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JP6663984B2 - ピロロベンゾジアゼピン抗体薬物複合体及び使用方法 - Google Patents

ピロロベンゾジアゼピン抗体薬物複合体及び使用方法 Download PDF

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関連出願の相互参照
本出願は、２０１５年１０月２日出願の米国仮特許出願第６２／２３６，４２９号明細書に対する優先権を主張し、本出願は、その全体が参照によって本明細書に組み込まれる。
配列表
本出願は、ＡＳＣＩＩ形式で電子的に提出された配列表を含有し、その全体が参照によって本明細書に組み込まれる。２０１６年９月３０日に作成されたＡＳＣＩＩコピーは、Ｐ３２８５８−ＷＯ＿ＳＬ．ｔｘｔという名称であり、５６，５２０バイトのサイズである。
本発明は一般に、ピロロベンゾジアゼピン中間体と複合化された抗体に関し、治療用途または診断用途を有する抗体−薬物複合体を形成する。抗体は、ピロロベンゾジアゼピン中間体との複合化のために反応しやすい、遊離システインアミノ酸を用いて操作されてよい。本発明はまた、癌などの過剰増殖性障害の処置、またはこのような障害のインビトロ、ｉｎ ｓｉｔｕ、及びインビボ診断のために抗体−薬物複合体化合物を使用する方法にも関する。
抗体薬物複合体（ＡＤＣ）は、抗原発現腫瘍細胞に対して強力な細胞傷害性薬物を標的化し、内在化、及び薬物の放出によって、それらの抗腫瘍活性を増強させることによる、抗体及び細胞傷害性薬物の両方の特性を組み合わせた標的型化学療法分子である（Ｃａｒｔｅｒ，Ｐ．ａｎｄ Ｓｅｎｔｅｒ，Ｐ．（２００８）Ｔｈｅ Ｃａｎｃｅｒ Ｊｏｕｒ．１４（３）：１５４−１６９）。所与の標的抗原に関するＡＤＣ開発の成功は、抗体の選択、リンカーの設計及び安定性、細胞傷害性薬物の効力ならびに抗体への薬物及びリンカーの複合化方法の最適化に依存する（Ｄｏｓｉｏ ｅｔ ａｌ（２０１１）Ｔｏｘｉｎｓ，３：８４８−８８３、Ｐｏｌａｋｉｓ，Ｐ．（２００５）Ｃｕｒｒｅｎｔ Ｏｐｉｎｉｏｎ ｉｎ Ｐｈａｒｍａｃｏｌｏｇｙ ５：３８２−３８７）。
ある種のピロロベンゾジアゼピン（ＰＢＤ）化合物は、ＤＮＡの特定の配列を認識してそれに結合する能力を有し、好ましい配列は、ＰｕＧＰｕである（Ｐｕ＝プリン、例えば、アデニンＡ及びグアニンＧなど）。最初のＰＢＤ抗腫瘍抗生物質であるアントラマイシンは、１９６５年に発見された（Ｌｅｉｍｇｒｕｂｅｒ，ｅｔ ａｌ．，Ｊ．Ａｍ．Ｃｈｅｍ．Ｓｏｃ．，８７：５７９３−５７９５（１９６５）、Ｌｅｉｍｇｒｕｂｅｒ，ｅｔ ａｌ．，Ｊ．Ａｍ．Ｃｈｅｍ．Ｓｏｃ．，８７，５７９１−５７９３（１９６５））。それ以来、多数の天然に存在するＰＢＤ及び類似体が、報告かつ記載されている（Ｔｈｕｒｓｔｏｎ，ｅｔ ａｌ．，Ｃｈｅｍ．Ｒｅｖ．１９９４，４３３−４６５（１９９４）、Ａｎｔｏｎｏｗ，Ｄ．ａｎｄ Ｔｈｕｒｓｔｏｎ，Ｄ．Ｅ．，（２０１１）Ｃｈｅｍ．Ｒｅｖ．１１１（４）：２８１５−２８６４）。ファミリーメンバーとしては、アベイマイシン（Ｈｏｃｈｌｏｗｓｋｉ，ｅｔ ａｌ．，（１９８７）Ｊ．Ａｎｔｉｂｉｏｔｉｃｓ，４０：１４５−１４８）、チカマイシン（Ｋｏｎｉｓｈｉ，ｅｔ ａｌ．，（１９８４）Ｊ．Ａｎｔｉｂｉｏｔｉｃｓ，３７：２００−２０６），Ｔｈｕｒｓｔｏｎ，ｅｔ ａｌ．，（１９９０）Ｃｈｅｍ．Ｂｒｉｔ．，２６：７６７−７７２、Ｂｏｓｅ，ｅｔ ａｌ．，（１９９２）Ｔｅｔｒａｈｅｄｒｏｎ，４８：７５１−７５８）、マゼトラマイシン（Ｋｕｍｉｎｏｔｏ，ｅｔ ａｌ．，Ｊ．Ａｎｔｉｂｉｏｔｉｃｓ，３３，６６５−６６７（１９８０））、ネオトラマイシンＡ及びＢ（Ｔａｋｅｕｃｈｉ，ｅｔ ａｌ．，Ｊ．Ａｎｔｉｂｉｏｔｉｃｓ，２９，９３−９６（１９７６））、ポロトラマイシン（Ｔｓｕｎａｋａｗａ，ｅｔ ａｌ．，（１９８８）Ｊ．Ａｎｔｉｂｉｏｔｉｃｓ，４１：１３６６−１３７３）、プロトラカルシン（Ｓｈｉｍｉｚｕ，ｅｔ ａｌ，Ｊ．Ａｎｔｉｂｉｏｔｉｃｓ，（１９８２）２９：２４９２−２５０３、Ｌａｎｇｌｅｙ ａｎｄ Ｔｈｕｒｓｔｏｎ，（１９８７）Ｊ．Ｏｒｇ．Ｃｈｅｍ．，５２：９１−９７）、シバノミシン、ＤＣ−１０２（Ｈａｒａ，ｅｔ ａｌ．，（１９８８）Ｊ．Ａｎｔｉｂｉｏｔｉｃｓ，４１：７０２−７０４、Ｉｔｏｈ，ｅｔ ａｌ．，Ｊ．Ａｎｔｉｂｉｏｔｉｃｓ，（１９８８）４１：１２８１−１２８４）、シビロマイシン（Ｌｅｂｅｒ，ｅｔ ａｌ．，（１９８８）Ｊ．Ａｍ．Ｃｈｅｍ．Ｓｏｃ．，１１０：２９９２−２９９３）ならびにトママイシン（Ａｒｉｍａ，ｅｔ ａｌ．，（１９７２）Ｊ．Ａｎｔｉｂｉｏｔｉｃｓ，２５：４３７−４４４）が挙げられる。
ピロロベンゾジアゼピンは、一般構造：

を有し、それらは芳香族Ａ環及びピロロＣ環の両方における置換基の数、種類及び位置、ならびにＣ環の飽和度が異なる。Ｂ環には、ＤＮＡのアルキル化に関与する求電子中心であるＮ１０−Ｃ１１位に、イミン（Ｎ＝Ｃ）、カルビノールアミン（ＮＨ−ＣＨ（ＯＨ））、またはカルビノールアミンメチルエーテル（ＮＨ−ＣＨ（ＯＭｅ））のいずれかが存在する。既知の天然物は全て、キラルＣ１１ａ位に（Ｓ）配置を有し、この配置はＣ環からＡ環の方向を見た場合に右回りのねじれを天然物に付与して、Ｂ型ＤＮＡの副溝との等螺旋性のために三次元形状を決定し、結合部位にぴったりと合うようになる（Ｋｏｈｎ，Ｉｎ Ａｎｔｉｂｉｏｔｉｃｓ ＩＩＩ．Ｓｐｒｉｎｇｅｒ−Ｖｅｒｌａｇ，Ｎｅｗ Ｙｏｒｋ，ｐｐ．３−１１（１９７５）、Ｈｕｒｌｅｙ ａｎｄ Ｎｅｅｄｈａｍ−ＶａｎＤｅｖａｎｔｅｒ，（１９８６）Ａｃｃ．Ｃｈｅｍ．Ｒｅｓ．，１９：２３０−２３７）。副溝中で付加物を形成するＰＢＤの能力によって、それらはＤＮＡプロセシングに干渉することができるため、それらを抗腫瘍剤として使用できる。ピロロベンゾジアゼピン二量体化合物は、２つのピロロベンゾジアゼピン構造体が、リンカーによってＡ環のＣ８位を介して共有結合している場合に、二本鎖ＤＮＡをジアルキル化して架橋する可能性がある（ＷＯ２００５／０８５２５１）。
ピロロベンゾジアゼピン化合物は、それらをＮ１０位において、インビボで除去可能な窒素保護基、例えば、カルバメートなどで保護することにより、プロドラッグとして用いられ得る（ＷＯ２０００／１２５０７、ＷＯ２００５／０２３８１４）。保護基は、ＰＢＤ部分のＮ１０位から除去可能であり、Ｎ１０−Ｃ１１イミン結合から離れる。酵素の作用によって切断され得る基を含む、様々な保護基が記載されている。
抗体−薬物複合体は、ピロロベンゾジアゼピン（ＰＢＤ）二量体が、Ｎ１０位を介して腫瘍関連抗原に特異的な抗体に連結される場合に、腫瘍細胞に対するインビトロ及びインビボ有効性を有する（ＷＯ２０１１／１３０５９８）。二量体の単量体ＰＢＤ単位を連結する架橋（「テザー」）によって、細胞結合剤、例えば、抗体などに結合するためのリンカー基を有するＰＢＤ二量体薬物部分を有する抗体−薬物複合体が、記載されている（ＷＯ２００７／０８５９３０）。Ｂ環のＮ１０−Ｃ１１位にアミド基及びアミン基を有するＰＢＤ二量体薬物部分を有する抗体−薬物複合体が、記載されている（ＷＯ２０１４／０９６３６８、ＷＯ２０１３／１７７４８１、ＷＯ２０１２／１１２７０８）。ＰＢＤのＮ１０でジスルフィド結合によって抗体に連結されたジアルキル化剤のピロロベンゾジアゼピン（ＰＢＤ）二量体薬物部分を含む抗体薬物複合体が、記載されている（ＷＯ２０１３／０５５９８７、Ｇｒｅｇｓｏｎ ｅｔ ａｌ．（２００１）Ｊ．Ｍｅｄ．Ｃｈｅｍ．４４：１１６１−１１７４）。
国際公開第２００５／０８５２５１号 国際公開第２０００／１２５０７号 国際公開第２００５／０２３８１４号 国際公開第２０１１／１３０５９８号 国際公開第２００７／０８５９３０号 国際公開第２０１４／０９６３６８号 国際公開第２０１３／１７７４８１号 国際公開第２０１２／１１２７０８号 国際公開第２０１３／０５５９８７号
Ｃａｒｔｅｒ，Ｐ．ａｎｄ Ｓｅｎｔｅｒ，Ｐ．（２００８）Ｔｈｅ Ｃａｎｃｅｒ Ｊｏｕｒ．１４（３）：１５４−１６９ Ｄｏｓｉｏ ｅｔ ａｌ（２０１１）Ｔｏｘｉｎｓ，３：８４８−８８３ Ｐｏｌａｋｉｓ，Ｐ．（２００５）Ｃｕｒｒｅｎｔ Ｏｐｉｎｉｏｎ ｉｎ Ｐｈａｒｍａｃｏｌｏｇｙ ５：３８２−３８７ Ｌｅｉｍｇｒｕｂｅｒ，ｅｔ ａｌ．，Ｊ．Ａｍ．Ｃｈｅｍ．Ｓｏｃ．，８７：５７９３−５７９５（１９６５） Ｌｅｉｍｇｒｕｂｅｒ，ｅｔ ａｌ．，Ｊ．Ａｍ．Ｃｈｅｍ．Ｓｏｃ．，８７，５７９１−５７９３（１９６５） Ｔｈｕｒｓｔｏｎ，ｅｔ ａｌ．，Ｃｈｅｍ．Ｒｅｖ．１９９４，４３３−４６５（１９９４） Ａｎｔｏｎｏｗ，Ｄ．ａｎｄ Ｔｈｕｒｓｔｏｎ，Ｄ．Ｅ．，（２０１１）Ｃｈｅｍ．Ｒｅｖ．１１１（４）：２８１５−２８６４ Ｈｏｃｈｌｏｗｓｋｉ，ｅｔ ａｌ．，（１９８７）Ｊ．Ａｎｔｉｂｉｏｔｉｃｓ，４０：１４５−１４８ Ｋｏｎｉｓｈｉ，ｅｔ ａｌ．，（１９８４）Ｊ．Ａｎｔｉｂｉｏｔｉｃｓ，３７：２００−２０６ Ｔｈｕｒｓｔｏｎ，ｅｔ ａｌ．，（１９９０）Ｃｈｅｍ．Ｂｒｉｔ．，２６：７６７−７７２ Ｂｏｓｅ，ｅｔ ａｌ．，（１９９２）Ｔｅｔｒａｈｅｄｒｏｎ，４８：７５１−７５８ Ｋｕｍｉｎｏｔｏ，ｅｔ ａｌ．，Ｊ．Ａｎｔｉｂｉｏｔｉｃｓ，３３，６６５−６６７（１９８０） Ｔａｋｅｕｃｈｉ，ｅｔ ａｌ．，Ｊ．Ａｎｔｉｂｉｏｔｉｃｓ，２９，９３−９６（１９７６） Ｔｓｕｎａｋａｗａ，ｅｔ ａｌ．，（１９８８）Ｊ．Ａｎｔｉｂｉｏｔｉｃｓ，４１：１３６６−１３７３ Ｓｈｉｍｉｚｕ，ｅｔ ａｌ，Ｊ．Ａｎｔｉｂｉｏｔｉｃｓ，（１９８２）２９：２４９２−２５０３ Ｌａｎｇｌｅｙ ａｎｄ Ｔｈｕｒｓｔｏｎ，（１９８７）Ｊ．Ｏｒｇ．Ｃｈｅｍ．，５２：９１−９７ Ｈａｒａ，ｅｔ ａｌ．，（１９８８）Ｊ．Ａｎｔｉｂｉｏｔｉｃｓ，４１：７０２−７０４ Ｉｔｏｈ，ｅｔ ａｌ．，Ｊ．Ａｎｔｉｂｉｏｔｉｃｓ，（１９８８）４１：１２８１−１２８４ Ｌｅｂｅｒ，ｅｔ ａｌ．，（１９８８）Ｊ．Ａｍ．Ｃｈｅｍ．Ｓｏｃ．，１１０：２９９２−２９９３ Ａｒｉｍａ，ｅｔ ａｌ．，（１９７２）Ｊ．Ａｎｔｉｂｉｏｔｉｃｓ，２５：４３７−４４４ Ｋｏｈｎ，Ｉｎ Ａｎｔｉｂｉｏｔｉｃｓ ＩＩＩ．Ｓｐｒｉｎｇｅｒ−Ｖｅｒｌａｇ，Ｎｅｗ Ｙｏｒｋ，ｐｐ．３−１１（１９７５） Ｈｕｒｌｅｙ ａｎｄ Ｎｅｅｄｈａｍ−ＶａｎＤｅｖａｎｔｅｒ，（１９８６）Ａｃｃ．Ｃｈｅｍ．Ｒｅｓ．，１９：２３０−２３７ Ｇｒｅｇｓｏｎ ｅｔ ａｌ．（２００１）Ｊ．Ｍｅｄ．Ｃｈｅｍ．４４：１１６１−１１７４
本発明は、式Ｉ：
Ｉ
（式中、

は、ＣＨ２−ＣＨ２、ＣＨ＝ＣＨ、Ｃ（＝Ｏ）−ＮＨ、またはＣＨ２−ＮＨから選択され、
Ａは、Ｆ、Ｃ１〜Ｃ６アルキル、または＝Ｃ（Ｒ）２（式中、Ｒは、Ｈ、Ｆ、Ｃ１〜Ｃ６アルキル、もしくはＣ１〜Ｃ６フルオロアルキルから独立して選択される）から選択された基で場合により置換される、５員または６員複素環式環であり、
Ｒ１及びＲ２は、ＨもしくはＣ１〜Ｃ６アルキルから独立して選択され、またはＲ１及びＲ２は、３員、４員、５員、もしくは６員シクロアルキルもしくはヘテロシクリル基を形成し、
Ｒ３は、ＮＯ２、Ｃｌ、Ｆ、ＣＮ、ＣＯ２ＨまたはＢｒから独立して選択され、
ｍは０、１または２である）
のリンカー−薬物中間体を含む。
本発明は、ジスルフィドリンカーによって抗体に共有結合したモノアルキル化剤のピロロベンゾジアゼピン薬物部分を含み、治療用途または診断用途を有する抗体−薬物複合体（ＡＤＣ）化合物を形成する。
本発明の別の態様は、式ＩＩ：
ＩＩ
の抗体−薬物複合体化合物またはその薬学的に許容される塩（式中：

は、ＣＨ２−ＣＨ２、ＣＨ２−Ｃ（＝Ｏ）、ＣＨ＝ＣＨ、またはＣＨ２−ＮＨから選択され、
Ａは、Ｆ、Ｃ１〜Ｃ６アルキル、または＝Ｃ（Ｒ）２（式中、Ｒは、Ｈ、Ｆ、Ｃ１〜Ｃ６アルキル、もしくはＣ１〜Ｃ６フルオロアルキルから独立して選択される）から選択された基で場合により置換される、５員または６員複素環式環であり、
Ｒ１及びＲ２は、ＨもしくはＣ１〜Ｃ６アルキルから独立して選択され、またはＲ１及びＲ２は、３員、４員、５員、もしくは６員シクロアルキルもしくはヘテロシクリル基を形成し、
ｐは、１〜８の整数であり、
Ａｂは、抗体である）
である。
例示的な実施形態では、抗体は、（１）〜（５３）から選択される１種以上の腫瘍関連抗原または細胞表面受容体に結合する：
（１）ＢＭＰＲ１Ｂ（骨形成タンパク質受容体ＩＢ型）、
（２）Ｅ１６（ＬＡＴ１、ＳＬＣ７Ａ５）、
（３）ＳＴＥＡＰ１（前立腺の６回膜貫通上皮抗原）、
（４）ＭＵＣ１６（０７７２Ｐ、ＣＡ１２５）、
（５）ＭＰＦ（ＭＰＦ、ＭＳＬＮ、ＳＭＲ、巨核球増強因子、メソテリン）、
（６）Ｎａｐｉ２ｂ（ＮＡＰＩ−３Ｂ、ＮＰＴＩＩｂ、ＳＬＣ３４Ａ２、溶質担体ファミリー３４（リン酸ナトリウム）、メンバー２、ＩＩ型ナトリウム依存性リン酸輸送体３ｂ）、
（７）Ｓｅｍａ ５ｂ（ＦＬＪ１０３７２、ＫＩＡＡ１４４５、Ｍｍ．４２０１５、ＳＥＭＡ５Ｂ、ＳＥＭＡＧ、セマフォリン５ｂ Ｈｌｏｇ、セマドメイン、７回トロンボスポンジン反復（１型及び１型様）、膜貫通ドメイン（ＴＭ）及び短い細胞質ドメイン、（セマフォリン）５Ｂ）、
（８）ＰＳＣＡ ｈｌｇ（２７０００５０Ｃ１２Ｒｉｋ、Ｃ５３０００８Ｏ１６Ｒｉｋ、ＲＩＫＥＮ ｃＤＮＡ ２７０００５０Ｃ１２、ＲＩＫＥＮ ｃＤＮＡ ２７０００５０Ｃ１２遺伝子）、
（９）ＥＴＢＲ（エンドセリンＢ型受容体）、
（１０）ＭＳＧ７８３（ＲＮＦ１２４、仮想タンパク質ＦＬＪ２０３１５）、
（１１）ＳＴＥＡＰ２（ＨＧＮＣ＿８６３９、ＩＰＣＡ−１、ＰＣＡＮＡＰ１、ＳＴＡＭＰ１、ＳＴＥＡＰ２、ＳＴＭＰ、前立腺癌関連遺伝子１、前立腺癌関連タンパク質１、前立腺の６回膜貫通上皮抗原２、６回膜貫通前立腺タンパク質）、
（１２）ＴｒｐＭ４（ＢＲ２２４５０、ＦＬＪ２００４１、ＴＲＰＭ４、ＴＲＰＭ４Ｂ、一過性受容体電位カチオンチャネル、サブファミリーＭ、メンバー４）、
（１３）ＣＲＩＰＴＯ（ＣＲ、ＣＲ１、ＣＲＧＦ、ＣＲＩＰＴＯ、ＴＤＧＦ１、奇形癌由来増殖因子）、
（１４）ＣＤ２１（ＣＲ２（補体受容体２）もしくはＣ３ＤＲ（Ｃ３ｄ／エプスタインバーウイルス受容体）もしくはＨｓ７３７９２）、
（１５）ＣＤ７９ｂ（ＣＤ７９Ｂ、ＣＤ７９β、ＩＧｂ（免疫グロブリン関連ベータ）、Ｂ２９）、
（１６）ＦｃＲＨ２（ＩＦＧＰ４、ＩＲＴＡ４、ＳＰＡＰ１Ａ（ＳＨ２ドメイン含有ホスファターゼアンカータンパク質１ａ）、ＳＰＡＰ１Ｂ、ＳＰＡＰ１Ｃ）、
（１７）ＨＥＲ２、
（１８）ＮＣＡ、
（１９）ＭＤＰ、
（２０）ＩＬ２０Ｒα、
（２１）ブレビカン、
（２２）ＥｐｈＢ２Ｒ、
（２３）ＡＳＬＧ６５９、
（２４）ＰＳＣＡ、
（２５）ＧＥＤＡ、
（２６）ＢＡＦＦ−Ｒ（Ｂ細胞活性化因子受容体、ＢＬｙＳ受容体３、ＢＲ３）、
（２７）ＣＤ２２（Ｂ細胞受容体ＣＤ２２−Ｂアイソフォーム）、
（２８）ＣＤ７９ａ（ＣＤ７９Ａ、ＣＤ７９α、免疫グロブリン関連アルファ）、
（２９）ＣＸＣＲ５（バーキットリンパ腫受容体１）、
（３０）ＨＬＡ−ＤＯＢ（ＭＨＣクラスＩＩ分子（Ｉａ抗原）のベータサブユニット）、
（３１）Ｐ２Ｘ５（プリン受容体Ｐ２Ｘリガンド依存性イオンチャネル５）、
（３２）ＣＤ７２（Ｂ細胞分化抗原ＣＤ７２、Ｌｙｂ−２）、
（３３）ＬＹ６４（リンパ球抗原６４（ＲＰ１０５）、ロイシンリッチ反復（ＬＲＲ）ファミリーのＩ型膜タンパク質）、
（３４）ＦｃＲＨ１（Ｆｃ受容体様タンパク質１）、
（３５）ＦｃＲＨ５（ＩＲＴＡ２、免疫グロブリンスーパーファミリー受容体転座関連２）、
（３６）ＴＥＮＢ２（推定膜貫通プロテオグリカン）、
（３７）ＰＭＥＬ１７（シルバーホモログ、ＳＩＬＶ、Ｄ１２Ｓ５３Ｅ、ＰＭＥＬ１７、ＳＩ、ＳＩＬ）、
（３８）ＴＭＥＦＦ１（ＥＧＦ様ドメイン及び２つのフォリスタチン様ドメインを有する膜貫通タンパク質１、トモレグリン−１）、
（３９）ＧＤＮＦ−Ｒａ１（ＧＤＮＦファミリー受容体アルファ１、ＧＦＲＡ１、ＧＤＮＦＲ、ＧＤＮＦＲＡ、ＲＥＴＬ１、ＴＲＮＲ１、ＲＥＴ１Ｌ、ＧＤＮＦＲ−アルファ１、ＧＦＲ−アルファ−１）、
（４０）Ｌｙ６Ｅ（リンパ球抗原６複合体、遺伝子座Ｅ、Ｌｙ６７、ＲＩＧ−Ｅ、ＳＣＡ−２、ＴＳＡ−１）、
（４１）ＴＭＥＭ４６（ｓｈｉｓａホモログ２（Ｘｅｎｏｐｕｓ ｌａｅｖｉｓ）、ＳＨＩＳＡ２）、
（４２）Ｌｙ６Ｇ６Ｄ（リンパ球抗原６複合体、遺伝子座Ｇ６Ｄ、Ｌｙ６−Ｄ、ＭＥＧＴ１）、
（４３）ＬＧＲ５（ロイシンリッチ反復含有Ｇタンパク質結合受容体５、ＧＰＲ４９、ＧＰＲ６７）、
（４４）ＲＥＴ（ｒｅｔ癌原遺伝子、ＭＥＮ２Ａ、ＨＳＣＲ１、ＭＥＮ２Ｂ、ＭＴＣ１、ＰＴＣ、ＣＤＨＦ１２、Ｈｓ．１６８１１４、ＲＥＴ５１、ＲＥＴ−ＥＬＥ１）、
（４５）ＬＹ６Ｋ（リンパ球抗原６複合体、遺伝子座Ｋ、ＬＹ６Ｋ、ＨＳＪ００１３４８、ＦＬＪ３５２２６）、
（４６）ＧＰＲ１９（Ｇタンパク質結合受容体１９、Ｍｍ．４７８７）、
（４７）ＧＰＲ５４（ＫＩＳＳ１受容体、ＫＩＳＳ１Ｒ、ＧＰＲ５４、ＨＯＴ７Ｔ１７５、ＡＸＯＲ１２）、
（４８）ＡＳＰＨＤ１（アスパラギン酸ベータ−ヒドロキシラーゼドメイン含有１、ＬＯＣ２５３９８２）、
（４９）チロシナーゼ（ＴＹＲ、ＯＣＡＩＡ、ＯＣＡ１Ａ、チロシナーゼ、ＳＨＥＰ３）、
（５０）ＴＭＥＭ１１８（ｒｉｎｇフィンガータンパク質、膜貫通２、ＲＮＦＴ２、ＦＬＪ１４６２７）、
（５１）ＧＰＲ１７２Ａ（Ｇタンパク質結合受容体１７２Ａ、ＧＰＣＲ４１、ＦＬＪ１１８５６、Ｄ１５Ｅｒｔｄ７４７ｅ）、
（５２）ＣＤ３３、または
（５３）ＣＬＬ−１。
本発明の別の態様は、式ＩＩの抗体−薬物複合体化合物、及び薬学的に許容される希釈剤、担体または賦形剤を含む医薬組成物である。
本発明の別の態様は、哺乳動物における癌を処置するための薬剤の製造における式ＩＩの抗体−薬物複合体化合物の使用である。
本発明の別の態様は、式ＩＩの抗体−薬物複合体化合物を含む医薬組成物を患者に投与することによって癌を処置する方法である。
本発明の別の態様は、式ＩＩの抗体−薬物複合体化合物を作製する方法である。
本発明の別の態様は、式ＩＩの抗体−薬物複合体化合物を含む医薬組成物、容器、及び医薬組成物が癌を処置するために使用され得ることを示す添付文書またはラベルを含む製品である。
特定の実施形態では、例えば以下が提供される：
（項目１）
式Ｉ：

Ｉ
（式中、


は、ＣＨ ２ −ＣＨ ２ 、ＣＨ＝ＣＨ、Ｃ（＝Ｏ）−ＮＨ、またはＣＨ ２ −ＮＨから選択され、
Ａは、Ｆ、Ｃ １ 〜Ｃ ６ アルキル、または＝Ｃ（Ｒ） ２ （式中、Ｒは、Ｈ、Ｆ、Ｃ １ 〜Ｃ ６ アルキル、もしくはＣ １ 〜Ｃ ６ フルオロアルキルから独立して選択される）から選択された基で場合により置換される、５員または６員複素環式環であり、
Ｒ １ 及びＲ ２ は、ＨもしくはＣ １ 〜Ｃ ６ アルキルから独立して選択され、またはＲ １ 及びＲ ２ は、３員、４員、５員、もしくは６員シクロアルキルもしくはヘテロシクリル基を形成し、
Ｒ ３ は、ＮＯ ２ 、Ｃｌ、Ｆ、ＣＮ、ＣＯ ２ ＨまたはＢｒから独立して選択され、
ｍは０、１または２である）
のリンカー−薬物中間体。
（項目２）
式Ｉａ：

Ｉａ．
の項目１に記載のリンカー−薬物中間体。
（項目３）
式Ｉｂ：

Ｉｂ．
の項目１に記載のリンカー−薬物中間体。
（項目４）
式Ｉｃ：

Ｉｃ
（式中、Ｒ ４ 及びＲ ５ は各々Ｈ、またはＲ ４ 及びＲ ５ は＝Ｏである）
の項目１に記載のリンカー−薬物中間体。
（項目５）
式Ｉｄ：

Ｉｄ．
の項目１に記載のリンカー−薬物中間体。
（項目６）
Ｒ ４ 及びＲ ５ が各々Ｈである、項目１に記載のリンカー−薬物中間体。
（項目７）
式Ｉｅ：

Ｉｅ．
の項目１に記載のリンカー−薬物中間体。
（項目８）
Ｒ ４ 及びＲ ５ が＝Ｏである、項目１に記載のリンカー−薬物中間体。
（項目９）
式Ｉｆ：

Ｉｆ．
の項目１に記載のリンカー−薬物中間体。
（項目１０）
Ｒ １ 及びＲ ２ が、それらが結合している前記炭素原子と共にシクロプロピル環またはシクロブチル環を形成する、項目１に記載のリンカー−薬物中間体。
（項目１１）
式ＩＩ：

ＩＩ
の抗体−薬物複合体化合物またはその薬学的に許容される塩（式中：


は、ＣＨ ２ −ＣＨ ２ 、ＣＨ ２ −Ｃ（＝Ｏ）、ＣＨ＝ＣＨ、またはＣＨ ２ −ＮＨから選択され、
Ａは、Ｆ、Ｃ １ 〜Ｃ ６ アルキル、または＝Ｃ（Ｒ） ２ （式中、Ｒは、Ｈ、Ｆ、Ｃ １ 〜Ｃ ６ アルキル、もしくはＣ １ 〜Ｃ ６ フルオロアルキルから独立して選択される）から選択された基で場合により置換される、５員または６員複素環式環であり、
Ｒ １ 及びＲ ２ は、ＨもしくはＣ １ 〜Ｃ ６ アルキルから独立して選択され、またはＲ １ 及びＲ ２ は、３員、４員、５員、もしくは６員シクロアルキルもしくはヘテロシクリル基を形成し、
ｐは、１〜８の整数であり、
Ａｂは、抗体である）。
（項目１２）
Ａｂが、（１）〜（５３）から選択される１種以上の腫瘍関連抗原または細胞表面受容体に結合する抗体である、項目１１に記載の抗体−薬物複合体化合物、またはその薬学的に許容される塩：
（１）ＢＭＰＲ１Ｂ（骨形成タンパク質受容体ＩＢ型）、
（２）Ｅ１６（ＬＡＴ１、ＳＬＣ７Ａ５）、
（３）ＳＴＥＡＰ１（前立腺の６回膜貫通上皮抗原）、
（４）ＭＵＣ１６（０７７２Ｐ、ＣＡ１２５）、
（５）ＭＰＦ（ＭＰＦ、ＭＳＬＮ、ＳＭＲ、巨核球増強因子、メソテリン）、
（６）Ｎａｐｉ２ｂ（ＮＡＰＩ−３Ｂ、ＮＰＴＩＩｂ、ＳＬＣ３４Ａ２、溶質担体ファミリー３４（リン酸ナトリウム）、メンバー２、ＩＩ型ナトリウム依存性リン酸輸送体３ｂ）、
（７）Ｓｅｍａ ５ｂ（ＦＬＪ１０３７２、ＫＩＡＡ１４４５、Ｍｍ．４２０１５、ＳＥＭＡ５Ｂ、ＳＥＭＡＧ、セマフォリン５ｂ Ｈｌｏｇ、セマドメイン、７回トロンボスポンジン反復（１型及び１型様）、膜貫通ドメイン（ＴＭ）及び短い細胞質ドメイン、（セマフォリン）５Ｂ）、
（８）ＰＳＣＡ ｈｌｇ（２７０００５０Ｃ１２Ｒｉｋ、Ｃ５３０００８Ｏ１６Ｒｉｋ、ＲＩＫＥＮ ｃＤＮＡ ２７０００５０Ｃ１２、ＲＩＫＥＮ ｃＤＮＡ ２７０００５０Ｃ１２遺伝子）、
（９）ＥＴＢＲ（エンドセリンＢ型受容体）、
（１０）ＭＳＧ７８３（ＲＮＦ１２４、仮想タンパク質ＦＬＪ２０３１５）、
（１１）ＳＴＥＡＰ２（ＨＧＮＣ＿８６３９、ＩＰＣＡ−１、ＰＣＡＮＡＰ１、ＳＴＡＭＰ１、ＳＴＥＡＰ２、ＳＴＭＰ、前立腺癌関連遺伝子１、前立腺癌関連タンパク質１、前立腺の６回膜貫通上皮抗原２、６回膜貫通前立腺タンパク質）、
（１２）ＴｒｐＭ４（ＢＲ２２４５０、ＦＬＪ２００４１、ＴＲＰＭ４、ＴＲＰＭ４Ｂ、一過性受容体電位カチオンチャネル、サブファミリーＭ、メンバー４）、
（１３）ＣＲＩＰＴＯ（ＣＲ、ＣＲ１、ＣＲＧＦ、ＣＲＩＰＴＯ、ＴＤＧＦ１、奇形癌由来増殖因子）、
（１４）ＣＤ２１（ＣＲ２（補体受容体２）もしくはＣ３ＤＲ（Ｃ３ｄ／エプスタインバーウイルス受容体）もしくはＨｓ７３７９２）、
（１５）ＣＤ７９ｂ（ＣＤ７９Ｂ、ＣＤ７９β、ＩＧｂ（免疫グロブリン関連ベータ）、Ｂ２９）、
（１６）ＦｃＲＨ２（ＩＦＧＰ４、ＩＲＴＡ４、ＳＰＡＰ１Ａ（ＳＨ２ドメイン含有ホスファターゼアンカータンパク質１ａ）、ＳＰＡＰ１Ｂ、ＳＰＡＰ１Ｃ）、
（１７）ＨＥＲ２、
（１８）ＮＣＡ、
（１９）ＭＤＰ、
（２０）ＩＬ２０Ｒα、
（２１）ブレビカン、
（２２）ＥｐｈＢ２Ｒ、
（２３）ＡＳＬＧ６５９、
（２４）ＰＳＣＡ、
（２５）ＧＥＤＡ、
（２６）ＢＡＦＦ−Ｒ（Ｂ細胞活性化因子受容体、ＢＬｙＳ受容体３、ＢＲ３）、
（２７）ＣＤ２２（Ｂ細胞受容体ＣＤ２２−Ｂアイソフォーム）、
（２８）ＣＤ７９ａ（ＣＤ７９Ａ、ＣＤ７９α、免疫グロブリン関連アルファ）、
（２９）ＣＸＣＲ５（バーキットリンパ腫受容体１）、
（３０）ＨＬＡ−ＤＯＢ（ＭＨＣクラスＩＩ分子（Ｉａ抗原）のベータサブユニット）、（３１）Ｐ２Ｘ５（プリン受容体Ｐ２Ｘリガンド依存性イオンチャネル５）、
（３２）ＣＤ７２（Ｂ細胞分化抗原ＣＤ７２、Ｌｙｂ−２）、
（３３）ＬＹ６４（リンパ球抗原６４（ＲＰ１０５）、ロイシンリッチ反復（ＬＲＲ）ファミリーのＩ型膜タンパク質）、
（３４）ＦｃＲＨ１（Ｆｃ受容体様タンパク質１）、
（３５）ＦｃＲＨ５（ＩＲＴＡ２、免疫グロブリンスーパーファミリー受容体転座関連２）、
（３６）ＴＥＮＢ２（推定膜貫通プロテオグリカン）、
（３７）ＰＭＥＬ１７（シルバーホモログ、ＳＩＬＶ、Ｄ１２Ｓ５３Ｅ、ＰＭＥＬ１７、ＳＩ、ＳＩＬ）、
（３８）ＴＭＥＦＦ１（ＥＧＦ様ドメイン及び２つのフォリスタチン様ドメインを有する膜貫通タンパク質１、トモレグリン−１）、
（３９）ＧＤＮＦ−Ｒａ１（ＧＤＮＦファミリー受容体アルファ１、ＧＦＲＡ１、ＧＤＮＦＲ、ＧＤＮＦＲＡ、ＲＥＴＬ１、ＴＲＮＲ１、ＲＥＴ１Ｌ、ＧＤＮＦＲ−アルファ１、ＧＦＲ−アルファ−１）、
（４０）Ｌｙ６Ｅ（リンパ球抗原６複合体、遺伝子座Ｅ、Ｌｙ６７、ＲＩＧ−Ｅ、ＳＣＡ−２、ＴＳＡ−１）、
（４１）ＴＭＥＭ４６（ｓｈｉｓａホモログ２（Ｘｅｎｏｐｕｓ ｌａｅｖｉｓ）、ＳＨＩＳＡ２）、
（４２）Ｌｙ６Ｇ６Ｄ（リンパ球抗原６複合体、遺伝子座Ｇ６Ｄ、Ｌｙ６−Ｄ、ＭＥＧＴ１）、
（４３）ＬＧＲ５（ロイシンリッチ反復含有Ｇタンパク質結合受容体５、ＧＰＲ４９、ＧＰＲ６７）、
（４４）ＲＥＴ（ｒｅｔ癌原遺伝子、ＭＥＮ２Ａ、ＨＳＣＲ１、ＭＥＮ２Ｂ、ＭＴＣ１、ＰＴＣ、ＣＤＨＦ１２、Ｈｓ．１６８１１４、ＲＥＴ５１、ＲＥＴ−ＥＬＥ１）、
（４５）ＬＹ６Ｋ（リンパ球抗原６複合体、遺伝子座Ｋ、ＬＹ６Ｋ、ＨＳＪ００１３４８、ＦＬＪ３５２２６）、
（４６）ＧＰＲ１９（Ｇタンパク質結合受容体１９、Ｍｍ．４７８７）、
（４７）ＧＰＲ５４（ＫＩＳＳ１受容体、ＫＩＳＳ１Ｒ、ＧＰＲ５４、ＨＯＴ７Ｔ１７５、ＡＸＯＲ１２）、
（４８）ＡＳＰＨＤ１（アスパラギン酸ベータ−ヒドロキシラーゼドメイン含有１、ＬＯＣ２５３９８２）、
（４９）チロシナーゼ（ＴＹＲ、ＯＣＡＩＡ、ＯＣＡ１Ａ、チロシナーゼ、ＳＨＥＰ３）、
（５０）ＴＭＥＭ１１８（ｒｉｎｇフィンガータンパク質、膜貫通２、ＲＮＦＴ２、ＦＬＪ１４６２７）、
（５１）ＧＰＲ１７２Ａ（Ｇタンパク質結合受容体１７２Ａ、ＧＰＣＲ４１、ＦＬＪ１１８５６、Ｄ１５Ｅｒｔｄ７４７ｅ）、
（５２）ＣＤ３３、または
（５３）ＣＬＬ−１。
（項目１３）
式ＩＩａ：

ＩＩａ．
の、項目１１に記載の抗体−薬物複合体化合物、またはその薬学的に許容される塩。
（項目１４）
式ＩＩｂ：

ＩＩｂ．
の、項目１１に記載の抗体−薬物複合体化合物、またはその薬学的に許容される塩。
（項目１５）
式ＩＩｃ：

ＩＩｃ
（式中、Ｒ ４ 及びＲ ５ は各々Ｈ、またはＲ ４ 及びＲ ５ は＝Ｏである）
の、項目１１に記載の抗体−薬物複合体化合物、またはその薬学的に許容される塩。
（項目１６）
Ｒ ４ 及びＲ ５ が各々Ｈである、項目１５に記載の抗体−薬物複合体化合物、またはその薬学的に許容される塩。
（項目１７）
Ｒ ４ 及びＲ ５ が＝Ｏである、項目１５に記載の抗体−薬物複合体化合物、またはその
薬学的に許容される塩。
（項目１８）
式ＩＩｄ：

ＩＩｄ．
を有する、項目１５に記載の抗体−薬物複合体化合物、またはその薬学的に許容される塩。
（項目１９）
式ＩＩｅ：

ＩＩｅ．
を有する、項目１５に記載の抗体−薬物複合体化合物、またはその薬学的に許容される塩。
（項目２０）
式ＩＩｆ：

ＩＩｆ．
を有する、項目１５に記載の抗体−薬物複合体化合物、またはその薬学的に許容される塩。
（項目２１）
Ａｂがシステイン操作抗体である、項目１１に記載の抗体−薬物複合体化合物、またはその薬学的に許容される塩。
（項目２２）
前記システイン操作抗体が、薬物複合化の部位としてＬＣ Ｋ１４９ＣまたはＨＣ Ａ１１８Ｃを含む、項目２１に記載の抗体−薬物複合体化合物、またはその薬学的に許容される塩。
（項目２３）
Ａｂが、抗ＨＥＲ２、抗ＣＤ２２、抗ＣＤ３３、抗ＮａＰｉ２ｂ、または抗ＣＬＬ−１から選択される、項目１１に記載の抗体−薬物複合体化合物、またはその薬学的に許容される塩。
（項目２４）
ｐが１、２、３、または４である、項目１１に記載の抗体−薬物複合体化合物、またはその薬学的に許容される塩。
（項目２５）
抗体−薬物複合体化合物の混合物を含み、抗体−薬物複合体化合物の前記混合物中における、１抗体当たりの前記平均薬物充填量ｐが、約２〜約５である、項目１１に記載の抗体−薬物複合体化合物、またはその薬学的に許容される塩。
（項目２６）
項目１１に記載の前記抗体−薬物複合体化合物、またはその薬学的に許容される塩及び薬学的に許容される賦形剤を含む医薬組成物。
（項目２７）
治療有効量の化学療法剤をさらに含む、項目２６に記載の医薬組成物。
（項目２８）
癌の処置方法であって、患者に治療有効量の項目２６に記載の前記医薬組成物を投与することを含む、前記方法。
（項目２９）
前記患者が、化学療法剤を、項目１１に記載の抗体−薬物複合体、またはその薬学的に許容される塩と組み合わせて投与される、項目２８に記載の方法。
（項目３０）
項目１１に記載の抗体−薬物複合体化合物、またはその薬学的に許容される塩の作製方法であって、抗体を項目１に記載の式Ｉのリンカー−薬物中間体と反応させることを含む、前記方法。
（項目３１）
式ＩＩ：

ＩＩ
の抗体−薬物複合体化合物またはその薬学的に許容される塩（式中：


は、ＣＨ ２ −ＣＨ ２ 、ＣＨ ２ −Ｃ（＝Ｏ）、ＣＨ＝ＣＨ、またはＣＨ ２ −ＮＨから選択され、
Ａは、Ｆ、Ｃ １ 〜Ｃ ６ アルキル、または＝Ｃ（Ｒ） ２ （式中、Ｒは、Ｈ、Ｆ、Ｃ １ 〜Ｃ
６ アルキル、もしくはＣ １ 〜Ｃ ６ フルオロアルキルから独立して選択される）から選択された基で場合により置換される、５員または６員複素環式環であり、
Ｒ １ 及びＲ ２ は、ＨもしくはＣ １ 〜Ｃ ６ アルキルから独立して選択され、またはＲ １ 及びＲ ２ は、３員、４員、５員、もしくは６員シクロアルキルもしくはヘテロシクリル基を形成し、
ｐは、１〜８の整数であり、
Ａｂは、（ａ）配列番号：２２のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ１、（ｂ）配列番号：２３のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ２、（ｃ）配列番号：２４のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ３、（ｄ）配列番号：１９のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ１、（ｅ）配列番号：２０のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ２、及び（ｆ）配列番号：２１のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ３を含む抗ＨＥＲ２抗体である）。
（項目３２）
前記抗ＨＥＲ２抗体が、配列番号：１７の配列を含む軽鎖可変領域及び配列番号：１８の配列を含む重鎖可変領域を含む、項目３１に記載の抗体−薬物複合体化合物、またはその薬学的に許容される塩。
（項目３３）
式ＩＩａ：

ＩＩａ。
を有する、項目３１に記載の抗体−薬物複合体化合物、またはその薬学的に許容される塩。
（項目３４）
式ＩＩｂ：

ＩＩｂ．
を有する、項目３１に記載の抗体−薬物複合体化合物、またはその薬学的に許容される塩。
（項目３５）
式ＩＩｃ：

ＩＩｃ
（式中、Ｒ ４ 及びＲ ５ は各々Ｈ、またはＲ ４ 及びＲ ５ は＝Ｏである）
を有する、項目３１に記載の抗体−薬物複合体化合物、またはその薬学的に許容される塩。
（項目３６）
Ｒ ４ 及びＲ ５ が各々Ｈである、項目３５に記載の抗体−薬物複合体化合物、またはその薬学的に許容される塩。
（項目３７）
Ｒ ４ 及びＲ ５ が＝Ｏである、項目３５に記載の抗体−薬物複合体化合物、またはその薬学的に許容される塩。
（項目３８）
式ＩＩｄ：

