PT1625847E - Utilização médica de uma tetra-hidrotrioazolo [4,3-a]pirazina - Google Patents

Description

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DESCRIÇÃO "UTILIZAÇÃO MÉDICA DE UMA TETRA-HIDROTRIOAZOLO [4,3-a]PIRA-ZINA"

ANTECEDENTES DA INVENÇÃO A diabetes refere-se a um processo de doença derivado de factores causativos múltiplos e caracterizada por elevados niveis de glicose no plasma ou hiperglicemia no estado de fastio ou após administração de glicose durante um teste oral de tolerância à glicose. A hiperglicemia persistente ou não controlada está associada a morbidez e mortalidade prematura a aumentada. Frequentemente a homeostase de glicose anormal está associada quer directamente como indirectamente a alterações do metabolismo lipídico de lipoproteínas e de apolipoproteínas e outras doenças metabólicas e hemodinâmicas. Consequentemente os pacientes com diabetes mellitus de Tipo 2 possuem um risco aumentado de complicações macrovasculares e microvasculares, incluindo doença coronária, ataque súbito de doença, hipertensão, nefropatia, neuropatia e retinopatia. Portanto, o controlo terapêutico da homeostase de glicose, do metabolismo lipidico e hipertensão são criticamente importantes na gestão e tratamento de diabetes mellitus.

Existem duas formas geralmente reconhecidas de diabetes . Na diabetes de Tipo 1, ou diabetes mellitus dependente 2 ΡΕ1625847 de insulina (IDDM), os pacientes produzem pouca ou nenhuma insulina, a hormona que regula a utilização da glicose. Na diabetes de tipo 2, ou diabetes mellitus não dependente de insulina (NIDDM), os pacientes possuem frequentemente níveis de insulina no plasma que são os mesmos ou mesmo mais elevados quando comparados com os sujeitos não diabéticos; no entanto, estes pacientes desenvolveram uma resistência ao efeito estimulante da insulina no metabolismo lipídico e da glicose nos principais tecidos sensíveis à insulina, que são o músculo, o fígado e os tecidos adiposos, e os níveis de insulina no plasma, embora elevados, são insuficientes para ultrapassar a pronunciada resistência à insulina. A resistência à insulina não é primariamente devida a um número diminuído de receptores de insulina mas sim a um defeito posterior da ligação da insulina ao seu receptor que não está ainda compreendido. Esta resistência à resposta da insulina resulta numa activação com insulina insuficiente de absorção de glicose, oxidação e armazenagem no músculo e repressão de insulina inadequada de lipólise no tecido adiposo e de produção e secreção de glicose no fígado.

Os tratamentos disponíveis para a diabetes tipo 2, que não mudaram substancialmente em muitos anos, possuem limitações reconhecidas . Embora o exercício físico e as reduções na ingestão de calorias na dieta vão melhorar dramaticamente o estado diabético, a aceitação deste tratamento é muito fraca devido aos estilos de vida sedentários bemenraizados e ao consumo de excesso de alimentos, especialmente de comidas contendo 3 ΡΕ1625847 elevadas quantidades de gordura saturada. Aumentando o nível de insulina no plasma por administração de sulfonilureias (e.g. tolbutamidaeglipizida) oumeglitinida, queestimulamascélulas β pancreáticas a segregar mais insulina, e/ou por injecção de insulina quando as sulfonilureias ou a meglitinida se tornam ineficazes, pode resultar em concentrações de insulina suficientemente elevadas para estimular os tecidos muito resistentes à insulina. No entanto, níveis perigosamente baixos de glicose no plasma podem resultar da administração de insulina ou de secretores de insulina (sulfonilureias ou meglitinida), e pode ocorrer umnível aumentado de resistência à insulina devido a níveis de insulina no plasma ainda superiores. As biguanidas aumentam a sensibilidade à insulina resultando nalguma correcção da hiperglicemia. No entanto, as duas biguanidas, fenformina e me tf ormina, podem induzir a acido se láctica e náuseas / diarreia A metformina possui menos efeitos secundários que a fenformina e é frequentemente prescrita para o tratamento de diabetes Tipo 2.

Asglitazonas (í.e. 5-benziltiazolidina-2,4-dionas) são uma classe de compostos descrita mais recentemente com potencial para melhorar muitos sintomas da diabetes tipo 2 . Estes agentes aumentam substancialmente a sensibilidade à insulina no músculo, fígado e tecido adiposo em muitos modelos animais de diabetes tipo 2 resultando na correcção parcial ou completa dos elevados níveis de glicose no plasma sem ocorrência de hipoglicemia. As glitazonas que são actualmente comercializadas são agonistas do receptor activado proliferador de peroxisomas (PPAR), primariamente o subtipo PPAR-gama. Crê-se geralmente 4 ΡΕ1625847 que o agonismo de PPAR-gama seja responsável pela sensibilização melhorada de insulina que é observada com as glitazonas. Os agonistas de PPAR mais recentes que estão a ser testados para o tratamento de diabetes de Tipo II são agonistas do subtipo alfa, gama ou delta, ou uma combinação destes, e em muitos casos são quimicamente diferentes das glitazonas (i.e., não são tiazolidinedionas) . Ocorreram efeitos secundários graves (e.g. toxicidade no fígado) com algumas das glitazonas, tais como a troglitazona.

Os métodos adicionais de tratar a doença estão ainda sob investigação. Novas abordagens bioquímicas que foram recentemente introduzidas e que estão ainda em desenvolvimento incluem o tratamento com inibidores de alfa-glucosidase (e.g. acarbose) e inibidores de proteína tirosina fosfatase-1 B (PTP-1 B) .

Os compostos que são inibidores da enzima dipeptidilpeptidase-IV ("DP-IV" ou "DPP-IV") estão também sob investigação como fármacos que poderão ser úteis no tratamento de diabetes, e particularmente de diabetes tipo 2 . Ver por exemplo WO 97/40832, WO 98/19998, Patente U.S. No. 5,939,560, Bioorg. Med. Chem. Lett., 6 (10), 1163-1166 (1996); e Bioorg. Med. Chem. Lett., 6(22), 2745-2748 (1996). A utilidade dos inibidores de DP-IV no tratamento da diabetes de tipo 2 é baseada no facto de que a DP-IV ín vivo inactiva prontamente o péptido semelhante aglucagon-1 (GLP-1) e o péptido inibidor gástrico (GIP) . OGLP-1 e o GIP são incretinas e são produzidas quando os alimentos são consumidos. As incretinas estimulam a produção de insulina. A inibição de DP-IV conduz a uma inactivação diminuída das 5 ΡΕ1625847 incretinas, e esta por sua vez resulta em eficiência aumentada das incretinas na estimulação da produção de insulina pelo pâncreas . A inibição da DP-IV resulta consequentemente num nível aumentado de insulina no soro. Vantajosamente, uma vez que as incretinas são produzidas pelo corpo apenas quando os alimentos são consumidos, não se espera que a inibição da DP-IV aumente o nível de insulina em alturas inadequadas, tais como entre as refeições, o que pode conduzir a um nível de açúcar no sangue excessivamente baixo (hipoglicemia). Consequentemente espe-ra-se que a inibição de DP-IV aumente a insulina sem aumentar o risco de hipoglicemia, que é um efeito secundário perigoso associado à utilização de secretores de insulina.

Os inibidores de DP-IV possuem também outras utilidades terapêuticas, como discutido aqui. Até à data os inibidores de DP-IV não foram extensivamente estudados, especialmente para outras utilidades para além da diabetes. São necessários novos compostos de modo a que possam ser descobertos inibidores de DP-IV melhorados para o tratamento de diabetes e potencialmente outras doenças e estados. A presente invenção é dirigida para o composto da

