[go: up one dir, main page]
More Web Proxy on the site http://driver.im/

KR20180054849A - 피롤로벤조디아제핀 항체 약물 콘쥬게이트 및 이의 사용 방법 - Google Patents

피롤로벤조디아제핀 항체 약물 콘쥬게이트 및 이의 사용 방법 Download PDF

Info

Publication number
KR20180054849A
KR20180054849A KR1020187011958A KR20187011958A KR20180054849A KR 20180054849 A KR20180054849 A KR 20180054849A KR 1020187011958 A KR1020187011958 A KR 1020187011958A KR 20187011958 A KR20187011958 A KR 20187011958A KR 20180054849 A KR20180054849 A KR 20180054849A
Authority
KR
South Korea
Prior art keywords
antibody
seq
amino acid
drug conjugate
hvr
Prior art date
Application number
KR1020187011958A
Other languages
English (en)
Other versions
KR102111338B1 (ko
Inventor
피터 드라고비치
토마스 필로우
잭 사도우스키
마크 엑스. 슬리브코브스키
빈칭 웨이
Original Assignee
제넨테크, 인크.
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by 제넨테크, 인크. filed Critical 제넨테크, 인크.
Publication of KR20180054849A publication Critical patent/KR20180054849A/ko
Application granted granted Critical
Publication of KR102111338B1 publication Critical patent/KR102111338B1/ko

Links

Images

Classifications

    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K47/00—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient
    • A61K47/50—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates
    • A61K47/51—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent
    • A61K47/68—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent the modifying agent being an antibody, an immunoglobulin or a fragment thereof, e.g. an Fc-fragment
    • A61K47/6889—Conjugates wherein the antibody being the modifying agent and wherein the linker, binder or spacer confers particular properties to the conjugates, e.g. peptidic enzyme-labile linkers or acid-labile linkers, providing for an acid-labile immuno conjugate wherein the drug may be released from its antibody conjugated part in an acidic, e.g. tumoural or environment
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K31/00—Medicinal preparations containing organic active ingredients
    • A61K31/33—Heterocyclic compounds
    • A61K31/395—Heterocyclic compounds having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. guanethidine or rifamycins
    • A61K31/55—Heterocyclic compounds having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. guanethidine or rifamycins having seven-membered rings, e.g. azelastine, pentylenetetrazole
    • A61K31/551—Heterocyclic compounds having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. guanethidine or rifamycins having seven-membered rings, e.g. azelastine, pentylenetetrazole having two nitrogen atoms, e.g. dilazep
    • A61K31/5513—1,4-Benzodiazepines, e.g. diazepam or clozapine
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K31/00—Medicinal preparations containing organic active ingredients
    • A61K31/33—Heterocyclic compounds
    • A61K31/395—Heterocyclic compounds having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. guanethidine or rifamycins
    • A61K31/55—Heterocyclic compounds having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. guanethidine or rifamycins having seven-membered rings, e.g. azelastine, pentylenetetrazole
    • A61K31/551—Heterocyclic compounds having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. guanethidine or rifamycins having seven-membered rings, e.g. azelastine, pentylenetetrazole having two nitrogen atoms, e.g. dilazep
    • A61K31/5513—1,4-Benzodiazepines, e.g. diazepam or clozapine
    • A61K31/5517—1,4-Benzodiazepines, e.g. diazepam or clozapine condensed with five-membered rings having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. imidazobenzodiazepines, triazolam
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K45/00—Medicinal preparations containing active ingredients not provided for in groups A61K31/00 - A61K41/00
    • A61K45/06—Mixtures of active ingredients without chemical characterisation, e.g. antiphlogistics and cardiaca
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K47/00—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient
    • A61K47/50—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates
    • A61K47/51—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent
    • A61K47/68—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent the modifying agent being an antibody, an immunoglobulin or a fragment thereof, e.g. an Fc-fragment
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K47/00—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient
    • A61K47/50—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates
    • A61K47/51—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent
    • A61K47/68—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent the modifying agent being an antibody, an immunoglobulin or a fragment thereof, e.g. an Fc-fragment
    • A61K47/6801—Drug-antibody or immunoglobulin conjugates defined by the pharmacologically or therapeutically active agent
    • A61K47/6803—Drugs conjugated to an antibody or immunoglobulin, e.g. cisplatin-antibody conjugates
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K47/00—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient
    • A61K47/50—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates
    • A61K47/51—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent
    • A61K47/68—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent the modifying agent being an antibody, an immunoglobulin or a fragment thereof, e.g. an Fc-fragment
    • A61K47/6801—Drug-antibody or immunoglobulin conjugates defined by the pharmacologically or therapeutically active agent
    • A61K47/6803—Drugs conjugated to an antibody or immunoglobulin, e.g. cisplatin-antibody conjugates
    • A61K47/68035—Drugs conjugated to an antibody or immunoglobulin, e.g. cisplatin-antibody conjugates the drug being a pyrrolobenzodiazepine
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K47/00—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient
    • A61K47/50—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates
    • A61K47/51—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent
    • A61K47/68—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent the modifying agent being an antibody, an immunoglobulin or a fragment thereof, e.g. an Fc-fragment
    • A61K47/6835—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent the modifying agent being an antibody, an immunoglobulin or a fragment thereof, e.g. an Fc-fragment the modifying agent being an antibody or an immunoglobulin bearing at least one antigen-binding site
    • A61K47/6851—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent the modifying agent being an antibody, an immunoglobulin or a fragment thereof, e.g. an Fc-fragment the modifying agent being an antibody or an immunoglobulin bearing at least one antigen-binding site the antibody targeting a determinant of a tumour cell
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K47/00—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient
    • A61K47/50—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates
    • A61K47/51—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent
    • A61K47/68—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent the modifying agent being an antibody, an immunoglobulin or a fragment thereof, e.g. an Fc-fragment
    • A61K47/6835—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent the modifying agent being an antibody, an immunoglobulin or a fragment thereof, e.g. an Fc-fragment the modifying agent being an antibody or an immunoglobulin bearing at least one antigen-binding site
    • A61K47/6851—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent the modifying agent being an antibody, an immunoglobulin or a fragment thereof, e.g. an Fc-fragment the modifying agent being an antibody or an immunoglobulin bearing at least one antigen-binding site the antibody targeting a determinant of a tumour cell
    • A61K47/6855—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent the modifying agent being an antibody, an immunoglobulin or a fragment thereof, e.g. an Fc-fragment the modifying agent being an antibody or an immunoglobulin bearing at least one antigen-binding site the antibody targeting a determinant of a tumour cell the tumour determinant being from breast cancer cell
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P1/00—Drugs for disorders of the alimentary tract or the digestive system
    • A61P1/04—Drugs for disorders of the alimentary tract or the digestive system for ulcers, gastritis or reflux esophagitis, e.g. antacids, inhibitors of acid secretion, mucosal protectants
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P15/00—Drugs for genital or sexual disorders; Contraceptives
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P35/00—Antineoplastic agents
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P43/00—Drugs for specific purposes, not provided for in groups A61P1/00-A61P41/00
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07D—HETEROCYCLIC COMPOUNDS
    • C07D487/00—Heterocyclic compounds containing nitrogen atoms as the only ring hetero atoms in the condensed system, not provided for by groups C07D451/00 - C07D477/00
    • C07D487/02—Heterocyclic compounds containing nitrogen atoms as the only ring hetero atoms in the condensed system, not provided for by groups C07D451/00 - C07D477/00 in which the condensed system contains two hetero rings
    • C07D487/04—Ortho-condensed systems
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07D—HETEROCYCLIC COMPOUNDS
    • C07D519/00—Heterocyclic compounds containing more than one system of two or more relevant hetero rings condensed among themselves or condensed with a common carbocyclic ring system not provided for in groups C07D453/00 or C07D455/00
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K16/00—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies
    • C07K16/18—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans
    • C07K16/28—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans against receptors, cell surface antigens or cell surface determinants
    • C07K16/2803—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans against receptors, cell surface antigens or cell surface determinants against the immunoglobulin superfamily
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K16/00—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies
    • C07K16/18—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans
    • C07K16/32—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans against translation products of oncogenes
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
    • C07K2317/40—Immunoglobulins specific features characterized by post-translational modification
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
    • C07K2317/50—Immunoglobulins specific features characterized by immunoglobulin fragments
    • C07K2317/52—Constant or Fc region; Isotype
    • C07K2317/522—CH1 domain
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
    • C07K2317/50—Immunoglobulins specific features characterized by immunoglobulin fragments
    • C07K2317/56—Immunoglobulins specific features characterized by immunoglobulin fragments variable (Fv) region, i.e. VH and/or VL
    • C07K2317/567—Framework region [FR]

Landscapes

  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
  • Engineering & Computer Science (AREA)
  • Medicinal Chemistry (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • Veterinary Medicine (AREA)
  • Animal Behavior & Ethology (AREA)
  • Pharmacology & Pharmacy (AREA)
  • Public Health (AREA)
  • Organic Chemistry (AREA)
  • Immunology (AREA)
  • Epidemiology (AREA)
  • Cell Biology (AREA)
  • Oncology (AREA)
  • Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
  • General Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
  • Molecular Biology (AREA)
  • Biochemistry (AREA)
  • Biophysics (AREA)
  • Genetics & Genomics (AREA)
  • Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
  • Reproductive Health (AREA)
  • Endocrinology (AREA)
  • Peptides Or Proteins (AREA)
  • Medicines Containing Antibodies Or Antigens For Use As Internal Diagnostic Agents (AREA)
  • Medicinal Preparation (AREA)
  • Pharmaceuticals Containing Other Organic And Inorganic Compounds (AREA)
  • Medicines That Contain Protein Lipid Enzymes And Other Medicines (AREA)
  • Nitrogen And Oxygen Or Sulfur-Condensed Heterocyclic Ring Systems (AREA)

Abstract

본 발명은 이황화물 링커를 통하여 피롤로벤조디아제핀 약물 모이어티에 콘쥬게이트된 항체를 포함하는 항체-약물 콘쥬게이트, 피롤로벤조디아제핀 링커-약물 중간생성물를 제공하며, 상기 항체-약물 콘쥬게이트를 이용하는 방법을 제공한다.

