DE69416003T2

DE69416003T2 - Kristalline, polymorphische form von (s,s,s)-n-(1-[2-carboxy-3-(n2-mesyllysylamino)propyl]-1-cyclopentylcarbonyl)tyrosin

Info

Publication number: DE69416003T2
Application number: DE69416003T
Authority: DE
Inventors: Peter James Sandwich Kent Ct13 9Nj Dunn; Michael Leslie Sandwich Kent Ct13 9Nj Hughes
Original assignee: Pfizer Research and Development Co NV SA
Current assignee: Pfizer Ireland Pharmaceuticals
Priority date: 1993-12-04
Filing date: 1994-11-09
Publication date: 1999-05-27
Anticipated expiration: 2014-11-10
Also published as: CN1068586C; FI962322A0; WO1995015308A1; GR3029590T3; HU225959B1; KR960706470A; CZ160496A3; RU2131869C1; CA2178085A1; DK0731787T3; MY115430A; ES2128031T3; GB9324931D0; NO306714B1; PL178559B1; JPH09500654A; HUT74683A; NO962294L; ATE175664T1; NZ276087A

Description

Die vorliegende Erfindung betrifft eine kristalline, polymorphe Form von (S,S,S)-N-(1-[2-Carboxy-3-(N²-mesyllysylamino)propyl]-1-cyclopentylcarbonyl)tyrosin, die die Formel:
aufweist, die nachstehend als die "α-Form" einer Verbindung der Formel (I) bezeichnet wird.
Insbesondere betrifft die Erfindung die α-Form einer Verbindung der Formel (I) und Verfahren für die Herstellung der α-Form, zur Herstellung der α-Form verwendete Zwischenprodukte, Mittel, die die α-Form enthalten und Verwendungen der α-Form.
Eine amorphe Form (nachstehend als die "β-Form" bezeichnet) einer Verbindung der Formel (I) wurde in EP-A- 0 358 398 als Beispiel 181 offenbart. Die Verbindung ist ein starker Inhibitor der Zink-abhängigen neutralen Endopeptidase E. C.3.4.24.11 und ist deshalb in der Lage, die biologischen Wirkungen des den Herzvorhofbetreffenden natriuretischen Faktors zu verstärken. Es ist deshalb ein natriuretisches, antihypertensives und diuretisches Mittel, das für die Behandlung von verschiedenen vaskulären Herzerkrankungen verwendbar ist. Die Verbindung ist ebenfalls ein starker Inhibitor des Angiotensin-umwandelnden Enzyms, eines weiteren Enzyms, das in die Steuerung des Blutdrucks einbezogen ist. Die Verbindung weist deshalb zweifache pharmakologische Wirkung dadurch auf, daß sie in der Lage ist, zwei Schlüsselenzyme zu inhibieren, die in die Steuerung des Blutdrucks einbezogen sind. Es ist deshalb wahrscheinlich, daß sie bei der Behandlung von verschiedenen Formen von Bluthochdruck und damit verbundenen cardiovaskulären Erkrankungen, wie Herzstauungsinsuffizienz und Glaukom, verwendbar ist.
Die β-Form kann durch Verfahren, wie Gefriertrocknen einer Lösung der Verbindung der Formel (I), durch schnelles Verdampfen des Lösungsmittels aus einer solchen Lösung oder durch Ausfällen aus einer solchen Lösung durch Zugabe eines schlechten Lösungsmittels, erhalten werden. Die β-Form schmilzt nicht scharf, sondern "erweicht" normalerweise bei etwa 160ºC.
Von der β-Form wurde jedoch gefunden, daß sie bestimmte Eigenschaften aufweist, die sie für die pharmazeutische Formulierung nicht besonders geeignet macht. Insbesondere ist sie von hygroskopischer Natur, weist eine geringe Schüttdichte und geringe Fließfähigkeit auf. Verarbeitungsversuche, die unter Verwendung der β-Form ausgeführt wurden, zeigten Probleme bei der Tablettenherstellung aus Zusammensetzungen, die diese Form enthielten.
Das von der vorliegenden Erfindung angesprochene Problem ist die Bereitstellung einer Form der Verbindung der Formel (I), die unter Bereitstellung einer stabilen und wirksamen Formulierung eines Arzneimittels wirksam verarbeitet werden kann.
Diese Aufgabe wurde durch das überraschende Auffinden gelöst, daß eine α-Form einer Verbindung der Formel (I), die nicht hygroskopisch, kristallin ist, und verglichen mit der β-Form, eine höhere Schüttdichte und bessere Fließeigenschaften aufweist, hergestellt werden kann. Die α-Form ist zur Verwendung in einer pharmazeutischen Formulierung des Arzneimittels besonders geeignet.
Die vorliegende Erfindung stellt deshalb eine kristalline, polymorphe α-Form einer Verbindung der Formel (I) bereit, die ein Infrarotspektrum als Verreibung in Nujol, das Absorptionsbanden zeigt bei ν = 3407, 3386, 3223, 3153, 1699, 1652, 1626, 1594, 1516, 1457 (Nujol), 1377 (Nujol), 1344, 1334, 1317, 1267, 1241, 1228, 1210, 1164, 1151, 1137, 1118, 1109, 1093, 1074, 1045, 1019, 1003, 981, 965, 911, 897, 862, 818, 800, 778, 762, 721 und 655 cm&supmin;¹, aufweist.
Die α-Form ist weiterhin gekennzeichnet durch ihr Pulverröntgenbeugungsbild, erhalten unter Verwendung von Kupferstrahlung, gefiltert mit einem Graphitmonochromator (λ = 0,15405 nm), das die Hauptpeaks bei 7,5, 8,9, 9,9, 11,6, 15,6, 17,2, 17,5, 18,0, 20,2, 22,1 und 23,3 Grad 2Θ zeigt.
Die α-Form wird darüberhinaus durch Differential- Scanning-Calorimetrie gekennzeichnet, wobei sie eine scharfe Endotherme im Bereich von 248-259ºC zeigt und sich oberhalb 260ºC zersetzt, wenn sie einer Abtastgeschwindigkeit von 20ºC pro Minute unterzogen wird.
Die α-Form schmilzt im allgemeinen im Bereich von 242-252ºC scharf, obwohl niedrigere Schmelzpunktbereiche aufgezeichnet wurden.
Andere Formen (nachstehend als die "γ-" und "δ-Formen" bezeichnet) der Verbindung der Formel (I) wurden auch erhalten, die ebenfalls einen Teil der Erfindung bilden, da sie als Zwischenprodukte bei der Herstellung der α-Form verwendet werden können.
Die Erfindung stellt somit weiterhin eine polymorphe γ-Form einer Verbindung der Formel (I) bereit, die ein Infrarotspektrum als Verreibung in Nujol, das Absorptionsbanden zeigt bei ν = 3377, 3240, 1665, 1639, 1594, 1527, 1518, 1494, 1457 (Nujol), 1443, 1377 (Nujol), 1344, 1321, 1304, 1254, 1195, 1178, 1162, 1143, 1111, 1098, 1046, 1031, 1012, 972, 962, 945, 932, 907, 879, 849, 815, 806, 780, 753, 729 und 658 cm&supmin;¹, aufweist.
Die γ-Form ist weiterhin gekennzeichnet durch ein Pulverröntgenbeugungsbild, erhalten unter Verwendung von Kupferstrahlung, gefiltert mit einem Graphitmonochromator (λ = 0,15405 nm), das die Hauptpeaks bei 9,0, 9,6, 10,6, 11,6, 12,7, 13,3, 14,6, 16,2, 17,9, 18,8, 20,2 und 21,8 Grad 2Θ zeigt.
Die γ-Form ist noch weiterhin gekennzeichnet durch Differential-Scanning-Calorimetrie, wobei sie eine scharfe Endotherme im Bereich von 176-186%, eine Exotherme bei etwa 207ºC und eine schwache Endotherme bei etwa 213ºC zeigt und sich oberhalb 250ºC zersetzt, wenn sie einer Abtastgeschwindigkeit von 20ºC pro Minute unterzogen wird.
Die γ-Form schmilzt im allgemeinen im Bereich von 170-185ºC scharf.
Die Erfindung stellt somit weiterhin eine hydratisierte δ-Form einer Verbindung der Formel (I) bereit, die einen Wassergehalt von 1 bis 7 Gewichtsprozent, vorzugsweise 2 bis 4 Gewichtsprozent, bestimmt durch Karl-Fischer-Analyse, und die ein Infrarotspektrum als Verreibung in Nujol, das Absorptionsbanden zeigt bei ν = 3667, 3425, 3380, 3287, 3137, 3098, 1709, 1673, 1637, 1619, 1596, 1568, 1556, 1516, 1458 (Nujol), 1448, 1419, 1390, 1378 (Nujol), 1356, 1338, 1300, 1270, 1249, 1229, 1198, 1174, 1141, 1108, 1091, 1075, 1064, 1045, 1033, 1019, 1001, 985, 962, 941, 909, 889, 877, 841, 822, 807, 763, 744, 732, 721 und 655 cm&supmin;¹ aufweist.
Die δ-Form ist weiterhin gekennzeichnet durch ein Pulverröntgenbeugungsbild, erhalten unter Verwendung von Kupferstrahlung, gefiltert mit einem Graphitmonochromator (λ = 0,15405 nm), das die Hauptpeaks bei 10,5, 10,8, 12,3, 14,5, 17,2, 17,6, 17,9, 18,9, 20,4, 21,5, 22,4, 23,0, 23,1, 24,7, 27,1, 27,8 und 28,9 Grad 2Θ zeigt.
Die δ-Form wird darüberhinaus durch Differential- Scanning-Calorimetrie gekennzeichnet, wobei sie eine scharfe Endotherme bei etwa 162% und bei etwa 166-168% zeigt, und sich oberhalb 200ºC zersetzt, wenn sie einer Abtastgeschwindigkeit von 20ºC pro Minute unterzogen wird.
Die δ-Form schmilzt im allgemeinen im Bereich von 165-175% scharf.
Obwohl die γ- und δ-Formen einer Verbindung der Formel (I) die gleichen pharmakologischen Aktivitäten wie die α- und β-Formen zeigen, sind sie als α-Form zur pharmazeutischen Formulierung nicht geeignet.
Die α-Form einer Verbindung der Formel (I) kann durch die nachstehenden Verfahren hergestellt werden:
1) Die α-Form kann durch katalytische Hydrierung einer wässerigen Lösung eines Natrium-, Kalium-, Ammonium- oder (C&sub1;-C&sub4;-Alkyl)ammoniumsalzes einer Verbindung der Formel:
unter Verwendung eines geeigneten Katalysators zur Entfernung der Benzyloxycarbonylschutzgruppe, beispielsweise Palladium-auf-Kohle, gefolgt von Ansäuern des Basensalzes der erhaltenen Verbindung der Formel (I) auf einen pH-Wert von 3 bis 5, vorzugsweise etwa 4, und vorzugsweise bei 35 bis 45ºC, unter Bereitstellung der α-Form hergestellt werden. Vorzugsweise wird ein Dinatriumsalz einer Verbindung der Formel (II) verwendet. Weitere geeignete Katalysatoren für die Entfernung der Benzyloxycarbonylschutzgruppe sind dem Fachmann gut bekannt, siehe beispielsweise T. W. Greene und P. G. Wuts, "Protective Groups in Organic Synthesis", Zweite Ausgabe, 1991, deren Lehren durch diesen Hinweis hierin einbezogen sind. In einem typischen Verfahren wird eine Lösung einer Verbindung der Formel (II) in einem geeigneten organischen Lösungsmittel, beispielsweise Essigsäureethylester, mit einer wässerigen Lösung von Natriumhydroxid geschüttelt, um ein Dinatriumsalz davon zu erzeugen. Die wässerige Lösung, die das Natriumsalz enthält, wird anschließend abgetrennt und in Anwesenheit eines 5% Palladium-auf-Kohle-Katalysators bei etwa 414 kPa (60 psi) und Raumtemperatur zur Entfernung der Benzyloxycarbonylschutzgruppe hydriert. Der Katalysator wird anschließend durch Filtration entfernt und das Filtrat unter Verwendung einer geeigneten Säure, beispielsweise wässerige Salzsäure, auf etwa pH 4 eingestellt. Die α-Form wird aus der Lösung ausgefällt und kann durch Filtration gesammelt werden. Eine Verbindung der Formel (II) kann durch den in Schema 1 ausgewiesenen Weg hergestellt werden. Schema 1