I 6 ΡΕ1625847 ou um seu sal farmaceuticamente aceitável, para utilizar num método de tratar, controlar ou prevenir a diabetes Tipo II ou um ou mais estados seleccionados a partir do grupo constituído por: (1) hiperglicemia, (2) fraca tolerância à glicose, (3) resistência à insulina, (4) obesidade, (5) patologias lipídicas, (6) dislipidemia, (7) hiperlipidemia, (8) hipertrigliceridemia, (9) hipercolesterotemia, (10) níveis baixos de HDL, (11) níveis elevados de LDL, (12) aterosclerose e as suas sequelas, (13) restenose vascular, (14) síndrome do intestino irritável, (15) doença inflamatória do intestino, incluindo doença de Crohn e colite ulcerativa, (16) outros estados inflamatórios, (17) pancreatite, (18) obesidade abdominal (19) doença neurodegenerativa, (20) retinopatia, (21) nefropatia, (22) neuropatia, (23) Síndrome X, (24) hiperandrogenismo dos ovários (síndrome dos ovários poliquísticos), e outras patologias onde a resistência à insulina é uma componente, o referido método compreendendo a administração separada do referido composto e um ou mais compostos adicionais seleccionados a partir do grupo constituído por: (a) outros inibidores da dipeptidilpeptidase IV (DP-IV); (b) sensibilizadores de insulina seleccionados a partir do grupo constituído por (i) agonistas de PPARy, outros ligandos PPAR, agonistas duais PPARa/γ, e agonistas de PPARa, (ii) biguanidas, e (iii) inibidores da proteína tirosinafosfatase-1 B (PTP-1 B); (c) insulina ou miméticos da insulina; (d) sulfonilureias ou outros secretores de insulina; 7 ΡΕ1625847 (e) inibidores de a-glucosidase; (f) agonistas de receptor de glucagon; (g) GLP-1, miméticos de GLP-1, e agonistas do receptor de GLP-1; (h) miméticos de GIP, GIP, e agonistas de receptor de GIP; (i) PACAP, miméticos de PACAP, e agonistas de receptor 3 de PACAP; (j) agentes redutores de colesterol seleccionados a partir do grupo constituído por (i) inibidores de HMG-CoAredutase, (ii) sequestrantes, (iii) álcool nicotinílico, ácido nicotínico ou um seu sal, (iv) agonistas de PPAR, (v) agonistas duais PPARa/γ, (vi) inibidores de absorção de colesterol, (vii) inibidores de acil-CoA:colesterol aciltransferase, e (viii) anti-oxidantes; (k) agonistas de PPARS; (l) compostos anti-obesidade; (m) inibidores do transportador de ácido biliar ileal; e (n) agentes anti-inflamatórios. 0 termo "sais farmaceuticamente aceitáveis" refere-se a sais preparados a partir de ácidos não tóxicos farmaceuticamente aceitáveis incluindo ácidos inorgânicos ou orgânicos.

Os sais poderão ser preparados a partir de ácidos não tóxicos farmaceuticamente aceitáveis, incluindo ácidos inorgânicos ou orgânicos. Tais ácidos incluem ácido acético, benzenossulfónico, benzóico, canforossulfónico, cítrico, eta- ΡΕ1625847 nossulfónico, fumárico, glucónico, glutâmico, bromídrico, clorídrico, isetiónico, láctico, maleico, málico, mandélico, metanossulfónico, múcico, nítrico, pamoico, pantoténico, fosfórico, succínico, sulfúrico, tartárico, p-toluenossul-fónico, e os semelhantes. Os ácidos particularmente preferidos são cítrico, bromídrico, clorídrico, maleico, fosfórico, sulfúrico, fumárico, e tartárico.

Entender-se-á que, como utilizadas aqui, as referências ao composto de Fórmula I pretendem também incluir os sais farmaceuticamente aceitáveis. 0 composto de Fórmula I é útil num método de inibir a enzima dipeptidilpeptidase-IV num paciente tal como um mamífero em necessidade de tal inibição compreendendo a administração de uma quantidade efectiva do composto. A presente invenção utiliza o composto revelado aqui como um inibidor da actividade da enzima dipeptidilpeptidase-IV.

Em adição aos primatas, tais como os seres humanos, pode ser tratada uma variedade de outros mamíferos de acordo como método da presente invenção. Por exemplo, podem ser tratados os mamíferos incluindo, mas não limitados a, vacas, ovelhas, cabras, cavalos, cães, gatos, porquinhos-da-índia, ratos ou outras espécies bovina, ovina, equina, canina, felina, roedora ou murina. No entanto, o método pode também ser praticado noutras espécies, tais como espécies aviárias (e.g., frangos). 0 sujeito tratado nos métodos presentes é geralmente 9 ΡΕ1625847 um mamífero, preferencialmente um ser humano, macho ou fêmea, no qual é desejada a inibição da actividade da enzima dipepti-dilpeptidase-IV. 0 termo "quantidade terapeuticamente efectiva" significa a quantidade do composto submetido que irá desencadear a resposta biológica ou médica de um tecido, sistema, animal ou humano que está a ser procurada pelo investigador, veterinário, médico ou outro clínico. 0 termo "composição" como utilizado aqui pretende compreender um produto compreendendo os componentes especificados nas quantidades especificadas, assim como qualquer produto que resulte, directamente ou indirectamente, da combinação dos componentes especificados nas quantidades especificadas. Tal termo em relação à composição farmacêutica, pretende compreender umproduto compreendendo o (s) componente (s) activo(s), eo(s) componente(s) inerte(s) que constitui(em) o veiculo, assim como qualquer produto que resulte, directamente ou indirectamente, da combinação, complexação ou agregação de dois ou mais dos componentes, ou da dissociação de um ou mais dos componentes, ou de outros tipos de reacções ou interacções de um ou mais dos componentes. Concordantemente, as composições farmacêuticas da presente invenção compreendem qualquer composição feita através da mistura de um composto da presente invenção e um veiculo farmaceuticamente aceitável. Por "farmaceuticamente aceitável" entende-se que um veículo, diluente ou excipiente tem de ser compatível com os outros componentes da formulação e não deletério para o seu recipiente.

Os termos "administração de" e ou "administrar um" 10 ΡΕ1625847 composto deverão ser entendidos significar providenciar um composto da invenção ou um pró-fármaco de um composto da invenção ao indivíduo em necessidade de tratamento. A utilidade do composto de Fórmula I como um inibidor da actividade da enzima dipeptidilpeptidase-IV poderá ser demonstrada pela metodologia conhecida na técnica. As constantes de inibição são determinadas como segue. É empregue um ensaio fluorométrico contínuo com o substrato Gly-Pro-AMC, que é quebrado pela DP-IV para libertar o grupo de saída AMC fluorescente. Os parâmetros cinéticos que descrevemesta reacção são como se segue: Km = 50 μΜ; kcat =75 s”1; kcat/Km = 1,5 x 106 M_1 s_1. Uma reacção típica contém aproximadamente 50 pM de enzima, 50 μΜ de Gly-Pro-AMC, e tampão (HEPES 100 mM, pH 7,5, 0,1 mg/ml de BSA) num volume total de reacção de 100 pL. A libertação de AMC é monitorizada continuamente numa placa de 96 poços do fluorímetro utilizando um comprimento de onda de excitação de 360 nm e um comprimento de onda de emissão de 460 nm. Sob estas condições, é produzido AMC a aproximadamente 0, 8 μΜ em 30 minutos a 25 graus C. A enzima utilizada nestes estudos era solúvel (domínio da transmembrana e extensão citoplásmica excluídos) na proteína humana produzida num sistema de expressão de baculovírus (Bac-To-Bac, Gibco BRL). Descobriu-se que as constantes cinéticas para a hidrólise de Gly-Pro-AMC e GLP-1 estão de acordo com os valores da literatura para a enzima nativa. Para medir as constantes de dissociação para os compostos, foram adicionadas soluções de inibidor em DMSO a reacções contendo a enzima e o substrato (a concentração final em DMSO é 1 %). Todas as experiências foram conduzidas à temperatura ambiente 11 ΡΕ1625847 utilizando as condições reaccionais padrão descritas acima. Para determinar as constantes de dissociação (Ki), as velocidades reaccionais foram ajustadas por regressão não linear à equação de Michaelis-Menton para inibição competitiva. Os erros na reprodução das constantes de dissociação são tipicamente inferiores a duas vezes.

Em particular, o composto de Fórmula I possuia uma actividade na inibição da enzima dipeptidilpeptidase-IV nos ensaios mencionados anteriormente, geralmente com um IC50 inferior a cerca de 1 μΜ. Um tal resultado é indicativo da actividade intrínseca do composto em utilização como um inibidor da actividade da enzima dipeptidilpeptidase-IV. A enzima dipeptidilpeptidase-IV (DP-IV) é uma proteína da superfície celular que foi implicada numa vasta gama de funções biológicas . Possui uma vasta distribuição nos tecidos (intestino, rim, fígado, pâncreas, placenta, timo, baço, células epiteliais, endotélio vascular, células linfóides e mielóides, soro), e níveis distintos de expressão no tipo de célula e de tecido. A DP-IV é idêntica ao marcador CD26 de activação da célula T, e pode clivar um número de péptidos reguladores imunológicos, endócrinos, e neurológicos in vitro. Isto sugeriu um potencial papel para esta peptidase numa variedade de processos de doença em seres humanos ou noutras espécies.

Concordantemente, o composto submetido é útil num método para a prevenção ou o tratamento das seguintes doenças, patologias e estados. 12 ΡΕ1625847

Diabetes de Tipo II e Patologias Relacionadas: Está bem estabelecido que as incretinas GLP-1 e GIP são rapidamente inactivadas in vivo pela DP-IV. Os estudos com ratinhos deficientes em ϋΡ-ΐν("/_) e os ensaios clínicos preliminares indicam que a inibição pela DP-IV aumenta as concentrações de estado estacionário de GLP-1 e GIP, resultando numa tolerância à glicose melhorada. Por analogia a GLP-1 e GIP, é provável que outros péptidos da família glucagon envolvidos na regulação da glicose sejam também activados pela DP-IV (e.g. PACAP, glucagon) . A inactivação destes péptidos pela DP-IV poderá também desempenhar um papel na homeostase da glicose. 0 inibidor de DP-IV de Fórmula I possui consequentemente utilidade no tratamento de diabetes de tipo II e no tratamento e na prevenção dos numerosos estados que frequentemente acompanham a diabetes Tipo II, incluindo a síndrome metabólica X, hipoglicemia reactiva, e dislipidemia diabética. A obesidade, discutida adiante, é outro estado que é frequentemente encontrado juntamente com a diabetes Tipo II que poderá responder ao tratamento com o composto de Fórmula I.

