DE69403459T2

DE69403459T2 - Peptidboronsäurederivate mit protease inhibierenden aktivität

Info

Publication number: DE69403459T2
Application number: DE69403459T
Authority: DE
Inventors: Nigel Scott Cook; Rainer Metternich; Carlo Tapparelli; Anette Wienand
Original assignee: Sandoz AG
Current assignee: Sandoz AG
Priority date: 1993-03-03
Filing date: 1994-03-01
Publication date: 1998-01-02
Anticipated expiration: 2014-03-02
Also published as: EP0688336A1; HUT72735A; TW329428B; ES2101516T3; NZ262415A; DK0688336T3; ATE153670T1; AU677297B2; DE69403459D1; AU6208094A; EP0688336B1; GR3023577T3; HU9501976D0; PL310940A1; WO1994020526A1; SG52766A1; CA2153656A1; MY131622A; JPH08507501A; KR960701085A

Description

Die Erfindung betrifft Inhibitoren von Serinproteasen, die im Blutgerinnungsprozeß beteiligt sind, wie Thrombin (Faktor IIa), Faktor Xa, Faktor VIIa, Faktor XIIa, Kallikrein, Plasmin, Prolylendopeptidase und Ig AI Protease.
Thrombin, das letzte Enzym im Gerinnungssystem, spaltet lösliches Fibrinogen zu Fibrin, das dann quervernetzt wird und ein unlösliches Gel bildet, das die Matrix für einen Thrombus bildet. Wenn ein Blutgefäß verletzt wird, ist der obige Prozeß notwenig, um die Blutung zu stoppen. Unter normalen Umständen findet man keine meßbare Menge Thrombin im Plasma. Die Erhöhung der Thrombinkonzentration kann zur Bildung von Gerinnseln führen, die zu einer thromboembolischen Erkrankung führen können, eine der verbreitetsten ernsthaften medizinischen Probleme unserer Zeit.
Thrombin trägt zur hämostatischen Kontrolle über mehrere biologische Reaktionen bei. Zusätzlich zu der primären Funktion, der Umwandlung von Fibrinogen zu Fibrin, aktiviert Thrombin den Faktor XIII, der für die Quervernetzung von Fibrin verantwortlich ist. Thrombin wirkt auch über einen positiven Rückmeldemechanismus, der die Aktivierung der Faktoren V und VIII einbezieht, von denen beider zur Bildung von Thrombin aus Prothrombin notwendig sind. Thrombin hat eine weitere wesentliche Rolle: Die Bindung an Blutplättchen initiiert die Blutplättchenfreisetzung und Aggregation, die für die primäre Hämostase verantwortlich sind.
Die Reaktionen von Thrombin werden ferner durch natürliche Inhibitoren im Plasma kontrolliert. Die wichtigsten hiervon sind Antithrombin III und Heparin. Diese zwei Verbindungen wurden isoliert und therapeutisch und prophylaktisch bei Zuständen eingesetzt, bei denen ein Ungleichgewicht im Hämostasemechanismus mit einem Risiko der Prothrombinaktivierung vorliegt.
Oral aktive synthetische Thrombininhibitoren wären als Alternativen zur parenteralen Verabreichung dieser natürlichen Inhibitoren brauchbar. Ein großer Forschungsaufwand auf diesem Gebiet führte zur Synthese von guten Thrombininhibitoren in vitro, aber es gibt bis jetzt keinen wirklich guten Kandidaten für eine orale therapeutische Verwendung. Duch die Imitierung der Aminosäuresequenzen von Fibrinogen, dem wichtigen natürlichen Substrat von Thrombin, wurden mehrere gute kurze Peptidsubstrate für Thrombin hergestellt. Diese Peptidsubstrate wurden auch derivatisiert, um Inhibitoren für das Enzym bereitzustellen. So ahmen die chromogenen Substrate D-Phe-Pro-Arg-pNA und D-Phe-Pip-Arg-pNA die der Thrombinspaltstelle vorangehende Sequenz nach. Die entsprechenden reversiblen und irreversiblen Inhibitoren, nämlich D-Phe-Pro-Arginal und D-Phe-Pro- Arg-CH&sub2;Cl zeigen eine Hemmung in vitro im Bereich von 10&supmin;&sup8; M. Chlormethylketone sind im allgemeinen unzureichend spezifisch, um für eine therapeutische Verwendung ideal zu sein, und das oben dargestellte Peptidaldehyd weist einen ziemlich niedrigen LD&sub5;&sub0; Wert auf.
Der Faktor Xa ist das Koagulationsenzym, das für die Erzeugung von Thrombin durch limitierte Proteolyse des Zymogens Prothrombin verantwortlich ist. Auf einer Gewicht pro Gewicht Grundlage ist der Faktor Xa in vitro mindestens 10 fach thrombogener als Thrombin. Dies kommt dadurch zustande, daß der Faktor Xa im amplifizierenden Kaskadensystem eine Stufe über Thrombin ist, so daß ein Molekül Faktor Xa viele Moleküle Thrombin aus dessen Vorläufer erzeugen kann. Die Wirksamkeit kann auch aus der relativ langsamen Entfernung von Faktor Xa aus dem Körper entstehen. Thrombin wird, anderes als der Faktor Xa, schnell aus der Blutzirkulation durch Stellen in der Gefäßwand mit hoher Affinität entfernt.
Die Bindung des Gewebsfaktors an Faktor VII stellt ein Schlüsselereignis bei der Auslösung der Blutgerinnung nach einer Gewebsverletzung dar. Erstens katalysiert dieser die Aktivierung von Faktor IX und Faktor X und zweitens wandeln Spuren von Faktor Xa und Faktor IXa (und möglicherweise andere Enzyme, die von Zellen nach einer Gewebsverletzung freigesetzt werden) die Zymogene der Faktor VII/Gewebsfaktorkomplexe in hoch aktive Faktor VIIa-Gewebsfaktorkomplexe um.
Die zentrale Stellung des Faktors Xa bei der Verbindung der intrinsischen und extrinsischen Wege wie auch die entscheidende Rolle des Faktors VIIa bei der Auslösung sowohl der intrinsischen als auch der extrinsischen Koagulationswege, machen die Faktoren Xa und VIIa zu geeigneten Zielen zur Modulierung des Hämostaseprozesses.
Kallikrein wird aus Präkallikrein durch die Einwirkung von Faktor XII in Gegenwart einer negativ geladenen Oberfläche gebildet. Kallikrein kann wiederum den Faktor XII in den Faktor XIIa spalten und dabei ein reziprokes Aktivierungssystem bilden. Der Faktor XIIa ist das erste Enzym des intrinsischen Teils des Gerinnungssystems. Die Bedeutung des Kontaktsystems ist möglicherweise als Oberflächen-vermitteltes Abwehrsystem zu sehen, und eine Aktivierung des Systems in großem Umfang wird normalerweise während eines Schocks oder einer disseminierten intravaskulären Koagulation (DIC) beobachtet. Die Rolle des Kallikreins ist an dieser Stelle die Spaltung von hochmolekularem Kininogen unter Freisetzung des Vasodilatators Bradykinin. Bradykinin verursacht ebenfälls eine erhöhte vaskuläre Permeabilität, Schmerzen und eine Migration der neutrophilen Leukozyten. Inhibitoren der Kininbildung sind bei bestimmten Entzündungstypen hilfreich, einschließlich Arthritis und Pancreatitis, und können auch bei der Behandlung von Asthma brauchbar sein. Die einzige Substanz, die als Kallikreininhibitor eine klinische Bedeutung erlangt hat, ist Aprotinin (Trasylol). Aprotinin ist ein Polypeptid mit einem Molekulargewicht von 6 500 und bildet einen stabilen Komplex mit Proteasen mit einer Bindungskonstante von 10&supmin;¹&sup0;-10&supmin;¹³ M.
Die Fibrinolyse ist der Prozeß der enzymatischen Auflösung von Fibrinogen und Fibringerinnseln. Das Plasma enthält ein Protein, nämlich Plasminogen, das unter dem Einfluß von verschiedenen Aktivatoren zu Plasmin umgewandelt wird, einem proteolytischen Enzym, dessen Aktivität der von Trypsin ähnelt. Das Plasmin baut Fibrinogen und Fibrin zu Fibrin/Fibrinogen-Abbauprodukten ab.
Unter normalen Bedingungen ist das Fibrinolysesystem im Gleichgewicht mit dem Koagulationssystem. Kleine Thromben, die im Blutstrom gebildet werden, werden enzymatisch aufgelöst und die Zirkulation durch die Gefäße wird durch die Aktivierung des fibrinolytischen Systems im Körper wiederhergestellt. Falls die fibrinolytische Aktivität zu hoch ist, kann sie eine Blutung verursachen oder verlängern. Die Aktivität kann durch natürliche Inhibitoren im Blut gehemmt werden.
Die Prolylendopeptidase spaltet Peptidbindungen auf der Carboxylseite von Prolinresten innerhalb einer Peptidkette. Sie ist eine Serinprotease, die leicht viele Neuropeptide einschließlich der Substanz P, Neurotensin, Thyrotropin-freisetzendes Hormon und luteinisierendes Hormon-freisetzendes Hormon abbaut und die mit der Fähigkeit der Zellen zur Bildung von Interleukin 2 (IL-2) in Zusammenhang gebracht wurde. Das Enyzm wird durch Benzyloxycarbonyl-prolyl-prolinal mit einem Ki von 14 nM gehemmt. Obwohl wenig über die physiologische Rolle der Prolylendopeptidase bekannt ist, kann sie eine wichtige Rolle bei der Regulierung der biologischen Aktivitäten von verschiedenen Neuropeptiden spielen.
Die durch die IgA Proteinase katalysierte Spaltung von IgA, der überwiegenden Antikörperform, die die erste Schutzlinie gegen eine Infektion darstellt, trennt die Fc Region von den antigenbindenden Fab Regionen des Molekuis. Eine solche Spaltung dürfte die antimikrobielle Aktivität stören oder aufheben. Alle bisher identifizierten IgA Proteinasen spalten nach einem Prolinrest innerhalb der Scharnierregion von humanem IgA. Peptidprolyl-Borsäuren hemmen die IgAI Proteinasen von Neisseria gonorrhoea und Haemophilus influenzae, was zeigt, daß diese Enzyme zur Serinproteasefamilie der proteolytischen Enzyme gehören.
Die vielen Rollen, die Thrombin in einer Vielzahl an physiologischen Prozessen spielt, welche mit pathologischen Störungen, wie Krebs, Entzündung und neuronaler Aktivität in Zusammenhang gebracht wurden, legen eine potentielle Verwendung von Thrombinihibitoren bei mehreren Indikationen nahe, die nicht strikt mit dem kardiovaskulären System zusammenhängen.
Es wurde gezeigt, daß viele Tumorzellen eine prokoagulierende Aktivität zeigen, die mit der Bildung von Thrombin einhergeht. Als Konsequenz treten eine lokale Fibrinablagerung und Koagulation auf, die für das Tumorwachstum wichtig sein dürften. Zusätzlich kann Thrombin aufgrund der Wirkungen auf Endothelzellen die Extravasation von Tumorzellen während der Metastase erleichtern. Daher können Thrombininhibitoren nicht nur bei der Behandlung von bestimmten Krebsarten hilfreich sein, sondern auch bei der Verringerung der Hyperkoagulabilität, die häufig bei Patienten während der Therapie mit chemotherapeutischen Mitteln beobachtet wird.
Die Thrombinaktivierung von Endothelzellen induziert mehrere proinflammatorische Veränderungen, wie die Synthese und Freisetzung von Interleukin 1, Prostaglandinen und dem Blutplättchenaktivierungsfaktor. Zusätzlich induziert Thrombin die Exposition von CD62 (alternativ bekannt als GMP-140) und CD63, zwei Adhäsionsmolekulen, die für die Adhäsion von Leukozyten an die Endotheloberfläche verantwortlich sind. Thrombin erhöht ebenfalls die vaskuläre Permeabilität von Proteinen unter Beteiligung Neutrophiler und spaltet das Interleukin-8-Vorläuferprotein, ein Peptid, das in Atemwegsstörungen, rheumatoider Arthritis und Colitis ulcerosa beteiligt sein dürfte.
Die Beteiligung von Thrombin bei allen diesen proinflammatorischen Prozessen machen Thrombininhibitoren zu einem potentiellen Ziel zur Verwendung bei der therapeutischen Behandlung der mit einer Entzündung zusammenhängenden pathologischen Störungen.
Die Aktivität der Protease Nexin-1, einem Modulator des Nervenwachstums und ein spezifischer natürlicher Thrombinantagonist, wird bei Patienten mit Alzheimerscher Krankheit deutlich und spezifisch verringert. Dies zusammen mit der Beobachtung, daß eine Thrombin-ähnliche Aktivität in den Gehirnen von Alzheimer- Patienten erhöht ist, legt nahe, daß Thrombininbitoren ein Potential zur Begrenzung oder zur Aufhebung der neuronalen pathologischen Veränderungen haben können, die mit der Hyperaktivität von Thrombin oder verwandten Serinproteasen zusammenhängt.
Borsäuren wurden als Inhibitoren von verschiedenen Serinesterasen und Serinproteasen untersucht. Das erste Borsäure-enthaltende Aminosäureanalogon, das als Proteaseinhibitor verwendet wurde, war das Borsäureanalogon von N-Acetyl-L-phenylalanin, das als Hemmstoff von Chymotrypsin und Subtilisin verwendet wurde. Peptidborsäuren wurden als Inhibitoren von Chymotrypsin, Subtilisin und Elastasen verwendet.
Die Wechselwirkung von Borsäuren mit Proteasen in biologischen Systemem ist bekannt und mehrere einfache Borsäuren sind ausreichend untoxisch für eine Verwendung im Menschen. Peptidborsäureinhibitoren der Elastase wurden kürzlich in Tierversuchen in Zusmmenhang mit einem Emphysem verwendet. Anders als die Peptidchlormethylketone wurde bei biologisch wirksamen Dosismengen von keiner Toxizität berichtet.
Die EP-A 0 293 381 (Dupont) beschreibt die Herstellung von Peptiden, die C-terminale Borsäurederivate von Lysin, Ornithin und Arginin enthalten und ihre Verwendung als Inhibitoren von Trypsin-ähnlichen Serinproteasen. Die anderen Aminosäuren der Peptide sind alle außer den D- und L-Formen der 20 natürlich vorkommenden Aminosäuren.
