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WO2020127581A1 - Composition comprenant un extrait de lactobacillus rhamnosus - Google Patents

Composition comprenant un extrait de lactobacillus rhamnosus Download PDF

Info

Publication number
WO2020127581A1
WO2020127581A1 PCT/EP2019/086091 EP2019086091W WO2020127581A1 WO 2020127581 A1 WO2020127581 A1 WO 2020127581A1 EP 2019086091 W EP2019086091 W EP 2019086091W WO 2020127581 A1 WO2020127581 A1 WO 2020127581A1
Authority
WO
WIPO (PCT)
Prior art keywords
skin
lactobacillus rhamnosus
composition
extract
improve
Prior art date
Application number
PCT/EP2019/086091
Other languages
English (en)
Inventor
Marc Dumas
Catherine Heusele
Valérie GORZELANCZYK
Olivier JEANNETON
Original Assignee
L V M H Recherche
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by L V M H Recherche filed Critical L V M H Recherche
Priority to CN201980092564.3A priority Critical patent/CN113453660B/zh
Priority to US17/415,585 priority patent/US12011501B2/en
Priority to JP2021535941A priority patent/JP2022514669A/ja
Priority to EP19835377.3A priority patent/EP3897569A1/fr
Priority to KR1020217023208A priority patent/KR20210116494A/ko
Publication of WO2020127581A1 publication Critical patent/WO2020127581A1/fr

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Classifications

    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K8/00—Cosmetics or similar toiletry preparations
    • A61K8/18—Cosmetics or similar toiletry preparations characterised by the composition
    • A61K8/96—Cosmetics or similar toiletry preparations characterised by the composition containing materials, or derivatives thereof of undetermined constitution
    • A61K8/99—Cosmetics or similar toiletry preparations characterised by the composition containing materials, or derivatives thereof of undetermined constitution from microorganisms other than algae or fungi, e.g. protozoa or bacteria
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61Q—SPECIFIC USE OF COSMETICS OR SIMILAR TOILETRY PREPARATIONS
    • A61Q17/00—Barrier preparations; Preparations brought into direct contact with the skin for affording protection against external influences, e.g. sunlight, X-rays or other harmful rays, corrosive materials, bacteria or insect stings
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61Q—SPECIFIC USE OF COSMETICS OR SIMILAR TOILETRY PREPARATIONS
    • A61Q19/00—Preparations for care of the skin
    • A61Q19/001—Preparations for care of the lips
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61Q—SPECIFIC USE OF COSMETICS OR SIMILAR TOILETRY PREPARATIONS
    • A61Q19/00—Preparations for care of the skin
    • A61Q19/08—Anti-ageing preparations

Definitions

  • Composition comprising an extract of Lactobacillus rhamnosus
  • the present invention relates to a composition
  • a composition comprising a new extract of Lactobacillus rhamnosus, in particular a lysate of Lactobacillus rhamnosus (CNCM 1-5313), and its beneficial effects on keratin materials, in particular the skin.
  • the skin is the first barrier of the human body. It protects the organs from differences in temperature, humidity, and aggressions from the external environment, such as UV rays, stress, pollution, pathogenic microorganisms ... However, excessive chemical and physical stimulations deteriorate the functions normal skin and induce or accelerate its aging, resulting in the appearance of wrinkles and a loss of firmness, flexibility and elasticity.
  • MRP1 ABCC1, LONP1, GPX1
  • the extract of Lactobacillus rhamnosus according to the invention and in particular a lysate of Lactobacillus rhamnosus is advantageous in that it has a detoxifying and antioxidant effect, an antiaging effect aimed at reducing wrinkles, of the loss of firmness and density (collagens and elastin and anchoring points between cells and these structural proteins), a strengthening effect on the skin (cellular structures like the nucleus of cells), an effect of adaptation of the skin to stress hypoxic, a depigmenting effect on skin spots (inhibition of melanogenesis) and / or a normalization effect of the skin microbiota via the strengthening of innate immunity and the skin barrier.
  • a first subject of the invention relates to a composition for topical application to keratin materials, in particular the skin and / or the lips, comprising, in a physiologically acceptable medium, at least one extract of Lactobacillus rhamnosus (CNCM I-5313), one of its fractions and / or one of its metabolites and at least one excipient chosen from solvents other than water, UV filters, surfactants, gelling agents, thickeners, fillers, materials coloring agents, film-forming polymers, perfumes and their mixtures, in particular solvents other than water, surfactants, gelling agents, thickeners, fillers, coloring matters, film-forming polymers, perfumes and their mixtures.
  • CNCM I-5313 Lactobacillus rhamnosus
  • the invention also relates to a non-therapeutic cosmetic process comprising the application to keratin materials of at least one extract of Lactobacillus rhamnosus (CNCM 1-5313) according to the invention or of a composition containing it, intended to prevent and / or reduce the signs of skin aging and / or promote and / or improve the barrier function.
  • CNCM 1-5313 Lactobacillus rhamnosus
  • Lactobacillus rhamnosus (CNCM 1-5313) or Lactobacillus rhamnosus CNCM 1-5313, corresponding to the strain of Lactobacillus rhamnosus deposited according to the Budapest Treaty with the National Collection of Cultures of Microorganisms (CNCM) at the 'Institut Pasteur (28 rue du Dondel Roux, F-75024 Paris cedex 15) on April 1, 2018 on behalf of BIOVITIS, Le Bourg, 15400 SAINT-ETIENNE-DE- CHOMEIL, under the designation under the number CNCM 1-5313.
  • Another subject of the invention relates to the non-therapeutic cosmetic use of an extract of Lactobacillus rhamnosus (CNCM 1-5313) to promote and / or improve the barrier function and / or reduce the signs of skin aging.
  • CNCM 1-5313 an extract of Lactobacillus rhamnosus
  • the present invention therefore relates in particular to a composition for topical application to keratin materials, in particular the skin and / or the lips, comprising, in a
  • RECTIFIED SHEET (RULE 91) ISA / EP physiologically acceptable medium, at least one extract of Lactobacillus rhamnosus (CNCM 1-5313), one of its fractions and / or one of its metabolites and at least one excipient chosen from solvents other than water, surfactants -actives, gelling agents, thickeners, fillers, coloring matters, film-forming polymers, perfumes and their mixtures.
  • keratin materials is meant according to the invention the skin, the mucous membranes (in particular the lips), and the integuments.
  • the composition is intended for topical application to the skin, the lips or the integuments, preferably the skin.
  • the “keratin materials” according to the invention are generally healthy keratin materials, that is to say that do not present disorders or disorders which would relate to a pathological state (“unhealthy” subjects, suffering from a pathology ). We will talk about healthy skin and / or lips or skin and / or lips in the rest of the description.
  • physiologically acceptable medium is meant a medium compatible with keratin materials, in particular the skin and / or the lips.
  • excipient means a substance devoid of cosmetic effect as such, but useful for incorporating Lactobacillus rhamnosus extract into the composition of the invention or for shaping this one.
  • probiotics means living microorganisms which, when administered in an adequate quantity, have beneficial effects on the health of the host.
  • prebiotics is understood to mean digestion-resistant food ingredients which induce specific changes in the composition and / or activity of the intestinal microbiota, thereby producing a beneficial effect on the health of the host.
  • serbiotics is meant products that contain both probiotics and prebiotics.
  • the extract of Lactobacillus rhamnosus (probiotic microorganism) according to the invention can be included in a composition according to the invention in a living, semi-active or inactivated, dead form. It can be included as fractions of cellular components or as metabolites.
  • the microorganism, metabolite (s) or fraction (s) little (Fri) t also be introduced in the form of a lyophilized powder, a culture supernatant and / or if necessary in a concentrated form.
  • the microorganism Lactobacillus rhamnosus is used in an inactivated or even dead form, and more particularly in the form of a lysate.
  • the extract of Lactobacillus rhamnosus according to the invention is a lysate of Lactobacillus rhamnosus (CNCM 1-5313) (not living), of one of its fractions and / or of one of its metabolites.
  • lysat is meant in particular a material obtained by cell lysis of the cells of the microorganism considered, thus causing the release of the intracellular biological constituents naturally contained in said cells.
  • the lysate used is formed in whole or in part of the intracellular biological constituents and of the constituents of the cell walls and membranes.
  • the present invention therefore relates to the use of a probiotic lysate and / or one of its fractions and / or one of its metabolites.
  • fraction more particularly designates a fragment of said microorganism endowed with the same beneficial effects on the skin, at least in part, by analogy to said whole microorganism.
  • the lysate according to the invention contains the cellular cytoplasmic fraction containing the enzymes (ex: dehydrogenases, phosphatases ...) and / or the constituents of the cell walls (ex: peptidoglycans %) and / or the constituents of the membranes cells (ex: glycerophospholipids ).
  • Cell lysis can be carried out by various technologies well known to those skilled in the art, such as for example osmotic shock, thermal shock, by ultrasound, or even under mechanical stress (eg centrifugation).
  • the lysate is obtained by centrifugation and osmotic shock (ex: addition of soda).
  • the microorganism is cultured anaerobically in a suitable culture medium.
  • the culture medium can be inactivated by pasteurization, for example at a temperature of 60 to 65 ° C. for 30 min.
  • the microorganisms are then collected by a conventional separation technique, for example membrane filtration, centrifugation and resuspended in a sterile physiological NaCl solution.
  • the lysate can be obtained by ultrasonic disintegration of such a medium in order to release the cytoplasmic fractions, the cell wall fragments and the products derived from metabolism. Then all the components in their natural distribution are then stabilized in a weakly acidic aqueous solution.
