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CN108391422B - 吡咯并苯并二氮杂䓬抗体-药物缀合物和使用方法 - Google Patents

吡咯并苯并二氮杂䓬抗体-药物缀合物和使用方法 Download PDF

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CN108391422B CN201680070410.0A CN201680070410A CN108391422B CN 108391422 B CN108391422 B CN 108391422B CN 201680070410 A CN201680070410 A CN 201680070410A CN 108391422 B CN108391422 B CN 108391422B
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J·萨多夫斯基
M·X·斯力科斯基
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Abstract

本申请提供抗体‑药物缀合物、吡咯并苯并二氮杂
Figure DDA0001680565910000011
接头‑药物中间体和使用所述抗体‑药物缀合物的方法，所述抗体‑药物缀合物包含经由二硫化物接头与吡咯并苯并二氮杂
Figure DDA0001680565910000012
药物部分缀合的抗体。

Description

吡咯并苯并二氮杂䓬抗体-药物缀合物和使用方法
对相关申请的交叉引用
本申请要求在2015年10月2日提交的美国临时专利申请62/236,429的优先权，在此将其全部内容引入作为参考。
序列表
本申请含有序列表，其已经按ASCII格式以电子方式提交且在此将其全部内容引入作为参考。所述ASCII拷贝(在2016年9月30日生成)被命名为P32858_US_1_Sequence_Listing.txt且大小为56,525字节。
技术领域
本申请大体上涉及与吡咯并苯并二氮杂
Figure BDA0001680565890000012
中间体缀合以形成抗体-药物缀合物的抗体，其具有治疗或诊断应用。所述抗体可用就与吡咯并苯并二氮杂
Figure BDA0001680565890000013
中间体缀合而言具有反应性的游离半胱氨酸氨基酸工程化。本申请还涉及将所述抗体-药物缀合物化合物用于治疗过度增殖性障碍例如癌症或体外、原位和体内诊断上述障碍的方法。
背景技术
抗体-药物缀合物(ADC)为如下将抗体和细胞毒性药物这两者的性质组合起来的靶向化疗分子：使强效细胞毒性药物靶向于表达抗原的肿瘤细胞，内化且释放药物，由此提高其抗肿瘤活性(Carter,P.和Senter,P.(2008)The Cancer Jour.14(3):154-169)。针对给定靶标抗原的成功ADC开发取决于对以下事项的优化：抗体选择、接头设计和稳定性、细胞毒性药物效能及药物和接头与抗体缀合的模式(Dosio等人(2011)Toxins,3:848-883；Polakis,P.(2005)Current Opinion in Pharmacology 5:382-387)。
某些吡咯并苯并二氮杂
Figure BDA0001680565890000014
(PBD)化合物能够识别和结合DNA中的特异性序列；优选的序列为PuGPu(Pu＝嘌呤,例如腺嘌呤A和鸟嘌呤G)。第一种PBD抗肿瘤抗生素即氨茴霉素在1965年被发现(Leimgruber等人,J.Am.Chem.Soc.,87:5793-5795(1965)；Leimgruber等人,J.Am.Chem.Soc.,87,5791-5793(1965))。自那时起已经报道和描述了多种天然存在的PBD和类似物(Thurston等人,Chem.Rev.1994,433-465(1994)；Antonow,D.和Thurston,D.E.,(2011)Chem.Rev.111(4):2815-2864)。家族成员包括abbeymycin(Hochlowski等人(1987)J.Antibiotics,40:145-148)、chicamycin(Konishi等人(1984)J.Antibiotics,37:200-206)；Thurston等人(1990)Chem.Brit.,26:767-772；Bose等人(1992)Tetrahedron,48:751-758)、甲基氨茴霉素(Kuminoto等人,J.Antibiotics,33,665-667(1980))、新茴霉素A和B(Takeuchi等人,J.Antibiotics,29,93-96(1976))、porothramycin(Tsunakawa等人(1988)J.Antibiotics,41:1366-1373)、prothracarcin(Shimizu等人,J.Antibiotics,(1982)29:2492-2503；Langley和Thurston,(1987)J.Org.Chem.,52:91-97)、西班米星、DC-102(Hara等人(1988)J.Antibiotics,41:702-704；Itoh等人,J.Antibiotics,(1988)41:1281-1284)、西伯里亚霉素(Leber等人(1988)J.Am.Chem.Soc.,110:2992-2993)和托马霉素(Arima等人(1972)J.Antibiotics,25:437-444)。
吡咯并苯并二氮杂
Figure BDA0001680565890000022
具有以下通式结构：
Figure BDA0001680565890000021
且区别在于芳族A环和吡咯并C环这两者中的取代基数目、类型和位置及C环的饱和度。B环在N10-C11位置具有亚胺(N＝C)、甲醇胺(NH-CH(OH))或甲醇胺甲基醚(NH-CH(OMe))即负责使DNA发生烷基化的亲电子中心。所有已知的天然产物在手性C11a位置都具有(S)-构型，这使其当由C环向A环观察时具有右手扭转且确定了就与B形DNA的小沟相对的异螺旋性而言的三维形状，由此在结合位点形成紧密配合(Kohn,In AntibioticsIII.Springer-Verlag,New York,pp.3-11(1975)；Hurley和Needham-VanDevanter,(1986)Acc.Chem.Res.,19:230-237)。PBD在小沟中形成加成物的能力使其能够干扰DNA加工，由此使其能够用作抗肿瘤剂。其中两个吡咯并苯并二氮杂
Figure BDA0001680565890000023
结构在A环的C8位置通过接头而共价连接的吡咯并苯并二氮杂
Figure BDA0001680565890000024
二聚体化合物可使双链DNA发生二烷基化和交联(WO2005/085251)。
吡咯并苯并二氮杂
Figure BDA0001680565890000025
化合物可按前药形式使用，其在N10位置用可在体内除去的氮保护基例如氨基甲酸酯进行保护(WO2000/12507；WO2005/023814)。可由PBD部分的N10位置除去保护基以释放N10-C11亚胺键。多种保护基是已知的，包括可通过酶作用来裂解的基团。
其中吡咯并苯并二氮杂
Figure BDA0001680565890000033
(PBD)二聚体在N10位置与对肿瘤相关抗原具有特异性的抗体连接的抗体-药物缀合物具有对抗肿瘤细胞的体外和体内效力(WO2011/130598)。已经描述了以下抗体-药物缀合物，其中PBD二聚体药物部分具有接头基团以经由与二聚体的单体PBD单元连接的桥(“拴系物”)而连接细胞结合剂例如抗体(WO2007/085930)。已经描述了以下抗体-药物缀合物，其中PBD二聚体药物部分的B环在N10-C11位置具有酰胺和胺基团(WO2014/096368；WO2013/177481；WO2012/112708)。已经描述了以下抗体-药物缀合物，其包含在PBD的N10位置通过二硫化物连接物与抗体连接的二烷化剂吡咯并苯并二氮杂
Figure BDA0001680565890000034
(PBD)二聚体药物部分(WO2013/055987；Gregson等人(2001)J.Med.Chem.44:1161-1174)。
发明内容
本申请包括式I的接头-药物中间体：
Figure BDA0001680565890000031
其中
Figure BDA0001680565890000032
选自CH2-CH2、CH＝CH、C(＝O)-NH或CH2-NH；
A为5元或6元杂环，其任选取代有选自以下的基团：F、C1-C6烷基或＝C(R)2，其中R独立选自H、F、C1-C6烷基或C1-C6氟烷基；
R1和R2独立选自H或C1-C6烷基，或R1和R2形成3、4、5或6元环烷基或杂环基；
R3独立选自NO2、Cl、F、CN、CO2H或Br；且
m为0、1或2。
本申请包括通过二硫化物接头与抗体共价连接以形成抗体-药物缀合物(ADC)化合物的单烷化剂吡咯并苯并二氮杂
Figure BDA0001680565890000035
药物部分，其具有治疗或诊断应用。
本申请另一个方面为式II的抗体-药物缀合物化合物或其药用盐：
Figure BDA0001680565890000041
其中
Figure BDA0001680565890000042
选自CH2-CH2、CH2-C(＝O)、CH＝CH或CH2-NH；
A为5元或6元杂环，其任选取代有选自以下的基团：F、C1-C6烷基或＝C(R)2，其中R独立选自H、F、C1-C6烷基或C1-C6氟烷基；
R1和R2独立选自H或C1-C6烷基，或R1和R2形成3、4、5或6元环烷基或杂环基；
p为1-8的整数；且
Ab为抗体。
在示例性实施方案中，所述抗体与选自(1)-(53)的一种或多种肿瘤相关抗原或细胞表面受体结合：
(1)BMPR1B(骨形态发生蛋白受体-IB型)；
(2)E16(LAT1,SLC7A5)；
(3)STEAP1(前列腺六跨膜上皮抗原)；
(4)MUC16(0772P,CA125)；
(5)MPF(MPF,MSLN,SMR,巨核细胞强化因子,间皮素)；
(6)Napi2b(NAPI-3B,NPTIIb,SLC34A2,溶质载体家族34(磷酸钠),成员2,II型钠依赖性磷酸转运蛋白3b)；
(7)Sema 5b(FLJ10372,KIAA1445,Mm.42015,SEMA5B,SEMAG,信号素5b Hlog,sema结构域,七凝血酶敏感素重复序列(1型和1型样),跨膜结构域(TM)和短胞质结构域,(信号素)5B)；
(8)PSCA hlg(2700050C12Rik,C530008O16Rik,RIKEN cDNA2700050C12,RIKENcDNA 2700050C12基因)；
(9)ETBR(内皮素B型受体)；
(10)MSG783(RNF124,假定蛋白FLJ20315)；
(11)STEAP2(HGNC_8639,IPCA-1,PCANAP1,STAMP1,STEAP2,STMP,前列腺癌相关基因1,前列腺癌相关蛋白1,前列腺六跨膜上皮抗原2,六跨膜前列腺蛋白)；
(12)TrpM4(BR22450,FLJ20041,TRPM4,TRPM4B,瞬时型受体电位阳离子通道,亚家族M,成员4)；
(13)CRIPTO(CR,CR1,CRGF,CRIPTO,TDGF1,畸胎癌源性生长因子)；
(14)CD21(CR2(补体受体2)或C3DR(C3d/爱泼斯坦-巴尔病毒受体)或Hs73792)；
(15)CD79b(CD79B,CD79β,IGb(免疫球蛋白相关β),B29)；
(16)FcRH2(IFGP4,IRTA4,SPAP1A(含有磷酸酶锚定蛋白1a的SH2结构域),SPAP1B,SPAP1C)；
(17)HER2；
(18)NCA；
(19)MDP；
(20)IL20Rα；
(21)Brevican；
(22)EphB2R；
(23)ASLG659；
(24)PSCA；
(25)GEDA；
(26)BAFF-R(B细胞活化因子受体,BLyS受体3,BR3)；
(27)CD22(B细胞受体CD22-B同工型)；
(28)CD79a(CD79A,CD79α,免疫球蛋白相关α)；
(29)CXCR5(伯基特淋巴瘤受体1)；
(30)HLA-DOB(MHC II类分子的β亚基(Ia抗原))；
(31)P2X5(嘌呤能受体P2X配体门控离子通道5)；
(32)CD72(B细胞分化抗原CD72,Lyb-2)；
(33)LY64(淋巴细胞抗原64(RP105),富亮氨酸重复序列(LRR)家族I型膜蛋白)；
(34)FcRH1(Fc受体样蛋白1)；
(35)FcRH5(IRTA2,免疫球蛋白超家族受体易位相关体2)；
(36)TENB2(推定跨膜蛋白聚糖)；
(37)PMEL17(silver同系物；SILV；D12S53E；PMEL17；SI；SIL)；
(38)TMEFF1(具有EGF样和两个卵泡抑素样结构域的跨膜蛋白1；Tomoregulin-1)；
(39)GDNF-Ra1(GDNF家族受体α1；GFRA1；GDNFR；GDNFRA；RETL1；TRNR1；RET1L；GDNFR-α1；GFR-ALPHA-1)；
(40)Ly6E(淋巴细胞抗原6复合物,基因座E；Ly67,RIG-E,SCA-2,TSA-1)；
(41)TMEM46(shisa同系物2(非洲爪蛙)；SHISA2)；
(42)Ly6G6D(淋巴细胞抗原6复合物,基因座G6D；Ly6-D,MEGT1)；
(43)LGR5(含有富亮氨酸重复序列的G蛋白偶联受体5；GPR49,GPR67)；
(44)RET(ret原癌基因；MEN2A；HSCR1；MEN2B；MTC1；PTC；CDHF12；Hs.168114；RET51；RET-ELE1)；
(45)LY6K(淋巴细胞抗原6复合物,基因座K；LY6K；HSJ001348；FLJ35226)；
(46)GPR19(G蛋白偶联受体19；Mm.4787)；
(47)GPR54(KISS1受体；KISS1R；GPR54；HOT7T175；AXOR12)；
(48)ASPHD1(含有天冬氨酸β-羟化酶的结构域1；LOC253982)；
(49)酪氨酸酶(TYR；OCAIA；OCA1A；酪氨酸酶；SHEP3)；
(50)TMEM118(跨膜环指蛋白2；RNFT2；FLJ14627)；
(51)GPR172A(G蛋白偶联受体172A；GPCR41；FLJ11856；D15Ertd747e)；
(52)CD33；或
(53)CLL-1。
本申请另一个方面为药物组合物，其包含式II的抗体-药物缀合物化合物和药用稀释剂、载体或赋形剂。
本申请另一个方面为式II的抗体-药物缀合物化合物在制备用于在哺乳动物中治疗癌症的药物中的用途。
本申请另一个方面为通过向患者给药包含式II的抗体-药物缀合物化合物的药物组合物来治疗癌症的方法。
本申请另一个方面为制备式II的抗体-药物缀合物化合物的方法。
本申请另一个方面为包含以下物品的制品：包含式II的抗体-药物缀合物化合物的药物组合物、容器和指明所述药物组合物可用于治疗癌症的包装插页或标签。
附图说明
图1A显示了用ADC-107、ADC-103和非靶向对照ADC-108处理的BJAB细胞的体外细胞存活曲线。
图1B显示了用ADC-107、ADC-103和非靶向对照ADC-108处理的WSU-DLCL2细胞的体外细胞存活曲线。
图1C显示了用ADC-107、ADC-103和非靶向对照ADC-108处理的Jurkat细胞的体外细胞存活曲线。
图1D显示了用ADC-101、ADC-113、ADC-103、ADC-111和ADC-112处理的BJAB细胞的体外细胞存活曲线。
图1E显示了用ADC-101、ADC-113、ADC-103、ADC-111和ADC-112处理的WSU-DLCL2细胞的体外细胞存活曲线。
图1F显示了用ADC-108、ADC-102、ADC-203、ADC-201和ADC-107处理的SK-BR-3细胞的体外细胞存活曲线。
图1G显示了用ADC-108、ADC-102、ADC-203、ADC-201和ADC-107处理的KPL-4细胞的体外细胞存活曲线。
图2在以IV方式给药一次以下试剂的CB-17Fox Chase SCID小鼠的WSU-DLCL2异种移植物模型的体内拟合肿瘤体积随时间变化的曲线中显示了抗体-药物缀合物的效力：
1)媒介物(组氨酸缓冲液#8),100μL
2)Thio Hu抗CD22 10F4v3LC K149C-(CLD-1),ADC-202,0.5mg/kg
3)Thio Hu抗CD22 10F4v3LC K149C-(CLD-1),ADC-202,2mg/kg
4)Thio Hu抗CD22 10F4v3LC K149C-(LD-51),单酰胺,ADC-103,2mg/kg
5)Thio Hu抗CD22 10F4v3LC K149C-(LD-51),单酰胺,ADC-103,5mg/kg
6)Thio Hu抗CD22 10F4v3LC K149C-(LD-51),单酰胺,ADC-103,10mg/kg
7)Thio Hu抗Her2(hu7C2)LC K149C-(LD-51),单酰胺,ADC-102,10mg/kg
图3在以IV方式给药一次以下试剂的CB-17Fox Chase SCID小鼠的Bjab-luc异种移植物模型的体内拟合肿瘤体积随时间变化的曲线中显示了抗体-药物缀合物的效力：
1)媒介物(组氨酸缓冲液#8HisAc 20mM,蔗糖240mM,TW-20 0.02％,pH5.5),100μL(微升)
2)Thio Hu抗CD22 10F4v3LC K149C-(CLD-1),ADC-202,0.1mg/kg
3)Thio Hu抗CD22 10F4v3LC K149C-(CLD-1),ADC-202,0.2mg/kg
4)Thio Hu抗CD22 10F4v3LC K149C-(C-LD1),ADC-202,0.4mg/kg
5)Thio Hu抗CD22 10F4v3LC K149C-(LD-51),单酰胺,ADC-105,1mg/kg
6)Thio Hu抗CD22 10F4v3LC K149C-(LD-51),单酰胺,ADC-105,2mg/kg
7)Thio Hu抗CD22 10F4v3LC K149C-(LD-51),单酰胺,ADC-105,4mg/kg
8)Thio Hu抗CD22 10F4v3LC K149C-(LD-51),单酰胺,ADC-105,8mg/kg
9)Thio Hu抗Her2hu7C2LC K149C-(CLD-1),ADC-201,0.4mg/kg
10)Thio Hu抗Her2hu7C2LC K149C-(LD-51),单酰胺,ADC-104,8mg/kg
图4在以IV方式给药一次以下试剂的WSU-DLCL2人细胞系小鼠模型的体内拟合肿瘤体积随时间变化的曲线中显示了抗体-药物缀合物的效力：
1)媒介物(组氨酸缓冲液#8),100μL
2)Thio Hu抗CD22 10F4v3LC K149C-(LD-51),单酰胺,ADC-105,5mg/kg
3)Thio Hu抗CD22 10F4v3LC K149C-(LD-52),单胺,ADC-107,0.5mg/kg
4)Thio Hu抗CD22 10F4v3LC K149C-(LD-52),单胺,ADC-107,2mg/kg
5)Thio Hu抗CD22 10F4v3LC K149C-(LD-52),单胺,ADC-107,5mg/kg
6)Thio Hu抗CD22 10F4v3LC K149C-(LD-52),单胺,ADC-107,10mg/kg
7)Thio Hu抗CD22 10F4v3LC K149C-(CLD-4),单胺,ADC-204,0.5mg/kg
8)Thio Hu抗CD22 10F4v3LC K149C-(CLD-4),单胺,ADC-204,2mg/kg
9)Thio Hu抗CD22 10F4v3LC K149C-(CLD-4),单胺,ADC-204,5mg/kg
10)Thio Hu抗CD22 10F4v3LC K149C-(CLD-4),单胺,ADC-204,10mg/kg
11)Thio Hu抗Her2hu7C2LC K149C-(LD-52),单胺,ADC-108,2mg/kg
12)Thio Hu抗Her2hu7C2LC K149C-(CLD-4),单胺,ADC-205,2mg/kg
图5A在以IV方式给药一次以下试剂的SCID米色小鼠的HER2KPL4肿瘤模型的体内拟合肿瘤体积随时间变化的曲线中显示了抗体-药物缀合物的效力：
1)媒介物
2)Thio-Her2hu7C2LC-K149C-(LD-51),单酰胺,ADC-106,1mg/kg
3)Thio-Her2hu7C2LC-K149C-(LD-51),单酰胺,ADC-106,5mg/kg
4)Thio-Her2hu7C2LC-K149C-(LD-52),单胺,ADC-108,0.5mg/kg
5)Thio-Her2hu7C2LC-K149C-(LD-52),单胺,ADC-108,1mg/kg
6)Thio-Her2hu7C2LC-K149C-(LD-52),单胺,ADC-108,2mg/kg
7)Thio-Her2hu7C2LC-K149C-(LD-52),单胺,ADC-108,5mg/kg
8)CD22LC-K149C-(LD-52),单胺,ADC-107,1mg/kg
图5B在以IV方式给药一次以下试剂的SCID米色小鼠的HER2KPL4肿瘤模型的体内拟合肿瘤体积随时间变化的曲线中显示了抗体-药物缀合物的效力：
1)媒介物
2)Tmab-DM1,ADC-211,1mg/kg
3)Thio-Her2hu7C2LC-K149C-(LD-51),单酰胺,ADC-106,1mg/kg
4)Thio-Her2hu7C2LC-K149C-(LD-51),单酰胺,ADC-106,5mg/kg
5)Tmab-DM1,ADC-211,1mg/kg+Thio-Her2hu7C2LC-K149C-(LD-51),单酰胺,ADC-106,1mg/kg
6)Tmab-DM1,ADC-211,1mg/kg+Thio-Her2hu7C2LC-K149C-(LD-51),单酰胺,ADC-106,5mg/kg
图6在以IV方式给药一次以下试剂的CRL nu/nu小鼠的HER2Fo5模型的体内拟合肿瘤体积随时间变化的曲线中显示了抗体-药物缀合物的效力：
1)媒介物(组氨酸缓冲液#8),100μL
2)Thio-Her2hu7C2LC-K149C-(CLD-1),ADC-201,0.5mg/kg
3)Thio-Her2hu7C2LC-K149C-(CLD-1),ADC-201,1mg/kg
4)Thio-Her2hu7C2LC-K149C-(LD-51),单酰胺,ADC-104,5mg/kg
5)Thio-Her2hu7C2LC-K149C-(LD-51),单酰胺,ADC-104,10mg/kg
6)Thio-Her2hu7C2LC-K149C-(LD-51),单酰胺,ADC-104,15mg/kg
7)Thio-Her2hu7C2LC-K149C,非缀合抗体,15mg/kg
8)Thio-CD22LC-K149C-(CLD-1),ADC-202,1mg/kg
9)Thio-CD22LC-K149C-(LD-51),单酰胺,ADC-105,15mg/kg
图7在以IV方式给药一次以下试剂的SCID米色小鼠的HER2KPL4肿瘤模型的体内拟合肿瘤体积随时间变化的曲线中显示了抗体-药物缀合物的效力：
1)媒介物
2)Thio-Her2hu7C2LC-K149C-(CLD-1),ADC-201,1mg/kg
3)Thio-Her2hu7C2LC-K149C-(CLD-1),ADC-201,3mg/kg
4)Thio-Her2hu7C2LC-K149C-(LD-51),单酰胺,ADC-104,3mg/kg
5)Thio-Her2hu7C2LC-K149C-(LD-51),单酰胺,ADC-104,6mg/kg
6)Thio-Her2hu7C2LC-K149C-(LD-51),单酰胺,ADC-104,10mg/kg
7)Thio-Her2hu7C2LC-K149C,非缀合抗体,3mg/kg
8)Thio-Her2hu7C2LC-K149C,非缀合抗体,10mg/kg
9)Thio-CD22LC-K149C-(CLD-1),ADC-202,3mg/kg
10)Thio-CD22LC-K149C-(LD-51),单酰胺,ADC-105,10mg/kg
图8在以IV方式给药一次以下试剂的CRL nu/nu小鼠的HER2Fo5模型的体内拟合肿瘤体积随时间变化的曲线中显示了抗体-药物缀合物的效力：
1)媒介物
2)Thio-Her2hu7C2LC-K149C-(LD-51),单酰胺,ADC-106,5mg/kg
3)Thio-Her2hu7C2LC-K149C-(LD-51),单酰胺,ADC-106,10mg/kg
4)Thio-Her2hu7C2LC-K149C-(LD-52),单胺,ADC-108,0.5mg/kg
5)Thio-Her2hu7C2LC-K149C-(LD-52),单胺,ADC-108,2mg/kg
6)Thio-Her2hu7C2LC-K149C-(LD-52),单胺,ADC-108,5mg/kg
7)Ctrl CD22LC-K149C-(LD-52),单胺,ADC-107,2mg/kg
图9在以IV方式给药一次以下试剂的CB-17Fox Chase SCID小鼠的WSU-DLCL2异种移植物模型的体内拟合肿瘤体积随时间变化的曲线中显示了抗体-药物缀合物的效力：
1)媒介物(组氨酸缓冲液#8),100μL
2)Thio Hu抗CD22LC-K149C-(LD-51),单酰胺,ADC-104,6mg/kg
3)Thio Hu抗CD22LC-K149C-(LD-51),单酰胺,ADC-104,16.4mg/kg
4)Thio Hu抗CD22LC-K149C-HC-L177C-(LD-51),单酰胺,ADC-111,3.3mg/kg
5)Thio Hu抗CD22LC-K149C-HC-L177C-(LD-51),单酰胺,ADC-111,6mg/kg
6)Thio Hu抗CD22LC-K149C-HC-L177C-(LD-51),单酰胺,ADC-111,9mg/kg
7)Thio Hu抗CD22LC-K149C-HC-L177C-HC-Y376C-(LD-51),单酰胺,ADC-112,2.2mg/kg
8)Thio Hu抗CD22LC-K149C-HC-L177C-HC-Y376C-(LD-51),单酰胺,ADC-112,6mg/kg
9)Thio Hu抗Her2hu7C2LC K149C-(LD-51),单酰胺,ADC-106,16.2mg/kg
10)Thio Hu抗Her2 4D5LC K149C-HC L177C-(LD-51),单酰胺,ADC-113,8.3mg/kg
图10在以IV方式给药一次以下试剂的SCID米色小鼠的HCC1569X2异种移植物模型的体内拟合肿瘤体积随时间变化的曲线中显示了抗体-药物缀合物的效力：
1)媒介物(组氨酸缓冲液#8),100μL
2)Thio Hu抗Ly6E LC K149C-(CLD-1),ADC-212,1mg/kg
3)Thio Hu抗Ly6E LC K149C-(CLD-1),ADC-212,3mg/kg
4)Thio Hu抗Ly6E LC K149C-(LD-51),单酰胺,ADC-115,3mg/kg
5)Thio Hu抗Ly6E LC K149C-(LD-51),单酰胺,ADC-115,6mg/kg
6)Thio Hu抗Ly6E LC K149C-(LD-51),单酰胺,ADC-115,12mg/kg
7)Thio Hu抗Ly6E LC K149C-(LD-51),单酰胺,ADC-115,18mg/kg
8)Thio Hu抗CD22 10F4v3LC K149C-(LD-51),单酰胺,ADC-110,12mg/kg
9)Thio Hu抗Ly6E LC K149C-(CLD-4),单胺,ADC-210,1mg/kg
10)Thio Hu抗Ly6E LC K149C-(CLD-4),单胺,ADC-210,3mg/kg
11)Thio Hu抗Ly6E LC K149C-(CLD-4),单胺,ADC-210,6mg/kg
12)Thio Hu抗CD22 10F4v3LC K149C-(CLD-4),单胺,ADC-204,3mg/kg
图11显示了二烷化剂吡咯并苯并二氮杂
Figure BDA0001680565890000111
(PBD)化合物和两种单烷化剂吡咯并苯并二氮杂
Figure BDA0001680565890000112
化合物与DNA的推定相互作用。
图12显示了对HER2LC K149C LD-51ADC与HER2LC K149C CLD-1ADC的小鼠效力和短尾猴毒理学进行的比较。
图13显示了对HER2LC K149C LD-51ADC与HER2LC K149C CLD-1ADC进行的基于暴露的治疗指数评价。
图14显示了具有不同接头的几种HER2hu7C2LC K149C ADC的细胞存活测定数据。
图15显示了小鼠同种异体移植物肿瘤模型中就多种ADC而言的肿瘤体积。
具体实施方式
现在将详细参考本申请某些实施方案，其实施例在所附结构和化学式中说明。虽然将结合所说明的实施方案对本申请进行描述，但是应该理解的是，这不是意在将本申请局限于这些实施方案。相反地，本申请意在涵盖可包括在权利要求书所定义的本申请范围内的所有可选形式、改造形式和等价形式。
本领域技术人员将认识到与本申请所描述的那些方法和材料类似或等同的多种方法和材料，其可用于实施本申请。本申请决不局限于所描述的方法和材料。
除非另有定义，本申请使用的技术和科学术语具有与本申请所属领域技术人员所通常理解相同的含义且与以下文献一致：Singleton等人(1994)Dictionary ofMicrobiology and Molecular Biology,第2版,J.Wiley&Sons,New York,NY；和Janeway,C.,Travers,P.,Walport,M.,Shlomchik(2001)Immunobiology,第5版,GarlandPublishing,New York。
定义
除非另有说明，本申请使用的以下术语和短语意在具有以下含义：
当本申请使用商标名时，申请人意在独立包括商标名产品的商标名产品制剂、通用名药物和活性药物成分。
出于本申请目的的“接纳体人框架”为以下框架，其包含来源于如下定义的人免疫球蛋白框架或人共有框架的轻链可变域(VL)框架或重链可变域(VH)框架的氨基酸序列。“来源于”人免疫球蛋白框架或人共有框架的接纳体人框架可包含与其相同的氨基酸序列，或其可含有氨基酸序列变化。在一些实施方案中，氨基酸变化的数目为10个或更少个、9个或更少个、8个或更少个、7个或更少个、6个或更少个、5个或更少个、4个或更少个、3个或更少个或2个或更少个。在一些实施方案中，VL接纳体人框架在序列方面与VL人免疫球蛋白框架序列或人共有框架序列相同。
“亲和力”是指分子(例如抗体)中的单一结合位点和其结合配对体(例如抗原)之间的非共价相互作用的总和强度。除非另有说明，本申请使用的“结合亲和力”是指固有结合亲和力，其反映了结合对的成员(例如抗体和抗原)之间的1:1相互作用。分子X针对其配对体Y的亲和力通常可通过解离常数(Kd)来表示。亲和力可通过本领域已知的常见方法来测量，包括本申请所描述的那些方法。用于测量结合亲和力的具体说明性和示例性实施方案如下所述。
在某些实施方案中，本申请所描述的抗体具有以下解离常数(Kd)：≤1μM、≤100nM、≤10nM、≤5nM、≤4nM、≤3nM、≤2nM、≤1nM、≤0.1nM、≤0.01nM或≤0.001nM(例如10-8M或更小,例如10-8M至10-13M,例如10-9M至10-13M)。
“亲和力成熟”抗体是指与没有下述变更的母体抗体相比在一个或多个高变区(HVR)中具有一处或多处变更的抗体，上述变更使所述抗体对抗原的亲和力得以改善。
术语“抗体”在本申请中以最宽含义使用且涵盖各种抗体结构，包括但不局限于单克隆抗体、多克隆抗体、多特异性抗体(例如双特异性抗体)和抗体片段(只要其显示出所需要的抗原结合活性)。
“抗体片段”是指分子而非完整抗体，其包含完整抗体的一部分且结合于完整抗体所结合的抗原。抗体片段的实例包括但不局限于Fv、Fab、Fab’、Fab’-SH、F(ab’)2；双特异性抗体；线性抗体；单链抗体分子(例如scFv)；和由抗体片段形成的多特异性抗体。
术语“癌症”和“癌性”是指或描述了哺乳动物中通常以失调的细胞生长/增殖为特征的生理状态。“肿瘤”包含一种或多种癌性细胞。癌症的实例包括但不局限于癌瘤、淋巴瘤、母细胞瘤、肉瘤和白血病或淋巴样恶性肿瘤。上述癌症的更具体实例包括鳞状细胞癌(例如上皮鳞状细胞癌)、肺癌(包括小细胞肺癌、非小细胞肺癌(“NSCLC”)、肺腺癌和肺鳞癌)、腹膜癌、肝细胞癌、胃部癌症或胃癌(包括胃肠癌)、胰腺癌、胶质母细胞瘤、子宫颈癌、卵巢癌、肝癌、膀胱癌、肝瘤、乳腺癌、结肠癌、直肠癌、结肠直肠癌、子宫内膜癌或子宫癌、唾液腺癌、肾癌或肾部癌症、前列腺癌、外阴癌、甲状腺癌、肝癌瘤、肛门癌、阴茎癌及头颈癌。
“HER2阳性”癌症包含具有高于正常水平的HER2的癌症细胞。HER2阳性癌症的实例包括HER2阳性乳腺癌和HER2阳性胃癌。HER2阳性癌症任选具有2+或3+的免疫组织化学(IHC)评分和/或≥2.0的原位杂化(ISH)扩增比例。
本申请使用的术语“早期乳腺癌(EBC)”或“早期乳腺癌”是指尚未扩散出乳腺或腋窝淋巴结的乳腺癌。其包括原位导管癌瘤及I期、IIA期、IIB期和IIIA期乳腺癌。
在该分类中将肿瘤或癌症称为“0期”、“I期”、“II期”、“III期”或“IV期”和各种亚期表明使用本领域已知的Overall Stage Grouping或Roman Numeral Staging方法对肿瘤或癌症进行分类。虽然癌症的实际阶段取决于癌症的类型，但是通常0期癌症为原位损伤，I期癌症为小的局限性肿瘤，II期和III期癌症为涉及局部淋巴结的局部高阶肿瘤，且IV期癌症表示转移性癌症。每类肿瘤的具体阶段是临床医师已知的。
术语“转移性乳腺癌”意指乳腺癌的状态，其中癌症细胞在体内通过血管或淋巴系统由原发部位转移至一个或多个其它部位以在除乳腺外的一个或多个器官中形成一处或多处继发肿瘤。
“高阶”癌症为已经通过局部浸润或转移而扩散出原发部位或器官的癌症。因此，术语“高阶”癌症包括局部高阶疾病和转移性疾病这两者。
“复发性”癌症为在响应于最初疗法例如手术后已经在最初部位或远距离部位再次生长的癌症。
“局部复发性”癌症为在治疗后在与先前所治疗的癌症相同的地方复发的癌症。
“可手术的”或“可切除的”癌症为局限于原发器官且适于手术(切除)的癌症。
“不可切除的”或“非可切除的”癌症不能通过手术来除去(切除)。
术语“嵌合”抗体是指以下抗体，其中重链和/或轻链的一部分来源于具体来源或物种，而重链和/或轻链的其余部分来源于不同的来源或物种。
抗体的“类别”是指其重链所具有的恒定域或恒定区的类型。有五种主要抗体类别：IgA、IgD、IgE、IgG和IgM，且其中几种可进一步分成亚类(同种型)，例如IgG1、IgG2、IgG3、IgG4、IgA1和IgA2。与不同类别的免疫球蛋白相应的重链恒定域分别称为α、δ、ε、γ和μ。
本申请使用的术语“细胞毒性剂”是指抑制或阻止细胞功能和/或引起细胞死亡或破坏的物质。细胞毒性剂包括但不局限于放射性同位素(例如At211、I131、I125、Y90、Re186、Re188、Sm153、Bi212、P32、Pb212和Lu的放射性同位素)；化学治疗剂或化学治疗药物(例如甲氨喋呤、甲烯土霉素、长春花生物碱(长春新碱、长春碱、依托泊苷)、多柔比星、美法仑、丝裂霉素C、苯丁酸氮芥、柔红霉素或其它嵌入剂)；生长抑制剂；酶和其片段，例如溶核酶；抗生素；毒素，例如细菌、真菌、植物或动物来源的小分子毒素或酶活性毒素，包括其片段和/或变体；和下述各种抗肿瘤剂或抗癌剂。
“效应子功能”是指可归因于抗体的Fc区的那些生物活性，其随抗体同种型而变化。抗体效应子功能的实例包括：C1q结合和补体依赖性细胞毒性(CDC)；Fc受体结合；抗体依赖性由细胞介导的细胞毒性(ADCC)；吞噬；下调细胞表面受体(例如B细胞受体)；和B细胞活化。
试剂例如药物制剂的“有效量”是指在按照剂量且持续必要时段的情况下有效实现所需要的治疗或预防结果的量。药物用于治疗癌症的有效量可减少癌症细胞数目；减小肿瘤尺寸；抑制(即在一定程度上减缓且优选停止)癌症细胞浸润到周围器官中；抑制(即在一定程度上减缓且优选停止)肿瘤转移；在一定程度上抑制肿瘤生长；和/或在一定程度上缓解与癌症相关的一种或多种症状。当药物可阻止生长和/或杀死现有癌症细胞时，其可以是细胞抑制性和/或细胞毒性的。有效量可延长无进展存活(例如通过实体瘤响应评价标准(RECIST)或CA-125变化来测量)、引起客观响应(包括部分响应(PR)或完全响应(CR))、增加整体存活时间和/或改善癌症的一种或多种症状(例如通过FOSI来评价)。
术语“表位”是指抗原分子上抗体所结合的具体位点。
“表位4D5”或“4D5表位”或“4D5”为HER2的细胞外结构域中抗体4D5(ATCC CRL10463)和曲妥珠单抗所结合的区域。该表位与HER2的跨膜结构域接近且在HER2的结构域IV中。为了筛选与4D5表位结合的抗体，可进行常规交叉阻断测定例如Antibodies,ALaboratory Manual,冷的Spring Harbor Laboratory,Ed Harlow and David Lane(1988)所描述的测定。可选择地，可进行表位绘图以评价抗体是否与HER2的4D5表位结合(例如HER2中约残基550至约残基610的区域中的任何一个或多个残基(包括的)(SEQ ID NO:39)。
“表位2C4”或“2C4表位”为HER2的细胞外结构域中抗体2C4所结合的区域。为了筛选与2C4表位结合的抗体，可进行常规交叉阻断测定例如Antibodies,A LaboratoryManual,冷的Spring Harbor Laboratory,Ed Harlow and David Lane(1988)所描述的测定。可选择地，可进行表位绘图以评价抗体是否与HER2的2C4表位结合。表位2C4所包含的残基来自HER2的细胞外结构域中的结构域II。2C4抗体和帕妥珠单抗在结构域I、II和III的交汇处与HER2的细胞外结构域结合(Franklin等人,Cancer Cell 5:317-328(2004))。
抗HER2鼠抗体7C2与HER2的结构域I中的表位结合。参见例如PCT公开文本WO98/17797。该表位不同于与HER2的结构域IV结合的曲妥珠单抗所结合的表位和与HER2的结构域II结合的帕妥珠单抗所结合的表位。曲妥珠单抗通过与结构域IV结合使非配体依赖性HER2-HER3复合物断裂，由此抑制下游信号传导(例如PI3K/AKT)。相反地，与结构域II结合的帕妥珠单抗阻止HER2在配体驱动下与其它HER家族成员(例如HER3、HER1或HER4)相互作用，由此也阻止下游信号转导。MAb 7C2与结构域I的结合不干扰曲妥珠单抗或帕妥珠单抗分别与结构域IV和II结合，由此使将MAb7C2ADC与曲妥珠单抗、trastuzumab emtansine(T-DM-1)和/或帕妥珠单抗组合起来成为可能。鼠抗体7C2即7C2.B9参见PCT公开文本WO98/17797。抗HER2 7C2人化抗体参见WO2016/040723A1。
术语“Fc区”在本申请中用于定义含有至少一部分恒定区的免疫球蛋白重链的C末端区域。所述术语包括天然序列Fc区和变异Fc区。在一个实施方案中，人IgG重链Fc区由Cys226或由Pro230延伸至重链的羧基末端。然而，Fc区的C末端赖氨酸(Lys447)可存在或可不存在。除非在本申请中另有说明，根据EU编号系统(也称为EU索引,参见Kabat等人,Sequences of Proteins of Immunological Interest,第5版,Public Health Service,National Institutes of Health,Bethesda,MD,1991)对Fc区或恒定区中的氨基酸残基进行编号。
“框架”或“FR”是指除高变区(HVR)残基外的可变域残基。可变域中的FR通常由四个FR结构域构成：FR1、FR2、FR3和FR4。因此，HVR和FR序列在VH(或VL)中通常按以下顺序出现：FR1-H1(L1)-FR2-H2(L2)-FR3-H3(L3)-FR4。
本申请可互换使用的术语“全长抗体”、“完整抗体”和“整个抗体”是指以下抗体，其具有与天然抗体结构基本上类似的结构或具有含有本申请所定义的Fc区的重链。
术语“宿主细胞”、“宿主细胞系”和“宿主细胞培养物”在本申请中可互换使用且是指已经引入有外源性核酸的细胞，包括上述细胞的后代。宿主细胞包括“转化体”和“转化细胞”，其包括原代转化细胞和由其衍生的后代而不论传代次数。后代在核酸内容方面可与亲本细胞不完全相同而可含有突变。本申请包括突变后代，其当就原始转化细胞的功能或生物活性进行筛查或选择时具有相同的功能或生物活性。
“人抗体”为以下抗体，其所具有的氨基酸序列对应于人类或人类细胞所产生或来源于使用全套人抗体或其它人抗体编码序列的非人来源的抗体的氨基酸序列。关于人抗体的该定义具体排除了包含非人抗原结合残基的人化抗体。
“人共有框架”为以下框架，其代表了在选择人免疫球蛋白VL或VH框架序列时最常出现的氨基酸残基。通常从可变域序列的亚组中选择人免疫球蛋白VL或VH序列。序列的亚组通常为以下文献所描述的亚组：Kabat等人,Sequences of Proteins of ImmunologicalInterest,第5版,NIH Publication91-3242,Bethesda MD(1991),vols.1-3。在一个实施方案中，就VL而言的亚组为以上文献“Kabat等人”所描述的亚组κI。在一个实施方案中，就VH而言的亚组为以上文献“Kabat等人”所描述的亚组III。
“人化”抗体是指以下嵌合抗体，其包含来自非人HVR的氨基酸残基和来自人FR的氨基酸残基。在某些实施方案中，人化抗体将包含基本上全部至少一种且通常两种可变域，其中全部或基本上全部HVR(例如CDR)对应于非人抗体中的那些HVR(例如CDR)，而全部或基本上全部FR对应于人抗体中的那些FR。人化抗体任选可包含来源于人抗体的抗体恒定区的至少一部分。抗体的“人化形式”例如非人抗体是指已经经历人化的抗体。
本申请使用的术语“高变区”或“HVR”是指抗体可变域的每个以下区域，其在序列方面是高度可变的和/或形成结构上确定的环(“高变环”)。天然四链抗体通常包含六个HVR；三个在VH中(H1、H2、H3)，且三个在VL中(L1、L2、L3)。HVR通常包含来自高变环和/或来自“互补决定区”(CDR)的氨基酸残基，后者具有最高的序列可变性和/或参与抗原识别。示例性高变环出现在以下位置：氨基酸残基26-32(L1)、50-52(L2)、91-96(L3)、26-32(H1)、53-55(H2)和96-101(H3)(Chothia和Lesk,J.Mol.Biol.196:901-917(1987))。示例性CDR(CDR-L1、CDR-L2、CDR-L3、CDR-H1、CDR-H2和CDR-H3)出现在以下位置：L1中的氨基酸残基24-34、L2中的氨基酸残基50-56、L3中的氨基酸残基89-97、H1中的氨基酸残基31-35B、H2中的氨基酸残基50-65和H3中的氨基酸残基95-102(Kabat等人,Sequences of Proteins ofImmunological Interest,第5版,Public Health Service,National Institutes ofHealth,Bethesda,MD(1991))。除VH中的CDR1外的CDR通常包含形成高变环的氨基酸残基。CDR还包含“特异性决定残基”或“SDR”，其为与抗原接触的残基。SDR包含在称为缩短CDR或a-CDR的CDR的区域中。示例性a-CDR(a-CDR-L1、a-CDR-L2、a-CDR-L3、a-CDR-H1、a-CDR-H2和a-CDR-H3)出现在以下位置：L1中的氨基酸残基31-34、L2中的氨基酸残基50-55、L3中的氨基酸残基89-96、H1中的氨基酸残基31-35B、H2中的氨基酸残基50-58和H3中的氨基酸残基95-102(参见Almagro和Fransson,Front.Biosci.13:1619-1633(2008))。除非另有说明，本申请根据以上文献“Kabat等人”对可变域中的HVR残基和其它残基(例如FR残基)进行编号。
“免疫缀合物”为与一种或多种异种分子(包括但不局限于细胞毒性剂)缀合的抗体。
“患者”或“个体”或“受试者”为哺乳动物。哺乳动物包括但不局限于驯养动物(例如牛、羊、猫、狗和马)、灵长类动物(例如人类和非人灵长类动物例如猴)、兔和啮齿类动物(例如小鼠和大鼠)。在某些实施方案中，所述患者、个体或受试者为人类。在一些实施方案中，所述患者可为“癌症患者”即遭受癌症(具体为胃癌或乳腺癌)的一种或多种症状或面临遭受癌症(具体为胃癌或乳腺癌)的一种或多种症状的风险的患者。
“患者群”是指一组癌症患者。上述群可用于证实药物在统计学上显著的效力和/或安全性。
“复发的”患者为在缓和后具有癌症的指征或症状的患者。所述患者任选在辅助或新辅助疗法后已经复发。
“显示出HER表达、扩增或活化”的癌症或生物样品为在诊断测试中表达(包括过表达)HER受体、具有扩增的HER基因和/或以其它方式显示出HER受体活化或磷酸化的癌症或生物样品。
“新辅助疗法”或“手术前疗法”在本申请中是指在手术前给予的疗法。新辅助疗法的目的是提供即刻全身治疗，这可消灭微转移灶，而若采取首先手术且然后全身疗法的标准顺序，则微转移灶可发生增殖。新辅助疗法还可有助于减小肿瘤尺寸，由此可完全切除最初不可切除的肿瘤或保留部分器官和其功能。另外，新辅助疗法可对药物效力进行体内评价，这可指导对后续治疗的选择。
“辅助疗法”在本申请中是指在决定性手术后给予的疗法，其中检测不到后遗疾病的任何迹象，从而降低疾病复发的风险。辅助疗法的目的是预防癌症的复发且由此降低癌症相关死亡的机会。辅助疗法在本申请中具体排除了新辅助疗法。
“决定性手术”如该术语在医药界中使用的那样使用。决定性手术包括例如使肿瘤得以除去或切除的手术或其它措施，包括使所有显而易见的肿瘤得以除去或切除的那些措施。决定性手术包括例如肿瘤的完全性或治愈性切除或完全性基本切除。决定性手术包括以一个或多个阶段进行的措施且包括例如多阶段手术措施，其中在切除肿瘤前进行一项或多项手术或其它措施。决定性手术包括除去或切除包括所涉及的器官、部分器官和组织及周围器官例如淋巴结、部分器官或组织在内的肿瘤的措施。除去可能是不完全的，从而使肿瘤细胞可能残余，即使检测不到。
“存活”是指患者保持生存且包括无疾病存活(DFS)、无进展存活(PFS)和整体存活(OS)。存活可通过Kaplan-Meier方法来评价，且在存活方面的任何差异使用分层对数秩检验来计算。
“无进展存活(PFS)”为由治疗的第一天至所备案的疾病进展(包括孤立的CNS进展)或研究中任何原因引起的死亡(无论哪个首先出现)的时间。
“无疾病存活(DFS)”是指患者在开始治疗或最初诊断后在没有癌症复发的情况下保持生存一定时段例如约1年、约2年、约3年、约4年、约5年、约10年等。在本申请一个方面，根据意向治疗原则对DFS进行分析，即基于其所接受的指定疗法对患者进行评价。在分析DFS时使用的事件可包括癌症的局部、区域和远距离复发、次发癌症的出现和在没有在先事件(例如乳腺癌复发或另一种原发癌症)的情况下任何原因引起的患者死亡。
“整体存活”是指患者在开始治疗或最初诊断后保持生存一定时段例如约1年、约2年、约3年、约4年、约5年、约10年等。在本申请所依赖的研究中，用于存活分析的事件为任何原因引起的死亡。
“延长存活”意指与未经治疗的患者或对照治疗方案相比在所治疗的患者中增加DFS和/或OS。存活在开始治疗或最初诊断后监测至少约6个月或至少约1年或至少约2年或至少约3年或至少约4年或至少约5年或至少约10年等。
“单一疗法”意指以下治疗方案，其在治疗期的过程中仅包括一种治疗剂用于治疗癌症或肿瘤。
“维持疗法”意指以下治疗方案，其被给予以降低疾病复发或进展的可能性。所提供的维持疗法可持续任何时长，包括高至受试者寿命的延长时段。维持疗法可在最初疗法后提供或与最初疗法或额外疗法组合提供。维持疗法所使用的剂量可发生变化且与其它类型的疗法所使用的剂量相比可包括降低的剂量。
“经分离的抗体”为已经与其天然环境中的组分分开的抗体。在一些实施方案中，将抗体纯化至纯度大于95％或99％，其通过例如电泳(例如SDS-PAGE、等电聚焦(IEF)、毛细管电泳)或色谱(例如离子交换或反相HPLC)来确定。关于对抗体纯度进行评价的方法的综述参见例如Flatman等人,J.Chromatogr.B 848:79-87(2007)。
“经分离的核酸”是指已经与其天然环境中的组分分开的核酸分子。经分离的核酸包括含有在以下细胞中的核酸分子，所述细胞通常含有所述核酸分子，但是所述核酸分子存在于染色体外或存在于与其天然染色体位置不同的染色体位置。
“经分离的对抗体进行编码的核酸”是指一种或多种对抗体重链和轻链(或其片段)进行编码的核酸分子，包括单一载体或不同载体中的上述一种或多种核酸分子和存在于宿主细胞中的一个或多个位置的上述一种或多种核酸分子。
本申请使用的术语“HER2”是指任何天然成熟HER2，其得自对细胞中的HER2前体蛋白进行加工。除非另有说明，所述术语包括来自任何脊椎动物来源的HER2，包括哺乳动物例如灵长类动物(例如人类和短尾猴)及啮齿类动物(例如小鼠和大鼠)。所述术语还包括天然存在的HER2变体例如剪接变体或等位变体。具有信号序列(具有信号序列,氨基酸1-22)的示例性人HER2前体蛋白的氨基酸序列显示在SEQ ID NO:64中。示例性成熟人HER2的氨基酸序列为SEQ ID NO:64中的氨基酸23-1255。
术语“HER2阳性细胞”是指在其表面上表达HER2的细胞。
本申请使用的术语“单克隆抗体”是指由基本上均质的抗体群得到的抗体，即除例如含有天然存在的突变或在生产单克隆抗体制剂期间出现的可能变体抗体外，构成所述群的各个抗体是相同的和/或与相同的表位结合，上述变体通常以很小的量存在。与通常包含针对不同决定子(表位)的不同抗体的多克隆抗体制剂相反的是，单克隆抗体制剂中的每个单克隆抗体针对抗原上的单一决定子。因此，修饰语“单克隆”表明抗体的性质是由基本上均质的抗体群得到且不应该被解释为抗体需要通过任何具体方法来产生。例如，根据本申请待使用的单克隆抗体可通过各种技术来制备，包括但不局限于杂交瘤方法、重组DNA方法、噬菌体展示方法和使用含有全部或部分人免疫球蛋白基因座的转基因动物的方法，上述方法和用于制备单克隆抗体的其它示例性方法在本申请中描述。
“裸抗体”是指没有与异种部分(例如细胞毒性部分)或放射性标签缀合的抗体。裸抗体可存在于药物制剂中。
“天然抗体”是指天然存在的具有各种结构的免疫球蛋白分子。例如，天然IgG抗体为约150,000道尔顿的杂四聚体糖蛋白，其由以二硫化物形式键合的两条相同的轻链和两条相同的重链构成。每条重链由N末端至C末端先后具有可变区(VH)(也称为可变重链域或重链可变域)和三个恒定域(CH1、CH2和CH3)。类似地，每条轻链由N末端至C末端先后具有可变区(VL)(也称为可变轻链域或轻链可变域)和恒定轻链(CL)域。抗体的轻链可基于其恒定域的氨基酸序列而被指定为两种类型(称为κ和λ)中的一种。
“小瓶”为适于容纳液体或冻干制剂的容器。在一个实施方案中，所述小瓶为一次用小瓶例如具有塞子的20cc一次用小瓶。
术语“包装插页”用于指通常包含在治疗产品的市售包装中的说明书，其含有关于以下事项的信息：与使用上述治疗产品相关的适应症、用法、剂量、给药、组合疗法、禁忌症和/或警告。
就参比多肽序列而言的“氨基酸序列同一性百分比(％)”被定义为候选序列中在使序列对齐且按需引入间隙以实现最大序列同一性百分比且不将任何保守取代视为序列同一性的一部分后与参比多肽序列中的氨基酸残基相同的氨基酸残基的百分比。出于确定氨基酸序列同一性百分比的目的而进行的对齐可按本领域技术人员已知的各种方式实现，例如使用公众可得到的计算机软件例如BLAST、BLAST-2、ALIGN或Megalign(DNASTAR)软件。本领域技术人员可确定适于使序列对齐的参数，包括在所比较的序列的全长下实现最大对齐所需要的任何算法。然而，出于本申请目的而使用序列比较计算机程序ALIGN-2来生成氨基酸序列同一性％值。ALIGN-2序列比较计算机程序的著作者为Genentech,Inc.，且已经将源代码及使用者备案信息提交至U.S.Copyright Office,Washington D.C.,20559，其中它被登记为U.S.Copyright Registration No.TXU510087。ALIGN-2程序是公众可由Genentech,Inc.,South San Francisco,California得到的或可由源代码编译。ALIGN-2程序应该被编译以在UNIX操作系统(包括数字化UNIX V4.0D)上使用。所有序列比较参数都通过ALIGN-2程序来设置且不能更改。
当ALIGN-2用于氨基酸序列比较时，所给定的氨基酸序列A针对、与或相对于所给定的氨基酸序列B的氨基酸序列同一性％(这也可称为针对、与或相对于所给定的氨基酸序列B具有或包含某个氨基酸序列同一性％的所给定的氨基酸序列A)如下计算：
100乘以分数X/Y
其中X为当序列对齐程序ALIGN-2使A和B对齐时通过该程序被评分为同一性匹配的氨基酸残基的数目，且其中Y为B中的氨基酸残基总数。将认识到的是，当氨基酸序列A的长度与氨基酸序列B的长度不相等时，A针对B的氨基酸序列同一性％将不等于B针对A的氨基酸序列同一性％。除非另有具体说明，本申请使用的所有氨基酸序列同一性％值都如上一段落所描述的那样使用ALIGN-2计算机程序来得到。
术语“药物制剂”是指以下制剂，其形式使其所含有的活性成分的生物活性是有效的，且其不含有任何对于接受所述制剂的受试者来说具有不可接受的毒性的额外组分。
“药用载体”是指药物制剂中除活性成分外的成分，其对于受试者来说是无毒性的。药用载体包括但不局限于缓冲剂、赋形剂、稳定剂或防腐剂。
本申请使用的“治疗”是指试图使所治疗的个体的自然过程发生改变的临床介入且可出于预防目的而进行或在临床病理过程中进行。所期望的治疗作用包括但不局限于预防疾病发生或复发、缓解症状、减少疾病的任何直接或间接病理结果、预防转移、降低疾病进展速率、使疾病状态转佳或减轻和缓和或改善预后。在一些实施方案中，本申请抗体用于延迟疾病发展或减缓疾病进展。
“共给药”意指在同一给药过程中静脉内给药两种(或更多种)药物而非相继输注所述两种或更多种药物。这通常将涉及将所述两种(或更多种)药物在其共给药前合并到同一IV袋中。
与一种或多种其它药物“并行”给药的药物在与所述一种或多种其它药物相同的治疗周期中、在与所述一种或多种其它药物相同的治疗日且任选在与所述一种或多种其它药物相同的时间给药。例如，就每3周给予一次的癌症疗法而言，并行给药的药物各自在3周周期的第1日给药。
“化学治疗剂”是指可用于治疗癌症的化学化合物。化学治疗剂的实例包括：烷化剂，例如塞替派和环磷酰胺
Figure BDA0001680565890000231
烷基磺酸酯，例如白消安、英丙舒凡和哌泊舒凡；氮丙啶类，例如苯佐替派、卡波醌、美妥替哌和乌瑞替派；乙撑亚胺类和甲基密胺类，包括六甲密胺、曲他胺、三乙撑膦酰胺、三乙撑硫化磷酰胺和三羟甲密胺；番荔枝内酯类(尤其是布拉它辛和布拉它辛酮)；δ-9-四氢大麻酚(屈大麻酚,
Figure BDA0001680565890000232
)；β-拉帕醌；拉帕醇；秋水仙碱类；白桦脂酸；喜树碱(包括合成类似物托泊替康
Figure BDA0001680565890000233
CPT-11(伊立替康,
Figure BDA0001680565890000234
)、乙酰基喜树碱、东莨菪素和9-氨基喜树碱)；苔藓抑素；callystatin；CC-1065(包括其阿多来新、卡折来新和比折来新合成类似物)；鬼臼毒素；鬼臼酸；替尼泊苷；cryptophycin类(具体为cryptophycin 1和cryptophycin 8)；多拉司他汀；duocarmycin(包括合成类似物即KW-2189和CB1-TM1)；艾榴塞洛素；pancratistatin；sarcodictyin；spongistatin；氮芥类，例如苯丁酸氮芥、萘氮芥、氯磷酰胺、雌莫司汀、异环磷酰胺、氮芥、盐酸氧氮芥、美法仑、新氮芥、苯芥胆甾醇、泼尼莫司汀、曲磷胺、乌拉莫司汀；亚硝基脲类，例如卡莫司汀、氯脲菌素、福莫司汀、洛莫司汀、尼莫司汀和雷莫司汀；抗生素，例如烯二炔抗生素(例如刺孢霉素，尤其是刺孢霉素γ1I和刺孢霉素ωI1(参见例如Nicolaou等人,Angew.Chem Intl.Ed.Engl.,33:183-186(1994))；CDP323即一种口服α-4整合素抑制剂；dynemicin，包括dynemicin A；埃斯培拉霉素；及新抑癌蛋白生色团和相关色蛋白烯二炔抗生素生色团)、aclacinomysin类、放线菌素、authramycin、偶氮丝氨酸、博来霉素类、放线菌素C、carabicin、洋红霉素、嗜癌霉素、色霉素类、放线菌素D、柔红霉素、地托比星、6-重氮基-5-氧代-L-正亮氨酸、多柔比星(包括
Figure BDA0001680565890000235
吗啉代多柔比星、氰基吗啉代多柔比星、2-吡咯啉子基多柔比星、盐酸多柔比星脂质体注射剂
Figure BDA0001680565890000236
脂质体多柔比星TLC D-99
Figure BDA0001680565890000241
聚乙二醇化脂质体多柔比星
Figure BDA0001680565890000242
和去氧多柔比星)、表柔比星、依索比星、伊达比星、麻西罗霉素、丝裂霉素类例如丝裂霉素C、麦考酚酸、诺拉霉素、橄榄霉素类、培洛霉素、泊非霉素、嘌罗霉素、三铁阿霉素、罗多比星、链黑霉素、链佐星、杀结核菌素、乌苯美司、净司他丁、佐柔比星；抗代谢剂，例如甲氨喋呤、吉西他滨
Figure BDA0001680565890000243
替加氟
Figure BDA0001680565890000244
卡培他滨
Figure BDA0001680565890000245
埃坡霉素和5-氟尿嘧啶(5-FU)；叶酸类似物，例如二甲叶酸、甲氨喋呤、喋罗呤、三甲曲沙；嘌呤类似物，例如氟达拉滨、6-巯基嘌呤、硫咪嘌呤、硫鸟嘌呤；嘧啶类似物，例如安西他滨、阿扎胞苷、6-氮杂尿苷、卡莫氟、阿糖胞苷、二脱氧尿苷、去氧氟尿苷、伊诺他滨、氟尿苷；雄激素类，例如卡普睾酮、丙酸甲雄烷酮、环硫雄醇、美雄烷、睾内酯；抗肾上腺素剂，例如氨鲁米特、米托坦、曲洛司坦；叶酸补充剂，例如亚叶酸；醋葡醛内酯；醛磷酰胺糖苷；氨基乙酰丙酸；恩尿嘧啶；安吖啶；bestrabucil；比生群；伊达曲杀；地磷酰胺；秋水仙胺；地吖醌；elfornithine；依利醋铵；埃坡霉素；依托格鲁；硝酸镓；羟基脲；香菇多糖；氯尼达明；美登醇类，例如美登素和安丝菌素；米托胍腙；米托蒽醌；莫哌达醇；根瘤菌剂；喷司他丁；蛋氨氮芥；吡柔比星；洛索蒽醌；2-乙基肼；丙卡巴肼；
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多糖复合物(JHS Natural Products,Eugene,OR)；雷佐生；根霉素；西佐喃；锗螺胺；细交链孢菌酮酸；三亚胺醌；2,2’,2’-三氯三乙胺；单端孢霉烯类(尤其是T-2毒素、verracurin A、杆孢菌素A和蛇形菌素)；乌拉坦；长春地辛
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达卡巴嗪；甘露莫司汀；二溴甘露醇；二溴卫矛醇；哌泊溴烷；gacytosine；阿糖胞苷(“Ara-C”)；塞替派；紫杉烷，例如紫杉醇
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紫杉醇白蛋白工程化纳米粒制剂(ABRAXANETM)和多西他赛
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苯丁酸氮芥；6-硫代鸟嘌呤；巯基嘌呤；甲氨喋呤；铂剂，例如顺铂、奥沙利铂(例如
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)和卡铂；长春胺类，其使微管蛋白聚合不会形成微管，包括长春碱
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长春新碱
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长春地辛(
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)和长春瑞滨
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依托泊苷(VP-16)；异环磷酰胺；米托蒽醌；亚叶酸；诺消灵；伊达曲杀；柔红霉素；氨基喋呤；伊班膦酸盐；拓扑异构酶抑制剂RFS2000；二氟甲基鸟氨酸(DMFO)；类视黄醇类，例如维甲酸，包括贝沙罗汀
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二膦酸盐，例如氯膦酸盐(例如
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或
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)、依替膦酸盐
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NE-58095、唑来膦酸/唑来膦酸盐
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阿伦膦酸盐
Figure BDA0001680565890000251
帕米膦酸盐
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替鲁膦酸盐
Figure BDA0001680565890000253
或利塞膦酸盐
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曲沙他滨(一种1,3-二氧杂环戊烷核苷胞嘧啶类似物)；反义寡核苷酸，具体为对异常细胞增殖所涉及的信号传导途径中的基因表达进行抑制的那些反义寡核苷酸，例如PKC-α、Raf、H-Ras和表皮生长因子受体(EGF-R)；疫苗，例如