In einem typischen Verfahren wird Acrylsäure-t-butylester(III) mit Paraformaldehyd in Anwesenheit von 3-Chinuclidinol umgesetzt, unter Bereitstellung von Hydroxymethylacrylsäure-t-butylester(IV). Dieser wird zunächst mit Thionylchlorid in Anwesenheit von Triethylamin und Pyridin behandelt, unter Bereitstellung des entsprechenden Chlormethacrylats, das anschließend mit (S,S)-α,α'-Dimethyldibenzylamin umgesetzt wird, unter Bereitstellung eines Acrylats der Formel (V). Dieses wird zu einer Verbindung der Formel (IX) durch das in Tet. Lett., 1993, 34(8), 1323-6, ausgewie sene Verfahren umgewandelt. Eine Verbindung der Formel (IX) wird dann mit einem Lysinderivat der Formel (X) durch ein ähnliches Verfahren zu jenem, das in EP-A-0 358 398 für die Herstellung einer Verbindung der Formel (XI) beschrieben wurde, kondensiert. Eine Verbindung der Formel (XI) wird dann zu einer Verbindung der Formel (II) unter Verwendung einer Lösung von Trifluoressigsäure und Anisol in Dichlormethan umgewandelt.
2) Die α-Form kann aus der δ-Form durch Rühren einer Lösung der δ-Form in Wasser oder in einer wässerigen Lösung eines geeigneten organischen Lösungsmittels, beispielsweise einem C&sub1;-C&sub4;-Alkanol, wie Methanol oder Isopropanol, oder einem C&sub3;-C&sub6;-Alkanon, wie Aceton, hergestellt werden. In einem typischen Verfahren wird die δ-Form in einem Gemisch aus Wasser/Methanol 1 : 5 oder Wasser/Aceton 1 : 10 gelöst und die Lösung wird einige Tage bei Raumtemperatur gerührt. Die α-Form fällt aus der Lösung aus und kann durch Filtration gesammelt werden.
3) Die α-Form kann aus der γ-Form durch Rühren einer Lösung der γ-Form in Wasser oder in einer wässerigen Lösung eines geeigneten organischen Lösungsmittels, beispielsweise einem C&sub1;-C&sub4;-Alkanol, wie Methanol oder Isopropanol, oder einem C&sub3;-C&sub6;-Alkanon, wie Aceton, hergestellt werden.
In einem typischen Verfahren wird die γ-Form in einem Gemisch von Wasser/Methanol 1 : 1 gelöst und die Lösung etwa 17 Stunden bei Raumtemperatur gerührt. Die α-Form fällt aus der Lösung aus und kann durch Filtration gesammelt werden.
4) Die α-Form kann aus der β-Form durch ein ähnliches Verfahren zu dem das in vorstehendem Verfahren 3) ausgewiesen ist, hergestellt werden.
5) Die α-Form kann durch Entfernen der Schutzgruppen hergestellt werden, vorzugsweise unter sauren Bedingungen, aus einer Verbindung der Formel:
worin P¹, P², P³ und P&sup4; alle geeignete Schutzgruppen darstellen, die vorzugsweise unter sauren Bedingungen entfernt werden können, zur Bereitstellung der α-Form nach Einstellen des pH-Werts auf 3 bis 5, vorzugsweise etwa 4, bei der Aufarbeitung der α-Form.
Geeignete Schutzgruppen für diesen Zweck, zusammen mit den Bedingungen für ihre Entfernung, sind dem Fachmann gut bekannt, siehe beispielsweise T. W. Greene und P. G. Wuts, "Protective Groups in Organic Synthesis", Zweite Ausgabe, Wiley-Interscience. P¹ ist vorzugsweise Formyl oder Benzyloxycarbonyl. P², P³ und P&sup4; sind vorzugsweise jeweils t-Butyl.
In einem typischen Verfahren, worin P¹ Formyl oder Benzyloxycarbonyl darstellt, und P², P³ und P&sup4; jeweils t-Butyl darstellen, wird eine Lösung einer Verbindung der Formel (XII) in einem geeigneten Lösungsmittel, beispielsweise 1,4- Dioxan oder Essigsäureethylester, mit einer geeigneten Säure, beispielsweise Salzsäure, zur Entfernung der Schutzgruppen behandelt und Einstellung auf einen pH-Wert von etwa 4 bei der Aufarbeitung liefert die α-Form.
Die Zwischenprodukte der Formel (XII) können durch übliche Verfahren hergestellt werden. Die Verbindung der Formel (XII), worin P¹ Benzyloxycarbonyl darstellt und P², P³ und P&sup4; jeweils t-Butyl darstellen, entspricht de r Verbindung der Formel (XI) in Schema 1, die Synthese davon wird weiterhin in Verfahren (1) beschrieben. Die Verbindung der Formel (XII), worin P¹ Formyl darstellt und P², P³ und P&sup4; jeweils t- Butyl darstellen, kann zunächst durch Entfernen der Benzyloxycarbonylgruppe aus der Verbindung der Formel (XI) durch Hydrogenolyse unter Verwendung eines geeigneten Katalysators, beispielsweise Palladium-auf-Kohle, gefolgt von Formylierung des erhaltenen Amins, beispielsweise unter Verwendung von Ameisensäure-Essigsäureanhydrid, hergestellt werden.
6) Die α-Form kann durch Entfernen der Schutzgruppen, vorzugsweise unter sauren Bedingungen, hergestellt werden, von einer Verbindung der Formel:
worin P&sup5; eine geeignete Schutzgruppe darstellt, die vorzugsweise unter sauren Bedingungen entfernt werden kann, zur Bereitstellung der α-Form nach Einstellen des pH-Werts auf 3 bis 5, vorzugsweise etwa 4, bei der Aufarbeitung. Geeignete Schutzgruppen für diesen Zweck, zusammen mit den Bedingungen für ihre Entfernung, sind dem Fachmann gut bekannt, siehe beispielsweise T. W. Greene und P. G. Wuts, "Protective Groups in Organic Synthesis", Zweite Ausgabe, Wiley-Interscience. P&sup5; ist vorzugsweise Formyl und weitere Beispiele für PS sind Benzyloxycarbonyl und tert-Butyloxycarbonyl.
In einem typischen Verfahren, worin P&sup5; Formyl darstellt, wird eine Lösung einer Verbindung der Formel (XIII) in einem geeigneten Lösungsmittel, beispielsweise 1,4-Dioxan, mit einer wässerigen Lösung einer geeigneten Säure, beispielsweise Salzsäure, zur Entfernung der Schutzgruppen behandelt und auf den pH-Wert von etwa 4 in der Aufarbeitung eingestellt, wobei die α-Form bereitgestellt wird.
Die Zwischenprodukte der Formel (XIII) können durch übliche Verfahren, wie selektives Entfernen der Schutzgruppen einer Verbindung der Formel (XII) zur Entfernung der P²-, P³- und P&sup4;-Schutzgruppen allein, hergestellt werden. Wenn P¹ beispielsweise Formyl darstellt und P², P³ und P&sup4; jeweils t-Butyl darstellen, können die t-Butylschutzgruppen selektiv durch Behandlung einer Verbindung der Formel (XII) mit Trifluoressigsäure in einem geeigneten Lösungsmittel, beispielsweise Dichlormethan, entfernt werden.
Die β-, γ- und δ-Formen, die als Zwischenprodukte bei der Herstellung der α-Form verwendet werden können, können wie nachstehend hergestellt werden:
(i) Die β-Form kann durch katalytische Hydrierung einer Lösung einer Verbindung der Formel (II) in einem geeigneten Lösungsmittel und in Anwesenheit eines geeigneten Katalysators für die Entfernung der Schutzgruppe, beispielsweise Palladium-auf-Kohle, hergestellt werden. In einem typischen Verfahren wird eine Lösung einer Verbindung der Formel (II) in wässerigem Ethanol bei etwa 414 kPa (60 psi) und Raumtemperatur in Anwesenheit eines Palladium-auf-Kohle-Katalysators hydriert. Der Katalysator wird anschließend durch Filtration entfernt und das Filtrat wird entweder unter vermindertem Druck unter Bereitstellung eines Schaums aufkonzentriert, der mit C&sub3;-C&sub6;-Alkanon, beispielsweise Aceton, gerührt wird, oder unter Bereitstellung der β-Form, die durch Filtration gesammelt werden kann, gefriergetrocknet. Diese Herstellung weist ebenfalls, wenn die C&sub3;-C&sub6;-Alkanonbehandlung verwendet wird, die gegebenenfalls bereitgestellte α-Form auf.
(ii) Die δ-Form kann durch katalytische Hydrierung einer Lösung einer Verbindung der Formel (II) in einem Gemisch eines geeigneten, mit Wasser nicht mischbaren, organischen Lösungsmittels, z. B. Essigsäureethylester, und Wasser, und in Anwesenheit eines geeigneten Katalysators für die Entfernung der Schutzgruppe, beispielsweise Palladium-auf-Kohle, gefolgt von Entfernen des Katalysators, Abtrennung der wässerigen Schicht und Ausfällen des Produkts aus der wässerigen Schicht unter Verwendung eines C&sub1;-C&sub4;-Alkanols, beispielsweise Methanol, hergestellt werden. In einem typischen Verfahren wird Wasser zu der Lösung einer Verbindung der Formel (II) in Essigsäureethylester gegeben und das Gemisch wird bei etwa 414 kPa (60 psi) und Raumtemperatur in Anwesenheit eines Palladium-auf-Kohle-Katalysators hydriert. Der Katalysator wird anschließend durch Filtration entfernt, die wässerige Phase aus dem Filtrat abgetrennt, unter vermindertem Druck zu einem geringen Volumen aufkonzentriert und in Methanol gegossen. Die δ-Form fällt langsam aus der Lösung aus und kann durch Filtration gesammelt werden. Diese Herstellung liefert gelegentlich auch die α-Form.
(iii) Die β-Form kann durch zunächst Gefriertrocknen einer wässerigen Lösung der δ-Form und anschließend Gefriertrocknen der erhaltenen festen Masse hergestellt werden.
(iv) Die γ-Form kann durch Rühren der δ-Form mit n- Propanol oder Acetonitril hergestellt werden. In einem typischen Verfahren wird das Gemisch etwa 24 Stunden bei Raumtemperatur gerührt und die γ-Form wird durch Filtration gesammelt.
(v) Die γ-Form kann durch Rühren einer Aufschlämmung der β-Form in Acetonitril oder n-Propanol, im allgemeinen für etwa 5 Tage bei Raumtemperatur, hergestellt werden. Die γ- Form wird durch Filtration gesammelt.