  • the lysate thus obtained generally has a concentration of the order of 0.1 to 10%, in particular from 0.5 to 5% and in particular from 1 to 2% by weight in dry matter (s) (active ( s)) in relation to its total weight.
  • the lysate can be used in different forms, in the form of a solution or in the form of a powder.
  • the lysate is in the form of a solution, preferably an aqueous solution, comprising from 0.1 to 10%, in particular from 0.5 to 5% and in particular from 1 to 2% in weight of dry matter (s) (active) relative to its total weight.
  • the probiotic microorganism according to the invention belongs to the species Lactobacillus rhamnosus (ATCC 7469, CCM 1825, NCDO 243, NCIB 6375 or WDCM 00101 depending on the collections in which it has been deposited), preferably the strain Lactobacillus rhamnosus CNCM 1- 5313, filed according to the Budapest Treaty with the National Collection of Cultures of Microorganisms (CNCM) at the Institut Pasteur (28 rue du Do Budapest Roux, F-75024 Paris cedex 15) on April 1, 2018 in the name of BIOVITIS , Le Bourg, 15400 SAINT-ETIENNE-DE-CHOMEIL, under the designation CNCM 1-5313, and / or one of its fractions and / or one of its metabolites.
  • CNCM National Collection of Cultures of Microorganisms
  • L. rhamnosus lysate is called Probiophyte LB by the supplier Greentech, and defined in INCI name under the name WATER and LACTOBACILLUS FERMENT
  • phenoxyethanol can be replaced by another preservative.
  • This lysate comprises a content of Lactobacillus rhamnosus ranging from 0.1 to 10%, in particular from 0.5 to 5% by weight and in particular from 1 to 2% by weight of dry matter (active material) relative to the total weight of said lysate.
  • the L. rhamnosus lysate of the invention can be formulated in a composition at a rate of at least 0.0001% (expressed in dry weight or weight of active material), in particular at a rate of 0.0001 to 10% and more particularly at the rate of 0.0001 to 5% by weight, in particular from 0.0001 to 2% by weight, and in particular from 0.0001% to 1%, or even from 0.0001 to 0.05% by weight relative to the total weight of the composition.
  • the extract of Lactobacillus rhamnosus (CNCM 1-5313) is present in a content ranging from 0.0001 to 0.05% by weight of active material relative to the total weight of said composition.
  • the L rhamnosus lysate according to the invention can be used alone or in combination with other probiotic microorganisms, prebiotic ingredients, symbiotic ingredients or their mixture.
  • the composition also comprises at least cosmetic active agent other than vitamins or extracts containing it, in particular chosen from oils rich in essential fatty acids or not, prebiotic extracts (which facilitate the growth of certain bacterial species beneficial to the cutaneous microflora to the detriment of undesirable species), other extracts from other strains of probiotic microorganisms or even symbiotic ingredients (probiotic extract + prebiotic extracts), seboregulators (to promote the biodiversity of the flora) and firming agents (to limit the enlargement of pores), soothing agents, protective active agents in particular stimulators of antioxidant and detoxifying defenses of the skin (otherwise called antioxidant agents or simply antioxidants), depigmenting agents, exfoliating agents, antiaging active ingredients, moisturizing ingredients, immunomodulatory active ingredients , and mixtures thereof.
  • prebiotic extracts which facilitate the growth of certain bacterial species beneficial to the cutaneous microflora to the detriment of undesirable species
  • other extracts from other strains of probiotic microorganisms or even symbiotic ingredients probiotic extract +
  • composition means a cosmetic or dermatological composition.
  • it will be a cosmetic composition. According to another particular mode, it will be a dermatological composition.
  • composition according to the invention can, for example, be used as a care and / or makeup product for the face and / or the body.
  • compositions according to the invention are intended more particularly for topical application to keratin materials, in particular to the skin.
  • compositions of the invention comprise a physiologically acceptable medium, that is to say compatible with the skin and the integuments.
  • the compositions may have all cosmetic forms, and in particular may be in the form of an oil-in-water or water-in-oil emulsion or multiple emulsion, a microemulsion, a solution, a suspension, '' a lotion, gel, cream, milk, serum, mist (sprayed fluid solution), stick or powder and suitable for application on the skin, the lips and / or the integuments.
  • the composition of the invention is intended for topical application to the skin and / or the lips and is in the form of a cosmetic composition for caring for and / or making up the skin and / or lips.
  • the cosmetic composition of the invention is advantageously in the form of an emulsion, a serum, or a mist.
  • the composition generally comprises at least one aqueous phase and at least one oily phase.
  • the aqueous phase generally represents from 1 to 99% by weight, relative to the total weight of said composition.
  • An oily phase according to the invention can comprise hydrocarbon oils, silicone oils, fluorinated or not, and mixtures thereof. These oils can be volatile or non-volatile, vegetable, mineral or synthetic.
  • hydrocarbon oils in particular of vegetable origin.
  • volatile hydrocarbon oils mention may be made in particular of branched C8-C16 alkanes, branched C8-C16 esters and mixtures thereof.
  • non-volatile hydrocarbon oils mention may in particular be made of hydrocarbon oils, hydrocarbon oils of vegetable origin, synthetic ethers of C10-C40, synthetic esters of C10-C40, fatty alcohols of C12-C26, acids higher C12-C22 fats, and mixtures thereof.
  • the oils may be present in the composition of the invention in a content ranging from 1 to 95% by weight relative to the total weight of the composition.
  • composition of the invention can also comprise any additive usually used in cosmetics such as UV filters, antioxidants, surfactants, gelling agents, fillers, coloring matters (eg pigments), preservatives, film-forming polymers, perfumes, active cosmetic agents, such as, for example, emollients, moisturizers, vitamins, anti-aging agents, lightening agents, and mixtures thereof.
  • additives such as UV filters, antioxidants, surfactants, gelling agents, fillers, coloring matters (eg pigments), preservatives, film-forming polymers, perfumes, active cosmetic agents, such as, for example, emollients, moisturizers, vitamins, anti-aging agents, lightening agents, and mixtures thereof.
  • the invention also relates to a non-therapeutic cosmetic process intended to prevent and / or reduce the signs of skin aging and / or to promote and / or improve the barrier function comprising the application to keratin materials of at least one extract of Lactobacillus rhamnosus (CNCM 1-5313) in particular a lysate of Lactobacillus rhamnosus (CNCM 1-5313), one of its fractions and / or one of its metabolites, or of a composition according to the invention, such as previously defined.
  • CNCM 1-5313 extract of Lactobacillus rhamnosus
  • CNCM 1-5313 a lysate of Lactobacillus rhamnosus
  • the keratin materials according to the invention are healthy keratin materials.
  • the extract of Lactobacillus rhamnosus is generally present in a content ranging from 0.0001 to 10% by weight of dry matter, in particular from 0.0001 to 5%, preferably from 0.0001 to 2%, and in particular from 0 .0001% to 1%, or even from 0.0001 to 0.05% by weight of dry matter relative to the total weight of the composition.
  • the composition used in the cosmetic process can be a care and / or makeup composition, in particular a care composition for the skin of the face and / or the body.
  • the method is intended to prevent and / or reduce the loss of firmness and density of the skin, prevent and / or reduce the appearance of wrinkles and / or fine lines and / or pigment spots, improve the radiance and / or the homogeneity of the skin, promoting and / or improving the hydration of the skin, detoxifying the skin, promoting and / or stimulating its antioxidant defenses and / or improving the resistance to hypoxia of the skin, and / or control the microflora of the skin, and / or stimulate the immunity of the skin and the formation of the skin barrier.
  • promoting and / or stimulating the antioxidant defenses of keratinous materials is meant in particular promoting oxygenation of the skin and thus reducing the effects of cutaneous hypoxia, promoting cellular respiration and the production of energy at the cellular level.
  • promoting and / or stimulating the immunity of the skin it is intended to maintain the balance of the microflora of the skin and to promote cutaneous homestasis for healthier skin that is better protected against external agents.
  • the process is intended to prevent and / or reduce the loss of firmness and density of the skin, prevent and / or reduce the appearance of wrinkles and / or fine lines and / or pigment spots, improve the radiance and / or homogeneity of the skin, promoting and / or improving the hydration of the skin, and / or improving the resistance to hypoxia of the skin, and / or controlling the microflora of the skin.
  • the composition of the invention is applied to aged, dull, tired skin, or affected by an unfavorable or unbalanced nutritional context, emotional stress or lack of sleep.
  • the present invention also relates to the non-therapeutic cosmetic use of an extract of Lactobacillus rhamnosus (CNCM 1-5313) for promoting and / or improving the barrier function and / or reducing the signs of skin aging, in particular preventing and / or reduce the loss of firmness and density of the skin, prevent and / or reduce the appearance of wrinkles and / or fine lines and / or pigment spots, improve the radiance and / or uniformity of the skin, promote and / or improve the hydration of the skin, detoxify the skin, stimulate its antioxidant defenses and / or improve the resistance to hypoxia of the skin, and / or control the microflora of the skin, and / or stimulate the immunity of the skin and the formation of the skin barrier.
  • an extract of Lactobacillus rhamnosus CNCM 1-5313
  • the extract according to the invention is used to promote and / or improve the barrier function and / or reduce the signs of skin aging, in particular preventing and / or reducing the loss of firmness and density of the skin , prevent and / or reduce the appearance of wrinkles and / or fine lines and / or pigmentation spots, improve the radiance and / or homogeneity of the skin, promote and / or improve skin hydration, detoxify the skin and / or improve resistance to hypoxia of the skin, and / or control the microflora of the skin.
  • the invention also relates to an extract of Lactobacillus rhamnosus CNCM 1-5313 according to the invention for promoting and / or stimulating the immunity of the skin.