ＩＩｄ．
を有する、項目３５に記載の抗体−薬物複合体化合物、またはその薬学的に許容される塩。
（項目３９）
式ＩＩｅ：

ＩＩｅ．
を有する、項目３５に記載の抗体−薬物複合体化合物、またはその薬学的に許容される塩。
（項目４０）
式ＩＩｆ：

ＩＩｆ．
を有する、項目３５に記載の抗体−薬物複合体化合物、またはその薬学的に許容される塩。
（項目４１）
前記抗ＨＥＲ２抗体がシステイン操作抗体である、項目３１に記載の抗体−薬物複合体化合物、またはその薬学的に許容される塩。
（項目４２）
前記システイン操作抗体が、薬物複合化の前記部位としてＬＣ Ｋ１４９ＣまたはＨＣ
Ａ１１８Ｃを含む、項目４１に記載の抗体−薬物複合体化合物、またはその薬学的に許容される塩。
（項目４３）
ｐが１、２、３、または４である、項目３１に記載の抗体−薬物複合体化合物、またはその薬学的に許容される塩。
（項目４４）
抗体−薬物複合体化合物の混合物を含み、抗体−薬物複合体化合物の前記混合物中における、１抗体当たりの前記平均薬物充填量ｐが、約２〜約５である、項目３１に記載の抗体−薬物複合体化合物、またはその薬学的に許容される塩。
（項目４５）
項目３１に記載の前記抗体−薬物複合体化合物、またはその薬学的に許容される塩及び薬学的に許容される賦形剤を含む医薬組成物。
（項目４６）
追加の治療剤をさらに含む、項目４５に記載の医薬組成物。
（項目４７）
前記追加の治療剤が化学療法剤である、項目４６に記載の医薬組成物。
（項目４８）
前記追加の治療剤が、ＨＥＲ２と結合する抗体または免疫複合体である、項目４６に記載の医薬組成物。
（項目４９）
前記追加の治療剤が、（ｉ）ＨＥＲ２のドメインＩＩに結合する抗体もしくは免疫複合体、及び／または（ｉｉ）ＨＥＲ２のドメインＩＶに結合する抗体もしくは免疫複合体である、項目４８に記載の医薬組成物。
（項目５０）
前記追加の治療剤が、（ｉ）エピトープ２Ｃ４に結合する抗体もしくは免疫複合体、及び／または（ｉｉ）エピトープ４Ｄ５に結合する抗体もしくは免疫複合体である、項目４８に記載の医薬組成物。
（項目５１）
前記追加の治療剤が、トラスツズマブ、トラスツズマブ−ＭＣＣ−ＤＭ１（Ｔ−ＤＭ１）、またはペルツズマブから選択される、項目４６に記載の医薬組成物。
（項目５２）
（１）トラスツズマブまたはＴ−ＤＭ１、及び（２）ペルツズマブをさらに含む、項目４６に記載の医薬組成物。
（項目５３）
癌の処置方法であって、患者に治療有効量の項目４５に記載の前記医薬組成物を投与することを含む、前記方法。
（項目５４）
前記癌が、ＨＥＲ２陽性癌である、項目５３に記載の方法。
（項目５５）
前記ＨＥＲ２陽性癌が、乳癌または胃癌である、項目５４に記載の方法。
（項目５６）
癌の処置方法であって、患者に治療有効量の項目３１に記載の抗体−薬物複合体化合物、またはその薬学的に許容される塩を投与することを含む、前記方法。
（項目５７）
前記癌が、ＨＥＲ２陽性癌である、項目５６に記載の方法。
（項目５８）
前記ＨＥＲ２陽性癌が、乳癌または胃癌である、項目５７に記載の方法。
（項目５９）
患者に追加の治療剤を投与することをさらに含む、項目５６に記載の方法。
（項目６０）
前記追加の治療剤が化学療法剤である、項目５９に記載の方法。
（項目６１）
前記追加の治療剤が、ＨＥＲ２と結合する抗体または免疫複合体である、項目５９に記載の方法。
（項目６２）
前記追加の治療剤が、（ｉ）ＨＥＲ２のドメインＩＩに結合する抗体もしくは免疫複合体、及び／または（ｉｉ）ＨＥＲ２のドメインＩＶに結合する抗体もしくは免疫複合体である、項目６１に記載の方法。
（項目６３）
前記追加の治療剤が、（ｉ）エピトープ２Ｃ４に結合する抗体もしくは免疫複合体、及び／または（ｉｉ）エピトープ４Ｄ５に結合する抗体もしくは免疫複合体である、項目６１に記載の方法。
（項目６４）
前記追加の治療剤が、トラスツズマブ、トラスツズマブ−ＭＣＣ−ＤＭ１（Ｔ−ＤＭ１）、またはペルツズマブから選択される、項目６１に記載の方法。
（項目６５）
前記患者に（１）トラスツズマブまたはＴ−ＤＭ１、及び（２）ペルツズマブを投与することをさらに含む、項目６１に記載の方法。
（項目６６）
式ＩＩｆ：
ＩＩｆ
の抗体薬物複合体、またはその薬学的に許容される塩（式中、Ａｂは、ＬＣ Ｋ１４９Ｃを含むシステイン操作抗ＨＥＲ２抗体であり、ｐは約２である）。
（項目６７）
Ａｂが、（ａ）配列番号：２２の前記アミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ１、（ｂ）配列番号：２３の前記アミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ２、（ｃ）配列番号：２４の前記アミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ３、（ｄ）配列番号：１９の前記アミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ１、（ｅ）配列番号：２０の前記アミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ２、及び（ｆ）配列番号：２１の前記アミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ３を含む抗ＨＥＲ２抗体である、項目６６に記載の抗体−薬物複合体化合物、またはその薬学的に許容される塩。
（項目６８）
前記抗ＨＥＲ２抗体が、配列番号：１７の前記配列を含む軽鎖可変領域及び配列番号：１８の前記配列を含む重鎖可変領域を含む、項目６６に記載の抗体−薬物複合体化合物、またはその薬学的に許容される塩。
（項目６９）
項目６６に記載の前記抗体−薬物複合体化合物、またはその薬学的に許容される塩及び薬学的に許容される賦形剤を含む医薬組成物。
ＡＤＣ−１０７、ＡＤＣ−１０３、及び非標的対照ＡＤＣ−１０８で処置したＢＪＡＢ細胞のインビトロ細胞生存能のプロットを示す。 ＡＤＣ−１０７、ＡＤＣ−１０３及び非標的対照ＡＤＣ−１０８で処置したＷＳＵ−ＤＬＣＬ２細胞のインビトロ細胞生存能のプロットを示す。 ＡＤＣ−１０７、ＡＤＣ−１０３及び非標的対照ＡＤＣ−１０８で処置したＪｕｒｋａｔ細胞のインビトロ細胞生存能のプロットを示す。 ＡＤＣ−１０１、ＡＤＣ−１１３、ＡＤＣ−１０３、ＡＤＣ−１１１、及びＡＤＣ−１１２で処置したＢＪＡＢ細胞のインビトロ細胞生存能のプロットを示す。 ＡＤＣ−１０１、ＡＤＣ−１１３、ＡＤＣ−１０３、ＡＤＣ−１１１、及びＡＤＣ−１１２で処置したＷＳＵ−ＤＬＣＬ２細胞のインビトロ細胞生存能のプロットを示す。 ＡＤＣ−１０８、ＡＤＣ−１０２、ＡＤＣ−２０３、ＡＤＣ−２０１、及びＡＤＣ−１０７で処置したＳＫ−ＢＲ−３細胞のインビトロ細胞生存能のプロットを示す。 ＡＤＣ−１０８、ＡＤＣ−１０２、ＡＤＣ−２０３、ＡＤＣ−２０１、及びＡＤＣ−１０７で処置したＫＰＬ−４細胞のインビトロ細胞生存能のプロットを示す。 以下を用いてＩＶで１回投薬した、ＣＢ−１７ Ｆｏｘ Ｃｈａｓｅ ＳＣＩＤマウスのＷＳＵ−ＤＬＣＬ２異種移植モデルにおいて、インビボでフィッティングした経時的腫瘍体積変化のプロットにおける抗体−薬物複合体の有効性を示す： １）ビヒクル（ヒスチジン緩衝液＃８）、１００μＬ ２）チオＨｕ抗ＣＤ２２ １０Ｆ４ｖ３ ＬＣ Ｋ１４９Ｃ−（ＣＬＤ−１）、ＡＤＣ−２０２、０．５ｍｇ／ｋｇ ３）チオＨｕ抗ＣＤ２２ １０Ｆ４ｖ３ ＬＣ Ｋ１４９Ｃ−（ＣＬＤ−１）、ＡＤＣ−２０２、２ｍｇ／ｋｇ ４）チオＨｕ抗ＣＤ２２ １０Ｆ４ｖ３ ＬＣ Ｋ１４９Ｃ−（ＬＤ−５１）、モノアミド、ＡＤＣ−１０３、２ｍｇ／ｋｇ ５）チオＨｕ抗ＣＤ２２ １０Ｆ４ｖ３ ＬＣ Ｋ１４９Ｃ−（ＬＤ−５１）、モノアミド、ＡＤＣ−１０３、５ｍｇ／ｋｇ ６）チオＨｕ抗ＣＤ２２ １０Ｆ４ｖ３ ＬＣ Ｋ１４９Ｃ−（ＬＤ−５１）、モノアミド、ＡＤＣ−１０３、１０ｍｇ／ｋｇ ７）チオＨｕ抗Ｈｅｒ２（ｈｕ７Ｃ２）ＬＣ Ｋ１４９Ｃ−（ＬＤ−５１）、モノアミド、ＡＤＣ−１０２、１０ｍｇ／ｋｇ 以下を用いてＩＶで１回投薬した、ＣＢ−１７ Ｆｏｘ Ｃｈａｓｅ ＳＣＩＤマウスのＢｊａｂ−ｌｕｃ異種移植モデルにおいて、インビボでフィッティングした経時的腫瘍体積変化のプロットにおける抗体−薬物複合体の有効性を示す： １）ビヒクル（ヒスチジン緩衝液＃８ ＨｉｓＡｃ ２０ｍＭ、スクロース２４０ｍＭ、ＴＷ−２０ ０．０２％、ｐＨ５．５）、１００μＬ（マイクロリットル） ２）チオＨｕ抗ＣＤ２２ １０Ｆ４ｖ３ ＬＣ Ｋ１４９Ｃ−（ＣＬＤ−１）、ＡＤＣ−２０２、０．１ｍｇ／ｋｇ ３）チオＨｕ抗ＣＤ２２ １０Ｆ４ｖ３ ＬＣ Ｋ１４９Ｃ−（ＣＬＤ−１）、ＡＤＣ−２０２、０．２ｍｇ／ｋｇ ４）チオＨｕ抗ＣＤ２２ １０Ｆ４ｖ３ ＬＣ Ｋ１４９Ｃ−（Ｃ−ＬＤ１）、ＡＤＣ−２０２、０．４ｍｇ／ｋｇ ５）チオＨｕ抗ＣＤ２２ １０Ｆ４ｖ３ ＬＣ Ｋ１４９Ｃ−（ＬＤ−５１）モノアミドＡＤＣ−１０５、１ｍｇ／ｋｇ ６）チオＨｕ抗ＣＤ２２ １０Ｆ４ｖ３ ＬＣ Ｋ１４９Ｃ−（ＬＤ−５１）モノアミドＡＤＣ−１０５、２ｍｇ／ｋｇ ７）チオＨｕ抗ＣＤ２２ １０Ｆ４ｖ３ ＬＣ Ｋ１４９Ｃ−（ＬＤ−５１）モノアミドＡＤＣ−１０５、４ｍｇ／ｋｇ ８）チオＨｕ抗ＣＤ２２ １０Ｆ４ｖ３ ＬＣ Ｋ１４９Ｃ−（ＬＤ−５１）モノアミドＡＤＣ−１０５、８ｍｇ／ｋｇ ９）チオＨｕ抗Ｈｅｒ２ ｈｕ７Ｃ２ ＬＣ Ｋ１４９Ｃ−（ＣＬＤ−１）ＡＤＣ−２０１、０．４ｍｇ／ｋｇ １０）チオＨｕ抗Ｈｅｒ２ ｈｕ７Ｃ２ ＬＣ Ｋ１４９Ｃ−（ＬＤ−５１）モノアミドＡＤＣ−１０４、８ｍｇ／ｋｇ 以下を用いてＩＶで１回投薬した、ＷＳＵ−ＤＬＣＬ２ヒト細胞株マウスモデルにおいて、インビボでフィッティングした経時的腫瘍体積変化のプロットにおける抗体−薬物複合体の有効性を示す： １）ビヒクル（ヒスチジン緩衝液＃８）、１００μＬ ２）チオＨｕ抗ＣＤ２２ １０Ｆ４ｖ３ ＬＣ Ｋ１４９Ｃ−（ＬＤ−５１）モノアミドＡＤＣ−１０５、５ｍｇ／ｋｇ ３）チオＨｕ抗ＣＤ２２ １０Ｆ４ｖ３ ＬＣ Ｋ１４９Ｃ−（ＬＤ−５２）モノアミン、ＡＤＣ−１０７、０．５ｍｇ／ｋｇ ４）チオＨｕ抗ＣＤ２２ １０Ｆ４ｖ３ ＬＣ Ｋ１４９Ｃ−（ＬＤ−５２）モノアミン、ＡＤＣ−１０７、２ｍｇ／ｋｇ ５）チオＨｕ抗ＣＤ２２ １０Ｆ４ｖ３ ＬＣ Ｋ１４９Ｃ−（ＬＤ−５２）モノアミン、ＡＤＣ−１０７、５ｍｇ／ｋｇ ６）チオＨｕ抗ＣＤ２２ １０Ｆ４ｖ３ ＬＣ Ｋ１４９Ｃ−（ＬＤ−５２）モノアミン、ＡＤＣ−１０７、１０ｍｇ／ｋｇ ７）チオＨｕ抗ＣＤ２２ １０Ｆ４ｖ３ ＬＣ Ｋ１４９Ｃ−（ＣＬＤ−４）モノアミン、ＡＤＣ−２０４、０．５ｍｇ／ｋｇ ８）チオＨｕ抗ＣＤ２２ １０Ｆ４ｖ３ ＬＣ Ｋ１４９Ｃ−（ＣＬＤ−４）モノアミン、ＡＤＣ−２０４、２ｍｇ／ｋｇ ９）チオＨｕ抗ＣＤ２２ １０Ｆ４ｖ３ ＬＣ Ｋ１４９Ｃ−（ＣＬＤ−４）モノアミン、ＡＤＣ−２０４、５ｍｇ／ｋｇ １０）チオＨｕ抗ＣＤ２２ １０Ｆ４ｖ３ ＬＣ Ｋ１４９Ｃ−（ＣＬＤ−４）モノアミン、ＡＤＣ−２０４、１０ｍｇ／ｋｇ １１）チオＨｕ抗Ｈｅｒ２ ｈｕ７Ｃ２ ＬＣ Ｋ１４９Ｃ−（ＬＤ−５２）モノアミン、ＡＤＣ−１０８、２ｍｇ／ｋｇ １２）チオＨｕ抗Ｈｅｒ２ ｈｕ７Ｃ２ ＬＣ Ｋ１４９Ｃ−（ＣＬＤ−４）モノアミン、ＡＤＣ−２０５、２ｍｇ／ｋｇ 以下を用いてＩＶで１回投薬した、ｓｃｉｄ ｂｅｉｇｅマウスのＨＥＲ２ ＫＰＬ４腫瘍モデルにおいて、インビボでフィッティングした経時的腫瘍体積変化のプロットにおける抗体−薬物複合体の有効性を示す： １）ビヒクル ２）チオＨｅｒ２ ｈｕ７Ｃ２ ＬＣ−Ｋ１４９Ｃ−（ＬＤ−５１）モノアミド、ＡＤＣ−１０６、１ｍｇ／ｋｇ ３）チオＨｅｒ２ ｈｕ７Ｃ２ ＬＣ−Ｋ１４９Ｃ−（ＬＤ−５１）モノアミド、ＡＤＣ−１０６、５ｍｇ／ｋｇ ４）チオＨｅｒ２ ｈｕ７Ｃ２ ＬＣ−Ｋ１４９Ｃ−（ＬＤ−５２）モノアミン、ＡＤＣ−１０８、０．５ｍｇ／ｋｇ ５）チオＨｅｒ２ ｈｕ７Ｃ２ ＬＣ−Ｋ１４９Ｃ−（ＬＤ−５２）モノアミン、ＡＤＣ−１０８、１ｍｇ／ｋｇ ６）チオＨｅｒ２ ｈｕ７Ｃ２ ＬＣ−Ｋ１４９Ｃ−（ＬＤ−５２）モノアミン、ＡＤＣ−１０８、２ｍｇ／ｋｇ ７）チオＨｅｒ２ ｈｕ７Ｃ２ ＬＣ−Ｋ１４９Ｃ−（ＬＤ−５２）モノアミン、ＡＤＣ−１０８、５ｍｇ／ｋｇ ８）ＣＤ２２ ＬＣ−Ｋ１４９Ｃ−（ＬＤ−５２）モノアミン、ＡＤＣ−１０７、１ｍｇ／ｋｇ 以下を用いてＩＶで１回投薬した、ｓｃｉｄ ｂｅｉｇｅマウスのＨＥＲ２ ＫＰＬ４腫瘍モデルにおいて、インビボでフィッティングした経時的腫瘍体積変化のプロットにおける抗体−薬物複合体の有効性を示す： １）ビヒクル ２）Ｔｍａｂ−ＤＭ１、ＡＤＣ−２１１、１ｍｇ／ｋｇ ３）チオＨｅｒ２ ｈｕ７Ｃ２ ＬＣ−Ｋ１４９Ｃ−（ＬＤ−５１）モノアミド、ＡＤＣ−１０６、１ｍｇ／ｋｇ ４）チオＨｅｒ２ ｈｕ７Ｃ２ ＬＣ−Ｋ１４９Ｃ−（ＬＤ−５１）モノアミド、ＡＤＣ−１０６、５ｍｇ／ｋｇ ５）Ｔｍａｂ−ＤＭ１、ＡＤＣ−２１１、１ｍｇ／ｋｇ＋チオＨｅｒ２ ｈｕ７Ｃ２ ＬＣ−Ｋ１４９Ｃ−（ＬＤ−５１）モノアミド、ＡＤＣ−１０６、１ｍｇ／ｋｇ ６）Ｔｍａｂ−ＤＭ１、ＡＤＣ−２１１、１ｍｇ／ｋｇ＋チオＨｅｒ２ ｈｕ７Ｃ２ ＬＣ−Ｋ１４９Ｃ−（ＬＤ−５１）モノアミド、ＡＤＣ−１０６、５ｍｇ／ｋｇ 以下を用いてＩＶで１回投薬した、ＣＲＬ ｎｕ／ｎｕマウスのＨＥＲ２ Ｆｏ５モデルにおいて、インビボでフィッティングした経時的腫瘍体積変化のプロットにおける抗体−薬物複合体の有効性を示す： １）ビヒクル（ヒスチジン緩衝液＃８）、１００μＬ ２）チオＨｅｒ２ ｈｕ７Ｃ２ ＬＣ−Ｋ１４９Ｃ−（ＣＬＤ−１）、ＡＤＣ−２０１、０．５ｍｇ／ｋｇ ３）チオＨｅｒ２ ｈｕ７Ｃ２ ＬＣ−Ｋ１４９Ｃ−（ＣＬＤ−１）、ＡＤＣ−２０１、１ｍｇ／ｋｇ ４）チオＨｅｒ２ ｈｕ７Ｃ２ ＬＣ−Ｋ１４９Ｃ−（ＬＤ−５１）、モノアミド、ＡＤＣ−１０４、５ｍｇ／ｋｇ ５）チオＨｅｒ２ ｈｕ７Ｃ２ ＬＣ−Ｋ１４９Ｃ−（ＬＤ−５１）、モノアミド、ＡＤＣ−１０４、１０ｍｇ／ｋｇ ６）チオＨｅｒ２ ｈｕ７Ｃ２ ＬＣ−Ｋ１４９Ｃ−（ＬＤ−５１）、モノアミド、ＡＤＣ−１０４、１５ｍｇ／ｋｇ ７）チオＨｅｒ２ ｈｕ７Ｃ２ ＬＣ−Ｋ１４９Ｃ非複合化抗体１５ｍｇ／ｋｇ ８）チオＣＤ２２ ＬＣ−Ｋ１４９Ｃ−（ＣＬＤ−１）、ＡＤＣ−２０２、１ｍｇ／ｋｇ ９）チオＣＤ２２ ＬＣ−Ｋ１４９Ｃ−（ＬＤ−５１）モノアミドＡＤＣ−１０５、１５ｍｇ／ｋｇ 以下を用いてＩＶで１回投薬した、ｓｃｉｄ ｂｅｉｇｅマウスのＨＥＲ２ ＫＰＬ４腫瘍モデルにおいて、インビボでフィッティングした経時的腫瘍体積変化のプロットにおける抗体−薬物複合体の有効性を示す： １）ビヒクル ２）チオＨｅｒ２ ｈｕ７Ｃ２ ＬＣ−Ｋ１４９Ｃ−（ＣＬＤ−１）、ＡＤＣ−２０１、１ｍｇ／ｋｇ ３）チオＨｅｒ２ ｈｕ７Ｃ２ ＬＣ−Ｋ１４９Ｃ−（ＣＬＤ−１）、ＡＤＣ−２０１、３ｍｇ／ｋｇ ４）チオＨｅｒ２ ｈｕ７Ｃ２ ＬＣ−Ｋ１４９Ｃ−（ＬＤ−５１）モノアミドＡＤＣ−１０４、３ｍｇ／ｋｇ ５）チオＨｅｒ２ ｈｕ７Ｃ２ ＬＣ−Ｋ１４９Ｃ−（ＬＤ−５１）モノアミドＡＤＣ−１０４、６ｍｇ／ｋｇ ６）チオＨｅｒ２ ｈｕ７Ｃ２ ＬＣ−Ｋ１４９Ｃ−（ＬＤ−５１）モノアミドＡＤＣ−１０４、１０ｍｇ／ｋｇ ７）チオＨｅｒ２ ｈｕ７Ｃ２ ＬＣ−Ｋ１４９Ｃ、非複合化抗体、３ｍｇ／ｋｇ ８）チオＨｅｒ２ ｈｕ７Ｃ２ ＬＣ−Ｋ１４９Ｃ、非複合化抗体、１０ｍｇ／ｋｇ ９）チオＣＤ２２ ＬＣ−Ｋ１４９Ｃ−（ＣＬＤ−１）、ＡＤＣ−２０２、３ｍｇ／ｋｇ １０）チオＣＤ２２ ＬＣ−Ｋ１４９Ｃ−（ＬＤ−５１）モノアミド、ＡＤＣ−１０５、１０ｍｇ／ｋｇ 以下を用いてＩＶで１回投薬した、ＣＲＬ ｎｕ／ｎｕマウスのＨＥＲ２ Ｆｏ５モデルにおいて、インビボでフィッティングした経時的腫瘍体積変化のプロットにおける抗体−薬物複合体の有効性を示す： １）ビヒクル ２）チオＨｅｒ２ ｈｕ７Ｃ２ ＬＣ−Ｋ１４９Ｃ−（ＬＤ−５１）、モノアミド、ＡＤＣ−１０６、５ｍｇ／ｋｇ ３）チオＨｅｒ２ ｈｕ７Ｃ２ ＬＣ−Ｋ１４９Ｃ−（ＬＤ−５１）、モノアミド、ＡＤＣ−１０６、１０ｍｇ／ｋｇ ４）チオＨｅｒ２ ｈｕ７Ｃ２ ＬＣ−Ｋ１４９Ｃ−（ＬＤ−５２）、モノアミン、ＡＤＣ−１０８、０．５ｍｇ／ｋｇ ５）チオＨｅｒ２ ｈｕ７Ｃ２ ＬＣ−Ｋ１４９Ｃ−（ＬＤ−５２）、モノアミン、ＡＤＣ−１０８、２ｍｇ／ｋｇ ６）チオＨｅｒ２ ｈｕ７Ｃ２ ＬＣ−Ｋ１４９Ｃ−（ＬＤ−５２）、モノアミン、ＡＤＣ−１０８、５ｍｇ／ｋｇ ７）対照ＣＤ２２ ＬＣ−Ｋ１４９Ｃ−（ＬＤ−５２）、モノアミン、ＡＤＣ−１０７、２ｍｇ／ｋｇ 以下を用いてＩＶで１回投薬した、ＣＢ−１７ Ｆｏｘ Ｃｈａｓｅ ＳＣＩＤマウスのＷＳＵ−ＤＬＣＬ２異種移植モデルにおいて、インビボでフィッティングした経時的腫瘍体積変化のプロットにおける抗体−薬物複合体の有効性を示す： １）ビヒクル（ヒスチジン緩衝液＃８）、１００ｕＬ ２）チオＨｕ抗ＣＤ２２ ＬＣ−Ｋ１４９Ｃ−（ＬＤ−５１）、モノアミド、ＡＤＣ−１０４、６ｍｇ／ｋｇ ３）チオＨｕ抗ＣＤ２２ ＬＣ−Ｋ１４９Ｃ−（ＬＤ−５１）、モノアミド、ＡＤＣ−１０４、１６．４ｍｇ／ｋｇ ４）チオＨｕ抗ＣＤ２２ ＬＣ−Ｋ１４９Ｃ−ＨＣ−Ｌ１７７Ｃ−（ＬＤ−５１）、モノアミド、ＡＤＣ−１１１、３．３ｍｇ／ｋｇ ５）チオＨｕ抗ＣＤ２２ ＬＣ−Ｋ１４９Ｃ−ＨＣ−Ｌ１７７Ｃ−（ＬＤ−５１）、モノアミド、ＡＤＣ−１１１、６ｍｇ／ｋｇ ６）チオＨｕ抗ＣＤ２２ ＬＣ−Ｋ１４９Ｃ−ＨＣ−Ｌ１７７Ｃ−（ＬＤ−５１）、モノアミド、ＡＤＣ−１１１、９ｍｇ／ｋｇ ７）チオＨｕ抗ＣＤ２２ ＬＣ−Ｋ１４９Ｃ−ＨＣ−Ｌ１７７Ｃ−ＨＣ−Ｙ３７６Ｃ−（ＬＤ−５１）、モノアミド、ＡＤＣ−１１２、２．２ｍｇ／ｋｇ ８）チオＨｕ抗ＣＤ２２ ＬＣ−Ｋ１４９Ｃ−ＨＣ−Ｌ１７７Ｃ−ＨＣ−Ｙ３７６Ｃ−（ＬＤ−５１）、モノアミド、ＡＤＣ−１１２、６ｍｇ／ｋｇ ９）チオＨｕ抗Ｈｅｒ２ ｈｕ７Ｃ２ ＬＣ Ｋ１４９Ｃ−（ＬＤ−５１）、モノアミド、ＡＤＣ−１０６、１６．２ｍｇ／ｋｇ １０）チオＨｕ抗Ｈｅｒ２ ４Ｄ５ ＬＣ Ｋ１４９Ｃ−ＨＣ Ｌ１７７Ｃ−（ＬＤ−５１）、モノアミド、ＡＤＣ−１１３、８．３ｍｇ／ｋｇ 以下を用いてＩＶで１回投薬した、ＳＣＩＤ ＢｅｉｇｅマウスのＨＣＣ１５６９Ｘ２異種移植モデルにおいて、インビボでフィッティングした経時的腫瘍体積変化のプロットにおける抗体−薬物複合体の有効性を示す： １）ビヒクル（ヒスチジン緩衝液＃８）、１００ｕＬ ２）チオＨｕ抗Ｌｙ６Ｅ ＬＣ Ｋ１４９Ｃ−（ＣＬＤ−１）、ＡＤＣ−２１２、１ｍｇ／ｋｇ ３）チオＨｕ抗Ｌｙ６Ｅ ＬＣ Ｋ１４９Ｃ−（ＣＬＤ−１）、ＡＤＣ−２１２、３ｍｇ／ｋｇ ４）チオＨｕ抗Ｌｙ６Ｅ ＬＣ Ｋ１４９Ｃ−（ＬＤ−５１）モノアミド、ＡＤＣ−１１５、３ｍｇ／ｋｇ ５）チオＨｕ抗Ｌｙ６Ｅ ＬＣ Ｋ１４９Ｃ−（ＬＤ−５１）モノアミド、ＡＤＣ−１１５、６ｍｇ／ｋｇ ６）チオＨｕ抗Ｌｙ６Ｅ ＬＣ Ｋ１４９Ｃ−（ＬＤ−５１）モノアミド、ＡＤＣ−１１５、１２ｍｇ／ｋｇ ７）チオＨｕ抗Ｌｙ６Ｅ ＬＣ Ｋ１４９Ｃ−（ＬＤ−５１）モノアミド、ＡＤＣ−１１５、１８ｍｇ／ｋｇ ８）チオＨｕ抗ＣＤ２２ １０Ｆ４ｖ３ ＬＣ Ｋ１４９Ｃ−（ＬＤ−５１）モノアミド、ＡＤＣ−１１０、１２ｍｇ／ｋｇ ９）チオＨｕ抗Ｌｙ６Ｅ ＬＣ Ｋ１４９Ｃ−（ＣＬＤ−４）、モノアミン、ＡＤＣ−２１０、１ｍｇ／ｋｇ １０）チオＨｕ抗Ｌｙ６Ｅ ＬＣ Ｋ１４９Ｃ−（ＣＬＤ−４）、モノアミン、ＡＤＣ−２１０、３ｍｇ／ｋｇ １１）チオＨｕ抗Ｌｙ６Ｅ ＬＣ Ｋ１４９Ｃ−（ＣＬＤ−４）、モノアミン、ＡＤＣ−２１０、６ｍｇ／ｋｇ １２）チオＨｕ抗ＣＤ２２ １０Ｆ４ｖ３ ＬＣ Ｋ１４９Ｃ−（ＣＬＤ−４）、モノアミン、ＡＤＣ−２０４、３ｍｇ／ｋｇ ジアルキル化剤のピロロベンゾジアゼピン（ＰＢＤ）化合物及び２つのモノアルキル化剤ピロロベンゾジアゼピン化合物とＤＮＡとの推定相互作用を示す。 ＨＥＲ２ ＬＣ Ｋ１４９Ｃ ＬＤ−５１ ＡＤＣと、ＨＥＲ２ ＬＣ Ｋ１４９Ｃ ＣＬＤ−１ ＡＤＣとのマウス有効性及びカニクイザル毒性学の比較を示す。 ＨＥＲ２ ＬＣ Ｋ１４９Ｃ ＬＤ−５１ ＡＤＣと、ＨＥＲ２ ＬＣ Ｋ１４９Ｃ ＣＬＤ−１ ＡＤＣとの曝露に基づく治療指数評価を示す。 異なるリンカーを有するいくつかのＨＥＲ２ ｈｕ７Ｃ２ ＬＣ Ｋ１４９Ｃ ＡＤＣを用いた細胞生存能アッセイデータを示す。 マウス同種移植腫瘍モデルにおける、様々なＡＤＣの経時的腫瘍体積を示す。
これより本発明の特定の実施形態を詳細に参照することになるが、それらの例は、添付の構造及び式に例示されている。本発明は、例示した実施形態と併せて記載されることになるが、それらは、本発明をこれらの実施形態に限定することを意図するものではないと理解されることになる。逆に、本発明は、全ての代替形態、変更形態、及び等価物を網羅することを意図し、それらは特許請求の範囲によって定義されるような本発明の範囲内に含まれてよい。
当業者であれば、本発明の実施に使用され得る、本明細書に記載されるものと類似の、または同等の多くの方法及び材料を認識することになる。本発明は、決して記載される方法及び材料に限定されるものではない。
別段の規定がない限り、本明細書で使用される専門用語及び科学用語は、本発明が属する分野の当業者によって一般に理解されるものと同じ意味を有し、以下と一致している：Ｓｉｎｇｌｅｔｏｎ ｅｔ ａｌ（１９９４）Ｄｉｃｔｉｏｎａｒｙ ｏｆ Ｍｉｃｒｏｂｉｏｌｏｇｙ ａｎｄ Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｂｉｏｌｏｇｙ，２ｎｄ Ｅｄ．，Ｊ．Ｗｉｌｅｙ＆Ｓｏｎｓ，Ｎｅｗ Ｙｏｒｋ，ＮＹ、及びＪａｎｅｗａｙ，Ｃ．，Ｔｒａｖｅｒｓ，Ｐ．，Ｗａｌｐｏｒｔ，Ｍ．，Ｓｈｌｏｍｃｈｉｋ（２００１）Ｉｍｍｕｎｏｂｉｏｌｏｇｙ，５ｔｈ Ｅｄ．，Ｇａｒｌａｎｄ Ｐｕｂｌｉｓｈｉｎｇ，Ｎｅｗ Ｙｏｒｋ。
定義
別段の記載がない限り、以下の用語及び語句は、本明細書で使用される場合、以下の意味を有することを意図する：
商標名が本明細書で使用される場合、出願人らは、商標名の製品製剤、ジェネリック医薬品、及び商標名の製品における医薬品有効成分（複数可）を独立して含むことを意図している。
本明細書における目的のための「アクセプターヒトフレームワーク」は、以下に定義されるような、ヒト免疫グロブリンフレームワークまたはヒトコンセンサスフレームワークに由来する軽鎖可変ドメイン（ＶＬ）フレームワークまたは重鎖可変ドメイン（ＶＨ）フレームワークのアミノ酸配列を含むフレームワークである。ヒト免疫グロブリンフレームワークまたはヒトコンセンサスフレームワーク「に由来する」アクセプターヒトフレームワークは、その同じアミノ酸配列を含む場合がある、またはアミノ酸配列変化を含有する場合がある。いくつかの実施形態では、アミノ酸変化の数は、１０以下、９以下、８以下、７以下、６以下、５以下、４以下、３以下、または２以下である。いくつかの実施形態では、ＶＬアクセプターヒトフレームワークは、ＶＬヒト免疫グロブリンフレームワーク配列またはヒトコンセンサスフレームワーク配列と同一の配列である。
「親和性」は、分子（例えば、抗体）の単一結合部位と、その結合パートナー（例えば、抗原）との間の非共有結合性相互作用の、合計の強度を指す。特段の指示がない限り、本明細書で使用される場合、「結合親和性」は、結合対のメンバー（例えば、抗体及び抗原）間での１：１の相互作用を反映する固有の結合親和性を指す。分子Ｘの、そのパートナーＹに対する親和性は、解離定数（Ｋｄ）で一般に表され得る。親和性は、本明細書に記載されるものを含む、当該技術分野において既知の一般的な方法によって測定され得る。結合親和性を測定するための特定の例証的かつ例示的な実施形態が、以下に記載される。
特定の実施形態では、本明細書に記載されるような抗体は、≦１μＭ、≦１００ｎＭ、≦１０ｎＭ、≦５ｎｍ、≦４ｎＭ、≦３ｎＭ、≦２ｎＭ、≦１ｎＭ、≦０．１ｎＭ、≦０．０１ｎＭ、または≦０．００１ｎＭ（例えば、１０−８Ｍ以下、例えば、１０−８Ｍ〜１０−１３Ｍ、例えば、１０−９Ｍ〜１０−１３Ｍ）の解離定数（Ｋｄ）を有する。
「親和性成熟」抗体は、１つ以上の超可変領域（ＨＶＲ）において１つ以上の変化を、このような変化を有しない親抗体と比較して、その１つ以上のＨＶＲに有する抗体を指し、このような変化が抗原に対する抗体の親和性改善をもたらす。
「抗体」という用語は、本明細書で最も広義に使用され、様々な抗体構造を包含し、それらが所望の抗原結合活性を示す限り、モノクローナル抗体、ポリクローナル抗体、多重特異性抗体（例えば、二重特異性抗体）、及び抗体断片を含むが、これらに限定されない。
「抗体断片」は、インタクトな抗体の一部を含み、インタクトな抗体が結合する抗原と結合するインタクトな抗体以外の分子を指す。抗体断片の例としては、Ｆｖ、Ｆａｂ、Ｆａｂ’、Ｆａｂ’−ＳＨ、Ｆ（ａｂ’）２、ダイアボディ、直鎖状抗体、単鎖抗体分子（例えば、ｓｃＦｖ）、及び抗体断片から形成される多重特異性抗体が挙げられるが、これらに限定されない。
「癌」及び「癌性」という用語は、典型的には無秩序な細胞成長／増殖を特徴とする哺乳動物の生理学的状態を指す、またはそれについて記載する。「腫瘍」は、１つ以上の癌性細胞を含む。癌の例としては、癌腫、リンパ腫、芽細胞腫、肉腫、及び白血病またはリンパ性悪性腫瘍が挙げられるが、これらに限定されない。このような癌のより詳細な例としては、扁平上皮細胞癌（例えば、上皮扁平上皮細胞癌）、小細胞肺癌、非小細胞肺癌（「ＮＳＣＬＣ」）、肺の腺癌及び肺の扁平上皮癌を含む肺癌、腹膜の癌、肝細胞癌、胃腸癌を含む胃癌または胃の癌、膵臓癌、膠芽腫、子宮頸癌、卵巣癌、肝臓癌、膀胱癌、ヘパトーマ、乳癌、大腸癌、直腸癌、結腸直腸癌、子宮内膜または子宮癌腫、唾液腺癌腫、腎臓の癌または腎臓癌、前立腺癌、外陰癌、甲状腺癌、肝臓癌腫、肛門癌腫、陰茎癌腫、加えて頭頸部癌が挙げられる。
「ＨＥＲ２陽性」癌は、正常レベルよりも高いＨＥＲ２を有する癌細胞を含む。ＨＥＲ２陽性癌の例としては、ＨＥＲ２陽性乳癌及びＨＥＲ２陽性胃癌が挙げられる。場合により、ＨＥＲ２陽性癌は、２＋もしくは３＋の免疫組織化学（ＩＨＣ）スコア及び／また≧２．０のｉｎ ｓｉｔｕハイブリダイゼーション（ＩＳＨ）増幅率を有する。
「早期乳癌（ＥＢＣ）」または「早期の乳癌」という用語は、本明細書において、乳房または腋窩リンパ節を越えて拡散していない乳癌を指すために使用される。これは、非浸潤性乳管癌腫ならびにＩ期、ＩＩＡ期、ＩＩＢ期、及びＩＩＩＡ期の乳癌を含む。
「０期」、「Ｉ期」、「ＩＩ期」、「ＩＩＩ期」、または「ＩＶ期」、及びこの分類内の様々なサブステージの腫瘍または癌への言及は、当該技術分野において既知の全病期分類またはローマ数字式分類方法を使用する腫瘍または癌の分類を示す。一般に癌の実際の病期は癌の種類に依存するが、０期癌は上皮病変であり、Ｉ期癌は小さな限局性腫瘍であり、ＩＩ期及びＩＩＩ期癌は、局所リンパ節の関与を示す局所進行性腫瘍であり、ＩＶ期癌は転移性癌を表す。各種の腫瘍に特異的な病期は、熟練した臨床医にとって既知である。
「転移性乳癌」という用語は、癌細胞が、血管またはリンパ管によって元の部位から体内の１つ以上の他の部位に伝播し、乳房に加えて１つ以上の器官内で１つ以上の二次腫瘍を形成する乳癌の状態を意味する。
「進行」癌は、局所浸潤または転移のいずれかによって元の部位または器官の外側に拡散している癌である。したがって、「進行」癌という用語は、局所的に進行した疾患及び転移性疾患の両方を含む。
「再発」癌は、外科手術などの初期療法への応答後に、原発部位または遠隔部位のいずれかにおいて再成長した癌である。
「局所的再発」癌は、処置後、以前に処置した癌と同じ場所で再発する癌である。
「手術可能な」または「切除可能な」癌は、主な器官に限定され、外科手術（切除）に適した癌である。
「ｎｏｎ−ｒｅｓｅｃｔａｂｌｅ（切除不可能な）」または「ｕｎｒｅｓｅｃｔａｂｌｅ（切除不可能な）」癌は、外科手術によって除去（切除）することができない。
「キメラ」抗体という用語は、重鎖及び／または軽鎖の一部が特定の供給源または種に由来する一方で、重鎖及び／または軽鎖の残部が、異なる供給源または種に由来する抗体を指す。
抗体の「クラス」は、その重鎖が保有する定常ドメインまたは定常領域の種類を指す。抗体の５つの主要なクラス：ＩｇＡ、ＩｇＤ、ＩｇＥ、ＩｇＧ、及びＩｇＭが存在し、これらのいくつかは、サブクラス（アイソタイプ）、例えば、ＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３、ＩｇＧ４、ＩｇＡ１、及びＩｇＡ２にさらに分類される場合がある。免疫グロブリンの異なるクラスに対応する重鎖定常ドメインは、それぞれα、δ、ε、γ、及びμと呼ばれる。
「細胞傷害剤」という用語は、本明細書で使用される場合、細胞機能を阻害もしくは防止する、及び／または細胞死もしくは破壊を引き起こす物質を指す。細胞傷害剤としては、放射性同位体（例えば、Ａｔ２１１、Ｉ１３１、Ｉ１２５、Ｙ９０、Ｒｅ１８６、Ｒｅ１８８、Ｓｍ１５３、Ｂｉ２１２、Ｐ３２、Ｐｂ２１２及びＬｕの放射性同位体）、化学療法剤または化学療法薬（例えば、メトトレキサート、アドリアマイシン、ビンカアルカロイド（ビンクリスチン、ビンブラスチン、エトポシド）、ドキソルビシン、メルファラン、マイトマイシンＣ、クロラムブシル、ダウノルビシンまたはその他の挿入剤）、成長阻害剤、酵素及びそれらの断片、例えば、核酸分解酵素など、抗生物質、毒素、例えば、細菌、真菌、植物または動物起源の小分子毒素または酵素的に活性な毒素などで、それらの断片及び／またはバリアントを含み、ならびに以下に記載される様々な抗腫瘍剤または抗癌剤が挙げられるが、これらに限定されない。
「エフェクター機能」は、抗体のＦｃ領域に起因するこれらの生物活性を指し、抗体のアイソタイプにより変化する。抗体エフェクター機能の例としては、Ｃ１ｑ結合及び補体依存性細胞傷害（ＣＤＣ）、Ｆｃ受容体結合、抗体依存性細胞媒介性細胞傷害（ＡＤＣＣ）、食作用、細胞表面受容体（例えば、Ｂ細胞受容体）の下方制御、ならびにＢ細胞活性化が挙げられる。
薬剤、例えば、医薬製剤の「有効量」は、必要な投与量及び期間で、所望の治療または予防結果を達成するために有効な量を指す。癌を処置するための有効量の薬物は、癌細胞の数を減少させる、腫瘍サイズを減少させる、末梢器官への癌細胞浸潤を阻害する（すなわち、ある程度遅くする、好ましくは停止させる）、腫瘍転移を阻害する（すなわち、ある程度遅くする、好ましくは停止させる）、腫瘍成長をある程度阻害する、かつ／または癌と関連する症状のうち１つ以上をある程度緩和する場合がある。薬物が既存の癌細胞の成長を防止する、かつ／またはそれらを死滅させる可能性がある限り、この薬物は細胞増殖抑制性及び／または細胞傷害性であってよい。有効量によって、無増悪生存期間が延長される（例えば、固形腫瘍のための応答評価基準、すなわちＲＥＣＩＳＴ、もしくはＣＡ−１２５変化によって測定される場合）、客観的奏効がもたらされる（部分奏効、すなわちＰＲ、もしくは完全奏効、すなわちＣＲを含む）、全生存期間が増加する、かつ／または癌の１つ以上の症状が改善される（例えば、ＦＯＳＩによって評価される場合）可能性がある。
「エピトープ」という用語は、抗体が結合する抗原分子上の特定の部位を指す。
「エピトープ４Ｄ５」または「４Ｄ５エピトープ」または「４Ｄ５」は、抗体４Ｄ５（ＡＴＣＣ ＣＲＬ １０４６３）及びトラスツズマブが結合するＨＥＲ２の細胞外ドメイン内の領域である。このエピトープは、ＨＥＲ２の膜貫通ドメインに近接し、ＨＥＲ２のドメインＩＶ内に存在する。４Ｄ５エピトープに結合する抗体をスクリーニングするために、Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ，Ａ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ Ｍａｎｕａｌ，Ｃｏｌｄ Ｓｐｒｉｎｇ Ｈａｒｂｏｒ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ，Ｅｄ Ｈａｒｌｏｗ ａｎｄ Ｄａｖｉｄ Ｌａｎｅ（１９８８）に記載されているアッセイなどの、日常的な交差ブロッキングアッセイが実施され得る。あるいは、エピトープマッピングを実施して、抗体がＨＥＲ２の４Ｄ５エピトープ（例えば、ＨＥＲ２（配列番号：３９）の約残基５５０以上〜約残基６１０以下の領域内における任意の１つ以上の残基に結合するかどうかを評価することができる。
「エピトープ２Ｃ４」または「２Ｃ４エピトープ」は、抗体２Ｃ４が結合するＨＥＲ２の細胞外ドメイン内の領域である。２Ｃ４エピトープに結合する抗体をスクリーニングするために、Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ，Ａ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ Ｍａｎｕａｌ，Ｃｏｌｄ Ｓｐｒｉｎｇ Ｈａｒｂｏｒ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ，Ｅｄ Ｈａｒｌｏｗ ａｎｄ Ｄａｖｉｄ Ｌａｎｅ（１９８８）に記載されているアッセイなどの、日常的な交差ブロッキングアッセイが実施され得る。あるいは、エピトープマッピングを実施して、抗体がＨＥＲ２の２Ｃ４エピトープに結合するかどうかを評価することができる。エピトープ２Ｃ４は、ＨＥＲ２の細胞外ドメインにおけるドメインＩＩの残基を含む。２Ｃ４抗体及びペルツズマブは、ドメインＩ、ＩＩ及びＩＩＩの接合部でＨＥＲ２の細胞外ドメインに結合する（Ｆｒａｎｋｌｉｎ ｅｔ ａｌ．Ｃａｎｃｅｒ Ｃｅｌｌ ５：３１７−３２８（２００４））。
抗ＨＥＲ２マウス抗体７Ｃ２は、ＨＥＲ２のドメインＩ内のエピトープに結合する。例えば、ＰＣＴ公開第ＷＯ９８／１７７９７を参照のこと。このエピトープは、ＨＥＲ２のドメインＩＶに結合するトラスツズマブによって結合されるエピトープ、及びＨＥＲ２のドメインＩＩに結合するペルツズマブによって結合されるエピトープとは異なる。ドメインＩＶと結合することによって、トラスツズマブは、リガンド非依存性ＨＥＲ２−ＨＥＲ３複合体を破壊し、それによって下流シグナル伝達（例えば、ＰＩ３Ｋ／ＡＫＴ）を阻害する。対照的に、ドメインＩＩへのペルツズマブ結合は、その他のＨＥＲファミリーメンバー（例えば、ＨＥＲ３、ＨＥＲ１またはＨＥＲ４）とのリガンド駆動ＨＥＲ２相互作用を防止し、したがって下流シグナル伝達も防止する。ドメインＩにＭＡｂ ７Ｃ２が結合しても、ドメインＩＶ及びＩＩそれぞれへのトラスツズマブまたはペルツズマブ結合の干渉をもたらすことはなく、それによってＭＡｂ ７Ｃ２ ＡＤＣとトラスツズマブ、トラスツズマブエムタンシン（Ｔ−ＤＭ−１）、及び／またはペルツズマブとを組み合わせる能力を提供する。マウス抗体７Ｃ２、７Ｃ２．Ｂ９は、ＰＣＴ公開第ＷＯ９８／１７７９７に記載されている。抗ＨＥＲ２ ７Ｃ２ヒト化抗体は、ＷＯ２０１６／０４０７２３Ａ１に開示されている。
本明細書における「Ｆｃ領域」という用語は、定常領域の少なくとも一部を含有する免疫グロブリン重鎖のＣ末端領域を定義するために使用される。この用語は、天然配列のＦｃ領域及びバリアントＦｃ領域を含む。一実施形態では、ヒトＩｇＧ重鎖Ｆｃ領域は、Ｃｙｓ２２６から、またはＰｒｏ２３０から重鎖のカルボキシル末端へと伸長する。しかしながら、Ｆｃ領域のＣ末端リジン（Ｌｙｓ４４７）は、存在してもよく、存在していなくともよい。本明細書で別段の指定がない限り、Ｆｃ領域または定常領域におけるアミノ酸残基の番号付けは、Ｋａｂａｔ ｅｔ ａｌ．，Ｓｅｑｕｅｎｃｅｓ ｏｆ Ｐｒｏｔｅｉｎｓ ｏｆ Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｉｃａｌ Ｉｎｔｅｒｅｓｔ，５ｔｈ Ｅｄ．Ｐｕｂｌｉｃ Ｈｅａｌｔｈ Ｓｅｒｖｉｃｅ，Ｎａｔｉｏｎａｌ Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅｓ ｏｆ Ｈｅａｌｔｈ，Ｂｅｔｈｅｓｄａ，ＭＤ，１９９１に記載されているような、ＥＵインデックスとも呼ばれるＥＵ番号付けシステムに従う。
「フレームワーク」または「ＦＲ」は、超可変領域（ＨＶＲ）残基以外の可変ドメイン残基を指す。可変ドメインのＦＲは、一般に４つのＦＲドメイン：ＦＲ１、ＦＲ２、ＦＲ３、及びＦＲ４からなる。したがって、ＨＶＲ及びＦＲ配列は、一般にＶＨ（またはＶＬ）において以下の配列に現れる：ＦＲ１−Ｈ１（Ｌ１）−ＦＲ２−Ｈ２（Ｌ２）−ＦＲ３−Ｈ３（Ｌ３）−ＦＲ４。
「全長抗体」、「インタクトな抗体」、及び「全抗体」という用語は、本明細書において同じ意味で使用され、天然抗体構造と実質的に類似した構造を有する、または本明細書で定義されるようなＦｃ領域を含有する重鎖を有する抗体を指す。
「宿主細胞」、「宿主細胞株」、及び「宿主細胞培養物」という用語は同じ意味で使用され、外因性核酸を導入した細胞を指し、このような細胞の子孫を含む。宿主細胞は、「形質転換体」及び「形質転換細胞」を含み、それらは一次形質転換細胞、及び継代の数に関係なくそれらに由来する子孫を含む。子孫は、親細胞と完全に同一の核酸含有量でなくともよく、変異を含有してもよい。元々の形質転換細胞中でスクリーニングされた、または選択されたものと同じ機能または生物活性を有する変異体子孫が、本明細書に含まれる。
「ヒト抗体」は、ヒトもしくはヒト細胞により産生される抗体、またはヒト抗体のレパートリーもしくはその他のヒト抗体をコードする配列を利用する非ヒト供給源に由来する抗体のアミノ酸配列に対応するアミノ酸配列を有する抗体である。ヒト抗体のこの定義は、非ヒト抗原結合残基を含むヒト化抗体を特に除外する。
「ヒトコンセンサスフレームワーク」は、ヒト免疫グロブリンＶＬまたはＶＨフレームワーク配列の選択において、最も一般的に生じるアミノ酸残基を表すフレームワークである。一般に、ヒト免疫グロブリンＶＬまたはＶＨ配列の選択は、可変ドメイン配列のサブグループからである。一般に、配列のサブグループは、Ｋａｂａｔ ｅｔ ａｌ．，Ｓｅｑｕｅｎｃｅｓ ｏｆ Ｐｒｏｔｅｉｎｓ ｏｆ Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｉｃａｌ Ｉｎｔｅｒｅｓｔ，Ｆｉｆｔｈ Ｅｄｉｔｉｏｎ，ＮＩＨ Ｐｕｂｌｉｃａｔｉｏｎ ９１−３２４２，Ｂｅｔｈｅｓｄａ ＭＤ（１９９１），ｖｏｌｓ．１−３におけるようなサブグループである。一実施形態では、ＶＬについてのサブグループは、上記ＫａｂａｔらにおけるようなサブグループカッパＩである。一実施形態では、ＶＨについてのサブグループは、上記ＫａｂａｔらにおけるようなサブグループＩＩＩである。
「ヒト化」抗体は、非ヒトＨＶＲのアミノ酸残基及びヒトＦＲのアミノ酸残基を含む、キメラ抗体を指す。特定の実施形態では、ヒト化抗体は、少なくとも１つ、典型的には２つの可変ドメインの全てを実質的に含み、そのドメイン中ではＨＶＲ（例えば、ＣＤＲ）の全てまたは実質的に全てが非ヒト抗体のＨＶＲに対応し、ＦＲの全てまたは実質的に全てがヒト抗体のＦＲに対応することになる。ヒト化抗体は場合により、ヒト抗体に由来する抗体定常領域の少なくとも一部を含んでよい。抗体、例えば、非ヒト抗体の「ヒト化型」は、ヒト化を遂げた抗体を指す。
「超可変領域」または「ＨＶＲ」という用語は、本明細書で使用される場合、配列において超可変である、かつ／または構造的に定義されたループ（「超可変ループ」）を形成する抗体可変ドメインにおける領域の各々を指す。一般に、天然の４鎖抗体は、６つのＨＶＲ、すなわちＶＨに３つ（Ｈ１、Ｈ２、Ｈ３）、及びＶＬに３つ（Ｌ１、Ｌ２、Ｌ３）を含む。ＨＶＲは一般に、超可変ループからの、及び／または「相補性決定領域」（ＣＤＲ）からのアミノ酸残基を含み、後者は、配列可変性が最も高く、かつ／または抗原認識に関与している。例示的な超可変ループは、アミノ酸残基２６〜３２（Ｌ１）、５０〜５２（Ｌ２）、９１〜９６（Ｌ３）、２６〜３２（Ｈ１）、５３〜５５（Ｈ２）、及び９６〜１０１（Ｈ３）において生じる。（Ｃｈｏｔｈｉａ ａｎｄ Ｌｅｓｋ，Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．１９６：９０１−９１７（１９８７）。）例示的なＣＤＲ（ＣＤＲ−Ｌ１、ＣＤＲ−Ｌ２、ＣＤＲ−Ｌ３、ＣＤＲ−Ｈ１、ＣＤＲ−Ｈ２、及びＣＤＲ−Ｈ３）は、Ｌ１のアミノ酸残基２４〜３４、Ｌ２の５０〜５６、Ｌ３の８９〜９７、Ｈ１の３１〜３５Ｂ、Ｈ２の５０〜６５、及びＨ３の９５〜１０２において生じる。（Ｋａｂａｔ ｅｔ ａｌ．，Ｓｅｑｕｅｎｃｅｓ ｏｆ Ｐｒｏｔｅｉｎｓ ｏｆ Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｉｃａｌ Ｉｎｔｅｒｅｓｔ，５ｔｈ Ｅｄ．Ｐｕｂｌｉｃ Ｈｅａｌｔｈ Ｓｅｒｖｉｃｅ，Ｎａｔｉｏｎａｌ Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅｓ ｏｆ Ｈｅａｌｔｈ，Ｂｅｔｈｅｓｄａ，ＭＤ（１９９１）。）ＶＨのＣＤＲ１を除いて、ＣＤＲは一般に、超可変ループを形成するアミノ酸残基を含む。ＣＤＲはまた、抗原と接触する残基である、「特異性決定残基」、または「ＳＤＲ」も含む。ＳＤＲは、短縮型ＣＤＲ、またはａ−ＣＤＲと呼ばれるＣＤＲの領域内に含有される。例示的なａ−ＣＤＲ（ａ−ＣＤＲ−Ｌ１、ａ−ＣＤＲ−Ｌ２、ａ−ＣＤＲ−Ｌ３、ａ−ＣＤＲ−Ｈ１、ａ−ＣＤＲ−Ｈ２、及びａ−ＣＤＲ−Ｈ３）は、Ｌ１のアミノ酸残基３１〜３４、Ｌ２の５０〜５５、Ｌ３の８９〜９６、Ｈ１の３１〜３５Ｂ、Ｈ２の５０〜５８、及びＨ３の９５〜１０２において生じる。（Ａｌｍａｇｒｏ ａｎｄ Ｆｒａｎｓｓｏｎ，Ｆｒｏｎｔ．Ｂｉｏｓｃｉ．１３：１６１９−１６３３（２００８）を参照のこと。）別段の指示がない限り、可変ドメイン内のＨＶＲ残基及びその他の残基（例えば、ＦＲ残基）は、上記Ｋａｂａｔらに従って本明細書で番号付けされる。
「免疫複合体」は、細胞傷害剤を含むが、これに限定されない１種以上の異種分子（複数可）と複合化された抗体である。
「患者」または「個体」または「対象」は、哺乳動物である。哺乳動物としては、家畜動物（例えば、ウシ、ヒツジ、ネコ、イヌ、及びウマ）、霊長類（例えば、ヒト及び非ヒト霊長類、例えば、サルなど）、ウサギ、ならびにげっ歯類（例えば、マウス及びラット）が挙げられるが、これらに限定されない。特定の実施形態では、患者、個体、または対象は、ヒトである。いくつかの実施形態では、患者は「癌患者」、すなわち、癌、特に胃癌または乳癌の１つ以上の症状を患っている、または患うリスクがある患者であってよい。
「患者集団」は、癌患者の群を指す。このような集団を使用して、薬物の統計的に有意な有効性及び／または安全性を実証することができる。
「再発」患者は、寛解後に癌の徴候または症状を有する患者である。場合により、患者は、アジュバントまたはネオアジュバント療法後に再発した。
「ＨＥＲ発現、増幅、または活性化を示す」癌または生体試料は、診断試験において、ＨＥＲ受容体を発現する（過剰発現を含む）、増幅ＨＥＲ遺伝子を有する、かつ／またはさもなければ、ＨＥＲ受容体の活性化もしくはリン酸化を実証するものである。
「ネオアジュバント療法」または「術前療法」は、本明細書において、外科手術前に施される療法を指す。ネオアジュバント療法の目標は、即時の全身処置を提供することであり、外科手術、続いて全身治療の標準的な順序に従った場合に、さもなければ増殖するだろう微小転移を根絶する可能性がある。ネオアジュバント療法はまた、腫瘍サイズを減少させ、それによって当初は切除不可能であった腫瘍を完全に切除できる、または器官及びその機能の一部を保持するのに役立つ場合がある。さらに、ネオアジュバント療法は、薬効のインビボ評価を可能にし、これによって後続する処置の選択を導く場合がある。
「アジュバント療法」は、本明細書において、疾患再発のリスクを減少させるために、残存疾患の証拠を検出することができない根治的手術後に施される療法を指す。アジュバント療法の目標は、癌の再発を防止することであり、したがって、癌関連死の可能性を減少させることである。アジュバント療法は、本明細書において、ネオアジュバント療法を特に除外する。
「根治的手術」は、その用語が医学界内で使用されるように使用される。根治的手術としては、例えば、全ての肉眼視可能な腫瘍の除去または切除をもたらすものを含む、腫瘍の除去または切除をもたらす外科的手順または別の手順が挙げられる。根治的手術としては、例えば、腫瘍の完全もしくは治癒的切除または肉眼的完全切除が挙げられる。根治的手術としては、１つ以上の段階で発生する手順が挙げられ、例えば、腫瘍の切除前に１つ以上の外科的手順またはその他の手順が実施される多段階の外科的手順が挙げられる。根治的手術としては、関与する器官、器官及び組織の一部、加えて周囲の器官、例えば、リンパ節、器官の一部、または組織などを含む腫瘍を除去する、または切除する手順が挙げられる。除去は不完全な場合があるため、腫瘍細胞が検出されないにもかかわらず、残存している場合がある。
「生存」は、患者が依然として生存していることを指し、無病生存（ＤＦＳ）、無増悪生存（ＰＦＳ）及び全生存（ＯＳ）を含む。生存は、カプラン・マイヤー法によって推定され得、生存のいかなる差も、層別ログランク検定を使用して計算される。
「無増悪生存」（ＰＦＳ）は、処置の初日から、どちらが最初に発生しても、記録された疾患進行（単離ＣＮＳ進行を含む）または研究上のあらゆる原因による死亡までの期間である。
「無病生存（ＤＦＳ）」は、癌の再発もなく、処置の開始から、または初期診断から規定の期間、例えば、約１年、約２年、約３年、約４年、約５年、約１０年などの間、依然として患者が生存していることを指す。本発明の一態様では、ＤＦＳは、ｉｎｔｅｎｔ−ｔｏ−ｔｒｅａｔの原則に従って分析され、すなわち、患者は、それらの割り当てられた療法に基づいて評価される。ＤＦＳの分析で使用される事象は、癌の局所的再発、局所再発及び遠隔再発、二次癌の発生、ならびに先行事象（例えば、乳癌再発または第２原発性癌）を有しない患者のあらゆる原因による死亡を含み得る。
「全生存」は、処置の開始から、または初期診断から規定の期間、例えば、約１年、約２年、約３年、約４年、約５年、約１０年などの間、依然として患者が生存していることを指す。本発明の基礎となる試験では、生存分析に使用される事象は、あらゆる原因による死亡であった。
「生存を延長させること」とは、未処置の患者と比較して、または対照処置プロトコールと比較して、処置患者におけるＤＦＳ及び／またはＯＳを増加させることを意味する。生存は、処置の開始後または初期診断後、少なくとも約６ヶ月、または少なくとも約１年、または少なくとも約２年、または少なくとも約３年、または少なくとも約４年、または少なくとも約５年、または少なくとも約１０年などの間モニターされる。
「単独療法」とは、一連の処置期間中に、癌または腫瘍の処置のために単一治療剤のみを含む治療レジメンを意味する。
「維持療法」とは、疾患再発または進行の可能性を減少させるために施される治療レジメンを意味する。維持療法は、最長で対象の寿命までの長期間を含む、任意の長さの期間にわたって提供され得る。維持療法は、初期療法後に提供され得る、または初期療法もしくは追加療法と併せて提供され得る。維持療法に使用される投与量は異なる可能性があり、その他の種類の療法に使用される投与量と比較した場合に減少した投与量を含み得る。
「単離抗体」は、その自然環境の構成成分から分離されている抗体である。いくつかの実施形態では、抗体は、例えば、電気泳動（例えば、ＳＤＳ−ＰＡＧＥ、等電点電気泳動（ＩＥＦ）、キャピラリー電気泳動）またはクロマトグラフィー（例えば、イオン交換もしくは逆相ＨＰＬＣ）により決定される場合、９５％または９９％超の純度まで精製される。抗体純度の評価方法の概説については、例えば、Ｆｌａｔｍａｎ ｅｔ ａｌ．，Ｊ．Ｃｈｒｏｍａｔｏｇｒ．Ｂ ８４８：７９−８７（２００７）を参照のこと。
「単離核酸」は、その自然環境の構成成分から分離されている核酸分子を指す。単離核酸は、通常核酸分子を含有する細胞内に含有される核酸分子を含むが、その核酸分子は、染色体外に、またはその自然な染色体位置とは異なる染色体位置に存在する。
「抗体をコードする単離核酸」は、抗体重鎖及び軽鎖（またはそれらの断片）をコードする１つ以上の核酸分子を指し、単一のベクターまたは別々のベクター内のこのような核酸分子（複数可）、及び宿主細胞内の１つ以上の位置に存在するこのような核酸分子（複数可）を含む。
「ＨＥＲ２」という用語は、本明細書で使用される場合、細胞内のＨＥＲ２前駆体タンパク質のプロセシングからもたらされる任意の天然成熟ＨＥＲ２を指す。この用語は、別段の指示がない限り、霊長類（例えば、ヒト及びカニクイザル）ならびにげっ歯類（例えば、マウス及びラット）などの哺乳動物を含む、任意の脊椎動物供給源からのＨＥＲ２を含む。この用語はまた、ＨＥＲ２の天然に存在するバリアント、例えば、スプライスバリアントまたは対立遺伝子バリアントも含む。シグナル配列を含む（シグナル配列であるアミノ酸１〜２２を含む）、例示的なヒトＨＥＲ２前駆体タンパク質のアミノ酸配列は、配列番号：６４に示される。例示的な成熟ヒトＨＥＲ２のアミノ酸配列は、配列番号：６４のアミノ酸２３〜１２５５である。
「ＨＥＲ２陽性細胞」という用語は、その表面上にＨＥＲ２を発現する細胞を指す。
「モノクローナル抗体」という用語は、本明細書で使用される場合、実質的に均一な抗体の集団から得られる抗体を指し、すなわち、集団に含まれる個々の抗体が同一であり、かつ／または同じエピトープと結合するが、例えば、天然に存在する変異を含有する、またはモノクローナル抗体調製物の産生中に発生する可能性のあるバリアント抗体を除き、このようなバリアントは一般に少量で存在している。異なる決定基（エピトープ）に対して指向される異なる抗体を典型的に含む、ポリクローナル抗体調製物とは対照的に、モノクローナル抗体調製物の各モノクローナル抗体は、抗原上の単一の決定基に対して指向される。したがって、「モノクローナル」という修飾語は、実質的に均一な抗体の集団から得られるような抗体の特徴を示し、任意の特定の方法による抗体の産生を必要とするものとして解釈されるべきではない。例えば、本発明に従って使用されるモノクローナル抗体は、様々な技術、例えば、ハイブリドーマ法、組換えＤＮＡ法、ファージディスプレイ法、及びヒト免疫グロブリン遺伝子座の全てまたは一部を含有するトランスジェニック動物を利用する方法を含むが、これらに限定されない技術によって作製されてよく、モノクローナル抗体を作製するこのような方法及びその他の例示的な方法は、本明細書に記載されている。
「裸抗体」は、異種部分（例えば、細胞傷害性部分）または放射性標識と複合化されていない抗体を指す。裸抗体は、医薬製剤中に存在してよい。
「天然抗体」は、様々な構造を有する、天然に存在する免疫グロブリン分子を指す。例えば、天然ＩｇＧ抗体は、ジスルフィド結合した２本の同一軽鎖と２本の同一重鎖で構成される、約１５０，０００ダルトンのヘテロ四量体糖タンパク質である。Ｎ末端からＣ末端へと、各重鎖は、可変重鎖ドメインまたは重鎖可変ドメインとも呼ばれる可変領域（ＶＨ）を有し、それに３つの定常ドメイン（ＣＨ１、ＣＨ２、及びＣＨ３）が続く。同様に、Ｎ末端からＣ末端へと、各軽鎖は、可変軽鎖ドメインまたは軽鎖可変ドメインとも呼ばれる可変領域（ＶＬ）を有し、それに定常軽鎖（ＣＬ）ドメインが続く。抗体の軽鎖は、その定常ドメインのアミノ酸配列に基づいて、カッパ（κ）及びラムダ（λ）と呼ばれる２種のうち一方に割り当てられる場合がある。
「バイアル」は、液体または凍結乾燥調製物を保持するのに好適な容器である。一実施形態では、バイアルは、単回使用バイアル、例えば、栓を有する２０ｃｃの単回使用バイアルである。
「添付文書」という用語は、治療用製品の商品包装に通例含まれる説明書を指すために使用され、このような治療用製品の使用に関する指示、使用方法、投与量、投与、併用療法、禁忌及び／または注意事項についての情報を含有する。
参照ポリペプチド配列に対する「パーセント（％）アミノ酸配列同一性」は、配列を整列させて、最大のパーセント配列同一性を得るために必要であればギャップを導入した後、いかなる保存的置換も配列同一性の一部として考慮せずに、参照ポリペプチド配列中のアミノ酸残基と同一である、候補配列中のアミノ酸残基のパーセンテージとして定義される。パーセントアミノ酸配列同一性を決定するためのアラインメントは、当該技術分野の範囲内である様々な方法で、例えば、ＢＬＡＳＴ、ＢＬＡＳＴ−２、ＡＬＩＧＮまたはＭｅｇａｌｉｇｎ（ＤＮＡＳＴＡＲ）ソフトウェアなどの公的に入手可能なコンピュータソフトウェアを使用して達成され得る。当業者であれば、比較されている配列の全長にわたって最大のアラインメントを達成するのに必要な任意のアルゴリズムを含む、配列を整列させるための適切なパラメータを決定することができる。しかしながら、本明細書における目的のために、％アミノ酸配列同一性値は、配列比較コンピュータプログラムＡＬＩＧＮ−２を使用して生成される。ＡＬＩＧＮ−２配列比較コンピュータプログラムは、Ｇｅｎｅｎｔｅｃｈ，Ｉｎｃ．によって著作されたもので、ソースコードは、米国著作権局、ワシントンＤ．Ｃ．、２０５５９に利用者向け文書と共に申請されていて、米国著作権登録番号ＴＸＵ５１００８７の下で登録されている。ＡＬＩＧＮ−２プログラムは、Ｇｅｎｅｎｔｅｃｈ，Ｉｎｃ．、サウスサンフランシスコ、カリフォルニア州から公的に入手可能である、またはソースコードからコンパイルされてよい。ＡＬＩＧＮ−２プログラムは、ｄｉｇｉｔａｌ ＵＮＩＸ（登録商標） Ｖ４．０Ｄを含む、ＵＮＩＸ（登録商標）オペレーティングシステム上での使用のためにコンパイルされるべきである。全ての配列比較パラメータは、ＡＬＩＧＮ−２プログラムによって設定されて変動しない。
アミノ酸配列比較にＡＬＩＧＮ−２を用いる状況では、所与のアミノ酸配列Ａの、所与のアミノ酸配列Ｂへの、所与のアミノ酸配列Ｂとの、または所与のアミノ酸配列Ｂに対する％アミノ酸配列同一性（これは、所与のアミノ酸配列Ｂに、所与のアミノ酸配列Ｂと、または所与のアミノ酸配列Ｂに対して、一定の％アミノ酸配列同一性を有する、または含む所与のアミノ酸配列Ａと言い換えることもできる）は、以下の通りに算出される：
分率Ｘ／Ｙの１００倍
（式中、Ｘは配列アラインメントプログラムＡＬＩＧＮ−２によって、ＡとＢのそのプログラムのアラインメントにおいて同一であると一致したスコアのアミノ酸残基の数であり、ＹはＢの総アミノ酸残基数である）。アミノ酸配列Ａの長さがアミノ酸配列Ｂの長さとは異なる場合、ＡのＢに対する％アミノ酸配列同一性は、ＢのＡに対する％アミノ酸配列同一性とは異なることになると理解されることになる。別段の具体的な記載がない限り、本明細書で使用される全ての％アミノ酸配列同一性値は、ＡＬＩＧＮ−２コンピュータプログラムを使用して、直前の段落に記載されるように得られる。
「医薬製剤」という用語は、その中に含有される活性成分の生物活性が効果的となり得るような形態であり、製剤が投与されることになる対象にとって許容できないほどの毒性がある追加の構成成分を一切含有しない調製物を指す。
「薬学的に許容される担体」は、対象にとって非毒性である、活性成分以外の医薬製剤中の成分を指す。薬学的に許容される担体としては、緩衝剤、賦形剤、安定剤、または防腐剤が挙げられるが、これらに限定されない。
本明細書で使用される場合、「処置」（及びその文法上の変化形、例えば「処置する」または「処置すること」など）は、処置されている個体の自然経過を変化させようと試みる臨床的介入を指し、予防のために、または臨床病理の過程におけるいずれかで実施され得る。処置の望ましい効果としては、疾患の発症または再発を予防すること、症状の緩和、疾患の直接的または間接的な任意の病理学的帰結の減少、転移を予防すること、疾患進行速度を低下させること、疾患状態の改善または軽減、及び寛解または予後の改善が挙げられるが、これらに限定されない。いくつかの実施形態では、本発明の抗体は、疾患の発症を遅延させる、または疾患の進行を遅くするために使用される。
「共投与」とは、２種以上の薬物の連続注入ではなく、同じ投与中に２種（以上）の薬物を静脈内投与することを意味する。一般に、これは２種（以上）の薬物を、その共投与前に同じＩＶバッグ中で組み合わせることを伴うこととする。
１種以上のその他の薬物と「同時に」投与される薬物は、同じ処置サイクル中に、１種以上のその他の薬物と同じ処置日に、場合により１種以上のその他の薬物と同じ時間で投与される。例えば、３週間ごとに施される癌療法の場合、同時に投与される薬物は各々、３週間サイクルの１日目に投与される。
「化学治療剤」は、癌の処置に有用な化学化合物を指す。化学療法剤の例としては、チオテパ及びシクロスホスファミド（ＣＹＴＯＸＡＮ（登録商標））などのアルキル化剤、ブスルファン、インプロスルファン及びピポスルファンなどのスルホン酸アルキル、ベンゾドーパ、カルボコン、メツレドーパ、及びウレドーパなどのアジリジン、アルトレタミン、トリエチレンメラミン、トリエチレンホスホラミド、トリエチレンチオホスホラミド及びトリメチロメラミンを含むエチレンイミン及びメチラメラミン（ｍｅｔｈｙｌａｍｅｌａｍｉｎｅ）、アセトゲニン（特に、ブラタシン及びブラタシノン）、デルタ−９−テトラヒドロカンナビノール（ドロナビノール、ＭＡＲＩＮＯＬ（登録商標））、ベータ−ラパコン、ラパコール、コルヒチン、ベツリン酸、カンプトテシン（合成類似体トポテカン（ＨＹＣＡＭＴＩＮ（登録商標））、ＣＰＴ−１１（イリノテカン、ＣＡＭＰＴＯＳＡＲ（登録商標））、アセチルカンプトテシン、スコポレクチン、及び９−アミノカンプトテシンを含む）、ブリオスタチン、カリスタチン、ＣＣ−１０６５（そのアドゼレシン、カルゼレシン及びビゼレシンの合成類似体を含む）、ポドフィロトキシン、ポドフィリン酸、テニポシド、クリプトフィシン（特に、クリプトフィシン１及びクリプトフィシン８）、ドラスタチン、デュオカルマイシン（合成類似体のＫＷ−２１８９及びＣＢ１−ＴＭ１を含む）、エリュテロビン、パンクラチスタチン、サルコジクチン、スポンジスタチン、ナイトロジェンマスタード、例えば、クロラムブシル、クロルナファジン、クロロホスファミド、エストラムスチン、イホスファミド、メクロレタミン、メクロレタミンオキシドヒドロクロリド、メルファラン、ノベンビチン、フェネステリン、プレドニムスチン、トロホスファミド、ウラシルマスタードなど、ニトロソウレア、例えば、カルムスチン、クロロゾトシン、フォテムスチン、ロムスチン、ニムスチン、及びラニムスチンなど、抗生物質、例えば、エンジイン抗生物質（例えば、カリケアマイシン、特にカリケアマイシンガンマ１Ｉ及びカリケアマイシンオメガＩ１（例えば、Ｎｉｃｏｌａｏｕ ｅｔ ａｌ．，Ａｎｇｅｗ．Ｃｈｅｍ Ｉｎｔｌ．Ｅｄ．Ｅｎｇｌ．，３３：１８３−１８６（１９９４））を参照のこと）、ＣＤＰ３２３、すなわち経口アルファ−４インテグリン阻害剤、ダイネミシンＡを含む、ダイネミシン、エスペラマイシン、加えてネオカルジノスタチン発色団及び関連色素タンパク質エンジイン抗生物質発色団）など、アクラシノマイシン（ａｃｌａｃｉｎｏｍｙｓｉｎ）、アクチノマイシン、オースラマイシン（ａｕｔｈｒａｍｙｃｉｎ）、アザセリン、ブレオマイシン、カクチノマイシン、カラビシン、カルミノマイシン、カルジノフィリン、クロモマイシン、ダクチノマイシン、ダウノルビシン、デトルビシン、６−ジアゾ−５−オキソ−Ｌ−ノルロイシン、ドキソルビシン（ＡＤＲＩＡＭＹＣＩＮ（登録商標）、モルホリノ−ドキソルビシン、シアノモルホリノ−ドキソルビシン、２−ピロリノ−ドキソルビシン、ドキソルビシンＨＣｌリポソーム注射剤（ＤＯＸＩＬ（登録商標））、リポソーマルドキソルビシンＴＬＣ Ｄ−９９（ＭＹＯＣＥＴ（登録商標））、ＰＥＧ化リポソーマルドキソルビシン（ＣＡＥＬＹＸ（登録商標））、及びデオキシドキソルビシンを含む）、エピルビシン、エソルビシン、イダルビシン、マルセロマイシン、マイトマイシンＣなどのマイトマイシン、ミコフェノール酸、ノガラマイシン、オリボマイシン、ペプロマイシン、ポルフィロマイシン、ピューロマイシン、ケラマイシン、ロドルビシン、ストレプトニグリン、ストレプトゾシン、ツベルシジン、ウベニメクス、ジノスタチン、ゾルビシン、代謝拮抗剤、例えば、メトトレキサート、ゲムシタビン（ＧＥＭＺＡＲ（登録商標））、テガフール（ＵＦＴＯＲＡＬ（登録商標））、カペシタビン（ＸＥＬＯＤＡ（登録商標））、エポチロン、及び５−フルオロウラシル（５−ＦＵ）など、葉酸類似体、例えば、デノプテリン、メトトレキサート、プテロプテリン、トリメトレキサートなど、プリン類似体、例えば、フルダラビン、６−メルカプトプリン、チアミプリン、チオグアニンなど、ピリミジン類似体、例えば、アンシタビン、アザシチジン、６−アザウリジン、カルモフール、シタラビン、ジデオキシウリジン、ドキシフルリジン、エノシタビン、フロクスウリジンなど、アンドロゲン、例えば、カルステロン、プロピオン酸ドロモスタノロン、エピチオスタノール、メピチオスタン、テストラクトンなど、抗副腎剤、例えば、アミノグルテチミド、ミトタン、トリロスタンなど、フロリン酸（ｆｒｏｌｉｎｉｃ ａｃｉｄ）などの葉酸補充剤、アセグラトン、アルドホスファミドグリコシド、アミノレブリン酸、エニルウラシル、アムサクリン、ベストラブシル、ビサントレン、エダトラキサート（ｅｄａｔｒａｘａｔｅ）、デフォファミン、デメコルシン、ジアジコン、エルフォルニチン（ｅｌｆｏｒｎｉｔｈｉｎｅ）、酢酸エリプチニウム、エポチロン、エトグルシド、硝酸ガリウム、ヒドロキシ尿素、レンチナン、ロニダイニン（ｌｏｎｉｄａｉｎｉｎｅ）、メイタンシノイド、例えば、メイタンシン及びアンサミトシンなど、ミトグアゾン、ミトキサントロン、モピダンモール（ｍｏｐｉｄａｎｍｏｌ）、ニトラエリン（ｎｉｔｒａｅｒｉｎｅ）、ペントスタチン、フェナメット、ピラルビシン、ロソキサントロン、２−エチルヒドラジド、プロカルバジン、ＰＳＫ（登録商標）多糖複合体（ＪＨＳ Ｎａｔｕｒａｌ Ｐｒｏｄｕｃｔｓ、ユージーン、オレゴン州）、ラゾキサン、リゾキシン、シゾフィラン、スピロゲルマニウム、テヌアゾン酸、トリアジコン、２，２’，２’’−トリクロロトリエチルアミン、トリコテセン（特に、Ｔ−２トキシン、ベラクリンＡ、ロリジンＡ及びアングイジン）、ウレタン、ビンデシン（ＥＬＤＩＳＩＮＥ（登録商標）、ＦＩＬＤＥＳＩＮ（登録商標））、ダカルバジン、マンノムスチン、ミトブロニトール、ミトラクトール、ピポブロマン、ガシトシン、アラビノシド（「Ａｒａ−Ｃ」）、チオテパ、タキソイド、例えば、パクリタキセル（ＴＡＸＯＬ（登録商標））、パクリタキセルのアルブミン操作ナノ粒子製剤（ＡＢＲＡＸＡＮＥ（商標））、及びドセタキセル（ＴＡＸＯＴＥＲＥ（登録商標））、クロランブシル（ｃｈｌｏｒａｎｂｕｃｉｌ）、６−チオグアニン、メルカプトプリン、メトトレキサート、白金剤、例えば、シスプラチン、オキサリプラチン（例えば、ＥＬＯＸＡＴＩＮ（登録商標））、及びカルボプラチンなど、ビンブラスチン（ＶＥＬＢＡＮ（登録商標））、ビンクリスチン（ＯＮＣＯＶＩＮ（登録商標））、ビンデシン（ＥＬＤＩＳＩＮＥ（登録商標）、ＦＩＬＤＥＳＩＮ（登録商標））、及びビノレルビン（ＮＡＶＥＬＢＩＮＥ（登録商標））を含む、チューブリン重合による微小管の形成を防ぐビンカ、エトポシド（ＶＰ−１６）、イホスファミド、ミトキサントロン、ロイコボリン、ノバントロン、エダトレキサート、ダウノマイシン、アミノプテリン、イバンドロネート、トポイソメラーゼ阻害剤ＲＦＳ２０００、ジフルオロメチルオルニチン（ＤＭＦＯ）、ベキサロテン（ＴＡＲＧＲＥＴＩＮ（登録商標））を含む、レチノイン酸などのレチノイド、ビスホスホネート、例えば、クロドロネート（例えば、ＢＯＮＥＦＯＳ（登録商標）またはＯＳＴＡＣ（登録商標））、エチドロネート（ＤＩＤＲＯＣＡＬ（登録商標））、ＮＥ−５８０９５、ゾレドロン酸／ゾレドロネート（ＺＯＭＥＴＡ（登録商標））、アレンドロネート（ＦＯＳＡＭＡＸ（登録商標））、パミドロネート（ＡＲＥＤＩＡ（登録商標））、チルドロネート（ＳＫＥＬＩＤ（登録商標））、またはリセドロネート（ＡＣＴＯＮＥＬ（登録商標））など、トロキサシタビン（１，３−ジオキソランヌクレオシドシトシン類似体）、アンチセンスオリゴヌクレオチド、特に異常な細胞増殖に関与するシグナル伝達経路における遺伝子の発現を阻害するもの、例えば、ＰＫＣ−アルファ、Ｒａｆ、Ｈ−Ｒａｓ、及び上皮成長因子受容体（ＥＧＦ−Ｒ）など、ワクチン、例えば、ＴＨＥＲＡＴＯＰＥ（登録商標）ワクチン及び遺伝子療法ワクチン、例えば、ＡＬＬＯＶＥＣＴＩＮ（登録商標）ワクチン、ＬＥＵＶＥＣＴＩＮ（登録商標）ワクチン、及びＶＡＸＩＤ（登録商標）ワクチンなど、トポイソメラーゼ１阻害剤（例えば、ＬＵＲＴＯＴＥＣＡＮ（登録商標））、ｒｍＲＨ（例えば、ＡＢＡＲＥＬＩＸ（登録商標））、ＢＡＹ４３９００６（ソラフェニブ、Ｂａｙｅｒ）、ＳＵ−１１２４８（スニチニブ、ＳＵＴＥＮＴ（登録商標）、Ｐｆｉｚｅｒ）、ペリホシン、ＣＯＸ−２阻害剤（例えば、セレコキシブまたはエトリコキシブ）、プロテオソーム阻害剤（例えば、ＰＳ３４１）、ボルテゾミブ（ＶＥＬＣＡＤＥ（登録商標））、ＣＣＩ−７７９、チピファルニブ（Ｒ１１５７７）、オラフェニブ、ＡＢＴ５１０、オブリメルセンナトリウム（ＧＥＮＡＳＥＮＳＥ（登録商標））などのＢｃｌ−２阻害剤、ピキサントロン、ＥＧＦＲ阻害剤（以下の定義を参照のこと）、チロシンキナーゼ阻害剤、ラパマイシン（シロリムス、ＲＡＰＡＭＵＮＥ（登録商標））などのセリン−トレオニンキナーゼ阻害剤、ロナファルニブ（ＳＣＨ６６３６、ＳＡＲＡＳＡＲ（商標））などのファルネシルトランスフェラーゼ阻害剤、ならびに上記のいずれかの薬学的に許容される塩、酸または誘導体、加えて上記のうち２種以上の組合せ、例えば、ＣＨＯＰ、すなわち、シクロホスファミド、ドキソルビシン、ビンクリスチン、及びプレドニゾロンの併用療法の略語、ならびにＦＯＬＦＯＸ、すなわち、オキサリプラチン（ＥＬＯＸＡＴＩＮ（商標））を５−ＦＵ及びロイコボリンと組み合わせた処置レジメンの略語などが挙げられる。
本明細書で定義されるような化学治療剤としては、癌の成長を促進し得るホルモンの効果を制御、減少、ブロック、または阻害するように機能する「抗ホルモン剤」または「内分泌治療薬」が挙げられる。それらは、それら自体がホルモンであってよく、タモキシフェン（ＮＯＬＶＡＤＥＸ（登録商標））、４−ヒドロキシタモキシフェン、トレミフェン（ＦＡＲＥＳＴＯＮ（登録商標））、イドキシフェン、ドロロキシフェン、ラロキシフェン（ＥＶＩＳＴＡ（登録商標））、トリオキシフェン、ケオキシフェン、及びＳＥＲＭ３などの選択的エストロゲン受容体モジュレーター（ＳＥＲＭ）を含む、混合アゴニスト／アンタゴニストプロファイルを有する抗エストロゲン、フルベストラント（ＦＡＳＬＯＤＥＸ（登録商標））、及びＥＭ８００（このような薬剤は、エストロゲン受容体（ＥＲ）二量体化をブロックする、ＤＮＡ結合を阻害する、ＥＲ代謝回転を増加させる、かつ／またはＥＲレベルを抑制する場合がある）などのアゴニスト特性を有しない純粋な抗エストロゲン、フォルメスタン及びエキセメスタン（ＡＲＯＭＡＳＩＮ（登録商標））などのステロイド性アロマターゼ阻害剤、ならびにアナストラゾール（ＡＲＩＭＩＤＥＸ（登録商標））、レトロゾール（ＦＥＭＡＲＡ（登録商標））及びアミノグルテチミドなどの非ステロイド性アロマターゼ阻害剤を含む、アロマターゼ阻害剤、ならびにボロゾール（ＲＩＶＩＳＯＲ（登録商標））、酢酸メゲストロール（ＭＥＧＡＳＥ（登録商標））、ファドロゾール、及び４（５）−イミダゾールを含む、その他のアロマターゼ阻害剤、ロイプロリド（ＬＵＰＲＯＮ（登録商標）及びＥＬＩＧＡＲＤ（登録商標））、ゴセレリン、ブセレリン、及びトリプテレリン（ｔｒｉｐｔｅｒｅｌｉｎ）を含む、黄体形成ホルモン放出ホルモンアゴニスト、酢酸メゲストロール及び酢酸メドロキシプロゲステロンなどのプロゲスチン、ジエチルスチルベストロール及びプレマリンなどのエストロゲン、ならびにフルオキシメステロン、全てのトランスレチオン酸（ｔｒａｎｓｒｅｔｉｏｎｉｃ ａｃｉｄ）及びフェンレチニドなどのアンドロゲン／レチノイドを含む、性ステロイド、オナプリストン、抗プロゲステロン、エストロゲン受容体ダウンレギュレーター（ＥＲＤ）、フルタミド、ニルタミド及びビカルタミドなどの抗アンドロゲン、ならびに上記のうちのいずれかの薬学的に許容される塩、酸または誘導体、加えて上記のうちの２つ以上の組合せを含むが、これらに限定されない。
「免疫抑制剤」という用語は、補助療法に関して本明細書で使用される場合、本明細書で処置されている哺乳動物の免疫系を抑制または遮断するように機能する物質を指す。これは、サイトカイン産生を抑制する、自己抗原発現を下方制御もしくは抑制する、またはＭＨＣ抗原を遮断する物質を含むことになる。このような薬剤の例としては、２−アミノ−６−アリール−５−置換ピリミジン（米国特許第４，６６５，０７７号明細書を参照のこと）、非ステロイド性抗炎症薬（ＮＳＡＩＤ）、ガンシクロビル、タクロリムス、コルチゾールまたはアルドステロンなどのグルココルチコイド、シクロオキシゲナーゼ阻害剤、５−リポキシゲナーゼ阻害剤、またはロイコトリエン受容体アンタゴニストなどの抗炎症剤、アザチオプリンまたはミコフェノール酸モフェチル（ＭＭＦ）などのプリンアンタゴニスト、シクロホスファミドなどのアルキル化剤、ブロモクリプチン、ダナゾール、ダプソン、グルタルアルデヒド（これは、米国特許第４，１２０，６４９号明細書に記載されるように、ＭＨＣ抗原を遮断する）、ＭＨＣ抗原及びＭＨＣ断片に関する抗イディオタイプ抗体、シクロスポリンＡ、コルチコステロイドまたはグルココルチコステロイドもしくはグルココルチコイド類似体などのステロイド、例えば、プレドニゾン、ＳＯＬＵ−ＭＥＤＲＯＬ（登録商標）コハク酸メチルプレドニゾロンナトリウムを含む、メチルプレドニゾロン、及びデキサメタゾン、メトトレキサート（経口または皮下）などのジヒドロ葉酸レダクターゼ阻害剤、クロロキン及びヒドロキシクロロキンなどの抗マラリア剤、スルファサラジン、レフルノミド、抗インターフェロン−アルファ、−ベータ、または−ガンマ抗体、抗腫瘍壊死因子（ＴＮＦ）−アルファ抗体（インフリキシマブ（ＲＥＭＩＣＡＤＥ（登録商標））またはアダリムマブ）、抗ＴＮＦ−アルファイムノアドヘシン（エタネルセプト）、抗ＴＮＦ−ベータ抗体、抗インターロイキン−２（ＩＬ−２）抗体及び抗ＩＬ−２受容体抗体、ならびに抗インターロイキン−６（ＩＬ−６）受容体抗体及びアンタゴニスト（ＡＣＴＥＭＲＡ（商標）（トシリズマブ）など）を含む、サイトカインまたはサイトカイン受容体抗体、抗ＣＤ１１ａ及び抗ＣＤ１８抗体を含む、抗ＬＦＡ−１抗体、抗Ｌ３Ｔ４抗体、異種性抗リンパ球グロブリン、ｐａｎ−Ｔ抗体、好ましくは抗ＣＤ３または抗ＣＤ４／ＣＤ４ａ抗体、ＬＦＡ−３結合ドメインを含有する可溶性ペプチド（ＷＯ９０／０８１８７、１９９０年７月２６日公開）、ストレプトキナーゼ、トランスフォーミング増殖因子−ベータ（ＴＧＦ−ベータ）、ストレプトドルナーゼ、宿主からのＲＮＡまたはＤＮＡ、ＦＫ５０６、ＲＳ−６１４４３、クロラムブシル、デオキシスパガリン、ラパマイシン、Ｔ細胞受容体（Ｃｏｈｅｎらの米国特許第５，１１４，７２１号明細書）、Ｔ細胞受容体断片（Ｏｆｆｎｅｒ ｅｔ ａｌ．，Ｓｃｉｅｎｃｅ，２５１：４３０−４３２（１９９１）、ＷＯ９０／１１２９４、Ｉａｎｅｗａｙ，Ｎａｔｕｒｅ，３４１：４８２（１９８９）、及びＷＯ９１／０１１３３）、ＢＡＦＦ抗体及びＢＲ３抗体及びｚＴＮＦ４アンタゴニストなどのＢＡＦＦアンタゴニスト（概説については、Ｍａｃｋａｙ ａｎｄ Ｍａｃｋａｙ，Ｔｒｅｎｄｓ Ｉｍｍｕｎｏｌ．，２３：１１３−５（２００２）を参照し、以下の定義も参照のこと）、ＣＤ４０−ＣＤ４０リガンドに対するブロッキング抗体（例えば、Ｄｕｒｉｅ ｅｔ ａｌ．，Ｓｃｉｅｎｃｅ，２６１：１３２８−３０（１９９３）、Ｍｏｈａｎ ｅｔ ａｌ．，Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．，１５４：１４７０−８０（１９９５））及びＣＴＬＡ４−Ｉｇ（Ｆｉｎｃｋ ｅｔ ａｌ．，Ｓｃｉｅｎｃｅ，２６５：１２２５−７（１９９４））を含む、抗ＣＤ４０受容体または抗ＣＤ４０リガンド（ＣＤ１５４）などのＴ細胞ヘルパーシグナルに干渉する生物剤、ならびにＴ１０Ｂ９などのＴ細胞受容体抗体（ＥＰ３４０，１０９）が挙げられる。本明細書におけるいくつかの好ましい免疫抑制剤としては、シクロホスファミド、クロラムブシル、アザチオプリン、レフルノミド、ＭＭＦ、またはメトトレキサートが挙げられる。
「ＰＤ−１軸結合アンタゴニスト」という用語は、ＰＤ−１軸結合パートナーとその結合パートナーのうちいずれか１つ以上との相互作用を阻害する分子を指し、結果としてＰＤ−１シグナル伝達軸上のシグナル伝達に起因するＴ細胞機能不全を除去し、Ｔ細胞機能（例えば、増殖、サイトカイン産生、標的細胞死滅）を回復または増強するという結果を伴う。本明細書で使用される場合、ＰＤ−１軸結合アンタゴニストとしては、ＰＤ−１結合アンタゴニスト、ＰＤ−Ｌ１結合アンタゴニスト及びＰＤ−Ｌ２結合アンタゴニストが挙げられる。
「ＰＤ−１結合アンタゴニスト」という用語は、ＰＤ−１とその結合パートナーのうち１つ以上、例えば、ＰＤ−Ｌ１、ＰＤ−Ｌ２などとの相互作用に起因するシグナル伝達を減少させる、ブロックする、阻害する、抑止する、またはそれに干渉する分子を指す。いくつかの実施形態では、ＰＤ−１結合アンタゴニストは、ＰＤ−１とその結合パートナーのうち１つ以上との結合を阻害する分子である。特定の態様では、ＰＤ−１結合アンタゴニストは、ＰＤ−１とＰＤ−Ｌ１及び／またはＰＤ−Ｌ２との結合を阻害する。例えば、ＰＤ−１結合アンタゴニストとしては、ＰＤ−１とＰＤ−Ｌ１及び／またはＰＤ−Ｌ２との相互作用に起因するシグナル伝達を減少させる、ブロックする、阻害する、抑止する、またはそれに干渉する抗ＰＤ−１抗体、それらの抗原結合断片、イムノアドヘシン、融合タンパク質、オリゴペプチド及びその他の分子が挙げられる。一実施形態では、ＰＤ−１結合アンタゴニストは、機能不全Ｔ細胞の機能不全を低減させる（例えば、抗原認識に対するエフェクター応答を増強する）ように、ＰＤ−１を介してシグナル伝達を媒介したＴリンパ球上で発現される細胞表面タンパク質によって、またはそれを介して媒介される負の共刺激シグナルを減少させる。いくつかの実施形態では、ＰＤ−１結合アンタゴニストは抗ＰＤ−１抗体である。特定の態様では、ＰＤ−１結合アンタゴニストは、本明細書に記載されるＭＤＸ−１１０６（ニボルマブ）である。別の特定の態様では、ＰＤ−１結合アンタゴニストは、本明細書に記載されるＭＫ−３４７５（ランブロリズマブ）である。別の特定の態様では、ＰＤ−１結合アンタゴニストは、本明細書に記載されるＣＴ−０１１（ピジリズマブ）である。別の特定の態様では、ＰＤ−１結合アンタゴニストは、本明細書に記載されるＡＭＰ−２２４である。
「ＰＤ−Ｌ１結合アンタゴニスト」という用語は、ＰＤ−Ｌ１とその結合パートナーのいずれか１つ以上、例えば、ＰＤ−１、Ｂ７−１などとの相互作用に起因するシグナル伝達を減少させる、ブロックする、阻害する、抑止する、またはそれに干渉する分子を指す。いくつかの実施形態では、ＰＤ−Ｌ１結合アンタゴニストは、ＰＤ−Ｌ１とその結合パートナーとの結合を阻害する分子である。特定の態様では、ＰＤ−Ｌ１結合アンタゴニストは、ＰＤ−Ｌ１とＰＤ−１及び／またはＢ７−１との結合を阻害する。いくつかの実施形態では、ＰＤ−Ｌ１結合アンタゴニストとしては、ＰＤ−Ｌ１とその結合パートナーの１つ以上、例えば、ＰＤ−１、Ｂ７−１などとの相互作用に起因するシグナル伝達を減少させる、ブロックする、阻害する、抑止する、またはそれに干渉する抗ＰＤ−Ｌ１抗体、それらの抗原結合断片、イムノアドヘシン、融合タンパク質、オリゴペプチド及びその他の分子が挙げられる。一実施形態では、ＰＤ−Ｌ１結合アンタゴニストは、機能不全Ｔ細胞の機能不全を低減させる（例えば、抗原認識に対するエフェクター応答を増強する）ように、ＰＤ−Ｌ１を介してシグナル伝達を媒介したＴリンパ球上で発現される細胞表面タンパク質によって、またはそれを介して媒介される負の共刺激シグナルを減少させる。いくつかの実施形態では、ＰＤ−Ｌ１結合アンタゴニストは抗ＰＤ−Ｌ１抗体である。特定の態様では、抗ＰＤ−Ｌ１抗体は、本明細書に記載されるＹＷ２４３．５５．Ｓ７０である。別の特定の態様では、抗ＰＤ−Ｌ１抗体は、本明細書に記載されるＭＤＸ−１１０５である。さらに別の特定の態様では、抗ＰＤ−Ｌ１抗体は、本明細書に記載されるＭＰＤＬ３２８０Ａである。さらに別の特定の態様では、抗ＰＤ−Ｌ１抗体は、本明細書に記載されるＭＥＤＩ４７３６である。
「ＰＤ−Ｌ２結合アンタゴニスト」という用語は、ＰＤ−Ｌ２とその結合パートナーのいずれか１つ以上、例えば、ＰＤ−１などとの相互作用に起因するシグナル伝達を減少させる、ブロックする、阻害する、抑止する、またはそれに干渉する分子を指す。いくつかの実施形態では、ＰＤ−Ｌ２結合アンタゴニストは、ＰＤ−Ｌ２とその結合パートナーのうち１つ以上との結合を阻害する分子である。特定の態様では、ＰＤ−Ｌ２結合アンタゴニストは、ＰＤ−Ｌ２とＰＤ−１との結合を阻害する。いくつかの実施形態では、ＰＤ−Ｌ２アンタゴニストとしては、ＰＤ−Ｌ２とその結合パートナーのいずれか１つ以上、例えば、ＰＤ−１などとの相互作用に起因するシグナル伝達を減少させる、ブロックする、阻害する、抑止する、またはそれに干渉する抗ＰＤ−Ｌ２抗体、それらの抗原結合断片、イムノアドヘシン、融合タンパク質、オリゴペプチド及びその他の分子が挙げられる。一実施形態では、ＰＤ−Ｌ２結合アンタゴニストは、機能不全Ｔ細胞の機能不全を低減させる（例えば、抗原認識に対するエフェクター応答を増強する）ように、ＰＤ−Ｌ２を介してシグナル伝達を媒介したＴリンパ球上で発現される細胞表面タンパク質によって、またはそれを介して媒介される負の共刺激シグナルを減少させる。いくつかの実施形態では、ＰＤ−Ｌ２結合アンタゴニストは、イムノアドヘシンである。
本明細書における治療剤の「固定」または「一定」用量は、患者の体重（ＷＴ）または体表面積（ＢＳＡ）にかかわらず、ヒト患者に投与される用量を指す。したがって、固定用量または一定用量は、ｍｇ／ｋｇ用量またはｍｇ／ｍ２用量としてではなく、むしろ治療剤の絶対量として提供される。
本明細書における「負荷」用量は一般に、患者に投与される治療剤の初期用量を含み、その後に１回以上のその維持用量（複数可）が続く。一般に、単回負荷用量が投与されるが、本明細書では複数回の負荷用量が考慮される。通常、投与される負荷用量（複数可）の量は、投与される維持用量（複数可）の量を超え、かつ／または負荷用量（複数可）は、維持用量（複数可）よりも高い頻度で投与され、その結果、維持用量（複数可）で達成され得るよりも早く治療剤の所望の定常状態濃度を達成する。
本明細書における「維持」用量は、処置期間にわたって患者に投与される治療剤の１回以上の用量を指す。通常、維持用量は処置間隔をあけて、例えば、およそ毎週、およそ２週間ごと、およそ３週間ごと、またはおよそ４週間ごとなど、好ましくは３週間ごとに投与される。
「注入」または「注入すること」は、治療目的で静脈から体内に薬物含有溶液を導入することを指す。一般に、これは静脈内（ＩＶ）バッグを介して達成される。
「静脈内バッグ」または「ＩＶバッグ」は、患者の静脈を介して投与され得る溶液を保持し得るバッグである。一実施形態では、溶液は、生理食塩水である（例えば、約０．９％または約０．４５％ＮａＣｌ）。場合により、ＩＶバッグは、ポリオレフィンまたはポリ塩化ビニルから形成される。
「可変領域」または「可変ドメイン」という用語は、抗体と抗原との結合に関与する抗体重鎖または軽鎖のドメインを指す。天然抗体の重鎖及び軽鎖の可変ドメイン（それぞれ、ＶＨ及びＶＬ）は一般に、各ドメインが４つの保存されたフレームワーク領域（ＦＲ）及び３つの超可変領域（ＨＶＲ）を含む、類似した構造を有する。（例えば、Ｋｉｎｄｔ ｅｔ ａｌ．ＫｕｂｙＩｍｍｕｎｏｌｏｇｙ，６ｔｈ ｅｄ．，Ｗ．Ｈ．Ｆｒｅｅｍａｎ ａｎｄ Ｃｏ．，ｐａｇｅ ９１（２００７）を参照のこと。）単一のＶＨまたはＶＬドメインは、抗原結合特異性を付与するのに十分な場合がある。さらに、特定の抗原と結合する抗体は、その抗原と結合する抗体由来のＶＨまたはＶＬドメインを使用して単離され、それぞれ相補的なＶＬまたはＶＨドメインのライブラリーをスクリーニングしてよい。例えば、Ｐｏｒｔｏｌａｎｏ ｅｔ ａｌ．，Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１５０：８８０−８８７（１９９３）、Ｃｌａｒｋｓｏｎ ｅｔ ａｌ．，Ｎａｔｕｒｅ ３５２：６２４−６２８（１９９１）を参照のこと。
「ベクター」という用語は、本明細書で使用される場合、核酸分子に連結される別の核酸を伝播できる核酸分子を指す。この用語は、自己複製核酸構造としてのベクター、加えてベクターを導入した宿主細胞のゲノム中に組み込まれるベクターを含む。特定のベクターは、それらが機能的に連結されている核酸の発現を導くことができる。このようなベクターは、本明細書において「発現ベクター」と称される。
「遊離システインアミノ酸」は、親抗体に操作が行われ、チオール官能基（−ＳＨ）を有し、分子内または分子間ジスルフィド架橋として対合されないシステインアミノ酸残基を指す。
「リンカー」、「リンカー単位」、または「リンク」は、抗体を薬物部分に共有結合させる原子の鎖を含む化学部分を意味する。
置換基の数を示す場合、「１つ以上」という用語は、１つの置換基から可能な限り最大数の置換基、すなわち、１つの水素の置き換えから、最大で全ての水素を置換基によって置き換えるまでの範囲を指す。「置換基」という用語は、親分子上の水素原子を置き換える原子または原子の群を示す。「置換された」という用語は、明記された基が１つ以上の置換基を持つことを示す。いずれの基も複数の置換基を有することができ、種々の可能な置換基が提供される場合、置換基は独立して選択され、同じである必要はない。「非置換」という用語は、明記された基が置換基を一切持たないことを意味する。「場合により置換された」という用語は、明記された基が非置換である、または可能な置換基の群から独立して選択される１つ以上の置換基で置換されていることを意味する。置換基の数を示す場合、「１つ以上」という用語は、１つの置換基から可能な限り最大数の置換基、すなわち、１つの水素の置き換えから、最大で全ての水素を置換基によって置き換えることを意味する。
「アルキル」という用語は、本明細書で使用される場合、１〜１２個の炭素原子（Ｃ１〜Ｃ１２）で、任意の長さの飽和した直鎖または分岐鎖一価炭化水素ラジカルを指し、アルキルラジカルは、以下に記載されている１つ以上の置換基で独立して場合により置換されてよい。別の実施形態では、アルキルラジカルは、１〜８個の炭素原子（Ｃ１〜Ｃ８）、または１〜６個の炭素原子（Ｃ１〜Ｃ６）である。アルキル基の例としては、メチル（Ｍｅ、−ＣＨ３）、エチル（Ｅｔ、−ＣＨ２ＣＨ３）、１−プロピル（ｎ−Ｐｒ、ｎ−プロピル、−ＣＨ２ＣＨ２ＣＨ３）、２−プロピル（ｉ−Ｐｒ、ｉ−プロピル、−ＣＨ（ＣＨ３）２）、１−ブチル（ｎ−Ｂｕ、ｎ−ブチル、−ＣＨ２ＣＨ２ＣＨ２ＣＨ３）、２−メチル−１−プロピル（ｉ−Ｂｕ、ｉ−ブチル、−ＣＨ２ＣＨ（ＣＨ３）２）、２−ブチル（ｓ−Ｂｕ、ｓ−ブチル、−ＣＨ（ＣＨ３）ＣＨ２ＣＨ３）、２−メチル−２−プロピル（ｔ−Ｂｕ、ｔ−ブチル、−Ｃ（ＣＨ３）３）、１−ペンチル（ｎ−ペンチル、−ＣＨ２ＣＨ２ＣＨ２ＣＨ２ＣＨ３）、２−ペンチル（−ＣＨ（ＣＨ３）ＣＨ２ＣＨ２ＣＨ３）、３−ペンチル（−ＣＨ（ＣＨ２ＣＨ３）２）、２−メチル−２−ブチル（−Ｃ（ＣＨ３）２ＣＨ２ＣＨ３）、３−メチル−２−ブチル（−ＣＨ（ＣＨ３）ＣＨ（ＣＨ３）２）、３−メチル−１−ブチル（−ＣＨ２ＣＨ２ＣＨ（ＣＨ３）２）、２−メチル−１−ブチル（−ＣＨ２ＣＨ（ＣＨ３）ＣＨ２ＣＨ３）、１−ヘキシル（−ＣＨ２ＣＨ２ＣＨ２ＣＨ２ＣＨ２ＣＨ３）、２−ヘキシル（−ＣＨ（ＣＨ３）ＣＨ２ＣＨ２ＣＨ２ＣＨ３）、３−ヘキシル（−ＣＨ（ＣＨ２ＣＨ３）（ＣＨ２ＣＨ２ＣＨ３））、２−メチル−２−ペンチル（−Ｃ（ＣＨ３）２ＣＨ２ＣＨ２ＣＨ３）、３−メチル−２−ペンチル（−ＣＨ（ＣＨ３）ＣＨ（ＣＨ３）ＣＨ２ＣＨ３）、４−メチル−２−ペンチル（−ＣＨ（ＣＨ３）ＣＨ２ＣＨ（ＣＨ３）２）、３−メチル−３−ペンチル（−Ｃ（ＣＨ３）（ＣＨ２ＣＨ３）２）、２−メチル−３−ペンチル（−ＣＨ（ＣＨ２ＣＨ３）ＣＨ（ＣＨ３）２）、２，３−ジメチル−２−ブチル（−Ｃ（ＣＨ３）２ＣＨ（ＣＨ３）２）、３，３−ジメチル−２−ブチル（−ＣＨ（ＣＨ３）Ｃ（ＣＨ３）３）、１−ヘプチル、１−オクチルなどが挙げられるが、これらに限定されない。
「アルキレン」という用語は、本明細書で使用される場合、１〜１２個の炭素原子（Ｃ１〜Ｃ１２）で、任意の長さの飽和した直鎖または分岐鎖二価炭化水素ラジカルを指し、アルキレンラジカルは、以下に記載されている１つ以上の置換基で独立して場合により置換されてよい。別の実施形態では、アルキレンラジカルは、１〜８個の炭素原子（Ｃ１〜Ｃ８）、または１〜６個の炭素原子（Ｃ１〜Ｃ６）である。アルキレン基の例としては、メチレン（−ＣＨ２−）、エチレン（−ＣＨ２ＣＨ２−）、プロピレン（−ＣＨ２ＣＨ２ＣＨ２−）などが挙げられるが、これらに限定されない。
「アルケニル」という用語は、少なくとも１つの不飽和部位、すなわち、炭素−炭素ｓｐ２二重結合を有する２〜８個の炭素原子（Ｃ２〜Ｃ８）で、任意の長さの直鎖または分岐鎖一価炭化水素ラジカルを指し、アルケニルラジカルは、本明細書に記載されている１つ以上の置換基で独立して場合により置換されてよく、「シス」及び「トランス」配向、またはあるいは「Ｅ」及び「Ｚ」配向を有するラジカルを含む。例としては、エチレニルまたはビニル（−ＣＨ＝ＣＨ２）、アリル（−ＣＨ２ＣＨ＝ＣＨ２）などが挙げられるが、これらに限定されない。
「アルケニレン」という用語は、少なくとも１つの不飽和部位、すなわち、炭素−炭素ｓｐ２二重結合を有する２〜８個の炭素原子（Ｃ２〜Ｃ８）で、任意の長さの直鎖または分岐鎖二価炭化水素ラジカルを指し、アルケニレンラジカルは、本明細書に記載されている１つ以上の置換基で独立して場合により置換されてよく、「シス」及び「トランス」配向、またはあるいは「Ｅ」及び「Ｚ」配向を有するラジカルを含む。例としては、エチレニレンまたはビニレン（−ＣＨ＝ＣＨ−）、アリル（−ＣＨ２ＣＨ＝ＣＨ−）などが挙げられるが、これらに限定されない。
「アルキニル」という用語は、少なくとも１つの不飽和部位、すなわち、炭素−炭素ｓｐ三重結合を有する２〜８個の炭素原子（Ｃ２〜Ｃ８）で、任意の長さの直鎖または分岐鎖一価炭化水素ラジカルを指し、アルキニルラジカルは、本明細書に記載されている１つ以上の置換基で独立して場合により置換されてよい。例としては、エチニル（−Ｃ≡ＣＨ）、プロピニル（プロパルギル、−ＣＨ２Ｃ≡ＣＨ）などが挙げられるが、これらに限定されない。
「アルキニレン」という用語は、少なくとも１つの不飽和部位、すなわち、炭素−炭素ｓｐ三重結合を有する２〜８個の炭素原子（Ｃ２〜Ｃ８）で、任意の長さの直鎖または分岐鎖二価炭化水素ラジカルを指し、アルキニレンラジカルは、本明細書に記載されている１つ以上の置換基で独立して場合により置換されてよい。例としては、エチニレン（−Ｃ≡Ｃ−）、プロピニレン（プロパルギレン、−ＣＨ２Ｃ≡Ｃ−）などが挙げられるが、これらに限定されない。
「炭素環」、「カルボシクリル」、「炭素環式環」及び「シクロアルキル」という用語は、単環式環として３〜１２個の炭素原子（Ｃ３〜Ｃ１２）または二環式環として７〜１２個の炭素原子を有する一価非芳香族飽和または部分不飽和環を指す。７〜１２個の原子を有する二環式炭素環は、例えば、ビシクロ［４，５］、［５，５］、［５，６］または［６，６］系として配置され得、９または１０個の環原子を有する二環式炭素環は、ビシクロ［５，６］もしくは［６，６］系として、またはビシクロ［２．２．１］ヘプタン、ビシクロ［２．２．２］オクタン及びビシクロ［３．２．２］ノナンなどの架橋系として配置され得る。スピロ部分も、この定義の範囲内に含まれる。単環式炭素環の例としては、シクロプロピル、シクロブチル、シクロペンチル、１−シクロペント−１−エニル、１−シクロペント−２−エニル、１−シクロペント−３−エニル、シクロヘキシル、１−シクロヘキサ−１−エニル、１−シクロヘキサ−２−エニル、１−シクロヘキサ−３−エニル、シクロヘキサジエニル、シクロヘプチル、シクロオクチル、シクロノニル、シクロデシル、シクロウンデシル、シクロドデシルなどが挙げられるが、これらに限定されない。カルボシクリル基は、本明細書に記載されている１つ以上の置換基で独立して場合により置換される。
「アリール」は、親芳香族環系の単一炭素原子から１個の水素原子を除去することにより誘導される、６〜２０個の炭素原子（Ｃ６〜Ｃ２０）の一価芳香族炭化水素ラジカルを意味する。いくつかのアリール基は、「Ａｒ」として例示的な構造で表される。アリールは、飽和環、部分不飽和環、または芳香族炭素環式環に縮合される芳香環を含む二環式ラジカルを含む。典型的なアリール基としては、ベンゼン（フェニル）、置換ベンゼン、ナフタレン、アントラセン、ビフェニル、インデニル、インダニル、１，２−ジヒドロナフタレン、１，２，３，４−テトラヒドロナフチルなどから誘導されるラジカルが挙げられるが、これらに限定されない。アリール基は、本明細書に記載されている１つ以上の置換基で独立して場合により置換される。
「アリーレン」は、親芳香族環系の２個の炭素原子から２個の水素原子を除去することにより誘導される、６〜２０個の炭素原子（Ｃ６〜Ｃ２０）の二価芳香族炭化水素ラジカルを意味する。いくつかのアリーレン基は、「Ａｒ」として例示的な構造で表される。アリーレンは、飽和環、部分不飽和環、または芳香族炭素環式環に縮合される芳香環を含む二環式ラジカルを含む。典型的なアリーレン基としては、ベンゼン（フェニレン）、置換ベンゼン、ナフタレン、アントラセン、ビフェニレン、インデニレン、インダニレン、１，２−ジヒドロナフタレン、１，２，３，４−テトラヒドロナフチルなどから誘導されるラジカルが挙げられるが、これらに限定されない。アリーレン基は、本明細書に記載されている１つ以上の置換基で独立して場合により置換される。
「複素環」、「ヘテロシクリル」及び「複素環式環」という用語は、本明細書では同じ意味で使用され、３〜約２０個の環原子の飽和または部分不飽和（すなわち、環内に１つ以上の二重結合及び／または三重結合を有する）炭素環式ラジカルを指し、その中で少なくとも１つの環原子が窒素、酸素、リン及び硫黄から選択されるヘテロ原子であり、残りの環原子がＣであり、１つ以上の環原子が、以下に記載されている１つ以上の置換基で独立して場合により置換される。複素環は、３〜７環員（２〜６個の炭素原子ならびにＮ、Ｏ、Ｐ、及びＳから選択される１〜４個のヘテロ原子）を有する単環または７〜１０環員（４〜９個の炭素原子ならびにＮ、Ｏ、Ｐ、及びＳから選択される１〜６個のヘテロ原子）を有する二環、例えば、ビシクロ［４，５］、［５，５］、［５，６］、または［６，６］系であってよい。複素環は、Ｐａｑｕｅｔｔｅ，Ｌｅｏ Ａ．、「Ｐｒｉｎｃｉｐｌｅｓ ｏｆ Ｍｏｄｅｒｎ Ｈｅｔｅｒｏｃｙｃｌｉｃ Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ」（Ｗ．Ａ．Ｂｅｎｊａｍｉｎ，Ｎｅｗ Ｙｏｒｋ，１９６８）、特に第１章、第３章、第４章、第６章、第７章、及び第９章、「Ｔｈｅ Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ ｏｆ Ｈｅｔｅｒｏｃｙｃｌｉｃ Ｃｏｍｐｏｕｎｄｓ，Ａ ｓｅｒｉｅｓ ｏｆ Ｍｏｎｏｇｒａｐｈｓ」（Ｊｏｈｎ Ｗｉｌｅｙ＆Ｓｏｎｓ，Ｎｅｗ Ｙｏｒｋ，１９５０から現在まで）、特に第１３巻、第１４巻、第１６巻、第１９巻、及び第２８巻、ならびにＪ．Ａｍ．Ｃｈｅｍ．Ｓｏｃ．（１９６０）８２：５５６６に記載されている。「ヘテロシクリル」は、複素環ラジカルが飽和環、部分不飽和環、または芳香族炭素環式環もしくは複素環式環と縮合されるラジカルも含む。複素環式環の例としては、モルホリン−４−イル、ピペリジン−１−イル、ピペラジニル、ピペラジン−４−イル−２−オン、ピペラジン−４−イル−３−オン、ピロリジン−１−イル、チオモルホリン−４−イル、Ｓ−ジオキソチオモルホリン−４−イル、アゾカン−１−イル、アゼチジン−１−イル、オクタヒドロピリド［１，２−ａ］ピラジン−２−イル、［１，４］ジアゼパン−１−イル、ピロリジニル、テトラヒドロフラニル、ジヒドロフラニル、テトラヒドロチエニル、テトラヒドロピラニル、ジヒドロピラニル、テトラヒドロチオピラニル、ピペリジノ、モルホリノ、チオモルホリノ、チオキサニル、ピペラジニル、ホモピペラジニル、アゼチジニル、オキセタニル、チエタニル、ホモピペリジニル、オキセパニル、チエパニル、オキサゼピニル、ジアゼピニル、チアゼピニル、２−ピロリニル、３−ピロリニル、インドリニル、２Ｈ−ピラニル、４Ｈ−ピラニル、ジオキサニル、１，３−ジオキソラニル、ピラゾリニル、ジチアニル、ジチオラニル、ジヒドロピラニル、ジヒドロチエニル、ジヒドロフラニル、ピラゾリジニルイミダゾリニル、イミダゾリジニル、３−アザビシコ（ａｚａｂｉｃｙｃｏ）［３．１．０］ヘキサニル、３−アザビシクロ［４．１．０］ヘプタニル、アザビシクロ［２．２．２］ヘキサニル、３Ｈ−インドリルキノリジニル及びＮ−ピリジル尿素が挙げられるが、これらに限定されない。スピロ部分も、この定義の範囲内に含まれる。２個の環原子がオキソ（＝Ｏ）部分で置換される複素環式基の例は、ピリミジノニル及び１，１−ジオキソ−チオモルホリニルである。本明細書における複素環基は、本明細書に記載されている１つ以上の置換基で独立して場合により置換される。
「ヘテロアリール」という用語は、５、６、または７員環の一価芳香族ラジカルを指し、窒素、酸素、及び硫黄から独立して選択される１個以上のヘテロ原子を含有する、５〜２０個の原子の縮合環系（その少なくとも１つが芳香族である）を含む。ヘテロアリール基の例は、ピリジニル（例えば、２−ヒドロキシピリジニルを含む）、イミダゾリル、イミダゾピリジニル、１−メチル−１Ｈ−ベンゾ［ｄ］イミダゾール、［１，２，４］トリアゾロ［１，５−ａ］ピリジン、ピリミジニル（例えば、４−ヒドロキシピリミジニルを含む）、ピラゾリル、トリアゾリル、ピラジニル、テトラゾリル、フリル、チエニル、イソオキサゾリル、チアゾリル、オキサジアゾリル、オキサゾリル、イソチアゾリル、ピロリル、キノリニル、イソキノリニル、テトラヒドロイソキノリニル、インドリル、ベンゾイミダゾリル、ベンゾフラニル、シンノリニル、インダゾリル、インドリジニル、フタラジニル、ピリダジニル、トリアジニル、イソインドリル、プテリジニル、プリニル、オキサジアゾリル、チアジアゾリル、チアジアゾリル、フラザニル、ベンゾフラザニル、ベンゾチオフェニル、ベンゾチアゾリル、ベンゾオキサゾリル、キナゾリニル、キノキサリニル、ナフチリジニル、及びフロピリジニルである。ヘテロアリール基は、本明細書に記載されている１つ以上の置換基で独立して場合により置換される。
複素環またはヘテロアリール基は、可能であれば炭素（炭素連結）または窒素（窒素連結）結合されてよい。例として、限定ではないが、炭素結合複素環またはヘテロアリールは、ピリジンの２、３、４、５、もしくは６位、ピリダジンの３、４、５、もしくは６位、ピリミジンの２、４、５、もしくは６位、ピラジンの２、３、５、もしくは６位、フラン、テトラヒドロフラン、チオフラン、チオフェン、ピロールもしくはテトラヒドロピロールの２、３、４、もしくは５位、オキサゾール、イミダゾールもしくはチアゾールの２、４、もしくは５位、イソオキサゾール、ピラゾール、もしくはイソチアゾールの３、４、もしくは５位、アジリジンの２もしくは３位、アゼチジンの２、３、もしくは４位、キノリンの２、３、４、５、６、７、もしくは８位またはイソキノリンの１、３、４、５、６、７、もしくは８位で結合される。
例として、限定ではないが、窒素結合複素環またはヘテロアリールは、アジリジン、アゼチジン、ピロール、ピロリジン、２−ピロリン、３−ピロリン、イミダゾール、イミダゾリジン、２−イミダゾリン、３−イミダゾリン、ピラゾール、ピラゾリン、２−ピラゾリン、３−ピラゾリン、ピペリジン、ピペラジン、インドール、インドリン、１Ｈ−インダゾールの１位、イソインドール、またはイソインドリンの２位、モルホリンの４位、及びカルバゾール、またはβ−カルボリンの９位で結合される。
「キラル」という用語は、鏡像パートナーの重ね合わせることができない特性を有する分子を指す一方で、「アキラル」という用語は、それらの鏡像パートナー上で重ね合わせることができる分子を指す。
「立体異性体」という用語は、同一の化学構造を有するが、空間内の原子または基の配置に関して異なる化合物を指す。
「ジアステレオマー」は、２つ以上のキラル中心を有し、それらの分子が互いの鏡像でない立体異性体を指す。ジアステレオマーは、異なる物理的特性、例えば、融点、沸点、スペクトル特性、及び反応性を有する。ジアステレオマーの混合物は、電気泳動法及びクロマトグラフィーなどの高分解能分析手順の下で分離されてよい。
「エナンチオマー」は、互いに重ね合わせることができない鏡像である化合物の２つの立体異性体を指す。
本明細書で使用される立体化学の定義及び規則は一般に、Ｓ．Ｐ．Ｐａｒｋｅｒ，Ｅｄ．，ＭｃＧｒａｗ−Ｈｉｌｌ Ｄｉｃｔｉｏｎａｒｙ ｏｆ Ｃｈｅｍｉｃａｌ Ｔｅｒｍｓ（１９８４）ＭｃＧｒａｗ−Ｈｉｌｌ Ｂｏｏｋ Ｃｏｍｐａｎｙ，Ｎｅｗ Ｙｏｒｋ、及びＥｌｉｅｌ，Ｅ．ａｎｄ Ｗｉｌｅｎ，Ｓ．，Ｓｔｅｒｅｏｃｈｅｍｉｓｔｒｙ ｏｆ Ｏｒｇａｎｉｃ Ｃｏｍｐｏｕｎｄｓ（１９９４）Ｊｏｈｎ Ｗｉｌｅｙ＆Ｓｏｎｓ，Ｉｎｃ．，Ｎｅｗ Ｙｏｒｋに従う。多くの有機化合物は、光学活性型で存在し、すなわち、それらは平面偏光の平面を回転させる能力を有する。光学活性化合物について記載する際に、接頭辞Ｄ及びＬ、またはＲ及びＳは、そのキラル中心（複数可）について分子の絶対配置を示すために使用される。接頭辞ｄ及びｌまたは（＋）及び（−）は、化合物による平面偏光の回転の符号を示すために用いられ、このうち（−）または１は、化合物が左旋性であることを意味する。（＋）またはｄの接頭辞を有する化合物は、右旋性である。所与の化学構造について、これらの立体異性体は、それらが互いの鏡像であることを除いて同一である。特定の立体異性体はまた、エナンチオマーと称される場合もあり、このような異性体の混合物は、多くの場合にエナンチオマー混合物と呼ばれる。エナンチオマーの５０：５０混合物は、ラセミ混合物またはラセミ体と称され、それらは化学反応またはプロセスにおいて立体選択または立体特異性が存在していない場合に生じる可能性がある。「ラセミ混合物」及び「ラセミ体」という用語は、光学活性を欠く２つのエナンチオマー種の等モル混合物を指す。
「薬学的に許容される塩」という語句は、本明細書で使用される場合、抗体−薬物複合体（ＡＤＣ）の薬学的に許容される有機塩または無機塩を指す。例示的な塩としては、硫酸塩、クエン酸塩、酢酸塩、シュウ酸塩、塩化物、臭化物、ヨウ化物、硝酸塩、重硫酸塩、リン酸塩、酸性リン酸塩、イソニコチン酸塩、乳酸塩、サリチル酸塩、酸性クエン酸塩、酒石酸塩、オレイン酸塩、タンニン酸塩、パントテン酸塩、重酒石酸塩、アスコルビン酸塩、コハク酸塩、マレイン酸塩、ゲンチジン酸塩、フマル酸塩、グルコン酸塩、グルクロン酸塩、糖酸塩、ギ酸塩、安息香酸塩、グルタミン酸塩、メタンスルホン酸塩、エタンスルホン酸塩、ベンゼンスルホン酸塩、ｐ−トルエンスルホン酸塩、及びパモ酸塩（すなわち、１，１’−メチレン−ビス−（２−ヒドロキシ−３−ナフト酸塩））の塩が挙げられるが、これらに限定されない。薬学的に許容される塩は、別の分子、例えば、酢酸イオン、コハク酸イオンまたはその他の対イオンなどの含有を含んでよい。対イオンは、親化合物上の電荷を安定させる任意の有機または無機部分であってよい。さらに、薬学的に許容される塩は、その構造中に２つ以上の荷電原子を有してよい。複数の荷電原子が薬学的に許容される塩の一部である場合には、複数の対イオンを有し得る。したがって、薬学的に許容される塩は、１つ以上の荷電原子及び／または１つ以上の対イオンを有し得る。
以下の略語が本明細書で使用され、示された定義を有する：ＢＭＥはベータ−メルカプトエタノールであり、ＢｏｃはＮ−（ｔ−ブトキシカルボニル）であり、ｃｉｔはシトルリン（２−アミノ−５−ウレイドペンタン酸）であり、ＤＣＣは１，３−ジシクロヘキシルカルボジイミドであり、ＤＣＭはジクロロメタンであり、ＤＥＡはジエチルアミンであり、ＤＥＡＤはアゾジカルボン酸ジエチルであり、ＤＥＰＣはジエチルホスホリルシアニデート（ｄｉｅｔｈｙｌｐｈｏｓｐｈｏｒｙｌｃｙａｎｉｄａｔｅ）であり、ＤＩＡＤはアゾジカルボン酸ジイソプロピルであり、ＤＩＥＡはＮ，Ｎ−ジイソプロピルエチルアミンであり、ＤＭＡはジメチルアセトアミドであり、ＤＭＡＰは４−ジメチルアミノピリジンであり、ＤＭＥはエチレングリコールジメチルエーテル（または１，２−ジメトキシエタン）であり、ＤＭＦはＮ，Ｎ−ジメチルホルムアミドであり、ＤＭＳＯはジメチルスルホキシドであり、ＤＴＴはジチオスレイトールであり、ＥＤＣＩは１−（３−ジメチルアミノプロピル）−３−エチルカルボジイミド塩酸塩であり、ＥＥＤＱは２−エトキシ−１−エトキシカルボニル−１，２−ジヒドロキノリンであり、ＥＳ−ＭＳはエレクトロスプレー質量分析であり、ＥｔＯＡｃは酢酸エチルであり、ＦｍｏｃはＮ−（９−フルオレニルメトキシカルボニル）であり、ｇｌｙはグリシンであり、ＨＡＴＵはＯ−（７−アザベンゾトリアゾール−１−イル）−Ｎ，Ｎ，Ｎ’，Ｎ’−テトラメチルウロニウムヘキサフルオロホスフェートであり、ＨＯＢｔは１−ヒドロキシベンゾトリアゾールであり、ＨＰＬＣは高圧液体クロマトグラフィーであり、ｉｌｅはイソロイシンであり、ｌｙｓはリジンであり、ＭｅＣＮ（ＣＨ３ＣＮ）はアセトニトリルであり、ＭｅＯＨはメタノールであり、Ｍｔｒは４−アニシルジフェニルメチル（または４−メトキシトリチル）であり、ＮＨＳはＮ−ヒドロキシスクシンイミドであり、ＰＢＳはリン酸緩衝生理食塩水（ｐＨ７）であり、ＰＥＧはポリエチレングリコールまたはエチレングリコール（−ＯＣＨ２ＣＨ２−）の単位であり、Ｐｈはフェニルであり、Ｐｎｐはｐ−ニトロフェニルであり、ＭＣは６−マレイミドカプロイルであり、ｐｈｅはＬ−フェニルアラニンであり、ＰｙＢｒｏｐはブロモトリ−ピロリジノホスホニウムヘキサフルオロホスフェートであり、ＳＥＣはサイズ排除クロマトグラフィーであり、Ｓｕはスクシンイミドであり、ＴＦＡはトリフルオロ酢酸であり、ＴＬＣは薄層クロマトグラフィーであり、ＵＶは紫外線であり、ｖａｌはバリンである。
腫瘍関連抗原：
（１）ＢＭＰＲ１Ｂ（骨形成タンパク質受容体ＩＢ型、Ｇｅｎｂａｎｋアクセッション番号ＮＭ＿００１２０３）
ｔｅｎ Ｄｉｊｋｅ，Ｐ．，ｅｔ ａｌ Ｓｃｉｅｎｃｅ ２６４（５１５５）：１０１−１０４（１９９４），Ｏｎｃｏｇｅｎｅ １４（１１）：１３７７−１３８２（１９９７））、ＷＯ２００４０６３３６２（請求項２）、ＷＯ２００３０４２６６１（請求項１２）、ＵＳ２００３１３４７９０−Ａ１（３８〜３９頁）、ＷＯ２００２１０２２３５（請求項１３、２９６頁）、ＷＯ２００３０５５４４３（９１〜９２頁）、ＷＯ２００２９９１２２（実施例２、５２８〜５３０頁）、ＷＯ２００３０２９４２１（請求項６）、ＷＯ２００３０２４３９２（請求項２、図１１２）、ＷＯ２００２９８３５８（請求項１、１８３頁）、ＷＯ２００２５４９４０（１００〜１０１頁）、ＷＯ２００２５９３７７（３４９〜３５０頁）、ＷＯ２００２３０２６８（請求項２７、３７６頁）、ＷＯ２００１４８２０４（実施例、図４）
ＮＰ＿００１１９４骨形成タンパク質受容体、ＩＢ型／ｐｉｄ＝ＮＰ＿００１１９４．１−
相互参照：ＭＩＭ：６０３２４８、ＮＰ＿００１１９４．１、ＡＹ０６５９９４
（２）Ｅ１６（ＬＡＴ１、ＳＬＣ７Ａ５、Ｇｅｎｂａｎｋアクセッション番号ＮＭ＿００３４８６）
Ｂｉｏｃｈｅｍ．Ｂｉｏｐｈｙｓ．Ｒｅｓ．Ｃｏｍｍｕｎ．２５５（２），２８３−２８８（１９９９），Ｎａｔｕｒｅ ３９５（６６９９）：２８８−２９１（１９９８）、Ｇａｕｇｉｔｓｃｈ，Ｈ．Ｗ．，ｅｔ ａｌ（１９９２）Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．２６７（１６）：１１２６７−１１２７３）、ＷＯ２００４０４８９３８（実施例２）、ＷＯ２００４０３２８４２（実施例ＩＶ）、ＷＯ２００３０４２６６１（請求項１２）、ＷＯ２００３０１６４７５（請求項１）、ＷＯ２００２７８５２４（実施例２）、ＷＯ２００２９９０７４（請求項１９、１２７〜１２９頁）、ＷＯ２００２８６４４３（請求項２７、２２２頁、３９３頁）、ＷＯ２００３００３９０６（請求項１０、２９３頁）、ＷＯ２００２６４７９８（請求項３３、９３〜９５頁）、ＷＯ２０００１４２２８（請求項５、１３３〜１３６頁）、ＵＳ２００３２２４４５４（図３）、ＷＯ２００３０２５１３８（請求項１２、１５０頁）、
ＮＰ＿００３４７７溶質担体ファミリー７（カチオン性アミノ酸輸送体、ｙ＋
系）、メンバー５／ｐｉｄ＝ＮＰ＿００３４７７．３−Ｈｏｍｏ ｓａｐｉｅｎｓ
相互参照：ＭＩＭ：６００１８２、ＮＰ＿００３４７７．３、ＮＭ＿０１５９２３、ＮＭ＿００３４８６＿１
（３）ＳＴＥＡＰ１（前立腺の６回膜貫通上皮抗原、Ｇｅｎｂａｎｋアクセッション番号ＮＭ＿０１２４４９）
Ｃａｎｃｅｒ Ｒｅｓ．６１（１５），５８５７−５８６０（２００１），Ｈｕｂｅｒｔ，Ｒ．Ｓ．，ｅｔ ａｌ（１９９９）Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．Ｕ．Ｓ．Ａ．９６（２５）：１４５２３−１４５２８）、ＷＯ２００４０６５５７７（請求項６）、ＷＯ２００４０２７０４９（図１Ｌ）、ＥＰ１３９４２７４（実施例１１）、ＷＯ２００４０１６２２５（請求項２）、ＷＯ２００３０４２６６１（請求項１２）、ＵＳ２００３１５７０８９（実施例５）、ＵＳ２００３１８５８３０（実施例５）、ＵＳ２００３０６４３９７（図２）、ＷＯ２００２８９７４７（実施例５、６１８〜６１９頁）、ＷＯ２００３０２２９９５（実施例９、図１３Ａ、実施例５３、１７３頁、実施例２、図２Ａ）、
ＮＰ＿０３６５８１ 前立腺の６回膜貫通上皮抗原
相互参照：ＭＩＭ：６０４４１５、ＮＰ＿０３６５８１．１、ＮＭ＿０１２４４９＿１
（４）０７７２Ｐ（ＣＡ１２５、ＭＵＣ１６、Ｇｅｎｂａｎｋアクセッション番号ＡＦ３６１４８６）
Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．２７６（２９）：２７３７１−２７３７５（２００１））、ＷＯ２００４０４５５５３（請求項１４）、ＷＯ２００２９２８３６（請求項６、図１２）、ＷＯ２００２８３８６６（請求項１５、１１６〜１２１頁）、ＵＳ２００３１２４１４０（実施例１６）、ＵＳ７９８９５９。相互参照：ＧＩ：３４５０１４６７、ＡＡＫ７４１２０．３、ＡＦ３６１４８６＿１
（５）ＭＰＦ（ＭＰＦ、ＭＳＬＮ、ＳＭＲ、巨核球増強因子、メソテリン、Ｇｅｎｂａｎｋアクセッション番号ＮＭ＿００５８２３）Ｙａｍａｇｕｃｈｉ，Ｎ．，ｅｔ ａｌ Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．２６９（２），８０５−８０８（１９９４），Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．Ｕ．Ｓ．Ａ．９６（２０）：１１５３１−１１５３６（１９９９），Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．Ｕ．Ｓ．Ａ．９３（１）：１３６−１４０（１９９６），Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．２７０（３７）：２１９８４−２１９９０（１９９５））、ＷＯ２００３１０１２８３（請求項１４）、（ＷＯ２００２１０２２３５（請求項１３、２８７〜２８８頁）、ＷＯ２００２１０１０７５（請求項４、３０８〜３０９頁）、ＷＯ２００２７１９２８（３２０〜３２１頁）、ＷＯ９４１０３１２（５２〜５７頁）、相互参照：ＭＩＭ：６０１０５１、ＮＰ＿００５８１４．２、ＮＭ＿００５８２３＿１
（６）Ｎａｐｉ２ｂ（Ｎａｐｉ３ｂ、ＮＡＰＩ−３Ｂ、ＮＰＴＩＩｂ、ＳＬＣ３４Ａ２、溶質担体ファミリー３４（リン酸ナトリウム）、メンバー２、ＩＩ型ナトリウム依存性リン酸輸送体３ｂ、Ｇｅｎｂａｎｋアクセッション番号ＮＭ＿００６４２４）
Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．２７７（２２）：１９６６５−１９６７２（２００２），Ｇｅｎｏｍｉｃｓ ６２（２）：２８１−２８４（１９９９），Ｆｅｉｌｄ，Ｊ．Ａ．，ｅｔ ａｌ（１９９９）Ｂｉｏｃｈｅｍ．Ｂｉｏｐｈｙｓ．Ｒｅｓ．Ｃｏｍｍｕｎ．２５８（３）：５７８−５８２）、ＷＯ２００４０２２７７８（請求項２）、ＥＰ１３９４２７４（実施例１１）、ＷＯ２００２１０２２３５（請求項１３、３２６頁）、ＥＰ８７５５６９（請求項１、１７〜１９頁）、ＷＯ２００１５７１８８（請求項２０、３２９頁）、ＷＯ２００４０３２８４２（実施例ＩＶ）、ＷＯ２００１７５１７７（請求項２４、１３９〜１４０頁）、
相互参照：ＭＩＭ：６０４２１７、ＮＰ＿００６４１５．１、ＮＭ＿００６４２４＿１
（７）Ｓｅｍａ ５ｂ（ＦＬＪ１０３７２、ＫＩＡＡ１４４５、Ｍｍ．４２０１５、ＳＥＭＡ５Ｂ、ＳＥＭＡＧ、セマフォリン５ｂ Ｈｌｏｇ、セマドメイン、７回トロンボスポンジン反復（１型及び１型様）、膜貫通ドメイン（ＴＭ）及び短い細胞質ドメイン、（セマフォリン）５Ｂ、Ｇｅｎｂａｎｋアクセッション番号ＡＢ０４０８７８）
Ｎａｇａｓｅ Ｔ．，ｅｔ ａｌ（２０００）ＤＮＡ Ｒｅｓ．７（２）：１４３−１５０）、ＷＯ２００４０００９９７（請求項１）、ＷＯ２００３００３９８４（請求項１）、ＷＯ２００２０６３３９（請求項１、５０頁）、ＷＯ２００１８８１３３（請求項１、４１〜４３頁、４８〜５８頁）、ＷＯ２００３０５４１５２（請求項２０）、ＷＯ２００３１０１４００（請求項１１）、
アクセッション：Ｑ９Ｐ２８３、ＥＭＢＬ、ＡＢ０４０８７８、ＢＡＡ９５９６９．１．Ｇｅｎｅｗ、ＨＧＮＣ：１０７３７、
（８）ＰＳＣＡ ｈｌｇ（２７０００５０Ｃ１２Ｒｉｋ、Ｃ５３０００８Ｏ１６Ｒｉｋ、ＲＩＫＥＮ ｃＤＮＡ ２７０００５０Ｃ１２、ＲＩＫＥＮ ｃＤＮＡ ２７０００５０Ｃ１２遺伝子、Ｇｅｎｂａｎｋアクセッション番号ＡＹ３５８６２８）、Ｒｏｓｓ ｅｔ ａｌ（２００２）Ｃａｎｃｅｒ Ｒｅｓ．６２：２５４６−２５５３）、ＵＳ２００３１２９１９２（請求項２）、ＵＳ２００４０４４１８０（請求項１２）、ＵＳ２００４０４４１７９（請求項１１）、ＵＳ２００３０９６９６１（請求項１１）、ＵＳ２００３２３２０５６（実施例５）、ＷＯ２００３１０５７５８（請求項１２）、ＵＳ２００３２０６９１８（実施例５）、ＥＰ１３４７０４６（請求項１）、ＷＯ２００３０２５１４８（請求項２０）、
相互参照：ＧＩ：３７１８２３７８、ＡＡＱ８８９９１．１、ＡＹ３５８６２８＿１
（９）ＥＴＢＲ（エンドセリンＢ型受容体、Ｇｅｎｂａｎｋアクセッション番号ＡＹ２７５４６３）、
Ｎａｋａｍｕｔａ Ｍ．，ｅｔ ａｌ Ｂｉｏｃｈｅｍ．Ｂｉｏｐｈｙｓ．Ｒｅｓ．Ｃｏｍｍｕｎ．１７７，３４−３９，１９９１、Ｏｇａｗａ Ｙ．，ｅｔ ａｌ Ｂｉｏｃｈｅｍ．Ｂｉｏｐｈｙｓ．Ｒｅｓ．Ｃｏｍｍｕｎ．１７８，２４８−２５５，１９９１、Ａｒａｉ Ｈ．，ｅｔ ａｌ Ｊｐｎ．Ｃｉｒｃ．Ｊ．５６，１３０３−１３０７，１９９２、Ａｒａｉ Ｈ．，ｅｔ ａｌ Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．２６８，３４６３−３４７０，１９９３、Ｓａｋａｍｏｔｏ Ａ．，Ｙａｎａｇｉｓａｗａ Ｍ．，ｅｔ ａｌ Ｂｉｏｃｈｅｍ．Ｂｉｏｐｈｙｓ．Ｒｅｓ．Ｃｏｍｍｕｎ．１７８，６５６−６６３，１９９１、Ｅｌｓｈｏｕｒｂａｇｙ Ｎ．Ａ．，ｅｔ ａｌ Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．２６８，３８７３−３８７９，１９９３、Ｈａｅｎｄｌｅｒ Ｂ．，ｅｔ ａｌ Ｊ．Ｃａｒｄｉｏｖａｓｃ．Ｐｈａｒｍａｃｏｌ．２０，ｓ１−Ｓ４，１９９２、Ｔｓｕｔｓｕｍｉ Ｍ．，ｅｔ ａｌ Ｇｅｎｅ ２２８，４３−４９，１９９９、Ｓｔｒａｕｓｂｅｒｇ Ｒ．Ｌ．，ｅｔ ａｌ Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．Ｕ．Ｓ．Ａ．９９，１６８９９−１６９０３，２００２、Ｂｏｕｒｇｅｏｉｓ Ｃ．，ｅｔ ａｌ Ｊ．Ｃｌｉｎ．Ｅｎｄｏｃｒｉｎｏｌ．Ｍｅｔａｂ．８２，３１１６−３１２３，１９９７、Ｏｋａｍｏｔｏ Ｙ．，ｅｔ ａｌ Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．２７２，２１５８９−２１５９６，１９９７、Ｖｅｒｈｅｉｊ Ｊ．Ｂ．，ｅｔ ａｌ Ａｍ．Ｊ．Ｍｅｄ．Ｇｅｎｅｔ．１０８，２２３−２２５，２００２、Ｈｏｆｓｔｒａ Ｒ．Ｍ．Ｗ．，ｅｔ ａｌ Ｅｕｒ．Ｊ．Ｈｕｍ．Ｇｅｎｅｔ．５，１８０−１８５，１９９７、Ｐｕｆｆｅｎｂｅｒｇｅｒ Ｅ．Ｇ．，ｅｔ ａｌ Ｃｅｌｌ ７９，１２５７−１２６６，１９９４、Ａｔｔｉｅ Ｔ．，ｅｔ ａｌ，Ｈｕｍ．Ｍｏｌ．Ｇｅｎｅｔ．４，２４０７−２４０９，１９９５、Ａｕｒｉｃｃｈｉｏ Ａ．，ｅｔ ａｌ Ｈｕｍ．Ｍｏｌ．Ｇｅｎｅｔ．５：３５１−３５４，１９９６、Ａｍｉｅｌ Ｊ．，ｅｔ ａｌ Ｈｕｍ．Ｍｏｌ．Ｇｅｎｅｔ．５，３５５−３５７，１９９６、Ｈｏｆｓｔｒａ Ｒ．Ｍ．Ｗ．，ｅｔ ａｌ Ｎａｔ．Ｇｅｎｅｔ．１２，４４５−４４７，１９９６、Ｓｖｅｎｓｓｏｎ Ｐ．Ｊ．，ｅｔ ａｌ Ｈｕｍ．Ｇｅｎｅｔ．１０３，１４５−１４８，１９９８、Ｆｕｃｈｓ Ｓ．，ｅｔ ａｌ Ｍｏｌ．Ｍｅｄ．７，１１５−１２４，２００１、Ｐｉｎｇａｕｌｔ Ｖ．，ｅｔ ａｌ（２００２）Ｈｕｍ．Ｇｅｎｅｔ．１１１，１９８−２０６、ＷＯ２００４０４５５１６（請求項１）、ＷＯ２００４０４８９３８（実施例２）、ＷＯ２００４０４００００（請求項１５１）、ＷＯ２００３０８７７６８（請求項１）、ＷＯ２００３０１６４７５（請求項１）、ＷＯ２００３０１６４７５（請求項１）、ＷＯ２００２６１０８７（図１）、ＷＯ２００３０１６４９４（図６）、ＷＯ２００３０２５１３８（請求項１２、１４４頁）、ＷＯ２００１９８３５１（請求項１、１２４〜１２５頁）、ＥＰ５２２８６８（請求項８、図２）、ＷＯ２００１７７１７２（請求項１、２９７〜２９９頁）、ＵＳ２００３１０９６７６、ＵＳ６５１８４０４（図３）、ＵＳ５７７３２２３（請求項１ａ、３１〜３４列）、ＷＯ２００４００１００４、
（１０）ＭＳＧ７８３（ＲＮＦ１２４、仮想タンパク質ＦＬＪ２０３１５、Ｇｅｎｂａｎｋアクセッション番号ＮＭ＿０１７７６３）、
ＷＯ２００３１０４２７５（請求項１）、ＷＯ２００４０４６３４２（実施例２）、ＷＯ２００３０４２６６１（請求項１２）、ＷＯ２００３０８３０７４（請求項１４、６１頁）、ＷＯ２００３０１８６２１（請求項１）、ＷＯ２００３０２４３９２（請求項２、図９３）、ＷＯ２００１６６６８９（実施例６）、
相互参照：ＬｏｃｕｓＩＤ：５４８９４、ＮＰ＿０６０２３３．２、ＮＭ＿０１７７６３＿１
（１１）ＳＴＥＡＰ２（ＨＧＮＣ＿８６３９、ＩＰＣＡ−１、ＰＣＡＮＡＰ１、ＳＴＡＭＰ１、ＳＴＥＡＰ２、ＳＴＭＰ、前立腺癌関連遺伝子１、前立腺癌関連タンパク質１、前立腺の６回膜貫通上皮抗原２、６回膜貫通前立腺タンパク質、Ｇｅｎｂａｎｋアクセッション番号ＡＦ４５５１３８）
Ｌａｂ．Ｉｎｖｅｓｔ．８２（１１）：１５７３−１５８２（２００２））、ＷＯ２００３０８７３０６、ＵＳ２００３０６４３９７（請求項１、図１）、ＷＯ２００２７２５９６（請求項１３、５４〜５５頁）、ＷＯ２００１７２９６２（請求項１、図４Ｂ）、ＷＯ２００３１０４２７０（請求項１１）、ＷＯ２００３１０４２７０（請求項１６）、ＵＳ２００４００５５９８（請求項２２）、ＷＯ２００３０４２６６１（請求項１２）、ＵＳ２００３０６０６１２（請求項１２、図１０）、ＷＯ２００２２６８２２（請求項２３、図２）、ＷＯ２００２１６４２９（請求項１２、図１０）、
相互参照：ＧＩ：２２６５５４８８、ＡＡＮ０４０８０．１、ＡＦ４５５１３８＿１
（１２）ＴｒｐＭ４（ＢＲ２２４５０、ＦＬＪ２００４１、ＴＲＰＭ４、ＴＲＰＭ４Ｂ、一過性受容体電位カチオンチャネル、サブファミリーＭ、メンバー４、Ｇｅｎｂａｎｋアクセッション番号ＮＭ＿０１７６３６）
Ｘｕ，Ｘ．Ｚ．，ｅｔ ａｌ Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．Ｕ．Ｓ．Ａ．９８（１９）：１０６９２−１０６９７（２００１），Ｃｅｌｌ １０９（３）：３９７−４０７（２００２），Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．２７８（３３）：３０８１３−３０８２０（２００３））、ＵＳ２００３１４３５５７（請求項４）、ＷＯ２０００４０６１４（請求項１４、１００〜１０３頁）、ＷＯ２００２１０３８２（請求項１、図９Ａ）、ＷＯ２００３０４２６６１（請求項１２）、ＷＯ２００２３０２６８（請求項２７、３９１頁）、ＵＳ２００３２１９８０６（請求項４）、ＷＯ２００１６２７９４（請求項１４、図１Ａ〜Ｄ）、
相互参照：ＭＩＭ：６０６９３６、ＮＰ＿０６０１０６．２、ＮＭ＿０１７６３６＿１
（１３）ＣＲＩＰＴＯ（ＣＲ、ＣＲ１、ＣＲＧＦ、ＣＲＩＰＴＯ、ＴＤＧＦ１、奇形癌由来増殖因子、Ｇｅｎｂａｎｋアクセッション番号ＮＰ＿００３２０３またはＮＭ＿００３２１２）
Ｃｉｃｃｏｄｉｃｏｌａ，Ａ．，ｅｔ ａｌ ＥＭＢＯ Ｊ．８（７）：１９８７−１９９１（１９８９），Ａｍ．Ｊ．Ｈｕｍ．Ｇｅｎｅｔ．４９（３）：５５５−５６５（１９９１））、ＵＳ２００３２２４４１１（請求項１）、ＷＯ２００３０８３０４１（実施例１）、ＷＯ２００３０３４９８４（請求項１２）、ＷＯ２００２８８１７０（請求項２、５２〜５３頁）、ＷＯ２００３０２４３９２（請求項２、図５８）、ＷＯ２００２１６４１３（請求項１、９４〜９５、１０５頁）、ＷＯ２００２２２８０８（請求項２、図１）、ＵＳ５８５４３９９（実施例２、１７〜１８列）、ＵＳ５７９２６１６（図２）、
相互参照：ＭＩＭ：１８７３９５、ＮＰ＿００３２０３．１、ＮＭ＿００３２１２＿１
（１４）ＣＤ２１（ＣＲ２（補体受容体２）またはＣ３ＤＲ（Ｃ３ｄ／エプスタインバーウイルス受容体）またはＨｓ．７３７９２ ＧｅｎＢａｎｋアクセッション番号Ｍ２６００４）
Ｆｕｊｉｓａｋｕ ｅｔ ａｌ（１９８９）Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．２６４（４）：２１１８−２１２５）、Ｗｅｉｓ Ｊ．Ｊ．，ｅｔ ａｌ Ｊ．Ｅｘｐ．Ｍｅｄ．１６７，１０４７−１０６６，１９８８、Ｍｏｏｒｅ Ｍ．，ｅｔ ａｌ Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．Ｕ．Ｓ．Ａ．８４，９１９４−９１９８，１９８７、Ｂａｒｅｌ Ｍ．，ｅｔ ａｌ Ｍｏｌ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．３５，１０２５−１０３１，１９９８、Ｗｅｉｓ Ｊ．Ｊ．，ｅｔ ａｌ Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．Ｕ．Ｓ．Ａ．８３，５６３９−５６４３，１９８６、Ｓｉｎｈａ Ｓ．Ｋ．，ｅｔ ａｌ（１９９３）Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１５０，５３１１−５３２０、ＷＯ２００４０４５５２０（実施例４）、ＵＳ２００４００５５３８（実施例１）、ＷＯ２００３０６２４０１（請求項９）、ＷＯ２００４０４５５２０（実施例４）、ＷＯ９１０２５３６（図９．１〜９．９）、ＷＯ２００４０２０５９５（請求項１）、
アクセッション：Ｐ２００２３、Ｑ１３８６６、Ｑ１４２１２、ＥＭＢＬ、Ｍ２６００４、ＡＡＡ３５７８６．１。
（１５）ＣＤ７９ｂ（ＣＤ７９Ｂ、ＣＤ７９β、ＩＧｂ（免疫グロブリン関連ベータ）、Ｂ２９、Ｇｅｎｂａｎｋアクセッション番号ＮＭ＿０００６２６または１１０３８６７４）
Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．Ｕ．Ｓ．Ａ．（２００３）１００（７）：４１２６−４１３１，Ｂｌｏｏｄ（２００２）１００（９）：３０６８−３０７６、Ｍｕｌｌｅｒ ｅｔ ａｌ（１９９２）Ｅｕｒ．Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．２２（６）：１６２１−１６２５）、ＷＯ２００４０１６２２５（請求項２、図１４０）、ＷＯ２００３０８７７６８、ＵＳ２００４１０１８７４（請求項１、１０２頁）、ＷＯ２００３０６２４０１（請求項９）、ＷＯ２００２７８５２４（実施例２）、ＵＳ２００２１５０５７３（請求項５、１５頁）、ＵＳ５６４４０３３、ＷＯ２００３０４８２０２（請求項１、３０６頁及び３０９頁）、ＷＯ９９／５５８６５８、ＵＳ６５３４４８２（請求項１３、図１７Ａ／Ｂ）、ＷＯ２０００５５３５１（請求項１１、１１４５〜１１４６頁）、
相互参照：ＭＩＭ：１４７２４５、ＮＰ＿０００６１７．１、ＮＭ＿０００６２６＿１
（１６）ＦｃＲＨ２（ＩＦＧＰ４、ＩＲＴＡ４、ＳＰＡＰ１Ａ（ＳＨ２ドメイン含有ホスファターゼアンカータンパク質１ａ）、ＳＰＡＰ１Ｂ、ＳＰＡＰ１Ｃ、Ｇｅｎｂａｎｋアクセッション番号ＮＭ＿０３０７６４、ＡＹ３５８１３０）
Ｇｅｎｏｍｅ Ｒｅｓ．１３（１０）：２２６５−２２７０（２００３），Ｉｍｍｕｎｏｇｅｎｅｔｉｃｓ ５４（２）：８７−９５（２００２），Ｂｌｏｏｄ ９９（８）：２６６２−２６６９（２００２），Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．Ｕ．Ｓ．Ａ．９８（１７）：９７７２−９７７７（２００１）、Ｘｕ，Ｍ．Ｊ．，ｅｔ ａｌ（２００１）Ｂｉｏｃｈｅｍ．Ｂｉｏｐｈｙｓ．Ｒｅｓ．Ｃｏｍｍｕｎ．２８０（３）：７６８−７７５、ＷＯ２００４０１６２２５（請求項２）、ＷＯ２００３０７７８３６、ＷＯ２００１３８４９０（請求項５、図１８Ｄ−１〜１８Ｄ−２）、ＷＯ２００３０９７８０３（請求項１２）、ＷＯ２００３０８９６２４（請求項２５）、
相互参照：ＭＩＭ：６０６５０９、ＮＰ＿１１０３９１．２、ＮＭ＿０３０７６４＿１
（１７）ＨＥＲ２（ＥｒｂＢ２、Ｇｅｎｂａｎｋアクセッション番号Ｍ１１７３０）
Ｃｏｕｓｓｅｎｓ Ｌ．，ｅｔ ａｌ Ｓｃｉｅｎｃｅ（１９８５）２３０（４７３０）：１１３２−１１３９）、Ｙａｍａｍｏｔｏ Ｔ．，ｅｔ ａｌ Ｎａｔｕｒｅ ３１９，２３０−２３４，１９８６、Ｓｅｍｂａ Ｋ．，ｅｔ ａｌ Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．Ｕ．Ｓ．Ａ．８２，６４９７−６５０１，１９８５、Ｓｗｉｅｒｃｚ Ｊ．Ｍ．，ｅｔ ａｌ Ｊ．Ｃｅｌｌ Ｂｉｏｌ．１６５，８６９−８８０，２００４、Ｋｕｈｎｓ Ｊ．Ｊ．，ｅｔ ａｌ Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．２７４，３６４２２−３６４２７，１９９９、Ｃｈｏ Ｈ．−Ｓ．，ｅｔ ａｌ Ｎａｔｕｒｅ ４２１，７５６−７６０，２００３、Ｅｈｓａｎｉ Ａ．，ｅｔ ａｌ（１９９３）Ｇｅｎｏｍｉｃｓ １５，４２６−４２９、ＷＯ２００４０４８９３８（実施例２）、ＷＯ２００４０２７０４９（図１Ｉ）、ＷＯ２００４００９６２２、ＷＯ２００３０８１２１０、ＷＯ２００３０８９９０４（請求項９）、ＷＯ２００３０１６４７５（請求項１）、ＵＳ２００３１１８５９２、ＷＯ２００３００８５３７（請求項１）、ＷＯ２００３０５５４３９（請求項２９、図１Ａ〜Ｂ）、ＷＯ２００３０２５２２８（請求項３７、図５Ｃ）、ＷＯ２００２２２６３６（実施例１３、９５〜１０７頁）、ＷＯ２００２１２３４１（請求項６８、図７）、ＷＯ２００２１３８４７（７１〜７４頁）、ＷＯ２００２１４５０３（１１４〜１１７頁）、ＷＯ２００１５３４６３（請求項２、４１〜４６頁）、ＷＯ２００１４１７８７（１５頁）、ＷＯ２０００４４８９９（請求項５２、図７）、ＷＯ２０００２０５７９（請求項３、図２）、ＵＳ５８６９４４５（請求項３、３１〜３８列）、ＷＯ９６３０５１４（請求項２、５６〜６１頁）、ＥＰ１４３９３９３（請求項７）、ＷＯ２００４０４３３６１（請求項７）、ＷＯ２００４０２２７０９、ＷＯ２００１００２４４（実施例３、図４）、
アクセッション：Ｐ０４６２６、ＥＭＢＬ、Ｍ１１７６７、ＡＡＡ３５８０８．１．ＥＭＢＬ、Ｍ１１７６１、ＡＡＡ３５８０８．１。
（１８）ＮＣＡ（ＣＥＡＣＡＭ６、Ｇｅｎｂａｎｋアクセッション番号Ｍ１８７２８）、
Ｂａｒｎｅｔｔ Ｔ．，ｅｔ ａｌ Ｇｅｎｏｍｉｃｓ ３，５９−６６，１９８８、Ｔａｗａｒａｇｉ Ｙ．，ｅｔ ａｌ Ｂｉｏｃｈｅｍ．Ｂｉｏｐｈｙｓ．Ｒｅｓ．Ｃｏｍｍｕｎ．１５０，８９−９６，１９８８、Ｓｔｒａｕｓｂｅｒｇ Ｒ．Ｌ．，ｅｔ ａｌ Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．Ｕ．Ｓ．Ａ．９９：１６８９９−１６９０３，２００２、ＷＯ２００４０６３７０９、ＥＰ１４３９３９３（請求項７）、ＷＯ２００４０４４１７８（実施例４）、ＷＯ２００４０３１２３８、ＷＯ２００３０４２６６１（請求項１２）、ＷＯ２００２７８５２４（実施例２）、ＷＯ２００２８６４４３（請求項２７、４２７頁）、ＷＯ２００２６０３１７（請求項２）、
アクセッション：Ｐ４０１９９、Ｑ１４９２０、ＥＭＢＬ、Ｍ２９５４１、ＡＡＡ５９９１５．１．ＥＭＢＬ、Ｍ１８７２８、
（１９）ＭＤＰ（ＤＰＥＰ１、Ｇｅｎｂａｎｋアクセッション番号ＢＣ０１７０２３）
Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．Ｕ．Ｓ．Ａ．９９（２６）：１６８９９−１６９０３（２００２））、ＷＯ２００３０１６４７５（請求項１）、ＷＯ２００２６４７９８（請求項３３、８５〜８７頁）、ＪＰ０５００３７９０（図６〜８）、ＷＯ９９４６２８４（図９）、
相互参照：ＭＩＭ：１７９７８０、ＡＡＨ１７０２３．１、ＢＣ０１７０２３＿１
（２０）ＩＬ２０Ｒα（ＩＬ２０Ｒａ、ＺＣＹＴＯＲ７、Ｇｅｎｂａｎｋアクセッション番号ＡＦ１８４９７１）、
Ｃｌａｒｋ Ｈ．Ｆ．，ｅｔ ａｌ Ｇｅｎｏｍｅ Ｒｅｓ．１３，２２６５−２２７０，２００３、Ｍｕｎｇａｌｌ Ａ．Ｊ．，ｅｔ ａｌ Ｎａｔｕｒｅ ４２５，８０５−８１１，２００３、Ｂｌｕｍｂｅｒｇ Ｈ．，ｅｔ ａｌ Ｃｅｌｌ １０４，９−１９，２００１、Ｄｕｍｏｕｔｉｅｒ Ｌ．，ｅｔ ａｌ Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１６７，３５４５−３５４９，２００１、Ｐａｒｒｉｓｈ−Ｎｏｖａｋ Ｊ．，ｅｔ ａｌ Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．２７７，４７５１７−４７５２３，２００２、Ｐｌｅｔｎｅｖ Ｓ．，ｅｔ ａｌ（２００３）Ｂｉｏｃｈｅｍｉｓｔｒｙ ４２：１２６１７−１２６２４、Ｓｈｅｉｋｈ Ｆ．，ｅｔ ａｌ（２００４）Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１７２，２００６−２０１０、ＥＰ１３９４２７４（実施例１１）、ＵＳ２００４００５３２０（実施例５）、ＷＯ２００３０２９２６２（７４〜７５頁）、ＷＯ２００３００２７１７（請求項２、６３頁）、ＷＯ２００２２２１５３（４５〜４７頁）、ＵＳ２００２０４２３６６（２０〜２１頁）、ＷＯ２００１４６２６１（５７〜５９頁）、ＷＯ２００１４６２３２（６３〜６５頁）、ＷＯ９８３７１９３（請求項１、５５〜５９頁）、
アクセッション：Ｑ９ＵＨＦ４、Ｑ６ＵＷＡ９、Ｑ９６ＳＨ８、ＥＭＢＬ、ＡＦ１８４９７１、ＡＡＦ０１３２０．１。
（２１）ブレビカン（ＢＣＡＮ、ＢＥＨＡＢ、Ｇｅｎｂａｎｋアクセッション番号ＡＦ２２９０５３）
Ｇａｒｙ Ｓ．Ｃ．，ｅｔ ａｌ Ｇｅｎｅ ２５６，１３９−１４７，２０００、Ｃｌａｒｋ Ｈ．Ｆ．，ｅｔ ａｌ Ｇｅｎｏｍｅ Ｒｅｓ．１３，２２６５−２２７０，２００３、Ｓｔｒａｕｓｂｅｒｇ Ｒ．Ｌ．，ｅｔ ａｌ Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．Ｕ．Ｓ．Ａ．９９，１６８９９−１６９０３，２００２、ＵＳ２００３１８６３７２（請求項１１）、ＵＳ２００３１８６３７３（請求項１１）、ＵＳ２００３１１９１３１（請求項１、図５２）、ＵＳ２００３１１９１２２（請求項１、図５２）、ＵＳ２００３１１９１２６（請求項１）、ＵＳ２００３１１９１２１（請求項１、図５２）、ＵＳ２００３１１９１２９（請求項１）、ＵＳ２００３１１９１３０（請求項１）、ＵＳ２００３１１９１２８（請求項１、図５２）、ＵＳ２００３１１９１２５（請求項１）、ＷＯ２００３０１６４７５（請求項１）、ＷＯ２００２０２６３４（請求項１）、
（２２）ＥｐｈＢ２Ｒ（ＤＲＴ、ＥＲＫ、Ｈｅｋ５、ＥＰＨＴ３、Ｔｙｒｏ５、Ｇｅｎｂａｎｋアクセッション番号ＮＭ＿００４４４２）、
Ｃｈａｎ，Ｊ．ａｎｄ Ｗａｔｔ，Ｖ．Ｍ．，Ｏｎｃｏｇｅｎｅ ６（６），１０５７−１０６１（１９９１）Ｏｎｃｏｇｅｎｅ １０（５）：８９７−９０５（１９９５），Ａｎｎｕ．Ｒｅｖ．Ｎｅｕｒｏｓｃｉ．２１：３０９−３４５（１９９８），Ｉｎｔ．Ｒｅｖ．Ｃｙｔｏｌ．１９６：１７７−２４４（２０００））、ＷＯ２００３０４２６６１（請求項１２）、ＷＯ２０００５３２１６（請求項１、４１頁）、ＷＯ２００４０６５５７６（請求項１）、ＷＯ２００４０２０５８３（請求項９）、ＷＯ２００３００４５２９（１２８〜１３２頁）、ＷＯ２０００５３２１６（請求項１、４２頁）、
相互参照：ＭＩＭ：６００９９７、ＮＰ＿００４４３３．２、ＮＭ＿００４４４２＿１
（２３）ＡＳＬＧ６５９（Ｂ７ｈ、Ｇｅｎｂａｎｋアクセッション番号ＡＸ０９２３２８）、
ＵＳ２００４０１０１８９９（請求項２）、ＷＯ２００３１０４３９９（請求項１１）、ＷＯ２００４０００２２１（図３）、ＵＳ２００３１６５５０４（請求項１）、ＵＳ２００３１２４１４０（実施例２）、ＵＳ２００３０６５１４３（図６０）、ＷＯ２００２１０２２３５（請求項１３、２９９頁）、ＵＳ２００３０９１５８０（実施例２）、ＷＯ２００２１０１８７（請求項６、図１０）、ＷＯ２００１９４６４１（請求項１２、図７ｂ）、ＷＯ２００２０２６２４（請求項１３、図１Ａ〜１Ｂ）、ＵＳ２００２０３４７４９（請求項５４、４５〜４６頁）、ＷＯ２００２０６３１７（実施例２、３２０〜３２１頁、請求項３４、３２１〜３２２頁）、ＷＯ２００２７１９２８（４６８〜４６９頁）、ＷＯ２００２０２５８７（実施例１、図１）、ＷＯ２００１４０２６９（実施例３、１９０〜１９２頁）、ＷＯ２０００３６１０７（実施例２、２０５〜２０７頁）、ＷＯ２００４０５３０７９（請求項１２）、ＷＯ２００３００４９８９（請求項１）、ＷＯ２００２７１９２８（２３３〜２３４頁、４５２〜４５３頁）、ＷＯ０１１６３１８、
（２４）ＰＳＣＡ（前立腺幹細胞抗原前駆体、Ｇｅｎｂａｎｋアクセッション番号ＡＪ２９７４３６）、
Ｒｅｉｔｅｒ Ｒ．Ｅ．，ｅｔ ａｌ Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．Ｕ．Ｓ．Ａ．９５，１７３５−１７４０，１９９８、Ｇｕ Ｚ．，ｅｔ ａｌ Ｏｎｃｏｇｅｎｅ １９，１２８８−１２９６，２０００、Ｂｉｏｃｈｅｍ．Ｂｉｏｐｈｙｓ．Ｒｅｓ．Ｃｏｍｍｕｎ．（２０００）２７５（３）：７８３−７８８、ＷＯ２００４０２２７０９、ＥＰ１３９４２７４（実施例１１）、ＵＳ２００４０１８５５３（請求項１７）、ＷＯ２００３００８５３７（請求項１）、ＷＯ２００２８１６４６（請求項１、１６４頁）、ＷＯ２００３００３９０６（請求項１０、２８８頁）、ＷＯ２００１４０３０９（実施例１、図１７）、ＵＳ２００１０５５７５１（実施例１、図１ｂ）、ＷＯ２０００３２７５２（請求項１８、図１）、ＷＯ９８５１８０５（請求項１７、９７頁）、ＷＯ９８５１８２４（請求項１０、９４頁）、ＷＯ９８４０４０３（請求項２、図１Ｂ）、
アクセッション：Ｏ４３６５３、ＥＭＢＬ、ＡＦ０４３４９８、ＡＡＣ３９６０７．１。
（２５）ＧＥＤＡ（Ｇｅｎｂａｎｋアクセッション番号ＡＹ２６０７６３）、
ＡＡＰ１４９５４脂肪腫ＨＭＧＩＣ融合パートナー様タンパク質／ｐｉｄ＝ＡＡＰ１４９５４．１−Ｈｏｍｏ ｓａｐｉｅｎｓ
種:Ｈｏｍｏ ｓａｐｉｅｎｓ（ヒト）
ＷＯ２００３０５４１５２（請求項２０）、ＷＯ２００３０００８４２（請求項１）、ＷＯ２００３０２３０１３（実施例３、請求項２０）、ＵＳ２００３１９４７０４（請求項４５）、
相互参照：ＧＩ：３０１０２４４９、ＡＡＰ１４９５４．１、ＡＹ２６０７６３＿１
（２６）ＢＡＦＦ−Ｒ（Ｂ細胞活性化因子受容体、ＢＬｙＳ受容体３、ＢＲ３、Ｇｅｎｂａｎｋアクセッション番号ＡＦ１１６４５６）、ＢＡＦＦ受容体／ｐｉｄ＝ＮＰ＿４４３１７７．１−Ｈｏｍｏ ｓａｐｉｅｎｓ
Ｔｈｏｍｐｓｏｎ，Ｊ．Ｓ．，ｅｔ ａｌ Ｓｃｉｅｎｃｅ ２９３（５５３７），２１０８−２１１１（２００１）、ＷＯ２００４０５８３０９、ＷＯ２００４０１１６１１、ＷＯ２００３０４５４２２（実施例、３２〜３３頁）、ＷＯ２００３０１４２９４（請求項３５、図６Ｂ）、ＷＯ２００３０３５８４６（請求項７０、６１５〜６１６頁）、ＷＯ２００２９４８５２（１３６〜１３７列）、ＷＯ２００２３８７６６（請求項３、１３３頁）、ＷＯ２００２２４９０９（実施例３、図３）、
相互参照：ＭＩＭ：６０６２６９、ＮＰ＿４４３１７７．１、ＮＭ＿０５２９４５＿１、ＡＦ１３２６００
（２７）ＣＤ２２（Ｂ細胞受容体ＣＤ２２−Ｂアイソフォーム、ＢＬ−ＣＡＭ、Ｌｙｂ−８、Ｌｙｂ８、ＳＩＧＬＥＣ−２、ＦＬＪ２２８１４、Ｇｅｎｂａｎｋアクセッション番号ＡＫ０２６４６７）、
Ｗｉｌｓｏｎ ｅｔ ａｌ（１９９１）Ｊ．Ｅｘｐ．Ｍｅｄ．１７３：１３７−１４６、ＷＯ２００３０７２０３６（請求項１、図１）、
相互参照：ＭＩＭ：１０７２６６、ＮＰ＿００１７６２．１、ＮＭ＿００１７７１＿１
（２８）ＣＤ７９ａ（ＣＤ７９Ａ、ＣＤ７９α、免疫グロブリン関連アルファ、Ｉｇベータ（ＣＤ７９Ｂ）と共有結合により相互作用し、ＩｇＭ分子と表面上で複合体を形成し、Ｂ細胞分化に関与するシグナルを伝達するＢ細胞特異的タンパク質）、ｐＩ：４．８４、ＭＷ：２５０２８ ＴＭ：２［Ｐ］ 遺伝子染色体：１９ｑ１３．２、Ｇｅｎｂａｎｋアクセッション番号ＮＰ＿００１７７４．１０）、
ＷＯ２００３０８８８０８、ＵＳ２００３０２２８３１９、ＷＯ２００３０６２４０１（請求項９）、ＵＳ２００２１５０５７３（請求項４、１３〜１４頁）、ＷＯ９９５８６５８（請求項１３、図１６）、ＷＯ９２０７５７４（図１）、ＵＳ５６４４０３３、Ｈａ ｅｔ ａｌ（１９９２）Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１４８（５）：１５２６−１５３１、Ｍｕｅｌｌｅｒ ｅｔ ａｌ（１９９２）Ｅｕｒ．Ｊ．Ｂｉｏｃｈｅｍ．２２：１６２１−１６２５、Ｈａｓｈｉｍｏｔｏ ｅｔ ａｌ（１９９４）Ｉｍｍｕｎｏｇｅｎｅｔｉｃｓ ４０（４）：２８７−２９５、Ｐｒｅｕｄ’ｈｏｍｍｅ ｅｔ ａｌ（１９９２）Ｃｌｉｎ．Ｅｘｐ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．９０（１）：１４１−１４６、Ｙｕ ｅｔ ａｌ（１９９２）Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１４８（２）６３３−６３７、Ｓａｋａｇｕｃｈｉ ｅｔ ａｌ（１９８８）ＥＭＢＯ Ｊ．７（１１）：３４５７−３４６４、
（２９）ＣＸＣＲ５（バーキットリンパ腫受容体１、ＣＸＣＬ１３ケモカインによって活性化され、リンパ球遊走及び体液性防御において機能し、ＨＩＶ−２感染ならびに恐らくはＡＩＤＳ、リンパ腫、骨髄腫、及び白血病の発症において役割を果たすＧタンパク質結合受容体）、３７２ａａ、ｐＩ：８．５４ ＭＷ：４１９５９ ＴＭ：７［Ｐ］ 遺伝子染色体：１１ｑ２３．３、Ｇｅｎｂａｎｋアクセッション番号ＮＰ＿００１７０７．１）
ＷＯ２００４０４００００、ＷＯ２００４０１５４２６、ＵＳ２００３１０５２９２（実施例２）、ＵＳ６５５５３３９（実施例２）、ＷＯ２００２６１０８７（図１）、ＷＯ２００１５７１８８（請求項２０、２６９頁）、ＷＯ２００１７２８３０（１２〜１３頁）、ＷＯ２０００２２１２９（実施例１、１５２〜１５３頁、実施例２、２５４〜２５６頁）、ＷＯ９９２８４６８（請求項１、３８頁）、ＵＳ５４４００２１（実施例２、４９〜５２列）、ＷＯ９４２８９３１（５６〜５８頁）、ＷＯ９２１７４９７（請求項７、図５）、Ｄｏｂｎｅｒ ｅｔ ａｌ（１９９２）Ｅｕｒ．Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．２２：２７９５−２７９９、Ｂａｒｅｌｌａ ｅｔ ａｌ（１９９５）Ｂｉｏｃｈｅｍ．Ｊ．３０９：７７３−７７９、
（３０）ＨＬＡ−ＤＯＢ（ペプチドと結合し、ＣＤ４＋Ｔリンパ球にそれらを提示するＭＨＣクラスＩＩ分子（Ｉａ抗原）のベータサブユニット）、２７３ａａ、ｐＩ：６．５６ ＭＷ：３０８２０ ＴＭ：１［Ｐ］ 遺伝子染色体：６ｐ２１．３、Ｇｅｎｂａｎｋアクセッション番号ＮＰ＿００２１１１．１）
Ｔｏｎｎｅｌｌｅ ｅｔ ａｌ（１９８５）ＥＭＢＯ Ｊ．４（１１）：２８３９−２８４７、Ｊｏｎｓｓｏｎ ｅｔ ａｌ（１９８９）Ｉｍｍｕｎｏｇｅｎｅｔｉｃｓ ２９（６）：４１１−４１３、Ｂｅｃｋ ｅｔ ａｌ（１９９２）Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．２２８：４３３−４４１、Ｓｔｒａｕｓｂｅｒｇ ｅｔ ａｌ（２００２）Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ ＵＳＡ ９９：１６８９９−１６９０３、Ｓｅｒｖｅｎｉｕｓ ｅｔ ａｌ（１９８７）Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．２６２：８７５９−８７６６、Ｂｅｃｋ ｅｔ ａｌ（１９９６）Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．２５５：１−１３、Ｎａｒｕｓｅ ｅｔ ａｌ（２００２）Ｔｉｓｓｕｅ Ａｎｔｉｇｅｎｓ ５９：５１２−５１９、ＷＯ９９５８６５８（請求項１３、図１５）、ＵＳ６１５３４０８（３５〜３８列）、ＵＳ５９７６５５１（１６８〜１７０列）、ＵＳ６０１１１４６（１４５〜１４６列）、Ｋａｓａｈａｒａ ｅｔ ａｌ（１９８９）Ｉｍｍｕｎｏｇｅｎｅｔｉｃｓ ３０（１）：６６−６８、Ｌａｒｈａｍｍａｒ ｅｔ ａｌ（１９８５）Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．２６０（２６）：１４１１１−１４１１９、
（３１）Ｐ２Ｘ５（プリン受容体Ｐ２Ｘリガンド依存性イオンチャネル５、細胞外ＡＴＰによって開閉されるイオンチャネル、これはシナプス伝達及び神経発生に関与する可能性があり、不足すると特発性排尿筋不安定の病態生理の一因となる場合がある）、４２２ａａ）、ｐＩ：７．６３、ＭＷ：４７２０６ ＴＭ：１［Ｐ］ 遺伝子染色体：１７ｐ１３．３、Ｇｅｎｂａｎｋアクセッション番号ＮＰ＿００２５５２．２）、
Ｌｅ ｅｔ ａｌ（１９９７）ＦＥＢＳ Ｌｅｔｔ．４１８（１−２）：１９５−１９９、ＷＯ２００４０４７７４９、ＷＯ２００３０７２０３５（請求項１０）、Ｔｏｕｃｈｍａｎ ｅｔ ａｌ（２０００）Ｇｅｎｏｍｅ Ｒｅｓ．１０：１６５−１７３、ＷＯ２００２２２６６０（請求項２０）、ＷＯ２００３０９３４４４（請求項１）、ＷＯ２００３０８７７６８（請求項１）、ＷＯ２００３０２９２７７（８２頁）、
（３２）ＣＤ７２（Ｂ細胞分化抗原ＣＤ７２、Ｌｙｂ−２）タンパク質配列全長ｍａｅａｉｔｙ．．．ｔａｆｒｆｐｄ（１．．３５９、３５９ａａ）、ｐＩ：８．６６、ＭＷ：４０２２５ ＴＭ：１［Ｐ］ 遺伝子染色体：９ｐ１３．３、Ｇｅｎｂａｎｋアクセッション番号ＮＰ＿００１７７３．１）、
ＷＯ２００４０４２３４６（請求項６５）、ＷＯ２００３０２６４９３（５１〜５２頁、５７〜５８頁）、ＷＯ２０００７５６５５（１０５〜１０６頁）、Ｖｏｎ Ｈｏｅｇｅｎ ｅｔ ａｌ（１９９０）Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１４４（１２）：４８７０−４８７７、Ｓｔｒａｕｓｂｅｒｇ ｅｔ ａｌ（２００２）Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ ＵＳＡ ９９：１６８９９−１６９０３、
（３３）ＬＹ６４（リンパ球抗原６４（ＲＰ１０５）、ロイシンリッチ反復（ＬＲＲ）ファミリーのＩ型膜タンパク質、これはＢ細胞活性化及びアポトーシスを制御し、機能喪失は全身性エリテマトーデスを有する患者における疾患活性の増加と関連する）、６６１ａａ、ｐＩ：６．２０、ＭＷ：７４１４７ ＴＭ：１［Ｐ］ 遺伝子染色体：５ｑ１２、Ｇｅｎｂａｎｋアクセッション番号ＮＰ＿００５５７３．１）
ＵＳ２００２１９３５６７、ＷＯ９７０７１９８（請求項１１、３９〜４２頁）、Ｍｉｕｒａ ｅｔ ａｌ（１９９６）Ｇｅｎｏｍｉｃｓ ３８（３）：２９９−３０４、Ｍｉｕｒａ ｅｔ ａｌ（１９９８）Ｂｌｏｏｄ ９２：２８１５−２８２２、ＷＯ２００３０８３０４７、ＷＯ９７４４４５２（請求項８、５７〜６１頁）、ＷＯ２０００１２１３０（２４〜２６頁）、
（３４）ＦｃＲＨ１（Ｆｃ受容体様タンパク質１、Ｃ２型Ｉｇ様及びＩＴＡＭドメインを含有する免疫グロブリンＦｃドメインの推定受容体、これはＢリンパ球分化において役割を有する可能性がある）、４２９ａａ、ｐＩ：５．２８、ＭＷ：４６９２５ ＴＭ：１［Ｐ］ 遺伝子染色体：１ｑ２１−１ｑ２２、Ｇｅｎｂａｎｋアクセッション番号ＮＰ＿４４３１７０．１）、
ＷＯ２００３０７７８３６、ＷＯ２００１３８４９０（請求項６、図１８Ｅ−１〜１８−Ｅ−２）、Ｄａｖｉｓ ｅｔ ａｌ（２００１）Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ ＵＳＡ ９８（１７）：９７７２−９７７７、ＷＯ２００３０８９６２４（請求項８）、ＥＰ１３４７０４６（請求項１）、ＷＯ２００３０８９６２４（請求項７）、
（３５）ＩＲＴＡ２（免疫グロブリンスーパーファミリー受容体転座関連２、Ｂ細胞発生及びリンパ腫形成において可能な役割を有する推定免疫受容体、転座による遺伝子の制御解除が一部のＢ細胞悪性腫瘍で生じる）、９７７ａａ、ｐＩ：６．８８ ＭＷ：１０６４６８ ＴＭ：１［Ｐ］ 遺伝子染色体：１ｑ２１、Ｇｅｎｂａｎｋアクセッション番号ヒト：ＡＦ３４３６６２、ＡＦ３４３６６３、ＡＦ３４３６６４、ＡＦ３４３６６５、ＡＦ３６９７９４、ＡＦ３９７４５３、ＡＫ０９０４２３、ＡＫ０９０４７５、ＡＬ８３４１８７、ＡＹ３５８０８５、マウス：ＡＫ０８９７５６、ＡＹ１５８０９０、ＡＹ５０６５５８、ＮＰ＿１１２５７１．１
ＷＯ２００３０２４３９２（請求項２、図９７）、Ｎａｋａｙａｍａ ｅｔ ａｌ（２０００）Ｂｉｏｃｈｅｍ．Ｂｉｏｐｈｙｓ．Ｒｅｓ．Ｃｏｍｍｕｎ．２７７（１）：１２４−１２７、ＷＯ２００３０７７８３６、ＷＯ２００１３８４９０（請求項３、図１８Ｂ−１〜１８Ｂ−２）、
（３６）ＴＥＮＢ２（ＴＭＥＦＦ２、トモレグリン、ＴＰＥＦ、ＨＰＰ１、ＴＲ、推定膜貫通プロテオグリカン、成長因子のＥＧＦ／ヘレグリンファミリー及びフォリスタチンに関連する）、３７４ａａ、ＮＣＢＩアクセッション：ＡＡＤ５５７７６、ＡＡＦ９１３９７、ＡＡＧ４９４５１、ＮＣＢＩ ＲｅｆＳｅｑ：ＮＰ＿０５７２７６、ＮＣＢＩ遺伝子：２３６７１、ＯＭＩＭ：６０５７３４、ＳｗｉｓｓＰｒｏｔ Ｑ９ＵＩＫ５、Ｇｅｎｂａｎｋアクセッション番号ＡＦ１７９２７４、ＡＹ３５８９０７、ＣＡＦ８５７２３、ＣＱ７８２４３６
ＷＯ２００４０７４３２０（配列番号８１０）、ＪＰ２００４１１３１５１（配列番号２，４，８）、ＷＯ２００３０４２６６１（配列番号５８０）、ＷＯ２００３００９８１４（配列番号４１１）、ＥＰ１２９５９４４（６９〜７０頁）、ＷＯ２００２３０２６８（３２９頁）、ＷＯ２００１９０３０４（配列番号２７０６）、ＵＳ２００４２４９１３０、ＵＳ２００４０２２７２７、ＷＯ２００４０６３３５５、ＵＳ２００４１９７３２５、ＵＳ２００３２３２３５０、ＵＳ２００４００５５６３、ＵＳ２００３１２４５７９、Ｈｏｒｉｅ ｅｔ ａｌ（２０００）Ｇｅｎｏｍｉｃｓ ６７：１４６−１５２、Ｕｃｈｉｄａ ｅｔ ａｌ（１９９９）Ｂｉｏｃｈｅｍ．Ｂｉｏｐｈｙｓ．Ｒｅｓ．Ｃｏｍｍｕｎ．２６６：５９３−６０２、Ｌｉａｎｇ ｅｔ ａｌ（２０００）Ｃａｎｃｅｒ Ｒｅｓ．６０：４９０７−１２、Ｇｌｙｎｎｅ−Ｊｏｎｅｓ ｅｔ ａｌ（２００１）Ｉｎｔ Ｊ Ｃａｎｃｅｒ．Ｏｃｔ １５、９４（２）：１７８−８４、
（３７）ＰＭＥＬ１７（シルバーホモログ、ＳＩＬＶ、Ｄ１２Ｓ５３Ｅ、ＰＭＥＬ１７、ＳＩ、ＳＩＬ）、ＭＥ２０、ｇｐ１００）ＢＣ００１４１４、ＢＴ００７２０２、Ｍ３２２９５、Ｍ７７３４８、ＮＭ＿００６９２８、ＭｃＧｌｉｎｃｈｅｙ，Ｒ．Ｐ．ｅｔ ａｌ（２００９）Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．Ｕ．Ｓ．Ａ．１０６（３３），１３７３１−１３７３６、Ｋｕｍｍｅｒ，Ｍ．Ｐ．ｅｔ ａｌ（２００９）Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．２８４（４），２２９６−２３０６、
（３８）ＴＭＥＦＦ１（ＥＧＦ様ドメイン及び２つのフォリスタチン様ドメインを有する膜貫通タンパク質１、トモレグリン−１）、Ｈ７３６５、Ｃ９ｏｒｆ２、Ｃ９ＯＲＦ２、Ｕ１９８７８、Ｘ８３９６１、ＮＭ＿０８０６５５、ＮＭ＿００３６９２、Ｈａｒｍｓ，Ｐ．Ｗ．（２００３）Ｇｅｎｅｓ Ｄｅｖ．１７（２１），２６２４−２６２９、Ｇｅｒｙ，Ｓ．ｅｔ ａｌ（２００３）Ｏｎｃｏｇｅｎｅ ２２（１８）：２７２３−２７２７、
（３９）ＧＤＮＦ−Ｒａ１（ＧＤＮＦファミリー受容体アルファ１、ＧＦＲＡ１、ＧＤＮＦＲ、ＧＤＮＦＲＡ、ＲＥＴＬ１、ＴＲＮＲ１、ＲＥＴ１Ｌ、ＧＤＮＦＲ−アルファ１、ＧＦＲ−ＡＬＰＨＡ−１）、Ｕ９５８４７、ＢＣ０１４９６２、ＮＭ＿１４５７９３ ＮＭ＿００５２６４、Ｋｉｍ，Ｍ．Ｈ．ｅｔ ａｌ（２００９）Ｍｏｌ．Ｃｅｌｌ．Ｂｉｏｌ．２９（８），２２６４−２２７７、Ｔｒｅａｎｏｒ，Ｊ．Ｊ．ｅｔ ａｌ（１９９６）Ｎａｔｕｒｅ ３８２（６５８６）：８０−８３、
（４０）Ｌｙ６Ｅ（リンパ球抗原６複合体、遺伝子座Ｅ、Ｌｙ６７、ＲＩＧ−Ｅ、ＳＣＡ−２、ＴＳＡ−１）、ＮＰ＿００２３３７．１、ＮＭ＿００２３４６．２、ｄｅ Ｎｏｏｉｊ−ｖａｎ Ｄａｌｅｎ，Ａ．Ｇ．ｅｔ ａｌ（２００３）Ｉｎｔ．Ｊ．Ｃａｎｃｅｒ １０３（６），７６８−７７４、Ｚａｍｍｉｔ，Ｄ．Ｊ．ｅｔ ａｌ（２００２）Ｍｏｌ．Ｃｅｌｌ．Ｂｉｏｌ．２２（３）：９４６−９５２、ＷＯ２０１３／１７７０５、
（４１）ＴＭＥＭ４６（ｓｈｉｓａホモログ２（Ｘｅｎｏｐｕｓ ｌａｅｖｉｓ）、ＳＨＩＳＡ２）、ＮＰ＿００１００７５３９．１、ＮＭ＿００１００７５３８．１、Ｆｕｒｕｓｈｉｍａ，Ｋ．ｅｔ ａｌ（２００７）Ｄｅｖ．Ｂｉｏｌ．３０６（２），４８０−４９２、Ｃｌａｒｋ，Ｈ．Ｆ．ｅｔ ａｌ（２００３）Ｇｅｎｏｍｅ Ｒｅｓ．１３（１０）：２２６５−２２７０、
（４２）Ｌｙ６Ｇ６Ｄ（リンパ球抗原６複合体、遺伝子座Ｇ６Ｄ、Ｌｙ６−Ｄ、ＭＥＧＴ１）、ＮＰ＿０６７０７９．２、ＮＭ＿０２１２４６．２、Ｍａｌｌｙａ，Ｍ．ｅｔ ａｌ（２００２）Ｇｅｎｏｍｉｃｓ ８０（１）：１１３−１２３、Ｒｉｂａｓ，Ｇ．ｅｔ ａｌ（１９９９）Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１６３（１）：２７８−２８７、
（４３）ＬＧＲ５（ロイシンリッチ反復含有Ｇタンパク質結合受容体５、ＧＰＲ４９、ＧＰＲ６７）、ＮＰ＿００３６５８．１、ＮＭ＿００３６６７．２、Ｓａｌａｎｔｉ，Ｇ．ｅｔ ａｌ（２００９）Ａｍ．Ｊ．Ｅｐｉｄｅｍｉｏｌ．１７０（５）：５３７−５４５、Ｙａｍａｍｏｔｏ，Ｙ．ｅｔ ａｌ（２００３）Ｈｅｐａｔｏｌｏｇｙ ３７（３）：５２８−５３３、
（４４）ＲＥＴ（ｒｅｔ癌原遺伝子、ＭＥＮ２Ａ、ＨＳＣＲ１、ＭＥＮ２Ｂ、ＭＴＣ１、ＰＴＣ、ＣＤＨＦ１２、Ｈｓ．１６８１１４、ＲＥＴ５１、ＲＥＴ−ＥＬＥ１）、ＮＰ＿０６６１２４．１、ＮＭ＿０２０９７５．４、Ｔｓｕｋａｍｏｔｏ，Ｈ．ｅｔ ａｌ（２００９）ＣａｎｃｅｒＳｃｉ．１００（１０）：１８９５−１９０１、Ｎａｒｉｔａ，Ｎ．ｅｔ ａｌ（２００９）Ｏｎｃｏｇｅｎｅ ２８（３４）：３０５８−３０６８、
（４５）ＬＹ６Ｋ（リンパ球抗原６複合体、遺伝子座Ｋ、ＬＹ６Ｋ、ＨＳＪ００１３４８、ＦＬＪ３５２２６）、ＮＰ＿０５９９９７．３、ＮＭ＿０１７５２７．３、Ｉｓｈｉｋａｗａ，Ｎ．ｅｔ ａｌ（２００７）Ｃａｎｃｅｒ Ｒｅｓ．６７（２４）：１１６０１−１１６１１、ｄｅ Ｎｏｏｉｊ−ｖａｎ Ｄａｌｅｎ，Ａ．Ｇ．ｅｔ ａｌ（２００３）Ｉｎｔ．Ｊ．Ｃａｎｃｅｒ １０３（６）：７６８−７７４、
（４６）ＧＰＲ１９（Ｇタンパク質結合受容体１９、Ｍｍ．４７８７）、ＮＰ＿００６１３４．１、ＮＭ＿００６１４３．２、Ｍｏｎｔｐｅｔｉｔ，Ａ．ａｎｄ Ｓｉｎｎｅｔｔ，Ｄ．（１９９９）Ｈｕｍ．Ｇｅｎｅｔ．１０５（１−２）：１６２−１６４、Ｏ’Ｄｏｗｄ，Ｂ．Ｆ．ｅｔ ａｌ（１９９６）ＦＥＢＳ Ｌｅｔｔ．３９４（３）：３２５−３２９、
（４７）ＧＰＲ５４（ＫＩＳＳ１受容体、ＫＩＳＳ１Ｒ、ＧＰＲ５４、ＨＯＴ７Ｔ１７５、ＡＸＯＲ１２）、ＮＰ＿１１５９４０．２、ＮＭ＿０３２５５１．４、Ｎａｖｅｎｏｔ，Ｊ．Ｍ．ｅｔ ａｌ（２００９）Ｍｏｌ．Ｐｈａｒｍａｃｏｌ．７５（６）：１３００−１３０６、Ｈａｔａ，Ｋ．ｅｔ ａｌ（２００９）Ａｎｔｉｃａｎｃｅｒ Ｒｅｓ．２９（２）：６１７−６２３、
（４８）ＡＳＰＨＤ１（アスパラギン酸ベータ−ヒドロキシラーゼドメイン含有１、ＬＯＣ２５３９８２）、ＮＰ＿８５９０６９．２、ＮＭ＿１８１７１８．３、Ｇｅｒｈａｒｄ，Ｄ．Ｓ．ｅｔ ａｌ（２００４）Ｇｅｎｏｍｅ Ｒｅｓ．１４（１０Ｂ）：２１２１−２１２７、
（４９）チロシナーゼ（ＴＹＲ、ＯＣＡＩＡ、ＯＣＡ１Ａ、チロシナーゼ、ＳＨＥＰ３）、ＮＰ＿０００３６３．１、ＮＭ＿０００３７２．４、Ｂｉｓｈｏｐ，Ｄ．Ｔ．ｅｔ ａｌ（２００９）Ｎａｔ．Ｇｅｎｅｔ．４１（８）：９２０−９２５、Ｎａｎ，Ｈ．ｅｔ ａｌ（２００９）Ｉｎｔ．Ｊ．Ｃａｎｃｅｒ １２５（４）：９０９−９１７、
（５０）ＴＭＥＭ１１８（ｒｉｎｇフィンガータンパク質、膜貫通２、ＲＮＦＴ２、ＦＬＪ１４６２７）、ＮＰ＿００１１０３３７３．１、ＮＭ＿００１１０９９０３．１、Ｃｌａｒｋ，Ｈ．Ｆ．ｅｔ ａｌ（２００３）Ｇｅｎｏｍｅ Ｒｅｓ．１３（１０）：２２６５−２２７０、Ｓｃｈｅｒｅｒ，Ｓ．Ｅ．ｅｔ ａｌ（２００６）Ｎａｔｕｒｅ ４４０（７０８２）：３４６−３５１
（５１）ＧＰＲ１７２Ａ（Ｇタンパク質結合受容体１７２Ａ、ＧＰＣＲ４１、ＦＬＪ１１８５６、Ｄ１５Ｅｒｔｄ７４７ｅ）、ＮＰ＿０７８８０７．１、ＮＭ＿０２４５３１．３、Ｅｒｉｃｓｓｏｎ，Ｔ．Ａ．ｅｔ ａｌ（２００３）Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．Ｕ．Ｓ．Ａ．１００（１１）：６７５９−６７６４、Ｔａｋｅｄａ，Ｓ．ｅｔ ａｌ（２００２）ＦＥＢＳ Ｌｅｔｔ．５２０（１−３）：９７−１０１。
（５２）ＣＤ３３、シアル酸結合免疫グロブリン様レクチンファミリーのメンバー、これは６７ｋＤａのグリコシル化膜貫通タンパク質である。ＣＤ３３は、委任骨髄単球前駆細胞及び赤血球前駆細胞に加えて、大半の骨髄性白血病細胞及び単球性白血病細胞上で発現される。これは、最も初期の多能性幹細胞、成熟顆粒球、リンパ細胞、または非造血細胞上では見られない（Ｓａｂｂａｔｈ ｅｔ ａｌ．，（１９８５）Ｊ．Ｃｌｉｎ．Ｉｎｖｅｓｔ．７５：７５６−５６、Ａｎｄｒｅｗｓ ｅｔ ａｌ．，（１９８６）Ｂｌｏｏｄ ６８：１０３０−５）。ＣＤ３３は、その細胞質尾部に２つのチロシン残基を含有し、その各々の後に、多くの阻害性受容体に見られる免疫受容体チロシンベース阻害モチーフ（ＩＴＩＭ）に類似した疎水性残基が続いている。
（５３）ＣＬＬ−１（ＣＬＥＣ１２Ａ、ＭＩＣＬ、及びＤＣＡＬ２）、これはＣ型レクチン／Ｃ型レクチン様ドメイン（ＣＴＬ／ＣＴＬＤ）スーパーファミリーのメンバーをコードする。このファミリーのメンバーは、共通のタンパク質折り畳みを共有し、多様な機能、例えば、細胞接着、細胞間シグナル伝達、糖タンパク質の代謝回転、ならびに炎症及び免疫応答における役割などを有する。この遺伝子によってコードされるタンパク質は、顆粒球及び単球機能の負の制御因子である。この遺伝子のいくつかの選択的スプライシング転写物バリアントが記載されているが、これらのバリアントの一部における全長の性質は分かっていない。この遺伝子は、染色体１２ｐ１３上のナチュラルキラー遺伝子複合体領域におけるその他のＣＴＬ／ＣＴＬＤスーパーファミリーメンバーと密接に関連している（Ｄｒｉｃｋａｍｅｒ Ｋ（１９９９）Ｃｕｒｒ．Ｏｐｉｎ．Ｓｔｒｕｃｔ．Ｂｉｏｌ．９（５）：５８５−９０、ｖａｎ Ｒｈｅｎｅｎ Ａ，ｅｔ ａｌ．，（２００７）Ｂｌｏｏｄ １１０（７）：２６５９−６６、Ｃｈｅｎ ＣＨ，ｅｔ ａｌ．（２００６）Ｂｌｏｏｄ １０７（４）：１４５９−６７、Ｍａｒｓｈａｌｌ ＡＳ，ｅｔ ａｌ．（２００６）Ｅｕｒ．Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．３６（８）：２１５９−６９、Ｂａｋｋｅｒ ＡＢ，ｅｔ ａｌ（２００５）Ｃａｎｃｅｒ Ｒｅｓ．６４（２２）：８４４３−５０、Ｍａｒｓｈａｌｌ ＡＳ，，ｅｔ ａｌ（２００４）Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．２７９（１５）：１４７９２−８０２）。ＣＬＬ−１は、単一のＣ型レクチン様ドメイン（カルシウムまたは糖のいずれかと結合するとは予測されていない）、ストーク領域、膜貫通ドメイン及びＩＴＩＭモチーフを含有する短い細胞質尾部を含む、ＩＩ型膜貫通受容体であることが示されている。
抗ＣＤ２２抗体
特定の実施形態では、表３Ａ及び表３ＢにおけるＡＤＣの抗ＣＤ２２抗体は、ＵＳ８２２６９４５によると、３つの軽鎖超可変領域（ＨＶＲ−Ｌ１、ＨＶＲ−Ｌ２及びＨＶＲ−Ｌ３）ならびに３つの重鎖超可変領域（ＨＶＲ−Ｈ１、ＨＶＲ−Ｈ２及びＨＶＲ−Ｈ３）を含む：
ＨＶＲ−Ｌ１ ＲＳＳＱＳＩＶＨＳＶＧＮＴＦＬＥ（配列番号：１）
ＨＶＲ−Ｌ２ ＫＶＳＮＲＦＳ（配列番号：２）
ＨＶＲ−Ｌ３ ＦＱＧＳＱＦＰＹＴ（配列番号：３）
ＨＶＲ−Ｈ１ ＧＹＥＦＳＲＳＷＭＮ（配列番号：４）
ＨＶＲ−Ｈ２ ＧＲＩＹＰＧＤＧＤＴＮＹＳＧＫＦＫＧ（配列番号：５）
ＨＶＲ−Ｈ３ ＤＧＳＳＷＤＷＹＦＤＶ（配列番号：６）
抗Ｌｙ６Ｅ抗体
特定の実施形態では、表３Ａ及び表３ＢのＡＤＣは、抗Ｌｙ６Ｅ抗体を含む。レチノイン酸誘導遺伝子Ｅ（ＲＩＧ−Ｅ）及び幹細胞抗原２（ＳＣＡ−２）としても知られるリンパ球抗原６複合体、遺伝子座Ｅ（Ｌｙ６Ｅ）。これは、結合パートナーが知られてない未知の機能を有する、ＧＰＩ結合した１３１アミノ酸長の約８．４ｋＤａタンパク質である。これは、マウスの未熟胸腺細胞、胸腺髄質上皮細胞中で発現される転写物として最初に同定された（Ｍａｏ，ｅｔ ａｌ．（１９９６）Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．Ｕ．Ｓ．Ａ．９３：５９１０−５９１４）。いくつかの実施形態では、本発明は、ＰＣＴ公開第ＷＯ２０１３／１７７０５５号明細書に記載されている抗Ｌｙ６Ｅ抗体を含む免疫複合体を提供する。
いくつかの実施形態では、本発明は、（ａ）配列番号：１２のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ１、（ｂ）配列番号：１３のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ２、（ｃ）配列番号：１４のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ３、（ｄ）配列番号：９のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ１、（ｅ）配列番号：１０のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ２、及び（ｆ）配列番号：１１のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ３から選択される少なくとも１つ、２つ、３つ、４つ、５つ、または６つのＨＶＲを含む抗Ｌｙ６Ｅ抗体を含む抗体−薬物複合体を提供する。
一態様では、本発明は、（ａ）配列番号：１２のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ１、（ｂ）配列番号：１３のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ２、及び（ｃ）配列番号：１４のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ３から選択される、少なくとも１つ、少なくとも２つ、または３つ全てのＶＨ ＨＶＲ配列を含む抗体を含む抗体−薬物複合体を提供する。さらなる実施形態では、抗体は、（ａ）配列番号：１２のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ１、（ｂ）配列番号：１３のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ２、及び（ｃ）配列番号：１４のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ３を含む。
別の態様では、本発明は、（ａ）配列番号：９のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ１、（ｂ）配列番号：１０のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ２、及び（ｃ）配列番号：１１のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ３から選択される、少なくとも１つ、少なくとも２つ、または３つ全てのＶＬ ＨＶＲ配列を含む抗体を含む抗体−薬物複合体を提供する。一実施形態では、抗体は、（ａ）配列番号：９のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ１、（ｂ）配列番号：１０のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ２、及び（ｃ）配列番号：１１のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ３を含む。
別の態様では、本発明の抗体−薬物複合体は、（ａ）（ｉ）配列番号：１２のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ１、（ｉｉ）配列番号：１３のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ２、及び（ｉｉｉ）配列番号：１４のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ３から選択される、少なくとも１つ、少なくとも２つ、または３つ全てのＶＨ ＨＶＲ配列を含むＶＨドメイン、ならびに（ｂ）（ｉ）配列番号：９のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ１、（ｉｉ）配列番号：１０のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ２、及び（ｃ）配列番号：１１のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ３から選択される、少なくとも１つ、少なくとも２つ、または３つ全てのＶＬ ＨＶＲ配列を含むＶＬドメインを含む抗体を含む。
別の態様では、本発明は、（ａ）配列番号：１２のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ１、（ｂ）配列番号：１３のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ２、（ｃ）配列番号：１４のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ３、（ｄ）配列番号：９のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ１、（ｅ）配列番号：１０のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ２、及び（ｆ）配列番号：１１のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ３を含む抗体を含む抗体−薬物複合体を提供する。
上記実施形態のいずれにおいても、抗体−薬物複合体の抗Ｌｙ６Ｅ抗体は、ヒト化されている。一実施形態では、抗Ｌｙ６Ｅ抗体は、上記実施形態のいずれかにおけるようなＨＶＲを含み、ヒトアクセプターフレームワーク、例えば、ヒト免疫グロブリンフレームワークまたはヒトコンセンサスフレームワークをさらに含む。
別の態様では、抗体−薬物複合体の抗Ｌｙ６Ｅ抗体は、配列番号：８のアミノ酸配列と少なくとも９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、または１００％の配列同一性を有する重鎖可変ドメイン（ＶＨ）配列を含む。特定の実施形態では、配列番号：８のアミノ酸配列と少なくとも９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、または９９％の同一性を有するＶＨ配列は、参照配列と比較して、置換（例えば、保存的置換）、挿入、または欠失を含有するが、その配列を含む抗Ｌｙ６Ｅ抗体は、Ｌｙ６Ｅに結合する能力を保持する。特定の実施形態では、合計で１〜１０個のアミノ酸が、配列番号：８において置換、挿入及び／または欠失されている。特定の実施形態では、合計で１〜５個のアミノ酸が、配列番号：８において置換、挿入及び／または欠失されている。特定の実施形態では、置換、挿入、または欠失は、ＨＶＲの外側の領域で（すなわち、ＦＲで）生じる。場合により、抗Ｌｙ６Ｅ抗体は、配列番号：８のＶＨ配列を含み、その配列の翻訳後修飾を含む。特定の実施形態では、ＶＨは、（ａ）配列番号：１２のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ１、（ｂ）配列番号：１３のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ２、及び（ｃ）配列番号：１４のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ３から選択される１つ、２つ、または３つのＨＶＲを含む。
別の態様では、抗体−薬物複合体の抗Ｌｙ６Ｅ抗体が提供され、この抗体は、配列番号：７のアミノ酸配列と少なくとも９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、または１００％の配列同一性を有する軽鎖可変ドメイン（ＶＬ）を含む。特定の実施形態では、配列番号：７のアミノ酸配列と少なくとも９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、または９９％の同一性を有するＶＬ配列は、参照配列と比較して、置換（例えば、保存的置換）、挿入、または欠失を含有するが、その配列を含む抗Ｌｙ６Ｅ抗体は、Ｌｙ６Ｅに結合する能力を保持する。特定の実施形態では、合計で１〜１０個のアミノ酸が、配列番号：７において置換、挿入及び／または欠失されている。特定の実施形態では、合計で１〜５個のアミノ酸が、配列番号：７において置換、挿入及び／または欠失されている。特定の実施形態では、置換、挿入、または欠失は、ＨＶＲの外側の領域で（すなわち、ＦＲで）生じる。場合により、抗Ｌｙ６Ｅ抗体は、配列番号：７のＶＬ配列を含み、その配列の翻訳後修飾を含む。特定の実施形態では、ＶＬは、（ａ）配列番号：９のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ１、（ｂ）配列番号：１０のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ２、及び（ｃ）配列番号：１１のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ３から選択される１つ、２つ、または３つのＨＶＲを含む。
別の態様では、抗Ｌｙ６Ｅ抗体を含む抗体−薬物複合体が提供され、この抗体は、上で提供される実施形態のいずれかにおけるようなＶＨ、及び上で提供される実施形態のいずれかにおけるようなＶＬを含む。
一実施形態では、抗体−薬物複合体が提供され、抗体は、それぞれ配列番号：８及び配列番号：７のＶＨ及びＶＬ配列を含み、それらの配列の翻訳後修飾を含む。
さらなる態様では、本明細書で提供される抗Ｌｙ６Ｅ抗体と同じエピトープに結合する抗体を含む抗体−薬物複合体が、本明細書で提供される。例えば、特定の実施形態では、それぞれ配列番号：８のＶＨ配列及び配列番号：７のＶＬ配列を含む抗Ｌｙ６Ｅ抗体と同じエピトープに結合する抗体を含む免疫複合体が、提供される。
本発明のさらなる態様では、上記実施形態のいずれかによる抗体−薬物複合体の抗Ｌｙ６Ｅ抗体は、ヒト抗体を含む、モノクローナル抗体である。一実施形態では、抗体−薬物複合体の抗Ｌｙ６Ｅ抗体は、抗体断片、例えば、Ｆｖ、Ｆａｂ、Ｆａｂ’、ｓｃＦｖ、ダイアボディ、またはＦ（ａｂ’）２断片である。別の実施形態では、抗体は、実質的に全長抗体、例えば、本明細書で定義されるようなＩｇＧ１抗体、ＩｇＧ２ａ抗体またはその他の抗体クラスもしくはアイソタイプである。いくつかの実施形態では、イムンコンジュゲート（ｉｍｍｕｎｃｏｎｊｕｇａｔｅ）（ＡＤＣ）は、それぞれ配列番号：１６及び１５のアミノ酸配列を含む重鎖及び軽鎖を含む抗Ｌｙ６Ｅ抗体を含む。
Ｌｙ６Ｅ抗体配列表