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疫苗和基因疗法疫苗，例如
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疫苗、
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疫苗和
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疫苗；拓扑异构酶1抑制剂(例如
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)；rmRH(例如
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)；BAY439006(索拉非尼；Bayer)；SU-11248(舒尼替尼,
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Pfizer)；哌立福辛、COX-2抑制剂(例如塞来考昔或艾托考昔)、蛋白体抑制剂(例如PS341)；硼替佐米
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CCI-779；替吡法尼(R11577)；索拉非尼、ABT510；Bcl-2抑制剂，例如奥利默森钠
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pixantrone；EGFR抑制剂(参见以下定义)；酪氨酸激酶抑制剂；丝氨酸-苏氨酸激酶抑制剂，例如雷帕霉素(西罗莫司,
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)；法尼基转移酶抑制剂，例如洛那法尼(SCH6636,SARASARTM)；和上述任何物质的药用盐、酸或衍生物；及上述两种或更多种物质的组合，例如CHOP即环磷酰胺、多柔比星、长春新碱和泼尼松龙的组合疗法的缩写；及FOLFOX即用奥沙利铂(ELOXATINTM)与5-FU和亚叶酸的组合进行的治疗方案的缩写。
本申请定义的化学治疗剂包括用于使可促进癌症生长的激素作用得以调节、降低、阻断或抑制的“抗激素剂”或“内分泌治疗剂”。其可为激素本身，包括但不局限于：具有混合型激动剂/拮抗剂性质的抗雌激素剂，包括他莫昔芬
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4-羟基他莫昔芬、托瑞米芬
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艾多昔芬、屈洛昔芬、雷洛昔芬
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曲沃昔芬、雷洛西芬和选择性雌激素受体调节剂(SERM)例如SERM3；不具有激动剂性质的纯抗雌激素剂，例如氟维司群
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和EM800(上述药物可阻断雌激素受体(ER)二聚化、抑制DNA结合、增加ER转化和/或压制ER水平)；芳香酶抑制剂，包括甾体芳香酶抑制剂例如福美坦和依西美坦
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和非甾体芳香酶抑制剂例如阿那曲唑
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来曲唑
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和氨鲁米特及其它芳香酶抑制剂，包括伏氯唑
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醋酸甲地孕酮
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法倔唑和4(5)-咪唑类；黄体化激素释放激素激动剂，包括亮丙瑞林(
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和
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)、戈舍瑞林、布舍瑞林和曲普瑞林；性甾体，包括妊娠素类例如醋酸甲地孕酮和醋酸甲羟孕酮、雌激素类例如己烯雌酚和倍美力及雄激素类/类视黄醇类例如氟甲睾酮、全反式视黄酸和芬维A胺；奥那司酮；抗黄体酮类；雌激素受体下调剂(ERD)；抗雄激素剂，例如氟他胺、尼鲁米特和比卡鲁胺；及上述任何物质的药用盐、酸或衍生物；及上述两种或更多种物质的组合。
本申请针对辅助疗法而使用的术语“免疫抑制剂”是指用于使本申请所治疗的哺乳动物的免疫系统得以抑制或屏蔽的物质。其可包括抑制细胞因子产生、下调或抑制自身抗原表达或屏蔽MHC抗原的物质。上述药物的实例包括：2-氨基-6-芳基-5-取代的嘧啶(参见美国专利4,665,077)；非甾体抗炎剂(NSAID)；更昔洛韦、他克莫司、糖皮质激素例如考的松或醛固酮、抗炎剂例如环氧化酶抑制剂、5-脂氧化酶抑制剂或白细胞三烯受体拮抗剂；嘌呤拮抗剂，例如硫唑嘌呤或霉酚酸酯(MMF)；烷化剂，例如环磷酰胺；溴隐亭；达那唑；氨苯砜；戊二醛(其如美国专利4,120,649所描述的那样屏蔽MHC抗原)；针对MHC抗原和MHC片段的抗独特型抗体；环孢菌素A；甾体，例如皮质类固醇或糖皮质类固醇或糖皮质激素类似物例如泼尼松、包括SOLU-
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琥珀酸甲泼尼龙钠在内的甲泼尼龙和地塞米松；二氢叶酸还原酶抑制剂，例如甲氨喋呤(口服或皮下)；抗疟剂，例如氯喹和羟氯喹；柳氮磺吡啶；来氟米特；细胞因子或细胞因子受体抗体，包括抗干扰素-α、-β或-γ抗体、抗肿瘤坏死因子(TNF)-α抗体(英夫利昔单抗
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或阿达木单抗)、抗TNF-α免疫粘合素(依那西普)、抗TNF-β抗体、抗白细胞介素-2(IL-2)抗体、抗IL-2受体抗体、抗白细胞介素-6(IL-6)受体抗体和拮抗剂(例如ACTEMRATM(托珠单抗))；抗LFA-1抗体，包括抗CD11a和抗CD18抗体；抗L3T4抗体；异种抗淋巴细胞球蛋白；泛T抗体，优选抗CD3或抗CD4/CD4a抗体；含有LFA-3结合域的可溶性肽(在90年7月26日公开的WO90/08187)；链激酶；转化生长因子-β(TGF-β)；链道酶；来自宿主的RNA或DNA；FK506；RS-61443；苯丁酸氮芥；脱氧精胍菌素；雷帕霉素；T细胞受体(Cohen等人,美国专利5,114,721)；T细胞受体片段(Offner等人,Science,251:430-432(1991)；WO90/11294；Ianeway,Nature,341:482(1989)；和WO91/01133)；BAFF拮抗剂，例如BAFF抗体、BR3抗体和zTNF4拮抗剂(综述参见Mackay和Mackay,Trends Immunol.,23:113-5(2002)且也参见以下定义)；对T细胞辅助信号进行干扰的生物剂，例如抗CD40受体或抗CD40配体(CD154)，包括针对CD40-CD40配体的阻断性抗体(例如Durie等人,Science,261:1328-30(1993)；Mohan等人,J.Immunol.,154:1470-80(1995))和CTLA4-Ig(Finck等人,Science,265:1225-7(1994))；及T细胞受体抗体(EP340,109)，例如T10B9。本申请一些优选的免疫抑制剂包括环磷酰胺、苯丁酸氮芥、硫唑嘌呤、来氟米特、MMF或甲氨喋呤。
术语“PD-1轴结合拮抗剂”是指以下分子，其使PD-1轴结合配对体与一种或多种其结合配对体的相互作用得以抑制，从而消除由于PD-1信号传导轴上的信号传导而引起的T细胞功能障碍，其结果是恢复或提高T细胞功能(例如增殖、细胞因子产生、靶细胞杀死)。本申请使用的PD-1轴结合拮抗剂包括PD-1结合拮抗剂、PD-L1结合拮抗剂和PD-L2结合拮抗剂。
术语“PD-1结合拮抗剂”是指以下分子，其使由于PD-1与一种或多种其结合配对体例如PD-L1、PD-L2的相互作用而引起的信号转导得以降低、阻断、抑制、废除或干扰。在一些实施方案中，PD-1结合拮抗剂为以下分子，其抑制PD-1与一种或多种其结合配对体的结合。在具体方面，PD-1结合拮抗剂抑制PD-1与PD-L1和/或PD-L2的结合。例如，PD-1结合拮抗剂包括以下抗PD-1抗体、其抗原结合片段、免疫粘合素、融合蛋白、寡肽和其它分子，其使由于PD-1与PD-L1和/或PD-L2的相互作用而引起的信号转导得以降低、阻断、抑制、废除或干扰。在一个实施方案中，PD-1结合拮抗剂减小通过或经由T淋巴细胞(经由PD-1来介导信号传导)上表达的细胞表面蛋白来介导的负性共刺激信号，从而使功能障碍的T细胞变得较不功能障碍(例如提高效应子对抗原识别的响应)。在一些实施方案中，PD-1结合拮抗剂为抗PD-1抗体。在具体方面，PD-1结合拮抗剂为本申请所描述的MDX-1106(nivolumab)。在另一个具体方面，PD-1结合拮抗剂为本申请所描述的MK-3475(lambrolizumab)。在另一个具体方面，PD-1结合拮抗剂为本申请所描述的CT-011(pidilizumab)。在另一个具体方面，PD-1结合拮抗剂为本申请所描述的AMP-224。
术语“PD-L1结合拮抗剂”是指以下分子，其使由于PD-L1与一种或多种其结合配对体例如PD-1、B7-1的相互作用而引起的信号转导得以降低、阻断、抑制、废除或干扰。在一些实施方案中，PD-L1结合拮抗剂为以下分子，其抑制PD-L1与其结合配对体的结合。在具体方面，PD-L1结合拮抗剂抑制PD-L1与PD-1和/或B7-1的结合。在一些实施方案中，PD-L1结合拮抗剂包括以下抗PD-L1抗体、其抗原结合片段、免疫粘合素、融合蛋白、寡肽和其它分子，其使由于PD-L1与一种或多种其结合配对体例如PD-1、B7-1的相互作用而引起的信号转导得以降低、阻断、抑制、废除或干扰。在一个实施方案中，PD-L1结合拮抗剂减小通过或经由T淋巴细胞(经由PD-L1来介导信号传导)上表达的细胞表面蛋白来介导的负性共刺激信号，从而使功能障碍的T细胞变得较不功能障碍(例如提高效应子对抗原识别的响应)。在一些实施方案中，PD-L1结合拮抗剂为抗PD-L1抗体。在具体方面，抗PD-L1抗体为本申请所描述的YW243.55.S70。在另一个具体方面，抗PD-L1抗体为本申请所描述的MDX-1105。在另一个具体方面，抗PD-L1抗体为本申请所描述的MPDL3280A。在另一个具体方面，抗PD-L1抗体为本申请所描述的MEDI4736。
术语“PD-L2结合拮抗剂”是指以下分子，其使由于PD-L2与一种或多种其结合配对体例如PD-1的相互作用而引起的信号转导得以降低、阻断、抑制、废除或干扰。在一些实施方案中，PD-L2结合拮抗剂为以下分子，其抑制PD-L2与一种或多种其结合配对体的结合。在具体方面，PD-L2结合拮抗剂抑制PD-L2与PD-1的结合。在一些实施方案中，PD-L2拮抗剂包括抗PD-L2抗体、其抗原结合片段、免疫粘合素、融合蛋白、寡肽和其它分子，其使由于PD-L2与一种或多种其结合配对体例如PD-1的相互作用而引起的信号转导得以降低、阻断、抑制、废除或干扰。在一个实施方案中，PD-L2结合拮抗剂减小通过或经由T淋巴细胞(经由PD-L2来介导信号传导)上表达的细胞表面蛋白来介导的负性共刺激信号，从而使功能障碍的T细胞变得较不功能障碍(例如提高效应子对抗原识别的响应)。在一些实施方案中，PD-L2结合拮抗剂为免疫粘合素。
治疗剂的“固定”或“平坦”剂量在本申请中是指给药于人类患者而不论所述患者的体重(WT)或体表面积(BSA)的剂量。因此，固定或平坦剂量不以mg/kg剂量或mg/m2剂量形式而以治疗剂的绝对量形式提供。
“负荷”剂量在本申请中通常包括治疗剂给药于患者的最初剂量且跟随有一个或多个其维持剂量。通常给药单一负荷剂量，但是多个负荷剂量包括在本申请中。负荷剂量所给药的量通常超过维持剂量所给药的量，和/或负荷剂量与维持剂量相比较频繁地给药，从而与维持剂量可实现治疗剂所需要的稳态浓度相比较早地实现治疗剂所需要的稳态浓度。
“维持”剂量在本申请中是指治疗剂在治疗期中给药于患者的一个或多个剂量。维持剂量通常以分开的治疗间隔例如约每周、约每2周、约每3周或约每4周且优选每3周给药。
“输注”是指出于治疗目的经由静脉将含有药物的溶液引入到身体中。这通常经由静脉(IV)袋来实现。
“静脉袋”或“IV袋”为以下袋子，其可容纳可经由患者的静脉来给药的溶液。在一个实施方案中，所述溶液为盐水溶液(例如约0.9％或约0.45％NaCl)。IV袋任选由聚烯烃或聚氯乙烯形成。
术语“可变区”或“可变域”是指抗体重链或轻链中参与抗体-抗原结合的结构域。天然抗体的重链和轻链中的可变域(分别为VH和VL)通常具有类似的结构，其中每个结构域包含四个保守框架区(FR)和三个高变区(HVR)(参见例如Kindt等人,Kuby Immunology,第6版,W.H.Freeman and Co.,第91页(2007))。单一VH或VL结构域可足以提供抗原结合特异性。另外，与具体抗原结合的抗体可使用来自与所述抗原结合的抗体的VH或VL结构域来分离以分别筛选互补VL或VH结构域库。参见例如Portolano等人,J.Immunol.150:880-887(1993)；Clarkson等人,Nature 352:624-628(1991)。
本申请使用的术语“载体”是指能够使其所关联的另一种核酸得以增长的核酸分子。所述术语包括呈自复制核酸结构形式的载体及引入到已经引入有其的宿主细胞的基因组中的载体。某些载体能够引导其在操作上所关联的核酸进行表达。上述载体在本申请中称为“表达载体”。
“游离半胱氨酸氨基酸”是指已经被工程化到母体抗体中的半胱氨酸氨基酸残基具有巯基官能团(-SH)且不配对成分子内或分子间二硫化物桥。
“接头”、“接头单元”或“接合”意指以下化学部分，其包含使抗体与药物部分共价连接的原子链。
当指明取代基的数目时，术语“一个或多个”是指范围为一个取代基至取代的最大可能数目，即一个氢被取代基代替至所有氢被取代基代替。术语“取代基”表示代替母体分子上的氢原子的原子或原子团。术语“取代”表示所指定的基团带有一个或多个取代基。当任何基团可带有多个取代基且提供各种可能取代基时，所述取代基是独立选择的且无须是相同的。术语“未取代”意指所指定的基团不带有任何取代基。术语“任选取代”意指所指定的基团是未取代的或被一个或多个独立选自可能取代基组群的取代基取代。当指明取代基的数目时，术语“一个或多个”意指一个取代基至取代的最大可能数目，即一个氢被取代基代替至所有氢被取代基代替。
本申请使用的术语“烷基”是指长度为一个至十二个碳原子(C1-C12)的饱和的直链或支链的一价的烃基，其中所述烷基可任选独立取代有一个或多个下述取代基。在另一个实施方案中，烷基具有一个至八个碳原子(C1-C8)或一个至六个碳原子(C1-C6)。烷基的实例包括但不局限于甲基(Me、-CH3)、乙基(Et、-CH2CH3)、1-丙基(n-Pr、正丙基、-CH2CH2CH3)、2-丙基(i-Pr、异丙基、-CH(CH3)2)、1-丁基(n-Bu、正丁基、-CH2CH2CH2CH3)、2-甲基-1-丙基(i-Bu、异丁基、-CH2CH(CH3)2)、2-丁基(s-Bu、仲丁基、-CH(CH3)CH2CH3)、2-甲基-2-丙基(t-Bu、叔丁基、-C(CH3)3)、1-戊基(正戊基、-CH2CH2CH2CH2CH3)、2-戊基(-CH(CH3)CH2CH2CH3)、3-戊基(-CH(CH2CH3)2)、2-甲基-2-丁基(-C(CH3)2CH2CH3)、3-甲基-2-丁基(-CH(CH3)CH(CH3)2)、3-甲基-1-丁基(-CH2CH2CH(CH3)2)、2-甲基-1-丁基(-CH2CH(CH3)CH2CH3)、1-己基(-CH2CH2CH2CH2CH2CH3)、2-己基(-CH(CH3)CH2CH2CH2CH3)、3-己基(-CH(CH2CH3)(CH2CH2CH3))、2-甲基-2-戊基(-C(CH3)2CH2CH2CH3)、3-甲基-2-戊基(-CH(CH3)CH(CH3)CH2CH3)、4-甲基-2-戊基(-CH(CH3)CH2CH(CH3)2)、3-甲基-3-戊基(-C(CH3)(CH2CH3)2)、2-甲基-3-戊基(-CH(CH2CH3)CH(CH3)2)、2,3-二甲基-2-丁基(-C(CH3)2CH(CH3)2)、3,3-二甲基-2-丁基(-CH(CH3)C(CH3)3、1-庚基、1-辛基等。
本申请使用的术语“亚烷基”是指长度为一个至十二个碳原子(C1-C12)的饱和的直链或支链的二价的烃基，其中所述亚烷基可任选独立取代有一个或多个下述取代基。在另一个实施方案中，亚烷基具有一个至八个碳原子(C1-C8)或一个至六个碳原子(C1-C6)。亚烷基的实例包括但不局限于亚甲基(-CH2-)、亚乙基(-CH2CH2-)、亚丙基(-CH2CH2CH2-)等。
术语“烯基”是指长度为两个至八个碳原子(C2-C8)的具有至少一个不饱和位置即碳-碳sp2双键的直链或支链的一价的烃基，其中所述烯基可任选独立取代有一个或多个本申请所描述的取代基且包括具有“顺式”和“反式”取向或“E”和“Z”取向的基团。实例包括但不局限于乙烯基(-CH＝CH2)、烯丙基(-CH2CH＝CH2)等。
术语“亚烯基”是指长度为两个至八个碳原子(C2-C8)的具有至少一个不饱和位置即碳-碳sp2双键的直链或支链的二价的烃基，其中所述亚烯基可任选独立取代有一个或多个本申请所描述的取代基且包括具有“顺式”和“反式”取向或“E”和“Z”取向的基团。实例包括但不局限于亚乙烯基(-CH＝CH-)、亚烯丙基(-CH2CH＝CH-)等。
术语“炔基”是指长度为两个至八个碳原子(C2-C8)的具有至少一个不饱和位置即碳-碳sp叁键的直链或支链的一价的烃基，其中所述炔基可任选独立取代有一个或多个本申请所描述的取代基。实例包括但不局限于乙炔基(-C≡CH)、丙炔基(炔丙基、-CH2C≡CH)等。
术语“亚炔基”是指长度为两个至八个碳原子(C2-C8)的具有至少一个不饱和位置即碳-碳sp叁键的直链或支链的二价的烃基，其中所述亚炔基可任选独立取代有一个或多个本申请所描述的取代基。实例包括但不局限于亚乙炔基(-C≡C-)、亚丙炔基(亚炔丙基、-CH2C≡C-)等。
术语“碳环”、“碳环基”和“环烷基”是指具有3-12个碳原子(C3-C12)呈单环形式或具有7-12个碳原子呈二环形式的一价的非芳族的饱和或部分不饱和的环。具有7至12个原子的二环碳环可排列成例如二环[4,5]、[5,5]、[5,6]或[6,6]系统，而具有9或10个环原子的二环碳环可排列成二环[5,6]或[6,6]系统或桥接系统例如二环[2.2.1]庚烷、二环[2.2.2]辛烷和二环[3.2.2]壬烷。螺环部分也包括在该定义的范围内。单环碳环的实例包括但不局限于环丙基、环丁基、环戊基、1-环戊-1-烯基、1-环戊-2-烯基、1-环戊-3-烯基、环己基、1-环己-1-烯基、1-环己-2-烯基、1-环己-3-烯基、环己二烯基、环庚基、环辛基、环壬基、环癸基、环十一烷基、环十二烷基等。碳环基任选独立取代有一个或多个本申请所描述的取代基。
“芳基”意指具有6-20个碳原子(C6-C20)的通过由母体芳环系统的一个碳原子除去一个氢原子而衍生的一价的芳族的烃基。一些芳基在示例性结构中表示为“Ar”。芳基包括二环基团，其包含与饱和环、部分不饱和环或芳族碳环稠合的芳环。典型的芳基包括但不局限于来源于苯(苯基)、取代的苯、萘、蒽、联苯、茚、茚满、1,2-二氢萘、1,2,3,4-四氢萘等的基团。芳基任选独立取代有一个或多个本申请所描述的取代基。
“亚芳基”意指具有6-20个碳原子(C6-C20)的通过由母体芳环系统的两个碳原子除去两个氢原子而衍生的二价的芳族的烃基。一些亚芳基在示例性结构中表示为“Ar”。亚芳基包括二环基团，其包含与饱和环、部分不饱和环或芳族碳环稠合的芳环。典型的亚芳基包括但不局限于来源于苯(亚苯基)、取代的苯、萘、蒽、联苯、茚、茚满、1,2-二氢萘、1,2,3,4-四氢萘等的基团。亚芳基任选取代有一个或多个本申请所描述的取代基。
术语“杂环”和“杂环基”在本申请中可互换使用且是指具有3至约20个环原子的饱和或部分不饱和(即在环中具有一个或多个双键和/或叁键)的碳环基团，其中至少一个环原子为选自氮、氧、磷和硫的杂原子，其余环原子为C，其中一个或多个环原子任选独立取代有一个或多个下述取代基。杂环可为具有3-7个环成员(2-6个碳原子和1-4个选自N、O、P和S的杂原子)的单环或具有7-10个环成员(4-9个碳原子和1-6个选自N、O、P和S的杂原子)的二环例如二环[4,5]、[5,5]、[5,6]或[6,6]系统。杂环参见Paquette,Leo A.；“Principles ofModern Heterocyclic Chemistry”(W.A.Benjamin,New York,1968)，具体为第1、3、4、6、7和9章；“The Chemistry of Heterocyclic Compounds,A series of Monographs”(JohnWiley&Sons,New York,1950年至今)，具体为第13、14、16、19和28卷；和J.Am.Chem.Soc.(1960)82:5566。“杂环基”还包括以下基团，其中杂环基团与饱和环、部分不饱和环或芳族碳环或杂环稠合。杂环的实例包括但不局限于吗啉-4-基、哌啶-1-基、哌嗪基、哌嗪-4-基-2-酮、哌嗪-4-基-3-酮、吡咯烷-1-基、硫吗啉-4-基、S,S-二氧代硫吗啉-4-基、氮杂环辛烷-1-基、氮杂环丁烷-1-基、八氢吡啶并[1,2-a]吡嗪-2-基、[1,4]二氮杂环庚烷-1-基、吡咯烷基、四氢呋喃基、二氢呋喃基、四氢噻吩基、四氢吡喃基、二氢吡喃基、四氢噻喃基、哌啶子基、吗啉代、硫吗啉代、硫杂氧杂环己基、哌嗪基、高哌嗪基、氮杂环丁烷基、氧杂环丁烷基、硫杂环丁烷基、高哌啶基、氧杂环庚烷基、硫杂环庚烷基、氧杂氮杂
Figure BDA0001680565890000321
基、二氮杂
Figure BDA0001680565890000322
基、硫杂氮杂
Figure BDA0001680565890000323
基、2-吡咯啉基、3-吡咯啉基、吲哚啉基、2H-吡喃基、4H-吡喃基、二氧杂环己烷基、1,3-二氧杂环戊烷基、吡唑啉基、二硫杂环己烷基、二硫杂环戊烷基、二氢吡喃基、二氢噻吩基、二氢呋喃基、吡唑烷基、咪唑啉基、咪唑烷基、3-氮杂二环[3.1.0]己基、3-氮杂二环[4.1.0]庚基、氮杂二环[2.2.2]己基、3H-吲哚基、喹嗪基和N-吡啶基脲。螺环部分也包括在该定义的范围内。其中2个环原子取代有氧代(＝O)部分的杂环基团的实例为嘧啶酮基和1,1-二氧代-硫吗啉基。杂环在本申请中任选独立取代有一个或多个本申请所描述的取代基。
术语“杂芳基”是指呈5、6或7元环形式的一价的芳族基团且包括具有5-20个原子的稠合环系(其中至少一个环是芳族的)，其含有一个或多个独立选自氮、氧和硫的杂原子。杂芳基的实例为吡啶基(包括例如2-羟基吡啶基)、咪唑基、咪唑并吡啶基、1-甲基-1H-苯并[d]咪唑基、[1,2,4]三唑并[1,5-a]吡啶基、嘧啶基(包括例如4-羟基嘧啶基)、吡唑基、三唑基、吡嗪基、四唑基、呋喃基、噻吩基、异噁唑基、噻唑基、噁二唑基、噁唑基、异噻唑基、吡咯基、喹啉基、异喹啉基、四氢异喹啉基、吲哚基、苯并咪唑基、苯并呋喃基、噌啉基、吲唑基、吲嗪基、酞嗪基、哒嗪基、三嗪基、异吲哚基、喋啶基、嘌呤基、噁二唑基、噻二唑基、噻二唑基、呋咱基、苯并呋咱基、苯并噻吩基、苯并噻唑基、苯并噁唑基、喹唑啉基、喹喔啉基、萘啶基和呋喃并吡啶基。杂芳基任选独立取代有一个或多个本申请所描述的取代基。
杂环或杂芳基可经碳(碳连)键合或在可能的情况下经氮(氮连)键合。例如但不局限于此，经碳键合的杂环或杂芳基在以下位置键合：吡啶的2、3、4、5或6位、哒嗪的3、4、5或6位、嘧啶的2、4、5或6位、吡嗪的2、3、5或6位、呋喃、四氢呋喃、噻吩、吡咯或四氢吡咯的2、3、4或5位、噁唑、咪唑或噻唑的2、4或5位、异噁唑、吡唑或异噻唑的3、4或5位、氮丙啶的2或3位、氮杂环丁烷的2、3或4位、喹啉的2、3、4、5、6、7或8位或异喹啉的1、3、4、5、6、7或8位。
例如但不局限于此，经氮键合的杂环或杂芳基在以下位置键合：氮丙啶、氮杂环丁烷、吡咯、吡咯烷、2-吡咯啉、3-吡咯啉、咪唑、咪唑烷、2-咪唑啉、3-咪唑啉、吡唑、吡唑啉、2-吡唑啉、3-吡唑啉、哌啶、哌嗪、吲哚、吲哚啉或1H-吲唑的1位、异吲哚或异吲哚啉的2位、吗啉的4位和咔唑或β-咔啉的9位。
术语“手性”是指具有镜像配对体不可重叠性的分子，而术语“非手性”是指可与其镜像配对体重叠的分子。
术语“立体异构体”是指具有相同的化学组成但就原子或基团的空间排列而言是不同的化合物。
“非对映异构体”是指具有两个或更多个手性中心且其分子不互为镜像的立体异构体。非对映异构体具有不同的物理性质例如熔点、沸点、光谱性质和反应性。非对映异构体的混合物可通过高分辨率分析措施例如电泳和色谱来区分。
“对映异构体”是指化合物的两种立体异构体，其互为不可重叠的镜像。
本申请使用的立体化学定义和规范遵循S.P.Parker,Ed.,McGraw-HillDictionary of Chemical Terms(1984)McGraw-Hill Book Company,New York；和Eliel,E.and Wilen,S.,Stereochemistry of Organic Compounds(1994)John Wiley&Sons,Inc.,New York。多种有机化合物以光学活性形式存在，即它们具有使平面偏振光的平面发生旋转的能力。当描述光学活性化合物时，前缀D和L或R和S用于表示分子围绕其(多个)手性中心的绝对构型。前缀d和l或(+)和(-)用于指定化合物所致平面偏振光旋转的标识，其中(-)或1意指化合物是左旋的。前缀为(+)或d的化合物是右旋的。就所给定的化学结构而言，这些立体异构体是相同的，除了它们互为镜像。具体立体异构体也可称为对映异构体，且上述异构体的混合物通常称为对映异构体混合物。对映异构体的50:50混合物称为外消旋混合物或外消旋体，其可出现在化学反应或方法尚未具有立体选择性或立体特异性的情况下。术语“外消旋混合物”和“外消旋体”是指两种对映异构体物质的等摩尔混合物，其没有光学活性。
本申请使用的短语“药用盐”是指抗体-药物缀合物(ADC)的药用有机或无机盐。示例性盐包括但不局限于硫酸盐、枸橼酸盐、乙酸盐、草酸盐、氯化物、溴化物、碘化物、硝酸盐、硫酸氢盐、磷酸盐、酸式磷酸盐、异烟酸盐、乳酸盐、水杨酸盐、酸式枸橼酸盐、酒石酸盐、油酸盐、鞣酸盐、泛酸盐、酒石酸氢盐、抗坏血酸盐、琥珀酸盐、马来酸盐、龙胆酸盐、富马酸盐、葡萄糖酸、葡萄糖醛酸盐、糖酸盐、甲酸盐、苯甲酸盐、谷氨酸盐、甲磺酸盐、乙磺酸盐、苯磺酸盐、对甲苯磺酸盐和扑酸盐(即1,1’-亚甲基-二(2-羟基-3-萘甲酸盐))。药用盐可涉及包含其它分子例如乙酸根离子、琥珀酸根离子或其它抗衡离子。抗衡离子可为使母体化合物上的电荷得以稳定任何有机或无机部分。另外，药用盐在其结构中可具有多于一个荷电原子。在多个荷电原子为药用盐的部分的情况下可具有多个抗衡离子。因此，药用盐可具有一个或多个荷电原子和/或一个或多个抗衡离子。
以下缩写在本申请中使用且具有所指明的定义：BME为β-巯基乙醇，Boc为N-(叔丁氧基羰基)，cit为瓜氨酸(2-氨基-5-脲基戊酸)，DCC为1,3-二环己基碳二亚胺，DCM为二氯甲烷，DEA为二乙胺，DEAD为偶氮二甲酸二乙酯，DEPC为氰基磷酸二乙酯，DIAD为偶氮二甲酸二异丙酯，DIEA为N,N-二异丙基乙胺，DMA为二甲基乙酰胺，DMAP为4-二甲基氨基吡啶，DME为乙二醇二甲基醚(或1,2-二甲氧基乙烷)，DMF为N,N-二甲基甲酰胺，DMSO为二甲基亚砜，DTT为二硫苏糖醇，EDCI为1-(3-二甲基氨基丙基)-3-乙基碳二亚胺盐酸盐，EEDQ为2-乙氧基-1-乙氧基羰基-1,2-二氢喹啉，ES-MS为电喷雾质谱，EtOAc为乙酸乙酯，Fmoc为N-(9-芴基甲氧基羰基)，gly为甘氨酸，HATU为O-(7-氮杂苯并三唑-1-基)-N,N,N’,N’-四甲基脲鎓六氟磷酸盐，HOBt为1-羟基苯并三唑，HPLC为高压液相色谱，ile为异亮氨酸，lys为赖氨酸，MeCN(CH3CN)为乙腈，MeOH为甲醇，Mtr为4-茴香基二苯基甲基(或4-甲氧基三甲苯基)，NHS为N-羟基琥珀酰亚胺，PBS为磷酸盐缓冲盐水(pH 7)，PEG为聚乙二醇或乙二醇单元(-OCH2CH2-)，Ph为苯基，Pnp为对硝基苯基，MC为6-马来酰亚氨基己酰基，phe为L-苯丙氨酸，PyBrop为溴三吡咯烷子基鏻六氟磷酸盐，SEC为尺寸排阻色谱，Su为琥珀酰亚胺，TFA为三氟乙酸，TLC为薄层色谱，UV为紫外线，且val为缬氨酸。
肿瘤相关抗原：
(1)BMPR1B(骨形态发生蛋白受体-IB型,Genbank登记号:NM_001203)
ten Dijke,P.等人,Science 264(5155):101-104(1994)；Oncogene14(11):1377-1382(1997)；WO2004063362(权利要求2)；WO2003042661(权利要求12)；US2003134790-A1(第38-39页)；WO2002102235(权利要求13；第296页)；WO2003055443(第91-92页)；WO200299122(实施例2；第528-530页)；WO2003029421(权利要求6)；WO2003024392(权利要求2；图112)；WO200298358(权利要求1；第183页)；WO200254940(第100-101页)；WO200259377(第349-350页)；WO200230268(权利要求27；第376页)；WO200148204(实施例；图4)
NP_001194骨形态发生蛋白受体,IB型/pid＝NP_001194.1-
交叉参考：MIM:603248；NP_001194.1；AY065994
(2)E16(LAT1,SLC7A5,Genbank登记号:NM_003486)
Biochem.Biophys.Res.Commun.255(2),283-288(1999)；Nature395(6699):288-291(1998)；Gaugitsch,H.W.等人(1992)J.Biol.Chem.267(16):11267-11273)；WO2004048938(实施例2)；WO2004032842(实施例IV)；WO2003042661(权利要求12)；WO2003016475(权利要求1)；WO200278524(实施例2)；WO200299074(权利要求19；第127-129页)；WO200286443(权利要求27；第222、393页)；WO2003003906(权利要求10；第293页)；WO200264798(权利要求33；第93-95页)；WO200014228(权利要求5；第133-136页)；US2003224454(图3)；WO2003025138(权利要求12；第150页)
NP_003477溶质载体家族7(阳离子氨基酸转运体,y+
系统),成员5/pid＝NP_003477.3-人类
交叉参考：MIM:600182；NP_003477.3；NM_015923；NM_003486_1
(3)STEAP1(前列腺六跨膜上皮抗原,Genbank登记号:NM_012449)
Cancer Res.61(15),5857-5860(2001)；Hubert,R.S.等人(1999)Proc.Natl.Acad.Sci.U.S.A.96(25):14523-14528；WO2004065577(权利要求6)；WO2004027049(图1L)；EP1394274(实施例11)；WO2004016225(权利要求2)；WO2003042661(权利要求12)；US2003157089(实施例5)；US2003185830(实施例5)；US2003064397(图2)；WO200289747(实施例5；第618-619页)；WO2003022995(实施例9；图13A；实施例53；第173页；实施例2；图2A)
NP_036581前列腺六跨膜上皮抗原
交叉参考：MIM:604415；NP_036581.1；NM_012449_1
(4)0772P(CA125,MUC16,Genbank登记号:AF361486)
J.Biol.Chem.276(29):27371-27375(2001)；WO2004045553(权利要求14)；WO200292836(权利要求6；图12)；WO200283866(权利要求15；第116-121页)；US2003124140(实施例16)；US798959
交叉参考：GI:34501467；AAK74120.3；AF361486_1
(5)MPF(MPF,MSLN,SMR,巨核细胞强化因子,间皮素,Genbank登记号:NM_005823)
Yamaguchi,N.等人,Biol.Chem.269(2),805-808(1994)；Proc.Natl.Acad.Sci.U.S.A.96(20):11531-11536(1999)；Proc.Natl.Acad.Sci.U.S.A.93(1):136-140(1996)；J.Biol.Chem.270(37):21984-21990(1995)；WO2003101283(权利要求14)；WO2002102235(权利要求13；第287-288页)；WO2002101075(权利要求4；第308-309页)；WO200271928(第320-321页)；WO9410312(第52-57页)
交叉参考：MIM:601051；NP_005814.2；NM_005823_1
(6)Napi2b(Napi3b,NAPI-3B,NPTIIb,SLC34A2,溶质载体家族34(磷酸钠),成员2,II型钠依赖性磷酸转运蛋白3b,Genbank登记号:NM_006424)
J.Biol.Chem.277(22):19665-19672(2002)；Genomics 62(2):281-284(1999)；Feild,J.A.等人(1999)Biochem.Biophys.Res.Commun.258(3):578-582；WO2004022778(权利要求2)；EP1394274(实施例11)；WO2002102235(权利要求13；第326页)；EP875569(权利要求1；第17-19页)；WO200157188(权利要求20；第329页)；WO2004032842(实施例IV)；WO200175177(权利要求24；第139-140页)
交叉参考：MIM:604217；NP_006415.1；NM_006424_1
(7)Sema 5b(FLJ10372,KIAA1445,Mm.42015,SEMA5B,SEMAG,信号素5b Hlog,sema结构域,七凝血酶敏感素重复序列(1型和1型样),跨膜结构域(TM)和短胞质结构域,(信号素)5B,Genbank登记号:AB040878)
Nagase T.等人(2000)DNA Res.7(2):143-150)；WO2004000997(权利要求1)；WO2003003984(权利要求1)；WO200206339(权利要求1；第50页)；WO200188133(权利要求1；第41-43、48-58页)；WO2003054152(权利要求20)；WO2003101400(权利要求11)
登记：Q9P283；EMBL；AB040878；BAA95969.1.Genew；HGNC:10737
(8)PSCA hlg(2700050C12Rik,C530008O16Rik,RIKEN cDNA2700050C12,RIKENcDNA 2700050C12基因,Genbank登记号:AY358628)
Ross等人(2002)Cancer Res.62:2546-2553；US2003129192(权利要求2)；US2004044180(权利要求12)；US2004044179(权利要求11)；US2003096961(权利要求11)；US2003232056(实施例5)；WO2003105758(权利要求12)；US2003206918(实施例5)；EP1347046(权利要求1)；WO2003025148(权利要求20)
交叉参考：GI:37182378；AAQ88991.1；AY358628_1
(9)ETBR(内皮素B型受体,Genbank登记号:AY275463)
Nakamuta M.等人,Biochem.Biophys.Res.Commun.177,34-39,1991；Ogawa Y.等人,Biochem.Biophys.Res.Commun.178,248-255,1991；Arai H.等人,Jpn.Circ.J.56,1303-1307,1992；Arai H.等人,J.Biol.Chem.268,3463-3470,1993；Sakamoto A.,Yanagisawa M.等人,Biochem.Biophys.Res.Commun.178,656-663,1991；ElshourbagyN.A.等人,J.Biol.Chem.268,3873-3879,1993；Haendler B.等人,J.Cardiovasc.Pharmacol.20,S1-S4,1992；Tsutsumi M.等人,Gene 228,43-49,1999；Strausberg R.L.等人,Proc.Natl.Acad.Sci.U.S.A.99,16899-16903,2002；Bourgeois C.等人,J.Clin.Endocrinol.Metab.82,3116-3123,1997；Okamoto Y.等人,Biol.Chem.272,21589-21596,1997；Verheij J.B.等人,Am.J.Med.Genet.108,223-225,2002；HofstraR.M.W.等人,Eur.J.Hum.Genet.5,180-185,1997；Puffenberger E.G.等人,Cell 79,1257-1266,1994；Attie T.等人,Hum.Mol.Genet.4,2407-2409,1995；Auricchio A.等人,Hum.Mol.Genet.5:351-354,1996；Amiel J.等人,Hum.Mol.Genet.5,355-357,1996；Hofstra R.M.W.等人,Nat.Genet.12,445-447,1996；Svensson P.J.等人,Hum.Genet.103,145-148,1998；Fuchs S.等人,Mol.Med.7,115-124,2001；Pingault V.等人(2002)Hum.Genet.111,198-206；WO2004045516(权利要求1)；WO2004048938(实施例2)；WO2004040000(权利要求151)；WO2003087768(权利要求1)；WO2003016475(权利要求1)；WO2003016475(权利要求1)；WO200261087(图1)；WO2003016494(图6)；WO2003025138(权利要求12；第144页)；WO200198351(权利要求1；第124-125页)；EP522868(权利要求8；图2)；WO200177172(权利要求1；第297-299页)；US2003109676；US6518404(图3)；US5773223(权利要求1a；第31-34栏)；WO2004001004
(10)MSG783(RNF124,假定蛋白FLJ20315,Genbank登记号:NM_017763)
WO2003104275(权利要求1)；WO2004046342(实施例2)；WO2003042661(权利要求12)；WO2003083074(权利要求14；第61页)；WO2003018621(权利要求1)；WO2003024392(权利要求2；图93)；WO200166689(实施例6)
交叉参考：LocusID:54894；NP_060233.2；NM_017763_1
(11)STEAP2(HGNC_8639,IPCA-1,PCANAP1,STAMP1,STEAP2,STMP,前列腺癌相关基因1,前列腺癌相关蛋白1,前列腺六跨膜上皮抗原2,六跨膜前列腺蛋白,Genbank登记号:AF455138)
Lab.Invest.82(11):1573-1582(2002)；WO2003087306；US2003064397(权利要求1；图1)；WO200272596(权利要求13；第54-55页)；WO200172962(权利要求1；图4B)；WO2003104270(权利要求11)；WO2003104270(权利要求16)；US2004005598(权利要求22)；WO2003042661(权利要求12)；US2003060612(权利要求12；图10)；WO200226822(权利要求23；图2)；WO200216429(权利要求12；图10)
交叉参考：GI:22655488；AAN04080.1；AF455138_1
(12)TrpM4(BR22450,FLJ20041,TRPM4,TRPM4B,瞬时型受体电位阳离子通道,亚家族M,成员4,Genbank登记号:NM_017636)
Xu,X.Z.等人,Proc.Natl.Acad.Sci.U.S.A.98(19):10692-10697(2001)；Cell109(3):397-407(2002)；J.Biol.Chem.278(33):30813-30820(2003)；US2003143557(权利要求4)；WO200040614(权利要求14；第100-103页)；WO200210382(权利要求1；图9A)；WO2003042661(权利要求12)；WO200230268(权利要求27；第391页)；US2003219806(权利要求4)；WO200162794(权利要求14；图1A-D)
交叉参考：MIM:606936；NP_060106.2；NM_017636_1
(13)CRIPTO(CR,CR1,CRGF,CRIPTO,TDGF1,畸胎癌源性生长因子,Genbank登记号:NP_003203或NM_003212)
Ciccodicola,A.等人,EMBO J.8(7):1987-1991(1989)；Am.J.Hum.Genet.49(3):555-565(1991)；US2003224411(权利要求1)；WO2003083041(实施例1)；WO2003034984(权利要求12)；WO200288170(权利要求2；第52-53页)；WO2003024392(权利要求2；图58)；WO200216413(权利要求1；第94-95、105页)；WO200222808(权利要求2；图1)；US5854399(实施例2；第17-18栏)；US5792616(图2)
交叉参考：MIM:187395；NP_003203.1；NM_003212_1
(14)CD21(CR2(补体受体2)或C3DR(C3d/爱泼斯坦-巴尔病毒受体)或Hs.73792,Genbank登记号:M26004)
Fujisaku等人(1989)J.Biol.Chem.264(4):2118-2125；Weis J.J.等人,J.Exp.Med.167,1047-1066,1988；Moore M.等人,Proc.Natl.Acad.Sci.U.S.A.84,9194-9198,1987；Barel M.等人,Mol.Immunol.35,1025-1031,1998；Weis J.J.等人,Proc.Natl.Acad.Sci.U.S.A.83,5639-5643,1986；Sinha S.K.等人(1993)J.Immunol.150,5311-5320；WO2004045520(实施例4)；US2004005538(实施例1)；WO2003062401(权利要求9)；WO2004045520(实施例4)；WO9102536(图9.1-9.9)；WO2004020595(权利要求1)
登记：P20023；Q13866；Q14212；EMBL；M26004；AAA35786.1
(15)CD79b(CD79B,CD79β,IGb(免疫球蛋白相关β),B29,Genbank登记号:NM_000626或11038674)
Proc.Natl.Acad.Sci.U.S.A.(2003)100(7):4126-4131；Blood(2002)100(9):3068-3076；Muller等人(1992)Eur.J.Immunol.22(6):1621-1625；WO2004016225(权利要求2,图140)；WO2003087768；US2004101874(权利要求1；第102页)；WO2003062401(权利要求9)；WO200278524(实施例2)；US2002150573(权利要求5；第15页)；US5644033；WO2003048202(权利要求1；第306和309页)；WO99558658；US6534482(权利要求13；图17A/B)；WO200055351(权利要求11；第1145-1146页)
交叉参考：MIM:147245；NP_000617.1；NM_000626_1
(16)FcRH2(IFGP4,IRTA4,SPAP1A(含有磷酸酶锚定蛋白1a的SH2结构域),SPAP1B,SPAP1C,Genbank登记号:NM_030764,AY358130)
Genome Res.13(10):2265-2270(2003)；Immunogenetics 54(2):87-95(2002)；Blood 99(8):2662-2669(2002)；Proc.Natl.Acad.Sci.U.S.A.98(17):9772-9777(2001)；Xu,M.J.等人(2001)Biochem.Biophys.Res.Commun.280(3):768-775；WO2004016225(权利要求2)；WO2003077836；WO200138490(权利要求5；图18D-1-18D-2)；WO2003097803(权利要求12)；WO2003089624(权利要求25)
交叉参考：MIM:606509；NP_110391.2；NM_030764_1
(17)HER2(ErbB2,Genbank登记号:M11730)
Coussens L.等人,Science(1985)230(4730):1132-1139；Yamamoto T.等人,Nature 319,230-234,1986；Semba K.等人,Proc.Natl.Acad.Sci.U.S.A.82,6497-6501,1985；Swiercz J.M.等人,J.Cell Biol.165,869-880,2004；Kuhns J.J.等人,J.Biol.Chem.274,36422-36427,1999；Cho H.-S.等人,Nature 421,756-760,2003；EhsaniA.等人(1993)Genomics 15,426-429；WO2004048938(实施例2)；WO2004027049(图1I)；WO2004009622；WO2003081210；WO2003089904(权利要求9)；WO2003016475(权利要求1)；US2003118592；WO2003008537(权利要求1)；WO2003055439(权利要求29；图1A-B)；WO2003025228(权利要求37；图5C)；WO200222636(实施例13；第95-107页)；WO200212341(权利要求68；图7)；WO200213847(第71-74页)；WO200214503(第114-117页)；WO200153463(权利要求2；第41-46页)；WO200141787(第15页)；WO200044899(权利要求52；图7)；WO200020579(权利要求3；图2)；US5869445(权利要求3；第31-38栏)；WO9630514(权利要求2；第56-61页)；EP1439393(权利要求7)；WO2004043361(权利要求7)；WO2004022709；WO200100244(实施例3；图4)
登记：P04626；EMBL；M11767；AAA35808.1.EMBL；M11761；AAA35808.1
(18)NCA(CEACAM6,Genbank登记号:M18728)
Barnett T.等人,Genomics 3,59-66,1988；Tawaragi Y.等人,Biochem.Biophys.Res.Commun.150,89-96,1988；Strausberg R.L.等人,Proc.Natl.Acad.Sci.U.S.A.99:16899-16903,2002；WO2004063709；EP1439393(权利要求7)；WO2004044178(实施例4)；WO2004031238；WO2003042661(权利要求12)；WO200278524(实施例2)；WO200286443(权利要求27；第427页)；WO200260317(权利要求2)
登记：P40199；Q14920；EMBL；M29541；AAA59915.1.EMBL；M18728
(19)MDP(DPEP1,Genbank登记号:BC017023)
Proc.Natl.Acad.Sci.U.S.A.99(26):16899-16903(2002)；WO2003016475(权利要求1)；WO200264798(权利要求33；第85-87页)；JP05003790(图6-8)；WO9946284(图9)
交叉参考：MIM:179780；AAH17023.1；BC017023_1
(20)IL20Rα(IL20Ra,ZCYTOR7,Genbank登记号:AF184971)
Clark H.F.等人,Genome Res.13,2265-2270,2003；Mungall A.J.等人,Nature425,805-811,2003；Blumberg H.等人,Cell 104,9-19,2001；Dumoutier L.等人,J.Immunol.167,3545-3549,2001；Parrish-Novak J.等人,J.Biol.Chem.277,47517-47523,2002；Pletnev S.等人(2003)Biochemistry 42:12617-12624；Sheikh F.等人(2004)J.Immunol.172,2006-2010；EP1394274(实施例11)；US2004005320(实施例5)；WO2003029262(第74-75页)；WO2003002717(权利要求2；第63页)；WO200222153(第45-47页)；US2002042366(第20-21页)；WO200146261(第57-59页)；WO200146232(第63-65页)；WO9837193(权利要求1；第55-59页)
登记：Q9UHF4；Q6UWA9；Q96SH8；EMBL；AF184971；AAF01320.1
(21)Brevican(BCAN,BEHAB,Genbank登记号:AF229053)
Gary S.C.等人,Gene 256,139-147,2000；Clark H.F.等人,Genome Res.13,2265-2270,2003；Strausberg R.L.等人,Proc.Natl.Acad.Sci.U.S.A.99,16899-16903,2002；US2003186372(权利要求11)；US2003186373(权利要求11)；US2003119131(权利要求1；图52)；US2003119122(权利要求1；图52)；US2003119126(权利要求1)；US2003119121(权利要求1；图52)；US2003119129(权利要求1)；US2003119130(权利要求1)；US2003119128(权利要求1；图52)；US2003119125(权利要求1)；WO2003016475(权利要求1)；WO200202634(权利要求1)
(22)EphB2R(DRT,ERK,Hek5,EPHT3,Tyro5,Genbank登记号:NM_004442)
Chan,J.和Watt,V.M.,Oncogene 6(6),1057-1061(1991)；Oncogene10(5):897-905(1995)；Annu.Rev.Neurosci.21:309-345(1998)；Int.Rev.Cytol.196:177-244(2000)；WO2003042661(权利要求12)；WO200053216(权利要求1；第41页)；WO2004065576(权利要求1)；WO2004020583(权利要求9)；WO2003004529(第128-132页)；WO200053216(权利要求1；第42页)
交叉参考：MIM:600997；NP_004433.2；NM_004442_1
(23)ASLG659(B7h,Genbank登记号:AX092328)
US20040101899(权利要求2)；WO2003104399(权利要求11)；WO2004000221(图3)；US2003165504(权利要求1)；US2003124140(实施例2)；US2003065143(图60)；WO2002102235(权利要求13；第299页)；US2003091580(实施例2)；WO200210187(权利要求6；图10)；WO200194641(权利要求12；图7b)；WO200202624(权利要求13；图1A-1B)；US2002034749(权利要求54；第45-46页)；WO200206317(实施例2；第320-321页；权利要求34；第321-322页)；WO200271928(第468-469页)；WO200202587(实施例1；图1)；WO200140269(实施例3；第190-192页)；WO200036107(实施例2；第205-207页)；WO2004053079(权利要求12)；WO2003004989(权利要求1)；WO200271928(第233-234、452-453页)；WO0116318
(24)PSCA(前列腺干细胞抗原前体,Genbank登记号:AJ297436)
Reiter R.E.等人,Proc.Natl.Acad.Sci.U.S.A.95,1735-1740,1998；Gu Z.等人,Oncogene 19,1288-1296,2000；Biochem.Biophys.Res.Commun.(2000)275(3):783-788；WO2004022709；EP1394274(实施例11)；US2004018553(权利要求17)；WO2003008537(权利要求1)；WO200281646(权利要求1；第164页)；WO2003003906(权利要求10；第288页)；WO200140309(实施例1；图17)；US2001055751(实施例1；图1b)；WO200032752(权利要求18；图1)；WO9851805(权利要求17；第97页)；WO9851824(权利要求10；第94页)；WO9840403(权利要求2；图1B)
登记：O43653；EMBL；AF043498；AAC39607.1
(25)GEDA(Genbank登记号:AY260763)；AAP14954脂肪瘤HMGIC融合配对体样蛋白/pid＝AAP14954.1-人类
物种：人类
WO2003054152(权利要求20)；WO2003000842(权利要求1)；WO2003023013(实施例3；权利要求20)；US2003194704(权利要求45)
交叉参考：GI:30102449；AAP14954.1；AY260763_1
(26)BAFF-R(B细胞活化因子受体,BLyS受体3,BR3,Genbank登记号:AF116456)；BAFF受体/pid＝NP_443177.1-人类
Thompson,J.S.等人,Science 293(5537),2108-2111(2001)；WO2004058309；WO2004011611；WO2003045422(实施例；第32-33页)；WO2003014294(权利要求35；图6B)；WO2003035846(权利要求70；第615-616页)；WO200294852(第136-137栏)；WO200238766(权利要求3；第133页)；WO200224909(实施例3；图3)
交叉参考：MIM:606269；NP_443177.1；NM_052945_1；AF132600
(27)CD22(B细胞受体CD22-B同工型,BL-CAM,Lyb-8,Lyb8,SIGLEC-2,FLJ22814,Genbank登记号:AK026467)
Wilson等人(1991)J.Exp.Med.173:137-146；WO2003072036(权利要求1；图1)
交叉参考：MIM:107266；NP_001762.1；NM_001771_1
(28)CD79a(CD79A,CD79α,免疫球蛋白相关α,一种与Igβ(CD79B)共价相互作用、在表面上与IgM分子形成复合物且转导B细胞分化所涉及的信号的B细胞特异性蛋白,pI:4.84,MW:25028,TM:2[P],基因染色体:19q13.2,Genbank登记号:NP_001774.10)
WO2003088808；US20030228319；WO2003062401(权利要求9)；US2002150573(权利要求4；第13-14页)；WO9958658(权利要求13,图16)；WO9207574(图1)；US5644033；Ha等人(1992)J.Immunol.148(5):1526-1531；Mueller等人(1992)Eur.J.Biochem.22:1621-1625；Hashimoto等人(1994)Immunogenetics 40(4):287-295；Preud’homme等人(1992)Clin.Exp.Immunol.90(1):141-146；Yu等人(1992)J.Immunol.148(2)633-637；Sakaguchi等人(1988)EMBO J.7(11):3457-3464
(29)CXCR5(伯基特淋巴瘤受体1,一种通过CXCL13趋化因子来活化、在淋巴细胞迁移和体液防御中具有功能且在HIV-2感染中和可能在AIDS、淋巴瘤、骨髓瘤和白血病的发展中发挥作用的G蛋白偶联受体；372aa,pI:8.54,MW:41959,TM:7[P],基因染色体:11q23.3,Genbank登记号:NP_001707.1)
WO2004040000；WO2004015426；US2003105292(实施例2)；US6555339(实施例2)；WO200261087(图1)；WO200157188(权利要求20；第269页)；WO200172830(第12-13页)；WO200022129(实施例1；第152-153页；实施例2；第254-256页)；WO9928468(权利要求1；第38页)；US5440021(实施例2；第49-52栏)；WO9428931(第56-58页)；WO9217497(权利要求7；图5)；Dobner等人(1992)Eur.J.Immunol.22:2795-2799；Barella等人(1995)Biochem.J.309:773-779
(30)HLA-DOB(与酞结合且将其呈递至CD4+T淋巴细胞的MHC II类分子的β亚基(Ia抗原)；273aa,pI:6.56,MW:30820,TM:1[P],基因染色体:6p21.3,Genbank登记号:NP_002111.1)
Tonnelle等人(1985)EMBO J.4(11):2839-2847；Jonsson等人(1989)Immunogenetics 29(6):411-413；Beck等人(1992)J.Mol.Biol.228:433-441；Strausberg等人(2002)Proc.Natl.Acad.Sci USA 99:16899-16903；Servenius等人(1987)J.Biol.Chem.262:8759-8766；Beck等人(1996)J.Mol.Biol.255:1-13；Naruse等人(2002)Tissue Antigens 59:512-519；WO9958658(权利要求13；图15)；US6153408(第35-38栏)；US5976551(第168-170栏)；US6011146(第145-146栏)；Kasahara等人(1989)Immunogenetics 30(1):66-68；Larhammar等人(1985)J.Biol.Chem.260(26):14111-14119
(31)P2X5(嘌呤能受体P2X配体门控离子通道5,一种通过细胞外ATP来门控、可参与突触传递和神经发生且其缺乏可促成特发性逼尿肌不稳定病理的离子通道；422aa,pI:7.63,MW:47206,TM:1[P],基因染色体:17p13.3,Genbank登记号:NP_002552.2)
Le等人(1997)FEBS Lett.418(1-2):195-199；WO2004047749；WO2003072035(权利要求10)；Touchman等人(2000)Genome Res.10:165-173；WO200222660(权利要求20)；WO2003093444(权利要求1)；WO2003087768(权利要求1)；WO2003029277(第82页)
(32)CD72(B细胞分化抗原CD72,Lyb-2,完整蛋白质序列maeaity...tafrfpd(1..359；359aa),pI:8.66,MW:40225,TM:1[P],基因染色体:9p13.3,Genbank登记号:NP_001773.1)
WO2004042346(权利要求65)；WO2003026493(第51-52、57-58页)；WO200075655(第105-106页)；Von Hoegen等人(1990)J.Immunol.144(12):4870-4877；Strausberg等人(2002)Proc.Natl.Acad.Sci USA99:16899-16903