  • the percentages are weight percentages expressed by weight relative to the total weight of the composition.
  • the Applicant has evaluated the effect of a lysate of L. rhamnosus probiotic bacterial strain: ATCC 7469, CCM 1825, NCDO 243, NCIB 6375 or WDCM 00101 according to the collections in which it has been deposited.
  • the probiotic bacterial strain used was deposited according to the Budapest Treaty with the National Collection of Cultures of Microorganisms (CNCM) at the Institut Pasteur (28 rue du Dondel Roux, F-75024 Paris cedex 15) on 1 1 April 2108 in the name of BIOVITIS, Le Bourg, 15400 SAINT -ETIENNE-DE-CHOMEIL, under the designation CNCM I- 5313.
  • L rhamnosus lysate is called Probiophyte LB by the supplier Greentech, and defined in INCI name under the name WATER and LACTOBACILLUS FERMENT LYSATE and PHENOXYETHANOL and SODIUM HYDROXIDE and CITRIC ACID, phenoxyethanol being able to be replaced by another preservative.
  • This lysate comprises a content of Lactobacillus rhamnosus ranging from 0.1 to 10%, in particular from 0.5 to 5% by weight and in particular from 1 to 2%, or even from 1.75% by weight of dry matter (active material ) relative to the total weight of said lysate.
  • Such a lysate (but without phenoxyethanol preservative) is tested at a content of 0.05, 0.1 and 0.2% in tests on cell cultures of skin cells and used in
  • LB Probiophyte Lactobacillus rhamnosus lysate in the following examples.
  • the test implemented here made it possible to compare two extracts of probiotic bacterial strains in order to select the extract most effective in stimulating skin cells.
  • Normal human keratinocytes are cultured and then treated with the probiotic extract of L rhamnosus described above or the extract of Lactococcus lactis.
  • Culture medium Keratinocyte-SFM supplemented with EGF 0.25 ng / ml, pituitary extract 25 pg / ml and gentamycin 25 pg / ml at 37 ° C and with 5% C02
  • Test medium Keratinocyte-SFM supplemented with gentamycin 25 pg / ml
  • Probiophyte LB without preservative extract of Lactobacillus rhamnosus CNCM I- 5313 according to the invention
  • Lactococcus lactis extract Lactococcus lactis extract supplied by Greentech (product ref 001 1 19, batch no LYCC1204E1 -BY of March 2012) and comprising a lactate of Lactococcus lactis, citric acid and sodium hydroxide.
  • the dry (active) content of L lactis is 5 to 6% by weight of raw material.
  • RNA of each sample was extracted using TriPure Isolation Reagent® according to the protocol recommended by the supplier. The quantity and quality of RNA were evaluated by capillary electrophoresis (Bioanalyzer 2100, Agilent).
  • cDNAs Complementary DNAs
  • dT oligo
  • dT oligo
  • dT Transcriptor First strand cDNA synthesis
  • the cDNA obtained was quantified by spectrophotometry (Nanovue; GE Healthcare), then the cDNA quantities were adjusted to 5 ng / mI.
  • PCR reactions polymerase chain reactions
  • quantitative PCR Light Cycler; Roche Molecular Systems Inc.
  • reaction mixture (10 ⁇ l final) for each sample contained:
  • the raw data was transferred and processed under Microsoft Excel ® software.
  • the incorporation of fluorescence into the amplified DNA is measured continuously during the PCR cycles. These measurements make it possible to obtain fluorescence intensity curves as a function of the PCR cycles and thus to evaluate a relative expression value (ER) for each marker.
  • the number of cycles is determined from the "exit" points of the fluorescence curves. For the same marker analyzed, the later a sample leaves (high number of cycles), the lower the initial number of copies of the mRNA.
  • ER relative expression
  • AU arbitrary units
  • Results showing the stimulating effect of the LB probiophyte according to the invention on several keratinocyte genes compared to the extract of Lactococcus lactis.
  • TGM1 transglutaminase gene
  • This second experiment makes it possible to deepen the biological effects of the LB Probiophyte, using the TLDA (TaqMan Low Density Array) methodology on a larger gene repertoire and on the three main cell types of the skin: keratinocytes, melanocytes, and fibroblasts.
  • TLDA TraqMan Low Density Array
  • Probiophyte LB without preservative extract of Lactobacillus rhamnosus CNCM 1-5313
  • N 3 cultures by experimental conditions
  • RNAs are extracted according to defined protocols.
  • RNA solutions obtained are assayed, and their quality verified, using a microplate reader, spectrostarNANO (BMG Labtech) coupled to MicrolabSTAR.
  • This device is connected to the computer controlling the robotic platform and has specific software for analyzing the results (MARS software).
  • the technique requires a 384-well microplate (LoBase), a positive control (RNA 250, AM7155, Thermofisher) to validate the pipetting performed by the robot as well as the values generated by the spectrostarNANO reader.
  • RT reverse transcription kit
  • Thermo Fisher The reverse transcription kit used is the High Capacity Reverse Transcription Kit (Thermo Fisher). It was used according to the protocol provided. 500 ng of total RNA are diluted in water for a final volume of 25 pL. They are then incubated for 10 minutes at 25 ° C and then 2 hours at 37 ° C in the presence of 25 ⁇ L of reaction mixture of High Capacity Reverse Transcription Kit 2X previously prepared as indicated below. The different incubations are done within TRobot (Biométra).
  • Quantitative real-time PCR can be used if its efficiency is between 90% and 1 10%. For each sample, the number of cycles at which the signal appears is determined by the SDS 2.3 software. For the same test, the expression levels of the transcripts of interest obtained are normalized with respect to the value obtained for the household gene Beta-2-microglobulin. This gene, the expression of which is constitutive and invariant, makes it possible to overcome any variations induced during the experiment (assay of total RNAs, pipetting, reverse transcription step, PCR in the apparatus).
  • ACt treated Ct target gene treated - Ct household gene treated
  • the extract therefore has a very important activity in the cells of the dermis.
  • antioxidant defenses of cells GPX1
  • ABCC1 MRP1
  • This last gene codes for a protein which will allow compounds that may be toxic to it to be expelled from the cell;
  • hypoxia conditions HIF1a
  • markers of hypoxia such as anhydrase carbonic 9 in aged skin
  • MT NADH dehydrogenase or ubiquinone
  • TLR1 innate immunity
  • MMP9 collagens
  • PARG factor stimulating melanogenesis in these cells
  • formulations are prepared according to conventional methods of formulation in the cosmetic field.
  • the composition makes it possible to improve the firmness of the skin and reduce wrinkles.
  • the composition makes it possible to give the skin a healthy glow, a radiant, even complexion.
  • vitamin CG Ascorbyl glucoside 0.5%
  • the composition makes it possible to improve the uniformity of the complexion.
  • the composition makes it possible to impart a healthy glow effect, a radiant, even complexion.
  • vitamin CG Ascorbyl glucoside 0.5%
  • the composition improves the firmness of the skin and gives it a healthy glow effect.
  • the composition makes it possible to promote and / or improve the nutrition of the skin and give it a healthy glow effect, a radiant and homogeneous complexion.

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Abstract

La présente invention concerne une composition pour application topique sur les matières kératiniques, en particulier la peau et/ou les lèvres, comprenant, dans un milieu physiologiquement acceptable, au moins un extrait de Lactobacillus rhamnosus (CNCM I-5313), d'une de ses fractions et/ou d'un de ses métabolites et au moins un excipient choisi parmi des solvants autres que l'eau, des filtres UV, des tensio-actifs, des gélifiants, des épaississants, des charges, des matières colorantes, des polymères filmogènes, des parfums et leurs mélanges; et ses utilisations, notamment pour favoriser et/ou améliorer la fonction barrière cutanée.

Description

Composition comprenant un extrait de Lactobacillus rhamnosus
DOMAINE DE L'INVENTION
La présente invention concerne une composition comprenant un nouvel extrait de Lactobacillus rhamnosus, en particulier un lysat de Lactobacillus rhamnosus (CNCM 1-5313), et ses effets bénéfiques sur les matières kératiniques, en particulier la peau.
ETAT DE LA TECHNIQUE
La peau est la première barrière du corps humain. Elle protège les organes des différences de température, d’humidité, et des agressions de l’environnement extérieur, comme les rayons UV, le stress, la pollution, les microorganismes pathogènes... Cependant, des stimulations chimiques et physiques excessives détériorent les fonctions normales de la peau et induisent ou accélèrent son vieillissement, entraînant l’apparition de rides et une perte de sa fermeté, sa souplesse et son élasticité.
La recherche de nouvelles molécules ou ingrédients actifs utilisables en cosmétique est une nécessité pour pouvoir développer des produits efficaces pour donner un aspect plus jeune à la peau, un teint homogène, sans irrégularité colonelle au niveau de la pigmentation ou de la microcirculation, un teint éclatant.
La Demanderesse a justement mis en évidence qu’un extrait de Lactobacillus rhamnosus, en particulier un lysat de Lactobacillus rhamnosus (CNCM 1-5313), avait des effets bénéfiques sur des cultures de cellules de peau in vitro : elle a démontré que ce lysat avait un effet stimulant sur l’expression de plusieurs gènes impliqués notamment dans :
- la détoxification (MRP1=ABCC1 , LONP1 , GPX1),
- le fonctionnement de la chaîne respiratoire de la mitochondrie impliquée dans la production d’énergie cellulaire (MT= NADH deshydrogénase / ubiquinone),
- la sécrétion de l’acide hyaluronique (MRP5),
- le maintien de l’intégrité des structures cellulaires comme celle du noyau cellulaire (SYNE2, LM NA), et
- la formation de plusieurs collagènes et de l’élastine (COL1A1 , COL5A1 , COL13A1 ,
ELN).
