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KR100914535B1 - 신규한 만델산 유도체 및 트롬빈 억제제로서 이들의 용도 - Google Patents

신규한 만델산 유도체 및 트롬빈 억제제로서 이들의 용도

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Publication number
KR100914535B1
KR100914535B1 KR1020087014402A KR20087014402A KR100914535B1 KR 100914535 B1 KR100914535 B1 KR 100914535B1 KR 1020087014402 A KR1020087014402 A KR 1020087014402A KR 20087014402 A KR20087014402 A KR 20087014402A KR 100914535 B1 KR100914535 B1 KR 100914535B1
Authority
KR
South Korea
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mmol
pab
aze
nmr
mhz
Prior art date
Application number
KR1020087014402A
Other languages
English (en)
Other versions
KR20080064204A (ko
Inventor
토드 인하르트
앤더스 요한슨
아른 스벤손
Original Assignee
아스트라제네카 아베
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
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Priority claimed from SE0100965A external-priority patent/SE0100965D0/xx
Priority claimed from SE0101239A external-priority patent/SE0101239D0/xx
Priority claimed from SE0102921A external-priority patent/SE0102921D0/xx
Application filed by 아스트라제네카 아베 filed Critical 아스트라제네카 아베
Publication of KR20080064204A publication Critical patent/KR20080064204A/ko
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Abstract

본 발명은 Ra, R1, R2, Y 및 R3이 본 명세서의 정의를 갖는 화학식 I의 신규한 만델산 유도체 화합물 및 이의 약학적으로 허용 가능한 유도체(프로드러그를 포함함)를 제공하며, 이 화합물 및 유도체는 트립신계 세린 프로테아제, 예컨대 트롬빈의 경쟁적 억제제로서 유용하거나 이 억제제의 프로드러그로서 유용하므로, 특히 트롬빈의 억제가 필요한 상태의 치료에서 또는 항응고제로서 유용하다.

Description

신규한 만델산 유도체 및 트롬빈 억제제로서 이들의 용도{NEW MANDELIC ACID DERIVATIVES AND THEIR USE AS THROMBIN INHIBITORS}
본 발명은 신규한 약학적으로 유용한 화합물, 특히 트립신계 세린 프로테아제, 특히 트롬빈의 경쟁적 억제제인 화합물 및/또는 이 화합물로 대사되는 화합물, 약제로서 이들의 용도, 이들을 함유하는 약학 조성물 및 이들의 제조에 대한 합성 경로에 관한 것이다.
혈액 응고는 지혈(즉, 손상된 혈관으로부터 혈액 손실의 방지) 및 혈전증(즉, 때때로 혈관 폐색을 일으키는 혈관내 혈괴의 형성) 모두에 수반되는 핵심 과정이다.
응고는 복잡한 일련의 효소 반응의 결과이다. 이 일련의 반응에서 궁극적인 단계 중 하나는 전효소 프로트롬빈의 활성 효소 트롬빈으로의 전환이다.
트롬빈은 응고에서 중심 역할을 하는 것으로 알려져 있다. 이것은 혈소판을 활성화시켜 혈소판 응집을 초래하며, 피브리노겐을 피브린 단량체로 전환시키고, 이 피브린 단량체는 피브린 중합체로 자발적으로 중합되며, 인자 XIII를 활성화시키고, 순차적으로 이 인자는 중합체를 가교시켜 불용성 피브린을 형성한다. 또한, 트롬빈은 인자 V 및 인자 VIII를 활성화시켜 프로트롬빈으로부터 트롬빈의 "양성 피드백" 발생을 초래한다.
혈소판 응집과 피브린의 형성 및 가교를 억제하기 위한 트롬빈의 효과적인 억제제는 항혈전증 활성을 나타낼 것으로 기대될 것이다. 또한, 항혈전증 활성은 양성 피드백 메카니즘의 효과적인 억제에 의해 향상될 것으로 기대될 것이다.
종래 기술
트롬빈의 저분자량 억제제의 초기 개발은 문헌(Claesson, Blood Coagul. Fibrinol. (1994) 5, 411)에 기재되어 있다.
문헌(Blomback et al, J. Clin. Lab. Invest. 24, suppl. 107, 59, (1969))에는 피브리노겐 Aα 쇄에 대한 개열 부위 주위에 위치한 아미노산 서열에 기초한 트롬빈 억제제가 보고되어 있다. 논의된 아미노산 서열 중에서 상기 문헌의 저자들은 트리펩티드 서열 Phe-Val-Arg(P9-P2-P1, 이하 P3-P2-P1 서열로 언급함)이 가장 효과적인 억제제인 것으로 제안하였다.
P1-위치에서 α,ω-아미노알킬 구아니딘을 지닌 디펩티딜 유도체를 주성분으로 한 트롬빈 억제제는 미국 특허 제4,346,078호 및 국제 특허 출원 제WO 93/11152호로부터 알려져 있다. 또한, 유사하게 구조적으로 관련된 디펩티딜 유도체도 보고되어 있다. 예를 들면, 국제 특허 출원 제WO 94/29336호에는, 예컨대 P1-위치에서 아미노메틸 벤즈아미딘, 고리 아미노알킬 아미딘 및 고리 아미노알킬 구아니딘을 지닌 화합물이 개시되어 있고(국제 특허 출원 제WO 97/23499호에는 이러한 화합물의 프로드러그 일부가 개시되어 있음); 유럽 특허 출원 제0 648 780호에는 예컨대 P1-위치에서 고리 아미노알킬 구아니딘을 지닌 화합물을 개시하고 있다.
펩티딜 유도체를 주성분으로 하며, 또한 P1-위치에서 고리 아미노알킬 구아니딘(예컨대, 3- 또는 4-아미노메틸-1-아미디노피페리딘)을 가진 트롬빈 억제제는 유럽 특허 출원 제0 468 231호, 제0 559 046호 및 제0 641 779호로부터 공지되어 있다.
P1-위치에서 아르기닌 알데히드를 지닌 트리펩티딜 유도체를 주성분으로 한 트롬빈 억제제는 유럽 특허 출원 제0 185 390호에 처음으로 개시되어 있었다.
보다 최근에, P3-위치에서 변성된 아르기닌 알데히드계 펩티딜 유도체가 보고되었다. 예를 들면, 국제 특허 출원 제WO 93/18060호에는 히드록시산이 개시되어 있고, 유럽 특허 출원 제0 526 877호에는 데스-아미노산을 개시되어 있으며, 유럽 특허 출원 제0 542 525호에는 P3-위치에서의 O-메틸 만델산이 개시되어 있다.
또한, P1-위치에서 친전자성 케톤을 주성분으로 한 세린 프로테아제(예, 트롬빈)의 억제제도 공지되어 있다. 예를 들면, 유럽 특허 출원 제0 195 212호에는 펩티딜 α-케토 에스테르 및 아미드가 개시되어 있고, 유럽 특허 출원 제0 362 002호에는 플루오로알킬아미드 케톤이 개시되어 있으며, 유럽 특허 출원 제0 364 344호에는 α,β,δ-트리케토화합물이 개시되어 있으며, 유럽 특허 출원 제0 530 167호에는 P1-위치에서의 아르기닌의 α-알콕시 케톤 유도체가 개시되어 있다.
다른 구조적으로 상이한 아르기닌 및 이의 이소티오우로늄 유사체의 C-말단 보론산 유도체를 주성분으로 한 트립신계 세린 프로테아제의 억제제는 유럽 특허 출원 제0 293 881호에 공지되어 있다.
보다 최근에, 펩티딜 유도체를 주성분으로 한 트롬빈 억제제는 유럽 특허 출원 제0 669 317호 및 국제 특허 출원 제WO 95/35309호, 제WO 95/23609호, 제WO 96/25426호, 제WO 97/02284호, 제WO 97/46577호, 제WO 98/32110호, 제WO 96/31504호, 제WO 96/03374호, 제WO 98/06740호, 제WO 97/49404호, 제WO 98/57932호, 제WO 99/29664호, 제WO 00/35869호 및 제WO 00/42059호에 개시되어 있다.
특히, 제WO 97/02284호 및 제WO 00/42059호에는 P3 위치에서 치환된 만델산을 지닌 트롬빈 억제제가 개시되어 있다.
그러나, 트롬빈과 같은 트립신계 세린 프로테아제의 효과적인 억제제에 대한 필요성이 남아 있다. 또한, 바람직한 약물동력학 프로필을 가지며, 다른 세린 프로테아제, 특히 지혈에 수반되는 것에 대하여 트롬빈을 억제하는 데에 선택적인 화합물이 요구된다. 트롬빈에 대하여 경쟁적 억제 활성을 나타내는 화합물은 항응고제로서, 따라서 혈전증 및 관련된 장애의 치료에서 특히 유용할 것으로 기대될 것이다.
본 발명에 따르면, 하기 화학식 I의 화합물 또는 이의 약학적으로 허용 가능한 유도체가 제공된다.
[화학식 I]
상기 식에서,
Ra는 -OH 또는 -CH2OH를 나타내고;
R1은 1 이상의 임의의 할로 치환기를 나타내며;
R2는 1 또는 2 개의 C1-3 알콕시 치환기를 나타내고, 이 치환기의 알킬부는 1 이상의 플루오로 치환기로 치환되며(즉, R2는 1 또는 2 개의 플루오로알콕시(C1-3)기를 나타냄);
Y는 -CH2- 또는 -(CH2)2-를 나타내고;
R3은 하기 화학식 I(i) 또는 I(ii)의 구조 단편을 나타내며,
[화학식 I(i)]
[화학식 I(ii)]
상기 식에서,
R4는 H 또는 1 이상의 플루오로 치환기를 나타내고,
X1, X2, X3 및 X4 중 1 또는 2 개는 -N-을 나타내며, 나머지는 -CH-를 나타낸다.
용어 "약학적으로 허용 가능한 유도체"는 약학적으로 허용 가능한 염(예컨대, 산 부가염)을 포함한다.