(vi) Die γ-Form kann durch Behandeln einer wässerigen Lösung der δ-Form mit einem C&sub3;-C&sub6;-Alkanon, beispielsweise Aceton, hergestellt werden. In einem typischen Verfahren wird eine wässerige Lösung der δ-Form in einen heftig gerührten, volumetrischen Überschuß von Aceton bei Raumtemperatur gegossen. Die γ-Form fällt aus der Lösung aus und kann durch Filtration gesammelt werden. Diese Herstellung liefert gelegentlich auch die α-Form.
(vii) Die β-Form kann durch Gefriertrocknen einer konzentrierten, wässerigen Lösung der α-Form hergestellt werden. In einem typischen Verfahren wird eine konzentrierte Lösung der α-Form in heißem Wasser hergestellt, die Lösung zur Entfernung von unlöslichem Material filtriert, dann abgekühlt, gefroren und schließlich gefriergetrocknet, unter Bereitstellung der β-Form.
Wie vorstehend erwähnt, ist die α-Form ein starker Inhibitor der neutralen Endopeptidase (E. C.3.4.24.11). Dieses Enzym ist in den Abbau einer Vielzahl von Peptidhormonen und Peptidautocoidsubstanzen, einschließlich insbesondere den Abbau des den Herzvorhofbetreffenden natriuretischen Faktors (ANF), einbezogen. Somit kann die α-Form durch Verhindern des Abbaus von ANF durch neutrale Endopeptidase E. C.3.4.24.11 die biologischen Wirkungen von ANF verstärken und ist deshalb ein diuretisches, natriuretisches und antihypertensives Mittel zur Verwendbarkeit bei der Behandlung einer Vielzahl von Erkrankungen, einschließlich Bluthochdruck, Herzversagen, Angina, Niereninsuffizienz, chronischem Nierenversagen, premenstrualem Syndrom, cyclicalem Ödem, Menieres-Erkrankung, Hyperaldosteronimus (primär und sekundär) und Hypercalciurie. Zusätzlich ist die α-Form aufgrund ihrer Fähigkeit, die Wirkungen von ANF zu verstärken, bei der Behandlung von Glaukom verwendbar. Des weiteren kann die α-Form als Ergebnis ihrer Fähigkeit, die neutrale Endopeptidase E. C.3.4.24.11 zu inhibieren, bei der Behandlung von Asthma, Entzündung, Schmerz, Epilepsie, manisch-depressive Psychose, Demenz, altersbedingter Verwirrung, Fettleibigkeit, gastrointestinale Erkrankungen (insbesondere Diarrhoe und reizbares Darmsyndrom) und Hyperreninämie und bei der Modulierung von Magensäuresekretion verwendbar.
Die Aktivität gegen neutrale Endopeptidase E.C.3.4.24.11 kann unter Verwendung des Verfahrens, das auf dem Assay, beschrieben von Barclay P. L, et al., Biochem. Biophys. Res. Comm., 1989, 164, 58-65, basiert, bewertet werden. Das Verfahren bezieht die Bestimmung der zur Verminderung auf 50% der Freisetzungsgeschwindigkeit von radiomarkierter Hippursäure aus Hippuryl-L-phenylalanyl-L-arginin durch ein neutrales Endopeptidase-Präparat aus der Rattenniere erforderlichen Konzentration der Verbindung ein.
Wie vorstehend erwähnt, ist die α-Form ebenfalls ein Inhibitor des Angiotensin-umwandelnden Enzyms (ACE). Als solches ist sie bei der Behandlung einer Vielzahl von Zuständen, für die ACE-Inhibitoren bekanntlich angewendet werden, einschließlich Hypotension, Herzstauungsinsuffizienz, Begrenzung der ischämischen Schädigung des Myocardiums, Schutz der Niere gegen Hyperfiltrationsschädigung, Verhinderung oder Umkehr linksseitiger ventrikulärer Hypertrophie, Gedächtnissteigerung, Steuerung der kognitiven Funktion, Demenz und Verhinderung von Wiederverschluß als Folge von koronarer Angioplastie oder koronarer arterieller Bypass-Operation, verwendbar. Ihre Aktivität gegen dieses Enzym kann unter Verwendung eines Verfahrens, das auf einer Modifizierung des von Rohrbach M. S., Anal. Biochem., 1978, 84, 272, beschriebenen Assays basiert, bewertet werden. Das Verfahren bezieht die Bestimmung der Konzentration einer Verbindung, die erforderlich ist, das Ausmaß der Freisetzung von radiomarkierter Hippursäure aus Hippuryl-L-histidyl-L-leucin durch Angiotensin-umwandelndes Enzym, das aus der Rattenniere isoliert wurde, auf 50% zu vermindern, ein.
Die Inhibitoraktivität kann ebenfalls in vivo nach intravenöser Injektion an anästhesierten Ratten unter Verwendung der Verfahren, die von I. L. Natoff et al., Journal of Pharmacological Methods, 1981, 5, 305 und von D. M. Gross et al., J. Pharmacol., Exp. Ther., 1981, 216, 552, beschrieben wurden, gemessen werden. Die Dosis des Inhibitors, der erforderlich ist, die Pressorantwort, die durch intravenöse Injektion von Angiotensin I (50 ng Bolus) auf 50% erzeugt wird, zu vermindern, wird bestimmt.
Die Aktivität der α-Form als diuretisches Mittel kann durch Messen seiner Fähigkeit, den Urinausstoß und die Natriumionenausscheidung bei AV-blockierten Hunden bei Bewußtsein zu erhöhen, unter Verwendung der von Alabaster C. T. et al., Brit. J. Pharmacol., 1989, 98, 823P, beschriebenen Verfahren bestimmt werden.
Die antihypertensive Aktivität der α-Form kann durch Messung der Blutdruckabnahme, gefolgt von oraler oder intravenöser Verabreichung an Salz-erschöpfte, diuretlsch sensibilisierte, spontan hypertensive Ratten, Salz-erschöpfte, renal hypertensive Hunde oder Desoxycorticosteronacetat (DOCA)/ Salz-hypertensive Ratten bewertet werden.
Zur Verabreichung an ein Tier bei der Behandlung von Bluthochdruck, Herzstauungsinsuffiezienz oder Niereninsuffizienz werden orale Dosierungen der α-Form im allgemeinen im Bereich von 1-500 mg täglich und vorzugsweise 5-200 mg täglich für die Behandlung von Menschen für einen durchschnittlichen, erwachsenen Patienten sein. Somit enthalten für einen typischen erwachsenen Patienten einzelne Tabletten oder Kapseln 1 bis 200 mg der Verbindung in einem geeigneten pharmazeutisch verträglichen Verdünnungsmittel oder Träger zur Ver abreichung in Einzel- oder in Mehrfachdosen, auf einmal oder einige Male am Tag. Dosierungen für die intravenöse Verabreichung würden im allgemeinen von 0,01 bis 50 mg, vorzugsweise 0,1 bis 10 mg, der Verbindungspro Einzeldosierung, wie erforderlich, sein. In der Praxis wird der Arzt die Dosierung bestimmen, die für den einzelnen Patienten momentan am besten geeignet ist und sie wird mit dem Alter, Gewicht und der Reaktion des einzelnen Patienten schwanken. Die vorstehenden Dosierungen sind für den durchschnittlichen Fall beispielhaft, jedoch kann es natürlich einzelne Fälle geben, für die höhere oder niedrigere Dosierungsbereiche von Wert sind und solche liegen innerhalb des Schutzbereichs dieser Erfindung.
Zur Verwendung beim Menschen kann die α-Form einzeln verabreicht werden, wird jedoch im allgemeinen in Anmischung mit einem pharmazeutisch verträglichen Verdünnungsmittel oder Träger, ausgewählt bezüglich dem beabsichtigten Verabreichungsweg und der pharmazeutischen Standardpraxis, verabreicht werden. Beispielsweise kann sie oral in Form von Tabletten, die solche Exzipienten, wie Stärke oder zweibasiges Calciumphosphat, enthalten oder in Kapseln oder Ovuli, entweder einzeln oder in Anmischung mit Exzipienten, oder in Form eines Elixiers oder einer Suspension, die Geschmacks- oder färbende Mittel enthält, verabreicht werden. Sie kann parenteral verabreicht werden, beispielsweise intravenös, intramuskulär oder subkutan. Zur parenteralen Verabreichung wird sie am besten in Form einer sterilen wässerigen Lösung, die andere Substanzen enthalten kann, beispielsweise ausreichend Salze oder Glucose, um die Lösung mit dem Blut isotonisch zu machen, verwendet.
Die α-Form kann mit anderen Mitteln, die bei der Steuerung des Blutdrucks, der Behandlung von Herzzuständen oder Niereninsuffizienz verwendbar sind, zusammen verabreicht werden. Somit kann sie beispielsweise mit einem Herzstimulans, beispielsweise Digitalis, einem Alphablocker, beispielsweise Doxazosin, einem Betablocker, einem Calciumkanalblocker, beispielsweise Amlodipine, exogenem ANF, einem Kaliumkanalaktivator oder mit weiterem diuretischen Mittel, das bezüglich des einzelnen Patienten oder Erkrankungszustands vom Arzt bestimmt werden sollte, zusammen verabreicht werden.
Die therapeutische Behandlung durch Verwendung der hierin offenbarten α-Form, kann therapeutische oder prophylaktische Behandlung einer bestimmte Erkrankung bedeuten.
Die Erfindung stellt weiterhin bereit:
(a) Ein pharmazeutisches Mittel, umfassend die α- Form, γ-Form oder hydratisierte δ-Form einer Verbindung der Formel (I), zusammen mit einem pharmazeutisch verträglichen Verdünnungsmittel oder Träger,
(b) die α-Form, γ-Form oder hydratisierte δ-Form einer Verbindung der Formel (I) oder ein pharmazeutisches Mittel davon zur Verwendung als Arzneimittel,
(c) die Verwendung der α-Form, γ-Form oder hydratisierten δ-Form einer Verbindung der Formel (I) oder eines pharmazeutischen Mittels davon, zur Herstellung eines Arzneimittels zur Behandlung einer Erkrankung, die von der Inhibierung des Angiotensin-umwandelnden Enzyms und/oder der Zinkabhängigen neutralen Endopeptidase E.C.3.4.24.11 abhängt,
(d) Verwendung wie in (c) ausgewiesen, worin die Erkrankung eine kardiovaskuläre Erkrankung, wie Bluthochdruck, Herzstauungsinsuffizienz, Niereninsuffizienz oder Glaukom ist,
(e) ein Natrium-, Kalium-, Ammonium- oder (C&sub1;-C&sub4;-Al- kyl)ammoniumsalz einer Verbindung der Formel (II),
(f) die γ-Form einer Verbindung der Formel (I)
(g) die hydratisierte δ-Form einer Verbindung der Formel (I),
(h) eine Verbindung der Formel (XII), mit der Maßgabe, daß P¹ nicht Benzyloxycarbonyl darstellt, wenn P², P³ und P&sup4; jeweils t-Butyl darstellen,
(i) eine Verbindung der Formel (XIII), mit der Maßgabe, daß P&sup5; nicht Benzyloxycarbonyl darstellt.
Die Herstellung der α-Form wird durch die nachstehenden Beispiele erläutert:

BEISPIEL 1

(S,S,S)-N-(1-[2-Carboxy-3-(N²-mesyllysylamino)propyl]-1-cyclopentylcarbonyl)tyrosin,α-Form

Eine Lösung von (S,S,S)-N-(1-[3-(N&sup6;-Benzyloxycarbonyl-N²-mesyllysylamino)-2-carboxypropyl]-1-cyclopentylcarbonyl)tyrosin in Essigsäureethylester (1190 ml) (ein Teil der Lösung wurde gemäß dem Verfahren von Herstellung 9 erhalten und enthielt 219 g des Ausgangsmaterials) wurde mit einer Lösung von Natriumhydroxid (23,1 g) in Wasser (503 ml) geschüttelt. Die wässerige Phase wurde abgetrennt und bei 414 kPa (60 psi) und Raumtemperatur über einem 5%-igen Palladium-auf- Kohle-Katalysator (20 g) 5 Stunden hydriert. Der Katalysator wurde dann abfiltriert und das Filtrat auf pH 4 mit 5 N wässeriger Salzsäurelösung eingestellt und ein weißer Feststoff fiel aus. Nach Granulieren für 18 Stunden bei Raumtemperatur wurde das feste Produkt filtriert, mit Wasser gewaschen und getrocknet, unter Gewinnung der Titelverbindung als weißer Feststoff (124,4 g), Fp. 248-250%. Gefunden: C,53,47; H,7,25; N,9,50. C&sub2;&sub6;H&sub4;&sub0;N&sub4;O&sub9;S erfordert: C,53,41; H,6,90; N,9,58%.

BEISPIEL 2

(S,S,S)-N-(1-[2-Carboxy-3-(N²-mesyllysylamino)- propyl]-1-cyclopentylcarbonyl)tyrosin, α-Form

Eine Lösung von (S,S,S)-N-(1-[2-Carboxy-3-(N²-mesyllysylamino)propyl]-1-cyclopentylcarbonyl)tyrosinhydrat (die δ-Form, siehe Herstellung 2) (3,0 g) in einem Gemisch von Wasser/Methanol 1 : 5 (18 ml) oder einem Gemisch Wasser/Aceton 1 : 10 (33 ml) wurde 3 Tage bei Raumtemperatur gerührt. Der erhaltene Feststoff wurde durch Filtration gesammelt und getrocknet, unter Gewinnung der Titelverbindung als weißer Feststoff. Fp. 246-8% (aus dem wässerigen Methanolverfahren), Fp. 242-3% (aus dem wässerigen Acetonverfahren).

BEISPIEL 3

(S,S,S)-N-(1-[2-Carboxy-3-(N²-mesyllysylamino)propyl]-1-cyclopentylcarbonyl)tyrosin, α-Form

(S,S,S)-N-(1-[2-Carboxy-3-(N²-mesyllysylamino)-propyl]-1-cyclopentylcarbonyl)tyrosin, γ-Form (siehe Herstellungen 4, 5, 7 und 8) (0,5 g) wurde in Wasser (4 ml) gelöst und Methanol (4 ml) wurde zugegeben. Die erhaltene Lösung wurde 17 Stunden bei Raumtemperatur gerührt. Ein weißer Feststoff bildete sich, der durch Filtration gesammelt und getrocknet wurde, unter Gewinnung der Titelverbindung (0,43 g), Fp. 250- 252%.

BEISPIEL 4

(S,S,S)-N-(1-[2-Carboxy-3-(N²-mesyllysylanino)propyl]-1-cyclopentylcarbonyl)tyrosin, β-Form (siehe Herstellungen 1, 3 und 6) (0,5 g) wurde in Wasser (4 ml) gelöst und Methanol (4 ml) wurde zugegeben. Die erhaltene Lösung wurde 17 Stunden bei Raumtemperatur gerührt. Ein weißer Feststoff bildete sich, der durch Filtration gesammelt und getrocknet wurde, unter Gewinnung der Titelverbindung (0,43 g), Fp. 249- 251%.

BEISPIEL 5

Zu einer Lösung der Verbindung von Herstellung 12 (2,50 g, 3,20 mMol) in 1,4-Dioxan (20 ml) wurde eine Lösung von 1,4-Dioxan (20 ml), gesättigt mit HCl-Gas, gegeben. Nach 30 Minuten schied sich die anfänglich klare Lösung als Öl ab, das 24 Stunden bei Raumtemperatur gerührt wurde. Wasser (20 ml) wurde zugegeben, unter Gewinnung einer klaren Lösung, die bei Raumtemperatur 60 Stunden gerührt wurde. Eindampfen der erhaltenen Lösung unter vermindertem Druck ergab ein Öl, das in Wasser gelöst wurde und mit wässeriger Natriumhydroxidlösung bis pH 4 basisch gemacht wurde. Das Lösungsmittel wurde durch Verdampfen unter vermindertem Druck entfernt und Granu lierung des erhaltenen Materials mit Methanol stellte einen weißlichen Feststoff bereit, der durch Filtration gesammelt wurde und in Wasser (4 ml) über Nacht erneut aufgeschlämmt wurde. Die Feststoffe wurden abfiltriert und getrocknet, unter Gewinnung der Titelverbindung (0,97 g), Fp. 225-230ºC. IR- und PXRD-Analyse bestätigten, daß das Produkt die erforderliche α-Form ist.

BEISPIEL 6

Zu einer Lösung der Verbindung von Herstellung 13 (1,78 g) in 1,4-Dioxan (18 ml) wurde wässerige 4M Salzsäure (18 ml) gegeben. Die klare, gelbe Lösung wurde bei Raumtemperatur 60 Stunden rühren lassen, gefolgt von weite ren 18 Stunden bei 35ºC. Entfernen des Lösungsmittels unter vermindertem Druck ergab 5,42 g Material, 4,22 g davon wurden in Wasser (10 ml) gelöst, die Lösung wurde mit wässeriger Natriumhydroxidlösung bis pH 4,0 basisch gemacht, mit der Verbindung von Beispiel 1 beimpft und bei Raumtemperatur 18 Stunden gerührt. Die erhaltene klare Lösung wurde auf etwa 10 ml Volumen unter vermindertem Druck aufkonzentriert, mit Methanol (15 ml) verdünnt und 48 Stunden granuliert. Die Feststoffe wurden durch Filtration gesammelt und getrocknet, unter Bereitstellung der Titelverbindung (1,25 g), Fp. 232-235ºC.
IR- und PXRD-Analyse bestätigten, daß das Produkt die erforderliche α-Form ist.

BEISPIEL 7

Zu einer gekühlten Lösung (10%) von (S,S,S)-N-(1-[3- (N&sup6;-Benzyloxycarbonyl-N²-mesyllysylamino)-2-(tert-butoxycarbonyl)propyl]-1-cyclopentylcarbonyl)-O&sup4;-tert-butyltyrosintert-butylester (13,3 g, 15,0 mMol) in Essigsäureethylester (27 ml) wurde eine 5,1M-Lösung von Chlorwasserstoff in Essigsäureethylester (70 ml) (357 mMol HCl) gegeben. Nach 30 Minuten schied sich die anfänglich klare Lösung als Teer ab. Das Gemisch wurde bei Raumtemperatur 18 Stunden gerührt. Die klare Lösung wurde von dem Teer abdekantiert und der Teer mit Essigsäureethylester (75 ml) verrieben, unter Gewinnung eines klebrigen Feststoffes. Das Dekantieren und Verreiben wurden 5-mal wiederholt, unter Gewinnung eines hygroskopischen Feststoffes, der in Wasser (12 ml) gelöst wurde. Die erhaltene wässerige Lösung wurde zweimal mit Essigsäureethylester gewaschen, mit wässeriger Natriumhydroxidlösung bis pH 4,0 basisch gemacht, mit der Verbindung von Beispiel 1 beimpft und bei 45-50% 42 Stunden gerührt. Die weißlichen Feststoffe wurden durch Filtration gesammelt, mit Wasser und Aceton gewaschen und getrocknet, unter Gewinnung der Titelverbindung (1,95 g), Fp. 237-238ºC.
IR- und PXRD-Analyse bestätigten, daß das Produkt die erforderliche α-Form ist.
Die nachstehenden Herstellungen erläutern die Herstellung von bestimmten Zwischenproduktverbindungen, die zum Synthetisieren der α-Form verwendet werden:

HERSTELLUNG 1

(S,S,S)-N-(1-[2-Carboxy-3-(N²-mesyllysylamino)propyl]-1-cyclopentylcarbonyl)tyrosin,β-Form

Eine Lösung von (S,S,S)-N-(1-[3-(N&sup6;-Benzyloxycarbonyl-N²-mesyllysylamino)-2-carboxypropyl]-1-cyclopentylcarbonyl)tyrosin (siehe Herstellung 9) (371 g) wurde in einem Gemisch von Ethanol/Wasser 9 : 1 (2,225 l) bei 414 kPa (60 psi) und Raumtemperatur über einem 10% Palladium-auf-Kohle-Katalysator (37,0 g) 4 Stunden hydriert. Der Katalysator wurde abfiltriert und das Filtrat eingedampft, unter Hinterlassen des Rohprodukts als Schaum. Dieses Material wurde mit Aceton (3,13 l) 24 Stunden gerührt, unter Gewinnung der Titelverbindung als weißer, amorpher Feststoff (283 g). Gefunden: C,52,97; H,7,02; N,8,97. C&sub2;&sub6;H&sub4;&sub0;N&sub4;O&sub9;S erfordert: C,53,41; H,6,90; N,9,58%.