Description

피롤로벤조디아제핀 항체 약물 콘쥬게이트 및 이의 사용 방법
관련 출원에 대한 교차 참조
본 출원은 2015년 10월 2일자로 제출된 미국 가출원 번호 62/236,429를 우선권으로 주장하며, 이의 전문이 본 명세서의 참고자료에 편입된다.
서열 목록
본 출원은 ASCII 포멧으로 전자적으로 제출된 서열 목록을 포함하며, 이의 전문은 본 명세서의 참고자료에 편입된다. 2016년 9월 30일에 만들어진 전술한 ASCII 복사체는 P32858_US_1_Sequence_Listing.txt로 명명되며, 크기는 56,520 바이트다.
발명의 분야
본 발명은 치료요법적 또는 진단용 용도를 갖는 항체-약물 콘쥬게이트를 만들기 위하여, 피롤로벤조디아제핀 중간생성물(intermediates)에 콘쥬게이트된 항체에 일반적으로 관계한다. 상기 항체는 피롤로벤조디아제핀 중간생성물과 콘쥬게이션(conjugation)에 반응성인 자유 시스테인 아미노산으로 조작될 수 있다. 본 발명은 과다증식성 장애, 이를 테면 암의 치료를 위하여, 또는 시험관내, 현장(in situ), 및 생체내 이러한 장애의 진단을 위하여 상기 항체-약물 콘쥬게이트 화합물을 이용하는 방법에 또한 관계한다.
발명의 배경
항체 약물 콘쥬게이트 (ADC)는 잠재적 세포독성 약물을 항원-발현 종양 세포로 표적화시키고, 내화(internalization), 그리고 약물의 방출에 의해, 이들의 항-종양 활성을 강화시킴으로써, 항체와 세포독성 약물 모두의 성질을 복합시키는 표적화된 화학요법적 분자다 (Carter, P. and Senter, P. (2008) The Cancer Jour. 14(3):154-169). 주어진 표적 항원에 대한 성공적인 ADC 발달은 항체 선별, 링커(linker) 기획 및 안정성, 세포독성 약물 효능 그리고 상기 항체에 대한 약물 및 링커 콘쥬게이션의 형태에 따라 달라진다(Dosio et al (2011) Toxins, 3:848-883; Polakis, P. (2005) CurrentOpinion in Pharmacology 5:382-387).
특정 피롤로벤조디아제핀 (PBD) 화합물은 특이적 DNA 서열을 인지하고, 이에 결합하는 능력을 보유하고; 선호되는 서열은 PuGPu (Pu = 퓨린, 이를 테면 아데닌 A 및 구아닌 G)이다. 첫번째 PBD 항종양 항생제인 안트라마이신은 1965년에 발견되었다 (Leimgruber, et al., J. Am. Chem. Soc., 87:5793-5795 (1965); Leimgruber, et al., J. Am. Chem. Soc., 87, 5791-5793 (1965)). 그 이후, 자연적으로 발생하는 많은 PBD 및 유사체가 보고되고, 기술되어 있다 (Thurston, et al., Chem. Rev. 1994, 433-465 (1994); Antonow, D. and Thurston, D.E., (2011) Chem. Rev. 111 (4):2815-2864). 패밀리 구성원으로는 아베마이신 (Hochlowski, et al., (1987) J. Antibiotics, 40:145-148), 치카마이신(Konishi, et al., (1984) J. Antibiotics, 37:200-206), Thurston, et al., (1990) Chem. Brit., 26:767-772; Bose, et al., (1992) Tetrahedron, 48:751-758), 마제트라마이신 (Kuminoto, et al., J. Antibiotics, 33, 665-667 (1980)), 네오트라마이신 A 및 B (Takeuchi, et al., J. Antibiotics, 29, 93-96 (1976)), 포로트라마이신(Tsunakawa, et al., (1988) J. Antibiotics, 41:1366-1373), 프로트라카르신 (Shimizu, et al, J. Antibiotics, (1982) 29:2492-2503; Langley and Thurston, (1987) J. Org. Chem., 52:91-97), 시바노미친, DC-102 (Hara, et al., (1988) J. Antibiotics, 41:702-704; Itoh, et al., J. Antibiotics, (1988) 41:1281-1284), 시비로마이신 (Leber, et al., (1988) J. Am. Chem. Soc., 110:2992-2993) 및 모마미신 (Arima, et al., (1972) J. Antibiotics, 25:437-444)을 포함한다.
피롤로벤조디아제핀은 다음의 일반 구조를 가지며:
Figure pct00001
방향족 A 고리 및 피롤로 C 고리 양자 모두에서 치환체의 수, 유형 및 위치 그리고 C 고리의 포화도가 상이하다. B-고리에서, DNA 알킬화를 담당하는 친전자성 중심인 N10-C11 위치에 이민 (N=C), 카르비놀라민(NH-CH(OH)), 또는 카르비놀라민 메틸 에테르 (NH-CH(OMe))가 있다. 모든 공지의 천연 산물은 키랄 C11a 위치에 (S)-배열을 갖고, 이로써 C 고리로부터 A 고리쪽으로 봤을 때 우회전 비틀림을 갖게 되고, 이소헬리시티(isohelicity)를 위한 3차원 모양을 결정하는데, B-형태 DNA의 작은 홈은 결합부위에 꼭 맞게 된다 (Kohn, In Antibiotics III. Springer-Verlag, New York, pp. 3-11 (1975); Hurleyand Needham-VanDevanter, (1986) Acc. Chem. Res., 19:230-237). 작은 홈에 부가물을 형성하는 PBD의 능력은 이들이 DNA 프로세싱을 간섭할 수 있도록 하고, 이로 인하여 항종양제로 이용될 수 있다. 피롤로벤조디아제핀 구조가 A 고리의 C8 위치를 통하여 링커에 의해 공쥬적으로 부착된, 피롤로벤조디아제핀 이합체 화합물은 디알킬화되고, 이중-가닥으로된 DNA를 가교할 수 있다 (WO 2005/085251).
피롤로벤조디아제핀 화합물은 N10 위치에서 질소 보호기, 이를 테면 카르바메이트에 의해 보호된 프로드럭으로 이용될 수 있는데, 이 보호기는 생체내에서 제거가능하다(WO 2000/12507; WO 2005/023814). 상기 보호기는 PBD 모이어티의 N10 위치로부터 제거되어, N10-C11 이민 결합이 남겨질 수 있다. 효소 작용에 의해 절단될 수 있는 것들을 비롯하여 보호기의 범위가 기술된다. 피롤로벤조디아제핀 (PBD) 이합체가 N10 위치를 통하여 종양-연관된 항원에 특이적인 항체에 연계된 항체-약물 콘쥬게이트는 종양 세포에 대항하여 시험관내 그리고 생체내 효과를 갖는다(WO 2011/130598). 이합체의 단량체 PBD 유닛을 연계시키는 다리("테테르(tether)")를 통하여 세포 결합 물질, 이를 테면 항체에 연결시키기 위한 링커 기를 갖는 PBD 이합체 약물 모이어티와의 항체-약물 콘쥬게이트가 기술되어 있다(WO 2007/085930). B 고리의 N10-C11 위치에서 아미드와 아민 기를 갖는 PBD 이합체 약물 모이어티와의 항체-약물 콘쥬게이트가 기술되어 있다 (WO 2014/096368; WO 2013/177481; WO 2012/112708). 항체에 이황화물 링키지에 의해 PBD의 N10에 연계된 디알킬레이터 피롤로벤조디아제핀 (PBD) 이합체 약물 모이어티를 포함하는 항체 약물 콘쥬게이트가 기술되어 있다 (WO2013/055987; Gregson et al. (2001) J. Med. Chem. 44:1161-1174).
요약
본 발명은 화학식 I의 링커-약물 중간생성물을 포함한다:
Figure pct00002
이때 X
Figure pct00003
Y는 CH2-CH2, CH=CH, C(=O)-NH, 또는 CH2-NH로부터 선택되고;
A는 F, C1-C6 알킬, 또는 =C(R)2 로부터 선택된 기로 임의선택적으로 치환된 5-원(membered) 또는 6-원(membered) 헤테로사이클릭 고리이며, 여기에서 R은 독립적으로 H, F, C1-C6 알킬, 또는 C1-C6 플루오르알킬로부터 선택되며;
R1 및 R2는 독립적으로 H 또는 C1-C6 알킬로부터 선택되거나, 또는 R1 과 R2 는 3, 4, 5, 또는 6-원(membered) 시클로알킬 또는 헤테로시클일 기를 형성하고;
R3은 독립적으로 NO2, Cl, F, CN, CO2H 또는 Br로부터 선택되며; 그리고
m은 0, 1 또는 2이다.
본 발명은 치료요법적 또는 진단용도를 갖는 항체-약물 콘쥬게이트 (ADC) 화합물을 형성하기 위하여 이황화물 링커에 의해 항체에 공유적으로 부착된 모노알킬레이터 피롤로벤조디아제핀 약물 모이어티를 포함한다.
본 발명의 또다른 측면은 화학식 II의 항체-약물 콘쥬게이트 화합물 II:
Figure pct00004
또는 약학적으로 수용가능한 이의 염이며, 이때:
X
Figure pct00005
Y는 CH2-CH2, CH2-C(=O), CH=CH, 또는 CH2-NH로부터 선택되며;
A는 F, C1-C6 알킬, 또는 =C(R)2 로부터 선택된 기로 임의선택적으로 치환된 5-원(membered) 또는 6-원(membered) 헤테로사이클릭 고리이며, 여기에서 R은 독립적으로 H, F, C1-C6 알킬, 또는 C1-C6 플루오르알킬로부터 선택되며;
R1 및 R2는 독립적으로 H 또는 C1-C6 알킬로부터 선택되거나, 또는 R1 과 R2 는 3, 4, 5, 또는 6-원(membered) 시클로알킬 또는 헤테로시클일 기를 형성하고;
p는 1 내지 8의 정수이며; 그리고
Ab는 항체다.
예시적인 구체예에서, 상기 항체는 (1)-(53)로부터 선택된 하나 또는 그 이상의 종양-연관된 항원 또는 세포-표면 수용체에 결합한다:
(1) BMPR1B (골 형태형성 단백질 수용체-유형 IB);
(2) E16 (LAT1, SLC7A5);
(3) STEAP1 (전립선의 6개 막경유 상피 항원);
(4) MUC16 (0772P, CA125);
(5) MPF (MPF, MSLN, SMR, 거핵구 강화 인자, 메소텔린);
(6) Napi2b (NAPI-3B, NPTIIb, SLC34A2, 용질 운반체 패밀리 34 (인산 나트륨), 구성원 2, 유형 II 나트륨-의존성 인산염 운반물질 3b);
(7) 세마(Sema) 5b (FLJ10372, KIAA1445, Mm.42015, SEMA5B, SEMAG, 세마포린(Semaphorin) 5b Hlog, 세마 도메인, 7개 트롬보스폰딘 반복체 (유형 1 및 유형 1-유사), 막경유 도메인 (TM) 그리고 짧은 세포질 도메인, (세마포린) 5B);
(8) PSCA hlg (2700050C12Rik, C530008O16Rik, RIKEN cDNA 2700050C12, RIKEN cDNA 2700050C12 유전자);
(9) ETBR (엔도텔린 유형 B 수용체);
(10) MSG783 (RNF124, 가상의 단백질 FLJ20315);
(11) STEAP2 (HGNC_8639, IPCA-1, PCANAP1, STAMP1, STEAP2, STMP, 전립선 암 연관된 유전자 1, 전립선 암 연관된 단백질 1, 전립선의 6개 막경유 상피 항원 2, 6개의 막경유 전립선 단백질);
(12) TrpM4 (BR22450, FLJ20041, TRPM4, TRPM4B, 일과성 수용체 잠재적 양이온 채널, 서브패밀리 M, 구성원 4);
(13) CRIPTO (CR, CR1, CRGF, CRIPTO, TDGF1, 기형암종-유도된 성장 인자);
(14) CD21 (CR2 (보체 수용체 2) 또는 C3DR (C3d/엡스테인 바르 바이러스 수용체) 또는 Hs 73792);
(15) CD79b (CD79B, CD79β, IGb (면역글로블린-연관된 베타), B29);
(16) FcRH2 (IFGP4, IRTA4, SPAP1A (포스파타제 엥커 단백질 1a가 함유된 SH2 도메인), SPAP1B, SPAP1C);
(17) HER2;
(18) NCA;
(19) MDP;
(20) IL20Rα;
(21) 브레비칸(Brevican);
(22) EphB2R;
(23) ASLG659;
(24) PSCA;
(25) GEDA;
(26) BAFF-R (B 세포-활성화 인자 수용체, BLyS 수용체 3, BR3);
(27) CD22 (B-세포 수용체 CD22-B 아이소폼);
(28) CD79a (CD79A, CD79α, 면역글로블린-연관된 알파);
(29) CXCR5 (버킷의(Burkitt's) 림프종 수용체 1);
(30) HLA-DOB (MHC 클라스 II 분자의 베타 서브유닛 (Ia 항원));
(31) P2X5 (퓨린성 수용체 P2X 리간드-게이트화된 이온 채널 5);
(32) CD72 (B-세포 분화 항원 CD72, Lyb-2);
(33) LY64 (림프구 항원 64 (RP105), 류신 풍부한 반복 (LRR) 패밀리의 유형 I 막 단백질);
(34) FcRH1 (Fc 수용체-유사 단백질 1);
(35) FcRH5 (IRTA2, 면역글로블린 슈퍼패밀리 수용체 전좌 연관된 2);
(36) TENB2 (추정 막경유 프로테오글리칸);
(37) PMEL17 (은(silver) 동족체(homolog); SILV; D12S53E; PMEL17; SI; SIL);
(38) TMEFF1 (EGF-유사 및 2개의 폴리스태틴-유사 도메인을 갖는 막경유 단백질 1; 토모레굴린(Tomoregulin)-1);
(39) GDNF-Ra1 (GDNF 패밀리 수용체 알파 1; GFRA1; GDNFR; GDNFRA; RETL1; TRNR1; RET1L; GDNFR-알파1; GFR-알파-1);
(40) Ly6E (림프구 항원 6 복합체, 좌(locus) E; Ly67, RIG-E, SCA-2, TSA-1);
(41) TMEM46 (쉬사(shisa) 동족체 2 (제노푸스 레비스(xenopus laevis)); SHISA2);
(42) Ly6G6D (림프구 항원 6 복합체, 좌 G6D; Ly6-D, MEGT1);
(43) LGR5 (류신-풍부 반복체-함유 G 단백질-연결된 수용체 5; GPR49, GPR67);
(44) RET (ret 프로토-종양유전자; MEN2A; HSCR1; MEN2B; MTC1; PTC; CDHF12; Hs.168114; RET51; RET-ELE1);
(45) LY6K (림프구 항원 6 복합체, 좌(locus) K; LY6K; HSJ001348; FLJ35226);
(46) GPR19 (G 단백질-연결된 수용체 19; Mm.4787);
(47) GPR54 (KISS1 수용체; KISS1R; GPR54; HOT7T175; AXOR12);
(48) ASPHD1 (아스파르테이트 베타-히드록실라제 도메인 함유 1; LOC253982);
(49) 티로시나제 (TYR; OCAIA; OCA1A; 티로시나제; SHEP3);
(50) TMEM118 (링 핑커(ring finger) 단백질, 막경유 2; RNFT2; FLJ14627);
(51) GPR172A (G 단백질-연결된 수용체 172A; GPCR41; FLJ11856; D15Ertd747e);
(52) CD33; 또는
(53) CLL-1.
본 발명의 또다른 측면은 화학식 II의 항체-약물 콘쥬게이트 화합물, 그리고 약학적으로 수용가능한 희석제, 운반체 또는 부형제를 포함하는 약학 조성물이다.
본 발명의 또다른 측면은 포유동물에서 암 치료를 위한 약물 제조에 화학식 II의 항체-약물 콘쥬게이트 화합물의 사용에 관한 것이다.
본 발명의 또다른 측면은 화학식 II의 항체-약물 콘쥬게이트 화합물을 포함하는 약학 조성물을 환자에게 투여함으로써, 암을 치료하는 방법에 관한 것이다.
본 발명의 또다른 측면은 화학식 II의 항체-약물 콘쥬게이트 화합물을 만드는 방법에 관한 것이다.
본 발명의 또다른 측면은 화학식 II의 항체-약물 콘쥬게이트 화합물을 포함하는 약학 조성물, 용기, 그리고 상기 약학 조성물이 암 치료에 이용될 수 있음을 나타내는 포장 삽입물 또는 라벨을 포함하는 제조물품에 관한 것이다.
도 1a는 ADC-107, ADC-103, 및 비-표적 대조 ADC-108로 처리된 BJAB 세포의 시험관내 세포 생존력의 플롯을 나타낸다.
도 1b는 ADC-107, ADC-103, 및 비-표적 대조 ADC-108로 처리된 WSU-DLCL2 세포의 시험관내 세포 생존력의 플롯을 나타낸다.
도 1c는 ADC-107, ADC-103, 및 비-표적 대조 ADC-108로 처리된 Jurkat 세포 세포의 시험관내 세포 생존력의 플롯을 나타낸다.
도 1d는 ADC-101, ADC-113, ADC-103, ADC-111, 및 ADC-112로 처리된 BJAB 세포의 시험관내 세포 생존력의 플롯을 나타낸다.
도 1e는 ADC-101, ADC-113, ADC-103, ADC-111, 및 ADC-112로 처리된 WSU-DLCL2 세포의 시험관내 세포 생존력의 플롯을 나타낸다.
도 1f는 ADC-108, ADC-102, ADC-203, ADC-201, 및 ADC-107로 처리된 SK-BR-3 세포의 시험관내 세포 생존력의 플롯을 나타낸다.
도 1g는 ADC-108, ADC-102, ADC-203, ADC-201, 및 ADC-107로 처리된 KPL-4 세포의 시험관내 세포 생존력의 플롯을 나타낸다.
도 2는 CB-17 Fox Chase SCID 마우스에서 WSU-DLCL2 이종이식편 모델에서 다음의 것을 IV로 일회 투여된 후 시간 경과에 따른 생체내 종양 용적 변화를 피팅한 플롯에서 항체-약물 콘쥬게이트의 효과를 나타낸다:
1) 비이클 (히스티딘 완충액 #8), 100 μL
2) 티오(Thio) Hu항-CD22 10F4v3 LC K149C-(CLD-1), ADC-202, 0.5 mg/kg
3) 티오 Hu 항-CD22 10F4v3 LC K149C-(CLD-1), ADC-202, 2 mg/kg
4) 티오 Hu 항-CD22 10F4v3 LC K149C-(LD-51), 모노아미드, ADC-103, 2 mg/kg
5) 티오 Hu 항-CD22 10F4v3 LC K149C-(LD-51), 모노아미드, ADC-103, 5 mg/kg
6) 티오 Hu 항-CD22 10F4v3 LC K149C-(LD-51), 모노아미드, ADC-103, 10 mg/kg
7) 티오 Hu 항-Her2 (hu7C2) LC K149C-(LD-51), 모노아미드, ADC-102, 10 mg/kg
도 3은 CB-17 Fox Chase SCID 마우스에서 Bjab-luc 이종이식편 모델에서 다음의 것을 IV로 1회 투여된 후 시간 경과에 따른 생체내 종양 용적 변화를 피팅한 플롯에서 항체-약물 콘쥬게이트의 효과를 나타낸다:
1) 비이클 (히스티딘 완충액 #8 HisAc 20mM, 슈크로스 240mM, TW-20 0.02%, pH 5.5), 100 μL (마이크로리터)
2) 티오 Hu 항-CD22 10F4v3 LC K149C-(CLD-1), ADC-202, 0.1 mg/kg
3) 티오 Hu 항-CD22 10F4v3 LC K149C-(CLD-1), ADC-202, 0.2 mg/kg
4) 티오 Hu 항-CD22 10F4v3 LC K149C-(C-LD1), ADC-202, 0.4 mg/kg
5) 티오 Hu 항-CD22 10F4v3 LC K149C-(LD-51) 모노아미드 ADC-105, 1 mg/kg
6) 티오 Hu 항-CD22 10F4v3 LC K149C-(LD-51) 모노아미드 ADC-105, 2 mg/kg
7) 티오 Hu 항-CD22 10F4v3 LC K149C-(LD-51) 모노아미드 ADC-105, 4 mg/kg
8) 티오 Hu 항-CD22 10F4v3 LC K149C-(LD-51) 모노아미드 ADC-105, 8 mg/kg
9) 티오 Hu 항-Her2 hu7C2 LC K149C-(CLD-1) ADC-201, 0.4 mg/kg
10) 티오 Hu 항-Her2 hu7C2 LC K149C-(LD-51) 모노아미드 ADC-104, 8 mg/kg
도 4는 WSU-DLCL2 인간 세포계통 마우스 모델에게 다음의 것을 IV로 일회 투여된 후 시간 경과에 따른 생체내 종양 용적 변화를 피팅한 플롯에서 항체-약물 콘쥬게이트의 효과를 나타낸다:
1) 비이클 (히스티딘 완충액 #8), 100 μL
2) 티오 Hu 항-CD22 10F4v3 LC K149C-(LD-51) 모노아미드 ADC-105, 5 mg/kg
3) 티오 Hu 항-CD22 10F4v3 LC K149C-(LD-52) 모노아민, ADC-107, 0.5 mg/kg
4) 티오 Hu 항-CD22 10F4v3 LC K149C-(LD-52) 모노아민, ADC-107, 2 mg/kg
5) 티오 Hu 항-CD22 10F4v3 LC K149C--(LD-52) 모노아민, ADC-107, 5 mg/kg
6) 티오 Hu 항-CD22 10F4v3 LC K149C-(LD-52) 모노아민, ADC-107, 10 mg/kg
7) 티오 Hu 항-CD22 10F4v3 LC K149C-(CLD-4) 모노아민, ADC-204, 0.5 mg/kg
8) 티오 Hu 항-CD22 10F4v3 LC K149C-(CLD-4) 모노아민, ADC-204, 2 mg/kg
9) 티오 Hu 항-CD22 10F4v3 LC K149C-(CLD-4) 모노아민, ADC-204, 5 mg/kg
10) 티오 Hu 항-CD22 10F4v3 LC K149C-(CLD-4) 모노아민, ADC-204, 10 mg/kg
11) 티오 Hu 항-Her2 hu7C2 LC K149C-(LD-52) 모노아민, ADC-108, 2 mg/kg
12) 티오 Hu 항-Her2 hu7C2 LC K149C-(CLD-4) 모노아민, ADC-205, 2 mg/kg
도 5a는 scid 베이지(beige) 마우스의 HER2 KPL4 종양 모델에서 다음의 것을 IV로 일회 투여된 후 시간 경과에 따른 생체내 종양 용적 변화를 피팅한 플롯에서 항체-약물 콘쥬게이트의 효과를 나타낸다:
1) 비이클
2) 티오-Her2 hu7C2 LC-K149C-(LD-51) 모노아미드, ADC-106, 1 mg/kg
3) 티오-Her2 hu7C2 LC-K149C-(LD-51) 모노아미드, ADC-106, 5 mg/kg
4) 티오-Her2 hu7C2 LC-K149C-(LD-52) 모노아민, ADC-108, 0.5 mg/kg
5) 티오-Her2 hu7C2 LC-K149C-(LD-52) 모노아민, ADC-108, 1 mg/kg
6) 티오-Her2 hu&c2 LC-K149C-(LD-52) 모노아민, ADC-108, 2 mg/kg
7) 티오-Her2 hu7C2 LC-K149C-(LD-52) 모노아민, ADC-108, 5 mg/kg
8) CD22 LC-K149C-(LD-52) 모노아민, ADC-107, 1mg/kg
도 5b는 scid 베이지 마우스의 HER2 KPL4 종양 모델에서 다음의 것을 IV로 일회 투여된 후 시간 경과에 따른 생체내 종양 용적 변화를 피팅한 플롯에서 항체-약물 콘쥬게이트의 효과를 나타낸다:
1) 비이클
2) Tmab-DM1, ADC-211, 1 mg/kg
3) 티오-Her2 hu7C2 LC-K149C-(LD-51) 모노아미드, ADC-106, 1 mg/kg
4) 티오-Her2 hu7C2 LC-K149C-(LD-51) 모노아미드, ADC-106, 5 mg/kg
5) Tmab-DM1, ADC-211, 1mg/kg + 티오-Her2 hu7C2 LC-K149C-(LD-51) 모노아미드, ADC-106, 1 mg/kg
6) Tmab-DM1, ADC-211, 1mg/kg + 티오-Her2 hu7C2 LC-K149C-(LD-51) 모노아미드, ADC-106, 5 mg/kg
도 6은 CRL nu/nu 마우스의 HER2 Fo5 모델 모델에서 다음의 것을 IV로 일회 투여된 후 시간 경과에 따른 생체내 종양 용적 변화를 피팅한 플롯에서 항체-약물 콘쥬게이트의 효과를 나타낸다:
1) 비이클 (히스티딘 완충액 #8), 100 μL
2) 티오-Her2 hu7C2 LC-K149C-(CLD-1), ADC-201, 0.5 mg/kg
3) 티오-Her2 hu7C2 LC-K149C-(CLD-1), ADC-201, 1 mg/kg
4) 티오-Her2 hu7C2 LC-K149C-(LD-51), 모노아미드, ADC-104, 5 mg/kg
5) 티오-Her2 hu7C2 LC-K149C-(LD-51), 모노아미드, ADC-104, 10 mg/kg
6) 티오-Her2 hu7C2 LC-K149C-(LD-51), 모노아미드, ADC-104, 15 mg/kg
7) 티오-Her2 hu7C2 LC-K149C 콘쥬게이트안된 항체 15 mg/kg
8) 티오-CD22 LC-K149C-(CLD-1), ADC-202, 1 mg/kg
9) 티오-CD22 LC-K149C-(LD-51) 모노아미드 ADC-105, 15 mg/kg
도 7은 scid 베이지 마우스의 HER2 KPL4 종양 모델에서 다음의 것을 IV로 일회 투여된 후 시간 경과에 따른 생체내 종양 용적 변화를 피팅한 플롯에서 항체-약물 콘쥬게이트의 효과를 나타낸다:
1) 비이클
2) 티오-Her2 hu7C2 LC-K149C-(CLD-1), ADC-201, 1 mg/kg
3) 티오-Her2 hu7C2 LC-K149C-(CLD-1), ADC-201, 3 mg/kg
4) 티오-Her2 hu7C2 LC-K149C-(LD-51) 모노아미드 ADC-104, 3 mg/kg
5) 티오-Her2 hu7C2 LC-K149C-(LD-51) 모노아미드 ADC-104, 6 mg/kg
6) 티오-Her2 hu7C2 LC-K149C-(LD-51) 모노아미드 ADC-104, 10 mg/kg
7) 티오-Her2 hu7C2 LC-K149C, 콘쥬게이트안된 항체, 3 mg/kg
8) 티오-Her2 hu7C2 LC-K149C, 콘쥬게이트안된 항체, 10 mg/kg
9) 티오-CD22 LC-K149C-(CLD-1), ADC-202, 3 mg/kg
10) 티오-CD22 LC-K149C-(LD-51) 모노아미드, ADC-105, 10 mg/kg
도 8은 CRL nu/nu 마우스의 HER2 Fo5 모델 모델에서 다음의 것을 IV로 일회 투여된 후 시간 경과에 따른 생체내 종양 용적 변화를 피팅한 플롯에서 항체-약물 콘쥬게이트의 효과를 나타낸다:
1) 비이클
2) 티오-Her2 hu7C2 LC-K149C-(LD-51), 모노아미드, ADC-106, 5 mg/kg
3) 티오-Her2 hu7C2 LC-K149C-(LD-51), 모노아미드, ADC-106, 10 mg/kg
4) 티오-Her2 hu7C2 LC-K149C-(LD-52), 모노아민, ADC-108, 0.5 mg/kg
5) 티오-Her2 hu7C2 LC-K149C-(LD-52), 모노아민, ADC-108, 2 mg/kg
6) 티오-Her2 hu7C2 LC-K149C-(LD-52), 모노아민, ADC-108, 5 mg/kg
7) Ctrl CD22 LC-K149C-(LD-52), 모노아민, ADC-107, 2 mg/kg
도 9는 CB-17 Fox Chase SCID 마우스에서 WSU-DLCL2 이종이식편 모델에서 다음의 것을 IV로 일회 투여된 후 시간 경과에 따른 생체내 종양 용적 변화를 피팅한 플롯에서 항체-약물 콘쥬게이트의 효과를 나타낸다:
1) 비이클 (히스티딘 완충액 #8), 100 uL
2) 티오 Hu 항-CD22 LC-K149C-(LD-51), 모노아미드, ADC-104, 6 mg/kg
3) 티오 Hu 항-CD22 LC-K149C-(LD-51), 모노아미드, ADC-104, 16.4 mg/kg
4) 티오 Hu 항-CD22 LC-K149C-HC-L177C-(LD-51), 모노아미드, ADC-111, 3.3 mg/kg
5) 티오 Hu 항-CD22 LC-K149C-HC-L177C-(LD-51), 모노아미드, ADC-111, 6 mg/kg
6) 티오 Hu 항-CD22 LC-K149C-HC-L177C-(LD-51), 모노아미드, ADC-111, 9 mg/kg
7) 티오 Hu 항-CD22 LC-K149C-HC-L177C-HC-Y376C-(LD-51), 모노아미드, ADC-112, 2.2 mg/kg
8) 티오 Hu 항-CD22 LC-K149C-HC-L177C-HC-Y376C-(LD-51), 모노아미드, ADC-112, 6 mg/kg
9) 티오 Hu 항-Her2 hu7C2 LC K149C-(LD-51), 모노아미드, ADC-106, 16.2 mg/kg
10) 티오 Hu 항-Her2 4D5 LC K149C-HC L177C-(LD-51), 모노아미드, ADC-113, 8.3 mg/kg
도 10은 SCID 베이지 마우스의 HCC1569X2 이종이식편 모델에서 다음의 것을 IV로 일회 투여된 후 시간 경과에 따른 생체내 종양 용적 변화를 피팅한 플롯에서 항체-약물 콘쥬게이트의 효과를 나타낸다:
1) 비이클 (히스티딘 완충액 #8), 100 uL
2) 티오 Hu 항-Ly6E LC K149C-(CLD-1), ADC-212, 1 mg/kg
3) 티오 Hu 항-Ly6E LC K149C-(CLD-1), ADC-212, 3 mg/kg
4) 티오 Hu 항-Ly6E LC K149C-(LD-51) 모노아미드, ADC-115, 3 mg/kg
5) 티오 Hu 항-Ly6E LC K149C-(LD-51) 모노아미드, ADC-115, 6 mg/kg
6) 티오 Hu 항-Ly6E LC K149C-(LD-51) 모노아미드, ADC-115, 12 mg/kg
7) 티오 Hu 항-Ly6E LC K149C-(LD-51) 모노아미드, ADC-115, 18 mg/kg
8) 티오 Hu 항-CD22 10F4v3 LC K149C-(LD-51) 모노아미드, ADC-110, 12 mg/kg
9) 티오 Hu 항-Ly6E LC K149C-(CLD-4), 모노아민, ADC-210, 1 mg/kg
10) 티오 Hu 항-Ly6E LC K149C-(CLD-4), 모노아민, ADC-210, 3 mg/kg
11) 티오 Hu 항-Ly6E LC K149C-(CLD-4), 모노아민, ADC-210, 6 mg/kg
12) 티오 Hu 항-CD22 10F4v3 LC K149C-(CLD-4), 모노아민, ADC-204, 3 mg/kg
도 11은 디알킬레이터 피롤로벤조디아제핀 (PBD) 화합물과 2개의 모노알킬레이터 피롤로벤조디아제핀 화합물과의 추정되는 DNA 상호작용을 나타낸다.
도 12는 HER2 LC K149C LD-51 ADC와 HER2 LC K149C CLD-1 ADC의 마우스 효과와 시노몰구스 원숭이 독성학의 비교를 나타낸다.
도 13은 HER2 LC K149C LD-51 ADC와 HER2 LC K149C CLD-1 ADC의 노출 근거한 치료요법 지수 평가를 나타낸다.
도 14는 상이한 링커를 가진 몇 개의 HER2 hu7C2 LC K149C ADCs로 세포 생존력 분석 데이터를 나타낸다.
도 15는 마우스 동종이식편 종양 모델에서 다양한 ADCs에 대한 시간 경과에 따른 종양 용적을 나타낸다.
예시적인 구체예들의 상세한 설명
이제 본 발명의 특정 구체예에 대해 상세히 언급 할 것이며, 이의 예는 첨부된 구조 및 화학식에서 설명된다. 본 발명은 도시된 구체예들과 관련하여 설명될 것이지만, 본 발명은 이들 구체예로 본 발명을 제한하려는 것이 아니라는 것을 이해할 것이다. 반대로, 본 발명은 모든 대안, 변형 및 등가물을 포괄하며, 이는 청구범위에서 특정된 것과 같이 본 발명의 범위 안에 포함될 수 있다.
당업자는 본 명세서에서 설명된 것들에 유사한 또는 대등한 많은 방법 및 재료를 인지할 것이며, 이는 본 발명의 실시에 이용될 수 있다. 본 발명은 설명된 방법 및 재료에 어떤 식으로던 국한되지 않는다.
명시적으로 다른 언급이 없는 한, 본 명세서에서 이용된 모든 기술적 그리고 과학적 용어는 본 발명이 속하는 당업계 숙련자들에 의해 공통적으로 이해되는 것과 동일한 의미를 가지고, 다음과 일관된다:. Singleton et al (1994) Dictionary of Microbiology and Molecular Biology, 2nd Ed., J. Wiley & Sons, New York, NY; 그리고 Janeway, C., Travers, P., Walport, M., Shlomchik (2001) Immunobiology, 5th Ed., Garland Publishing, New York.
정의
달리 명시되지 않는 한, 여기에 사용된 다음 용어 및 구문은 다음과 같은 의미를 갖는다:
본 명세서에서 상표가 사용되는 경우, 출원인은 상품명 제제, 복제약(generic drug) 및 활성 명칭 제품의 활성 약제 성분을 독립적으로 포함하고자 한다.
본 명세서에서 목적을 위하여 "수용체 인간 틀구조(acceptor humanframework)"이란 하기에서 정의된 바와 같이, 인간 면역글로블린 틀구조 또는 인간 콘센수스(consensus) 틀구조에서 유도된 아미노산 서열 경쇄 가변 도메인 (VL) 틀구조, 또는 중쇄 가변 도메인 (VH) 틀구조이 포함된 틀구조이다. 인간 면역글로블린 틀구조 또는 인간 콘센수스 틀구조로부터 "유도된(derived from)" 수용체 인간 틀구조는 이의 동일한 아미노산 서열을 포함할 수 있거나, 또는 아미노산 서열 변화를 함유할 수 있다. 일부 구체예들에서, 상기 아미노산 변화의 수는 10개 또는 그 미만, 9개 또는 그 미만, 8개 또는 그 미만, 7개 또는 그 미만, 6개 또는 그 미만, 5개 또는 그 미만, 4개 또는 그 미만, 3개 또는 그 미만, 또는 2개 또는 그 미만이 된다. 일부 구체예들에서, 상기 VL 수용체 인간 틀구조는 상기 VL 인간 면역글로블린 틀구조 서열 또는 인간 콘센수스 틀구조 서열의 서열과 동일하다.
"친화력(affinity)"이란 분자의 단일 결합 부위 (예컨데, 항체)와 이의 결합 짝 (예컨데, 항원) 사이에 비공유 상호작용의 총 강도를 말한다. 다른 언급이 없는 한, 본 명세서에서 사용된 바와 같이, "결합 친화력(binding affinity)"이란 결합 쌍의 구성요소들간 (예컨데, 항체와 항원)에 1:1 상호작용을 반영한 고유한 결합 친화력을 지칭한다. 분자 X가 이의 짝 Y에 대한 친화성은 일반적으로 해리 상수 (Kd)로 나타낼 수 있다. 친화력은 본 명세서에서 설명된 것이 포함된 당분야에 공통적인 방법들에 의해 측정될 수 있다. 결합 친화도를 측정하기 위한 특이적으로 설명되고, 예시적인 구체예를 하기에 기재한다.
특정 구체예들에 있어서, 본 명세서에서 기술된 항체는 ≤　1μM, ≤　100 nM, ≤　10 nM, ≤　5 nm, ≤　4 nM, ≤　3 nM, ≤　2 nM, ≤　1 nM, ≤　0.1 nM, ≤　0.01 nM, 또는 ≤　0.001 nM (가령, 10-8 M 또는 그 미만, 가령 10-8 M 내지 10-13 M, 가령, 10-9 M 내지 10-13 M)의 해리 상수 (Kd)를 갖는다.
"친화력 발달된(affinity matured)" 항체는 변이를 소유하지 않는 부모 항체와 비교하였을 때, 하나 또는 그 이상의 초가변적 영역에 하나 또는 그 이상의 변이를 갖는 항체를 지칭하며, 이러한 변이로 인하여 항원에 대한 상기 항체의 친화력 개선을 초래한다.
용어 "항체"는 본 명세서에서 단클론 항체, 다클론 항체, 다중특이적 항체 (가령, 이중특이적 항체), 그리고 원하는 항원-결합 활성을 나타내는 항체 단편을 포함하나, 이에 국한되지 않은 다양한 항체 구조를 포괄하는 광범위한 의미로 이용된다.
"항체 단편(antibody fragment)"은 손상되지 않은(intact) 항체가 결합하는 항원에 결합하는 손상되지 않은 항체의 부분을 포함하는 손상되지 않은 항체 이외의 분자를 지칭한다. 항체 단편들의 예로는 Fv, Fab, Fab', Fab'-SH, F(ab')2; 디아바디(diabodies); 선형 항체; 단일-쇄 항체 분자들 (예로써 scFv); 그리고 항체 단편들로부터 형성된 다중특이적 항체가 포함되나, 이에 국한되지 않는다.
용어 "암(cancer)"과 "암의(cancerous)"란 조절불가능한 세포 성장/증식을 전형적으로 특징으로 하는 포유류의 생리학적 상태를 지칭하거나 또는 설명한다. "종양(tumor)"은 하나 또는 그 이상의 암에 걸린 세포를 포함한다. 암의 예로는 암종, 림프종, 모세포종, 백혈병 또는 림프구 악성을 포함하나 이에 국한되지 않는다 이러한 암의 좀더 구체적인 예는 편평 세포 암 (가령, 상피 편평 세포 암), 소(small)-세포 폐암, 비-소 세포 폐암 ("NSCLC")이 포함된 폐암, 폐의 선암종 및 폐의 편평 암종, 복막 암, 간세포의 암, 위장암이 포함된 위의 또는 위암, 췌장암, 교모세포종, 경부암, 난소 암, 간 암, 방광 암, 간종양, 유방암, 결장암, 직장암, 결장직장암, 내막 또는 자궁 암종, 침샘 암종, 신장 또는 콩팥암, 전립선암, 외음 암, 갑상선암, 간의 암종, 항문 암종, 음경 암종, 뿐만 아니라 두경부 암을 포함한다.
용어 "HER2-양성(positive)" 암은 HER2의 정상 수준보다 더 높은 수준을 갖는 암 세포들을 포함한다. HER2-양성 암의 예로는 HER2-양성 유방 암과 HER2-양성 위 암을 포함한다. 임의선택적으로, HER2-양성 암은 면역조직화학 (IHC) 점수 2+ 또는 3+을 갖거나 및/또는 제자리 혼성화 (ISH) 증폭 비율 ≥2.0을 가진다.
"초기 단계 유방암 (early stage breast cancer, EBC)"또는 "초기 유방암(early breast cancer)"이라는 용어는 유방암이나 겨드랑이 림프절 이상으로 퍼지지 않은 유방암을 의미한다. 이것은 도관 제자리 암종(carcinoma in situ) 및 유방 암의 I 기, IIA 기, IIB 기, 및 IIIA 기를 포함한다.
종양 또는 암을 언급할 때, "0기", "I 기", "II 기", "III 기", 또는 "IV 기", 및 이 분류 안에 다양한 하위-기들은 당해 분야에 공지된 전체 단계 그룹화, 또는 로마 숫자 단계결정 방법을 사용하여 종양 또는 암의 분류를 나타낸다. 암의 실질적인 기수는 일반적으로 암의 유형에 따라 달라지는데, 0 기 암은 제자리 병소이며, I 기 암은 작은 국소화된 종양이며, II 기와 III 기 암은 국소 진행된 종양으로, 국소 림프절이 관여하고, 그리고 IV 기 암은 전이 암을 나타낸다. 종양의 각 유형별 특정 단계는 숙련된 임상의에게 알려져 있다.
"전이성 유방암(metastatic breast cancer)"이란 용어는 유방암이 암세포가 원발성 부위로부터 혈관 또는 임파선에 의해 인체의 유방을 제외한 하나 또는 그 이상의 장기의 하나 이상의 다른 부위에 하나 또는 그 이상의 이차 종양을 형성하는 유방암 상태를 의미한다.
"진행성(advanced)" 암은 국소 침범 또는 전이에 의해 기원 장기 부위 밖으로 전이된 암이다. 따라서, "진행성" 암이란 국소 진행성 및 전이성 질환을 모두 포함한다.
"재발성(recurrent)" 암은 초기 치료, 이를 테면, 외과술에 대한 반응 후에 초기 부위 또는 먼 부위에서 재성장된 암이다.
"국소 재발(locally recurrent)" 암은 이전에 치료한 암과 동일한 장소에서 치료 후 다시 나타나는 암이다.
"수술 가능(operable)" 또는 "절제가능한(resectable)" 암은 원발성 장기에 국한되고, 수술 (절제)에 적합한 암이다.
"비-절제성(non-resectable)" 또는 "절제 불가능한(unresectable)"암은 수술로 제거(절제)될 수 없다.
용어 "키메라(chimeric)" 항체는 중쇄 및/또는 경쇄의 부분이 특정 원천 또는 종들로부터 유도되지만, 한편 이 중쇄 및/또는 경쇄의 나머지 부분은 상이한 원천 또는 종들로부터 유도된 항체를 지칭한다.
항체의 "클래스(class)"란 이의 중쇄가 보유하는 불변 도메인 또는 불변 영역의 유형을 지칭한다. 항체에는 5 가지 주요 부류가 있다: IgA, IgD, IgE, IgG, 및 IgM, 그리고 이들중 몇 가지는 하위클라스(이소타입), 예를 들면, IgG1, IgG2, IgG3, IgG4, IgA1, 및 IgA2로 더 세분될 수 있다. 면역글로블린의 상이한 클래스에 대응하는 중쇄 불변 도메인은 차례로 α, δ, ε, γ, 및 μ으로 불린다.
용어 "세포독성 물질(cytotoxic agent)"은 본 명세서에서 이용된 바와 같이, 세포의 기능을 저해 또는 막는 및/또는 세포 사멸 또는 파괴시키는 물질을 지칭한다. 세포독성 물질들은 방사능활성 동위원소 (가령, At211, I131, I125, Y90, Re186, Re188, Sm153, Bi212, P32, Pb212 및 Lu의 방사능활성 동위원소), 화학치료요법적 물질 또는 약물(가령, 메토트렉세이트, 아드리아마이신, 빈카 알칼로이드 (빈크리스틴, 빈블라스틴, 에토포시드), 독소루비신, 멜파란, 미토마이신 C, 클로람부칠, 다우노루비친 또는 다른 삽입(intercalating) 물질); 성장 저해성 물질들; 효소 및 이의 단편들 이를 테면 핵산분해성 효소; 항생제; 독소, 이를 테면 세균, 곰팡이, 식물 또는 동물 기원의 작은 분자 독소 또는 효소적으로 활성 독소, 및 이의 단편들 및/또는 변이체; 그리고 하기에서 논의되는 다양한 항종양 또는 항암 물질이 포함된다.
용어 "작동 기능(effector functions)"이란 항체 이소타입(isotype)에 의해 가변적인, 항체의 Fc 영역에 기인된 생물학적 활성을 지칭한다. 항체 작동 기능의 실시예로는 다음을 포함한다: C1q 결합 및 보체 의존성 세포독성 (CDC); Fc 수용체 결합; 항체-의존성 세포-매개된 세포독성 (ADCC); 식작용; 세포 표면 수용체들 (예로써 B 세포 수용체)의 하향 조절; 그리고 B 세포 활성화.
물질, 가령, 약학 제형의 "유효량(effective amount)"이란 필요한 치료 또는 예방 결과를 달성하는데 필요한 투여량 및 필요한 시간 동안 효과적인 양을 지칭한다. 유효량의 약물은 암 세포들의 수를 감소; 종양 크기의 감소; 암 세포가 주변 장기로의 침윤 저해(즉, 어느 정도 지연 및 선호적으로 중단); 종양 전이의 저해 (즉, 어느 정도 지연 및 선호적으로 중단); 종양 성장을 어느 정도 저해; 및/또는 암과 연합된 하나 또는 그 이상의 증상을 어느 정도 완화시키는데 있어서 효과를 보유할 수 있다. 약물이 기존의 암 세포를 증식 및/또는 죽이는 것을 막을 수 있는 정도일 경우, 이들은 세포 증식 억제 및/또는 세포 독성이라고 할 수 있다. 상기 유효량은 무진행-생존 (예: Response Evaluation Criteria for Solid Tumors, RECIST 또는 CA-125 변화에 대한 반응 평가 기준으로 측정)을 연장시킬 수 있고, 객관적 반응 (부분 반응, 홍보 또는 완전 반응, CR 포함), 전체 생존 기간의 증가 및/또는 암의 하나 또는 그 이상의 증상을 호전시킬 수 있다 (예: FOSI에서 평가).
용어 "에피토프(epitope)"는 항체가 결합하는 항원 분자상의 특정 부위를 지칭한다.
"에피토프 4D5" 또는 "4D5 에피토프" 또는 "4D5"는 항체 4D5 (ATCC CRL 10463) 및 트라스투주마브(trastuzumab)가 결합하는 HER2의 세포외 도메인에 있는 영역이다. 이 에피토프는 HER2의 막경유 도메인에 근접하고, HER2의 도메인 IV 안에 있다. 4D5 에피토프에 결합하는 항체를 스크리닝하기 위하여, Antibodies, A Laboratory Manual, Cold Spring Harbor Laboratory, Ed Harlow and David Lane (1988)에서 설명된 것과 같은 일상적인 교차 차단 분석(cross-blocking assay)을 수행할 수 있다. 대안으로, 상기 항체가 HER2의 4D5 에피토프, (가령 HER2 (서열 번호: 39)의 대락 잔기 550에서 대략 잔기 610(포함) 영역의 임의의 하나 또는 그 이상의 잔기에 결합하는 지를 평가하기 위하여 에피토프 매핑(mapping)이 실행될 수 있다.
"에피토프 2C4" 또는 "2C4 에피토프"는 항체 2C4가 결합하는 HER2의 세포외 도메인에 있는 영역이다. 2C4 에피토프에 결합하는 항체를 스크리닝하기 위하여, Antibodies, A Laboratory Manual, Cold Spring Harbor Laboratory, Ed Harlow and David Lane (1988)에서 설명된 것과 같은 일상적인 교차 차단 분석(cross-blocking 분석)을 수행할 수 있다. 대안으로, 상기 항체가 HER2의 2C4 에피토프에 결합하는 지를 평가하기 위하여 에피토프 매핑이 실행될 수 있다. 에피토프 2C4는 HER2의 세포외 도메인 안에 도메인 II의 잔기들을 포함한다. 2C4 항체와 페르투주마브는 도메인 I, II 및 III의 이음부(junction)에서 HER2의 세포외 도메인에 결합한다(Franklin et al. Cancer Cell5:317-328 (2004)).
항-HER2 뮤린 항체 7C2는 HER2의 도메인 I에서 에피토프에 결합한다. 가령, PCT 공개 번호. WO 98/17797 참고. 이 에피토프는 HER2의 도메인 IV에 결합하는 트라스투주마브가 결합된 에피토프와 상이하고, HER2의 도메인 II에 결합하는 페르투주마브가 결합된 에티포트와 상이하다. 도메인 IV에 결합함으로써, 트라스투주마브는 리간드-독립적 HER2-HER3 복합체를 파괴하고, 이로 인하여 하류 신호생성(signaling) (가령 PI3K/AKT)이 억제된다. 대조적으로, 도메인 II에 결합하는 페르투주마브는 다른 HER 패밀리 구성원 (가령, HER3, HER1 또는 HER4)과의 리간드-구동된 HER2 상호작용을 방해하고, 따라서 하류 신호 형질도입을 방지한다. MAb 7C2의 도메인 I에 결합이 차례로 트라스투주마브 또는 페르투주마브의 도메인 IV 및 II의 결합을 간섭하지는 않으며, 이로 인하여 MAb 7C2 ADC와 트라스투주마브, 트라스투주마브 엠탄신 (T-DM-1), 및/또는 페르투주마브과의 복합 가능성을 제시한다. 뮤린 항체 7C2, 7C2.B9는 PCT 공개 번호. WO 98/17797에 기술된다. 항-HER2 7C2 인간화된 항체는 WO2016/040723A1에 공개된다.
본 명세서에서 용어 "Fc 영역(region)"은 불변 영역의 최소한 일부분이 포함된 면역글로블린 중쇄의 C-말단 영역을 특정하는데 이용된다. 상기 용어는 고유한 서열 Fc 영역들 및 변이체 Fc 영역들을 포함한다. 한 구체예에서, 인간 IgG 중쇄 Fc 영역은 중쇄의 Cys226, 또는 Pro230으로부터 카르복실-말단까지 이어진다. 그러나, Fc 영역의 C-말단 리신 (Lys447)은 존재할 수도 또는 존재하지 않을 수도 있다. 명시적으로 다른 언급이 없는 한, Fc 영역 또는 불변 영역에서 아미노산 잔기의 번호매김은 EU 번호매김 체계, Kabat et al, Sequences of Proteins of Immunological Interest, 5th Ed. PublicHealth Service, National Institutes of Health, Bethesda, MD, 1991에서 설명된 소위 EU 색인에 따른다.
"틀구조(framework)" 또는 "FR"은 초가변 영역 (HVR) 잔기이외의 가변 도메인 잔기를 지칭한다. 가변 도메인의 FR은 일반적으로 4개의 FR 도메인들로 구성된다: FR1, FR2, FR3, 및 FR4. 따라서, HVR 및 FR 서열들은 일반적으로 VH (또는 VL)에서 다음의 서열로 나타난다: FR1-H1(L1)-FR2-H2(L2)-FR3-H3(L3)-FR4.
용어 "전장(full length) 항체", "무손상(intact) 항체", 및 "전체(whole) 항체"는 본 명세서에서 호환 이용되는데, 고유한 항체 구조와 실질적으로 유사한 구조를 갖는 또는 본 명세서에서 정의된 Fc 영역을 함유하는 중쇄를 갖는 항체를 지칭한다.
용어 "숙주 세포(host cell)", "숙주 세포 계통(cell line)", 및 "숙주 세포 배양물(culture)"은 호환 이용되며, 외생 핵산이 도입된 세포 및 이러한 세포들의 후대가 포함된 세포들을 지칭한다. 숙주 세포들은 "형질변환체(transformants)"와 "형질변환된(transformed) 세포들"이 포함되는데, 이들은 계대의 수와 무관하게, 1차 형질변환된 세포와 이로부터 유도된 후대를 포함한다. 후대는 핵산 함량에 있어서 부모계 세포와 완벽하게 동일하지는 않고, 돌연변이를 포함할 수 있다. 원래 형질변환된 세포에 대하여 선별된 또는 선택된 것과 동일한 기능 또는 생물학적 활성을 보유한 돌연변이 후대가 본 명세서에 포함된다.
"인간 항체(human antibody)"는 인간 또는 인간 세포에 의해 생산된 항체에 대응하는 또는 인간 항체 레퍼토리를 이용하는 또는 다른 인간 항체-인코딩 서열을 이용하는 비-인간 원천으로부터 유도된 항체에 대응하는 아미노산 서열을 보유하는 항체다. 인간 항체의 정의는 비-인간 항원-결합 잔기를 포함하는 인간화된 항체를 특이적으로 배제한다.
"인간 콘센수스 틀구조(human consensus framework)"는 인간 면역글로블린 VL 또는 VH 틀구조 서열의 선별에서 가장 빈번하게 발생하는 아미노산 잔기를 제시하는 틀구조다. 일반적으로, 인간 면역글로블린 VL 또는 VH 서열의 선별은 가변적 도메인 서열들의 하위집단으로부터 한다. 일반적으로, 서열의 하위집단은 Kabat et al., Sequences of Proteins of Immunological Interest, Fifth Edition, NIH 공개 91-3242, Bethesda MD (1991), vols. 1-3와 같은 하위집단이다. 한 구체예에서, 상기 VL의 경우, 상기 하위집단은 Kabat et al., 상기와 같은 하위집단 카파 I이다. 한 구체예에서, 상기 VH의 경우, 상기 하위집단은 Kabat et al., 상기와 같은 하위집단 III 이다.
"인간화된(humanized)" 항체는 비-humHVRs의 아미노산 잔기들과 인간 FRs의 아미노산 잔기들을 포함하는 키메라 항체를 말한다. 특정 구체예들에 있어서, 인간화된 항체는 실질적으로 최소한 하나의, 그리고 전형적으로 2개의 가변 도메인을 모두 포함하는데, 이때 HVRs (가령, CDRs)의 모든 또는 실질적으로 모든 것은 비-인간 항체에 대응하며, FRs의 모든 또는 실질적으로 모든 것은 인간 항체의 것에 대응한다. 인간화된 항체는 임의선택적으로 인간 항체로부터 유도된 항체 불변 영역의 최소한 일부를 포함할 수 있다. 항체의 "인간화된 형태(humanized form)", 가령, 비-인간 항체는 인간화를 겪은 항체를 말한다.
본 명세서에서 이용된 바와 같이, 용어 "초가변 영역(hypervariable region)" 또는 "HVR"은 서열에서 초가변적이고, 및/또는 구조적으로 특정된 루프("초가변 루프(hypervariable loops)")를 형성하는 항체 가변 도메인의 영역을 지칭한다. 일반적으로, 고유한 4개-쇄로된 항체는 6개의 HVRs; VH에 3개 (H1, H2, H3), 그리고 VL에 3개 (L1, L2, L3)를 포함한다. HVRs는 일반적으로 초가변 루프 및/또는 "상보성 결정 영역들(complementarity determining regions)" (CDRs)의 아미노산 잔기를 포함하는데, 후자는 최대 서열 가변성이며 및/또는 항원 인지에 관련된다. 예시적인 초가변적 루프는 아미노산 잔기 26-32 (L1), 50-52 (L2), 91-96 (L3), 26-32 (H1), 53-55 (H2), 및 96-101 (H3)에서 발생된다 (Chothia and Lesk, J. Mol. Biol. 196:901-917 (1987).) 예시적인 CDRs (CDR-L1, CDR-L2, CDR-L3, CDR-H1, CDR-H2, 및 CDR-H3)는 L1의 아미노산 잔기 24-34, L2의 아미노산 잔기 50-56, L3의 아미노산 잔기 89-97, H1의 아미노산 잔기 31-35B, H2의 아미노산 잔기 50-65, 그리고 H3의 아미노산 잔기 95-102에서 발생된다. (Kabat et al., Sequences of Proteins of Immunological Interest, 5th Ed. PublicHealth Service, National Institutes of Health, Bethesda, MD (1991).) VH에서 CDR1을 제외하고, CDRs는 초가변 루프를 형성하는 아미노산 잔기를 일반적으로 포함한다. CDR은 항원과 접촉하는 잔기인 "특이성 결정 잔기(specificity determining residues)" 또는 "SDRs"도 포함한다. SDR은 약어로 나타낸-CDR 또는 a-CDR이라고 불리는 CDR의 영역 내에 포함된다. 예시적인 a-CDRs (a-CDR-L1, a-CDR-L2, a-CDR-L3, a-CDR-H1, a-CDR-H2, 및 a-CDR-H3)는 L1의 아미노산 잔기 31-34, L2의 아미노산 잔기 50-55, L3의 아미노산 잔기 89-96, H1의 아미노산 잔기 31-35B, H2의 아미노산 잔기 50-58, 및 H3의 아미노산 잔기 95-102에서 발생된다. (Almagro and Fransson, Front. Biosci. 13:1619-1633 (2008) 참고.) 다른 언급이 없는 한, HVR 잔기와 가변적 도메인 (예로써, FR 잔기)에 있는 다른 잔기들은 Kabat et al., 상기에 따라 번호매김된다.
"면역콘쥬게이트(immunoconjugate)"는 세포독성 물질을 포함하나, 이에 국한되지 않는 하나 또는 그 이상의 이질성 분자(들)에 접합된 항체다.
"환자(patient)" 또는 "개체(individual)" 또는 "대상(subject)"은 포유류다. 포유류는 길들여진 동물 (예를 들면, 소, 양, 고양이, 개 및 말), 영장류 (예를 들면, 인간 및 비-인간 영장류, 이를 테면 원숭이), 토끼, 그리고 설치류 (예를 들면, 마우스 및 렛(rats))을 포함하나, 이에 국한되지 않는다. 특정 구체예들에서, 환자, 개체, 또는 대상은 인간이다. 일부 구체예들에서, 상기 환자는 "암 환자", 즉 암, 특히 위암 또는 유방암의 하나 이상의 증상을 앓고 있거나 또는 이에 걸릴 위험이 있는 환자일 수 있다.
"환자 집단"은 암 환자군을 지칭한다. 이러한 집단은 약물의 통계적으로 유의미한 효능 및/또는 안전성을 입증하는 데 사용될 수 있다.
"재발된(relapsed)" 환자는 치료 후 암의 징후 또는 증상이 있는 환자다. 임의선택적으로, 상기 환자는 보완 또는 신보완 요법 후 재발되었다.
"HER 발현, 증폭, 또는 활성화를 나타내는" 암 또는 생물학적 시료는 진단용 테스트에서 HER 수용체를 발현시키고(과다발현포함), 증폭된 HER 유전자를 갖고, 및/또는 그렇지 않으면 HER 수용체의 활성화 또는 인산화를 실증하는 것들이다.
용어 "신보완 요법(Neoadjuvant therapy)" 또는 수술전 치료(preoperative therapy)"는 수술 전 제공되는 요법을 의미한다. 신보완 요법의 목표는 즉각적인 전신 치료를 제공하는 것으로, 잠재적으로 표준 외과 수술 후 전신 요법을 받을 경우 증식될 수 있는 미세전이를 근절할 수 있다. 또한 신보완 요법은 종양의 크기를 줄여서, 초기에 절제 불가능한 종양을 완전히 절제하거나 또는 장기 및 기능을 보존할 수 있다. 또한, 신보완 요법은 약물 효과의 생체 내 평가를 허용하며, 이는 후속 치료의 선택을 안내할 수 있다.
"보조 치료 (adjuvant therapy)"는 질병의 재발 위험을 줄이기 위해 잔여 질환의 증거가 발견되지 않도록, 완결 수술 후 제공되는 치료를 의미한다. 보조 치료의 목표는 암의 재발을 방지하고, 따라서 암 관련 사망의 가능성을 줄이는 것이다. 본 발명에서 보조 치료는 명시적으로 신보완 요법을 배제한다.
의료기관에서 사용되는 용어로 "완결 수술(definitive surgery)"이 사용된다. 완결 수술은 예를 들어 외과적으로 또는 다른 방법으로 종양을 제거하거나 또는 절제하는 과정을 포함하며, 모든 육안으로 보이는 종양을 제거하거나 절제하는 결과를 포함한다. 완결 수술은 예를 들어, 종양의 완전 절제 또는 완치적 절제 또는 완전한 전체 절제(gross resection)를 포함한다. 완결 수술은 하나 이상의 단계에서 발생하는 절차를 포함하며, 예를 들어, 하나 또는 그 이상의 수술 또는 다른 절차가 종양의 절제 전에 수행되는 다-단계 수술 절차를 포함한다. 완결 수술은 관련된 장기, 기관 및 조직의 일부 뿐만 아니라 림프절, 기관의 일부 또는 조직과 같은 주변 장기를 포함하여 종양을 제거하거나 절제하는 절차를 포함한다. 비록 종양 세포가 감지되지 않더라도, 남아 있을 수 있기 때문에 제거는 완벽할 수 없다.
"생존"은 살아남은 환자를 말하며, 질병없는 생존 (DFS), 무-진행 생존 (PFS) 및 전반적 생존 (OS)을 포함한다. 생존은 Kaplan-Meier 방법으로 추정할 수 있으며, 생존율의 차이는 층화된 로그-등급 테스트(stratified log-rank test)를 사용하여 예측될 수 있다.
"무-진행 생존 (Progression-Free Survival,PFS)"은 치료 첫 날부터 기록된 질병 진행 (격리된 CNS 진행 포함) 또는 연구 동안 임의의 원인(어느 것이 먼저 발생되던 간에)에 의한 사망에 이르기까지의 시간이다.
"무-질환 생존 (Disease Free survival,DFS)"이란 치료 시작 또는 초기 진단으로부터 약 1 년, 약 2 년, 약 3 년, 약 4 년, 약 5 년, 약 10년과 같은 특정된 기간 동안 암의 재발없이 살아남은 환자를 의미한다. 본 발명의 한 측면에서, DFS는 계획된 치료 원리(intent-to-treat principle)리에 따라 분석되고, 즉 환자는 그들에게 할당된 치료에 기초하여 평가된다. DFS 분석에 사용된 이벤트에는 암의 국소 재발, 지역적 및 원격 재발, 이차 암 발생 및 이전 사건(가령, 유방암의 재발 또는 2차 원발성 암)이 없는 환자의 임의의 원인으로 인한 사망이 포함될 수 있다.
"전반적인 생존(overall survival)"이란 치료 시작 또는 초기 진단으로부터 약 1 년, 약 2 년, 약 3 년, 약 4 년, 약 5 년, 약 10년과 같은 특정된 기간 동안 살아남은 환자를 의미한다. 본 발명의 기초가 되는 연구에서 생존 분석을 위해 사용된 사건은 임의의 원인으로 인한 사망이었다.
"생존 연장(extending survival)"이란 치료받지 않은 환자에 비해 치료된 환자에서, 또는 대조군 치료 프로토콜과 관련하여 DFS 및/또는 OS를 증가시키는 것을 의미한다. 생존은 치료 개시 또는 최초 진단 후 적어도 약 6 개월, 적어도 약 1 년, 적어도 약 2 년, 적어도 약 3 년, 적어도 약 4 년, 적어도 약 5 년, 적어도 약 10 년, 등등 동안 모니터된다.
"단일 요법(monotherapy)"은 치료 기간 동안 암 또는 종양의 치료를 위한 단일 치료제만을 포함하는 치료 요법을 의미한다.
"유지 요법(maintenance therapy)"은 질병 재발 또는 진행의 가능성을 줄이기 위해 주어진 치료 요법을 의미한다. 유지 요법은 대상의 수명까지의 연장된 기간을 포함하여 임의의 길이의 기간 동안 제공될 수 있다. 유지 요법은 초기 치료 후에 또는 초기 또는 추가 요법과 병용으로 제공될 수 있다. 유지 요법에 사용된 용량은 다양할 수 있으며, 다른 유형의 요법에 사용되는 용량과 비교하여 감소된 용량을 포함할 수 있다.
"단리된(isolated) 항체"는 이의 자연 환경의 성분으로부터 분리된 항체다. 일부 구체예들에 있어서, 항체는 예를 들면, 전기영동의 (예로써, SDS-페이지, 등전초점조절 (IEF), 모세관전기이동) 또는 크로마토그래프 (예로써, 이온 교환 또는 역상 HPLC)에 의해 측정되었을 때 95% 또는 99% 순도 이상으로 정제된다. 항체 순도의 평가 방법에 대한 검토는 예로써, Flatman et al., J. Chromatogr. B 848:79-87 (2007)를 참고한다.
"단리된 핵산"은 이의 자연 환경의 성분으로부터 분리된 핵산 분자를 지칭한다. 단리된 핵산은 핵산 분자를 보통 포함하는 세포 안에 있는 핵산 분자를 포함하지만, 상기 핵산 분자는 자연 염색체 위치와는 상이한 염색체 위치에 존재하거나 또는 염색체외부에 존재한다.
"항체를 인코드하는 단리된 핵산"은 항체 중쇄 및 경쇄 (또는 이의 단편들)을 인코드하는 하나 또는 그 이상의 핵산 분자들을 지칭하며, 단일 벡터 또는 별도의 벡터 안에 있는 이러한 핵산 분자(들), 그리고 숙주 세포내 하나 또는 그 이상의 위치에 존재하는 핵산 분자(들)이 포함된다.
본 명세서에서 사용된 바와 같이, "HER2"는 세포 안에서 HER2 전구물질 단백질로부터 프로세싱된 임의의 고유한 성숙한 HER2를 지칭한다. 상기 용어는 다른 언급이 없는 한, 포유류, 이를 테면 영장류 (예를 들면, 인간 및 시노몰구스 원숭이) 및 설치류 (예를 들면, 마우스 및 렛)가 포함된 임의의 척추동물 원천으로부터 HER2를 포함한다. 상기 용어는 HER2의 자연 발생 변이체, 가령, 접합(splice) 변이체 또는 대립유전자 변이체를 또한 포함한다. 신호 서열 (신호 서열, 아미노산 1-22과 함께)과 함께, 예시적인 인간 HER2 전구물질 단백질의 아미노산 서열은 서열 번호: 64에 나타낸다. 예시적인 성숙한 인간 HER2의 아미노산 서열은 서열 번호: 64의 아미노산 23-1255이다.
용어 "HER2-양성 세포"는 이의 표면 상에 HER2를 발현시키는 세포를 말한다.
용어 "단일클론 항체(monoclonal antibody)"는 본 명세서에서 이용된 바와 같이 실질적으로 동질성 항체의 집단으로부터 수득한 항체, 가령, 이러한 집단을 포함하는 개별 항체는 동일하거나 및/또는 동일한 에피토프에 결합하지만, 예로써, 자연 발생적 돌연변이를 포함하는 또는 단일클론 항체 조제물 생산 동안 발생되는 가능한 변이체 항체의 경우는 제외되며, 이러한 변이체들은 일반적으로 소량 존재한다. 상이한 결정인자 (에피토프)에 대항하는 상이한 항체를 일반적으로 함유하는 다중클론성 항체 조제물과 대조적으로, 단일클론 항체 조제물의 각 단일클론 항체는 항원에 있는 단일 결정인자를 지향한다. 따라서, 변경인자 "단일클론"은 상기 항체의 특징은 실질적으로 동질성 집단의 항체로부터 획득되나, 이 항체 생산에 임의의 특정 방법이 요구되지 않는 것으로 간주되는 것을 나타낸다. 예를 들면, 본 발명에 따라 이용되는 단일클론 항체는 하이브리도마 방법, 재조합 DNA 방법들, 파아지-디스플레이 방법들, 그리고 상기 인간 면역글로블린 좌(loci)의 전부 또는 일부를 포함하는 유전자삽입 동물을 이용하는 방법들을 포함하나, 이에 국한되지 않는 다양한 기술에 의해 만들어질 수 있으며, 단일클론 항체를 만드는 이러한 방법들과 다른 예시적인 방법들은 본 명세서에서 설명된다.
"네이키드(naked) 항체"는 이질성 모이어티 (예로써, 세포독성 모이어티) 또는 방사능라벨에 접합되지 않은 항체를 말한다. 상기 네이키드 항체는 약학 제형에 존재할 수 있다.
"고유 항체(Native antibodies)"는 다양한 구조를 가진 자연 발생적 면역글로블린 분자들을 지칭한다. 예를 들면, 고유한 IgG 항체는 이종사량체 당단백질로써, 약 150,000 달톤이며, 2개의 동일한 경쇄와 2개의 동일한 중쇄를 포함하며, 이들은 이황화 결합에 의해 연결되어 있다. N-말단에서 C-말단으로, 각 중쇄는 가변적 영역 (VH), -이는 가변적 중쇄 도메인 또는 중쇄 가변적 도메인으로 불리며-, 이어서 3개의 불변 도메인 (CH1, CH2, 및 CH3)이 이어진다. 유사하게, N-말단에서 C-말단으로, 각 경쇄는 가변적 영역 (VL), -가변적 경쇄 도메인 또는 경쇄 가변적 도메인으로도 불림-, 불변 경쇄 (CL) 도메인이 이어진다. 항체의 경쇄는 이의 불변 도메인의 아미노산 서열에 근거하여 2가지 유형 소위 카파 (κ) 및 람다 (λ)중 하나로 지정될 수 있다.
"바이알(vial)"은 액체 또는 동결 건조된 제제를 보관하기에 적합한 용기를 말한다. 한 구체예에서, 바이알은 일회용 바이알, 마개가 달린 20cc 일회용 바이알이다.
용어 "포장 삽입물(package insert)"은 이러한 치료요법적 산물의 사용과 관련된 지시, 용도, 투여량, 투여, 복합 요법, 금기 및/또는 경고에 대한 정보가 포함된 치료요법적 산물의 시판 포장에 관례적으로 포함되는 지침을 칭할 때 이용된다.
참고 폴리펩티드 서열에 대하여 "아미노산 서열 동일성 백분율(percent amino acid sequence identity(%))"은 참고 서열 및 후보 서열들을 배열하고, 필요에 따라 최대 백분율의 서열 동일성을 획득하기 위하여 갭을 도입한 후, 참고 폴리펩티드 서열에 있는 아미노산 잔기와 동일한 후보 서열에 있는 아미노산 잔기의 백분율로 정의되며, 임의의 보존 치환은 서열 동일성 부분으로 간주되지 않는다. 아미노산 서열 동일성 백분율을 결정하기 위한 목적으로 배열은 당업자의 기술 분야에 있는 다양한 방법을 통하여 이루어질 수 있는데, 예를 들면, 공개 이용가능한 컴퓨터 소프트웨어, 이를 테면 BLAST, BLAST-2, ALIGN 또는 Megalign (DNASTAR) 소프트웨어를 이용하여 이루어질 수 있다. 당업자는 비교되는 서열의 전장에 걸쳐 최대 배열을 획득하기 위한 임의의 알고리즘을 포함하는, 서열 배열을 위한 적절한 매개변수를 결정할 수 있다. 그러나, 본 명세서의 목적을 위하여, 아미노산 서열 동일성 % 값은 서열 비교 컴퓨터 프로그램 ALIGN-2을 이용하여 생성된다. ALIGN-2 서열 비교 컴퓨터 프로그램은 Genentech, Inc.의 것이며, 이의 원천 코드는 U.S. Copyright Office, Washington D.C., 20559에 사용자 문서에 정리되어 있으며, 이것은 U.S. 저작권 등록 번호 TXU510087로 등록되어 있다. ALIGN-2 프로그램은 Genentech, Inc., South San Francisco, California에서 공개적으로 이용가능하며, 또는 원천 코드로부터 만들 수 있다. ALIGN-2 프로그램은 디지털 UNIX V4.0D를 포함하여 UNIX 운영 체제에서 사용하도록 컴파일해야 한다. 모든 서열 비교 매개변수는 ALIGN-2 프로그램에 의해 설정되며 가변적이지 않다.
ALIGN-2가 아미노산 서열 비교를 위하여 이용되는 상황에서, 주어진 아미노산 서열 A과 주어진 아미노산 서열 B의 아미노산 서열 동일성 % (이는 주어진 아미노산 서열 B과 또는 이에 대항하여 아미노산 서열 동일성 특정 %를 가진 또는 포함하는 주어진 아미노산 서열 A로 말을 바꿀 수 있다)는 다음과 같이 산출된다:
100 x 분획 X/Y
이때 X는 A와 B의 프로그램 배열에서 서열 배열 프로그램 ALIGN-2에 의해 동일하게 필적되는 것으로 기록되는 아미노산 잔기의 수를 말하며, Y는 B의 전체 아미노산 잔기 수가 된다. 아미노산 서열 A의 길이는 아미노산 서열 B의 길이와 동일하지 않는 경우, B에 대한 A의 아미노산 서열 동일성 %는 A에 대한 B의 아미노산 서열 동일성 %와 대등하지 않을 것으로 인지된다. 다른 특정 언급이 없는 한, 본 명세서에서 이용된 모든 아미노산 서열 동일성 % 값은 ALIGN-2 컴퓨터 프로그램을 이용하여 바로 직전 단락에서 설명된 바와 같이 획득된다.
용어 "약학 제형(pharmaceutical formulation)"이란 이 조성물 안에 포함된 활성 성분의 생물학적 활성이 효과가 있도록 하기 위한 형태의 조제물을 지칭하며, 제형이 투여되는 대상에게 수용불가능한 독성을 주는 추가 성분들은 포함하지 않는다.
"약학적으로 수용가능한 운반체(pharmaceutically acceptable carrier)"란 대상에게 비독성이며, 활성 성분 이외의 약학 제제에 포함된 성분을 지칭한다. 약학적으로 수용가능한 운반체는 완충액, 부형제, 안정화제, 또는 보존제를 포함하나, 이에 국한되지 않는다.
본 명세서에서 이용된 바와 같이, "치료(treatment)" (및 이의 문법적 변이, 이를 테면 "치료하다(treat)" 또는 "치료하는(treating)")라는 것은 치료될 개인에서 자연 과정을 변경시키려는 시도로 임상적 중재과정을 말하며, 그리고 예방 또는 임상적 병리학의 과정 동안 실행될 수 있다. 치료의 바람직한 효과에는 질환의 발생 또는 재발 방지, 증상의 완화, 상기 질환의 임의의 직접 또는 간접적인 병리학적 결과의 감소, 전이 방지, 질환 진행 속도 감소, 상기 질환 상태의 개선 또는 경감, 그리고 차도 또는 개선된 예후가 포함되나, 이에 국한되지 않는다. 일부 구체예들에 있어서, 본 발명의 항체는 질환 또는 장애의 발달을 지연 또는 질환의 진행을 느리게 하는데 이용된다.
"공동-투여(co-administering)"란 두 가지 또는 그 이상의 약물을 연속적으로 주입하는 것이 아니라 동일한 투여 중에 두 가지 (또는 그 이상의) 약물을 정맥 내 투여하는 것을 의미한다. 일반적으로, 이것은 병합 투여 전, 두 가지 (또는 그 이상) 약물을 동일한 IV 주머니에 이들을 혼합하는 것을 포함할 것이다.
하나 또는 그 이상의 다른 약물과 "동시에(concurrently)" 투여되는 약물은 동일한 치료 주기 동안 하나 이상의 다른 약물과 동일한 치료 일에, 그리고 선택적으로 하나 이상의 다른 약물과 동일한 시점에 투여된다. 예를 들어, 매 3 주마다 암 치료를 받는 경우, 동시에 투여되는 약물은 각각 3-주 주기의 첫날에 투여된다.
"화학치료요법적 물질(chemotherapeutic agent)"은 암 치료에 유용한 화학적 화합물을 말한다. 화학치료요법적 물질의 예로는 알킬화 물질 이를 테면 티오테파 및 사이클로포스파미드 (CYTOXAN®); 알킬 술포네이트 이를 테면 부술판, 임프로술판 및 피포술판; 아지르딘 이를 테면 벤조도파, 카르보쿼온, 메투레도파, 및 우레도파; 알트레타민, 트리에틸렌멜라민, 트리에틸렌포스포라미드, 트리에틸렌티오포스파라미드 그리고 트리메틸로로멜라민이 포함된 에틸렌이민 및 메틸아멜라민; 아세토게닌 (구체적으로 불라타신 및 불라타시논); 델타-9-테트라히드로카나비놀 (드로나비놀, MARINOL®); 베타-라파촌; 라파촐; 콜치신; 베툴린산; 캄포토테신 (합성 유사체 토포테칸(HYCAMTIN®) 포함), CPT-11 (이리노테칸, CAMPTOSAR®), 아세틸캄포테신, 스코포렉틴, 그리고 9-아미노캄포테신); 비로스타틴; 칼리스태틴; CC-1065 (이의 아도젤레신, 카르젤레신 및비젤레신 합성 유사체들을 포함); 포도필로톡신; 포도필린산; 테니포시드; 크립토피신 (특히 크립토피신 1 및 크립토피신 8); 돌라스태틴; 듀오카르마이신 (합성 유사체들, KW-2189 및 CB1-TM1을 포함); 에루테로빈; 판크라티스태틴; 사르코딕틴; 스폰기스태틴; 질소 머스타드 이를 테면 클로람부칠, 클로로나파진, 클로로포스파미드, 에스트라무스틴, 이포스파미드, 메크로에타민, 메크로에타민 옥시드 하이드로클로리드, 멜파란, 노벰비친, 페네스테린, 프레디니무스틴, 트로포스파미드, 우라실 무스타드, 니트로조우레아 이를 테면 카르무스틴, 클로로조토신, 포테무스틴, 로무스틴, 니무스틴, 그리고 라니무스틴; 항생제 이를 테면 에네디네 항생제 (가령, 칼케아미신, 구체적으로 칼케아미신 감마1I 그리고 칼케아미신 오메가I1 (가령, Nicolaou et al., Angew. Chem Intl. Ed. Engl., 33: 183-186 (1994)); CDP323, 경구 알파-4 인테그린 저해제; 디네미신 A를 포함한 디네미신; 비스포스포네이트, 이를 테면 클로드로네이트; 에스페라미신; 뿐만 아니라 네오카르지노스태틴 발색단 및 관련된 색단백질 에네디네 항생제 발색단), 아클라치노미신, 악티노마이신, 아우트라마이신, 아자세린, 블레오마이신, 칵티노마이신, 카라비친, 카르미노마이신, 카르지노필린, 크로모미치니스, 닥티노마이신, 다우노루비친, 데토루비친, 6-디아조-5-옥소-L-노르류신, ADRIAMYCIN®. 독소루비신 (몰포리노-독소루비신, 시아노몰포리노-독소루비신, 2-피롤리노-독소루비신, 독소루비신 HCl 리포좀 주사(DOXIL®), 리포좀성 독소루비신 TLC D-99 (MYOCET®), 페길화된 리포좀성 독소루비신 (CAELYX®), 그리고 데옥시독소루비신을 포함), 에피루비친, 에소루비친, 이다루비친, 마르셀로마이신, 미토마이신, 이를 테면 미토마이신 C, 미코페놀산, 노갈라마이신, 올리보마이신, 페플로마이신, 포르피로마이신, 퓨로마이신, 퀘라마이신, 로도루비친, 스테렙토니그린, 스트렙토조신, 투베르치딘, 우베니멕스, 지노스태틴, 조루비친; 항-대사물질 이를 테면 메토트렉세이트, 겜시타빈 (GEMZAR®), 테가푸르 (UFTORAL®), 카페시타빈 (XELODA®), 에포틸론, 그리고 5-플루오르우라실 (5-FU); 콤브레타스타틴; 엽산 유사체들, 이를 테면 데노프테린, 메토트렉세이트, 프테로프테린, 트리메트렉세이트; 퓨린 유사체들, 이를 테면 플루다라빈, 6-멀캅토퓨린, 티아미프린, 티오구아닌; 피리미딘 유사체들, 이를 테면 안씨타빈, 아자씨티딘, 6-아자우리딘, 카르모퓨르, 씨타라빈, 디데옥시우리딘, 독시플루리딘, 에노씨타빈, 플옥스우리딘; 안드로겐, 이를 테면 카루스테론, 드로모스타노론 프로피오네이트, 에피티오스타놀, 메피티오스탄, 테스토락톤; 항-아드레날, 이를 테면 아미노글루테티미드, 미토탄, 트리로스탄; 엽산 보충물, 이를 테면 프로리닌산; 아세갈라톤; 알도포스파미드 글리코시드; 아미노레불린산; 에닐우라실; 암사크린; 베스트라부칠; 비산트렌; 에다트라세이트; 데포파민; 데메콜신; 디아지퀘온; 엘포르미틴; 에립티니움 아세테이트; 에포틸온; 에토글루씨드; 갈리움 니트레이트; 히드록시우레아; 렌티난; 로니다닌; 메이탄시노이드, 이를 테면 메이탄신 및 안사미토신; 미토구아존; 미토산트론; 모피단몰; 니트라에린; 펜토스태틴; 페나메트; 피라루비친; 로스옥산트론; 2-에틸히드라지드; 프로카르바진; PSK® 폴리사카라이드 복합체 (JHS Natural Products, Eugene, OR); 라조옥산; 리조신; 시조피란; 스피로게르마니움; 테누아조신; 트리아지쿼온; 2,2',2'-트리클로로트리에틸아민; ; 트리코테쎄네스 (구체적으로 T-2 톡신, 베라쿠린 A, 로리딘 A 및 앙귀딘); 우레탄; 빈데신(ELDISINE®, FILDESIN®); 다카르바진; 만노무스틴; 미토브로니톨; 미토락톨; 피포브로만; 가시토신; 아라비노시드 ("Ara-C"); 티오테파; 탁소이드, 예로써, 파클리탁셀 (TAXOL®), 파클리탁셀의 알부민-조작된 나노입자 제형 (ABRAXANETM), 및 도세탁살 (TAXOTERE®); 클로란부칠; 6-티오구아닌; 멀캅토퓨린; 메토트렉세이트; 백금 물질, 이를 테면 시스플라틴, 옥살리플라틴 (예로써, ELOXATIN®), 그리고 카르보플라틴; 튜블린 중합화에 의한 미소관 형성을 방해하는 빈카, 빈블라스틴 (VELBAN®), 빈크리스틴 (ONCOVIN®), 빈데신 (ELDISINE®, FILDESIN®), 그리고 비노렐빈 (NAVELBINE®) 포함; 에토포시드 (VP-16); 이포스파미드; 미토산트론; 류코보린; 노반트론; 에다트렉세이트; 다우노마이신; 아미노프테린; 이반드로네이트; 토포이소메라제 저해제 RFS 2000; 디플로로으메틸오르니틴 (DMFO); 레티노이드, 이를 테면 베사로텐 (TARGRETIN®)을 포함하는 레티논산; 비스포스포네이트, 이를 테면 클로드로네이트 (예를 들면, BONEFOS® 또는 OSTAC®), 에티드로네이트 (DIDROCAL®), NE-58095, 조레드론산/조레드로네이트 (ZOMETA®), 알렌드로네이트 (FOSAMAX®), 파미드로네이트 (ARE디아®), 티루드로네이트 (SKELID®), 또는 리세드로네이트 (ACTONEL®); 트록사씨타빈 (1,3-디옥솔란 뉴클레오시드 시토신 유사체); 안티센스 올리고뉴클레오티드, 특히 비정상적인 세포 증식에 연루된 신호생성 경로에서 유전자 발현을 저해하는 것들, 이를 테면, 예를 들면, PKC-알파, Raf, H-Ras 및 상피 성장 인자 수용체 (EGF-R); 백신 이를 테면 THERATOPE® 백신 및 유전자 치료 백신, 예를 들면, ALLOVECTIN® 백신, LEUVECTIN® 백신, 및 VAXID® 백신; 토포이소메라제 1 저해제 (예로써, LURTOTECAN®); rmRH (예로써, ABARELIX®); BAY439006 (소라페니브; Bayer); SU-11248 (써니티니브, SUTENT®, Pfizer); 페리포신, COX-2 저해제 (예로써 쎌레코시브 또는 에토리코시브), 프로테오좀 저해제 (예로써 PS341); 보르테조미브 (VELCADE®); CCI-779; 티피파르니브 (R11577); 오라페니브, ABT510; Bcl-2 저해제 이를 테면 오블리메르센 나트륨 (GENASENSE®); 피산트론; EGFR 저해제들(하기 정의 참조); 티로신 키나제 저해제들; 세린-트레오닌 키나제 저해제들 이를 테면 라파마이신 (시롤리무스, RAPAMUNE®); 파르네실전이효소 저해제들, 이를 테면 로나파르니브 (SCH 6636, SARASARTM); 그리고 약학적으로 수용가능한 염, 상기 임의의 것의 산 또는 유사체들; 뿐만 아니라, 상기 2개 또는 그 이상의 복합체, 이를 테면 CHOP, 사이클로포스파미드, 독소루비신, 빈크리스틴 및 프레드니솔론의 복합 요법의 약어; 그리고 FOLFOX, 5-FU 및 류코보린과 복합된 옥살리플라틴(ELOXATINTM)의 치료 섭생의 약어를 포함한다.
본 명세서에서 정의된 바와 같이 화학요법치료 물질들은 "항-호르몬 물질들(anti-hormonal agents)" 또는 "엔도크린 치료제(endocrine therapeutics)"를 포함하는데 이들은 암 성장을 촉진시킬 수 있는 호르몬 효과를 조절, 감소, 차단 또는 저해시키는 작용을 한다. 이들은 다음을 포함하나, 이에 국한되지 않는 자체가 호르몬 일 수 있다: 탐옥시펜 (NOLVADEX®), 4-히드록시탐옥시펜, 토레미펜 (FARESTON®), 이독시펜, 드롤록시펜, 랄옥시펜 (EVISTA®), 트리옥시펜, 케옥시펜, 그리고 선택적 에스트로겐 수용체 조절물질 (SERMs) 이를 테면 SERM3을 비롯한 항진제/길항제 혼합형 프로파일을 갖는 항-에스트로겐; 항진제 성질이 없는 순수 항-에스트로겐, 이를 테면 풀베스트란트 (FASLODEX®), 및 EM800 (이들 물질은 에스트로겐 수용체 (ER) 이합체화를 차단시키고, DNA 결합을 억제시키고, ER 회전을 증가시키고, 및/또는 ER 수준을 억제한다); 스테로이드 아로마타제 억제제, 이를 테면 포르메스탄 및 엑세메스탄 (AROMASIN®), 그리고 비-스테로이드 아로마타제 억제제, 이를 테면 아나스트라졸 (ARIMIDEX®), 레트로졸 (FEMARA®) 그리고 아미노글루테티미드를 포함하는 아로마타제 억제제, 그리고 기타 아로마타제 억제제는 보로졸 (RIVISOR®), 메게스트롤 아세테이트 (MEGASE®), 파드로졸, 및 4(5)-이미다졸; 루프로리드 (LUPRON® 및 ELIGARD®), 고세레린, 부세레린, 및 트리프테린을 포함하는 황체화 호르몬-방출 호르몬 항진제; 프로게스테론을 비롯한 성 스테로이드, 이를 테면 메게스트롤 아세테이트 및 메드록시프로게스테론 아세테이트, 에스트로겐 이를 테면 디에틸스틸베스트롤 및 프레마린, 그리고 안드로겐/레티도이드, 이를 테면 플루옥시메스테론, 모든 트란스레티논산 및 펜레티니드; 오나프리스톤; 항-프로게스테론; 에스트로겐 수용체 하향-조절제 (ERDs); 항-안드로겐, 이를 테면 플루타미드, 니루타미드 및 비칼루타미드; 그리고 상기의 임의의 것의 약학적으로 허용가능한 염, 산 또는 유도체; 상기 둘 또는 그 이상의 조합.
보완 요법을 위해 본원에서 사용되는 "면역억제제(immunosuppressive agent)"라는 용어는 본원에서 치료되는 포유 동물의 면역계를 억제하거나 가려주는 물질을 의미한다. 여기에는 사이토킨 생성을 억제하고, 자체 항원 발현을 하향 조정하거나 또는 억제하고, 또는 MHC 항원을 가려주는 물질이 포함된다. 이러한 물질로는 2-아미노-6-아릴-5-치환된 피리미딘 (U.S. 특허 4,665,077); 비-스테로이드 항-염증성 약물 (NSAIDs); 강씨클로비르, 타크로리무스, 글루코코르티코이드 이를 테면, 코르티솔 또는 알도스테론, 항-염증성 물질, 이를 테면 시클로옥시게나제 억제제, 5-리폭시게나제 억제제, 또는 루코트리엔 수용체 길항제; 퓨린 길항제, 이를 테면 아자티오프린 또는 미코페놀레이트 모훼틸(MMF); 알킬화 물질, 이를 테면 사이클로포스파미드; 브로모크립틴; 다나졸; 답손; 글루타알데히드(U.S. 특허 4,120,649에서 기술된 바와 같이, MHC 항원을 만든다); MHC 항원 및 MHC 단편에 대한 항-특발성 항체; 사이클로스포린 A; 스테로이드, 이를 테면 코르티코스테로이드 또는 글루코코르티코스테로이드 또는 글루코코르티코이트 유사체, 가령, SOLU-MEDROL® 메틸메틸프레드니솔론 나트륨 숙시네이트 및 덱사메타손을 비롯한 프레드니손, 메틸프레드니솔론; 디히드로폴레이트 환원효소 억제제, 이를 테면 메토트렉세이트 (경구 또는 피하); 항-말라리아 물질, 이를 테면 클로로퀸 및 히드록시클로로퀸; 술파살라진; 레플루노미드; 사이토킨 또는 항-인터페론-알파, -베타, 또는 -감마 항체를 포함하는 사이토킨 수용체 항체, 항-종양 괴사 인자(TNF)-알파 항체 (인플리시마브(REMICADE®) 또는 아달리무마브), 항-TNF-알파 면역어드헤신 (에타네르?셕?), 항-TNF-베타 항체, 항-인터루킨-2 (IL-2) 항체 및 항-IL-2 수용체 항체, 그리고 항-인터루킨-6 (IL-6) 수용체 항체 및 길항제 (이를 테면, ACTEMRATM (토실리주마브)); 항-CD11a 및 항-CD18 항체를 포함하는 항-LFA-1 항체; 항-L3T4 항체; 이종기원의 항-림프구 글로블린; 범(pan)-T 항체, 선호적으로 항-CD3 또는 항-CD4/CD4a 항체; LFA-3 결합 도메인이 함유된 가용성 펩티드 (WO 90/08187, 7/26/90 공개); 스트렙토키나제; 형질전환 성장 인자-베타 (TGF-베타); 스트렙토도르나제; 숙주의 RNA 또는 DNA; FK506; RS-61443;, 클로람부칠; 데옥시스페러구알린; 라파마이신; T-세포 수용체 (Cohen et al., 미국 특허 5,114,721); T-세포 수용체 단편 (Offner et al., Science, 251: 430-432 (1991); WO 90/11294; Ianeway, Nature, 341: 482 (1989); 그리고 WO 91/01133); BAFF 길항제, 이를 테면 BAFF 항체 및 BR3 항체 그리고 zTNF4 길항제 (검토를 위하여 Mackay and Mackay, Trends Immunol., 23:113-5 (2002) 참고, 그리고 또한 하기 정의 또한 참고); T 세포 헬퍼 신호를 간섭하는 생물학적 물질, 이를 테면, CD40-CD40 리간드에 대하여 항체를 차단하는 항-CD40 수용체 또는 항-CD40 리간드 (CD154) (가령, Durieet al., Science, 261: 1328-30 (1993); Mohan et al., J. Immunol., 154: 1470-80 (1995)) 및 CTLA4-Ig (Finck et al., Science, 265: 1225-7 (1994)); 그리고 T-세포 수용체 항체 (EP 340,109) 이를 테면 T10B9가 포함된다. 본 명세서에서 일부 선호되는 면역억제제는 시클로포스파미드, 클로람부칠, 아자티오프린, 레플루노미드, MMF, 또는 메토트렉세이트를 포함한다.
용어 "PD-1 축 결합 길항제(axis binding antagonist)"는 상기 PD-1 신호생성 축에서 신호생성으로 기인된 T 세포 기능이상을 제거하기 위하여, PD-1 축 결합 짝과 이의 하나 또는 그 이상의 결합 짝과의 상호작용을 저해하는 분자를 지칭하며, 그 결과 T-세포 기능 (예로써, 증식, 시토킨 생산, 표적 세포 사멸)이 복원 또는 강화된다. 본 명세서에서 이용된 바와 같이, PD-1 축 결합 길항제는 PD-1 결합 길항제, PD-L1 결합 길항제 및 PD-L2 결합 길항제를 포함한다.
용어 "PD-1 결합 길항제(binding antagonist)"는 PD-1과 이의 하나 또는 그 이상의 결합 짝, 이를 테면 PD-L1, PD-L2와의 상호작용으로 인하여 신호전달을 감소, 차단, 억제, 소멸 또는 간섭하는 분자를 지칭한다. 일부 구체예들에 있어서, 상기 PD-1 결합 길항제는 하나 또는 그 이상의 이의 결합 짝에 PD-1의 결합을 억제하는 분자다. 특이적 측면에 있어서, 상기 PD-1 결합 길항제는 PD-1이 PD-L1 및/또는 PD-L2에 결합하는 것을 저해한다. 예를 들면, PD-1 결합 길항제들은 PD-1과 PD-L1 및/또는 PD-L2와의 상호작용으로 인하여 생성되는 신호 전달을 감소, 차단, 억제, 소멸 또는 간섭하는 항-PD-1 항체, 이의 항원 결합 단편들, 면역접합체, 융합 단백질, 올리고펩티드 및 기타 분자를 포함한다. 한 구체예에서, PD-1 결합 길항제는 PD-1을 통하여 T 림프구 매개된 신호생성에서 발현된 세포 표면 단백질에 의해 또는 이를 통하여 매개된 음성 공동-자극 신호를 감소시켜, 이상기능의 T-세포가 기능이상이 덜 되도록 한다(예로써, 항원 인지에 대한 효과인자 반응을 강화). 일부 구체예들에 있어서, 상기 PD-1 결합 길항제는 항-PD-1 항체다. 특이적 측면에 있어서, PD-1 결합 길항제는 본 명세서에서 설명된 MDX-1106 (니보루마브)이다. 또다른 특이적 측면에서, PD-1 결합 길항제는 본 명세서에서 설명된 MK-3475 (람브로리주마브)이다. 또다른 특이적 측면에서, PD-1 결합 길항제는 본 명세서에서 설명된 CT-011 (피디리주마브)이다. 또다른 특이적 측면에서, PD-1 결합 길항제는 본 명세서에서 설명된 AMP-224이다.
용어 "PD-L1 결합 길항제"는 PD-L1과 이의 하나 또는 그 이상의 결합 짝, 이를 테면 PD-1, B7-1과의 상호작용으로 인하여 신호전달을 감소, 차단, 억제, 소멸 또는 간섭하는 분자를 지칭한다. 일부 구체예들에 있어서, PD-L1 결합 길항제는 PD-L1이 이의 결합 짝에 결합하는 것을 억제하는 분자다. 특이적 측면에 있어서, 상기 PD-L1 결합 길항제는 PD-L1이 PD-1 및/또는 B7-1에 결합하는 것을 저해한다. 일부 구체예들에 있어서, 상기 PD-L1 결합 길항제들은 PD-L1과 하나 또는 그 이상의 이의 결합 짝, 이를 테면 PD-1, B7-1과의 상호작용으로 인하여 생성되는 신호 전달을 감소, 차단, 억제, 소멸 또는 간섭하는 항-PD-L1 항체, 이의 항원 결합 단편들, 면역접합체, 융합 단백질, 올리고펩티드 및 기타 분자를 포함한다. 한 구체예에서, PD-L1 결합 길항제는 PD-L1을 통하여 T 림프구 매개된 신호생성에서 발현된 세포 표면 단백질에 의해 또는 이를 통하여 매개된 음성 공동-자극 신호를 감소시켜, 이상기능의 T-세포가 기능이상이 덜 되도록 한다(예로써, 항원 인지에 대한 효과인자 반응을 강화). 일부 구체예들에 있어서, PD-L1 결합 길항제는 항-PD-L1 항체다. 특이적 측면에 있어서, 항-PD-L1 항체는 본 명세서에서 설명된 YW243.55.S70이다. 또다른 특이적 측면에서, 항-PD-L1 항체는 본 명세서에서 설명된 MDX-1105이다. 여전히 또다른 특이적 측면에서, 항-PD-L1 항체는 본 명세서에서 설명된 MPDL3280A이다. 여전히 또다른 특이적 측면에서, 항-PD-L1 항체는 본 명세서에서 설명된 MEDI4736이다.
용어 "PD-L2 결합 길항제"는 PD-2와 이의 하나 또는 그 이상의 결합 짝, 이를 테면 PD-1과의 상호작용으로 인하여 신호전달을 감소, 차단, 억제, 소멸 또는 간섭하는 분자를 지칭한다. 일부 구체예들에 있어서, PD-L2 결합 길항제는 PD-L2가 하나 또는 그 이상의 이의 결합 짝에 결합하는 것을 억제하는 분자다. 특이적 측면에 있어서, 상기 PD-L2 결합 길항제는 PD-L2가 PD-1에 결합하는 것을 저해한다. 일부 구체예들에 있어서, 상기 PD-L2 길항제들은 PD-L2와 하나 또는 그 이상의 이의 결합 짝, 이를 테면 PD-1과의 상호작용으로 인하여 생성되는 신호 전달을 감소, 차단, 억제, 소멸 또는 간섭하는 항-PD-L2 항체, 이의 항원 결합 단편들, 면역접합체, 융합 단백질, 올리고펩티드 및 기타 분자를 포함한다. 한 구체예에서, PD-L2 결합 길항제는 PD-L2를 통하여 T 림프구 매개된 신호생성에서 발현된 세포 표면 단백질에 의해 또는 이를 통하여 매개된 음성 공동-자극 신호를 감소시켜, 이상기능의 T-세포가 기능이상이 덜 되도록 한다(예로써, 항원 인지에 대한 효과인자 반응을 강화). 일부 구체예들에 있어서, PD-L2 결합 길항제는 면역접합체다.
본원에서 치료제의 "고정된(fixed)" 또는 "고른(flat)" 투여량은 환자의 체중 (WT) 또는 신체 표면적 (BSA)에 상관없이, 인간 환자에게 투여되는 투여량을 지칭한다. 따라서 고정 또는 고른 용량은 mg/kg 용량 또는 mg/m2 용량으로 제공되는 것이 아니라, 치료제의 절대량으로 제공된다.
본원에서 "로딩 (loading)" 투여량은 일반적으로 환자에게 투여되는 치료제의 초기 투여량을 포함하고, 그 다음 1 회 또는 그 이상의 유지 투여량(들)이 뒤 따른다. 일반적으로, 한번의 로딩이 투여되지만, 다수의 로딩 또한 본 명세서에서 고려된다. 보통, 유지 투여량(들)으로 달성될 수 있는 것보다 더 일찍 치료제의 원하는 정상 상태(steady-state)의 농도에 도달되도록 하기 위하여, 로딩 투여량(들)은 투여되는 유지 투여량 (들)을 초과하고, 및/또는 로딩 투여량(들)은 유지 투여량(들)보다 더 빈번하게 투여된다.
본원에서 "유지(maintenance)" 투여량은 치료 기간에 걸쳐 환자에게 투여되는 치료제의 하나 또는 그 이상의 투여량을 지칭한다. 일반적으로, 유지 투여량은 이를 테면, 대략 매주, 대략 2 주마다, 대략 3 주마다, 또는 대략 4 주마다, 바람직하게는 3 주마다와 같은 주기의 처리 간격으로 투여된다.
"주입(infusion)" 또는 "주입하는(infusing)"이란 치료 목적을 위해 정맥을 통해 약물 함유 용액을 체내에 도입하는 것을 의미한다. 일반적으로 이것은 정맥용 (IV) 주머니를 통해 이루어진다.
"정맥용 주머니(intravenous bag)" 또는 "IV 주머니(bag)"는 환자의 정맥을 통해 투여할 수 있도록 용액을 담을 수 있는 주머니다. 한 구체예에서, 상기 용액은 염수 용액 (가령 약 0.9% 또는 약 0.45% NaCl)이다. 임의선택적으로, 상기 IV 주머니는 폴리올레핀 또는 폴리비닐 클로라이드로 만든다.
용어 "가변적 영역(variable region)" 또는 "가변적 도메인(variable domain)"은 항체가 항원에 결합하는데 관여하는 항체 중쇄 또는 경쇄 도메인을 말한다. 고유한 항체의 중쇄와 경쇄 (차례로 VH 및 VL)의 가변적 도메인은 일반적으로 유사한 구조를 가지며, 각 도메인은 4개의 보존된 틀구조 영역 (FRs)과 3개의 초가변적 영역 (HVRs)을 포함한다. (예로써, Kindt et al. KubyImmunology, 6th ed., W.H. Freeman and Co., page 91 (2007). 참고) 단일 VH 또는 VL 도메인은 충분히 항원-결합 특이성을 부여할 수 있다. 더욱이, 특정 항원에 결합하는 항체는 상보성 VL 또는 VH 도메인의 라이브러리를 스크린하기 위하여 항원에 결합하는 항체의 VH 또는 VL 도메인을 이용하여 단리될 수 있다. 예로써, Portolano et al., J. Immunol. 150:880-887 (1993); Clarkson et al., Nature 352:624-628 (1991) 참고.
용어 "벡터(vector)"는 본 명세서에서 이용된 바와 같이, 이에 연계된 또다른 핵산을 증식시킬 수 있는 핵산 분자를 말한다. 상기 용어는 자가-복제 핵산 구조의 벡터, 뿐만 아니라 이것이 도입된 숙주 세포의 게놈 안에 혼입된 벡터를 포함한다. 특정 벡터는 작용가능하도록 연계된 핵산의 발현을 지시할 수 있다. 이러한 벡터를 본 명세서에서 "발현 벡터(expression vectors)"라고 한다.
"유리 시스테인 아미노산(free cysteine amino acid)"은 부모 항체로 조작되고, 티올 작용기 (-SH)를 가지며, 분자 내 또는 분자간 이황화물 다리를 통하여 쌍을 이루지 않는 시스테인 아미노산 잔기를 나타낸다.
"링커(linker)", "링커 유닛(unit)",또는 "연계(link)"란 항체를 약물 모이어티에 공유결합시키는 원자 사슬을 포함하는 화학적 잔기를 의미한다.
치환체의 수를 나타낼 때, "하나 또는 그 이상의"이라는 용어는 하나의 치환기에서 최대로 가능한 치환 수까지의 범위, 즉 하나의 수소 치환에서 모든 수소의 치환체로 치환되는 범위를 의미한다. 용어 "치환체(substituent)"는 부모 분자상의 수소 원자를 대체하는 원자 또는 원자 군을 나타낸다. 용어 "치환된(substituted)"이란 특정 그룹이 하나 또는 그 이상의 치환체를 갖는 것을 나타낸다. 여기에서 임의의 기가 다수의 치환체를 가질 수 있고, 다양한 가능한 치환체가 제공되는 경우, 치환체는 독립적으로 선택되며, 동일할 필요는 없다. "치환되지 않은(unsubstituted)"이란 용어는 특정 그룹이 치환체를 갖지 않는다는 것을 의미한다. 용어 "임의적으로 치환되는(optionally substituted)"이란 특정 기가 치환되지 않거나 또는 가능한 치환체의 군으로부터 독립적으로 선택된 하나 이상의 치환체로 치환됨을 의미한다. 치환체의 수를 나타낼 때, "하나 또는 그 이상의"이라는 용어는 하나의 치환기에서 최대로 가능한 치환 수까지의 범위, 즉 하나의 수소 치환에서 모든 수소의 치환체까지를 의미한다.
본원에서 사용된 용어 "알킬(alkyl)"은 1 내지 12개 탄소 원자의 임의의 길이의 포화 선형 또는 분지 쇄 1가 탄화수소 라디칼을 의미하고(C1-C12), 이때 상기 알킬 라디칼은 하기에서 기술된 하나 또는 그 이상의 치환체에 의해 독립적으로 임의선택적으로 치환될 수 있다. 또다른 구체예에서, 알킬 라디칼은 1 내지 8개 탄소원자(C1-C8), 또는 1 내지 6개 탄소 원자 (C1-C6)이다. 알킬 기의 예로는 다음을 포함하나, 이에 국한되지 않는다: 메틸 (Me, -CH3), 에틸 (Et, -CH2CH3), 1-프로필 (n-Pr, n-프로필, -CH2CH2CH3), 2-프로필 (i-Pr, i-프로필, -CH(CH3)2), 1-부틸 (n-Bu, n-부틸, -CH2CH2CH2CH3), 2-메틸-1-프로필 (i-Bu, i-부틸, -CH2CH(CH3)2), 2-부틸 (s-Bu, s-부틸, -CH(CH3)CH2CH3), 2-메틸-2-프로필 (t-Bu, t-부틸, -C(CH3)3), 1-펜틸 (n-펜틸, -CH2CH2CH2CH2CH3), 2-펜틸 (-CH(CH3)CH2CH2CH3), 3-펜틸 (-CH(CH2CH3)2), 2-메틸-2-부틸 (-C(CH3)2CH2CH3), 3-메틸-2-부틸 (-CH(CH3)CH(CH3)2), 3-메틸-1-부틸 (-CH2CH2CH(CH3)2), 2-메틸-1-부틸 (-CH2CH(CH3)CH2CH3), 1-헥실 (-CH2CH2CH2CH2CH2CH3), 2-헥실 (-CH(CH3)CH2CH2CH2CH3), 3-헥실 (-CH(CH2CH3)(CH2CH2CH3)), 2-메틸-2-펜틸 (-C(CH3)2CH2CH2CH3), 3-메틸-2-펜틸 (-CH(CH3)CH(CH3)CH2CH3), 4-메틸-2-펜틸 (-CH(CH3)CH2CH(CH3)2), 3-메틸-3-펜틸 (-C(CH3)(CH2CH3)2), 2-메틸-3-펜틸 (-CH(CH2CH3)CH(CH3)2), 2,3-디메틸-2-부틸 (-C(CH3)2CH(CH3)2), 3,3-디메틸-2-부틸 (-CH(CH3)C(CH3)3, 1-헵틸, 1-옥틸, 및 이와 유사한 것들.
본원에서 사용된 용어 "알킬렌(alkylene)"은 1 내지 12개 탄소 원자의 임의의 길이의 포화 선형 또는 분지 쇄 2가 탄화수소 라디칼을 의미한하고(C1-C12), 이때 상기 알킬 라디칼은 하기에서 기술된 하나 또는 그 이상의 치환체에 의해 독립적으로 임의선택적으로 치환될 수 있다. 또다른 구체예에서, 알킬렌 라디칼은 1 내지 8개 탄소원자(C1-C8), 또는 1 내지 6개 탄소 원자 (C1-C6)이다. 알킬렌 기의 에로는 다음을 포함하나, 이에 국한되지 않는다: 메틸렌 (-CH2-), 에틸렌 (-CH2CH2-), 프로필렌 (-CH2CH2CH2-), 그리고 이와 유사한 것들.
용어 "알케닐(alkenyl)"은 적어도 하나 이상의 불포화 부위, 가령, 탄소-탄소, sp2 이중 결합을 갖는 2 내지 8 개의 탄소 원자 (C2-C8)의 임의의 길이의 선형 또는 분지형 사슬 1가 탄화수소 라디칼을 지칭하며, 이때 상기 알케닐 라디칼은 본원에 기재된 하나 또는 이상의 치환기로 독립적으로 임의로 치환될 수 있고, "시스(cis)" 및 "트랜스(trans)" 배향(orientations) 또는 대안적으로 "E" 및 "Z" 배향을 갖는 라디칼을 포함한다. 예로는 에틸레닐 또는 비닐 (-CH=CH2), 알릴 (-CH2CH=CH2), 그리고 이와 유사한 것들을 포함하나, 이에 국한되지 않는다.
용어 "알케닐렌(alkenylene)"은 적어도 하나 이상의 불포화 부위, 가령, 탄소-탄소, sp2 이중 결합을 갖는 2 내지 8 개의 탄소 원자 (C2-C8)의 임의의 길이의 선형 또는 분지형 사슬 2가 탄화수소 라디칼을 지칭하며, 이때 상기 알케닐렌 라디칼은 본원에 기재된 하나 또는 이상의 치환기로 독립적으로 임의로 치환될 수 있고, "시스" 및 "트랜스" 배향 또는 대안적으로 "E" 및 "Z" 배향을 갖는 라디칼을 포함한다. 예로는 에틸레닐렌 또는 비닐렌 (-CH=CH-), 알릴 (-CH2CH=CH-), 그리고 이와 유사한 것들을 포함하나, 이에 국한되지 않는다.
용어 "알키닐(alkynyl)"은 적어도 하나 이상의 불포화 부위, 가령, 탄소-탄소, sp 삼중 결합을 갖는 2 내지 8 개의 탄소 원자 (C2-C8)의 임의의 길이의 선형 또는 분지형 사슬 1가 탄화수소 라디칼을 지칭하며, 이때 상기 알키닐 라디칼은 본원에 기재된 하나 또는 이상의 치환기로 독립적으로 임의로 치환될 수 있다. 예로는 에티닐 (-C≡CH), 프로피닐(프로파르길, -CH2C≡CH), 그리고 이와 유사한 것들을 포함하나, 이에 국한되지 않는다.
용어 "알키닐렌(alkynylene)"은 적어도 하나 이상의 불포화 부위, 가령, 탄소-탄소, sp 삼중 결합을 갖는 2 내지 8 개의 탄소 원자 (C2-C8)의 임의의 길이의 선형 또는 분지형 사슬 2가 탄화수소 라디칼을 지칭하며, 이때 상기 알키닐렌 라디칼은 본원에 기재된 하나 또는 이상의 치환기로 독립적으로 임의로 치환될 수 있다. 예로는 에티닐렌 (-C≡C-), 프로피닐렌 (프로파르길렌, -CH2C≡C-), 그리고 이와 유사한 것들을 포함하나, 이에 국한되지 않는다.
용어 "카브로사이클(carbocycle)", "카르보시클일(carbocyclyl)", "카르보시클릭(carbocyclic) 고리" 및 "시클로알킬(cycloalkyl)"이란 3 내지 12개의 탄소 원자를 갖는, 모노사이클릭 고리 (C3-C12) 또는 7 내지 12개 탄소 원자를 갖는 바이사이클릭 고리의 1가의 비-방향족, 포화된 또는 부분적으로 불포화된 고리를 지칭한다. 7 내지 12개 원자를 갖는 바이사이클릭 카르보사이클은 예를 들면, 바이시클로 [4,5], [5,5], [5,6] 또는 [6,6] 시스템으로 정렬될 수 있고, 그리고 9 또는 10개 고리 원자를 갖는 바이사이클 카르보사이클은 바이시클로 [5,6] 또는 [6,6] 시스템, 또는 다리연결된 시스템, 이를 테면 바이시클로[2.2.1]헵탄, 바이시클로[2.2.2]옥탄 및 바이시클로[3.2.2]노난으로 정렬될 수 있다. 스피로 모이어티는 이 정의의 범위 안에 또한 포함된다. 모노사이클릭 카르보사이클의 예로는 다음을 포함하나, 이에 국한되지 않는다: 사이클로프로필, 사이클로부틸, 사이클로펜틸, 1-사이클로펜트-1-에닐, 1-사이클로펜트-2-에닐, 1-사이클로펜트-3-에닐, 사이클로헥실, 1-사이클로헥스-1-에닐, 1-사이클로헥스-2-에닐, 1-사이클로헥스-3-에닐, 사이클로헥사디에닐, 사이클로헵틸, 사이클로옥틸, 사이클로노닐, 사이클로데실, 사이클로운데실, 사이클로도데실, 그리고 이와 유사한 것들. 카르보시클일 기는 본원에서 기술된 하나 또는 그 이상의 치환체로 임의선택적으로 독립적으로 치환된다.
"아릴"이란 부모 방향족 고리 시스템의 단일 탄소 원자로부터 한 개의 수소 원자가 제거됨으로써 유도된 6-20개 탄소 원자(C6-C20)의 1가 방향족 탄화수소 라디칼을 의미한다. 일부 아릴 기는 예시적인 구조에서 "Ar"로 표시된다. 아릴은 포화된, 부분 불포화된 고리, 또는 방향족 카르보시클릭 고리에 융합된 방향족 고리를 포함하는 바이사이클릭 라디칼을 포함한다. 전형적인 아릴 기는 벤젠 (페닐), 치환된 벤젠, 나프탈렌, 안트라센, 바이페닐, 인데닐, 인다닐, 1,2-디히드로나프탈렌, 1,2,3,4-테트라히드로나프틸, 그리고 이와 유사한 것들로부터 유도된 라디칼을 포함하나, 이에 국한되지 않는다. 아릴 기는 본원에서 기술된 하나 또는 그 이상의 치환체로 임의선택적으로 독립적으로 치환된다.
"아릴렌(arylene)"이란 부모 방향족 고리 시스템의 2개의 탄소 원자로부터 2개의 수소 원자가 제거됨으로써 유도된 6-20개 탄소 원자(C6-C20)의 2가 방향족 탄화수소 라디칼을 의미한다. 일부 아릴렌 기는 예시적인 구조에서 "Ar"로 표시된다. 아릴렌은 포화된, 부분 불포화된 고리, 또는 방향족 카르보시클릭 고리에 융합된 방향족 고리를 포함하는 바이사이클릭 라디칼을 포함한다. 전형적인 아릴렌 기는 벤젠 (페닐렌), 치환된 벤젠, 나프탈렌, 안트라센, 바이페닐렌, 인데닐렌, 인다닐렌, 1,2-디히드로나프탈렌, 1,2,3,4-테트라히드로나프틸, 그리고 이와 유사한 것들로부터 유도된 라디칼을 포함하나, 이에 국한되지 않는다. 아릴렌 기는 본원에서 기술된 하나 또는 그 이상의 치환체로 임의선택적으로 치환된다.
용어 "헤테로사이클(heterocycle)", "헤테로시클일(heterocyclyl)" 및 "헤테로사이클릭 고리(heterocyclic ring)"는 본원에서 호환 사용되며, 포화된 또는 부분적으로 불포화된 (가령, 고리 안에 하나 또는 그 이상의 이중 및/또는 삼중 결합을 갖는) 3 내지 약 20개 고리 원자의 카르보시클릭 라디칼을 지칭하며, 이때 적어도 하나의 고리 원자는 질소, 산소, 인 그리고 황으로부터 선택된 헤테로 원자이며, 나머지 고리 원자는 C이며, 여기에서 하나 또는 그 이상의 고리 원자는 하기에서 기술된 하나 또는 그 이상의 치환체로 임의선택적으로 독립적으로 치환된다. 헤테로사이클은 3 내지 7개의 고리 구성원 (2 내지 6개의 탄소 원자와 N, O, P, 및 S로부터 선택된 1 내지 4개의 헤테로 원자)을 갖는 모노사이클, 또는 7 내지 10개의 고리 구성원 (4 내지 9개의 탄소 원자 및 N, O, P, 및 S로부터 선택된 1 내지 6개의 헤테로 원자)을 갖는 바이사이클, 예로써: 바이사이클로 [4,5], [5,5], [5,6], 또는 [6,6] 시스템일 수 있다. 헤테로사이클은 Paquette, Leo A.; "Principles of Modern Heterocyclic Chemistry" (W.A. Benjamin, New York, 1968), particularly Chapters 1, 3, 4, 6, 7, and 9; "The Chemistry of Heterocyclic Compounds, A series of Monographs" (John Wiley & Sons, New York, 1950, 현재까지), 특히 볼륨 13, 14, 16, 19, 및 28; 그리고 J. Am. Chem. Soc. (1960) 82:5566에서 기술된다. "헤테로시클일"은 라디칼을 포함하는데, 여기에서 헤테로사이클 라디칼은 포화된, 부분적으로 불포화된 고리, 또는 방향족 카르보시클릭 또는 헤테로사이클릭 고리에 융합된다. 헤테로사이클릭 고리의 예로는 다음을 포함하나, 이에 국한되지 않는다: 몰포린-4-일, 피페리딘-1-일, 피페라지닐, 피페라진-4-일-2-온, 피페라진-4-일-3-온, 피롤리딘-1-일, 티오몰포린-4-일, S-디옥소티오몰포린-4-일, 아조칸-1-일, 아제티딘-1-일, 옥타히드로피리도[1,2-a]피라진-2-일, [1,4]디아제판-1-일, 피롤리디닐, 테트라히드로퓨라닐, 디히드로퓨라닐, 테트라히드로티에닐, 테트라히드로피라닐, 디히드로피라닐, 테트라히드로티오피라닐, 피페리디노, 몰포리노, 티오몰포리노, 티옥사닐, 피페라지닐, 호모피페라지닐, 아제티디닐, 옥세타닐, 티에타닐, 호모피페리디닐, 옥세파닐, 티에파닐, 옥사제피닐, 디아제피닐, 티아제피닐, 2-피롤리닐, 3-피롤리닐, 인돌리닐, 2H-피라닐, 4H-피라닐, 디옥사닐, 1,3-디옥소라닐, 피라졸리닐, 디티아닐, 디티오라닐, 디히드로피라닐, 디히드로티에닐, 디히드로퓨라닐, 피라졸리디닐이미다졸리닐, 이미다졸리디닐, 3-아자바이시코[3.1.0]헥사닐, 3-아자바이사이클로[4.1.0]헵타닐, 아자바이사이클로[2.2.2]헥사닐, 3H-인돌일 퀴놀리지닐 및 N-피리딜 우레아. 스피로 모이어티는 이 정의의 범위 안에 또한 포함된다. 2개 고리 원자는 옥소 (=O) 모이어티로 치환된, 헤테로사이클릭 기의 예로는 피리미디노닐 및 1,1-디옥소-티오몰포리닐이다. 본원에서 헤테로사이클 기는 하나 또는 그 이상의 치환체로 임의선택적으로 독립적으로 치환된다.
"헤테로아릴(heteroaryl)"은 5-, 6-, 또는 7-원(membered) 고리로 된 1가 방향족 라디칼을 지칭하는데, 질소, 산소, 및 황으로부터 독립적으로 선택된 하나 또는 그 이상의 헤테로 원자를 함유하는, 5-20개 원자의 융합된 고리 시스템(이중 적어도 하나는 방향족)을 포함한다. 헤테로아릴 기의 예로는 피리디닐 (예로써, 2-히드록시피리디닐 포함), 이미다피라지닐, 이미다조피리디닐, 1-메틸-1H-벤조[d]이미다졸, [1,2,4]트리아졸로[1,5-a]피리딘, 피리미디닐 (예로써, 4-히드록시피리미디닐), 피라피라지닐, 트리아피라지닐, 피라지닐, 테트라졸일, 퓨릴, 티에닐, 이소옥사졸일, 티아졸일, 옥사디아졸일, 옥사졸일, 이소티아졸일, 피롤일, 퀴놀리닐, 이소퀴놀리닐, 테트라히드로이소퀴놀리닐, 인돌일, 벤즈이미다피라지닐, 벤조퓨라닐, 시놀리닐, 인다졸일, 인돌리지닐, 프탈리지닐, 피리다지닐, 트리아지닐, 이소인돌일, 프테리디닐, 퓨리닐, 옥사디아졸일, 티아디아졸일, 티아디아졸일, 퓨라자닐, 벤조퓨라자닐, 벤조티오페닐, 벤조티아졸일, 벤조옥사졸일, 퀴나졸리닐, 퀸옥살리닐, 나프티리디닐, 및 퓨로피리디닐이다. 헤테로아릴 기는 본원에서 기술된 하나 또는 그 이상의 치환체로 임의선택적으로 독립적으로 치환된다.
헤테로사이클 또는 헤테로아릴 기는 이러한 것들이 가능하다면, 탄소 (탄소-연계된), 또는 질소 (질소-연계된) 결합된 것일 수 있다. 예를 들자면, 탄소 결합된 헤테로사이클 또는 헤테로아릴은 피리딘의 위치 2, 3, 4, 5, 또는 6, 피리다진의 위치 3, 4, 5, 또는 6, 피리미딘의 위치 2, 4, 5, 또는 6, 피라진의 위치 2, 3, 5, 또는 6, 퓨란, 테트라히드로퓨란, 티오퓨란, 티오펜, 피롤 또는 테트라히드로피롤의 위치 2, 3, 4, 또는 5, 옥사졸, 이미다졸 또는 티아졸의 위치 2, 4, 또는 5, 이소옥사졸, 피라졸, 또는 이소티아졸의 위치 3, 4, 또는 5, 아지리딘의 위치 2 또는 3, 아제티딘의 위치 2, 3, 또는 4, 퀴놀린의 위치 2, 3, 4, 5, 6, 7, 또는 8 또는 이소퀴놀린의 위치 1, 3, 4, 5, 6, 7, 또는 8에서 결합되나, 이에 국한되지 않는다.
예로써, 질소 결합된 헤테로사이클 또는 헤테로아릴은 아지리딘, 아제티딘, 피롤, 피롤리딘, 2-피롤린, 3-피롤린, 이미다졸, 이미다졸리딘, 2-이미다졸린, 3-이미다졸린, 피라졸, 피라졸린, 2-피라졸린, 3-피라졸린, 피페리딘, 피페라진, 인돌, 인돌린, 1H-인다졸의 위치 1, 이소인돌, 또는 이소인돌린의 위치 2, 몰포린의 위치 4, 그리고 카르바졸, 또는 β-카르보린의 위치 9에서 결합되나, 이에 국한되지 않는다.
용어 "키랄 (chiral)"은 거울 상 파트너의 겹쳐지지 않는 성질을 갖는 분자를 의미하는 반면, 용어 "아키랄(achiral)"은 거울 상 파트너에 중첩될 수 있는 분자를 지칭한다.
용어 "입체이성질체(stereoisomers)"는 동일한 화학적 구성을 갖지만, 공간에서의 원자 또는 그룹의 배치와 관련하여 상이한 화합물을 지칭한다.
"부분입체이성질체(diastereomer)"는 2 개 이상의 중심이 있는 입체 이성질체를 지칭하며, 그의 분자는 서로의 거울상이 아니다. 부분입체이성질체는 상이한 물리적 성질, 가령, 융점, 비점, 분광 특성 및 반응성을 갖는다. 부분입체이성질체의 혼합물은 전기영동 및 크로마토그래피와 같은 고분해능 분석 과정 하에서 분리될 수 있다.
"거울상이성질체(enantiomers)"는 서로 중첩되지 않는 거울상인 화합물의 2 개의 입체이성질체를 지칭한다.