약어는 본 명세서의 끝에 열거되어 있다. 화학식 I(i) 및 I(ii)의 단편에서 결합에 대한 물결선은 단편의 결합 위치를 표시한다.
R1이 나타낼 수 있는 할로기로는 플루오로, 클로로, 브로모 및 요오도가 있다. 불확실함을 피하기 위해, 1 이상의 임의이 할로기를 나타내는 경우, R1은 존재하지 않을 수 있거나(따라서, 원자가 법칙을 고수하도록 H로 대체됨), 또는 이것은 1 이상의 할로 원자를 나타낼 수 있다.
R3이 화학식 I(i)의 구조 단편(여기서, R4가 1 이상의 플루오로 치환기를 나타냄)을 나타내는 경우, 화학식 I의 바람직한 화합물은 R4가 2-위치 또는 3-위치에서 단일 플루오로 치환기를, 또는 2-위치 및 5-위치, 보다 바람직하게는 2-위치 및 6-위치에서 2 플루오로 치환기를 나타내는 것을 포함한다(여기서, 치환 위치는 화학식 I(i) 구조 단편의 나머지 분자로의(즉, -NHCH2-기로의) 부착점에 대하여 결정됨).
R3이 화학식 I(ii)의 구조 단편을 나타내는 경우, 화학식 I의 바람직한 화합물은
(a) X1, X2, X3 및 X4 중 하나는 -N-을 나타내고, 나머지는 -CH-를 나타내는 것; 또는
(b) X1 및 X3, 또는 X2 및 X4는 모두 -N-를 나타내고, 다른 두개는 -CH-(적절하게는)를 나타내는 것
을 포함한다.
화학식 I의 바람직한 화합물은
R1이 단일 플루오로, 클로로 또는 브로모 치환기를 나타내고;
R2가 1 이상의 플루오로 치환기로 치환된 C1-2 알콕시, 예컨대 -OCHF2, -OCF3-, -OCH2CF3, -OCH2CHF2, -OCH2CH2F 또는 -OCH(CH2F)2를 나타내며;
R3가 화학식 I(i)의 구조 단편을 나타내고;
R4가 H를 나타내는 것
을 포함한다.
화학식 I의 보다 바람직한 화합물은
R3가 OH를 나타내고;
R1이 단일 클로로 치환기를 나타내며;
R2가 -OCF3, 바람직하게는 -OCH2CHF2, 보다 바람직하게는 -OCHF2 또는 -OCH2CH2F를 나타내는 것
을 포함한다.
화학식 I의 화합물의 적절한 페닐기 상의 R1 및 R2의 바람직한 치환점은 그 페닐기의 나머지 분자로의 부착점에 대한 2 개의 메타-위치(즉, α- 또는 β-히드록시산기를 지닌 탄소 원자에 대하여 3-위치 및/또는 5-위치(바람직하게는 3,5-치환)에서)를 포함한다.
언급할 수 있는 화학식 I의 화합물은
R2가 치환기의 알킬부가 1 이상의 플루오로 치환기로 치환된 1 또는 2 개의 C1-2 알콕시 치환기를 나타내는 것; 또는
R2가 치환기의 알킬부가 1 이상의 플루오로 치환기로 치환된 1 또는 2 개의 C3 알콕시 치환기를 나타내는 것
을 포함한다.
화학식 I의 화합물은, 예컨대 후술되는 바와 같이, 당업자에게 공지된 기법에 따라 제조할 수 있다.
본 발명의 추가의 양태에 따르면, 화학식 I의 화합물의 제조 방법이 제공되며, 상기 방법은
(i) 예컨대 커플링제(예컨대, DMF, EDC, DCC, HBTU, HATU, PyBOP 또는 TBTU 중의 염화옥살일), 적절한 염기(예컨대, 피리딘, DMAP, TEA, 2,4,6-콜리딘 또는 DIPEA) 및 적합한 유기 용매(예컨대, 디클로로메탄, 아세토니트릴, EtOAc 또는 DMF)의 존재 하에서 하기 화학식 II의 화합물을 하기 화학식 III의 화합물과 커플링시키는 단계;
[화학식 II]
(상기 식에서, Ra, R1 및 R2는 전술한 바와 같음)
[화학식 III]
(상기 식에서, Y 및 R3은 전술한 바와 같음)
(ii) 예컨대, 상기 (i) 단계에 기재된 바와 같은 조건 하에서 하기 화학식 IV의 화합물을 하기 화학식 V의 화합물과 커플링시키는 단계;
[화학식 IV]
(상기 식에서, Ra, R1, R2 및 Y는 전술한 바와 같음)
[화학식 V]
(상기 식에서, R3은 전술한 바와 같음)
(iii) R1이 존재하지 않는 화학식 I의 화합물의 경우, 예컨대 적합한 촉매(예컨대, Pd/C와 같은 지지된 금속 촉매(예컨대, 10% (w/w) Pd/C))와 적절한 용매(예컨대, 에탄올과 같은 저급(예컨대 C1-6) 알킬 알콜)의 존재 하에서, 그리고 임의로 적합한 산(예컨대, 아세트산)의 존재 하에서 및/또는 문헌(Synth. Comm. (1998) 4351)에 기재된 바와 같이 수소화함으로써 R5가 OR6인 하기 정의되는 바와 같은 화학식 Ia의 해당 화합물(R5 및 R6가 하기 정의되는 바와 같음)을 환원시키는 단계; 또는
(iv) 당업자에게 공지된 조건 하에서, 예컨대 에틸이미도에이트 중간체(에탄올 중에서 화학식 XVIA 또는 XVIB의 화합물을 HCl(g)과 반응시킴으로써 형성됨)를 에탄올 중의 암모니아 기체와 반응시킴으로써, 또는 본 명세서에서 참고로 인용한 문헌(Tetraheron Lett. 40, 7067 (1999))에 기재된 이러한 조건 하에서 하기 정의되는 바와 같은 화학식 XVIA 또는 XVIB의 해당 화합물을 적당한 암모니아 공급원(예컨대, 아세트산암모늄 또는 암모니아 기체)과 반응시키는 단계(예를 들면, R3이 X2 또는 X4가 N을 나타내는 화학식 I(ii)의 구조 단편을 나타내는 화학식 I의 화합물을 제조하는 경우, N-아세틸 시스테인(예컨대, 1 내지 30 당량의 N-아세틸 시스테인) 및 적당한 용매(예컨대, 메탄올과 같은 저급 알킬(예컨대, C1-6) 알콜)의 존재 하에서, 화학식 XVIB의 해당 화합물을 아세트산암모늄과 반응시키는 단계)
를 포함한다
화학식 II의 화합물은 공지 및/또는 표준 기법을 사용하여 얻을 수 있다.
예를 들면, Ra가 OH를 나타내는 화학식 II의 화합물은 하기 화학식 VI의 알데히드를
(a) 예컨대 실온 또는 고온(예컨대, 100℃ 미만)에서 적합한 유기 용매(예컨대, 클로로포름 또는 염화메틸렌)의 존재 하에서 및, 필요에 따라 적합한 염기(예컨대, TEA) 및/또는 적합한 촉매 시스템(예컨대, 염화벤질암모늄 또는 요오드화아연, 또는 예컨대 문헌(Chem. Rev., (1999) 99, 3649)에 기재된 바와 같은 키랄성 촉매를 사용함)의 존재 하에서 하기 화학식 VII의 화합물과 반응시킨 후, 당업자에게 공지된 조건(예컨대, 후술하는 바와 같음) 하에서 가수분해 시키거나;
(b) NaHSO3 및 물의 존재 하에서 NaCN 또는 KCN과 반응시킨 후, 가수분해시키거나;
(c) 예컨대 고온(예컨대, 실온 이상 100℃ 이하)에서 적합한 유기 용매(예컨대, 클로로포름) 및, 필요에 따라, 적합한 촉매 시스템(예컨대, 염화벤질암모늄)의 존재 하에서 클로로포름과 반응시킨 후, 가수분해시키거나;
(d) 하기 화학식 VIII의 화합물과 반응시킨 후, 당업자에게 공지된 조건 하에서 산화 개열(예컨대, 가오존분해 또는 오스뮴 또는 루테늄 촉매화)시키거나;
(e) 당업자에게 공지된 조건 하에서 트리스(메틸티오)메탄과 반응시킨 후, 예컨대, HgO 및 HBF4의 존재 하에서 가수분해시킴으로써 제조할 수 있다:
[화학식 VI]
(상기 식에서, R1 및 R2는 전술한 바와 같음)
[화학식 VII]
(상기 식에서, R"은 H 또는 (CH3)Si를 나타냄)
[화학식 VIII]
(상기 식에서, M은 Mg 또는 Li를 나타냄)
Ra가 -CH2OH인 화학식 II의 화합물은, 예컨대 실온 이하에서 적합한 환원제(예컨대, 붕수소화나트륨) 및 적절한 유기 용매(예컨대, 메탄올, 에탄올, THF 또는 이의 혼합물)의 존재 하에서 하기 화학식 IX의 화합물을 환원시킨 후, 예컨대 후술되는 바와 같은 당업자에게 공지된 조건 하에서 화학식 IXA의 생성된 트로프산 에스테르 중간체를 가수분해시킴으로서 제조할 수 있다. 당업자라면, 환원 및 가수 분해 단계가, 예컨대 후술되는 바와 같이 1-포트 절차로서 수행될 수 있다는 것을 인식할 것이다.
[화학식 IX]
(상기 식에서, R은 C1-6 알킬 또는 C1-3 알킬페닐을 나타내고, R1 및 R2는 전술한 바와 같음)
[화학식 IXA]
(상기 식에서, R, R1 및 R2는 전술한 바와 같음)
대안으로, Ra는 -OH를 나타내는 화학식 II의 화합물은 적합한 산화제(예컨대, 적합한 유리 라디칼 산화제(예컨대, TEMPO) 및 적절한 차아염소산염(예컨대 차아염소산나트륨)의 조합)의 존재 하에서 당업자에게 공지된 조건 하에서, 예컨대 -10℃ 내지 실온에서, 적합한 용매(예컨대, 물, 아세톤 또는 이의 혼합물), 적절한 염(예컨대, 브롬화칼륨과 같은 알칼리 금속 할로겐화물) 및 적합한 염기(예컨대, 알칼리 금속 탄산염 또는 탄산수소염, 예컨대 탄산수소나트륨)의 존재 하에서 제2 히드록실기에서 임의로 보호되는 하기 화학식 IXB의 화합물 또는 이의 유도체를 산화시킴으로서 제조할 수 있다.
