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KR20160094971A - 인돌아민 2,3-디옥시게나제 억제제의 합성 방법 - Google Patents

인돌아민 2,3-디옥시게나제 억제제의 합성 방법 Download PDF

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KR20160094971A
KR20160094971A KR1020167015077A KR20167015077A KR20160094971A KR 20160094971 A KR20160094971 A KR 20160094971A KR 1020167015077 A KR1020167015077 A KR 1020167015077A KR 20167015077 A KR20167015077 A KR 20167015077A KR 20160094971 A KR20160094971 A KR 20160094971A
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데이빗 제이. 멜로니
링카이 웡
자청 저우
융춘 판
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인사이트 홀딩스 코포레이션
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Abstract

본원은, 암 및 다른 장애의 치료에 유용한, 인돌아민 2,3-디옥시게나제의 억제제인 4-({2-[(아미노설포닐)아미노]에틸}아미노)-N-(3-브로모-4-플루오로페닐)-N'-하이드록시-1,2,5-옥사디아졸-3-카복스이미다마이드를 제조하기 위한 방법 및 중간체에 관한 것이다.

Description

인돌아민 2,3-디옥시게나제 억제제의 합성 방법 {PROCESS FOR THE SYNTHESIS OF AN INDOLEAMINE 2,3-DIOXYGENASE INHIBITOR}
본원은 2013년 11월 8일 자 출원된 미국 가 출원 번호 61/901,689를 우선권 주장하며, 상기 가 출원 전체는 본원에 참고로 포함된다.
본원은, 암 및 다른 장애의 치료에 유용한, 인돌아민 2,3-디옥시게나제의 억제제인 4-({2-[(아미노설포닐)아미노]에틸}아미노)-N-(3-브로모-4-플루오로페닐)-N'-하이드록시-1,2,5-옥사디아졸-3-카복스이미다마이드를 제조하는 방법, 및 중간체에 관한 것이다.
트립토판 (Trp)은 단백질, 니아신 및 신경전달물질 5-하이드록시트립타민 (세로토닌)의 생합성에 필요한 필수 아미노산이다. 효소 인돌아민 2,3-디옥시게나제 (INDO 또는 IDO로 또한 공지됨)는 L-트립토판의 N-포르밀-카이뉴레닌으로의 분해에서 제1 및 속도 제한 단계를 촉매화한다. 인간 세포에서, IDO 활성으로부터 비롯된 Trp의 결핍(depletion)은 탁월한 감마 인터페론 (IFN-γ)-유도가능한 항균성 작용인자 기전이다. IFN-γ 자극은 IDO의 활성화를 유도하는데, 이는 Trp의 결핍을 일으켜서 Trp-의존성 세포내 병원체, 예컨대, 톡소플라즈마 곤딜(Toxoplasma gondii) 및 클라미디아 트라코마티스의 성장을 저지한다. IDO 활성은 또한 많은 종양 세포에 대해 항증식 효과를 가지며 동종이형 종양의 거부 동안 생체내에서 IDO 유도가 관찰되었는데, 이는 종양 거부 과정에서 이 효소의 가능한 역할을 나타낸다 (Daubener, et al., 1999, Adv . Exp . Med . Biol., 467: 517-24; Taylor, et al., 1991, FASEB J., 5: 2516-22).
말초 혈액 림프구(PBLs)와 공동-배양된 HeLa 세포는 IDO 활성의 상향 조절을 통해 면역-억제성 표현형을 획득하는 것으로 관찰되었다. 인터류킨-2 (IL2)를 사용한 치료 시에 PBL 증식에서의 감소는, PBLs에 의한 IFNG 분비에 반응하여 종양 세포에 의해 분비된 IDO로부터 비롯되는 것으로 생각되었다. 이 효과는 특정 IDO 억제제인 1-메틸-트립토판 (1MT)으로의 처리에 의해 역전되었다. 종양 세포에서 IDO 활성이 항종양 반응을 손상시키도록 제공될 수 있음이 제안되었다 (Logan, et al., 2002, Immunology, 105: 478-87).
최근에는, Trp 결핍의 면역조절 역할이 크게 주목되었다. 여러 증거들은 IDO가 면역 관용(tolerance)의 유도에 관련됨을 시사한다. 포유동물 임신, 종양 내성, 만성 감염 및 자가면역 질환의 연구로부터, IDO를 발현하는 세포가 T-세포 반응을 억제하고 관용을 촉진시킬 수 있음이 밝혀졌다. 가속된 Trp 이화작용은 세포성 면역 활성화와 관련된 질환 및 장애, 예컨대, 감염, 암, 자가면역 질환 및 AIDS에서 뿐만 아니라, 임신 동안 관찰되었다. 예를 들면, 증가된 수준의 IFN 및 상승된 수준의 소변 Trp 대사물질이 자가면역 질환에서 관찰되었다; 자가면역 질환에서 나타나는 Trp의 전신 또는 국소 결핍은 이러한 질환의 퇴행 및 소모성 증상과 관련될 수 있음이 가정되었다. 이러한 가설을 지지하여, 높은 수준의 IDO가 관절염 관절의 윤활액으로부터 단리된 세포에서 관찰되었다. IFNs은 또한 인간 면역결핍 바이러스 (HIV) 환자에서 상승되며, 증가하는 IFN 수준은 악화되는 예후와 관련된다. 따라서, IDO가 HIV 감염에 의해 만성적으로 유도되며 기회 감염에 의해 추가로 증가됨이, 및 Trp의 만성적 손실이 악액질, 치매 및 설사를 담당하는 기전, 및 가능하게는 AIDS 환자의 면역억제를 개시함이 제안되었다 (Brown, et al., 1991, Adv . Exp. Med . Biol., 294: 425-35). 이를 위해, 최근에는 IDO 억제가 HIV의 마우스 모델에서 바이러스-특이적 T 세포의 수준을 향상시키며 동시에 바이러스-감염된 대식세포의 수를 감소시킬 수 있음이 밝혀졌다 (Portula et al., 2005, Blood, 106: 2382-90).
IDO는, 자궁에서 태아 거부를 방지하는 면역억제 과정에서 역할을 담당하는 것으로 생각된다. 40년 넘게 전에, 조직 이식 면역학에 의해 예측될 것임에 불구하고, 임신 동안 유전적으로 비대응성의 포유동물 수태물이 생존함이 관찰되었다 (Medawar, 1953, Symp . Soc . Exp . Biol. 7: 320-38). 모체 및 태아의 해부학적 분리 및 태아의 항원 미숙은 태아 동종이식편 생존을 충분히 설명할 수 없다. 최근에는 모체의 면역학적 관용이 주목되었다. IDO가 인간 융합세포영양막 세포에 의해 발현되고 전신 트립토판 농도가 정상적인 임신 동안에는 감소되기 때문에, 모체-태아 경계면에서의 IDO 발현이 태아 동종이식편의 면역학적 거부를 방지하는데 필수적인 것으로 가정되었다. 이러한 가설을 시험하기 위해, (유전적동계 또는 동종이형 태아를 보유하는) 임신된 마우스를 1MT에 노출시켰고, 모든 동종이형 임신의 급속한 T 세포-유도된 거부가 관찰되었다. 따라서, 트립토판을 이화작용시킴으로써, 포유동물 수태물은 T-세포 활성을 억제시키고 거부에 대해 자체적으로 방어하는 것으로 보이며, 뮤린 임신 동안 트립토판 이화작용을 차단하면 모체 T 세포가 태아 동종이식편 거부를 자극할 수 있다 (Munn, et al., 1998, Science, 281: 1191-3).
IDO에 의한 트립토판 분해에 기반한 종양 면역 내성 기전에 대한 추가 증거는, 대부분의 인간 종양이 IDO를 구성적으로 발현하며 면역원성 마우스 종양 세포에 의한 IDO의 발현은 사전면역화시킨 마우스에 의한 이들의 거부를 방지한다는 관찰로부터 비롯된다. 이 효과는 종양 부위에서 특이적 T 세포의 축적 결핍에 의해 동반되며, 눈에 띄는 독성이 없는 가운데 IDO의 억제제를 사용한 마우스의 전신 처리에 의해 부분적으로 복귀될 수 있다. 따라서, 암 환자의 치료 백신의 효능은 IDO 억제제의 동시 투여에 의해 개선될 수 있음이 제안되었다 (Uyttenhove et al., 2003, Nature Med., 9: 1269-74). IDO 억제제, 1-MT가 화학요법제와 상승작용하여 마우스에서 종양 성장을 감소시킬 수 있음이 또한 밝혀졌는데, 이는 IDO 억제가 또한 종래 세포독성 치료제의 항-종양 활성을 향상시킬 수 있음을 시사한다 (Muller et al., 2005, Nature Med., 11: 312-9).
종양에 대한 면역학적 무반응의 원인이 되는 한 기전은, 관용유발 숙주 APCs에 의한 종양 항원의 제공일 수 있다. CD123 (IL3RA) 및 CCR6을 공동발현하고 T-세포 증식을 억제하는 인간 IDO-발현 항원-제공 세포 (APCs)의 아집단이 또한 기술되었다. 둘 모두의 성숙 및 미성숙 CD123-양성 수지상 세포가 T-세포 활성을 억제하였고, 이러한 IDO 억제 활성은 1MT에 의해 방해받았다 (Munn, et al., 2002, Science, 297: 1867-70). 마우스 종양-제거된(draining) 림프절(TDLNs)은 면역억제 수준의 IDO를 구성적으로 발현하는 플라스마사이토이드(plasmacytoid) 수지상 세포 (pDCs)의 아집단을 함유함이 또한 실증되었다. 시험관 내에서 단지 0.5%의 림프절 세포를 포함함에도 불구하고, 이러한 pDCs는 pDCs 자체에 의해 제공된 항원에 대한 T 세포 반응을 효력있게 억제하였고 또한 우세한 방식으로 비억제성 APCs에 의해 제공된 제3 그룹의 항원에 대한 T 세포 반응을 억제하였다. pDCs의 집단 내에서, 기능적인 IDO-매개된 억제제 활성의 대부분은 B-연결 마커 CD19를 공동발현하는 pDCs의 신규 아집단과 함께 분리되었다. 따라서, TDLNs에서 pDCs에 의한 IDO-매개된 억제는 숙주 항종양 T 세포 반응을 효력있게 억제하는 국소 미세환경을 생성시킴이 가정되었다 (Munn, et al., 2004, J. Clin . Invest., 114(2): 280-90).
IDO는 트립토판, 세로토닌 및 멜라토닌의 인돌 모이어티를 분해시키며, 카이뉴레닌으로 집합적으로 공지된 신경활성 및 면역조절성 대사물질의 생성을 개시한다. 트립토판을 국소적으로 결핍시키고 프로아폽토틱(proapoptotic) 카이뉴레닌을 증가시킴으로써, 수지상 세포(DCs)에 의해 발현된 IDO는 T-세포 증식 및 생존에 크게 영향을 미칠 수 있다. DCs에서 IDO 유도는 조절성 T 세포에 의해 유도된 결실된 관용의 일반 기전일 수 있었다. 그와 같은 관용성 반응이 다양한 생리병리학적인 조건에서 나타나는 것으로 예상될 수 있기 때문에, 트립토판 대사 및 카이뉴레닌 생성은 면역계와 신경계 사이에 결정적인 경계면을 나타낼 수 있다 (Grohmann, et al., 2003, Trends Immunol., 24: 242-8). 지속적인 면역 활성화 상태에서, 유리 혈청 Trp의 생체이용률은 감소되며, 감소된 세포토닌 생성의 결과로 세로토닌 기능들이 또한 영향받을 수 있다 (Wirleitner, et al., 2003, Curr . Med . Chem., 10: 1581-91).
흥미롭게도, 인터페론-α의 투여가 신경정신과적 부작용, 예컨대, 우울 증상 및 인지 기능에서의 변화를 유도하는 것으로 관찰되었다. 세로토닌 신경전달에 대한 직접적인 영향이 이러한 부작용의 원인일 수 있다. 또한, IDO 활성화가 감소된 수준의 트립토판을 초래하기 때문에, 세로토닌 (5-HT)의 전구체, IDO가 중추 5-HT 합성을 감소시킴으로써 이러한 신경정신과적 부작용에서 역할을 담당할 수 있다. 더욱이, 카이뉴레닌 대사물질, 예컨대, 3-하이드록시-카이뉴레닌 (3-OH-KYN) 및 퀴놀린산(QUIN)은 뇌 기능에 대해 독성 효과를 갖는다. 3-OH-KYN은 반응성 산소 종 (ROS)의 생성을 증가시켜서 산화적 스트레스를 나타낼 수 있고, QUIN은 아폽토시스 및 해마 위축증을 일으키는 해마 N-메틸-D-아스파르테이트 (NMDA) 수용체의 과다자극을 나타낼 수 있다. ROS 과다생성, 및 NMDA 과다자극에 의해 나타난 해마 위축증은 우울증과 관련되었다 (Wichers and Maes, 2004, J. Psychiatry Neurosci., 29: 11-17). 따라서, IDO 활성은 우울증에서 역할을 담당할 수 있다.
IDO의 소 분자 억제제가 IDO-관련된 질환, 예컨대, 상기한 것들을 치료 또는 예방하기 위해 개발되고 있다. 예를 들면, 옥사디아졸 및 다른 복소환식 IDO 억제제는 US 2006/0258719 및 US 2007/0185165에 보고되어 있다. PCT 공개 WO 99/29310에는 IDO 억제제, 예컨대, 1-메틸-DL-트립토판, p-(3-벤조푸라닐)-DL-알라닌, p-[3-벤조(b)티에닐]-DL-알라닌, 및 6-니트로-L-트립토판을 사용하여 트립토판 및 트립토판 대사물질의 국소 세포외 농도를 변경시키는 것을 포함하는 T 세포-매개된 면역성 변경 방법이 보고되어 있다 (Munn, 1999). 유럽 특허 1501918로 또한 공표된 WO 03/087347에는, T 세포 관용을 향상 또는 감소시키기 위한 항원-제공 세포의 제조 방법이 보고되어 있다 (Munn, 2003). 인돌아민-2,3-디옥시게나제 (IDO) 억제 활성을 갖는 화합물이 WO 2004/094409에 추가로 보고되어 있고; 미국 특허 출원 공개 번호 2004/0234623은 다른 치료 양식(modality)과 함께 인돌아민-2,3-디옥시게나제 억제제의 투여에 의해 암 또는 감염증을 갖는 대상체의 치료 방법에 관한 것이다.
면역억제, 종양 내성 및/또는 거부, 만성 감염, HIV-감염, AIDS (악액질, 치매 및 설사와 같은 그 징후(manifestation)를 포함함), 자가면역 질환 또는 장애 (예컨대, 류머티스성 관절염), 및 면역학적 관용 및 자궁 내 태아 거부 방지에서 IDO에 대한 역할을 나타내는 실험 데이터의 측면에서, IDO 활성을 억제시킴으로써 트립토판 분해 억제를 목적으로 한 치료제가 바람직하다. IDO 억제제는 T 세포를 활성화시키며, 따라서 상기 T 세포가 임신, 암 또는 바이러스, 예컨대, HIV에 의해 억제되는 경우에 T 세포 활성화를 향상시키는데 사용될 수 있다. IDO의 억제는 또한 신경학적 또는 신경정신과적 질환 또는 장애, 예컨대, 우울증을 앓는 환자에 대한 중요한 치료 전략일 수 있다.
IDO 억제제의 상기 유용성 때문에, IDO 억제제의 신규 제조 방법을 개발할 필요가 있다. 본원은 이러한 요구 및 기타 것들에 관한 것이다.
발명의 요약
하기 식 I을 갖는 화합물 4-({2-[(아미노설포닐)아미노]에틸}아미노)-N-(3-브로모-4-플루오로페닐)-N'-하이드록시-1,2,5-옥사디아졸-3-카복스이미다마이드는 효소 인돌아민 2,3-디옥시게나제 (IDO로 또한 공지됨)의 억제제이다:
Figure pct00001
.,
식 I의 화합물 뿐만 아니라 그것의 제법 및 용도가, 전체가 본원에 참고로 편입되어 있는 미국 특허 번호 8,088,803에 기술되어 있다. 본원에 제공된 중간체 및 방법은, 심각한 질환의 치료를 위한 IDO 억제제의 개발에 대해 진행 중인 요구를 만족시키는 것을 돕는다.
본원은 그 중에서도, 하기 식 I의 화합물을 제조하기 위한 중간체 및 방법을 제공한다:
Figure pct00002
.
따라서, 본원은 하기 식 F5의 화합물을 하기 식 F6의 알데하이드와 반응시켜서 하기 식 F7의 화합물을 수득하는 것을 포함하는 방법을 제공한다:
Figure pct00003
,
Figure pct00004
,
Figure pct00005
상기 식에서, Pg1은 하기 정의되어 있다.
본원은 추가로 하기 식 F15의 화합물을 하기 식 F5의 화합물과 반응시켜서 하기 식 F16의 화합물을 수득하는 것을 포함하는 방법을 제공한다:
Figure pct00006
,
Figure pct00007
상기 식에서, R1 및 R3은 하기 정의되어 있다.
본원은 추가로 하기 식 F17의 화합물을 하기 식 F5의 화합물과 반응시켜서 하기 식 F18의 화합물을 수득하는 것을 포함하는 방법을 제공한다:
Figure pct00008
,
Figure pct00009
상기 식에서, R4는 하기 정의되어 있다.
특정의 공정 단계가 하기 도식에 예시되어 있지만, 개별 공정 단계는 개별적으로 또는 임의의 조합으로 청구될 수 있음이 의도된다 (예를 들면, 도식 I에서, 단계 E, F, G, H, 및 I는 개별적으로 또는 조합으로 청구될 수 있다). 공정들은 하기 도식에서의 각각 및 모든 단계를 갖는 전체 공정으로 제한되는 것으로 의도되지 않는다.
따라서, 식 I의 화합물을 제조하기 위한 일반적인 도식이 하기 도식 1에 기술되어 있다.
Figure pct00010
따라서, 본원은 하기 식 F5의 화합물을 하기 식 F6의 알데하이드와 반응시켜서 하기 식 F7의 화합물을 수득하는 것을 포함하는 방법을 제공한다:
Figure pct00011
,
Figure pct00012
,
Figure pct00013
상기 식에서, Pg1은 아미노 보호 그룹이다.
아미노 보호 그룹 Pg1이, 원하는 변형을 수행하면서 아미노 그룹의 원치않는 반응을 방지하는데 사용될 수 있다. 아미노 보호 그룹에 의해 질소 원자에 대한 용이한 공유 결합 뿐만 아니라 상기 질소 원자로부터의 선택적 절단이 허용된다. 적합한 "아미노 보호 그룹", 예컨대, 알콕시카보닐 (예컨대, 에톡시카보닐, tert-부톡시카보닐 (Boc), 벤질옥시카보닐 (Cbz), 9-플루오레닐메틸옥시카보닐 (Fmoc) 등), 아실 (예컨대, 아세틸 (Ac), 벤조일 (Bz) 등), 설포닐 (예컨대, 메탄설포닐, 트리플루오로메탄설포닐 등), 아릴알킬 (예컨대, 벤질, 4-메톡시벤질, 디페닐메틸, 트리페닐메틸 (트리틸) 등), 알케닐알킬 (예컨대, 알릴, 프레닐 등), 디아릴메틸레네일 (예컨대, (C6H5)2C=N 등), 및 실릴 (예컨대, tert-부틸디메틸실릴, 트리이소프로필실릴 등)이 당해 분야의 숙련가에게 공지되어 있다. 아미노 보호 그룹의 화학성은, 전체가 본원에 참고로 편입되어 있는 문헌 [Wuts and Greene, Greene's Protective Groups in Organic Synthesis, 4th Ed., pp 696-926, John Wiley & Sons: New York, 2006]에서 확인할 수 있다.
일부 구현예에서, Pg1은 에톡시카보닐, tert-부톡시카보닐, 벤질옥시카보닐, 또는 9-플루오레닐메틸옥시카보닐이다.
일부 구현예에서, Pg1은 C1-6 알콕시카보닐이다.
일부 구현예에서, Pg1은 tert-부톡시카보닐이다.
단계 E에 대한 적절한 용매는 비제한적으로 메탄올 또는 테트라하이드로푸란 (THF), 아세토니트릴 등을 포함한다. 할로겐화 탄화수소 용매 (즉, 할로겐화된 알칸, 예컨대, 디클로로메탄, 클로로포름, 디클로로에탄 또는 테트라클로로에탄)가 또한 사용될 수 있다.
일부 구현예에서, 상기 반응은 테트라하이드로푸란을 포함하는 용매 성분 중에서 수행된다. 본원에서 사용된 바와 같이, 용매 성분은 한 용매, 또는 용매의 혼합물을 칭할 수 있다. 일부 구현예에서, 용매 성분은 유기 용매이다. 일부 구현예에서, 상기 반응은 할로겐화 탄화수소 용매를 포함하는 용매 성분 중에서 수행된다. 일부 구현예에서, 상기 할로겐화 탄화수소 용매는 디클로로메탄이다.
일부 구현예에서, 상기 반응은 아세토니트릴을 포함하는 용매 성분 중에서 수행된다.
일부 구현예에서, 상기 반응은 디클로로메탄 및 아세토니트릴을 포함하는 용매 성분 중에서 수행된다.
일부 구현예에서, 상기 반응은 환원제의 존재 하에서 수행된다.
환원제는 유기 화합물을 더 낮은 산화 상태로 환원시킬 수 있는 임의의 화합물일 수 있다. 환원은 보통 수소 원자의 부가, 또는 그룹으로부터 산소 원자의 제거를 포함한다. 예를 들면, 알데하이드, 예컨대, F6은 수소 기체 (H2) 형태 또는 하이드라이드 시약 (예컨대, NaB(OAc)3H, NaBH4, LiAlH4 등)을 사용한 수소의 부가에 의해; 트리페닐포스핀을 사용하여; 또는 아이오딘화나트륨, 클로로트리메틸실란, 및 메탄올의 조합물을 사용하여 식 F5의 아민의 존재 하에서 환원될 수 있다 (단계 E, 도식 1). 일부 구현예에서, 이 단계는 산 (예컨대, 트리플루오로아세트산)의 존재 하에서 산성 조건 아래에서 수행될 수 있다. 일부 구현예에서, 이 단계는 약 -15℃ 내지 약 30℃, 예를 들면, 약 -15℃ 내지 약 0℃, 약 -5℃ 내지 약 5℃, 약 -5℃ 내지 약 0℃, 또는 약 0℃ 내지 약 45℃의 온도에서 수행될 수 있다.
일부 구현예에서, 상기 환원제는 보로하이드라이드 환원제 (예를 들면, NaB(OAc)3H, NaBH4, 또는 다른 붕소 함유 하이드라이드 환원제)이다.
일부 구현예에서, 상기 보로하이드라이드 환원제는 나트륨 트리아세톡시보로하이드라이드이다.
일부 구현예에서, 상기 반응은 트리플루오로아세트산의 존재 하에서 수행된다.
일부 구현예에서, 상기 방법은 추가로 상기 식 F7의 화합물을 탈보호시켜서 하기 식 F8의 화합물을 수득하는 것을 포함한다:
Figure pct00014
.
이 단계 F에 유용한 아미노 탈보호제가 당해 분야의 숙련가에게 공지, 예컨대, 상기 워츠 및 그리네(Wuts and Greene)의 문헌에 공지되어 있다. 특히, 상기 아미노 보호 그룹은 화합물의 다른 원하는 부분에는 영향을 미치지 않으면서 상기 언급된 다양한 그룹에 특이적인 많은 이용가능한 아미노 탈보호제를 사용하여 편리하게 제거될 수 있다. tert-부톡시카보닐 그룹은 예를 들면, 산 (예컨대, 염산, 트리플루오로아세트산, 톨루엔설폰산 등); 산을 생성시키는 것으로 공지된 시약 조합물 (예를 들면, 아세틸 클로라이드와 메탄올의 혼합물); 또는 루이스산 (예를 들면, BF3·Et2O)으로의 처리에 의해 질소 원자로부터 제거 (예를 들면, 가수분해)될 수 있다. 벤질옥시카보닐 그룹은 예를 들면, 수소 및 촉매 (예컨대, 탄소상 팔라듐)로의 처리에 의해 질소 원자로부터 제거 (예를 들면, 수소화분해)될 수 있다.
일부 구현예에서, 아미노 탈보호제는 트리플루오로아세트산이다. 일부 구현예에서, 아미노 탈보호제는 트리플루오로아세트산, 및 > 0.5 용적%의 물, 예를 들면, > 1.0 용적%의 물, > 1.5 용적%의 물, > 2.0 용적%의 물, 약 2 내지 약 10 용적%의 물, 약 10 내지 약 20 용적%의 물, 또는 약 20 내지 약 50 용적%의 물을 함유한다. 일부 구현예에서, 아미노 탈보호제는 약 98:2의 용적 비의 트리플루오로아세트산과 물의 혼합물일 수 있다. 일부 구현예에서, 아미노 탈보호제는 임의로 용매 (예를 들면, 물, THF, 디옥산, 에틸 아세테이트 등) 중의 염산일 수 있다. 일부 구현예에서, 용매 성분은 에틸 아세테이트이다. 일부 구현예에서, 아미노 탈보호제는 임의로 용매, 예컨대, 알코올 (예컨대, 이소프로판올, 메탄올 또는 에탄올) 중의 염산일 수 있다. 할로겐화 탄화수소 용매 (예를 들면, 디클로로메탄, 클로로포름, 디클로로에탄 또는 테트라클로로에탄)가 또한 사용될 수 있다. 일부 구현예에서, 염산 및 식 F7의 화합물의 몰 비는 약 6.0, 약 5.0, 약 4.0, 약 3.0 약 2.0, 약 1.0, 또는 약 1.1이다. 일부 구현예에서, 단계 F는 약 -10℃ 내지 약 60℃, 예를 들면, 약 -10℃ 내지 약 0℃, 약 0℃ 내지 약 25℃, 약 25℃ 내지 약 45℃, 또는 약 45℃ 내지 약 60℃의 온도에서 수행될 수 있다.