Es wurde festgestellt, daß Verbindungen, die bessere Eigenschaften als Inhibitoren von Trypsin-ähnlichen Serinproteasen aufweisen, erhalten werden, wenn das Peptid zumindest eine unnatürliche α-Aminosäure mit einer hydrophoben Seitenkette aufweist. Verbindungen dieses letzteren Typs sind in EP-A 0 471 651 als Verbindungen der Formel I beschrieben
worin W für Wasserstoff oder eine N-Schutzgruppe steht,
Y für eine Sequenz aus n Aminosäuren steht, die so ausgewählt sind, daß das n+1 Aminosäurepeptid Y- Lys oder Y-Arg eine Affinität für das aktive Zentrum einer Trypsin-ähnlichen Protease aufweist, worin n für eine ganze Zahl von 1 bis 10 steht und worin mindestens eine Aminosäure eine unnatürliche Aminosäure mit einer hydrophoben Seitenkette ist,
Q&sub1; und Q&sub2; gleich oder verschieden sind und aus -OH, -COR&sub1;, -CONR&sub1;R&sub2;, -NR&sub1;R&sub2; oder -OR&sub3; ausgewählt sind oder Q&sub1; und Q&sub2; zusammengenommen einen Diolrest bilden,
R&sub1;, R&sub2; und R&sub3;, die gleich oder verschieden sein können, stehen für C&sub1;&submin;&sub1;&sub0;Alkyl, C&sub1;&submin;&sub1;&sub0;Aryl, C&sub1;&submin;&sub1;&sub0;Aralkyl oder Phenyl, das mit bis zu drei Gruppen substituiert ist, die ausgewählt sind aus C&sub1;&submin;&sub4;Alkyl, Halogen und C&sub1;&submin;&sub4;Alkoxy,
R&sub4; für Wasserstoff oder C&sub1;&submin;&sub1;&sub0;Alkyl steht,
R&sub5; für eine Gruppe -A-X steht,
worin A steht für -(CH&sub2;)z-, worin z für 2, 3, 4 oder 5 steht, -CH(CH&sub3;)-(CH&sub2;)&sub2;-, -CH&sub2;-CH(CH&sub3;)CH&sub2;-, -(CH&sub2;)&sub2;- CH(CH&sub3;)-, -CH&sub2;)&sub2;-C(CH&sub3;)&sub2;-, -CH(CH&sub3;)-(CH&sub2;)&sub3;-, -CH&sub2;-CH(CH&sub3;)-(CH&sub2;)&sub2;-, -CH&sub2;-CH&sub2;-CH(CH&sub3;)CH&sub2;-, -(CH&sub2;)&sub3;- CH(CH&sub3;)-, -(CH&sub2;)&sub3;-C(CH&sub3;)&sub2;-, C&sub6;&submin;&sub1;&sub0;Aryl, C&sub6;&submin;&sub1;&sub0;Aralkyl,
und worin X für -NH&sub2;, -NH-C-(NH)-NH&sub2;, -S-C(NH)-NH&sub2;, -N&sub3;, C&sub1;&submin;&sub4;Alkoxy, C&sub1;&submin;&sub4;Alkylthio oder -Si(CH&sub3;)&sub3; steht oder R&sub4; und R&sub5; zusammen eine Trimethylengruppe bilden
und das mit * markierte asymmetrische Kohlenstoffatom die D- oder L-Konfiguration aufweisen kann oder für jedes Gemisch aus diesen steht.
Eine unnatürliche Aminosäure wird als eine andere Aminosäure als D- oder L-Ala, Arg, Asp, Cys, Gln, Glu, Gly, His, Ile, Leu, Lys, Met, Phe, Pro, Ser, Thr, Trp, Tyr oder Val definiert.
Es wurde nun festgestellt, daß weitere Verbesserungen an diesem letzteren Verbindungstyp durch eine geeignete Wahl des Rests R&sub5; vorgenommen werden können.
Demnach liefert die vorliegende Erfindung Verbindungen der obigen Formel I und Salze hiervon, worin W, R&sub4;, Q&sub1; und Q&sub2; wie in EP-A 0471 651 definiert sind,
Y für eine Sequenz aus 2 Aminosäuren steht, von denen die N-terminale Aminosäure eine unnatürliche Aminosäure mit einer hydrophoben Seitenkette ist und die andere Aminosäure L-Prolin ist, die unnatürliche Aminosäure so gewählt ist, daß das Aminosäurepeptid Y-Lys oder Y-Arg eine Affinität für das aktive Zentrum einer Trypsin-ahniichen Protease aufweist, und
R&sub5; für eine Gruppe -A-X steht,
worin A steht für -(CH&sub2;)z-, worin z für 2, 3, 4 oder 5 steht, -CH(CH&sub3;)CH&sub2;-, -CH&sub2;-CH(CH&sub3;)CH&sub2;-, -(CH&sub2;)&sub2;- CH(CH&sub3;), -(CH&sub2;)&sub2;-C(CH&sub3;)&sub2;-, -CH(CH&sub3;)(CH&sub2;)&sub3;-, -CH&sub2;-CH(CH&sub3;)-(CH&sub2;)&sub2;-, -CH&sub2;-CH&sub2;-CH(CH&sub3;)CH&sub2;-, -(CH&sub2;)&sub2;C(CH&sub3;)CH&sub2;-, -(CH&sub2;)&sub3;-CH(CH&sub3;)-, -(CH&sub2;)&sub3;-C(CH&sub3;)&sub2;-, -(CH&sub2;)&sub3;CH(CH&sub3;)CH&sub2;-, C&sub1;&submin;&sub1;&sub0;Aryl, C&sub1;&submin;&sub1;&sub0;Aralkyl, und worin X für OH, SH, NR&sub6;R&sub7; oder Phenyl steht,
worin R&sub6; für H oder C&sub1;&submin;&sub1;&sub0;Alkyl steht und R&sub7; für C&sub1;&submin;&sub1;&sub0;Alkyl, -CO-R&sub8;, CS-R&sub8; oder SO&sub2;-R&sub8; steht,
worin R, steht für H oder C&sub1;&submin;&sub1;&sub0;Alkyl, C&sub1;&submin;&sub1;&sub0;Alkoxy, C&sub6;&submin;&sub1;&sub0;Aryl, C&sub6;&submin;&sub1;&sub0;Aralkyl, das wahlweise mit bis zu drei Gruppen substituiert ist, die ausgewählt sind aus Halogen, OH, C&sub1;&submin;&sub4;Alkoxy, C(NH)R&sub9;, NR&sub1;&sub0;R&sub1;&sub1; und C(O)OR&sub6; (worin R&sub6; wie oben definiert ist)
worin R&sub9; für C&sub1;&submin;&sub3;Alkyl oder N(CH&sub3;)&sub2; steht und worin R&sub1;&sub0; und R&sub1;&sub1; (die gleich oder verschieden sein können) für H oder C&sub1;&submin;&sub1;&sub0;Alkyl stehen,
und das mit * markierte asymmetrische Kohlenstoffatom die D- oder L-Konfiguration aufweist und die Verbindungen jedes Gemisch aus diesen enthalten können.
Unnatürliche Aminosäure hat dieselbe Bedeutung wie in EP-A 0 471 651.
Vorzugsweise hat die N-Schutzgruppe W die Formel H(CH&sub2;CH&sub2;O)p-, worin pfür 3-30 steht, R&sub1;&sub2;CO-, R&sub1;&sub3;OCO- oder R&sub1;&sub4;SO&sub2;-,
worin R&sub1;&sub2; für C&sub1;&submin;&sub6;Alkyl oder H(CH&sub2;-O-CH&sub2;)p steht, worin p wie oben definiert ist, R&sub1;&sub3; für C&sub1;&submin;&sub6;alkyl, Phenyl, Benzyl oder Naphthyl steht und R&sub1;&sub4; für Phenyl, Naphthyl oder C&sub1;&submin;&sub4;Alkylphenyl steht, wovon R&sub1;&sub3;OCO- besonders bevorzugt ist. Die am meisten bevorzugten Schutzgruppen sind die der Formel R&sub1;&sub3;'OCO-, worin R&sub1;&sub3;' für tert-Butyl (als BOC bezeichnet) steht und worin R&sub1;&sub3;' für Benzyl steht (mit Z bezeichnet).
Vorzugsweise steht R&sub5; für R&sub5;', worin R&sub5;' für -(CH&sub2;)z-X" steht, worin X" für OH, Phenyl, NH-CO-R&sub8;', NH- CS-R&sub8;', NHSO&sub2;R&sub8;' oder NR&sub1;&sub0;'R&sub1;&sub1;' steht,
worin R&sub8; für H oder C&sub1;&submin;&sub3;Alkyl oder C&sub1;&submin;&sub3;Alkoxy steht und worin R&sub1;&sub0;' und R&sub1;&sub1;', die gleich oder verschieden sein können, für H oder C&sub1;&submin;&sub3;Alkyl stehen,
wahlweise substituiert mit bis zu 3 Halogenatomen und z' für 2, 3 oder 4 steht.
Bevorzugter steht R&sub5; für R&sub5;", worin R&sub5;" für -(CH&sub2;)z-X" steht, worin X" für OH, C&sub6;H&sub5;, C&sub6;H&sub4;Cl, C&sub6;H&sub4;N(Me)&sub2;, NH-CO-CH&sub3;, NH-CHO, NH-CS-NHCH&sub3;, NH-CO-CH(CH&sub3;)&sub2;, NH-CO-CH&sub2;-CH&sub3;, NH-CHS, NH-CO- CH&sub2;Cl, NH-CO-OCH&sub3; steht und z' wie oben definiert ist.
Bevorzugte Verbindungen sind die der Formel Ia
worin W, Y, R&sub4; und R&sub5; wie oben definiert sind und R&sub1;&sub3; und R&sub1;&sub6; für den Rest einer Dihydroxyverbindung stehen. Brauchbare Beispiele für Dihydroxyverbindungen sind 2,3-Butandiol, Catechol, 2,3-Dimethyl-2',3'- Butandiol, Cyclohexandiol, Ethylenglycol, 1,2-Hexandiol, 2,3-Hexandiol, Diethanolamin oder aliphatische oder aromatische Verbindungen, die Hydroxygruppen aufweisen, welche an benachbarten Kohlenstoffatomen substituiert sind oder an Kohlenstoffatomen, die durch andere Kohlenstoffätome substituiert sind.
Besonders bevorzugt sind die Verbindungen, worin Q&sub1; und Q&sub2; zusammengenommen für die Gruppe OPin der Formel a) oder die Gruppe der Formel b) stehen
worin L für eine C&sub1;&submin;&sub4;Alkylgruppe steht, inshesondere Methyl, i-Pr, n-Pr oder n-Bu.
Die unnatürliche Aminosäure kann eine alkylierte natürliche Aminosäure sein, wie O-Alkyl- oder S- Alkyl-Cystein. Jedoch sind bevorzugte unnatürliche Aminosäuren die der Formel II
worin R&sub1;&sub7; für eine hydrophobe Gruppe steht, die aus einer alicyclischen Gruppe mit mindestens zwei Ringen ohne polare Substituenten besteht und entweder direkt oder über eine Methylengruppe an die Aminosäure gebunden ist, wobei die Methylengruppe an eine aromatische Gruppe, die wahlweise mit einer polaren Gruppe substituiert ist, oder an eine tert-Butyl oder Trimethylsilylgruppe gebunden ist. Vorzugsweise steht R&sub1;&sub7; für R&sub1;&sub7;', worin R&sub1;&sub7; für eine Gruppe der folgenden Formeln (c), (d), (e), (f), (g), (h) oder (i) steht.
Die unnatürlichen Aminosäuren der Formel II können in D- und L-Form oder in jedem Gemisch aus diesen vorliegen, vorzugsweise aber in D-Form.
Bevorzugtere Verbindungen haben die Formel I'
worin W, R&sub4;, R&sub5;, R&sub1;&sub7;, Q&sub1; und Q&sub2; wie oben definiert sind.
Besonders bevorzugte Verbindungen sind die der Formel I"
worin W, R&sub4;, R&sub5;' und R&sub1;&sub7; wie oben definiert sind.
Die am meisten bevorzugten Verbindungen sind die Verbindung der Formel III
die Verbindung der Formel IV
die Verbindung der Formel V
und die Verbindung der Formel VI
Ein Peptid sollte eine Affinität für das aktive Zentrum der Trypsin-ähnlichen Proteasen aufweisen, falls die Dissoziationskonstante des Peptid-Protease-Komplexes einen Wert von 10&supmin;&sup5; M oder weniger aufweist.
Die Verbindungen der Formel I, worin X für NHCHO oder NHCOAlkyl steht, können durch Umsetzung einer Verbindung der Formel I, worin X für -NH&sub2; steht, mit einer aktiven Form der entsprechenden Säure hergestellt werden.
Die Verbindungen der Formel I, worin X für NHCO Alkoxy steht, können durch Behandlung einer Verbindung der Formel I, worin X für -NH&sub2; steht, mit N,O-Bis(trimethylsilyl)acetamid gefolgt von der Zugabe einer aktiven Form des entsprechenden Esters hergestellt werden.
Die Verbindungen der Formel I, worin X für NHC(S)NHAlkyl steht, können durch Umsetzung einer Verbindung der Formel I, worin X für -NH&sub2; steht, mit dem entsprechenden Alkylisothiocyanat in einem organischen Lösemittel hergestellt werden.
Verbindungen der Formel I, worin X für -NH&sub2; steht, können wiederum durch Hydrierung einer Verbindung der Formel I hergestellt werden, worin X für -N&sub3; steht. Die Hydrierung kann unter Standardbedingungen mittels beispielsweise einem Pd/C Katalysator durchgeführt werden.
Verbindungen der Formel I, worin X für -N&sub3; steht, können durch die Umsetzung einer Verbindung der Formel VI
worin W, Y, Q&sub1; und Q&sub2; wie oben definiert sind und R&sub1;&sub8; für -A-Br steht, worin A wie oben definiert ist, mit Natriumazid in einem polaren aprotischen Lösemittel hergestellt werden, wie Dimethylsulfoxid.
Die Verbindungen der Formel I, worin X für -NHCHS steht, können durch Umsetzung der Verbindung der Formel I, worin X für NHCHO steht, mit einem Laweson-Reagenz in einem organischen Lösemittel hergestellt werden, wie Toluol.
Die Verbindungen der Formel I, worin X für ein wahlweise substituiertes Phenyl steht, können hergestellt werden durch die Umsetzung einer Verbindung der Formel VII
worin Q&sub1; und Q&sub2; wie oben definiert sind und R&sub1;&sub9; für -A-Phenyl (wahlweise substituiert) steht, worin A wie oben definiert ist, mit LiN[Si(CH&sub3;)&sub3;]&sub2; gefolgt von einer Hydrolyse mit einem Säureüberschuß und Kupplung mit einem geschützten Peptid der Formel VIII
worin W und Y wie oben definiert sind.
Die Reaktion wird vorzugsweise in einem trockenen aprotischen polaren Lösemittel durchgeführt, beispielsweise Tetrahydrofüran, bei einer Temperatur zwischen -78ºC und Raumtemperatur.
Die Zwischenprodukte der Formel VII können durch das Verfahren von Matteson et al., Organometallics, 3,1284-1288 (1984) erhalten werden.
Das geschützte Peptid der Formel VIII kaan durch Verfahren hergestellt werden, die in der Peptidehemie bekaant sind, wobei man von der gewünschten unnatürlichen Aminosäure ausgeht. Solche Aminosäuren sind entweder im Handel erhaltlich (beispielsweise die Aminosäure, worin R&sub1;&sub6; für die Gruppe c) steht) oder können durch Verfähren hergestellt werden, die zu den in der Literatur beschriebenen analog sind, wie beispielsweise Angew. Chem. 93, 793 (1981) und J. Am. Chem. Soc. 109, 6881 (1987).
Die Verbindungen der Formel I, worin X für OH steht, können durch Umsetzung einer Verbindung der Formel I, worin X für -OSi(CH&sub3;)C(CH&sub3;)&sub3; steht, mit einem Desilylierungsmittel hergestellt werden, wie Tetrabutylammoniumfluorid.
Die Verbindungen der Formel I sind als Inhibitoren von Trypsin-ähniichen Proteasen brauchbar und können in vitro für diagnostische und mechanistische Untersuchungen dieser Enzyme verwendet werden. Darüberhinaus sind sie aufgrund ihrer hemmenden Wirkung zur Verwendung bei der Pravention oder Behandlung von Krankheiten indiziert, die durch einen Enzymüberschuß in einem regulatorischen System verursacht werden, beispielsweise der Kontrolle der Koagulation und Fibrinolyse.
Die erfindungsgemäßen Verbindungen weisen hemmende Eigenschaften für Trypsin-ähnliche Serinproteasen auf, wie dies in den folgenden Testverfahren gezeigt wird.