[화학식 IXB]
(상기 식에서, R1 및 R2는 전술한 바와 같음)
화학식 II(여기서, Ra는 -OH를 나타냄)의 화합물의 거울상 이성질체(즉, C-원자 α- 에서 CO2H기까지 치환기의 상이한 배열을 갖는 화합물)는 거울상 이성질 특이성 유도체화 단계에 의해 분리할 수 있다. 이것은, 예컨대 효소 방법에 의해서 달성할 수 있다. 이러한 효소 방법의 예로는 실온 및 환류 온도(예컨대, 45 내지 65℃)에서 적합한 효소(예컨대, 리파제 PS 아마노(Amano)), 적절한 에스테르(예컨대, 비닐 아세테이트) 및 적합한 용매(예컨대, 메틸 t-부틸 에테르)의 존재 하에서의 α-OH기의 에스테르 교환 반응이 있다. 그 다음, 유도체화된 이성질체는 통상의 분리 기법(예컨대, 크로마토그래피)에 의해 미반응 이성질체로부터 분리할 수 있다.
이러한 유도체화 단계에서 화학식 II의 화합물에 첨가된 기는 임의의 추가의 반응 전에 또는 화학식 I의 화합물의 합성 중의 임의의 이후 단계에서 제거할 수 있다. 추가의 기는 통상의 기법(예컨대, α-OH기의 에스테르의 경우, 당업자에게 공지된 조건(예컨대, 실온 및 환류 온도 사이에서 적합한 염기(예컨대, NaOH) 및 적절한 용매(예컨대, MeOH, 물 또는 이의 혼합물)의 존재 하에서의 가수분해)을 사용하여 제거할 수 있다.
화학식 II의 화합물(Ra는 -CH2OH를 나타냄)의 거울상 이성질체는 키랄 크로마토그래피 기법(예컨대, 키랄 HPLC)에 의해 분리할 수 있다.
화학식 III의 화합물은, 예컨대 화학식 I의 화합물의 제조에 대해 기술한 것과 동일한 조건 하에서 하기 화학식 X의 화합물을 전술한 바와 같은 화학식 V의 화합물에 커플링시킴으로서 제조할 수 있다.
[화학식 X]
(상기 식에서, Y는 전술한 바와 같음)
화학식 IV의 화합물은, 예컨대 화학식 I의 화합물의 제조를 위해 기술한 것과 동일한 조건 하에서 전술한 바와 같은 화학식 II의 화합물을 전술한 바와 같은 상기 화학식 X의 화합물에 커플링시킴으로서 제조할 수 있다.
화학식 VI의 화합물은 공지 및/또는 표준 기법을 사용하여 얻을 수 있다. 예를 들면, 이들은
(i) 하기 화학식 XI의 화합물을 금속화(여기서, 금속은, 예컨대 Li와 같은 알칼리 금속, 바람직하게는 Mg와 같은 2가 금속일 수 있음)시킨 후, 예컨대 후술되는 조건 하에서 적합한 포르밀기 공급원(예컨대, N,N-디메틸포름아미드)과 반응시키거나;
[화학식 XI]
(상기 식에서, Hal은 Cl, Br 및 I로부터 선택되는 할로겐 원자를 나타내고, R1 및 R2는 전술한 바와 같음)
(ii) 적합한 환원제(예컨대, DIBAL-H)의 존재 하에서 하기 화학식 XII의 화합물을 환원시키거나; 또는
[화학식 XII]
(상기 식에서, R1 및 R2는 전술한 바와 같음)
(iii) 적합한 산화제(예컨대, MnO2, 피리디늄 클로로크롬산염, DMSO 및 염화옥살일의 조합, 또는 DMSO 중의 SO3 피리딘 착체)의 존재 하에서 하기 화학식 XIII의 화합물을 산화시킴으로써 제조할 수 있다.
[화학식 XIII]
화학식 IX의 화합물은, 예컨대 문헌(J. Org. Chem. 54, 3831 (1989))에 기재된 기법과 유사하게 및/또는 후술하는 바와 같은 통상의 기법에 의해 해당 페닐아세테이트(예컨대, 문헌(J. Am. Chem. Soc. 98, 6750 (1976))에 기재된 바와 같은 해당 아세토페논으로부터 또는 해당 벤질 시아나이드로부터 표준 가수분해 절차에 의해 얻을 수 있음)로부터 제조할 수 있다.
화학식 IXB의 화합물은 적합한 디히드록실화제(예컨대, OsO4를 제공하는 시약 또는 시약 혼합물, 예컨대 AD-믹스-α 또는, 특히 AD-믹스-β)의 존재 하에서 예컨대 당업자에게 공지된 조건 하에서, 예컨대 -10℃ 내지 실온에서 적절한 용매(예컨대, 물, t-부탄올 또는 이의 혼합물)의 존재 하에서 하기 화학식 XIIIA의 해당 화합물의 디히드록실화에 의해 제조할 수 있다. 비대칭 산화제, 예컨대 AD-믹스-α 또는 AD-믹스-β를 사용하는 경우, 이 방법은 제1 및 제2 히드록실기가 모두 부착된 C-원자의 기(R 또는 S)의 특이적인 배열을 갖는 화학식 IXB의 화합물을 제조하는 데 사용할 수 있다.
[화학식 XIIIA]
(상기 식에서, R1 및 R2는 전술한 바와 같음)
화학식 XIIIA의 화합물은 당업자에게 공지된 조건 하에서, 예컨대 실온 내지 환류 온도(예컨대, 50℃)에서 적절한 용매(예컨대, 톨루엔), 적합한 커플링제(예컨대, 팔라듐(0) 배위 착체, 예컨대 테트라키스(트리페닐포스핀)팔라듐(0))의 존재 하에서, 그리고 임의로 적절한 촉매(예컨대, 2,6-디-t-부틸-4-메틸페놀)의 존재 하에서 전술한 바와 같은 화학식 XI의 해당 화합물을 비닐 음이온의 적합한 공급원(예컨대, 트리부틸(비닐)주석)과 반응시킴으로써 제조할 수 있다.
화학식 V, VII, VIII, X, XI, XII 및 XIII의 화합물은 시중에서 구입할 수 있거나, 문헌에 공지되어 있거나, 또는 쉽게 구입할 있는 출발 물질로부터 적절한 시약 및 반응 조건을 사용하여 본 명세서에 기재된 방법과 유사한 방법 또는 표준 기법에 따른 통상의 합성 절차에 의해 얻을 수 있다. 화학식 Ia, XVIA 및 XVIB의 화합물은 후술하는 방법에 의해 얻을 수 있다.
화학식 I, II, III, IV, V, VI, IX, IXA, IXB, XI, XII, XIII 및 XIIIA의 화합물 내의 페닐 고리 상의 치환기는 적절한 시약 및 반응 조건을 사용하여 쉽게 구할 수 있는 출발 물질로부터 표준 기법에 따른 표준 작용기 상호전환을 통하여 당업자에게 공지된 기법을 사용하여 도입되거나 및/또는 상호전환될 수 있다.
예를 들면, 화학식 I, II, IV, VI, IXA, XI, XII 및 XIII의 화합물은 하기 화학식 XIVA, XIVB, XIVC, XIVD, XIVE, XIVF, XIVG 및 XIVH 각각의 해당 화합물로부터, 예컨대
(a) 예컨대, 실온 이상(예컨대, 환류 온도)에서 적합한 염기(예컨대, 수용액 중의 칼륨 t-부톡시드, KOH 또는 NaOH) 및 적절한 유기 용매(예컨대, THF, 클로로포름 또는 i-프로판올)의 존재 하에서 해당 불화 할로알칸과 반응시키거나; 또는
(b) 예컨대, 적합한 염기(예컨대, K2CO3) 및 적절한 용매(예컨대, DMF)의 존재 하에서 하기 화학식 XIVJ의 화합물과 반응시킴으로써,
예컨대 후술하는 바와 같은 두 경우 모두에서 제조할 수 있다.
[화학식 XIVA]
[화학식 XIVB]
[화학식 XIVC]
[화학식 XIVD]
[화학식 XIVE]
[화학식 XIVF]
[화학식 XIVG]
[화학식 XIVH]
(상기 식들에서, Ra, R, R1, R3, Y 및 Hal(적절하게는)은 전술한 바와 같음)
[화학식 XIVJ]
RxS(O)2ORY
{상기 식에서, Rx는 C1 -4 알킬, C1 -4 퍼플루오로알킬 또는 페닐(메틸, 니트로 또는 할로로 임의로 치환됨)을 나타내고, Ry는 CH2CF3, CH2CHF2, CH2CH2F 또는 CH(CH2F)2임}.
당업자라면, 화학식 II, IV, VI, IXA, XI, XII 및 XIII(즉, 화학식 XIVB, XIVC, XIVD, XIVE, XIVF, XIVG 및 XIVH 각각의 화합물의 적절한 전구 물질 상에서)의 화합물 전체 합성 중에 보다 초기 단계에서 작용기 전환 반응도 실시할 수 있다는 것을 인식할 것이다.