본 명세서에서 사용되는 입체화학적 정의 및 관례는 일반적으로 다음을 따른다: S. P. Parker, Ed., McGraw-Hill Dictionary of Chemical Terms (1984) McGraw-Hill Book Company, New York; 그리고 Eliel, E. and Wilen, S., Stereochemistry of Organic Compounds (1994) John Wiley & Sons, Inc., New York. 많은 유기 화합물은 광학 활성 형태로 존재하며, 즉, 이들은 평면- 편광된 빛의 평면을 회전시키는 능력을 갖는다. 광학 활성 화합물을 기술함에 있어서, 접두사 D 및 L, 또는 R 및 S는 그의 키랄 중심(들)에 대한 분자의 절대 배치를 나타내기 위해 사용된다. 접두사 d 및 l ,또는 (+) 및 (-)는 화합물에 의한 평면 편광의 회전을 표시하기 위해 사용되며, (-) 또는 1은 화합물이 좌회전 성임을 의미한다. (+) 또는 d 접두어가 붙은 화합물은 우회전성이다. 주어진 화학 구조에 대해, 이들 입체이성질체는 서로 거울상인 것을 제외하고는 동일하다. 특정 입체이성질체는 또한 거울상이성질체 (enantiomer)로 불릴 수 있고, 그러한 이성질체의 혼합물은 종종 거울상 이성질체 혼합물 (enantiomeric mixture)로 불린다. 거울상 이성질체의 50:50 혼합물은 화학 반응 또는 공정에서 입체 선택 또는 입체 특이성이 없는 경우에 발생할 수 있는 라세미 혼합물 또는 라셈체(racemate)라 칭한다. 용어 "라세미 혼합물(racemic mixture)" 및 "라셈체(racemate)" 는 광학 활성이 없는 2 종의 거울상 이성질체 종의 등몰량 혼합물을 의미한다.
본 명세서에서 이용된 바와 같이, 구절 "약학적으로 수용가능한 염(pharmaceutically acceptable salt)"이란 본 명세서에서 설명된 화합물의 약학적으로 수용가능한 항체-약물 콘쥬게이트 (ADC)의 유기 또는 무기 염을 지칭한다. 예시적인 염은 황산염, 시트르산, 아세테이트, 옥살산염, 염화물, 브롬화물, 요오드화물, 질산염, 중황산염, 인산염, 산성 인산염, 이소니코틴산염, 락트산염, 살리실산염, 산 시트르산염, 타르타르산염, 올레산염, 탄닌산염, 펜나토테네이트, 중타르타르산염, 아스코르베이트, 숙시네이트, 말레이트, 겐티스네이트, 푸마레이트, 글루코네이트, 글루쿠로네이트, 사카레이트, 포르메이트, 벤조에이트, 글루타메이트, 메탄술포네이트, 에탄술포네이트, 벤젠술포네이트, p-톨루엔 술포네이트 및 파모에이트 (즉, 1,1'-메틸렌-비스-(2'-히드록시-3- 나프토에이트)) 염을 포함하나, 이에 국한되지 않는다. 약학적으로 수용가능한 염은 아세테이트 이온, 숙시네이트 이온 또는 다른 반대이온과 같은 또다른 분자의 함입과 관련될 수 있다. 반대이온(counterion)은 부모 화합물의 전하를 안정화시키는 임의의 유기 또는 무기 부분일 수 있다. 또한, 약학적으로 수용되는 염은 그 구조 내에 하나 이상의 하전된 원자를 가질 수 있다. 다수의 하전된 원자가 약학적으로 수용되는 염의 일부인 경우는 다수의 반대이온을 가질 수 있다. 따라서, 약학적으로 수용되는 염은 하나 또는 그 이상의 하전된 원자 및/또는 하나 또는 그 이상의 반대이온을 가질 수 있다.
다음의 약어들은 본원에서 사용되며, 명시된 정의를 갖는다: BME는 베타-멀캅토에탄올이며, Boc는 N-(t-부톡시카르보닐)이며, cit는 시트룰린 (2-아미노-5-우레이도 펜타논산)이며, DCC는 1,3-디사이클로헥실카르보디이미드이며, DCM는 디클로로메탄이며, DEA는 디에틸아민이며, DEAD는 디에틸아조디카르복실레이트이며, DEPC는 디에틸포스포릴시아니데이트, DIAD는 디이소프로필아조디카르복실레이트이며, DIEA는 N,N-디이소프로필에틸아민이며, DMA는 디메틸아세트아미드이며, DMAP는 4-디메틸아미노피리딘이며, DME는 에틸렌글리콜 디메틸 에테르 (또는 1,2-디메톡시에탄)이며, DMF는 N,N-디메틸포름아미드이며, DMSO는 디메틸드술폭시이며, DTT는 디티오트레이톨이며, EDCI는 1-(3-디메틸아미노프로필)-3-에틸카르보디이미드 염화수소산염이며, EEDQ는 2-에톡시-1-에톡시카르보닐-1,2-디히드로퀴놀린이며, ES-MS는 전자분무 질량 분광계이며, EtOAc는 에틸 아세테이트이며, Fmoc는 N-(9-플루오레닐메톡시카르보닐)이며, gly는 글리신이며, HATU는 O-(7-아자벤조트리아졸-1-일)-N,N,N',N'-테트라메틸우로니움 헥사플루오르인산염이며, HOBt는 1-히드록시벤조트리아졸이며, HPLC는 고압 액체 크로마토그래피이며, ile는 이소류신이며, lys은 리신이며, MeCN (CH3CN)는 아세토니트릴이며, MeOH는 메탄올이며, Mtr은 4-아니실디페닐메틸 (또는 4-메톡시트리틸)이며, NHS는 N-히드록시숙시니미드이며, PBS는 인산염-완충된 염수 (pH 7)이며, PEG는 폴리에틸렌 글리콜 또는 에틸렌 글리콜 (-OCH2CH2-)의 유닛이며, Ph는 페닐이며, Pnp는 p-니트로페닐이며, MC는 6-말레이미도카프로일이며, phe는 L-페닐알라닌이며, PyBrop는 브로모 tris-피롤리딘 포스포니움 헥사플루오르인산염이며, SEC는 크기-압출 크로마토그래피이며, Su는 숙시니미드이며, TFA는 트리플루오르아세트산이며, TLC는 박층 크로마토그래피이며, UV는 자외선이며, 그리고 val은 발린이다.
종양-연관된 항원:
(1) BMPR1B (골 형태형성 단백질 수용체-유형 IB, Genbank 기탁 번호 NM_001203)
ten Dijke,P., et al Science 264 (5155):101-104 (1994), Oncogene 14 (11):1377-1382 (1997)); WO2004063362 (청구항 2); WO2003042661 (청구항 12); US2003134790-A1 (페이지 38-39); WO2002102235 (청구항 13; 페이지 296); WO2003055443 (페이지 91-92); WO200299122 (실시예 2; 페이지 528-530); WO2003029421 (청구항 6); WO2003024392 (청구항 2; 도 112); WO200298358 (청구항 1; 페이지 183); WO200254940 (페이지 100-101); WO200259377(페이지 349-350); WO200230268 (청구항 27; 페이지 376); WO200148204 (실시예; 도 4)
NP_001194 골 형태형성 단백질 수용체, 유형 IB /pid=NP_00ultraviolet1194.1 -교차-참고: MIM:603248; NP_001194.1; AY065994
(2) E16 (LAT1, SLC7A5, Genbank 기탁 번호 NM_003486)
Biochem. Biophys. Res. Commun. 255 (2), 283-288 (1999), Nature 395 (6699):288-291 (1998), Gaugitsch, H.W., et al (1992) J. Biol. Chem. 267 (16):11267-11273); WO2004048938 (실시예 2); WO2004032842 (실시예 IV); WO2003042661 (청구항 12); WO2003016475 (청구항 1); WO200278524 (실시예 2); WO200299074 (청구항 19; 페이지 127-129); WO200286443 (청구항 27; 페이지 222, 393); WO2003003906 (청구항 10; 페이지 293); WO200264798 (청구항 33; 페이지 93-95); WO200014228 (청구항 5; 페이지 133-136); US2003224454 (도 3); WO2003025138 (청구항 12; 페이지 150);
NP_003477 용질 운반체 패밀리 7 (양이온 아미노산 운반물질, y+
시스템), 구성원 5 /pid=NP_003477.3 - 호모 사피엔스
교차-참고: MIM:600182; NP_003477.3; NM_015923; NM_003486_1
(3) STEAP1 (전립선의 6개 막경유 상피 항원, Genbank 기탁 번호 NM_012449)
Cancer Res. 61 (15), 5857-5860 (2001), Hubert,R.S., et al (1999) Proc. Natl. Acad. Sci. U.S.A. 96 (25):14523-14528); WO2004065577 (청구항 6); WO2004027049 (도 1L); EP1394274 (실시예 11); WO2004016225 (청구항 2); WO2003042661 (청구항 12); US2003157089 (실시예 5); US2003185830 (실시예 5); US2003064397 (도 2); WO200289747 (실시예 5; 페이지 618-619); WO2003022995 (실시예 9; 도 13A, 실시예 53; 페이지 173, 실시예 2; 도 2A);
NP_036581 전립선의 6개 막경유 상피 항원
교차-참고: MIM:604415; NP_036581.1; NM_012449_1
(4) 0772P (CA125, MUC16, Genbank 기탁 번호 AF361486)
J. Biol. Chem. 276 (29):27371-27375 (2001)); WO2004045553 (청구항 14); WO200292836 (청구항 6; 도 12); WO200283866 (청구항 15; 페이지 116-121); US2003124140 (실시예 16); 미국 798959. 교차-참고: GI:34501467; AAK74120.3; AF361486_1
(5) MPF (MPF, MSLN, SMR, 거핵구 강화 인자, 메소텔린, Genbank 기탁 번호 NM_005823) Yamaguchi, N., et al Biol. Chem. 269 (2), 805-808 (1994), Proc. Natl. Acad. Sci. U.S.A. 96 (20):11531-11536 (1999), Proc. Natl. Acad. Sci. U.S.A. 93 (1):136-140 (1996), J. Biol. Chem. 270 (37):21984-21990 (1995)); WO2003101283 (청구항 14); (WO2002102235 (청구항 13; 페이지 287-288); WO2002101075 (청구항 4; 페이지 308-309); WO200271928 (페이지 320-321); WO9410312 (페이지 52-57); 교차-참고: MIM:601051; NP_005814.2; NM_005823_1
(6) Napi2b (Napi3b, NAPI-3B, NPTIIb, SLC34A2, 용질 운반체 패밀리 34 (인산 나트륨), 구성원 2, 유형 II 나트륨-의존성 인산염 운반물질 3b,Genbank 기탁 번호 NM_006424)
J. Biol. Chem. 277 (22):19665-19672 (2002), Genomics 62 (2):281-284 (1999), Feild, J.A., et al (1999) Biochem. Biophys. Res. Commun. 258 (3):578-582); WO2004022778 (청구항 2); EP1394274 (실시예 11); WO2002102235 (청구항 13; 페이지 326); EP875569 (청구항 1; 페이지 17-19); WO200157188 (청구항 20; 페이지 329); WO2004032842 (실시예 IV); WO200175177 (청구항 24; 페이지 139-140);
교차-참고: MIM:604217; NP_006415.1; NM_006424_1
(7) 세마 5b (FLJ10372, KIAA1445, Mm.42015, SEMA5B, SEMAG, 세마포린 5b Hlog, 세마 도메인, 7개 트롬보스폰딘 반복체 (유형 1 및 유형 1-유사), 막경유 도메인 (TM) 그리고 짧은 세포질 도메인, (세마포린) 5B, Genbank 기탁 번호 AB040878)
Nagase T., et al (2000) DNA Res. 7 (2):143-150); WO2004000997 (청구항 1); WO2003003984 (청구항 1); WO200206339 (청구항 1; 페이지 50); WO200188133 (청구항 1; 페이지 41-43, 48-58); WO2003054152 (청구항 20); WO2003101400 (청구항 11);
기탁: Q9P283; EMBL; AB040878; BAA95969.1. Genew; HGNC:10737;
(8) PSCA hlg(2700050C12Rik, C530008O16Rik, RIKEN cDNA 2700050C12, RIKEN cDNA 2700050C12 유전자, Genbank 기탁 번호 AY358628); Ross et al (2002) Cancer Res. 62:2546-2553; US2003129192 (청구항 2); US2004044180 (청구항 12); US2004044179 (청구항 11); US2003096961 (청구항 11); US2003232056 (실시예 5); WO2003105758 (청구항 12); US2003206918 (실시예 5); EP1347046 (청구항 1); WO2003025148 (청구항 20);
교차-참고: GI:37182378; AAQ88991.1; AY358628_1
(9) ETBR (엔도텔린 유형 B 수용체, Genbank 기탁 번호 AY275463);
Nakamuta M., et al Biochem. Biophys. Res. Commun. 177, 34-39, 1991; Ogawa Y., et al Biochem. Biophys. Res. Commun. 178, 248-255, 1991; Arai H., et al Jpn. Circ. J. 56, 1303-1307, 1992; Arai H., et al J. Biol. Chem. 268, 3463-3470, 1993; Sakamoto A., Yanagisawa M., et al Biochem. Biophys. Res. Commun. 178, 656-663, 1991; Elshourbagy N.A., et al J. Biol. Chem. 268, 3873-3879, 1993; Haendler B., et al J. Cardiovasc. Pharmacol. 20, s1-S4, 1992; Tsutsumi M., et al Gene 228, 43-49, 1999; Strausberg R.L., et al Proc. Natl. Acad. Sci. U.S.A. 99, 16899-16903, 2002; Bourgeois C., et al J. Clin. Endocrinol. Metab. 82, 3116-3123, 1997; Okamoto Y., et al Biol. Chem. 272, 21589-21596, 1997; Verheij J.B., et al Am. J. Med. Genet. 108, 223-225, 2002; Hofstra R.M.W., et al Eur.J. Hum.Genet. 5, 180-185, 1997; PuffenbergerE.G., et al Cell 79, 1257-1266, 1994; Attie T., et al, Hum.Mol. Genet. 4, 2407-2409, 1995; AuricchioA., et al Hum.Mol. Genet. 5:351-354, 1996; Amiel J., et al Hum.Mol. Genet. 5, 355-357, 1996; Hofstra R.M.W., et al Nat. Genet. 12, 445-447, 1996; Svensson P.J., et al Hum.Genet. 103, 145-148, 1998; FuchsS., et al Mol. Med. 7, 115-124, 2001; Pingault V., et al (2002) Hum.Genet. 111, 198-206; WO2004045516 (청구항 1); WO2004048938 (실시예 2); WO2004040000 (청구항 151); WO2003087768 (청구항 1); WO2003016475 (청구항 1); WO2003016475 (청구항 1); WO200261087 (도 1); WO2003016494 (도 6); WO2003025138 (청구항 12; 페이지 144); WO200198351 (청구항 1; 페이지 124-125); EP522868 (청구항 8; 도 2); WO200177172 (청구항 1; 페이지 297-299); US2003109676; US6518404 (도 3); US5773223 (청구항 1a; Col 31-34); WO2004001004;
(10) MSG783 (RNF124, 가상의 단백질 FLJ20315, Genbank 기탁 번호 NM_017763);
WO2003104275 (청구항 1); WO2004046342 (실시예 2); WO2003042661 (청구항 12); WO2003083074 (청구항 14; 페이지 61); WO2003018621 (청구항 1); WO2003024392 (청구항 2; 도 93); WO200166689 (실시예 6);
교차-참고: LocusID:54894; NP_060233.2; NM_017763_1
(11) STEAP2 (HGNC_8639, IPCA-1, PCANAP1, STAMP1, STEAP2, STMP, 전립선 암 연관된 유전자 1, 전립선 암 연관된 단백질 1, 전립선의 6개 막경유 상피 항원 2, 6개 막경유 전립선 단백질, Genbank 기탁 번호 AF455138)
Lab. Invest. 82 (11):1573-1582 (2002)); WO2003087306; US2003064397 (청구항 1; 도 1); WO200272596 (청구항 13; 페이지 54-55); WO200172962 (청구항 1; 도 4B); WO2003104270 (청구항 11); WO2003104270 (청구항 16); US2004005598 (청구항 22); WO2003042661 (청구항 12); US2003060612 (청구항 12; 도 10); WO200226822 (청구항 23; 도 2); WO200216429 (청구항 12; 도 10);
교차-참고: GI:22655488; AAN04080.1; AF455138_1
(12) TrpM4 (BR22450, FLJ20041, TRPM4, TRPM4B, 일과성 수용체 잠재적 양이온 채널, 서브패밀리 M, 구성원 4, Genbank 기탁 번호 NM_017636)
Xu,X.Z., et al Proc. Natl. Acad. Sci. U.S.A. 98 (19):10692-10697 (2001), Cell 109 (3):397-407 (2002), J. Biol. Chem. 278 (33):30813-30820 (2003)); US2003143557 (청구항 4); WO200040614 (청구항 14; 페이지 100-103); WO200210382 (청구항 1; 도 9A); WO2003042661 (청구항 12); WO200230268 (청구항 27; 페이지 391); US2003219806 (청구항 4); WO200162794 (청구항 14; 도 1A-D);
교차-참고: MIM:606936; NP_060106.2; NM_017636_1
(13) CRIPTO (CR, CR1, CRGF, CRIPTO, TDGF1, 기형암종-유도된 성장 인자, Genbank 기탁 번호 NP_003203 or NM_003212)
Ciccodicola, A., et al EMBO J. 8 (7):1987-1991 (1989), Am. J. Hum.Genet. 49 (3):555-565 (1991)); US2003224411 (청구항 1); WO2003083041 (실시예 1); WO2003034984 (청구항 12); WO200288170 (청구항 2; 페이지 52-53); WO2003024392 (청구항 2; 도 58); WO200216413 (청구항 1; 페이지 94-95, 105); WO200222808 (청구항 2; 도 1); US5854399 (실시예 2; Col 17-18); US5792616 (도 2);
교차-참고: MIM:187395; NP_003203.1; NM_003212_1
(14) CD21 (CR2 (보체 수용체 2) 또는 C3DR (C3d/엡스테인 바르 바이러스 수용체) 또는 Hs.73792 Genbank 기탁 번호 M26004)
Fujisakuet al (1989) J. Biol. Chem. 264 (4):2118-2125); Weis J.J., et al J. Exp. Med. 167, 1047-1066, 1988; Moore M., et al Proc. Natl. Acad. Sci. U.S.A. 84, 9194-9198, 1987; Barel M., et al Mol. Immunol. 35, 1025-1031, 1998; Weis J.J., et al Proc. Natl. Acad. Sci. U.S.A. 83, 5639-5643, 1986; Sinha S.K., et al (1993) J. Immunol. 150, 5311-5320; WO2004045520 (실시예 4); US2004005538 (실시예 1); WO2003062401 (청구항 9); WO2004045520 (실시예 4); WO9102536 (도 9.1-9.9); WO2004020595 (청구항 1);
기탁: P20023; Q13866; Q14212; EMBL; M26004; AAA35786.1.
(15) CD79b (CD79B, CD79β, IGb (면역글로블린-연관된 베타), B29, Genbank 기탁 번호 NM_000626 또는 11038674)
Proc. Natl. Acad. Sci. U.S.A. (2003) 100 (7):4126-4131, Blood (2002) 100 (9):3068-3076, Mulleret al (1992) Eur.J. Immunol. 22 (6):1621-1625); WO2004016225 (청구항 2, 도 140); WO2003087768, US2004101874 (청구항 1, 페이지 102); WO2003062401 (청구항 9); WO200278524 (실시예 2); 미국2002150573 (청구항 5, 페이지 15); US5644033; WO2003048202 (청구항 1, 페이지 306 및 309); WO 99/558658, US6534482 (청구항 13, 도 17A/B); WO200055351 (청구항 11, 페이지 1145-1146);
교차-참고: MIM:147245; NP_000617.1; NM_000626_1
(16) FcRH2 (IFGP4, IRTA4, SPAP1A ( 포스파타제 엥커 단백질 1a이 함유된 SH2 도메인), SPAP1B, SPAP1C, Genbank 기탁 번호 NM_030764, AY358130)
Genome Res. 13 (10):2265-2270 (2003), Immunogenetics 54 (2):87-95 (2002), Blood 99 (8):2662-2669 (2002), Proc. Natl. Acad. Sci. U.S.A. 98 (17):9772-9777 (2001), Xu,M.J., et al (2001) Biochem. Biophys. Res. Commun. 280 (3):768-775; WO2004016225 (청구항 2); WO2003077836; WO200138490 (청구항 5; 도 18D-1-18D-2); WO2003097803 (청구항 12); WO2003089624 (청구항 25);
교차-참고: MIM:606509; NP_110391.2; NM_030764_1
(17) HER2 (ErbB2, Genbank 기탁 번호 M11730)
Coussens L., et al Science (1985) 230(4730):1132-1139); Yamamoto T., et al Nature 319, 230-234, 1986; Semba K., et al Proc. Natl. Acad. Sci. U.S.A. 82, 6497-6501, 1985; Swiercz J.M., et al J. Cell Biol. 165, 869-880, 2004; KuhnsJ.J., et al J. Biol. Chem. 274, 36422-36427, 1999; Cho H.-S., et al Nature 421, 756-760, 2003; Ehsani A., et al (1993) Genomics 15, 426-429; WO2004048938 (실시예 2); WO2004027049 (도 1I); WO2004009622; WO2003081210; WO2003089904 (청구항 9); WO2003016475 (청구항 1); US2003118592; WO2003008537 (청구항 1); WO2003055439 (청구항 29; 도 1A-B); WO2003025228 (청구항 37; 도 5C); WO200222636 (실시예 13; 페이지 95-107); WO200212341 (청구항 68; 도 7); WO200213847 (페이지 71-74); WO200214503 (페이지 114-117); WO200153463 (청구항 2; 페이지 41-46); WO200141787 (페이지 15); WO200044899 (청구항 52; 도 7); WO200020579 (청구항 3; 도 2); US5869445 (청구항 3; Col 31-38); WO9630514 (청구항 2; 페이지 56-61); EP1439393 (청구항 7); WO2004043361 (청구항 7); WO2004022709; WO200100244 (실시예 3; 도 4);
기탁: P04626; EMBL; M11767; AAA35808.1. EMBL; M11761; AAA35808.1.
(18) NCA (CEACAM6, Genbank 기탁 번호 M18728);
Barnett T., et al Genomics 3, 59-66, 1988; Tawaragi Y., et al Biochem. Biophys. Res. Commun. 150, 89-96, 1988; Strausberg R.L., et al Proc. Natl. Acad. Sci. U.S.A. 99:16899-16903, 2002; WO2004063709; EP1439393 (청구항 7); WO2004044178 (실시예 4); WO2004031238; WO2003042661 (청구항 12); WO200278524 (실시예 2); WO200286443 (청구항 27; 페이지 427); WO200260317 (청구항 2);
기탁: P40199; Q14920; EMBL; M29541; AAA59915.1. EMBL; M18728;
(19) MDP (DPEP1, Genbank 기탁 번호 BC017023)
Proc. Natl. Acad. Sci. U.S.A. 99 (26):16899-16903 (2002)); WO2003016475 (청구항 1); WO200264798 (청구항 33; 페이지 85-87); JP05003790 (도 6-8); WO9946284 (도 9);
교차-참고: MIM:179780; AAH17023.1; BC017023_1
(20) IL20Rα (IL20Ra, ZCYTOR7, Genbank 기탁 번호 AF184971);
Clark H.F., et al Genome Res. 13, 2265-2270, 2003; MungallA.J., et al Nature 425, 805-811, 2003; Blumberg H., et al Cell 104, 9-19, 2001; DumoutierL., et al J. Immunol. 167, 3545-3549, 2001; Parrish-Novak J., et al J. Biol. Chem. 277, 47517-47523, 2002; Pletnev S., et al (2003) Biochemistry 42:12617-12624; Sheikh F., et al (2004) J. Immunol. 172, 2006-2010; EP1394274 (실시예 11); US2004005320 (실시예 5); WO2003029262 (페이지 74-75); WO2003002717 (청구항 2; 페이지 63); WO200222153 (페이지 45-47); US2002042366 (페이지 20-21); WO200146261 (페이지 57-59); WO200146232 (페이지 63-65); WO9837193 (청구항 1; 페이지 55-59);
기탁: Q9UHF4; Q6UWA9; Q96SH8; EMBL; AF184971; AAF01320.1.
(21) 브레비칸(Brevican) (BCAN, BEHAB, Genbank 기탁 번호 AF229053)
Gary S.C., et al GENE 256, 139-147, 2000; Clark H.F., et al Genome Res. 13, 2265-2270, 2003; Strausberg R.L., et al Proc. Natl. Acad. Sci. U.S.A. 99, 16899-16903, 2002; US2003186372 (청구항 11); US2003186373 (청구항 11); US2003119131 (청구항 1; 도 52); US2003119122 (청구항 1; 도 52); US2003119126 (청구항 1); US2003119121 (청구항 1; 도 52); US2003119129 (청구항 1); US2003119130 (청구항 1); US2003119128 (청구항 1; 도 52); US2003119125 (청구항 1); WO2003016475 (청구항 1); WO200202634 (청구항 1);
(22) EphB2R (DRT, ERK, Hek5, EPHT3, Tyro5, Genbank 기탁 번호 NM_004442)
Chan,J. and Watt, V.M., Oncogene 6 (6), 1057-1061 (1991) Oncogene 10 (5):897-905 (1995), Annu. Rev. Neurosci. 21:309-345 (1998), Int. Rev. Cytol. 196:177-244 (2000)); WO2003042661 (청구항 12); WO200053216 (청구항 1; 페이지 41); WO2004065576 (청구항 1); WO2004020583 (청구항 9); WO2003004529 (페이지 128-132); WO200053216 (청구항 1; 페이지 42);
교차-참고: MIM:600997; NP_004433.2; NM_004442_1
(23) ASLG659 (B7h, Genbank 기탁 번호 AX092328)
US20040101899 (청구항 2); WO2003104399 (청구항 11); WO2004000221 (도 3); US2003165504 (청구항 1); US2003124140 (실시예 2); US2003065143 (도 60); WO2002102235 (청구항 13; 페이지 299); US2003091580 (실시예 2); WO200210187 (청구항 6; 도 10); WO200194641 (청구항 12; 도 7b); WO200202624 (청구항 13; 도 1A-1B); US2002034749 (청구항 54; 페이지 45-46); WO200206317 (실시예 2; 페이지 320-321, 청구항 34; 페이지 321-322); WO200271928 (페이지 468-469); WO200202587 (실시예 1; 도 1); WO200140269 (실시예 3; 페이지 190-192); WO200036107 (실시예 2; 페이지 205-207); WO2004053079 (청구항 12); WO2003004989 (청구항 1); WO200271928 (페이지 233-234, 452-453); WO 0116318;
(24) PSCA (전립선 줄기 세포 항원 전구물질, Genbank 기탁 번호 AJ297436)
Reiter R.E., et al Proc. Natl. Acad. Sci. U.S.A. 95, 1735-1740, 1998; GuZ., et al Oncogene 19, 1288-1296, 2000; Biochem. Biophys. Res. Commun. (2000) 275(3):783-788; WO2004022709; EP1394274 (실시예 11); US2004018553 (청구항 17); WO2003008537 (청구항 1); WO200281646 (청구항 1; 페이지 164); WO2003003906 (청구항 10; 페이지 288); WO200140309 (실시예 1; 도 17); US2001055751 (실시예 1; 도 1b); WO200032752 (청구항 18; 도 1); WO9851805 (청구항 17; 페이지 97); WO9851824 (청구항 10; 페이지 94); WO9840403 (청구항 2; 도 1B);
기탁: O43653; EMBL; AF043498; AAC39607.1.
(25) GEDA (Genbank 기탁 번호 AY260763);
AAP14954 지방종 HMGIC 융합-짝-유사 단백질 /pid=AAP14954.1 - 호모 사피엔스
종: 호모 사피엔스 (인간)
WO2003054152 (청구항 20); WO2003000842 (청구항 1); WO2003023013 (실시예 3, 청구항 20); US2003194704 (청구항 45);
교차-참고: GI:30102449; AAP14954.1; AY260763_1
(26) BAFF-R (B 세포 -활성화 인자 수용체, BLyS 수용체 3, BR3, Genbank 기탁 번호 AF116456); BAFF 수용체 /pid=NP_443177.1 - 호모 사피엔스
Thompson, J.S., et al Science 293 (5537), 2108-2111 (2001); WO2004058309; WO2004011611; WO2003045422 (실시예; 페이지 32-33); WO2003014294 (청구항 35; 도 6B); WO2003035846 (청구항 70; 페이지 615-616); WO200294852 (Col 136-137); WO200238766 (청구항 3; 페이지 133); WO200224909 (실시예 3; 도 3);
교차-참고: MIM:606269; NP_443177.1; NM_052945_1; AF132600
(27) CD22 (B-세포 수용체 CD22-B 아이소폼, BL-CAM, Lyb-8, Lyb8, SIGLEC-2, FLJ22814, Genbank 기탁 번호 AK026467);
Wilson et al (1991) J. Exp. Med. 173:137-146; WO2003072036 (청구항 1; 도 1);
교차-참고: MIM:107266; NP_001762.1; NM_001771_1
(28) CD79a (CD79A, CD79α, 면역글로블린-연관된 알파, Ig 베타 (CD79B)와 공유적으로 상호작용하고, Ig M 분자와 함께 이 표면에서 복합체를 형성하고, B-세포 분화에 관련된 신호를 변환시키는 B 세포-특이적 단백질), pI: 4.84, MW: 25028 TM: 2 [P] 유전자 염색체: 19q13.2, Genbank 기탁 번호 NP_001774.10)
WO2003088808, US20030228319; WO2003062401 (청구항 9); US2002150573 (청구항 4, 페이지 13-14); WO9958658 (청구항 13, 도 16); WO9207574 (도 1); US5644033; Ha et al (1992) J. Immunol. 148(5):1526-1531; Muelleret al (1992) Eur.J. Biochem. 22:1621-1625; Hashimoto et al (1994) Immunogenetics 40(4):287-295; Preud'homme et al (1992) Clin. Exp. Immunol. 90(1):141-146; Yuet al (1992) J. Immunol. 148(2) 633-637; Sakaguchi et al (1988) EMBO J. 7(11):3457-3464;
(29) CXCR5 (버킷의 림프종 수용체 1, CXCL13 케모킨에 의해 활성화되고, 림프구 이동 및 체액 방어에 기능을 하며, HIV-2 감염 및 AIDS, 림프종, 골수종, 그리고 백혈병의 발생에 역할을 아마도 하는 G 단백질-연결된 수용체); 372 aa, pI: 8.54 MW: 41959 TM: 7 [P] 유전자 염색체: 11q23.3, Genbank 기탁 번호 NP_001707.1)
WO2004040000; WO2004015426; US2003105292 (실시예 2); US6555339 (실시예 2); WO200261087 (도 1); WO200157188 (청구항 20, 페이지 269); WO200172830 (페이지 12-13); WO200022129 (실시예 1, 페이지 152-153, 실시예 2, 페이지 254-256); WO9928468 (청구항 1, 페이지 38); US5440021 (실시예 2, col 49-52); WO9428931 (페이지 56-58); WO9217497 (청구항 7, 도 5); Dobner et al (1992) Eur.J. Immunol. 22:2795-2799; Barella et al (1995) Biochem. J. 309:773-779;
(30) HLA-DOB (펩티드에 결합하고, 이를 CD4+ T 림프구로 제시하는 MHC 클라스 II 분자의 베타 서브유닛(Ia 항원)); 273 aa, pI: 6.56 MW: 30820 TM: 1 [P] 유전자 염색체: 6p21.3, Genbank 기탁 번호 NP_002111.1)
Tonnelle et al (1985) EMBO J. 4(11):2839-2847; Jonsson et al (1989) Immunogenetics 29(6):411-413; Beck et al (1992) J. Mol. Biol. 228:433-441; Strausberg et al (2002) Proc. Natl. Acad. Sci USA 99:16899-16903; Servenius et al (1987) J. Biol. Chem. 262:8759-8766; Beck et al (1996) J. Mol. Biol. 255:1-13; Naruse et al (2002) Tissue Antigens 59:512-519; WO9958658 (청구항 13, 도 15); US6153408 (Col 35-38); US5976551 (col 168-170); US6011146 (col 145-146); Kasahara et al (1989) Immunogenetics 30(1):66-68; Larhammar et al (1985) J. Biol. Chem. 260(26):14111-14119;
(31) P2X5 (퓨린성 수용체 P2X 리간드-게이트화된 이온 채널 5, 세포외 ATP에 생성된 이온 채널, 시냅스 전달 및 신경생성에 관여할 수 있으며, 결핍은 특발성 배뇨근 불안정의 병태생리학에 기여할 수 있다); 422 aa), pI: 7.63, MW: 47206 TM: 1 [P] 유전자 염색체: 17p13.3, Genbank 기탁 번호 NP_002552.2)
Le et al (1997) FEBS Lett. 418(1-2):195-199; WO2004047749; WO2003072035 (청구항 10); Touchman et al (2000) Genome Res. 10:165-173; WO200222660 (청구항 20); WO2003093444 (청구항 1); WO2003087768 (청구항 1); WO2003029277 (페이지 82);
(32) CD72 (B-세포 분화 항원 CD72, Lyb-2) 단백질 서열 전체 마에이티(maeaity)..tafrfpd (1.359; 359 aa), pI: 8.66, MW: 40225 TM: 1 [P] 유전자 염색체: 9p13.3, Genbank 기탁 번호 NP_001773.1)
WO2004042346 (청구항 65); WO2003026493 (페이지 51-52, 57-58); WO200075655 (페이지 105-106); Von Hoegen et al (1990) J. Immunol. 144(12):4870-4877; Strausberg et al (2002) Proc. Natl. Acad. Sci USA 99:16899-16903;
(33) LY64 (림프구 항원 64 (RP105), 류신 풍부 반복부 (LRR) 패밀리의 유형 I 막 단백질, B-세포 활성화 및 자가사멸을 조절하며, 기능 상실은 전신 홍반성 낭창이 있는 환자에서 질환 활성 증가와 연합됨); 661 aa, pI: 6.20, MW: 74147 TM: 1 [P] 유전자 염색체: 5q12, Genbank 기탁 번호 NP_005573.1)
US2002193567; WO9707198 (청구항 11, 페이지 39-42); Miura et al (1996) Genomics 38(3):299-304; Miura et al (1998) Blood 92:2815-2822; WO2003083047; WO9744452 (청구항 8, 페이지 57-61); WO200012130 (페이지 24-26);
(34) FcRH1 (Fc 수용체-유사 단백질 1, C2 유형 Ig-유사 및 ITAM 도메인을 함유한 면역글로블린 Fc 도메인에 대한 추정 수용체로써, B-림프구 분화에 기능을 할 수 있다); 429 aa, pI: 5.28, MW: 46925 TM: 1 [P] 유전자 염색체: 1q21-1q22, Genbank 기탁 번호 NP_443170.1)
WO2003077836; WO200138490 (청구항 6, 도 18E-1-18-E-2); Davis et al (2001) Proc. Natl. Acad. Sci USA 98(17):9772-9777; WO2003089624 (청구항 8); EP1347046 (청구항 1); WO2003089624 (청구항 7);
(35) IRTA2 (면역글로블린 슈퍼패밀리 수용체 전좌 연관된 2, B 세포 발달 및 림프종생성에 가능한 역할을 가진 추정 면역 수용체; 일부 B 세포 악성에서 전좌에 의한 유전자 하향조절이 발생됨); 977 aa, pI: 6.88 MW: 106468 TM: 1 [P] 유전자 염색체: 1q21, Genbank 기탁 번호 인간:AF343662, AF343663, AF343664, AF343665, AF369794, AF397453, AK090423, AK090475, AL834187, AY358085; 마우스:AK089756, AY158090, AY506558; NP_112571.1
WO2003024392 (청구항 2, 도 97); Nakayama et al (2000) Biochem. Biophys. Res. Commun. 277(1):124-127; WO2003077836; WO200138490 (청구항 3, 도 18B-1-18B-2);
(36) TENB2 (TMEFF2, 토모레굴린, TPEF, HPP1, TR, 추정 막경유 프로테오글리칸, 성장인자 및 폴리스태틴의 EGF/헤레굴린 패밀리와 관련됨); 374 aa, NCBI 기탁: AAD55776, AAF91397, AAG49451, NCBI RefSeq: NP_057276; NCBI 유전자: 23671; OMIM: 605734; SwissProt Q9UIK5; Genbank 기탁 번호 AF179274; AY358907, CAF85723, CQ782436
WO2004074320 (서열 번호 810); JP2004113151 (서열 번호 2, 4, 8); WO2003042661 (서열 번호 580); WO2003009814 (서열 번호 411); EP1295944 (페이지 69-70); WO200230268 (페이지 329); WO200190304 (서열 번호 2706); US2004249130; US2004022727; WO2004063355; US2004197325; US2003232350; US2004005563; US2003124579; Horie et al (2000) Genomics 67:146-152; Uchida et al (1999) Biochem. Biophys. Res. Commun. 266:593-602; Liang et al (2000) Cancer Res. 60:4907-12; Glynne-Jones et al (2001) Int J Cancer. Oct 15;94(2):178-84;
(37) PMEL17 (은 동족체; SILV; D12S53E; PMEL17; SI; SIL); ME20; gp100) BC001414; BT007202; M32295; M77348; NM_006928; McGlinchey, R.P. et al (2009) Proc. Natl. Acad. Sci. U.S.A. 106 (33), 13731-13736; Kummer,M.P. et al (2009) J. Biol. Chem. 284 (4), 2296-2306;
(38) TMEFF1 (EGF-유사 및 2개의 폴리스태틴-유사 도메인 1을 갖는 막 경유 단백질; 토모레굴린-1); H7365; C9orf2; C9ORF2; U19878; X83961; NM_080655; NM_003692; Harms, P.W. (2003) Genes Dev. 17 (21), 2624-2629; Gery, S. et al (2003) Oncogene 22 (18):2723-2727;
(39) GDNF-Ra1 (GDNF 패밀리 수용체 알파 1; GFRA1; GDNFR; GDNFRA; RETL1; TRNR1; RET1L; GDNFR-알파1; GFR-알파-1); U95847; BC014962; NM_145793 NM_005264; Kim, M.H. et al (2009) Mol. Cell. Biol. 29 (8), 2264-2277; Treanor, J.J. et al (1996) Nature 382 (6586):80-83;
(40) Ly6E (림프구 항원 6 복합체, 좌 E; Ly67,RIG-E,SCA-2,TSA-1); NP_002337.1; NM_002346.2; de Nooij-van Dalen, A.G. et al (2003) Int. J. Cancer 103 (6), 768-774; Zammit, D.J. et al (2002) Mol. Cell. Biol. 22 (3):946-952; WO 2013/17705;
(41) TMEM46 (쉬사(shisa) 동족체 2 (제노푸스 레비스(xenopus laevis)); SHISA2); NP_001007539.1; NM_001007538.1; Furushima,K. et al (2007) Dev. Biol. 306 (2), 480-492; Clark, H.F. et al (2003) Genome Res. 13 (10):2265-2270;
(42) Ly6G6D (림프구 항원 6 복합체, 좌 G6D; Ly6-D, MEGT1); NP_067079.2; NM_021246.2; Mallya, M. et al (2002) Genomics 80 (1):113-123; Ribas, G. et al (1999) J. Immunol. 163 (1):278-287;
(43) LGR5 (류신-풍부 반복체-함유 G 단백질-연결된 수용체 5; GPR49, GPR67); NP_003658.1; NM_003667.2; Salanti, G. et al (2009) Am. J. Epidemiol. 170 (5):537-545; Yamamoto, Y. et al (2003) Hepatology 37 (3):528-533;
(44) RET (ret 프로토-종양유전자; MEN2A; HSCR1; MEN2B; MTC1; PTC; CDHF12; Hs.168114; RET51; RET-ELE1); NP_066124.1; NM_020975.4; Tsukamoto, H. et al (2009) Cancer Sci. 100 (10):1895-1901; Narita, N. et al (2009) Oncogene 28 (34):3058-3068;
(45) LY6K (림프구 항원 6 복합체, 좌 K; LY6K; HSJ001348; FLJ35226); NP_059997.3; NM_017527.3; Ishikawa, N. et al (2007) Cancer Res. 67 (24):11601-11611; de Nooij-van Dalen, A.G. et al (2003) Int. J. Cancer 103 (6):768-774;
(46) GPR19 (G 단백질-연결된 수용체 19; Mm.4787); NP_006134.1; NM_006143.2; Montpetit, A. and Sinnett, D. (1999) Hum.Genet. 105 (1-2):162-164; O'Dowd, B.F. et al (1996) FEBS Lett. 394 (3):325-329;
(47) GPR54 (KISS1 수용체; KISS1R; GPR54; HOT7T175; AXOR12); NP_115940.2; NM_032551.4; Navenot, J.M. et al (2009) Mol. Pharmacol. 75 (6):1300-1306; Hata, K. et al (2009) AntiCancer Res. 29 (2):617-623;
(48) ASPHD1 (아스파르테이트 베타-히드록실라제 도메인 함유 1; LOC253982); NP_859069.2; NM_181718.3; Gerhard, D.S. et al (2004) Genome Res. 14 (10B):2121-2127;
(49) 티로시나제 (TYR; OCAIA; OCA1A; 티로시나제; SHEP3); NP_000363.1; NM_000372.4; Bishop, D.T. et al (2009) Nat. Genet. 41 (8):920-925; Nan, H. et al (2009) Int. J. Cancer 125 (4):909-917;
(50) TMEM118 (링 핑거 단백질, 막경유 2; RNFT2; FLJ14627); NP_001103373.1; NM_001109903.1; Clark, H.F. et al (2003) Genome Res. 13 (10):2265-2270; Scherer, S.E. et al (2006) Nature 440 (7082):346-351
(51) GPR172A (G 단백질-연결된 수용체 172A; GPCR41; FLJ11856; D15Ertd747e); NP_078807.1; NM_024531.3; Ericsson, T.A. et al (2003) Proc. Natl. Acad. Sci. U.S.A. 100 (11):6759-6764; Takeda, S. et al (2002) FEBS Lett. 520 (1-3):97-101.
(52) CD33, 시알산 결합, 면역글로블린-유사 렉틴 패밀리의 구성원으로써, 67-kDa 당화된 막경유 단백질이다. CD33은 범해진(committed) 골수 세포 및 적혈구 전구 세포 이외에 대부분의 골수 및 단핵구 백혈병 세포에서 발현된다. 이것은 가장 초기의 다분화능 줄기 세포, 성숙한 과립구, 림프구 세포 또는 비조혈 세포에서 볼 수 없다(Sabbath et al., (1985) J. Clin. Invest. 75:756-56; Andrews et al., (1986) Blood 68:1030-5). CD33은 세포질 꼬리에 두 개의 티로신 잔기를 가지고 있으며, 각각은 많은 억제 수용체에서 볼 수 있는 면역 수용체 티로신-계 억제 모티프 (ITIM)와 유사한 소수성 잔기가 뒤 따른다.
(53) CLL-1 (CLEC12A, MICL, 및 DCAL2), 이는 C-유형 렉틴/C-유형 렉틴-유사 도메인 (CTL/CTLD) 슈퍼패밀리의 구성원을 인코드한다. 이 패밀리의 멤버들은 공통적인 단백질 폴드(fold)를 공유하고, 다양한 기능들, 이를 테면 세포 흡착, 세포-세포 신호생성, 당단백질 전환, 그리고 염증 및 면역 반응에서의 역할을 갖는다. 이 유전자에 의해 인코드된 단백질은 과립구 및 단핵구 기능의 음성 조절인자다. 이 유전자의 몇가지 대체 접목된 전사 변이체들이 설명되었지만, 이들 변이체들 일부의 전장 성질은 결정되지 않았다. 이 유전자는 염색체 12p13 상에서 자연 킬러 유전자 복합체 영역 안에 다른 CTL/CTLD 슈퍼패밀리 멤버들과 밀접하게 연계되어 있다 (Drickamer K (1999) Curr.Opin. Struct. Biol. 9 (5):585-90; van Rhenen A, et al., (2007) Blood 110 (7):2659-66; Chen CH, et al. (2006) Blood 107 (4):1459-67; Marshall AS, et al. (2006) Eur.J. Immunol. 36 (8):2159-69; Bakker AB, et al (2005) Cancer Res. 64 (22):8443-50; Marshall AS,, et al (2004) J. Biol. Chem. 279 (15):14792-802). CLL-1은 다음을 포함하는 유형 II 막통과 수용체인 것으로 나타났다: 단일 C-유형 렉틴-유사 도메인 (칼슘 또는 슈가에 결합하는 것으로 예상되지 않는), 대(stalk) 영역, 막통과 도메인 그리고 ITIM 모티프를 함유하는 짧은 세포질 꼬리.
항-CD22 항체
특정 구체예들에서, US 8226945:에 따라 표 3A 및 3B에서 ADC의 항-CD22 항체는 3개의 경쇄 초가변 영역 (HVR-L1, HVR-L2 및 HVR-L3)과 3개의 중쇄 초가변 영역 (HVR-H1, HVR-H2 및 HVR-H3)을 포함한다:
HVR-L1 RSSQSIVHSVGNTFLE (서열 번호:1)
HVR-L2 KVSNRFS (서열 번호:2)
HVR-L3 FQGSQFPYT (서열 번호:3)
HVR-H1 GYEFSRSWMN (서열 번호:4)
HVR-H2 GRIYPGDGDTNYSGKFKG (서열 번호:5)
HVR-H3 DGSSWDWYFDV (서열 번호:6)
항-Ly6E 항체
특정 구체예들에서, 표 3A 와 3B의 ADC는 항-Ly6E 항체를 포함한다. 레티논산으로 또한 알려진, 림프구 항원 6 복합체, 좌 E (Ly6E)는 유전자 E (RIG-E) 및 줄기 세포 항원 2 (SCA-2)를 유도한다. 이것은 알려진 기능도 없고, 공지된 결합 짝도 없는, GPI 연계된, 131개 아미노산 길이, ~8.4kDa 단백질이다. 처음에는 마우스의 흉선 수질 상피 세포, 미성숙 흉선 세포에서 발현된 전사물로 처음 확인되었다(Mao, et al. (1996) Proc. Natl. Acad. Sci. U.S.A. 93:5910-5914). 일부 구체예들에서, 본 발명은 PCT 공개 번호. WO 2013/177055에서 기술된 항-Ly6E 항체가 포함된 면역콘쥬게이트를 제공한다.
일부 구체예들에서, 본 발명은 다음으로부터 선별된 최소한 1, 2, 3, 4, 5, 또는 6개의 HVRs이 포함된 결합 도메인을 가진 항-Ly6E 항체를 제공한다: (a) 서열 번호: 12의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H1; (b) 서열 번호: 13의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H2; (c) 서열 번호: 14의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H3; (d) 서열 번호: 9의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-L1; (e) 서열 번호: 10의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-L2; 그리고 (f) 서열 번호: 11의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-L3이 포함된 항-Ly6E 항체를 포함하는 항체-약물 콘쥬게이트를 제공한다.
한 측면에서, 본 발명은 (a) 서열 번호: 12의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H1; (b) 서열 번호: 13의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H2; 그리고 (c) 서열 번호: 14의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H3으로부터 선택된 적어도 1, 2, 또는 3개 모두의 VH HVR이 포함된 항체를 포함하는 항체-약물 콘쥬게이트를 제공한다. 추가 구체예에서, 상기 항체는 (a) 서열 번호: 12의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H1; (b) 서열 번호: 13의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H2; 그리고 (c) 서열 번호: 14의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H3을 포함한다.
또다른 측면에서, 본 발명은 (a) 서열 번호: 9의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-L1; (b) 서열 번호: 10의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-L2; 그리고 (c) 서열 번호: 11의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-L3으로부터 선택된 적어도 1, 2, 또는 3개 모두의 VL HVR가 포함된 항체를 포함하는 항체-약물 콘쥬게이트를 제공한다. 한 구체예에서, 상기 항체는 (a) 서열 번호: 9의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-L1; (b) 서열 번호: 10의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-L2; 그리고 (c) 서열 번호: 11의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-L3을 포함한다.
또다른 측면에서, 본 발명의 항체-약물 콘쥬게이트는 다음을 포함하는 항체를 포함한다: (a) (i) 서열 번호: 12의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H1, (ii) 서열 번호: 13의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H2, 그리고 (iii) 서열 번호: 14의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H3으로부터 선별된 최소한 1, 최소한 2 또는 이들 3개 모두의 VH HVR이 포함된 VH 도메인; 그리고 (b) (i) 서열 번호: 9의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-L1, (ii) 서열 번호: 10의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-L2, 그리고 (iii) 서열 번호: 11의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-L3으로부터 선별된 최소한 1, 최소한 2 또는 이들 3개 모두의 VL HVR이 포함된 VL 도메인.
또다른 측면에서, 본 발명은 (a) 서열 번호: 12의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H1; (b) 서열 번호: 13의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H2; (c) 서열 번호: 14의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H3; (d) 서열 번호: 9의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-L1; (e) 서열 번호: 10의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-L2; 그리고 (f) 서열 번호: 11의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-L3이 포함된 항체를 포함하는 항체-약물 콘쥬게이트를 제공한다.
상기 임의의 구체예에서, 항체-약물 콘쥬게이트의 항-Ly6E 항체는 인간화된다. 한 구체예에서, 항-Ly6E 항체는 상기 구체예들중 임의의 것에서와 같이, HVRs를 포함하고, 인간 수용체 틀구조, 예로써, 인간 면역글로블린 틀구조 또는 인간 콘센수스 틀구조를 더 포함한다.
또다른 측면에서, 항체-약물 콘쥬게이트의 항-Ly6E 항체는 서열 번호: 8의 아미노산 서열에 대하여 적어도 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99%, 또는 100% 서열 동일성을 갖는 중쇄 가변 도메인 (VH) 서열을 포함한다. 특정 구체예들에서, 서열 번호:8의 아미노산 서열에 대하여 적어도 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 또는 99% 동일성을 갖는 VH 서열은 기준 서열에 대하여 치환 (가령, 보존적 치환), 삽입, 또는 결손을 함유하지만, 이 서열을 포함하는 항-Ly6E 항체는 여전히 Ly6E에 결합하는 능력을 보유한다. 특정 구체예들에서, 서열 번호: 8에서 총 1 내지 10개의 아미노산이 치환, 삽입 및/또는 결실되었다. 특정 구체예들에서, 서열 번호: 8에서 총 1 내지 5개의 아미노산이 치환, 삽입 및/또는 결실되었다. 특정 구체예들에서, 치환, 삽입, 또는 결손은 HVRs의 외부 영역(가령, FRs)에서 발생된다. 임의선택적으로, 상기 항-Ly6E 항체는 서열 번호: 8의 전사-후 변형을 비롯하여 이 서열의 VH 서열을 포함한다. 특정 구체예에서, VH는 (a) 서열 번호: 12의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H1; (b) 서열 번호: 13의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H2; 그리고 (c) 서열 번호: 14의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H3으로부터 선택된 1, 2 또는 3개의 HVRs를 포함한다.
또다른 측면에서, 항체-약물 콘쥬게이트의 항-Ly6E 항체가 제공되는데, 이 항체는 서열 번호: 7의 아미노산 서열에 대하여 적어도 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99%, 또는 100% 서열 동일성을 갖는 경쇄 가변 도메인 (VL) 서열을 포함한다. 특정 구체예들에서, 서열 번호:7의 아미노산 서열에 대하여 적어도 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 또는 99% 동일성을 갖는 VL 서열은 기준 서열에 대하여 치환 (가령, 보존적 치환), 삽입, 또는 결손을 함유하지만, 이 서열을 포함하는 항-Ly6E 항체는 여전히 Ly6E에 결합하는 능력을 보유한다. 특정 구체예들에서, 서열 번호: 7에서 총 1 내지 10개의 아미노산이 치환, 삽입 및/또는 결실되었다. 특정 구체예들에서, 서열 번호: 7에서 총 1 내지 5개의 아미노산이 치환, 삽입 및/또는 결실되었다. 특정 구체예들에서, 치환, 삽입, 또는 결손은 HVRs의 외부 영역(가령, FRs)에서 발생된다. 임의선택적으로, 상기 항-Ly6E 항체는 서열 번호: 7의 전사-후 변형을 비롯하여 이 서열의 VL 서열을 포함한다. 특정 구체예에서, VL은 (a) 서열 번호: 9의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-L1; (b) 서열 번호: 10의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-L2; 그리고 (c) 서열 번호: 11의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-L3으로부터 선택된 1, 2 또는 3개의 HVRs를 포함한다.
또다른 측면에서, 항-Ly6E 항체를 포함하는 항체-약물 콘쥬게이트가 제공되는데, 이때 상기 항체는 상기에서 제공된 구체예들중 임의의 것과 같이, VH와 상기에서 제공된 구체예들중 임의의 것과 같이, VL을 포함한다.
한 구체예에서, 항체-약물 콘쥬게이트가 제공되며, 이때 상기 항체는 차례로 서열 번호:8 및 서열 번호:7의 VH와 VL 서열, 그리고 이들 서열의 전사-후 변형을 포함한다.
추가 측면에서, 본원에서 제공되는 항-Ly6E 항체와 동일한 에피토프에 결합하는 항체를 포함하는 항체-약물 콘쥬게이트가 제공된다. 예로써, 특정 구체예들에서, 서열 번호: 8의 VH 서열과 서열 번호: 7의 VL 서열을 포함하고, 항-Ly6E 항체가 결합하는 동일한 에피토프에 결합되는 항체를 포함하는 면역콘쥬게이트가 제공된다.
본 발명의 추가 측면에서, 상기 구체예들중 임의의 것에 따른 항-Ly6E 항체는 인간 항체가 포함된 단일 클론 항체다. 한 구체예에서, 항체-약물 콘쥬게이트의 항-Ly6E 항체는 항체 단편, 가령, Fv, Fab, Fab', scFv, 디아바디, 또는 F(ab')2 단편이다. 또다른 구체예에서, 상기 항체는 실질적으로 본 명세서에서 정의된 바와 같은 전장 항체, 예로써, IgG1 항체, IgG2a 또는 다른 항체 클래스 또는 이소타입이다. 일부 구체예들에서, 서열 번호: 16 및 15를 차례로 포함하는 중쇄와 경쇄가 포함된 항-Ly6E 항체를 포함한다.
Ly6E 항체서열의 표
Figure pct00006
Figure pct00007
항-HER2 항체
특정 구체예들에서, 표 3A 와 3B의 ADC는 항-HER2 항체를 포함한다. 본 발명의 한 구체예에서, 본 발명의 ADC의 항-HER2 항체는 인간화된 항-HER2 항체, 가령, US 5821337의 표 3에서 기술된 huMAb4D5-1, huMAb4D5-2,huMAb4D5-3,huMAb4D5-4,huMAb4D5-5,huMAb4D5-6,huMAb4D5-7및 huMAb4D5-8를 포함하며, 이들은 참고자료에 편입된다. 이들 항체는 HER2에 결합하는 뮤린 항체의 보체-결정 영역(4D5)과 인간 틀구조 영역을 함유한다. 인간화된 항체 huMAb4D5-8는 상업적으로 상표명 HERCEPTIN®으로 이용되는 트라스투주마브로 지칭된다. 본 발명의 또다른 구체예에서, 본 발명의 ADC의 항-HER2 항체는 인간화된 항-HER2 항체, 가령, US7862817에서 기술된 인간화된 2C4를 포함한다. 예시적인 인간화된 2C4 항체는 상표명 PERJETA®으로 시판되는 페르투주마브이다.
본 발명의 또다른 구체예에서, 본 발명의 ADC의 항-HER2 항체는 인간화된 7C2 항-HER2 항체를 포함한다. 인간화된 7C2 항체는 항-HER2 항체다.
일부 구체예들에서, 본 발명은 다음으로부터 선별된 최소한 1, 2, 3, 4, 5, 또는 6개의 HVRs이 포함된 항-HER2 항체를 포함하는 항체-약물 콘쥬게이트를 제공한다: (a) 서열 번호: 22의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H1; (b) 서열 번호: 23, 27 또는 28의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H2; (c) 서열 번호: 24 또는 29의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H3; (d) 서열 번호: 19의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-L1; (e) 서열 번호: 20의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-L2; 그리고 (f) 서열 번호: 21의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-L3. 일부 구체예들에서, 본 발명은 다음으로부터 선별된 최소한 1, 2, 3, 4, 5, 또는 6개의 HVRs이 포함된 항-HER2 항체를 포함하는 항체-약물 콘쥬게이트를 제공한다: (a) 서열 번호: 22의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H1; (b) 서열 번호: 23의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H2; (c) 서열 번호: 24의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H3; (d) 서열 번호: 19의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-L1; (e) 서열 번호: 20의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-L2; 그리고 (f) 서열 번호: 21의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-L3.
한 측면에서, 본 발명은 (a) 서열 번호: 22의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H1; (b) 서열 번호: 23, 27 또는 28의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H2; 그리고 (c) 서열 번호: 24 또는 29의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H3으로부터 선택된 적어도 1, 2, 또는 3개 모두의 VH HVR이 포함된 항체를 포함하는 항체-약물 콘쥬게이트를 제공한다. 한 측면에서, 본 발명은 (a) 서열 번호: 22의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H1; (b) 서열 번호: 23의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H2; 그리고 (c) 서열 번호: 24의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H3으로부터 선택된 적어도 1, 2, 또는 3개 모두의 VH HVR이 포함된 항체를 포함하는 항체-약물 콘쥬게이트를 제공한다. 추가 구체예에서, 상기 항체는 (a) 서열 번호: 22의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H1; (b) 서열 번호: 23, 27, 또는 28의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H2; 그리고 (c) 서열 번호: 24 또는 29의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H3을 포함한다. 추가 구체예에서, 상기 항체는 (a) 서열 번호: 22의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H1; (b) 서열 번호: 23의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H2; 그리고 (c) 서열 번호: 24의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H3을 포함한다.
또다른 측면에서, 본 발명은 (a) 서열 번호: 19의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-L1; (b) 서열 번호: 20의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-L2; 그리고 (c) 서열 번호: 21의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-L3으로부터 선택된 적어도 1, 2, 또는 3개 모두의 VL HVR가 포함된 항체를 포함하는 항체-약물 콘쥬게이트를 제공한다. 한 구체예에서, 상기 항체는 (a) 서열 번호: 19의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-L1; (b) 서열 번호: 20의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-L2; 그리고 (c) 서열 번호: 21의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-L3을 포함한다.
또다른 측면에서, 본 발명의 항체-약물 콘쥬게이트는 다음을 포함하는 항체를 포함한다: (a) (i) 서열 번호: 22의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H1, (ii) 서열 번호: 23, 27 또는 28의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H2, 그리고 (iii) 서열 번호: 24 또는 29의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H3으로부터 선별된 최소한 1, 최소한 2 또는 이들 3개 모두의 VH HVR이 포함된 VH 도메인; 그리고 (b) (i) 서열 번호: 19의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-L1, (ii) 서열 번호: 20의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-L2, 그리고 (iii) 서열 번호: 21의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-L3으로부터 선별된 최소한 1, 최소한 2 또는 이들 3개 모두의 VL HVR이 포함된 VL 도메인. 또다른 측면에서, 본 발명의 항체-약물 콘쥬게이트는 다음을 포함하는 항체를 포함한다: (a) (i) 서열 번호: 22의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H1, (ii) 서열 번호: 23의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H2, 그리고 (iii) 서열 번호: 24의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H3으로부터 선별된 최소한 1, 최소한 2 또는 이들 3개 모두의 VH HVR이 포함된 VH 도메인; 그리고 (b) (i) 서열 번호: 19의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-L1, (ii) 서열 번호: 20의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-L2, 그리고 (iii) 서열 번호: 21의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-L3으로부터 선별된 최소한 1, 최소한 2 또는 이들 3개 모두의 VL HVR이 포함된 VL 도메인.
또다른 측면에서, 본 발명은 (a) 서열 번호: 22의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H1; (b) 서열 번호: 23, 27 또는 28의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H2; (c) 서열 번호: 24 또는 29의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H3; (d) 서열 번호: 19의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-L1; (e) 서열 번호: 20의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-L2; 그리고 (f) 서열 번호: 21의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-L3이 포함된 항체를 포함하는 항체-약물 콘쥬게이트를 제공한다. 또다른 측면에서, 본 발명은 (a) 서열 번호: 22의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H1; (b) 서열 번호: 23의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H2; (c) 서열 번호: 24의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H3; (d) 서열 번호: 19의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-L1; (e) 서열 번호: 20의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-L2; 그리고 (f) 서열 번호: 21의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-L3이 포함된 항체를 포함하는 항체-약물 콘쥬게이트를 제공한다.
상기 임의의 구체예에서, 항체-약물 콘쥬게이트의 항-HER2 항체는 인간화된다. 한 구체예에서, 항체-약물 콘쥬게이트의 항-HER2 항체는 상기 구체예들중 임의의 것에서와 같이, HVRs를 포함하고, 인간 수용체 틀구조, 예로써, 인간 면역글로블린 틀구조 또는 인간 콘센수스 틀구조를 더 포함한다.
또다른 측면에서, 항체-약물 콘쥬게이트의 항-HER2 항체는 서열 번호: 18의 아미노산 서열에 대하여 적어도 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99%, 또는 100% 서열 동일성을 갖는 중쇄 가변 도메인 (VH) 서열을 포함한다. 특정 구체예들에서, 서열 번호:18의 아미노산 서열에 대하여 적어도 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 또는 99% 동일성을 갖는 VH 서열은 기준 서열에 대하여 치환 (가령, 보존적 치환), 삽입, 또는 결손을 함유하지만, 이 서열을 포함하는 항-HER2 항체는 여전히 HER2에 결합하는 능력을 보유한다. 특정 구체예들에서, 서열 번호: 18에서 총 1 내지 10개의 아미노산이 치환, 삽입 및/또는 결실되었다. 특정 구체예들에서, 서열 번호: 18에서 총 1 내지 5개의 아미노산이 치환, 삽입 및/또는 결실되었다. 특정 구체예들에서, 치환, 삽입, 또는 결손은 HVRs의 외부 영역(가령, FRs)에서 발생된다. 임의선택적으로, 상기 항- HER2 항체는 서열 번호: 18의 전사-후 변형을 비롯하여 이 서열의 VH 서열을 포함한다. 특정 구체예에서, VH는 (a) 서열 번호: 22의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H1; (b) 서열 번호: 23의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H2; 그리고 (c) 서열 번호: 24의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H3으로부터 선택된 1, 2 또는 3개의 HVRs를 포함한다.
또다른 측면에서, 항체-약물 콘쥬게이트의 항-HER2 항체가 제공되는데, 이 항체는 서열 번호: 17의 아미노산 서열에 대하여 적어도 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99%, 또는 100% 서열 동일성을 갖는 경쇄 가변 도메인 (VL) 서열을 포함한다. 특정 구체예들에서, 서열 번호:17의 아미노산 서열에 대하여 적어도 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 또는 99% 동일성을 갖는 VL 서열은 기준 서열에 대하여 치환 (가령, 보존적 치환), 삽입, 또는 결손을 함유하지만, 이 서열을 포함하는 항-HER2 항체는 여전히 HER2에 결합하는 능력을 보유한다. 특정 구체예들에서, 서열 번호: 17에서 총 1 내지 10개의 아미노산이 치환, 삽입 및/또는 결실되었다. 특정 구체예들에서, 서열 번호: 17에서 총 1 내지 5개의 아미노산이 치환, 삽입 및/또는 결실되었다. 특정 구체예들에서, 치환, 삽입, 또는 결손은 HVRs의 외부 영역(가령, FRs)에서 발생된다. 임의선택적으로, 상기 항-HER2 항체는 서열 번호: 17의 전사-후 변형을 비롯하여 이 서열의 VL 서열을 포함한다. 특정 구체예에서, VL은 (a) 서열 번호: 19의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-L1; (b) 서열 번호: 20의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-L2; 그리고 (c) 서열 번호: 21의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-L3으로부터 선택된 1, 2 또는 3개의 HVRs를 포함한다.
또다른 측면에서, 항-HER2 항체를 포함하는 항체-약물 콘쥬게이트가 제공되는데, 이때 상기 항체는 상기에서 제공된 구체예들중 임의의 것과 같이, VH와 상기에서 제공된 구체예들중 임의의 것과 같이, VL을 포함한다.
한 구체예에서, 항체를 포함하는 항체-약물 콘쥬게이트가 제공되며, 이때 상기 항체는 차례로 서열 번호:18 및 서열 번호:17의 VH와 VL 서열, 그리고 이들 서열의 전사-후 변형을 포함한다.
한 구체예에서, 항체를 포함하는 항체-약물 콘쥬게이트가 제공되는데, 이때 상기 항체는 서열 번호:30의 인간화된 7C2.v2.2.LA (hu7C2) K149C 카파 경쇄 서열을 포함하다.
한 구체예에서, 항체를 포함하는 항체-약물 콘쥬게이트가 제공되는데, 이때 상기 항체는 서열 번호: 31의 Hu7C2 A118C IgG1 중쇄 서열을 포함한다.
추가 측면에서, 본원에서 제공되는 항-HER2 항체와 동일한 에피토프에 결합하는 항체를 포함하는 항체-약물 콘쥬게이트가 제공된다. 예로써, 특정 구체예들에서, 서열 번호: 18의 VH 서열과 서열 번호: 17의 VL 서열을 포함하고, 항-HER2 항체가 결합하는 동일한 에피토프에 결합되는 항체를 포함하는 면역콘쥬게이트가 제공된다.
본 발명의 추가 측면에서, 상기 구체예들중 임의의 것에 따른 항-HER2 항체는 인간 항체가 포함된 단일 클론 항체다. 한 구체예에서, 면역콘쥬게이트의 항-HER2 항체는 항체 단편, 가령, Fv, Fab, Fab', scFv, 디아바디, 또는 F(ab')2 단편이다. 또다른 구체예에서, 면역콘쥬게이트는 실질적으로 본 명세서에서 정의된 바와 같은 전장 항체, 예로써, IgG1 항체, IgG2a 또는 다른 항체 클래스 또는 이소타입인 항체다.
인간화된 7C2 항-HER2 항체 서열의 표
Figure pct00008
Figure pct00009
Figure pct00010
Figure pct00011
항-MUC16 항체
특정 구체예들에서, 표 3A 와 3B의 ADC는 항-MUC16 항체를 포함한다.
일부 구체예들에서, 본 발명은 다음으로부터 선별된 최소한 1, 2, 3, 4, 5, 또는 6개의 HVRs이 포함된 항-MUC16 항체를 포함하는 항체-약물 콘쥬게이트를 제공한다: (a) 서열 번호: 35의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H1; (b) 서열 번호: 36의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H2; (c) 서열 번호: 37의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H3; (d) 서열 번호: 32의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-L1; (e) 서열 번호: 33의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-L2; 그리고 (f) 서열 번호: 34의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-L3.
한 측면에서, 본 발명은 (a) 서열 번호: 35의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H1; (b) 서열 번호: 36의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H2; 그리고 (c) 서열 번호: 37의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H3으로부터 선택된 적어도 1, 2, 또는 3개 모두의 VH HVR이 포함된 항체를 포함하는 항체-약물 콘쥬게이트를 제공한다. 추가 구체예에서, 상기 항체는 (a) 서열 번호: 35의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H1; (b) 서열 번호: 36의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H2; 그리고 (c) 서열 번호: 37의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H3을 포함한다.
또다른 측면에서, 본 발명은 (a) 서열 번호: 32의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-L1; (b) 서열 번호: 33의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-L2; 그리고 (c) 서열 번호: 34의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-L3으로부터 선택된 적어도 1, 2, 또는 3개 모두의 VL HVR가 포함된 항체를 포함하는 항체-약물 콘쥬게이트를 제공한다. 한 구체예에서, 상기 항체는 (a) 서열 번호: 32의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-L1; (b) 서열 번호: 33의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-L2; 그리고 (c) 서열 번호: 34의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-L3을 포함한다.
또다른 측면에서, 본 발명의 항체-약물 콘쥬게이트는 다음을 포함하는 항체를 포함한다: (a) (i) 서열 번호: 35의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H1, (ii) 서열 번호: 36의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H2, 그리고 (iii) 서열 번호: 37의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H3으로부터 선별된 최소한 1, 최소한 2 또는 이들 3개 모두의 VH HVR이 포함된 VH 도메인; 그리고 (b) (i) 서열 번호: 32의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-L1, (ii) 서열 번호: 33의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-L2, 그리고 (iii) 서열 번호: 34의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-L3으로부터 선별된 최소한 1, 최소한 2 또는 이들 3개 모두의 VL HVR이 포함된 VL 도메인.
또다른 측면에서, 본 발명은 (a) 서열 번호: 35의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H1; (b) 서열 번호: 36의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H2; (c) 서열 번호: 37의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H3; (d) 서열 번호: 32의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-L1; (e) 서열 번호: 33의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-L2; 그리고 (f) 서열 번호: 34의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-L3이 포함된 항체를 포함하는 항체-약물 콘쥬게이트를 제공한다.
상기 임의의 구체예에서, 항체-약물 콘쥬게이트의 항-MUC16 항체는 인간화된다. 한 구체예에서, 항-MUC16 항체는 상기 구체예들중 임의의 것에서와 같이, HVRs를 포함하고, 인간 수용체 틀구조, 예로써, 인간 면역글로블린 틀구조 또는 인간 콘센수스 틀구조를 더 포함한다.
또다른 측면에서, 항체-약물 콘쥬게이트의 항-MUC16 항체는 서열 번호: 39의 아미노산 서열에 대하여 적어도 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99%, 또는 100% 서열 동일성을 갖는 중쇄 가변 도메인 (VH) 서열을 포함한다. 특정 구체예들에서, 서열 번호:39의 아미노산 서열에 대하여 적어도 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 또는 99% 동일성을 갖는 VH 서열은 기준 서열에 대하여 치환 (가령, 보존적 치환), 삽입, 또는 결손을 함유하지만, 이 서열을 포함하는 항-MUC16 항체는 여전히 MUC16에 결합하는 능력을 보유한다. 특정 구체예들에서, 서열 번호: 39에서 총 1 내지 10개의 아미노산이 치환, 삽입 및/또는 결실되었다. 특정 구체예들에서, 서열 번호: 39에서 총 1 내지 5개의 아미노산이 치환, 삽입 및/또는 결실되었다. 특정 구체예들에서, 치환, 삽입, 또는 결손은 HVRs의 외부 영역(가령, FRs)에서 발생된다. 임의선택적으로, 상기 항-MUC16 항체는 서열 번호: 39의 전사-후 변형을 비롯하여 이 서열의 VH 서열을 포함한다. 특정 구체예에서, VH는 (a) 서열 번호: 35의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H1; (b) 서열 번호: 36의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H2; 그리고 (c) 서열 번호: 37의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H3으로부터 선택된 1, 2 또는 3개의 HVRs를 포함한다.
또다른 측면에서, 항체-약물 콘쥬게이트의 항-MUC16 항체가 제공되는데, 이 항체는 서열 번호: 38의 아미노산 서열에 대하여 적어도 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99%, 또는 100% 서열 동일성을 갖는 경쇄 가변 도메인 (VL) 서열을 포함한다. 특정 구체예들에서, 서열 번호:38의 아미노산 서열에 대하여 적어도 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 또는 99% 동일성을 갖는 VL 서열은 기준 서열에 대하여 치환 (가령, 보존적 치환), 삽입, 또는 결손을 함유하지만, 이 서열을 포함하는 항-MUC16 항체는 여전히 MUC16에 결합하는 능력을 보유한다. 특정 구체예들에서, 서열 번호: 38에서 총 1 내지 10개의 아미노산이 치환, 삽입 및/또는 결실되었다. 특정 구체예들에서, 서열 번호: 38에서 총 1 내지 5개의 아미노산이 치환, 삽입 및/또는 결실되었다. 특정 구체예들에서, 치환, 삽입, 또는 결손은 HVRs의 외부 영역(가령, FRs)에서 발생된다. 임의선택적으로, 상기 항-MUC16 항체는 서열 번호: 38의 전사-후 변형을 비롯하여 이 서열의 VL 서열을 포함한다. 특정 구체예에서, VL은 (a) 서열 번호: 32의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-L1; (b) 서열 번호: 33의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-L2; 그리고 (c) 서열 번호: 34의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-L3으로부터 선택된 1, 2 또는 3개의 HVRs를 포함한다.
또다른 측면에서, 항-MUC16 항체를 포함하는 항체-약물 콘쥬게이트가 제공되는데, 이때 상기 항체는 상기에서 제공된 구체예들중 임의의 것과 같이, VH와 상기에서 제공된 구체예들중 임의의 것과 같이, VL을 포함한다.
한 구체예에서, 항체-약물 콘쥬게이트가 제공되며, 이때 상기 항체는 차례로 서열 번호:39 및 서열 번호:38의 VH와 VL 서열, 그리고 이들 서열의 전사-후 변형을 포함한다.
추가 측면에서, 본원에서 제공되는 항-MUC16 항체와 동일한 에피토프에 결합하는 항체를 포함하는 항체-약물 콘쥬게이트가 제공된다. 예로써, 특정 구체예들에서, 서열 번호: 39의 VH 서열과 서열 번호: 38의 VL 서열을 포함하고, 항-MUC16 항체가 결합하는 동일한 에피토프에 결합되는 항체를 포함하는 면역콘쥬게이트가 제공된다.
본 발명의 추가 측면에서, 상기 구체예들중 임의의 것에 따른 항-MUC16 항체는 인간 항체가 포함된 단일 클론 항체다. 한 구체예에서, 항체-약물 콘쥬게이트의 항-MUC16 항체는 항체 단편, 가령, Fv, Fab, Fab', scFv, 디아바디, 또는 F(ab')2 단편이다. 또다른 구체예에서, 상기 항체는 실질적으로 본 명세서에서 정의된 바와 같은 전장 항체, 예로써, IgG1 항체, IgG2a 또는 다른 항체 클래스 또는 이소타입이다.
MUC16 항체 서열의 표
Figure pct00012
항-STEAP-1 항체
특정 구체예들에서, 표 3A 와 3B의 ADC는 항-STEAP-1 항체를 포함한다.
일부 구체예들에서, 본 발명은 다음으로부터 선별된 최소한 1, 2, 3, 4, 5, 또는 6개의 HVRs이 포함된 항-STEAP-1 항체를 포함하는 항체-약물 콘쥬게이트를 제공한다: (a) 서열 번호: 40의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H1; (b) 서열 번호: 41의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H2; (c) 서열 번호: 42의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H3; (d) 서열 번호: 43의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-L1; (e) 서열 번호: 44의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-L2; 그리고 (f) 서열 번호: 45의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-L3.
한 측면에서, 본 발명은 (a) 서열 번호: 40의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H1; (b) 서열 번호: 41의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H2; 그리고 (c) 서열 번호: 42의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H3으로부터 선택된 적어도 1, 2, 또는 3개 모두의 VH HVR이 포함된 항체를 포함하는 항체-약물 콘쥬게이트를 제공한다. 추가 구체예에서, 상기 항체는 (a) 서열 번호: 40의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H1; (b) 서열 번호: 41의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H2; 그리고 (c) 서열 번호: 42의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H3을 포함한다.
또또다른 측면에서, 본 발명은 (a) 서열 번호: 43의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-L1; (b) 서열 번호: 44의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-L2; 그리고 (c) 서열 번호: 45의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-L3으로부터 선택된 적어도 1, 2, 또는 3개 모두의 VL HVR가 포함된 항체를 포함하는 항체-약물 콘쥬게이트를 제공한다. 한 구체예에서, 상기 항체는 (a) 서열 번호: 43의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-L1; (b) 서열 번호: 44의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-L2; 그리고 (c) 서열 번호: 45의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-L3을 포함한다.
또다른 측면에서, 본 발명의 항체-약물 콘쥬게이트는 다음을 포함하는 항체를 포함한다: (a) (i) 서열 번호: 40의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H1, (ii) 서열 번호: 41의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H2, 그리고 (iii) 서열 번호: 42의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H3으로부터 선별된 최소한 1, 최소한 2 또는 이들 3개 모두의 VH HVR이 포함된 VH 도메인; 그리고 (b) (i) 서열 번호: 43의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-L1, (ii) 서열 번호: 44의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-L2, 그리고 (iii) 서열 번호: 45의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-L3으로부터 선별된 최소한 1, 최소한 2 또는 이들 3개 모두의 VL HVR이 포함된 VL 도메인.
또다른 측면에서, 본 발명은 (a) 서열 번호: 40의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H1; (b) 서열 번호: 41의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H2; (c) 서열 번호: 42의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H3; (d) 서열 번호: 43의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-L1; (e) 서열 번호: 44의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-L2; 그리고 (f) 서열 번호: 45의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-L3이 포함된 항체를 포함하는 항체-약물 콘쥬게이트를 제공한다.
상기 임의의 구체예에서, 항체-약물 콘쥬게이트의 항-STEAP-1 항체는 인간화된다. 한 구체예에서, 항-STEAP-1 항체는 상기 구체예들중 임의의 것에서와 같이, HVRs를 포함하고, 인간 수용체 틀구조, 예로써, 인간 면역글로블린 틀구조 또는 인간 콘센수스 틀구조를 더 포함한다.
또다른 측면에서, 항체-약물 콘쥬게이트의 항-STEAP-1 항체는 서열 번호: 46의 아미노산 서열에 대하여 적어도 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99%, 또는 100% 서열 동일성을 갖는 중쇄 가변 도메인 (VH) 서열을 포함한다. 특정 구체예들에서, 서열 번호:46의 아미노산 서열에 대하여 적어도 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 또는 99% 동일성을 갖는 VH 서열은 기준 서열에 대하여 치환 (가령, 보존적 치환), 삽입, 또는 결손을 함유하지만, 이 서열을 포함하는 항-STEAP-1 항체는 여전히 STEAP-1에 결합하는 능력을 보유한다. 특정 구체예들에서, 서열 번호: 46에서 총 1 내지 10개의 아미노산이 치환, 삽입 및/또는 결실되었다. 특정 구체예들에서, 서열 번호: 46에서 총 1 내지 5개의 아미노산이 치환, 삽입 및/또는 결실되었다. 특정 구체예들에서, 치환, 삽입, 또는 결손은 HVRs의 외부 영역(가령, FRs)에서 발생된다. 임의선택적으로, 상기 항-STEAP-1 항체는 서열 번호: 46의 전사-후 변형을 비롯하여 이 서열의 VH 서열을 포함한다. 특정 구체예에서, VH는 (a) 서열 번호: 40의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H1; (b) 서열 번호: 41의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H2; 그리고 (c) 서열 번호: 42의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H3으로부터 선택된 1, 2 또는 3개의 HVRs를 포함한다.
또다른 측면에서, 항체-약물 콘쥬게이트의 항-STEAP-1 항체가 제공되는데, 이 항체는 서열 번호: 47의 아미노산 서열에 대하여 적어도 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99%, 또는 100% 서열 동일성을 갖는 경쇄 가변 도메인 (VL) 서열을 포함한다. 특정 구체예들에서, 서열 번호:47의 아미노산 서열에 대하여 적어도 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 또는 99% 동일성을 갖는 VL 서열은 기준 서열에 대하여 치환 (가령, 보존적 치환), 삽입, 또는 결손을 함유하지만, 이 서열을 포함하는 항-STEAP-1 항체는 여전히 STEAP-1에 결합하는 능력을 보유한다. 특정 구체예들에서, 서열 번호: 47에서 총 1 내지 10개의 아미노산이 치환, 삽입 및/또는 결실되었다. 특정 구체예들에서, 서열 번호: 47에서 총 1 내지 5개의 아미노산이 치환, 삽입 및/또는 결실되었다. 특정 구체예들에서, 치환, 삽입, 또는 결손은 HVRs의 외부 영역(가령, FRs)에서 발생된다. 임의선택적으로, 상기 항-STEAP-1 항체는 서열 번호: 47의 전사-후 변형을 비롯하여 이 서열의 VL 서열을 포함한다. 특정 구체예에서, VL은 (a) 서열 번호: 43의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-L1; (b) 서열 번호: 44의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-L2; 그리고 (c) 서열 번호: 45의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-L3으로부터 선택된 1, 2 또는 3개의 HVRs를 포함한다.
또다른 측면에서, 항-STEAP-1 항체를 포함하는 항체-약물 콘쥬게이트가 제공되는데, 이때 상기 항체는 상기에서 제공된 구체예들중 임의의 것과 같이, VH와 상기에서 제공된 구체예들중 임의의 것과 같이, VL을 포함한다.
한 구체예에서, 항체-약물 콘쥬게이트가 제공되며, 이때 상기 항체는 차례로 서열 번호:46 및 서열 번호:47의 VH와 VL 서열, 그리고 이들 서열의 전사-후 변형을 포함한다.
추가 측면에서, 본원에서 제공되는 항-STEAP-1 항체와 동일한 에피토프에 결합하는 항체를 포함하는 항체-약물 콘쥬게이트가 제공된다. 예로써, 특정 구체예들에서, 서열 번호: 46의 VH 서열과 서열 번호: 47의 VL 서열을 포함하고, 항-STEAP-1 항체가 결합하는 동일한 에피토프에 결합되는 항체를 포함하는 면역콘쥬게이트가 제공된다.
본 발명의 추가 측면에서, 상기 구체예들중 임의의 것에 따른 항-STEAP-1 항체는 인간 항체가 포함된 단일 클론 항체다. 한 구체예에서, 항체-약물 콘쥬게이트의 항-STEAP-1 항체는 항체 단편, 가령, Fv, Fab, Fab', scFv, 디아바디, 또는 F(ab')2 단편이다. 또다른 구체예에서, 상기 항체는 실질적으로 본 명세서에서 정의된 바와 같은 전장 항체, 예로써, IgG1 항체, IgG2a 또는 다른 항체 클래스 또는 이소타입이다.
STEAP 항체 서열의 표
Figure pct00013
항-NaPi2b 항체
특정 구체예들에서, 표 3A 및 3B의 ADC는 항-NaPi2b 항체를 포함한다.
일부 구체예들에서, 본 발명은 다음으로부터 선별된 최소한 1, 2, 3, 4, 5, 또는 6개의 HVRs이 포함된 항-NaPi2b 항체를 포함하는 항체-약물 콘쥬게이트를 제공한다: (a) 서열 번호: 48의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H1; (b) 서열 번호: 49의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H2; (c) 서열 번호: 50의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H3; (d) 서열 번호: 51의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-L1; (e) 서열 번호: 52의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-L2; 그리고 (f) 서열 번호: 53의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-L3.
한 측면에서, 본 발명은 (a) 서열 번호: 48의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H1; (b) 서열 번호: 49의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H2; 그리고 (c) 서열 번호: 50의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H3으로부터 선택된 적어도 1, 2, 또는 3개 모두의 VH HVR이 포함된 항체를 포함하는 항체-약물 콘쥬게이트를 제공한다. 추가 구체예에서, 상기 항체는 (a) 서열 번호: 48의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H1; (b) 서열 번호: 49의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H2; 그리고 (c) 서열 번호: 50의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H3을 포함한다.
또또다른 측면에서, 본 발명은 (a) 서열 번호: 51의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-L1; (b) 서열 번호: 52의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-L2; 그리고 (c) 서열 번호: 53의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-L3으로부터 선택된 적어도 1, 2, 또는 3개 모두의 VL HVR가 포함된 항체를 포함하는 항체-약물 콘쥬게이트를 제공한다. 한 구체예에서, 상기 항체는 (a) 서열 번호: 51의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-L1; (b) 서열 번호: 52의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-L2; 그리고 (c) 서열 번호: 53의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-L3을 포함한다.
또다른 측면에서, 본 발명의 항체-약물 콘쥬게이트는 다음을 포함하는 항체를 포함한다: (a) (i) 서열 번호: 48의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H1, (ii) 서열 번호: 49의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H2, 그리고 (iii) 서열 번호: 50의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H3으로부터 선별된 최소한 1, 최소한 2 또는 이들 3개 모두의 VH HVR이 포함된 VH 도메인; 그리고 (b) (i) 서열 번호: 51의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-L1, (ii) 서열 번호: 52의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-L2, 그리고 (iii) 서열 번호: 53의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-L3으로부터 선별된 최소한 1, 최소한 2 또는 이들 3개 모두의 VL HVR이 포함된 VL 도메인.
또다른 측면에서, 본 발명은 (a) 서열 번호: 48의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H1; (b) 서열 번호: 49의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H2; (c) 서열 번호: 50의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H3; (d) 서열 번호: 51의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-L1; (e) 서열 번호: 52의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-L2; 그리고 (f) 서열 번호: 53의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-L3이 포함된 항체를 포함하는 항체-약물 콘쥬게이트를 제공한다.