抗ＨＥＲ２抗体
特定の実施形態では、表３Ａ及び表３ＢのＡＤＣは、抗ＨＥＲ２抗体を含む。本発明の一実施形態では、本発明のＡＤＣの抗ＨＥＲ２抗体は、ヒト化抗ＨＥＲ２抗体、例えば、ＵＳ５８２１３３７の表３に記載されているようなｈｕＭＡｂ４Ｄ５−１、ｈｕＭＡｂ４Ｄ５−２、ｈｕＭＡｂ４Ｄ５−３、ｈｕＭＡｂ４Ｄ５−４、ｈｕＭＡｂ４Ｄ５−５、ｈｕＭＡｂ４Ｄ５−６、ｈｕＭＡｂ４Ｄ５−７及びｈｕＭＡｂ４Ｄ５−８を含み、その特許文献は具体的に参照によって本明細書に組み込まれる。これらの抗体は、ＨＥＲ２に結合するマウス抗体（４Ｄ５）の相補性決定領域と共にヒトフレームワーク領域を含有する。ヒト化抗体ｈｕＭＡｂ４Ｄ５−８は、ＨＥＲＣＥＰＴＩＮ（登録商標）という商標名で市販されている、トラスツズマブとも称される。本発明の別の実施形態では、本発明のＡＤＣの抗ＨＥＲ２抗体は、ヒト化抗ＨＥＲ２抗体、例えば、ＵＳ７８６２８１７に記載されているようなヒト化２Ｃ４を含む。例示的なヒト化２Ｃ４抗体は、ＰＥＲＪＥＴＡ（登録商標）という商標名で市販されている、ペルツズマブである。
本発明の別の実施形態では、本発明のＡＤＣの抗ＨＥＲ２抗体は、ヒト化７Ｃ２抗ＨＥＲ２抗体を含む。ヒト化７Ｃ２抗体は、抗ＨＥＲ２抗体である。
いくつかの実施形態では、本発明は、（ａ）配列番号：２２のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ１、（ｂ）配列番号：２３、２７、または２８のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ２、（ｃ）配列番号：２４または２９のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ３、（ｄ）配列番号：１９のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ１、（ｅ）配列番号：２０のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ２、及び（ｆ）配列番号：２１のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ３から選択される少なくとも１つ、２つ、３つ、４つ、５つ、または６つのＨＶＲを含む抗ＨＥＲ２抗体を含む抗体−薬物複合体を提供する。いくつかの実施形態では、本発明は、（ａ）配列番号：２２のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ１、（ｂ）配列番号：２３のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ２、（ｃ）配列番号：２４のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ３、（ｄ）配列番号：１９のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ１、（ｅ）配列番号：２０のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ２、及び（ｆ）配列番号：２１のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ３から選択される少なくとも１つ、２つ、３つ、４つ、５つ、または６つのＨＶＲを含む抗ＨＥＲ２抗体を含む抗体−薬物複合体を提供する。
一態様では、本発明は、（ａ）配列番号：２２のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ１、（ｂ）配列番号：２３、２７、または２８のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ２、及び（ｃ）配列番号：２４または２９のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ３から選択される、少なくとも１つ、少なくとも２つ、または３つ全てのＶＨ ＨＶＲ配列を含む抗体を含む抗体−薬物複合体を提供する。一態様では、本発明は、（ａ）配列番号：２２のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ１、（ｂ）配列番号：２３のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ２、及び（ｃ）配列番号：２４のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ３から選択される、少なくとも１つ、少なくとも２つ、または３つ全てのＶＨ ＨＶＲ配列を含む抗体を含む免疫複合体を提供する。さらなる実施形態では、抗体は、（ａ）配列番号：２２のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ１、（ｂ）配列番号：２３、２７、または２８のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ２、及び（ｃ）配列番号：２４または２９のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ３を含む。さらなる実施形態では、抗体は、（ａ）配列番号：２２のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ１、（ｂ）配列番号：２３のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ２、及び（ｃ）配列番号：２４のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ３を含む。
別の態様では、本発明は、（ａ）配列番号：１９のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ１、（ｂ）配列番号：２０のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ２、及び（ｃ）配列番号：２１のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ３から選択される、少なくとも１つ、少なくとも２つ、または３つ全てのＶＬ ＨＶＲ配列を含む抗体を含む抗体−薬物複合体を提供する。一実施形態では、抗体は、（ａ）配列番号：１９のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ１、（ｂ）配列番号：２０のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ２、及び（ｃ）配列番号：２１のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ３を含む。
別の態様では、本発明の抗体−薬物複合体は、（ａ）（ｉ）配列番号：２２のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ１、（ｉｉ）配列番号：２３、２７、または２８のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ２、及び（ｉｉｉ）配列番号：２４または２９のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ３から選択される、少なくとも１つ、少なくとも２つ、または３つ全てのＶＨ ＨＶＲ配列を含むＶＨドメイン、ならびに（ｂ）（ｉ）配列番号：１９のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ１、（ｉｉ）配列番号：２０のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ２、及び（ｃ）配列番号：２１のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ３から選択される、少なくとも１つ、少なくとも２つ、または３つ全てのＶＬ ＨＶＲ配列を含むＶＬドメインを含む抗体を含む。別の態様では、本発明の抗体−薬物複合体は、（ａ）（ｉ）配列番号：２２のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ１、（ｉｉ）配列番号：２３のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ２、及び（ｉｉｉ）配列番号：２４のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ３から選択される、少なくとも１つ、少なくとも２つ、または３つ全てのＶＨ ＨＶＲ配列を含むＶＨドメイン、ならびに（ｂ）（ｉ）配列番号：１９のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ１、（ｉｉ）配列番号：２０のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ２、及び（ｃ）配列番号：２１のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ３から選択される、少なくとも１つ、少なくとも２つ、または３つ全てのＶＬ ＨＶＲ配列を含むＶＬドメインを含む抗体を含む。
別の態様では、本発明は、（ａ）配列番号：２２のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ１、（ｂ）配列番号：２３、２７、または２８のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ２、（ｃ）配列番号：２４または２９のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ３、（ｄ）配列番号：１９のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ１、（ｅ）配列番号：２０のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ２、及び（ｆ）配列番号：２１のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ３を含む抗体を含む抗体−薬物複合体を提供する。別の態様では、本発明は、（ａ）配列番号：２２のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ１、（ｂ）配列番号：２３のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ２、（ｃ）配列番号：２４のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ３、（ｄ）配列番号：１９のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ１、（ｅ）配列番号：２０のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ２、及び（ｆ）配列番号：２１のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ３を含む抗体を含む抗体−薬物複合体を提供する。
上記実施形態のいずれにおいても、抗体−薬物複合体の抗ＨＥＲ２抗体は、ヒト化されている。一実施形態では、抗体−薬物複合体の抗ＨＥＲ２抗体は、上記実施形態のいずれかにおけるようなＨＶＲを含み、ヒトアクセプターフレームワーク、例えば、ヒト免疫グロブリンフレームワークまたはヒトコンセンサスフレームワークをさらに含む。
別の態様では、抗体−薬物複合体の抗ＨＥＲ２抗体は、配列番号：１８のアミノ酸配列と少なくとも９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、または１００％の配列同一性を有する重鎖可変ドメイン（ＶＨ）配列を含む。特定の実施形態では、配列番号：１８のアミノ酸配列と少なくとも９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、または９９％の同一性を有するＶＨ配列は、参照配列と比較して、置換（例えば、保存的置換）、挿入、または欠失を含有するが、その配列を含む抗ＨＥＲ２抗体は、ＨＥＲ２に結合する能力を保持する。特定の実施形態では、合計で１〜１０個のアミノ酸が、配列番号：１８において置換、挿入及び／または欠失されている。特定の実施形態では、合計で１〜５個のアミノ酸が、配列番号：１８において置換、挿入及び／または欠失されている。特定の実施形態では、置換、挿入、または欠失は、ＨＶＲの外側の領域で（すなわち、ＦＲで）生じる。場合により、抗ＨＥＲ２抗体は、配列番号：１８のＶＨ配列を含み、その配列の翻訳後修飾を含む。特定の実施形態では、ＶＨは、（ａ）配列番号：２２のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ１、（ｂ）配列番号：２３のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ２、及び（ｃ）配列番号：２４のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ３から選択される１つ、２つ、または３つのＨＶＲを含む。
別の態様では、抗体−薬物複合体の抗ＨＥＲ２抗体が提供され、この抗体は、配列番号：１７のアミノ酸配列と少なくとも９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、または１００％の配列同一性を有する軽鎖可変ドメイン（ＶＬ）を含む。特定の実施形態では、配列番号：１７のアミノ酸配列と少なくとも９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、または９９％の同一性を有するＶＬ配列は、参照配列と比較して、置換（例えば、保存的置換）、挿入、または欠失を含有するが、その配列を含む抗ＨＥＲ２抗体は、ＨＥＲ２に結合する能力を保持する。特定の実施形態では、合計で１〜１０個のアミノ酸が、配列番号：１７において置換、挿入及び／または欠失されている。特定の実施形態では、合計で１〜５個のアミノ酸が、配列番号：１７において置換、挿入及び／または欠失されている。特定の実施形態では、置換、挿入、または欠失は、ＨＶＲの外側の領域で（すなわち、ＦＲで）生じる。場合により、抗ＨＥＲ２抗体は、配列番号：１７のＶＬ配列を含み、その配列の翻訳後修飾を含む。特定の実施形態では、ＶＬは、（ａ）配列番号：１９のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ１、（ｂ）配列番号：２０のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ２、及び（ｃ）配列番号：２１のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ３から選択される１つ、２つ、または３つのＨＶＲを含む。
別の態様では、抗ＨＥＲ２抗体を含む抗体−薬物複合体が提供され、この抗体は、上で提供される実施形態のいずれかにおけるようなＶＨ、及び上で提供される実施形態のいずれかにおけるようなＶＬを含む。
一実施形態では、抗体を含む抗体−薬物複合体が提供され、抗体は、それぞれ配列番号：１８及び配列番号：１７のＶＨ及びＶＬ配列を含み、それらの配列の翻訳後修飾を含む。
一実施形態では、抗体を含む抗体−薬物複合体が提供され、抗体は、配列番号：３０のヒト化７Ｃ２．ｖ２．２．ＬＡ（ｈｕ７Ｃ２）Ｋ１４９Ｃカッパ軽鎖配列を含む。
一実施形態では、抗体を含む抗体−薬物複合体が提供され、抗体は、配列番号：３１のＨｕ７Ｃ２ Ａ１１８Ｃ ＩｇＧ１重鎖配列を含む。
さらなる態様では、本明細書で提供される抗ＨＥＲ２抗体と同じエピトープに結合する抗体を含む抗体−薬物複合体が、本明細書で提供される。例えば、特定の実施形態では、それぞれ配列番号：１８のＶＨ配列及び配列番号：１７のＶＬ配列を含む抗ＨＥＲ２抗体と同じエピトープに結合する抗体を含む免疫複合体が、提供される。
本発明のさらなる態様では、上記実施形態のいずれかによる抗体−薬物複合体の抗ＨＥＲ２抗体は、ヒト抗体を含む、モノクローナル抗体である。一実施形態では、免疫複合体の抗ＨＥＲ２抗体は、抗体断片、例えば、Ｆｖ、Ｆａｂ、Ｆａｂ’、ｓｃＦｖ、ダイアボディ、またはＦ（ａｂ’）２断片である。別の実施形態では、免疫複合体は、実質的に全長抗体、例えば、本明細書で定義されるようなＩｇＧ１抗体、ＩｇＧ２ａ抗体またはその他の抗体クラスもしくはアイソタイプである抗体を含む。
ヒト化７Ｃ２抗ＨＥＲ２抗体配列表