(33)LY64(淋巴细胞抗原64(RP105),富亮氨酸重复序列(LRR)家族I型膜蛋白,调节B细胞活化和细胞凋亡且功能缺失与系统性红斑狼疮患者中的疾病活性提高相关；661aa,pI:6.20,MW:74147,TM:1[P],基因染色体:5q12,Genbank登记号:NP_005573.1)
US2002193567；WO9707198(权利要求11；第39-42页)；Miura等人(1996)Genomics38(3):299-304；Miura等人(1998)Blood 92:2815-2822；WO2003083047；WO9744452(权利要求8；第57-61页)；WO200012130(第24-26页)
(34)FcRH1(Fc受体样蛋白1,一种针对免疫球蛋白Fc结构域、含有C2型Ig样和ITAM结构域且可在B淋巴细胞分化中发挥作用的推定受体；429aa,pI:5.28,MW:46925,TM:1[P],基因染色体:1q21-1q22,Genbank登记号:NP_443170.1)
WO2003077836；WO200138490(权利要求6,图18E-1-18-E-2)；Davis等人(2001)Proc.Natl.Acad.Sci USA 98(17):9772-9777；WO2003089624(权利要求8)；EP1347046(权利要求1)；WO2003089624(权利要求7)
(35)IRTA2(免疫球蛋白超家族受体易位相关体2,一种可能在B细胞发展和淋巴瘤发生中发挥作用的推定免疫受体；易位所致基因失调发生在一些B细胞恶性肿瘤中；977aa,pI:6.88,MW:106468TM:1[P],基因染色体:1q21,Genbank登记号:人:AF343662,AF343663,AF343664,AF343665,AF369794,AF397453,AK090423,AK090475,AL834187,AY358085；小鼠:AK089756,AY158090,AY506558；NP_112571.1)
WO2003024392(权利要求2,图97)；Nakayama等人(2000)Biochem.Biophys.Res.Commun.277(1):124-127；WO2003077836；WO200138490(权利要求3,图18B-1-18B-2)
(36)TENB2(TMEFF2,tomoregulin,TPEF,HPP1,TR,推定跨膜蛋白聚糖,与EGF/heregulin家族生长因子和卵泡抑素相关；374aa,NCBI登记:AAD55776,AAF91397,AAG49451,NCBI参考序列:NP_057276；NCBI基因:23671；OMIM:605734；SwissProt Q9UIK5；Genbank登记号:AF179274；AY358907,CAF85723,CQ782436)
WO2004074320(SEQ ID NO:810)；JP2004113151(SEQ ID NO:2,4,8)；WO2003042661(SEQ ID NO:580)；WO2003009814(SEQ ID NO:411)；EP1295944(第69-70页)；WO200230268(第329页)；WO200190304(SEQ ID NO:2706)；US2004249130；US2004022727；WO2004063355；US2004197325；US2003232350；US2004005563；US2003124579；Horie等人(2000)Genomics67:146-152；Uchida等人(1999)Biochem.Biophys.Res.Commun.266:593-602；Liang等人(2000)Cancer Res.60:4907-12；Glynne-Jones等人(2001)Int JCancer.Oct 15；94(2):178-84
(37)PMEL17(silver同系物；SILV；D12S53E；PMEL17；SI；SIL)；ME20；gp100；BC001414；BT007202；M32295；M77348；NM_006928；McGlinchey,R.P.等人(2009)Proc.Natl.Acad.Sci.U.S.A.106(33),13731-13736；Kummer,M.P.等人(2009)J.Biol.Chem.284(4),2296-2306
(38)TMEFF1(具有EGF样和两个卵泡抑素样结构域的跨膜蛋白1；Tomoregulin-1)；H7365；C9orf2；C9ORF2；U19878；X83961；NM_080655；NM_003692；Harms,P.W.(2003)GenesDev.17(21),2624-2629；Gery,S.等人(2003)Oncogene 22(18):2723-2727
(39)GDNF-Ra1(GDNF家族受体α1；GFRA1；GDNFR；GDNFRA；RETL1；TRNR1；RET1L；GDNFR-α1；GFR-ALPHA-1)；U95847；BC014962；NM_145793；NM_005264；Kim,M.H.等人(2009)Mol.Cell.Biol.29(8),2264-2277；Treanor,J.J.等人(1996)Nature 382(6586):80-83
(40)Ly6E(淋巴细胞抗原6复合物,基因座E；Ly67,RIG-E,SCA-2,TSA-1)；NP_002337.1；NM_002346.2；de Nooij-van Dalen,A.G.等人(2003)Int.J.Cancer 103(6),768-774；Zammit,D.J.等人(2002)Mol.Cell.Biol.22(3):946-952；WO2013/17705
(41)TMEM46(shisa同系物2(非洲爪蛙)；SHISA2)；NP_001007539.1；NM_001007538.1；Furushima,K.等人(2007)Dev.Biol.306(2),480-492；Clark,H.F.等人(2003)Genome Res.13(10):2265-2270
(42)Ly6G6D(淋巴细胞抗原6复合物,基因座G6D；Ly6-D,MEGT1)；NP_067079.2；NM_021246.2；Mallya,M.等人(2002)Genomics 80(1):113-123；Ribas,G.等人(1999)J.Immunol.163(1):278-287
(43)LGR5(含有富亮氨酸重复序列的G蛋白偶联受体5；GPR49,GPR67)；NP_003658.1；NM_003667.2；Salanti,G.等人(2009)Am.J.Epidemiol.170(5):537-545；Yamamoto,Y.等人(2003)Hepatology 37(3):528-533
(44)RET(ret原癌基因；MEN2A；HSCR1；MEN2B；MTC1；PTC；CDHF12；Hs.168114；RET51；RET-ELE1)；NP_066124.1；NM_020975.4；Tsukamoto,H.等人(2009)Cancer Sci.100(10):1895-1901；Narita,N.等人(2009)Oncogene28(34):3058-3068
(45)LY6K(淋巴细胞抗原6复合物,基因座K；LY6K；HSJ001348；FLJ35226)；NP_059997.3；NM_017527.3；Ishikawa,N.等人(2007)Cancer Res.67(24):11601-11611；deNooij-van Dalen,A.G.等人(2003)Int.J.Cancer103(6):768-774
(46)GPR19(G蛋白偶联受体19；Mm.4787)；NP_006134.1；NM_006143.2；Montpetit,A.and Sinnett,D.(1999)Hum.Genet.105(1-2):162-164；O’Dowd,B.F.等人(1996)FEBSLett.394(3):325-329
(47)GPR54(KISS1受体；KISS1R；GPR54；HOT7T175；AXOR12)；NP_115940.2；NM_032551.4；Navenot,J.M.等人(2009)Mol.Pharmacol.75(6):1300-1306；Hata,K.等人(2009)Anti癌症Res.29(2):617-623
(48)ASPHD1(含有天冬氨酸β-羟化酶的结构域1；LOC253982)；NP_859069.2；NM_181718.3；Gerhard,D.S.等人(2004)Genome Res.14(10B):2121-2127
(49)酪氨酸酶(TYR；OCAIA；OCA1A；酪氨酸酶；SHEP3)；NP_000363.1；NM_000372.4；Bishop,D.T.等人(2009)Nat.Genet.41(8):920-925；Nan,H.等人(2009)Int.J.Cancer 125(4):909-917
(50)TMEM118(跨膜环指蛋白2；RNFT2；FLJ14627)；NP_001103373.1；NM_001109903.1；Clark,H.F.等人(2003)Genome Res.13(10):2265-2270；Scherer,S.E.等人(2006)Nature 440(7082):346-351
(51)GPR172A(G蛋白偶联受体172A；GPCR41；FLJ11856；D15Ertd747e)；NP_078807.1；NM_024531.3；Ericsson,T.A.等人(2003)Proc.Natl.Acad.Sci.U.S.A.100(11):6759-6764；Takeda,S.等人(2002)FEBS Lett.520(1-3):97-101
(52)CD33,与唾液酸结合的免疫球蛋白样凝集素家族成员,一种67kDa糖基化跨膜蛋白。CD33除定型骨髓单核细胞和红细胞祖细胞外还在大多数髓细胞性和单核细胞性白血病细胞上表达。其在早期多能干细胞、成熟粒细胞、淋巴样细胞或非造血细胞上没有观察到(Sabbath等人(1985)J.Clin.Invest.75:756-56；Andrews等人(1986)Blood 68:1030-5)。CD33在其胞质尾区上含有两个酪氨酸残基，其各自跟随有与在多种抑制性受体中观察到的基于免疫受体酪氨酸的抑制性基序(ITIM)类似的疏水性残基。
(53)CLL-1(CLEC12A,MICL和DCAL2),对C型凝集素/C型凝集素样结构域(CTL/CTLD)超家族成员进行编码。该家族成员分享共同的蛋白质折叠且具有各种功能例如细胞粘附、细胞-细胞信号传导和糖蛋白周转且在炎症和免疫响应中发挥作用。该基因所编码的蛋白质为粒细胞和单核细胞功能的负性调节剂。已经描述了该基因的几种可变剪接的转录变体，但是这些变体中的一些的全长性质尚未确定。该基因与染色体12p13上的天然杀伤基因复合体区域中的其它CTL/CTLD超家族成员紧密关联(Drickamer K(1999)Curr.Opin.Struct.Biol.9(5):585-90；van Rhenen A等人(2007)Blood 110(7):2659-66；Chen CH等人(2006)Blood 107(4):1459-67；Marshall AS等人(2006)Eur.J.Immunol.36(8):2159-69；Bakker AB等人(2005)Cancer Res.64(22):8443-50；Marshall AS等人(2004)J.Biol.Chem.279(15):14792-802)。已经显示CLL-1为II型跨膜受体，其包含单一C型凝集素样结构域(其不被预期与钙或糖结合)、柄区、跨膜结构域和含有ITIM基序的短胞质尾区。
抗CD22抗体
在某些实施方案中，表3A和3B中的ADC中的抗CD22抗体包含三个轻链高变区(HVR-L1、HVR-L2和HVR-L3)及三个重链高变区(HVR-H1、HVR-H2和HVR-H3)，参见US8226945：
HVR-L1：RSSQSIVHSVGNTFLE(SEQ ID NO:1)
HVR-L2：KVSNRFS(SEQ ID NO:2)
HVR-L3：FQGSQFPYT(SEQ ID NO:3)
HVR-H1：GYEFSRSWMN(SEQ ID NO:4)
HVR-H2：GRIYPGDGDTNYSGKFKG(SEQ ID NO:5)
HVR-H3：DGSSWDWYFDV(SEQ ID NO:6)
抗Ly6E抗体
在某些实施方案中，表3A和3B中的ADC包含抗Ly6E抗体。淋巴细胞抗原6复合物基因座E(Ly6E)也称为维甲酸所诱导的基因E(RIG-E)和干细胞抗原2(SCA-2)。其为与GPI关联的长度为131个氨基酸的～8.4kDa的功能未知的不具有已知结合配对体的蛋白质。其最初在小鼠中被鉴定为在未成熟胸腺细胞即胸腺髓上皮细胞中表达的转录物(Mao等人(1996)Proc.Natl.Acad.Sci.U.S.A.93:5910-5914)。在一些实施方案中，本申请提供免疫缀合物，其包含PCT公开文本WO2013/177055描述的抗Ly6E抗体。
在一些实施方案中，本申请提供包含抗Ly6E抗体的抗体-药物缀合物，所述Ly6E抗体包含至少一个、两个、三个、四个、五个或六个选自以下的HVR：(a)含有氨基酸序列SEQ IDNO:12的HVR-H1；(b)含有氨基酸序列SEQ ID NO:13的HVR-H2；(c)含有氨基酸序列SEQ IDNO:14的HVR-H3；(d)含有氨基酸序列SEQ ID NO:9的HVR-L1；(e)含有氨基酸序列SEQ IDNO:10的HVR-L2；和(f)含有氨基酸序列SEQ ID NO:11的HVR-L3。
在一个方面，本申请提供包含抗体的抗体-药物缀合物，所述抗体包含至少一个、至少两个或全部三个选自以下的VH HVR序列：(a)含有氨基酸序列SEQ ID NO:12的HVR-H1；(b)含有氨基酸序列SEQ ID NO:13的HVR-H2；和(c)含有氨基酸序列SEQ ID NO:14的HVR-H3。在另一个实施方案中，所述抗体包含(a)含有氨基酸序列SEQ ID NO:12的HVR-H1；(b)含有氨基酸序列SEQ ID NO:13的HVR-H2；和(c)含有氨基酸序列SEQ ID NO:14的HVR-H3。
在另一个方面，本申请提供包含抗体的抗体-药物缀合物，所述抗体包含至少一个、至少两个或全部三个选自以下的VL HVR序列：(a)含有氨基酸序列SEQ ID NO:9的HVR-L1；(b)含有氨基酸序列SEQ ID NO:10的HVR-L2；和(c)含有氨基酸序列SEQ ID NO:11的HVR-L3。在一个实施方案中，所述抗体包含(a)含有氨基酸序列SEQ ID NO:9的HVR-L1；(b)含有氨基酸序列SEQ ID NO:10的HVR-L2；和(c)含有氨基酸序列SEQ ID NO:11的HVR-L3。
在另一个方面，本申请抗体-药物缀合物包含抗体，所述抗体包含(a)VH结构域，其包含至少一个、至少两个或全部三个选自以下的VH HVR序列：(i)含有氨基酸序列SEQ IDNO:12的HVR-H1；(ii)含有氨基酸序列SEQ ID NO:13的HVR-H2；和(iii)含有氨基酸序列SEQID NO:14的HVR-H3；及(b)VL结构域，其包含至少一个、至少两个或全部三个选自以下的VLHVR序列：(i)含有氨基酸序列SEQ ID NO:9的HVR-L1；(ii)含有氨基酸序列SEQ ID NO:10的HVR-L2；和(iii)含有氨基酸序列SEQ ID NO:11的HVR-L3。
在另一个方面，本申请提供包含抗体的抗体-药物缀合物，所述抗体包含(a)含有氨基酸序列SEQ ID NO:12的HVR-H1；(b)含有氨基酸序列SEQ ID NO:13的HVR-H2；(c)含有氨基酸序列SEQ ID NO:14的HVR-H3；(d)含有氨基酸序列SEQ ID NO:9的HVR-L1；(e)含有氨基酸序列SEQ ID NO:10的HVR-L2；和(f)含有氨基酸序列SEQ ID NO:11的HVR-L3。
在任何上述实施方案中，抗体-药物缀合物中的抗Ly6E抗体是人化的。在一个实施方案中，抗Ly6E抗体包含任何上述实施方案中的HVR且还包含人接纳体框架例如人免疫球蛋白框架或人共有框架。
在另一个方面，抗体-药物缀合物中的抗Ly6E抗体包含与氨基酸序列SEQ ID NO:8具有至少90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％序列同一性的重链可变域(VH)序列。在某些实施方案中，与氨基酸序列SEQ ID NO:8具有至少90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％或99％同一性的VH序列相对于所述参考序列含有取代(例如保守取代)、插入或缺失，但是包含该序列的抗Ly6E抗体保留与Ly6E结合的能力。在某些实施方案中，SEQ ID NO:8中总共1-10个氨基酸已经被取代、插入和/或缺失。在某些实施方案中，SEQ ID NO:8中总共1-5个氨基酸已经被取代、插入和/或缺失。在某些实施方案中，取代、插入或缺失发生在处于HVR外(即FR中)的区域。任选地，抗Ly6E抗体包含SEQ IDNO:8的VH序列，包括该序列的翻译后修饰。在具体实施方案中，所述VH包含一个、两个或三个选自以下的HVR：(a)含有氨基酸序列SEQ ID NO:12的HVR-H1；(b)含有氨基酸序列SEQ IDNO:13的HVR-H2；和(c)含有氨基酸序列SEQ ID NO:14的HVR-H3。
在另一个方面，提供抗体-药物缀合物中的抗Ly6E抗体，其中所述抗体包含与氨基酸序列SEQ ID NO:7具有至少90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％序列同一性的轻链可变域(VL)。在某些实施方案中，与氨基酸序列SEQ ID NO:7具有至少90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％或99％同一性的VL序列相对于所述参考序列含有取代(例如保守取代)、插入或缺失，但是包含该序列的抗Ly6E抗体保留与Ly6E结合的能力。在某些实施方案中，SEQ ID NO:7中总共1-10个氨基酸已经被取代、插入和/或缺失。在某些实施方案中，SEQ ID NO:7中总共1-5个氨基酸已经被取代、插入和/或缺失。在某些实施方案中，取代、插入或缺失发生在处于HVR外(即FR中)的区域。任选地，抗Ly6E抗体包含SEQ ID NO:7的VL序列，包括该序列的翻译后修饰。在具体实施方案中，所述VL包含一个、两个或三个选自以下的HVR：(a)含有氨基酸序列SEQ ID NO:9的HVR-L1；(b)含有氨基酸序列SEQ ID NO:10的HVR-L2；和(c)含有氨基酸序列SEQ ID NO:11的HVR-L3。
在另一个方面，提供包含抗Ly6E抗体的抗体-药物缀合物，其中所述抗体包含任何上述实施方案中的VH和任何上述实施方案中的VL。
在一个实施方案中，提供抗体-药物缀合物，其中所述抗体包含分别为SEQ ID NO:8和SEQ ID NO:7的VH和VL序列，包括这些序列的翻译后修饰。
在另一个方面，本申请提供包含抗体的抗体-药物缀合物，所述抗体结合于与本申请提供的抗Ly6E抗体相同的表位。例如，在某些实施方案中，提供包含抗体的免疫缀合物，所述抗体结合于与包含分别为SEQ ID NO:8的VH序列和SEQ ID NO:7的VL序列的抗Ly6E抗体相同的表位。
在本申请另一个方面，任何上述实施方案的抗体-药物缀合物中的抗Ly6E抗体为单克隆抗体，包括人抗体。在一个实施方案中，抗体-药物缀合物中的抗Ly6E抗体为抗体片段例如Fv、Fab、Fab’、scFv、双特异性抗体或F(ab’)2片段。在另一个实施方案中，所述抗体为基本上全长抗体例如IgG1抗体、IgG2a抗体或本申请定义的其它抗体类别或同种型。在一些实施方案中，免疫缀合物(ADC)包含抗Ly6E抗体，其所包含的重链和轻链包含分别为SEQID NO:16和15的氨基酸序列。
Ly6E抗体序列表格
Figure BDA0001680565890000511
Figure BDA0001680565890000521
Figure BDA0001680565890000531
抗HER2抗体
在某些实施方案中，表3A和3B中的ADC包含抗HER2抗体。在本申请一个实施方案中，本申请ADC中的抗HER2抗体包含人化抗HER2抗体例如US5821337的表3描述的huMAb4D5-1、huMAb4D5-2、huMAb4D5-3、huMAb4D5-4、huMAb4D5-5、huMAb4D5-6、huMAb4D5-7和huMAb4D5-8，将其具体引入到本申请中作为参考。这些抗体含有人框架区，其具有与HER2结合的鼠抗体(4D5)的互补决定区。人化抗体huMAb4D5-8也称为曲妥珠单抗，其以
Figure BDA0001680565890000532
商品名市售。在本申请另一个实施方案中，本申请ADC中的抗HER2抗体包含人化抗HER2抗体例如US7862817描述的人化2C4。示例性人化2C4抗体为帕妥珠单抗，其以商品名
Figure BDA0001680565890000533
市售。
在本申请另一个实施方案中，本申请ADC中的抗HER2抗体包含人化7C2抗HER2抗体。人化7C2抗体为抗HER2抗体。
在一些实施方案中，本申请提供包含抗HER2抗体的抗体-药物缀合物，所述抗HER2抗体包含至少一个、两个、三个、四个、五个或六个选自以下的HVR：(a)含有氨基酸序列SEQID NO:22的HVR-H1；(b)含有氨基酸序列SEQ ID NO:23、27或28的HVR-H2；(c)含有氨基酸序列SEQ ID NO:24或29的HVR-H3；(d)含有氨基酸序列SEQ ID NO:19的HVR-L1；(e)含有氨基酸序列SEQ ID NO:20的HVR-L2；和(f)含有氨基酸序列SEQ ID NO:21的HVR-L3。在一些实施方案中，本申请提供包含抗HER2抗体的抗体-药物缀合物，所述抗HER2抗体包含至少一个、两个、三个、四个、五个或六个选自以下的HVR：(a)含有氨基酸序列SEQ ID NO:22的HVR-H1；(b)含有氨基酸序列SEQ ID NO:23的HVR-H2；(c)含有氨基酸序列SEQ ID NO:24的HVR-H3；(d)含有氨基酸序列SEQ ID NO:19的HVR-L1；(e)含有氨基酸序列SEQ ID NO:20的HVR-L2；和(f)含有氨基酸序列SEQ ID NO:21的HVR-L3。
在一个方面，本申请提供包含抗体的抗体-药物缀合物，所述抗体包含至少一个、至少两个或全部三个选自以下的VH HVR序列：(a)含有氨基酸序列SEQ ID NO:22的HVR-H1；(b)含有氨基酸序列SEQ ID NO:23、27或28的HVR-H2；和(c)含有氨基酸序列SEQ ID NO:24或29的HVR-H3。在一个方面，本申请提供包含抗体的免疫缀合物，所述抗体包含至少一个、至少两个或全部三个选自以下的VH HVR序列：(a)含有氨基酸序列SEQ ID NO:22的HVR-H1；(b)含有氨基酸序列SEQ ID NO:23的HVR-H2；和(c)含有氨基酸序列SEQ ID NO:24的HVR-H3。在另一个实施方案中，所述抗体包含(a)含有氨基酸序列SEQ ID NO:22的HVR-H1；(b)含有氨基酸序列SEQ ID NO:23、27或28的HVR-H2；和(c)含有氨基酸序列SEQ ID NO:24或29的HVR-H3。在另一个实施方案中，所述抗体包含(a)含有氨基酸序列SEQ ID NO:22的HVR-H1；(b)含有氨基酸序列SEQ ID NO:23的HVR-H2；和(c)含有氨基酸序列SEQ ID NO:24的HVR-H3。
在另一个方面，本申请提供包含抗体的抗体-药物缀合物，所述抗体包含至少一个、至少两个或全部三个选自以下的VL HVR序列：(a)含有氨基酸序列SEQ ID NO:19的HVR-L1；(b)含有氨基酸序列SEQ ID NO:20的HVR-L2；和(c)含有氨基酸序列SEQ ID NO:21的HVR-L3。在一个实施方案中，所述抗体包含(a)含有氨基酸序列SEQ ID NO:19的HVR-L1；(b)含有氨基酸序列SEQ ID NO:20的HVR-L2；和(c)含有氨基酸序列SEQ ID NO:21的HVR-L3。
在另一个方面，本申请抗体-药物缀合物包含抗体，所述抗体包含(a)VH结构域，其包含至少一个、至少两个或全部三个选自以下的VH HVR序列：(i)含有氨基酸序列SEQ IDNO:22的HVR-H1；(ii)含有氨基酸序列SEQ ID NO:23、27或28的HVR-H2；和(iii)含有氨基酸序列SEQ ID NO:24或29的HVR-H3；及(b)VL结构域，其包含至少一个、至少两个或全部三个选自以下的VL HVR序列：(i)含有氨基酸序列SEQ ID NO:19的HVR-L1；(ii)含有氨基酸序列SEQ ID NO:20的HVR-L2；和(iii)含有氨基酸序列SEQ ID NO:21的HVR-L3。在另一个方面，本申请抗体-药物缀合物包含抗体，所述抗体包含(a)VH结构域，其包含至少一个、至少两个或全部三个选自以下的VH HVR序列：(i)含有氨基酸序列SEQ ID NO:22的HVR-H1；(ii)含有氨基酸序列SEQ ID NO:23的HVR-H2；和(iii)含有氨基酸序列SEQ ID NO:24的HVR-H3；及(b)VL结构域，其包含至少一个、至少两个或全部三个选自以下的VL HVR序列：(i)含有氨基酸序列SEQ ID NO:19的HVR-L1；(ii)含有氨基酸序列SEQ ID NO:20的HVR-L2；和(c)含有氨基酸序列SEQ ID NO:21的HVR-L3。
在另一个方面，本申请提供包含抗体的抗体-药物缀合物，所述抗体包含(a)含有氨基酸序列SEQ ID NO:22的HVR-H1；(b)含有氨基酸序列SEQ ID NO:23、27或28的HVR-H2；(c)含有氨基酸序列SEQ ID NO:24或29的HVR-H3；(d)含有氨基酸序列SEQ ID NO:19的HVR-L1；(e)含有氨基酸序列SEQ ID NO:20的HVR-L2；和(f)含有氨基酸序列SEQ ID NO:21的HVR-L3。在另一个方面，本申请提供包含抗体的抗体-药物缀合物，所述抗体包含(a)含有氨基酸序列SEQ ID NO:22的HVR-H1；(b)含有氨基酸序列SEQ ID NO:23的HVR-H2；(c)含有氨基酸序列SEQ ID NO:24的HVR-H3；(d)含有氨基酸序列SEQ ID NO:19的HVR-L1；(e)含有氨基酸序列SEQ ID NO:20的HVR-L2；和(f)含有氨基酸序列SEQ ID NO:21的HVR-L3。
在任何上述实施方案中，抗体-药物缀合物中的抗HER2抗体是人化的。在一个实施方案中，抗体-药物缀合物中的抗HER2抗体包含任何上述实施方案中的HVR且还包含人接纳体框架例如人免疫球蛋白框架或人共有框架。
在另一个方面，抗体-药物缀合物中的抗HER2抗体包含与氨基酸序列SEQ ID NO:18具有至少90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％序列同一性的重链可变域(VH)序列。在某些实施方案中，与氨基酸序列SEQ ID NO:18具有至少90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％或99％同一性的VH序列相对于所述参考序列含有取代(例如保守取代)、插入或缺失，但是包含该序列的抗HER2抗体保留与HER2结合的能力。在某些实施方案中，SEQ ID NO:18中总共1-10个氨基酸已经被取代、插入和/或缺失。在某些实施方案中，SEQ ID NO:18中总共1-5个氨基酸已经被取代、插入和/或缺失。在某些实施方案中，取代、插入或缺失发生在处于HVR外(即FR中)的区域。任选地，抗HER2抗体包含SEQ ID NO:18的VH序列，包括该序列的翻译后修饰。在具体实施方案中，所述VH包含一个、两个或三个选自以下的HVR：(a)含有氨基酸序列SEQ ID NO:22的HVR-H1,(b)含有氨基酸序列SEQ ID NO:23的HVR-H2；和(c)含有氨基酸序列SEQ ID NO:24的HVR-H3。
在另一个方面，提供抗体-药物缀合物中的抗HER2抗体，其中所述抗体包含与氨基酸序列SEQ ID NO:17具有至少90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％序列同一性的轻链可变域(VL)。在某些实施方案中，与氨基酸序列SEQ ID NO:17具有至少90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％或99％同一性的VL序列相对于所述参考序列含有取代(例如保守取代)、插入或缺失，但是包含该序列的抗HER2抗体保留与HER2结合的能力。在某些实施方案中，SEQ ID NO:17中总共1-10个氨基酸已经被取代、插入和/或缺失。在某些实施方案中，SEQ ID NO:17中总共1-5个氨基酸已经被取代、插入和/或缺失。在某些实施方案中，取代、插入或缺失发生在处于HVR外(即FR中)的区域。任选地，抗HER2抗体包含SEQ ID NO:17的VL序列，包括该序列的翻译后修饰。在具体实施方案中，所述VL包含一个、两个或三个选自以下的HVR：(a)含有氨基酸序列SEQ ID NO:19的HVR-L1；(b)含有氨基酸序列SEQ ID NO:20的HVR-L2；和(c)含有氨基酸序列SEQ ID NO:21的HVR-L3。
在另一个方面，提供包含抗HER2抗体的抗体-药物缀合物，其中所述抗体包含任何上述实施方案中的VH和任何上述实施方案中的VL。
在一个实施方案中，提供包含抗体的抗体-药物缀合物，其中所述抗体包含分别为SEQ ID NO:18和SEQ ID NO:17的VH和VL序列，包括这些序列的翻译后修饰。
在一个实施方案中，提供包含抗体的抗体-药物缀合物，其中所述抗体包含SEQ IDNO:30的人化7C2.v2.2.LA(hu7C2)K149Cκ轻链序列。
在一个实施方案中，提供包含抗体的抗体-药物缀合物，其中所述抗体包含SEQ IDNO:31的Hu7C2A118C IgG1重链序列。
在另一个方面，本申请提供包含抗体的抗体-药物缀合物，所述抗体结合于与本申请提供的抗HER2抗体相同的表位。例如，在某些实施方案中，提供包含抗体的免疫缀合物，所述抗体结合于与包含分别为SEQ ID NO:18的VH序列和SEQ ID NO:17的VL序列的抗HER2抗体相同的表位。
在本申请另一个方面，任何上述实施方案的抗体-药物缀合物中的抗HER2抗体为单克隆抗体，包括人抗体。在一个实施方案中，免疫缀合物中的抗HER2抗体为抗体片段例如Fv、Fab、Fab’、scFv、双特异性抗体或F(ab’)2片段。在另一个实施方案中，免疫缀合物包含抗体，所述抗体为基本上全长抗体例如IgG1抗体、IgG2a抗体或本申请定义的其它抗体类别或同种型。
人化7C2抗HER2抗体序列表格
Figure BDA0001680565890000571
Figure BDA0001680565890000581
Figure BDA0001680565890000591
Figure BDA0001680565890000601
抗MUC16抗体
在某些实施方案中，表3A和3B中的ADC包含抗MUC16抗体。
在一些实施方案中，本申请提供包含抗MUC16抗体的抗体-药物缀合物，所述抗MUC16抗体包含至少一个、两个、三个、四个、五个或六个选自以下的HVR：(a)含有氨基酸序列SEQ ID NO:35的HVR-H1；(b)含有氨基酸序列SEQ ID NO:36的HVR-H2；(c)含有氨基酸序列SEQ ID NO:37的HVR-H3；(d)含有氨基酸序列SEQ ID NO:32的HVR-L1；(e)含有氨基酸序列SEQ ID NO:33的HVR-L2；和(f)含有氨基酸序列SEQ ID NO:34的HVR-L3。
在一个方面，本申请提供包含抗体的抗体-药物缀合物，所述抗体包含至少一个、至少两个或全部三个选自以下的VH HVR序列：(a)含有氨基酸序列SEQ ID NO:35的HVR-H1；(b)含有氨基酸序列SEQ ID NO:36的HVR-H2；(c)含有氨基酸序列SEQ ID NO:37的HVR-H3。在另一个实施方案中，所述抗体包含(a)含有氨基酸序列SEQ ID NO:35的HVR-H1；(b)含有氨基酸序列SEQ ID NO:36的HVR-H2；(c)含有氨基酸序列SEQ ID NO:37的HVR-H3。
在另一个方面，本申请提供包含抗体的抗体-药物缀合物，所述抗体包含至少一个、至少两个或全部三个选自以下的VL HVR序列：(a)含有氨基酸序列SEQ ID NO:32的HVR-L1；(b)含有氨基酸序列SEQ ID NO:33的HVR-L2；和(c)含有氨基酸序列SEQ ID NO:34的HVR-L3。在一个实施方案中，所述抗体包含(a)含有氨基酸序列SEQ ID NO:32的HVR-L1；(b)含有氨基酸序列SEQ ID NO:33的HVR-L2；和(c)含有氨基酸序列SEQ ID NO:34的HVR-L3。
在另一个方面，本申请抗体-药物缀合物包含抗体，所述抗体包含(a)VH结构域，其包含至少一个、至少两个或全部三个选自以下的VH HVR序列：(i)含有氨基酸序列SEQ IDNO:35的HVR-H1；(ii)含有氨基酸序列SEQ ID NO:36的HVR-H2；和(iii)含有氨基酸序列SEQID NO:37的HVR-H3；及(b)VL结构域，其包含至少一个、至少两个或全部三个选自以下的VLHVR序列：(i)含有氨基酸序列SEQ ID NO:32的HVR-L1；(ii)含有氨基酸序列SEQ ID NO:33的HVR-L2；和(iii)含有氨基酸序列SEQ ID NO:34的HVR-L3。
在另一个方面，本申请提供包含抗体的抗体-药物缀合物，所述抗体包含(a)含有氨基酸序列SEQ ID NO:35的HVR-H1；(b)含有氨基酸序列SEQ ID NO:36的HVR-H2；(c)含有氨基酸序列SEQ ID NO:37的HVR-H3；(d)含有氨基酸序列SEQ ID NO:32的HVR-L1；(e)含有氨基酸序列SEQ ID NO:33的HVR-L2；和(f)含有氨基酸序列SEQ ID NO:34的HVR-L3。
在任何上述实施方案中，抗体-药物缀合物中的抗MUC16抗体是人化的。在一个实施方案中，抗MUC16抗体包含任何上述实施方案中的HVR且还包含人接纳体框架例如人免疫球蛋白框架或人共有框架。
在另一个方面，抗体-药物缀合物中的抗MUC16抗体包含与氨基酸序列SEQ ID NO:39具有至少90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％序列同一性的重链可变域(VH)序列。在某些实施方案中，与氨基酸序列SEQ ID NO:39具有至少90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％或99％同一性的VH序列相对于所述参考序列含有取代(例如保守取代)、插入或缺失，但是包含该序列的抗MUC16抗体保留与MUC16结合的能力。在某些实施方案中，SEQ ID NO:39中总共1-10个氨基酸已经被取代、插入和/或缺失。在某些实施方案中，SEQ ID NO:39中总共1-5个氨基酸已经被取代、插入和/或缺失。在某些实施方案中，取代、插入或缺失发生在处于HVR外(即FR中)的区域。任选地，抗MUC16抗体包含SEQ ID NO:39的VH序列，包括该序列的翻译后修饰。在具体实施方案中，所述VH包含一个、两个或三个选自以下的HVR：(a)含有氨基酸序列SEQ ID NO:35的HVR-H1；(b)含有氨基酸序列SEQ ID NO:36的HVR-H2；和(c)含有氨基酸序列SEQ ID NO:37的HVR-H3。
在另一个方面，提供抗体-药物缀合物中的抗MUC16抗体，其中所述抗体包含与氨基酸序列SEQ ID NO:38具有至少90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％序列同一性的轻链可变域(VL)。在某些实施方案中，与氨基酸序列SEQ ID NO:38具有至少90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％或99％同一性的VL序列相对于所述参考序列含有取代(例如保守取代)、插入或缺失，但是包含该序列的抗MUC16抗体保留与MUC16结合的能力。在某些实施方案中，SEQ ID NO:38中总共1-10个氨基酸已经被取代、插入和/或缺失。在某些实施方案中，SEQ ID NO:38中总共1-5个氨基酸已经被取代、插入和/或缺失。在某些实施方案中，取代、插入或缺失发生在处于HVR外(即FR中)的区域。任选地，抗MUC16抗体包含SEQ ID NO:38的VL序列，包括该序列的翻译后修饰。在具体实施方案中，所述VL包含一个、两个或三个选自以下的HVR：(a)含有氨基酸序列SEQ ID NO:32的HVR-L1；(b)含有氨基酸序列SEQ ID NO:33的HVR-L2；和(c)含有氨基酸序列SEQ ID NO:34的HVR-L3。
在另一个方面，提供包含抗MUC16抗体的抗体-药物缀合物，其中所述抗体包含任何上述实施方案中的VH和任何上述实施方案中的VL。
在一个实施方案中，提供抗体-药物缀合物，其中所述抗体包含分别为SEQ ID NO:39和SEQ ID NO:38的VH和VL序列，包括这些序列的翻译后修饰。
在另一个方面，本申请提供包含抗体的抗体-药物缀合物，所述抗体结合于与本申请提供的抗MUC16抗体相同的表位。例如，在某些实施方案中，提供包含抗体的免疫缀合物，所述抗体结合于与包含分别为SEQ ID NO:39的VH序列和SEQ ID NO:38的VL序列的抗MUC16抗体相同的表位。
在本申请另一个方面，任何上述实施方案的抗体-药物缀合物中的抗MUC16抗体为单克隆抗体，包括人抗体。在一个实施方案中，抗体-药物缀合物中的抗MUC16抗体为抗体片段例如Fv、Fab、Fab’、scFv、双特异性抗体或F(ab’)2片段。在另一个实施方案中，所述抗体为基本上全长抗体例如IgG1抗体、IgG2a抗体或本申请定义的其它抗体类别或同种型。
MUC16抗体序列表格
Figure BDA0001680565890000621
Figure BDA0001680565890000631
抗STEAP-1抗体
在某些实施方案中，表3A和3B中的ADC包含抗STEAP-1抗体。
在一些实施方案中，本申请提供包含抗STEAP-1抗体的抗体-药物缀合物，所述抗STEAP-1抗体包含至少一个、两个、三个、四个、五个或六个选自以下的HVR：(a)含有氨基酸序列SEQ ID NO:40的HVR-H1；(b)含有氨基酸序列SEQ ID NO:41的HVR-H2；(c)含有氨基酸序列SEQ ID NO:42的HVR-H3；(d)含有氨基酸序列SEQ ID NO:43的HVR-L1；(e)含有氨基酸序列SEQ ID NO:44的HVR-L2；和(f)含有氨基酸序列SEQ ID NO:45的HVR-L3。
在一个方面，本申请提供包含抗体的抗体-药物缀合物，所述抗体包含至少一个、至少两个或全部三个选自以下的VH HVR序列：(a)含有氨基酸序列SEQ ID NO:40的HVR-H1；(b)含有氨基酸序列SEQ ID NO:41的HVR-H2；(c)含有氨基酸序列SEQ ID NO:42的HVR-H3。在另一个实施方案中，所述抗体包含(a)含有氨基酸序列SEQ ID NO:40的HVR-H1；(b)含有氨基酸序列SEQ ID NO:41的HVR-H2；(c)含有氨基酸序列SEQ ID NO:42的HVR-H3。
在另一个方面，本申请提供包含抗体的抗体-药物缀合物，所述抗体包含至少一个、至少两个或全部三个选自以下的VL HVR序列：(a)含有氨基酸序列SEQ ID NO:43的HVR-L1；(b)含有氨基酸序列SEQ ID NO:44的HVR-L2；和(c)含有氨基酸序列SEQ ID NO:45的HVR-L3。在一个实施方案中，所述抗体包含(a)含有氨基酸序列SEQ ID NO:43的HVR-L1；(b)含有氨基酸序列SEQ ID NO:44的HVR-L2；和(c)含有氨基酸序列SEQ ID NO:45的HVR-L3。
在另一个方面，本申请抗体-药物缀合物包含抗体，所述抗体包含(a)VH结构域，其包含至少一个、至少两个或全部三个选自以下的VH HVR序列：(i)含有氨基酸序列SEQ IDNO:40的HVR-H1；(ii)含有氨基酸序列SEQ ID NO:41的HVR-H2；和(iii)含有氨基酸序列SEQID NO:42的HVR-H3；及(b)VL结构域，其包含至少一个、至少两个或全部三个选自以下的VLHVR序列：(i)含有氨基酸序列SEQ ID NO:43的HVR-L1；(ii)含有氨基酸序列SEQ ID NO:44的HVR-L2；和(iii)含有氨基酸序列SEQ ID NO:45的HVR-L3。
在另一个方面，本申请提供包含抗体的抗体-药物缀合物，所述抗体包含(a)含有氨基酸序列SEQ ID NO:40的HVR-H1；(b)含有氨基酸序列SEQ ID NO:41的HVR-H2；(c)含有氨基酸序列SEQ ID NO:42的HVR-H3；(d)含有氨基酸序列SEQ ID NO:43的HVR-L1；(e)含有氨基酸序列SEQ ID NO:44的HVR-L2；和(f)含有氨基酸序列SEQ ID NO:45的HVR-L3。
在任何上述实施方案中，抗体-药物缀合物中的抗STEAP-1抗体是人化的。在一个实施方案中，抗STEAP-1抗体包含任何上述实施方案中的HVR且还包含人接纳体框架例如人免疫球蛋白框架或人共有框架。
在另一个方面，抗体-药物缀合物中的抗STEAP-1抗体包含与氨基酸序列SEQ IDNO:46具有至少90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％序列同一性的重链可变域(VH)序列。在某些实施方案中，与氨基酸序列SEQ ID NO:46具有至少90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％或99％同一性的VH序列相对于所述参考序列含有取代(例如保守取代)、插入或缺失，但是包含该序列的抗STEAP-1抗体保留与STEAP-1结合的能力。在某些实施方案中，SEQ ID NO:46中总共1-10个氨基酸已经被取代、插入和/或缺失。在某些实施方案中，SEQ ID NO:46中总共1-5个氨基酸已经被取代、插入和/或缺失。在某些实施方案中，取代、插入或缺失发生在处于HVR外(即FR中)的区域。任选地，抗STEAP-1抗体包含SEQ ID NO:46的VH序列，包括该序列的翻译后修饰。在具体实施方案中，所述VH包含一个、两个或三个选自以下的HVR：(a)含有氨基酸序列SEQ ID NO:40的HVR-H1,(b)含有氨基酸序列SEQ ID NO:41的HVR-H2；和(c)含有氨基酸序列SEQ ID NO:42的HVR-H3。
在另一个方面，提供抗体-药物缀合物中的抗STEAP-1抗体，其中所述抗体包含与氨基酸序列SEQ ID NO:47具有至少90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％序列同一性的轻链可变域(VL)。在某些实施方案中，与氨基酸序列SEQ ID NO:47具有至少90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％或99％同一性的VL序列相对于所述参考序列含有取代(例如保守取代)、插入或缺失，但是包含该序列的抗STEAP-1抗体保留与STEAP-1结合的能力。在某些实施方案中，SEQ ID NO:47中总共1-10个氨基酸已经被取代、插入和/或缺失。在某些实施方案中，SEQ ID NO:47中总共1-5个氨基酸已经被取代、插入和/或缺失。在某些实施方案中，取代、插入或缺失发生在处于HVR外(即FR中)的区域。任选地，抗STEAP-1抗体包含SEQ ID NO:47的VL序列，包括该序列的翻译后修饰。在具体实施方案中，所述VL包含一个、两个或三个选自以下的HVR：(a)含有氨基酸序列SEQ ID NO:43的HVR-L1；(b)含有氨基酸序列SEQ ID NO:44的HVR-L2；和(c)含有氨基酸序列SEQ IDNO:45的HVR-L3。
在另一个方面，提供包含抗STEAP-1抗体的抗体-药物缀合物，其中所述抗体包含任何上述实施方案中的VH和任何上述实施方案中的VL。
在一个实施方案中，提供抗体-药物缀合物，其中所述抗体包含分别为SEQ ID NO:46和SEQ ID NO:47的VH和VL序列，包括这些序列的翻译后修饰。
在另一个方面，本申请提供包含抗体的抗体-药物缀合物，所述抗体结合于与本申请提供的抗STEAP-1抗体相同的表位。例如，在某些实施方案中，提供包含抗体的免疫缀合物，所述抗体结合于与包含分别为SEQ ID NO:46的VH序列和SEQ ID NO:47的VL序列的抗STEAP-1抗体相同的表位。
在本申请另一个方面，任何上述实施方案的抗体-药物缀合物中的抗STEAP-1抗体为单克隆抗体，包括人抗体。在一个实施方案中，抗体-药物缀合物中的抗STEAP-1抗体为抗体片段例如Fv、Fab、Fab’、scFv、双特异性抗体或F(ab’)2片段。在另一个实施方案中，所述抗体为基本上全长抗体例如IgG1抗体、IgG2a抗体或本申请定义的其它抗体类别或同种型。
STEAP抗体序列表格
Figure BDA0001680565890000651
Figure BDA0001680565890000661
抗NaPi2b抗体
在某些实施方案中，表3A和3B中的ADC包含抗NaPi2b抗体。
在一些实施方案中，本申请提供包含抗NaPi2b抗体的抗体-药物缀合物，所述抗NaPi2b抗体包含至少一个、两个、三个、四个、五个或六个选自以下的HVR：(a)含有氨基酸序列SEQ ID NO:48的HVR-H1；(b)含有氨基酸序列SEQ ID NO:49的HVR-H2；(c)含有氨基酸序列SEQ ID NO:50的HVR-H3；(d)含有氨基酸序列SEQ ID NO:51的HVR-L1；(e)含有氨基酸序列SEQ ID NO:52的HVR-L2；和(f)含有氨基酸序列SEQ ID NO:53的HVR-L3。
在一个方面，本申请提供包含抗体的抗体-药物缀合物，所述抗体包含至少一个、至少两个或全部三个选自以下的VH HVR序列：(a)含有氨基酸序列SEQ ID NO:48的HVR-H1；(b)含有氨基酸序列SEQ ID NO:49的HVR-H2；(c)含有氨基酸序列SEQ ID NO:50的HVR-H3。在另一个实施方案中，所述抗体包含(a)含有氨基酸序列SEQ ID NO:48的HVR-H1；(b)含有氨基酸序列SEQ ID NO:49的HVR-H2；(c)含有氨基酸序列SEQ ID NO:50的HVR-H3。
在另一个方面，本申请提供包含抗体的抗体-药物缀合物，所述抗体包含至少一个、至少两个或全部三个选自以下的VL HVR序列：(a)含有氨基酸序列SEQ ID NO:51的HVR-L1；(b)含有氨基酸序列SEQ ID NO:52的HVR-L2；和(c)含有氨基酸序列SEQ ID NO:53的HVR-L3。在一个实施方案中，所述抗体包含(a)含有氨基酸序列SEQ ID NO:51的HVR-L1；(b)含有氨基酸序列SEQ ID NO:52的HVR-L2；和(c)含有氨基酸序列SEQ ID NO:53的HVR-L3。
在另一个方面，本申请抗体-药物缀合物包含抗体，所述抗体包含(a)VH结构域，其包含至少一个、至少两个或全部三个选自以下的VH HVR序列：(i)含有氨基酸序列SEQ IDNO:48的HVR-H1；(ii)含有氨基酸序列SEQ ID NO:49的HVR-H2；和(iii)含有氨基酸序列SEQID NO:50的HVR-H3；及(b)VL结构域，其包含至少一个、至少两个或全部三个选自以下的VLHVR序列：(i)含有氨基酸序列SEQ ID NO:51的HVR-L1；(ii)含有氨基酸序列SEQ ID NO:52的HVR-L2；和(iii)含有氨基酸序列SEQ ID NO:53的HVR-L3。
在另一个方面，本申请提供包含抗体的抗体-药物缀合物，所述抗体包含(a)含有氨基酸序列SEQ ID NO:48的HVR-H1；(b)含有氨基酸序列SEQ ID NO:49的HVR-H2；(c)含有氨基酸序列SEQ ID NO:50的HVR-H3；(d)含有氨基酸序列SEQ ID NO:51的HVR-L1；(e)含有氨基酸序列SEQ ID NO:52的HVR-L2；和(f)含有氨基酸序列SEQ ID NO:53的HVR-L3。
在任何上述实施方案中，抗体-药物缀合物中的抗NaPi2b抗体是人化的。在一个实施方案中，抗NaPi2b抗体包含任何上述实施方案中的HVR且还包含人接纳体框架例如人免疫球蛋白框架或人共有框架。
在另一个方面，抗体-药物缀合物中的抗NaPi2b抗体包含与氨基酸序列SEQ IDNO:54具有至少90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％序列同一性的重链可变域(VH)序列。在某些实施方案中，与氨基酸序列SEQ ID NO:54具有至少90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％或99％同一性的VH序列相对于所述参考序列含有取代(例如保守取代)、插入或缺失，但是包含该序列的抗NaPi2b抗体保留与NaPi2b结合的能力。在某些实施方案中，SEQ ID NO:54中总共1-10个氨基酸已经被取代、插入和/或缺失。在某些实施方案中，SEQ ID NO:54中总共1-5个氨基酸已经被取代、插入和/或缺失。在某些实施方案中，取代、插入或缺失发生在处于HVR外(即FR中)的区域。任选地，抗NaPi2b抗体包含SEQ ID NO:54的VH序列，包括该序列的翻译后修饰。在具体实施方案中，所述VH包含一个、两个或三个选自以下的HVR：(a)含有氨基酸序列SEQ ID NO:48的HVR-H1,(b)含有氨基酸序列SEQ ID NO:49的HVR-H2；和(c)含有氨基酸序列SEQ ID NO:50的HVR-H3。
在另一个方面，提供抗体-药物缀合物中的抗NaPi2b抗体，其中所述抗体包含与氨基酸序列SEQ ID NO:55具有至少90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％序列同一性的轻链可变域(VL)。在某些实施方案中，与氨基酸序列SEQ ID NO:55具有至少90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％或99％同一性的VL序列相对于所述参考序列含有取代(例如保守取代)、插入或缺失，但是包含该序列的抗NaPi2b抗体保留与NaPi2b结合的能力。在某些实施方案中，SEQ ID NO:55中总共1-10个氨基酸已经被取代、插入和/或缺失。在某些实施方案中，SEQ ID NO:55中总共1-5个氨基酸已经被取代、插入和/或缺失。在某些实施方案中，取代、插入或缺失发生在处于HVR外(即FR中)的区域。任选地，抗NaPi2b抗体包含SEQ ID NO:55的VL序列，包括该序列的翻译后修饰。在具体实施方案中，所述VL包含一个、两个或三个选自以下的HVR：(a)含有氨基酸序列SEQ ID NO:51的HVR-L1；(b)含有氨基酸序列SEQ ID NO:52的HVR-L2；和(c)含有氨基酸序列SEQ ID NO:53的HVR-L3。
在另一个方面，提供包含抗NaPi2b抗体的抗体-药物缀合物，其中所述抗体包含任何上述实施方案中的VH和任何上述实施方案中的VL。
在一个实施方案中，提供抗体-药物缀合物，其中所述抗体包含分别为SEQ ID NO:54和SEQ ID NO:55的VH和VL序列，包括这些序列的翻译后修饰。
在另一个方面，本申请提供包含抗体的抗体-药物缀合物，所述抗体结合于与本申请提供的抗NaPi2b抗体相同的表位。例如，在某些实施方案中，提供包含抗体的免疫缀合物，所述抗体结合于与包含分别为SEQ ID NO:54的VH序列和SEQ ID NO:55的VL序列的抗NaPi2b抗体相同的表位。
在本申请另一个方面，任何上述实施方案的抗体-药物缀合物中的抗NaPi2b抗体为单克隆抗体，包括人抗体。在一个实施方案中，抗体-药物缀合物中的抗NaPi2b抗体为抗体片段例如Fv、Fab、Fab’、scFv、双特异性抗体或F(ab’)2片段。在另一个实施方案中，所述抗体为基本上全长抗体例如IgG1抗体、IgG2a抗体或本申请定义的其它抗体类别或同种型。
NaPi2b抗体序列表格
Figure BDA0001680565890000681
Figure BDA0001680565890000691
抗CD79b抗体
在某些实施方案中，表3A和3B中的ADC包含抗CD79b抗体。
在一些实施方案中，本申请提供包含抗CD79b抗体的抗体-药物缀合物，所述抗CD79b抗体包含至少一个、两个、三个、四个、五个或六个选自以下的HVR：(a)含有氨基酸序列SEQ ID NO:58的HVR-H1；(b)含有氨基酸序列SEQ ID NO:59的HVR-H2；(c)含有氨基酸序列SEQ ID NO:60的HVR-H3；(d)含有氨基酸序列SEQ ID NO:61的HVR-L1；(e)含有氨基酸序列SEQ ID NO:62的HVR-L2；和(f)含有氨基酸序列SEQ ID NO:63的HVR-L3。
在一个方面，本申请提供包含抗体的抗体-药物缀合物，所述抗体包含至少一个、至少两个或全部三个选自以下的VH HVR序列：(a)含有氨基酸序列SEQ ID NO:58的HVR-H1；(b)含有氨基酸序列SEQ ID NO:59的HVR-H2；和(c)含有氨基酸序列SEQ ID NO:60的HVR-H3。在另一个实施方案中，所述抗体包含(a)含有氨基酸序列SEQ ID NO:58的HVR-H1；(b)含有氨基酸序列SEQ ID NO:59的HVR-H2；和(c)含有氨基酸序列SEQ ID NO:60的HVR-H3。
在另一个方面，本申请提供包含抗体的抗体-药物缀合物，所述抗体包含至少一个、至少两个或全部三个选自以下的VL HVR序列：(a)含有氨基酸序列SEQ ID NO:61的HVR-L1；(b)含有氨基酸序列SEQ ID NO:62的HVR-L2；和(c)含有氨基酸序列SEQ ID NO:63的HVR-L3。在一个实施方案中，所述抗体包含(a)含有氨基酸序列SEQ ID NO:61的HVR-L1；(b)含有氨基酸序列SEQ ID NO:62的HVR-L2；和(c)含有氨基酸序列SEQ ID NO:63的HVR-L3。
在另一个方面，本申请抗体-药物缀合物包含抗体，所述抗体包含(a)VH结构域，其包含至少一个、至少两个或全部三个选自以下的VH HVR序列：(i)含有氨基酸序列SEQ IDNO:58的HVR-H1；(ii)含有氨基酸序列SEQ ID NO:59的HVR-H2；和(iii)含有氨基酸序列SEQID NO:60的HVR-H3；及(b)VL结构域，其包含至少一个、至少两个或全部三个选自以下的VLHVR序列：(i)含有氨基酸序列SEQ ID NO:61的HVR-L1；(ii)含有氨基酸序列SEQ ID NO:62的HVR-L2；和(iii)含有氨基酸序列SEQ ID NO:63的HVR-L3。
在另一个方面，本申请提供包含抗体的抗体-药物缀合物，所述抗体包含(a)含有氨基酸序列SEQ ID NO:58的HVR-H1；(b)含有氨基酸序列SEQ ID NO:59的HVR-H2；(c)含有氨基酸序列SEQ ID NO:60的HVR-H3；(d)含有氨基酸序列SEQ ID NO:61的HVR-L1；(e)含有氨基酸序列SEQ ID NO:62的HVR-L2；和(f)含有氨基酸序列SEQ ID NO:63的HVR-L3。
在任何上述实施方案中，抗体-药物缀合物中的抗CD79b抗体是人化的。在一个实施方案中，抗CD79b抗体包含任何上述实施方案中的HVR且还包含人接纳体框架例如人免疫球蛋白框架或人共有框架。
在另一个方面，抗体-药物缀合物中的抗CD79b抗体包含与氨基酸序列SEQ ID NO:56具有至少90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％序列同一性的重链可变域(VH)序列。在某些实施方案中，与氨基酸序列SEQ ID NO:56具有至少90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％或99％同一性的VH序列相对于所述参考序列含有取代(例如保守取代)、插入或缺失，但是包含该序列的抗CD79b抗体保留与CD79b结合的能力。在某些实施方案中，SEQ ID NO:56中总共1-10个氨基酸已经被取代、插入和/或缺失。在某些实施方案中，SEQ ID NO:56中总共1-5个氨基酸已经被取代、插入和/或缺失。在某些实施方案中，取代、插入或缺失发生在处于HVR外(即FR中)的区域。任选地，抗CD79b抗体包含SEQ ID NO:8的VH序列，包括该序列的翻译后修饰。在具体实施方案中，所述VH包含一个、两个或三个选自以下的HVR：(a)含有氨基酸序列SEQ ID NO:58的HVR-H1,(b)含有氨基酸序列SEQ ID NO:59的HVR-H2；和(c)含有氨基酸序列SEQ ID NO:60的HVR-H3。
在另一个方面，提供抗体-药物缀合物中的抗CD79b抗体，其中所述抗体包含与氨基酸序列SEQ ID NO:57具有至少90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％序列同一性的轻链可变域(VL)。在某些实施方案中，与氨基酸序列SEQ ID NO:57具有至少90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％或99％同一性的VL序列相对于所述参考序列含有取代(例如保守取代)、插入或缺失，但是包含该序列的抗CD79b抗体保留与CD79b结合的能力。在某些实施方案中，SEQ ID NO:57中总共1-10个氨基酸已经被取代、插入和/或缺失。在某些实施方案中，SEQ ID NO:57中总共1-5个氨基酸已经被取代、插入和/或缺失。在某些实施方案中，取代、插入或缺失发生在处于HVR外(即FR中)的区域。任选地，抗CD79b抗体包含SEQ ID NO:57的VL序列，包括该序列的翻译后修饰。在具体实施方案中，所述VL包含一个、两个或三个选自以下的HVR：(a)含有氨基酸序列SEQ ID NO:61的HVR-L1；(b)含有氨基酸序列SEQ ID NO:62的HVR-L2；和(c)含有氨基酸序列SEQ ID NO:63的HVR-L3。
在另一个方面，提供包含抗CD79b抗体的抗体-药物缀合物，其中所述抗体包含任何上述实施方案中的VH和任何上述实施方案中的VL。
在一个实施方案中，提供抗体-药物缀合物，其中所述抗体包含分别为SEQ ID NO:56和SEQ ID NO:57的VH和VL序列，包括这些序列的翻译后修饰。
在另一个方面，本申请提供包含抗体的抗体-药物缀合物，所述抗体结合于与本申请提供的抗CD79b抗体相同的表位。例如，在某些实施方案中，提供包含抗体的免疫缀合物，所述抗体结合于与包含分别为SEQ ID NO:56的VH序列和SEQ ID NO:57的VL序列的抗CD79b抗体相同的表位。
在本申请另一个方面，任何上述实施方案的抗体-药物缀合物中的抗CD79b抗体为单克隆抗体，包括人抗体。在一个实施方案中，抗体-药物缀合物中的抗CD79b抗体为抗体片段例如Fv、Fab、Fab’、scFv、双特异性抗体或F(ab’)2片段。在另一个实施方案中，所述抗体为基本上全长抗体例如IgG1抗体、IgG2a抗体或本申请定义的其它抗体类别或同种型。
CD79b抗体序列表格
Figure BDA0001680565890000721
抗体亲和力
在某些实施方案中，本申请提供的抗体所具有的解离常数(Kd)为≤1μM、≤100nM、≤50nM、≤10nM、≤5nM、≤1nM、≤0.1nM、≤0.01nM或≤0.001nM且任选为≥10-13M(例如10-8M或更小,例如10-8M至10-13M,例如10-9M至10-13M)。
在一个实施方案中，Kd如下测量：如以下测定所描述的那样用所关注的抗体的Fab版本和其抗原进行经放射性标记的抗原结合测定(RIA)。Fab针对抗原的溶液结合亲和力如下测量：在一系列未经标记的滴定抗原存在下用最小浓度的经(125I)标记的抗原对Fab进行平衡，然后用经抗Fab抗体涂覆的板捕获所结合的抗原(参见例如Chen等人,J.Mol.Biol.293:865-881(1999))。为了确定测定条件，
Figure BDA0001680565890000731
多孔板(ThermoScientific)用5μg/ml捕获用抗Fab抗体(Cappel Labs)/50mM碳酸钠(pH 9.6)涂覆过夜，然后在室温(约23℃)用2％(w/v)牛血清白蛋白/PBS阻断2-5小时。在非吸附板(Nunc#269620)中将100pM或26pM[125I]-抗原与所关注的Fab的系列稀释液混合(例如与Presta等人,Cancer Res.57:4593-4599(1997)中对抗VEGF抗体即Fab-12进行的评价一致)。然后将所关注的Fab孵育过夜；然而，孵育可持续更长时段(例如约65小时)以确保达到平衡。然后将混合物转移到捕获板中以在室温进行孵育(例如1小时)。然后除去溶液，且板用0.1％聚山梨酯20(吐温-
Figure BDA0001680565890000732
)/PBS洗涤8次。当板已经干燥时，加入150μl/孔闪烁剂(MICROSCINT-20TM；Packard)，且在TOPCOUNTTMγ计数器(Packard)上对板进行计数10分钟。选择每种Fab实现小于或等于20％最大结合的浓度用于竞争性结合测定。
根据另一个实施方案，通过表面等离子共振测定在25℃使用带有固定抗原CM5芯片的
Figure BDA0001680565890000733
-2000或
Figure BDA0001680565890000734