Ainsi, l’extrait de Lactobacillus rhamnosus selon l’invention et en particulier un lysat de Lactobacillus rhamnosus (CNCM 1-5313), est avantageux en ce qu’il présente un effet détoxifiant et antioxydant, un effet antiâge visant une diminution des rides, de la perte de fermeté et de densité (collagènes et élastine et points d’ancrage entre les cellules et ces protéines de structure), un effet de renforcement de la peau (structures cellulaires comme le noyau des cellules), un effet d’adaptation de la peau aux stress hypoxiques, un effet dépigmentant sur les taches cutanées (inhibition de la mélanogénèse) et/ou un effet de normalisation du microbiote cutané via le renforcement de l’immunité innée et de la barrière cutanée.
EXPOSE DE L'INVENTION
Un premier objet de l’invention concerne une composition pour application topique sur les matières kératiniques, en particulier la peau et/ou les lèvres, comprenant, dans un milieu physiologiquement acceptable, au moins un extrait de Lactobacillus rhamnosus (CNCM I- 5313), d’une de ses fractions et/ou d’un de ses métabolites et au moins un excipient choisi parmi des solvants autres que l’eau, des filtres UV, des tensio-actifs, des gélifiants, des épaississants, des charges, des matières colorantes, des polymères filmogènes, des parfums et leurs mélanges, en particulier des solvants autres que l’eau, des tensio-actifs, des gélifiants, des épaississants, des charges, des matières colorantes, des polymères filmogènes, des parfums et leurs mélanges.
L’invention porte également sur un procédé cosmétique non thérapeutique comprenant l’application sur les matières kératiniques d’au moins un extrait de Lactobacillus rhamnosus (CNCM 1-5313) selon l’invention ou d’une composition en contenant, destiné à prévenir et/ou diminuer les signes du vieillissement cutané et/ou à favoriser et/ou améliorer la fonction barrière. On parlera indifféremment de Lactobacillus rhamnosus (CNCM 1-5313) ou de Lactobacillus rhamnosus CNCM 1-5313, correspondant à la souche de Lactobacillus rhamnosus déposée suivant le traité de Budapest auprès de la Collection nationale de cultures de micro-organismes (CNCM) à l'Institut Pasteur (28 rue du Docteur Roux, F-75024 Paris cedex 15) le 1 1 Avril 2018 au nom de BIOVITIS, Le Bourg, 15400 SAINT-ETIENNE-DE- CHOMEIL, sous la désignation sous le numéro CNCM 1-5313.
Un autre objet de l’invention concerne l’utilisation cosmétique non thérapeutique d’un extrait de Lactobacillus rhamnosus (CNCM 1-5313) pour favoriser et/ou améliorer la fonction barrière et/ou diminuer les signes du vieillissement cutané.
DESCRIPTION DETAILLEE DE L'INVENTION
La présente invention porte donc notamment sur une composition pour application topique sur les matières kératiniques, en particulier la peau et/ou les lèvres, comprenant, dans un
FEUILLE RECTIFIÉE (RÈGLE 91) ISA/EP milieu physiologiquement acceptable, au moins un extrait de Lactobacillus rhamnosus (CNCM 1-5313), d’une de ses fractions et/ou d’un de ses métabolites et au moins un excipient choisi parmi des solvants autres que l’eau, des tensio-actifs, des gélifiants, des épaississants, des charges, des matières colorantes, des polymères filmogènes, des parfums et leurs mélanges.
Par ‘matières kératiniques’, on entend selon l’invention la peau, les muqueuses (en particulier les lèvres), et les phanères. Selon un mode particulier, la composition est destinée à une application topique sur la peau, les lèvres ou les phanères, de préférence la peau.
Les « matières kératiniques » selon l’invention sont généralement des matières kératiniques saines, c’est-à-dire ne présentant pas de troubles ou de désordres qui relèveraient d’un état pathologique (sujets ‘non sains’, atteints d’une pathologie). On parlera indifféremment de peaux et/ou lèvres saines ou de peaux et/ou lèvres dans le reste de la description.
Par‘milieu physiologiquement acceptable’, on entend un milieu compatible avec les matières kératiniques, en particulier la peau et/ou les lèvres.
Par‘excipient’ selon l’invention, on entend une substance dépourvue d’effet cosmétique en tant que telle, mais utile à l’incorporation de de l’extrait de Lactobacillus rhamnosus dans la composition de l’invention ou à la mise en forme celle-ci.
Extrait de Lactobacillus rhamnosus
Selon les définitions utilisées par les associations scientifiques internationales pour les probiotiques et les prébiotiques, on entend par‘probiotiques’, des microorganismes vivants qui, lorsqu’ils sont administrés en quantité adéquate, ont des effets bénéfiques sur la santé de l’hôte. On entend par‘prébiotiques’, des ingrédients alimentaires résistant à la digestion qui induisent des changements spécifiques dans la composition et/ou l’activité du microbiote intestinal produisant ainsi un effet bénéfique sur la santé de l’hôte. On entend par ‘symbiotiques’, des produits qui contiennent à la fois des probiotiques et des prébiotiques.
L’extrait de Lactobacillus rhamnosus (microorganisme probiotique) selon l’invention peut être inclus dans une composition selon l'invention sous une forme vivante, semi-active ou inactivée, morte. Il peut être inclus sous forme de fractions de composants cellulaires ou sous la forme de métabolites. Le microorganisme, métabolite(s) ou fraction(s) peu(ven)t également être introduit(s) sous la forme d'une poudre lyophilisée, d'un surnageant de culture et/ou le cas échéant sous une forme concentrée.
Selon un mode de réalisation particulier, le microorganisme Lactobacillus rhamnosus est mis en oeuvre sous une forme inactivée voire morte, et plus particulièrement sous forme d'un lysat.
Ainsi, selon un mode particulier et préféré, l’extrait de Lactobacillus rhamnosus selon l’invention est un lysat de Lactobacillus rhamnosus (CNCM 1-5313) (non vivant), d’une de ses fractions et/ou d’un de ses métabolites.
On parlera indifféremment dans la description ‘d’extrait probiotique’ ou ‘d’extrait de Lactobacillus rhamnosus’ ou de‘lysat probiotique’ ou de‘lysat de Lactobacillus rhamnosus’. Par‘lysat’, on entend notamment un matériau obtenu par lyse cellulaire des cellules du microorganisme considéré provoquant ainsi la libération des constituants biologiques intracellulaires naturellement contenus dans lesdites cellules. Le lysat mis en oeuvre est formé en tout ou partie des constituants biologiques intracellulaires et des constituants des parois et membranes cellulaires. La présente invention concerne donc la mise en oeuvre d'un lysat probiotique et/ou une de ses fractions et/ou un de ses métabolites.
Au sens de l'invention, le terme‘fraction’ désigne plus particulièrement un fragment dudit microorganisme doté des mêmes effets bénéfiques sur la peau, au moins en partie, par analogie audit microorganisme entier.
En particulier, le lysat selon l’invention contient la fraction cytoplasmique cellulaire renfermant les enzymes (ex : déshydrogénases, phosphatases...) et/ou les constituants des parois cellulaires (ex : peptidoglycanes...) et/ou les constituants des membranes cellulaires (ex : glycérophospholipides...).
La lyse cellulaire peut être réalisée par différentes technologies bien connues de l’homme du métier, telles que par exemple choc osmotique, choc thermique, par ultrasons, ou encore sous contrainte mécanique (ex : centrifugation).
Selon un mode de réalisation préféré, le lysat est obtenu par centrifugation et choc osmotique (ex : ajout de soude).
Selon un mode particulier, le microorganisme est cultivé anaérobiquement dans un milieu de culture adéquat. Lorsque la phase stationnaire du développement est atteinte, le milieu de culture peut être inactivé par pasteurisation, par exemple à une température de 60 à 65 °C pendant 30 mn. Les microorganismes sont alors recueillis par une technique de séparation conventionnelle par exemple filtration membranaire, centrifugation et remis en suspension dans une solution NaCI physiologique stérile. Le lysat peut être obtenu par désintégration aux ultrasons d'un tel milieu afin d'en libérer les fractions cytoplasmiques, les fragments de paroi cellulaire et les produits issus du métabolisme. Puis tous les composants dans leur distribution naturelle sont ensuite stabilisés dans une solution aqueuse faiblement acide.
Le lysat ainsi obtenu possède généralement une concentration de l'ordre de 0,1 à 10 %, en particulier de 0,5 à 5 % et notamment de 1 à 2 % en poids en matière(s) sèche(s) (active(s)) par rapport à son poids total.
Le lysat peut être mis en œuvre sous différentes formes, sous la forme d'une solution ou sous la forme d’une poudre.
Selon un mode particulier, le lysat est sous la forme d’une solution, de préférence d’une solution aqueuse, comprenant de 0,1 à 10 %, en particulier de 0,5 à 5 % et notamment de 1 à 2 % en poids en matière(s) sèche(s) (active(s)) par rapport à son poids total.
Le microorganisme probiotique selon l’invention appartient à l’espèce Lactobacillus rhamnosus (ATCC 7469, CCM 1825, NCDO 243, NCIB 6375 ou encore WDCM 00101 suivant les collections dans lesquelles elle a été déposée), de préférence la souche Lactobacillus rhamnosus CNCM 1-5313, déposée suivant le traité de Budapest auprès de la Collection nationale de cultures de micro-organismes (CNCM) à l'Institut Pasteur (28 rue du Docteur Roux, F-75024 Paris cedex 15) le 1 1 Avril 2018 au nom de BIOVITIS, Le Bourg, 15400 SAINT- ETIENNE-DE-CHOMEIL, sous la désignation CNCM 1-5313, et/ou une de ses fractions et/ou un de ses métabolites.