화학식 XIVA, XIVB, XIVC, XIVD, XIVE, XIVF, XIVG, XIVH 및 XIVJ의 화합물은 시중 구입할 수 있거나, 문헌에 공지되어 있거나, 또는 쉽게 구입할 있는 출발 물질로부터 적절한 시약 및 반응 조건을 사용하여 본 명세서에 기재된 방법과 유사한 방법에 의해 또는 표준 기법에 따른 통상의 합성 절차에 의해 얻을 수 있다. 예를 들면, 화학식 XIVA, XIVB, XIVC, XIVD, XIVE, XIVF, XIVG, 및 XIVH의 화합물은 표준 조건 하에서 해당 보호된 페놀(보호기의 예로는 메틸, 알릴, 벤질 또는 t-부틸을 들 수 있음)을 탈보호시킴으로써 얻을 수 있다. 또한, 화학식 XIVD(식 중, R1은 단일 클로로 치환기임)의 화합물은 디할로 또는 트리할로 치환 벤젠(예컨대, 불소 원자를 메톡시기로 치환하고(예컨대, 고온에서 1-메틸-2-피롤리딘온/메탄올 중의 NaOMe와 반응시킴으로써), 브롬기를 포르밀기로 치환한 후(예컨대, 화학식 VI의 화합물의 제조에 대해 전술한 바와 같음), 탈메틸화(K2CO3의 존재 하에서 1-메틸-2-피롤리딘온 중의 PhSH를 사용함으로써)시킨 1-Br, 3-Cl, 5-F-벤젠)으로부터 얻을 수 있다.
또한, 화학식 I(식 중, R1은 부재함)의 화합물은, 예컨대 당업자에게 공지된 조건 하에서 수소화 반응에 의해 화학식 I(식 중, R1은 할로(예컨대, 클로로)를 나타냄)의 해당 화합물로부터(또는 이의 적절한 전구 물질을 통하여) 제조할 수 있다.
화학식 I의 화합물은 통상의 기법을 사용하여 이들의 반응 혼합물로부터 분리할 수 있다.
본 발명에 따르면, 화학식 I의 화합물의 약학적으로 허용 가능한 유도체로는 화학식 I의 화합물의, "보호된" 유도체 및/또는 프로드러그로서 작용하는 화합물이 있다.
언급할 수 있는 화학식 I의 화합물의 프로드러그로서 작용할 수 있는 화합물은 하기 화학식 Ia의 화합물 및 이의 약학적으로 허용 가능한 유도체이다:
[화학식 Ia]
(상기 식에서, R3a는 하기 화학식 I(iii) 또는 I(iv)의 구조 단편을 나타냄)
[화학식 I(iii)]
[화학식 I(iv)]
(상기 식들에서, R5는 OR6 또는 C(O)OR7을 나타내고,
R6는 H, C1-10 알킬, C1-3 알킬아릴 또는 C1-3 알킬옥시아릴(후자의 2개의 기의 알킬부는 1 이상의 산소 원자가 임의로 개재되어 있고, 후자의 2개의 기의 아릴부는 할로, 페닐, 메틸 또는 메톡시로부터 선택되는 1 이상의 치환기로 임의로 치환되며, 또한 후자의 3개의 기는 1 이상의 할로 치환기로 임의로 치환됨)을 나타내며;
R7은 C1-10 알킬(후자의 기는 1 이상의 산소 원자로 임의로 차단됨) 또는 C1-3 알킬 아릴 또는 C1-3 알킬옥시아릴(후자의 2개의 기의 알킬부는 1 이상의 산소 원자가 임의로 개재되어 있고, 후자의 2개의 기의 아릴부는 할로, 페닐, 메틸 또는 메톡시로부터 선택되는 1 이상의 치환기로 임의로 치환되며, 또한 후자의 3개의 기는 1 이상의 할로 치환기로 임의로 치환됨)을 나타내고;
Ra, R1, R2, Y, R4, X1, X2, X3 및 X4는 전술한 바와 같음).
용어 화학식 Ia의 화합물의 "약학적으로 허용 가능한 유도체"는 약학적으로 허용 가능한 염(예컨대, 산 부가염)이 있다.
화학식 I(iii) 또는 I(iv)의 단편에서 결합 상의 물결선은 단편의 결합 위치를 표시한다.
R6 및 R7를 나타낼 수 있는 알킬옥시아릴기는 산소 원자를 통해 가교된 알킬기 및 아릴기를 포함한다. 알킬아릴기 및 알킬옥시아릴기는 이 기들의 알킬부를 통하여 나머지 분자에 가교되며, 여기서 알킬부는 (충분한 탄소 원자수(즉, 3)가 있는 경우) 분지쇄일 수 있다. R6 및 R7를 나타내거나 이를 치환시킬 수 있는 알킬아릴기 및 알킬옥시아릴기의 알킬부는 탄소환 방향족기 및 복소환 방향족기, 예컨대 페닐, 나프틸, 피리딘일, 옥사졸일, 이소옥사졸일, 티아디아졸일, 인돌일 및 벤조푸란일 등이 있다.
R6 및 R7를 나타낼 수 있는 알킬기는 직쇄 또는, 충분한 탄소 원자수(즉, 3 이상)가 존재하는 경우, 분지쇄 및/또리 고리형일 수 있다. 또한, 충분한 탄소 원자수(즉, 4 이상)가 존재하는 경우, 이러한 알킬기도 또한 부분 고리형/비고리형일 수 있다. 또한, 이러한 알킬기는 포화 또는, 충분한 탄소 원자수(즉, 2 이상)가 존재하는 경우 불포화될 수 있다.
R6 및 R7를 치환시킬 수 있는 할로기로는 플루오로, 클로로, 브로모 및 요오도가 있다.
R5가 C(O)OR7을 나타내는 경우, 바람직한 R7기로는
(a) 직쇄, 분지쇄 또는 고리 C3-6 알킬, 예컨대 C4-6 시클로알킬;
(b) C1-2 알킬아릴기, 예컨대 상기 열거한 바와 같이 임의로 치환된 벤질
이 있다.
화학식 Ia의 바람직한 화합물로는 R5가 OR6를 나타내는 것이 있다.
R5가 OR6를 나타내는 경우, 바람직한 R6기는
(a) H;
(b) 미치환, 직쇄, 분지쇄 또는 고리형 C1-8(예컨대, C1-6) 알킬, 예컨대 직쇄형 C1-3 알킬(예컨대, 에틸 또는, 특히 메틸), 분지쇄 C3-8 알킬(예컨대, i-프로필, i-부틸 또는 4-헵틸) 또는 고리형 C4-7 알킬 (즉, C4-7 시클로알킬, 예컨대, 시클로부틸 또는 시클로헥실);
(c) C1-3 알킬옥시페닐(예컨대, C2 알킬옥시페닐)(여기서, 페닐기는 상기 열거된 바와 같은 1 이상의 치환기(예컨대, 트리플루오로메틸)로 임의로 치환됨);
(d) C1-2 알킬아릴(예컨대, 메틸아릴)(여기서, 아릴기는 페닐, 피리딘일, 옥사졸일 또는 이소옥사졸일이고, 후자의 3개의 기는 상기 열거한 바와 같은 1 이상의 치환기(예컨대, 메톡시, 메틸, 브로모 및/또는 클로로)로 임의로 치환됨)
가 있다.
화학식 Ia의 바람직한 화합물은 R5가 OR6를 나타내고, R6가 직쇄형, 분지쇄형(적절하게는) 또는 고리형(적절하게는) C1-6(예컨대, C1-4) 알킬, 예컨대, 메틸, 에틸, n-프로필, i-프로필 또는 시클로부틸을 나타내는 것이다.
화학식 Ia의 화합물은 1 이상의 하기 방법에 의해 제조할 수 있다:
(a) 예컨대, 화학식 I의 화합물의 합성에 대해 전술한 것과 유사한 조건 하에서 전술한 바와 같은 화학식 II의 해당 화합물을 하기 화학식 XV의 화합물과 반응 시키는 방법;
[화학식 XV]
(상기 식에서, Y 및 R3a는 전술한 바와 같음)
(b) 예컨대, 화학식 I의 화합물의 합성에 대해 전술한 것과 유사한 조건 하에서 전술한 바와 같은 화학식 IV의 해당 화합물을 하기 화학식 XVI의 화합물과 반응시키는 방법;
[화학식 XVI]
R3aCH2NH2
(상기 식에서, R3a는 전술한 바와 같음)
(c) R5가 OH를 나타내는 화학식 I의 화합물의 경우, 예컨대 당업자에게 공지된 조건 하에서 하기 화학식 XVIA 또는 XVIB의 해당 화합물을 히드록실아민과 반응시키는 방법;
[화학식 XVIA]
[화학식 XVIB]
(상기 식에서, Ra, R1, R2, R4, Y, X1, X2, X3, 및 X4는 전술한 바와 같음)
(d) R5가 OR6를 나타내는 화학식 I의 화합물의 경우, 예컨대, 실온 내지 환류 온도에서 적절한 유기 용매(예컨대, THF, CH3CN, DMF 또는 DMSO)의 존재 하에서 하기 화학식 XVII의 화합물인 화학식 I의 해당 화합물의 보호된 유도체를 하기 화학식 XVIII의 화합물 또는 이의 산 부가염과 반응시킨 후, 당업자에게 공지된 조건 하에서 -C(O)ORb를 제거(예컨대, QF 또는 TFA(예컨대, 후술하는 바와 같음)와 반응시킴으로써)하는 방법;
[화학식 XVII]
(상기 식에서, R3b는 하기 화학식 I(v) 또는 I(vi)의 구조 단편을 나타내며;
[화학식 I(v)]
[화학식 I(vi)]
(상기 식에서, Rb는, 예컨대 -CH2CH2-Si(CH3)3 또는 벤질, 또는 이의 호변이상질체를 나타내고, Ra, R1, R2, Y, R4, X1, X2, X3 및 X4는 전술한 바와 같음)
[화학식 XVIII]
(상기 식에서, R6는 전술한 바와 같음)
(e) R5가 OH를 나타내는 화학식 I의 화합물의 경우, 예컨대 당업자에게 공지된 조건 하에서 Rb가 벤질을 나타내는 전술한 바와 같은 화학식 XVII의 화합물 또는 이의 산 부가염을 히드록실아민과 반응시키는 방법;
(f) R5가 COOR7을 나타내는 화학식 Ia의 화합물의 경우, 예컨대 실온에서 또는 실온 주위에서 적합한 염기(예컨대, 수용액 중의 NaOH) 및 적절한 유기 용매(예컨대, 염화메틸렌)의 존재 하에서, 전술한 바와 같은 화학식 I의 해당 화합물을 하기 화학식 XIX의 화합물과 반응시키는 방법; 또는
[화학식 XIX]
L1COOR7
(상기 식에서, L1은 할로 또는 니트로페닐(예컨대, 4-니트로페닐)과 같은 적합한 이탈기를 나타내고, R7은 전술한 바와 같음)
(g) R5가 OCH3 또는 OCH2CH3를 나타내는 화학식 Ia의 화합물의 경우, 예컨대 적합한 염기(예컨대, KOH와 같은 알칼리 금속 수산화물(예컨대, 50 중량%의 수용액 중)) 및 적절한 촉매(예컨대, 염화벤질트리메틸암모늄(예컨대, 10 중량%의 CH2Cl2 또는 THF 용액 중)과 같은 4차 암모늄 할로겐화물)의 존재 하에서 R5가 OH인 화학식 Ia의 해당 화합물을 디메틸술페이트 또는 디에틸술페이트와 각각 반응시키는 방법.