抗ＭＵＣ１６抗体
特定の実施形態では、表３Ａ及び表３ＢのＡＤＣは、抗ＭＵＣ１６抗体を含む。
いくつかの実施形態では、本発明は、（ａ）配列番号：３５のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ１、（ｂ）配列番号：３６のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ２、（ｃ）配列番号：３７のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ３、（ｄ）配列番号：３２のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ１、（ｅ）配列番号：３３のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ２、及び（ｆ）配列番号：３４のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ３から選択される少なくとも１つ、２つ、３つ、４つ、５つ、または６つのＨＶＲを含む抗ＭＵＣ１６抗体を含む抗体−薬物複合体を提供する。
一態様では、本発明は、（ａ）配列番号：３５のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ１、（ｂ）配列番号：３６のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ２、（ｃ）配列番号：３７のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ３から選択される、少なくとも１つ、少なくとも２つ、または３つ全てのＶＨ ＨＶＲ配列を含む抗体を含む抗体−薬物複合体を提供する。さらなる実施形態では、抗体は、（ａ）配列番号：３５のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ１、（ｂ）配列番号：３６のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ２、（ｃ）配列番号：３７のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ３を含む。
別の態様では、本発明は、（ａ）配列番号：３２のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ１、（ｂ）配列番号：３３のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ２、及び（ｃ）配列番号：３４のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ３から選択される、少なくとも１つ、少なくとも２つ、または３つ全てのＶＬ ＨＶＲ配列を含む抗体を含む抗体−薬物複合体を提供する。一実施形態では、抗体は、（ａ）配列番号：３２のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ１、（ｂ）配列番号：３３のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ２、及び（ｃ）配列番号：３４のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ３を含む。
別の態様では、本発明の抗体−薬物複合体は、（ａ）（ｉ）配列番号：３５のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ１、（ｉｉ）配列番号：３６のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ２、及び（ｉｉｉ）配列番号：３７のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ３から選択される、少なくとも１つ、少なくとも２つ、または３つ全てのＶＨ ＨＶＲ配列を含むＶＨドメイン、ならびに（ｂ）（ｉ）配列番号：３２のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ１、（ｉｉ）配列番号：３３のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ２、及び（ｃ）配列番号：３４のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ３から選択される、少なくとも１つ、少なくとも２つ、または３つ全てのＶＬ ＨＶＲ配列を含むＶＬドメインを含む抗体を含む。
別の態様では、本発明は、（ａ）配列番号：３５のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ１、（ｂ）配列番号：３６のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ２、（ｃ）配列番号：３７のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ３、（ｄ）配列番号：３２のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ１、（ｅ）配列番号：３３のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ２、及び（ｆ）配列番号：３４のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ３を含む抗体を含む抗体−薬物複合体を提供する。
上記実施形態のいずれにおいても、抗体−薬物複合体の抗ＭＵＣ１６抗体は、ヒト化されている。一実施形態では、抗ＭＵＣ１６抗体は、上記実施形態のいずれかにおけるようなＨＶＲを含み、ヒトアクセプターフレームワーク、例えば、ヒト免疫グロブリンフレームワークまたはヒトコンセンサスフレームワークをさらに含む。
別の態様では、抗体−薬物複合体の抗ＭＵＣ１６抗体は、配列番号：３９のアミノ酸配列と少なくとも９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、または１００％の配列同一性を有する重鎖可変ドメイン（ＶＨ）配列を含む。特定の実施形態では、配列番号：３９のアミノ酸配列と少なくとも９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、または９９％の同一性を有するＶＨ配列は、参照配列と比較して、置換（例えば、保存的置換）、挿入、または欠失を含有するが、その配列を含む抗ＭＵＣ１６抗体は、ＭＵＣ１６に結合する能力を保持する。特定の実施形態では、合計で１〜１０個のアミノ酸が、配列番号：３９において置換、挿入及び／または欠失されている。特定の実施形態では、合計で１〜５個のアミノ酸が、配列番号：３９において置換、挿入及び／または欠失されている。特定の実施形態では、置換、挿入、または欠失は、ＨＶＲの外側の領域で（すなわち、ＦＲで）生じる。場合により、抗ＭＵＣ１６抗体は、配列番号：３９のＶＨ配列を含み、その配列の翻訳後修飾を含む。特定の実施形態では、ＶＨは、（ａ）配列番号：３５のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ１、（ｂ）配列番号：３６のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ２、及び（ｃ）配列番号：３７のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ３から選択される１つ、２つ、または３つのＨＶＲを含む。
別の態様では、抗体−薬物複合体の抗ＭＵＣ１６抗体が提供され、この抗体は、配列番号：３８のアミノ酸配列と少なくとも９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、または１００％の配列同一性を有する軽鎖可変ドメイン（ＶＬ）を含む。特定の実施形態では、配列番号：３８のアミノ酸配列と少なくとも９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、または９９％の同一性を有するＶＬ配列は、参照配列と比較して、置換（例えば、保存的置換）、挿入、または欠失を含有するが、その配列を含む抗ＭＵＣ１６抗体は、ＭＵＣ１６に結合する能力を保持する。特定の実施形態では、合計で１〜１０個のアミノ酸が、配列番号：３８において置換、挿入及び／または欠失されている。特定の実施形態では、合計で１〜５個のアミノ酸が、配列番号：３８において置換、挿入及び／または欠失されている。特定の実施形態では、置換、挿入、または欠失は、ＨＶＲの外側の領域で（すなわち、ＦＲで）生じる。場合により、抗ＭＵＣ１６抗体は、配列番号：３８のＶＬ配列を含み、その配列の翻訳後修飾を含む。特定の実施形態では、ＶＬは、（ａ）配列番号：３２のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ１、（ｂ）配列番号：３３のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ２、及び（ｃ）配列番号：３４のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ３から選択される１つ、２つ、または３つのＨＶＲを含む。
別の態様では、抗ＭＵＣ１６抗体を含む抗体−薬物複合体が提供され、この抗体は、上で提供される実施形態のいずれかにおけるようなＶＨ、及び上で提供される実施形態のいずれかにおけるようなＶＬを含む。
一実施形態では、抗体−薬物複合体が提供され、抗体は、それぞれ配列番号：３９及び配列番号：３８のＶＨ及びＶＬ配列を含み、それらの配列の翻訳後修飾を含む。
さらなる態様では、本明細書で提供される抗ＭＵＣ１６抗体と同じエピトープに結合する抗体を含む抗体−薬物複合体が、本明細書で提供される。例えば、特定の実施形態では、それぞれ配列番号：３９のＶＨ配列及び配列番号：３８のＶＬ配列を含む抗ＭＵＣ１６抗体と同じエピトープに結合する抗体を含む免疫複合体が、提供される。
本発明のさらなる態様では、上記実施形態のいずれかによる抗体−薬物複合体の抗ＭＵＣ１６抗体は、ヒト抗体を含む、モノクローナル抗体である。一実施形態では、抗体−薬物複合体の抗ＭＵＣ１６抗体は、抗体断片、例えば、Ｆｖ、Ｆａｂ、Ｆａｂ’、ｓｃＦｖ、ダイアボディ、またはＦ（ａｂ’）２断片である。別の実施形態では、抗体は、実質的に全長抗体、例えば、本明細書で定義されるようなＩｇＧ１抗体、ＩｇＧ２ａ抗体またはその他の抗体クラスもしくはアイソタイプである。
ＭＵＣ１６抗体配列表

抗ＳＴＥＡＰ−１抗体
特定の実施形態では、表３Ａ及び表３ＢのＡＤＣは、抗ＳＴＥＡＰ−１抗体を含む。
いくつかの実施形態では、本発明は、（ａ）配列番号：４０のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ１、（ｂ）配列番号：４１のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ２、（ｃ）配列番号：４２のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ３、（ｄ）配列番号：４３のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ１、（ｅ）配列番号：４４のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ２及び（ｆ）配列番号：４５のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ３から選択される少なくとも１つ、２つ、３つ、４つ、５つ、または６つのＨＶＲを含む抗ＳＴＥＡＰ−１抗体を含む抗体−薬物複合体を提供する。
一態様では、本発明は、（ａ）配列番号：４０のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ１、（ｂ）配列番号：４１のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ２、（ｃ）配列番号：４２のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ３から選択される、少なくとも１つ、少なくとも２つ、または３つ全てのＶＨ ＨＶＲ配列を含む抗体を含む抗体−薬物複合体を提供する。さらなる実施形態では、抗体は、（ａ）配列番号：４０のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ１、（ｂ）配列番号：４１のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ２、（ｃ）配列番号：４２のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ３を含む。
別の態様では、本発明は、（ａ）配列番号：４３のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ１、（ｂ）配列番号：４４のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ２、及び（ｃ）配列番号：４５のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ３から選択される、少なくとも１つ、少なくとも２つ、または３つ全てのＶＬ ＨＶＲ配列を含む抗体を含む抗体−薬物複合体を提供する。一実施形態では、抗体は、（ａ）配列番号：４３のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ１、（ｂ）配列番号：４４のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ２、及び（ｃ）配列番号：４５のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ３を含む。
別の態様では、本発明の抗体−薬物複合体は、（ａ）（ｉ）配列番号：４０のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ１、（ｉｉ）配列番号：４１のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ２、及び（ｉｉｉ）配列番号：４２のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ３から選択される、少なくとも１つ、少なくとも２つ、または３つ全てのＶＨ ＨＶＲ配列を含むＶＨドメイン、ならびに（ｂ）（ｉ）配列番号：４３のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ１、（ｉｉ）配列番号：４４のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ２、及び（ｃ）配列番号：４５のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ３から選択される、少なくとも１つ、少なくとも２つ、または３つ全てのＶＬ ＨＶＲ配列を含むＶＬドメインを含む抗体を含む。
別の態様では、本発明は、（ａ）配列番号：４０のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ１、（ｂ）配列番号：４１のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ２、（ｃ）配列番号：４２のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ３、（ｄ）配列番号：４３のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ１、（ｅ）配列番号：４４のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ２、及び（ｆ）配列番号：４５のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ３を含む抗体を含む抗体−薬物複合体を提供する。
上記実施形態のいずれにおいても、抗体−薬物複合体の抗ＳＴＥＡＰ−１抗体は、ヒト化されている。一実施形態では、抗ＳＴＥＡＰ−１抗体は、上記実施形態のいずれかにおけるようなＨＶＲを含み、ヒトアクセプターフレームワーク、例えば、ヒト免疫グロブリンフレームワークまたはヒトコンセンサスフレームワークをさらに含む。
別の態様では、抗体−薬物複合体の抗ＳＴＥＡＰ−１抗体は、配列番号：４６のアミノ酸配列と少なくとも９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、または１００％の配列同一性を有する重鎖可変ドメイン（ＶＨ）配列を含む。特定の実施形態では、配列番号：４６のアミノ酸配列と少なくとも９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、または９９％の同一性を有するＶＨ配列は、参照配列と比較して、置換（例えば、保存的置換）、挿入、または欠失を含有するが、その配列を含む抗ＳＴＥＡＰ−１抗体は、ＳＴＥＡＰ−１に結合する能力を保持する。特定の実施形態では、合計で１〜１０個のアミノ酸が、配列番号：４６において置換、挿入及び／または欠失されている。特定の実施形態では、合計で１〜５個のアミノ酸が、配列番号：４６において置換、挿入及び／または欠失されている。特定の実施形態では、置換、挿入、または欠失は、ＨＶＲの外側の領域で（すなわち、ＦＲで）生じる。場合により、抗ＳＴＥＡＰ−１抗体は、配列番号：４６のＶＨ配列を含み、その配列の翻訳後修飾を含む。特定の実施形態では、ＶＨは、（ａ）配列番号：４０のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ１、（ｂ）配列番号：４１のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ２、及び（ｃ）配列番号：４２のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ３から選択される１つ、２つ、または３つのＨＶＲを含む。
別の態様では、抗体−薬物複合体の抗ＳＴＥＡＰ−１抗体が提供され、この抗体は、配列番号：４７のアミノ酸配列と少なくとも９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、または１００％の配列同一性を有する軽鎖可変ドメイン（ＶＬ）を含む。特定の実施形態では、配列番号：４７のアミノ酸配列と少なくとも９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、または９９％の同一性を有するＶＬ配列は、参照配列と比較して、置換（例えば、保存的置換）、挿入、または欠失を含有するが、その配列を含む抗ＳＴＥＡＰ−１抗体は、ＳＴＥＡＰ−１に結合する能力を保持する。特定の実施形態では、合計で１〜１０個のアミノ酸が、配列番号：４７において置換、挿入及び／または欠失されている。特定の実施形態では、合計で１〜５個のアミノ酸が、配列番号：４７において置換、挿入及び／または欠失されている。特定の実施形態では、置換、挿入、または欠失は、ＨＶＲの外側の領域で（すなわち、ＦＲで）生じる。場合により、抗ＳＴＥＡＰ−１抗体は、配列番号：４７のＶＬ配列を含み、その配列の翻訳後修飾を含む。特定の実施形態では、ＶＬは、（ａ）配列番号：４３のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ１、（ｂ）配列番号：４４のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ２、及び（ｃ）配列番号：４５のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ３から選択される１つ、２つ、または３つのＨＶＲを含む。
別の態様では、抗ＳＴＥＡＰ−１抗体を含む抗体−薬物複合体が提供され、この抗体は、上で提供される実施形態のいずれかにおけるようなＶＨ、及び上で提供される実施形態のいずれかにおけるようなＶＬを含む。
一実施形態では、抗体−薬物複合体が提供され、抗体は、それぞれ配列番号：４６及び配列番号：４７のＶＨ及びＶＬ配列を含み、それらの配列の翻訳後修飾を含む。
さらなる態様では、本明細書で提供される抗ＳＴＥＡＰ−１抗体と同じエピトープに結合する抗体を含む抗体−薬物複合体が、本明細書で提供される。例えば、特定の実施形態では、それぞれ配列番号：４６のＶＨ配列及び配列番号：４７のＶＬ配列を含む抗ＳＴＥＡＰ−１抗体と同じエピトープに結合する抗体を含む免疫複合体が、提供される。
本発明のさらなる態様では、上記実施形態のいずれかによる抗体−薬物複合体の抗ＳＴＥＡＰ−１抗体は、ヒト抗体を含む、モノクローナル抗体である。一実施形態では、抗体−薬物複合体の抗ＳＴＥＡＰ−１抗体は、抗体断片、例えば、Ｆｖ、Ｆａｂ、Ｆａｂ’、ｓｃＦｖ、ダイアボディ、またはＦ（ａｂ’）２断片である。別の実施形態では、抗体は、実質的に全長抗体、例えば、本明細書で定義されるようなＩｇＧ１抗体、ＩｇＧ２ａ抗体またはその他の抗体クラスもしくはアイソタイプである。
ＳＴＥＡＰ抗体配列表

抗ＮａＰｉ２ｂ抗体
特定の実施形態では、表３Ａ及び表３ＢのＡＤＣは、抗ＮａＰｉ２ｂ抗体を含む。
いくつかの実施形態では、本発明は、（ａ）配列番号：４８のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ１、（ｂ）配列番号：４９のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ２、（ｃ）配列番号：５０のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ３、（ｄ）配列番号：５１のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ１、（ｅ）配列番号：５２のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ２及び（ｆ）配列番号：５３のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ３から選択される少なくとも１つ、２つ、３つ、４つ、５つ、または６つのＨＶＲを含む抗ＮａＰｉ２ｂ抗体を含む抗体−薬物複合体を提供する。
一態様では、本発明は、（ａ）配列番号：４８のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ１、（ｂ）配列番号：４９のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ２、（ｃ）配列番号：５０のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ３から選択される、少なくとも１つ、少なくとも２つ、または３つ全てのＶＨ ＨＶＲ配列を含む抗体を含む抗体−薬物複合体を提供する。さらなる実施形態では、抗体は、（ａ）配列番号：４８のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ１、（ｂ）配列番号：４９のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ２、（ｃ）配列番号：５０のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ３を含む。
別の態様では、本発明は、（ａ）配列番号：５１のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ１、（ｂ）配列番号：５２のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ２、及び（ｃ）配列番号：５３のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ３から選択される、少なくとも１つ、少なくとも２つ、または３つ全てのＶＬ ＨＶＲ配列を含む抗体を含む抗体−薬物複合体を提供する。一実施形態では、抗体は、（ａ）配列番号：５１のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ１、（ｂ）配列番号：５２のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ２、及び（ｃ）配列番号：５３のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ３を含む。
別の態様では、本発明の抗体−薬物複合体は、（ａ）（ｉ）配列番号：４８のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ１、（ｉｉ）配列番号：４９のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ２、及び（ｉｉｉ）配列番号：５０のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ３から選択される、少なくとも１つ、少なくとも２つ、または３つ全てのＶＨ ＨＶＲ配列を含むＶＨドメイン、ならびに（ｂ）（ｉ）配列番号：５１のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ１、（ｉｉ）配列番号：５２のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ２、及び（ｃ）配列番号：５３のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ３から選択される、少なくとも１つ、少なくとも２つ、または３つ全てのＶＬ ＨＶＲ配列を含むＶＬドメインを含む抗体を含む。
別の態様では、本発明は、（ａ）配列番号：４８のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ１、（ｂ）配列番号：４９のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ２、（ｃ）配列番号：５０のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ３、（ｄ）配列番号：５１のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ１、（ｅ）配列番号：５２のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ２、及び（ｆ）配列番号：５３のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ３を含む抗体を含む抗体−薬物複合体を提供する。
上記実施形態のいずれにおいても、抗体−薬物複合体の抗ＮａＰｉ２ｂ抗体は、ヒト化されている。一実施形態では、抗ＮａＰｉ２ｂ抗体は、上記実施形態のいずれかにおけるようなＨＶＲを含み、ヒトアクセプターフレームワーク、例えば、ヒト免疫グロブリンフレームワークまたはヒトコンセンサスフレームワークをさらに含む。
別の態様では、抗体−薬物複合体の抗ＮａＰｉ２ｂ抗体は、配列番号：５４のアミノ酸配列と少なくとも９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、または１００％の配列同一性を有する重鎖可変ドメイン（ＶＨ）配列を含む。特定の実施形態では、配列番号：５４のアミノ酸配列と少なくとも９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、または９９％の同一性を有するＶＨ配列は、参照配列と比較して、置換（例えば、保存的置換）、挿入、または欠失を含有するが、その配列を含む抗ＮａＰｉ２ｂ抗体は、ＮａＰｉ２ｂに結合する能力を保持する。特定の実施形態では、合計で１〜１０個のアミノ酸が、配列番号：５４において置換、挿入及び／または欠失されている。特定の実施形態では、合計で１〜５個のアミノ酸が、配列番号：５４において置換、挿入及び／または欠失されている。特定の実施形態では、置換、挿入、または欠失は、ＨＶＲの外側の領域で（すなわち、ＦＲで）生じる。場合により、抗ＮａＰｉ２ｂ抗体は、配列番号：５４のＶＨ配列を含み、その配列の翻訳後修飾を含む。特定の実施形態では、ＶＨは、（ａ）配列番号：４８のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ１、（ｂ）配列番号：４９のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ２、及び（ｃ）配列番号：５０のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ３から選択される１つ、２つ、または３つのＨＶＲを含む。
別の態様では、抗体−薬物複合体の抗ＮａＰｉ２ｂ抗体が提供され、この抗体は、配列番号：５５のアミノ酸配列と少なくとも９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、または１００％の配列同一性を有する軽鎖可変ドメイン（ＶＬ）を含む。特定の実施形態では、配列番号：５５のアミノ酸配列と少なくとも９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、または９９％の同一性を有するＶＬ配列は、参照配列と比較して、置換（例えば、保存的置換）、挿入、または欠失を含有するが、その配列を含む抗ＮａＰｉ２ｂ抗体は、ＮａＰｉ２ｂに結合する能力を保持する。特定の実施形態では、合計で１〜１０個のアミノ酸が、配列番号：５５において置換、挿入及び／または欠失されている。特定の実施形態では、合計で１〜５個のアミノ酸が、配列番号：５５において置換、挿入及び／または欠失されている。特定の実施形態では、置換、挿入、または欠失は、ＨＶＲの外側の領域で（すなわち、ＦＲで）生じる。場合により、抗ＮａＰｉ２ｂ抗体は、配列番号：５５のＶＬ配列を含み、その配列の翻訳後修飾を含む。特定の実施形態では、ＶＬは、（ａ）配列番号：５１のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ１、（ｂ）配列番号：５２のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ２、及び（ｃ）配列番号：５３のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ３から選択される１つ、２つ、または３つのＨＶＲを含む。
別の態様では、抗ＮａＰｉ２ｂ抗体を含む抗体−薬物複合体が提供され、この抗体は、上で提供される実施形態のいずれかにおけるようなＶＨ、及び上で提供される実施形態のいずれかにおけるようなＶＬを含む。
一実施形態では、抗体−薬物複合体が提供され、抗体は、それぞれ配列番号：５４及び配列番号：５５のＶＨ及びＶＬ配列を含み、それらの配列の翻訳後修飾を含む。
さらなる態様では、本明細書で提供される抗ＮａＰｉ２ｂ抗体と同じエピトープに結合する抗体を含む抗体−薬物複合体が、本明細書で提供される。例えば、特定の実施形態では、それぞれ配列番号：５４のＶＨ配列及び配列番号：５５のＶＬ配列を含む抗ＮａＰｉ２ｂ抗体と同じエピトープに結合する抗体を含む免疫複合体が、提供される。
本発明のさらなる態様では、上記実施形態のいずれかによる抗体−薬物複合体の抗ＮａＰｉ２ｂ抗体は、ヒト抗体を含む、モノクローナル抗体である。一実施形態では、抗体−薬物複合体の抗ＮａＰｉ２ｂ抗体は、抗体断片、例えば、Ｆｖ、Ｆａｂ、Ｆａｂ’、ｓｃＦｖ、ダイアボディ、またはＦ（ａｂ’）２断片である。別の実施形態では、抗体は、実質的に全長抗体、例えば、本明細書で定義されるようなＩｇＧ１抗体、ＩｇＧ２ａ抗体またはその他の抗体クラスもしくはアイソタイプである。
ＮａＰｉ２ｂ抗体配列表

抗ＣＤ７９ｂ抗体
特定の実施形態では、表３Ａ及び表３ＢのＡＤＣは、抗ＣＤ７９ｂ抗体を含む。
いくつかの実施形態では、本発明は、（ａ）配列番号：５８のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ１、（ｂ）配列番号：５９のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ２、（ｃ）配列番号：６０のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ３、（ｄ）配列番号：６１のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ１、（ｅ）配列番号：６２のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ２、及び（ｆ）配列番号：６３のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ３から選択される少なくとも１つ、２つ、３つ、４つ、５つ、または６つのＨＶＲを含む抗ＣＤ７９ｂ抗体を含む抗体−薬物複合体を提供する。
一態様では、本発明は、（ａ）配列番号：５８のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ１、（ｂ）配列番号：５９のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ２、及び（ｃ）配列番号：６０のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ３から選択される、少なくとも１つ、少なくとも２つ、または３つ全てのＶＨ ＨＶＲ配列を含む抗体を含む抗体−薬物複合体を提供する。さらなる実施形態では、抗体は、（ａ）配列番号：５８のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ１、（ｂ）配列番号：５９のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ２、及び（ｃ）配列番号：６０のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ３を含む。
別の態様では、本発明は、（ａ）配列番号：６１のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ１、（ｂ）配列番号：６２のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ２、及び（ｃ）配列番号：６３のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ３から選択される、少なくとも１つ、少なくとも２つ、または３つ全てのＶＬ ＨＶＲ配列を含む抗体を含む抗体−薬物複合体を提供する。一実施形態では、抗体は、（ａ）配列番号：６１のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ１、（ｂ）配列番号：６２のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ２、及び（ｃ）配列番号：６３のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ３を含む。
別の態様では、本発明の抗体−薬物複合体は、（ａ）（ｉ）配列番号：５８のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ１、（ｉｉ）配列番号：５９のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ２、及び（ｉｉｉ）配列番号：６０のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ３から選択される、少なくとも１つ、少なくとも２つ、または３つ全てのＶＨ ＨＶＲ配列を含むＶＨドメイン、ならびに（ｂ）（ｉ）配列番号：６１のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ１、（ｉｉ）配列番号：６２のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ２、及び（ｃ）配列番号：６３のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ３から選択される、少なくとも１つ、少なくとも２つ、または３つ全てのＶＬ ＨＶＲ配列を含むＶＬドメインを含む抗体を含む。
別の態様では、本発明は、（ａ）配列番号：５８のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ１、（ｂ）配列番号：５９のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ２、（ｃ）配列番号：６０のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ３、（ｄ）配列番号：６１のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ１、（ｅ）配列番号：６２のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ２、及び（ｆ）配列番号：６３のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ３を含む抗体を含む抗体−薬物複合体を提供する。
上記実施形態のいずれにおいても、抗体−薬物複合体の抗ＣＤ７９ｂ抗体は、ヒト化されている。一実施形態では、抗ＣＤ７９ｂ抗体は、上記実施形態のいずれかにおけるようなＨＶＲを含み、ヒトアクセプターフレームワーク、例えば、ヒト免疫グロブリンフレームワークまたはヒトコンセンサスフレームワークをさらに含む。
別の態様では、抗体−薬物複合体の抗ＣＤ７９ｂ抗体は、配列番号：５６のアミノ酸配列と少なくとも９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、または１００％の配列同一性を有する重鎖可変ドメイン（ＶＨ）配列を含む。特定の実施形態では、配列番号：５６のアミノ酸配列と少なくとも９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、または９９％の同一性を有するＶＨ配列は、参照配列と比較して、置換（例えば、保存的置換）、挿入、または欠失を含有するが、その配列を含む抗ＣＤ７９ｂ抗体は、ＣＤ７９ｂに結合する能力を保持する。特定の実施形態では、合計で１〜１０個のアミノ酸が、配列番号：５６において置換、挿入及び／または欠失されている。特定の実施形態では、合計で１〜５個のアミノ酸が、配列番号：５６において置換、挿入及び／または欠失されている。特定の実施形態では、置換、挿入、または欠失は、ＨＶＲの外側の領域で（すなわち、ＦＲで）生じる。場合により、抗ＣＤ７９ｂ抗体は、配列番号：８のＶＨ配列を含み、その配列の翻訳後修飾を含む。特定の実施形態では、ＶＨは、（ａ）配列番号：５８のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ１、（ｂ）配列番号：５９のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ２、及び（ｃ）配列番号：６０のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ３から選択される１つ、２つ、または３つのＨＶＲを含む。
別の態様では、抗体−薬物複合体の抗ＣＤ７９ｂ抗体が提供され、この抗体は、配列番号：５７のアミノ酸配列と少なくとも９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、または１００％の配列同一性を有する軽鎖可変ドメイン（ＶＬ）を含む。特定の実施形態では、配列番号：５７のアミノ酸配列と少なくとも９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、または９９％の同一性を有するＶＬ配列は、参照配列と比較して、置換（例えば、保存的置換）、挿入、または欠失を含有するが、その配列を含む抗Ｌｙ６Ｅ抗体は、ＣＤ７９ｂに結合する能力を保持する。特定の実施形態では、合計で１〜１０個のアミノ酸が、配列番号：５７において置換、挿入及び／または欠失されている。特定の実施形態では、合計で１〜５個のアミノ酸が、配列番号：５７において置換、挿入及び／または欠失されている。特定の実施形態では、置換、挿入、または欠失は、ＨＶＲの外側の領域で（すなわち、ＦＲで）生じる。場合により、抗ＣＤ７９ｂ抗体は、配列番号：５７のＶＬ配列を含み、その配列の翻訳後修飾を含む。特定の実施形態では、ＶＬは、（ａ）配列番号：６１のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ１、（ｂ）配列番号：６２のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ２、及び（ｃ）配列番号：６３のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ３から選択される１つ、２つ、または３つのＨＶＲを含む。
別の態様では、抗ＣＤ７９ｂ抗体を含む抗体−薬物複合体が提供され、この抗体は、上で提供される実施形態のいずれかにおけるようなＶＨ、及び上で提供される実施形態のいずれかにおけるようなＶＬを含む。
一実施形態では、抗体−薬物複合体が提供され、抗体は、それぞれ配列番号：５６及び配列番号：５７のＶＨ及びＶＬ配列を含み、それらの配列の翻訳後修飾を含む。
さらなる態様では、本明細書で提供される抗ＣＤ７９ｂ抗体と同じエピトープに結合する抗体を含む抗体−薬物複合体が、本明細書で提供される。例えば、特定の実施形態では、それぞれ配列番号：５６のＶＨ配列及び配列番号：５７のＶＬ配列を含む抗ＣＤ７９ｂ抗体と同じエピトープに結合する抗体を含む免疫複合体が、提供される。
本発明のさらなる態様では、上記実施形態のいずれかによる抗体−薬物複合体の抗ＣＤ７９ｂ抗体は、ヒト抗体を含む、モノクローナル抗体である。一実施形態では、抗体−薬物複合体の抗ＣＤ７９ｂ抗体は、抗体断片、例えば、Ｆｖ、Ｆａｂ、Ｆａｂ’、ｓｃＦｖ、ダイアボディ、またはＦ（ａｂ’）２断片である。別の実施形態では、抗体は、実質的に全長抗体、例えば、本明細書で定義されるようなＩｇＧ１抗体、ＩｇＧ２ａ抗体またはその他の抗体クラスもしくはアイソタイプである。
ＣＤ７９ｂ抗体配列表

