[go: up one dir, main page]
More Web Proxy on the site http://driver.im/

TW201718027A - 吡咯并苯并二氮呯抗體藥物結合物及使用方法 - Google Patents

吡咯并苯并二氮呯抗體藥物結合物及使用方法 Download PDF

Info

Publication number
TW201718027A
TW201718027A TW105131811A TW105131811A TW201718027A TW 201718027 A TW201718027 A TW 201718027A TW 105131811 A TW105131811 A TW 105131811A TW 105131811 A TW105131811 A TW 105131811A TW 201718027 A TW201718027 A TW 201718027A
Authority
TW
Taiwan
Prior art keywords
antibody
seq
amino acid
hvr
drug conjugate
Prior art date
Application number
TW105131811A
Other languages
English (en)
Inventor
湯瑪斯 皮勒
傑克 薩多斯基
彼得 德瑞哥維克
馬克 Ｘ 史瓦斯其
斌清 魏
Original Assignee
美商建南德克公司
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by 美商建南德克公司 filed Critical 美商建南德克公司
Publication of TW201718027A publication Critical patent/TW201718027A/zh

Links

Classifications

    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K31/00—Medicinal preparations containing organic active ingredients
    • A61K31/33—Heterocyclic compounds
    • A61K31/395—Heterocyclic compounds having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. guanethidine or rifamycins
    • A61K31/55—Heterocyclic compounds having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. guanethidine or rifamycins having seven-membered rings, e.g. azelastine, pentylenetetrazole
    • A61K31/551—Heterocyclic compounds having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. guanethidine or rifamycins having seven-membered rings, e.g. azelastine, pentylenetetrazole having two nitrogen atoms, e.g. dilazep
    • A61K31/5513—1,4-Benzodiazepines, e.g. diazepam or clozapine
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K31/00—Medicinal preparations containing organic active ingredients
    • A61K31/33—Heterocyclic compounds
    • A61K31/395—Heterocyclic compounds having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. guanethidine or rifamycins
    • A61K31/55—Heterocyclic compounds having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. guanethidine or rifamycins having seven-membered rings, e.g. azelastine, pentylenetetrazole
    • A61K31/551—Heterocyclic compounds having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. guanethidine or rifamycins having seven-membered rings, e.g. azelastine, pentylenetetrazole having two nitrogen atoms, e.g. dilazep
    • A61K31/5513—1,4-Benzodiazepines, e.g. diazepam or clozapine
    • A61K31/5517—1,4-Benzodiazepines, e.g. diazepam or clozapine condensed with five-membered rings having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. imidazobenzodiazepines, triazolam
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K45/00—Medicinal preparations containing active ingredients not provided for in groups A61K31/00 - A61K41/00
    • A61K45/06—Mixtures of active ingredients without chemical characterisation, e.g. antiphlogistics and cardiaca
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K47/00—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient
    • A61K47/50—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates
    • A61K47/51—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent
    • A61K47/68—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent the modifying agent being an antibody, an immunoglobulin or a fragment thereof, e.g. an Fc-fragment
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K47/00—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient
    • A61K47/50—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates
    • A61K47/51—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent
    • A61K47/68—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent the modifying agent being an antibody, an immunoglobulin or a fragment thereof, e.g. an Fc-fragment
    • A61K47/6801—Drug-antibody or immunoglobulin conjugates defined by the pharmacologically or therapeutically active agent
    • A61K47/6803—Drugs conjugated to an antibody or immunoglobulin, e.g. cisplatin-antibody conjugates
    • A61K47/68035—Drugs conjugated to an antibody or immunoglobulin, e.g. cisplatin-antibody conjugates the drug being a pyrrolobenzodiazepine
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K47/00—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient
    • A61K47/50—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates
    • A61K47/51—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent
    • A61K47/68—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent the modifying agent being an antibody, an immunoglobulin or a fragment thereof, e.g. an Fc-fragment
    • A61K47/6835—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent the modifying agent being an antibody, an immunoglobulin or a fragment thereof, e.g. an Fc-fragment the modifying agent being an antibody or an immunoglobulin bearing at least one antigen-binding site
    • A61K47/6851—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent the modifying agent being an antibody, an immunoglobulin or a fragment thereof, e.g. an Fc-fragment the modifying agent being an antibody or an immunoglobulin bearing at least one antigen-binding site the antibody targeting a determinant of a tumour cell
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K47/00—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient
    • A61K47/50—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates
    • A61K47/51—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent
    • A61K47/68—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent the modifying agent being an antibody, an immunoglobulin or a fragment thereof, e.g. an Fc-fragment
    • A61K47/6835—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent the modifying agent being an antibody, an immunoglobulin or a fragment thereof, e.g. an Fc-fragment the modifying agent being an antibody or an immunoglobulin bearing at least one antigen-binding site
    • A61K47/6851—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent the modifying agent being an antibody, an immunoglobulin or a fragment thereof, e.g. an Fc-fragment the modifying agent being an antibody or an immunoglobulin bearing at least one antigen-binding site the antibody targeting a determinant of a tumour cell
    • A61K47/6855—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent the modifying agent being an antibody, an immunoglobulin or a fragment thereof, e.g. an Fc-fragment the modifying agent being an antibody or an immunoglobulin bearing at least one antigen-binding site the antibody targeting a determinant of a tumour cell the tumour determinant being from breast cancer cell
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K47/00—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient
    • A61K47/50—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates
    • A61K47/51—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent
    • A61K47/68—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent the modifying agent being an antibody, an immunoglobulin or a fragment thereof, e.g. an Fc-fragment
    • A61K47/6889—Conjugates wherein the antibody being the modifying agent and wherein the linker, binder or spacer confers particular properties to the conjugates, e.g. peptidic enzyme-labile linkers or acid-labile linkers, providing for an acid-labile immuno conjugate wherein the drug may be released from its antibody conjugated part in an acidic, e.g. tumoural or environment
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P1/00—Drugs for disorders of the alimentary tract or the digestive system
    • A61P1/04—Drugs for disorders of the alimentary tract or the digestive system for ulcers, gastritis or reflux esophagitis, e.g. antacids, inhibitors of acid secretion, mucosal protectants
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P15/00—Drugs for genital or sexual disorders; Contraceptives
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P35/00—Antineoplastic agents
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P43/00—Drugs for specific purposes, not provided for in groups A61P1/00-A61P41/00
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07D—HETEROCYCLIC COMPOUNDS
    • C07D487/00—Heterocyclic compounds containing nitrogen atoms as the only ring hetero atoms in the condensed system, not provided for by groups C07D451/00 - C07D477/00
    • C07D487/02—Heterocyclic compounds containing nitrogen atoms as the only ring hetero atoms in the condensed system, not provided for by groups C07D451/00 - C07D477/00 in which the condensed system contains two hetero rings
    • C07D487/04—Ortho-condensed systems
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07D—HETEROCYCLIC COMPOUNDS
    • C07D519/00—Heterocyclic compounds containing more than one system of two or more relevant hetero rings condensed among themselves or condensed with a common carbocyclic ring system not provided for in groups C07D453/00 or C07D455/00
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K16/00—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies
    • C07K16/18—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans
    • C07K16/28—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans against receptors, cell surface antigens or cell surface determinants
    • C07K16/2803—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans against receptors, cell surface antigens or cell surface determinants against the immunoglobulin superfamily
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K16/00—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies
    • C07K16/18—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans
    • C07K16/32—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans against translation products of oncogenes
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
    • C07K2317/40—Immunoglobulins specific features characterized by post-translational modification
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
    • C07K2317/50—Immunoglobulins specific features characterized by immunoglobulin fragments
    • C07K2317/52—Constant or Fc region; Isotype
    • C07K2317/522—CH1 domain
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
    • C07K2317/50—Immunoglobulins specific features characterized by immunoglobulin fragments
    • C07K2317/56—Immunoglobulins specific features characterized by immunoglobulin fragments variable (Fv) region, i.e. VH and/or VL
    • C07K2317/567—Framework region [FR]

Landscapes

  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • Engineering & Computer Science (AREA)
  • Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
  • Medicinal Chemistry (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • Pharmacology & Pharmacy (AREA)
  • Animal Behavior & Ethology (AREA)
  • Public Health (AREA)
  • Veterinary Medicine (AREA)
  • Organic Chemistry (AREA)
  • Immunology (AREA)
  • Epidemiology (AREA)
  • Cell Biology (AREA)
  • Oncology (AREA)
  • Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
  • General Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
  • Molecular Biology (AREA)
  • Biochemistry (AREA)
  • Biophysics (AREA)
  • Genetics & Genomics (AREA)
  • Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
  • Endocrinology (AREA)
  • Reproductive Health (AREA)
  • Peptides Or Proteins (AREA)
  • Medicines Containing Antibodies Or Antigens For Use As Internal Diagnostic Agents (AREA)
  • Medicinal Preparation (AREA)
  • Pharmaceuticals Containing Other Organic And Inorganic Compounds (AREA)
  • Medicines That Contain Protein Lipid Enzymes And Other Medicines (AREA)
  • Nitrogen And Oxygen Or Sulfur-Condensed Heterocyclic Ring Systems (AREA)