As seguintes doenças, patologias e estados estão relacionados com a diabetes Tipo 2, e consequentemente poderão ser tratados, controlados ou nalguns casos prevenidos, por tratamento com o composto de Fórmula I: (1) hiperglicemia, (2) fraca tolerância à glicose, (3) resistência à insulina, (4) obesidade, (5) patologias lipídicas, (6) dislipidemia, (7) hiperlipidemia, (8) hipertrigliceridemia, (9) hipercolestero- 13 ΡΕ1625847 lemia, (10) baixos níveis de HDL, (11) elevados níveis de LDL, (12) aterosclerose e suas sequelas, (13) restenose vascular, (14) síndrome do intestino irritável, (15) doença inflamatória do intestino, incluindo a doença de Crohn e a colite ulcerativa, (16) outros estados inflamatórios, (17) pancreatite, (18) obesidade abdominal, (19) doença neurodegenerativa, (20) retinopatia, (21) nefropatia, (22) neuropatia, (23) Síndrome X, (24) hiperandrogenismo dos ovários (síndrome do ovário poliquístico) , e outras patologias onde a resistência à insulina é uma componente.

Obesidade: os inibidores da DP-IV poderão ser úteis para o tratamento da obesidade. Este é baseado nos efeitos inibidores observados na ingestão de alimentos e esvaziamento gástrico de GLP-1 e GLP-2. A administração exógena de GLP-1 em seres humanos decresce significativamente a ingestão de alimentos e retarda o esvaziamento gástrico (Am. J. Physiol. 277, R910-R916 (1999)). A administração ICV de GLP-1 em ratos e ratinhos também tem efeitos profundos na ingestão de alimentos (Nature Medicine 2, 1254-1258 (1996)). Esta inibição de alimentação não é observada em ratinhos GLP-l-R<-/-), indicando que estes efeitos são mediados através dos receptores cerebrais de GLP-1. Por analogia a GLP-1, é provável que o GLP-2 seja também regulado pela DP-IV. A administração ICV de GLP-2 também inibe a ingestão de alimentos, análogo aos efeitos observados com GLP-1 (Nature Medicine 6, 802-807 (2000)).

Deficiência na Hormona do Crescimento: A inibição da DP-IV poderá ser útil para o tratamento da deficiência na hormona 14 ΡΕ1625847 de crescimento, baseada na hipótese de que o factor libertador da hormona de crescimento (GRF), um péptido que estimula a libertação da hormona de crescimento a partir da pituitária anterior, é clivado pela enzima DP-IV in vivo (WO 00/56297). Os dados seguintes providenciam evidência que o GRF é um substrato endógeno: (1) o GRF é clivado eficientemente in vitro para gerar o produto inactivo GRF[3-44] (BBA 1122, 147-153 (1992)); (2) o GRF é rapidamente degradado no plasma a GRF[3-44]; isto é prevenido pelo inibidor da DP-IV diprotina A; e (3) o GRF [3-44] é encontrado no plasma de um porco transgénico GRF humano (J. Clin. Invest. 83, 1533-1540 (1989)) .As sim os inibidores da DP-IV poderão ser úteis para o mesmo espectro de indicações que foram consideradas para os secretores de hormona de crescimento.

Lesão Intestinal: O potencial para utilizar os inibidores de DP-IV para o tratamento de lesão intestinal é sugerido pelos resultados de estudos indicando que o péptido-2 (GLP-2) semelhante a glucagon, provavelmente um substrato endógeno para a DP-IV, poderá exibir efeitos tróficos no epitélio intestinal (Regulatory Peptides 90, 27-32 (2000)). A administração de GLP-2 resulta numa pequena massa intestinal aumentada em roedores e atenua a lesão intestinal em modelos de roedores de colite e enterite. Imunossupressão: a inibição da DP-IV poderá ser útil para a modulação da resposta imunológica, baseada nos estudos implicando a enzima DP-IV na activação das células T e no processamento de quimioquinas, e eficácia dos inibidores de DP-IV em modelos in vivo da doença. Foi demonstrado que a DP-IV é idêntica a CD26, um marcador de superfície celular para células imunológicas activadas. A expressão de CD26 é regulada 15 ΡΕ1625847 pelo estado de diferenciação e activação das células imunes. É geralmente aceite que a CD26 funciona como uma molécula co-estimuladora em modelos in vitro de activação de células T. Um número de quimioquinas contém prolina na penúltima posição, presumivelmente para as proteger da degradação por amino-peptidases não especificas. Muitas destas demonstraram ser processadas in vitro pela DP-IV. Em vários casos (RANTES, LD78-beta, MDC, eotaxina, SDF-1 alfa), a clivagem resulta numa actividade alterada na quimiotaxa e em ensaios de sinalização. A selectividade para o receptor também parece ser modificada nalguns casos (RANTES). Foram identificadas múltiplas formas truncadas N-terminalmente de um número de quimioquinas em sistemas de cultura celular in vitro, incluindo os produtos previstos da hidrólise de DP-IV.

Os inibidores de DP-IV demonstraram ser imu-no-supressores eficazes em modelos animais de transplantação e artrite.Aprodipina (Pro-Pro-difenil-fosfonato), um inibidor irreversível da DP-IV, demonstrou duplicar a sobrevivência de enxerto cardíaco em ratos desde o dia 7 até ao dia 14 (Transplantation 63, 1495-1500 (1997)). Foram testados inibidores de DP-IV em artrite induzida por colagénio e alquildiamina em ratos e demonstrado uma atenuação estatisticamente significativa do inchaço da pata traseira neste modelo (Int. J. Immunopharmacology 19, 15-24 (1997), Immunopharmacology 40, 21-26 (1998)) . A DP-IV está sobre-regulada num número de doenças auto-imunes incluindo artrite reumatóide, esclerose múltipla, doença de Graves, e tiroidite de Hashimoto (Immunology Today 20, 367-375 (1999)) . 16 ΡΕ1625847

Infecção por HIV: A inibição de DP-IV poderá ser útil para o tratamento ou a prevenção de infecção por HIV ou SIDA porque um número de quimioquinas que inibem a entrada da célula de HIV são substratos potenciais para a DP-IV (Immunology Today 20, 367-375 (1999) ) . No caso de SDF-1 alfa, a clivagem decresce a actividade antiviral (PNAS 95, 6331-6 (1998)). Assim, esperar-se-ia que a estabilização de SDF-lalfa através da inibição de DP-IV decrescesse a infectividade de HIV.

Hematopoiese: A inibição de DP-IV poderá ser útil para o tratamento ou a prevenção de hematopiese porque a DP-IV poderá estar envolvida na hematopoiese. Um inibidor de DP-IV, Val-Boro-Pro, estimulou a hematopoiese num modelo de rato de neutropenia induzida por ciclofosfamida (WO 99/56753).

Patologias Neuronais: A inibição de DP-IV poderá ser útil para o tratamento ou a prevenção de várias patologias neuronais ou psiquiátricas devido a um número de péptidos implicados numa variedade de processos neuronais ser clivado in vitro pela DP-IV. Um inibidor de DP-IV poderá assim possuir um beneficio terapêutico no tratamento de patologias neuronais . Aendomorfina-2, beta-casomorfina, esubstância P demonstraram todas ser substratos in vitro para a DP-IV. Em todos os casos, a clivagem in vitro é altamente eficiente, com kcat/Km ~ 106 M"1 s_1 ou maior. Num modelo de teste de salto por choque eléctrico de analgesia em ratos, um inibidor de DP-IV mostrou um efeito significativo que foi independente da presença de endomorfina-2 exógena (Brain Research 815, 278-286 (1999)). 17 ΡΕ1625847

Invasão Tumoral e Metástase: A inibição de DP-IVpoderá ser útil para o tratamento ou a prevenção de invasão tumoral e metástase porque foi observado um aumento ou um decréscimo na expressão de várias ectopeptidases incluindo a DP-IV durante a transformação de células normais para um fenótipo maligno (J. Exp. Med. 190, 301-305. (1999)). A sobre- ou sob-regulação destas proteínas parece ser específica do tecido e do tipo de célula. Por exemplo, foi observada expressão aumentada de CD26/DP-IV em linfoma de célula T, leucemia linfoblástica aguda de célula T, carcinomas de tiróide derivado de célula, carcinomas de célula basal, e carcinomas da mama. Assim, os inibidores de DP-IVpoderão possuir utilidade no tratamento de tais carcinomas.

Hipertrofia Prostática Benigna: A inibição de DP-IV poderá ser útil para o tratamento de hipertrofia prostática benigna porque foi notada actividade aumentada de DP-IV no tecido da próstata empacientes comBPH (Eur. J. Clin. Chem. Clin. Biochem. 30, 333-338 (1992)) .