抗体親和性
特定の実施形態では、本明細書で提供される抗体は、≦１μＭ、≦１００ｎＭ、≦５０ｎＭ、≦１０ｎＭ、≦５ｎＭ、≦１ｎＭ、≦０．１ｎＭ、≦０．０１ｎＭ、または≦０．００１ｎＭの解離定数（Ｋｄ）を有し、場合により、≧１０−１３Ｍ（例えば、１０−８Ｍ以下、例えば、１０−８Ｍ〜１０−１３Ｍ、例えば、１０−９Ｍ〜１０−１３Ｍ）である。
一実施形態では、Ｋｄは、以下のアッセイによって記載されるような、対象抗体のＦａｂ型及びその抗原を用いて実施される、放射性標識抗原結合アッセイ（ＲＩＡ）によって測定される。抗原に対するＦａｂの溶液結合親和性は、非標識抗原の滴定系列の存在下において最小濃度の（１２５Ｉ）−標識抗原でＦａｂを平衡化し、次いで、抗Ｆａｂ抗体コーティングプレートで、結合した抗原を捕捉することによって測定される（例えば、Ｃｈｅｎ ｅｔ ａｌ．，Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．２９３：８６５−８８１（１９９９）を参照のこと）。アッセイ条件を確立するために、ＭＩＣＲＯＴＩＴＥＲ（登録商標）マルチウェルプレート（Ｔｈｅｒｍｏ Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ）を、５０ｍＭの炭酸ナトリウム（ｐＨ９．６）中で５μｇ／ｍｌの捕捉抗Ｆａｂ抗体（Ｃａｐｐｅｌ Ｌａｂｓ）を用いて一晩コーティングし、その後、２％（ｗ／ｖ）のウシ血清アルブミンを含むＰＢＳを用いて室温（およそ２３℃）で２〜５時間ブロックする。非吸着プレート（Ｎｕｎｃ番号２６９６２０）において、１００ｐＭまたは２６ｐＭの［１２５Ｉ］−抗原を、対象のＦａｂ段階希釈物（例えば、Ｐｒｅｓｔａ ｅｔ ａｌ．，Ｃａｎｃｅｒ Ｒｅｓ．５７：４５９３−４５９９（１９９７）における、抗ＶＥＧＦ抗体のＦａｂ−１２の評価と一致する）と混合する。次いで、対象のＦａｂを一晩インキュベートするが、インキュベーションは、確実に平衡状態に達するためにより長い時間（例えば、約６５時間）継続してよい。その後、混合物を、室温でのインキュベーション（例えば、１時間）のために捕捉プレートに移す。次いで溶液を除去し、プレートを、０．１％ポリソルベート２０（ＴＷＥＥＮ−２０（登録商標））を含むＰＢＳで８回洗浄する。プレートが乾燥したら、１５０μｌ／ウェルのシンチラント（ＭＩＣＲＯＳＣＩＮＴ−２０（商標）、Ｐａｃｋａｒｄ）を添加し、プレートをＴＯＰＣＯＵＮＴ（商標）ガンマカウンター（Ｐａｃｋａｒｄ）上で１０分間計数する。最大結合の２０％以下となる各Ｆａｂの濃度を、競合結合アッセイで使用するために選択する。
別の実施形態によれば、Ｋｄを、ＢＩＡＣＯＲＥ（登録商標）−２０００またはＢＩＡＣＯＲＥ（登録商標）−３０００（ＢＩＡｃｏｒｅ，Ｉｎｃ．、ピスカタウェイ、ニュージャージー州）を使用する表面プラズモン共鳴アッセイを使用して、２５℃で固定化抗原ＣＭ５チップを用いて、約１０応答単位（ＲＵ）で測定する。簡潔に述べると、カルボキシメチル化デキストランバイオセンサーチップ（ＣＭ５、ＢＩＡＣＯＲＥ，Ｉｎｃ．）を、供給業者の指示に従って、Ｎ−エチル−Ｎ’−（３−ジメチルアミノプロピル）−カルボジイミド塩酸塩（ＥＤＣ）及びＮ−ヒドロキシスクシンイミド（ＮＨＳ）で活性化する。抗原を、１０ｍＭの酢酸ナトリウム（ｐＨ４．８）で５μｇ／ｍｌ（約０．２μＭ）まで希釈した後、結合したタンパク質の応答単位（ＲＵ）がおよそ１０になるように５μｌ／分の流速で注入する。抗原の注入後、１Ｍのエタノールアミンを注入して未反応基をブロックする。速度論的測定のために、Ｆａｂの２倍段階希釈物（０．７８ｎＭ〜５００ｎＭ）を２５℃で、およそ２５μｌ／分の流速で０．０５％ポリソルベート２０（ＴＷＥＥＮ−２０（商標））界面活性剤を含むＰＢＳ（ＰＢＳＴ）に注入する。結合速度（ｋｏｎ）及び解離速度（ｋｏｆｆ）を、単純１対１ラングミュア結合モデル（ＢＩＡＣＯＲＥ（登録商標）評価ソフトウェアバージョン３．２）を使用して、結合及び解離センサーグラムを同時にフィッティングすることにより算出する。平衡解離定数（Ｋｄ）を、ｋｏｆｆ／ｋｏｎ比として算出する。例えば、Ｃｈｅｎ ｅｔ ａｌ．，Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．２９３：８６５−８８１（１９９９）を参照のこと。上記の表面プラズモン共鳴アッセイによる結合速度が１０６Ｍ−１ｓ−１を超える場合には、結合速度は、分光計、例えば、ストップフロー法を備えた分光光度計（Ａｖｉｖ Ｉｎｓｔｒｕｍｅｎｔｓ）または攪拌キュベットを備えた８０００シリーズＳＬＭ−ＡＭＩＮＣＯ（商標）分光光度計（ＴｈｅｒｍｏＳｐｅｃｔｒｏｎｉｃ）などで測定する場合、ＰＢＳ（ｐＨ７．２）中、２０ｎＭの抗抗原抗体（Ｆａｂ型）の蛍光発光強度（励起＝２９５ｎｍ、発光＝３４０ｎｍ、１６ｎｍ帯域幅）の増加または減少を、抗原の濃度を上げながら２５℃で測定する蛍光消光技術を使用することにより決定することができる。
抗体断片
特定の実施形態では、本明細書で提供される抗体は、抗体断片である。抗体断片としては、Ｆａｂ、Ｆａｂ’、Ｆａｂ’−ＳＨ、Ｆ（ａｂ’）２、Ｆｖ、及びｓｃＦｖ断片、ならびに以下に記載されるその他の断片が挙げられるが、これらに限定されない。特定の抗体断片の概説については、Ｈｕｄｓｏｎ ｅｔ ａｌ．Ｎａｔ．Ｍｅｄ．９：１２９−１３４（２００３）を参照のこと。ｓｃＦｖ断片の概説については、例えば、Ｐｌｕｃｋｔｈｕｎ，ｉｎ Ｔｈｅ Ｐｈａｒｍａｃｏｌｏｇｙ ｏｆ Ｍｏｎｏｃｌｏｎａｌ Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ，ｖｏｌ．１１３，Ｒｏｓｅｎｂｕｒｇ ａｎｄ Ｍｏｏｒｅ ｅｄｓ．，（Ｓｐｒｉｎｇｅｒ−Ｖｅｒｌａｇ，Ｎｅｗ Ｙｏｒｋ），ｐｐ．２６９−３１５（１９９４）を参照し、またＷＯ９３／１６１８５、ならびに米国特許第５，５７１，８９４号明細書及び第５，５８７，４５８号明細書も参照のこと。サルベージ受容体結合エピトープ残基を含み、増加したインビボ半減期を有するＦａｂ及びＦ（ａｂ’）２断片の考察については、米国特許第５，８６９，０４６号明細書を参照のこと。
ダイアボディは、二価または二重特異性の場合がある２つの抗原結合部位を有する抗体断片である。例えば、ＥＰ４０４，０９７、ＷＯ１９９３／０１１６１、Ｈｕｄｓｏｎ ｅｔ ａｌ．，Ｎａｔ．Ｍｅｄ．９：１２９−１３４（２００３）、及びＨｏｌｌｉｎｇｅｒ ｅｔ ａｌ．，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ ９０：６４４４−６４４８（１９９３）を参照のこと。トリアボディ及びテトラボディはまた、Ｈｕｄｓｏｎ ｅｔ ａｌ．，Ｎａｔ Ｍｅｄ．９：１２９−１３４（２００３）にも記載されている。
単一ドメイン抗体は、抗体の重鎖可変ドメインの全てもしくは一部または軽鎖可変ドメインの全てもしくは一部を含む抗体断片である。特定の実施形態では、単一ドメイン抗体は、ヒト単一ドメイン抗体である（Ｄｏｍａｎｔｉｓ，Ｉｎｃ．、ウォルサム、マサチューセッツ州、例えば、米国特許第６，２４８，５１６（Ｂ１）号明細書を参照のこと）。
抗体断片は様々な技術によって作製され得、これらは本明細書に記載されるような、インタクトな抗体のタンパク質分解消化、加えて組換え宿主細胞（例えば、Ｅ．ｃｏｌｉまたはファージ）による産生が挙げられるが、これらに限定されない。
キメラ抗体及びヒト化抗体
特定の実施形態では、本明細書で提供される抗体は、キメラ抗体である。ある種のキメラ抗体は、例えば、米国特許第４，８１６，５６７号明細書、及びＭｏｒｒｉｓｏｎ ｅｔ ａｌ．，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ，８１：６８５１−６８５５（１９８４）に記載されている。一例では、キメラ抗体は、非ヒト可変領域（例えば、マウス、ラット、ハムスター、ウサギ、または非ヒト霊長類、例えば、サルなどに由来する可変領域）及びヒト定常領域を含む。さらなる例では、キメラ抗体は、クラスまたはサブクラスが親抗体のものから変化している「クラススイッチ」抗体である。キメラ抗体は、それらの抗原結合断片を含む。
特定の実施形態では、キメラ抗体は、ヒト化抗体である。典型的には、非ヒト抗体は、親非ヒト抗体の特異性及び親和性を保持しながら、ヒトに対する免疫原性を減少させるようにヒト化される。一般に、ヒト化抗体は、ＨＶＲ、例えば、ＣＤＲ（またはそれらの一部）が非ヒト抗体に由来し、ＦＲ（またはそれらの一部）がヒト抗体配列に由来する１つ以上の可変ドメインを含む。ヒト化抗体はまた、場合によりヒト定常領域の少なくとも一部を含むことになる。いくつかの実施形態では、ヒト化抗体におけるいくつかのＦＲ残基は、非ヒト抗体（例えば、ＨＶＲ残基が由来する抗体）由来の対応する残基により置換され、例えば、抗体の特異性または親和性を回復または改善する。
ヒト化抗体及びそれらの作製方法は、例えば、Ａｌｍａｇｒｏ ａｎｄ Ｆｒａｎｓｓｏｎ，Ｆｒｏｎｔ．Ｂｉｏｓｃｉ．１３：１６１９−１６３３（２００８）で概説され、さらに例えば、Ｒｉｅｃｈｍａｎｎ ｅｔ ａｌ．，Ｎａｔｕｒｅ ３３２：３２３−３２９（１９８８）、Ｑｕｅｅｎ ｅｔ ａｌ．，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔ’ｌ Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ ８６：１００２９−１００３３（１９８９）、米国特許第５，８２１，３３７号明細書、第７，５２７，７９１号明細書、第６，９８２，３２１号明細書、及び第７，０８７，４０９号明細書、Ｋａｓｈｍｉｒｉ ｅｔ ａｌ．，Ｍｅｔｈｏｄｓ ３６：２５−３４（２００５）（ＳＤＲ（ａ−ＣＤＲ）移植について記載）、Ｐａｄｌａｎ，Ｍｏｌ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．２８：４８９−４９８（１９９１）（「表面再構成」について記載）、Ｄａｌｌ’Ａｃｑｕａ ｅｔ ａｌ．，Ｍｅｔｈｏｄｓ ３６：４３−６０（２００５）（「ＦＲシャッフリング」について記載）、ならびにＯｓｂｏｕｒｎ ｅｔ ａｌ．，Ｍｅｔｈｏｄｓ ３６：６１−６８（２００５）及びＫｌｉｍｋａ ｅｔ ａｌ．，Ｂｒ．Ｊ．Ｃａｎｃｅｒ，８３：２５２−２６０（２０００）（ＦＲシャッフリングに対する「誘導選択」手法について記載）に記載されている。
ヒト化に使用されてよいヒトフレームワーク領域としては、「ベストフィット」法（例えば、Ｓｉｍｓ ｅｔ ａｌ．Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１５１：２２９６（１９９３）を参照のこと）を使用して選択されるフレームワーク領域、軽鎖または重鎖可変領域の特定のサブグループにおけるヒト抗体のコンセンサス配列に由来するフレームワーク領域（例えば、Ｃａｒｔｅｒ ｅｔ ａｌ．Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ，８９：４２８５（１９９２）、及びＰｒｅｓｔａ ｅｔ ａｌ．Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．，１５１：２６２３（１９９３）を参照のこと）、ヒト成熟（体細胞変異）フレームワーク領域またはヒト生殖細胞系フレームワーク領域（例えば、Ａｌｍａｇｒｏ ａｎｄ Ｆｒａｎｓｓｏｎ，Ｆｒｏｎｔ．Ｂｉｏｓｃｉ．１３：１６１９−１６３３（２００８）を参照のこと）、ならびにＦＲライブラリーのスクリーニングから得られるフレームワーク領域（例えば、Ｂａｃａ ｅｔ ａｌ．，Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．２７２：１０６７８−１０６８４（１９９７）及びＲｏｓｏｋ ｅｔ ａｌ．，Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．２７１：２２６１１−２２６１８（１９９６）を参照のこと）が挙げられるが、これらに限定されない。
ヒト抗体
特定の実施形態では、本明細書で提供される抗体は、ヒト抗体である。ヒト抗体は、当該技術分野において既知の様々な技術を使用して産生され得る。ヒト抗体は、一般にｖａｎ Ｄｉｊｋ ａｎｄ ｖａｎ ｄｅ Ｗｉｎｋｅｌ，Ｃｕｒｒ．Ｏｐｉｎ．Ｐｈａｒｍａｃｏｌ．５：３６８−７４（２００１）及びＬｏｎｂｅｒｇ，Ｃｕｒｒ．Ｏｐｉｎ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．２０：４５０−４５９（２００８）に記載されている。
ヒト抗体は、抗原投与に応答して、インタクトなヒト抗体またはヒト可変領域を有するインタクトな抗体を産生するように改変されたトランスジェニック動物に免疫原を投与することにより調製されてよい。このような動物は典型的に、ヒト免疫グロブリン遺伝子座の全てまたは一部を含有し、これらは内因性免疫グロブリン遺伝子座を置き換える、または染色体外に存在する、もしくは動物の染色体にランダムに組み込まれる。このようなトランスジェニックマウスでは、内因性免疫グロブリン遺伝子座は一般に、不活性化されている。トランスジェニック動物からヒト抗体を得る方法の概説については、Ｌｏｎｂｅｒｇ，Ｎａｔ．Ｂｉｏｔｅｃｈ．２３：１１１７−１１２５（２００５）を参照のこと。また例えば、ＸＥＮＯＭＯＵＳＥ（商標）技術について記載している米国特許第６，０７５，１８１号明細書及び第６，１５０，５８４号明細書、ＨＵＭＡＢ（登録商標）技術について記載している米国特許第５，７７０，４２９号明細書、Ｋ−Ｍ ＭＯＵＳＥ（登録商標）技術について記載している米国特許第７，０４１，８７０号明細書、ならびにＶＥＬＯＣＩＭＯＵＳＥ（登録商標）技術について記載している米国特許出願公開第ＵＳ２００７／００６１９００号明細書も参照のこと）。このような動物によって生成されるインタクトな抗体由来のヒト可変領域は、例えば、異なるヒト定常領域と組み合わせることによって、さらに改変されてよい。
ヒト抗体は、ハイブリドーマベースの方法によっても作製され得る。ヒトモノクローナル抗体の産生のためのヒト骨髄腫及びマウス−ヒトヘテロ骨髄腫細胞株が、記載されている。（例えば、Ｋｏｚｂｏｒ Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．，１３３：３００１（１９８４）、Ｂｒｏｄｅｕｒ ｅｔ ａｌ．，Ｍｏｎｏｃｌｏｎａｌ Ａｎｔｉｂｏｄｙ Ｐｒｏｄｕｃｔｉｏｎ Ｔｅｃｈｎｉｑｕｅｓ ａｎｄ Ａｐｐｌｉｃａｔｉｏｎｓ，ｐｐ．５１−６３（Ｍａｒｃｅｌ Ｄｅｋｋｅｒ，Ｉｎｃ．，Ｎｅｗ Ｙｏｒｋ，１９８７）、及びＢｏｅｒｎｅｒ ｅｔ ａｌ．，Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．，１４７：８６（１９９１）を参照のこと。）ヒトＢ細胞ハイブリドーマ技術によって生成されるヒト抗体はまた、Ｌｉ ｅｔ ａｌ．，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ，１０３：３５５７−３５６２（２００６）に記載されている。さらなる方法としては、例えば、米国特許第７，１８９，８２６号明細書（ハイブリドーマ細胞株由来のモノクローナルヒトＩｇＭ抗体の産生について記載）及びＮｉ，Ｘｉａｎｄａｉ Ｍｉａｎｙｉｘｕｅ，２６（４）：２６５−２６８（２００６）（ヒト−ヒトハイブリドーマについて記載）に記載されているものが挙げられる。ヒトハイブリドーマ技術（トリオーマ技術）はまた、Ｖｏｌｌｍｅｒｓ ａｎｄ Ｂｒａｎｄｌｅｉｎ，Ｈｉｓｔｏｌｏｇｙ ａｎｄ Ｈｉｓｔｏｐａｔｈｏｌｏｇｙ，２０（３）：９２７−９３７（２００５）及びＶｏｌｌｍｅｒｓ ａｎｄ Ｂｒａｎｄｌｅｉｎ，Ｍｅｔｈｏｄｓ ａｎｄ Ｆｉｎｄｉｎｇｓ ｉｎ Ｅｘｐｅｒｉｍｅｎｔａｌ ａｎｄ Ｃｌｉｎｉｃａｌ Ｐｈａｒｍａｃｏｌｏｇｙ，２７（３）：１８５−９１（２００５）に記載されている。
ヒト抗体はまた、ヒト由来のファージディスプレイライブラリーから選択されるＦｖクローン可変ドメイン配列を単離することにより生成されてよい。次いで、このような可変ドメイン配列は、所望のヒト定常ドメインと組み合わされてよい。抗体ライブラリーからヒト抗体を選択するための技術は、以下に記載される。
ライブラリー由来抗体
本発明の抗体は、１つ以上の所望の活性を有する抗体についてコンビナトリアルライブラリーをスクリーニングすることによって単離されてよい。例えば、ファージディスプレイライブラリーを生成し、所望の結合特性を有する抗体についてこのようなライブラリーをスクリーニングする様々な方法が、当該技術分野において既知である。このような方法は、例えば、Ｈｏｏｇｅｎｂｏｏｍ ｅｔ ａｌ．ｉｎ Ｍｅｔｈｏｄｓ ｉｎ Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｂｉｏｌｏｇｙ １７８：１−３７（Ｏ’Ｂｒｉｅｎ ｅｔ ａｌ．，ｅｄ．，Ｈｕｍａｎ Ｐｒｅｓｓ，Ｔｏｔｏｗａ，ＮＪ，２００１）で概説され、さらに例えば、ｔｈｅ ＭｃＣａｆｆｅｒｔｙ ｅｔ ａｌ．，Ｎａｔｕｒｅ ３４８：５５２−５５４、Ｃｌａｃｋｓｏｎ ｅｔ ａｌ．，Ｎａｔｕｒｅ ３５２：６２４−６２８（１９９１）、Ｍａｒｋｓ ｅｔ ａｌ．，Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．２２２：５８１−５９７（１９９２）、Ｍａｒｋｓ ａｎｄ Ｂｒａｄｂｕｒｙ，ｉｎ Ｍｅｔｈｏｄｓ ｉｎ Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｂｉｏｌｏｇｙ ２４８：１６１−１７５（Ｌｏ，ｅｄ．，Ｈｕｍａｎ Ｐｒｅｓｓ，Ｔｏｔｏｗａ，ＮＪ，２００３）、Ｓｉｄｈｕ ｅｔ ａｌ．，Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．３３８（２）：２９９−３１０（２００４）、Ｌｅｅ ｅｔ ａｌ．，Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．３４０（５）：１０７３−１０９３（２００４）、Ｆｅｌｌｏｕｓｅ，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ １０１（３４）：１２４６７−１２４７２（２００４）、及びＬｅｅ ｅｔ ａｌ．，Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．Ｍｅｔｈｏｄｓ ２８４（１−２）：１１９−１３２（２００４）に記載されている。
ある種のファージディスプレイ法では、Ｗｉｎｔｅｒ ｅｔ ａｌ．，Ａｎｎ．Ｒｅｖ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．，１２：４３３−４５５（１９９４）に記載されているように、ＶＨ及びＶＬ遺伝子のレパートリーをポリメラーゼ連鎖反応（ＰＣＲ）によって別々にクローニングし、ファージライブラリーにおいてランダムに再結合させて、次いで、抗原結合ファージについてスクリーニングすることができる。ファージは典型的に、単鎖Ｆｖ（ｓｃＦｖ）断片として、またはＦａｂ断片としてのいずれかで抗体断片を提示する。免疫化源からのライブラリーは、ハイブリドーマを構築する必要なく、免疫原に対して高親和性抗体を提供する。あるいは、Ｇｒｉｆｆｉｔｈｓ ｅｔ ａｌ．，ＥＭＢＯ Ｊ，１２：７２５−７３４（１９９３）に記載されているように、ナイーブレパートリーを（例えば、ヒトから）クローニングし、一切免疫化することなく、広範囲な非自己抗原及び自己抗原にも、抗体の単一の供給源を提供することができる。最後に、Ｈｏｏｇｅｎｂｏｏｍ ａｎｄ Ｗｉｎｔｅｒ，Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．，２２７：３８１−３８８（１９９２）に記載されているように、ナイーブライブラリーはまた、再構成されていないＶ遺伝子セグメントを幹細胞からクローニングし、ランダム配列を含有するＰＣＲプライマーを使用して、超可変ＣＤＲ３領域をコードし、インビトロで再構成を行うことによって合成的に作製され得る。ヒト抗体のファージライブラリーについて記載している特許公報としては、例えば、米国特許第５，７５０，３７３号明細書、ならびに米国特許公開第２００５／００７９５７４号明細書、第２００５／０１１９４５５号明細書、第２００５／０２６６０００号明細書、第２００７／０１１７１２６号明細書、第２００７／０１６０５９８号明細書、第２００７／０２３７７６４号明細書、第２００７／０２９２９３６号明細書、及び第２００９／０００２３６０号明細書が挙げられる。
ヒト抗体ライブラリーから単離される抗体または抗体断片は、本明細書ではヒト抗体またはヒト抗体断片と見なされる。
多重特異性抗体
特定の実施形態では、本明細書で提供される抗体は、多重特異性抗体、例えば、二重特異性抗体である。多重特異性抗体は、少なくとも２つの異なる部位に対して結合特異性を有するモノクローナル抗体である。特定の実施形態では、二重特異性抗体は、同じ標的の２つの異なるエピトープに結合してよい。二重特異性抗体はまた、標的を発現する細胞に対して細胞傷害剤を局在化させるために使用されてよい。二重特異性抗体は、全長抗体または抗体断片として調製され得る。
多重特異性抗体を作製するための技術としては、異なる特異性を有する２つの免疫グロブリン重鎖−軽鎖対の組換え共発現（Ｍｉｌｓｔｅｉｎ ａｎｄ Ｃｕｅｌｌｏ，Ｎａｔｕｒｅ ３０５：５３７（１９８３）、ＷＯ９３／０８８２９、及びＴｒａｕｎｅｃｋｅｒ ｅｔ ａｌ．，ＥＭＢＯ Ｊ．１０：３６５５（１９９１）を参照のこと）、ならびに「ノブ・イン・ホール（ｋｎｏｂ−ｉｎ−ｈｏｌｅ）」操作（例えば、米国特許第５，７３１，１６８号明細書を参照のこと）が挙げられるが、これらに限定されない。「ノブ・イン・ホール」または「ＫｎＨ」技術という用語は、本明細書で使用される場合、２つのポリペプチドを、それらが相互作用する界面において一方のポリペプチドに突起（ノブ）を導入し、他方のポリペプチドに空洞（ホール）を導入することによって、インビトロまたはインビボで共に対合することを誘導する技術を指す。例えば、ＫｎＨは、抗体のＦｃ：Ｆｃ結合界面、ＣＬ：ＣＨ１界面またはＶＨ／ＶＬ界面に導入されている（例えば、ＵＳ２０１１／０２８７００９、ＵＳ２００７／０１７８５５２、ＷＯ９６／０２７０１１、ＷＯ９８／０５０４３１、Ｚｈｕ ｅｔ ａｌ．，１９９７，Ｐｒｏｔｅｉｎ Ｓｃｉｅｎｃｅ ６：７８１−７８８、及びＷＯ２０１２／１０６５８７を参照のこと）。いくつかの実施形態では、ＫｎＨは、多重特異性抗体の製造中に２本の異なる重鎖を共に対合させることを促進する。例えば、抗体のＦｃ領域中にＫｎＨを有する多重特異性抗体は、各Ｆｃ領域に連結された単一可変ドメインをさらに含み得る、または類似した、もしくは異なる軽鎖可変ドメインと対合する異なる重鎖可変ドメインをさらに含み得る。ＫｎＨ技術をさらに使用して、２つの異なる受容体細胞外ドメインを共に対合し得る、または異なる標的認識配列を含む任意のその他のポリペプチド配列を対合し得る（例えば、アフィボディ、ペプチボディ及びその他のＦｃ融合体を含む）。
「ノブ変異」という用語は、本明細書で使用される場合、ポリペプチドが別のポリペプチドと相互作用する界面において、突起（ノブ）をポリペプチド中に導入する変異を指す。いくつかの実施形態では、他方のポリペプチドは、ホール変異を有する。
「ホール変異」という用語は、本明細書で使用される場合、ポリペプチドが別のポリペプチドと相互作用する界面において、空洞（ホール）をポリペプチド中に導入する変異を指す。いくつかの実施形態では、他方のポリペプチドは、ノブ変異を有する。
簡潔な非限定的考察が、以下に提供される。
「突起」は、第１ポリペプチドの界面から突出し、それゆえ隣接した界面（すなわち、第２ポリペプチドの界面）の補償空洞内に配置可能であって、その結果、例えば、ヘテロ多量体を安定させることにより、ホモ多量体形成よりもヘテロ多量体形成を有利にする、少なくとも１本のアミノ酸側鎖を指す。突起は、元々の界面内に存在してよい、または合成によって（例えば、界面をコードする核酸を変化させることによって）導入されてよい。いくつかの実施形態では、第１ポリペプチドの界面をコードする核酸は、突起をコードするように変化される。これを達成するために、第１ポリペプチドの界面における少なくとも１つの「元の」アミノ酸残基をコードする核酸が、元のアミノ酸残基よりも大きい側鎖体積を有する少なくとも１つの「移入」アミノ酸残基をコードする核酸で置き換えられる。２つ以上の元の残基及び対応する移入残基が存在し得ることが理解されるだろう。様々なアミノ残基の側鎖体積は、例えば、ＵＳ２０１１／０２８７００９の表１に示されている。「突起」を導入する変異は、「ノブ変異」と称されてよい。
いくつかの実施形態では、突起形成のための移入残基は、アルギニン（Ｒ）、フェニルアラニン（Ｆ）、チロシン（Ｙ）及びトリプトファン（Ｗ）から選択される天然に存在するアミノ酸残基である。いくつかの実施形態では、移入残基は、トリプトファンまたはチロシンである。いくつかの実施形態では、突起形成のための元の残基は、アラニン、アスパラギン、アスパラギン酸、グリシン、セリン、トレオニンまたはバリンなどの小さい側鎖体積を有する。
「空洞」は、第２ポリペプチドの界面から窪んでいて、それゆえ隣接した第１ポリペプチドの界面上の対応する突起を収容する、少なくとも１つのアミノ酸側鎖を指す。空洞は、元々の界面内に存在してよい、または合成によって（例えば、界面をコードする核酸を変化させることによって）導入されてよい。いくつかの実施形態では、第２ポリペプチドの界面をコードする核酸は、空洞をコードするように変化される。これを達成するために、第２ポリペプチドの界面における少なくとも１つの「元の」アミノ酸残基をコードする核酸が、元のアミノ酸残基よりも小さい側鎖体積を有する少なくとも１つの「移入」アミノ酸残基をコードするＤＮＡで置き換えられる。２つ以上の元の残基及び対応する移入残基が存在し得ることが理解されるだろう。いくつかの実施形態では、空洞形成のための移入残基は、アラニン（Ａ）、セリン（Ｓ）、トレオニン（Ｔ）及びバリン（Ｖ）から選択される天然に存在するアミノ酸残基である。いくつかの実施形態では、移入残基は、セリン、アラニンまたはトレオニンである。いくつかの実施形態では、空洞形成のための元の残基は、チロシン、アルギニン、フェニルアラニンまたはトリプトファンなどの大きい側鎖体積を有する。「空洞」を導入する変異は、「ホール変異」と称されてよい。
突起は、空洞内に「配置可能」であり、これは、第１ポリペプチド及び第２ポリペプチドそれぞれの界面上における突起及び空洞の空間的位置、ならびに突起及び空洞のサイズが、界面における第１ポリペプチドと第２ポリペプチドとの正常な会合を著しく障害することなく、突起が空洞内に位置し得るようになることを意味する。Ｔｙｒ、Ｐｈｅ及びＴｒｐなどの突起は、典型的には界面の軸から垂直に伸長せず、好ましい立体構造を有しないため、突起と対応する空洞とのアラインメントは、いくつかの場合には、Ｘ線結晶学または核磁気共鳴（ＮＭＲ）によって得られるものなどの三次元構造に基づいて、突起／空洞の対をモデリングすることに依拠する場合がある。これは、当該技術分野において広く受け入れられている技術を使用して達成され得る。
いくつかの実施形態では、ＩｇＧ１定常領域内のノブ変異は、Ｔ３６６Ｗ（ＥＵ番号付け）である。いくつかの実施形態では、ＩｇＧ１定常領域内のホール変異は、Ｔ３６６Ｓ、Ｌ３６８Ａ及びＹ４０７Ｖ（ＥＵ番号付け）から選択される１つ以上の変異を含む。いくつかの実施形態では、ＩｇＧ１定常領域内のホール変異は、Ｔ３６６Ｓ、Ｌ３６８Ａ及びＹ４０７Ｖ（ＥＵ番号付け）を含む。
いくつかの実施形態では、ＩｇＧ４定常領域内のノブ変異は、Ｔ３６６Ｗ（ＥＵ番号付け）である。いくつかの実施形態では、ＩｇＧ４定常領域内のホール変異は、Ｔ３６６Ｓ、Ｌ３６８Ａ、及びＹ４０７Ｖ（ＥＵ番号付け）から選択される１つ以上の変異を含む。いくつかの実施形態では、ＩｇＧ４定常領域内のホール変異は、Ｔ３６６Ｓ、Ｌ３６８Ａ、及びＹ４０７Ｖ（ＥＵ番号付け）を含む。
多重特異性抗体はまた、抗体Ｆｃヘテロ二量体分子を作製するために静電ステアリング効果を操作すること（ＷＯ２００９／０８９００４Ａ１）、２つ以上の抗体または断片を架橋すること（例えば、米国特許第４，６７６，９８０号明細書、及びＢｒｅｎｎａｎ ｅｔ ａｌ．，Ｓｃｉｅｎｃｅ，２２９：８１（１９８５）を参照のこと）、二重特異性抗体を作製するためにロイシンジッパーを使用すること（例えば、Ｋｏｓｔｅｌｎｙ ｅｔ ａｌ．，Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．，１４８（５）：１５４７−１５５３（１９９２）を参照のこと）、二重特異性抗体断片を産生するために「ダイアボディ」技術を使用すること（例えば、Ｈｏｌｌｉｎｇｅｒ ｅｔ ａｌ．，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ，９０：６４４４−６４４８（１９９３）を参照のこと）、ならびに単鎖Ｆｖ（ｓＦｖ）二量体を使用すること（例えば、Ｇｒｕｂｅｒ ｅｔ ａｌ．，Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．，１５２：５３６８（１９９４）を参照のこと）、ならびに例えば、Ｔｕｔｔ ｅｔ ａｌ．Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１４７：６０（１９９１）に記載されているように三重特異性抗体を調製することによって作製されてよい。
「オクトパス抗体」を含む、３つ以上の機能的抗原結合部位を有する操作抗体もまた、本明細書に含まれる（例えば、ＵＳ２００６／００２５５７６Ａ１を参照のこと）。
本明細書における抗体または断片としては、標的に加えて別の異なる抗原に結合する抗原結合部位を含む「二重作用ＦＡｂ」または「ＤＡＦ」も挙げられる（例えば、ＵＳ２００８／００６９８２０を参照のこと）。
抗体バリアント
特定の実施形態では、本明細書で提供される抗体のアミノ酸配列バリアントが考慮される。例えば、抗体の結合親和性及び／またはその他の生物学的特性を改善することが望ましい場合もある。抗体のアミノ酸配列バリアントは、抗体をコードするヌクレオチド配列に適切な修飾を導入することによって、またはペプチド合成によって調製されてよい。このような修飾としては、例えば、抗体のアミノ酸配列内における残基からの欠失、及び／または残基への挿入、及び／または残基の置換が挙げられる。欠失、挿入、及び置換の任意の組合せを作製して最終構築物に到達し得るが、ただし、最終構築物は、所望の特性、例えば、抗原結合を有するものとする。
置換、挿入、及び欠失バリアント
特定の実施形態では、１つ以上のアミノ酸置換を有する抗体バリアントが提供される。置換変異誘発の対象の部位としては、ＨＶＲ及びＦＲが挙げられる。保存的置換を、「好ましい置換」という表題で表１に示す。より実質的な変化を、「例示的な置換」という表題で表１に提供し、アミノ酸側鎖のクラスに関してさらに以下に記載する。アミノ酸置換を対象の抗体に導入してよく、その生成物を、所望の活性、例えば、抗原結合の保持／改善、免疫原性の減少、またはＡＤＣＣもしくはＣＤＣの改善についてスクリーニングしてよい。

アミノ酸は、共通の側鎖特性によってグループ分けされてよい：
（１）疎水性：ノルロイシン、Ｍｅｔ、Ａｌａ、Ｖａｌ、Ｌｅｕ、Ｉｌｅ、
（２）中性の親水性：Ｃｙｓ、Ｓｅｒ、Ｔｈｒ、Ａｓｎ、Ｇｌｎ、
（３）酸性：Ａｓｐ、Ｇｌｕ、
（４）塩基性：Ｈｉｓ、Ｌｙｓ、Ａｒｇ、
（５）鎖配向に影響を与える残基：Ｇｌｙ、Ｐｒｏ、
（６）芳香族：Ｔｒｐ、Ｔｙｒ、Ｐｈｅ。
非保存的置換は、これらのクラスのうち１つのメンバーを別のクラスに交換することを伴うことになる。
１種の置換バリアントは、親抗体（例えば、ヒト化抗体またはヒト抗体）の１つ以上の超可変領域残基を置換することを含む。一般に、さらなる研究のために選択されて得られたバリアント（複数可）は、親抗体と比較して、ある種の生物学的特性の改変（例えば、改善）（例えば、親和性の増加、免疫原性の減少）を有することになる、かつ／または親抗体のある種の生物学的特性を実質的に保持していることになる。例示的な置換バリアントは親和性成熟抗体であり、例えば、ファージディスプレイに基づく親和性成熟技術、例えば、本明細書に記載されるものなどを使用して簡便に生成されてよい。簡潔に述べると、１つ以上のＨＶＲ残基を変異させて、バリアント抗体がファージ上に提示されたら、特定の生物活性（例えば、結合親和性）についてスクリーニングする。
変化（例えば、置換）は、例えば、抗体親和性を改善するためにＨＶＲで行われてよい。このような変化は、ＨＶＲの「ホットスポット」、すなわち、体細胞成熟プロセスの間に高頻度で変異するコドンによってコードされる残基（例えば、Ｃｈｏｗｄｈｕｒｙ，Ｍｅｔｈｏｄｓ Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．２０７：１７９−１９６（２００８）を参照のこと）、及び／またはＳＤＲ（ａ−ＣＤＲ）で行われてよく、得られたバリアントＶＨまたはＶＬを結合親和性について試験する。二次ライブラリーの構築及び二次ライブラリーからの再選択による親和性成熟は、例えば、Ｈｏｏｇｅｎｂｏｏｍ ｅｔ ａｌ．ｉｎ Ｍｅｔｈｏｄｓ ｉｎ Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｂｉｏｌｏｇｙ １７８：１−３７（Ｏ’Ｂｒｉｅｎ ｅｔ ａｌ．，ｅｄ．，Ｈｕｍａｎ Ｐｒｅｓｓ，Ｔｏｔｏｗａ，ＮＪ，（２００１））に記載されている。親和性成熟のいくつかの実施形態では、様々な方法（例えば、エラープローンＰＣＲ、チェーンシャッフリング、またはオリゴヌクレオチド指定変異誘発）のいずれかによって、成熟のために選択された可変遺伝子中に多様性が導入される。次いで、二次ライブラリーを作製する。次いで、ライブラリーをスクリーニングして、所望の親和性を有する任意の抗体バリアントを同定する。多様性を導入する別の方法にはＨＶＲ指向性手法を含み、その手法では、いくつかのＨＶＲ残基（例えば、一度に４〜６残基）をランダム化する。抗原結合に関与するＨＶＲ残基を、例えば、アラニンスキャニング変異誘発またはモデリングを使用して、具体的に同定してよい。多くの場合、特にＣＤＲ−Ｈ３及びＣＤＲ−Ｌ３を標的とする。
特定の実施形態では、置換、挿入、または欠失は、このような変化が、抗原と結合する抗体の能力を実質的に減少させない限り、１つ以上のＨＶＲ内で生じてよい。例えば、結合親和性を実質的に減少させない保存的変化（例えば、本明細書で提供されるような保存的置換）が、ＨＶＲで行われてよい。このような変化は、ＨＶＲの「ホットスポット」またはＳＤＲの外側であってもよい。上で提供されるバリアントＶＨ及びＶＬ配列の特定の実施形態では、各ＨＶＲは不変である、または１つ、２つ、もしくは３つ以下のアミノ酸置換を含有するかのいずれかである。
変異誘発のために標的としてよい抗体の残基または領域を同定する有用な方法は、Ｃｕｎｎｉｎｇｈａｍ ａｎｄ Ｗｅｌｌｓ（１９８９）Ｓｃｉｅｎｃｅ，２４４：１０８１−１０８５で記載されているように「アラニンスキャニング変異誘発」と呼ばれている。この方法では、標的残基の残基または群（例えば、ａｒｇ、ａｓｐ、ｈｉｓ、ｌｙｓ、及びｇｌｕなどの荷電残基）を同定して、中性または負荷電アミノ酸（例えば、アラニンまたはポリアラニン）で置き換えて、抗体と抗原との相互作用に影響を及ぼすかどうかを決定する。さらなる置換を、最初の置換に対して機能的感受性を示すアミノ酸位置に導入してよい。あるいは、またはさらに、抗原−抗体複合体の結晶構造を使用して、抗体と抗原との間の接触点を同定する。このような接触残基及び隣接残基を、置換の候補として標的としてよい、または排除してよい。バリアントをスクリーニングして、それらが所望の特性を含有するかどうかを決定してよい。
アミノ酸配列挿入としては、１残基〜１００以上の残基を含有するポリペプチドの長さの範囲である、アミノ末端及び／またはカルボキシル末端融合、加えて単一または複数のアミノ酸残基の配列内挿入が挙げられる。末端挿入の例としては、Ｎ末端メチオニル残基を有する抗体が挙げられる。抗体分子のその他の挿入バリアントとしては、抗体のＮ末端またはＣ末端と酵素との融合（例えば、ＡＤＥＰＴのための）または抗体の血清半減期を増加させるポリペプチドとの融合が挙げられる。
グリコシル化バリアント
特定の実施形態では、本明細書で提供される抗体は、抗体がグリコシル化される程度を増加または減少させるように変化される。抗体へのグリコシル化部位の付加または欠失は、１つ以上のグリコシル化部位が作製または除去されるようにアミノ酸配列を変化させることによって簡便に行われてよい。
抗体がＦｃ領域を含む場合、それに結合される炭水化物が変化されてよい。哺乳動物細胞によって産生される天然抗体は、典型的には、一般にＦｃ領域のＣＨ２ドメインのＡｓｎ２９７にＮ結合によって結合される、分岐した二分岐オリゴ糖を含む。例えば、Ｗｒｉｇｈｔ ｅｔ ａｌ．ＴＩＢＴＥＣＨ １５：２６−３２（１９９７）を参照のこと。オリゴ糖としては、様々な炭水化物、例えば、マンノース、Ｎ−アセチルグルコサミン（ＧｌｃＮＡｃ）、ガラクトース、及びシアル酸、加えて二分岐オリゴ糖構造の「幹」におけるＧｌｃＮＡｃに結合されるフコースを挙げてよい。いくつかの実施形態では、本発明の抗体におけるオリゴ糖の修飾は、特定の改善された特性を有する抗体バリアントを作製するために行われてよい。
一実施形態では、抗体バリアントは、Ｆｃ領域に（直接的または間接的に）結合されるフコースを欠いている炭水化物構造を有して提供される。例えば、このような抗体中のフコース量は、１％〜８０％、１％〜６５％、５％〜６５％または２０％〜４０％であってよい。フコース量は、例えば、ＷＯ２００８／０７７５４６に記載されているようにＭＡＬＤＩ−ＴＯＦ質量分析法によって測定される場合、Ａｓｎ２９７に結合される全ての糖構造（例えば、複合、ハイブリッド及び高マンノース構造）の合計と比較して、Ａｓｎ２９７における糖鎖内のフコースの平均量を算出することにより決定される。Ａｓｎ２９７は、Ｆｃ領域の２９７位あたり（Ｆｃ領域残基のＥＵ番号付け）に位置するアスパラギン残基を指すが、Ａｓｎ２９７はまた、抗体の軽微な配列変化に起因して、２９７位の上流または下流の約±３アミノ酸、すなわち、２９４位〜３００位の間に位置してもよい。このようなフコシル化バリアントは、改善したＡＤＣＣ機能を有する場合がある。例えば、米国特許公開第ＵＳ２００３／０１５７１０８号明細書（Ｐｒｅｓｔａ，Ｌ．）、第ＵＳ２００４／００９３６２１号明細書（Ｋｙｏｗａ Ｈａｋｋｏ Ｋｏｇｙｏ Ｃｏ．，Ｌｔｄ）を参照のこと。「非フコシル化」または「フコース欠損」抗体バリアントに関連する刊行物の例としては、ＵＳ２００３／０１５７１０８、ＷＯ２０００／６１７３９、ＷＯ２００１／２９２４６、ＵＳ２００３／０１１５６１４、ＵＳ２００２／０１６４３２８、ＵＳ２００４／００９３６２１、ＵＳ２００４／０１３２１４０、ＵＳ２００４／０１１０７０４、ＵＳ２００４／０１１０２８２、ＵＳ２００４／０１０９８６５、ＷＯ２００３／０８５１１９、ＷＯ２００３／０８４５７０、ＷＯ２００５／０３５５８６、ＷＯ２００５／０３５７７８、ＷＯ２００５／０５３７４２、ＷＯ２００２／０３１１４０、Ｏｋａｚａｋｉ ｅｔ ａｌ．Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．３３６：１２３９−１２４９（２００４）、Ｙａｍａｎｅ−Ｏｈｎｕｋｉ ｅｔ ａｌ．Ｂｉｏｔｅｃｈ．Ｂｉｏｅｎｇ．８７：６１４（２００４）が挙げられる。非フコシル化抗体を産生できる細胞株の例としては、タンパク質フコシル化を欠いているＬｅｃ１３ＣＨＯ細胞（Ｒｉｐｋａ ｅｔ ａｌ．Ａｒｃｈ．Ｂｉｏｃｈｅｍ．Ｂｉｏｐｈｙｓ．２４９：５３３−５４５（１９８６）、米国特許出願第ＵＳ２００３／０１５７１０８（Ａ１）号明細書、Ｐｒｅｓｔａ，Ｌ、及びＷＯ２００４／０５６３１２Ａ１、Ａｄａｍｓ ｅｔ ａｌ．、特に実施例１１にて）、ならびにノックアウト細胞株、例えば、アルファ−１，６−フコシルトランスフェラーゼ遺伝子、すなわち、ＦＵＴ８ノックアウトＣＨＯ細胞（例えば、Ｙａｍａｎｅ−Ｏｈｎｕｋｉ ｅｔ ａｌ．Ｂｉｏｔｅｃｈ．Ｂｉｏｅｎｇ．８７：６１４（２００４）、Ｋａｎｄａ，Ｙ．ｅｔ ａｌ．，Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌ．Ｂｉｏｅｎｇ．，９４（４）：６８０−６８８（２００６）、及びＷＯ２００３／０８５１０７を参照のこと）などが挙げられる。
抗体バリアントには、例えば、抗体のＦｃ領域に結合される二分岐オリゴ糖が、ＧｌｃＮＡｃによって二分される二分オリゴ糖がさらに提供される。このような抗体バリアントは、減少したフコシル化及び／または改善したＡＤＣＣ機能を有する場合がある。このような抗体バリアントの例は、例えば、ＷＯ２００３／０１１８７８（Ｊｅａｎ−Ｍａｉｒｅｔ ｅｔ ａｌ．）、米国特許第６，６０２，６８４号明細書（Ｕｍａｎａ ｅｔ ａｌ．）、及びＵＳ２００５／０１２３５４６（Ｕｍａｎａ ｅｔ ａｌ．）に記載されている。Ｆｃ領域に結合されるオリゴ糖内に少なくとも１つのガラクトース残基を有する抗体バリアントも、提供される。このような抗体バリアントは、改善したＣＤＣ機能を有する場合がある。このような抗体バリアントは、例えば、ＷＯ１９９７／３００８７（Ｐａｔｅｌ ｅｔ ａｌ．）、ＷＯ１９９８／５８９６４（Ｒａｊｕ，Ｓ．）、及びＷＯ１９９９／２２７６４（Ｒａｊｕ，Ｓ．）に記載されている。
Ｆｃ領域バリアント
特定の実施形態では、１つ以上のアミノ酸修飾が、本明細書で提供される抗体のＦｃ領域に導入されることによって、Ｆｃ領域バリアントを生成してよい。Ｆｃ領域バリアントは、１つ以上のアミノ酸位置にアミノ酸修飾（例えば、置換）を含むヒトＦｃ領域配列（例えば、ヒトＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３またはＩｇＧ４Ｆｃ領域）を含んでよい。
特定の実施形態では、本発明は、全てではないが、一部のエフェクター機能を有する抗体バリアントを考慮し、これらは、インビボにおける抗体の半減期が重要である一方で、特定のエフェクター機能（補体及びＡＤＣＣなど）が不要または有害である用途に関して望ましい候補となる。インビトロ及び／またはインビボの細胞傷害性アッセイを実施して、ＣＤＣ及び／またはＡＤＣＣ活性の減少／枯渇を確認することができる。例えば、Ｆｃ受容体（ＦｃＲ）結合アッセイを実施して、抗体がＦｃγＲ結合を欠いている（したがって、ＡＤＣＣ活性を欠いている可能性がある）が、ＦｃＲｎ結合能を保持することを確実にすることができる。ＡＤＣＣを媒介する一次細胞であるＮＫ細胞は、ＦｃγＲＩＩＩのみを発現するのに対して、単球はＦｃγＲＩ、ＦｃγＲＩＩ及びＦｃγＲＩＩＩを発現する。造血細胞上でのＦｃＲ発現は、Ｒａｖｅｔｃｈ ａｎｄ Ｋｉｎｅｔ，Ａｎｎｕ．Ｒｅｖ．Ｉｍｍｕｎｏｌ ９：４５７−９２（１９９１）の４６４頁の表３にまとめられている。対象分子のＡＤＣＣ活性を評価するためのインビトロアッセイの非限定的な例は、米国特許第５，５００，３６２号明細書（例えば、Ｈｅｌｌｓｔｒｏｍ，Ｉ．ｅｔ ａｌ．Ｐｒｏｃ．Ｎａｔ’ｌ Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ ８３：７０５９−７０６３（１９８６）を参照のこと）及びＨｅｌｌｓｔｒｏｍ，Ｉ ｅｔ ａｌ．，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔ’ｌ Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ ８２：１４９９−１５０２（１９８５）、第５，８２１，３３７号明細書（Ｂｒｕｇｇｅｍａｎｎ，Ｍ．ｅｔ ａｌ．，Ｊ．Ｅｘｐ．Ｍｅｄ．１６６：１３５１−１３６１（１９８７）を参照のこと）に記載されている。あるいは、非放射性アッセイ法を用いてよい（例えば、フローサイトメトリーのためのＡＣＴＩ（商標）非放射性細胞傷害性アッセイ（ＣｅｌｌＴｅｃｈｎｏｌｏｇｙ，Ｉｎｃ．マウンテンビュー、カリフォルニア州、及びＣｙｔｏＴｏｘ９６（登録商標）非放射性細胞傷害性アッセイ（Ｐｒｏｍｅｇａ、マディソン、ウィスコンシン州）を参照のこと。このようなアッセイに有用なエフェクター細胞としては、末梢血単核細胞（ＰＢＭＣ）及びナチュラルキラー（ＮＫ）細胞が挙げられる。あるいは、またはさらに、対象分子のＡＤＣＣ活性を、例えば、動物モデル、例えば、Ｃｌｙｎｅｓ ｅｔ ａｌ．Ｐｒｏｃ． Ｎａｔ’ｌ Ａｃａｄ． Ｓｃｉ．（ＵＳＡ）９５：６５２−６５６（１９９８）に開示されているものなどにおいて、インビボで評価してよい。Ｃ１ｑ結合アッセイを実施して、抗体がＣ１ｑと結合することができず、それゆえＣＤＣ活性を欠いていることを確認してもよい。例えば、ＷＯ２００６／０２９８７９及びＷＯ２００５／１００４０２におけるＣ１ｑ及びＣ３ｃ結合ＥＬＩＳＡを参照のこと。補体活性化を評価するために、ＣＤＣアッセイを実施してよい（例えば、Ｇａｚｚａｎｏ−Ｓａｎｔｏｒｏ ｅｔ ａｌ．，Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．Ｍｅｔｈｏｄｓ ２０２：１６３（１９９６）、Ｃｒａｇｇ，Ｍ．Ｓ．ｅｔ ａｌ．，Ｂｌｏｏｄ １０１：１０４５−１０５２（２００３）、及びＣｒａｇｇ，Ｍ．Ｓ．ａｎｄ Ｍ．Ｊ．Ｇｌｅｎｎｉｅ，Ｂｌｏｏｄ １０３：２７３８−２７４３（２００４）を参照のこと）。ＦｃＲｎ結合及びインビボクリアランス／半減期の決定もまた、当該技術分野において既知の方法を使用して実施することができる（例えば、Ｐｅｔｋｏｖａ，Ｓ．Ｂ．ｅｔ ａｌ．，Ｉｎｔ’ｌ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１８（１２）：１７５９−１７６９（２００６）を参照のこと）。
いくつかの実施形態では、１つ以上のアミノ酸修飾が、新生児Ｆｃ受容体へのＩｇＧ結合を増加させるために、本明細書に提供される抗体のＦｃ部分に導入されてよい。特定の実施形態では、抗体は、ＥＵ番号付けに従って以下の３つの変異を含む：Ｍ２５２Ｙ、Ｓ２５４Ｔ、及びＴ２５６Ｅ（「ＹＴＥ変異」）（米国特許第８，６９７，６５０号明細書、またＤａｌｌ’Ａｃｑｕａ ｅｔ ａｌ．，Ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆ Ｂｉｏｌｏｇｉｃａｌ Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ ２８１（３３）：２３５１４−２３５２４（２００６）も参照のこと。特定の実施形態では、ＹＴＥ変異は、抗体がその同種抗原に結合する能力に影響を及ぼさない。特定の実施形態では、ＹＴＥ変異は、抗体の血清半減期を、天然（すなわち、非ＹＴＥ変異体）抗体と比較して増加させる。いくつかの実施形態では、ＹＴＥ変異は、抗体の血清半減期を、天然（すなわち、非ＹＴＥ変異体）抗体と比較して３倍増加させる。いくつかの実施形態では、ＹＴＥ変異は、抗体の血清半減期を、天然（すなわち、非ＹＴＥ変異体）抗体と比較して２倍増加させる。いくつかの実施形態では、ＹＴＥ変異は、抗体の血清半減期を、天然（すなわち、非ＹＴＥ変異体）抗体と比較して４倍増加させる。いくつかの実施形態では、ＹＴＥ変異は、抗体の血清半減期を、天然（すなわち、非ＹＴＥ変異体）抗体と比較して少なくとも５倍増加させる。いくつかの実施形態では、ＹＴＥ変異は、抗体の血清半減期を、天然（すなわち、非ＹＴＥ変異体）抗体と比較して少なくとも１０倍増加させる。例えば、米国特許第８，６９７，６５０号明細書を参照し、またＤａｌｌ’Ａｃｑｕａ ｅｔ ａｌ．，Ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆ Ｂｉｏｌｏｇｉｃａｌ Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ ２８１（３３）：２３５１４−２３５２４（２００６）も参照のこと。
特定の実施形態では、ＹＴＥ変異体は、抗体の抗体依存性細胞媒介性細胞傷害（ＡＤＣＣ）活性を調節する手段を提供する。特定の実施形態では、ＹＴＥＯ変異体は、ヒト抗原に対して指向されるヒト化ＩｇＧ抗体のＡＤＣＣ活性を調節する手段を提供する。例えば、米国特許第８，６９７，６５０号明細書を参照し、またＤａｌｌ’Ａｃｑｕａ ｅｔ ａｌ．，Ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆ Ｂｉｏｌｏｇｉｃａｌ Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ ２８１（３３）：２３５１４−２３５２４（２００６）も参照のこと。
特定の実施形態では、ＹＴＥ変異体は、血清半減期、組織分布、及び抗体活性（例えば、ＩｇＧ抗体のＡＤＣＣ活性）の同時調節を可能にする。例えば、米国特許第８，６９７，６５０号明細書を参照し、またＤａｌｌ’Ａｃｑｕａ ｅｔ ａｌ．，Ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆ Ｂｉｏｌｏｇｉｃａｌ Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ ２８１（３３）：２３５１４−２３５２４（２００６）も参照のこと。
減少したエフェクター機能を有する抗体としては、Ｆｃ領域残基２３８、２６５、２６９、２７０、２９７、３２７及び３２９のうち１つ以上の置換を有するもの（米国特許第６，７３７，０５６号明細書）が挙げられる。このようなＦｃ変異体としては、残基２６５及び２９７のアラニンへの置換を有する、いわゆる「ＤＡＮＡ」Ｆｃ変異体（米国特許第７，３３２，５８１号明細書）を含む、アミノ酸位置２６５、２６９、２７０、２９７及び３２７のうち２つ以上に置換を有するＦｃ変異体が挙げられる。
特定の実施形態では、野生型ヒトＦｃ領域の３２９位（ＥＵ番号付け）におけるプロリン（Ｐ３２９）は、グリシンもしくはアルギニン、またはＦｃのＰ３２９とＦｃｇＲＩＩＩのトリプトファン残基Ｗ８７及びＷ１１０との間に形成される、Ｆｃ／Ｆｃガンマ受容体界面内でプロリンサンドイッチを破壊するのに十分に大きいアミノ酸残基で置換される（Ｓｏｎｄｅｒｍａｎｎ ｅｔ ａｌ．：Ｎａｔｕｒｅ ４０６，２６７−２７３（２０００年７月２０日））。さらなる実施形態では、Ｆｃバリアント中の少なくとも１つのさらなるアミノ酸置換は、Ｓ２２８Ｐ、Ｅ２３３Ｐ、Ｌ２３４Ａ、Ｌ２３５Ａ、Ｌ２３５Ｅ、Ｎ２９７Ａ、Ｎ２９７Ｄ、またはＰ３３１Ｓであり、さらに別の実施形態では、少なくとも１つのさらなるアミノ酸置換は、ヒトＩｇＧ１Ｆｃ領域のＬ２３４Ａ及びＬ２３５ＡまたはヒトＩｇＧ４Ｆｃ領域のＳ２２８Ｐ及びＬ２３５Ｅであり、これらは全て、ＥＵ番号付けに従うものである（米国特許第８，９６９，５２６号明細書、これはその全体が参照によって組み込まれる）。
特定の実施形態では、ポリペプチドは、野生型ヒトＩｇＧ Ｆｃ領域のＦｃバリアントを含み、このポリペプチドは、グリシンで置換されたヒトＩｇＧ Ｆｃ領域のＰ３２９を有し、Ｆｃバリアントは、ヒトＩｇＧ１Ｆｃ領域のＬ２３４Ａ及びＬ２３５ＡまたはヒトＩｇＧ４Ｆｃ領域のＳ２２８Ｐ及びＬ２３５Ｅにおいて少なくとも２つのさらなるアミノ酸置換を含み、残基は、ＥＵ番号付けに従って番号付けされる（米国特許第８，９６９，５２６号明細書、これはその全体が参照によって組み込まれる）。特定の実施形態では、Ｐ３２９Ｇ、Ｌ２３４Ａ及びＬ２３５Ａ（ＥＵ番号付け）置換を含むポリペプチドは、野生型ヒトＩｇＧ Ｆｃ領域を含むポリペプチドによって誘導されるＡＤＣＣが少なくともＡＤＣＣの２０％に下方調節される場合、及び／またはＡＤＣＰが下方調節される場合、ヒトＦｃγＲＩＩＩＡ及びＦｃγＲＩＩＡに対して親和性の減少を示す（米国特許第８，９６９，５２６号明細書、これはその全体が参照によって組み込まれる）。
具体的な実施形態では、野生型ヒトＦｃポリペプチドのＦｃバリアントを含むポリペプチドは、三重変異、すなわち、ＥＵ番号付けに従ってＰｒｏ３２９位のアミノ酸置換、Ｌ２３４Ａ及びＬ２３５Ａ変異を含む（Ｐ３２９／ＬＡＬＡ）（米国特許第８，９６９，５２６号明細書、これはその全体が参照によって組み込まれる）。具体的な実施形態では、ポリペプチドは、以下のアミノ酸置換を含む：ＥＵ番号付けに従ってＰ３２９Ｇ、Ｌ２３４Ａ、及びＬ２３５Ａ。
ＦｃＲに対して改善または減少した結合性を有する特定の抗体バリアントが記載されている。（例えば、米国特許第６，７３７，０５６号明細書、ＷＯ２００４／０５６３１２、及びＳｈｉｅｌｄｓ ｅｔ ａｌ．，Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．９（２）：６５９１−６６０４（２００１）を参照のこと。）
特定の実施形態では、抗体バリアントは、ＡＤＣＣを改善する１つ以上のアミノ酸置換、例えば、Ｆｃ領域の２９８位、３３３位、及び／または３３４位（残基のＥＵ番号付け）に置換を有するＦｃ領域を含む。
いくつかの実施形態では、例えば、米国特許第６，１９４，５５１号明細書、ＷＯ９９／５１６４２、及びＩｄｕｓｏｇｉｅ ｅｔ ａｌ．Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１６４：４１７８−４１８４（２０００）に記載されているように、変化された（すなわち、改善または減少したいずれかの）Ｃ１ｑ結合及び／または補体依存性細胞傷害（ＣＤＣ）をもたらす変化が、Ｆｃ領域中で行われる。
増加した半減期を有し、胎児への母体ＩｇＧの移動に関与する（Ｇｕｙｅｒ ｅｔ ａｌ．，Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１１７：５８７（１９７６）及びＫｉｍ ｅｔ ａｌ．，Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．２４：２４９（１９９４））新生児Ｆｃ受容体（ＦｃＲｎ）への改善した結合性を有する抗体が、ＵＳ２００５／００１４９３４Ａ１（Ｈｉｎｔｏｎ ｅｔ ａｌ．）に記載されている。これらの抗体は、その中にＦｃ領域とＦｃＲｎとの結合を改善する１つ以上の置換を有するＦｃ領域を含む。このようなＦｃバリアントとしては、Ｆｃ領域残基：２３８、２５６、２６５、２７２、２８６、３０３、３０５、３０７、３１１、３１２、３１７、３４０、３５６、３６０、３６２、３７６、３７８、３８０、３８２、４１３、４２４または４３４のうち１つ以上に置換、例えば、Ｆｃ領域残基４３４の置換（米国特許第７，３７１，８２６号明細書）を有するものが挙げられる。
Ｆｃ領域バリアントのその他の例に関しては、Ｄｕｎｃａｎ＆Ｗｉｎｔｅｒ，Ｎａｔｕｒｅ ３２２：７３８−４０（１９８８）、米国特許第５，６４８，２６０号明細書、米国特許第５，６２４，８２１号明細書、及びＷＯ９４／２９３５１も参照のこと。
システイン操作抗体バリアント
特定の実施形態では、抗体の１つ以上の残基がシステイン残基で置換されているシステイン操作抗体、例えば、「ＴＨＩＯＭＡＢ（商標）」またはＴＤＣを作製することが望ましい場合がある。特定の実施形態では、置換残基は、複合化に利用可能な抗体の部位に存在する。それらの残基をシステインで置換することにより、反応性チオール基は、それによって抗体の到達可能な部位に配置され、抗体をその他の部分、例えば、薬物部分またはリンカー−薬物部分などと複合化するために使用され、本明細書でさらに記載されるように免疫複合体を作製してよい。特定の実施形態では、以下の残基のいずれか１つ以上がシステインで置換されてよい：軽鎖のＫ１４９（Ｋａｂａｔ番号付け）、軽鎖のＶ２０５（Ｋａｂａｔ番号付け）、重鎖のＡ１１８（ＥＵ番号付け）、重鎖のＡ１４０（ＥＵ番号付け）、重鎖のＬ１７４（ＥＵ番号付け）、重鎖のＹ３７３（ＥＵ番号付け）、及び重鎖Ｆｃ領域のＳ４００（ＥＵ番号付け）。具体的な実施形態では、本明細書に記載される抗体は、ＨＣ−Ａ１４０Ｃ（ＥＵ番号付け）システイン置換を含む。具体的な実施形態では、本明細書に記載される抗体は、ＬＣ−Ｋ１４９Ｃ（Ｋａｂａｔ番号付け）システイン置換を含む。具体的な実施形態では、本明細書に記載される抗体は、ＨＣ−Ａ１１８Ｃ（ＥＵ番号付け）システイン置換を含む。システイン操作抗体は、例えば、米国特許第７，５２１，５４１号明細書に記載されているように生成されてよい。
特定の実施形態では、抗体は、以下の重鎖システイン置換のうちの１つを含む：
特定の実施形態では、抗体は、以下の軽鎖システイン置換のうちの１つを含む：
非限定的で例示的なｈｕ７Ｃ２．ｖ２．２．ＬＡ軽鎖（ＬＣ）Ｋ１４９Ｃ ＴＨＩＯＭＡＢ（商標）は、それぞれ配列番号：２６及び３０の重鎖及び軽鎖アミノ酸配列を有する。非限定的で例示的なｈｕ７Ｃ２．ｖ２．２．ＬＡ重鎖（ＨＣ）Ａ１１８Ｃ ＴＨＩＯＭＡＢ（商標）は、それぞれ配列番号：３１及び２５の重鎖及び軽鎖アミノ酸配列を有する。
抗体誘導体
特定の実施形態では、本明細書で提供される抗体は、当該技術分野において既知の、容易に入手可能な追加の非タンパク質部分を含有するようにさらに修飾されてよい。抗体の誘導体化に好適な部分としては、水溶性ポリマーが挙げられるが、これに限定されない。水溶性ポリマーの非限定的例としては、ポリエチレングリコール（ＰＥＧ）、エチレングリコール／プロピレングリコールのコポリマー、カルボキシメチルセルロース、デキストラン、ポリビニルアルコール、ポリビニルピロリドン、ポリ−１，３−ジオキソラン、ポリ−１，３，６−トリオキサン、エチレン／無水マレイン酸コポリマー、ポリアミノ酸（ホモポリマーまたはランダムコポリマーのいずれか）、及びデキストランまたはポリ（ｎ−ビニルピロリドン）ポリエチレングリコール、プロピレングリコールホモポリマー、ポリプロピレンオキシド／エチレンオキシドコポリマー、ポリオキシエチル化ポリオール（例えば、グリセロール）、ポリビニルアルコール、ならびにこれらの混合物が挙げられるが、これらに限定されない。ポリエチレングリコールプロピオンアルデヒドは、水中でのその安定性ゆえに製造上の利点を有する場合がある。ポリマーは、任意の分子量のものであってよく、分岐または非分岐であってよい。抗体に結合されるポリマー数は変動してよく、２つ以上のポリマーが結合される場合、それらは同じまたは異なる分子であり得る。一般に、誘導体化に使用されるポリマー数及び／またはポリマーの種類は、これらに限定されないが、改善される抗体の特定の特性または機能、抗体誘導体が規定の条件下で療法に使用されることになるかどうかなどを含む考慮に基づいて決定され得る。
別の実施形態では、放射線への曝露によって選択的に加熱されてよい、抗体及び非タンパク質部分の複合体が提供される。一実施形態では、非タンパク質部分は、カーボンナノチューブである（Ｋａｍ ｅｔ ａｌ．，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ １０２：１１６００−１１６０５（２００５））。放射線は任意の波長のものであってよく、普通の細胞を害することはないが、抗体−非タンパク質部分の近位の細胞が死滅する温度まで非タンパク質部分を加熱する波長を含むが、これらに限定されない。
組換え方法及び組成物
抗体は、例えば、米国特許第４，８１６，５６７号明細書に記載されているような組換え方法及び組成物を使用して産生されてよい。一実施形態では、本明細書に記載される抗体をコードする単離核酸が提供される。このような核酸は、抗体のＶＬを含むアミノ酸配列及び／または抗体のＶＨを含むアミノ酸配列（例えば、抗体の軽鎖及び／または重鎖）をコードしてよい。さらなる実施形態では、このような核酸を含む１種以上のベクター（例えば、発現ベクター）が提供される。さらなる実施形態では、このような核酸を含む宿主細胞が提供される。このような一実施形態では、宿主細胞は、（１）抗体のＶＬを含むアミノ酸配列及び抗体のＶＨを含むアミノ酸配列をコードする核酸を含むベクター、または（２）抗体のＶＬを含むアミノ酸配列をコードする核酸を含む第１ベクター及び抗体のＶＨを含むアミノ酸配列をコードする核酸を含む第２ベクターを含む（例えば、これらで形質転換されている）。一実施形態では、宿主細胞は、真核性、例えば、チャイニーズハムスター卵巣（ＣＨＯ）細胞またはリンパ細胞（例えば、Ｙ０、ＮＳ０、Ｓｐ２０細胞）である。一実施形態では、抗体を作製する方法が提供され、本方法は、上で提供されるように、抗体の発現に好適な条件下で抗体をコードする核酸を含む宿主細胞を培養すること、及び場合により、宿主細胞（または宿主細胞培地）から抗体を回収することを含む。
抗体の組換え産生のために、例えば、上に記載されているような抗体をコードする核酸を単離し、さらなるクローニング及び／または宿主細胞内での発現のために１種以上のベクター中に挿入する。このような核酸は、従来の手順を使用して（例えば、抗体の重鎖及び軽鎖をコードする遺伝子に特異的に結合することができるオリゴヌクレオチドプローブを使用することにより）容易に単離かつ配列決定されてよい。
抗体をコードするベクターのクローニングまたは発現に好適な宿主細胞としては、本明細書に記載される原核細胞または真核細胞が挙げられる。例えば、抗体は、特にグリコシル化及びＦｃエフェクター機能が必要ない場合には、細菌内で産生されてよい。細菌内での抗体断片及びポリペプチドの発現については、例えば、米国特許第５，６４８，２３７号明細書、第５，７８９，１９９号明細書、及び第５，８４０，５２３号明細書を参照のこと。（Ｅ．ｃｏｌｉでの抗体断片の発現について記載している、Ｃｈａｒｌｔｏｎ，Ｍｅｔｈｏｄｓ ｉｎ Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｂｉｏｌｏｇｙ，Ｖｏｌ．２４８（Ｂ．Ｋ．Ｃ．Ｌｏ，ｅｄ．，Ｈｕｍａｎａ Ｐｒｅｓｓ，Ｔｏｔｏｗａ，ＮＪ，２００３），ｐｐ．２４５−２５４も参照のこと。）発現後、抗体は、可溶性画分における細菌細胞ペーストから単離されてよく、さらに精製され得る。
原核生物に加えて、真核微生物、例えば、糸状菌または酵母などは、抗体をコードするベクターの好適なクローニング宿主または発現宿主であり、この真核微生物は、グリコシル化経路が「ヒト化」されていて、部分的または完全にヒトグリコシル化パターンを有する抗体の産生をもたらす真菌及び酵母株を含む。Ｇｅｒｎｇｒｏｓｓ，Ｎａｔ．Ｂｉｏｔｅｃｈ．２２：１４０９−１４１４（２００４）、及びＬｉ ｅｔ ａｌ．，Ｎａｔ．Ｂｉｏｔｅｃｈ．２４：２１０−２１５（２００６）を参照のこと。
グリコシル化抗体の発現に好適な宿主細胞はまた、多細胞生物（無脊椎動物及び脊椎動物）にも由来する。無脊椎動物細胞の例としては、植物細胞及び昆虫細胞が挙げられる。多数のバキュロウイルス株が同定されていて、これらは昆虫細胞と組み合わせて、特にＳｐｏｄｏｐｔｅｒａ ｆｒｕｇｉｐｅｒｄａ細胞のトランスフェクションに使用されてよい。
植物細胞培養物を、宿主として利用することもできる。例えば、米国特許第５，９５９，１７７号明細書、第６，０４０，４９８号明細書、第６，４２０，５４８号明細書、第７，１２５，９７８号明細書、及び第６，４１７，４２９号明細書（トランスジェニック植物における抗体産生のためのＰＬＡＮＴＩＢＯＤＩＥＳ（商標）技術について記載）を参照のこと。
脊椎動物細胞を、宿主として使用してもよい。例えば、懸濁液中で成長するように適合された哺乳動物細胞株が有用な場合がある。有用な哺乳動物宿主細胞株のその他の例は、ＳＶ４０により形質転換されたサル腎臓ＣＶ１株（ＣＯＳ−７）、ヒト胎児腎臓株（２９３細胞または例えば、Ｇｒａｈａｍ ｅｔ ａｌ．，Ｊ．Ｇｅｎ Ｖｉｒｏｌ．３６：５９（１９７７）に記載されるような２９３細胞）、ベビーハムスター腎臓細胞（ＢＨＫ）、マウスセルトリ細胞（例えば、Ｍａｔｈｅｒ，Ｂｉｏｌ．Ｒｅｐｒｏｄ．２３：２４３−２５１（１９８０）に記載されるようなＴＭ４細胞）、サル腎臓細胞（ＣＶ１）、アフリカミドリザル腎臓細胞（ＶＥＲＯ−７６）、ヒト子宮頸癌腫細胞（ＨＥＬＡ）、イヌ腎臓細胞（ＭＤＣＫ、バッファローラット肝臓細胞（ＢＲＬ３Ａ）、ヒト肺細胞（Ｗ１３８）、ヒト肝臓細胞（Ｈｅｐ Ｇ２）、マウス乳腺腫瘍（ＭＭＴ０６０５６２）、例えば、Ｍａｔｈｅｒ ｅｔ ａｌ．，Ａｎｎａｌｓ Ｎ．Ｙ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．３８３：４４−６８（１９８２）に記載されるようなＴＲＩ細胞、ＭＲＣ５細胞、及びＦＳ４細胞である。その他の有用な哺乳動物宿主細胞株としては、ＤＨＦＲ−ＣＨＯ細胞（Ｕｒｌａｕｂ ｅｔ ａｌ．，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ ７７：４２１６（１９８０））を含む、チャイニーズハムスター卵巣（ＣＨＯ）細胞、ならびに骨髄腫細胞株、例えば、Ｙ０、ＮＳ０及びＳｐ２／０などが挙げられる。抗体産生に好適な特定の哺乳動物宿主細胞株の概説については、例えば、Ｙａｚａｋｉ ａｎｄ Ｗｕ，Ｍｅｔｈｏｄｓ ｉｎ Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｂｉｏｌｏｇｙ，Ｖｏｌ．２４８（Ｂ．Ｋ．Ｃ．Ｌｏ，ｅｄ．，Ｈｕｍａｎａ Ｐｒｅｓｓ，Ｔｏｔｏｗａ，ＮＪ），ｐｐ．２５５−２６８（２００３）を参照のこと。
モノアルキル化剤のピロロベンゾジアゼピン薬物部分
本発明の抗体−薬物複合体化合物は、抗体に対してジスルフィドリンカーを用いてＮ１０基で誘導体化されたモノアルキル化剤のピロロベンゾジアゼピン薬物部分を含む。
表１ａに示す、例示的なモノアルキル化剤のピロロベンゾジアゼピン（ＰＢＤ）薬物部分を調製した。




モノアルキル化剤のピロロベンゾジアゼピン、リンカー−薬物中間体
本発明の抗体−薬物複合体（ＡＤＣ）化合物は、モノアルキル化剤のピロロベンゾジアゼピン、リンカー−薬物中間体と抗体との複合化によって調製されてよい。リンカー−薬物中間体のチオピリジル基を、抗体のシステインチオールに置き換えてジスルフィド結合ＡＤＣを形成する。
モノアルキル化剤のピロロベンゾジアゼピン、リンカー−薬物中間体は、式Ｉ：
Ｉ
（式中、

は、ＣＨ２−ＣＨ２、ＣＨ＝ＣＨ、Ｃ（＝Ｏ）−ＮＨ、及びＣＨ２−ＮＨから選択され、
Ａは、Ｆ、Ｃ１〜Ｃ６アルキル、及び＝Ｃ（Ｒ）２（式中、Ｒは、Ｈ、Ｆ、Ｃ１〜Ｃ６アルキル、及びＣ１〜Ｃ６フルオロアルキルから独立して選択される）から選択された基で場合により置換される、５員または６員複素環式環であり、
Ｒ１及びＲ２は、Ｈ及びＣ１〜Ｃ６アルキルから独立して選択され、またはＲ１及びＲ２は、３員、４員、５員、もしくは６員シクロアルキルもしくはヘテロシクリル基を形成し、
Ｒ３は、ＮＯ２、Ｃｌ、Ｆ、ＣＮ、ＣＯ２Ｈ及びＢｒから独立して選択され、
ｍは０、１または２である）
を有する。
例示的な実施形態では、Ａは５員環である。
例示的な実施形態では、Ａは、環外メチレン基の＝ＣＨ２で置換された５員環である。
例示的な実施形態では、Ａは６員環である。
例示的な実施形態では、Ａはモルホリニル環である。
例示的な実施形態では、Ｒ１は−ＣＨ３であり、Ｒ２はＨである。
例示的な実施形態では、Ｒ１及びＲ２は、シクロプロピルまたはシクロブチルを形成する。
例示的な実施形態では、Ｒ３は−ＮＯ２であり、ｍは１である。
例示的な実施形態では、

は、ＣＨ２−ＣＨ２またはＣＨ＝ＣＨである。
例示的な実施形態では、

は、Ｃ（＝Ｏ）−ＮＨまたはＣＨ２−ＮＨである。
モノアルキル化剤のピロロベンゾジアゼピン、リンカー−薬物中間体の例示的実施形態は、式Ｉａである：
Ｉａ
例示的な実施形態では、Ｒ４及びＲ５は、各々Ｈである。
例示的な実施形態では、Ｒ４及びＲ５は＝Ｏである。
モノアルキル化剤のピロロベンゾジアゼピン、リンカー−薬物中間体の例示的実施形態は、式Ｉｂである：
Ｉｂ．
モノアルキル化剤のピロロベンゾジアゼピン、リンカー−薬物中間体の例示的実施形態は、式Ｉｃである：
Ｉｃ．
モノアルキル化剤のピロロベンゾジアゼピン、リンカー−薬物中間体の例示的実施形態は、式Ｉｄである：
Ｉｄ．
特定の機構または効果に限定されるものではないが、モノアルキル化剤のピロロベンゾジアゼピン、リンカー中間体のピリジル環上における電子求引性基Ｒ３、例えば、ＮＯ２、Ｃｌ、Ｆ、ＣＮ、ＣＯ２ＨまたはＢｒなどの存在によって、システイン操作抗体のシステインチオールとの反応が促進される。システインチオールが、抗体上の妨害部位または反応性が低い部位に導入されている場合、このようなモノアルキル化剤のピロロベンゾジアゼピン、リンカー中間体は、対応する非置換ピリジル類似体（Ｒ３＝Ｈ）と比較して、抗体とのより効率的な複合化反応を付与する場合がある。
例示的なモノアルキル化剤のピロロベンゾジアゼピン、リンカー−薬物中間体を、表２Ａに示す。比較物ジアルキル化剤のピロロベンゾジアゼピン、リンカー−薬物中間体を、表２Ｂに示す。リンカー−薬物中間体及び比較物の合成を実施例に記載する。



抗体−薬物複合体（ＡＤＣ）
本発明の抗体−薬物複合体（ＡＤＣ）化合物は、ジスルフィドリンカーを用いてＮ１０基で誘導体化された強力なモノアルキル化剤のピロロベンゾジアゼピン薬物部分に共有結合で連結された、腫瘍関連抗原に特異的な抗体を含み、生物活性を有するものを含む。本発明のＡＤＣは治療活性を有してよく、癌を含む、多数の過剰増殖性障害に対して効果的であってよい。モノアルキル化剤のピロロベンゾジアゼピン薬物部分の生物活性は、抗体への複合化によって調節される。本発明のＡＤＣは、有効用量のモノアルキル化剤のピロロベンゾジアゼピン薬物、または毒素を、腫瘍細胞または部位に選択的に送達し、それによって治療指数（「治療濃度域」）を増加させながら、より高い選択性、すなわち、より低い有効用量が達成されてよい。例示的な実施形態では、ＡＤＣ化合物は、モノアルキル化剤のピロロベンゾジアゼピン薬物部分に、リンカーによって複合化される、すなわち、共有結合されるシステイン操作抗体を含む。
２つ以上の求核性システインチオール基が、抗体と薬物−リンカー中間体またはリンカー試薬とを反応させる場合に、得られた生成物は、抗体に結合された１つ以上の薬物部分が分布している、ＡＤＣ化合物の混合物であると理解されるべきである。１抗体当たりの平均薬物数（ＤＡＲ）は、混合物から、抗体に特異的かつ薬物に特異的である二重ＥＬＩＳＡ抗体アッセイによって算出されてよい。個々のＡＤＣ分子は、質量分析によって混合物中で同定されてよく、ＨＰＬＣ、例えば、疎水性相互作用クロマトグラフィーによって分離されてよい（例えば、ＭｃＤｏｎａｇｈ ｅｔ ａｌ（２００６）Ｐｒｏｔ．Ｅｎｇｒ．Ｄｅｓｉｇｎ＆Ｓｅｌｅｃｔｉｏｎ １９（７）：２９９−３０７、Ｈａｍｂｌｅｔｔ ｅｔ ａｌ（２００４）Ｃｌｉｎ．Ｃａｎｃｅｒ Ｒｅｓ．１０：７０６３−７０７０、Ｈａｍｂｌｅｔｔ，Ｋ．Ｊ．，ｅｔ ａｌ．「Ｅｆｆｅｃｔ ｏｆ ｄｒｕｇ ｌｏａｄｉｎｇ ｏｎ ｔｈｅ ｐｈａｒｍａｃｏｌｏｇｙ，ｐｈａｒｍａｃｏｋｉｎｅｔｉｃｓ，ａｎｄ ｔｏｘｉｃｉｔｙ ｏｆ ａｎ ａｎｔｉ−ＣＤ３０ ａｎｔｉｂｏｄｙ−ｄｒｕｇ ｃｏｎｊｕｇａｔｅ，」Ａｂｓｔｒａｃｔ Ｎｏ．６２４，Ａｍｅｒｉｃａｎ Ａｓｓｏｃｉａｔｉｏｎ ｆｏｒ Ｃａｎｃｅｒ Ｒｅｓｅａｒｃｈ，２００４ Ａｎｎｕａｌ Ｍｅｅｔｉｎｇ，Ｍａｒｃｈ ２７−３１，２００４，Ｐｒｏｃｅｅｄｉｎｇｓ ｏｆ ｔｈｅ ＡＡＣＲ，Ｖｏｌｕｍｅ ４５，Ｍａｒｃｈ ２００４、Ａｌｌｅｙ，Ｓ．Ｃ．，ｅｔ ａｌ．「Ｃｏｎｔｒｏｌｌｉｎｇ ｔｈｅ ｌｏｃａｔｉｏｎ ｏｆ ｄｒｕｇ ａｔｔａｃｈｍｅｎｔ ｉｎ ａｎｔｉｂｏｄｙ−ｄｒｕｇ ｃｏｎｊｕｇａｔｅｓ，」Ａｂｓｔｒａｃｔ Ｎｏ．６２７，Ａｍｅｒｉｃａｎ Ａｓｓｏｃｉａｔｉｏｎ ｆｏｒ Ｃａｎｃｅｒ Ｒｅｓｅａｒｃｈ，２００４ Ａｎｎｕａｌ Ｍｅｅｔｉｎｇ，Ｍａｒｃｈ ２７−３１，２００４，Ｐｒｏｃｅｅｄｉｎｇｓ ｏｆ ｔｈｅ ＡＡＣＲ，Ｖｏｌｕｍｅ ４５，Ｍａｒｃｈ ２００４を参照のこと）。特定の実施形態では、単一の負荷値を有する均一なＡＤＣが、電気泳動またはクロマトグラフィーによって複合混合物から単離されてよい。
本発明の抗体−薬物複合体化合物は、式ＩＩ：
ＩＩ
の構造またはその薬学的に許容される塩（式中：
式中、

は、ＣＨ２−ＣＨ２、ＣＨ２−Ｃ（＝Ｏ）、ＣＨ＝ＣＨ、またはＣＨ２−ＮＨから選択され、
Ｒ１及びＲ２は、ＨもしくはＣ１〜Ｃ６アルキルから独立して選択され、またはＲ１及びＲ２は、３員、４員、５員、もしくは６員シクロアルキルもしくはヘテロシクリル基を形成し、
ｐは、１〜８の整数であり、
Ａｂは、抗体である）
を有する。
例示的な実施形態では、抗体は、（１）〜（５３）から選択される１種以上の腫瘍関連抗原または細胞表面受容体に結合する：
（１）ＢＭＰＲ１Ｂ（骨形成タンパク質受容体ＩＢ型）、
（２）Ｅ１６（ＬＡＴ１、ＳＬＣ７Ａ５）、
（３）ＳＴＥＡＰ１（前立腺の６回膜貫通上皮抗原）、
（４）ＭＵＣ１６（０７７２Ｐ、ＣＡ１２５）、
（５）ＭＰＦ（ＭＰＦ、ＭＳＬＮ、ＳＭＲ、巨核球増強因子、メソテリン）、
（６）Ｎａｐｉ２ｂ（ＮＡＰＩ−３Ｂ、ＮＰＴＩＩｂ、ＳＬＣ３４Ａ２、溶質担体ファミリー３４（リン酸ナトリウム）、メンバー２、ＩＩ型ナトリウム依存性リン酸輸送体３ｂ）、
（７）Ｓｅｍａ ５ｂ（ＦＬＪ１０３７２、ＫＩＡＡ１４４５、Ｍｍ．４２０１５、ＳＥＭＡ５Ｂ、ＳＥＭＡＧ、セマフォリン５ｂ Ｈｌｏｇ、セマドメイン、７回トロンボスポンジン反復（１型及び１型様）、膜貫通ドメインＩ及び短い細胞質ドメイン、（セマフォリング（ｓｅｍａｐｈｏｒｉｎｇ））５Ｂ）、
（８）ＰＳＣＡ ｈｌｇ（２７０００５０Ｃ１２Ｒｉｋ、Ｃ５３０００８Ｏ１６Ｒｉｋ、ＲＩＫＥＮ ｃＤＮＡ ２７０００５０Ｃ１２、ＲＩＫＥＮ ｃＤＮＡ ２７０００５０Ｃ１２遺伝子）、
（９）ＥＴＢＲ（エンドセリンＢ型受容体）、
（１０）ＭＳＧ７８３（ＲＮＦ１２４、仮想タンパク質ＦＬＪ２０３１５）、
（１１）ＳＴＥＡＰ２（ＨＧＮＣ＿８６３９、ＩＰＣＡ−１、ＰＣＡＮＡＰ１、ＳＴＡＭＰ１、ＳＴＥＡＰ２、ＳＴＭＰ、前立腺癌関連遺伝子１、前立腺癌関連タンパク質１、前立腺の６回膜貫通上皮抗原２、６回膜貫通前立腺タンパク質）、
（１２）ＴｒｐＭ４（ＢＲ２２４５０、ＦＬＪ２００４１、ＴＲＰＭ４、ＴＲＰＭ４Ｂ、一過性受容体電位カチオンチャネル、サブファミリーＭ、メンバー４）、
（１３）ＣＲＩＰＴＯ（ＣＲ、ＣＲ１、ＣＲＧＦ、ＣＲＩＰＴＯ、ＴＤＧＦ１、奇形癌由来増殖因子）、
（１４）ＣＤ２１（ＣＲ２（補体受容体２）もしくはＣ３ＤＲ（Ｃ３ｄ／エプスタインバーウイルス受容体）もしくはＨｓ７３７９２）、
（１５）ＣＤ７９ｂ（ＣＤ７９Ｂ、ＣＤ７９β、Ｉｇｂ（免疫グロブリン関連ベータ）、Ｂ２９）、
（１６）ＦｃＲＨ２（ＩＦＧＰ４、ＩＲＴＡ４、ＳＰＡＰ１Ａ（ＳＨ２ドメイン含有ホスファターゼアンカータンパク質１ａ）、ＳＰＡＰ１Ｂ、ＳＰＡＰ１Ｃ）、
（１７）ＨＥＲ２、
（１８）ＮＣＡ、
（１９）ＭＤＰ、
（２０）ＩＬ２０Ｒα、
（２１）ブレビカン、
（２２）ＥｐｈＢ２Ｒ、
（２３）ＡＳＬＧ６５９、
（２４）ＰＳＣＡ、
（２５）ＧＥＤＡ、
（２６）ＢＡＦＦ−Ｒ（Ｂ細胞活性化因子受容体、ＢｌｙＳ受容体３、ＢＲ３）、
（２７）ＣＤ２２（Ｂ細胞受容体ＣＤ２２−Ｂアイソフォーム）、
（２８）ＣＤ７９ａ（ＣＤ７９Ａ、ＣＤ７９α、免疫グロブリン関連アルファ）、
（２９）ＣＸＣＲ５（バーキットリンパ腫受容体１）、
（３０）ＨＬＡ−ＤＯＢ（ＭＨＣクラスＩＩ分子（Ｉａ抗原）のベータサブユニット）、
（３１）Ｐ２Ｘ５（プリン受容体Ｐ２Ｘリガンド依存性イオンチャネル５）、
（３２）ＣＤ７２（Ｂ細胞分化抗原ＣＤ７２、Ｌｙｂ−２）、
（３３）ＬＹ６４（リンパ球抗原６４（ＲＰ１０５）、ロイシンリッチ反復（ＬＲＲ）ファミリーのＩ型膜タンパク質）、
（３４）ＦｃＲＨ１（Ｆｃ受容体様タンパク質１）、
（３５）ＦｃＲＨ５（ＩＲＴＡ２、免疫グロブリンスーパーファミリー受容体転座関連２）、
（３６）ＴＥＮＢ２（推定膜貫通プロテオグリカン）、
（３７）ＰＭＥＬ１７（シルバーホモログ、ＳＩＬＶ、Ｄ１２Ｓ５３Ｅ、ＰＭＥＬ１７、ＳＩ、ＳＩＬ）、
（３８）ＴＭＥＦＦ１（ＥＧＦ様ドメイン及び２つのフォリスタチン様ドメインを有する膜貫通タンパク質１、トモレグリン−１）、
（３９）ＧＤＮＦ−Ｒａ１（ＧＤＮＦファミリー受容体アルファ１、ＧＦＲＡ１、ＧＤＮＦＲ、ＧＤＮＦＲＡ、ＲＥＴＬ１、ＴＲＮＲ１、ＲＥＴ１Ｌ、ＧＤＮＦＲ−アルファ１、ＧＦＲ−アルファ−１）、
（４０）Ｌｙ６Ｅ（リンパ球抗原６複合体、遺伝子座Ｅ、Ｌｙ６７、ＲＩＧ−Ｅ、ＳＣＡ−２、ＴＳＡ−１）、
（４１）ＴＭＥＭ４６（ｓｈｉｓａホモログ２（Ｘｅｎｏｐｕｓ ｌａｅｖｉｓ）、ＳＨＩＳＡ２）、
（４２）Ｌｙ６Ｇ６Ｄ（リンパ球抗原６複合体、遺伝子座Ｇ６Ｄ、Ｌｙ６−Ｄ、ＭＥＧＴ１）、
（４３）ＬＧＲ５（ロイシンリッチ反復含有Ｇタンパク質結合受容体５、ＧＰＲ４９、ＧＰＲ６７）、
（４４）ＲＥＴ（ｒｅｔ癌原遺伝子、ＭＥＮ２Ａ、ＨＳＣＲ１、ＭＥＮ２Ｂ、ＭＴＣ１、ＰＴＣ、ＣＤＨＦ１２、Ｈｓ．１６８１１４、ＲＥＴ５１、ＲＥＴ−ＥＬＥ１）、
（４５）ＬＹ６Ｋ（リンパ球抗原６複合体、遺伝子座Ｋ、ＬＹ６Ｋ、ＨＳＪ００１３４８、ＦＬＪ３５２２６）、
（４６）ＧＰＲ１９（Ｇタンパク質結合受容体１９、Ｍｍ．４７８７）、
（４７）ＧＰＲ５４（ＫＩＳＳ１受容体、ＫＩＳＳ１Ｒ、ＧＰＲ５４、ＨＯＴ７Ｔ１７５、ＡＸＯＲ１２）、
（４８）ＡＳＰＨＤ１（アスパラギン酸ベータ−ヒドロキシラーゼドメイン含有１、ＬＯＣ２５３９８２）、
（４９）チロシナーゼ（ＴＹＲ、ＯＣＡＩＡ、ＯＣＡ１Ａ、チロシナーゼ、ＳＨＥＰ３）、
（５０）ＴＭＥＭ１１８（ｒｉｎｇフィンガータンパク質、膜貫通２、ＲＮＦＴ２、ＦＬＪ１４６２７）、
（５１）ＧＰＲ１７２Ａ（Ｇタンパク質結合受容体１７２Ａ、ＧＰＣＲ４１、ＦＬＪ１１８５６、Ｄ１５Ｅｒｔｄ７４７ｅ）、
（５２）ＣＤ３３、または
（５３）ＣＬＬ−１。
例示的な抗体−薬物複合体化合物は、式ＩＩａ：
ＩＩａ
を含む。
例示的な抗体−薬物複合体化合物の式ＩＩａは、式中、Ｒ４及びＲ５が各々Ｈ、またはＲ４及びＲ５が＝Ｏであることを含む。
例示的な抗体−薬物複合体化合物は、式ＩＩｂ：
ＩＩｂ．
を含む。
表３Ａの抗体薬物複合体ＡＤＣ−１０１〜ＡＤＣ−１１９を、表２Ａのモノアルキル化剤のピロロベンゾジアゼピン、リンカー−薬物中間体ＬＤ−５１またはＬＤ−５２を、システイン操作抗体を含む抗体と複合化することによって調製した。表３Ｂの比較抗体薬物複合体ＡＤＣ−２０１〜ＡＤＣ−２１１を、表２Ｂの比較物のピロロベンゾジアゼピンリンカー−薬物中間体ＣＬＤ−１〜６を、システイン操作抗体を含む抗体と複合化することによって調製した。





比較物ＡＤＣ−２１１、すなわち、トラスツズマブエムタンシン（ＫＡＤＣＹＬＡ（登録商標）、トラスツズマブ−ＭＣＣ−ＤＭ１（Ｔ−ＤＭ１、Ｔｍａｂ−ＤＭ１）は、抗体−薬物複合体（ＣＡＳ登録番号１３９５０４−５０−０、Ｐｈｉｌｌｉｐｓ Ｇ．ｅｔ ａｌ．（２００８）Ｃａｎｃｅｒ Ｒｅｓ．６８：９２８０−９０、ＵＳ８１４２７８４）であり、構造：