화학식 I(v) 및 I(vi)의 단편에서 결합 상의 물결선은 파선의 결합 위치를 표시한다.
화학식 XVIA 및 XVIB의 화합물은, 예컨대 화학식 I의 화합물의 합성에 대해 전술한 것과 유사한 조건 하에서 전술한 바와 같은 화학식 II의 해당 화합물을 하기 화학식 XIXA 또는 XIXB의 화합물과 반응시킴으로써 제조할 수 있다.
[화학식 XIXA]
[화학식 XIXB]
(상기 식에서, R4, Y, X1, X2, X3 및 X4는 전술한 바와 같음)
대안으로, 화학식 XVIA 및 XVIB의 화합물은, 예컨대 화학식 I의 화합물의 합성에 대해 전술한 것과 유사한 조건 하에서 전술한 바와 같은 화학식 IV의 해당 화합물을 하기 화학식 XIXC 또는 XIXD의 화합물과 반응시킴으로써 제조할 수 있다.
[화학식 XIXC]
[화학식 XIXD]
(상기 식에서, R4, X1, X2, X3 및 X4는 전술한 바와 같음)
화학식 XVII의 화합물은, 예컨대 화학식 I의 화합물의 합성에 대해 전술한 것과 유사한 조건 하에서 전술한 바와 같은 화학식 II의 해당 화합물을 하기 화학식 XX의 화합물과 반응시킴으로서 제조할 수 있다.
[화학식 XX]
(상기 식에서, Y 및 R3b는 전술한 바와 같음)
대안으로, 화학식 XVII의 화합물은, 예컨대 화학식 Ia의 화합물의 제조에 대해 전술한 조건 하에서 화학식 I의 해당 화합물을 화학식 XIX의 화합물에 상응하는 화합물(R7 대신에 Rb가 존재하며, Rb가 전술한 바와 같음)과 반응시킴으로써 제조할 수 있다.
화학식 XV 및 XX의 화합물은, 예컨대 화학식 I의 화합물의 합성에 대해 전술한 것과 유사한 조건 하에서 전술한 바와 같은 화학식 X의 해당 화합물을 전술한 바와 같은 화학식 XVI의 화합물 또는 하기 화학식 XXI의 화합물과 각각 반응시킴으로서 제조할 수 있다.
[화학식 XXI]
R3bCH2NH2
(상기 식에서, R3b는 전술한 바와 같음)
화학식 XVI, XVIII, XIX, XIXA, XIXB, XIXC, XIXD 및 XXI의 화합물은 시중에서 구입할 수 있거나, 문헌에 공지되어 있거나, 또는 쉽게 구입할 있는 출발 물질로부터 적절한 시약 및 반응 조건을 사용하여 본 명세서에 기재된 방법과 유사한 방법 또는 표준 기법에 따른 통상의 합성 절차에 의해 얻을 수 있다. 예를 들면, 화학식 XIXA 및 XIXB의 화합물은, 예컨대 전술한 것과 유사한 조건 하에서 화학식 XIXC 또는 XIXD(적절하게는)의 해당 화합물을 화학식 X의 화합물과 반응시킴으로써 제조할 수 있다.
전술한 바와 같은 화학식 I 및 Ia의 화합물 및 이들의 유도체는 이하 "본발명의 화합물"이라고 한다.
따라서, 본 발명의 바람직한 화합물은 후술하는 실시예의 화합물을 들 수 있다. 이에 관하여, 언급할 수 있는 본 발명의 화합물은 하기와 같다:
Ph(3-Cl)(5-OCHF2)-(R)CH(OH)C(O)-Aze-Pab;
Ph(3-Cl)(5-OCHF2)-(R)CH(OH)C(O)-Aze-Pab(OMe);
Ph(3-Cl)(5-OCHF2)-(R)CH(OH)C(O)-Aze-Pab(OEt);
Ph(3-Cl)(5-OCHF2)-(R)CH(OH)C(O)-Aze-Pab(OnPr);
Ph(3-Cl)(5-OCHF2)-(R)CH(OH)C(O)-Aze-Pab(OiPr);
Ph(3-Cl)(5-OCHF2)-(R)CH(OH)C(O)-Aze-Pab(OcBu);
Ph(3-Cl)(5-OCHF2)-(R)CH(OH)C(O)-Aze-Pab(OH);
Ph(3-Cl)(5-OCHF2)-(R)CH(OH)C(O)-Aze-Pab(COOc펜틸);
Ph(3-Cl)(5-OCHF2)-(R)CH(OH)C(O)-Aze-Pab(Z);
Ph(3-Cl)(5-OCF3)-(R)CH(OH)C(O)-Aze-Pab;
Ph(3-Cl)(5-OCF3)-(R)CH(OH)C(O)-Aze-Pab(OMe);
Ph(3-Cl)(5-OCF3)-(R)CH(OH)C(O)-Aze-Pab(OCH2-3-(5-Me-이소옥사졸));
Ph(3-Cl)(5-OCF3)-(R)CH(OH)C(O)-Aze-Pab(OCH2-3-피리딘);
Ph(3-Cl)(5-OCF3)-(R)CH(OH)C(O)-Aze-Pab(OiBu);
Ph(3-Cl)(5-OCF3)-(R)CH(OH)C(O)-Aze-Pab(OEt);
Ph(3-Cl)(5-OCF3)-(R)CH(OH)C(O)-Aze-Pab(OBn);
Ph(3-Cl)(5-OCF3)-(R)CH(OH)C(O)-Aze-Pab(Oc헥실);
Ph(3-Cl)(5-OCF3)-(R)CH(OH)C(O)-Aze-Pab(OcBu);
Ph(3-Cl)(5-OCF3)-(R)CH(OH)C(O)-Aze-Pab(OCH2CH2OPh(3-CF3));
Ph(3-Cl)(5-OCF3)-(R)CH(OH)C(O)-Aze-Pab(OBn(4-Cl));
Ph(3-Cl)(5-OCF3)-(R)CH(OH)C(O)-Aze-Pab(OBn(3-MeO));
Ph(3-Cl)(5-OCF3)-(R)CH(OH)C(O)-Aze-Pab(OBn(2-Br));
Ph(3-Cl)(5-OCF3)-(R)CH(OH)C(O)-Aze-Pab(OBn(4-Me));
Ph(3-Cl)(5-OCF3)-(R)CH(OH)C(O)-Aze-Pab(O-4-헵틸);
Ph(3-Cl)(5-OCHF2)-(S)CH(CH2OH)C(O)-Aze-Pab;
Ph(3-Cl)(5-OCF3)-(S)CH(CH2OH)C(O)-Aze-Pab;
Ph(3-Cl)(5-OCF3)-(S)CH(CH2OH)C(O)-Aze-Pab(OMe);
Ph(5-OCHF2)-(R)CH(OH)C(O)-Aze-Pab;
Ph(5-OCF3)-(R)CH(OH)C(O)-Aze-Pab;
Ph(3-Cl)(5-OCH2CF3)-(R)CH(OH)C(O)-Aze-Pab;
Ph(3-Cl)(5-OCH2CF3)-(R)CH(OH)C(O)-Aze-Pab(OMe);
Ph(3-Cl)(5-OCH2CHF2)-(R)CH(OH)C(O)-Aze-Pab;
Ph(3-Cl)(5-OCH2CHF2)-(R)CH(OH)C(O)-Aze-Pab(OMe);
Ph(3-Cl)(5-OCH2F)-(R)CH(OH)C(O)-Aze-Pab;
Ph(3-Cl)(5-OCH2F)-(R)CH(OH)C(O)-Aze-Pab(OMe);
Ph(3-Cl)(5-OCH2CH2F)-(R)CH(OH)C(O)-Aze-Pab;
Ph(3-Cl)(5-OCH2CH2F)-(R)CH(OH)C(O)-Aze-Pab(OMe);
Ph(3-Cl)(5-OCH(CH2F)2)-(R)CH(OH)C(O)-Aze-Pab;
Ph(3-Cl)(5-OCH(CH2F)2)-(R)CH(OH)C(O)-Aze-Pab(OMe);
Ph(3-F)(5-OCHF2)-(R)CH(OH)C(O)-Aze-Pab;
Ph(3-F)(5-OCHF2)-(R)CH(OH)C(O)-Aze-Pab(OMe);
Ph(3-Br)(5-OCH2F)-(R)CH(OH)C(O)-Aze-Pab;
Ph(3-Br)(5-OCHF2)-(R)CH(OH)C(O)-Aze-Pab;
Ph(3-Br)(5-OCHF2)-(R)CH(OH)C(O)-Aze-Pab(OMe);
Ph(3-Cl, 5-OCH2CHF2)-(R)CH(OH)C(O)-Aze-Pab(OH);
Ph(3-Cl, 5-OCH2CH2F)-(R)CH(OH)C(O)-Aze-Pab(OH);
Ph(3-Cl, 5-OCHF2)-(R)CH(OH)C(O)-Pro-Pab;
Ph(3-Cl, 5-OCHF2)-(R)CH(OH)C(O)-Pro-Pab(OMe);
Ph(3-Cl, 5-OCHF2)-(R)CH(OH)C(O)-Aze-NH-CH2-((2-아미디노)-5-피리딘일);
Ph(3-Cl, 5-OCHF2)-(R)CH(OH)C(O)-Aze-NH-CH2-((2-메톡시아미디노)-5-피리딘일);
Ph(3-Cl, 5-OCHF2)-(R)CH(OH)C(O)-Aze-NH-CH2-((5-아미디노)-2-피리미딘일);
Ph(3-Cl, 5-OCHF2)-(R)CH(OH)C(O)-Aze-NH-CH2-((5-메톡시아미디노)-2-피리딘일);
Ph(3-Cl, 5-OCHF2)-(R)CH(OH)C(O)-Aze-Pab(3-F);
Ph(3-Cl, 5-OCHF2)-(R)CH(OH)C(O)-Aze-Pab(2,6-디F);
Ph(3-Cl, 5-OCHF2)-(R)CH(OH)C(O)-Aze-Pab(2,6-디F)(OMe);
Ph(3-Cl, 5-OCHF2)-(R)CH(OH)C(O)-Aze-Pab(2,5-디F); 및
Ph(3-Cl, 5-OCHF2)-(R)CH(OH)C(O)-Aze-Pab(2,5-디F)(OMe)
이 있다.