Un lysat de cette souche L. rhamnosus est obtenu selon le protocole suivant du fournisseur Greentech :
1 . Culture de la souche L. rhamnosus dans un milieu de culture adéquat ;
2. Récupération de la biomasse par centrifugation ;
3. Lyse cellulaire (ajout de soude) ;
4. Ajustement du pH (ajout d’acide citrique) et de la matière sèche (ajout d’eau stérile) pour obtenir une teneur en matière active allant de 0,1 à 10% en poids de matière sèche (matière active) par rapport au poids total dudit lysat ;
5. Ajout de conservateur (phénoxyéthanol).
Un tel lysat de L. rhamnosus est dénommé Probiophyte LB par le fournisseur Greentech, et définie en nom INCI sous la dénomination WATER and LACTOBACILLUS FERMENT
FEUILLE RECTIFIÉE (RÈGLE 91) ISA/EP LYSATE and PHENOXYETHANOL and SODIUM HYDROXIDE and CITRIC ACID, le phénoxyéthanol pouvant être remplacé par un autre conservateur.
Ce lysat comprend une teneur en Lactobacillus rhamnosus allant de 0 , 1 à 10%, en particulier de 0,5 à 5% en poids et notamment de 1 à 2% en poids de matière sèche (matière active) par rapport au poids total dudit lysat.
Le lysat de L. rhamnosus de l'invention peut être formulé dans une composition à raison d'au moins 0,0001 % (exprimé en poids sec ou poids de matière active), en particulier à raison de 0,0001 à 10 % et plus particulièrement à raison de 0,0001 à 5 % en poids en particulier de 0,0001 à 2 % en poids, et notamment de 0,0001 % à 1 %, voire de 0,0001 à 0,05% en poids par rapport au poids total de la composition.
Selon un mode particulier, l’extrait de Lactobacillus rhamnosus (CNCM 1-5313) est présent en une teneur allant de 0,0001 à 0,05% en poids de matière active par rapport au poids total de ladite composition.
Le lysat de L rhamnosus selon l’invention pourra être utilisé seul ou associé à d’autres microorganismes probiotiques, des ingrédients prébiotiques, des ingrédients symbiotiques ou leur mélange.
Selon un mode particulier, la composition comprend en outre au moins actif cosmétique autre que des vitamines ou des extraits en contenant, en particulier choisi parmi des huiles riches en acides gras essentiels ou non, des extraits prébiotiques (qui facilitent la croissance de certaines espèces bactériennes bénéfiques de la microflore cutanée au détriment d’espèces indésirables), d’autres extraits d’autres souches de microorganismes probiotiques ou encore des ingrédients symbiotiques (extrait de probiotiques + extraits prébiotiques), des séborégulateurs (pour favoriser la biodiversité de la flore) et des agents raffermissants (pour limiter l’élargissement des pores), des agents apaisants, des actifs protecteurs en particulier des stimulateurs de défenses antioxydantes et détoxifiantes de la peau (autrement nommés agents antioxydants ou simplement antioxydants), des agents dépigmentants, des agents exfoliants, des actifs antiâge, des ingrédients hydratants, des actifs immunomodulateurs, et leurs mélanges.
Par ‘composition’ selon l’invention, on entend une composition cosmétique ou dermatologique.
Selon un mode particulier, il s’agira d’une composition cosmétique. Selon un autre mode particulier, il s’agira d’une composition dermatologique.
La composition selon l'invention peut, par exemple, être utilisée comme produit de soin et/ou de maquillage pour le visage et/ou le corps.
Les compositions selon l'invention sont destinées plus particulièrement à une application topique sur les matières kératiniques, en particulier sur la peau.
Les compositions de l’invention comprennent un milieu physiologiquement acceptable, c'est- à-dire compatible avec la peau et les phanères. Les compositions peuvent avoir toutes les formes cosmétiques, et notamment être sous la forme d’une émulsion huile-dans-eau ou eau-dans-huile ou émulsion multiple, d’une microémulsion, d’une solution, d’une suspension, d’une lotion, d’un gel, d’une crème, d’un lait, d’un sérum, d’une brume (solution fluide pulvérisée), d’un stick ou encore d’une poudre et adaptées à une application sur la peau, les lèvres et/ou les phanères.
Selon un mode particulier, la composition de l’invention est destinée à une application topique sur la peau et/ou les lèvres et se présente sous la forme d’une composition cosmétique de soin et/ou de maquillage de la peau et/ou des lèvres.
La composition cosmétique de l’invention est avantageusement sous la forme d’une émulsion, d’un sérum, ou d’une brume.
La composition comprend généralement au moins une phase aqueuse et au moins une phase huileuse.
La phase aqueuse représente généralement de 1 à 99% en poids, par rapport au poids total de ladite composition.
Une phase huileuse selon l’invention peut comprendre des huiles hydrocarbonées, siliconées, fluorées ou non, et leurs mélanges. Ces huiles peuvent être volatiles ou non volatiles, végétale, minérale ou synthétique.
Avantageusement, on utilisera des huiles hydrocarbonées, notamment d’origine végétale. Comme huiles volatiles hydrocarbonées, on peut citer notamment les alcanes ramifiés en C8-C16, les esters ramifiés en C8-C16 et leurs mélanges.
Comme huiles non volatiles hydrocarbonées, on peut citer notamment les huiles hydrocarbonées, les huiles hydrocarbonées d’origine végétale, les éthers de synthèse en C10-C40, les esters de synthèse en C10-C40, les alcools gras en C12-C26, les acides gras supérieurs en C12-C22, et leurs mélanges. Les huiles pourront être présentes dans la composition de l’invention en une teneur allant de 1 à 95 % en poids par rapport au poids total de la composition.
La composition de l'invention peut également comprendre tout additif usuellement utilisé en cosmétique tels que des filtres UV, des antioxydants, des tensio-actifs, des gélifiants, des charges, matières colorantes (ex : pigments), des conservateurs, des polymères filmogènes, des parfums, des agents actifs cosmétiques, comme par exemple des émollients, des hydratants, des vitamines, des agents anti-âge, des agents éclaircissants, et leurs mélanges.
Procédé cosmétique et autres utilisations
L’invention porte également sur un procédé cosmétique non thérapeutique destiné à prévenir et/ou diminuer les signes du vieillissement cutané et/ou à favoriser et/ou améliorer la fonction barrière comprenant l’application sur les matières kératiniques d’au moins un extrait de Lactobacillus rhamnosus (CNCM 1-5313) en particulier un lysat de Lactobacillus rhamnosus (CNCM 1-5313), d’une de ses fractions et/ou d’un de ses métabolites, ou d’une composition selon l’invention, telle que définie précédemment.
De préférence, les matières kératiniques selon l’invention sont des matières kératiniques saines.
L’extrait de Lactobacillus rhamnosus est présent généralement en une teneur allant de 0,0001 à 10% en poids de matière sèche, en particulier de 0,0001 à 5%, de préférence de 0,0001 à 2%, et notamment de 0,0001 % à 1 %, voire de 0,0001 à 0,05% en poids de matière sèche par rapport au poids total de la composition.
La composition mise en oeuvre dans le procédé cosmétique peut être une composition de soin et/ou de maquillage, en particulier une composition de soin de la peau du visage et/ou du corps.
En particulier, le procédé est destiné à prévenir et/ou diminuer la perte de fermeté et de densité de la peau, prévenir et/ou diminuer l’apparition de rides et/ou ridules et/ou de taches pigmentaires, améliorer l’éclat et/ou l’homogénéité de la peau, favoriser et/ou améliorer l’hydratation de la peau, détoxifier la peau, favoriser et/ou stimuler ses défenses antioxydantes et/ou améliorer la résistance à l’hypoxie de la peau, et/ou contrôler la microflore de la peau, et/ou stimuler l’immunité de la peau et la formation de la barrière cutanée. Par « favoriser et/ou stimuler les défenses antioxydantes des matières kératiniques », on entend notamment favoriser l’oxygénation de la peau et ainsi diminuer les effets de l’hypoxie cutanée, favoriser la respiration cellulaire et la production d’énergie au niveau cellulaire.
Par « favoriser et/ou stimuler l’immunité de la peau », on entend maintenir l’équilibre de la microflore de la peau et favoriser l’homéstasie cutanée pour une peau plus saine et mieux protégée contre les agents externes.
Selon un mode particulier, le procédé est destiné à prévenir et/ou diminuer la perte de fermeté et de densité de la peau, prévenir et/ou diminuer l’apparition de rides et/ou ridules et/ou de taches pigmentaires, améliorer l’éclat et/ou l’homogénéité de la peau, favoriser et/ou améliorer l’hydratation de la peau, et/ou améliorer la résistance à l’hypoxie de la peau, et/ou contrôler la microflore de la peau.
Selon un mode particulier, la composition de l’invention est appliquée sur une peau âgée, atone, fatiguée, ou impactée par un contexte nutritionnel défavorable ou déséquilibré, de stress émotionnel ou de manque de sommeil.
La présente invention porte également sur l’utilisation cosmétique non thérapeutique d’un extrait de Lactobacillus rhamnosus (CNCM 1-5313) pour favoriser et/ou améliorer la fonction barrière et/ou diminuer les signes du vieillissement cutané, en particulier prévenir et/ou diminuer la perte de fermeté et de densité de la peau, prévenir et/ou diminuer l’apparition de rides et/ou ridules et/ou de tâches pigmentaires, améliorer l’éclat et/ou l’homogénéité de la peau, favoriser et/ou améliorer l’hydratation de la peau, détoxifier la peau, stimuler ses défenses antioxydantes et/ou améliorer la résistance à l’hypoxie de la peau, et/ou contrôler la microflore de la peau, et/ou stimuler l’immunité de la peau et la formation de la barrière cutanée.