（式中、Ｔｒは抗ＨＥＲ２抗体のトラスツズマブである）
を有する。
インビトロ細胞増殖アッセイ
一般に、抗体−薬物複合体（ＡＤＣ）の細胞傷害活性または細胞増殖抑制活性は、受容体タンパク質、例えば、ＨＥＲ２を有する哺乳動物細胞を、細胞培養培地中でＡＤＣの抗体に曝露し、細胞を約６時間〜約５日間の期間で培養して、細胞生存能を測定することによって測定される。細胞に基づくインビトロアッセイを使用して、本発明のＡＤＣの生存能（増殖）、細胞傷害性、及びアポトーシスの誘導（カスパーゼ活性化）を測定した。
抗体−薬物複合体（ＡＤＣ）のインビトロ効力を、細胞増殖アッセイ（実施例６）によって測定した。本発明のＡＤＣは、腫瘍細胞増殖の阻害において驚くべき、かつ予想外の効力を示した。ＡＤＣの効力は、細胞の標的抗原発現と相関していた。試験した複合体は、細胞の表面上に発現される特定の抗原に結合することができ、インビトロでこれらの細胞死を引き起こすことができる。
ＣｅｌｌＴｉｔｅｒ−Ｇｌｏ（登録商標）Ｌｕｍｉｎｅｓｃｅｎｔ Ｃｅｌｌ Ｖｉａｂｉｌｉｔｙ Ａｓｓａｙは、市販されている（Ｐｒｏｍｅｇａ Ｃｏｒｐ．、マディソン、ウィスコンシン州）、甲虫目ルシフェラーゼの組換え発現に基づく均一アッセイ法である（ＵＳ５５８３０２４、ＵＳ５６７４７１３、ＵＳ５７００６７０）。この細胞増殖アッセイは、代謝的に活性な細胞の指標である、存在するＡＴＰの定量に基づいて、培養物中の生細胞の数を決定する（Ｃｒｏｕｃｈ ｅｔ ａｌ（１９９３）Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．Ｍｅｔｈ．１６０：８１−８８、ＵＳ６６０２６７７）。ＣｅｌｌＴｉｔｅｒ−Ｇｌｏ（登録商標）Ａｓｓａｙは、９６ウェル形式で実施されたため、自動化ハイスループットスクリーニング（ＨＴＳ）に適している（Ｃｒｅｅ ｅｔ ａｌ（１９９５）ＡｎｔｉＣａｎｃｅｒ Ｄｒｕｇｓ ６：３９８−４０４）。均一アッセイ手順は、単一の試薬（ＣｅｌｌＴｉｔｅｒ−Ｇｌｏ（登録商標）試薬）を、血清補充培地中で培養された細胞に直接添加することを含む。細胞洗浄、培地の除去及び複数回のピペッティングステップは必要ない。この系は、３８４ウェル形式で、試薬の添加及び混合後１０分で１５細胞／ウェルほど少量でも検出する。細胞はＡＤＣで継続的に処置されてよい、またはそれらは処置されて、ＡＤＣから分離されてよい。一般に、短時間、すなわち、３時間処置された細胞は、継続的に処置された細胞と同じ効力効果を示した。
均一「添加−混合−測定」形式によって、細胞溶解及び存在するＡＴＰの量に比例して発光シグナルの生成がもたらされる。ＡＴＰの量は、培養物中に存在する細胞数に正比例する。ＣｅｌｌＴｉｔｅｒ−Ｇｌｏ（登録商標）Ａｓｓａｙは、ルシフェラーゼ反応によって生成される「グロータイプ」発光シグナルを生成し、これは、使用される細胞型及び培地に応じて、一般に５時間超の半減期を有する。生細胞は、相対発光単位（ＲＬＵ）に反映される。基質の甲虫ルシフェリンは、組換えホタルルシフェラーゼによって酸化的にカルボキシル基が除去され、ＡＴＰからＡＭＰへの変換及び光子の生成を伴う。
細胞に基づくインビトロアッセイを使用して、本発明のＡＤＣの生存能（増殖）、細胞傷害性、及びアポトーシスの誘導（カスパーゼ活性化）を測定する。一般に、抗体−薬物複合体（ＡＤＣ）の細胞傷害活性または細胞増殖抑制活性は、抗原、例えば、Ｈｅｒ２またはＭＵＣ１６ポリペプチドなどを発現する哺乳動物細胞を、細胞培養培地中でＡＤＣに曝露し、細胞を約６時間〜約５日間の期間で培養して、細胞生存能を測定することによって測定される。抗ＭＵＣ１６ ＡＤＣの細胞増殖アッセイに有用な哺乳動物細胞としては、（１）ＭＵＣ１６ポリペプチドを発現する細胞株ＯＶＣＡＲ−３、（２）ＭＵＣ１６ポリペプチドの一部をその細胞表面上に安定して発現するように操作されたＰＣ３由来細胞株（ＰＣ３／ＭＵＣ１６）、（３）ＭＵＣ１６ポリペプチドを発現しない親ＰＣ３細胞株、及び（４）ＭＵＣ１６ポリペプチドを発現しないが、外因性ＭＵＣ１６発現を亢進するために使用されるベクターを保持するＰＣ３細胞株（ＰＣ３／ｎｅｏ）が挙げられる。
図１Ａ、図１Ｂ、図１Ｃは、チオＨｕ抗ＣＤ２２ １０Ｆ４ｖ３ ＬＣ Ｋ１４９Ｃ−（ＬＤ−５２）ＡＤＣ−１０７モノアミンが１桁台のｎＭ効力を示すことを示していて、ＢＪＡＢ中における非標的対照ＡＤＣ−１０８との差は約４倍（図１Ａ）、ＷＳＵ−ＤＬＣＬ２中における非標的対照との差は約７倍（図１Ｂ）、Ｊｕｒｋａｔ中における非標的対照ＡＤＣ−１０８よりも約５倍高い効力を有する（図１Ｃ）。モノアミンＡＤＣ−１０７は、ＢＪＡＢ及びＷＳＵ−ＤＬＣＬ２中において、それぞれチオＨｕ抗ＣＤ２２ １０Ｆ４ｖ３ ＬＣ Ｋ１４９Ｃ−（ＬＤ−５１）モノ−アミドＡＤＣ−１０３及び非標的対照ＡＤＣ−１０８よりも約１０倍及び約２２倍も強力である（図１Ａ〜図１Ｃ）。

インビボ有効性
抗体−薬物複合体（ＡＤＣ）のインビボ有効性を、マウスにおける腫瘍成長阻害（実施例７）によって測定した。本発明のＡＤＣは、腫瘍成長の阻害において驚くべき、かつ予想外の効力を示した。ＡＤＣの有効性は、腫瘍細胞の標的抗原発現と相関していた。
抗体−薬物複合体の有効性を、げっ歯類における癌細胞の同種移植片または異種移植片を移植し、ＡＤＣを用いて腫瘍を処置することによってインビボで測定した。結果の変動は、細胞株、ＡＤＣと癌細胞上に存在する受容体との抗体結合の特異性、投薬レジメン、及びその他の要因に応じて予想することになる。ＡＤＣのインビボ有効性を、中レベルから高レベルの腫瘍関連抗原、例えば、Ｈｅｒ２、ＣＤ２２、及びＬｙ６Ｅなどを発現するトランスジェニック外植マウスモデルを使用して測定した。対象をＡＤＣで１回処置し、３〜６週間にわたってモニターし、腫瘍倍加、ｌｏｇ細胞死滅、及び腫瘍縮小までの時間を測定した。フォローアップ用量反応及び複数回用量実験を実施した。
例えば、本発明の抗ＨＥＲ２ ＡＤＣのインビボ有効性は、高発現ＨＥＲ２トランスジェニック外植マウスモデルによって測定され得る（Ｐｈｉｌｌｉｐｓ ｅｔ ａｌ（２００８）Ｃａｎｃｅｒ Ｒｅｓ．６８：９２８０−９０）。同種移植片は、ＨＥＲＣＥＰＴＩＮ（登録商標）療法に応答しない、または応答しにくいＦｏ５ ｍｍｔｖトランスジェニックマウスから増殖させる。対象を特定の用量レベル（ｍｇ／ｋｇ）でのＡＤＣ及びプラセボ緩衝液対照（ビヒクル）で１回処置し、２週間以上にわたってモニターし、腫瘍倍加、ｌｏｇ細胞死滅、及び腫瘍縮小までの時間を測定した。
図２は、ＣＢ−１７ Ｆｏｘ Ｃｈａｓｅ ＳＣＩＤマウスのＷＳＵ−ＤＬＣＬ２異種移植モデルにおいて、インビボでフィッティングした経時的腫瘍体積変化のプロットにおける抗体−薬物複合体のＡＤＣ−２０２、ＡＤＣ−１０３、及びＡＤＣ−１０２の有効性を示す。
図３は、ＣＢ−１７ Ｆｏｘ Ｃｈａｓｅ ＳＣＩＤマウスのＢｊａｂ−ｌｕｃ異種移植モデルにおいて、インビボでフィッティングした経時的腫瘍体積変化のプロットにおける抗体−薬物複合体の有効性を示す。０．２ｍｇ／ｋｇ及び０．４ｍｇ／ｋｇ用量の比較物ＡＤＣ−２０２は腫瘍退縮をもたらし、０．１ｍｇ／ｋｇ用量では６２％ＴＧＩをもたらす。１ｍｇ／ｋｇ、２ｍｇ／ｋｇ、及び４ｍｇ／ｋｇ用量のモノアミドＡＤＣ−１０５における４０〜５８％のＴＧＩ範囲は、これらの用量レベルが類似した応答を有することを示し、その場合に最高用量の８ｍｇ／ｋｇのみが有意な活性、８９％ＴＧＩを示す。さらに、８ｍｇ／ｋｇでの活性は、０．１〜０．２ｍｇ／ｋｇ用量の比較物ジアルキル化剤ＡＤＣ−２０２の範囲内であり、約５０分の１の効力をもたらす。８ｍｇ／ｋｇでのオフターゲット対照の抗Ｈｅｒ２ ｈｕ７Ｃ２ ＡＤＣ−１０４−モノアミドは、０．４ｍｇ／ｋｇでのオフターゲット対照の比較物抗Ｈｅｒ２ ｈｕ７Ｃ２ ＡＤＣ−２０１と比べて２分の１の活性、すなわち、１８％対３６％ＴＧＩを示した。体重安全性評価では、全ての群が体重増加を示した。
図４は、ＷＳＵ−ＤＬＣＬ２ヒト細胞株マウスモデルにおいて、インビボでフィッティングした経時的腫瘍体積変化のプロットにおける抗体−薬物複合体の有効性を示す。オンターゲット抗ＣＤ２２ＡＤＣ−１０７モノアミン及びｖａｌ−ｃｉｔ連結ＡＤＣ−２０４の有効性を、０．５〜１０ｍｇ／ｋｇの用量で評価した。モノアミドＡＤＣ−１０５を比較のために含んだ。オフターゲット抗Ｈｅｒ２モノアミンＡＤＣ−１０８及びＡＤＣ−２０５を対照に使用した。モノアミンＡＤＣ−１０７及びＡＤＣ−２０４の両方の活性は、類似していると思われる。両方の最小有効用量（ＭＥＤ）は、０．５〜２ｍｇ／ｋｇである。１０ｍｇ／ｋｇの最高用量では、両方とも５／５動物で完全奏効をもたらしたが、モノアミドＡＤＣでは結果が見られなかった。さらに、モノアミンＡＤＣは、モノアミドＡＤＣと比較して＞１０倍の活性をもたらす（０．５ｍｇ／ｋｇ用量のモノアミン対５ｍｇ／ｋｇ用量のモノアミドにおける比較応答）。２ｍｇ／ｋｇで投薬された両方のＨｅｒ２対照は、類似した応答を有する（約３０％ＴＧＩ）。全ての群において有意な体重減少はなかった。
図５Ａは、ｓｃｉｄ ｂｅｉｇｅマウスのＨＥＲ２ ＫＰＬ４腫瘍モデルにおいて、インビボでフィッティングした経時的腫瘍体積変化のプロットにおける抗体−薬物複合体のＡＤＣ−１０６、ＡＤＣ−１０８、及びＡＤＣ−１０７の有効性を示す。
図５Ｂは、ｓｃｉｄ ｂｅｉｇｅマウスのＨＥＲ２ ＫＰＬ４腫瘍モデルにおいて、インビボでフィッティングした経時的腫瘍体積変化のプロットにおける抗体−薬物複合体の有効性を示す。チオＨｅｒ２ ｈｕ７Ｃ２ ＬＣ−Ｋ１４９Ｃ−（ＬＤ−５１）モノアミドのＡＤＣ−１０６及びＴｍａｂ−ＤＭ１と組み合わせたＡＤＣ−１０６の有効性を測定した。
図６は、ＩＶで１回投薬した、ＣＲＬ ｎｕ／ｎｕマウスのＨＥＲ２ Ｆｏ５モデルにおいて、インビボでフィッティングした経時的腫瘍体積変化のプロットにおける抗体−薬物複合体のＡＤＣ−２０１、ＡＤＣ−１０４、ＡＤＣ−２０２、及びＡＤＣ−１０５、ならびに非複合化抗体ｈｕ７Ｃ２の有効性を示す。オンターゲットＡＤＣ−２０１及びＡＤＣ−１０４は、腫瘍阻害及び用量依存的効果を示す。オフターゲットＡＤＣ−２０２、ＡＤＣ−１０５、及び非複合化抗体ｈｕ７Ｃ２は、全く腫瘍阻害を示さない。
図７は、ｓｃｉｄ ｂｅｉｇｅマウスのＨＥＲ２ ＫＰＬ４腫瘍モデルにおいて、インビボでフィッティングした経時的腫瘍体積変化のプロットにおける抗体−薬物複合体のＡＤＣ−２０１、ＡＤＣ−１０４、ＡＤＣ−２０２、ＡＤＣ−１０５、及び非複合化抗体ｈｕ７Ｃ２の有効性を示す。オンターゲットＡＤＣ−２０１及びＡＤＣ−１０４は、腫瘍阻害及び用量依存的効果を示す。オフターゲットＡＤＣ−２０２、ＡＤＣ−１０５、及び非複合化抗体ｈｕ７Ｃ２は、ほとんどまたは全く腫瘍阻害を示さない。
図８は、ＣＲＬ ｎｕ／ｎｕマウスのＨＥＲ２ Ｆｏ５モデルにおいて、インビボでフィッティングした経時的腫瘍体積変化のプロットにおける抗体−薬物複合体のＡＤＣ−１０６、ＡＤＣ−１８、及びＡＤＣ−１７の有効性を示す。オンターゲットＡＤＣ−１０６及びＡＤＣ−１０８は、腫瘍阻害及び用量依存的効果を示す。オフターゲットＡＤＣ−１０７は、ほとんどまたは全く腫瘍阻害を示さない。
図９は、ＣＢ−１７ Ｆｏｘ Ｃｈａｓｅ ＳＣＩＤマウスのＣＤ２２発現ＷＳＵ−ＤＬＣＬ２異種移植モデルにおいて、インビボでフィッティングした経時的腫瘍体積変化のプロットにおける抗体−薬物複合体のＡＤＣ−１０４、ＡＤＣ−１１１、ＡＤＣ−１１２、ＡＤＣ−１０６、及びＡＤＣ−１１３の有効性を示す。オンターゲットＡＤＣ−１０４、ＡＤＣ−１１１、ＡＤＣ−１１２は、腫瘍阻害及び用量依存的効果を示す。オフターゲットＡＤＣ−１０６及びＡＤＣ−１３３は、全く腫瘍阻害を示さない。
図１０は、ＨＣＣ１５６９Ｘ２異種移植モデルにおいて、インビボでフィッティングした経時的腫瘍体積変化のプロットにおける抗体−薬物複合体の有効性を示す。Ｌｙ６Ｅ−ＳＧ３４５１−モノアミドは用量依存的活性を有し、６ｍｇ／ｋｇ及び１２ｍｇ／ｋｇで成長が遅延し、１８ｍｇ／ｋｇで投薬する場合に腫瘍はほぼ停止する。１ｍｇ／ｋｇ及び３ｍｇ／ｋｇで投薬したＬｙ６Ｅ−ＳＧ３４５１、ならびに１ｍｇ／ｋｇ、３ｍｇ／ｋｇ、及び６ｍｇ／ｋｇで投薬したＬｙ６Ｅ−ＳＧ３２０３−モノアミンでは腫瘍退縮が見られる。Ｌｙ６Ｅ ＳＧ３４５１及びＳＧ３２０３−モノアミン基を互いにクラスター化する。
オリゴヌクレオチド結合／アルキル化アッセイ
ピロロベンゾジアゼピン（ＰＢＤ）化合物は、鎖間架橋に加えて、配列依存的鎖内ＤＮＡ架橋及びモノアルキル化付加物を形成することが知られている（Ｒａｈｍａｎ ＫＭ，ｅｔ ａｌ（２００９）Ｊ Ａｍ Ｃｈｅｍ Ｓｏｃ １３１：１３７５６−１３７６６）。ＰＢＤは、キラルＣ１１ａ（Ｓ）位を有し、この位置によってＰＢＤに適切な形状が付与され、ＤＮＡの副溝にしっかりと合う。加えて、求電子性Ｎ１０−Ｃ１１部分（すなわち、相互変換可能なイミン、カルビノールアミン、またはカルビノールアミンメチルエーテル官能基）は、それらのＣ１１位とグアニン核酸塩基の求核性Ｃ２−ＮＨ２基との間に共有アミナール結合を形成し得る。ピロロベンゾジアゼピン化合物と、様々な長さ及び配列の二本鎖形成オリゴヌクレオチドとの相互作用を、あらかじめ同定した鎖内及び鎖間架橋について、Ｐｕ−ＧＡＡＴＧ−Ｐｙ＞Ｐｕ−ＧＡＴＣ−Ｐｙ＞＞Ｐｕ−ＧＡＴＧ−ＰｙまたはＰｕ−ＧＡＡＴＣ−Ｐｙの配列を用いて試験した（実施例８）。オリゴヌクレオチド結合及びアルキル化アッセイは、ＨＰＬＣ分離及びＭＳ検出によって、核酸に対するＡＤＣのピロロベンゾジアゼピン薬物部分の結合能を評価するための単純モデルである（Ｎａｒａｙａｎａｓｗａｍｙ Ｍ．ｅｔ ａｌ（２００８）Ａｎａｌ．Ｂｉｏｃｈｅｍ．３７４：１７３−１８１）。したがって、ＡＤＣの効力及び有効性は相関し、予測されてよい。モノアルキル化剤のピロロベンゾジアゼピン薬物部分は区別されてよく、例えば、モノアミドＤＭ−３をモノアミンＤＭ−１と、及び表１ａのモノアルキル化剤を、Ｃ−１などの表１ｂの比較物ジアルキル化剤ピロロベンゾジアゼピン薬物部分と区別するなどである（実施例８）。
ピロロベンゾジアゼピン化合物を結合／アルキル化することになる、選択したオリゴヌクレオチド配列の出現頻度は非常に高く、それらが出現する染色体のサイズに正比例しない。この試験におけるピロロベンゾジアゼピン化合物は、表１ａのモノアルキル化剤ピロロベンゾジアゼピン薬物部分及び表１ｂの比較物薬物部分を含む。本試験は、差次的レベルの薬物によって二本鎖オリゴヌクレオチドがアルキル化され、アルキル化能は、開始二本鎖オリゴヌクレオチドのＰｕ−ＧＡＡＡＴＣ−Ｐｙ及びＰｕ−ＧＡＡＡＴＧ−Ｐｙ（式中、ＰｕはプリンヌクレオチドＡまたはＧであり、ＰｙはピリミジンヌクレオチドＣまたはＴである）の消失により正確に評価され得ることを示した。モノアミドＰＢＤ ＤＭ−２（表１ａ）は、モノアミンＰＢＤ ＤＭ−１と比べて二本鎖オリゴヌクレオチドを結合／アルキル化する効率がおよそ８分の１であった。比較物ジアルキル化剤Ｃ−１（表１ｂ）は、モノアミンＤＭ−１よりも二本鎖オリゴヌクレオチドを共有結合的にアルキル化する効率が２〜３倍高いことを示す。ＰＢＤモノマーＣ−２は、二量体Ｃ−１と比べて二本鎖オリゴヌクレオチドの共有結合的アルキル化において＞５０分の１の効率を示す。Ｃ−３を形成するＣ−１のイミン結合の減少によって、ＤＮＡ結合が完全に排除される。様々なオリゴＰＢＤ付加物を異なるアルキル化剤で形成し、ＨＰＬＣによって分離し、ＭＳ分析による質量で特徴付けした。
図１１は、ジアルキル化剤のピロロベンゾジアゼピン（ＰＢＤ）二量体化合物ＣＬＤ−１（上）ならびに２つのモノアルキル化剤ピロロベンゾジアゼピン二量体化合物モノアミンＤＭ−１（中）及びモノアミドＤＭ−２（下）とＤＮＡとの反応後の推定付加物を示す（Ｒａｈｍａｎ ＫＭ，ｅｔ ａｌ（２００９）Ｊ Ａｍ Ｃｈｅｍ Ｓｏｃ １３１：１３７５６−１３７６６）。ジアルキル化剤のＰＢＤ二量体化合物は、ＤＮＡ二本鎖の対向鎖上におけるグアニン核酸塩基のＣ２−ＮＨ２基と、２つの共有結合（架橋）を形成し得る。モノアルキル化剤のＰＢＤ二量体化合物は、グアニン核酸塩基と１つしか共有結合を形成できないため、結合のオン／オフ速度及び分裂細胞の破壊に影響を及ぼす。
モノアミドＤＭ−２は、モノアミンＤＭ−１と比べて二本鎖オリゴヌクレオチドに対して８〜１０分の１の結合／アルキル化を示し、これは癌細胞株及びインビボ腫瘍異種移植モデルにおけるそれらのＡＤＣの効力及び有効性と相関する。モノアミドの低レベルなＤＮＡアルキル化は、毒性の減少を伴う有効性を支持し、良好な治療指数を実証する可能性がある。概して、ＤＮＡ結合／アルキル化の程度は、ＰＢＤ類似体の有効性と相関し、モノアミドをモノアミンＰＢＤと、及びジアルキル化剤ＰＢＤと区別する。ＰＢＤ−ＡＤＣの治療指数（ＴＩ）最適化は、モノアルキル化剤のＤＮＡ結合／アルキル化活性を調節することにより達成できる場合があり、オリゴ結合／アルキル化法を使用して、許容される安全性を伴いながら、最適な抗腫瘍有効性を有するＰＢＤ類似体の設計及び評価を誘導できる。
安全性／毒性特性
本発明の抗体−薬物複合体（ＡＤＣ）及び比較物ＡＤＣを、それらの安全性及び毒性関連特性について試験した。
モノアミンモノアルキル化剤（ＬＤ−５２）を有する抗ＨＥＲ２ ｈｕ７Ｃ２抗体ＡＤＣ−１０８は、０、７、１４日目に（５０、７５、１２５μｇ（マイクログラム）／ｋｇを投薬後、４５日間にわたってパーセント体重変化により算出した場合、イミンジアルキル化剤（Ｃ−１）を有する対応する抗ＨＥＲ２ ｈｕ７Ｃ２抗体ＡＤＣ−２０１と比較して、ＣＤ−１マウスにおける耐性の改善及び治療指数（ＴＩ）の改善を示した。ＡＤＣ−１０８の最大耐量（ＭＴＤ）が２００μｇ／ｋｇであるのに対して、ＡＤＣ−２０１のＭＴＤは７５μｇ／ｋｇである。ラット（Ｓｐｒａｇｕｅ−Ｄａｗｌｅｙ）及びカニクイザルにおける毒性シグナルとしては、網状赤血球の一過性の減少、注射部位近傍の軽度な皮膚変色及び剥離、血管漏出、肝臓酵素の上昇、神経変性、骨髄／リンパ枯渇、腎臓、眼球、及び肺の所見、ならびに罹患率を挙げてよい。
予備的安全性データは、比較物ＡＤＣと比較して、本発明のＡＤＣに関して有意な利益を示唆する。
医薬製剤
本発明の治療用抗体−薬物複合体（ＡＤＣ）の医薬製剤は、典型的には非経口投与、すなわち、ボーラス、静脈内、腫瘍内注射のために、薬学的に許容される非経口ビヒクルと共に、注射用単位剤形で調製される。所望の純度を有する抗体−薬物複合体（ＡＤＣ）は、場合により凍結乾燥製剤または水溶液の形態で、薬学的に許容される希釈剤、担体、賦形剤または安定剤（Ｒｅｍｉｎｇｔｏｎ’ｓ Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ Ｓｃｉｅｎｃｅｓ（１９８０）１６ｔｈ ｅｄｉｔｉｏｎ，Ｏｓｏｌ，Ａ．Ｅｄ．）と混合される。
処置の抗体−薬物複合体方法
本発明の抗体−薬物複合体（ＡＤＣ）は、様々な疾患または障害、例えば、腫瘍抗原の過剰発現を特徴とするものを処置するために使用されてよいと考えられる。例示的な状態または過剰増殖性障害としては、良性または悪性の固形腫瘍ならびに血液障害、例えば、白血病及びリンパ性悪性腫瘍などが挙げられる。その他のものとしては、ニューロン性、グリア性、アストロサイト性、視床下部性、腺性、マクロファージ性、上皮性、間質性、胞胚腔性、炎症性、血管新生性及び自己免疫性を含む免疫性の障害が挙げられる。
本発明の抗体−薬物複合体（ＡＤＣ）は、処置されるべき状態に適した任意の経路で投与されてよい。ＡＤＣは、典型的には非経口、すなわち、注入、皮下、筋肉内、静脈内、皮内、髄腔内及び硬膜外に投与されることになる。
一般に、処置されるべき疾患または障害は、癌などの過剰増殖性疾患である。本明細書における処置されるべき癌の例としては、癌腫、リンパ腫、芽細胞腫、肉腫、及び白血病またはリンパ性悪性腫瘍が挙げられるが、これらに限定されない。このような癌のより詳細な例としては、扁平上皮細胞癌（例えば、上皮扁平上皮細胞癌）、小細胞肺癌、非小細胞肺癌、肺の腺癌及び肺の扁平上皮癌を含む肺癌、腹膜の癌、肝細胞癌、胃腸癌を含む胃癌または胃の癌、膵臓癌、膠芽腫、子宮頸癌、卵巣癌、肝臓癌、膀胱癌、ヘパトーマ、乳癌、大腸癌、直腸癌、結腸直腸癌、子宮内膜または子宮癌腫、唾液腺癌腫、腎臓の癌または腎臓癌、前立腺癌、外陰癌、甲状腺癌、肝臓癌腫、肛門癌腫、陰茎癌腫、加えて頭頸部癌が挙げられる。
ＡＤＣ化合物が処置に使用されてよい自己免疫疾患としては、リウマチ性障害（例えば、関節リウマチ、シェーグレン症候群、強皮症、全身性エリテマトーデス（ＳＬＥ）及びループス腎炎などのループス、多発性筋炎／皮膚筋炎、クリオグロブリン血症、抗リン脂質抗体症候群、ならびに乾癬性関節炎など）、変形性関節症、自己免疫性胃腸及び肝臓障害（例えば、炎症性腸疾患（例えば、潰瘍性大腸炎及びクローン病）、自己免疫性胃炎及び悪性貧血、自己免疫性肝炎、原発性胆汁性肝硬変、原発性硬化性胆管炎、ならびにセリアック病など）、血管炎（例えば、チャーグ・ストラウス血管炎、ウェゲナー肉芽腫症、及び多発動脈炎（ｐｏｌｙａｒｔｅｒｉｉｔｉｓ）を含む、ＡＮＣＡ関連血管炎など）、自己免疫性神経障害（例えば、多発性硬化症、眼球クローヌス・ミオクローヌス症候群、重症筋無力症、視神経脊髄炎、パーキンソン病、アルツハイマー病、及び自己免疫性多発ニューロパチーなど）、腎障害（例えば、糸球体腎炎、グッドパスチャー症候群、及びベルジェ病など）、自己免疫性皮膚障害（例えば、乾癬、蕁麻疹（ｕｒｔｉｃａｒｉａ）、蕁麻疹（ｈｉｖｅｓ）、尋常性天疱瘡、水疱性類天疱瘡、及び皮膚エリテマトーデスなど）、血液障害（例えば、血小板減少性紫斑病、血栓性血小板減少性紫斑病、輸血後紫斑病、及び自己免疫性溶血性貧血など）、アテローム性動脈硬化症、ブドウ膜炎、自己免疫性聴力疾患（例えば、内耳疾患及び聴力損失など）、ベーチェット病、レイノー症候群、器官移植、ならびに自己免疫性内分泌障害（例えば、インスリン依存型糖尿病（ＩＤＤＭ）などの糖尿病関連自己免疫疾患、アジソン病、ならびに自己免疫性甲状腺疾患（例えば、グレーブス病及び甲状腺炎）など）が挙げられる。より好ましいこのような疾患としては、例えば、関節リウマチ、潰瘍性大腸炎、ＡＮＣＡ関連血管炎、ループス、多発性硬化症、シェーグレン症候群、グレーブス病、ＩＤＤＭ、悪性貧血、甲状腺炎、及び糸球体腎炎が挙げられる。
疾患の予防または処置に関して、ＡＤＣの適切な投与量は、上に定義されるような処置されるべき疾患の種類、疾患の重症度及び経過、分子が予防目的または治療目的で投与されるのかどうか、以前の療法、患者の病歴及び抗体に対する応答、ならびに主治医の裁量に依存することになる。分子は、好適には一度に、または一連の処置にわたって患者に投与される。疾患の種類及び重症度に応じて、例えば、１回以上の個別投与によるもの、または持続注入によるものであろうと、約１μｇ／ｋｇ〜１５ｍｇ／ｋｇ（例えば、０．１〜２０ｍｇ／ｋｇ）の分子が、患者に投与する最初の候補投与量である。典型的な１日投与量は、前述の要因に応じて、約１μｇ／ｋｇ〜１００ｍｇ／ｋｇまたはそれを超える範囲であってよい。患者に投与されるＡＤＣの例示的な投与量は、約０．１〜約１０ｍｇ／ｋｇ患者体重の範囲内である。
本発明の抗体または免疫複合体は、療法において単独で、またはその他の薬剤と組み合わせたいずれかで使用され得る。例えば、本発明の抗体または免疫複合体は、少なくとも１種の追加の治療剤と共投与されてよい。
いくつかの実施形態では、ｈｕ７Ｃ２．ｖ．２．２．ＬＡ抗体−薬物複合体（ｈｕ７Ｃ２ ＡＤＣ）は、ＨＥＲ２に結合する別の抗体または免疫複合体である追加の治療剤と共投与される。いくつかの実施形態では、追加の治療剤は、（ｉ）ＨＥＲ２のドメインＩＩに結合する抗体もしくは免疫複合体、及び／または（ｉｉ）ＨＥＲ２のドメインＩＶに結合する抗体もしくは免疫複合体である。いくつかの実施形態では、追加の治療剤は、（ｉ）エピトープ２Ｃ４に結合する抗体もしくは免疫複合体、及び／または（ｉｉ）エピトープ４Ｄ５に結合する抗体もしくは免疫複合体である。
いくつかの実施形態では、ｈｕ７Ｃ２．ｖ．２．２．ＬＡ抗体−薬物複合体（ｈｕ７Ｃ２ ＡＤＣ）は、トラスツズマブ（Ｈｅｒｃｅｐｔｉｎ（登録商標））、Ｔ−ＤＭ１（Ｋａｄｃｙｌａ（登録商標））及びペルツズマブ（Ｐｅｒｊｅｔａ（登録商標））から選択される１種以上の追加の治療剤と共投与される。いくつかの実施形態では、ｈｕ７Ｃ２ ＡＤＣは、トラスツズマブと共投与される。いくつかの実施形態では、ｈｕ７Ｃ２ ＡＤＣは、Ｔ−ＤＭ１と共投与される。いくつかの実施形態では、ｈｕ７Ｃ２ ＡＤＣは、ペルツズマブと共投与される。いくつかの実施形態では、ｈｕ７Ｃ２ ＡＤＣは、トラスツズマブ及びペルツズマブと共投与される。いくつかの実施形態では、ｈｕ７Ｃ２ ＡＤＣは、Ｔ−ＤＭ１及びペルツズマブと共投与される。
いくつかの実施形態では、追加の治療剤は、ＰＤ−１軸結合アンタゴニスト、例えば、ＰＤ−Ｌ１結合アンタゴニストなどである。
上記のこのような併用療法は、併用投与（２種以上の治療剤が、同じまたは別個の製剤に含まれる場合）、及び個別投与を包含し、個別投与の場合には、本発明の抗体または免疫複合体の投与が、追加の治療剤及び／またはアジュバントの投与前に、その投与と同時に、かつ／またはその投与後に行われ得る。本発明の抗体または免疫複合体はまた、放射線療法と組み合わせて使用され得る。
本発明の抗体または免疫複合体（及び任意の追加の治療剤）は、非経口、肺内、及び鼻腔内投与、ならびに局所処置に所望される場合、病巣内投与を含む、任意の好適な手段によって投与され得る。非経口注入としては、筋肉内、静脈内、動脈内、腹腔内、または皮下投与が挙げられる。投薬は、任意の好適な経路により、例えば、注射、例えば、静脈内または皮下注射などにより、投与が短時間または長期的なものであるかに部分的に依存して行われ得る。単回投与または様々な時点にわたる複数回投与、ボーラス投与、及びパルス注入を含むが、これらに限定されない様々な投薬スケジュールが、本明細書で考慮される。
本発明の抗体または免疫複合体は、適切な医療行為に合った様式で製剤化、投薬、かつ投与されることになる。この文脈において考慮すべき要因としては、処置されている特定の障害、処置されている特定の哺乳動物、個々の患者の臨床状態、障害の原因、薬剤の送達部位、投与方法、投与のスケジューリング、及び医師に既知のその他の要因が挙げられる。抗体または免疫複合体に必要ではないが、場合により、問題となっている障害の予防または処置に現在使用されている１種以上の薬剤を用いて製剤化される。このようなその他の薬剤の有効量は、製剤中に存在する抗体または免疫複合体の量、障害または処置の種類、及び上述したその他の要因に依存する。これらは一般に、本明細書に記載されるのと同じ投与量及び投与経路により、または本明細書に記載される投与量の約１％〜９９％で、または経験的に／臨床的に適切であると決定された任意の投与量及び任意の経路によって使用される。
疾患の予防または治療に関して、本発明の抗体または免疫複合体の適切な投与量（単独で、または１種以上のその他の追加の治療剤と組み合わせて使用される場合）は、処置されるべき疾患の種類、抗体または免疫複合体の種類、疾患の重症度及び経過、抗体または免疫複合体が予防目的または治療目的で投与されるのかどうか、以前の療法、患者の病歴及び抗体または免疫複合体に対する応答、ならびに主治医の裁量に依存することになる。抗体または免疫複合体は、好適には一度に、または一連の処置にわたって患者に投与される。疾患の種類及び重症度に応じて、例えば、１回以上の個別投与によるもの、または持続注入によるものであろうと、約１μｇ／ｋｇ〜１５ｍｇ／ｋｇ（例えば、０．１ｍｇ／ｋｇ〜１０ｍｇ／ｋｇ）の抗体または免疫複合体が、患者に投与する最初の候補投与量であり得る。ある典型的な１日投与量は、前述の要因に応じて、約１μｇ／ｋｇ〜１００ｍｇ／ｋｇまたはそれを超える範囲であってよい。数日間以上にわたる反復投与については、状態に応じて、処置は一般に、疾患症状の望ましい抑制が生じるまで持続されることになる。抗体または免疫複合体の１つの例示的な投与量は、約０．０５ｍｇ／ｋｇ〜約１０ｍｇ／ｋｇの範囲内であることになる。したがって、約０．５ｍｇ／ｋｇ、２．０ｍｇ／ｋｇ、４．０ｍｇ／ｋｇもしくは１０ｍｇ／ｋｇ（またはそれらの任意の組合せ）のうち１つ以上の用量が患者に投与されてよい。このような用量は間欠的に、例えば、毎週または３週間ごとに（例えば、患者が抗体の約２〜約２０回用量、または例えば、抗体の約６回用量を受けるように）投与されてよい。最初により高い負荷用量、続いて１回以上のより低い用量が投与されてよい。しかしながら、その他の投与レジメンが有用であってよい。この療法の進捗は、従来の技術及びアッセイによって容易にモニターされる。
製品
本発明の別の実施形態では、上に記載される障害の処置に有用な材料を含有する製品、または「キット」が提供される。製品は、容器及び容器上に、または容器に付随するラベルまたは添付文書を含む。好適な容器としては、例えば、ボトル、バイアル、シリンジ、ブリスターパックなどが挙げられる。容器は、ガラスまたはプラスチックなどの様々な材料から形成されてよい。容器は、状態を処置するのに効果的な抗体−薬物複合体（ＡＤＣ）組成物を保持し、滅菌アクセスポートを有してよい（例えば、容器は、静脈内輸液バッグまたは皮下注射針によって穿刺可能な栓を有するバイアルであってよい）。組成物中における少なくとも１種の活性剤は、ＡＤＣである。ラベルまたは添付文書は、組成物が、癌などの好適な状態の処置に使用されることを示している。あるいは、またはさらに、製品は、薬学的に許容される緩衝液、例えば、注射用静菌水（ＢＷＦＩ）、リン酸緩衝生理食塩水、リンゲル液及びデキストロース溶液などを含む第２（または第３）容器をさらに含んでよい。製品は、その他の緩衝液、希釈剤、フィルター、針、及びシリンジを含む、商業的及び使用者の観点から望ましいその他の材料をさらに含んでよい。
実施例１ モノアルキル化剤のピロロベンゾジアゼピン薬物部分（表１ａ）の調製
（Ｓ）−７−メトキシ−８−（（５−（（（Ｓ）−７−メトキシ−２−メチレン−５−オキソ−２，３，５，１０，１１，１１ａ−ヘキサヒドロ−１Ｈ−ベンゾ［ｅ］ピロロ［１，２−ａ］［１，４］ジアゼピン−８−イル）オキシ）ペンチル）オキシ）−２−メチレン−２，３−ジヒドロ−１Ｈ−ベンゾ［ｅ］ピロロ［１，２−ａ］［１，４］ジアゼピン−５（１１ａＨ）−オン ＤＭ−１の合成

ＤＣＭ（５．０ｍＬ）中の（５−（（５−（５−アミノ−４−（（Ｓ）−２−（（（ｔｅｒｔ−ブチルジメチルシリル）オキシ）メチル）−４−メチレンピロリジン−１−カルボニル）−２−メトキシフェノキシ）ペンチル）オキシ）−２−（（Ｓ）−２−（（（ｔｅｒｔ−ブチルジメチルシリル）オキシ）メチル）−４−メチレンピロリジン−１−カルボニル）−４−メトキシフェニル）カルバミン酸ｔｅｒｔ−ブチル１（０．５０ｇ、０．５２４ｍｍｏｌ）の溶液に、ピリジン（８３ｍｇ、１．０５ｍｍｏｌ）、続いてクロロギ酸アリル、Ａｌｌｏｃ−Ｃｌ（９５ｍｇ、０．７８６ｍｍｏｌ、Ｓｉｇｍａ Ａｌｄｒｉｃｈ、ＣＡＳ番号２９３７−５０−０）を１６℃で添加した。混合物を１２時間攪拌した。混合物をＤＣＭ（３０ｍＬ）で希釈し、ＨＣｌ水溶液（１Ｎ、５．０ｍＬ×２）、続いてＮａＨＣＯ３水溶液（５ｍＬ×２）で洗浄した。有機層を濃縮して粗生成物を得て、これをフラッシュカラム（石油エーテル中の２０％ＥｔＯＡｃ）によって精製し、（５−（（５−（５−（（（アリルオキシ）カルボニル）アミノ）−４−（（Ｓ）−２−（（（ｔｅｒｔ−ブチルジメチルシリル）オキシ）メチル）−４−メチレンピロリジン−１−カルボニル）−２−メトキシフェノキシ）ペンチル）オキシ）−２−（（Ｓ）−２−（（（ｔｅｒｔ−ブチルジメチルシリル）オキシ）メチル）−４−メチレンピロリジン−１−カルボニル）−４−メトキシフェニル）カルバミン酸ｔｅｒｔ−ブチル２（５００ｍｇ、９２％）を無色の油として得た。ＬＣＭＳ：（ＥＳＩ， １０−８０， ＡＢ， １．５ 分）， ＲＴ ＝ １．２００ 分， ｍ／ｚ ＝ １０３７ ［Ｍ＋１］＋．
ＨＯＡｃ／ＴＨＦ／Ｈ２Ｏ（６ｍＬ／３ｍＬ／２ｍＬ）中の化合物２（５００ｍｇ、０．４８ｍｍｏｌ）の溶液を室温で１日攪拌した。溶液をＥｔＯＡｃ（６０ｍＬ）で希釈し、Ｈ２Ｏ（２０ｍＬ×４）、ＮａＨＣＯ３水溶液（２０ｍＬ×２）、及びＨ２Ｏ（２０ｍＬ）で洗浄した。有機層をＮａ２ＳＯ４上で乾燥して濾過し、真空下で濃縮して（５−（（５−（５−（（（アリルオキシ）カルボニル）アミノ）−４−（（Ｓ）−２−（ヒドロキシメチル）−４−メチレンピロリジン−１−カルボニル）−２−メトキシフェノキシ）ペンチル）オキシ）−２−（（Ｓ）−２−（ヒドロキシメチル）−４−メチレンピロリジン−１−カルボニル）−４−メトキシフェニル）カルバミン酸ｔｅｒｔ−ブチル３（３９０ｇ、１００％）を油として得た。
無水ＤＣＭ（１５ｍＬ）中の化合物３（２００ｍｇ、０．２４７ｍｍｏｌ）の攪拌溶液に、デスマーチンペルヨージナン（４１９ｍｇ、０．９８８ｍｍｏｌ）を添加した。反応混合物を室温で２時間攪拌した。それを０℃でＮａ２ＳＯ３水溶液（３０ｍＬ）を用いてクエンチし、ＤＣＭ（２０ｍＬ×３）で抽出した。組み合わせた有機層をブライン（２０ｍＬ）で洗浄し、Ｎａ２ＳＯ４上で乾燥して、濾過して濃縮した。残留物をｐｒｅｐ−ＴＬＣ（ＤＣＭ／ＭｅＯＨ＝２０：１）によって精製し、（１１Ｓ，１１ａＳ）−８−（（５−（（（１１Ｓ，１１ａＳ）−１０−（ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル）−１１−ヒドロキシ−７−メトキシ−２−メチレン−５−オキソ−２，３，５，１０，１１，１１ａ−ヘキサヒドロ−１Ｈ−ベンゾ［ｅ］ピロロ［１，２−ａ］［１，４］ジアゼピン−８−イル）オキシ）ペンチル）オキシ）−１１−ヒドロキシ−７−メトキシ−２−メチレン−５−オキソ−２，３，１１，１１ａ−テトラヒドロ−１Ｈ−ベンゾ［ｅ］ピロロ［１，２−ａ］［１，４］ジアゼピン−１０（５Ｈ）−カルボン酸アリル４（８０ｍｇ、４０．２％）を無色固体として得た。ＬＣＭＳ（ＥＳＩ）：ＲＴ ＝ ０．７０９ 分， Ｍ−Ｂｏｃ−Ｈ２Ｏ ＋ Ｈ＋ ＝ ６８７．１．方法 ＝ ５−９５ＡＢ ／１．５ 分．
ＴＦＡ（２．０ｍＬ）中の化合物４（８０ｍｇ、０．０９９ｍｍｏｌ）の溶液を、０℃で０．５時間攪拌した。溶液を、飽和ＮａＨＣＯ３溶液（１２０ｍＬ）に０℃で滴下した。混合物をＤＣＭ（２０ｍＬ×３）で抽出し、組み合わせた有機層をＮａ２ＳＯ４上で乾燥させて濾過し、濃縮して粗（１１Ｓ，１１ａＳ）−１１−ヒドロキシ−７−メトキシ−８−（（５−（（（Ｓ）−７−メトキシ−２−メチレン−５−オキソ−２，３，５，１１ａ−テトラヒドロ−１Ｈ−ベンゾ［ｅ］ピロロ［１，２−ａ］［１，４］ジアゼピン−８−イル）オキシ）ペンチル）オキシ）−２−メチレン−５−オキソ−２，３，１１，１１ａ−テトラヒドロ−１Ｈ−ベンゾ［ｅ］ピロロ［１，２−ａ］［１，４］ジアゼピン−１０（５Ｈ）−カルボン酸アリル５（５０ｍｇ、７３．５％）を得た。
無水ＤＣＭ（４．０ｍＬ）中の化合物５（５０ｍｇ、０．０７３ｍｍｏｌ）の攪拌溶液に、ＨＯＡｃ（１３ｍｇ、０．２１９ｍｍｏｌ）、続いてＮａＢＨ３ＣＮ（２３ｍｇ、０．３６５ｍｍｏｌ）を添加した。反応混合物を室温で一晩攪拌した。次いで、混合物を真空下で濃縮し、ｐｒｅｐ−ＴＬＣ（ＤＣＭ／ＭｅＯＨ＝９：１）によって精製して、（１１Ｓ，１１ａＳ）−１１−ヒドロキシ−７−メトキシ−８−（（５−（（（Ｓ）−７−メトキシ−２−メチレン−５−オキソ−２，３，５，１０，１１，１１ａ−ヘキサヒドロ−１Ｈ−ベンゾ［ｅ］ピロロ［１，２−ａ］［１，４］ジアゼピン−８−イル）オキシ）ペンチル）オキシ）−２−メチレン−５−オキソ−２，３，１１，１１ａ−テトラヒドロ−１Ｈ−ベンゾ［ｅ］ピロロ［１，２−ａ］［１，４］ジアゼピン−１０（５Ｈ）−カルボン酸アリル６（４０ｍｇ、８０．０％）を無色固体として得た。ＬＣＭＳ（ＥＳＩ）：ＲＴ ＝ ３．０８５ 分， Ｍ ＋ Ｈ＋ ＝ ６８９．１． 方法 ＝ １０−８０ＡＢ ／７ 分．
無水ＤＣＭ（３．０ｍＬ）中の化合物６（４０ｍｇ、０．０５８ｍｍｏｌ）の攪拌溶液に、ピロリジン（２１ｍｇ、０．２９ｍｍｏｌ）、続いてＰｄ（ＰＰｈ３）４（７．０ｍｇ、０．００６ｍｍｏｌ）を添加した。反応混合物を、室温でＮ２下において２時間攪拌した。次いで、混合物を真空下で濃縮し、ｐｒｅｐ−ＴＬＣ（ＤＣＭ／ＭｅＯＨ＝１：１）によって精製して、ＤＭ−１（１２ｍｇ、３５．３％）をオフホワイト固体として得た。ＬＣＭＳ（ＥＳＩ）：ＲＴ ＝ ０．６５１ 分， Ｍ ＋ Ｈ＋ ＝ ５８７．１． 方法 ＝ ５−９５ＡＢ ／１．５ 分． １Ｈ ＮＭＲ （４００ ＭＨｚ， ＤＣＣｌ３） δ ７．６７ （ｄ， Ｊ ＝ ４．４ Ｈｚ， １Ｈ）， ７．５７ （ｓ， １Ｈ）， ７．４９ （ｓ， １Ｈ）， ６．７９ （ｓ， １Ｈ）， ６．０４ （ｓ， １Ｈ）， ５．１８ （ｄ， Ｊ ＝ １１．６ Ｈｚ， ２Ｈ）， ５．０４ （ｄ， Ｊ ＝ １１．２ Ｈｚ， ２Ｈ）， ４．４１ − ４．３７ （ｍ， １Ｈ）， ４．２８ − ４．２５ （ｍ， ３Ｈ）， ４．１３ − ４．００ （ｍ， ３Ｈ）， ３．９８ − ３．９５ （ｍ， ２Ｈ）， ３．９３ （ｓ， ３Ｈ）， ３．８９ − ３．８５ （ｍ， １Ｈ）， ３．８２ （ｓ， ３Ｈ）， ３．５４ （ｄ， Ｊ ＝ ３０ Ｈｚ， １Ｈ）， ３．３４ − ３．２８ （ｄｄ， Ｊ ＝ １２．４， ９．２ Ｈｚ， １Ｈ）， ３．１５ − ３．０８ （ｍ， １Ｈ）， ２．９６ − ２．８６ （ｍ， ２Ｈ）， ２．４４ − ２．３９ （ｄｄ， Ｊ ＝ １５．２， ６．０ Ｈｚ， １Ｈ）， １．９５ − １．９０ （ｍ， ４Ｈ）， １．６７ − １．６２ （ｍ， ２Ｈ）．
（Ｓ）−７−メトキシ−８−（（５−（（（Ｓ）−７−メトキシ−２−メチレン−５−オキソ−２，３，５，１１ａ−テトラヒドロ−１Ｈ−ベンゾ［ｅ］ピロロ［１，２−ａ］［１，４］ジアゼピン−８−イル）オキシ）ペンチル）オキシ）−２−メチレン−２，３−ジヒドロ−１Ｈ−ベンゾ［ｅ］ピロロ［１，２−ａ］［１，４］ジアゼピン−５，１１（１０Ｈ，１１ａＨ）−ジオン ＤＭ−２の合成

無水ＤＣＭ（２０ｍＬ）中の（（ペンタン−１，５−ジイルビス（オキシ））ビス（６−（（Ｓ）−２−（ヒドロキシメチル）−４−メチレンピロリジン−１−カルボニル）−４−メトキシ−３，１−フェニレン））ジカルバミン酸ジ−ｔｅｒｔ−ブチル７（２００ｍｇ、０．２４ｍｍｏｌ）の攪拌溶液に、ＤＭＰ（６１０ｍｇ、１．４４ｍｍｏｌ）を０℃で添加した。反応混合物を室温で３時間攪拌した。混合物をＥｔＯＡｃ（１００ｍＬ）で希釈し、Ｎａ２ＳＯ３水溶液（３０ｍＬ）を用いて０℃でクエンチした。有機層をＨ２Ｏ（３０ｍＬ×３）、ＮａＨＣＯ３水溶液（３０ｍＬ）、及びＨ２Ｏ（３０ｍＬ）で洗浄し、次いで、（Ｎａ２ＳＯ４）上で乾燥して濾過し、濃縮した。残留物をｐｒｅｐ−ＨＰＬＣによって精製し、（Ｓ）−８−（（５−（（（１１Ｓ，１１ａＳ）−１０−（ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル）−１１−ヒドロキシ−７−メトキシ−２−メチレン−５−オキソ−２，３，５，１０，１１，１１ａ−ヘキサヒドロ−１Ｈ−ベンゾ［ｅ］ピロロ［１，２−ａ］［１，４］ジアゼピン−８−イル）オキシ）ペンチル）オキシ）−７−メトキシ−２−メチレン−５，１１−ジオキソ−２，３，１１，１１ａ−テトラヒドロ−１Ｈ−ベンゾ［ｅ］ピロロ［１，２−ａ］［１，４］ジアゼピン−１０（５Ｈ）−カルボン酸ｔｅｒｔ−ブチル８（５８ｍｇ、３０．０％）を白色固体として得た。ＬＣＭＳ（ＥＳＩ）：ＲＴ ＝ ０．７４８ 分， Ｍ ＋ Ｎａ＋ ＝ ８４１．４． 方法 ＝ ５−９５ＡＢ ／１．５ 分．
９５％ＴＦＡ／Ｈ２Ｏ（２．０ｍＬ）中の化合物８（５８ｍｇ、０．０７ｍｍｏｌ）の溶液を、０℃で２時間攪拌した。次いで、溶液を飽和ＮａＨＣＯ３溶液（１２０ｍＬ）に０℃で滴下した。混合物をＤＣＭ（２０ｍＬ×３）で抽出した。組み合わせた有機層をＮａ２ＳＯ４上で乾燥して濾過し、濃縮してｐｒｅｐ−ＨＰＬＣによって精製し、ＤＭ−２（１５．７ｍｇ、３８％）を白色固体として得た。１Ｈ ＮＭＲ （４００ ＭＨｚ， ＣＤＣｌ３） δ ｐｐｍ １．６５ − １．７３ （ｍ， ２ Ｈ） １．８９ − ２．００ （ｍ， ４ Ｈ） ２．７７ − ２．８９ （ｍ， １ Ｈ） ２．９１ − ３．００ （ｍ， １ Ｈ） ３．０８ − ３．１９ （ｍ， １ Ｈ） ３．４６ （ｄ， Ｊ ＝ １６．６ Ｈｚ， １ Ｈ） ３．９１ （ｓ， ３ Ｈ） ３．９４ （ｓ， ３ Ｈ） ４．０２ （ｔ， Ｊ ＝ ６．５ Ｈｚ， ２ Ｈ） ４．０６ − ４．１９ （ｍ， ２ Ｈ） ４．２０ − ４．２６ （ｍ， ２ Ｈ） ４．３０ （ｓ， ２ Ｈ） ４．４３ （ｄ， Ｊ ＝ １５．６ Ｈｚ， １ Ｈ） ５．０９ − ５．２６ （ｍ， ４ Ｈ） ６．４１ （ｓ， １ Ｈ） ６．８０ （ｓ， １ Ｈ） ７．４３ （ｓ， １ Ｈ） ７．５１ （ｓ， １ Ｈ） ７．７１ （ｄ， Ｊ ＝ ４．５ Ｈｚ， １ Ｈ） ７．８３ （ｓ， １ Ｈ）．
（Ｓ）−８−メトキシ−９−（（５−（（（Ｓ）−７−メトキシ−２−メチレン−５−オキソ−２，３，５，１１ａ−テトラヒドロ−１Ｈ−ベンゾ［ｅ］ピロロ［１，２−ａ］［１，４］ジアゼピン−８−イル）オキシ）ペンチル）オキシ）−１，３，４，１２ａ−テトラヒドロ−６Ｈ−ベンゾ［ｅ］［１，４］オキサジノ［４，３−ａ］［１，４］ジアゼピン−６，１２（１１Ｈ）−ジオン ＤＭ−３の合成

ＤＭＦ（１００ｍＬ）中の４−ヒドロキシ−３−メトキシ安息香酸メチル３８（３．０ｇ、１６．５ｍｍｏｌ）の溶液を、臭化ベンジル（４．２２ｇ、２４．７ｍｍｏｌ）及びＫ２ＣＯ３（４．５６ｇ、３２．９ｍｍｏｌ）に添加した。反応混合物を１００℃で３時間攪拌した。混合物を真空中で濃縮し、水（５０ｍＬ）中に溶解してＥｔＯＡＣ（３０ｍＬ×２）で抽出し、ＮａＣｌ（３０ｍＬ）で洗浄してＮａ２ＳＯ４上で乾燥した。それを濃縮して、シリカクロマトグラフィー（石油エーテル中の０〜３０％ＥｔＯＡｃ）によって精製し、４−（ベンジルオキシ）−３−メトキシ安息香酸メチル３９（３．８ｇ、１３．５ｍｍｏｌ、８２．２％収率）を白色固体として得た。ＬＣＭＳ （５−９５ＡＢ／１．５ 分）：ＲＴ ＝ ０．７８７ 分， ［Ｍ＋Ｈ］＋２７２．９
ＨＯＡｃ（５．０ｍＬ）中の３９（２．０ｇ、７．３４ｍｍｏｌ）の溶液を、ＨＯＡｃ（５．０ｍＬ）及びＨＮＯ３（２０．６ｍＬ、４４１ｍｍｏｌ）の混合物に０℃で添加した。反応混合物を２０℃で３０分間攪拌した。混合物を氷水（１００ｍＬ）中に注ぎ、ｐＨを５〜６に調整した。混合物を濾過し、濾液を濃縮して４−（ベンジルオキシ）−５−メトキシ−２−ニトロ安息香酸メチル４０（２．３ｇ、７．２５ｍｍｏｌ、９８．７％収率）を黄色固体として得た。
ＭｅＯＨ（２０ｍＬ）中の４０（２．３ｇ、７．２５ｍｍｏｌ）の溶液を、水（５ｍＬ）中のＬｉＯＨ（２．２５ｍＬ、３６．２４ｍｍｏｌ）の溶液に添加した。反応混合物を２０℃で２時間攪拌した。混合物を水（５０ｍＬ）中に注ぎ、ＥｔＯＡｃ（５０ｍＬ）で洗浄した。水相のｐＨを２Ｍ ＨＣｌで３〜４に調整し、ＥｔＯＡｃ（５０ｍＬ×３）で抽出した。それをＮａＣｌ（２５ｍＬ）で洗浄してＮａ２ＳＯ４上で乾燥し、真空中で濃縮して粗４−（ベンジルオキシ）−５−メトキシ−２−ニトロ安息香酸４１（２．０ｇ、６．５９ｍｍｏｌ、９１％収率）を白色固体として得た。
ＤＣＭ（３０ｍＬ）中の４１（４６０．０ｍｇ、１．５２ｍｍｏｌ）及び（Ｓ）−モルホリン−３−カルボン酸メチル４２、ＣＡＳ登録番号７４１２８８−３１−３、Ｈｉｃｋｓ，Ｆ．ｅｔ ａｌ，（２０１３）Ｏｒｇａｎｉｃ Ｐｒｏｃｅｓｓ Ｒｅｓｅａｒｃｈ＆Ｄｅｖｅｌｏｐｍｅｎｔ，１７（５）：８２９−８３７，（３３０ｍｇ、２．２８ｍｍｏｌ）及びジイソプロピルエチルアミン、ＤＩＥＡ（３９２ｍｇ、３．０３ｍｍｏｌ）の混合物を、ＨＡＴＵ（８６５ｍｇ、２．２８ｍｍｏｌ）に添加した。反応溶液を２０℃で８時間攪拌した。溶液を真空中で濃縮し、シリカ上でのクロマトグラフィー（石油エーテル中の０〜５０％ＥｔＯＡｃ）によって精製して、（Ｓ）−４−（４−（ベンジルオキシ）−５−メトキシ−２−ニトロベンゾイル）モルホリン−３−カルボン酸メチル４３（５２０ｍｇ、１．２１ｍｍｏｌ、７９．７％収率）を黄色油として得た。ＬＣＭＳ （５−９５ＡＢ／１．５ 分）：ＲＴ ＝ ０．７３１分， ［Ｍ＋Ｎａ］＋４５３．０
ＥｔＯＨ（２０ｍＬ）及び水（１５ｍＬ）中のＮＨ４Ｃｌ（６４６ｍｇ、１２．１ｍｍｏｌ）の溶液を、４３（５２０ｍｇ、１．２１ｍｍｏｌ）及び鉄（５３９ｍｇ、９．６７ｍｍｏｌ）に添加した。反応混合物を９０℃で１２時間攪拌した後、それを濾過して、濾液をＥｔＯＡｃ（５０ｍＬ×３）で抽出し、ＮａＣｌ（２０ｍＬ）で洗浄してＮａ２ＳＯ４上で乾燥し、真空中で濃縮した。反応混合物を、シリカ上でのクロマトグラフィー（石油エーテル中の０〜３０％ＥｔＯＡｃ）によって精製し、（Ｓ）−９−（ベンジルオキシ）−８−メトキシ−１，３，４，１２ａ−テトラヒドロ−６Ｈ−ベンゾ［ｅ］［１，４］オキサジノ［４，３−ａ］［１，４］ジアゼピン−６，１２（１１Ｈ）−ジオン４４（３２０ｍｇ、０．８４ｍｍｏｌ、６９．７％収率）を白色固体として得た。ＬＣＭＳ （５−９５ＡＢ／１．５ 分）：ＲＴ ＝ ０．６３８分， ［Ｍ＋Ｈ］＋３６８．９
ＤＣＭ（１０ｍＬ）及びＭｅＯＨ（１．０ｍＬ）中の４４（２６０ｍｇ、０．７１ｍｍｏｌ）の溶液を、１０％パラジウム炭素（２６．０ｍｇ、０．０２０ｍｍｏｌ）に添加した。反応混合物を１８℃で１時間、Ｈ２下（１５ｐｓｉ）で攪拌した。反応混合物を濾過して真空中で濃縮し、（Ｓ）−９−ヒドロキシ−８−メトキシ−１，３，４，１２ａ−テトラヒドロ−６Ｈ−ベンゾ［ｅ］［１，４］オキサジノ［４，３−ａ］［１，４］ジアゼピン−６，１２（１１Ｈ）−ジオン４５（１００ｍｇ、０．３５９ｍｍｏｌ、５０．９％収率）を白色固体として得た。
ＤＭＦ（５．０ｍＬ）中の（１１Ｓ，１１ａＳ）−８−ヒドロキシ−７−メトキシ−２−メチレン−５−オキソ−１１−（（テトラヒドロ−２Ｈ−ピラン−２−イル）オキシ）−２，３，１１，１１ａ−テトラヒドロ−１Ｈ−ベンゾ［ｅ］ピロロ［１，２−ａ］［１，４］ジアゼピン−１０（５Ｈ）−カルボン酸ｔｅｒｔ−ブチル４６（２００ｍｇ、０．４３ｍｍｏｌ）の溶液を、Ｋ２ＣＯ３（６０ｍｇ、０．４３ｍｍｏｌ）及び１，５−ジヨードペンタン（７０３ｍｇ、２．１７ｍｍｏｌ）に添加した。反応混合物を９０℃で１２時間攪拌した。反応混合物を濃縮して、シリカクロマトグラフィー（石油エーテル中の０〜５０％ＥｔＯＡｃ）によって精製し、（１１Ｓ，１１ａＳ）−８−（（５−ヨードペンチル）オキシ）−７−メトキシ−２−メチレン−５−オキソ−１１−（（テトラヒドロ−２Ｈ−ピラン−２−イル）オキシ）−２，３，１１，１１ａ−テトラヒドロ−１Ｈ−ベンゾ［ｅ］ピロロ［１，２−ａ］［１，４］ジアゼピン−１０（５Ｈ）−カルボン酸ｔｅｒｔ−ブチル４７（１２９ｍｇ、０．１９１ｍｍｏｌ、４３．９％収率）を黄色油として得た。ＬＣＭＳ （５−９５ＡＢ／１．５ 分）：ＲＴ ＝ ０．９０７分， ［Ｍ＋Ｈ］＋６５７．１
ＤＭＦ（５．０ｍＬ）中の４７（１００ｍｇ、０．１５０ｍｍｏｌ）、４５（５０．９ｍｇ、０．１８ｍｍｏｌ）及びＫ２ＣＯ３（３１．６ｍｇ、０．２３ｍｍｏｌ）の混合物。混合物を９０℃で３時間攪拌した。混合物を真空中で濃縮し、クロマトグラフィー（ＤＣＭ中の０〜５％ＭｅＯＨ Ｒｆ＝０．４）によって精製して、（１１Ｓ，１１ａＳ）−７−メトキシ−８−（（５−（（（Ｓ）−８−メトキシ−６，１２−ジオキソ−３，４，６，１１，１２，１２ａ−ヘキサヒドロ−１Ｈ−ベンゾ［ｅ］［１，４］オキサジノ［４，３−ａ］［１，４］ジアゼピン−９−イル）オキシ）ペンチル）オキシ）−２−メチレン−５−オキソ−１１−（（テトラヒドロ−２Ｈ−ピラン−２−イル）オキシ）−２，３，１１，１１ａ−テトラヒドロ−１Ｈ−ベンゾ［ｅ］ピロロ［１，２−ａ］［１，４］ジアゼピン−１０（５Ｈ）−カルボン酸ｔｅｒｔ−ブチル４８（７５ｍｇ、０．０９３ｍｍｏｌ、６１％収率）を無色の油として得た。
化合物４８（７５．０ｍｇ、０．０９０ｍｍｏｌ）をＴＦＡ（１．９ｍＬ）及び水（０．１０ｍＬ）に０℃で添加した。混合物を１７℃で１時間攪拌した。反応混合物を飽和ＮａＨＣＯ３（２００ｍＬ）中に注ぎ、ＤＣＭ（１００ｍＬ×３）で抽出してブライン（５０ｍＬ）で洗浄し、乾燥してｐｒｅｐ−ＴＬＣ（ＤＣＭ中の４％メタノール Ｒｆ＝０．５）によって精製して、ＤＭ−３（１８．９ｍｇ、０．０３０ｍｍｏｌ、３２．３％収率）を白色固体として得た。ＬＣＭＳ （５−９５ＡＢ／１．５ 分）：ＲＴ ＝ ０．６３３ 分， ［Ｍ＋Ｈ］＋ ６０５．２．１Ｈ ＮＭＲ （４００ ＭＨｚ，ＣＤＣｌ３） δ ８．１６ （ｓ， １Ｈ）， ７．６４ （ｄ， Ｊ ＝ ４．４ Ｈｚ， １Ｈ）， ７．４３ （ｓ， １Ｈ）， ７．２２ （ｄ， Ｊ ＝ ２３．２ Ｈｚ， １Ｈ）， ６．７３ （ｄ， Ｊ ＝ ２．４ Ｈｚ， １Ｈ）， ６．３５（ｄ， Ｊ ＝ ２．８ Ｈｚ， １Ｈ）， ５．１１ （ｄ， Ｊ ＝ １０．８ Ｈｚ， ２Ｈ）， ４．４１ （ｓ， ３Ｈ）， ４．３８ （ｓ， ２Ｈ）， ４．２２ （ｓ， ３Ｈ）， ４．０５ （ｓ， ３Ｈ）， ４．０４ （ｓ， ３Ｈ）， ４．０２ （ｓ， ３Ｈ）， ３．９５−３．９２ （ｍ， １Ｈ）， ３．８６ （ｓ， １Ｈ）， ３．８３−３．６２ （ｍ， １Ｈ）， ３．１８ （ｓ， １Ｈ）， ２．８８ （ｄ， Ｊ ＝ ３０．８ Ｈｚ， １Ｈ）， １．８６ （ｓ， ４Ｈ） １．７９−１．６２ （ｍ， ２Ｈ）．
（Ｓ）−７−メトキシ−８−（（５−（（（Ｓ）−７−メトキシ−５−オキソ−２，３，５，１１ａ−テトラヒドロ−１Ｈ−ベンゾ［ｅ］ピロロ［１，２−ａ］アゼピン−８−イル）オキシ）ペンチル）オキシ）−２−メチレン−１，２，３，１１ａ−テトラヒドロ−５Ｈ−ベンゾ［ｅ］ピロロ［１，２−ａ］［１，４］ジアゼピン−５−オン ＤＭ−５の合成

ＤＣＭ（８０ｍＬ）中の（Ｓ）−２−（ヒドロキシメチル）ピロリジン−１−カルボン酸ｔｅｒｔ−ブチル２５（３．０ｇ、１４．９ｍｍｏｌ）の溶液に、デスマーチンペルヨージナン、ＤＭＰ（９．４８ｇ、２２．４ｍｍｏｌ）を添加した。混合物を０℃で１時間攪拌した後、それをＮａ２Ｓ２Ｏ３（５０ｍＬ）／ＮａＨＣＯ３（５０ｍＬ）及びＭＴＢＥ（１３０ｍＬ）に添加した。有機相を水（６０ｍＬ×３）で洗浄し、濃縮して（Ｓ）−２−ホルミルピロリジン−１−カルボン酸ｔｅｒｔ−ブチル２６（２．９ｇ、１４．６ｍｍｏｌ、９７．６％収率）を無色の油として得た。
ＭｅＯＨ（２０ｍＬ）中の化合物２６（２．９ｇ、１４．６ｍｍｏｌ）及び（１−ジアゾ−２−オキソ−プロピル）ホスホン酸ジメチルの溶液に、Ｋ２ＣＯ３（６．０３ｇ、４３．７ｍｍｏｌ）を添加した。反応混合物を２０℃で１時間攪拌した後、それを真空中で濃縮し、残留物をカラムクロマトグラフィー（ＰＥ中の１０％ＥｔＯＡｃ）によって精製して、（Ｓ）−２−エチニルピロリジン−１−カルボン酸ｔｅｒｔ−ブチル２７（２．０ｇ、１０．２４ｍｍｏｌ、７０．４％収率）を無色の油として得た。
ＤＭＦ（５０ｍＬ）中の化合物２７（２．０ｇ、１０．２ｍｍｏｌ）及び４−（ベンジルオキシ）−２−ブロモ−５−メトキシ安息香酸メチル２８（５．４ｇ、１５．４ｍｍｏｌ）の溶液に、Ｃｓ２ＣＯ３（３．９７ｇ、２０．５ｍｍｏｌ）及びＰｄ（ＰＰｈ３）４（７８５ｍｇ、１．５４ｍｍｏｌ）を添加した。混合物を、９５℃でＮ２下において１時間攪拌した。混合物を濃縮して、フラッシュカラムクロマトグラフィー（ＰＥ中の２０％ＥｔＯＡｃ）によって精製し、（Ｓ）−２−（（５−（ベンジルオキシ）−４−メトキシ−２−（メトキシカルボニル）フェニル）エチニル）ピロリジン−１−カルボン酸ｔｅｒｔ−ブチル２９（１．６０ｇ、２．４４ｍｍｏｌ、２３．８％収率）を無色の油として得た。ＬＣＭＳ （５−９５ＡＢ／１．５ 分）：ＲＴ ＝ ０．９９４ 分， ［Ｍ＋Ｈ−５６］＋４１０．０
ＭｅＯＨ（１０ｍＬ）中の化合物２９（２．０ｇ、４．３ｍｍｏｌ）の溶液に、Ｐｄ／ＣａＣＯ３（２００．０ｍｇ、２１．５ｍｍｏｌ）を添加した。混合物を３０℃で１時間、Ｈ２下（１ａｔｍ）で攪拌した。混合物を濾過し、濾液を濃縮して粗生成物を得て、これをフラッシュカラムクロマトグラフィー（ＰＥ中の１０％ＥｔＯＡｃ）によって精製して、（Ｓ，Ｚ）−２−（５−（ベンジルオキシ）−４−メトキシ−２−（メトキシカルボニル）スチリル）ピロリジン−１−カルボン酸ｔｅｒｔ−ブチル３０（１．０ｇ、２．１４ｍｍｏｌ、４９．８％収率）を白色固体として得た。ＬＣＭＳ （５−９５ＡＢ／１．５ 分）：ＲＴ ＝ ０．９８３ 分， ［Ｍ＋Ｎａ］＋４９０．１
ＥｔＯＡｃ（１０ｍＬ）中の化合物３０（０．９ｇ、１．９２ｍｍｏｌ）の溶液に、ＨＣｌ／ＥｔＯＡｃ（６．０ｍＬ）を添加した。混合物を２５℃で１時間攪拌した後、それを濃縮して（Ｓ，Ｚ）−４−（ベンジルオキシ）−５−メトキシ−２−（２−（ピロリジン−２−イル）ビニル）安息香酸メチル３１（０．７７ｇ、１．９０ｍｍｏｌ、９９％収率）を白色固体として得た。
ＭｅＯＨ（３０ｍＬ）中の化合物３１（０．７７ｇ、１．９１ｍｍｏｌ）の溶液に、ＮａＯＭｅ（１．０３ｇ、１９．０６ｍｍｏｌ）を添加した。混合物を３０℃で２時間攪拌した。混合物を濃縮して、フラッシュカラムクロマトグラフィー（ＰＥ中の２５〜７５％ＥｔＯＡｃ）によって精製し、（Ｓ）−８−（ベンジルオキシ）−７−メトキシ−１，２，３，１１ａ−テトラヒドロ−５Ｈ−ベンゾ［ｅ］ピロロ［１，２−ａ］アゼピン−５−オン３２（０．６０ｇ、１．７９ｍｍｏｌ、９３．８％収率）を黄色油として得た。１Ｈ ＮＭＲ （４００ ＭＨｚ， ＣＤＣｌ３）δ ｐｐｍ １．８９ − ２．１１ （ｍ， ３ Ｈ） ２．１８ − ２．３３ （ｍ， １ Ｈ） ３．５９ （ｄｔ， Ｊ ＝ １２．０， ７．６ Ｈｚ， １ Ｈ） ３．８０ （ｄｔ， Ｊ ＝ １１．５， ５．８ Ｈｚ， １ Ｈ） ３．９０ − ３．９６ （ｍ， １ Ｈ） ３．９７ （ｓ， ３ Ｈ） ５．１９ （ｓ， ２ Ｈ） ５．８６ （ｄｄ， Ｊ ＝ １０．０， ４．８ Ｈｚ， １ Ｈ） ６．５３ （ｄｄ， Ｊ ＝ １０．０， ２．０ Ｈｚ， １ Ｈ） ６．６９ （ｓ， １ Ｈ） ７．２９ − ７．３５ （ｍ， １ Ｈ） ７．３６ − ７．４１ （ｍ， ２ Ｈ） ７．４２ − ７．４８ （ｍ， ２ Ｈ） ７．６２ （ｓ， １ Ｈ）
ＤＣＭ（５０ｍＬ）中の化合物３２（５８０ｍｇ、１．７３ｍｍｏｌ）の溶液に、ＴｉＣｌ４（６５６ｍｇ、３．４６ｍｍｏｌ）を添加した。混合物を３０℃で１２時間攪拌した。混合物を１Ｍ ＨＣｌ（２０ｍＬ）及びＥｔＯＡｃ（１００ｍＬ）に添加した。有機層を水（５０ｍＬ×３）で洗浄し、濃縮して（Ｓ）−８−ヒドロキシ−７−メトキシ−１，２，３，１１ａ−テトラヒドロ−５Ｈ−ベンゾ［ｅ］ピロロ［１，２−ａ］アゼピン−５−オン３３（２５０ｍｇ、０．４４ｍｍｏｌ、２５．３％収率）を黄色固体として得た。
ＤＭＦ（５．０ｍＬ）中の化合物３３（５０．０ｍｇ、０．２０ｍｍｏｌ）の溶液を、Ｋ２ＣＯ３（４２．２６ｍｇ、０．３１ｍｍｏｌ）及び１，５−ジヨードペンタン（３３３ｍｇ、１．０ｍｍｏｌ）に添加した。反応混合物を９０℃で３時間攪拌した。反応混合物を、シリカクロマトグラフィー（石油エーテル中の０〜５０％ＥｔＯＡＣ）によって精製し、（Ｓ）−８−（（５−ヒドロキシペンチル）オキシ）−７−メトキシ−１，２，３，１１ａ−テトラヒドロ−５Ｈ−ベンゾ［ｅ］ピロロ［１，２−ａ］アゼピン−５−オン３４（６０ｍｇ、０．１７８ｍｍｏｌ、８７．６％収率）を油として得た。ＬＣＭＳ （５−９５ＡＢ／１．５ 分）：ＲＴ ＝０．７６５ 分， ［Ｍ＋Ｈ］＋３３２．０
ＤＣＭ（６．０ｍＬ）中の化合物３４（６０．０ｍｇ、０．１８ｍｍｏｌ）の溶液に、トリエチルアミン（５５ｍｇ、０．５４ｍｍｏｌ）及び塩化メタンスルホニル、ＭｓＣｌ（４１ｍｇ、０．３６ｍｍｏｌ）を添加した。混合物を３５℃で１時間攪拌した後、ＥｔＯＡｃ（８０ｍＬ）、水（５０ｍＬ×３）で洗浄した。有機層を濃縮して、（Ｓ）−５−（（７−メトキシ−５−オキソ−２，３，５，１１ａ−テトラヒドロ−１Ｈ−ベンゾ［ｅ］ピロロ［１，２−ａ］アゼピン−８−イル）オキシ）ペンチルメタンスルホン酸３５（７０ｍｇ）を無色の油として得た。ＬＣＭＳ （５−９５ＡＢ／１．５ 分）：ＲＴ ＝ ０．６７９ 分， ［Ｍ＋Ｈ］＋４１０．０
ＤＭＦ（５．０ｍＬ）中の化合物３５（７０ｍｇ、０．１７ｍｍｏｌ）及び（１１Ｓ，１１ａＳ）−８−ヒドロキシ−７−メトキシ−２−メチレン−５−オキソ−１１−（（テトラヒドロ−２Ｈ−ピラン−２−イル）オキシ）−２，３，１１，１１ａ−テトラヒドロ−１Ｈ−ベンゾ［ｅ］ピロロ［１，２−ａ］［１，４］ジアゼピン−１０（５Ｈ）−カルボン酸ｔｅｒｔ−ブチル３６（８７ｍｇ、０．１９ｍｍｏｌ）の溶液に、Ｋ２ＣＯ３（４７ｍｇ、０．３４ｍｍｏｌ）及びＫＩ（５．６８ｍｇ、０．０３０ｍｍｏｌ）を添加した。混合物を９０℃で３時間攪拌し、ｐｒｅｐ−ＨＰＬＣ（ＨＣＯＯＨ）によって精製して、（１１ａＲ）−７−メトキシ−８−（（５−（（（Ｓ）−７−メトキシ−５−オキソ−２，３，５，１１ａ−テトラヒドロ−１Ｈ−ベンゾ［ｅ］ピロロ［１，２−ａ］アゼピン−８−イル）オキシ）ペンチル）オキシ）−２−メチレン−５−オキソ−１１ａ−（（テトラヒドロ−２Ｈ−ピラン−２−イル）オキシ）−２，３，１１，１１ａ−テトラヒドロ−１Ｈ−ベンゾ［ｅ］ピロロ［１，２−ａ］［１，４］ジアゼピン−１０（５Ｈ）−カルボン酸ｔｅｒｔ−ブチル３７（７０ｍｇ、０．０８４ｍｍｏｌ、４９．２％収率）を白色固体として得た。ＬＣＭＳ （５−９５ＡＢ／１．５ 分）：ＲＴ ＝ ０．８４５ 分， ［Ｍ＋Ｈ］＋７７４．４
ＴＦＡ（１．９ｍＬ）及び水（０．１０ｍＬ）中の化合物３７（５０ｍｇ、０．０６０ｍｍｏｌ）の溶液を、３５℃で１時間攪拌した。混合物を、飽和ＮａＨＣＯ３（３０ｍＬ）とＥｔＯＡｃ（５０ｍＬ）との間で分画した。有機層を水（３０ｍＬ×２）及びブライン（３０ｍＬ）で洗浄し、Ｎａ２ＳＯ４上で乾燥した。それを濃縮し、ｐｒｅｐ−ＴＬＣ（ＤＣＭ中の５％ＭｅＯＨ、Ｒｆ＝０．５）によって精製して、ＤＭ−５（２０ｍｇ、０．０３４ｍｍｏｌ、５３．１％収率）を白色固体として得た。ＬＣＭＳ （５−９５ＡＢ／１．５ 分）：ＲＴ ＝ ０．８２５ 分， ［Ｍ＋Ｈ］＋５７２．１．１Ｈ ＮＭＲ （４００ ＭＨｚ， ＣＤＣｌ３）δｐｐｍ １．６５ − １．７５ （ｍ， ３ Ｈ） １．８８ − ２．１０ （ｍ， ８ Ｈ） ２．１９ − ２．３１ （ｍ， １ Ｈ） ２．８２ − ３．２９ （ｍ， ２ Ｈ） ３．６０ （ｄｔ， Ｊ ＝ １１．９， ７．５ Ｈｚ， １ Ｈ） ３．８１ （ｄｔ， Ｊ ＝ １１．６， ５．９ Ｈｚ， １ Ｈ） ３．８６ − ３．９１ （ｍ， １ Ｈ） ３．９４ （ｓ， ６ Ｈ） ３．９７ （ｂｒ． ｓ．， １ Ｈ） ４．０１ − ４．１８ （ｍ， ４ Ｈ） ４．３０ （ｓ， ２ Ｈ） ５．１９ （ｄ， Ｊ ＝ １０．６ Ｈｚ， ２ Ｈ） ５．８９ （ｄｄ， Ｊ ＝ ９．９， ５．１ Ｈｚ， １ Ｈ） ６．５３ − ６．６３ （ｍ， １ Ｈ） ６．６６ （ｓ， １ Ｈ） ６．８１ （ｓ， １ Ｈ） ７．５１ （ｓ， １ Ｈ） ７．５９ （ｓ， １ Ｈ） ７．６８ （ｄ， Ｊ ＝ ４．４ Ｈｚ， １ Ｈ）
実施例２ モノアルキル化剤のピロロベンゾジアゼピンリンカー−薬物中間体（表２Ａ）の調製