상기 임의의 구체예에서, 항체-약물 콘쥬게이트의 항-NaPi2b 항체는 인간화된다. 한 구체예에서, 항-NaPi2b 항체는 상기 구체예들중 임의의 것에서와 같이, HVRs를 포함하고, 인간 수용체 틀구조, 예로써, 인간 면역글로블린 틀구조 또는 인간 콘센수스 틀구조를 더 포함한다.
또다른 측면에서, 항체-약물 콘쥬게이트의 항-NaPi2b 항체는 서열 번호: 54의 아미노산 서열에 대하여 적어도 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99%, 또는 100% 서열 동일성을 갖는 중쇄 가변 도메인 (VH) 서열을 포함한다. 특정 구체예들에서, 서열 번호:54의 아미노산 서열에 대하여 적어도 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 또는 99% 동일성을 갖는 VH 서열은 기준 서열에 대하여 치환 (가령, 보존적 치환), 삽입, 또는 결손을 함유하지만, 이 서열을 포함하는 항-NaPi2b 항체는 여전히 NaPi2b에 결합하는 능력을 보유한다. 특정 구체예들에서, 서열 번호: 54에서 총 1 내지 10개의 아미노산이 치환, 삽입 및/또는 결실되었다. 특정 구체예들에서, 서열 번호: 54에서 총 1 내지 5개의 아미노산이 치환, 삽입 및/또는 결실되었다. 특정 구체예들에서, 치환, 삽입, 또는 결손은 HVRs의 외부 영역(가령, FRs)에서 발생된다. 임의선택적으로, 상기 항-NaPi2b 항체는 서열 번호: 54의 전사-후 변형을 비롯하여 이 서열의 VH 서열을 포함한다. 특정 구체예에서, VH는 (a) 서열 번호: 48의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H1; (b) 서열 번호: 49의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H2; 그리고 (c) 서열 번호: 50의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H3으로부터 선택된 1, 2 또는 3개의 HVRs를 포함한다.
또다른 측면에서, 항체-약물 콘쥬게이트의 항-NaPi2b 항체가 제공되는데, 이 항체는 서열 번호: 55의 아미노산 서열에 대하여 적어도 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99%, 또는 100% 서열 동일성을 갖는 경쇄 가변 도메인 (VL) 서열을 포함한다. 특정 구체예들에서, 서열 번호:55의 아미노산 서열에 대하여 적어도 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 또는 99% 동일성을 갖는 VL 서열은 기준 서열에 대하여 치환 (가령, 보존적 치환), 삽입, 또는 결손을 함유하지만, 이 서열을 포함하는 항-NaPi2b 항체는 여전히 NaPi2b에 결합하는 능력을 보유한다. 특정 구체예들에서, 서열 번호: 55에서 총 1 내지 10개의 아미노산이 치환, 삽입 및/또는 결실되었다. 특정 구체예들에서, 서열 번호: 55에서 총 1 내지 5개의 아미노산이 치환, 삽입 및/또는 결실되었다. 특정 구체예들에서, 치환, 삽입, 또는 결손은 HVRs의 외부 영역(가령, FRs)에서 발생된다. 임의선택적으로, 상기 항-NaPi2b 항체는 서열 번호: 55의 전사-후 변형을 비롯하여 이 서열의 VL 서열을 포함한다. 특정 구체예에서, VL은 (a) 서열 번호: 51의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-L1; (b) 서열 번호: 52의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-L2; 그리고 (c) 서열 번호: 53의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-L3으로부터 선택된 1, 2 또는 3개의 HVRs를 포함한다.
또다른 측면에서, 항-NaPi2b 항체를 포함하는 항체-약물 콘쥬게이트가 제공되는데, 이때 상기 항체는 상기에서 제공된 구체예들중 임의의 것과 같이, VH와 상기에서 제공된 구체예들중 임의의 것과 같이, VL을 포함한다.
한 구체예에서, 항체-약물 콘쥬게이트가 제공되며, 이때 상기 항체는 차례로 서열 번호:54 및 서열 번호:55의 VH와 VL 서열, 그리고 이들 서열의 전사-후 변형을 포함한다.
추가 측면에서, 본원에서 제공되는 항-NaPi2b 항체와 동일한 에피토프에 결합하는 항체를 포함하는 항체-약물 콘쥬게이트가 제공된다. 예로써, 특정 구체예들에서, 서열 번호: 54의 VH 서열과 서열 번호: 55의 VL 서열을 포함하고, 항-NaPi2b 항체가 결합하는 동일한 에피토프에 결합되는 항체를 포함하는 면역콘쥬게이트가 제공된다.
본 발명의 추가 측면에서, 상기 구체예들중 임의의 것에 따른 항-NaPi2b 항체는 인간 항체가 포함된 단일 클론 항체다. 한 구체예에서, 항체-약물 콘쥬게이트의 항-NaPi2b 항체는 항체 단편, 가령, Fv, Fab, Fab', scFv, 디아바디, 또는 F(ab')2 단편이다. 또다른 구체예에서, 상기 항체는 실질적으로 본 명세서에서 정의된 바와 같은 전장 항체, 예로써, IgG1 항체, IgG2a 또는 다른 항체 클래스 또는 이소타입이다.
NaPi2b 항체 서열의 표
Figure pct00014
항-CD79b 항체
특정 구체예들에서, 표 3A 와 3B의 ADC는 항-CD79b 항체를 포함한다.
일부 구체예들에서, 본 발명은 다음으로부터 선별된 최소한 1, 2, 3, 4, 5, 또는 6개의 HVRs이 포함된 항-CD79b 항체를 포함하는 항체-약물 콘쥬게이트를 제공한다: (a) 서열 번호: 58의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H1; (b) 서열 번호: 59의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H2; (c) 서열 번호: 60의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H3; (d) 서열 번호: 61의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-L1; (e) 서열 번호: 62의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-L2; 그리고 (f) 서열 번호: 63의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-L3.
한 측면에서, 본 발명은 (a) 서열 번호: 58의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H1; (b) 서열 번호: 59의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H2; 그리고 (c) 서열 번호: 60의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H3으로부터 선택된 적어도 1, 2, 또는 3개 모두의 VH HVR이 포함된 항체를 포함하는 항체-약물 콘쥬게이트를 제공한다. 추가 구체예에서, 상기 항체는 (a) 서열 번호: 58의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H1; (b) 서열 번호: 59의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H2; 그리고 (c) 서열 번호: 60의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H3을 포함한다.
또또다른 측면에서, 본 발명은 (a) 서열 번호: 61의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-L1; (b) 서열 번호: 62의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-L2; 그리고 (c) 서열 번호: 63의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-L3으로부터 선택된 적어도 1, 2, 또는 3개 모두의 VL HVR가 포함된 항체를 포함하는 항체-약물 콘쥬게이트를 제공한다. 한 구체예에서, 상기 항체는 (a) 서열 번호: 61의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-L1; (b) 서열 번호: 62의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-L2; 그리고 (c) 서열 번호: 63의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-L3을 포함한다.
또다른 측면에서, 본 발명의 항체-약물 콘쥬게이트는 다음을 포함하는 항체를 포함한다: (a) (i) 서열 번호: 58의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H1, (ii) 서열 번호: 59의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H2, 그리고 (iii) 서열 번호: 60의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H3으로부터 선별된 최소한 1, 최소한 2 또는 이들 3개 모두의 VH HVR이 포함된 VH 도메인; 그리고 (b) (i) 서열 번호: 61의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-L1, (ii) 서열 번호: 62의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-L2, 그리고 (iii) 서열 번호: 63의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-L3으로부터 선별된 최소한 1, 최소한 2 또는 이들 3개 모두의 VL HVR이 포함된 VL 도메인.
또다른 측면에서, 본 발명은 (a) 서열 번호: 58의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H1; (b) 서열 번호: 59의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H2; (c) 서열 번호: 60의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H3; (d) 서열 번호: 61의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-L1; (e) 서열 번호: 62의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-L2; 그리고 (f) 서열 번호: 63의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-L3이 포함된 항체를 포함하는 항체-약물 콘쥬게이트를 제공한다.
상기 임의의 구체예에서, 항체-약물 콘쥬게이트의 항-CD79b 항체는 인간화된다. 한 구체예에서, 항-CD79b 항체는 상기 구체예들중 임의의 것에서와 같이, HVRs를 포함하고, 인간 수용체 틀구조, 예로써, 인간 면역글로블린 틀구조 또는 인간 콘센수스 틀구조를 더 포함한다.
또다른 측면에서, 항체-약물 콘쥬게이트의 항-CD79b 항체는 서열 번호: 56의 아미노산 서열에 대하여 적어도 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99%, 또는 100% 서열 동일성을 갖는 중쇄 가변 도메인 (VH) 서열을 포함한다. 특정 구체예들에서, 서열 번호:56의 아미노산 서열에 대하여 적어도 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 또는 99% 동일성을 갖는 VH 서열은 기준 서열에 대하여 치환 (가령, 보존적 치환), 삽입, 또는 결손을 함유하지만, 이 서열을 포함하는 항-CD79b 항체는 여전히 CD79b에 결합하는 능력을 보유한다. 특정 구체예들에서, 서열 번호: 56에서 총 1 내지 10개의 아미노산이 치환, 삽입 및/또는 결실되었다. 특정 구체예들에서, 서열 번호: 56에서 총 1 내지 5개의 아미노산이 치환, 삽입 및/또는 결실되었다. 특정 구체예들에서, 치환, 삽입, 또는 결손은 HVRs의 외부 영역(가령, FRs)에서 발생된다. 임의선택적으로, 상기 항-CD79b 항체는 서열 번호: 8의 전사-후 변형을 비롯하여 이 서열의 VH 서열을 포함한다. 특정 구체예에서, VH는 (a) 서열 번호: 58의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H1; (b) 서열 번호: 59의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H2; 그리고 (c) 서열 번호: 60의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H3으로부터 선택된 1, 2 또는 3개의 HVRs를 포함한다.
또다른 측면에서, 항체-약물 콘쥬게이트의 항-CD79b 항체가 제공되는데, 이 항체는 서열 번호: 57의 아미노산 서열에 대하여 적어도 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99%, 또는 100% 서열 동일성을 갖는 경쇄 가변 도메인 (VL) 서열을 포함한다. 특정 구체예들에서, 서열 번호:57의 아미노산 서열에 대하여 적어도 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 또는 99% 동일성을 갖는 VL 서열은 기준 서열에 대하여 치환 (가령, 보존적 치환), 삽입, 또는 결손을 함유하지만, 이 서열을 포함하는 항-CD79b 항체는 여전히 CD79b에 결합하는 능력을 보유한다. 특정 구체예들에서, 서열 번호: 57에서 총 1 내지 10개의 아미노산이 치환, 삽입 및/또는 결실되었다. 특정 구체예들에서, 서열 번호: 57에서 총 1 내지 5개의 아미노산이 치환, 삽입 및/또는 결실되었다. 특정 구체예들에서, 치환, 삽입, 또는 결손은 HVRs의 외부 영역(가령, FRs)에서 발생된다. 임의선택적으로, 상기 항-CD79b 항체는 서열 번호: 57의 전사-후 변형을 비롯하여 이 서열의 VL 서열을 포함한다. 특정 구체예에서, VL은 (a) 서열 번호: 61의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-L1; (b) 서열 번호: 62의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-L2; 그리고 (c) 서열 번호: 63의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-L3으로부터 선택된 1, 2 또는 3개의 HVRs를 포함한다.
또다른 측면에서, 항-CD79b 항체를 포함하는 항체-약물 콘쥬게이트가 제공되는데, 이때 상기 항체는 상기에서 제공된 구체예들중 임의의 것과 같이, VH와 상기에서 제공된 구체예들중 임의의 것과 같이, VL을 포함한다.
한 구체예에서, 항체-약물 콘쥬게이트가 제공되며, 이때 상기 항체는 차례로 서열 번호:56 및 서열 번호:57의 VH와 VL 서열, 그리고 이들 서열의 전사-후 변형을 포함한다.
추가 측면에서, 본원에서 제공되는 항-CD79b 항체와 동일한 에피토프에 결합하는 항체를 포함하는 항체-약물 콘쥬게이트가 제공된다. 예로써, 특정 구체예들에서, 서열 번호: 56의 VH 서열과 서열 번호: 57의 VL 서열을 포함하고, 항-CD79b 항체가 결합하는 동일한 에피토프에 결합되는 항체를 포함하는 면역콘쥬게이트가 제공된다.
본 발명의 추가 측면에서, 상기 구체예들중 임의의 것에 따른 항-CD79b 항체는 인간 항체가 포함된 단일 클론 항체다. 한 구체예에서, 항체-약물 콘쥬게이트의 항-CD79b1 항체는 항체 단편, 가령, Fv, Fab, Fab', scFv, 디아바디, 또는 F(ab')2 단편이다. 또다른 구체예에서, 상기 항체는 실질적으로 본 명세서에서 정의된 바와 같은 전장 항체, 예로써, IgG1 항체, IgG2a 또는 다른 항체 클래스 또는 이소타입이다.
CD79b 항체 서열의 표
Figure pct00015
항체 친화력
특정 구체예들에서, 본 명세서에서 제공된 항체는 ≤　1μM, ≤　100 nM, ≤　50 nM, ≤　10 nM, ≤　5 nM, ≤　1 nM, ≤　0.1 nM, ≤　0.01 nM, 또는 ≤　0.001 nM의 해리 상수(Kd)를 갖고, 그리고 임의선택적으로 ≥　10-13 M (가령 10-8 M 또는 그 미만, 가령 10-8 M 내지 10-13 M, 가령, 10-9 M 내지 10-13 M)이다.
특정 구체예들에 있어서, Kd는 하기 분석에 기재된 바와 같이, 관심있는 항체의 Fab 버전 및 그의 항원으로 수행된, 방사능라벨된 항원 결합 분석(RIA)에 의해 측정된다. 항원에 대한 Fabs의 용액 결합 친화력은 라벨안된 항원의 일련의 역가 존재하에 최소 농도의 (125I)-라벨된 항원으로 Fab를 평형화시키고, 그 다음 항-Fab 항체-피복된 플레이트로 결합된 항원을 포집시킴으로써 측정된다 (예로써, Chen et al., J. Mol. Biol. 293:865-881(1999) 참고). 분석을 위한 조건을 확립하기 위하여, MICRITITER® 다중-웰 플레이트(Thermo Scientific)는 50 mM 탄산나트륨 (pH 9.6) 안에 5 μg/ml의 포획 항-Fab 항체 (Cappel Labs)로 하룻밤 동안 피복되며, 그리고 후속적으로 2% (w/v) 소 혈청 알부민/PBS로 2-5 시간 동안 실온 (대략적으로 23℃)에서 차단된다. 비-흡착성 플레이트 (Nunc #269620)에서, 100 pM 또는 26 pM [125I]-항원은 관심대상의 Fab의 일련의 희석물과 혼합된다 (예로써, 상기 항-VEGF 항체, Fab-12의 평가와 일관된다, Presta et al., Cancer Res. 57:4593-4599 (1997)). 관심대상의 Fab는 그 다음 하룻밤 동안 항온처리되고; 그러나, 평형에 확실하게 이를 수 있도록 더 오랜 기간(예로써, 약 65 시간) 동안 항온처리가 지속될 수 있다. 그 이후, 상기 혼합물은 실온에서 항온처리(예로써, 1 시간 동안)를 위하여 포획 플레이트로 이전된다. 상기 용액은 그 다음 제거되며, 상기 플레이트는 0.1% 폴리소르베이트 20 (TWEEN-20®)/PBS에서 8회 세척되었다. 상기 플레이트를 건조할 때, 150 μl/웰의 섬광물질 (MICROSCINT-20 TM; Packard)이 추가되며, 상기 플레이트는 10분 동안 TOPCOUNT TM 감마 카운터 (Packard)상에서 카운트된다. 경쟁적 결합 분석에 사용하기 위하여 최대 결합의 20% 미만 또는 20%에 대등한 각 Fab 농도가 선택된다.
또다른 구체예에 따르면, Kd는 25℃에서 ~10개 반응 유닛 (RU)에서 고정된 항원 CM5 칩과 함께, BIACORE®-2000 또는 BIACORE®-3000 (BIAcore, Inc., Piscataway, NJ)를 이용한 표면 플라스몬 공명 분석을 이용하여 측정된다. 간략하게 설명하자면, 카르복시메틸화된 덱스트란 바이오센서 칩 (CM5, BIACORE, Inc.)은 공급업자에 따라 N-에틸-N'-(3-디메틸아미노프로필)-카르보디이미드 염화수소산염 (EDC) 및 N-히드록시숙시니미드 (NHS)로 활성화된다. 항원은 10 mM 나트륨 아세테이트, pH 4.8을 이용하여 5 μg/ml (~0.2 μM)으로 희석시킨 후, 5 μl/분의 유속으로 주사하여 결합된 단백질의 대략 10개 반응 단위 (RU)를 얻는다. 항원 주입 후, 1 M 에탄올아민을 주입하여 미-반응 그룹을 차단한다. 운동성 측정을 위하여, 2-배 연속 희석된 Fab (0.78 nM 내지 500 nM)는 25℃, 대략적으로 25 μl/분의 유속에서 0.05% 폴리소르베이트 20 (TWEEN-20TM) 계면활성제 (PBST)와 함께 PBS에서 주사된다. 연합(association)과 해리(dissociation) 센서그램을 동시에 피팅함으로써, 단순 일대일 Langmuir 결합 모델 (BIACORE ® Evaluation Software 버젼 3.2)을 이용하여 연합 속도 (kon)와 해리 속도 (koff)가 산출된다. 평형 해리 상수 (Kd)는 비율 kon/koff로 산출된다. 예를 들면, Chen et al., J. Mol. Biol. 293:865-881 (1999) 참고. 상기 표면 플라스몬 공명 분석에 의한 연합 속도(on-rate)가 106M-1s-1를 초과한다면, 그 다음 분광계, 이를 테면 정지-유동(stop-flow) 장착된 분광광도계 (Aviv Instruments) 또는 교반 큐벳(교반된 cuvette)이 있는 8000-일련의 SLM-AMINO TM 분광광도계(ThermoSpectronic)에서 측정되었을 때, 항원 농도를 증가시킨 상태하에서, PBS, pH 7.2안에 20 nM 항-항원 항체 (Fab 형태)의 25oC 형광 방출 강도 (여기(excitation)= 295 nm; 방출 = 340 nm, 16 nm 밴드-대역)을 측정하는 형광 ??칭 기술을 이용하여 연합이 결정될 수 있다.
항체 단편
특정 구체예들에서, 본 명세서에서 제공된 항체는 항체 단편이다. 항체 단편들은 Fab, Fab', Fab'-SH, F(ab')2, Fv, 및 scFv 단편들, 그리고 하기에서 설명된 다른 단편들을 포함하나, 이에 국한되지 않는다. 특정 항체 단편들에 대한 검토는 Hudson et al. Nat. Med. 9:129-134 (2003)을 참고한다. scFv 단편들의 검토는 예로써,
Figure pct00016
, in The Pharmacology of Monoclonal Antibodies, vol. 113, Rosenburg and Moore eds., (Springer-Verlag, New York), pp. 269-315 (1994); WO 93/16185; 그리고 U.S. 특허번호 5,571,894 및 5,587,458를 또한 참고한다. 구난(salvage) 수용체 결합 에피토프 잔기를 포함하고, 생체내 반감기가 증가된 Fab 및 F(ab')2 단편들의 논의는 U.S. 특허 번호 5,869,046을 참고한다.
다이바디는 이가 또는 이중특이적일 수 있는 2개의 항원-결합 부위를 가진 항체 단편들이다. 예를 들면, EP 404,097; WO 1993/01161; Hudsonet al. Nat. Med. 9:129-134 (2003); 그리고 Hollinger et al. Proc. Natl. Acad. Sci. USA 90: 6444-6448 (1993)을 참고한다. 트리아바디(Triabodies) 및 테트라바디(tetrabodies) 또한 Hudson et al. Nat. Med. 9:129-134 (2003)에서 설명된다.
단일-도메인 항체는 이 항체의 중쇄 가변적 도메인의 전부 또는 일부분 또는 경쇄 가변적 도메인의 전부 또는 일부분이 포함된 항체 단편들이다. 특정 구체예들에 있어서, 단일-도메인 항체는 인간 단일-도메인 항체다 (Domantis, Inc., Waltham, MA; 예로써, U.S. 특허번호. 6,248,516 B1).
다양한 기술에 의해 무손상 항체의 단백질분해성 절단 뿐만 아니라, 본 명세서에서 설명된 바와 같이, 재조합 숙주 세포들 (예로써 대장균(E. coli) 또는 파아지)에 의해 생산된 것을 포함하는 항체 단편들이 만들어질 수 있다.
키메라 및 인간화된 항체들
특정 구체예들에 있어서, 본 발명의 항체는 키메라 항체다. 특정 키메라 항체는 예로써, U.S. 특허번호 4,816,567; 그리고 Morrison et al. Proc. Natl. Acad. Sci. USA, 81:6851-6855 (1984))에서 설명된다. 한 실시예에서, 키메라 항체는 비-인간 가변적 영역 (예로써, 마우스, 렛(rat), 햄스터, 토끼, 또는 비-인간 영장류, 이를 테면 원숭이로부터 유도된 가변적 영역)과 인간 불변 영역을 포함한다. 추가 실시예에서, 키메라 항체는 "클래스 전환된(class switched)" 항체로써, 부모 항체의 것과는 다른 클래스 또는 하위클래스로 변화된 것이다. 키메라 항체는 이의 항원-결합 단편들을 함유한다.
특정 구체예들에 있어서, 키메라 항체는 인간화된 항체다. 전형적으로, 비-인간 항체는 인간에 대한 면역원성이 감소되도록 인간화되지만, 부모계 비-인간 항체의 특이성 및 친화력은 유지된다. 일반적으로, 인간화된 항체는 하나 또는 그 이상의 가변적 도메인을 포함하는데, HVRs, 예로써, CDRs, (또는 이의 부분들)는 비-인간 항체로부터 유도되고, FRs (또는 이의 부분들)은 인간 항체 서열로부터 유도된다. 인간화된 항체는 임의선택적으로 인간 불변 영역의 최소한 일부분을 또한 포함할 것이다. 일부 구체예들에 있어서, 인간화된 항체에서 일부 FR 잔기는 비-인간 항체 (예로써, HVR 잔기가 유도된 항체)의 대응 잔기로 대체되어, 예로써, 항체 특이성 또는 친화력이 복원 또는 개선된다.
인간화된 항체 및 이를 만드는 방법들은 예로써, Almagro and Fransson, Front. Biosci. 13:1619-1633 (2008)에서 볼 수 있고, 그리고 예로써, Riechmann et al., Nature 332:323-329 (1988); Queenet al., Proc. Nat'l Acad. Sci. USA 86:10029-10033 (1989); US 특허번호 5, 821,337, 7,527,791, 6,982,321, 및 7,087,409; Kashmiri et al., Methods 36:25-34 (2005) (SDR(a-CDR) 접목을 설명); Padlan, Mol. Immunol. 28:489-498 (1991) ("재표면화(resurfacing)"을 설명); Dall'Acqua et al., Methods 36:43-60 (2005) ("FR 셔플링(shuffling)"을 설명); 그리고 Osbourn et al., Methods36:61-68 (2005) 및 Klimka et al., Br. J. Cancer, 83:252-260 (2000) (FR 셔플링에 대한 "유도된 선별" 방법 설명)에서 추가 설명된다.
인간화에 이용될 수 있는 인간 틀구조 영역은 다음을 포함하나, 이에 국한되지 않는다: "베스트-피트(best-fit)" 방법을 이용하여 선별된 틀구조 영역 (예로써, Sims et al. J. Immunol. 151:2296 (1993) 참고); 경쇄 또는 중쇄 가변적 영역의 특정 하위 집단의 인간항체의 콘센수스 서열로부터 유도된 틀구조영역 (예로써, Carter et al. Proc. Natl. Acad. Sci. USA, 89:4285 (1992); 그리고 Presta et al. J. Immunol., 151:2623 (1993)); 인간 성숙 (체세포적으로 돌연변이된) 틀구조 영역 또는 인간 생식계열 틀구조 영역 (예로써, Almagro and Fransson, Front. Biosci. 13:1619-1633 (2008) 참고); 그리고 FR 라이브러리 스크리닝으로부터 유도된 틀구조 영역(예로써, Baca et al., J. Biol. Chem. 272:10678-10684 (1997) 및 Rosok et al., J. Biol. Chem. 271:22611-22618 (1996) 참고).
인간 항체
특정 구체예들에서, 본 명세서에서 제공된 항체는 인간 항체다. 인간 항체는 당분야에 공지된 다양한 기술에 의해 만들어질 수 있다. 인간 항체는 전반적으로 van Dijk and van de Winkel, Curr.Opin. Pharmacol. 5: 368-74 (2001) 및 Lonberg, Curr.Opin. Immunol. 20:450-459 (2008)에서 설명된다.
항원 시험감염(challenge)에 반응하여, 무손상 인간 항체 또는 인간 가변적 영역을 가진 무손상 항체를 만들기 위하여 변형된 유전자삽입 동물에 면역원을 주사함으로써, 인간 항체를 만들 수 있다. 이러한 동물 전형적으로 상기 인간 면역글로블린 좌(loci)의 전부 또는 부분을 함유하며, 이 좌는 내생적 면역글로블린 좌를 대체하거나, 또는 염색체외적으로 존재하거나 또는 이 동물의 염색체 안에 무작위로 통합된다. 이러한 유전자삽입 마우스에서 상기 내생적 면역글로블린 좌는 일반적으로 비활성화된다. 유전자삽입 동물로부터 인간 항체를 획득하는 방법은 Lonberg, Nat. Biotech. 23:1117-1125 (2005)을 참고한다. 또한, 예로써, U.S. 특허번호 6,075,181 및 6,150,584에서는 XENOMOUSETM 기술을 설명하고; U.S. 특허번호. 5,770,429에서는 HuMab® 기술을 설명하고; U.S. 특허번호. 7,041,870에서는 K-M MOUSE® 기술을 설명하고, 그리고 U.S. 특허 출원 공개 번호. US 2007/0061900에서는 VELOCIMOUSE® 기술을 설명한다). 이러한 동물에 의해 생성되는 무손상 항체의 인간 가변적 영역은 예로써, 상이한 인간 불변 영역과 복합됨으로써 추가 변형될 수 있다.
인간 항체는 또한 하이브리도마-기반의 방법들에 의해 만들어질 수 있다. 인간 단일클론 항체를 만들기 위하여 인간 골수종 및 마우스-인간 이종골수종 세포계가 설명되었다. (예로써, Kozbor J. Immunol., 133: 3001 (1984); Brodeur et al., Monoclonal Antibody Production Techniques and Applications, pp. 51-63 (Marcel Dekker, Inc., New York, 1987); 그리고 Boerner et al., J. Immunol., 147: 86 (1991 참고.) 인간 B-세포 하이브리도마 기술을 통하여 생성된 인간 항체가 Li et al., Proc. Natl. Acad. Sci. USA, 103:3557-3562 (2006)에서 설명된다. 추가 방법들은 예를 들면, U.S. 특허번호. 7,189,826 (하이브리도마 세포주로부터 단일클론 인간 IgM 항체의 생산을 설명) 및 Ni, Xiandai Mianyixue, 26(4):265-268 (2006) (인간-인간 하이브리도마를 설명)에서 설명된 것들을 포함한다. 인간 하이브리도마 기술 (Trioma technology)은 Vollmers and Brandlein, Histology and Histopathology, 20(3):927-937 (2005) 및 Vollmers and Brandlein, Methods and Findings in Experimental and Clinical Pharmacology, 27(3):185-91 (2005)에서 또한 설명된다.
인간 항체는 또한 인간-유도된 파아지 디스플레이 라이브러리로부터 선별된 Fv 클론 가변적 도메인 서열을 단리시킴으로써 생성될 수 있다. 이러한 가변적 도메인 서열은 그 다음 바람직한 인간 불변 도메인과 복합될 수 있다. 항체 라이브러리로부터 인간 항체를 선별하기 위한 기술은 하기에서 설명된다.
라이브러리-유도된 항체들
본 발명의 항체들은 바람직한 활성 또는 활성들을 가진 항체에 대한 복합 라이브러리를 스크리닝함으로써 단리될 수 있다. 예를 들면, 파아지 디스플레이 라이브러리를 생성하고, 바람직한 결합 특징들을 보유하는 항체에 대하여 이러한 라이브러리를 스크리닝하는 다양한 방법들이 당분야에 공지되어 있다. 이러한 방법들은 예로써, Hoogenboom et al. in Methods in Molecular Biology 178:1-37 (O'Brien et al., ed., HumanPress, Totowa, NJ, 2001)에서 설명되며, 그리고 예로써, McCafferty et al., Nature 348:552-554; Clackson et al., Nature 352: 624-628 (1991); Marks et al., J. Mol. Biol. 222: 581-597 (1992); Marks and Bradbury, in Methods in Molecular Biology 248:161-175 (Lo, ed., HumanPress, Totowa, NJ, 2003); Sidhu et al., J. Mol. Biol. 338(2): 299-310 (2004); Lee et al., J. Mol. Biol. 340(5): 1073-1093 (2004); Fellouse, Proc. Natl. Acad. Sci. USA 101(34): 12467-12472 (2004); 그리고 Lee et al., J. Immunol. Methods 284(1-2): 119-132(2004)에서 추가 설명된다.
특정 파아지 디스플레이 방법들에서 VH 및 VL 유전자의 레퍼토리는 중합효소 연쇄 반응 (PCR)에 의해 별도로 클론되고, 파아지 라이브러리에서 무작위로 복합되며, 이는 그 다음 Winter et al., Ann. Rev. Immunol., 12: 433-455 (1994)에서 설명된 바와 같이, 항원-결합 파아지에 대해 스크리닝될 수 있다. 파아지는 전형적으로 단일-쇄 Fv (scFv) 단편들 또는 Fab 단편들로써 디스플레이 항체 단편들을 나타낸다. 면역화된 원천으로부터 라이브러리는 하이브리도마의 구축 요구없이 면역원에 대한 고-친화력 항체를 제공한다. 대안으로, Griffiths et al., EMBO J, 12: 725-734 (1993)에서 설명된 바와 같이 임의의 면역화없이, 광역의 비-자가 및 자가 항원들에 대한 단일 원천 항체를 제공하기 위하여 자연그대로의(naive) 레퍼토리가 클론될 수 있다(예로써, 인간으로부터). 최종적으로, Hoogenboom and Winter, J. Mol. Biol., 227: 381-388 (1992)에서 설명된 바와 같이, 자연그대로(naive)의 라이브러리는 줄기 세포들로부터 재배열안된 V-유전자 세그먼트를 클로닝하고, 그리고 초 가변적 CDR3 영역이 인코드되고, 그리고 시험관내 재배열이 이루어지도록 PCR 프라이머를 이용하여 합성적으로 만들 수 있다. 인간 항체 파아지 라이브러리를 설명하는 특허 공개는 예를 들면: US 특허번호. 5,750,373, 그리고 US 특허 공개 번호. 2005/0079574, 2005/0119455, 2005/0266000, 2007/0117126, 2007/0160598, 2007/0237764, 2007/0292936, 및 2009/0002360을 포함한다.
인간 항체 라이브러리로부터 단리된 항체들 또는 항체 단편들은 본 명세서의 인간 항체 또는 인간 항체 단편들로 간주된다.
다중특이적 항체들
특정 구체예들에 있어서, 본 발명의 항체는 다중특이적 항체, 예를 들면, 이중특이적 항체다. 다중특이적 항체는 최소한 2가지 상이한 부위에 대한 결합 특이성을 가지는 단일클론 항체다. 특정 구체예들에 있어서, 이중특이적 항체는 동일한 표적의 2가지 상이한 에피토프에 결합할 수 있다. 이중특이적 항체는 또한 표적을 발현하는 세포에 세포 독성 제제를 국소화시키는데 사용될 수 있다. 이중특이적 항체는 전장 항체 또는 항체 단편들로 준비될 수 있다.
다중특이적 항체를 만드는 기술은 상이한 특이성을 보유한 2개의 면역글로블린 중쇄-경쇄 쌍의 재조합 공동-발현(Milstein and Cuello,Nature 305: 537 (1983)), WO 93/08829, 및 Traunecker et al., EMBO J. 10: 3655 (1991) 참고), 및 "구멍내 손잡이(knob-in-hole)" 조작기술 (예로써, U.S. 특허번호. 5,731,168 참고)을 포함하나, 이에 국한되지 않는다. 본 명세서에 사용된 용어 "구멍내 손잡이(knob-into-hole)" 또는 "KnH"기술은 두 폴리펩티드가 상호작용하는 계면에서 하나의 폴리펩티드에 돌기(노브)를 도입하고, 다른 하나의 폴리펩티드에 공동 (구멍)을 도입함으로써, 시험관내 또는 생체 내에서 두 폴리펩티드의 쌍을 함께 지휘하는 기술을 나타낸다. 예로써, KnHs는 항체의 Fc:Fc 결합 계면(interfaces), CL:CH1 계면 또는 VH/VL 계면에 도입되었다 (가령, US 2011/0287009, US2007/0178552, WO 96/027011, WO 98/050431, Zhu et al., 1997, Protein Science 6:781-788, 및 WO2012/106587 참고). 일부 구체예들에서, KnHs는 다중특이성 항체의 제조 과정에서 서로 다른 두 개의 중쇄가 함께 결합되도록 유도한다. 예로써, Fc 영역에 KnH를 갖는 다중특이적 항체는 각 Fc 영역에 연계된 단일 가변 도메인을 추가로 포함할 수 있거나 또는 유사하거나 상이한 경쇄 가변 도메인과 쌍을 이루는 상이한 중쇄 가변 도메인을 추가로 포함할 수 있다. KnH 기술은 또한 2 개의 상이한 수용체 세포외 도메인을 함께 또는 상이한 표적 인식 서열 (예를 들어, 아피바디(affibodies), 펩티바디(peptibodies) 및 다른 Fc 융합체를 포함함)을 포함하는 임의의 다른 폴리펩티드 서열을 페어링하는데 사용될 수 있다.
본 명세서에서 사용되는 "노브 돌연변이(knob mutation)"라는 용어는 폴리펩티드가 다른 폴리펩티드와 상호 작용하는 계면에서 폴리펩티드 내로 돌기 (노브)를 도입시키는 돌연변이를 의미한다. 일부 구체예들에서, 다른 폴리펩티드는 구멍 돌연변이를 갖는다.
본 명세서에서 사용되는 "구멍 돌연변이(hole mutation)"라는 용어는 폴리펩티드가 다른 폴리펩티드와 상호 작용하는 계면에서 폴리펩티드 내로 동공 (구멍)을 도입시키는 돌연변이를 의미한다. 일부 구체예들에서, 상기 다른 폴리펩티드는 노브 돌연변이를 갖는다.
간단한 논의가 아래에 제공되나, 이에 국한되지 않는다.
"돌기 (protuberance)"는 제 1 폴리펩티드의 계면으로부터 돌출하여 이형다합체를 안정화시키기 위해 인접한 계면 (즉, 제 2 폴리 펩티드의 계면)에서 상보성 공동 내에 위치할 수 있는 적어도 하나의 아미노산 측쇄를 의미하며, 예를 들어, 동형다합체 형성보다 이형다합체 형성을 선호한다. 돌기는 원래의 계면에 존재할 수 있거나 (예를 들어, 계면을 코딩하는 핵산을 변경시킴으로써) 합성으로 도입될 수 있다. 일부 구체예들에서, 제 1 폴리펩티드의 계면을 인코딩하는 핵산은 돌기를 인코딩하도록 변경된다. 이를 달성하기 위해, 제 1 폴리펩티드의 계면에서 적어도 하나의 "원래(original)" 아미노산 잔기를 인코딩하는 핵산은 원래 아미노산보다 큰 측쇄 체적을 갖는 적어도 하나의 "수입(import)" 아미노산 잔기를 인코딩하는 핵산으로 대체된다. 하나 이상의 원래 잔기 및 상응하는 수입 잔기가 존재할 수 있음을 이해할 것이다. 다양한 아미노 잔기의 측쇄 부피는 예를 들어 US2011/0287009의 표 1에 기재되어 있다. "돌기(protuberance)"를 도입하기 위한 돌연변이는 "노브(knob) 돌연변이"라고 할 수 있다.
일부 구체예들에서, 돌연변이 형성을 위한 수입 잔기는 아르기닌 (R), 페닐알라닌 (F), 티로신 (Y) 및 트립토판 (W)으로부터 선택되는 자연 발생적인 아미노산 잔기이다. 일부 구체예들에서, 수입 잔기는 트립토판 또는 티로신이다. 일부 구체에에서, 돌기 형성을위 한 원래의 잔기는 알라닌, 아스파라긴, 아스파르트 산, 글리신, 세린, 트레오닌 또는 발린과 같은 작은 측쇄 부피를 갖는다.
"공동 (cavity)"은 제 2 폴리펩티드의 계면으로부터 오목하게 들어간된 적어도 하나의 아미노산 측쇄를 의미하며, 따라서 제 1 폴리펩티드의 인접 계면 상에 상응하는 돌기를 수용한다. 상기 공동은 원래의 계면에 존재할 수 있거나 (예를 들어, 계면을 코딩하는 핵산을 변경시킴으로써) 합성으로 도입될 수 있다. 일부 구체예들에서, 제 2 폴리펩티드의 계면을 인코딩하는 핵산은 공동을 인코딩하도록 변경된다. 이를 달성하기 위해, 제 2 폴리펩티드의 계면에서 적어도 하나의 "원래" 아미노산 잔기를 인코딩하는 핵산은 원래 아미노산보다 더 작은 측쇄 체적을 갖는 적어도 하나의 "수입" 아미노산 잔기를 인코딩하는 DNA로 대체된다. 하나 이상의 원래 잔기 및 상응하는 수입 잔기가 존재할 수 있음을 이해할 것이다. 일부 구체예들에서, 공동 형성을 위한 수입 잔기는 알라닌 (A), 세린 (S), 트레오닌 (T) 및 발린 (V)으로부터 선택되는 자연 발생 아미노산 잔기이다. 일부 구체예들에서, 수입 잔기은 세린, 알라닌 또는 트레오닌이다. 일부 구체예들에서, 공동의 형성을 위한 원래 잔기은 티로신, 아르기닌, 페닐알라닌 또는 트립토판과 같은 큰 측쇄 부피를 갖는다. "공동"을 도입하는 돌연변이는 "구멍(hole) 돌연변이"라고 할 수 있다.
상기 돌기는 공동에서 "위치가능(positionable)"하며, 이것은 각각 제 1 폴리펩티드와 제 2 폴리펩티드의 계면 상의 돌기 및 공동의 공간적 위치, 그리고 돌기 및 공동의 크기는 계면에서의 제 1 폴리펩티드와 제 2 폴리펩티드의 정상적인 연합을 크게 방해하지 않으면서, 공동 안에 위치할 수 있는 크기가 된다. Tyr, Phe 및 Trp와 같은 돌기는 전형적으로 계면의 축으로부터 수직으로 연장되지 않으며, 선호되는 배위(conformations)를 갖고, 일부 경우에 상응하는 공동을 갖는 돌기의 정렬은 X-선 결정학 또는 핵 자기 공명 (NMR)에 의해 얻어진 것과 같은, 3 차원 구조에 기초하여 돌기/공동 쌍을 모델링에 따라 달라질 수 있다. 이것은 당해 기술 분야에서 널리 수용되는 기술을 사용하여 달성될 수 있다.
일부 구체예들에서, IgG1 불변 영역에서 노브 돌연변이는 T366W (EU 번호매김)이다. 일부 구체예들에서, IgG1 불변 영역에서 구멍 돌연변이는 T366S, L368A 및 Y407V (EU 번호매김)로부터 선택된 하나 또는 그 이상의 돌연변이를 포함한다. 일부 구체예들에서, IgG1 불변 영역에서 구멍 돌연변이는 T366S, L368A 및 Y407V (EU 번호매김)를 포함한다.
일부 구체예들에서, IgG4 불변 영역에서 노브 돌연변이는 T366W (EU 번호매김)이다. 일부 구체예들에서, IgG4 불변 영역에서 구멍 돌연변이는 T366S, L368A 및 Y407V (EU 번호매김)로부터 선택된 하나 또는 그 이상의 돌연변이를 포함한다. 일부 구체예들에서, IgG4 불변 영역에서 구멍 돌연변이는 T366S, L368A 및 Y407V (EU 번호매김)를 포함한다.
다중-특이적 항체는 항체 Fc-이종이량체 분자들 (WO　2009/089004A1)을 만들기 위한 정전기적 스티어링(electrostatic steering) 효과를 조작하고; 2개 또는 그 이상 항체 또는 단편들 (예로써, US 특허번호. 4,676,980, 및 Brennan et al., Science, 229: 81 (1985) 참고)을 가교시키고; 류신 지퍼를 이용하여 이중-특이적 항체를 만들고 (예로써, Kostelny et al., J. Immunol., 148(5):1547-1553 (1992) 참고); 이중특이적 항체 단편들을 만들기 위하여 "디아바디" 기술을 이용하고 (예로써, Hollinger et al., Proc. Natl. Acad. Sci. USA, 90:6444-6448 (1993)); 그리고 단일-쇄 Fv (sFv) 이량체 (예로써 Gruber et al., J. Immunol., 152:5368 (1994) 참고)를 이용하고; 그리고 예로써, Tuttet al. J. Immunol. 147: 60 (1991)에서 설명된 바와 같이, 삼중특이적 항체를 제조함으로써, 또한 만들어질 수 있다.
"옥토푸스(Octopus) 항체"를 포함하는, 3개 또는 그 이상 기능성 항원 결합 부위들을 가진 조작제작된 항체가 또한 본 명세서에 포함된다 (예로써 US　2006/0025576A1 참고).
본원의 상기 항체 또는 단편은 표적 뿐만 아니라 또다른 상이한 항원에 결합하는 항원 결합 부위를 포함하는 "이중 작용 FAb" 또는 "DAF"를 또한 포함한다 (예로써, US　2008/0069820 참고).
항체 변이체
특정 구체예들에 있어서, 본 명세서에서 제공되는 항체의 아미노산 서열 변이체들도 고려된다. 예를 들면, 항체의 상기 결합 친화력 및/또는 다른 생물학적 성질들을 개선시키는 것이 바람직할 수 있다. 항체의 아미노산 서열 변이체들은 상기 항체를 인코드하는 뉴클레오티드 서열 안으로 적절한 변형을 도입시킴으로써, 또는 펩티드 합성에 의해 만들어질 수 있다. 이러한 변형은 예를 들면, 상기 항체의 아미노산 서열로부터 결손, 및/또는 이들 아미노산 서열 안으로 삽입 및/또는 잔기의 치환을 포함한다. 만일 최종 구조체가 바람직한 특징, 예를 들면, 항원-결합을 보유한 다면, 최종 구조체에 결손, 삽입, 및 치환의 임의의 조합이 있을 수 있다.
치환, 삽입, 및 결손 변이체
특정 구체예들에 있어서, 하나 또는 그 이상의 아미노산 치환들을 갖는 항체 변이체들이 제공된다. 치환 돌연변이유발을 위한 관심 부위는 HVRs 및 FRs를 포함한다. 보존적 치환들은 표 1에서 "선호되는 치환들"이라는 제목 아래에 나타낸다. 더 많은 실질적인 변화는 표 1의 "예시적인 치환들"이라는 제목하에 제시되며, 이는 아미노산 측쇄 클래스를 참고하여 더 논의된다 아미노산 치환들은 바람직한 활성, 예를 들면, 유지된/개선된 항원 결합, 감소된 면역원성, 또는 개선된 ADCC 또는 CDC에 대하여 스크린된 관심대상 항체 및 산물 안으로 도입될 수 있다.
표 1
Figure pct00017
아미노산은 공통적인 측쇄 성질들에 따라 집단화될 수 있다:
(1) 소수성: 노르류신, Met, Ala, Val, Leu, Ile;
(2) 중성 친수성: Cys, Ser, Thr, Asn, Gln;
(3) 산성: Asp, Glu;
(4) 염기성: His, Lys, Arg;
(5) 측쇄 방향에 영향을 주는 잔기: Gly, Pro;
(6) 방향족: Trp, Tyr, Phe.
비-보존성 치환들은 한 클래스의 멤버를 또다른 클래스로 교환을 수반할 것이다.
치환성 변이체의 한 가지 유형은 부모 항체의 하나 또는 그 이상의 초가변적 영역 잔기의 치환 (예로써 인간화된 또는 인간 항체)과 관련된다. 일반적으로, 추가 연구를 위하여 선별된 생성된 변이체(들)은 부모 항체와 비교하였을 때, 특정 생물학적 성질들의 변형(예로써, 개선), (예로써, 증가된 친화력, 감소된 면역원성)을 가지거나 및/또는 부모 항체의 특정 생물학적 성질들을 실질적으로 유지할 것이다. 예시적인 치환성 변이체는 친화력 발달된 항체이며, 이는 예로써, 파아지 디스플레이-기반의 친화력 성숙 기술, 이를 테면 본 명세서에서 설명된 것과 같은 것들을 이용하여 편의적으로 만들어질 수 있다. 간략하게 설명하자면, 하나 또는 그 이상의 HVR 잔기는 돌연변이되며, 변이체 항체는 파아지 상에서 디스플레이되며, 그리고 특정 생물학적 활성 (예로써 결합 친화력)에 대하여 스크리닝된다.
변경 (예로써, 치환들)은 예로써, 항체 친화력을 개선시키기 위하여 HVRs에서 만들어질 수 있다. 이러한 변경은 HVR에서 "핫스팟(hotspots))", 가령, 체세포 성숙 과정 동안 고빈도로 돌연변이를 겪는 코돈에 의해 인코드되는 잔기에서 만들어질 수 있고[가령, Chowdhury Methods Mol. Biol. 207:179-196 (2008)], 및/또는 SDRs (a-CDRs)), 생성된 변이체 VH 또는 VL은 결합 친화력에 대하여 테스트된다. 제 2 라이브러리를 구축하고, 재선별함으로써 친화력 성숙은 예로써, Hoogenboom et al. in Methods in Molecular Biology 178:1-37 (O'Brien et al., ed., HumanPress, Totowa, NJ, (2001))에서 설명되었다. 친화력 성숙의 일부 구체예들에 있어서, 다양성은 다양한 방법들 중 임의의 방법에 의해 성숙을 위해 선택된 가변 유전자들에 도입된다(가령, 오류-발생(error-prone) PCR, 쇄 셔플링, 또는 올리고뉴클레오티드-지향된 돌연변이생성). 제 2 이브러리가 생성된다. 이어서, 이 라이브러리를 스크리닝하여, 원하는 친화력을 갖는 임의의 항체 변이체를 동정한다. 다양성을 도입하는 또다른 방법은 HVR-지향된 접근법을 포함하는데, 이때 몇개 HVR 잔기 (가령, 한번에 4-6개 잔기)가 무작위화된다. 항언 결합에 관여하는 HVR 잔기는 가령, 알라닌 스캐닝 돌연변이유발 또는 모델링을 이용하여 특이적으로 동정될 수 있다. CDR-H3 및 CDR-L3이 특히 대개 표적이 된다.
특정 구체예들에 있어서, 치환들, 삽입, 또는 결손은 이러한 변이로 인하여 상기 항체가 항원에 결합하는 능력을 실질적으로 감소시키지 않는 한, 하나 또는 그 이상의 HVRs 안에서 발생될 수 있다. 예를 들면, 결합 친화력을 실질적으로 감소시키지 않는 보존적 변경 (가령, 본 명세서에서 제공된 보존적 치환)이 HVRs에 만들어 질 수 있다. 이러한 변경은 HVR "핫스팟(hotspots)" 또는 SDRs 밖에 있을 수 있다. 상기에서 제시된 변이체 VH 및 VL의 특정 구체예들에 있어서, 각 HVR은변경되지 않거나, 또는 1, 2 또는 3개 이상의 아미노산 치환을 함유한다.
돌연변이유발의 표적이될 수 있는 항체의 잔기 또는 영역을 식별하기 위한 유용한 방법은 Cunningham and Wells (1989) Science, 244:1081-1085에서 설명된 바와 같은 "알라닌 스캐닝 돌연변이유발"이라고 불린다. 이 방법에서 표적 잔기 또는 표적 잔기들의 집단 (예로써, 하전된 잔기, 이를 테면 arg, asp, his, lys, 및 glu)이 확인되고, 그리고 중성 또는 음으로 하전된 아미노산 (예로써, 알라닌 또는 폴리알라닌)으로 대체되어, 항원과 항체의 상호작용이 영향을 받았는지를 판단한다. 추가 치환이 상기 아미노산 위치에 도입되어, 초기 치환에 대한 기능적 민감성을 입증할 수 있다. 대안으로, 또는 추가로, 항원-항체 복합체의 결정(crystal) 구조를 이용하여 항체와 항원 간의 접촉 접을 동정한다. 이러한 접촉 잔기와 이웃 잔기는 치환의 후보로 표적화되거나, 또는 제거될 수 있다. 변이체들이 원하는 성질을 보유하는지를 판단하기 위하여 이 변이체들이 스크리닝될 수 있다.
아미노산 서열 삽입은 한 개 잔기에서 수백 또는 그 이상의 잔기가 함유된 폴리펩티드 범위, 뿐만 아니라 단일 또는 다수의 아미노산 잔기의 서열내 삽입이 포함된 아미노- 및/또는 카르복실-말단 융합을 포함한다. 말단 삽입의 예로는 N-말단 메티오닐 잔기를 갖는 항체를 포함한다. 상기 항체 분자의 다른 삽입 변이체들은 효소 (예로써 ADEPT의 경우)에 항체의 N- 또는 C-말단의 융합 또는 상기 항체의 혈청 반감기를 증가시키는 폴리펩티드에 항체의 N- 또는 C-말단의 융합을 포함한다.
당화 변이체들
특정 구체예들에서, 본 명세서에서 제공된 항체는 이 항체가 당화되는 정도를 증가 또는 감소시키기 위하여 변경된다. 항체의 당화 부위의 추가 또는 결손은 하나 또는 그 이상의 당화 부위가 만들어지거나 또는 제거되도록 아미노산 서열을 변경시킴으로써 편의적으로 실행될 수 있다.
상기 항체가 Fc 영역을 포함할 때, 이에 부착된 탄수화물이 변경될 수 있다. 포유류 세포들에 의해 만들어지는 고유 항체는 Fc 영역의 CH2 도메인의 Asn297에 N-링키지에 의해 일반적으로 부착된 분기화된, 바이안테너리(biantennary) 올리고사카라이드를 전형적으로 포함한다. 가령, Wright et al. TIBTECH 15:26-32 (1997) 참고. 상기 올리고사카라이드는 다양한 탄수화물, 예로써, 만노스, N-아세틸 글루코사민 (GlcNAc), 갈락토스, 및 시알산, 뿐만 아니라 상기 바이안테너리 올리고사카라이드 구조의 "줄기(stem)"에 GlcNAc에 부착된 푸코스를 포함할 수 있다. 일부 구체예들에 있어서, 본 발명의 항체의 올리고사카라이드의 변형은 특정 개선된 성질들을 가진 항체 변이체들을 만들기 위하여 만들어질 수 있다.
한 구체예에서, Fc 영역에 부착된(직접 또는 간접적으로) 푸코스가 없는 탄수화물 구조를 가진 항체 변이체들이 제공된다. 예를 들면, 이러한 항체에서 푸코스의 양은 1% 내지 80%, 1% 내지 65%, 5% 내지 65% 또는 20% 내지 40%가될 수 있다. 푸코스의 양은 예를 들면, WO　2008/077546에서 설명된 바와 같이 MALDI-TOF 질량 분광분석에 의해 측정된 바와 같이, Asn 297에 부착된 모든 당구조(가령, 복합체, 하이브리드 및 높은 만노스 구조)의 합과 비교하여 Asn297에서 슈가 쇄 안에 평균 푸코스 양을 산출함으로써, 결정된다. Asn297은 Fc 영역에서 대략 위치 297 (Fc 영역 잔기의 EU 번호매김 )에 위치한 아스파라긴 잔기를 지칭하며; 그러나, Asn297은 항체에서 소수의 서열 변이로 인하여 위치 297의 상류 또는 하류 약 ± 3의 아미노산, 가령, 위치 294와 300에 또한 위치할 수 있다. 이러한 푸코실화 변이체들은 개선된 ADCC 기능을 보유할 수 있다. 가령, US 특허 공개 번호. US 2003/0157108 (Presta, L.); US 2004/0093621 (Kyowa Hakko Kogyo Co., Ltd) 참고. "데푸코실화된(defucosylated)" 또는 "푸코스-결핍(fucose-deficient)" 항체 변이체에 관련된 공개 예는 다음을 포함한다: US 2003/0157108; WO 2000/61739; WO 2001/29246; US 2003/0115614; US 2002/0164328; US 2004/0093621; US 2004/0132140; US 2004/0110704; US 2004/0110282; US 2004/0109865; WO 2003/085119; WO 2003/084570; WO 2005/035586; WO 2005/035778; WO2005/053742; WO2002/031140; Okazaki et al. J. Mol. Biol. 336:1239-1249 (2004); Yamane-Ohnuki et al. Biotech. Bioeng. 87: 614 (2004). 탈푸코실화된 항체를 생산할 수 있는 세포주의 예로는 단백질 푸코실화 결핍 Lec13 CHO 세포들 (Ripka et al. Arch. Biochem. Biophys. 249:533-545 (1986); US 특허 출원 번호 2003/0157108 A1, Presta, L; 그리고 WO　2004/056312 A1, Adams et al., 특히 실시예 11), 그리고 녹아웃 세포주, 이를 테면 알파-1,6-퓨코실전이효소 유전자, FUT8, 녹아웃 CHO 세포들 (예로써, Yamane-Ohnuki et al. Biotech. Bioeng. 87: 614 (2004); Kanda, Y. et al., Biotechnol. Bioeng., 94(4):680-688 (2006); 그리고 WO2003/085107 참고)을 포함한다.
예를 들면, 양분된 올리고사카라이드를 가진 항체 변이체들이 더 제공되는데, 항체의 Fc 영역의 바이안테너리 올리고사카라이드는 GlcNAc에 의해 양분된다. 이러한 항체 변이체들은 감소된 푸코실화 및/또는 개선된 ADCC 기능을 보유할 수 있다. 이러한 변이체들의 예들은 예로써, WO 2003/011878 (Jean-Mairet et al.); US 특허번호. 6,602,684 (Umana et al.); 그리고 US 2005/0123546 (Umana et al.)에서 설명된다. Fc 영역에 부착된 올리고사카라이드에서 최소한 한 개의 갈락토스 잔기를 가진 항체 변이체들이 또한 제공된다. 이러한 항체 변이체들은 개선된 CDC 기능을 보유할 수 있다. 이러한 항체 변이체들은 예로써, WO 1997/30087 (Patel et al.); WO 1998/58964 (Raju, S.); 그리고 WO 1999/22764 (Raju, S.)에서 설명된다.
Fc 영역 변이체
특정 구체예들에 있어서, 하나 또는 그 이상의 아미노산 변형이 본 발명의 항체의 Fc 영역 안으로 도입되고, 이로 인하여 Fc 영역 변이체가 만들어질 수 있다. 상기 Fc 영역 변이체는 하나 또는 그 이상의 아미노산 위치에서 아미노산 변형(예로써, 치환)을 포함하는 인간 Fc 영역 서열 (예로써, 인간 IgG1, IgG2, IgG3 또는 IgG4 Fc 영역)를 포함할 수 있다.
특정 구체예들에 있어서, 본 발명은 모든 효과인자 기능을 보유하는 것은 아니지만 일부 기능을 보유하는 항체 변이체를 고려하며, 이는 생체내 항체의 반감기가 중요한 응용분야에 바람직한 후보를 만들고, 특정 효과인자 기능 (이를 테면 보체 및 ADCC)은 불필요하거나 또는 유해하다. 시험관내 및/또는 생체내 세포독성 분석을 실행하여 CDC 및/또는 ADCC 활성의 감소/고갈을 확인할 수 있다. 예를 들면, Fc 수용체 (FcR) 결합 분석을 실행하여 상기 항체가 FcγR 결합이 결여되지만 (그런 이유로 ADCC 활성이 결여될 수 있는), 그러나 FcRn 결합 능력은 유지된다는 것을 확인할 수 있다. ADCC를 조정하는 주요 세포, NK 세포들은 오직 Fc(RIII만을 발현시키지만, 단핵구는 Fc(RI, Fc(RII and Fc(RIII를 발현시킨다. 조혈 세포들에서 FcR 발현은 Ravetch and Kinet, Annu. Rev. Immunol. 9:457-492 (1991)의 페이지 464의 표 3에 요약되어 있다. 관심 분자의 ADCC 활성을 평가하기 위한 시험관내 분석의 비제한적 실시예는 U.S. 특허번호. 5,500,362 (예로써 Hellstrom, I. et al. Proc. Nat'l Acad. Sci. USA 83:7059-7063 (1986)) 및 Hellstrom, I et al., Proc. Nat'l Acad. Sci. USA 82:1499-1502 (1985); 5,821,337 (Bruggemann, M. et al., J. Exp. Med. 166:1351-1361 (1987) 참고)에서 설명되어 있다. 대안으로, 비-방사능활성 분석 방법들이 이용될 수 있다 (예를 들면, 유동 세포측정을 위한 ACTI™ 비-방사능활성 세포독성 분석 (CellTechnology, Inc. Mountain View, CA; 그리고 CytoTox 96® 비-방사능활성 세포독성 분석 (Promega, Madison, WI). 이러한 분석에 유용한 작동 세포들은 주변 혈액 단핵 세포들 (PBMC) 및 천연 킬러 (NK) 세포들을 포함한다. 대안으로, 또는 추가적으로, 관심 분자의 ADCC 활성은 예로써, Clynes et al. Proc. Nat'l Acad. Sci. USA 95:652-656 (1998)에서 공개된 바와 같은 동물 모델에서 생체내에서 평가될 수 있다. 상기 항체가 C1q에 결합할 수 없고, 이로 인하여 CDC 활성이 결여된다는 것을 확인하기 위하여 C1q 결합 분석이 또한 실행될 수 있다. 예로써, WO　2006/029879와 WO　2005/100402에서 C1q 및 C3c 결합 ELISA 참고. 보체 활성화를 평가하기 위하여, CDC 분석이 실행될 수 있다(예를 들면, Gazzano-Santoro et al. J. Immunol. Methods 202:163 (1996); Cragg, M.S. et al. Blood. 101:1045-1052 (2003); 그리고 Cragg, M.S. and M.J. Glennie Blood. 103:2738-2743 (2004) 참고). FcRn 결합과 생체내 제거/반감기 결정은 당분야에 공지된 방법들을 이용하여 또한 실행될 수 있다 (예로써, Petkova, S.B. et al. Int'l. Immunol. 18(12):1759-1769 (2006) 참고).
일부 구체예들에서, 하나 이상의 아미노산 변형이 신생아 Fc 수용체에 대한 IgG 결합을 증가시키기 위해 본원에서 제공된 항체의 Fc 부분에 도입될 수 있다. 특정 구체예들에서, 상기 항체는 EU 번호매김에 따라 다음 3개의 돌연변이를 포함한다: M252Y, S254T, 및 T256E ("YTE 돌연변이") (US 특허 번호 8,697,650; Dall'Acqua et al., Journal of Biological Chemistry 281(33):23514-23524 (2006) 또한 참고. 특정 구체예들에서, YTE 돌연변이는 동종(cognate) 항원에 결합하는 항체의 능력에 영향을 미치지 않는다. 특정 구체예들에서, 상기 YTE 돌연변이는 고유의(native) (가령, 비-YTE 돌연변이체) 항체와 비교하였을 때, 상기 항체의 혈청 반감기를 증가시킨다. 일부 구체예들에서, 상기 YTE 돌연변이는 고유의 (가령, 비-YTE 돌연변이체) 항체와 비교하였을 때, 상기 항체의 혈청 반감기를 3-배 증가시킨다. 일부 구체예들에서, 상기 YTE 돌연변이는 고유의 (가령, 비-YTE 돌연변이체) 항체와 비교하였을 때, 상기 항체의 혈청 반감기를 2-배 증가시킨다. 일부 구체예들에서, 상기 YTE 돌연변이는 고유의 (가령, 비-YTE 돌연변이체) 항체와 비교하였을 때, 상기 항체의 혈청 반감기를 4-배 증가시킨다. 일부 구체예들에서, 상기 YTE 돌연변이는 고유의 (가령, 비-YTE 돌연변이체) 항체와 비교하였을 때, 상기 항체의 혈청 반감기를 최소한 5-배 증가시킨다. 일부 구체예들에서, 상기 YTE 돌연변이는 고유의 (가령, 비-YTE 돌연변이체) 항체와 비교하였을 때, 상기 항체의 혈청 반감기를 최소한 10-배 증가시킨다. 가령, US 특허 번호. 8,697,650; Dall'Acqua et al., Journal of Biological Chemistry 281(33):23514-23524 (2006) 또한 참고.
특정 구체예들에서, 상기 YTE 돌연변이체는 항체의 항체 의존 세포 매개 세포 독성 (ADCC) 활성을 조절하는 수단을 제공한다. 특정 구체예들에서, 상기 YTEO 돌연변이체는 인간 항원에 대한 인간화 IgG 항체의 ADCC 활성을 조절하는 수단을 제공한다. 가령, US 특허 번호. 8,697,650; Dall'Acqua et al., Journal of Biological Chemistry 281(33):23514-23524 (2006) 또한 참고.
특정 구체예들에서, 상기 YTE 돌연변이체는 혈청 반감기, 조직 분포 및 항체 활성 (예를 들어, IgG 항체의 ADCC 활성)의 동시 조절을 가능하게 한다. 가령, US 특허 번호. 8,697,650; Dall'Acqua et al., Journal of Biological Chemistry 281(33):23514-23524 (2006) 또한 참고.
감소된 효과인자 기능를 가진 항체들은 Fc 영역 잔기 238, 265, 269, 270, 297, 327 및 329중 하나 또는 그 이상의 치환을 가진 것들을 포함한다(U.S. 특허 번호 6,737,056). 이러한 Fc 돌연변이체들은 잔기 265 및 297의 잔기가 알라닌으로 치환된 소위 "DANA" Fc 돌연변이체를 포함하는, 아미노산 위치 265, 269, 270, 297 및 327중 2개 또는 그 이상에서 치환을 가진 Fc 돌연변이체를 포함한다 (US 특허번호 7,332,581 참고).
특정 구체예들에 있어서, 항체에서 야생형 인간 Fc 영역의 위치 329(EU 번호매김)의 프롤린은 글리신 또는 아르기닌 또는 Fc의 P329와 FcgRIII의 트립토판 잔기 W87 및 W110에서 형성된 Fc/Fc 감마 수용체 경계면 안에 프롤린 샌드위치를 파괴하는데 충분히 큰 아미노산 잔기로 치환된다 (Sondermann et al.: Nature 406, 267-273 (20 July2000)). 추가 구체예에서, Fc 변이체에서 적어도 하나의 추가 아미노산 치환은 S228P, E233P, L234A, L235A, L235E, N297A, N297D, 또는 P331S이며, 여전히 또다른 구체예에서 전술한 적어도 하나의 추가 아미노산 치환은 인간 IgG1 Fc 영역의 L234A 및 L235A이거나 또는 인간 IgG4 Fc 영역의 S228P 및 L235E이다(이들 모두는 EU 번호매김에 따른다 (U.S. 특허 번호 8,969,526는 본 명세서에 전문이 참고자료에 편입됨).
특정 구체예들에서, 폴리펩티드 야생형 인간 IgG Fc 영역의 Fc 변이체를 포함하는데, 이때 상기 폴리펩티드는 글리신으로 치환된 인간 IgG Fc 영역의 P329를 갖고, 이때 상기 Fc 변이체는 인간 IgG1 Fc 영역의 L234A 및 L235A에, 또는 인간 IgG4 Fc 영역의 S228P 및 L235E에 적어도 2개의 추가 아미노산 치환을 포함하고, 그리고 이때 이들 잔기는 EU 번호매김에 따라 번호매겨된다(U.S. 특허 번호 8,969,526는 본 명세서에 전문이 참고자료에 편입됨). 특정 구체예들에서, P329G, L234A 및 L235A (EU 번호매김) 치환이 포함된 폴리펩티드는 인간 FcγRIIIA 및 FcγRIIA에 대한 친화력을 ADCC의 하향-조정에 대하여 야생형 인간 IgG Fc 영역을 포함하는 폴리펩티드에 의해 유도된 ADCC의 적어도 20%, 및/또는 ADCP의 하향-조정에 대하여 감소된 친화력을 나타낸다 (U.S. 특허 번호 8,969,526는 본 명세서에 전문이 참고자료에 편입됨).
특이적 구체예에서, 야생형 인간 Fc 폴리펩티드의 Fc 변이체를 포함하는 폴리펩티드는 EU 번호매김 (P329/LALA)에 따라 삼중 돌연변이: 위치 Pro329, L234A 및 L235A 돌연변이를 포함한다. (U.S. 특허 번호 8,969,526는 본 명세서에 전문이 참고자료에 편입됨). 특이적 구체예들에서, 상기 폴리펩티드는 EU 번호매김에 따라 다음의 아미노산 치환: P329G, L234A, 및 L235A를 포함한다.
FcRs에 대한 결합이 개선된 또는 감소된 특정 항체 변이체들이 설명된다. (가령, U.S. 특허 번호 6,737,056; WO 2004/056312, 및 Shields et al., J. Biol. Chem. 9(2): 6591-6604 (2001). 참고)
특정 구체예들에 있어서, 항체 변이체는 ADCC를 개선시키는 하나 또는 그 이상의 아미노산 치환들, 예로써, Fc 영역의 위치 298, 333, 및/또는 334 (잔기의 EU 번호매김)에서 치환을 가진 Fc 영역을 포함한다.
일부 구체예들에 있어서, Fc 영역 안에 예로써, US 특허번호 6,194,551, WO　99/51642, 및 Idusogie et al. J. Immunol. 164: 4178-4184 (2000)에서 설명된 바와 같이, 변경된 (가령, 개선된 또는 감소된) C1q 결합 및/또는 보체 의존적 세포독성 (CDC)을 초래하는 변형이 만들어진다.
태아로 모계 IgGs의 전달을 담당하는, 증가된 반감기와 신생아의 Fc 수용체 (FcRn)에 대한 결합이 개선된 항체들(Guyer et al., J. Immunol. 117:587 (1976) 그리고 Kim et al., J. Immunol. 24:249 (1994))은 US2005/0014934A1 (Hinton et al.)에서 설명된다. 이들 항체는 Fc 영역이 FcRn에 결합을 개선시키는 하나 또는 그 이상의 치환들을 가진 Fc 영역을 포함한다. 이러한 Fc 변이체들은 Fc 영역 잔기의 하나 또는 그 이상에서 치환을 가진 것들을 포함한다: 238, 256, 265, 272, 286, 303, 305, 307, 311, 312, 317, 340, 356, 360, 362, 376, 378, 380, 382, 413, 424 또는 434, 예로써, Fc 영역 잔기 434의 치환 (US 특허번호. 7,371,826).
Fc 영역 변이체들의 다른 예들에 관련된 Duncan & Winter, Nature 322:738-40 (1988); U.S. 특허번호. 5,648,260; U.S.특허번호. 5,624,821; 그리고 WO 94/29351 참고.
시스테인 조작된 항체 변이체들
특정 구체예들에 있어서, 항체의 하나 또는 그 이상의 잔기가 시스테인 잔기으로 대체된, 시스테인 조작된 항체, 가령, "THIOMAB™" 또는 TDC를 만드는 것이 바람직할 수 있다. 특정 구체예에서, 상기 치환된 잔기는 접합에 이용가능한 항체의 접근가능한 부위에서 일어난다. 이들 잔기를 시스테인으로 치환함으로써, 반응활성 티올기는 이 상체의 접근가능한 부위에 위치하게 되고, 다른 모이어티, 이를 테면 하기에서 설명되는 약물 모이어티 또는 링커-약물 모이어티에 이 항체가 접합되어 면역접합체가 생성될 수 있다. 특정 구체예들에 있어서, 임의의 하나 또는 그 이상의 다음 잔기는 시스테인으로 치환될 수 있다: 경쇄의 K149 (Kabat 번호매김); 경쇄의V205 (Kabat 번호매김); 중쇄의 A118 (EU 번호매김); 중쇄의A140 (EU 번호매김); 중쇄의L174 (EU 번호매김) ; 중쇄의Y373 (EU 번호매김); 그리고 중쇄 Fc 영역의 S400 (EU 번호매김). 특이적 구체예들에서, 본원에 기술된 항체는 HC-A140C (EU 번호매김) 시스테인 치환을 포함한다. 특이적 구체예들에서, 본원에 기술된 항체는 LC-K149C (Kabat 번호매김) 시스테인 치환을 포함한다. 특이적 구체예들에서, 본원에 기술된 항체는 HC-A118C (EU 번호매김) 시스테인 치환을 포함한다. 시스테인 조작된 항체는 예를 들면, U.S. 특허번호. 7,521,541에서 설명된 것과 같이 생성될 수 있다.
특정 구체예들에서, 상기 항체는 다음의 중쇄 시스테인 치환중 하나를 포함한다:
Figure pct00018
특정 구체예들에서, 상기 항체는 다음의 경쇄 시스테인 치환중 하나를 포함한다.
Figure pct00019
비-제한적 예시적인 hu7C2.v2.2.LA 경쇄 (LC) K149C THIOMAB™ 은 차례로 서열 번호: 26 및 30의 중쇄 및 경쇄 아미노산 서열을 갖는다. 비-제한적 예시적인 hu7C2.v2.2.LA 중쇄 (HC) A118C THIOMAB™은 차례로 서열 번호: 31 및 25의 중쇄 및 경쇄 아미노산 서열을 갖는다.
항체 유도체들
특정 구체예들에 있어서, 본원에서 제공된 항체는 당업계에 공지되어 있고, 쉽게 입수할 수 있는 추가의 비단백질성 잔기를 함유하도록 추가로 변형될 수 있다. 상기 항체의 유도체화에 적합한 모이어티들은 물 가용성 폴리머들을 포함하나, 이에 국한되지 않는다. 물 가용성 폴리머의 비-제한적인 예로는 폴리에틸렌 글리콜 (PEG), 에틸렌 글리콜/프로필렌 글리콜의 코폴리머, 카르복시메틸셀룰로오스, 덱스트란, 폴리비닐 알코올, 폴리비닐 피롤리돈, 폴리-1, 3-디옥소란, 폴리-1,3,6-트리옥산, 에틸렌/말레 무수물 코폴리머, 폴리아미노산 (호모폴리머 또는 무작위 코폴리머), 그리고 덱스트란 또는 폴리(n-비닐 피롤리돈)폴리에틸렌 글리콜, 프로프로필렌 글리콜 호모폴리머, 프로리프로필렌 산화물/에틸렌 산화물 코-폴리머, 폴리옥시에틸화된 폴리올 (예로써, 글리세롤), 폴리비닐 알코올, 및 이의 혼합물을 포함하나, 이에 국한되지 않는다. 폴리에틸렌 글리콜 프로피온알데히드는 물에서의 안정성으로 인하여 제작에서 장점을 가질 수 있다. 중합체는 임의의 분자량일 수 있고, 분지형 또는 비-분지형일 수 있다. 상기 항체에 부착된 폴리머의 수는 가변적일 수 있으며, 하나 이상의 폴리머가 부착된 경우, 이들은 동일하거나 또는 상이한 분자들일 수 있다. 일반적으로, 유도체화에 이용된 폴리머의 수 및/또는 유형은 개선되는 항체의 특정 성질들 또는 기능들, 상기 항체 유도체가 특정 조건하에서 치료에 이용되는지의 여부를 포함하는 고려사항들에 근거하여 결정될 수 있다.
또다른 구체예에서, 방사선에 노출됨으로써 선별적으로 가열될 수 있는 항체와 비단백질성 모이어티의 접합체들이 제공된다. 한 구체예에서, 상기 비단백질성 모이어티는 탄소 나노튜브다 (Kam et al., Proc. Natl. Acad. Sci. USA 102: 11600-11605 (2005)). 방사능은 임의의 파장일 수 있으며, 정상 세포들에게 해를 주지 않지만, 그러나 상기 항체-비단백질성 모이어티에 근접한 세포들은 사멸되는 온도에서 비단백질성 모이어티에 열을 가하는 파장이 포함되나, 이에 국한되지 않는다.
재조합 방법 및 조성물들
항체는 재조합 방법 및 조성물을 사용하여, 예를 들어 U.S. 특허 제 4,816,567 호에 기재된 바와 같이 제조될 수 있다. 한 구체예에서, 본 명세서에서 설명된 항체가 인코딩된 단리된 핵산이 제공된다. 이러한 핵산은 상기 항체의 상기 VL이 포함된 아미노산 서열 및/또는 VH가 포함된 아미노산 서열(예로써, 항체의 경쇄 및/또는 중쇄)을 인코드할 수 있다. 추가 구체예에 있어서, 이러한 핵산이 포함된 하나 또는 그 이상의 벡터 (예로써, 발현 벡터)가 제공된다. 추가 구체예에 있어서, 이러한 핵산이 포함된 숙주 세포가 제공된다. 이러한 하나의 구체예에 있어서, 숙주 세포는 다음을 포함한다 (예로써, 하기의 것으로 형질변환되었다): (1) 상기 항체의 VL이 포함된 아미노산 서열과 상기 항체의 VH가 포함된 아미노산 서열을 인코드하는 핵산이 포함된 벡터, 또는 (2) 상기 항체의 VL이 포함된 아미노산 서열을 인코드하는 핵산이 포함된 제 1 벡터와 상기 항체의 VH가 포함된 아미노산 서열을 인코드하는 핵산이 포함된 제 2 벡터. 한 구체예에서, 상기 숙주 세포는 진핵, 예로써 중국 헴스터 난소 (CHO) 세포 또는 림프구 세포 (예로써, Y0, NS0, Sp20 세포)다. 한 구체예에서, 항체를 만드는 방법이 제공되는데, 이때 상기 방법은 상기에서 제공된 바와 같이, 상기 항체를 인코드하는 핵산이 포함된 숙주 세포를 상기 항체의 발현에 적합한 조건하에서 배양하고, 그리고 임의선택적으로 상기 숙주 세포 (또는 숙주 세포 배양 배지)로부터 상기 항체를 회수하는 것을 포함한다.
항체의 재조합 생산을 위하여, 예로써 상기에서 기술된 바와 같이 항체를 인코드하는 핵산이 단리되고, 숙주 세포 안에서 추가 클로닝 및/또는 숙주 세포 안에서 발현을 위하여 하나 또는 그 이상의 벡터 안으로 삽입된다. 이러한 핵산은 통상적인 과정 (예로써, 상기 항체의 중쇄 및 경쇄를 인코드하는 유전자에 특이적으로 결합할 수 있는 올리고뉴클레오티드 프로브를 이용하여)을 이용하여 단리 및 서열화될 수 있다.
항체-인코딩된 벡터의 클로닝 또는 발현에 적합한 숙주 세포는 본 명세서에서 설명된 원핵 또는 진핵 세포들을 포함한다. 예를 들면, 특히 당화 및 Fc 효과인자 기능이 필요하지 않을 때, 박테리아 안에서 항체가 만들어질 수 있다. 박테리아 안에서 항체 단편들 및 폴리펩티드의 발현과 관련하여 예로써, U.S. 특허번호 5,648,237, 5,789,199, 및 5,840,523 참고. (대장균(E. coli)에서 항체 단편들의 발현을 설명하는 Charlton, Methods in Molecular Biology, Vol. 248 (B.K.C. Lo, ed., HumanaPress, Totowa, NJ, 2003), pp. 245-254 또한 참고) 발현 후, 상기 항체는 박테리아 세포 페이스트로부터 가용성 분획으로 단리되며, 추가 정제될 수 있다.
원핵세포에 추가적으로, 진핵 미생물, 이를 테면 섬유성 곰팡이 또는 효모는 항체-인코딩된 벡터의 적절한 클로닝 또는 발현 숙주이며, 당화 경로가 "인간화되고", 결과적으로 부분적으로 또는 온전하게 인간 당화 패턴을 가진 항체가 생산되는 곰팡이 및 효모 균주가 포함된다. Gerngross, Nat. Biotech. 22:1409-1414 (2004), 및 Li et al., Nat. Biotech. 24:210-215 (2006) 참고.
당화된 항체의 발현에 적합한 숙주 세포들은 다중세포 유기체 (무척추동물 및 척추동물)로부터 또한 유도된다. 무척추동물 세포들의 예로는 식물 및 곤충 세포들이 포함된다. 스포도프테라 푸르기페르다(Spodoptera frugiperda) 세포들의 형질감염을 위하여 곤충 세포들과 병용될 수 있는 많은 베큘로바이러스 균주들이 확인되었다.
식물 세포 배양 또한 숙주로 이용될 수 있다. 예로써, US 특허번호 5,959,177, 6,040,498, 6,420,548, 7,125,978, 및 6,417,429 참고 (유전자삽입 식물에서 항체를 생산하기 위한 PLANTIBODIESTM 을 설명).
척추동물 세포들 또한 숙주로 이용될 수 있다. 예를 들면, 현탁액에서 성장하도록 적응된 포유류 세포주들이 유용할 수 있다. 유용한 포유류 숙주 세포주의 다른 예로는 SV40에 의해 형질변환된 원숭이 신장 CV1 세포주 (COS-7); 인간 배아 신장 세포주 (예로써, Graham et al., J. Gen Virol. 36:59 (1977)에서 설명된 293 또는 293 세포들); 아기 햄스터 신장 세포들 (BHK); 마우스 세르톨리 세포들 (예로써, Mather, Biol. Reprod. 23:243-251 (1980)에서 설명된 TM4 세포들); 원숭이 신장 세포들 (CV1); 아프리카 녹색 원숭이 신장 세포들 (VERO-76); 인간 경부 암종 세포들 (HELA); 갯과 신장 세포들 (MDCK; 버팔로 렛 간 세포들 (BRL 3A); 인간 폐 세포들 (W138); 인간 간 세포들 (Hep G2); 마우스 유방 종양 (MMT 060562); 예로써, Mather et al., Annals N.Y. Acad. Sci. 383:44-68 (1982)에서 설명된 TRI 세포들; MRC 5 세포들; 그리고 FS4 세포들이다. 다른 유용한 포유동물 숙주 세포계통은 DHFR- CHO 세포 (Urlaub et al., Proc. Natl. Acad. Sci. USA 77:4216 (1980))을 포함하는 중국 헴스터 난소(CHO) 세포(Urlaub et al., Proc. Natl. Acad. Sci. USA 77:4216 (1980)); 그리고 골수종 세포계통 이를 테면 Y0, NS0 및 Sp2/0을 포함한다. 항체 생산에 적합한 특정 포유류 숙주 세포주의 검토는 예로써, Yazaki and Wu,Methods in Molecular Biology, Vol. 248 (B.K.C. Lo, ed., HumanaPress, Totowa, NJ), pp. 255-268 (2003)를 참고한다.
모노알킬레이터 피롤로벤조디아제핀 약물 모이어티
본 발명의 항체-약물 콘쥬게이트 화합물은 N10 기에서 상기 항체에 이황화물 링커를 갖는 것으로 유도된 모노알킬레이터 피롤로벤조디아제핀 약물 모이어티를 포함한다.
표 1a에 나타낸 예시적인 모노알킬레이터 피롤로벤조디아제핀 (PBD) 약물 모이어티가 준비되었다.
표 1a 모노알킬레이터 피롤로벤조디아제핀 약물 모이어티
Figure pct00020
Figure pct00021
Figure pct00022
표 1b 비교 약물 모이어티
Figure pct00023
모노알킬레이터 피롤로벤조디아제핀, 링커-약물 중간생성물
본 발명의 항체-약물 콘쥬게이트 (ADC) 화합물은 항체와 함께, 모노알킬레이터 피롤로벤조디아제핀, 링커-약물 중간생성물의 콘쥬게이션에 의해 준비될 수 있다. 링커-약물 중간생성물의 티오피리딜 기는 항체의 시스테인 티올로 대체되어 이황화물 연계된 ADC가 형성된다.
상기 모노알킬레이터 피롤로벤조디아제핀, 링커-약물 중간생성물은 화학식 I을 갖는다:
Figure pct00024
이때 X
Figure pct00025
Y는 CH2-CH2, CH=CH, C(=O)-NH, 및 CH2-NH로부터 선택되고;
A는 F, C1-C6 알킬, 및 =C(R)2 로부터 선택된 기로 임의선택적으로 치환된 5-원(membered) 또는 6-원(membered) 헤테로사이클릭 고리이며, 여기에서 R은 독립적으로 H, F, C1-C6 알킬, 및 C1-C6 플루오르알킬로부터 선택되며;
R1 및 R2는 독립적으로 H 및 C1-C6 알킬로부터 선택되거나, 또는 R1 과 R2 는 3, 4, 5, 또는 6-원(membered) 시클로알킬 또는 헤테로시클일 기를 형성하고;
R3은 독립적으로 NO2, Cl, F, CN, CO2H 및 Br로부터 선택되며; 그리고
m은 0, 1 또는 2이다.
예시적인 구체예에서, A는 5-원(membered) 고리이다.
예시적인 구체예에서, A는 엑소사이클릭 메틸렌 기, =CH2 .로 치환된 5-원(membered) 고리이다.
예시적인 구체예에서, A는 6-원(membered) 고리이다.
예시적인 구체예에서, A는 몰포리닐 고리이다.
예시적인 구체예에서, R1 은 -CH3 이며, R2 는 H이다.
예시적인 구체예에서, R1 과 R2 는 사이클로프로필 또는 사이클로부틸을 형성한다.
예시적인 구체예에서, R3 은 -NO2 이며, m은 1이다.
예시적인 구체예에서, X
Figure pct00026
Y는 CH2-CH2 또는 CH=CH이다.
예시적인 구체예에서, X
Figure pct00027
Y는 C(=O)-NH 또는 CH2-NH이다.
모노알킬레이터 피롤로벤조디아제핀, 링커-약물 중간생성물의 예시적인 구체예는 화학식 Ia이다:
Figure pct00028
예시적인 구체예에서, R4 및 R5 는 각각 H이다.
예시적인 구체예에서, R4 및 R5 는 =O이다.
모노알킬레이터 피롤로벤조디아제핀, 링커-약물 중간생성물의 예시적인 구체예는 화학식 Ib이다:
Figure pct00029
모노알킬레이터 피롤로벤조디아제핀, 링커-약물 중간생성물의 예시적인 구체예는 화학식 Ic이다:
Figure pct00030
모노알킬레이터 피롤로벤조디아제핀, 링커-약물 중간생성물의 예시적인 구체예는 화학식 Id이다:
Figure pct00031
특정 기전 또는 효과에 국한되지 않고, 모노알킬레이터 피롤로벤조디아제핀, 링커 중간생성물의 피리딜 고리상에 전자-구인성 기 R3 이를 테면 NO2, Cl, F, CN, CO2H 또는 Br의 존재는 시스테인-조작된 항체의 시스테인 티올과의 반응을 가속한다. 여기에서 상기 시스테인 티올이 상기 항체 상의 방해된(hindered) 또는 활성이 적은 부위로 도입될 때, 이러한 모노알킬레이터 피롤로벤조디아제핀, 링커 중간생성물은 치환안된 피리딜 유사체 (R3 = H)와 비교하여 항체와의 더 효과적인 콘쥬게이션 반응을 제공할 수 있다.
예시적인 모노알킬레이터 피롤로벤조디아제핀, 링커-약물 중간생성물은 표 2A에 나타낸다. 비교 디알킬레이터 피롤로벤조디아제핀, 링커-약물 중간생성물은 표 2B에 나타낸다. 링커-약물 중간생성물 및 비교물질의 합성은 실시예에서 기술된다.
표 2A 모노알킬레이터 피롤로벤조디아제핀, 링커-약물 중간생성물
Figure pct00032
Figure pct00033
표 2B 비교 피롤로벤조디아제핀 링커-약물 중간생성물
Figure pct00034
Figure pct00035
Figure pct00036
항체-약물 콘쥬게이트 (ADC)
상기 본 발명의 항체-약물 콘쥬게이트 (ADC) 화합물은 N10 기에서 이황화물 링커로 유도화된 강력한 모노알킬레이터 피롤로벤조디아제핀 약물 모이어티에 연계된, 공유적으로 부착된 종양-연관된 항원에 특이적인 항체를 포함하며, 그리고 생물학적 활성을 가진 것들을 함유한다. 본 발명의ADC는 치료요법적 활성을 가지며, 암을 비롯하여 다수의 과다증식성 장애에 대하여 효과를 가질 것이다. 모노알킬레이터 피롤로벤조디아제핀 약물 모이어티의 생물학적 활성은 항체에 콘쥬게이션됨으로써 조정된다. 본 발명의 ADC는 종양 세포 또는 부위에 선택적으로 모노알킬레이터 피롤로벤조디아제핀 약물, 또는 독소의 효과량을 전달하고, 여기에서 치료요법적 지수 ("치료요법적 창")를 증가시키면서, 더 큰 선택성, 가령 더 낮은 효과 용량이 획득될 수 있다. 예시적인 구체예에서, 상기 ADC 화합물은 모노알킬레이터 피롤로벤조디아제핀 약물 모이어티에 콘쥬게이트된, 가령, 링커에 의해 공유적으로 부착된 시스테인-조작된 항체를 함유한다.
여기에서 하나 이상의 친핵성 시스테인 티올 기는 물-링커 중간생성물 또는 링커 시약과 반응하고, 그 다음 생성 산물은 항체에 부착된 하나 또는 그 이상의 약물 모이어티 분포를 갖는 ADC 화합물의 혼합물이라는 것을 이해해야 한다. 항체당 약물의 평균 수 (DAR)는 이 항체에 특이적이고, 이 약물에 특이적인 이중 ELISA 항체 분석에 의해 상기 혼합물로부터 산출될 수 있다. 개별 ADC 분자는 질량 분광법에 의해 혼합물에서 식별되고, HPLC, 가령 소수성 상호작용 크로마토그래피에 의해 분리될 수 있다 (가령, McDonagh et al (2006) Prot. Engr. Design & Selection 19(7):299-307; Hamblett et al (2004) Clin. Cancer Res. 10:7063-7070; Hamblett, K.J., et al. "Effect of drug loading on the pharmacology, pharmacokinetics, and toxicity of an anti-CD30 antibody-drug conjugate," Abstract No. 624, American Association for Cancer Research, 2004 Annual Meeting, March 27-31, 2004, Proceedings of the AACR, Volume 45, March 2004; Alley, S.C., et al. "Controlling the location of drug attachment in antibody-drug conjugates," Abstract No. 627, American Association for Cancer Research, 2004 Annual Meeting, March 27-31, 2004, Proceedings of the AACR, Volume 45, March 2004) 참고). 특정 구체예들에서, 단일 로딩 값을 갖는 균질성 ADC는 콘쥬게이션 혼합물로부터 전기영동 또는 크로마토그래피에 의해 단리될 수 있다.
본 발명의 항체-약물 콘쥬게이트 화합물은 화학식 II의 구조를 갖는다:
Figure pct00037
또는 약학적으로 수용가능한 이의 염이며, 이때:
이때:
X
Figure pct00038
Y는 CH2-CH2, CH2-C(=O), CH=CH, 또는 CH2-NH로부터 선택되며;
R1 및 R2는 독립적으로 H 또는 C1-C6 알킬로부터 선택되거나, 또는 R1 과 R2 는 3, 4, 5, 또는 6-원(membered) 시클로알킬 또는 헤테로시클일 기를 형성하고;
p는 1 내지 8의 정수이며; 그리고
Ab는 항체다.
예시적인 구체예에서, 상기 항체는 (1)-(53)로부터 선택된 하나 또는 그 이상의 종양-연관된 항원 또는 세포-표면 수용체에 결합한다:
(1) BMPR1B (골 형태형성 단백질 수용체-유형 IB);
(2) E16 (LAT1, SLC7A5);
(3) STEAP1 (전립선의 6개 막경유 상피 항원);
(4) MUC16 (0772P, CA125);
(5) MPF (MPF, MSLN, SMR, 거핵구 강화 인자, 메소텔린);
(6) Napi2b (NAPI-3B, NPTIIb, SLC34A2, 용질 운반체 패밀리 34 (인산 나트륨), 구성원 2, 유형 II 나트륨-의존성 인산염 운반물질 3b);
(7) Sema 5b (FLJ10372, KIAA1445, Mm.42015, SEMA5B, SEMAG, 세마포린 5b Hlog, 세마 도메인, 7개 트롬보스폰딘 반복체 (유형 1 및 유형 1-유사), 막경유 도메인 I 및 짧은 세포질 도메인, (세마포링) 5B);
(8) PSCA hlg (2700050C12Rik, C530008O16Rik, RIKEN cDNA 2700050C12, RIKEN cDNA 2700050C12 유전자);
(9) ETBR (엔도텔린 유형 B 수용체);
(10) MSG783 (RNF124, 가상의 단백질 FLJ20315);
(11) STEAP2 (HGNC_8639, IPCA-1, PCANAP1, STAMP1, STEAP2, STMP, 전립선 암 연관된 유전자 1, 전립선 암 연관된 단백질 1, 전립선의 6개 막경유 상피 항원 2, 6개의 막경유 전립선 단백질);
(12) TrpM4 (BR22450, FLJ20041, TRPM4, TRPM4B, 일과성 수용체 잠재적 양이온 채널, 서브패밀리 M, 구성원 4);
(13) CRIPTO (CR, CR1, CRGF, CRIPTO, TDGF1, 기형암종-유도된 성장 인자);
(14) CD21 (CR2 (보체 수용체 2) 또는 C3DR (C3d/엡스테인 바르 바이러스 수용체) 또는 Hs 73792);
(15) CD79b (CD79B, CD79β, Igb (면역글로블린-연관된 베타), B29);
(16) FcRH2 (IFGP4, IRTA4, SPAP1A (포스파타제 엥커 단백질 1a가 함유된 SH2 도메인), SPAP1B, SPAP1C);
(17) HER2;
(18) NCA;
(19) MDP;
(20) IL20Rα;
(21) 브레비칸(Brevican);
(22) EphB2R;
(23) ASLG659;
(24) PSCA;
(25) GEDA;
(26) BAFF-R (B 세포-활성화 인자 수용체, BlyS 수용체 3, BR3);
(27) CD22 (B-세포 수용체 CD22-B 아이소폼);
(28) CD79a (CD79A, CD79α, 면역글로블린-연관된 알파);
(29) CXCR5 (버킷의 림프종 수용체 1);
(30) HLA-DOB (MHC 클라스 II 분자의 베타 서브유닛 (Ia 항원));
(31) P2X5 (퓨린성 수용체 P2X 리간드-게이트화된 이온 채널 5);
(32) CD72 (B-세포 분화 항원 CD72, Lyb-2);
(33) LY64 (림프구 항원 64 (RP105), 류신 풍부한 반복 (LRR) 패밀리의 유형 I 막 단백질);
(34) FcRH1 (Fc 수용체-유사 단백질 1);
(35) FcRH5 (IRTA2, 면역글로블린 슈퍼패밀리 수용체 전좌 연관된 2);
(36) TENB2 (추정 막경유 프로테오글리칸);
(37) PMEL17 (은(silver) 동족체(homolog); SILV; D12S53E; PMEL17; SI; SIL);
(38) TMEFF1 (EGF-유사 및 2개의 폴리스태틴-유사 도메인을 갖는 막경유 단백질 1; 토모레굴린(Tomoregulin)-1);
(39) GDNF-Ra1 (GDNF 패밀리 수용체 알파 1; GFRA1; GDNFR; GDNFRA; RETL1; TRNR1; RET1L; GDNFR-알파1; GFR-알파-1);
(40) Ly6E (림프구 항원 6 복합체, 좌 E; Ly67,RIG-E,SCA-2,TSA-1);
(41) TMEM46 (쉬사 동족체 2 (제노푸스 레비스); SHISA2);
(42) Ly6G6D (림프구 항원 6 복합체, 좌 G6D; Ly6-D, MEGT1);
(43) LGR5 (류신-풍부 반복체-함유 G 단백질-연결된 수용체 5; GPR49, GPR67);
(44) RET (ret 프로토-종양유전자; MEN2A; HSCR1; MEN2B; MTC1; PTC; CDHF12; Hs.168114; RET51; RET-ELE1);
(45) LY6K (림프구 항원 6 복합체, 좌(locus) K; LY6K; HSJ001348; FLJ35226);
(46) GPR19 (G 단백질-연결된 수용체 19; Mm.4787);
(47) GPR54 (KISS1 수용체; KISS1R; GPR54; HOT7T175; AXOR12);
(48) ASPHD1 (아스파르테이트 베타-히드록실라제 도메인 함유 1; LOC253982);
(49) 티로시나제 (TYR; OCAIA; OCA1A; 티로시나제; SHEP3);
(50) TMEM118 (링 핑커(ring finger) 단백질, 막경유 2; RNFT2; FLJ14627);
(51) GPR172A (G 단백질-연결된 수용체 172A; GPCR41; FLJ11856; D15Ertd747e);
(52) CD33; 또는
(53) CLL-1.
예시적인 항체-약물 콘쥬게이트 화합물은 화학식 IIa을 포함한다:
Figure pct00039
예시적인 항체-약물 콘쥬게이트 화합물 화학식 IIa의 R4 및 R5는 각각 H이며, 또는 R4 및 R5는 =O 이다.
예시적인 항체-약물 콘쥬게이트 화합물은 화학식 IIb를 포함한다:
Figure pct00040
표 3A의 항체 약물 콘쥬게이트 ADC-101 - ADC-119는 표 2A의 모노알킬레이터 피롤로벤조디아제핀, 링커-약물 중간생성물 LD-51 또는 LD-52를 시스테인 조작된 항체를 비롯한 항체와 콘쥬게이팅시킴으로써 준비되었다. 표 3B의 비교 항체-약물 콘쥬게이트 ADC-201 - ADC-211은 표 2B의 비교 피롤로벤조디아제핀 링커-약물 중간생성물 CLD-1-6을 시스테인 조작된 항체를 비롯한 항체와 콘쥬게이팅시킴으로써 준비되었다.
표 3A 모노알킬레이터 이황화물 항체-약물 콘쥬게이트 (ADC)
Figure pct00041
Figure pct00042
표 3B 비교 항체-약물 콘쥬게이트 (ADC)
Figure pct00043
Figure pct00044
A118C (EU 번호매김) = A121C (순차적(Sequential) 번호매김) = A114C (Kabat 번호매김)
경쇄의 K149C (Kabat 번호매김)
야생형 ("WT"), 시스테인 조작된 돌연변이체 항체 ("티오"), 경쇄 ("LC"), 중쇄 ("HC"), 6-말레이미도카프로일 ("MC"), 말레이미도프로파노일 ("MP"), 발린-시트룰린 ("val-cit" 또는 "vc"), 알라닌-페닐알라닌 ("ala-phe"), p-아미노벤질 ("PAB"), 및 p-아미노벤질옥시카르보닐 ("PABC")
비교 ADC-211, 트라스투주마브 엠탄신 (KADCYLA®, 트라스투주마브-MCC-DM1 (T-DM1, Tmab-DM1)는 항체-약물 콘쥬게이트 (CAS 등록 번호 139504-50-0; Phillips G. et al. (2008) Cancer Res. 68:9280-90; US 8142784)이며, 다음 구조를 가진다:
Figure pct00045
여기에서 Tr은 상기 항-HER2 항체 트라스투주마브이다.
시험관내 세포 증식 분석
일반적으로, 항체-약물 콘쥬게이트 (ADC)의 세포독성 또는 세포정균(cytostatic) 활성은 수용체 단백질, 가령 HER2를 보유하는 포유류 세포를 세포 배양 배지 안에서 ADC의 항체에 노출시키고; 이 세포를 약 6 시간 내지 약 5 일 동안 배양하고; 그리고 세포 생존력을 측정함으로써, 측정된다. 세포-기반 시험관내 분석을 이용하여 생존력 (증식), 세포독성, 및 본 발명의 ADC의 세포자가사멸 (카스파제 활성화)을 측정하였다.
항체-약물 콘쥬게이트 (ADC)의 시험관내 효능은 세포 증식 분석 (실시예 6)에 의해 측정되었다. 본 발명의 ADC는 종양 세포 증식 억제에 있어서 놀라운, 그리고 기대이상의 효능을 보였다. 상기 ADC의 효능은 세포의 표적 항원 발현과 관련있었다. 시험된 콘쥬게이트는 세포 표면 상에 발현된 특정 항원에 결합할 수 있고, 시험관에서 이들 세포를 사멸시킬 수 있다.
CellTiter-Glo® 발광 세포 생존력 분석은 클레오프테라(Coleoptera) 루시퍼라제 (US 5583024; 미국 5674713; 미국 700670)의 재조합 발현에 기반을 둔 상업적(Promega Corp., Madison, WI)으로 이용가능한 균질성 분석이다. 이 세포 증식 분석은 대사적으로 활성 세포의 지표인 존재하는 ATP의 정량을 바탕으로 배양물내에 살아있는 세포의 수를 결정한다(Crouch et al (1993) J. Immunol. Meth. 160:81-88; US 6602677). 상기 CellTiter-Glo® 분석은 96 웰 포멧에서 실행되었고, 자통화된 고-처리량 스크리닝(HTS) (Cree et al (1995) AntiCancer Drugs 6:398-404)에 적용될 수 있다. 상기 균질성 분석 과정은 혈청-보충된 배지에서 배양된 세포에 직접적으로 단일 시약 (CellTiter-Glo® 시약)을 추가하는 것과 관련된다. 세포 세척, 배지 제거 및 여러차례 피펫팅 단계가 필요하지 않다. 이 시스템은 시약을 첨가하고, 혼합한 후, 10 분 이내에 384-웰 포맷으로 웰당 15개 정도의 적은 세포를 검출한다. 세포는 ADC로 연속적으로 처리되거나, 또는 ADC에서 처리되고 분리될 수 있다. 일반적으로, 즉, 3 시간 동안 처리된 세포는 연속 처리된 세포와 동일한 효력 효과를 보였다.
균질한 "추가-혼합-측정(add-mix-measure)" 포맷은 세포 용해 및 존재하는 ATP의 양에 비례하는 발광 신호를 만들어낸다. ATP의 양은 배양물에 존재하는 세포의 수에 직접적으로 비례한다. CellTiter-Glo® 분석은 세포 유형 및 사용된 배지에 따라 반감기가 일반적으로 5 시간 이상인 루시퍼라제 반응에 의해 생성되는 "예열-형(glow-type)" 발광 신호를 만든다. 생존 가능한 세포는 상대적 발광 단위 (RLU)로 반영된다. 딱정벌레 루시페린 (Beetle Luciferin)는 재조합 반딧불 루시퍼 라제에 의해 산화적으로 탈카복실화되며, ATP가 AMP로 전환되고 광자가 생성된다.
세포-기반 시험관내 분석을 이용하여 생존력 (증식), 세포독성, 및 본 발명의 ADC의 세포자가사멸 (카스파제 활성화)을 측정한다. 일반적으로, 항체-약물 콘쥬게이트 (ADC)의 세포독성 또는 세포정균 활성은 수용체 단백질, 가령 HER2 또는 MUC16 폴리펩티드를 발현시키는 포유류 세포를 세포 배양 배지 안에서 ADC의 항체에 노출시키고; 이 세포를 약 6 시간 내지 약 5 일 동안 배양하고; 그리고 세포 생존력을 측정함으로써, 측정된다. 항-MUC16 ADC에 대한 세포 증식 분석에 유용한 포유 동물 세포는 다음을 포함한다: (1) MUC16 폴리펩티드-발현 세포계통 OVCAR-3; (2) 세포 표면상에서 MUC16 폴리펩티드의 일부분(PC3/MUC16)을 안정적으로 발현시키도록 조작된 PC3-유도된 세포계통; (3) MUC16 폴리펩티드를 발현시키지 않는 부모계 PC3 세포계통; 그리고 (4) MUC16 폴리펩티드를 발현시키지는 않지만, 외인성 MUC16 발현 (PC3/neo)을 유도하는데 이용되는 벡터를 휴대하고 있는 PC3 세포계통.
도 1a, 1b, 1c는 BJAB에서 비-표적 대조 ADC-108와는 약 4-배 차이를 갖는 한 자릿수 nM 효능을 나타내고(도 1a), WSU-DLCL2에서 비-표적 대조와 약 7-배 차이를 갖고(도 1b), 그리고 Jurkat 에서 대조 ADC-108보다 약 5-배 더 큰 효능을 갖는 (도 1c) 티오 Hu 항-CD22 10F4v3 LC K149C-(LD-52) ADC-107 모노아민을 보여준다. 모노아민 ADC-107은 BJAB 및 WSU-DLCL2에서 티오 Hu 항-CD22 10F4v3 LC K149C-(LD-51) 모노-아미드 ADC-103 및 비-표적 대조 ADC-108보다 차례로 약 10-배와 약 22-배 더 강력하다(도 1a-c).
표 4 항체 약물 콘쥬게이트 (도 1f, 1g)의 시험관내 세포 증식 분석
Figure pct00046
표 5 시험관내 효능 (도 1a, 1b, 1c)
Figure pct00047
생체내 효과
항체-약물 콘쥬게이트 (ADC)의 생체내 효과는 마우스에서 종양 성장 저해로 측정되었다 (실시예 7). 본 발명의 ADC는 종양 성장 저해에 있어서 놀라운, 그리고 기대이상의 효능을 보였다. 상기 ADC의 효능은 종양 세포의 표적 항원 발현과 관련있었다.
항체-약물 콘쥬게이트의 효과는 설치류에 암 세포의 동종이식편 또는 이종이식편을 이식하고, ADC로 종양을 치료함으로써 생체 내에서 측정되었다. 세포계통, 암세포에 존재하는 수용체에 대한 ADC의 항체 결합의 특이성, 투약 요법 및 기타 요인에 따라 가변적인 결과가 예상된다. 상기 ADC의 생체내 효과는 종양-연관된 항원, 이를 테면 Her2, CD22, 및 Ly6E의 중간 내지 높은 수준으로 발현시키는 유전자삽입 체외이식편(explant) 마우스 모델을 이용하여 측정하였다. 대상은 ADC로 한번 치료받고, 종양 배가, 로그 세포 사멸 및 종양 수축까지의 시간을 측정하기 위해 3-6 주간 모니터링 하였다. 후속 용량-반응 및 다중-용량 실험이 수행되었다.
예로써, 본 발명의 항-HER2 ADC의 생체내 효과는 고발현 HER2 유전자삽입 체외이식편 마우스 모델에 의해 측정될 수 있다 (Phillips et al (2008) Cancer Res. 68:9280-90). 동종이식편은 HERCEPTIN®요법에 반응하지 않거나, 또는 반응이 불량한 Fo5 mmtv 유전자삽입 마우스에서 번식되었다. 대상은 특정 용량 수준(mg/kg)에서 ADC와 플라시보 완충액 대조 (비이클)로 일회 치료받고, 종양 배가, 로그 세포 사멸 및 종양 수축까지의 시간을 측정하기 위해 2 주 이상 모니터링하였다.
도 2는 CB-17 Fox Chase SCID 마우스에서 WSU-DLCL2 이종이식편 모델에서 시간 경과에 따른 종양 용적 변화를 피팅한 플롯에서 항체-약물 콘쥬게이트, ADC-202, ADC-103, 및 ADC-102의 효과를 나타낸다.
도 3은 CB-17 Fox Chase SCID 마우스에서 Bjab-luc 이종이식편 모델에서 시간 경과에 따른 생체내 종양 용적 변화를 피팅한 플롯에서 항체-약물 콘쥬게이트의 효과를 나타낸다: 0.2와 0.4 mg/kg 용량의 비교측정물 ADC-202는 종양 퇴행을 초래하고, 0.1 mg/kg 용량은 62% TGI를 초래한다. 모노아미드 ADC-105의 1, 2 및 4 mg/kg 용량에서 40-58 %의 TGI 범위는 이 용량 수준이 유사한 반응을 보임을 나타내고, 한편 최고 8 mg/kg 용량 만이 유의적인 활성, 89% TGI를 나타낸다.　 더우기, 8 mg/kg에서의 활성은 비교 디알킬레이터 ADC-202의 0.1 내지 0.2 mg/kg 범위에 속하고, ~50x 적은 효능을 초래한다. 8 mg/kg에서 오프-타깃(off-target) 대조 항-Her2 hu7C2 ADC-104 -모노아미드는 0.4 mg/kg에서 오프-타깃 대조, 비교 항-Her2 hu7C2 ADC-201보다 2배 활성이 적다, 18 vs 36% TGI. 체중 안전성 평가에서 모든 그룹은 체중 증가를 보였다.
도 4는 WSU-DLCL2 인간 세포계통 마우스 모델에게 시간 경과에 따른 생체내 종양 용적 변화를 피팅한 플롯에서 항체-약물 콘쥬게이트의 효과를 나타낸다: 온-타깃(on-target), 항-CD22 ADC-107 모노아민 및 val-cit 링키지 ADC-204의 효과는 0.5-10 mg/kg 용량에서 평가되었다. 비교를 위해 모노아미드 ADC-105를 포함시켰다. 오프-타깃 항-Her2 모노아민 ADC-108 및 ADC-205는 대조용으로 이용되었다. 　모노아민 ADC-107 및 ADC-204 둘 모두의 활성은 유사한 것으로 보인다. 둘 모두의 최소 유효 용량 (MED)은 0.5 ~ 2 mg/kg 사이다.　 가장 높은 10mg/kg 용량에서 5/5 마리의 동물 모두에서 완전한 반응을 보였으므로, 모노아미드 ADC에서는 나타나지 않았다.　 더욱이, 모노아민 ADC는 모노아미드 ADC와 비교하였을 때, >10배 활성을 가졌다 (0.5 mg/kg 용량의 모노아민 vs 5 mg/kg 용량의 모노아미드에서의 반응과 비교). 　2 mg/kg의 용량의 두 Her2 대조는 유사한 반응을 가진다 (~30% TGI). 모든 그룹에서 유의적인 체중 감소는 없다.
도 5a는 scid 베이지 마우스의 HER2 KPL4 종양 모델에서 시간 경과에 따른 생체내 종양 용적 변화를 피팅한 플롯에서 항체-약물 콘쥬게이트, ADC-106, ADC-108, 및 ADC-107의 효과를 나타낸다.
도 5b는 scid 베이지 마우스의 HER2 KPL4 종양 모델에서 시간 경과에 따른 생체내 종양 용적 변화를 피팅한 플롯에서 항체-약물 콘쥬게이트의 효과를 나타낸다. Tmab-DM1와 복합된, 티오-Her2 hu7C2 LC-K149C-(LD-51) 모노아미드, ADC-106 및 ADC-106의 효과가 측정되었다.
도 6은 CRL nu/nu 마우스의 HER2 Fo5 모델 모델에서 IV로 일회 투여된 후 시간 경과에 따른 생체내 종양 용적 변화를 피팅한 플롯에서 항체-약물 콘쥬게이트, ADC-201, ADC-104, ADC-202, 및 ADC-105, 그리고 콘쥬게이트안된 항체 hu7C2의 효과를 나타낸. 온-타깃 ADC-201 및 ADC-104는 종양 저해 및 용량-의존성 효과를 보인다. 오프-타깃 ADC-202, ADC-105, 그리고 콘쥬게이트안된 항체 hu7C2는 종양 저해를 나타내지 않는다.
도 7은 scid 베이지 마우스의 HER2 KPL4 종양 모델에서 시간 경과에 따른 생체내 종양 용적 변화를 피팅한 플롯에서 항체-약물 콘쥬게이트,, ADC-201, ADC-104, ADC-202, ADC-105, 및 콘쥬게이트안된 항체 hu7C2의 효과를 나타낸다. 온-타깃 ADC-201 및 ADC-104는 종양 저해 및 용량-의존성 효과를 보인다. 오프-타깃 ADC-202, ADC-105, 및 콘쥬게이트안된 항체 hu7C2는 종양 저해를 나타내지 않는다.
도 8은 CRL nu/nu 마우스의 HER2 Fo5 모델 모델에서 시간 경과에 따른 생체내 종양 용적 변화를 피팅한 플롯에서 항체-약물 콘쥬게이트, ADC-106, ADC-18, 및 ADC-17의 효과를 나타낸다. 온-타깃 ADC-106 및 ADC-108은 종양 저해 및 용량-의존성 효과를 나타낸다. 오프-타깃 ADC-107은 종양 저해가 없거나 거의 없다.
도 9는 CB-17 Fox Chase SCID 마우스의 CD22-발현 WSU-DLCL2 이종이식편 모델에서 시간 경과에 따른 생체내 종양 용적 변화를 피팅한 플롯에서 항체-약물 콘쥬게이트, ADC-104, ADC-111, ADC-112, ADC-106, 및 ADC-113의 효과를 나타낸다. 온-타깃 ADC-104, ADC-111, ADC-112는 종양 저해 및 용량-의존성 효과를 나타낸다. 오프-타깃 ADC-106 및 ADC-133은 종양 저해를 나타내지 않는다.
도 10은 HCC1569X2 이종이식편 모델에서 시간 경과에 따른 생체내 종양 용적 변화를 피팅한 플롯에서 항체-약물 콘쥬게이트의 효과를 나타낸다: Ly6E-SG3451-모노 아미드는 투여량 의존적인 활성을 가지며, 6 및 12 mg/kg에서의 성장 지연 및 18 mg/kg에서의 투여시의 울혈 주위 종양을 갖는다.　 1 및 3 mg/kg에서 투여한 Ly6E-SG3451 및 1,3 및 6 mg/kg에서 투여한 Ly6E-SG3203-모노 아민으로 종양 퇴화가 나타난다.　 Ly6E SG3451 및 SG3203-모노 아민 그룹은 함께 클러스터링된다.
올리고뉴클레오티드 결합/알킬화 분석
피롤로벤조디아제핀 (PBD) 화합물은 서열-의존성, 가닥내(intrastrand) DNA 가교(cross-links) 및 가닥간(interstrand) 가교에 추가하여 모노알킬화된 부가물을 형성하는 것으로 공지되어 있다 (Rahman KM, et al (2009) J Am Chem Soc 131:13756-13766). PBD에는 키랄 C11a (S)-위치가 있어, DNA의 작은 홈(groov)에 단단히 고정되도록 적절한 모양을 제공한다. 또한, 친전자성 N10-C11 모이어티 (가령, 호환성있는 이민, 카르비놀라민, 또는 카르비놀라민 메틸 에테르 기능성)는 이의 C11-위치와 구아닌 핵염기의 친핵성 C2-NH2 기 사이에 공유 동물 링키지를 형성할 수 있다. 다양한 길이와 서열의 듀플렉스-형성 올리고뉴클레오티드와 피롤로벤조디아제핀 화합물의 상호작용은 이미 확인된 가닥내 그리고 가닥간 가교형성(cross-linking)에 대하여 Pu-GAATG-Py > >> 또는 Pu-GAATC-Py 서열로 연구되었다 (실시예 8). 올리고뉴클레오티드 결합 및 알킬화 분석은 HPLC 분리 및 MS 탐지를 통하여 핵산에서 ADC의 피롤로벤조디아제핀 약물 모이어티의 결합 잠재력을 평가하는 간단한 모델이다(Narayanaswamy M. et al (2008) Anal. Biochem. 374:173-181). 따라서, ADC의 효능 및 효과가 관련되며, 예측될 수 있다. 모노알킬레이터 피롤로벤조디아제핀 약물 모이어티는 모노아민 DM-1으로부터 분화된, 이를 테면 모노아미드 DM-3 및 표 1b의 비교 디알킬레이터 피롤로벤조디아제핀 약물 모이어티로부터 표 1a의 모노알킬레이터, 이를 테면 C-1 (실시예 8)일 수 있다.
피롤로벤조디아제핀 화합물을 결합/알킬화시키는 선택된 올리고 뉴클레오티드 서열의 발생 빈도는 매우 높으며, 이들이 발생하는 염색체의 크기에 직접 비례하지 않는다. 이 연구에서 피롤로벤조디아제핀 화합물은 표 1a의 모노알킬레이터 피롤로벤조디아제핀 약물 모이어티와 표 1b의 비교 약물 모이어티를 포함한다. 이 연구는 이중-가닥으로된 올리고뉴클레오티드를 알킬레이트시키는 약물의 차등 수준을 보여주었고, 알킬화 잠재력은 출발 듀플렉스 올리고뉴클레오티드, 및 Pu-GAAATG-Py, (여기에서 Pu는 퓨린 뉴클레오티드 A 또는 G이며, Py는 피리미딘 뉴클레오티드 C 또는 T임)의 사라짐을 통하여 정확하게 평가될 수 있다. 모노아미드 PBD DM-2 (표 1a)는 모노아민 PBD DM-1보다 듀플레스 올리고뉴클레오티드에 결합하여/알킬레이트 시키는데 있어서 대략적으로 8배 효과가 적었다. 비교 디알킬레이터 C-1 (표 1b)는 모노아민 DM-1보다 듀플렉스 올리고뉴클레오티드를 공유적으로 알킬화시키는데 2-3배 더 효과를 보여준다. PBD 단량체 C-2는 이합체 C-1보다 듀플렉스 올리고뉴클레오티드를 공유적으로 알킬화시키는데 있어서 >50배 덜 효과적이다. C-1의 이민 결합이 환원되어 C-3을 형성함으로써 DNA 결합은 완전하게 제거된다. 다양한 올리고-PBD 부가물은 상이한 알킬화기로 형성되었고, HPLC로 분리되었으며, 그리고 질량에 의한 MS 분석에 의해 특징화되었다.