-3000(BIAcore,Inc.,Piscataway,NJ)以～10个响应单位(RU)对Kd进行测量。简言之，经羧基甲基化的右旋糖酐生物传感器芯片(CM5,BIACORE,Inc.)根据供应商提供的说明书用N-乙基-N’-(3-二甲基氨基丙基)-碳二亚胺盐酸盐(EDC)和N-羟基琥珀酰亚胺(NHS)活化。抗原用10mM乙酸钠(pH 4.8)稀释至5μg/ml(～0.2μM)，然后以5μl/分钟的流速进行注射以实现偶联蛋白的约10个响应单位(RU)。注射抗原后，注射1M乙醇胺以阻断未反应的基团。为了进行动力学测量，在25℃以约25μl/min的流速注射Fab在具有0.05％聚山梨酯20(吐温-20TM)表面活性剂的PBS(PBST)中的两倍连续稀释液(0.78nM-500nM)。缔合速率(kon)和离解速率(koff)使用简单一对一Langmuir结合模型(
Figure BDA0001680565890000735
评价软件3.2版)通过同时对缔合和离解传感图进行拟合来计算。将平衡解离常数(Kd)计算为比例koff/kon。参见例如Chen等人,J.Mol.Biol.293:865-881(1999)。若上述表面等离子共振测定所给出的缔合速率超过106M-1s-1，则缔合速率可通过使用荧光淬灭技术来确定，所述荧光淬灭技术对20nM抗抗原抗体(Fab形式)在PBS(pH 7.2)中的溶液在25℃在浓度增加的抗原存在下的荧光发射强度的提高或降低(激发＝295nm；发射＝340nm,16nm带通)进行测量，其在光谱仪例如配备有停流的分光光度计(Aviv Instruments)或带有搅拌杯的8000系列SLM-AMINCOTM分光光度计(ThermoSpectronic)中测量。
抗体片段
在某些实施方案中，本申请提供的抗体为抗体片段。抗体片段包括但不局限于Fab、Fab’、Fab’-SH、F(ab’)2、Fv和scFv片段及下述其它片段。关于某些抗体片段的综述参见Hudson等人,Nat.Med.9:129-134(2003)。关于scFv片段的综述参见例如Pluckthün,ThePharmacology of Monoclonal Antibodies,第113卷,Rosenburg和Moore编辑,(Springer-Verlag,New York),第269-315页(1994)；还参见WO93/16185；及美国专利5,571,894和5,587,458。关于包含补救受体结合表位残基且体内半衰期延长的Fab和F(ab’)2片段的论述参见美国专利5,869,046。
双特异性抗体为具有两个抗原结合位点的抗体片段，其可以是二价或双特异性的。参见例如EP404,097；WO1993/01161；Hudson等人,Nat.Med.9:129-134(2003)；和Hollinger等人,Proc.Natl.Acad.Sci.USA90:6444-6448(1993)。三特异性抗体和四特异性抗体也参见Hudson等人,Nat.Med.9:129-134(2003)。
单域抗体为包含抗体的全部或一部分重链可变域或全部或一部分轻链可变域的抗体片段。在某些实施方案中，单域抗体为人单域抗体(Domantis,Inc.,Waltham,MA；参见例如美国专利6,248,516B1)。
抗体片段可通过各种技术来制备，包括但不局限于如本申请所描述的那样对完整抗体进行蛋白水解消化及通过重组宿主细胞(例如大肠杆菌或噬菌体)来产生。
嵌合和人化抗体
在某些实施方案中，本申请提供的抗体为嵌合抗体。某些嵌合抗体参见例如美国专利4,816,567；和Morrison等人,Proc.Natl.Acad.Sci.USA,81:6851-6855(1984))。在一个实例中，嵌合抗体包含非人可变区(例如来源于小鼠、大鼠、仓鼠、兔或非人灵长类动物例如猴的可变区)和人恒定区。在另一个实例中，嵌合抗体为“类别转换”抗体，其中类别或亚类已经由母体抗体的类别或亚类发生变化。嵌合抗体包括其抗原结合片段。
在某些实施方案中，嵌合抗体为人化抗体。通常对非人抗体进行人化以降低对人类的免疫原性同时保持亲本非人抗体的特异性和亲和力。人化抗体通常包含一个或多个可变域，其中HVR例如CDR(或其部分)来源于非人抗体，而FR(或其部分)来源于人抗体序列。人化抗体还将任选包含至少一部分人恒定区。在一些实施方案中，人化抗体中的一些FR残基用来自非人抗体(例如HVR残基所来源的抗体)的相应残基取代以例如恢复或改善抗体特异性或亲和力。
人化抗体和其制备方法例如在Almagro和Fransson,Front.Biosci.13:1619-1633(2008)中综述且进一步参见例如Riechmann等人,Nature332:323-329(1988)；Queen等人,Proc.Nat’l Acad.Sci.USA86:10029-10033(1989)；美国专利5,821,337、7,527,791、6,982,321和7,087,409；Kashmiri等人,Methods 36:25-34(2005)(描述了SDR(a-CDR)移植)；Padlan,Mol.Immunol.28:489-498(1991)(描述了“表面重建”)；Dall’Acqua等人,Methods36:43-60(2005)(描述了“FR改组”)；和Osbourn等人,Methods36:61-68(2005)和Klimka等人,Br.J.Cancer,83:252-260(2000)(描述了用于FR改组的“引导选择”)。
可用于人化的人框架区包括但不局限于：使用“最佳配合”方法来选择的框架区(参见例如Sims等人,J.Immunol.151:2296(1993))；来源于具有轻链或重链可变区具体亚组的人抗体的共有序列的框架区(参见例如Carter等人,Proc.Natl.Acad.Sci.USA,89:4285(1992)；和Presta等人,J.Immunol.,151:2623(1993))；人成熟(体细胞成熟)框架区或人种系框架区(参见例如Almagro和Fransson,Front.Biosci.13:1619-1633(2008))；和来源于FR筛选库的框架区(参见例如Baca等人,J.Biol.Chem.272:10678-10684(1997)；和Rosok等人,J.Biol.Chem.271:22611-22618(1996))。
人抗体
在某些实施方案中，本申请提供的抗体为人抗体。人抗体可使用本领域已知的各种技术来产生。人抗体通常参见van Dijk和van de Winkel,Curr.Opin.Pharmacol.5:368-74(2001)；和Lonberg,Curr.Opin.Immunol.20:450-459(2008)。
人抗体可如下制备：将免疫原给药于转基因动物，所述转基因动物已经被改造以产生完整人抗体或具有响应于抗原刺激的人可变区的完整抗体。上述动物通常含有全部或部分人免疫球蛋白基因座，所述人免疫球蛋白基因座代替内源性免疫球蛋白基因座或存在于染色体外或随机整合到动物的染色体中。内源性免疫球蛋白基因座在上述转基因小鼠中通常已经失活。关于由转基因动物得到人抗体的方法的综述参见Lonberg,Nat.Biotech.23:1117-1125(2005)。还参见例如描述了XENOMOUSETM技术的美国专利6,075,181和6,150,584；描述了
Figure BDA0001680565890000761
技术的美国专利5,770,429；描述了K-M
Figure BDA0001680565890000762
技术的美国专利7,041,870；和描述了
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技术的美国专利申请公开文本US2007/0061900。可对来自由上述动物产生的完整抗体的人可变区进行进一步改造，例如通过与不同的人恒定区组合。
人抗体还可通过基于杂交瘤的方法来制备。已经描述了用于产生人单克隆抗体的人骨髓瘤和小鼠-人杂骨髓瘤细胞系(参见例如Kozbor J.Immunol.,133:3001(1984)；Brodeur等人,Monoclonal Antibody Production Techniques and Applications,第51-63页(Marcel Dekker,Inc.,New York,1987)；和Boerner等人,J.Immunol.,147:86(1991))。经由人B细胞杂交瘤技术而产生的人抗体还参见Li等人,Proc.Natl.Acad.Sci.USA,103:3557-3562(2006)。其它方法包括例如在以下文献中描述的那些方法：美国专利7,189,826(描述了由杂交瘤细胞系产生单克隆人IgM抗体)；和Ni,Xiandai Mianyixue,26(4):265-268(2006)(描述了人-人杂交瘤)。人杂交瘤技术(三源杂交瘤技术)还参见Vollmers和Brandlein,Histology and Histopathology,20(3):927-937(2005)；及Vollmers和Brandlein,Methods and Findings in Experimental andClinical Pharmacology,27(3):185-91(2005)。
人抗体还可如下产生：对从由人类衍生的噬菌体显示库中选择的Fv克隆可变域序列进行分离。上述可变域序列然后可与所需要的人恒定域组合。用于从抗体库中选择人抗体的技术如下所述。
来源于库的抗体
本申请抗体可如下分离：针对具有所需要的一种或多种活性的抗体对组合库进行筛选。例如，用于产生噬菌体显示库和针对具有所需要的结合特征的抗体对上述库进行筛选的各种方法是本领域已知的。上述方法例如在Hoogenboom等人,Methods in MolecularBiology 178:1-37(O’Brien等人编辑,Human Press,Totowa,NJ,2001)中综述且进一步参见例如McCafferty等人,Nature 348:552-554；Clackson等人,Nature 352:624-628(1991)；Marks等人,J.Mol.Biol.222:581-597(1992)；Marks和Bradbury,Methods inMolecular Biology 248:161-175(Lo编辑,Human Press,Totowa,NJ,2003)；Sidhu等人,J.Mol.Biol.338(2):299-310(2004)；Lee等人,J.Mol.Biol.340(5):1073-1093(2004)；Fellouse,Proc.Natl.Acad.Sci.USA101(34):12467-12472(2004)；和Lee等人,J.Immunol.Methods284(1-2):119-132(2004)。
在某些噬菌体显示方法中，全套VH和VL基因通过聚合酶链反应(PCR)来分别克隆且在噬菌体库中随机重组，然后可针对与抗原结合的噬菌体对所述噬菌体库进行筛选，其参见Winter等人,Ann.Rev.Immunol.,12:433-455(1994)。噬菌体通常以单链Fv(scFv)片段或Fab片段形式显示抗体片段。来自免疫化来源的库提供对免疫原具有高亲和力的抗体而无需构建杂交瘤。可选择地，可对天然全套(例如来自人类)进行克隆以在不进行任何免疫化的情况下使单一来源的抗体响应于宽范围的非自体和自体抗原，其参见Griffiths等人,EMBO J,12:725-734(1993)。天然库最后还可如下以合成方式建立：对来自干细胞的非重排V基因片段进行克隆且使用含有随机序列的PCR引物以编码高变CDR3区和完成体外重排，其参见Hoogenboom和Winter,J.Mol.Biol.,227:381-388(1992)。描述了人抗体噬菌体库的专利公开文本包括例如美国专利5,750,373及美国专利公开文本2005/0079574、2005/0119455、2005/0266000、2007/0117126、2007/0160598、2007/0237764、2007/0292936和2009/0002360。
从人抗体库中分离的抗体或抗体片段被视为本申请人抗体或人抗体片段。
多特异性抗体
在某些实施方案中，本申请提供的抗体为多特异性抗体例如双特异性抗体。多特异性抗体为对至少两个不同位点具有结合特异性的单克隆抗体。在某些实施方案中，双特异性抗体可与同一靶标的两个不同表位结合。双特异性抗体还可用于将细胞毒性剂定位于表达靶标的细胞。可将双特异性抗体制备成全长抗体或抗体片段形式。
用于制备多特异性抗体的技术包括但不局限于对具有不同特异性的两个免疫球蛋白重链-轻链对进行重组共表达(参见Milstein和Cuello,Nature305:537(1983))；WO93/08829；和Traunecker等人,EMBO J.10:3655(1991))和“杵状结构在臼状结构中”工程化(参见例如美国专利5,731,168)。本申请使用的术语“杵状结构在臼状结构中”或“KnH”技术是指如下在体外或在体内引导两个多肽配对在一起的技术：在它们相互作用的界面将突出物(杵状结构)引入到一个多肽中且将空腔(臼状结构)引入到另一个多肽中。例如，已经在抗体的Fc:Fc结合界面即CL:CH1界面或VH/VL界面引入KnH(参见例如US2011/0287009；US2007/0178552；WO96/027011；WO98/050431；Zhu等人,1997,Protein Science 6:781-788；和WO2012/106587)。在一些实施方案中，KnH在制备多特异性抗体期间驱动两个不同的重链配对在一起。例如，在其Fc区中具有KnH的多特异性抗体可进一步包含与每个Fc区连接的单一可变域或进一步包含与类似或不同的轻链可变域配对的不同重链可变域。KnH技术还可用于将两个不同的受体细胞外结构域配对在一起或将包含不同靶标识别序列的任何其它多肽序列(包括例如亲和体、肽体和其它Fc融合物)配对在一起。
本申请使用的术语“杵状结构突变”是指以下突变，其将突出物(杵状结构)在所述多肽与另一个多肽相互作用的界面引入到所述多肽中。在一些实施方案中，所述另一个多肽具有臼状结构突变。
本申请使用的术语“臼状结构突变”是指以下突变，其将空腔(臼状结构)在所述多肽与另一个多肽相互作用的界面引入到所述多肽中。在一些实施方案中，所述另一个多肽具有杵状结构突变。
以下提供简要非限制性论述。
“突出物”是指至少一个氨基酸侧链，其由第一个多肽的界面突出且由此可定位在处于相邻界面(即第二个多肽的界面)的互补空腔中，从而例如使杂多聚体得以稳定且由此与形成同多聚体相比偏向于形成杂多聚体。突出物可存在于原始界面或可按合成方式引入(例如通过改变对界面进行编码的核酸)。在一些实施方案中，使对第一个多肽的界面进行编码的核酸发生改变以对突出物进行编码。为了使这得以实现，将对处于第一个多肽的界面的至少一个“原始”氨基酸残基进行编码的核酸替换为对与原始氨基酸残基相比具有较大侧链体积的至少一个“输入”氨基酸残基进行编码的核酸。将认识到的是，原始残基和相应的输入残基可多于一个。各种氨基残基的侧链体积显示在例如US2011/0287009的表1中。引入“突出物”的突变可称为“杵状结构突变”。
在一些实施方案中，用于形成突出物的输入残基为天然存在的选自精氨酸(R)、苯丙氨酸(F)、酪氨酸(Y)和色氨酸(W)的氨基酸残基。在一些实施方案中，输入残基为色氨酸或酪氨酸。在一些实施方案中，用于形成突出物的原始残基具有小的侧链体积，例如丙氨酸、天冬酰胺、天冬氨酸、甘氨酸、丝氨酸、苏氨酸或缬氨酸。
“空腔”是指至少一个氨基酸侧链，其由第二个多肽的界面凹陷且由此适应处于第一个多肽的相邻界面的相应突出物。空腔可存在于原始界面或可按合成方式引入(例如通过改变对界面进行编码的核酸)。在一些实施方案中，使对第二个多肽的界面进行编码的核酸发生改变以对空腔进行编码。为了使这得以实现，将对处于第二个多肽的界面的至少一个“原始”氨基酸残基进行编码的核酸替换为对与原始氨基酸残基相比具有较小侧链体积的至少一个“输入”氨基酸残基进行编码的DNA。将认识到的是，原始残基和相应的输入残基可多于一个。在一些实施方案中，用于形成空腔的输入残基为天然存在的选自丙氨酸(A)、丝氨酸(S)、苏氨酸(T)和缬氨酸(V)的氨基酸残基。在一些实施方案中，输入残基为丝氨酸、丙氨酸或苏氨酸。在一些实施方案中，用于形成空腔的原始残基具有大的侧链体积，例如酪氨酸、精氨酸、苯丙氨酸或色氨酸。引入“空腔”的突变可称为“臼状结构突变”。
突出物“可定位”在空腔中，这意指突出物和空腔分别在第一个多肽和第二个多肽的界面的空间定位且突出物和空腔的尺寸使突出物可定位在空腔中而不显著干扰第一个多肽和第二个多肽在界面的正常缔合。由于突出物例如Tyr、Phe和Trp通常不由界面的轴垂直延伸且具有优选的构象，因此突出物与相应空腔的对准在一些情况下可依赖于根据三维结构例如通过X射线晶体学或核磁共振(NMR)而得到的三维结构对突出物/空腔对进行建模。这可使用本领域广泛接受的技术来实现。
在一些实施方案中，IgG1恒定区中的杵状结构突变为T366W(EU编号)。在一些实施方案中，IgG1恒定区中的臼状结构突变包含选自T366S、L368A和Y407V(EU编号)的一个或多个突变。在一些实施方案中，IgG1恒定区中的臼状结构突变包含T366S、L368A和Y407V(EU编号)。
在一些实施方案中，IgG4恒定区中的杵状结构突变为T366W(EU编号)。在一些实施方案中，IgG4恒定区中的臼状结构突变包含选自T366S、L368A和Y407V(EU编号)的一个或多个突变。在一些实施方案中，IgG4恒定区中的臼状结构突变包含T366S、L368A和Y407V(EU编号)。
多特异性抗体还可如下制备：对静电转向作用进行工程化以制备抗体Fc杂二聚体分子(WO2009/089004A1)；对两个或更多个抗体或片段进行交联(参见例如美国专利4,676,980；和Brennan等人,Science,229:81(1985))；使用亮氨酸拉链以产生双特异性抗体(参见例如Kostelny等人,J.Immunol.,148(5):1547-1553(1992))；使用“双特异性抗体”技术以制备双特异性抗体片段(参见例如Hollinger等人,Proc.Natl.Acad.Sci.USA,90:6444-6448(1993))；使用单链Fv(sFv)二聚体(参见例如Gruber等人,J.Immunol.,152:5368(1994))；和如例如Tutt等人,J.Immunol.147:60(1991)所描述的那样制备三特异性抗体。
具有三个或更多个功能性抗原结合位点的工程化抗体(包括“章鱼抗体”)也包括在本申请中(参见例如US2006/0025576A1)。
本申请抗体或片段还包括“双重作用FAb”或“DAF”，其包含与靶标及另一种不同的抗原结合的抗原结合位点(参见例如US2008/0069820)。
抗体变体
在某些实施方案中，本申请涉及本申请提供的抗体的氨基酸序列变体。例如，对抗体的结合亲和力和/或其它生物学性质进行改善可以是合乎需要的。抗体的氨基酸序列变体可如下制备：将合适的改造引入到对抗体进行编码的核苷酸序列中或进行肽合成。上述改造包括例如对抗体的氨基酸序列中的残基进行缺失和/或插入和/或取代。可进行缺失、插入和取代的任何组合以得到最终构建体，条件是最终构建体具有所需要的特征例如抗原结合。
取代、插入和缺失变体
在某些实施方案中，本申请提供具有一个或多个氨基酸取代的抗体变体。就取代诱变而言所关注的位点包括HVR和FR。保守取代在表1中显示在表头“优选的取代”下。更多的取代变化在表1中提供在表头“示例性取代”下且如以下参考氨基酸侧链类别所进一步描述的那样。可将氨基酸取代引入到所关注的抗体中且针对所需要的活性例如保留的/改善的抗原结合、降低的免疫原性或改善的ADCC或CDC对产物进行筛选。
表1
Figure BDA0001680565890000801
Figure BDA0001680565890000811
可根据共同的侧链性质对氨基酸进行分组：
(1)疏水性：正亮氨酸、Met、Ala、Val、Leu、Ile；
(2)中性亲水性：Cys、Ser、Thr、Asn、Gln；
(3)酸性：Asp、Glu；
(4)碱性：His、Lys、Arg；
(5)影响链取向的残基：Gly、Pro；
(6)芳香性：Trp、Tyr、Phe。
非保守取代所要进行的是，将这些类别中的一个类别的成员替换为另一个类别。
一种类型的取代变体涉及对母体抗体(例如人化或人抗体)中的一个或多个高变区残基进行取代。通常，被选择用于进一步研究的所得变体与母体抗体相比将在某些生物学性质方面具有改造(例如改善)(例如提高的亲和力、降低的免疫原性)和/或将基本上保留母体抗体的某些生物学性质。示例性取代变体为亲和力成熟抗体，其可常规产生，例如使用基于噬菌体显示的亲和力成熟技术例如本申请所描述的那些亲和力成熟技术。简言之，使一个或多个HVR残基发生突变且使变体抗体在噬菌体上显示且针对具体生物活性(例如结合亲和力)进行筛选。
变更(例如取代)可在HVR中进行以例如改善抗体亲和力。上述变更可在HVR“热点”即在体细胞成熟过程中高频率地经受突变的密码子所编码的残基(参见例如Chowdhury,Methods Mol.Biol.207:179-196(2008))和/或SDR(a-CDR)中进行，其中针对结合亲和力对所得到的变体VH或VL进行测试。通过从二级库中构建和再选来进行亲和力成熟已经描述在例如Hoogenboom等人,Methods in Molecular Biology 178:1-37(O’Brien等人编辑,Human Press,Totowa,NJ,(2001))中。在亲和力成熟的一些实施方案中，通过各种方法(例如易错PCR、链改组或由寡核苷酸引导的诱变)中的任何一种将多样性引入到针对成熟来选择的可变基因中。然后产生二级库。然后对库进行筛选以鉴定具有所需亲和力的任何抗体变体。用于引入多样性的另一种方法涉及由HVR引导的措施，其中几个HVR残基(例如一次4-6个残基)被随机化。参与抗原结合的HVR残基可例如使用丙氨酸扫描诱变或建模来具体鉴定。具体地，CDR-H3和CDR-L3经常被靶向。
在某些实施方案中，取代、插入或缺失可发生在一个或多个HVR中，只要上述变更不实质上降低抗体与抗原结合的能力。例如，不实质上降低结合亲和力的保守变更(例如本申请提供的保守取代)可在HVR中进行。上述变更可在HVR“热点”或SDR外。在上述变体VH和VL序列的某些实施方案中，每个HVR是未变更的或含有不多于一个、两个或三个氨基酸取代。
可用于对抗体中可被靶向以诱变的残基或区域进行鉴定的方法称为“丙氨酸扫描诱变”，其参见Cunningham和Wells(1989)Science,244:1081-1085。在该方法中，靶标残基中的残基或基团(例如荷电残基例如arg、asp、his、lys和glu)被鉴定且替换为中性或荷负电氨基酸(例如丙氨酸或聚丙氨酸)以确定抗体与抗原的相互作用是否被影响。可在对最初取代显示出功能敏感性的氨基酸位置进行进一步取代。可选择或额外地，抗原-抗体复合物的晶体结构用于鉴定抗体和抗原之间的接触点。上述接触残基和邻近残基作为用于取代的候选对象可被靶向或删除。可对变体进行筛选以确定其是否含有所需要的性质。
氨基酸序列插入包括长度范围为一个残基至含有一百个或更多个残基的多肽的氨基末端和/或羧基末端融合及一个或多个氨基酸残基的序列内插入。末端插入的实例包括具有N末端蛋氨酰残基的抗体。抗体分子的其它插入变体包括抗体的N末端或C末端与酶(例如就ADEPT而言)或多肽的融合，其增加了抗体的血清半衰期。
糖基化变体
在某些实施方案中，对本申请提供的抗体进行更改以提高或降低抗体被糖基化的程度。可通过更改氨基酸序列以形成或除去一个或多个糖基化位点而方便地向抗体中添加糖基化位点或使抗体缺失糖基化位点。
在抗体包含Fc区的情况下，可对与其连接的碳水化合物进行更改。哺乳动物细胞所产生的天然抗体通常包含枝化双触角寡糖，其通常通过N连接物而与Fc区的CH2结构域中的Asn297连接。参见例如Wright等人,TIBTECH 15:26-32(1997)。寡糖可包括各种碳水化合物例如甘露糖、N-乙酰基葡糖胺(GlcNAc)、半乳糖和唾液酸及与双触角寡糖结构的“主干”中的GlcNAc连接的岩藻糖。在一些实施方案中，可对本申请抗体中的寡糖进行改造，从而产生具有某些改善的性质的抗体变体。
在一个实施方案中，本申请提供的抗体变体所具有的碳水化合物结构缺乏与Fc区连接(直接或间接)的岩藻糖。例如，岩藻糖在上述抗体中的量可为1％至80％、1％至65％、5％至65％或20％至40％。岩藻糖的量如下确定：相对于与Asn297连接的所有糖结构(例如复合物、杂化物和高甘露糖结构)的总和对岩藻糖在处于Asn297的糖链中的平均量进行计算，其通过MALDI-TOF质谱来测量且参见例如WO2008/077546。Asn297是指在Fc区中处于约297位的天冬酰胺残基(对Fc区残基进行Eu编号)；然而，Asn297还可由于抗体中很小的序列变化而处于在297位的上游或下游约±3个氨基酸处即在294位和300位之间。上述岩藻糖基化变体可具有改善的ADCC功能。参见例如美国专利公开文本US2003/0157108(Presta,L.)；US2004/0093621(Kyowa Hakko Kogyo Co.,Ltd)。与“去岩藻糖基化”或“岩藻糖缺乏”抗体变体相关的出版物的实例包括：US2003/0157108；WO2000/61739；WO2001/29246；US2003/0115614；US2002/0164328；US2004/0093621；US2004/0132140；US2004/0110704；US2004/0110282；US2004/0109865；WO2003/085119；WO2003/084570；WO2005/035586；WO2005/035778；WO2005/053742；WO2002/031140；Okazaki等人,J.Mol.Biol.336:1239-1249(2004)；Yamane-Ohnuki等人,Biotech.Bioeng.87:614(2004)。能够产生去岩藻糖基化抗体的细胞系的实例包括缺乏蛋白质岩藻糖基化的Lec13CHO细胞(Ripka等人,Arch.Biochem.Biophys.249:533-545(1986)；Presta,L的美国专利申请US2003/0157108A1；和Adams等人的WO2004/056312A1且尤其是实施例11)和敲除细胞系例如α-1,6-岩藻糖转移酶基因即FUT8敲除CHO细胞(参见例如Yamane-Ohnuki等人,Biotech.Bioeng.87:614(2004)；Kanda,Y.等人,Biotechnol.Bioeng.,94(4):680-688(2006)；和WO2003/085107)。
抗体变体还配备有一分为二的寡糖，例如其中与抗体的Fc区连接的双触角寡糖通过GlcNAc来一分为二。上述抗体变体可具有降低的岩藻糖基化和/或改善的ADCC功能。上述抗体变体的实例参见例如WO2003/011878(Jean-Mairet等人)；美国专利6,602,684(Umana等人)；和US2005/0123546(Umana等人)。还提供在与Fc区连接的寡糖中具有至少一个半乳糖残基的抗体变体。上述抗体变体可具有改善的CDC功能。上述抗体变体参见例如WO1997/30087(Patel等人)；WO1998/58964(Raju,S.)；和WO1999/22764(Raju,S.)。
Fc区变体
在某些实施方案中，可将一个或多个氨基酸改造引入到本申请提供的抗体的Fc区中，由此产生Fc区变体。Fc区变体可包含在一个或多个氨基酸位置包含氨基酸改造(例如取代)的人Fc区序列(例如人IgG1、IgG2、IgG3或IgG4Fc区)。
在某些实施方案中，本申请涉及具有一些但非全部效应子功能的抗体变体，这使其成为就其中抗体体内半衰期是重要的而某些效应子功能(例如补体和ADCC)是不必要或有害的应用而言所期望的候选物。可进行体外和/或体内细胞毒性测定以证实CDC和/或ADCC活性的降低/消失。例如，可进行Fc受体(FcR)结合测定以确保抗体缺乏FcγR结合(因此可能缺乏ADCC活性)，但是保留FcRn结合能力。用于介导ADCC的原代细胞即NK细胞仅表达Fc(RIII，而单核细胞表达Fc(RI、Fc(RII和Fc(RIII。FcR在造血细胞上的表达概括在Ravetch和Kinet,Annu.Rev.Immunol.9:457-492(1991)第464页表3中。用于对所关注的分子的ADCC活性进行评价的体外测定的非限制性实例参见美国专利5,500,362(参见例如Hellstrom,I.等人,Proc.Nat’l Acad.Sci.USA 83:7059-7063(1986))和Hellstrom,I.等人,Proc.Nat’l Acad.Sci.USA82:1499-1502(1985)；5,821,337(参见Bruggemann,M.等人,J.Exp.Med.166:1351-1361(1987))。可选择地，可使用非放射性测定方法(参见例如用于流式细胞术的ACTITM非放射性细胞毒性测定(CellTechnology,Inc.Mountain View,CA)；和CytoTox
Figure BDA0001680565890000841
非放射性细胞毒性测定(Promega,Madison,WI))。可用于上述测定的效应子细胞包括外周血单核细胞(PBMC)和自然杀伤(NK)细胞。可选择或额外地，可在体内对所关注的分子的ADCC活性进行评价，例如在Clynes等人,Proc.Nat’l Acad.Sci.USA 95:652-656(1998)所公开的动物模型中。还可进行C1q结合测定以证实抗体不能与C1q结合且因此缺乏CDC活性。参见例如WO2006/029879和WO2005/100402中的C1q和C3c结合ELISA。为了评价补体活化，可进行CDC测定(参见例如Gazzano-Santoro等人,J.Immunol.Methods 202:163(1996)；Cragg,M.S.等人,Blood101:1045-1052(2003)；及Cragg,M.S.和M.J.Glennie,Blood103:2738-2743(2004))。还可使用本领域已知的方法来确定FcRn结合和体内清除率/半衰期(参见例如Petkova,S.B.等人,Int’l.Immunol.18(12):1759-1769(2006))。
在一些实施方案中，可将一个或多个氨基酸改造引入到本申请提供的抗体的Fc部分中，从而增加IgG与新生儿Fc受体的结合。在某些实施方案中，抗体包含以下三个根据EU编号的突变：M252Y、S254T和T256E(“YTE突变”)(美国专利8,697,650；也参见Dall’Acqua等人,Journal of Biological Chemistry 281(33):23514-23524(2006))。在某些实施方案中，YTE突变不影响抗体与其同源抗原结合的能力。在某些实施方案中，YTE突变与天然(即非YTE突变)抗体相比使抗体的血清半衰期得以增加。在一些实施方案中，YTE突变与天然(即非YTE突变)抗体相比使抗体的血清半衰期增加3倍。在一些实施方案中，YTE突变与天然(即非YTE突变)抗体相比使抗体的血清半衰期增加2倍。在一些实施方案中，YTE突变与天然(即非YTE突变)抗体相比使抗体的血清半衰期增加4倍。在一些实施方案中，YTE突变与天然(即非YTE突变)抗体相比使抗体的血清半衰期增加至少5倍。在一些实施方案中，YTE突变与天然(即非YTE突变)抗体相比使抗体的血清半衰期增加至少10倍。参见例如美国专利8,697,650；也参见Dall’Acqua等人,Journal of Biological Chemistry 281(33):23514-23524(2006)。
在某些实施方案中，YTE突变体提供了对抗体的抗体依赖性由细胞介导的细胞毒性(ADCC)活性进行调节的手段。在某些实施方案中，YTEO突变体提供了对引向人抗原的人化IgG抗体的ADCC活性进行调节的手段。参见例如美国专利8,697,650；也参见Dall’Acqua等人,Journal of Biological Chemistry 281(33):23514-23524(2006)。
在某些实施方案中，YTE突变体允许同时对血清半衰期、组织分布和抗体活性(例如IgG抗体的ADCC活性)进行调节。参见例如美国专利8,697,650；也参见Dall’Acqua等人,Journal of Biological Chemistry281(33):23514-23524(2006)。
效应子功能降低的抗体包括其中对Fc区残基238、265、269、270、297、327和329中的一个或多个进行取代的那些抗体(美国专利6,737,056)。上述Fc突变体包括其中在氨基酸265、269、270、297和327位中的两个或更多个处进行取代的Fc突变体，包括其中残基265和297用丙氨酸取代的所谓的“DANA”Fc突变体(美国专利7,332,581)。
在某些实施方案中，处于野生型人Fc区的329位(EU编号)的脯氨酸(P329)被取代为甘氨酸或精氨酸或大到足以使Fc的P329与FcgRIII的色氨酸残基W87和W110形成的Fc/Fcγ受体界面中的脯氨酸夹层得以破坏的氨基酸残基(Sondermann等人,Nature 406,267-273(2000年7月20日))。在另一个实施方案中，Fc变体中的至少一个其它氨基酸取代为S228P、E233P、L234A、L235A、L235E、N297A、N297D或P331S，且在另一个实施方案中，所述至少一个其它氨基酸取代为人IgG1Fc区中的L234A和L235A或人IgG4Fc区中的S228P和L235E，其都根据EU编号(美国专利8,969,526,将其全部内容引入作为参考)。
在某些实施方案中，多肽包含野生型人IgG Fc区的Fc变体，其中所述多肽的人IgGFc区中的P329被取代为甘氨酸，且其中所述Fc变体包含至少两个其它氨基酸取代即人IgG1Fc区中的L234A和L235A或人IgG4Fc区中的S228P和L235E，且其中残基根据EU编号来编号(美国专利8,969,526,将其全部内容引入作为参考)。在某些实施方案中，包含P329G、L234A和L235A(EU编号)取代的多肽显示出与人FcγRIIIA和FcγRIIA的降低的亲和力以将ADCC下调为包含野生型人IgG Fc区的多肽所诱导的ADCC的至少20％和/或下调ADCP(美国专利8,969,526,将其全部内容引入作为参考)。
在具体实施方案中，包含野生型人Fc多肽的Fc变体的多肽包含三重突变：根据EU编号在Pro329位的氨基酸取代、L234A和L235A突变(P329/LALA)(美国专利8,969,526,将其全部内容引入作为参考)。在具体实施方案中，所述多肽包含以下氨基酸取代：根据EU编号的P329G、L234A和L235A。
描述了与FcR的结合得以改善或降低的某些抗体变体(参见例如美国专利6,737,056；WO2004/056312；和Shields等人,J.Biol.Chem.9(2):6591-6604(2001))。
在某些实施方案中，抗体变体所包含的Fc区具有一个或多个使ADCC得以改善的氨基酸取代例如在Fc区的298、333和/或334位(残基的EU编号)的取代。
在一些实施方案中，对Fc区进行变更，这使C1q结合和/或补体依赖性细胞毒性(CDC)发生更改(即改善或降低)，其例如参见美国专利6,194,551；WO99/51642；和Idusogie等人,J.Immunol.164:4178-4184(2000)。
半衰期增加且与负责将母体IgG转运至胎儿的新生儿Fc受体(FcRn)(Guyer等人,J.Immunol.117:587(1976)；和Kim等人,J.Immunol.24:249(1994))的结合得以改善的抗体参见US2005/0014934A1(Hinton等人)。这些抗体所包含的Fc区具有一个或多个使Fc区与FcRn的结合得以改善的取代。上述Fc变体包括在以下Fc区残基中的一个或多个处具有取代的那些Fc变体：238、256、265、272、286、303、305、307、311、312、317、340、356、360、362、376、378、380、382、413、424或434，例如对Fc区残基434的取代(美国专利7,371,826)。
Fc区变体的其它实例也参见Duncan和Winter,Nature 322:738-40(1988)；美国专利5,648,260；美国专利5,624,821；及WO94/29351。
半胱氨酸工程化抗体变体
在某些实施方案中，产生半胱氨酸工程化抗体例如“THIOMABTM”或TDC可以是合乎需要的，其中抗体中的一个或多个残基被取代为半胱氨酸残基。在具体实施方案中，对残基的取代发生在抗体中可用于缀合的位点。通过将这些残基取代为半胱氨酸而使反应性巯基由此处于抗体中可接近的位点且可如本申请所进一步描述的那样用于使抗体与其它部分例如药物部分或接头-药物部分缀合以产生免疫缀合物。在某些实施方案中，以下残基中的任何一个或多个可被取代为半胱氨酸：轻链中的K149(Kabat编号)；轻链中的V205(Kabat编号)；重链中的A118(EU编号)；重链中的A140(EU编号)；重链中的L174(EU编号)；重链中的Y373(EU编号)；和重链Fc区中的S400(EU编号)。在具体实施方案中，本申请所描述的抗体包含HC-A140C(EU编号)半胱氨酸取代。在具体实施方案中，本申请所描述的抗体包含LC-K149C(Kabat编号)半胱氨酸取代。在具体实施方案中，本申请所描述的抗体包含HC-A118C(EU编号)半胱氨酸取代。半胱氨酸工程化抗体可如例如美国专利7,521,541所描述的那样来产生。
在某些实施方案中，所述抗体包含以下重链半胱氨酸取代之一：
链(HC/LC) 残基 EU突变位点# Kabat突变位点#
HC T 114 110
HC A 140 136
HC L 174 170
HC L 179 175
HC T 187 183
HC T 209 205
HC V 262 258
HC G 371 367
HC Y 373 369
HC E 382 378
HC S 424 420
HC N 434 430
HC Q 438 434
在某些实施方案中，所述抗体包含以下轻链半胱氨酸取代之一：
链(HC/LC) 残基 EU突变位点# Kabat突变位点#
LC I 106 106
LC R 108 108
LC R 142 142
LC K 149 149
LC V 205 205
非限制性示例性hu7C2.v2.2.LA轻链(LC)K149C THIOMABTM具有分别为SEQ ID NO:26和30的重链和轻链氨基酸序列。非限制性示例性hu7C2.v2.2.LA重链(HC)A118CTHIOMABTM具有分别为SEQ ID NO:31和25的重链和轻链氨基酸序列。
抗体衍生物
在某些实施方案中，可对本申请提供的抗体进行进一步改造以含有本领域已知且可容易得到的额外非蛋白质性部分。适于对抗体进行衍生的部分包括但不局限于水溶性聚合物。水溶性聚合物的非限制性实例包括但不局限于聚乙二醇(PEG)、乙二醇/丙二醇共聚物、羧甲基纤维素、右旋糖酐、聚乙烯醇、聚乙烯吡咯烷酮、聚1,3-二氧杂环戊烷、聚1,3,6-三氧杂环己烷、乙烯/马来酸酐共聚物、聚氨基酸(均聚物或无规共聚物)和右旋糖酐或聚(N-乙烯基吡咯烷酮)聚乙二醇、丙二醇均聚物、聚氧化丙烯/氧化乙烯共聚物、聚氧乙基化多元醇(例如甘油)、聚乙烯醇和其混合物。聚乙二醇丙醛由于其在水中的稳定性而可在制备中具有优点。聚合物可具有任何分子量且可以是枝化或非枝化的。与抗体连接的聚合物的数目是可变的，且若连接有多于一个聚合物，则其可为相同或不同的分子。通常，用于衍生化的聚合物的数目和/或类型可基于所考虑的因素来确定，包括但不局限于待改善的抗体的具体性质或功能、抗体衍生物是否将在所定义的条件下用于疗法等。
在另一个实施方案中，本申请提供抗体和以下非蛋白质性部分的缀合物，所述非蛋白质性部分可通过暴露于辐射而被选择性加热。在一个实施方案中，所述非蛋白质性部分为碳纳米管(Kam等人,Proc.Natl.Acad.Sci.USA102:11600-11605(2005))。所述辐射可具有任何波长且包括但不局限于以下波长，其不损害普通细胞，但是将非蛋白质性部分加热至使与抗体-非蛋白质性部分接近的细胞被杀死的温度。
重组方法和组合物
抗体可使用重组方法和组合物来产生，例如如美国专利4,816,567所描述的那样。在一个实施方案中，本申请提供经分离的对本申请所描述的抗体进行编码的核酸。上述核酸可编码包含抗体的VL的氨基酸序列和/或包含抗体的VH的氨基酸序列(例如抗体的轻链和/或重链)。在另一个实施方案中，本申请提供一种或多种包含上述核酸的载体(例如表达载体)。在另一个实施方案中，本申请提供包含上述核酸的宿主细胞。在一个上述实施方案中，所述宿主细胞包含(例如已经转化有)：(1)包含以下核酸的载体，所述核酸编码包含抗体的VL的氨基酸序列和包含抗体的VH的氨基酸序列；或(2)包含以下核酸的第一载体，所述核酸编码包含抗体的VL的氨基酸序列，和包含以下核酸的第二载体，所述核酸编码包含抗体的VH的氨基酸序列。在一个实施方案中，所述宿主细胞是真核的，例如中国仓鼠卵巢(CHO)细胞或淋巴样细胞(例如Y0、NS0、Sp20细胞)。在一个实施方案中，本申请提供制备抗体的方法，其中所述方法包括如以上所提供的那样在适于抗体表达的条件下对包含编码抗体的核酸的宿主细胞进行培养和任选从宿主细胞(或宿主细胞培养基)中回收抗体。
为了重组产生抗体，对如以上描述的那样编码抗体的核酸进行分离且插入到一种或多种用于在宿主细胞中进一步克隆和/或表达的载体中。上述核酸可使用常规措施来容易地分离和测序(例如通过使用能够与对抗体的重链和轻链进行编码的基因特异性结合的寡核苷酸探针)。
适于克隆或表达抗体编码载体的宿主细胞包括本申请所描述的原核或真核细胞。例如，抗体可在细菌中产生，特别是当不需要糖基化和Fc效应子功能时。抗体片段和多肽在细菌中的表达参见例如美国专利5,648,237、5,789,199和5,840,523(也参见Charlton,Methods in Molecular Biology,第248卷(B.K.C.Lo,ed.,Humana Press,Totowa,NJ,2003),第245-254页,描述了抗体片段在大肠杆菌中的表达)。表达后，抗体可在可溶性级份中与细菌细胞糊分离且可进一步纯化。
除了原核生物，真核微生物例如丝状真菌或酵母也为适于抗体编码载体的克隆或表达宿主，包括以下真菌和酵母菌株，其糖基化途径已经被“人化”且由此产生具有部分或完整人糖基化模式的抗体。参见Gerngross,Nat.Biotech.22:1409-1414(2004)；和Li等人,Nat.Biotech.24:210-215(2006)。
适于表达糖基化抗体的宿主细胞还来源于多细胞生物体(无脊椎动物和脊椎动物)。无脊椎动物细胞的实例包括植物和昆虫细胞。已经鉴定了多种可与昆虫细胞一起使用的杆状病毒菌株，其具体用于转染草地夜蛾细胞。
植物细胞培养物也可用作宿主。参见例如美国专利5,959,177、6,040,498、6,420,548、7,125,978和6,417,429(描述了用于在转基因植物中产生抗体的PLANTIBODIESTM技术)。
脊椎动物细胞也可用作宿主。例如，适于在悬浮液中生长的哺乳动物细胞系可以是有用的。有用的哺乳动物宿主细胞系的其它实例为通过SV40(COS-7)来转化的猴肾CV1细胞系；人胚肾细胞系(如例如Graham等人,J.Gen Virol.36:59(1977)所描述的293或293细胞)；幼仓鼠肾细胞(BHK)；小鼠塞托利细胞(如例如Mather,Biol.Reprod.23:243-251(1980)所描述的TM4细胞)；猴肾细胞(CV1)；非洲绿猴肾细胞(VERO-76)；人宫颈癌细胞(HELA)；犬肾细胞(MDCK)；布法罗大鼠肝细胞(BRL 3A)；人肺细胞(W138)；人肝细胞(HepG2)；小鼠乳房肿瘤(MMT 060562)；如例如Mather等人,Annals N.Y.Acad.Sci.383:44-68(1982)所描述的TRI细胞；MRC 5细胞；和FS4细胞。其它有用的哺乳动物宿主细胞系包括中国仓鼠卵巢(CHO)细胞，包括DHFR-CHO细胞(Urlaub等人,Proc.Natl.Acad.Sci.USA 77:4216(1980))；及骨髓瘤细胞系，例如Y0、NS0和Sp2/0。关于适于产生抗体的某些哺乳动物宿主细胞系的综述参见例如Yazaki和Wu,Methods in Molecular Biology,第248卷(B.K.C.Lo,ed.,Humana Press,Totowa,NJ),第255-268页(2003)。
单烷化剂吡咯并苯并二氮杂
Figure BDA0001680565890000901
药物部分
本申请抗体-药物缀合物化合物包含在N10基团处用与抗体连接的二硫化物接头进行衍生化的单烷化剂吡咯并苯并二氮杂
Figure BDA0001680565890000912
药物部分。
已经制备了表1a所显示的示例性单烷化剂吡咯并苯并二氮杂
Figure BDA0001680565890000913
(PBD)药物部分。
表1a单烷化剂吡咯并苯并二氮杂
Figure BDA0001680565890000914
药物部分
Figure BDA0001680565890000911
Figure BDA0001680565890000921
Figure BDA0001680565890000931
表1b比较剂药物部分
Figure BDA0001680565890000932
单烷化剂吡咯并苯并二氮杂
Figure BDA0001680565890000933
接头-药物中间体
本申请抗体-药物缀合物(ADC)化合物可通过使单烷化剂吡咯并苯并二氮杂
Figure BDA0001680565890000934
接头-药物中间体与抗体缀合来制备。将接头-药物中间体中的巯基吡啶基替换为抗体中的半胱氨酸巯基以形成经二硫化物连接的ADC。
单烷化剂吡咯并苯并二氮杂
Figure BDA0001680565890000935
接头-药物中间体具有式I：
Figure BDA0001680565890000941
其中
Figure BDA0001680565890000942
选自CH2-CH2、CH＝CH、C(＝O)-NH和CH2-NH；
A为5元或6元杂环，其任选取代有选自以下的基团：F、C1-C6烷基和＝C(R)2，其中R独立选自H、F、C1-C6烷基和C1-C6氟烷基；
R1和R2独立选自H和C1-C6烷基，或R1和R2形成3、4、5或6元环烷基或杂环基；
R3独立选自NO2、Cl、F、CN、CO2H和Br；且
m为0、1或2。
在示例性实施方案中，A为5元环。
在示例性实施方案中，A为取代有环外亚甲基即＝CH2的5元环。
在示例性实施方案中，A为6元环。
在示例性实施方案中，A为吗啉基环。
在示例性实施方案中，R1为-CH3，且R2为H。
在示例性实施方案中，R1和R2形成环丙基或环丁基。
在示例性实施方案中，R3为-NO2，且m为1。
在示例性实施方案中，
Figure BDA0001680565890000945
为CH2-CH2或CH＝CH。
在示例性实施方案中，
Figure BDA0001680565890000944
为C(＝O)-NH或CH2-NH。
单烷化剂吡咯并苯并二氮杂
Figure BDA0001680565890000943
接头-药物中间体的示例性实施方案为式Ia：
Figure BDA0001680565890000951
在示例性实施方案中，R4和R5各自为H。
在示例性实施方案中，R4和R5为＝O。
单烷化剂吡咯并苯并二氮杂
Figure BDA0001680565890000954
接头-药物中间体的示例性实施方案为式Ib：
Figure BDA0001680565890000952
单烷化剂吡咯并苯并二氮杂
Figure BDA0001680565890000955
接头-药物中间体的示例性实施方案为式Ic：
Figure BDA0001680565890000953
单烷化剂吡咯并苯并二氮杂
Figure BDA0001680565890000956
接头-药物中间体的示例性实施方案为式Id：
Figure BDA0001680565890000961
在不局限于具体机制或作用的情况下，吸电子基团R3例如NO2、Cl、F、CN、CO2H或Br在单烷化剂吡咯并苯并二氮杂
Figure BDA0001680565890000963
接头中间体的吡啶基环上的存在使与半胱氨酸工程化抗体中的半胱氨酸巯基的反应得以加速。当已经将半胱氨酸巯基引入至具有位阻或较低反应性的抗体位点时，上述单烷化剂吡咯并苯并二氮杂
Figure BDA0001680565890000964
接头中间体与未取代的相应吡啶基类似物(R3＝H)相比可较有效地与抗体进行缀合反应。
示例性单烷化剂吡咯并苯并二氮杂
Figure BDA0001680565890000965
接头-药物中间体显示在表2A中。比较剂二烷化剂吡咯并苯并二氮杂
Figure BDA0001680565890000966
接头-药物中间体显示在表2B中。接头-药物中间体和比较剂的合成在实施例中描述。
表2A单烷化剂吡咯并苯并二氮杂
Figure BDA0001680565890000967
接头-药物中间体
Figure BDA0001680565890000962
Figure BDA0001680565890000971
表2B比较剂吡咯并苯并二氮杂
Figure BDA0001680565890000973
接头-药物中间体
Figure BDA0001680565890000972
Figure BDA0001680565890000981
Figure BDA0001680565890000991
抗体-药物缀合物(ADC)
本申请抗体-药物缀合物(ADC)化合物包含对肿瘤相关抗原具有特异性的与在N10基团处用二硫化物接头进行衍生化的强效单烷化剂吡咯并苯并二氮杂
Figure BDA0001680565890000992
药物部分共价连接的抗体且包括那些具有生物活性的抗体-药物缀合物(ADC)化合物。本申请ADC可具有治疗活性且可有效对抗包括癌症在内的多种过度增殖性障碍。单烷化剂吡咯并苯并二氮杂
Figure BDA0001680565890000994
药物部分的生物活性通过与抗体缀合来调整。本申请ADC将有效剂量的单烷化剂吡咯并苯并二氮杂
Figure BDA0001680565890000993
药物或毒素选择性地递送至肿瘤细胞或部位，由此可实现较大的选择性即较低的有效剂量同时提高治疗指数(“治疗窗”)。在示例性实施方案中，ADC化合物包含通过接头与单烷化剂吡咯并苯并二氮杂
Figure BDA0001680565890000995
药物部分缀合即共价连接的半胱氨酸工程化抗体。
应该理解的是，当抗体中多于一个亲核性半胱氨酸巯基与药物-接头中间体或接头试剂反应时，所得到的产物为多种ADC化合物的混合物，其分布为一个或多个药物部分与一个抗体连接。药物平均数每抗体(DAR)可由混合物通过对抗体具有特异性且对药物具有特异性的双重ELISA抗体测定来计算。混合物中的各个ADC分子可通过质谱来鉴定且可通过HPLC例如疏水性相互作用色谱来分离(参见例如McDonagh等人(2006)Prot.Engr.Design &Selection 19(7):299-307；Hamblett等人(2004)Clin.Cancer Res.10:7063-7070；Hamblett,K.J.等人,“Effect of drug loading on the pharmacology,pharmacokinetics,and毒性of an anti-CD30antibody-drug conjugate”,AbstractNo.624,American Association for Cancer Research,2004Annual Meeting,2004年3月27-31日,Proceedings of the AACR,第45卷,2004年3月；Alley,S.C.等人,“Controllingthe location of drug attachment in antibody-drug conjugates”,Abstract No.627,American Association for Cancer Research,2004Annual Meeting,2004年3月27-31日,Proceedings of the AACR,第45卷,2004年3月)。在某些实施方案中，具有单一负载值的均质ADC可由缀合混合物通过电泳或色谱来分离。
本申请抗体-药物缀合物化合物具有式II结构或为其药用盐：
Figure BDA0001680565890001001
其中
Figure BDA0001680565890001002
选自CH2-CH2、CH2-C(＝O)、CH＝CH或CH2-NH；
R1和R2独立选自H或C1-C6烷基，或R1和R2形成3、4、5或6元环烷基或杂环基；
p为1-8的整数；且
Ab为抗体。
在示例性实施方案中，所述抗体与选自(1)-(53)的一种或多种肿瘤相关抗原或细胞表面受体结合：
(1)BMPR1B(骨形态发生蛋白受体-IB型)；
(2)E16(LAT1,SLC7A5)；
(3)STEAP1(前列腺六跨膜上皮抗原)；
(4)MUC16(0772P,CA125)；
(5)MPF(MPF,MSLN,SMR,巨核细胞强化因子,间皮素)；
(6)Napi2b(NAPI-3B,NPTIIb,SLC34A2,溶质载体家族34(磷酸钠),成员2,II型钠依赖性磷酸转运蛋白3b)；
(7)Sema 5b(FLJ10372,KIAA1445,Mm.42015,SEMA5B,SEMAG,信号素5b Hlog,sema结构域,七凝血酶敏感素重复序列(1型和1型样),跨膜结构域I和短胞质结构域,(信号素)5B)；
(8)PSCA hlg(2700050C12Rik,C530008O16Rik,RIKEN cDNA2700050C12,RIKENcDNA 2700050C12基因)；
(9)ETBR(内皮素B型受体)；
(10)MSG783(RNF124,假定蛋白FLJ20315)；
(11)STEAP2(HGNC_8639,IPCA-1,PCANAP1,STAMP1,STEAP2,STMP,前列腺癌相关基因1,前列腺癌相关蛋白1,前列腺六跨膜上皮抗原2,六跨膜前列腺蛋白)；
(12)TrpM4(BR22450,FLJ20041,TRPM4,TRPM4B,瞬时型受体电位阳离子通道,亚家族M,成员4)；
(13)CRIPTO(CR,CR1,CRGF,CRIPTO,TDGF1,畸胎癌源性生长因子)；
(14)CD21(CR2(补体受体2)或C3DR(C3d/爱泼斯坦-巴尔病毒受体)或Hs73792)；
(15)CD79b(CD79B,CD79β,Igb(免疫球蛋白相关β),B29)；
(16)FcRH2(IFGP4,IRTA4,SPAP1A(含有磷酸酶锚定蛋白1a的SH2结构域),SPAP1B,SPAP1C)；
(17)HER2；
(18)NCA；
(19)MDP；
(20)IL20Rα；
(21)Brevican；
(22)EphB2R；
(23)ASLG659；
(24)PSCA；
(25)GEDA；
(26)BAFF-R(B细胞活化因子受体,BlyS受体3,BR3)；
(27)CD22(B细胞受体CD22-B同工型)；
(28)CD79a(CD79A,CD79α,免疫球蛋白相关α)；
(29)CXCR5(伯基特淋巴瘤受体1)；
(30)HLA-DOB(MHC II类分子的β亚基(Ia抗原))；
(31)P2X5(嘌呤能受体P2X配体门控离子通道5)；
(32)CD72(B细胞分化抗原CD72,Lyb-2)；
(33)LY64(淋巴细胞抗原64(RP105),富亮氨酸重复序列(LRR)家族I型膜蛋白)；
(34)FcRH1(Fc受体样蛋白1)；
(35)FcRH5(IRTA2,免疫球蛋白超家族受体易位相关体2)；
(36)TENB2(推定跨膜蛋白聚糖)；
(37)PMEL17(silver同系物；SILV；D12S53E；PMEL17；SI；SIL)；
(38)TMEFF1(具有EGF样和两个卵泡抑素样结构域的跨膜蛋白1；Tomoregulin-1)；
(39)GDNF-Ra1(GDNF家族受体α1；GFRA1；GDNFR；GDNFRA；RETL1；TRNR1；RET1L；GDNFR-α1；GFR-ALPHA-1)；
(40)Ly6E(淋巴细胞抗原6复合物,基因座E；Ly67,RIG-E,SCA-2,TSA-1)；
(41)TMEM46(shisa同系物2(非洲爪蛙)；SHISA2)；
(42)Ly6G6D(淋巴细胞抗原6复合物,基因座G6D；Ly6-D,MEGT1)；
(43)LGR5(含有富亮氨酸重复序列的G蛋白偶联受体5；GPR49,GPR67)；
(44)RET(ret原癌基因；MEN2A；HSCR1；MEN2B；MTC1；PTC；CDHF12；Hs.168114；RET51；RET-ELE1)；
(45)LY6K(淋巴细胞抗原6复合物,基因座K；LY6K；HSJ001348；FLJ35226)；
(46)GPR19(G蛋白偶联受体19；Mm.4787)；
(47)GPR54(KISS1受体；KISS1R；GPR54；HOT7T175；AXOR12)；
(48)ASPHD1(含有天冬氨酸β-羟化酶的结构域1；LOC253982)；
(49)酪氨酸酶(TYR；OCAIA；OCA1A；酪氨酸酶；SHEP3)；
(50)TMEM118(跨膜环指蛋白2；RNFT2；FLJ14627)；
(51)GPR172A(G蛋白偶联受体172A；GPCR41；FLJ11856；D15Ertd747e)；
(52)CD33；或
(53)CLL-1。
示例性抗体-药物缀合物化合物包括式IIa：
Figure BDA0001680565890001021
示例性抗体-药物缀合物化合物包括式IIa，其中R4和R5各自为H，或R4和R5为＝O。
示例性抗体-药物缀合物化合物包括式IIb：
Figure BDA0001680565890001031
表3A中的抗体-药物缀合物ADC-101-ADC-119如下制备：使表2A中的单烷化剂吡咯并苯并二氮杂
Figure BDA0001680565890001033
接头-药物中间体LD-51或LD-52与包括半胱氨酸工程化抗体在内的抗体缀合。表3B中的比较剂抗体-药物缀合物ADC-201-ADC-211如下制备：使表2B中的比较剂吡咯并苯并二氮杂
Figure BDA0001680565890001034
接头-药物中间体CLD-1-6与包括半胱氨酸工程化抗体在内的抗体缀合。
表3A单烷化剂二硫化物抗体-药物缀合物(ADC)
Figure BDA0001680565890001032
Figure BDA0001680565890001041
表3B比较剂抗体-药物缀合物(ADC)
Figure BDA0001680565890001042
A118C(EU编号)＝A121C(Sequential编号)＝A114C(Kabat编号)
轻链中的K149C(Kabat编号)
野生型(“WT”)、半胱氨酸工程化突变抗体(“thio”)、轻链(“LC”)、重链(“HC”)、6-马来酰亚氨基己酰基(“MC”)、马来酰亚氨基丙酰基(“MP”)、缬氨酸-瓜氨酸(“val-cit”或“vc”)、丙氨酸-苯丙氨酸(“ala-phe”)、对氨基苄基(“PAB”)和对氨基苄基氧基羰基(“PABC”)
比较剂ADC-211即trastuzumab emtansine(
Figure BDA0001680565890001043
曲妥珠单抗-MCC-DM1(T-DM1,Tmab-DM1)为抗体-药物缀合物(CAS登记号139504-50-0；Phillips G.等人(2008)Cancer Res.68:9280-90；US8142784)且具有以下结构：
Figure BDA0001680565890001051
其中Tr为抗HER2抗体曲妥珠单抗。
体外细胞增殖测定
抗体-药物缀合物(ADC)的细胞毒性或细胞抑制活性通常如下测量：在细胞培养基中使具有受体蛋白例如HER2的哺乳动物细胞暴露于ADC中的抗体；将细胞培养约6小时至约5天的时段；且对细胞存活进行测量。基于细胞的体外测定用于测量本申请ADC的存活(增殖)、细胞毒性和对细胞凋亡的诱导(半胱天冬酶活化)。
抗体-药物缀合物(ADC)的体外效能通过细胞增殖测定(实施例6)来测量。本申请ADC在抑制肿瘤细胞增殖中显示出令人惊讶和预料不到的效能。ADC的效力与细胞的靶标抗原表达相关。所测试的缀合物能够与在细胞表面上表达的特异性抗原结合且在体外使这些细胞死亡。
CellTiter-
Figure BDA0001680565890001052
发光细胞存活测定为商业上可得的(Promega Corp.,Madison,WI)以鞘翅类萤光素酶的重组表达为基础的均质测定方法(US5583024；US5674713；US5700670)。该细胞增殖测定基于对所存在的ATP(代谢活性细胞的指示剂)进行量化来确定培养中存活细胞的数目(Crouch等人(1993)J.Immunol.Meth.160:81-88；US6602677)。CellTiter-
Figure BDA0001680565890001053
测定以96孔模式进行，这使其适于自动化高通量筛选(HTS)(Cree等人(1995)AntiCancer Drugs 6:398-404)。均质测定措施涉及将单一试剂(CellTiter-
Figure BDA0001680565890001054
试剂)直接添加至在补充有血清的培养基中培养的细胞。不需要洗涤细胞、除去培养基和多次移液步骤。系统在添加试剂和混合后以384孔模式在10分钟内检测少达15个细胞/孔。细胞可用ADC持续处理，或可对其进行处理且与ADC分离。经短暂即3小时处理的细胞普遍显示出与经持续处理的细胞相同的效能作用。
均质“添加-混合-测量”模式引起溶胞且产生与所存在的ATP量成比例的发光信号。ATP的量与培养中所存在的细胞数目成直接比例。CellTiter-
Figure BDA0001680565890001063
测定产生“辉光型”发光信号，其通过萤光素酶反应而产生且具有通常大于5小时的半衰期(取决于细胞类型和所使用的培养基)。相对发光单位(RLU)反映了存活细胞。重组萤火虫萤光素酶使底物即甲虫萤光素发生氧化脱羧基化且伴随有ATP向AMP转化和产生光子。