a) Enzymhemmkinetik

Die Testsubstanz wird in Cremophor/Ethanol (1:1) oder DMSO gelöst und mit destilliertem Wasser unter Bildung einer 1 mM Stammlösung verdünnt. Weitere Verdünnungen werden im Testpuffer (100 mM Natriumphosphatpuffer, pH 7,4, enthält 100 mM NaCl und 0,1 % Rinderserumalbumin) durchgeführt. Kinetische Tests werden mittels einer Mikrotiterpiatte mit 96 Vertiefüngen durchgeführt, wobei jede Vertiefüng 50 µl Substrat, 100 µl Testverbindung und 100 µl Enzym in Puffer enthält. Die Endkonzentrationen für das Substrat und das Enzym sind folgende: 160 pM α-Thrombin und 100 µl Pefachrom TH (Km = 6,9 µM) 800 pM humanes Plasmin und 200 µM Pelachrom PL (Km 66,4 µM) und 260 pM Trypsin aus dem Rinderpankreas und 500 µM Pefächrom TRY (Km = 167,7 µM). Die Tests werden durch die Zugbbe des Enzyms zu Lösungen gestartet, die die zu testende Substanz und das Substrat enthalten. Die Freisetzung von p-Nitroanilin durch die Hydrolyse des Substrats wird für 30 Minuten durch Messung der Zunahme der optischen Dichte bei 405 nm mit einem kinetischen Thermomax Mikrotiterplattenphotometer (Molecular Devices, Menlo Park CA, USA) gemessen. Wenn der gehemmte konstante Zustand schnell erreicht wird, wird die Hemmkonstante (Ki) durch Errechnung der Daten mittels der gewichteten linearen Regression mittels der Dixon-Gleichung bestimmt (Biochem. J. 1953, 55:170-171). Für langsam und fest bindende Inhibitoren kann der Hemmechanismus durch das folgende Schema beschrieben werden
worin E, S, P und I jeweils für das Enyzm, das Substrat, das Produkt (p-Nitroanilin) und die zu testende Hemmsubstanz stehen, und kon und koff die Assoziations- und Dissoziationsgeschwindigkeitskonstanten für die Hemmung sind (Tapparelli et al., J. Biol. Chem. 268 (1993), 4734-4741). Progressionsgeradendaten für die Bildung von p- Nitroanilin in Gegenwart verschiedener Inhibitorkonzentrationen werden durch nicht-lineare Regression nach der Gleichung des Mechanismus erstellt, der im Schema gezeigt ist (Morrison und Walsh, Adv. Enzymol. Relat. Areas, Mol. Biol. 1988, 61: 201-301). Diese Analysen ergeben Abschätzungen für die scheinbaren Werte von kon, koff und Ki, die für das Vorkommen von Substrat korrigiert wurden, um die wahren Werte zu ergeben, wie dies bei Morrison und Walsh unten beschrieben wurde. Unter den beschriebenen experimentellen Bedingungen kann man einen Ki von 13 nM für die Verbindung von Beispiel 1 beobachten.