Selon un mode particulier, l’extrait selon l’invention est utilisé pour favoriser et/ou améliorer la fonction barrière et/ou diminuer les signes du vieillissement cutané, en particulier prévenir et/ou diminuer la perte de fermeté et de densité de la peau, prévenir et/ou diminuer l’apparition de rides et/ou ridules et/ou de tâches pigmentaires, améliorer l’éclat et/ou l’homogénéité de la peau, favoriser et/ou améliorer l’hydratation de la peau, détoxifier la peau et/ou améliorer la résistance à l’hypoxie de la peau, et/ou contrôler la microflore de la peau. L’invention porte également sur un extrait de Lactobacillus rhamnosus CNCM 1-5313 selon l’invention pour favoriser et/ou stimuler l’immunité de la peau.
L’invention va désormais être illustrée dans les exemples non limitatifs suivants.
Sauf indication contraire, les pourcentages sont des pourcentages pondéraux exprimés en poids par rapport au poids total de la composition.
EXEMPLES
La Demanderesse a évalué l’effet d’un lysat de souche bactérienne probiotique de L. rhamnosus: ATCC 7469, CCM 1825, NCDO 243, NCIB 6375 ou encore WDCM 00101 suivant les collections dans lesquelles elle a été déposée.
En particulier, la souche bactérienne probiotique utilisée a été déposée suivant le traité de Budapest auprès de la Collection nationale de cultures de micro-organismes (CNCM) à l'Institut Pasteur (28 rue du Docteur Roux, F-75024 Paris cedex 15) le 1 1 Avril 2108 au nom de BIOVITIS, Le Bourg, 15400 SAINT -ETIENNE-DE-CHOMEIL, sous la désignation CNCM I- 5313.
Un lysat de cette souche L rhamnosus est obtenu selon le protocole suivant du fournisseur Greentech :
1 . Culture de la souche L. rhamnosus dans un milieu de culture adéquat ;
2. Récupération de la biomasse par centrifugation ;
3. Lyse cellulaire (ajout de soude) ;
4. Ajustement du pH (ajout d’acide citrique) et de la matière sèche (ajout d’eau stérile) pour obtenir une teneur en matière active allant de 0,01 à 10% en poids de matière sèche (matière active) par rapport au poids total dudit lysat ;
5. Ajout éventuel de conservateur (ex : phénoxyéthanol).
Un tel lysat de L rhamnosus est dénommé Probiophyte LB par le fournisseur Greentech, et définie en nom INCI sous la dénomination WATER and LACTOBACILLUS FERMENT LYSATE and PHENOXYETHANOL and SODIUM HYDROXIDE and CITRIC ACID, le phénoxyéthanol pouvant être remplacé par un autre conservateur.
Ce lysat comprend une teneur en Lactobacillus rhamnosus allant de 0 ,1 à 10%, en particulier de 0,5 à 5% en poids et notamment de 1 à 2%, voire de 1 ,75% en poids de matière sèche (matière active) par rapport au poids total dudit lysat.
Un tel lysat (mais sans conservateur phénoxyéthanol) est testé à une teneur de 0,05, 0,1 et 0,2 % dans les tests sur des cultures cellulaires de cellules de peau et utilisé dans les
FEUILLE RECTIFIÉE (RÈGLE 91) ISA/EP compositions cosmétiques pour application topique illustrées ci-après à des teneurs allant de
I à 2% en poids de matière première.
II est nommé indifféremment Probiophyte LB ou lysat de Lactobacillus rhamnosus dans les exemples suivants.
Exemple 1 : Effet de l’extrait de L rhamnosus sur des cultures de kératinocytes
Le test mis en œuvre ici a permis de comparer deux extraits de souches bactériennes probiotiques afin de sélectionner l’extrait le plus efficace à stimuler les cellules cutanées. On a utilisé une méthodologie RT-qPCR qui permet d’observer la stimulation ou l’inhibition ou encore l’absence de stimulation de gènes impliqués dans des processus cutanés clés du soin en particulier sur des kératinocytes, cellules majoritaires de l’épiderme.
Des kératinocytes humains normaux (KHN sont mis en culture puis traités avec l’extrait probiotique de L rhamnosus décrit ci-dessus ou l’extrait de Lactococcus lactis.
Après traitement des KHN, une étude par qPCR (réaction en chaîne par polymérase) sur les gènes étudiés est effectuée à partir des ADNc obtenus après transcription inverse des ARN totaux extraits.
Cellules utilisées et conditions de culture :
Cellules : kératinocytes épidermiques humains normaux au 3ème passage (NHEK)
Milieu de culture : Kératinocyte-SFM complémenté avec EGF 0,25 ng/ml, extrait pituitaire 25 pg/ml et gentamycine 25 pg/ml à 37°C et avec 5% de C02
Milieu d’essai : Kératinocyte-SFM complémenté avec gentamycine 25 pg/ml
Composés testés :
Probiophyte LB sans conservateur : extrait de Lactobacillus rhamnosus CNCM I- 5313 selon l’invention
Extrait de Lactococcus lactis : extrait de Lactococcus lactis fourni par Greentech (réf produit 001 1 19, n° lot LYCC1204E1 -BY de Mars 2012) et comprenant un lysat de Lactococcus lactis, de l’acide citrique et de l’hydroxyde de sodium. La teneur en matière sèche (active) de L lactis est de 5 à 6% en poids de matière première.
Doses testées : 0,05 ; 0,1 et 0,2 %
Temps de traitement : 24h
N=3 cultures par conditions expérimentales Analyses effectuées :
Mesure de l’expression génique par RT-qPCR sur les ARN messagers extraits des tapis cellulaires non traités (témoins) et traités avec les différentes concentrations d’extrait probiotique. Plusieurs gènes ont été évalués ; sont présentés dans les tableaux ci-dessous les gènes et résultats correspondants pour lesquels des résultats différentiels ont été observés entre l’extrait selon l’invention (Probiophyte LB : extrait de Lactobacillus rhamnosus) et l’extrait comparatif (extrait de Lactococcus lactis).
Technologie RT -gPCR (RT-PCR quantitative )
• Obtention des ARN totaux
Les ARN totaux de chaque échantillon ont été extraits à l’aide de TriPure Isolation Reagent® selon le protocole préconisé par le fournisseur. La quantité et la qualité des ARN ont été évaluées par électrophorèse capillaire (Bioanalyzer 2100, Agilent).
Les traces d’ADN potentiellement contaminant ont été éliminées par traitement avec le système DNA-free (Ambion).
• Synthèse des ADN complémentaires
Les ADN complémentaires (ADNc) ont été synthétisés par transcription inverse des ARN totaux en présence d’oligo(dT) et de l’enzyme « Transcriptor First strand cDNA synthesis » (Roche Diagnostics). L’ADNc obtenu a été quantifié par spectrophotométrie (Nanovue ; GE Healthcare), puis les quantités ADNc ont été ajustées à 5 ng/mI.
• PCR quantitative
Les réactions de PCR (polymerase chain reactions) ont été réalisées par PCR quantitative (Light Cycler ; Roche Molecular Systems Inc.) et selon les procédures recommandées par le fournisseur.
Le mélange réactionnel (10 pl final) pour chaque échantillon contenait :
2.5 mI d’ADNc à 5 ng/mI,
les amorces des différents marqueurs utilisés,
le mélange réactionnel contenant l’enzyme taq DNA polymérase, le marqueur SYBR Green
Traitem
Figure imgf000013_0001
Les données brutes ont été transférées et traitées sous le logiciel Microsoft Excel®. L’incorporation de fluorescence dans l’ADN amplifié est mesurée en continu au cours des cycles de PCR. Ces mesures permettent d’obtenir des courbes d’intensité de la fluorescence en fonction des cycles de PCR et d’évaluer ainsi une valeur d’expression relative (ER) pour chaque marqueur.
Le nombre de cycles est déterminé à partir des points de « sortie » des courbes de fluorescence. Pour un même marqueur analysé, plus un échantillon sort tard (nombre de cycles élevé), plus le nombre initial de copies de l’ARNm est faible.
La valeur d’ER (expression relative) est exprimée en unités arbitraires (UA) selon la formule suivante : l/2nombre de cycles) x 106
Tableau 1 :
Figure imgf000014_0001
Gènes étudiés Tableau 2 :
Figure imgf000015_0001
Résultats montrant l’effet stimulant du probiophyte LB selon l’invention sur plusieurs gènes kératinocytaires comparativement à l’extrait de Lactococcus lactis.
Le tableau ci-dessus montre l’effet stimulant du Probiophyte LB sur plusieurs processus cutanés importants :
la formation de la barrière cutanée avec la stimulation du gène de la transglutaminase (TGM1) qui permet la formation des enveloppes cornées des cornéocytes qui assurent la résistance mécanique et chimique et l’hydrophobicité de la surface de la peau ainsi que l’organisation des lipides de la surface de celle- ci ;
l’immunité innée avec la stimulation de plusieurs gènes de peptides antimicrobiens qui permettent de contrôler le développement de la microflore cutanée : DEFB4A, S100A7, PI3, RNASE7, et
le renforcement de la jonction dermo-épidermique avec la stimulation du gène du collagène de type 7 (COL7A1) un collagène de cohésion entre le derme et la jonction épidermique. Ce collagène diminue au cours du vieillissement.