일부 구현예에서, 상기 탈보호는 식 F7의 화합물을 염산과 반응시키는 것을 포함한다.
일부 구현예에서, 상기 탈보호는 식 F7의 화합물을 이소프로판올을 포함하는 용매 성분 중에서 염산과 반응시키는 것을 포함한다.
일부 구현예에서, 상기 탈보호는 식 F7의 화합물을 할로겐화 탄화수소 용매를 포함하는 용매 성분 중에서 염산과 반응시키는 것을 포함한다.
일부 구현예에서, 상기 할로겐화 탄화수소 용매는 디클로로메탄이다.
일부 구현예에서, 본 발명은 상기 식 F8의 화합물을 유기 염기의 존재 하에서 Pg2-NH-SO2-X와 반응시켜서 하기 식 F9의 화합물을 수득하는 것을 추가로 포함한다:
Figure pct00015
,
상기 식에서,
Pg2는 아미노 보호 그룹이고;
X는 할로이다.
일부 구현예에서, Pg2-NH-SO2Cl은 제조되어 식 F8의 화합물과의 반응에 즉시 사용될 수 있다. 보호 그룹 Pg2는 아민 또는 설폰아마이드를 보호하기 위해 당해 기술에 공지된 임의의 보호 그룹들 (예컨대, Pg1에 대해 상기된 것들)로부터 선택될 수 있었다. 일부 구현예에서, Pg2는 알콕시카보닐 그룹 (예컨대, tert-부톡시카보닐)일 수 있다.
적절한 용매는 비제한적으로 할로겐화 탄화수소 용매, 예컨대, 디클로로메탄 등을 포함한다. 유기 염기는, 식 F8의 화합물 및 보호된 아미노-설포닐 클로라이드의 반응 동안에 생성된 HCl을 중화시키도록 제공되는 임의의 염기일 수 있다. 유기 염기는 비환식 3차 아민, 예컨대, 트리(C1-6)알킬아민 (예를 들면, 트리에틸아민, 디이소프로필에틸아민 (DIPEA) 등), 환형 3차 아민 (예를 들면, N-메틸 피페리딘, 1,4-디아자바이사이클로[2.2.2]옥탄 (DABCO) 등)을 포함할 수 있다. 일부 구현예에서, 유기 염기는 트리에틸아민일 수 있다. 일부 구현예에서, 이 단계는 약 -15℃ 내지 약 60℃, 예를 들면, 약 -15℃ 내지 약 0℃, 약 0℃ 내지 약 25℃, 약 25℃ 내지 약 45℃, 또는 약 45℃ 내지 약 60℃의 온도에서 수행될 수 있다.
그와 같은 구현예에서, Pg2-NH-SO2Cl은 알코올 (예컨대, 에탄올, tert-부틸 알코올 등)과 클로로설포닐 이소시아네이트 (ClS(O)2NCO)의 반응에 의해 얻어질 수 있다.
일부 구현예에서, Pg2는 에톡시카보닐, tert-부톡시카보닐, 벤질옥시카보닐, 또는 9-플루오레닐메틸옥시카보닐이다.
일부 구현예에서, Pg2는 C1-6 알콕시카보닐이다.
일부 구현예에서, Pg2는 tert-부톡시카보닐이다.
일부 구현예에서, 상기 반응은 할로겐화 탄화수소 용매를 포함하는 용매 성분 중에서 수행된다.
일부 구현예에서, 상기 할로겐화 탄화수소 용매는 디클로로메탄이다.
일부 구현예에서, 상기 유기 염기는 트리(C1-6)알킬아민을 포함한다.
일부 구현예에서, 상기 유기 염기는 트리에틸아민이다.
일부 구현예에서, X는 클로로이다.
일부 구현예에서, 본 발명은 추가로 상기 식 F9의 화합물을 탈보호하여 하기 식 F10의 화합물을 수득하는 것을 포함한다:
Figure pct00016
일부 구현예에서, 적합한 탈보호제는 식 F7의 화합물을 탈보호시키기 위해 상기한 것들을 포함할 수 있다.
일부 구현예에서, 상기 탈보호는 식 F9의 화합물을 염산과 반응시키는 것을 포함한다. 일부 구현예에서, 상기 탈보호는 식 F9의 화합물을 알코올을 포함하는 용매 성분 중에서 염산과 반응시키는 것을 포함한다. 일부 구현예에서, 상기 알코올은 에탄올이다. 일부 구현예에서, 상기 탈보호는 식 F9의 화합물을 에틸 아세테이트를 포함하는 용매 성분 중에서 염산과 반응시키는 것을 포함한다.
일부 구현예에서, 본 발명은 추가로 상기 식 F10의 화합물을 염기와 반응시켜서 하기 식 I의 화합물을 수득하는 것을 포함한다:
Figure pct00017
.
임의로 용매 중에서 식 I의 화합물 내 아미독심이 드러나도록 F10에서의 옥사디아졸론 고리를 전환 (예를 들면, 가수분해)시키기 위해 염기가 사용될 수 있다 (단계 I, 도식 1). 옥사디아졸론으로서 아미독심의 보호는 전체적으로 하이드록실 그룹의 유해 반응 또는 아미독심의 유해 반응을 방지하는데 유용할 수 있다. 염기는 무기 염기, 예컨대, 알칼리 금속 하이드록사이드 (예를 들면, NaOH, LiOH, KOH, Mg(OH)2 등); 또는 유기 염기, 예컨대, 비환식 아민 (예를 들면, 트리에틸아민, 디이소프로필에틸아민 (DIPEA) 등) 또는 환형 아민 (예를 들면, 피롤리딘, 피페리딘 등)일 수 있다. 염기는 수지 (예컨대, 앰버라이트(Amberlite)® 등) 형태로 이용가능하도록 제조될 수 있다. 일부 추가 구현예에서, 염기는 수용액 형태로 제공될 수 있다 (예를 들면, 약 0.5N 용액, 약 1N 용액, 약 1.5N 용액, 약 2.5N 용액, 약 3N 내지 약 5N 용액, 약 5N 내지 약 10N 용액). 일부 구현예에서, 염기는 알칼리 금속 하이드록사이드 (예컨대, 수산화나트륨)이다. 일부 구현예에서, 염기는 수 중 2N NaOH 용액일 수 있다. 일부 구현예에서, 용매는 에탄올 또는 테트라하이드로푸란 (THF)일 수 있다. 일부 구현예에서, 용매는 에탄올과 물의 혼합물일 수 있다. 일부 구현예에서, 식 F10의 화합물을 염기와 반응시켜서 식 I의 화합물을 수득하는 것은 약 -10℃ 내지 약 60℃, 예를 들면, 약 -10℃ 내지 약 20℃, 약 0℃ 내지 약 30℃, 약 0℃ 내지 약 10℃, 또는 약 0℃ 내지 약 5℃의 온도에서 수행될 수 있다.
일부 구현예에서, 상기 염기는 알칼리 금속 하이드록사이드를 포함한다.
일부 구현예에서, 상기 알칼리 금속 하이드록사이드는 수산화나트륨이다.
일부 구현예에서, 상기 반응은 테트라하이드로푸란, 물 및 에탄올을 포함하는 용매 성분 중에서 수행된다.
일부 구현예에서, 식 F5의 화합물은 도식 2에 나타난 연속 단계에서 수득될 수 있다. 중간체, 4-아미노-N'-하이드록시-1,2,5-옥사디아졸-3-카복스이미다마이드 F2의 제법은, 전체가 본원에 참고로 편입되어 있는 문헌 [J. heterocycl . Chem. (1965), 2, 253]에 기술되어 있고, 그것의 클로로 옥심 F3으로의 전환은, 전체가 본원에 참고로 편입되어 있는 문헌 [Synth . Commun. (1988), 18, 1427]에 기술되어 있다. 일부 구현예에서, 식 F3의 클로로 옥심이 임의로 용매 (예컨대, 물) 중에서 3-브로모-4-플루오로아닐린에 커플링된 다음, 중탄산나트륨이 부가되어 식 F4의 아미독심이 제공될 수 있다. 그 후, F4의 화합물의 아미독심 작용가는 고온, 예컨대, 약 50℃, 약 60℃, 약 70℃, 약 80℃, 약 90℃, 또는 약 100℃에서 용매 (예컨대, 에틸 아세테이트, 디옥산, THF 등) 중의 N,N-카보닐디이미다졸 (DCI)을 사용하여 옥사디아졸론 또는 식 F5로 전환될 수 있다 .
Figure pct00018
대안적으로, 식 F10의 화합물은 하기 도식 3에 나타난 연속 단계를 통해 얻어질 수 있다.
Figure pct00019
일부 구현예에서, 본원은 하기 식 F15의 화합물을 하기 식 F5의 화합물과 반응시켜서 하기 식 F16의 화합물을 수득하는 것을 포함하는 방법을 제공한다:
Figure pct00020
,
Figure pct00021
,
Figure pct00022
,
상기 식에서,
각각의 R1은 독립적으로 아미노 보호 그룹이고;
R3은 C1-6 알킬 또는 벤질이다.
일부 구현예에서, R1은 C2-4 알케닐-C1-3 알킬 또는 페닐-C1-3 알킬인데, 여기서 상기 페닐-C1-3 알킬은 1, 2, 또는 3개의 독립적으로 선택된 C1-4 알콕시 그룹에 의해 임의로 치환된다.
일부 구현예에서, R1은 C2-4 알케닐-C1-3 알킬 또는 페닐-C1-3 알킬인데, 여기서 상기 페닐-C1-3 알킬은 1, 2, 또는 3개의 메톡시 그룹에 의해 임의로 치환된다.
일부 구현예에서, R1은 알릴이다.
일부 구현예에서, R1은 4-메톡시벤질이다.
일부 구현예에서, R3은 C1-6 알킬이다.
일부 구현예에서, R3은 tert-부틸이다.
일부 구현예에서, R3은 C1-4 알킬이다.
일부 구현예에서, R3은 부틸이다.
바람직하게는, 상기 반응은 환원제의 존재 하에서 수행된다. 환원제는 유기 화합물을 더 낮은 산화 상태로 환원시킬 수 있는 임의의 화합물일 수 있다. 일부 구현예에서, 상기 환원제는 촉매 또는 하이드라이드 시약 (예컨대, NaB(OAc)3H, NaBH4, LiAlH4 등)의 존재 하에서; 트리페닐포스핀을 사용하는; 또는 아이오딘화나트륨, 클로로트리메틸실란, 및 메탄올의 조합물을 사용하는 수소 기체일 수 있다. 일부 구현예에서, 이 단계는 산, 예컨대, 트리플루오로아세트산의 존재 하에서 수행될 수 있다. 이 단계에 대한 적합한 용매는 이소프로필 알코올, THF, 디옥산 등을 포함한다. 일부 구현예에서, 이 단계는 약 -15℃ 내지 약 30℃, 예를 들면, 약 -15℃ 내지 약 0℃, 약 -5℃ 내지 약 5℃, 약 -5℃ 내지 약 0℃, 약 0 내지 5℃, 또는 약 0℃ 내지 약 45℃의 온도에서 수행될 수 있다.
일부 구현예에서, 상기 반응은 테트라하이드로푸란을 포함하는 용매 성분 중에서 수행된다.
일부 구현예에서, 상기 반응은 환원제의 존재 하에서 수행된다.
일부 구현예에서, 상기 환원제는 보로하이드라이드 환원제이다.
일부 구현예에서, 상기 보로하이드라이드 환원제는 나트륨 트리아세톡시보로하이드라이드이다.
일부 구현예에서, 상기 반응은 트리플루오로아세트산의 존재 하에서 수행된다.
일부 구현예에서, 본 발명은 추가로 상기 식 F16의 화합물을 탈보호하여 하기 식 F10의 화합물을 수득하는 것을 포함한다:
Figure pct00023
.
R1N을 치환하기 위한 NH2를 사용한 화합물 F16의 처리는 당해 분야의 숙련가에게 공지된, 문헌 [Wuts and Greene, Greene's Protective Groups in Organic Synthesis, 4th Ed., pp 696-926, John Wiley & Sons: New York, 2006]에 공지된 특정한 아민 보호 그룹을 탈보호시키는 방법에 의해 수행될 수 있다. 일부 구현예에서, R1이 알릴이면, 탈보호제는 팔라듐 촉매 (예를 들면, Pd(Ph3P)4, Pd/C, 또는 Pd(dba)DPPB)일 수 있다. 일부 구현예에서, R1이 4-메톡시벤질이면, 탈보호제는 유기산 (예컨대, 트리플루오로아세트산 또는 메탄설폰산 등); 무기산 (예컨대, 염산); 수소 및 팔라듐; 또는 액체 암모니아 중의 나트륨을 포함할 수 있다. 탈보호는 약 30℃ 내지 약 90℃, 예를 들면, 약 50℃ 내지 약 100℃, 또는 약 60℃ 내지 약 80℃의 온도에서 수행될 수 있다.
일부 구현예에서, 상기 탈보호는 식 F16의 화합물을 트리플루오로아세트산과 반응시키는 것을 포함한다.
일부 구현예에서, 상기 탈보호는 식 F16의 화합물을 염산과 반응시키는 것을 포함한다.
화합물 F15는 하기 도식 4에 나타난 바와 같이 클로로설포닐이소시아네이트로부터 3 단계 공정 (단계 J, K 및 L)에 의해 제조될 수 있다.
Figure pct00024
따라서, 본원은, 추가로 하기 식 F14의 화합물을 환원제로 처리하여 상기 식 F15의 화합물을 수득하는 것을 포함하는 방법에 의해서 상기 식 F15의 화합물이 얻어지는 방법을 제공한다:
Figure pct00025
,
상기 식에서, R2는 C1-4 알킬이고;
R3은 상기 정의되어 있다.
일부 구현예에서, R2는 메틸이다.
일부 구현예에서, R2는 에틸이다.
일부 구현예에서, 상기 환원은 디이소부틸알루미늄 하이드라이드 (DIBAL-H)를 사용하여 수행될 수 있다. 적합한 용매는 할로겐화 탄화수소 용매, 예컨대, 디클로로메탄, 클로로포름, 디클로로에탄, 테트라클로로에탄 등을 포함한다. 일부 구현예에서, 상기 환원은 대략 실온, 예를 들면, 약 -80℃ 내지 약 30℃, 약 -78℃ 내지 약 0℃, 약 0℃ 내지 약 30℃, 또는 약 25℃ 내지 약 30℃에서 수행될 수 있다.
일부 구현예에서, 상기 처리는 할로겐화 탄화수소 용매 중에서 수행된다.
일부 구현예에서, 상기 할로겐화 탄화수소 용매는 디클로로메탄이다.
일부 구현예에서, 상기 환원제는 디이소부틸알루미늄 하이드라이드이다.
일부 구현예에서, 상기 식 F14의 화합물은, 하기 식 F13의 화합물을 하나 이상의 독립적으로 선택된 아미노 보호제로 보호하여 식 F14의 화합물을 수득하는 것을 포함하는 방법에 의해서 얻어진다:
Figure pct00026
.
F14 상의 보호 그룹 R1은 (상기) 당해 기술에 공지된 다양한 아미노 보호 그룹으로부터 선택될 수 있다. 일부 구현예에서, 상기 아미노 보호제는 알릴 브로마이드 또는 4-메톡시벤질 클로라이드이다.
일부 구현예에서, 상기 하나 이상의 아미노 보호제는 알릴 브로마이드 및 4-메톡시벤질 클로라이드로부터 선택된다.
일부 구현예에서, 상기 보호는 염기의 존재 하에서 수행된다.
일부 구현예에서, 상기 염기는 탄산칼륨이다.
일부 구현예에서, 상기 보호는 아세토니트릴을 포함하는 용매 성분 중에서 수행된다.
일부 구현예에서, F13의 화합물의 제조물은 클로로설포닐이소시아네이트를 알코올 R3OH (여기서, R3은 상기 정의됨) 및 글리신 에스테르 H2NCH2CO2R2 (여기서, R2는 C1-4 알킬임)로 처리하여 얻어질 수 있다. 일부 구현예에서, 이 단계 J는 유기 산 (예컨대, 아세트산, 벤조산, 트리플루오로아세트산)의 존재 하에서 수행된다. 이 단계를 위한 적합한 용매는 디클로로메탄, 클로로포름, 디클로로에탄, 테트라클로로에탄 등을 포함한다.
일부 구현예에서, 본원은 하기 식 F13의 화합물을 제공한다:
Figure pct00027
상기 식에서,
R2는 C1-4 알킬이고;
R3은 C1-6 알킬 또는 벤질이다.
일부 구현예에서, R2는 메틸이다.
일부 구현예에서, R2는 에틸이다.
일부 구현예에서, R3은 C1-6 알킬이다.
일부 구현예에서, R3은 tert-부틸이다.
일부 구현예에서, 식 F13의 화합물은 하기 에틸-2-((N-(tert-부톡시카보닐)설파모일)아미노)아세테이트이다:
Figure pct00028
일부 구현예에서, 본 발명은 추가로 하기 식 F14의 화합물을 제공한다:
Figure pct00029
상기 식에서,
각각의 R1은 독립적으로 아미노 보호 그룹이고;
R2는 C1-4 알킬이고;
R3은 C1-6 알킬 또는 벤질이다.
일부 구현예에서, R1은 C2-4 알케닐-C1-3 알킬 또는 페닐-C1-3 알킬인데, 여기서 상기 페닐-C1-3 알킬은 1, 2, 또는 3개의 독립적으로 선택된 C1-4 알콕시 그룹에 의해 임의로 치환된다.
일부 구현예에서, R1은 알릴이다.
일부 구현예에서, R1는 4-메톡시벤질이다.
일부 구현예에서, R2는 메틸이다.
일부 구현예에서, R2는 에틸이다.
일부 구현예에서, R3은 C1-6 알킬이다.
일부 구현예에서, R3은 tert-부틸이다.
일부 구현예에서, R3은 C1-4 알킬이다.
일부 구현예에서, R3은 부틸이다.
일부 구현예에서, R3은 C1-4 알킬이다.
일부 구현예에서, R3은 부틸이다.
일부 구현예에서, 식 F14의 화합물은 하기 에틸-2-(알릴(N-알릴-N-(tert-부톡시카보닐)설파모일)아미노) 아세테이트이다:
Figure pct00030
.
일부 구현예에서, 식 F14의 화합물은 하기 에틸-2-(4-메톡시벤질(N-4-메톡시벤질-N-(tert-부톡시카보닐)설파모일)아미노)아세테이트이다:
Figure pct00031
.
일부 구현예에서, 본원은 하기 식 F15의 화합물을 제공한다:
Figure pct00032
,
상기 식에서,
R3은 C1-6 알킬 또는 벤질이고;
각각의 R1은 독립적으로 아미노 보호 그룹이다.
일부 구현예에서, R1은 C2-4 알케닐-C1-3 알킬 또는 페닐-C1-3 알킬인데, 여기서 상기 페닐-C1-3 알킬은 1, 2, 또는 3개의 독립적으로 선택된 C1-4 알콕시 그룹에 의해 임의로 치환된다.
일부 구현예에서, R1은 알릴이다.
일부 구현예에서, R1은 4-메톡시벤질이다.
일부 구현예에서, R3은 C1-6 알킬이다.
일부 구현예에서, R3은 tert-부틸이다.
일부 구현예에서, 식 F15의 화합물은 하기 tert-부틸 알릴{[알릴(2-옥소에틸)아미노]설포닐}카바메이트이다:
Figure pct00033
.
일부 구현예에서, 식 F15의 화합물은 하기 tert-부틸(4-메톡시벤질){[(4-메톡시벤질)(2-옥소에틸)아미노]설포닐}카바메이트이다:
Figure pct00034
일부 구현예에서, 본 발명은 하기 식 F16의 화합물을 제공한다:
Figure pct00035
상기 식에서, R3은 C1-6 알킬 또는 벤질이고, 각각의 R1은 독립적으로 아미노 보호 그룹이다.
일부 구현예에서, R1은 C2-4 알케닐-C1-3 알킬 또는 페닐-C1-3 알킬인데, 여기서 상기 페닐-C1-3 알킬은 1, 2, 또는 3개의 독립적으로 선택된 C1-4 알콕시 그룹에 의해 임의로 치환된다.
일부 구현예에서, R1은 알릴이다.
일부 구현예에서, R1은 4-메톡시벤질이다.
일부 구현예에서, R3은 C1-6 알킬이다.
일부 구현예에서, R3은 tert-부틸이다.
일부 구현예에서, R3은 C1-4 알킬이다.
일부 구현예에서, R3은 부틸이다.
일부 구현예에서, 식 F16의 화합물은 하기 tert-부틸 알릴(N-알릴-N-(2-(4-(4-(3-브로모-4-플루오로페닐)-5-옥소-4,5-디하이드로-1,2,4-옥사디아졸-3-일)-1,2,5-옥사디아졸-3-일아미노)에틸)설파모일)카바메이트이다:
Figure pct00036
.
일부 구현예에서, 식 F16의 화합물은 하기 tert-부틸 (4-메톡시벤질)-(N-(4-메톡시벤질)-N-(2-(4-(4-(3-브로모-4-플루오로페닐)-5-옥소-4,5-디하이드로-1,2,4-옥사디아졸-3-일)-1,2,5-옥사디아졸-3-일아미노)에틸)설파모일)카바메이트이다:
Figure pct00037
.
도식 5는 식 F10의 화합물을 제조하기 위한 대안적인 경로를 설명한다.
Figure pct00038
본원은 또한 하기 식 F17의 화합물을 하기 식 F5의 화합물과 반응시켜서 하기 식 F18의 화합물을 수득하는 것을 포함하는 방법을 제공한다:
Figure pct00039
Figure pct00040
Figure pct00041
.
상기 식에서, R4는 C1-6 알킬, C1-6 할로알킬, 벤질, 또는 9H-플루오렌-9-일메틸이다.
일부 구현예에서, R4는 tert-부틸이다.
일부 구현예에서, R4는 벤질이다.
일부 구현예에서, R4는 에틸이다.
일부 구현예에서, R4는 C1-3 할로알킬이다.
일부 구현예에서, R4는 2,2,2-트리클로로에틸이다.
일부 구현예에서, R4는 9H-플루오렌-9-일메틸이다.
이 단계 Q에서, 화합물 F18은 일부 구현예에서는 F17을 환원제의 존재 하에서 식 F5의 아민 화합물과 반응시켜서 제조될 수 있다.
일부 구현예에서, 상기 반응은 환원제의 존재 하에서 수행된다.
상기 환원제는 예를 들면, 유기실란, 예컨대, 트리(C1-3 알킬)실란 (예를 들면, 트리에틸실란); 수소 원소 또는 하이드라이드 시약 (예컨대, NaB(OAc)3H, NaBH4, LiAlH4 등)을 사용하여; 트리페닐포스핀을 사용하여; 또는 아이오딘화 나트륨, 클로로트리메틸실란, 및 메탄올의 조합물을 사용하여 유기 화합물을 더 낮은 산화 상태로 환원시킬 수 있는 임의의 화합물일 수 있다. 일부 구현예에서, 이 단계는 산, 예컨대, 트리플루오로아세트산의 존재 하에서 수행될 수 있다. 적합한 용매는 비제한적으로 할로겐화 탄화수소 용매 (예를 들면, 디클로로메탄, 클로로포름, 디클로로에탄 또는 테트라클로로에탄)를 포함한다. 일부 구현예에서, 상기 할로겐화 탄화수소 용매는 1,2-디클로로에탄이다.
일부 구현예에서, 상기 환원제는 유기실란이다.
일부 구현예에서, 상기 환원제는 트리(C1-3 알킬)실란이다.
일부 구현예에서, 상기 환원제는 트리에틸실란이다.
일부 구현예에서, 상기 반응은 유기 산의 존재 하에서 수행된다.
일부 구현예에서, 상기 유기산은 트리플루오로아세트산이다.
일부 구현예에서, 상기 유기산은 메탄설폰산이다.
일부 구현예에서, 상기 반응은 할로겐화 탄화수소 용매를 포함하는 용매 성분 중에서 수행된다.
일부 구현예에서, 상기 할로겐화 탄화수소 용매는 디클로로메탄이다.
일부 구현예에서, 상기 할로겐화 탄화수소 용매는 1,2-디클로로에탄이다.
일부 구현예에서, 상기 방법은 추가로 상기 식 F18의 화합물을 탈보호하여 하기 식 F10의 화합물을 수득하는 것을 포함한다:
Figure pct00042
.