１，２−ジ（ピリジン−２−イル）ジスルファン及び２−メルカプトエタノールを、ピリジン及びメタノール中において室温で反応させて、２−（ピリジン−２−イルジスルファニル）エタノールを得た。トリエチルアミン及びアセトニトリル中における４−ニトロフェニルカルボノクロリデートを用いたアシル化によって、４−ニトロフェニル２−（ピリジン−２−イルジスルファニル）エチルカーボネート９を得た。
無水ＤＭＦ／ＭｅＯＨ（２５ｍＬ／２５ｍＬ）中の１，２−ビス（５−ニトロピリジン−２−イル）ジスルファン１０（１．０ｇ、３．２２ｍｍｏｌ）の混合物に、ＨＯＡｃ（０．１ｍＬ）、続いて２−アミノエタンチオール塩酸塩１１（１８３ｍｇ、１．６１ｍｍｏｌ）を添加した。反応混合物を室温で一晩攪拌した後、それを真空下で濃縮して溶媒を除去し、残留物をＤＣＭ（３０ｍＬ×４）で洗浄して、２−（（５−ニトロピリジン−２−イル）ジスルファニル）エタンアミン塩酸塩１２を淡黄色固体として得た（３００ｍｇ、６９．６％）。１Ｈ ＮＭＲ （４００ ＭＨｚ， ＤＭＳＯ−ｄ６） δ ９．２８ （ｄ， Ｊ ＝ ２．４ Ｈｚ， １Ｈ）， ８．５６ （ｄｄ， Ｊ ＝ ８．８， ２．４ Ｈｚ， １Ｈ）， ８．２４ （ｓ， ４Ｈ）， ８．０３ （ｄ， Ｊ ＝ ８．８ Ｈｚ， １Ｈ）， ３．１５ − ３．１３ （ｍ， ２Ｈ）， ３．０８ − ３．０６ （ｍ， ２Ｈ）
無水ＤＣＭ／ＣＨ３ＯＨ（２５０ｍＬ／２５０ｍＬ）中の１，２−ビス（５−ニトロピリジン−２−イル）ジスルファン１０（９．６ｇ、３０．９７ｍｍｏｌ）及び２−メルカプトエタノール（１．２１ｇ、１５．４９ｍｍｏｌ）の溶液を、室温でＮ２下において２４時間攪拌した。混合物を真空下で濃縮した後、残留物をＤＣＭ（３００ｍＬ）で希釈した。ＭｎＯ２（１０ｇ）を添加して、混合物を室温でさらに０．５時間攪拌した。混合物を、シリカゲル上でのカラムクロマトグラフィー（ＤＣＭ／ＭｅＯＨ＝１００／１〜１００／１）によって精製し、２−（（５−ニトロピリジン−２−イル）ジスルファニル）エタノール１３（２．２ｇ、６１．１％）を褐色油として得た。１Ｈ ＮＭＲ （４００ ＭＨｚ， ＣＤＣｌ３） δ ９．３３ （ｄ， Ｊ ＝ ２．８ Ｈｚ， １Ｈ）， ８．３８ − ８．３５ （ｄｄ， Ｊ ＝ ９．２， ２．８ Ｈｚ， １Ｈ）， ７．６７ （ｄ， Ｊ ＝ ９．２ Ｈｚ， １Ｈ）， ４．１０ （ｔ， Ｊ ＝ ７．２ Ｈｚ， １Ｈ）， ３．８１ − ３．７６ （ｑ， ２Ｈ）， ３．０１ （ｔ， Ｊ ＝ ５．２ Ｈｚ， ２Ｈ）．
無水ＤＭＦ（１０ｍＬ）中の１３（５００ｍｇ、２．１５ｍｍｏｌ）の溶液に、ＤＩＥＡ（８３４ｍｇ、６．４５ｍｍｏｌ）、続いてＰＮＰカーボネート（ビス（４−ニトロフェニル）カーボネート、１．３１ｇ、４．３１ｍｍｏｌ）を添加した。反応溶液を室温で４時間攪拌し、混合物をｐｒｅｐ−ＨＰＬＣ（ＦＡ）によって精製して、４−ニトロフェニル２−（（５−ニトロピリジン−２−イル）ジスルファニル）エチルカーボネート１４（２７０ｍｇ、３３．１％）を淡褐色油として得た。１Ｈ ＮＭＲ （４００ ＭＨｚ， ＣＤＣｌ３） δ ９．３０ （ｄ， Ｊ ＝ ２．４ Ｈｚ， １Ｈ）， ８．４３ − ８．４０ （ｄｄ， Ｊ ＝ ８．８， ２．４ Ｈｚ， １Ｈ）， ８．３０ − ８．２８ （ｍ， ２Ｈ）， ７．８７ （ｄ， Ｊ ＝ ８．８ Ｈｚ， １Ｈ）， ７．３９ − ７．３７ （ｍ， ２Ｈ）， ４．５６ （ｔ， Ｊ ＝ ６．４ Ｈｚ， ２Ｈ）， ３．２１ （ｔ， Ｊ ＝ ６．４ Ｈｚ， ２Ｈ）．
（１１Ｓ，１１ａＳ）−（Ｒ）−２−（（５−ニトロピリジン−２−イル）ジスルファニル）プロピル１１−ヒドロキシ−７−メトキシ−８−（（５−（（（Ｓ）−７−メトキシ−２−メチレン−５，１１−ジオキソ−２，３，５，１０，１１，１１ａ−ヘキサヒドロ−１Ｈ−ベンゾ［ｅ］ピロロ［１，２−ａ］［１，４］ジアゼピン−８−イル）オキシ）ペンチル）オキシ）−２−メチレン−５−オキソ−２，３，１１，１１ａ−テトラヒドロ−１Ｈ−ベンゾ［ｅ］ピロロ［１，２−ａ］［１，４］ジアゼピン−１０（５Ｈ）−カルボキシレート（ＬＤ−５１）の合成

塩化スルフリル（２．３５ｍＬの１．０Ｍ ＤＣＭ溶液、２．３５ｍｍｏｌ）を、乾燥ＤＣＭ（７．５ｍＬ）中の５−ニトロピリジン−２−チオール（３３４ｍｇ、２．１４ｍｍｏｌ）の攪拌懸濁液に０℃（氷／アセトン）でアルゴン雰囲気下において滴下した。反応混合物は黄色懸濁液から黄色溶液に変化し、それを室温まで加温して、次いで２時間攪拌した後、溶媒を真空中での蒸発によって除去して黄色固体を得た。固体をＤＣＭ（１５ｍＬ）中に再溶解し、乾燥ＤＣＭ（７．５ｍＬ）中の（Ｒ）−２−メルカプトプロパン−１−オール（２１３ｍｇ、２．３１ｍｍｏｌ）の溶液を用いて０℃でアルゴン雰囲気下において滴下処理した。反応混合物を室温まで加温して２０時間攪拌し、この時点でのＬＣ／ＭＳによる分析によって、保持時間１．４１分間（ＥＳ＋）ｍ／ｚ２４７（［Ｍ＋Ｈ］＋、約１００％相対強度）で実質的な生成物形成が明らかとなった。沈殿物を濾過により除去し、濾液を真空中で蒸発させて橙色固体を得て、それをＨ２Ｏ（２０ｍＬ）で処理し、水酸化アンモニウム溶液で塩基性化した。混合物をＤＣＭ（３×２５ｍＬ）で抽出し、組み合わせた抽出物をＨ２Ｏ（２０ｍＬ）、ブライン（２０ｍＬ）で洗浄して乾燥させ（ＭｇＳＯ４）、濾過して真空中で蒸発させて、粗生成物を得た。フラッシュクロマトグラフィー（１％増分の勾配溶離：１００％ＤＣＭから９８：２ｖ／ｖのＤＣＭ／ＭｅＯＨ）による精製によって、（Ｒ）−２−（（５−ニトロピリジン−２−イル）ジスルファニル）プロパン−１−オール１５が油として得られた（１１１ｍｇ、２１％収率）。
ＤＣＭ（１０ｍＬ）中のトリホスゲン、Ｃｌ３ＣＯＣＯＯＣＣｌ３、Ｓｉｇｍａ Ａｌｄｒｉｃｈ、ＣＡＳ登録番号３２３１５−１０−９（２４１ｍｇ、０．８１２ｍｍｏｌ）の溶液に、ＤＣＭ（１０ｍＬ）中の（Ｒ）−２−（（５−ニトロピリジン−２−イル）ジスルファニル）プロパン−１−オール１５（５００ｍｇ、２．０３ｍｍｏｌ）及びピリジン（１５３ｍｇ、１．９３ｍｍｏｌ）の溶液を２０℃で滴下した。反応混合物を２０℃で３０分間攪拌した後、それを濃縮して、（Ｒ）−２−（（５−ニトロピリジン−２−イル）ジスルファニル）プロピルカルボノクロリデート１６を、さらに精製することなく次のステップで直接使用した。
ＤＣＭ（１０ｍＬ）中の化合物１６（６２６ｍｇ、２．０３ｍｍｏｌ）の溶液を、（５−（（５−（５−アミノ−４−（（Ｓ）−２−（（（ｔｅｒｔ−ブチルジメチルシリル）オキシ）メチル）−４−メチレンピロリジン−１−カルボニル）−２−メトキシフェノキシ）ペンチル）オキシ）−２−（（Ｓ）−２−（（（ｔｅｒｔ−ブチルジメチルシリル）オキシ）メチル）−４−メチレンピロリジン−１−カルボニル）−４−メトキシフェニル）カルバミン酸ｔｅｒｔ−ブチル１（１．５０ｇ、１．５７ｍｍｏｌ）及びピリジン（１６１ｍｇ、２．０５ｍｍｏｌ）の溶液に２０℃で滴下した。反応混合物を２０℃で３時間攪拌した。溶媒を除去し、残留物をフラッシュカラム（石油エーテル中のＥｔＯＡｃ ０〜３０％）によって精製し、（２−（（Ｓ）−２−（（（ｔｅｒｔ−ブチルジメチルシリル）オキシ）メチル）−４−メチレンピロリジン−１−カルボニル）−５−（（５−（４−（（Ｓ）−２−（（（ｔｅｒｔ−ブチルジメチルシリル）オキシ）メチル）−４−メチレンピロリジン−１−カルボニル）−２−メトキシ−５−（（（（Ｒ）−２−（（５−ニトロピリジン−２−イル）ジスルファニル）プロポキシ）カルボニル）アミノ）フェノキシ）ペンチル）オキシ）−４−メトキシフェニル）カルバミン酸ｔｅｒｔ−ブチル１７（１．６ｇ、８３％）を黄色泡沫として得た。ＬＣＭＳ （５−９５ＡＢ／１．５ 分）：ＲＴ ＝ １．３６０分， ［Ｍ＋Ｎａ］＋１２４７．４
ＴＨＦ／Ｈ２Ｏ（１０ｍＬ／１０ｍＬ）中の化合物１７（９００ｍｇ、０．７３４ｍｍｏｌ）の溶液に、ＨＯＡｃ（１５ｍＬ）を２０℃で添加した。反応混合物を２０℃で２４時間攪拌した。反応混合物をＥｔＯＡｃ（５０ｍＬ）で希釈し、水（２×２０ｍＬ）、飽和ＮａＨＣＯ３水溶液（３０ｍＬ）及びブライン（３０ｍＬ）で洗浄した。それを乾燥させ、濃縮して粗生成物を得て、これをフラッシュクロマトグラフィー（ＤＣＭ：ＭｅＯＨ＝１００：１〜２０：１）によって精製して、（２−（（Ｓ）−２−（ヒドロキシメチル）−４−メチレンピロリジン−１−カルボニル）−５−（（５−（４−（（Ｓ）−２−（ヒドロキシメチル）−４−メチレンピロリジン−１−カルボニル）−２−メトキシ−５−（（（（Ｒ）−２−（（５−ニトロピリジン−２−イル）ジスルファニル）プロポキシ）カルボニル）アミノ）フェノキシ）ペンチル）オキシ）−４−メトキシフェニル）カルバミン酸ｔｅｒｔ−ブチル１８（７００ｍｇ、９５．６％）を黄色泡沫として得た。ＬＣＭＳ （５−９５ＡＢ／１．５ 分）：ＲＴ ＝ ０．９７８分， ［Ｍ＋Ｈ］＋ ９９７．６
ＤＣＭ（４０ｍＬ）中の化合物１８（７００ｍｇ、０．７０２ｍｍｏｌ）の溶液に、デス−マーチンペルヨージナン、ＤＭＰ、１，１，１−トリス（アセチルオキシ）−１，１−ジヒドロ−１，２−ベンゾヨードキソール−３−（１Ｈ）−オン、Ｓｉｇｍａ Ａｌｄｒｉｃｈ、ＣＡＳ登録番号８７４１３−０９−０（１．１９ｍｇ、２．８１ｍｍｏｌ）を２０℃で添加した。反応混合物を２０℃で１時間攪拌した。反応を、ＮａＨＣＯ３／Ｎａ２ＳＯ３（２０ｍＬ／２０ｍＬ）の飽和溶液でクエンチし、ＤＣＭ（３×１０ｍＬ）で抽出した。組み合わせた有機層を、ＮａＨＣＯ３／Ｎａ２ＳＯ３（１０ｍＬ／１０ｍＬ）、ブライン（２０ｍＬ）で洗浄し、乾燥して濃縮し、（１１Ｓ，１１ａＳ）−１１−ヒドロキシ−８−（（５−（（（１１Ｓ，１１ａＳ）−１１−ヒドロキシ−７−メトキシ−２−メチレン−１０−（（（Ｒ）−２−（（５−ニトロピリジン−２−イル）ジスルファニル）プロポキシ）カルボニル）−５−オキソ−２，３，５，１０，１１，１１ａ−ヘキサヒドロ−１Ｈ−ベンゾ［ｅ］ピロロ［１，２−ａ］［１，４］ジアゼピン−８−イル）オキシ）ペンチル）オキシ）−７−メトキシ−２−メチレン−５−オキソ−２，３，１１，１１ａ−テトラヒドロ−１Ｈ−ベンゾ［ｅ］ピロロ［１，２−ａ］［１，４］ジアゼピン−１０（５Ｈ）−カルボン酸ｔｅｒｔ−ブチル１９（ＬＣＭＳ （５−９５ＡＢ／１．５分）： ＲＴ ＝０．９１２ 分， ［Ｍ＋Ｎａ］＋１０１５．３）及び（Ｓ）−８−（（５−（（（１１Ｓ，１１ａＳ）−１１−ヒドロキシ−７−メトキシ−２−メチレン−１０−（（（Ｒ）−２−（（５−ニトロピリジン−２−イル）ジスルファニル）プロポキシ）カルボニル）−５−オキソ−２，３，５，１０，１１，１１ａ−ヘキサヒドロ−１Ｈ−ベンゾ［ｅ］ピロロ［１，２−ａ］［１，４］ジアゼピン−８−イル）オキシ）ペンチル）オキシ）−７−メトキシ−２−メチレン−５，１１−ジオキソ−２，３，１１，１１ａ−テトラヒドロ−１Ｈ−ベンゾ［ｅ］ピロロ［１，２−ａ］［１，４］ジアゼピン−１０（５Ｈ）−カルボン酸ｔｅｒｔ−ブチル２０の混合物を得て、これを次のステップで直接使用した。
冷ＴＦＡ（８ｍＬ）を、１９及び２０（６００ｍｇ、０．６０４ｍｍｏｌ）の粗混合物に０℃で添加した。反応混合物を０℃で３０分間攪拌した。反応混合物を、冷飽和ＮａＨＣＯ３水溶液（１５０ｍＬ）に０℃で滴下し、ＤＣＭ（４×４０ｍＬ）で抽出した。組み合わせた有機層をブライン（５０ｍＬ）で洗浄し、乾燥させて濃縮し、粗生成物を得て、これをｐｒｅ−ＴＬＣ（ＤＣＭ：ＭｅＯＨ＝１５：１）によって精製して、純ＬＤ−５１（２８ｍｇ、５．２％）を黄色泡沫として分離させた。ＬＣＭＳ：（５−９５， ＡＢ， １．５ 分）， ０．７３９ 分， ｍ／ｚ ＝ ８９１．２ （Ｍ＋１）．１Ｈ ＮＭＲ （４００ ＭＨｚ， ＣＤＣｌ３） δ ９．２６ （ｓ， １Ｈ）， ８．３１ （ｄ， Ｊ ＝ ６．８ Ｈ， １Ｈｚ）， ８．１８ （ｓ， １Ｈ）， ７．６２ （ｄ， Ｊ ＝ ８．４ Ｈｚ， １Ｈ）， ７．４１ （ｓ， １Ｈ）， ７．１８ （ｓ， １Ｈ）， ６．７７ （ｓ， １Ｈ）， ６．４１ （ｓ， １Ｈ）， ５．６０ （ｄ， Ｊ ＝ １０．０ Ｈｚ， １Ｈ）， ５．２０−５．０６ （ｍ， ４Ｈ）， ４．５０−３．８１ （ｍ， １８Ｈ）， ３．７０−３．６０ （ｍ， １Ｈ）， ３．５０−３．４０ （ｍ， １Ｈ）， ３．１８ （ｂｒ， １Ｈ）， ２．９８−２．６２ （ｍ， ６Ｈ）， １．９５−１．８６ （ｍ， ４Ｈ）， １．７０−１．５２ （ｍ， ２Ｈ）， １．１７ （ｄ， Ｊ ＝ ６．４ Ｈｚ， ３Ｈ）．
（１１Ｓ，１１ａＳ）−（Ｒ）−２−（（５−ニトロピリジン−２−イル）ジスルファニル）プロピル１１−ヒドロキシ−７−メトキシ−８−（（５−（（（Ｓ）−７−メトキシ−２−メチレン−５−オキソ−２，３，５，１０，１１，１１ａ−ヘキサヒドロ−１Ｈ−ベンゾ［ｅ］ピロロ［１，２−ａ］［１，４］ジアゼピン−８−イル）オキシ）ペンチル）オキシ）−２−メチレン−５−オキソ−２，３，１１，１１ａ−テトラヒドロ−１Ｈ−ベンゾ［ｅ］ピロロ［１，２−ａ］［１，４］ジアゼピン−１０（５Ｈ）−カルボキシレート（ＬＤ−５２）の合成
ＴＨＦ（３．０ｍＬ）中のＣＬＤ−１（４５ｍｇ、０．０５０ｍｍｏｌ）の溶液に、ＮａＢＨ３ＣＮ（３ｍｇ、０．０５０ｍｍｏｌ）及びＨＯＡｃ（０．０５ｍＬ）を０℃で添加した。混合物を０℃で２分間攪拌した。反応溶液を、ｐｒｅｐ−ＴＬＣ（ＤＣＭ中の７％メタノール、Ｒｆ＝０．５）によって精製して、ＬＤ−５２（２０ｍｇ、０．０２２ｍｍｏｌ、４２．１％収率）を白色固体として得た。ＬＣＭＳ （５−９５ＡＢ／１．５ 分）：ＲＴ ＝ ０．８７８ 分， ［Ｍ＋Ｈ］＋８７７．２．１Ｈ ＮＭＲ （４００ ＭＨｚ， ＣＤＣｌ３） δ ９．１９ （ｓ， １Ｈ）， ８．２７ （ｄ， Ｊ ＝ ６．８ Ｈｚ， １Ｈ）， ７．５８ （ｄ， Ｊ ＝ ８．８ Ｈｚ， １Ｈ）， ７．５３ （ｓ， １Ｈ） ， ７．２４ （ｓ， １Ｈ） ， ６．６９ （ｓ， １Ｈ）， ６．０２ （ｓ， １Ｈ）， ５．５６ （ｄ， Ｊ ＝ ９．７ Ｈｚ， １Ｈ）， ５．１２ （ｓ， ２Ｈ）， ５．０５ （ｄ， Ｊ ＝ １１．２ Ｈｚ， ２Ｈ）， ４．５４ （ｂｒ．ｓ， １Ｈ）， ４．４２−４．３８ （ｍ， １Ｈ）， ４．２９−４．２２ （ｍ， ４Ｈ）， ４．１３−４．０９ （ｍ， １Ｈ）， ４．０２−３．３９ （ｍ， ８Ｈ）， ３．７９ （ｓ， ３Ｈ）， ３．６３ （ｔ， Ｊ ＝ ８．０ Ｈｚ， １Ｈ）， ３．５３ （ｄ， Ｊ ＝ １１．９ Ｈｚ， １Ｈ）， ３．３７−３．３１ （ｍ， １Ｈ）， ３．１６−３．１４ （ｍ， １Ｈ）， ２．９４−２．８８ （ｍ， ２Ｈ）， ２．７４−２．７１ （ｍ， １Ｈ）， ２．４４−２．３９ （ｍ， １Ｈ）， １．９３−１．８５ （ｍ， ４Ｈ）， １．６６−１．５６ （ｍ， ２Ｈ）， １．２４−１．１４ （ｍ， ３Ｈ）
実施例３ 比較物のピロロベンゾジアゼピンリンカー−薬物中間体（表２Ｂ）の調製
（Ｒ）−２−（（５−ニトロピリジン−２−イル）ジスルファニル）プロピル（１１Ｓ，１１ａＳ）−１１−ヒドロキシ−７−メトキシ−８−（（５−（（（Ｓ）−７−メトキシ−２−メチレン−５−オキソ−２，３，５，１０，１１，１１ａ−ヘキサヒドロ−１Ｈ−ベンゾ［ｅ］ピロロ［１，２−ａ］［１，４］ジアゼピン−８−イル）オキシ）ペンチル）オキシ）−２−メチレン−５−オキソ−２，３，１１，１１ａ−テトラヒドロ−１Ｈ−ベンゾ［ｅ］ピロロ［１，２−ａ］［１，４］ジアゼピン−１０（５Ｈ）−カルボキシレート（ＣＬＤ−１）の合成
ＤＣＭ（２．０ｍＬ）中の１８（５０ｍｇ、０．０５０ｍｍｏｌ）の溶液に、ＤＭＰ（１４９ｍｇ、０．３５ｍｍｏｌ）を２５℃で添加した。反応混合物を２５℃で２時間攪拌した。反応物をＤＣＭ（５ｍＬ）で希釈し、ＮａＨＣＯ３／Ｎａ２ＳＯ３（２ｍＬ／２ｍＬ）の飽和溶液でクエンチして、ＤＣＭ（２×５ｍＬ）で抽出した。組み合わせた有機層を、ＮａＨＣＯ３／Ｎａ２ＳＯ３（２ｍＬ／２ｍＬ）、ブライン（５ｍＬ）で洗浄し、乾燥して濃縮した。残留物をｐｒｅ−ＴＬＣ（ＤＣＭ：ＭｅＯＨ＝２０：１）によって精製し、（１１Ｓ，１１ａＳ）−１１−ヒドロキシ−８−（（５−（（（１１Ｓ，１１ａＳ）−１１−ヒドロキシ−７−メトキシ−２−メチレン−１０−（（（Ｒ）−２−（（５−ニトロピリジン−２−イル）ジスルファニル）プロポキシ）カルボニル）−５−オキソ−２，３，５，１０，１１，１１ａ−ヘキサヒドロ−１Ｈ−ベンゾ［ｅ］ピロロ［１，２−ａ］［１，４］ジアゼピン−８−イル）オキシ）ペンチル）オキシ）−７−メトキシ−２−メチレン−５−オキソ−２，３，１１，１１ａ−テトラヒドロ−１Ｈ−ベンゾ［ｅ］ピロロ［１，２−ａ］［１，４］ジアゼピン−１０（５Ｈ）−カルボン酸ｔｅｒｔ−ブチル１９を得て、これを次のステップで直接使用した。ＬＣＭＳ：（５−９５， ＡＢ， １．５ 分）， ０．８３０ 分， ｍ／ｚ ＝ １０１３．４ （Ｍ＋２３）．
冷ＴＦＡ（１ｍＬ）を、１９（２０ｍｇ、０．０２０ｍｍｏｌ）に０℃で添加した。反応混合物を０℃で２０分間攪拌した。反応混合物を、冷飽和ＮａＨＣＯ３水溶液（２０ｍＬ）に０℃で滴下し、ＤＣＭ（３×１５ｍＬ）で抽出した。組み合わせた有機層をブライン（１５ｍＬ）で洗浄し、乾燥させて濃縮し、粗生成物を得て、これをｐｒｅ−ＴＬＣ（ＤＣＭ：ＭｅＯＨ＝１５：１）によって精製して、ＣＬＤ−１（４ｍｇ、２３％）を灰色固体として得た。ＬＣＭＳ：（５−９５， ＡＢ， １．５ 分）， ０．８９ 分， ｍ／ｚ ＝ ８７３．６ （Ｍ＋１）．１Ｈ ＮＭＲ （４００ ＭＨｚ， ＣＤＣｌ３） δ ９．２２ （ｓ， １Ｈ）， ８．３８ （ｄ， Ｊ ＝ ８．８ Ｈｚ， １Ｈ）， ７．７８ （ｄ， Ｊ ＝ ８．８ Ｈｚ， １Ｈ）， ７．６８ （ｄ， Ｊ ＝ ４．４ Ｈｚ， １Ｈ）， ７．４９ （ｓ， １Ｈ）， ７．３３ （ｓ， １Ｈ）， ６．８２ （ｓ， １Ｈ）， ６．７７ （ｓ， １Ｈ）， ５．２０−５．１３ （ｍ， ４Ｈ）， ４．３６−４．２６ （ｍ， ５Ｈ）， ４．２０−３．９５ （ｍ， ７Ｈ）， ４．８９−３．７０ （ｍ， ８Ｈ）， ３．５０−２．７０ （ｍ， ５Ｈ）， ２．０５−１．８２ （ｍ， ４Ｈ）， １．４０−１．１５ （ｍ， ３Ｈ）．
４−（（Ｓ）−２−（（Ｓ）−２−（６−（２，５−ジオキソ−２，５−ジヒドロ−１Ｈ−ピロール−１−イル）ヘキサンアミド）−３−メチルブタンアミド）−５−ウレイドペンタンアミド）ベンジル（１１Ｓ，１１ａＳ）−１１−ヒドロキシ−７−メトキシ−８−（（５−（（（Ｓ）−７−メトキシ−２−メチレン−５−オキソ−２，３，５，１０，１１，１１ａ−ヘキサヒドロ−１Ｈ−ベンゾ［ｅ］ピロロ［１，２−ａ］［１，４］ジアゼピン−８−イル）オキシ）ペンチル）オキシ）−２−メチレン−５−オキソ−２，３，１１，１１ａ−テトラヒドロ−１Ｈ−ベンゾ［ｅ］ピロロ［１，２−ａ］［１，４］ジアゼピン−１０（５Ｈ）−カルボキシレート ＣＬＤ−４の合成

ＤＣＭ（２０ｍＬ）中のトリホスゲン（１５６ｍｇ、０．５２ｍｍｏｌ）の溶液に、ＤＣＭ（５．０ｍＬ）中の１（１．０ｇ、１．０５ｍｍｏｌ）及びＥｔ３Ｎ（３１８ｍｇ、３．１５ｍｍｏｌ）の溶液を添加した。混合物を０℃で１時間攪拌し、濃縮して粗中間体を得て、これをＤＣＭ（２０ｍＬ）中に添加し（０．８８ｇ、１．５３ｍｍｏｌ）、ＤＭＦ（１０ｍＬ）中のトリエチルアミン（３１０ｍｇ、３．０７ｍｍｏｌ）及び６−（２，５−ジオキソ−２，５−ジヒドロ−１Ｈ−ピロール−１−イル）−Ｎ−（（Ｓ）−１−（（（Ｓ）−１−（（４−（ヒドロキシメチル）フェニル）アミノ）−１−オキソ−５−ウレイドペンタン−２−イル）アミノ）−３−メチル−１−オキソブタン−２−イル）ヘキサンアミド、ＭＣ−ＶＣ−ＰＡＢ（１．０ｇ、１．０２ｍｍｏｌ）の混合物に０℃で添加した。混合物をＤＣＭ（４０ｍＬ）で希釈し、水（２×３０ｍＬ）で洗浄した。有機層をＮａ２ＳＯ４上で乾燥させて濃縮し、シリカ上でのクロマトグラフィー（ＤＣＭ中の０〜１０％ＭｅＯＨ）によって精製し、（２−（（Ｓ）−２−（（（ｔｅｒｔ−ブチルジメチルシリル）オキシ）メチル）−４−メチレンピロリジン−１−カルボニル）−５−（（５−（４−（（Ｓ）−２−（（（ｔｅｒｔ−ブチルジメチルシリル）オキシ）メチル）−４−メチレンピロリジン−１−カルボニル）−５−（（（（４−（（Ｓ）−２−（（Ｓ）−２−（６−（２，５−ジオキソ−２，５−ジヒドロ−１Ｈ−ピロール−１−イル）ヘキサンアミド）−３−メチルブタンアミド）−５−ウレイドペンタンアミド）ベンジル）オキシ）カルボニル）アミノ）−２−メトキシフェノキシ）ペンチル）オキシ）−４−メトキシフェニル）カルバミン酸ｔｅｒｔ−ブチル２１（１．０ｇ、０．６４ｍｍｏｌ、６２．４％収率）を黄色固体として得た。
ＴＨＦ（６．０ｍＬ）中の化合物２１（１．０ｇ、０．６４ｍｍｏｌ）の溶液に、水（６．０ｍＬ）及び酢酸（９．０ｍＬ）を添加した。混合物を２０℃で１２時間攪拌した。混合物をＥｔＯＡｃ（１００ｍＬ）に添加し、有機層を水（５０ｍＬ×３）及び飽和ＮａＨＣＯ３（５０ｍＬ）で洗浄して濃縮し、（５−（（５−（５−（（（（４−（（Ｓ）−２−（（Ｓ）−２−（６−（２，５−ジオキソ−２，５−ジヒドロ−１Ｈ−ピロール−１−イル）ヘキサンアミド）−３−メチルブタンアミド）−５−ウレイドペンタンアミド）ベンジル）オキシ）カルボニル）アミノ）−４−（（Ｓ）−２−（ヒドロキシメチル）−４−メチレンピロリジン−１−カルボニル）−２−メトキシフェノキシ）ペンチル）オキシ）−２−（（Ｓ）−２−（ヒドロキシメチル）−４−メチレンピロリジン−１−カルボニル）−４−メトキシフェニル）カルバミン酸ｔｅｒｔ−ブチル２２（７００ｍｇ、０．５３ｍｍｏｌ、８２．１％収率）を白色固体としてを得た。
ＤＭＳＯ（５．０ｍＬ）中の２２（５９７ｍｇ、０．４５ｍｍｏｌ）の溶液に、２−ヨードキシ安息香酸、ＩＢＸ（１２６ｍｇ、０．４５ｍｍｏｌ）を１８℃で添加した。反応混合物を３７℃で８時間攪拌し、ｐｒｅｐ−ＨＰＬＣ（水中のアセトニトリル４０〜７０％／０．２２５％ＦＡ）によって精製して、（１１Ｓ，１１ａＳ）−８−（（５−（（（１１Ｓ，１１ａＳ）−１０−（（（４−（（Ｓ）−２−（（Ｓ）−２−（（６−（２，５−ジオキソ−２，５−ジヒドロ−１Ｈ−ピロール−１−イル）ヘキシル）アミノ）−３−メチルブタンアミド）−５−ウレイドペンタンアミド）ベンジル）オキシ）カルボニル）−１１−ヒドロキシ−７−メトキシ−２−メチレン−５−オキソ−２，３，５，１０，１１，１１ａ−ヘキサヒドロ−１Ｈ−ベンゾ［ｅ］ピロロ［１，２−ａ］［１，４］ジアゼピン−８−イル）オキシ）ペンチル）オキシ）−１１−ヒドロキシ−７−メトキシ−２−メチレン−５−オキソ−２，３，１１，１１ａ−テトラヒドロ−１Ｈ−ベンゾ［ｅ］ピロロ［１，２−ａ］［１，４］ジアゼピン−１０（５Ｈ）−カルボン酸ｔｅｒｔ−ブチル水和物２３（１２０ｍｇ、０．０８９ｍｍｏｌ、１９．８％収率）を白色固体として得た。
ＴＦＡ（４．０ｍＬ）中の２３（１００ｍｇ、０．０８０ｍｍｏｌ）の溶液を０℃で３０分間攪拌し、次いで、冷飽和ＮａＨＣＯ３（４０ｍＬ）に添加した。それをＥｔＯＡｃ（６０ｍＬ×３）で抽出した。組み合わせた有機層を濃縮して、４−（（Ｓ）−２−（（Ｓ）−２−（６−（２，５−ジオキソ−２，５−ジヒドロ−１Ｈ−ピロール−１−イル）ヘキサンアミド）−３−メチルブタンアミド）−５−ウレイドペンタンアミド）ベンジル（１１Ｓ，１１ａＳ）−１１−ヒドロキシ−７−メトキシ−８−（（５−（（（Ｓ）−７−メトキシ−２−メチレン−５−オキソ−２，３，５，１１ａ−テトラヒドロ−１Ｈ−ベンゾ［ｅ］ピロロ［１，２−ａ］［１，４］ジアゼピン−８−イル）オキシ）ペンチル）オキシ）−２−メチレン−５−オキソ−２，３，１１，１１ａ−テトラヒドロ−１Ｈ−ベンゾ［ｅ］ピロロ［１，２−ａ］［１，４］ジアゼピン−１０（５Ｈ）−カルボキシレート２４（９０ｍｇ）を黄色固体として得て、これを次のステップで直接使用した。
ＤＭＦ（４．０ｍＬ）中の化合物２４（９０ｍｇ、０．０７０ｍｍｏｌ）の溶液に、トリアセトキシ水素化ホウ素ナトリウム（９．４２ｍｇ、０．１５００ｍｍｏｌ）を添加した。シアノ水素化ホウ素ナトリウムも還元剤として使用できる。混合物を２０℃で３０分間攪拌した。得られた残留物を、ｐｒｅｐ−ＨＰＬＣ（水中のアセトニトリル０〜４０／０．１％ＨＣｌ）によって精製して、ＣＬＤ−４（２８ｍｇ、０．０２２ｍｍｏｌ、２９．５％収率）を白色固体として得た。ＬＣＭＳ：（５−９５， ＡＢ， １．５ 分）， ０．８３２ 分， ｍ／ｚ ＝ ６０２．７， １２０３．６ （Ｍ＋１）
実施例４ 還元及び再酸化による複合化のためのシステイン操作抗体の調製
軽鎖アミノ酸は、Ｋａｂａｔ（Ｋａｂａｔ ｅｔ ａｌ．，Ｓｅｑｕｅｎｃｅｓ ｏｆ ｐｒｏｔｅｉｎｓ ｏｆ ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｉｃａｌ ｉｎｔｅｒｅｓｔ，（１９９１）５ｔｈ Ｅｄ．，ＵＳ Ｄｅｐｔ ｏｆ Ｈｅａｌｔｈ ａｎｄ Ｈｕｍａｎ Ｓｅｒｖｉｃｅ，Ｎａｔｉｏｎａｌ Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅｓ ｏｆ Ｈｅａｌｔｈ，Ｂｅｔｈｅｓｄａ，ＭＤ）に従って番号付けされる。重鎖アミノ酸は、Ｋａｂａｔシステムと記された場合を除いて、ＥＵ番号付けシステム（Ｅｄｅｌｍａｎ ｅｔ ａｌ（１９６９）Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．ｏｆ Ｓｃｉ．６３（１）：７８−８５）に従って番号付けされる。１文字アミノ酸略語が使用される。
ＣＨＯ細胞中で発現される全長システイン操作モノクローナル抗体（ＴＨＩＯＭＡＢ（商標））は、細胞培養条件によって、システイン付加物（システイン）を持つ、または操作システイン上でグルタチオン化される。そのままでは、ＣＨＯ細胞から精製されるＴＨＩＯＭＡＢ（商標）は、Ｃｙｓ反応性リンカー−薬物中間体と複合化できない。システイン操作抗体は、還元剤、例えば、ＤＴＴ（クリーランド試薬、ジチオスレイトール）またはＴＣＥＰ（トリス（２−カルボキシエチル）ホスフィン塩酸塩、Ｇｅｔｚ ｅｔ ａｌ（１９９９）Ａｎａｌ．Ｂｉｏｃｈｅｍ．Ｖｏｌ ２７３：７３−８０、Ｓｏｌｔｅｃ Ｖｅｎｔｕｒｅｓ、ビバリー、マサチューセッツ州）などで処理し、続いてデヒドロアスコルビン酸などの穏和な酸化剤を用いた鎖間ジスルフィド結合の再形成（再酸化）によって、表２Ａのものなどの、本発明のリンカー−薬物中間体との複合化に反応しやすくなる場合がある。ＣＨＯ細胞中で発現する全長システイン操作モノクローナル抗体（ＴＨＩＯＭＡＢ（商標））（Ｇｏｍｅｚ ｅｔ ａｌ（２０１０）Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ ａｎｄ Ｂｉｏｅｎｇ．１０５（４）：７４８−７６０、Ｇｏｍｅｚ ｅｔ ａｌ（２０１０）Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌ．Ｐｒｏｇ．２６：１４３８−１４４５）を、例えば、２ｍＭ ＥＤＴＡを含む５０ｍＭ Ｔｒｉｓ、ｐＨ８．０中の約５０倍過剰のＤＴＴを用いて室温で一晩還元して、これによりＣｙｓ及びグルタチオン付加物が除去され、加えて抗体中の鎖間ジスルフィド結合が還元される。付加物の除去を、ＰＬＲＰ−Ｓカラムを使用して逆相ＬＣＭＳによってモニターした。還元したＴＨＩＯＭＡＢ（商標）を希釈し、少なくとも４体積の１０ｍＭコハク酸ナトリウム、ｐＨ５緩衝液に添加することによって酸性化した。
あるいは、抗体を希釈して、少なくとも４体積の１０ｍＭコハク酸塩、ｐＨ５に添加し、ｐＨがおよそ５になるまで１０％酢酸で滴定することによって酸性化した。ｐＨが低下し、希釈したＴＨＩＯＭＡＢ（商標）を、続いてＨｉＴｒａｐ Ｓ陽イオン交換カラム上に負荷し、いくつかのカラム体積の１０ｍＭ酢酸ナトリウム、ｐＨ５で洗浄し、５０ｍＭ Ｔｒｉｓ、ｐＨ８．０、１５０ｍＭ塩化ナトリウムで溶出した。ジスルフィド結合は、再酸化を行うことで、親Ｍａｂ中に存在するシステイン残基間で再確立された。上に記載した、溶出還元ＴＨＩＯＭＡＢ（商標）を、１５×デヒドロアスコルビン酸（ＤＨＡＡ）で約３時間、またはあるいは、２００ｎＭ〜２ｍＭの硫酸銅水溶液（ＣｕＳＯ４）を用いて、室温で一晩処理する。当該技術分野において既知の、その他の酸化剤、すなわち、酸化薬剤、及び酸化条件を使用してよい。周囲空気酸化も効果的であってよい。この穏やかで部分的な再酸化ステップにより、高い忠実度で鎖内ジスルフィドが効率的に形成される。再酸化を、ＰＬＲＰ−Ｓカラムを使用して逆相ＬＣＭＳによってモニターした。再酸化したＴＨＩＯＭＡＢ（商標）を、上に記載したようにコハク酸塩緩衝液で希釈してｐＨをおよそ５とし、Ｓカラム上での精製は、溶出を１０ｍＭコハク酸塩、ｐＨ５、１０ｍＭコハク酸塩、ｐＨ５（緩衝液Ａ）中の３００ｍＭ塩化ナトリウム（緩衝液Ｂ）のグラジエントを用いて実施したという点を除いて、上に記載したように行った。溶出したＴＨＩＯＭＡＢ（商標）に、ＥＤＴＡを２ｍＭの最終濃度まで添加して、必要であれば濃縮し、５ｍｇ／ｍＬ超の最終濃度に到達させた。複合化用に準備した、得られたＴＨＩＯＭＡＢ（商標）を−２０℃でアリコートにして保存した。液体クロマトグラフィー／質量分光分析を、６２００シリーズＴＯＦまたはＱＴＯＦ Ａｇｉｌｅｎｔ ＬＣ／ＭＳ上で実施した。試料を、８０℃まで加熱したＰＲＬＰ−Ｓ（登録商標）、１０００Ａ、マイクロボアカラム（５０ｍｍ×２．１ｍｍ、Ｐｏｌｙｍｅｒ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓ、シュロップシャー州、英国）上でクロマトグラフ処理した。３０〜４０％Ｂ（溶媒Ａ：０．０５％ＴＦＡ水溶液、溶媒Ｂ：０．０４％ＴＦＡアセトニトリル溶液）からのリニアグラジエントを使用して、溶出液を、エレクトロスプレー源を使用して直接イオン化した。データを収集し、ＭａｓｓＨｕｎｔｅｒソフトウェアによってデコンボリューションした。ＬＣ／ＭＳ分析前に、抗体または薬物複合体（５０マイクログラム）をＰＮＧａｓｅ Ｆ（２単位／ｍｌ、ＰＲＯｚｙｍｅ、サンレアンドロ、カリフォルニア州）を用いて２時間３７℃で処理し、Ｎ結合型炭水化物を除去した。
あるいは、抗体または薬物複合体を、ＬｙｓＣ（０．２５μｇ／５０μｇ（マイクログラム）抗体または複合体）を用いて１５分間３７℃で部分的に消化し、ＬＣＭＳによる分析のためにＦａｂ及びＦｃ断片を得た。デコンボリューションしたＬＣＭＳスペクトルのピークを割り当てて定量した。薬物抗体比（ＤＡＲ）を、観察した全てのピークと比較して、薬物複合化抗体に対応する１つ以上のピーク強度の比を算出することによって算出した。
実施例５ リンカー−薬物中間体と抗体との複合化
実施例２の還元及び再酸化手順後、１０ｍＭコハク酸塩、ｐＨ５、１５０ｍＭ ＮａＣｌ、２ｍＭ ＥＤＴＡ中のシステイン操作抗体（ＴＨＩＯＭＡＢ（商標））のｐＨを、１Ｍ ＴｒｉｓでｐＨ７．５〜８．５に調整する。表２Ａのものを含むが、これらに限定されない、チオール反応性ピリジルジスルフィド基を有するリンカー−薬物中間体の過剰な、約３モルから２０当量を、ＤＭＦまたはＤＭＡ中に溶解し、還元、再酸化、かつｐＨ調整した抗体に添加する。反応物を室温で、または３７℃でインキュベートし、反応混合物のＬＣ−ＭＳ分析によって決定した場合の完了（１〜約２４時間）までモニターする。反応が完了する場合、複合体を、いくつかの方法のうち１つまたは任意の組合せによって精製し、残存する未反応リンカー−薬物中間体及び凝集タンパク質（有意水準で存在する場合）を除去することが目標となる。例えば、複合体を、最終ｐＨがおよそ５．５になるまで１０ｍＭ酢酸ヒスチジン、ｐＨ５．５で希釈し、Ａｋｔａ精製システム（ＧＥ Ｈｅａｌｔｈｃａｒｅ）に連結したＨｉＴｒａｐ ＳカラムまたはＳ ｍａｘｉスピンカラム（Ｐｉｅｒｃｅ）のいずれかを使用して、Ｓ陽イオン交換クロマトグラフィーによって精製してよい。あるいは、複合体を、Ａｋｔａ精製システムに連結したＳ２００カラムまたはＺｅｂａスピンカラムを使用して、ゲル濾過クロマトグラフィーによって精製してよい。あるいは、透析を使用してよい。ＴＨＩＯＭＡＢ薬物複合体を、ゲル濾過または透析のいずれかを使用して、２０ｍＭ Ｈｉｓ／酢酸塩、ｐＨ５中に、２４０ｍＭスクロースと共に製剤化した。精製複合体を遠心限外濾過によって濃縮し、無菌条件下で０．２μｍフィルターに通して濾過し、保存用に凍結した。抗体−薬物複合体を、ＢＣＡアッセイによって特徴付けしてタンパク質濃度を決定し、凝集分析のために分析的ＳＥＣ（サイズ排除クロマトグラフィー）及びリジンＣエンドペプチダーゼ（ＬｙｓＣ）での処理後にＬＣ−ＭＳで特徴付けしてＤＡＲを算出した。
サイズ排除クロマトグラフィーを、０．２５ｍＭ塩化カリウム及び１５％ＩＰＡを含む０．２Ｍリン酸カリウム ｐＨ６．２中において０．７５ｍｌ／分の流速で、Ｓｈｏｄｅｘ ＫＷ８０２．５カラムを使用して複合体上で実施する。複合体の凝集状態は、２８０ｎｍでの溶出ピーク面積吸光度の積分によって決定した。
ＬＣ−ＭＳ分析を、Ａｇｉｌｅｎｔ ＱＴＯＦ ６５２０ ＥＳＩ機器を使用してＡＤＣ上で実施してよい。一例として、抗体−薬物複合体を、Ｔｒｉｓ、ｐＨ７．５中の１：５００ｗ／ｗエンドプロテイナーゼＬｙｓ Ｃ（Ｐｒｏｍｅｇａ）で３０分間３７℃で処理する。得られた切断断片を、８０℃に加熱した１０００Å（オングストローム）、８μｍ（ミクロン）ＰＬＲＰ−Ｓ（高架橋ポリスチレン）カラム上に負荷し、３０％Ｂ〜４０％Ｂのグラジエントで５分間溶出する。移動相Ａは、０．０５％ＴＦＡを含むＨ２Ｏであり、移動相Ｂは、０．０４％ＴＦＡを含むアセトニトリルであった。流速は、０．５ｍｌ／分であった。タンパク質溶出を、エレクトロスプレーイオン化及びＭＳ分析前に、２８０ｎｍでのＵＶ吸光度検出によってモニターした。非複合化Ｆｃ断片、残存非複合化Ｆａｂ及び薬物付加Ｆａｂのクロマトグラフィー分解は、通常、達成された。得られたｍ／ｚスペクトルを、Ｍａｓｓ Ｈｕｎｔｅｒ（商標）ソフトウェア（Ａｇｉｌｅｎｔ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ）を使用してデコンボリューションし、抗体断片の質量を算出した。
これらの手順によって、表３Ａ及び表３Ｂのシステイン操作抗体薬物複合体を調製した。
実施例６ インビトロ細胞増殖アッセイ
ＡＤＣの有効性は、以下のプロトコールを用いて細胞増殖アッセイにより測定した（ＣＥＬＬＴＩＴＥＲ ＧＬＯ（商標）Ｌｕｍｉｎｅｓｃｅｎｔ Ｃｅｌｌ Ｖｉａｂｉｌｉｔｙ Ａｓｓａｙ，Ｐｒｏｍｅｇａ Ｃｏｒｐ．Ｔｅｃｈｎｉｃａｌ Ｂｕｌｌｅｔｉｎ ＴＢ２８８、Ｍｅｎｄｏｚａ ｅｔ ａｌ（２００２）Ｃａｎｃｅｒ Ｒｅｓ．６２：５４８５−５４８８）。プロトコールは、ＣＥＬＬＴＩＴＥＲ ＧＬＯ（商標）Ｌｕｍｉｎｅｓｃｅｎｔ Ｃｅｌｌ Ａｓｓａｙの変更版である：
１．培地中に約１０４個の細胞（ＳＫＢＲ−３、ＢＴ４７４、ＭＣＦ７またはＭＤＡ−ＭＢ−４６８）を含有する１００μｌの細胞培養物のアリコートを、９６ウェル不透明壁プレートの各ウェルに付着させた。
２．培地を含有するが、細胞を含有しない対照ウェルを調製した。
３．ＡＤＣを実験ウェルに添加し、３〜５日間インキュベートした。
４．プレートを、およそ３０分間室温に平衡させた。
５．各ウェル中に存在する細胞培養培地の量に等しい量のＣＥＬＬＴＩＴＥＲ ＧＬＯ（商標）Ｒｅａｇｅｎｔを添加した。
６．内容物をオービタルシェーカー上で２分間混合し、細胞溶解を誘導した。
７．プレートを室温で１０分間インキュベートして、発光シグナルを安定させた。
８．発光を記録し、ＲＬＵ＝相対発光単位としてグラフで報告した。
データは、図１Ａ〜図１Ｅに見られるような、標準偏差エラーバーを含む、複製物の各セットについて発光の平均値としてプロットする。
培地：ＳＫ−ＢＲ−３は、５０／５０／１０％ＦＢＳ／グルタミン／２５０μｇ／ｍＬ Ｇ−４１８中で成長し、ＯＶＣＡＲ−３はＲＰＭＩ／２０％ＦＢＳ／グルタミン中で成長する。
実施例７ 異種移植マウスにおける腫瘍成長阻害、インビボ有効性
０日目の単回処置前に腫瘍を確立し、１５０〜２００ｍｍ３の体積（キャリパーを使用して測定した場合）まで成長させた。腫瘍体積は、次式に従ってキャリパーを使用して測定した：Ｖ（ｍｍ３）＝０．５Ａ×Ｂ２（式中、Ａ及びＢは、それぞれ長径及び短径である）。腫瘍体積が３０００ｍｍ３に到達する前に、または腫瘍が切迫潰瘍形成の徴候を示した場合にマウスを安楽死させた。各実験群（１群当たり１０匹のマウス）から収集したデータは、平均±ＳＥとして表した。
ＨＢＳＳ／マトリゲル中に懸濁させたＨＥＲ２ ＫＰＬ−４細胞を３００万個細胞／マウスで、胸部乳房脂肪体に０．２ｍｌの体積でｎ＝１５０マウスに接種する。腫瘍が１００〜２５０ｍｍ３の平均腫瘍体積に到達した場合、それらを各群８〜１０匹のマウスを含む１０の群にグループ分けすることになる。単回処置を、０日目に尾静脈から静脈内に投与することになる。体積は０．３ｍｌを超えることなく、針サイズは２８または２９ゲージである。
ＨＣＣ１５６９細胞株はＬｙ６Ｅを発現し、ＡＴＣＣ（Ａｍｅｒｉｃａｎ Ｔｙｐｅ Ｃｕｌｔｕｒｅ Ｃｏｌｌｅｃｔｉｏｎ、マナサス、バージニア州）から入手して、亜株ＨＣＣ１５６９Ｘ２を、マウスでの最適な成長のためにＧｅｎｅｎｔｅｃｈで生成した。メスＣ．Ｂ−１７ ＳＣＩＤ−ｂｅｉｇｅマウス（Ｃｈａｒｌｅｓ Ｒｉｖｅｒ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ）に各々、ＨＢＳＳ／マトリゲル（１：１比）に懸濁させた５００万個のＨＣＣ１５６９Ｘ２細胞を、胸部乳房脂肪体領域に接種した。異種移植腫瘍が１００〜３００ｍｍ３の平均腫瘍体積に到達した場合（０日目と称される）、動物を各々５匹のマウスを含む群に無作為化し、抗体−薬物複合体の単回静脈内注射を尾静脈から施した。マウスの腫瘍及び体重を、試験全体を通して週に１〜２回測定した。体重の減少がそれらの開始体重の＞２０％となった場合、即座にマウスを安楽死させた。腫瘍が３０００ｍｍ３に到達する前に、または切迫潰瘍化の徴候を示す前に、全ての動物を安楽死させた。腫瘍体積を、キャリパーを使用して二次元（長さ及び幅）で測定し、その腫瘍体積を、次の式を使用して算出した：腫瘍サイズ（ｍｍ３）＝（より長い測定値×より短い測定値２）×０．５（ＷＯ２０１３／１７７０５５）。
Ｆｏ５マウス乳腺腫瘍モデルを用いて、単回用量静脈内注射後、以前に記載されているように（Ｐｈｉｌｌｉｐｓ ＧＤＬ，Ｌｉ ＧＭ，Ｄｕｇｇｅｒ ＤＬ，ｅｔ ａｌ．Ｔａｒｇｅｔｉｎｇ ＨＥＲ２−Ｐｏｓｉｔｉｖｅ Ｂｒｅａｓｔ Ｃａｎｃｅｒ ｗｉｔｈ Ｔｒａｓｔｕｚｕｍａｂ−ＤＭ１，ａｎ Ａｎｔｉｂｏｄｙ−Ｃｙｔｏｔｏｘｉｃ Ｄｒｕｇ Ｃｏｎｊｕｇａｔｅ．（２００８）Ｃａｎｃｅｒ Ｒｅｓ．６８：９２８０−９０）、本発明の抗体−薬物複合体のインビボ有効性を評価し、上の文献は参照によって本明細書に組み込まれる。抗Ｈｅｒ２ ＡＤＣを、図３及び図５に示すような、ヒトＨＥＲ２遺伝子が、マウス乳腺腫瘍ウイルスプロモーター（ＭＭＴＶ−ＨＥＲ２）の転写制御下で乳腺上皮において過剰発現されるＦｏ５モデルのトランスジェニックマウスモデルを用いて試験した。ＨＥＲ２過剰発現は、乳腺腫瘍の自然発達を引き起こす。これらの創始動物（創始＃５［Ｆｏ５］）のうち１匹の乳腺腫瘍を、腫瘍断片（約２×２ｍｍのサイズ）の連続移植によってＦＶＢマウスの次世代に伝播した。全ての試験は、Ｇｕｉｄｅ ｆｏｒ ｔｈｅ Ｃａｒｅ ａｎｄ Ｕｓｅ ｏｆ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ Ａｎｉｍａｌｓに従って実施した。各抗体−薬物複合体（単回用量）を、試験の開始時、及び移植後１４日目に９匹の動物の静脈内に投薬した。初発腫瘍サイズは約２００ｍｍ３の体積であった。本発明の抗体−薬物複合体及び対照による経時的腫瘍成長阻害の測定値を、図２〜図８に示す。
別の乳房脂肪体移植の有効性モデルを、記載されているように（Ｃｈｅｎ ｅｔ ａｌ．（２００７）Ｃａｎｃｅｒ Ｒｅｓ ６７：４９２４−４９３２）用いて、単回静脈内用量後の腫瘍体積を評価し、腹腔内腫瘍を持つマウスから切除した腫瘍を使用して、次いで、レシピエントマウスの乳房脂肪体に連続的に継代してよい。
抗ＣＤ２２及び抗Ｎａｐｉ ＡＤＣの細胞死滅活性を、５日間のインキュベーション後にＣＤ２２またはＮａｐｉ発現細胞株で、及び異種移植マウスで決定した。
実施例８ オリゴヌクレオチド結合／アルキル化アッセイ
ピロロベンゾジアゼピン化合物と、様々な長さ及び配列の二本鎖形成オリゴヌクレオチドとの相互作用を、あらかじめ同定した鎖内及び鎖間架橋について、Ｐｕ−ＧＡＡＴＧ−Ｐｙ＞Ｐｕ−ＧＡＴＣ−Ｐｙ＞＞Ｐｕ−ＧＡＴＧ−ＰｙまたはＰｕ−ＧＡＡＴＣ−Ｐｙ（式中、ＰｕはプリンヌクレオチドＡまたはＧであり、ＰｙはピリミジンヌクレオチドＣまたはＴである）の配列を用いて試験した（Ｒａｈｍａｎ ＫＭ，ｅｔ ａｌ（２００９）Ｊ Ａｍ Ｃｈｅｍ Ｓｏｃ １３１：１３７５６−１３７６６）。鎖間Ｇ二本鎖、５’−ＴＡＴＡＧＡＡＡＴＣＴＡＴＡ−３及び３’−ＡＴＡＴＣＴＴＴＡＧＡＴＡＴ−５’、ならびに鎖内Ｇ二本鎖、５’−ＴＡＴＡＧＡＡＡＴＧＴＡＴＡ−３及び３’−ＡＴＡＴＣＴＴＴＡＣＡＴＡＴ−５’を、以下の手順によって試験した：
１００μＭでの化合物を、５０μＭの二本鎖デオキシリボヌクレオチド（ＤＮＡ）と共に１時間、１０ｍＭ Ｂｉｓ−Ｔｒｉｓ、ｐＨ７．１中において３７℃でインキュベートした。試料を、Ｈｙｐｅｒｓｉｌ Ｇｏｌｄ Ｃ１８カラム（１００×２．１、１．９μＭ、Ｔｈｅｒｍｏ Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ）上において、Ｓｃｉｅｘ ＴｒｉｐｌｅＴＯＦ ５６００上でＬＣ／ＭＳ／ＵＶによって分析した。カラムを０．４ｍＬ／分で、緩衝液Ａ（５０ｍＭヘキサフルオロイソプロパノール及び１５ｍＭジエチルアミン）から緩衝液Ｂ（５０％のＡ及び５０％の１：１メタノール：アセトニトリル）の、５％〜２５％Ｂを８分、７５％Ｂまでを５分、及び９５％Ｂまでを１分というグラジエントによって溶出した。
実施例９ カニクイザルにおける安全性／毒性試験
本発明の抗体−薬物複合体を、肺での発現による抗原依存性毒性の肺への影響を含む、カニクイザルにおける毒性について評価した。
試験設計：
レジメン：ＩＶ投薬を１日目及び２２日目に２回行い、２回の全サイクルにわたって毒性を評価する。１０日間の導入（１Ｍ／群）、１Ｍ／２Ｆが残る前の１０日間に投薬し、急性罹患率／死亡率のリスクを軽減する。
起こり得る臨床観察としては、皮膚の発赤、皮膚の黒変、痂皮形成／落屑、潰瘍、顔面腫脹／浮腫、除脂肪身体状態、食欲の欠如、及び全体的な瀕死状態を挙げてよい。
カニクイザルの抗体−薬物複合体投薬と関連する、起こり得る臨床病理変化としては、不適切な濃縮尿と併発する尿素窒素及びクレアチニンの増加、尿細管機能障害、肺胞変性、及び血液学パラメータの用量反応変化に関連する可能性のあるナトリウム、塩化物、及びカリウムの変化ならびに炎症を挙げてよい。
主な器官毒性としては、腎臓、目、皮膚／ＳＱ／筋肉、骨髄、肺、リンパ器官（脾臓及び胸腺リンパ枯渇）を挙げてよい。
病理学的所見に関する重症度の用量依存的増加は、抗体−薬物複合体及び対照化合物の安全性／毒性特性の比較を可能にする場合がある。
実施例１０ マウスにおける有効性
抗Ｈｅｒ２抗体−薬物複合体の有効性を、ＭＭＴＶ−ＨＥＲ２創始＃５（マウス乳腺腫瘍）のマウス同種移植モデル、またはＫＰＬ４、ＨＣＣ１５６９Ｘ２（ヒト乳癌）のマウス異種移植モデルで調査した。
ＭＭＴＶ−ＨＥＲ２創始＃５（Ｆｏ５）モデル（Ｇｅｎｅｎｔｅｃｈで開発した）は、ヒトＨＥＲ２遺伝子が、マウス乳腺腫瘍ウイルスプロモーター（ＭＭＴＶ−ＨＥＲ２）の転写制御下で乳腺上皮において過剰発現されるトランスジェニックマウスモデルである。過剰発現は、ヒトＨＥＲ２受容体を過剰発現する乳腺腫瘍の自然発達を引き起こす。創始動物（創始＃５、Ｆｏ５）のうち１匹の乳腺腫瘍を、およそ１５〜３０ｍｍ３サイズの腫瘍断片として、メスｎｕ／ｎｕまたはＦＶＢマウス（Ｃｈａｒｌｅｓ Ｒｉｖｅｒ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓ）の胸部乳房脂肪体に外科的に移植した。
ＫＰＬ４乳癌細胞株を、Ｄｒ．Ｊ．Ｋｕｒｅｂａｙａｓｈｉ ｌａｂ（日本）から入手した。ＨＣＣ１５６９乳癌細胞株を、ＡＴＣＣ（Ａｍｅｒｉｃａｎ Ｔｙｐｅ Ｃｕｌｔｕｒｅ Ｃｏｌｌｅｃｔｉｏｎ、マナサス、バージニア州）から入手して、亜株ＨＣＣ１５６９Ｘ２を、マウスでの最適な成長のためにＧｅｎｅｎｔｅｃｈで生成した。両方の細胞株は、ＦＡＣＳ及びＩＨＣによって決定したようにＨＥＲ２を発現する。モデルを確立するために、メスＣ．Ｂ−１７ ＳＣＩＤ−ｂｅｉｇｅマウス（Ｃｈａｒｌｅｓ Ｒｉｖｅｒ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓ）に各々、ＨＢＳＳ／マトリゲル（１：１比）に懸濁させた３００万個のＫＰＬ４細胞または５００万個のＨＣＣ１５６９Ｘ２細胞を、胸部乳房脂肪体領域に接種した。
腫瘍が１００〜３００ｍｍ３の平均腫瘍体積に到達した場合、動物を各々５〜１０匹のマウスを含む群に無作為化し、ＡＤＣの単回静脈内注射を施した（０日目と称される）。マウスの腫瘍及び体重を、試験全体を通して週に１〜２回測定した。体重の減少がそれらの開始体重の＞２０％となった場合、即座にマウスを安楽死させた。腫瘍が３０００ｍｍ３に到達する前に、または切迫潰瘍化の徴候を示す前に、全ての動物を安楽死させた。腫瘍体積を、キャリパーを使用して二次元（長さ及び幅）で測定し、その腫瘍体積を、次の式を使用して算出した：腫瘍サイズ（ｍｍ３）＝０．５×（長さ×幅×幅）。この試験のデータを図１２及び図１３に示す。
実施例１１ カニクイザルにおける毒性学
抗ＨＥＲ２ ｈｕ７Ｃ２ ＬＣ：Ｋ１４９Ｃ−ＬＤ−５１カニクイザル毒性学試験
試験的な用量漸増毒性学試験を、カニクイザルにおいて実施した。動物に、ｑ３ｗで緩徐ＩＶボーラスの２回または４回用量の抗ＨＥＲ２ ｈｕ７Ｃ２ ＬＣ：Ｋ１４９Ｃ−ＬＤ−５１を１ｍｇ／ｋｇの用量レベルで開始して施した。用量漸増を２〜３週間ずらした。試験設計を以下の表７にまとめる。

毒性を、臨床検査及び眼科検査ならびに臨床病理によって評価した（血液学、血清生化学、凝固及び尿検査、試験全体にわたっておよそ毎週）。肉眼及び顕微鏡による組織病理学を、最終用量の３週間後、剖検時に収集した組織で実施した。
１６ｍｇ／ｋｇの抗ＨＥＲ２ ｈｕ７Ｃ２ ＬＣ：Ｋ１４９Ｃ−ＬＤ−５１をｑ３ｗで４回用量投与した動物では、組織学的所見は一般に、１６ｍｇ／ｋｇの２回用量後に観察したものよりも、重症度が高かった。尿細管変性（軽度〜中等度）、リンパ枯渇（胸腺、脾臓、リンパ節、軽度〜中等度）、皮膚の色素沈着／過角化症（軽度）、小腸粘膜（軽度）、及び軽度の肺胞変性／線維増殖症（軽度）を観察した。
カニクイザルにおける抗ＨＥＲ２ ｈｕ７Ｃ２ ＬＣ：Ｋ１４９Ｃ−ＬＤ−５１の主な標的器官は、腎臓、骨髄、皮膚、肺、リンパ器官（脾臓、胸腺、リンパ節）、小腸、及び目（角膜）である。２×ｑ３ｗレジメンとしての最大耐量（ＭＴＤ）が１６ｍｇ／ｋｇである一方、４×ｑ３ｗレジメンとしてのＭＴＤは８ｍｇ／ｋｇである。
抗ＨＥＲ２−ＣＬＤ−１の試験は、サルでは実施しなかった。しかしながら、ＣＬＤ−１の２×ｑ３ｗ用量のＭＴＤを、その他のシステイン操作抗体と複合化した場合にカニクイザルにおいて決定した。抗ＮａＰｉ２ｂ−ＣＬＤ−１の２ｑ３ｗ用量のＭＴＤが０．５ｍｇ／ｋｇであった一方、非標的複合体ｇＤ−ＣＬＤ−１のＭＴＤは０．５ｍｇ／ｋｇであった。観察した類似の標的器官効果は、毒性が、主に抗原非依存的でＣＬＤ−１またはＬＤ−５１に起因していることを示唆する。ＣＬＤ−１複合体と比較したＬＤ−５１複合体のＭＴＤの増加は、ＣＬＤ−１と比較してＬＤ−５１の忍容性の改善を示す。これらの試験のデータを図１２及び図１３に示す。
実施例１２ Ｃ−１及びＤＭ−２ラット毒性学試験
試験的な単回用量毒性学試験を、ラットにおいてＣ−１（ＰＢＤビスアルキル化剤）及びＤＭ−２（ＰＢＤモノアルキル化剤）遊離薬物を比較して実施した。動物に、単回ＩＶ用量のＣ−１、ＤＭ−２、またはビヒクルを施し、７日間の回復期間にわたってモニターした。試験設計を以下の表８にまとめる。
毒性を、臨床観察及び臨床病理によって評価した（投薬後７２時間及び１６８時間における血液学及び臨床化学）。一般に、結果は、Ｃ−１の用量レベルの１０倍でＤＭ−２と類似していた。Ｃ−１については、網状赤血球の用量依存的減少を７２時間での全用量において観察し、投薬後１６８時間で０．０５及び０．１ｍｇ／ｋｇの群において回復した。０．２ｍｇ／ｋｇ用量では、肝毒性及び腎毒性を示す臨床病理変化を観察した。０．０５及び０．１ｍｇ／ｋｇの用量は、臨床徴候もなく、十分に忍容される。
ＤＭ−２の０．５及び１ｍｇ／ｋｇ用量レベルは十分に忍容され、臨床徴候または早期の安楽死をもたらすこともなかった。２ｍｇ／ｋｇを投与した動物は、２〜４日目にそれらの体重がおよそ１４％減少し、４日目には瀕死状態で安楽死させた。網状赤血球の用量依存的減少を、投薬後７２時間でＤＭ−２の全用量において観察し、投薬後１６８時間で０．５及び１ｍｇ／ｋｇの群において回復した。２ｍｇ／ｋｇ用量では、肝毒性及び腎毒性を示す臨床病理変化を観察した。
要約すると、Ｃ−１またはＤＭ−２の単回用量に起因する毒性プロファイルは類似していて、Ｃ−１は、ＤＭ−２よりもおよそ１０倍強力であった。両方の被験物質の主な標的器官は、骨髄、腎臓、及び肝臓であった。Ｃ−１及びＤＭ−２のＭＴＤは、ラットの単回ＩＶ用量として、それぞれ０．１及び１ｍｇ／ｋｇであった。この試験の結果は、Ｃ−１と比較してＤＭ−２の忍容性の改善を示す。
実施例１３ ＨＥＲ２陽性乳癌細胞株ＳＫ−ＢＲ−３及びＫＰＬ−４におけるインビトロ活性
細胞を９６ウェルプレートに播種し、５％ＣＯ２の加湿雰囲気において３７℃で一晩付着させた。次いで、培地を除去し、様々な濃度の各薬物を含有する新鮮な培養培地で置き換えた。Ｃｅｌｌ Ｔｉｔｅｒ−Ｇｌｏ（Ｐｒｏｍｅｇａ Ｃｏｒｐ．）を薬物投与の５日後にウェルに添加し、発光シグナルを、ＥｎＶｉｓｉｏｎマルチラベルプレートリーダー（ＰｅｒｋｉｎＥｌｍｅｒ）を使用して測定した。試験した化合物は、抗ＨＥＲ２ ｈｕ７Ｃ２ ＬＣ：Ｋ１４９Ｃ ＣＬＤ−７、抗ＨＥＲ２ ｈｕ７Ｃ２ ＬＣ：Ｋ１４９Ｃ ＣＬＤ−８、抗ＨＥＲ２ ｈｕ７Ｃ２ ＬＣ：Ｋ１４９Ｃ ＣＬＤ−９、及び抗ＨＥＲ２ ｈｕ７Ｃ２ ＬＣ：Ｋ１４９Ｃ ＬＤ−５１であった。

ＣＬＤ−７

ＣＬＤ−８

ＣＬＤ−９
この試験のデータを図１４及び以下の表９に示す。

実施例１４ インビボマウス同種移植有効性
抗Ｈｅｒ２抗体−薬物複合体（ＡＤＣ）の有効性を、ＭＭＴＶ−ＨＥＲ２創始＃５（マウス乳腺腫瘍）のマウス同種移植モデルで調査した。ＭＭＴＶ−ＨＥＲ２創始＃５（Ｆｏ５）モデル（Ｇｅｎｅｎｔｅｃｈで開発した）は、ヒトＨＥＲ２遺伝子が、マウス乳腺腫瘍ウイルスプロモーター（ＭＭＴＶ−ＨＥＲ２）の転写制御下で乳腺上皮において過剰発現されるトランスジェニックマウスモデルである。過剰発現は、ヒトＨＥＲ２受容体を過剰発現する乳腺腫瘍の自然発達を引き起こす。創始動物（創始＃５、Ｆｏ５）のうち１匹の乳腺腫瘍を、腫瘍断片の連続移植によってＦＶＢマウス（Ｃｈａｒｌｅｓ Ｒｉｖｅｒ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓ）に伝播した。
有効性試験については、Ｆｏ５トランスジェニック乳腺腫瘍を、およそ１５〜３０ｍｍ３サイズの腫瘍断片として、メスｎｕ／ｎｕマウス（Ｃｈａｒｌｅｓ Ｒｉｖｅｒ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓ、ホリスター、カリフォルニア州）の胸部乳房脂肪体に外科的に移植した。同種移植腫瘍が１００〜３００ｍｍ３の平均腫瘍体積に到達した場合（０日目と称される）、動物を各々７匹のマウスを含む群に無作為化し、ＡＤＣの単回静脈内注射を施した。マウスの腫瘍及び体重を、試験全体を通して週に１〜２回測定した。体重の減少がそれらの開始体重の＞２０％となった場合、即座にマウスを安楽死させた。腫瘍が３０００ｍｍ３に到達する前に、または切迫潰瘍化の徴候を示す前に、全ての動物を安楽死させた。腫瘍体積を、キャリパーを使用して二次元（長さ及び幅）で測定し、その腫瘍体積を、次の式を使用して算出した：腫瘍サイズ（ｍｍ３）＝０．５×（長さ×幅×幅）。この試験のデータを図１５に示す。４つの抗Ｈｅｒ２ ＡＤＣの中でも、抗Ｈｅｒ２−ＬＤ−５１のみが、ビヒクル群と比較した場合に明らかな抗腫瘍活性を実証した。抗Ｈｅｒ２−ＬＤ−５１の有効性は、対応する非標的対照の抗ＣＤ２２−ＬＤ−５１が腫瘍成長に対して全く影響を及ぼさなかった場合に標的依存的であった。
実施例１５ ＤＭ−４、Ｃ−１、Ｃ−２、Ｃ−３、ＣＬＤ−２、ＣＬＤ、３、ＣＬＤ−５及びＣＬＤ−６の合成
Ｃ−１、Ｃ−２、Ｃ−３及びＣＬＤ−２を作製する合成法は、以下の文献中に見出され得る：Ｃ−１：Ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆ Ｍｅｄｉｃｉｎａｌ Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ（２００４），４７（５），１１６１−１１７４、Ｃ−２：Ｂｉｏｏｒｇａｎｉｃ＆Ｍｅｄｉｃｉｎａｌ Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ Ｌｅｔｔｅｒｓ（２０００），１０（１６），１８４５−１８４７またはＰＣＴ国際出願ＷＯ２００００１２５０８、Ｃ−３：ＰＣＴ国際出願ＷＯ２０１５１５５７５３、及びＣＬＤ−２ ＵＳ２０１６００７４５２７。
ＣＬＤ−７の合成
スキーム

実験

ＤＣＭ（１５ｍＬ）中のトリホスゲン（６０．６ｍｇ、０．２００ｍｍｏｌ）の溶液に、ＤＣＭ（１５ｍＬ）中のピリジン（１２９ｍｇ、１．６３ｍｍｏｌ）及び２（５５．３ｍｇ、０．２２０ｍｍｏｌ）の溶液を添加した。混合物を０℃で１０分間攪拌し、ＴＬＣ（石油エーテル中の２５％ＥｔＯＡｃ、Ｒｆ＝０．５）によって、出発物質が消費されたことが示された。混合物を濃縮乾固し、ＤＣＭ（１０ｍＬ）中に溶解して、ＤＣＭ（１５ｍＬ）中の化合物１（１５０．０ｍｇ、０．２００ｍｍｏｌ）及びＥｔ３Ｎ（１０３．３ｍｇ、１．０２ｍｍｏｌ）の溶液に添加した。混合物を０℃で１時間攪拌した。ＴＬＣ（石油エーテル中の５０％ＥｔＯＡｃ）によって、出発物質が消費されたことが示された。混合物を濃縮し、粗物質をシリカ上でのフラッシュカラムクロマトグラフィー（石油エーテル中の０〜３３％ＥｔＯＡｃ）によって精製した。それを濃縮して、３（１８０．０ｍｇ、８１％）を黄色固体として得た。ＬＣＭＳ （５−９５ＡＢ／１．５ 分）：ＲＴ ＝ １．０１４ 分， ［Ｍ＋Ｈ］＋１００７．１．

ＴＨＦ（３．０ｍＬ）及び水（３．０ｍＬ）の混合物中におけるＨＯＡｃ（５．０ｍＬ、８７ｍｍｏｌ）の溶液に、３（１５０．０ｍｇ、０．１５００ｍｍｏｌ）を添加した。反応溶液を４０℃で１６時間攪拌した。溶液を濃縮して溶媒を除去し、残留物をＥｔＯＡｃ（１００ｍＬ）で希釈してＨ２Ｏ（３０ｍＬ×４）で洗浄し、Ｎａ２ＳＯ４上で乾燥させて濾過して濃縮した。残留物を、ｐｒｅｐ−ＴＬＣ（ＤＣＭ中の５％ＭｅＯＨ、Ｒｆ＝０．５）によって精製して、４（１００ｍｇ、７５％）を黄色固体として得た。ＬＣＭＳ （５−９５ＡＢ／１．５ 分）：ＲＴ ＝ ０．７７６ 分， ［Ｍ＋Ｈ］＋８９３．２．