基于细胞的体外测定用于测量本申请ADC的存活(增殖)、细胞毒性和对细胞凋亡的诱导(半胱天冬酶活化)。抗体-药物缀合物(ADC)的细胞毒性或细胞抑制活性通常如下测量：在细胞培养基中使表达抗原例如Her2或MUC16多肽的哺乳动物细胞暴露于ADC；将细胞培养约6小时至约5天的时段；且对细胞存活进行测量。可用于针对抗MUC16ADC的细胞增殖测定的哺乳动物细胞包括：(1)MUC16多肽表达细胞系OVCAR-3；(2)经工程化以在其细胞表面上稳定表达一部分MUC16多肽的PC3源性细胞系(PC3/MUC16)；(3)不表达MUC16多肽的亲本PC3细胞系；和(4)不表达MUC16多肽但携带有用于驱动外源性MUC16表达的载体的PC3细胞系(PC3/neo)。
图1A、1B、1C表明Thio Hu抗CD22 10F4v3LC K149C-(LD-52)ADC-107单胺显示出个位数nM效能，其在BJAB中约4倍不同于非靶向对照ADC-108(图1A)，在WSU-DLCL2中约7倍不同于非靶向对照(图1B)且在Jurkat中效能比非靶向对照ADC-108大约5倍(图1C)。单胺ADC-107在BJAB和WSU-DLCL2中分别比Thio Hu抗CD22 10F4v3LC K149C-(LD-51)单酰胺ADC-103和非靶向对照ADC-108强效约10倍和约22倍(图1A-C)。
表4抗体-药物缀合物的体外细胞增殖测定(图1F、1G)
Figure BDA0001680565890001061
表5体外效能(图1A、1B、1C)
Figure BDA0001680565890001062
Figure BDA0001680565890001071
体内效力
抗体-药物缀合物(ADC)的体内效力通过小鼠中的肿瘤生长抑制来测量(实施例7)。本申请ADC在抑制肿瘤生长中显示出令人惊讶和预料不到的效能。ADC的效力与肿瘤细胞的靶标抗原表达相关。
抗体-药物缀合物的体内效力如下测量：将癌症细胞的同种异体移植物或异种移植物移植到啮齿类动物中，且用ADC处理肿瘤。预期各种结果，这取决于细胞系、ADC与存在于癌症细胞上的受体的抗体结合特异性、给药方案和其它因素。使用表达中水平至高水平肿瘤相关抗原例如Her2、CD22和Ly6E的转基因外植体小鼠模型对ADC的体内效力进行测量。受试动物用ADC处理一次且监测3-6周以测量肿瘤翻倍时间、log细胞杀死和肿瘤收缩。还进行了剂量-响应和多剂量实验。
例如，本申请抗HER2ADC的体内效力可通过高表达HER2转基因外植体小鼠模型来测量(Phillips等人(2008)Cancer Res.68:9280-90)。同种异体移植物由对
Figure BDA0001680565890001072
疗法不响应或响应很差的Fo5mmtv转基因小鼠繁殖。受试动物用某些剂量水平(mg/kg)的ADC和安慰剂缓冲液对照(媒介物)处理一次且监测2周或更长时间以测量肿瘤翻倍时间、log细胞杀死和肿瘤收缩。
图2在CB-17Fox Chase SCID小鼠的WSU-DLCL2异种移植物模型的体内拟合肿瘤体积随时间变化的曲线中显示了抗体-药物缀合物ADC-202、ADC-103和ADC-102的效力。
图3在CB-17Fox Chase SCID小鼠的Bjab-luc异种移植物模型的体内拟合肿瘤体积随时间变化的曲线中显示了抗体-药物缀合物的效力。剂量为0.2和0.4mg/kg的比较剂ADC-202引起肿瘤消退，而0.1mg/kg剂量引起62％TGI。剂量为1、2和4mg/kg的单酰胺ADC-105的TGI范围为40-58％，其表明这些剂量水平具有类似的响应，而仅最高剂量即8mg/kg显示出显著的活性即89％TGI。另外，8mg/kg的活性在剂量为0.1和0.2mg/kg的比较剂二烷化剂ADC-202之间即实现小～50倍的效能。8mg/kg的脱靶标对照抗Her2hu7C2ADC-104-单酰胺显示出比0.4mg/kg的脱靶标对照比较剂抗Her2hu7C2ADC-201小2倍的活性即18％TGI与36％TGI。所有组在体重安全性评价中都显示出体重增加。
图4在WSU-DLCL2人细胞系小鼠模型的体内拟合肿瘤体积随时间变化的曲线中显示了抗体-药物缀合物的效力。在剂量为0.5-10mg/kg的情况下对中靶标抗CD22ADC-107单胺和val-cit连接物ADC-204的效力进行评价。引入单酰胺ADC-105用于比较。脱靶标抗Her2单胺ADC-108和ADC-205用作对照。单胺ADC-107和ADC-204这两者的活性似乎是类似的。就这两者而言的最小有效剂量(MED)都在0.5和2mg/kg之间。这两者在最高剂量即10mg/kg时都在5/5只动物中引起完全响应，该结果在单酰胺ADC的情况下没有观察到。另外，单胺ADC与单酰胺ADC相比实现>10倍的活性(对剂量为0.5mg/kg的单胺与剂量为5mg/kg的单酰胺的响应进行比较)。剂量为2mg/kg的两种Her2对照具有类似的响应(～30％TGI)。所有组都没有显著的体重减轻。
图5A在SCID米色小鼠的HER2KPL4肿瘤模型的体内拟合肿瘤体积随时间变化的曲线中显示了抗体-药物缀合物ADC-106、ADC-108和ADC-107的效力。
图5B在SCID米色小鼠的HER2KPL4肿瘤模型的体内拟合肿瘤体积随时间变化的曲线中显示了抗体-药物缀合物的效力。测量了Thio-Her2hu7C2LC-K149C-(LD-51),单酰胺,ADC-106和ADC-106与Tmab-DM1的组合的效力。
图6在以IV方式给药一次的CRL nu/nu小鼠的HER2Fo5模型的体内拟合肿瘤体积随时间变化的曲线中显示了抗体-药物缀合物ADC-201、ADC-104、ADC-202、ADC-105和非缀合抗体hu7C2的效力。中靶标ADC-201和ADC-104显示出肿瘤抑制和剂量依赖性作用。脱靶标ADC-202、ADC-105和非缀合抗体hu7C2没有显示出任何肿瘤抑制。
图7在SCID米色小鼠的HER2KPL4肿瘤模型的体内拟合肿瘤体积随时间变化的曲线中显示了抗体-药物缀合物ADC-201、ADC-104、ADC-202、ADC-105和非缀合抗体hu7C2的效力。中靶标ADC-201和ADC-104显示出肿瘤抑制和剂量依赖性作用。脱靶标ADC-202、ADC-105和非缀合抗体hu7C2显示出很小的肿瘤抑制或没有显示出任何肿瘤抑制。
图8在CRL nu/nu小鼠的HER2Fo5模型的体内拟合肿瘤体积随时间变化的曲线中显示了抗体-药物缀合物ADC-106、ADC-18和ADC-17的效力。中靶标ADC-106和ADC-108显示出肿瘤抑制和剂量依赖性作用。脱靶标ADC-107显示出很小的肿瘤抑制或没有显示出任何肿瘤抑制。
图9在CB-17Fox Chase SCID小鼠的表达CD22的WSU-DLCL2异种移植物模型的体内拟合肿瘤体积随时间变化的曲线中显示了抗体-药物缀合物ADC-104、ADC-111、ADC-112、ADC-106和ADC-113的效力。中靶标ADC-104、ADC-111、ADC-112显示出肿瘤抑制和剂量依赖性作用。脱靶标ADC-106和ADC-133没有显示出任何肿瘤抑制。
图10在HCC1569X2异种移植物模型的体内拟合肿瘤体积随时间变化的曲线中显示了抗体-药物缀合物的效力。Ly6E-SG3451-单酰胺具有剂量依赖性活性，其中在6和12mg/kg时实现生长延迟且当以18mg/kg给药时实现肿瘤基本停滞。就以1和3mg/kg给药的Ly6E-SG3451及以1、3和6mg/kg给药的Ly6E-SG3203-单胺而言观察到肿瘤消退。将Ly6E SG3451和SG3203-单胺组集中在一起。
寡核苷酸结合/烷基化测定
已知吡咯并苯并二氮杂
Figure BDA0001680565890001091
(PBD)化合物除链间交联物外还形成序列依赖性链内DNA交联物和单烷基化加合物(Rahman KM等人(2009)J Am Chem Soc 131:13756-13766)。PBD具有使其呈适当形状以紧密匹配DNA小沟的手性C11a(S)位置。另外，亲电子N10-C11部分(即可互变的亚胺、甲醇胺或甲醇胺甲基醚官能团)可在其C11位置和鸟嘌呤核碱基的亲核性C2-NH2基团之间形成共价缩醛胺连接物。对吡咯并苯并二氮杂
Figure BDA0001680565890001092
化合物与各种长度和序列的双链形成寡核苷酸的相互作用进行了研究，其中就先前鉴定的链内和链间交联而言的顺序为Pu-GAATG-Py>Pu-GATC-Py>>Pu-GATG-Py或Pu-GAATC-Py(实施例8)。寡核苷酸结合和烷基化测定为通过HPLC分离和MS检测对ADC中的吡咯并苯并二氮杂
Figure BDA0001680565890001093
药物部分与核酸的结合潜能进行评价的简单模型(Narayanaswamy M.等人(2008)Anal.Biochem.374:173-181)。由此可对ADC的效能和效力进行关联和预测。可对单烷化剂吡咯并苯并二氮杂
Figure BDA0001680565890001094
药物部分进行区分，例如区分单酰胺DM-3与单胺DM-1和区分表1a中的单烷化剂与表1b中的比较剂二烷化剂吡咯并苯并二氮杂
Figure BDA0001680565890001096
药物部分例如C-1(实施例8)。
吡咯并苯并二氮杂
Figure BDA0001680565890001095
化合物可结合/烷基化的所选寡核苷酸序列的出现频率是非常高的且不与其所处的染色体的大小成直接比例。该研究中的吡咯并苯并二氮杂
Figure BDA0001680565890001101
化合物包括表1a中的单烷化剂吡咯并苯并二氮杂
Figure BDA0001680565890001102
药物部分和表1b中的比较剂药物部分。所述研究表明药物使双链寡核苷酸发生不同水平的烷基化，且烷基化潜能可通过起始双链寡核苷酸即Pu-GAAATC-Py和Pu-GAAATG-Py的消失来精确评价，其中Pu为嘌呤核苷酸A或G，而Py为嘧啶核苷酸C或T。单酰胺PBD DM-2(表1a)以比单胺PBD DM-1小约8倍的效力使双链寡核苷酸发生结合/烷基化。比较剂二烷化剂C-1(表1b)以比单胺DM-1大2-3倍的效力使双链寡核苷酸发生共价烷基化。PBD单体C-2以比二聚体C-1小>50倍的效力使双链寡核苷酸发生共价烷基化。对C-1的亚胺键进行还原以形成C-3，这使DNA结合完全消失。用不同烷化剂形成各种寡PBD加合物，通过HPLC来分离，且通过MS分析以质量进行表征。
图11显示了使二烷化剂吡咯并苯并二氮杂
Figure BDA0001680565890001103
(PBD)二聚体化合物CLD-1(上部)及两种单烷化剂吡咯并苯并二氮杂
Figure BDA0001680565890001104
二聚体化合物即单胺DM-1(中部)和单酰胺DM-2(下部)与DNA反应后的推定加合物(Rahman KM等人(2009)J Am Chem Soc 131:13756-13766)。二烷化剂PBD二聚体化合物可与DNA双链的相对链上的鸟嘌呤核碱的C2-NH2基团形成两个共价接附(交联)。单烷化剂PBD二聚体化合物仅可与鸟嘌呤核碱形成一个共价接附，由此影响分裂细胞的开/关结合和断裂的动力学。
单酰胺DM-2显示出比单胺DM-1小8-10倍的双链寡核苷酸结合/烷基化，这与其ADC在癌症细胞系和体内肿瘤异种移植物模型中的效能和效力关联。单酰胺的较低水平的DNA烷基化使效力具有降低的毒性且可显示出较好的治疗指数。综上，DNA结合/烷基化的程度与PBD类似物的效力关联且将单酰胺与单胺PBD和二烷化剂PBD区分开来。PBD-ADC的优化治疗指数(TI)可通过对单烷化剂的DNA结合/烷基化活性进行调整来实现，且寡结合/烷基化方法可用于指导对抗肿瘤效力最佳且安全性可接受的PBD类似物进行设计和评价。
安全性/毒性
对本申请抗体-药物缀合物(ADC)和比较剂ADC的安全性和毒性相关性质进行了研究。
如通过在第0、7、14天以50、75、125μg(微克)/kg给药后历时45天的体重变化百分比而计算的那样，具有单胺单烷化剂(LD-52)的抗HER2hu7C2抗体ADC-108与具有亚胺二烷化剂(C-1)的相应抗HER2hu7C2抗体ADC-201相比在CD-1小鼠中显示出改善的耐受性和改善的治疗指数(TI)。ADC-108的最大耐受剂量(MTD)为200μg/kg，而ADC-201的MTD为75μg/kg。大鼠(Sprague-Dawley)和短尾猴中的毒性信号可包括网织红细胞短暂减少、注射部位附近的轻微皮肤变色和剥落、血管渗漏、肝酶升高、神经变性、骨髓/淋巴耗竭、肾、眼和肺观察结果和发病。
初步安全性数据暗示本申请ADC与比较剂ADC相比具有显著的益处。
药物制剂
本申请治疗性抗体-药物缀合物(ADC)的药物制剂通常与药用胃肠外载体一起制备成单位剂量注射用形式用于胃肠外给药即推注、静脉内、肿瘤内注射。具有所需纯度的抗体-药物缀合物(ADC)任选与药用稀释剂、载体、赋形剂或稳定剂混合成冻干制剂或水溶液形式(Remington’s Pharmaceutical Sciences(1980),第16版,Osol,A.Ed.)。
抗体-药物缀合物治疗方法
本申请抗体-药物缀合物(ADC)被预期可用于治疗多种例如以肿瘤抗原过表达为特征的疾病或障碍。示例性病症或过度增殖性障碍包括良性或恶性实体瘤及血液学障碍例如白血病和淋巴样恶性肿瘤。其它包括神经元、神经胶质、星形细胞、下丘脑、腺性、巨噬细胞、上皮、间质、囊胚腔、炎性、血管发生和免疫学(包括自身免疫性)障碍。
本申请抗体-药物缀合物(ADC)可通过适于待治疗的病症的任何途径来给药。所述ADC通常将胃肠外即输注、皮下、肌内、静脉内、皮内、鞘内和硬膜外给药。
待治疗的疾病或障碍通常为过度增殖性疾病例如癌症。本申请待治疗的癌症的实例包括但不局限于癌瘤、淋巴瘤、母细胞瘤、肉瘤和白血病或淋巴样恶性肿瘤。上述癌症的更具体实例包括鳞状细胞癌(例如上皮鳞状细胞癌)、包括小细胞肺癌、非小细胞肺癌、肺腺癌和肺鳞癌在内的肺癌、腹膜癌、肝细胞癌、包括胃肠癌在内的胃部癌症或胃癌、胰腺癌、胶质母细胞瘤、子宫颈癌、卵巢癌、肝癌、膀胱癌、肝瘤、乳腺癌、结肠癌、直肠癌、结肠直肠癌、子宫内膜癌或子宫癌、唾液腺癌、肾癌或肾部癌症、前列腺癌、外阴癌、甲状腺癌、肝癌瘤、肛门癌、阴茎癌及头颈癌。
可使用所述ADC化合物来治疗的自身免疫性疾病包括风湿性障碍(例如类风湿性关节炎、斯耶格伦综合征、硬皮病、狼疮例如全身性红斑狼疮(SLE)和狼疮性肾炎、多肌炎/皮肌炎、冷球蛋白血症、抗磷脂抗体综合征和牛皮癣性关节炎)、骨关节炎、自身免疫性胃肠和肝障碍(例如炎性肠病(例如溃疡性结肠炎和克罗恩病)、自身免疫性胃炎和恶性贫血、自身免疫性肝炎、原发性胆汁性肝硬变、原发性硬化性胆管炎和腹部疾病)、血管炎(例如包括丘-施血管炎、韦格纳肉芽肿病和多动脉炎在内的ANCA相关血管炎)、自身免疫性神经障碍(例如多发性硬化、眼阵挛肌阵挛综合征、重症肌无力、视神经脊髓炎、帕金森病、阿尔茨海默病和自身免疫性多神经病)、肾部障碍(例如肾小球肾炎、古德帕斯彻综合征和贝尔热隆疾病)、自身免疫性皮肤障碍(例如牛皮癣、荨麻疹、风疹、寻常型天疱疮、大疱性类天疱疮和皮肤红斑狼疮)、血液学障碍(例如血小板减少性紫癜、血栓性血小板减少性紫癜、输血后紫癜和自身免疫性溶血性贫血)、动脉粥样硬化、葡萄膜炎、自身免疫性听力疾病(例如内耳疾病和听力丧失)、贝切特病、雷诺综合征、器官移植和自身免疫性内分泌障碍(例如糖尿病相关自身免疫性疾病例如胰岛素依赖性糖尿病(IDDM)、艾迪生病和自身免疫性甲状腺疾病(例如格雷夫斯病和甲状腺炎))。更优选的上述疾病包括例如类风湿性关节炎、溃疡性结肠炎、ANCA相关血管炎、狼疮、多发性硬化、斯耶格伦综合征、格雷夫斯病、IDDM、恶性贫血、甲状腺炎和肾小球肾炎。
ADC适于预防或治疗疾病的剂量将取决于待治疗的上述疾病的类型、疾病的严重度和过程、分子的给药是出于预防还是治疗目的、先前的疗法、患者的临床病史和对抗体的响应及主治医师的判断。分子适于一次性或历经一系列治疗而给药于患者。约1mg/kg至15mg/kg(例如0.1-20mg/kg)分子为给药于患者的最初候选剂量，这取决于疾病的类型和严重度，无论是例如通过一次或多次分开给药，还是通过连续输注。典型的每日剂量可为约1mg/kg至100mg/kg或更多，这取决于上述因素。ADC待给药于患者的示例性剂量为约0.1至约10mg/kg患者体重。
本申请抗体或免疫缀合物在疗法中可单独使用或与其它药物联用。例如，本申请抗体或免疫缀合物可与至少一种额外的治疗剂共给药。
在一些实施方案中，hu7C2.v.2.2.LA抗体-药物缀合物(hu7C2ADC)与以下额外的治疗剂共给药，所述额外的治疗剂为另一种与HER2结合的抗体或免疫缀合物。在一些实施方案中，所述额外的治疗剂为(i)与HER2的结构域II结合的抗体或免疫缀合物；和/或(ii)与HER2的结构域IV结合的抗体或免疫缀合物。在一些实施方案中，所述额外的治疗剂为(i)与表位2C4结合的抗体或免疫缀合物；和/或(ii)与表位4D5结合的抗体或免疫缀合物。
在一些实施方案中，hu7C2.v.2.2.LA抗体-药物缀合物(hu7C2ADC)与选自以下的一种或多种额外的治疗剂共给药：曲妥珠单抗
Figure BDA0001680565890001131
T-DM1
Figure BDA0001680565890001132
和帕妥珠单抗
Figure BDA0001680565890001133
在一些实施方案中，hu7C2ADC与曲妥珠单抗共给药。在一些实施方案中，hu7C2ADC与T-DM1共给药。在一些实施方案中，hu7C2ADC与帕妥珠单抗共给药。在一些实施方案中，hu7C2ADC与曲妥珠单抗和帕妥珠单抗共给药。在一些实施方案中，hu7C2ADC与T-DM1和帕妥珠单抗共给药。
在一些实施方案中，所述额外的治疗剂为PD-1轴结合拮抗剂例如PD-L1结合拮抗剂。
上述组合疗法涵盖组合给药(其中两种或更多种治疗剂包含在同一或不同制剂中)和分开给药(其中本申请抗体或免疫缀合物的给药在给药额外的治疗剂和/或辅助剂前、与给药额外的治疗剂和/或辅助剂同时或在给药额外的治疗剂和/或辅助剂后进行)。本申请抗体或免疫缀合物还可与放射疗法联用。
本申请抗体或免疫缀合物(和任何额外的治疗剂)可通过任何合适的方式来给药，包括胃肠外、肺内和鼻内及在需要局部治疗的情况下的病灶内给药。胃肠外输注包括肌内、静脉内、动脉内、腹膜内或皮下给药。给药可通过任何合适的途径来进行，例如通过注射例如静脉内或皮下注射，这部分取决于给药是短期的还是长期的。本申请涉及各种给药方案，包括但不局限于单次或历经多个时间点的多次给药、推注给药和脉冲输注。
本申请抗体或免疫缀合物可按与良好医药实践一致的方式配制、分剂和给药。就此所考虑的因素包括所治疗的具体障碍、所治疗的具体哺乳动物、个体患者的临床状态、障碍的原因、递送药物的部位、给药方法、给药的时间安排和医药从业人员所已知的其它因素。所述抗体或免疫缀合物无须但任选与一种或多种当前用于对所关注的障碍进行预防或治疗的药物一起配制。上述其它药物的有效量取决于抗体或免疫缀合物在制剂中存在的量、障碍或治疗的类型和以上所论述的其它因素。这些其它药物通常以与本申请所述相同的剂量和给药途径或以本申请所述剂量的约1-99％或任何剂量且通过经验上/临床上确定合适的任何途径来使用。
本申请抗体或免疫缀合物适于预防或治疗疾病的剂量(当单独使用或与一种或多种其它额外的治疗剂联用时)将取决于待治疗的疾病的类型、抗体或免疫缀合物的类型、疾病的严重度和过程、抗体或免疫缀合物的给药是出于预防还是治疗目的、先前的疗法、患者的临床病史和对抗体或免疫缀合物的响应及主治医师的判断。所述抗体或免疫缀合物适于一次性或历经一系列治疗而给药于患者。约1μg/kg至15mg/kg(例如0.1mg/kg-10mg/kg)抗体或免疫缀合物可为给药于患者的最初候选剂量，这取决于疾病的类型和严重度，无论是例如通过一次或多次分开给药，还是通过连续输注。一种典型的每日剂量可为约1μg/kg至100mg/kg或更多，这取决于上述因素。就历时几天或更长时间的重复给药(取决于病症)而言，治疗通常可持续到出现对疾病症状的所需抑制。所述抗体或免疫缀合物的一种示例性剂量可为约0.05mg/kg至约10mg/kg。因此，可向患者给药一剂或多剂约0.5mg/kg、2.0mg/kg、4.0mg/kg或10mg/kg(或其任何组合)。上述剂量可间歇给药，例如每周或每三周(例如从而使患者接受约两剂至约二十剂或例如约六剂所述抗体)。可先后给药最初较高负荷剂量和一个或多个较低剂量。然而，可使用其它剂量方案。该疗法的过程通过常规技术和测定来容易地监测。
制品
在本申请另一个实施方案中，本申请提供制品或“试剂盒”，其含有可用于治疗上述障碍的物质。所述制品包含容器和在所述容器上或与所述容器关联的标签或包装插页。合适的容器包括例如瓶、小瓶、注射器、泡罩包装等。所述容器可由各种材料例如玻璃或塑料成形。所述容器容纳可有效治疗病症的抗体-药物缀合物(ADC)组合物且可具有无菌取口(例如所述容器可为具有可通过皮下注射针头来刺破的塞子的静脉内溶液袋或小瓶)。所述组合物中的至少一种活性剂为ADC。所述标签或包装插页指明所述组合物用于治疗所选病症例如癌症。可选择或额外地，所述制品还可包含第二(或第三)容器，其包含药用缓冲液例如抑菌性注射用水(BWFI)、磷酸盐缓冲盐水、林格溶液和葡萄糖溶液。其还可包含由商业和使用者角度来看合乎需要的其它物质，包括其它缓冲液、稀释剂、填充剂、针头和注射器。
实施例
实施例1制备单烷化剂吡咯并苯并二氮杂
Figure BDA0001680565890001141
药物部分(表1a)
合成(S)-7-甲氧基-8-((5-(((S)-7-甲氧基-2-亚甲基-5-氧代-2,3,5,10,11,11a-六氢-1H-苯并[e]吡咯并[1,2-a][1,4]二氮杂
Figure BDA0001680565890001152
-8-基)氧基)戊基)氧基)-2-亚甲基-2,3-二氢-1H-苯并[e]吡咯并[1,2-a][1,4]二氮杂
Figure BDA0001680565890001153
-5(11aH)-酮DM-1
Figure BDA0001680565890001151
在16℃向(5-((5-(5-氨基-4-((S)-2-(((叔丁基二甲基甲硅烷基)氧基)甲基)-4-亚甲基吡咯烷-1-羰基)-2-甲氧基苯氧基)戊基)氧基)-2-((S)-2-(((叔丁基二甲基甲硅烷基)氧基)甲基)-4-亚甲基吡咯烷-1-羰基)-4-甲氧基苯基)氨基甲酸叔丁酯1(0.50g,0.524mmol)在DCM(5.0mL)中的溶液中先后加入吡啶(83mg,1.05mmol)和氯甲酸烯丙酯即Alloc-Cl(95mg,0.786mmol,Sigma Aldrich,CAS号2937-50-0)。将混合物搅拌12h。混合物用DCM(30mL)稀释且先后用HCl水溶液(1N,5.0mL×2)和NaHCO3水溶液(5mL×2)洗涤。将有机层浓缩，得到粗产物，其通过快速柱(20％EtOAc/石油醚)来纯化，得到(5-((5-(5-(((烯丙基氧基)羰基)氨基)-4-((S)-2-(((叔丁基二甲基甲硅烷基)氧基)甲基)-4-亚甲基吡咯烷-1-羰基)-2-甲氧基苯氧基)戊基)氧基)-2-((S)-2-(((叔丁基二甲基甲硅烷基)氧基)甲基)-4-亚甲基吡咯烷-1-羰基)-4-甲氧基苯基)氨基甲酸叔丁酯2(500mg,92％)，其为无色油状物。LCMS:(ESI,10-80,AB,1.5min),RT＝1.200min,m/z＝1037[M+1]+。
将化合物2(500mg,0.48mmol)在HOAc/THF/H2O(6mL/3mL/2mL)中的溶液在室温搅拌1天。溶液用EtOAc(60mL)稀释，用H2O(20mL×4)、NaHCO3水溶液(20mL×2)和H2O(20mL)洗涤。有机层用Na2SO4干燥，过滤且真空浓缩，得到(5-((5-(5-(((烯丙基氧基)羰基)氨基)-4-((S)-2-(羟基甲基)-4-亚甲基吡咯烷-1-羰基)-2-甲氧基苯氧基)戊基)氧基)-2-((S)-2-(羟基甲基)-4-亚甲基吡咯烷-1-羰基)-4-甲氧基苯基)氨基甲酸叔丁酯3(390g,100％)，其为油状物。
向化合物3(200mg,0.247mmol)在无水DCM(15mL)中的搅拌溶液中加入戴斯-马丁高碘剂(419mg,0.988mmol)。将反应混合物在室温搅拌2h。其在0℃用Na2SO3水溶液(30mL)淬灭且用DCM(20mL×3)萃取。合并的有机层用盐水(20mL)洗涤，用Na2SO4干燥，过滤且浓缩。残余物通过制备型TLC(DCM/MeOH＝20:1)来纯化，得到(11S,11aS)-8-((5-(((11S,11aS)-10-(叔丁氧基羰基)-11-羟基-7-甲氧基-2-亚甲基-5-氧代-2,3,5,10,11,11a-六氢-1H-苯并[e]吡咯并[1,2-a][1,4]二氮杂
Figure BDA0001680565890001161
-8-基)氧基)戊基)氧基)-11-羟基-7-甲氧基-2-亚甲基-5-氧代-2,3,11,11a-四氢-1H-苯并[e]吡咯并[1,2-a][1,4]二氮杂
Figure BDA0001680565890001162
-10(5H)-羧酸烯丙酯4(80mg,40.2％)，其为无色固体。LCMS(ESI):RT＝0.709min,M-Boc-H2O+H+＝687.1,方法＝5-95AB/1.5min。
将化合物4(80mg,0.099mmol)在TFA(2.0mL)中的溶液在0℃搅拌0.5h。将溶液在0℃逐滴加到饱和NaHCO3溶液(120mL)中。混合物用DCM(20mL×3)萃取且合并的有机层用Na2SO4干燥，过滤且浓缩，得到粗(11S,11aS)-11-羟基-7-甲氧基-8-((5-(((S)-7-甲氧基-2-亚甲基-5-氧代-2,3,5,11a-四氢-1H-苯并[e]吡咯并[1,2-a][1,4]二氮杂
Figure BDA0001680565890001163
-8-基)氧基)戊基)氧基)-2-亚甲基-5-氧代-2,3,11,11a-四氢-1H-苯并[e]吡咯并[1,2-a][1,4]二氮杂
Figure BDA0001680565890001164
-10(5H)-羧酸烯丙酯5(50mg,73.5％)。
向化合物5(50mg,0.073mmol)在无水DCM(4.0mL)中的搅拌溶液中先后加入HOAc(13mg,0.219mmol)和NaBH3CN(23mg,0.365mmol)。将反应混合物在室温搅拌过夜。然后将混合物真空浓缩且通过制备型TLC(DCM/MeOH＝9:1)来纯化，得到(11S,11aS)-11-羟基-7-甲氧基-8-((5-(((S)-7-甲氧基-2-亚甲基-5-氧代-2,3,5,10,11,11a-六氢-1H-苯并[e]吡咯并[1,2-a][1,4]二氮杂
Figure BDA0001680565890001165
-8-基)氧基)戊基)氧基)-2-亚甲基-5-氧代-2,3,11,11a-四氢-1H-苯并[e]吡咯并[1,2-a][1,4]二氮杂
Figure BDA0001680565890001166
-10(5H)-羧酸烯丙酯6(40mg,80.0％)，其为无色固体。LCMS(ESI):RT＝3.085min,M+H+＝689.1,方法＝10-80AB/7min。
向化合物6(40mg,0.058mmol)在无水DCM(3.0mL)中的搅拌溶液中先后加入吡咯烷(21mg,0.29mmol)和Pd(PPh3)4(7.0mg,0.006mmol)。将反应混合物在室温在氮气下搅拌2h。然后将混合物真空浓缩且通过制备型TLC(DCM/MeOH＝1:1)来纯化，得到DM-1(12mg,35.3％)，其为灰白色固体。LCMS(ESI):RT＝0.651min,M+H+＝587.1,方法＝5-95AB/1.5min。1HNMR(400MHz,DCCl3)δ7.67(d,J＝4.4Hz,1H),7.57(s,1H),7.49(s,1H),6.79(s,1H),6.04(s,1H),5.18(d,J＝11.6Hz,2H),5.04(d,J＝11.2Hz,2H),4.41-4.37(m,1H),4.28-4.25(m,3H),4.13-4.00(m,3H),3.98-3.95(m,2H),3.93(s,3H),3.89-3.85(m,1H),3.82(s,3H),3.54(d,J＝30Hz,1H),3.34-3.28(dd,J＝12.4,9.2Hz,1H),3.15-3.08(m,1H),2.96-2.86(m,2H),2.44-2.39(dd,J＝15.2,6.0Hz,1H),1.95-1.90(m,4H),1.67-1.62(m,2H)。
合成(S)-7-甲氧基-8-((5-(((S)-7-甲氧基-2-亚甲基-5-氧代-2,3,5,11a-四氢-1H-苯并[e]吡咯并[1,2-a][1,4]二氮杂
Figure BDA0001680565890001172
-8-基)氧基)戊基)氧基)-2-亚甲基-2,3-二氢-1H-苯并[e]吡咯并[1,2-a][1,4]二氮杂
Figure BDA0001680565890001173
-5,11(10H,11aH)-二酮DM-2
Figure BDA0001680565890001171
在0℃向((戊烷-1,5-二基二(氧基))二(6-((S)-2-(羟基甲基)-4-亚甲基吡咯烷-1-羰基)-4-甲氧基-3,1-亚苯基))二氨基甲酸二叔丁酯7(200mg,0.24mmol)在无水DCM(20mL)中的搅拌溶液中加入DMP(610mg,1.44mmol)。将反应混合物在室温搅拌3h。混合物用EtOAc(100mL)稀释且在0℃用Na2SO3水溶液(30mL)淬灭。有机层用H2O(30mL×3)、NaHCO3水溶液(30mL)和H2O(30mL)洗涤，然后用Na2SO4干燥，过滤且浓缩。残余物通过制备型HPLC来纯化，得到(S)-8-((5-(((11S,11aS)-10-(叔丁氧基羰基)-11-羟基-7-甲氧基-2-亚甲基-5-氧代-2,3,5,10,11,11a-六氢-1H-苯并[e]吡咯并[1,2-a][1,4]二氮杂
Figure BDA0001680565890001174
-8-基)氧基)戊基)氧基)-7-甲氧基-2-亚甲基-5,11-二氧代-2,3,11,11a-四氢-1H-苯并[e]吡咯并[1,2-a][1,4]二氮杂
Figure BDA0001680565890001175
-10(5H)-羧酸叔丁酯8(58mg,30.0％)，其为白色固体。LCMS(ESI):RT＝0.748min,M+Na+＝841.4,方法＝5-95AB/1.5min。
将化合物8(58mg,0.07mmol)在95％TFA/H2O(2.0mL)中的溶液在0℃搅拌2h。然后将溶液在0℃逐滴加到饱和NaHCO3溶液(120mL)中。混合物用DCM(20mL×3)萃取。合并的有机层用Na2SO4干燥，过滤，浓缩且通过制备型HPLC来纯化，得到DM-2(15.7mg,38％)，其为白色固体。1H NMR(400MHz,CDCl3)δppm 1.65-1.73(m,2H)1.89-2.00(m,4H)2.77-2.89(m,1H)2.91-3.00(m,1H)3.08-3.19(m,1H)3.46(d,J＝16.6Hz,1H)3.91(s,3H)3.94(s,3H)4.02(t,J＝6.5Hz,2H)4.06-4.19(m,2H)4.20-4.26(m,2H)4.30(s,2H)4.43(d,J＝15.6Hz,1H)5.09-5.26(m,4H)6.41(s,1H)6.80(s,1H)7.43(s,1H)7.51(s,1H)7.71(d,J＝4.5Hz,1H)7.83(s,1H)。
合成(S)-8-甲氧基-9-((5-(((S)-7-甲氧基-2-亚甲基-5-氧代-2,3,5,11a-四氢-1H-苯并[e]吡咯并[1,2-a][1,4]二氮杂
Figure BDA0001680565890001182
-8-基)氧基)戊基)氧基)-1,3,4,12a-四氢-6H-苯并[e][1,4]噁嗪并[4,3-a][1,4]二氮杂
Figure BDA0001680565890001183
-6,12(11H)-二酮DM-3
Figure BDA0001680565890001181
向4-羟基-3-甲氧基苯甲酸甲酯38(3.0g,16.5mmol)在DMF(100mL)中的溶液中加入苄基溴(4.22g,24.7mmol)和K2CO3(4.56g,32.9mmol)。将反应混合物在100℃搅拌3h。将混合物真空浓缩且溶解在水(50mL)中，用EtOAC(30mL×2)萃取，用NaCl(30mL)洗涤，用Na2SO4干燥。将其浓缩且通过硅胶色谱(0-30％EtOAc/石油醚)来纯化，得到4-(苄基氧基)-3-甲氧基苯甲酸甲酯39(3.8g,13.5mmol,82.2％收率)，其为白色固体。LCMS(5-95AB/1.5min):RT＝0.787min,[M+H]+272.9
将39(2.0g,7.34mmol)在HOAc(5.0mL)中的溶液在0℃加到HOAc(5.0mL)和HNO3(20.6mL,441mmol)的混合物中。将反应混合物在20℃搅拌30min。将混合物倒入冰水(100mL)中且调整pH至5-6。将混合物过滤且将滤液浓缩，得到4-(苄基氧基)-5-甲氧基-2-硝基苯甲酸甲酯40(2.3g,7.25mmol,98.7％收率)，其为黄色固体。
向40(2.3g,7.25mmol)在MeOH(20mL)中的溶液中加入LiOH(2.25mL,36.24mmol)在水(5mL)中的溶液。将反应混合物在20℃搅拌2h。将混合物倒入水(50mL)中且用EtOAc(50mL)洗涤。水相用2M HCl调整pH至3-4且用EtOAc(50mL×3)萃取。其用NaCl(25mL)洗涤，用Na2SO4干燥且真空浓缩，得到粗4-(苄基氧基)-5-甲氧基-2-硝基苯甲酸41(2.0g,6.59mmol,91％收率)，其为白色固体。
向41(460.0mg,1.52mmol)、(S)-吗啉-3-羧酸甲酯42(CAS登记号741288-31-3,Hicks,F.等人(2013)Organic Process Research&Development,17(5):829-837)(330mg,2.28mmol)和二异丙基乙基胺即DIEA(392mg,3.03mmol)在DCM(30mL)中的混合物中加入HATU(865mg,2.28mmol)。将反应溶液在20℃搅拌8h。将溶液真空浓缩且通过硅胶色谱(0-50％EtOAC/石油醚)来纯化，得到(S)-4-(4-(苄基氧基)-5-甲氧基-2-硝基苯甲酰基)吗啉-3-羧酸甲酯43(520mg,1.21mmol,79.7％收率)，其为黄色油状物。LCMS(5-95AB/1.5min):RT＝0.731min,[M+Na]+453.0。
向NH4Cl(646mg,12.1mmol)在EtOH(20mL)和水(15mL)中的溶液中加入43(520mg,1.21mmol)和铁(539mg,9.67mmol)。将反应混合物在90℃搅拌12h后，将其过滤且滤液用EtOAc(50mL×3)萃取，用NaCl(20mL)洗涤，用Na2SO4干燥且真空浓缩。反应混合物通过硅胶色谱(0-30％EtOAc/石油醚)来纯化，得到(S)-9-(苄基氧基)-8-甲氧基-1,3,4,12a-四氢-6H-苯并[e][1,4]噁嗪并[4,3-a][1,4]二氮杂
Figure BDA0001680565890001191
-6,12(11H)-二酮44(320mg,0.84mmol,69.7％收率)，其为白色固体。LCMS(5-95AB/1.5min):RT＝0.638min,[M+H]+368.9。
向44(260mg,0.71mmol)在DCM(10mL)和MeOH(1.0mL)中的溶液中加入10％钯/碳(26.0mg,0.020mmol)。将反应混合物在18℃在氢气(15psi)下搅拌1h。将反应混合物过滤且真空浓缩，得到(S)-9-羟基-8-甲氧基-1,3,4,12a-四氢-6H-苯并[e][1,4]噁嗪并[4,3-a][1,4]二氮杂
Figure BDA0001680565890001192
-6,12(11H)-二酮45(100mg,0.359mmol,50.9％收率)，其为白色固体。
向(11S,11aS)-8-羟基-7-甲氧基-2-亚甲基-5-氧代-11-((四氢-2H-吡喃-2-基)氧基)-2,3,11,11a-四氢-1H-苯并[e]吡咯并[1,2-a][1,4]二氮杂
Figure BDA0001680565890001193
-10(5H)-羧酸叔丁酯46(200mg,0.43mmol)在DMF(5.0mL)中的溶液中加入K2CO3(60mg,0.43mmol)和1,5-二碘戊烷(703mg,2.17mmol)。将反应混合物在90℃搅拌12h。将反应混合物浓缩且通过硅胶色谱(0-50％EtOAc/石油醚)来纯化，得到(11S,11aS)-8-((5-碘戊基)氧基)-7-甲氧基-2-亚甲基-5-氧代-11-((四氢-2H-吡喃-2-基)氧基)-2,3,11,11a-四氢-1H-苯并[e]吡咯并[1,2-a][1,4]二氮杂
Figure BDA0001680565890001201
-10(5H)-羧酸叔丁酯47(129mg,0.191mmol,43.9％收率)，其为黄色油状物。LCMS(5-95AB/1.5min):RT＝0.907min,[M+H]+657.1。
将47(100mg,0.150mmol)、45(50.9mg,0.18mmol)和K2CO3(31.6mg,0.23mmol)在DMF(5.0mL)中混合。将混合物在90℃搅拌3h。将混合物真空浓缩且通过色谱(0-5％MeOH/DCM,Rf＝0.4)来纯化，得到(11S,11aS)-7-甲氧基-8-((5-(((S)-8-甲氧基-6,12-二氧代-3,4,6,11,12,12a-六氢-1H-苯并[e][1,4]噁嗪并[4,3-a][1,4]二氮杂
Figure BDA0001680565890001202
-9-基)氧基)戊基)氧基)-2-亚甲基-5-氧代-11-((四氢-2H-吡喃-2-基)氧基)-2,3,11,11a-四氢-1H-苯并[e]吡咯并[1,2-a][1,4]二氮杂
Figure BDA0001680565890001203
-10(5H)-羧酸叔丁酯48(75mg,0.093mmol,61％收率)，其为无色油状物。
在0℃向化合物48(75.0mg,0.090mmol)中添加TFA(1.9mL)和水(0.10mL)。将混合物在17℃搅拌1h。将反应混合物倒入饱和NaHCO3(200mL)中且用DCM(100mL×3)萃取，用盐水(50mL)洗涤，干燥且通过制备型TLC(4％甲醇/DCM,Rf＝0.5)来纯化，得到DM-3(18.9mg,0.030mmol,32.3％收率)，其为白色固体。LCMS(5-95AB/1.5min):RT＝0.633min,[M+H]+605.2。1HNMR(400MHz,CDCl3)δ8.16(s,1H),7.64(d,J＝4.4Hz,1H),7.43(s,1H),7.22(d,J＝23.2Hz,1H),6.73(d,J＝2.4Hz,1H),6.35(d,J＝2.8Hz,1H),5.11(d,J＝10.8Hz,2H),4.41(s,3H),4.38(s,2H),4.22(s,3H),4.05(s,3H),4.04(s,3H),4.02(s,3H),3.95-3.92(m,1H),3.86(s,1H),3.83-3.62(m,1H),3.18(s,1H),2.88(d,J＝30.8Hz,1H),1.86(s,4H)1.79-1.62(m,2H)。
合成(S)-7-甲氧基-8-((5-(((S)-7-甲氧基-5-氧代-2,3,5,11a-四氢-1H-苯并[e]吡咯并[1,2-a]氮杂
Figure BDA0001680565890001204
-8-基)氧基)戊基)氧基)-2-亚甲基-1,2,3,11a-四氢-5H-苯并[e]吡咯并[1,2-a][1,4]二氮杂
Figure BDA0001680565890001205
-5-酮DM-5
Figure BDA0001680565890001211
向(S)-2-(羟基甲基)吡咯烷-1-羧酸叔丁酯25(3.0g,14.9mmol)在DCM(80mL)中的溶液中加入戴斯-马丁高碘剂即DMP(9.48g,22.4mmol)。将混合物在0℃搅拌1h后，向其中加入Na2S2O3(50mL)/NaHCO3(50mL)和MTBE(130mL)。有机相用水(60mL×3)洗涤且浓缩，得到(S)-2-甲酰基吡咯烷-1-羧酸叔丁酯26(2.9g,14.6mmol,97.6％收率)，其为无色油状物。
向化合物26(2.9g,14.6mmol)和(1-重氮基-2-氧代-丙基)膦酸二甲酯在MeOH(20mL)中的溶液中加入K2CO3(6.03g,43.7mmol)。将反应混合物在20℃搅拌1h后，将其真空浓缩，残余物通过柱色谱(10％EtOAc/PE)来纯化，得到(S)-2-乙炔基吡咯烷-1-羧酸叔丁酯27(2.0g,10.24mmol,70.4％收率)，其为无色油状物。
向化合物27(2.0g,10.2mmol)和4-(苄基氧基)-2-溴-5-甲氧基苯甲酸甲酯28(5.4g,15.4mmol)在DMF(50mL)中的溶液中加入Cs2CO3(3.97g,20.5mmol)和Pd(PPh3)4(785mg,1.54mmol)。将混合物在95℃在氮气下搅拌1h。将混合物浓缩且通过快速柱色谱(20％EtOAc/PE)来纯化，得到(S)-2-((5-(苄基氧基)-4-甲氧基-2-(甲氧基羰基)苯基)乙炔基)吡咯烷-1-羧酸叔丁酯29(1.60g,2.44mmol,23.8％收率)，其为无色油状物。LCMS(5-95AB/1.5min):RT＝0.994min,[M+H-56]+410.0。
向化合物29(2.0g,4.3mmol)在MeOH(10mL)中的溶液中加入Pd/CaCO3(200.0mg,21.5mmol)。将混合物在30℃在氢气(1atm)下搅拌1h。将混合物过滤且将滤液浓缩，得到粗产物，其通过快速柱色谱(10％EtOAc/PE)来纯化，得到(S,Z)-2-(5-(苄基氧基)-4-甲氧基-2-(甲氧基羰基)苯乙烯基)吡咯烷-1-羧酸叔丁酯30(1.0g,2.14mmol,49.8％收率)，其为白色固体。LCMS(5-95AB/1.5min):RT＝0.983min,[M+Na]+490.1。
向化合物30(0.9g,1.92mmol)在EtOAc(10mL)中的溶液中加入HCl/EtOAc(6.0mL)。将混合物在25℃搅拌1h后，将其浓缩，得到(S,Z)-4-(苄基氧基)-5-甲氧基-2-(2-(吡咯烷-2-基)乙烯基)苯甲酸甲酯31(0.77g,1.90mmol,99％收率)，其为白色固体。
向化合物31(0.77g,1.91mmol)在MeOH(30mL)中的溶液中加入NaOMe(1.03g,19.06mmol)。将混合物在30℃搅拌2h。将混合物浓缩且通过快速柱色谱(25-75％EtOAc/PE)来纯化，得到(S)-8-(苄基氧基)-7-甲氧基-1,2,3,11a-四氢-5H-苯并[e]吡咯并[1,2-a]氮杂
Figure BDA0001680565890001221
-5-酮32(0.60g,1.79mmol,93.8％收率)，其为黄色油状物。1H NMR(400MHz,CDCl3)δppm 1.89-2.11(m,3H)2.18-2.33(m,1H)3.59(dt,J＝12.0,7.6Hz,1H)3.80(dt,J＝11.5,5.8Hz,1H)3.90-3.96(m,1H)3.97(s,3H)5.19(s,2H)5.86(dd,J＝10.0,4.8Hz,1H)6.53(dd,J＝10.0,2.0Hz,1H)6.69(s,1H)7.29-7.35(m,1H)7.36-7.41(m,2H)7.42-7.48(m,2H)7.62(s,1H)。
向化合物32(580mg,1.73mmol)在DCM(50mL)中的溶液中加入TiCl4(656mg,3.46mmol)。将混合物在30℃搅拌12h。向混合物中加入1MHCl(20mL)和EtOAc(100mL)。有机层用水(50mL×3)洗涤且浓缩，得到(S)-8-羟基-7-甲氧基-1,2,3,11a-四氢-5H-苯并[e]吡咯并[1,2-a]氮杂
Figure BDA0001680565890001222
-5-酮33(250mg,0.44mmol,25.3％收率)，其为黄色固体。
向化合物33(50.0mg,0.20mmol)在DMF(5.0mL)中的溶液中加入K2CO3(42.26mg,0.31mmol)和1,5-二碘戊烷(333mg,1.0mmol)。将反应混合物在90℃搅拌3h。反应混合物通过硅胶色谱(0-50％EtOAC/石油醚)来纯化，得到(S)-8-((5-羟基戊基)氧基)-7-甲氧基-1,2,3,11a-四氢-5H-苯并[e]吡咯并[1,2-a]氮杂
Figure BDA0001680565890001231
-5-酮34(60mg,0.178mmol,87.6％收率)，其为油状物。LCMS(5-95AB/1.5min):RT＝0.765min,[M+H]+332.0。
向化合物34(60.0mg,0.18mmol)在DCM(6.0mL)中的溶液中加入三乙胺(55mg,0.54mmol)和甲磺酰氯即MsCl(41mg,0.36mmol)。将混合物在35℃搅拌1h后，加入EtOAc(80mL)且用水(50mL×3)洗涤。将有机层浓缩，得到甲磺酸(S)-5-((7-甲氧基-5-氧代-2,3,5,11a-四氢-1H-苯并[e]吡咯并[1,2-a]氮杂
Figure BDA0001680565890001232
-8-基)氧基)戊基酯35(70mg)，其为无色油状物。LCMS(5-95AB/1.5min):RT＝0.679min,[M+H]+410.0。
向化合物35(70mg,0.17mmol)和(11S,11aS)-8-羟基-7-甲氧基-2-亚甲基-5-氧代-11-((四氢-2H-吡喃-2-基)氧基)-2,3,11,11a-四氢-1H-苯并[e]吡咯并[1,2-a][1,4]二氮杂
Figure BDA0001680565890001233
-10(5H)-羧酸叔丁酯36(87mg,0.19mmol)在DMF(5.0mL)中的溶液中加入K2CO3(47mg,0.34mmol)和KI(5.68mg,0.030mmol)。将混合物在90℃搅拌3h且通过制备型HPLC(HCOOH)来纯化，得到(11aR)-7-甲氧基-8-((5-(((S)-7-甲氧基-5-氧代-2,3,5,11a-四氢-1H-苯并[e]吡咯并[1,2-a]氮杂
Figure BDA0001680565890001234
-8-基)氧基)戊基)氧基)-2-亚甲基-5-氧代-11a-((四氢-2H-吡喃-2-基)氧基)-2,3,11,11a-四氢-1H-苯并[e]吡咯并[1,2-a][1,4]二氮杂
Figure BDA0001680565890001235
-10(5H)-羧酸叔丁酯37(70mg,0.084mmol,49.2％收率)，其为白色固体。LCMS(5-95AB/1.5min):RT＝0.845min,[M+H]+774.4。
将化合物37(50mg,0.060mmol)在TFA(1.9mL)和水(0.10mL)中的溶液在35℃搅拌1h。将混合物分配在饱和NaHCO3(30mL)和EtOAc(50mL)之间。有机层用水(30mL×2)和盐水(30mL)洗涤且用Na2SO4干燥。将其浓缩且通过制备型TLC(5％MeOH/DCM,Rf＝0.5)来纯化，得到DM-5(20mg,0.034mmol,53.1％收率)，其为白色固体。LCMS(5-95AB/1.5min):RT＝0.825min,[M+H]+572.1。1H NMR(400MHz,CDCl3)δppm 1.65-1.75(m,3H)1.88-2.10(m,8H)2.19-2.31(m,1H)2.82-3.29(m,2H)3.60(dt,J＝11.9,7.5Hz,1H)3.81(dt,J＝11.6,5.9Hz,1H)3.86-3.91(m,1H)3.94(s,6H)3.97(br.s.,1H)4.01-4.18(m,4H)4.30(s,2H)5.19(d,J＝10.6Hz,2H)5.89(dd,J＝9.9,5.1Hz,1H)6.53-6.63(m,1H)6.66(s,1H)6.81(s,1H)7.51(s,1H)7.59(s,1H)7.68(d,J＝4.4Hz,1H)。
实施例2制备单烷化剂吡咯并苯并二氮杂
Figure BDA0001680565890001236
接头-药物中间体(表2A)
Figure BDA0001680565890001241
使1,2-二(吡啶-2-基)二硫烷和2-巯基乙醇在吡啶和甲醇中在室温反应，得到2-(吡啶-2-基二硫基)乙醇。用氯甲酸4-硝基苯基酯在三乙胺和乙腈中进行酰化，得到碳酸4-硝基苯基酯2-(吡啶-2-基二硫基)乙基酯9。
向1,2-二(5-硝基吡啶-2-基)二硫烷10(1.0g,3.22mmol)在无水DMF/MeOH(25mL/25mL)中的混合物中先后加入HOAc(0.1mL)和2-氨基乙硫醇盐酸盐11(183mg,1.61mmol)。将反应混合物在室温搅拌过夜后，将其真空浓缩以除去溶剂且残余物用DCM(30mL×4)洗涤，得到2-((5-硝基吡啶-2-基)二硫基)乙胺盐酸盐12，其为浅黄色固体(300mg,69.6％)。1HNMR(400MHz,DMSO-d6)δ9.28(d,J＝2.4Hz,1H),8.56(dd,J＝8.8,2.4Hz,1H),8.24(s,4H),8.03(d,J＝8.8Hz,1H),3.15-3.13(m,2H),3.08-3.06(m,2H)。
Figure BDA0001680565890001242
将1,2-二(5-硝基吡啶-2-基)二硫烷10(9.6g,30.97mmol)和2-巯基乙醇(1.21g,15.49mmol)在无水DCM/CH3OH(250mL/250mL)中的溶液在室温在氮气下搅拌24h。将混合物真空浓缩后，残余物用DCM(300mL)稀释。加入MnO2(10g)且将混合物在室温再搅拌0.5h。混合物通过硅胶柱色谱(DCM/MeOH＝100/1至100/1)来纯化，得到2-((5-硝基吡啶-2-基)二硫基)乙醇13(2.2g,61.1％)，其为棕色油状物。1H NMR(400MHz,CDCl3)δ9.33(d,J＝2.8Hz,1H),8.38-8.35(dd,J＝9.2,2.8Hz,1H),7.67(d,J＝9.2Hz,1H),4.10(t,J＝7.2Hz,1H),3.81-3.76(q,2H),3.01(t,J＝5.2Hz,2H)。
向13(500mg,2.15mmol)在无水DMF(10mL)中的溶液中先后加入DIEA(834mg,6.45mmol)和PNP碳酸酯(碳酸二(4-硝基苯基)酯,1.31g,4.31mmol)。将反应溶液在室温搅拌4h且混合物通过制备型HPLC(FA)来纯化，得到碳酸4-硝基苯基酯2-((5-硝基吡啶-2-基)二硫基)乙基酯14(270mg,33.1％)，其为棕色油状物。1H NMR(400MHz,CDCl3)δ9.30(d,J＝2.4Hz,1H),8.43-8.40(dd,J＝8.8,2.4Hz,1H),8.30-8.28(m,2H),7.87(d,J＝8.8Hz,1H),7.39-7.37(m,2H),4.56(t,J＝6.4Hz,2H),3.21(t,J＝6.4Hz,2H)。
Figure BDA0001680565890001251
合成(11S,11aS)-11-羟基-7-甲氧基-8-((5-(((S)-7-甲氧基-2-亚甲基-5,11-二氧代-2,3,5,10,11,11a-六氢-1H-苯并[e]吡咯并[1,2-a][1,4]二氮杂
Figure BDA0001680565890001252
-8-基)氧基)戊基)氧基)-2-亚甲基-5-氧代-2,3,11,11a-四氢-1H-苯并[e]吡咯并[1,2-a][1,4]二氮杂
Figure BDA0001680565890001253
-10(5H)-羧酸(R)-2-((5-硝基吡啶-2-基)二硫基)丙基酯(LD-51)
Figure BDA0001680565890001261
将硫酰氯(2.35mL 1.0M在DCM中的溶液,2.35mmol)在0℃(冰/丙酮)在氩气气氛下逐滴加到5-硝基吡啶-2-硫醇(334mg,2.14mmol)在无水DCM(7.5mL)中的搅拌混悬液中。反应混合物由黄色混悬液变为黄色溶液且温热至室温，然后搅拌2小时，然后溶剂通过真空蒸发来除去，得到黄色固体。将固体重新溶解在DCM(15mL)中且用(R)-2-巯基丙-1-醇(213mg,2.31mmol)在无水DCM(7.5mL)中的溶液在0℃在氩气气氛下逐滴处理。将反应混合物温热至室温且搅拌20小时，此时LC/MS分析表明基本上形成保留时间为1.41分钟且(ES+)m/z为247([M+H]+,～100％相对强度)的产物。析出物通过过滤来除去且将滤液真空蒸发，得到橙色固体，其用H2O(20mL)处理且用氢氧化铵溶液碱化。混合物用DCM(3×25mL)萃取且合并的萃取物用H2O(20mL)、盐水(20mL)洗涤，干燥(MgSO4)，过滤且真空蒸发，得到粗产物。通过快速色谱(增量为1％的梯度洗脱:100％DCM至98:2v/v DCM/MeOH)来纯化，得到(R)-2-((5-硝基吡啶-2-基)二硫基)丙-1-醇15，其为油状物(111mg,21％收率)。
在20℃向三光气(Cl3COCOOCCl3,Sigma Aldrich,CAS登记号32315-10-9,241mg,0.812mmol)在DCM(10mL)中的溶液中逐滴加入(R)-2-((5-硝基吡啶-2-基)二硫基)丙-1-醇15(500mg,2.03mmol)和吡啶(153mg,1.93mmol)在DCM(10mL)中的溶液。将反应混合物在20℃搅拌30min后，将其浓缩且氯甲酸(R)-2-((5-硝基吡啶-2-基)二硫基)丙基酯16不经进一步纯化即直接用于下一步。
将化合物16(626mg,2.03mmol)在DCM(10mL)中的溶液在20℃逐滴加到(5-((5-(5-氨基-4-((S)-2-(((叔丁基二甲基甲硅烷基)氧基)甲基)-4-亚甲基吡咯烷-1-羰基)-2-甲氧基苯氧基)戊基)氧基)-2-((S)-2-(((叔丁基二甲基甲硅烷基)氧基)甲基)-4-亚甲基吡咯烷-1-羰基)-4-甲氧基苯基)氨基甲酸叔丁酯1(1.50g,1.57mmol)和吡啶(161mg,2.05mmol)的溶液中。将反应混合物在20℃搅拌3h。将溶剂除去且残余物通过快速柱(EtOAc/石油醚0～30％)来纯化，得到(2-((S)-2-(((叔丁基二甲基甲硅烷基)氧基)甲基)-4-亚甲基吡咯烷-1-羰基)-5-((5-(4-((S)-2-(((叔丁基二甲基甲硅烷基)氧基)甲基)-4-亚甲基吡咯烷-1-羰基)-2-甲氧基-5-((((R)-2-((5-硝基吡啶-2-基)二硫基)丙氧基)羰基)氨基)苯氧基)戊基)氧基)-4-甲氧基苯基)氨基甲酸叔丁酯17(1.6g,83％)，其为黄色泡沫状物。LCMS(5-95AB/1.5min):RT＝1.360min,[M+Na]+1247.4。
在20℃向化合物17(900mg,0.734mmol)在THF/H2O(10mL/10mL)中的溶液中加入HOAc(15mL)。将反应混合物在20℃搅拌24h。反应混合物用EtOAc(50mL)稀释且用水(2×20mL)、饱和NaHCO3水溶液(30mL)和盐水(30mL)洗涤。将其干燥且浓缩，得到粗产物，其通过快速色谱(DCM:MeOH＝100:1～20:1)来纯化，得到(2-((S)-2-(羟基甲基)-4-亚甲基吡咯烷-1-羰基)-5-((5-(4-((S)-2-(羟基甲基)-4-亚甲基吡咯烷-1-羰基)-2-甲氧基-5-((((R)-2-((5-硝基吡啶-2-基)二硫基)丙氧基)羰基)氨基)苯氧基)戊基)氧基)-4-甲氧基苯基)氨基甲酸叔丁酯18(700mg,95.6％)，其为黄色泡沫状物。LCMS(5-95AB/1.5min):RT＝0.978min,[M+H]+997.6。
在20℃向化合物18(700mg,0.702mmol)在DCM(40mL)中的溶液中加入戴斯-马丁高碘剂(DMP,1,1,1-三(乙酰基氧基)-1,1-二氢-1,2-苯并碘杂氧杂环戊烯-3(1H)-酮,SigmaAldrich,CAS登记号87413-09-0,1.19mg,2.81mmol)。将反应混合物在20℃搅拌1h。反应用NaHCO3/Na2SO3(20mL/20mL)饱和溶液淬灭且用DCM(3×10mL)萃取。合并的有机层用NaHCO3/Na2SO3(10mL/10mL)、盐水(20mL)洗涤，干燥且浓缩，得到(11S,11aS)-11-羟基-8-((5-(((11S,11aS)-11-羟基-7-甲氧基-2-亚甲基-10-(((R)-2-((5-硝基吡啶-2-基)二硫基)丙氧基)羰基)-5-氧代-2,3,5,10,11,11a-六氢-1H-苯并[e]吡咯并[1,2-a][1,4]二氮杂
Figure BDA0001680565890001281
-8-基)氧基)戊基)氧基)-7-甲氧基-2-亚甲基-5-氧代-2,3,11,11a-四氢-1H-苯并[e]吡咯并[1,2-a][1,4]二氮杂
Figure BDA0001680565890001282
-10(5H)-羧酸叔丁酯19(LCMS(5-95AB/1.5min):RT＝0.912min,[M+Na]+1015.3)和(S)-8-((5-(((11S,11aS)-11-羟基-7-甲氧基-2-亚甲基-10-(((R)-2-((5-硝基吡啶-2-基)二硫基)丙氧基)羰基)-5-氧代-2,3,5,10,11,11a-六氢-1H-苯并[e]吡咯并[1,2-a][1,4]二氮杂
Figure BDA0001680565890001284
-8-基)氧基)戊基)氧基)-7-甲氧基-2-亚甲基-5,11-二氧代-2,3,11,11a-四氢-1H-苯并[e]吡咯并[1,2-a][1,4]二氮杂
Figure BDA0001680565890001283
-10(5H)-羧酸叔丁酯20的混合物，其直接用于下一步。
将冷的TFA(8mL)在0℃加到19和20的粗混合物(600mg,0.604mmol)中。将反应混合物在0℃搅拌30min。将反应混合物在0℃逐滴加到冷的饱和NaHCO3水溶液(150mL)中且用DCM(4×40mL)萃取。合并的有机层用盐水(50mL)洗涤，干燥且浓缩，得到粗产物，其通过制备型TLC(DCM:MeOH＝15:1)来纯化，分离到纯LD-51(28mg,5.2％)，其为黄色泡沫状物。LCMS:(5-95,AB,1.5min),0.739min,m/z＝891.2(M+1)。1H NMR(400MHz,CDCl3)δ9.26(s,1H),8.31(d,J＝6.8H,1Hz),8.18(s,1H),7.62(d,J＝8.4Hz,1H),7.41(s,1H),7.18(s,1H),6.77(s,1H),6.41(s,1H),5.60(d,J＝10.0Hz,1H),5.20-5.06(m,4H),4.50-3.81(m,18H),3.70-3.60(m,1H),3.50-3.40(m,1H),3.18(br,1H),2.98-2.62(m,6H),1.95-1.86(m,4H),1.70-1.52(m,2H),1.17(d,J＝6.4Hz,3H)。
合成(11S,11aS)-11-羟基-7-甲氧基-8-((5-(((S)-7-甲氧基-2-亚甲基-5-氧代-2,3,5,10,11,11a-六氢-1H-苯并[e]吡咯并[1,2-a][1,4]二氮杂
Figure BDA0001680565890001285
-8-基)氧基)戊基)氧基)-2-亚甲基-5-氧代-2,3,11,11a-四氢-1H-苯并[e]吡咯并[1,2-a][1,4]二氮杂
Figure BDA0001680565890001286
-10(5H)-羧酸(R)-2-((5-硝基吡啶-2-基)二硫基)丙基酯(LD-52)
在0℃向CLD-1(45mg,0.050mmol)在THF(3.0mL)中的溶液中加入NaBH3CN(3mg,0.050mmol)和HOAc(0.05mL)。将混合物在0℃搅拌2min。反应溶液通过制备型TLC(7％甲醇/DCM,Rf＝0.5)来纯化，得到LD-52(20mg,0.022mmol,42.1％收率)，其为白色固体。LCMS(5-95AB/1.5min):RT＝0.878min,[M+H]+877.2。1H NMR(400MHz,CDCl3)δ9.19(s,1H),8.27(d,J＝6.8Hz,1H),7.58(d,J＝8.8Hz,1H),7.53(s,1H),7.24(s,1H),6.69(s,1H),6.02(s,1H),5.56(d,J＝9.7Hz,1H),5.12(s,2H),5.05(d,J＝11.2Hz,2H),4.54(br.s,1H),4.42-4.38(m,1H),4.29-4.22(m,4H),4.13-4.09(m,1H),4.02-3.39(m,8H),3.79(s,3H),3.63(t,J＝8.0Hz,1H),3.53(d,J＝11.9Hz,1H),3.37-3.31(m,1H),3.16-3.14(m,1H),2.94-2.88(m,2H),2.74-2.71(m,1H),2.44-2.39(m,1H),1.93-1.85(m,4H),1.66-1.56(m,2H),1.24-1.14(m,3H)。
实施例3制备比较剂吡咯并苯并二氮杂
Figure BDA0001680565890001291
接头-药物中间体(表2B)
合成(11S,11aS)-11-羟基-7-甲氧基-8-((5-(((S)-7-甲氧基-2-亚甲基-5-氧代-2,3,5,10,11,11a-六氢-1H-苯并[e]吡咯并[1,2-a][1,4]二氮杂
Figure BDA0001680565890001292
-8-基)氧基)戊基)氧基)-2-亚甲基-5-氧代-2,3,11,11a-四氢-1H-苯并[e]吡咯并[1,2-a][1,4]二氮杂
Figure BDA0001680565890001293
-10(5H)-羧酸(R)-2-((5-硝基吡啶-2-基)二硫基)丙基酯(CLD-1)