일부 구현예에서, 특정한 아민 보호 그룹 (예컨대, 카바메이트)의 탈보호 방법은 당해 분야의 숙련가에게 공지, 예컨대, 문헌 [Wuts and Greene, Greene's Protective Groups in Organic Synthesis, 4th Ed., pp 696-926, John Wiley & Sons: New York, 2006]에 공지되어 있다. 예를 들면, tert-부톡시카보닐 그룹 (예를 들면, R4가 tert-부틸인 경우)은 예를 들면, 산 (예컨대, 염산, 트리플루오로아세트산, 톨루엔설폰산 등); 산을 생성시키는 것으로 공지된 시약 조합물 (예를 들면, 아세틸 클로라이드와 메탄올의 혼합물); 또는 루이스산 (예를 들면, BF3·Et2O)으로의 처리에 의해 질소 원자로부터 제거 (예를 들면, 가수분해)될 수 있다. 벤질옥시카보닐 그룹 (예를 들면, R4가 벤질인 경우)은 예를 들면, 수소 및 촉매 (예컨대, 탄소상 팔라듐)로의 처리에 의해 질소 원자로부터 제거 (예를 들면, 수소화분해)될 수 있다. 메톡시카보닐 및 에톡시카보닐 그룹 (즉, R4가 메틸 또는 에틸인 경우)은 무기 염기 (예컨대, KOH 또는 K2CO3); 시약 조합물 (예를 들면, 아세틸 클로라이드, 아이오딘화 나트륨 및 아세토니트릴의 혼합물)로의 처리에 의해; 또는 산 (예를 들면, HBr, AcOH)으로의 처리에 의해 제거될 수 있다. 2,2,2-트리클로로에톡시카보닐 그룹은 예를 들면, 촉매 (예를 들면, Zn/AcOH 또는 Cd/AcOH)로의 처리에 의해 제거될 수 있다. 이 단계에 적합한 용매는 비제한적으로 메탄올 또는 테트라하이드로푸란 (THF), 아세토니트릴 등을 포함한다. 일부 구현예에서, 상기 처리는 약 30℃ 내지 약 90℃, 예를 들면, 약 50℃ 내지 약 100℃, 또는 약 60℃ 내지 약 80℃의 온도에서 수행된다.
일부 구현예에서, 상기 탈보호는 식 F18의 화합물을 아세트산의 존재 하에서 아연과 반응시키는 것을 포함한다.
일부 구현예에서, 상기 탈보호는 테트라하이드로푸란을 포함하는 용매 성분 중에서 수행된다.
일부 구현예에서, 상기 방법은 추가로 상기 식 F10의 화합물을 염기와 반응시켜서 하기 식 I의 화합물을 수득하는 것을 포함한다:
Figure pct00043
.
일부 구현예에서, 상기 염기는 알칼리 금속 하이드록사이드를 포함한다.
일부 구현예에서, 상기 알칼리 금속 하이드록사이드는 수산화나트륨이다.
일부 구현예에서, 상기 반응은 테트라하이드로푸란, 물 및 에탄올을 포함하는 용매 성분 중에서 수행된다.
일부 구현예에서, 상기 방법은 상기 식 F18의 화합물을 하기 식 I의 화합물로 전환시키는 것을 추가로 포함하는데, 상기 전환은 식 F18의 화합물을 염기와 조합시켜서 제1 혼합물을 형성시키는 것을 포함한다:
Figure pct00044
,
일부 구현예에서, 상기 염기는 N,N-비스(2-아미노에틸)에탄-1,2-디아민이다.
일부 구현예에서, 상기 전환은 산을 상기 제1 혼합물에 부가하는 것을 추가로 포함한다. 일부 구현예에서, 상기 산은 수성 강산이다. 일부 구현예에서, 상기 수성 강산은 수성 염산이다.
일부 구현예에서, 상기 전환은 테트라하이드로푸란 및 에틸 아세테이트를 포함하는 용매 성분 중에서 수행된다.
본원은 또한
i) 하기 식 F19의 화합물을 트리에틸실란 및 메탄설폰산의 존재 하에서 하기 식 F5의 화합물과 반응시켜서 하기 식 F20의 화합물을 수득하는 단계; 및
ii) 하기 식 F20의 화합물을 하기 식 I의 화합물로 전환시키는 단계를 포함하며,
상기 전환이 하기 식 F20의 화합물을 N,N-비스(2-아미노에틸)에탄-1,2-디아민과 조합시키는 것을 포함하는, 방법을 제공한다:
Figure pct00045
Figure pct00046
Figure pct00047
Figure pct00048
,
일부 구현예에서, 상기 전환은 상기 조합 후에 수성 염산을 부가하는 것을 추가로 포함한다.
화합물 F17은 하기 도식 6에 나타난 대로 클로로설포닐이소시아네이트로부터의 한 단계 공정 (단계 P)에 의해 제조될 수 있다.
Figure pct00049
일부 구현예에서, 식 F17의 화합물의 제조물은 임의로 용매 (예를 들면, 할로겐화 탄화수소 용매, 예컨대, 디클로로메탄, 클로로포름, 디클로로에탄, 테트라클로로에탄) 중에서 클로로설포닐이소시아네이트를 2,2-디메톡시에탄아민 및 알코올 R4OH (R4는 상기 정의되어 있음)로 처리하여 얻어질 수 있다. 일부 구현예에서, 이 단계는 염기의 존재 하에서 수행된다. 상기 염기는 유기 염기, 예컨대, 비환식 아민 (예를 들면, 트리에틸아민, 디이소프로필에틸아민 (DIPEA) 등) 또는 환형 아민 (예를 들면, 피롤리딘, 피페리딘 등); 또는 무기 염기, 예컨대, 알칼리 (예를 들면, NaOH, LiOH, KOH, Mg(OH)2 등)일 수 있다. 일부 구현예에서, 상기 반응은 용매, 예를 들면, 할로겐화 탄화수소 용매, 예컨대, 디클로로메탄, 클로로포름, 디클로로에탄, 또는 테트라클로로에탄 중에서 수행된다.
일부 구현예에서, 본원은 추가로 하기 식 F17의 화합물을 제공한다:
Figure pct00050
,
상기 식에서, R4는 C1-6 알킬, C1-6 할로알킬, 또는 벤질이다.
일부 구현예에서, R4는 tert-부틸이다.
일부 구현예에서, R4는 벤질이다.
일부 구현예에서, R4는 에틸이다.
일부 구현예에서, R4는 C1-3 할로알킬이다.
일부 구현예에서, R4는 2,2,2-트리클로로에틸이다.
일부 구현예에서, R4는 9H-플루오렌-9-일메틸이다.
일부 구현예에서, 상기 식 F17의 화합물은 tert-부틸 N-(2,2-디메톡시에틸)설파모일카바메이트이다.
일부 구현예에서, 상기 식 F17의 화합물은 벤질 N-(2,2-디메톡시에틸)설파모일카바메이트이다.
일부 구현예에서, 상기 식 F17의 화합물은 에틸 N-(2,2-디메톡시에틸)설파모일카바메이트이다.
일부 구현예에서, 상기 식 F17의 화합물은 2,2,2-트리클로로에틸 N-(2,2-디메톡시에틸)설파모일카바메이트이다.
일부 구현예에서, 상기 식 F17의 화합물은 (9H-플루오렌-9-일)메틸 N-(2,2-디메톡시에틸)설파모일카바메이트이다.
일부 구현예에서, 본원은 추가로 하기 식 F18의 화합물을 제공한다:
Figure pct00051
,
상기 식에서, R4는 C1-6 알킬, C1-6 할로알킬, 또는 벤질이다.
일부 구현예에서, R4는 tert-부틸이다.
일부 구현예에서, R4는 벤질이다.
일부 구현예에서, R4는 에틸이다.
일부 구현예에서, R4는 C1-3 할로알킬이다.
일부 구현예에서, R4는 2,2,2-트리클로로에틸이다.
일부 구현예에서, R4는 9H-플루오렌-9-일메틸이다.
일부 구현예에서, 상기 식 F18의 화합물은 하기 벤질 ({[2-({[4-(3-브로모-4-플루오로페닐)-5-옥소-4,5-디하이드로-1,2,4-옥사디아졸-3-일]-1,2,5-옥사디아졸-3-일}아미노)에틸]아미노}설포닐)카바메이트이다:
Figure pct00052
.
일부 구현예에서, 상기 식 F18의 화합물은 하기 에틸 ({[2-({[4-(3-브로모-4-플루오로페닐)-5-옥소-4,5-디하이드로-1,2,4-옥사디아졸-3-일]-1,2,5-옥사디아졸-3-일}아미노)에틸]아미노}설포닐)카바메이트이다:
Figure pct00053
.
일부 구현예에서, 상기 식 F18의 화합물은 하기 2,2,2-트리클로로에틸 ({[2-({[4-(3-브로모-4-플루오로페닐)-5-옥소-4,5-디하이드로-1,2,4-옥사디아졸-3-일]-1,2,5-옥사디아졸-3-일}아미노)에틸]아미노}설포닐)카바메이트이다:
Figure pct00054
.
일부 구현예에서, 상기 식 F18의 화합물은 하기 (9H-플루오렌-9-일)메틸 N-(2-((4-(4-(3-브로모-4-플루오로페닐)-5-옥소-4,5-디하이드로-1,2,4-옥사디아졸-3-일)-1,2,5-옥사디아졸-3-일)아미노)에틸)설파모일카바메이트이다:
Figure pct00055
.
본원에서 사용된 바와 같이, 용어 "알킬"은, 단독으로 또는 추가의 모이어티 용어들과 함께 사용되는 경우에, 1 내지 6개의 탄소 원자, 1 내지 4개의 탄소 원자, 또는 1 내지 3 탄소 원자를 갖는 직쇄형 또는 분지형의 포화된 탄화수소 그룹을 칭한다. 알킬 그룹 예는 메틸, 에틸, n-프로필, 이소프로필, n-부틸, 이소부틸, sec-부틸, tert-부틸 등을 포함한다.
본원에서 사용된 바와 같이, "알케닐"은 하나 이상의 이중 탄소-탄소 결합을 갖는 알킬 그룹을 칭한다. 일부 구현예에서, 상기 알킬 그룹은 2 내지 6개의 탄소 원자, 2 내지 4개의 탄소 원자, 또는 2 내지 3 탄소 원자를 갖는다. 알케닐 그룹 예는 에테닐 (비닐), 프로페닐 등을 포함한다.
본원에서 사용된 바와 같이, "알케닐알킬"은 식 -알킬-알케닐의 그룹을 칭한다. 일부 구현예에서, 상기 알케닐알킬 그룹은 알릴이다.
본원에서 사용된 바와 같이, 용어 "할로알킬"은, 단독으로 또는 추가의 모이어티와 함께 사용되는 경우에, F, Cl, Br, 및 I로부터 독립적으로 선택된 하나 이상의 할로겐 원자에 의해 치환된 알킬 그룹을 칭한다. 할로알킬 그룹 예는 CF3, CHF2, CH2CF3 등을 포함한다.
본원에서 사용된 바와 같이, 용어 "알콕시"는 -O-알킬 그룹을 칭한다. 일부 구현예에서, 상기 알킬 그룹은 1 내지 6개의 탄소 원자, 1 내지 4개의 탄소 원자, 또는 1 내지 3 탄소 원자를 갖는다. 알콕시 그룹 예는 메톡시, 에톡시, 프로폭시 (예를 들면, n-프로폭시 및 이소프로폭시), t-부톡시 등을 포함한다.
본원에서 사용된 바와 같이, "트리알킬아민"은 3개의 독립적으로 선택된 알킬 그룹에 의해 치환된 질소 원자를 칭한다. 일부 구현예에서, 각각의 알킬 그룹은 2 내지 6개의 탄소 원자, 2 내지 4개의 탄소 원자, 또는 2 내지 3 탄소 원자를 갖는다. 트리알킬아민 그룹 예는 트리메틸아민, 트리에틸아민 등을 포함한다.
본원에서 사용된 바와 같이, 용어 "알콕시카보닐"은 식 -C(O)-O-알킬의 그룹을 칭한다. 일부 구현예에서, 상기 알킬 그룹은 2 내지 6개의 탄소 원자, 2 내지 4개의 탄소 원자, 또는 2 내지 3 탄소 원자를 갖는다. 알콕시카보닐 그룹 예는 에톡시카보닐, tert-부톡시카보닐 (Boc) 등을 포함한다.
할로겐화 탄화수소 용매는 할로겐화된 알칸, 예컨대, 디클로로메탄, 클로로포름, 디클로로에탄 또는 테트라클로로에탄을 칭하는데, 여기서 상기 알칸은 하나 이상의 할로 원자와 함께 1 내지 12개의 탄소 원자, 1 내지 6개의 탄소 원자, 또는 1 내지 4개의 탄소 원자를 갖는 분지형 또는 직쇄형일 수 있다. 일부 구현예에서, 상기 할로겐화 탄화수소 용매는 1 내지 12개의 탄소 원자, 1 내지 6개의 탄소 원자, 또는 1 내지 4개의 탄소 원자의 염소화 알칸이다.
본 명세서 내 다양한 위치에서, 본 발명의 화합물의 치환체는 그룹으로 또는 범위로 개시될 수 있다. 본 발명이 그와 같은 그룹 및 범위 성분의 각각 및 모든 개별 하위조합을 포함하는 것으로 구체적으로 의도된다.
본 발명의 화합물은 안정한 것으로 의도된다. 본원에서 사용된 바와 같이 "안정한"은, 반응 혼합물로부터 유용한 정도의 순도로의 단리를 견디기에 충분히 강력하며, 바람직하게는 효능있는 치료제로 제형화될 수 있는 화합물을 칭한다.
명확하게 하기 위해 개별 구현예의 맥락에서 기술되는 본 발명의 특정 특성들은 또한 단일 구현예에서 조합되어 제공될 수 있음이 추가로 이해된다. 반대로, 간결함을 위해 단일 구현예의 맥락에서 기술되는 본 발명의 다양한 특성들은 또한 개별적으로 또는 임의의 적합한 하위조합으로 제공될 수 있다.
본 발명의 화합물이 모든 가능한 기하 이성질체를 포함하는 것으로 추가로 의도된다. 본 화합물의 시스 및 트랜스 기하 이성질체가 기술되며, 이들은 이성질체의 혼합물로 또는 분리된 이성질체 형태로 단리될 수 있다.
본 발명의 화합물은 또한 타우토머 형태를 포함한다. 타우토머 형태는 양성자가 동시에 이동하면서 단일 결합을 인접한 이중 결합으로 교환함에 의해서 생성된다.
본 발명의 화합물은 또한 중간체 또는 최종 화합물에서 나타나는 원자의 모든 동위원소를 포함할 수 있다. 동위원소는 동일한 원자 번호를 갖지만 상이한 질량수를 갖는 그러한 원자를 포함한다. 예를 들면, 수소의 동위원소는 삼중수소 및 중수소를 포함한다.
일부 구현예에서, 본 발명의 화합물 및 그것의 염은 실질적으로 단리된다. "실질적으로 단리된"은, 상기 화합물이 형성되거나 검출되는 환경으로부터 이 화합물이 적어도 부분적으로 또는 실질적으로 분리됨을 의미한다. 부분적 분리물은 예를 들면, 본 발명의 화합물이 풍부한 조성물을 포함할 수 있다. 실질적 분리물은 적어도 약 50 중량%, 적어도 약 60 중량%, 적어도 약 70 중량%, 적어도 약 80 중량%, 적어도 약 90 중량%, 적어도 약 95 중량%, 적어도 약 97 중량%, 또는 적어도 약 99 중량%의 본 발명의 화합물, 또는 그것의 염을 함유하는 조성물을 포함할 수 있다. 화합물 및 그것의 염의 단리 방법은 당해 기술에서 일반적이다.
본원은 또한 본원에 기술된 화합물의 염을 포함한다. 본원에서 사용된 바와 같이, "염"은, 현존하는 산 또는 염기 모이어티를 그것의 염 형태로 전환시킴으로써 모 화합물이 개질되는, 개시된 화합물의 유도체를 칭한다. 염의 예는 비제한적으로, 염기성 잔기, 예컨대, 아민의 무기산 (예컨대, HCl, HBr, H2SO4) 또는 유기산 (예컨대, 아세트산, 벤조산, 트리플루오로아세트산) 염; 산성 잔기, 예컨대, 카복실산의 알칼리 (예컨대, Li, Na, K, Mg, Ca) 또는 유기 (예컨대, 트리알킬암모늄) 염 등을 포함한다. 본원의 염은, 종래의 화학적 방법에 의해 염기성 또는 산성 모이어티를 함유하는 모 화합물로부터 합성될 수 있다. 일반적으로, 그와 같은 염은 이러한 화합물의 유리 산 또는 염기 형태를 물 중에서 또는 유기 용매 중에서, 또는 이들 둘의 혼합물 중에서 화학양론적 양의 적절한 염기 또는 산과 반응시킴으로써 제조될 수 있다; 일반적으로, 비수성 매체, 예컨대, 에테르, 에틸 아세테이트, 에탄올, 이소프로판올, 또는 아세토니트릴 (ACN)이 바람직하다.
본원은 또한 본원에 기술된 화합물의 약제학적으로 허용가능한 염을 포함한다. "약제학적으로 허용가능한 염"은 예를 들면, 비독성의 무기 또는 유기 산으로부터 형성된 모 화합물의 통상적인 비-독성 염인 상기 "염"의 아집단을 포함한다. 적합한 염의 리스트는, 각각의 전체가 본원에 참고로 편입되어 있는 문헌 [Remington's Pharmaceutical Sciences, 17th ed., Mack Publishing Company, Easton, Pa., 1985, p. 1418 및 Journal of Pharmaceutical Science, 66, 2 (1977)]에서 확인된다. 어구 "약제학적으로 허용가능한"은, 건전한 의학적 판단의 범주 내에서 과도한 독성, 자극, 알러지성 반응, 또는 다른 문제 또는 합병증 없이 인간 및 동물의 조직과 접촉하여 사용하기에 적합하며 합리적인 유익/위험 비와 상응하는 그러한 화합물, 물질, 조성물, 및/또는 투여 형태를 칭하도록 본원에서 사용된다.
본원에 기술된 방법들은 당해 기술에 공지된 임의의 적합한 방법에 따라 모니터링될 수 있다. 예를 들면, 생성물 형성은, 분광 수단, 예컨대, 핵 자기 공명 분광법 (예를 들면, 1H 또는 13C), 적외선 분광법, 분광광도법 (예를 들면, UV-가시광), 또는 질량 분광분석법에 의해; 또는 크로마토그래피, 예컨대, 고성능 액체 크로마토그래피 (HPLC) 또는 박층 크로마토그래피에 의해 모니터링될 수 있다. 반응으로 수득된 화합물은 당해 기술에 공지된 임의의 적합한 방법에 의해 정제될 수 있다. 예를 들면, 적합한 흡착제 (예를 들면, 실리카겔, 알루미나 등) 상의 크로마토그래피 (중간 압력), HPLC, 또는 분취 박층 크로마토그래피; 증류; 승화, 분쇄, 또는 재결정화가 있다. 화합물의 순도는 일반적으로 물리적인 방법, 예컨대, (고체의 경우에) 용융점 측정, NMR 스펙트럼 얻기, 또는 HPLC 분리의 수행에 의해 측정된다. 용융점이 감소하면, NMR 스펙트럼 내 원치않는 신호가 감소되면, 또는 HPLC 자취 내 이질적인(extraneous) 피크가 제거되면, 본 화합물은 정제된 것으로 일컬어질 수 있다. 일부 구현예에서, 본 화합물은 실질적으로 정제된다.
화합물의 제조는 다양한 화학적 그룹의 보호 및 탈보호를 포함할 수 있다. 보호 및 탈보호에 대한 필요, 및 적절한 보호 그룹의 선택은 당해 분야의 숙련가에 의해 쉽게 결정될 수 있다. 보호 그룹의 화학성은 예를 들면, 전체가 본원에 참고로 편입되어 있는 문헌 [Wuts and Greene, Greene's Protective Groups in Organic Synthesis, 4th Ed., John Wiley & Sons: New York, 2006]에서 확인할 수 있다.
본원에 기술된 방법들의 반응은, 유기 합성의 당해 분야의 숙련가에 의해 용이하게 선택될 수 있는 적합한 용매 중에서 수행될 수 있다. 적합한 용매는 반응이 수행되는 온도, 즉, 용매의 동결 온도에서 용매의 비등 온도까지의 범위일 수 있는 온도에서 출발 물질 (반응물), 중간체, 또는 생성물과 실질적으로 비-반응성일 수 있다. 소정 반응은 하나의 용매, 또는 하나 초과 용매의 혼합물 중에서 수행될 수 있다. 반응 단계에 따라서, 그 특수한 반응 단계에 적합한 용매(들)가 선택될 수 있다. 적절한 용매는 물, 알칸 (예컨대, 펜탄, 헥산, 헵탄, 사이클로헥산 등, 또는 이들의 혼합물), 방향족 용매 (예컨대, 벤젠, 톨루엔, 자일렌 등), 알코올 (예컨대, 메탄올, 에탄올, 이소프로판올 등), 에테르 (예컨대, 디알킬에테르, 메틸 tert-부틸 에테르 (MTBE), 테트라하이드로푸란 (THF), 디옥산 등), 에스테르 (예컨대, 에틸 아세테이트, 부틸 아세테이트 등), 할로겐화 탄화수소 용매 (예컨대, 디클로로메탄 (DCM), 클로로포름, 디클로로에탄, 테트라클로로에탄), 디메틸포름아마이드 (DMF), 디메틸설폭사이드 (DMSO), 아세톤, 아세토니트릴 (ACN), 헥사메틸포스포르아마이드 (HMPA) 및 N-메틸 비닐피롤리돈 (NMP)을 포함한다. 그와 같은 용매는 습윤 또는 무수 형태로 사용될 수 있다.
화합물의 라세미 혼합물의 분해(resolution)는 당해 분야에 공지된 수많은 방법 중 임의 것에 의해 수행될 수 있다. 방법 예는, 광학 활성, 염 형성 유기 산인 "키랄성의 분해되는 산"을 사용하는 분별 재결정을 포함한다. 분별 재결정 방법에 적합한 분해제는 예를 들면, 광학 활성 산, 예컨대, D 및 L 형태의 타르타르산, 디아세틸타르타르산, 디벤조일타르타르산, 만델산, 말산, 락트산 또는 다양한 광학 활성 캄포르설폰산이다. 라세미 혼합물의 분해는 또한 광학 활성 분해제 (예를 들면, 디니트로벤조일페닐글리신)가 패킹된 칼럼 상에서의 용리에 의해 수행될 수 있다. 적합한 용리 용매 조성물은 당해 분야의 숙련가에 의해 결정될 수 있다.
사용 방법
식 I의 화합물은 효소 인돌아민-2,3-디옥시게나제 (IDO)의 활성을 억제할 수 있다. 예를 들면, 식 I의 화합물은, 억제 양의 식 I의 화합물을 투여하여 상기 효소 조절이 필요한 세포에서 또는 개체에서 IDO의 활성을 억제하는데 사용될 수 있다.
식 I의 화합물은, IDO 발현 세포를 함유하는 시스템, 예컨대, 조직, 살아있는 유기체, 또는 세포 배양물 중에서 트립토판의 분해를 억제하는 방법에 사용될 수 있다. 일부 구현예에서, 본원은 유효량의 식 I의 화합물을 투여하여 포유 동물에서 세포외 트립토판 수준을 변경 (예를 들면, 증가)시키는 방법을 제공한다. 트립토판 수준 및 트립토판 분해 측정 방법은 당해 기술에서 일반적이다.
식 I의 화합물은, 환자에게 유효량의 식 I의 화합물을 투여하여 상기 환자에서 면역억제, 예컨대, IDO-매개된 면역억제를 억제하는 방법에 사용될 수 있다. IDO-매개된 면역억제는 예를 들면, 암, 종양 성장, 전이, 바이러스 감염, 바이러스 복제 등과 관련되었다.
식 I의 화합물은 또한, 치료가 필요한 개체에게 치료적 유효량 또는 용량의 식 I의 화합물 또는 그것의 약제 조성물을 투여하여 상기 개체 (예를 들면, 환자)에서 IDO의 활성 또는 발현, 예컨대, 비정상 활성 및/또는 과발현과 관련된 질환을 치료하는 방법에 사용될 수 있다. 질환 예는 IDO 효소의 발현 또는 활성, 예컨대 과다 발현 또는 비정상 활성에 직접적으로 또는 간접적으로 연관되는 임의의 질환, 장애 또는 병태를 포함할 수 있다. IDO-관련 질환은 또한 효소 활성을 조절하여 예방, 완화 또는 치유될 수 있는 임의의 질환, 장애 또는 병태를 포함할 수 있다. IDO-관련 질환의 예는 암, 바이러스 감염, 예컨대, HIV 감염, HCV 감염, 우울증, 신경퇴행성 장애, 예컨대, 알츠하이머 병 및 헌팅톤 병, 외상, 노화 관련 백내장, 장기 이식 (예를 들면, 장기 이식 거부), 및 자가면역 질환, 예컨대, 천식, 류마티스성 관절염, 다발성 경화증, 알러지성 염증, 염증성 장 질환, 건선 및 전신 홍반 루푸스를 포함한다. 본원에서의 방법에 의해 치료가능한 암 예는 결장, 췌장, 유방, 전립선, 폐, 뇌, 난소, 자궁경부, 고환, 신장, 두경부, 림프종, 백혈병, 흑색종 등의 암을 포함한다. 식 I의 화합물은 또한 비만 및 허혈의 치료에 유용할 수 있다.
본원에서 사용된 바와 같이, 용어 "세포"는, 시험관 내, 생체 외 또는 생체 내에 있는 세포를 칭한다. 일부 구현예에서, 생체외 세포는 유기체, 예컨대, 포유동물로부터 절제된 조직 샘플의 일부일 수 있다. 일부 구현예에서, 시험관내 세포는 세포 배양물 내 세포일 수 있다. 일부 구현예에서, 생체내 세포는 유기체, 예컨대, 포유동물에서의 살아있는 세포이다.
본원에서 사용된 바와 같이, 용어 "접촉시키는"은, 시험관내 시스템 또는 생체내 시스템 중에서 명시된 모이어티를 함께 있게 하는 것을 칭한다. 예를 들면, IDO 효소를 식 I의 화합물과 "접촉시키는" 것은, 식 I의 화합물을 IDO를 갖는 개체 또는 환자, 예컨대, 인간에게 투여하는 것 뿐만 아니라, 예를 들면 식 I의 화합물을 IDO 효소를 함유하는 세포 또는 정제된 제조물 함유 샘플 내로 도입시키는 것을 포함한다.