Motilidade do esperma/contracepção masculina: A inibição de DP-IV poderá ser útil para a alteração de motilidade do esperma e para a contracepção masculina porque no fluido seminal, prostatosomas, organelos derivados da próstata importantes para a motilidade do esperma, possui níveis muito elevados de actividade de DP-IV (Eur. J. Clin. Chem. Clin. Biochem 30, 333-338 (1992)) .

Gengivite: A inibição de DP-IV poderá ser útil para 18 ΡΕ1625847 o tratamento de gengivite porque foi descoberta actividade de DP-IV no fluido crevicular gengival e nalguns estudos correlacionados com a gravidade da doença periodontal (Arch. Oral Biol. 37, 167-173 (1992)).

Osteoporose: A inibição de DP-IV poderá ser útil para o tratamento ou a prevenção de osteoporose porque os receptores de GIP estão presentes nos osteoblastos. 0 composto de Fórmula I tem utilidade para tratar ou prevenir um ou mais dos seguintes estados ou doenças: (1) hiperglicemia, (2) baixa tolerância à glicose, (3) resistência à insulina, (4) obesidade, (5) patologias lipidicas, (6) dislipidemia, (7) hiperlipidemia, (8) hipertrigliceridemia, (9) hipercolesterolemia, (10) baixos níveis de HDL, (11) elevados níveisdeLDL, (12) aterosclerose e suas sequelas, (13) restenose vascular, (14) síndrome do intestino irritável, (15) doença inflamatória do intestino, incluindo a doença de Crohn e a colite ulcerativa, (16) outros estados inflamatórios, (17) pancreatite, (18) obesidade abdominal, (19) doença neurodegenerativa, (20) retinopatia, (21) nefropatia, (22) neuropatia, (23) Síndrome X, (24) hiperandrogenismo ovariano (síndrome de ovário poliquístico), (25) diabetes Tipo II, e outros estados que poderão ser tratados ou prevenidos por inibição de DP-IV, e é útil num método para a prevenção ou o tratamento das doenças mencionadas anteriormente, patologias e estados em combinação com outros agentes. O composto de Fórmula I é utilizado em combinação com 19 ΡΕ1625847 um ou mais de outros fármacos no tratamento, prevenção, supressão ou melhoramento de doenças ou estados para os quais os compostos de Fórmula I ou os outros fármacos poderão possuir utilidade, em que a combinação dos fármacos conjuntamente é mais segura ou mais efectiva que qualquer fármaco sozinho. Tal (is) outro (s) fármaco(s) poderá (ão) ser administrado (s) , por uma via e numa quantidade comummente utilizada para tal, contemporaneamente ou sequencialmente com o composto de Fórmula I. Quando o composto de Fórmula I é utilizado contemporaneamente com um ou mais de outros fármacos, a terapia de combinação inclui terapias nas quais o composto de Fórmula I e um ou mais de outros fármacos são administrados em horários diferentes sobrepostos. É também contemplado que quando utilizado em combinação com um ou mais outros componentes activos, o composto de Fórmula I e os outros componentes activos poderão ser utilizados em doses mais baixas do que quando cada um é utilizado individualmente.

Outros componentes activos que poderão ser administrados em combinação com um composto de Fórmula I, são: (a) outros inibidores de dipeptidilpeptidase IV (DP-IV) ; (b) sensibilizadores de insulina incluindo (i) agonistas de PPARy tais como as glitazonas (e.g. troglitazona, pioglitazona, englitazona, MCC-555, rosiglitazona, e os semelhantes) e outros ligandos de PPAR, incluindo agonistas duais PPARa/γ, tais como KRP-297,e agonistas de PPARa tais como derivados de ácido fenofibrico (genfibrozilo, clofibrato, fenofibrato e bezafibrato), (ii) biguanidas tais como metformina e fenformina, e (iii) inibidores de proteina tirosina fosfatase-ΙΒ (PTP-1B); 20 ΡΕ1625847 (c) insulina ou miméticos de insulina; (d) sulfonilureias e outros secretores de insulina tais como tolbutamida e glipizida, meglitinida, e materiais relacionados; (e) inibidores de α-glucosidase (tais como acarbose); (f) antagonistas de receptor de glucagon tais como aqueles revelados em WO 98/04528, WO 99/01423, WO 00/39088, e WO 00/69810; (g) GLP-1, miméticos de GLP-1, e agonistas de receptor de GLP-1 tais como aqueles revelados em WO 00/42026 e WO 00/59887; (h) GIP e miméticos de GIP tais como aqueles revelados em WO 00/58360, e agonistas de receptor de GIP; (i) PACAP, miméticos de PACAP, e agonistas de receptor 3 de PACAP tais como aqueles revelados em WO 01/23420; (j) agentes diminuidores de colesterol tais como (i) inibidores de HMG-CoA reductase (lovastatina, simvas-tatina, pravastatina, fluvastatina, atorvastatina, rivastatina, itavastatina, rosuvastatina, e outras estatinas), (ii) sequestrantes (colestiramina, coles-tipol, e derivados de dial cilaminoalquilo de um dextrano reticulado), (iii) álcool nicotinilo, ácido nicotinico ou um seu sal, (iv) agonistas de PPARa tais como derivados de ácido fenofibrico (gemfibrozilo, clofibrato, feno-fibrato e bezafibrato), (v) agonistas duais de PPARa/γ, tais como KRP-297, (vi) inibidores de absorção de colesterol, tais como beta-sitosterol e ezetimiba, (vii) inibidores de acil CoA:colesterol aciltransferase, tais como avasimiba, e (viii) anti-oxidantes, tal como probucol; 21 ΡΕ1625847 (k) agonistas de PPARô, tais como aqueles revelados em WO 97/28149; (l) compostos anti-obesidade tais como fenfluramina, dexfenfluramina, fentermina, sibutramina, ou listato, inibidores do neuropéptido Y5, e (agonistas do receptor adrenérgico β; (m) um inibidor do transportador do ácido biliar ileal; e (n) agentes pretendidos para utilizar em estados inflamatórios tais como aspirina, fármacos anti-in-flamatóriosnãoesteróides, glucocorticóides, azulfidina, e inibidores selectivos de ciclo-oxigenase 2.

As combinações acima incluem combinações de um composto de Fórmula I não só com um outro composto activo mas também com dois ou mais outros compostos activos. Exemplos não limitantes incluem combinações do composto possuindo a Fórmula I com dois ou mais compostos activos seleccionados a partir de biguanidas, sulfonilureias, inibidores da HMG-CoA redutase, agonistas de PPAR, inibidores de PTP-1B, outros inibidores de DP-IV, e compostos anti-obesidade.

Tais outros fármacos poderão ser administrados, por uma via e numa quantidade comummente utilizadas para tal, contemporaneamente ou sequencialmente comum composto de Fórmula I. A razão em peso do composto de Fórmula I para o segundo componente activo poderá ser variada e irá depender da dose 22 ΡΕ1625847 efectiva de cada componente. Geralmente, irá ser utilizada uma dose eficaz de cada um. Assim, por exemplo, quando um composto de Fórmula I é combinado com outro agente, a razão em peso do composto da presente invenção para o outro agente irá geralmente variar desde cerca de 1000:1 até cerca de 1:1000, preferencialmente cerca de 200:1 até cerca de 1:200. As combinações de um composto da presente invenção e outros componentes activos irão geralmente também estar dentro do intervalo anteriormente apresentado, mas em cada caso, deverá ser utilizada uma dose eficaz de cada componente activo.

Em tais combinações o composto de Fórmula I e os outros agentes activos são administrados separadamente. Adicionalmente, a administração de um elemento poderá ser anterior a, concorrente com, ou subsequente à administração do(s) outro (s) agente(s).

Os compostos da presente invenção poderão ser administrados por vias de administração oral, parentérica (e.g., intramuscular, intraperitoneal, intravenosa, ICV, injecção intracisternal ou infusão, injecção subcutânea, ou implante), por inalação através de um pulverizador, nasal, vaginal, rectal, sublingual, ou tópica e poderão ser formulados, sós ou acompanhados, formulações unitárias de dosagem adequadas contendo veículos farmaceuticamente aceitáveis não tóxicos convencionais, adjuvantes e veículos adequados para cada via de administração. Adicionalmente ao tratamento de animais de sangue quente tais como ratinhos, ratos, cavalos, gado bovino, ovelhas, cães, gatos, macacos, etc., os compostos da invenção são eficazes para uso em seres humanos. 23 ΡΕ1625847

As composições farmacêuticas para a administração dos compostos desta invenção poderão ser convenientemente apresentadas em formas de dosagem unitária e poderão ser preparadas por qualquer um dos métodos bem conhecidos na técnica de farmácia. Todos os métodos incluem o passo de trazer o componente activo em associação com o veiculo que constitui um ou mais dos componentes acessórios. Em geral, as composições farmacêuticas são preparadas por trazer o componente activo uniformemente e intimamente emassociação com um veiculo liquido ou um sólido finamente dividido ou ambos, e seguidamente, se necessário, formar o produto na formulação desejada. Na formulação farmacêutica o composto objecto activo está incluído num quantidade suficiente para produzir o efeito desejado sobre o processo ou o estado das doenças. Como usado aqui, o termo "composição" pretende abranger um produto compreendendo os componentes especificados nas quantidades especificadas, bem como qualquer produto que resulte, directamente ou indirectamente, da combinação dos componentes especificados nas quantidades especificadas.