在25℃向18(50mg,0.050mmol)在DCM(2.0mL)中的溶液中加入DMP(149mg,0.35mmol)。将反应混合物在25℃搅拌2h。反应混合物用DCM(5mL)稀释且用NaHCO3/Na2SO3(2mL/2mL)饱和溶液淬灭且用DCM(2×5mL)萃取。合并的有机层用NaHCO3/Na2SO3(2mL/2mL)、盐水(5mL)洗涤，干燥且浓缩。残余物通过制备型TLC(DCM:MeOH＝20:1)来纯化，得到(11S,11aS)-11-羟基-8-((5-(((11S,11aS)-11-羟基-7-甲氧基-2-亚甲基-10-(((R)-2-((5-硝基吡啶-2-基)二硫基)丙氧基)羰基)-5-氧代-2,3,5,10,11,11a-六氢-1H-苯并[e]吡咯并[1,2-a][1,4]二氮杂
Figure BDA0001680565890001294
-8-基)氧基)戊基)氧基)-7-甲氧基-2-亚甲基-5-氧代-2,3,11,11a-四氢-1H-苯并[e]吡咯并[1,2-a][1,4]二氮杂
Figure BDA0001680565890001295
-10(5H)-羧酸叔丁酯19，其直接用于下一步。LCMS:(5-95,AB,1.5min),0.830min,m/z＝1013.4(M+23)。
将冷的TFA(1mL)在0℃加到19(20mg,0.020mmol)中。将反应混合物在0℃搅拌20min。将反应混合物在0℃逐滴加到冷的饱和NaHCO3水溶液(20mL)中且用DCM(3×15mL)萃取。合并的有机层用盐水(15mL)洗涤，干燥且浓缩，得到粗产物，其通过制备型TLC(DCM:MeOH＝15:1)来纯化，得到CLD-1(4mg,23％)，其为灰色固体。LCMS:(5-95,AB,1.5min),0.89min,m/z＝873.6(M+1)。1H NMR(400MHz,CDCl3)δ9.22(s,1H),8.38(d,J＝8.8Hz,1H),7.78(d,J＝8.8Hz,1H),7.68(d,J＝4.4Hz,1H),7.49(s,1H),7.33(s,1H),6.82(s,1H),6.77(s,1H),5.20-5.13(m,4H),4.36-4.26(m,5H),4.20-3.95(m,7H),4.89-3.70(m,8H),3.50-2.70(m,5H),2.05-1.82(m,4H),1.40-1.15(m,3H)。
合成(11S,11aS)-11-羟基-7-甲氧基-8-((5-(((S)-7-甲氧基-2-亚甲基-5-氧代-2,3,5,10,11,11a-六氢-1H-苯并[e]吡咯并[1,2-a][1,4]二氮杂
Figure BDA0001680565890001296
-8-基)氧基)戊基)氧基)-2-亚甲基-5-氧代-2,3,11,11a-四氢-1H-苯并[e]吡咯并[1,2-a][1,4]二氮杂
Figure BDA0001680565890001302
-10(5H)-羧酸4-((S)-2-((S)-2-(6-(2,5-二氧代-2,5-二氢-1H-吡咯-1-基)己酰氨基)-3-甲基丁酰氨基)-5-脲基戊酰氨基)苄基酯CLD-4
Figure BDA0001680565890001301
向三光气(156mg,0.52mmol)在DCM(20mL)中的溶液中加入1(1.0g,1.05mmol)和Et3N(318mg,3.15mmol)在DCM(5.0mL)中的溶液。将混合物在0℃搅拌1h且浓缩，得到粗中间体，将其(0.88g,1.53mmol)在DCM(20mL)中的溶液在0℃加到三乙胺(310mg,3.07mmol)和6-(2,5-二氧代-2,5-二氢-1H-吡咯-1-基)-N-((S)-1-(((S)-1-((4-(羟基甲基)苯基)氨基)-1-氧代-5-脲基戊-2-基)氨基)-3-甲基-1-氧代丁-2-基)己酰胺即MC-VC-PAB(1.0g,1.02mmol)在DMF(10mL)中的混合物中。混合物用DCM(40mL)稀释，用水(2×30mL)洗涤。有机层用Na2SO4干燥，浓缩且通过硅胶色谱(0-10％MeOH/DCM)来纯化，得到(2-((S)-2-(((叔丁基二甲基甲硅烷基)氧基)甲基)-4-亚甲基吡咯烷-1-羰基)-5-((5-(4-((S)-2-(((叔丁基二甲基甲硅烷基)氧基)甲基)-4-亚甲基吡咯烷-1-羰基)-5-((((4-((S)-2-((S)-2-(6-(2,5-二氧代-2,5-二氢-1H-吡咯-1-基)己酰氨基)-3-甲基丁酰氨基)-5-脲基戊酰氨基)苄基)氧基)羰基)氨基)-2-甲氧基苯氧基)戊基)氧基)-4-甲氧基苯基)氨基甲酸叔丁酯21(1.0g,0.64mmol,62.4％收率)，其为黄色固体。
向化合物21(1.0g,0.64mmol)在THF(6.0mL)中的溶液中加入水(6.0mL)和乙酸(9.0mL)。将混合物在20℃搅拌12h。向混合物中加入EtOAc(100mL)且有机层用水(50mL×3)和饱和NaHCO3(50mL)洗涤且浓缩，得到(5-((5-(5-((((4-((S)-2-((S)-2-(6-(2,5-二氧代-2,5-二氢-1H-吡咯-1-基)己酰氨基)-3-甲基丁酰氨基)-5-脲基戊酰氨基)苄基)氧基)羰基)氨基)-4-((S)-2-(羟基甲基)-4-亚甲基吡咯烷-1-羰基)-2-甲氧基苯氧基)戊基)氧基)-2-((S)-2-(羟基甲基)-4-亚甲基吡咯烷-1-羰基)-4-甲氧基苯基)氨基甲酸叔丁酯22(700mg,0.53mmol,82.1％收率)，其为白色固体。
在18℃向22(597mg,0.45mmol)在DMSO(5.0mL)中的溶液中加入2-碘酰基苯甲酸即IBX(126mg,0.45mmol)。将反应混合物在37℃搅拌8h且通过制备型HPLC(乙腈40-70％/0.225％FA水溶液)来纯化，得到(11S,11aS)-8-((5-(((11S,11aS)-10-(((4-((S)-2-((S)-2-((6-(2,5-二氧代-2,5-二氢-1H-吡咯-1-基)己基)氨基)-3-甲基丁酰氨基)-5-脲基戊酰氨基)苄基)氧基)羰基)-11-羟基-7-甲氧基-2-亚甲基-5-氧代-2,3,5,10,11,11a-六氢-1H-苯并[e]吡咯并[1,2-a][1,4]二氮杂
Figure BDA0001680565890001311
-8-基)氧基)戊基)氧基)-11-羟基-7-甲氧基-2-亚甲基-5-氧代-2,3,11,11a-四氢-1H-苯并[e]吡咯并[1,2-a][1,4]二氮杂
Figure BDA0001680565890001312
-10(5H)-羧酸叔丁酯水合物23(120mg,0.089mmol,19.8％收率)，其为白色固体。
将23(100mg,0.080mmol)在TFA(4.0mL)中的溶液在0℃搅拌30min，然后加到冷的饱和NaHCO3(40mL)中。其用EtOAc(60mL×3)萃取。将合并的有机层浓缩，得到(11S,11aS)-11-羟基-7-甲氧基-8-((5-(((S)-7-甲氧基-2-亚甲基-5-氧代-2,3,5,11a-四氢-1H-苯并[e]吡咯并[1,2-a][1,4]二氮杂
Figure BDA0001680565890001313
-8-基)氧基)戊基)氧基)-2-亚甲基-5-氧代-2,3,11,11a-四氢-1H-苯并[e]吡咯并[1,2-a][1,4]二氮杂
Figure BDA0001680565890001314
-10(5H)-羧酸4-((S)-2-((S)-2-(6-(2,5-二氧代-2,5-二氢-1H-吡咯-1-基)己酰氨基)-3-甲基丁酰氨基)-5-脲基戊酰氨基)苄基酯24(90mg)，其为黄色固体，所述固体直接用于下一步。
向化合物24(90mg,0.070mmol)在DMF(4.0mL)中的溶液中加入三乙酰氧基硼氢化钠(9.42mg,0.1500mmol)。氰基硼氢化钠也可用作还原剂。将混合物在20℃搅拌30min。所得到的残余物通过制备型HPLC(乙腈0-40/0.1％HCl水溶液)来纯化，得到CLD-4(28mg,0.022mmol,29.5％收率)，其为白色固体。LCMS:(5-95,AB,1.5min),0.832min,m/z＝602.7,1203.6(M+1)。
实施例4通过还原和再次氧化来制备用于缀合的半胱氨酸工程化抗体
根据Kabat(Kabat等人,Sequences of proteins of immunological interest,(1991)第5版,USDept of Health and Human Service,National Institutes of Health,Bethesda,MD)对轻链氨基酸进行编号。根据EU编号系统(Edelman等人(1969)Proc.Natl.Acad.of Sci.63(1):78-85)对重链氨基酸进行编号，除了当指明为Kabat系统时。使用单字母氨基酸缩写。
在CHO细胞中表达的全长半胱氨酸工程化单克隆抗体(THIOMABTM)由于细胞培养条件而携带有半胱氨酸加合物(胱氨酸)或在所工程化的半胱氨酸上被谷胱甘肽化。因此，由CHO细胞纯化的THIOMABTM不能与Cys-反应性接头-药物中间体缀合。可如下使半胱氨酸工程化抗体具有反应性以与本申请接头-药物中间体例如表2A中的那些接头-药物中间体缀合：用还原剂例如DTT(Cleland’s试剂即二硫苏糖醇)或TCEP(三(2-羧基乙基)膦盐酸盐；Getz等人(1999)Anal.Biochem.Vol 273:73-80；Soltec Ventures,Beverly,MA)处理，然后用温和的氧化剂例如脱氢抗坏血酸再次形成链间二硫化物键(再次氧化)。在CHO细胞中表达的全长半胱氨酸工程化单克隆抗体(THIOMABTM)(Gomez等人(2010)Biotechnology andBioeng.105(4):748-760；Gomez等人(2010)Biotechnol.Prog.26:1438-1445)例如用约50倍过量的DTT在具有2mM EDTA的50mM Tris(pH 8.0)中在室温还原过夜，这除去了Cys和谷胱甘肽加合物且还原了抗体中的链间二硫化物键。加合物的除去通过反相LCMS使用PLRP-S柱来监测。将经还原的THIOMABTM稀释且通过加到至少4倍体积的10mM琥珀酸钠pH 5缓冲液中来酸化。
可选择地，将抗体稀释且如下酸化：加到至少4倍体积的10mM琥珀酸盐(pH 5)中且与10％乙酸一起研磨直到pH为约5。然后将经pH降低和稀释的THIOMABTM加载到HiTrap S阳离子交换柱上，用几倍柱体积的10mM乙酸钠(pH 5)洗涤且用具有150mM氯化钠的50mM Tris(pH 8.0)洗脱。通过进行再次氧化而在存在于母体Mab中的半胱氨酸残基之间再次形成二硫化物键。上述所洗脱的经还原的THIOMABTM用15×脱氢抗坏血酸(DHAA)处理约3小时或可选择地用200nM-2mM硫酸铜(CuSO4)水溶液在室温处理过夜。可使用本领域已知的其它氧化剂和氧化条件。环境空气氧化也可以是有效的。该温和的部分的再次氧化步骤可有效和高保真地形成链内二硫化物。再次氧化通过反相LCMS使用PLRP-S柱来监测。经再次氧化的THIOMABTM用上述琥珀酸盐缓冲液稀释以达到pH约5且如上所述用S柱进行纯化，除了用具有300mM氯化钠的10mM琥珀酸盐(pH 5)(缓冲液B)在10mM琥珀酸盐(pH 5)(缓冲液A)中的梯度进行洗脱。向所洗脱的THIOMABTM中加入EDTA至最终浓度为2mM且按需浓缩以达到大于5mg/mL的最终浓度。将所得到的准备用于缀合的THIOMABTM以等分液形式贮存在-20℃。用6200系列TOF或QTOF Agilent LC/MS进行液相色谱/质谱分析。用加热至80℃的PRLP-
Figure BDA0001680565890001331
1000A微孔柱(50mm×2.1mm,Polymer Laboratories,Shropshire,UK)对样品进行色谱。使用30-40％B(溶剂A:0.05％TFA/水,溶剂B:0.04％TFA/乙腈)的线性梯度且洗脱液使用电喷雾源来直接离子化。收集数据且通过MassHunter软件来进行解卷积。进行LC/MS分析前，抗体或药物缀合物(50微克)在37℃用PNGase F(2单位/ml；PROzyme,San Leandro,CA)处理2小时以除去经N连接的碳水化合物。
可选择地，抗体或药物缀合物在37℃用LysC(0.25μg/50μg(微克)抗体或缀合物)部分消化15分钟，得到Fab和Fc片段以进行LCMS分析。对经解卷积的LCMS谱中的峰进行归属和量化。药物与抗体比例(DAR)如下计算：对与缀合有药物的抗体相应的一个或多个峰的强度相对于所观察到的所有峰的比例进行计算。
实施例5接头-药物中间体与抗体的缀合
进行实施例2的还原和再次氧化措施后，半胱氨酸工程化抗体(THIOMABTM)在10mM琥珀酸盐(pH 5)、150mM NaCl、2mM EDTA中的溶液用1M Tris进行pH调节至pH 7.5-8.5。将过量的即约3-20摩尔当量的具有硫醇反应性吡啶基二硫化物基团的接头-药物中间体(包括但不局限于表2A中的那些接头-药物中间体)溶解在DMF或DMA中且加到经还原、再次氧化和pH调节的抗体中。将反应混合物在室温或37℃孵育且进行检测直到完成(1至约24小时)，其通过对反应混合物进行LC-MS分析来确定。当反应完成时，缀合物通过几种方法中的一种或任何组合来纯化，目的是除去剩余的未反应的接头-药物中间体和聚集的蛋白质(若以显著的水平存在)。例如，缀合物可用10mM组氨酸-乙酸盐(pH 5.5)稀释直到最终pH为约5.5且通过S阳离子交换色谱使用与Akta纯化系统(GE Healthcare)连接的HiTrap S柱或S maxi旋转柱(Pierce)来纯化。可选择地，缀合物可通过凝胶过滤色谱使用与Akta纯化系统连接的S200柱或Zeba旋转柱来纯化。可选择地，可进行透析。使用凝胶过滤或透析将THIOMAB药物缀合物配制到具有240mM蔗糖的20mM His/乙酸盐(pH 5)中。经纯化的缀合物通过离心超滤来浓缩且在无菌条件下过滤通过0.2μm过滤器且冷冻贮存。抗体-药物缀合物如下表征：进行BCA测定用于确定蛋白质浓度，进行分析型SEC(尺寸排阻色谱)用于聚集分析且在用Lysine C内肽酶(LysC)处理后进行LC-MS用于计算DAR。
使用Shodex KW802.5柱在具有0.25mM氯化钾和15％IPA的0.2M磷酸钾(pH 6.2)中以0.75ml/min的流速对缀合物进行尺寸排阻色谱。缀合物的聚集状态通过对280nm处的洗脱峰面积吸光度进行积分来确定。
可使用Agilent QTOF 6520ESI仪器对ADC进行LC-MS分析。例如，抗体-药物缀合物用1:500w/w内蛋白酶Lys C(Promega)在Tris(pH 7.5)中在37℃处理30min。将所得到的裂解片段加载到加热至80℃的
Figure BDA0001680565890001341
(Angstrom),8μm(微米)PLRP-S(高度交联的聚苯乙烯)柱上且用历时5分钟30％B至40％B的梯度洗脱。流动相A为具有0.05％TFA的H2O且流动相B为具有0.04％TFA的乙腈。流速为0.5ml/min。蛋白质洗脱通过280nm处的UV吸光度检测来监测，然后进行电喷雾离子化和MS分析。通常对未缀合的Fc片段、残余的未缀合的Fab和经药物化的Fab进行色谱分辨。使用Mass HunterTM软件(Agilent Technologies)对所得到的m/z谱进行解卷积以计算抗体片段的质量。
通过这些措施来制备表3A和3B中的半胱氨酸工程化抗体-药物缀合物。
实施例6体外细胞增殖测定
ADC的效力通过细胞增殖测定使用以下方案(CELLTITER GLOTM发光细胞存活测定,Promega Corp.Technical Bulletin TB288；Mendoza等人(2002)Cancer Res.62:5485-5488)来测量。方案为CELLTITER GLOTM发光细胞测定的变体：
1.将在培养基中含有约104个细胞(SKBR-3,BT474,MCF7或MDA-MB-468)的100μl细胞培养物等分液沉积在壁不透明的96孔板的每个孔中。
2.制备含有培养基而无细胞的对照孔。
3.将ADC加到实验孔中且孵育3-5天。
4.将板平衡至室温且保持约30分钟。
5.加入体积与存在于每个孔中的细胞培养基的体积相等的CELLTITER GLOTM试剂。
6.将内容物在定轨振荡器上混合2分钟以引起溶胞。
7.将板在室温孵育10分钟以使发光信号稳定。
8.对发光进行记录且在图表中报道为RLU＝相对发光单位。
如图1A-E所示，将数据绘制为每个重复组的具有标准偏差误差棒的发光平均值。
培养基：使SK-BR-3在50/50/10％FBS/谷氨酰胺/250μg/mL G-418中生长，使OVCAR-3在RPMI/20％FBS/谷氨酰胺中生长。
实施例7在异种移植物小鼠中的肿瘤生长抑制体内效力
建立肿瘤且使其生长至在单次处置前在第0天的体积为150-200mm3(其使用测径器来测量)。肿瘤体积使用测径器根据以下公式来测量：V(mm3)＝0.5A×B2，其中A和B分别为长直径和短直径。在肿瘤体积达到3000mm3前或当肿瘤显示出即将溃疡的迹象时，对小鼠进行安乐死。将由每个实验组(10只小鼠/组)收集的数据表达为平均值±SE。
n＝150只小鼠用HER2KPL-4细胞以混悬在HBSS/基质胶中的3百万个细胞/小鼠且以0.2ml的体积接种在胸部乳房脂肪垫中。当肿瘤已经达到平均肿瘤体积为100-250mm3时，其被分组成每组8-10只小鼠的10组。在第0天以静脉内方式经由尾静脉给予单次处置。体积不超过0.3ml，针头尺寸为28或29号。
HCC1569细胞系表达Ly6E且得自ATCC(American Type Culture Collection；Manassas,VA)且亚系HCC1569X2在Genentech产生用于在小鼠中最佳生长。雌性C.B-17SCID米色小鼠(Charles River Laboratory)各自在胸部乳房脂肪垫区域中用混悬在HBSS/基质胶(比例为1:1)中的5百万个HCC1569X2细胞接种。当异种移植物肿瘤达到平均肿瘤体积为100-300mm3(称为第0天)时，动物被随机分成每组5只小鼠的多组且通过尾静脉来接受抗体-药物缀合物的单次静脉内注射。在整个研究期间每周1-2次对小鼠的肿瘤和体重进行测量。当体重减轻>20％其起始体重时立即对小鼠进行安乐死。所有动物在肿瘤达到3000mm3或显示出即将溃疡的迹象前被安乐死。使用测径器以两个纬度(长度和宽度)对肿瘤体积进行测量且肿瘤体积使用以下公式来计算：肿瘤尺寸(mm3)＝(较长方向上的测量值×较短方向上的测量值2)×0.5(WO2013/177055)。
Fo5小鼠乳房肿瘤模型如先前所描述的那样用于评价本申请抗体-药物缀合物在单剂静脉内注射后的体内效力(Phillips GDL,Li GM,Dugger DL等人,Targeting HER2-Positive Breast Cancer with Trastuzumab-DM1,an Antibody-Cytotoxic DrugConjugate.(2008)Cancer Res.68:9280-90,将其引入到本申请中作为参考)。如图3和5所示，用Fo5模型(其中人HER2基因在乳房上皮中在鼠类动物乳房肿瘤病毒启动子(MMTV-HER2)的转录调节下过表达的转基因小鼠模型)测试抗Her2ADC。HER2的过表达引起乳房肿瘤的自发发展。这些创始者动物中的一只(创始者#5[Fo5])的乳房肿瘤已经通过对肿瘤碎块(尺寸为～2×2mm)进行连续移植而在FVB小鼠的后代中繁殖。所有研究根据实验室动物看管和使用指导来进行。在研究开始时和在移植后14天以静脉内方式向9只动物给药每种抗体-药物缀合物(单剂)。最初肿瘤尺寸为约200mm3体积。本申请抗体-药物缀合物和对照引起的肿瘤生长抑制随时间的测量值显示在图2-8中。
可如所描述的那样使用另一种乳房脂肪垫移植物效力模型(Chen等人(2007)Cancer Res 67:4924-4932)，其在单次静脉内给药后评价肿瘤体积且使用由携带有腹膜内肿瘤的小鼠切除的肿瘤，然后连续传代到接受者小鼠的乳房脂肪垫中。
在孵育5天后的CD22或Napi表达细胞系中和在异种移植物小鼠中确定了抗CD22和抗Napi ADC的细胞杀死活性。
实施例8寡核苷酸结合/烷基化测定
对吡咯并苯并二氮杂
Figure BDA0001680565890001361
化合物与各种长度和序列的双链形成寡核苷酸的相互作用进行了研究，其中就先前鉴定的链内和链间交联而言的顺序为Pu-GAATG-Py>Pu-GATC-Py>>Pu-GATG-Py或Pu-GAATC-Py，其中Pu为嘌呤核苷酸A或G，而Py为嘧啶核苷酸C或T(RahmanKM等人(2009)J Am Chem Soc 131:13756-13766)。通过以下措施对链间G双链即5’-TATAGAAATCTATA-3’和3’-ATATCTTTAGATAT-5’及链内G双链即5’-TATAGAAATGTATA-3’和3’-ATATCTTTACATAT-5’进行了研究：
将100μM化合物与50μM双链脱氧寡核苷酸(DNA)一起在10mM Bis-Tris(pH 7.1)中在37℃孵育1小时。样品通过LC/MS/UV使用Sciex TripleTOF 5600和Hypersil Gold C18柱(100×2.1,1.9μm,Thermo Scientific)来分析。柱以0.4mL/min的流速通过缓冲液A(50mM六氟异丙醇和15mM二乙胺)至缓冲液B(50％A和50％1:1甲醇:乙腈)的梯度即5％B历时8min至25％B、历时5min至75％B且历时1min至95％B来洗脱。
实施例9在短尾猴中进行的安全性/毒性研究
在短尾猴中对本申请抗体-药物缀合物的毒性进行了评价，包括抗原依赖性毒性由于在肺中表达而引起的肺作用。
研究设计：
方案：在第1和22天以IV方式给药两次以历时2个完整周期对毒性进行评价。10天引入(1M/组)即在保持1M/2F前10天给药以降低急性发病率/死亡率的风险。
潜在临床观察结果可包括皮肤发红、皮肤变黑、形成腐肉/脱屑、溃疡、面部肿胀/水肿、体态倾斜、缺乏食欲和一般性濒死。
与在短尾猴中给药抗体-药物缀合物相关的潜在临床病理学变化可包括尿素氮和肌酸酐的升高伴有不当浓缩的尿、可能与肾小管功能受损相关的钠、氯和钾变更、肺泡变性和血液学参数的剂量响应性变化及炎症。
主要器官毒性可包括肾、眼、皮肤/SQ/肌肉、骨髓、肺、淋巴样器官(脾和胸腺淋巴耗竭)。
病理学发现结果严重度的剂量依赖性提高可允许对抗体-药物缀合物和对照化合物的安全性/毒性进行比较。
实施例10在小鼠中的效力
在MMTV-HER2创始者#5(鼠类动物乳房肿瘤)的小鼠同种异体移植物模型或KPL4、HCC1569X2(人乳腺癌)的小鼠异种移植物模型中研究了抗Her2抗体-药物缀合物的效力。
MMTV-HER2创始者#5(Fo5)模型(在Genentech开发)为其中人HER2基因在乳房上皮中在鼠类动物乳房肿瘤病毒启动子(MMTV-HER2)的转录调节下过表达的转基因小鼠模型。所述过表达引起过表达人HER2受体的乳房肿瘤的自发发展。来自创始者动物中的一只(创始者#5即Fo5)的乳房肿瘤以尺寸为约15-30mm3的肿瘤碎块形式手术移植到雌性nu/nu或FVB小鼠(Charles River Laboratories)的胸部乳房脂肪垫中。
KPL4乳腺癌细胞系得自J.Kurebayashi博士的实验室(日本)。HCC1569乳腺癌细胞系得自ATCC(American Type Culture Collection；Manassas,VA)且亚系HCC1569X2在Genentech产生用于在小鼠中最佳生长。两种细胞系都表达HER2，其通过FACS和IHC来确定。雌性C.B-17SCID米色小鼠(Charles River Laboratories)各自在胸部乳房脂肪垫区域中用混悬在HBSS/基质胶(比例为1:1)中的3百万个KPL4细胞或5百万个HCC1569X2细胞接种以建立所述模型。
当肿瘤达到平均肿瘤体积为100-300mm3时，动物被随机分成每组5-10只小鼠的多组且接受ADC的单次静脉内注射(称为第0天)。在整个研究期间每周1-2次对小鼠的肿瘤和体重进行测量。当体重减轻>20％其起始体重时立即对小鼠进行安乐死。所有动物在肿瘤达到3000mm3或显示出即将溃疡的迹象前被安乐死。使用测径器以两个纬度(长度和宽度)对肿瘤体积进行测量且肿瘤体积使用以下公式来计算：肿瘤尺寸(mm3)＝0.5×(长度×宽度×宽度)。来自该测试的数据显示在图12和13中。
实施例11在短尾猴中的毒理学
抗HER2hu7C2LC:K149C-LD-51短尾猴毒理学研究
在短尾猴中进行了探索性剂量递增毒理学研究。动物接受抗HER2hu7C2LC:K149C-LD-51的两剂或四剂q3w缓慢IV推注，其中起始于1mg/kg的剂量水平。剂量递增持续2-3周。研究设计概括在下表7中。
表7：抗HER2-LD51LC:K149C短尾猴毒理学研究设计
测试品 n/性别 剂量(mg/kg) 给药方案
媒介物 2M/2F 0 2×q3w
抗HER2-LD51 1M 1 2×q3w
抗HER2-LD51 1M 2 2×q3w
抗HER2-LD51 1M 4 2×q3w
抗HER2-LD51 1M 8 2×q3w
抗HER2-LD51 2M/2F 16 2×q3w
抗HER2-LD51 2M/2F 16 4×q3w
抗HER2-LD51 2M/2F 24 2×q3w
抗HER2-LD51 1M 36 2×q3w
毒性通过临床和目视检查及临床病理学(血液学、血清化学、凝血和尿分析；在整个研究期间约每周一次)来评价。在最后一剂后三周当尸检时对所收集的组织进行宏观和微观组织病理学。
给药四剂q3w 16mg/kg抗HER2hu7C2LC:K149C-LD-51的动物中的组织学发现结果通常比在两剂16mg/kg后观察到的组织学发现结果严重。观察到肾小管变性(轻度-中度)、淋巴耗竭(胸腺、脾、淋巴结；轻度-中度)、皮肤色素沉着/过度角化(轻度)、小肠粘膜(轻度)和轻度肺泡变性/纤维组织形成(轻度)。
抗HER2hu7C2LC:K149C-LD-51在短尾猴中的主要靶向器官为肾、骨髓、皮肤、肺、淋巴样器官(脾、胸腺、淋巴结)、小肠和眼(角膜)。2×q3w方案的最大耐受剂量(MTD)为16mg/kg，而4×q3w方案的MTD为8mg/kg。
没有在猴中对抗HER2-CLD-1进行任何研究。然而，在短尾猴中确定了CLD-1当与其它半胱氨酸工程化抗体缀合时的2×q3w给药MTD。2剂q3w抗NaPi2b-CLD-1的MTD为0.5mg/kg，而2剂q3w非靶向缀合物gD-CLD-1的MTD为0.5mg/kg。所观察到的类似靶向器官作用暗示毒性在很大程度上是抗原非依赖性的且可归因于CLD-1或LD-51。LD-51缀合物与CLD-1缀合物相比提高的MTD表明了LD-51与CLD-1相比改善的耐受性。这些测试的数据显示在图12和13中。
实施例12C-1和DM-2大鼠毒理学研究
在大鼠中进行了探索性单剂毒理学研究以对C-1(PBD二烷化剂)和DM-2(PBD单烷化剂)游离药物进行比较。动物接受C-1、DM-2或媒介物的单剂IV且在7天恢复期中被监测。研究设计概括在下表8中。
表8：C-1和DM-2游离药物大鼠毒理学研究设计
测试品 n/性别 剂量(mg/kg)
媒介物 5F 0
C-1 5F 0.05
C-1 5F 0.1
C-1 5F 0.2
DM-2 5F 0.5
DM-2 5F 1
DM-2 5F 2
毒性通过临床观察结果和临床病理学(给药后72和168小时的血液学和临床化学)来评价。结果就10倍于C-1剂量水平的DM-2而言通常是类似的。就所有剂量的C-1而言在72小时都观察到网织红细胞的剂量依赖性减少，其中0.05和0.1mg/kg组至给药后168小时恢复。当剂量为0.2mg/kg时观察到指示肝和肾毒性的临床病理学变化。0.05和0.1mg/kg的剂量是良好耐受的而无任何临床迹象。
剂量水平为0.5和1mg/kg的DM-2是良好耐受的，其不引起任何临床迹象或早期安乐死。给药2mg/kg的动物在第2-4天减轻约14％其体重且在第4天在濒死状态下被安乐死。就所有剂量的DM-2而言在给药后72小时都观察到网织红细胞的剂量依赖性减少，其中0.5和1mg/kg组至给药后168小时恢复。当剂量为2mg/kg时观察到指示肝和肾毒性的临床病理学变化。
综上，单剂C-1或DM-2所引起的毒性分布是类似的，，其中C-1的效力约10倍于DM-2。两种测试品的主要靶向器官都为骨髓、肾和肝。C-1和DM-2当在大鼠中单剂IV时的MTD分别为0.1和1mg/kg。该研究的结果表明了DM-2与C-1相比改善的耐受性。
实施例13在HER2阳性乳腺癌细胞系SK-BR-3和KPL-4中的体外活性
将细胞铺板在96孔板中且在37℃在5％CO2的加湿气氛下粘附过夜。然后将培养基除去且用含有各种浓度的每种药物的新鲜培养基代替。在给药后5天将Cell Titer-Glo(Promega Corp.)加到孔中且使用EnVision多标签读板器(PerkinElmer)对发光信号进行测量。所测试的化合物为抗HER2hu7C2LC:K149C CLD-7；抗HER2hu7C2LC:K149C CLD-8；抗HER2hu7C2LC:K149C CLD-9；和抗HER2hu7C2LC:K149C LD-51：
Figure BDA0001680565890001401
Figure BDA0001680565890001411
来自该测试的数据显示在图14和下表9中。
表9
Figure BDA0001680565890001412
实施例14体内小鼠同种异体移植物效力
在MMTV-HER2创始者#5(鼠类动物乳房肿瘤)的小鼠同种异体移植物模型中对抗Her2抗体-药物缀合物(ADC)的效力进行了研究。MMTV-HER2创始者#5(Fo5)模型(在Genentech开发)为其中人HER2基因在乳房上皮中在鼠类动物乳房肿瘤病毒启动子(MMTV-HER2)的转录调节下过表达的转基因小鼠模型。所述过表达引起过表达人HER2受体的乳房肿瘤的自发发展。来自创始者动物中的一只(创始者#5即Fo5)的乳房肿瘤已经通过对肿瘤碎块进行连续移植而在FVB小鼠(Charles River Laboratories)中繁殖。
Fo5转基因乳房肿瘤以尺寸为约15-30mm3的肿瘤碎块形式手术移植到雌性nu/nu小鼠(Charles River Laboratories；Hollister,CA)的胸部乳房脂肪垫中以进行效力研究。当同种异体移植物肿瘤达到平均肿瘤体积为100-300mm3(称为第0天)时，动物被随机分成每组7只小鼠的多组且接受ADC的单次静脉内注射。在整个研究期间每周1-2次对小鼠的肿瘤和体重进行测量。当体重减轻>20％其起始体重时立即对小鼠进行安乐死。所有动物在肿瘤达到3000mm3或显示出即将溃疡的迹象前被安乐死。使用测径器以两个纬度(长度和宽度)对肿瘤体积进行测量且肿瘤体积使用以下公式来计算：肿瘤尺寸(mm3)＝0.5×(长度×宽度×宽度)。来自该研究的数据显示在图15中。在4种抗Her2ADC中仅抗Her2-LD-51当与媒介物组比较时显示出明确的抗肿瘤活性。抗Her2-LD-51的效力是靶标依赖性的，这是因为相应的非靶向对照抗CD22-LD-51对肿瘤生长不具有任何作用。
实施例15合成DM-4、C-1、C-2、C-3、CLD-2、CLD-3、CLD-5和CLD-6
用于制备C-1、C-2、C-3和CLD-2的合成措施可参见以下文献：C-1：Journal ofMedicinal Chemistry(2004),47(5),1161-1174；C-2：Bioorganic & MedicinalChemistry Letters(2000),10(16),1845-1847或PCT国际申请WO2000012508；C-3：PCT国际申请WO2015155753；和CLD-2：US20160074527。
合成CLD-7
方案
Figure BDA0001680565890001421
实验
Figure BDA0001680565890001422
向三光气(60.6mg,0.200mmol)在DCM(15mL)中的溶液中加入吡啶(129mg,1.63mmol)和2(55.3mg,0.220mmol)在DCM(15mL)中的溶液。将混合物在0℃搅拌10min，TLC(25％EtOAc/石油醚,Rf＝0.5)显示原料耗尽。将混合物浓缩至干且溶解在DCM(10mL)中且加到化合物1(150.0mg,0.200mmol)和Et3N(103.3mg,1.02mmol)在DCM(15mL)中的溶液中。将混合物在0℃搅拌1h。TLC(50％EtOAc/石油醚)显示原料耗尽。将混合物浓缩且粗品通过快速硅胶柱色谱(0-33％EtOAc/石油醚)来纯化。将其浓缩，得到3(180.0mg,81％)，其为黄色固体。LCMS(5-95AB/1.5min):RT＝1.014min,[M+H]+1007.1。
Figure BDA0001680565890001431
向HOAc(5.0mL,87mmol)在THF(3.0mL)和水(3.0mL)的混合物中的溶液中加入3(150.0mg,0.1500mmol)。将反应溶液在40℃搅拌16h。将溶液浓缩以除去溶剂且残余物用EtOAc(100mL)稀释，用H2O(30mL×4)洗涤，用Na2SO4干燥，过滤且浓缩。残余物通过制备型TLC(5％MeOH/DCM,Rf＝0.5)来纯化，得到4(100mg,75％)，其为黄色固体。LCMS(5-95AB/1.5min):RT＝0.776min,[M+H]+893.2。
Figure BDA0001680565890001432
向DMP(22.8mg,0.0500mmol)在无水DCM(10.0mL)中的溶液中加入化合物4(40.0mg,0.0400mmol)。将反应混合物在18℃搅拌1h。混合物用DCM(50mL)稀释，过滤。滤液用Na2SO3(30mL×3)洗涤，用Na2SO4干燥，过滤且真空浓缩。残余物通过制备型TLC(5％MeOH/DCM,Rf＝0.5)来纯化，得到CLD-7(GNT_B343_867-1)(20mg,50％)，其为黄色固体。LCMS(5-95AB/1.5min):RT＝0.761min,[M+H]+891.0,显示96％所需要的产物。HPLC(10-80AB/15min):RT＝8.40min,显示94.9％所需要的产物。
合成CLD-8
方案
Figure BDA0001680565890001433
实验
Figure BDA0001680565890001441
向化合物1(40.0mg,0.190mmol)在THF(5.0mL)/水(5.0mL)中的溶液中加入TCEP(277.9mg,0.970mmol)。将反应混合物在16℃搅拌48h。溶液用H2O(10mL)稀释，用DCM(20mL×3)萃取。合并的有机层用Na2SO4干燥，过滤且直接用于下一步。
Figure BDA0001680565890001442
向化合物2(40.0mg,0.380mmol)在DCM(25mL)和MeOH(25mL)的混合物中的溶液中加入化合物3(238.3mg,0.770mmol)。将反应溶液在16℃搅拌16h且加入MnO2(500mg)且将混合物搅拌0.5h。将混合物过滤且将滤液真空浓缩。残余物用MeOH(5mL)稀释，再次过滤以除去大部分剩余的化合物3，将滤液浓缩且通过制备型TLC(33％EtOAc/石油醚,Rf＝0.5)来纯化，得到化合物4(50mg,0.157mmol,40.8％收率)，其为无色油状物。LCMS(5-95AB/1.5min):RT＝0.805min,[M+H]+258.9,显示81％所需要的产物。
Figure BDA0001680565890001443
向三光气(64.6mg,0.220mmol)和
Figure BDA0001680565890001444
分析筛(30mg)在无水DCM(8mL)中的搅拌混合物中缓慢加入化合物5(160.0mg,0.220mmol)和三乙胺(110.1mg,1.09mmol)在无水DCM(8mL)中的溶液。将反应混合物在16℃搅拌1h且将混合物真空浓缩以除去溶剂。将其溶解在无水DCM(10.0mL)中且先后添加三乙胺(65.8mg,0.650mmol)和化合物4(50.0mg,0.190mmol)在无水DCM(5.0mL)中的溶液。将反应混合物在16℃搅拌16h。将混合物过滤，将滤液浓缩且通过制备型TLC(10％MeOH/DCM,Rf＝0.8)来纯化，得到化合物6(100mg,0.0814mmol,37.6％收率)，其为黄色固体。LCMS(5-95AB/1.5min):RT＝1.119min,[M+H]+1019.4,显示83％所需要的产物。
Figure BDA0001680565890001451
将化合物6(100.0mg,0.1000mmol)在乙酸(3.0mL)、THF(2.0mL)和水(1.0mL)的混合物中的溶液在16℃搅拌48h。将溶液真空浓缩且残余物用DCM(30mL)稀释，用H2O(20mL×3)洗涤，干燥，过滤且浓缩。残余物通过制备型TLC(10％MeOH/DCM,Rf＝0.5)来纯化，得到化合物7(55mg,0.0602mmol,61.3％收率)，其为黄色固体。LCMS(5-95AB/1.5min):RT＝0.892min,[M+H]+905.2,显示99％所需要的产物。
Figure BDA0001680565890001452
向化合物7(55mg,0.060mmol)和
Figure BDA0001680565890001453
分析筛(30mg)在无水DCM(6.0mL)中的混合物中加入DMP(44.0mg,0.104mmol)。将反应混合物在16℃搅拌1h。混合物用EtOAc(30mL)稀释，用饱和Na2SO3溶液(30mL)淬灭且用EtOAc(30mL×3)萃取。合并的有机层用Na2SO4干燥，过滤且浓缩。残余物通过制备型TLC(10％MeOH/DCM,Rf＝0.5)来纯化，得到CLD-8(GNT_B343_866-1)(42mg,77％收率)，其为浅黄色固体。LCMS(5-95AB/1.5min):RT＝0.868min,[M+H]+903.2,显示98％所需要的产物。
合成CLD-9
方案
Figure BDA0001680565890001461
实验
Figure BDA0001680565890001462
向化合物2(2383mg,7.68mmol)在DCM(10mL)/MeOH(10mL)中的溶液中加入化合物1(300mg,3.84mmol)。将溶液在16℃搅拌2h。将MnO2(5.0g)加到溶液中，将混合物在16℃搅拌30min。将混合物过滤且将滤液真空浓缩且残余物用MeOH(15mL)洗涤，过滤且浓缩。粗产物通过快速硅胶柱色谱(DCM)来纯化，得到化合物3(800mg,3.25mmol,84.8％收率)，其为油状物。LCMS(5-95AB/1.5min):RT＝0.608min,[M+H]+232.8。
Figure BDA0001680565890001463
将化合物3(65.0mg,0.280mmol)和吡啶(88.5mg,1.12mmol)在无水DCM(5.0mL)中的溶液在0℃逐滴加到三光气(41.5mg,0.140mmol)在无水DCM(5.0mL)中的溶液中。将溶液在0℃搅拌10min且将混合物浓缩，得到粗化合物4，其为白色固体，所述固体用于下一步。
Figure BDA0001680565890001471
向化合物5(4000mg,5.84mmol)在无水DCM(80mL)中的溶液中先后加入咪唑(2.38g,35.1mmol)和TBSCl(1.761g,11.7mmol)。将反应混合物在40℃搅拌3h。混合物用DCM(100mL)稀释，用H2O(50mL×3)洗涤，用Na2SO4干燥，过滤且浓缩。残余物通过快速硅胶柱色谱(0-3.3％MeOH/DCM)来纯化，得到化合物6(2.50g,3.13mmol,53.6％收率)，其为浅黄色固体。LCMS(5-95AB/1.5min):RT＝0.945min,[M+H]+799.2。
Figure BDA0001680565890001472
向化合物6(2.30g,2.88mmol)在无水DCM(100mL)中的溶液中加入DMP(4.88g,11.52mmol)。将反应混合物在10℃搅拌2h。将其过滤，滤液用EtOAc(600mL)稀释，用饱和Na2SO3溶液(200mL)、饱和Na2SO3/NaHCO3溶液(v/v＝1:1,200mL)和盐水淬灭。有机层用Na2SO4干燥，过滤且浓缩，得到粗油状物，将其溶解在叔丁醇(40mL,2.88mmol)/水(20mL)中，然后在10℃先后用2-甲基-2-丁烯(30mL,2.88mmol)和二氢磷酸钠(1.382mg,11.5mmol)处理。将其在10℃搅拌0.5h后，将反应混合物与亚氯酸钠(1.56g,17.3mmol)一起在10℃搅拌1h。混合物用EtOAc(300mL)稀释且用水(100mL)和盐水(100mL)洗涤。有机层用Na2SO4干燥，过滤且真空浓缩，得到化合物7(2.0g,2.46mmol,85.5％收率)，其为粗产物。LCMS(5-95AB/1.5min):RT＝0.929min,[M+H]+813.2。
Figure BDA0001680565890001473
向化合物7(2.0g,2.46mmol)在DMF(20mL)中的溶液中先后加入K2CO3(680mg,4.92mmol)和MeI(3.95g,27.8mmol)。将反应混合物在10℃搅拌1h。混合物用EtOAc(200mL)稀释，用盐水(40mL×5)洗涤，然后用Na2SO4干燥，过滤且真空浓缩，得到化合物8(2.0g,2.42mmol,98.3％收率)，其为黄色油状物。LCMS(5-95AB/1.5min):RT＝0.975min,[M+H]+827.2。
Figure BDA0001680565890001481
向化合物8(2.0g,2.42mmol)和铁(1.35g,24.2mmol)在EtOH(20mL)/水(10mL)中的混合物中加入NH4Cl(2.59g,48.7mmol)。将反应混合物在70℃搅拌2h。将混合物过滤，将滤液真空浓缩以除去EtOH且水浆液用EtOAc(50mL×3)萃取。合并的EtOAc层用Na2SO4干燥，过滤，浓缩且通过快速硅胶柱色谱(3-5％MeOH/DCM,Rf＝0.5)来纯化，得到化合物9(1.5g,1.89mmol,78.1％收率)，其为黄色固体。LCMS(5-95AB/1.5min):RT＝0.845min,[M+H]+735.3。
Figure BDA0001680565890001482
向化合物9(100mg,0.140mmol)和DIEA(68.8mg,0.680mmol)在DCM(15mL)中的溶液中加入化合物4(80.2mg,0.270mmol)且将反应混合物在0℃搅拌1h。将混合物浓缩且残余物通过快速硅胶柱色谱(0-5％MeOH/DCM,Rf＝0.5)来纯化，得到化合物10(130mg,0.117mmol,85.8％收率)，其为黄色油状物。LCMS(5-95AB/1.5min):RT＝0.985min,[M+H]+993.4。
Figure BDA0001680565890001483
向乙酸(6.0mL,105mmol)在THF(6.0mL)/水(3.0mL)中的溶液中加入化合物10(130mg,0.130mmol)。将反应溶液在40℃搅拌24h。将溶液真空浓缩以除去溶剂，残余物用EtOAc(30mL)稀释，用H2O(10mL×4)洗涤，用Na2SO4干燥，过滤且真空浓缩。残余物通过制备型TLC(8％MeOH/DCM,Rf＝0.5)来纯化，得到化合物11(60mg,0.0683mmol,52.2％收率)，其为黄色油状物。LCMS(5-95AB/1.5min):RT＝0.763min,[M+H]+879.0。
Figure BDA0001680565890001484
向化合物11在无水DCM(5mL)中的溶液中加入DMP(17.4mg,0.0400mmol)。将反应混合物在18℃搅拌1h。混合物用DCM(50mL)稀释，过滤。滤液用Na2SO3(30mL×3)洗涤，用Na2SO4干燥，过滤且真空浓缩。粗产物通过制备型TLC(5％MeOH/DCM,Rf＝0.5)来纯化，得到CLD-9(GNT_B343_865-1)(12.2mg,0.0136mmol,39.9％收率)，其为浅黄色固体。LCMS(5-95AB/1.5min):RT＝0.739min,[M+H]+877.2。
合成DM-4
方案
Figure BDA0001680565890001491
实验
Figure BDA0001680565890001492
向化合物1(3.0g,14.9mmol)在DCM(80mL)中的溶液中加入DMP(9.48g,22.4mmol)。将混合物在0℃搅拌1h后，其用Na2S2O3(50mL)/NaHCO3(50mL)和MTBE(130mL)稀释。有机相用水(60mL×3)洗涤且浓缩，得到化合物2(2.9g,14.6mmol,97.6％收率)，其为无色油状物。
Figure BDA0001680565890001493
向化合物2(2.9g,14.6mmol)和(1-重氮基-2-氧代-丙基)膦酸二甲酯在MeOH(20mL)中的溶液中加入K2CO3(6.03g,43.7mmol)。将反应混合物在20℃搅拌1h后，将其真空浓缩且残余物通过快速硅胶柱色谱(10％EtOAc/PE)来纯化，得到产物化合物3(2.0g,10.24mmol,70.4％收率)，其为无色油状物。
Figure BDA0001680565890001501
向化合物3(2.0g,10.2mmol)和化合物4(5.4g,15.4mmol)在DMF(50mL)中的溶液中加入Cs2CO3(3.97g,20.5mmol)和Pd(PPh3)4(785mg,1.54mmol)。将混合物在95℃在氮气下搅拌1h。将混合物浓缩且通过快速硅胶柱色谱(20％EtOAc/PE)来纯化，得到产物化合物5(1.60g,2.44mmol,23.8％收率)，其为无色油状物。LCMS(5-95AB/1.5min):RT＝0.994min,[M+H-56]+410.0。
Figure BDA0001680565890001502
向化合物5(2.0g,4.3mmol)在MeOH(10mL)中的溶液中加入Pd/CaCO3(200.0mg,21.5mmol)。将混合物在30℃在氢气(1atm)下搅拌1h。将混合物过滤且将滤液浓缩，得到粗产物，其通过快速硅胶柱色谱(10％EtOAc/PE)来纯化，得到产物化合物6(1.0g,2.14mmol,49.8％收率)，其为白色固体。LCMS(5-95AB/1.5min):RT＝0.983min,[M+Na]+490.1。
Figure BDA0001680565890001503
向化合物6(0.90g,1.92mmol)在EtOAc(10mL)中的溶液中加入HCl/EtOAc(6.0mL)。将混合物在25℃搅拌1h后，将其浓缩，得到粗产物化合物7(0.77g,1.90mmol,99％收率)，其为白色固体。
Figure BDA0001680565890001504
向化合物7(0.77g,1.91mmol)在MeOH(30mL)中的溶液中加入NaOMe(1.03g,19.06mmol)。将混合物在30℃搅拌2h。将混合物浓缩且通过快速硅胶柱色谱(25-75％EtOAc/PE)来纯化，得到产物化合物8(0.60g,1.79mmol,93.8％收率)，其为黄色油状物。1HNMR(400MHz,CDCl3)δppm1.89-2.11(m,3H)2.18-2.33(m,1H)3.59(dt,J＝12.0,7.6Hz,1H)3.80(dt,J＝11.5,5.8Hz,1H)3.90-3.96(m,1H)3.97(s,3H)5.19(s,2H)5.86(dd,J＝10.0,4.8Hz,1H)6.53(dd,J＝10.0,2.0Hz,1H)6.69(s,1H)7.29-7.35(m,1H)7.36-7.41(m,2H)7.42-7.48(m,2H)7.62(s,1H)。
Figure BDA0001680565890001511
向化合物8(580mg,1.73mmol)在DCM(50mL)中的溶液中加入TiCl4(656mg,3.46mmol)。将混合物在30℃搅拌12h。向混合物中加入HCl(1.0M,20mL)和EtOAc(100mL)。有机层用水(50mL×3)洗涤且浓缩，得到粗产物化合物9(250mg,0.44mmol,25.3％收率)，其为黄色固体。
Figure BDA0001680565890001512
向化合物9(50.0mg,0.20mmol)在DMF(5.0mL)中的溶液中加入K2CO3(42.26mg,0.31mmol)和1,5-二碘戊烷(333mg,1.0mmol)。将反应混合物在90℃搅拌3h。反应混合物通过硅胶柱色谱(0-50％EtOAC/石油醚)来纯化，得到化合物10(60mg,0.178mmol,87.6％收率)，其为油状物。LCMS(5-95AB/1.5min):RT＝0.765min,[M+H]+332.0。
Figure BDA0001680565890001513
向化合物10(60.0mg,0.18mmol)在DCM(6.0mL)中的溶液中加入三乙胺(55mg,0.54mmol)和MsCl(41mg,0.36mmol)。将混合物在35℃搅拌1h后，其用EtOAc(80mL)稀释且用水(50mL×3)洗涤。将有机层浓缩，得到粗产物(70mg)，其为无色油状物。LCMS(5-95AB/1.5min):RT＝0.679min,[M+H]+410.0。
Figure BDA0001680565890001514
向化合物11(70mg,0.17mmol)和化合物12(87mg,0.19mmol)在DMF(5.0mL)中的溶液中加入K2CO3(47mg,0.34mmol)和KI(5.68mg,0.030mmol)。将混合物在90℃搅拌3h且通过制备型HPLC(HCOOH)来纯化，得到产物化合物13(70mg,0.084mmol,49.2％收率)，其为白色固体。LCMS(5-95AB/1.5min):RT＝0.845min,[M+H]+774.4。
Figure BDA0001680565890001521
将化合物13(50mg,0.060mmol)在TFA(1.9mL)和水(0.10mL)的混合物中的溶液在35℃搅拌1h。将混合物分配在饱和NaHCO3(30mL)和EtOAc(50mL)之间。有机层用水(30mL×2)、盐水(30mL)洗涤且用Na2SO4干燥。将其浓缩且通过制备型TLC(5％MeOH/DCM,Rf＝0.5)来纯化，得到产物DM-4(GNT_B343_655-1)(20mg,0.034mmol,53.1％收率)，其为白色固体。LCMS(5-95AB/1.5min):RT＝0.825min,[M+H]+572.1。1H NMR(400MHz,CDCl3)δppm 1.65-1.75(m,3H)1.88-2.10(m,8H)2.19-2.31(m,1H)2.82-3.29(m,2H)3.60(dt,J＝11.9,7.5Hz,1H)3.81(dt,J＝11.6,5.9Hz,1H)3.86-3.91(m,1H)3.94(s,6H)3.97(br.s.,1H)4.01-4.18(m,4H)4.30(s,2H)5.19(d,J＝10.6Hz,2H)5.89(dd,J＝9.9,5.1Hz,1H)6.53-6.63(m,1H)6.66(s,1H)6.81(s,1H)7.51(s,1H)7.59(s,1H)7.68(d,J＝4.4Hz,1H)。
合成CLD-3
方案
Figure BDA0001680565890001531
实验
Figure BDA0001680565890001532
在0℃向化合物6(5.00g,37.83mmol)和Et3N(11.49g,113.50mmol)在DCM(100mL)中的溶液中逐滴加入MsCl(8.97g,78.32mmol)。将其在25℃在氮气下搅拌2h后，将反应混合物倒入冰水(200mL)中且用DCM(100mL×2)萃取。有机相用盐水洗涤，用Na2SO4干燥且真空浓缩，得到粗产物(7.0g,95％)，其为黄色油状物。将其与KSAc(6.59g,57.66mmol)一起混合在丙酮/水(50mL/50mL)中且在25℃搅拌10h。将反应混合物浓缩且通过快速硅胶柱色谱(PE/EtOAc＝100/1～40/1)来纯化，得到纯化合物8(1.0g,14.6％)，其为黄色油状物。
Figure BDA0001680565890001533
在0℃在氮气下向LiAlH4(692mg,18.23mmol)在THF(20mL)中的混悬液中加入化合物8(867mg,4.56mmol)在THF(5mL)中的溶液。将反应混合物在75℃在回流下搅拌2h。反应混合物在0℃通过EtOAc(3.0mL)和HCl溶液(2.0M,5mL)来淬灭。反应混合物直接用于下一步。
Figure BDA0001680565890001541
在25℃向化合物10(2.84g,9.12mmol)在DCM/MeOH(25mL/25mL)中的溶液中加入化合物9的溶液(来自上述步骤)。将混合物在25℃搅拌10h。向反应混合物中加入MnO2(3.4g,39.6mmol)且过滤。将滤液真空浓缩且通过快速硅胶柱色谱(DCM)和SFC来纯化，得到化合物2(0.80g,67.4％)，其为黄色油状物。LCMS(5-95AB,1.5min):RT＝1.020min,M+H+＝260.9。
Figure BDA0001680565890001542
在0℃向三光气(46mg,0.16mmol)在DCM(3.0mL)中的溶液中逐滴加入化合物2(100mg,0.38mmol)和吡啶(30mg,0.38mmol)在DCM(3mL)中的溶液。将反应混合物在0℃搅拌15min且在26℃逐滴加到化合物1(280mg,0.29mmol)和吡啶(30mg,0.38mmol)在DCM(4.0mL)中的溶液中。将反应混合物在26℃搅拌2h。将溶剂除去且残余物通过制备型TLC(溶剂:30％EtOAc/石油醚)来纯化，得到化合物3(300mg,82.4％)，其为黄色泡沫状物。LCMS(5-95AB/1.5min):RT＝1.248min,[M+H]+1239.5。
Figure BDA0001680565890001543
在26℃向化合物3(312mg,0.24mmol)在THF/H2O(4mL/4mL)中的溶液中加入HOAc(6.0mL)。将反应混合物在26℃搅拌24h后，其用EtOAc(20mL)稀释且用水(2×10mL)、饱和NaHCO3水溶液(15mL)和盐水(15mL)洗涤。将其干燥，浓缩且通过快速硅胶柱色谱(0-5％MeOH/DCM)来纯化，得到化合物4(240mg,97.1％)，其为黄色泡沫状物。LCMS(5-95AB/1.5min):RT＝0.876min,[M+H]+1011.3。
Figure BDA0001680565890001551
在0℃向化合物4(101mg,0.10mmol)在DCM(5.0mL)中的溶液中加入DMP(125mg,0.29mmol)。将反应混合物在26℃搅拌2h。反应用NaHCO3/Na2SO3(2.0mL/2.0mL)饱和溶液淬灭且用DCM(3×5mL)萃取。合并的有机层用NaHCO3/Na2SO3(2mL/2mL)、盐水(5mL)洗涤，干燥且浓缩。残余物通过制备型TLC(DCM/MeOH＝15:1)来纯化，得到化合物5(66mg,66.2％)，其为黄色泡沫状物。LCMS(5-95AB/1.5min):RT＝0.815min,[(M-100)/2+Na]+476.1。
Figure BDA0001680565890001552
将冷的TFA(95％在水中,2.0mL)在0℃加到化合物5(66mg,0.06mmol)中。将反应混合物在0℃搅拌30min。将反应混合物在0℃逐滴加到冷的饱和NaHCO3水溶液(4.0mL)中且其用DCM(4×8.0mL)萃取。合并的有机层用盐水(20mL)洗涤，干燥且浓缩，得到粗产物，其通过制备型TLC(6.25％MeOH/DCM,Rf＝0.5)来纯化，得到CLD-3(GNT_B343_427-1)(27.4mg,47.4％)，其为黄色泡沫状物。1HNMR(400MHz,CDCl3)δ9.21(s,1H),8.38-8.35(m,1H),7.79(d,J＝8.8Hz,1H),7.69(d,J＝4.4Hz,1H),7.47(s,1H),7.17(s,1H),6.80(s,1H),6.50(s,1H),5.57(d,J＝9.2Hz,1H),5.20-5.13(m,4H),4.29-4.25(m,5H),4.14-4.09(m.4H),3.96-3.87(m,8H),3.38(d,J＝8.0Hz,1H),3.58(d,J＝8.0Hz,2H),3.44(s,1H),3.16-3.09(m,1H),2.97-2.89(m,3H),2.71-2.67(m,1H),1.95-1.91(m,6H),1.45-1.22(m,3H)。LCMS(5-95AB/1.5min):RT＝0.750min,[M+H]+889.8。
合成CLD-5
(11S,11aS)-11-羟基-7,8-二甲氧基-5-氧代-2-(喹啉-6-基)-11,11a-二氢-1H-苯并[e]吡咯并[1,2-a][1,4]二氮杂
Figure BDA0001680565890001562
-10(5H)-羧酸(R)-2-((4-硝基苯基)二硫基)丙基酯
Figure BDA0001680565890001561
将2M草酰氯溶液(39mL,77.14mmol)和60mL二氯甲烷在500mL烧瓶中混合，冷却至-78℃。经由注射器历时～2-3min加入DMSO(5.77mL,77.14mmol)。将混合物在-78℃搅拌20min，然后经由注射器加入(5S)-5-[[叔丁基(二甲基)甲硅烷基]氧基甲基]-1-(4,5-二甲氧基-2-硝基-苯甲酰基)吡咯烷-3-酮原料(11.33g,溶解在30mL二氯甲烷中且用10mL二氯甲烷淋洗,根据Journal of Medicinal Chemistry,2010,53,2927-2941和Bioorganic&Medicinal Chemistry Letters,2000,10,1845-1847来合成)。在-78℃保持30min后，经由注射器历时2min加入Et3N(22.6mL,154.3mmol)。～4min后，将混合物温热至0℃且搅拌1h。将混合物倒入100mL水中。将二氯甲烷分离。水层用EtOAc(2×75mL)萃取。合并的有机萃取物先后用1N HCl和饱和碳酸氢钠洗涤，用Na2SO4干燥且浓缩。残余物通过硅胶柱色谱(70％-90％EtOAc/庚烷)来纯化，得到所需要的产物，其为浅黄色泡沫状物(10.12g)。
Figure BDA0001680565890001571
将(5S)-5-[[叔丁基(二甲基)甲硅烷基]氧基甲基]-1-(4,5-二甲氧基-2-硝基-苯甲酰基)吡咯烷-3-酮(1.20g,2.74mmol)、2,6-二甲基吡啶(1.27mL,10.9mmol)在二氯甲烷(45mL)中混合，然后冷却至-35℃。然后经由注射器缓慢加入三氟甲磺酸酐(0.87mL,溶解在～5.2mL DCM中)，混合物变为亮黄色且将浴温升高至-33℃。将反应温度始终保持不超过-20℃。总共～1小时后，将反应混合物移液到饱和NaHCO3水溶液、冰和EtOAc的混合物中，然后用乙酸乙酯(总共～400mL)萃取两次。合并的有机物先后用1N HCl水溶液和盐水洗涤，然后用硫酸钠干燥，浓缩。残余物通过硅胶柱色谱(40％-100％EtOAc/庚烷)来纯化，得到所需要的产物，其为黄色固体(957mg)。
Figure BDA0001680565890001572
在250mL烧瓶中向三氟甲磺酸乙烯基酯(957mg,1.68mmol)中先后加入乙醇(8.75mL,)和水(2.5mL,)、6-喹啉基硼酸(348mg 2.01mmol,)、磷酸钾(1.10g,5.03mmol)和[1,1’-二(二苯基膦基)二茂铁]二氯化钯(II)(982mg,0.134mmol)。混合物用氮气吹洗，然后在室温在氮气下搅拌。进行反应(～10min)后，将EtOAc(50mL)加到反应混合物中。将混合物过滤以除去任何固体，将水(～5mL)加到滤液中。滤液用EtOAc(2×)萃取。合并的有机物用硫酸钠干燥且浓缩。残余物通过硅胶柱色谱(40％-100％EtOAc/庚烷)来纯化，得到所需要的产物，其为黄色固体(928mg)。
Figure BDA0001680565890001573
将硝基原料(322mg,0.586mmol)溶解在6mL乙醇中，然后先后加入锌粉(383mg。5.86mmol)和1.5ml 5％甲酸在水中的溶液(75μL甲酸在1.5mL水中)。然后将混合物加热至53℃且搅拌直到反应完成(～3.5小时)。将混合物冷却至室温，过滤。滤液用EtOAc(～10mL)稀释，然后加入3M氨(～3mL)。混合物用EtOAc(3×)萃取。合并的有机物用硫酸钠干燥且浓缩，得到粗苯胺，其不经纯化即用于下一步。
Figure BDA0001680565890001581
将三光气(79.4mg,0.268mmol)溶解在1.5mL二氯甲烷中，然后加入(2R)-2-[(4-硝基苯基)二硫基]丙-1-醇(196mg,0.797mmol)和吡啶(0.092mL)在2mL二氯甲烷中的溶液。30min后，将上述溶液加到苯胺原料和吡啶(0.092mL)在4.5mL二氯甲烷中的溶液中。反应完成(～1小时)后，混合物用EtOAc稀释，然后先后用1M HCl溶液和饱和碳酸钠溶液洗涤。有机物用硫酸钠干燥且浓缩。残余物通过硅胶柱色谱(30％-70％EtOAc/庚烷)来纯化，得到所需要的氨基甲酸酯(182mg)。
Figure BDA0001680565890001582
将经TBS保护的醇(182mg,0.230mmol)溶解在4mL:1mL THF:水中，然后加入4mL乙酸。将混合物加热至55℃。进行反应(～过两夜)后，将混合物冷却至室温，然后用50mL乙酸乙酯稀释。加入碳酸钾以中和乙酸直到pH达到～10。混合物用乙酸乙酯萃取两次。合并的有机物用硫酸钠干燥且浓缩。残余物通过硅胶柱色谱(0％-10％MeOH/EtOAc)来纯化，得到所需要的醇(125mg)。
Figure BDA0001680565890001591