HERSTELLUNG 2

(S,S,S)-N-(1-[2-Carboxy-3-(N²-mesyllysylamino)propyl]-1-cyclonentylcarbonyl)tyrosinhydrat (δ-Form)

Eine Lösung von (S,S,S)-N-(1-[3-(N&sup6;-Benzyloxycarbonyl-N²-mesyllysylamino)-2-carboxypropyl] -1-cyclopentylcarbonyl)tyrosin (siehe Herstellung 9) (351 g) in Essigsäureethylester (1300 ml) wurde zu Wasser (385 ml) gegeben und das Zwei-Phasen-Gemisch bei 414 kPa (60 psi) und Raumtemperatur über einem 5% Palladium-auf-Kohle-Katalysator (35 g) 20 Stunden hydriert. Der Katalysator wurde abfiltriert, die wässerige Phase abgetrennt und zu geringem Volumen unter vermindertem Druck aufkonzentriert. Die viskose Lösung wurde in Methanol (2,85 l) gegossen und bei Raumtemperatur 18 Stunden gerührt, währenddessen langsam ein Feststoff ausgefällt wurde. Der Feststoff wurde bei 5-10ºC 2 Stunden granuliert, filtriert, mit Methanol gewaschen und getrocknet, unter Gewinnung der Titelverbindung als weißer Feststoff (178,1 g), Fp. 168-171%. Gefunden: C,51,37; H,7,47; N,9,06. C&sub2;&sub6;H&sub4;&sub0;N&sub4;O&sub9;S·χH&sub2;O (worin χ = 1) erfordert: C,51,81; H,7,02; N, 9,30%.
Wassergehalt = 3,6 Gewichtsprozent, bestimmt durch Karl-Fischer-Analyse (χ = 1, erfordert 3,0 Gewichtsprozent).

HERSTELLUNG 3

(S,S,S)-N-(1-[2-Carboxy-3-(N²-mesyllysylamino)propyl]-1-cyclopentylcarbonyl)tyrosinhydrat (die δ-Form, siehe Herstellung 2) (20,0 g) wurde in Wasser (250 ml) bei Raumtemperatur gelöst und die klare Lösung unter Verwendung eines festen Kohlendioxid/Aceton-Bades gefroren. Die feste Masse wurde gefriergetrocknet, unter Gewinnung der Titelverbindung als weißer Feststoff (19,0 g). Dieses Material zersetzte sich langsam innerhalb des Temperaturbereichs von 155-170ºC.

HERSTELLUNG 4

(S,S,S)-N-(1-[2-Carboxy-3-(N²-mesyllysylamino)propyl]-1-cyclocentylcarbonyl)tyrosin, γ-Form

(S,S,S)-N-(1-[2-Carboxy-3-(N²-mesyllysylamino)propyl]-1-cyclopentylcarbonyl)tyrosinhydrat (die δ-Form, siehe Herstellung 2) (1,0 g) wurde mit entweder n-Propanol oder Acetonitril (10 ml) 24 Stunden bei Raumtemperatur gerührt. In jedem Fall wurde der erhaltene weiße Feststoff durch Filtration gesammelt und getrocknet, unter Bereitstellung der Titelverbindung, Fp. 172-176ºC.

HERSTELLUNG 5

(S,S,S)-N-(1-[2-Carboxy-3-(N²-mesyllysylamino)propyl]-1-cyclopentylcarbonyl)tyrosin, γ-Form

(S,S,S)-N-(1-[2-Carboxy-3-(N²-mesyllysylamino)propyl]-1-cyclopentylcarbonyl)tyrosinhydrat (die δ-Form, siehe Herstellung 2) (847,0 g) wurde in Wasser (762 ml) gelöst und die Lösung mit Aceton (1,0 l) verdünnt. Diese Lösung wurde langsam zu heftig gerührtem Aceton (18,05 l) bei Raumtemperatur gegeben und ein weißer Feststoff fiel aus. Das Gemisch wurde bei Raumtemperatur 18 Stunden gerührt, der Feststoff durch Filtration gesammelt, mit Aceton gewaschen und getrocknet, unter Gewinnung der Titelverbindung als weißer Feststoff (775 g), Fp. 179-181ºC. Gefunden: C,53,42; H,6,88; N,9,37, S, 5,49. C&sub2;&sub6;H&sub4;&sub0;N&sub4;O&sub9;S erfordert: C,53,41; H,6,90; N,9,58; S, 5,48%.

HERSTELLUNG 6

(S,S,S)-N-(1-[2-Carboxy-3-(N²-mesyllysylamino)propyl]-1-cyclopentylcarbonyl)tyrosin, β-Form

(S,S,S)-N-(1-[2-Carboxy-3-(N²-mesyllysylamino)propyl]-1-cyclopentylcarbonyl)tyrosin, α-Form (siehe Beispiele 1 bis 4) (4,0 g) wurde zu Wasser (200 ml) gegeben und das Gemisch 30 Minuten bei 90-95ºC gerührt. Unlösliches Material wurde abfiltriert, das Filtrat mit weiterem Wasser (50 ml) verdünnt und auf Raumtemperatur abgekühlt. Nach Filtration zur Entfernung eines leichten Schleiers wurde das klare Filtrat unter Verwendung eines festen Kohlendioxid/Acetonbades gefroren. Die erhaltene feste Masse wurde gefriergetrocknet, unter Gewinnung der Titelverbindung als weißer Feststoff (3,0 g) . Dieses Material zersetzte sich langsam über den Temperaturbereich 155-165ºC.

HERSTELLUNG 7

(S,S,S)-N-(1-[2-Carboxy-3-[N²-mesyllysylamino)propyl]-1-cyclopentylcarbonyl)tyrosin, γ-Form

(S,S,S)-N-(1-[2-Carboxy-3-(N²-mesyllysylamino)propyl]-1-cyclopentylcarbonyl)tyrosin, β-Form (siehe Herstellungen 1, 3 und 6) (0,3 g) wurde in Acetonitril (15 ml) aufgeschlämmt und 5 Tage gerührt. Der erhaltene weiße Feststoff wurde durch Filtration gesammelt und unter vermindertem Druck getrocknet, unter Bereitstellung der Titelverbindung (0,26 g).

HERSTELLUNG 8

(S,S,S)-N-(1-[2-Carboxy-3-(N²-mesyllysylamino)propyl]-1-cyclopentylcarbonyl]tyrosin, γ-Form

(S,S,S)-N-(1-[2-Carboxy-3-(N²-mesyllysylamino)propyl]-1-cyclopentylcarbonyl]tyrosin, β-Form (siehe Herstellungen 1, 3 und 6) (0,3 g) wurde in n-Propanol (10 ml) aufgeschlämmt und 5 Tage gerührt. Der erhaltene weiße Feststoff wurde durch Filtration gesammelt und unter vermindertem Druck getrocknet, unter Bereitstellung der Titelverbindung (0,26 g), Fp. 175-180ºC.

HERSTELLUNG 9

(S,S,S)-N-(1-[3-(N&sup6;-Benzyloxycarbonyl-N²-mesyllysylamino)-2-carboxypropyl]-1-cyclopentylcarbonyl)tyrosin

(S,S,S)-N-(1-[3-(N&sup6;-Benzyloxycarbonyl-N²-mesyllysylamino)-2-(tert-butoxycarbonyl)propyl]-1-cyclopentylcarbonyl)- O&sup4;-tert-butyltyrosin-tert-butylester (404 g) wurde in Dichlormethan (810 ml) gelöst. Anisol (769 g) wurde in einer Portion zugegeben und dann wurde Trifluoressigsäure (1,158 kg) tropfenweise innerhalb ungefähr 10 Minuten zugegeben. Nach Vervollständigung der Zugabe wurde das Reaktionsgemisch 6 Stunden bei 35ºC und anschließend bei Raumtemperatur über Nacht gerührt. Wasser (1000 ml) wurde zugegeben und drei Schichten bildeten sich. Die obere und die untere Schicht wurden vereinigt, in Essigsäureethylester (2 l) gelöst und die erhaltene Lösung mit Salzlösung gewaschen. Die organische Phase wurde mit Salzlösung vermischt, der pH-Wert auf 3 eingestellt und die Schichten abtrennen lassen. Drei Schichten bildeten sich. Die organischen Phasen wurden abgetrennt, in Essigsäureethylester aufgenommen und mit gesättigter, wässeriger Natriumbicarbonatlösung (1,6 1) und Salzlösung (0,5 l) extrahiert. Die vereinigten wässerigen Schichten wurden mit Essigsäureethylester gewaschen, dann angesäuert und mit Essigsäureethylester extrahiert, unter Gewinnung einer Essigsäureethylesterlösung (1,54 l) der Titelverbindung. Diese Lösung wurde entweder direkt verwendet (siehe beispielsweise Beispiel 1) oder das Lösungsmittel entfernt, unter Bereitstellung der Titelverbindung.

HERSTELLUNG 10

(S)-N&sup6;-Benzyloxycarbonyl-N²-mesyllysin

(S)-N&sup6;-Benzyloxycarbonyllysin (1,5 kg) wurde in Methylenchlorid (7,5 l) aufgeschlämmt und Chlortrimethylsilan (1,36 l) innerhalb 10 Minuten zugegeben. Das Gemisch wurde 30 Minuten unter Rückfluß erhitzt, unter Gewinnung einer Lösung, die vor der gleichzeitigen Zugabe von Diisopropylethylamin (1,87 l) und Methansulfonylchlorid (435 ml) mit einer solchen Geschwindigkeit, um die Temperatur unterhalb 25ºC zu halten, auf 3% abgekühlt wurde. Das Reaktionsgemisch wurde weitere 2,5 Stunden gerührt, dann in 2M wässerige Salzsäurelösung gegossen. Die Schichten wurden abgetrennt und die Methylenchloridphase wurde mit 2M wässeriger Salzsäurelösung gewaschen, gefolgt von Wasser. Das Lösungsmittel wurde unter vermindertem Druck entfernt und durch Essigsäure-n-butylester ersetzt. Die Lösung wurde abgekühlt und das erhaltene kristalline Material wurde durch Filtration gesammelt, mit Essigsäuren-butylester gewaschen und unter vermindertem Druck getrocknet, unter Bereitstellung der Titelverbindung (1,63 kg), Fp. 83,5-84%.
[α]²&sup5;D-13,4º (c = 1, Methanol). Gefunden: C,50,23; H,6,40; N,7,76.
C&sub1;&sub5;H&sub2;&sub2;N&sub2;O&sub6;S erfordert: C,50,27; H,6,19; N,7,82%.
¹H-NMR (300 MHz, d&sub6;-DMSO): δ = 1,23-1,78(6H, m), 2,85(3H, s), 2,98(2H, q), 3,80(1H, dt), 5,00(2H, s), 7,25(1H, t), 7,30-7,43(5H, m), 7,51(1H, d) ppm.