As composições farmacêuticas contendo o componente activo poderão estar numa forma adequada para uso oral, por exemplo, como comprimidos, trociscos, pastilhas, suspensões aquosas ou oleosas, pós ou grânulos dispersáveis, emulsões, cápsulas duras ou macias, ou xaropes e elixires. As composições pretendidas para uso oral poderão ser preparadas de acordo com qualquer método conhecido para a técnica de fabrico de composições farmacêuticas e tais composições poderão conter um 24 ΡΕ1625847 ou mais agentes seleccionados a partir do grupo consistindo de agentes adoçantes, agentes aromatizantes, agentes corantes e agentes conservantes de modo a providenciar preparações farmaceuticamente elegantes e saborosas. Os comprimidos contêm o componente activo emmistura comexcipientes farmaceuticamente aceitáveis não tóxicos que são adequados para o fabrico de comprimidos. Estes excipientes poderão ser por exemplo, diluentes inertes, tais como carbonato de cálcio, carbonato de sódio, lactose, fosfato de cálcio ou fosfato de sódio; agentes de granulação e desintegração, por exemplo, amido de milho, ou ácido algínico; agentes ligantes, por exemplo amido, gelatina ou acácia, e agentes de lubrificação, por exemplo estearato de magnésio, ácido esteárico ou talco. Os comprimidos poderão ser não revestidos ou poderão ser revestidos por técnicas conhecidas para retardar a desintegração e a absorção no tracto gastrointestinal e assimproporcionar uma acção continua durante um periodo mais longo. Por exemplo, poderá ser empregue um material de retardo temporal tal como o monoestearato de glicerilo ou o diastearato de glicerilo. Poderão também ser revestidos pelas técnicas descritas nas Patentes U.S. 4 256 108; 4 166 452; e 4 265 874 para formar comprimidos terapêuticos osmóticos para libertação de controlo.

As formulações para utilização oral poderão também ser apresentadas como cápsulas de gelatina duras em que o componente activo é misturado com um diluente sólido inerte, por exemplo, carbonato de cálcio, fosfato de cálcio ou caulino, ou cápsulas de gelatina macias em que o componente activo é misturado com água ou ummeio oleoso, por exemplo óleo de amendoim, parafina liquida ou azeite. 25 ΡΕ1625847

As suspensões aquosas contêm os materiais activos em mistura com excipientes adequados para o fabrico de suspensões aquosas. Tais excipientes são agentes de suspensão, por exemplo carboximetilcelulose de sódio, metilcelulose, hidroxipro-pilmetilcelulose, alginato de sódio, polivinilpirrolidona, goma tragacanta e goma acácia; os agentes de dispersão ou de humidificação poderão ser um fosfatideo de ocorrência natural, por exemplo lecitina, ou produtos de condensação de um óxido de alcileno com ácidos gordos, por exemplo estearato de polioxietileno, ou produtos de condensação de óxido de etileno com álcoois alifáticos de cadeia longa, por exemplo hepta-decaetilenoxicetanol, ou produtos de condensação de óxido de etileno com ésteres parciais derivados de ácidos gordos e um hexitol tal como monooleato de polioxietileno sorbitol, ou produtos de condensação de óxido de etileno com ésteres parciais derivados de ácidos gordos e anidridos de hexitol, por exemplo monooleato de polietileno sorbitano. As suspensões aquosas poderão também conter um ou mais conservantes, por exemplo p-hidroxibenzoato de etilo, ou de n-propilo, um ou mais agentes de coloração, um ou mais agentes aromatizantes, e um ou mais agentes adoçantes, tais como sacarose ou sacarina.

As suspensões oleosas poderão ser formuladas por suspensão do componente activo num óleo vegetal, por exemplo óleo de amendoim, azeite, óleo de sésamo ou óleo de coco, ou um óleo mineral tal como parafina liquida. As suspensões oleosas poderão conter um agente espessante, por exemplo cera de abelha, parafina dura ou álcool cetilico. Poderão ser adicionados agentes 26 ΡΕ1625847 adoçantes tais como aqueles enunciados acima, e agentes aromatizantes para providenciar uma preparação oral saborosa. Estas composições poderão ser conservadas pela adição de um anti-oxidante tal como ácido ascórbico.

Os pós e grânulos dispersáveis adequados para a preparação de uma suspensão aquosa pela adição de água proporcionam o componente activo em mistura com um agente de dispersão ou humidificação, agente de suspensão e um ou mais conservantes. Os agentes de dispersão ou humidificação e os agentes de suspensão são exemplificados por aqueles já mencionados acima. Poderão também estar presentes excipientes adicionais, por exemplo, agentes adoçantes, aromatizantes e corantes.

As composições farmacêuticas úteis na invenção poderão também estar na forma de emulsões óleo-em-água. A fase oleosa poderá ser um óleo vegetal, por exemplo azeite ou óleo de amendoim, ou um óleo mineral, por exemplo parafina liquida ou mistura destes. Os agentes emulsionantes poderão ser gomas que ocorrem naturalmente, por exemplo gama acácia ou goma tragacanta, fosfatideos de ocorrência natural, por exemplo soja, lecitina, e ésteres ou ésteres parciais derivados de ácidos gordos e anidridos de hexitol, por exemplo monooleato de sorbitano, e produtos de condensação dos referidos ésteres parciais com óxido de etileno, por exemplo monooleato de polioxietileno sorbitano. As emulsões poderão também conter agentes adoçantes ou aromatizantes. 27 ΡΕ1625847

Poderão ser formulados xaropes e elixires com agentes adoçantes, por exemplo glicerol, propilenoglicol, sorbitol ou sacarose. Tais formulações poderão também conter um agente emoliente, umconservante e agentes aromatizantes e de coloração.

As composições farmacêuticas poderão estar na forma de uma suspensão aquosa ou oleaginosa injectável estéril. Esta suspensão poderá ser formulada de acordo com a técnica conhecida utilizando aqueles agentes de dispersão ou de humidificação adequados e agentes de suspensão que foram mencionados acima. A preparação injectável estéril poderá também ser uma solução ou suspensão injectável estéril num diluente ou solvente parentericamente aceitável não tóxico, por exemplo como uma solução em 1,3-butanodiol. Entre os veículos e solventes aceitáveis que poderão ser empregues estão água, solução de Ringer e solução de cloreto de sódio isotónica. Adicionalmente, são convencionalmente empregues óleos fixos estéreis, como um solvente ou meio de suspensão. Para este propósito poderá ser empregue qualquer óleo insipido incluindo mono- ou di-glicéridos sintéticos. Adicionalmente, os ácidos gordos tais como o ácido oleico encontram utilização na preparação de injectáveis.

Os compostos da presente invenção poderão também ser administrados na forma de supositórios para administração rectal do fármaco. Estas composições podem ser preparadas misturando o fármaco com um excipiente não irritante adequado que é sólido a temperaturas comuns mas liquido à temperatura rectal e por conseguinte irá derreter-se no recto para libertar o fármaco. Tais materiais são manteiga de cacau e polietilenoglicois. 28 ΡΕ1625847

Para uso tópico, são empregues cremes, unguentos, geleias, soluções ou suspensões, etc., contendo os compostos da presente invenção. (Para os propósitos deste pedido, a aplicação tópica deverá incluir soluções de lavagem de boca e para gargarejos).

No tratamento ou na prevenção dos estados que requerem inibição da actividade da enzima dipeptidil peptidase-IVumnivel de dosagem adequado irá geralmente ser cerca de 0,01 até 500 mg por Kg de peso corporal do paciente por dia que pode ser administrado em doses únicas ou múltiplas. Preferencialmente, o nivel de dosagem será de cerca de 0,1 até cerca de 250 mg/Kg por dia; mais preferencialmente cerca de 0,5 até cerca de 100 mg/Kg por dia. Um nivel de dosagem adequado poderá ser cerca de 0,01 até 250 mg/Kg por dia, cerca de 0,05 até 100 g/Kg por dia, ou cerca de 0,1 até 50 mg/Kg por dia. Neste intervalo a dosagem poderá ser 0,05 até 0,5, 0,5 até 5 ou 5 até 50 mg/Kg por dia. Para administração oral, as composições são preferencialmente providenciadas na forma de comprimidos contendo 1,0 até 1000 miligramas do componente activo, particularmente 1,0, 5,0, 10,0, 15,0, 20,0, 25,0, 50,0, 75,0, 100.0, 150,0, 200,0, 250,0, 300,0, 400,0, 500,0, 600,0, 750,0, 800.0, 900,0, e 1000,0 miligramas de substância activa para o ajuste sintomático da dosagem ao paciente a ser tratado. Os compostos poderão ser administrados num regime de 1 a 4 vezes por dia, preferencialmente uma a duas vezes por dia.