b) In vitro Koagulationstests

Die in vitro Koagulationstests werden mit vereinigtem citratisiertem Humanplasma durchgeführt. Die zu testende Substanz oder das Lösemittel werden mit Plasma bei 37ºC für 10 Minuten vor dem Test inkubiert. Die Thrombinzeit (TT) Bestimmungen werden bei einer Thrombinendkonzentration von 5 E/ml durchgeführt. Die aktivierte partielle Thromboplastinzeit (APTT) wird durch Inkubation von 0,1 ml Plasma ± zu testender Substanz in 0,1 ml Sojabohnenphospholipid in Ellagsäure (Actin-FS) für 4 Minuten bei 37ºC gefolgt von der Zugabe von 0,1 ml CaCl&sub2; (50 mM) bestimmt. In diesem Testverfähren erhöhen die erfindungsgemäßen Verbindungen TT und APTT bei einer Konzentration von 0,1 µM bis 0,5 µM signifikant. Mit der Verbindung von Beispiel 1 erreicht man die Verlängerung der TT über 300 Sekunden bei 1,8 µM, die Erhöhung der APTT auf den zweifachen Wert der Kontrolle wird bei 4,4 µM ereicht.

c) In vitro Blutplättchenaggregationstest

Gewaschene humane Blutplättchen werden durch eine Modifizierung des Verfahrens von Ardlie (Br. J. Pharmacol. 1970, 19: 7-17) präpariert. Die Suspension der gewaschenen Blutplättchen (0,46 ml) wird auf 37ºC gehalten und bei 1100 Upm gerührt. Nach der Zugabe der zu testenden Substanz oder des Lösemittels bleiben die Blutplättchen für 2 Minuten erhalten, bevor die Aggregation durch 1 tim Humanthrombin induziert wird. Das Ausmaß der Blutplättchenaggregation wird durch die maximale Aggregationsamplitude und Hemmung der Aggregationsgeschwindigkeit quantifiziert, die in Abwesenheit des Inhibitors bebachtet wird. Bei diesem Testverfahren hemmen die erfindungsgemäßen Verbindungen signifikant die Blutplättchenaggregation im Konzentrationsbereich von wenigen nM. Die Verbindung von Beispiel 1 weist einen HK&sub5;&sub0; Wert von 3,8 nM auf Die erfindungsgemäßen Verbindungen, die Inhibitoren für Thrombin oder den Faktor Xa sind, weisen anti-thrombogene Eigenschaften auf und können verwendet werden, wenn ein antithrombogenes Mittel erforderlich ist. Im allgemeinen können diese Verbindungen einem Patienten oral oder parenteral verabreicht werden, um einen antithrombogenen Effekt zu erhalten. Im Fall von größeren Säugern, wie dem Menschen, können die Verbindungen alleine oder in Kombination mit pharmazeutischen Trägern oder Verdünnungsmitteln in einer Dosis von 0,02 bis 15 mg/kg Körpergewicht und vorzugsweise 1-10 mg/kg verabreicht werden, um die antithrombogene Wirkung zu erhalten, und können als einzelne Dosis oder in mehreren Dosen oder als verzögert freisetzende Formulierung verabreicht werden. Wenn für einen Patienten ein extrakorporaler Blutkreislauf hergestellt werden soll, können 0,1-1 mg/kg intravenös verabreicht werden. Bei einer Verwendung mit Gesamtblut können 1-10 mg pro Liter zur Verhinderung der Koagulation bereitgestellt werden. Pharmazeutische Verdünnungsmittel sind gut bekannt und beinhalten Zucker, Stärke und Wasser, welche zur Herstellung von Tabletten, Kapseln, injizierbaren Lösungen und dergleichen verwendet werden können. Die erfindungsgemäßen Verbindungen können dann zum Zweck der Verhinderung der Blutgerinnung in Blutsammlungs- oder Blutverteilungsbehaltern, Schläuchen oder implantierbaren Vorrichtungen, die mit Blut in Kontakt kommen, ins Blut gegeben werden.
Beim arterio-venösen Shunt-Thrombosemodell der Ratte, wobei eine Modifizierung des Modells von Butler et al., (Blood Coag. Fibrinol. Band 3, (1992), Seite 155) beschrieben wurde, verhindern die erfindungsgemäßen Verbindungen die Thrombusbildung in einer dosisabhängigen Weise. Mittels der Verbindung von Beispiel 1 wird die Thrombusbildung zu 21 % bei einer Dosis von 0,3 mg/kg i.v. gehemmt und bei einer Dosis von 3 mg/kg i.v. verhindert.
In Anbetracht ihrer hemmenden Aktivität für Trypsin-ähnliche Serinproteasen sind die Verbindungen der Formel I zur Hemmung des vaskulären Wiederaufbaus (Proliferation, Migration) nach einer venösen oder arteriellen Operation oder einer anderen Form einer vaskulären Beschädigung indiziert.
Die perkutane trazisluminale Koronarangioplastie (PTCA) ist zu einem herkömmlichen operativen Verfahren für die Behandlung von artheroskierotischen Plaques geworden, die Koronararterien verstopfen. Die Angioplastie wird ebenfalls nut peripheren Gefäßen durchgeführt, wie den femoralen und renalen Arterien, wenn auch in einem geringeren Ausmaß. Die Zerteilung/Kompression eines artherosklerotischen Plaques und die Dehnung der Arterienwand während einer Ballonkatheterangioplastie führt zusätzlich zu einer Verletzung (oder Entfernung) der Endothelzellen und möglicherweise auch zu einer Beschädigung der darunterliegenden glatten Muskelzellen. Dies ist für die primären Komplikationen der PTCA verantwortlich, nämlich einer akuten Reokklusion (Ausbilden eines verschließenden Blutplättchenthrombus auf der exponierten thrombogenen Gefäßoberfläche) und chronische Restenose (primär aufgrund der Proliferation und Migration von glatten Muskellen). Akute Restenose, die bei 5 % der Patienten innerhalb von 24 Stunden nach einer PTCA auftritt, ist lebensbedrohend und muß sofort operativ behandelt werden. Eine chronische Restenose, die 3-6 Monate nach der Operation bei etwa 30 % der Patienten diagnostiziert wird, führt zu Brustschmerzen, aber ist nur lebensbedrohend, wenn der Verschluß 100 % beträgt (rutt einen Myokardinfarkt hervor, wenn der Plaque rupturieren sollte).
Die mögliche Beteiligung von Thrombin bei der vaskulären Reaktion auf eine Verletzung ist kürzlich untersucht worden. Durch die Wirkung auf Blutplättchen kann Thrombin bei der frühen Aktivierung von Blutplättchen und der Aktivierung an der Verletzungsstelle beteiligt sein, und aufgrund der mitogenen Wirkung auf die glatten Muskelzellen könnte Thrombin auch zu einer Intimaverdickung beitragen. Die Thrombinkonzentrationen dürften an den Stellen der vaskulären Verletzung aufgrund des andauernd aktivierten Gerinnungsvorgangs in Abwesenheit einer normalen Endothelschicht und auch aufgrund der Freisetzung von Gerinnsel-gebundenem Thrombin während des thrombolytischen Prozesses erhöht sein. Zusätzlich wird Thrombin an die extrazelluläre Matrix gebunden, wo es aktiv und vom hemmenden Effekt der zirkulierenden Antithrombine für lange Zeitspannen geschützt bleiben kann.
Die Wechselwirkung von Blutplättchen mit einer erstilaft verletzten Gefäßwand scheint teilweise von der lokalen Thrombinerzeugung abzuhängen.
Trotz der verdichteten Evidenz, daß die Thrombinhemmung ein potentiell attraktives Prinzip zur Beschränkung der Restenose nach einer Ballonangioplastie ist, weisen alle verfügbaren Mittel den Nachteil auf, daß sie parenteral (oder lokal) verabreicht werden müssen, um zur Bewirkung eines Effekts eine ausreichend hohe lokale Konzentration zu erreichen, oder es sind andere Effekte limitierend.
Die erfindungsgemäßen Verbindungen können verwendet werden, um den vaskulären Wiederaufbau in Dosen zu hemmen, die denen ähnlich sind, die bei einer Verwendung als antithrombogene Mittel auftreten.
Vorteilhafterweise sind die erfindungsgemäßen Verbindungen oral aktiv, weisen ein schnelles Einsetzen der Aktivität auf und haben eine geringe Toxizität. Zusätzlich können diese Verbindungen eine besondere Brauchbarkeit bei der Behandlung von Individuen haben, die gegenüber Verbindungen, wie Heparin, überempfindlich sind.
In den folgenden Beispielen haben die Symbole die folgenden Bedeutungen:
z = Benzyloxycarbonyl
Boc = t-Butyloxycarbonyl
Ac = Acetyl
MeOH = Methylalkohol
EtOAc = Ethylacetat
DMF = Dimethylformamid
DCC = Dicyclohexylcarbodiimid
HONSu = N-Hydroxysuccinimid
OPin = Pinandiol
THF = Tetrahydrofüran
n-Bu = n-Butyl
Np = p-Nitrophenyl
TLC = Dünnschichtchromatographie
Bzl = Benzyl
TMSal = Trimethylsilylalarün
BoroPro-OPin = Analogon von Prolin, worin die -COOH Gruppe durch B-OPin ersetzt ist
Borolys = -NH-CH-(CH&sub2;-CH&sub2;-CHRCH&sub2;-NH&sub2;)B--

Beispiel 1

Boc-D-TMSal-Pro-NH-CH[(CH&sub2;)&sub4;OH]B-OPin

A. Boc-D-TMSal-OH

21,5 g (113,7 mmol) D-TMSal Ethylester, der gemäß dem in Angew. Chem. 93, 793 (1981) beschriebenen Verfahren hergestellt wurde, werden in CH&sub2;Cl&sub2; gelöst und eine Lösung eines Überschusses Boc&sub2;O in CH&sub2;Cl&sub2; wird zugegeben. Nach 15 Stunden bei Raumtemperatur werden 500 ml einer eiskalten 0,25 N Chlorwasserstoffsäure zugegeben. Die orgsnische Phase wird mit 5 % NaHCO&sub3; und Kochsalzlösung gewaschen, dann über Na&sub2;SO&sub4; getrocknet und im Vakuum konzentriert.
Das Rohmaterial (färbloses Öl) wird direkt im Verseitungschritt verwendet. Es wird in Methanol gelöst, auf 0ºC, mit 510 ml 1 N NaOH gemischt und bei 0ºC für 3 Stunden gerührt. Nach der Ansäuerung auf pH 1 mit 1 N HCl wird das Gemisch mehrmals mit Ether extrahiert. Die organischen Phasen werden vereinigt, mit Kochsalzlösung gewaschen, über Na&sub2;SO&sub4; getrocknet und im Vakuum konzentriert. Das Produkt (29,7 g Öl) wird im nächsten Schritt ohne weitere Reinigung verwendet.