HERSTELLUNG 11

(S,S,S)-N-(1-[2-tert-Butoxycarbonyl-3-(N²-mesyllysylamino)propyl]-1-cyclopentylcarbonyl)-O&sup4;-tert-butyltyrosintert-butylester

Zu einer Lösung von (S,S,S)-N-(1-[3-(N&sup6;-Benzyloxycarbonyl-N²-mesyllysylamino)-2-(tert-butoxycarbonyl)propyl]-1- cyclopentylcarbonyl)-O&sup4;-tert-butyltyrosin-tert-butylester (48,64 g, 54,8 mMol) in vergälltem Alkohol (1,0 l) wurde 5% Palladium-auf-Kohle (5 g) (wasserfeucht) gegeben und das Gemisch wurde bei 345-414 kPa (50-60 psi) und Raumtemperatur 19 Stunden hydriert. Nach Entfernung des Katalysators durch Filtration wurde die erhaltene Lösung unter vermindertem Druck aufkonzentriert, unter Bereitstellung der Titelverbindung als farbloses Öl (46,56 g), das Ethanol enthielt.
¹H-NMR (300 MHz, CDCl&sub3;): δ = 1,27(9H, s), 1,41(9H, s), 1,44(9H,s), 1,45-1,62(14H, breit m), 1,8-2,05(4H, breit m) 2,21(2H, m), 2,72(2H, t), 2,79(3H, breit), 2,96(3H, s), 3,1(2H, m), 3,59(1H, m), 3,96(1H, t), 4,73(1H, m), 6,43(1H, dt), 6,89(2H, dt), 7,09(2H, dt), 7,51(1H, dt) ppm.

HERSTELLUNG 12

(S,S,S)-N-(1-(2-tert-Butoxycarbonyl-3-(N&sup6;-formyl-N²mesyllysylamino)propyl]-1-cyclopentylcarbonyl)-O&sup4;-tert-butyltyrosin-tert-butylester

Eine gekühlte Lösung (0ºC) von Ameisensäure-Essigsäureanhydrid in Essigsäure (hergestellt durch Vereinigen von 45,3 ml Essigsäureanhydrid mit 22,8 ml Ameisensäure, unter Erwärmen der erhaltenen Lösung auf 50-60ºC für 15 Minuten, dann Abkühlen auf 0ºC) wurde zu einer Lösung der Verbindung von Herstellung 11 (27, 3 g, 36, 3 mMol) in Ameisensäure (33, 7 ml) bei 0ºC innerhalb 10 Minuten zugegeben. Die Lösung wurde erwärmen lassen und bei Raumtemperatur 45 Minuten gerührt und dann auf Eis gestoppt. Das erhaltene Gemisch wurde mit wässeriger Natriumhydroxidlösung neutralisiert und mit Dichlormethan (2 x) extrahiert. Die vereinigten organischen Schichten wurden zweimal mit Salzlösung gewaschen und unter vermindertem Druck eingedampft, unter Bereitstellung der Titelverbindung als gelber Schaum (28,0 g).
¹H-NMR (300 MHz, CDCl&sub3;): δ = 1,26(9H, s), 1,41(18H, s), 1,45-2,03(16H, breit), 2,23(2H, breit m), 2,97(3H, s), 3,08(2H, m), 3,28(2H, m), 3,51(1H, m), 3,98(1H, breit m), 4,73(1H, q), 5,57(1H, breit dt), 5,91(1H, breit), 6,32(1H, dt), 6,90(2H, dt), 7,08(2H, dt), 7,29(1H, breit), 8,17(1H, s) ppm.

HERSTELLUNG 13

(S,S,S)-N-(1-[2-Carboxy-3-(N&sup6;-formyl-N²-mesyllysylamino)propyl]-1-cyclopentylcarbonyl)tyrosin

Zu einer gekühlten Lösung (0ºC) der Verbindung von Herstellung 12 (2,71 g, 3,46 mMol) in Dichlormethan (4,8 ml) wurde Trifluoressigsäure (4,8 ml) gegeben. Das Reaktionsgemisch wurde sich auf Raumtemperatur erwärmen lassen und 24 Stunden gerührt. Das Gemisch wurde dann unter vermindertem Druck aufkonzentriert, unter Bereitstellung der Titelverbindung als Feststoff (2,4 g), Fp. 56-60ºC.
¹H-NMR (300 MHz, d&sub6;-DMSO): δ = 1,2-1,6(14H, breit m), 1,71-1,86(3H, m), 1,86-1,99(1H, m), 2,28-2,41(1H, m), 2,78(3H, s), 2,8-3,09(4H, m), 3,12-3,25(2H, m), 3,7(1H, m), 4,35(1H, m), 6,6(2H, dt), 6,98(2H, dt), 7,25(1H, dt), 7,50(1H, dt), 7,91(2H, m), 7,97(1H, s) ppm.

Charakterisierung der α-, β-, -γ- und δ-Formen durch IR- PXRD- und DSC-Analyse und durch Schmelzpunktbestimmung

a) Infrarot-Spektroskopie (IR)

Die Infrarotspektren der unterschiedlichen Formen wurden als Nujol-Verreibung unter Verwendung eines Nicolet 800 FT-IR-Spektrometers bestimmt. Für jede Form werden die Wellenzahlen (ν [cm&supmin;¹]) der Absorptionsbanden in Tabelle 1 angeführt. TABELLE 1 TABELLE 1 (Fortsetzung)
* zeigt jene Banden an, die bezüglich des Unterscheidens zwischen den verschiedenen Formen als sehr signifikant betrachtet werden.
Repräsentative Infrarotspektren für die verschiedenen Formen werden in Fig. 1A, 1B, 2A, 2B, 3A, 3B, 4A und 4B gezeigt.

b) Pulverröntgenbeugung (PXRD)

Die Pulverröntgenbeugungsbilder der verschiedenen Formen wurden unter Verwendung eines Siemens D500 Difraktometers erhalten, das bei 40 kV/30 mA und unter Verwendung von Kupferstrahlung, gefiltert mit einem Graphitmonochromator (λ = 0,15405 nm), und einem Szintillationszählerdetektor arbeitete. Für jede Form wurde die Strahlungsintensität als Funktion des Winkels 2Θ wurde über den Bereich 2º bis 45º 2Θ unter Verwendung eines schrittweisen Abtastmodus durch Zählen für 6 Sekunden bei Schrittintervallen von 0,03ºC 2Θ aufgezeichnet. Für jede Form werden die Hauptpeaks, die in den Bildern ersichtlich sind (Grad 2Θ), in Tabelle 2 angeführt. TABELLE 2
Repräsentative Pulveröntgenbeugungsbilder für die verschiedenen Formen werden in Fig. 5 bis 8 gezeigt.

(c) Differential-Scanning-Calorimetrie (DSC)

Proben (etwa 5 mg) der verschiedenen Formen wurden unter Verwendung eines Perkin-Elmer 7 Series Thermal Analyser mit einer Abtastgeschwindigkeit von 20ºC pro Minute analysiert. Die aus den verschiedenen Formen erhaltenen Ergebnisse werden in Tabelle 3 zusammengefaßt.

TABELLE 3

Form Zusammenfassung der DSC-Analyse
α-Form Scharfe Endotherme im Bereich 248-259ºC Zersetzung oberhalb 260ºC.
β-Form Breite Endotherme im Bereich 60-130ºC. Schwache Endotherme bei etwa 147ºC. Zersetzung oberhalb 200ºC.
γ-Form Scharfe Endotherme im Bereich 176-186ºC Scharfe Exotherme bei etwa 207ºC. Schwache Endotherme bei etwa 213ºC. Zersetzung oberhalb 250ºC.
δ-Form Scharfe Endothermen bei etwa 162 und bei etwa 166-168ºC. Zersetzung oberhalb 200ºC.
Repräsentative DSC-Thermogramme für die verschiedenen Formen werden in Fig. 9 bis 12 gezeigt.

(d) Schmelzpunkt

Die Schmelzpunkte der verschiedenen Formen wurden durch Heiztisch-Mikroskopie unter Verwendung einer Mettler FP5/FP52-Vorrichtung mit einer Heizgeschwindigkeit von 2ºC pro Minute bestimmt. Die typischen Bereiche, in denen die verschiedenen Formen schmelzen, sind in Tabelle 4 angegeben.

TABELLE 4

Form Scharfe Schmelzpunkte in dem Bereich (ºC)
α-Form 242-252
γ-Form 170-185
δ-Form 165-175

Vergleichende Untersuchungen

Die α- und β-Formen wurden unter Verwendung von Verarbeitungs- und Hygroskopizitäts-Untersuchungen verglichen.

(a) Verarbeitungsuntersuchung

Eine Tablettiermaschine mit Meßinstrumenten (Manesty Machines Limited, Modell F3) wurde hinsichtlich Kraft und oberem Stempelvorschub ausreichend kalibriert.
Nach der Kalibrierung wurde ein Plazebo, nämlich ein Avicel (Handelsmarke)/DCP- (dibasisches Calciumphosphat)-Gemisch auf der Maschine, unter Verwendung von flachen, zueinandergewandten Stempeln mit 13 mm zur Messung der Reproduzierbarkeit der Technik verarbeitet. Unter Verwendung einer aliquoten Menge des Gemisches wurde die Maschine geeignet eingestellt, um das Zielkompressionsgewicht (400 mg) und ausreichende Härte zu erreichen. Zwanzig Einheiten aliquote Mengen wurden dann separat abgewogen und in den Schuh der Maschine geladen. Die Maschine wurde unter Kraft arbeiten lassen, bis das Gemisch in dem Schuh erschöpft war und keine weiteren Tabletten hergestellt wurden. Fig. 13 zeigt eine Kurve der oberen Stempelkraft als Funktion der Anzahl der Tabletten für drei Avicel/DCP Plazebo-Gemische, jeweils zwanzig Einheiten, und Tabelle 5 zeigt das durchschnittliche Gewicht und die Härte der zehn härtesten Tabletten (angenommen, es sind die ersten zehn hergestellten Tabletten). Es ist aus den in Fig. 13 wiedergegebenen Daten ersichtlich, daß das gesamte Verfahren für dieses Gemisch sehr reproduzierbar war. Die Abnahme der oberen Stempelkraft, die am Ende des Durchlaufs stattfand, kann mit der Verminderung der Menge an Ge misch in dem Schuh und der folgenden mangelhaften Auffüllung der Preßform korreliert werden.