본원에서 사용된 바와 같이, 번갈아가면서 사용된 용어 "개체" 또는 "환자"는, 임의의 동물, 예컨대, 포유동물, 바람직하게는 마우스, 랫트, 다른 설치류, 토끼, 개, 고양이, 돼지, 소, 양, 말, 또는 영장류, 및 가장 바람직하게는 인간을 칭한다.
본원에서 사용된 바와 같이, 어구 "치료적 유효량"은, 연구자, 수의사, 의사 또는 다른 임상의에 의해 시도되는 조직, 시스템, 동물, 개체 또는 인간에서 생물학적 또는 의학적 반응을 유발시키는 활성 화합물 또는 약제의 양을 칭한다.
본원에서 사용된 바와 같이 용어 "치료하는" 또는 "치료"는, 1) 질환 예방; 예를 들면, 질환, 병태 또는 장애에 취약할 수 있지만 상기 질환의 병리 또는 징후를 아직 경험하지 않거나 나타내지 않는 개체에서 질환, 병태 또는 장애의 예방; 2) 질환 억제; 예를 들면, 질환, 병태 또는 장애의 병리 또는 징후를 경험하거나 나타내는 개체에서 질환, 병태 또는 장애의 억제 (즉, 병리 및/또는 징후의 추가 진행 저지), 또는 3) 질환 완화; 예를 들면, 질환, 병태 또는 장애의 병리 또는 징후를 경험하거나 나타내는 개체에서 질환, 병태 또는 장애의 완화 (즉, 병리 및/또는 징후의 역전)를 칭한다.
병용 요법
하나 이상의 추가의 약제 또는 치료 방법, 예컨대, 예를 들면, 항-바이러스제, 화학요법제 또는 다른 항암제, 면역 증강제, 면역억제제, 방사선, 항종양 및 항바이러스 백신, 사이토카인 요법 (예를 들면, IL2, GM-CSF 등), 및/또는 티로신 키나제 억제제가, IDO-관련된 질환, 장애 또는 병태를 치료하기 위해서 식 I의 화합물과 함께 사용될 수 있다. 상기 제제들은 단일 투여 형태로 식 I의 화합물과 조합될 수 있거나, 상기 제제들은 개별 투여 형태로 동시에 또는 순차적으로 투여될 수 있다.
식 I의 화합물과 함께 사용하도록 고찰된 적합한 항바이러스제는, 뉴클레오사이드 및 뉴클레오타이드 역전사효소 억제제 (NRTIs), 비-뉴클레오사이드 역전사효소 억제제 (NNRTIs), 프로테아제 억제제 및 다른 항바이러스 약물을 포함할 수 있다.
적합한 NRTIs 예는 지도부딘 (AZT); 디다노신 (ddl); 잘시타빈 (ddC); 스타부딘 (d4T); 라미부딘 (3TC); 아바카비르 (1592U89); 아데포비르 디피복실 [비스(POM)-PMEA]; 로부카비르 (BMS-180194); BCH-10652; 에미트리시타빈 [(-)-FTC]; 베타-L-FD4 (또한 베타-L-D4C로 불려지며 베타-L-2',3'-디클레옥시-5-플루오로-시티덴으로 명명됨); DAPD, ((-)-베타-D-2,6,-디아미노-퓨린 디옥솔란); 및 로데노신 (FddA)을 포함한다. 전형적인 적합한 NNRTIs는 네비라핀 (BI-RG-587); 데라비라딘 (BHAP, U-90152); 에파비렌즈 (DMP-266); PNU-142721; AG-1549; MKC-442 (1-(에톡시-메틸)-5-(1-메틸에틸)-6-(페닐메틸)-(2,4(1H,3H)-피리미딘디온); 및 (+)-칼라놀라이드 A (NSC-675451) 및 B를 포함한다. 전형적인 적합한 프로테아제 억제제는 사퀴나비르 (Ro 31-8959); 리토나비르 (ABT-538); 인디나비르 (MK-639); 넬프나비르 (AG-1343); 암프레나비르 (141W94); 라시나비르 (BMS-234475); DMP-450; BMS-2322623; ABT-378; 및 AG-1 549를 포함한다. 다른 항바이러스제는 하이드록시우레아, 리바비린, IL-2, IL-12, 펜타푸사이드 및 이슘 프로젝트 번호 11607을 포함한다.
적합한 화학요법제 또는 다른 항암제는 예를 들면, 알킬화제 (예컨대, 비제한적으로 질소 머스타드, 에틸렌이민 유도체, 알킬 설포네이트, 니트로소우레아 및 트리아젠), 예컨대, 우라실 머스타드, 클로르메틴, 사이클로포스파마이드 (사이톡산(Cytoxan)TM), 이포스파마이드, 멜팔란, 클로르암부실, 피포브로만, 트리에틸렌-멜라민, 트리에틸렌티오포스포르아민, 부설판, 카르머스틴, 로머스틴, 스트렙토조신, 다카르바진, 및 테모졸로마이드를 포함한다.
흑색종의 치료에서, 식 I의 화합물과 함께 사용하기에 적합한 제제는 하기 것들을 포함한다: 임의로 다른 화학요법 약물, 예컨대, 카르머스틴 (BCNU) 및 시스플라틴과 함께 다카르바진 (DTIC); DTIC, BCNU, 시스플라틴 및 타목시펜으로 이루어진 "다트머쓰(Dartmouth) 요법"; 시스플라틴, 빈블라스틴, 및 DTIC의 조합물; 또는 테모졸로마이드. 본 발명에 따른 화합물은 또한 흑색종의 치료에서 면역요법 약물, 예컨대, 사이토카인, 예컨대, 인터페론 알파, 인터루킨 2, 및 종양 괴사 인자 (TNF)와 조합될 수 있다.
식 I의 화합물은 또한 흑색종 치료에서 백신 요법과 함께 사용될 수 있다. 항흑색종 백신은 어떤 면에서는, 바이러스에 의해 야기된 질환, 예컨대, 소아마비, 홍역, 및 볼거리를 예방하는데 사용되는 항바이러스 백신과 유사하다. 항원으로 불리는 흑색종 세포의 일부 또는 약화된 흑색종 세포를 환자 내로 주사하여, 흑색종 세포를 파괴시키도록 신체 면역계를 자극할 수 있다.
팔 또는 다리로 국한되는 흑색종은 또한 온열의 단리된 사지 관류 기술을 사용하여 식 I의 화합물을 포함하는 제제의 조합물을 사용하여 치료될 수 있다. 이 치료 프로토콜은 신체 나머지로부터 관련된 사지의 순환을 임시적으로 분리시키고 고용량의 화학요법제를 사지로 공급되는 동맥 내로 주입하여, 내부 장기를, 그렇지 않으면 심각한 부작용을 일으킬 수 있는 이러한 용량에 노출시키지 않으면서 고용량을 종양 영역으로 제공한다. 보통 상기 유체는 102 내지 104℉로 가온된다. 멜팔란은 이러한 화학요법 절차에서 가장 자주 사용되는 약물이다. 이것은 종양 괴사 인자 (TNF) (사이토카인 부분 참고)로 불리는 또 하나의 제제와 함께 제공될 수 있다.
적합한 화학요법제 또는 다른 항암제는 예를 들면, 항대사물질 (예컨대, 비제한적으로 엽산 길항제, 피리미딘 유사체, 퓨린 유사체 및 아데노신 데아미나제 억제제), 예컨대, 메토트렉세이트, 5-플루오로우라실, 플록수리딘, 사이타라빈, 6-머캅토퓨린, 6-티오구아닌, 플루다라빈 포스페이트, 펜토스타틴, 및 젬시타빈을 포함한다.
적합한 화학요법제 또는 다른 항암제는 예를 들면, 특정의 천연 생성물 및 그것의 유도체 (예를 들면, 빈카 알카로이드, 항종양 항생제, 효소, 림포카인 및 에피포도필로톡신), 예컨대, 빈블라스틴, 빈크리스틴, 빈데신, 블레오마이신, 닥티노마이신, 다우노루비신, 독소루비신, 에피루비신, 아이다루비신, 아라-C, 파클리탁셀 (탁솔TM), 미트라마이신, 데옥시코포르마이신, 미토마이신-C, L-아스파라기나제, 인터페론 (특히 IFN-a), 에토포사이드, 및 테니포사이드를 추가로 포함한다.
다른 세포독성제는 나벨벤, CPT-11, 아나스트라졸, 레트라졸, 카페시타빈, 렐록사핀, 사이클로포스파마이드, 이포사마이드, 및 드롤록사핀을 포함한다.
세포독성제, 예컨대, 에피도필로톡신; 항신생물성 효소; 토포이소머라제 억제제; 프로카바진; 미톡산트론; 백금 배위 착물, 예컨대, 시스-플라틴 및 카보플라틴; 생물학적 반응 조절제; 성장 억제제; 항호르몬 치료제; 류코보린; 테가푸르; 및 조혈 성장 인자가 또한 적합하다.
다른 항암제(들)는 항체 치료제, 예컨대, 트라스투주맙 (헤르셉틴), 공동자극인자 분자, 예컨대, CTLA-4, 4-1BB 및 PD-1에 대한 항체, 또는 사이토카인 (IL-10, TGF-β 등)에 대한 항체를 포함한다.
다른 항암제는 또한 면역 세포 이동을 차단하는 것들, 예컨대, 케모카인 수용체, 예컨대, CCR2 및 CCR4에 대한 길항제를 포함한다.
다른 항암제는 또한 면역계, 예컨대, 아쥬반트 또는 입양 T 세포 전달을 증대시키는 것들을 포함한다.
항암 백신은 수지상 세포, 합성 펩타이드, DNA 백신 및 재조합 바이러스를 포함한다.
이러한 화학요법제의 대부분의 안전한 및 효과적인 투여 방법은 당해 분야의 숙련가에게 공지되어 있다. 또한, 그것의 투여는 참고 문헌에 기술되어 있다. 예를 들면, 많은 화학요법제의 투여는, 전체가 본원에 참고로 편입되어 있는 문헌 ["Physicians' Desk Reference" (PDR, 예를 들면, 뉴저지 몬트베일 메디칼 이코노믹스 컴퍼니의 1996년 판]에 기술되어 있다.
약제 제형 및 투여 형태
의약품으로서 사용하는 경우에, 식 I의 화합물은, 식 I의 화합물과 약제학적으로 허용가능한 담체의 조합물인 약제 조성물 형태로 투여될 수 있다. 이러한 조성물은 약제 기술에 널리 공지된 방식으로 제조될 수 있으며, 국소 또는 전신 치료가 필요한지 및 치료할 영역에 따라서 다양한 경로에 의해 투여될 수 있다. 투여는 국소 (예컨대, 안과 및 점막으로의, 예컨대, 비강내, 질 및 직장 전달), 폐 (예를 들면, 예컨대, 분무기에 의한 분말 또는 에어로졸의 흡입 또는 취입에 의한; 기관내, 비강내, 표피 및 경피), 안구, 경구 또는 비경구일 수 있다. 안구 전달 방법은, 수술로 결막낭 중에 위치시킨 안과 삽입물 또는 풍선 카테터에 의한 국소 투여 (안약), 결막하, 눈주위 또는 초자체내 주사 또는 도입을 포함할 수 있다. 비경구 투여는 정맥내, 동맥내, 피하, 복강내, 또는 근육내 주사 또는 주입; 또는 두개내, 예를 들면, 척추강내 또는 뇌실내 투여를 포함한다. 비경구 투여는 단일 대량주입 용량 형태일 수 있거나, 예를 들면, 연속 관류 펌프에 의한 것일 수 있다. 국소 투여를 위한 약제 조성물 및 제형은 경피 패치, 연고, 로션, 크림, 겔, 액적, 좌약, 스프레이, 액체 및 분말을 포함할 수 있다. 종래의 약제학적 담체, 수성, 분말 또는 오일성 베이스, 증점제 등이 필수적이거나 바람직할 수 있다.
하나 이상의 약제학적으로 허용가능한 담체와 함께 식 I의 화합물을 함유하는 약제 조성물이 제조될 수 있다. 본 발명의 조성물의 제조 시에, 활성 성분을 전형적으로 부형제와 혼합시키고, 부형제에 의해 희석시키거나 예를 들면, 캡슐, 샤세트, 종이, 또는 다른 용기 형태로 그와 같은 담체 내부에 봉입시킨다. 부형제가 희석제로 제공되는 경우에, 이것은 활성 성분에 대한 비히클, 담체 또는 매체로 작용하는 고체, 반-고체, 또는 액체 물질일 수 있다. 따라서, 상기 조성물은 정제, 알약, 분말, 로젠지, 샤세트, 카셰, 엘릭시르, 현탁액, 에멀젼, 용액, 시럽, 에어로졸 (고체로서 또는 액체 매체 중에서), 예를 들면, 최대 10 중량%의 활성 화합물을 함유하는 연고, 연질 및 경질 젤라틴 캡슐, 좌약, 멸균성의 주사가능한 용액, 및 멸균성의 포장된 분말 형태일 수 있다.
제형의 제조 시에, 다른 성분과 조합시키기 전에 적절한 입자 크기를 제공하도록 활성 화합물을 분쇄시킬 수 있다. 활성 화합물이 실질적으로 불용성이면, 이 화합물은 200 메시 미만의 입자 크기로 분쇄될 수 있다. 활성 화합물이 실질적으로 수용성이면, 제형 내 실질적으로 균일한 분포가 제공되도록 분쇄에 의해 입자 크기를, 예를 들면 약 40 메시로 조정할 수 있다.
적합한 부형제의 일부 예는 락토오스, 덱스트로오스, 수크로오스, 소르비톨, 만니톨, 전분, 아카시아검, 인산칼슘, 알기네이트, 트라가칸쓰, 젤라틴, 규산칼슘, 미세결정성 셀룰로오스, 폴리비닐피롤리돈, 셀룰로오스, 물, 시럽, 및 메틸 셀룰로오스를 포함한다. 상기 제형은 추가로 하기 것들을 포함할 수 있다: 윤활제, 예컨대, 탈크, 스테아르산마그네슘, 및 미네랄 오일; 습윤제; 유화 및 현탁화제; 보존제, 예컨대, 메틸- 및 프로필하이드록시-벤조에이트; 감미제; 및 풍미제. 본 발명의 조성물은 당해 기술에 공지된 절차를 사용하여 환자에게 투여된 후에 활성 성분의 신속, 지속 또는 지연 방출을 제공하도록 제형화될 수 있다.
상기 조성물은, 각각의 용량이 약 5 내지 약 100 mg, 더 일반적으로는 약 10 내지 약 30 mg의 활성 성분을 함유하는, 단위 투여 형태로 제형화될 수 있다. 용어 "단위 투여 형태"는, 각각의 단위체가 적합한 약제학적 부형제와 함께 원하는 치료 효과를 나타내도록 계산된 소정 양의 활성 물질을 함유하는, 인간 대상체 및 다른 포유동물에 대한 단위 용량으로 적합한 물리적으로 개별의 단위체를 칭한다.
활성 화합물은 넓은 용량 범위에 걸쳐서 효과적일 수 있으며, 일반적으로 약제학적 유효량으로 투여된다. 그러나, 실제로 투여된 화합물의 양은 일반적으로 관련된 상황, 예컨대, 치료할 병태, 선택된 투여 경로, 투여된 실제 화합물, 개별 환자의 연령, 체중, 및 반응, 환자 증상의 중증도 등에 따라서 의사에 의해 결정될 것이다.
고체 조성물, 예컨대, 정제의 제조를 위해, 주요 활성 성분을 약제학적 부형제와 혼합시켜서, 식 I의 화합물의 균질 혼합물을 함유하는 고체 사전-제형 조성물을 형성시킨다. 이러한 사전-제형 조성물을 균질한 것으로 칭하는 경우에, 활성 성분은 전형적으로 조성물 전체에 걸쳐 균일하게 분산되어, 이 조성물이 동등하게 효과적인 단위 투여 형태, 예컨대, 정제, 알약 및 캡슐로 용이하게 세분될 수 있다. 그 후, 이 고체 사전-제형을 본원의, 예를 들면, 0.1 내지 약 500 mg의 활성 성분을 함유하는 상기 유형의 단위 투여 형태로 세분시킨다.
식 I의 화합물을 함유하는 정제 또는 알약을 코팅 또는 다르게는 화합시켜서, 지속 작용의 이점을 제공하는 투여 형태를 제공할 수 있다. 예를 들면, 상기 정제 또는 알약은 내부 용량 및 외부 용량 성분을 포함할 수 있는데, 상기 외부 용량 성분은 상기 내부 용량 성분 위로 덮개 형태로 되어 있다. 상기 2개의 성분은, 위에서의 붕해에 저항하며 상기 내부 성분이 온전하게 십이지장으로 통과하거나 방출이 지연될 수 있게 작용하는 장용 층에 의해서 분리될 수 있다. 그와 같은 장용 층 또는 코팅을 위해 다양한 물질이 사용될 수 있는데, 그와 같은 물질은 수많은 고분자산, 및 고분자산과 셸락, 세틸 알코올, 및 셀룰로오스 아세테이트와 같은 물질의 혼합물을 포함한다.
본원의 화합물 및 조성물이 경구 투여를 위해 또는 주사에 의해 혼입될 수 있는 액체 형태는, 수용액, 적합하게는 향첨가된(flavored) 시럽, 수성 또는 오일 현탁액, 및 식용 오일, 예컨대, 목화씨 오일, 참께 오일, 코코넛 오일, 또는 땅콩 오일 뿐만 아니라, 엘릭시르 및 유사한 약제학적 비히클과의 향첨가된 에멀젼을 포함한다.
흡입 또는 취입을 위한 조성물은, 약제학적으로 허용가능한, 수성 또는 유기 용매, 또는 이들의 혼합물 중의 용액 및 현탁액, 및 분말을 포함한다. 상기 액체 또는 고체 조성물은 상기한 바와 같은 적합한 약제학적으로 허용가능한 부형제를 함유할 수 있다. 일부 구현예에서, 상기 조성물은 국소 또는 전신 효과를 위해 경구 또는 코 호흡기 경로에 의해 투여된다. 조성물은 불활성 기체를 사용하여 분무될 수 있다. 분무된 용액은 분무 장치로부터 직접적으로 흡입될 수 있거나, 분무 장치가 안면 마스크 텐트, 또는 간헐적 양압 호흡기에 부착될 수 있다. 용액, 현탁액, 또는 분말 조성물은 제형을 적절한 방식으로 전달하는 장치로부터 경구로 또는 비강으로 투여될 수 있다.
환자에게 투여된 화합물 또는 조성물의 양은, 무엇이 투여되는 지, 투여 목적, 예컨대, 예방 또는 치료, 환자의 상태, 투여 방식 등에 따라서 달라질 것이다. 치료적 응용예에서, 조성물은 질환의 증상 및 그 합병증을 치유 또는 적어도 부분적으로 저지하기에 충분한 양으로 상기 질환을 이미 앓고 있는 환자에게 투여될 수 있다. 유효 용량은 질환의 중증도, 환자의 연령, 체중 및 전반적인 상태 등과 같은 인자에 따른 주치 임상의의 판단 뿐만 아니라, 치료할 질환 상태에 따를 것이다.
환자에게 투여된 조성물은 상기 약제 조성물의 형태일 수 있다. 이러한 조성물은 종래의 멸균 기술에 의해 멸균될 수 있거나, 멸균 여과될 수 있다. 수용액은 그대로의 사용을 위해 포장 또는 동결건조될 수 있는데, 동결건조된 제조물은 투여 전에 멸균된 수성 담체와 조합된다. 화합물 제조물의 pH는 전형적으로 3 내지 11, 더 바람직하게는 5 내지 9 및 가장 바람직하게는 7 내지 8일 것이다. 특정한 전술한 부형제, 담체, 또는 안정제의 사용에 의해 약제학적 염이 형성될 것임이 이해될 것이다.
식 I의 화합물의 치료 용량은 예를 들면, 치료가 행해지는 구체적인 용도, 화합물의 투여 방식, 환자의 건강 및 상태, 및 처방의의 판단에 따라 달라질 수 있다. 약제 조성물 내 식 I의 화합물의 비율 또는 농도는 투여량, 화학적 특성 (예를 들면, 소수성), 및 투여 경로를 포함하는 다수의 인자에 따라 달라질 수 있다. 예를 들면, 식 I의 화합물은 비경구 투여를 위해 약 0.1 내지 약 10% w/v의 화합물을 함유하는 수성 생리적 완충 용액 중에 제공될 수 있다. 일부 전형적인 용량 범위는 약 1 ㎍/kg 내지 약 1 g/kg의 체중/1일이다. 일부 구현예에서, 상기 용량 범위는 약 0.01 mg/kg 내지 약 100 mg/kg의 체중/1일이다. 용량은 질환 또는 장애의 유형 및 진행 정도, 구체적인 환자의 전반적인 건강 상태, 선택된 화합물의 상대적 생물학적 효능, 부형제의 제형, 및 그것의 투여 경로와 같은 변수에 따를 것이다. 유효 용량은 시험관 내에서 또는 동물 모델 시험 시스템으로부터 유도된 용량-반응 곡선으로부터 외삽될 수 있다.
식 I의 화합물은 또한 임의의 약제, 예컨대, 항-바이러스제, 백신, 항체, 면역 증강제, 면역 억제제, 항-염증제 등을 포함할 수 있는 하나 이상의 추가의 활성 성분과 함께 제형화될 수 있다.
본원은 또한 치료적 유효량의 식 I의 화합물을 포함하는 약제 조성물을 함유하는 하나 이상의 용기를 포함하는, 예를 들면 본원에서 언급된 IDO-관련된 질환 또는 장애, 비만, 당뇨병 및 다른 질환의 치료 또는 예방에 유용한 약제학적 키트를 포함한다. 그와 같은 키트는 당해 분야의 숙련가에게 쉽게 명백해질 것이듯이, 원한다면 예를 들면, 하나 이상의 약제학적으로 허용가능한 담체를 갖는 용기, 추가의 용기 등과 같은 하나 이상의 다양한 종래 약제학적 키트 성분을 추가로 포함할 수 있다. 투여된 성분의 양, 투여 지침, 및/또는 성분 혼합에 대한 지침을 명시하는 삽입물 또는 라벨로서의 설명서가 상기 키트 중에 또한 포함될 수 있다.
실시예
본 발명을 구체적인 예에 의해 더 상세하게 설명할 것이다. 하기 예는 예시 목적을 위해 제공된 것이며, 본 발명을 임의의 방식으로 제한하도록 의도되지 않는다. 당해 분야의 숙련가는, 변경 또는 변화되어 본질적으로 동일한 결과를 나타낼 수 있는 다양한 비-임계 파라미터를 용이하게 인식할 것이다.
실시예 1. 4-({2-[( 아미노설포닐 )아미노]에틸}아미노)- N -(3- 브로모 -4- 플루오로페닐 )- N' -하이드록시-1,2,5-옥사디아졸-3-카복스아미다마이드의 합성
Figure pct00056
단계 A: 4-아미노-N'- 하이드록시 -1,2,5- 옥사디아졸 -3-카복스아미다마이드 (2)
Figure pct00057
말로노니트릴 [알드리치(Aldrich) 제품, 제품 # M1407] (320.5 g, 5 mol)을 물 (7 L)에 부가하고, 45℃로 사전가열시키고, 45℃에서 5분 동안 교반시켰다. 생성된 용액을 얼음조에서 냉각시키고, 아질산나트륨(380 g, 5.5 mol, 1.1 당량)을 부가했다. 온도가 10℃가 되면, 6N 염산 (55 mL)을 부가했다. 온도가 16℃가 되면서 온건한 발열 반응이 일어났다. 15분 후에, 얼음조를 제거하고, 반응 혼합물을 16-18℃에서 1.5시간 동안 교반시켰다. 반응 혼합물을 13℃로 냉각시키고, 50% 수성 하이드록실아민 하이드로클로라이드 (990 g, 15 mol, 3.0 당량)를 한 번에 모두 부가하였다. 온도가 26℃로 상승하였다. 발열 반응이 진정되면, 얼음조를 제거하고 26-27℃에서 1시간 동안 교반을 계속한 다음, 서서히 환류시켰다. 2시간 동안 환류를 유지한 다음, 반응 혼합물을 밤새 서서히 냉각시켰다. 반응 혼합물을 얼음조에서 교반시키고, 6N 염산 (800 mL)을 40분에 걸쳐 나누어 부가하여 pH 7.0으로 조정하였다. 얼음조 내 5℃에서 교반을 계속하였다. 침전물을 여과로 수집하고, 물로 잘 세척하고, 진공 오븐 (50℃)에서 건조시켜서, 원하는 생성물 (644 g, 90%)을 황백색 고형물로 수득하였다. 13C NMR (75 MHz, CD3OD): δ 156.0, 145.9, 141.3; C3H5N5O2 (MW 143.10), LCMS (EI) m/e 144.0 (M+ + H).