도 11은 디알킬레이터 피롤로벤조디아제핀 (PBD) 이합체 화합물 CLD-1 (상단) 및 2개의 모노알킬레이터 피롤로벤조디아제핀 이합체 화합물, 모노아민 DM-1 (중간) 그리고 모노아미드 DM-2 (아래)가 DNA와 반응 후 추정 부가물을 나타낸다 (Rahman KM, et al (2009) J Am Chem Soc 131:13756-13766). 디알킬레이터 PBD 이합체 화합물은 DNA 듀플렉스의 반대 가닥 상에 구아닌 핵염기의 C2-NH2 기와 함께 2개의 공유적 부착(가교)을 만들 수 있다. 모노알킬레이터 PBD 이합체 화합물은 구아닌 핵염기와 함께 오직 하나의 공유 부착을 만들 수 있고, 따라서 온/오프 결합의 역학 및 분할하는 세포의 중단에 영향을 줄 수 있다.
모노아미드 DM-2는 듀플렉스 올리고뉴클레오티드에 대한 모노아민 DM-1보다 8-10배 적은 결합/알킬화를 나타내며, 이것은 암 세포계통 및 생체내 종양 이종이식편 모델에서 이들의 ADCs의 효능 및 효과와 관련된다. 모노아미드에 대한 DNA 알킬화의 더 낮은 수준은 감소된 독성을 갖는 효과를 뒷받침하고, 더 우수한 치료요법적 지수를 실증할 수 있다. 전반적으로, DNA 결합/알킬화 정도는 PBD 유사체의 효과와 관련되며, 모노아민 PBD, 그리고 디알킬레이터 PBD로부터 모노아미드를 분별한다. PBD-ADCs의 최적화된 치료요법적 지수(TI)는 모노알킬레이터의 DNA 결합/알킬화 활성 조정을 통하여 획득가능할 수 있으며, 최적의 항종양 효과와 수용가능한 안전성을 갖는 PBD 유사체를 기획 및 평가를 유도할 수 있다.
안전성/독성 성질
본 발명의 항체-약물-콘쥬게이트 (ADC)와 비교 ADC는 이들의 안전성 및 독성 관련된 성질에 대하여 연구되었다.
모노아민 모노알킬레이터 (LD-52)와 항-HER2 hu7C2 항체 ADC-108은 CD-1 마우스에서 개선된 내성을 나타내었고, 0일차, 7일차, 14일차에 kg 당 (50, 75, 125 μg (마이크로그램)을 투여한 후 45일에 걸쳐 체중 변화를 산출함으로써, 대응하는 항-HER2 hu7C2 항체 ADC-201과 비교하여 개선된 치료요법적 지수 (TI)를 나타내었다. ADC-108에 대한 최대 용인되는 용량(MTD)은 200 μg/kg이며, 한편 ADC-201의 MTD는 75 μg/kg이다. 렛(Sprague-Dawley) 및 시노몰구스 원숭이의 독성 신호는 망상 적혈구의 일시적인 감소, 주사 부위 근처의 작은 피부 변색 및 박편, 혈관 누출, 간 효소 증가, 신경 퇴행, 골수/림프 결핍, 신장, 안구 및 폐 관찰 및 이환율을 포함할 수 있다.
예비 안전성 데이터는 비교물 ADC에 비해 본 발명의 ADC의 중요한 이점을 시사한다.
약학 제제
본 발명의 치료요법적 항체-약물 콘쥬게이트 (ADC)의 약학 제제는 전형적으로 비경구 투여, 즉 약학적으로 수용가능한 비경 구적 비이클과 함께, 단위 투약령 주사가능한 형태를 사용하여 볼루스(bolus), 정맥내, 종양내 주입용으로 제조된다. 원하는 정도의 순도를 갖는 항체-약물 콘쥬게이트 (ADC)는 선택적으로 약학적으로 수용가능한 희석제, 담체, 부형제 또는 안정화제 (Remington's Pharmaceutical Sciences (1980) 16th edition, Osol, A. Ed.)와 혼합되어, 동결 건조된 제제 또는 수용액의 형태가 된다.
항체-약물 콘쥬게이트 치료 방법
본 발명의 항체-약물 콘쥬게이트 (ADC)는 종양 항원의 과발현을 특징으로 하는 다양한 질환 또는 장애를 치료하는데 사용될 수 있음이 고려된다. 예시적인 상태 또는 과증식성 장애는 양성 또는 악성 고형 종양 및 백혈병 및 림프성 악성 종양과 같은 혈액학적 장애를 포함한다. 다른 것들은 자가 면역, 장애를 포함한 신경 세포, 신경교 세포, 성상세포, 시상하부, 선(glandular), 대식세포, 상피세포, 간질 세포, 포배강(blastocoelic), 염증성, 혈관 신생 및 면역학을 포함한다.
본 발명의 항체-약물 콘쥬게이트 (ADC)는 치료될 상태에 적합한 임의의 경로로 투여될 수 있다. 상기 ADC는 전형적으로 비경구 투여, 즉 주입, 피하, 근육 내, 정맥 내, 피내, 경막내 및 경막외 투여된다.
일반적으로, 치료될 질병 또는 장애는 암과 같은 과증식 질환이다. 본원에서 치료될 암의 예로는 암종, 림프종, 모세포종, 백혈병 또는 림프구 악성을 포함하나 이에 국한되지 않는다. 이러한 암의 좀더 구체적인 예는 편평 세포 암 (가령, 상피 편평 세포 암), 소(small)-세포 폐암, 비-소 세포 폐암이 포함된 폐암, 폐의 선암종 및 폐의 편평 암종, 복막 암, 간세포의 암, 위장암이 포함된 위의 또는 위암, 췌장암, 교모세포종, 경부암, 난소 암, 간 암, 방광 암, 간종양, 유방암, 결장암, 직장암, 결장직장암, 내막 또는 자궁 암종, 침샘 암종, 신장 또는 콩팥암, 전립선암, 외음 암, 갑상선암, 간의 암종, 항문 암종, 음경 암종, 뿐만 아니라 두경부 암을 포함한다.
치료에서 상기 ADC 화합물이 이용될 수 있는 자가면역 질환은 류마티즘성 장애 (이를 테면, 예로써, 류마티즘성 관절염, 쇼그렌 증후군, 경피증, 낭창 이를 테면 전신 홍반성 낭창 (SLE) 및 신장염 낭창, 다발성근염/피부근염, 저온글로불린혈증, 항-인지질 항체 증후군, 및 건선성 관절염), 골관절염, 위장 자가면역 및 간 장애 (이를 테면, 예로써, 염증성 장 질환 (가령, 궤양 성 대장염 및 크론 병), 자가면역성 위염 및 악성 빈혈,자가면역성 간염, 원발성 담즙성 간경변, 원발성 경화성 담관염 및 체강 질환), 맥관염 (이를 테면, 예로써, ANCA-연관된 맥관염, 추르크-스트라우스(Churg-Strauss) 맥관염, 베게너(Wegener) 육아종증, 그리고 다중동맥염(polyarteriitis) 포함,　자가면역성 신경 장애 (이를 테면, 예로써, 다발성 경화증, 안구간대경련-근간대경련 증후군, 중증 근무력증, 광학 신경근염, 파킨슨 병, 알츠하이머 병, 그리고 자가면역성 다중신경병증(polyneuropathies)), 신장 장애 (이를 테면, 예로써, 사구체신염, 굿파스쳐(Goodpasture's) 증후군, 및 베르그(Berger's) 질환), 자가면역성 피부 장애 (이를 테면, 예로써, 건선, 심마진(urticaria),두드러기, 심상성 천포창, 수포성 천포창 및 피부 낭창 홍반성 루푸스), 혈액성 장애 (이를 테면, 예로써, 혈소판 감소성 자반병, 혈전성 혈소판 감소성 자반병, 수혈후 자색반, 그리고 자가면역성 용혈성 빈혈), 아테롬성경화증, 포도막염, 자가면역성 청각 질환 (이를 테면, 예로써, 내이(inner ear) 질환 및 청각 상실), 바쳇트(Behcet's) 질환, 레이나우드(Raynaud's) 증후군, 장기 이식, 그리고 자가면역성 엔도크린 장애 (이를 테면, 예로써, 당뇨-관련된 자가면역성 질환, 이를 테면 인슐린-의존성 진성 당뇨병 (IDDM), 에디손(Addison's) 질환, 그리고 자가면역성 갑상선 질환 (가령, 그레이브(Graves') 질환 및 갑상선염))을 포함한다.　 더욱 선호되는 질환으로는 예로써, 류마티즘성 관절염, 궤양성 대장염, ANCA-연관된 맥관염, 낭창, 다발성 경화증, 쇼그렌 증후군, 그레이브스(Graves') 병, IDDM, 악성 빈혈, 갑상선염 및 사구체 신염이 포함된다.
질환의 방지 또는 치료를 위하여, ADC의 적절한 용량은 상기에서 정의된 바와 같이 치료될 질환의 유형, 질환의 심각성 및 과정, 상기 분자가 예방 또는 치료 목적으로 투여되는지의 여부, 기존 치료, 환자의 임상적 병력 그리고 상기 항체에 대한 반응, 그리고 주치의의 판단에 따라 달라질 것이다. 상기 분자는 한 번에 또는 일련의 치료 일정에 걸쳐 환자에게 적절하게 투여된다. 상기 질환의 유형과 심각성에 따라, 약 1 μg/kg 내지 15 mg/kg (예를 들면 0.1 mg/kg - 10 mg/kg)의 분자가 예를 들면, 하나 또는 그 이상의 별도의 투여, 또는 연속 주입에 의해, 환자에게 투여하기 위한 초기 후보 투여량이다. 언급된 인자들에 따라, 하나의 전형적인 일일 투여량의 범위는 약 1 μg/kg 내지 100 mg/kg 또는 그 이상이될 수 있다. 환자에게 투여되는 ADC의 예시적인 투여량은 약 0.1 내지 약 10 mg/kg (환자 체중)이다.
본 발명의 항체 또는 면역콘쥬게이트는 치료법에서 단독으로 이용될 수 있고 또는 다른 물질과 복합되어 이용될 수 있다. 예를 들면, 본 발명의 항체 또는 면역콘쥬게이트는 최소한 하나의 추가 치료 물질과 공동-투여될 수 있다.
일부 구체예들에서, hu7C2.v.2.2.LA 항체-약물 콘쥬게이트 (hu7C2 ADC)능 HER2에 결합하는 또다른 항체 또는 면역콘쥬게이트인 추가 치료제와 함께 공동-투여된다. 일부 구체예들에서, 상기 추가 치료제는 (i) HER2의 도메인 II에 결합하는 항체 또는 면역콘쥬게이트, 및/또는 (ii) 도메인 IV 또는 HER2에 결합하는 항체 또는 면역콘쥬게이트이다. 일부 구체예들에서, 상기 추가 치료제는 (i) 에피토프 2C4에 결합하는 항체 또는 면역콘쥬게이트, 및/또는 (ii) 에피토프 4D5에 결합하는 항체 또는 면역콘쥬게이트이다.
일부 구체예들에서, hu7C2.v.2.2.LA 항체-약물 콘쥬게이트 (hu7C2 ADC)는 트라스투주마브 (Herceptin®), T-DM1 (Kadcyla®) 및 페르투주마브 (Perjeta®)로부터 선택된 하나 또는 그 이상의 추가 치료제와 공동-투여된다. 일부 구체예들에서, hu7C2 ADC는 트라스투주마브와 공동-투여된다. 일부 구체예들에서, hu7C2 ADC는 T-DM1과 공동-투여된다. 일부 구체예들에서, hu7C2 ADC는 페르투주마브와 공동-투여된다. 일부 구체예들에서, hu7C2 ADC는 트라스투주마브 및 페르투주마브와 공동-투여된다. 일부 구체예들에서, hu7C2 ADC는 T-DM1 및 페르투주마브와 공동-투여된다.
일부 구체예들에서, 상기 추가 치료제는 PD-1 축(axis) 결합 길항제, 이를 테면 PD-L1 결합 길항제이다.
상기의 이러한 복합 치료요법은 복합된 투여(두 가지 또는 그 이상의 치료요법적 물질이 동일한 또는 별도 제재 안에 함유됨), 및 별도 투여를 포함하고, 이 경우, 상기 본 발명의 항체 또는 면역콘쥬게이트 투여는 추가적인 치료요법적 물질 및/또는 어쥬번트의 투여 전, 동시 및/또는 다음에 일어난다. 본 발명의 항체 또는 면역콘쥬게이트는 방사선요법과 복합되어 또한 이용될 수 있다.
본 발명의 항체 또는 면역콘쥬게이트 (및 임의의 추가 치료 물질)는 장관외, 폐내, 그리고 비강내 그리고 국소 치료가 바람직한 경우 병소내 투여를 포함한 임의의 적절한 수단에 의해 투여될 수 있다. 장관외 주입은 근육내, 정맥, 동맥내, 복막내, 또는 피부아래 투여를 포함한다. 투여(dosing)는 부분적으로 투여가 잠시 동안인지 또는 만성적인지에 따라, 예를 들면, 주사, 이를 테면 정맥 또는 피부아래 주사에 의한 것일 수 있다. 다양한 시점에 걸쳐 단일 또는 다중 투여, 볼루스 투여, 그리고 펄스 주입을 포함하는 다양한 투여 일정이 고려된다.
본 발명의 항체 또는 면역콘쥬게이트는 양호한 의료 실시와 일관된 방식으로 제형화되고, 투여분량화되고, 투여될 것이다. 이 내용에서 고려되는 인자들은 치료될 특정 장애, 치료되는 특정 포유류, 개별 환자의 임상적 상태, 장애의 원인, 물질의 전달 부위, 투여 방법, 투여 일정, 그리고 의료 전문인에게 공지된 다른 인자들을 포함한다. 상기 항체 또는 면역콘쥬게이트는 문제의 장애를 방지 또는 치료하기 위하여 현재 이용되는 하나 또는 그 이상의 물질들과 함께 임의선택적으로 조제될 수 있지만, 반드시 그럴 필요는 없다. 이러한 다른 물질들의 유효량은 제재에 존재하는 항체 또는 면역콘쥬게이트의 양, 장애 또는 치료의 유형, 그리고 상기에서 논의된 다른 인자들에 따라 달라진다. 이들은 일반적으로 본 명세서에서 설명된 바와 같은 투여 경로와 함께 동일한 투여량으로 이용되거나, 또는 본 명세서에서 논의된 투여량의 약 1 내지 99%, 또는 실험적으로/임상적으로 적절한 것으로 판단된 임의의 투여량 및 임의의 경로에서 이용된다.
질환의 방지 또는 치료를 위하여, 본 발명의 항체 또는 면역콘쥬게이트 (단독으로 이용되거나 또는 하나 또는 그 이상의 다른 추가 치료 물질들과 복합되어)의 적절한 투여량은 치료될 질환의 유형, 항체 또는 면역콘쥬게이트의 유형, 질환의 심각성 및 과정, 상기 항체가 예방 또는 치료 목적으로 투여되는지의 여부, 기존 치료, 환자의 임상적 병력 그리고 상기 항체에 대한 반응, 그리고 주치의의 판단에 따라 달라질 것이다. 상기 항체 또는 면역콘쥬게이트는 한 번에 또는 일련의 치료 일정에 걸쳐 환자에게 적절하게 투여된다. 상기 질환의 유형과 심각성에 따라, 약 1 μg/kg 내지 15 mg/kg (예를 들면 0.1 mg/kg - 10 mg/kg)의 항체 또는 면역콘쥬게이트가 예를 들면, 하나 또는 그 이상의 별도의 투여, 또는 연속 주입에 의해, 환자에게 투여하기 위한 초기 후보 투여량이다. 언급된 인자들에 따라, 하나의 전형적인 일일 투여량의 범위는 약 1 μg/kg 내지 100 mg/kg 또는 그 이상이될 수 있다. 수일 동안 또는 더 긴 시간에 걸쳐 반복된 투여를 위하여, 상태에 따라, 치료는 일반적으로 질환의 증세의 바람직한 억제가 일어날 때 까지 지속될 것이다. 상기 항체 또는 면역콘쥬게이트의 한 가지 예시적인 투여량은 약 0.05 mg/kg 내지 약 10 mg/kg 범위 안에 있을 것이다. 따라서, 하나 또는 그 이상의 투여분량의 약 0.5 mg/kg, 2.0 mg/kg, 4.0 mg/kg 또는 10 mg/kg (또는 이의 임의의 조합)이 상기 환자에게 투여될 수 있다. 이러한 투여분량은 간헐적으로, 예를 들면 매주 또는 3주마다 투여될 수 있다 (예를 들면 상기 환자는 약 2 내지 약 20, 또는 예를 들면 약 6회 투여분량의 항체를 제공받는다). 초기 더 높은 부하(loading) 투여분량, 그 다음 이어서 하나 또는 그 이상의 더 낮은 투여분량이 투여될 수 있다. 그러나, 다른 투여분량 섭생이 유용할 수 있다. 이 요법의 진행은 통상적인 기술 및 분석에 의해 용이하게 감시된다.
제조 물품
본 발명의 또다른 구체예에서, 상기 설명된 장애의 치료에 유용한 물질이 포함된 제조 물품, 또는 "키트"가 제공된다. 상기 제조 물품은 용기와 용기 위에 또는 용기에 연합된 라벨 또는 포장 삽입물을 포함한다. 적절한 용기는 예를 들면, 병, 바이알, 주사기, 블리스터 팩(blister pack) 등을 포함한다. 상기 용기는 다양한 물질, 이를 테면 유리 또는 플라스틱으로 형성될 수 있다. 상기 용기는 상기 상태의 치료에 효과적인 항체-약물 콘쥬게이트 (ADC) 조성물을 보유하며, 멸균 접근 포트를 가질 수 있다 (예를 들면, 상기 용기는 피하 주사 바늘이 뚫을 수 있는 마개를 가진 정맥 용액 주머니 또는 바이알일 수 있다). 상기 조성물내 최소한 하나의 활성물질은 ADC이다. 상기 라벨 또는 포장 삽입물에는 상기 조성물이 선택된 상태, 이를 테면, 암을 치료하기 위하여 이용된다는 것이 표시된다. 대안으로, 또는 추가적으로, 상기 제조 물품은 약학적으로-수용가능한 완충액, 이를 테면 주사 (BWFI)용 정균수, 포스페이트-완충된 염수, Ringer 용액 및 덱스트로즈 용액이 포함된 제 2 (또는 제3) 용기를 더 포함할 수 있다. 다른 완충액, 희석제, 필터, 바늘 및 주사기가 포함된 상업적 그리고 사용자 관점에서 바람직한 다른 물질들을 더 포함할 수 있다.
실시예
실시예 1 모노알킬레이터 피롤로벤조디아제핀 약물 모이어티 (표 1a)의 제조
(S)-7-메톡시-8-((5-(((S)-7-메톡시-2-메틸렌-5-옥소-2,3,5,10,11,11a-헥사히드로-1H-벤조[e]피롤로[1,2-a][1,4]디아제핀-8-일)옥시)펜틸)옥시)-2-메틸렌-2,3-디히드로-1H-벤조[e]피롤로[1,2-a][1,4]디아제핀-5(11aH)-온, DM-1의 합성
Figure pct00048
16 oC에서 tert-부틸 (5-((5-(5-아미노-4-((S)-2-(((tert-부틸디메틸실일)옥시)메틸)-4-메틸렌피롤리딘-1-카르보닐)-2-메톡시펜옥시)펜틸)옥시)-2-((S)-2-(((tert-부틸디메틸실일)옥시)메틸)-4-메틸렌피롤리딘-1-카르보닐)-4-메톡시페닐)카르바메이트 1 (0.50 g, 0.524 mmol)/DCM (5.0 mL) 용액에 피리딘 (83 mg, 1.05 mmol)이 추가되었고, 이어서 알릴 클로로포르메이트, Alloc-Cl (95 mg, 0.786 mmol, Sigma Aldrich, CAS 번호 2937-50-0)을 추가하였다. 상기 혼합물은 12 h 동안 교반되었다. 상기 혼합물은 DCM (30 mL)로 희석되었고, 그리고 수성 HCl (1N, 5.0 mL x 2)로 세척된 후, 수성 NaHCO3 (5 mL x 2)로 세척되었다. 유기 층은 농축되어, 미정제(crude) 산물이 제공되며, 이 산물은 섬광 컬럼 (석유 에테르내 20% EtOAc)로 정제되어, tert-부틸 (5-((5-(5-(((알릴옥시)카르보닐)아미노)-4-((S)-2-(((tert-부틸디메틸실일)옥시)메틸)-4-메틸렌피롤리딘-1-카르보닐)-2-메톡시펜옥시)펜틸)옥시)-2-((S)-2-(((tert-부틸디메틸실일)옥시)메틸)-4-메틸렌피롤리딘-1-카르보닐)-4-메톡시페닐)카르바메이트 2 (500 mg, 92%), 무색 오일이 제공된다. LCMS: (ESI, 10-80, AB, 1.5 분), RT = 1.200 분, m/z = 1037 [M+1]+.
화합물 2 (500 mg, 0.48 mmol)의 HOAc/THF/H2O (6 mL/3 mL/2 mL) 용액은 실온에서 1 일 동안 교반되었다. 상기 용액은 EtOAc (60 mL)로 희석되었고, H2O (20 mL × 4), aq. NaHCO3 (20 mL × 2), 및 H2O (20 mL)로 세척되었다. 유기 층은 Na2SO4상에서 건조되었고, 여과되고, 진공하에서 농축되어, tert-부틸 (5-((5-(5-(((알릴옥시)카르보닐)아미노)-4-((S)-2-(히드록시메틸)-4-메틸렌피롤리딘-1-카르보닐)-2-메톡시펜옥시)펜틸)옥시)-2-((S)-2-(히드록시메틸)-4-메틸렌피롤리딘-1-카르보닐)-4-메톡시페닐)카르바메이트 3 (390 g, 100 %), 오일이 수득되었다.
화합물 3 (200 mg, 0.247 mmol)의 무수 DCM (15　mL) 교반된 용액에 데스 마르틴(Dess Martin) 페리오디난 (419 mg, 0.988 mmol)을 추가하였다. 상기 반응 혼합물은 실온에서 2 h 동안 교반되었다. aq. Na2SO3 용액 (30 mL)으로 0 oC에서 담금질되었고, DCM (20 mL × 3)로 추출되었다. 상기 복합된 유기층은 염수(20mL)로 세척되었고, Na2SO4로 건조되었고, 여과되고, 농축되었다. 상기 잔유물은 prep-TLC (DCM/MeOH = 20:1)로 정제되어, 알릴 (11S,11aS)-8-((5-(((11S,11aS)-10-(tert-부톡시카르보닐)-11-히드록시-7-메톡시-2-메틸렌-5-옥소-2,3,5,10,11,11a-헥사히드로-1H-벤조[e]피롤로[1,2-a][1,4]디아제핀-8-일)옥시)펜틸)옥시)-11-히드록시-7-메톡시-2-메틸렌-5-옥소-2,3,11,11a-테트라히드로-1H-벤조[e]피롤로[1,2-a][1,4]디아제핀-10(5H)-카르복실레이트 4 (80 mg, 40.2 %), 무색 고체를 얻었다. LCMS (ESI): RT = 0.709 분, M-Boc-H2O + H+ = 687.1. 방법 = 5-95AB /1.5 분.
화합물 4 (80 mg, 0.099 mmol)의 TFA (2.0 mL) 용액은 0 oC에서 0.5 h 동안 교반되었다. 상기 용액은 포화된 NaHCO3 용액 (120　mL) 안으로 0 oC에서 점적 추가되었다. 상기 혼합물은 DCM (20 mL × 3)로 추출되었고, 복합된 유기 층은 Na2SO4상에서 건조되고, 여과되고, 그리고 농축되어 미정제 알릴 (11S,11aS)-11-히드록시-7-메톡시-8-((5-(((S)-7-메톡시-2-메틸렌-5-옥소-2,3,5,11a-테트라히드로-1H-벤조[e]피롤로[1,2-a][1,4]디아제핀-8-일)옥시)펜틸)옥시)-2-메틸렌-5-옥소-2,3,11,11a-테트라히드로-1H-벤조[e]피롤로[1,2-a][1,4]디아제핀-10(5H)-카르복실레이트 5 (50 mg, 73.5 %)를 얻는다.
화합물 5 (50 mg, 0.073 mmol)의 무수 DCM 교반 용액(4.0 mL)에 HOAc (13 mg, 0.219 mmol), 이어서 NaBH3CN (23 mg, 0.365 mmol)를 추가하였다. 상기 반응 혼합물은 실온에서 하룻밤 동안 교반되었다. 그 다음 상기 혼합물은 진공하에서 농축되고, prep-TLC (DCM/MeOH = 9:1)에 의해 정제되어, 알릴 (11S,11aS)-11-히드록시-7-메톡시-8-((5-(((S)-7-메톡시-2-메틸렌-5-옥소-2,3,5,10,11,11a-헥사히드로-1H-벤조[e]피롤로[1,2-a][1,4]디아제핀-8-일)옥시)펜틸)옥시)-2-메틸렌-5-옥소-2,3,11,11a-테트라히드로-1H-벤조[e]피롤로[1,2-a][1,4]디아제핀-10(5H)-카르복실레이트 6 (40 mg, 80.0 %), 무색 고체를 얻었다. LCMS (ESI): RT = 3.085 분, M + H+ = 689.1. 방법 = 10-80AB /7 분.
화합물 6 (40 mg, 0.058 mmol)의 무수 DCM (3.0 mL) 교반된 용액에 피롤리딘 (21 mg, 0.29 mmol)이 추가되었고, 이어서 Pd(PPh3)4 (7.0 mg, 0.006　mmol)이 추가되었다. 상기 반응 혼합물은 N2 하에 실온에서 2 h 동안 교반되었다. 그 다음 상기 혼합물은 진공하에서 농축되고, prep-TLC (DCM/MeOH = 1:1)에 의해 정제되어 DM-1 (12 mg, 35.3 %), 미색 고체를 얻었다. LCMS (ESI): RT = 0.651 분, M + H+ = 587.1. 방법 = 5-95AB /1.5 분. 1H NMR (400 MHz, DCCl3) δ 7.67 (d, J = 4.4 Hz, 1H), 7.57 (s, 1H), 7.49 (s, 1H), 6.79 (s, 1H), 6.04 (s, 1H), 5.18 (d, J = 11.6 Hz, 2H), 5.04 (d, J = 11.2 Hz, 2H), 4.41 - 4.37 (m, 1H), 4.28 - 4.25 (m, 3H), 4.13 - 4.00 (m, 3H), 3.98 - 3.95 (m, 2H), 3.93 (s, 3H), 3.89 - 3.85 (m, 1H), 3.82 (s, 3H), 3.54 (d, J = 30 Hz, 1H), 3.34 - 3.28 (dd, J = 12.4, 9.2 Hz, 1H), 3.15 - 3.08 (m, 1H), 2.96 - 2.86 (m, 2H), 2.44 - 2.39 (dd, J = 15.2, 6.0 Hz, 1H), 1.95 - 1.90 (m, 4H), 1.67 - 1.62 (m, 2H).
(S)-7-메톡시-8-((5-(((S)-7-메톡시-2-메틸렌-5-옥소-2,3,5,11a-테트라히드로-1H-벤조[e]피롤로[1,2-a][1,4]디아제핀-8-일)옥시)펜틸)옥시)-2-메틸렌-2,3-디히드로-1H-벤조[e]피롤로[1,2-a][1,4]디아제핀-5,11(10H,11aH)-디온 DM-2의 합성
Figure pct00049
디-tert-부틸 ((펜탄-1,5-디일비스(옥시))비스(6-((S)-2-(히드록시메틸)-4-메틸렌피롤리딘-1-카르보닐)-4-메톡시-3,1-페닐렌))디카르바메이트 7 (200 mg, 0.24 mmol)의 무수 DCM (20 mL) 교반된 용액에 DMP (610 mg, 1.44 mmol)를 0 oC에서 첨가하였다. 상기 반응 혼합물은 실온에서 3 h 동안 교반되었다. 상기 혼합물은 EtOAc (100 mL)로 희석되었고, 0 oC에서 aq. Na2SO3 용액 (30 mL)으로 담금질되었다. 유기 층은 H2O (30 mL × 3), aq. NaHCO3 용액 (30 mL), 및 H2O (30 mL)로 세척되었고, 그 다음 (Na2SO4)에서 건조되었고, 여과되고, 그리고 농축되었다. 상기 잔유물은 prep-HPLC에 의해 정제되어 tert-부틸 (S)-8-((5-(((11S,11aS)-10-(tert-부톡시카르보닐)-11-히드록시-7-메톡시-2-메틸렌-5-옥소-2,3,5,10,11,11a-헥사히드로-1H-벤조[e]피롤로[1,2-a][1,4]디아제핀-8-일)옥시)펜틸)옥시)-7-메톡시-2-메틸렌-5,11-디옥소-2,3,11,11a-테트라히드로-1H-벤조[e]피롤로[1,2-a][1,4]디아제핀-10(5H)-카르복실레이트 8 (58 mg, 30.0 %),백색 고체를 얻었다. LCMS (ESI): RT = 0.748 분, M + Na+ = 841.4. 방법 = 5-95AB /1.5 분.
화합물 8 (58 mg, 0.07 mmol)의 95% TFA/H2O (2.0 mL) 용액은 0 oC에서 2 h 동안 교반되었다. 그 다음 상기 용액은 포화된 NaHCO3 용액 (120　mL) 안으로 0 oC에서 점적 추가되었다. 상기 혼합물은 DCM (20 mL × 3)로 추출되었다. 상기 복합된 유기 층은 Na2SO4에서 건조되고, 여과되고, 농축되고 그리고 prep-HPLC에 의해 정제되어, DM-2 (15.7 mg, 38 %) 백색 고체를 얻었다. 1H NMR (400 MHz, CDCl3) δ ppm 1.65 - 1.73 (m, 2 H) 1.89 - 2.00 (m, 4 H) 2.77 - 2.89 (m, 1 H) 2.91 - 3.00 (m, 1 H) 3.08 - 3.19 (m, 1 H) 3.46 (d, J = 16.6 Hz, 1 H) 3.91 (s, 3 H) 3.94 (s, 3 H) 4.02 (t, J = 6.5 Hz, 2 H) 4.06 - 4.19 (m, 2 H) 4.20 - 4.26 (m, 2 H) 4.30 (s, 2 H) 4.43 (d, J = 15.6 Hz, 1 H) 5.09 - 5.26 (m, 4 H) 6.41 (s, 1 H) 6.80 (s, 1 H) 7.43 (s, 1 H) 7.51 (s, 1 H) 7.71 (d, J = 4.5 Hz, 1 H) 7.83 (s, 1 H).
(S)-8-메톡시-9-((5-(((S)-7-메톡시-2-메틸렌-5-옥소-2,3,5,11a-테트라히드로-1H-벤조[e]피롤로[1,2-a][1,4]디아제핀-8-일)옥시)펜틸)옥시)-1,3,4,12a-테트라히드로-6H-벤조[e][1,4]옥사지노[4,3-a][1,4]디아제핀-6,12(11H)-디온 DM-3
Figure pct00050
메틸 4-히드록시-3-메톡시벤조에이트 38 (3.0 g, 16.5 mmol)의　DMF (100 mL) 용액에 벤질 브롬화물 (4.22 g, 24.7 mmol) 및 K2CO3 (4.56 g, 32.9 mmol)가 추가되었다. 상기 반응 혼합물은 100 oC에서 3 h 동안 교반되었다. 상기 혼합물은 진공에서 농축되었고, 물 (50 mL)에 용해되었고, EtOAC (30 mL x 2)로 추출되었고, NaCl (30 mL)로 세척되고, Na2SO4에서 건조되었다. 이것은 농축되었고, 실리카 크로마토그래피 (석유 에테르내 0-30% EtOAc)에 의해 정제되어 메틸 4-(벤질옥시)-3-메톡시벤조에이트 39 (3.8 g, 13.5 mmol, 82.2% 수율),백색 고체를 얻었다. LCMS (5-95AB/1.5분): RT = 0.787 분, [M+H]+272.9
39 (2.0 g, 7.34 mmol)의 HOAc (5.0 mL) 용액에 HOAc (5.0 mL)　및 HNO3 (20.6 mL, 441 mmol)의 혼합물을 0℃에 추가하였다. 상기 반응 혼합물은 20 oC에서 30 분간 교반되었다. 상기 혼합물을　얼음물 (100 mL)에 붓고, pH는 5-6로 조정하였다. 상기 혼합물은 여과되고, 여과액은 농축되어 메틸 4-(벤질옥시)-5-메톡시-2-니트로벤조에이트40 (2.3g, 7.25 mmol, 98.7% 수율), 황색 고체를 얻었다.
40 (2.3 g, 7.25 mmol)의 MeOH (20 mL) 용액은 LiOH (2.25 mL, 36.24 mmol)의 수용액(5 mL)에 추가되었다. 상기 반응 혼합물은 20 oC에서 2 h 동안 교반되었다. 상기 혼합물은 물 (50 mL)에 붓고, EtOAc (50 mL)로 세척하였다. 물 상(phase)은 2M HCl를 이용하여 pH를 3-4로 조정하고, EtOAc (50 mL x 3)로 추출되었다. 이것은 NaCl (25 mL)로 세척되었고,　Na2SO4 에서 건조되고, 진공에서 농축되어, 미정제 4-(벤질옥시)-5-메톡시-2-니트로벤조산 41 (2.0 g, 6.59 mmol, 91% 수율)　, 백색 고체를 얻었다.
DCM (30 mL)안에 41 (460.0 mg, 1.52 mmol) 및 메틸 (S)-몰포린-3-카르복실레이트 42, CAS 등록 번호 741288-31-3, Hicks, F. et al, (2013) Organic Process Research & Development, 17(5):829-837, (330 mg, 2.28 mmol) 및 디이소프로필에틸아민, DIEA (392 mg, 3.03 mmol)의 혼합물은 HATU (865 mg, 2.28 mmol)에 추가하였다. 상기 반응 용액은 20 oC에서　8 h 동안 교반되었다. 상기 용액은 진공에서 농축되었고, 실리카 (석유 에테르 안에 0-50% EtOAC) 상에서 크로마토그래피에 의해 정제되어 메틸 (S)-4-(4-(벤질옥시)-5-메톡시-2-니트로벤조일)몰포린-3-카르복실레이트 43 (520 mg, 1.21 mmol, 79.7% 수율), 황색 오일을 얻었다. LCMS (5-95AB/1.5분): RT =　0.731분, [M+Na]+453.0
NH4Cl (646 mg, 12.1 mmol)의　EtOH (20 mL) 　및 물 (15 mL) 용액에 43 (520 mg, 1.21 mmol)　및 철 (539 mg, 9.67 mmol)을 추가하였다. 상기 반응 혼합물을 90 oC에서 12 h 동안 교반시킨 후, 여과하고, 여과액은 EtOAc(50 mL x 3)로 추출하고, NaCl (20 mL)로 세척하고, Na2SO4 상에서 건조시키고, 진공에서 농축시켰다.　 상기 반응 혼합물은 실리카 (석유 에테르 안에 0-30% EtOAc)상에서 크로마토그래피에 의해 정제하여 (S)-9-(벤질옥시)-8-메톡시-1,3,4,12a-테트라히드로-6H-벤조[e][1,4]옥사지노[4,3-a][1,4]디아제핀-6,12(11H)-디온 44 (320 mg ,0.84 mmol, 69.7% 수율),　백색 고체를 얻었다. LCMS (5-95AB/1.5분): RT = 0.638분, [M+H]+368.9
44 (260 mg, 0.71 mmol)의 DCM (10 mL) 및　MeOH (1.0 mL) 용액에 목탄상에 10% 팔라듐(26.0 mg, 0.020 mmol)을 추가하였다. 상기 반응 혼합물은　18 oC에서 1 h 동안 H2 (15 psi)하에서 교반되었다. 상기 반응 혼합물은 여과되었고, 진공에서 농축되어　(S)-9-히드록시-8-메톡시-1,3,4,12a-테트라히드로-6H-벤조[e][1,4]옥사지노[4,3-a][1,4]디아제핀-6,12(11H)-디온 45 (100 mg, 0.359 mmol, 50.9% 수율), 백색 고체를 얻었다.
tert-부틸 (11S,11aS)-8-히드록시-7-메톡시-2-메틸렌-5-옥소-11-((테트라히드로-2H-피란-2-일)옥시)-2,3,11,11a-테트라히드로-1H-벤조[e]피롤로[1,2-a][1,4]디아제핀-10(5H)-카르복실레이트 46 (200 mg, 0.43 mmol)의 DMF (5.0 mL) 용액에 K2CO3 (60 mg, 0.43 mmol) 　및　 1,5-디요드펜탄 (703 mg, 2.17mmol)를 추가하였다. 상기 반응 혼합물은 90 oC에서　12 h 동안 교반되었다. 상기 반응 혼합물은 농축되고, 실리카 크로마토그래피 (석유 에테르 안 0-50% EtOAc)에 의해 정제되어 tert-부틸 (11S,11aS)-8-((5-요오드펜틸)옥시)-7-메톡시-2-메틸렌-5-옥소-11-((테트라히드로-2H-피란-2-일)옥시)-2,3,11,11a-테트라히드로-1H-벤조[e]피롤로[1,2-a][1,4]디아제핀-10(5H)-카르복실레이트 47 (129 mg, 0.191 mmol, 43.9% 수율), 황색 오일을 얻었다. LCMS (5-95AB/1.5분): RT = 0.907분, [M+H]+657.1
DMF (5.0 mL)안에 47 (100 mg, 0.150 mmol), 45 (50.9 mg, 0.18 mmol)　　및 K2CO3 (31.6 mg, 0.23 mmol) 혼합물. 상기 혼합물은 90 oC에서 3 h 동안 교반되었다. 상기 혼합물은 진공에서 농축되었고,　크로마토그래피　(DCM안 0-5% MeOH, Rf = 0.4)에 의해 정제되어 tert-부틸 (11S,11aS)-7-메톡시-8-((5-(((S)-8-메톡시-6,12-디옥소-3,4,6,11,12,12a-헥사히드로-1H-벤조[e][1,4]옥사지노[4,3-a][1,4]디아제핀-9-일)옥시)펜틸)옥시)-2-메틸렌-5-옥소-11-((테트라히드로-2H-피란-2-일)옥시)-2,3,11,11a-테트라히드로-1H-벤조[e]피롤로[1,2-a][1,4]디아제핀-10(5H)-카르복실레이트 48 (75 mg, 0.093 mmol, 61% 수율), 무색 오일을 얻었다.
화합물 48 (75.0 mg, 0.090 mmol)은　0℃에서 TFA (1.9 mL)와　물 (0.10 mL)에 추가되었다. 상기 혼합물은 17 oC에서 1h 동안 교반되었다. 상기 반응 혼합물은 포화된　NaHCO3 (200 mL)에 붓고, 　DCM (100 mL x 3)로 추출하고, 염수 (50 mL)로 세척하고, 건조하고, prep-TLC(DCM 안에 4% 메탄올, Rf = 0.5)에 의해 정제되어,　 DM-3 (18.9 mg, 0.030 mmol, 32.3% 수율), 백색 고체를 얻었다. LCMS (5-95AB/1.5분): RT = 0.633 분, [M+H]+ 605.2. 1H NMR (400 MHz,CDCl3) δ 8.16 (s, 1H), 7.64 (d, J = 4.4 Hz, 1H), 7.43 (s, 1H), 7.22 (d, J = 23.2 Hz, 1H), 6.73 (d, J =　2.4 Hz, 1H), 6.35(d, J = 2.8 Hz, 1H), 5.11 (d, J =　10.8 Hz, 2H), 4.41 (s, 3H), 4.38 (s, 2H), 4.22 (s, 3H), 4.05 (s, 3H), 4.04 (s, 3H), 4.02 (s, 3H), 3.95-3.92 (m, 1H), 3.86 (s, 1H), 3.83-3.62 (m, 1H), 3.18 (s, 1H), 2.88 (d, J = 30.8 Hz, 1H), 1.86 (s, 4H) 1.79-1.62 (m, 2H).
(S)-7-메톡시-8-((5-(((S)-7-메톡시-5-옥소-2,3,5,11a-테트라히드로-1H-벤조[e]피롤로[1,2-a]아제핀-8-일)옥시)펜틸)옥시)-2-메틸렌-1,2,3,11a-테트라히드로-5H-벤조[e]피롤로[1,2-a][1,4]디아제핀-5-온, DM-5의 합성
Figure pct00051
tert-부틸 (S)-2-(히드록시메틸)피롤리딘-1-카르복실레이트 25 (3.0 g, 14.9 mmol)의 DCM (80 mL) 용액에 데스 마르틴 페리오디난, DMP (9.48 g, 22.4 mmol)을 추가하였다. 상기 혼합물은 0 oC에서 1 h 동안 교반되었고, Na2S2O3 (50 mL)/ NaHCO3 (50 mL)　및 MTBE (130 mL)에 추가되었다. 유기 상(organic phase)은 물 (60 mL x 3)로 세척하였고, 농축되어 tert-부틸 (S)-2-포르밀피롤리딘-1-카르복실레이트 26 (2.9 g, 14.6 mmol, 97.6% 수율), 무색 오일을 얻었다.
화합물 26 (2.9 g, 14.6 mmol) 및 디메틸 (1-디아조-2-옥소-프로필) 포스포네이트의 MeOH (20 mL) 용액에 K2CO3 (6.03 g, 43.7 mmol)를 추가하였다. 상기 반응 혼합물은 20 oC에서 1 h 동안 교반시킨 후, 진공에서 농축되었고, 상기 잔유물은 컬럼 크로마토그래피 (PE 안에 10% EtOAc)에 의해 정제되어, tert-부틸 (S)-2-에티닐피롤리딘-1-카르복실레이트 27 (2.0 g, 10.24 mmol, 70.4% 수율), 무색 오일을 얻었다.
화합물 27 (2.0 g, 10.2 mmol) 및 메틸 4-(벤질옥시)-2-브로모-5-메톡시벤조에이트 28 (5.4 g, 15.4 mmol)의 DMF (50 mL) 용액에 Cs2CO3 (3.97 g, 20.5 mmol) 및 Pd(PPh3)4 (785 mg, 1.54 mmol)을 추가하였다. 상기 혼합물은 95 oC에서 N2 하에 1 h 동안 교반되었다. 상기 혼합물은 농축되고, 섬광 컬럼 크로마토그래피 (PE 안에 20% EtOAc)에 의해 정제되어 tert-부틸 (S)-2-((5-(벤질옥시)-4-메톡시-2-(메톡시카르보닐)페닐)에티닐)피롤리딘-1-카르복실레이트 29 (1.60 g, 2.44 mmol, 23.8% 수율), 무색 오일을 얻었다. LCMS (5-95AB/1.5분): RT = 0.994 분, [M+H-56]+410.0
화합물 29 (2.0 g, 4.3 mmol)의 MeOH (10 mL) 용액에 Pd/CaCO3 (200.0 mg, 21.5 mmol)를 추가하였다. 상기 혼합물은 30 oC에서 1 h 동안 H2 (1 atm)하에서 교반되었다. 상기 혼합물은 여과되고, 여과물은 농축되어 미정제 산물을 얻었고, 이 산물은 섬광 컬럼 크로마토그래피 (PE 안 10% EtOAc)에 의해 정제되어, tert-부틸 (S,Z)-2-(5-(벤질옥시)-4-메톡시-2-(메톡시카르보닐)스티릴)피롤리딘-1-카르복실레이트 30 (1.0 g, 2.14 mmol, 49.8% 수율),백색 고체를 얻었다. LCMS (5-95AB/1.5분): RT = 0.983 분, [M+Na]+490.1
화합물 30 (0.9 g, 1.92 mmol)의 EtOAc (10 mL) 용액에 HCl/EtOAc (6.0 mL)를 추가하였다. 상기 혼합물은 25 oC에서 1 h 동안 교반된 후, 농축되어 메틸 (S,Z)-4-(벤질옥시)-5-메톡시-2-(2-(피롤리딘-2-일)비닐)벤조에이트 31 (0.77 g, 1.90 mmol, 99% 수율), 백색 고체를 얻었다.
화합물 31 (0.77 g, 1.91 mmol)의 MeOH (30 mL) 용액에 NaOMe (1.03 g, 19.06 mmol)를 추가하였다. 상기 혼합물은 30 oC에서 2 h 동안 교반되었다. 상기 혼합물은 농축되고, 섬광 컬럼 크로마토그래피 (PE 안에 25-75% EtOAc)에 의해 정제되어, (S)-8-(벤질옥시)-7-메톡시-1,2,3,11a-테트라히드로-5H-벤조[e]피롤로[1,2-a]아제핀-5-온 32 (0.60 g, 1.79 mmol, 93.8% 수율), 황색 오일을 얻었다. 1H NMR (400 MHz, CDCl3)δ ppm 1.89 - 2.11 (m, 3 H) 2.18 - 2.33 (m, 1 H) 3.59 (dt, J = 12.0, 7.6 Hz, 1 H) 3.80 (dt, J = 11.5, 5.8 Hz, 1 H) 3.90 - 3.96 (m, 1 H) 3.97 (s, 3 H) 5.19 (s, 2 H) 5.86 (dd, J = 10.0, 4.8 Hz, 1 H) 6.53 (dd, J = 10.0, 2.0 Hz, 1 H) 6.69 (s, 1 H) 7.29 - 7.35 (m, 1 H) 7.36 - 7.41 (m, 2 H) 7.42 - 7.48 (m, 2 H) 7.62 (s, 1 H)
화합물 32 (580 mg, 1.73 mmol)의 DCM (50 mL) 용액에 TiCl4 (656 mg, 3.46 mmol)가 추가되었다. 상기 혼합물은 30 oC에서 12 h 동안 교반되었다. 상기 혼합물은 1M HCl (20 mL)　및 EtOAc (100 mL)에 추가되었다. 유기 층은 물 (50 mL x 3)로 세척되었고, 농축되어 (S)-8-히드록시-7-메톡시-1,2,3,11a-테트라히드로-5H-벤조[e]피롤로[1,2-a]아제핀-5-온 33 (250 mg, 0.44 mmol, 25.3% 수율), 황색 고체를 얻었다.
화합물 33 (50.0 mg, 0.20 mmol)의　DMF (5.0 mL) 용액에 K2CO3 (42.26 mg, 0.31 mmol) 　및　 1,5-디요드펜탄 (333 mg, 1.0 mmol)을 추가하였다. 상기 반응 혼합물은 90 oC에서 3 h 동안 교반되었다. 상기 반응 혼합물은 실리카 크로마토그래피 (석유 에테르 안 0-50% EtOAC)에 의해 정제되어, (S)-8-((5-히드록시펜틸)옥시)-7-메톡시-1,2,3,11a-테트라히드로-5H-벤조[e]피롤로[1,2-a]아제핀-5-온 34 (60 mg, 0.178 mmol, 87.6% 수율), 오일을 얻었다. LCMS (5-95AB/1.5분): RT =0.765 분, [M+H]+332.0
화합물 34 (60.0 mg, 0.18 mmol)의 DCM (6.0 mL) 용액에 트리에틸아민 (55 mg, 0.54 mmol)　및 메탄술포닐 클로라이드, MsCl (41 mg, 0.36 mmol)를 추가하였다. 상기 혼합물은 35 oC에서 1 h 동안 교반되었고, EtOAc (80 mL) 그리고 물 (50 mL x 3)로 세척되었다. 유기 층은 농축되어 (S)-5-((7-메톡시-5-옥소-2,3,5,11a-테트라히드로-1H-벤조[e]피롤로[1,2-a]아제핀-8-일)옥시)펜틸 메탄술포네이트 35 (70 mg), 무색 오일을 얻었다. LCMS (5-95AB/1.5분): RT = 0.679 분, [M+H]+410.0
화합물 35 (70 mg, 0.17 mmol) 및 tert-부틸 (11S,11aS)-8-히드록시-7-메톡시-2-메틸렌-5-옥소-11-((테트라히드로-2H-피란-2-일)옥시)-2,3,11,11a-테트라히드로-1H-벤조[e]피롤로[1,2-a][1,4]디아제핀-10(5H)-카르복실레이트 36 (87 mg, 0.19 mmol)의 DMF (5.0 mL) 용액에 K2CO3 (47 mg, 0.34 mmol) 및 KI (5.68 mg, 0.030 mmol)를 추가하였다. 상기 혼합물은 90 oC에서 3 h 동안 교반되었고, prep-HPLC (HCOOH)에 의해 정제되어, tert-부틸 (11aR)-7-메톡시-8-((5-(((S)-7-메톡시-5-옥소-2,3,5,11a-테트라히드로-1H-벤조[e]피롤로[1,2-a]아제핀-8-일)옥시)펜틸)옥시)-2-메틸렌-5-옥소-11a-((테트라히드로-2H-피란-2-일)옥시)-2,3,11,11a-테트라히드로-1H-벤조[e]피롤로[1,2-a][1,4]디아제핀-10(5H)-카르복실레이트 37 (70 mg, 0.084 mmol, 49.2% 수율),　백색 고체를 얻었다. LCMS (5-95AB/1.5분): RT = 0.845 분, [M+H]+774.4
화합물 37 (50 mg, 0.060 mmol)의 TFA (1.9 mL) 및 물 (0.10 mL) 용액은 35 oC에서 1 h 동안 교반되었다. 상기 혼합물은 sat.NaHCO3 (30 mL)와 EtOAc (50 mL) 사이에서 분할되었다. 유기 층은 물 (30 mL x 2) 및 염수 (30 mL)로 세척되었고, Na2SO4상에서 건조되었다. 이것은 농축되었고, prep-TLC (DCM 안에 5% MeOH, Rf = 0.5)에 의해 정제되어 DM-5 (20 mg, 0.034 mmol, 53.1% 수율),　백색 고체를 얻었다. LCMS (5-95AB/1.5분): RT = 0.825 분, [M+H]+572.1. 1H NMR (400 MHz, CDCl3)δppm 1.65 - 1.75 (m, 3 H) 1.88 - 2.10 (m, 8 H) 2.19 - 2.31 (m, 1 H) 2.82 - 3.29 (m, 2 H) 3.60 (dt, J = 11.9, 7.5 Hz, 1 H) 3.81 (dt, J = 11.6, 5.9 Hz, 1 H) 3.86 - 3.91 (m, 1 H) 3.94 (s, 6 H) 3.97 (br. s., 1 H) 4.01 - 4.18 (m, 4 H) 4.30 (s, 2 H) 5.19 (d, J = 10.6 Hz, 2 H) 5.89 (dd, J = 9.9, 5.1 Hz, 1 H) 6.53 - 6.63 (m, 1 H) 6.66 (s, 1 H) 6.81 (s, 1 H) 7.51 (s, 1 H) 7.59 (s, 1 H) 7.68 (d, J = 4.4 Hz, 1 H)
실시예 2 모노알킬레이터 피롤로벤조디아제핀 링커-약물 중간생성물 (표 2A)의 제조
Figure pct00052
1,2-디(피리딘-2-일)디술판 및 2-멀캅토에탄올은 실온에서 피리딘 및 메탄올 안에서 반응하여 2-(피리딘-2-일디술파닐)에탄올을 얻었다. 트리에틸아민 및 아세토니트릴 안에서 4-니트로페닐 카르보노클로리데이트와의 아실화에 의해 4-니트로페닐 2-(피리딘-2-일디술파닐)에틸 카르보네이트 9를 얻었다.
무수 DMF/MeOH (25 mL/25 mL)안 1,2-비스(5-니트로피리딘-2-일)디술판 10 (1.0 g, 3.22 mmol) 혼합물에 HOAc (0.1 mL)를 추가하고, 이어서 2-아미노에탄티올 염화수소산염 11 (183 mg, 1.61 mmol)를 추가하였다. 상기 반응 혼합물은 실온에서 하룻밤동안 교반된 후, 진공하에서 농축되어 용매를 제거하고, 상기 잔유물은 DCM (30 mL × 4)로 세척되어, 2-((5-니트로피리딘-2-일)디술파닐)에탄아민 염화수소산염 12, 옅은 황색 고체 (300 mg, 69.6 %)를 얻었다. 1H NMR (400 MHz, DMSO-d 6 ) δ 9.28 (d, J = 2.4 Hz, 1H), 8.56 (dd, J = 8.8, 2.4 Hz, 1H), 8.24 (s, 4H), 8.03 (d, J = 8.8 Hz, 1H), 3.15 - 3.13 (m, 2H), 3.08 - 3.06 (m, 2H)
Figure pct00053
1,2-비스(5-니트로피리딘-2-일)디술판 10 (9.6 g, 30.97 mmol) 및 2-멀캅토에탄올 (1.21 g, 15.49 mmol)의 무수 DCM/CH3OH (250 mL/250 mL) 용액은 실온에서 N2 하에서 24 h 동안 교반되었다. 상기 혼합물은 진공하에서 농축된 후, 상기 잔유물은 DCM (300 mL)로 희석되었다. MnO2 (10 g)이 추가되었고, 상기 혼합물은 실온에서 추가 0.5 h 동안 교반되었다. 상기 혼합물은 실리카 겔 (DCM/MeOH = 100/1 내지 100/1) 상에서 컬럼 크로마토그래피에 의해 정제되어, 2-((5-니트로피리딘-2-일)디술파닐)에탄올 13 (2.2 g, 61.1 %), 갈색 오일을 얻었다. 1H NMR (400 MHz, CDCl3) δ 9.33 (d, J = 2.8 Hz, 1H), 8.38 - 8.35 (dd, J = 9.2, 2.8 Hz, 1H), 7.67 (d, J = 9.2 Hz, 1H), 4.10 (t, J = 7.2 Hz, 1H), 3.81 - 3.76 (q, 2H), 3.01 (t, J = 5.2 Hz, 2H).
13 (500 mg, 2.15 mmol)의 무수 DMF (10 mL) 용액에 DIEA (834 mg, 6.45 mmol)를 추가하고, 이어서 PNP 카르보네이트 (비스(4-니트로페닐) 카르보네이트, 1.31g, 4.31 mmol)를 추가하였다. 상기 반응 용액은 실온에서 4 h 동안 교반되었고, 상기 혼합물은 prep-HPLC (FA)에 의해 정제되어 4-니트로페닐 2-((5-니트로피리딘-2-일)디술파닐)에틸 카르보네이트 14 (270 mg, 33.1 %), 밝은 갈색 오일을 얻었다. 1H NMR (400 MHz, CDCl3) δ 9.30 (d, J = 2.4 Hz, 1H), 8.43 - 8.40 (dd, J = 8.8, 2.4 Hz, 1H), 8.30 - 8.28 (m, 2H), 7.87 (d, J = 8.8 Hz, 1H), 7.39 - 7.37 (m, 2H), 4.56 (t, J = 6.4 Hz, 2H), 3.21 (t, J = 6.4 Hz, 2H).
Figure pct00054
(11S,11aS)-(R)-2-((5-니트로피리딘-2-일)디술파닐)프로필 11-히드록시-7-메톡시-8-((5-(((S)-7-메톡시-2-메틸렌-5,11-디옥소-2,3,5,10,11,11a-헥사히드로-1H-벤조[e]피롤로[1,2-a][1,4]디아제핀-8-일)옥시)펜틸)옥시)-2-메틸렌-5-옥소-2,3,11,11a-테트라히드로-1H-벤조[e]피롤로[1,2-a][1,4]디아제핀-10(5H)-카르복실레이트 (LD-51)의 합성
Figure pct00055
술퓨릴 클로라이드 (2.35 mL의 1.0M 용액/DCM, 2.35 mmol)를 0℃에서 (얼음/아세톤) 아르곤 대기 하에 건조 DCM (7.5 mL)에서 5-니트로피리딘-2-티올 (334 mg, 2.14 mmol)의 교반된 현탁액으로 점적 추가하였다. 상기 반응 혼합물은 황색 현탁액에서 황색 용액으로 바뀌었고, 실온이 되도록 방치한 후, 그 다음 2시간 동안 교반시킨 후, 용애를 진공하에서 증발시켜, 황색 고체를 얻었다. 상기 고체는 DCM (15 mL)에 다시 용해시켰고, 건조 DCM (7.5 mL)안에 (R)-2-멀캅토프로판-1-올 (213 mg, 2.31 mmol) 용액으로 0℃에서 아르곤 대기 하에 점적 처리하였다. 상기 반응 혼합물은 실온이 되도록 방치해두고, 20 시간 동안 교반되었으며, 이 시점에서 LC/MS 분석에 의해 정체 시간 1.41 분, (ES+) m/z 247 ([M+ H]+., ~100% 상대적 강도)에 실질적인 산물 형성이 드러났다. 상기 침전물은 여과에 의해 제거되었고, 여과액은 진공에서 기화되어 오렌지색 고체를 얻고, 이는 H2O (20 mL)로 처리하고, 수산화 암모늄 용액으로 염기화하였다. 상기 혼합물은 DCM (3 x 25 mL)으로 추출하였고, 복합된 추출물은 H2O (20 mL), 염수 (20 mL)로 세척하고, 건조되고 (MgSO4), 여과되고, 그리고 진공에서 기화되어 미정제 산물을 얻었다. 섬광 크로마토그래피 (1% 증분되는 구배 용액: 100% DCM 내지 98:2 v/v DCM/MeOH)에 의한 정제로 (R)-2-((5-니트로피리딘-2-일)디술파닐)프로판-1-올 15, 오일 (111 mg, 21% 수율)을 얻었다.
트리포스겐(triphosgene), Cl3COCOOCCl3, Sigma Aldrich, CAS 등록 번호 32315-10-9 (241 mg, 0.812 mmol)의 DCM (10 mL) 용액에 (R)-2-((5-니트로피리딘-2-일)디술파닐)프로판-1-올 15 (500 mg, 2.03 mmol) 및 피리딘 (153 mg, 1.93 mmol)의 DCM (10 mL) 용액을 20 oC에서 점적 추가하였다. 상기 반응 혼합물은 20oC에서 30 분 동안 교반시킨 후, 농축되었고, (R)-2-((5-니트로피리딘-2-일)디술파닐)프로필 카르보노클로리데이트 16 은 추가 정제없이 다음 단계에 바로 이용되었다.
화합물 16 (626 mg, 2.03 mmol)의 DCM (10 mL) 용액에 tert-부틸 (5-((5-(5-아미노-4-((S)-2-(((tert-부틸디메틸실일)옥시)메틸)-4-메틸렌피롤리딘-1-카르보닐)-2-메톡시펜옥시)펜틸)옥시)-2-((S)-2-(((tert-부틸디메틸실일)옥시)메틸)-4-메틸렌피롤리딘-1-카르보닐)-4-메톡시페닐)카르바메이트 1 (1.50 g, 1.57 mmol) 및 피리딘 (161 mg, 2.05 mmol)의 용액을 20 oC에서 점적 첨가하였다. 상기 반응 혼합물은 20 oC에서 3 h 동안 교반되었다. 상기 용매는 제거되었고, 상기 잔유물은 섬광 컬럼 (석유 에테르 안에 EtOAc 0~30%)에서 정제되어 tert-부틸 (2-((S)-2-(((tert-부틸디메틸실일)옥시)메틸)-4-메틸렌피롤리딘-1-카르보닐)-5-((5-(4-((S)-2-(((tert-부틸디메틸실일)옥시)메틸)-4-메틸렌피롤리딘-1-카르보닐)-2-메톡시-5-((((R)-2-((5-니트로피리딘-2-일)디술파닐)프로폭시)카르보닐)아미노)펜옥시)펜틸)옥시)-4-메톡시페닐)카르바메이트 17 (1.6 g, 83%), 황색 포말(foam)을 얻었다. LCMS (5-95AB/1.5분): RT = 1.360분, [M+Na]+1247.4
화합물 17 (900 mg, 0.734 mmol)의 THF/H2O (10 mL/10 mL) 용액에 HOAc (15 mL)를 20 oC에서 추가하였다. 상기 반응 혼합물은 20 oC에서 24 h 동안 교반하였다. 상기 반응 혼합물은 EtOAc (50 mL)로 희석되었고, 물 (2 x 20 mL), 포화된 aq. NaHCO3 (30 mL) 및 염수 (30 mL)로 세척되었다. 건조되었고, 농축되어 미정제 산물을 얻었고, 이는 섬광 크로마토그래피 (DCM:MeOH = 100:1~20:1)에 의해 정제되어 tert-부틸 (2-((S)-2-(히드록시메틸)-4-메틸렌피롤리딘-1-카르보닐)-5-((5-(4-((S)-2-(히드록시메틸)-4-메틸렌피롤리딘-1-카르보닐)-2-메톡시-5-((((R)-2-((5-니트로피리딘-2-일)디술파닐)프로폭시)카르보닐)아미노)펜옥시)펜틸)옥시)-4-메톡시페닐)카르바메이트 18 (700 mg, 95.6%), 황색 포말을 얻었다. LCMS (5-95AB/1.5 분): RT = 0.978분, [M+H]+　997.6
화합물 18 (700 mg, 0.702 mmol)의 DCM (40 mL) 용액에 데스-마르틴 페리오디난, DMP, 1,1,1-트리스(아세틸옥시)-1,1-디히드로-1,2-벤즈요오독솔-3-(1H)-온, Sigma Aldrich, CAS 등록 번호 87413-09-0 (1.19　mg, 2.81 mmol)을 20oC에서 추가하였다. 상기 반응 혼합물은 20oC에서 1 h 동안 교반되었다. 상기 반응은 포화 용액 NaHCO3/Na2SO3 (20 mL/20 mL)으로 중단되었고, DCM (3 x 10 mL)로 추출되었다. 복합된 유기 층은 NaHCO3/Na2SO3 (10 mL/10 mL), 염수 (20 mL)로 세척되었고, 건조되었고, 농축되어 tert-부틸 (11S,11aS)-11-히드록시-8-((5-(((11S,11aS)-11-히드록시-7-메톡시-2-메틸렌-10-(((R)-2-((5-니트로피리딘-2-일)디술파닐)프로폭시)카르보닐)-5-옥소-2,3,5,10,11,11a-헥사히드로-1H-벤조[e]피롤로[1,2-a][1,4]디아제핀-8-일)옥시)펜틸)옥시)-7-메톡시-2-메틸렌-5-옥소-2,3,11,11a-테트라히드로-1H-벤조[e]피롤로[1,2-a][1,4]디아제핀-10(5H)-카르복실레이트 19 (LCMS (5-95AB/1.5분): RT =0.912 분, [M+Na]+1015.3) 및 tert-부틸 (S)-8-((5-(((11S,11aS)-11-히드록시-7-메톡시-2-메틸렌-10-(((R)-2-((5-니트로피리딘-2-일)디술파닐)프로폭시)카르보닐)-5-옥소-2,3,5,10,11,11a-헥사히드로-1H-벤조[e]피롤로[1,2-a][1,4]디아제핀-8-일)옥시)펜틸)옥시)-7-메톡시-2-메틸렌-5,11-디옥소-2,3,11,11a-테트라히드로-1H-벤조[e]피롤로[1,2-a][1,4]디아제핀-10(5H)-카르복실레이트 20 (이는 다음 단계로 바로 사용되었다)의 혼합물을 얻었다.
냉각 TFA (8 mL)을 0 oC에서 19 및 20 (600 mg, 0.604 mmol)의 미정제 혼합물에 추가하였다. 상기 반응 혼합물은 0 oC에서 30 분 동안 교반되었다. 상기 반응 혼합물은 0 oC에서 냉각 포화 aq. NaHCO3 (150 mL)로 점적 추가하였고, DCM (4 x 40 mL)로 추출하였다. 상기 복합된 유기 층은 염수 (50 mL)로 세척하였고, 건조시키고, 농축시켜 미정제 산물을 얻었고, 순수 LD-51 (28　mg, 5.2%), 황색 포말을 분리시키기 위하여 이것을 pre-TLC (DCM:MeOH = 15:1)을 이용하여 정제하였다. LCMS: (5-95, AB, 1.5 분), 0.739 분, m/z = 891.2 (M+1). 1H NMR (400 MHz, CDCl3) δ 9.26 (s, 1H), 8.31 (d, J = 6.8 H, 1Hz), 8.18 (s, 1H), 7.62 (d, J = 8.4 Hz, 1H), 7.41 (s, 1H), 7.18 (s, 1H), 6.77 (s, 1H), 6.41 (s, 1H), 5.60 (d, J = 10.0 Hz, 1H), 5.20-5.06 (m, 4H), 4.50-3.81 (m, 18H), 3.70-3.60 (m, 1H), 3.50-3.40 (m, 1H), 3.18 (br, 1H), 2.98-2.62 (m, 6H), 1.95-1.86 (m, 4H), 1.70-1.52 (m, 2H), 1.17 (d, J = 6.4 Hz, 3H).
(11S,11aS)-(R)-2-((5-니트로피리딘-2-일)디술파닐)프로필 11-히드록시-7-메톡시-8-((5-(((S)-7-메톡시-2-메틸렌-5-옥소-2,3,5,10,11,11a-헥사히드로-1H-벤조[e]피롤로[1,2-a][1,4]디아제핀-8-일)옥시)펜틸)옥시)-2-메틸렌-5-옥소-2,3,11,11a-테트라히드로-1H-벤조[e]피롤로[1,2-a][1,4]디아제핀-10(5H)-카르복실레이트 (LD-52) 합성
CLD-1 (45 mg, 0.050 mmol)의 THF (3.0 mL) 용액에 0oC에서 NaBH3CN (3 mg, 0.050 mmol) 및 HOAc (0.05 mL)을 첨가하였다. 상기 혼합물은 0 oC에서　2 분 동안 교반되었다. 상기 반응 용액은prep-TLC (DCM안 7% 메탄올, Rf = 0.5)으로 정제되어, LD-52 (20 mg, 0.022 mmol, 42.1% 수율), 백색 고체를 얻었다. LCMS (5-95AB/1.5 분): RT = 0.878 분, [M+H]+877.2. 1H NMR (400 MHz, CDCl3) δ 9.19 (s, 1H), 8.27 (d, J = 6.8 Hz, 1H), 7.58 (d, J = 8.8 Hz, 1H), 7.53 (s, 1H), 7.24 (s, 1H), 6.69 (s, 1H), 6.02 (s, 1H), 5.56 (d, J = 9.7 Hz, 1H), 5.12 (s, 2H), 5.05 (d, J = 11.2 Hz, 2H), 4.54 (br.s, 1H), 4.42-4.38 (m, 1H), 4.29-4.22 (m, 4H), 4.13-4.09 (m, 1H), 4.02-3.39 (m, 8H), 3.79 (s, 3H), 3.63 (t, J = 8.0 Hz, 1H), 3.53 (d, J = 11.9 Hz, 1H), 3.37-3.31 (m, 1H), 3.16-3.14 (m, 1H), 2.94-2.88 (m, 2H), 2.74-2.71 (m, 1H), 2.44-2.39 (m, 1H), 1.93-1.85 (m, 4H), 1.66-1.56 (m, 2H), 1.24-1.14 (m, 3H)
실시예 3 비교 피롤로벤조디아제핀 링커-약물 중간생성물 (표 2B)의 제조
(R)-2-((5-니트로피리딘-2-일)디술파닐)프로필 (11S,11aS)-11-히드록시-7-메톡시-8-((5-(((S)-7-메톡시-2-메틸렌-5-옥소-2,3,5,10,11,11a-헥사히드로-1H-벤조[e]피롤로[1,2-a][1,4]디아제핀-8-일)옥시)펜틸)옥시)-2-메틸렌-5-옥소-2,3,11,11a-테트라히드로-1H-벤조[e]피롤로[1,2-a][1,4]디아제핀-10(5H)-카르복실레이트 (CLD-1)의 합성
18 (50 mg, 0.050 mmol)의 DCM (2.0 mL) 용액에 25oC에서 DMP (149 mg, 0.35 mmol)를 첨가하였다. 상기 반응 혼합물은 25 oC에서 2 h 동안 교반되었다. 상기 반응물은 DCM (5 mL)로 희석되었고, 포화 용액 NaHCO3/Na2SO3 (2 mL/2 mL)으로 중단되었고, DCM (2 x 5 mL)로 추출되었다. 상기 복합된 유기 층은 NaHCO3/Na2SO3 (2 mL/2 mL), 염수 (5 mL)로 세척되었고, 건조되고 그리고 농축되었다. 상기 잔유물은 pre-TLC (DCM:MeOH = 20:1)에 의해 정제되어 tert-부틸 (11S,11aS)-11-히드록시-8-((5-(((11S,11aS)-11-히드록시-7-메톡시-2-메틸렌-10-(((R)-2-((5-니트로피리딘-2-일)디술파닐)프로폭시)카르보닐)-5-옥소-2,3,5,10,11,11a-헥사히드로-1H-벤조[e]피롤로[1,2-a][1,4]디아제핀-8-일)옥시)펜틸)옥시)-7-메톡시-2-메틸렌-5-옥소-2,3,11,11a-테트라히드로-1H-벤조[e]피롤로[1,2-a][1,4]디아제핀-10(5H)-카르복실레이트 19 를 얻었고, 다음 단계에서 바로 이용되었다. LCMS: (5-95, AB, 1.5 분), 0.830 분, m/z = 1013.4 (M+23).
냉각 TFA (1 mL)는 0 oC에서 19 (20 mg, 0.020 mmol)에 추가되었다. 상기 반응 혼합물은 0oC에서 20 분 동안 교반되었다. 상기 반응 혼합물은 0oC에서 냉각 포화 aq. NaHCO3 (20 mL)에 점적 추가되었고, DCM (3 x 15 mL)로 추출되었다. 상기 복합된 유기 층은 염수 (15 mL)로 세척되고, 건조되고 그리고 농축되어 미정제 산물을 얻었고, pre-TLC (DCM:MeOH = 15:1)에 의해 정제되어 CLD-1 (4 mg, 23%), 회색 고체를 얻었다. LCMS: (5-95, AB, 1.5 분), 0.89 분, m/z = 873.6 (M+1). 1H NMR (400 MHz, CDCl3) δ 9.22 (s, 1H), 8.38 (d, J = 8.8 Hz, 1H), 7.78 (d, J = 8.8 Hz, 1H), 7.68 (d, J = 4.4 Hz, 1H), 7.49 (s, 1H), 7.33 (s, 1H), 6.82 (s, 1H), 6.77 (s, 1H), 5.20-5.13 (m, 4H), 4.36-4.26 (m, 5H), 4.20-3.95 (m, 7H), 4.89-3.70 (m, 8H), 3.50-2.70 (m, 5H), 2.05-1.82 (m, 4H), 1.40-1.15 (m, 3H).
4-((S)-2-((S)-2-(6-(2,5-디옥소-2,5-디히드로-1H-피롤-1-일)헥산아미도)-3-메틸부탄아미도)-5-우레이도펜탄아미도)벤질 (11S,11aS)-11-히드록시-7-메톡시-8-((5-(((S)-7-메톡시-2-메틸렌-5-옥소-2,3,5,10,11,11a-헥사히드로-1H-벤조[e]피롤로[1,2-a][1,4]디아제핀-8-일)옥시)펜틸)옥시)-2-메틸렌-5-옥소-2,3,11,11a-테트라히드로-1H-벤조[e]피롤로[1,2-a][1,4]디아제핀-10(5H)-카르복실레이트, CLD-4 합성
Figure pct00056
트리포스겐 (156 mg, 0.52 mmol)의 DCM (20 mL) 용액에 1 (1.0 g, 1.05 mmol)　및 Et3N (318 mg, 3.15 mmol)의 DCM (5.0 mL) 용액을 추가하였다. 상기 혼합물은 0 oC에서 1　h 동안 교반되었고, 농축되어 미정제 중간생성물을 얻었고, DCM (20 mL)에 이것(0.88 g, 1.53 mmol)을 추가하고, 0 oC에서 DMF (10 mL) 안에 트리에틸아민 (310 mg, 3.07 mmol) 및 6-(2,5-디옥소-2,5-디히드로-1H-피롤-1-일)-N-((S)-1-(((S)-1-((4-(히드록시메틸)페닐)아미노)-1-옥소-5-우레이도펜탄-2-일)아미노)-3-메틸-1-옥소부탄-2-일)헥사아미드, MC-VC-PAB (1.0 g, 1.02 mmol)의 혼합물에 추가하였다. 상기 혼합물은 DCM (40 mL)으로 희석되었고, 물 (2 x　30 mL)로 세척되었다. 유기 층은 Na2SO4에서 건조되었고, 농축되고, 그리고 실리카 (DCM 안 0-10%　MeOH) 상에서 크로마토그래피에 의해 정제되어 tert-부틸 (2-((S)-2-(((tert-부틸디메틸실일)옥시)메틸)-4-메틸렌피롤리딘-1-카르보닐)-5-((5-(4-((S)-2-(((tert-부틸디메틸실일)옥시)메틸)-4-메틸렌피롤리딘-1-카르보닐)-5-((((4-((S)-2-((S)-2-(6-(2,5-디옥소-2,5-디히드로-1H-피롤-1-일)헥산아미도)-3-메틸부탄아미도)-5-우레이도펜탄아미도)벤질)옥시)카르보닐)아미노)-2-메톡시펜옥시)펜틸)옥시)-4-메톡시페닐)카르바메이트 21 (1.0 g, 0.64 mmol, 62.4% 수율),　황색 고체를 얻었다.
화합물 21 (1.0 g, 0.64 mmol)의 THF (6.0 mL) 용액에 물 (6.0 mL) 및 아세트산 (9.0 mL)을 추가하였다. 상기 혼합물은 20 oC에서 12 h 동안 교반되었다. 상기 혼합물에 EtOAc (100 mL)을 추가하고, 유기 층은 물 (50 mL x 3) 및 sat. NaHCO3 (50 mL)로 세척하고, 그리고 농축되어 tert-부틸 (5-((5-(5-((((4-((S)-2-((S)-2-(6-(2,5-디옥소-2,5-디히드로-1H-피롤-1-일)헥산아미도)-3-메틸부탄아미도)-5-우레이도펜탄아미도)벤질)옥시)카르보닐)아미노)-4-((S)-2-(히드록시메틸)-4-메틸렌피롤리딘-1-카르보닐)-2-메톡시펜옥시)펜틸)옥시)-2-((S)-2-(히드록시메틸)-4-메틸렌피롤리딘-1-카르보닐)-4-메톡시페닐)카르바메이트22 (700 mg, 0.53 mmol, 82.1% 수율),　백색 고체를 얻었다.
22 (597 mg, 0.45 mmol)의 DMSO (5.0 mL) 용액에 18 oC에서 2-요오드옥시벤조산, IBX (126 mg, 0.45 mmol)을 첨가하였다. 상기 반응 혼합물은 37 oC에서 8 h 동안 교반되었고, prep-HPLC　(물에서 아세토니트릴 40-70%/0.225 %　FA)에 의해 정제되어 tert-부틸 (11S,11aS)-8-((5-(((11S,11aS)-10-(((4-((S)-2-((S)-2-((6-(2,5-디옥소-2,5-디히드로-1H-피롤-1-일)헥실)아미노)-3-메틸부탄아미도)-5-우레이도펜탄아미도)벤질)옥시)카르보닐)-11-히드록시-7-메톡시-2-메틸렌-5-옥소-2,3,5,10,11,11a-헥사히드로-1H-벤조[e]피롤로[1,2-a][1,4]디아제핀-8-일)옥시)펜틸)옥시)-11-히드록시-7-메톡시-2-메틸렌-5-옥소-2,3,11,11a-테트라히드로-1H-벤조[e]피롤로[1,2-a][1,4]디아제핀-10(5H)-카르복실레이트 수화물 23 (120 mg, 0.089 mmol, 19.8% 수율),　백색 고체를 얻었다.
23 (100 mg, 0.080 mmol)의 TFA (4.0 mL) 용액은 0 oC에서 30 분 동안 교반되었고, 그 다음 냉각 sat.NaHCO3 (40 mL)에 추가되었다. 이것은 EtOAc (60 mL x 3)로 추출되었다. 복합된 유기 층들을 농축시켜 4-((S)-2-((S)-2-(6-(2,5-디옥소-2,5-디히드로-1H-피롤-1-일)헥산아미도)-3-메틸부탄아미도)-5-우레이도펜탄아미도)벤질 (11S,11aS)-11-히드록시-7-메톡시-8-((5-(((S)-7-메톡시-2-메틸렌-5-옥소-2,3,5,11a-테트라히드로-1H-벤조[e]피롤로[1,2-a][1,4]디아제핀-8-일)옥시)펜틸)옥시)-2-메틸렌-5-옥소-2,3,11,11a-테트라히드로-1H-벤조[e]피롤로[1,2-a][1,4]디아제핀-10(5H)-카르복실레이트 24 (90 mg), 황색 고체를 얻었고, 다음 단계에서 바로 이용되었다.
화합물 24 (90 mg, 0.070 mmol)의 DMF (4.0 mL) 용액에 트리아세톡시수소화붕소 나트륨 (9.42mg, 0.1500mmol)을 첨가하였다. 시아노 수소화붕소 나트륨은 또한 환원제로 이용될 수 있다. 상기 혼합물은 20 oC에서 30 분 동안 교반되었다. 생성 잔유물은 prep-HPLC (물에서 아세토니트릴 0-40/0.1% HCl)에 의해 정제되어 CLD-4 (28 mg, 0.022 mmol, 29.5% 수율), 백색 고체를 얻었다. LCMS: (5-95, AB, 1.5 분), 0.832 분, m/z = 602.7, 1203.6 (M+1)
실시예 4 환원 및 재산화에 의해 콘쥬게이션을 위한 시스테인 조작된 항체의 제조
경쇄 아미노산은 Kabat (Kabat et al., Sequences of proteins of immunological interest, (1991) 5th Ed., US Dept of Health and Human Service, National Institutes of Health, Bethesda, MD)에 따라 번호매겨진다. 중쇄 아미노산은 Kabat 시스템에서 명시된 것을 제외하고, EU 번호매김 시스템 (Edelman et al (1969) Proc. Natl. Acad. of Sci. 63(1):78-85)에 의해 번호매겨진다. 단일 문자 아미노산 약어가 사용된다.
CHO 세포에서 발현된 전장의, 시스테인 조작된 단일클론 항체 (THIOMAB™)는 시스테인 부가물 (시스틴)을 보유하거나, 또는 세포 배양물 조건으로 인하여 조작된 시스테인 상에서 글루타티오닐화된다. 마찬가지로, CHO 세포에서 정제된 THIOMAB™s는 Cys-반응성 링커-약물 중간생성물에 콘쥬게이트될 수 없다. 시스테인 조작된 항체는 환원제 이를 테면 DTT (Cleland의 시약, 디티오트레이톨) 또는 TCEP (트리스(2-카르복시에틸)포스핀 염화수소산염; Getz et al (1999) Anal. Biochem. Vol 273:73-80; Soltec Ventures, Beverly, MA)로 처러하고, 약한 산화제 이를 테면 데히드로아스코르브산으로 쇄간 이황화물 결합 (re-oxidation)을 재형성시킴으로써, 이를 테면, 표 2A에 있는 링커-약물 중간생성물과의 콘쥬게이션에 대하여 반응성을 가지도록 만들어질 수 있다. CHO 세포에서 발현된 전장의, 시스테인 조작된 단일클론 항체 (THIOMAB™) (Gomez et al (2010) Biotechnology and Bioeng. 105(4):748-760; Gomez et al (2010) Biotechnol. Prog. 26:1438-1445)는 실온에서 하룻밤동안 2 mM EDTA와 함께, 50 mM Tris, pH 8.0에서 약 50배 과량의 DTT로 환원되었고, 이는 Cys 및 글루타티오닌 부가물을 제거하고, 뿐만 아니라 항체 안에 쇄간 이황화물 결합을 환원시킨다. 부가물의 제거는 PLRP-S 컬럼을 이용하여 역상(reverse-phase) LCMS에 의해 모니터되었다. 환원된 THIOMAB™ 는 희석되고, 10 mM 숙신산 나트륨, pH 5 완충액의 최소한 4배 용적으로 추가함으로써 산성화되었다.
대안으로, 상기 항체는 희석되었고, 10 mM 숙신산염, pH 5의 최소한 4배 용적으로 추가함으로써 산성화되었고, pH가 대략 5가될 때까지 10% 아세트산으로 적정되었다. pH-낮아진, 그리고 희석된 THIOMAB™ 는 후속적으로 HiTrap S 양이온 교환 컬럼 상에 로딩되었고, 몇 컬럼 용적의 10 mM 나트륨 아세테이트, pH 5로 세척되었고, 그리고 50 mM Tris, pH 8.0, 150 mM 염화나트륨으로 용리되었다. 재산화를 실행함으로써, 부모 Mab에 존재하는 시스테인 잔기 사이에 이황화물 결합이 다시 설정되었다. 상기에서 기술된 용리된 환원된 THIOMAB™ 는 3시간 동안15X 데히드로아스코르브산 (DHAA)으로 처리되었고, 또는 대안으로, 실온에서 하룻밤동안 200 nM 내지 2 mM의 수성 황산동 (CuSO4)으로 처리되었다. 다른 산화제, 가령 당분야에 공지된 산화제 및 산화가능한 조건이 이용될 수 있다. 대기(ambient air) 산화가 또한 효과적일 수 있다. 이와 같은 약한, 부분적인 재산화 단계는 높은 충실성(high fidelity)의 쇄내 이황화물을 형성한다. 재산화는 PLRP-S 컬럼을 이용하여 역상 LCMS에 의해 모니터되었다. 재산화된 THIOMAB™ 는 상기에서 기술된 바와 같이 숙신산염 완충액으로 희석시켜 pH를 대략적으로 5로 하고, 용리가 10 mM 숙신산염, pH 5 (완충액 A)에서 10 mM 숙신산염, pH 5, 300 mM 염화나트륨 (완충액 B)의 구배로 실행되는 것을 제외하고, S 컬럼 상에서 정제는 상기와 같이 실행되었다. 상기 용리된 THIOMAB™에 EDTA는 2 mM의 최종 농도로 추가되었고, 필요하다면, 5 mg/mL이상의 최종 농도에 도달하도록 농축되었다. 콘쥬게이션을 위하여 준비된 생성물 THIOMAB™은 분량으로(in aliquots) -20 C에 보관되었다. 액체 크로마토그래피/질량 분광 분석은 6200 시리즈 TOF 또는 QTOF Agilent LC/MS 상에서 실행되었다. 80 ℃로 열이 가해진 PRLP-S®, 1000 A, 소구경(microbore) 컬럼 (50mm×2.1mm, Polymer Laboratories, Shropshire, UK) 상에서 시료는 크로마토그래피되었다. 30-40% B (용매 A: 물 안에 0.05% TFA, 용매 B: 아세토니트릴 안에 0.04% TFA)의 선형 구배를 이용하였으며, 용리액은 전기분무 소스를 이용하여 바로 이온화시켰다. MassHunter 소프트웨어로 데이터를 수집하고 디콘볼루션되었다. LC/MS 분석 전에, 항체 또는 약물 콘쥬게이트 (50 마이크로그램)는 N-연계된 탄수화물을 제거하기 위하여, 2시간 동안 37 ℃ 에서 PNGase F (2 유닛/ml; PROzyme, San Leandro, CA)로 처리하였다.
대안으로, 항체 또는 약물 콘쥬게이트는 LCMS 분석을 위하여 Fab 및 Fc 단편을 제공하기 위해 15 분 동안 37 ℃에서 LysC (0.25 μg/50 μg (마이크로그램) 항체 또는 콘쥬게이트)로 부분적으로 절단되었다. 데콘볼루션된 LCMS 스펙트럼에서 피크가 할당되었고, 정량화되었다. 약물-항체 비율 (DAR)은 관찰된 모든 피크에 대한 약물-콘쥬게이션된 항체에 상응하는 피크 또는 피크의 강도의 비를 계산함으로써, 산출되었다.
실시예 5 링커-약물 중간생성물을 항체에 콘쥬게이션
실시예 2의 환원 및 재산화 과정 후, 10 mM 숙신산염, pH 5, 150 mM NaCl, 2 mM EDTA안에 시스테인-조작된 항체 (THIOMAB™)는 1M Tris를 이용하여 pH가 7.5-8.5로 조정된다. 표 2A에 기술된 것을 포함하나, 이에 국한되지 않는 티올-반응성 피리딜 이황화물 기를 갖는 링커-약물 중간생성물의 약 3몰 내지 20 당량의 과량은 DMF 또는 DMA에 용해되고, 그리고 상기 환원된, 재산화된, 그리고 pH-조정된 항체에 추가된다. 반응물을 실온 또는 37 C에서 배양하고, 반응 혼합물의 LC-MS 분석에 의해 결정될 때, 완료될 때까지 (1 내지 약 24 시간) 모니터링한다. 상기 반응이 완료되면, 상기 콘쥬게이트는 몇 가지 방법 중 하나 또는 몇 가지 방법의 임의의 조합에 의해 정제되고, 이 목적은 남아있는 반응안된 링커-약물 중간생성물 및 응집된 단백질 (현저한 수준으로 존재한다면)을 제거하는 것이다. 예로써, 상기 콘쥬게이트는 최종 pH가 약 5.5가될 때까지 pH 5.5 인 10 mM 히스티딘-아세테이트로 희석되, Akta 정제 시스템 (GE Healthcare) 또는 S maxi 스핀 컬럼 (Pierce)에 연결된 HiTrap S 컬럼을 사용하여 S 양이온 교환 크로마토그래피로 정제될 수 있다. 대안으로, 상기 콘쥬게이트 접합체는 Akta 정제 시스템 또는 Zeba 스핀 컬럼에 연결된 S200 컬럼을 사용하는 겔 여과 크로마토 그래피에 의해 정제될 수 있다. 대안으로, 투석이 이용될 수 있다. 상기 THIOMAB 약물 콘쥬게이트를 겔 여과 또는 투석을 사용하여 240 mM 슈크로스와 함께, 20 mM His/ 아세테이트, pH 5로 제형 화하였다. 상기 정제된 콘쥬게이트를 원심 한외 여과에 의해 농축시키고, 멸균 조건 하에서 0.2-μm 필터를 통해 여과하고 저장을 위해 동결시켰다. 상기 항체-약물 콘쥬게이트는 단백질 농도를 측정하기위한 BCA 분석, 응집 분석을위한 분석용 SEC (크기-배제 크로마토그래피) 및 DAR을 산출하기위한 리신 C 엔도 펩티다아제 (LysC) 처리 후의 LC-MS를 통하여 특징화하였다.
크기 배제 크로마토그래피는 분당 0.75 ml의 유속에서 0.25 mM 염화칼륨 및 15 % IPA와 함께, 0.2 M 인산 칼슘 pH 6.2에서 Shodex KW802.5 컬럼을 사용하여 콘쥬게이트 상에서 수행된다. 복합체의 응집 상태는 280 nm에서 용리된 피크 면적 흡광도의 적분에 의해 결정되었다.
LC-MS 분석은 Agilent QTOF 6520 ESI 장비를 사용하여 ADC에서 수행될 수 있다. 예로써, 상기 항체-약물 콘쥬게이트는 37℃에서 30분 동안 Tris, pH 7.5안에 1:500 w/w 엔도프로테나제 Lys C (Promega)로 처리한다. 상기 생성 절단 단편은 80 ℃로 가열된, 1000Å (Angstrom), 8 μm (미크론) PLRP-S (고도로 가교된 폴리스티렌) 컬럼에 로딩하고, 5분간 30% B에서 40% B의 구배로 용리된다. 이동상(Mobile phase) A는 0.05% TFA와 함께, H2O이며, 이동상 B는 0.04% TFA와 함께, 아세토니트릴이었다. 유속은 분당 0.5ml이었다. 단백질 용리는 전기분무화 및 MS 분석 전, 280nm에서 UV 흡수도 탐지에 의해 모니터링되었다. 콘쥬게이트안된 Fc 단편, 잔류하는 콘쥬게이트안된 Fab 및 약물 화된 Fab의 크로마토그래피 해상도가 일반적으로 취득되었다. 획득된 m/z 스펙트럼을 Mass Hunter ™ 소프트웨어 (Agilent Technologies)를 사용하여 디콘볼 루션하여 항체 단편의 질량을 산출하였다.
이들 과정에 의해, 표 3A 및 3B의 시스테인 조작된, 항체 약물 콘쥬게이트가 준비되었다.
실시예 6 시험관내 세포 증식 분석
효과 of ADC의 효과는 다음의 프로토콜을 이용한 세포 증식 분석에 의해 측정되었다 (CELLTITER GLO™ 발광 세포 분석(Luminescent Cell Viability Assay), Promega Corp. Technical BulletinTB288; Mendoza et al (2002) Cancer Res. 62:5485-5488). 이 프로토콜은 CELLTITER GLO ™ 발광 세포 분석법을 수정한 것이다.
1.배지 안에 약 104 세포 (SKBR-3, BT474, MCF7 또는 MDA-MB-468)를 담고 있는 100 μl의 세포 배양물 분획을 96-웰, 불투명 웰 플레이트의 각 웰안에 넣었다.
2.대조 웰은 배지는 함유하고, 세포는 함유되지 않도록 제조 하였다.
3.ADC를 실험 웰에 첨가하고 3-5 일 동안 배양하였다.
4.상기 플레이트를 약 30 분 동안 실온으로 평형시켰다.
5.각 웰 안에 존재하는 세포 배양 배지의 용적에 대등한 용적의 CELLTITER GLO™ 시약을 추가하였다.
6.내용물을 오비탈(orbital) 진탕기에서 2 분 동안 혼합하여 세포 용해를 유도하였다.
7.상기 플레이트를 실온에서 10 분 동안 항온 처리하여 발광 신호를 안정화시켰다.
8.발광은 RLU = 상대적 발광 단위(relative luminescenceunits)로서 기록 및 보고하였다.
데이터는 도 1a -도 1e에 도시된 바와 같이, 표준 편차 오차 막대와 함께, 각 복제 세트에 대한 발광의 평균을 나타낸 것이다.
배지: SK-BR-3 50/50/10%FBS/글루타민/250 μg/mL에서 성장, G-418 OVCAR-3 RPMI/20%FBS/글루타민에서 성장.
실시예 7 이종이식편 마우스에서 종양 성장 저해, 생체내 효과
종양은 0 일차 시점에 한 번 치료하기 전에 150-200 mm3 (캘리퍼를 사용하여 측정)로 성장하도록 허용되었다. 종양 체적은 다음 공식에 따라 캘리퍼를 사용하여 측정하였다: V (mm3) = 0.5A X B2, 여기에서 A와 B는 각각 길고, 짧은 지름이다. 종양의 부피가 3000 mm3에 도달하기 전이나 종양이 임박한 궤양의 징후를 보일 때까지 마우스를 안락사시켰다. 각 실험군 (그룹당 10 마리)으로부터 수집된 데이터를 평균 + SE로 나타내었다.
0.2 ml 볼륨에서 흉부 유방 지방 패드에 HBSS/매트리겔에 현탁된 일시 중단 300 만 세포/마우스에서 HER2 KPL-4 세포로, n = 150 마리의 마우스를 예방 접종. 종양이 100-250 mm3의 평균 종양 부피에 도달하면 각각 8-10 마리씩 10 그룹으로 그룹화된다. 단일 치료는 0 일차 시점에 꼬리 정맥을 통해 정맥 내 투여될 것이다. 용적은 0.3ml를 초과하지 않고, 바늘 크기 28 또는 29 게이지이다.
HCC1569 세포 계통은 Ly6E를 발현하고, ATCC (American Type CultureCollection, Manassas, VA)로부터 얻었으며, 하위계통(sub-line) HCC1569X2는 생쥐에서 최적 성장을 위해 Genentech에서 생성되었다. 암컷 C.B-17 SCID-베이지 마우스 (Charles River Laboratory) 각각에 흉부 유방 지방 패드 부위에서 HBSS/매트리겔 (1:1 비율)에 현탁된 5백만 HCC1569X2 세포를 접종하였다. 이종 이식 종양이 100-300 mm3의 평균 종양 체적 (0일차 시점이라고 함)에 도달할 때, 동물을 무작위로 5 마리의 마우스 그룹으로 나누고, 꼬리 정맥을 통해 항체-약물 콘쥬게이트의 단일 정맥 주사를 하였다. 연구 기간 동안 마우스의 종양 및 체중을 일주일에 1-2 회 측정했다. 체중 감소가 시작 체중의 >20 %인 경우, 마우스를 즉시 안락사시켰다. 종양이 3000mm3에 도달하기 전에 모든 동물을 안락사시켰으며 임박한 궤양의 징후를 보였다. 종양 용적은 캘리퍼를 사용하여 2 차원 (길이 및 폭)으로 측정하였고, 종양 용적은 다음 공식을 사용하여 계산하였다: 종양 크기 (mm3)　=　(더 긴 측정　x 더 짧은 측정2) x 0.5 (WO 2013/177055).
발명의 항체-약물 콘쥬게이트의 생체내 효과를 평가하기 위하여 Fo5 마우스 유방 종양 모델에 단일 용량 정맥 주사 후, 기존에 이미 설명된 바와 같이((Phillips GDL, Li GM, DuggerDL, et al. Targeting HER2-Positive Breast Cancer with Trastuzumab-DM1, an Antibody-Cytotoxic Drug Conjugate. (2008) Cancer Res. 68:9280-90, 본 명세서의 참고자료에 편입됨) 평가되었다. 항-Her2 ADC는 Fo5 모델, 유전자삽입 마우스 모델로 테스트하였는데, 이 모델에서 인간 HER2 유전자는 뮤린 유방 종양 바이러스 프로모터 (MMTV-HER2)의 전사 제어하에 유방 상피에서 과다발현된다(도 3 및 5에 나타냄). HER2 과다-발현은 유방 종양의 자발적 발달의 원인이다. 이들 토대(founder) 동물중 한 마리 (토대 #5 [Fo5])의 유방 종양은 종양 단편의 연속적인 이식 (크기는 ~ 2×2 mm)에 의해 FVB 마우스의 후속 세대로 번식되었다. 모든 연구는 실험실 동물의 관리 및 사용 안내서에 따라 수행되었다. 각 항체-약물 콘쥬게이트 (단일 용량)은 연구 시작 및 이식 후 14 일 시점에 9 마리의 동물에게 정맥내 투여되었다. 최초 종양 크기는 약 200 mm3 용적이었다. 본 발명의 항체-약물 콘쥬게이트 및 대조에 의한 시간 경과에 따른 종양 성장 억제의 측정을 도 2-8에 나타내었다.
또다른 유방 지방 패트 이식 효과 모델은 (Chen et al. (2007) Cancer Res 67:4924-4932)에서 기술된 바와 같이, 단일 정맥내 투여 후, 복강내 종양을 품고있는 마우스로부터 잘라낸 종양을 이용하고, 그 다음 수령체 마우스의 유방 지방 패드로 순차적으로 계대(passaged)하여, 종양 용적을 평가하는데 이용될 수 있다.
항-CD22 및 항-Napi ADCs의 세포 사멸 활성은 5-일 배양 후 CD22 또는 Napi-발현 세포계통 그리고 이종이식편 마우스에서 결정되었다.
실시예 8 올리고뉴클레오티드 결합/알킬화 분석
다양한 길이와 서열의 듀플렉스-형성 올리고뉴클레오티드와 피롤로벤조디아제핀 화합물의 상호작용은 이미 확인된 가닥내 그리고 가닥간 가교형성(cross-linking)에 대하여 Pu-GAATG-Py > >> 또는 Pu-GAATC-Py 서열 (여기에서 Pu 는 퓨린 뉴클레오티드 A 또는 G이며, Py는 피리미딘 뉴클레오티드 C 또는 T임)로 연구되었다 (Rahman KM, et al (2009) J Am Chem Soc 131:13756-13766). 상기 가닥간 G 듀플렉스, 5'- TATAGAAATCTATA-3' 및 3'-ATATCTTTAGATAT-5', 그리고 가닥내 G 듀플렉스, 5'-TATAGAAATGTATA-3' 및 3'-ATATCTTTACATAT-5'는 다음의 절차에 따라 연구되었다:
100 μM의 화합물은 37 ℃에서 10 mM Bis-Tris, pH 7.1 안에서 1 시간 동안 50 μM 이중 가닥 데옥시올리고뉴클레오티드 (DNA)와 함께 항온처리되었다. 상기 시료는 Hypersil Gold C18 컬럼 (100x2.1, 1.9 μM, Thermo Scientific) 상의 Sciex TripleTOF 5600에서 LC/MS/UV를 이용하여 분석되었다. 상기 컬럼은 완충액 A (50 mM 헥사플루오르-이소프로판올 및 15 mM 디에틸아민) 내지 완충액 B (50% A 와 1:1 메탄올:아세토니트릴 50%), 8분 안에 5% 내지 25% B, 5분 안에 75% B, 그리고 1 분 안에 95% B의 구배로, 분당 0.4 mL로 용리되었다.
실시예 9 시노몰구스 원숭이에서 안전성/독성 연구
폐에서 발현으로 인하여 항원-의존성 독성의 폐 효과를 비롯한, 시노몰구스 원숭이에서 독성에 대하여 본 발명의 항체-약물 콘쥬게이트를 평가하였다.
연구 기획:
섭생: 2차례의 완전한 주기에 걸쳐 독성을 평가하기 위하여, 1일차와 22일차에 IV 2회 투약. 10 일 시작 (그룹당 1M), 급성 이환율/사망율의 위험을 완화시키기 위하여 남아있는 1M/2F 전 10일차에 투여됨
잠재적인 임상 관찰은 피부 발적, 피부의 흑색 변색, 탈모/스케일링, 궤양, 안면 팽창/부종, 몸이 마른 신체 상태, 식욕 부진 및 전반적인 사망을 포함할 수 있다.
시노몰구스 원숭이에서 항체-약물 콘쥬게이트 투여와 관련된 잠재적인 임상 병리학 적 변화는 요소 질소와 크레아티닌의 증가, 손상된 신장 관 기능 및 폐의 폐포 변성과 관련이 있을 것 같은 부적절하게 농축된 소변, 나트륨, 염화물, 칼슘의 변화와 복합된 요소 질소 및 크레아티닌의 증가, 혈액 매개 변수에서 용량-반응성 변화 및 염증에 대한 반응을 포함할 수 있다.
주요 장기 독성에는 신장, 눈, 피부/SQ/근육, 골수, 폐, 림프관 (비장 및 흉선 림프 결핍)이 포함될 수 있다.
병리학 소견에서 용량-의존성 증가는항체-약물 콘쥬게이트 및 대조 화합물의 안전성/독성 성질을 비교할 수 있게 한다.
실시예 10 마우스에서 효과
항-Her2 항체-약물 콘쥬게이트의 효과는 MMTV-HER2 토대 #5 (뮤린 유방 종양)의 마우스 동종이식편 모델, 또는 KPL4의 마우스 이종이식편 모델, HCC1569X2 (인간 유방암)에서 조사되었다.
MMTV-HER2 토대 #5 (Fo5) 모델 (Genentech에서 개발됨)은 유전자삽입 마우스 모델이며, 이 모델은 뮤린 유방 종양 바이러스 프로모터 (MMTV-HER2)의 전사 제어하에 유방 상피에서 인간 HER2 유전자가 과다발현된다. 상기 과다발현은 인간 HER2 수용체를 과다발현시키는 유방 종양의 자발적 발달의 원인이다. 토대 동물중 한 마리 (토대 #5, Fo5)의 유방 종양을 대략적으로 15-30 mm3 크기의 종양 단편으로 암컷 nu/nu 또는 FVB 마우스(Charles River Laboratories)의 흉부 유방 지방 패트에 외과적으로 이식하였다.
KPL4 유방암 세포계통은 Dr. J. Kurebayashilab (Japan)에서 얻었다. HCC1569 유방암 세포계통은 ATCC (American Type CultureCollection, Manassas, VA)로부터 얻었으며, 하위계통(sub-line) HCC1569X2는 생쥐에서 최적 성장을 위해 Genentech에서 생성되었다. 두 세포계통 모두 FACS와 IHC에 의해 결정된 바와 같이 HER2를 발현한다. 상기 모델을 만들기 위하여, 암컷 C.B-17 SCID-베이지 마우스 (Charles River Laboratories) 각각에 흉부 유방 지방 패드 부위에서 HBSS/매트리겔 (1:1 비율)에 현탁된 5백만 HCC1569X2 세포를 접종하였다.
종양의 평균 종양 용적이 100-300 mm3에 도달할 때, 동물을 무작위로 5-10 마리의 마우스 그룹으로 나누고, 꼬리 정맥을 통해 ADCs의 단일 정맥 주사를 하였다(0일차로 지칭함). 연구 기간 동안 마우스의 종양 및 체중을 일주일에 1-2 회 측정했다. 체중 감소가 시작 체중의 20 % 이상인 경우, 마우스를 즉시 안락사시켰다. 종양이 3000mm3에 도달하기 전에 모든 동물을 안락사시켰으며 임박한 궤양의 징후를 보였다. 종양 용적은 캘리퍼를 사용하여 2 차원 (길이 및 폭)으로 측정하였고, 종양 용적은 다음 공식을 사용하여 계산하였다: 종양 크기 (mm3)　=　0.5 x (길이 x 폭 x 폭). 이 테스트의 데이터는 도 12 및 13에 나타낸다.
실시예 11 시노몰구스 원숭이에서 독성학
항-HER2 hu7C2 LC:K149C-LD-51 시노몰구스 원숭이 독성학 연구
시노몰구스 원숭이에서 시험적 용량-단계적 확대 독성학 연구를 시행하였다. 동물들은 1 mg/kg의 용량 수준에서 시작하여, 2 또는 4회 q3w의 느린 IV 볼루스 용량의 항 HER2 hu7C2 LC:K149C-LD-51을 투여 받았다. 복용량 확대 단계는 2 ~ 3 주 시차로 진행되었다. 이 연구 안은 하기 표 7에 요약된다.
표 7: 항-HER2-LD51 LC:K149C 시노몰구스 원숭이 독성학 연구의 기획
Figure pct00057
독성은 임상 및 안과 검사 및 임상 병리 (혈액학, 혈청 화학, 응고 및 소변 검사, 연구 기간 중 거의 매주)로 평가했다. 육안 및 현미경적 조직 병리학은 최종 투여 후 3 주차에 부검 채취 조직에서 수행되었다.
16 mg/kg의 항 HER2 hu7C2 LC:K149C-LD-51을 4회 q3w 투여받은 동물에서 조직학적 소견은 일반적으로 16 mg/kg의 2 회 접종 후에 관찰된 것보다 더 심했다. 신장 관상 퇴행증 (경증-중등도), 림프구 결핍 (흉선, 비장, 림프절, 경증-중등도), 피부 색소 침착/각화증 (경증), 소장 점막 (경증), 경미한 폐의 폐포 변성/섬유화 (경증) 관찰되었다.
시노몰구스 원숭이에서 항-HER2 hu7C2 LC:K149C-LD-51의 주요 표적 장기는 신장, 골수, 피부, 폐, 림프구 기관 (비장, 흉선, 림프절), 소장 및 눈 (각막)이다. 2X q3w 섭생으로 최대 용인되는 용량은 16 mg/kg이며, 4X q3w 섭생에서 MTD는 8 mg/kg이다.
이들 원숭이에서 항-HER2-CLD-1의 연구는 실행되지 않았다. 그러나, 시노몰구스 원숭이에서 다른 시스테인 조작된 항체에 콘쥬게이트될 때, CLD-1의 2X q3w 용량 MTD는 결정되었다. 항-NaPi2b-CLD-1의 2 q3w 용량 MTD는 0.5 mg/kg이었고, 비-표적화 콘쥬게이트 gD-CLD-1의 것은 0.5 mg/kg이었다. 관찰된 유사한 표적 장기 효과는 독성이 대부분 항원-독립적이고 CLD-1 또는 LD-51에 기인한 것으로 나타났다. CLD-1 콘쥬게이트와 비교하여, LD-51 콘쥬게이트의 증가된 MTD는 CLD-1에 비해 LD-51의 내약성이 개선됨을 나타낸다. 이 테스트의 데이터는 도 12 및 13에 나타낸다.
실시예 12 C-1 및 DM-2 렛(rat) 독성학 연구
C-1 (PBD 비스 알킬레이터) 및 DM-2 (PBD 모노알킬레이터) 자유(free) 약물을 비교하기 위하여 렛에서 실험적 단일 용량 독성학 연구가 실행되었다. 동물들은 C-1, DM-2, 또는 비이클의 단일 IV 용량을 투여받고, 7 일간의 회복 기간 동안 모니터링되었다. 이 연구 안은 하기 표 8에 요약된다.
표 8: C-1 및 DM-2 자유 약물의 렛 독성학 연구안
Figure pct00058
독성은 임상 관찰 및 임상 병리학 (투여 후 72 시간 및 168 시간에 혈액학 및 임상화학 요법)에 의해 평가되었다. 일반적으로, 결과는 C-1의 용량 수준의 10 배에서 DM-2와 유사했다. C-1의 경우, 72 시간 시점에서 모든 투여량에서 망상 적혈구의 용량 의존적인 감소가 관찰되었으며, 투여후 168 hrs 시점에서 0.05 및 0.1 mg/kg 군으로 회복되었다. 0.2 mg/kg 용량에서 간과 신장의 독성을 나타내는 임상 병리학적 변화가 관찰되었다. 0.05와 0.1 mg/kg의 투여량은 임상 증상이 없이, 내약성이 있다.
DM-2의 0.5 및 1 mg/kg 용량 수준은 내약성이 우수하여, 임상 증상이나 조기 안락사가 발생하지 않았다. 2 mg/kg을 투여한 동물은 2 일차부터 4 일차까지 몸무게의 약 14 %를 잃었고, 4 일차 빈사 상태에서 안락사되었다. 투여 후 72 시간까지 DM-2의 모든 투여량에서 망상 적혈구의 용량-의존적 감소가 관찰되었고, 투여 후 168 시간까지 0.5 및 1 mg/kg 군으로 회복되었다. 2 mg/kg 용량에서 간과 신장의 독성을 나타내는 임상 병리학적 변화가 관찰되었다.
요약하면, C-1 또는 DM-2의 단일 투여로 인한 독성 프로파일은 유사하였으며, C-1은 DM-2의 약 10 배의 효능을 보였다. 두 검사 물품의 주요 표적 장기는 골수, 신장 및 간이었다. C-1과 DM-2의 MTD는 각각 렛에서 단일 IV 용량으로 0.1 및 1 mg /kg이었다. 이 연구의 결과는 C-1에 비해 DM-2의 내약성이 개선되었음을 나타낸다.
실시예 13 HER2 양성 유방암 세포계통 SK-BR-3 및 KPL-4에서 시험관내 활성
96-웰 플레이트에 세포를 도말하였고, 37o C, 5% CO2.가습된 대기에서 하룻밤동안 흡착되도록 두었다.　 그 다음 배지를 제거하였고, 다양한 농도의 각 약물이 함유된 새로운 배양 배지로 대체되었다. 　　약물 투여 후 5일 차 시점에 웰에 Cell Titer-Glo (Promega Corp.)를 추가하고, EnVision MultilabelPlate Reader (PerkinElmer)를 이용하여 발광 신호를 측정하였다. 테스트된 화합물은 항-HER2 hu7C2 LC:K149C CLD-7; 항-HER2 hu7C2 LC:K149C CLD-8; 항-HER2 hu7C2 LC:K149C CLD-9; 그리고 항-HER2 hu7C2 LC:K149C LD-51이었다.
Figure pct00059
이 테스트의 데이터는 아래 도 14 및 표 9에 나타낸다.
표 9
Figure pct00060
실시예 14 생체내 마우스 동종이식편 효과
항-Her2 항체-약물 콘쥬게이트(ADCs)의 효과는 MMTV-HER2 토대 #5 (뮤린 유방 종양)의 마우스 동종이식편 모델에서 조사되었다. MMTV-HER2 토대 #5 (Fo5) 모델 (Genentech에서 개발됨)은 유전자삽입 마우스 모델이며, 이 모델은 뮤린 유방 종양 바이러스 프로모터 (MMTV-HER2)의 전사 제어하에 유방 상피에서 인간 HER2 유전자가 과다발현된다. 상기 과다발현은 인간 HER2 수용체를 과다발현시키는 유방 종양의 자발적 발달의 원인이다. 이들 토대(founder) 동물중 한 마리 (토대 #5 [Fo5])의 유방 종양은 종양 단편의 연속적인 이식에 의해 FVB 마우스 (Charles River Laboratories)에서 번식되었다.
효과 연구를 위하여, 상기 Fo5 유전자삽입 유방 종양을 대략적으로 15-30 mm3 크기의 종양 단편으로 암컷 nu/nu 마우스 (Charles River Laboratories; Hollister, CA)의 흉부 유방 지방 패트에 외과적으로 이식하였다. 상기 동종이식편 종양이 100-300 mm3의 평균 종양 체적 (0일차 시점이라고 함)에 도달할 때, 동물을 무작위로 7 마리의 마우스 그룹으로 나누고, 상기 ADCs을 단일 정맥 주사를 하였다. 연구 기간 동안 마우스의 종양 및 체중을 일주일에 1-2 회 측정했다. 체중 감소가 시작 체중의 20 % 이상인 경우, 마우스를 즉시 안락사시켰다. 종양이 3000mm3에 도달하기 전에 모든 동물을 안락사시켰으며 임박한 궤양의 징후를 보였다. 종양 용적은 캘리퍼를 사용하여 2 차원 (길이 및 폭)으로 측정하였고, 종양 용적은 다음 공식을 사용하여 계산하였다: 종양 크기 (mm3)　=　0.5 x (길이 x 폭 x 폭). 이 연구의 데이터는 도 15에 나타낸다. 상기 4개의 항-Her2 ADCs중에서, 오직 항-Her2-LD-51 만이 비이클 집단과 비교하였을 때, 명백한 항-종양 활성을 보여주었다. 항-Her2-LD-51의 효과는 대응하는 비-표적 대조 항-CD22-LD-51이 종양 성장에서 효과가 없었기 때문에 표적-의존성이었다.
실시예 15 DM-4, C-1, C-2, C-3, CLD-2, CLD, 3, CLD-5 및 CLD-6의 합성
C-1, C-2, C-3 및 CLD-2를 만드는 합성 과정은 다음의 문헌에서 찾아볼 수 있을 것이다: C-1: Journal of Medicinal Chemistry　(2004),　47(5),　1161-1174; C-2:　Bioorganic & Medicinal Chemistry Letters　(2000),　10(16),　1845-1847 or　PCT Int. Appl.　 WO　2000012508; C-3 : PCT Int. Appl. WO　2015155753; 그리고　CLD-2 US20160074527.
CLD-7의 합성
계획
Figure pct00061
실험
Figure pct00062
트리포스겐 (60.6 mg, 0.200 mmol)의 DCM (15 mL) 용액에 피리딘 (129 mg, 1.63 mmol) 및 2 (55.3 mg, 0.220 mmol)의 DCM (15 mL) 용액을 추가하였다. 상기 혼합물은 0 ℃에서 10 분 교반되었고, TLC (석유 에테르 안에 25% EtOAc, Rf = 0.5)에서 출발 물질이 소모되었음이 나타났다. 상기 혼합물은 농축 건조시키고, DCM (10 mL)에 용해시키고, 화합물 1 (150.0 mg, 0.200 mmol) 및 Et3N (103.3 mg, 1.02 mmol)의 DCM (15 mL) 용액에 추가하였다. 상기 혼합물은 0 ℃에서 1 시간 동안 교반되었다.　TLC (석유 에테르 안에 25% EtOAc)에서 출발 물질이 소모되었음이 나타났다. 상기 혼합물은 농축되고, 상기 미정제 산물은 실리카 (석유 에테르에서 0-33% EtOAc) 상에서 섬광 컬럼 크로마토그래피에 의해 정제되었다. 이는 농축되어, 황색 고체의 3 (180.0 mg, 81%)을 얻었다. LCMS (5-95AB/1.5분): RT = 1.014 분, [M+H]+1007.1.
Figure pct00063
HOAc (5.0 mL, 87 mmol)의 THF (3.0 mL) 및 물 (3.0 mL)의 혼합 용액에 3 (150.0 mg, 0.1500 mmol)을 추가하였다. 상기 반응 용액은 40 ℃에서　16 h 동안 교반되었다. 상기 용액을 농축시켜 용매를 제거하고, 상기 잔유물은 EtOAc (100 mL)로 희석시키고, H2O (30 mL × 4)로 세척하고, Na2SO4에서 건조되고, 여과되고, 그리고 농축되었다. 잔유물은 prep-TLC (DCM에서 5% MeOH, R f = 0.5)에 의해 정제되어, 황색 고체의 4 (100 mg, 75%)를 얻었다. LCMS (5-95AB/1.5분): RT = 0.776 분, [M+H]+893.2.
Figure pct00064
DMP (22.8 mg, 0.0500 mmol)의 무수 DCM (10.0 mL) 용액에 화합물 4 (40.0 mg, 0.0400 mmol)를 추가하였다. 상기 반응 혼합물은 18 ℃에서 1 h 동안 교반되었다. 상기 혼합물은 DCM (50 mL)로 희석되었고, 여과되었다. 여과물은 Na2SO3 (30 mL × 3)로 세척되었고, Na2SO4상에서 건조되었고, 여과되고, 그리고 진공에서 농축되었다. 상기 잔유물은 prep-TLC (DCM안에 5% MeOH, R f = 0.5)에 의해 정제되어, 황색 고체의　CLD-7 (GNT_B343_867-1) (20 mg, 50%)를 얻었다. LCMS (5-95AB/1.5분): RT = 0.761 분, [M+H]+ 891.0에서 원하는 산물의 96%를 나타내었다. HPLC (10-80AB/15분): RT = 8.40 분, 원하는 산물의 94.9%를 나타내었다.
CLD-8의 합성
계획
Figure pct00065
실험
Figure pct00066
화합물 1 (40.0 mg, 0.190 mmol)의 THF (5.0 mL)/ 물 (5.0 mL) 용액에 TCEP (277.9 mg, 0.970 mmol)를 추가하였다. 상기 반응 혼합물은 16 ℃에서 48 h 동안 교반되었다. 상기 용액은 H2O (10 mL)로 희석되었고, DCM (20 mL × 3)로 추출되었다. 복합된 유기 층들은 Na2SO4에서 건조되고, 여과되고, 그리고 다음 단계에 바로 이용되었다.
Figure pct00067
화합물 2 (40.0 mg, 0.380 mmol)의 DCM (25 mL) 및 MeOH (25 mL) 혼합 용액에 화합물 3 (238.3 mg, 0.770 mmol)을 추가하였다. 상기 반응 용액은 16 ℃에서 16 h 동안 교반되었고, MnO2 (500 mg)이 추가되었고, 상기 혼합물은 0.5 h 동안 교반되었다. 상기 혼합물은 여과되고, 여과물은 진공에서 농축되었다. 상기 잔유물은 MeOH (5 mL)로 희석되고, 다시 여과되어 남아있는 대부분의 화합물 3을 제거하였고, 여과액은 농축되고, prep-TLC (석유 에테르 안에 33% EtOAc, R f =0.5)에 의해 정제되어, 무색 오일의 화합물 4 (50 mg,0.157 mmol, 40.8% 수율)를 얻었다. LCMS (5-95AB/1.5분): RT = 0.805 분, [M+H]+ 258.9 는 81　%의 DP를 나타내었다.
Figure pct00068
무수　DCM (8 mL)안에 트리포스겐 (64.6 mg, 0.220 mmol) 및 4 Å MS (30 mg)의 교반된 혼합물에 화합물 5 (160.0 mg, 0.220 mmol) 및 트리에틸아민 (110.1 mg, 1.09 mmol)의 무수 DCM (8 mL) 용액을 천천히 추가하였다. 상기 반응 혼합물은 16 ℃에서 1 h 동안 교반되었고, 상기 혼합물은 진공에서 농축되었고 용매를 제거하였다. 무수 DCM (10.0 mL)에 용해되었고, 트리에틸아민 (65.8 mg, 0.650 mmol)이 추가되었고, 화합물 4 (50.0 mg, 0.190 mmol)의 무수 DCM (5.0 mL) 용액이 이어서 추가되었다. 상기 반응 혼합물은 16 ℃에서 16 h 동안 교반되었다. 상기 혼합물은 여과되고, 여과액은 농축되고, prep-TLC (DCM안에 10% MeOH, R f = 0.8)에 의해 정제되어, 황색 고체의 화합물 6 (100 mg, 0.0814 mmol, 37.6% 수율)을 얻었다. LCMS (5-95AB/1.5분): RT = 1.119 분, [M+H]+ 1019.4에서 원하는 산물의 83%를 나타내었다.
Figure pct00069
화합물 6 (100.0 mg, 0.1000 mmol)의 아세트산 (3.0 mL), THF (2.0 mL) 및 물 (1.0 mL) 혼합 용액은 16 ℃에서 48 h 동안 교반되었다. 상기 용액은 진공에서 농축되었고, 상기 잔유물은 DCM (30 mL)으로 희석되었고, H2O (20 mL × 3)로 세척되고, 건조되고, 여과되고, 그리고 농축되었다. 상기 잔유물은 prep-TLC (DCM 안에 10% MeOH, R f =0.5)에 의해 정제되어, 황색 고체의 화합물 7 (55 mg, 0.0602 mmol, 61.3% 수율)을 얻었다. LCMS (5-95AB/1.5분): RT = 0.892 분, [M+H]+ 905.2에서 원하는 산물의 99%를 나타내었다.
Figure pct00070
무수　DCM (6.0 mL)에서 화합물 7 (55 mg, 0.060 mmol) 및 4 Å MS (30 mg)의 혼합물에 DMP (44.0 mg, 0.104 mmol)를 추가하였다. 상기 반응 혼합물은 16 ℃에서 1 h 동안 교반되었다. 상기 혼합물은 EtOAc (30 mL)로 희석되었고, 포화된 Na2SO3 용액 (30 mL)으로 담금질되었으며, 그리고 EtOAc (30 mL × 3)로 추출되었다. 상기 복합된 유기 층들은 Na2SO4에서 건조되고, 여과되고, 그리고 농축되었다. 상기 잔유물은 prep-TLC (DCM 안에 10% MeOH, R f = 0.5)에 의해 정제되어, 옅은 황색 고체의 CLD-8 (GNT_B343_866-1) (42 mg, 77% 수율)을 얻었다. LCMS (5-95AB/1.5분): RT = 0.868　분, [M+H]+ 903.2에서 원하는 산물의 98%를 나타내었다.
CLD-9의 합성
계획
Figure pct00071
실험
Figure pct00072
화합물 2 (2383 mg, 7.68 mmol)의 DCM (10 mL) /MeOH (10 mL) 용액에 화합물 1 (300 mg, 3.84 mmol)을 첨가하였다.　 상기 용액은 16 ℃에서 2 h 동안 교반되었다.　 MnO2 (5.0 g)는 상기 용액에 추가되었고, 상기 혼합물은 16 ℃에서 30　분 동안 교반되었다.　　상기 혼합물은 여과되고, 여과액은 진공에서 농축되었고, 상기 잔유물은 MeOH (15 mL)로 세척되었고, 여과되고 그리고 농축되었다.　 상기 미정제 산물은 실리카 (DCM)상에서 　섬광 컬럼 크로마토그래피에 의해 정제되어, 오일의 화합물 3 (800 mg, 3.25 mmol, 84.8% 수율)을 얻었다. 　 LCMS (5-95AB/1.5분): RT = 0.608 분, [M+H]+ 232.8.
Figure pct00073
무수　 DCM (5.0 mL) 안에 화합물 3 (65.0 mg, 0.280 mmol) 및 피리딘 (88.5 mg, 1.12 mmol)은 0 ℃에서 무수 DCM (5.0 mL)안 트리포스겐 (41.5 mg, 0.140 mmol) 용액에 점적 추가되었다. 상기 용액은 0 ℃에서 10 분 동안 교반되었고, 상기 혼합물은 농축되어, 백색 고체의 미정제 화합물 4 을 얻었고, 이는 다음 단계에 이용되었다.
Figure pct00074
화합물 5 (4000 mg, 5.84 mmol)의 무수 DCM (80 mL)용액에 이미다졸 (2.38 g, 35.1 mmol)이 추가되었고, 이어서 TBSCl (1.761 g, 11.7 mmol)이 추가되었다. 상기 반응 혼합물은 40 ℃에서　3 h 동안 교반되었다.　상기 혼합물은 DCM (100 mL)으로 희석되었고, H2O (50 mL × 3)로 세척되고, Na2SO4상에서 건조되고, 여과되고, 그리고 농축되었다.　상기 잔유물은 실리카 (DCM안에 0 - 3.3 % MeOH)상에서 섬광 컬럼 크로마토그래피에 의해 정제되어, 옅은 황색 고체의 화합물 6 (2.50 g, 3.13 mmol, 53.6% 수율)을 얻었다.
LCMS (5-95AB/1.5분): RT = 0.945 분, [M+H]+ 799.2.
Figure pct00075
화합물 6 (2.30 g, 2.88 mmol)의 무수 DCM (100 mL) 용액에 DMP (4.88 g, 11.52 mmol)를 추가하였다.　 상기 반응 혼합물은 10 ℃에서 2　h 동안 교반되었다.　 여과되고, 여과액은 EtOAc (600 mL)로 희석하고, sat. Na2SO3 용액 (200 mL), sat. Na2SO3/ NaHCO3 용액 (v/v=1:1, 200 mL) 및 염수로 담금질되었다. 유기 층은 Na2SO4에서 건조되고, 여과되고, 그리고 농축되어 미정제 오일을 얻고, 이를 tBuOH (40 mL, 2.88 mmol)/물 (20 mL)에 용해하고, 그 다음 10 ℃에서 2-메틸-2-부텐 (30 mL, 2.88 mmol)　및 나트륨 디히드로겐포스페이트 (1.382 mg, 11.5 mmol)로 연속적으로 처리하였다. 　 10 ℃에서 0.5 h 동안 교반시킨 후, 상기 반응 혼합물은 아염소산나트륨 (1.56 g, 17.3 mmol)으로 10 oC에서 1 h 동안 교반시켰다.　 혼합물은 EtOAc (300 mL)로 희석하고,　물 (100 mL) 및 염수 (100 mL)로 세척하였다. 유기 층은 Na2SO4상에서 건조되고, 여과되고, 진공에서 농축되어, 미정제 산물인 화합물 7 (2.0 g, 2.46 mmol, 85.5% 수율)을 얻었다. LCMS (5-95AB/1.5분): RT = 0.929 분, [M+H]+ 813.2.
Figure pct00076
화합물 7 (2.0 g, 2.46 mmol)의 DMF (20 mL)　용액에 K2CO3 (680 mg, 4.92 mmol)를 추가하고, 이어서 MeI (3.95 g, 27.8 mmol)를 추가하였다. 상기 반응 혼합물은 10 ℃에서 1 h 동안 교반되었다.　 상기 혼합물은 EtOAc (200 mL)로 희석시키고, 염수 (40 mL × 5)로 세척한 후, 그 다음 Na2SO4상에서 건조되고, 여과되고, 그리고 진공에서 농축되어 황색 오일의 화합물 8 (2.0 g, 2.42 mmol, 98.3% 수율)을 얻었다. LCMS (5-95AB/1.5분): RT = 0.975 분, [M+H]+ 827.2.
Figure pct00077