본 발명의 화합물은 호변이상을 나타낼 수 있다. 모든 호변이상체 및 이의 혼합물은 본 발명의 범주 내에 포함된다. 언급할 수 있는 특별한 호변이상체는 화학식 Ia의 화합물 내 아미딘 작용기에서 이중 결합의 위치와 치환기 R5의 위치와 연결된 것을 포함한다.
또한, 본 발명의 화합물은 2 이상의 비대칭 탄소 원자를 함유하므로, 광학 및/또는 부분 입체 이성질 현상을 나타낼 수 있다. 부분 입체 이성질체는, 크로마토그래피와 같은 통상의 기법을 사용하여 분리할 수 있다. 다양한 입체 이성질체는 예컨대, 통상적인 HPLC 기법을 사용하여 화합물들의 라세미 또는 다른 혼합물의 분리에 의해 분리할 수 있다. 대안으로, 필요한 광학 이성질체는 라세미화 또는 에피머화를 초래하지 않는 조건 하에서 적절한 광학 활성 출발 물질을 반응시키거나, 또는 호모키랄산으로 유도체화시킨 후 통상의 수단(예컨대, HPLC, 실리카 상의 크로마토그래피)으로 부분 입체 이성질체를 분리함으로써 제조할 수 있다. 모든 입체 이성질체는 본 발명의 범주 내에 포함된다.
하기 단편이 S-배열인 본 발명의 화합물이 바람직하다.
본 발명의 바람직한 화합물은 하기 구조 단편이, Ra가 -OH를 나타내는 경우, R-배열로 존재하거나, Ra가 -CH2OH를 나타내는 경우, S-배열로 존재하는 것들을 포함한다.
상기 2 개의 단편에서 결합 상의 물결선은 단편의 결합 위치를 나타낸다.
언급할 수 있는 본 발명의 화합물은 Ph(3-Cl)(5-OCHF2)-CH(OH)C(O)-Aze-Pab(여기서, 이 경우에 Aze는 아제티딘-2-카르복실레이트(즉, (R)-형태 및/또는 (S)- 형태)뿐만 아니라, Pab 내 아미디노 단위에서의 수소 원자 대신에, R6가 C1-3 알킬을 나타내는 기 -OR6(전술한 바와 같음)가 존재하는 등가 화합물(즉, Ph(3-Cl)(5-OCHF2)-CH(OH)C(O)-Aze-Pab(OMe), Ph(3-Cl)(5-OCHF2)-CH(OH)C(O)-Aze-Pab(OEt), Ph(3-Cl)(5-CHF2)-CH(OH)C(O)-Aze-Pab(OnPr) 또는 Ph(3-Cl)(5-OCHF2)-CH(OH)C(O)-Aze-Pab(OiPr)을 나타냄)를 포함한다. 추가로 언급할 수 있는 본 발명의 화합물은 이전 문장에서 확인된 특이적인 화합물이 아닌 것을 포함한다.
당업자들은 전술 및 후술한 공정에서 중간체 화합물의 작용기가 보호기에 의해 보호될 필요가 있다는 것을 인식할 것이다.
보호하는 것이 바람직한 작용기로는 히드록시, 아미노 및 카르복실산이 있다. 히드록시에 대한 적합한 보호기로는 임의로 치환된 및/또는 불포화된 알킬기(예컨대, 메틸, 알릴, 벤질 또는 t-부틸), 트리알킬실릴기 또는 디아릴알킬실릴기(예컨대, t-부틸디메틸실릴, t-부틸디페닐실릴 또는 트리메틸실릴) 및 테트라히드로피란일이 있다. 카르복실산에 대한 적합한 보호기로는 C1-6 알킬 또는 벤질 에스테르가 있다. 아미노 및 아미디노에 대한 적합한 보호기로는 t-부틸옥시카르보닐, 벤질옥시카르보닐 또는 2-트리메틸실릴에톡시카르보닐(Teoc)이 있다. 또한, 아미디노 질소들은 히드록시기 또는 알콕시기에 의해 보호될 수 있고, 단보호 또는 이보호될 수 있다.
작용기의 보호 및 탈보호는 커플링 전후에 또는 상기 언급한 반응식에서 임의의 다른 반응 전후에 일어날 수 있다.
보호기는 후술하는 바와 같은 당업자에게 공지된 기법에 따라 제거할 수 있다.
당업자는 대안으로 그리고 몇가지 경우에서 좀더 편리한 방법으로 본 발명의 화합물을 얻기 위하여, 상기 언급한 개별 방법을 상이한 순서로 수행할 수 있고, 및/또는 개별 반응을 전체 과정 내의 상이한 단계에서 수행할 수 있다(즉, 치환기를 첨가하거나, 및/또는 상기 언급한 것에 대한 중간체 상에서 특별한 반응과 함께 수행할 수 있음). 이것은 보호기에 대한 필요성을 부정하거나 필요하게 할 수 있다.
관련된 화학 유형은 합성을 수행하기 위한 순서뿐만 아니라 기를 보호하는 필요성 및 유형을 지시할 것이다.
보호기의 용도는 문헌("Protective Groups in Organic Chemistry", edited by J.W,F McOmie, Plenum Press (1973)) 및 문헌("Protective Groups in Organic Synthesis", 3rd edition, T.W. Greene & P.G.M. Wutz, Wiley-Interscience (1999))에 상세하게 기재되어 있다.
본 발명의 화합물의 보호된 유도체는 표준 탈보호 기법(예컨대, 수소화)을 사용하여 화학적으로 본 발명의 화합물로 전환시킬 수 있다. 또한, 당업자는 화학식 I의 특정 화합물이 화학식 I의 화합물의 "보호된 유도체"인 것으로도 언급될 수 있다는 것을 인식할 것이다.
의약 및 약학적 용도
본 발명의 화합물은, 예컨대 약리학적 활성을 그 자체로 소유할 수 있다. 이러한 활성을 소유할 수 있는 본 발명의 화합물은 화학식 I의 화합물을 포함하지만, 이에 한정되는 것은 아니다.
그러나, 본 발명의 다른 화합물(화학식 Ia의 화합물을 포함함)은 이러한 활성을 소유할 수 없지만, 비경구 또는 경구 투여될 수 있고, 그 후 체내에서 대사되어 약리학적으로 활성인 화합물(화학식 I의 해당 화합물을 포함하지만, 이에 한정되는 것은 아님)을 형성할 수 있다. 따라서, 이러한 화합물들(또한, 몇 가지 약리학적 활성을 소유할 수 있는 화합물을 포함하지만, 이 활성은 대사되는 "활성" 화합물의 것보다 상당히 낮음)은 활성 화합물의 "프로드러그"로서 기술할 수 있다.
따라서, 본 발명의 화합물은 이들이 약리학적 활성을 소유하고, 및/또는 경구 또는 비경구 투여한 후 체내에서 대사되어 약리학적 활성을 소유하는 화합물을 형성하기 때문에 유용하다. 따라서, 본 발명의 화합물은 약제로서 처방된다.
본 발명의 추가의 양태에 따라, 약제로서 사용하기 위한 본 발명의 화합물을 제공한다.
특히, 본 발명의 화합물은 그 자체로 트롬빈의 강력한 억제제이거나 및/또는 (예컨대, 프로드러그의 경우), 예컨대 후술하는 테스트에서 설명되는 바와 같이 투여 후 대사되어 트롬빈의 강력한 억제제를 형성한다.
"트롬빈 억제제의 프로드러그"에 의해, 본 발명자는 경구 또는 비경구 투여(예컨대, 하기 테스트 E 참조)한 후 또는 대안으로는 간 미소체의 존재 하에서 항온 처리(예컨대, 하기 테스트 G 참조)한 후 실험적으로 검출 가능한 양으로, 그리고 예정된 시간 내(예컨대, 약 1 시간)에 트롬빈 억제제를 형성하는 화합물을 포함한다.
따라서, 본 발명의 화합물은 하기를 비롯한, 트롬빈의 억제가 요구되는 이러한 상태 및/또는 항응고 치료가 제시되는 상태에 유용할 것으로 기대된다. 인간을 비롯한 동물의 혈액 및/또는 조직에서 혈전증 및 응고 항진의 치료 및/또는 예방.