단계 B: 4-아미노-N- 하이드록시 -1,2,5- 옥사디아졸 -3- 카복시미도일 클로라이드 (3)
Figure pct00058
4-아미노-N'-하이드록시-1,2,5-옥사디아졸-3-카복스아미다마이드 (422 g, 2.95 mol)를 물 (5.9 L), 아세트산 (3 L) 및 6N 염산 (1.475 L, 3.0 당량)의 혼합물에 부가하고, 투명 용액이 얻어질 때까지 현탁액을 42-45℃에서 교반시켰다. 염화나트륨 (518 g, 3.0 당량)을 부가하고, 이 용액을 얼음/물/메탄올 조 중에서 교반시켰다. 온도를 0℃ 미만으로 유지하면서, 물 (700 mL) 중의 아질산나트륨 (199.5 g, 0.98 당량) 용액을 3.5시간에 걸쳐 부가하였다. 부가를 완료한 후에, 1.5시간 동안 얼음조에서 교반을 계속한 다음, 반응 혼합물을 15℃로 가온시켰다. 침전물을 여과로 수집하고, 물로 잘 세척하고, 에틸 아세테이트 (3.4 L) 중에 용해시키고, 무수 황산나트륨 (500 g)으로 처리하고, 실온에서 1시간 동안 교반시켰다. 이 현탁액을 황산나트륨 (200 g)을 통하여 여과시키고, 여과물을 회전식 증발기 상에서 농축시켰다. 잔류물을 메틸 tert-부틸 에테르 (5.5 L)에 용해시키고, 활성탄 (40 g)으로 처리하고, 실온에서 40분 동안 교반시키고, 셀라이트를 통해 여과하였다. 용매를 회전식 증발기에서 제거하고, 얻어지는 생성물을 진공 오븐 (45℃) 중에서 건조시켜서, 원하는 생성물 (256 g, 53.4%)을 황백색 고형물로 수득하였다. 13C NMR (100 MHz, CD3OD) δ 155.8, 143.4, 129.7; C3H3ClN4O2 (MW 162.53), LCMS (EI) m/e 163/165 (M+ + H).
단계 C: 4-아미노-N-(3- 브로모 -4- 플루오로페닐 )-N'- 하이드록시 -1,2,5- 옥사디 아졸-3-카복스아미다마이드 (4)
Figure pct00059
4-아미노-N-하이드록시-1,2,5-옥사디아졸-3-카복스이미도일 클로라이드 (33.8 g, 208 mmol)를 물 (300 mL)과 혼합시켰다. 60℃에서, 10분 동안 교반시키면서, 3-브로모-4-플루오로아닐린 (시그마-알드리치(Sigma-Aldrich) 제품) (43.6 g, 229 mmol, 1.1 당량)을 상기 현탁액에 부가하였다. 60℃에서 교반시키면서, 물 (300 mL) 중의 중탄산나트륨 (26.3 g, 313 mmol, 1.5 당량)의 용액을 15분에 걸쳐 부가하였다. 20분 동안 교반시킨 후에, LCMS로부터 반응 완료가 나타났다. 그 후, 반응 혼합물을 실온으로 냉각시키고, 에틸 아세테이트 (2 x 300 mL)로 추출하였다. 합한 에틸 아세테이트 용액을 무수 황산나트륨 상에서 건조시키고 농축시켜, 원하는 생성물 (65 g, 99%)을 황백색 고형물로 수득하였는데, 이것을 추가 정제 없이 차후 반응에 사용하였다. C9H7BrFN5O2 (MW 316.09), LCMS (EI) m/e 316/318 (M+ + H).
단계 D: 3-(4-아미노-1,2,5- 옥사디아졸 -3-일)-4-(3- 브로모 -4- 플루오로페닐 )-1,2,4-옥사디아졸-5(4H)-온 (5)
Figure pct00060
4-아미노-N-(3-브로모-4-플루오로페닐)-N'-하이드록시-1,2,5-옥사디아졸-3-카복스아미다마이드 (65.7 g, 208 mmol), N,N-카보닐디이미다졸 (시그마-알드리치 제품) (50.6 g, 312 mmol, 1.5 당량), 및 에틸 아세테이트 (750 mL)의 혼합물을 60℃로 가열하고, 20분 동안 교반시켰다. LCMS로부터 반응 완료가 나타났다. 반응물을 실온으로 냉각시키고, 1N 염산 (2 x 750 mL)으로 세척하고, 황산나트륨 상에서 건조시키고, 농축시켰다. 미정제 생성물을 디클로로메탄, 에틸 아세테이트, 및 디에틸 에테르의 혼합물로 분쇄시켜서, 원하는 생성물 (60.2 g, 85%)을 황백색 고형물로 수득하였다. 1H NMR (300 MHz, DMSO-d 6 ) δ 8.05 (m, 1H), 7.69 (m, 1H), 7.57 (t, 1H, J = 8.7 Hz), 6.58 (s, 2H); C10H5BrFN5O3 (MW 342.08), LCMS (EI) m/e 342/344 (M+ + H).
단계 E: tert -부틸 [2-({4-[2-(3- 브로모 -4- 플루오로페닐 )-5-옥소-2,5- 디하이 드로-1,2,4-옥사디아졸-3-일]-1,2,5-옥사디아졸-3-일}아미노)에틸]카바메이트 (7)
Figure pct00061
질소 하에서 교반시키면서, 트리플루오로아세트산 (20.0 mL) 및 테트라하이드로푸란 (10.0 mL)의 용액에 나트륨 트리아세톡시보로하이드라이드 (10.59 g, 49.97 mmol, 10.0 당량)를 나누어 부가하였다. 이 혼합물을 실온에서 10분 동안 교반시킨 다음, -5℃로 냉각시켰다. 온도를 0℃ 미만으로 유지하면서, THF (15.0 mL) 중의 3-(4-아미노-1,2,5-옥사디아졸-3-일)-4-(3-브로모-4-플루오로페닐)-1,2,4-옥사디아졸-5(4H)-온 (1.71 g, 5.0 mmol) 및 tert-부틸 (2-옥소에틸)카바메이트 (시그마-알드리치 제품)(1.99 g, 12.5 mmol, 2.5 당량)의 용액을 교반시키면서 30분에 걸쳐 적가하였다. 반응물을 -5 내지 0℃에서 교반시키고, THF (1.0 mL) 중의 추가 부분의 tert-부틸 (2-옥소에틸)카바메이트 (0.20 g, 1.2 mmol, 0.24 당량)를 20분, 40분 및 4시간 간격으로 적가하였다. 5.25시간 후에 HPLC로부터 반응 완료가 나타났다. 반응 혼합물을 빙냉시킨 중탄산나트륨 (500 mL)에 붓고, 이 용액을 실온에서 밤새 교반시켰다. 침전물을 여과로 수집하고, 염수로 세척하였다. 생성된 잔류물을 헵탄 (40 mL) 및 디에틸 에테르 (40 mL)와 혼합시키고, 실온에서 5시간 동안 교반시켰다. 침전물을 여과로 수집하고, 디에틸 에테르로 세척하고, 진공 오븐에서 건조시켜, 원하는 생성물 (1953 mg, 80.5%)을 황백색 고형물로 수득하였다. 1H NMR (300 MHz, DMSO-d 6 ) δ 8.08 (m, 1H), 7.71 (m, 1H), 7.59 (t, 1H, J = 8.7 Hz), 6.94 (m, 1H), 6.52 (m, 1H), 3.32 (m, 2H), 3.15 (m, 2H), 1.36 (s, 9H); C17H18BrFN6O5 (MW 485.26); LCMS (EI) m/e 507/509 (M+ + Na).
단계 F: 3-{4-[(2- 아미노에틸 )아미노]-1,2,5- 옥사디아졸 -3-일}-4-(3- 브로모 -4-플루오로페닐)-1,2,4-옥사디아졸-5(4H)-온 하이드로클로라이드 (8)
Figure pct00062
방법 A ( tert -부틸 [2-({4-[2-(3- 브로모 -4- 플루오로페닐 )-5-옥소-2,5- 디하이드로 -1,2,4-옥사디아졸-3-일]-1,2,5-옥사디아졸-3-일}아미노)에틸]카바메이트; 단계 E로부터 제조됨):
500 mL 플라스크에 tert-부틸 [2-({4-[2-(3-브로모-4-플루오로페닐)-5-옥소-2,5-디하이드로-1,2,4-옥사디아졸-3-일]-1,2,5-옥사디아졸-3-일}아미노)에틸]카바메이트 (20 g, 41.2 mmol) 및 이소프로판올 (255 mL)을 넣었다. 슬러리를 실온에서 교반시켰다. 염화수소 기체 (7.55g, 207 mmol, 5.0 당량)를 하위표면 유리 관을 사용하여 16분에 걸쳐 상기 슬러리에 부가하였다. 그 후, 에틸 아세테이트 (111 mL)를 상기 배치(batch)에 부가하고, 반응물을 43℃로 가열하고, 7.5시간 동안 교반시켰다. 배치를 19℃로 냉각시키고 에틸 아세테이트 (44 mL)를 부가했다. 슬러리를 여과하고, 생성된 잔류물을 에틸 아세테이트 (2 x 55 mL)로 세척하였다. 단리된 고형물을 감압 하 45℃에서 15시간 동안 건조시켜서, 원하는 생성물 (16.61 g ,95.5% 수율)을 황백색 내지 백색 고형물로 수득하였다. 1H NMR (300 MHz, DMSO-d 6 ) δ 8.11 (bs, 3H), 7.78 (m, 1H), 7.73 (m, 1H), 7.59 (t, 1H, J = 8.7 Hz), 6.74 (t, 1H, J = 6.1 Hz), 3.50 (m, 2H), 3.02 (m, 2H); C12H11BrClFN6O3, (MW 421.61; 유리 염기에 대한 C12H10BrFN6O3, MW 385.15), LCMS (EI) m/e 385/387 (M+ + H).
방법 B (3-(4-아미노-1,2,5- 옥사디아졸 -3-일)-4-(3- 브로모 -4- 플루오로페닐 )-1,2,4-옥사디아졸-5(4H)-온; 단계 D로부터 직접 제조됨):
나트륨 트리아세톡시보로하이드라이드 (2.33 g, 11.0 mmol, 11.0 당량)를 트리플루오로아세트산 (12.0 mL, 155.8 mmol, 155.8 당량)과 혼합시켰다. 생성된 용액을 실온에서 30분 동안 혼합시켰다. 디클로로메탄 (10.0 mL) 및 아세토니트릴 (6.0 mL) 중의 3-(4-아미노-1,2,5-옥사디아졸-3-일)-4-(3-브로모-4-플루오로페닐)-1,2,4-옥사디아졸-5(4H)-온 (5, 0.342 g, 1.0 mmol) 및 tert-부틸 (2-옥소에틸)카바메이트 (시그마-알드리치 제품) (1.04 g, 6.51 mmol, 6.5 당량)의 용액을 N2 하에서 교반시켰다. 이 용액을 -5℃로 냉각시키고, 나트륨 트리아세톡시보로하이드라이드 및 트리플루오로아세트산의 용액을 5분에 걸쳐 적가하였다. 반응물을 실온에서 4시간 동안 교반시켰다. HPLC 및 LC-MS (M+ - Boc + H: 385/387, 브로마이드 패턴)로부터 원하는 생성물: 출발 물질의 비가 4:1이었음이 나타났다. 상기 혼합물을 농축시키고 디클로로메탄 (10 mL)으로 희석하였다. 용액을 0℃로 냉각시키고 온도를 0-5℃에서 유지하면서 4N 수산화나트륨을 서서히 부가하여 pH를 8-9로 조정하였다. 수성 층을 디클로로메탄 (3 x 10 mL)으로 추출하였다. 합한 디클로로메탄 용액을 중탄산나트륨 및 염수로 세척하고, 황산나트륨 상에서 건조시키고, 농축시켰다. 그 후, 미정제 잔류물을 디클로로메탄 (6.0 mL)에 용해시키고, 생성된 용액을 0℃로 냉각시켰다. 0-5℃에서 디옥산 (3.0 mL) 중의 4N 염산을 적가하였다. 혼합물을 실온에서 20분 동안 교반시켰다. 침전물을 여과로 수집하고, 디에틸 에테르로 세척하고, 진공에서 건조시켜서, 원하는 생성물 (289 mg, 54%)을 황백색 고형물로 수득하였다. 1H NMR (300 MHz, DMSO-d 6 ) δ 8.11 (bs, 3H), 7.78 (m, 1H), 7.73 (m, 1H), 7.59 (t, 1H, J = 8.7 Hz), 6.74 (t, 1H, J = 6.1 Hz), 3.50 (m, 2H), 3.02 (m, 2H); C12H11BrClFN6O3, (MW 421.61; 유리 염기에 대한 C12H10BrFN6O3, MW 385.15), LCMS (EI) m/e 385/387 (M+ + H).
단계 G: tert -부틸 ({[2-({4-[4-(3-브로모-4-플루오로페닐)-5-옥소-4,5-디하이드로-1,2,4-옥사디아졸-3-일]-1,2,5-옥사디아졸-3-일}아미노)에틸]아미노}설포닐)카바메이트 (9)
Figure pct00063
실온에서 20-L 유리 반응기에 3-{4-[(2-아미노에틸)아미노]-1,2,5-옥사디아졸-3-일}-4-(3-브로모-4-플루오로페닐)-1,2,4-옥사디아졸-5(4H)-온 하이드로클로라이드 (1200 g, 2.846 mol) 및 디클로로메탄 (6.5 L)을 넣었다. 트리에틸아민 (950 g, 9.39 mol, 3.3 당량)을 7분에 걸쳐 배치에 부가하였다. 그 후, 상기 배치를 -14.6℃로 냉각시켰다.
5-L 둥근바닥 플라스크에 tert-부탄올 (253 g, 3.41 mol, 1.2 당량) 및 디클로로메탄 (2.6 L)을 넣었다. 상기 용액을 0.9℃로 냉각시켰다. 배치 온도를 10℃ 미만으로 유지하면서, 이 용액에 43분에 걸쳐 클로로설포닐 이소시아네이트 (463 g, 3.27 mol, 1.15 당량)를 부가하였다. 생성된 tert-부틸 (클로로설포닐)카바메이트 용액을 1시간 동안 3-5℃에서 유지하였다.
배치 온도를 0℃ 미만으로 유지하면서, tert-부틸 (클로로설포닐)카바메이트의 용액을 73분에 걸쳐 반응기에 부가하였다. 그 후, 배치를 1시간에 걸쳐 10℃로 가온시킨 다음, 10-14℃에서 1시간 동안 교반시켰다. 물 (4.8 L)을 배치에 부가하고, 켄칭된 반응 혼합물을 실온에서 14.5시간 동안 교반시켰다. 배치를 그대로 두고, 상 분리시켰다. 반응기에 유지된 디클로로메탄 용액을 단리시키고, 여기에 25분에 걸쳐 아세트산 (513 g)을 넣어 생성물을 침전시켰다. 생성된 슬러리를 20℃에서 2.5시간 동안 교반시켰다. 생성물을 여과로 단리하고, 디클로로메탄 (1.8 L)으로 세척하였다. 생성물을 감압 하 (-30 inHg) 45℃에서 16시간 동안 건조시켜서, 원하는 생성물 (1342 g, 83.5% 수율)을 백색 고형물로 수득하였다. 1H NMR (400 MHz, DMSO-d 6 ): δ 10.90 (s, 1H), 8.08 (dd, J = 6.2, 2.5 Hz, 1H), 7.72 (m, 1H), 7.59 (t, J = 8.6 Hz, 1H), 6.58 (t, J = 5.7 Hz, 1H), 3.38 (dd, J = 12.7, 6.2 Hz, 2H), 3.10 (dd, J = 12.1, 5.9 Hz, 2H), 1.41 (s, 9시간). C17H19BrFN7O7S (MW 564.34), LCMS (EI) m/e 585.9/587.9 (M+ + Na).
단계 H: N-[2-({4-[4-(3- 브로모 -4- 플루오로페닐 )-5-옥소-4,5- 디하이드로 -1,2,4-옥사디아졸-3-일]-1,2,5-옥사디아졸-3-일}아미노)에틸]설파마이드 (10)
Figure pct00064
tert-부틸 ({[2-({4-[4-(3-브로모-4-플루오로페닐)-5-옥소-4,5-디하이드로-1,2,4-옥사디아졸-3-일]-1,2,5-옥사디아졸-3-일}아미노)에틸]아미노}설포닐)카바메이트 (1200 g, 2.126 mol)를 함유하는 20-L 플라스크에 20℃에서 에탄올 (12 L)을 부가하였다. 생성된 혼합물을 실온에서 교반시키고, 염화수소 기체 (472 g, 12.9 mol, 6.07 당량)를 넣었다. 배치를 50℃로 가열하고, 반응 완료까지 3시간 동안 그 온도를 유지하였다. 용매를 33-39℃에서 진공 증류에 의해 제거하고, 6 Kg의 증류물을 수집하였다. 에틸 아세테이트 (6.8 L, 6.1 Kg)를 배치에 부가하고 증류시켜 5.1 Kg의 증류물을 수집하였다. 에틸 아세테이트 (7.2 L, 6.48 Kg)를 배치에 부가하고 증류시켜 5.1 Kg의 증류물을 수집하였다. 에틸 아세테이트 (2.4 L, 2.14 Kg)를 배치에 부가하여 용매 비를 조정하였다. 1H NMR로부터 에틸 아세테이트:에탄올 몰 비가 1.0:0.1였음이 나타났다. 상기 용액을 65℃로 가열하였다. n-헵탄 (4.1 kg)을 60-65℃에서 43분에 걸쳐 용액에 부가하였다. 생성된 슬러리를 65℃에서 1시간 동안 교반시켰다. 슬러리를 2.5시간에 걸쳐 20℃로 냉각시키고, 그 온도에서 15시간 동안 교반시켰다. 생성물을 여과로 수집하고, n-헵탄 (2.42 L)으로 세척하였다. 생성물을 감압 하 45℃에서 65시간 동안 건조시켜서, 원하는 생성물 (906 g, 91.8% 수율)을 황백색 고형물로 수득하였다. 1H NMR (400 MHz, DMSO-d 6 ) δ 8.08 (dd, J = 6.2) 7.72 (m, 1H), 7.59 (t, J = 8.7 Hz, 1H), 6.67 (t, J = 5.9 Hz, 1H), 6.55 (s, 2H) 6.52 (t, J = 6.0 Hz, 1H), 3.38 (dd, J = 12.7, 6.3 Hz, 2H), 3.11 (dd, J = 12.3, 6.3 Hz, 2H); C12H11BrFN7O5S (MW 464.23), LCMS (EI) m/e 485.8/487.8 (M+ - C5H8O2 + Na).
단계 I: 4-({2-[( 아미노설포닐 )아미노]에틸}아미노)-N-(3- 브로모 -4- 플루오로페닐 )-N'-하이드록시-1,2,5-옥사디아졸-3-카복스아미다마이드 (11)
Figure pct00065
20-L 유리 반응기에 N-[2-({4-[4-(3-브로모-4-플루오로페닐)-5-옥소-4,5-디하이드로-1,2,4-옥사디아졸-3-일]-1,2,5-옥사디아졸-3-일}아미노)에틸]설파마이드 (799.4 g, 1.72 mol) 및 THF (3.2 L)를 부가하였다. 생성된 용액을 20℃에서 7분 동안 교반시킨 다음, 물 (1.6 L)을 넣었다. 배치를 2℃로 냉각시키고, 8분에 걸쳐 30중량% 수산화나트륨 용액 (475 mL, 666.4 g, 4.99 mol, 2.9 당량)을 넣었다. 배치를 20℃로 가온시키고 그 온도를 16시간 동안 유지하였다. 그 후, 배치에 23분에 걸쳐 메틸 tert-부틸 에테르 (8.0 L)를 넣었다. 물 (2.7 L)을 부가하고 배치를 약 0℃로 냉각시켰다. 그 후, 배치에 9분에 걸쳐 85중량% 인산 (370.7 g, 3.22 mol, 1.9 당량)을 넣었다. 배치를 20℃로 가온시키고 1시간 동안 교반시켰다. 배치를 그대로 두고 상 분리시켰다. 유기 층을 반응기에 유지시키고, 물 (2.9 L) 및 85중량% 인산 (370.7g, 3.22 mol)을 넣고, 20℃에서 1시간 동안 교반시켰다. 배치를 그대로 두고 상 분리시켰다. 유기 층을 반응기에 유지시키고, 물 (3.2 L)을 넣고, 20℃에서 1시간 동안 교반시켰다. 배치를 그대로 두고 상 분리시켰다. 유기 용액을 반응기에 유지시키고, 감압 하 20℃에서 증류시켜서 3.4 Kg의 증류물을 제거하였다. 에탄올 (4.8 L)을 배치에 넣고, 이 배치를 3.2 L의 용적으로 증류시켰다. 이 증류 공정을 한 번 더 반복하였다. 에탄올 (0.6 L)을 배치에 부가하여 배치 용적을 4 L로 조정하였다. 배치를 20℃에서 16시간 동안 교반시킨 다음, 물 (6.39 L)을 넣었다. 생성된 슬러리를 20℃에서 5시간 동안 교반시켰다. 생성물을 여과로 수집하고, 에탄올 (529 mL)과 물 (1059 mL)의 혼합물로 2회 세척하였다. 생성물을 감압 하 45℃에서 65시간 동안 건조시켜서, 원하는 생성물 (719.6 g, 95.4%)을 백색 고형물로 수득하였다. 1H NMR (400 MHz, DMSO-d 6 ): δ 11.51 (s, 1H), 8.90 (s, 1H), 7.17 (t, J = 8.8 Hz, 1H), 7.11 (dd, J = 6.1, 2.7 Hz, 1H), 6.76 (m, 1H), 6.71 (t, J = 6.0 Hz, 1H), 6.59 (s, 2H), 6.23 (t, J = 6.1 Hz, 1H), 3.35 (dd, J = 10.9, 7.0 Hz, 2H), 3.10 (dd, J = 12.1, 6.2 Hz, 2H); C11H13BrFN7O4S (MW 438.23), LCMS (EI) m/e 437.9/439.9 (M+ + H).
실시예 2. N-[2-({4-[4-(3- 브로모 -4- 플루오로페닐 )-5-옥소-4,5- 디하이드로 -1,2,4-옥사디아졸-3-일]-1,2,5-옥사디아졸-3-일}아미노)에틸]설파마이드의 대안적 제법
Figure pct00066
단계 1: 에틸 {[( tert - 부톡시카보닐 )-아미노] 설포닐 }아미노아세테이트 (13)
Figure pct00067
디클로로메탄 (100 mL) 중의 클로로설포닐이소시아네이트 (시그마-알드리치 제품) (5.0 mL, 57.4 mmol)의 용액을 0℃로 냉각시켰다. tert-부틸 알코올 (4.26 g, 57.4 mmol, 1.0 당량)을 부가 깔대기를 통하여 디클로로메탄 (100 mL)에 부가하였다. 이 용액을 0℃에서 30분 동안 교반시켰다. 0℃에서 글리신 에틸 에스테르 하이드로클로라이드 (8.82 g, 63.2 mmol, 1.1 당량)를 부가한 다음, 트리에틸아민 (20.0 mL, 144 mmol, 2.5 당량)을 적가하였다. 이 반응 혼합물을 실온에서 4시간 동안 교반시켰다. 반응물을 디클로로메탄 (100 mL)으로 희석시키고, 0.1N 염산 및 염수로 세척했다. 유기 층을 황산나트륨 상에서 건조시키고 농축시켜서 원하는 생성물 (13.2 g, 81.4 %)을 미정제 황백색 고형물을 수득하였는데, 이것을 추가 정제 없이 차후 반응에 사용하였다. 1H NMR (300 MHz, DMSO-d 6 ) δ 10.88 (s, 1H), 8.07 (t, 1H, J = 6.1 Hz), 4.08 (q, 2H, J = 7.1 Hz), 3.78 (d, 2H, J = 6.1 Hz), 1.40 (s, 9H), 1.18 (t, 3H, J = 7.1 Hz).
단계 2a. 에틸 ( 알릴{[알릴(tert-부톡시카보닐)아미노]설포닐 }아미노)아세테이트 (14a)
Figure pct00068
N2 하 실온에서 에틸 ({[(tert-부톡시카보닐)아미노]설포닐}아미노아세테이트 (1.0 g, 3.54 mmol)를 탄산칼륨 (2.45 g, 17.7 mmol, 5.0 당량) 및 아세토니트릴 (23.0 mL)과 혼합시켰다. 알릴 브로마이드 (1.84 mL, 21.2 mmol, 6.0 당량)를 적가했다. 이 반응 혼합물을 70℃로 가열하고, 그 온도에서 14시간 동안 교반시켰다. HPLC 및 LCMS로부터 반응 완료가 나타났다. 반응물을 여과시키고, 여과물을 농축시켰다. 잔류물을 디클로로메탄에 용해시키고, 중탄산나트륨 및 염수로 세척했다. 유기 층을 황산나트륨 상에서 건조시키고 농축시켜서 원하는 생성물 (1.11 g, 87 %)을 미정제 황백색 고형물로 수득하였는데, 이것을 추가 정제 없이 차후 반응에 사용하였다. 1H NMR (300 MHz, DMSO-d 6 ) δ 5.75 (m, 2H), 5.20 (m, 4H), 4.12 (m, 6H), 3.89 (m, 2H), 1.43 (s, 9H), 1.18 (t, 3H, J = 8.7 Hz).