将醇原料(116mg,0.171mmol)溶解在6mL二氯甲烷中，然后在室温加入戴斯-马丁高碘剂(89.8mg,0.205mmol)。～2.5小时后，加入饱和碳酸氢钠溶液(～6mL)和1M硫代硫酸钠溶液(～4mL)。混合物用二氯甲烷萃取一次且用氯仿萃取两次。合并的有机物(～75mL)用硫酸钠干燥，浓缩，得到～103mg粗产物，其通过反相HPLC来纯化，得到所需要的产物(29.5mg)。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ9.24(s,1H),8.83(dd,J＝1.6,4.2Hz,1H),8.47(dd,J＝2.6,8.9Hz,1H),8.32(d,J＝8.0Hz,1H),8.12(dd,J＝1.9,8.9Hz,1H),7.92(d,J＝8.8Hz,1H),7.87(d,J＝1.8Hz,1H),7.80(s,1H),7.75(d,J＝8.5Hz,1H),7.51(dd,J＝4.2,8.3Hz,1H),7.20(s,1H),7.07(s,1H),6.95(d,J＝6.3Hz,1H),5.78-5.62(m,1H),4.30(d,J＝6.8Hz,1H),4.00(td,J＝3.2,10.0Hz,1H),3.85(s,6H),3.56-3.44(m,1H),3.08(d,J＝14.6Hz,1H),1.14(d,J＝6.3Hz,3H),0.07(s,12H)。MS m/z＝676[M+1]+。
合成CLD-6
(11S,11aS)-11-羟基-7,8-二甲氧基-5-氧代-2-(喹啉-6-基)-11,11a-二氢-1H-苯并[e]吡咯并[1,2-a][1,4]二氮杂
Figure BDA0001680565890001592
-10(5H)-羧酸2-((4-硝基苯基)二硫基)乙基酯
Figure BDA0001680565890001601
在0℃向化合物1(1.13kg,4.59mol,1.00当量)在THF(10L)中的溶液中分两份加入LiBH4(99.90g,4.59mol,1.00当量)(在加入LiBH4期间几乎没有任何温度变化)。将混悬液在0℃搅拌1h，然后在10-20℃搅拌18h。将混合物冷却至0℃且加入NH4Cl水溶液(5L)。将各层分离且水层用EA(5L×3)萃取。合并的有机物用盐水洗涤。有机层用Na2SO4干燥，过滤且浓缩，得到化合物2，其为澄清油状物(1600g,7.36mol,80.2％收率)。
Figure BDA0001680565890001602
向50L烧瓶中装入化合物2(1.60kg,7.36mol,1.00当量)、DCM(20L)，然后在搅拌下在0℃依序逐滴加入TEA(1.12kg,11.05mol,1.50当量)和乙酰氯(635.54g,8.10mol,1.10当量)。加入后，将所得到的溶液在15-25℃搅拌18h，通过加入5L水来淬灭且用3×2L DCM萃取。合并的有机层用无水硫酸钠干燥且真空浓缩，得到化合物3，其为无色油状物(2.46kg,9.49mol,128.90％收率)。
Figure BDA0001680565890001611
向20L三颈圆底烧瓶中装入化合物3(1.23kg,4.75mol,1.00当量)在DCM(12L)中的溶液，然后在15℃分几批加入PCC(1.54kg,7.13mol)。将所得到的溶液在15-25℃搅拌18h。将固体滤出且将滤液真空浓缩。残余物在用乙酸乙酯:石油醚(1:5)洗脱的硅胶柱上纯化，得到化合物4，其为浅黄色液体(1.13kg,4.38mol,46.15％收率)。
Figure BDA0001680565890001612
向10L三颈圆底烧瓶中装入甲基(三苯基)溴化鏻(958.03g,2.68mol)、THF(2.5L)，然后在0℃历时2h逐份加入t-BuOK(300.94g,2.68mol)。在搅拌下在0℃向其中逐滴加入化合物4(460.00g,1.79mol)在THF(2.5L)中的溶液。将所得到的溶液在-5～0℃搅拌20min，通过加入500mL水来淬灭且用3×500mL乙酸乙酯萃取。合并的有机层用无水硫酸钠干燥且真空浓缩。残余物在用乙酸乙酯:石油醚(1:20)洗脱的硅胶柱上纯化，得到化合物5，其为浅黄色液体(275.00g,1.08mol,30.09％)。
Figure BDA0001680565890001613
将化合物5(330.00g,1.29mol)在HCl(气体)/EtOAc(3L,4M/L)中的混合物在0℃搅拌20min。然后将混合物在10-30℃搅拌1h。将混合物真空浓缩，得到化合物6，其为黄色固体(250.00g,1.30mol,101％)，所述固体不经纯化即用于下一步。
Figure BDA0001680565890001621
向用氮气惰性气氛净化和保持的3000mL三颈圆底烧瓶中装入化合物7(354.42g,1.56mol,1.30当量)在THF(1.5L)中的溶液，然后在搅拌下逐滴加入SOCl2(1.71kg,14.33mol,11.94当量)。将所得到的溶液在20-30℃搅拌4h，然后真空浓缩。向另一个用氮气惰性气氛净化和保持的3000mL三颈圆底烧瓶中装入化合物6(230.00g,1.20mol,1.00当量)在DCM(2.5L)中的溶液。在搅拌下在-40℃向其中逐滴加入Et3N(485.75g,4.80mol,4.00当量)，然后在-40℃加入第一个烧瓶中的溶液。将温度自然温热至0℃，通过加入3000mL水/冰来淬灭且用3×1000mL二氯甲烷萃取。合并的有机层用无水硫酸钠干燥且真空浓缩。残余物在用EtOAc:PE(1:3)洗脱的硅胶柱上纯化，得到化合物8，其为浅棕色油状物(210.00g)，所述油状物不经纯化即用于下一步。
Figure BDA0001680565890001622
在0℃向化合物8(90.00g,247.02mmol,1.00当量)在THF(400mL)、MeOH(100mL)、H2O(400mL)中的混合物中一次性加入NaOH(29.64g,741.05mmol,3.00当量)。将混合物在20-30℃搅拌18h。水相用EtOAc(300mL×3)萃取。合并的有机相用饱和盐水(100mL)洗涤，用无水Na2SO4干燥，过滤且真空浓缩，得到化合物9，其为黄色固体(90.26g,粗品)，所述固体不经进一步纯化即用于下一步。
Figure BDA0001680565890001623
向配备有温度探头、磁力搅拌器和氮气进口的2000mL三颈圆底烧瓶中加入TBDMSCl(126.62g,840.12mmol)、咪唑(57.20g,840.12mmol,3.00当量)在DMF(1L)中的溶液。然后将化合物9(90.26g,280.04mmol,1.00当量)在DMF(1L)中的溶液在0℃加到混合物中。将所得到的反应混合物在25-30℃搅拌2h。将反应混合物倒入冰-水(1L)中，然后用DCM(200mL×3)萃取。合并的有机相用盐水(100mL)洗涤，用Na2SO4干燥且真空浓缩，得到残余物，得到化合物10，其为黄色油状物(126.00g)，所述油状物不经进一步纯化即用于下一步。
Figure BDA0001680565890001631
向化合物10(126.00g,288.61mmol,1.00当量)在AcOH(1L)中的混合物中逐份加入Zn(188.72g,2.89mol)同时保持温度低于30℃。将混合物在20-30℃搅拌30min。将残余物倒入EtOAc(500mL)中且过滤。将滤液真空浓缩。残余物通过硅胶色谱(PE/EtOAc＝10/1,1/1)来纯化，得到11，其为黄色油状物(58.00g,142.64mmol,49％收率)。1H NMR(400MHz,氯仿-d)δppm 6.71(s,1H)6.22(s,1H)4.85-4.97(m,2H)4.52(br.s.,1H)4.14-4.23(m,1H)3.99-4.13(m,1H)3.82(s,3H)3.77(s,3H)3.59(d,J＝5.73Hz,1H)2.63-2.72(m,2H)2.01-2.04(m,1H)1.23(t,J＝7.06Hz,1H)0.85(s,9H)-0.06-0.06(m,5H)。
(11S,11aS)-11-羟基-7,8-二甲氧基-5-氧代-2-(喹啉-6-基)-11,11a-二氢-1H-苯并[e]吡咯并[1,2-a][1,4]二氮杂
Figure BDA0001680565890001633
-10(5H)-羧酸2-((4-硝基苯基)二硫基)乙基酯
Figure BDA0001680565890001632
标题化合物按照上述步骤5-7来合成。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ9.24(d,J＝2.3Hz,1H),8.66-8.34(m,1H),8.15-7.62(m,1H),7.11(s,1H),6.98(s,1H),6.67(d,J＝5.8Hz,1H),5.37(dd,J＝9.5,6.3Hz,1H),5.13(d,J＝6.2Hz,2H),4.54-4.31(m,1H),4.12(d,J＝15.6Hz,1H),4.03-3.91(m,2H),3.86-3.78(m,6H),3.76(d,J＝3.4Hz,1H),3.48(t,J＝8.8Hz,1H),3.24-3.00(m,2H),2.96-2.80(m,1H)。MS m/z＝549[M+1]+。
虽然已经出于清楚理解的目的而通过具体说明和实施例对上述发明进行了详细描述，但是不应该将说明书和实施例解释为限制本申请范围。在说明书通篇中引用的所有专利、专利申请和参考文献都被明确地引入作为参考。
序列表
<110> 豪夫迈·罗氏有限公司
<120> 吡咯并苯并二氮杂䓬抗体-药物缀合物和使用方法
<130> P32858-WO
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<141>
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Leu Asn Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Thr Val Lys Leu Leu Ile
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Tyr Tyr Thr Ser Asn Leu His Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly
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Ser Gly Ser Gly Thr Asp Tyr Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro
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Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln Tyr Ser Glu Leu Pro Trp
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Thr Leu Thr Leu Thr Cys Thr Val Ser Gly Phe Ser Leu Thr Gly Tyr
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Ser Val Asn Trp Ile Arg Gln Pro Pro Gly Lys Ala Leu Glu Trp Leu
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Gly Met Ile Trp Gly Asp Gly Ser Thr Asp Tyr Asn Ser Ala Leu Lys
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Ser Arg Leu Thr Ile Ser Lys Asp Thr Ser Lys Asn Gln Val Val Leu
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Tyr Tyr Thr Ser Asn Leu His Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly
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Ser Gly Ser Gly Thr Asp Tyr Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro
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Pro Ser Val Phe Ile Phe Pro Pro Ser Asp Glu Gln Leu Lys Ser Gly
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Thr Ala Ser Val Val Cys Leu Leu Asn Asn Phe Tyr Pro Arg Glu Ala
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多肽"
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多肽"
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<211> 113
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<221> source
<223> /注="关于人工序列的描述: 合成
多肽"
<400> 47
Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly
1 5 10 15
Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Lys Ser Ser Gln Ser Leu Leu Tyr Arg
20 25 30
Ser Asn Gln Lys Asn Tyr Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys
35 40 45
Ala Pro Lys Leu Leu Ile Tyr Trp Ala Ser Thr Arg Glu Ser Gly Val
50 55 60
Pro Ser Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr
65 70 75 80
Ile Ser Ser Leu Gln Pro Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln
85 90 95
Tyr Tyr Asn Tyr Pro Arg Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Val Glu Ile
100 105 110
Lys
<210> 48
<211> 10
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<221> source
<223> /注="关于人工序列的描述: 合成
肽"
<400> 48
Gly Phe Ser Phe Ser Asp Phe Ala Met Ser
1 5 10
<210> 49
<211> 18
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<221> source
<223> /注="关于人工序列的描述: 合成
肽"
<400> 49
Ala Thr Ile Gly Arg Val Ala Phe His Thr Tyr Tyr Pro Asp Ser Met
1 5 10 15
Lys Gly
<210> 50
<211> 13
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<221> source
<223> /注="关于人工序列的描述: 合成
肽"
<400> 50
Ala Arg His Arg Gly Phe Asp Val Gly His Phe Asp Phe
1 5 10
<210> 51
<211> 16
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
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肽"
<400> 51
Arg Ser Ser Glu Thr Leu Val His Ser Ser Gly Asn Thr Tyr Leu Glu
1 5 10 15
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<211> 7
<212> PRT
<213> 人工序列
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肽"
<400> 52
Arg Val Ser Asn Arg Phe Ser
1 5
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<211> 9
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
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肽"
<400> 53
Phe Gln Gly Ser Phe Asn Pro Leu Thr
1 5
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<211> 120
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<221> source
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多肽"
<400> 54
Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly
1 5 10 15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Ser Phe Ser Asp Phe
20 25 30
Ala Met Ser Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val
35 40 45
Ala Thr Ile Gly Arg Val Ala Phe His Thr Tyr Tyr Pro Asp Ser Met
50 55 60
Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr Leu Tyr
65 70 75 80
Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ala Arg His Arg Gly Phe Asp Val Gly His Phe Asp Phe Trp Gly Gln
100 105 110
Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser
115 120
<210> 55
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<212> PRT
<213> 人工序列
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多肽"
<400> 55
Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly
1 5 10 15
Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Arg Ser Ser Glu Thr Leu Val His Ser
20 25 30
Ser Gly Asn Thr Tyr Leu Glu Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala
35 40 45
Pro Lys Leu Leu Ile Tyr Arg Val Ser Asn Arg Phe Ser Gly Val Pro
50 55 60
Ser Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile
65 70 75 80
Ser Ser Leu Gln Pro Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Phe Gln Gly
85 90 95
Ser Phe Asn Pro Leu Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys
100 105 110
Arg
<210> 56
<211> 117
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
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多肽"
<400> 56
Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly
1 5 10 15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Ser Ser Tyr
20 25 30
Trp Ile Glu Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Ile
35 40 45
Gly Glu Ile Leu Pro Gly Gly Gly Asp Thr Asn Tyr Asn Glu Ile Phe
50 55 60
Lys Gly Arg Ala Thr Phe Ser Ala Asp Thr Ser Lys Asn Thr Ala Tyr
65 70 75 80
Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95
Thr Arg Arg Val Pro Ile Arg Leu Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Leu
100 105 110
Val Thr Val Ser Ser
115
<210> 57
<211> 112
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
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多肽"
<400> 57
Asp Ile Gln Leu Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly
1 5 10 15
Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Lys Ala Ser Gln Ser Val Asp Tyr Glu
20 25 30
Gly Asp Ser Phe Leu Asn Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro
35 40 45
Lys Leu Leu Ile Tyr Ala Ala Ser Asn Leu Glu Ser Gly Val Pro Ser
50 55 60
Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser
65 70 75 80
Ser Leu Gln Pro Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln Ser Asn
85 90 95
Glu Asp Pro Leu Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys Arg
100 105 110
<210> 58
<211> 10
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
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肽"
<400> 58
Gly Tyr Thr Phe Ser Ser Tyr Trp Ile Glu
1 5 10
<210> 59
<211> 18
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
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肽"
<400> 59
Gly Glu Ile Leu Pro Gly Gly Gly Asp Thr Asn Tyr Asn Glu Ile Phe
1 5 10 15
Lys Gly
<210> 60
<211> 10
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<221> source
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肽"
<400> 60
Thr Arg Arg Val Pro Ile Arg Leu Asp Tyr
1 5 10
<210> 61
<211> 15
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<221> source
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肽"
<400> 61
Lys Ala Ser Gln Ser Val Asp Tyr Glu Gly Asp Ser Phe Leu Asn
1 5 10 15
<210> 62
<211> 7
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<221> source
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肽"
<400> 62
Ala Ala Ser Asn Leu Glu Ser
1 5
<210> 63
<211> 9
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<221> source
<223> /注="关于人工序列的描述: 合成
肽"
<400> 63
Gln Gln Ser Asn Glu Asp Pro Leu Thr
1 5
<210> 64
<211> 1255
<212> PRT
<213> 人类(Homo sapiens)
<400> 64
Met Glu Leu Ala Ala Leu Cys Arg Trp Gly Leu Leu Leu Ala Leu Leu
1 5 10 15
Pro Pro Gly Ala Ala Ser Thr Gln Val Cys Thr Gly Thr Asp Met Lys
20 25 30
Leu Arg Leu Pro Ala Ser Pro Glu Thr His Leu Asp Met Leu Arg His
35 40 45
Leu Tyr Gln Gly Cys Gln Val Val Gln Gly Asn Leu Glu Leu Thr Tyr
50 55 60
Leu Pro Thr Asn Ala Ser Leu Ser Phe Leu Gln Asp Ile Gln Glu Val
65 70 75 80
Gln Gly Tyr Val Leu Ile Ala His Asn Gln Val Arg Gln Val Pro Leu
85 90 95
Gln Arg Leu Arg Ile Val Arg Gly Thr Gln Leu Phe Glu Asp Asn Tyr
100 105 110
Ala Leu Ala Val Leu Asp Asn Gly Asp Pro Leu Asn Asn Thr Thr Pro
115 120 125
Val Thr Gly Ala Ser Pro Gly Gly Leu Arg Glu Leu Gln Leu Arg Ser
130 135 140
Leu Thr Glu Ile Leu Lys Gly Gly Val Leu Ile Gln Arg Asn Pro Gln
145 150 155 160
Leu Cys Tyr Gln Asp Thr Ile Leu Trp Lys Asp Ile Phe His Lys Asn
165 170 175
Asn Gln Leu Ala Leu Thr Leu Ile Asp Thr Asn Arg Ser Arg Ala Cys
180 185 190
His Pro Cys Ser Pro Met Cys Lys Gly Ser Arg Cys Trp Gly Glu Ser
195 200 205
Ser Glu Asp Cys Gln Ser Leu Thr Arg Thr Val Cys Ala Gly Gly Cys
210 215 220
Ala Arg Cys Lys Gly Pro Leu Pro Thr Asp Cys Cys His Glu Gln Cys
225 230 235 240
Ala Ala Gly Cys Thr Gly Pro Lys His Ser Asp Cys Leu Ala Cys Leu
245 250 255
His Phe Asn His Ser Gly Ile Cys Glu Leu His Cys Pro Ala Leu Val
260 265 270
Thr Tyr Asn Thr Asp Thr Phe Glu Ser Met Pro Asn Pro Glu Gly Arg
275 280 285
Tyr Thr Phe Gly Ala Ser Cys Val Thr Ala Cys Pro Tyr Asn Tyr Leu
290 295 300
Ser Thr Asp Val Gly Ser Cys Thr Leu Val Cys Pro Leu His Asn Gln
305 310 315 320
Glu Val Thr Ala Glu Asp Gly Thr Gln Arg Cys Glu Lys Cys Ser Lys
325 330 335
Pro Cys Ala Arg Val Cys Tyr Gly Leu Gly Met Glu His Leu Arg Glu
340 345 350
Val Arg Ala Val Thr Ser Ala Asn Ile Gln Glu Phe Ala Gly Cys Lys
355 360 365
Lys Ile Phe Gly Ser Leu Ala Phe Leu Pro Glu Ser Phe Asp Gly Asp
370 375 380
Pro Ala Ser Asn Thr Ala Pro Leu Gln Pro Glu Gln Leu Gln Val Phe
385 390 395 400
Glu Thr Leu Glu Glu Ile Thr Gly Tyr Leu Tyr Ile Ser Ala Trp Pro
405 410 415
Asp Ser Leu Pro Asp Leu Ser Val Phe Gln Asn Leu Gln Val Ile Arg
420 425 430
Gly Arg Ile Leu His Asn Gly Ala Tyr Ser Leu Thr Leu Gln Gly Leu
435 440 445
Gly Ile Ser Trp Leu Gly Leu Arg Ser Leu Arg Glu Leu Gly Ser Gly
450 455 460
Leu Ala Leu Ile His His Asn Thr His Leu Cys Phe Val His Thr Val
465 470 475 480
Pro Trp Asp Gln Leu Phe Arg Asn Pro His Gln Ala Leu Leu His Thr
485 490 495
Ala Asn Arg Pro Glu Asp Glu Cys Val Gly Glu Gly Leu Ala Cys His
500 505 510
Gln Leu Cys Ala Arg Gly His Cys Trp Gly Pro Gly Pro Thr Gln Cys
515 520 525
Val Asn Cys Ser Gln Phe Leu Arg Gly Gln Glu Cys Val Glu Glu Cys
530 535 540
Arg Val Leu Gln Gly Leu Pro Arg Glu Tyr Val Asn Ala Arg His Cys
545 550 555 560
Leu Pro Cys His Pro Glu Cys Gln Pro Gln Asn Gly Ser Val Thr Cys
565 570 575
Phe Gly Pro Glu Ala Asp Gln Cys Val Ala Cys Ala His Tyr Lys Asp
580 585 590
Pro Pro Phe Cys Val Ala Arg Cys Pro Ser Gly Val Lys Pro Asp Leu
595 600 605
Ser Tyr Met Pro Ile Trp Lys Phe Pro Asp Glu Glu Gly Ala Cys Gln
610 615 620
Pro Cys Pro Ile Asn Cys Thr His Ser Cys Val Asp Leu Asp Asp Lys
625 630 635 640
Gly Cys Pro Ala Glu Gln Arg Ala Ser Pro Leu Thr Ser Ile Ile Ser
645 650 655
Ala Val Val Gly Ile Leu Leu Val Val Val Leu Gly Val Val Phe Gly
660 665 670
Ile Leu Ile Lys Arg Arg Gln Gln Lys Ile Arg Lys Tyr Thr Met Arg
675 680 685
Arg Leu Leu Gln Glu Thr Glu Leu Val Glu Pro Leu Thr Pro Ser Gly
690 695 700
Ala Met Pro Asn Gln Ala Gln Met Arg Ile Leu Lys Glu Thr Glu Leu
705 710 715 720
Arg Lys Val Lys Val Leu Gly Ser Gly Ala Phe Gly Thr Val Tyr Lys
725 730 735
Gly Ile Trp Ile Pro Asp Gly Glu Asn Val Lys Ile Pro Val Ala Ile
740 745 750
Lys Val Leu Arg Glu Asn Thr Ser Pro Lys Ala Asn Lys Glu Ile Leu
755 760 765
Asp Glu Ala Tyr Val Met Ala Gly Val Gly Ser Pro Tyr Val Ser Arg
770 775 780
Leu Leu Gly Ile Cys Leu Thr Ser Thr Val Gln Leu Val Thr Gln Leu
785 790 795 800
Met Pro Tyr Gly Cys Leu Leu Asp His Val Arg Glu Asn Arg Gly Arg
805 810 815
Leu Gly Ser Gln Asp Leu Leu Asn Trp Cys Met Gln Ile Ala Lys Gly
820 825 830
Met Ser Tyr Leu Glu Asp Val Arg Leu Val His Arg Asp Leu Ala Ala
835 840 845
Arg Asn Val Leu Val Lys Ser Pro Asn His Val Lys Ile Thr Asp Phe
850 855 860
Gly Leu Ala Arg Leu Leu Asp Ile Asp Glu Thr Glu Tyr His Ala Asp
865 870 875 880
Gly Gly Lys Val Pro Ile Lys Trp Met Ala Leu Glu Ser Ile Leu Arg
885 890 895
Arg Arg Phe Thr His Gln Ser Asp Val Trp Ser Tyr Gly Val Thr Val
900 905 910
Trp Glu Leu Met Thr Phe Gly Ala Lys Pro Tyr Asp Gly Ile Pro Ala
915 920 925
Arg Glu Ile Pro Asp Leu Leu Glu Lys Gly Glu Arg Leu Pro Gln Pro
930 935 940
Pro Ile Cys Thr Ile Asp Val Tyr Met Ile Met Val Lys Cys Trp Met
945 950 955 960
Ile Asp Ser Glu Cys Arg Pro Arg Phe Arg Glu Leu Val Ser Glu Phe
965 970 975
Ser Arg Met Ala Arg Asp Pro Gln Arg Phe Val Val Ile Gln Asn Glu
980 985 990
Asp Leu Gly Pro Ala Ser Pro Leu Asp Ser Thr Phe Tyr Arg Ser Leu
995 1000 1005
Leu Glu Asp Asp Asp Met Gly Asp Leu Val Asp Ala Glu Glu Tyr
1010 1015 1020
Leu Val Pro Gln Gln Gly Phe Phe Cys Pro Asp Pro Ala Pro Gly
1025 1030 1035
Ala Gly Gly Met Val His His Arg His Arg Ser Ser Ser Thr Arg
1040 1045 1050
Ser Gly Gly Gly Asp Leu Thr Leu Gly Leu Glu Pro Ser Glu Glu
1055 1060 1065
Glu Ala Pro Arg Ser Pro Leu Ala Pro Ser Glu Gly Ala Gly Ser
1070 1075 1080
Asp Val Phe Asp Gly Asp Leu Gly Met Gly Ala Ala Lys Gly Leu
1085 1090 1095
Gln Ser Leu Pro Thr His Asp Pro Ser Pro Leu Gln Arg Tyr Ser
1100 1105 1110
Glu Asp Pro Thr Val Pro Leu Pro Ser Glu Thr Asp Gly Tyr Val
1115 1120 1125
Ala Pro Leu Thr Cys Ser Pro Gln Pro Glu Tyr Val Asn Gln Pro
1130 1135 1140
Asp Val Arg Pro Gln Pro Pro Ser Pro Arg Glu Gly Pro Leu Pro
1145 1150 1155
Ala Ala Arg Pro Ala Gly Ala Thr Leu Glu Arg Pro Lys Thr Leu
1160 1165 1170
Ser Pro Gly Lys Asn Gly Val Val Lys Asp Val Phe Ala Phe Gly
1175 1180 1185
Gly Ala Val Glu Asn Pro Glu Tyr Leu Thr Pro Gln Gly Gly Ala
1190 1195 1200
Ala Pro Gln Pro His Pro Pro Pro Ala Phe Ser Pro Ala Phe Asp
1205 1210 1215
Asn Leu Tyr Tyr Trp Asp Gln Asp Pro Pro Glu Arg Gly Ala Pro
1220 1225 1230
Pro Ser Thr Phe Lys Gly Thr Pro Thr Ala Glu Asn Pro Glu Tyr
1235 1240 1245
Leu Gly Leu Asp Val Pro Val
1250 1255
<210> 65
<211> 14
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<221> source
<223> /注="关于人工序列的描述: 合成
寡核苷酸"
<400> 65
tatagaaatc tata 14
<210> 66
<211> 14
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<221> source
<223> /注="关于人工序列的描述: 合成
寡核苷酸"
<400> 66
tatagatttc tata 14
<210> 67
<211> 14
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<221> source
<223> /注="关于人工序列的描述: 合成
寡核苷酸"
<400> 67
tatagaaatg tata 14
<210> 68
<211> 14
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<221> source
<223> /注="关于人工序列的描述: 合成
寡核苷酸"
<400> 68
tatacatttc tata 14
<210> 69
<211> 7
<212> PRT
<213> 人类(Homo sapiens)
<400> 69
Met Ala Glu Ala Ile Thr Tyr
1 5
<210> 70
<211> 7
<212> PRT
<213> 人类(Homo sapiens)
<400> 70
Thr Ala Phe Arg Phe Pro Asp
1 5

Claims (40)

1.式Ic的接头-药物中间体：
Figure FDA0003225680970000011
其中
R1和R2独立选自H或C1-C6烷基；
R3独立为NO2；
R4和R5为＝O；且
m为1。
2.权利要求1的接头-药物中间体，其具有式If：
Figure FDA0003225680970000012
3.式IIc的抗体-药物缀合物化合物或其药用盐：
Figure FDA0003225680970000013
其中
R1和R2独立选自H或C1-C6烷基；
R4和R5为＝O；
p为1-8的整数；且
Ab为抗体。
4.权利要求3的抗体-药物缀合物化合物或其药用盐，其中Ab为与选自(1)-(53)的一种或多种肿瘤相关抗原或细胞表面受体结合的抗体：
(1)BMPR1B；
(2)E16；
(3)STEAP1；
(4)MUC16；
(5)MPF；
(6)Napi2b；
(7)Sema 5b；
(8)PSCA hlg；
(9)ETBR；
(10)MSG783；
(11)STEAP2；
(12)TrpM4；
(13)CRIPTO；
(14)CD21；
(15)CD79b；
(16)FcRH2；
(17)HER2；
(18)NCA；
(19)MDP；
(20)IL20Rα；
(21)Brevican；
(22)EphB2R；
(23)ASLG659；
(24)PSCA；
(25)GEDA；
(26)BAFF-R；
(27)CD22；
(28)CD79a；
(29)CXCR5；
(30)HLA-DOB；
(31)P2X5；
(32)CD72；
(33)LY64；
(34)FcRH1；
(35)FcRH5；
(36)TENB2；
(37)PMEL17；
(38)TMEFF1；
(39)GDNF-Ra1；
(40)Ly6E；
(41)TMEM46；
(42)Ly6G6D；
(43)LGR5；
(44)RET；
(45)LY6K；
(46)GPR19；
(47)GPR54；
(48)ASPHD1；
(49)酪氨酸酶；
(50)TMEM118；
(51)GPR172A；
(52)CD33；或
(53)CLL-1。
5.权利要求3的抗体-药物缀合物化合物或其药用盐，所述化合物具有式IIf：
Figure FDA0003225680970000041
6.权利要求3的抗体-药物缀合物化合物或其药用盐，其中Ab为半胱氨酸工程化抗体。
7.权利要求3的抗体-药物缀合物化合物或其药用盐，其中Ab选自抗HER2、抗CD22、抗CD33、抗Napi2b或抗CLL-1。
8.式IIc的抗体-药物缀合物化合物或其药用盐：
Figure FDA0003225680970000042
其中
R1和R2独立选自H或C1-C6烷基；
R4和R5为＝O；
p为1-8的整数；且
Ab为抗HER2抗体，其包含(a)由氨基酸序列SEQ ID NO:22组成的HVR-H1；(b)由氨基酸序列SEQ ID NO:23组成的HVR-H2；(c)由氨基酸序列SEQ ID NO:24组成的HVR-H3；(d)由氨基酸序列SEQ ID NO:19组成的HVR-L1；(e)由氨基酸序列SEQ ID NO:20组成的HVR-L2；和(f)由氨基酸序列SEQ ID NO:21组成的HVR-L3。
9.权利要求8的抗体-药物缀合物化合物或其药用盐，其中所述抗HER2抗体包含由序列SEQ ID NO:17组成的轻链可变区和由序列SEQ ID NO:18组成的重链可变区。
10.权利要求8的抗体-药物缀合物化合物或其药用盐，所述化合物具有式IIf：
Figure FDA0003225680970000051
11.权利要求8的抗体-药物缀合物化合物或其药用盐，其中所述抗HER2抗体为半胱氨酸工程化抗体。
12.权利要求6或11的抗体-药物缀合物化合物或其药用盐，其中所述半胱氨酸工程化抗体包含轻链中根据Kabat编号的K149C取代或重链中根据EU编号的A118C取代作为药物缀合位点。
13.权利要求3或8的抗体-药物缀合物化合物或其药用盐，其中p为1、2、3或4。
14.权利要求3或8的抗体-药物缀合物化合物或其药用盐，其包含多种抗体-药物缀合物化合物的混合物，其中所述多种抗体-药物缀合物化合物的混合物中的平均药物负载每抗体即p为2至5。
15.式IIf的抗体-药物缀合物化合物或其药用盐：
Figure FDA0003225680970000052
其中Ab为包含LC K149C的半胱氨酸工程化抗HER2抗体，并且p为2。
16.权利要求15的抗体-药物缀合物化合物或其药用盐，其中Ab为抗HER2抗体，其包含(a)由氨基酸序列SEQ ID NO:22组成的HVR-H1；(b)由氨基酸序列SEQ ID NO:23组成的HVR-H2；(c)由氨基酸序列SEQ ID NO:24组成的HVR-H3；(d)由氨基酸序列SEQ ID NO:19组成的HVR-L1；(e)由氨基酸序列SEQ ID NO:20组成的HVR-L2；和(f)由氨基酸序列SEQ ID NO:21组成的HVR-L3。
17.权利要求15的抗体-药物缀合物化合物或其药用盐，其中所述抗HER2抗体包含由序列SEQ ID NO:17组成的轻链可变区和由序列SEQ ID NO:18组成的重链可变区。
18.式IIf的抗体-药物缀合物化合物或其药用盐：
Figure FDA0003225680970000061
其中Ab为包含LC K149C的半胱氨酸工程化抗HER2抗体，所述抗体具有SEQ ID NO:26的重链氨基酸序列和SEQ ID NO:30的轻链氨基酸序列，并且p为2。
19.一种制备权利要求3、8、15、16、17或18的抗体-药物缀合物化合物或其药用盐的方法，所述方法包括将抗体与权利要求1的式I的接头-药物中间体反应。
20.一种药物组合物，其包含权利要求3、8、15、16、17或18的抗体-药物缀合物化合物或其药用盐和药用赋形剂。
21.权利要求20的药物组合物，其还包含额外的治疗剂。
22.权利要求21的药物组合物，其中所述额外的治疗剂为化学治疗剂。
23.权利要求21的药物组合物，其中所述额外的治疗剂为与HER2结合的抗体或免疫缀合物。
24.权利要求23的药物组合物，其中所述额外的治疗剂为(i)与HER2的结构域II结合的抗体或免疫缀合物；和/或(ii)与HER2的结构域IV结合的抗体或免疫缀合物。
25.权利要求23的药物组合物，其中所述额外的治疗剂为(i)与表位2C4结合的抗体或免疫缀合物；和/或(ii)与表位4D5结合的抗体或免疫缀合物。
26.权利要求21的药物组合物，其中所述额外的治疗剂选自曲妥珠单抗、曲妥珠单抗-MCC-DM1(T-DM1)或帕妥珠单抗。
27.权利要求21的药物组合物，其还包含(1)曲妥珠单抗或T-DM1；和(2)帕妥珠单抗。
28.权利要求21-27中任一项的药物组合物在制备用于以下方法的药物中的用途，所述方法为治疗癌症的方法，其包括向患者给药治疗有效量的所述药物组合物。
29.权利要求28的用途，其中所述癌症为HER2阳性癌症。
30.权利要求29的用途，其中所述HER2阳性癌症为乳腺癌或胃癌。
31.权利要求3、8和15-18中任一项的抗体-药物缀合物化合物或其药用盐在制备用于以下方法的药物中的用途，所述方法为治疗癌症的方法，其包括向患者给药治疗有效量的所述抗体-药物缀合物化合物或其药用盐。
32.权利要求31的用途，其中所述癌症为HER2阳性癌症。
33.权利要求32的用途，其中所述HER2阳性癌症为乳腺癌或胃癌。
34.权利要求31的用途，其还包括向患者给药额外的治疗剂。
35.权利要求34的用途，其中所述额外的治疗剂为化学治疗剂。
36.权利要求34的用途，其中所述额外的治疗剂为与HER2结合的抗体或免疫缀合物。
37.权利要求36的用途，其中所述额外的治疗剂为(i)与HER2的结构域II结合的抗体或免疫缀合物；和/或(ii)与HER2的结构域IV结合的抗体或免疫缀合物。
38.权利要求36的用途，其中所述额外的治疗剂为(i)与表位2C4结合的抗体或免疫缀合物；和/或(ii)与表位4D5结合的抗体或免疫缀合物。
39.权利要求36的用途，其中所述额外的治疗剂选自曲妥珠单抗、曲妥珠单抗-MCC-DM1(T-DM1)或帕妥珠单抗。
40.权利要求36的用途，其还包括向所述患者给药(1)曲妥珠单抗或T-DM1；和(2)帕妥珠单抗。
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Families Citing this family (24)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN103068406B (zh) * 2010-06-08 2017-06-30 基因泰克公司 半胱氨酸改造的抗体和偶联物
WO2016040723A1 (en) 2014-09-12 2016-03-17 Genentech, Inc. Anti-her2 antibodies and immunoconjugates
MA43345A (fr) 2015-10-02 2018-08-08 Hoffmann La Roche Conjugués anticorps-médicaments de pyrrolobenzodiazépine et méthodes d'utilisation
MA43354A (fr) * 2015-10-16 2018-08-22 Genentech Inc Conjugués médicamenteux à pont disulfure encombré
JP7093767B2 (ja) 2016-08-11 2022-06-30 ジェネンテック， インコーポレイテッド ピロロベンゾジアゼピンプロドラッグ及びその抗体コンジュゲート
CA3126646A1 (en) 2017-09-29 2019-04-04 Daiichi Sankyo Company, Limited Antibody-pyrrolobenzodiazepine derivative conjugate
EP3720437A4 (en) * 2017-12-06 2021-11-03 Yale University PRODRUGS ACTIVATED BY REDUCTION IN CYTOSOL
GB201803342D0 (en) * 2018-03-01 2018-04-18 Medimmune Ltd Methods
KR20200138288A (ko) 2018-03-28 2020-12-09 미쓰비시 타나베 파마 코퍼레이션 cMET 모노클로날 결합제의 약물 접합체, 및 그의 용도
GB201806022D0 (en) 2018-04-12 2018-05-30 Medimmune Ltd Pyrrolobenzodiazepines and conjugates thereof
JP2022511337A (ja) 2018-09-19 2022-01-31 インサーム （インスティテュート ナショナル デ ラ サンテ エ デ ラ ルシェルシェ メディカル） 免疫チェックポイント治療に抵抗性のある癌の治療のための方法および医薬組成物
EP3894427A1 (en) 2018-12-10 2021-10-20 Genentech, Inc. Photocrosslinking peptides for site specific conjugation to fc-containing proteins
EP3914241A4 (en) * 2019-01-25 2023-01-18 Yale University ANTICANCER DRUGS AND METHODS OF PRODUCTION AND USE THEREOF
EP3920956A4 (en) * 2019-02-04 2022-11-16 Xenetic Biosciences Inc. METHODS OF USE OF GLYCOSYLATED THERAPEUTIC PROTEINS
CA3191804A1 (en) * 2019-03-25 2020-10-01 Daiichi Sankyo Company, Limited Anti-her2 antibody-pyrrolobenzodiazepine derivative conjugate
BR112021017350A2 (pt) * 2019-03-27 2021-11-16 Daiichi Sankyo Co Ltd Combinação de conjugado de anticorpo-derivado de pirrolobenzodiazepina e inibidor de parp
US20220363776A1 (en) 2019-10-04 2022-11-17 INSERM (Institut National de la Santé et de la Recherche Médicale) Methods and pharmaceutical composition for the treatment of ovarian cancer, breast cancer or pancreatic cancer
EP4069312A4 (en) * 2019-12-04 2024-03-27 The Research Foundation for the State University of New York COMPOSITIONS AND METHODS FOR REDUCING OFF-TARGET TOXICITY OF ANTIBODY-DRUG CONJUGATES
TW202216771A (zh) 2020-06-26 2022-05-01 德商拜耳廠股份有限公司 用於治療應用之ccr8抗體
EP4189071A1 (en) 2020-08-03 2023-06-07 Institut National de la Santé et de la Recherche Médicale (INSERM) Population of treg cells functionally committed to exert a regulatory activity and their use for adoptive therapy
CN112125924B (zh) * 2020-09-15 2021-09-24 吉林大学 一种螺旋寡聚物、仿生离子通道、制备方法、应用
MX2023008628A (es) 2021-01-22 2023-09-22 Bayer Ag Anticuerpos lrrc15 y conjugados de los mismos.
JP2024535712A (ja) 2021-08-27 2024-10-02 ヤンセン バイオテツク，インコーポレーテツド 抗ｐｓｍａ抗体及びその使用
WO2023215293A1 (en) 2022-05-02 2023-11-09 Athanor Biosciences, Inc. Cancer eradicating – bio-nanoparticles (ce-bnp)

Citations (3)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
WO2014096368A1 (en) * 2012-12-21 2014-06-26 Spirogen Sàrl Pyrrolobenzodiazepines and conjugates thereof
CN103987407A (zh) * 2011-10-14 2014-08-13 斯皮罗根有限公司 吡咯并苯并二氮杂卓及其偶联物
CN104540524A (zh) * 2012-07-09 2015-04-22 基因泰克公司 包含抗cd22抗体的免疫缀合物

Family Cites Families (386)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US798959A (en) 1904-12-19 1905-09-05 George W Goss Corn-husker.
IL47062A (en) 1975-04-10 1979-07-25 Yeda Res & Dev Process for diminishing antigenicity of tissues to be usedas transplants by treatment with glutaraldehyde
US4665077A (en) 1979-03-19 1987-05-12 The Upjohn Company Method for treating rejection of organ or skin grafts with 6-aryl pyrimidine compounds
US4427588A (en) 1982-11-08 1984-01-24 Bristol-Myers Company Process for conversion of oxotomaymycin to tomaymycin
US4816567A (en) 1983-04-08 1989-03-28 Genentech, Inc. Recombinant immunoglobin preparations
US4676980A (en) 1985-09-23 1987-06-30 The United States Of America As Represented By The Secretary Of The Department Of Health And Human Services Target specific cross-linked heteroantibodies
US5583024A (en) 1985-12-02 1996-12-10 The Regents Of The University Of California Recombinant expression of Coleoptera luciferase
US6548640B1 (en) 1986-03-27 2003-04-15 Btg International Limited Altered antibodies
IL85035A0 (en) 1987-01-08 1988-06-30 Int Genetic Eng Polynucleotide molecule,a chimeric antibody with specificity for human b cell surface antigen,a process for the preparation and methods utilizing the same
WO1988007089A1 (en) 1987-03-18 1988-09-22 Medical Research Council Altered antibodies
IL85746A (en) 1988-03-15 1994-05-30 Yeda Res & Dev Preparations comprising t-lymphocyte cells treated with 8-methoxypsoralen or cell membranes separated therefrom for preventing or treating autoimmune diseases
FI891226A (fi) 1988-04-28 1989-10-29 Univ Leland Stanford Junior Reseptordeterminanter i anti-t-celler foer behandling av autoimmunsjukdom.