無水ＤＣＭ（１０．０ｍＬ）中のＤＭＰ（２２．８ｍｇ、０．０５００ｍｍｏｌ）の溶液に、化合物４（４０．０ｍｇ、０．０４００ｍｍｏｌ）を添加した。反応混合物を１８℃で１時間攪拌した。混合物をＤＣＭ（５０ｍＬ）で希釈して濾過した。濾液をＮａ２ＳＯ３（３０ｍＬ×３）で洗浄し、Ｎａ２ＳＯ４上で乾燥させて濾過し、真空中で濃縮した。残留物を、ｐｒｅｐ−ＴＬＣ（ＤＣＭ中の５％ＭｅＯＨ、Ｒｆ＝０．５）によって精製して、ＣＬＤ−７（ＧＮＴ＿Ｂ３４３＿８６７−１）（２０ｍｇ、５０％）を黄色固体として得た。ＬＣＭＳ （５−９５ＡＢ／１．５ 分）：ＲＴ ＝ ０．７６１ 分， ［Ｍ＋Ｈ］＋ ８９１．０によって、所望の生成物の９６％が示された。ＨＰＬＣ （１０−８０ＡＢ／１５分）：ＲＴ ＝ ８．４０ 分によって、所望の生成物の９４．９％が示された。
ＣＬＤ−８の合成
スキーム

実験

ＴＨＦ（５．０ｍＬ）／水（５．０ｍＬ）中の化合物１（４０．０ｍｇ、０．１９０ｍｍｏｌ）の溶液に、ＴＣＥＰ（２７７．９ｍｇ、０．９７０ｍｍｏｌ）を添加した。反応混合物を１６℃で４８時間攪拌した。溶液をＨ２Ｏ（１０ｍＬ）で希釈し、ＤＣＭ（２０ｍＬ×３）で抽出した。組み合わせた有機層をＮａ２ＳＯ４上で乾燥させて濾過し、次のステップで直接使用した。

ＤＣＭ（２５ｍＬ）及びＭｅＯＨ（２５ｍＬ）の混合物中における化合物２（４０．０ｍｇ、０．３８０ｍｍｏｌ）の溶液に、化合物３（２３８．３ｍｇ、０．７７０ｍｍｏｌ）を添加した。反応溶液を１６℃で１６時間攪拌し、ＭｎＯ２（５００ｍｇ）を添加して、混合物を０．５時間攪拌した。混合物を濾過し、濾液を真空中で濃縮した。残留物をＭｅＯＨ（５ｍＬ）で希釈して再度濾過し、残留する化合物３の大半を除去して濾液を濃縮し、ｐｒｅｐ−ＴＬＣ（石油エーテル中の３３％ＥｔＯＡｃ、Ｒｆ＝０．５）によって精製して、化合物４（５０ｍｇ、０．１５７ｍｍｏｌ、４０．８％収率）を無色の油として得た。ＬＣＭＳ （５−９５ＡＢ／１．５ 分）：ＲＴ ＝ ０．８０５ 分， ［Ｍ＋Ｈ］＋ ２５８．９によって、ＤＰの８１％が示された。

無水ＤＣＭ（８ｍＬ）中のトリホスゲン（６４．６ｍｇ、０．２２０ｍｍｏｌ）及び４ÅのＭＳ（３０ｍｇ）の攪拌混合物に、無水ＤＣＭ（８ｍＬ）中の化合物５（１６０．０ｍｇ、０．２２０ｍｍｏｌ）及びトリエチルアミン（１１０．１ｍｇ、１．０９ｍｍｏｌ）の溶液をゆっくりと添加した。反応混合物を１６℃で１時間攪拌し、混合物を真空中で濃縮して溶媒を除去した。それを無水ＤＣＭ（１０．０ｍＬ）中に溶解して、トリエチルアミン（６５．８ｍｇ、０．６５０ｍｍｏｌ）、続いて無水ＤＣＭ（５．０ｍＬ）中の化合物４（５０．０ｍｇ、０．１９０ｍｍｏｌ）の溶液を添加した。反応混合物を１６℃で１６時間攪拌した。混合物を濾過して濾液を濃縮し、ｐｒｅｐ−ＴＬＣ（ＤＣＭ中の１０％ＭｅＯＨ、Ｒｆ＝０．８）によって精製して、化合物６（１００ｍｇ、０．０８１４ｍｍｏｌ、３７．６％収率）を黄色固体として得た。ＬＣＭＳ （５−９５ＡＢ／１．５ 分）：ＲＴ ＝ １．１１９ 分， ［Ｍ＋Ｈ］＋ １０１９．４によって、所望の生成物の８３％が示された。

酢酸（３．０ｍＬ）、ＴＨＦ（２．０ｍＬ）及び水（１．０ｍＬ）の混合物中における化合物６（１００．０ｍｇ、０．１０００ｍｍｏｌ）の溶液を、１６℃で４８時間攪拌した。溶液を真空中で濃縮して、残留物をＤＣＭ（３０ｍＬ）で希釈してＨ２Ｏ（２０ｍＬ×３）で洗浄し、乾燥させて濾過して濃縮した。残留物を、ｐｒｅｐ−ＴＬＣ（ＤＣＭ中の１０％ＭｅＯＨ、Ｒｆ＝０．５）によって精製して、化合物７（５５ｍｇ、０．０６０２ｍｍｏｌ、６１．３％収率）を黄色固体として得た。ＬＣＭＳ （５−９５ＡＢ／１．５ 分）：ＲＴ ＝ ０．８９２ 分， ［Ｍ＋Ｈ］＋ ９０５．２によって、所望の生成物の９９％が示された。

無水ＤＣＭ（６．０ｍＬ）中の化合物７（５５ｍｇ、０．０６０ｍｍｏｌ）及び４ÅのＭＳ（３０ｍｇ）の混合物に、ＤＭＰ（４４．０ｍｇ、０．１０４ｍｍｏｌ）を添加した。反応混合物を１６℃で１時間攪拌した。混合物をＥｔＯＡｃ（３０ｍＬ）で希釈して、飽和Ｎａ２ＳＯ３溶液（３０ｍＬ）でクエンチし、ＥｔＯＡｃ（３０ｍＬ×３）で抽出した。組み合わせた有機層をＮａ２ＳＯ４上で乾燥し、濾過して濃縮した。残留物を、ｐｒｅｐ−ＴＬＣ（ＤＣＭ中の１０％ＭｅＯＨ、Ｒｆ＝０．５）によって精製して、ＣＬＤ−８（ＧＮＴ＿Ｂ３４３＿８６６−１）（４２ｍｇ、７７％収率）を淡黄色固体として得た。ＬＣＭＳ （５−９５ＡＢ／１．５ 分）：ＲＴ ＝ ０．８６８ 分， ［Ｍ＋Ｈ］＋ ９０３．２によって、所望の生成物の９８％が示された。
ＣＬＤ−９の合成
スキーム

実験

ＤＣＭ（１０ｍＬ）／ＭｅＯＨ（１０ｍＬ）中における化合物２（２３８３ｍｇ、７．６８ｍｍｏｌ）の溶液に、化合物１（３００ｍｇ、３．８４ｍｍｏｌ）を添加した。溶液を１６℃で２時間攪拌した。ＭｎＯ２（５．０ｇ）をその溶液中に添加し、混合物を１６℃で３０分間攪拌した。混合物を濾過し、濾液を真空中で濃縮して残留物をＭｅＯＨ（１５ｍＬ）で洗浄し、濾過して濃縮した。粗生成物を、シリカ上でのフラッシュカラムクロマトグラフィー（ＤＣＭ）によって精製して、化合物３（８００ｍｇ、３．２５ｍｍｏｌ、８４．８％収率）を油として得た。ＬＣＭＳ （５−９５ＡＢ／１．５ 分）：ＲＴ ＝ ０．６０８ 分， ［Ｍ＋Ｈ］＋ ２３２．８．

無水ＤＣＭ（５．０ｍＬ）中の化合物３（６５．０ｍｇ、０．２８０ｍｍｏｌ）及びピリジン（８８．５ｍｇ、１．１２ｍｍｏｌ）を、無水ＤＣＭ（５．０ｍＬ）中のトリホスゲン（４１．５ｍｇ、０．１４０ｍｍｏｌ）溶液に０℃で滴下した。溶液を０℃で１０分間攪拌し、混合物を濃縮して粗化合物４を白色固体として得て、これを次のステップに使用した。

無水ＤＣＭ（８０ｍＬ）中の化合物５（４０００ｍｇ、５．８４ｍｍｏｌ）の溶液に、イミダゾール（２．３８ｇ、３５．１ｍｍｏｌ）、続いてＴＢＳＣｌ（１．７６１ｇ、１１．７ｍｍｏｌ）を添加した。反応混合物を４０℃で３時間攪拌した。混合物をＤＣＭ（１００ｍＬ）で希釈してＨ２Ｏ（５０ｍＬ×３）で洗浄し、Ｎａ２ＳＯ４上で乾燥させて濾過して濃縮した。残留物を、シリカ上でのフラッシュカラムクロマトグラフィー（ＤＣＭ中の０〜３．３％ＭｅＯＨ）によって精製して、化合物６（２．５０ｇ、３．１３ｍｍｏｌ、５３．６％収率）を淡黄色固体として得た。
ＬＣＭＳ （５−９５ＡＢ／１．５ 分）：ＲＴ ＝ ０．９４５ 分， ［Ｍ＋Ｈ］＋ ７９９．２．
無水ＤＣＭ（１００ｍＬ）中の化合物６（２．３０ｇ、２．８８ｍｍｏｌ）の溶液に、ＤＭＰ（４．８８ｇ、１１．５２ｍｍｏｌ）を添加した。反応混合物を１０℃で２時間攪拌した。それを濾過して、濾液をＥｔＯＡｃ（６００ｍＬ）で希釈し、飽和Ｎａ２ＳＯ３溶液（２００ｍＬ）、飽和Ｎａ２ＳＯ３／ＮａＨＣＯ３溶液（ｖ／ｖ＝１：１、２００ｍＬ）及びブラインでクエンチした。有機層をＮａ２ＳＯ４上で乾燥させて濾過し、濃縮して粗油を得て、これをｔＢｕＯＨ（４０ｍＬ、２．８８ｍｍｏｌ）／水（２０ｍＬ）中に溶解させて、次いで、２−メチル−２−ブテン（３０ｍＬ、２．８８ｍｍｏｌ）及びリン酸二水素ナトリウム（１．３８２ｍｇ、１１．５ｍｍｏｌ）を用いて連続して１０℃で処理した。それを１０℃で０．５時間攪拌した後、反応混合物を亜塩素酸ナトリウム（１．５６ｇ、１７．３ｍｍｏｌ）と共に１０℃で１時間攪拌した。混合物をＥｔＯＡｃ（３００ｍＬ）で希釈し、水（１００ｍＬ）及びブライン（１００ｍＬ）で洗浄した。有機層をＮａ２ＳＯ４上で乾燥させて濾過し、真空中で濃縮して化合物７（２．０ｇ、２．４６ｍｍｏｌ、８５．５％収率）を粗生成物として得た。ＬＣＭＳ （５−９５ＡＢ／１．５ 分）：ＲＴ ＝ ０．９２９ 分， ［Ｍ＋Ｈ］＋ ８１３．２．

ＤＭＦ（２０ｍＬ）中の化合物７（２．０ｇ、２．４６ｍｍｏｌ）の溶液に、Ｋ２ＣＯ３（６８０ｍｇ、４．９２ｍｍｏｌ）、続いてＭｅＩ（３．９５ｇ、２７．８ｍｍｏｌ）を添加した。反応混合物を１０℃で１時間攪拌した。混合物をＥｔＯＡｃ（２００ｍＬ）で希釈してブライン（４０ｍＬ×５）で洗浄し、次いで、Ｎａ２ＳＯ４上で乾燥させて濾過し、真空中で濃縮して化合物８（２．０ｇ、２．４２ｍｍｏｌ、９８．３％収率）を黄色油として得た。ＬＣＭＳ （５−９５ＡＢ／１．５ 分）：ＲＴ ＝ ０．９７５ 分， ［Ｍ＋Ｈ］＋ ８２７．２．

ＥｔＯＨ（２０ｍＬ）／水（１０ｍＬ）中の化合物８（２．０ｇ、２．４２ｍｍｏｌ）及び鉄（１．３５ｇ、２４．２ｍｍｏｌ）の混合物に、ＮＨ４Ｃｌ（２．５９ｇ、４８．７ｍｍｏｌ）を添加した。反応混合物を７０℃で２時間攪拌した。混合物を濾過し、濾液を真空中で濃縮してＥｔＯＨを除去し、水スラリーをＥｔＯＡｃ（５０ｍＬ×３）で抽出した。組み合わせたＥｔＯＡｃ層をＮａ２ＳＯ４上で乾燥させて濾過して濃縮し、シリカ上でのフラッシュカラムクロマトグラフィー（ＤＣＭ中の３〜５％ＭｅＯＨ、Ｒｆ＝０．５）によって精製して、化合物９（１．５ｇ、１．８９ｍｍｏｌ、７８．１％収率）を黄色固体として得た。ＬＣＭＳ （５−９５ＡＢ／１．５ 分）：ＲＴ ＝ ０．８４５ 分， ［Ｍ＋Ｈ］＋ ７３５．３．

ＤＣＭ（１５ｍＬ）中の化合物９（１００ｍｇ、０．１４０ｍｍｏｌ）及びＤＩＥＡ（６８．８ｍｇ、０．６８０ｍｍｏｌ）の溶液に、化合物４（８０．２ｍｇ、０．２７０ｍｍｏｌ）を添加し、反応物を０℃で１時間攪拌した。混合物を濃縮し、残留物をシリカ上でのフラッシュカラムクロマトグラフィー（ＤＣＭ中の０〜５％ＭｅＯＨ、Ｒｆ＝０．５）によって精製して、化合物１０（１３０ｍｇ、０．１１７ｍｍｏｌ、８５．８％収率）を黄色油として得た。ＬＣＭＳ （５−９５ＡＢ／１．５ 分）：ＲＴ ＝ ０．９８５ 分， ［Ｍ＋Ｈ］＋ ９９３．４

ＴＨＦ（６．０ｍＬ）／水（３．０ｍＬ）中の酢酸（６．０ｍＬ、１０５ｍｍｏｌ）の溶液に、化合物１０（１３０ｍｇ、０．１３０ｍｍｏｌ）を添加した。反応溶液を４０℃で２４時間攪拌した。溶液を真空中で濃縮して溶媒を除去し、残留物をＥｔＯＡｃ（３０ｍＬ）で希釈してＨ２Ｏ（１０ｍＬ×４）で洗浄し、Ｎａ２ＳＯ４上で乾燥させて濾過して真空中で濃縮した。残留物を、ｐｒｅｐ−ＴＬＣ（ＤＣＭ中の８％ＭｅＯＨ、Ｒｆ＝０．５）によって精製して、化合物１１（６０ｍｇ、０．０６８３ｍｍｏｌ、５２．２％収率）を黄色油として得た。ＬＣＭＳ （５−９５ＡＢ／１．５ 分）：ＲＴ ＝ ０．７６３ 分， ［Ｍ＋Ｈ］＋ ８７９．０

無水ＤＣＭ（５ｍＬ）中の化合物１１の溶液に、ＤＭＰ（１７．４ｍｇ、０．０４００ｍｍｏｌ）を添加した。反応混合物を１８℃で１時間攪拌した。混合物をＤＣＭ（５０ｍＬ）で希釈して濾過した。濾液をＮａ２ＳＯ３（３０ｍＬ×３）で洗浄し、Ｎａ２ＳＯ４上で乾燥させて濾過し、真空中で濃縮した。粗生成物を、ｐｒｅｐ−ＴＬＣ（ＤＣＭ中の５％ＭｅＯＨ、Ｒｆ＝０．５）によって精製して、ＣＬＤ−９（ＧＮＴ＿Ｂ３４３＿８６５−１）（１２．２ｍｇ、０．０１３６ｍｍｏｌ、３９．９％収率）を淡黄色固体として得た。ＬＣＭＳ （５−９５ＡＢ／１．５ 分）：ＲＴ ＝ ０．７３９ 分， ［Ｍ＋Ｈ］＋ ８７７．２
ＤＭ−４の合成
スキーム

実験

ＤＣＭ（８０ｍＬ）中の化合物１（３．０ｇ、１４．９ｍｍｏｌ）の溶液に、ＤＭＰ（９．４８ｇ、２２．４ｍｍｏｌ）を添加した。混合物を０℃で１時間攪拌した後、それをＮａ２Ｓ２Ｏ３（５０ｍＬ）／ＮａＨＣＯ３（５０ｍＬ）及びＭＴＢＥ（１３０ｍＬ）で希釈した。有機相を水（６０ｍＬ×３）で洗浄し、濃縮して化合物２（２．９ｇ、１４．６ｍｍｏｌ、９７．６％収率）を無色の油として得た。

ＭｅＯＨ（２０ｍＬ）中の化合物２（２．９ｇ、１４．６ｍｍｏｌ）及び（１−ジアゾ−２−オキソ−プロピル）ホスホン酸ジメチルの溶液に、Ｋ２ＣＯ３（６．０３ｇ、４３．７ｍｍｏｌ）を添加した。反応混合物を２０℃で１時間攪拌した後、それを真空中で濃縮し、残留物をシリカ上でのフラッシュカラムクロマトグラフィー（ＰＥ中の１０％ＥｔＯＡｃ）によって精製して、生成物の化合物３（２．０ｇ、１０．２４ｍｍｏｌ、７０．４％収率）を無色の油として得た。

ＤＭＦ（５０ｍＬ）中の化合物３（２．０ｇ、１０．２ｍｍｏｌ）及び化合物４（５．４ｇ、１５．４ｍｍｏｌ）の溶液に、Ｃｓ２ＣＯ３（３．９７ｇ、２０．５ｍｍｏｌ）及びＰｄ（ＰＰｈ３）４（７８５ｍｇ、１．５４ｍｍｏｌ）を添加した。混合物を、９５℃でＮ２下において１時間攪拌した。混合物を濃縮して、シリカ上でのフラッシュカラムクロマトグラフィー（ＰＥ中の２０％ＥｔＯＡｃ）によって精製し、生成物の化合物５（１．６０ｇ、２．４４ｍｍｏｌ、２３．８％収率）を無色の油として得た。
ＬＣＭＳ （５−９５ＡＢ／１．５ 分）：ＲＴ ＝ ０．９９４ 分， ［Ｍ＋Ｈ−５６］＋４１０．０．

ＭｅＯＨ（１０ｍＬ）中の化合物５（２．０ｇ、４．３ｍｍｏｌ）の溶液に、Ｐｄ／ＣａＣＯ３（２００．０ｍｇ、２１．５ｍｍｏｌ）を添加した。混合物を３０℃で１時間、Ｈ２下（１ａｔｍ）において攪拌した。混合物を濾過し、濾液を濃縮して粗生成物を得て、これをシリカ上でのフラッシュカラムクロマトグラフィー（ＰＥ中の１０％ＥｔＯＡｃ）によって精製して、生成物の化合物６（１．０ｇ、２．１４ｍｍｏｌ、４９．８％収率）を白色固体として得た。ＬＣＭＳ （５−９５ＡＢ／１．５ 分）：ＲＴ ＝ ０．９８３ 分， ［Ｍ＋Ｎａ］＋４９０．１．

ＥｔＯＡｃ（１０ｍＬ）中の化合物６（０．９０ｇ、１．９２ｍｍｏｌ）の溶液に、ＨＣｌ／ＥｔＯＡｃ（６．０ｍＬ）を添加した。混合物を２５℃で１時間攪拌した後、それを濃縮して粗生成物の化合物７（０．７７ｇ、１．９０ｍｍｏｌ、９９％収率）を白色固体として得た。

ＭｅＯＨ（３０ｍＬ）中の化合物７（０．７７ｇ、１．９１ｍｍｏｌ）の溶液に、ＮａＯＭｅ（１．０３ｇ、１９．０６ｍｍｏｌ）を添加した。混合物を、３０℃で２時間攪拌した。混合物を濃縮して、シリカ上でのフラッシュカラムクロマトグラフィー（ＰＥ中の２５〜７５％ＥｔＯＡｃ）によって精製し、生成物の化合物８（０．６０ｇ、１．７９ｍｍｏｌ、９３．８％収率）を黄色油として得た。１Ｈ ＮＭＲ （４００ ＭＨｚ， ＣＤＣｌ３）δ ｐｐｍ １．８９ − ２．１１ （ｍ， ３ Ｈ） ２．１８ − ２．３３ （ｍ， １ Ｈ） ３．５９ （ｄｔ， Ｊ ＝ １２．０， ７．６ Ｈｚ， １ Ｈ） ３．８０ （ｄｔ， Ｊ ＝ １１．５， ５．８ Ｈｚ， １ Ｈ） ３．９０ − ３．９６ （ｍ， １ Ｈ） ３．９７ （ｓ， ３ Ｈ） ５．１９ （ｓ， ２ Ｈ） ５．８６ （ｄｄ， Ｊ ＝ １０．０， ４．８ Ｈｚ， １ Ｈ） ６．５３ （ｄｄ， Ｊ ＝ １０．０， ２．０ Ｈｚ， １ Ｈ） ６．６９ （ｓ， １ Ｈ） ７．２９ − ７．３５ （ｍ， １ Ｈ） ７．３６ − ７．４１ （ｍ， ２ Ｈ） ７．４２ − ７．４８ （ｍ， ２ Ｈ） ７．６２ （ｓ， １ Ｈ）

ＤＣＭ（５０ｍＬ）中の化合物８（５８０ｍｇ、１．７３ｍｍｏｌ）の溶液に、ＴｉＣｌ４（６５６ｍｇ、３．４６ｍｍｏｌ）を添加した。混合物を３０℃で１２時間攪拌した。混合物をＨＣｌ（１．０Ｍ、２０ｍＬ）及びＥｔＯＡｃ（１００ｍＬ）に添加した。有機層を水（５０ｍＬ×３）で洗浄し、濃縮して粗生成物の化合物９（２５０ｍｇ、０．４４ｍｍｏｌ、２５．３％収率）を黄色固体として得た。

ＤＭＦ（５．０ｍＬ）中の化合物９（５０．０ｍｇ、０．２０ｍｍｏｌ）の溶液を、Ｋ２ＣＯ３（４２．２６ｍｇ、０．３１ｍｍｏｌ）及び１，５−ジヨードペンタン（３３３ｍｇ、１．０ｍｍｏｌ）に添加した。反応混合物を９０℃で３時間攪拌した。反応混合物を、シリカカラムクロマトグラフィー（石油エーテル中の０〜５０％ＥｔＯＡＣ）によって精製し、化合物１０（６０ｍｇ、０．１７８ｍｍｏｌ、８７．６％収率）を油として得た。ＬＣＭＳ （５−９５ＡＢ／１．５ 分）：ＲＴ ＝ ０．７６５ 分， ［Ｍ＋Ｈ］＋３３２．０

ＤＣＭ（６．０ｍＬ）中の化合物１０（６０．０ｍｇ、０．１８ｍｍｏｌ）の溶液に、トリエチルアミン（５５ｍｇ、０．５４ｍｍｏｌ）及びＭｓＣｌ（４１ｍｇ、０．３６ｍｍｏｌ）を添加した。混合物を３５℃で１時間攪拌した後、それをＥｔＯＡｃ（８０ｍＬ）で希釈して、水（５０ｍＬ×３）で洗浄した。有機層を濃縮して、粗生成物（７０ｍｇ）を無色の油として得た。ＬＣＭＳ （５−９５ＡＢ／１．５ 分）：ＲＴ ＝ ０．６７９ 分， ［Ｍ＋Ｈ］＋４１０．０

ＤＭＦ（５．０ｍＬ）中の化合物１１（７０ｍｇ、０．１７ｍｍｏｌ）及び化合物１２（８７ｍｇ、０．１９ｍｍｏｌ）の溶液に、Ｋ２ＣＯ３（４７ｍｇ、０．３４ｍｍｏｌ）及びＫＩ（５．６８ｍｇ、０．０３０ｍｍｏｌ）を添加した。混合物を９０℃で３時間攪拌し、ｐｒｅｐ−ＨＰＬＣ（ＨＣＯＯＨ）によって精製して、生成物の化合物１３（７０ｍｇ、０．０８４ｍｍｏｌ、４９．２％収率）を白色固体として得た。ＬＣＭＳ （５−９５ＡＢ／１．５ 分）：ＲＴ ＝ ０．８４５ 分， ［Ｍ＋Ｈ］＋７７４．４．

ＴＦＡ（１．９ｍＬ）及び水（０．１０ｍＬ）の混合物中における化合物１３（５０ｍｇ、０．０６０ｍｍｏｌ）の溶液を、３５℃で１時間攪拌した。混合物を、飽和ＮａＨＣＯ３（３０ｍＬ）とＥｔＯＡｃ（５０ｍＬ）との間で分画した。有機層を水（３０ｍＬ×２）、ブライン（３０ｍＬ）で洗浄し、Ｎａ２ＳＯ４上で乾燥した。それを濃縮し、ｐｒｅｐ−ＴＬＣ（ＤＣＭ中の５％ＭｅＯＨ、Ｒｆ＝０．５）によって精製して、生成物ＤＭ−４（ＧＮＴ＿Ｂ３４３＿６５５−１）（２０ｍｇ、０．０３４ｍｍｏｌ、５３．１％収率）を白色固体として得た。ＬＣＭＳ （５−９５ＡＢ／１．５ 分）：ＲＴ ＝ ０．８２５ 分， ［Ｍ＋Ｈ］＋５７２．１．１Ｈ ＮＭＲ （４００ ＭＨｚ， ＣＤＣｌ３）δｐｐｍ １．６５ − １．７５ （ｍ， ３Ｈ） １．８８ − ２．１０ （ｍ， ８Ｈ） ２．１９ − ２．３１ （ｍ， １Ｈ） ２．８２ − ３．２９ （ｍ， ２Ｈ） ３．６０ （ｄｔ， Ｊ ＝ １１．９， ７．５ Ｈｚ， １Ｈ） ３．８１ （ｄｔ， Ｊ ＝ １１．６， ５．９ Ｈｚ， １Ｈ） ３．８６ − ３．９１ （ｍ， １Ｈ） ３．９４ （ｓ， ６Ｈ） ３．９７ （ｂｒ． ｓ．， １Ｈ） ４．０１ − ４．１８ （ｍ， ４Ｈ） ４．３０ （ｓ， ２Ｈ） ５．１９ （ｄ， Ｊ ＝ １０．６ Ｈｚ， ２Ｈ） ５．８９ （ｄｄ， Ｊ ＝ ９．９， ５．１ Ｈｚ， １Ｈ） ６．５３ − ６．６３ （ｍ， １Ｈ） ６．６６ （ｓ， １Ｈ） ６．８１ （ｓ， １Ｈ） ７．５１ （ｓ， １Ｈ） ７．５９ （ｓ， １Ｈ） ７．６８ （ｄ， Ｊ ＝ ４．４ Ｈｚ， １Ｈ）
ＣＬＤ−３の合成
スキーム

実験

ＤＣＭ（１００ｍＬ）中の化合物６（５．００ｇ、３７．８３ｍｍｏｌ）及びＥｔ３Ｎ（１１．４９ｇ、１１３．５０ｍｍｏｌ）の溶液に、ＭｓＣｌ（８．９７ｇ、７８．３２ｍｍｏｌ）を０℃で滴下した。それを２５℃で２時間Ｎ２下において攪拌した後、反応混合物を氷水（２００ｍＬ）中に注ぎ、ＤＣＭ（１００ｍＬ×２）で抽出した。有機相をブラインで洗浄し、Ｎａ２ＳＯ４上で乾燥させて真空中で濃縮し、粗生成物（７．０ｇ、９５％）を黄色油として得た。それを、アセトン／水（５０ｍＬ／５０ｍＬ）中においてＫＳＡｃ（６．５９ｇ、５７．６６ｍｍｏｌ）と混合して、２５℃で１０時間攪拌した。反応混合物を濃縮して、シリカ上でのフラッシュカラムクロマトグラフィー（ＰＥ／ＥｔＯＡｃ＝１００／１〜４０／１）によって精製し、純粋化合物８（１．０ｇ、１４．６％）を黄色油として得た。

ＴＨＦ（２０ｍＬ）中のＬｉＡｌＨ４（６９２ｍｇ、１８．２３ｍｍｏｌ）の懸濁液に、ＴＨＦ（５ｍＬ）中の化合物８（８６７ｍｇ、４．５６ｍｍｏｌ）の溶液を０℃でＮ２下において添加した。反応混合物を７５℃で還流下において２時間攪拌した。反応混合物をＥｔＯＡｃ（３．０ｍＬ）及びＨＣｌ溶液（２．０Ｍ、５ｍＬ）によって０℃でクエンチした。反応混合物を次のステップで直接使用した。

ＤＣＭ／ＭｅＯＨ（２５ｍＬ／２５ｍＬ）中の化合物１０（２．８４ｇ、９．１２ｍｍｏｌ）の溶液に、化合物９（上記ステップから）の溶液を２５℃で添加した。混合物を２５℃で１０時間攪拌した。反応混合物をＭｎＯ２（３．４ｇ、３９．６ｍｍｏｌ）に添加して濾過した。濾液を真空中で濃縮し、シリカ上でのフラッシュカラムクロマトグラフィー（ＤＣＭ）及びＳＦＣによって精製し、化合物２（０．８０ｇ、６７．４％）を黄色油として得た。ＬＣＭＳ （５−９５ ＡＢ， １．５ 分）：ＲＴ ＝ １．０２０ 分， Ｍ＋Ｈ＋ ＝ ２６０．９．

ＤＣＭ（３．０ｍＬ）中のトリホスゲン（４６ｍｇ、０．１６ｍｍｏｌ）の溶液に、ＤＣＭ（３ｍＬ）中の化合物２（１００ｍｇ、０．３８ｍｍｏｌ）及びピリジン（３０ｍｇ、０．３８ｍｍｏｌ）の溶液を０℃で滴下した。反応混合物を０℃で１５分間攪拌し、ＤＣＭ（４．０ｍＬ）中の化合物１（２８０ｍｇ、０．２９ｍｍｏｌ）及びピリジン（３０ｍｇ、０．３８ｍｍｏｌ）の溶液に２６℃で滴下した。反応混合物を２６℃で２時間攪拌した。溶媒を除去し、残留物をｐｒｅｐ−ＴＬＣ（溶媒：石油エーテル中の３０％ＥｔＯＡｃ）によって精製して、化合物３（３００ｍｇ、８２．４％）を黄色泡沫として得た。ＬＣＭＳ （５−９５ＡＢ／１．５ 分）：ＲＴ ＝１．２４８ 分， ［Ｍ＋Ｈ］＋１２３９．５

ＴＨＦ／Ｈ２Ｏ（４ｍＬ／４ｍＬ）中の化合物３（３１２ｍｇ、０．２４ｍｍｏｌ）の溶液に、ＨＯＡｃ（６．０ｍＬ）を２６℃で添加した。反応混合物を２６℃で２４時間攪拌した後、それをＥｔＯＡｃ（２０ｍＬ）で希釈して、水（２×１０ｍＬ）、飽和ＮａＨＣＯ３水溶液（１５ｍＬ）及びブライン（１５ｍＬ）で洗浄した。それを乾燥して濃縮し、シリカ上でのフラッシュカラムクロマトグラフィー（ＤＣＭ中の０〜５％ＭｅＯＨ）によって精製して、化合物４（２４０ｍｇ、９７．１％）を黄色泡沫として得た。ＬＣＭＳ （５−９５ＡＢ／１．５ 分）：ＲＴ ＝ ０．８７６分， ［Ｍ＋Ｈ］＋ １０１１．３．

ＤＣＭ（５．０ｍＬ）中の化合物４（１０１ｍｇ、０．１０ｍｍｏｌ）の溶液に、ＤＭＰ（１２５ｍｇ、０．２９ｍｍｏｌ）を０℃で添加した。反応混合物を２６℃で２時間攪拌した。反応を、ＮａＨＣＯ３／Ｎａ２ＳＯ３（２．０ｍＬ／２．０ｍＬ）の飽和溶液でクエンチし、ＤＣＭ（３×５ｍＬ）で抽出した。組み合わせた有機層を、ＮａＨＣＯ３／Ｎａ２ＳＯ３（２ｍＬ／２ｍＬ）、ブライン（５ｍＬ）で洗浄し、乾燥して濃縮した。残留物を、ｐｒｅｐ−ＴＬＣ（ＤＣＭ／ＭｅＯＨ＝１５：１）によって精製して、化合物５（６６ｍｇ、６６．２％）を黄色泡沫として得た。ＬＣＭＳ （５−９５ＡＢ／１．５ 分）：ＲＴ ＝ ０．８１５ 分， ［（Ｍ−１００）／２＋Ｎａ］＋ ４７６．１

冷ＴＦＡ（水中で９５％、２．０ｍＬ）を化合物５（６６ｍｇ、０．０６ｍｍｏｌ）に０℃で添加した。反応混合物を０℃で３０分間攪拌した。反応混合物を、冷飽和ＮａＨＣＯ３水溶液（４．０ｍＬ）に０℃で滴下し、それをＤＣＭ（４×８．０ｍＬ）で抽出した。組み合わせた有機層をブライン（２０ｍＬ）で洗浄し、乾燥させて濃縮し、粗生成物を得て、これをｐｒｅ−ＴＬＣ（ＤＣＭ中の６．２５％ＭｅＯＨ、Ｒｆ＝０．５）によって精製して、ＣＬＤ−３（ＧＮＴ＿Ｂ３４３＿４２７−１）（２７．４ｍｇ、４７．４％）を黄色泡沫として得た。１Ｈ ＮＭＲ （４００ ＭＨｚ， ＣＤＣｌ３） δ ９．２１ （ｓ， １Ｈ）， ８．３８−８．３５ （ｍ， １Ｈ）， ７．７９ （ｄ， Ｊ ＝ ８．８ Ｈｚ， １Ｈ）， ７．６９ （ｄ， Ｊ ＝ ４．４ Ｈｚ， １Ｈ）， ７．４７ （ｓ， １Ｈ）， ７．１７ （ｓ， １Ｈ）， ６．８０ （ｓ， １Ｈ）， ６．５０ （ｓ， １Ｈ）， ５．５７ （ｄ， Ｊ ＝ ９．２ Ｈｚ， １Ｈ）， ５．２０−５．１３ （ｍ， ４Ｈ）， ４．２９−４．２５ （ｍ， ５Ｈ）， ４．１４−４．０９ （ｍ． ４Ｈ）， ３．９６−３．８７ （ｍ， ８Ｈ）， ３．３８ （ｄ， Ｊ ＝ ８．０ Ｈｚ， １Ｈ）， ３．５８ （ｄ， Ｊ ＝ ８．０ Ｈｚ， ２Ｈ）， ３．４４ （ｓ， １Ｈ）， ３．１６−３．０９ （ｍ， １Ｈ）， ２．９７−２．８９ （ｍ， ３Ｈ）， ２．７１−２．６７ （ｍ， １Ｈ）， １．９５−１．９１ （ｍ， ６Ｈ）， １．４５−１．２２ （ｍ， ３Ｈ）．ＬＣＭＳ （５−９５ＡＢ／１．５ 分）：ＲＴ ＝ ０．７５０ 分， ［Ｍ＋Ｈ］＋ ８８９．８．
ＣＬＤ−５の合成
（Ｒ）−２−（（４−ニトロフェニル）ジスルファニル）プロピル（１１Ｓ，１１ａＳ）−１１−ヒドロキシ−７，８−ジメトキシ−５−オキソ−２−（キノリン−６−イル）−１１，１１ａ−ジヒドロ−１Ｈ−ベンゾ［ｅ］ピロロ［１，２−ａ］［１，４］ジアゼピン−１０（５Ｈ）−カルボキシレート

２Ｍの塩化オキサリル溶液（３９ｍＬ、７７．１４ｍｍｏｌ）及び６０ｍＬのジクロロメタンを５００ｍＬフラスコ中で混合して、−７８℃に冷却した。ＤＭＳＯ（５．７７ｍＬ、７７．１４ｍｍｏｌ）を、シリンジによって約２〜３分にわたって添加した。混合物を２０分間−７８℃で攪拌し、次いで、シリンジによって上に（５Ｓ）−５−［［ｔｅｒｔ−ブチル（ジメチル）シリル］オキシメチル］−１−（４，５−ジメトキシ−２−ニトロ−ベンゾイル）ピロリジン−３−オン出発物質（３０ｍＬのジクロロメタン中に１１．３３ｇを溶解し、ジクロロメタン１０ｍＬを加えてすすぎ、Ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆ Ｍｅｄｉｃｉｎａｌ Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ，２０１０，５３，２９２７−２９４１及びＢｉｏｏｒｇａｎｉｃ＆Ｍｅｄｉｃｉｎａｌ Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ Ｌｅｔｔｅｒｓ，２０００，１０，１８４５−１８４７に従って合成した）。３０分後に−７８℃で、Ｅｔ３Ｎ（２２．６ｍＬ、１５４．３ｍｍｏｌ）をシリンジによって２分にわたって添加した。約４分後、混合物を０℃まで加温し、１時間攪拌した。混合物を１００ｍＬの水中に注いだ。ジクロロメタンを分離した。水層をＥｔＯＡｃ（２×７５ｍＬ）で抽出した。組み合わせた有機抽出物を１Ｎ ＨＣｌ、次いで、飽和重炭酸ナトリウムで洗浄し、Ｎａ２ＳＯ４上で乾燥させて濃縮した。残留物をシリカゲルカラムクロマトグラフィー（７０％〜９０％ＥｔＯＡｃ／ヘプタン）によって精製し、所望の生成物を微黄色泡沫として得た（１０．１２ｇ）。

（５Ｓ）−５−［［ｔｅｒｔ−ブチル（ジメチル）シリル］オキシメチル］−１−（４，５−ジメトキシ−２−ニトロ−ベンゾイル）ピロリジン−３−オン（１．２０ｇ、２．７４ｍｍｏｌ）、２，６−ルチジン（１．２７ｍＬ、１０．９ｍｍｏｌ）を、ジクロロメタン（４５ｍＬ）中で混合し、次いで、−３５℃まで冷却した。次いで、トリフル酸無水物（約５．２ｍＬのＤＣＭ中に０．８７ｍＬを溶解させた）をシリンジによってゆっくりと添加した。混合物は鮮黄色に変わり、浴温度を−３３℃まで上昇させた。反応温度を、全体を通して−２０℃を超えないように維持した。合計で約１時間後、反応混合物を、飽和ＮａＨＣＯ３水溶液、氷及びＥｔＯＡｃの混合物中にピペットで分注し、次いで、酢酸エチル（合計で約４００ｍＬ）で２回抽出した。組み合わせた有機質を、１Ｎ ＨＣｌ水溶液、次いでブラインで洗浄し、次いで、硫酸ナトリウム上で乾燥させて濃縮した。残留物をシリカゲルカラムクロマトグラフィー（４０％〜１００％ＥｔＯＡｃ／ヘプタン）によって精製し、所望の生成物を黄色固体として得た（９５７ｍｇ）。

２５０ｍＬフラスコのエタノール（８．７５ｍＬ）及び水（２．５ｍＬ）中におけるビニルトリフラート（９５７ｍｇ、１．６８ｍｍｏｌ）に、６−キノリルボロン酸（３４８ｍｇ、２．０１ｍｍｏｌ）、リン酸カリウム（１．１０ｇ、５．０３ｍｍｏｌ）、次いで［１,１’−ビス（ジフェニルホスフィノ）フェロセン］ジクロロパラジウム（ｉｉ）（９８２ｍｇ、０．１３４ｍｍｏｌ）を添加した。混合物を窒素でフラッシュし、次いで、室温で窒素下において攪拌した。反応を行った（約１０分）後、ＥｔＯＡｃ（５０ｍＬ）を反応混合物に添加した。混合物を濾過して全ての固体を除去した。水（約５ｍＬ）を濾液に添加した。濾液をＥｔＯＡｃ（２×）で抽出した。組み合わせた有機質を硫酸ナトリウムで乾燥させて濃縮した。残留物をシリカゲルカラムクロマトグラフィー（４０％〜１００％ＥｔＯＡｃ／ヘプタン）によって精製し、所望の生成物を黄色固体として得た（９２８ｍｇ）。

ニトロ出発物質（３２２ｍｇ、０．５８６ｍｍｏｌ）を６ｍＬのエタノール中に溶解し、次いで、亜鉛末（３８３ｍｇ．５．８６ｍｍｏｌ）、続いて１．５ｍｌの５％ギ酸水溶液（１．５ｍＬの水中に７５ｕＬのギ酸）を添加した。次いで、混合物を５３℃まで加熱し、反応が完了するまで（約３．５時間）攪拌した。混合物を室温まで冷却して濾過した。濾液をＥｔＯＡｃ（約１０ｍＬ）で希釈し、次いで、３Ｍのアンモニア（約３ｍＬ）を添加した。混合物をＥｔＯＡｃ（３×）で抽出した。組み合わせた有機質を硫酸ナトリウムで乾燥させて濃縮し、粗アニリンを得て、これを精製することなく次のステップで使用した。

トリホスゲン（７９．４ｍｇ、０．２６８ｍｍｏｌ）を、１．５ｍＬのジクロロメタン中に溶解し、次いで、２ｍＬのジクロロメタン中の（２Ｒ）−２−［（５−ニトロ−２−ピリジル）ジスルファニル］プロパン−１−オール（１９６ｍｇ、０．７９７ｍｍｏｌ）及びピリジン（０．０９２ｍＬ）の溶液を添加した。３０分後、上記溶液を、４．５ｍＬのジクロロメタン中のアニリン出発物質及びピリジン（０．０９２ｍＬ）の溶液に添加した。反応が完了した（約１時間）後、混合物をＥｔＯＡｃで希釈し、次いで、１Ｍ ＨＣＬ溶液、次いで飽和炭酸ナトリウム溶液で洗浄した。有機質を硫酸ナトリウムで乾燥させて濃縮した。残留物をシリカゲルカラムクロマトグラフィー（３０％〜７０％ＥｔＯＡｃ／ヘプタン）によって精製し、所望のカルバメート（１８２ｍｇ）を得た。

ＴＢＳ保護アルコール（１８２ｍｇ、０．２３０ｍｍｏｌ）を、４ｍＬ：１ｍＬのＴＨＦ：水中に溶解し、次いで、４ｍＬの酢酸を添加した。混合物を５５℃まで加熱した。反応を行った（約二晩）後、混合物を室温まで冷却し、次いで、５０ｍＬの酢酸エチルで希釈した。炭酸カリウムを添加して、ｐＨが約１０に到達するまで酢酸を中和した。混合物を酢酸エチルで２回抽出した。組み合わせた有機質を硫酸ナトリウムで乾燥させて濃縮した。残留物をシリカゲルカラムクロマトグラフィー（０％〜１０％ＭｅＯＨ／ＥｔＯＡｃ）によって精製し、所望のアルコール（１２５ｍｇ）を得た。

アルコール出発物質（１１６ｍｇ、０．１７１ｍｍｏｌ）を、６ｍＬのジクロロメタン中に溶解し、次いで、デス−マーチンペルヨージナン（８９．８ｍｇ、０．２０５ｍｍｏｌ）を室温で添加した。約２．５時間後、飽和重炭酸ナトリウム溶液（約６ｍＬ）及び１Ｍのチオ硫酸ナトリウム溶液（約４ｍＬ）を添加した。混合物をジクロロメタンで１回、クロロホルムで２回抽出した。組み合わせた有機質（約７５ｍＬ）を硫酸ナトリウム上で乾燥して濃縮し、約１０３ｍｇの粗生成物を得て、これを逆相ＨＰＬＣによって精製して所望の生成物（２９．５ｍｇ）を得た。
１Ｈ ＮＭＲ （４００ ＭＨｚ， ＤＭＳＯ−ｄ６） δ ９．２４ （ｓ， １Ｈ）， ８．８３ （ｄｄ， Ｊ ＝ １．６， ４．２ Ｈｚ， １Ｈ）， ８．４７ （ｄｄ， Ｊ ＝ ２．６， ８．９ Ｈｚ， １Ｈ）， ８．３２ （ｄ， Ｊ ＝ ８．０ Ｈｚ， １Ｈ）， ８．１２ （ｄｄ， Ｊ ＝ １．９， ８．９ Ｈｚ， １Ｈ）， ７．９２ （ｄ， Ｊ ＝ ８．８ Ｈｚ， １Ｈ）， ７．８７ （ｄ， Ｊ ＝ １．８ Ｈｚ， １Ｈ）， ７．８０ （ｓ， １Ｈ）， ７．７５ （ｄ， Ｊ ＝ ８．５ Ｈｚ， １Ｈ）， ７．５１ （ｄｄ， Ｊ ＝ ４．２， ８．３ Ｈｚ， １Ｈ）， ７．２０ （ｓ， １Ｈ）， ７．０７ （ｓ， １Ｈ）， ６．９５ （ｄ， Ｊ ＝ ６．３ Ｈｚ， １Ｈ）， ５．７８ − ５．６２ （ｍ， １Ｈ）， ４．３０ （ｄ， Ｊ ＝ ６．８ Ｈｚ， １Ｈ）， ４．００ （ｔｄ， Ｊ ＝ ３．２， １０．０ Ｈｚ， １Ｈ）， ３．８５ （ｓ， ６Ｈ）， ３．５６ − ３．４４ （ｍ， １Ｈ）， ３．０８ （ｄ， Ｊ ＝ １４．６ Ｈｚ， １Ｈ）， １．１４ （ｄ， Ｊ ＝ ６．３ Ｈｚ， ３Ｈ）， ０．０７ （ｓ， １２Ｈ）．ＭＳ ｍ／ｚ ＝ ６７６ ［Ｍ＋１］＋、
ＣＬＤ−６の合成
２−（（４−ニトロフェニル）ジスルファニル）エチル（１１Ｓ，１１ａＳ）−１１−ヒドロキシ−７，８−ジメトキシ−５−オキソ−２−（キノリン−６−イル）−１１，１１ａ−ジヒドロ−１Ｈ−ベンゾ［ｅ］ピロロ［１，２−ａ］［１，４］ジアゼピン−１０（５Ｈ）−カルボキシレート


ＴＨＦ（１０Ｌ）中の化合物１（１．１３ｋｇ、４．５９ｍｏｌ、１．００Ｅｑ）の溶液に０℃で、ＬｉＢＨ４（９９．９０ｇ、４．５９ｍｏｌ、１．００Ｅｑ）を２回に分けて添加した（ＬｉＢＨ４の添加中に温度充填はほぼなかった）。懸濁液を０℃で１時間、次いで１０〜２０℃で１８時間攪拌した。混合物を０℃まで冷却し、ＮＨ４Ｃｌ水溶液（５Ｌ）を添加した。層を分離し、水層をＥＡ（５Ｌ×３）で抽出した。組み合わせた有機質をブラインで洗浄した。有機層を、Ｎａ２ＳＯ４上で乾燥させて濾過して濃縮し、化合物２を透明な油として得た（１６００ｇ、７．３６ｍｏｌ、８０．２％収率）。

５０Ｌフラスコに、化合物２（１．６０ｋｇ、７．３６ｍｏｌ、１．００Ｅｑ）、ＤＣＭ（２０Ｌ）を充填し、続いてＴＥＡ（１．１２ｋｇ、１１．０５ｍｏｌ、１．５０Ｅｑ）及び塩化アセチル（６３５．５４ｇ、８．１０ｍｏｌ、１．１０Ｅｑ）を、０℃で攪拌しながら順次滴下した。添加後、得られた溶液を１５〜２５℃で１８時間攪拌し、５Ｌの水を添加することによってクエンチして、３×２ＬのＤＣＭで抽出した。組み合わせた有機層を無水硫酸ナトリウム上で乾燥させて、真空下で濃縮し、化合物３を無色の油として得た（２．４６ｋｇ、９．４９ｍｏｌ、１２８．９０％収率）。

２０Ｌの三口丸底フラスコに、ＤＣＭ（１２Ｌ）中の化合物３（１．２３ｋｇ、４．７５ｍｏｌ、１．００Ｅｑ）を充填し、続いていくつかのバッチに分けて１５℃でＰＣＣ（１．５４ｋｇ、７．１３ｍｏｌ）を添加した。得られた溶液を１５〜２５℃で１８時間攪拌した。固体を濾取し、濾液を真空下で濃縮した。残留物をシリカゲルカラム上で精製し、酢酸エチル：石油エーテル（１：５）で溶出して、化合物４を淡黄色液体として得た（１．１３ｋｇ、４．３８ｍｏｌ、４６．１５％収率）。

１０Ｌの三口丸底フラスコに、メチル（トリフェニル）ホスホニウムブロミド（９５８．０３ｇ、２．６８ｍｏｌ）、ＴＨＦ（２．５Ｌ）を充填し、続いてｔ−ＢｕＯＫ（３００．９４ｇ、２．６８ｍｏｌ）を分割して０℃で２時間にわたって添加した。これに、ＴＨＦ（２．５Ｌ）中の溶液化合物４（４６０．００ｇ、１．７９ｍｏｌ）を、攪拌しながら０℃で滴下した。得られた溶液を−５〜０℃で２０分間攪拌し、５００ｍＬの水を添加することによってクエンチして、３×５００ｍＬの酢酸エチルで抽出した。組み合わせた有機層を無水硫酸ナトリウム上で乾燥し、真空下で濃縮した。残留物をシリカゲルカラム上で精製し、酢酸エチル：石油エーテル（１：２０）で溶出して、化合物５を淡黄色液体として得た（２７５．００ｇ、１．０８ｍｏｌ、３０．０９％）。

ＨＣｌ（気体）／ＥｔＯＡｃ（３Ｌ、４Ｍ／Ｌ）中の化合物５（３３０．００ｇ、１．２９ｍｏｌ）の混合物を０℃で２０分間攪拌した。次いで、混合物を１０〜３０℃で１時間攪拌した。混合物を真空中で濃縮し、化合物６を黄色固体として得て（２５０．００ｇ、１．３０ｍｏｌ、１０１％）、これを精製することなく次のステップに使用する。

パージして窒素の不活性雰囲気を維持した３０００ｍＬの三口丸底フラスコ中に、ＴＨＦ（１．５Ｌ）中の化合物７（３５４．４２ｇ、１．５６ｍｏｌ、１．３０Ｅｑ）の溶液を充填し、続いてＳＯＣｌ２（１．７１ｋｇ、１４．３３ｍｏｌ、１１．９４Ｅｑ）を攪拌しながら滴下した。得られた溶液を２０〜３０℃で４時間攪拌し、次いで、真空下で濃縮した。パージして窒素の不活性雰囲気を維持した別の３０００ｍＬの三口丸底フラスコ中に、ＤＣＭ（２．５Ｌ）中の化合物６（２３０．００ｇ、１．２０ｍｏｌ、１．００Ｅｑ）の溶液を充填した。これに、Ｅｔ３Ｎ（４８５．７５ｇ、４．８０ｍｏｌ、４．００Ｅｑ）を攪拌しながら−４０℃で滴下し、続いて第１フラスコ中の溶液を−４０℃で滴下した。温度を自然に０℃になるように加温し、３０００ｍＬの水／氷を添加することによってクエンチして、３×１０００ｍＬのジクロロメタンで抽出した。組み合わせた有機層を無水硫酸ナトリウム上で乾燥し、真空下で濃縮した。残留物をシリカゲルカラム上で精製し、ＥｔＯＡｃ：ＰＥ（１：３）で溶出して、化合物８を淡褐色油として得て（２１０．００ｇ）、これを精製することなく次のステップに使用する。

ＴＨＦ（４００ｍＬ）、ＭｅＯＨ（１００ｍＬ）、Ｈ２Ｏ（４００ｍＬ）中の化合物８（９０．００ｇ、２４７．０２ｍｍｏｌ、１．００Ｅｑ）の混合物に、ＮａＯＨ（２９．６４ｇ、７４１．０５ｍｍｏｌ、３．００Ｅｑ）を一度に０℃で添加した。混合物を２０〜３０℃で１８時間攪拌した。水相をＥｔＯＡｃ（３００ｍＬ×３）で抽出した。組み合わせた有機相を飽和ブライン（１００ｍＬ）で洗浄し、無水Ｎａ２ＳＯ４で乾燥して濾過し、真空中で濃縮して化合物９を黄色固体として得て（９０．２６ｇ、粗物質）、これをさらに精製することなく次のステップに使用した。

温度プローブ、マグネチックスターラー及び窒素注入口を備えた２０００ｍＬの三口丸底フラスコに、ＤＭＦ（１Ｌ）中のＴＢＤＭＳＣｌ（１２６．６２ｇ、８４０．１２ｍｍｏｌ）、イミダゾール（５７．２０ｇ、８４０．１２ｍｍｏｌ、３．００Ｅｑ）を添加した。次いで、ＤＭＦ（１Ｌ）中の化合物９（９０．２６ｇ、２８０．０４ｍｍｏｌ、１．００Ｅｑ）の溶液を混合物に０℃で添加した。得られた反応混合物を、２時間２５〜３０℃で攪拌した。反応混合物を氷水（１Ｌ）中に注ぎ、次いで、ＤＣＭ（２００ｍＬ×３）で抽出した。組み合わせた有機相をブライン（１００ｍＬ）で洗浄し、Ｎａ２ＳＯ４上で乾燥して真空中で濃縮し、残留物を得て、化合物１０を黄色油として得て（１２６．００ｇ）、これをさらに精製することなく次のステップに使用した。

ＡｃＯＨ（１Ｌ）中の化合物１０（１２６．００ｇ、２８８．６１ｍｍｏｌ、１．００Ｅｑ）の混合物に、Ｚｎ（１８８．７２ｇ、２．８９ｍｏｌ）を、温度を３０℃未満に維持することにより、分割して添加した。混合物を２０〜３０℃で３０分間攪拌した。残留物をＥｔＯＡｃ（５００ｍＬ）中に注いで濾過した。濾液を真空中で濃縮した。残留物をシリカゲルクロマトグラフィー（ＰＥ／ＥｔＯＡｃ＝１０／１、１／１）によって精製し、１１を黄色油として得た（５８．００ｇ、１４２．６４ｍｍｏｌ、４９％収率）。
１Ｈ ＮＭＲ （４００ ＭＨｚ， クロロホルム−ｄ） ｄ ｐｐｍ ６．７１ （ｓ， １ Ｈ） ６．２２ （ｓ， １ Ｈ） ４．８５ − ４．９７ （ｍ， ２ Ｈ） ４．５２ （ｂｒ． ｓ．， １ Ｈ） ４．１４ − ４．２３ （ｍ， １ Ｈ） ３．９９ − ４．１３ （ｍ， １ Ｈ） ３．８２ （ｓ， ３ Ｈ） ３．７７ （ｓ， ３ Ｈ） ３．５９ （ｄ， Ｊ＝５．７３ Ｈｚ， １ Ｈ） ２．６３ − ２．７２ （ｍ， ２ Ｈ） ２．０１ − ２．０４ （ｍ， １ Ｈ） １．２３ （ｔ， Ｊ＝７．０６ Ｈｚ， １ Ｈ） ０．８５ （ｓ， ９ Ｈ） −０．０６ − ０．０６ （ｍ， ５ Ｈ）．
２−（（４−ニトロフェニル）ジスルファニル）エチル（１１Ｓ，１１ａＳ）−１１−ヒドロキシ−７，８−ジメトキシ−５−オキソ−２−（キノリン−６−イル）−１１，１１ａ−ジヒドロ−１Ｈ−ベンゾ［ｅ］ピロロ［１，２−ａ］［１，４］ジアゼピン−１０（５Ｈ）−カルボキシレート

表題化合物を、上に記載されているようなステップ５〜７の後に合成した。１Ｈ ＮＭＲ （４００ ＭＨｚ， ＤＭＳＯ−ｄ６） δ ９．２４ （ｄ， Ｊ ＝ ２．３ Ｈｚ， １Ｈ）， ８．６６ − ８．３４ （ｍ， １Ｈ）， ８．１５ − ７．６２ （ｍ， １Ｈ）， ７．１１ （ｓ， １Ｈ）， ６．９８ （ｓ， １Ｈ）， ６．６７ （ｄ， Ｊ ＝ ５．８ Ｈｚ， １Ｈ）， ５．３７ （ｄｄ， Ｊ ＝ ９．５， ６．３ Ｈｚ， １Ｈ）， ５．１３ （ｄ， Ｊ ＝ ６．２ Ｈｚ， ２Ｈ）， ４．５４ − ４．３１ （ｍ， １Ｈ）， ４．１２ （ｄ， Ｊ ＝ １５．６ Ｈｚ， １Ｈ）， ４．０３ − ３．９１ （ｍ， ２Ｈ）， ３．８６ − ３．７８ （ｍ， ６Ｈ）， ３．７６ （ｄ， Ｊ ＝ ３．４ Ｈｚ， １Ｈ）， ３．４８ （ｔ， Ｊ ＝ ８．８ Ｈｚ， １Ｈ）， ３．２４ − ３．００ （ｍ， ２Ｈ）， ２．９６ − ２．８０ （ｍ， １Ｈ）．ＭＳ ｍ／ｚ ＝ ５４９ ［Ｍ＋１］＋
前述の発明は、明確な理解のために例証及び例示としてある程度詳細に記載してきたが、記載及び例示が、本発明の範囲を限定すると解釈されるべきではない。本明細書全体を通して引用される全ての特許、特許出願、及び参考文献は、参照によって明示的に組み込まれる。

Claims (49)

  1. 式Ｉｃ：
    Ｉｃ
    （式中、
    Ｒ １及びＲ２は、ＨもしくはＣ１〜Ｃ６アルキルから独立して選択され、またはＲ１及びＲ２は、３員、４員、５員、もしくは６員シクロアルキルもしくはヘテロシクリル基を形成し、
    Ｒ３は、ＮＯ２、Ｃｌ、Ｆ、ＣＮ、ＣＯ２ＨまたはＢｒから独立して選択され、
    Ｒ ４ 及びＲ ５ は＝Ｏであり、
    ｍは１または２である）
    のリンカー−薬物中間体。
  2. 式Ｉｄ：
    Ｉｄ．
    の請求項１に記載のリンカー−薬物中間体。
  3. 式Ｉｆ：
    Ｉｆ．
    の請求項１に記載のリンカー−薬物中間体。
  4. 式ＩＩｃ：
    ＩＩｃ
    の抗体−薬物複合体化合物またはその薬学的に許容される塩（式中：
    Ｒ １及びＲ２は、ＨもしくはＣ１〜Ｃ６アルキルから独立して選択され、またはＲ１及びＲ２は、３員、４員、５員、もしくは６員シクロアルキルもしくはヘテロシクリル基を形成し、
    Ｒ ４ 及びＲ ５ は＝Ｏであり、
    ｐは、１〜８の整数であり、
    Ａｂは、抗体である）。
  5. Ａｂが、（１）〜（５３）から選択される１種以上の腫瘍関連抗原または細胞表面受容体に結合する抗体である、請求項４に記載の抗体−薬物複合体化合物、またはその薬学的に許容される塩：
    （１）ＢＭＰＲ１Ｂ（骨形成タンパク質受容体ＩＢ型）、
    （２）Ｅ１６（ＬＡＴ１、ＳＬＣ７Ａ５）、
    （３）ＳＴＥＡＰ１（前立腺の６回膜貫通上皮抗原）、
    （４）ＭＵＣ１６（０７７２Ｐ、ＣＡ１２５）、
    （５）ＭＰＦ（ＭＰＦ、ＭＳＬＮ、ＳＭＲ、巨核球増強因子、メソテリン）、
    （６）Ｎａｐｉ２ｂ（ＮＡＰＩ−３Ｂ、ＮＰＴＩＩｂ、ＳＬＣ３４Ａ２、溶質担体ファミリー３４（リン酸ナトリウム）、メンバー２、ＩＩ型ナトリウム依存性リン酸輸送体３ｂ）、
    （７）Ｓｅｍａ ５ｂ（ＦＬＪ１０３７２、ＫＩＡＡ１４４５、Ｍｍ．４２０１５、ＳＥＭＡ５Ｂ、ＳＥＭＡＧ、セマフォリン５ｂ Ｈｌｏｇ、セマドメイン、７回トロンボスポンジン反復（１型及び１型様）、膜貫通ドメイン（ＴＭ）及び短い細胞質ドメイン、（セマフォリン）５Ｂ）、
    （８）ＰＳＣＡ ｈｌｇ（２７０００５０Ｃ１２Ｒｉｋ、Ｃ５３０００８Ｏ１６Ｒｉｋ、ＲＩＫＥＮ ｃＤＮＡ ２７０００５０Ｃ１２、ＲＩＫＥＮ ｃＤＮＡ ２７０００５０Ｃ１２遺伝子）、
    （９）ＥＴＢＲ（エンドセリンＢ型受容体）、
    （１０）ＭＳＧ７８３（ＲＮＦ１２４、仮想タンパク質ＦＬＪ２０３１５）、
    （１１）ＳＴＥＡＰ２（ＨＧＮＣ＿８６３９、ＩＰＣＡ−１、ＰＣＡＮＡＰ１、ＳＴＡＭＰ１、ＳＴＥＡＰ２、ＳＴＭＰ、前立腺癌関連遺伝子１、前立腺癌関連タンパク質１、前立腺の６回膜貫通上皮抗原２、６回膜貫通前立腺タンパク質）、
    （１２）ＴｒｐＭ４（ＢＲ２２４５０、ＦＬＪ２００４１、ＴＲＰＭ４、ＴＲＰＭ４Ｂ、一過性受容体電位カチオンチャネル、サブファミリーＭ、メンバー４）、
    （１３）ＣＲＩＰＴＯ（ＣＲ、ＣＲ１、ＣＲＧＦ、ＣＲＩＰＴＯ、ＴＤＧＦ１、奇形癌由来増殖因子）、
    （１４）ＣＤ２１（ＣＲ２（補体受容体２）もしくはＣ３ＤＲ（Ｃ３ｄ／エプスタインバーウイルス受容体）もしくはＨｓ７３７９２）、
    （１５）ＣＤ７９ｂ（ＣＤ７９Ｂ、ＣＤ７９β、ＩＧｂ（免疫グロブリン関連ベータ）、Ｂ２９）、
    （１６）ＦｃＲＨ２（ＩＦＧＰ４、ＩＲＴＡ４、ＳＰＡＰ１Ａ（ＳＨ２ドメイン含有ホスファターゼアンカータンパク質１ａ）、ＳＰＡＰ１Ｂ、ＳＰＡＰ１Ｃ）、
    （１７）ＨＥＲ２、
    （１８）ＮＣＡ、
    （１９）ＭＤＰ、
    （２０）ＩＬ２０Ｒα、
    （２１）ブレビカン、
    （２２）ＥｐｈＢ２Ｒ、
    （２３）ＡＳＬＧ６５９、
    （２４）ＰＳＣＡ、
    （２５）ＧＥＤＡ、
    （２６）ＢＡＦＦ−Ｒ（Ｂ細胞活性化因子受容体、ＢＬｙＳ受容体３、ＢＲ３）、
    （２７）ＣＤ２２（Ｂ細胞受容体ＣＤ２２−Ｂアイソフォーム）、
    （２８）ＣＤ７９ａ（ＣＤ７９Ａ、ＣＤ７９α、免疫グロブリン関連アルファ）、
    （２９）ＣＸＣＲ５（バーキットリンパ腫受容体１）、
    （３０）ＨＬＡ−ＤＯＢ（ＭＨＣクラスＩＩ分子（Ｉａ抗原）のベータサブユニット）、
    （３１）Ｐ２Ｘ５（プリン受容体Ｐ２Ｘリガンド依存性イオンチャネル５）、
    （３２）ＣＤ７２（Ｂ細胞分化抗原ＣＤ７２、Ｌｙｂ−２）、
    （３３）ＬＹ６４（リンパ球抗原６４（ＲＰ１０５）、ロイシンリッチ反復（ＬＲＲ）ファミリーのＩ型膜タンパク質）、
    （３４）ＦｃＲＨ１（Ｆｃ受容体様タンパク質１）、
    （３５）ＦｃＲＨ５（ＩＲＴＡ２、免疫グロブリンスーパーファミリー受容体転座関連２）、
    （３６）ＴＥＮＢ２（推定膜貫通プロテオグリカン）、
    （３７）ＰＭＥＬ１７（シルバーホモログ、ＳＩＬＶ、Ｄ１２Ｓ５３Ｅ、ＰＭＥＬ１７、ＳＩ、ＳＩＬ）、
    （３８）ＴＭＥＦＦ１（ＥＧＦ様ドメイン及び２つのフォリスタチン様ドメインを有する膜貫通タンパク質１、トモレグリン−１）、
    （３９）ＧＤＮＦ−Ｒａ１（ＧＤＮＦファミリー受容体アルファ１、ＧＦＲＡ１、ＧＤＮＦＲ、ＧＤＮＦＲＡ、ＲＥＴＬ１、ＴＲＮＲ１、ＲＥＴ１Ｌ、ＧＤＮＦＲ−アルファ１、ＧＦＲ−アルファ−１）、
    （４０）Ｌｙ６Ｅ（リンパ球抗原６複合体、遺伝子座Ｅ、Ｌｙ６７、ＲＩＧ−Ｅ、ＳＣＡ−２、ＴＳＡ−１）、
    （４１）ＴＭＥＭ４６（ｓｈｉｓａホモログ２（Ｘｅｎｏｐｕｓ ｌａｅｖｉｓ）、ＳＨＩＳＡ２）、
    （４２）Ｌｙ６Ｇ６Ｄ（リンパ球抗原６複合体、遺伝子座Ｇ６Ｄ、Ｌｙ６−Ｄ、ＭＥＧＴ１）、
    （４３）ＬＧＲ５（ロイシンリッチ反復含有Ｇタンパク質結合受容体５、ＧＰＲ４９、ＧＰＲ６７）、
    （４４）ＲＥＴ（ｒｅｔ癌原遺伝子、ＭＥＮ２Ａ、ＨＳＣＲ１、ＭＥＮ２Ｂ、ＭＴＣ１、ＰＴＣ、ＣＤＨＦ１２、Ｈｓ．１６８１１４、ＲＥＴ５１、ＲＥＴ−ＥＬＥ１）、
    （４５）ＬＹ６Ｋ（リンパ球抗原６複合体、遺伝子座Ｋ、ＬＹ６Ｋ、ＨＳＪ００１３４８、ＦＬＪ３５２２６）、
    （４６）ＧＰＲ１９（Ｇタンパク質結合受容体１９、Ｍｍ．４７８７）、
    （４７）ＧＰＲ５４（ＫＩＳＳ１受容体、ＫＩＳＳ１Ｒ、ＧＰＲ５４、ＨＯＴ７Ｔ１７５、ＡＸＯＲ１２）、
    （４８）ＡＳＰＨＤ１（アスパラギン酸ベータ−ヒドロキシラーゼドメイン含有１、ＬＯＣ２５３９８２）、
    （４９）チロシナーゼ（ＴＹＲ、ＯＣＡＩＡ、ＯＣＡ１Ａ、チロシナーゼ、ＳＨＥＰ３）、
    （５０）ＴＭＥＭ１１８（ｒｉｎｇフィンガータンパク質、膜貫通２、ＲＮＦＴ２、ＦＬＪ１４６２７）、
    （５１）ＧＰＲ１７２Ａ（Ｇタンパク質結合受容体１７２Ａ、ＧＰＣＲ４１、ＦＬＪ１１８５６、Ｄ１５Ｅｒｔｄ７４７ｅ）、
    （５２）ＣＤ３３、または
    （５３）ＣＬＬ−１。
  6. 式ＩＩｆ：
    ＩＩｆ．
    を有する、請求項４に記載の抗体−薬物複合体化合物、またはその薬学的に許容される塩。
  7. Ａｂがシステイン操作抗体である、請求項４に記載の抗体−薬物複合体化合物、またはその薬学的に許容される塩。
  8. 前記システイン操作抗体が、薬物複合化の部位として、Ｋａｂａｔ番号付けに従った軽鎖におけるＫ１４９Ｃ置換、またはＥＵ番号付けに従った重鎖におけるＡ１１８Ｃ置換を含む、請求項７に記載の抗体−薬物複合体化合物、またはその薬学的に許容される塩。
  9. Ａｂが、抗ＨＥＲ２、抗ＣＤ２２、抗ＣＤ３３、抗ＮａＰｉ２ｂ、または抗ＣＬＬ−１から選択される、請求項４に記載の抗体−薬物複合体化合物、またはその薬学的に許容される塩。
  10. ｐが１、２、３、または４である、請求項４に記載の抗体−薬物複合体化合物、またはその薬学的に許容される塩。
  11. 抗体−薬物複合体化合物の混合物を含み、抗体−薬物複合体化合物の前記混合物中における、１抗体当たりの前記平均薬物充填量ｐが、約２〜約５である、請求項４に記載の抗体−薬物複合体化合物、またはその薬学的に許容される塩。
  12. 請求項４に記載の前記抗体−薬物複合体化合物、またはその薬学的に許容される塩及び薬学的に許容される賦形剤を含む医薬組成物。
  13. 治療有効量の化学療法剤をさらに含む、請求項１２に記載の医薬組成物。
  14. 癌を処置するための請求項１２に記載の医薬組成物。
  15. 前記組成物が、化学療法剤と組み合わせて投与されることを特徴とする、請求項１４に記載の医薬組成物。
  16. 請求項４に記載の抗体−薬物複合体化合物、またはその薬学的に許容される塩の作製方法であって、抗体を請求項１に記載の式Ｉｃのリンカー−薬物中間体と反応させることを含む、前記方法。
  17. 式ＩＩｃ：
    ＩＩｃ
    の抗体−薬物複合体化合物またはその薬学的に許容される塩（式中：
    Ｒ１及びＲ２は、ＨもしくはＣ１〜Ｃ６アルキルから独立して選択され、またはＲ１及びＲ２は、３員、４員、５員、もしくは６員シクロアルキルもしくはヘテロシクリル基を形成し、
    Ｒ ４ 及びＲ ５ は＝Ｏであり、
    ｐは、１〜８の整数であり、
    Ａｂは、（ａ）配列番号：２２のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ１、（ｂ）配列番号：２３のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ２、（ｃ）配列番号：２４のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ３、（ｄ）配列番号：１９のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ１、（ｅ）配列番号：２０のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ２、及び（ｆ）配列番号：２１のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ３を含む抗ＨＥＲ２抗体である）。
  18. 前記抗ＨＥＲ２抗体が、配列番号：１７の配列を含む軽鎖可変領域及び配列番号：１８の配列を含む重鎖可変領域を含む、請求項１７に記載の抗体−薬物複合体化合物、またはその薬学的に許容される塩。
  19. 式ＩＩｆ：
    ＩＩｆ．
    を有する、請求項１７に記載の抗体−薬物複合体化合物、またはその薬学的に許容される塩。
  20. 前記抗ＨＥＲ２抗体がシステイン操作抗体である、請求項１７に記載の抗体−薬物複合体化合物、またはその薬学的に許容される塩。
  21. 前記システイン操作抗体が、薬物複合化の前記部位として、Ｋａｂａｔ番号付けに従った軽鎖におけるＫ１４９Ｃ置換、またはＥＵ番号付けに従った重鎖におけるＡ１１８Ｃ置換を含む、請求項２０に記載の抗体−薬物複合体化合物、またはその薬学的に許容される塩。
  22. ｐが１、２、３、または４である、請求項１７に記載の抗体−薬物複合体化合物、またはその薬学的に許容される塩。
  23. 抗体−薬物複合体化合物の混合物を含み、抗体−薬物複合体化合物の前記混合物中における、１抗体当たりの前記平均薬物充填量ｐが、約２〜約５である、請求項１７に記載の抗体−薬物複合体化合物、またはその薬学的に許容される塩。
  24. 請求項１７に記載の前記抗体−薬物複合体化合物、またはその薬学的に許容される塩及び薬学的に許容される賦形剤を含む医薬組成物。
  25. 追加の治療剤をさらに含む、請求項２４に記載の医薬組成物。
  26. 前記追加の治療剤が化学療法剤である、請求項２５に記載の医薬組成物。
  27. 前記追加の治療剤が、ＨＥＲ２と結合する抗体または免疫複合体である、請求項２５に記載の医薬組成物。
  28. 前記追加の治療剤が、（ｉ）ＨＥＲ２のドメインＩＩに結合する抗体もしくは免疫複合体、及び／または（ｉｉ）ＨＥＲ２のドメインＩＶに結合する抗体もしくは免疫複合体である、請求項２７に記載の医薬組成物。
  29. 前記追加の治療剤が、（ｉ）エピトープ２Ｃ４に結合する抗体もしくは免疫複合体、及び／または（ｉｉ）エピトープ４Ｄ５に結合する抗体もしくは免疫複合体である、請求項２７に記載の医薬組成物。
  30. 前記追加の治療剤が、トラスツズマブ、トラスツズマブ−ＭＣＣ−ＤＭ１（Ｔ−ＤＭ１）、またはペルツズマブから選択される、請求項２５に記載の医薬組成物。
  31. （１）トラスツズマブまたはＴ−ＤＭ１、及び（２）ペルツズマブをさらに含む、請求項２５に記載の医薬組成物。
  32. 癌を処置するための請求項２４に記載の医薬組成物。
  33. 前記癌が、ＨＥＲ２陽性癌である、請求項３２に記載の医薬組成物。
  34. 前記ＨＥＲ２陽性癌が、乳癌または胃癌である、請求項３３に記載の医薬組成物。
  35. 癌を処置するための組成物であって、請求項１７に記載の抗体−薬物複合体化合物、またはその薬学的に許容される塩を含み、前記組成物が、患者に投与される、組成物。
  36. 前記癌が、ＨＥＲ２陽性癌である、請求項３５に記載の組成物。
  37. 前記ＨＥＲ２陽性癌が、乳癌または胃癌である、請求項３６に記載の組成物。
  38. 前記患者に追加の治療剤が投与される、請求項３５に記載の組成物。
  39. 前記追加の治療剤が化学療法剤である、請求項３８に記載の組成物。
  40. 前記追加の治療剤が、ＨＥＲ２と結合する抗体または免疫複合体である、請求項３８に記載の組成物。
  41. 前記追加の治療剤が、（ｉ）ＨＥＲ２のドメインＩＩに結合する抗体もしくは免疫複合体、及び／または（ｉｉ）ＨＥＲ２のドメインＩＶに結合する抗体もしくは免疫複合体である、請求項４０に記載の組成物。
  42. 前記追加の治療剤が、（ｉ）エピトープ２Ｃ４に結合する抗体もしくは免疫複合体、及び／または（ｉｉ）エピトープ４Ｄ５に結合する抗体もしくは免疫複合体である、請求項４０に記載の組成物。
  43. 前記追加の治療剤が、トラスツズマブ、トラスツズマブ−ＭＣＣ−ＤＭ１（Ｔ−ＤＭ１）、またはペルツズマブから選択される、請求項４０に記載の組成物。
  44. 前記患者に前記（１）トラスツズマブまたはＴ−ＤＭ１、及び（２）ペルツズマブが投与される、請求項４０に記載の組成物。
  45. 式ＩＩｆ：
    ＩＩｆ
    の抗体薬物複合体、またはその薬学的に許容される塩（式中、Ａｂは、薬物複合化の部位として、Ｋａｂａｔ番号付けに従った軽鎖におけるＫ１４９Ｃ置換、またはＥＵ番号付けに従った重鎖におけるＡ１１８Ｃ置換を含むシステイン操作抗ＨＥＲ２抗体であり、ｐは約２である）。
  46. Ａｂが、（ａ）配列番号：２２の前記アミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ１、（ｂ）配列番号：２３の前記アミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ２、（ｃ）配列番号：２４の前記アミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ３、（ｄ）配列番号：１９の前記アミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ１、（ｅ）配列番号：２０の前記アミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ２、及び（ｆ）配列番号：２１の前記アミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ３を含む抗ＨＥＲ２抗体である、請求項４５に記載の抗体−薬物複合体化合物、またはその薬学的に許容される塩。
  47. 前記抗ＨＥＲ２抗体が、配列番号：１７の前記配列を含む軽鎖可変領域及び配列番号：１８の前記配列を含む重鎖可変領域を含む、請求項４５に記載の抗体−薬物複合体化合物、またはその薬学的に許容される塩。
  48. 請求項４５に記載の前記抗体−薬物複合体化合物、またはその薬学的に許容される塩及び薬学的に許容される賦形剤を含む医薬組成物。
  49. 前記抗ＨＥＲ２抗体が、（ｉ）配列番号：２６の重鎖配列と配列番号：３０の軽鎖配列；または、（ｉｉ）配列番号：３１の重鎖配列と配列番号：２５の軽鎖配列、を含む、請求項４５に記載の抗体−薬物複合体化合物。
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