단계 2b. 에틸 [{[( tert - 부톡시카보닐 )(4-메톡시벤질)아미노] 설포닐 }(4-메톡시벤질)아미노]아세테이트 (14b)
Figure pct00069
에틸 ({[(tert-부톡시카보닐)아미노]설포닐}아미노)아세테이트 (1.00 g, 4.0 mmol)를 N,N-디메틸포름아마이드 (DMF, 6.0 mL)와 혼합시키고, 실온에서 교반시켰다. 아이오딘화나트륨 (0.01 g, 0.1 mmol, 0.025 당량), 탄산칼륨 (2.40 g, 20 mmol, 5.0 당량) 및 파라-메톡시벤질 클로라이드 (2.64 mL, 19.5 mmol, 4.875 당량)를 상기 혼합물에 부가하였다. 이 반응을 80℃로 가온시키고, 80℃에서 2시간 동안 교반시켰다. LCMS로부터 반응 완료가 나타났다. 반응물을 실온으로 냉각시키고, 셀라이트를 통해 여과하였다. 셀라이트 층을 디클로로메탄으로 세척하고, 합한 유기 여과물을 농축시켰다. 농축된 잔류물을 디클로로메탄 (20 mL)에 용해시키고, 중탄산나트륨 (5 x 12 mL) 및 염수로 세척했다. 유기 층을 황산나트륨 상에서 건조시키고 농축시켰다. 잔류물을 실리카겔 (0-40% 에틸 아세테이트/헥산 구배 용리) 상에서 정제하여, 원하는 생성물 (1.39 g, 80%)을 황백색 고형물로 수득하였다. 1H NMR (300 MHz, DMSO-d 6 ) δ 7.22 (m, 2H), 7.14 (m, 2H), 6.88 (m, 4H), 4.64 (s, 2H), 4.33 (s, 2H), 4.03 (q, 2H, J = 7.1 Hz), 3.92 (s, 2H), 3.72 (s, 3H), 3.71 (s, 3H), 1.39 (s, 9H), 1.14 (t, 3H, J = 7.1 Hz).
단계 3a. tert -부틸 알릴{[알릴(2-옥소에틸)아미노]설포닐}카바메이트 (15a)
Figure pct00070
N2 하 -78℃에서 디클로로메탄 (15 mL) 중의 에틸 (알릴{[알릴(tert-부톡시카보닐)아미노]설포닐}아미노)아세테이트 (1.11 g, 3.05 mmol)의 용액을 디클로로메탄 (3.66 mL, 3.66 mmol, 1.2 당량) 중의 1.0M 디이소부틸알루미늄 하이드라이드로 처리하였다. 반응 혼합물을 -78℃에서 1시간 동안 교반시킨 다음, 메탄올 (1.5 mL)로 켄칭시키고, 나트륨 칼륨 타르트레이트 포화 용액 (65 mL)으로 처리하였다. 이 용액을 실온에서 밤새 교반시켰다. 그 후, 수성 층을 디클로로메탄 (3 x 20 mL)으로 추출하였다. 합한 디클로로메탄 용액을 염수로 세척하고, 황산나트륨 상에서 건조시키고, 여과시키고, 농축시켜서 원하는 생성물 (0.62 g, 64 %)을 미정제의 진한(thick) 무색 오일을 수득하였는데, 이것을 추가 정제 없이 차후 반응에 사용하였다. 1H NMR (300 MHz, DMSO-d 6 ) δ 9.45 (s, 1H), 5.76 (m, 2H), 5.18 (m, 4H), 4.15 (m, 4H), 3.72 (m, 2H), 1.43 (s, 9H).
단계 3b. tert -부틸 (4-메톡시벤질){[(4-메톡시벤질)(2- 옥소에틸 )아미노] 설포닐 }카바메이트 (15b)
Figure pct00071
N2 하 -78℃에서 디클로로메탄 (20.0 mL) 중의 에틸 [{[(tert-부톡시카보닐)(4-메톡시벤질)아미노]설포닐}(4-메톡시벤질)아미노]아세테이트 (5.30 g, 10 mmol)의 용액을 디클로로메탄 (12.2 mL, 12.2 mmol, 1.22 당량) 중의 1.0 M 디이소부틸알루미늄 하이드라이드로 처리하였다. 반응 혼합물을 -78℃에서 3시간 동안 교반시켰다. 그 후, 반응물을 메탄올 (3 mL)로 켄칭시키고, 디클로로메탄 (100 mL) 및 나트륨 칼륨 타르트레이트 포화 용액 (150 mL)으로 처리하였다. 이 용액을 실온에서 밤새 교반시켰다. 그 후, 수성 층을 디클로로메탄 (3 x 20 mL)으로 추출하였다. 합한 디클로로메탄 용액을 염수로 세척하고, 황산나트륨 상에서 건조시키고 농축시켰다. 그 후, 잔류물을 실리카겔 (0-30% 에틸 아세테이트/헥산 구배 용리) 상에서 정제하여, 원하는 생성물 (3.45 g, 71%)을 황백색 고형물로 수득하였다. 1H NMR (300 MHz, DMSO-d 6 ) δ 9.24 (s, 1H), 7.23 (m, 4H), 6.88 (m, 4H), 4.68 (s, 2H), 4.31 (s, 2H), 4.07 (s, 2H), 3.72 (s, 3H), 3.71 (s, 3H), 1.40 (s, 9H).
단계 4a. tert -부틸 알릴(N-알릴-N-(2-(4-(4-(3-브로모-4-플루오로페닐)-5-옥소-4,5-디하이드로-1,2,4-옥사디아졸-3-일)-1,2,5-옥사디아졸-3-일아미노)에틸)설파모일)카바메이트 (16a)
Figure pct00072
주위 온도에서 50-mL 플라스크에 나트륨 트리아세톡시보로하이드라이드 (1.06 g, 5.0 mmol, 1.0 당량), 트리플루오로아세트산 (TFA, 2.0 mL, 26 mmol) 및 테트라하이드로푸란 (THF, 1.0 mL)을 부가하였다. 이 혼합물을 N2 하에 -5℃로 냉각시키고, 0-5℃에서 10분 동안 교반시켰다. 이 용액에 0-5℃에서 5분에 걸쳐 THF (1.5 mL) 중의 3-(4-아미노-1,2,5-옥사디아졸-3-일)-4-(3-브로모-4-플루오로페닐)-1,2,4-옥사디아졸-5(4H)-온 (0.171 g, 5.0 mmol; 단계 D) 및 tert-부틸 알릴{[알릴(2-옥소에틸)아미노]설포닐}카바메이트 (0.398 g, 2.5 mmol, 0.5 당량)를 적가하였다. 생성된 반응 혼합물을 N2 하 0-5℃에서 교반시켰다. 20분, 40분 및 2.5시간 시점에서, 0-5℃에서 THF (0.20 mL) 중의 tert-부틸 알릴{[알릴(2-옥소에틸)아미노]설포닐}카바메이트 (0.040 g, 0.125 mmol, 0.25 당량)의 용액을 적가하였다. 2.5시간에, 0-5℃에서 트리플루오로아세트산 (TFA, 1.5 mL, 9.5 mmol) 중의 나트륨 트리아세톡시보로하이드라이드 (0.211 g, 1.0 mmol, 0.2 당량)의 용액을 부가하였다. 반응물을 실온으로 가온시키고 밤새 교반했다. 그 후, 반응 혼합물을 탄산나트륨의 빙냉시킨 포화 용액 (50 mL)에 붓고, 디클로로메탄 (3 x 20 mL)으로 추출하였다. 합한 디클로로메탄 추출물을 염수로 세척하고, 황산나트륨 상에서 건조시키고, 농축시켰다. 그 후, 잔류물을 실리카겔 (0-75% 에틸 아세테이트/헥산 구배 용리) 상에서 정제하여, 원하는 생성물 (0.239 g, 74.2%)을 황백색 고형물로 수득하였다. 1H NMR (300 MHz, DMSO-d 6 ) δ 8.07 (m, 1H), 7.71 (m, 1H), 7.58 (t, 1H, J = 8.7 Hz), 6.62 (m, 1H), 5.77 (m, 2H), 5.19 (m, 4H), 4.17 (m, 2H), 3.89 (m, 2H), 3.44 (m, 2H), 3.38 (m, 2H), 1.42 (s, 9H); C23H27BrFN7O7S (MW 644.47), LCMS (EI) m/e 544/546 (M+ - Boc + H).
단계 4b. tert -부틸 N-(2-(4-(4-(3-브로모-4-플루오로페닐)-5-옥소-4,5-디하이드로-1,2,4-옥사디아졸-3-일)-1,2,5-옥사디아졸-3-일아미노)에틸)-N-(4-메톡시벤질)설파모일(4-메톡시벤질)카바메이트 (16b)
Figure pct00073
주위 온도에서 50-mL 플라스크에 나트륨 트리아세톡시보로하이드라이드 (0.50 g, 2.37 mmol, 4.74 당량), 트리플루오로아세트산 (TFA, 1.0 mL, 13 mmol) 및 테트라하이드로푸란을 부가하였다. 이 혼합물을 N2 하에서 0-5℃로 냉각시키고, 0-5℃에서 10분 동안 교반시켰다. 이 용액에 0-5℃에서 테트라하이드로푸란 (THF, 1.50 mL) 중의 tert-부틸 (4-메톡시벤질){[(4-메톡시벤질)(2-옥소에틸)아미노]설포닐}카바메이트 (0.40 g, 0.84 mmol, 1.68 당량) 및 3-(4-아미노-1,2,5-옥사디아졸-3-일)-4-(3-브로모-4-플루오로페닐)-1,2,4-옥사디아졸-5(4H)-온 (0.17 g, 0.50 mmol; 단계 D)을 부가하였다. 반응물을 0-5℃에서 45분 동안 교반시킨 다음, 0-5℃에서 THF (0.50 mL) 중의 tert-부틸 (4-메톡시벤질){[(4-메톡시벤질)(2-옥소에틸)아미노]설포닐}카바메이트 (0.12 g, 0.20 mmol, 0.4 당량)의 용액을 부가하였다. 0-5℃에서 1시간 동안 교반시킨 후에, 반응물을 교반시키면서 서서히 실온으로 가온시켰다. 2.5시간 및 4.5시간 시점에서, 트리플루오로아세트산 (0.25 mL)을 부가했다. 5시간에, THF (0.20 mL) 중의 tert-부틸 (4-메톡시벤질){[(4-메톡시벤질)(2-옥소에틸)아미노]설포닐}카바메이트 (0.060 g, 0.1 mmol, 0.2 당량)의 용액을 부가했다. 6.5시간에, 트리플루오로아세트산 (0.25 mL) 중의 나트륨 트리아세톡시보로하이드라이드 (0.060 g, 0.24 mmol, 0.48 당량)의 용액을 부가했다. HPLC로부터 대략 4%의 3-(4-아미노-1,2,5-옥사디아졸-3-일)-4-(3-브로모-4-플루오로페닐)-1,2,4-옥사디아졸-5(4H)-온 출발 물질 (단계 D로부터의)이 여전히 잔류하고 있음이 나타났다. 반응 혼합물을 실온에서 밤새 교반시켰다. HPLC로부터 반응 완료가 나타났다. 반응 혼합물을 탄산나트륨의 빙냉시킨 포화 용액 (50 mL)에 붓고, 혼합물을 디클로로메탄 (3 x 20 mL)으로 추출했다. 합한 디클로로메탄 추출물을 염수로 세척하고, 황산나트륨 상에서 건조시키고, 농축시켰다. 그 후, 잔류물을 실리카겔 (0-30% 에틸 아세테이트/헥산 구배 용리) 상에서 정제하여, 원하는 생성물 (0.33 g, 82.5%)을 황백색 고형물로 수득하였다. 1H NMR (300 MHz, DMSO-d 6 ) δ 8.06 (m, 1H), 7.69 (m, 1H), 7.57 (t, 1H, J = 8.7 Hz), 7.22 (m, 4H), 6.87 (m, 4H), 6.48 (m, 1H), 4.72 (s, 2H), 4.36 (s, 2H), 3.70 (S, 6H), 3.39 (m, 2H), 3.31 (m, 2H), 1.37 (s, 9H); C33H35BrFN7O9S (MW 804.64), LCMS (EI) m/e 826/828 (M+ - Boc + Na).
단계 5: N-[2-({4-[4-(3- 브로모 -4- 플루오로페닐 )-5-옥소-4,5- 디하이드로 -1,2,4-옥사디아졸-3-일]-1,2,5-옥사디아졸-3-일}아미노)에틸]설파마이드 (10)
Figure pct00074
주위 온도에서 25-mL 플라스크에 트리플루오로아세트산 (TFA, 0.50 mL, 6.5 mmol) 중의 tert-부틸 {[[2-({4-[4-(3-브로모-4-플루오로페닐)-5-옥소-4,5-디하이드로-1,2,4-옥사디아졸-3-일]-1,2,5-옥사디아졸-3-일}아미노)에틸](4-메톡시벤질)아미노]설포닐}(4-메톡시벤질)카바메이트 (40.2 mg, 0.050 mmol)를 부가하였다. 이 반응 혼합물을 N2 하에 70℃로 가열하고, 1시간 동안 교반시켰다. HPLC로부터 반응 완료가 나타났다. 반응 혼합물을 실온으로 냉각시키고, TFA를 증발시켰다. 잔류 TFA를 디클로로메탄 (3 x 10 mL)으로 처리하여 제거한 다음, 진공에서 증발시켰다. 그 후, 잔류물을 디클로로메탄 및 메탄올로 분쇄하여, 원하는 생성물 (20 mg, 87%)을 미정제 황백색 고형물로 수득하였다. 1H NMR (400 MHz, DMSO-d 6 ) δ 8.08 (dd, J = 6.2, 2.5 Hz, 1H), 7.72 (m, 1H), 7.59 (t, J = 8.7 Hz, 1H), 6.67 (t, J = 5.9 Hz, 1H), 6.55 (s, 2H) 6.52 (t, J = 6.0 Hz, 1H), 3.38 (dd, J = 12.7, 6.3 Hz, 2H), 3.11 (dd, J = 12.3, 6.3 Hz, 2H); C12H11BrFN7O5S (MW 464.23), LCMS (EI) m/e 487.8/489.8 (M+ + Na).
실시예 3. N-[2-({4-[4-(3- 브로모 -4- 플루오로페닐 )-5-옥소-4,5- 디하이드로 -1,2,4-옥사디아졸-3-일]-1,2,5-옥사디아졸-3-일)아미노)에틸]설파마이드의 대안적 제법
Figure pct00075
단계 1a. tert -부틸 N-(2,2- 디메톡시에틸 ) 설파모일카바메이트 (17a)
Figure pct00076
디클로로메탄 (120 mL) 중의 클로로설포닐이소시아네이트 (11.32 g, 80 mmol)의 용액을 0℃로 냉각시켰다. tert-부틸 알코올 (7.65 mL, 80.0 mmol, 1.0 당량)을 부가 깔때기를 통해 부가하였다. 혼합물을 0℃에서 1.5시간 동안 교반시켰다. 이 혼합물에 메틸렌 클로라이드 (DCM 120.0 mL) 중의 아미노아세트알데하이드 디메틸 아세탈 (8.76 mL, 80.0 mmol, 1.0 당량) 및 트리에틸아민 (TEA, 33.4 mL, 240 mmol, 3.0 당량)의 용액을 부가 깔때기를 통해 부가하였다. 반응물을 실온으로 가온시키고 밤새 교반했다. 반응물을 0.1N 염산으로 처리하고, 유기 층을 염수로 세척하고 황산나트륨 상에서 건조시키고 농축시켜서, 원하는 생성물 (15.6 g, 68.5 %)을 미정제 황백색 고형물로 수득하였는데, 이것을 추가 정제 없이 차후 반응에 사용하였다: 1H NMR (300 MHz, DMSO-d 6 ) δ 10.84 (s, 1H), 7.62 (t, 1H, J = 6.0 Hz), 4.38 (t, 1H, J = 5.5 Hz), 3.24 (s, 6H), 2.96 (dd, 2H, J = 5.8 Hz), 1.41(s, 9H).
단계 1b. 벤질 N-(2,2- 디메톡시에틸 ) 설파모일카바메이트 (17b)
Figure pct00077
디클로로메탄 (100 mL) 중의 클로로설포닐이소시아네이트 (16.26 g, 114.9 mmol)의 용액을 0℃로 냉각시켰다. 벤질 알코올 (12.44g, 115.0 mmol, 1.0 당량)을 부가 깔때기를 통해 부가하였다. 혼합물을 0℃에서 0.5시간 동안 교반시켰다. 이 혼합물에 아미노아세트알데하이드 디메틸 아세탈 (13.25 g,126.0 mmol, 1.1 당량)과 트리에틸아민 (TEA, 17.4 g, 172 mmol, 1.5 당량)의 혼합물을 15℃ 미만에서 부가 깔때기를 통해 적가하였다. 반응물을 실온으로 가온시키고 밤새 교반했다. 반응 혼합물을 0.5N 염산 (100 mL)으로 처리하고, 수집된 유기 상을 염수로 세척하고, 황산나트륨 상에서 건조시키고, 진공에서 농축시켜 원하는 생성물 (23.5 g, 64.3 %)을 미정제 황백색 고형물로 수득하였다. 1H NMR (300 MHz, DMSO-d 6 ) δ 11.29 (s, 1H), 7.90 (t, 1H, J = 6.0 Hz), 7.37 (m, 5H), 5.12 (s, 2H), 4.35 (t, 1H, J = 5.5 Hz), 3.21 (s, 6H), 2.97 (dd, 2H, J = 5.8 Hz).
단계 1c. 에틸 N-(2,2- 디메톡시에틸 ) 설파모일카바메이트 (17c)
Figure pct00078
디클로로메탄 (120 mL) 중의 클로로설포닐이소시아네이트 (11.32 g, 80 mmol)의 용액을 0℃로 냉각시켰다. 에탄올 (4.67 mL, 80.0 mmol, 1.0 당량)을 부가 깔때기를 통해 부가하였다. 혼합물을 0℃에서 1.5시간 동안 교반시켰다. 이 혼합물에 0℃에서 디클로로메탄 (DCM, 120.0 mL) 중의 아미노아세트알데하이드 디메틸 아세탈 (8.76 mL,80.0 mmol, 1.0 당량), 트리에틸아민 (TEA, 33.4 mL, 240 mmol, 3.0 당량)의 용액을 부가 깔때기를 통해 적가하였다. 반응물을 실온으로 가온시키고, 밤새 교반했다. 반응물을 0.1N 염산으로 처리하고, 수집된 유기 상을 염수로 세척하고, 황산나트륨 상에서 건조시키고, 진공에서 농축시켜서 원하는 생성물 (11.2 g, 55 %)을 미정제 황백색 고형물로 수득하였다. 1H NMR (300 MHz, DMSO-d 6 ) δ 11.13 (s, 1H), 7.81 (t, 1H, J = 6.0 Hz), 4.37 (t, 1H, J = 5.5 Hz), 4.09 (q, 2H, J = 7.1 Hz), 3.23 (s, 6H), 2.97 (dd, 2H, J = 5.8 Hz), 1.19 (t, 3H, J = 7.1 Hz).
단계 1d. 2,2,2- 트리클로로에틸 N-(2,2- 디메톡시에틸 ) 설파모일카바메이트 (17d)
Figure pct00079
디클로로메탄 (120 mL) 중의 클로로설포닐이소시아네이트 (6.96 mL, 80 mmol)의 용액을 0℃로 냉각시켰다. 0℃에서 2,2,2-트리클로로에탄올 (7.67 mL, 80.0 mmol, 1.0 당량)을 부가 깔때기를 통해 부가하였다. 이 혼합물을 0℃에서 1.5시간 동안 교반시켰다. 그 후, 이 혼합물에 0℃에서 디클로로메탄 (DCM, 120.0 mL) 중의 아미노아세트알데하이드 디메틸 아세탈 (8.76 mL,80.0 mmol, 1.0 당량) 및 트리에틸아민 (TEA, 33.4 mL, 240 mmol, 3.0 당량)의 용액을 부가 깔때기를 통해 적가하였다. 반응물을 실온으로 가온시키고, 실온에서 밤새 교반시켰다. 반응물을 0.1N 염산으로 처리하고, 수집된 유기 상을 염수로 세척하고, Na2SO4 상에서 건조시키고 농축시켜서 원하는 생성물 (28.01 g, 97 %)을 미정제 황백색 고형물로 수득하였는데, 이것을 추가 정제 없이 차후 반응에 사용하였다. 1H NMR (300 MHz, DMSO-d 6 ) δ 11.79 (s, 1H), 8.08 (t, 1H, J = 5.9 Hz), 4.90 (s, 2H), 4.37 (t, 1H, J = 5.5 Hz), 3.23 (s, 6H), 3.00 (dd, 2H, J = 5.7 Hz).
단계 2a. t ert -부틸 ({[2-({[4-(3-브로모-4-플루오로페닐)-5-옥소-4,5-디하이드로-1,2,4-옥사디아졸-3-일]-1,2,5-옥사디아졸-3-일}아미노)에틸]아미노}설포닐)카바메이트 (18a)
Figure pct00080
N2 하 실온에서 디클로로메탄 (1.0 mL) 중의 3-(4-아미노-1,2,5-옥사디아졸-3-일)-4-(3-브로모-4-플루오로페닐)-1,2,4-옥사디아졸-5(4H)-온 (103 mg, 0.302 mmol, 1.5 당량; 단계 D) 및 tert-부틸 N-(2,2-디메톡시에틸)설파모일카바메이트 (57.2 mg, 0.201 mmol)의 혼합물을 교반시켰다. 이 혼합물에 트리플루오로아세트산 (0.50 mL, 6.5 mmol) 및 트리에틸실란 (80.2 μL, 0.502 mmol, 2.5 당량)을 적가하였다. 이 반응 혼합물을 실온에서 2시간 동안 교반시켰다. HPLC로부터 대략 30% 전환이 나타났다. 반응 혼합물을 0℃로 냉각시키고, 포화 중탄산나트륨을 사용하여 pH ~ 8로 켄칭하였다. 혼합물을 에틸 아세테이트 (3 x 10 mL)에서 추출하였다. 합한 유기 추출물을 염수로 세척하고, 황산나트륨 상에서 건조시키고, 농축시켰다. 잔류물을 분취 TLC (50% 에틸 아세테이트/헥산)로 정제하여, 원하는 생성물 (27.5 mg, 29.5%)을 황백색 고형물로 수득하였다. 1H NMR (DMSO-d 6 , 400 MHz): δ 10.90 (s, 1H), 8.08 (dd, J = 6.2, 2.5Hz, 1H), 7.72 (m, 1H), 7.59 (t, J = 8.6Hz, 1H), 6.58 (t, J = 5.7Hz, 1H), 3.38 (dd, J = 12.7, 6.2Hz, 2H), 3.10 (dd, J = 12.1, 5.9Hz, 2H), 1.41 (s, 9H). C17H19BrFN7O7S (MW 564.34), LCMS (EI) m/e 485.8/487.8 (M+ - C5H8O2 + Na).
단계 2b. 벤질 ({[2-({[4-(3-브로모-4-플루오로페닐)-5-옥소-4,5-디하이드로-1,2,4-옥사디아졸-3-일]-1,2,5-옥사디아졸-3-일}아미노)에틸]아미노}설포닐)카바메이트 (18b)
Figure pct00081
1,2-디클로로에탄 (3.0 mL) 중의 3-(4-아미노-1,2,5-옥사디아졸-3-일)-4-(3-브로모-4-플루오로페닐)-1,2,4-옥사디아졸-5(4H)-온 (68 mg, 0.20 mmol; 단계 D로부터의) 및 벤질 {[(2,2-디메톡시에틸)아미노]설포닐}카바메이트 (191 mg, 0.60 mmol, 3.0 당량)의 혼합물을 0℃로 냉각시켰다. 이 혼합물에 트리플루오로아세트산 (1.0 mL, 13.0 mmol) 및 트리에틸실란 (105 μL, 0.66 mmol, 3.3 당량)을 적가하였다. 이 반응 혼합물을 0℃에서 2시간 동안 교반시켰다. HPLC로부터 반응 완료가 나타났다. 반응 혼합물을 0℃로 냉각시키고, 포화 중탄산나트륨을 사용하여 pH ~ 8로 켄칭시키고, 켄칭된 반응 혼합물을 EtOAc (3 x 10 mL)로 추출하였다. 합한 유기 추출물을 염수로 세척하고, 황산나트륨 상에서 건조시키고, 농축시켰다. 그 후, 잔류물을 헵탄과 디에틸 에테르의 혼합물 중에서 밤새 교반시켰다. 고형물을 여과로 수집하고, 헵탄으로 세척하고, 진공에서 건조시켜서, 원하는 생성물 (125 mg, 99%)을 미정제 황백색 고형물로 수득하였다. 1H NMR (300 MHz, DMSO-d 6 ) δ 11.31 (s, 1H), 8.05 (m, 1H), 7.87 (m, 1H), 7.68 (m, 1H), 7.56 (m, 1H), 7.32 (m, 5H), 6.54 (m, 1H), 5.07 (s, 2H), 3.29 (m, 2H), 3.09 (m, 2H); C20H17BrFN7O7S (MW 598.36), LCMS m/e 598/600 (M+ + H).