Abstract

本發明提供包含經由二硫鍵連接子結合於吡咯并苯并二氮呯藥物部分之抗體的抗體-藥物結合物、吡咯并苯并二氮呯連接子-藥物中間物及使用該等抗體-藥物結合物之方法。

Description

吡咯并苯并二氮呯抗體藥物結合物及使用方法 【相關申請案之交互參照】
本申請案主張2015年10月2日申請之美國臨時申請案第62/223429號之優先權權益，該美國臨時申請案係以全文引用之方式併入本文中。
本發明總體上係關於結合於吡咯并苯并二氮呯中間物以形成具有治療性或診斷性應用之抗體-藥物結合物之抗體。該等抗體可經游離半胱胺酸胺基酸工程改造，對與該等吡咯并苯并二氮呯中間物結合具有反應性。本發明亦係關於使用該等抗體-藥物結合物化合物治療諸如癌症之過度增生性病症或活體外、原位及活體內診斷此類病症之方法。
抗體-藥物結合物(ADC)藉由使有效細胞毒性藥物靶向抗原表現性腫瘤細胞、內化且釋放藥物、藉此增强該等藥物之抗腫瘤活性而為組合抗體與細胞毒性藥物兩者之性質的靶向化學治療分子(Carter,P.及Senter,P.(2008)The Cancer Jour.14(3)：154-169)。針對既定靶抗原之成功ADC開發視抗體選擇、連接子設計及穩定性之最佳化、細胞毒性藥物效力及藥物及連接子結合於抗體之模式而定(Dosio等人(2011)Toxins,3：848-883；Polakis,P.(2005)Current Opinion in Pharmacology 5：382-387)。
某些吡咯并苯并二氮呯(PBD)化合物具有識別且鍵結於特定DNA序列之能力；較佳序列為PuGPu(Pu=嘌呤，諸如腺嘌呤A及鳥嘌呤G)。第一PBD抗腫瘤抗生素安麯黴素在1965年發現(Leimgruber,等人，J.Am.Chem.Soc.,87：5793-5795(1965)；Leimgruber,等人，J.Am.Chem.Soc.,87,5791-5793(1965))。自此，已報導且描述許多天然存在之PBD及類 似物(Thurston，等人，Chem.Rev.1994,433-465(1994)；Antonow,D.及Thurston,D.E.,(2011)Chem.Rev.111(4)：2815-2864)。家族成員包括阿比黴素(abbeymycin)(Hochlowski，等人，(1987)J.Antibiotics,40：145-148)、奇卡黴素(chicamycin)(Konishi，等人，(1984)J.Antibiotics,37：200-206),Thurston，等人，(1990)Chem.Brit.,26：767-772；Bose，等人，(1992)Tetrahedron,48：751-758)、甲基胺茴黴素(mazethramycin)(Kuminoto，等人，J.Antibiotics,33,665-667(1980))、新茴黴素(neothramycins)A及B(Takeuchi，等人，J.Antibiotics,29,93-96(1976))、潑洛黴素(porothramycin)(Tsunakawa，等人，(1988)J.Antibiotics,41：1366-1373)、普拉卡素(prothracarcin)(Shimizu，等人，J.Antibiotics,(1982)29：2492-2503；Langley及Thurston,(1987)J.Org.Chem.,52：91-97)、西巴黴素(sibanomicin)DC-102(Hara，等人，(1988)J.Antibiotics,41：702-704；Itoh，等人，J.Antibiotics,(1988)41：1281-1284)、西伯利亞黴素(sibiromycin)(Leber，等人，(1988)J.Am.Chem.Soc.,110：2992-2993)及托馬黴素(tomamycin)(Arima，等人，(1972)J.Antibiotics,25：437-444)。
吡咯并苯并二氮呯具有通用結構：
且在芳族A環及吡咯并C環兩者中取代基之數量、類型及位置及C環之飽和度方面不同。在B環中，在N10-C11位置(負責烷基化DNA之親電子中心)存在亞胺(N=C)、甲醇胺(NH-CH(OH))或甲醇胺甲基醚(NH-CH(OMe))。所有已知天然產物在對掌性C11a位置具有(S)-構型，這在自C環朝向A環觀察時為其提供向右扭轉且確定三維形狀以與B型DNA之小溝達成等螺旋性，從而在結合位點處產生適貼配合(Kohn,In Antibiotics III.Springer-Verlag,New York，第3-11(1975)頁；Hurley及Needham-VanDevanter,(1986)Acc.Chem.Res.,19：230-237)。PBD在小溝中形成加合物之能力使其能够干擾DNA加工，因此使其用作抗腫瘤劑。其中兩個吡咯并苯并二氮呯結構經由A環之C8位置藉由連接子共價連接之吡咯并苯并二氮呯二聚體化 合物可二烷基化且交聯雙股DNA(WO 2005/085251)。
吡咯并苯并二氮呯化合物可藉由在N10位置用諸如胺基甲酸酯之氮保護基保護它們而用作前藥，該氮保護基可活體內移除(WO 2000/12507；WO 2005/023814)。該等保護基可自PBD部分之N10位置移除以留下N10-C11亞胺鍵。描述一系列保護基，包括可藉由酶作用裂解之基團。
其中吡咯并苯并二氮呯(PBD)二聚體經由N10位置連接於對腫瘤相關抗原具有特异性之抗體的抗體-藥物結合物具有針對腫瘤細胞之活體外及活體內功效(WO2011/130598)。已描述具有PBD二聚體藥物部分之抗體-藥物結合物，該等PBD二聚體藥物部分具有連接子基團以用於經由連接該二聚體之單體PBD單元的橋(「繫鍵(tether)」)連接於諸如抗體之細胞結合劑(WO 2007/085930)。已描述具有PBD二聚體藥物部分之抗體-藥物結合物，該等PBD二聚體藥物部分在B環中在N10-C11位置具有醯胺及胺基團(WO 2014/096368；WO 2013/177481；WO 2012/112708)。已描述了包含二烷化劑吡咯并苯并二氮呯(PBD)二聚體藥物部分的在該PBD之N10處經由二硫鍵連接於抗體之抗體藥物結合物(WO2013/055987；Gregson等人(2001)J.Med.Chem.44：1161-1174)。
本發明包括一種式I之連接子-藥物中間物：
其中XY選自CH2-CH2、CH=CH、C(=O)-NH或CH2-NH；A為視情况經選自F、C1-C6烷基或=C(R)2之基團取代之5員或6員雜 環，其中R獨立地選自H、F、C1-C6烷基或C1-C6氟烷基；R1及R2獨立地選自H或C1-C6烷基，或R1及R2形成3員、4員、5員或6員環烷基或雜環基基團；R3獨立地選自NO2、Cl、F、CN、CO2H或Br；且m為0、1或2。
本發明包括經由二硫鍵連接子共價連接於抗體以形成具有治療性或診斷性應用之抗體-藥物結合物(ADC)化合物的單烷化劑吡咯并苯并二氮呯藥物部分。
本發明之另一態樣為一種式II之抗體-藥物結合物化合物：
或其醫藥學上可接受之鹽，其中：XY選自CH2-CH2、CH2-C(=O)、CH=CH或CH2-NH；A為視情况經選自F、C1-C6烷基或=C(R)2之基團取代之5員或6員雜環，其中R獨立地選自H、F、C1-C6烷基或C1-C6氟烷基；R1及R2獨立地選自H或C1-C6烷基，或R1及R2形成3員、4員、5員或6員環烷基或雜環基基團；p為1至8之整數；且Ab為抗體。
在一例示性實施例中，該抗體結合至選自(1)-(53)之一或多種腫瘤相關抗原或細胞表面受體：(1)BMPR1B(骨形態發生蛋白受體-IB型)；(2)E16(LAT1、SLC7A5)；(3)STEAP1(前列腺之六跨膜上皮抗原)； (4)MUC16(0772P、CA125)；(5)MPE(MPF、MSLN、SMR、巨核細胞增強因子、間皮素)；(6)Napi2b(NAPI-3B、NPTIIb、SLC34A2、溶質携帶物家族34(磷酸鈉)第2成員、第II型鈉依賴性磷酸鹽轉運體3b)；(7)Sema 5b(FLJ10372、KIAA1445、Mm.42015、SEMA5B、SEMAG、導向蛋白5b Hlog、sema域、七個血小板反應蛋白重複序列(第1型及第1型樣)、跨膜域(TM)及短細胞質域、(導向蛋白)5B)；(8)PSCA hlg(2700050C12Rik、C530008O16Rik、RIKEN cDNA 2700050C12、RIKEN cDNA 2700050C12基因)；(9)ETBR(內皮素B型受體)；(10)MSG783(RNF124、假定蛋白FLJ20315)；(11)STEAP2(HGNC_8639、IPCA-1、PCANAP1、STAMP1、STEAP2、STMP、前列腺癌相關基因1、前列腺癌相關蛋白1、前列腺之六跨膜上皮抗原2、六跨膜前列腺蛋白)；(12)TrpM4(BR22450、FLJ20041、TRPM4、TRPM4B、瞬時受體電位陽離子通道，次家族M，第4成員)；(13)CRIPTO(CR、CR1、CRGF、CRIPTO、TDGF1、畸胎瘤衍生生長因子)；(14)CD21(CR2(補體受體2)或C3DR(C3d/艾伯斯坦-巴爾(Epstein Barr)病毒受體)或Hs 73792)；(15)CD79b(CD79B、CD79β、IGb(免疫球蛋白相關型β)、B29)；(16)FcRH2(IFGP4、IRTA4、SPAP1A(含SH2域之磷酸酶錨定蛋白1a)、SPAP1B、SPAP1C)；(17)HER2；(18)NCA；(19)MDP；(20)IL20Rα；(21)短縮素；(22)EphB2R； (23)ASLG659；(24)PSCA；(25)GEDA；(26)BAFF-R(B細胞活化因子受體、BLyS受體3、BR3)；(27)CD22(B細胞受體CD22-B同功异型物)；(28)CD79a(CD79A、CD79α、免疫球蛋白相關型α)；(29)CXCR5(伯基特氏淋巴瘤受體1)；(30)HLA-DOB(MHC第II類分子之β次單元(Ia抗原))；(31)P2X5(嘌呤能受體P2X配位體門控離子通道5)；(32)CD72(B細胞分化抗原CD72、Lyb-2)；(33)LY64(淋巴細胞抗原64(RP105)，富含白胺酸之重複序列(LRR)之第I型膜蛋白家族)；(34)FcRH1(Fc受體樣蛋白1)；(35)FcRH5(IRTA2，免疫球蛋白超家族受體易位相關型2)；(36)TENB2(推定跨膜蛋白多醣)；(37)PMEL17(銀同系物；SILV；D12S53E；PMEL17；SI；SIL)；(38)TMEFF1(具有EGF樣域及兩個抑濾泡素樣域1之跨膜蛋白；腦腫瘤抑癌蛋白-1)；(39)GDNF-Ra1(GDNF家族受體α 1；GFRA1；GDNFR；GDNFRA；RETL1；TRNR1；RET1L；GDNFR-α1；GFR-A-1)；(40)Ly6E(淋巴細胞抗原6複合物，基因座E；Ly67，RIG-E，SCA-2，TSA-1)；(41)TMEM46(shisa同系物2(非洲爪蟾)；SHISA2)；(42)Ly6G6D(淋巴細胞抗原6複合物，基因座G6D；Ly6-D；MEGT1)；(43)LGR5(含富含白胺酸之重複序列之G蛋白偶聯受體5；GPR49、GPR67)；(44)RET(ret原癌基因；MEN2A；HSCR1；MEN2B；MTC1；PTC；CDHF12；Hs.168114；RET51；RET-ELE1)；(45)LY6K(淋巴細胞抗原6複合物，基因座K；LY6K；HSJ001348； FLJ35226)；(46)GPR19(G蛋白偶聯受體19；Mm.4787)；(47)GPR54(KISS1受體；KISS1R；GPR54；HOT7T175；AXOR12)；(48)ASPHD1(含天冬胺酸β-羥化酶域1；LOC253982)；(49)酪胺酸酶(TYR；OCAIA；OCA1A；酪胺酸酶；SHEP3)；(50)TMEM118(環指蛋白，跨膜2；RNFT2；FLJ14627)；(51)GPR172A(G蛋白偶聯受體172A；GPCR41；FLJ11856；D15Ertd747e)；(52)CD33；或(53)CLL-1。
本發明之另一態樣為一種醫藥組合物，其包含式II之抗體-藥物結合物化合物及醫藥學上可接受之稀釋劑、載劑或賦形劑。
本發明之另一態樣為式II之抗體-藥物結合物化合物在製造用於治療哺乳動物之癌症之藥劑中的用途。
本發明之另一態樣為一種藉由向患者投與包含式II之抗體-藥物結合物化合物之醫藥組合物來治療癌症的方法。
本發明之另一態樣為一種製備式II之抗體-藥物結合物化合物之方法。
本發明之另一態樣為一種製品，其包括包含式II之抗體-藥物結合物化合物之醫藥組合物、容器及包裝插頁或標簽，該包裝插頁或標簽指示該醫藥組合物可用於治療癌症。
圖1A顯示用ADC-107、ADC-103及非標靶對照ADC-108處理之BJAB細胞之活體外細胞活力的曲綫圖。
圖1B顯示用ADC-107、ADC-103及非標靶對照ADC-108處理之WSU-DLCL2細胞之活體外細胞活力的曲綫圖。
圖1C顯示用ADC-107、ADC-103及非標靶對照ADC-108處理之Jurkat細胞之活體外細胞活力的曲綫圖。
圖1D顯示用ADC-101、ADC-113、ADC-103、ADC-111及 ADC-112處理之BJAB細胞之活體外細胞活力的曲綫圖。
圖1E顯示用ADC-101、ADC-113、ADC-103、ADC-111及ADC-112處理之WSU-DLCL2細胞之活體外細胞活力的曲綫圖。
圖1F顯示用ADC-108、ADC-102、ADC-203、ADC-201及ADC-107處理之SK-BR-3細胞之活體外細胞活力的曲綫圖。
圖1G顯示用ADC-108、ADC-102、ADC-203、ADC-201及ADC-107處理之KPL-4細胞之活體外細胞活力的曲綫圖。
圖2顯示一旦用以下各項靜脉內給藥，在CB-17 Fox Chase SCID小鼠中之WSU-DLCL2异種移植物模型中隨時間推移活體內擬合之腫瘤體積變化之曲綫中抗體-藥物結合物的功效：
1)媒劑(組胺酸緩衝液#8)，100μL
2)硫基Hu抗-CD22 10F4v3 LC K149C-(CLD-1)，ADC-202，0.5mg/kg
3)硫基Hu抗-CD22 10F4v3 LC K149C-(CLD-1)，ADC-202，2mg/kg
4)硫基Hu抗-CD22 10F4v3 LC K149C-(LD-51)，單醯胺，ADC-103，2mg/kg
5)硫基Hu抗-CD22 10F4v3 LC K149C-(LD-51)，單醯胺，ADC-103，5mg/kg
6)硫基Hu抗-CD22 10F4v3 LC K149C-(LD-51)，單醯胺，ADC-103，10mg/kg
7)硫基Hu抗-Her2(hu7C2)LC K149C-(LD-51)，單醯胺，ADC-102，10mg/kg
圖3顯示一旦用以下各項靜脉內給藥，在CB-17 Fox Chase SCID小鼠中之Bjab-luc异種移植物模型中隨時間推移活體內擬合之腫瘤體積變化之曲綫中抗體-藥物結合物的功效：
1)媒劑(組胺酸緩衝液#8 HisAc 20mM，蔗糖240mM，TW-20 0.02%，pH 5.5)，100μL(微升)
2)硫基Hu抗-CD22 10F4v3 LC K149C-(CLD-1)，ADC-202，0.1mg/kg
3)硫基Hu抗-CD22 10F4v3 LC K149C-(CLD-1)，ADC-202，0.2mg/kg
4)硫基Hu抗-CD22 10F4v3 LC K149C-(C-LD1)，ADC-202，0.4mg/kg
5)硫基Hu抗-CD22 10F4v3 LC K149C-(LD-51)單醯胺，ADC-105，1mg/kg
6)硫基Hu抗-CD22 10F4v3 LC K149C-(LD-51)單醯胺，ADC-105，2mg/kg
7)硫基Hu抗-CD22 10F4v3 LC K149C-(LD-51)單醯胺，ADC-105，4mg/kg
8)硫基Hu抗-CD22 10F4v3 LC K149C-(LD-51)單醯胺，ADC-105，8mg/kg
9)硫基Hu抗-Her2 hu7C2 LC K149C-(CLD-1)ADC-201，0.4mg/kg
10)硫基Hu抗-Her2 hu7C2 LC K149C-(LD-51)單醯胺ADC-104，8mg/kg
圖4顯示一旦用以下各項靜脉內給藥，在WSU-DLCL2人類細胞株小鼠模型中隨時間推移活體內擬合之腫瘤體積變化之曲綫中抗體-藥物結合物的功效：
1)媒劑(組胺酸緩衝液#8)，100μL
2)硫基Hu抗-CD22 10F4v3 LC K149C-(LD-51)單醯胺，ADC-105，5mg/kg
3)硫基Hu抗-CD22 10F4v3 LC K149C-(LD-52)單胺，ADC-107，0.5mg/kg
4)硫基Hu抗-CD22 10F4v3 LC K149C-(LD-52)單胺，ADC-107，2mg/kg
5)硫基Hu抗-CD22 10F4v3 LC K149C-(LD-52)單胺，ADC-107，5mg/kg
6)硫基Hu抗-CD22 10F4v3 LC K149C-(LD-52)單胺，ADC-107，10mg/kg
7)硫基Hu抗-CD22 10F4v3 LC K149C-(CLD-4)單胺，ADC-204，0.5mg/kg
8)硫基Hu抗-CD22 10F4v3 LC K149C-(CLD-4)單胺，ADC-204，2mg/kg
9)硫基Hu抗-CD22 10F4v3 LC K149C-(CLD-4)單胺，ADC-204，5mg/kg
10)硫基Hu抗-CD22 10F4v3 LC K149C-(CLD-4)單胺，ADC-204，10mg/kg
11)硫基Hu抗-Her2 hu7C2 LC K149C-(LD-52)單胺，ADC-108，2mg/kg
12)硫基Hu抗-Her2 hu7C2 LC K149C-(CLD-4)單胺，ADC-205，2mg/kg
圖5A顯示一旦用以下各項靜脉內給藥，在scid beige小鼠中之HER2 KPL4腫瘤模型中隨時間推移活體內擬合之腫瘤體積變化之曲綫中抗體-藥物結合物的功效：
1)媒劑
2)硫基-Her2 hu7C2 LC-K149C-(LD-51)單醯胺，ADC-106，1mg/kg
3)硫基-Her2 hu7C2 LC-K149C-(LD-51)單醯胺，ADC-106，5mg/kg
4)硫基-Her2 hu7C2 LC-K149C-(LD-52)單胺，ADC-108，0.5mg/kg
5)硫基-Her2 hu7C2 LC-K149C-(LD-52)單胺，ADC-108，1mg/kg
6)硫基-Her2 hu7C2 LC-K149C-(LD-52)單胺，ADC-108，2mg/kg
7)硫基-Her2 hu7C2 LC-K149C-(LD-52)單胺，ADC-108，5mg/kg
8)CD22 LC-K149C-(LD-52)單胺，ADC-107，1mg/kg
圖5B顯示一旦用以下各項靜脉內給藥，在scid beige小鼠中之HER2 KPL4腫瘤模型中隨時間推移活體內擬合之腫瘤體積變化之曲綫中抗體-藥物結合物的功效：
1)媒劑
2)Tmab-DM1，ADC-211，1mg/kg
3)硫基-Her2 hu7C2 LC-K149C-(LD-51)單醯胺，ADC-106，1mg/kg
4)硫基-Her2 hu7C2 LC-K149C-(LD-51)單醯胺，ADC-106，5mg/kg
5)Tmab-DM1，ADC-211，1mg/kg+硫基-Her2 hu7C2 LC-K149C-(LD-51)單醯胺，ADC-106，1mg/kg
6)Tmab-DM1，ADC-211，1mg/kg+硫基-Her2 hu7C2 LC-K149C-(LD-51)單醯胺，ADC-106，5mg/kg
圖6顯示一旦用以下各項靜脉內給藥，在CRL nu/nu小鼠中 之HER2 Fo5模型中隨時間推移活體內擬合之腫瘤體積變化之曲綫中抗體-藥物結合物的功效：
1)媒劑(組胺酸緩衝液#8)，100μL
2)硫基-Her2 hu7C2 LC-K149C-(CLD-1)，ADC-201，0.5mg/kg
3)硫基-Her2 hu7C2 LC-K149C-(CLD-1)，ADC-201，1mg/kg
4)硫基-Her2 hu7C2 LC-K149C-(LD-51)，單醯胺，ADC-104，5mg/kg
5)硫基-Her2 hu7C2 LC-K149C-(LD-51)，單醯胺，ADC-104，10mg/kg
6)硫基-Her2 hu7C2 LC-K149C-(LD-51)，單醯胺，ADC-104，15mg/kg
7)硫基-Her2 hu7C2 LC-K149C未結合之抗體15mg/kg
8)硫基-CD22 LC-K149C-(CLD-1)，ADC-202，1mg/kg
9)硫基-CD22 LC-K149C-(LD-51)單醯胺ADC-105，15mg/kg
圖7顯示一旦用以下各項靜脉內給藥，在scid beige小鼠中之HER2 KPL4腫瘤模型中隨時間推移活體內擬合之腫瘤體積變化之曲綫中抗體-藥物結合物的功效：
1)媒劑
2)硫基-Her2 hu7C2 LC-K149C-(CLD-1)，ADC-201，1mg/kg
3)硫基-Her2 hu7C2 LC-K149C-(CLD-1)，ADC-201，3mg/kg
4)硫基-Her2 hu7C2 LC-K149C-(LD-51)單醯胺，ADC-104，3mg/kg
5)硫基-Her2 hu7C2 LC-K149C-(LD-51)單醯胺，ADC-104，6mg/kg
6)硫基-Her2 hu7C2 LC-K149C-(LD-51)單醯胺，ADC-104，10mg/kg
7)硫基-Her2 hu7C2 LC-K149C，未結合之抗體，3mg/kg
8)硫基-Her2 hu7C2 LC-K149C，未結合之抗體，10mg/kg
9)硫基-CD22 LC-K149C-(CLD-1)，ADC-202，3mg/kg
10)硫基-CD22 LC-K149C-(LD-51)單醯胺，ADC-105，10mg/kg
圖8顯示一旦用以下各項靜脉內給藥，在CRL nu/nu小鼠中之HER2 Fo5模型中隨時間推移活體內擬合之腫瘤體積變化之曲綫中抗體-藥物結合物的功效：
1)媒劑
2)硫基-Her2 hu7C2 LC-K149C-(LD-51)，單醯胺，ADC-106，5mg/kg
3)硫基-Her2 hu7C2 LC-K149C-(LD-51)，單醯胺，ADC-106，10mg/kg
4)硫基-Her2 hu7C2 LC-K149C-(LD-52)，單胺，ADC-108，0.5mg/kg
5)硫基-Her2 hu7C2 LC-K149C-(LD-52)，單胺，ADC-108，2mg/kg
6)硫基-Her2 hu7C2 LC-K149C-(LD-52)，單胺，ADC-108，5mg/kg
7)Ctrl CD22 LC-K149C-(LD-52)，單胺，ADC-107，2mg/kg
圖9顯示一旦用以下各項靜脉內給藥，在CB-17 Fox Chase SCID小鼠中之WSU-DLCL2异種移植物模型中隨時間推移活體內擬合之腫瘤體積變化之曲綫中抗體-藥物結合物的功效：
1)媒劑(組胺酸緩衝液#8)，100uL
2)硫基Hu抗-CD22 LC-K149C-(LD-51)，單醯胺，ADC-104，6mg/kg
3)硫基Hu抗-CD22 LC-K149C-(LD-51)，單醯胺，ADC-104，16.4mg/kg
4)硫基Hu抗-CD22 LC-K149C-HC-L177C-(LD-51)，單醯胺，ADC-111，3.3mg/kg
5)硫基Hu抗-CD22 LC-K149C-HC-L177C-(LD-51)，單醯胺，ADC-111，6mg/kg
6)硫基Hu抗-CD22 LC-K149C-HC-L177C-(LD-51)，單醯胺，ADC-111，9mg/kg
7)硫基Hu抗-CD22 LC-K149C-HC-L177C-HC-Y376C-(LD-51)，單醯胺，ADC-112，2.2mg/kg
8)硫基Hu抗-CD22 LC-K149C-HC-L177C-HC-Y376C-(LD-51)，單醯胺，ADC-112，6mg/kg
9)硫基Hu抗-Her2 hu7C2 LC K149C-(LD-51)，單醯胺，ADC-106，16.2mg/kg
10)硫基Hu抗-Her2 4D5 LC K149C-HC L177C-(LD-51)，單醯胺，ADC-113，8.3mg/kg
圖10顯示一旦用以下各項靜脉內給藥，在SCID Beige小鼠中之HCC1569X2异種移植物模型中隨時間推移活體內擬合之腫瘤體積變化之曲綫中抗體-藥物結合物的功效：
1)媒劑(組胺酸緩衝液#8)，100uL
2)硫基Hu抗-Ly6E LC K149C-(CLD-1)，ADC-212，1mg/kg
3)硫基Hu抗-Ly6E LC K149C-(CLD-1)，ADC-212，3mg/kg
4)硫基Hu抗-Ly6E LC K149C-(LD-51)單醯胺，ADC-115，3mg/kg
5)硫基Hu抗-Ly6E LC K149C-(LD-51)單醯胺，ADC-115，6mg/kg
6)硫基Hu抗-Ly6E LC K149C-(LD-51)單醯胺，ADC-115，12mg/kg
7)硫基Hu抗-Ly6E LC K149C-(LD-51)單醯胺，ADC-115，18mg/kg
8)硫基Hu抗-CD22 10F4v3 LC K149C-(LD-51)單醯胺，ADC-110，12mg/kg
9)硫基Hu抗-Ly6E LC K149C-(CLD-4)，單胺，ADC-210，1mg/kg
10)硫基Hu抗-Ly6E LC K149C-(CLD-4)，單胺，ADC-210，3mg/kg
11)硫基Hu抗-Ly6E LC K149C-(CLD-4)，單胺，ADC-210，6mg/kg
12)硫基Hu抗-CD22 10F4v3 LC K149C-(CLD-4)，單胺，ADC-204，3mg/kg
圖11顯示二烷化劑吡咯并苯并二氮呯(PBD)化合物及兩種單烷化劑吡咯并苯并二氮呯化合物與DNA之推定相互作用。
圖12顯示HER2 LC K149C LD-51 ADC與HER2 LC K149C CLD-1 ADC之小鼠功效及食蟹獼猴毒理學之比較。
圖13顯示HER2 LC K149C LD-51 ADC與HER2 LC K149C CLD-1 ADC之基於暴露的治療指數評估。
圖14顯示具有不同連接子之若干HER2 hu7C2 LC K149C ADC的細胞活力檢定資料。
圖15示出小鼠同種异體移植物腫瘤模型中各種ADC之隨時間推移的腫瘤體積。
現將詳細參照本發明某些實施例，該等實施例之實例以所附結構及式予以說明。儘管本發明將結合列舉之實施例進行描述，但應瞭解，其不欲將本發明局限於彼等實施例。相反，本發明意欲涵蓋可包括在本發明之如由申請專利範圍限定之範疇內的所有替代物、修改及等效物。
熟習此項技術者將認識到與本文所述者相類似或相當之許 多方法及材料，其可用於實踐本發明。本發明决不限於所述方法及材料。
除非另外定義，否則本文中使用之技術及科學術語具有與熟習本發明所屬之技術者所普遍理解之相同含義，且與以下各項一致：Singleton等人(1994)Dictionary of Microbiology and Molecular Biology,第2版，J.Wiley & Sons,New York,NY；及Janeway,C.,Travers,P.,Walport,M.,Shlomchik(2001)Immunobiology，第5版，Garland Publishing,New York。
定義
除非另外說明，否則如本文使用之下列術語及片語意欲具有下列含義：當本文中使用商標名時，申請人意欲獨立地包括所述商標名產品調配物、通用藥物及所述商標名產品之活性醫藥成分。
出於本文之目的，「接受體人類構架」為以下構架，其包含源於如以下定義之人類免疫球蛋白構架或人類共同構架之輕鏈可變域(VL)構架或重鏈可變域(VH)構架的胺基酸序列。「源於」人類免疫球蛋白構架或人類共同構架之接受體人類構架可包含與人類免疫球蛋白構架或人類共同構架相同之胺基酸序列，或其可含有胺基酸序列變化。在一些實施例中，胺基酸變化數目為10處或10處以下、9處或9處以下、8處或8處以下、7處或7處以下、6處或6處以下、5處或5處以下、4處或4處以下、3處或3處以下，或2處或2處以下。在一些實施例中，VL接受體人類構架之序列與VL人類免疫球蛋白構架序列或人類共同構架序列一致。
「親和力」係指分子(例如抗體)之單個結合位點與其結合搭配物(例如抗原)之間非共價相互作用的强度總和。除非另外指示，否則如本文所用之「結合親和力」係指反映結合對(例如抗體與抗原)成員之間之1：1相互作用的固有結合親和力。分子X對其搭配物Y之親和力通常可由解離常數(Kd)表示。親和力可藉由此項技術中已知之常用方法(包括本文所述者)加以量測。在下文中描述量測結合親和力之特定說明性及例示性實施例。
在某些實施例中，如本文所述之抗體之解離常數(Kd)1μM、100nM、10nM、5Nm、4nM、3nM、2nM、1nM、0.1nM、0.01nM或0.001nM(例如10-8M或10-8M以下，例如10-8M至 10-13M，例如10-9M至10-13M)。
「親和力成熟」抗體係指在一或多個高變區(HVR)中具有一或多處改變之抗體，與不具有該等改變之親本抗體相比，該等改變改良該抗體對抗原之親和力。
術語「抗體」在本文中係以最廣泛意義使用且涵蓋各種抗體結構，包括但不限於單株抗體、多株抗體、多特异性抗體(例如雙特异性抗體)及抗體片段，只要其展現所要抗原結合活性即可。
「抗體片段」係指除完整抗體以外之分子，該分子包含完整抗體之一部分且結合完整抗體所結合之抗原。抗體片段之實例包括(但不限於)Fv、Fab、Fab'、Fab’-SH、F(ab')2；雙功能抗體；綫性抗體；單鏈抗體分子(例如scFv)；及由抗體片段形成之多特异性抗體。
術語「癌症」及「癌性」係指或描述哺乳動物之特徵通常在於細胞生長/增殖失調之生理學病狀。「腫瘤」包含一或多種癌細胞。癌症之實例包括(但不限於)癌瘤、淋巴瘤、母細胞瘤、肉瘤及白血病或淋巴惡性腫瘤。該等癌症之更特定實例包括鱗狀細胞癌(例如上皮鱗狀細胞癌)；肺癌，包括小細胞肺癌、非小細胞肺癌(「NSCLC」)、肺腺癌及肺鱗狀癌；腹膜癌；肝細胞癌(hepatocellular cancer)；胃癌(gastric/stomach cancer)，包括胃腸癌：胰腺癌；神經膠質母細胞瘤；子宮頸癌；卵巢癌；肝癌(liver cancer)；膀胱癌；肝細胞瘤(hepatoma)；乳癌；結腸癌；直腸癌；結腸直腸癌；子宮內膜或子宮癌；唾液腺癌；腎癌(kidney/renal cancer)；前列腺癌；陰門癌；甲狀腺癌；肝癌；肛門癌；陰莖癌；以及頭頸癌。
「HER2陽性」癌症包括HER2水準高於正常水準之癌細胞。HER2陽性癌症之實例包括HER2陽性乳癌及HER2陽性胃癌。視情况，HER2陽性癌症之免疫組織化學(IHC)評分為2+或3+及/或原位雜交(ISH)擴增比2.0。
術語「早期乳癌(early stage breast cancer)(EBC)」或「早期乳癌(early breast cancer)」在本文用於指尚未擴散到乳腺以下或腋窩淋巴結之乳癌。此包括導管原位癌及第I期、第IIA期、第IIB期及第IIIA期乳癌。
腫瘤或癌症稱為「第0期」、「第I期」、「第II期」、「第III 期」或「第IV期」及此分類之內的各種子階段指示使用此項技術中已知之總體階段分組或羅馬數字分期方法之腫瘤或癌症分類。雖然癌症之實際階段視癌症之類型而定，但一般而言，第0期癌症為原位病變，第I期癌症為小局部化腫瘤，第II期及第III期癌症為展現局部淋巴結牽連之局部晚期腫瘤，且第IV期癌症表示轉移性癌症。每種類型之腫瘤之特定階段對於熟練臨床醫師而言為已知。
術語「轉移性乳癌」意謂其中癌細胞經由血管或淋巴管從原始部位傳播至身體中其他地方之一或多個部位而在除乳腺之外的一或多個器官中形成一或多種繼發性腫瘤的乳癌狀態。
「晚期」癌症為已經由局部侵入或轉移擴散到起源部位或器官外部之癌症。因此，術語「晚期」癌症包括局部晚期及轉移性疾病兩者。
「復發性」癌症為在對初始治療(諸如手術)有反應之後在初始部位或在遠處部位再生之癌症。
「局部復發性」癌症為在治療之後在與先前治療之癌症相同位置中返回之癌症。
「可手術」或「可切除」癌症為局限於原發器官且適合於手術(切除)之癌症。
「非可切除」或「不可切除」癌症不能够藉由手術移除(切除)。
術語「嵌合」抗體係指重鏈及/或輕鏈之一部分源於特定來源或物種，而重鏈及/或輕鏈之其餘部分源於不同來源或物種之抗體。
抗體之「類別」係指抗體重鏈所具有之恒定域或恒定區之類型。存在五個主要抗體類別：IgA、IgD、IgE、IgG及IgM，且此等類別中之若干類別可進一步分成子類(同型)，例如IgG1、IgG2、IgG3、IgG4、IgA1及IgA2。對應於不同免疫球蛋白類別之重鏈恒定域分別稱為α、δ、ε、γ及μ。
如本文所用之術語「細胞毒性劑」係指抑制或阻止細胞功能及/或導致細胞死亡或破壞之物質。細胞毒性劑包括但不限於放射性同位素(例如At211、I131、I125、Y90、Re186、Re188、Sm153、Bi212、P32、Pb212及Lu之放射性同位素)；化學治療劑或藥物(例如甲胺蝶呤、阿德力黴素 (adriamicin)、長春花生物鹼(長春新鹼、長春花鹼、依托泊苷)、小紅莓、美法侖、絲裂黴素C、苯丁酸氮芥、道諾黴素或其他嵌入劑)；生長抑制劑；酶及其片段，諸如核分解酶；抗生素；毒素，諸如細菌、真菌、植物或動物來源之小分子毒素或酶活性毒素，包括其片段及/或變异體；及下文揭示之各種抗腫瘤劑或抗癌劑。
「效應功能」係指可歸因於抗體之Fc區之彼等生物活性，其隨抗體同型而變化。抗體效應功能之實例包括：C1q結合及補體依賴性細胞毒性(CDC)；Fc受體結合；抗體依賴性細胞介導之細胞毒性(ADCC)；吞噬作用；細胞表面受體(例如B細胞受體)之下調；及B細胞活化。
藥劑(例如醫藥調配物)之「有效量」係指在一定劑量下且持續一段必需時間有效達成所要治療性或防治性結果之量。用於治療癌症之有效量之藥物可减少癌細胞之數目；降低腫瘤尺寸；抑制(亦即在某種程度上减慢且較佳地停止)癌細胞浸潤至外周器官中；抑制(亦即在某種程度上减慢且較佳地停止)腫瘤轉移；在某種程度上抑制腫瘤生長；及/或在某種程度上减輕與癌症相關之一或多種症狀。在藥物可預防生長及/或殺死現有癌細胞之程度上，其可為細胞抑制性的及/或細胞毒性的。有效量可延長無進展存活(例如，如藉由針對實體腫瘤之反應評價標準、RECIST或CA-125變化)，產生客觀反應(包括部分反應(PR)或完全反應(CR))，增加總體存活時間及/或改善癌症之一或多種症狀(例如，如藉由FOSI所評估)。
術語「抗原决定基」係指抗體所結合之在抗原分子上之特定位點。
「抗原决定基4D5」或「4D5抗原决定基」或「4D5」為抗體4D5(ATCC CRL 10463)及曲妥珠單抗所結合之HER2之細胞外域中之區域。此抗原决定基接近於HER2之跨膜域，且在HER2之域IV內。為篩選結合4D5抗原决定基之抗體，可進行諸如描述於Antibodies,A Laboratory Manual,Cold Spring Harbor Laboratory,Ed Harlow及David Lane(1988)中之常規交叉阻斷檢定。或者，可進行抗原决定基定位以評估抗體是否結合HER2之4D5抗原决定基(例如，HER2(SEQ ID NO：39)之約殘基550至約殘基610(包括殘基550與殘基610)之區域中的任何一或多個殘基)。
「抗原决定基2C4」或「2C4抗原决定基」為抗體2C4所結合之HER2之細胞外域中之區域。為篩選結合2C4抗原决定基之抗體，可進行諸如描述於Antibodies,A Laboratory Manual,Cold Spring Harbor Laboratory,Ed Harlow及David Lane(1988)中之常規交叉阻斷檢定。或者，可進行抗原决定基定位以評估抗體是否結合HER2之2C4抗原决定基。抗原决定基2C4包含來自HER2之細胞外域中之域II的殘基。2C4抗體及帕妥珠單抗在域I、II及III之接頭處結合HER2之細胞外域(Franklin等人Cancer Cell 5：317-328(2004))。
抗HER2鼠類抗體7C2結合HER2之域I中之抗原决定基。參見例如PCT公開案第WO 98/17797號。此抗原决定基與曲妥珠單抗(其結合HER2之域IV)所結合之抗原决定基及帕妥珠單抗(其結合HER2之域II)所結合之抗原决定基不同。藉由結合域IV，曲妥珠單抗破壞配位體獨立性HER2-HER3複合物，進而抑制下游信號傳導(例如PI3K/AKT)。相比之下，結合域II之帕妥珠單抗防止與其他HER家族成員(例如HER3、HER1或HER4)之配位體驅動之HER2相互作用，因此亦防止下游信號轉導。MAb 7C2與域I之結合不會導致對曲妥珠單抗或帕妥珠單抗分別與域IV及II結合之干擾，進而提供組合MAb 7C2 ADC與曲妥珠單抗、曲妥珠單抗安坦辛(T-DM-1)及/或帕妥珠單抗之潜力。鼠類抗體7C2、7C2.B9描述於PCT公開案第WO 98/17797號中。抗HER2 7C2人類化抗體揭示於WO2016/040723A1中。
術語「Fc區」在本文中用於定義免疫球蛋白重鏈之含有至少一部分恒定區之C末端區域。該術語包括天然序列Fc區域及變异體Fc區域。在一實施例中，人類IgG重鏈Fc區從Cys226或Pro230延伸至重鏈之羧基末端。然而，Fc區之C末端離胺酸(Lys447)可存在或可不存在。除非本文另外規定，否則Fc區或恒定區中之胺基酸殘基之編號係根據EU編號系統，亦稱為EU索引，如Kabat等人，Sequences of Proteins of Immunological Interest，第5版Public Health Service,National Institutes of Health,Bethesda,MD,1991中所描述。
「構架」或「FR」係指除高變區(HVR)殘基以外之可變域殘 基。可變域之FR通常由四個FR域組成：FR1、FR2、FR3及FR4。因此，HVR及FR序列通常按以下順序出現在VH(或VL)中：FR1-H1(L1)-FR2-H2(L2)-FR3-H3(L3)-FR4。
術語「全長抗體」、「完整抗體」及「全抗體」在本文中可互換用於指具有實質上與天然抗體結構類似之結構或具有含有如本文定義之Fc區之重鏈的抗體。
術語「宿主細胞」、「宿主細胞株」及「宿主細胞培養物」可互換使用且係指已引入有外源性核酸之細胞，包括此等細胞之子代。宿主細胞包括「轉型體」及「轉型細胞」，其包括初級轉型細胞及源於其之子代而不考慮繼代數目。子代在核酸內含物方面可能不與母細胞完全相同，而可能含有突變。本文包括具有與在原始轉型細胞中所篩檢或選擇相同之功能或生物活性之突變型子代。
「人類抗體」為具有對應於由人類或人類細胞所產生或源於利用人類抗體譜系或其他人類抗體編碼序列之非人類來源之抗體胺基酸序列之胺基酸序列的抗體。人類抗體之此定義明確排除包含非人類抗原結合殘基之人類化抗體。
「人類共同構架」為代表在人類免疫球蛋白VL或VH構架序列之選擇中最常出現之胺基酸殘基的構架。一般而言，人類免疫球蛋白VL或VH序列係選自可變域序列之亞群。一般而言，序列亞群為如Kabat等人，Sequences of Proteins of Immunological Interest，第5版，NIH Publication 91-3242,Bethesda MD(1991)，第1-3卷中之亞群。在一實施例中，對於VL，亞群為如Kabat等人(同上)中之亞群κ I。在一實施例中，對於VH，亞群為如Kabat等人(同上)中之亞群III。
「人類化」抗體係指包含來自非人類HVR之胺基酸殘基及來自人類FR之胺基酸殘基的嵌合抗體。在某些實施例中，人類化抗體將包含實質上全部至少一個且通常兩個可變域，其中全部或實質上全部HVR(例如CDR)對應於非人類抗體之HVR，且全部或實質上全部FR對應於人類抗體之FR。人類化抗體視情况可包含源於人類抗體之抗體恒定區之至少一部分。例如非人類抗體之抗體之「人類化形式」係指已進行人類化之抗體。
如本文所用之術語「高變區」或「HVR」係指抗體可變域中序列高變及/或形成結構確定之環(「高變環」)之各區域。一般而言，天然四鏈抗體包含六個HVR；三個在VH中(H1、H2、H3)，且三個在VL中(L1、L2、L3)。HVR通常包含來自高變環之胺基酸殘基及/或來自「互補决定區」(CDR)之胺基酸殘基，互補决定區具有最高序列可變性及/或參與抗原識別。例示性高變環存在於胺基酸殘基26-32(L1)、50-52(L2)、91-96(L3)、26-32(H1)、53-55(H2)及96-101(H3)處。(Chothia及Lesk,J.Mol.Biol.196：901-917(1987)。)例示性CDR(CDR-L1、CDR-L2、CDR-L3、CDR-H1、CDR-H2及CDR-H3)存在於L1之胺基酸殘基24-34、L2之胺基酸殘基50-56、L3之胺基酸殘基89-97、H1之胺基酸殘基31-35B、H2之胺基酸殘基50-65及H3之胺基酸殘基95-102處。(Kabat等人，Sequences of Proteins of Immunological Interest，第5版Public Health Service,National Institutes of Health,Bethesda,MD(1991)。除VH中之CDR1之外，CDR通常包含形成高變環之胺基酸殘基。CDR亦包含作為接觸抗原之殘基的「特异性决定殘基」或「SDR」。SDR係含在CDR之稱為縮略CDR(abbreviated-CDR)或a-CDR之區域內。例示性a-CDR(a-CDR-L1、a-CDR-L2、a-CDR-L3、a-CDR-H1、a-CDR-H2及a-CDR-H3)存在於L1之胺基酸殘基31-34、L2之胺基酸殘基50-55、L3之胺基酸殘基89-96、H1之胺基酸殘基31-35B、H2之胺基酸殘基50-58及H3之胺基酸殘基95-102處。(參見Almagro及Fransson,Front.Biosci.13：1619-1633(2008)。)除非另外指示，否則HVR殘基及可變域中之其他殘基(例如FR殘基)在本文中係根據Kabat等人(同上)加以編號。
「免疫結合物」為結合於一或多個异源分子(包括但不限於細胞毒性劑)之抗體。
「患者」或「個體」或「受試者」為哺乳動物。哺乳動物包括但不限於馴養動物(例如母牛、綿羊、猫、狗及馬)、靈長類動物(例如人類及非人類靈長類動物，諸如猴)、兔及嚙齒動物(例如小鼠及大鼠)。在某些實施例中，患者、個體或受試者為人類。在一些實施例中，患者可為「癌症患者」，亦即患有或處於患有癌症、特定言之胃癌或乳癌之一或多種症狀 之患者。
「患者群體」係指一組癌症患者。此等群體可用於證明藥物之統計上顯著之功效及/或安全性。
「復發」患者為在緩解之後具有癌症之病徵或症狀之患者。視情况，患者在輔助或新輔助療法之後復發。
「展示HER表現、擴增或活化」之癌症或生物樣品為在診斷測試中表現(包括過度表現)HER受體、具有經擴增之HER基因及/或另外證明HER受體之活化或磷酸化之癌症或生物樣品。
「新輔助療法」或「手術前療法」在本文係指在手術之前給輿之療法。新輔助療法之目的在於提供即時全身性治療，從而潜在根除將在遵循手術、隨後全身性療法之標準順序之情形下另外增殖之微轉移。新輔助療法亦可幫助降低腫瘤尺寸，進而允許初始不可切除腫瘤之完全切除或保存器官部分及其功能。此外，新輔助療法容許活體內評估藥物功效，此可指導隨後治療之選擇。
「輔助療法」在本文係指在確定性手術之後給輿之療法，其中不可偵測到殘餘疾病之述象，以便降低疾病復發之風險。輔助療法之目的在於預防癌症之復發，且因此降低癌症相關死亡之機會。本文中之輔助療法明確排除新輔助療法。
「確定性手術」如同該術語用於醫學界內一樣使用。確定性手術包括例如，導致腫瘤移除或切除之程序、手術或其他，包括導致全部顯著可見腫瘤之移除或切除者。確定性手術包括例如，腫瘤之完全或治愈性切除或基本完全切除。確定性手術包括在一或多個階段中發生之程序，且包括例如多階段手術程序，其中一或多個手術或其他程序在腫瘤切除之前進行。確定性手術包括用於移除或切除包括牽涉器官、部分器官及組織以及諸如淋巴結之周圍器官、部分器官或組織之腫瘤的程序。移除可為不完全的，以致雖然不可偵測到，但腫瘤細胞可能仍然存在。
「存活」係指患者仍然活著，且包括無疾病存活(DFS)、無進展存活(PFS)及總體存活(OS)。可藉由卡普蘭-邁耶(Kaplan-Meier)方法估計存活，且使用分層對數秩檢驗計算存活之任何差异。
「無進展存活」(PFS)為從治療第一天至記錄之疾病進展(包括分離之CNS進展)或由於所研究之任何原因之死亡(無論哪個首先發生)的時間。
「無疾病存活」(DFS)係指自治療開始或初始診斷起，患者仍然活著而無癌症返回持續限定時間段，諸如約1年、約2年、約3年、約4年、約5年、約10年等。在本發明之一個態樣中，DFS係根據意向治療原則加以分析，亦即基於患者之經分配療法對患者加以評價。在DFS之分析中使用之事件可包括癌症之局部、區域及遠端復發，繼發癌症之出現，及無先前事件(例如，乳癌復發或第二原發癌)之患者中由於任何原因的死亡。
「總體存活」係指自治療開始或初始診斷起，患者仍然活著持續限定時間段，諸如約1年、約2年、約3年、約4年、約5年、約10年等。在本發明的基礎研究中，用於存活分析之事件為由於任何原因之死亡。
「延長存活」意謂相對於未經治療之患者或相對於對照治療方案，增加經治療患者之DFS及/或OS。在開始治療或初始診斷之後，監測存活持續至少約六個月，或至少約1年、或至少約2年、或至少約3年、或至少約4年、或至少約5年、或至少約10年等。
「單一療法」意謂在治療期過程期間僅包括用於治療癌症或腫瘤之單一治療劑之治療方案。
「維持療法」意謂給輿以降低疾病復發或進展之可能性之治療方案。可提供維持療法持續任何時間長度，包括延長之時間段直至受試者之壽命。維持療法可在初始療法之後或與初始或另外療法結合提供。用於維持療法之劑量可變化且可包括相較於用於其他類型之療法的劑量减少之劑量。
「經分離抗體」為已與其自然環境之組分分離之抗體。在一些實施例中，將抗體純化至大於95%或99%純度，如藉由例如電泳(例如SDS-PAGE、等電聚焦(IEF)、毛細管電泳)或層析(例如離子交換或逆相HPLC)所測定。關於評估抗體純度之方法之綜述，參見例如Flatman等人，J. Chromatogr.B 848：79-87(2007)。
「經分離核酸」係指已與其自然環境之組分分離之核酸分子。經分離核酸包括通常含有核酸分子之細胞中含有之核酸分子，但該核酸分子係存在於染色體外或存在於不同於其天然染色體位置之染色體位置處。
「編碼抗體之經分離核酸」係指一或多個編碼抗體重鏈及輕鏈(或其片段)之核酸分子，包括在單一載體或各別載體中之此(此等)核酸分子及存在於宿主細胞中之一或多個位置處之此(此等)核酸分子。
如本文所用之術語「HER2」係指由加工細胞中之HER2前驅體蛋白所產生之任何天然成熟HER2。除非另外指示，否則該術語包括來自任何脊椎動物來源之HER2，該脊椎動物來源包括哺乳動物，諸如靈長類動物(例如人類及食蟹獼猴)及嚙齒動物(例如小鼠及大鼠)。該術語亦包括HER2之天然存在之變异體，例如剪接變异體或對偶基因變异體。具有信號序列(具有信號序列，胺基酸1-22)之例示性人類HER2前驅體蛋白之胺基酸序列顯示於SEQ ID NO：64中。例示性成熟人類HER2之胺基酸序列為SEQ ID NO：64之胺基酸23-1255。
術語「HER2陽性細胞」係指在其表面上表現HER2之細胞。
如本文所用之術語「單株抗體」係指自實質上均質之抗體群體獲得之抗體，亦即除可能之變异抗體(例如含有天然存在之突變或在製備單株抗體製備物期間產生，此等變异體通常少量存在)之外，構成該群體之個別抗體相同及/或結合相同抗原决定基。與通常包括針對不同决定子(抗原决定基)之不同抗體之多株抗體製備物不同，單株抗體製備物之各單株抗體係針對抗原上之單個决定子。因此，修飾語「單株」指示如從抗體之實質上均質群體獲得之抗體的特性，且不應理解為要求該等任何特定方法來產生抗體。舉例而言，根據本發明使用之單株抗體可藉由各種技術製成，包括但不限於融合瘤方法、重組DNA方法、噬菌體展示方法，及利用含有全部或一部分人類免疫球蛋白基因座之轉殖基因動物的方法，此等方法及製造單株抗體之其他例示性方法在本文中描述。
「裸抗體」係指未結合於异源部分(例如細胞毒性部分)或放 射性標記之抗體。裸抗體可存在於醫藥調配物中。
「天然抗體」係指具有不同結構之天然存在之免疫球蛋白分子。舉例而言，天然IgG抗體為約150,000道爾頓之异源四聚醣蛋白，由經二硫鍵鍵結之兩個相同輕鏈及兩個相同重鏈構成。自N末端至C末端，各重鏈具有可變區(VH)，亦稱為可變重域或重鏈可變域，隨後為三個恒定域(CH1、CH2及CH3)。類似地，自N末端至C末端，各輕鏈具有可變區(VL)，亦稱為可變輕域或輕鏈可變域，之後為恒定輕(CL)域。抗體之輕鏈可基於其恒定域之胺基酸序列指定為稱為κ(κ)及λ(λ)之兩種類型中之一者。
「小瓶」為適合用於容納液體或凍乾製備物之容器。在一實施例中，小瓶為單次使用小瓶，例如具有塞子之20-cc單次使用小瓶。
術語「包裝插頁」用於指慣常包括在治療性產品之商業包裝中之說明書，其含有關於與使用此等治療性產品相關之適應症、用法、劑量、投藥、組合療法、禁忌症及/或警告的資訊。
相對於參照多肽序列之「胺基酸序列一致性百分比(%)」定義為在比對參照多肽序列與候選序列且必要時引入間隙以達成最大序列一致性百分比之後，且在不將任何保守性取代視為序列一致性之一部分的情况下，候選序列中與參照多肽序列中之胺基酸殘基一致的胺基酸殘基之百分比。可以此項技術中之技能範圍內之多種方式，例如使用可公開獲得之電腦軟體，諸如BLAST、BLAST-2、ALIGN或Megalign(DNASTAR)軟體來達成比對以便測定胺基酸序列一致性百分比。熟習此項技術者可確定適用於比對序列之參數，包括在所比較序列之全長範圍內達成最大比對所需之任何算法。然而，出於本文目的，使用序列比較電腦程式ALIGN-2產生胺基酸序列一致性%值。ALIGN-2序列比較電腦程式由Genentech,Inc.創造，且原始程式碼已與使用說明書一起在美國版權局(U.S.Copyright Office,Washington D.C.,20559)存檔，其中其以美國版權登記號TXU510087登記。ALIGN-2程式可公開自Genentech,Inc.,South San Francisco,California獲得，或可自原始程式碼編譯。ALIGN-2程式應編譯以用於UNIX操作系統(包括數位UNIX V4.0D)。所有序列比較參數皆由ALIGN-2程式設定且不改變。
在采用ALIGN-2進行胺基酸序列比較之情形下，既定胺基 酸序列A對於、與或相對於既定胺基酸序列B之胺基酸序列一致性%(或者可稱為既定胺基酸序列A對於、與或相對於既定胺基酸序列B具有或包含某一%之胺基酸序列一致性)係如下加以計算：100乘分數X/Y
其中X為藉由序列比對程式ALIGN-2在彼程式進行A與B比對時計分為相同匹配之胺基酸殘基數，且其中Y為B中之胺基酸殘基總數。應瞭解當胺基酸序列A之長度不等於胺基酸序列B之長度時，A對於B之胺基酸序列一致性%將不等於B對於A之胺基酸序列一致性%。除非另外明確陳述，否則本文使用之所有胺基酸序列一致性%值皆係使用ALIGN-2電腦程式如前一段中所述來獲得。
術語「醫藥調配物」係指以下製備物，其呈允許當中所含之活性成分之生物活性有效之形式，且不含對調配物所將投與之受試者有不可接受毒性之其他組分。
「醫藥學上可接受之載劑」係指醫藥調配物中除活性成分以外之對受試者無毒的成分。醫藥學上可接受之載劑包括但不限於緩衝劑、賦形劑、穩定劑或防腐劑。
如本文所用之「治療(treatment)」(及其語法變化形式，諸如「治療(treat)」或「治療(treating)」)係指試圖改變所治療個體之自然病程，且可為達成防治目的或在臨床病理過程中進行之臨床介入。合乎需要之治療作用包括但不限於防止疾病發生或復發、减輕症狀、减弱疾病之任何直接或間接病理學結果、防止轉移、降低疾病進展速率、改善或緩解疾病病况及緩和或改善預後。在一些實施例中，本發明之抗體用於延遲疾病發展或减緩疾病進展。
「共同投與」意謂在同一投藥期間靜脉內投與兩種(或兩種以上)藥物，而不是依序輸注兩種或兩種以上藥物。一般而言，此將涉及在兩種(或兩種以上)藥物共同投與之前將其組合至同一IV袋中。
與一或多種其他藥物「同時」投與之藥物係在同一治療週期期間、與該一或多種其他藥物同一天治療且視情况在與該一或多種其他藥物同一時間投與。例如，對於每3週給輿之癌症療法，同時投與之藥物係 各自在3週週期之第1天投與。
「化學治療劑」係指適用於治療癌症之化學化合物。化學治療劑之實例包括烷化劑諸如塞替派及環磷醯胺(CYTOXAN®)；磺酸烷基酯諸如白消安、英丙舒凡及哌泊舒凡；氮丙啶類諸如苯佐替派(benzodopa)、卡波醌、美妥替派(meturedopa)及烏瑞替派(uredopa)；乙烯亞胺及甲基密胺，包括六甲蜜胺、三伸乙基密胺、三伸乙基磷醯胺、三伸乙基硫代磷醯胺及三羥甲基密胺；番荔枝內酯(acetogenin)(尤其是布拉他辛(bullatacin)及布拉他辛酮(bullatacinone))；δ-9-四氫大麻酚(屈大麻酚，MARINOL®)；β-拉帕醌；拉帕醇；秋水仙鹼；樺木酸；喜樹鹼(包括合成類似物托泊替康(HYCAMTIN®)、CPT-11(伊立替康，CAMPTOSAR®)；乙醯基喜樹鹼、莨菪素及9-胺基喜樹鹼)；苔蘚抑素；卡裏斯他汀(callystatin)；CC-1065(包括其合成類似物阿多來新、卡澤來新及比澤來新)；鬼臼毒素；鬼臼酸；替尼泊苷；念珠藻環肽(尤其是念珠藻環肽1及念珠藻環肽8)；多拉司他汀；倍癌黴素(包括合成類似物KW-2189及CB1-TMI)；艾榴塞洛素；水鬼蕉鹼；匍枝珊瑚醇(sarcodictyin)；海綿抑素；氮芥類諸如苯丁酸氮芥、萘氮芥、氯磷醯胺(chlorophosphamide)、雌莫司汀、异環磷醯胺、氮芥、鹽酸氧氮芥、美法侖、新恩比興、苯芥膽甾醇、潑尼莫司汀、曲磷胺、烏拉莫司汀；亞硝基脲類諸如卡莫司汀、氯脲菌素、福莫司汀、洛莫司汀、尼莫司汀及雷莫司汀；抗生素類諸如烯二炔抗生素(例如卡奇黴素，尤其是卡奇黴素γ1I及卡奇黴素ωI1(參見，例如，Nicolaou等人，Angew.Chem Intl.Ed.Engl.,33：183-186(1994))；CDP323；經口α-4整聯蛋白抑制劑；達內黴素，包括達內黴素A；埃斯培拉黴素；以及新制癌菌素生色團及相關色蛋白烯二炔抗生素生色團)、阿克拉黴素(aclacinomysin)、放線菌素、安麯黴素(authramycin)、偶氮絲胺酸、博來黴素、放綫菌素C、卡拉比星(carabicin)、洋紅黴素(caminomycin)、嗜癌黴素、色黴素、放線菌素D、道諾黴素、地托比星、6-重氮-5-側氧基-L-正白胺酸、小紅莓(包括ADRIAMYCIN®、(N-嗎啉基)-小紅莓、氰基(N-嗎啉基)-小紅莓、2-(N-吡咯啉基)-小紅莓、小紅莓HCl脂質體注射劑(DOXIL®)、脂質體小紅莓TLCD-99(MYOCET®)、聚乙二醇脂質體小紅莓(CAELYX®)及脫氧小紅莓)、表柔比星、依索比星、伊達比星、 麻西羅黴素、絲裂黴素類諸如絲裂黴素C、黴酚酸、諾加黴素、橄欖黴素、培洛黴素、泊非黴素、嘌呤黴素、三鐵阿黴素、羅多比星、鏈黑黴素、鏈脲佐菌素、殺結核菌素、烏苯美司、淨司他丁、佐柔比星；抗代謝藥諸如甲胺蝶呤、吉西他賓(GEMZAR®)、喃氟啶(UFTORAL®)、卡培他濱(XELODA®)、埃博黴素及5-氟尿嘧啶(5-FU)；葉酸類似物諸如二甲葉酸、甲胺蝶呤、蝶羅呤、三甲曲沙；嘌呤類似物諸如氟達拉濱、6-巰基嘌呤、硫咪嘌呤、硫鳥嘌呤；嘧啶類似物諸如安西他濱、阿紮胞苷、6-氮雜尿苷、卡莫氟、阿糖胞苷、二脫氧尿苷、脫氧氟尿苷、依諾他濱、氟尿苷；雄激素類諸如卡普睾酮、丙酸屈他雄酮、環硫雄醇、美雄烷、睾內酯；抗腎上腺類諸如胺魯米特、米托坦、曲洛司坦；葉酸補充劑諸如亞葉酸(frolinic acid)；醋葡醛內酯；醛磷醯胺糖苷；胺基乙醯丙酸；恩尿嘧啶；安吖啶；bestrabucil；比生群；依達曲沙(edatraxate)；地磷醯胺(defofamine)；秋水仙胺；地吖醌；依氟鳥胺酸(elfornithine)；依利醋銨；埃博黴素；依託格魯；硝酸鎵；羥基脲；香菇多醣(lentinan)；氯尼達明；美登素類化合物諸如美登素及安絲菌素；米托胍腙；米托蒽醌；莫哌達醇；尼曲吖啶；噴司他丁；蛋胺氮芥；吡柔比星；洛索蒽醌；2-乙基醯肼；丙卡巴肼；PSK®多醣複合物(JHS Natural Products,Eugene,OR)；雷佐生；根黴素；西佐喃；鍺螺胺；細交鏈孢菌酮酸(tenuazonic acid)；三亞胺醌；2,2',2'-三氯三乙胺；單端孢黴烯類(尤其T-2毒素，疣抱菌素A，桿孢菌素A及蛇形菌素)；烏拉坦；長春地辛(ELDISINE®，FILDESIN®)；達卡巴嗪；甘露莫司汀；二溴甘露醇；二溴衛矛醇；哌泊溴烷；伽胞嘧啶(gacytosine)；阿糖胞苷(「Ara-C」)；噻替派；紫杉烷，例如，紫杉醇(TAXOL®)，紫杉醇之白蛋白工程改造之奈米顆粒調配物(ABRAXANETM)，及多西紫杉醇(TAXOTERE®)；苯丁酸氮芥；6-硫鳥嘌呤；巰基嘌呤；甲胺蝶呤；鉑劑諸如順鉑，奧克賽鉑(例如，ELOXATIN®)，及卡鉑；長春花，其防止微管蛋白聚合形成微管，包括長春花鹼(VELBAN®)，長春新鹼(ONCOVIN®)，長春地辛(ELDISINE®，FILDESIN®)，及長春瑞賓(NAVELBINE®)；依託泊苷(VP-16)；异環磷醯胺；米托蒽醌；亞葉酸；諾肖林；依達曲沙；柔紅黴素；胺基蝶呤；伊班膦酸鹽；拓撲异構酶抑制劑RFS 2000；二氟甲基鳥胺酸(DMFO)；類視色素諸如 視黃酸，包括蓓薩羅丁(TARGRETIN®)；雙膦酸鹽類諸如氯膦酸鹽(例如，BONEFOS®或OSTAC®)，依替膦酸鹽(DIDROCAL®)，NE-58095，唑來膦酸/唑來膦酸鹽(ZOMETA®)，阿侖膦酸鹽(FOSAMAX®)，帕米膦酸鹽(AREDIA®)，替魯膦酸鹽(SKELID®)，或利塞膦酸鹽(ACTONEL®)；曲沙他濱(1,3-二氧戊環核苷胞嘧啶類似物)；反義寡核苷酸，尤其抑制牽涉异常細胞增殖之信號傳導途徑中之基因表現的反義寡核苷酸，例如像，PKC-α、Raf、H-Ras及表皮生長因子受體(EGF-R)；疫苗諸如THERATOPE®疫苗及基因治療疫苗，例如，ALLOVECTIN®疫苗，LEUVECTIN®疫苗，及VAXID®疫苗；拓撲異構酶1抑制劑(例如，LURTOTECAN®)；rmRH(例如，ABARELIX®)；BAY439006(索拉非尼；Bayer)；SU-11248(舒尼替尼，SUTENT®,Pfizer)；哌立福辛、COX-2抑制劑(例如，塞來昔布或依托考昔)，蛋白體抑制劑(例如，PS341)；硼替佐米(VELCADE®)；CCI-779；替吡法尼(R11577)；索拉非尼(orafenib)，ABT510；Bcl-2抑制劑諸如奧利默森納(GENASENSE®)；匹杉瓊；EGFR抑制劑(參見以下定義)；酪胺酸激酶抑制劑；絲胺酸-蘇胺酸激酶抑制劑諸如納巴黴素(西羅莫司，RAPAMUNE®)；法呢醯轉移酶抑制劑諸如洛那法尼(SCH 6636，SARASARTM)；及上述任一者之醫藥學上可接受之鹽、酸或衍生物；以及上述兩者或兩者以上之組合諸如CHOP，環磷醯胺、小紅莓、長春新鹼與潑尼松龍之組合療法之縮寫；及FOLFOX，具有奧克賽鉑(ELOXATINTM)與5-FU及亞葉酸組合之治療方案之縮寫。
如本文定義之化學治療劑包括「抗激素劑」或「內分泌治療劑」，其用於調節、减少、阻斷或抑制可促進癌症生長之激素的作用。其可為激素本身，包括但不限於，具有混合促效劑/拮抗劑特性之抗雌激素，包括他莫昔芬(NOLVADEX®)、4-羥基他莫昔芬、托瑞米芬(FARESTON®)、艾多昔芬(idoxifene)、屈洛昔芬(droloxifene)、雷洛昔芬(EVISTA®)、曲沃昔芬(trioxifene)、克沃昔芬(keoxifene)及選擇性雌激素受體調節劑(SERM)諸如SERM3；無促效劑特性之純抗雌激素，諸如氟維司群(fulvestrant)(FASLODEX®)及EM800(此等藥劑可阻斷雌激素受體(ER)二聚化、抑制DNA結合、增加ER轉換及/或遏制ER水準)；芳香酶抑制劑，包括類固醇 芳香酶抑制劑，諸如福美坦(formestane)及依西美坦(exemestane)(AROMASIN®)，及非類固醇芳香酶抑制劑，諸如阿那曲唑(ARIMIDEX®)、來曲唑(FEMARA®)及胺魯米特，及其他芳香酶抑制劑，包括伏氯唑(vorozole)(RIVISOR®)、醋酸甲地孕酮(MEGASE®)、法倔唑(fadrozole)及4(5)-咪唑；促黃體激素釋放激素促效劑，包括亮丙瑞林(leuprolide)(LUPRON®及ELIGARD®)、戈舍瑞林(goserelin)、布舍瑞林(buserelin)及曲普瑞林(tripterelin)；性類固醇，包括孕酮，諸如醋酸甲地孕酮及醋酸甲羥孕酮，雌激素諸如己烯雌酚及普雷馬林，及雄激素/類視色素諸如氟甲睾酮(fluoxymesterone)，全反維甲酸及芬維A胺(fenretinide)；奧那司酮(onapristone)；抗孕酮；雌激素受體下調劑(ERD)；抗雄激素諸如氟他胺(flutamide)、尼魯米特(nilutamide)及比卡魯胺(bicalutamide)；及上述中任一者之醫藥學上可接受之鹽、酸或衍生物；以及上述中兩者或兩者以上之組合。
如本文用於輔助療法之術語「免疫抑制劑」係指起作用以抑制或掩蔽本文所治療之哺乳動物的免疫系統之物質。此將包括抑制細胞因子產生、下調或抑制自身抗原表現或掩蔽MHC抗原之物質。此等試劑之實例包括2-胺基-6-芳基-5-取代之嘧啶(參見美國專利第4,665,077號)；非類固醇抗炎藥物(NSAID)；更昔洛韋(ganciclovir)、他克莫司(tacrolimus)、糖皮質激素諸如皮質醇(cortisol)或醛固酮(aldosterone)、抗炎劑諸如環氧合酶抑制劑、5-脂氧合酶抑制劑或白三烯受體拮抗劑；嘌呤拮抗劑諸如咪唑硫嘌呤(azathioprine)或麥考酚酸莫酯(mycophenolate mofetil，MMF)；烷化劑，諸如環磷醯胺；溴隱亭(bromocryptine)；達那唑(danazol)；胺苯碸(dapsone)；戊二醛(其掩蔽MHC抗原，如美國專利第4,120,649號中所述)；MHC抗原及MHC片段之抗獨特型抗體；環孢黴素A；類固醇諸如皮質類固醇或糖皮質類固醇或糖皮質類固醇類似物，例如强的松、甲基强的松龍，包括SOLU-MEDROL®甲基强的松龍丁二酸鈉及地塞米松；二氫葉酸還原酶抑制劑諸如甲胺喋呤(口服或皮下)；抗瘧疾劑諸如氯喹及羥氯喹；柳氮磺吡啶(sulfasalazine)；來氟米特(leflunomide)；細胞因子或細胞因子受體抗體，包括抗干擾素-α、-β或-λ抗體，抗腫瘤壞死因子(TNF)-α抗體(英夫利昔單抗 (infliximab)(REMICADE®)或阿達木單抗(adalimumab))、抗TNF-α免疫粘合素(依那西普(etanercept))、抗-TNF β抗體、抗-白細胞介素-2(IL-2)抗體及抗-IL-2受體抗體，及抗-白細胞介素-6(IL-6)受體抗體及拮抗劑(諸如ACTEMRATM(塔西單抗(tocilizumab)))；抗-LFA-1抗體，包括抗-CD11a及抗-CD18抗體；抗-L3T4抗體；异源抗淋巴細胞球蛋白；pan-T抗體，較佳抗-CD3或抗-CD4/CD4a抗體；含有LFA-3結合域之可溶性肽(7/26/90公佈之WO 90/08187)；鏈激酶；轉型生長因子-β(TGF-β])；鏈道酶；來自宿主之RNA或DNA；FK506；RS-61443；苯丁酸氮芥；去氧精胍菌素(deoxyspergualin)；雷帕黴素；T細胞受體(Cohen等人，美國專利第5,114,721號)；T細胞受體片段(Offner等人，Science,251：430-432(1991)；WO 90/11294；Ianeway,Nature,341：482(1989)；及WO 91/01133)；BAFF拮抗劑，諸如BAFF抗體及BR3抗體，及zTNF4拮抗劑(關於評述，參見Mackay及Mackay,Trends Immunol.,23：113-5(2002)，且亦參見以下定義)；干擾輔助T細胞信號之生物學藥劑，諸如抗-CD40受體或抗-CD40配位體(CD154)，包括阻斷針對CD40-CD40配位體之抗體(例如Durie等人，Science,261：1328-30(1993)；Mohan等人，J.Immunol.,154：1470-80(1995))及CTLA4-Ig(Finck等人，Science,265：1225-7(1994))；及T細胞受體抗體(EP 340,109)，諸如T10B9。本文中一些較佳免疫抑制劑包括環磷醯胺、苯丁酸氮芥、咪唑硫嘌呤、來氟米特、MMF或甲胺喋呤。
術語「PD-1軸結合拮抗劑」係指抑制PD-1軸結合搭配物與其一或多種結合搭配物之相互作用、以便去除由PD-1信號傳導軸上之信號傳導導致之T細胞功能異常、結果恢復或增強T細胞功能(例如增殖、細胞因子產生、標靶細胞殺傷)之分子。如本文使用，PD-1軸結合拮抗劑包括PD-1結合拮抗劑、PD-L1結合拮抗劑及PD-L2結合拮抗劑。
術語「PD-1結合拮抗劑」係指减少、阻斷、抑制、消除或干擾PD-1與其結合搭配物諸如PD-L1、PD-L2中之一或多者之相互作用所導致的信號轉導的分子。在一些實施例中，PD-1結合拮抗劑為抑制PD-1與其結合搭配物中之一或多者之結合的分子。在一特定態樣中，PD-1結合拮抗劑抑制PD-1與PD-L1及/或PD-L2之結合。舉例而言，PD-1結合拮抗 劑包括抗PD-1抗體、其抗原結合片段、免疫粘附素、融合蛋白、寡肽及减少、阻斷、抑制、消除或干擾PD-1與PD-L1及/或PD-L2之相互作用所導致的信號轉導的其他分子。在一實施例中，PD-1結合拮抗劑降低藉由或經由T淋巴細胞上表現之細胞表面蛋白(其經由PD-1介導信號傳導)介導的負共刺激信號，以便使功能異常性T細胞具有較低功能異常性(例如增强效應子對抗原識別之反應)。在一些實施例中，PD-1結合拮抗劑為抗PD-1抗體。在一特定態樣中，PD-1結合拮抗劑為本文所述之MDX-1106(尼沃魯單抗)。在另一特定態樣中，PD-1結合拮抗劑為本文所述之MK-3475(蘭布株單抗(lambrolizumab))。在另一特定態樣中，PD-1結合拮抗劑為本文所述之CT-011(匹利株單抗(pidilizumab))。在另一特定態樣中，PD-1結合拮抗劑為本文所述之AMP-224。
術語「PD-L1結合拮抗劑」係指减少、阻斷、抑制、消除或干擾PD-L1與其結合搭配物諸如PD-1、B7-1中之一或多者之相互作用所導致的信號轉導的分子。在一些實施例中，PD-L1結合拮抗劑為抑制PD-L1與其結合搭配物之結合的分子。在一特定態樣中，PD-L1結合拮抗劑抑制PD-L1與PD-1及/或B7-1之結合。在一些實施例中，PD-L1結合拮抗劑包括抗PD-L1抗體、其抗原結合片段、免疫粘附素、融合蛋白、寡肽及减少、阻斷、抑制、消除或干擾PD-L1與其結合搭配物諸如PD-1、B7-1中之一或多者之相互作用所導致的信號轉導的其他分子。在一實施例中，PD-L1結合拮抗劑降低藉由或經由T淋巴細胞上表現之細胞表面蛋白(其經由PD-L1介導信號傳導)介導的負共刺激信號，以便使功能異常性T細胞具有較低功能異常性(例如增强效應子對抗原識別之反應)。在一些實施例中，PD-L1結合拮抗劑為抗PD-L1抗體。在一特定態樣中，抗-PD-L1抗體為本文所述之YW243.55.S70。在另一特定態樣中，抗-PD-L1抗體為本文所述之MDX-1105。在另一特定態樣中，抗-PD-L1抗體為本文所述之MPDL3280A。在另一特定態樣中，抗-PD-L1抗體為本文所述之MEDI4736。
術語「PD-L2結合拮抗劑」係指减少、阻斷、抑制、消除或干擾PD-L2與其結合搭配物諸如PD-1中之一或多者之相互作用所導致的信號轉導的分子。在一些實施例中，PD-L2結合拮抗劑為抑制PD-L2與其結 合搭配物中之一或多者之結合的分子。在一特定態樣中，PD-L2結合拮抗劑抑制PD-L2與PD-1之結合。在一些實施例中，PD-L2拮抗劑包括抗PD-L2抗體、其抗原結合片段、免疫粘附素、融合蛋白、寡肽及减少、阻斷、抑制、消除或干擾PD-L2與其結合搭配物諸如PD-1中之一或多者之相互作用所導致的信號轉導的其他分子。在一實施例中，PD-L2結合拮抗劑降低藉由或經由T淋巴細胞上表現之細胞表面蛋白(其經由PD-L2介導信號傳導)介導的負共刺激信號，以便使功能異常性T細胞具有較低功能異常性(例如增强效應子對抗原識別之反應)。在一些實施例中，PD-L2結合拮抗劑為免疫粘附素。
本文中治療劑之「固定」或「平直」劑量係指在不考慮患者之體重(WT)或體表面積(BSA)之情形下投與至人類患者之劑量。固定或平直劑量因此不提供為mg/kg劑量或mg/m2劑量，而是提供為治療劑之絕對量。
本文中之「負載」劑量通常包含投與至患者之治療劑之初始劑量，且隨後為其一或多個維持劑量。一般而言，投與單個負載劑量，但本文涵蓋多個負載劑量。通常，所投與之負載劑量的量超過所投與之維持劑量的量及/或負載劑量比維持劑量更頻繁地投與，以便比可用維持劑量所達成更早達成治療劑之所要穩態濃度。
本文中之「維持」劑量係指在治療期內投與至患者之治療劑的一或多個劑量。通常，維持劑量以間隔之治療時間間隔投與，諸如大約每週、大約每2週、大約每3週或大約每4週，較佳每3週。
「輸注(Infusion)」或「輸注(infusing)」係指出於治療目的，經由靜脉將含藥物溶液引入體內。一般而言，此經由靜脉內(IV)袋達成。
「靜脉內袋」或「IV袋」為可容納可經由患者之靜脉投與之溶液之袋。在一實施例中，溶液為鹽水溶液(例如約0.9%或約0.45%NaCl)。視情况，IV袋由聚烯烴或聚氯乙烯形成。
術語「可變區」或「可變域」係指抗體重鏈或輕鏈中參與抗體結合抗原之域。天然抗體之重鏈可變域及輕鏈可變域(分別為VH及VL)通常具有類似結構，其中各域包含四個保守構架區(FR)及三個高變區(HVR)。(參見例如Kindt等人Kuby Immunology，第6版，W.H.Freeman and Co.，第91頁(2007)。單一VH或VL域可足以賦予抗原結合特异性。此外，可分別使用來自結合特定抗原之抗體之VH或VL域篩檢互補VL或VH域之文庫來分離結合該特定抗原之抗體。參見例如Portolano等人，J.Immunol.150：880-887(1993)；Clarkson等人，Nature 352：624-628(1991)。
如本文所用之術語「載體」係指核酸分子，其能够使其所連接之另一核酸增殖。該術語包括呈自我複製核酸結構形式之載體以及併入其中已引入有其之宿主細胞之基因組中的載體。某些載體能够導引與其可操作地連接之核酸之表現。此等載體在本文中稱為「表現載體」。
「游離半胱胺酸胺基酸」係指已工程改造至親本抗體中、具有硫醇官能基(-SH)且未配對為分子內或分子間二硫橋鍵之半胱胺酸胺基酸殘基。
「連接子」、「連接子單元」或「連接」意謂包含一系列原子之使抗體共價連接於藥物部分之化學部分。
當指示取代基之數目時，術語“一或多個”係指從一個取代基至最高可能之取代數目的範圍，亦即藉由取代基置換一個氫直至置換全部氫。術語「取代基」表示置換親本分子上之氫原子之原子或一組原子。術語「經取代之」表示指定基團携帶一或多個取代基。在任何基團可携帶多個取代基且提供各種可能取代基之情形下，該等取代基獨立地加以選擇且不必為相同的。術語「未經取代」意謂指定基團不帶有取代基。術語「視情况經取代之」意謂指定基團為未經取代的或經獨立地選自可能取代基之群的一或多個取代基取代。當指示取代基之數目時，術語“一或多個”意謂從一個取代基至最高可能之取代數目，亦即藉由取代基置換一個氫直至置換全部氫。
如本文所用之術語「烷基」係指具有一至十二個碳原子(C1-C12)之任何長度之飽和直鏈或分支鏈單價烴基，其中烷基可視情况獨立地經一或多個下文所述的取代基取代。在另一實施例中，烷基為一至八個碳原子(C1-C8)或一至六個碳原子(C1-C6)。烷基之實例包括(但不限於)甲基(Me、-CH3)、乙基(Et、-CH2CH3)、1-丙基(n-Pr、正丙基、-CH2CH2CH3)、2-丙基(i-Pr、异丙基、-CH(CH3)2)、1-丁基(n-Bu、正丁基、-CH2CH2CH2CH3)、 2-甲基-1-丙基(i-Bu、异丁基、-CH2CH(CH3)2)、2-丁基(s-Bu、第二丁基、-CH(CH3)CH2CH3)、2-甲基-2-丙基(t-Bu、第三丁基、-C(CH3)3)、1-戊基(正戊基、-CH2CH2CH2CH2CH3)、2-戊基(-CH(CH3)CH2CH2CH3)、3-戊基(-CH(CH2CH3)2)、2-甲基-2-丁基(-C(CH3)2CH2CH3)、3-甲基-2-丁基(-CH(CH3)CH(CH3)2)、3-甲基-1-丁基(-CH2CH2CH(CH3)2)、2-甲基-1-丁基(-CH2CH(CH3)CH2CH3)、1-己基(-CH2CH2CH2CH2CH2CH3)、2-己基(-CH(CH3)CH2CH2CH2CH3)、3-己基(-CH(CH2CH3)(CH2CH2CH3))、2-甲基-2-戊基(-C(CH3)2CH2CH2CH3)、3-甲基-2-戊基(-CH(CH3)CH(CH3)CH2CH3)、4-甲基-2-戊基(-CH(CH3)CH2CH(CH3)2)、3-甲基-3-戊基(-C(CH3)(CH2CH3)2)、2-甲基-3-戊基(-CH(CH2CH3)CH(CH3)2)、2,3-二甲基-2-丁基(-C(CH3)2CH(CH3)2)、3,3-二甲基-2-丁基(-CH(CH3)C(CH3)3)、1-庚基、1-辛基等。
如本文所用之術語「伸烷基」係指具有一至十二個碳原子(C1-C12)之任何長度之飽和直鏈或分支鏈二價烴基，其中伸烷基可視情况獨立地經一個或多個下文所述的取代基取代。在另一實施例中，伸烷基為一至八個碳原子(C1-C8)或一至六個碳原子(C1-C6)。伸烷基之實例包括(但不限於)亞甲基(-CH2-)、伸乙基(-CH2CH2-)、伸丙基(-CH2CH2CH2-)及類似基團。
術語「烯基」係指具有二至八個碳原子(C2-C8)之任何長度與至少一個不飽和位點(即碳-碳sp2雙鍵)之直鏈或分支鏈單價烴基，其中烯基可視情况獨立地經一或多個本文所述之取代基取代，且包括具有「順式」及「反式」定向或者「E」及「Z」定向之基團。實例包括(但不限於)乙烯基(ethylenyl/vinyl)(-CH=CH2)、烯丙基(-CH2CH=CH2)及類似基團。
術語「伸烯基」係指具有二至八個碳原子(C2-C8)之任何長度與至少一個不飽和位點(即碳-碳sp2雙鍵)之直鏈或分支鏈二價烴基，其中伸烯基可視情况獨立地經一或多個本文所述之取代基取代，且包括具有「順式」及「反式」定向或者「E」及「Z」定向之基團。實例包括(但不限於)伸乙烯基(ethylenylene/vinylene)(-CH=CH-)、烯丙基(-CH2CH=CH-)及類似基團。
術語「炔基」係指具有二至八個碳原子(C2-C8)之任何長度與至少一個不飽和位點(亦即碳-碳sp參鍵)之直鏈或分支鏈單價烴基，其中 炔基可視情况獨立地經一或多個本文所述之取代基取代。實例包括(但不限於)乙炔基(-C≡CH)、丙炔基(炔丙基，-CH2C≡CH)及類似基團。
術語「伸炔基」係指具有二至八個碳原子(C2-C8)之任何長度與至少一個不飽和位點(亦即碳-碳sp參鍵)之直鏈或分支鏈二價烴基，其中伸炔基可視情况獨立地經一或多個本文所述之取代基取代。實例包括(但不限於)伸乙炔基(-C≡C-)、伸丙炔基(伸炔丙基，-CH2C≡C-)及類似基團。
術語「碳環(carbocycle)」、「碳環基」、「碳環(carbocyclic ring)」及「環烷基」係指具有3至12個碳原子(C3-C12)呈單環形式或7至12個碳原子呈雙環形式之單價非芳族、飽和或部分不飽和環。具有7至12個原子之雙環碳環可布置成例如雙環[4,5]、[5,5]、[5,6]或[6,6]系統，且具有9或10個環原子之雙環碳環可布置成雙環[5,6]或[6,6]系統，或橋接系統，諸如雙環[2.2.1]庚烷、雙環[2.2.2]辛烷及雙環[3.2.2]壬烷。螺環部分亦包括在此定義之範疇內。單環碳環之實例包括(但不限於)環丙基、環丁基、環戊基、1-環戊-1-烯基、1-環戊-2-烯基、1-環戊-3-烯基、環己基、1-環己-1-烯基、1-環己-2-烯基、1-環己-3-烯基、環己二烯基、環庚基、環辛基、環壬基、環癸基、環十一烷基、環十二烷基及類似基團。碳環基視情况獨立地經一或多個本文所述之取代基取代。
「芳基」意謂藉由自母體芳族環系統之單一碳原子移除一個氫原子得到之具有6-20(C6-C20)個碳原子之單價芳族烴基。一些芳基在例示性結構中以「Ar」表示。芳基包括包含與飽和、部分不飽和環或芳族碳環稠合之芳族環之雙環基團。典型芳基包括(但不限於)衍生自苯(苯基)、經取代苯、萘、蒽、聯苯、茚基、茚滿基、1,2-二氫萘、1,2,3,4-四氫萘基及類似基團之基團。芳基視情况獨立地經一或多個本文所述之取代基取代。
「伸芳基」意謂藉由自母體芳族環系統之兩個碳原子移除兩個氫原子得到之具有6-20(C6-C20)個碳原子之二價芳族烴基。一些伸芳基在例示性結構中以「Ar」表示。伸芳基包括包含與飽和、部分不飽和環或芳族碳環稠合之芳族環之雙環基團。典型伸芳基包括(但不限於)衍生自苯(伸苯基)、經取代苯、萘、蒽、伸聯苯、伸茚基、伸茚滿基、1,2-二氫萘、1,2,3,4-四氫萘基及類似基團之基團。伸芳基視情况經一或多個本文所述之取代基 取代。
術語「雜環(heterocycle)」、「雜環基」及「雜環(heterocyclic ring)」在本文中可互換使用且係指具有3至約20個環原子之飽和或部分不飽和(亦即，在環內具有一或多個雙鍵及/或參鍵)碳環基團，其中至少一個環原子為選自氮、氧、磷及硫之雜原子，其餘環原子為C，其中一或多個環原子視情况獨立地經一或多個下文所述之取代基取代。雜環可為具有3至7個環成員(2至6個碳原子及1至4個選自N、O、P及S之雜原子)之單環或具有7至10個環成員(4至9個碳原子及1至6個選自N、O、P及S之雜原子)之雙環，例如：雙環[4,5]、[5,5]、[5,6]或[6,6]系統。雜環描述於Paquette,Leo A.；「Principles of Modern Heterocyclic Chemistry」(W.A.Benjamin,New York,1968)，尤其第1、3、4、6、7及9章；「The Chemistry of Heterocyclic Compounds,A series of Monographs」(John Wiley & Sons,New York,1950出版)，尤其第13、14、16、19及28卷；及J.Am.Chem.Soc.(1960)82：5566。「雜環基」亦包括雜環基團與飽和、部分不飽和環或芳族碳環或雜環稠合之基團。雜環之實例包括(但不限於)嗎啉-4-基、哌啶-1-基、哌嗪基、哌嗪-4-基-2-酮、哌嗪-4-基-3-酮、吡咯啶-1-基、硫嗎啉-4-基、S-二側氧基硫嗎啉-4-基、氮雜環辛烷-1-基、氮雜環丁烷-1-基、八氫吡啶并[1,2-a]吡嗪-2-基、[1,4]二氮雜環庚烷-1-基、吡咯啶基、四氫呋喃基、二氫呋喃基、四氫噻吩基、四氫哌喃基、二氫哌喃基、四氫噻喃基、N-哌啶基、N-嗎啉基、N-硫嗎啉基、噻噁烷基(thioxanyl)、哌嗪基、高哌嗪基、氮雜環丁烷基、氧雜環丁烷基、硫雜環丁烷基、高哌啶基、氧雜環庚烷基、硫雜環庚烷基、氧氮雜環庚烷基、二氮呯基、硫氮雜環庚烷基、2-吡咯啉基、3-吡咯啉基、吲哚啉基、2H-哌喃基、4H-哌喃基、二噁烷基、1,3-二氧雜環戊烷基、吡唑啉基、二硫雜環己烷基、二硫雜環戊烷基、二氫哌喃基、二氫噻吩基、二氫呋喃基、吡唑啶基咪唑啉基、咪唑啶基、3-氮雜雙環[3.1.0]己烷基、3-氮雜雙環[4.1.0]庚烷基、氮雜雙環[2.2.2]己烷基、3H-吲哚基喹嗪基及N-吡啶基脲。螺環部分亦包括在此定義之範疇內。2個環原子經側氧基(=O)部分取代之雜環基團之實例為嘧啶酮基及1,1-二側氧基-硫嗎啉基。本文中之雜環基團視情况獨立地經一或多個本文所述之取代基取代。
術語「雜芳基」係指具有5、6或7員環之單價芳族基團，且包括具有5-20個原子且含有一或多個獨立選自氮、氧及硫之雜原子之稠環系統(其中至少一者為芳族的)。雜芳基之實例為吡啶基(包括例如2-羥基吡啶基)、咪唑基、咪唑并吡啶基、1-甲基-1H-苯并[d]咪唑、[1,2,4]三唑并[1,5-a]吡啶、嘧啶基(包括例如4-羥基嘧啶基)、吡唑基、三唑基、吡嗪基、四唑基、呋喃基、噻吩基、异噁唑基、噻唑基、噁二唑基、噁唑基、异噻唑基、吡咯基、喹啉基、异喹啉基、四氫异喹啉基、吲哚基、苯并咪唑基、苯并呋喃基、口辛啉基(cinnolinyl)、吲唑基、吲嗪基、酞嗪基、噠嗪基、三嗪基、异吲哚基、喋啶基、嘌呤基、噁二唑基、噻二唑基、噻二唑基、呋呫基、苯并呋呫基、苯并噻吩基、苯并噻唑基、苯并噁唑基、喹唑啉基、喹喔啉基、萘啶基及呋喃并吡啶基。雜芳基視情况獨立地經一或多個本文所述之取代基取代。
可能時，雜環或雜芳基可為碳(碳連接)或氮(氮連接)鍵結的。例如且不限於，碳鍵結之雜環或雜芳基係在以下位置處鍵結：吡啶之2、3、4、5或6位；噠嗪之3、4、5或6位；嘧啶之2、4、5或6位；吡嗪之2、3、5或6位；呋喃、四氫呋喃、硫呋喃、噻吩、吡咯或四氫吡咯之2、3、4或5位；噁唑、咪唑或噻唑之2、4或5位；异噁唑、吡唑或异噻唑之3、4或5位；氮雜環丙烷之2或3位；氮雜環丁烷之2、3或4位；喹啉之2、3、4、5、6、7或8位；或异喹啉之1、3、4、5、6、7或8位。
例如且不限於，氮鍵結之雜環或雜芳基係在以下位置處鍵結：氮丙啶、氮雜環丁烷、吡咯、吡咯啶、2-吡咯啉、3-吡咯啉、咪唑、咪唑啶、2-咪唑啉、3-咪唑啉、吡唑、吡唑啉、2-吡唑啉、3-吡唑啉、哌啶、哌嗪、吲哚、吲哚啉、1H-吲唑、异吲哚或异吲哚啉之2位；嗎啉之4位；及咔唑或β-咔啉之9位。
術語「對掌性」係指分子具有與鏡像搭配物不可重疊之性質，而術語「非對掌性」係指分子可重疊於其鏡像搭配物上。
術語「立體异構物」係指具有相同化學組成，但在原子或基團於空間中之排列方面不同之化合物。
「非鏡像异構物」係指具有兩個或兩個以上對掌性中心且分 子不互為鏡像之立體异構物。非鏡像异構物具有不同物理性質，例如熔點、沸點、光譜性質及反應性。非鏡像异構物之混合物可在諸如電泳及層析之高解析度分析程序下分離。
「鏡像异構物」係指化合物之兩個互為不可重疊鏡像之立體异構物。
本文使用之立體化學定義及慣例通常遵循S.P.Parker,編，McGraw-Hill Dictionary of Chemical Terms(1984)McGraw-Hill Book Company,New York；及Eliel,E.及Wilen,S.,Stereochemistry of Organic Compounds(1994)John Wiley & Sons,Inc.,New York。許多有機化合物以光學活性形式存在，亦即其能够使平面偏振光之平面旋轉。在描述光學活性化合物時，字首D及L或R及S用於表示分子圍繞其對掌性中心之絕對組態。字首d及l或(+)及(-)用於指定由化合物所致之平面偏振光旋轉方向，其中(-)或1意謂化合物為左旋化合物。字首為(+)或d之化合物為右旋化合物。對於既定化學結構，此等立體异構物為相同的，例外之處為其互為鏡像。特定立體异構物亦可稱為鏡像异構物，且此等异構物之混合物常稱為鏡像异構混合物。鏡像异構物之50：50混合物稱為外消旋混合物或外消旋物，其可在化學反應或製程中不存在立體選擇或立體特异性時存在。術語「外消旋混合物」及「外消旋物」係指兩種鏡像异構物質之缺乏光學活性之等莫耳混合物。
如本文中所用，片語「醫藥學上可接受之鹽」係指抗體-藥物結合物(ADC)之醫藥學上可接受之有機或無機鹽。例示性鹽包括(但不限於)硫酸鹽、檸檬酸鹽、乙酸鹽、草酸鹽、氯化物、溴化物、碘化物、硝酸鹽、硫酸氫鹽、磷酸鹽、酸式磷酸鹽、异烟酸鹽、乳酸鹽、水楊酸鹽、酸式檸檬酸鹽、酒石酸鹽、油酸鹽、丹寧酸鹽、泛酸鹽、酒石酸氫鹽、抗壞血酸鹽、丁二酸鹽、順丁烯二酸鹽、龍膽酸鹽(gentisinate)、反丁烯二酸鹽、葡糖酸鹽、葡糖醛酸鹽、葡萄糖二酸鹽、甲酸鹽、苯甲酸鹽、麩胺酸鹽、甲磺酸鹽、乙磺酸鹽、苯磺酸鹽、對甲苯磺酸鹽及雙羥萘酸鹽(亦即1,1’-亞甲基-雙-(2-羥基3-萘甲酸鹽))鹽。醫藥學上可接受之鹽可涉及包括另一分子，諸如乙酸根離子、丁二酸根離子或其他平衡離子。該平衡離子可為使 母體化合物上之電荷穩定的任何有機或無機部分。此外，醫藥學上可接受之鹽之結構中可具有一個以上帶電原子。多個帶電原子為醫藥學上可接受之鹽之一部分的情形可具有多個平衡離子。因此，醫藥學上可接受之鹽可具有一或多個帶電原子及/或一或多個平衡離子。
以下縮寫在本文中使用且具有所指示定義：BME為β-巰基乙醇；Boc為N-(第三丁氧基羰基)；cit為瓜胺酸(2-胺基-5-脲基戊酸)；DCC為1,3-二環己基碳化二亞胺；DCM為二氯甲烷；DEA為二乙胺；DEAD為偶氮二甲酸二乙酯；DEPC為二乙基磷醯基氰化物(diethylphosphorylcyanidate)；DIAD為偶氮二甲酸二异丙酯；DIEA為N,N-二异丙基乙胺；DMA為二甲基乙醯胺；DMAP為4-二甲基胺基吡啶；DME為乙二醇二甲醚(或1,2-二甲氧基乙烷)；DMF為N,N-二甲基甲醯胺；DMSO為二甲亞碸；DTT為二硫蘇糖醇；EDCI為1-(3-二甲基胺基丙基)-3-乙基碳化二亞胺鹽酸鹽；EEDQ為2-乙氧基-1-乙氧基羰基-1,2-二氫喹啉；ES-MS為電噴霧質譜；EtOAc為乙酸乙酯；Fmoc為N-(9-茀基甲氧基羰基)；gly為甘胺酸；HATU為O-(7-氮雜苯并三唑-1-基)-N,N,N’,N’-四甲基脲六氟磷酸酯；HOBt為1-羥基苯并三唑；HPLC為高壓液相層析；ile為异白胺酸；lys為離胺酸；MeCN(CH3CN)為乙腈；MeOH為甲醇；Mtr為4-大茴香基二苯基甲基(或4-甲氧基三苯甲基)；NHS為N-羥基丁二醯亞胺；PBS為磷酸鹽緩衝鹽水(pH 7)；PEG為聚乙二醇或乙二醇單元(-OCH2CH2-)；Ph為苯基；Pnp為對硝基苯基；MC為6-順丁烯二醯亞胺基己醯基；phe為L-苯丙胺酸；PyBrop為六氟磷酸溴參-(N-吡咯啶基)鏻；SEC為尺寸排阻層析法；Su為丁二醯亞胺；TFA為三氟乙酸；TLC為薄層層析法；UV為紫外綫；及val為纈胺酸。
腫瘤相關抗原：
(1)BMPR1B(骨形態發生蛋白受體-IB型，Genbank登錄號NM_001203)ten Dijke,P.，等人Science 264(5155)：101-104(1994),Oncogene 14(11)：1377-1382(1997))；WO2004063362(申請專利範圍第2項)；WO2003042661(申請專利範圍第12項)；US2003134790-A1(第38-39頁)；WO2002102235(申請專利範圍第13項；第296頁)；WO2003055443(第91-92 頁)；WO200299122(實例2；第528-530頁)；WO2003029421(申請專利範圍第6項)；WO2003024392(申請專利範圍第2項；圖112)；WO200298358(申請專利範圍第1項；第183頁)；WO200254940(第100-101頁)；WO200259377(第349-350頁)；WO200230268(申請專利範圍第27項；第376頁)；WO200148204(實例；圖4)NP_001194骨形態發生蛋白受體，IB型/pid=NP_001194.1-交互參照：MIM：603248；NP_001194.1；AY065994
(2)E16(LAT1、SLC7A5，Genbank登錄號NM_003486)Biochem.Biophys.Res.Commun.255(2),283-288(1999),Nature 395(6699)：288-291(1998),Gaugitsch,H.W.，等人(1992)J.Biol.Chem.267(16)：11267-11273)；WO2004048938(實例2)；WO2004032842(實例IV)；WO2003042661(申請專利範圍第12項)；WO2003016475(申請專利範圍第1項)；WO200278524(實例2)；WO200299074(申請專利範圍第19項；第127-129頁)；WO200286443(申請專利範圍第27項；第222、393頁)；WO2003003906(申請專利範圍第10項；第293頁)；WO200264798(申請專利範圍第33項；第93-95頁)；WO200014228(申請專利範圍第5項；第133-136頁)；US2003224454(圖3)；WO2003025138(申請專利範圍第12項；第150頁)；NP_003477溶質携帶物家族7(陽離子胺基酸轉運體，y+系統)，成員5/pid=NP_003477.3-智人交互參照：MIM：600182；NP_003477.3；NM_015923；NM_003486_1
(3)STEAP1(前列腺之六跨膜上皮抗原，Genbank登錄號NM__012449)Cancer Res.61(15),5857-5860(2001),Hubert,R.S.，等人(1999)Proc.Natl.Acad.Sci.U.S.A.96(25)：14523-14528)；WO2004065577(申請專利範圍第6項)；WO2004027049(圖1L)；EP1394274(實例11)；WO2004016225(申請專利範圍第2項)；WO2003042661(申請專利範圍第12項)；US2003157089(實例5)；US2003185830(實例5)；US2003064397(圖2)；WO200289747(實例5；第618-619頁)；WO2003022995(實例9；圖13A，實例53；第173頁，實例2；圖2A)； NP_036581前列腺之六跨膜上皮抗原交互參照：MIM：604415；NP_036581.1；NM_012449_1
(4)0772P(CA125、MUC16，Genbank登錄號AF361486)J.Biol.Chem.276(29)：27371-27375(2001))；WO2004045553(申請專利範圍第14項)；WO200292836(申請專利範圍第6項；圖12)；WO200283866(申請專利範圍第15項；第116-121頁)；US2003124140(實例16)；US 798959.交互參照：GI：34501467；AAK74120.3；AF361486_1
(5)MPF(MPF、MSLN、SMR、巨核細胞增強因子、間皮素，Genbank登錄號NM_005823)Yamaguchi,N.，等人Biol.Chem.269(2),805-808(1994),Proc.Natl.Acad.Sci.U.S.A.96(20)：11531-11536(1999),Proc.Natl.Acad.Sci.U.S.A.93(1)：136-140(1996),J.Biol.Chem.270(37)：21984-21990(1995))；WO2003101283(申請專利範圍第14項)；(WO2002102235(申請專利範圍第13項；第287-288頁)；WO2002101075(申請專利範圍第4項；第308-309頁)；WO200271928(第320-321頁)；WO9410312(第52-57頁)；交互參照：MIM：601051；NP_005814.2；NM_005823_1
(6)Napi2b(Napi3b、NAPI-3B、NPTIIb、SLC34A2、溶質携帶物家族34(磷酸鈉)第2成員、第II型鈉依賴性磷酸鹽轉運體3b，Genbank登錄號NM_006424)J.Biol.Chem.277(22)：19665-19672(2002),Genomics 62(2)：281-284(1999),Feild,J.A.，等人(1999)Biochem.Biophys.Res.Commun.258(3)：578-582)；WO2004022778(申請專利範圍第2項)；EP1394274(實例11)；WO2002102235(申請專利範圍第13項；第326頁)；EP875569(申請專利範圍第1項；第17-19頁)；WO200157188(申請專利範圍第20項；第329頁)；WO2004032842(實例IV)；WO200175177(申請專利範圍第24項；第139-140頁)；交互參照：MIM：604217；NP_006415.1；NM_006424_1
(7)Sema 5b(FLJ10372、KIAA1445、Mm.42015、SEMA5B、SEMAG、導向蛋白5b Hlog、sema域、七個血小板反應蛋白重複序列(第1型及第1型樣)、跨膜域(TM)及短細胞質域、(導向蛋白)5B，Genbank登錄號 AB040878)Nagase T.，等人(2000)DNA Res.7(2)：143-150)；WO2004000997(申請專利範圍第1項)；WO2003003984(申請專利範圍第1項)；WO200206339(申請專利範圍第1項；第50頁)；WO200188133(申請專利範圍第1項；第41-43、48-58頁)；WO2003054152(申請專利範圍第20項)；WO2003101400(申請專利範圍第11項)；登錄；Q9P283；EMBL；AB040878；BAA95969.1.Genew；HGNC：10737；
(8)PSCA hlg(2700050C12Rik、C530008O16Rik、RIKEN cDNA 2700050C12、RIKEN cDNA2700050C12基因，Genbank登錄號AY358628)；Ross等人(2002)Cancer Res.62：2546-2553；US2003129192(申請專利範圍第2項)；US2004044180(申請專利範圍第12項)；US2004044179(申請專利範圍第11項)；US2003096961(申請專利範圍第11項)；US2003232056(實例5)；WO2003105758(申請專利範圍第12項)；US2003206918(實例5)；EP1347046(申請專利範圍第1項)；WO2003025148(申請專利範圍第20項)；交互參照：GI：37182378；AAQ88991.1；AY358628_1
(9)ETBR(內皮素B型受體，Genbank登錄號AY275463)；Nakamuta M.，等人Biochem.Biophys.Res.Commun.177,34-39,1991；OgawaY.，等人Biochem.Biophys.Res.Commun.178,248-255,1991；Arai H.，等人Jpn.Circ.J.56,1303-1307,1992；Arai H.，等人J.Biol.Chem.268,3463-3470,1993；Sakamoto A.,Yanagisawa M.，等人Biochem.Biophys.Res.Commun.178,656-663,1991；Elshourbagy N.A.，等人J.Biol.Chem.268,3873-3879,1993；Haendler B.，等人J.Cardiovasc.Pharmacol.20,s1-S4,1992；Tsutsumi M.，等人Gene 228,43-49,1999；Strausberg R.L.，等人Proc.Natl.Acad.Sci.U.S.A.99,16899-16903,2002；Bourgeois C.，等人J.Clin.Endocrinol.Metab.82,3116-3123,1997；Okamoto Y.，等人Biol.Chem.272,21589-21596,1997；Verheij J.B.，等人Am.J.Med.Genet.108,223-225,2002；Hofstra R.M.W.，等人Eur.J.Hum.Genet.5,180-185,1997；Puffenberger E.G.，等人Cell 79,1257-1266,1994；AttieT.，等人，Hum.Mol.Genet.4,2407-2409,1995；Auricchio A.，等人Hum.Mol.Genet.5：351-354, 1996；Amiel J.，等人Hum.Mol.Genet.5,355-357,1996；Hofstra R.M.W.，等人Nat.Genet.12,445-447,1996；Svensson P.J.，等人Hum.Genet.103,145-148,1998；Fuchs S.，等人Mol.Med.7,115-124,2001；Pingault V.，等人(2002)Hum.Genet.111,198-206；WO2004045516(申請專利範圍第1項)；WO2004048938(實例2)；WO2004040000(申請專利範圍第151項)；WO2003087768(申請專利範圍第1項)；WO2003016475(申請專利範圍第1項)；WO2003016475(申請專利範圍第1項)；WO200261087(圖1)；WO2003016494(圖6)；WO2003025138(申請專利範圍第12項；第144頁)；WO200198351(申請專利範圍第1項；第124-125頁)；EP522868(申請專利範圍第8項；圖2)；WO200177172(申請專利範圍第1項；第297-299頁)；US2003109676；US6518404(圖3)；US5773223(申請專利範圍第1a項；第31-34列)；WO2004001004；