EtOH (20 mL)/물 (10 mL) 안에 화합물 8 (2.0 g, 2.42 mmol)　및 철 (1.35 g, 24.2 mmol) 혼합물에 NH4Cl (2.59 g, 48.7 mmol)를 추가하였다.　 상기 반응 혼합물은 70 ℃에서 2 h 동안 교반되었다.　상기 혼합물은 여과되고, 여과물은 진공에서 농축되었어 EtOH를 제거하였고, 물 슬러리는 EtOAc (50 mL × 3)로 추출되었다. 상기 복합된 EtOAc 층은 Na2SO4 상에서 건조되고, 여과되고, 농축되고, 그리고 　실리카 (DCM 안에 3-5% MeOH, Rf = 0.5) 상에서 섬광 컬럼 크로마토그래피에 의해 정제되어, 황색 고체의 화합물 9 (1.5 g, 1.89 mmol, 78.1% 수율)를 얻었다. LCMS (5-95AB/1.5분): RT = 0.845 분, [M+H]+ 735.3.
Figure pct00078
화합물 9 (100 mg, 0.140 mmol) 및 DIEA (68.8 mg, 0.680 mmol)의　DCM (15 mL) 용액에 화합물 4 (80.2 mg, 0.270 mmol)를 추가하고, 상기 반응물은 0 ℃에서 1 h 동안 교반되었다. 상기 혼합물은 농축되고, 실리카 (DCM 안에 0-5% MeOH, Rf = 0.5)상에서 섬광 컬럼 크로마토그래피에 의해 정제되어, 황색 오일의 화합물 10 (130 mg, 0.117 mmol, 85.8% 수율)을 얻었다.　 LCMS (5-95AB/1.5분): RT = 0.985 분, [M+H]+ 993.4
Figure pct00079
아세트산 (6.0 mL, 105 mmol)의 THF (6.0 mL)/물 (3.0 mL) 용액에 화합물 10 (130 mg, 0.130 mmol)을 추가하였다. 상기 반응 용액은 40 ℃에서 24 h 동안 교반되었다.　 상기 용액은 진공에서 농축되어 용매를 제거하고, 상기 잔유물은 EtOAc (30 mL)로 희석되고, H2O (10 mL × 4)로 세척하고, Na2SO4에서 건조되고, 여과되고, 그리고 진공에서 농축되었다. 상기 잔유물은 prep-TLC (DCM 안에 8 % MeOH, R f = 0.5)에 의해 정제되어, 황색 오일의 화합물 11 (60 mg, 0.0683 mmol, 52.2% 수율)을 얻었다. LCMS (5-95AB/1.5분): RT = 0.763 분, [M+H]+ 879.0
Figure pct00080
화합물 11의 무수 DCM (5 mL) 용액에 DMP (17.4 mg, 0.0400 mmol)를 첨가하였다. 상기 반응 혼합물은 18 ℃에서 1 h 동안 교반되었다.　상기 혼합물은 DCM (50 mL)로 희석되었고, 여과되었다. 여과물은 Na2SO3 (30 mL × 3)로 세척되었고, Na2SO4상에서 건조되었고, 여과되고, 그리고 진공에서 농축되었다. 상기 미정제 산물은 prep-TLC (DCM안에 5% MeOH, Rf=0.5)에 의해 정제되어, 옅은 황색 고체인 CLD-9 (GNT_B343_865-1) (12.2 mg, 0.0136 mmol, 39.9% 수율)를 얻었다. LCMS (5-95AB/1.5분): RT = 0.739 분, [M+H]+ 877.2
DM-4의 합성
계획
Figure pct00081
실험
Figure pct00082
화합물 1 (3.0 g, 14.9 mmol)의 DCM (80 mL) 용액에 DMP (9.48 g, 22.4 mmol)를 추가하였다. 상기 혼합물은 0 oC에서 1 h 동안 교반되었고, Na2S2O3 (50 mL)/ NaHCO3 (50 mL)　및 MTBE (130 mL)로 희석되었다. 상기 유기 상은 물 (60 mL x 3)로 세척되고, 농축되어 무색 오일의 화합물 2 (2.9 g, 14.6 mmol, 97.6% 수율)을 얻었다.
Figure pct00083
화합물 2 (2.9 g, 14.6 mmol) 및 디메틸 (1-디아조-2-옥소-프로필) 포스포네이트의 MeOH (20 mL) 용액에 K2CO3 (6.03 g, 43.7 mmol)를 추가하였다. 상기 반응 혼합물은 20 ℃에서 1 h 동안 교반된 후, 진공에서 농축되었고, 상기 잔유물은 실리카 (PE 안에 10% EtOAc) 상에서 섬광 컬럼 크로마토그래피에 의해 정제되어, 무색 오일의 산물 화합물 3 (2.0 g, 10.24 mmol, 70.4% 수율)을 얻었다.
Figure pct00084
화합물 3 (2.0 g, 10.2 mmol) 및 화합물 4 (5.4 g, 15.4 mmol)의 DMF (50 mL) 용액에 Cs2CO3 (3.97 g, 20.5 mmol)　및 Pd(PPh3)4 (785 mg, 1.54 mmol)를 추가하였다. 상기 혼합물은 95 oC에서 N2 하에 1 h 동안 교반되었다. 상기 혼합물은 농축되고, 실리카 (PE 안에 20% EtOAc) 상에서 섬광 컬럼 크로마토그래피에 의해 정제되어, 무색 오일의 산물 화합물 5 (1.60 g, 2.44 mmol, 23.8% 수율)를 얻었다.
LCMS (5-95AB/1.5분): RT = 0.994 분, [M+H-56]+410.0.
Figure pct00085
화합물 5 (2.0 g, 4.3 mmol)의 MeOH (10 mL) 용액에 Pd/CaCO3 (200.0 mg, 21.5 mmol)를 추가하였다. 상기 혼합물은 30 ℃에서 1 h 동안 H2 (1 atm)하에서 교반되었다. 상기 혼합물은 여과되고, 여과액은 농축되어, 미정제 산물을 얻었고, 이는 실리카 (PE 안에 10% EtOAc) 상에서 섬광 컬럼 크로마토그래피에 의해 정제되어, 백색 고체의 산물 화합물 6 (1.0 g, 2.14 mmol, 49.8% 수율)을 얻었다. LCMS (5-95AB/1.5분): RT = 0.983 분, [M+Na]+490.1.
Figure pct00086
화합물 6 (0.90 g, 1.92 mmol)의 EtOAc (10 mL)　용액에 HCl/EtOAc (6.0 mL)을 추가하였다. 상기 혼합물은 25 ℃에서 1 h 동안 교반된 후, 농축되어, 백색 고체의 미정제 산물 화합물 7 (0.77 g, 1.90 mmol, 99% 수율)을 얻었다.
Figure pct00087
화합물 7 (0.77 g, 1.91 mmol)의 MeOH (30 mL)　용액에 NaOMe (1.03 g, 19.06 mmol)를 추가하였다. 상기 혼합물은 30 ℃에서 2 h 동안 교반되었다. 상기 혼합물은 농축되고, 실리카 (PE 안에 25-75% EtOAc) 상에서 섬광 컬럼 크로마토그래피에 의해 정제되어, 황색 오일의 산물 화합물 8 (0.60 g, 1.79 mmol, 93.8% 수율)을 얻었다. 1H NMR (400 MHz, CDCl3)δ ppm 1.89 - 2.11 (m, 3 H) 2.18 - 2.33 (m, 1 H) 3.59 (dt, J = 12.0, 7.6 Hz, 1 H) 3.80 (dt, J = 11.5, 5.8 Hz, 1 H) 3.90 - 3.96 (m, 1 H) 3.97 (s, 3 H) 5.19 (s, 2 H) 5.86 (dd, J = 10.0, 4.8 Hz, 1 H) 6.53 (dd, J = 10.0, 2.0 Hz, 1 H) 6.69 (s, 1 H) 7.29 - 7.35 (m, 1 H) 7.36 - 7.41 (m, 2 H) 7.42 - 7.48 (m, 2 H) 7.62 (s, 1 H)
Figure pct00088
화합물 8 (580 mg, 1.73 mmol)의 DCM (50 mL) 용액에 TiCl4 (656 mg, 3.46 mmol)를 추가하였다. 상기 혼합물은 30 ℃에서 12 h 동안 교반되었다. 상기 혼합물은 HCl (1.0 M, 20 mL)　및 EtOAc (100 mL)에 추가되었다. 유기 층은 물 (50 mL x 3)로 세척되고, 농축되어, 황색 고체의 미정제 산물 화합물 9 (250 mg, 0.44 mmol, 25.3% 수율)을 얻었다.
Figure pct00089
화합물 9 (50.0 mg, 0.20 mmol)의　DMF (5.0 mL) 용액에 K2CO3 (42.26 mg, 0.31 mmol) 　및　 1,5-디요드펜탄 (333 mg, 1.0 mmol)을 추가하였다. 상기 반응 혼합물은 90 ℃에서 1 h 동안 교반되었다. 상기 반응 혼합물은 실리카 컬럼 크로마토그래피 (석유 에테르안에 0-50% EtOAC)에 의해 정제되어, 오일의 화합물 10 (60 mg, 0.178 mmol, 87.6% 수율)을 얻었다. LCMS (5-95AB/1.5분): RT = 0.765 분, [M+H]+332.0
Figure pct00090
화합물 10 (60.0 mg, 0.18 mmol)의 DCM (6.0 mL) 용액에 트리에틸아민 (55 mg, 0.54 mmol)　및 MsCl (41 mg, 0.36 mmol)를 추가하였다. 상기 혼합물은 35 ℃에서 1 h 동안 교반되고, EtOAc (80 mL)로 희석되고, 물 (50 mL x 3)로 세척되었다. 유기 층은 농축되어, 무색 오일의 미정제 산물 (70 mg)을 얻었다. LCMS (5-95AB/1.5분): RT = 0.679 분, [M+H]+410.0
Figure pct00091
화합물 11 (70 mg, 0.17 mmol) 및 화합물 12 (87 mg, 0.19 mmol)의 DMF (5.0 mL) 용액에 K2CO3 (47 mg, 0.34 mmol) 및 KI (5.68 mg, 0.030 mmol)를 추가하였다. 상기 혼합물은 90 ℃에서 3 h 동안 교반되고, prep-HPLC (HCOOH)에 의해 정제되어, 백색 고체의 생산물 화합물 13 (70 mg, 0.084 mmol, 49.2% 수율)을 었다. LCMS (5-95AB/1.5분): RT = 0.845 분, [M+H]+774.4.
Figure pct00092
TFA (1.9 mL)　및 물 (0.10 mL) 안에 화합물 13 (50 mg, 0.060 mmol)의 용액은 35 ℃에서 1 h 동안 교반되었다. 상기 혼합물은 sat.NaHCO3 (30 mL)와 EtOAc (50 mL) 사이에서 분할되었다. 유기 층은 물 (30 mL x 2) 및 염수 (30 mL)로 세척되었고, Na2SO4상에서 건조되었다. 농축되고, prep-TLC (DCM 안에 5% MeOH, Rf = 0.5)에 의해 정제되어 DM-5 (20 mg, 0.034 mmol, 53.1% 수율),　백색 고체를 얻었다. LCMS (5-95AB/1.5 분): RT = 0.825 분, [M+H]+572.1. 1H NMR (400 MHz, CDCl3)δppm 1.65 - 1.75 (m, 3H) 1.88 - 2.10 (m, 8H) 2.19 - 2.31 (m, 1H) 2.82 - 3.29 (m, 2H) 3.60 (dt, J = 11.9, 7.5 Hz, 1H) 3.81 (dt, J = 11.6, 5.9 Hz, 1H) 3.86 - 3.91 (m, 1H) 3.94 (s, 6H) 3.97 (br. s., 1H) 4.01 - 4.18 (m, 4H) 4.30 (s, 2H) 5.19 (d, J = 10.6 Hz, 2H) 5.89 (dd, J = 9.9, 5.1 Hz, 1H) 6.53 - 6.63 (m, 1H) 6.66 (s, 1H) 6.81 (s, 1H) 7.51 (s, 1H) 7.59 (s, 1H) 7.68 (d, J = 4.4 Hz, 1H)
CLD-3의 합성
계획
Figure pct00093
실험
Figure pct00094
0℃에서 화합물 6 (5.00 g, 37.83 mmol) 및 Et3N (11.49 g, 113.50 mmol)의 DCM (100 mL) 용액에 MsCl (8.97 g, 78.32 mmol)을 점적 추가하였다. 25℃에서 2 h 동안 N2하에 교반된 후, 상기 반응 혼합물을 얼음물 (200 mL)에 붓고, DCM (100 mL x 2)로 추출하였다. 상기 유기 상은 염수로 세척되고, Na2SO4 에서 건조되고, 진공에서 농축되었어, 황색 오일의 미정제 산물 (7.0 g, 95%)을 얻었다. 아세톤/물 (50 mL/50 mL)안에서 KSAc (6.59 g, 57.66 mmol)와 혼합된 후, 25oC에서 10 h 동안 교반되었다. 상기 반응 혼합물은 농축되고, 실리카 (PE/ EtOAc =100/1~40/1)상에서 정제되어, 황색 오일의 순수 화합물 8 (1.0 g, 14.6%)을 얻었다.
Figure pct00095
0℃, N2하에서 THF (20 mL) 안에 LiAlH4 (692 mg, 18.23 mmol)의 현탁액에 화합물 8 (867 mg, 4.56 mmol)의 THF (5 mL) 용액을 추가하였다. 상기 반응 혼합물은 75℃에서 환류하에서 2 h 동안 교반되었다. 0℃에서 상기 반응 혼합물은 EtOAc (3.0 mL) 및 HCl 용액 (2.0 M, 5 mL)에 의해 담금질되었다. 상기 반응 혼합물은 다음 단계에 바로 이용되었다.
Figure pct00096
25℃에서 화합물 10 (2.84 g, 9.12 mmol)의 DCM/MeOH (25 mL/25 mL) 용액에 화합물 9 (상기 단계로부터)의 용액을 추가하였다. 상기 혼합물은 25℃에서 10 h 동안 교반되었다. 상기 반응 혼합물에 MnO2 (3.4 g, 39.6 mmol)이 추가되었고, 여과되었다. 여과액은 진공에서 농축되었고, 실리카 (DCM) 및 SFC 상에서 섬광 컬럼 크로마토그래피에 의해 정제되어, 황색 오일의 화합물 2 (0.80 g, 67.4%), 황색 오일을 얻었다. LCMS (5-95 AB, 1.5 분): RT = 1.020 분, M+H+ = 260.9.
Figure pct00097
0℃에서 트리포스겐 (46 mg, 0.16 mmol)의 DCM (3.0 mL) 용액에 화합물 2 (100 mg, 0.38 mmol) 및 피리딘 (30 mg, 0.38 mmol) 용액을 추가하였다. 상기 반응 혼합물은 0℃에서 15 분 동안 교반되었고, 화합물 1 (280 mg, 0.29 mmol) 및 피리딘 (30 mg, 0.38 mmol)의 DCM (4.0 mL) 용액이 26℃에서 점적 추가되었다. 상기 반응 혼합물은 26℃에서 2 h 동안 교반되었다. 상기 용매는 제거되었고, 상기 잔유물은 prep-TLC (용매: 석유 에테르안에 30% EtOAc)에 의해 정제되어, 황색 포말의 화합물 3 (300 mg, 82.4%)을 얻었다. LCMS (5-95AB/1.5분): RT =1.248 분, [M+H]+1239.5
Figure pct00098
26℃에서 화합물 3 (312 mg, 0.24 mmol)의 THF/H2O (4 mL/4 mL) 용액에 HOAc (6.0 mL)를 추가하였다. 상기 반응 혼합물은 26℃에서 24 h 동안 교반된 후, EtOAc (20 mL)로 희석된 후, 물 (2 x 10 mL), sat. aq. NaHCO3 (15 mL) 및 염수 (15 mL)로 세척되었다. 건조되고, 농축되고 그리고 실리카 (DCM 안에 0-5% MeOH) 상에서 섬광 컬럼 크로마토그래피에 의해 정제되어, 황색 포말의 화합물 4 (240 mg, 97.1%)를 얻었다. LCMS (5-95AB/1.5분): RT = 0.876분, [M+H]+ 1011.3.
Figure pct00099
0℃에서 화합물 4 (101 mg, 0.10 mmol)의 DCM (5.0 mL) 용액에 DMP (125 mg, 0.29 mmol)가 추가되었다. 상기 반응 혼합물은 26℃에서 2 h 동안 교반되었다. 상기 반응은 sat. 용액 NaHCO3/Na2SO3 (2.0 mL/2.0 mL)에 의해 담금질되었고, DCM (3 x 5 mL)로 추출되었다. 복합된 유기 층은 NaHCO3/Na2SO3 (2 mL/2 mL), 염수 (5 mL)에 의해 세척되고, 건조되고 그리고 농축되었다. 상기 잔유물은 prep-TLC (DCM/MeOH=15:1)에 의해 정제되어, 황색 포말의 화합물 5 (66 mg, 66.2%)을 얻었다. LCMS (5-95AB/1.5분): RT = 0.815 분, [(M-100)/2+Na]+ 476.1
Figure pct00100
0℃에서 냉각 TFA (물 안에 95%, 2.0 mL)는 화합물 5 (66 mg, 0.06 mmol)에 추가되었다. 상기 반응 혼합물은 0℃에서 30 분 동안 교반되었다. 0℃에서 상기 반응 혼합물은 냉각 sat. aq. NaHCO3 (4.0 mL)에 점적 추가되었고, DCM (4 x 8.0 mL)로 추출되었다. 복합된 유기 층은 염수 (20 mL)로 세척되고, 건조되고 그리고 농축되어, 미정제 산물얻었고, 이는 prep-TLC (DCM안에 6.25% MeOH, Rf = 0.5)에 의해 정제되어, 황색 포말의 CLD-3 (GNT_B343_427-1) (27.4 mg, 47.4%)을 얻었다. 1H NMR (400 MHz, CDCl3) δ 9.21 (s, 1H), 8.38-8.35 (m, 1H), 7.79 (d, J = 8.8　Hz, 1H), 7.69 (d, J = 4.4 Hz, 1H), 7.47 (s, 1H), 7.17 (s, 1H), 6.80 (s, 1H), 6.50 (s, 1H), 5.57 (d, J = 9.2 Hz, 1H), 5.20-5.13 (m, 4H), 4.29-4.25 (m, 5H), 4.14-4.09 (m. 4H), 3.96-3.87 (m, 8H), 3.38 (d, J = 8.0 Hz, 1H), 3.58 (d, J = 8.0 Hz, 2H), 3.44 (s, 1H), 3.16-3.09 (m, 1H), 2.97-2.89 (m, 3H), 2.71-2.67 (m, 1H), 1.95-1.91 (m, 6H), 1.45-1.22 (m, 3H). LCMS (5-95AB/1.5분): RT = 0.750 분, [M+H]+ 889.8.
CLD-5의 합성
(R)-2-((4-니트로페닐)디술파닐)프로필 (11S,11aS)-11-히드록시-7,8-디메톡시-5-옥소-2-(퀴놀린-6-일)-11,11a-디히드로-1H-벤조[e]피롤로[1,2-a][1,4]디아제핀-10(5H)-카르복실레이트
Figure pct00101
2M 옥살일클로라이드 용액 (39 mL, 77.14 mmol) 및 60 mL의 디클로로메탄은 500-mL 플라스크에서 혼합되었고, -78 ℃로 냉각되었다. DMSO (5.77 mL, 77.14 mmol)는 ~2-3분에 걸쳐 주사기를 통하여 추가되었다. 상기 혼합물은 -78 ℃에서 20분 동안 교반되었고, 그 다음 주사기를 통하여 (5S)-5-[[tert-부틸(디메틸)실일] 옥시메틸] -1-(4,5-디메톡시-2-니트로-벤조일)피롤리딘-3-온 출발 물질 (30 mL의 디클로로메탄에 11.33 g이 용해됨+ 10 mL 헹굼, Journal of Medicinal Chemistry, 2010,　53,　2927-2941 및 Bioorganic & Medicinal Chemistry Letters, 2000,　10,　1845-1847에 따라 합성됨). -78 ℃에서 30분 후, Et3N (22.6 mL, 154.3 mmol)는 2분에 걸쳐 주사기를 통하여 추가되었다. ~ 4 분 후, 상기 혼합물은 0 ℃로 따뜻하게 한 후, 1 h 동안 교반되었다. 상기 혼합물은 100 mL의 물에 부었다. 디클로로메탄은 분리되었다. 수성층은 EtOAc (2x75 mL)로 추출되었다. 복합된 org 추출물은 1N HCl로 세척되었고, 그 다음 sat. 중탄산나트륨염으로 세척되었고, Na2SO4 상에서 건조되었고, 그리고 농축되었다. 상기 잔유물은 실리카 겔 컬럼 크로마토그래피 (70%-90% EtOAc/헵탄)에 의해 정제되어, 약한 황색 포말의 원하는 산물(10.12 g)을 얻었다.
Figure pct00102
(5S)-5-[[tert-부틸(디메틸)실일]옥시메틸]-1-(4,5-디메톡시-2-니트로-벤조일)피롤리딘-3-온 (1.20 g, 2.74 mmol), 2,6-루티딘 (1.27 mL, 10.9 mmol)은 디클로로메탄 (45 mL)에서 혼합되고, 그 다음 -35 ℃로 냉각되었다. 그 다음 트리플릭(triflic) 무수물 (~5.2 mL의 DCM에 0.87 mL 용해됨)은 주사기를 통하여 천천히 추가되었고 ---상기 혼합물은 밝은 황색으로 변하였고, 수조 온도는 -33 ℃로 상승되었다. 상기 반응 온도는 전기간에 걸쳐 -20 ℃를 넘지않도록 유지되었다. 총 ~ 1hr 후, 상기 반응 혼합물은 aq. 포화된 NaHCO3 용액, 얼음 및 EtOAc의 혼합물 안으로 피펫팅하였고, 그 다음 에틸 아세테이트 (총 ~ 400mL)로 2회 추출되었다. 복합된 유기물은 1N aq. HCl, 그 다음 염수로 세척되었고, 그 다음 황산나트륨에서 건조되고, 농축되었다. 상기 잔유물은 실리카 겔 컬럼 크로마토그래피 (40%-100% EtOAc/헵탄)에 의해 정제되어, 황색 고체의 원하는 산물(957 mg)을 얻었다.
Figure pct00103
250 mL 플라스크 안에서 에탄올 (8.75 mL,) 및 물 (2.5 mL,)안에 비닐 트리플레이트 (957 mg, 1.68 mmol)에 6-퀴놀일보론산 (348 mg 2.01 mmol,), 인산칼륨염 (1.10 g, 5.03 mmol), 그 다음 [1,1'-비스(디페닐포스피노)훼로센]디클로로팔라듐(ii) (982 mg, 0.134 mmol)이 추가되었다. 상기 혼합물에 질소를 충전하고, 그 다음 실온에서 질소하에서 교반되었다. 상기 반응이 실행된 후 (~10 분), EtOAc (50 mL)를 상기 반응 혼합물에 추가하였다. 상기 혼합물은 여과되여 임의의 고체가 제거되었다. 물 (~ 5 mL)이 이 여과액에 추가되었다. 여과액은 EtOAc (2x)로 추출되었다. 복합된 유기물은 황산나트륨으로 건조되고, 그리고 농축되었다. 상기 잔유물은 실리카 겔 컬럼 크로마토그래피 (40%-100% EtOAc/헵탄)에 의해 정제되어, 황색 고체의 원하는 산물(928 mg)을 얻었다.
Figure pct00104
상기 니트로 출발 물질 (322 mg, 0.586 mmol)은 6mL의 에탄올에 용해되었고 그 다음 아연 분진 (383 mg. 5.86 mmol)이 추가되고, 이어서 1.5 ml의 5% 포름산/물 (1.5 mL의 물에 75 uL의 포름산)이 추가되었다. 상기 혼합물은 그 다음 53 ℃로 가열되었고, 반응이 완료될 때까지(~ 3.5 hrs) 교반되었다. 상기 혼합물은 실온으로 냉각되었고, 여과되었다. 여과물은 EtOAc (~ 10 mL)로 희석되었고, 그 다음 3 M 암모니아 (~ 3 mL)가 추가되었다. 상기 혼합물은 EtOAc (3x)로 추출되었다. 복합된 유기물은 황산나트륨으로 건조되고, 농축되어, 미정제 아닐린을 얻었고, 이는 추가 정제없이 다음 단계에 이용되었다.
Figure pct00105
트리포스겐 (79.4 mg, 0.268 mmol)은 1.5 mL의 디클로로메탄에 용해되었고, 그 다음 (2R)-2-[(5-니트로-2-피리딜)디술파닐]프로판-1-올 (196 mg, 0.797 mmol) 및 피리딘 (0.092 mL)의 2 mL 디클로로메탄 용액이 추가되었다. 30 분 후, 상기 용액은 아닐린 출발 물질 및 피리딘 (0.092 mL)의 4.5 mL 디클로로메탄 용액에 추가되었다. 상기 반응이 완료된 후 (~ 1 hr), 상기 혼합물은 EtOAc로 희석되며, 그 다음 1 M HCL 용액 및 그 다음 포화된 탄산나트륨 용액으로 세척되었다. 유기물은 황산나트륨으로 건조되고, 그리고 농축되었다. 상기 잔유물은 실리카 겔 컬럼 크로마토그래피 (30%-70% EtOAc/헵탄)에 의해 정제되어, 황색 고체의 원하는 산물 카르바메이트 (182 mg)를 얻었다.
Figure pct00106
상기 TBS-보호된 알코올 (182 mg, 0.230 mmol)은 4 mL : 1 mL의 THF : 물에 용해되고, 그 다음 4 mL의 아세트산이 추가되었다. 상기 혼합물은 55 ℃로 가열되었다. 상기 반응이 완료되고 (~ 이틀밤동안), 상기 혼합물은 실온으로 냉각되며, 그 다음 50 mL의 에틸 아세테이트로 희석되었다. 탄산칼륨은 아세트산의 pH 가 ~ 10에 이를 때까지 중화시키기 위하여 추가되었다. 상기 혼합물은 에틸 아세테이트를 이용하여 2회 추출되었다. 복합된 유기물은 황산나트륨으로 건조되고, 그리고 농축되었다. 상기 잔유물은 실리카 겔 컬럼 크로마토그래피 (0%-10% MeOH/EtOAc)에 의해 정제되어, 원하는 알코올 (125 mg)을 얻었다.
Figure pct00107
상기 알코올 출발 물질 (116 mg, 0.171 mmol)은 6 mL의 디클로로메탄에 용해되었고, 그 다음 데스-마르틴 페리오디난 (89.8 mg, 0.205 mmol)이 실온에서 추가되었다. ~ 2.5 hrs 후, 포화된 중탄산나트륨 용액 (~ 6 mL) 및 1M 티오황산나트륨 용액 (~ 4 mL) 이 추가되었다. 상기 혼합물은 디클로로메탄으로 한번 추출되고, 클로로포름으로 2회 추출되었다. 복합된 유기물 ( ~ 75 mL)은 황산나트륨상에서 건조되고, 농축되어 ~ 103 mg의 미정제 산물을 얻었고, 이는 역상-HPLC에 의해 정제되어, 원하는 산물 (29.5 mg)을 얻었다. 1H NMR (400 MHz, DMSO-d 6) δ 9.24 (s, 1H), 8.83 (dd, J = 1.6, 4.2 Hz, 1H), 8.47 (dd, J = 2.6, 8.9 Hz, 1H), 8.32 (d, J = 8.0 Hz, 1H), 8.12 (dd, J = 1.9, 8.9 Hz, 1H), 7.92 (d, J = 8.8 Hz, 1H), 7.87 (d, J = 1.8 Hz, 1H), 7.80 (s, 1H), 7.75 (d, J = 8.5 Hz, 1H), 7.51 (dd, J = 4.2, 8.3 Hz, 1H), 7.20 (s, 1H), 7.07 (s, 1H), 6.95 (d, J = 6.3 Hz, 1H), 5.78 - 5.62 (m, 1H), 4.30 (d, J = 6.8 Hz, 1H), 4.00 (td, J = 3.2, 10.0 Hz, 1H), 3.85 (s, 6H), 3.56 - 3.44 (m, 1H), 3.08 (d, J = 14.6 Hz, 1H), 1.14 (d, J = 6.3 Hz, 3H), 0.07 (s, 12H). MS m/z = 676 [M+1]+;
CLD-6의 합성
2-((4-니트로페닐)디술파닐)에틸 (11S,11aS)-11-히드록시-7,8-디메톡시-5-옥소-2-(퀴놀린-6-일)-11,11a-디히드로-1H-벤조[e]피롤로[1,2-a][1,4]디아제핀-10(5H)-카르복실레이트
Figure pct00108
화합물 1 (1.13 kg, 4.59 mol, 1.00 Eq)의　THF (10 L)　용액에 0 oC에서　2 부분(two portions)으로 LiBH4 (99.90 g, 4.59 mol, 1.00 Eq)(LiBH4 추가 동안 온도 변화는 거의 없음)를 추가하였다. 상기 현탁액은 0 oC에서 1 h 교반되었고, 그 다음 10-20 oC에서 18 h 동안 교반되었다. 상기 혼합물은 0℃로 냉각되었고,　aq　NH4Cl (5 L)가 추가되었다. 층들은 분리되었고, 수성 층은 EA (5 L x 3)로 추출되었다. 복합된 유기물은 염수로 세척되었다.　 유기 층은 Na2SO4에서 건조되고, 여과되고, 농축되어　맑은 오일의 화합물(1600 g, 7.36 mol, 80.2% 수율)을 얻었다.
Figure pct00109
50-L 플라스크에 화합물 2 (1.60 kg, 7.36 mol, 1.00 Eq), DCM (20 L)를 충전하고, 이어서 TEA (1.12 kg, 11.05 mol, 1.50 Eq) 및 아세틸 클로라이드 (635.54 g, 8.10 mol, 1.10 Eq)를 교대로 0oC에서 교반시키면서 점적 추가하였다. 추가가 끝난 후, 생성 용액은 15-25 oC 에서 18 h 동안 교반되고, 5 L의 물을 추가하여 진정되었고, 3 x 2L의 DCM로 추출되었다. 복합된 유기 층은 무수 황산나트륨에서 건조되고, 진공하에서 농축되어 무색 오일의 화합물 3 (2.46 kg, 9.49 mol, 128.90% 수율)을 얻었다.
Figure pct00110
20L 3-가지 달린 밑-둥근 플라스크에 화합물 3 (1.23 kg, 4.75 mol, 1.00 Eq)의 DCM (12 L)을 충전하고, 이어서 15oC에서 몇회 배취(batches)를 통하여 PCC (1.54 kg, 7.13 mol)를 추가하였다. 생성 용액은 15-25oC에서 18 h 동안 교반되었다. 고체는 걸러내었고, 여과액은 진공하에서 농축되었다. 상기 잔유물은 실리카겔 컬럼상에서 에틸 아세테이트: 석유 에테르 (1:5)로 용리되어, 밝은 황색 액체의 화합물 4 (1.13 kg, 4.38 mol, 46.15% 수율)를 얻었다.
Figure pct00111
10-L 3-가지 달린 밑-둥근 플라스크에 메틸(트리페닐)포스포니움 브롬화물 (958.03 g, 2.68 mol), THF (2.5 L)을 충전하고, 이어서 0oC에서 2h에 걸쳐 부분으로(in portions) t-BuOK (300.94 g, 2.68 mol)가 추가되었다. 여기에 0oC에서 교반하면서 용액 화합물 4 (460.00 g, 1.79 mol)의 THF (2.5 L) 용액을 점적 추가하였다. 생성 용액은 -5~0 oC에서 20 분 동안 교반되고, 500 mL의 물을 추가하여 반응은 진정되고, 3 x 500 mL의 에틸 아세테이트로 추출되었다. 복합된 유기 층은 무수 황산나트륨 염에서 건조되었고, 진공하에서 농축되었다. 상기 잔유물은 실리카겔 컬럼상에서 에틸 아세테이트: 석유 에테르 (1:20)로 용리되어, 밝은 황색 액체의 화합물 5 (275.00 g, 1.08 mol, 30.09 %)를 얻었다.
Figure pct00112
화합물 5 (330.00 g, 1.29 mol)의 HCl (gas)/EtOAc (3 L, 4M/L) 혼합물은 0 oC에서 20 분 동안 교반되었다. 그 다음 상기 혼합물은 10-30 oC에서 1 h 동안 교반되었다. 상기 혼합물은 진공에서 농축되어 황색 고체의 화합물 6(250.00 g, 1.30 mol, 101%)을 얻었고, 정제없이 다음 단계에 이용된다.
Figure pct00113
비활성 질소를 충전하여 유지시킨 3000-mL 3-가지 달린 밑-둥근 플라스크에 화합물 7 (354.42 g, 1.56 mol, 1.30 Eq)의 THF (1.5 L) 용액을 충전하고, 교반시키면서 SOCl2 (1.71 kg, 14.33 mol, 11.94 Eq)를 점적 추가하였다. 상기 생성 용액은 20-30oC에서 4 h 동안 교반되었고, 그 다음 진공하에서 농축되었다. 비활성 질소를 충전하여 유지시킨 또다른 3000-mL 3-가지 달린 밑-둥근 플라스크에 화합물 6 (230.00 g, 1.20 mol, 1.00 Eq)의 DCM (2.5 L) 용액을 충전하였다. 여기에 Et3N (485.75 g, 4.80 mol, 4.00 Eq)을 -40oC에서 교반시키면서 Et3N (485.75 g, 4.80 mol, 4.00 Eq)를 점적 추가하고, 그 다음, -40oC에서 첫번째 플라스크의 용액을 추가하였다. 온도는 0 oC로 자연적으로 상승시키고, 3000 mL의 물/얼음을 추가하여 반응을 진정시키고, 3x1000 mL의 디클로로메탄으로 추출하였다. 복합된 유기 층은 무수 황산나트륨 염에서 건조되었고, 진공하에서 농축되었다. 상기 잔유물은 실리카 겔 컬럼에서 EtOAc:PE (1:3)로 용리시킴으로써, 밝은 갈색 오일 (210.00 g)의 화합물 8을 얻었고, 이는 정제없이 다음 단계에 사용되었다.
Figure pct00114
화합물 8 (90.00 g, 247.02 mmol, 1.00 Eq)의 THF (400 mL), MeOH (100 mL), H2O (400 mL) 혼합물에 0oC에서 한 부분으로 NaOH (29.64 g, 741.05 mmol, 3.00 Eq)가 추가되었다. 상기 혼합물은 20-30oC에서 18 h 동안 교반되었다. 수성 상은 EtOAc (300 mL x 3)로 추출되었다. 복합된 유기 상은 포화된 염수 (100 mL)로 세척되고, 무수 Na2SO4로 건조되고, 여과되고, 진공에서 농축되어 황색 고체의 화합물 9 (90.26 g, 미정제)를 얻었고, 추가 정제없이 다음 단계에 이용되었다.
Figure pct00115
온도 프로브, 자성 교반기 및 질소 유입구가 갖추어진 2000 mL 3개-가지 달린 밑 둥근 플라스크에 TBDMSCl (126.62 g, 840.12 mmol), 이미다졸 (57.20 g, 840.12 mmol, 3.00 Eq)의 DMF (1 L)을 추가하였다. 그 다음 화합물 9 (90.26 g, 280.04 mmol, 1.00 Eq)의 DMF (1 L) 용액에 상기 혼합물을 0oC에서 추가하였다. 생성된 반응 혼합물은 2 h 동안 25-30 oC에서 교반되었다. 상기 반응 혼합물은 얼음-물 (1 L)에 붓고, 그 다음 DCM (200 mL x 3)로 추출하였다. 복합된 유기 상은 염수 (100 mL)로 세척되고, Na2SO4 로 건조되고, 진공에서 농축되어 상기 잔유물을 얻고, 황색 오일 (126.00 g)의 화합물 10을 얻고, 이는 추가 정제없이 다음 단계에 이용되었다.
Figure pct00116
화합물 10 (126.00 g, 288.61 mmol, 1.00 Eq)의 AcOH (1 L) 혼합물에 온도를 30 oC 이하로 유지시키면서 부분으로(in portions) Zn (188.72 g, 2.89 mol)을 추가하였다. 상기 혼합물은 20-30 oC에서 30 분 동안 교반되었다. 상기 잔유물은 EtOAc (500 mL)에 붓고, 여과되었다. 여과액은 진공에서 농축되었다. 상기 잔유물은 실리카 겔 크로마토그래피 (PE/EtOAc=10/1, 1/1) 에 의해 황색 오일의 11 (58.00 g, 142.64 mmol, 49% 수율)을 얻었다.
1H NMR (400 MHz, 클로로포름-d) d ppm 6.71 (s, 1 H) 6.22 (s, 1 H) 4.85 - 4.97 (m, 2 H) 4.52 (br. s., 1 H) 4.14 - 4.23 (m, 1 H) 3.99 - 4.13 (m, 1 H) 3.82 (s, 3 H) 3.77 (s, 3 H) 3.59 (d, J=5.73 Hz, 1 H) 2.63 - 2.72 (m, 2 H) 2.01 - 2.04 (m, 1 H) 1.23 (t, J=7.06 Hz, 1 H) 0.85 (s, 9 H) -0.06 - 0.06 (m, 5 H).
2-((4-니트로페닐)디술파닐)에틸 (11S,11aS)-11-히드록시-7,8-디메톡시-5-옥소-2-(퀴놀린-6-일)-11,11a-디히드로-1H-벤조[e]피롤로[1,2-a][1,4]디아제핀-10(5H)-카르복실레이트
Figure pct00117
상기에서 설명된 바와 같이 표제 화합물은 단계 5-7에 따라 합성되었다. 1H NMR (400 MHz, DMSO-d 6) δ 9.24 (d, J = 2.3 Hz, 1H), 8.66 - 8.34 (m, 1H), 8.15 - 7.62 (m, 1H), 7.11 (s, 1H), 6.98 (s, 1H), 6.67 (d, J = 5.8 Hz, 1H), 5.37 (dd, J = 9.5, 6.3 Hz, 1H), 5.13 (d, J = 6.2 Hz, 2H), 4.54 - 4.31 (m, 1H), 4.12 (d, J = 15.6 Hz, 1H), 4.03 - 3.91 (m, 2H), 3.86 - 3.78 (m, 6H), 3.76 (d, J = 3.4 Hz, 1H), 3.48 (t, J = 8.8 Hz, 1H), 3.24 - 3.00 (m, 2H), 2.96 - 2.80 (m, 1H). MS m/z = 549 [M+1]+
전술한 발명은 이해를 분명하게 하기 위한 목적으로, 설명 및 실시예를 통하여 일부 상세하게 설명되어 있지만, 설명 및 실시예들은 본 발명의 범위를 제한시키는 것으로 간주되어서는 안된다. 본 명세서 전반에 걸쳐 인용된 모든 특허, 특허 출원 및 참고 문헌은 명시적으로 참고 문헌으로 인용된다.
SEQUENCE LISTING <110> GENENTECH, INC., ET AL. <120> PYRROLOBENZODIAZEPINE ANTIBODY DRUG CONJUGATES AND METHODS OF USE <130> P32858-WO <140> <141> <150> 62/236,429 <151> 2015-10-02 <160> 70 <170> PatentIn version 3.5 <210> 1 <211> 16 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <221> source <223> /note="Description of Artificial Sequence: Synthetic peptide" <400> 1 Arg Ser Ser Gln Ser Ile Val His Ser Val Gly Asn Thr Phe Leu Glu 1 5 10 15 <210> 2 <211> 7 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <221> source <223> /note="Description of Artificial Sequence: Synthetic peptide" <400> 2 Lys Val Ser Asn Arg Phe Ser 1 5 <210> 3 <211> 9 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <221> source <223> /note="Description of Artificial Sequence: Synthetic peptide" <400> 3 Phe Gln Gly Ser Gln Phe Pro Tyr Thr 1 5 <210> 4 <211> 10 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <221> source <223> /note="Description of Artificial Sequence: Synthetic peptide" <400> 4 Gly Tyr Glu Phe Ser Arg Ser Trp Met Asn 1 5 10 <210> 5 <211> 18 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <221> source <223> /note="Description of Artificial Sequence: Synthetic peptide" <400> 5 Gly Arg Ile Tyr Pro Gly Asp Gly Asp Thr Asn Tyr Ser Gly Lys Phe 1 5 10 15 Lys Gly <210> 6 <211> 11 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <221> source <223> /note="Description of Artificial Sequence: Synthetic peptide" <400> 6 Asp Gly Ser Ser Trp Asp Trp Tyr Phe Asp Val 1 5 10 <210> 7 <211> 107 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <221> source <223> /note="Description of Artificial Sequence: Synthetic polypeptide" <400> 7 Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly 1 5 10 15 Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Ser Ala Ser Gln Gly Ile Ser Asn Tyr 20 25 30 Leu Asn Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Thr Val Lys Leu Leu Ile 35 40 45 Tyr Tyr Thr Ser Asn Leu His Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly 50 55 60 Ser Gly Ser Gly Thr Asp Tyr Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro 65 70 75 80 Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln Tyr Ser Glu Leu Pro Trp 85 90 95 Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys 100 105 <210> 8 <211> 120 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <221> source <223> /note="Description of Artificial Sequence: Synthetic polypeptide" <400> 8 Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Pro Ala Leu Val Lys Pro Thr Gln 1 5 10 15 Thr Leu Thr Leu Thr Cys Thr Val Ser Gly Phe Ser Leu Thr Gly Tyr 20 25 30 Ser Val Asn Trp Ile Arg Gln Pro Pro Gly Lys Ala Leu Glu Trp Leu 35 40 45 Gly Met Ile Trp Gly Asp Gly Ser Thr Asp Tyr Asn Ser Ala Leu Lys 50 55 60 Ser Arg Leu Thr Ile Ser Lys Asp Thr Ser Lys Asn Gln Val Val Leu 65 70 75 80 Thr Met Thr Asn Met Asp Pro Val Asp Thr Ala Thr Tyr Tyr Cys Ala 85 90 95 Arg Asp Tyr Tyr Phe Asn Tyr Ala Ser Trp Phe Ala Tyr Trp Gly Gln 100 105 110 Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser 115 120 <210> 9 <211> 11 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <221> source <223> /note="Description of Artificial Sequence: Synthetic peptide" <400> 9 Ser Ala Ser Gln Gly Ile Ser Asn Tyr Leu Asn 1 5 10 <210> 10 <211> 7 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <221> source <223> /note="Description of Artificial Sequence: Synthetic peptide" <400> 10 Tyr Thr Ser Asn Leu His Ser 1 5 <210> 11 <211> 9 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <221> source <223> /note="Description of Artificial Sequence: Synthetic peptide" <400> 11 Gln Gln Tyr Ser Glu Leu Pro Trp Thr 1 5 <210> 12 <211> 10 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <221> source <223> /note="Description of Artificial Sequence: Synthetic peptide" <400> 12 Gly Phe Ser Leu Thr Gly Tyr Ser Val Asn 1 5 10 <210> 13 <211> 16 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <221> source <223> /note="Description of Artificial Sequence: Synthetic peptide" <400> 13 Met Ile Trp Gly Asp Gly Ser Thr Asp Tyr Asn Ser Ala Leu Lys Ser 1 5 10 15 <210> 14 <211> 12 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <221> source <223> /note="Description of Artificial Sequence: Synthetic peptide" <400> 14 Asp Tyr Tyr Val Asn Tyr Ala Ser Trp Phe Ala Tyr 1 5 10 <210> 15 <211> 214 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <221> source <223> /note="Description of Artificial Sequence: Synthetic polypeptide" <400> 15 Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly 1 5 10 15 Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Ser Ala Ser Gln Gly Ile Ser Asn Tyr 20 25 30 Leu Asn Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Thr Val Lys Leu Leu Ile 35 40 45 Tyr Tyr Thr Ser Asn Leu His Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly 50 55 60 Ser Gly Ser Gly Thr Asp Tyr Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro 65 70 75 80 Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln Tyr Ser Glu Leu Pro Trp 85 90 95 Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys Arg Thr Val Ala Ala 100 105 110 Pro Ser Val Phe Ile Phe Pro Pro Ser Asp Glu Gln Leu Lys Ser Gly 115 120 125 Thr Ala Ser Val Val Cys Leu Leu Asn Asn Phe Tyr Pro Arg Glu Ala 130 135 140 Lys Val Gln Trp Cys Val Asp Asn Ala Leu Gln Ser Gly Asn Ser Gln 145 150 155 160 Glu Ser Val Thr Glu Gln Asp Ser Lys Asp Ser Thr Tyr Ser Leu Ser 165 170 175 Ser Thr Leu Thr Leu Ser Lys Ala Asp Tyr Glu Lys His Lys Val Tyr 180 185 190 Ala Cys Glu Val Thr His Gln Gly Leu Ser Ser Pro Val Thr Lys Ser 195 200 205 Phe Asn Arg Gly Glu Cys 210 <210> 16 <211> 450 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <221> source <223> /note="Description of Artificial Sequence: Synthetic polypeptide" <400> 16 Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Pro Ala Leu Val Lys Pro Thr Gln 1 5 10 15 Thr Leu Thr Leu Thr Cys Thr Val Ser Gly Phe Ser Leu Thr Gly Tyr 20 25 30 Ser Val Asn Trp Ile Arg Gln Pro Pro Gly Lys Ala Leu Glu Trp Leu 35 40 45 Gly Met Ile Trp Gly Asp Gly Ser Thr Asp Tyr Asn Ser Ala Leu Lys 50 55 60 Ser Arg Leu Thr Ile Ser Lys Asp Thr Ser Lys Asn Gln Val Val Leu 65 70 75 80 Thr Met Thr Asn Met Asp Pro Val Asp Thr Ala Thr Tyr Tyr Cys Ala 85 90 95 Arg Asp Tyr Tyr Phe Asn Tyr Ala Ser Trp Phe Ala Tyr Trp Gly Gln 100 105 110 Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val 115 120 125 Phe Pro Leu Ala Pro Ser Ser Lys Ser Thr Ser Gly Gly Thr Ala Ala 130 135 140 Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser 145 150 155 160 Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val 165 170 175 Leu Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro 180 185 190 Ser Ser Ser Leu Gly Thr Gln Thr Tyr Ile Cys Asn Val Asn His Lys 195 200 205 Pro Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys Lys Val Glu Pro Lys Ser Cys Asp 210 215 220 Lys Thr His Thr Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Leu Leu Gly Gly 225 230 235 240 Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile 245 250 255 Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser His Glu 260 265 270 Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His 275 280 285 Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr Arg 290 295 300 Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys 305 310 315 320 Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu Pro Ala Pro Ile Glu 325 330 335 Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr 340 345 350 Thr Leu Pro Pro Ser Arg Glu Glu Met Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu 355 360 365 Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp 370 375 380 Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val 385 390 395 400 Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp 405 410 415 Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His 420 425 430 Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro 435 440 445 Gly Lys 450 <210> 17 <211> 112 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <221> source <223> /note="Description of Artificial Sequence: Synthetic polypeptide" <400> 17 Asp Ile Val Met Thr Gln Ser Pro Asp Ser Leu Ala Val Ser Leu Gly 1 5 10 15 Glu Arg Ala Thr Ile Asn Cys Arg Ala Ser Gln Ser Val Ser Gly Ser 20 25 30 Arg Phe Thr Tyr Met His Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Pro Pro 35 40 45 Lys Leu Leu Ile Lys Tyr Ala Ser Ile Leu Glu Ser Gly Val Pro Asp 50 55 60 Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser 65 70 75 80 Ser Leu Gln Ala Glu Asp Val Ala Val Tyr Tyr Cys Gln His Ser Trp 85 90 95 Glu Ile Pro Pro Trp Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys 100 105 110 <210> 18 <211> 118 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <221> source <223> /note="Description of Artificial Sequence: Synthetic polypeptide" <400> 18 Glu Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ala 1 5 10 15 Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Ser Phe Thr Gly Tyr 20 25 30 Trp Met Asn Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Ile 35 40 45 Gly Met Ile His Pro Leu Asp Ala Glu Ile Arg Ala Asn Gln Lys Phe 50 55 60 Arg Asp Arg Val Thr Ile Thr Val Asp Thr Ser Thr Ser Thr Ala Tyr 65 70 75 80 Leu Glu Leu Ser Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys 85 90 95 Ala Arg Gly Thr Tyr Asp Gly Gly Phe Glu Tyr Trp Gly Gln Gly Thr 100 105 110 Leu Val Thr Val Ser Ser 115 <210> 19 <211> 15 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <221> source <223> /note="Description of Artificial Sequence: Synthetic peptide" <400> 19 Arg Ala Ser Gln Ser Val Ser Gly Ser Arg Phe Thr Tyr Met His 1 5 10 15 <210> 20 <211> 7 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <221> source <223> /note="Description of Artificial Sequence: Synthetic peptide" <400> 20 Tyr Ala Ser Ile Leu Glu Ser 1 5 <210> 21 <211> 10 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <221> source <223> /note="Description of Artificial Sequence: Synthetic peptide" <400> 21 Gln His Ser Trp Glu Ile Pro Pro Trp Thr 1 5 10 <210> 22 <211> 5 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <221> source <223> /note="Description of Artificial Sequence: Synthetic peptide" <400> 22 Gly Tyr Trp Met Asn 1 5 <210> 23 <211> 17 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <221> source <223> /note="Description of Artificial Sequence: Synthetic peptide" <400> 23 Met Ile His Pro Leu Asp Ala Glu Ile Arg Ala Asn Gln Lys Phe Arg 1 5 10 15 Asp <210> 24 <211> 9 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <221> source <223> /note="Description of Artificial Sequence: Synthetic peptide" <400> 24 Gly Thr Tyr Asp Gly Gly Phe Glu Tyr 1 5 <210> 25 <211> 219 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <221> source <223> /note="Description of Artificial Sequence: Synthetic polypeptide" <400> 25 Asp Ile Val Met Thr Gln Ser Pro Asp Ser Leu Ala Val Ser Leu Gly 1 5 10 15 Glu Arg Ala Thr Ile Asn Cys Arg Ala Ser Gln Ser Val Ser Gly Ser 20 25 30 Arg Phe Thr Tyr Met His Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Pro Pro 35 40 45 Lys Leu Leu Ile Lys Tyr Ala Ser Ile Leu Glu Ser Gly Val Pro Asp 50 55 60 Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser 65 70 75 80 Ser Leu Gln Ala Glu Asp Val Ala Val Tyr Tyr Cys Gln His Ser Trp 85 90 95 Glu Ile Pro Pro Trp Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys 100 105 110 Arg Thr Val Ala Ala Pro Ser Val Phe Ile Phe Pro Pro Ser Asp Glu 115 120 125 Gln Leu Lys Ser Gly Thr Ala Ser Val Val Cys Leu Leu Asn Asn Phe 130 135 140 Tyr Pro Arg Glu Ala Lys Val Gln Trp Lys Val Asp Asn Ala Leu Gln 145 150 155 160 Ser Gly Asn Ser Gln Glu Ser Val Thr Glu Gln Asp Ser Lys Asp Ser 165 170 175 Thr Tyr Ser Leu Ser Ser Thr Leu Thr Leu Ser Lys Ala Asp Tyr Glu 180 185 190 Lys His Lys Val Tyr Ala Cys Glu Val Thr His Gln Gly Leu Ser Ser 195 200 205 Pro Val Thr Lys Ser Phe Asn Arg Gly Glu Cys 210 215 <210> 26 <211> 448 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <221> source <223> /note="Description of Artificial Sequence: Synthetic polypeptide" <400> 26 Glu Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ala 1 5 10 15 Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Ser Phe Thr Gly Tyr 20 25 30 Trp Met Asn Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Ile 35 40 45 Gly Met Ile His Pro Leu Asp Ala Glu Ile Arg Ala Asn Gln Lys Phe 50 55 60 Arg Asp Arg Val Thr Ile Thr Val Asp Thr Ser Thr Ser Thr Ala Tyr 65 70 75 80 Leu Glu Leu Ser Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys 85 90 95 Ala Arg Gly Thr Tyr Asp Gly Gly Phe Glu Tyr Trp Gly Gln Gly Thr 100 105 110 Leu Val Thr Val Ser Ser Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val Phe Pro 115 120 125 Leu Ala Pro Ser Ser Lys Ser Thr Ser Gly Gly Thr Ala Ala Leu Gly 130 135 140 Cys Leu Val Lys Asp Tyr Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser Trp Asn 145 150 155 160 Ser Gly Ala Leu Thr Ser Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val Leu Gln 165 170 175 Ser Ser Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro Ser Ser 180 185 190 Ser Leu Gly Thr Gln Thr Tyr Ile Cys Asn Val Asn His Lys Pro Ser 195 200 205 Asn Thr Lys Val Asp Lys Lys Val Glu Pro Lys Ser Cys Asp Lys Thr 210 215 220 His Thr Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Leu Leu Gly Gly Pro Ser 225 230 235 240 Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg 245 250 255 Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser His Glu Asp Pro 260 265 270 Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala 275 280 285 Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val 290 295 300 Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr 305 310 315 320 Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr 325 330 335 Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu 340 345 350 Pro Pro Ser Arg Glu Glu Met Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys 355 360 365 Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser 370 375 380 Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp 385 390 395 400 Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser 405 410 415 Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala 420 425 430 Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly Lys 435 440 445 <210> 27 <211> 17 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <221> source <223> /note="Description of Artificial Sequence: Synthetic peptide" <400> 27 Met Ile His Pro Met Asp Ser Glu Ile Arg Ala Asn Gln Lys Phe Arg 1 5 10 15 Asp <210> 28 <211> 17 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <221> source <223> /note="Description of Artificial Sequence: Synthetic peptide" <400> 28 Met Ile His Pro Leu Asp Ser Glu Ile Arg Ala Asn Gln Lys Phe Arg 1 5 10 15 Asp <210> 29 <211> 9 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <221> source <223> /note="Description of Artificial Sequence: Synthetic peptide" <400> 29 Gly Thr Tyr Asp Gly Gly Phe Lys Tyr 1 5 <210> 30 <211> 219 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <221> source <223> /note="Description of Artificial Sequence: Synthetic polypeptide" <400> 30 Asp Ile Val Met Thr Gln Ser Pro Asp Ser Leu Ala Val Ser Leu Gly 1 5 10 15 Glu Arg Ala Thr Ile Asn Cys Arg Ala Ser Gln Ser Val Ser Gly Ser 20 25 30 Arg Phe Thr Tyr Met His Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Pro Pro 35 40 45 Lys Leu Leu Ile Lys Tyr Ala Ser Ile Leu Glu Ser Gly Val Pro Asp 50 55 60 Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser 65 70 75 80 Ser Leu Gln Ala Glu Asp Val Ala Val Tyr Tyr Cys Gln His Ser Trp 85 90 95 Glu Ile Pro Pro Trp Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys 100 105 110 Arg Thr Val Ala Ala Pro Ser Val Phe Ile Phe Pro Pro Ser Asp Glu 115 120 125 Gln Leu Lys Ser Gly Thr Ala Ser Val Val Cys Leu Leu Asn Asn Phe 130 135 140 Tyr Pro Arg Glu Ala Lys Val Gln Trp Cys Val Asp Asn Ala Leu Gln 145 150 155 160 Ser Gly Asn Ser Gln Glu Ser Val Thr Glu Gln Asp Ser Lys Asp Ser 165 170 175 Thr Tyr Ser Leu Ser Ser Thr Leu Thr Leu Ser Lys Ala Asp Tyr Glu 180 185 190 Lys His Lys Val Tyr Ala Cys Glu Val Thr His Gln Gly Leu Ser Ser 195 200 205 Pro Val Thr Lys Ser Phe Asn Arg Gly Glu Cys 210 215 <210> 31 <211> 448 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <221> source <223> /note="Description of Artificial Sequence: Synthetic polypeptide" <400> 31 Glu Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ala 1 5 10 15 Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Ser Phe Thr Gly Tyr 20 25 30 Trp Met Asn Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Ile 35 40 45 Gly Met Ile His Pro Leu Asp Ala Glu Ile Arg Ala Asn Gln Lys Phe 50 55 60 Arg Asp Arg Val Thr Ile Thr Val Asp Thr Ser Thr Ser Thr Ala Tyr 65 70 75 80 Leu Glu Leu Ser Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys 85 90 95 Ala Arg Gly Thr Tyr Asp Gly Gly Phe Glu Tyr Trp Gly Gln Gly Thr 100 105 110 Leu Val Thr Val Ser Ser Cys Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val Phe Pro 115 120 125 Leu Ala Pro Ser Ser Lys Ser Thr Ser Gly Gly Thr Ala Ala Leu Gly 130 135 140 Cys Leu Val Lys Asp Tyr Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser Trp Asn 145 150 155 160 Ser Gly Ala Leu Thr Ser Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val Leu Gln 165 170 175 Ser Ser Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro Ser Ser 180 185 190 Ser Leu Gly Thr Gln Thr Tyr Ile Cys Asn Val Asn His Lys Pro Ser 195 200 205 Asn Thr Lys Val Asp Lys Lys Val Glu Pro Lys Ser Cys Asp Lys Thr 210 215 220 His Thr Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Leu Leu Gly Gly Pro Ser 225 230 235 240 Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg 245 250 255 Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser His Glu Asp Pro 260 265 270 Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala 275 280 285 Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val 290 295 300 Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr 305 310 315 320 Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr 325 330 335 Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu 340 345 350 Pro Pro Ser Arg Glu Glu Met Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys 355 360 365 Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser 370 375 380 Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp 385 390 395 400 Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser 405 410 415 Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala 420 425 430 Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly Lys 435 440 445 <210> 32 <211> 11 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <221> source <223> /note="Description of Artificial Sequence: Synthetic peptide" <400> 32 Lys Ala Ser Asp Leu Ile His Asn Trp Leu Ala 1 5 10 <210> 33 <211> 8 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <221> source <223> /note="Description of Artificial Sequence: Synthetic peptide" <400> 33 Tyr Gly Ala Thr Ser Leu Glu Thr 1 5 <210> 34 <211> 9 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <221> source <223> /note="Description of Artificial Sequence: Synthetic peptide" <400> 34 Gln Gln Tyr Trp Thr Thr Pro Phe Thr 1 5 <210> 35 <211> 11 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <221> source <223> /note="Description of Artificial Sequence: Synthetic peptide" <400> 35 Gly Tyr Ser Ile Thr Asn Asp Tyr Ala Trp Asn 1 5 10 <210> 36 <211> 17 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <221> source <223> /note="Description of Artificial Sequence: Synthetic peptide" <400> 36 Gly Tyr Ile Ser Tyr Ser Gly Tyr Thr Thr Tyr Asn Pro Ser Leu Lys 1 5 10 15 Ser <210> 37 <211> 9 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <221> source <223> /note="Description of Artificial Sequence: Synthetic peptide" <400> 37 Ala Arg Trp Ala Ser Gly Leu Asp Tyr 1 5 <210> 38 <211> 108 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <221> source <223> /note="Description of Artificial Sequence: Synthetic polypeptide" <400> 38 Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly 1 5 10 15 Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Lys Ala Ser Asp Leu Ile His Asn Trp 20 25 30 Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu Leu Ile 35 40 45 Tyr Gly Ala Thr Ser Leu Glu Thr Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly 50 55 60 Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro 65 70 75 80 Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln Tyr Trp Thr Thr Pro Phe 85 90 95 Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys Arg 100 105 <210> 39 <211> 116 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <221> source <223> /note="Description of Artificial Sequence: Synthetic polypeptide" <400> 39 Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly 1 5 10 15 Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Tyr Ser Ile Thr Asn Asp 20 25 30 Tyr Ala Trp Asn Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp 35 40 45 Val Gly Tyr Ile Ser Tyr Ser Gly Tyr Thr Thr Tyr Asn Pro Ser Leu 50 55 60 Lys Ser Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Thr Ser Lys Asn Thr Leu Tyr 65 70 75 80 Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys 85 90 95 Ala Arg Trp Ala Ser Gly Leu Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val 100 105 110 Thr Val Ser Ser 115 <210> 40 <211> 11 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <221> source <223> /note="Description of Artificial Sequence: Synthetic peptide" <400> 40 Gly Tyr Ser Ile Thr Ser Asp Tyr Ala Trp Asn 1 5 10 <210> 41 <211> 17 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <221> source <223> /note="Description of Artificial Sequence: Synthetic peptide" <400> 41 Gly Tyr Ile Ser Asn Ser Gly Ser Thr Ser Tyr Asn Pro Ser Leu Lys 1 5 10 15 Ser <210> 42 <211> 15 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <221> source <223> /note="Description of Artificial Sequence: Synthetic peptide" <400> 42 Glu Arg Asn Tyr Asp Tyr Asp Asp Tyr Tyr Tyr Ala Met Asp Tyr 1 5 10 15 <210> 43 <211> 17 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <221> source <223> /note="Description of Artificial Sequence: Synthetic peptide" <400> 43 Lys Ser Ser Gln Ser Leu Leu Tyr Arg Ser Asn Gln Lys Asn Tyr Leu 1 5 10 15 Ala <210> 44 <211> 7 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <221> source <223> /note="Description of Artificial Sequence: Synthetic peptide" <400> 44 Trp Ala Ser Thr Arg Glu Ser 1 5 <210> 45 <211> 9 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <221> source <223> /note="Description of Artificial Sequence: Synthetic peptide" <400> 45 Gln Gln Tyr Tyr Asn Tyr Pro Arg Thr 1 5 <210> 46 <211> 124 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <221> source <223> /note="Description of Artificial Sequence: Synthetic polypeptide" <400> 46 Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly 1 5 10 15 Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Val Ser Gly Tyr Ser Ile Thr Ser Asp 20 25 30 Tyr Ala Trp Asn Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp 35 40 45 Val Gly Tyr Ile Ser Asn Ser Gly Ser Thr Ser Tyr Asn Pro Ser Leu 50 55 60 Lys Ser Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Thr Ser Lys Asn Thr Leu Tyr 65 70 75 80 Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys 85 90 95 Ala Arg Glu Arg Asn Tyr Asp Tyr Asp Asp Tyr Tyr Tyr Ala Met Asp 100 105 110 Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser 115 120 <210> 47 <211> 113 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <221> source <223> /note="Description of Artificial Sequence: Synthetic polypeptide" <400> 47 Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly 1 5 10 15 Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Lys Ser Ser Gln Ser Leu Leu Tyr Arg 20 25 30 Ser Asn Gln Lys Asn Tyr Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys 35 40 45 Ala Pro Lys Leu Leu Ile Tyr Trp Ala Ser Thr Arg Glu Ser Gly Val 50 55 60 Pro Ser Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr 65 70 75 80 Ile Ser Ser Leu Gln Pro Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln 85 90 95 Tyr Tyr Asn Tyr Pro Arg Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Val Glu Ile 100 105 110 Lys <210> 48 <211> 10 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <221> source <223> /note="Description of Artificial Sequence: Synthetic peptide" <400> 48 Gly Phe Ser Phe Ser Asp Phe Ala Met Ser 1 5 10 <210> 49 <211> 18 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <221> source <223> /note="Description of Artificial Sequence: Synthetic peptide" <400> 49 Ala Thr Ile Gly Arg Val Ala Phe His Thr Tyr Tyr Pro Asp Ser Met 1 5 10 15 Lys Gly <210> 50 <211> 13 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <221> source <223> /note="Description of Artificial Sequence: Synthetic peptide" <400> 50 Ala Arg His Arg Gly Phe Asp Val Gly His Phe Asp Phe 1 5 10 <210> 51 <211> 16 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <221> source <223> /note="Description of Artificial Sequence: Synthetic peptide" <400> 51 Arg Ser Ser Glu Thr Leu Val His Ser Ser Gly Asn Thr Tyr Leu Glu 1 5 10 15 <210> 52 <211> 7 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <221> source <223> /note="Description of Artificial Sequence: Synthetic peptide" <400> 52 Arg Val Ser Asn Arg Phe Ser 1 5 <210> 53 <211> 9 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <221> source <223> /note="Description of Artificial Sequence: Synthetic peptide" <400> 53 Phe Gln Gly Ser Phe Asn Pro Leu Thr 1 5 <210> 54 <211> 120 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <221> source <223> /note="Description of Artificial Sequence: Synthetic polypeptide" <400> 54 Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly 1 5 10 15 Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Ser Phe Ser Asp Phe 20 25 30 Ala Met Ser Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val 35 40 45 Ala Thr Ile Gly Arg Val Ala Phe His Thr Tyr Tyr Pro Asp Ser Met 50 55 60 Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr Leu Tyr 65 70 75 80 Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys 85 90 95 Ala Arg His Arg Gly Phe Asp Val Gly His Phe Asp Phe Trp Gly Gln 100 105 110 Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser 115 120 <210> 55 <211> 113 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <221> source <223> /note="Description of Artificial Sequence: Synthetic polypeptide" <400> 55 Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly 1 5 10 15 Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Arg Ser Ser Glu Thr Leu Val His Ser 20 25 30 Ser Gly Asn Thr Tyr Leu Glu Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala 35 40 45 Pro Lys Leu Leu Ile Tyr Arg Val Ser Asn Arg Phe Ser Gly Val Pro 50 55 60 Ser Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile 65 70 75 80 Ser Ser Leu Gln Pro Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Phe Gln Gly 85 90 95 Ser Phe Asn Pro Leu Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys 100 105 110 Arg <210> 56 <211> 117 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <221> source <223> /note="Description of Artificial Sequence: Synthetic polypeptide" <400> 56 Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly 1 5 10 15 Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Ser Ser Tyr 20 25 30 Trp Ile Glu Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Ile 35 40 45 Gly Glu Ile Leu Pro Gly Gly Gly Asp Thr Asn Tyr Asn Glu Ile Phe 50 55 60 Lys Gly Arg Ala Thr Phe Ser Ala Asp Thr Ser Lys Asn Thr Ala Tyr 65 70 75 80 Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys 85 90 95 Thr Arg Arg Val Pro Ile Arg Leu Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Leu 100 105 110 Val Thr Val Ser Ser 115 <210> 57 <211> 112 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <221> source <223> /note="Description of Artificial Sequence: Synthetic polypeptide" <400> 57 Asp Ile Gln Leu Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly 1 5 10 15 Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Lys Ala Ser Gln Ser Val Asp Tyr Glu 20 25 30 Gly Asp Ser Phe Leu Asn Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro 35 40 45 Lys Leu Leu Ile Tyr Ala Ala Ser Asn Leu Glu Ser Gly Val Pro Ser 50 55 60 Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser 65 70 75 80 Ser Leu Gln Pro Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln Ser Asn 85 90 95 Glu Asp Pro Leu Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys Arg 100 105 110 <210> 58 <211> 10 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <221> source <223> /note="Description of Artificial Sequence: Synthetic peptide" <400> 58 Gly Tyr Thr Phe Ser Ser Tyr Trp Ile Glu 1 5 10 <210> 59 <211> 18 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <221> source <223> /note="Description of Artificial Sequence: Synthetic peptide" <400> 59 Gly Glu Ile Leu Pro Gly Gly Gly Asp Thr Asn Tyr Asn Glu Ile Phe 1 5 10 15 Lys Gly <210> 60 <211> 10 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <221> source <223> /note="Description of Artificial Sequence: Synthetic peptide" <400> 60 Thr Arg Arg Val Pro Ile Arg Leu Asp Tyr 1 5 10 <210> 61 <211> 15 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <221> source <223> /note="Description of Artificial Sequence: Synthetic peptide" <400> 61 Lys Ala Ser Gln Ser Val Asp Tyr Glu Gly Asp Ser Phe Leu Asn 1 5 10 15 <210> 62 <211> 7 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <221> source <223> /note="Description of Artificial Sequence: Synthetic peptide" <400> 62 Ala Ala Ser Asn Leu Glu Ser 1 5 <210> 63 <211> 9 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <221> source <223> /note="Description of Artificial Sequence: Synthetic peptide" <400> 63 Gln Gln Ser Asn Glu Asp Pro Leu Thr 1 5 <210> 64 <211> 1255 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 64 Met Glu Leu Ala Ala Leu Cys Arg Trp Gly Leu Leu Leu Ala Leu Leu 1 5 10 15 Pro Pro Gly Ala Ala Ser Thr Gln Val Cys Thr Gly Thr Asp Met Lys 20 25 30 Leu Arg Leu Pro Ala Ser Pro Glu Thr His Leu Asp Met Leu Arg His 35 40 45 Leu Tyr Gln Gly Cys Gln Val Val Gln Gly Asn Leu Glu Leu Thr Tyr 50 55 60 Leu Pro Thr Asn Ala Ser Leu Ser Phe Leu Gln Asp Ile Gln Glu Val 65 70 75 80 Gln Gly Tyr Val Leu Ile Ala His Asn Gln Val Arg Gln Val Pro Leu 85 90 95 Gln Arg Leu Arg Ile Val Arg Gly Thr Gln Leu Phe Glu Asp Asn Tyr 100 105 110 Ala Leu Ala Val Leu Asp Asn Gly Asp Pro Leu Asn Asn Thr Thr Pro 115 120 125 Val Thr Gly Ala Ser Pro Gly Gly Leu Arg Glu Leu Gln Leu Arg Ser 130 135 140 Leu Thr Glu Ile Leu Lys Gly Gly Val Leu Ile Gln Arg Asn Pro Gln 145 150 155 160 Leu Cys Tyr Gln Asp Thr Ile Leu Trp Lys Asp Ile Phe His Lys Asn 165 170 175 Asn Gln Leu Ala Leu Thr Leu Ile Asp Thr Asn Arg Ser Arg Ala Cys 180 185 190 His Pro Cys Ser Pro Met Cys Lys Gly Ser Arg Cys Trp Gly Glu Ser 195 200 205 Ser Glu Asp Cys Gln Ser Leu Thr Arg Thr Val Cys Ala Gly Gly Cys 210 215 220 Ala Arg Cys Lys Gly Pro Leu Pro Thr Asp Cys Cys His Glu Gln Cys 225 230 235 240 Ala Ala Gly Cys Thr Gly Pro Lys His Ser Asp Cys Leu Ala Cys Leu 245 250 255 His Phe Asn His Ser Gly Ile Cys Glu Leu His Cys Pro Ala Leu Val 260 265 270 Thr Tyr Asn Thr Asp Thr Phe Glu Ser Met Pro Asn Pro Glu Gly Arg 275 280 285 Tyr Thr Phe Gly Ala Ser Cys Val Thr Ala Cys Pro Tyr Asn Tyr Leu 290 295 300 Ser Thr Asp Val Gly Ser Cys Thr Leu Val Cys Pro Leu His Asn Gln 305 310 315 320 Glu Val Thr Ala Glu Asp Gly Thr Gln Arg Cys Glu Lys Cys Ser Lys 325 330 335 Pro Cys Ala Arg Val Cys Tyr Gly Leu Gly Met Glu His Leu Arg Glu 340 345 350 Val Arg Ala Val Thr Ser Ala Asn Ile Gln Glu Phe Ala Gly Cys Lys 355 360 365 Lys Ile Phe Gly Ser Leu Ala Phe Leu Pro Glu Ser Phe Asp Gly Asp 370 375 380 Pro Ala Ser Asn Thr Ala Pro Leu Gln Pro Glu Gln Leu Gln Val Phe 385 390 395 400 Glu Thr Leu Glu Glu Ile Thr Gly Tyr Leu Tyr Ile Ser Ala Trp Pro 405 410 415 Asp Ser Leu Pro Asp Leu Ser Val Phe Gln Asn Leu Gln Val Ile Arg 420 425 430 Gly Arg Ile Leu His Asn Gly Ala Tyr Ser Leu Thr Leu Gln Gly Leu 435 440 445 Gly Ile Ser Trp Leu Gly Leu Arg Ser Leu Arg Glu Leu Gly Ser Gly 450 455 460 Leu Ala Leu Ile His His Asn Thr His Leu Cys Phe Val His Thr Val 465 470 475 480 Pro Trp Asp Gln Leu Phe Arg Asn Pro His Gln Ala Leu Leu His Thr 485 490 495 Ala Asn Arg Pro Glu Asp Glu Cys Val Gly Glu Gly Leu Ala Cys His 500 505 510 Gln Leu Cys Ala Arg Gly His Cys Trp Gly Pro Gly Pro Thr Gln Cys 515 520 525 Val Asn Cys Ser Gln Phe Leu Arg Gly Gln Glu Cys Val Glu Glu Cys 530 535 540 Arg Val Leu Gln Gly Leu Pro Arg Glu Tyr Val Asn Ala Arg His Cys 545 550 555 560 Leu Pro Cys His Pro Glu Cys Gln Pro Gln Asn Gly Ser Val Thr Cys 565 570 575 Phe Gly Pro Glu Ala Asp Gln Cys Val Ala Cys Ala His Tyr Lys Asp 580 585 590 Pro Pro Phe Cys Val Ala Arg Cys Pro Ser Gly Val Lys Pro Asp Leu 595 600 605 Ser Tyr Met Pro Ile Trp Lys Phe Pro Asp Glu Glu Gly Ala Cys Gln 610 615 620 Pro Cys Pro Ile Asn Cys Thr His Ser Cys Val Asp Leu Asp Asp Lys 625 630 635 640 Gly Cys Pro Ala Glu Gln Arg Ala Ser Pro Leu Thr Ser Ile Ile Ser 645 650 655 Ala Val Val Gly Ile Leu Leu Val Val Val Leu Gly Val Val Phe Gly 660 665 670 Ile Leu Ile Lys Arg Arg Gln Gln Lys Ile Arg Lys Tyr Thr Met Arg 675 680 685 Arg Leu Leu Gln Glu Thr Glu Leu Val Glu Pro Leu Thr Pro Ser Gly 690 695 700 Ala Met Pro Asn Gln Ala Gln Met Arg Ile Leu Lys Glu Thr Glu Leu 705 710 715 720 Arg Lys Val Lys Val Leu Gly Ser Gly Ala Phe Gly Thr Val Tyr Lys 725 730 735 Gly Ile Trp Ile Pro Asp Gly Glu Asn Val Lys Ile Pro Val Ala Ile 740 745 750 Lys Val Leu Arg Glu Asn Thr Ser Pro Lys Ala Asn Lys Glu Ile Leu 755 760 765 Asp Glu Ala Tyr Val Met Ala Gly Val Gly Ser Pro Tyr Val Ser Arg 770 775 780 Leu Leu Gly Ile Cys Leu Thr Ser Thr Val Gln Leu Val Thr Gln Leu 785 790 795 800 Met Pro Tyr Gly Cys Leu Leu Asp His Val Arg Glu Asn Arg Gly Arg 805 810 815 Leu Gly Ser Gln Asp Leu Leu Asn Trp Cys Met Gln Ile Ala Lys Gly 820 825 830 Met Ser Tyr Leu Glu Asp Val Arg Leu Val His Arg Asp Leu Ala Ala 835 840 845 Arg Asn Val Leu Val Lys Ser Pro Asn His Val Lys Ile Thr Asp Phe 850 855 860 Gly Leu Ala Arg Leu Leu Asp Ile Asp Glu Thr Glu Tyr His Ala Asp 865 870 875 880 Gly Gly Lys Val Pro Ile Lys Trp Met Ala Leu Glu Ser Ile Leu Arg 885 890 895 Arg Arg Phe Thr His Gln Ser Asp Val Trp Ser Tyr Gly Val Thr Val 900 905 910 Trp Glu Leu Met Thr Phe Gly Ala Lys Pro Tyr Asp Gly Ile Pro Ala 915 920 925 Arg Glu Ile Pro Asp Leu Leu Glu Lys Gly Glu Arg Leu Pro Gln Pro 930 935 940 Pro Ile Cys Thr Ile Asp Val Tyr Met Ile Met Val Lys Cys Trp Met 945 950 955 960 Ile Asp Ser Glu Cys Arg Pro Arg Phe Arg Glu Leu Val Ser Glu Phe 965 970 975 Ser Arg Met Ala Arg Asp Pro Gln Arg Phe Val Val Ile Gln Asn Glu 980 985 990 Asp Leu Gly Pro Ala Ser Pro Leu Asp Ser Thr Phe Tyr Arg Ser Leu 995 1000 1005 Leu Glu Asp Asp Asp Met Gly Asp Leu Val Asp Ala Glu Glu Tyr 1010 1015 1020 Leu Val Pro Gln Gln Gly Phe Phe Cys Pro Asp Pro Ala Pro Gly 1025 1030 1035 Ala Gly Gly Met Val His His Arg His Arg Ser Ser Ser Thr Arg 1040 1045 1050 Ser Gly Gly Gly Asp Leu Thr Leu Gly Leu Glu Pro Ser Glu Glu 1055 1060 1065 Glu Ala Pro Arg Ser Pro Leu Ala Pro Ser Glu Gly Ala Gly Ser 1070 1075 1080 Asp Val Phe Asp Gly Asp Leu Gly Met Gly Ala Ala Lys Gly Leu 1085 1090 1095 Gln Ser Leu Pro Thr His Asp Pro Ser Pro Leu Gln Arg Tyr Ser 1100 1105 1110 Glu Asp Pro Thr Val Pro Leu Pro Ser Glu Thr Asp Gly Tyr Val 1115 1120 1125 Ala Pro Leu Thr Cys Ser Pro Gln Pro Glu Tyr Val Asn Gln Pro 1130 1135 1140 Asp Val Arg Pro Gln Pro Pro Ser Pro Arg Glu Gly Pro Leu Pro 1145 1150 1155 Ala Ala Arg Pro Ala Gly Ala Thr Leu Glu Arg Pro Lys Thr Leu 1160 1165 1170 Ser Pro Gly Lys Asn Gly Val Val Lys Asp Val Phe Ala Phe Gly 1175 1180 1185 Gly Ala Val Glu Asn Pro Glu Tyr Leu Thr Pro Gln Gly Gly Ala 1190 1195 1200 Ala Pro Gln Pro His Pro Pro Pro Ala Phe Ser Pro Ala Phe Asp 1205 1210 1215 Asn Leu Tyr Tyr Trp Asp Gln Asp Pro Pro Glu Arg Gly Ala Pro 1220 1225 1230 Pro Ser Thr Phe Lys Gly Thr Pro Thr Ala Glu Asn Pro Glu Tyr 1235 1240 1245 Leu Gly Leu Asp Val Pro Val 1250 1255 <210> 65 <211> 14 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <221> source <223> /note="Description of Artificial Sequence: Synthetic oligonucleotide" <400> 65 tatagaaatc tata 14 <210> 66 <211> 14 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <221> source <223> /note="Description of Artificial Sequence: Synthetic oligonucleotide" <400> 66 tatagatttc tata 14 <210> 67 <211> 14 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <221> source <223> /note="Description of Artificial Sequence: Synthetic oligonucleotide" <400> 67 tatagaaatg tata 14 <210> 68 <211> 14 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <221> source <223> /note="Description of Artificial Sequence: Synthetic oligonucleotide" <400> 68 tatacatttc tata 14 <210> 69 <211> 7 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 69 Met Ala Glu Ala Ile Thr Tyr 1 5 <210> 70 <211> 7 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 70 Thr Ala Phe Arg Phe Pro Asp 1 5