B. Boc-D-TMSal-Pro-ONSu

29,7 g (113,7 mmol) Boc-D-TMSal-OH und 19,0 g (136,3 mmol) p-Nitrophenol werden in EtOAc gelöst. Nach dem Abkühlen auf 0ºC werden 23,4 g (113,6 mmol) DCC zugegeben und das Gemisch wird für 1 Stunde bei 0ºC und dann für 15 Stunden bei Raumtemperatur gerührt. Das Präzipitat wird abfiltriert und mit EtOAc gewaschen und dann wird das Filtrat im Vakuum konzentriert. Das entstehende Öl wird durch Blitzchromatographie (9:1, Hexan/EtOAc) unter Bildung des gewünschten Boc-D-TMSal-ONp als weiße Kristalle gereinigt.
51,6 g (113,7 mmol) Boc-D-TMSal-ONp werden in THF gelöst und eine wäßrige Lösung äquimolarer Mengen Prolin und Et&sub3;N wird zugegeben. Nach 20 Stunden bei Raumtemperatur wird das THF im Vakuum entfernt und der wäßrige Rückstand wird mit Wasser verdünnt und dann mehrmals mit EtOAc extrahiert. Der pH der wäßrigen Schicht wird durch die Zugabe von 10 %iger Zitronensäure auf 3 eingestellt. Das entstehende ölige Produkt wird dann mehrmals mit EtOAc extrahiert. Die vereinigten organischen Phasen werden mit Kochsalzlösung gewaschen, über Na&sub2;SO&sub4; getrocknet und im Vakuum konzentriert. Das farblöse Öl wird aus Ether/Hexan unter Bildung des Dipeptids Boc-D-TMSal-Pro-OH als weiße kristalline Verbindung umkristallisiert, Smp: 176ºC.
26,0 g (72,5 mmol) des entstehenden Dipeptids werden in EtOAc gelöst. Nach dem Abkühlen auf 0ºC werden 9,8 g (85,5 mmol) HONSu und 14,9 g (72,3 mmol) DCC zugegeben. Das Gemisch wird für 3 Stunden bei 0ºC und dann für weitere 15 Stunden bei Raumtemperatur gerührt. Das Gemisch wird erneut auf 0ºC gekühlt, der Dicyclohexylharnstoff wird abfiltiert und mehrmals mit EtOAc gewaschen. Das Filtrat wird mit wäßrigem 0,1 M Na&sub2;CO&sub3; und dann mit wäßrigem 2 % KHSO&sub4; gewaschen. Nach dem Trocknen über Na&sub2;SO&sub4; und einer Konzentrierung im Vakuum erhält man Boc-D-TMSal-Pro-ONSu als weißen Schaum.

C. (+)-Pinandiol-(S)-1-chlor-5-t-butyldimethylsiloxy-pentan-1-borat

10,5 ml (120 mmol) 3-Buten-1-ol, 22,3 g (144 mmol) t-Butyldimethylsilylchlorid und 20,4 g (300 mmol) Imidazol werden in 60 ml DMF gelöst und über Nacht bei 35ºC gerührt. Die zwei Phasen werden getrennt und die Produktphase wird mit 2 N Weinsäure, Wasser und Kochsalzlösung gewaschen. Nach dem Trocknen über Na&sub2;SO&sub4; und einer Konzentrierung im Vakuum erhält man 1-t-Butyldimethylsiloxy-3-buten als farbloses Öl.
7,45 g (40 mmol) dieses Produkts werden für 24 Stunden mit 5,1 g (40 mmol) Katecholboran bei 125ºC unter Bildung eines gelbbraunen Öls gerührt. Dieses Öl wird zu 6,9 g (40 mmol) (+)-Pinandiol in 30 ml THF gegeben und über Nacht gerührt. Nach einer Blitzchromatographie (95:9, Hexan/EtOAc) erhält man (+)-Pinandiol-4- t-butyldimethylsiloxy-butan-1-borat.
Wahrend einer Zeitspanne von 20 Minuten werden 17 ml (27,0 mmol) BULI (1,6 M in Hexan) zu einer vorgekühlten Lösung (-100ºC) von 2,8 ml CH&sub2;Cl&sub2; und 49 ml THF gegeben. Nach einem Rühren für 15 Minuten bei -100ºC werden über eine Zeitspanne von 20 Minuten 9,0 g (24,5 mmol) des oben erhaltenen Pinandiolboratprodukts in 24 ml THF zugegeben. Das Reaktionsgemisch wird erneut für 15 Minuten bei -100ºC gerührt, wonach 1,24 g (12,3 mmol) ZnCl&sub2; (fest) zugegeben werden. Das Reaktionsgemisch kann sich über Nacht auf Raumtemperatur erwärmen. Nach einer Konzentrierung im Vakuum wird der Rücktand in Ether/H&sub2;O gelöst. Die organische Phase wird über Na&sub2;SO&sub4; getrocknet und im Vakuum konzentriert. (+ )-Pinandiol-(S)-1-chlor-5-t-butyldimethylsiloxy-butan-1-borat erhält man als gelbbraunes Öl.

D. Boc-D-TMSal-Pro-NH-CH[(CH&sub2;)&sub4;OSi(t-Bu)Me&sub2;]B-OPin

12,8 ml (20,4 mmol) Butyllithium (1,6 M in Hexan) wird zu einer vorgekühlten (-78ºC) Lösung von 4,3 mi (20,4 nunol) Hexamethyldisilaaan in 30 ml THF gegeben. Das Reaktionsgemisch wird für 1 Stunde bei Raumtemperatur gerührt, dann erneut auf -78ºC abgekühlt. 8,5 g (20,4 mmol) (+)-Pinandiol-(S)-1-chlor-5-t- butyldimethylsiloxy-butan-1-borat werden in THF zugegeben. Nach dem Rühren für eine Stunde bei -87ºC kann sich die Lösung über Nacht auf Raumtemperatur erwärmen. Nach dem erneuten Abkühlen auf -78ºC werden 3 Moläquivalente HCI in Dioxan zugegeben. Das Gemisch wird für 1 Stunde bei -78ºC und dann für 2 Stunden bei Raumtemperatur gerührt. Nach dem Abkühlen auf -20ºC wird eine Lösung aus 9,28 g (40,8 mmol) des aktiven Esters von Beispiel 1 Schritt B in CH&sub2;Cl&sub2; gefolgt von der Zugabe von 5,67 ml (40,8 mmol) Triethylamin zugegeben. Das Gemisch wird für 1 Stunde bei -20ºC und für 2 Stunden bei Raumtemperatur gerührt und dann filtriert. Nach einer Konzentrierung im Vakuum wird der Rückstand in Ether/H&sub2;O gelöst. Die organische Phase wird über Na&sub2;SO&sub4; getrocknet und im Vakuum konzentriert. Nach der Blitzchromatographie (6:4, Hexan/EtOAc) erhält man das gewunschte Produkt, [α]D²&sup0; = -45,6º (c= 0,5 in MeOH), MH&spplus; =736.

E. Boc-D-TMSal-Pro-NH-CH[(CH&sub2;)&sub4;OH]B-OPin

600 mg (0,816 mmol) der in Schritt D von Beispiel 1 erhaltenen Siloxyverbindung werden in THF gelöst und 514 mg (1,62 mmol) Tetrabutylammoniumfluorid werden zugegeben. Nach einem Rühren über Nacht bei Raumtemperatur wird das Gemisch im Vakuum konzentriert und in Ether/H&sub2;O gelöst. Die organische Phase wird über Na&sub2;SO&sub4; getrocknet und im Vakuum konzentriert. Das Nebenprodukt wird mit EtOAc auf Silicagel entfernt und das Produkt wird mit EtOAc/EtOH (9:1) unter Bildung des Titelprodukts als weißer Schaum eluiert, [α]D²&sup0; = -72,4º (c =0,5 in MeOH), MH&spplus; = 622.

Beispiel 24

Boc-D-TMSal-Pro-NH-CH[CH&sub2;)&sub4;NHCHO]B-OPin

A) (+)-Pinandiol-(S)-1-chlor-5-brom-pentan-1-borat

20,8 ml (203,3 mmol) 4-Brom-1-buten werden mit 924,4 g (203,3 mmol) Katecholboran bei 100ºC über 16 Stunden umgesetzt. Das Rohprodukt wird im Vakuum unter Bildung von 4-Brom-butan-1-borat als weißes kristallines Produkt destilliert.
27,7 g (163 mmol) (+)-Pinandiol werden in THF gelöst und 41,6 g (163 mmol) wie oben synthetisiertes 4- Brom-butan-1-berat werden zugegeben. Nach 1 Stunde bei Raumtemperatur wird das THF im Vakuum entfernt und der Rückstand wird durch Blitzchromatographie (9:1, Hexan/EtOAc) unter Bildung von (+)-Pinandiol-4- brombutan-1-borat als flirbloses Öl gereinigt.
Das gewunschte (+)-Pinandiol-(S)-1-chlor-5-brompentan-1-borat wird gemäß dem in Organometallics 3, 1284 (1984) angegebenen Verfahren hergestellt. 9,8 ml CH&sub2;Cl&sub2; in THF werden auf -100ºC abgekühlt und 71,6 ml (114,5 mmol) n-Butyllithium (1,6 M in Hexan) werden über 20 Minuten zugegeben. Nach 15 Minuten bei -100ºC wird eine kalte (-78ºC) Lösung aus 32,8 g (104,1 mmol) (+)-Pinandiol-5-brompentan-1-borat in THF zugegeben. Nach einer weiteren Stunde bei -100ºC werden 7,1 g (52,0 mmol) wasserfreies ZnCl&sub2; in THF zugegeben. Nach weiteren 15 Minuten bei -100ºC wird das Reaktionsgemisch auf Raumtemperatur erwärmt. Das Lösemittel wird im Vakuum entfernt, der Rückstand wird mit Hexan/Wasser verdünnt und mehrmals mit Hexan extrahiert. Nach dem Trocknen über Na&sub2;SO&sub4; und der Entfernung des Lösemittels im Vakuum erhält man (+)-Pinandiol-(S)-1-chlor- 5-brompentan-1-borat als gelbes Öl, das dann im nächsten Schritt direkt ohne weitere Reinigung eingesetzt wird.