(10)MSG783(RNF124、假定蛋白FLJ20315，Genbank登錄號NM_017763)；WO2003104275(申請專利範圍第1項)；WO2004046342(實例2)；WO2003042661(申請專利範圍第12項)；WO2003083074(申請專利範圍第14項；第61頁)；WO2003018621(申請專利範圍第1項)；WO2003024392(申請專利範圍第2項；圖93)；WO200166689(實例6)；交互參照：LocusID：54894；NP_060233.2；NM_017763_1
(11)STEAP2(HGNC_8639、IPCA-1、PCANAP1、STAMP1、STEAP2、STMP、前列腺癌相關基因1、前列腺癌相關蛋白1、前列腺之六跨膜上皮抗原2、六跨膜前列腺蛋白，Genbank登錄號AF455138)Lab.Invest.82(11)：1573-1582(2002))；WO2003087306；US2003064397(申請專利範圍第1項；圖1)；WO200272596(申請專利範圍第13項；第54-55頁)；WO200172962(申請專利範圍第1項；圖4B)；WO2003104270(申請專利範圍第11項)；WO2003104270(申請專利範圍第16項)；US2004005598(申請專利範圍第22項)；WO2003042661(申請專利範圍第12項)；US2003060612(申請專利範圍第12項；圖10)；WO200226822(申請專利範圍第23項；圖2)；WO200216429(申請專利範圍第12項；圖10)； 交互參照：GI：22655488；AAN04080.1；AF455138_1
(12)TrpM4(BR22450、FLJ20041、TRPM4、TRPM4B、瞬時受體電位陽離子通道，次家族M，第4成員，Genbank登錄號NM_017636)Xu,X.Z.，等人Proc.Natl.Acad.Sci.U.S.A.98(19)：10692-10697(2001),Cell 109(3)：397-407(2002),J.Biol.Chem.278(33)：30813-30820(2003))；US2003143557(申請專利範圍第4項)；WO200040614(申請專利範圍第14項；第100-103頁)；WO200210382(申請專利範圍第1項；圖9A)；WO2003042661(申請專利範圍第12項)；WO200230268(申請專利範圍第27項；第391頁)；US2003219806(申請專利範圍第4項)；WO200162794(申請專利範圍第14項；圖1A-D)；交互參照：MIM：606936；NP_060106.2；NM_017636_1
(13)CRIPTO(CR、CR1、CRGF、CRIPTO、TDGF1、畸胎瘤衍生生長因子，Genbank登錄號NP_003203或NM_003212)Ciccodicola,A.，等人EMBO J.8(7)：1987-1991(1989),Am.J.Hum.Genet.49(3)：555-565(1991))；US2003224411(申請專利範圍第1項)；WO2003083041(實例1)；WO2003034984(申請專利範圍第12項)；WO200288170(申請專利範圍第2項；第52-53頁)；WO2003024392(申請專利範圍第2項；圖58)；WO200216413(申請專利範圍第1項；第94-95、105頁)；WO200222808(申請專利範圍第2項；圖1)；US5854399(實例2；第17-18列)；US5792616(圖2)；交互參照：MIM：187395；NP_003203.1；NM_003212_1
(14)CD21(CR2(補體受體2)或C3DR(C3d/艾伯斯坦-巴爾(Epstein Barr)病毒受體)或Hs 73792，Genbank登錄號M26004)Fujisaku等人(1989)J.Biol.Chem.264(4)：2118-2125)；Weis J.J.，等人J.Exp.Med.167,1047-1066,1988；Moore M.，等人Proc.Natl.Acad.Sci.U.S.A.84,9194-9198,1987；Barel M.，等人Mol.Immunol.35,1025-1031,1998；Weis J.J.，等人Proc.Natl.Acad.Sci.U.S.A.83,5639-5643,1986；Sinha S.K.，等人(1993)J.Immunol.150,5311-5320；WO2004045520(實例4)；US2004005538(實例1)；WO2003062401(申請專利範圍第9項)； WO2004045520(實例4)；WO9102536(圖9.1-9.9)；WO2004020595(申請專利範圍第1項)；登錄：P20023；Q13866；Q14212；EMBL；M26004；AAA35786.1。
(15)CD79b(CD79B、CD79β、IGb(免疫球蛋白相關型β)、B29，Genbank登錄號NM_000626或11038674)Proc.Natl.Acad.Sci.U.S.A.(2003)100(7)：4126-4131,Blood(2002)100(9)：3068-3076,Muller等人(1992)Eur.J.Immunol.22(6)：1621-1625)；WO2004016225(申請專利範圍第2項，圖140)；WO2003087768,US2004101874(申請專利範圍第1項，第102頁)；WO2003062401(申請專利範圍第9項)；WO200278524(實例2)；US2002150573(申請專利範圍第5項，第15頁)；US5644033；WO2003048202(申請專利範圍第1項，第306及309頁)；WO 99/558658,US6534482(申請專利範圍第13項，圖17A/B)；WO200055351(申請專利範圍第11項，第1145-1146頁)；交互參照：MIM：147245；NP_000617.1；NM_000626_1
(16)FcRH2(IFGP4、IRTA4、SPAP1A(含SH2域之磷酸酶錨定蛋白1a)、SPAP1B、SPAP1C，Genbank登錄號NM_030764、AY358130)Genome Res.13(10)：2265-2270(2003),Immunogenetics 54(2)：87-95(2002),Blood 99(8)：2662-2669(2002),Proc.Natl.Acad.Sci.U.S.A.98(17)：9772-9777(2001),Xu,M.J.，等人(2001)Biochem.Biophys.Res.Commun.280(3)：768-775；WO2004016225(申請專利範圍第2項)；WO2003077836；WO200138490(申請專利範圍第5項；圖18D-1-18D-2)；WO2003097803(申請專利範圍第12項)；WO2003089624(申請專利範圍第25項)；交互參照：MIM：606509；NP_110391.2；NM_030764_1
(17)HER2(ErbB2，Genbank登錄號M11730)Coussens L.，等人Science(1985)230(4730)：1132-1139)；Yamamoto T.，等人Nature 319,230-234,1986；Semba K.，等人Proc.Natl.Acad.Sci.U.S.A.82,6497-6501,1985；Swiercz J.M.，等人J.Cell Biol.165,869-880,2004；Kuhns J.J.，等人J.Biol.Chem.274,36422-36427,1999；Cho H.-S.，等人 Nature 421,756-760,2003；Ehsani A.，等人(1993)Genomics 15,426-429；WO2004048938(實例2)；WO2004027049(圖1I)；WO2004009622；WO2003081210；WO2003089904(申請專利範圍第9項)；WO2003016475(申請專利範圍第1項)；US2003118592；WO2003008537(申請專利範圍第1項)；WO2003055439(申請專利範圍第29項；圖1A-B)；WO2003025228(申請專利範圍第37項；圖5C)；WO200222636(實例13；第95-107頁)；WO200212341(申請專利範圍第68項；圖7)；WO200213847(第71-74頁)；WO200214503(第114-117頁)；WO200153463(申請專利範圍第2項；第41-46頁)；WO200141787(第15頁)；WO200044899(申請專利範圍第52項；圖7)；WO200020579(申請專利範圍第3項；圖2)；US5869445(申請專利範圍第3項；第31-38列)；WO9630514(申請專利範圍第2項；第56-61頁)；EP1439393(申請專利範圍第7項)；WO2004043361(申請專利範圍第7項)；WO2004022709；WO200100244(實例3；圖4)；登錄：P04626；EMBL；M11767；AAA35808.1.EMBL；M11761；AAA35808.1。
(18)NCA(CEACAM6，Genbank登錄號M18728)；Barnett T.，等人Genomics 3,59-66,1988；Tawaragi Y.，等人Biochem.Biophys.Res.Commun.150,89-96,1988；Strausberg R.L.，等人Proc.Natl.Acad.Sci.U.S.A.99：16899-16903,2002；WO2004063709；EP1439393(申請專利範圍第7項)；WO2004044178(實例4)；WO2004031238；WO2003042661(申請專利範圍第12項)；WO200278524(實例2)；WO200286443(申請專利範圍第27項；第427頁)；WO200260317(申請專利範圍第2項)；登錄：P40199；Q14920；EMBL；M29541；AAA59915.1.EMBL；M18728；
(19)MDP(DPEP1，Genbank登錄號BC017023)Proc.Natl.Acad.Sci.U.S.A.99(26)：16899-16903(2002))；WO2003016475(申請專利範圍第1項)；WO200264798(申請專利範圍第33項；第85-87頁)；JP05003790(圖6-8)；WO9946284(圖9)；交互參照：MIM：179780；AAH17023.1；BC017023_1
(20)IL20Rα(IL20Ra、ZCYTOR7，Genbank登錄號AF184971)； Clark H.F.，等人Genome Res.13,2265-2270,2003；Mungall A.J.，等人Nature 425,805-811,2003；Blumberg H.，等人Cell 104,9-19,2001；Dumoutier L.，等人J.Immunol.167,3545-3549,2001；Parrish-Novak J.，等人J.Biol.Chem.277,47517-47523,2002；Pletnev S.，等人(2003)Biochemistry 42：12617-12624；Sheikh F.，等人(2004)J.Immunol.172,2006-2010；EP1394274(實例11)；US2004005320(實例5)；WO2003029262(第74-75頁)；WO2003002717(申請專利範圍第2項；第63頁)；WO200222153(第45-47頁)；US2002042366(第20-21頁)；WO200146261(第57-59頁)；WO200146232(第63-65頁)；WO9837193(申請專利範圍第1項；第55-59頁)；登錄：Q9UHF4；Q6UWA9；Q96SH8；EMBL；AF184971；AAF01320.1。
(21)短縮素(BCAN、BEHAB，Genbank登錄號AF229053)Gary S.C.，等人Gene 256,139-147,2000；Clark H.F.，等人Genome Res.13,2265-2270,2003；Strausberg R.L.，等人Proc.Natl.Acad.Sci.U.S.A.99,16899-16903,2002；US2003186372(申請專利範圍第11項)；US2003186373(申請專利範圍第11項)；US2003119131(申請專利範圍第1項；圖52)；US2003119122(申請專利範圍第1項；圖52)；US2003119126(申請專利範圍第1項)；US2003119121(申請專利範圍第1項；圖52)；US2003119129(申請專利範圍第1項)；US2003119130(申請專利範圍第1項)；US2003119128(申請專利範圍第1項；圖52)；US2003119125(申請專利範圍第1項)；WO2003016475(申請專利範圍第1項)；WO200202634(申請專利範圍第1項)；
(22)EphB2R(DRT、ERK、Hek5、EPHT3、Tyro5，Genbank登錄號NM_004442)Chan,J.及Watt,V.M.,Oncogene 6(6),1057-1061(1991)Oncogene 10(5)：897-905(1995),Annu.Rev.Neurosci.21：309-345(1998),Int.Rev.Cytol.196：177-244(2000))；WO2003042661(申請專利範圍第12項)；WO200053216(申請專利範圍第1項；第41頁)；WO2004065576(申請專利範圍第1項)；WO2004020583(申請專利範圍第9項)；WO2003004529(第128-132頁)； WO200053216(申請專利範圍第1項；第42頁)；交互參照：MIM：600997；NP_004433.2；NM_004442_1
(23)ASLG659(B7h，Genbank登錄號AX092328)US20040101899(申請專利範圍第2項)；WO2003104399(申請專利範圍第11項)；WO2004000221(圖3)；US2003165504(申請專利範圍第1項)；US2003124140(實例2)；US2003065143(圖60)；WO2002102235(申請專利範圍第13項；第299頁)；US2003091580(實例2)；WO200210187(申請專利範圍第6項；圖10)；WO200194641(申請專利範圍第12項；圖7b)；WO200202624(申請專利範圍第13項；圖1A-1B)；US2002034749(申請專利範圍第54項；第45-46頁)；WO200206317(實例2；第320-321頁，申請專利範圍第34項；第321-322頁)；WO200271928(第468-469頁)；WO200202587(實例1；圖1)；WO200140269(實例3；第190-192頁)；WO200036107(實例2；第205-207頁)；WO2004053079(申請專利範圍第12項)；WO2003004989(申請專利範圍第1項)；WO200271928(第233-234、452-453頁)；WO 0116318；
(24)PSCA(前列腺幹細胞抗原前驅體，Genbank登錄號AJ297436)Reiter R.E.，等人Proc.Natl.Acad.Sci.U.S.A.95,1735-1740,1998；Gu Z.，等人Oncogene 19,1288-1296,2000；Biochem.Biophys.Res.Commun.(2000)275(3)：783-788；WO2004022709；EP1394274(實例11)；US2004018553(申請專利範圍第17項)；WO2003008537(申請專利範圍第1項)；WO200281646(申請專利範圍第1項；第164頁)；WO2003003906(申請專利範圍第10項；第288頁)；WO200140309(實例1；圖17)；US2001055751(實例1；圖1b)；WO200032752(申請專利範圍第18項；圖1)；WO9851805(申請專利範圍第17項；第97頁)；WO9851824(申請專利範圍第10項；第94頁)；WO9840403(申請專利範圍第2項；圖1B)；登錄：O43653；EMBL；AF043498；AAC39607.1。
(25)GEDA(Genbank登錄號AY260763)；AAP14954脂肪瘤HMGIC融合搭配物樣蛋白/pid=AAP14954.1-智人物種：智人(人類) WO2003054152(申請專利範圍第20項)；WO2003000842(申請專利範圍第1項)；WO2003023013(實例3，申請專利範圍第20項)；US2003194704(申請專利範圍第45項)；交互參照：GI：30102449；AAP14954.1；AY260763_1
(26)BAFF-R(B細胞活化因子受體、BLyS受體3、BR3，Genbank登錄號AF116456)；BAFF受體/pid=NP_443177.1-智人Thompson,J.S.，等人Science 293(5537),2108-2111(2001)；WO2004058309；WO2004011611；WO2003045422(實例；第32-33頁)；WO2003014294(申請專利範圍第35項；圖6B)；WO2003035846(申請專利範圍第70項；第615-616頁)；WO200294852(第136-137列)；WO200238766(申請專利範圍第3項；第133頁)；WO200224909(實例3；圖3)；交互参照：MIM：606269；NP_443177.1；NM_052945_1；AF132600
(27)CD22(B細胞受體CD22-B同功异型物、BL-CAM、Lyb-8、Lyb8、SIGLEC-2、FLJ22814，Genbank登錄號AK026467)；Wilson等人(1991)J.Exp.Med.173：137-146；WO2003072036(申請專利範圍第1項；圖1)；交互參照：MIM：107266；NP_001762.1；NM_001771_1
(28)CD79a(CD79A、CD79α、免疫球蛋白相關型α、B細胞特异性蛋白，其與Ig β(CD79B)共價相互作用且在表面上與Ig M分子形成複合物、轉導參與B細胞分化之信號)，pI：4.84，MW：25028 TM：2[P]基因染色體：19q13.2，Genbank登錄號NP_001774.10)WO2003088808，US20030228319；WO2003062401(申請專利範圍第9項)；US2002150573(申請專利範圍第4項，第13-14頁)；WO9958658(申請專利範圍第13項，圖16)；WO9207574(圖1)；US5644033；Ha等人(1992)J.Immunol.148(5)：1526-1531；Mueller等人(1992)Eur.J.Biochem.22：1621-1625；Hashimoto等人(1994)Immunogenetics 40(4)：287-295；Preud’homme等人(1992)Clin.Exp.Immunol.90(1)：141-146；Yu等人(1992)J.Immunol.148(2)633-637；Sakaguchi等人(1988)EMBO J.7(11)：3457-3464；
(29)CXCR5(伯基特氏淋巴瘤受體1，由CXCL13趨化因子活化、在淋巴細胞遷移及體液防禦方面發揮功能、在HIV-2感染且可能在AIDS、淋巴瘤、骨髓瘤及白血病之發展中起作用之G蛋白偶聯受體；372 aa；pI：8.54 MW：41959 TM：7[P]基因染色體：11q23.3，Genbank登錄號NP_001707.1)WO2004040000；WO2004015426；US2003105292(實例2)；US6555339(實例2)；WO200261087(圖1)；WO200157188(申請專利範圍第20項，第269頁)；WO200172830(第12-13頁)；WO200022129(實例1，第152-153頁，實例2，第254-256頁)；WO9928468(申請專利範圍第1項，第38頁)；US5440021(實例2，第49-52列)；WO9428931(第56-58頁)；WO9217497(申請專利範圍第7項，圖5)；Dobner等人(1992)Eur.J.Immunol.22：2795-2799；Barella等人(1995)Biochem.J.309：773-779；
(30)HLA-DOB(MHC第II類分子之β次單元(Ia抗原)，其結合肽且將該等肽呈現至CD4+ T淋巴細胞)；273 aa，pI：6.56 MW：30820 TM：1[P]基因染色體：6p21.3，Genbank登錄號NP_002111.1)Tonnelle等人(1985)EMBO J.4(11)：2839-2847；Jonsson等人(1989)Immunogenetics 29(6)：411-413；Beck等人(1992)J.Mol.Biol.228：433-441；Strausberg等人(2002)Proc.Natl.Acad.Sci USA 99：16899-16903；Servenius等人(1987)J.Biol.Chem.262：8759-8766；Beck等人(1996)J.Mol.Biol.255：1-13；Naruse等人(2002)Tissue Antigens 59：512-519；WO9958658(申請專利範圍第13項，圖15)；US6153408(第35-38列)；US5976551(第168-170列)；US6011146(第145-146列)；Kasahara等人(1989)Immunogenetics 30(1)：66-68；Larhammar等人(1985)J.Biol.Chem.260(26)：14111-14119；
(31)P2X5(嘌呤能受體P2X配位體門控離子通道5，由細胞外ATP門控之離子通道，可參與突觸傳遞及神經生成，缺乏可促成特發性逼尿肌不穩定之病理生理學)；422 aa)，pI：7.63，MW：47206 TM：1[P]基因染色體：17p13.3，Genbank登錄號NP_002552.2)Le等人(1997)FEBS Lett.418(1-2)：195-199；WO2004047749；WO2003072035(申請專利範圍第10項)；Touchman等人(2000)Genome Res.10：165-173；WO200222660(申請專利範圍第20項)；WO2003093444(申請 專利範圍第1項)；WO2003087768(申請專利範圍第1項)；WO2003029277(第82頁)；
(32)CD72(B細胞分化抗原CD72、Lyb-2)蛋白質序列完全maeaity...tafrfpd(1..359；359 aa)，pI：8.66，MW：40225 TM：1[P]基因染色體：9p13.3，Genbank登錄號NP_001773.1)WO2004042346(申請專利範圍第65項)；WO2003026493(第51-52、57-58頁)；WO200075655(第105-106頁)；Von Hoegen等人(1990)J.Immunol.144(12)：4870-4877；Strausberg等人(2002)Proc.Natl.Acad.Sci USA 99：16899-16903；
(33)LY64(淋巴細胞抗原64(RP105)，富含白胺酸之重複序列(LRR)之第I型膜蛋白家族，調節B細胞活化及細胞雕亡，功能喪失與患有全身性紅斑狼瘡之患者中疾病活性增加相關)；661 aa，pI：6.20，MW：74147 TM：1[P]基因染色體：5q12，Genbank登錄號NP_005573.1)US2002193567；WO9707198(申請專利範圍第11項，第39-42頁)；Miura等人(1996)Genomics 38(3)：299-304；Miura等人(1998)Blood 92：2815-2822；WO2003083047；WO9744452(申請專利範圍第8項，第57-61頁)；WO200012130(第24-26頁)；
(34)FcRH1(Fc受體樣蛋白1，包含C2型Ig樣域及ITAM域之免疫球蛋白Fc域之推定受體，可在B淋巴細胞分化中具有作用)；429 aa，pI：5.28，MW：46925 TM：1[P]基因染色體：1q21-1q22，Genbank登錄號NP_443170.1)WO2003077836；WO200138490(申請專利範圍第6項，圖18E-1-18-E-2)；Davis等人(2001)Proc.Natl.Acad.Sci USA 98(17)：9772-9777；WO2003089624(申請專利範圍第8項)；EP1347046(申請專利範圍第1項)；WO2003089624(申請專利範圍第7項)；
(35)IRTA2(免疫球蛋白超家族受體易位相關型2，在B細胞發育及淋巴瘤發生中具有可能作用之推定免疫受體；藉由易位使基因失調在一些B細胞惡性腫瘤中發生)；977 aa，pI：6.88 MW：106468 TM：1[P]基因染色體：1q21，Genbank登錄號人類：AF343662、AF343663、AF343664、 AF343665、AF369794、AF397453、AK090423、AK090475、AL834187、AY358085；小鼠：AK089756、AY158090、AY506558；NP_112571.1WO2003024392(申請專利範圍第2項，圖97)；Nakayama等人(2000)Biochem.Biophys.Res.Commun.277(1)：124-127；WO2003077836；WO200138490(申請專利範圍第3項，圖18B-1-18B-2)；
(36)TENB2(TMEFF2、腦腫瘤抑癌蛋白、TPEF、HPP1、TR、推定跨膜蛋白多醣，與生長因子及抑濾泡素之EGF/調蛋白家族相關)；374 aa，NCBI登錄：AAD55776、AAF91397、AAG49451、NCBI RefSeq：NP_057276；NCBI基因：23671；OMIM：605734；SwissProt Q9UIK5；Genbank登錄號AF179274；AY358907、CAF85723、CQ782436WO2004074320(SEQ ID NO 810)；JP2004113151(SEQ ID NOS 2、4、8)；WO2003042661(SEQ ID NO 580)；WO2003009814(SEQ ID NO 411)；EP1295944(第69-70頁)；WO200230268(第329頁)；WO200190304(SEQ ID NO 2706)；US2004249130；US2004022727；WO2004063355；US2004197325；US2003232350；US2004005563；US2003124579；Horie等人(2000)Genomics 67：146-152；Uchida等人(1999)Biochem.Biophys.Res.Commun.266：593-602；Liang等人(2000)Cancer Res.60：4907-12；Glynne-Jones等人(2001)Int J Cancer.10月15日；94(2)：178-84；
(37)PMEL17(銀同系物；SILV；D12S53E；PMEL17；SI；SIL)；ME20；gp100)BC001414；BT007202；M32295；M77348；NM_006928；McGlinchey,R.P.等人(2009)Proc.Natl.Acad.Sci.U.S.A.106(33),13731-13736；Kummer,M.P.等人(2009)J.Biol.Chem.284(4),2296-2306；
(38)TMEFF1(具有EGF樣域及兩個抑濾泡素樣域1之跨膜蛋白；腦腫瘤抑癌蛋白-1)；H7365；C9orf2；C9ORF2；U19878；X83961；NM_080655；NM_003692；Harms,P.W.(2003)Genes Dev.17(21),2624-2629；Gery,S.等人(2003)Oncogene 22(18)：2723-2727；
(39)GDNF-Ra1(GDNF家族受體α 1；GFRA1；GDNFR；GDNFRA；RETL1；TRNR1；RET1L；GDNFR-α1；GFR-A-1)；U95847；BC014962；NM_145793 NM_005264；Kim,M.H.等人(2009)Mol.Cell.Biol.29(8), 2264-2277；Treanor,J.J.等人(1996)Nature 382(6586)：80-83；
(40)Ly6E(淋巴細胞抗原6複合物，基因座E；Ly67、RIG-E、SCA-2、TSA-1)；NP_002337.1；NM_002346.2；de Nooij-van Dalen,A.G.等人(2003)Int.J.Cancer 103(6),768-774；Zammit,D.J.等人(2002)Mol.Cell.Biol.22(3)：946-952；WO 2013/17705；
(41)TMEM46(shisa同系物2(非洲爪蟾)；SHISA2)；NP_001007539.1；NM_001007538.1；Furushima,K.等人(2007)Dev.Biol.306(2),480-492；Clark,H.F.等人(2003)Genome Res.13(10)：2265-2270；
(42)Ly6G6D(淋巴細胞抗原6複合物，基因座G6D；Ly6-D、MEGT1)；NP_067079.2；NM_021246.2；Mallya,M.等人(2002)Genomics 80(1)：113-123；Ribas,G.等人(1999)J.Immunol.163(1)：278-287；
(43)LGR5(含富含白胺酸之重複序列之G蛋白偶聯受體5；GPR49、GPR67)；NP_003658.1；NM_003667.2；Salanti,G.等人(2009)Am.J.Epidemiol.170(5)：537-545；Yamamoto,Y.等人(2003)Hepatology 37(3)：528-533；
(44)RET(ret原癌基因；MEN2A；HSCR1；MEN2B；MTC1；PTC；CDHF12；Hs.168114；RET51；RET-ELE1)；NP_066124.1；NM_020975.4；Tsukamoto,H.等人(2009)Cancer Sci.100(10)：1895-1901；Narita,N.等人(2009)Oncogene 28(34)：3058-3068；
(45)LY6K(淋巴細胞抗原6複合物，基因座K；LY6K；HSJ001348；FLJ35226)；NP_059997.3；NM_017527.3；Ishikawa,N.等人(2007)Cancer Res.67(24)：11601-11611；de Nooij-van Dalen,A.G.等人(2003)Int.J.Cancer 103(6)：768-774；
(46)GPR19(G蛋白偶聯受體19；Mm.4787)；NP_006134.1；NM_006143.2；Montpetit,A.及Sinnett,D.(1999)Hum.Genet.105(1-2)：162-164；O'Dowd,B.F.等人(1996)FEBS Lett.394(3)：325-329；
(47)GPR54(KISS1受體；KISS1R；GPR54；HOT7T175；AXOR12)；NP_115940.2；NM_032551.4；Navenot,J.M.等人(2009)Mol.Pharmacol.75(6)：1300-1306；Hata,K.等人(2009)Anticancer Res.29(2)：617-623；
(48)ASPHD1(含天冬胺酸β-羥化酶域1；LOC253982)；NP_859069.2；NM_181718.3；Gerhard,D.S.等人(2004)Genome Res.14(10B)：2121-2127；
(49)酪胺酸酶(TYR；OCAIA；OCA1A；酪胺酸酶；SHEP3)；NP_000363.1；NM_000372.4；Bishop,D.T.等人(2009)Nat.Genet.41(8)：920-925；Nan,H.等人(2009)Int.J.Cancer 125(4)：909-917；
(50)TMEM118(環指蛋白，跨膜2；RNFT2；FLJ14627)；NP_001103373.1；NM_001109903.1；Clark,H.F.等人(2003)Genome Res.13(10)：2265-2270；Scherer,S.E.等人(2006)Nature 440(7082)：346-351
(51)GPR172A(G蛋白偶聯受體172A；GPCR41；FLJ11856；D15Ertd747e)；NP_078807.1；NM_024531.3；Ericsson,T.A.等人(2003)Proc.Natl.Acad.Sci.U.S.A.100(11)：6759-6764；Takeda,S.等人(2002)FEBS Lett.520(1-3)：97-101。
(52)CD33，唾液酸結合，免疫球蛋白樣凝集素家族之成員，為67-kDa糖基化跨膜蛋白。除了定型骨髓單核細胞及類紅血球祖細胞外，CD33亦在大多數骨髓性及單核細胞性白血病細胞上表現。其未在最早多能幹細胞、成熟粒細胞、淋巴樣細胞或非造血細胞上觀察到(Sabbath等人，(1985)J.Clin.Invest.75：756-56；Andrews等人，(1986)Blood 68：1030-5)。CD33在其胞質尾上包含兩個酪胺酸殘基，該等酪胺酸殘基之後各自為類似於在許多抑制性受體中觀察到之基於免疫受體酪胺酸之抑制性基元(ITIM)的疏水性殘基。
(53)CLL-1(CLEC12A、MICL及DCAL2)編碼C型凝集素/C型凝集素樣域(CTL/CTLD)超家族之成員。此家族之成員共用共有蛋白摺疊，且具有多種多樣之功能，諸如細胞粘附、細胞-細胞信號傳導、醣蛋白轉換及在發炎及免疫反應中之作用。由此基因編碼之蛋白質為粒細胞及單核細胞功能之負調節劑。已描述此基因之若干種替代剪接轉錄變异體，但一些此等變异體之全長性質尚未確定。此基因與染色體上12p13之自然基因複合區中之其他CTL/CTLD超家族成員密切相關(Drickamer K(1999)Curr.Opin.Struct.Biol.9(5)：585-90；van Rhenen A，等人，(2007)Blood 110(7)：2659-66；Chen CH，等人(2006)Blood 107(4)：1459-67；Marshall AS，等人(2006)Eur.J.Immunol.36(8)：2159-69；Bakker AB，等人(2005)Cancer Res.64(22)：8443-50；Marshall AS，等人(2004)J.Biol.Chem.279(15)：14792-802)。已證明CLL-1為II型跨膜受體，該受體包含單一C型凝集素樣域(其經預測不結合鈣或糖)、柄區、跨膜域及含有ITIM基元之短胞質尾。
抗CD22抗體
在某些實施例中，表3A及3B中ADC之抗CD22抗體包含根據US 8226945之三個輕鏈高變區(HVR-L1、HVR-L2及HVR-L3)及三個重鏈高變區(HVR-H1、HVR-H2及HVR-H3)：
HVR-L1 RSSQSIVHSVGNTFLE (SEQ ID NO：1)
HVR-L2 KVSNRFS (SEQ ID NO：2)
HVR-L3 FQGSQFPYT (SEQ ID NO：3)
HVR-H1 GYEFSRSWMN (SEQ ID NO：4)
HVR-H2 GRIYPGDGDTNYSGKFKG (SEQ ID NO：5)
HVR-H3 DGSSWDWYFDV (SEQ ID NO：6)
抗Ly6E抗體
在某些實施例中，表3A及3B之ADC包含抗Ly6E抗體。淋巴細胞抗原6複合物，基因座E(Ly6E)，亦稱為視黃酸誘導之基因E(RIG-E)及幹細胞抗原2(SCA-2)。其為無已知結合搭配物之未知功能的GPI連接之131個胺基酸長度之約8.4kDa蛋白質。其初始鑑別為在小鼠中之不成熟胸腺細胞、胸腺髓質上皮細胞中表現之轉錄物(Mao，等人(1996)Proc.Natl.Acad.Sci.U.S.A.93：5910-5914)。在一些實施例中，本發明提供包含一種在PCT公開案第WO 2013/177055號中描述之抗Ly6E抗體之免疫結合物。
在一些實施例中，本發明提供一種包含抗Ly6E抗體之抗體-藥物結合物，該抗Ly6E抗體包含至少一個、兩個、三個、四個、五個或六個選自以下之HVR：(a)HVR-H1，其包含SEQ ID NO：12之胺基酸序列；(b)HVR-H2，其包含SEQ ID NO：13之胺基酸序列；(c)HVR-H3，其包含SEQ ID NO：14之胺基酸序列；(d)HVR-L1，其包含SEQ ID NO：9之胺基酸序列；(e)HVR-L2，其包含SEQ ID NO：10之胺基酸序列；及(f)HVR-L3， 其包含SEQ ID NO：11之胺基酸序列。
在一個態樣中，本發明提供一種包含抗體之抗體-藥物結合物，該抗體包含至少一個、至少兩個或全部三個選自以下之VH HVR序列：(a)HVR-H1，其包含SEQ ID NO：12之胺基酸序列；(b)HVR-H2，其包含SEQ ID NO：13之胺基酸序列；及(c)HVR-H3，其包含SEQ ID NO：14之胺基酸序列。在另一實施例中，該抗體包含(a)HVR-H1，其包含SEQ ID NO：12之胺基酸序列；(b)HVR-H2，其包含SEQ ID NO：13之胺基酸序列；及(c)HVR-H3，其包含SEQ ID NO：14之胺基酸序列。
在另一態樣中，本發明提供一種包含抗體之抗體-藥物結合物，該抗體包含至少一個、至少兩個或全部三個選自以下之VL HVR序列：(a)HVR-L1，其包含SEQ ID NO：9之胺基酸序列；(b)HVR-L2，其包含SEQ ID NO：10之胺基酸序列；及(c)HVR-L3，其包含SEQ ID NO：11之胺基酸序列。在一實施例中，該抗體包含(a)HVR-L1，其包含SEQ ID NO：9之胺基酸序列；(b)HVR-L2，其包含SEQ ID NO：10之胺基酸序列；及(c)HVR-L3，其包含SEQ ID NO：11之胺基酸序列。
在另一態樣中，本發明之抗體-藥物結合物包含抗體，該抗體包含(a)VH域，其包含至少一個、至少兩個或全部三個選自以下之VH HVR序列：(i)HVR-H1，其包含SEQ ID NO：12之胺基酸序列，(ii)HVR-H2，其包含SEQ ID NO：13之胺基酸序列，及(iii)HVR-H3，其包含選自SEQ ID NO：14之胺基酸序列；及(b)VL域，其包含至少一個、至少兩個或全部三個選自以下之VL HVR序列：(i)HVR-L1，其包含SEQ ID NO：9之胺基酸序列，(ii)HVR-L2，其包含SEQ ID NO：10之胺基酸序列，及(c)HVR-L3，其包含SEQ ID NO：11之胺基酸序列。
在另一態樣中，本發明提供一種包含抗體之抗體-藥物結合物，該抗體包含：(a)HVR-H1，其包含SEQ ID NO：12之胺基酸序列；(b)HVR-H2，其包含SEQ ID NO：13之胺基酸序列；(c)HVR-H3，其包含SEQ ID NO：14之胺基酸序列；(d)HVR-L1，其包含SEQ ID NO：9之胺基酸序列；(e)HVR-L2，其包含SEQ ID NO：10之胺基酸序列；及(f)HVR-L3，其包含SEQ ID NO：11之胺基酸序列。
在任一以上實施例中，抗體-藥物結合物之抗Ly6E抗體經人類化。在一實施例中，抗Ly6E抗體包含如任何以上實施例中之HVR，且進一步包含人類接受體構架，例如人類免疫球蛋白構架或人類共同構架。
在另一態樣中，抗體-藥物結合物之抗Ly6E抗體包含與SEQ ID NO：8之胺基酸序列具有至少90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%序列一致性之重鏈可變域(VH)序列。在某些實施例中，相對於參照序列，與SEQ ID NO：8之胺基酸序列具有至少90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%或99%一致性之VH序列含有取代(例如保守性取代)、插入或缺失，但包含彼序列之抗Ly6E抗體保留結合Ly6E之能力。在某些實施例中，在SEQ ID NO：8中，總計1至10個胺基酸已經取代、插入及/或缺失。在某些實施例中，在SEQ ID NO：8中，總計1至5個胺基酸已經取代、插入及/或缺失。在某些實施例中，取代、插入或缺失發生在HVR外的區域中(亦即，FR中)。視情况，抗Ly6E抗體包含SEQ ID NO：8之VH序列，包括彼序列之轉譯後修飾。在一特定實施例中，VH包含一、二或三個選自以下之HVR：(a)HVR-H1，其包含SEQ ID NO：12之胺基酸序列；(b)HVR-H2，其包含SEQ ID NO：13之胺基酸序列；及(c)HVR-H3，其包含SEQ ID NO：14之胺基酸序列。
在另一態樣中，提供一種抗體-藥物結合物之抗Ly6E抗體，其中該抗體包含與SEQ ID NO：7之胺基酸序列具有至少90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%序列一致性之輕鏈可變域(VL)。在某些實施例中，相對於參照序列，與SEQ ID NO：7之胺基酸序列具有至少90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%或99%一致性之VL序列含有取代(例如保守性取代)、插入或缺失，但包含彼序列之抗Ly6E抗體保留結合Ly6E之能力。在某些實施例中，在SEQ ID NO：7中，總計1至10個胺基酸已經取代、插入及/或缺失。在某些實施例中，在SEQ ID NO：7中，總計1至5個胺基酸已經取代、插入及/或缺失。在某些實施例中，取代、插入或缺失發生在HVR外的區域中(亦即，FR中)。視情况，抗Ly6E抗體包含SEQ ID NO：7之VL序列，包括彼序列之轉譯後修飾。在一特定實施例中，VL包含一、二或三個選自以下之HVR：(a) HVR-L1，其包含SEQ ID NO：9之胺基酸序列；(b)HVR-L2，其包含SEQ ID NO：10之胺基酸序列；及(c)HVR-L3，其包含SEQ ID NO：11之胺基酸序列。
在另一態樣中，提供一種包含抗Ly6E抗體之抗體-藥物結合物，其中該抗體包含如任何以上提供之實施例中之VH及如任何以上提供之實施例中之VL。
在一實施例中，提供一種抗體-藥物結合物，其中該抗體包含分別在SEQ ID NO：8及SEQ ID NO：7中之VH及VL序列，包括彼等序列之轉譯後修飾。
在另一態樣中，本文提供抗體-藥物結合物，其包含與本文提供之抗Ly6E抗體結合相同抗原决定基之抗體。舉例而言，在某些實施例中，提供一種包含抗體之免疫結合物，該抗體與分別包含SEQ ID NO：8之VH序列及SEQ ID NO：7之VL序列的抗Ly6E抗體結合相同抗原决定基。
在本發明之另一態樣中，根據任何以上實施例之抗體-藥物結合物之抗Ly6E抗體為單株抗體，包括人類抗體。在一實施例中，抗體-藥物結合物之抗Ly6E抗體為抗體片段，例如Fv、Fab、Fab’、scFv、雙功能抗體或F(ab’)2片段。在另一實施例中，該抗體為實質上全長抗體，例如IgG1抗體、IgG2a抗體或如本文所定義之其他抗體類或同型。在一些實施例中，免疫結合物(ADC)包含抗Ly6E抗體，該抗體包含分別包含SEQ ID NO：16及15之胺基酸序列之重鏈及輕鏈。
Ly6E抗體序列之表
抗HER2抗體
在某些實施例中，表3A及3B之ADC包含抗HER2抗體。在本發明之一實施例中，本發明之ADC之抗HER2抗體包含人源化抗HER2抗體，例如huMAb4D5-1、huMAb4D5-2、huMAb4D5-3、huMAb4D5-4、huMAb4D5-5、huMAb4D5-6、huMAb4D5-7及huMAb4D5-8，如在US 5821337之表3中所描述，該專利明確以引用之方式併入本文中。彼等抗體包含具有結合HER2之鼠類抗體(4D5)之互補决定區的人類構架區。人類化抗體huMAb4D5-8亦稱為曲妥珠單抗，其可在商標HERCEPTIN®下商購。在本發明之另一實施例中，本發明之ADC之抗HER2抗體包含人類化抗HER2抗體，例如人類化2C4，如US7862817中所描述。例示性人類化2C4抗體為帕妥珠單抗，其可在商標PERJETA®下商購。
在本發明之另一實施例中，本發明之ADC之抗HER2抗體包含人類化7C2抗HER2抗體。人類化7C2抗體為抗HER2抗體。
在一些實施例中，本發明提供一種包含抗HER2抗體之抗體-藥物結合物，該抗HER2抗體包含至少一個、兩個、三個、四個、五個或六個選自以下之HVR：(a)HVR-H1，其包含SEQ ID NO：22之胺基酸序列；(b)HVR-H2，其包含SEQ ID NO：23、27或28之胺基酸序列；(c)HVR-H3，其包含SEQ ID NO：24或29之胺基酸序列；(d)HVR-L1，其包含SEQ ID NO：19之胺基酸序列；(e)HVR-L2，其包含SEQ ID NO：20之胺基酸序列；及(f)HVR-L3，其包含SEQ ID NO：21之胺基酸序列。在一些實施例中，本發明提供一種包含抗HER2抗體之抗體-藥物結合物，該抗HER2抗體包含至少一個、兩個、三個、四個、五個或六個選自以下之HVR：(a)HVR-H1，其包含SEQ ID NO：22之胺基酸序列；(b)HVR-H2，其包含SEQ ID NO：23 之胺基酸序列；(c)HVR-H3，其包含SEQ ID NO：24之胺基酸序列；(d)HVR-L1，其包含SEQ ID NO：19之胺基酸序列；(e)HVR-L2，其包含SEQ ID NO：20之胺基酸序列；及(f)HVR-L3，其包含SEQ ID NO：21之胺基酸序列。
在一個態樣中，本發明提供一種包含抗體之抗體-藥物結合物，該抗體包含至少一個、至少兩個或全部三個選自以下之VH HVR序列：(a)HVR-H1，其包含SEQ ID NO：22之胺基酸序列；(b)HVR-H2，其包含SEQ ID NO：23、27或28之胺基酸序列；及(c)HVR-H3，其包含SEQ ID NO：24或29之胺基酸序列。在一個態樣中，本發明提供一種包含抗體之免疫結合物，該抗體包含至少一個、至少兩個或全部三個選自以下之VH HVR序列：(a)HVR-H1，其包含SEQ ID NO：22之胺基酸序列；(b)HVR-H2，其包含SEQ ID NO：23之胺基酸序列；及(c)HVR-H3，其包含SEQ ID NO：24之胺基酸序列。在另一實施例中，該抗體包含(a)HVR-H1，其包含SEQ ID NO：22之胺基酸序列；(b)HVR-H2，其包含SEQ ID NO：23、27或28之胺基酸序列；及(c)HVR-H3，其包含SEQ ID NO：24或29之胺基酸序列。在另一實施例中，該抗體包含(a)HVR-H1，其包含SEQ ID NO：22之胺基酸序列；(b)HVR-H2，其包含SEQ ID NO：23之胺基酸序列；及(c)HVR-H3，其包含SEQ ID NO：24之胺基酸序列。
在另一態樣中，本發明提供一種包含抗體之抗體-藥物結合物，該抗體包含至少一個、至少兩個或全部三個選自以下之VL HVR序列：(a)HVR-L1，其包含SEQ ID NO：19之胺基酸序列；(b)HVR-L2，其包含SEQ ID NO：20之胺基酸序列；及(c)HVR-L3，其包含SEQ ID NO：21之胺基酸序列。在一實施例中，該抗體包含(a)HVR-L1，其包含SEQ ID NO：19之胺基酸序列；(b)HVR-L2，其包含SEQ ID NO：20之胺基酸序列；及(c)HVR-L3，其包含SEQ ID NO：21之胺基酸序列。
在另一態樣中，本發明之抗體-藥物結合物包含抗體，該抗體包含(a)VH域，其包含至少一個、至少兩個或全部三個選自以下之VH HVR序列：(i)HVR-H1，其包含SEQ ID NO：22之胺基酸序列，(ii)HVR-H2，其包含SEQ ID NO：23、27或28之胺基酸序列，及(iii)HVR-H3， 其包含選自SEQ ID NO：24或29之胺基酸序列；及(b)VL域，其包含至少一個、至少兩個或全部三個選自以下之VL HVR序列：(i)HVR-L1，其包含SEQ ID NO：19之胺基酸序列，(i)HVR-L2，其包含SEQ ID NO：20之胺基酸序列，及(c)HVR-L3，其包含SEQ ID NO：21之胺基酸序列。在另一態樣中，本發明之抗體-藥物結合物包含抗體，該抗體包含(a)VH域，其包含至少一個、至少兩個或全部三個選自以下之VH HVR序列：(i)HVR-H1，其包含SEQ ID NO：22之胺基酸序列，(ii)HVR-H2，其包含SEQ ID NO：23之胺基酸序列，及(iii)HVR-H3，其包含選自SEQ ID NO：24之胺基酸序列；及(b)VL域，其包含至少一個、至少兩個或全部三個選自以下之VL HVR序列：(i)HVR-L1，其包含SEQ ID NO：19之胺基酸序列，(ii)HVR-L2，其包含SEQ ID NO：20之胺基酸序列，及(c)HVR-L3，其包含SEQ ID NO：21之胺基酸序列。
在另一態樣中，本發明提供一種包含抗體之抗體-藥物結合物，該抗體包含：(a)HVR-H1，其包含SEQ ID NO：22之胺基酸序列；(b)HVR-H2，其包含SEQ ID NO：23、27或28之胺基酸序列；(c)HVR-H3，其包含SEQ ID NO：24或29之胺基酸序列；(d)HVR-L1，其包含SEQ ID NO：19之胺基酸序列；(e)HVR-L2，其包含SEQ ID NO：20之胺基酸序列；及(f)HVR-L3，其包含SEQ ID NO：21之胺基酸序列。在另一態樣中，本發明提供一種包含抗體之抗體-藥物結合物，該抗體包含：(a)HVR-H1，其包含SEQ ID NO：22之胺基酸序列；(b)HVR-H2，其包含SEQ ID NO：23之胺基酸序列；(c)HVR-H3，其包含SEQ ID NO：24之胺基酸序列；(d)HVR-L1，其包含SEQ ID NO：19之胺基酸序列；(e)HVR-L2，其包含SEQ ID NO：20之胺基酸序列；及(f)HVR-L3，其包含SEQ ID NO：21之胺基酸序列。
在任一以上實施例中，抗體-藥物結合物之抗HER2抗體經人類化。在一實施例中，抗體-藥物結合物之抗HER2抗體包含如任何以上實施例中之HVR，且進一步包含人類接受體構架，例如人類免疫球蛋白構架或人類共同構架。
在另一態樣中，抗體-藥物結合物之抗HER2抗體包含與SEQ ID NO：18之胺基酸序列具有至少90%、91%、92%、93%、94%、95%、 96%、97%、98%、99%或100%序列一致性之重鏈可變域(VH)序列。在某些實施例中，相對於參照序列，與SEQ ID NO：18之胺基酸序列具有至少90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%或99%一致性之VH序列含有取代(例如保守性取代)、插入或缺失，但包含彼序列之抗HER2抗體保留結合HER2之能力。在某些實施例中，在SEQ ID NO：18中，總計1至10個胺基酸已經取代、插入及/或缺失。在某些實施例中，在SEQ ID NO：18中，總計1至5個胺基酸已經取代、插入及/或缺失。在某些實施例中，取代、插入或缺失發生在HVR外的區域中(亦即，FR中)。視情况，抗HER2抗體包含SEQ ID NO：18之VH序列，包括彼序列之轉譯後修飾。在一特定實施例中，VH包含一、二或三個選自以下之HVR：(a)HVR-H1，其包含SEQ ID NO：22之胺基酸序列；(b)HVR-H2，其包含SEQ ID NO：23之胺基酸序列；及(c)HVR-H3，其包含SEQ ID NO：24之胺基酸序列。
在另一態樣中，提供一種抗體-藥物結合物之抗HER2抗體，其中該抗體包含與SEQ ID NO：17之胺基酸序列具有至少90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%序列一致性之輕鏈可變域(VL)。在某些實施例中，相對於參照序列，與SEQ ID NO：17之胺基酸序列具有至少90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%或99%一致性之VL序列含有取代(例如保守性取代)、插入或缺失，但包含彼序列之抗HER2抗體保留結合HER2之能力。在某些實施例中，在SEQ ID NO：17中，總計1至10個胺基酸已經取代、插入及/或缺失。在某些實施例中，在SEQ ID NO：17中，總計1至5個胺基酸已經取代、插入及/或缺失。在某些實施例中，取代、插入或缺失發生在HVR外的區域中(亦即，FR中)。視情况，抗HER2抗體包含SEQ ID NO：17之VL序列，包括彼序列之轉譯後修飾。在一特定實施例中，VL包含一、二或三個選自以下之HVR：(a)HVR-L1，其包含SEQ ID NO：19之胺基酸序列；(b)HVR-L2,其包含SEQ ID NO：20之胺基酸序列；及(c)HVR-L3，其包含SEQ ID NO：21之胺基酸序列。
在另一態樣中，提供一種包含抗HER2抗體之抗體-藥物結合物，其中該抗體包含如任何以上提供之實施例中之VH及如任何以上提 供之實施例中之VL。
在一實施例中，提供一種包含抗體之抗體-藥物結合物，其中該抗體包含分別在SEQ ID NO：18及SEQ ID NO：17中之VH及VL序列，包括彼等序列之轉譯後修飾。
在一實施例中，提供一種包含抗體之抗體-藥物結合物，其中該抗體包含SEQ ID NO：30之人類化7C2.v2.2.LA(hu7C2)K149C κ輕鏈序列。
在一實施例中，提供一種包含抗體之抗體-藥物結合物，其中該抗體包含SEQ ID NO：31之Hu7C2 A118C IgG1重鏈序列。
在另一態樣中，本文提供抗體-藥物結合物，其包含與本文提供之抗HER2抗體結合相同抗原决定基之抗體。舉例而言，在某些實施例中，提供一種包含抗體之免疫結合物，該抗體與分別包含SEQ ID NO：18之VH序列及SEQ ID NO：17之VL序列的抗HER2抗體結合相同抗原决定基。
在本發明之另一態樣中，根據任何以上實施例之抗體-藥物結合物之抗HER2抗體為單株抗體，包括人類抗體。在一實施例中，免疫結合物之抗HER2抗體為抗體片段，例如Fv、Fab、Fab’、scFv、雙功能抗體或F(ab’)2片段。在另一實施例中，免疫結合物包含抗體，該抗體為實質上全長抗體，例如IgG1抗體、IgG2a抗體或如本文所定義之其他抗體類或同型。
人類化7C2抗HER2抗體序列之表
抗MUC16抗體
在某些實施例中，表3A及3B之ADC包含抗MUC16抗體。
在一些實施例中，本發明提供一種包含抗MUC16抗體之抗體-藥物結合物，該抗MUC16抗體包含至少一個、兩個、三個、四個、五個或六個選自以下之HVR：(a)HVR-H1，其包含SEQ ID NO：35之胺基酸 序列；(b)HVR-H2，其包含SEQ ID NO：36之胺基酸序列；(c)HVR-H3，其包含SEQ ID NO：37之胺基酸序列；(d)HVR-L1，其包含SEQ ID NO：32之胺基酸序列；(e)HVR-L2，其包含SEQ ID NO：33之胺基酸序列；及(f)HVR-L3，其包含SEQ ID NO：34之胺基酸序列。
在一個態樣中，本發明提供一種包含抗體之抗體-藥物結合物，該抗體包含至少一個、至少兩個或全部三個選自以下之VH HVR序列：(a)HVR-H1，其包含SEQ ID NO：35之胺基酸序列；(b)HVR-H2，其包含SEQ ID NO：36之胺基酸序列；(c)HVR-H3，其包含SEQ ID NO：37之胺基酸序列。在另一實施例中，該抗體包含(a)HVR-H1，其包含SEQ ID NO：35之胺基酸序列；(b)HVR-H2，其包含SEQ ID NO：36之胺基酸序列；(c)HVR-H3，其包含SEQ ID NO：37之胺基酸序列。
在另一態樣中，本發明提供一種包含抗體之抗體-藥物結合物，該抗體包含至少一個、至少兩個或全部三個選自以下之VL HVR序列：(a)HVR-L1，其包含SEQ ID NO：32之胺基酸序列；(b)HVR-L2，其包含SEQ ID NO：33之胺基酸序列；及(c)HVR-L3，其包含SEQ ID NO：34之胺基酸序列。在一個實施例中，該抗體包含(a)HVR-L1，其包含SEQ ID NO：32之胺基酸序列；(b)HVR-L2，其包含SEQ ID NO：33之胺基酸序列；及(c)HVR-L3，其包含SEQ ID NO：34之胺基酸序列。
在另一態樣中，本發明之抗體-藥物結合物包含抗體，該抗體包含(a)VH域，其包含至少一個、至少兩個或全部三個選自以下之VH HVR序列：(i)HVR-H1，其包含SEQ ID NO：35之胺基酸序列，(ii)HVR-H2，其包含SEQ ID NO：36之胺基酸序列，及(iii)HVR-H3，其包含選自SEQ ID NO：37之胺基酸序列；及(b)VL域，其包含至少一個、至少兩個或全部三個選自以下之VL HVR序列：(i)HVR-L1，其包含SEQ ID NO：32之胺基酸序列，(ii)HVR-L2，其包含SEQ ID NO：33之胺基酸序列，及(c)HVR-L3，其包含SEQ ID NO：34之胺基酸序列。
在另一態樣中，本發明提供一種包含抗體之抗體-藥物結合物，該抗體包含：(a)HVR-H1，其包含SEQ ID NO：35之胺基酸序列；(b)HVR-H2，其包含SEQ ID NO：36之胺基酸序列；(c)HVR-H3，其包含SEQ ID NO：37之胺基酸序列；(d)HVR-L1，其包含SEQ ID NO：32之胺基酸序列；(e)HVR-L2，其包含SEQ ID NO：33之胺基酸序列；及(f)HVR-L3，其包含SEQ ID NO：34之胺基酸序列。
在任一以上實施例中，抗體-藥物結合物之抗MUC16抗體經人類化。在一個實施例中，抗MUC16抗體包含如任何以上實施例中之HVR，且進一步包含人類接受體構架，例如人類免疫球蛋白構架或人類共同構架。
在另一態樣中，抗體-藥物結合物之抗MUC16抗體包含與SEQ ID NO：39之胺基酸序列具有至少90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%序列一致性之重鏈可變域(VH)序列。在某些實施例中，相對於參照序列，與SEQ ID NO：39之胺基酸序列具有至少90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%或99%一致性之VH序列含有取代(例如保守性取代)、插入或缺失，但包含彼序列之抗MUC16抗體保留結合MUC16之能力。在某些實施例中，在SEQ ID NO：39中，總計1至10個胺基酸已經取代、插入及/或缺失。在某些實施例中，在SEQ ID NO：39中，總計1至5個胺基酸已經取代、插入及/或缺失。在某些實施例中，取代、插入或缺失發生在HVR外的區域中(亦即，FR中)。視情况，抗MUC16抗體包含SEQ ID NO：39之VH序列，包括彼序列之轉譯後修飾。在一特定實施例中，VH包含一、二或三個選自以下之HVR：(a)HVR-H1，其包含SEQ ID NO：35之胺基酸序列；(b)HVR-H2，其包含SEQ ID NO：36之胺基酸序列；及(c)HVR-H3，其包含SEQ ID NO：37之胺基酸序列。
在另一態樣中，提供一種抗體-藥物結合物之抗MUC16抗體，其中該抗體包含與SEQ ID NO：38之胺基酸序列具有至少90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%序列一致性之輕鏈可變域(VL)。在某些實施例中，相對於參照序列，與SEQ ID NO：38之胺基酸序列具有至少90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%或99%一致性之VL序列含有取代(例如保守性取代)、插入或缺失，但包含彼序列之抗MUC16抗體保留結合MUC16之能力。在某些實施例中， 在SEQ ID NO：38中，總計1至10個胺基酸已經取代、插入及/或缺失。在某些實施例中，在SEQ ID NO：38中，總計1至5個胺基酸已經取代、插入及/或缺失。在某些實施例中，取代、插入或缺失發生在HVR外的區域中(亦即，FR中)。視情况，抗MUC16抗體包含SEQ ID NO：38之VL序列，包括彼序列之轉譯後修飾。在一特定實施例中，VL包含一、二或三個選自以下之HVR：(a)HVR-L1，其包含SEQ ID NO：32之胺基酸序列；(b)HVR-L2，其包含SEQ ID NO：33之胺基酸序列；及(c)HVR-L3，其包含SEQ ID NO：34之胺基酸序列。
在另一態樣中，提供一種包含抗MUC16抗體之抗體-藥物結合物，其中該抗體包含如任何以上提供之實施例中之VH及如任何以上提供之實施例中之VL。
在一實施例中，提供一種抗體-藥物結合物，其中該抗體包含分別在SEQ ID NO：39及SEQ ID NO：38中之VH及VL序列，包括彼等序列之轉譯後修飾。
在另一態樣中，本文提供抗體-藥物結合物，其包含與本文提供之抗MUC16抗體結合相同抗原决定基之抗體。舉例而言，在某些實施例中，提供一種包含抗體之免疫結合物，該抗體與分別包含SEQ ID NO：39之VH序列及SEQ ID NO：38之VL序列的抗MUC16抗體結合相同抗原决定基。
在本發明之另一態樣中，根據任何以上實施例之抗體-藥物結合物之抗MUC16抗體為單株抗體，包括人類抗體。在一個實施例中，抗體-藥物結合物之抗MUC16抗體為抗體片段，例如Fv、Fab、Fab’、scFv、雙功能抗體或F(ab’)2片段。在另一實施例中，該抗體為實質上全長抗體，例如IgG1抗體、IgG2a抗體或如本文所定義之其他抗體類或同型。
MUC16抗體序列之表
抗STEAP-1抗體
在某些實施例中，表3A及3B之ADC包含抗STEAP-1抗體。
在一些實施例中，本發明提供一種包含抗STEAP-1抗體之抗體-藥物結合物，該抗STEAP-1抗體包含至少一個、兩個、三個、四個、五個或六個選自以下之HVR：(a)HVR-H1，其包含SEQ ID NO：40之胺基酸序列；(b)HVR-H2，其包含SEQ ID NO：41之胺基酸序列；(c)HVR-H3，其包含SEQ ID NO：42之胺基酸序列；(d)HVR-L1，其包含SEQ ID NO：43之胺基酸序列；(e)HVR-L2，其包含SEQ ID NO：44之胺基酸序列；及(f)HVR-L3，其包含SEQ ID NO：45之胺基酸序列。
在一個態樣中，本發明提供一種包含抗體之抗體-藥物結合物，該抗體包含至少一個、至少兩個或全部三個選自以下之VH HVR序列：(a)HVR-H1，其包含SEQ ID NO：40之胺基酸序列；(b)HVR-H2，其包含SEQ ID NO：41之胺基酸序列；(c)HVR-H3，其包含SEQ ID NO：42之胺基酸序列。在另一實施例中，該抗體包含(a)HVR-H1，其包含SEQ ID NO：40之胺基酸序列；(b)HVR-H2，其包含SEQ ID NO：41之胺基酸序列；(c) HVR-H3，其包含SEQ ID NO：42之胺基酸序列。
在另一態樣中，本發明提供一種包含抗體之抗體-藥物結合物，該抗體包含至少一個、至少兩個或全部三個選自以下之VL HVR序列：(a)HVR-L1，其包含SEQ ID NO：43之胺基酸序列；(b)HVR-L2，其包含SEQ ID NO：44之胺基酸序列；及(c)HVR-L3，其包含SEQ ID NO：45之胺基酸序列。在一個實施例中，該抗體包含(a)HVR-L1，其包含SEQ ID NO：43之胺基酸序列；(b)HVR-L2，其包含SEQ ID NO：44之胺基酸序列；及(c)HVR-L3，其包含SEQ ID NO：45之胺基酸序列。
在另一態樣中，本發明之抗體-藥物結合物包含抗體，該抗體包含(a)VH域，其包含至少一個、至少兩個或全部三個選自以下之VH HVR序列：(i)HVR-H1，其包含SEQ ID NO：40之胺基酸序列，(ii)HVR-H2，其包含SEQ ID NO：41之胺基酸序列，及(iii)HVR-H3，其包含選自SEQ ID NO：42之胺基酸序列；及(b)VL域，其包含至少一個、至少兩個或全部三個選自以下之VL HVR序列：(i)HVR-L1，其包含SEQ ID NO：43之胺基酸序列，(ii)HVR-L2，其包含SEQ ID NO：44之胺基酸序列，及(c)HVR-L3，其包含SEQ ID NO：45之胺基酸序列。
在另一態樣中，本發明提供一種包含抗體之抗體-藥物結合物，該抗體包含：(a)HVR-H1，其包含SEQ ID NO：40之胺基酸序列；(b)HVR-H2，其包含SEQ ID NO：41之胺基酸序列；(c)HVR-H3，其包含SEQ ID NO：42之胺基酸序列；(d)HVR-L1，其包含SEQ ID NO：43之胺基酸序列；(e)HVR-L2，其包含SEQ ID NO：44之胺基酸序列；及(f)HVR-L3，其包含SEQ ID NO：45之胺基酸序列。
在任一以上實施例中，抗體-藥物結合物之抗STEAP-1抗體經人類化。在一個實施例中，抗STEAP-1抗體包含如任何以上實施例中之HVR，且進一步包含人類接受體構架，例如人類免疫球蛋白構架或人類共同構架。
在另一態樣中，抗體-藥物結合物之抗STEAP-1抗體包含與SEQ ID NO：46之胺基酸序列具有至少90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%序列一致性之重鏈可變域(VH)序列。在某 些實施例中，相對於參照序列，與SEQ ID NO：46之胺基酸序列具有至少90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%或99%一致性之VH序列含有取代(例如保守性取代)、插入或缺失，但包含彼序列之抗STEAP-1抗體保留結合STEAP-1之能力。在某些實施例中，在SEQ ID NO：46中，總計1至10個胺基酸已經取代、插入及/或缺失。在某些實施例中，在SEQ ID NO：46中，總計1至5個胺基酸已經取代、插入及/或缺失。在某些實施例中，取代、插入或缺失發生在HVR外的區域中(亦即，FR中)。視情况，抗STEAP-1抗體包含SEQ ID NO：46之VH序列，包括彼序列之轉譯後修飾。在一特定實施例中，VH包含一、二或三個選自以下之HVR：(a)HVR-H1，其包含SEQ ID NO：40之胺基酸序列；(b)HVR-H2，其包含SEQ ID NO：41之胺基酸序列；及(c)HVR-H3，其包含SEQ ID NO：42之胺基酸序列。
在另一態樣中，提供一種抗體-藥物結合物之抗STEAP-1抗體，其中該抗體包含與SEQ ID NO：47之胺基酸序列具有至少90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%序列一致性之輕鏈可變域(VL)。在某些實施例中，相對於參照序列，與SEQ ID NO：47之胺基酸序列具有至少90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%或99%一致性之VL序列含有取代(例如保守性取代)、插入或缺失，但包含彼序列之抗STEAP-1抗體保留結合STEAP-1之能力。在某些實施例中，在SEQ ID NO：47中，總計1至10個胺基酸已經取代、插入及/或缺失。在某些實施例中，在SEQ ID NO：47中，總計1至5個胺基酸已經取代、插入及/或缺失。在某些實施例中，取代、插入或缺失發生在HVR外的區域中(亦即，FR中)。視情况，抗STEAP-1抗體包含SEQ ID NO：47之VL序列，包括彼序列之轉譯後修飾。在一特定實施例中，VL包含一、二或三個選自以下之HVR：(a)HVR-L1，其包含SEQ ID NO：43之胺基酸序列；(b)HVR-L2，其包含SEQ ID NO：44之胺基酸序列；及(c)HVR-L3，其包含SEQ ID NO：45之胺基酸序列。
在另一態樣中，提供一種包含抗STEAP-1抗體之抗體-藥物結合物，其中該抗體包含如任何以上提供之實施例中之VH及如任何以上 提供之實施例中之VL。
在一實施例中，提供一種抗體-藥物結合物，其中該抗體包含分別在SEQ ID NO：46及SEQ ID NO：47中之VH及VL序列，包括彼等序列之轉譯後修飾。
在另一態樣中，本文提供抗體-藥物結合物，其包含與本文提供之抗STEAP-1抗體結合相同抗原决定基之抗體。舉例而言，在某些實施例中，提供一種包含抗體之免疫結合物，該抗體與分別包含SEQ ID NO：46之VH序列及SEQ ID NO：47之VL序列的抗STEAP-1抗體結合相同抗原决定基。
在本發明之另一態樣中，根據任何以上實施例之抗體-藥物結合物之抗STEAP-1抗體為單株抗體，包括人類抗體。在一個實施例中，抗體-藥物結合物之抗STEAP-1抗體為抗體片段，例如Fv、Fab、Fab’、scFv、雙功能抗體或F(ab’)2片段。在另一實施例中，該抗體為實質上全長抗體，例如IgG1抗體、IgG2a抗體或如本文所定義之其他抗體類或同型。
STEAP抗體序列之表
抗NaPi2b抗體
在某些實施例中，表3A及3B之ADC包含抗NaPi2b抗體。
在一些實施例中，本發明提供一種包含抗NaPi2b抗體之抗體-藥物結合物，該抗NaPi2b抗體包含至少一個、兩個、三個、四個、五個或六個選自以下之HVR：(a)HVR-H1，其包含SEQ ID NO：48之胺基酸序列；(b)HVR-H2，其包含SEQ ID NO：49之胺基酸序列；(c)HVR-H3，其包含SEQ ID NO：50之胺基酸序列；(d)HVR-L1，其包含SEQ ID NO：51之胺基酸序列；(e)HVR-L2，其包含SEQ ID NO：52之胺基酸序列；及(f)HVR-L3，其包含SEQ ID NO：53之胺基酸序列。
在一個態樣中，本發明提供一種包含抗體之抗體-藥物結合物，該抗體包含至少一個、至少兩個或全部三個選自以下之VH HVR序列：(a)HVR-H1，其包含SEQ ID NO：48之胺基酸序列；(b)HVR-H2，其包含SEQ ID NO：49之胺基酸序列；(c)HVR-H3，其包含SEQ ID NO：50之胺基酸序列。在另一實施例中，該抗體包含(a)HVR-H1，其包含SEQ ID NO：48之胺基酸序列；(b)HVR-H2，其包含SEQ ID NO：49之胺基酸序列；(c)HVR-H3，其包含SEQ ID NO：50之胺基酸序列。
在另一態樣中，本發明提供一種包含抗體之抗體-藥物結合物，該抗體包含至少一個、至少兩個或全部三個選自以下之VL HVR序列：(a)HVR-L1，其包含SEQ ID NO：51之胺基酸序列；(b)HVR-L2，其包含SEQ ID NO：52之胺基酸序列；及(c)HVR-L3，其包含SEQ ID NO：53之胺基酸序列。在一個實施例中，該抗體包含(a)HVR-L1，其包含SEQ ID NO：51之胺基酸序列；(b)HVR-L2，其包含SEQ ID NO：52之胺基酸序列；及(c)HVR-L3，其包含SEQ ID NO：53之胺基酸序列。
在另一態樣中，本發明之抗體-藥物結合物包含抗體，該抗體包含(a)VH域，其包含至少一個、至少兩個或全部三個選自以下之VH HVR序列：(i)HVR-H1，其包含SEQ ID NO：48之胺基酸序列，(ii) HVR-H2，其包含SEQ ID NO：49之胺基酸序列，及(iii)HVR-H3，其包含選自SEQ ID NO：50之胺基酸序列；及(b)VL域，其包含至少一個、至少兩個或全部三個選自以下之VL HVR序列：(i)HVR-L1，其包含SEQ ID NO：51之胺基酸序列，(ii)HVR-L2，其包含SEQ ID NO：52之胺基酸序列，及(c)HVR-L3，其包含SEQ ID NO：53之胺基酸序列。
在另一態樣中，本發明提供一種包含抗體之抗體-藥物結合物，該抗體包含：(a)HVR-H1，其包含SEQ ID NO：48之胺基酸序列；(b)HVR-H2，其包含SEQ ID NO：49之胺基酸序列；(c)HVR-H3，其包含SEQ ID NO：50之胺基酸序列；(d)HVR-L1，其包含SEQ ID NO：51之胺基酸序列；(e)HVR-L2，其包含SEQ ID NO：52之胺基酸序列；及(f)HVR-L3，其包含SEQ ID NO：53之胺基酸序列。
在任一以上實施例中，抗體-藥物結合物之抗NaPi2b抗體經人類化。在一個實施例中，抗NaPi2b抗體包含如任何以上實施例中之HVR，且進一步包含人類接受體構架，例如人類免疫球蛋白構架或人類共同構架。
在另一態樣中，抗體-藥物結合物之抗NaPi2b抗體包含與SEQ ID NO：54之胺基酸序列具有至少90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%序列一致性之重鏈可變域(VH)序列。在某些實施例中，相對於參照序列，與SEQ ID NO：54之胺基酸序列具有至少90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%或99%一致性之VH序列含有取代(例如保守性取代)、插入或缺失，但包含彼序列之抗NaPi2b抗體保留結合NaPi2b之能力。在某些實施例中，在SEQ ID NO：54中，總計1至10個胺基酸已經取代、插入及/或缺失。在某些實施例中，在SEQ ID NO：54中，總計1至5個胺基酸已經取代、插入及/或缺失。在某些實施例中，取代、插入或缺失發生在HVR外的區域中(亦即，FR中)。視情况，抗NaPi2b抗體包含SEQ ID NO：54之VH序列，包括彼序列之轉譯後修飾。在一特定實施例中，VH包含一、二或三個選自以下之HVR：(a)HVR-H1，其包含SEQ ID NO：48之胺基酸序列；(b)HVR-H2，其包含SEQ ID NO：49之胺基酸序列；及(c)HVR-H3，其包含SEQ ID NO：50之胺基酸序列。
在另一態樣中，提供一種抗體-藥物結合物之抗NaPi2b抗體，其中該抗體包含與SEQ ID NO：55之胺基酸序列具有至少90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%序列一致性之輕鏈可變域(VL)。在某些實施例中，相對於參照序列，與SEQ ID NO：55之胺基酸序列具有至少90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%或99%一致性之VL序列含有取代(例如保守性取代)、插入或缺失，但包含彼序列之抗NaPi2b抗體保留結合抗NaPi2b之能力。在某些實施例中，在SEQ ID NO：55中，總計1至10個胺基酸已經取代、插入及/或缺失。在某些實施例中，在SEQ ID NO：55中，總計1至5個胺基酸已經取代、插入及/或缺失。在某些實施例中，取代、插入或缺失發生在HVR外的區域中(亦即，FR中)。視情况，抗NaPi2b抗體包含SEQ ID NO：55之VL序列，包括彼序列之轉譯後修飾。在一特定實施例中，VL包含一、二或三個選自以下之HVR：(a)HVR-L1，其包含SEQ ID NO：51之胺基酸序列；(b)HVR-L2，其包含SEQ ID NO：52之胺基酸序列；及(c)HVR-L3，其包含SEQ ID NO：53之胺基酸序列。
在另一態樣中，提供一種包含抗NaPi2b抗體之抗體-藥物結合物，其中該抗體包含如任何以上提供之實施例中之VH及如任何以上提供之實施例中之VL。
在一實施例中，提供一種抗體-藥物結合物，其中該抗體包含分別在SEQ ID NO：54及SEQ ID NO：55中之VH及VL序列，包括彼等序列之轉譯後修飾。
在另一態樣中，本文提供抗體-藥物結合物，其包含與本文提供之抗NaPi2b抗體結合相同抗原决定基之抗體。舉例而言，在某些實施例中，提供一種包含抗體之免疫結合物，該抗體與分別包含SEQ ID NO：54之VH序列及SEQ ID NO：55之VL序列的抗NaPi2b抗體結合相同抗原决定基。
在本發明之另一態樣中，根據任何以上實施例之抗體-藥物結合物之抗NaPi2b抗體為單株抗體，包括人類抗體。在一個實施例中，抗體-藥物結合物之抗NaPi2b抗體為抗體片段，例如Fv、Fab、Fab’、scFv、 雙功能抗體或F(ab’)2片段。在另一實施例中，該抗體為實質上全長抗體，例如IgG1抗體、IgG2a抗體或如本文所定義之其他抗體類或同型。
NaPi2b抗體序列之表
抗CD79b抗體
在某些實施例中，表3A及3B之ADC包含抗CD79b抗體。
在一些實施例中，本發明提供一種包含抗CD79b抗體之抗體-藥物結合物，該抗CD79b抗體包含至少一個、兩個、三個、四個、五個或六個選自以下之HVR：(a)HVR-H1，其包含SEQ ID NO：58之胺基酸序列；(b)HVR-H2，其包含SEQ ID NO：59之胺基酸序列；(c)HVR-H3，其包含SEQ ID NO：60之胺基酸序列；(d)HVR-L1，其包含SEQ ID NO：61之胺基酸序列；(e)HVR-L2，其包含SEQ ID NO：62之胺基酸序列；及(f)HVR-L3，其包含SEQ ID NO：63之胺基酸序列。
在一個態樣中，本發明提供一種包含抗體之抗體-藥物結合物，該抗體包含至少一個、至少兩個或全部三個選自以下之VH HVR序列： (a)HVR-H1，其包含SEQ ID NO：58之胺基酸序列；(b)HVR-H2，其包含SEQ ID NO：59之胺基酸序列；及(c)HVR-H3，其包含SEQ ID NO：60之胺基酸序列。在另一實施例中，該抗體包含(a)HVR-H1，其包含SEQ ID NO：58之胺基酸序列；(b)HVR-H2，其包含SEQ ID NO：59之胺基酸序列；及(c)HVR-H3，其包含SEQ ID NO：60之胺基酸序列。
在另一態樣中，本發明提供一種包含抗體之抗體-藥物結合物，該抗體包含至少一個、至少兩個或全部三個選自以下之VL HVR序列：(a)HVR-L1，其包含SEQ ID NO：61之胺基酸序列；(b)HVR-L2，其包含SEQ ID NO：62之胺基酸序列；及(c)HVR-L3，其包含SEQ ID NO：63之胺基酸序列。在一個實施例中，該抗體包含(a)HVR-L1，其包含SEQ ID NO：61之胺基酸序列；(b)HVR-L2，其包含SEQ ID NO：62之胺基酸序列；及(c)HVR-L3，其包含SEQ ID NO：63之胺基酸序列。
在另一態樣中，本發明之抗體-藥物結合物包含抗體，該抗體包含(a)VH域，其包含至少一個、至少兩個或全部三個選自以下之VH HVR序列：(i)HVR-H1，其包含SEQ ID NO：58之胺基酸序列，(ii)HVR-H2，其包含SEQ ID NO：59之胺基酸序列，及(iii)HVR-H3，其包含選自SEQ ID NO：60之胺基酸序列；及(b)VL域，其包含至少一個、至少兩個或全部三個選自以下之VL HVR序列：(i)HVR-L1，其包含SEQ ID NO：61之胺基酸序列，(ii)HVR-L2，其包含SEQ ID NO：62之胺基酸序列，及(c)HVR-L3，其包含SEQ ID NO：63之胺基酸序列。
在另一態樣中，本發明提供一種包含抗體之抗體-藥物結合物，該抗體包含：(a)HVR-H1，其包含SEQ ID NO：58之胺基酸序列；(b)HVR-H2，其包含SEQ ID NO：59之胺基酸序列；(c)HVR-H3，其包含SEQ ID NO：60之胺基酸序列；(d)HVR-L1，其包含SEQ ID NO：61之胺基酸序列；(e)HVR-L2，其包含SEQ ID NO：62之胺基酸序列；及(f)HVR-L3，其包含SEQ ID NO：63之胺基酸序列。
在任一以上實施例中，抗體-藥物結合物之抗CD79b抗體經人類化。在一個實施例中，抗CD79b抗體包含如任何以上實施例中之HVR，且進一步包含人類接受體構架，例如人類免疫球蛋白構架或人類共同構架。
在另一態樣中，抗體-藥物結合物之抗CD79b抗體包含與SEQ ID NO：56之胺基酸序列具有至少90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%序列一致性之重鏈可變域(VH)序列。在某些實施例中，相對於參照序列，與SEQ ID NO：56之胺基酸序列具有至少90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%或99%一致性之VH序列含有取代(例如保守性取代)、插入或缺失，但包含彼序列之抗CD79b抗體保留結合CD79b之能力。在某些實施例中，在SEQ ID NO：56中，總計1至10個胺基酸已經取代、插入及/或缺失。在某些實施例中，在SEQ ID NO：56中，總計1至5個胺基酸已經取代、插入及/或缺失。在某些實施例中，取代、插入或缺失發生在HVR外的區域中(亦即，FR中)。視情况，抗CD79b抗體包含SEQ ID NO：8之VH序列，包括彼序列之轉譯後修飾。在一特定實施例中，VH包含一、二或三個選自以下之HVR：(a)HVR-H1，其包含SEQ ID NO：58之胺基酸序列；(b)HVR-H2，其包含SEQ ID NO：59之胺基酸序列；及(c)HVR-H3，其包含SEQ ID NO：60之胺基酸序列。
在另一態樣中，提供一種抗體-藥物結合物之抗CD79b抗體，其中該抗體包含與SEQ ID NO：57之胺基酸序列具有至少90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%序列一致性之輕鏈可變域(VL)。在某些實施例中，相對於參照序列，與SEQ ID NO：57之胺基酸序列具有至少90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%或99%一致性之VL序列含有取代(例如保守性取代)、插入或缺失，但包含彼序列之抗Ly6E抗體保留結合CD79b之能力。在某些實施例中，在SEQ ID NO：57中，總計1至10個胺基酸已經取代、插入及/或缺失。在某些實施例中，在SEQ ID NO：57中，總計1至5個胺基酸已經取代、插入及/或缺失。在某些實施例中，取代、插入或缺失發生在HVR外的區域中(亦即，FR中)。視情况，抗CD79b抗體包含SEQ ID NO：57之VL序列，包括彼序列之轉譯後修飾。在一特定實施例中，VL包含一、二或三個選自以下之HVR：(a)HVR-L1，其包含SEQ ID NO：61之胺基酸序列；(b)HVR-L2，其包含SEQ ID NO：62之胺基酸序列；及(c)HVR-L3，其包含SEQ ID NO：63之胺基酸序列。
在另一態樣中，提供一種包含抗CD79b抗體之抗體-藥物結合物，其中該抗體包含如任何以上提供之實施例中之VH及如任何以上提供之實施例中之VL。
在一實施例中，提供一種抗體-藥物結合物，其中該抗體包含分別在SEQ ID NO：56及SEQ ID NO：57中之VH及VL序列，包括彼等序列之轉譯後修飾。
在另一態樣中，本文提供抗體-藥物結合物，其包含與本文提供之抗CD79b抗體結合相同抗原决定基之抗體。舉例而言，在某些實施例中，提供一種包含抗體之免疫結合物，該抗體與分別包含SEQ ID NO：56之VH序列及SEQ ID NO：57之VL序列的抗CD79b抗體結合相同抗原决定基。
在本發明之另一態樣中，根據任何以上實施例之抗體-藥物結合物之抗CD79b抗體為單株抗體，包括人類抗體。在一個實施例中，抗體-藥物結合物之抗CD79b抗體為抗體片段，例如Fv、Fab、Fab’、scFv、雙功能抗體或F(ab’)2片段。在另一實施例中，該抗體為實質上全長抗體，例如IgG1抗體、IgG2a抗體或如本文所定義之其他抗體類或同型。
CD79b抗體序列之表
抗體親和力
在某些實施例中，本文提供之抗體之解離常數(Kd)1μM、100nM、50nM、10nM、5nM、1nM、0.1nM、0.01nM或0.001nM，且視情况為10-13M。(例如10-8M或10-8M以下，例如10-8M至10-13M，例如10-9M至10-13M)。
在一實施例中，Kd係藉由用相關抗體之Fab型式及其抗原進行之放射性標記抗原結合檢定(RIA)來量測，如以下檢定所描述。Fab對抗原之溶液結合親和力係藉由在一滴定系列之未標記抗原存在下，使Fab與最小濃度之(125I)標記抗原平衡，接著用抗Fab抗體塗布之板捕獲所結合抗原來量測(參見例如Chen等人，J.Mol.Biol.293：865-881(1999))。為建立檢定條件，將MICROTITER®多孔板(Thermo Scientific)用含5μg/ml捕獲抗Fab抗體(Cappel Lab)之50mM碳酸鈉(pH 9.6)塗布隔夜，且隨後在室溫(約23℃)下用含2%(w/v)牛血清白蛋白之PBS阻斷2-5小時。在非吸附板(Nunc #269620)中，將100pM或26pM[125I]-抗原與相關Fab之連續稀釋液混合(例如與Presta等人，Cancer Res.57：4593-4599(1997)中對抗VEGF抗體Fab-12之評定一致)。接著將相關Fab培育隔夜；然而，培育可持續較長時期(例如約65小時)以確保達到平衡。此後，將混合物轉移至捕獲板中以在室溫下培育(例如1小時)。接著移除溶液且用含0.1%聚山梨醇酯20(TWEEN-20®)之PBS將板洗滌八次。當板已乾燥時，每孔添加150μl/閃爍體(MICROSCINT-20TM；Packard)，且在TOPCOUNTTM γ計數器(Packard)上對板持續10分鐘計數。選擇各Fab之達成小於或等於最大結合之20%的濃度 以用於競爭性結合檢定中。
根據另一實施例，使用BIACORE®-2000或BIACORE®-3000(BLAcore公司，Piscataway,NJ)，用固定之抗原CM5晶片在約10反應單位(RU)下在25℃下使用表面電漿子共振檢定來量測Kd。簡言之，根據供應商說明書用N-乙基-N’-(3-二甲基胺基丙基)-碳化二亞胺鹽酸鹽(EDC)及N-羥基丁二醯亞胺(NHS)活化羧甲基化葡聚糖生物感測器晶片(CM5，BIACORE公司)。用10mM乙酸鈉(pH4.8)將抗原稀釋至5μg/ml(約0.2μM)，隨後在流速5μl/分鐘下注射以達成約10反應單位(RU)之偶聯蛋白質。在注射抗原之後，注射1M乙醇胺以阻斷未反應基團。對於動力學量測，在25℃下將Fab之兩倍連續稀釋液(0.78nM至500nM)以約25μl/分鐘之流速注入含0.05%聚山梨酸酯20(TWEEN-20TM)界面活性劑(PBST)之PBS中。締合速率(k締合)及解離速率(k解離)係使用簡單一一對應朗繆爾結合模型(BIACORE®評估軟體版本3.2)藉由同時擬合締合及解離感測圖來計算。平衡解離常數(Kd)計算為比率k解離/k締合。參見例如Chen等人，J.Mol.Biol.293：865-881(1999)。若根據以上表面電漿子共振鑑別之締合速率超過106M-1 s-1，則可藉由使用螢光淬滅技術來測定締合速率，該技術量測在如在分光計(諸如停流配備分光光度計(Aviv Instruments)或具有攪拌比色皿之8000系列SLM-AMINCOTM分光光度計(ThermoSpectronic))中量測之遞增濃度之抗原存在下，在25℃下於PBS(pH 7.2)中之20nM抗抗原抗體(Fab形式)之螢光發射强度(激發=295nm；發射=340nm，16nm帶通)的增加或降低。
抗體片段
在某些實施例中，本文提供之抗體為抗體片段。抗體片段包括但不限於Fab、Fab’、Fab’-SH、F(ab’)2、Fv及scFv片段及下述其他片段。對於某些抗體片段之綜述，參見Hudson等人.Nat.Med.9：129-134(2003)。對於scFv片段之綜述，參見例如Pluckthün，於The Pharmacology of Monoclonal Antibodies，第113卷，Rosenburg及Moore編，(Springer-Verlag,New York)，第269-315頁(1994)；亦參見WO 93/16185；及美國專利第5,571,894號及第5,587,458號。對於包含結合抗原决定基殘基之補救受體且 活體內半衰期增加之Fab及F(ab')2片段之論述，參見美國專利第5,869,046號。
雙功能抗體為可為二價或雙特异性之具有兩個抗原結合位點之抗體片段。參見例如EP 404,097；WO 1993/01161；Hudson等人，Nat.Med.9：129-134(2003)；及Hollinger等人，Proc.Natl.Acad.Sci.USA 90：6444-6448(1993)。三功能抗體及四功能抗體亦描述於Hudson等人，Nat.Med.9：129-134(2003)中。
單域抗體為包含抗體之全部或一部分重鏈可變域或全部或一部分輕鏈可變域之抗體片段。在某些實施例中，單域抗體為人類單域抗體(Domantis,Inc.,Waltham,MA；參見例如美國專利第6,248,516 B1號)。
抗體片段可藉由各種技術製備，包括但不限於蛋白水解消化完整抗體以及如本文所述，藉由重組宿主細胞(例如大腸杆菌(E.coli)或噬菌體)產生。
嵌合及人源化抗體
在某些實施例中，本文提供之抗體為嵌合抗體。某些嵌合抗體例如描述於美國專利第4,816,567號；及Morrison等人，Proc.Natl.Acad.Sci.USA,81：6851-6855(1984))中。在一個實例中，嵌合抗體包含非人類可變區(例如源於小鼠、大鼠、倉鼠、兔或非人類靈長類動物(諸如猴)之可變區)及人類恒定區。在另一實例中，嵌合抗體為「類別轉換」抗體，其中類別或子類已自親本抗體之類別或子類發生改變。嵌合抗體包括其抗原結合片段。
在某些實施例中，嵌合抗體為人源化抗體。通常，非人類抗體經人源化以降低對人類之免疫原性，同時保留親本非人類抗體之特异性及親和力。一般而言，人源化抗體包含一或多個可變域，其中HVR，例如CDR(或其部分)源於非人類抗體，且FR(或其部分)源於人類抗體序列。人源化抗體視情况亦將包含至少一部分人類恒定區。在一些實施例中，人源化抗體中之一些FR殘基經來自非人類抗體(例如HVR殘基所來源之抗體)之相應殘基取代，例如以恢復或改良抗體特异性或親和力。
人類化抗體及其製備方法例如評述於Almagro及Fransson, Front.Biosci.13：1619-1633(2008)中，且進一步例如描述於Riechmann等人，Nature 332：323-329(1988)；Queen等人，Proc.Nat’l Acad.Sci.USA 86：10029-10033(1989)；美國專利第5,821,337號、第7,527,791號、第6,982,321號及第7,087,409號；Kashmiri等人，Methods 36：25-34(2005)(描述SDR(a-CDR)移植)；Padlan,Mol.Immunol.28：489-498(1991)(描述「表面重塑」)；Dall’Acqua等人，Methods 36：43-60(2005)(描述「FR改組」)；及Osbourn等人，Methods 36：61-68(2005)及Klimka等人，Br.J.Cancer,83：252-260(2000)(描述FR改組之「引導選擇」方法)中。
可用於人類化之人類構架區包括但不限於：使用「最佳擬合」方法選擇之構架區(參見例如Sims等人J.Immunol.151：2296(1993))；源於輕鏈或重鏈可變區之特定子組之人類抗體的一致序列之構架區(參見例如Carter等人Proc.Natl.Acad.Sci.USA,89：4285(1992)；及Presta等人J.Immunol.,151：2623(1993))；人類成熟(體細胞突變)構架區或人類生殖系構架區(參見例如Almagro及Fransson,Front.Biosci.13：1619-1633(2008))；及由篩檢FR文庫獲得之構架區(參見例如Baca等人，J.Biol.Chem.272：10678-10684(1997)及Rosok等人，J.Biol.Chem.271：22611-22618(1996))。
人類抗體
在某些實施例中，本文提供之抗體為人類抗體。人類抗體可使用此項技術中已知之各種技術產生。人類抗體一般描述於van Dijk及van de Winkel,Curr.Opin.Pharmacol.5：368-74(2001)及Lonberg,Curr.Opin.Immunol.20：450-459(2008)中。
人類抗體可藉由向已經修改以響應於抗原攻擊而產生完整人類抗體或具有人類可變區之完整抗體之轉殖基因動物投與免疫原來製備。此等動物通常含有全部或一部分人類免疫球蛋白基因座，其置換內源性免疫球蛋白基因座或存在於染色體外或隨機整合至動物之染色體中。在此等轉殖基因小鼠中，內源性免疫球蛋白基因座通常已不活化。對於自轉殖基因動物獲得人類抗體之方法之綜述，參見Lonberg,Nat.Biotech.23：1117-1125(2005)。亦參見例如描述XENOMOUSETM技術之美國 專利第6,075,181號及第6,150,584號；描述HUMA®技術之美國專利第5,770,429號；描述K-M MOUSE®技術之美國專利第7,041,870號及描述VELOCIMOUSE®技術之美國專利申請公開案第US 2007/0061900號)。來自由此等動物產生之完整抗體之人類可變區可例如藉由與不同人類恒定區組合而進一步修飾。
人類抗體亦可藉由基於融合瘤之方法製備。用於產生人類單株抗體之人類骨髓瘤及小鼠-人類异源骨髓瘤細胞株已有描述。(參見例如Kozbor J.Immunol.,133：3001(1984)；Brodeur等人，Monoclonal Antibody Production Techniques and Applications，第51-63頁(Marcel Dekker,Inc.,New York,1987)；及Boerner等人，J.Immunol.,147：86(1991))。經由人類B細胞融合瘤技術產生之人類抗體亦描述於Li等人，Proc.Natl.Acad.Sci.USA,103：3557-3562(2006)中。其他方法包括例如描述於美國專利第7,189,826號(描述自融合瘤細胞株產生單株人類IgM抗體)及Ni,Xiandai Mianyixue,26(4)：265-268(2006)(描述人類-人類融合瘤)中之方法。人類融合瘤技術(三源融合瘤技術)亦描述於Vollmers及Brandlein,Histology and Histopathology,20(3)：927-937(2005)及Vollmers及Brandlein,Methods and Findings in Experimental and Clinical Pharmacology,27(3)：185-91(2005)中。