US5750373A (en) 1990-12-03 1998-05-12 Genentech, Inc. Enrichment method for variant proteins having altered binding properties, M13 phagemids, and growth hormone variants
KR0184860B1 (ko) 1988-11-11 1999-04-01 메디칼 리써어치 카운실 단일영역 리간드와 이를 포함하는 수용체 및 이들의 제조방법과 이용(법)
WO1990008187A1 (en) 1989-01-19 1990-07-26 Dana Farber Cancer Institute Soluble two domain cd2 protein
DK0463101T3 (da) 1989-03-21 1994-03-14 Immune Response Corp Inc Vaccination og fremgangsmåde mod sygdomme, som skyldes patogene reaktioner og specifikke T-cellepopulationer
DE3920358A1 (de) 1989-06-22 1991-01-17 Behringwerke Ag Bispezifische und oligospezifische, mono- und oligovalente antikoerperkonstrukte, ihre herstellung und verwendung
DE69031919T3 (de) 1989-07-19 2005-01-27 Connetics Corp., Palo Alto T-zell-rezeptor-peptide als heilmittel für autoimmune und bösartige krankheiten
WO1991002536A1 (en) 1989-08-23 1991-03-07 Scripps Clinic And Research Foundation Compositions and methods for detection and treatment of epstein-barr virus infection and immune disorders
US5959177A (en) 1989-10-27 1999-09-28 The Scripps Research Institute Transgenic plants expressing assembled secretory antibodies
US6075181A (en) 1990-01-12 2000-06-13 Abgenix, Inc. Human antibodies derived from immunized xenomice
US6150584A (en) 1990-01-12 2000-11-21 Abgenix, Inc. Human antibodies derived from immunized xenomice
JPH053790A (ja) 1990-04-19 1993-01-14 Fujisawa Pharmaceut Co Ltd デヒドロペプチダーゼ−ｉ
US5256643A (en) 1990-05-29 1993-10-26 The Government Of The United States Human cripto protein
US5770429A (en) 1990-08-29 1998-06-23 Genpharm International, Inc. Transgenic non-human animals capable of producing heterologous antibodies
WO1992007574A1 (en) 1990-10-25 1992-05-14 Tanox Biosystems, Inc. Glycoproteins associated with membrane-bound immunoglobulins as antibody targets on b cells
US5571894A (en) 1991-02-05 1996-11-05 Ciba-Geigy Corporation Recombinant antibodies specific for a growth factor receptor
ATE194385T1 (de) 1991-03-29 2000-07-15 Genentech Inc Menschliche pf4a rezeptoren und ihre verwendung
US5440021A (en) 1991-03-29 1995-08-08 Chuntharapai; Anan Antibodies to human IL-8 type B receptor
US5543503A (en) 1991-03-29 1996-08-06 Genentech Inc. Antibodies to human IL-8 type A receptor
EP0940468A1 (en) 1991-06-14 1999-09-08 Genentech, Inc. Humanized antibody variable domain
GB9114948D0 (en) 1991-07-11 1991-08-28 Pfizer Ltd Process for preparing sertraline intermediates
JP3050424B2 (ja) 1991-07-12 2000-06-12 塩野義製薬株式会社 ヒトエンドセリンリセプター
US5264557A (en) 1991-08-23 1993-11-23 The United States Of America As Represented By The Department Of Health And Human Services Polypeptide of a human cripto-related gene, CR-3
EP0604580A1 (en) 1991-09-19 1994-07-06 Genentech, Inc. EXPRESSION IN E. COLI OF ANTIBODY FRAGMENTS HAVING AT LEAST A CYSTEINE PRESENT AS A FREE THIOL, USE FOR THE PRODUCTION OF BIFUNCTIONAL F(ab') 2? ANTIBODIES
US5587458A (en) 1991-10-07 1996-12-24 Aronex Pharmaceuticals, Inc. Anti-erbB-2 antibodies, combinations thereof, and therapeutic and diagnostic uses thereof
WO1993008829A1 (en) 1991-11-04 1993-05-13 The Regents Of The University Of California Compositions that mediate killing of hiv-infected cells
US5976551A (en) 1991-11-15 1999-11-02 Institut Pasteur And Institut Nationale De La Sante Et De La Recherche Medicale Altered major histocompatibility complex (MHC) determinant and method of using the determinant
US6153408A (en) 1991-11-15 2000-11-28 Institut Pasteur And Institut National De La Sante Et De La Recherche Medicale Altered major histocompatibility complex (MHC) determinant and methods of using the determinant
EP0625200B1 (en) 1992-02-06 2005-05-11 Chiron Corporation Biosynthetic binding protein for cancer marker
IL107366A (en) 1992-10-23 2003-03-12 Chugai Pharmaceutical Co Ltd Genes coding for megakaryocyte potentiator
US5644033A (en) 1992-12-22 1997-07-01 Health Research, Inc. Monoclonal antibodies that define a unique antigen of human B cell antigen receptor complex and methods of using same for diagnosis and treatment
US5801005A (en) 1993-03-17 1998-09-01 University Of Washington Immune reactivity to HER-2/neu protein for diagnosis of malignancies in which the HER-2/neu oncogene is associated
US5869445A (en) 1993-03-17 1999-02-09 University Of Washington Methods for eliciting or enhancing reactivity to HER-2/neu protein
CA2163345A1 (en) 1993-06-16 1994-12-22 Susan Adrienne Morgan Antibodies
US5773223A (en) 1993-09-02 1998-06-30 Chiron Corporation Endothelin B1, (ETB1) receptor polypeptide and its encoding nucleic acid methods, and uses thereof
US5750370A (en) 1995-06-06 1998-05-12 Human Genome Sciences, Inc. Nucleic acid encoding human endothlein-bombesin receptor and method of producing the receptor
US5789199A (en) 1994-11-03 1998-08-04 Genentech, Inc. Process for bacterial production of polypeptides
US5840523A (en) 1995-03-01 1998-11-24 Genetech, Inc. Methods and compositions for secretion of heterologous polypeptides
US5731168A (en) 1995-03-01 1998-03-24 Genentech, Inc. Method for making heteromultimeric polypeptides
JPH08336393A (ja) 1995-04-13 1996-12-24 Mitsubishi Chem Corp 光学活性なγ−置換−β−ヒドロキシ酪酸エステルの製造法
US5869046A (en) 1995-04-14 1999-02-09 Genentech, Inc. Altered polypeptides with increased half-life
US5707829A (en) 1995-08-11 1998-01-13 Genetics Institute, Inc. DNA sequences and secreted proteins encoded thereby
US20020193567A1 (en) 1995-08-11 2002-12-19 Genetics Institute, Inc. Secreted proteins and polynucleotides encoding them
GB9603256D0 (en) 1996-02-16 1996-04-17 Wellcome Found Antibodies
JP3646191B2 (ja) 1996-03-19 2005-05-11 大塚製薬株式会社 ヒト遺伝子
AU722499B2 (en) 1996-05-17 2000-08-03 Schering Corporation Human B-cell antigens, related reagents
US7371376B1 (en) 1996-10-18 2008-05-13 Genentech, Inc. Anti-ErbB2 antibodies
JP2001504326A (ja) * 1996-10-18 2001-04-03 ジェネンテック インコーポレーテッド 抗ＥｒｂＢ２抗体
US5945511A (en) 1997-02-20 1999-08-31 Zymogenetics, Inc. Class II cytokine receptor
US20030185830A1 (en) 1997-02-25 2003-10-02 Corixa Corporation Compositions and methods for the therapy and diagnosis of prostate cancer
US7033827B2 (en) 1997-02-25 2006-04-25 Corixa Corporation Prostate-specific polynucleotide compositions
US6261791B1 (en) 1997-03-10 2001-07-17 The Regents Of The University Of California Method for diagnosing cancer using specific PSCA antibodies
US6541212B2 (en) 1997-03-10 2003-04-01 The Regents Of The University Of California Methods for detecting prostate stem cell antigen protein
DE69824287T2 (de) 1997-03-10 2005-06-16 The Regents Of The University Of California, Oakland Prostata stammzell-antigen (psca)
US6555339B1 (en) 1997-04-14 2003-04-29 Arena Pharmaceuticals, Inc. Non-endogenous, constitutively activated human protein-coupled receptors
US6319688B1 (en) 1997-04-28 2001-11-20 Smithkline Beecham Corporation Polynucleotide encoding human sodium dependent phosphate transporter (IPT-1)
CA2288600C (en) 1997-05-02 2010-06-01 Genentech, Inc. A method for making multispecific antibodies having heteromultimeric and common components
WO1998051805A1 (en) 1997-05-15 1998-11-19 Abbott Laboratories Reagents and methods useful for detecting diseases of the prostate
WO1998051824A1 (en) 1997-05-15 1998-11-19 Abbott Laboratories Reagents and methods useful for detecting disease of the urinary tract
ES2244066T3 (es) 1997-06-24 2005-12-01 Genentech, Inc. Procedimiento y composiciones de glicoproteinas galactosiladas.
US6040498A (en) 1998-08-11 2000-03-21 North Caroline State University Genetically engineered duckweed
US6602677B1 (en) 1997-09-19 2003-08-05 Promega Corporation Thermostable luciferases and methods of production
US20030060612A1 (en) 1997-10-28 2003-03-27 Genentech, Inc. Compositions and methods for the diagnosis and treatment of tumor
AU759779B2 (en) 1997-10-31 2003-05-01 Genentech Inc. Methods and compositions comprising glycoprotein glycoforms
US20020034749A1 (en) 1997-11-18 2002-03-21 Billing-Medel Patricia A. Reagents and methods useful for detecting diseases of the breast
US6610833B1 (en) 1997-11-24 2003-08-26 The Institute For Human Genetics And Biochemistry Monoclonal human natural antibodies
US6110695A (en) 1997-12-02 2000-08-29 The Regents Of The University Of California Modulating the interaction of the chemokine, B Lymphocyte Hemoattractant, and its Receptor, BLR1
WO1999029888A1 (en) 1997-12-05 1999-06-17 The Scripps Research Institute Humanization of murine antibody
WO2004031238A2 (en) 2002-10-03 2004-04-15 Mcgill Univeristy Antibodies and cyclic peptides which bind cea (carcinoembryonic antigen) and their use as cancer therapeutics
CA2323071C (en) 1998-03-13 2011-06-21 The Burnham Institute Molecules that home to various selected organs or tissues
WO1999048527A1 (en) 1998-03-27 1999-09-30 Genentech, Inc. Apo-2 ligand-anti-her-2 antibody synergism
US6194551B1 (en) 1998-04-02 2001-02-27 Genentech, Inc. Polypeptide variants
ATE375365T1 (de) 1998-04-02 2007-10-15 Genentech Inc Antikörper varianten und fragmente davon
WO1999054342A1 (en) 1998-04-20 1999-10-28 Pablo Umana Glycosylation engineering of antibodies for improving antibody-dependent cellular cytotoxicity
US6534482B1 (en) 1998-05-13 2003-03-18 Epimmune, Inc. Expression vectors for stimulating an immune response and methods of using the same
US20020187472A1 (en) 2001-03-09 2002-12-12 Preeti Lal Steap-related protein
US20030064397A1 (en) 1998-05-22 2003-04-03 Incyte Genomics, Inc. Transmembrane protein differentially expressed in prostate and lung tumors
GB9818731D0 (en) 1998-08-27 1998-10-21 Univ Portsmouth Compounds
WO2000012130A1 (en) 1998-08-27 2000-03-09 Smithkline Beecham Corporation Rp105 agonists and antagonists
ES2199200T3 (es) 1998-08-27 2004-02-16 Spirogen Limited Pirrolobenzodiacepinas.
JP4689781B2 (ja) 1998-09-03 2011-05-25 独立行政法人科学技術振興機構 アミノ酸輸送蛋白及びその遺伝子
WO2000020579A1 (en) 1998-10-02 2000-04-13 Mcmaster University Spliced form of erbb-2/neu oncogene
WO2001057188A2 (en) 2000-02-03 2001-08-09 Hyseq, Inc. Novel nucleic acids and polypeptides
US20020119158A1 (en) 1998-12-17 2002-08-29 Corixa Corporation Compositions and methods for the therapy and diagnosis of ovarian cancer
US6962980B2 (en) 1999-09-24 2005-11-08 Corixa Corporation Compositions and methods for the therapy and diagnosis of ovarian cancer
US6468546B1 (en) 1998-12-17 2002-10-22 Corixa Corporation Compositions and methods for therapy and diagnosis of ovarian cancer
US20030091580A1 (en) 2001-06-18 2003-05-15 Mitcham Jennifer L. Compositions and methods for the therapy and diagnosis of ovarian cancer
US6858710B2 (en) 1998-12-17 2005-02-22 Corixa Corporation Compositions and methods for the therapy and diagnosis of ovarian cancer
ATE407949T1 (de) 1998-12-30 2008-09-15 Beth Israel Hospital Charakterisierung der proteinfamilie von soc/crac kalziumkanälen
US20030009013A1 (en) 1998-12-30 2003-01-09 Genentech, Inc. Secreted and transmembrane polypeptides and nucleic acids encoding the same
HUP0104865A3 (en) 1999-01-15 2004-07-28 Genentech Inc Polypeptide variants with altered effector function
US6737056B1 (en) 1999-01-15 2004-05-18 Genentech, Inc. Polypeptide variants with altered effector function
WO2000044899A1 (en) 1999-01-29 2000-08-03 Corixa Corporation Her-2/neu fusion proteins
GB9905124D0 (en) 1999-03-05 1999-04-28 Smithkline Beecham Biolog Novel compounds
AU3395900A (en) 1999-03-12 2000-10-04 Human Genome Sciences, Inc. Human lung cancer associated gene sequences and polypeptides
JP4368530B2 (ja) 1999-04-09 2009-11-18 協和発酵キリン株式会社 免疫機能分子の活性を調節する方法
US7312303B2 (en) 1999-05-11 2007-12-25 Genentech, Inc. Anti-PRO4980 antibodies
CA2370466C (en) 1999-06-25 2011-02-08 Sharon Erickson Methods of treatment using anti-erbb antibody-maytansinoid conjugates
AU4952600A (en) 1999-06-03 2000-12-28 Takeda Chemical Industries Ltd. Screening method with the use of cd100
US7041292B1 (en) 1999-06-25 2006-05-09 Genentech, Inc. Treating prostate cancer with anti-ErbB2 antibodies
US6949245B1 (en) 1999-06-25 2005-09-27 Genentech, Inc. Humanized anti-ErbB2 antibodies and treatment with anti-ErbB2 antibodies
US7589172B2 (en) 1999-07-20 2009-09-15 Genentech, Inc. PRO256 polypeptides
US7297770B2 (en) 1999-08-10 2007-11-20 Genentech, Inc. PRO6496 polypeptides
US7294696B2 (en) 1999-08-17 2007-11-13 Genentech Inc. PRO7168 polypeptides
CA2380355A1 (en) 1999-09-01 2001-03-08 Genentech, Inc. Secreted and transmembrane polypeptides and nucleic acids encoding the same
US20030129192A1 (en) 1999-09-10 2003-07-10 Corixa Corporation Compositions and methods for the therapy and diagnosis of ovarian cancer
US20030232056A1 (en) 1999-09-10 2003-12-18 Corixa Corporation Compositions and methods for the therapy and diagnosis of ovarian cancer
US20030206918A1 (en) 1999-09-10 2003-11-06 Corixa Corporation Compositions and methods for the therapy and diagnosis of ovarian cancer
WO2001025454A2 (en) 1999-10-04 2001-04-12 Medicago Inc. Method for regulating transcription of foreign genes in the presence of nitrogen
US7125978B1 (en) 1999-10-04 2006-10-24 Medicago Inc. Promoter for regulating expression of foreign genes
CA2388245C (en) 1999-10-19 2012-01-10 Tatsuya Ogawa The use of serum-free adapted rat cells for producing heterologous polypeptides
IL149116A0 (en) 1999-10-29 2002-11-10 Genentech Inc Anti-prostate stem cell antigen (psca) antibody compositions and methods of use
EP2316843B1 (en) 1999-11-29 2015-10-14 The Trustees of Columbia University in the City of New York Isolation of five novel genes coding for new Fc receptors-type melanoma involved in the pathogenesis of lymphoma/melanoma
EP1248800A2 (en) 1999-11-30 2002-10-16 Corixa Corporation Compositions and methods for therapy and diagnosis of breast cancer
AU2087401A (en) 1999-12-10 2001-06-18 Epimmune, Inc. Inducing cellular immune responses to her2/neu using peptide and nucleic acid compositions
EP1240319A1 (en) 1999-12-15 2002-09-18 Genentech, Inc. Shotgun scanning, a combinatorial method for mapping functional protein epitopes
NZ502058A (en) 1999-12-23 2003-11-28 Ovita Ltd Isolated mutated nucleic acid molecule for regulation of ovulation rate
US6610286B2 (en) 1999-12-23 2003-08-26 Zymogenetics, Inc. Method for treating inflammation using soluble receptors to interleukin-20
EP1244708B8 (en) 1999-12-23 2007-03-07 ZymoGenetics, Inc. Method for treating inflammation
AU783473B2 (en) 1999-12-23 2005-10-27 Zymogenetics Inc. Soluble interleukin-20 receptor
US7297333B2 (en) 2000-01-20 2007-11-20 Genentech, Inc. Anti-PRO10268 antibodies
US20030224379A1 (en) 2000-01-21 2003-12-04 Tang Y. Tom Novel nucleic acids and polypeptides
CA2398102A1 (en) 2000-01-21 2001-07-26 Corixa Corporation Compounds and methods for prevention and treatment of her-2/neu associated malignancies
AU2001238596A1 (en) 2000-02-22 2001-09-03 Millennium Pharmaceuticals, Inc. 18607, a novel human calcium channel
US20030219806A1 (en) 2000-02-22 2003-11-27 Millennium Pharmaceuticals, Inc. Novel 18607, 15603, 69318, 12303, 48000, 52920, 5433, 38554, 57301, 58324, 55063, 52991, 59914, 59921 and 33751 molecules and uses therefor
US20040002068A1 (en) 2000-03-01 2004-01-01 Corixa Corporation Compositions and methods for the detection, diagnosis and therapy of hematological malignancies
US20040005561A1 (en) 2000-03-01 2004-01-08 Corixa Corporation Compositions and methods for the detection, diagnosis and therapy of hematological malignancies
WO2001066689A2 (en) 2000-03-07 2001-09-13 Hyseq, Inc. Novel nucleic acids and polypeptides
AU4941101A (en) 2000-03-24 2001-10-08 Fahri Saatcioglu Novel prostate-specific or testis-specific nucleic acid molecules, polypeptides,and diagnostic and therapeutic methods
WO2001072830A2 (de) 2000-03-31 2001-10-04 Ipf Pharmaceuticals Gmbh Diagnostik- und arzneimittel zur untersuchung des zelloberflächenproteoms von tumor- und entzündungszellen sowie zur behandlung von tumorerkrankungen und entzündlichen erkrankungen vorzugsweise mit hilfe einer spezifischen chemokinrezeptor-analyse und der chemokinrezeptor-ligand-interaktion
US7279294B2 (en) 2000-04-03 2007-10-09 The United States Of America As Represented By The Secretary, Dept. Of Health And Human Services, Nih Tumor markers in ovarian cancer
AU2001249885A1 (en) 2000-04-07 2001-10-23 Arena Pharmaceuticals, Inc. Non-endogenous, constitutively activated known g protein-coupled receptors
HUP0300369A2 (hu) 2000-04-11 2003-06-28 Genentech, Inc. Többértékű antitestek és alkalmazásuk
US20030119115A1 (en) 2000-05-17 2003-06-26 Genentech, Inc. Secreted and transmembrane polypeptides and nucleic acids encoding the same
WO2001088133A2 (en) 2000-05-18 2001-11-22 Lexicon Genetics Incorporated Human semaphorin homologs and polynucleotides encoding the same
AU2001274888A1 (en) 2000-05-19 2001-12-03 Human Genome Sciences, Inc. Nucleic acids, proteins, and antibodies
PL217410B1 (pl) 2000-05-19 2014-07-31 Genentech Inc Zastosowanie antagonisty ErbB, antagonista ErbB do zastosowania w metodzie leczenia raka i sposób identyfikacji pacjenta skłonnego do korzystnej odpowiedzi na antagonistę ErbB przy leczeniu raka
US20020051990A1 (en) 2000-06-09 2002-05-02 Eric Ople Novel gene targets and ligands that bind thereto for treatment and diagnosis of ovarian carcinomas
JP2004523203A (ja) 2000-06-16 2004-08-05 インサイト・ゲノミックス・インコーポレイテッド Ｇタンパク質結合受容体
JP2004502414A (ja) 2000-06-30 2004-01-29 ヒューマン　ジノーム　サイエンシーズ，　インコーポレイテッド Ｂ７様ポリヌクレオチド、ポリペプチドおよび抗体
CA2413262A1 (en) 2000-06-30 2002-01-10 Amgen, Inc. B7-like molecules and uses thereof
AU2001273151A1 (en) 2000-06-30 2002-01-14 Incyte Genomics, Inc. Human extracellular matrix and cell adhesion polypeptides
WO2002006339A2 (en) 2000-07-03 2002-01-24 Curagen Corporation Proteins and nucleic acids encoding same
US20040044179A1 (en) 2000-07-25 2004-03-04 Genentech, Inc. Secreted and transmembrane polypeptides and nucleic acids encoding the same
US6891030B2 (en) 2000-07-27 2005-05-10 Mayo Foundation For Medical Education And Research T-cell immunoregulatory molecule
AU2001287639A1 (en) 2000-07-28 2002-02-13 Ulrich Wissenbach Trp8, trp9 and trp10, markers for cancer
US7229623B1 (en) 2000-08-03 2007-06-12 Corixa Corporation Her-2/neu fusion proteins
WO2002013847A2 (en) 2000-08-14 2002-02-21 Corixa Corporation Methods for diagnosis and therapy of hematological and virus-associated malignancies
AU2001295008A1 (en) 2000-08-14 2002-02-25 Corixa Corporation Compositions and methods for the therapy and diagnosis of Her-2/neu-associated malignancies
US6984494B2 (en) 2000-08-15 2006-01-10 Genentech, Inc. Analytical method
GB0020953D0 (en) 2000-08-24 2000-10-11 Smithkline Beecham Biolog Vaccine
MXPA03001645A (es) 2000-08-24 2004-05-14 Genentech Inc Composiciones y metodos para el diagnostico y tratamiento de tumores.
WO2002022660A2 (en) 2000-09-11 2002-03-21 Hyseq, Inc. Novel nucleic acids and polypeptides
US6613567B1 (en) 2000-09-15 2003-09-02 Isis Pharmaceuticals, Inc. Antisense inhibition of Her-2 expression
EP1351703B1 (en) 2000-09-15 2006-07-26 ZymoGenetics, Inc. Use of a polypeptide comprising the extracellular domains of il-20ra and il-20rb for the treatment of inflammation
US7491797B2 (en) 2000-09-15 2009-02-17 Genentech, Inc. PRO6308 polypeptide
CA2422814A1 (en) 2000-09-18 2002-03-21 Biogen, Inc. Cripto mutant and uses thereof
UA83458C2 (uk) 2000-09-18 2008-07-25 Байоджен Айдек Ма Інк. Виділений поліпептид baff-r (рецептор фактора активації в-клітин сімейства tnf)
US7064191B2 (en) 2000-10-06 2006-06-20 Kyowa Hakko Kogyo Co., Ltd. Process for purifying antibody
US6946292B2 (en) 2000-10-06 2005-09-20 Kyowa Hakko Kogyo Co., Ltd. Cells producing antibody compositions with increased antibody dependent cytotoxic activity
WO2002031140A1 (fr) 2000-10-06 2002-04-18 Kyowa Hakko Kogyo Co., Ltd. Cellules produisant des compositions d'anticorps
EP1474528A4 (en) 2000-10-13 2006-06-14 Protein Design Labs Inc METHODS FOR DIAGNOSING PROSTATE CANCER, COMPOSITIONS AND METHODS FOR SCREENING PROSTATE CANCER MODULATORS
US6596541B2 (en) 2000-10-31 2003-07-22 Regeneron Pharmaceuticals, Inc. Methods of modifying eukaryotic cells
CA2428242A1 (en) 2000-11-07 2002-05-16 Zymogenetics, Inc. Human tumor necrosis factor receptor
US20020150573A1 (en) 2000-11-10 2002-10-17 The Rockefeller University Anti-Igalpha-Igbeta antibody for lymphoma therapy
AU2002239422B2 (en) 2000-11-30 2006-12-07 E. R. Squibb & Sons, L.L.C. Transgenic transchromosomal rodents for making human antibodies
WO2002061087A2 (en) 2000-12-19 2002-08-08 Lifespan Biosciences, Inc. Antigenic peptides, such as for g protein-coupled receptors (gpcrs), antibodies thereto, and systems for identifying such antigenic peptides
AU2002243495A1 (en) 2001-01-12 2002-07-24 University Of Medicine And Dentistry Of New Jersey Bone morphogenetic protein-2 in the treatment and diagnosis of cancer
US20030119119A1 (en) 2001-01-16 2003-06-26 Genentech, Inc. Secreted and transmembrane polypeptides and nucleic acids encoding the same
US20030119133A1 (en) 2001-01-16 2003-06-26 Genentech, Inc. Secreted and transmembrane polypeptides and nucleic acids encoding the same
US7754208B2 (en) 2001-01-17 2010-07-13 Trubion Pharmaceuticals, Inc. Binding domain-immunoglobulin fusion proteins
MXPA03006617A (es) 2001-01-24 2004-12-02 Protein Design Labs Inc Metodos de diagnostico de cancer de pecho, composiciones y metodos de rastreo de moduladores de cancer de pecho.
WO2002060317A2 (en) 2001-01-30 2002-08-08 Corixa Corporation Compositions and methods for the therapy and diagnosis of pancreatic cancer
US20040170994A1 (en) 2001-02-12 2004-09-02 Callen David Frederick DNA sequences for human tumour suppressor genes
US20030087250A1 (en) 2001-03-14 2003-05-08 Millennium Pharmaceuticals, Inc. Nucleic acid molecules and proteins for the identification, assessment, prevention, and therapy of ovarian cancer
US20040236091A1 (en) 2001-03-28 2004-11-25 Chicz Roman M. Translational profiling
WO2003008537A2 (en) 2001-04-06 2003-01-30 Mannkind Corporation Epitope sequences
US6820011B2 (en) 2001-04-11 2004-11-16 The Regents Of The University Of Colorado Three-dimensional structure of complement receptor type 2 and uses thereof
MXPA03009510A (es) 2001-04-17 2005-04-29 Univ Arkansas Secuencias de repeticion del gen ca125 y su uso para intervenciones de diagnosticos y terapeuticas.
AU2002309583A1 (en) 2001-04-18 2002-11-05 Protein Desing Labs, Inc. Methods of diagnosis of lung cancer, compositions and methods of screening for modulators of lung cancer
SI1390389T1 (sl) 2001-04-26 2009-06-30 Biogen Idec Inc Protitelesa, ki blokirajo cripto in uporabe le-teh
EP1515982A4 (en) 2001-05-09 2005-10-26 Corixa Corp METHODS AND COMPOSITIONS FOR THE THERAPY AND DIAGNOSIS OF PROSTATE CANCER
WO2002092836A2 (en) 2001-05-11 2002-11-21 Sloan-Kettering Institute For Cancer Research Nucleic acid sequence encoding ovarian antigen, ca125, and uses thereof
IL158920A0 (en) 2001-05-24 2004-05-12 Zymogenetics Inc Taci-immunoglobulin fusion proteins
WO2003000842A2 (en) 2001-06-04 2003-01-03 Curagen Corporation Novel proteins and nucleic acids encoding same
AU2002314901A1 (en) 2001-06-04 2002-12-16 Eos Biotechnology, Inc. Methods of diagnosis and treatment of androgen-dependent prostate cancer, prostate cancer undergoing androgen-withdrawal, and androgen-independent prostate cancer
WO2002099040A2 (en) 2001-06-05 2002-12-12 Exelixis, Inc. Igs as modifiers of the p53 pathway and methods of use
JP2005501528A (ja) 2001-06-05 2005-01-20 エクセリクシス・インコーポレイテッド ｐ５３経路のモディファイヤーとしてのＧＦＡＴｓおよび使用方法
US7235358B2 (en) 2001-06-08 2007-06-26 Expression Diagnostics, Inc. Methods and compositions for diagnosing and monitoring transplant rejection
WO2002101075A2 (en) 2001-06-13 2002-12-19 Millennium Pharmaceuticals, Inc. Novel genes, compositions, kits, and methods for identification, assessment, prevention, and therapy of cervical cancer
US7189507B2 (en) 2001-06-18 2007-03-13 Pdl Biopharma, Inc. Methods of diagnosis of ovarian cancer, compositions and methods of screening for modulators of ovarian cancer
WO2002102235A2 (en) 2001-06-18 2002-12-27 Eos Biotechnology Inc. Methods of diagnosis of ovarian cancer, compositions and methods of screening for modulators of ovarian cancer
WO2003004989A2 (en) 2001-06-21 2003-01-16 Millennium Pharmaceuticals, Inc. Compositions, kits, and methods for identification, assessment, prevention, and therapy of breast cancer
WO2003002717A2 (en) 2001-06-28 2003-01-09 Schering Corporation Biological activity of ak155
US20030120040A1 (en) 2001-06-29 2003-06-26 Genentech, Inc. Secreted and Transmembrane polypeptides and nucleic acids encoding the same
WO2003004529A2 (en) 2001-07-02 2003-01-16 Licentia Ltd. Ephrin-tie receptor materials and methods
US20040076955A1 (en) 2001-07-03 2004-04-22 Eos Biotechnology, Inc. Methods of diagnosis of bladder cancer, compositions and methods of screening for modulators of bladder cancer
WO2003003984A2 (en) 2001-07-05 2003-01-16 Curagen Corporation Novel proteins and nucleic acids encoding same
WO2003055439A2 (en) 2001-07-18 2003-07-10 The Regents Of The University Of California Her2/neu target antigen and use of same to stimulate an immune response
US20030108963A1 (en) 2001-07-25 2003-06-12 Millennium Pharmaceuticals, Inc. Novel genes, compositions, kit, and methods for identification, assessment, prevention and therapy of prostate cancer
EA007984B1 (ru) 2001-08-03 2007-02-27 Дженентек, Инк. ПОЛИПЕПТИДЫ TACIs И BR3 И ИХ ПРИМЕНЕНИЕ
CN1555411A (zh) 2001-08-03 2004-12-15 ���迨�����＼���ɷݹ�˾ 抗体-依赖性细胞毒性增大的抗体糖基化变体
EP1478772A2 (en) 2001-08-14 2004-11-24 The General Hospital Corporation Nucleic acid and amino acid sequences involved in pain
US20030092013A1 (en) 2001-08-16 2003-05-15 Vitivity, Inc. Diagnosis and treatment of vascular disease
WO2003018621A2 (en) 2001-08-23 2003-03-06 Oxford Biomedica (Uk) Limited Genes
AU2002357643A1 (en) 2001-08-29 2003-04-14 Vanderbilt University The human mob-5 (il-24) receptors and uses thereof
US20030124579A1 (en) 2001-09-05 2003-07-03 Eos Biotechnology, Inc. Methods of diagnosis of ovarian cancer, compositions and methods of screening for modulators of ovarian cancer
ES2537074T3 (es) 2001-09-06 2015-06-02 Agensys, Inc. Ácido nucleico y proteína correspondiente denominados STEAP-1 útiles en el tratamiento y la detección de cáncer
EP1434881A4 (en) 2001-09-17 2005-10-26 Protein Design Labs Inc METHOD FOR DIAGNOSIS OF CANCER COMPOSITIONS AND METHOD FOR SCREENING ON CANCER MODULATORS
JP2005536439A (ja) 2001-09-18 2005-12-02 ジェネンテック・インコーポレーテッド 腫瘍の診断及び治療のための組成物と方法
US20050004017A1 (en) 2001-09-18 2005-01-06 Yuval Reiss Methods and compositions for treating hcap associated diseases
WO2003025148A2 (en) 2001-09-19 2003-03-27 Nuvelo, Inc. Novel nucleic acids and polypeptides
US20030077644A1 (en) 2001-09-28 2003-04-24 Bing Yang Diagnosis and treatment of diseases caused by mutations in CD72
AU2002362436A1 (en) 2001-10-03 2003-04-14 Rigel Pharmaceuticals, Inc. Modulators of lymphocyte activation and migration
WO2003029421A2 (en) 2001-10-03 2003-04-10 Origene Technologies, Inc. Regulated breast cancer genes
US20030228319A1 (en) 2002-04-16 2003-12-11 Genentech, Inc. Compositions and methods for the diagnosis and treatment of tumor
US20050123925A1 (en) 2002-11-15 2005-06-09 Genentech, Inc. Compositions and methods for the diagnosis and treatment of tumor
CA2461665A1 (en) 2001-10-19 2003-05-01 Genentech, Inc. Compositions and methods for the diagnosis and treatment of inflammatory bowel disorders
CA2465268A1 (en) 2001-10-24 2003-05-01 National Jewish Medical And Research Center Three-dimensional structures of tall-1 and its cognate receptors and modified proteins and methods related thereto
US20030157108A1 (en) 2001-10-25 2003-08-21 Genentech, Inc. Glycoprotein compositions
CN1966725A (zh) 2001-10-31 2007-05-23 爱尔康公司 骨形态生发蛋白(bmp)、bmp受体和bmp结合蛋白及它们在诊断和治疗青光眼中的用途
US20030232350A1 (en) 2001-11-13 2003-12-18 Eos Biotechnology, Inc. Methods of diagnosis of cancer, compositions and methods of screening for modulators of cancer
WO2003042661A2 (en) 2001-11-13 2003-05-22 Protein Design Labs, Inc. Methods of diagnosis of cancer, compositions and methods of screening for modulators of cancer
US7344843B2 (en) 2001-11-29 2008-03-18 Serono Genetics Institute S.A. Agonists and antagonists of prolixin for the treatment of metabolic disorders
WO2003048202A2 (en) 2001-12-03 2003-06-12 Asahi Kasei Pharma Corporation Nf-kappab activating genes
CA2469941A1 (en) 2001-12-10 2003-07-03 Nuvelo, Inc. Novel nucleic acids and polypeptides
US20040093621A1 (en) 2001-12-25 2004-05-13 Kyowa Hakko Kogyo Co., Ltd Antibody composition which specifically binds to CD20
US20030134790A1 (en) 2002-01-11 2003-07-17 University Of Medicine And Dentistry Of New Jersey Bone Morphogenetic Protein-2 And Bone Morphogenetic Protein-4 In The Treatment And Diagnosis Of Cancer
US7452675B2 (en) 2002-01-25 2008-11-18 The Queen's Medical Center Methods of screening for TRPM4b modulators
ATE482719T1 (de) 2002-02-21 2010-10-15 Univ Duke Behandlungsverfahren unter verwendung von anti- cd22-antikörpern
EP2388265A1 (en) 2002-02-22 2011-11-23 Genentech, Inc. Compositions and methods for the treatment of immune related diseases
US20030219795A1 (en) 2002-03-01 2003-11-27 Marcia Belvin SCDs as modifiers of the p53 pathway and methods of use
WO2003097803A2 (en) 2002-05-15 2003-11-27 Avalon Pharmaceuticals Cancer-linked gene as target for chemotherapy
WO2003104399A2 (en) 2002-06-07 2003-12-18 Avalon Pharmaceuticals, Inc Cancer-linked gene as target for chemotherapy
US6660856B2 (en) 2002-03-08 2003-12-09 Kaohsiung Medical University Synthesis of pyrrolo[2,1-c][1,4]benzodiazepine analogues
EP2258712A3 (en) 2002-03-15 2011-05-04 Multicell Immunotherapeutics, Inc. Compositions and Methods to Initiate or Enhance Antibody and Major-histocompatibility Class I or Class II-restricted T Cell Responses by Using Immunomodulatory, Non-coding RNA Motifs
WO2004000997A2 (en) 2002-03-19 2003-12-31 Curagen Corporation Therapeutic polypeptides, nucleic acids encoding same, and methods of use
JP2005534286A (ja) 2002-03-21 2005-11-17 サネシス ファーマシューティカルズ， インコーポレイテッド キナーゼインヒビターの同定
US7193069B2 (en) 2002-03-22 2007-03-20 Research Association For Biotechnology Full-length cDNA
EP1494693B1 (en) 2002-03-22 2010-12-08 Biogen Idec MA Inc. Cripto-specific antibodies
US7317087B2 (en) 2002-03-25 2008-01-08 The Uab Research Foundation Members of the FC receptor homolog gene family (FCRH1-3, 6), related reagents, and uses thereof
WO2003083074A2 (en) 2002-03-28 2003-10-09 Idec Pharmaceuticals Corporation Novel gene targets and ligands that bind thereto for treatment and diagnosis of colon carcinomas
US20030194704A1 (en) 2002-04-03 2003-10-16 Penn Sharron Gaynor Human genome-derived single exon nucleic acid probes useful for gene expression analysis two
AU2003223469A1 (en) 2002-04-05 2003-10-27 Agensys, Inc. Nucleic acid and corresponding protein entitled 98p4b6 useful in treatment and detection of cancer
AU2003236019A1 (en) 2002-04-09 2003-10-20 Kyowa Hakko Kirin Co., Ltd. Drug containing antibody composition appropriate for patient suffering from Fc Gamma RIIIa polymorphism
CA2481920A1 (en) 2002-04-09 2003-10-16 Kyowa Hakko Kogyo Co., Ltd. Antibody composition-containing medicament
DE60336548D1 (de) 2002-04-09 2011-05-12 Kyowa Hakko Kirin Co Ltd Zelle mit erniedrigter oder deletierter aktivität eines am gdp-fucosetransport beteiligten proteins
US20040110704A1 (en) 2002-04-09 2004-06-10 Kyowa Hakko Kogyo Co., Ltd. Cells of which genome is modified
WO2003085119A1 (fr) 2002-04-09 2003-10-16 Kyowa Hakko Kogyo Co., Ltd. Procede d'amelioration de l'activite d'une composition d'anticorps de liaison avec le recepteur fc$g(g) iiia
AU2003236015A1 (en) 2002-04-09 2003-10-20 Kyowa Hakko Kirin Co., Ltd. Process for producing antibody composition
AU2003223520A1 (en) 2002-04-12 2003-10-27 Mitokor Targets for therapeutic intervention identified in the mitochondrial proteome
AU2003239158A1 (en) 2002-04-17 2003-11-03 Baylor College Of Medicine Aib1 as a prognostic marker and predictor of resistance to encocrine therapy
WO2003093444A2 (en) 2002-05-03 2003-11-13 Incyte Corporation Transporters and ion channels
WO2003101388A2 (en) 2002-05-30 2003-12-11 Bristol-Myers Squibb Company Human solute carrier family 7 member 11 (hslc7a11)
WO2003102157A2 (en) 2002-06-03 2003-12-11 Genentech, Inc. Synthetic antibody phage libraries
EP1575492A4 (en) 2002-06-04 2007-05-09 Avalon Pharmaceuticals GENERAL ASSOCIATED WITH CANCER AS TARGET FOR CHEMOTHERAPY
WO2003101283A2 (en) 2002-06-04 2003-12-11 Incyte Corporation Diagnostics markers for lung cancer
DK1513934T3 (da) 2002-06-06 2011-05-02 Oncotherapy Science Inc Gener og polypeptider relateret til humane coloncancersygdomme
WO2003104270A2 (en) 2002-06-06 2003-12-18 Ingenium Pharmaceuticals Ag Dudulin 2 genes, expression products, non-human animal model: uses in human hematological disease
WO2003105758A2 (en) 2002-06-12 2003-12-24 Avalon Pharmaceuticals, Inc. Cancer-linked gene as target for chemotherapy
US20040249130A1 (en) 2002-06-18 2004-12-09 Martin Stanton Aptamer-toxin molecules and methods for using same
AU2003247576A1 (en) 2002-06-18 2003-12-31 Archemix Corp. Aptamer-toxin molecules and methods for using same
US7304149B2 (en) 2002-06-20 2007-12-04 Washington University In St. Louis BTLA nucleic acids
EP2365004B1 (en) 2002-06-21 2016-01-06 Johns Hopkins University School of Medicine Membrane associated tumor endothelium markers
WO2004009622A2 (en) 2002-07-19 2004-01-29 Cellzome Ag Protein complexes of cellular networks underlying the development of cancer and other diseases
AU2003256836A1 (en) 2002-07-25 2004-02-16 Genentech, Inc. Taci antibodies and uses thereof
AR040956A1 (es) 2002-07-31 2005-04-27 Schering Ag Nuevos conjugados de efectores, procedimientos para su preparacion y su uso farmaceutico
AU2003251471A1 (en) 2002-08-06 2004-02-25 Bayer Healthcare Ag Diagnostics and therapeutics for diseases associated with human cxc chemokine receptor 5(cxcr5)
JP2004121218A (ja) 2002-08-06 2004-04-22 Jenokkusu Soyaku Kenkyusho:Kk 気管支喘息または慢性閉塞性肺疾患の検査方法
AU2003259163B2 (en) 2002-08-16 2008-07-03 Immunogen, Inc. Cross-linkers with high reactivity and solubility and their use in the preparation of conjugates for targeted delivery of small molecule drugs
KR20050048615A (ko) 2002-08-19 2005-05-24 제넨테크, 인크. 종양의 진단 및 치료를 위한 조성물 및 방법
EP1572957A4 (en) 2002-08-27 2007-10-10 Bristol Myers Squibb Pharma Co IDENTIFICATION OF POLYNUCLEOTIDES FOR PREDICTING THE ACTIVITY OF COMPOUNDS INTERACTING WITH AND / OR MODULATING TYROSINE KINASE PROTEINS AND / OR TYROSINE KINASE PROTEIN PATHWAYS IN MAMMARY CELLS
WO2004020595A2 (en) 2002-08-29 2004-03-11 Five Prime Therapeutics, Inc. Novel human polypeptides encoded by polynucleotides
AU2002951346A0 (en) 2002-09-05 2002-09-26 Garvan Institute Of Medical Research Diagnosis of ovarian cancer
AU2003270311A1 (en) 2002-09-06 2004-03-29 Mannkind Corporation Epitope sequences
AU2003300776A1 (en) 2002-09-09 2004-05-25 Omeros Corporation G protein coupled receptors and uses thereof
JP2004113151A (ja) 2002-09-27 2004-04-15 Sankyo Co Ltd 癌遺伝子及びその用途
AU2003288918A1 (en) 2002-10-04 2004-05-04 Van Andel Research Institute Molecular sub-classification of kidney tumors and the discovery of new diagnostic markers
US7361740B2 (en) 2002-10-15 2008-04-22 Pdl Biopharma, Inc. Alteration of FcRn binding affinities or serum half-lives of antibodies by mutagenesis
JP2006516094A (ja) 2002-11-08 2006-06-22 ジェネンテック・インコーポレーテッド ナチュラルキラー細胞関連疾患の治療のための組成物と方法
CA2503621A1 (en) 2002-11-13 2004-05-27 Genentech, Inc. Methods and compositions for diagnosing dysplasia
CA2505919A1 (en) 2002-11-15 2004-06-03 The Board Of Trustees Of The University Of Arkansas Ca125 gene and its use for diagnostic and therapeutic interventions
CA2505601C (en) 2002-11-15 2014-10-28 Musc Foundation For Research Development Complement receptor 2 targeted complement modulators
AU2003297300A1 (en) 2002-11-20 2004-06-15 Biogen Idec Inc. Novel gene targets and ligands that bind thereto for treatment and diagnosis of carcinomas
EP1624753B1 (en) 2002-11-21 2012-01-25 The University of Utah Research Foundation Purinergic modulation of smell
US20040253606A1 (en) 2002-11-26 2004-12-16 Protein Design Labs, Inc. Methods of detecting soft tissue sarcoma, compositions and methods of screening for soft tissue sarcoma modulators
WO2004053079A2 (en) 2002-12-06 2004-06-24 Diadexus, Inc. Compositions, splice variants and methods relating to ovarian specific genes and proteins
US20040157278A1 (en) 2002-12-13 2004-08-12 Bayer Corporation Detection methods using TIMP 1
PT1572744E (pt) 2002-12-16 2010-09-07 Genentech Inc Variantes de imunoglobulina e utilizações destas
WO2004058171A2 (en) 2002-12-20 2004-07-15 Protein Design Labs, Inc. Antibodies against gpr64 and uses thereof
US20050249671A9 (en) 2002-12-23 2005-11-10 David Parmelee Neutrokine-alpha conjugate, neutrokine-alpha complex, and uses thereof
CA2512536A1 (en) 2003-01-08 2004-07-29 Bristol-Myers Squibb Company Biomarkers and methods for determining sensitivity to epidermal growth factor receptor modulators
US20050227301A1 (en) 2003-01-10 2005-10-13 Polgen Cell cycle progression proteins
US20050181375A1 (en) 2003-01-10 2005-08-18 Natasha Aziz Novel methods of diagnosis of metastatic cancer, compositions and methods of screening for modulators of metastatic cancer
EP1583820A4 (en) 2003-01-14 2007-07-18 Bristol Myers Squibb Co ASSOCIATED POLYNUCLEOTIDES AND POLYPEPTIDES ASSOCIATED WITH THE NF-KB WAY
WO2004065576A2 (en) 2003-01-15 2004-08-05 Millennium Pharmaceuticals, Inc. Methods and compositions for the treatment of urological disorder using differential expressed polypeptides
AU2004205631A1 (en) 2003-01-16 2004-08-05 Genentech, Inc. Synthetic antibody phage libraries
AU2004213432A1 (en) 2003-02-14 2004-09-02 Sagres Discovery, Inc. Novel therapeutic targets in cancer
US20030224411A1 (en) 2003-03-13 2003-12-04 Stanton Lawrence W. Genes that are up- or down-regulated during differentiation of human embryonic stem cells
WO2004087717A1 (en) 2003-03-31 2004-10-14 Council Of Scientific And Industrial Research Non-cross-linking pyrrolo[2,1-c][1,4]benzodiazepines as potential antitumour agents and process thereof
RU2314309C2 (ru) * 2003-03-31 2008-01-10 Каунсил Оф Сайентифик Энд Индастриал Рисерч Пирроло [2.1-c][1.4] бензодиазепины, способ их получения и фармацевтическая композиция на их основе
GB0321295D0 (en) 2003-09-11 2003-10-15 Spirogen Ltd Synthesis of protected pyrrolobenzodiazepines
AU2004279742A1 (en) 2003-10-08 2005-04-21 Kyowa Hakko Kirin Co., Ltd. Fused protein composition
US20070134759A1 (en) 2003-10-09 2007-06-14 Harue Nishiya Process for producing antibody composition by using rna inhibiting the function of alpha1,6-fucosyltransferase
KR101220691B1 (ko) 2003-11-05 2013-01-14 로슈 글리카트 아게 증가된 ｆｃ 수용체 결합 친화성 및 효과기 기능을 가진ｃｄ20 항체
ES2605443T3 (es) 2003-11-06 2017-03-14 Seattle Genetics, Inc. Conjugados de auristatina con anticuerpos anti-HER2 o anti-CD22 y su uso en terapia
WO2005053742A1 (ja) 2003-12-04 2005-06-16 Kyowa Hakko Kogyo Co., Ltd. 抗体組成物を含有する医薬
ES2398975T3 (es) 2004-03-01 2013-03-25 Spirogen Sàrl Derivados de 11-hidroxi-5H-pirrolo[2,1-c][1,4]benzodiazepin-5-ona como intermedios clave para la preparación de pirrolobenzodiazepinas sustituidas en C2
ZA200608130B (en) 2004-03-31 2008-12-31 Genentech Inc Humanized anti-TGF-beta antibodies
US7785903B2 (en) 2004-04-09 2010-08-31 Genentech, Inc. Variable domain library and uses
EP2357201B1 (en) 2004-04-13 2017-08-30 F. Hoffmann-La Roche AG Anti-P-selectin antibodies
FR2869231B1 (fr) 2004-04-27 2008-03-14 Sod Conseils Rech Applic Composition therapeutique contenant au moins un derive de la pyrrolobenzodiazepine et la fludarabine
CA2567520A1 (en) 2004-06-01 2005-12-15 Genentech, Inc. Maytansinoid-antibody conjugates
TWI309240B (en) 2004-09-17 2009-05-01 Hoffmann La Roche Anti-ox40l antibodies
US20100111856A1 (en) 2004-09-23 2010-05-06 Herman Gill Zirconium-radiolabeled, cysteine engineered antibody conjugates
EP3088004B1 (en) 2004-09-23 2018-03-28 Genentech, Inc. Cysteine engineered antibodies and conjugates
JO3000B1 (ar) 2004-10-20 2016-09-05 Genentech Inc مركبات أجسام مضادة .
WO2006078307A1 (en) 2005-01-21 2006-07-27 Genentech, Inc. Fixed dosing of her antibodies
BRPI0606542A8 (pt) 2005-02-23 2018-03-20 Genentech Inc métodos para aumentar o tempo de progressão de uma doença (ttp)
WO2007056441A2 (en) 2005-11-07 2007-05-18 Genentech, Inc. Binding polypeptides with diversified and consensus vh/vl hypervariable sequences
WO2007064919A2 (en) 2005-12-02 2007-06-07 Genentech, Inc. Binding polypeptides with restricted diversity sequences
PL1813614T3 (pl) 2006-01-25 2012-03-30 Sanofi Sa Środki cytotoksyczne zawierające nowe pochodne tomaymycyny
US20070292936A1 (en) 2006-05-09 2007-12-20 Genentech, Inc. Binding polypeptides with optimized scaffolds
PL2446904T3 (pl) 2006-05-30 2015-10-30 Genentech Inc Przeciwciała anty-CD22, ich immunokoniugaty oraz ich zastosowania
EP1864682A1 (en) * 2006-06-09 2007-12-12 Sanofi-Aventis Leptomycin derivatives
US10118970B2 (en) 2006-08-30 2018-11-06 Genentech, Inc. Multispecific antibodies
US20080226635A1 (en) 2006-12-22 2008-09-18 Hans Koll Antibodies against insulin-like growth factor I receptor and uses thereof
CN100592373C (zh) 2007-05-25 2010-02-24 群康科技(深圳)有限公司 液晶显示面板驱动装置及其驱动方法
MX350962B (es) 2008-01-07 2017-09-27 Amgen Inc Metodo para fabricar moleculas heterodimericas de fragmentos cristalizables de anticuerpo, utilizando efectos electrostaticos de direccion.
GB0819097D0 (en) 2008-10-17 2008-11-26 Spirogen Ltd Pyrrolobenzodiazepines
GB0819095D0 (en) 2008-10-17 2008-11-26 Spirogen Ltd Pyrrolobenzodiazepines
CA2750519C (en) * 2009-02-05 2018-09-25 Immunogen, Inc. Benzodiazepine derivatives
FR2949469A1 (fr) 2009-08-25 2011-03-04 Sanofi Aventis Derives anticancereux, leur preparation et leur application en therapeutique
CN104610454A (zh) 2010-02-16 2015-05-13 米迪缪尼有限公司 Hsa相关组合物及使用方法
CN102167742B (zh) 2010-02-25 2014-05-14 上海百迈博制药有限公司 一种全人源抗her2单克隆抗体、其制备方法及用途
MX368648B (es) 2010-04-15 2019-10-09 Seattle Genetics Inc Pirrolobenzodiazepinas usadas para tratar enfermedades proliferativas.
CN102933236B (zh) 2010-04-15 2014-10-08 斯皮罗根有限公司 吡咯并苯二氮卓类及其结合物
CN103068405A (zh) 2010-04-15 2013-04-24 西雅图基因公司 靶向吡咯并苯并二氮杂卓结合物
CA2796633C (en) 2010-04-23 2020-10-27 Genentech, Inc. Production of heteromultimeric proteins
CN103068406B (zh) 2010-06-08 2017-06-30 基因泰克公司 半胱氨酸改造的抗体和偶联物
FR2963007B1 (fr) 2010-07-26 2013-04-05 Sanofi Aventis Derives anticancereux, leur preparation et leur application therapeutique
CN103313990B (zh) * 2010-11-17 2016-07-20 基因泰克公司 丙氨酰美登醇抗体偶联物
CA2825064C (en) 2011-02-04 2022-08-30 Genentech, Inc. Fc variants and methods for their production
CN113896731A (zh) 2011-02-15 2022-01-07 伊缪诺金公司 细胞毒性苯并二氮杂䓬衍生物
ES2692268T3 (es) 2011-03-29 2018-12-03 Roche Glycart Ag Variantes de Fc de anticuerpo
WO2013017705A1 (es) 2011-08-03 2013-02-07 Salvador Moreno Rufino Baltasar Sistema de panel para construccion con retroiluminacion a base de diodos electroluminosos
SG11201400770SA (en) 2011-09-20 2014-04-28 Spirogen Sarl Pyrrolobenzodiazepines as unsymmetrical dimeric pbd compounds for inclusion in targeted conjugates
US9399073B2 (en) * 2011-10-14 2016-07-26 Seattle Genetics, Inc. Pyrrolobenzodiazepines
BR112014009055B1 (pt) 2011-10-14 2021-12-14 Seattle Genetics, Inc. Compostos pirrolobenzodiazepinas, conjugados alvos, ligante de fármaco e uso dos ditos conjugados para tratar uma doença proliferativa
CN108164551A (zh) 2011-10-14 2018-06-15 西雅图基因公司 吡咯并苯并二氮杂卓和靶向结合物
WO2013171157A1 (en) 2012-05-14 2013-11-21 Sanofi Method for producing recombinant 11-de-o-methyltomaymycin
KR101718200B1 (ko) 2012-05-21 2017-03-21 제넨테크, 인크. 항-Ly6E 항체 및 면역접합체 및 사용 방법
WO2013177481A1 (en) 2012-05-25 2013-11-28 Immunogen, Inc. Benzodiazepines and conjugates thereof
RS57694B1 (sr) 2012-10-12 2018-11-30 Adc Therapeutics Sa Pirolobenzodiazepin - anti-psma konjugati antitela
KR101995620B1 (ko) 2012-10-12 2019-07-03 에이디씨 테라퓨틱스 에스에이 피롤로벤조디아제핀-항체 컨주게이트
NZ707490A (en) 2012-10-12 2018-09-28 Adc Therapeutics Sa Pyrrolobenzodiazepine-anti-cd22 antibody conjugates
US9745303B2 (en) 2012-10-12 2017-08-29 Medimmune Limited Synthesis and intermediates of pyrrolobenzodiazepine derivatives for conjugation
KR20150083994A (ko) 2012-10-12 2015-07-21 스피로즌 살 피롤로벤조디아제핀 및 그의 컨주게이트
ES2680153T3 (es) 2012-10-12 2018-09-04 Adc Therapeutics Sa Conjugados de anticuerpos anti-PSMA-pirrolobenzodiazepinas
WO2014057118A1 (en) 2012-10-12 2014-04-17 Adc Therapeutics Sarl Pyrrolobenzodiazepine-anti-cd22 antibody conjugates
JP2016502504A (ja) 2012-10-12 2016-01-28 エイディーシー・セラピューティクス・エス・アー・エール・エルＡｄｃ Ｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃｓ Ｓａｒｌ ピロロベンゾジアゼピン−抗体結合体
MX364329B (es) 2012-10-12 2019-04-23 Medimmune Ltd Conjugados del anticuerpo pirrolobenzodiazepina.
US10695433B2 (en) 2012-10-12 2020-06-30 Medimmune Limited Pyrrolobenzodiazepine-antibody conjugates
WO2014096365A1 (en) 2012-12-21 2014-06-26 Spirogen Sàrl Unsymmetrical pyrrolobenzodiazepines-dimers for use in the treatment of proliferative and autoimmune diseases
EP2958944B1 (en) 2013-02-22 2019-03-27 AbbVie Stemcentrx LLC Antidll3-antibody-pbd conjugates and uses thereof
CA2918139A1 (en) * 2013-08-12 2015-02-19 Genentech, Inc. 1-(chloromethyl)-2,3-dihydro-1h-benzo[e]indole dimer antibody-drug conjugate compounds, and methods of use and treatment
CN105848685B (zh) 2013-12-16 2020-09-22 健泰科生物技术公司 拟肽化合物及其抗体药物偶联物
WO2015095223A2 (en) * 2013-12-16 2015-06-25 Genentech, Inc. Peptidomimetic compounds and antibody-drug conjugates thereof
SG11201701128YA (en) 2014-09-12 2017-03-30 Genentech Inc Cysteine engineered antibodies and conjugates
WO2016040723A1 (en) 2014-09-12 2016-03-17 Genentech, Inc. Anti-her2 antibodies and immunoconjugates
MA40575A (fr) 2014-09-17 2016-03-24 Genentech Inc Pyrrolobenzodiazépines et conjugués à base de disulfure d'anticorps associés
WO2016044396A1 (en) 2014-09-17 2016-03-24 Genentech, Inc. Immunoconjugates comprising anti-her2 antibodies and pyrrolobenzodiazepines
GB201513607D0 (en) * 2015-07-31 2015-09-16 Feingold Jay M Pyrrolobenzodiazepine-antibody conjugates
JP6817288B2 (ja) 2015-08-10 2021-01-20 ハンジョウ ディーエーシー バイオテック シーオー．，エルティディ．Ｈａｎｇｚｈｏｕ Ｄａｃ Ｂｉｏｔｅｃｈ Ｃｏ．，Ｌｔｄ． 新規な連結体及び生体分子と薬物との特異的共役におけるその使用
MA43345A (fr) 2015-10-02 2018-08-08 Hoffmann La Roche Conjugués anticorps-médicaments de pyrrolobenzodiazépine et méthodes d'utilisation

Patent Citations (3)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN103987407A (zh) * 2011-10-14 2014-08-13 斯皮罗根有限公司 吡咯并苯并二氮杂卓及其偶联物
CN104540524A (zh) * 2012-07-09 2015-04-22 基因泰克公司 包含抗cd22抗体的免疫缀合物
WO2014096368A1 (en) * 2012-12-21 2014-06-26 Spirogen Sàrl Pyrrolobenzodiazepines and conjugates thereof

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