B) Boc-D-TMSal-Pro-NH-CH[(CH&sub2;)&sub4;Br]B-OPin

Eine Lösung von 65,2 ml (66,2 mmol) LiN(SiMe&sub3;)&sub2; (1 M in THF) in THF wird auf -78ºC abgekühlt. 23,7 g (65,2 mmol) α-Chlorborat von Beispiel 2 Schritt A werden in THF zugegeben. Nach dem Rühren für 1 Stunde bei -78ºC wird das Gemisch für 15 Stunden bei Raumtemperatur gerührt.
Nach dieser Zeitspanne wird das Reaktionsgemisch auf -78ºC abgekühlt. 29,8 ml (6,56 N Lösung, 196 mmol) HCl in Dioxan werden zugegeben und die Lösung wird für 45 Minuten bei -78ºC und dann für 2 Stunden bei Raumtemperatur gerührt. Das Gemisch wird auf -15ºC abgekühlt, 29,7 g (65,2 mmol) Boc-TMSal-Pro-ONSu von Beispiel 1 Schritt B in CH&sub2;Cl&sub2; werden gefolgt von 18,1 ml (130,4 mmol) Triethylamin zum Starten der Kupplungsreaktion zugegeben. Nach dem Rühren bei -15ºC für 1 Stunde wird das Gemisch für 2 Stunden bei Raumtemperatur gerührt. Das Gemisch wird dann über Hyflo filtriert und in Vakuum konzentriert. Der Rückstand wird mit Etherlwasser verdünnt und mehrmals mit Ether extrahiert. Nach dem Trocknen über Na&sub2;SO&sub4; und einer Konzentrierung im Vakuum erhält man das gewunschte Boc-D-TMSal-Pro-NH-CH[(CH&sub2;)&sub4;Br]B-OPin als weiße Kristalle aus Ether/Hexan, Smp 74ºC.

C) Boc-D-TMSal-Pro-NH-CHR[(CH&sub2;)&sub4;N&sub3;]B-OPin

33,3 g (48,6 mmol) des Produkts von Beispiel 2 Schritt B werden in DMSO gelöst und 6,3 g (97,2 mmol) Natriumazid werden zugegeben. Das Gemisch wird für 6 Stunden bei Raumtemperatur gerührt. Ether/Eiswasser wird zugegeben und das entstehende Öl wird unter Bildung von Boc-D-TMSal-Pro-NH-CH[(CH&sub2;)&sub4;N&sub3;]B-OPin als weiße kristalline Verbindung kristallisiert, Smp 69-70ºC, [α]D²&sup0; = -56,6º (c = 1,0 in MeOH), MH&spplus; = 647.

D) Boc-D-TMSal-Pro-BoroLys-OPin

22,0 g (34,0 mmol) des Azids von Beispiel 2 Schritt C werden in EtOAc gelöst und in Gegenwart von 4, g 10 % Pd/C hydriert. Nach 9 Stunden wird der Katalysator entfernt und die Lösung wird im Vakuum konzentriert. Der entstehende Schaum wird in EtOAc gelöst und unter Bildung des gewunschten Boc-TMSal-Pro- BoroLys-OPin als weiße Kristalle kristallisiert Smp 128-129ºC, [α]D²&sup0; = -40,8º (c =0,5 in CH&sub2;Cl&sub2;), MH&spplus; =621.

E) Boc-D-TMSal-Pro-NH-CH[(CH&sub2;)&sub4;NHCHO]B-OPin

0,224 ml (5,95 mmol) Ameisensäure und 0,530 g (5,2 mmol) Essigsäureaahydrid werden für 2 h bei 60ºC gerührt. Das Gemisch wird auf 0ºC abgekühlt und 1,86 g (3,00 mmol) des in Schritt D von Beispiel 2 erhaltenen Borlysins werden in THF gelöst zugegeben. Nach einem zehnminütigen Rühren bei 0ºC wird das Reaktionsgemisch bei Raumtemperatur über Nacht gerührt. 80 ml Eiswasser werden zugegeben, die Lösung wird mehrmals mit Ether extrahiert und mit Kochsalzlösung gewaschen. Nach dem Trocknen über Na&sub2;SO&sub4; und einer Konzentrierung im Vakuum erhält man das gewunschte Produkt als weißen Schaum, der dann aus Etherexan umkristallisiert werden kann, Smp 93-99ºC, [α]D²&sup0; = -77,8º (c =0,5 in MeOH), MH&spplus; = 649.
Die Produkte Boc-D-TMSal-Pro-NH-CH[(CH&sub2;)&sub5;NHCHO]B-OPin ([α]D²&sup0; = -47,2º (c = 0,5 in MeOH), MH&spplus; =663) und Boc-D-TMSal-Pro-NH-CH[(CH&sub2;)&sub3;NHCHO]B-OPin ([α]D²&sup0; = -68,0º (c = 0,5 in MeOH), MH&spplus; = 635) erhält man analog.

Beispiel 5-14

Boc-D-TMSal-Pro-NH-CH[(CH&sub2;)&sub4;NHC(O)CH&sub3;]B-OPin

20 µl (0,25 mmol) Pyridin und 18 µl (0,25 mmol) Acetylchlorid in CH&sub2;Cl&sub2; werden auf 0ºC abgekühlt, 155,2 mg (0,25 mmol) des Borlysinprodukts von Beispiel 2 Schritt D werden zugegeben und die Lösung wird für 1 Stunde gerührt. Wasser wird zugegeben, das Produkt wird mehrmals mit Ether extrahiert, mit Kochsalzlösung gewaschen, über Na&sub2;SO&sub4; getrocknet und im Vaküum konzentriert. Das gewunschte Produkt erhält man als Öl, [α]D²&sup0; = -62,6º (c = 0,5 in MeOH), MH&spplus; = 663.
Die folgenden (Boc-D-TMSal-Pro-NH-CR[(CH&sub2;)&sub4;NHC(O)R]B-OPin) Produkte, worin R für die in der folgenden Tabelle gezeigten Reste steht, werden analog aus den entsprechenden Acylchloriden oder Acylbromiden hergestellt.

Beispiel 15-16

Boc-D-TMSal-Pro-NH-CH[(CH&sub2;)&sub4;NHC(O)CH&sub2;Cl]B-OPin

124,2 ing (0,2 mmol) des Borlysinprodukts von Beispiel 2 Schritt D in THF werden auf 0ºC abgekühlt und 35,2 mg (0,2 mmol) Monochloressigsäureanhydrid werden zugegeben. Nach dem Rühren für 3 Stunden bei Raumtemperatur wird das Lösemittel im Vakuum entfernt und man erhält das Produkt als weißen Schaum, [α]D²&sup0; = -57,8º, (c =0,5 in MeOH), MH&spplus; = 697.
Das Boc-D-TMSal-Pro-NH-CH[(CH&sub2;)&sub4;NHC(O)CCl&sub3;]B-OPin Produkt wird analog hergestellt, [α]D²&sup0; = -54,0º (c = 0,5 in MeOH), MH&spplus; = 765.

Beispiel 17

58,7 µl (0,24 mmol) N,O-Bis-trimethylsilyl)acetamid in CH&sub2;Cl&sub2; werden zu 124,2 mg (0,20 mmol) des Borlysinprodukts von Beispiel 2 Schritt D in CH&sub2;Cl&sub2; gegeben und für 1 Stunde bei Raumtemperatur gerührt. Nach dem Abkühlen auf 0ºC werden 19,5 µl (0,24 mmol) Methylchlorformiat in CH&sub2;Cl&sub2; zugegeben und das Gemisch wird für 5 Stunden bei 0ºC gerührt. Das CH&sub2;Cl&sub2; wird entfernt und es wird ein pH 7 Puffer bei 0ºC zugegeben. Das Produkt wird mehrmals mit Ether extrahiert, mit Kochsalzlösung gewaschen, über Na&sub2;SO&sub4; getrocknet und im Vakuum unter Bildung eines weißen Schaums konzentriert, [α]D²&sup0; = -59,6º (c =0,5 in MeOH), MH&spplus; 679.

Beispiel 18-22

Boc-D-TMSal-Pro-NH-CH[(CH&sub2;)&sub4;NHC(S)NHCH&sub3;]B-OPin

124,2 mg (0,2 mmol) des Borlysinprodukts von Beispiel 2 Schritt D in CH&sub2;Cl&sub2; werden auf 0ºC abgekühlt und 15 mg (0,2 mmol) Methylisothiocyanat werden zugegeben. Nach dem Rühren für 7 Stunden bei Raumtemperatur wird das Lösemittel im Vakuum entfernt und das Produkt erhält man als weißen Schaum, das dann aus Etherexan kristallisiert werden kann, Smp 109-113º, [α]D²&sup0; = -66,8º (c =0,5 in MeOH), MH&spplus; = 694.
Analog erhält man Boc-D-TMSal-Pro-NH-CH[(CH&sub2;)&sub4;NHC(S)NHEt]B-OPin ([α]D²&sup0; = -66,4 º (c = 0,5 in MeOH), MH&spplus; = 708), Boc-D-TMSal-Pro-NH-CH[(CH&sub2;)&sub4;NHC(O)NHCH&sub3;]B-OPin ([α]D²&sup0; = -62,2 º (c = 0,5 in MeOH), MH&spplus; = 678), Boc-D-TM-Sal-Pro-NH-CH[(CH&sub2;)&sub4;NHC(O)NHEt]B-OPin ([α]D²&sup0; = -65,6 º (c = 0,5 in Me-OH), MH&spplus; = 692) und Boc-D-TMSal-Pro-NH-CH[(CH&sub2;)&sub3;NHC(O)NHEt]B-OPin ([α]D²&sup0; = -71,0º (c = 0,5 in Me-OH, MH&spplus; =678) aus den entsprechenden Iso(thio)cyanaten.

Beispiel 23

Boc-D-TMSal-Pro-NH-CH[(CH&sub2;)&sub4;NHCHS]B-OPin

217 mg (0,35 mmol) des Formamidprodukts von Beispiel 2 Schritt E in Toluol werden mit 70,8 mg (0,175 mmol) Laweson-Reagenz behandelt. Nach dem Rühren für 1,5 Stunden bei Raumtemperatur wird das Toluol im Vakuum entfernt. Das gewünschte Produkt wird aus Ether umkristallisiert, Smp 123-125ºC, [α]D²&sup0; = -74,8º (c =0,5 in MeOH), MH&spplus; = 665.

Beispiel 24

Boc-D-TMSal-Pro-NH-CH[(CH&sub2;)&sub4;NHCH(S)CH&sub3;]B-OPin

124 mg (0,2 mmol) des Borlysinprodukts von Beispiel 2 Schritt D werden in MeOH gelöst und 23 µl (0,2 mmol) Ethyldithioacetat in MeOH werden bei Raumtemperatur zugegeben. Nach dem Rühren für 2,5 Stunden bei 60ºC wird das Lösemittel im Vakuum entfernt. Der Rückstand wird durch RP-Chromatographie (7:3, EtOH(H&sub2;O) gereinigt und das gewunschte Produkt erhält man als weißen Schaum, [α]D²&sup0; = -65,8º (c = 0,5 in MeOH), MH&spplus; = 679.

Beispiel 25-26

Boc-D-TMSal-Pro-NH-CH[(CH&sub2;)NHC(O)NH&sub2;]B-OPin

248,3 mg (0,4 mmol) des Borlysinprodukts von Beispiel 2 Schritt D und 0,4 ml 1 N HCl in H&sub2;O werden auf 50ºC erwärmt. Nach 5 Minuten werden 33,2 mg (0,4 mmol) Kaliumcyanat in kleinen Portionen zugegeben. Nach 6 Stunden bei 50ºC wird Wasser zugegeben, das Produkt wird mit EtOAc extrahiert, über Na&sub2;SO&sub4; getrocknet und im Vakuum konzentriert. Nach einer Blitzchromatographie (1:9, Hexan/EtOAc) erhält man das gewünschte Produkt, [α]D²&sup0; = -71,7º (c = 0,5 in MeOH), MH&spplus; =664.
Das Boc-D-TMSal-Prc-NR-CH[(CH&sub2;)&sub3;NHC(O)NH&sub2;]B-OPin Produkt wird analog hergestellt, [α]D²&sup0; = -54,0º (c =0,5 in MeOH), MH&spplus; = 765.