人類抗體亦可藉由分離自人類來源噬菌體呈現文庫選擇之Fv純系可變域序列來產生。此等可變域序列可接著與所要人類恒定域組合。用於自抗體文庫選擇人類抗體之技術在以下描述。
文庫來源之抗體
本發明之抗體可藉由篩檢組合文庫中具有一或多種所要活性之抗體來分離。舉例而言，此項技術中已知多種用於產生噬菌體呈現文庫及篩檢此等文庫中具有所要結合特徵之抗體之方法。此等方法綜述於例如Hoogenboom等人，Methods in Molecular Biology 178：1-37(O’Brien等人編，Human Press,Totowa,NJ,2001)中，且進一步描述於例如McCafferty等人，Nature 348：552-554；Clackson等人，Nature 352：624-628(1991)；Marks等人，J.Mol.Biol.222：581-597(1992)；Marks及Brabbury,Methods in Molecular Biology 248：161-175(Lo編，Human Press,Totowa,NJ,2003)；Sidhu等人，J. Mol.Biol.338(2)：299-310(2004)；Lee等人，J.Mol.Biol.340(5)：1073-1093(2004)；Fellouse,Proc.Natl.Acad.Sci.USA 101(34)：12467-12472(2004)；及Lee等人，J.Immunol.Methods 284(1-2)：119-132(2004)中。
在某些噬菌體呈現方法中，藉由聚合酶鏈反應(PCR)分別選殖VH及VL基因之譜系且隨機重組於噬菌體文庫中，可接著篩檢該等文庫中之抗原結合噬菌體，如Winter等人，Ann.Rev.Immunol.,12：433-455(1994)中所述。噬菌體通常呈現呈單鏈Fv(scFv)片段形式或呈Fab片段形式之抗體片段。來自經免疫來源之文庫提供對免疫原具有高親和力之抗體而無需構築融合瘤。或者，可選殖(例如自人類選殖)天然譜系以提供單一來源之針對廣泛範圍之非自體抗原以及自體抗原的抗體而不進行任何免疫，如Griffiths等人，EMBO J,12：725-734(1993)中所述。最後，天然文庫亦可藉由以下方式合成製備：自幹細胞選殖未重排V基因區段，及使用含有隨機序列之PCR引子以編碼高度可變CDR3區及在活體外達成重排，如Hoogenboom及Winter,J.Mol.Biol.,227：381-388(1992)中所述。描述人類抗體噬菌體文庫之專利公開案包括例如：美國專利第5,750,373號，及美國專利公開案第2005/0079574號、第2005/0119455號、第2005/0266000號、第2007/0117126號、第2007/0160598號、第2007/0237764號、第2007/0292936號及第2009/0002360號。
自人類抗體文庫分離之抗體或抗體片段在本文中被視為人類抗體或人類抗體片段。
多特异性抗體
在某些實施例中，本文提供之抗體為多特异性抗體，例如雙特异性抗體。多特异性抗體為對至少兩個不同位點具有結合特异性之單株抗體。在某些實施例中，雙特异性抗體可結合至同一標靶之兩個不同抗原决定基。雙特异性抗體亦可用於使細胞毒性劑定位於表現該標靶之細胞。雙特异性抗體可製備成全長抗體或抗體片段。
製備多特异性抗體之技術包括(但不限於)重組共表現具有不同特异性之兩對免疫球蛋白重鏈-輕鏈(參見Milstein及Cuello,Nature 305：537(1983)),WO 93/08829及Traunecker等人，EMBO J.10：3655(1991))及 「孔中結(knob-in-hole)」工程改造(參見例如美國專利第5,731,168號)。如本文所用之術語「鈕入孔」或「KnH」技術係指藉由在一個多肽與另一多肽相互作用之介面處將隆凸(鈕)引入一個多肽且凹穴(孔)引入另一多肽來在活體外或活體內指導兩個多肽一起之配對的技術。例如，KnH已引入抗體之Fc：Fc結合界面、CL：CH1界面或VH/VL界面(參見例如，US 2011/0287009、US2007/0178552、WO 96/027011、WO 98/050431、Zhu等人，1997,Protein Science 6：781-788及WO2012/106587)。在一些實施例中，KnH在多特异性抗體之製造期間驅動兩個不同重鏈配對在一起。例如，在其Fc區中具有KnH之多特异性抗體可進一步包含連接至各Fc區之單一可變域，或進一步包含與相似或不同輕鏈可變域配對之不同重鏈可變域。KnH技術亦可用於將兩個不同受體細胞外域配對在一起或用於配對包含不同標靶識別序列之任何其他多肽序列(例如，包括親和體、肽體及其他Fc融合體)。
如本文所用，術語「鈕突變」係指在多肽與另一個多肽相互作用之介面處將隆凸(鈕)引入該多肽之突變。在一些實施例中，另一多肽具有孔突變。
如本文所用，術語「孔突變」係指在多肽與另一個多肽相互作用之介面處將凹穴(孔)引入該多肽之突變。在一些實施例中，另一多肽具有鈕突變。
以下提供簡要非限制性討論。
「隆凸」係指至少一個胺基酸側鏈，其例如從第一多肽之界面凸出且因此可定位於相鄰界面(亦即，第二多肽之界面)中之補償空穴中以便使异源多聚體穩定且由此相對於同源多聚體形成有利於异源多聚體形成。隆凸可存在於原始界面中或可合成引入(例如藉由改變編碼該界面之核酸)。在一些實施例中，編碼該第一多肽之界面的核酸經改變以編碼該隆凸。為達成此，將編碼第一多肽之界面中之至少一個「原始」胺基酸殘基的核酸用編碼至少一個「輸入」胺基酸殘基之核酸置換，該“輸入”胺基酸殘基具有比該原始胺基酸殘基更小之側鏈體積。應理解，可存在一個以上原始殘基及相應輸入殘基。不同胺基殘基之側鏈體積在例如US 2011/0287009之表 1中顯示。引入「隆凸」之突變可稱為「鈕突變」。
在一些實施例中，用於形成隆凸之輸入殘基為選自精胺酸(R)、苯丙胺酸(F)、酪胺酸(Y)及色胺酸(W)之天然存在之胺基酸殘基。在一些實施例中，輸入殘基為色胺酸或酪胺酸。在一些實施例中，用於形成隆凸之原始殘基具有較小側鏈體積，諸如丙胺酸、天冬醯胺、天冬胺酸、甘胺酸、絲胺酸、蘇胺酸或纈胺酸。
「凹穴」係指至少一個胺基酸側鏈，其自第二多肽之界面凹入且因此容納第一多肽之相鄰界面上的相應隆凸。凹穴可存在於原始界面中或可合成引入(例如，藉由改變編碼該界面之核酸)。在一些實施例中，編碼該第二多肽之界面的核酸經改變以編碼該凹穴。為達成此，將編碼第二多肽之界面中之至少一個「原始」胺基酸殘基的核酸用編碼至少一個「輸入」胺基酸殘基之DNA置換，該「輸入」胺基酸殘基具有比該原始胺基酸殘基更小之側鏈體積。應理解，可存在一個以上原始殘基及相應輸入殘基。在一些實施例中，用於形成凹穴之輸入殘基為選自丙胺酸(A)、絲胺酸(S)、蘇胺酸(T)及纈胺酸(V)之天然存在之胺基酸殘基。在一些實施例中，輸入殘基為絲胺酸、丙胺酸或蘇胺酸。在一些實施例中，用於形成凹穴之原始殘基具有較大側鏈體積，諸如酪胺酸、精胺酸、苯丙胺酸或色胺酸。引入「凹穴」之突變可稱為「孔突變」。
隆凸「可定位」於凹穴中意謂對應第一多肽及第二多肽之界面上之隆凸及凹穴之空間位置且隆凸及凹穴之尺寸為使得該隆凸可位於該凹穴中而不會顯著擾亂該第一及第二多肽在該界面處之正常締合。因為諸如Tyr、Phe及Trp之隆凸通常不會自該界面之軸垂直延伸且具有較佳構形，所以隆凸與相應凹穴之對準在一些情形下可依賴於基於三維結構(諸如藉由X射綫晶體學或核磁共振(NMR)獲得之三維結構)建模該隆凸/凹穴對。此可使用此項技術中廣泛接受之技術來達成。
在一些實施例中，IgG1恒定區中之鈕突變為T366W(EU編號)。在一些實施例中，IgG1恒定區中之孔突變包含選自T366S、L368A及Y407V(EU突變)之一或多個突變。在一些實施例中，IgG1恒定區中之孔突變包含T366S、L368A及Y407V(EU編號)。
在一些實施例中，IgG4恒定區中之鈕突變為T366W(EU編號)。在一些實施例中，IgG4恒定區中之孔突變包含選自T366S、L368A及Y407V(EU突變)之一或多個突變。在一些實施例中，IgG4恒定區中之孔突變包含T366S、L368A及Y407V(EU編號)。
多特异性抗體亦可藉由以下來製備：工程改造靜電操控效應以製備抗體Fc-雜二聚分子(WO 2009/089004A1)；交聯兩個或兩個以上抗體或片段(參見例如美國專利第4,676,980號及Brennan等人，Science,229：81(1985))；使用白胺酸拉煉來產生雙特异性抗體(參見例如Kostelny等人，J.Immunol.,148(5)：1547-1553(1992))；使用「雙功能抗體」技術以製備雙特异性抗體片段(參見例如Hollinger等人，Proc.Natl.Acad.Sci.USA,90：6444-6448(1993))；及使用單鏈Fv(sFv)二聚體(參見例如Gruber等人，J.Immunol.,152：5368(1994))；及製備三特异性抗體，如例如Tutt等人J.Immunol.147：60(1991)中所述。
本文亦包括具有三個或三個以上功能性抗原結合位點之工程改造抗體，包括「章魚抗體(Octopus antibody)」(參見例如US 2006/0025576A1)。
本文之抗體或片段亦包括「雙重作用性FAb」或「DAF」，其包含結合標靶以及另一不同抗原之抗原結合位點(參見例如，US 2008/0069820)。
抗體變异體
在某些實施例中，涵蓋本文提供之抗體之胺基酸序列變异體。舉例而言，可能需要改良抗體之結合親和力及/或其他生物性質。抗體之胺基酸序列變异體可藉由將適當修飾引入編碼抗體之核苷酸序列中或藉由肽合成來製備。此等修飾包括例如抗體之胺基酸序列內之殘基的缺失及/或插入及/或取代。可對缺失、插入及取代進行任何組合以獲得最終構築體，其限制條件為最終構築體具有所要特徵，例如抗原結合性。
取代、插入及缺失變异體
在某些實施例中，提供具有一或多個胺基酸取代之抗體變异體。用於取代性突變誘發之相關位點包括HVR及FR。保守性取代展示於 表1中之標題「較佳取代」下。更實質性變化提供於表1中之標題「例示性取代」下，且如以下關於胺基酸側鏈類別進一步所述。胺基酸取代可引入相關抗體中且篩檢具有所要活性(例如維持/改良之抗原結合性、降低之免疫原性或改良之ADCC或CDC)之產物。
可根據共同側鏈性質對胺基酸分組：(1)疏水性：正白胺酸、Met、Ala、Val、Leu、Ile；(2)中性親水性：Cys、Ser、Thr、Asn、Gln；(3)酸性：Asp、Glu； (4)鹼性：His、Lys、Arg；(5)影響鏈定向之殘基：Gly、Pro；(6)芳族：Trp、Tyr、Phe。
非保守性取代將需要將此等類別之一之成員交換成另一類別。
一種類型之取代變异體涉及取代親本抗體(例如人類化或人類抗體)之一或多個高變區殘基。一般而言，選用於進一步研究之所得變异體相對於親本抗體將在某些生物性質方面具有改變(例如改良)(例如親和力增加、免疫原性降低)及/或將實質上保留親本抗體之某些生物性質。一例示性取代變异體為親和力成熟抗體，其可例如使用基於噬菌體呈現之親和力成熟技術(諸如本文所述者)便利地產生。簡言之，使一或多個HVR殘基突變且使變异型抗體呈現在噬菌體上且針對特定生物活性(例如結合親和力)加以篩檢。
可在HVR中進行改變(例如取代)例如以改良抗體親和力。可在HVR「熱點」(亦即由在體細胞成熟過程期間以高頻率經受突變之密碼子編碼之殘基)(參見例如Chowdhury,Methods Mol.Biol.207：179-196(2008))及/或SDR(a-CDR)中進行此等改變，且測試所得變异型VH或VL之結合親和力。藉由構築二級文庫且自二級文庫中重新選擇之親和力成熟已描述於例如Hoogenboom等人.Methods in Molecular Biology 178：1-37(O’Brien等人編，Human Press,Totowa,NJ,(2001))中。在親和力成熟之一些實施例中，藉由多種方法(例如易出錯PCR、鏈改組或寡核苷酸定向突變誘發)中之任一者將多樣性引入選用於成熟之可變基因中。接著產生二級文庫。接著篩檢文庫以鑑別具有所要親和力之任何抗體變异體。引入多樣性之另一方法涉及HVR定向方法，其中使若干HVR殘基(例如一次4-6個殘基)隨機化。可例如使用丙胺酸掃描突變誘發或模型化來特异性鑑別參與抗原結合之HVR殘基。特定言之，通常以CDR-H3及CDR-L3為標靶。
在某些實施例中，取代、插入或缺失可發生在一或多個HVR內，只要此等改變不實質上降低抗體結合抗原之能力即可。舉例而言，可在HVR中進行不實質上降低結合親和力之保守性改變(例如如本文提供之 保守性取代)。此等改變可在HVR「熱點」或SDR以外。在以上提供之變异型VH及VL序列之某些實施例中，各HVR未改變或含有不超過一、兩個或三個胺基酸取代。
適用於鑑別抗體之可作為突變誘發標靶之殘基或區域的方法稱為「丙胺酸掃描突變誘發」，如Cunningham及Wells(1989)Science,244：1081-1085所述。在此方法中，鑑別某一殘基或一組標靶殘基(例如帶電荷殘基，諸如arg、asp、his、lys及glu)且置換為中性或帶負電荷胺基酸(例如丙胺酸或聚丙胺酸)以確定抗體與抗原之相互作用是否受到影響。可在對初始取代顯示功能敏感性之胺基酸位置處引入進一步取代。或者或另外，使用抗原-抗體複合物之晶體結構來鑑別抗體與抗原之間之接觸點。此等接觸殘基及相鄰殘基可作為取代候選物而靶向或消除。可篩檢變异體以確定其是否含有所要性質。
胺基酸序列插入包括長度在一個殘基至含有一百個或一百個以上殘基之多肽之範圍內的胺基末端及/或羧基末端融合、以及單一或多個胺基酸殘基之序列內插入。末端插入之實例包括具有N末端甲硫胺醯基殘基之抗體。抗體分子之其他插入變异體包括抗體之N末端或C末端與增加抗體之血清半衰期之酶(例如用於ADEPT)或多肽的融合。
糖基化變异體
在某些實施例中，改變本文提供之抗體以增加或降低抗體糖基化之程度。對抗體添加糖基化位點或使抗體缺失糖基化位點可藉由改變胺基酸序列以使得產生或移除一或多個糖基化位點來便利地達成。
當抗體包含Fc區時，可改變與其連接之碳水化合物。由哺乳動物細胞產生之天然抗體通常包含通常藉由N-鍵聯連接於Fc區之CH2域之Asn297的分支雙觸角寡醣。參見例如Wright等人.TIBTECH 15：26-32(1997).寡醣可包括各種碳水化合物，例如甘露糖、N-乙醯基葡糖胺(GlcNAc)、半乳糖及唾液酸、以及連接於雙觸角寡醣結構之「主幹」中之GlcNAc的海藻糖。在一些實施例中，可對本發明之抗體中之寡醣進行修飾以產生具有某些改良性質之抗體變异體。
在一實施例中，提供具有缺乏(直接或間接)連接於Fc區之 海藻糖之碳水化合物結構的抗體變异體。舉例而言，海藻糖在此抗體中之量可為1%至80%、1%至65%、5%至65%或20%至40%。如藉由MALDI-TOF質譜法所量測，藉由相對於連接於Asn297之所有糖結構(例如複合、雜合及高甘露糖結構)之總和計算Asn297處之糖鏈內海藻糖的平均量來測定海藻糖之量，如例如WO 2008/077546中所述。Asn297係指位於Fc區中約位置297(Fc區殘基之Eu編號)處之天冬醯胺殘基；然而，Asn297亦可由於抗體中之微小序列變化而位於位置297之上游或下游約±3個胺基酸處，亦即在位置294與300之間。此等海藻糖基化變异體可具有改良之ADCC功能。參見例如美國專利公開案第US 2003/0157108號(Presta,L.)、第US 2004/0093621號(Kyowa Hakko Kogyo Co.,Ltd)。與「去海藻糖基化」或「海藻糖缺乏」抗體變异體相關之公開案之實例包括：US 2003/0157108；WO 2000/61739；WO 2001/29246；US 2003/0115614；US 2002/0164328；US 2004/0093621；US 2004/0132140；US 2004/0110704；US 2004/0110282；US 2004/0109865；WO 2003/085119；WO 2003/084570；WO 2005/035586；WO 2005/035778；WO2005/053742；WO2002/031140；Okazaki等人.J.Mol.Biol.336：1239-1249(2004)；Yamane-Ohnuki等人.Biotech.Bioeng.87：614(2004)。能够產生去海藻糖基化抗體之細胞株之實例包括缺乏蛋白質海藻糖基化作用之Lec13 CHO細胞(Ripka等人.Arch.Biochem.Biophys.249：533-545(1986)；美國專利申請案第US 2003/0157108 A1號，Presta,L；及WO 2004/056312 A1,Adams等人，尤其實例11)及基因剔除細胞株，諸如α-1,6-海藻糖基轉移酶基因FUT8基因剔除CHO細胞(參見例如Yamane-Ohnuki等人.Biotech.Bioeng.87：614(2004)；Kanda,Y.等人，Biotechnol.Bioeng.,94(4)：680-688(2006)；及WO2003/085107)。
進一步提供具有二等分寡醣之抗體變异體，例如其中連接於抗體之Fc區之雙觸角寡醣係由GlcNAc二等分。此等抗體變异體可具有降低之海藻糖基化及/或改良之ADCC功能。此等抗體變异體之實例例如描述於WO 2003/011878(Jean-Mairet等人)；美國專利第6,602,684號(Umana等人)；及US 2005/0123546(Umana等人)中。亦提供在連接於Fc區之寡醣中具有至少一個半乳糖殘基之抗體變异體。此等抗體變异體可具有改良之 CDC功能。此等抗體變异體例如描述於WO 1997/30087(Patel等人)；WO 1998/58964(Raju,S.)；及WO 1999/22764(Raju,S.)中。
Fc區變异體
在某些實施例中，可將一或多個胺基酸修飾引入本文提供之抗體之Fc區中，藉此產生Fc區變异體。Fc區變异體可包含在一或多個胺基酸位置處包含胺基酸修飾(例如取代)之人類Fc區序列(例如人類IgG1、IgG2、IgG3或IgG4 Fc區)。
在某些實施例中，本發明涵蓋具有一些而非所有效應功能之抗體變异體，該等效應功能使該抗體變异體成為抗體之活體內半衰期較為重要但某些效應功能(諸如補體及ADCC)不必要或有害之應用所需要的候選物。可進行活體外及/或活體內細胞毒性檢定以確認CDC及/或ADCC活性之降低/去除。舉例而言，可進行Fc受體(FcR)結合檢定以確保抗體缺乏FcγR結合性(因此可能缺乏ADCC活性)，但保留FcRn結合能力。用於介導ADCC之初級細胞NK細胞僅表現Fc(RIII，而單核細胞表現Fc(RI、Fc(RII及Fc(RIII。FcR在造血細胞上之表現概述於Ravetch及Kinet,Annu.Rev.Immunol.9：457-492(1991)第464頁上之表3中。活體外檢定以評定相關分子之ADCC活性之非限制性實例描述於美國專利第5,500,362號中(參見例如Hellstrom,I.等人.Proc.Nat’l Acad.Sci.USA 83：7059-7063(1986))及Hellstrom,I等人，Proc.Nat’l Acad.Sci.USA 82：1499-1502(1985)；5,821,337(參見Bruggemann,M.等人，J.Exp.Med.166：1351-1361(1987))。或者，可采用非放射性檢定方法，(參見例如用於流動式細胞量測術之ACTITM非放射性細胞毒性檢定(CellTechnology公司Mountain View,CA)；及CytoTox 96®非放射性細胞毒性檢定(Promega,Madison,WI)。適用於此等檢定之效應細胞包括周邊血液單核細胞(PBMC)及自然殺手(NK)細胞。或者或另外，相關分子之ADCC活性可例如在動物模型，諸如Clynes等人.Proc.Nat’l Acad.Sci.USA 95：652-656(1998)中揭露之動物模型中進行活體內評定。亦可進行C1q結合檢定以確認抗體不能結合C1q且因此缺乏CDC活性。參見例如WO 2006/029879及WO 2005/100402中之C1q及C3c結合ELISA。為評定補體活化，可進行CDC檢定(參見例如Gazzano-Santoro等人，J.Immunol.Methods 202：163(1996)；Cragg,M.S.等人，Blood 101：1045-1052(2003)；及Cragg,M.S.及M.J.Glennie,Blood 103：2738-2743(2004))。亦可使用此項技術中已知之方法對FcRn結合及活體內清除率/半衰期進行測定(參見例如Petkova,S.B.等人，Int’l.Immunol.18(12)：1759-1769(2006))。
在一些實施例中，可將一或多個胺基酸修飾引入本文提供之抗體之Fc區中，藉此增加IgG與新生兒Fc受體之結合。在某些實施例中，該抗體包含根據EU編號之以下三個突變：M252Y、S254T及T256E(「YTE」突變)(美國專利第8,697,650號；亦參見Dall’Acqua等人，Journal of Biological Chemistry 281(33)：23514-23524(2006)。在某些實施例中，YTE突變不會影響抗體結合其同源抗原之能力。在某些實施例中，相較於天然(亦即，非YTE突變體)抗體，YTE突變增加抗體之血清半衰期。在一些實施例中，相較於天然(亦即，非YTE突變體)抗體，YTE突變使抗體之血清半衰期增加3倍。在一些實施例中，相較於天然(亦即，非YTE突變體)抗體，YTE突變使抗體之血清半衰期增加2倍。在一些實施例中，相較於天然(亦即，非YTE突變體)抗體，YTE突變使抗體之血清半衰期增加4倍。在一些實施例中，相較於天然(亦即，非YTE突變體)抗體，YTE突變使抗體之血清半衰期增加至少5倍。在一些實施例中，相較於天然(亦即，非YTE突變體)抗體，YTE突變使抗體之血清半衰期增加至少10倍。參見例如，美國專利第8,697,650號；亦參見Dall’Acqua等人，Journal of Biological Chemistry 281(33)：23514-23524(2006)。
在某些實施例中，YTE突變體提供調節抗體之抗體依賴性細胞介導之細胞毒性(ADCC)之方式。在某些實施例中，YTEO突變體提供調節針對人類抗原之人類化IgG抗體之ADCC活性的方式。參見例如，美國專利第8,697,650號；亦參見Dall’Acqua等人，Journal of Biological Chemistry 281(33)：23514-23524(2006)。
在某些實施例中，YTE突變體允許同時調節血清半衰期、組織分布及抗體活性(例如，IgG抗體之ADCC活性)。參見例如，美國專利第8,697,650號；亦參見Dall’Acqua等人，Journal of Biological Chemistry 281(33)：23514-23524(2006)。
效應功能降低之抗體包括Fc區殘基238、265、269、270、297、327及329中之一或多者經取代之抗體(美國專利第6,737,056號)。此等Fc突變體包括在胺基酸位置265、269、270、297及327中之兩者或兩者以上處具有取代之Fc突變體，包括殘基265及297取代成丙胺酸之所謂「DANA」Fc突變體(美國專利第7,332,581號)。
在某些實施例中，野生型人類Fc區之位置329(EU編號)(P329)處之脯胺酸經甘胺酸或精胺酸或胺基酸殘基取代，該胺基酸殘基足够大以破壞在Fc之P329與FcgRIH之色胺酸殘基W87及W110之間形成的Fc/Fc γ受體界面內的脯胺酸夾層(Sondermann等人：Nature 406,267-273(20 July 2000))。在另一實施例中，Fc變异體中之至少一個另外胺基酸取代為S228P、E233P、L234A、L235A、L235E、N297A、N297D或P331S，且在另一實施例中，該至少一個另外胺基酸取代為人類IgG1 Fc區之L234A及L235A或人類IgG4 Fc區之S228P及L235E，全部根據EU編號(美國專利第8,969,526號，其係以全文引用之方式併入)。
在某些實施例中，多肽包含野生型人類IgG Fc區之Fc變异體，其中該多肽具有人類IgG Fc區之經甘胺酸取代之P329，且其中該Fc變异體包含在人類IgG1 Fc區之L234A及L235A或人類IgG4 Fc區之S228P及L235E處之至少兩個另外胺基酸取代，且其中該等殘基係根據EU編號進行編號(美國專利第8,969,526號，其係以全文引用之方式併入)。在某些實施例中，包含P329G、L234A及L235A(EU編號)取代之多肽顯示對人類FcγRIIIA及FcγRIIA之親和力降低，此係由於ADCC下調至由包含野生型人類IgG Fc區之多肽誘導之ADCC的至少20%，及/或由於ADCP之下調(美國專利第8,969,526號，其係以全文引用之方式併入)。
在一特定實施例中，包含野生型人類Fc多肽之Fc變异體之多肽包含三重突變：根據EU編號，在位置Pro329處之胺基酸取代、L234A突變及L235A突變(P329/LALA)(美國專利第8,969,526號，其係一全文引用之方式併入)。在特定實施例中，多肽包含以下胺基酸取代：根據EU編號，P329G、L234A及L235A。
與FcR之結合改良或减弱之某些抗體變异體已有描述。(參 見例如美國專利第6,737,056號；WO 2004/056312及Shields等人，J.Biol.Chem.9(2)：6591-6604(2001)。)
在某些實施例中，抗體變异體包含具有一或多個改良ADCC之胺基酸取代(例如在Fc區之位置298、333及/或334(EU殘基編號)處之取代)之Fc區。
在一些實施例中，在Fc區中進行導致C1q結合及/或補體依賴性細胞毒性(CDC)改變(亦即，改良或减弱)之改變，例如，如美國專利第6,194,551號、WO 99/51642及Idusogie等人.J.Immunol.164：4178-4184(2000)中所描述。
半衰期增加且與負責將母體IgG轉移至胎兒之新生兒Fc受體(FcRn)(Guyer等人，J.Immunol.117：587(1976)及Kim等人，J.Immunol.24：249(1994))之結合改良的抗體描述於US2005/0014934A1(Hinton等人)中。彼等抗體包含其中具有改良Fc區域與FcRn之結合的一或多個取代的Fc區域。此等Fc變异體包括在以下一或多個Fc區殘基處具有取代之變异體：238、256、265、272、286、303、305、307、311、312、317、340、356、360、362、376、378、380、382、413、424或434，例如Fc區殘基434之取代(美國專利第7,371,826號)。
關於Fc區變异體之其他實例，亦參見Duncan及Winter,Nature 322：738-40(1988)；美國專利第5,648,260號；美國專利第5,624,821號；及WO 94/29351。
半胱胺酸工程改造抗體變异體
在某些實施例中，可能需要產生半胱胺酸工程改造抗體，例如「THIOMABTM」或TDC，其中抗體之一或多個殘基經半胱胺酸殘基取代。在特定實施例中，經取代之殘基存在於抗體之可用於結合之位點處。藉由用半胱胺酸取代彼等殘基，反應性硫醇基藉此定位在抗體之可及位點處且可用於使抗體結合於其他部分(諸如藥物部分或連接子-藥物部分)以產生免疫結合物，如本文進一步所述。在某些實施例中，任一或多個以下殘基可經半胱胺酸取代：輕鏈之K149(Kabat編號)；輕鏈之V205(Kabat編號)；重鏈之A118(EU編號)；重鏈之A140(EU編號)；重鏈之L174(EU編 號)；重鏈之Y373(EU編號)；及重鏈Fc區之S400(EU編號)。在特定實施例中，本文描述之抗體包含HC-A140C(EU編號)半胱胺酸取代。在特定實施例中，本文描述之抗體包含LC-K149C(EU編號)半胱胺酸取代。在特定實施例中，本文描述之抗體包含HC-A118C(EU編號)半胱胺酸取代。可如例如美國專利第7,521,541號中所描述來產生半胱胺酸工程改造抗體。
在某些實施例中，該抗體包含以下重鏈半胱胺酸取代之一者：
在某些實施例中，該抗體包含以下輕鏈半胱胺酸取代之一者：
非限制性例示性hu7C2.v2.2.LA輕鏈(LC)K149C THIOMABTM分別具有SEQ ID NO：26及30之重鏈及輕鏈胺基酸序列。非限制性例示性hu7C2.v2.2.LA重鏈(HC)A118C THIOMABTM分別具有SEQ ID NO：31及25之重鏈及輕鏈胺基酸序列。
抗體衍生物
在某些實施例中，本文提供之抗體可經進一步修飾以含有此項技術中已知且容易獲得之其他非蛋白質部分。適於使抗體衍生化之部分包括但不限於水溶性聚合物。水溶性聚合物之非限制性實例包括(但不限於)聚乙二醇(PEG)、乙二醇/丙二醇之共聚物、羧甲基纖維素、葡聚糖、聚乙烯醇、聚乙烯吡咯啶酮、聚-1,3-二氧雜環戊烷、聚-1,3,6-三噁烷、乙烯/順丁烯二酸酐共聚物、聚胺基酸(均聚物或無規共聚物)、及葡聚糖或聚(n-乙烯基吡咯啶酮)聚乙二醇、聚丙二醇均聚物、聚環氧丙烷/環氧乙烷共聚物、聚氧乙基化多元醇(例如甘油)、聚乙烯醇及其混合物。聚乙二醇丙醛由於其在水中之穩定性而可具有製造優勢。聚合物可具有任何分子量，且可分支或未分支。連接於抗體之聚合物之數目可變化，且若連接一個以上聚合物，則其可為相同或不同分子。一般而言，用於衍生化之聚合物之數目及/或類型可基於包括但不限於欲改良之抗體之特定性質或功能、抗體衍生物是否將在確定條件下用於療法中等考慮因素加以確定。
在另一實施例中，提供抗體與可藉由暴露於輻射而選擇性加熱之非蛋白質部分的結合物。在一個實施例中，非蛋白質部分為碳奈米管(Kam等人，Proc.Natl.Acad.Sci.USA 102：11600-11605(2005))。輻射可具有任何波長，且包括但不限於不損害普通細胞但會將非蛋白質部分加熱至鄰近於抗體-非蛋白質部分之細胞被殺死之溫度的波長。
重組方法及組合物
可使用例如如美國專利第4,816,567號中所述之重組方法及組合物來產生抗體。在一個實施例中，提供編碼本文所描述之抗體之經分離核酸。此種核酸可編碼包含抗體之VL之胺基酸序列及/或包含抗體之VH之胺基酸序列(例如抗體之輕鏈及/或重鏈)。在另一實施例中，提供一或多種包含此種核酸之載體(例如表現載體)。在另一實施例中，提供一種包含此種核酸之宿主細胞。在一個此實施例中，宿主細胞包含(例如已用以下轉型)：(1)包含編碼包含抗體之VL之胺基酸序列及包含抗體之VH之胺基酸序列的核酸之載體，或(2)包含編碼包含抗體之VL之胺基酸序列的核酸之第一載體及包含編碼包含抗體之VH之胺基酸序列的核酸之第二載體。在 一實施例中，宿主細胞為真核的，例如中國倉鼠卵巢(CHO)細胞或淋巴樣細胞(例如Y0、NS0、Sp20細胞)。在一個實施例中，提供一種製備抗體之方法，其中該方法包括在適於表現該抗體之條件下培養如以上提供之包含編碼該抗體之核酸的宿主細胞，及視情况自該宿主細胞(或宿主細胞培養基)回收該抗體。
對於重組產生抗體，分離編碼例如如上所述之抗體之核酸且將其插入一或多種載體中以用於進一步在宿主細胞中選殖及/或表現。此種核酸可易於使用習知程序(例如藉由使用能够特异性結合編碼抗體之重鏈及輕鏈之基因之寡核苷酸探針)進行分離及定序。
適於選殖或表現抗體編碼性載體之宿主細胞包括本文所述之原核或真核細胞。舉例而言，抗體可在細菌中產生，特定言之當不需要糖基化及Fc效應功能時。對於抗體片段及多肽在細菌中之表現，參見例如美國專利第5,648,237號、第5,789,199號及第5,840,523號(亦參見例如Charlton,Methods in Molecular Biology，第248卷(B.K.C.Lo，編，Humana Press,Totowa,NJ,2003)，第245-254頁，其描述抗體片段在大腸杆菌中之表現)。在表現之後，抗體可自細菌細胞糊狀物分離於可溶性部分中且可進一步純化。
除原核生物之外，諸如絲狀真菌或酵母之真核微生物亦為適於抗體編碼性載體之選殖或表現宿主，包括糖基化路徑已經「人源化」，從而產生具有部分或完全人類糖基化型態之抗體之真菌及酵母菌株。參見Gerngross,Nat.Biotech.22：1409-1414(2004)及Li等人，Nat.Biotech.24：210-215(2006)。
適於表現糖基化抗體之宿主細胞亦源於多細胞生物體(無脊椎動物及脊椎動物)。無脊椎動物細胞之實例包括植物及昆蟲細胞。已鑑別衆多可連同昆蟲細胞一起使用之杆狀病毒株，尤其用於轉染草地粘蟲(Spodoptera frugiperda)細胞。
植物細胞培養物亦可用作宿主。參見，例如，美國專利第5,959,177、6,040,498、6,420,548、7,125,978及6,417,429號(描述用於在轉殖基因植物中產生抗體之PLANTIBODIESTM技術)。
脊椎動物細胞亦可用作宿主。舉例而言，適合於懸浮生長之哺乳動物細胞株可為適用的。適用哺乳動物宿主細胞株之其他實例為藉由SV40(COS-7)轉型之猴腎CV1細胞株；人胚胎腎細胞株(293或293細胞，如例如Graham等人J.Gen Virol.36：59(1977)所描述)；幼倉鼠腎細胞(BHK)；小鼠塞爾托利細胞(TM4細胞，如例如Mather,Biol.Reprod.23：243-251(1980)所描述)；猴腎細胞(CV1)；非洲綠猴腎細胞(VERO-76)；人宮頸癌細胞(HELA)；犬腎細胞(MDCK；布法羅大鼠肝臟細胞(BRL3A)；人肺細胞(W138)；人肝細胞(HepG2)；小鼠乳腺腫瘤(MMT 060562)；TRI細胞，如例如Mather等人Annals N.Y.Acad.Sci.383：44-68(1982)所描述；MRC5細胞；及FS4細胞。其他適用哺乳動物宿主細胞株包括中國倉鼠卵巢(CHO)細胞，包括DHFR-CHO細胞(Urlaub等人，Proc.Natl.Acad.Sci.USA 77：4216(1980))；及骨髓瘤細胞株，諸如Y0、NS0及Sp2/0。對於適於抗體產生之某些哺乳動物宿主細胞株之綜述，參見例如Yazaki及Wu,Methods in Molecular Biology，第248卷(B.K.C.Lo編，Humana Press,Totowa,NJ)，第255-268頁(2003)。
單烷化劑吡咯并苯并二氮呯藥物部分
本發明之抗體-藥物結合物化合物包含在N10基團處用二硫鍵連接子衍生化成抗體之單烷化劑吡咯并苯并二氮呯藥物部分。
已製備了在表1a中所示之例示性單烷化劑吡咯并苯并二氮呯(PBD)藥物部分。
單烷化劑吡咯并苯并二氮呯連接子-藥物中間物
本發明之抗體-藥物結合物(ADC)化合物可藉由使單烷化劑吡咯并苯并二氮呯連接子-藥物中間物與抗體結合來製備。該連接子-藥物中間物之硫吡啶基經抗體之半胱胺酸硫醇置換以形成二硫鍵連接之ADC。
該單烷化劑吡咯并苯并二氮呯連接子-藥物中間物具有式I：
其中XY選自CH2-CH2、CH=CH、C(=O)-NH及CH2-NH；A為視情况經選自F、C1-C6烷基及=C(R)2之基團取代之5員或6員雜環，其中R獨立地選自H、F、C1-C6烷基及C1-C6氟烷基；R1及R2獨立地選自H及C1-C6烷基，或R1及R2形成3員、4員、5員或6員環烷基或雜環基基團；R3獨立地選自NO2、Cl、F、CN、CO2H及Br；且m為0、1或2。
在一例示性實施例中，A為5員環。
在一例示性實施例中，A為經環外亞甲基=CH2取代之5員環。
在一例示性實施例中，A為6員環。
在一例示性實施例中，A為嗎啉基環。
在一例示性實施例中，R1為-CH3且R2 is H。
在一例示性實施例中，R1及R2形成環丙基或環丁基。
在一例示性實施例中，R3為-NO2且m為1。
在一例示性實施例中，XY為CH2-CH2或CH=CH。
在一例示性實施例中，XY為C(=O)-NH或CH2-NH。
單烷化劑吡咯并苯并二氮呯連接子-藥物中間物之例示性實施例為式Ia：
在一例示性實施例中，R4及R5各自為H。
在一例示性實施例中，R4及R5為=O。
單烷化劑吡咯并苯并二氮呯連接子-藥物中間物之例示性實施例為式Ib：
單烷化劑吡咯并苯并二氮呯連接子-藥物中間物之例示性實施例為式Ic：
單烷化劑吡咯并苯并二氮呯連接子-藥物中間物之例示性實施例為式Id：
不限於特定作用機制，單烷化劑吡咯并苯并二氮呯連接子中間物之吡啶基環上吸電子基團R3如NO2、Cl、F、CN、CO2H或Br之存在加速與半胱胺酸工程改造抗體之半胱胺酸硫醇的反應。在已在抗體上之位阻或反應性較低位點處引入半胱胺酸硫醇之情形下，此種單烷化劑吡咯并苯并二氮呯連接子中間物可相對於相應未經取代之吡啶基類似物(R3=H)給輿與抗體之更有效結合反應。
例示性單烷化劑吡咯并苯并二氮呯連接子-藥物中間物在表2A中示出。比較二烷化劑吡咯并苯并二氮呯連接子-藥物中間物在表2B中示出。連接子-藥物中間物及比較物之合成在實施例中進行描述。
抗體-藥物結合物(ADC)
本發明之抗體-藥物結合物(ADC)化合物包含對腫瘤相關抗原具有特异性之抗體，該抗體共價連接至在N10基團處經二硫鍵連接子衍生化之有效單烷化劑吡咯并苯并二氮呯藥物部分；且包括具有生物活性之彼等化合物。本發明之ADC可具有可具有治療活性且為針對多種過度增生性病症(包括癌症)有效的。單烷化劑吡咯并苯并二氮呯藥物部分之生物活性係藉由結合至抗體進行調節。本發明之ADC將有效劑量之單烷化劑吡咯并苯并二氮呯藥物或毒素選擇性傳遞至腫瘤細胞或部位，藉此可達成較高選擇性(亦即較低有效劑量)，同時增加治療指數(「治療窗」)。在一例示性實施例中，ADC化合物包括藉由連接子結合(亦即共價連接)於單烷化劑吡咯并苯并二氮呯藥物部分之半胱胺酸工程改造抗體。
應瞭解當抗體之一個以上親核半胱胺酸硫醇基團與藥物-連接子中間物或連接子試劑反應時，則所得產物為分布有一或多個連接於抗體之藥物部分之ADC化合物的混合物。每個抗體之藥物之平均數(DAR)可 藉由對抗體具有特异性且對藥物具有特异性之雙重ELISA抗體檢定自混合物計算。可藉由質譜鑑別混合物中之個別ADC分子且藉由HPLC(例如疏水性相互作用層析)分離(參見例如McDonagh等人(2006)Prot.Engr.Design & Selection 19(7)：299-307；Hamblett等人(2004)Clin.Cancer Res.10：7063-7070：Hamblett,K.J.等人「Effect of drug loading on the pharmacology,pharmacokinetics,and toxicity of an anti-CD30 antibody-drug conjugate」，摘要第624號，American Association for Cancer Research,2004 Annual Meeting,2004年3月27-31日，Proceedings of the AACR，第45卷，2004年3月；Alley,S.C.等人，「Controlling the location of drug attachment in antibody-drug conjugates」，摘要第627號，American Association for Cancer Research,2004 Annual Meeting,2004年3月27-31日，Proceedings of the AACR，第45卷，2004年3月)。在某些實施例中，具有單一負載量值之均質ADC可藉由電泳或層析自結合混合物中分離。
本發明之抗體-藥物結合物化合物具有式II之結構：
或其醫藥學上可接受之鹽，其中：其中：XY選自CH2-CH2、CH2-C(=O)、CH=CH或CH2-NH；R1及R2獨立地選自H或C1-C6烷基，或R1及R2形成3員、4員、5員或6員環烷基或雜環基基團；p為1至8之整數；且Ab為抗體。
在一例示性實施例中，該抗體結合選自(1)-(53)之一或多種 腫瘤相關抗原或細胞表面受體：(1)BMPR1B(骨形態發生蛋白受體-IB型)；(2)E16(LAT1、SLC7A5)；(3)STEAP1(前列腺之六跨膜上皮抗原)；(4)MUC16(0772P、CA125)；(5)MPF(MPF、MSLN、SMR、巨核細胞增強因子、間皮素)；(6)Napi2b(NAPI-3B、NPTIIb、SLC34A2、溶質携帶物家族34(磷酸鈉)第2成員、第II型鈉依賴性磷酸鹽轉運體3b)；(7)Sema 5b(FLJ10372、KIAA1445、Mm.42015、SEMA5B、SEMAG、導向蛋白5b Hlog、sema域、七個血小板反應蛋白重複序列(第1型及第1型樣)、跨膜域I及短細胞質域、(導向蛋白)5B)；(8)PSCA hlg(2700050C12Rik、C530008O16Rik、RIKEN cDNA 2700050C12、RIKEN cDNA 2700050C12基因)；(9)ETBR(內皮素B型受體)；(10)MSG783(RNF124、假定蛋白FLJ20315)；(11)STEAP2(HGNC_8639、IPCA-1、PCANAP1、STAMP1、STEAP2、STMP、前列腺癌相關基因1、前列腺癌相關蛋白1、前列腺之六跨膜上皮抗原2、六跨膜前列腺蛋白)；(12)TrpM4(BR22450、FLJ20041、TRPM4、TRPM4B、瞬時受體電位陽離子通道，次家族M，第4成員)；(13)CRIPTO(CR、CR1、CRGF、CRIPTO、TDGF1、畸胎瘤衍生生長因子)；(14)CD21(CR2(補體受體2)或C3DR(C3d/艾伯斯坦-巴爾病毒受體)或Hs 73792)；(15)CD79b(CD79B、CD79β、Igb(免疫球蛋白相關型β)、B29)；(16)FcRH2(IFGP4、IRTA4、SPAP1A(含SH2域之磷酸酶錨定蛋白1a)、SPAP1B、SPAP1C)；(17)HER2；(18)NCA； (19)MDP；(20)IL20Rα；(21)短縮素；(22)EphB2R；(23)ASLG659；(24)PSCA；(25)GEDA；(26)BAFF-R(B細胞活化因子受體、BlyS受體3、BR3)；(27)CD22(B細胞受體CD22-B同功异型物)；(28)CD79a(CD79A、CD79α、免疫球蛋白相關型α)；(29)CXCR5(伯基特氏淋巴瘤受體1)；(30)HLA-DOB(MHC第II類分子之β次單元(Ia抗原))；(31)P2X5(嘌呤能受體P2X配位體門控離子通道5)；(32)CD72(B細胞分化抗原CD72、Lyb-2)；(33)LY64(淋巴細胞抗原64(RP105)，富含白胺酸之重複序列(LRR)之第I型膜蛋白家族)；(34)FcRH1(Fc受體樣蛋白1)；(35)FcRH5(IRTA2，免疫球蛋白超家族受體易位相關型2)；(36)TENB2(推定跨膜蛋白多醣)；(37)PMEL17(銀同系物；SILV；D12S53E；PMEL17；SI；SIL)；(38)TMEFF1(具有EGF樣域及兩個抑濾泡素樣域1之跨膜蛋白；腦腫瘤抑癌蛋白-1)；(39)GDNF-Ra1(GDNF家族受體α 1；GFRA1；GDNFR；GDNFRA；RETL1；TRNR1；RET1L；GDNFR-α1；GFR-A-1)；(40)Ly6E(淋巴細胞抗原6複合物，基因座E；Ly67、RIG-E、SCA-2、TSA-1)；(41)TMEM46(shisa同系物2(非洲爪蟾)；SHISA2)；(42)Ly6G6D(淋巴細胞抗原6複合物，基因座G6D；Ly6-D；MEGT1)；(43)LGR5(含富含白胺酸之重複序列之G蛋白偶聯受體5；GPR49， GPR67)；(44)RET(ret原癌基因；MEN2A；HSCR1；MEN2B；MTC1；PTC；CDHF12；Hs.168114；RET51；RET-ELE1)；(45)LY6K(淋巴細胞抗原6複合物，基因座K；LY6K；HSJ001348；FLJ35226)；(46)GPR19(G蛋白偶聯受體19；Mm.4787)；(47)GPR54(KISS1受體；KISS1R；GPR54；HOT7T175；AXOR12)；(48)ASPHD1(含天冬胺酸β-羥化酶域1；LOC253982)；(49)酪胺酸酶(TYR；OCAIA；OCA1A；酪胺酸酶；SHEP3)；(50)TMEM118(環指蛋白，跨膜2；RNFT2；FLJ14627)；(51)GPR172A(G蛋白偶聯受體172A；GPCR41；FLJ11856；D15Ertd747e)；(52)CD33；或(53)CLL-1。
例示性抗體-藥物結合物化合物包括式IIa：
例示性抗體-藥物結合物化合物式Iia包括其中R4及R5各自為H，或R4及R5為=O。
例示性抗體-藥物結合物化合物包括式IIb：
表3A之抗體藥物結合物ADC-101-ADC-119藉由使表2A之單烷化劑吡咯并苯并二氮呯連接子-藥物中間物LD-51或LD-52與抗體(包括半胱胺酸工程改造抗體)結合來製備。表3B之比較抗體-藥物結合物ADC-201-ADC-211藉由使表2B之比較吡咯并苯并二氮呯連接子-藥物中間物CLD-1-6與抗體(包括半胱胺酸工程改造抗體)結合來製備。
A118C(EU編號)=A121C(序列編號)=A114C(Kabat編號)
輕鏈之K149C(Kabat編號)
野生型(「WT」)，半胱胺酸工程改造突變型抗體(「硫基」)，輕鏈(「LC」)，重鏈(「HC」)，6-順丁烯二醯亞胺基己醯基(「MC」)，順丁烯二醯亞胺基丙醯基(「MP」)，纈胺酸-瓜胺酸(「val-cit」或「vc」)，丙胺酸-苯丙胺酸(「ala-phe」)，對-胺基苄基(「PAB」)及對-胺基苄氧基羰基(「PABC」)
比較ADC-211，曲妥珠單抗安坦辛(KADCYLA®，曲妥珠單抗-MCC-DM1(T-DM1、Tmab-DM1)為抗體-藥物結合物(CAS登記號139504-50-0；Phillips G.等人(2008)Cancer Res.68：9280-90；US 8142784)且具有結構：
其中Tr為抗HER2抗體曲妥珠單抗。
活體外細胞增殖檢定
一般而言，藉由以下來量測抗體-藥物結合物(ADC)之細胞毒性或細胞抑制活性：將具有受體蛋白(例如HER2)之哺乳動物細胞暴露於細胞培養基中之ADC之抗體；將該等細胞培養約6小時至約5天之時間段；且量測細胞活力。基於細胞之活體外檢定用於量測本發明之ADC的活力(增殖)、細胞毒性及對細胞雕亡(半胱天冬酶活化)的誘導。
抗體-藥物結合物(ADC)之活體外效力藉由細胞增殖檢定來量測(實例6)。本發明之ADC顯示在抑制腫瘤細胞增殖中令人驚訝且出人意料之效力。ADC之效力與細胞之標靶抗原表現相關。所測試結合物能够結合在細胞之表面上表現之特异性抗原且在活體外引起彼等細胞之死亡。
CellTiter-Glo®發光細胞活力檢定為基於鞘翅目螢光素酶之重組表現之可商購(Promega Corp.,Madison,WI)均質檢定方法(US 5583024；US5674713；US5700670)。此細胞增殖檢定基於對所存在ATP之定量來測定培養物中之活細胞數目，ATP為代謝活性細胞之指標(Crouch等人(1993)J.Immunol.Meth.160：81-88；US 6602677)。CellTiter-Glo®檢定以96孔形式進行，從而使得檢定適用於自動高通量篩檢(HTS)(Cree等人(1995)AntiCancer Drugs 6：398-404)。均質檢定程序涉及向補充血清之培養基中培養之細胞直接添加單一試劑(CellTiter-Glo®試劑)。不需要細胞洗滌、培養基移除及多個移液步驟。在添加試劑且混合之後10分鐘，該系統在384孔形式中偵測到少至15個細胞/孔。將該等細胞用ADC連續處理，或可對它們 進行處理且與ADC分離。一般而言，短暫處理(亦即3小時)之細胞顯示與連續處理之細胞相同效力作用。
均質「添加-混合-量測」導致細胞溶解及與所存在ATP之量成比例之發光信號的產生。ATP之量與培養物中存在之細胞的數目成正比。CellTiter-Glo®檢定產生藉由螢光素酶反應產生之「發光型」發光信號，視細胞類型及所用培養基而定，該信號具有通常大於五小時之半衰期。活細胞以相對發光單位(RLU)反映。受質甲殼蟲螢光素藉由重組螢火蟲螢光素酶氧化脫羧基，其中ATP伴隨轉化為AMP且產生光子。
基於細胞之活體外檢定用於量測本發明之ADC的活力(增殖)、細胞毒性及對細胞雕亡(半胱天冬酶活化)的誘導。一般而言，藉由以下來量測抗體-藥物結合物(ADC)之細胞毒性或細胞抑制活性：將表現諸如Her2或MUC16多肽之抗原的哺乳動物細胞暴露於細胞培養基中之ADC；將該等胞培養約6小時至約5天之時間段；且量測細胞活力。適用於抗MUC16 ADC之細胞增殖檢定之哺乳動物細胞包括：(1)表現MUC16多肽之細胞株OVCAR-3；(2)經工程改造為在其細胞表面上穩定表現MUC16多肽之一部分之PC3來源的細胞株(PC3/MUC16)；(3)不表現MUC16多肽之親本PC3細胞株；及(4)不表現MUC16多肽但携帶用於驅動外源性MUC16表現之載體的親本PC3細胞株(PC3/neo)。
圖1A、1B、1C顯示硫基Hu抗CD22 10F4v3 LC K149C-(LD-52)ADC-107單胺展現與BJAB中之非標靶對照ADC-108具有約4倍差异(圖1A)、與WSU-DLCL2中之非標靶對照具有約7倍差异(圖1B)及比Jurkat中之非標靶對照ADC-108效力大約5倍(圖1C)之單數位nM效力。單胺ADC-107分別比硫基Hu抗CD22 10F4v3 LC K149C-(LD-51)單胺ADC-103及BJAB及WSU-DLCL2中之非標靶對照ADC-108效力高約10倍及約22倍(圖1A-C)。
活體內功效
抗體-藥物結合物(ADC)之活體內功效藉由小鼠中之腫瘤生長抑制來量測(實例7)。本發明之ADC顯示在抑制腫瘤生長中令人驚訝且出人意料之效力。ADC之功效與腫瘤細胞之標靶抗原表現相關。
抗體-藥物結合物之功效藉由將癌細胞之同種异體移植物或异種移植物植入嚙齒動物中且用ADC治療腫瘤來在活體內進行量測。視細胞株、ADC與癌細胞上存在之受體之抗體結合的特异性、給藥方案及其他因素而定，預期可變結果。ADC之活體內功效係使用表現中等至高水準之腫瘤相關抗原諸如Her2、CD22及Ly6E之基因轉殖外植體小鼠模型中進行量測。將受試者用ADC處理一次且監測3-6週以量測腫瘤倍增、對數細胞殺死及腫瘤縮减之時間。進行追踪劑量反應及多劑量實驗。
例如，本發明之抗HER2 ADC之活體內功效可藉由高表現HER2基因轉殖外植體小鼠模型進行量測(Phillips等人(2008)Cancer Res.68：9280-90)。同種异體移植物從對HERCEPTIN®療法無反應或不良反應之 Fo5 mmtv基因轉殖小鼠繁殖。將受試者用某些劑量水準(mg/kg)之ADC及安慰劑緩衝液對照(媒劑)處理一次且監測兩週或兩週以上以量測腫瘤倍增、對數細胞殺死及腫瘤縮减之時間。
圖2顯示在CB-17 Fox Chase SCID小鼠中之WSU-DLCL2异種移植物模型中隨時間推移活體內擬合之腫瘤體積變化之曲綫中抗體-藥物結合物ADC-202、ADC-103及ADC-102的功效。
圖3顯示在CB-17 Fox Chase SCID小鼠中之Bjab-luc异種移植物模型中隨時間推移活體內擬合之腫瘤體積變化之曲綫中抗體-藥物結合物的功效。0.2及0.4mg/kg劑量之比較ADC-202產生腫瘤消退，其中0.1mg/kg劑量產生62% TGI。在單醯胺ADC-105之1、2及4mg/kg劑量中40%-58%之TGI範圍指示此等劑量水準具有類似反應，其中僅最高8mg/kg劑量顯示顯著活性，89% TGI。此外，在8mg/kg下之活性落在0.1與0.2mg/kg劑量之間之比較二烷化劑ADC-202，從而產生低約50倍效力。在8mg/kg下之脫靶對照抗Her2 hu7C2 ADC-104-單醯胺顯示比0.4mg/kg下之脫靶對照比較抗Her2 hu7C2 ADC-201低2倍活性，18%對比36% TGI。在體重安全性評估中，所有組展現重量增加。
圖4顯示在WSU-DLCL2人類細胞株小鼠模型中隨時間推移活體內擬合之腫瘤體積變化之曲綫中抗體-藥物結合物的功效。到靶抗CD22 ADC-107單胺及val-cit鍵聯ADC-204之功效在0.5-10mg/kg之劑量下進行評估。包括單醯胺ADC-105以用於比較。脫靶抗Her2單胺ADC-108及ADC-205用於對照。單胺ADC-107及ADC-204兩者之活性似乎為類似的。兩者之最小有效劑量(MED)介於0.5與2mg/kg之間。在最高10mg/kg劑量下，兩者在5/5動物中均產生完全反應，此為在單醯胺ADC情形下未觀察到之結果。此外，相較於單醯胺ADC(比較在0.5mg/kg劑量單胺對比5mg/kg劑量單醯胺下之反應)，單胺ADC產生>10倍活性。以2mg/kg給藥之兩者Her2對照具有類似反應(約30% TGI)。對於所有組無顯著重量損失。
圖5A顯示在scid beige小鼠中之HER2 KPL4腫瘤模型中隨時間推移活體內擬合之腫瘤體積變化之曲綫中抗體-藥物結合物 ADC-106、ADC-108及ADC-107的功效。
圖5B顯示在scid beige小鼠中之HER2 KPL4腫瘤模型中隨時間推移活體內擬合之腫瘤體積變化之曲綫中抗體-藥物結合物的功效。量測硫基-Her2 hu7C2 LC-K149C-(LD-51)單醯胺、ADC-106及ADC-106與Tmab-DM1之組合的功效。
圖6顯示一次靜脉內給藥，在CRL nu/nu小鼠中之HER2 Fo5模型中隨時間推移活體內擬合之腫瘤體積變化之曲綫中抗體-藥物結合物ADC-201、ADC-104、ADC-202及ADC-105及未結合抗體hu7C2的功效。到靶ADC-201及ADC-104顯示腫瘤抑制及劑量依賴性作用。脫靶ADC-202、ADC-105及未結合抗體hu7C2未顯示腫瘤抑制。
圖7顯示在scid beige小鼠中之HER2 KPL4腫瘤模型中隨時間推移活體內擬合之腫瘤體積變化之曲綫中抗體-藥物結合物ADC-201、ADC-104、ADC-202、ADC-105及未結合抗體hu7C2的功效。到靶ADC-201及ADC-104顯示腫瘤抑制及劑量依賴性作用。脫靶ADC-202、ADC-105及未結合抗體hu7C2顯示極少或不顯示腫瘤抑制。
圖8顯示在CRL nu/nu小鼠中之HER2 Fo5模型中隨時間推移活體內擬合之腫瘤體積變化之曲綫中抗體-藥物結合物ADC-106、ADC-18及ADC-107的功效。到靶ADC-106及ADC-108顯示腫瘤抑制及劑量依賴性作用。脫靶ADC-107顯示極少或不顯示腫瘤抑制。
圖9顯示在CB-17 Fox Chase SCID小鼠中之表現CD22之WSU-DLCL2异種移植物模型中隨時間推移活體內擬合之腫瘤體積變化之曲綫中抗體-藥物結合物ADC-104、ADC-111、ADC-112、ADC-106及ADC-113的功效。到靶ADC-104、ADC-111、ADC-112顯示腫瘤抑制及劑量依賴性作用。脫靶ADC-106及ADC-133不顯示腫瘤抑制。
圖10顯示在HCC1569X2异種移植物模型中隨時間推移活體內擬合之腫瘤體積變化之曲綫中抗體-藥物結合物的功效。Ly6E-SG3451-單醯胺具有劑量依賴性活性，其中在6及12mg/kg下生長延遲且當以18mg/kg給藥時腫瘤大約停滯。在以1及3mg/kg給藥之Ly6E-SG3451及以1、3及6mg/kg下給藥之Ly6E-SG3203-單胺情形下觀察到腫瘤消退。將Ly6E SG3451及SG3203-單胺組叢集在一起。
寡核苷酸結合/烷基化檢定
吡咯并苯并二氮呯(PBD)化合物已知除股間交聯外亦形成序列依賴性股內DNA交聯及單烷基化加合物(Rahman KM，等人(2009)J Am Chem Soc 131：13756-13766)。PBD具有對掌性C11a(S)-位置，該位置為該等PBD提供適當形狀以在DNA之小溝中牢固配合。此外，親電子N10-C11部分(亦即，可相互轉化之亞胺、甲醇胺或甲醇胺甲基醚官能基)可在其C11-位置與鳥嘌呤核鹼基之親核C2-NH2基團之間形成共價縮醛胺鍵聯。對於先前鑑別之股內及股間交聯，使用Pu-GAATG-Py>Pu-GATC-Py>>Pu-GATG-Py或Pu-GAATC-Py之序列對吡咯并苯并二氮呯化合物與具有各種長度及序列之雙鏈體形成寡核苷酸之相互作用進行研究(實施例8)。寡核苷酸結合及烷基化檢定為用於藉由HPLC分離及MS偵測評估ADC中之吡咯并苯并二氮呯藥物部分與核酸之結合潜力的簡單模型(Narayanaswamy M.等人(2008)Anal.Biochem.374：173-181)。ADC之效力及功效因此可相關且預測。單烷化劑吡咯并苯并二氮呯藥物部分可將諸如單醯胺DM-3與單胺DM-1及表1a之單烷化劑與表1b之比較二烷化劑吡咯并苯并二氮呯藥物部分諸如C-1區分開(實施例8)。
將結合/烷基化吡咯并苯并二氮呯化合物之選定寡核苷酸序列之出現頻率極高且不與其中它們出現之染色體之大小成正比。在此研究中吡咯并苯并二氮呯化合物包括來自表1a之單烷化劑吡咯并苯并二氮呯藥物部分及來自表1b之比較藥物部分。該研究顯示藥物烷基化雙股寡核苷酸的差异水準且烷基化潜力可藉由起始雙鏈體寡核苷酸Pu-GAAATC-Py及Pu-GAAATG-Py之消失準確評估，其中Pu為嘌呤核苷酸A或G且Py為嘧啶核苷酸C或T。與單胺PBD DM-1相比，單醯胺PBD DM-2(表1a)結合/烷基化雙鏈體寡核苷酸之效率低大約8倍。與單胺DM-1相比，比較二烷化劑C-1(表1b)顯示共價烷基化雙鏈體寡核苷酸之效率高2-3倍。與二聚體C-1相比，PBD單體C-2顯示在共價烷基化雙鏈體寡核苷酸中之效率低>50倍。C-1之亞胺鍵還原以形成C-3完全消除DNA結合。各種寡聚-PBD加合物係用不同烷化劑形成，藉由HPLC分離且藉由MS分析藉由質量進行 表徵。
圖11顯示在二烷化劑吡咯并苯并二氮呯(PBD)二聚體化合物CLD-1(上圖)及兩種單烷化劑吡咯并苯并二氮呯二聚體化合物單胺DM-1(中圖)及單醯胺DM-2(下圖)與DNA反應之後之推定加合物(Rahman KM,等人(2009)J Am Chem Soc 131：13756-13766)。二烷化劑PBD二聚體化合物可與DNA雙鏈體之相對股上之鳥嘌呤核鹼基的C2-NH2基團形成兩個共價連接(交聯)。單烷化劑PBD二聚體化合物可與鳥嘌呤核鹼基形成僅一個共價連接，從而影響分裂細胞之締合/解離結合及破壞的動力學。
與單胺DM-1相比，單醯胺DM-2顯示對雙鏈體寡核苷酸之結合/烷基化低8-10倍，這與其ADC在癌細胞株及活體內腫瘤异種移植物模型中之效力及功效相關。單醯胺之較低DNA烷基化水準支持具有降低毒性之功效且可展示較佳治療指數。總而言之，DNA結合/烷基化之程度與PBD類似物之功效相關且將單醯胺與單胺PBD及二烷化劑PBD區別開。PBD-ADC之最佳化治療指數(TI)可藉由調節單烷化劑之DNA結合/烷基化活性達成，且寡聚物結合/烷基化方法可用於指導具有最佳抗腫瘤功效與可接受之安全性之PBD類似物的設計及評價。
安全性/毒性性質
將本發明之抗體-藥物結合物(ADC)及比較ADC針對其安全性及毒性相關性質進行研究。
相對於相應抗HER2 hu7C2抗體ADC-201與亞胺二烷化劑(C-1)，抗HER2 hu7C2抗體ADC-108與單胺單烷化劑(LD-52)顯示在CD-1小鼠中改良之耐受性及改良之治療指數(TI)，如藉由在第0天、第7天、第14天每kg給藥(50、75、125μg(微克)之後45天內之體重變化百分比所計算。ADC-108之最大耐受劑量(MTD)為200μg/kg，而ADC-201之MTD為75μg/kg。大鼠(斯普拉格-道利)及食蟹猴中之毒性信號可包括網狀紅血球之瞬時减少、少量皮膚變色及注射部位處剝落、血管滲漏、肝酶升高、神經退化、骨髓/淋巴消耗、腎、眼部及肺觀察結果、及死亡。
初步安全性資料表明本發明之ADC相對於比較ADC之顯著益處。
醫藥調配物
本發明之治療性抗體-藥物結合物之醫藥調配物通常製備用於腸胃外投與，亦即與醫藥學上可接受之腸胃外媒劑且以單位劑量可注射形式推注、靜脉內、腫瘤內注射。將具有所要純度程度之抗體-藥物結合物(ADC)視情况與醫藥學上可接受之稀釋劑、載劑、賦形劑或穩定劑(Remington's Pharmaceutical Sciences(1980)第16版，Osol,A.Ed.)混合，呈凍乾調配物或水溶液形式。
抗體-藥物結合物治療方法
預期本發明之抗體-藥物結合物(ADC)可用於治療各種疾病或病症，例如特徵為腫瘤抗原過度表現之疾病或病症。例示性病狀或過度增生性病症包括良性或惡性實體腫瘤及血液系統病症諸如白血病及淋巴惡性腫瘤。其他包括神經元、神經膠質、星形膠質細胞、下丘腦、腺體、巨噬細胞、上皮、基質、囊胚腔、發炎性、血管生成性及免疫(包括自體免疫性)病症。
本發明之抗體-藥物結合物(ADC)可藉由適於欲治療病狀之任何途徑投與。ADC通常將腸胃外投與，亦即輸注、皮下、肌內、靜脉內、皮內、鞘內及硬膜外投與。
一般而言，欲治療之疾病或病狀為過度增生性疾病諸如癌症。在本文欲治療癌症之實例包括(但不限於)癌瘤、淋巴瘤、母細胞瘤、肉瘤及白血病或淋巴惡性腫瘤。該等癌症之更特定實例包括鱗狀細胞癌(例如上皮鱗狀細胞癌)；肺癌，包括小細胞肺癌、非小細胞肺癌、肺腺癌及肺鱗狀癌；腹膜癌；肝細胞癌(hepatocellular cancer)；胃癌(gastric/stomach cancer)，包括胃腸癌；胰腺癌；神經膠質母細胞瘤；子宮頸癌；卵巢癌；肝癌(liver cancer)；膀胱癌；肝細胞瘤(hepatoma)；乳癌；結腸癌；直腸癌；結腸直腸癌；子宮內膜或子宮癌；唾液腺癌；腎癌(kidney/renal cancer)；前列腺癌；陰門癌；甲狀腺癌；肝癌；肛門癌；陰莖癌；以及頭頸癌。
ADC化合物可用於治療之自體免疫性疾病包括風濕性病症(諸如，例如類風濕性關節炎、休格倫氏症候群(Sjögren's syndrome)、硬皮病、狼瘡諸如全身性紅斑狼瘡(SLE)及狼瘡腎炎、多發性肌炎/皮肌炎、冷球蛋白 血症、抗磷脂抗體症候群及牛皮癬性關節炎)、骨關節炎、自體免疫性胃腸及肝病症(諸如，例如發炎性腸病(例如潰瘍性結腸炎及克羅恩氏病)、自體免疫性胃炎及惡性貧血、自體免疫性肝炎、原發性膽汁性肝硬化、原發性硬化性膽管炎及乳糜瀉)、血管炎(諸如，例如ANCA相關血管炎，包括車格-施特勞斯(Churg-Strauss)血管炎、韋格納氏肉芽腫病及多發性動脉炎)、自體免疫性神經病症(諸如，例如多發性硬化、眼陣攣肌陣攣症候群、重症肌無力、視神經脊髓炎、帕金森氏病、阿茲海默氏病及自體免疫性多發性神經病變)、腎病症(諸如，例如腎小球腎炎、古德帕斯徹氏症候群(Goodpasture’s syndrome)及伯杰氏病(Berger’s disease))、自體免疫性皮膚病病症(諸如，例如牛皮癬、蕁麻疹、麻疹、尋常型天疱瘡、大疱性類天疱瘡及皮膚紅斑狼瘡)、血液病症(諸如，例如血小板减少性紫癜、血栓性血小板减少性紫癜、輸血後紫癜及自體免疫性溶血性貧血)、動脉粥樣硬化、葡萄膜炎、自體免疫性聽力疾病(諸如，例如內耳疾病及聽力損失)、白塞氏病(Behcet's disease)、雷諾氏症候群(Raynaud's syndrome)、器官移植及自體免疫性內分泌病症(諸如，例如，糖尿病相關自體免疫性疾病，諸如胰島素依賴性糖尿病(IDDM)、阿狄森氏病(Addison’s disease)及自體免疫性甲狀腺疾病(例如格雷夫斯氏病(Graves’ disease)及甲狀腺炎))。較佳該等疾病包括例如，類風濕性關節炎、潰瘍性結腸炎、ANCA相關血管炎、狼瘡、多發性硬化、休格倫氏症候群、格雷夫斯氏病、IDDM、惡性貧血、甲狀腺炎及腎小球腎炎。
為了預防或治療疾病，ADC之適當劑量將視如上所述之待治療之疾病之類型、疾病之嚴重程度及病程、投與分子是出於預防還是治療目的、先前療法、患者之臨床史及對抗體之反應及主治醫師之裁量而定。分子適合一次性或歷經一系列治療投與至患者。視疾病之類型及嚴重性而定，約1μg/kg至15mg/kg(例如0.1-20mg/kg)之分子為用於向患者投與之初始候選劑量，無論例如藉由一或多次分開投藥或藉由連續輸注。視以上提及之因素而定，一種典型每日劑量可在約1μg/kg至100mg/kg或100mg/kg以上之範圍內。欲投與至患者之ADC之例示性劑量在患者體重之約0.1至約10mg/kg之範圍內。
本發明之抗體或免疫結合物可單獨或與其他藥劑組合用於療法中。舉例而言，本發明之抗體或免疫結合物可與至少一種另外治療劑共投與。
在一些實施例中，hu7C2.v.2.2.LA抗體-藥物結合物(hu7C2 ADC)與為結合HER2之另一種抗體或免疫結合物之另一治療劑共投與。在一些實施例中，該另一治療劑為(i)結合HER2之域II之抗體或免疫結合物，及/或(ii)結合HER2之域IV之抗體或免疫結合物。在一些實施例中，該另一治療劑為(i)結合抗原決定基2C4之抗體或免疫結合物，及/或(ii)結合抗原決定基4D5之抗體或免疫結合物。
在一些實施例中，hu7C2.v.2.2.LA抗體-藥物結合物(hu7C2 ADC)與一或多種選自曲妥珠單抗(Herceptin®)、T-DM1(Kadcyla®)及帕妥珠單抗(Perjeta®)之另一治療劑共投與。在一些實施例中，hu7C2 ADC與曲妥珠單抗共投與。在一些實施例中，hu7C2 ADC與T-DM1共投與。在一些實施例中，hu7C2 ADC與帕妥珠單抗共投與。在一些實施例中，hu7C2 ADC與曲妥珠單抗及帕妥珠單抗共投與。在一些實施例中，hu7C2 ADC與T-DM1及帕妥珠單抗共投與。
在一些實施例中，另一治療劑為PD-1軸結合拮抗劑，諸如PD-L1結合拮抗劑。
以上指示之此等組合療法涵蓋組合投藥(其中兩種或兩種以上治療劑包括在同一或各別調配物中)、及分開投藥，在該情况下，投與本發明之抗體或免疫結合物可在投與另一治療劑及/或佐劑之前、同時及/或之後發生。本發明之抗體或免疫結合物亦可與放射療法組合使用。
本發明之抗體或免疫結合物(及任何另一治療劑)可藉由任何適合手段投與，包括腸胃外、肺內及鼻內投藥，且必要時，對於局部治療而言，包括病變內投藥。腸胃外輸注包括肌肉內、靜脉內、動脉內、腹膜內或皮下投藥。給藥可藉由任何適合途徑進行，例如藉由注射，諸如靜脉內或皮下注射，部分地視投藥為暫時的抑或長期的而定。本文涵蓋各種給藥時程，包括但不限於單次投藥或歷經各個時間點多次投藥、推注投藥及脉衝輸注。
本發明之抗體或免疫結合物將以符合優良醫學規範之方式調配、給藥及投與。在此情形下考慮之因素包括所治療之特定病症、所治療之特定哺乳動物、個別患者之臨床病狀、病症之病因、藥劑傳遞部位、投藥方法、投藥時程及醫學從業者已知之其他因素。抗體或免疫結合物無需但視情况與一或多種當前用於預防或治療所述病症之藥劑一起調配。此等其他藥劑之有效量視調配物中存在之抗體或免疫結合物之量、病症或治療類型及以上論述之其他因素而定。此等藥劑係通常以與本文所述相同之劑量及用如本文所述之投藥途徑，或以本文所述劑量之約1%至99%，或以憑經驗/臨床上確定為適當之任何劑量且藉由憑經驗/臨床上確定為適當之任何途徑加以使用。
對於預防或治療疾病，本發明之抗體或免疫結合物(當單獨或與一或多種其他另外治療劑組合使用時)之適當劑量將取決於欲治療疾病之類型、抗體或免疫結合物之類型、疾病之嚴重性及病程、投與抗體或免疫結合物係出於預防目的抑或治療目的、先前療法、患者之臨床病史及對抗體或免疫結合物之反應、及主治醫師之判斷。抗體或免疫結合物適合一次性或歷經一系列治療投與患者。視疾病之類型及嚴重性而定，約1μg/kg至15mg/kg(例如0.1mg/kg-10mg/kg)之抗體或免疫結合物可為用於向患者投與之初始候選劑量，無論例如藉由一或多次分開投藥或藉由連續輸注。視以上提及之因素而定，一種典型每日劑量可在約1μg/kg至100mg/kg或100mg/kg以上之範圍內。對於歷經數天或更長時間之重複投藥，視病狀而定，治療將通常持續直至出現對疾病症狀之所要抑制作用為止。抗體或免疫結合物之一種例示性劑量將在約0.05mg/kg至約10mg/kg之範圍內。因此，可向患者投與約0.5mg/kg、2.0mg/kg、4.0mg/kg或10mg/kg之一或多種劑量(或其任何組合)。此等劑量可間歇投與，例如每週或每三週(例如以使患者接受約2至約20個劑量，或例如約六個劑量之抗體)。可投與初始較高負載劑量，隨後可投與一或多個較低劑量。然而，其他劑量方案可為有用的。此療法之進展易於藉由習知技術及檢定加以監測。
製品
在本發明之另一實施例中，提供含有適用於治療上述病症之 材料的製品或「套組」。該製品包含容器及在該容器上或與該容器相伴之標簽或包裝插頁。合適之容器包括例如瓶、小瓶、注射器、泡罩包裝等。該等容器可由各種材料形成，諸如玻璃或塑膠。該容器容納可有效於治療病狀之抗體-藥物結合物(ADC)組合物且可具有無菌入口(sterile access port)(例如，容器可為靜脉輸液袋或具有可經皮下注射用注射針刺穿之塞子之小瓶)。組合物中之至少一種活性劑為ADC。標簽或包裝插頁指示該組合物用於治療所選病狀，諸如癌症。或者或另外，製品可進一步包括第二(或第三)容器，其包括醫藥學上可接受之緩衝液，諸如注射用抑菌水(BWFI)、磷酸鹽緩衝鹽水、林格氏溶液(Ringer's solution)及右旋糖溶液。其可進一步包括自商業及使用者觀點看來合乎需要之其他物質，包括其他緩衝劑、稀釋劑、過濾器、針及注射器。
實例
實例1 單烷化劑吡咯并苯并二氮呯藥物部分(表1a)之製備
(S)-7-甲氧基-8-((5-(((S)-7-甲氧基-2-亞甲基-5-側氧基-2,3,5,10,11,11a-六氫-1H-苯并[e]吡咯并[1,2-a][1,4]二氮呯-8-基)氧基)戊基)氧基)-2-亞甲基-2,3-二氫-1H-苯并[e]吡咯并[1,2-a][1,4]二氮呯-5(11aH)-酮DM-1之合成
在16℃下向(5-((5-(5-胺基-4-((S)-2-(((第三丁基二甲基矽烷基)氧基)甲基)-4-亞甲基吡咯啶-1-羰基)-2-甲氧基苯氧基)戊基)氧 基)-2-((S)-2-(((第三丁基二甲基矽烷基)氧基)甲基)-4-亞甲基吡咯啶-1-羰基)-4-甲氧基苯基)胺基甲酸第三丁酯1(0.50g，0.524mmol)於DCM(5.0mL)中的溶液添加吡啶(83mg，1.05mmol)，接著添加氯甲酸烯丙酯Alloc-Cl(95mg，0.786mmol，Sigma Aldrich，CAS編號2937-50-0)。攪拌混合物12小時。用DCM(30mL)稀釋混合物且用HCl水溶液(1N，5.0mL×2)洗滌，接著用NaHCO3水溶液(5mL×2)洗滌。濃縮有機層以得到粗產物，將粗產物藉由急驟管柱(於石油醚中之20% EtOAc溶液)純化以得到呈無色油狀之(5-((5-(5-(((烯丙氧基)羰基)胺基)-4-((S)-2-(((第三丁基二甲基矽烷基)氧基)甲基)-4-亞甲基吡咯啶-1-羰基)-2-甲氧基苯氧基)戊基)氧基)-2-((S)-2-(((第三丁基二甲基矽烷基)氧基)甲基)-4-亞甲基吡咯啶-1-羰基)-4-甲氧基苯基)胺基甲酸第三丁酯2(500mg，92%)。LCMS：(ESI,10-80,AB,1.5分鐘)，RT=1.200分鐘，m/z=1037[M+1]+。
將化合物2(500mg，0.48mmol)於HOAc/THF/H2O(6mL/3mL/2mL)中之溶液在室溫下攪拌1天。將溶液用EtOAc(60mL)稀釋，用H2O(20mL×4)、NaHCO3水溶液(20mL×2)及H2O(20mL)洗滌。將有機層經Na2SO4乾燥，過濾且在真空下濃縮以得到呈油狀之(5-((5-(5-(((烯丙氧基)羰基)胺基)-4-((S)-2-(羥甲基)-4-亞甲基吡咯啶-1-羰基)-2-甲氧基苯氧基)戊基)氧基)-2-((S)-2-(羥甲基)-4-亞甲基吡咯啶-1-羰基)-4-甲氧基苯基)胺基甲酸第三丁酯3(390g，100%)。
向化合物3(200mg，0.247mmol)於無水DCM(15mL)中之攪拌溶液中添加戴斯馬丁(Dess Martin)高碘烷(419mg，0.988mmol)。在室溫下攪拌反應混合物2小時。在0℃下，將反應用Na2SO3水溶液(30mL)淬滅，且用DCM(20mL×3)萃取。將經合併之有機層用鹽水(20mL)洗滌，經Na2SO4乾燥，過濾且濃縮。將殘餘物藉由製備型TLC(DCM/MeOH=20：1)純化以得到呈無色固體狀之(11S,11aS)-8-((5-(((11S,11aS)-10-(第三丁氧基羰基)-11-羥基-7-甲氧基-2-亞甲基-5-側氧基-2,3,5,10,11,11a-六氫-1H-苯并[e]吡咯并[1,2-a][1,4]二氮呯-8-基)氧基)戊基)氧基)-11-羥基-7-甲氧基-2-亞甲基-5-側氧基-2,3,11,11a-四氫-1H-苯并[e]吡咯并[1,2-a][1,4]二氮呯-10(5H)-甲酸烯丙酯4(80mg，40.2%)。LCMS(ESI)：RT=0.709分鐘，M-Boc-H2O+H+= 687.1。方法=5-95AB/1.5分鐘。
在0℃下攪拌化合物4(80mg，0.099mmol)於TFA(2.0mL)中之溶液0.5小時。在0℃下將該溶液逐滴添加至飽和NaHCO3溶液(120mL)。用DCM(20mL×3)萃取混合物，且經Na2SO4乾燥經合併之有機層，過濾且濃縮以得到粗(11S,11aS)-11-羥基-7-甲氧基-8-((5-(((S)-7-甲氧基-2-亞甲基-5-側氧基-2,3,5,11a-四氫-1H-苯并[e]吡咯并[1,2-a][1,4]二氮呯-8-基)氧基)戊基)氧基)-2-亞甲基-5-側氧基-2,3,11,11a-四氫-1H-苯并[e]吡咯并[1,2-a][1,4]二氮呯-10(5H)-甲酸烯丙酯5(50mg，73.5%)。
向化合物5(50mg，0.073mmol)於無水DCM(4.0mL)中之攪拌溶液中添加HOAc(13mg，0.219mmol)，接著添加NaBH3CN(23mg，0.365mmol)。在室溫下攪拌反應混合物隔夜。隨後在真空下濃縮混合物且藉由製備型TLC(DCM/MeOH=9：1)純化以得到呈無色固體狀之(11S,11aS)-11-羥基-7-甲氧基-8-((5-(((S)-7-甲氧基-2-亞甲基-5-側氧基-2,3,5,10,11,11a-六氫-1H-苯并[e]吡咯并[1,2-a][1,4]二氮呯-8-基)氧基)戊基)氧基)-2-亞甲基-5-側氧基-2,3,11,11a-四氫-1H-苯并[e]吡咯并[1,2-a][1,4]二氮呯-10(5H)-甲酸烯丙酯6(40mg，80.0%)。LCMS(ESI)：RT=3.085分鐘，M+H+=689.1。方法=10-80AB/7分鐘。
向化合物6(40mg，0.058mmol)於無水DCM(3.0mL)中之攪拌溶液中添加吡咯啶(21mg，0.29mmol)，接著添加Pd(PPh3)4(7.0mg，0.006mmol)。在室溫下在N2下攪拌反應混合物2小時。隨後在真空下濃縮混合物且藉由製備型TLC(DCM/MeOH=1：1)純化以得到呈灰白色固體狀之DM-1(12mg，35.3%)。LCMS(ESI)：RT=0.651分鐘，M+H+=587.1。方法=5-95AB/1.5分鐘。1H NMR(400MHz,DCCl3)δ 7.67(d,J=4.4Hz,1H),7.57(s,1H),7.49(s,1H),6.79(s,1H),6.04(s,1H),5.18(d,J=11.6Hz,2H),5.04(d,J=11.2Hz,2H),4.41-4.37(m,1H),4.28-4.25(m,3H),4.13-4.00(m,3H),3.98-3.95(m,2H),3.93(s,3H),3.89-3.85(m,1H),3.82(s,3H),3.54(d,J=30Hz,1H),3.34-3.28(dd,J=12.4,9.2Hz,1H),3.15-3.08(m,1H),2.96-2.86(m,2H),2.44-2.39(dd,J=15.2,6.0Hz,1H),1.95-1.90(m,4H),1.67-1.62(m,2H)。
(S)-7-甲氧基-8-((5-(((S)-7-甲氧基-2-亞甲基-5-側氧基-2,3,5,11a-四氫-1H-苯并[e]吡咯并[1,2-a][1,4]二氮呯-8-基)氧基)戊基)氧基)-2-亞甲基-2,3-二氫-1H-苯并[e]吡咯并[1,2-a][1,4]二氮呯-5,11(10H,11aH)-二酮DM-2之合成
在0℃下向((戊烷-1,5-二基雙(氧基))雙(6-((S)-2-(羥甲基)-4-亞甲基吡咯啶-1-羰基)-4-甲氧基-3,1-伸苯基))二胺基甲酸二-第三丁酯7(200mg，0.24mmol)於無水DCM(20mL)中之攪拌溶液添加DMP(610mg，1.44mmol)。在室溫下攪拌反應混合物3小時。用EtOAc(100mL)稀釋混合物，且在0℃下用Na2SO3水溶液(30mL)淬滅。將有機層用H2O(30mL×3)、NaHCO3水溶液(30mL)及H2O(30mL)洗滌，隨後經(Na2SO4)乾燥，過濾且濃縮。將殘餘物藉由製備型HPLC純化以得到呈白色固體狀之(S)-8-((5-(((11S,11aS)-10-(第三丁氧基羰基)-11-羥基-7-甲氧基-2-亞甲基-5-側氧基-2,3,5,10,11,11a-六氫-1H-苯并[e]吡咯并[1,2-a][1,4]二氮呯-8-基)氧基)戊基)氧基)-7-甲氧基-2-亞甲基-5,11-二側氧基-2,3,11,11a-四氫-1H-苯并[e]吡咯并[1,2-a][1,4]二氮呯-10(5H)-甲酸第三丁酯8(58mg，30.0%)。LCMS(ESI)：RT=0.748分鐘，M+Na+=841.4。方法=5-95AB/1.5分鐘。
在0℃下攪拌化合物8(58mg，0.07mmol)於95% TFA/H2O(2.0mL)中之溶液2小時。隨後在0℃下將該溶液逐滴添加至飽和NaHCO3溶液(120mL)。用DCM(20mL×3)萃取混合物。將經合併之有機層經Na2SO4乾燥，過濾，濃縮且藉由製備型HPLC純化以得到呈白色固體狀之DM-2(15.7mg，38%)。1H NMR(400MHz,CDCl3)δ ppm 1.65-1.73(m,2 H)1.89-2.00(m,4 H)2.77-2.89(m,1 H)2.91-3.00(m,1 H)3.08-3.19(m,1 H)3.46(d,J=16.6Hz,1 H)3.91(s,3 H)3.94(s,3 H)4.02(t,J=6.5Hz,2 H)4.06-4.19(m,2 H)4.20-4.26(m,2 H)4.30(s,2 H)4.43(d,J=15.6Hz,1 H) 5.09-5.26(m,4 H)6.41(s,1 H)6.80(s,1 H)7.43(s,1 H)7.51(s,1 H)7.71(d,J=4.5Hz,1 H)7.83(s,1 H)。
(S)-8-甲氧基-9-((5-(((S)-7-甲氧基-2-亞甲基-5-側氧基-2,3,5,11a-四氫-1H-苯并[e]吡咯并[1,2-a][1,4]二氮呯-8-基)氧基)戊基)氧基)-1,3,4,12a-四氫-6H-苯并[e][1,4]噁嗪并[4,3-a][1,4]二氮呯-6,12(11H)-二酮DM-3之合成
向4-羥基-3-甲氧基苯甲酸甲酯38(3.0g，16.5mmol)於DMF(100mL)中之溶液添加苄基溴(4.22g，24.7mmol)及K2CO3(4.56g，32.9mmol)。在100℃下攪拌反應混合物3小時。將混合物在真空中濃縮且溶解於水(50mL)中，用EtOAC(30mL×2)萃取，用NaCl(30mL)洗滌，經Na2SO4乾燥。將其濃縮且藉由二氧化矽層析(0%-30% EtOAc於石油醚中)純化以得到呈白色固體狀之4-(苄氧基)-3-甲氧基苯甲酸甲酯39(3.8g，13.5mmol，82.2%產率)。LCMS(5-95AB/1.5分鐘)：RT=0.787分鐘，[M+H]+272.9
在0℃下將39(2.0g，7.34mmol)於HOAc(5.0mL)中之溶液添加至HOAc(5.0mL)及HNO3(20.6mL，441mmol)之混合物。在20℃下攪拌反應混合物30分鐘。將混合物傾入冰水(100mL)中且pH調節至5-6。 過濾混合物，且濃縮濾液以得到呈黃色固體狀之4-(苄氧基)-5-甲氧基-2-硝基苯甲酸甲酯40(2.3g，7.25mmol，98.7%產率)。
向40(2.3g，7.25mmol)於MeOH(20mL)中之溶液添加LiOH(2.25mL，36.24mmol)於水(5mL)中之溶液。在20℃下攪拌反應混合物2小時。將混合物傾入水(50mL)中，且用EtOAc(50mL)洗滌。將水相用2M HCl pH調節至3-4，且用EtOAc(50mL×3)萃取。將其用NaCl(25mL)洗滌，經Na2SO4乾燥且在真空中濃縮以得到呈白色固體狀之粗4-(苄氧基)-5-甲氧基-2-硝基苯甲酸41(2.0g，6.59mmol，91%產率)。
向41(460.0mg，1.52mmol)及(S)-嗎啉-3-甲酸甲酯42(CAS登記號741288-31-3,Hicks,F.等人，(2013)Organic Process Research & Development,17(5)：829-837)(330mg，2.28mmol)及二异丙基乙胺DIEA(392mg，3.03mmol)於DCM(30mL)中之混合物添加HATU(865mg，2.28mmol)。在20℃下攪拌反應溶液8小時。將溶液在真空中濃縮且藉由二氧化矽層析(於石油醚中之0%-50% EtOAC溶液)純化以得到呈黃色油狀之(S)-4-(4-(苄氧基)-5-甲氧基-2-硝基苯甲醯基)嗎啉-3-甲酸甲酯43(520mg，1.21mmol，79.7%產率)。LCMS(5-95AB/1.5分鐘)：RT=0.731分鐘，[M+Na]+453.0
向NH4Cl(646mg，12.1mmol)於EtOH(20mL)及水(15mL)中之溶液添加43(520mg，1.21mmol)及鐵(539mg，9.67mmol)。在90℃下攪拌反應混合物12小時之後，將其過濾且用EtOAc(50mL×3)萃取濾液，用NaCl(20mL)洗滌，經Na2SO4乾燥且在真空中濃縮。將反應混合物藉由二氧化矽層析(於石油醚中之0%-30% EtOAc溶液)純化以得到呈白色固體狀之(S)-9-(苄氧基)-8-甲氧基-1,3,4,12a-四氫-6H-苯并[e][1,4]噁嗪并[4,3-a][1,4]二氮呯-6,12(11H)-二酮44(320mg，0.84mmol，69.7%產率)。LCMS(5-95AB/1.5分鐘)：RT=0.638分鐘，[M+H]+368.9
向44(260mg，0.71mmol)於DCM(10mL)及MeOH(1.0mL)中之溶液添加10%炭載鈀(26.0mg，0.020mmol)。在18℃下在H2(15psi)下攪拌反應混合物1小時。將反應混合物過濾且在真空中濃縮以得到呈白色固體狀之(S)-9-羥基-8-甲氧基-1,3,4,12a-四氫-6H-苯并[e][1,4]噁嗪并 [4,3-a][1,4]二氮呯-6,12(11H)-二酮45(100mg，0.359mmol，50.9%產率)。
向(11S,11aS)-8-羥基-7-甲氧基-2-亞甲基-5-側氧基-11-((四氫-2H-哌喃-2-基)氧基)-2,3,11,11a-四氫-1H-苯并[e]吡咯并[1,2-a][1,4]二氮呯-10(5H)-甲酸第三丁酯46(200mg，0.43mmol)於DMF(5.0mL)中之溶液添加K2CO3(60mg，0.43mmol)及1,5-二碘戊烷(703mg，2.17mmol)。在90℃下攪拌反應混合物12小時。將反應混合物濃縮且藉由二氧化矽層析(於石油醚中0%-50% EtOAc溶液)純化以得到呈黃色油狀之(11S,11aS)-8-((5-碘戊基)氧基)-7-甲氧基-2-亞甲基-5-側氧基-11-((四氫-2H-哌喃-2-基)氧基)-2,3,11,11a-四氫-1H-苯并[e]吡咯并[1,2-a][1,4]二氮呯-10(5H)-甲酸第三丁酯47(129mg，0.191mmol，43.9%產率)。LCMS(5-95AB/1.5分鐘)：RT=0.907分鐘，[M+H]+657.1
47(100mg，0.150mmol)、45(50.9mg，0.18mmol)及K2CO3(31.6mg，0.23mmol)於DMF(5.0mL)中之混合物。在90℃下攪拌混合物3小時。將混合物在真空中濃縮且藉由層析(0%-5% MeOH於DCM中Rf=0.4)純化以得到呈無色油狀之(11S,11aS)-7-甲氧基-8-((5-(((S)-8-甲氧基-6,12-二側氧基-3,4,6,11,12,12a-六氫-1H-苯并[e][1,4]噁嗪并[4,3-a][1,4]二氮呯-9-基)氧基)戊基)氧基)-2-亞甲基-5-側氧基-11-((四氫-2H-哌喃-2-基)氧基)-2,3,11,11a-四氫-1H-苯并[e]吡咯并[1,2-a][1,4]二氮呯-10(5H)-甲酸第三丁酯48(75mg，0.093mmol，61%產率)。
在0℃下向化合物48(75.0mg，0.090mmol)添加TFA(1.9mL)及水(0.10mL)。在17℃下攪拌混合物1小時。將反應混合物傾入飽和NaHCO3(200mL)中且用DCM(100mL×3)萃取，用鹽水(50mL)洗滌，乾燥且藉由製備型TLC(4%甲醇於DCM中Rf=0.5)純化以得到呈白色固體狀之DM-3(18.9mg，0.030mmol，32.3%產率)。LCMS(5-95AB/1.5分鐘)：RT=0.633分鐘，[M+H]+ 605.2。1H NMR(400MHz,CDCl3)δ 8.16(s,1H),7.64(d,J=4.4Hz,1H),7.43(s,1H),7.22(d,J=23.2Hz,1H),6.73(d,J=2.4Hz,1H),6.35(d,J=2.8Hz,1H),5.11(d,J=10.8Hz,2H),4.41(s,3H),4.38(s,2H),4.22(s,3H),4.05(s,3H),4.04(s,3H),4.02(s,3H),3.95-3.92(m,1H),3.86(s,1H),3.83-3.62(m,1H),3.18(s,1H),2.88(d,J=30.8Hz,1H),1.86(s,4H) 1.79-1.62(m,2H)。
(S)-7-甲氧基-8-((5-(((S)-7-甲氧基-5-側氧基-2,3,5,11a-四氫-1H-苯并[e]吡咯并[1,2-a]氮呯-8-基)氧基)戊基)氧基)-2-亞甲基-1,2,3,11a-四氫-5H-苯并[e]吡咯并[1,2-a][1,4]二氮呯-5-酮DM-5之合成
向(S)-2-(羥甲基)吡咯啶-1-甲酸第三丁酯25(3.0g，14.9mmol)於DCM(80mL)中之溶液添加戴斯馬丁高碘烷DMP(9.48g，22.4mmol)。在0℃下攪拌混合物1小時之後，向其添加Na2S2O3(50mL)/NaHCO3(50mL)及MTBE(130mL)。將有機相用水(60mL×3)洗滌且濃縮以得到呈無色油狀之(S)-2-甲醯基吡咯啶-1-甲酸第三丁酯26(2.9g，14.6mmol，97.6% 產率)。
向化合物26(2.9g，14.6mmol)及(1-重氮基-2-側氧基-丙基)膦酸二甲酯於MeOH(20mL)中之溶液添加K2CO3(6.03g，43.7mmol)。在20℃下攪拌反應混合物1小時之後，將其在真空中濃縮，藉由管柱層析(10%EtOAc於PE中)純化殘餘物以得到呈無色油狀之(S)-2-乙炔基吡咯啶-1-甲酸第三丁酯27(2.0g，10.24mmol，70.4%產率)。
向化合物27(2.0g，10.2mmol)及4-(苄氧基)-2-溴-5-甲氧基苯甲酸甲酯28(5.4g，15.4mmol)於DMF(50mL)中之溶液添加Cs2CO3(3.97g，20.5mmol)及Pd(PPh3)4(785mg，1.54mmol)。在95℃下在N2下攪拌混合物1小時。將混合物濃縮且藉由急驟管柱層析(20% EtOAc於PE中)純化以得到呈無色油狀之(S)-2-((5-(苄氧基)-4-甲氧基-2-(甲氧基羰基)苯基)乙炔基)吡咯啶-1-甲酸第三丁酯29(1.60g，2.44mmol，23.8%產率)。LCMS(5-95AB/1.5分鐘)：RT=0.994分鐘，[M+H-56]+410.0
向化合物29(2.0g，4.3mmol)於MeOH(10mL)中之溶液添加Pd/CaCO3(200.0mg，21.5mmol)。在30℃下在H2(1atm)下攪拌混合物1小時。過濾混合物且濃縮濾液以得到粗產物，將粗產物藉由急驟管柱層析(10% EtOAc於PE中)純化以得到呈白色固體狀之(S,Z)-2-(5-(苄氧基)-4-甲氧基-2-(甲氧基羰基)苯乙烯基)乙炔基)吡咯啶-1-甲酸第三丁酯30(1.0g，2.14mmol，49.8%產率)。LCMS(5-95AB/1.5分鐘)：RT=0.983分鐘，[M+Na]+490.1
向化合物30(0.9g，1.92mmol)於EtOAc(10mL)中之溶液添加HCl/EtOAc(6.0mL)。在25℃下攪拌混合物1小時之後，將其濃縮以得到呈白色固體狀之(S,Z)-4-(苄氧基)-5-甲氧基-2-(2-(吡咯啶-2-基)乙烯基)苯甲酸甲酯31(0.77g，1.90mmol，99%產率)。
向化合物31(0.77g，1.91mmol)於MeOH(30mL)中之溶液添加NaOMe(1.03g，19.06mmol)。在30℃下攪拌混合物2小時。將混合物濃縮且藉由急驟管柱層析(於PE中之25%-75% EtOAc溶液)純化以得到呈黃色油狀之(S)-8-(苄氧基)-7-甲氧基-1,2,3,11a-四氫-5H-苯并[e]吡咯并[1,2-a]氮呯-5-酮32(0.60g，1.79mmol，93.8%產率)。1H NMR(400MHz,CDCl3)δ ppm 1.89-2.11(m,3 H)2.18-2.33(m,1 H)3.59(dt,J=12.0,7.6Hz,1 H) 3.80(dt,J=11.5,5.8Hz,1 H)3.90-3.96(m,1 H)3.97(s,3 H)5.19(s,2 H)5.86(dd,J=10.0,4.8Hz,1 H)6.53(dd,J=10.0,2.0Hz,1 H)6.69(s,1 H)7.29-7.35(m,1 H)7.36-7.41(m,2 H)7.42-7.48(m,2 H)7.62(s,1 H)
向化合物32(580mg，1.73mmol)於DCM(50mL)中之溶液添加TiCl4(656mg，3.46mmol)。在30℃下攪拌混合物12小時。向混合物添加1M HCl(20mL)及EtOAc(100mL)。將有機層用水(50mL×3)洗滌且濃縮以得到呈黃色固體狀之(S)-8-羥基-7-甲氧基-1,2,3,11a-四氫-5H-苯并[e]吡咯并[1,2-a]氮呯-5-酮33(250mg，0.44mmol，25.3%產率)。
向化合物33(50.0mg，0.20mmol)於DMF(5.0mL)中之溶液添加K2CO3(42.26mg，0.31mmol)及1,5-二碘戊烷(333mg，1.0mmol)。在90℃下攪拌反應混合物3小時。將反應混合物藉由二氧化矽層析(於石油醚中之0%-50% EtOAc溶液)純化以得到呈油狀之(S)-8-((5-羥戊基)氧基)-7-甲氧基-1,2,3,11a-四氫-5H-苯并[e]吡咯并[1,2-a]氮呯-5-酮34(60mg，0.178mmol，87.6%產率)。LCMS(5-95AB/1.5分鐘)：RT=0.765分鐘，[M+H]+332.0
向化合物34(60.0mg，0.18mmol)於DCM(6.0mL)中之溶液添加三乙胺(55mg，0.54mmol)及甲烷磺醯氯MsCl(41mg，0.36mmol)。在35℃下攪拌混合物1小時之後，EtOAc(80mL)且用水(50mL×3)洗滌。濃縮有機層以得到呈無色油狀之甲烷磺酸(S)-5-((7-甲氧基-5-側氧基-2,3,5,11a-四氫-1H-苯并[e]吡咯并[1,2-a]氮呯-8-基)氧基)戊基酯35(70mg)。LCMS(5-95AB/1.5分鐘)：RT=0.679分鐘，[M+H]+410.0
向化合物35(70mg，0.17mmol)及(11S,11aS)-8-羥基-7-甲氧基-2-亞甲基-5-側氧基-11-((四氫-2H-哌喃-2-基)氧基)-2,3,11,11a-四氫-1H-苯并[e]吡咯并[1,2-a][1,4]二氮呯-10(5H)-甲酸第三丁酯36(87mg，0.19mmol)於DMF(5.0mL)中之溶液添加K2CO3(47mg，0.34mmol)及KI(5.68mg，0.030mmol)。將混合物在90℃下攪拌3小時，且藉由製備型HPLC(HCOOH)純化以得到呈白色固體狀之(11aR)-7-甲氧基-8-((5-(((S)-7-甲氧基-5-側氧基-2,3,5,11a-四氫-1H-苯并[e]吡咯并[1,2-a]氮呯-8-基)氧基)戊基)氧基)-2-亞甲基-5-側氧基-11a-((四氫-2H-哌喃-2-基)氧基)-2,3,11,11a-四氫-1H-苯并[e]吡咯并[1,2-a][1,4]二氮呯-10(5H)-甲酸第三丁酯37(70mg，0.084mmol,49.2% 產率)。LCMS(5-95AB/1.5分鐘)：RT=0.845分鐘，[M+H]+774.4
在35℃下攪拌化合物37(50mg，0.060mmol)於TFA(1.9mL)及水(0.10mL)中之溶液1小時。將混合物分配於飽和NaHCO3(30mL)與EtOAc(50mL)之間。將有機層用水(30mL×2)及鹽水(30mL)洗滌且經Na2SO4乾燥。將其濃縮且藉由製備型TLC(於DCM中5% MeOH溶液，Rf=0.5)純化以得到呈白色固體狀之DM-5(20mg，0.034mmol，53.1%產率)。LCMS(5-95AB/1.5分鐘)：RT=0.825分鐘，[M+H]+572.1。1H NMR(400MHz,CDCl3)δppm 1.65-1.75(m,3 H)1.88-2.10(m,8 H)2.19-2.31(m,1 H)2.82-3.29(m,2 H)3.60(dt,J=11.9,7.5Hz,1 H)3.81(dt,J=11.6,5.9Hz,1 H)3.86-3.91(m,1 H)3.94(s,6 H)3.97(br.s.,1 H)4.01-4.18(m,4 H)4.30(s,2 H)5.19(d,J=10.6Hz,2 H)5.89(dd,J=9.9,5.1Hz,1 H)6.53-6.63(m,1 H)6.66(s,1 H)6.81(s,1 H)7.51(s,1 H)7.59(s,1 H)7.68(d,J=4.4Hz,1 H)
實例2 單烷化劑吡咯并苯并二氮呯連接子-藥物中間物(表2A)之製備
使1,2-二(吡啶-2-基)二硫烷及2-巰基乙醇在室溫下在吡啶及甲醇中反應以得到2-(吡啶-2-基二硫烷基)乙醇。用三乙胺及乙腈中之氯甲酸4-硝基苯酯醯化得到碳酸2-(吡啶-2-基二硫烷基)乙基4-硝基苯酯9。
向1,2-雙(5-硝基吡啶-2-基)二硫烷10(1.0g，3.22mmol)於無水DMF/MeOH(25mL/25mL)中之混合物添加HOAc(0.1mL)，接著添加2-胺基乙硫醇鹽酸鹽11(183mg，1.61mmol)。在室溫下攪拌反應混合物隔夜之後，將其在真空下濃縮以移除溶劑，且用DCM(30mL×4)洗滌殘餘物以得到呈淺黃色固體狀之2-((5-硝基吡啶-2-基)二硫烷基)乙胺鹽酸鹽12(300mg，69.6%)。1H NMR(400MHz,DMSO-d 6 )δ9.28(d,J=2.4Hz,1H),8.56(dd, J=8.8,2.4Hz,1H),8.24(s,4H),8.03(d,J=8.8Hz,1H),3.15-3.13(m,2H),3.08-3.06(m,2H)