Quando se trata ou previne a diabetes mellitus e/ou 29 ΡΕ1625847 hiperglicemia ou hipertrigliceridemia ou outras doenças para as quais os compostos da presente invenção são indicados, geralmente são obtidos resultados satisfatórios quando os compostos da presente invenção são administrados numa dosagem diária de desde cerca de 0,1 miligramas até cerca de 100 miligramas por quilograma de peso corporal do animal, dados preferencialmente como uma dose diária única ou em doses divididas duas a seis vezes por dia, ou numa forma de libertação continua. Para a maioria dos mamíferos grandes, a dosagem diária total é desde cerca de 1,0 miligramas até cerca de 1000 miligramas, preferencialmente desde cerca de 1 miligrama até cerca de 50 miligramas. No caso de um ser humano adulto de 70 kg, a dose diária total será geralmente desde cerca de 7 miligramas até cerca de 350 miligramas. Este regime de dosagem poderá ser ajustado para providenciar a resposta terapêutica óptima.

Entender-se-á, contudo, que o nível de dose específico e a frequência de dosagem para qualquer paciente em particular poderá ser variada e dependerá de uma variedade de factores incluindo a actividade do composto especifico empregue, a estabilidade metabólica e comprimento da acção daquele composto, a idade, peso corporal, saúde geral, sexo, dieta, modo e tempo de administração, taxa de excreção, combinação de fármacos, a gravidade do estado particular, e a terapia a que se submete o hospedeiro.

Nos Exemplos seguintes é ilustrado um método para preparar o composto de Fórmula I. Os materiais de partida são feitos de acordo com os procedimentos conhecidos na técnica ou como ilustrado aqui. 30 ΡΕ1625847 A ordem de levar a cabo os esquemas reaccionais poderá ser variada para facilitar a reacção ou para evitar produtos reaccionais indesejáveis. Os exemplos seguintes são providenciados de modo a que a invenção possa ser compreendida mais completamente.

Ácido (3.R) - 3- [ (1,1-dimetiletoxicarbonil) amino] -4- [2-fluo-ro-4- (trifluorometil)fenil]-butanóico

Passo A. (2.R, 55)-2,5-di-hidro-3,6-dimetoxi-2-(2'-fluoro-4'-(trifluorometil)benzil)-5-isopropilpirazina A uma solução de 3,32 g (18 mmol) de (2S)-2,5-di-hi-dro-3,6-dimetoxi-2-isopropilpirazina disponível comercialmente em 100 mL de tetra-hidrofurano a -70 °C foram adicionados 12 mL (19 mmol) de uma solução 1,6 M de butilitio em hexanos. Após agitação a esta temperatura durante 20 min, foram adicionados 5 g (19,5 mmol) de brometo de 2-fluoro-4-tri-fluorometilbenzílico em 20 mL de tetra-hidrofurano e foi continuada a agitação durante 3 h antes de aquecer a reacção 31 ΡΕ1625847 até à temperatura ambiente. A reacção foi extinta com água, concentrada em vácuo, e extraída com acetato de etilo. A fase orgânica combinada foi lavada com solução aquosa saturada de cloreto de sódio, seca, e concentrada em vácuo. A purificação por cromatografia flash (sílica gel, 0-5% de acetato de etilo em hexanos) originou 5,5 g do composto intitulado. 1H RMN (500 MHz, CDC13) δ 7,33-7,25 (m, 3H) , 4,35-4,31 (m, 1H) , 3,75 (s, 3H) , 3,65 (s, 3H), 3,60 (t, 1H, J=3,4 Hz), 3,33 (dd, 1H, J=4,6, 13,5 Hz), 3,03 (dd, 1H, J=7, 13,5 Hz), 2,25-2,15 (m, 1 H) , 1,0 (d, 3H, J=7 Hz), 0,66 (d, 3H, J=7 Hz).

Passo B. Éster metílico de (Η)-Aí-(1,1-dimetiletoxicarbonil) -2-fluoro-4-trifluorometil)fenil-alanina A uma solução de 5, 5 g (15 mmol) de (2R, 55) 2,5-di-hi-dro-3,6-dimetoxi-2-(2'-fluoro-4'-trifluorometil)benzil)-5-i sopropilpirazina em 50 mL de uma mistura de acetonitri-lo:diclorometano (10:1) foram adicionados 80 mL de ácido trifluoroacético aquoso 1 N. A reacção foi agitada durante 6 h e os solventes orgânicos foram removidos em vácuo. Foi adicionado carbonato de sódio até a solução ser básica (pH >8), e seguidamente a reacção foi diluída com 100 mL de tetra-hidrofurano e foram adicionados 10 g (46 mmol) de dicarbonato di-terc-butílico. A pasta resultante foi agitada durante 16 h, concentrada em vácuo, e extraída com acetato de etilo. A fase orgânica combinada foi lavada com solução aquosa saturada de cloreto de sódio, seca e concentrada em vácuo. A purificação por cromatografia flash (sílica gel, acetato de etilo 32 ΡΕ1625847 a 20% em hexanos) originou 5,1 g do composto intitulado. 1H RMN (500MHz, CDC13) 87,38-7,28 (m, 3H) , 5,10 (dlargo, 1H), 4,65-3,98 (m, 1H), 3,76 (s, 3H), 3,32-3,25 (m, 1H), 3,13-3,05 (m, 1H), 1,40 (s, 9H).

Passo C. (R)-N-(1,1-dimetiletoxicarbonil)-2-fluoro-4- tri-fluoro metil)fenilalanina

Uma solução de 5,1 g (14 mmol) de éster metilico de (R, S)-N-(1,1-dimetiletoicarbonil)-2-fluoro-4-trifluorometil )fenilalanina em 350 mL de uma mistura de tetra-hidrofurano: metanol: hidróxido delítiolN (3:1:1) foi agitada a 50 °C durante 4 h. A reacção foi arrefecida, acidificada com ácido clorídrico a 5 % e extraída comacetato de etilo. As fases orgânicas combinadas foram lavadas com solução aquosa saturada de cloreto de sódio, secas sobre sulfato de magnésio e concentradas em vácuo para originar 4,8 g com composto intitulado. 1E RMN (500 MHz, CD3OD) δ 7,45-7,38 (m, 3H) , 4, 44-4, 40 (m, 1H) , 3,38-3,33 (m, H) , 2,98 (dd, 1 H, J=9,6, 13,5 Hz), 1,44 (s, 9H) .

Passo D. Ácido (3R)-3-[(1,1-dimetiletoxicarbonil)amino]-4-[2-fluoro-4-(trifluorometil)-fenil]butanóico A uma solução de 3,4 g (9,7 mmol) do produto do Passo C em 60 mL de tetra-hidrofurano a 0 °C foram adicionados sequencialmente 2,3 mL (13 mmol) de diisopropiletilamina e 1,7 mL (13 mmol) de cloroformato de isobutilo e a reacção foi agitada a esta temperatura durante 30 min. Foi seguidamente adicionada 33 ΡΕ1625847 uma solução etérea arrefecida de diazometano até a cor amarela persistir e a agitação foi continuada durante 16 h adicionais. 0 excesso de diazometano extinto pela adição gota a gota de ácido acético, e a reacção foi diluída com acetato de etilo e lavada sequencialmente com ácido clorídrico a 5 %, solução aquosa saturada de bicarbonato de sódio e solução aquosa saturada de cloreto de sódio, seca sobre sulfato de magnésio e concentrada em vácuo. A purificação por cromatografia flash (sílica gel, hexano:acetato de etilo 9:1) originou 0,5 g de diazocetona. A uma solução de 0,5 g (1,33 mmol) de diazocetona dissolvida em 100 mL de metanol a 0 °C foram adicionados sequencialmente 0,7 mL (4 mmol) de diisopropiletilamina e 32 mg (0,13mmol) debenzoato de prata. A reacção foi agitada durante 2 h antes da diluição com acetato de etilo e lavagem sequencialmente com ácido clorídrico 2 N, bicarbonato de sódio aquoso saturado, e solução aquosa saturada de cloreto de sódio. A fase orgânica foi seca sobre sulfato de magnésio, concentrada em vácuo e dissolvida em 50 mL de uma mistura de tetra-hidrofurano : metanol: hidróxido de lítio aquoso 1 N (3:1:1) e agitada a 50 °C durante 3 h. A reacção foi arrefecida, acidificada comácido clorídrico diluído a 5 % e extraída comacetato de etilo . As fases orgânicas combinadas foram lavadas com solução aquosa saturada de cloreto de sódio, secas sobre sulfato de magnésio e concentradas em vácuo para originar 410 mg do composto intitulado como um sólido espumoso branco. RMN (500 MHz, CD3OD) δ 7,47-7,33 (m, 3H), 4,88 (s largo, 1H) , 4,26-3, 98 (m, 1H) , 3,06-3,01 (m, 1H) , 2,83-2,77 (m, 1H), 2,58-2,50 (m, 2H) , 1,29 (s, 9H) . 34 ΡΕ1625847 INTERMEDIÁRIO 3

Ácido_(3.R) -3- [ (1,1-dimetiletoxicarbonil) amino] -4- (2,4,5- trifluorofenil)butanóico

Passo A. (2S, 5R)-2,5-di-hidro:3,6-dimetoxi-2-isopropil-5-(2',4',5'trifluorobenzil)-pirazina 0 composto intitulado (3,81g) foi preparado a partir de 3,42 g (18,5 mmol) de (2S)-2,5-di-hidro-3,6-dimeto-xi-2-iso-propilpirazina utilizando o procedimento descrito para o Intermediário 2, Passo A. 1E RMN (500 MHz, CDC13) δ 7,01 (m, 1H) , 6,85 (m, 1H) , 4,22 (m, 1H) , 3,78 (m, 3H) , 3,64 (m, 3H) , 3,61 (m, 1H), 3,20 (m, 1H), 2,98 (m, 1H), 2,20 (m, 1H), 0,99 (d, 3H, J=8 Hz), 0,62 (d, 3H, J=8 Hz).