Beispiel 27

Boc-D-TMSal-Pro-NH-CH[(CH&sub2;)&sub4;NHC(O)CH&sub2;OH]B-OPin

48 µl (0,6 mmol) Pyridin und 99,6 µl (0,6 mmol) Benzyloxyacetylchlorid in THF werden auf 0ºC abgekühlt und 372,4 mg (0,6 mmol) des Borlysinprodukts von Beispiel 2 Schritt D werden zugegeben. Nach 3 Stunden bei 0ºC wird Wasser zugegeben, das Produkt mehrmals mit Ether extrahiert, über Na&sub2;SO&sub4; getrocknet und im Vakuum konzentriert.
Der entstehende weiße Schaum (370 mg, 0,48 mmol) wird in EtOH gelöst und in Gegenwart von 0,5 g 10 % Pd/C bei 40 psi hydiiert. Nach 12 Stunden wird der Katalysator entfernt und die Lösung wird im Vakuum konzentriert. Nach einer Blitzchromatographie (9:1, EtOAc/EtOH) erhält man das gewünschte Produkt, [α]D²&sup0; = -67,0º (c = 0,5 in MeOH), MH&spplus; = 679.

Beispiel 28

Boc-D-TMSal-Pro-NH-CHF(CH&sub2;)&sub4;NHSO&sub2;CH&sub3;]B-OPin

19,8 µl (0,25 mmol) Methansulfonsäurechlorid in THF werden bei 0ºC zu 20 µl (0,25 mmol) Pyridin gegeben. 155,2 mg (0,25 mmol) des Borlysinprodukts von Beispiel 2 Schritt D werden in THF zu diesem Gemisch gegeben. Nach dem Rühren für 2,5 Stunden bei 0ºC wird Wasser zugegeben, das Produkt wird mit Ether extrahiert, über Na&sub2;SO&sub4; getrocknet und im Vakuum unter Bildung des Produkts als weißen Schaum konzentriert, [α]D²&sup0; = -61,6º (c = 0,5 in MeOH), MH&spplus; = 699.

Beispiel 29-31

A. (+)-Pinandiol-(S)-1-chlor-3-phenylpropan-1-berat

3,47 g (30,0 mmol) Styrol und 3,6 g (30,0 mmol) Catecholberan werden für 20 Stunden bei 100ºC unter Bildung eines gelbbraunen Öls gerührt. Dieses Öl wird zu 5,0 g (30,0 mmol) (+)-Pinandiol in THF gegeben und über Nacht gerührt. Nach einer Blitzchromatographie (8:2, Hexan/EtOAc) erhält man (+)-Pinandiol-2- phenylethan-1-borat.
Über einen Zeitraum von 20 Minuten werden 15 ml (24,0 mmol) BuLi (1,6 M in Hexan) zu einer vorgekühlten Lösung (-100ºC) aus 2,1 ml CH&sub2;Cl&sub2; und 37 ml THF gegeben. Nach dem Rühren für 30 Minuten bei -100ºC werden über einen Zeitraum von 20 Minuten 6,2 g (21,8 mmol) des oben erhaltenen Pinandiolboratprodukts in THF zugegeben. Das Reaktionsgemisch wird erneut für 1 Stunde bei -100ºC gerührt, wonach 1,51 g (10,9 mmol) ZnCl&sub2; in THF zugegeben werden. Das Reaktionsgemisch kann sich über Nacht auf Raumtemperatur erwärmen. Nach einer Konzentrierung im Vakuum wird der Rückstand in Ether/H&sub2;O gelöst. Die organische Phase wird über Na&sub2;SO&sub4; getrocknet und im Vakuum konzentriert. (+)-Pinandiol-(S)-1-chlor-3-phenylpropan-1-borat erhält man als gelboranges Öl.

B. Boc-D-TMSal-Pro-NH-CH[(CH&sub2;)&sub2;C&sub6;H&sub5;]B-OPin

5,1 ml (8,09 mmol) Butyllithium (1,6 M in Hexan) wird zu einer vorgekühlten Lösung (-78ºC) aus 1,7 ml (8,09 mmol) Hexamethyldisilazan in THF gegeben. Das Reaktionsgemisch wird für 1 Stunde bei Raumtemperatur gerührt und dann erneut auf -78ºC abgekühlt. 2,68 g (8,09 mmol) (+)-Pinandiol-(S)-1-chlor-3-phenylpropan-1- borat werden in THF gelöst zugegeben. Nach dem Rühren für 1 Stunde bei -78ºC wird die Lösung über Nacht auf Raumtemperatur erwärmt. Nach dem erneuten Kühlen auf -78ºC werden 3 Moläquivalente HCl in Dioxan zugegeben. Das Gemisch wird für 1 Stunde bei -78ºC und dann für 2 Stunden bei Raumtemperatur gerührt. Nach dem Abkühlen auf -20ºC wird eine Lösung aus 3,7 g (8,09 mmol) des aktiven Esters von Beispiel 1 Schritt B in CH&sub2;Cl&sub2; zugegeben, wonach eine Zugabe von 2,3 ml (18,2 mmol) Triethylamin erfolgt. Das Gemisch wird für 1 Stunde bei -20ºC und für 2 Stunden bei Raumtemperatur gerührt und dann filtriert. Nach einer Konzentrierung im Vakuum wird der Rückstand in Ether/H&sub2;O gelöst. Die organische Phase wird über Na&sub2;SO&sub4; getrocknet und im Vakuum konzentriert. Nach einer Blitzchromatographle (6:4, Hexan/EtOAc) erhält man das gewunschte Produkt, [α]²&sup0; = -88,6º (c =0,5 in MeOH), MH&spplus; = 654.
Die Produkte Boc-D-TMSal-Pro-NH-CH[(CH&sub2;)&sub2;(Cl-C&sub6;H&sub4;]B-OPin ([α]D²&sup0; = -83,2º (c = 0,5 in MeOH), MH&spplus; =688) und Boc-D-TMSal-Pro-NH-CH[(CH&sub2;)&sub2;(p-NME&sub2;-C&sub6;H&sub4;]B-OPin ([α]D²&sup0; = -84,8º (c = 0,54 in MeOH), MH&spplus; =697) erhält man analog.

Beispiel 32

CH&sub3;[O(CH&sub2;)&sub2;]&sub3;OCH&sub2;C(O)-D-TMSal-Pro-NH-CH[(CH&sub2;)&sub4;NHCHO]B-OPin

A. CH&sub3;[O(CH&sub2;)&sub2;]&sub3;OCH&sub2;C(O)-D-TMSal-Pro-NH-CH[(CH&sub2;)&sub4;N&sub3;]B-OPin

5,15 g (8,00 mmol) des Azidprodukts von Beispiel 2 Schritt C werden zu 40,0 ml Essigsäure/konz. HCl (9:1) gegeben und für 75 Minuten gerührt. Nach einer Konzentrierung im Vakuum wird HCl H-D-TMSal-Pro-NH- CH[(CH&sub2;)&sub4;N&sub3;]B-OPin aus Ether kristallisiert, Smp 87ºC.
0,29 ml (2,40 mmol) Pivaloylchlorid in THF werden zu einem Gemisch aus 1,17 g (2,00 mmol) des oben erhaltenen Produkts und 0,34 ml (2,40 mmol) Triethylamin in THF bei 0ºC gegeben und für 1 Stunde bei dieser Temperatur gerührt. Zu dieser Lösung werden 533 mg (2,40 mmol) CH&sub3;[O(CH)&sub2;]&sub3;OCH&sub2;CO&sub2;H in THF und anschließend 4,0 ml gesättigtes wäßriges NaHSO&sub4; gegeben. Nach dem Rühren für 1 Stunde bei Raumtemperatur wird gesättigtes wäßriges NaHSO&sub4; zugegeben und das Produkt wird mehrmals mit EtOAc extrahiert. Die orgunischen Phasen werden mit 2 N H&sub2;SO&sub4; und Kochsalzlösung gewaschen, über Na&sub2;SO&sub4; getrocknet und im Vaküum konzentriert. Das Rohprodukt wird in MeOH/Wasser (6:4) gelöst und mit Hexan gewaschen. Nach der Konzentrierung der MeOH/Wasserphase erhält man CR&sub3;[O(CH&sub2;)]&sub3;OCH&sub2;C(O)-D-TMSal-Pro-NH-CH[(CH&sub2;)&sub4;N&sub3;]B-OPin als Öl, [α]D²&sup0; = -74,5º (c = 0,83 in MeOH), MH&spplus; = 751.

B. CH&sub3;[O(CH&sub2;)&sub2;]&sub3;OCH&sub2;C(O)-D-TMSal-Pro-NH-CH[(CH&sub2;)&sub4;NH&sub2;]B-OPin

1,05 g (1,40 mmol) des Produkts von Beispiel 32 Schritt A werden in 14 ml EtOH gelöst und in Gegenwart von 140 mg 10 % Pd/C und 0,84 ml (1,38 mmol) 2 N HCl hydriert. Nach 2,5 Stunden wird der Katalysator entfernt und Wasser zugegeben. Die Wasserphase wird mit Ether gewaschen und im Vakuum unter Bildung von 855 mg (80 %) CH&sub3;[O(CH&sub2;)]&sub3;OCH&sub2;C(O)-D-TMSal-Pro-NH-CH[(CH&sub2;)&sub4;NH&sub2;]B-Opin als Öl konzentriert, [α]D²&sup0; = -74,2º (c = 0,61 in MeOH), MH&spplus; = 725.

C. CH&sub3;[O(CH&sub2;)&sub2;]&sub3;OCH&sub2;C(O)-D-TMSal-Pro-NH-CH[(CH&sub2;)&sub4;NHCHO]B-OPin

31 µl (0,80 mmol) Ameisensäure und 71 µl (0,70 mmol) Essigsäureanhydrid werden flir 2 Stunden bei 50ºC gerührt. Nach dem Abkühlen auf 0ºC werden 325 mg (0,43 mmol) des Borlysinprodukts von Beispiel 32 Schritt B in THF und 0,12 ml (0,86 mmol) Triethylamin zugegeben. Nach dem Rühren für 17 Stunden bei Raumtemperatur wird EtOAc zugegeben und die Lösung wird mit 2 N H&sub2;SO&sub4; und Kochsalzlösung gewaschen, über Na&sub2;SO&sub4; getrocknet und im Vakuum konzentriert. Nach einer RP-Chromatographie (MeOH/Wasser, Gradient 50 % H&sub2;O T 25 % H&sub2;O) erhält man das gewunschte Produkt als Öl, [α]D²&sup0; -80,8º (c =0,27 in MeOH), MH&spplus; =753.