단계 2c. 에틸 ({[2-({4-[4-(3-브로모-4-플루오로페닐)-5-옥소-4,5-디하이드로-1,2,4-옥사디아졸-3-일]-1,2,5-옥사디아졸-3-일}아미노)에틸아미노}설포닐)카바메이트 (18c)
Figure pct00082
1,2-디클로로에탄 (2.50 mL, 31.7 mmol) 중의 3-(4-아미노-1,2,5-옥사디아졸-3-일)-4-(3-브로모-4-플루오로페닐)-1,2,4-옥사디아졸-5(4H)-온 (68 mg, 0.20 mmol; 단계 D로부터의) 및 에틸 {[(2,2-디메톡시에틸)아미노]설포닐}카바메이트 (154 mg, 0.600 mmol, 3.0 당량)의 혼합물을 0℃에서 교반시켰다. 이 혼합물에 트리플루오로아세트산 (1.00 mL, 13.0 mmol) 및 트리에틸실란 (105 μL, 0.66 mmol, 3.3 당량)을 적가하였다. 반응 혼합물을 0℃에서 3시간 동안 교반시켰다. HPLC로부터 원하는 생성물로의 97.5% 전환이 나타났다. 반응 혼합물을 0℃로 냉각시키고, 포화 중탄산나트륨을 사용하여 pH ~ 8로 켄칭하였다. 혼합물을 에틸 아세테이트 (3 x 10 mL)에서 추출하였다. 합한 유기 추출물을 염수로 세척하고, 황산나트륨 상에서 건조시키고, 농축시켰다. 잔류물을 헵탄과 디에틸 에테르의 혼합물 중에서 밤새 교반시켰다. 고형물을 여과로 수집하고, 헵탄으로 세척하여 원하는 생성물 (95 mg, 88%)을 미정제 황백색 고형물로 수득하였다. 1H NMR (300 MHz, DMSO-d 6 ) δ 11.18 (s, 1H), 8.08 (m, 1H), 7.70 (m, 2H), 7.59 (t, 1H, J = 8.7 Hz), 6.56 (s, 1H), 4.04 (d, 2H, J = 7.2 Hz), 3.35 (m, 2H), 3.11 (m, 2H), 1.15 (t, 3H, J = 7.2 Hz); C15H15BrFN7O7S (MW 536.29), LCMS (EI) m/e 536/538 (M+ + H).
단계 2d. 2,2,2- 트리클로로에틸 ({[2-({4-[4-(3-브로모-4-플루오로페닐)-5-옥소-4,5-디하이드로-1,2,4-옥사디아졸-3-일]-1,2,5-옥사디아졸-3-일}아미노)에틸]아미노}설포닐)카바메이트 (18d)
Figure pct00083
디클로로메탄 (DCM, 6.0 mL) 중의 3-(4-아미노-1,2,5-옥사디아졸-3-일)-4-(3-브로모-4-플루오로페닐)-1,2,4-옥사디아졸-5(4H)-온 (5, 0.680 g, 1.99 mmol) 및 2,2,2-트리클로로에틸 {[(2,2-디메톡시에틸)아미노]설포닐}카바메이트 (17d, 2.22 g, 6.17 mmol, 3.1 당량)의 현탁액을 실온에서 교반시켰다. 반응 온도를 30℃ 미만으로 유지하면서, 이 혼합물에 트리에틸실란 (1.27 mL, 7.95 mmol, 4.0 당량), 및 디클로로메탄 (DCM, 2.0 mL) 중의 트리플루오로아세트산 (TFA, 3.0 mL, 39.0 mmol)의 용액을 부가하였다. 실온에서 진탕시킨 지 5분 후에 반응 혼합물이 균질해졌고, 이것을 실온에서 1시간 동안 교반시켰다. HPLC로부터 반응 완료가 나타났다. 반응물을 여과시키고, 침전물을 디클로로메탄과 헵탄의 혼합물 (용적을 기준으로 한 디클로로메탄:헵탄 비는 1:9임) 중에 현탁시켰다. 현탁액을 실온에서 밤새 교반시켰다. 침전물을 여과로 수집하고, 헵탄 중의 10% 디클로로메탄으로 세척하고, 진공에서 건조시켜서 원하는 생성물 (1.15 g, 90.4%)을 황백색 고형물로 수득하였는데, 이것을 추가 정제 없이 차후 반응에 사용하였다. 1H NMR (300 MHz, DMSO-d 6 ) δ 11.85 (s, 1H), 8.07 (m, 2H), 7.70 (m, 1H), 7.57 (t, 1H, J = 8.7 Hz), 6.56 (m, 1H), 4.88 (m, 2H), 3.37 (m, 2H), 3.16 (m, 2H); C15H12BrCl3FN7O7S (MW 639.62), LCMS (EI) m/e 638/640/642 (M+ + H).
단계 3. N-[2-({4-[4-(3- 브로모 -4- 플루오로페닐 )-5-옥소-4,5- 디하이드로 -1,2,4-옥사디아졸-3-일]-1,2,5-옥사디아졸-3-일}아미노)에틸]설파마이드 (10)
Figure pct00084
테트라하이드로푸란 (THF, 4.0 mL) 중의 2,2,2-트리클로로에틸 ({[2-({4-[4-(3-브로모-4-플루오로페닐)-5-옥소-4,5-디하이드로-1,2,4-옥사디아졸-3-일]-1,2,5-옥사디아졸-3-일}아미노)에틸]아미노}설포닐)카바메이트 (320 mg, 0.50 mmol; 단계 Q, 방법 D로부터의)를 실온에서 교반시켰다. 아세트산 (0.30 mL, 5.3 mmol) 및 아연 플레이크 (160 mg, 2.5 mmol, 5.0 당량)를 순차적으로 부가했다. 이 반응 혼합물을 실온에서 3시간 동안 교반시켰다. HPLC로부터 반응 완료가 나타났다. 반응 혼합물을 셀라이트를 통해 여과하고, THF로 세척하였다. 합한 여과물을 진공에서 농축시키고, 생성된 잔류물을 에틸 아세테이트 (20 mL)에 용해시켰다. 에틸 아세테이트 용액을 포화 탄산나트륨 및 염수로 세척하고, 황산나트륨 상에서 건조시키고, 농축시켰다. 미정제 물질을 에틸 아세테이트 및 디에틸 에테르로부터 결정화하여, 원하는 생성물 (147 mg, 63%)을 황백색 고형물로 수득하였다.
실시예 4. 4-({2-[( 아미노설포닐 )아미노]에틸}아미노)- N -(3- 브로모 -4- 플루오 로페닐)- N' -하이드록시-1,2,5-옥사디아졸-3-카복스아미다마이드의 대안적 제법
Figure pct00085
단계 1. (9H- 플루오렌 -9-일) 메틸 N-(2,2- 디메톡시에틸 ) 설파모일카바메이트
Figure pct00086
실온에서, 오븐 건조시킨 2L 4-목 둥근바닥 플라스크에 9-플루오레닐메탄올 (50.0 g, 255 mmol) 및 무수 DCM (382 mL)을 넣었다. 생성된 슬러리를 얼음조에서 약 0-5℃로 냉각시켰다. 반응 혼합물 온도를 < 5℃에서 유지하면서, 무수 DCM (127 mL) 중의 클로로설포닐 이소시아네이트 (CSI, 23.0 mL, 264 mmol)의 용액을 22분에 걸쳐 부가 깔때기를 통해 상기 슬러리에 적가하였다. 생성된 혼합물을 0-5℃에서 1.75시간 동안 교반시켜서 짙은 백색 슬러리를 생성시켰다. 무수 DCM (382 mL) 및 4-메틸모폴린 (84.0 mL, 764 mmol) 중의 아미노아세트알데하이드 디메틸 아세탈 (27.9 mL, 255 mmol)의 용액을 71분에 걸쳐 약 0-5℃에서 상기 혼합물에 부가하였다. 그 후, 생성된 반응 혼합물을 얼음조에서 1.5시간 동안 교반시켰다. HPLC가 반응 완료를 나타내면, 22분에 걸쳐 1.0M 인산 (H3PO4, 수성, 640 mL)을 적가하여 반응 혼합물을 pH 1-2로 산성화시켰다. 그 후, 물 (300 mL), EtOAc (2150 mL) 및 헵탄 (250 mL)을 부가하고, 생성된 혼합물을 10분 동안 교반시켰다. 2개 상이 분리되었는데, 유기 상을 순차적으로 물 (500 mL), 헵탄 (300 mL) 및 물 (2 x 500 mL)로 세척하고, MgSO4 상에서 건조시켰다. 여과물을 진공 하에서 농축 건조시켰다. 생성된 고형물을 65℃에서 EtOAc (600 mL)에 재용해시키고, 이 따뜻한 용액을 깨끗한 3 L 둥근 바닥 플라스크 내로 여과하였다. 여과물을 실온으로 냉각시키고, 2.5시간 동안 교반시킨 다음, 헵탄 (1200 mL)을 80분에 걸쳐 부가 깔때기를 통해 부가하였다. 밤새 실온에서 교반시킨 후에, 혼합물을 얼음조에서 1시간 동안 냉각시켰다. 생성된 고형물을 여과로 수집하고, 25% EtOAc/헵탄 (250 mL)으로 세척하고, 진공 하 약 40-45℃에서 밤새 건조시켜서, 9H-플루오렌-9-일메틸 {[(2,2-디메톡시에틸)아미노]설포닐}카바메이트 (91.3 g, 88% 수율)를 백색 분말로 수득하였다. 1H NMR (300 MHz, DMSO-d 6 ) δ 11.43 (s, 1H), 7.98 - 7.85 (m, 3H), 7.76 (d, J = 7.5 Hz, 2H), 7.43 (t, J = 7.2 Hz, 2H), 7.33 (td, J = 7.4, 1.1 Hz, 2H), 4.44 - 4.33 (m, 3H), 4.33 - 4.22 (m, 1H), 3.23 (s, 6H), 2.99 (t, J = 5.8 Hz, 2H) ppm.
단계 2. 9H- 플루오렌 -9- 일메틸 ({[2-({4-[4-(3-브로모-4-플루오로페닐)-5-옥소-4,5-디하이드로-1,2,4-옥사디아졸-3-일]-1,2,5-옥사디아졸-3-일}아미노)에틸]아미노}설포닐)카바메이트
Figure pct00087
주위 온도에서 10 분에 걸쳐, DCM (160 mL) 중의 3-(4-아미노-1,2,5-옥사디아졸-3-일)-4-(3-브로모-4-플루오로페닐)-1,2,4-옥사디아졸-5(4H)-온 (10.00 g, 29.23 mmol)의 교반시킨 현탁액에 메탄설폰산 (MeSO3H, 8.46 g, 88.04 mmol) 및 트리에틸실란 (Et3SiH, 8.37 g, 71.96 mmol)을 부가하여 슬러리를 얻었다. 수조를 사용하여 내부 온도를 약 20℃ 미만에서 유지하면서, 고체 9H-플루오렌-9-일메틸{[(2,2-디메톡시에틸)아미노]설포닐}카바메이트 (12.25 g, 30.14 mmol)를 나누어 (1 g/3 - 4분; 1 시간에 걸쳐) 부가하였다. 부가 후, 생성된 혼합물을 약 13 내지 22℃에서 3일 동안 교반시켰다. 추가의 트리에틸실란 (Et3SiH, 0.1755 g, 1.51 mmol) 및 9H-플루오렌-9-일메틸{[(2,2-디메톡시에틸)아미노]설포닐}카바메이트 (0.3082 g, 0.76 mmol)를 부가하고, 생성된 혼합물을 주위 온도에서 추가 23시간 동안 교반시켰다. 이소프로필 알코올 (IPA, 15 mL)을 부가하고, 생성된 혼합물을 주위 온도에서 1시간 동안 교반시켰다. 헵탄 (100 mL)을 부가하고, 혼합물을 주위 온도에서 추가 2시간 동안 교반시켰다. 고형물을 여과로 수집하고, IPA/헵탄 (1/5; 2 x 30 mL) 및 헵탄 (2 x 30 mL)으로 세척하고, 진공 하에서 건조시켜서, 9H-플루오렌-9-일메틸 ({[2-({4-[4-(3-브로모-4-플루오로페닐)-5-옥소-4,5-디하이드로-1,2,4-옥사디아졸-3-일]-1,2,5-옥사디아졸-3-일}아미노)에틸]아미노}설포닐)카바메이트를 백색 고형물 (18.30 g, 91.1% 수율)로 수득하였다. 1H NMR (500 MHz, DMSO-d 6 ) δ 11.44 (s, 1H), 8.07 (dd, J = 6.2, 2.5 Hz, 1H), 7.90 (t, J = 5.6 Hz, 1H), 7.88 (d, J = 7.6 Hz, 2H), 7.72 (d, J = 7.0 Hz, 2H), 7.71 (ddd, J = 8.9, 4.3, 2.6 Hz, 1H), 7.57 (dd, J = 8.7, 8.7 Hz, 1H), 7.40 (t, J = 7.4 Hz, 2H), 7.31 (td, J = 7.4, 1.0 Hz, 2H), 6.55 (t, J = 6.0 Hz, 1H), 4.35 (d, J = 7.3 Hz, 2H), 4.25 (t, J = 7.2 Hz, 1H), 3.39 (q, J = 6.4 Hz, 2H), 3.15 (q, J = 6.3 Hz, 2H); 13C NMR (126 MHz, DMSO-d 6 ) δ 159.03 (d, J = 248.7 Hz), 156.61 (s), 155.22 (s), 151.55 (s), 148.67 (s), 143.29 (s), 140.68 (s), 133.82 (s), 133.39 (s), 130.05 (d, J = 8.5 Hz), 128.54 (d, J = 3.2 Hz), 127.73 (s), 127.07 (s), 125.24 (s), 120.11 (s), 117.42 (d, J = 24.0 Hz), 108.19 (d, J = 22.5 Hz), 66.70 (s), 46.17 (s), 43.34 (s), 40.79 (s) ppm; 19F NMR (376 MHz, DMSO-d 6 ) δ -103.99 - -107.39 (m) ppm.
단계 3. 4-({2-[( 아미노설포닐 )아미노]에틸}아미노)-N-(3- 브로모 -4- 플루오로페닐 )-N'-하이드록시-1,2,5-옥사디아졸-3-카복스아미다마이드
Figure pct00088
주위 온도에서 1L 4-목 둥근바닥 플라스크에 9H-플루오렌-9-일메틸({[2-({4-[4-(3-브로모-4-플루오로페닐)-5-옥소-4,5-디하이드로-1,2,4-옥사디아졸-3-일]-1,2,5-옥사디아졸-3-일}아미노)에틸]아미노}설포닐)카바메이트 (25.0 g, 36.4 mmol) 및 무수 THF (250 mL)를 넣어 균질한 용액을 생성시켰다. 그 후, 상기 용액을 얼음조에서 0-5℃로 냉각시키고 나서, 35분에 걸쳐 부가 깔대기를 통해 N,N-비스(2-아미노에틸)에탄-1,2-디아민 (114 mL, 728 mmol)을 적가하였다. 부가 깔때기를 무수 THF (50 mL)로 헹구고, 헹굼액을 반응 혼합물에 부가했다. 얼음조를 제거하고, 반응물을 서서히 주위 온도로 가온시키고, 주위 온도에서 2.5시간 동안 교반시켰다. EtOAc (400 mL)를 부가하고, 생성된 혼합물을 2L 4-목 둥근 바닥 플라스크로 이동시키고, 얼음조에서 약 0-5℃로 냉각시켰다. 내부 온도를 10℃ 미만에서 유지하면서, 2.0M HCl 수용액 (400 mL, 800.0 mmol)을 부가 깔때기를 통해 적가하였다. 2개 상으로 분리되었는데, 수성 상을 EtOAc (200 mL)로 추출하였다. 유기 분획을 합하고, 약 6-7℃로 냉각시켰다. 내부 온도를 10℃ 미만에서 유지하면서, 2.0M HCl 수용액 (200.0 mL, 400.0 mmol)을 차가운 유기 분획에 적가하였다. 2개 상으로 분리되었는데, 유기 상을 물 (2 x 400 mL)로 세척하고, MgSO4 상에서 건조시키고, 감압 하에 밝은 황색 시럽으로 농축시켰다. 상기 시럽을 EtOAc (60.0 mL)에 용해시켜서 균질한 용액을 수득하였다. 이 용액에 DCM (250.0 mL) 및 tert-부틸 메틸 에테르 (TBME, 100.0 mL)의 용액을 적가했다. 생성된 슬러리를 실온에서 밤새 교반시킨 다음, 얼음조에서 1시간 동안 냉각시켰다. 고형물을 여과로 수집하고, DCM (150 mL) 및 TBME (100 mL)의 빙냉시킨 250 mL 용액으로 세척하고, 진공하에서 건조시켜서 14.4 g의 미정제의 원하는 생성물을 백색 고형물로 수득하였다.
상기 미정제 생성물을 60℃에서 EtOAc (140.0 mL)에 용해시키고, 이 따뜻한 용액을 여과했다. 여과물을 실온으로 냉각한 다음, 55분에 걸쳐 헵탄 (100.0 mL)을 적가하였다. 그 후, 생성된 혼합물을 실온에서 밤새 교반시켰다. 고형물을 여과로 수집하고, 헵탄과 EtOAc (75 mL)의 2:1 혼합물로 세척하고, 진공 하 40-50℃에서 일정 중량으로 건조시켜서, 4-({2-[(아미노설포닐)아미노]에틸}아미노)-N-(3-브로모-4-플루오로페닐)-N'-하이드록시-1,2,5-옥사디아졸-3-카복스아미다마이드 (12.9 g, 81% 수율)를 백색 고형물로 수득하였다.
실시예 A: 인간 인돌아민 2,3- 디옥시게나제 (IDO) 효소 검정
N-말단 His 태그를 갖는 인간 인돌아민 2,3-디옥시게나제 (IDO)를 이.콜라 이(E.coli)에서 발현시키고 균질하게 정제하였다. IDO는 트립토판의 인돌 핵의 피롤 고리의 산화적 절단을 촉매화하여 N'-포르밀카이뉴레닌을 생성시킨다. 50 mM 인산칼륨 완충제 (pH 6.5) 중의 0.2 mg/mL 카탈라제, 20 mM 아스코르베이트 및 5 μM 메틸렌 블루의 존재 하에서 95 nM IDO 및 2 mM D-Trp를 사용하여 문헌에 기술된 바와 같이 실온에서 검정을 수행하였다. N'-포르밀카이뉴레닌의 형성으로 인한 321 nm에서의 흡광도 증가를 계속해서 따라가면서, 초기 반응 속도를 기록하였다 (문헌 [Sono, M. et al., 1980, J. Biol . Chem. 255, 1339-1345] 참고). 식 I의 화합물을 실시예 A의 검정에서 시험하여, < 200 nM의 IC50을 가짐을 확인하였다.
실시예 B: HeLa 세포 기반의 인돌아민 2,3- 디옥시게나제 (IDO)/ 카이뉴레닌 검정에서 억제제 활성의 측정
HeLa 세포 (#CCL-2)를 미국 미생물 보존 센터 (미국 버지니아 마나사스 ATCC)로부터 입수하고, 2 mM L-글루타민을 갖는 최소 필수 배지 (이글(eagle) 제품), 및 1.5 g/L 중탄산나트륨, 0.1 mM 비-필수 아미노산, 1 mM 피루브산나트륨 및 10% 소태아 혈청 (모두 인비트로젠(Invitrogen)) 제품)을 함유하도록 조정된 이글 BSS 중에 일상적으로 유지시켰다. 세포를 5% CO2가 공급된 가습된 인큐베이터 중의 37℃에서 유지하였다. 검정을 하기와 같이 수행하였다: HeLa 세포를 5 x 103/웰 밀도로 96 웰 배양 플레이트에 파종시키고, 밤새 성장시켰다. 다음 날, IFN-γ (50 ng/mL 최종 농도) 및 화합물의 연속 희석물 (200 μL 배양 배지의 총 용적으로)을 세포 내로 부가하였다. 48시간의 인큐베이션 후에, 140 μL의 상청액/웰을 새로운 96 웰 플레이트로 이동시켰다. 10 μL의 6.1N 트리클로로아세트산 (#T0699, 시그마 제품)을 각각의 웰 내로 혼합시키고, 50℃에서 30분 동안 인큐베이션시켜서, 인돌아민 2,3-디옥시게나제에 의해 생성된 N-포르밀카이뉴레닌을 카이뉴레닌으로 가수분해하였다. 그 후, 반응 혼합물을 10분 동안 2500 rpm에서 원심분리시켜 침전물을 제거하였다. 100 μL의 상청액/웰을 또 하나의 96 웰 플레이트로 이동시키고, 아세트산 중의 100 μl의 2% (w/v) p-디메틸아미노벤즈알데하이드 (#15647-7, 시그마-알드리치 제품)와 혼합시켰다. 카이뉴레닌으로부터 유래한 황색은, 스펙트라맥스(SPECTRAmax) 250 마이크로플레이트 판독기 (몰리큘러 디바이씨즈(Molecular Devices) 제품)를 사용하여 480 nm에서 측정되었다. L-카이뉴레닌 (#K8625, 시그마 제품)이 표준으로 사용되었다. 표준 (240, 120, 60, 30, 15, 7.5, 3.75, 1.87 μM)을 100 μL 배양 배지 중에서 제조하고, 동등한 용적의 2% (w/v) p-디메틸아미노벤즈알데하이드와 혼합시켰다. 개별 농도에서의 억제율(%)을 측정하고, 2회의 평균 값을 얻었다. IC50 값 (프리즘 그래프패드(Prism Graphpad))을 생성시키도록 비선형 회귀법을 사용하여 데이타를 분석하였다. 문헌 [Takikawa O et al., 1988, J. Biol . Chem ., 263(4): 2041-8]을 참고하기 바란다.
실시예 C: IDO-발현 수지상 세포에 의해 억제되는 T 세포 증식에 대한 IDO 억제제의 효과 측정
단핵구를 백혈구영동(leukophoresis)에 의해 인간 말초 단핵 세포로부터 수집하였다. 그 후, 단핵구를, 10% 소태아 혈청 및 2 mM L-글루타민 (모두 인비트로젠 제품)이 보충된 RPMI 1640 배지를 사용하여 96 웰 플레이트에 1 x 106 세포/웰의 밀도로 파종하였다. 37℃에서 밤새 배양시킨 후에 부착 세포가 플레이트 상에 유지되었다. 그 후, 부착 단핵구를 5-7일 동안 100 ng/ml GM-CSF (#300-03, 페프로테크(PeproTech) 제품) 및 250 ng/ml IL-4 (#200-04, 페프로테크 제품)로 자극한 다음, 추가 2일 동안 살모넬라 타이피뮤리움으로부터의 5 μg/mL LPS (#437650, 시그마 제품) 및 50 ng/mL IFN-γ (#285-IF, 알 앤드 디 시스템스(R&D System) 제품)로 활성화시켜서 수지상 세포 성숙을 유도하였다.
수지상 세포를 활성화시킨 후에, 배지를 100-200 U/mL IL-2 (#CYT-209, 프로스펙-타니 테크노진(ProSpec-Tany TechnoGene) 제품) 및 100 ng/mL 항-CD3 항체 (#555336, 파민젠(Pharmingen) 제품), T 세포 (2-3 x 105 세포/웰), 및 IDO 화합물의 연속 희석물이 보충된 완전(completed) RPMI 1640으로 교체하였다. 2일 초과 동안 인큐베이션시킨 후에, 제조업자의 설명에 따라 비색 세포 증식 ELISA 키트 (#1647229, 로쉐 몰리큘러 바이오케미컬스(Roche Molecular Biochemicals) 제품)를 사용하여 BrdU 혼입 검정에 의해 T 세포 증식을 측정하였다. 세포를 10 μM BrdU 라벨링 용액의 존재 하에서 16-18시간 동안 계속해서 배양하였다. 그 후, 라벨링 매체를 제거하고, 200μL 픽스데나트(FixDenat)/웰을 세포에 부가하고, 실온에서 30분 동안 인큐베이션시켰다. 픽스데나트 용액을 제거하고, 100μL/웰의 항-BrdU-POD 항체 접합체(conjugate) 작용 용액을 부가했다. 반응을 실온에서 90분 동안 수행하였다. 그 후, 상기 항체 접합체를 제거하고, 세포를 200μL/웰의 세척 용액으로 3회 헹구었다. 마지막으로, 100μL/웰의 기질 용액을 부가하고, 색 현상 동안 마이크로플레이트 판독기 (스펙트라맥스 플러스, 몰리큘러 디바이씨즈 제품)를 사용하여 결과물을 얻었다. 다양한 시점에서의 다중 판독치를 얻어, 데이타가 선형 범위 내에 있었음을 확인하였다. 데이타는 일반적으로 반복 실험으로부터 얻었는데, 적절한 대조가 포함되었다. 문헌 [Terness P et al., 2002, J. Exp . Med ., 196(4): 447-57; 및 Hwu, P et al., 2000, J. Immunol., 164(7): 3596-9]을 참고하기 바란다.
실시예 D: 항종양 활성에 대한 IDO 억제제의 생체 내 에서의 시험
생체 내에서의 항종양 효능은 변형시킨 종양 동종이식/이종이식 프로토콜을 사용하여 시험할 수 있다. 예를 들면, 문헌 [Muller, A.J. et al., 2005, Nat. Med. 11:312-319]에는, 면역-적격 마우스에서 IDO 억제가 세포독성 화학요법과 상승작용할 수 있음이 기술되었다. 이 시너지효과는, 면역-적격의 유전적동계 마우스에서 성장시킨 뮤린 종양 이종이식 모델 (예를 들면, B16 및 관련된 변종, CT-26, LLC)에서 조사되는 IDO 억제제의 상승작용 효과를, 중화되는 항-CD4 항체로 처리한 유전적동계 마우스 또는 면역-부적격 마우스 (예를 들면 nu/nu)에서 성장시킨 동일한 종양에서 관찰된 것과 비교함으로써, T-세포에 의존적인 것으로 밝혀졌다.