Claims (69)

  1. 화학식 I의 링커-약물 중간생성물:
    Figure pct00118

    이때 X
    Figure pct00119
    Y는 CH2-CH2, CH=CH, C(=O)-NH, 또는 CH2-NH로부터 선택되고;
    A는 F, C1-C6 알킬, 또는 =C(R)2 로부터 선택된 기로 임의선택적으로 치환된 5-원(membered) 또는 6-원(membered) 헤테로사이클릭 고리이며, 여기에서 R은 독립적으로 H, F, C1-C6 알킬, 또는 C1-C6 플루오르알킬로부터 선택되며;
    R1 및 R2는 독립적으로 H 또는 C1-C6 알킬로부터 선택되거나, 또는 R1 과 R2 는 3, 4, 5, 또는 6-원(membered) 시클로알킬 또는 헤테로시클일 기를 형성하고;
    R3은 독립적으로 NO2, Cl, F, CN, CO2H 또는 Br로부터 선택되며; 그리고
    m은 0, 1 또는 2이다.
  2. 청구항 1에 있어서, 화학식 Ia의 링커-약물 중간생성물:
    Figure pct00120

  3. 청구항 1에 있어서, 화학식 Ib의 링커-약물 중간생성물:
    Figure pct00121

  4. 청구항 1에 있어서, 화학식 Ic의 링커-약물 중간생성물:
    Figure pct00122

    이때 R4 및 R5 는 각각 H이거나, 또는 R4 와 R5 는 =O이다.
  5. 청구항 1에 있어서, 화학식 Id의 링커-약물 중간생성물:
    Figure pct00123

  6. 청구항 1에 있어서, 이때 R4 및 R5 는 각각 H인, 링커-약물 중간생성물.
  7. 청구항 1에 있어서, 화학식 Ie의 링커-약물 중간생성물:
    Figure pct00124

  8. 청구항 1에 있어서 이때 R4 와 R5 는 =O인, 링커-약물 중간생성물.
  9. 청구항 1에 있어서, 화학식 If의 링커-약물 중간생성물:
    Figure pct00125

  10. 청구항 1에 있어서 이때 R1 과 R2 는 이들이 부착된 탄소원자와 함께, 사이클로프로필 또는 사이클로부틸 고리를 형성하는, 링커-약물 중간생성물.
  11. 화학식 II의 항체-약물 콘쥬게이트 화합물:
    Figure pct00126

    또는 약학적으로 수용가능한 이의 염이며, 이때:
    X
    Figure pct00127
    Y는 CH2-CH2, CH2-C(=O), CH=CH, 또는 CH2-NH로부터 선택되며;
    A는 F, C1-C6 알킬, 또는 =C(R)2 로부터 선택된 기로 임의선택적으로 치환된 5-원(membered) 또는 6-원(membered) 헤테로사이클릭 고리이며, 여기에서 R은 독립적으로 H, F, C1-C6 알킬, 또는 C1-C6 플루오르알킬로부터 선택되며;
    R1 및 R2는 독립적으로 H 또는 C1-C6 알킬로부터 선택되거나, 또는 R1 과 R2 는 3, 4, 5, 또는 6-원(membered) 시클로알킬 또는 헤테로시클일 기를 형성하고;
    p는 1 내지 8의 정수이며; 그리고
    Ab는 항체다.
  12. 청구항 11에 있어서, 이때 Ab는 (1)-(53)로부터 선택된 하나 또는 그 이상의 종양-연관된 항원 또는 세포-표면 수용체에 결합하는 항체인, 항체-약물 콘쥬게이트, 또는 이의 약학적으로 수용가능한 화합물:
    (1) BMPR1B (골 형태형성 단백질 수용체-유형 IB);
    (2) E16 (LAT1, SLC7A5);
    (3) STEAP1 (전립선의 6개 막경유 상피 항원);
    (4) MUC16 (0772P, CA125);
    (5) MPF (MPF, MSLN, SMR, 거핵구 강화 인자, 메소텔린);
    (6) Napi2b (NAPI-3B, NPTIIb, SLC34A2, 용질 운반체 패밀리 34 (인산 나트륨), 구성원 2, 유형 II 나트륨-의존성 인산염 운반물질 3b);
    (7) 세마(Sema) 5b (FLJ10372, KIAA1445, Mm.42015, SEMA5B, SEMAG, 세마포린(Semaphorin) 5b Hlog, 세마 도메인, 7개 트롬보스폰딘 반복체 (유형 1 및 유형 1-유사), 막경유 도메인 (TM) 그리고 짧은 세포질 도메인, (세마포린) 5B);
    (8) PSCA hlg (2700050C12Rik, C530008O16Rik, RIKEN cDNA 2700050C12, RIKEN cDNA 2700050C12 유전자);
    (9) ETBR (엔도텔린 유형 B 수용체);
    (10) MSG783 (RNF124, 가상의 단백질 FLJ20315);
    (11) STEAP2 (HGNC_8639, IPCA-1, PCANAP1, STAMP1, STEAP2, STMP, 전립선 암 연관된 유전자 1, 전립선 암 연관된 단백질 1, 전립선의 6개 막경유 상피 항원 2, 6개의 막경유 전립선 단백질);
    (12) TrpM4 (BR22450, FLJ20041, TRPM4, TRPM4B, 일과성 수용체 잠재적 양이온 채널, 서브패밀리 M, 구성원 4);
    (13) CRIPTO (CR, CR1, CRGF, CRIPTO, TDGF1, 기형암종-유도된 성장 인자);
    (14) CD21 (CR2 (보체 수용체 2) 또는 C3DR (C3d/엡스테인 바르 바이러스 수용체) 또는 Hs 73792);
    (15) CD79b (CD79B, CD79β, IGb (면역글로블린-연관된 베타), B29);
    (16) FcRH2 (IFGP4, IRTA4, SPAP1A (포스파타제 엥커 단백질 1a가 함유된 SH2 도메인), SPAP1B, SPAP1C);
    (17) HER2;
    (18) NCA;
    (19) MDP;
    (20) IL20Rα;
    (21) 브레비칸(Brevican);
    (22) EphB2R;
    (23) ASLG659;
    (24) PSCA;
    (25) GEDA;
    (26) BAFF-R (B 세포-활성화 인자 수용체, BLyS 수용체 3, BR3);
    (27) CD22 (B-세포 수용체 CD22-B 아이소폼);
    (28) CD79a (CD79A, CD79α, 면역글로블린-연관된 알파);
    (29) CXCR5 (버킷의(Burkitt's) 림프종 수용체 1);
    (30) HLA-DOB (MHC 클라스 II 분자의 베타 서브유닛 (Ia 항원));
    (31) P2X5 (퓨린성 수용체 P2X 리간드-게이트화된 이온 채널 5);
    (32) CD72 (B-세포 분화 항원 CD72, Lyb-2);
    (33) LY64 (림프구 항원 64 (RP105), 류신 풍부한 반복 (LRR) 패밀리의 유형 I 막 단백질);
    (34) FcRH1 (Fc 수용체-유사 단백질 1);
    (35) FcRH5 (IRTA2, 면역글로블린 슈퍼패밀리 수용체 전좌 연관된 2);
    (36) TENB2 (추정 막경유 프로테오글리칸);
    (37) PMEL17 (은(silver) 동족체(homolog); SILV; D12S53E; PMEL17; SI; SIL);
    (38) TMEFF1 (EGF-유사 및 2개의 폴리스태틴-유사 도메인을 갖는 막경유 단백질 1; 토모레굴린(Tomoregulin)-1);
    (39) GDNF-Ra1 (GDNF 패밀리 수용체 알파 1; GFRA1; GDNFR; GDNFRA; RETL1; TRNR1; RET1L; GDNFR-알파1; GFR-알파-1);
    (40) Ly6E (림프구 항원 6 복합체, 좌 E; Ly67,RIG-E,SCA-2,TSA-1);
    (41) TMEM46 (쉬사 동족체 2 (제노푸스 레비스); SHISA2);
    (42) Ly6G6D (림프구 항원 6 복합체, 좌 G6D; Ly6-D, MEGT1);
    (43) LGR5 (류신-풍부 반복체-함유 G 단백질-연결된 수용체 5; GPR49, GPR67);
    (44) RET (ret 프로토-종양유전자; MEN2A; HSCR1; MEN2B; MTC1; PTC; CDHF12; Hs.168114; RET51; RET-ELE1);
    (45) LY6K (림프구 항원 6 복합체, 좌(locus) K; LY6K; HSJ001348; FLJ35226);
    (46) GPR19 (G 단백질-연결된 수용체 19; Mm.4787);
    (47) GPR54 (KISS1 수용체; KISS1R; GPR54; HOT7T175; AXOR12);
    (48) ASPHD1 (아스파르테이트 베타-히드록실라제 도메인 함유 1; LOC253982);
    (49) 티로시나제 (TYR; OCAIA; OCA1A; 티로시나제; SHEP3);
    (50) TMEM118 (링 핑커(ring finger) 단백질, 막경유 2; RNFT2; FLJ14627);
    (51) GPR172A (G 단백질-연결된 수용체 172A; GPCR41; FLJ11856; D15Ertd747e);
    (52) CD33; 또는
    (53) CLL-1.
  13. 청구항 11에 있어서, 화학식 IIa의 항체-약물 콘쥬게이트, 또는 이의 약학적으로 수용가능한 화합물:
    Figure pct00128

  14. 청구항 11에 있어서, 화학식 IIb의 항체-약물 콘쥬게이트, 또는 이의 약학적으로 수용가능한 화합물:
    Figure pct00129

  15. 청구항 11에 있어서, 화학식 IIc의 항체-약물 콘쥬게이트, 또는 이의 약학적으로 수용가능한 화합물:
    Figure pct00130

    이때 R4 및 R5 는 각각 H이거나, 또는 R4 와 R5 는 =O이다.
  16. 청구항 15에 있어서, 이때 R4 및 R5 는 각각 H인, 항체-약물 콘쥬게이트, 또는 이의 약학적으로 수용가능한 화합물.
  17. 청구항 15에 있어서, 이때 R4 와 R5 는 =O인, 항체-약물 콘쥬게이트, 또는 이의 약학적으로 수용가능한 화합물.
  18. 청구항 15에 있어서, 화학식 IId을 갖는 항체-약물 콘쥬게이트, 또는 이의 약학적으로 수용가능한 화합물:
    Figure pct00131

  19. 청구항 15에 있어서, 화학식 IIe를 갖는 항체-약물 콘쥬게이트, 또는 이의 약학적으로 수용가능한 화합물:
    Figure pct00132

  20. 청구항 15에 있어서, 화학식 IIf의 항체-약물 콘쥬게이트, 또는 이의 약학적으로 수용가능한 화합물:
    Figure pct00133

  21. 청구항 11에 있어서, 이때 Ab는 시스테인-조작된 항체인, 항체-약물 콘쥬게이트, 또는 이의 약학적으로 수용가능한 화합물.
  22. 청구항 21에 있어서, 이때 상기 시스테인-조작된 항체는 약물의 콘쥬게이션 부위로써 LC K149C 또는 HC A118C를 포함하는, 항체-약물 콘쥬게이트, 또는 이의 약학적으로 수용가능한 화합물.
  23. 청구항 11에 있어서, 이때 Ab는 항-HER2, 항-CD22, 항-CD33, 항-Napi2b, 또는 항-CLL-1로부터 선택되는, 항체-약물 콘쥬게이트, 또는 이의 약학적으로 수용가능한 화합물.
  24. 청구항 11에 있어서, 이때 p는 1, 2, 3, 또는 4인, 항체-약물 콘쥬게이트, 또는 이의 약학적으로 수용가능한 화합물.
  25. 청구항 11에 있어서, 항체-약물 콘쥬게이트 화합물의 혼합물을 포함하며, 이때 상기 항체-약물 콘쥬게이트 화합물의 혼합물에서 항체당 평균 약물 로딩, p는 약 2 내지 약 5인 항체-약물 콘쥬게이트, 또는 이의 약학적으로 수용가능한 화합물.
  26. 청구항 11에 따른 항체-약물 콘쥬게이트 화합물, 또는 약학적으로 수용가능한 이의 염 그리고 약학적으로 수용가능한 부형제를 포함하는 약학 조성물.
  27. 청구항 26에 있어서, 화학치료제의 치료요법적 유효량을 더 포함하는, 약학 조성물.
  28. 청구항 26에 따른 약학 조성물의 치료요법적 유효량을 환자에게 투여하는 것을 포함하는 암 치료 방법.
  29. 청구항 28에 있어서, 이때 상기 환자에게 청구항 11에 따른 항체-약물 콘쥬게이트, 또는 약학적으로 수용가능한 이의 염과 함께 화학치료제를 투여하는, 방법.
  30. 청구항 11에 따른 항체-약물 콘쥬게이트 화합물, 또는 약학적으로 수용가능한 이의 염을 만드는 방법에 있어서, 상기 방법은 항체를 청구항 1에 따른 화학식 I의 링커-약물 중간생성물과 반응시키는 것을 포함하는 방법.
  31. 화학식 II의 항체-약물 콘쥬게이트 화합물:
    Figure pct00134

    또는 약학적으로 수용가능한 이의 염이며, 이때:
    X
    Figure pct00135
    Y는 CH2-CH2, CH2-C(=O), CH=CH, 또는 CH2-NH로부터 선택되며;
    A는 F, C1-C6 알킬, 또는 =C(R)2 로부터 선택된 기로 임의선택적으로 치환된 5-원(membered) 또는 6-원(membered) 헤테로사이클릭 고리이며, 여기에서 R은 독립적으로 H, F, C1-C6 알킬, 또는 C1-C6 플루오르알킬로부터 선택되며;
    R1 및 R2는 독립적으로 H 또는 C1-C6 알킬로부터 선택되거나, 또는 R1 과 R2 는 3, 4, 5, 또는 6-원(membered) 시클로알킬 또는 헤테로시클일 기를 형성하고;
    p는 1 내지 8의 정수이며; 그리고
    Ab는 (a) 서열 번호: 22의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H1; (b) 서열 번호: 23의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H2; (c) 서열 번호: 24의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H3; (d) 서열 번호: 19의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-L1 ; (e) 서열 번호: 20의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-L2; 그리고 (f) 서열 번호: 21의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-L3을 포함하는 항-HER2 항체다.
  32. 청구항 31에 있어서, 이때 상기 항-HER2 항체는 서열 번호: 17의 서열을 포함하는 경쇄 가변 영역과 서열 번호: 18의 서열을 포함하는 중쇄 가변 영역을 포함하는, 항체-약물 콘쥬게이트 화합물, 또는 이의 약학적으로 수용가능한 염.
  33. 청구항 31에 있어서, 화학식 IIa을 갖는 항체-약물 콘쥬게이트 화합물, 또는 이의 약학적으로 수용가능한 염:
    Figure pct00136

  34. 청구항 31에 있어서, 화학식 IIb을 갖는 항체-약물 콘쥬게이트 화합물, 또는 이의 약학적으로 수용가능한 염:
    Figure pct00137

  35. 청구항 31에 있어서, 화학식 IIc를 갖는 항체-약물 콘쥬게이트 화합물, 또는 이의 약학적으로 수용가능한 염:
    Figure pct00138

    이때 R4 및 R5 는 각각 H이거나, 또는 R4 와 R5 는 =O이다.
  36. 청구항 35에 있어서, 이때 R4 와 R5 는 각각 H인, 항체-약물 콘쥬게이트 화합물, 또는 이의 약학적으로 수용가능한 염.
  37. 청구항 35에 있어서, 이때 R4 및 R5 는 =O인, 항체-약물 콘쥬게이트 화합물, 또는 이의 약학적으로 수용가능한 염.
  38. 청구항 35에 있어서, 화학식 IId를 갖는 항체-약물 콘쥬게이트 화합물, 또는 이의 약학적으로 수용가능한 염:
    Figure pct00139
  39. 청구항 35에 있어서, 화학식 IIe를 갖는 항체-약물 콘쥬게이트 화합물, 또는 이의 약학적으로 수용가능한 염:
    Figure pct00140

  40. 청구항 35에 있어서, 화학식 IIf를 갖는 항체-약물 콘쥬게이트 화합물, 또는 이의 약학적으로 수용가능한 염:
    Figure pct00141

  41. 청구항 31에 있어서, 이때 상기 항-HER2 항체는 시스테인-조작된 항체인, 항체-약물 콘쥬게이트 화합물, 또는 이의 약학적으로 수용가능한 염.
  42. 청구항 41에 있어서, 이때 상기 시스테인-조작된 항체는 LC K149C 또는 HC A118C를 약물 콘쥬게이션 부위로 포함하는, 항체-약물 콘쥬게이트 화합물, 또는 이의 약학적으로 수용가능한 염.
  43. 청구항 31에 있어서, 이때 p는 1, 2, 3, 또는 4인, 항체-약물 콘쥬게이트 화합물, 또는 이의 약학적으로 수용가능한 염.
  44. 청구항 31에 있어서, 항체-약물 콘쥬게이트 화합물의 혼합물을 포함하며, 이때 상기 항체-약물 콘쥬게이트 화합물의 혼합물에서 항체당 평균 약물 로딩, p는 약 2 내지 약 5인, 항체-약물 콘쥬게이트 화합물, 또는 이의 약학적으로 수용가능한 염.
  45. 청구항 31에 따른 항체-약물 콘쥬게이트 화합물, 또는 약학적으로 수용가능한 이의 염 그리고 약학적으로 수용가능한 부형제를 포함하는, 약학 조성물.
  46. 청구항 45에 있어서, 추가 치료제를 더 포함하는, 약학 조성물.
  47. 청구항 46에 있어서, 이때 상기 추가 치료제는 화학치료제인, 약학 조성물.
  48. 청구항 46에 있어서, 이때 상기 추가 치료제는 HER2에 결합하는 항체 또는 면역콘쥬게이트인, 약학 조성물.
  49. 청구항 48에 있어서, 이때 상기 추가 치료제는 (i) HER2의 도메인 II에 결합하는 항체 또는 면역콘쥬게이트, 및/또는 (ii) 도메인 IV 또는 HER2에 결합하는 항체 또는 면역콘쥬게이트인, 약학 조성물.
  50. 청구항 48에 있어서, 이때 상기 추가 치료제는 (i) 에피토프 2C4에 결합하는 항체 또는 면역콘쥬게이트, 및/또는 (ii) 에피토프 4D5에 결합하는 항체 또는 면역콘쥬게이트인, 약학 조성물.
  51. 청구항 46에 있어서, 이때 상기 추가 치료제는 트라스투주마브, 트라스투주마브-MCC-DM1 (T-DM1), 또는 페르투주마브인, 약학 조성물.
  52. 청구항 46에 있어서, (1) 트라스투주마브 또는 T-DM1, 그리고 (2) 페르투주마브를 더 포함하는, 약학 조성물.
  53. 청구항 45에 따른 약학 조성물의 치료요법적 유효량을 환자에게 투여하는 것을 포함하는 암 치료 방법.
  54. 청구항 53에 있어서, 이때 상기 암은 HER2-양성 암인, 방법.
  55. 청구항 54에 있어서, 이때 상기 HER2-양성 암은 유방암 또는 위암인, 방법.
  56. 청구항 31에 따른 항체-약물 콘쥬게이트 화합물, 또는 약학적으로 수용가능한 이의 염의 치료요법적 유효량을 환자에게 투여하는 것을 포함하는 암 치료 방법.
  57. 청구항 56에 있어서, 이때 이때 상기 암은 HER2-양성 암인, 방법.
  58. 청구항 57에 있어서, 이때 상기 HER2-양성 암은 유방암 또는 위암인, 방법.
  59. 청구항 56에 있어서, 환자에게 추가 치료제를 더 투여하는 것을 포함하는, 방법.
  60. 청구항 59에 있어서, 이때 상기 추가 치료제는 화학치료제인, 방법.
  61. 청구항 59에 있어서, 이때 상기 추가 치료제는 HER2에 결합하는 항체 또는 면역콘쥬게이트인, 방법.
  62. 청구항 61에 있어서, 이때 추가 치료제는 (i) HER2의 도메인에 결합하는 항체 또는 면역콘쥬게이트, 및/또는 (ii) 도메인 IV 또는 HER2에 결합하는 항체 또는 면역콘쥬게이트인, 방법.
  63. 청구항 61에 있어서, 이때 상기 추가 치료제는 (i) 에피토프 2C4에 결합하는 항체 또는 면역콘쥬게이트, 및/또는 (ii) 에피토프 4D5에 결합하는 항체 또는 면역콘쥬게이트인, 방법.
  64. 청구항 61에 있어서, 이때 상기 추가 치료제는 트라스투주마브, 트라스투주마브-MCC-DM1 (T-DM1), 또는 페르투주마브인, 방법.
  65. 청구항 61에 있어서, (1) 트라스투주마브 또는 T-DM1, 그리고 (2) 페르투주마브를 상기 환자에게 더 투여하는 것을 포함하는, 방법.
  66. 화학식 IIf의 항체 약물 콘쥬게이트, 또는 약학적으로 수용가능한 이의 염
    Figure pct00142

    이때 Ab는 LC K149C를 포함하는 시스테인-조작된 항-HER2 항체이며, p는 약 2이다.
  67. 청구항 66에 있어서, 상기 Ab는 (a) 서열 번호: 22의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H1; (b) 서열 번호: 23의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H2; (c) 서열 번호: 24의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H3; (d) 서열 번호: 19의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-L1 ; (e) 서열 번호: 20의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-L2; 그리고 (f) 서열 번호: 21의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-L3을 포함하는 항-HER2 항체인, 항체-약물 콘쥬게이트 화합물, 또는 이의 약학적으로 수용가능한 염.
  68. 청구항 66에 있어서, 이때 상기 항-HER2 항체는 서열 번호: 17의 서열을 포함하는 경쇄 가변 영역과 서열 번호: 18의 서열을 포함하는 중쇄 가변 영역을 포함하는, 항체-약물 콘쥬게이트 화합물, 또는 이의 약학적으로 수용가능한 염.
  69. 청구항 66에 따른 항체-약물 콘쥬게이트 화합물, 또는 약학적으로 수용가능한 이의 염 그리고 약학적으로 수용가능한 부형제를 포함하는, 약학 조성물.