응고 항진은 혈전색전 질환을 유발할 수 있는 것으로 공지되어 있다. 언급할 수 있는 응고 항진 및 혈전색전 질환과 관련된 상태는 인자 V-변이(인자 V Leiden)와 같은 선천성 또는 후천성 활성화 단백질 C 내성 및, 항트롬빈 III, 단백질 C, 단백질 S, 헤파린 공인자 II에서의 선천성 또는 후천성 결핍을 포함한다. 응고 항진 및 혈전색전 질환과 관련된 것으로 공지된 기타 상태들은 순환하는 항인식질 항체(루푸스 항응고제), 호모시스테인혈증, 헤파린 유도 혈소판 장애 및 섬유소용해에서의 결손뿐만 아니라 응고 증후군(예컨대, 파종성 혈관내 응고병증(DIC)) 및 일반적인 혈관 손상을 포함한다.
알츠하이머 병과 같은 신경변성 질환에서 응고 항진의 증상없이 바람직하지 않은 과량의 트롬빈이 존재하는 상태의 치료.
언급될 수 있는 특정 질환 상태로는 정맥 혈전증(예컨대, DVT) 및 폐동맥 색전증, 동맥 혈전증(예컨대, 심근 경색, 협심증, 혈전증으로 인한 발작 및 말초 동맥 혈전증), 및 통상, 심방 세동(예컨대, 비혈관 심방 세동) 동안의 심방으로부터, 또는 경벽 심근 경색 후 좌심실로부터, 또는 울혈성 심부전에 의해 유발되는 전신 색전증의 치료 및/또는 예방 처치; 경피 트란스-내강 혈관 성형술(PTA) 및 관상 동맥 바이패스 수술 후 재폐색의 예방; 미소외과술 및 일반 혈관 수술 후 재혈전증의 예방이 있다.
추가의 증상은 박테리아, 다발성 외상, 중독 또는 임의의 다른 메카니즘에 의해 유발되는 파종성 혈관내 응고병증의 치료 및/또는 예방 처치; 혈액이 체내의 외래 표면, 예컨대 혈관 이식편, 혈관 스텐트, 혈관 카테터, 기계적 및 생물학적 보철 밸브 또는 임의의 다른 의료 장치에 접촉하는 경우의 항응고제 치료; 및 혈액이 의료 장치와 접촉하는 경우, 예컨대 신체 외부에서 심폐 장치를 사용하는 심혈관 외과 수술 동안 또는 혈액 투석 중에 항응고 치료; 특발성 성인 호흡 곤란 증후군, 방사선 또는 화학 요법 치료 후의 폐 섬유증, 폐혈증성 쇼크, 폐혈증, 염증성 반응의 치료 및/또는 예방 처치를 포함하고, 이는 부종, 급성 또는 만성 아테롬성 경화증, 예컨대 관상 동맥 질병 및 아테롬성 경화증의 플라크의 형성, 대뇌 동맥 질병, 대뇌 경색, 대뇌 혈전증, 대뇌 색전증, 말초 동맥 질병, 허혈, 협심증(불안정한 협심증을 포함함), 재관류 손상, 경피성 트란스-내강 혈관성형술(PTA) 및 관상 동맥 바이패스 수술 후의 재발협착증을 포함하지만, 이에 한정되는 것은 아니다.
또한, 트립신 및/또는 트롬빈을 억제하는 본 발명의 화합물은 췌장염의 치료에 유용할 수 있다.
따라서, 본 발명의 화합물은 이러한 상태들의 치료 및/또는 예방 처치 모두에 처방될 수 있다.
본 발명의 추가의 양태에 따라서, 트롬빈의 억제가 필요한 상태의 치료 방법을 제공하는 데, 이 방법은 이러한 상태의 환자 또는 이러한 상태에 감염되기 쉬운 환자에게 본 발명의 화합물의 치료학적 유효량을 투여하는 것을 포함한다.
일반적으로, 본 발명의 화합물은 임의의 다른 비경구 경로에 의해 또는 흡입을 통하여 유리 염기 또는 약학적으로 허용 가능한 제형인 약학적으로 허용 가능한 비독성 유기산 또는 무기산으로서 본 발명의 화합물을 포함하는 약학 제제의 형태로 경구, 정맥내, 피하, 협측내, 직장내, 피부내, 비강내, 기관내, 기관지내 투여될 것이다.
본 발명의 화합물을 투여하는 바람직한 경로는 경구이다. 바람직한 약학 제제는 본 발명의 화합물을 포함하는 변형된 방출 약학 조성물을 포함한다. 용어 "변형된 방출" 약학 조성물은 약제의 방출의 개시 및/또는 속도가 갈레누스파 조작에 의해서 변경되는 임의의 조성물을 포함하므로 본 명세서에서 참고로 인용한 적절한 문헌(미국 약전(USP XXII))의 서문/전문의 xliii 및 Xliv 페이지에서 제공한 정의를 포함하는 것으로 당업자에게 이해될 것이다.
따라서, 적합한 변형된 방출 제제는 의약에서의 표준 기법(예컨대, Pharmaceutisch Weekblad Scientific Edition, 6, 57 (1984); Medical Applications of Controlled Release, Vol II, eds. Langer and Wise (1984) Bocaraton, Florida, at pages 1 to 34; Industrial Aspects of Pharmaceuticals, ed. Sandel, Swedish Pharmaceutical Press (1993) at pages 93 to 104; 및 pages 191 to 211 of "Pharmaceutics: The Science of Dosage Form Design", ed. M. E. Aulton(1988)(Churchill Livingstone) 참조)에 따라 당업자에 의해 제조할 수 있다.
따라서, 바람직한 변형된 방출 제제는 본 발명의 적절한 화합물이 중합체 매트릭스에 삽입된 것을 포함한다. 이러한 점에서, 본 발명자는 본 발명의 화합물이 수성 매질(즉, "친수성 겔화 성분")에서 팽윤하는 중합체와 함께 제공되는, 본 발명의 화합물을 포함하는 제제를 소위 "팽윤" 변형된 방출 시스템의 형태 또는 "겔화 매트릭스" 변형된 방출 시스템의 형태의 경구 투여용으로 제공하는 것이 바람직하다고 생각한다.
특히, 본 발명자는 본 발명의 화합물이 아이오타-카라기난 및 1 이상의 중성 겔화 중합체를 포함하는 겔화 매트릭스 조성물 내에서 함께 조제되는 것이 바람직하다고 생각한다.
아이오타-카라기난은 15 중량% 이상의 수치로 이러한 바람직한 제제 중에 존재하는 것이 바람직하다. 아이오타-카라기난의 바람직한 등급은 점도가 5 센티푸와즈(cps) 이상, 바람직하게는 5 내지 10 cps인(82℃로 가온한 후, 75℃에서 30 rpm의 속도로 가동 중인 #1 회전축이 장착된 브룩필드(Brookfield LV) LV 점도계로 점도를 측정한 1.5% 용액의 경우) 약학적 등급 아이오타-카라기난(에프엠씨 바이오폴리머(FMC)에서 시판됨)과, 20℃로 가온한 후, 라우다 서모스탯(Lauda thermostat) C3 및 하케 메스-시스템(Hakke Mess-System) III과 함께 사용되는 하케형의 폴링볼(fallingball) 점도계를 사용하고, 밀도 7.8 g/㎤의 금 도금된 스테인레스 강 볼을 사용하여 점도를 측정한 0.3% 수용액의 경우 바람직하게는 점도가 14 mPaㆍs 이상인 기술 등급 아이오타-카라기난(플루카 바이오케미카(Fluka Biochemica)에서 시판됨)을 포함한다.
중성 겔화 중합체는 겔화 성질을 가지고, 실질적으로 pH와 무관한 용해도를 가진 단일 또는 1 이상의 중성 부식성 중합체의 혼합물일 수 있다. 중성 겔화 중합체는 10 중량% 이상, 그러나 보다 바람직하게는 20 중량% 이상의 수치로 제제 내에 존재하는 것이 바람직하다.
적합한 중성 겔화 중합체는 폴리에틸렌 옥시드(PEO), PEO 부류의 유도체 및 부재(예컨대, 바람직하게는 천연의 고상 상태로 존재하는 적합한 분자량 또는 점도의 폴리에틸렌 글리콜(PEG))를 포함한다. 단일 중성 겔화 중합체로서 사용하는 경우, PEO는 1650 내지 5500 mPaㆍs의 수용액 점도 범위(또는 1650 내지 5500 cps; 2 rpm으로 2번 회전축을 갖는 브룩필드 RVF 점도계를 사용하여 25℃에서 1% 수용액에 대해 측정함)에 상응하는 4 밀리온(4M) 이상의 MW를 갖는 것이 바람직하다. 적합한 PEO의 다른 예로는 5500 내지 7500 mPaㆍs의 수용액 점도 범위에 상응하는 5 밀리온(5M) 정도의 MW의 PEO 또는 10000 내지 15000 mPaㆍs의 수용액 점도 범위에 상응하는 8 밀리온(8M) 정도의 MW의 PEO가 있다. 이러한 범위는 문헌(USP 24/NF 19, 2000 edition, pp. 2285-2286)에서 이 중합체에 대해 인용되는 25℃에서 측정한 전형적인 용액 점도(cps)에 대한 값에 걸쳐 있다. PEG가 단일 중성 겔화 중합체로서 사용되는 경우, 이것은 고분자량, 예컨대 모세관 점도계를 사용하여 20℃에서 50% 수용액(w/w)을 사용하여 측정한 2700 내지 3500 mPaㆍs(또는 2700 내지 3500 cps)의 점도 범위에 상응하는 20000 정도의 MW를 갖는 것이 바람직하다[유럽 약전 3판., 2000, Supplement, pp. 908-909 참조].