Exemple 2 : Effet de l’extrait de L rhamnosus sur des cultures de kératinocytes, de mélanocytes et de fibroblastes
Cette deuxième expérience permet d’approfondir les effets biologiques du Probiophyte LB, par la méthodologie TLDA (TaqMan Low Density Array) sur un répertoire de gènes plus important et sur les trois types cellulaires principaux de la peau : les kératinocytes, les mélanocytes, et les fibroblastes.
Cellules utilisées :
Cellules : kératinocytes épidermiques humains normaux au 5eme passage (KHN), Fibroblastes humains normaux de derme au 6eme passage, mélanocytes humains normaux au 7eme passage (MHN)
Composés testés :
Probiophyte LB sans conservateur) : extrait de Lactobacillus rhamnosus CNCM 1-5313
Doses testées : 0,1 et 0,2 pg/ml
Temps de traitement : 24h
N=3 cultures par conditions expérimentales
Analyses effectuées :
Mesure de l’expression génique par RT-qPCR à partir les ARN messagers extraits des tapis cellulaires non traités (témoins) et traités avec les différentes concentrations de Probiophyte LB.
Technologie TLDA ( TaqMan Low Density Array)
• Obtention des ARN totaux Le milieu de culture des cellules est éliminé, et 250 pL de tampon de lyse RLT (fourni dans le kit Nucleospin RNA trace, Macherey-Nagel) sont ajoutés. Les cellules sont raclées à l’aide d’un Cell Sera per puis, le lysat cellulaire est récupéré dans une deepwell 1 ,2 mL (fournie dans le kit Nucleospin RNA). Les ARN totaux sont extraits selon les protocoles définis.
Les solutions d’ARN totaux obtenues sont dosées, et leur qualité vérifiée, à l'aide d'un lecteur de microplaques, le spectrostarNANO (BMG Labtech) couplé au MicrolabSTAR. Cet appareil est relié à l'ordinateur pilotant la plateforme robotique et possède le logiciel spécifique d'analyse des résultats (logiciel MARS). La technique nécessite une microplaque de 384 puits (LoBase), un contrôle positif (RNA 250, AM7155, Thermofisher) permettant de valider les pipetages réalisés par le robot ainsi que les valeurs générées par le lecteur spectrostarNANO.
• Synthèse des ADN complémentaires
Le kit de reverse transcription (RT) utilisé est le High Capacity Reverse Transcription Kit (Thermo Fisher). Il a été utilisé selon le protocole fourni. 500 ng d’ARN totaux sont dilués dans de l’eau pour un volume final de 25 pL. Ils sont ensuite incubés pendant 10 minutes à 25°C puis 2 heures à 37°C en présence de 25 pL de mélange réactionnel de High Capacity Reverse Transcription Kit 2X préalablement préparé comme indiqué ci-dessous. Les différentes incubations sont faites au sein du TRobot (Biométra).
Tableau 3 :
Figure imgf000017_0001
Mélange réactionnel High Capacity Reverse Transcription Kit 2X pour 1 réaction
• PCR-TaqMan Low Density Array
15 pL de chaque RT sont mélangés à 60 mI d’eau puis 75 pL de TaqMan Gene Expression master mix (ThermoFisher), contenant l’ADN polymerase, sont ajoutés. Après homogénéisation, 100 pL sont déposés sur les cartes microfluidiques contenant les sondes correspondant aux gènes testés, ces dernières sont centrifugées puis scellées. Le CD Rom correspondant au profil des gènes déposés sur les plaques est chargé dans le logiciel SDS 2.3, précisant l’emplacement de chaque gène sur la carte. Le gène contrôle (ou « endogenous gene ») à utiliser pour la normalisation des résultats est à indiquer avant le lancement de la PCR. Cette dernière est réalisée selon le protocole fourni par Applied Biosystems dans l’appareil ABI Prism 7900HT Sequence détection System. Les étapes de la qPCR sont 2 min à 50°C, 10 min à 94,5°C puis 30s à 97°C et 1 min à 59,7°C pour 40 cycles.
Analyses statistiques
La PCR quantitative en temps réel peut être exploitée si son efficacité est comprise entre 90% et 1 10%. Pour chaque échantillon, le nombre de cycles auquel apparaît le signal est déterminé par le logiciel SDS 2.3. Pour un même essai, les niveaux d’expression des transcrits d’intérêt obtenus sont normalisés par rapport à la valeur obtenue pour le gène de ménage Beta-2-microglobuline. Ce gène dont l’expression est constitutive et invariante permet de s’affranchir toutes variations induites au cours de l’expérience (dosage des ARNs totaux, pipetages, étape de réverse transcription, PCR dans l’appareillage).
Dans la méthode de RT-PCR TLDA, la quantification est effectuée en utilisant la méthode comparative de AACt. Les valeurs de quantification relative (RQ) obtenues correspondent au niveau d’amplitude (x fois plus ou moins que le contrôle) de l’expression par rapport à notre contrôle ici le non irradié. Le RQ est obtenu par le calcul suivant où le contrôle est égal à 1 : Q = 2 DD = 2 (^t traité - ACt non traité)
ACt traité = Ct gène cible traité - Ct gène de ménage traité
ACt non traité Ct gène cible non traité - Ct gène de ménage non traité
Afin d’évaluer des variations d’activité transcriptionnelle statistiquement significative, nous utiliserons le test t de Student. Chaque condition est réalisée en triplicate (3 non traités et 3 traités dans les mêmes conditions). Le test-F de Fischer est tout d’abord appliqué en comparant les deux matrices de données. Lorsque la valeur est supérieur à a = 0,05 alors la variance pour le test t de Student est de 2, lorsque le test-F de Fischer est inférieur à a =
0,05 alors la variance sera égale à 3. Les variations transcriptionnelles retenues seront celles qui ont un test t de Student inférieur à a = 0,05.
Les résultats sont présentés en moyenne sur n=3. Le test t de Student a été utilisé pour comparer l’effet entre les cellules traitées et non traitées.
Les résultats sont considérés comme significatifs pour p<0,05(*) ou p<0,01 (**).
Ci-dessous les tableaux des résultats montrant l’effet du Probiophyte LB sur plusieurs gènes kératinocytaires (KHN) complémentaires à ceux de l’étude précédente, et sur plusieurs gènes mélanocytaires (MHN) et fibroblastiques (FHN). Les valeurs inférieures à 1 correspondent à un effet inhibiteur sur l’expression desdits gènes et les valeurs supérieures à 1 correspondent à un effet stimulant sur l’expression desdits gènes. Tableau 4 :
Figure imgf000019_0001
Résultats sur l’expression génique des mélanocytes
Tableau 5 :
Figure imgf000019_0002
Résultats sur l’expression génique des kératinocytes
Tableau 6
Figure imgf000019_0003
Figure imgf000020_0001
Figure imgf000021_0001
Résultats sur l’expression génique des fibroblastes
Ces résultats montrent que les fibroblastes dermiques sont beaucoup plus sensibles à la modulation de leurs gènes par le Probiophyte LB (n=22 gènes modulés) que ne le sont les kératinocytes (n=2 gènes modulés) et les mélanocytes (n=1 gène modulé). L’extrait a donc une activité très importante au niveau des cellules du derme.
Pour les fibroblastes dermiques on a observé en particulier une activation, par le lysat de Lactobacillus rhamnosus de l’invention, des gènes impliqués dans :
l’accroche et la cohésion cellules-matrice qui permet au fibroblaste de densifier et de contracter la matrice avec les effets positifs de ce processus sur la fermeté (ITGB1) ;
le maintien de l’intégrité des structures cellulaires comme le noyau et donc de la résistance des cellules de la peau (SYNE2, LMNA) ;
la formation de plusieurs collagènes et d’élastine qui sont les constituants majeurs du derme et dont la stimulation s’oppose aux effets du vieillissement (COL1A1 , COL5A1 , COL13A1 , ELN) ;
l’équilibre hydrique du derme qu’il s’agisse des mouvements d’eau (AQP1) ou des réserves d’eau avec la formation (HAS2 et 3), la fixation (CD44) et la sécrétion (ABCC5) d’acide hyaluronique qui peut capter jusqu’à 1000 fois son poids en eau ;
la régénération des cellules dermiques (Ki67) ;
les défenses antioxydantes des cellules (GPX1) et détoxifiantes (ABCC1 =MRP1). Ce dernier gène code pour une protéine qui va permettre d’expulser hors de la cellule des composés qui peuvent lui être toxiques ;
l’adaptation des cellules à des conditions d’hypoxie (HIF1a) qui augmentent avec l’âge dans la peau (cf marqueurs de l’hypoxie comme l’anhydrase carbonique 9 dans la peau âgée) et qui peut s’expliquer par la réduction du réseau vasculaire dermique avec l’âge ;
l’énergétique et la nutrition avec l’entrée de glucose dans les cellules (SLC2A1) ;
la production d’énergie au niveau de la mitochondrie (MT= NADH déshydrogénase ou ubiquinone) ;
la détoxification et donc la protection de la mitochondrie par la dégradation et le recyclage des protéines mitochondriales endommagées (LONP1).
Pour les kératinocytes on a observé :
une activation d’un gène impliqué dans l’immunité innée (TLR1) et qui est un récepteur de surveillance immunitaire aux constituants bactériens de type lipopeptides
une inhibition d’un gène impliqué dans dégradation des collagènes (MMP9), processus qui augmente avec le vieillissement.
Pour les mélanocytes, on a observé :
une baisse d’un facteur stimulateur de la mélanogénèse dans ces cellules (PPARG) ce qui contribue à un effet dépigmentant.