KR1020187011958A 2015-10-02 2016-09-30 피롤로벤조디아제핀 항체 약물 콘쥬게이트 및 이의 사용 방법 KR102111338B1 (ko)

Applications Claiming Priority (3)

Application Number Priority Date Filing Date Title
US201562236429P 2015-10-02 2015-10-02
US62/236,429 2015-10-02
PCT/US2016/054858 WO2017059289A1 (en) 2015-10-02 2016-09-30 Pyrrolobenzodiazepine antibody drug conjugates and methods of use

Publications (2)

Publication Number Publication Date
KR20180054849A true KR20180054849A (ko) 2018-05-24
KR102111338B1 KR102111338B1 (ko) 2020-05-15

Family

ID=57145040

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
KR1020187011958A KR102111338B1 (ko) 2015-10-02 2016-09-30 피롤로벤조디아제핀 항체 약물 콘쥬게이트 및 이의 사용 방법

Country Status (25)

Country Link
US (3) US10058613B2 (ko)
EP (1) EP3355935B1 (ko)
JP (3) JP6663984B2 (ko)
KR (1) KR102111338B1 (ko)
CN (1) CN108391422B (ko)
AR (1) AR106235A1 (ko)
AU (1) AU2016331931C1 (ko)
BR (1) BR112018006016A2 (ko)
CA (1) CA2996902C (ko)
CL (1) CL2018000813A1 (ko)
CO (1) CO2018004152A2 (ko)
CR (1) CR20180243A (ko)
HK (1) HK1259127A1 (ko)
IL (1) IL258046A (ko)
MA (1) MA43345A (ko)
MX (1) MX2018003628A (ko)
NZ (1) NZ741261A (ko)
PE (1) PE20181067A1 (ko)
PH (1) PH12018500693A1 (ko)
RU (1) RU2736725C1 (ko)
SG (1) SG10201912680RA (ko)
TW (1) TW201718027A (ko)
UA (1) UA123104C2 (ko)
WO (1) WO2017059289A1 (ko)
ZA (1) ZA201801957B (ko)

Families Citing this family (24)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN103068406B (zh) * 2010-06-08 2017-06-30 基因泰克公司 半胱氨酸改造的抗体和偶联物
WO2016040723A1 (en) 2014-09-12 2016-03-17 Genentech, Inc. Anti-her2 antibodies and immunoconjugates
MA43345A (fr) 2015-10-02 2018-08-08 Hoffmann La Roche Conjugués anticorps-médicaments de pyrrolobenzodiazépine et méthodes d'utilisation
MA43354A (fr) * 2015-10-16 2018-08-22 Genentech Inc Conjugués médicamenteux à pont disulfure encombré
JP7093767B2 (ja) 2016-08-11 2022-06-30 ジェネンテック， インコーポレイテッド ピロロベンゾジアゼピンプロドラッグ及びその抗体コンジュゲート
CA3126646A1 (en) 2017-09-29 2019-04-04 Daiichi Sankyo Company, Limited Antibody-pyrrolobenzodiazepine derivative conjugate
EP3720437A4 (en) * 2017-12-06 2021-11-03 Yale University PRODRUGS ACTIVATED BY REDUCTION IN CYTOSOL
GB201803342D0 (en) * 2018-03-01 2018-04-18 Medimmune Ltd Methods
KR20200138288A (ko) 2018-03-28 2020-12-09 미쓰비시 타나베 파마 코퍼레이션 cMET 모노클로날 결합제의 약물 접합체, 및 그의 용도
GB201806022D0 (en) 2018-04-12 2018-05-30 Medimmune Ltd Pyrrolobenzodiazepines and conjugates thereof
JP2022511337A (ja) 2018-09-19 2022-01-31 インサーム （インスティテュート ナショナル デ ラ サンテ エ デ ラ ルシェルシェ メディカル） 免疫チェックポイント治療に抵抗性のある癌の治療のための方法および医薬組成物
EP3894427A1 (en) 2018-12-10 2021-10-20 Genentech, Inc. Photocrosslinking peptides for site specific conjugation to fc-containing proteins
EP3914241A4 (en) * 2019-01-25 2023-01-18 Yale University ANTICANCER DRUGS AND METHODS OF PRODUCTION AND USE THEREOF
EP3920956A4 (en) * 2019-02-04 2022-11-16 Xenetic Biosciences Inc. METHODS OF USE OF GLYCOSYLATED THERAPEUTIC PROTEINS
CA3191804A1 (en) * 2019-03-25 2020-10-01 Daiichi Sankyo Company, Limited Anti-her2 antibody-pyrrolobenzodiazepine derivative conjugate
BR112021017350A2 (pt) * 2019-03-27 2021-11-16 Daiichi Sankyo Co Ltd Combinação de conjugado de anticorpo-derivado de pirrolobenzodiazepina e inibidor de parp
US20220363776A1 (en) 2019-10-04 2022-11-17 INSERM (Institut National de la Santé et de la Recherche Médicale) Methods and pharmaceutical composition for the treatment of ovarian cancer, breast cancer or pancreatic cancer
EP4069312A4 (en) * 2019-12-04 2024-03-27 The Research Foundation for the State University of New York COMPOSITIONS AND METHODS FOR REDUCING OFF-TARGET TOXICITY OF ANTIBODY-DRUG CONJUGATES
TW202216771A (zh) 2020-06-26 2022-05-01 德商拜耳廠股份有限公司 用於治療應用之ccr8抗體
EP4189071A1 (en) 2020-08-03 2023-06-07 Institut National de la Santé et de la Recherche Médicale (INSERM) Population of treg cells functionally committed to exert a regulatory activity and their use for adoptive therapy
CN112125924B (zh) * 2020-09-15 2021-09-24 吉林大学 一种螺旋寡聚物、仿生离子通道、制备方法、应用
MX2023008628A (es) 2021-01-22 2023-09-22 Bayer Ag Anticuerpos lrrc15 y conjugados de los mismos.
JP2024535712A (ja) 2021-08-27 2024-10-02 ヤンセン バイオテツク，インコーポレーテツド 抗ｐｓｍａ抗体及びその使用
WO2023215293A1 (en) 2022-05-02 2023-11-09 Athanor Biosciences, Inc. Cancer eradicating – bio-nanoparticles (ce-bnp)

Citations (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
WO2015023355A1 (en) * 2013-08-12 2015-02-19 Genentech, Inc. 1-(chloromethyl)-2,3-dihydro-1h-benzo[e]indole dimer antibody-drug conjugate compounds, and methods of use and treatment
KR20150027829A (ko) * 2012-07-09 2015-03-12 제넨테크, 인크. 항-cd22 항체를 포함하는 면역접합체

Family Cites Families (387)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US798959A (en) 1904-12-19 1905-09-05 George W Goss Corn-husker.
IL47062A (en) 1975-04-10 1979-07-25 Yeda Res & Dev Process for diminishing antigenicity of tissues to be usedas transplants by treatment with glutaraldehyde
US4665077A (en) 1979-03-19 1987-05-12 The Upjohn Company Method for treating rejection of organ or skin grafts with 6-aryl pyrimidine compounds
US4427588A (en) 1982-11-08 1984-01-24 Bristol-Myers Company Process for conversion of oxotomaymycin to tomaymycin
US4816567A (en) 1983-04-08 1989-03-28 Genentech, Inc. Recombinant immunoglobin preparations
US4676980A (en) 1985-09-23 1987-06-30 The United States Of America As Represented By The Secretary Of The Department Of Health And Human Services Target specific cross-linked heteroantibodies
US5583024A (en) 1985-12-02 1996-12-10 The Regents Of The University Of California Recombinant expression of Coleoptera luciferase
US6548640B1 (en) 1986-03-27 2003-04-15 Btg International Limited Altered antibodies
IL85035A0 (en) 1987-01-08 1988-06-30 Int Genetic Eng Polynucleotide molecule,a chimeric antibody with specificity for human b cell surface antigen,a process for the preparation and methods utilizing the same
WO1988007089A1 (en) 1987-03-18 1988-09-22 Medical Research Council Altered antibodies
IL85746A (en) 1988-03-15 1994-05-30 Yeda Res & Dev Preparations comprising t-lymphocyte cells treated with 8-methoxypsoralen or cell membranes separated therefrom for preventing or treating autoimmune diseases
FI891226A (fi) 1988-04-28 1989-10-29 Univ Leland Stanford Junior Reseptordeterminanter i anti-t-celler foer behandling av autoimmunsjukdom.
US5750373A (en) 1990-12-03 1998-05-12 Genentech, Inc. Enrichment method for variant proteins having altered binding properties, M13 phagemids, and growth hormone variants
KR0184860B1 (ko) 1988-11-11 1999-04-01 메디칼 리써어치 카운실 단일영역 리간드와 이를 포함하는 수용체 및 이들의 제조방법과 이용(법)
WO1990008187A1 (en) 1989-01-19 1990-07-26 Dana Farber Cancer Institute Soluble two domain cd2 protein
DK0463101T3 (da) 1989-03-21 1994-03-14 Immune Response Corp Inc Vaccination og fremgangsmåde mod sygdomme, som skyldes patogene reaktioner og specifikke T-cellepopulationer
DE3920358A1 (de) 1989-06-22 1991-01-17 Behringwerke Ag Bispezifische und oligospezifische, mono- und oligovalente antikoerperkonstrukte, ihre herstellung und verwendung
DE69031919T3 (de) 1989-07-19 2005-01-27 Connetics Corp., Palo Alto T-zell-rezeptor-peptide als heilmittel für autoimmune und bösartige krankheiten
WO1991002536A1 (en) 1989-08-23 1991-03-07 Scripps Clinic And Research Foundation Compositions and methods for detection and treatment of epstein-barr virus infection and immune disorders
US5959177A (en) 1989-10-27 1999-09-28 The Scripps Research Institute Transgenic plants expressing assembled secretory antibodies
US6075181A (en) 1990-01-12 2000-06-13 Abgenix, Inc. Human antibodies derived from immunized xenomice
US6150584A (en) 1990-01-12 2000-11-21 Abgenix, Inc. Human antibodies derived from immunized xenomice
JPH053790A (ja) 1990-04-19 1993-01-14 Fujisawa Pharmaceut Co Ltd デヒドロペプチダーゼ−ｉ
US5256643A (en) 1990-05-29 1993-10-26 The Government Of The United States Human cripto protein
US5770429A (en) 1990-08-29 1998-06-23 Genpharm International, Inc. Transgenic non-human animals capable of producing heterologous antibodies
WO1992007574A1 (en) 1990-10-25 1992-05-14 Tanox Biosystems, Inc. Glycoproteins associated with membrane-bound immunoglobulins as antibody targets on b cells
US5571894A (en) 1991-02-05 1996-11-05 Ciba-Geigy Corporation Recombinant antibodies specific for a growth factor receptor
ATE194385T1 (de) 1991-03-29 2000-07-15 Genentech Inc Menschliche pf4a rezeptoren und ihre verwendung
US5440021A (en) 1991-03-29 1995-08-08 Chuntharapai; Anan Antibodies to human IL-8 type B receptor
US5543503A (en) 1991-03-29 1996-08-06 Genentech Inc. Antibodies to human IL-8 type A receptor
EP0940468A1 (en) 1991-06-14 1999-09-08 Genentech, Inc. Humanized antibody variable domain
GB9114948D0 (en) 1991-07-11 1991-08-28 Pfizer Ltd Process for preparing sertraline intermediates
JP3050424B2 (ja) 1991-07-12 2000-06-12 塩野義製薬株式会社 ヒトエンドセリンリセプター
US5264557A (en) 1991-08-23 1993-11-23 The United States Of America As Represented By The Department Of Health And Human Services Polypeptide of a human cripto-related gene, CR-3
EP0604580A1 (en) 1991-09-19 1994-07-06 Genentech, Inc. EXPRESSION IN E. COLI OF ANTIBODY FRAGMENTS HAVING AT LEAST A CYSTEINE PRESENT AS A FREE THIOL, USE FOR THE PRODUCTION OF BIFUNCTIONAL F(ab') 2? ANTIBODIES
US5587458A (en) 1991-10-07 1996-12-24 Aronex Pharmaceuticals, Inc. Anti-erbB-2 antibodies, combinations thereof, and therapeutic and diagnostic uses thereof
WO1993008829A1 (en) 1991-11-04 1993-05-13 The Regents Of The University Of California Compositions that mediate killing of hiv-infected cells
US5976551A (en) 1991-11-15 1999-11-02 Institut Pasteur And Institut Nationale De La Sante Et De La Recherche Medicale Altered major histocompatibility complex (MHC) determinant and method of using the determinant
US6153408A (en) 1991-11-15 2000-11-28 Institut Pasteur And Institut National De La Sante Et De La Recherche Medicale Altered major histocompatibility complex (MHC) determinant and methods of using the determinant
EP0625200B1 (en) 1992-02-06 2005-05-11 Chiron Corporation Biosynthetic binding protein for cancer marker
IL107366A (en) 1992-10-23 2003-03-12 Chugai Pharmaceutical Co Ltd Genes coding for megakaryocyte potentiator
US5644033A (en) 1992-12-22 1997-07-01 Health Research, Inc. Monoclonal antibodies that define a unique antigen of human B cell antigen receptor complex and methods of using same for diagnosis and treatment
US5801005A (en) 1993-03-17 1998-09-01 University Of Washington Immune reactivity to HER-2/neu protein for diagnosis of malignancies in which the HER-2/neu oncogene is associated
US5869445A (en) 1993-03-17 1999-02-09 University Of Washington Methods for eliciting or enhancing reactivity to HER-2/neu protein
CA2163345A1 (en) 1993-06-16 1994-12-22 Susan Adrienne Morgan Antibodies
US5773223A (en) 1993-09-02 1998-06-30 Chiron Corporation Endothelin B1, (ETB1) receptor polypeptide and its encoding nucleic acid methods, and uses thereof
US5750370A (en) 1995-06-06 1998-05-12 Human Genome Sciences, Inc. Nucleic acid encoding human endothlein-bombesin receptor and method of producing the receptor
US5789199A (en) 1994-11-03 1998-08-04 Genentech, Inc. Process for bacterial production of polypeptides
US5840523A (en) 1995-03-01 1998-11-24 Genetech, Inc. Methods and compositions for secretion of heterologous polypeptides
US5731168A (en) 1995-03-01 1998-03-24 Genentech, Inc. Method for making heteromultimeric polypeptides
JPH08336393A (ja) 1995-04-13 1996-12-24 Mitsubishi Chem Corp 光学活性なγ−置換−β−ヒドロキシ酪酸エステルの製造法
US5869046A (en) 1995-04-14 1999-02-09 Genentech, Inc. Altered polypeptides with increased half-life
US5707829A (en) 1995-08-11 1998-01-13 Genetics Institute, Inc. DNA sequences and secreted proteins encoded thereby
US20020193567A1 (en) 1995-08-11 2002-12-19 Genetics Institute, Inc. Secreted proteins and polynucleotides encoding them
GB9603256D0 (en) 1996-02-16 1996-04-17 Wellcome Found Antibodies
JP3646191B2 (ja) 1996-03-19 2005-05-11 大塚製薬株式会社 ヒト遺伝子
AU722499B2 (en) 1996-05-17 2000-08-03 Schering Corporation Human B-cell antigens, related reagents
US7371376B1 (en) 1996-10-18 2008-05-13 Genentech, Inc. Anti-ErbB2 antibodies
JP2001504326A (ja) * 1996-10-18 2001-04-03 ジェネンテック インコーポレーテッド 抗ＥｒｂＢ２抗体
US5945511A (en) 1997-02-20 1999-08-31 Zymogenetics, Inc. Class II cytokine receptor
US20030185830A1 (en) 1997-02-25 2003-10-02 Corixa Corporation Compositions and methods for the therapy and diagnosis of prostate cancer
US7033827B2 (en) 1997-02-25 2006-04-25 Corixa Corporation Prostate-specific polynucleotide compositions
US6261791B1 (en) 1997-03-10 2001-07-17 The Regents Of The University Of California Method for diagnosing cancer using specific PSCA antibodies
US6541212B2 (en) 1997-03-10 2003-04-01 The Regents Of The University Of California Methods for detecting prostate stem cell antigen protein
DE69824287T2 (de) 1997-03-10 2005-06-16 The Regents Of The University Of California, Oakland Prostata stammzell-antigen (psca)
US6555339B1 (en) 1997-04-14 2003-04-29 Arena Pharmaceuticals, Inc. Non-endogenous, constitutively activated human protein-coupled receptors
US6319688B1 (en) 1997-04-28 2001-11-20 Smithkline Beecham Corporation Polynucleotide encoding human sodium dependent phosphate transporter (IPT-1)
CA2288600C (en) 1997-05-02 2010-06-01 Genentech, Inc. A method for making multispecific antibodies having heteromultimeric and common components
WO1998051805A1 (en) 1997-05-15 1998-11-19 Abbott Laboratories Reagents and methods useful for detecting diseases of the prostate
WO1998051824A1 (en) 1997-05-15 1998-11-19 Abbott Laboratories Reagents and methods useful for detecting disease of the urinary tract
ES2244066T3 (es) 1997-06-24 2005-12-01 Genentech, Inc. Procedimiento y composiciones de glicoproteinas galactosiladas.
US6040498A (en) 1998-08-11 2000-03-21 North Caroline State University Genetically engineered duckweed
US6602677B1 (en) 1997-09-19 2003-08-05 Promega Corporation Thermostable luciferases and methods of production
US20030060612A1 (en) 1997-10-28 2003-03-27 Genentech, Inc. Compositions and methods for the diagnosis and treatment of tumor
AU759779B2 (en) 1997-10-31 2003-05-01 Genentech Inc. Methods and compositions comprising glycoprotein glycoforms
US20020034749A1 (en) 1997-11-18 2002-03-21 Billing-Medel Patricia A. Reagents and methods useful for detecting diseases of the breast
US6610833B1 (en) 1997-11-24 2003-08-26 The Institute For Human Genetics And Biochemistry Monoclonal human natural antibodies
US6110695A (en) 1997-12-02 2000-08-29 The Regents Of The University Of California Modulating the interaction of the chemokine, B Lymphocyte Hemoattractant, and its Receptor, BLR1
WO1999029888A1 (en) 1997-12-05 1999-06-17 The Scripps Research Institute Humanization of murine antibody
WO2004031238A2 (en) 2002-10-03 2004-04-15 Mcgill Univeristy Antibodies and cyclic peptides which bind cea (carcinoembryonic antigen) and their use as cancer therapeutics
CA2323071C (en) 1998-03-13 2011-06-21 The Burnham Institute Molecules that home to various selected organs or tissues
WO1999048527A1 (en) 1998-03-27 1999-09-30 Genentech, Inc. Apo-2 ligand-anti-her-2 antibody synergism
US6194551B1 (en) 1998-04-02 2001-02-27 Genentech, Inc. Polypeptide variants
ATE375365T1 (de) 1998-04-02 2007-10-15 Genentech Inc Antikörper varianten und fragmente davon
WO1999054342A1 (en) 1998-04-20 1999-10-28 Pablo Umana Glycosylation engineering of antibodies for improving antibody-dependent cellular cytotoxicity
US6534482B1 (en) 1998-05-13 2003-03-18 Epimmune, Inc. Expression vectors for stimulating an immune response and methods of using the same
US20020187472A1 (en) 2001-03-09 2002-12-12 Preeti Lal Steap-related protein
US20030064397A1 (en) 1998-05-22 2003-04-03 Incyte Genomics, Inc. Transmembrane protein differentially expressed in prostate and lung tumors
GB9818731D0 (en) 1998-08-27 1998-10-21 Univ Portsmouth Compounds
WO2000012130A1 (en) 1998-08-27 2000-03-09 Smithkline Beecham Corporation Rp105 agonists and antagonists
ES2199200T3 (es) 1998-08-27 2004-02-16 Spirogen Limited Pirrolobenzodiacepinas.
JP4689781B2 (ja) 1998-09-03 2011-05-25 独立行政法人科学技術振興機構 アミノ酸輸送蛋白及びその遺伝子
WO2000020579A1 (en) 1998-10-02 2000-04-13 Mcmaster University Spliced form of erbb-2/neu oncogene
WO2001057188A2 (en) 2000-02-03 2001-08-09 Hyseq, Inc. Novel nucleic acids and polypeptides
US20020119158A1 (en) 1998-12-17 2002-08-29 Corixa Corporation Compositions and methods for the therapy and diagnosis of ovarian cancer
US6962980B2 (en) 1999-09-24 2005-11-08 Corixa Corporation Compositions and methods for the therapy and diagnosis of ovarian cancer
US6468546B1 (en) 1998-12-17 2002-10-22 Corixa Corporation Compositions and methods for therapy and diagnosis of ovarian cancer
US20030091580A1 (en) 2001-06-18 2003-05-15 Mitcham Jennifer L. Compositions and methods for the therapy and diagnosis of ovarian cancer
US6858710B2 (en) 1998-12-17 2005-02-22 Corixa Corporation Compositions and methods for the therapy and diagnosis of ovarian cancer
ATE407949T1 (de) 1998-12-30 2008-09-15 Beth Israel Hospital Charakterisierung der proteinfamilie von soc/crac kalziumkanälen
US20030009013A1 (en) 1998-12-30 2003-01-09 Genentech, Inc. Secreted and transmembrane polypeptides and nucleic acids encoding the same
HUP0104865A3 (en) 1999-01-15 2004-07-28 Genentech Inc Polypeptide variants with altered effector function
US6737056B1 (en) 1999-01-15 2004-05-18 Genentech, Inc. Polypeptide variants with altered effector function
WO2000044899A1 (en) 1999-01-29 2000-08-03 Corixa Corporation Her-2/neu fusion proteins
GB9905124D0 (en) 1999-03-05 1999-04-28 Smithkline Beecham Biolog Novel compounds
AU3395900A (en) 1999-03-12 2000-10-04 Human Genome Sciences, Inc. Human lung cancer associated gene sequences and polypeptides
JP4368530B2 (ja) 1999-04-09 2009-11-18 協和発酵キリン株式会社 免疫機能分子の活性を調節する方法
US7312303B2 (en) 1999-05-11 2007-12-25 Genentech, Inc. Anti-PRO4980 antibodies
CA2370466C (en) 1999-06-25 2011-02-08 Sharon Erickson Methods of treatment using anti-erbb antibody-maytansinoid conjugates
AU4952600A (en) 1999-06-03 2000-12-28 Takeda Chemical Industries Ltd. Screening method with the use of cd100
US7041292B1 (en) 1999-06-25 2006-05-09 Genentech, Inc. Treating prostate cancer with anti-ErbB2 antibodies
US6949245B1 (en) 1999-06-25 2005-09-27 Genentech, Inc. Humanized anti-ErbB2 antibodies and treatment with anti-ErbB2 antibodies
US7589172B2 (en) 1999-07-20 2009-09-15 Genentech, Inc. PRO256 polypeptides
US7297770B2 (en) 1999-08-10 2007-11-20 Genentech, Inc. PRO6496 polypeptides
US7294696B2 (en) 1999-08-17 2007-11-13 Genentech Inc. PRO7168 polypeptides
CA2380355A1 (en) 1999-09-01 2001-03-08 Genentech, Inc. Secreted and transmembrane polypeptides and nucleic acids encoding the same
US20030129192A1 (en) 1999-09-10 2003-07-10 Corixa Corporation Compositions and methods for the therapy and diagnosis of ovarian cancer
US20030232056A1 (en) 1999-09-10 2003-12-18 Corixa Corporation Compositions and methods for the therapy and diagnosis of ovarian cancer
US20030206918A1 (en) 1999-09-10 2003-11-06 Corixa Corporation Compositions and methods for the therapy and diagnosis of ovarian cancer
WO2001025454A2 (en) 1999-10-04 2001-04-12 Medicago Inc. Method for regulating transcription of foreign genes in the presence of nitrogen
US7125978B1 (en) 1999-10-04 2006-10-24 Medicago Inc. Promoter for regulating expression of foreign genes
CA2388245C (en) 1999-10-19 2012-01-10 Tatsuya Ogawa The use of serum-free adapted rat cells for producing heterologous polypeptides
IL149116A0 (en) 1999-10-29 2002-11-10 Genentech Inc Anti-prostate stem cell antigen (psca) antibody compositions and methods of use
EP2316843B1 (en) 1999-11-29 2015-10-14 The Trustees of Columbia University in the City of New York Isolation of five novel genes coding for new Fc receptors-type melanoma involved in the pathogenesis of lymphoma/melanoma
EP1248800A2 (en) 1999-11-30 2002-10-16 Corixa Corporation Compositions and methods for therapy and diagnosis of breast cancer
AU2087401A (en) 1999-12-10 2001-06-18 Epimmune, Inc. Inducing cellular immune responses to her2/neu using peptide and nucleic acid compositions
EP1240319A1 (en) 1999-12-15 2002-09-18 Genentech, Inc. Shotgun scanning, a combinatorial method for mapping functional protein epitopes
NZ502058A (en) 1999-12-23 2003-11-28 Ovita Ltd Isolated mutated nucleic acid molecule for regulation of ovulation rate
US6610286B2 (en) 1999-12-23 2003-08-26 Zymogenetics, Inc. Method for treating inflammation using soluble receptors to interleukin-20
EP1244708B8 (en) 1999-12-23 2007-03-07 ZymoGenetics, Inc. Method for treating inflammation
AU783473B2 (en) 1999-12-23 2005-10-27 Zymogenetics Inc. Soluble interleukin-20 receptor
US7297333B2 (en) 2000-01-20 2007-11-20 Genentech, Inc. Anti-PRO10268 antibodies
US20030224379A1 (en) 2000-01-21 2003-12-04 Tang Y. Tom Novel nucleic acids and polypeptides
CA2398102A1 (en) 2000-01-21 2001-07-26 Corixa Corporation Compounds and methods for prevention and treatment of her-2/neu associated malignancies
AU2001238596A1 (en) 2000-02-22 2001-09-03 Millennium Pharmaceuticals, Inc. 18607, a novel human calcium channel
US20030219806A1 (en) 2000-02-22 2003-11-27 Millennium Pharmaceuticals, Inc. Novel 18607, 15603, 69318, 12303, 48000, 52920, 5433, 38554, 57301, 58324, 55063, 52991, 59914, 59921 and 33751 molecules and uses therefor
US20040002068A1 (en) 2000-03-01 2004-01-01 Corixa Corporation Compositions and methods for the detection, diagnosis and therapy of hematological malignancies
US20040005561A1 (en) 2000-03-01 2004-01-08 Corixa Corporation Compositions and methods for the detection, diagnosis and therapy of hematological malignancies
WO2001066689A2 (en) 2000-03-07 2001-09-13 Hyseq, Inc. Novel nucleic acids and polypeptides
AU4941101A (en) 2000-03-24 2001-10-08 Fahri Saatcioglu Novel prostate-specific or testis-specific nucleic acid molecules, polypeptides,and diagnostic and therapeutic methods
WO2001072830A2 (de) 2000-03-31 2001-10-04 Ipf Pharmaceuticals Gmbh Diagnostik- und arzneimittel zur untersuchung des zelloberflächenproteoms von tumor- und entzündungszellen sowie zur behandlung von tumorerkrankungen und entzündlichen erkrankungen vorzugsweise mit hilfe einer spezifischen chemokinrezeptor-analyse und der chemokinrezeptor-ligand-interaktion
US7279294B2 (en) 2000-04-03 2007-10-09 The United States Of America As Represented By The Secretary, Dept. Of Health And Human Services, Nih Tumor markers in ovarian cancer
AU2001249885A1 (en) 2000-04-07 2001-10-23 Arena Pharmaceuticals, Inc. Non-endogenous, constitutively activated known g protein-coupled receptors
HUP0300369A2 (hu) 2000-04-11 2003-06-28 Genentech, Inc. Többértékű antitestek és alkalmazásuk
US20030119115A1 (en) 2000-05-17 2003-06-26 Genentech, Inc. Secreted and transmembrane polypeptides and nucleic acids encoding the same
WO2001088133A2 (en) 2000-05-18 2001-11-22 Lexicon Genetics Incorporated Human semaphorin homologs and polynucleotides encoding the same
AU2001274888A1 (en) 2000-05-19 2001-12-03 Human Genome Sciences, Inc. Nucleic acids, proteins, and antibodies
PL217410B1 (pl) 2000-05-19 2014-07-31 Genentech Inc Zastosowanie antagonisty ErbB, antagonista ErbB do zastosowania w metodzie leczenia raka i sposób identyfikacji pacjenta skłonnego do korzystnej odpowiedzi na antagonistę ErbB przy leczeniu raka
US20020051990A1 (en) 2000-06-09 2002-05-02 Eric Ople Novel gene targets and ligands that bind thereto for treatment and diagnosis of ovarian carcinomas
JP2004523203A (ja) 2000-06-16 2004-08-05 インサイト・ゲノミックス・インコーポレイテッド Ｇタンパク質結合受容体
JP2004502414A (ja) 2000-06-30 2004-01-29 ヒューマン　ジノーム　サイエンシーズ，　インコーポレイテッド Ｂ７様ポリヌクレオチド、ポリペプチドおよび抗体
CA2413262A1 (en) 2000-06-30 2002-01-10 Amgen, Inc. B7-like molecules and uses thereof
AU2001273151A1 (en) 2000-06-30 2002-01-14 Incyte Genomics, Inc. Human extracellular matrix and cell adhesion polypeptides
WO2002006339A2 (en) 2000-07-03 2002-01-24 Curagen Corporation Proteins and nucleic acids encoding same
US20040044179A1 (en) 2000-07-25 2004-03-04 Genentech, Inc. Secreted and transmembrane polypeptides and nucleic acids encoding the same
US6891030B2 (en) 2000-07-27 2005-05-10 Mayo Foundation For Medical Education And Research T-cell immunoregulatory molecule
AU2001287639A1 (en) 2000-07-28 2002-02-13 Ulrich Wissenbach Trp8, trp9 and trp10, markers for cancer
US7229623B1 (en) 2000-08-03 2007-06-12 Corixa Corporation Her-2/neu fusion proteins
WO2002013847A2 (en) 2000-08-14 2002-02-21 Corixa Corporation Methods for diagnosis and therapy of hematological and virus-associated malignancies
AU2001295008A1 (en) 2000-08-14 2002-02-25 Corixa Corporation Compositions and methods for the therapy and diagnosis of Her-2/neu-associated malignancies
US6984494B2 (en) 2000-08-15 2006-01-10 Genentech, Inc. Analytical method
GB0020953D0 (en) 2000-08-24 2000-10-11 Smithkline Beecham Biolog Vaccine
MXPA03001645A (es) 2000-08-24 2004-05-14 Genentech Inc Composiciones y metodos para el diagnostico y tratamiento de tumores.
WO2002022660A2 (en) 2000-09-11 2002-03-21 Hyseq, Inc. Novel nucleic acids and polypeptides
US6613567B1 (en) 2000-09-15 2003-09-02 Isis Pharmaceuticals, Inc. Antisense inhibition of Her-2 expression
EP1351703B1 (en) 2000-09-15 2006-07-26 ZymoGenetics, Inc. Use of a polypeptide comprising the extracellular domains of il-20ra and il-20rb for the treatment of inflammation
US7491797B2 (en) 2000-09-15 2009-02-17 Genentech, Inc. PRO6308 polypeptide
CA2422814A1 (en) 2000-09-18 2002-03-21 Biogen, Inc. Cripto mutant and uses thereof
UA83458C2 (uk) 2000-09-18 2008-07-25 Байоджен Айдек Ма Інк. Виділений поліпептид baff-r (рецептор фактора активації в-клітин сімейства tnf)
US7064191B2 (en) 2000-10-06 2006-06-20 Kyowa Hakko Kogyo Co., Ltd. Process for purifying antibody
US6946292B2 (en) 2000-10-06 2005-09-20 Kyowa Hakko Kogyo Co., Ltd. Cells producing antibody compositions with increased antibody dependent cytotoxic activity
WO2002031140A1 (fr) 2000-10-06 2002-04-18 Kyowa Hakko Kogyo Co., Ltd. Cellules produisant des compositions d'anticorps
EP1474528A4 (en) 2000-10-13 2006-06-14 Protein Design Labs Inc METHODS FOR DIAGNOSING PROSTATE CANCER, COMPOSITIONS AND METHODS FOR SCREENING PROSTATE CANCER MODULATORS
US6596541B2 (en) 2000-10-31 2003-07-22 Regeneron Pharmaceuticals, Inc. Methods of modifying eukaryotic cells
CA2428242A1 (en) 2000-11-07 2002-05-16 Zymogenetics, Inc. Human tumor necrosis factor receptor
US20020150573A1 (en) 2000-11-10 2002-10-17 The Rockefeller University Anti-Igalpha-Igbeta antibody for lymphoma therapy
AU2002239422B2 (en) 2000-11-30 2006-12-07 E. R. Squibb & Sons, L.L.C. Transgenic transchromosomal rodents for making human antibodies
WO2002061087A2 (en) 2000-12-19 2002-08-08 Lifespan Biosciences, Inc. Antigenic peptides, such as for g protein-coupled receptors (gpcrs), antibodies thereto, and systems for identifying such antigenic peptides
AU2002243495A1 (en) 2001-01-12 2002-07-24 University Of Medicine And Dentistry Of New Jersey Bone morphogenetic protein-2 in the treatment and diagnosis of cancer
US20030119119A1 (en) 2001-01-16 2003-06-26 Genentech, Inc. Secreted and transmembrane polypeptides and nucleic acids encoding the same
US20030119133A1 (en) 2001-01-16 2003-06-26 Genentech, Inc. Secreted and transmembrane polypeptides and nucleic acids encoding the same
US7754208B2 (en) 2001-01-17 2010-07-13 Trubion Pharmaceuticals, Inc. Binding domain-immunoglobulin fusion proteins
MXPA03006617A (es) 2001-01-24 2004-12-02 Protein Design Labs Inc Metodos de diagnostico de cancer de pecho, composiciones y metodos de rastreo de moduladores de cancer de pecho.
WO2002060317A2 (en) 2001-01-30 2002-08-08 Corixa Corporation Compositions and methods for the therapy and diagnosis of pancreatic cancer
US20040170994A1 (en) 2001-02-12 2004-09-02 Callen David Frederick DNA sequences for human tumour suppressor genes
US20030087250A1 (en) 2001-03-14 2003-05-08 Millennium Pharmaceuticals, Inc. Nucleic acid molecules and proteins for the identification, assessment, prevention, and therapy of ovarian cancer
US20040236091A1 (en) 2001-03-28 2004-11-25 Chicz Roman M. Translational profiling
WO2003008537A2 (en) 2001-04-06 2003-01-30 Mannkind Corporation Epitope sequences
US6820011B2 (en) 2001-04-11 2004-11-16 The Regents Of The University Of Colorado Three-dimensional structure of complement receptor type 2 and uses thereof
MXPA03009510A (es) 2001-04-17 2005-04-29 Univ Arkansas Secuencias de repeticion del gen ca125 y su uso para intervenciones de diagnosticos y terapeuticas.
AU2002309583A1 (en) 2001-04-18 2002-11-05 Protein Desing Labs, Inc. Methods of diagnosis of lung cancer, compositions and methods of screening for modulators of lung cancer
SI1390389T1 (sl) 2001-04-26 2009-06-30 Biogen Idec Inc Protitelesa, ki blokirajo cripto in uporabe le-teh
EP1515982A4 (en) 2001-05-09 2005-10-26 Corixa Corp METHODS AND COMPOSITIONS FOR THE THERAPY AND DIAGNOSIS OF PROSTATE CANCER
WO2002092836A2 (en) 2001-05-11 2002-11-21 Sloan-Kettering Institute For Cancer Research Nucleic acid sequence encoding ovarian antigen, ca125, and uses thereof
IL158920A0 (en) 2001-05-24 2004-05-12 Zymogenetics Inc Taci-immunoglobulin fusion proteins
WO2003000842A2 (en) 2001-06-04 2003-01-03 Curagen Corporation Novel proteins and nucleic acids encoding same
AU2002314901A1 (en) 2001-06-04 2002-12-16 Eos Biotechnology, Inc. Methods of diagnosis and treatment of androgen-dependent prostate cancer, prostate cancer undergoing androgen-withdrawal, and androgen-independent prostate cancer
WO2002099040A2 (en) 2001-06-05 2002-12-12 Exelixis, Inc. Igs as modifiers of the p53 pathway and methods of use
JP2005501528A (ja) 2001-06-05 2005-01-20 エクセリクシス・インコーポレイテッド ｐ５３経路のモディファイヤーとしてのＧＦＡＴｓおよび使用方法
US7235358B2 (en) 2001-06-08 2007-06-26 Expression Diagnostics, Inc. Methods and compositions for diagnosing and monitoring transplant rejection
WO2002101075A2 (en) 2001-06-13 2002-12-19 Millennium Pharmaceuticals, Inc. Novel genes, compositions, kits, and methods for identification, assessment, prevention, and therapy of cervical cancer
US7189507B2 (en) 2001-06-18 2007-03-13 Pdl Biopharma, Inc. Methods of diagnosis of ovarian cancer, compositions and methods of screening for modulators of ovarian cancer
WO2002102235A2 (en) 2001-06-18 2002-12-27 Eos Biotechnology Inc. Methods of diagnosis of ovarian cancer, compositions and methods of screening for modulators of ovarian cancer
WO2003004989A2 (en) 2001-06-21 2003-01-16 Millennium Pharmaceuticals, Inc. Compositions, kits, and methods for identification, assessment, prevention, and therapy of breast cancer
WO2003002717A2 (en) 2001-06-28 2003-01-09 Schering Corporation Biological activity of ak155
US20030120040A1 (en) 2001-06-29 2003-06-26 Genentech, Inc. Secreted and Transmembrane polypeptides and nucleic acids encoding the same
WO2003004529A2 (en) 2001-07-02 2003-01-16 Licentia Ltd. Ephrin-tie receptor materials and methods
US20040076955A1 (en) 2001-07-03 2004-04-22 Eos Biotechnology, Inc. Methods of diagnosis of bladder cancer, compositions and methods of screening for modulators of bladder cancer
WO2003003984A2 (en) 2001-07-05 2003-01-16 Curagen Corporation Novel proteins and nucleic acids encoding same
WO2003055439A2 (en) 2001-07-18 2003-07-10 The Regents Of The University Of California Her2/neu target antigen and use of same to stimulate an immune response
US20030108963A1 (en) 2001-07-25 2003-06-12 Millennium Pharmaceuticals, Inc. Novel genes, compositions, kit, and methods for identification, assessment, prevention and therapy of prostate cancer
EA007984B1 (ru) 2001-08-03 2007-02-27 Дженентек, Инк. ПОЛИПЕПТИДЫ TACIs И BR3 И ИХ ПРИМЕНЕНИЕ
CN1555411A (zh) 2001-08-03 2004-12-15 ���迨�����＼���ɷݹ�˾ 抗体-依赖性细胞毒性增大的抗体糖基化变体
EP1478772A2 (en) 2001-08-14 2004-11-24 The General Hospital Corporation Nucleic acid and amino acid sequences involved in pain
US20030092013A1 (en) 2001-08-16 2003-05-15 Vitivity, Inc. Diagnosis and treatment of vascular disease
WO2003018621A2 (en) 2001-08-23 2003-03-06 Oxford Biomedica (Uk) Limited Genes
AU2002357643A1 (en) 2001-08-29 2003-04-14 Vanderbilt University The human mob-5 (il-24) receptors and uses thereof
US20030124579A1 (en) 2001-09-05 2003-07-03 Eos Biotechnology, Inc. Methods of diagnosis of ovarian cancer, compositions and methods of screening for modulators of ovarian cancer
ES2537074T3 (es) 2001-09-06 2015-06-02 Agensys, Inc. Ácido nucleico y proteína correspondiente denominados STEAP-1 útiles en el tratamiento y la detección de cáncer
EP1434881A4 (en) 2001-09-17 2005-10-26 Protein Design Labs Inc METHOD FOR DIAGNOSIS OF CANCER COMPOSITIONS AND METHOD FOR SCREENING ON CANCER MODULATORS
JP2005536439A (ja) 2001-09-18 2005-12-02 ジェネンテック・インコーポレーテッド 腫瘍の診断及び治療のための組成物と方法
US20050004017A1 (en) 2001-09-18 2005-01-06 Yuval Reiss Methods and compositions for treating hcap associated diseases
WO2003025148A2 (en) 2001-09-19 2003-03-27 Nuvelo, Inc. Novel nucleic acids and polypeptides
US20030077644A1 (en) 2001-09-28 2003-04-24 Bing Yang Diagnosis and treatment of diseases caused by mutations in CD72
AU2002362436A1 (en) 2001-10-03 2003-04-14 Rigel Pharmaceuticals, Inc. Modulators of lymphocyte activation and migration
WO2003029421A2 (en) 2001-10-03 2003-04-10 Origene Technologies, Inc. Regulated breast cancer genes
US20030228319A1 (en) 2002-04-16 2003-12-11 Genentech, Inc. Compositions and methods for the diagnosis and treatment of tumor
US20050123925A1 (en) 2002-11-15 2005-06-09 Genentech, Inc. Compositions and methods for the diagnosis and treatment of tumor
CA2461665A1 (en) 2001-10-19 2003-05-01 Genentech, Inc. Compositions and methods for the diagnosis and treatment of inflammatory bowel disorders
CA2465268A1 (en) 2001-10-24 2003-05-01 National Jewish Medical And Research Center Three-dimensional structures of tall-1 and its cognate receptors and modified proteins and methods related thereto
US20030157108A1 (en) 2001-10-25 2003-08-21 Genentech, Inc. Glycoprotein compositions
CN1966725A (zh) 2001-10-31 2007-05-23 爱尔康公司 骨形态生发蛋白(bmp)、bmp受体和bmp结合蛋白及它们在诊断和治疗青光眼中的用途
US20030232350A1 (en) 2001-11-13 2003-12-18 Eos Biotechnology, Inc. Methods of diagnosis of cancer, compositions and methods of screening for modulators of cancer
WO2003042661A2 (en) 2001-11-13 2003-05-22 Protein Design Labs, Inc. Methods of diagnosis of cancer, compositions and methods of screening for modulators of cancer
US7344843B2 (en) 2001-11-29 2008-03-18 Serono Genetics Institute S.A. Agonists and antagonists of prolixin for the treatment of metabolic disorders
WO2003048202A2 (en) 2001-12-03 2003-06-12 Asahi Kasei Pharma Corporation Nf-kappab activating genes
CA2469941A1 (en) 2001-12-10 2003-07-03 Nuvelo, Inc. Novel nucleic acids and polypeptides
US20040093621A1 (en) 2001-12-25 2004-05-13 Kyowa Hakko Kogyo Co., Ltd Antibody composition which specifically binds to CD20
US20030134790A1 (en) 2002-01-11 2003-07-17 University Of Medicine And Dentistry Of New Jersey Bone Morphogenetic Protein-2 And Bone Morphogenetic Protein-4 In The Treatment And Diagnosis Of Cancer
US7452675B2 (en) 2002-01-25 2008-11-18 The Queen's Medical Center Methods of screening for TRPM4b modulators
ATE482719T1 (de) 2002-02-21 2010-10-15 Univ Duke Behandlungsverfahren unter verwendung von anti- cd22-antikörpern
EP2388265A1 (en) 2002-02-22 2011-11-23 Genentech, Inc. Compositions and methods for the treatment of immune related diseases
US20030219795A1 (en) 2002-03-01 2003-11-27 Marcia Belvin SCDs as modifiers of the p53 pathway and methods of use
WO2003097803A2 (en) 2002-05-15 2003-11-27 Avalon Pharmaceuticals Cancer-linked gene as target for chemotherapy
WO2003104399A2 (en) 2002-06-07 2003-12-18 Avalon Pharmaceuticals, Inc Cancer-linked gene as target for chemotherapy
US6660856B2 (en) 2002-03-08 2003-12-09 Kaohsiung Medical University Synthesis of pyrrolo[2,1-c][1,4]benzodiazepine analogues
EP2258712A3 (en) 2002-03-15 2011-05-04 Multicell Immunotherapeutics, Inc. Compositions and Methods to Initiate or Enhance Antibody and Major-histocompatibility Class I or Class II-restricted T Cell Responses by Using Immunomodulatory, Non-coding RNA Motifs
WO2004000997A2 (en) 2002-03-19 2003-12-31 Curagen Corporation Therapeutic polypeptides, nucleic acids encoding same, and methods of use
JP2005534286A (ja) 2002-03-21 2005-11-17 サネシス ファーマシューティカルズ， インコーポレイテッド キナーゼインヒビターの同定
US7193069B2 (en) 2002-03-22 2007-03-20 Research Association For Biotechnology Full-length cDNA
EP1494693B1 (en) 2002-03-22 2010-12-08 Biogen Idec MA Inc. Cripto-specific antibodies
US7317087B2 (en) 2002-03-25 2008-01-08 The Uab Research Foundation Members of the FC receptor homolog gene family (FCRH1-3, 6), related reagents, and uses thereof
WO2003083074A2 (en) 2002-03-28 2003-10-09 Idec Pharmaceuticals Corporation Novel gene targets and ligands that bind thereto for treatment and diagnosis of colon carcinomas
US20030194704A1 (en) 2002-04-03 2003-10-16 Penn Sharron Gaynor Human genome-derived single exon nucleic acid probes useful for gene expression analysis two
AU2003223469A1 (en) 2002-04-05 2003-10-27 Agensys, Inc. Nucleic acid and corresponding protein entitled 98p4b6 useful in treatment and detection of cancer
AU2003236019A1 (en) 2002-04-09 2003-10-20 Kyowa Hakko Kirin Co., Ltd. Drug containing antibody composition appropriate for patient suffering from Fc Gamma RIIIa polymorphism
CA2481920A1 (en) 2002-04-09 2003-10-16 Kyowa Hakko Kogyo Co., Ltd. Antibody composition-containing medicament
DE60336548D1 (de) 2002-04-09 2011-05-12 Kyowa Hakko Kirin Co Ltd Zelle mit erniedrigter oder deletierter aktivität eines am gdp-fucosetransport beteiligten proteins
US20040110704A1 (en) 2002-04-09 2004-06-10 Kyowa Hakko Kogyo Co., Ltd. Cells of which genome is modified
WO2003085119A1 (fr) 2002-04-09 2003-10-16 Kyowa Hakko Kogyo Co., Ltd. Procede d'amelioration de l'activite d'une composition d'anticorps de liaison avec le recepteur fc$g(g) iiia
AU2003236015A1 (en) 2002-04-09 2003-10-20 Kyowa Hakko Kirin Co., Ltd. Process for producing antibody composition
AU2003223520A1 (en) 2002-04-12 2003-10-27 Mitokor Targets for therapeutic intervention identified in the mitochondrial proteome
AU2003239158A1 (en) 2002-04-17 2003-11-03 Baylor College Of Medicine Aib1 as a prognostic marker and predictor of resistance to encocrine therapy
WO2003093444A2 (en) 2002-05-03 2003-11-13 Incyte Corporation Transporters and ion channels
WO2003101388A2 (en) 2002-05-30 2003-12-11 Bristol-Myers Squibb Company Human solute carrier family 7 member 11 (hslc7a11)
WO2003102157A2 (en) 2002-06-03 2003-12-11 Genentech, Inc. Synthetic antibody phage libraries
EP1575492A4 (en) 2002-06-04 2007-05-09 Avalon Pharmaceuticals GENERAL ASSOCIATED WITH CANCER AS TARGET FOR CHEMOTHERAPY
WO2003101283A2 (en) 2002-06-04 2003-12-11 Incyte Corporation Diagnostics markers for lung cancer
DK1513934T3 (da) 2002-06-06 2011-05-02 Oncotherapy Science Inc Gener og polypeptider relateret til humane coloncancersygdomme
WO2003104270A2 (en) 2002-06-06 2003-12-18 Ingenium Pharmaceuticals Ag Dudulin 2 genes, expression products, non-human animal model: uses in human hematological disease
WO2003105758A2 (en) 2002-06-12 2003-12-24 Avalon Pharmaceuticals, Inc. Cancer-linked gene as target for chemotherapy
US20040249130A1 (en) 2002-06-18 2004-12-09 Martin Stanton Aptamer-toxin molecules and methods for using same
AU2003247576A1 (en) 2002-06-18 2003-12-31 Archemix Corp. Aptamer-toxin molecules and methods for using same
US7304149B2 (en) 2002-06-20 2007-12-04 Washington University In St. Louis BTLA nucleic acids
EP2365004B1 (en) 2002-06-21 2016-01-06 Johns Hopkins University School of Medicine Membrane associated tumor endothelium markers
WO2004009622A2 (en) 2002-07-19 2004-01-29 Cellzome Ag Protein complexes of cellular networks underlying the development of cancer and other diseases
AU2003256836A1 (en) 2002-07-25 2004-02-16 Genentech, Inc. Taci antibodies and uses thereof
AR040956A1 (es) 2002-07-31 2005-04-27 Schering Ag Nuevos conjugados de efectores, procedimientos para su preparacion y su uso farmaceutico
AU2003251471A1 (en) 2002-08-06 2004-02-25 Bayer Healthcare Ag Diagnostics and therapeutics for diseases associated with human cxc chemokine receptor 5(cxcr5)
JP2004121218A (ja) 2002-08-06 2004-04-22 Jenokkusu Soyaku Kenkyusho:Kk 気管支喘息または慢性閉塞性肺疾患の検査方法
AU2003259163B2 (en) 2002-08-16 2008-07-03 Immunogen, Inc. Cross-linkers with high reactivity and solubility and their use in the preparation of conjugates for targeted delivery of small molecule drugs
KR20050048615A (ko) 2002-08-19 2005-05-24 제넨테크, 인크. 종양의 진단 및 치료를 위한 조성물 및 방법
EP1572957A4 (en) 2002-08-27 2007-10-10 Bristol Myers Squibb Pharma Co IDENTIFICATION OF POLYNUCLEOTIDES FOR PREDICTING THE ACTIVITY OF COMPOUNDS INTERACTING WITH AND / OR MODULATING TYROSINE KINASE PROTEINS AND / OR TYROSINE KINASE PROTEIN PATHWAYS IN MAMMARY CELLS
WO2004020595A2 (en) 2002-08-29 2004-03-11 Five Prime Therapeutics, Inc. Novel human polypeptides encoded by polynucleotides
AU2002951346A0 (en) 2002-09-05 2002-09-26 Garvan Institute Of Medical Research Diagnosis of ovarian cancer
AU2003270311A1 (en) 2002-09-06 2004-03-29 Mannkind Corporation Epitope sequences
AU2003300776A1 (en) 2002-09-09 2004-05-25 Omeros Corporation G protein coupled receptors and uses thereof
JP2004113151A (ja) 2002-09-27 2004-04-15 Sankyo Co Ltd 癌遺伝子及びその用途
AU2003288918A1 (en) 2002-10-04 2004-05-04 Van Andel Research Institute Molecular sub-classification of kidney tumors and the discovery of new diagnostic markers
US7361740B2 (en) 2002-10-15 2008-04-22 Pdl Biopharma, Inc. Alteration of FcRn binding affinities or serum half-lives of antibodies by mutagenesis
JP2006516094A (ja) 2002-11-08 2006-06-22 ジェネンテック・インコーポレーテッド ナチュラルキラー細胞関連疾患の治療のための組成物と方法
CA2503621A1 (en) 2002-11-13 2004-05-27 Genentech, Inc. Methods and compositions for diagnosing dysplasia
CA2505919A1 (en) 2002-11-15 2004-06-03 The Board Of Trustees Of The University Of Arkansas Ca125 gene and its use for diagnostic and therapeutic interventions
CA2505601C (en) 2002-11-15 2014-10-28 Musc Foundation For Research Development Complement receptor 2 targeted complement modulators
AU2003297300A1 (en) 2002-11-20 2004-06-15 Biogen Idec Inc. Novel gene targets and ligands that bind thereto for treatment and diagnosis of carcinomas
EP1624753B1 (en) 2002-11-21 2012-01-25 The University of Utah Research Foundation Purinergic modulation of smell
US20040253606A1 (en) 2002-11-26 2004-12-16 Protein Design Labs, Inc. Methods of detecting soft tissue sarcoma, compositions and methods of screening for soft tissue sarcoma modulators
WO2004053079A2 (en) 2002-12-06 2004-06-24 Diadexus, Inc. Compositions, splice variants and methods relating to ovarian specific genes and proteins
US20040157278A1 (en) 2002-12-13 2004-08-12 Bayer Corporation Detection methods using TIMP 1
PT1572744E (pt) 2002-12-16 2010-09-07 Genentech Inc Variantes de imunoglobulina e utilizações destas
WO2004058171A2 (en) 2002-12-20 2004-07-15 Protein Design Labs, Inc. Antibodies against gpr64 and uses thereof
US20050249671A9 (en) 2002-12-23 2005-11-10 David Parmelee Neutrokine-alpha conjugate, neutrokine-alpha complex, and uses thereof
CA2512536A1 (en) 2003-01-08 2004-07-29 Bristol-Myers Squibb Company Biomarkers and methods for determining sensitivity to epidermal growth factor receptor modulators
US20050227301A1 (en) 2003-01-10 2005-10-13 Polgen Cell cycle progression proteins
US20050181375A1 (en) 2003-01-10 2005-08-18 Natasha Aziz Novel methods of diagnosis of metastatic cancer, compositions and methods of screening for modulators of metastatic cancer
EP1583820A4 (en) 2003-01-14 2007-07-18 Bristol Myers Squibb Co ASSOCIATED POLYNUCLEOTIDES AND POLYPEPTIDES ASSOCIATED WITH THE NF-KB WAY
WO2004065576A2 (en) 2003-01-15 2004-08-05 Millennium Pharmaceuticals, Inc. Methods and compositions for the treatment of urological disorder using differential expressed polypeptides
AU2004205631A1 (en) 2003-01-16 2004-08-05 Genentech, Inc. Synthetic antibody phage libraries
AU2004213432A1 (en) 2003-02-14 2004-09-02 Sagres Discovery, Inc. Novel therapeutic targets in cancer
US20030224411A1 (en) 2003-03-13 2003-12-04 Stanton Lawrence W. Genes that are up- or down-regulated during differentiation of human embryonic stem cells
WO2004087717A1 (en) 2003-03-31 2004-10-14 Council Of Scientific And Industrial Research Non-cross-linking pyrrolo[2,1-c][1,4]benzodiazepines as potential antitumour agents and process thereof
RU2314309C2 (ru) * 2003-03-31 2008-01-10 Каунсил Оф Сайентифик Энд Индастриал Рисерч Пирроло [2.1-c][1.4] бензодиазепины, способ их получения и фармацевтическая композиция на их основе
GB0321295D0 (en) 2003-09-11 2003-10-15 Spirogen Ltd Synthesis of protected pyrrolobenzodiazepines
AU2004279742A1 (en) 2003-10-08 2005-04-21 Kyowa Hakko Kirin Co., Ltd. Fused protein composition
US20070134759A1 (en) 2003-10-09 2007-06-14 Harue Nishiya Process for producing antibody composition by using rna inhibiting the function of alpha1,6-fucosyltransferase
KR101220691B1 (ko) 2003-11-05 2013-01-14 로슈 글리카트 아게 증가된 ｆｃ 수용체 결합 친화성 및 효과기 기능을 가진ｃｄ20 항체
ES2605443T3 (es) 2003-11-06 2017-03-14 Seattle Genetics, Inc. Conjugados de auristatina con anticuerpos anti-HER2 o anti-CD22 y su uso en terapia
WO2005053742A1 (ja) 2003-12-04 2005-06-16 Kyowa Hakko Kogyo Co., Ltd. 抗体組成物を含有する医薬
ES2398975T3 (es) 2004-03-01 2013-03-25 Spirogen Sàrl Derivados de 11-hidroxi-5H-pirrolo[2,1-c][1,4]benzodiazepin-5-ona como intermedios clave para la preparación de pirrolobenzodiazepinas sustituidas en C2
ZA200608130B (en) 2004-03-31 2008-12-31 Genentech Inc Humanized anti-TGF-beta antibodies
US7785903B2 (en) 2004-04-09 2010-08-31 Genentech, Inc. Variable domain library and uses
EP2357201B1 (en) 2004-04-13 2017-08-30 F. Hoffmann-La Roche AG Anti-P-selectin antibodies
FR2869231B1 (fr) 2004-04-27 2008-03-14 Sod Conseils Rech Applic Composition therapeutique contenant au moins un derive de la pyrrolobenzodiazepine et la fludarabine
CA2567520A1 (en) 2004-06-01 2005-12-15 Genentech, Inc. Maytansinoid-antibody conjugates
TWI309240B (en) 2004-09-17 2009-05-01 Hoffmann La Roche Anti-ox40l antibodies
US20100111856A1 (en) 2004-09-23 2010-05-06 Herman Gill Zirconium-radiolabeled, cysteine engineered antibody conjugates
EP3088004B1 (en) 2004-09-23 2018-03-28 Genentech, Inc. Cysteine engineered antibodies and conjugates
JO3000B1 (ar) 2004-10-20 2016-09-05 Genentech Inc مركبات أجسام مضادة .
WO2006078307A1 (en) 2005-01-21 2006-07-27 Genentech, Inc. Fixed dosing of her antibodies
BRPI0606542A8 (pt) 2005-02-23 2018-03-20 Genentech Inc métodos para aumentar o tempo de progressão de uma doença (ttp)
WO2007056441A2 (en) 2005-11-07 2007-05-18 Genentech, Inc. Binding polypeptides with diversified and consensus vh/vl hypervariable sequences
WO2007064919A2 (en) 2005-12-02 2007-06-07 Genentech, Inc. Binding polypeptides with restricted diversity sequences
PL1813614T3 (pl) 2006-01-25 2012-03-30 Sanofi Sa Środki cytotoksyczne zawierające nowe pochodne tomaymycyny
US20070292936A1 (en) 2006-05-09 2007-12-20 Genentech, Inc. Binding polypeptides with optimized scaffolds
PL2446904T3 (pl) 2006-05-30 2015-10-30 Genentech Inc Przeciwciała anty-CD22, ich immunokoniugaty oraz ich zastosowania
EP1864682A1 (en) * 2006-06-09 2007-12-12 Sanofi-Aventis Leptomycin derivatives
US10118970B2 (en) 2006-08-30 2018-11-06 Genentech, Inc. Multispecific antibodies
US20080226635A1 (en) 2006-12-22 2008-09-18 Hans Koll Antibodies against insulin-like growth factor I receptor and uses thereof
CN100592373C (zh) 2007-05-25 2010-02-24 群康科技(深圳)有限公司 液晶显示面板驱动装置及其驱动方法
MX350962B (es) 2008-01-07 2017-09-27 Amgen Inc Metodo para fabricar moleculas heterodimericas de fragmentos cristalizables de anticuerpo, utilizando efectos electrostaticos de direccion.
GB0819097D0 (en) 2008-10-17 2008-11-26 Spirogen Ltd Pyrrolobenzodiazepines
GB0819095D0 (en) 2008-10-17 2008-11-26 Spirogen Ltd Pyrrolobenzodiazepines
CA2750519C (en) * 2009-02-05 2018-09-25 Immunogen, Inc. Benzodiazepine derivatives
FR2949469A1 (fr) 2009-08-25 2011-03-04 Sanofi Aventis Derives anticancereux, leur preparation et leur application en therapeutique
CN104610454A (zh) 2010-02-16 2015-05-13 米迪缪尼有限公司 Hsa相关组合物及使用方法
CN102167742B (zh) 2010-02-25 2014-05-14 上海百迈博制药有限公司 一种全人源抗her2单克隆抗体、其制备方法及用途
MX368648B (es) 2010-04-15 2019-10-09 Seattle Genetics Inc Pirrolobenzodiazepinas usadas para tratar enfermedades proliferativas.
CN102933236B (zh) 2010-04-15 2014-10-08 斯皮罗根有限公司 吡咯并苯二氮卓类及其结合物
CN103068405A (zh) 2010-04-15 2013-04-24 西雅图基因公司 靶向吡咯并苯并二氮杂卓结合物
CA2796633C (en) 2010-04-23 2020-10-27 Genentech, Inc. Production of heteromultimeric proteins
CN103068406B (zh) 2010-06-08 2017-06-30 基因泰克公司 半胱氨酸改造的抗体和偶联物
FR2963007B1 (fr) 2010-07-26 2013-04-05 Sanofi Aventis Derives anticancereux, leur preparation et leur application therapeutique
CN103313990B (zh) * 2010-11-17 2016-07-20 基因泰克公司 丙氨酰美登醇抗体偶联物
CA2825064C (en) 2011-02-04 2022-08-30 Genentech, Inc. Fc variants and methods for their production
CN113896731A (zh) 2011-02-15 2022-01-07 伊缪诺金公司 细胞毒性苯并二氮杂䓬衍生物
ES2692268T3 (es) 2011-03-29 2018-12-03 Roche Glycart Ag Variantes de Fc de anticuerpo
WO2013017705A1 (es) 2011-08-03 2013-02-07 Salvador Moreno Rufino Baltasar Sistema de panel para construccion con retroiluminacion a base de diodos electroluminosos
SG11201400770SA (en) 2011-09-20 2014-04-28 Spirogen Sarl Pyrrolobenzodiazepines as unsymmetrical dimeric pbd compounds for inclusion in targeted conjugates
US9399073B2 (en) * 2011-10-14 2016-07-26 Seattle Genetics, Inc. Pyrrolobenzodiazepines
BR112014009055B1 (pt) 2011-10-14 2021-12-14 Seattle Genetics, Inc. Compostos pirrolobenzodiazepinas, conjugados alvos, ligante de fármaco e uso dos ditos conjugados para tratar uma doença proliferativa
CN108164551A (zh) 2011-10-14 2018-06-15 西雅图基因公司 吡咯并苯并二氮杂卓和靶向结合物
HUE025661T2 (en) 2011-10-14 2016-04-28 Medimmune Ltd Pyrrolobenzodiazepines and their conjugates
WO2013171157A1 (en) 2012-05-14 2013-11-21 Sanofi Method for producing recombinant 11-de-o-methyltomaymycin
KR101718200B1 (ko) 2012-05-21 2017-03-21 제넨테크, 인크. 항-Ly6E 항체 및 면역접합체 및 사용 방법
WO2013177481A1 (en) 2012-05-25 2013-11-28 Immunogen, Inc. Benzodiazepines and conjugates thereof
RS57694B1 (sr) 2012-10-12 2018-11-30 Adc Therapeutics Sa Pirolobenzodiazepin - anti-psma konjugati antitela
KR101995620B1 (ko) 2012-10-12 2019-07-03 에이디씨 테라퓨틱스 에스에이 피롤로벤조디아제핀-항체 컨주게이트
NZ707490A (en) 2012-10-12 2018-09-28 Adc Therapeutics Sa Pyrrolobenzodiazepine-anti-cd22 antibody conjugates
US9745303B2 (en) 2012-10-12 2017-08-29 Medimmune Limited Synthesis and intermediates of pyrrolobenzodiazepine derivatives for conjugation
KR20150083994A (ko) 2012-10-12 2015-07-21 스피로즌 살 피롤로벤조디아제핀 및 그의 컨주게이트
ES2680153T3 (es) 2012-10-12 2018-09-04 Adc Therapeutics Sa Conjugados de anticuerpos anti-PSMA-pirrolobenzodiazepinas
WO2014057118A1 (en) 2012-10-12 2014-04-17 Adc Therapeutics Sarl Pyrrolobenzodiazepine-anti-cd22 antibody conjugates
JP2016502504A (ja) 2012-10-12 2016-01-28 エイディーシー・セラピューティクス・エス・アー・エール・エルＡｄｃ Ｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃｓ Ｓａｒｌ ピロロベンゾジアゼピン−抗体結合体
MX364329B (es) 2012-10-12 2019-04-23 Medimmune Ltd Conjugados del anticuerpo pirrolobenzodiazepina.
US10695433B2 (en) 2012-10-12 2020-06-30 Medimmune Limited Pyrrolobenzodiazepine-antibody conjugates
WO2014096365A1 (en) 2012-12-21 2014-06-26 Spirogen Sàrl Unsymmetrical pyrrolobenzodiazepines-dimers for use in the treatment of proliferative and autoimmune diseases
EP2935268B2 (en) 2012-12-21 2021-02-17 MedImmune Limited Pyrrolobenzodiazepines and conjugates thereof
EP2958944B1 (en) 2013-02-22 2019-03-27 AbbVie Stemcentrx LLC Antidll3-antibody-pbd conjugates and uses thereof
CN105848685B (zh) 2013-12-16 2020-09-22 健泰科生物技术公司 拟肽化合物及其抗体药物偶联物
WO2015095223A2 (en) * 2013-12-16 2015-06-25 Genentech, Inc. Peptidomimetic compounds and antibody-drug conjugates thereof
SG11201701128YA (en) 2014-09-12 2017-03-30 Genentech Inc Cysteine engineered antibodies and conjugates
WO2016040723A1 (en) 2014-09-12 2016-03-17 Genentech, Inc. Anti-her2 antibodies and immunoconjugates
MA40575A (fr) 2014-09-17 2016-03-24 Genentech Inc Pyrrolobenzodiazépines et conjugués à base de disulfure d'anticorps associés
WO2016044396A1 (en) 2014-09-17 2016-03-24 Genentech, Inc. Immunoconjugates comprising anti-her2 antibodies and pyrrolobenzodiazepines
GB201513607D0 (en) * 2015-07-31 2015-09-16 Feingold Jay M Pyrrolobenzodiazepine-antibody conjugates
JP6817288B2 (ja) 2015-08-10 2021-01-20 ハンジョウ ディーエーシー バイオテック シーオー．，エルティディ．Ｈａｎｇｚｈｏｕ Ｄａｃ Ｂｉｏｔｅｃｈ Ｃｏ．，Ｌｔｄ． 新規な連結体及び生体分子と薬物との特異的共役におけるその使用
MA43345A (fr) 2015-10-02 2018-08-08 Hoffmann La Roche Conjugués anticorps-médicaments de pyrrolobenzodiazépine et méthodes d'utilisation

Patent Citations (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
KR20150027829A (ko) * 2012-07-09 2015-03-12 제넨테크, 인크. 항-cd22 항체를 포함하는 면역접합체
WO2015023355A1 (en) * 2013-08-12 2015-02-19 Genentech, Inc. 1-(chloromethyl)-2,3-dihydro-1h-benzo[e]indole dimer antibody-drug conjugate compounds, and methods of use and treatment

Also Published As

Publication number Publication date
CN108391422B (zh) 2021-10-22
EP3355935B1 (en) 2020-10-21
CA2996902A1 (en) 2017-04-06
IL258046A (en) 2018-05-31
JP6663984B2 (ja) 2020-03-13
UA123104C2 (uk) 2021-02-17
CO2018004152A2 (es) 2018-07-19
JP2018530545A (ja) 2018-10-18
US10639373B2 (en) 2020-05-05
AU2016331931B2 (en) 2019-09-26
US10632196B2 (en) 2020-04-28
US10058613B2 (en) 2018-08-28
HK1259127A1 (zh) 2019-11-22
JP2019218405A (ja) 2019-12-26
PH12018500693A1 (en) 2018-10-01
TW201718027A (zh) 2017-06-01
US20170095570A1 (en) 2017-04-06
MA43345A (fr) 2018-08-08
ZA201801957B (en) 2020-07-29
CL2018000813A1 (es) 2019-02-22
MX2018003628A (es) 2018-08-01
AR106235A1 (es) 2017-12-27
AU2016331931C1 (en) 2020-01-16
BR112018006016A2 (pt) 2019-01-29
KR102111338B1 (ko) 2020-05-15
US20180326062A1 (en) 2018-11-15
RU2736725C1 (ru) 2020-11-19
EP3355935A1 (en) 2018-08-08
JP2021167356A (ja) 2021-10-21
US20180185486A1 (en) 2018-07-05
AU2016331931A1 (en) 2018-04-12
SG10201912680RA (en) 2020-03-30
PE20181067A1 (es) 2018-07-04
CN108391422A (zh) 2018-08-10
CA2996902C (en) 2020-06-02
CR20180243A (es) 2018-07-31
WO2017059289A1 (en) 2017-04-06
NZ741261A (en) 2019-11-29

Similar Documents

Publication Publication Date Title
US10639373B2 (en) Pyrrolobenzodiazepine antibody drug conjugates and methods of use
US20230330102A1 (en) Protac antibody conjugates and methods of use
US20240002379A1 (en) Asymmetric conjugate compounds
US20240109916A1 (en) Cytotoxic agents
US20230067037A1 (en) Conjugated chemical inducers of degradation and methods of use
US20210371413A1 (en) Polycyclic amides as cytotoxic agents
EP3522933B1 (en) Methods for preparing antibody drug conjugates
US20220098191A1 (en) G-a crosslinking cytotoxic agents
EP4188927A1 (en) Cytotoxic agents

Legal Events

Date Code Title Description
A201 Request for examination
E902 Notification of reason for refusal
E701 Decision to grant or registration of patent right
GRNT Written decision to grant