在室溫下在N2下攪拌1,2-雙(5-硝基吡啶-2-基)二硫烷10(9.6g，30.97mmol)及2-巰基乙醇(1.21g，15.49mmol)於無水DCM/CH3OH(250mL/250mL)中之溶液24小時。在真空下濃縮混合物之後，用DCM(300mL)稀釋殘餘物。添加MnO2(10g)且在室溫下攪拌混合物另外0.5小時。藉由矽膠管柱層析(DCM/MeOH=100/1至100/1)純化混合物以得到呈棕色油狀之2-((5-硝基吡啶-2-基)二硫烷基)乙醇13(2.2g，61.1%)。1H NMR(400MHz,CDCl3)δ9.33(d,J=2.8Hz,1H),8.38-8.35(dd,J=9.2,2.8Hz,1H),7.67(d,J=9.2Hz,1H),4.10(t,J=7.2Hz,1H),3.81-3.76(q,2H),3.01(t,J=5.2Hz,2H)。
向13(500mg，2.15mmol)於無水DMF(10mL)中之溶液添加DIEA(834mg，6.45mmol)，接著添加PNP碳酸酯(雙(4-硝基苯基)碳酸酯，1.31g，4.31mmol)。在室溫下攪拌反應溶液4小時且藉由製備型HPLC(FA)純化混合物以得到呈淺棕色油狀之碳酸2-((5-硝基吡啶-2-基)二硫烷基)乙基4-硝基苯酯14(270mg，33.1%)。1H NMR(400MHz,CDCl3)δ9.30(d,J=2.4Hz,1H),8.43-8.40(dd,J=8.8,2.4Hz,1H),8.30-8.28(m,2H),7.87(d,J=8.8Hz,1H),7.39-7.37(m,2H),4.56(t,J=6.4Hz,2H),3.21(t,J=6.4Hz,2H)。
(11S,11aS)-(R)-11-羥基-7-甲氧基-8-((5-(((S)-7-甲氧基-2-亞甲基-5,11-二側氧基-2,3,5,10,11,11a-六氫-1H-苯并[e]吡咯并[1,2-a][1,4]二氮呯-8-基)氧基)戊基)氧基)-2-亞甲基-5-側氧基-2,3,11,11a-四氫-1H-苯并[e]吡咯并[1,2-a][1,4]二氮呯-10(5H)-甲酸2-((5-硝基吡啶-2-基)二硫烷基)丙酯(LD-51)之合成
在0℃(冰/丙酮)下在氬氣氛圍下將硫醯氯(2.35mL之DCM 中之1.0M溶液，2.35mmol)逐滴添加至5-硝基吡啶-2-硫醇(334mg，2.14mmol)於乾燥DCM(7.5mL)中之攪拌懸浮液。反應混合物從黃色懸浮液變為黃色溶液且使其溫至室溫，隨後攪拌2小時，之後藉由在真空中蒸發移除溶劑以提供黃色固體。將固體再溶解於DCM(15mL)中且在0℃下在氬氣氛圍下用(R)-2-巰基丙-1-醇(213mg，2.31mmol)於乾燥DCM(7.5mL)中之溶液逐滴處理。使反應混合物溫至室溫且攪拌20小時，在此時藉由LC/MS分析揭示在滯留時間1.41分鐘(ES+)m/z 247([M+H]+，約100%相對强度)下之顯著產物形成。藉由過濾移除沈澱且在真空中蒸發濾液以得到橙色固體，用H2O(20mL)處理該固體且用氫氧化銨溶液鹼化。用DCM(3×25mL)萃取混合物且用H2O(20mL)、鹽水(20mL)洗滌經合併之萃取物，乾燥(MgSO4)，過濾且在真空中蒸發以得到粗產物。藉由急驟層析純化(以1%增量之梯度溶離：100% DCM至98：2 v/v DCM/MeOH)得到呈油狀之(R)-2-((5-硝基吡啶-2-基)二硫烷基)丙-1-醇15(111mg，21%產率)。
在20℃下向三光氣Cl3COCOOCCl3(Sigma Aldrich,CAS登記號32315-10-9)(241mg，0.812mmol)於DCM(10mL)中之溶液逐滴添加(R)-2-((5-硝基吡啶-2-基)二硫烷基)丙-1-醇15(500mg，2.03mmol)及吡啶(153mg，1.93mmol)於DCM(10mL)中之溶液。在20℃下攪拌反應混合物30分鐘之後，將其濃縮且(R)-2-((5-硝基吡啶-2-基)二硫烷基)氯甲酸丙酯16不經進一步純化直接用於下一步驟。
在20℃下將化合物16(626mg，2.03mmol)於DCM(10mL)中之溶液逐滴添加至(5-((5-(5-胺基-4-((S)-2-(((第三丁基二甲基矽烷基)氧基)甲基)-4-亞甲基吡咯啶-1-羰基)-2-甲氧基苯氧基)戊基)氧基)-2-((S)-2-(((第三丁基二甲基矽烷基)氧基)甲基)-4-亞甲基吡咯啶-1-羰基)-4-甲氧基苯基)胺基甲酸第三丁酯1(1.50g，1.57mmol)及吡啶(161mg，2.05mmol)之溶液。在20℃下攪拌反應混合物3小時。移除溶劑且藉由急驟管柱(EtOAc於石油醚中0%~30%)純化殘餘物以得到呈黃色泡沫狀之(2-((S)-2-(((第三丁基二甲基矽烷基)氧基)甲基)-4-亞甲基吡咯啶-1-羰基)-5-((5-(4-((S)-2-(((第三丁基二甲基矽烷基)氧基)甲基)-4-亞甲基吡咯啶-1-羰基)-2-甲氧基-5-((((R)-2-((5-硝基吡啶-2-基)二硫烷基)丙氧基)羰基)胺基)苯氧基)戊基)氧基)-4-甲氧基苯基)胺 基甲酸第三丁酯17(1.6g，83%)。LCMS(5-95AB/1.5分鐘)：RT=1.360分鐘，[M+Na]+1247.4
在20℃下向化合物17(900mg，0.734mmol)於THF/H2O(10mL/10mL)中之溶液添加HOAc(15mL)。在20℃下攪拌反應混合物24小時。用EtOAc(50mL)稀釋反應混合物且用水(2×20mL)、飽和NaHCO3水溶液(30mL)及鹽水(30mL)洗滌。將其乾燥且濃縮以得到粗產物，藉由急驟層析(DCM：MeOH=100：1~20：1)純化粗產物以得到呈黃色泡沫狀之(2-((S)-2-(羥甲基)-4-亞甲基吡咯啶-1-羰基)-5-((5-(4-((S)-2-(羥甲基)-4-亞甲基吡咯啶-1-羰基)-2-甲氧基-5-((((R)-2-((5-硝基吡啶-2-基)二硫烷基)丙氧基)羰基)胺基)苯氧基)戊基)氧基)-4-甲氧基苯基)胺基甲酸第三丁酯18(700mg，95.6%)。LCMS(5-95AB/1.5分鐘)：RT=0.978分鐘，[M+H]+ 997.6
在20℃下向化合物18(700mg，0.702mmol)於DCM(40mL)中之溶液添加戴斯馬丁高碘烷DMP 1,1,1-三(乙醯氧基)-1,1-二氫-1,2-苯碘醯-3-(1H)-酮(Sigma Aldrich,CAS登記號87413-09-0)(1.19mg，2.81mmol)。在20℃下攪拌反應混合物1小時。用NaHCO3/Na2SO3(20mL/20mL)飽和溶液淬滅反應且用DCM(3×10mL)萃取。將經合併之有機層用NaHCO3/Na2SO3(10mL/10mL)、鹽水(20mL)洗滌，乾燥且濃縮以得到(11S,11aS)-11-羥基-8-((5-(((11S,11aS)-11-羥基-7-甲氧基-2-亞甲基-10-(((R)-2-((5-硝基吡啶-2-基)二硫烷基)丙氧基)羰基)-5-側氧基-2,3,5,10,11,11a-六氫-1H-苯并[e]吡咯并[1,2-a][1,4]二氮呯-8-基)氧基)戊基)氧基)-7-甲氧基-2-亞甲基-5-側氧基-2,3,11,11a-四氫-1H-苯并[e]吡咯并[1,2-a][1,4]二氮呯-10(5H)-甲酸第三丁酯19(LCMS(5-95AB/1.5分鐘)：RT=0.912分鐘，[M+Na]+1015.3)與(S)-8-((5-(((11S,11aS)-11-羥基-7-甲氧基-2-亞甲基-10-(((R)-2-((5-硝基吡啶-2-基)二硫烷基)丙氧基)羰基)-5-側氧基-2,3,5,10,11,11a-六氫-1H-苯并[e]吡咯并[1,2-a][1,4]二氮呯-8-基)氧基)戊基)氧基)-7-甲氧基-2-亞甲基-5,11-二側氧基-2,3,11,11a-四氫-1H-苯并[e]吡咯并[1,2-a][1,4]二氮呯-10(5H)-甲酸第三丁酯20之混合物，該混合物直接用於下一步驟。
在0℃下將冷TFA(8mL)添加至19及20之粗混合物(600 mg，0.604mmol)。在0℃下攪拌反應混合物30分鐘。在0℃下將反應混合物逐滴添加至冷飽和NaHCO3水溶液(150mL)且用DCM(4×40mL)萃取。 將經合併之有機層用鹽水(50mL)洗滌，乾燥且濃縮以得到粗產物，將該粗產物藉由製備型TLC(DCM：MeOH=15：1)純化以分離呈黃色泡沫狀之純LD-51(28mg，5.2%)。LCMS：(5-95,AB,1.5分鐘)，0.739分鐘，m/z=891.2(M+1)。1H NMR(400MHz,CDCl3)δ 9.26(s,1H),8.31(d,J=6.8H,1Hz),8.18(s,1H),7.62(d,J=8.4Hz,1H),7.41(s,1H),7.18(s,1H),6.77(s,1H),6.41(s,1H),5.60(d,J=10.0Hz,1H),5.20-5.06(m,4H),4.50-3.81(m,18H),3.70-3.60(m,1H),3.50-3.40(m,1H),3.18(br,1H),2.98-2.62(m,6H),1.95-1.86(m,4H),1.70-1.52(m,2H),1.17(d,J=6.4Hz,3H)。
(11S,11aS)-(R)-11-羥基-7-甲氧基-8-((5-(((S)-7-甲氧基-2-亞甲基-5-側氧基-2,3,5,10,11,11a-六氫-1H-苯并[e]吡咯并[1,2-a][1,4]二氮呯-8-基)氧基)戊基)氧基)-2-亞甲基-5-側氧基-2,3,11,11a-四氫-1H-苯并[e]吡咯并[1,2-a][1,4]二氮呯-10(5H)-甲酸2-((5-硝基吡啶-2-基)二硫烷基)丙酯(LD-52)之合成
在0℃下向CLD-1(45mg，0.050mmol)於THF(3.0mL)中之溶液添加NaBH3CN(3mg，0.050mmol)及HOAc(0.05mL)。在0℃下攪拌混合物2分鐘。藉由製備型TLC(於DCM中7%甲醇溶液，Rf=0.5)純化反應溶液以得到呈白色固體狀之LD-52(20mg，0.022mmol，42.1%產率)。LCMS(5-95AB/1.5分鐘)：RT=0.878分鐘，[M+H]+877.2。1H NMR(400MHz,CDCl3)δ 9.19(s,1H),8.27(d,J=6.8Hz,1H),7.58(d,J=8.8Hz,1H),7.53(s,1H),7.24(s,1H),6.69(s,1H),6.02(s,1H),5.56(d,J=9.7Hz,1H),5.12(s,2H),5.05(d,J=11.2Hz,2H),4.54(br.s,1H),4.42-4.38(m,1H),4.29-4.22(m,4H),4.13-4.09(m,1H),4.02-3.39(m,8H),3.79(s,3H),3.63(t,J=8.0Hz,1H),3.53(d,J=11.9Hz,1H),3.37-3.31(m,1H),3.16-3.14(m,1H),2.94-2.88(m,2H),2.74-2.71(m,1H),2.44-2.39(m,1H),1.93-1.85(m,4H),1.66-1.56(m,2H),1.24-1.14(m,3H)
實例3 比較吡咯并苯并二氮呯連接子-藥物中間物(表2B)之製備
(11S,11aS)-11-羥基-7-甲氧基-8-((5-(((S)-7-甲氧基-2-亞甲基-5-側氧基-2,3,5,10,11,11a-六氫-1H-苯并[e]吡咯并[1,2-a][1,4]二氮呯-8-基)氧基)戊基) 氧基)-2-亞甲基-5-側氧基-2,3,11,11a-四氫-1H-苯并[e]吡咯并[1,2-a][1,4]二氮呯-10(5H)-甲酸(R)-2-((5-硝基吡啶-2-基)二硫烷基)丙酯(CLD-1)之合成
在25℃下向18(50mg，0.050mmol)於DCM(2.0mL)中之溶液添加DMP(149mg，0.35mmol)。在25℃下攪拌反應混合物2小時。將反應用DCM(5mL)稀釋且用NaHCO3/Na2SO3(2mL/2mL)之飽和溶液淬滅，且用DCM(2×5mL)萃取。將經合併之有機層用NaHCO3/Na2SO3(2mL/2mL)、鹽水(5mL)洗滌，乾燥且濃縮。藉由製備型TLC(DCM：MeOH=20：1)純化殘餘物以得到(11S,11aS)-11-羥基-8-((5-(((11S,11aS)-11-羥基-7-甲氧基-2-亞甲基-10-(((R)-2-((5-硝基吡啶-2-基)二硫烷基)丙氧基)羰基)-5-側氧基-2,3,5,10,11,11a-六氫-1H-苯并[e]吡咯并[1,2-a][1,4]二氮呯-8-基)氧基)戊基)氧基)-7-甲氧基-2-亞甲基-5-側氧基-2,3,11,11a-四氫-1H-苯并[e]吡咯并[1,2-a][1,4]二氮呯-10(5H)-甲酸第三丁酯19，其直接用於下一步驟中。LCMS：(5-95,AB,1.5分鐘)，0.830分鐘，m/z=1013.4(M+23)。
在0℃下將冷TFA(1mL)添加至19(20mg，0.020mmol)。在0℃下攪拌反應混合物20分鐘。在0℃下將反應混合物逐滴添加至冷飽和NaHCO3水溶液(20mL)且用DCM(3×15mL)萃取。將經合併之有機層用鹽水(15mL)洗滌，乾燥且濃縮以得到粗產物，藉由製備型TLC(DCM：MeOH=15：1)純化該粗產物以得到呈灰色固體狀之CLD-1(4mg，23%)。LCMS：(5-95,AB,1.5分鐘)，0.89分鐘，m/z=873.6(M+1)。1H NMR(400MHz,CDCl3)δ 9.22(s,1H),8.38(d,J=8.8Hz,1H),7.78(d,J=8.8Hz,1H),7.68(d,J=4.4Hz,1H),7.49(s,1H),7.33(s,1H),6.82(s,1H),6.77(s,1H),5.20-5.13(m,4H),4.36-4.26(m,5H),4.20-3.95(m,7H),4.89-3.70(m,8H),3.50-2.70(m,5H),2.05-1.82(m,4H),1.40-1.15(m,3H)。
(11S,11aS)-11-羥基-7-甲氧基-8-((5-(((S)-7-甲氧基-2-亞甲基-5-側氧基-2,3,5,10,11,11a-六氫-1H-苯并[e]吡咯并[1,2-a][1,4]二氮呯-8-基)氧基)戊基)氧基)-2-亞甲基-5-側氧基-2,3,11,11a-四氫-1H-苯并[e]吡咯并[1,2-a][1,4]二氮呯-10(5H)-甲酸4-((S)-2-((S)-2-(6-(2,5-二側氧基-2,5-二氫-1H-吡咯-1-基)己醯胺基)-3-甲基丁醯胺基)-5-脲基戊醯胺基)苄酯CLD-4之合成
向三光氣(156mg，0.52mmol)於DCM(20mL)中之溶液添加1(1.0g，1.05mmol)及Et3N(318mg，3.15mmol)於DCM(5.0mL)中之溶液。在0℃下攪拌混合物1小時，且濃縮以得到粗中間物，將該粗中間物添加(0.88g，1.53mmol)於DCM(20mL)中且在0℃下添加至三乙胺(310mg，3.07mmol)及6-(2,5-二側氧基-2,5-二氫-1H-吡咯-1-基)-N-((S)-1-(((S)-1-((4-(羥甲基)苯基)胺基)-1-側氧基-5-脲基戊-2-基)胺基)-3-甲基-1-側氧基丁-2-基)己醯胺MC-VC-PAB(1.0g，1.02mmol)於DMF(10mL)中之混合物中。將混合物用DCM(40mL)稀釋，用水(2×30mL)洗滌。將有機層經Na2SO4乾燥，濃縮且藉由二氧化矽層析(0%-10% MeOH於DCM中)純化以得到呈黃色固體狀之(2-((S)-2-(((第三丁基二甲基矽烷基)氧基)甲基)-4-亞甲基吡咯啶-1-羰基)-5-((5-(4-((S)-2-(((第三丁基二甲基矽烷基)氧基)甲基)-4-亞甲基吡咯啶-1-羰基)-5-((((4-((S)-2-((S)-2-(6-(2,5-二側氧基-2,5-二氫-1H-吡咯-1-基)己醯胺基)-3-甲基丁醯胺基)-5-脲基戊醯胺基)苄基) 氧基)羰基)胺基)-2-甲氧基苯氧基)戊基)氧基)-4-甲氧基苯基)胺基甲酸第三丁酯21(1.0g，0.64mmol，62.4%產率)。
向化合物21(1.0g，0.64mmol)於THF(6.0mL)中之溶液添加水(6.0mL)及乙酸(9.0mL)。在20℃下攪拌混合物12小時。向該混合物添加EtOAc(100mL)，且將有機層用水(50mL×3)及飽和NaHCO3(50mL)洗滌且濃縮以得到呈白色固體狀之(5-((5-(5-((((4-((S)-2-((S)-2-(6-(2,5-二側氧基-2,5-二氫-1H-吡咯-1-基)己醯胺基)-3-甲基丁醯胺基)-5-脲基戊醯胺基)苄基)氧基)羰基)胺基)-4-((S)-2-(羥甲基)-4-亞甲基吡咯啶-1-羰基)-2-甲氧基苯氧基)戊基)氧基)-2-((S)-2-(羥甲基)-4-亞甲基吡咯啶-1-羰基)-4-甲氧基苯基)胺基甲酸第三丁酯22(700mg，0.53mmol，82.1%產率)。
在18℃下向22(597mg，0.45mmol)於DMSO(5.0mL)中之溶液添加2-二氧碘基苯甲酸IBX(126mg，0.45mmol)。在37℃下攪拌反應混合物8小時且藉由製備型HPLC(於水中之乙腈40%-70%/0.225% FA)純化以得到呈白色固體狀之(11S,11aS)-8-((5-(((11S,11aS)-10-(((4-((S)-2-((S)-2-((6-(2,5-二側氧基-2,5-二氫-1H-吡咯-1-基)己基)胺基)-3-甲基丁醯胺基)-5-脲基戊醯胺基)苄基)氧基)羰基)-11-羥基-7-甲氧基-2-亞甲基-5-側氧基-2,3,5,10,11,11a-六氫-1H-苯并[e]吡咯并[1,2-a][1,4]二氮呯-8-基)氧基)戊基)氧基)-11-羥基-7-甲氧基-2-亞甲基-5-側氧基-2,3,11,11a-四氫-1H-苯并[e]吡咯并[1,2-a][1,4]二氮呯-10(5H)-甲酸第三丁酯水合物23(120mg，0.089mmol，19.8%產率)。
在0℃下攪拌23(100mg，0.080mmol)於TFA(4.0mL)中之溶液30分鐘，隨後添加至冷飽和NaHCO3(40mL)。將其用EtOAc(60mL×3)萃取。濃縮經合併之有機層以得到呈黃色固體狀之(11S,11aS)-11-羥基-7-甲氧基-8-((5-(((S)-7-甲氧基-2-亞甲基-5-側氧基-2,3,5,11a-四氫-1H-苯并[e]吡咯并[1,2-a][1,4]二氮呯-8-基)氧基)戊基)氧基)-2-亞甲基-5-側氧基-2,3,11,11a-四氫-1H-苯并[e]吡咯并[1,2-a][1,4]二氮呯-10(5H)-甲酸4-((S)-2-((S)-2-(6-(2,5-二側氧基-2,5-二氫-1H-吡咯-1-基)己醯胺基)-3-甲基丁醯胺基)-5-脲基戊醯胺基)苄酯24(90mg)，其直接用於下一步驟中。
向化合物24(90mg，0.070mmol)於DMF(4.0mL)中之溶液 添加三乙醯氧基硼氫化鈉(9.42mg，0.1500mmol)。氰基硼氫化鈉亦可用作還原劑。在20℃下攪拌混合物30分鐘。藉由製備型HPLC(於水中之乙腈0-40/0.1% HCl)純化所得殘餘物以得到呈白色固體狀之CLD-4(28mg，0.022mmol，29.5%產率)。LCMS：(5-95,AB,1.5分鐘)，0.832分鐘，m/z=602.7,1203.6(M+1)
實例4 藉由還原及再氧化製備用於結合之半胱胺酸工程改造抗體
輕鏈胺基酸係根據Kabat(Kabat等人，Sequences of proteins of immunological interest,(1991)第5版，US Dept of Health and Human Service,National Institutes of Health,Bethesda,MD)加以編號。重鏈胺基酸係根據EU編號系統(Edelman等人(1969)Proc.Natl.Acad.of Sci.63(1)：78-85)加以編號，除了如Kabat系統注釋之處。使用單字母胺基酸縮寫。
表現於CHO細胞中之全長半胱胺酸工程改造單株抗體(THIOMABTM)携帶半胱胺酸加合物(胱胺酸)或由於細胞培養條件而在工程改造半胱胺酸上麩胱甘肽化(glutathionylated)。因此，自CHO細胞純化之THIOMABTM不能結合於Cys-反應性連接子-藥物中間物。藉由用還原劑諸如DTT(克萊蘭德試劑(Cleland's reagent)，二硫蘇糖醇)或TCEP(參(2-羧乙基)膦鹽酸鹽；Getz等人(1999)Anal.Biochem.Vol 273：73-80；Soltec Ventures,Beverly,MA)處理，接著用溫和氧化劑諸如去氫抗壞血酸再形成鏈間二硫鍵(再氧化)，可使半胱胺酸工程改造抗體對與本發明之連接子-藥物中間物(如表2A中之所述者)結合具有反應性。將表現於CHO細胞中之全長半胱胺酸工程改造單株抗體(THIOMABTM)(Gomez等人(2010)Biotechnology and Bioeng.105(4)：748-760；Gomez等人(2010)Biotechnol.Prog.26：1438-1445)例如在50mM Tris(pH 8.0)與2mM EDTA中在室溫下用約50倍過量之DTT還原隔夜，此移除Cys及麩胱甘肽加合物以及還原該抗體中之鏈間二硫鍵。使用PLRP-S管柱，藉由逆相LCMS來監測加合物之移除。將經還原之THIOMABTM稀釋且藉由添加至至少四體積之10mM丁二酸鈉(pH 5)緩衝液而酸化。
或者，將該抗體稀釋且藉由添加至至少四體積之10mM丁二酸鹽(pH 5)且用10%乙酸滴定直到pH為大約五來酸化。隨後將pH降低 且經稀釋之THIOMABTM負載至HiTrap S離子交換管柱上，用若干管柱體積之10mM乙酸鈉(pH 5)洗滌且用50mM Tris(pH 8.0)、150mM氯化鈉溶離。藉由進行再氧化在親本Mab中存在之半胱胺酸殘基之間再形成二硫鍵。將上述經溶離、還原之THIOMABTM用15X去氫抗壞血酸(DHAA)處理約3小時或作為替代，在室溫下用200nM至2mM硫酸銅水溶液(CuSO4)處理隔夜。亦可使用此項技術中已知之其他氧化劑(oxidant)(亦即(oxidizing agent))。環境空氣氧化亦可為有效的。此溫和部分再氧化步驟以高保真度有效形成鏈內二硫鍵。使用PLRP-S管柱，藉由逆相LCMS來監測再氧化。將再氧化之THIOMABTM用如上所述之丁二酸鹽緩衝液稀釋以使pH達到約5，且如上所述進行S管柱上之純化，例外之處在於用10mM丁二酸鹽(pH 5)、含300mM氯化鈉(緩衝液B)之10mM丁二酸鹽(pH 5)(緩衝液A)之梯度進行溶離。向經溶離之THIOMABTM中添加EDTA至2mM之最終濃度且濃縮(必要時)以達到大於5mg/mL之最終濃度。將所得準備用於結合之THIOMABTM以等分試樣儲存在-20C下。在6200系列TOF或QTOF Agilent LC/MS上進行液相層析/質譜分析。將樣品在加熱至80℃之PRLP-S®，1000 A微孔管柱(50mm×2.1mm，Polymer Laboratories,Shropshire,UK)上進行層析。使用30%-40% B(溶劑A：於水中之0.05% TFA，溶劑B：於乙腈中之0.04% TFA)之綫性梯度且使用電噴霧源將溶離劑直接離子化。收集資料且藉由MassHunter軟體解迴旋。在LC/MS分析之前，在37℃下用PNG酶F(2單位/ml；PROzyme,San Leandro,CA)處理抗體或藥物結合物(50微克)2小時以移除N-連接碳水化合物。
或者，在37℃下用LysC(0.25μg/50μg(微克)抗體或結合物)部分消化抗體或藥物結合物15分鐘以得到Fab和Fc片段以用於藉由LCMS加以分析。指定且定量經解迴旋之LCMS譜中之峰。藉由計算對應於藥物結合之抗體之一或多個峰的强度相對於所觀察到之全部峰的强度之比率來計算藥物與抗體比率(DAR)。
實例5 連接子-藥物中間物與抗體之結合
在實例2之還原及及再氧化之後，用1M Tris將10mM丁二酸鹽(pH 5)、150mM NaCl、2mM EDTA中之半胱胺酸工程改造抗體 (THIOMABTM)pH調節至pH 7.5-8.5。將過量(約3莫耳至20當量)具有硫醇反應性吡啶基二硫鍵基團之連接子-藥物中間物(包括但不限於表2A中之所述者)溶解於DMF或DMA中且添加至經還原、氧化且pH調節之抗體。在室溫或37C下培育反應物且監測直到完成(1至約24小時)，如藉由反應混合物之LC-MS分析所測定。當反應完成時，藉由若干方法之一者或任何組合純化結合物，目的為移除剩餘未反應之連接子-藥物中間物及聚集蛋白質(若以顯著水準存在)。舉例而言，可用10mM組胺酸-乙酸鹽(pH 5.5)稀釋結合物直到最終pH為大約5.5，且使用連接至Akta純化系統(GE Healthcare)之HiTrap S管柱或S maxi旋轉管柱(Pierce)藉由S離子交換層析進行純化。或者，可使用連接至Akta純化系統之S200管柱或Zeba旋轉管柱藉由凝膠過濾層析純化結合物。或者，可使用滲析。使用凝膠過濾或滲析用240mM蔗糖將THIOMAB藥物結合物調配至20mM His/乙酸鹽(pH 5)中。藉由離心超濾濃縮經純化之結合物且在無菌條件下經0.2-μm過濾器過濾且冷凍儲存。藉由BCA測定表徵抗體-藥物結合物以測定蛋白質濃度，分析型SEC(尺寸排阻層析)用於聚集分析且在用離胺酸C肽鏈內切酶(LysC)處理之後LC-MS以計算DAR。
使用Shodex KW802.5管柱在0.2M磷酸鉀(pH 6.2)與0.25mM氯化鉀及15% IPA中以0.75ml/分鐘流速對結合物進行尺寸排阻層析。藉由在280nm下之溶離峰區域吸光度之積分來測定結合物之聚集狀態。
可使用Agilent QTOF 6520 ESI儀器對ADC進行LC-MS分析。作為實例，在37℃下用含1：500 w/w內切蛋白酶Lys C(Promega)之Tris(pH 7.5)處理抗體-藥物結合物30分鐘。將所得裂解片段負載到加熱至80℃之1000Å(Angstrom)8μm(微米)PLRP-S(高度交聯苯乙烯)管柱上且在5分鐘內用30% B至40% B之梯度溶離。移動相A為具有0.05% TFA之H2O且移動相B為具有0.04% TFA之乙腈。流速為0.5ml/分鐘。藉由在280nm下之UV吸光度偵測來監測蛋白質溶離，之後進行電噴霧電離及MS分析。通常達成未結合Fc片段、殘餘未結合Fab及藥物結合之Fab的層析分離。使用Mass HunterTM軟體(Agilent Technologies)解迴旋所獲得之m/z譜以計算抗體片段之質量。
藉由此等程序，製備了表3A及3B之半胱胺酸工程改造抗體藥物結合物。
實例6 活體外細胞增殖檢定
藉由采用以下方案(CELLTITER GLOTM發光細胞活力檢定，Promega Corp.Technical Bulletin TB288；Mendoza等(2002)Cancer Res.62：5485-5488)之細胞增殖檢定來量測ADC之功效。該方法為CELLTITER GLOTM發光細胞檢定之修改：
1.將100μl於培養基中含有約104個細胞(SKBR-3、BT474、MCF7或MDA-MB-468)之細胞培養物之等分試樣沈積在96孔不透明壁之板的每個孔中。
2.製備含有培養基且無細胞之對照孔。
3.將ADC添加至實驗孔且培育3-5天。
4.使板平衡至室溫大約30分鐘。
5.添加與每個孔中存在之細胞培養基之體積相等體積的CELLTITER GLOTM試劑。
6.將內容物在軌道式振蕩器上混合2分鐘以誘導細胞溶解。
7.將板在室溫下培育10分鐘以使發光信號穩定。
8.記錄發光且在圖中報導為RLU=相對發光單位。
將資料作為每組重複實驗之發光之平均值繪圖，使用標準偏差誤差條，如在圖1A-1E中觀察到。
培養基：SK-BR-3生長於50/50/10%FBS/麩胺醯胺/250μg/mL G-418 OVCAR-3生長於RPMI/20%FBS/麩胺醯胺中。
實例7 异種移植物小鼠中之腫瘤生長抑制，活體內功效
建立腫瘤且使其在第0天單一治療之前生長至150-200mm3體積(如使用測徑器所量測)。根據以下公式使用測徑器量測腫瘤體積：V(mm3)=0.5A X B2，其中A及B分別為長直徑及短直徑。在腫瘤體積達到3000mm3之前或在腫瘤顯示逼近潰爛之迹象時對小鼠實施安樂死。自每個實驗組(10只小鼠/組)收集之資料表示為平均值±SE。
將n=150只小鼠在胸乳腺脂肪墊中以0.2ml體積以懸浮於HBSS/基質膠中之300萬個細胞/小鼠接種HER2 KPL-4細胞。當腫瘤已達 到100-250mm3之平均腫瘤體積時，將它們分組到10個組中，每組8-10只小鼠。單一治療將為在第0天經由尾靜脉靜脉內投與。體積不超過0.3ml，針尺寸28或29號。
HCC1569細胞株表現Ly6E且獲自ATCC(美國菌種保存中心；Manassas,VA)，且子系HCC1569X2在Genentech產生以用於在小鼠中最佳生長。將雌性C.B-17 SCID-beige小鼠(Charles River Laboratory)各自在胸乳腺脂肪墊區域中接種懸浮於HBSS/基質膠(1：1比率)中之500萬個HCC1569X2細胞。當异種移植物腫瘤達到100-300mm3之平均腫瘤體積時(稱為第0天)，將動物隨機分入各自具有5只小鼠之組中，且經由尾靜脉接受抗體-藥物結合物之單次靜脉內注射。在整個研究期間一週1-2次量測小鼠之腫瘤及體重。當體重損失>20%其起始重量時立即對小鼠實施安樂死。在腫瘤達到3000mm3之前或在顯示逼近潰爛之迹象時對所有動物實施安樂死。使用測徑器以兩個尺寸(長度及寬度)量測腫瘤體積，且使用以下公式計算腫瘤體積：腫瘤大小(mm3)=(較長量測值×較短量測值2)×0.5(WO 2013/177055)。
采用Fo5小鼠乳腺腫瘤模型來在單劑量靜脉內注射之後且如先前所描述(Phillips GDL,Li GM,Dugger DL，等人Targeting HER2-Positive Breast Cancer with Trastuzumab-DM1,an Antibody-Cytotoxic Drug Conjugate.(2008)Cancer Res.68：9280-90)(以引用之方式併入)評價本發明之抗體-藥物結合物之活體內功效。使用Fo5模型對抗Her2 ADC進行測試，該模型為轉殖基因小鼠模型，其中人類HER2基因在鼠類乳腺腫瘤病毒病毒啟動子(MMTV-HER2)之轉錄調控下過度表現於乳腺上皮細胞中，如圖3及5中所示。HER2過度表現引起乳腺腫瘤之自發發展。此等原種轉殖基因(founder)動物(原種轉殖基因#5[Fo5])之一者之乳腺腫瘤已藉由腫瘤片段(大小約2×2mm)之連續移植而在FVB小鼠之後續世代中繁殖。所有研究皆根據實驗室動物照護及使用指南進行。每種抗體-藥物結合物(單劑量)在研究開始時及移植後14天靜脉內給藥於九隻動物中。初始腫瘤大小為約200mm3體積。在圖2-8中顯示隨時間推移藉由本發明之抗體-藥物結合物及對照進行之腫瘤生長抑制之量測值。
可如所描述(Chen等人(2007)Cancer Res 67：4924-4932)采用另一乳腺脂肪墊移植功效模型，從而在單次靜脉內劑量之後評估腫瘤體積且使用自携帶腹膜內腫瘤之小鼠切除之腫瘤，隨後連續傳代至接受體小鼠之乳腺脂肪墊中。
在5天培育之後表現CD22或Napi之細胞株中且在异種移植物小鼠中測定抗CD22及抗Napi ADC之細胞殺傷活性。
實例8 寡核苷酸結合/烷基化檢定
對於先前鑑別之股內及股間交聯(Rahman KM，等人(2009)J Am Chem Soc 131：13756-13766)，使用Pu-GAATG-Py>Pu-GATC-Py>>Pu-GATG-Py或Pu-GAATC-Py之序列對吡咯并苯并二氮呯化合物與具有各種長度及序列之雙鏈體形成寡核苷酸之相互作用進行研究，其中Pu為嘌呤核苷酸A或G且Py為嘧啶核苷酸C或T。藉由以下程序對股間G雙鏈體5’-TATAGAAATCTATA-3’及3’-ATATCTTTAGATAT-5’，及股內G雙鏈體5’-TATAGAAATGTATA-3’及3’-ATATCTTTACATAT-5’進行研究： 在37℃下將100μM之化合物與50μM雙股去氧寡核苷酸(DNA)在10mM Bis-Tris(pH 7.1)中培育1小時。在Sciex TripleTOF 5600上在Hypersil Gold C18管柱(100×2.1，1.9μM，Thermo Scientific)上藉由LC/MS/UV對樣品加以分析。以0.4mL/分鐘，藉由以下緩衝液A(50mM六氟-异丙醇及15mM二乙胺)與緩衝液B(50% A及50%之1：1甲醇：乙腈)之梯度來對管柱進行溶離：5%至25% B，8分鐘；直至75% B，5分鐘，且直至95% B，1分鐘。
實例9 食蟹獼猴中之安全性/毒性研究
在食蟹獼猴中對本發明之抗體-藥物結合物之毒性進行評價，包括由於在肺中表現所致之抗原依賴性毒性之肺作用。
研究設計：
方案：在第1天及第22天IV給藥两次以評估在2個完整週期內之毒性。第10天進入(1M/組)，在剩餘1M/2F之前10天給藥以降低急性罹病/死亡之風險。
潜在臨床觀察結果可包括皮膚發紅、皮膚黑色變色、脫落/ 脫皮、潰瘍、面部腫脹/水腫、瘦體狀態、食欲缺乏及一般瀕死狀態。
在食蟹獼猴中與抗體-藥物結合物給藥相關之潜在臨床病理學變化可包括與不充分濃縮尿組合之尿素氮及肌酸酐增加，可能與腎小管功能受損有關之鈉、氯化物及鉀之改變，肺泡變性，及血液學參數及發炎之劑量反應性變化。
主要器官毒性可包括腎、眼睛、皮膚/SQ/肌肉、骨髓、肺、淋巴器官(脾及胸腺淋巴消耗)。
病理學發現之嚴重程度之劑量依賴性增加可允許比較抗體-藥物結合物與對照化合物之安全性/毒性性質。
實例10 小鼠中之功效
在MMTV-HER2原種轉殖基因#5(鼠類乳腺腫瘤)之小鼠同種异體移植物模型或KPL4、HCC1569X2(人類乳癌)之小鼠异種移植物模型中研究抗Her2抗體-藥物結合物之功效。
MMTV-HER2原種轉殖基因#5(Fo5)模型(在Genentech發展)為轉殖基因小鼠模型，其中人類HER2基因在鼠類乳腺腫瘤病毒啟動子(MMTV-HER2)之轉錄調控下過度表現於乳腺上皮細胞中。過度表現引起過度表現人類HER2受體之乳腺腫瘤之自發發展。將來自原種轉殖基因動物(原種轉殖基因#5，Fo5)之一者之乳腺腫瘤作為大小約15-30mm3之腫瘤片段手術移植到雌性nu/nu或FVB小鼠(Charles River Laboratories)之胸乳腺脂肪墊中。
KPL4乳癌細胞株獲自Dr.J.Kurebayashi lab(日本)。HCC1569乳癌細胞株獲自ATCC(美國菌種保存中心；Manassas,VA)，且子系HCC1569X2在Genentech產生以用於在小鼠中最佳生長。兩種細胞株均表現HER2，如藉由FACS及IHC所測定。為建立該模型，將雌性C.B-17 SCID-beige小鼠(Charles River Laboratory)各自在胸乳腺脂肪墊區域中接種懸浮於HBSS/基質膠(1：1比率)中之300萬個KPL4細胞或500萬個HCC1569X2細胞。
當腫瘤達到100-300mm3之平均腫瘤體積時，將動物隨機分入各自具有5-10只小鼠之組中，且接受ADC之單次靜脉內注射(稱為第0 天)。在整個研究期間一週1-2次量測小鼠之腫瘤及體重。當體重損失>20%其起始重量時立即對小鼠實施安樂死。在腫瘤達到3000mm3之前或在顯示逼近潰爛之迹象時對所有動物實施安樂死。使用測徑器以兩個尺寸(長度及寬度)量測腫瘤體積，且使用以下公式計算腫瘤體積：腫瘤大小(mm3)=0.5×(長度×寬度×寬度)。來自此測試之資料在圖12及13中顯示。
實例11 食蟹獼猴中之毒理學
抗HER2hu7C2 LC：K149C-LD-51食蟹獼猴毒理學研究
在食蟹獼猴中進行探索性劑量遞增毒理學研究。動物接受以1mg/kg劑量水準開始之抗HER2 hu7C2 LC：K149C-LD-51之每三週(q3w)兩個至四個緩慢靜脉內推注劑量。劑量遞增2-3週交錯。研究設計概述於以下表7中。
藉由臨床及眼科檢查及臨床病理學(血液學、血清化學、凝血和尿分析；在整個研究期間大約每週)評估毒性。對在最後一個劑量之後三週尸體剖檢時收集之組織進行肉眼及顯微鏡組織病理學。
在每3週投與四個劑量之16mg/kg抗HER2 hu7C2 LC：K149C-LD-51之動物中，組織學發現通常比在16mg/kg之兩個劑量之後觀察到之所述者更嚴重。觀察到腎小管變性(輕度至中度)、淋巴消耗(胸腺、脾、淋巴結；輕度至中度)、皮膚色素沈著/過度角化(輕度)、小腸粘膜(輕度)及輕度肺泡變性/纖維增生(輕度)。
在食蟹獼猴中抗HER2 hu7C2 LC：K149C-LD-51之主要標靶 器官為腎、骨髓、皮膚、肺、淋巴器官(脾、胸腺、淋巴結)、小腸及眼睛(角膜)。作為每3週2個劑量(2X q3w)方案之最大耐受劑量(MTD)為16mg/kg，而作為每3週4個劑量(4X q3w)方案之MTD為8mg/kg。
未在猴中進行抗HER2-CLD-1之研究。然而，在食蟹獼猴中測定當結合於其他半胱胺酸工程改造抗體時CLD-1之每3週2個劑量MTD。抗NaPi2b-CLD-1之每3週2個劑量之MTD為0.5mg/kg，而非靶向結合物gD-CLD-1之每3週2個劑量之MTD為0.5mg/kg。所觀察到之類似標靶器官作用表明毒性主要為抗原依賴性的且歸因於CLD-1或LD-51。相較於CLD-1結合物，LD-51結合物之MTD增加指示相較於CLD-1，LD-51之耐受性改良。此等測試之資料在圖12及13中顯示。
實例12 C-1及DM-2大鼠毒理學研究
探索性單劑量毒理學研究在大鼠中進行，從而比較C-1(PBD雙烷化劑)及DM-2(PBD單烷化劑)游離藥物。動物接受C-1、DM-2或媒劑之單次靜脉劑量且監測7天恢復期。研究設計概述於以下表8中。
藉由臨床觀察結果及臨床病理學(劑量後72及168小時之血液學及臨床化學)評估毒性。一般而言，對於DM-2，結果與十倍劑量水準之C-1類似。對於C-1，在所有劑量下在72小時觀察到網狀紅血球之劑量依賴性减少，到劑量後168小時在0.05及0.1mg/kg組中恢復。在0.2mg/kg劑量下，觀察到指示肝及腎毒性之臨床病理學變化。0.05及0.1mg/kg良好耐受，無臨床徵象。
DM-2之0.5及1mg/kg劑量水準良好耐受，未產生臨床徵象或早期安樂死。投與2mg/kg之動物自第2天至第4天損失大約14%之其 體重且在第4天在瀕死狀態下實施安樂死。在劑量後72小時在DM-2之全部劑量下觀察到網狀紅血球之劑量依賴性减少，其到劑量後168小時在0.5及1mg/kg組中恢復。在2mg/kg劑量下，觀察到指示肝及腎毒性之臨床病理學變化。
總之，由單劑量之C-1或DM-2產生之毒性概况類似，其中C-1之效力為DM-2之效力大約十倍。兩種測試品之主要標靶器官為骨髓、腎及肝。作為大鼠中之單次靜脉內劑量，C-1及DM-2之MTD分別為0.1及1mg/kg。此研究之結果指示相較於C-1，DM-2之耐受性改良。
實例13 HER2陽性乳癌細胞株SK-BR-3及KPL-4中之活體外活性
將細胞塗鋪於96孔板中且使其在37℃下在5% CO2之含濕氣氛圍中粘著隔夜。隨後移除培養基且藉由含各種濃度之每種藥物之新鮮培養基替換。在藥物投與之後5天將Cell Titer-Glo(Promega Corp.)添加至孔且使用EnVision多標記板讀取器(PerkinElmer)量測發光信號。所測試之化合物為抗HER2 hu7C2 LC：K149C CLD-7；抗HER2 hu7C2 LC：K149C CLD-8；抗HER2 hu7C2 LC：K149C CLD-9；及抗HER2 hu7C2 LC：K149C LD-51
CLD-8
來自此測試之資料在圖14及以下表9中顯示。
實例14 活體內小鼠同種异體移植物功效
在MMTV-HER2原種轉殖基因#5(鼠類乳腺腫瘤)之小鼠同種异體移植物模型中研究抗Her2抗體-藥物結合物(ADC)之功效。MMTV-HER2原種轉殖基因#5(Fo5)模型(在Genentech發展)為轉殖基因小鼠模型，其中人類HER2基因在鼠類乳腺腫瘤病毒啟動子(MMTV-HER2)之轉錄調控下過度表現於乳腺上皮細胞中。過度表現引起過度表現人類HER2受體之乳腺腫瘤之自發發展。來自該等原種轉殖基因動物(原種轉殖基因#5，Fo5)之一者之乳腺腫瘤已藉由腫瘤片段之連續移植而在FVB小鼠(Charles River Laboratories)中繁殖。
對於功效研究，將Fo5轉殖基因乳腺腫瘤作為大小大約15-30mm3之腫瘤片段手術移植到雌性nu/nu小鼠(Charles River Laboratories；Hollister,CA)之胸乳腺脂肪墊中。當同種异體移植物腫瘤達到100-300mm3之平均腫瘤體積時(稱為第0天)，將動物隨機分入各自具有7只小鼠之組中，且接受ADC之單次靜脉內注射。在整個研究期間一週1-2次量測小鼠之腫瘤及體重。當體重損失>20%其起始重量時立即對小鼠實施安樂死。在腫瘤達到3000mm3之前或在顯示逼近潰爛之述象時對所有動物實施安樂死。使用測徑器以兩個尺寸(長度及寬度)量測腫瘤體積，且使用以下公式計算腫瘤體積：腫瘤大小(mm3)=0.5×(長度×寬度×寬度)。來自此研究之資料在圖15中顯示。當相較於媒劑組時，在4種抗Her2 ADC中，僅抗Her2-LD-51展現明顯抗腫瘤活性。抗Her2-LD-51之功效為標靶依賴性的，因為相應非標靶對照抗CD22-LD-51對腫瘤生長沒有影響。
實例15 DM-4、C-1、C-2、C-3、CLD-2、CLD-3、CLD-5及CLD-6之合成
用於製備C-1、C-2、C-3及CLD-2之合成程序可在以下文件中找到：C-1：Journal of Medicinal Chemistry(2004),47(5),1161-1174；C-2：Bioorganic & Medicinal Chemistry LLetters(2000),10(16),1845-1847或PCT國際申請案WO 2000012508；C-3：PCT國際申請案WO 2015155753；及CLD-2 US 20160074527。
CLD-7之合成
流程
實驗
向三光氣(60.6mg，0.200mmol)於DCM(15mL)中之溶液添加吡啶(129mg，1.63mmol)及2(55.3mg，0.220mmol)於DCM(15mL)中之溶液。在0℃下攪拌混合物10分鐘，TLC(於石油醚中之25% EtOAc溶液，Rf=0.5)顯示起始物質消耗。將混合物濃縮至乾且溶解於DCM(10mL)中，且添加至化合物1(150.0mg，0.200mmol)及Et3N(103.3mg，1.02mmol)於DCM(15mL)中之溶液。在0℃下攪拌混合物1小時。TLC(於石油醚中之50% EtOAc溶液)顯示起始物質消耗。濃縮混合物，且藉由二氧化矽急驟管柱層析(於石油醚中之0%-33% EtOAc溶液)純化粗物質。將其濃縮以得到呈黃色固體狀之3(180.0mg，81%)。LCMS(5-95AB/1.5分鐘)：RT=1.014分鐘，[M+H]+1007.1。
實例向HOAc(5.0mL，87mmol)於THF(3.0mL)與水(3.0mL)之混合物中之溶液添加3(150.0mg，0.1500mmol)。在40℃下攪拌反應溶液16小時。濃縮溶液以移除溶劑，且將殘餘物用EtOAc(100mL)稀釋，用H2O(30mL×4)洗滌，經Na2SO4乾燥，過濾且濃縮。藉由製備型TLC(於DCM中之5% MeOH溶液，R f =0.5)純化殘餘物以得到呈黃色固體狀之4(100mg，75%)。LCMS(5-95AB/1.5分鐘)：RT=0.776分鐘，[M+H]+893.2。
向DMP(22.8mg，0.0500mmol)於無水DCM(10.0mL)中之 溶液添加化合物4(40.0mg，0.0400mmol)。在18℃下攪拌反應混合物1小時。用DCM(50mL)稀釋混合物，過濾。將濾液用Na2SO3(30mL×3)洗滌，經Na2SO4乾燥，過濾且在真空中濃縮。藉由製備型TLC(於DCM中之5% MeOH溶液，R f =0.5)純化殘餘物以得到呈黃色固體狀之CLD-7(GNT_B343_867-1)(20mg，50%)。LCMS(5-95AB/1.5分鐘)：RT=0.761分鐘，[M+H]+ 891.0顯示96%之所要產物。HPLC(10-80AB/15分鐘)：RT=8.40分鐘顯示94.9%之所要產物。
CLD-8之合成
流程
實驗
向化合物1(40.0mg，0.190mmol)於THF(5.0mL)/水(5.0mL)中之溶液添加TCEP(277.9mg，0.970mmol)。在16℃下攪拌反應混合物48小時。將溶液用H2O(10mL)稀釋，用DCM(20mL×3)萃取。將經合併之有機層經Na2SO4乾燥，過濾且直接用於下一步驟中。
向化合物2(40.0mg，0.380mmol)於DCM(25mL)與MeOH(25mL)之混合物中之溶液添加化合物3(238.3mg，0.770mmol)。在16℃下攪拌反應溶液16小時，且添加MnO2(500mg)，且攪拌混合物0.5小時。過濾混合物且在真空中濃縮濾液。將殘餘物用MeOH(5mL)稀釋，再次過濾以移除大部分剩餘化合物3，將濾液濃縮且藉由製備型TLC(於石油醚中之33% EtOAc溶液，R f =0.5)純化以得到呈無色油狀之化合物4(50mg，0.157mmol，40.8%產率)。LCMS(5-95AB/1.5分鐘)：RT=0.805分鐘，[M+H]+ 258.9顯示81%之DP。
向三光氣(64.6mg，0.220mmol)及4Å MS(30mg)於無水DCM(8mL)中之攪拌混合物緩慢添加化合物5(160.0mg，0.220mmol)及三乙胺(110.1mg，1.09mmol)於無水DCM(8mL)中之溶液。在16℃下攪拌反應混合物1小時，且在真空中濃縮混合物以移除溶劑。將其溶解於無水DCM(10.0mL)中且添加三乙胺(65.8mg，0.650mmol)，接著添加化合物4(50.0mg，0.190mmol)於無水DCM(5.0mL)中之溶液。在16℃下攪拌反應混合物16小時。過濾混合物，濃縮濾液且藉由製備型TLC(於DCM中之10% MeOH溶液，R f =0.8)純化以得到呈黃色固體狀之化合物6(100mg，0.0814mmol，37.6%產率)。LCMS(5-95AB/1.5分鐘)：RT=1.119分鐘，[M+H]+1019.4顯示83%之所要產物。
在16℃下攪拌化合物6(100.0mg，0.1000mmol)於乙酸(3.0mL)、THF(2.0mL)及水(1.0mL)之混合物中之溶液48小時。在真空中濃縮溶液，且將殘餘物用DCM(30mL)稀釋，用H2O(20mL×3)洗滌，乾燥，過濾且濃縮。藉由製備型TLC(於DCM中之10% MeOH溶液，R f =0.5)純化 殘餘物以得到呈黃色固體狀之化合物7(55mg，0.0602mmol，61.3%產率)。LCMS(5-95AB/1.5分鐘)：RT=0.892分鐘，[M+H]+ 905.2顯示99%之所要產物。
向化合物7(55mg，0.060mmol)及4Å MS(30mg)於無水DCM(6.0mL)中之混合物添加DMP(44.0mg，0.104mmol)。在16℃下攪拌反應混合物1小時。將混合物用EtOAc(30mL)稀釋，用飽和Na2SO3溶液(30mL)淬滅，且用EtOAc(30mL×3)萃取。將經合併之有機層經Na2SO4乾燥，過濾且濃縮。藉由製備型TLC(於DCM中之10% MeOH溶液，R f =0.5)純化殘餘物以得到呈淺黃色固體狀之CLD-8(GNT_B343_866-1)(42mg，77%產率)。LCMS(5-95AB/1.5分鐘)：RT=0.868分鐘，[M+H]+ 903.2顯示98%之所要產物。
CLD-9之合成
流程
實驗
向化合物2(2383mg，7.68mmol)於DCM(10mL)/MeOH(10mL)中之溶液添加化合物1(300mg，3.84mmol)。在16℃下攪拌溶液2小時。將MnO2(5.0g)添加至溶液，在16℃下攪拌混合物30分鐘。過濾混合物且在真空中濃縮濾液，且用MeOH(15mL)洗滌殘餘物，過濾且濃縮。藉由二氧化矽急驟管柱層析(DCM)純化粗產物以得到呈油狀之化合物3(800mg，3.25mmol，84.8%產率)。LCMS(5-95AB/1.5分鐘)：RT=0.608分鐘，[M+H]+ 232.8。
在0℃下將於無水DCM(5.0mL)中之化合物3(65.0mg，0.280mmol)及吡啶(88.5mg，1.12mmol)逐滴添加至無水DCM(5.0mL)中之三光氣(41.5mg，0.140mmol)溶液。在0℃下攪拌溶液10分鐘，且濃縮混合物以得到呈白色固體之粗化合物4，該粗化合物用於下一步驟。
向化合物5(4000mg，5.84mmol)於無水DCM(80mL)中之溶液添加咪唑(2.38g，35.1mmol)，接著添加TBSCl(1.761g，11.7mmol)。在40℃下攪拌反應混合物3小時。將混合物用DCM(100mL)稀釋，用H2O(50mL×3)洗滌，經Na2SO4乾燥，過濾且濃縮。藉由二氧化矽急驟管柱層析(於DCM中之0%-3.3% MeOH溶液)純化殘餘物以得到呈淺黃色固體狀之化合物6(2.50g，3.13mmol，53.6%產率)。
LCMS(5-95AB/1.5分鐘)：RT=0.945分鐘，[M+H]+ 799.2。
向化合物6(2.30g，2.88mmol)於無水DCM(100mL)中之溶液添加DMP(4.88g，11.52mmol)。在10℃下攪拌反應混合物2小時。將其過濾，將濾液用EtOAc(600mL)稀釋，用飽和Na2SO3溶液(200mL)、飽和Na2SO3/NaHCO3溶液(v/v=1：1，200mL)及鹽水淬滅。將有機層經Na2SO4乾燥，過濾且濃縮以得到粗油狀物，將該粗油狀物溶解於tBuOH(40mL，2.88mmol)/水(20mL)中，且隨後在10℃下用2-甲基-2-丁烯(30mL，2.88mmol)及磷酸二氫鈉(1.382mg，11.5mmol)連續處理。將其在10℃下攪拌0.5小時之後，將反應混合物與亞氯酸鈉(1.56g，17.3mmol)在10℃下攪拌1小時。將混合物用EtOAc(300mL)稀釋，且用水(100mL)及鹽水(100mL)洗滌。將有機層經Na2SO4乾燥，過濾且在真空中濃縮以得到呈粗產物之化合物7(2.0g，2.46mmol，85.5%產率)。LCMS(5-95AB/1.5分鐘)：RT=0.929分鐘，[M+H]+ 813.2。
向化合物7(2.0g，2.46mmol)於DMF(20mL)中之溶液添加K2CO3(680mg，4.92mmol)，接著添加MeI(3.95g，27.8mmol)。在10℃下攪拌反應混合物1小時。將混合物用EtOAc(200mL)稀釋，用鹽水(40mL×5)洗滌，隨後經Na2SO4乾燥，過濾且在真空中濃縮以得到呈黃色油狀之化合物8(2.0g，2.42mmol，98.3%產率)。LCMS(5-95AB/1.5分鐘)：RT=0.975分鐘，[M+H]+ 827.2。
向化合物8(2.0g，2.42mmol)及鐵(1.35g，24.2mmol)於EtOH(20mL)/水(10mL)中之混合物添加NH4Cl(2.59g，48.7mmol)。在70℃下攪拌反應混合物2小時。過濾混合物，在真空中濃縮濾液以移除 EtOH，且用EtOAc(50mL×3)萃取水漿液。將經合併之EtOAc層經Na2SO4乾燥，過濾，濃縮且藉由二氧化矽急驟管柱層析(於DCM中之3%-5% MeOH溶液，Rf=0.5)純化以得到呈黃色固體狀之化合物9(1.5g，1.89mmol，78.1%產率)。LCMS(5-95AB/1.5分鐘)：RT=0.845分鐘，[M+H]+ 735.3。
向化合物9(100mg，0.140mmol)及DIEA(68.8mg，0.680mmol)於DCM(15mL)中之溶液添加化合物4(80.2mg，0.270mmol)，且在0℃下攪拌反應1小時。濃縮混合物且藉由二氧化矽急驟管柱層析(於DCM中之0%-5% MeOH溶液，Rf=0.5)純化殘餘物以得到呈黃色油狀之化合物10(130mg，0.117mmol，85.8%產率)。LCMS(5-95AB/1.5分鐘)：RT=0.985分鐘，[M+H]+ 993.4
向乙酸(6.0mL，105mmol)於THF(6.0mL)/水(3.0mL)中之溶液添加化合物10(130mg，0.130mmol)。在40℃下攪拌反應溶液24小時。在真空中濃縮溶液以移除溶劑，將殘餘物用EtOAc(30mL)稀釋，用H2O(10mL×4)洗滌，經Na2SO4乾燥，過濾且在真空中濃縮。藉由製備型TLC(於DCM中之8% MeOH溶液，R f =0.5)純化殘餘物以得到呈黃色油狀之化合物11(60mg，0.0683mmol，52.2%產率)。LCMS(5-95AB/1.5分鐘)：RT=0.763分鐘，[M+H]+ 879.0
向化合物11於無水DCM(5mL)中之溶液添加DMP(17.4mg，0.0400mmol)。在18℃下攪拌反應混合物1小時。用DCM(50mL)稀 釋混合物，過濾。將濾液用Na2SO3(30mL×3)洗滌，經Na2SO4乾燥，過濾且在真空中濃縮。藉由製備型TLC(於DCM中之5% MeOH溶液，Rf=0.5)純化粗產物以得到呈淺黃色固體狀之CLD-9(GNT_B343_865-1)(12.2mg，0.0136mmol，39.9%產率)。LCMS(5-95AB/1.5分鐘)：RT=0.739分鐘，[M+H]+ 877.2
DM-4之合成
流程
實驗
向化合物1(3.0g，14.9mmol)於DCM(80mL)中之溶液添加DMP(9.48g，22.4mmol)。在0℃下攪拌混合物1小時後，將其用Na2S2O3(50mL)/NaHCO3(50mL)及MTBE(130mL)稀釋。將有機相用水(60mL×3)洗滌且濃縮以得到呈無色油狀之化合物2(2.9g，14.6mmol，97.6%產率)。
向化合物2(2.9g，14.6mmol)及(1-重氮基-2-側氧基-丙基)膦酸二甲酯於MeOH(20mL)中之溶液添加K2CO3(6.03g，43.7mmol)。在20℃下攪拌反應混合物1小時後，將其在真空中濃縮，且藉由二氧化矽急驟管柱層析(於PE中之10%EtOAc溶液)純化殘餘物以得到呈無色油狀之產物化合物3(2.0g，10.24mmol，70.4%產率)。
向化合物3(2.0g，10.2mmol)及化合物4(5.4g，15.4mmol)於DMF(50mL)中之溶液添加Cs2CO3(3.97g，20.5mmol)及Pd(PPh3)4(785mg，1.54mmol)。在95℃下在N2下攪拌混合物1小時。濃縮混合物且藉由二氧化矽急驟管柱層析(於PE中之20% EtOAc溶液)純化以得到呈無色油狀之產物化合物5(1.60g，2.44mmol，23.8%產率)。
LCMS(5-95AB/1.5分鐘)：RT=0.994分鐘，[M+H-56]+410.0。
向化合物5(2.0g，4.3mmol)於MeOH(10mL)中之溶液添加Pd/CaCO3(200.0mg，21.5mmol)。在30℃下在H2(1atm)下攪拌混合物1小時。過濾混合物且濃縮濾液以得到粗產物，藉由二氧化矽急驟管柱層析(於PE中之10% EtOAc溶液)純化該粗產物以得到呈白色固體狀之產物化合物6(1.0g，2.14mmol，49.8%產率)。LCMS(5-95AB/1.5分鐘)：RT=0.983分鐘，[M+Na]+490.1。
向化合物6(0.90g，1.92mmol)於EtOAc(10mL)中之溶液添加HCl/EtOAc(6.0mL)。在25℃下攪拌混合物1小時之後，將其濃縮以得到呈白色固體狀之粗產物化合物7(0.77g，1.90mmol，99%產率)。
向化合物7(0.77g，1.91mmol)於MeOH(30mL)中之溶液添加NaOMe(1.03g，19.06mmol)。在30℃下攪拌混合物2小時。濃縮混合物且藉由二氧化矽急驟管柱層析(於PE中之25%-75%EtOAc溶液)純化以得到呈黃色油狀之產物化合物8(0.60g，1.79mmol，93.8%產率)。1H NMR(400MHz,CDCl3)δ ppm 1.89-2.11(m,3 H)2.18-2.33(m,1 H)3.59(dt,J=12.0,7.6Hz,1 H)3.80(dt,J=11.5,5.8Hz,1 H)3.90-3.96(m,1 H)3.97(s,3 H)5.19(s,2 H)5.86(dd,J=10.0,4.8Hz,1 H)6.53(dd,J=10.0,2.0Hz,1 H)6.69(s,1 H)7.29-7.35(m,1 H)7.36-7.41(m,2 H)7.42-7.48(m,2 H)7.62(s,1 H)
向化合物8(580mg，1.73mmol)於DCM(50mL)中之溶液添加TiCl4(656mg，3.46mmol)。在30℃下攪拌混合物12小時。向混合物添加HCl(1.0M，20mL)及EtOAc(100mL)。將有機層用水(50mL×3)洗滌且濃縮以得到呈黃色固體狀之粗產物化合物9(250mg，0.44mmol，25.3%產率)。
向化合物9(50.0mg，0.20mmol)於DMF(5.0mL)中之溶液 添加K2CO3(42.26mg，0.31mmol)及1,5-二碘戊烷(333mg，1.0mmol)。在90℃下攪拌反應混合物3小時。藉由二氧化矽管柱層析(於石油醚中之0%-50%EtOAC溶液)純化反應混合物以得到呈油狀之化合物10(60mg，0.178mmol，87.6%產率)。LCMS(5-95AB/1.5分鐘)：RT=0.765分鐘，[M+H]+332.0
向化合物10(60.0mg，0.18mmol)於DCM(6.0mL)中之溶液添加三乙胺(55mg，0.54mmol)及MsCl(41mg，0.36mmol)。在35℃下攪拌混合物1小時之後，將其用EtOAc(80mL)稀釋且用水(50mL×3)洗滌。濃縮有機層以得到呈無色油狀之粗產物(70mg)。LCMS(5-95AB/1.5分鐘)：RT=0.679分鐘，[M+H]+410.0
向化合物11(70mg，0.17mmol)及化合物12(87mg，0.19mmol)於DMF(5.0mL)中之溶液添加K2CO3(47mg，0.34mmol)及KI(5.68mg，0.030mmol)。在90℃下攪拌混合物3小時，且藉由製備型HPLC(HCOOH)純化以得到呈白色固體狀之產物化合物13(70mg，0.084mmol，49.2%產率)。LCMS(5-95AB/1.5分鐘)：RT=0.845分鐘，[M+H]+774.4。
在35℃下攪拌化合物13(50mg，0.060mmol)於TFA(1.9mL)及水(0.10mL)之混合物中之溶液1小時。將混合物分配於飽和NaHCO3(30mL)與EtOAc(50mL)之間。將有機層用水(30mL×2)、鹽水(30mL)洗滌且 經Na2SO4乾燥。將其濃縮且藉由製備型TLC(於DCM中5% MeOH溶液，Rf=0.5)純化以得到呈白色固體狀之產物DM-4(GNT_B343_655-1)(20mg，0.034mmol，53.1%產率)。LCMS(5-95AB/1.5分鐘)：RT=0.825分鐘，[M+H]+572.1。1H NMR(400MHz,CDCl3)δppm 1.65-1.75(m,3H)1.88-2.10(m,8H)2.19-2.31(m,1H)2.82-3.29(m,2H)3.60(dt,J=11.9,7.5Hz,1H)3.81(dt,J=11.6,5.9Hz,1H)3.86-3.91(m,1H)3.94(s,6H)3.97(br.s.,1H)4.01-4.18(m,4H)4.30(s,2H)5.19(d,J=10.6Hz,2H)5.89(dd,J=9.9,5.1Hz,1H)6.53-6.63(m,1H)6.66(s,1H)6.81(s,1H)7.51(s,1H)7.59(s,1H)7.68(d,J=4.4Hz,1H)
CLD-3之合成
流程
實驗
在0℃下向化合物6(5.00g，37.83mmol)及Et3N(11.49g，113.50mmol)於DCM(100mL)中之溶液逐滴添加MsCl(8.97g，78.32mmol)。在25℃下在N2下攪拌其2小時之後，將反應混合物傾入冰水(200mL)中，且用DCM(100mL×2)萃取。將有機相用鹽水洗滌，經Na2SO4乾燥且在真空中濃縮以得到呈黃色油狀之粗產物(7.0g，95%)。將其與KSAc(6.59g，57.66mmol)在丙酮/水(50mL/50mL)中混合且在25℃下攪拌10小時。濃縮反應混合物且藉由二氧化矽急驟管柱層析(PE/EtOAc=100/1~40/1)純化以得到呈黃色油狀之純化合物8(1.0g，14.6%)。
在0℃下在N2下向LiAlH4(692mg，18.23mmol)於THF(20mL)中之懸浮液添加化合物8(867mg，4.56mmol)於THF(5mL)中之溶液。在75℃下在回流下攪拌反應混合物2小時。在0℃下藉由EtOAc(3.0mL)及HCl溶液(2.0M，5mL)淬滅反應混合物。該反應混合物直接用於下一步驟。
在25℃下向化合物10(2.84g，9.12mmol)於DCM/MeOH(25mL/25mL)中之溶液添加化合物9之溶液(來自以上步驟)。在25℃下攪拌混合物10小時。向反應混合物添加MnO2(3.4g，39.6mmol)且過濾。在真空中濃縮濾液且藉由二氧化矽急驟管柱層析(DCM)及SFC純化以得到呈黃色油狀之化合物2(0.80g，67.4%)。LCMS(5-95 AB,1.5分鐘)：RT=1.020分鐘，M+H+=260.9。
在0℃下向三光氣(46mg，0.16mmol)於DCM(3.0mL)中之溶液逐滴添加化合物2(100mg，0.38mmol)及吡啶(30mg，0.38mmol)於DCM(3mL)中之溶液。在0℃下攪拌反應混合物15分鐘，且在26℃下逐滴添加至化合物1(280mg，0.29mmol)及吡啶(30mg，0.38mmol)於DCM(4.0mL)中之溶液。在26℃下攪拌反應混合物2小時。移除溶劑且藉由製備型TLC(溶劑：於石油醚中之30%EtOAc溶液)純化殘餘物以得到呈黃色泡沫狀之化合物3(300mg，82.4%)。LCMS(5-95AB/1.5分鐘)：RT=1.248分鐘，[M+H]+1239.5
在26℃下向化合物3(312mg，0.24mmol)於THF/H2O(4mL/4mL)中之溶液添加HOAc(6.0mL)。在26℃下攪拌反應混合物24小時之後，將其用EtOAc(20mL)稀釋且用水(2×10mL)、飽和NaHCO3水溶液(15mL)及鹽水(15mL)洗滌。將其乾燥、濃縮且藉由二氧化矽急驟管柱層析(於DCM中之0%-5% MeOH溶液)純化以得到呈黃色泡沫狀之化合物4(240mg，97.1%)。LCMS(5-95AB/1.5分鐘)：RT=0.876分鐘，[M+H]+ 1011.3。
在0℃下向化合物4(101mg，0.10mmol)於DCM(5.0mL)中之溶液添加DMP(125mg，0.29mmol)。在26℃下攪拌反應混合物2小時。用NaHCO3/Na2SO3(2.0mL/2.0mL)之飽和溶液淬滅反應且用DCM(3×5mL)萃取。將經合併之有機層用NaHCO3/Na2SO3(2mL/2mL)、鹽水(5mL)洗滌，乾燥且濃縮。藉由製備型TLC(DCM/MeOH=15：1)純化殘餘物以得到呈黃色泡沫狀之化合物5(66mg，66.2%)。LCMS(5-95AB/1.5分鐘)：RT=0.815分鐘，[(M-100)/2+Na]+ 476.1
在0℃下將冷TFA(於水中之95%溶液，2.0mL)添加至化合物5(66mg，0.06mmol)。在0℃下攪拌反應混合物30分鐘。在0℃下將反應混合物逐滴添加至冷飽和NaHCO3水溶液(4.0mL)且用DCM(4×8.0mL)萃取。將經合併之有機層用鹽水(20mL)洗滌，乾燥且濃縮以得到粗產物，將該粗產物藉由製備型TLC(於DCM中之6.25% MeOH溶液，Rf=0.5)純化以得到呈黃色泡沫狀之CLD-3(GNT_B343_427-1)(27.4mg，47.4%)。1H NMR(400MHz,CDCl3)δ 9.21(s,1H),8.38-8.35(m,1H),7.79(d,J=8.8Hz,1H),7.69(d,J=4.4Hz,1H),7.47(s,1H),7.17(s,1H),6.80(s,1H),6.50(s,1H),5.57(d,J=9.2Hz,1H),5.20-5.13(m,4H),4.29-4.25(m,5H),4.14-4.09(m.4H),3.96-3.87(m,8H),3.38(d,J=8.0Hz,1H),3.58(d,J=8.0Hz,2H),3.44(s,1H),3.16-3.09(m,1H),2.97-2.89(m,3H),2.71-2.67(m,1H),1.95-1.91(m,6H),1.45-1.22(m,3H)。LCMS(5-95AB/1.5分鐘)：RT=0.750分鐘，[M+H]+ 889.8。
CLD-5之合成
(11S,11aS)-11-羥基-7,8-二甲氧基-5-側氧基-2-(喹啉-6-基)-11,11a-二氫-1H-苯并[e]吡咯并[1,2-a][1,4]二氮呯-10(5H)-甲酸(R)-2-((4-硝基苯基)二硫烷基)丙酯
將2M乙二醯氯溶液(39mL，77.14mmol)及60mL二氯甲烷在500-mL燒瓶中混合，冷却至-78℃。經約2-3分鐘經由注射器添加DMSO(5.77mL，77.14mmol)。在-78℃下攪拌混合物20分鐘，隨後經由注射器經添加(5S)-5-[[第三丁基(二甲基)矽烷基]氧基甲基]-1-(4,5-二甲氧基-2-硝基-苯甲醯基)吡咯啶-3-酮起始物質(11.33g溶解於30mL二氯甲烷加10mL沖洗液中，根據Journal of Medicinal Chemistry,2010,53,2927-2941及Bioorganic & Medicinal Chemistry Letters,2000,10,1845-1847合成)。在-78 ℃下30分鐘之後，經2分鐘經由注射器添加Et3N(22.6mL，154.3mmol)。在約4分鐘之後，將混合物溫至0℃且攪拌1小時。將混合物傾入100mL水中。分離二氯甲烷。用EtOAc(2×75mL)萃取水層。用1N HCl、隨後飽和碳酸氫鈉洗滌經合併之有機萃取物，經Na2SO4乾燥且濃縮。藉由矽膠管柱層析(70%-90% EtOAc/庚烷)純化殘餘物以得到呈微黃色泡沫狀之所要產物(10.12g)。
將(5S)-5-[[第三丁基(二甲基)矽烷基]氧基甲基]-1-(4,5-二甲氧基-2-硝基-苯甲醯基)吡咯啶-3-酮(1.20g，2.74mmol)、2,6-二甲吡啶(1.27mL，10.9mmol)在二氯甲烷(45mL)中混合且隨後冷却至-35℃。隨後經由注射器緩慢添加三氟甲磺酸酐(0.87mL溶解於約5.2mL DCM中)---混合物變成亮黃色且浴溫增加至-33℃。自始至終將反應溫度保持不超過-20℃。在總計1小時之後，將反應混合物吸移至飽和NaHCO3水溶液、冰及EtOAc之混合物中，且用乙酸乙酯萃取兩次(總計約400mL)。將經合併之有機物用1N HCl水溶液、隨後鹽水洗滌，且隨後經硫酸鈉乾燥，濃縮。藉由矽膠管柱層析(40%-100% EtOAc/庚烷)純化殘餘物以得到呈黃色固體狀之所要產物(957mg)。
向250mL燒瓶中之三氟甲磺酸乙烯酯(957mg，1.68mmol)添加乙醇(8.75mL)及水(2.5mL)、6-喹啉基硼酸(348mg，2.01mmol)、磷酸鉀(1.10g，5.03mmol)，且隨後添加[1,1'-雙(二苯基膦基)二茂鐵]二氯鈀(ii)(982mg，0.134mmol)。用氮沖洗混合物且隨後在室溫下在氮下攪拌。在反應進行(約10分鐘)之後，將EtOAc(50mL)添加至反應混合物。過濾混合物 以移除任何固體。將水(約5mL)添加至濾液。用EtOAc(2x)萃取濾液。將經合併之有機物用硫酸鈉乾燥且濃縮。藉由矽膠管柱層析(40%-100% EtOAc/庚烷)純化殘餘物以得到呈黃色固體狀之所要產物(928mg)。
將硝基起始物質(322mg，0.586mmol)溶解於6mL乙醇中，且隨後添加鋅粉(383mg，5.86mmol)，接著添加於水中之1.5ml 5%甲酸(於1.5mL水中之75uL甲酸)。隨後將混合物加熱至53℃且攪拌直到反應完成(約3.5小時)。將混合物冷却至室溫，過濾。將濾液用EtOAc(約10mL)稀釋且隨後添加3M氨(約3mL)。用EtOAc(3x)萃取混合物。用硫酸鈉乾燥經合併之有機物且濃縮以提供粗苯胺，其不經純化即用於下一步驟。
將三光氣(79.4mg，0.268mmol)溶解於1.5mL二氯甲烷中，隨後添加(2R)-2-[(5-硝基-2-吡啶基)二硫烷基]丙-1-醇(196mg，0.797mmol)及吡啶(0.092mL)於2mL二氯甲烷中之溶液。在30分鐘之後，將上述溶液添加至苯胺起始物質及吡啶(0.092mL)於4.5mL二氯甲烷中之溶液。在反應完成(約1小時)之後，將混合物用EtOAc稀釋，隨後用1M HCL溶液洗滌，且隨後飽和碳酸鈉溶液洗滌。將有機物用硫酸鈉乾燥且濃縮。藉由矽膠管柱層析(30%-70% EtOAc/庚烷)純化殘餘物以得到所要胺基甲酸酯(182mg)。
將經TBS保護之醇(182mg，0.230mmol)溶解於4mL：1mL之THF：水中，且隨後添加4mL乙酸。將混合物加熱至55℃。在反應進行(約兩個隔夜)之後，將混合物冷却至室溫且隨後用50mL乙酸乙酯稀釋。添加碳酸鉀以中和乙酸，直到pH達到約10。用乙酸乙酯萃取混合物兩次。將經合併之有機物用硫酸鈉乾燥且濃縮。藉由矽膠管柱層析(0%-10% MeOH/EtOAc)純化殘餘物以得到所要醇(125mg)。
將醇起始物質(116mg，0.171mmol)溶解於6mL二氯甲烷中，且隨後在室溫下添加戴斯馬丁高碘烷(89.8mg，0.205mmol)。在約2.5小時之後，添加飽和碳酸氫鈉溶液(約6mL)及1M硫代硫酸鈉溶液(約4mL)。用二氯甲烷萃取混合物一次且用氯仿萃取混合物兩次。將經合併之有機物(約75mL)經硫酸鈉乾燥，濃縮以得到約103mg粗產物，藉由逆相HPLC純化該粗產物以得到所要產物(29.5mg)。
1H NMR(400MHz,DMSO-d 6)δ 9.24(s,1H),8.83(dd,J=1.6,4.2Hz,1H),8.47(dd,J=2.6,8.9Hz,1H),8.32(d,J=8.0Hz,1H),8.12(dd,J=1.9,8.9Hz,1H),7.92(d,J=8.8Hz,1H),7.87(d,J=1.8Hz,1H),7.80(s,1H),7.75(d,J=8.5Hz,1H),7.51(dd,J=4.2,8.3Hz,1H),7.20(s,1H),7.07(s,1H),6.95(d,J=6.3Hz,1H),5.78-5.62(m,1H),4.30(d,J=6.8Hz,1H),4.00(td,J=3.2,10.0Hz,1H),3.85(s,6H),3.56-3.44(m,1H),3.08(d,J=14.6Hz,1H),1.14(d,J=6.3Hz,3H),0.07(s,12H).MS m/z=676[M+1]+；
CLD-6之合成
(11S,11aS)-11-羥基-7,8-二甲氧基-5-側氧基-2-(喹啉-6-基)-11,11a-二氫-1H-苯并[e]吡咯并[1,2-a][1,4]二氮呯-10(5H)-甲酸2-((4-硝基苯基)二硫烷基)乙酯
在0℃下向化合物1(1.13kg，4.59mol，1.00當量)於THF(10L)中之溶液以兩部分添加LiBH4(99.90g，4.59mol，1.00當量)(在添加LiBH4期間幾乎無溫度變化)。在0℃下攪拌懸浮液1小時，隨後在10℃-20℃下攪拌18小時。將混合物冷却至0℃且添加NH4Cl(5L)水溶液。分離各層且用EA(5L×3)萃取水層。用鹽水洗滌經合併之有機物。將有機層經Na2SO4乾燥，過濾且濃縮以得到呈澄清油狀之化合物2(1600g，7.36mol，80.2%產率)。
向50-L燒瓶饋入化合物2(1.60kg，7.36mol，1.00當量)、DCM(20L)，接著在0℃下在攪拌下依次逐滴添加TEA(1.12kg，11.05mol，1.50當量)及乙醯氯(635.54g，8.10mol，1.10當量)。在添加之後，在15℃-25℃下攪拌所得溶液18小時，藉由添加5L水淬滅且用3×2L DCM萃取。將經合併之有機層經無水硫酸鈉乾燥，且在真空下濃縮以得到呈無色油狀之化合物3(2.46kg，9.49mol，128.90%產率)。
在15℃下向20L 3頸圓底燒瓶饋入於DCM(12L)中之化合物3(1.23kg，4.75mol，1.00當量)，接著分數批添加PCC(1.54kg，7.13mol)。在15℃-25℃下攪拌所得溶液18小時。濾出固體且在真空下濃縮濾液。將殘餘物在用乙酸乙酯：石油醚(1：5)溶離之矽膠管柱上純化以得到呈淡黃色液體之化合物4(1.13kg，4.38mol，46.15%產率)。
向10-L 3頸圓底燒瓶饋入甲基(三苯基)溴化鏻(958.03g，2.68mol)、THF(2.5L)，接著在0℃下經2小時分數份添加t-BuOK(300.94g，2.68mol)。在0℃下在攪拌下向此逐滴添加化合物4(460.00g，1.79mol)於THF(2.5L)中之溶液。將所得溶液在-5℃~0℃下攪拌20分鐘，藉由添加500mL水淬滅且用3×500mL乙酸乙酯萃取。將經合併之有機層經無水硫 酸鈉乾燥且在真空下濃縮。將殘餘物在用乙酸乙酯：石油醚(1：20)溶離之矽膠管柱上純化以得到呈淡黃色液體之化合物5(275.00g，1.08mol，30.09%)。
在0℃下攪拌化合物5(330.00g，1.29mol)於HCl(氣體)/EtOAc(3L，4M/L)中之混合物20分鐘。隨後在10℃-30℃下攪拌混合物1小時。在真空中濃縮混合物以得到呈黃色固體狀之化合物6(250.00g，1.30mol，101%)，其不經純化即用於下一步驟中。
向用惰性氮氣氛圍淨化且維持之3000-mL 3頸圓底燒瓶饋入化合物7(354.42g，1.56mol，1.30當量)於THF(1.5L)中之溶液，接著在攪拌下逐滴添加SOCl2(1.71kg，14.33mol，11.94當量)。將所得溶液在20℃-30℃下攪拌4小時，且隨後在真空下濃縮。向用惰性氮氣氛圍淨化且維持之另一3000-mL 3頸圓底燒瓶中饋入化合物6(230.00g，1.20mol，1.00當量)於DCM(2.5L)中之溶液。在-40℃下在攪拌下向此逐滴添加Et3N(485.75g，4.80mol，4.00當量)，接著在-40℃下添加第一燒瓶中之溶液。使溫度自然溫至0℃，藉由添加3000mL水/冰淬滅，且用3×1000mL二氯甲烷萃取。將經合併之有機層經無水硫酸鈉乾燥且在真空下濃縮。將殘餘物在用EtOAc：PE(1：3)溶離之矽膠管柱上純化以得到呈淡棕色油狀之化合物8(210.00g)，其不經純化即用於下一步驟。
在0℃下向化合物8(90.00g，247.02mmol，1.00當量)於THF(400mL)、MeOH(100mL)、H2O(400mL)中之混合物一次性添加NaOH(29.64g，741.05mmol，3.00當量)。在20℃-30℃下攪拌混合物18小時。用EtOAc(300mL×3)萃取水相。將經合併之有機相用飽和鹽水(100mL)洗滌，用無水Na2SO4乾燥，過濾且在真空中濃縮以得到呈黃色固體狀之化合物9(90.26g，粗物質)，其不經進一步純化即用於下一步驟。
在配備有溫度探針、磁攪拌器及氮氣進口之2000mL三頸圓底燒瓶中添加於DMF(1L)中之TBDMSCl(126.62g，840.12mmol)、咪唑(57.20g，840.12mmol，3.00當量)隨後在0℃下將化合物9(90.26g，280.04mmol，1.00當量)於DMF(1L)中之溶液添加至混合物。在25℃-30℃下攪拌所得反應混合物2小時。將反應混合物傾入冰水(1L)中，且隨後用DCM(200mL×3)萃取。將經合併之有機相用鹽水(100mL)洗滌，經Na2SO4乾燥且在真空中濃縮以得到殘餘物，以得到呈黃色油狀之化合物10(126.00g)，其不經進一步純化即用於下一步驟。
藉由將溫度維持在30℃以下向化合物10(126.00g，288.61mmol，1.00當量)於AcOH(1L)中之混合物分數份添加Zn(188.72g，2.89 mol)。在20℃-30℃下攪拌混合物30分鐘。將殘餘物傾入EtOAc(500mL)中且過濾。在真空中濃縮濾液。藉由矽膠層析(PE/EtOAc=10/1，1/1)純化殘餘物以得到呈黃色油狀之11(58.00g，142.64mmol，49%產率)。
1H NMR(400MHz,CHLOROFORM-d)d ppm 6.71(s,1 H)6.22(s,1 H)4.85-4.97(m,2 H)4.52(br.s.,1 H)4.14-4.23(m,1 H)3.99-4.13(m,1 H)3.82(s,3 H)3.77(s,3 H)3.59(d,J=5.73Hz,1 H)2.63-2.72(m,2 H)2.01-2.04(m,1 H)1.23(t,J=7.06Hz,1 H)0.85(s,9 H)-0.06-0.06(m,5 H)。
(11S,11aS)-11-羥基-7,8-二甲氧基-5-側氧基-2-(喹啉-6-基)-11,11a-二氫-1H-苯并[e]吡咯并[1,2-a][1,4]二氮呯-10(5H)-甲酸2-((4-硝基苯基)二硫烷基)乙酯
按照如上所述之步驟5-7合成標題化合物。1H NMR(400MHz,DMSO-d 6)δ 9.24(d,J=2.3Hz,1H),8.66-8.34(m,1H),8.15-7.62(m,1H),7.11(s,1H),6.98(s,1H),6.67(d,J=5.8Hz,1H),5.37(dd,J=9.5,6.3Hz,1H),5.13(d,J=6.2Hz,2H),4.54-4.31(m,1H),4.12(d,J=15.6Hz,1H),4.03-3.91(m,2H),3.86-3.78(m,6H),3.76(d,J=3.4Hz,1H),3.48(t,J=8.8Hz,1H),3.24-3.00(m,2H),2.96-2.80(m,1H)。MS m/z=549[M+1]+
儘管上述本發明已出於清楚理解之目的藉由說明及實例方式相當詳細地加以描述，但描述及實例不應解釋為限制本發明之範疇。在整個說明書中引用之所有專利、專利申請案及參考文獻以引用之方式明確併入。
<110> 美商建南德克公司
<120> 吡咯并苯并二氮呯抗體藥物結合物及使用方法
<130> P32858-WO
<140> TW 105131811
<141> 2016-09-30
<150> 62/236,429
<151> 2015-10-02
<160> 70
<170> PatentIn 3.5版
<210> 1
<211> 16
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<221> 來源
<223> /注意=「人工序列之描述：合成肽」
<400> 1
<210> 2
<211> 7
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<221> 來源
<223> /注意=「人工序列之描述：合成肽」
<400> 2
<210> 3
<211> 9
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<221> 來源
<223> /注意=「人工序列之描述：合成肽」
<400> 3
<210> 4
<211> 10
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<221> 來源
<223> /注意=「人工序列之描述：合成肽」
<400> 4
<210> 5
<211> 18
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<221> 來源
<223> /注意=「人工序列之描述：合成肽」
<400> 5
<210> 6
<211> 11
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<221> 來源
<223> /注意=「人工序列之描述：合成肽」
<400> 6
<210> 7
<211> 107
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<221> 來源
<223> /注意=「人工序列之描述：合成多肽」
<400> 7
<210> 8
<211> 120
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<221> 來源
<223> /注意=「人工序列之描述：合成多肽」
<400> 8
<210> 9
<211> 11
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<221> 來源
<223> /注意=「人工序列之描述：合成肽」
<400> 9
<210> 10
<211> 7
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<221> 來源
<223> /注意=「人工序列之描述：合成肽」
<400> 10
<210> 11
<211> 9
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<221> 來源
<223> /注意=「人工序列之描述：合成肽」
<400> 11
<210> 12
<211> 10
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<221> 來源
<223> /注意=「人工序列之描述：合成肽」
<400> 12
<210> 13
<211> 16
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<221> 來源
<223> /注意=「人工序列之描述：合成肽」
<400> 13
<210> 14
<211> 12
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<221> 來源
<223> /注意=「人工序列之描述：合成肽」
<400> 14
<210> 15
<211> 214
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<221> 來源
<223> /注意=「人工序列之描述：合成多肽」
<400> 15
<210> 16
<211> 450
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<221> 來源
<223> /注意=「人工序列之描述：合成多肽」
<400> 16
<210> 17
<211> 112
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<221> 來源
<223> /注意=「人工序列之描述：合成多肽」
<400> 17
<210> 18
<211> 118
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<221> 來源
<223> /注意=「人工序列之描述：合成多肽」
<400> 18
<210> 19
<211> 15
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<221> 來源
<223> /注意=「人工序列之描述：合成 肽」
<400> 19
<210> 20
<211> 7
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<221> 來源
<223> /注意=「人工序列之描述：合成肽」
<400> 20
<210> 21
<211> 10
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<221> 來源
<223> /注意=「人工序列之描述：合成肽」
<400> 21
<210> 22
<211> 5
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<221> 來源
<223> /注意=「人工序列之描述：合成肽」
<400> 22
<210> 23
<211> 17
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<221> 來源
<223> /注意=「人工序列之描述：合成肽」
<400> 23
<210> 24
<211> 9
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<221> 來源
<223> /注意=「人工序列之描述：合成肽」
<400> 24
<210> 25
<211> 219
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<221> 來源
<223> /注意=「人工序列之描述：合成多肽」
<400> 25
<210> 26
<211> 448
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<221> 來源
<223> /注意=「人工序列之描述：合成多肽」
<400> 26
<210> 27
<211> 17
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<221> 來源
<223> /注意=「人工序列之描述：合成肽」
<400> 27
<210> 28
<211> 17
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<221> 來源
<223> /注意=「人工序列之描述：合成 肽」
<400> 28
<210> 29
<211> 9
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<221> 來源
<223> /注意=「人工序列之描述：合成肽」
<400> 29
<210> 30
<211> 219
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<221> 來源
<223> /注意=「人工序列之描述：合成多肽」
<400> 30
<210> 31
<211> 448
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<221> 來源
<223> /注意=「人工序列之描述：合成多肽」
<400> 31
<210> 32
<211> 11
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<221> 來源
<223> /注意=「人工序列之描述：合成肽」
<400> 32
<210> 33
<211> 8
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<221> 來源
<223> /注意=「人工序列之描述：合成肽」
<400> 33
<210> 34
<211> 9
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<221> 來源
<223> /注意=「人工序列之描述：合成肽」
<400> 34
<210> 35
<211> 11
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<221> 來源
<223> /注意=「人工序列之描述：合成肽」
<400> 35
<210> 36
<211> 17
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<221> 來源
<223> /注意=「人工序列之描述：合成肽」
<400> 36
<210> 37
<211> 9
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<221> 來源
<223> /注意=「人工序列之描述：合成肽」
<400> 37
<210> 38
<211> 108
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<221> 來源
<223> /注意=「人工序列之描述：合成多肽」
<400> 38
<210> 39
<211> 116
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<221> 來源
<223> /注意=「人工序列之描述：合成多肽」
<400> 39
<210> 40
<211> 11
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<221> 來源
<223> /注意=「人工序列之描述：合成肽」
<400> 40
<210> 41
<211> 17
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<221> 來源
<223> /注意=「人工序列之描述：合成肽」
<400> 41
<210> 42
<211> 15
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<221> 來源
<223> /注意=「人工序列之描述：合成肽」
<400> 42
<210> 43
<211> 17
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<221> 來源
<223> /注意=「人工序列之描述：合成肽」
<400> 43
<210> 44
<211> 7
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<221> 來源
<223> /注意=「人工序列之描述：合成肽」
<400> 44
<210> 45
<211> 9
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<221> 來源
<223> /注意=「人工序列之描述：合成肽」
<400> 45
<210> 46
<211> 124
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<221> 來源
<223> /注意=「人工序列之描述：合成多肽」
<400> 46
<210> 47
<211> 113
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<221> 來源
<223> /注意=「人工序列之描述：合成多肽」
<400> 47
<210> 48
<211> 10
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<221> 來源
<223> /注意=「人工序列之描述：合成肽」
<400> 48
<210> 49
<211> 18
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<221> 來源
<223> /注意=「人工序列之描述：合成肽」
<400> 49
<210> 50
<211> 13
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<221> 來源
<223> /注意=「人工序列之描述：合成肽」
<400> 50
<210> 51
<211> 16
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<221> 來源
<223> /注意=「人工序列之描述：合成肽」
<400> 51
<210> 52
<211> 7
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<221> 來源
<223> /注意=「人工序列之描述：合成肽」
<400> 52
<210> 53
<211> 9
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<221> 來源
<223> /注意=「人工序列之描述：合成肽」
<400> 53
<210> 54
<211> 120
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<221> 來源
<223> /注意=「人工序列之描述：合成多肽」
<400> 54
<210> 55
<211> 113
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<221> 來源
<223> /注意=「人工序列之描述：合含多肽」
<400> 55
<210> 56
<211> 117
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<221> 來源
<223> /注意=「人工序列之描述：合成多肽」
<400> 56
<210> 57
<211> 112
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<221> 來源
<223> /注意=「人工序列之描述：合成多肽」
<400> 57
<210> 58
<211> 10
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<221> 來源
<223> /注意=「人工序列之描述：合成肽」
<400> 58
<210> 59
<211> 18
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<221> 來源
<223> /注意=「人工序列之描述：合成肽」
<400> 59
<210> 60
<211> 10
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<221> 來源
<223> /注意=「人工序列之描述：合成肽」
<400> 60
<210> 61
<211> 15
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<221> 來源
<223> /注意=「人工序列之描述：合成肽」
<400> 61
<210> 62
<211> 7
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<221> 來源
<223> /注意=「人工序列之描述：合成肽」
<400> 62
<210> 63
<211> 9
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<221> 來源
<223> /注意=「人工序列之描述：合成肽」
<400> 63
<210> 64
<211> 1255
<212> PRT
<213> 智人
<400> 64
<210> 65
<211> 14
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<221> 來源
<223> /注意=「人工序列之描述：合成寡核苷酸」
<400> 65
<210> 66
<211> 14
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<221> 來源
<223> /注意=「人工序列之描述：合成寡核苷酸」
<400> 66
<210> 67
<211> 14
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<221> 來源
<223> /注意=「人工序列之描述：合成寡核苷酸」
<400> 67
<210> 68
<211> 14
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<221> 來源
<223> /注意=「人工序列之描述：合成寡核苷酸」
<400> 68
<210> 69
<211> 7
<212> PRT
<213> 智人
<400> 69
<210> 70
<211> 7
<212> PRT
<213> 智人
<400> 70