TABELLE 5

Die Tabelle zeigt das mittlere Gewicht und die Härte der unter Verwendung eines Avicel/DCP Plazebo-Gemisches hergestellten Tabletten.
Nach dem Versuch zur Bestimmung der Reproduzierbarkeit der Technik wurden Gemische, die die α-Form oder die β- Form enthielten, gemäß der folgenden Formulierung getrennt hergestellt: α- oder β-Form (100 mg), vorgelatinisierte Stärke (40 mg), dibasisches Calciumphosphat (wasserfrei) (256 mg) und Magnesiumstearat (2 mg). Ein Misch/Sieb/Misch-Verfahren wurde zur Herstellung von 20 g des Gemisches vor der Schlagverdichtung auf der Maschine verwendet. Die Beladung war 100 mg, da frühere Erfahrungen gezeigt haben, daß bei höherer Beladung die auftretenden Verarbeitungsschwierigkeiten anwachsen. Die Maschine wurde auf das Gemisch eingestellt und dann wurden 50 Tabletten aus dem bestimmten Gemisch in einer kontinuierlichen Charge hergestellt.
Die Optimierung der Maschine war mit dem β-Form-Gemisch aufgrund seiner geringen Fließeigenschaften schwieriger. Neben der vorsichtigen Einstellung der Verfahrensvariablen war es nicht möglich, die obere Stempelkraft zwischen beiden Gemischen konstantzuhalten und folglich wurde das β- Form-Gemisch zu einer größeren Härte komprimiert.
Die Daten des oberen Stempels werden für beide Gemische in Fig. 14 gezeigt. Die Größe der Variabilität in der Kraft des oberen Stempels (und Tablettengewicht) für das β- Form-Gemisch war mit dem ungleichförmigen Füllen der Preßform für diese Formulierung verbunden. Die in Tabelle 6 angegebe nen Daten bestätigen, daß Verarbeiten der β-Form-Formulierung viel schwieriger war und viel größerer Variabilität unterzogen war, als wenn die α-Form-Formulierung verwendet wurde.

TABELLE 6

Die Tabelle zeigt die Variabilität der Verarbeitungsparameter für Gemische, die α- und β-Formen enthalten.
Die gemessene Ausstoßkraft für die letzten zehn Tabletten von jedem Gemisch wird in Fig. 15 gezeigt. Die aus der β-Form gebildeten Tabletten erfordern viel größere Kraft zur Entfernung derselben aus der Preßform. Dieser Effekt zeigt sich durch die Tabletten selbst, die aus der Preßform durch den Schuh "herausschnellten".
Die erhaltenen Daten zeigten die geringen Verarbeitungseigenschaften der β-Form, verglichen mit der α-Form. Die β-Form weist eine geringe Schüttdichte (Fluff-Dichte = 0,09 g·ml&supmin;¹, verglichen mit 0,36 g·ml&supmin;¹ der α-Form) und mangelhafte Fließeigenschaften auf und wenn Gemische, die sie enthielten, tablettiert wurden, führt dies zu einer großen Variabilität des Tablettengewichts und eine hohe Ausstoßkraft ist erforderlich. In dieser Hinsicht zeigt die α-Form überlegene Eigenschaften, die sie besonders für die pharmazeutische Formulierung geeignet machen.

(b) Hygroskopizitäts-Untersuchung

(i) Die Hygroskopizität der α- und β-Formen wurde durch gravimetrische Analyse wie nachstehend bewertet.
Proben der α- und β-Formen wurden getrennt unter den nachstehenden Bedingungen in Kilner (Handelsmarke)-Gefäße ge stellt: 40ºC, 40ºC und 75% RH (relative Feuchtigkeit) und 40ºC und 95% RH. Die Wasseraufnahme von jeder Probe wurde gravimetrisch dreifach nach ausgewählten Zeitintervallen bewertet.
Proben der β-Form, die bei 40ºC/75% RH oder 40ºC/95% RH für 1 Tag gelagert wurden, unterlagen einer morphologischen Veränderung. Proben der β-Form, die bei 40ºC/95% RH 1 Tag gelagert wurden, unterlagen einem geringen Gewichtsverlust (vorzugsweise nach einer Gewichtserhöhung aufgrund von Wasserabsorption, gefolgt von der morphologischen Veränderung und anschließend Feuchtigkeitsverlust), wohingegen Proben, gelagert bei 40ºC/75% RH durchschnittlich 6% zu ihrem ursprünglichen Gewicht gewannen.
Fig. 16 zeigt die aus der gravimetrischen Analyse erhaltenen Ergebnisse. Die α-Form wurde nicht als hygroskopisch befunden. Die β-Form jedoch wurde als sehr hygroskopisch bei 40ºC/75% RH befunden.
(ii) Feuchtigkeitsmikrowaagenversuche an den α- und β-Formen bestätigten, daß die α-Form nicht hygroskopisch war, wohingegen die β-Form sehr hygroskopisch war. Proben der α- und β-Formen wurden getrennt in die Vorrichtung bei 40ºC gegeben und mit der Umgebung ins Gleichgewicht gebracht bevor die bestimmte Probe mit Zeiträumen zwischen jedem Erhöhen der Feuchtigkeit erhöhter relativer Luftfeuchtigkeit ausgesetzt wird. Die Ergebnisse werden in Fig. 17 gezeigt. Diese zeigen, daß um 8 Gewichtsprozent Wasser (verglichen mit dem ursprünglichen Gewicht) von der β-Form während des Versuchs aufgenommen wurden.
Die morphologische Veränderung, die die β-Form bei hohen Feuchtigkeiten eingehen kann, wurde weiterhin untersucht und eine Umwandlung eines Pulvers mit sehr niedriger Schüttdichte zu einem dichten, glasartigen Feststoff wurde beobachtet.

Claims

1. Kristalline, α-polymorphe Form einer Verbindung der Formel:

gekennzeichnet durch ein Infrarotspektrum als Verreibung in Nujol, das Absorptionsbanden bei ν = 3407, 3386, 3223, 3153, 1699, 1652, 1626, 1594, 1516, 1457 (Nujol), 1377 (Nujol), 1344, 1334, 1317, 1267, 1241, 1228, 1210, 1164, 1151, 1137, 1118, 1109, 1093, 1074, 1045, 1019, 1003, 981, 965, 911, 897, 862, 818, 800, 778, 762, 721 und 655 cm&supmin;¹ zeigt.

2. Verbindung nach Anspruch 1, weiterhin gekennzeichnet durch ein Pulverröntgenbeugungsbild, erhalten unter Verwendung von Kupferstrahlung, gefiltert mit einem Graphitmonochromator (λ = 0,15405 nm), das die-Hauptpeaks bei 7,5, 8,9, 9,9, 11,6, 15,6, 17,2, 17,5, 18,0, 20,2, 22,1 und 23,3 Grad 2Θ zeigt.

3. γ-polymorphe Form einer Verbindung der Formel (I) nach Anspruch 1, gekennzeichnet durch ein Infrarotspektrum als Verreibung in Nujol, das Absorptionsbanden bei ν = 3377, 3240, 1665, 1639, 1594, 1527, 1518, 1494, 1457 (Nujol), 1443, 1377 (Nujol), 1344, 1321, 1304, 1254, 1195, 1178, 1162, 1143, 1111, 1098, 1046, 1031, 1012, 972, 962, 945, 932, 907, 879, 849, 815, 806, 780, 753, 729 und 658 cm&supmin;¹ zeigt.

4. Verbindung nach Anspruch 3, die weiterhin durch ein Pulverröntgenbeugungsbild charakterisiert ist, erhalten unter Verwendung von Kupferstrahlung, gefiltert mit einem Graphitmonochromator (λ = 0,15405 nm), das die Hauptpeaks bei 9,0, 9,6, 10,6, 11,6, 12,7, 13,3, 14,6, 16,2, 17,9, 18,8, 20,2 und 21,8 Grad 2Θ zeigt.

5. Hydratisierte δ-Form einer Verbindung der Formel (I) nach Anspruch 1, gekennzeichnet durch einen Wassergehalt von 1 bis 7 Gewichtsprozent, bestimmt durch Karl-Fischer-Analyse, und ein Infrarotspektrum als Verreibung in Nujol, das Absorptionsbanden bei ν = 3667, 3425, 3380, 3287, 3137, 3098, 1709, 1673, 1637, 1619, 1596, 1568, 1556, 1516, 1458 (Nujol) 1448, 1419, 1390, 1378 (Nujol), 1356, 1338, 1300, 1270, 1249, 1229, 1198, 1174, 1141, 1108, 1091, 1075, 1064, 1045, 1033, 1019, 1001, 985, 962, 941, 909, 889, 877, 841, 822, 807, 763, 744, 732, 721 und 655 cm&supmin;¹ zeigt.

6. Verbindung nach Anspruch 5, die weiterhin gekennzeichnet ist durch ein Pulverröntgenbeugungsbild, erhalten unter Verwendung von Kupferstrahlung, gefiltert mit einem Graphitmonochromator (λ = 0,15405 nm), das die Hauptpeaks bei 10,5, 10,8, 12,3, 14,5, 17,2, 17,6, 17,9, 18,9, 20,4, 21,5, 22,4, 23,0, 23,1, 24,7, 27,1, 27,8 und 28,9 Grad 2Θ zeigt.

7. Verbindung nach Anspruch 5 oder 6, die einen Wassergehalt von 2 bis 4 Gewichtsprozent, bestimmt durch Karl- Fischer-Analyse, aufweist.

8. Pharmazeutisches Mittel, umfassend die α-polymorphe Form einer Verbindung der Formel (I) nach Anspruch 1 oder 2, die γ-polymorphe Form einer Verbindung der Formel (I) nach Anspruch 3 oder 4, oder die hydratisierte δ-Form einer Verbindung der Formel (I) nach Anspruch 5, 6 oder 7, zusammen mit einem pharmazeutisch verträglichen Verdünnungsmittel oder Träger.

9. Mittel nach Anspruch 8, wobei die α-polymorphe Form einer Verbindung der Formel (I) vorliegt.

10. α-polymorphe Form einer Verbindung der Formel (I) nach Anspruch 1 oder 2, γ-polymorphe Form einer Verbindung der Formel (I) nach Anspruch 3 oder 4, oder hydratisierte 6- Form einer Verbindung der Formel (I) nach Anspruch 5, 6 oder 7, oder ein pharmazeutisches Mittel von einer beliebigen Form davon, nach Anspruch 8 oder 9, falls geeignet, zur Verwendung als Arzneimittel.

11. Verbindung oder Mittel davon zur Verwendung als Arzneimittel nach Anspruch 10, wobei die Verbindung die αpolymorphe Form einer Verbindung der Formel (I) darstellt.

12. Verwendung der α-polymorphen Form einer Verbindung der Formel (I) nach Anspruch 1 oder 2, der γ-polymorphen Form einer Verbindung der Formel (I) nach Anspruch 3 oder 4, oder der hydratisierten δ-Form einer Verbindung der Formel (I) nach Anspruch 5, 6 oder 7, oder eines pharmazeutischen Mittels von einer beliebigen Form davon, nach Anspruch 8 oder 9, falls geeignet, zur Herstellung eines Arzneimittels zur Behandlung einer Erkrankung, die von der Inhibierung des Angiotensin-umwandelnden Enzyms und/oder der Zink-abhängigen neutralen Endopeptidase E. C.3.4.24.11 abhängt.