L’ensemble de ces résultats montre donc que l’extrait de Lactobacillus rhamnosus CNCM 1-5313 selon l’invention appliqué sur les matières kératiniques, en particulier la peau, permet de prévenir et/ou diminuer la perte de fermeté et de densité de la peau, prévenir et/ou diminuer l’apparition de rides et/ou ridules et/ou de tâches pigmentaires, améliorer l’éclat et/ou l’homogénéité de la peau, favoriser et/ou améliorer l’hydratation de la peau, détoxifier la peau, stimuler ses défenses antioxydantes et/ou améliorer la résistance à l’hypoxie de la peau, et/ou contrôler la microflore de la peau, et/ou stimuler l’immunité de la peau et la formation de la barrière cutanée.
Exemple 3 : Formulations
Les formulations suivantes sont préparées selon les méthodes classiques de formulation du domaine cosmétique.
Sérum régénérant antiâge
Eau qsp 100% Alcool 5%
Glycols 8%
Isononanoate d’isotridecyle 4%
Squalane 2%
Triglycéride d’acides caprylique/caprique 2%
Methyl gluceth-20 : 2%
Steareth-2 : 0,5%
Steareth-21 : 0,5%
Carbomer 0,3%
Hyaluronate de sodium 0,2%
Gomme de xanthane 0, 1 %
Hydroxide de sodium 0, 1 %
Adénosine 0,04%
Lysat de L rhamnosus 2%
Appliquée sur la peau, la composition permet de d’améliorer la fermeté de la peau, diminuer les rides.
Masque purifiant
Eau qsp 100%
Kaolin 18%
Acide stéarique 3,5%
Acide palmitique 3,5%
Glycols 6%
Dioxyde de titane 3%
Acide laurique 2%
Glyceryl stéarate 1 ,5%
PEG-100 stéarate 1 ,5%
Hydroxide de potassium 1 ,4%
Phenoxyethanol 0,7%
Polymère acrylique 0,5%
Gomme de xanthane 0,05%
Lysat de L rhamnosus 1 %
Gluconate de zinc 0,05% Appliquée sur la peau, la composition permet de diminuer le taux de sébum, diminuer la taille des pores, améliorer le grain de peau.
Lotion détoxifiante antipollution
Eau qsp 100%
Glycols 15%
Alcool 5%
Phenoxyéthanol 0,8%
PEG-60 huile de ricin hydrogénée 0,5%
Hyaluronate de sodium 0, 1 %
Lysat de L rhamnosus 0,5%
Extrait prébiotique 0,5%
Appliquée sur la peau, la composition permet de conférer à la peau un effet bonne mine, un teint éclatant, homogène.
Essence blanchissante
Eau qsp 100%
Glycols 1 1 %
Propanediol 5%
Dimethicone 2%
Alcool 1 %
Tromethamine 1 ,5%
Phenoxyethanol 0,9%
Copolymère acrylique 0,6%
Citrate de sodium 0,5%
Lysat de L rhamnosus 2%
Glucoside d’ascorbyle (vitamine CG) 0,5%
Appliquée sur la peau, la composition permet d’améliorer l’homogénéité du teint.
Fond de teint éclat
Eau qsp 100%
Huiles hydrocarbonées 12%
Dioxyde de titane 10% Propanediol 5%
Glycérine 5%
Oxyde de zinc 3%
Tensioactifs 3%
Polymère filmogène 1 %
Sorbate de potassium 0, 1 %
Lysat de L rhamnosus 1 %
Appliquée sur la peau, la composition permet de conférer un effet bonne mine, un teint éclatant, homogène.
Sérum vitaminé
Glycérol 4%
Butylène glycol 3%
Carbomer 0,5%
Acide lactique 1 %
Lysat de L rhamnosus 2%
Hydroxyde de sodium 0,7%
Gomme de xanthane 0, 1 %
Gélifiant acrylique 0,2%
Alcool 3%
Glucoside d’ascorbyle (vitamine CG) 0,5%
Phenoxyéthanol 0,5%
Colorants qs%
Eau qsp100%
Appliquée sur la peau, la composition permet d’améliorer la fermeté de la peau et lui conférer un effet bonne mine.
Brume
Glycérol 2%
Glycol s 4%
Gélifiants 2%
Lysat de L rhamnosus 1 %
Triclycéride d’acides caprylic/capric 0,25% Emulsionnants 0,6%
Phénoxyéthanol 0,5%
Tocopherol (vitamine E) 0,02%
Eau qsp 100%
Appliquée sur la peau, la composition permet de favoriser et/ou améliorer la nutrition de la peau et lui conférer un effet bonne mine, un teint éclatant et homogène.
PCT
(original sous forme électronique)
Figure imgf000027_0001
Figure imgf000027_0002
RESERVE A L'OFFICE RECEPTEUR
Figure imgf000027_0003
RESERVE AU BUREAU INTERNATIONAL
Figure imgf000027_0004
FEUILLE DE REMPLACEMENT (RÈGLE 26)

Claims

REVENDICATIONS
1. Composition pour application topique sur les matières kératiniques, en particulier la peau et/ou les lèvres, comprenant, dans un milieu physiologiquement acceptable, au moins un extrait de Lactobacillus rhamnosus CNCM 1-5313, d’une de ses fractions et/ou d’un de ses métabolites et au moins un excipient choisi parmi des solvants autres que l’eau, des tensio-actifs, des gélifiants, des épaississants, des charges, des matières colorantes, des polymères filmogènes, des parfums et leurs mélanges, caractérisée en ce qu’il s’agit d’un lysat de Lactobacillus rhamnosus CNCM 1-5313, d’une de ses fractions et/ou d’un de ses métabolites.
2. Composition selon la revendication 1 , caractérisée en ce que le lysat de Lactobacillus rhamnosus CNCM 1-5313 comprend de 0,1 à 10 %, en particulier de 0,5 à 5 % et notamment de 1 à 2 % en poids en matière(s) sèche(s) (active(s)) par rapport à son poids total.
3. Composition selon la revendication 1 ou la revendication 2, caractérisée en ce que l’extrait de Lactobacillus rhamnosus CNCM 1-5313 est présent en une teneur allant de 0,0001 à 10 %, notamment de 0,0001 à 5 %, en particulier de 0,0001 à 2 % en poids, et notamment de 0,0001 % à 1 %, voire de 0,0001 à 0,05% en poids de matière active (matière sèche) par rapport au poids total de ladite composition.
4. Composition selon l’une quelconque des revendications 1 à 3, caractérisée en ce qu’elle comprend en outre au moins actif cosmétique autre que des vitamines ou des extraits en contenant, en particulier choisi parmi des huiles riches en acides gras essentiels ou non, des extraits prébiotiques, d’autres extraits d’autres souches de microorganismes probiotiques ou encore des ingrédients symbiotiques, des séborégulateurs et des agents raffermissants, des agents apaisants, des antioxydants, des agents dépigmentants, des agents exfoliants, des actifs antiâge, des ingrédients hydratants, des actifs immunomodulateurs, et leurs mélanges.
5. Composition selon l’une quelconque des revendications 1 à 4, caractérisée en ce qu’elle est sous la forme d’une émulsion huile-dans-eau ou eau-dans-huile ou d’une émulsion multiple, d’une solution, d’une suspension, d’une lotion, d’un gel, d’une crème, d’un lait, d’un sérum, d’une brume, d’un stick ou encore d’une poudre.
6. Composition selon l’une quelconque des revendications 1 à 5, caractérisée en ce qu’il s’agit d’une composition cosmétique de soin et/ou de maquillage de la peau et/ou des lèvres.
7. Procédé cosmétique non thérapeutique destiné à prévenir et/ou diminuer les signes du vieillissement cutané et/ou à favoriser et/ou améliorer la fonction barrière, comprenant l’application sur les matières kératiniques d’au moins un extrait de Lactobacillus rhamnosus CNCM 1-5313, en particulier un lysat de Lactobacillus rhamnosus CNCM 1-5313, d’une de ses fractions et/ou d’un de ses métabolites, ou d’une composition telle que définie dans l’une quelconque des revendications 1 à 6.
8. Procédé cosmétique selon la revendication 7, caractérisé en ce qu’il est destiné à prévenir et/ou diminuer la perte de fermeté et/ou de densité de la peau, prévenir et/ou diminuer l’apparition de rides et/ou ridules et/ou de tâches pigmentaires, améliorer l’éclat et/ou l’homogénéité de la peau, favoriser et/ou améliorer l’hydratation de la peau, détoxifier la peau, et/ou améliorer la résistance à l’hypoxie de la peau, et/ou contrôler la microflore de la peau.
9. Procédé cosmétique selon la revendication 7 ou la revendication 8, caractérisé en ce que la composition est appliquée sur une peau âgée, atone, fatiguée, ou impactée par un contexte nutritionnel défavorable ou déséquilibré, de stress émotionnel ou de manque de sommeil.
10. Utilisation cosmétique non thérapeutique d’un extrait de Lactobacillus rhamnosus CNCM 1-5313, en particulier un lysat de Lactobacillus rhamnosus CNCM 1-5313, d’une de ses fractions et/ou d’un de ses métabolites, pour favoriser et/ou améliorer la fonction barrière et/ou diminuer les signes du vieillissement cutané, en particulier prévenir et/ou diminuer la perte de fermeté et/ou de densité de la peau, prévenir et/ou diminuer l’apparition de rides et/ou ridules et/ou de tâches pigmentaires, améliorer l’éclat et/ou l’homogénéité de la peau, favoriser et/ou améliorer l’hydratation de la peau, détoxifier la peau, et/ou améliorer la résistance à l’hypoxie de la peau, et/ou contrôler la microflore de la peau.
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