Passo B. Éster metílico de (R)-N-(1,1-dimetiletoxi carbo-nil)-2,4,5-trifluorofenilalanina A uma solução de 3,81 g (11,6 mmol) de (2 S, 5R)-2,5-di-hidro-3,6-dimetoxi-2-isopropil-5-(2',4',5'triflu oro-benzil)pirazina em 20 mL de acetonitrilo foram adicionados 20 mL de ácido clorídrico 2 N. A reacção foi agitada durante 35 ΡΕ1625847 72 h e concentrada em vácuo. 0 resíduo foi dissolvido em 30 mL de diclorometano e 10 mL (72 mmol) de trietilamina e foram adicionados 9,68 g (44,8 mmol) de di-terc-butildicarbonato. A reacção foi agitada durante 16 h, diluída com acetato de etilo e lavada sequencialmente com ácido clorídrico 1N e solução aquosa saturada de cloreto de sódio. A fase orgânica foi seca sobre sulfato de sódio, concentrada em vácuo e purificada por cromatografia flash (sílica gel, 9 :1 hexanos:acetato de etilo) para originar 2,41 g do composto intitulado. 1H RMN (500 MHz, CDC13) 5 6,99 (m, 1H), 6,94 (m, 1H) , 5,08 (m, 1H) , 4,58 (m, 1H) , 3,78 (m, 3H), 3,19 (m, 1H), 3,01 (m, 1H), 1,41 (s, 9H).

Passo C. (R)-N-(1,1-dimetiletoxicarbonil)-2,4,5-trifluoro fe- nilalanina O composto intitulado (2,01 g) foi preparado a partir de 2,41 g (7,5 mol) de éster metílico de (R) -N- (1,1-dimetiletoxicarbonil) -2,4,5-trifluorofenilalanina utilizando o procedimento descrito para o Intermediário 2, Passo C. MS (M + 1)-BOC 220,9.

Passo D. Ácido (3R)-3-[(1,1-dimetiletoxicarbonil)amino]-4-(2,4,5-trifluorofenil)-butanóico A uma solução de 0,37 g (1,16 mmol) de (R)-N-( 1,1-dimetiletoxicarbonil)-2, 4, 5-trifluorofenilalanina em 10 mL de éter dietílico a -20 °C foram adicionados sequencialmente 0,193 mL (1,3 mmol) de trietilamina e 0,18 mL (1,3 mmol) de cloroformato de isobutilo, e a reacção foi agitada a esta temperatura durante 36 ΡΕ1625847 15 min. Uma solução etérea arrefecida de diazometano foi seguidamente adicionada até a cor amarela persistir e a agitação foi continuada durante 1 h adicional. 0 excesso de diazometano foi extinto pela adição gota a gota de ácido acético, e a reacção foi diluida com acetato de etilo e lavada sequencialmente com solução aquosa saturada de bicarbonato de sódio e solução aquosa saturada de cloreto de sódio, seca sobre sulfato de magnésio e concentrada em vácuo. A purificação por cromatografia flash (sílica gel, 3:1 hexano:acetato de etilo) originou 0,36 g de diazocetona. A uma solução de 0,35 g (1,15 mmol) de diazocetona dissolvida em 12 mL de 1, 4-dioxano: água (5:1) foram adicionados 26 mg (0,113 mmol) de benzoato de prata. A solução resultante foi su j eita a ultra-sons durante 2 h antes de diluição com acetato de etilo e lavagem sequentemente comácido clorídrico 1 Ne solução aquosa saturada de cloreto de sódio, secagem sobre sulfato de magnésio e concentração em vácuo. A purificação por cromatografia flash (sílica gel, diclorometano:metanol:ácido acético 97:2 :1) originou 401 mg do composto intitulado. 1H RMN (500 MHz, CDCI3) δ 7,06 (m, 1 H) , 6,95 (m, 1H) , 5,06 (s largo, 1H) , 4,18 (m, 1H) , 2,98 (m, 2H), 2,61 (m, 2H), 1,39 (s, 9H). EXEMPLO DE REFERENCIA 1

. 2HC1 37 ΡΕ1625847 7 - [ (3-R) -3-Amino-4- (3, 4-difluorofenil) butanoil] -2- (trifluoro metil)-5,6,7,8-tetra-hidroimidazo[1,2-a]pirazina, di-cloridrato

Passo A. 2-(trifluorometil)imidazo[1,2-a]pirazina A uma solução de 2-aminopirazina (5,25 g, 55,2 mmol) em etanol (120 mL) foi adicionada l-bromo-3,3,3-trifluo-roacetona (5,73 mL, 55,2 mmol) . A reacção foi agitada ao refluxo durante 20 h. Após evaporação do solvente, o residuo foi dividido entre acetato de etilo e solução aquosa saturada de bicarbonato de sódio. A fase aquosa foi extraída com acetato de etilo (3 x). A fase orgânica combinada foi lavada com solução aquosa saturada de cloreto de sódio, seca sobre sulfato de magnésio e concentrada. O resíduo foi purificado por cromatografia flash (sílica gel, 1:1 acetato de etilorhexano, seguidamente acetato de etilo a 100 %) para originar 2,35 g do composto intitulado como um sólido. XH RMN (500 MHz, CDC13) δ 8,02 (m, 2H), 8,13 (m, 1H), 9,22 (s, 1H). ESI-MS 188 (M+l).

Passo B. 2- (Trifluorometil)-5,6,7,8-tetra-hidroimidazo[1,2-a] pirazina A uma solução de 2-(trifluorometil)imidazo [1,2-a]-pirazina (2,0 g, 10,46 mmol, do Passo A) em metanol (100 mL) foi adicionado paládio a 10 % em carbono (400 mg). A mistura foi agitada sob hidrogénio atmosférico à temperatura ambiente durante 14 h. A mistura foi filtrada através de Celite e lavada com metanol (3 X) . O filtrado foi concentrado e purificado por 38 ΡΕ1625847 cromatografia flash (sílica gel, metanol a 10 % em acetato de etilo, seguidamente metanol a 15 % em clorofórmio com hidróxido de amónio aquoso a 1 %) para originar 1,33 g do composto intitulado como um sólido. 1H RMN (500 MHz, CDCI3) δ 1,93 (s largo, 1H) , 3,26 (t, 2H, J=5,5 Hz), 3,99 (t, 2H, J=5,5 Hz), 4,10 (s, 1H), 7,16 (s, 1H). ESI-MS 192 (M+l).

Passo C. 7 - [ (3-R) - 3- [ (1,1-Dimetiletoxicarbonil) amino] -4-(3,4-difluorofenil)butanoil]-2-(trifluorometil)-5,6,7,8-tetra-hi droimidazo[1,2-a]pirazina A uma solução de 2-(trifluorometil)-5,6,7,8- te-tra-hidroimidazo[1,2-a]pirazina (64,3 mg, 0,34 mmol, do Passo B) e ácido (3R)-3-[(1,1-dimetiletoxicarbonil)amino]-4-(3,4--difluorofenil)butanóico (105,9mg, 0,34mmol) emdiclorometano (5 mL) foi adicionado HOBT (54,5 mg, 0, 42 mmol) a 0 °C. A reacção foi agitada a 0 °C durante 10 min, seguidamente foi adicionado EDC (96, 6 mg, 0,50 mmol) . Após remoção do banho de gelo, a reacção foi deixada a agitar à temperatura ambiente durante 14 h. Amistura foi concentrada e purificada por HPLC (Gilson; coluna C18 YMC-Pack Pro, 100 x 20 mm I.D.; gradiente de solvente desde acetonitrilo a 10 %, água a 90 %, e ácido trifluoroacético 0,1 % a acetonitrilo a 90 %, água a 10 %, e ácido trifluoroacético a 0,1 %) para originar 115 mg do composto intitulado como um sólido espumoso. 1R RMN (500 MHz, CDCI3) δ 1,36 (s, 9H) , 2,62 (m, 2H), 2,86 (m, 2H) 3,34 (s largo, 1H), 3,86 (m, 1H), 4,05 (m, 4H), 4,85 (m, 1H) 5,30-5,38 (m, 1H) 6,97 (m, 3H), 7,28 (m, 1H). LC/MS 489 (M+l). 39 ΡΕ1625847