면역-적격 대 면역-부적격 마우스에서 차이 나는 항종양 효과의 개념은 단일 제제로서 조사되는 IDO 억제제의 시험을 또한 가능케 할 수 있다. 예를 들면, LLC 종양은 그것의 유전적동계 숙주 균주, C57Bl/6에서는 잘 성장한다. 그러나, 이러한 마우스를 IDO 억제제 1-MT (대 위약)로 처리하면 종양의 형성이 크게 지연되는데, 이것은 IDO 억제가 성장 억제성이었음을 의미하는 것이다 (Friberg, M. et al. 2002, Int . J. Cancer 101:151-155). 이러한 논리에 따라서, 당업자는 C57Bl/6 면역-적격 마우스에서 성장시킨 LLC 이종이식 종양 모델에서의 IDO 억제 효능을 조사하고, 이것을 누드 또는 SCID 마우스 (또는 T-세포 활성을 중화시킨 항체로 처리한 C57Bl/6 마우스)에서 LLC 종양 성장에 대한 IDO 억제제의 효과와 비교할 수 있다. IDO의 종양-매개된 면역 억제 활성을 완화시키는 효과가, 상이한 종양 모델의 면역원성 잠재력에 따라서 아마도 상이할 것이기 때문에, 그것의 면역원성 잠재력을 증가시키기 위해서 종양 세포에 유전자 변형이 실시될 수 있다. 예를 들면, B16.F10 세포에서 GM-CSF의 발현은 그것의 면역원성 잠재력을 증가시킨다 (Dranoff, G. et al. 1993, Proc. Natl . Acad . Sci ., USA, 90:3539-3543). 이와 같이, 일부 종양 모델 (예를 들면 B16.F10)에서, 당업자는 면역 자극 단백질, 예컨대, GM-CSF를 발현하는 [다]클론을 생성시키고, 면역-적격 및 면역-부적격 마우스 둘 모두에서 이러한 종양 세포로부터 확립된 종양에 대한 IDO 억제제의 성장 억제 효과를 시험할 수 있다.
생체 내에서 IDO 억제제의 효능을 평가하기 위한 제3 방법에서는, '사전-면역화' 뮤린 종양 동종이식/이종이식 모델이 사용된다. 이러한 모델에서, 면역-적격 마우스를 특정 종양 항원 또는 항원들에 대해 감작시켜서 치료적 항종양 백신을 모방하게 한다. 이것은, 마우스를 차후 이종이식 실험에서 (면역화에 사용된 것들과 유사한 종양 항원을 보유하는) 뮤린 종양 세포주로 시험감염시키는 경우에 면역계에 의해 매개된 항-종양 반응을 위해 마우스를 초회감작시킨다. IDO의 발현은, 항-종양 반응을 둔화시키고 이종이식편을 더 신속하게 성장시킬 수 있는 것으로 밝혀졌다. 중요하게, 이 모델에서 종양의 성장은 IDO 억제제 1-MT에 의해 억제된다 (Uyttenhove, C. et al. 2003, Nat. Med. 9:1269-1274). 이 모델은, IDO 활성이 P815 종양 성장에 대해 허용성이고 따라서 IDO의 특정 억제는 성장 억제성이어야 하므로, 특히 매력있다.
마지막으로, 생체 내에서 IDO 억제제의 영향을 평가하기 위해 치료적 면역화가 사용될 수 있다. 예를 들면, 당업자가 종양 세포의 정맥 내 주사에 이어, 종양 세포에 의해 발현된 잘 특성규명된 면역원성 펩타이드 (예를 들면 TRP-2)로 처리하여서 Blk/6 마우스를 시험감염시킬 수 있음이 B16-BL6 세포를 사용하여 실증되었다 (Ji et al., 2005, J. Immunol, 175: 1456-63). 중요하게, 면역계 조절제, 예컨대, 항-CTL-4 항체는 그와 같은 치료적 면역화에 대한 반응을 개선시킬 수 있다. IDO 억제제의 영향은 유사한 방식으로 - IDO 억제제와 함께 또는 이것 없이 종양 펩타이드 면역화에서 평가될 수 있다. 효능은 동물 생존 (이환(morbidity)까지의 시간)에 의해, 또는 규정된 시점에서 폐 및/또는 다른 장기로의 종양 전이의 측정에 의해 평가된다.
상기 언급된 모델 중 임의 것/모두에서, 종양 반응성 면역 세포의 수 및/또는 활성을 직접적으로 및/또는 간접적으로 평가하는 것이 또한 가능할 수 있다. 종양 반응성 면역 세포의 수 및/또는 활성의 평가 방법은 잘 확립되어 있고, 당업자에게 공지된 기술을 사용하여 수행될 수 있다 (Current Protocol in Immunology, Vol. 4, Coligan, J. E. et al.; Immunotherapy of Cancer, Human Press, 2006, Disis, M.L. 및 여기서의 참고문헌). 개념상으로, IDO의 면역 억제성 효과에서의 감소는 종양 특이적 면역 세포의 수 또는 반응성을 증가시킬 수 있다. 게다가, IDO 억제는 다른 치료제, 예를 들면 화학요법제 및/또는 면역 조절제 (예를 들면 항-CTLA4 항체)와 조합되는 경우에, 종양 반응성 면역 세포의 수 또는 반응성을 추가로 증가시킬 수 있다.
모든 동종이식/이종이식 실험은 표준 종양 기술을 사용하여 수행될 수 있다 (문헌 [Corbett et al, In Cancer Drug Discovery and Development: Anticancer Drug Development Guide: Preclinical Screening, Clinical Trials, and Approval, 2nd Ed. Teicher, B.A. 및 Andrews, P.A., Gumana Press Inc.: Totowa, NJ, 2004]에서 고찰됨). 유전자 (예를 들면 IDO, GM-CSF)의 클로닝, 및 종양 세포주로의 도입은 당업자에게 공지된 기술을 사용하여 수행할 수 있다 (문헌 [Sambrook, J. and Russel, D., Molecular Cloning: A laboratory Mannual (3 rd edition), Cold Spring Harbor Laboratory Press: Cold Spring Harbor, NY, 2001]에서 고찰됨).
실시예 E: 인간 면역결핍 바이러스-1 (HIV-1) 뇌염 모델에서 IDO 억제제의 생체 내 에서의 시험
1. 세포 단리 및 바이러스 감염
단핵구 및 PBL은 HIV-1, 2 및 B형 간염 혈청검사음성 공여체로부터의 백혈구영동 팩(pack)의 역류 원심분리 용리에 의해 얻을 수 있다. 단핵구를 테플론 플라스크를 사용하여 10% 열-불활성화시킨 풀링된 인간 혈청, 1% 글루타민, 50 ㎍/mL 겐타마이신, 10 ㎍/mL 시프로플록사신 (시그마 제품), 및 1000 U/mL 고도로 정제된 재조합 인간 대식세포 집락 자극 인자가 보충된 둘베코 변형 이글 배지 (DMEM, 시그마-알드리치 제품) 내 현탁액 배양물 중에서 배양시킨다. 7일 동안 배양시킨 후에, MDM을 0.01의 감염 다중도에서 HIV-1ADA로 감염시킨다.
2. Hu - PBL -NOD/ SCID HIVE 마우스
4주령의 수컷 NOD/C.B-17 SCID 마우스는 구매할 수 있다 (잭슨 라이브러리(Jackson Library) 제품). 동물을 병원체 비함유 조건 하에 있는 멸균된 마이크로아이솔레이터 케이지(microisolator cage)에 유지한다. 모든 동물에게 PBL을 이식하기 3일 전에 랫트 항-CD122 (0.25 mg/마우스)를, 및 PBL 주사 (20 × 106 세포/마우스) 하루 전 및 3일 후에 토끼 아시알로(asialo)-GM1 항체 (0.2 mg/마우스) (와코(Wako) 제품)를 2회 복막 내로 주사하였다. PBL 재구성하고 8일 후에 HIV-1ADA-감염된 MDM (10 μL 중 3 × 105 세포)을 두개 내로 (i.c.) 주사하여, hu-PBL-NOD/SCID HIVE 마우스를 생성시킨다. HIV-1 감염된 MDM을 두개 내로 주사한 직후에, hu-PBL-NOD/SCID HIVE 마우스에게 대조군 (비히클) 또는 화합물 펠렛 (14 또는 28일의 서방성, 이노베이티브 리서치(Innovative Research) 제품)을 피하 이식한다. IDO 화합물로 처리한 hu PBL-NOD/SCID HIVE 동물에서 바이러스-특이적 CTL의 유도를 확인하도록 초기 실험을 설계한다. 이것은 뇌 조직으로부터 제거된 MDM의 테트라머(tetermer) 염색 및 신경병리적 분석으로 확인한다. 그 후, 인간 림프구 재구성, 체액성 면역 반응, 및 신경병리적 변경을 분석하도록 실험을 설계한다. 이러한 실험에서, 동물을, 인간 MDM을 두개 내로 주사하고 7일에 출혈시키고, 14일 및 21일에 희생시킨다. EDTA-함유 관에 수집된 혈액을 흐름 세포측정에 사용하고, 혈장을 ELISA (베크만 코울터(Beckman Coulter)TM)를 사용한 HIV-1 p24의 검출을 위해 사용한다. HIV-1-특이적 항체를 제조업자의 설명 (캠브릿지 바이오테크(Cambridge Biotech) HIV-1 웨스턴 블롯 키트, 칼립테 바이오메디칼(Calypte Biomedical) 제품)에 따라 웨스턴 블롯 시험으로 검출한다. 유사한 양의 바이러스-특이적 항체는 대조군 및 화합물-처리된 동물에서 검출한다. 3개의 상이한 인간 백혈구 공여체를 사용하여 총 3회의 독립적 실험을 수행할 수 있다.
3. hu PBL -NOD/ SCID HIVE 마우스에서의 말초 혈액 및 비장의 팩스캔 (FACScan)
인간 MDM을 두개 내로 주사하고 1 내지 3주의 말초 혈액 및 2주 및 3주의 비장세포에 대해서 2색 FACS 분석을 수행할 수 있다. 세포를 4℃에서 30분 동안 인간 CD4, CD8, CD56, CD3, IFN-γ (이바이오사이언스(eBioscience) 제품)에 대한 형광색소-접합된 단클론성 Abs (mAbs)와 함께 인큐베이션시킨다. 세포 면역 반응을 평가하기 위해서, 뮤린 세포를 배제하도록 항-인간 CD8 및 FITC-접합된 항-마우스 CD45와 함께 IFN-γ 세포내 염색을 수행한다. Ag-특이적 CTL을 측정하기 위해서, HIV-1gag (p17 (aa77-85) SLYNTVATL, SL-9) 및 HIV-1pol [(aa476-485) ILKEPVHGV, IL-9]에 대한 알로피코시아닌-접합된 테트라머 염색을 파이토헤마글루티닌/인터루킨-2 (PHA/IL-2)-자극된 비장세포 상에서 수행한다. NIH/미국 알러지 및 감염 질환 협회, 국가 테트라머 핵심 시설의 권고에 따라서 세포를 염색한다. 데이타를 셀퀘스트(CellQuest) 소프트웨어 (벡톤 디킨슨 이뮤노사이토메트리 시스템(Becton Dickinson Immunocytometry System) 제품)를 사용하여 팩스 칼리부르(FACS Calibur)TM로 분석하였다.
4. 조직병리 및 이미지 분석
MDM를 두개 내로 주사하고 14일 및 21일에 뇌 조직을 수집하고, 4% 인산염-완충된 파라포름알데하이드에 고정시키고, 파라핀 중에 포매시키거나 추후 사용을 위해 -80℃에서 동결시킨다. 주사 위치를 확인하기 위해 포매된 블록으로부터의 관상(coronal) 단면을 절단한다. 각각의 마우스에 대해, 30-100개 (5 ㎛ 두께)의 일련의 단면을 인간 MDM 주사 부위로부터 절단하고, 3-7개 슬라이드 (10개의 단면씩 분리)를 분석한다. 크실렌을 사용하여 뇌 단면으로부터 파라핀 제거하고, 구배 알코올에서 수화시킨다. 면역조직화학적 염색은, 항원 회수를 위해 30분 동안 0.01 mol/L 시트레이트 완충제 중에서 95℃로 가열시킴으로써 항원 회수하는 기본적인 간접 프로토콜을 따른다. 마우스 뇌에서 인간 세포를 확인하기 위해, 모든 사람 백혈구를 확인하는 mAb:비멘틴 (1:50, 클론 3B4, 다코 코포레이션(Dako Corporation) 제품)을 사용한다. 인간 MDM 및 CD8+ 림프구는 각각 CD68 (1:50 희석, 클론 KP 1) 및 CD8 (1:50 희석, 클론 144B) 항체로 검출된다. 바이러스-감염된 세포는 mAb: HIV-1 p24 (1:10, 클론 Kal-1, 모두 다코 제품)로 표지된다. 반응성 뮤린 미세아교 세포는 Iba-1 항체 (1:500, 와코 제품)로 검출된다. 인간 IDO (huIDO)의 발현은, 일본 삿포로, 홋카이도 대학, 의학 대학원, 중앙 연구소 세포 약리학과로부터 입수한 Abs로 확인된다. 1차 항체는 적절한 바이오티닐화 2차 항체로 검출되며, 아비딘-바이오틴 복합체 (벡타스타틴 엘라이트(Vectastain Elite) ABC 키트, 벡터 라보라토리즈(Vector Laboratories) 제품) 및 홀스래디쉬 퍼옥시다아제 (HRP) 결합된 덱스트란 폴리머 (엔비젼(Envision), 다코 코포레이션 제품)로 확인된다. 면역염색된 단면을 메이어(Mayer) 헤마톡실린으로 대조염색시킨다. 1차 항체가 결실되거나 무관한 IgG 아이소타입이 혼입되는 단면을 대조군으로 제공하였다. 블라인드시킨(blinded) 2명의 독립적인 관찰자가 각각의 마우스로부터의 각각의 단면 내 CD8+ 림프구, CD68+ MDM 및 HIV-1 p24+ 세포의 수를 계수한다. 니콘 이클립스 800 현미경 (니콘 인스트루먼츠 인크.(Nikon Instruments Inc) 제품)을 사용하여 간단한 현미경 시험을 수행한다. Iba1에 대한 반정량적 분석 (면역염색에 의해 점유된 면적 퍼센트)을 이전에 기술된 바와 같이 컴퓨터-보조된 이미지 분석 (이미지-프로(Image-Pro)®플러스, 미디어 사이버네틱스(Cybernetics) 제품)으로 수행한다.
5. 통계적 분석
데이타는 비교를 위한 스튜던트 t-시험 및 ANOVA와 함께 프리즘(Prism)(그래프패드 제품)을 사용하여 분석할 수 있다. P-값 < 0.05이 유의미한 것으로 간주되었다.
6. 참고문헌
Poluektova LY, Munn DH, Persidsky Y, 및 Gendelman HE (2002). Generation of cytotoxic T cells against virus-infected human brain macrophages in a murine model of HIV-1 encephalitis. J. Immunol. 168(8): 3941-9.
본원에서 설명된 것들에 추가한 본 발명의 다양한 변형은 상술된 설명으로부터 당업자에게 명확해질 것이다. 그와 같은 변형은 또한 첨부된 청구범위의 범주 내에 있는 것으로 의도된다. 본원에서 인용된 모든 특허, 특허 출원, 및 간행물을 포함하는 각각의 참고문헌은, 전체가 본원에 참고로 편입되어 있다.

Claims (66)

  1. 하기 식 F5의 화합물을 하기 식 F6의 알데하이드와 반응시켜서 하기 식 F7의 화합물을 수득하는 것을 포함하는, 방법:
    Figure pct00089
    ,
    Figure pct00090
    ,
    Figure pct00091
    ,
    상기 식에서,
    Pg1은 아미노 보호 그룹이다.
  2. 제1항에 있어서, Pg1이 에톡시카보닐, tert-부톡시카보닐, 벤질옥시카보닐, 또는 9-플루오레닐메틸옥시카보닐인, 방법.
  3. 제1항에 있어서, Pg1이 tert-부톡시카보닐인, 방법.
  4. 제1항 내지 제3항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 반응이 환원제의 존재 하에서 수행되는, 방법.
  5. 제4항에 있어서, 상기 환원제가 보로하이드라이드 환원제인, 방법.
  6. 제5항에 있어서, 상기 보로하이드라이드 환원제가 나트륨 트리아세톡시보로하이드라이드인, 방법.
  7. 제1항 내지 제6항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 식 F7의 화합물을 탈보호시켜서 하기 식 F8의 화합물을 수득하는 것을 추가로 포함하는, 방법:
    Figure pct00092
    .
  8. 제7항에 있어서, 상기 탈보호가 식 F7의 화합물을 염산과 반응시키는 것을 포함하는, 방법.
  9. 제7항 또는 제8항에 있어서, 상기 식 F8의 화합물을 유기 염기의 존재 하에서 Pg2-NH-SO2-X와 반응시켜서 하기 식 F9의 화합물을 수득하는 것을 추가로 포함하는, 방법:
    Figure pct00093

    상기 식에서,
    Pg2는 아미노 보호 그룹이고;
    X는 할로이다.
  10. 제9항에 있어서, Pg2가 에톡시카보닐, tert-부톡시카보닐, 벤질옥시카보닐, 또는 9-플루오레닐메틸옥시카보닐인, 방법.
  11. 제9항에 있어서, Pg2가 tert-부톡시카보닐인, 방법.
  12. 제9항 내지 제11항 중 어느 한 항에 있어서, X가 클로로인, 방법.
  13. 제9항 내지 제12항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 식 F9의 화합물을 탈보호시켜서 하기 식 F10의 화합물을 수득하는 것을 추가로 포함하는, 방법:
    Figure pct00094
    .
  14. 제13항에 잇어서, 상기 탈보호가 식 F9의 화합물을 염산과 반응시키는 것을 포함하는, 방법.
  15. 제13항에 있어서, 상기 탈보호가 식 F9의 화합물을 에틸 아세테이트를 포함하는 용매 성분 중에서 염산과 반응시키는 것을 포함하는, 방법.
  16. 제13항 내지 제15항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 식 F10의 화합물을 염기와 반응시켜서 하기 식 I의 화합물을 수득하는 것을 추가로 포함하는, 방법:
    Figure pct00095
    .
  17. 제16항에 있어서, 상기 염기가 수산화나트륨인, 방법.
  18. 하기 식 F15의 화합물을 하기 식 F5의 화합물과 반응시켜서 하기 식 F16의 화합물을 수득하는 것을 포함하는, 방법:
    Figure pct00096
    ,
    Figure pct00097
    ,
    Figure pct00098
    ,
    상기 식에서,
    각각의 R1은 독립적으로 아미노 보호 그룹이고;
    R3은 C1-6 알킬 또는 벤질이다.
  19. 제18항에 있어서, 각각의 R1이 C2-4 알케닐-C1-3 알킬 또는 페닐-C1-3 알킬이며, 여기서 상기 페닐-C1-3 알킬은 1, 2, 또는 3개의 독립적으로 선택된 C1-4 알콕시 그룹에 의해 임의로 치환되는, 방법.
  20. 제18항에 있어서, 각각의 R1이 알릴인, 방법.
  21. 제18항에 있어서, 각각의 R1이 4-메톡시벤질인, 방법.
  22. 제18항에 있어서, R3이 C1-6 알킬인, 방법.
  23. 제18항에 있어서, R3이 tert-부틸인, 방법.
  24. 제18항 내지 제23항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 반응이 환원제의 존재 하에서 수행되는, 방법.
  25. 제24항에 있어서, 상기 환원제가 보로하이드라이드 환원제인, 방법.
  26. 제25항에 있어서, 상기 보로하이드라이드 환원제가 나트륨 트리아세톡시보로하이드라이드인, 방법.
  27. 제24항 내지 제26항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 반응이 트리아세트산의 존재 하에서 수행되는, 방법.
  28. 제18항 내지 제27항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 식 F16의 화합물을 탈보호시켜서 하기 식 F10의 화합물을 수득하는 것을 추가로 포함하는, 방법:
    Figure pct00099
    .
  29. 제28항에 있어서, 상기 탈보호가 식 F16의 화합물을 트리아세트산과 반응시키는 것을 포함하는, 방법.
  30. 제28항에 있어서, 상기 탈보호가 식 F16의 화합물을 염산과 반응시키는 것을 포함하는, 방법.
  31. 제18항 내지 제30항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 식 F15의 화합물이, 하기 식 F14의 화합물을 환원제로 처리하여 상기 식 F15의 화합물을 수득하는 것을 포함하는 방법에 의해서 얻어지는, 방법:
    Figure pct00100
    ,
    상기 식에서, R2는 C1-4 알킬이다.
  32. 제31항에 있어서, 상기 환원제가 디이소부틸알루미늄 하이드라이드인, 방법.
  33. 제31항 또는 제32항에 있어서, 상기 식 F14의 화합물이, 하기 식 F13의 화합물을 하나 이상의 독립적으로 선택된 보호제로 보호하여 식 F14의 화합물을 수득하는 것을 포함하는 방법에 의해서 얻어지는, 방법:
    Figure pct00101
    .
  34. 제33항에 있어서, 상기 하나 이상의 아미노 보호제가 알릴 브로마이드 및 4-메톡시벤질 클로라이드로부터 선택되는, 방법.
  35. 제33항 또는 제34항에 있어서, 상기 보호가 염기의 존재 하에서 수행되는, 방법.
  36. 하기 식 F15의 화합물:
    Figure pct00102
    ,
    상기 식에서,
    R3은 C1-6 알킬 또는 벤질이고;
    각각의 R1은 독립적으로 아미노 보호 그룹이다.
  37. 제36항에 있어서, tert-부틸 알릴{[알릴(2-옥소에틸)아미노]설포닐}카바메이트인, 화합물.
  38. 제36항에 있어서, tert-부틸(4-메톡시벤질){[(4-메톡시벤질)(2-옥소에틸)아미노]설포닐}카바메이트인, 화합물.
  39. 하기 식 F17의 화합물을 하기 식 F5의 화합물과 반응시켜서 하기 식 F18의 화합물을 수득하는 것을 포함하는, 방법:
    Figure pct00103
    ,
    Figure pct00104
    ,
    Figure pct00105
    ,
    상기 식에서, R4는 C1-6 알킬, C1-6 할로알킬, 벤질, 또는 9H-플루오렌-9-일메틸이다.
  40. 제39항에 있어서, R4가 tert-부틸인, 방법.
  41. 제39항에 있어서, R4가 벤질인, 방법.
  42. 제39항에 있어서, R4가 에틸인, 방법.
  43. 제39항에 있어서, R4가 2,2,2-트리클로로에틸인, 방법.
  44. 제40항 내지 제43항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 반응이 환원제의 존재 하에서 수행되는, 방법.
  45. 제44항에 있어서, 상기 환원제가 트리에틸실란인, 방법.
  46. 제44항 또는 제45항에 있어서, 상기 반응이 유기 산의 존재 하에서 수행되는, 방법.
  47. 제46항에 있어서, 상기 유기 산이 트리플루오로아세트산인, 방법.
  48. 제40항 내지 제47항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 식 F18의 화합물을 탈보호시켜 하기 식 F10의 화합물을 수득하는 것을 추가로 포함하는, 방법:
    Figure pct00106
    .
  49. 제48항에 있어서, 상기 탈보호가 식 F18의 화합물을 아세트산의 존재 하에서 아연과 반응시키는 것을 포함하는, 방법.
  50. 제48항 또는 제49항에 있어서, 상기 식 F10의 화합물을 염기와 반응시켜서 하기 식 I의 화합물을 수득하는 것을 추가로 포함하는, 방법:
    Figure pct00107
    .
  51. 제50항에 있어서, 상기 염기가 수산화나트륨인, 방법.
  52. 제39항에 있어서, R4가 9H-플루오렌-9-일메틸인, 방법.
  53. 제52항에 있어서, 상기 반응이 환원제의 존재 하에서 수행되는, 방법.
  54. 제53항에 있어서, 상기 환원제가 트리에틸실란인, 방법.
  55. 제53항 또는 제54항에 있어서, 상기 반응이 유기 산의 존재 하에서 수행되는, 방법.
  56. 제55항에 있어서, 상기 유기 산이 메탄설폰산인, 방법.
  57. 제52항 내지 제56항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 식 F18의 화합물을 하기 식 I의 화합물로 전환시키는 것을 추가로 포함하며,
    상기 전환이 식 F18의 화합물을 염기와 조합시켜 제1 혼합물을 형성시키는 것을 포함하는, 방법:
    Figure pct00108
    .
  58. 제57항에 있어서, 상기 염기가 N,N-비스(2-아미노에틸)에탄-1,2-디아민인,, 방법.
  59. 제57항 또는 제58항에 있어서, 상기 전환이 수성 염산을 상기 제1 혼합물에 부가하는 것을 추가로 포함하는, 방법.
  60. 하기 식 F17의 화합물:
    Figure pct00109
    ,
    상기 식에서,
    R4는 C1-6 알킬, C1-6 할로알킬, 벤질, 또는 9H-플루오렌-9-일메틸이다.
  61. 제60항에 있어서, tert-부틸 N-(2,2-디메톡시에틸)설파모일카바메이트인, 화합물.
  62. 제60항에 있어서, 벤질 N-(2,2-디메톡시에틸)설파모일카바메이트인, 화합물.
  63. 제60항에 있어서, 에틸 N-(2,2-디메톡시에틸)설파모일카바메이트인, 화합물.
  64. 제60항에 있어서, 2,2,2-트리클로로에틸 N-(2,2-디메톡시에틸)설파모일카바메이트인, 화합물.
  65. 제60항에 있어서, (9H-플루오렌-9-일)메틸 N-(2,2-디메톡시에틸)설파모일카바메이트인, 화합물.
  66. i) 하기 식 F19의 화합물을 트리에틸실란 및 메탄설폰산의 존재 하에서 하기 식 F5의 화합물과 반응시켜서 하기 식 F20의 화합물을 수득하는 단계; 및
    ii) 하기 식 F20의 화합물을 하기 식 I의 화합물로 전환시키는 단계를 포함하며,
    상기 전환이 하기 식 F20의 화합물을 N,N-비스(2-아미노에틸)에탄-1,2-디아민과 조합시키는 것을 포함하는, 방법:
    Figure pct00110

    Figure pct00111

    Figure pct00112

    Figure pct00113
    .
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