Claims (73)

  1. 一種式I之連接子-藥物中間物： 其中XY選自CH2-CH2、CH=CH、C(=O)-NH或CH2-NH；A為視情况經選自F、C1-C6烷基或=C(R)2之基團取代之5員或6員雜環，其中R獨立地選自H、F、C1-C6烷基或C1-C6氟烷基；R1及R2獨立地選自H或C1-C6烷基，或R1及R2形成3員、4員、5員或6員環烷基或雜環基基團；R3獨立地選自NO2、Cl、F、CN、CO2H或Br；且m為0、1或2。
  2. 如申請專利範圍第1項之連接子-藥物中間物，其具有式Ia：
  3. 如申請專利範圍第1項之連接子-藥物中間物，其具有式Ib：
  4. 如申請專利範圍第1項之連接子-藥物中間物，其具有式Ic： 其中R4及R5各自為H，或R4及R5為=O。
  5. 如申請專利範圍第1項之連接子-藥物中間物，其具有式Id：
  6. 如申請專利範圍第1項之連接子-藥物中間物，其中R4及R5各自為H。
  7. 如申請專利範圍第1項之連接子-藥物中間物，其具有式Ie：
  8. 如申請專利範圍第1項之連接子-藥物中間物，其中R4及R5為=O。
  9. 如申請專利範圍第1項之連接子-藥物中間物，其具有式If：
  10. 如申請專利範圍第1項之連接子-藥物中間物，其中R1及R2形成環丙基或環丁基。
  11. 一種式II之抗體-藥物結合物化合物： 或其醫藥學上可接受之鹽，其中：XY選自CH2-CH2、CH2-C(=O)、CH=CH或CH2-NH；A為視情况經選自F、C1-C6烷基或=C(R)2之基團取代之5員或6員雜環，其中R獨立地選自H、F、C1-C6烷基或C1-C6氟烷基；R1及R2獨立地選自H或C1-C6烷基，或R1及R2形成3員、4員、5員 或6員環烷基或雜環基基團；p為1至8之整數；且Ab為抗體。
  12. 如申請專利範圍第11項之抗體-藥物結合物化合物，或其醫藥學上可接受之鹽，其中Ab為結合至選自(1)-(53)之一或多種腫瘤相關抗原或細胞表面受體的抗體：(1)BMPR1B(骨形態發生蛋白受體-IB型)；(2)E16(LAT1、SLC7A5)；(3)STEAP1(前列腺之六跨膜上皮抗原)；(4)MUC16(0772P、CA125)；(5)MPF(MPF、MSLN、SMR、巨核細胞增強因子、間皮素)；(6)Napi2b(NAPI-3B、NPTIIb、SLC34A2、溶質携帶物家族34(磷酸鈉)第2成員、第II型鈉依賴性磷酸鹽轉運體3b)；(7)Sema 5b(FLJ10372、KIAA1445、Mm.42015、SEMA5B、SEMAG、導向蛋白5b Hlog、sema域、七個血小板反應蛋白重複序列(第1型及第1型樣)、跨膜域(TM)及短細胞質域、(導向蛋白)5B)；(8)PSCA hlg(2700050C12Rik、C530008O16Rik、RIKEN cDNA2700050C12、RIKEN cDNA 2700050C12基因)；(9)ETBR(內皮素B型受體)；(10)MSG783(RNF124、假定蛋白FLJ20315)；(11)STEAP2(HGNC_8639、IPCA-1、PCANAP1、STAMP1、STEAP2、STMP、前列腺癌相關基因1、前列腺癌相關蛋白1、前列腺之六跨膜上皮抗原2、六跨膜前列腺蛋白)；(12)TrpM4(BR22450、FLJ20041、TRPM4、TRPM4B、瞬時受體電位陽離子通道，次家族M，第4成員)；(13)CRIPTO(CR、CR1、CRGF、CRIPTO、TDGF1、畸胎瘤衍生生長因子)；(14)CD21(CR2(補體受體2)或C3DR(C3d/艾司坦-巴爾病毒受體)或Hs 73792)；(15)CD79b(CD79B、CD79β、IGb(免疫球蛋白相關型β)、B29)； (16)FcRH2(IFGP4、IRTA4、SPAP1A(含SH2域之磷酸酶錨定蛋白1a)、SPAP1B、SPAP1C)；(17)HER2；(18)NCA；(19)MDP；(20)IL20Rα；(21)短縮素(Brevican)；(22)EphB2R；(23)ASLG659；(24)PSCA；(25)GEDA；(26)BAFF-R(B細胞活化因子受體、BLyS受體3、BR3)；(27)CD22(B細胞受體CD22-B同功异型物)；(28)CD79a(CD79A、CD79α、免疫球蛋白相關型α)；(29)CXCR5(伯基特氏淋巴瘤受體1)；(30)HLA-DOB(MHC第II類分子之β次單元(Ia抗原))；(31)P2X5(嘌呤能受體P2X配位體門控離子通道5)；(32)CD72(B細胞分化抗原CD72、Lyb-2)；(33)LY64(淋巴細胞抗原64(RP105)，富含白胺酸之重複序列(LRR)之第I型膜蛋白家族)；(34)FcRH1(Fc受體樣蛋白1)；(35)FcRH5(IRTA2，免疫球蛋白超家族受體易位相關型2)；(36)TENB2(推定跨膜蛋白多醣)；(37)PMEL17(銀同系物；SILV；D12S53E；PMEL17；SI；SIL)；(38)TMEFF1(具有EGF樣域及兩個抑濾泡素樣域1之跨膜蛋白；腦腫瘤抑癌蛋白-1)；(39)GDNF-Ra1(GDNF家族受體α 1；GFRA1；GDNFR；GDNFRA；RETL1；TRNR1；RET1L；GDNFR-α1；GFR-A-1)；(40)Ly6E(淋巴細胞抗原6複合物，基因座E；Ly67、RIG-E、SCA-2、TSA-1)； (41)TMEM46(shisa同系物2(非洲爪蟾)；SHISA2)；(42)Ly6G6D(淋巴細胞抗原6複合物，基因座G6D；Ly6-D；MEGT1)；(43)LGR5(含富含白胺酸之重複序列之G蛋白偶聯受體5；GPR49，GPR67)；(44)RET(ret原癌基因；MEN2A；HSCR1；MEN2B；MTC1；PTC；CDHF12；Hs.168114；RET51；RET-ELE1)；(45)LY6K(淋巴細胞抗原6複合物，基因座K；LY6K；HSJ001348；FLJ35226)；(46)GPR19(G蛋白偶聯受體19；Mm.4787)；(47)GPR54(KISS1受體；KISS1R；GPR54；HOT7T175；AXOR12)；(48)ASPHD1(含天冬胺酸β-羥化酶域1；LOC253982)；(49)酪胺酸酶(TYR；OCAIA；OCA1A；酪胺酸酶；SHEP3)；(50)TMEM118(環指蛋白，跨膜2；RNFT2；FLJ14627)；(51)GPR172A(G蛋白偶聯受體172A；GPCR41；FLJ11856；D15Ertd747e)；(52)CD33；或(53)CLL-1。
  13. 如申請專利範圍第11項或申請專利範圍第12項之抗體-藥物結合物化合物，或其醫藥學上可接受之鹽，其具有式IIa：
  14. 如申請專利範圍第11項或申請專利範圍第12項之抗體-藥物結合物化合物，或其醫藥學上可接受之鹽，其具有式IIb：
  15. 如申請專利範圍第11項或申請專利範圍第12項之抗體-藥物結合物化合物，或其醫藥學上可接受之鹽，其具有式IIc： 其中R4及R5各自為H，或R4及R5為=O。
  16. 如申請專利範圍第15項之抗體-藥物結合物化合物或其醫藥學上可接受之鹽，其中R4及R5各自為H。
  17. 如申請專利範圍第15項之抗體-藥物結合物化合物或其醫藥學上可接受之鹽，其中R4及R5為=O。
  18. 如申請專利範圍第15項之抗體-藥物結合物化合物或其醫藥學上可接受之鹽，其具有式IId：
  19. 如申請專利範圍第15項之抗體-藥物結合物化合物或其醫藥學上可接受之鹽，其具有式IIe：
  20. 如申請專利範圍第15項之抗體-藥物結合物化合物，或其醫藥學上可接受之鹽，其具有式IIf：
  21. 如申請專利範圍第11或12項之抗體-藥物結合物化合物或其醫藥學上可接受之鹽，其中Ab為半胱胺酸工程改造抗體。
  22. 如申請專利範圍第21項之抗體-藥物結合物化合物或其醫藥學上可接受之鹽，其中該半胱胺酸工程改造抗體包含LC K149C或HC A118C作為藥物結合位點。
  23. 如申請專利範圍第11或12項之抗體-藥物結合物化合物或其醫藥學上可接受之鹽，其中Ab選自抗HER2、抗CD22、抗CD33、抗Napi2b或抗CLL-1。
  24. 如申請專利範圍第11或12項之抗體-藥物結合物化合物或其醫藥學上可接受之鹽，其中p為1、2、3或4。
  25. 如申請專利範圍第11或12項之抗體-藥物結合物化合物或其醫藥學上可接受之鹽，其包含該等抗體-藥物結合物化合物之混合物，其中該抗體-藥物結合物化合物混合物中每抗體之平均藥物負載量p為約2至約5。
  26. 一種醫藥組合物，其包含如申請專利範圍第11項至第25項中任一項之 抗體-藥物結合物化合物或其醫藥學上可接受之鹽以及醫藥學上可接受之稀釋劑、載劑或賦形劑。
  27. 如申請專利範圍第26項之醫藥組合物，其進一步包含治療有效量之化學治療劑。
  28. 一種如申請專利範圍第11項至第25項中任一項之抗體-藥物結合物化合物或其醫藥學上可接受之鹽的用途，其用於製造用以治療哺乳動物之癌症之藥劑。
  29. 一種如申請專利範圍第26項之醫藥組合物的用途，其用於製造用以治療癌症之藥劑。
  30. 如申請專利範圍第29項之用途，其中該藥劑係用於與化學治療劑共同投與。
  31. 如申請專利範圍第11或12項之抗體-藥物結合物化合物或其醫藥學上可接受之鹽，其用於治療癌症之方法中。
  32. 一種製備如申請專利範圍第11項至第25項中任一項之抗體-藥物結合物化合物或其醫藥學上可接受之鹽的方法，該方法包括使抗體與如申請專利範圍第1項之式I連接子-藥物中間物反應。
  33. 一種製品，其包括如申請專利範圍第26項之醫藥組合物、容器及包裝插頁或標簽，該包裝插頁或標簽指示該醫藥組合物可用於治療癌症。
  34. 一種式II之抗體-藥物結合物化合物： 或其醫藥學上可接受之鹽，其中：XY選自CH2-CH2、CH2-C(=O)、CH=CH或CH2-NH；A為視情况經選自F、C1-C6烷基或=C(R)2之基團取代之5員或6員雜環，其中R獨立地選自H、F、C1-C6烷基或C1-C6氟烷基；R1及R2獨立地選自H或C1-C6烷基，或R1及R2形成3員、4員、5員 或6員環烷基或雜環基基團；p為1至8之整數；且Ab為包含以下各項之抗HER2抗體：(a)HVR-H1，其包含SEQ ID NO：22之胺基酸序列；(b)HVR-H2，其包含SEQ ID NO：23之胺基酸序列；(c)HVR-H3，其包含SEQ ID NO：24之胺基酸序列；(d)HVR-L1，其包含SEQ ID NO：19之胺基酸序列；(e)HVR-L2，其包含SEQ ID NO：20之胺基酸序列；及(f)HVR-L3，其包含SEQ ID NO：21之胺基酸序列。
  35. 如申請專利範圍第34項之抗體-藥物結合物化合物或其醫藥學上可接受之鹽，其中該抗HER2抗體包含輕鏈可變區，其包含SEQ ID NO：17之序列；及重鏈可變區，其包含SEQ ID NO：18之序列。
  36. 如申請專利範圍第34項或申請專利範圍第35項之抗體-藥物結合物化合物或其醫藥學上可接受之鹽，其具有式IIa：
  37. 如申請專利範圍第34項或申請專利範圍第35項之抗體-藥物結合物化合物或其醫藥學上可接受之鹽，其具有式IIb：
  38. 如申請專利範圍第34項或申請專利範圍第35項之抗體-藥物結合物化合物或其醫藥學上可接受之鹽，其具有式IIc： 其中R4及R5各自為H，或R4及R5為=O。
  39. 如申請專利範圍第38項之抗體-藥物結合物化合物或其醫藥學上可接受之鹽，其中R4及R5各自為H。
  40. 如申請專利範圍第38項之抗體-藥物結合物化合物或其醫藥學上可接受之鹽，其中R4及R5為=O。
  41. 如申請專利範圍第38項之抗體-藥物結合物化合物或其醫藥學上可接受之鹽，其具有式IId：
  42. 如申請專利範圍第38項之抗體-藥物結合物化合物或其醫藥學上可接受之鹽，其具有式IIe：
  43. 如申請專利範圍第38項之抗體-藥物結合物化合物或其醫藥學上可接受之鹽，其具有式IIf：
  44. 如申請專利範圍第34或35項之抗體-藥物結合物化合物或其醫藥學上可接受之鹽，其中抗HER2抗體為半胱胺酸工程改造抗體。
  45. 如申請專利範圍第44項之抗體-藥物結合物化合物或其醫藥學上可接受之鹽，其中該半胱胺酸工程改造抗體包含LC K149C或HC A118C作為藥物結合位點。
  46. 如申請專利範圍第34或35項之抗體-藥物結合物化合物或其醫藥學上可接受之鹽，其中p為1、2、3或4。
  47. 如申請專利範圍第34或35項之抗體-藥物結合物化合物或其醫藥學上可接受之鹽，其包含該等抗體-藥物結合物化合物之混合物，其中該抗體-藥物結合物化合物混合物中每抗體之平均藥物負載量p為約2至約5。
  48. 一種醫藥組合物，其包含如申請專利範圍第34項至第47項中任一項之抗體-藥物結合物化合物或其醫藥學上可接受之鹽以及醫藥學上可接受之稀釋劑、載劑或賦形劑。
  49. 如申請專利範圍第48項之醫藥組合物，其進一步包含另一治療劑。
  50. 如申請專利範圍第48項之醫藥組合物，其中該另一治療劑為化學治療劑。
  51. 如申請專利範圍第48項之醫藥組合物，其中該另一治療劑為結合HER2之抗體或免疫結合物。
  52. 如申請專利範圍第51項之醫藥組合物，其中該另一治療劑為(i)結合至HER2之域II之抗體或免疫結合物，及/或(ii)結合至HER2之域IV之抗體或免疫結合物。
  53. 如申請專利範圍第51項之醫藥組合物，其中該另一治療劑為(i)結合至抗原決定基2C4之抗體或免疫結合物，及/或(ii)結合至抗原決定基4D5 之抗體或免疫結合物。
  54. 如申請專利範圍第49項之醫藥組合物，其中該另一治療劑選自曲妥珠單抗、曲妥珠單抗-MCC-DM1(T-DM1)或帕妥珠單抗。
  55. 如申請專利範圍第49項之醫藥組合物，其進一步包含(1)曲妥珠單抗或T-DM1，及(2)帕妥珠單抗。
  56. 如申請專利範圍第34或35項之抗體-藥物結合物化合物或其醫藥學上可接受之鹽，其用於治療癌症之方法中。
  57. 一種如申請專利範圍第48項至第55項中任一項之醫藥組合物的用途，其用於製造用以治療癌症之藥劑。
  58. 如申請專利範圍第57項之用途，其中該癌症為HER2陽性癌症。
  59. 如申請專利範圍第58項之用途，其中該HER2陽性癌症為乳癌或胃癌。
  60. 一種如申請專利範圍第34項至第47項中任一項之抗體-藥物結合物化合物或其醫藥學上可接受之鹽的用途，其用於製造用以治療哺乳動物之癌症之藥劑。
  61. 如申請專利範圍第60項之用途，其中該癌症為HER2陽性癌症。
  62. 如申請專利範圍第61項之用途，其中該HER2陽性癌症為乳癌或胃癌。
  63. 如申請專利範圍第60項之用途，其中該藥劑係用於與另一治療劑共同投與。
  64. 如申請專利範圍第63項之用途，其中該另一治療劑為化學治療劑。
  65. 如申請專利範圍第63項之用途，其中該另一治療劑為結合HER2之抗體或免疫結合物。
  66. 如申請專利範圍第65項之用途，其中該另一治療劑為(i)結合至HER2之域II之抗體或免疫結合物，及/或(ii)結合至HER2之域IV之抗體或免疫結合物。
  67. 如申請專利範圍第65項之用途，其中該另一治療劑為(i)結合至抗原決定基2C4之抗體或免疫結合物，及/或(ii)結合至抗原決定基4D5之抗體或免疫結合物。
  68. 如申請專利範圍第65項之用途，其中該另一治療劑選自曲妥珠單抗、曲妥珠單抗-MCC-DM1(T-DM1)或帕妥珠單抗。
  69. 如申請專利範圍第65項之用途，其中該藥劑係用於與(1)曲妥珠單抗或 T-DM1，及(2)帕妥珠單抗共同投與。
  70. 一種式IIf之抗體藥物結合物或其醫藥學上可接受之鹽 其中Ab為包含LC K149C之半胱胺酸工程改造抗HER2抗體，且p為約2。
  71. 如申請專利範圍第70項之抗體-藥物結合物化合物或其醫藥學上可接受之鹽，其中Ab為包含以下各項之抗HER2抗體：(a)HVR-H1，其包含SEQ ID NO：22之胺基酸序列；(b)HVR-H2，其包含SEQ ID NO：23之胺基酸序列；(c)HVR-H3，其包含SEQ ID NO：24之胺基酸序列；(d)HVR-L1，其包含SEQ ID NO：19之胺基酸序列；(e)HVR-L2，其包含SEQ ID NO：20之胺基酸序列；及(f)HVR-L3，其包含SEQ ID NO：21之胺基酸序列。
  72. 如申請專利範圍第70項之抗體-藥物結合物化合物或其醫藥學上可接受之鹽，其中該抗HER2抗體包含輕鏈可變區，其包含SEQ ID NO：17之序列；及重鏈可變區，其包含SEQ ID NO：18之序列。
  73. 一種醫藥組合物，其包含如申請專利範圍第70項至第72項中任一項之抗體-藥物結合物化合物或其醫藥學上可接受之鹽以及醫藥學上可接受之稀釋劑、載劑或賦形劑。
TW105131811A 2015-10-02 2016-09-30 吡咯并苯并二氮呯抗體藥物結合物及使用方法 TW201718027A (zh)