13. Verwendung nach Anspruch 12, wobei die Erkrankung eine cardiovaskuläre Erkrankung, wie Bluthochdruck, Herzstauungsinsuffizienz, Niereninsuffizienz oder Glaukom, darstellt.

14. Verwendung nach Anspruch 12 oder 13, wobei die αpolymorphe Form einer Verbindung der Formel (I) oder eines Mittels davon verwendet wird.

15. Natrium-, Kalium-, Ammonium- oder (C&sub1;-C&sub4;-Alkyl)- ammoniumsalz einer Verbindung der Formel:

16. Natriumsalz einer Verbindung der Formel (II) nach Anspruch 15.

17. Verbindung der Formel:

worin P¹, P², P³ und P&sup4;, die gleich oder verschieden sein können, alle Schutzgruppen darstellen, die vorzugsweise unter sauren Bedingungen entfernt werden können, unter Bereitstellung einer Verbindung der Formel (I) nach Anspruch 1, mit der Maßgabe, daß P¹ nicht Benzyloxycarbonyl darstellt, wenn P², P³ und P&sup4; jeweils t-Butyl darstellen.

18. Verbindung nach Anspruch 17, wobei P¹ Formyl oder Benzyloxycarbonyl darstellt.

19. Verbindung nach Anspruch 17 oder 18, wobei P², P³ und P&sup4; jeweils t-Butyl darstellen.

20. Verbindung der Formel:

worin P&sup5; eine Schutzgruppe darstellt, die vorzugsweise unter sauren Bedingungen entfernt werden kann, unter Bereitstellung einer Verbindung der Formel (I) nach Anspruch 1, mit der Maßgabe, daß P&sup5; nicht Benzyloxycarbonyl darstellt.

21. Verbindung nach Anspruch 20, worin P&sup5; Formyl darstellt.

22. Verfahren zur Herstellung einer kristallinen, α- polymorphen Form einer Verbindung der Formel:

die gekennzeichnet ist durch ein Infrarotspektrum als Verreibung in Nujol, das die Absorptionsbanden bei ν = 3407, 3386, 3223, 3153, 1699, 1652, 1626, 1594, 1516, 1457 (Nujol) 1377 (Nujol), 1344, 1334, 1317, 1267, 1241, 1228, 1210, 1164, 1151, 1137, 1118, 1109, 1093, 1074, 1045, 1019, 1003, 981, 965, 911, 897, 862, 818, 800, 778, 762, 721 und 655 cm&supmin;¹ zeigt, das umfaßt

a) katalytische Hydrierung einer wässerigen Lösung eines Natrium-, Kalium-, Ammonium- oder (C&sub1;-C&sub4;-Alkyl)- ammoniumsalzes einer Verbindung der Formel:

unter Verwendung eines Katalysators, der die Benzyloxycarbonyl-Schutzgruppe entfernen kann, gefolgt von Ansäuern des Basensalzes der Verbindung der Formel (I), erhalten bei einem pH-Wert von 3 bis 5, vorzugsweise etwa 4, unter Bereitstellung der erforderlichen α-polymorphen Form;

(b) Behandlung einer hydratisierten δ-Form einer Verbindung der Formel (I) nach diesem Anspruch, gekennzeichnet durch einen Wassergehalt von 1 bis 7 Gewichtsprozent, bestimmt durch Karl-Fischer-Analyse, und ein Infrarotspektrum als Verreibung in Nujol, das Absorptionsbanden bei ν = 3667, 3425, 3380, 3287, 3137, 3098, 1709, 1673, 1637, 1619, 1596, 1568, 1556, 1516, 1458 (Nujol), 1448, 1419, 1390, 1378 (Nujol), 1356, 1338, 1300, 1270, 1249, 1229, 1198, 1174, 1141, 1108, 1091, 1075, 1064, 1045, 1033, 1019, 1001, 985, 962, 941, 909, 889, 877, 841, 822, 807, 763, 744, 732, 721 und 655 cm&supmin;¹ zeigt, mit Wasser, einer wässerigen Lösung eines C&sub1;-C&sub4;-Alkanols, wie Methanol oder 2-Propanol, oder einer wässerigen Lösung eines C&sub3;-C&sub6;-Alkanons, wie Aceton;

(c) Behandlung einer γ-polymorphen Form einer Verbindung der Formel (I), wie in diesem Anspruch definiert, gekennzeichnet durch ein Infrarotspektrum als Verreibung in Nujol, das Absorptionsbanden bei ν = 3377, 3240, 1665, 1639, 1594, 1527, 1518, 1494, 1457 (Nujol), 1443, 1377 (Nujol), 1344, 1321, 1304, 1254, 1195, 1178, 1162, 1143, 1111, 1098, 1046, 1031, 1012, 972, 962, 945, 932, 907, 879, 849, 815, 806, 780, 753, 729 und 658 cm&supmin;¹ zeigt, mit Wasser, einer wässerigen Lösung eines C&sub1;-C&sub4;-Alkanols, wie Methanol oder 2- Propanol, oder einer wässerigen Lösung eines C&sub3;-C&sub6;-Alkanons, wie Aceton;

(d) Behandlung einer amorphen β-Form einer Verbindung der Formel (I), wie in diesem Anspruch definiert, gekennzeichnet durch ein Infrarotspektrtum als Verreibung in Nujol, das Absorptionsbanden bei ν = 3384, 1708, 1638, 1615, 1595, 1533, 1516, 1458 (Nujol), 1396, 1378 (Nujol), 1313, 1245, 1172, 1144, 1106, 980, 889, 830, 808, 737, 721 und 665 cm&supmin;¹ zeigt, mit Wasser, einer wässerigen Lösung eines C&sub1;-C&sub4;-Alkanols, wie Methanol oder 2-Propanol, oder einer wässerigen Lösung eines C&sub3;-C&sub6;-Alkanons, wie Aceton;

(e) katalytische Hydrierung einer Lösung einer Verbindung der Formel (II), wie in diesem Anspruch definiert, in einem wässerigen, organischen Lösungsmittel in Anwesenheit eines Katalysators, der die Benzyloxycarbonyl-Schutzgruppe entfernen kann, Entfernen des Katalysators und des Lösungsmittels aus dem Gemisch nach im wesentlichen vollständiger Entfernung der Benzyloxycarbonyl-Schutzgruppe und Rühren des Rückstands mit einem C&sub3;-C&sub6;-Alkanon, wie Aceton;

(f) Entfernen der Schutzgruppen, vorzugsweise unter sauren Bedingungen, von einer Verbindung der Formel

worin P¹, P², P³ und P&sup4;, die gleich oder verschieden sein können, alle Schutzgruppen darstellen, die vorzugsweise unter sauren Bedingungen entfernt werden können, zur Bereitstellung der gewünschten α-polymorphen Form nach Einstellen des pH-Werts auf 3 bis 5, vorzugsweise etwa 4, bei der Aufarbeitung; oder

(g) Entfernen der Schutzgruppen, vorzugsweise unter sauren Bedingungen, von einer Verbindung der Formel

worin P&sup5; eine Schutzgruppe darstellt, die vorzugsweise unter sauren Bedingungen entfernt werden kann, zur Bereitstellung der gewünschten α-polymorphen Form nach Einstellen des pH-Werts auf 3 bis 5, vorzugsweise etwa 4, bei der Aufarbeitung.

23. Verfahren nach Anspruch 22(a), wobei der Katalysator Palladium-auf-Kohle ist.

24. Verfahren nach Anspruch 22 (a) oder 23, wobei ein Natriumsalz einer Verbindung der Formel (II) verwendet wird.

25. Verfahren nach Anspruch 22 (a), 23 oder 24, wobei die Ansäuerung bei 35 bis 45ºC ausgeführt wird.

26. Verfahren nach Anspruch 22(f), wobei P¹ Formyl oder Benzyloxycarbonyl darstellt.

27. Verfahren nach Anspruch 22(f) oder 26, wobei P², P³ und P&sup4; jeweils t-Butyl darstellen.

28. Verfahren nach Anspruch 22(g), wobei P&sup5; Formyl darstellt.

29. Verfahren nach einem der Ansprüche 22 bis 28, wobei die α-polymorphe Form einer Verbindung der Formel (I) weiterhin gekennzeichnet ist durch ein Pulverröntgenbeugungsbild, erhalten unter Verwendung von Kupferstrahlung, gefiltert mit einem Graphitmonochromator (λ = 0,15405 nm), das die Hauptpeaks bei 7,5, 8,9, 9,9, 11,6, 15,6, 17,2, 17,5, 18,0, 20,2, 22,1 und 23,3 Grad 28 zeigt.

30. Verfahren zur Herstellung der γ-polymorphen Form einer Verbindung der Formel (I) nach Anspruch 22(c), das die Behandlung der hydratisierten δ-Form einer Verbindung der Formel (I) nach Anspruch 22(b) mit 1-Propanol oder Acetonitril umfaßt.

31. Verfahren zur Herstellung der γ-polymorphen Form einer Verbindung der Formel (I) nach Anspruch 22(c), das die Behandlung einer amorphen β-Form einer Verbindung der Formel (I) nach Anspruch 22(d) mit Acetonitril oder n-Propanol umfaßt.

32. Verfahren zur Herstellung der γ-polymorphen Form einer Verbindung der Formel (I) nach Anspruch 22(c), das die Behandlung einer wässerigen Lösung der hydratisierten δ-Form einer Verbindung der Formel (I) nach Anspruch 22(b) mit einem volumetrischen Überschuß an einem C&sub3;-C&sub6;-Alkanon, wie Aceton, umfaßt.

33. Verfahren zur Herstellung der hydratisierten δ- Form einer Verbindung der Formel (I) nach Anspruch 22(b), das die katalytische Hydrierung einer Lösung einer Verbindung der Formel (II) nach Anspruch 22(a) in einem Gemisch eines mit Wasser nicht mischbaren Lösungsmittels und Wasser und in Anwesenheit eines Katalysators, der die Benzyloxycarbonyl- Schutzgruppe entfernen kann, Entfernen des Katalysators und Abtrennen der wässerigen Schicht nach im wesentlichen vollständiger Entfernung der Benzyloxycarbonylschutzgruppe, gefolgt von Behandlung der wässerigen Schicht mit einem C&sub1;-C&sub4;- Alkanol, wie Methanol, umfaßt.

34. Verfahren zur Herstellung einer amorphen β-Form einer Verbindung der Formel (I) nach Anspruch 22(d), das Gefriertrocknen einer gefrorenen, wässerigen Lösung der hydra tisierten δ-Form einer Verbindung der Formel (I) nach Anspruch 22(b) umfaßt.

35. Verfahren zur Herstellung einer amorphen β-Form einer Verbindung der Formel (I) nach Anspruch 22 (d), das Gefriertrocknen einer konzentrierten, wässerigen Lösung der apolymorphen Form einer Verbindung der Formel (I) nach Anspruch 22 umfaßt.