Passo D. 7-[ (3.R)-3-Amino-4-(3, 4-difluorofenil)butanoil]-2-(trifluorometil)-5,6,7,8-tetra-hidroimidazo[1,2-a]pirazina, dicloridrato A 7-[(3R)-3-[(1,1-dimetiletoxicarbonil)amino]-4-(3, 4-difluorofenil)butanoil]-2-(trifluorometil)-5,6,7,8-tetra hidroimidazo[1,2-a]pirazina (110,8 mg, 0,226 mmol, do passo C) foram adicionados 2 mL de metanol saturado com cloreto de hidrogénio. A reacção foi agitada à temperatura ambiente durante 1 h. Concentração originou 89, 5 mg do composto intitulado como um sólido espumoso. 1R RMN (500 MHz, CD3OD) δ 2,97-3,10 (m, 4H), 3,91-4,34 (m, 5H), 4,90-5,04 (m, 2H), 7,16-7,33 (m, 2H), 8,01-8,08 (m, 1H). ESI-MS 389 (M+l). EXEMPLO 7

F

7-[(3R)-3-Amino-4-(2,4,5-trifluorofenil)butanoil]-3-(triflu orometil)-5,6,7,8-tetra-hidro-l,2,4-triazolo[4,3-a]pirazina, cloridrato

Passo A. 7- [ (3-R) -3- [ (1,1-dimetiletoxicarbonil) amino] -4- (2, 4, 5-trifluorofenil)-butanoil]-3-(trifluorometil)-5, 6, 7,8-te-tra-hidro-1,2,4-triazolo[4,3-a]pirazina O composto intitulado foi preparado a partir do ácido 40 ΡΕ1625847 (3R)-3-[(1,1-dimetiletoxicarbonil)-amino]-4-(2, 4,5-trifluor ofenil)butanóico (Intermediário 3, 50,1 mg, 0,15 mmol) e 3-(trifluorometil)-5,6,7,8-tetra-hidro-l, 2,4-triazolo[4,3-a Jpirazina (39,2mg, 0,20mmol) utilizandoumprocedimentoanálogo ao descrito para o Exemplo 1, Passo C. O produto bruto foi purificado por TLC preparativa (sílica gel, acetato de etilo a 100 %) para originar o composto intitulado (29 mg) como um sólido. XH RMN (500 MHz, CDCl3) δ 1,37 (s, 9H) , 2,61-3,00 (m, 4H) , 3, 92-4,30 (m, 5H) , 4,93 (s, 1H) , 4,95-5,12 (m, 1H) , 5,22-5,35 (largo, 1H) , 6, 83-6, 95 (m, 1H) , 7,02-7,12 (m, 1 H) . LC/MS (M+l-t-Bu) 452.

Passo B. 7-[(3R)-3-amino-4-(2,4,5-trifluorofenil)butanoil]--3-(trifluorometil)-5,6,7,8-tetra-hidro-l,2,4-triazolo-[4,3-a]pirazina, cloridrato 41 ΡΕ1625847 adaptações, variações, modificações, substituições, delecções, ou adições de procedimentos e protocolos. Por exemplo, as dosagens efectivas para além das dosagens particulares como enunciado aqui acima poderão ser aplicáveis como uma consequência de variações na capacidade de resposta do mamífero que está a ser tratado por qualquer uma das indicações com os compostos da invenção indicados acima. As respostas farmacológicas específicas observadas poderão variar de acordo com e dependendo dos compostos activos particulares seleccionados ou se estão presentes veículos farmacêuticos, bem como o tipo de formulação e o modo de administração empregue, e tais variações ou diferenças esperadas nos resultados estão contempladas de acordo com os objectos e as práticas da presente invenção.

Lisboa, 13 de Agosto de 2010

Claims (4)

1. ΡΕ1625847 1 REIVINDICAÇÕES 1. 0 composto: F

   ou um seu sal farmaceuticamente aceitável, para utilizar num método de tratar, controlar ou prevenir a diabetes de Tipo II ou um ou mais estados seleccionados a partir do grupo constituído por: (1) hiperglicemia, (2) fraca tolerância à glicose, (3) resistência a insulina, (4) obesidade, (5) patologias lipídicas, (6) dislipidemia, (7) hiperlipidemia, (8) hipertrigliceridemia, (9) hipercolesterotemia, (10) níveis baixos de HDL, (11) níveis elevados de LDL, (12) aterosclerose e as suas sequelas, (13) restenose vascular, (14) síndrome do intestino irritável, (15) doença inflamatória do intestino, incluindo doença de Crohn e colite ulcerativa, (16) outros estados inflamatórios, (17) pancreatite, (18) obesidade abdominal (19) doença neuro-degenerativa, (20) retinopatia, (21) nefropatia, (22) neuropatia, (23) Síndrome X, (24) hiperandrogenismo dos ovários (síndrome dos ovários poliquísticos) , e outras patologias onde a resistência à insulina é uma componente, compreendendo o referido método a administração do referido 2 ΡΕ1625847 composto e um ou mais compostos adicionais seleccionados a partir do grupo constituído por: (a) outros inibidores da dipeptidilpeptidase IV (DP-IV) ; (b) sensibilizadores de insulina seleccionados a partir do grupo constituído por (i) agonistas de PPARy, outros ligandos PPAR, agonistas duais PPARa/γ, e agonistas de PPARa, (ii) biguanidas, e (iii) inibidores da proteina tirosinafosfatase-1 B (PTP-1 B) ; (c) insulina ou miméticos da insulina; (d) sulfonilureias ou outros secretores de insulina; (e) inibidores de a-glucosidase; (f) agonistas de receptor de glucagon; (g) GLP-1, miméticos de GLP-1, e agonistas do receptor de GLP-1; (h) miméticos de GIP, GIP, e agonistas de receptor de GIP; (i) PACAP, miméticos de PACAP, e agonistas de receptor 3 de PACAP; (j) agentes redutores de colesterol seleccionados a partir do grupo constituído por (i) inibidores de HMG-CoAredutase, (ii) sequestrantes, (iii) álcool nicotinílico, ácido nicotínico ou um seu sal, (iv) agonistas de PPAR, (v) agonistas duais PPARa/γ, (vi) inibidores de absorção de colesterol, (vii) inibidores de acil-CoA:colesterol aciltransferase, e (viii) anti-oxidantes; (k) agonistas de PPARS; (l) compostos anti-obesidade; (m) inibidores do transportador de ácido biliar ileal; (n) agentes anti-inflamatórios. 3 ΡΕ1625847
2. 2. Um composto como definido na Reivindicação 1 em que o referido agonista de PPARy é pioglitazona ou rosiglitazona.
3. 3. Um composto como definido em qualquer reivindicação prévia em que a referida utilização é um método de tratar diabetes tipo II. Lisboa, 13 de Agosto de 2010 1 ΡΕ1625847 REFERÊNCIAS CITADAS NA DESCRIÇÃO Esta lista de referências citadas pelo requerente é apenas para conveniência do leitor. A mesma não faz parte do documento da patente Europeia. Ainda que tenha sido tomado o devido cuidado ao compilar as referências, podem não estar excluídos erros ou omissões e o IEP declina quaisquer responsabilidades a esse respeito. Documentos de patentes citadas na Descrição * WQ 8342926 A
4. 4 WO 005888? A » WGG3SS3SSA * WQ 0123429 A * W0872S149 > US 4258188  * US 4155452 A * US 4255574 A * WG 9740832 A * WO981SS80A * US 5838588 A * WD 0058287 A * WQ 9956-753 A * WG 9804528 A * WO §801423 A * 'mmmmA 4 WOQOSS51SA Literatura que não é de patentes cd 4 Atesl cmmy Wti, ¾ wm-nm * S0 :22:. .2735-2748··. * Ar: f 1899, ^ m. BSIõ-PS!i » AIs&ís AíasAvfii?, 1898. 2, *254-1253 * hmftt Meãdoe. 2900. <raf 3. 852-S87 * SSA 1S92, vof ^122,147-1 £3 * J c$n Sflvm.. 5889, VSl. 53, 1S33-1S4S * Pe&âíts. 2*390. 90,27-32 4 1997,'«!, 53, 1435-1503 da na Descrição * M, J. 1807; v«l i&rlS-24; * &miU!*si&8(mç®ÍBf&. 1098 vas.40 21-25 ,♦ lAroitftofcgjí Tecteíí. 1989. yd 28, 357-775 « PNAS. xm. VGA §5, 8331-« * Brosi Rmearch. 198S, v®!. 8tS;, 2.7&28S * j E.<í.k&}.. 1969 vaiSe.#0fcSÕ5........ * £i)f 1. Oto Cíws. CSr·. 7215. 38,; 333-338 4 AnS? Oral &»l. i m. y«i.S7;W-#S':'