Applications Claiming Priority (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
US201562236429P 2015-10-02 2015-10-02

Publications (1)

Publication Number Publication Date
TW201718027A true TW201718027A (zh) 2017-06-01

Family

ID=57145040

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
TW105131811A TW201718027A (zh) 2015-10-02 2016-09-30 吡咯并苯并二氮呯抗體藥物結合物及使用方法

Country Status (25)

Country Link
US (3) US10058613B2 (zh)
EP (1) EP3355935B1 (zh)
JP (3) JP6663984B2 (zh)
KR (1) KR102111338B1 (zh)
CN (1) CN108391422B (zh)
AR (1) AR106235A1 (zh)
AU (1) AU2016331931C1 (zh)
BR (1) BR112018006016A2 (zh)
CA (1) CA2996902C (zh)
CL (1) CL2018000813A1 (zh)
CO (1) CO2018004152A2 (zh)
CR (1) CR20180243A (zh)
HK (1) HK1259127A1 (zh)
IL (1) IL258046A (zh)
MA (1) MA43345A (zh)
MX (1) MX2018003628A (zh)
NZ (1) NZ741261A (zh)
PE (1) PE20181067A1 (zh)
PH (1) PH12018500693A1 (zh)
RU (1) RU2736725C1 (zh)
SG (1) SG10201912680RA (zh)
TW (1) TW201718027A (zh)
UA (1) UA123104C2 (zh)
WO (1) WO2017059289A1 (zh)
ZA (1) ZA201801957B (zh)

Families Citing this family (24)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN103068406B (zh) * 2010-06-08 2017-06-30 基因泰克公司 半胱氨酸改造的抗体和偶联物
WO2016040723A1 (en) 2014-09-12 2016-03-17 Genentech, Inc. Anti-her2 antibodies and immunoconjugates
MA43345A (fr) 2015-10-02 2018-08-08 Hoffmann La Roche Conjugués anticorps-médicaments de pyrrolobenzodiazépine et méthodes d'utilisation
MA43354A (fr) * 2015-10-16 2018-08-22 Genentech Inc Conjugués médicamenteux à pont disulfure encombré
JP7093767B2 (ja) 2016-08-11 2022-06-30 ジェネンテック， インコーポレイテッド ピロロベンゾジアゼピンプロドラッグ及びその抗体コンジュゲート
CA3126646A1 (en) 2017-09-29 2019-04-04 Daiichi Sankyo Company, Limited Antibody-pyrrolobenzodiazepine derivative conjugate
EP3720437A4 (en) * 2017-12-06 2021-11-03 Yale University PRODRUGS ACTIVATED BY REDUCTION IN CYTOSOL
GB201803342D0 (en) * 2018-03-01 2018-04-18 Medimmune Ltd Methods
KR20200138288A (ko) 2018-03-28 2020-12-09 미쓰비시 타나베 파마 코퍼레이션 cMET 모노클로날 결합제의 약물 접합체, 및 그의 용도
GB201806022D0 (en) 2018-04-12 2018-05-30 Medimmune Ltd Pyrrolobenzodiazepines and conjugates thereof
JP2022511337A (ja) 2018-09-19 2022-01-31 インサーム （インスティテュート ナショナル デ ラ サンテ エ デ ラ ルシェルシェ メディカル） 免疫チェックポイント治療に抵抗性のある癌の治療のための方法および医薬組成物
EP3894427A1 (en) 2018-12-10 2021-10-20 Genentech, Inc. Photocrosslinking peptides for site specific conjugation to fc-containing proteins
EP3914241A4 (en) * 2019-01-25 2023-01-18 Yale University ANTICANCER DRUGS AND METHODS OF PRODUCTION AND USE THEREOF
EP3920956A4 (en) * 2019-02-04 2022-11-16 Xenetic Biosciences Inc. METHODS OF USE OF GLYCOSYLATED THERAPEUTIC PROTEINS
CA3191804A1 (en) * 2019-03-25 2020-10-01 Daiichi Sankyo Company, Limited Anti-her2 antibody-pyrrolobenzodiazepine derivative conjugate
BR112021017350A2 (pt) * 2019-03-27 2021-11-16 Daiichi Sankyo Co Ltd Combinação de conjugado de anticorpo-derivado de pirrolobenzodiazepina e inibidor de parp
US20220363776A1 (en) 2019-10-04 2022-11-17 INSERM (Institut National de la Santé et de la Recherche Médicale) Methods and pharmaceutical composition for the treatment of ovarian cancer, breast cancer or pancreatic cancer
EP4069312A4 (en) * 2019-12-04 2024-03-27 The Research Foundation for the State University of New York COMPOSITIONS AND METHODS FOR REDUCING OFF-TARGET TOXICITY OF ANTIBODY-DRUG CONJUGATES
TW202216771A (zh) 2020-06-26 2022-05-01 德商拜耳廠股份有限公司 用於治療應用之ccr8抗體
EP4189071A1 (en) 2020-08-03 2023-06-07 Institut National de la Santé et de la Recherche Médicale (INSERM) Population of treg cells functionally committed to exert a regulatory activity and their use for adoptive therapy
CN112125924B (zh) * 2020-09-15 2021-09-24 吉林大学 一种螺旋寡聚物、仿生离子通道、制备方法、应用
MX2023008628A (es) 2021-01-22 2023-09-22 Bayer Ag Anticuerpos lrrc15 y conjugados de los mismos.
JP2024535712A (ja) 2021-08-27 2024-10-02 ヤンセン バイオテツク，インコーポレーテツド 抗ｐｓｍａ抗体及びその使用
WO2023215293A1 (en) 2022-05-02 2023-11-09 Athanor Biosciences, Inc. Cancer eradicating – bio-nanoparticles (ce-bnp)