Beispiel 33

CH&sub3;[O(CH&sub2;)&sub2;]&sub3;OCH&sub2;C(O)-D-TMSal-Pro-NH-CH[(CH&sub2;)&sub4;NHCH(O)NHEt]B-OPin

325 mg (0,43 mmol) des Borlysinprodukts von Beispiel 32 Schritt B in THF werden auf 0ºC abgekühlt und 40 µl (0,43 mmol) Ethylisocyanat und 48 µl (0,43 mmol) N-Methylmorpholin werden zugegeben. Nach einem vierstündigem Rühren bei Raumtemperatur wird EtOAc zugegeben und die Lösung wird mit 1 N NaHSO&sub4;, gesättigtem wäßrigem NaHCO&sub3; und Kochsalzlösung gewaschen, über Na&sub2;SO&sub4; getrocknet und im Vakuum konzentriert.
Nach einer RP-Chromatographie (MeOH/Wasser, Gradient 50 % H&sub2;O T 25 % H&sub2;O) erhält man das gewunschte Produkt als Öl, [α]D²&sup0; = -76,0º (c = 0,55 in MeOH), MH&spplus; = 796.

Beispiel 34

H-D-TMSal-Pro-NH-CH[(CH&sub2;)&sub4;NHCHO]B(OH)&sub2;

150 mg (0,231 mmol) des Formamidprodukts von Beispiel 2 Schritt E werden in 2,5 ml Essigsäure/konz. HCl (1:9) gelöst und für 4 Stunden bei Raumtemperatur gerührt. Nach einer Konzentrierung im Vakuum wird der Rückstand dreimal in Toluol gelöst und wieder im Vakuum konzentriert. Man erhält das gewunschte Produkt als gelben Schaum, [α]D²&sup0; = -63,6º (c = 0,55 in MeOH), MH&spplus; = 415.

Beispiel 35

H-D-TMSal-Pro-NH-CH[(CH&sub2;)&sub4;NHC(O)NHEt]B(OH)&sub2;

150 mg (0,217 mmol) des Produkts Boc-D-TMSal-Pro-NH-CH[(CH&sub2;)&sub4;NHC(O)NHEt]B-OPin von Beispiel 21 werden in 2,5 ml Essigsäure/konz. HCl (1:9) gelöst und für 4 Stunden bei Raumtemperatur gerührt. Nach einer Konzentrierung im Vakuum wird der Rückstand dreimal in Toluol gelöst und erneut im Vakuum konzentriert Man erhält das gewunschte Produkt als orangen Schaum, [α]D²&sup0; = -74,1º (c =0,56 in MeOH), MH&spplus; = 458

Claims

1. Verbindung der Formel I

worin W für Wasserstoff oder eine N-Schutzgruppe steht,

Y für eine Sequenz aus 2 Aminosäuren steht, von denen die N-terminale Aminosäure eine unnatürliche Aminosäure mit einer hydrophoben Seitenkette ist und die andere Aminosäure L-Prolin ist, die unnntürliche Aminosäure so gewählt ist, däß das Aminosäurepeptid Y-Lys oder Y-Arg eine Affinitat für das aktive Zentrum einer Trypsin-ähnlichen Protease aufweist,

Q&sub1; und Q&sub2; gleich oder verschieden sind und ausgewählt sind aus -OH, -COR&sub1;, -CONR&sub1;R&sub2;, -NR&sub1;R&sub2; oder -OR&sub3; oder Q&sub1; und Q&sub2; zusammengenommen einen Diolrest bilden,

R&sub1;, R&sub2; und R&sub3;, die gleich oder verschieden sein können, stehen für C&sub1;&submin;&sub1;&sub0;Alkyl, C&sub6;&submin;&sub1;&sub0;aryl, C&sub6;&submin;&sub1;&sub0;aralkyl oder Phenyl, das mit bis zu drei Gruppen substituiert ist, die ausgewählt sind aus C&sub1;&submin;&sub4;Alkyl, Halogen und C&sub1;&submin;&sub4;Alkoxy,

R&sub4; für Wasserstoff oder C&sub1;&submin;&sub1;&sub0;Alkyl steht,

R&sub5; für eine Gruppe -A-X steht,

worin A steht für -(CH&sub2;)z-, worin z für 2, 3, 4 oder 5 steht, -CH(CH&sub3;)(CH&sub2;)-, -CH&sub2;-CH(CH&sub3;)CH&sub2;-, -(CH&sub2;)&sub2;CH(CR&sub3;)-, -(CH&sub2;)&sub2;-C(CH&sub3;)&sub2;-, -CH(CH&sub3;)-(CH&sub2;)&sub3;-, -CH&sub2;-CH(CH&sub3;)(CH&sub2;)&sub3;-, -CH&sub2;-CH&sub2;-CH(CH&sub3;)-CH&sub2;-, -(CH&sub2;)&sub2;C(CH&sub3;)-CH&sub2;-, -(CH&sub2;)&sub3;-CH(CH&sub3;), -(CH&sub2;)&sub3;-C(CH&sub3;)-, -(CH&sub2;)&sub3;CH(CH&sub3;)CH&sub2;-, C&sub1;&submin;&sub1;&sub0;Aryl, C&sub1;&submin;&sub1;&sub0;Aralkyl, und worin X für OH, SH, NR&sub6;R&sub7; oder Phenyl steht,

worin R&sub6; für H oder C&sub1;&submin;&sub1;&sub0;Alkyl steht und R&sub7; für C&sub1;&submin;&sub1;&sub0;Alkyl, -CO-R&sub8;, CS-R&sub8; oder SO&sub2;-R&sub8; steht, worin R&sub8; steht für H oder C&sub1;&submin;&sub1;&sub0;Alkyl, C&sub1;&submin;&sub1;&sub0;Alkoxy, C&sub1;&submin;&sub1;&sub0;Aryl, C&sub1;&submin;&sub1;&sub0;Aralkyl, das wahlweise mit bis zu drei Gruppen subtituiert ist, die ausgewählt sind aus Halogen, OH, C&sub1;&submin;&sub4;Alkoxy, C(NH)R&sub9;, NR&sub1;&sub0;R&sub1;&sub1; und C(O)OR&sub6; (worin R&sub6; wie oben definiert ist)

worin R&sub9; für C&sub1;&submin;&sub3;Alkyl oder N(CH&sub3;) steht und worin R&sub1;&sub0; und R&sub1;&sub1; (die gleich oder verschieden sein können) für H oder C&sub1;&submin;&sub1;&sub0;Alkyl stehen,

und das mit * markierte asymmetrische Kohlenstoffätom die D- oder 1-Konfiguration aufweist und die Verbindungen jedes Gemisch aus diesen enthalten können.

2. Verbindung nach Anspruch 1, worin W für H(CH&sub2;CH&sub2;O)p-, R&sub1;&sub2;CO-, R&sub1;&sub3;OCO oder R&sub1;&sub4;SO&sub2;- steht, worin

R&sub1;&sub2; für C&sub1;&sub4;Alkyl oder H(CH&sub2;-O-CH&sub2;)p steht

R&sub1;&sub3; für C&sub1;&sub4;Alkyl, Phenyl, Benzyl oder Naphthyl steht, und

R&sub1;&sub4; für Phenyl, Naphthyl oder C&sub1;&sub4;Alkylphenyl steht

worin p für 3-30 steht.

3. Verbindung nach Anspruch 1 oder 2 der Formel Ia

worin W, Y, R&sub4; und R&sub5; wie in den Ansprüchen 1 oder 2 definiert sind und R&sub1;&sub5; und R&sub1;&sub6; für den Rest einer Dihydroxyverbindung stehen.

4. Verbindung nach Anspruch 1 oder 2, worin Q&sub1; und Q&sub2; zusammen für eine Gruppe der Formel (a) oder (b) stehen

worin L für eine C&sub1;&submin;&sub4;Alkylgruppe steht.

5. Verbindung nach einem der Ansprüche 1 bis 4, worin die unnatürliche Aminosäure die Formel II aufweist

worin R&sub1;&sub7; für eine hydrophobe Gruppe steht, die aus einer alicyclischen Gruppe mit mindestens zwei Ringen ohne polare Substituenten besteht und entweder direkt oder über eine Methylengruppe an die Aminosäure gebunden ist, wobei die Methylengruppe an eine aromatische Gruppe, die wahlweise mit einer polaren Gruppe substituiert ist, oder an eine tert-Butyl oder Trimethylsilylgruppe gebunden ist.

6. Verbindung nach Anspruch 5, worin R&sub1;&sub7; für R&sub1;&sub7;' steht und eine Gruppe der Formel (c), (d), (e), (f), (g), (h) oder (i) ist

7. Verbindung nach Anspruch 1, die aus den Verbindungen der Formeln III, IV, V und VI ausgewählt ist

8. Verfahren zur Herstellung einer Verbindung der Formel I nach Anspruch 1, gekennzeichnet durch

(i) wenn X für NHCHO oder NHCOAlkyl steht, Umsetzung einer Verbindung der Formel I, worin X für -NH&sub2; steht, mit einer aktiven Form der entsprechenden Säure,

(ii) wenn X für NHCOAlkoxy steht, Behandlung der Verbindung der Formel I, worin X für NH&sub2; steht, mit N,O- Bis(trimethylsilyl)acetamid gefolgt von der Zugabe einer äktiven Form des entsprechenden Esters,

(iii) wenn X für NHC(S)NHAlkyl steht, Umsetzung der Verbindung der Formel I, worin X für -NH&sub2; steht, mit dem entsprechenden Alkylisothiocyanat,

(iv) wenn X für NHCHS steht, Umsetzung der Verbindung der Formel I, worin X für -NHCHO steht, mit einem Laweson-Reagenz,

(v) wenn X für ein wahlweise substituiertes Phenyl steht, Umsetzung einer Verbindung der Formel VII

worin Q1 und Q2 nach Anspruch 1 definiert sind und R&sub1;&sub9; für -A-Phenyl (wahlweise substituiert) steht, worin A nach Anspruch 1 definiert ist, mit Linkupplung mit einem geschützten Peptid der Formel VIII

worin W und Y nach Anspruch 1 definiert sind, und

(vi) wenn X für OH steht, Umsetzung einer Verbindung der Formel I, worin X für -OSi(CH&sub3;)-C(CH&sub3;) steht, mit einem Desilylierungsmittel.

9. Verbindung nach einem der Ansprüche 1 bis 7 zur Verwendung als Pharmazeutiküm.

10. Therapeutische Zusammensetzung, die eine Verbindung nach einem der Ansprüche 1 bis 7 zusammen mit pharmazeutisch annehmbaren Zusätzen und/oder Verdünnungsmitteln enthält.

11. Verwendung einer Verbindung nach einem der Ansprüche 1 bis 7 zur Herstellung eines Arzneimittels zur Hemmung von Trypsin-ähnlichen Serinproteasen.

12. Verwendung nach Anspruch 11, dadurch gekennzeichnet, däß die Trypsin-ähnliche Serinprotease Thrombin, Faktor Xa, Kallikrein, Plasmin, Prolylendopeptidase oder IgAI Protease ist.

13. Therapeutische Zusammensetzung mit einer antikoagulierenden oder antithrombogenen Aktivität, die eine Verbindung nach einem der Ansprüche 1 bis 7 zusammen mit pharmazeutisch annehmbaren Zusätzen und/oder Verdünnungsmitteln enthält.

14. Verwendung nach Anspruch 12 zur Hemmung von Thrombin.

15. Verwendung einer Verbindung nach einem der Ansprüche 1 bis 7 zur Herstellung eines Arzneimittels zur Verwendung als Inhibitor des vaskulären Wiederaufbaus nach einer venösen oder arteriellen Operation oder einer anderen Form der vaskulären Zerstörung.