Family Cites Families (389)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US798959A (en) 1904-12-19 1905-09-05 George W Goss Corn-husker.
IL47062A (en) 1975-04-10 1979-07-25 Yeda Res & Dev Process for diminishing antigenicity of tissues to be usedas transplants by treatment with glutaraldehyde
US4665077A (en) 1979-03-19 1987-05-12 The Upjohn Company Method for treating rejection of organ or skin grafts with 6-aryl pyrimidine compounds
US4427588A (en) 1982-11-08 1984-01-24 Bristol-Myers Company Process for conversion of oxotomaymycin to tomaymycin
US4816567A (en) 1983-04-08 1989-03-28 Genentech, Inc. Recombinant immunoglobin preparations
US4676980A (en) 1985-09-23 1987-06-30 The United States Of America As Represented By The Secretary Of The Department Of Health And Human Services Target specific cross-linked heteroantibodies
US5583024A (en) 1985-12-02 1996-12-10 The Regents Of The University Of California Recombinant expression of Coleoptera luciferase
US6548640B1 (en) 1986-03-27 2003-04-15 Btg International Limited Altered antibodies
IL85035A0 (en) 1987-01-08 1988-06-30 Int Genetic Eng Polynucleotide molecule,a chimeric antibody with specificity for human b cell surface antigen,a process for the preparation and methods utilizing the same
WO1988007089A1 (en) 1987-03-18 1988-09-22 Medical Research Council Altered antibodies
IL85746A (en) 1988-03-15 1994-05-30 Yeda Res & Dev Preparations comprising t-lymphocyte cells treated with 8-methoxypsoralen or cell membranes separated therefrom for preventing or treating autoimmune diseases
FI891226A (fi) 1988-04-28 1989-10-29 Univ Leland Stanford Junior Reseptordeterminanter i anti-t-celler foer behandling av autoimmunsjukdom.
US5750373A (en) 1990-12-03 1998-05-12 Genentech, Inc. Enrichment method for variant proteins having altered binding properties, M13 phagemids, and growth hormone variants
KR0184860B1 (ko) 1988-11-11 1999-04-01 메디칼 리써어치 카운실 단일영역 리간드와 이를 포함하는 수용체 및 이들의 제조방법과 이용(법)
WO1990008187A1 (en) 1989-01-19 1990-07-26 Dana Farber Cancer Institute Soluble two domain cd2 protein
DK0463101T3 (da) 1989-03-21 1994-03-14 Immune Response Corp Inc Vaccination og fremgangsmåde mod sygdomme, som skyldes patogene reaktioner og specifikke T-cellepopulationer
DE3920358A1 (de) 1989-06-22 1991-01-17 Behringwerke Ag Bispezifische und oligospezifische, mono- und oligovalente antikoerperkonstrukte, ihre herstellung und verwendung
DE69031919T3 (de) 1989-07-19 2005-01-27 Connetics Corp., Palo Alto T-zell-rezeptor-peptide als heilmittel für autoimmune und bösartige krankheiten
WO1991002536A1 (en) 1989-08-23 1991-03-07 Scripps Clinic And Research Foundation Compositions and methods for detection and treatment of epstein-barr virus infection and immune disorders
US5959177A (en) 1989-10-27 1999-09-28 The Scripps Research Institute Transgenic plants expressing assembled secretory antibodies
US6075181A (en) 1990-01-12 2000-06-13 Abgenix, Inc. Human antibodies derived from immunized xenomice
US6150584A (en) 1990-01-12 2000-11-21 Abgenix, Inc. Human antibodies derived from immunized xenomice
JPH053790A (ja) 1990-04-19 1993-01-14 Fujisawa Pharmaceut Co Ltd デヒドロペプチダーゼ−ｉ
US5256643A (en) 1990-05-29 1993-10-26 The Government Of The United States Human cripto protein
US5770429A (en) 1990-08-29 1998-06-23 Genpharm International, Inc. Transgenic non-human animals capable of producing heterologous antibodies
WO1992007574A1 (en) 1990-10-25 1992-05-14 Tanox Biosystems, Inc. Glycoproteins associated with membrane-bound immunoglobulins as antibody targets on b cells
US5571894A (en) 1991-02-05 1996-11-05 Ciba-Geigy Corporation Recombinant antibodies specific for a growth factor receptor
ATE194385T1 (de) 1991-03-29 2000-07-15 Genentech Inc Menschliche pf4a rezeptoren und ihre verwendung
US5440021A (en) 1991-03-29 1995-08-08 Chuntharapai; Anan Antibodies to human IL-8 type B receptor
US5543503A (en) 1991-03-29 1996-08-06 Genentech Inc. Antibodies to human IL-8 type A receptor
EP0940468A1 (en) 1991-06-14 1999-09-08 Genentech, Inc. Humanized antibody variable domain
GB9114948D0 (en) 1991-07-11 1991-08-28 Pfizer Ltd Process for preparing sertraline intermediates
JP3050424B2 (ja) 1991-07-12 2000-06-12 塩野義製薬株式会社 ヒトエンドセリンリセプター
US5264557A (en) 1991-08-23 1993-11-23 The United States Of America As Represented By The Department Of Health And Human Services Polypeptide of a human cripto-related gene, CR-3
EP0604580A1 (en) 1991-09-19 1994-07-06 Genentech, Inc. EXPRESSION IN E. COLI OF ANTIBODY FRAGMENTS HAVING AT LEAST A CYSTEINE PRESENT AS A FREE THIOL, USE FOR THE PRODUCTION OF BIFUNCTIONAL F(ab') 2? ANTIBODIES
US5587458A (en) 1991-10-07 1996-12-24 Aronex Pharmaceuticals, Inc. Anti-erbB-2 antibodies, combinations thereof, and therapeutic and diagnostic uses thereof
WO1993008829A1 (en) 1991-11-04 1993-05-13 The Regents Of The University Of California Compositions that mediate killing of hiv-infected cells
US5976551A (en) 1991-11-15 1999-11-02 Institut Pasteur And Institut Nationale De La Sante Et De La Recherche Medicale Altered major histocompatibility complex (MHC) determinant and method of using the determinant
US6153408A (en) 1991-11-15 2000-11-28 Institut Pasteur And Institut National De La Sante Et De La Recherche Medicale Altered major histocompatibility complex (MHC) determinant and methods of using the determinant
EP0625200B1 (en) 1992-02-06 2005-05-11 Chiron Corporation Biosynthetic binding protein for cancer marker
IL107366A (en) 1992-10-23 2003-03-12 Chugai Pharmaceutical Co Ltd Genes coding for megakaryocyte potentiator
US5644033A (en) 1992-12-22 1997-07-01 Health Research, Inc. Monoclonal antibodies that define a unique antigen of human B cell antigen receptor complex and methods of using same for diagnosis and treatment
US5801005A (en) 1993-03-17 1998-09-01 University Of Washington Immune reactivity to HER-2/neu protein for diagnosis of malignancies in which the HER-2/neu oncogene is associated
US5869445A (en) 1993-03-17 1999-02-09 University Of Washington Methods for eliciting or enhancing reactivity to HER-2/neu protein
CA2163345A1 (en) 1993-06-16 1994-12-22 Susan Adrienne Morgan Antibodies
US5773223A (en) 1993-09-02 1998-06-30 Chiron Corporation Endothelin B1, (ETB1) receptor polypeptide and its encoding nucleic acid methods, and uses thereof
US5750370A (en) 1995-06-06 1998-05-12 Human Genome Sciences, Inc. Nucleic acid encoding human endothlein-bombesin receptor and method of producing the receptor
US5789199A (en) 1994-11-03 1998-08-04 Genentech, Inc. Process for bacterial production of polypeptides
US5840523A (en) 1995-03-01 1998-11-24 Genetech, Inc. Methods and compositions for secretion of heterologous polypeptides
US5731168A (en) 1995-03-01 1998-03-24 Genentech, Inc. Method for making heteromultimeric polypeptides
JPH08336393A (ja) 1995-04-13 1996-12-24 Mitsubishi Chem Corp 光学活性なγ−置換−β−ヒドロキシ酪酸エステルの製造法
US5869046A (en) 1995-04-14 1999-02-09 Genentech, Inc. Altered polypeptides with increased half-life
US5707829A (en) 1995-08-11 1998-01-13 Genetics Institute, Inc. DNA sequences and secreted proteins encoded thereby
US20020193567A1 (en) 1995-08-11 2002-12-19 Genetics Institute, Inc. Secreted proteins and polynucleotides encoding them
GB9603256D0 (en) 1996-02-16 1996-04-17 Wellcome Found Antibodies
JP3646191B2 (ja) 1996-03-19 2005-05-11 大塚製薬株式会社 ヒト遺伝子
AU722499B2 (en) 1996-05-17 2000-08-03 Schering Corporation Human B-cell antigens, related reagents
US7371376B1 (en) 1996-10-18 2008-05-13 Genentech, Inc. Anti-ErbB2 antibodies
JP2001504326A (ja) * 1996-10-18 2001-04-03 ジェネンテック インコーポレーテッド 抗ＥｒｂＢ２抗体
US5945511A (en) 1997-02-20 1999-08-31 Zymogenetics, Inc. Class II cytokine receptor
US20030185830A1 (en) 1997-02-25 2003-10-02 Corixa Corporation Compositions and methods for the therapy and diagnosis of prostate cancer
US7033827B2 (en) 1997-02-25 2006-04-25 Corixa Corporation Prostate-specific polynucleotide compositions
US6261791B1 (en) 1997-03-10 2001-07-17 The Regents Of The University Of California Method for diagnosing cancer using specific PSCA antibodies
US6541212B2 (en) 1997-03-10 2003-04-01 The Regents Of The University Of California Methods for detecting prostate stem cell antigen protein
DE69824287T2 (de) 1997-03-10 2005-06-16 The Regents Of The University Of California, Oakland Prostata stammzell-antigen (psca)
US6555339B1 (en) 1997-04-14 2003-04-29 Arena Pharmaceuticals, Inc. Non-endogenous, constitutively activated human protein-coupled receptors
US6319688B1 (en) 1997-04-28 2001-11-20 Smithkline Beecham Corporation Polynucleotide encoding human sodium dependent phosphate transporter (IPT-1)
CA2288600C (en) 1997-05-02 2010-06-01 Genentech, Inc. A method for making multispecific antibodies having heteromultimeric and common components
WO1998051805A1 (en) 1997-05-15 1998-11-19 Abbott Laboratories Reagents and methods useful for detecting diseases of the prostate
WO1998051824A1 (en) 1997-05-15 1998-11-19 Abbott Laboratories Reagents and methods useful for detecting disease of the urinary tract
ES2244066T3 (es) 1997-06-24 2005-12-01 Genentech, Inc. Procedimiento y composiciones de glicoproteinas galactosiladas.
US6040498A (en) 1998-08-11 2000-03-21 North Caroline State University Genetically engineered duckweed
US6602677B1 (en) 1997-09-19 2003-08-05 Promega Corporation Thermostable luciferases and methods of production
US20030060612A1 (en) 1997-10-28 2003-03-27 Genentech, Inc. Compositions and methods for the diagnosis and treatment of tumor
AU759779B2 (en) 1997-10-31 2003-05-01 Genentech Inc. Methods and compositions comprising glycoprotein glycoforms
US20020034749A1 (en) 1997-11-18 2002-03-21 Billing-Medel Patricia A. Reagents and methods useful for detecting diseases of the breast
US6610833B1 (en) 1997-11-24 2003-08-26 The Institute For Human Genetics And Biochemistry Monoclonal human natural antibodies
US6110695A (en) 1997-12-02 2000-08-29 The Regents Of The University Of California Modulating the interaction of the chemokine, B Lymphocyte Hemoattractant, and its Receptor, BLR1
WO1999029888A1 (en) 1997-12-05 1999-06-17 The Scripps Research Institute Humanization of murine antibody
WO2004031238A2 (en) 2002-10-03 2004-04-15 Mcgill Univeristy Antibodies and cyclic peptides which bind cea (carcinoembryonic antigen) and their use as cancer therapeutics
CA2323071C (en) 1998-03-13 2011-06-21 The Burnham Institute Molecules that home to various selected organs or tissues
WO1999048527A1 (en) 1998-03-27 1999-09-30 Genentech, Inc. Apo-2 ligand-anti-her-2 antibody synergism
US6194551B1 (en) 1998-04-02 2001-02-27 Genentech, Inc. Polypeptide variants
ATE375365T1 (de) 1998-04-02 2007-10-15 Genentech Inc Antikörper varianten und fragmente davon
WO1999054342A1 (en) 1998-04-20 1999-10-28 Pablo Umana Glycosylation engineering of antibodies for improving antibody-dependent cellular cytotoxicity
US6534482B1 (en) 1998-05-13 2003-03-18 Epimmune, Inc. Expression vectors for stimulating an immune response and methods of using the same
US20020187472A1 (en) 2001-03-09 2002-12-12 Preeti Lal Steap-related protein
US20030064397A1 (en) 1998-05-22 2003-04-03 Incyte Genomics, Inc. Transmembrane protein differentially expressed in prostate and lung tumors
GB9818731D0 (en) 1998-08-27 1998-10-21 Univ Portsmouth Compounds
WO2000012130A1 (en) 1998-08-27 2000-03-09 Smithkline Beecham Corporation Rp105 agonists and antagonists
ES2199200T3 (es) 1998-08-27 2004-02-16 Spirogen Limited Pirrolobenzodiacepinas.
JP4689781B2 (ja) 1998-09-03 2011-05-25 独立行政法人科学技術振興機構 アミノ酸輸送蛋白及びその遺伝子
WO2000020579A1 (en) 1998-10-02 2000-04-13 Mcmaster University Spliced form of erbb-2/neu oncogene
WO2001057188A2 (en) 2000-02-03 2001-08-09 Hyseq, Inc. Novel nucleic acids and polypeptides
US20020119158A1 (en) 1998-12-17 2002-08-29 Corixa Corporation Compositions and methods for the therapy and diagnosis of ovarian cancer
US6962980B2 (en) 1999-09-24 2005-11-08 Corixa Corporation Compositions and methods for the therapy and diagnosis of ovarian cancer
US6468546B1 (en) 1998-12-17 2002-10-22 Corixa Corporation Compositions and methods for therapy and diagnosis of ovarian cancer
US20030091580A1 (en) 2001-06-18 2003-05-15 Mitcham Jennifer L. Compositions and methods for the therapy and diagnosis of ovarian cancer
US6858710B2 (en) 1998-12-17 2005-02-22 Corixa Corporation Compositions and methods for the therapy and diagnosis of ovarian cancer
ATE407949T1 (de) 1998-12-30 2008-09-15 Beth Israel Hospital Charakterisierung der proteinfamilie von soc/crac kalziumkanälen
US20030009013A1 (en) 1998-12-30 2003-01-09 Genentech, Inc. Secreted and transmembrane polypeptides and nucleic acids encoding the same
HUP0104865A3 (en) 1999-01-15 2004-07-28 Genentech Inc Polypeptide variants with altered effector function
US6737056B1 (en) 1999-01-15 2004-05-18 Genentech, Inc. Polypeptide variants with altered effector function
WO2000044899A1 (en) 1999-01-29 2000-08-03 Corixa Corporation Her-2/neu fusion proteins
GB9905124D0 (en) 1999-03-05 1999-04-28 Smithkline Beecham Biolog Novel compounds
AU3395900A (en) 1999-03-12 2000-10-04 Human Genome Sciences, Inc. Human lung cancer associated gene sequences and polypeptides
JP4368530B2 (ja) 1999-04-09 2009-11-18 協和発酵キリン株式会社 免疫機能分子の活性を調節する方法
US7312303B2 (en) 1999-05-11 2007-12-25 Genentech, Inc. Anti-PRO4980 antibodies
CA2370466C (en) 1999-06-25 2011-02-08 Sharon Erickson Methods of treatment using anti-erbb antibody-maytansinoid conjugates
AU4952600A (en) 1999-06-03 2000-12-28 Takeda Chemical Industries Ltd. Screening method with the use of cd100
US7041292B1 (en) 1999-06-25 2006-05-09 Genentech, Inc. Treating prostate cancer with anti-ErbB2 antibodies
US6949245B1 (en) 1999-06-25 2005-09-27 Genentech, Inc. Humanized anti-ErbB2 antibodies and treatment with anti-ErbB2 antibodies
US7589172B2 (en) 1999-07-20 2009-09-15 Genentech, Inc. PRO256 polypeptides
US7297770B2 (en) 1999-08-10 2007-11-20 Genentech, Inc. PRO6496 polypeptides
US7294696B2 (en) 1999-08-17 2007-11-13 Genentech Inc. PRO7168 polypeptides
CA2380355A1 (en) 1999-09-01 2001-03-08 Genentech, Inc. Secreted and transmembrane polypeptides and nucleic acids encoding the same
US20030129192A1 (en) 1999-09-10 2003-07-10 Corixa Corporation Compositions and methods for the therapy and diagnosis of ovarian cancer
US20030232056A1 (en) 1999-09-10 2003-12-18 Corixa Corporation Compositions and methods for the therapy and diagnosis of ovarian cancer
US20030206918A1 (en) 1999-09-10 2003-11-06 Corixa Corporation Compositions and methods for the therapy and diagnosis of ovarian cancer
WO2001025454A2 (en) 1999-10-04 2001-04-12 Medicago Inc. Method for regulating transcription of foreign genes in the presence of nitrogen
US7125978B1 (en) 1999-10-04 2006-10-24 Medicago Inc. Promoter for regulating expression of foreign genes
CA2388245C (en) 1999-10-19 2012-01-10 Tatsuya Ogawa The use of serum-free adapted rat cells for producing heterologous polypeptides
IL149116A0 (en) 1999-10-29 2002-11-10 Genentech Inc Anti-prostate stem cell antigen (psca) antibody compositions and methods of use
EP2316843B1 (en) 1999-11-29 2015-10-14 The Trustees of Columbia University in the City of New York Isolation of five novel genes coding for new Fc receptors-type melanoma involved in the pathogenesis of lymphoma/melanoma
EP1248800A2 (en) 1999-11-30 2002-10-16 Corixa Corporation Compositions and methods for therapy and diagnosis of breast cancer
AU2087401A (en) 1999-12-10 2001-06-18 Epimmune, Inc. Inducing cellular immune responses to her2/neu using peptide and nucleic acid compositions
EP1240319A1 (en) 1999-12-15 2002-09-18 Genentech, Inc. Shotgun scanning, a combinatorial method for mapping functional protein epitopes
NZ502058A (en) 1999-12-23 2003-11-28 Ovita Ltd Isolated mutated nucleic acid molecule for regulation of ovulation rate
US6610286B2 (en) 1999-12-23 2003-08-26 Zymogenetics, Inc. Method for treating inflammation using soluble receptors to interleukin-20
EP1244708B8 (en) 1999-12-23 2007-03-07 ZymoGenetics, Inc. Method for treating inflammation
AU783473B2 (en) 1999-12-23 2005-10-27 Zymogenetics Inc. Soluble interleukin-20 receptor
US7297333B2 (en) 2000-01-20 2007-11-20 Genentech, Inc. Anti-PRO10268 antibodies
US20030224379A1 (en) 2000-01-21 2003-12-04 Tang Y. Tom Novel nucleic acids and polypeptides
CA2398102A1 (en) 2000-01-21 2001-07-26 Corixa Corporation Compounds and methods for prevention and treatment of her-2/neu associated malignancies
AU2001238596A1 (en) 2000-02-22 2001-09-03 Millennium Pharmaceuticals, Inc. 18607, a novel human calcium channel
US20030219806A1 (en) 2000-02-22 2003-11-27 Millennium Pharmaceuticals, Inc. Novel 18607, 15603, 69318, 12303, 48000, 52920, 5433, 38554, 57301, 58324, 55063, 52991, 59914, 59921 and 33751 molecules and uses therefor
US20040002068A1 (en) 2000-03-01 2004-01-01 Corixa Corporation Compositions and methods for the detection, diagnosis and therapy of hematological malignancies
US20040005561A1 (en) 2000-03-01 2004-01-08 Corixa Corporation Compositions and methods for the detection, diagnosis and therapy of hematological malignancies
WO2001066689A2 (en) 2000-03-07 2001-09-13 Hyseq, Inc. Novel nucleic acids and polypeptides
AU4941101A (en) 2000-03-24 2001-10-08 Fahri Saatcioglu Novel prostate-specific or testis-specific nucleic acid molecules, polypeptides,and diagnostic and therapeutic methods
WO2001072830A2 (de) 2000-03-31 2001-10-04 Ipf Pharmaceuticals Gmbh Diagnostik- und arzneimittel zur untersuchung des zelloberflächenproteoms von tumor- und entzündungszellen sowie zur behandlung von tumorerkrankungen und entzündlichen erkrankungen vorzugsweise mit hilfe einer spezifischen chemokinrezeptor-analyse und der chemokinrezeptor-ligand-interaktion
US7279294B2 (en) 2000-04-03 2007-10-09 The United States Of America As Represented By The Secretary, Dept. Of Health And Human Services, Nih Tumor markers in ovarian cancer
AU2001249885A1 (en) 2000-04-07 2001-10-23 Arena Pharmaceuticals, Inc. Non-endogenous, constitutively activated known g protein-coupled receptors
HUP0300369A2 (hu) 2000-04-11 2003-06-28 Genentech, Inc. Többértékű antitestek és alkalmazásuk
US20030119115A1 (en) 2000-05-17 2003-06-26 Genentech, Inc. Secreted and transmembrane polypeptides and nucleic acids encoding the same
WO2001088133A2 (en) 2000-05-18 2001-11-22 Lexicon Genetics Incorporated Human semaphorin homologs and polynucleotides encoding the same
AU2001274888A1 (en) 2000-05-19 2001-12-03 Human Genome Sciences, Inc. Nucleic acids, proteins, and antibodies
PL217410B1 (pl) 2000-05-19 2014-07-31 Genentech Inc Zastosowanie antagonisty ErbB, antagonista ErbB do zastosowania w metodzie leczenia raka i sposób identyfikacji pacjenta skłonnego do korzystnej odpowiedzi na antagonistę ErbB przy leczeniu raka
US20020051990A1 (en) 2000-06-09 2002-05-02 Eric Ople Novel gene targets and ligands that bind thereto for treatment and diagnosis of ovarian carcinomas
JP2004523203A (ja) 2000-06-16 2004-08-05 インサイト・ゲノミックス・インコーポレイテッド Ｇタンパク質結合受容体
JP2004502414A (ja) 2000-06-30 2004-01-29 ヒューマン　ジノーム　サイエンシーズ，　インコーポレイテッド Ｂ７様ポリヌクレオチド、ポリペプチドおよび抗体
CA2413262A1 (en) 2000-06-30 2002-01-10 Amgen, Inc. B7-like molecules and uses thereof
AU2001273151A1 (en) 2000-06-30 2002-01-14 Incyte Genomics, Inc. Human extracellular matrix and cell adhesion polypeptides
WO2002006339A2 (en) 2000-07-03 2002-01-24 Curagen Corporation Proteins and nucleic acids encoding same
US20040044179A1 (en) 2000-07-25 2004-03-04 Genentech, Inc. Secreted and transmembrane polypeptides and nucleic acids encoding the same
US6891030B2 (en) 2000-07-27 2005-05-10 Mayo Foundation For Medical Education And Research T-cell immunoregulatory molecule
AU2001287639A1 (en) 2000-07-28 2002-02-13 Ulrich Wissenbach Trp8, trp9 and trp10, markers for cancer
US7229623B1 (en) 2000-08-03 2007-06-12 Corixa Corporation Her-2/neu fusion proteins
WO2002013847A2 (en) 2000-08-14 2002-02-21 Corixa Corporation Methods for diagnosis and therapy of hematological and virus-associated malignancies
AU2001295008A1 (en) 2000-08-14 2002-02-25 Corixa Corporation Compositions and methods for the therapy and diagnosis of Her-2/neu-associated malignancies
US6984494B2 (en) 2000-08-15 2006-01-10 Genentech, Inc. Analytical method
GB0020953D0 (en) 2000-08-24 2000-10-11 Smithkline Beecham Biolog Vaccine
MXPA03001645A (es) 2000-08-24 2004-05-14 Genentech Inc Composiciones y metodos para el diagnostico y tratamiento de tumores.
WO2002022660A2 (en) 2000-09-11 2002-03-21 Hyseq, Inc. Novel nucleic acids and polypeptides
US6613567B1 (en) 2000-09-15 2003-09-02 Isis Pharmaceuticals, Inc. Antisense inhibition of Her-2 expression
EP1351703B1 (en) 2000-09-15 2006-07-26 ZymoGenetics, Inc. Use of a polypeptide comprising the extracellular domains of il-20ra and il-20rb for the treatment of inflammation
US7491797B2 (en) 2000-09-15 2009-02-17 Genentech, Inc. PRO6308 polypeptide
CA2422814A1 (en) 2000-09-18 2002-03-21 Biogen, Inc. Cripto mutant and uses thereof
UA83458C2 (uk) 2000-09-18 2008-07-25 Байоджен Айдек Ма Інк. Виділений поліпептид baff-r (рецептор фактора активації в-клітин сімейства tnf)
US7064191B2 (en) 2000-10-06 2006-06-20 Kyowa Hakko Kogyo Co., Ltd. Process for purifying antibody
US6946292B2 (en) 2000-10-06 2005-09-20 Kyowa Hakko Kogyo Co., Ltd. Cells producing antibody compositions with increased antibody dependent cytotoxic activity
WO2002031140A1 (fr) 2000-10-06 2002-04-18 Kyowa Hakko Kogyo Co., Ltd. Cellules produisant des compositions d'anticorps
EP1474528A4 (en) 2000-10-13 2006-06-14 Protein Design Labs Inc METHODS FOR DIAGNOSING PROSTATE CANCER, COMPOSITIONS AND METHODS FOR SCREENING PROSTATE CANCER MODULATORS
US6596541B2 (en) 2000-10-31 2003-07-22 Regeneron Pharmaceuticals, Inc. Methods of modifying eukaryotic cells
CA2428242A1 (en) 2000-11-07 2002-05-16 Zymogenetics, Inc. Human tumor necrosis factor receptor
US20020150573A1 (en) 2000-11-10 2002-10-17 The Rockefeller University Anti-Igalpha-Igbeta antibody for lymphoma therapy
AU2002239422B2 (en) 2000-11-30 2006-12-07 E. R. Squibb & Sons, L.L.C. Transgenic transchromosomal rodents for making human antibodies
WO2002061087A2 (en) 2000-12-19 2002-08-08 Lifespan Biosciences, Inc. Antigenic peptides, such as for g protein-coupled receptors (gpcrs), antibodies thereto, and systems for identifying such antigenic peptides
AU2002243495A1 (en) 2001-01-12 2002-07-24 University Of Medicine And Dentistry Of New Jersey Bone morphogenetic protein-2 in the treatment and diagnosis of cancer
US20030119119A1 (en) 2001-01-16 2003-06-26 Genentech, Inc. Secreted and transmembrane polypeptides and nucleic acids encoding the same
US20030119133A1 (en) 2001-01-16 2003-06-26 Genentech, Inc. Secreted and transmembrane polypeptides and nucleic acids encoding the same
US7754208B2 (en) 2001-01-17 2010-07-13 Trubion Pharmaceuticals, Inc. Binding domain-immunoglobulin fusion proteins
MXPA03006617A (es) 2001-01-24 2004-12-02 Protein Design Labs Inc Metodos de diagnostico de cancer de pecho, composiciones y metodos de rastreo de moduladores de cancer de pecho.
WO2002060317A2 (en) 2001-01-30 2002-08-08 Corixa Corporation Compositions and methods for the therapy and diagnosis of pancreatic cancer
US20040170994A1 (en) 2001-02-12 2004-09-02 Callen David Frederick DNA sequences for human tumour suppressor genes
US20030087250A1 (en) 2001-03-14 2003-05-08 Millennium Pharmaceuticals, Inc. Nucleic acid molecules and proteins for the identification, assessment, prevention, and therapy of ovarian cancer
US20040236091A1 (en) 2001-03-28 2004-11-25 Chicz Roman M. Translational profiling
WO2003008537A2 (en) 2001-04-06 2003-01-30 Mannkind Corporation Epitope sequences
US6820011B2 (en) 2001-04-11 2004-11-16 The Regents Of The University Of Colorado Three-dimensional structure of complement receptor type 2 and uses thereof
MXPA03009510A (es) 2001-04-17 2005-04-29 Univ Arkansas Secuencias de repeticion del gen ca125 y su uso para intervenciones de diagnosticos y terapeuticas.
AU2002309583A1 (en) 2001-04-18 2002-11-05 Protein Desing Labs, Inc. Methods of diagnosis of lung cancer, compositions and methods of screening for modulators of lung cancer
SI1390389T1 (sl) 2001-04-26 2009-06-30 Biogen Idec Inc Protitelesa, ki blokirajo cripto in uporabe le-teh
EP1515982A4 (en) 2001-05-09 2005-10-26 Corixa Corp METHODS AND COMPOSITIONS FOR THE THERAPY AND DIAGNOSIS OF PROSTATE CANCER
WO2002092836A2 (en) 2001-05-11 2002-11-21 Sloan-Kettering Institute For Cancer Research Nucleic acid sequence encoding ovarian antigen, ca125, and uses thereof
IL158920A0 (en) 2001-05-24 2004-05-12 Zymogenetics Inc Taci-immunoglobulin fusion proteins
WO2003000842A2 (en) 2001-06-04 2003-01-03 Curagen Corporation Novel proteins and nucleic acids encoding same
AU2002314901A1 (en) 2001-06-04 2002-12-16 Eos Biotechnology, Inc. Methods of diagnosis and treatment of androgen-dependent prostate cancer, prostate cancer undergoing androgen-withdrawal, and androgen-independent prostate cancer
WO2002099040A2 (en) 2001-06-05 2002-12-12 Exelixis, Inc. Igs as modifiers of the p53 pathway and methods of use
JP2005501528A (ja) 2001-06-05 2005-01-20 エクセリクシス・インコーポレイテッド ｐ５３経路のモディファイヤーとしてのＧＦＡＴｓおよび使用方法
US7235358B2 (en) 2001-06-08 2007-06-26 Expression Diagnostics, Inc. Methods and compositions for diagnosing and monitoring transplant rejection
WO2002101075A2 (en) 2001-06-13 2002-12-19 Millennium Pharmaceuticals, Inc. Novel genes, compositions, kits, and methods for identification, assessment, prevention, and therapy of cervical cancer
US7189507B2 (en) 2001-06-18 2007-03-13 Pdl Biopharma, Inc. Methods of diagnosis of ovarian cancer, compositions and methods of screening for modulators of ovarian cancer
WO2002102235A2 (en) 2001-06-18 2002-12-27 Eos Biotechnology Inc. Methods of diagnosis of ovarian cancer, compositions and methods of screening for modulators of ovarian cancer
WO2003004989A2 (en) 2001-06-21 2003-01-16 Millennium Pharmaceuticals, Inc. Compositions, kits, and methods for identification, assessment, prevention, and therapy of breast cancer
WO2003002717A2 (en) 2001-06-28 2003-01-09 Schering Corporation Biological activity of ak155
US20030120040A1 (en) 2001-06-29 2003-06-26 Genentech, Inc. Secreted and Transmembrane polypeptides and nucleic acids encoding the same
WO2003004529A2 (en) 2001-07-02 2003-01-16 Licentia Ltd. Ephrin-tie receptor materials and methods
US20040076955A1 (en) 2001-07-03 2004-04-22 Eos Biotechnology, Inc. Methods of diagnosis of bladder cancer, compositions and methods of screening for modulators of bladder cancer
WO2003003984A2 (en) 2001-07-05 2003-01-16 Curagen Corporation Novel proteins and nucleic acids encoding same
WO2003055439A2 (en) 2001-07-18 2003-07-10 The Regents Of The University Of California Her2/neu target antigen and use of same to stimulate an immune response
US20030108963A1 (en) 2001-07-25 2003-06-12 Millennium Pharmaceuticals, Inc. Novel genes, compositions, kit, and methods for identification, assessment, prevention and therapy of prostate cancer
EA007984B1 (ru) 2001-08-03 2007-02-27 Дженентек, Инк. ПОЛИПЕПТИДЫ TACIs И BR3 И ИХ ПРИМЕНЕНИЕ
CN1555411A (zh) 2001-08-03 2004-12-15 ���迨�����＼���ɷݹ�˾ 抗体-依赖性细胞毒性增大的抗体糖基化变体
EP1478772A2 (en) 2001-08-14 2004-11-24 The General Hospital Corporation Nucleic acid and amino acid sequences involved in pain
US20030092013A1 (en) 2001-08-16 2003-05-15 Vitivity, Inc. Diagnosis and treatment of vascular disease
WO2003018621A2 (en) 2001-08-23 2003-03-06 Oxford Biomedica (Uk) Limited Genes
AU2002357643A1 (en) 2001-08-29 2003-04-14 Vanderbilt University The human mob-5 (il-24) receptors and uses thereof
US20030124579A1 (en) 2001-09-05 2003-07-03 Eos Biotechnology, Inc. Methods of diagnosis of ovarian cancer, compositions and methods of screening for modulators of ovarian cancer
ES2537074T3 (es) 2001-09-06 2015-06-02 Agensys, Inc. Ácido nucleico y proteína correspondiente denominados STEAP-1 útiles en el tratamiento y la detección de cáncer
EP1434881A4 (en) 2001-09-17 2005-10-26 Protein Design Labs Inc METHOD FOR DIAGNOSIS OF CANCER COMPOSITIONS AND METHOD FOR SCREENING ON CANCER MODULATORS
JP2005536439A (ja) 2001-09-18 2005-12-02 ジェネンテック・インコーポレーテッド 腫瘍の診断及び治療のための組成物と方法
US20050004017A1 (en) 2001-09-18 2005-01-06 Yuval Reiss Methods and compositions for treating hcap associated diseases
WO2003025148A2 (en) 2001-09-19 2003-03-27 Nuvelo, Inc. Novel nucleic acids and polypeptides
US20030077644A1 (en) 2001-09-28 2003-04-24 Bing Yang Diagnosis and treatment of diseases caused by mutations in CD72
AU2002362436A1 (en) 2001-10-03 2003-04-14 Rigel Pharmaceuticals, Inc. Modulators of lymphocyte activation and migration
WO2003029421A2 (en) 2001-10-03 2003-04-10 Origene Technologies, Inc. Regulated breast cancer genes
US20030228319A1 (en) 2002-04-16 2003-12-11 Genentech, Inc. Compositions and methods for the diagnosis and treatment of tumor
US20050123925A1 (en) 2002-11-15 2005-06-09 Genentech, Inc. Compositions and methods for the diagnosis and treatment of tumor
CA2461665A1 (en) 2001-10-19 2003-05-01 Genentech, Inc. Compositions and methods for the diagnosis and treatment of inflammatory bowel disorders
CA2465268A1 (en) 2001-10-24 2003-05-01 National Jewish Medical And Research Center Three-dimensional structures of tall-1 and its cognate receptors and modified proteins and methods related thereto
US20030157108A1 (en) 2001-10-25 2003-08-21 Genentech, Inc. Glycoprotein compositions
CN1966725A (zh) 2001-10-31 2007-05-23 爱尔康公司 骨形态生发蛋白(bmp)、bmp受体和bmp结合蛋白及它们在诊断和治疗青光眼中的用途
US20030232350A1 (en) 2001-11-13 2003-12-18 Eos Biotechnology, Inc. Methods of diagnosis of cancer, compositions and methods of screening for modulators of cancer
WO2003042661A2 (en) 2001-11-13 2003-05-22 Protein Design Labs, Inc. Methods of diagnosis of cancer, compositions and methods of screening for modulators of cancer
US7344843B2 (en) 2001-11-29 2008-03-18 Serono Genetics Institute S.A. Agonists and antagonists of prolixin for the treatment of metabolic disorders
WO2003048202A2 (en) 2001-12-03 2003-06-12 Asahi Kasei Pharma Corporation Nf-kappab activating genes
CA2469941A1 (en) 2001-12-10 2003-07-03 Nuvelo, Inc. Novel nucleic acids and polypeptides
US20040093621A1 (en) 2001-12-25 2004-05-13 Kyowa Hakko Kogyo Co., Ltd Antibody composition which specifically binds to CD20
US20030134790A1 (en) 2002-01-11 2003-07-17 University Of Medicine And Dentistry Of New Jersey Bone Morphogenetic Protein-2 And Bone Morphogenetic Protein-4 In The Treatment And Diagnosis Of Cancer
US7452675B2 (en) 2002-01-25 2008-11-18 The Queen's Medical Center Methods of screening for TRPM4b modulators
ATE482719T1 (de) 2002-02-21 2010-10-15 Univ Duke Behandlungsverfahren unter verwendung von anti- cd22-antikörpern
EP2388265A1 (en) 2002-02-22 2011-11-23 Genentech, Inc. Compositions and methods for the treatment of immune related diseases
US20030219795A1 (en) 2002-03-01 2003-11-27 Marcia Belvin SCDs as modifiers of the p53 pathway and methods of use
WO2003097803A2 (en) 2002-05-15 2003-11-27 Avalon Pharmaceuticals Cancer-linked gene as target for chemotherapy
WO2003104399A2 (en) 2002-06-07 2003-12-18 Avalon Pharmaceuticals, Inc Cancer-linked gene as target for chemotherapy
US6660856B2 (en) 2002-03-08 2003-12-09 Kaohsiung Medical University Synthesis of pyrrolo[2,1-c][1,4]benzodiazepine analogues
EP2258712A3 (en) 2002-03-15 2011-05-04 Multicell Immunotherapeutics, Inc. Compositions and Methods to Initiate or Enhance Antibody and Major-histocompatibility Class I or Class II-restricted T Cell Responses by Using Immunomodulatory, Non-coding RNA Motifs
WO2004000997A2 (en) 2002-03-19 2003-12-31 Curagen Corporation Therapeutic polypeptides, nucleic acids encoding same, and methods of use
JP2005534286A (ja) 2002-03-21 2005-11-17 サネシス ファーマシューティカルズ， インコーポレイテッド キナーゼインヒビターの同定
US7193069B2 (en) 2002-03-22 2007-03-20 Research Association For Biotechnology Full-length cDNA
EP1494693B1 (en) 2002-03-22 2010-12-08 Biogen Idec MA Inc. Cripto-specific antibodies
US7317087B2 (en) 2002-03-25 2008-01-08 The Uab Research Foundation Members of the FC receptor homolog gene family (FCRH1-3, 6), related reagents, and uses thereof
WO2003083074A2 (en) 2002-03-28 2003-10-09 Idec Pharmaceuticals Corporation Novel gene targets and ligands that bind thereto for treatment and diagnosis of colon carcinomas
US20030194704A1 (en) 2002-04-03 2003-10-16 Penn Sharron Gaynor Human genome-derived single exon nucleic acid probes useful for gene expression analysis two
AU2003223469A1 (en) 2002-04-05 2003-10-27 Agensys, Inc. Nucleic acid and corresponding protein entitled 98p4b6 useful in treatment and detection of cancer
AU2003236019A1 (en) 2002-04-09 2003-10-20 Kyowa Hakko Kirin Co., Ltd. Drug containing antibody composition appropriate for patient suffering from Fc Gamma RIIIa polymorphism
CA2481920A1 (en) 2002-04-09 2003-10-16 Kyowa Hakko Kogyo Co., Ltd. Antibody composition-containing medicament
DE60336548D1 (de) 2002-04-09 2011-05-12 Kyowa Hakko Kirin Co Ltd Zelle mit erniedrigter oder deletierter aktivität eines am gdp-fucosetransport beteiligten proteins
US20040110704A1 (en) 2002-04-09 2004-06-10 Kyowa Hakko Kogyo Co., Ltd. Cells of which genome is modified
WO2003085119A1 (fr) 2002-04-09 2003-10-16 Kyowa Hakko Kogyo Co., Ltd. Procede d'amelioration de l'activite d'une composition d'anticorps de liaison avec le recepteur fc$g(g) iiia
AU2003236015A1 (en) 2002-04-09 2003-10-20 Kyowa Hakko Kirin Co., Ltd. Process for producing antibody composition
AU2003223520A1 (en) 2002-04-12 2003-10-27 Mitokor Targets for therapeutic intervention identified in the mitochondrial proteome
AU2003239158A1 (en) 2002-04-17 2003-11-03 Baylor College Of Medicine Aib1 as a prognostic marker and predictor of resistance to encocrine therapy
WO2003093444A2 (en) 2002-05-03 2003-11-13 Incyte Corporation Transporters and ion channels
WO2003101388A2 (en) 2002-05-30 2003-12-11 Bristol-Myers Squibb Company Human solute carrier family 7 member 11 (hslc7a11)
WO2003102157A2 (en) 2002-06-03 2003-12-11 Genentech, Inc. Synthetic antibody phage libraries
EP1575492A4 (en) 2002-06-04 2007-05-09 Avalon Pharmaceuticals GENERAL ASSOCIATED WITH CANCER AS TARGET FOR CHEMOTHERAPY
WO2003101283A2 (en) 2002-06-04 2003-12-11 Incyte Corporation Diagnostics markers for lung cancer
DK1513934T3 (da) 2002-06-06 2011-05-02 Oncotherapy Science Inc Gener og polypeptider relateret til humane coloncancersygdomme
WO2003104270A2 (en) 2002-06-06 2003-12-18 Ingenium Pharmaceuticals Ag Dudulin 2 genes, expression products, non-human animal model: uses in human hematological disease
WO2003105758A2 (en) 2002-06-12 2003-12-24 Avalon Pharmaceuticals, Inc. Cancer-linked gene as target for chemotherapy
US20040249130A1 (en) 2002-06-18 2004-12-09 Martin Stanton Aptamer-toxin molecules and methods for using same
AU2003247576A1 (en) 2002-06-18 2003-12-31 Archemix Corp. Aptamer-toxin molecules and methods for using same
US7304149B2 (en) 2002-06-20 2007-12-04 Washington University In St. Louis BTLA nucleic acids
EP2365004B1 (en) 2002-06-21 2016-01-06 Johns Hopkins University School of Medicine Membrane associated tumor endothelium markers
WO2004009622A2 (en) 2002-07-19 2004-01-29 Cellzome Ag Protein complexes of cellular networks underlying the development of cancer and other diseases
AU2003256836A1 (en) 2002-07-25 2004-02-16 Genentech, Inc. Taci antibodies and uses thereof
AR040956A1 (es) 2002-07-31 2005-04-27 Schering Ag Nuevos conjugados de efectores, procedimientos para su preparacion y su uso farmaceutico
AU2003251471A1 (en) 2002-08-06 2004-02-25 Bayer Healthcare Ag Diagnostics and therapeutics for diseases associated with human cxc chemokine receptor 5(cxcr5)
JP2004121218A (ja) 2002-08-06 2004-04-22 Jenokkusu Soyaku Kenkyusho:Kk 気管支喘息または慢性閉塞性肺疾患の検査方法
AU2003259163B2 (en) 2002-08-16 2008-07-03 Immunogen, Inc. Cross-linkers with high reactivity and solubility and their use in the preparation of conjugates for targeted delivery of small molecule drugs
KR20050048615A (ko) 2002-08-19 2005-05-24 제넨테크, 인크. 종양의 진단 및 치료를 위한 조성물 및 방법
EP1572957A4 (en) 2002-08-27 2007-10-10 Bristol Myers Squibb Pharma Co IDENTIFICATION OF POLYNUCLEOTIDES FOR PREDICTING THE ACTIVITY OF COMPOUNDS INTERACTING WITH AND / OR MODULATING TYROSINE KINASE PROTEINS AND / OR TYROSINE KINASE PROTEIN PATHWAYS IN MAMMARY CELLS
WO2004020595A2 (en) 2002-08-29 2004-03-11 Five Prime Therapeutics, Inc. Novel human polypeptides encoded by polynucleotides
AU2002951346A0 (en) 2002-09-05 2002-09-26 Garvan Institute Of Medical Research Diagnosis of ovarian cancer
AU2003270311A1 (en) 2002-09-06 2004-03-29 Mannkind Corporation Epitope sequences
AU2003300776A1 (en) 2002-09-09 2004-05-25 Omeros Corporation G protein coupled receptors and uses thereof
JP2004113151A (ja) 2002-09-27 2004-04-15 Sankyo Co Ltd 癌遺伝子及びその用途
AU2003288918A1 (en) 2002-10-04 2004-05-04 Van Andel Research Institute Molecular sub-classification of kidney tumors and the discovery of new diagnostic markers
US7361740B2 (en) 2002-10-15 2008-04-22 Pdl Biopharma, Inc. Alteration of FcRn binding affinities or serum half-lives of antibodies by mutagenesis
JP2006516094A (ja) 2002-11-08 2006-06-22 ジェネンテック・インコーポレーテッド ナチュラルキラー細胞関連疾患の治療のための組成物と方法
CA2503621A1 (en) 2002-11-13 2004-05-27 Genentech, Inc. Methods and compositions for diagnosing dysplasia
CA2505919A1 (en) 2002-11-15 2004-06-03 The Board Of Trustees Of The University Of Arkansas Ca125 gene and its use for diagnostic and therapeutic interventions
CA2505601C (en) 2002-11-15 2014-10-28 Musc Foundation For Research Development Complement receptor 2 targeted complement modulators
AU2003297300A1 (en) 2002-11-20 2004-06-15 Biogen Idec Inc. Novel gene targets and ligands that bind thereto for treatment and diagnosis of carcinomas
EP1624753B1 (en) 2002-11-21 2012-01-25 The University of Utah Research Foundation Purinergic modulation of smell
US20040253606A1 (en) 2002-11-26 2004-12-16 Protein Design Labs, Inc. Methods of detecting soft tissue sarcoma, compositions and methods of screening for soft tissue sarcoma modulators
WO2004053079A2 (en) 2002-12-06 2004-06-24 Diadexus, Inc. Compositions, splice variants and methods relating to ovarian specific genes and proteins
US20040157278A1 (en) 2002-12-13 2004-08-12 Bayer Corporation Detection methods using TIMP 1
PT1572744E (pt) 2002-12-16 2010-09-07 Genentech Inc Variantes de imunoglobulina e utilizações destas
WO2004058171A2 (en) 2002-12-20 2004-07-15 Protein Design Labs, Inc. Antibodies against gpr64 and uses thereof
US20050249671A9 (en) 2002-12-23 2005-11-10 David Parmelee Neutrokine-alpha conjugate, neutrokine-alpha complex, and uses thereof
CA2512536A1 (en) 2003-01-08 2004-07-29 Bristol-Myers Squibb Company Biomarkers and methods for determining sensitivity to epidermal growth factor receptor modulators
US20050227301A1 (en) 2003-01-10 2005-10-13 Polgen Cell cycle progression proteins
US20050181375A1 (en) 2003-01-10 2005-08-18 Natasha Aziz Novel methods of diagnosis of metastatic cancer, compositions and methods of screening for modulators of metastatic cancer
EP1583820A4 (en) 2003-01-14 2007-07-18 Bristol Myers Squibb Co ASSOCIATED POLYNUCLEOTIDES AND POLYPEPTIDES ASSOCIATED WITH THE NF-KB WAY
WO2004065576A2 (en) 2003-01-15 2004-08-05 Millennium Pharmaceuticals, Inc. Methods and compositions for the treatment of urological disorder using differential expressed polypeptides
AU2004205631A1 (en) 2003-01-16 2004-08-05 Genentech, Inc. Synthetic antibody phage libraries
AU2004213432A1 (en) 2003-02-14 2004-09-02 Sagres Discovery, Inc. Novel therapeutic targets in cancer
US20030224411A1 (en) 2003-03-13 2003-12-04 Stanton Lawrence W. Genes that are up- or down-regulated during differentiation of human embryonic stem cells
WO2004087717A1 (en) 2003-03-31 2004-10-14 Council Of Scientific And Industrial Research Non-cross-linking pyrrolo[2,1-c][1,4]benzodiazepines as potential antitumour agents and process thereof
RU2314309C2 (ru) * 2003-03-31 2008-01-10 Каунсил Оф Сайентифик Энд Индастриал Рисерч Пирроло [2.1-c][1.4] бензодиазепины, способ их получения и фармацевтическая композиция на их основе
GB0321295D0 (en) 2003-09-11 2003-10-15 Spirogen Ltd Synthesis of protected pyrrolobenzodiazepines
AU2004279742A1 (en) 2003-10-08 2005-04-21 Kyowa Hakko Kirin Co., Ltd. Fused protein composition
US20070134759A1 (en) 2003-10-09 2007-06-14 Harue Nishiya Process for producing antibody composition by using rna inhibiting the function of alpha1,6-fucosyltransferase
KR101220691B1 (ko) 2003-11-05 2013-01-14 로슈 글리카트 아게 증가된 ｆｃ 수용체 결합 친화성 및 효과기 기능을 가진ｃｄ20 항체
ES2605443T3 (es) 2003-11-06 2017-03-14 Seattle Genetics, Inc. Conjugados de auristatina con anticuerpos anti-HER2 o anti-CD22 y su uso en terapia
WO2005053742A1 (ja) 2003-12-04 2005-06-16 Kyowa Hakko Kogyo Co., Ltd. 抗体組成物を含有する医薬
ES2398975T3 (es) 2004-03-01 2013-03-25 Spirogen Sàrl Derivados de 11-hidroxi-5H-pirrolo[2,1-c][1,4]benzodiazepin-5-ona como intermedios clave para la preparación de pirrolobenzodiazepinas sustituidas en C2
ZA200608130B (en) 2004-03-31 2008-12-31 Genentech Inc Humanized anti-TGF-beta antibodies
US7785903B2 (en) 2004-04-09 2010-08-31 Genentech, Inc. Variable domain library and uses
EP2357201B1 (en) 2004-04-13 2017-08-30 F. Hoffmann-La Roche AG Anti-P-selectin antibodies
FR2869231B1 (fr) 2004-04-27 2008-03-14 Sod Conseils Rech Applic Composition therapeutique contenant au moins un derive de la pyrrolobenzodiazepine et la fludarabine
CA2567520A1 (en) 2004-06-01 2005-12-15 Genentech, Inc. Maytansinoid-antibody conjugates
TWI309240B (en) 2004-09-17 2009-05-01 Hoffmann La Roche Anti-ox40l antibodies
US20100111856A1 (en) 2004-09-23 2010-05-06 Herman Gill Zirconium-radiolabeled, cysteine engineered antibody conjugates
EP3088004B1 (en) 2004-09-23 2018-03-28 Genentech, Inc. Cysteine engineered antibodies and conjugates
JO3000B1 (ar) 2004-10-20 2016-09-05 Genentech Inc مركبات أجسام مضادة .
WO2006078307A1 (en) 2005-01-21 2006-07-27 Genentech, Inc. Fixed dosing of her antibodies
BRPI0606542A8 (pt) 2005-02-23 2018-03-20 Genentech Inc métodos para aumentar o tempo de progressão de uma doença (ttp)
WO2007056441A2 (en) 2005-11-07 2007-05-18 Genentech, Inc. Binding polypeptides with diversified and consensus vh/vl hypervariable sequences
WO2007064919A2 (en) 2005-12-02 2007-06-07 Genentech, Inc. Binding polypeptides with restricted diversity sequences
PL1813614T3 (pl) 2006-01-25 2012-03-30 Sanofi Sa Środki cytotoksyczne zawierające nowe pochodne tomaymycyny
US20070292936A1 (en) 2006-05-09 2007-12-20 Genentech, Inc. Binding polypeptides with optimized scaffolds
PL2446904T3 (pl) 2006-05-30 2015-10-30 Genentech Inc Przeciwciała anty-CD22, ich immunokoniugaty oraz ich zastosowania
EP1864682A1 (en) * 2006-06-09 2007-12-12 Sanofi-Aventis Leptomycin derivatives
US10118970B2 (en) 2006-08-30 2018-11-06 Genentech, Inc. Multispecific antibodies
US20080226635A1 (en) 2006-12-22 2008-09-18 Hans Koll Antibodies against insulin-like growth factor I receptor and uses thereof
CN100592373C (zh) 2007-05-25 2010-02-24 群康科技(深圳)有限公司 液晶显示面板驱动装置及其驱动方法
MX350962B (es) 2008-01-07 2017-09-27 Amgen Inc Metodo para fabricar moleculas heterodimericas de fragmentos cristalizables de anticuerpo, utilizando efectos electrostaticos de direccion.
GB0819097D0 (en) 2008-10-17 2008-11-26 Spirogen Ltd Pyrrolobenzodiazepines
GB0819095D0 (en) 2008-10-17 2008-11-26 Spirogen Ltd Pyrrolobenzodiazepines
CA2750519C (en) * 2009-02-05 2018-09-25 Immunogen, Inc. Benzodiazepine derivatives
FR2949469A1 (fr) 2009-08-25 2011-03-04 Sanofi Aventis Derives anticancereux, leur preparation et leur application en therapeutique
CN104610454A (zh) 2010-02-16 2015-05-13 米迪缪尼有限公司 Hsa相关组合物及使用方法
CN102167742B (zh) 2010-02-25 2014-05-14 上海百迈博制药有限公司 一种全人源抗her2单克隆抗体、其制备方法及用途
MX368648B (es) 2010-04-15 2019-10-09 Seattle Genetics Inc Pirrolobenzodiazepinas usadas para tratar enfermedades proliferativas.
CN102933236B (zh) 2010-04-15 2014-10-08 斯皮罗根有限公司 吡咯并苯二氮卓类及其结合物
CN103068405A (zh) 2010-04-15 2013-04-24 西雅图基因公司 靶向吡咯并苯并二氮杂卓结合物
CA2796633C (en) 2010-04-23 2020-10-27 Genentech, Inc. Production of heteromultimeric proteins
CN103068406B (zh) 2010-06-08 2017-06-30 基因泰克公司 半胱氨酸改造的抗体和偶联物
FR2963007B1 (fr) 2010-07-26 2013-04-05 Sanofi Aventis Derives anticancereux, leur preparation et leur application therapeutique
CN103313990B (zh) * 2010-11-17 2016-07-20 基因泰克公司 丙氨酰美登醇抗体偶联物
CA2825064C (en) 2011-02-04 2022-08-30 Genentech, Inc. Fc variants and methods for their production
CN113896731A (zh) 2011-02-15 2022-01-07 伊缪诺金公司 细胞毒性苯并二氮杂䓬衍生物
ES2692268T3 (es) 2011-03-29 2018-12-03 Roche Glycart Ag Variantes de Fc de anticuerpo
WO2013017705A1 (es) 2011-08-03 2013-02-07 Salvador Moreno Rufino Baltasar Sistema de panel para construccion con retroiluminacion a base de diodos electroluminosos
SG11201400770SA (en) 2011-09-20 2014-04-28 Spirogen Sarl Pyrrolobenzodiazepines as unsymmetrical dimeric pbd compounds for inclusion in targeted conjugates
US9399073B2 (en) * 2011-10-14 2016-07-26 Seattle Genetics, Inc. Pyrrolobenzodiazepines
BR112014009055B1 (pt) 2011-10-14 2021-12-14 Seattle Genetics, Inc. Compostos pirrolobenzodiazepinas, conjugados alvos, ligante de fármaco e uso dos ditos conjugados para tratar uma doença proliferativa
CN108164551A (zh) 2011-10-14 2018-06-15 西雅图基因公司 吡咯并苯并二氮杂卓和靶向结合物
HUE025661T2 (en) 2011-10-14 2016-04-28 Medimmune Ltd Pyrrolobenzodiazepines and their conjugates
WO2013171157A1 (en) 2012-05-14 2013-11-21 Sanofi Method for producing recombinant 11-de-o-methyltomaymycin
KR101718200B1 (ko) 2012-05-21 2017-03-21 제넨테크, 인크. 항-Ly6E 항체 및 면역접합체 및 사용 방법
WO2013177481A1 (en) 2012-05-25 2013-11-28 Immunogen, Inc. Benzodiazepines and conjugates thereof
SG11201500087VA (en) * 2012-07-09 2015-02-27 Genentech Inc Immunoconjugates comprising anti-cd22 antibodies
RS57694B1 (sr) 2012-10-12 2018-11-30 Adc Therapeutics Sa Pirolobenzodiazepin - anti-psma konjugati antitela
KR101995620B1 (ko) 2012-10-12 2019-07-03 에이디씨 테라퓨틱스 에스에이 피롤로벤조디아제핀-항체 컨주게이트
NZ707490A (en) 2012-10-12 2018-09-28 Adc Therapeutics Sa Pyrrolobenzodiazepine-anti-cd22 antibody conjugates
US9745303B2 (en) 2012-10-12 2017-08-29 Medimmune Limited Synthesis and intermediates of pyrrolobenzodiazepine derivatives for conjugation
KR20150083994A (ko) 2012-10-12 2015-07-21 스피로즌 살 피롤로벤조디아제핀 및 그의 컨주게이트
ES2680153T3 (es) 2012-10-12 2018-09-04 Adc Therapeutics Sa Conjugados de anticuerpos anti-PSMA-pirrolobenzodiazepinas
WO2014057118A1 (en) 2012-10-12 2014-04-17 Adc Therapeutics Sarl Pyrrolobenzodiazepine-anti-cd22 antibody conjugates
JP2016502504A (ja) 2012-10-12 2016-01-28 エイディーシー・セラピューティクス・エス・アー・エール・エルＡｄｃ Ｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃｓ Ｓａｒｌ ピロロベンゾジアゼピン−抗体結合体
MX364329B (es) 2012-10-12 2019-04-23 Medimmune Ltd Conjugados del anticuerpo pirrolobenzodiazepina.
US10695433B2 (en) 2012-10-12 2020-06-30 Medimmune Limited Pyrrolobenzodiazepine-antibody conjugates
WO2014096365A1 (en) 2012-12-21 2014-06-26 Spirogen Sàrl Unsymmetrical pyrrolobenzodiazepines-dimers for use in the treatment of proliferative and autoimmune diseases
EP2935268B2 (en) 2012-12-21 2021-02-17 MedImmune Limited Pyrrolobenzodiazepines and conjugates thereof
EP2958944B1 (en) 2013-02-22 2019-03-27 AbbVie Stemcentrx LLC Antidll3-antibody-pbd conjugates and uses thereof
CA2918139A1 (en) * 2013-08-12 2015-02-19 Genentech, Inc. 1-(chloromethyl)-2,3-dihydro-1h-benzo[e]indole dimer antibody-drug conjugate compounds, and methods of use and treatment
CN105848685B (zh) 2013-12-16 2020-09-22 健泰科生物技术公司 拟肽化合物及其抗体药物偶联物
WO2015095223A2 (en) * 2013-12-16 2015-06-25 Genentech, Inc. Peptidomimetic compounds and antibody-drug conjugates thereof
SG11201701128YA (en) 2014-09-12 2017-03-30 Genentech Inc Cysteine engineered antibodies and conjugates
WO2016040723A1 (en) 2014-09-12 2016-03-17 Genentech, Inc. Anti-her2 antibodies and immunoconjugates
MA40575A (fr) 2014-09-17 2016-03-24 Genentech Inc Pyrrolobenzodiazépines et conjugués à base de disulfure d'anticorps associés
WO2016044396A1 (en) 2014-09-17 2016-03-24 Genentech, Inc. Immunoconjugates comprising anti-her2 antibodies and pyrrolobenzodiazepines
GB201513607D0 (en) * 2015-07-31 2015-09-16 Feingold Jay M Pyrrolobenzodiazepine-antibody conjugates
JP6817288B2 (ja) 2015-08-10 2021-01-20 ハンジョウ ディーエーシー バイオテック シーオー．，エルティディ．Ｈａｎｇｚｈｏｕ Ｄａｃ Ｂｉｏｔｅｃｈ Ｃｏ．，Ｌｔｄ． 新規な連結体及び生体分子と薬物との特異的共役におけるその使用
MA43345A (fr) 2015-10-02 2018-08-08 Hoffmann La Roche Conjugués anticorps-médicaments de pyrrolobenzodiazépine et méthodes d'utilisation

Also Published As

Publication number Publication date
CN108391422B (zh) 2021-10-22
EP3355935B1 (en) 2020-10-21
CA2996902A1 (en) 2017-04-06
IL258046A (en) 2018-05-31
JP6663984B2 (ja) 2020-03-13
UA123104C2 (uk) 2021-02-17
CO2018004152A2 (es) 2018-07-19
JP2018530545A (ja) 2018-10-18
US10639373B2 (en) 2020-05-05
AU2016331931B2 (en) 2019-09-26
US10632196B2 (en) 2020-04-28
US10058613B2 (en) 2018-08-28
HK1259127A1 (zh) 2019-11-22
JP2019218405A (ja) 2019-12-26
PH12018500693A1 (en) 2018-10-01
US20170095570A1 (en) 2017-04-06
MA43345A (fr) 2018-08-08
ZA201801957B (en) 2020-07-29
CL2018000813A1 (es) 2019-02-22
MX2018003628A (es) 2018-08-01
AR106235A1 (es) 2017-12-27
AU2016331931C1 (en) 2020-01-16
BR112018006016A2 (pt) 2019-01-29
KR102111338B1 (ko) 2020-05-15
US20180326062A1 (en) 2018-11-15
KR20180054849A (ko) 2018-05-24
RU2736725C1 (ru) 2020-11-19
EP3355935A1 (en) 2018-08-08
JP2021167356A (ja) 2021-10-21
US20180185486A1 (en) 2018-07-05
AU2016331931A1 (en) 2018-04-12
SG10201912680RA (en) 2020-03-30
PE20181067A1 (es) 2018-07-04
CN108391422A (zh) 2018-08-10
CA2996902C (en) 2020-06-02
CR20180243A (es) 2018-07-31
WO2017059289A1 (en) 2017-04-06
NZ741261A (en) 2019-11-29

Similar Documents

Publication Publication Date Title
KR102111338B1 (ko) 피롤로벤조디아제핀 항체 약물 콘쥬게이트 및 이의 사용 방법
US20230330102A1 (en) Protac antibody conjugates and methods of use
US20230067037A1 (en) Conjugated chemical inducers of degradation and methods of use
US20210371413A1 (en) Polycyclic amides as cytotoxic agents
US20190144443A1 (en) Asymmetric conjugate compounds
EP3679045A1 (en) Cytotoxic agents
US20220098191A1 (en) G-a crosslinking cytotoxic agents
WO2022023735A1 (en) Cytotoxic agents
WO2024220546A2 (en) Antibodies and antibody-drug conjugates and methods of use and synthetic processes and intermediates