다른 적합한 겔화 중합체는 셀룰로스 유도체, 예컨대 적합하게 고 점도를 지닌 히드록시프로필메틸 셀룰로스(HPMC) 또는 히드록시에틸셀룰로스(HEC)(예컨대, "HPMC 10000 cps", "HPMC 15000 cps", "HEC type HH" 또는 "HEC type H")을 포함한다. 단일 중성 중합체로서 사용하는 경우, "HPMC 10000 cps" 및 "HPMC 15000 cps"와 같은 히드록시프로필메틸 셀룰로스 중합체는 모세관 점도계(웁벨로드(ubbelohde) 또는 등가)를 사용하여 2%(w/w) 수용액으로 20℃에서 측정하고 건조한 물질을 기준으로 계산한 경우 각각 7500 내지 14000 mPaㆍs(또는 7500 내지 14000 cps) 및 11250 내지 21000 mPaㆍs(또는 11250 내지 21000 cps)의 뚜렷한 점도를 갖는다. 히드록시에틸셀룰로스 중합체의 하나의 유형은, 예컨대 허큘리스 인코포레이티드(Hercules Incorporated; 아쿠알론)로부터의 "Natrosol 250 Pharma, 타입 HH"는 브룩필드 Synchro-Lectric Model LVF 장치를 상태 1% 용액 농도, 스핀들 번호 4, 스핀들 속도 30 rpm, 인자 200, 25℃에서 사용하여 통상적으로 약 20,000 mPaㆍs의 브룩필드 점도를 나타낸다(Natrosol Physical and Chemical Properties booklet, 33.007-E6 (1993), p.21 참조).
언급할 수 있는 특별한 제제는 본 발명의 화합물을 아이오타-카라기난 및 HPMC(10,000 cps)와 함께 50:50(중량%) 비율로, 또는 아이오타-카라기난 및 PEO 4M과 함께 50:50(중량%) 비율로 조제한 것을 포함한다.
이러한 제제 내의 바람직한 추가의 부형제는 윤활제, 예컨대 스테아릴 푸마르산나트륨을 포함한다.
또는, 치료하고자 하는 환자의 장애 및 환자와 투여 경로에 따라 조성물은 다양한 투여량으로 투여할 수 있다.
또한, 본 발명의 화합물은 다음의 것 중 1 이상과 같은 다른 작용 메카니즘을 가진 임의의 항혈전증제(들)와 결합하거나 및/또는 함께 투여할 수 있다: 항혈소판제 아세틸살리실산, 티클로피딘 및 클로피도그렐; 트롬복산 수용체 및/또는 합성효소 억제제; 피브리노겐 수용체 길항제; 프로스타시클린 모의제; 포스포디에스테라제 억제제; ADP-수용체 (PT2) 길항제; 및 카르복시펩티다제 U(CPU)의 억제제.
또한, 본 발명의 화합물은 혈전융해 질병, 특히 심근 경색의 치료에서 혈전융해제, 예컨대, 조직 플라스미노겐 활성화제(천연, 재조합 또는 개질됨), 스트렙토키나제, 우로키나제, 프로우로키나제, 아니솔화된 플라스미노겐-스트렙토킨제 활성제 복합제(ASPAC), 동물 타액선 플라스미노겐 활성제 등 중 1종 이상과 배합되거나 및/또는 함께 투여할 수 있다.
본 발명의 추가의 양태에 따라서, 약학적으로 허용 가능한 보조제, 희석제 또는 담체와 혼합한 본 발명의 화합물을 포함하는 약학적 제제를 제공한다.
인간의 치료에서 본 발명의 화합물의 적합한 일일 투여량은 경구 투여시 체중 1 kg 당 약 0.001 내지 100 mg이고, 비경구 투여시 체중 1 kg 당 0.001 내지 50 mg이다.
불명료함을 피하기 위해, 본 명세서에서 사용된 바와 같은 용어 "처치"는 치료 및/또는 예방 처치를 포함한다.
본 발명의 화합물은 더욱 효과적이고, 독성이 보다 적으며, 장시간 작용할 수 있으며, 폭넓은 범위의 활성을 가지고, 보다 강력하며, 부작용이 거의 없고, 보다 쉽게 흡수되고, 및/또는 종래 화합물보다 뛰어난 기타의 유용한 약리학적, 물리적 또는 화학적 성질을 갖는다는 이점을 갖는다. 본 발명의 화합물은 종래에 공지된 화합물보다 빈번하지 않게 투여할 수 있다는 추가의 이점을 가질 수 있다.
생물학적 테스트
하기 테스트 절차를 사용할 수 있다.
테스트 A
트롬빈 응고 시간(TT)의 측정
억제제 용액(25 ㎕)을 3 분 동안 혈장(25 ㎕)으로 항온처리하였다. 그 다음, 완충 용액(pH7.4) 중의 인간 트롬빈(T 6769; 시그마 케미컬 컴패니(Sigma Chem. Co) 또는 헤마톨로직 테크놀로지스(Hematologic Technologies))(25 ㎕, 4.0 NIH 단위/㎖)를 가하고, 응고시간을 자동화 장치(KC 10; 아멜룽(Amelung))로 측정하였다.
트롬빈 응고 시간(TT)은 절대값(초)뿐만 아니라 억제제가 없는 TT(TT0):억제제가 있는 TT(TTi)의 비로서 나타내었다. 후자의 비(범위 1 내지 0)는 억제제의 농도에 대하여 도시하였고, 하기 식에 따라 S자형 투여량-반응 곡선에 적용하였다.
y=a/[1+(x/IC50)s]
(상기 수학식에서, a는 최대 범위, 즉 1을 나타내고; s는 투여량 반응 곡선의 기울기이며; IC50은 응고 시간을 두배로 하는 억제제의 농도임). 계산은 0은 시작 1은 끝으로 정의한 것과 같은 식을 설정한 소프트웨어 프로그램 GraFit Version 3(에리타커스 소프트웨어, 로빈 래더바로우(Erithacus Software, Robin Leatherbarrow), 영국 런던에 소재하는 임페리얼 칼리지 오브 사이언스)을 사용하여 PC로 수행하였다.
테스트 B
색소 로보트 분석으로의 트롬빈 억제의 측정
트롬빈 억제제 효능은 플라토(Plato) 3300 로보트 마이크로판 프로세서(스위스 체하-8634 홈브레흐티콘에 소재하는 로지스 아게(Rosys AG)에서 96-웰 반부피 미세적정판(미국 매사추세츄주 캠브리지에 소재하는 코스타(Costar); Cat No 3690)을 사용하여 색소 기질 방법으로 측정하였다. DMSO(72 ㎕) 중의 테스트 물질의 공급 용액 0.1 내지 1 mmol/ℓ를 DMSO로 1:3(24+48 ㎕)으로 연속 희석시켜 10 가지 상이한 농도를 얻고, 이를 분석에서 샘플로서 분석하였다. 테스트 샘플 2 ㎕를 124 ㎕ 분석 완충액으로 희석시키고, 분석 완충액 중의 색소 기질 용액(스웨덴 묄른달 크로모게닉 S-2366), 최종적으로 분석 완충액 중의 α-트롬빈 용액(인간 α-트롬빈, 시그마 케미칼 컴패티 또는 헤마톨로직 테크놀로지) 12 ㎕를 가하고, 이 샘플들을 혼합하였다. 최종 분석 농도들은 테스트 물질 0.00068 내지 13.3 μmol/ℓ, S-2366 0.30 mmol/ℓ, α-트롬빈 0.020 NIHU/㎖이었다. 37℃에서 40 분의 항온처리 동안 선형 흡광도 증가는 억제제없는 블랭크에 대하여 테스트 샘플에 대한 억제율(%)의 계산에 사용하였다. 트롬빈 활성의 50% 억제를 초래하는 억제제 농도에 해당하는 IC50-로보트 밸브는 로그 농도 대 억제율(%) 곡선으로부터 계산하였다.
테스트 C
인간 트롬빈에 대한 억제 상수 K i 의 측정
Ki-측정은 Cobas Bio 원심분리 분석기(Roche, Basel, Switzerland)에서 37℃에서 수행한 색소 기질 방법을 사용하여 측정하였다. 다양한 농도의 테스트 화합물로 인간 α-트롬빈을 항온처리한 후 남아 있는 효소 활성을 3가지 상이한 기질 농도로 측정하고, 405 nm에서 광학 흡광도의 변화로서 측정하였다.
테스트 화합물 용액(100 ㎕; 일반적으로 BSA 함유하는 완충액 또는 살린 10 g/ℓ)을 BSA(10 g/ℓ)를 함유하는 분석 완충액(0.05 mol/L Tris-HCl(pH 7.4), NaCl로 조절된 이온력 0.15) 중의 인간 α-트롬빈(시그마 케미칼 컴파니) 200 ㎕와 혼합시켰다. Cobas Bio에서 샘플로서 분석하였다. 60 ㎕ 샘플을 물 20 ㎕와 함께 분석 완충액 중의 기질 S-2238(스웨덴 묄른달에 소재하는 크로모게닉 에이비)에 가하고, 흡광도 변화(ΔA/분)을 모니터하였다. S-2238의 최종 농도는 16, 24 및 50 mol/ℓ이고 트롬빈 0.125 NIH U/㎖였다.
정상 상태 반응 속도는 딕슨 플롯(Dixon plot), 즉 억제 농도 대 1/(ΔA/분)의 다이어그램을 구성하는 데 사용하였다. 통상적으로, 가역적인 경쟁적인 억제제의 경우, 상이한 기질 농도에 대한 데이타 점은 x는 -Ki에서 구분하는 직선을 형성한다.
테스트 D
활성화된 부분 트롬보플라스틴 시간(APTT)의 측정
APTT는 풀 정상 인간 시트르화된 혈장에서 스타고(Stago)에서 제조한 시약 PTT 자동화 5로 측정하였다. 억제제를 혈장에 가하고, APTT 시약으로 3 분 동안 항온처리한 후, 염화칼슘 용액 100 ㎕를 가하고, APTT를 시약 생산자의 지시에 따라 응고 분석기 KC10(아멜룽)을 사용함으로써 측정하였다.
응고 시간은 절대값(초)뿐만 아니라 억제제가 없는 TT(TT0):억제제가 있는 TT(TTi)의 비로서 나타내었다. 후자의 비(범위 1 내지 0)는 억제제의 농도를 상대로 도시하였고, 하기 식에 따라 S자형 투여량-반응 곡선에 적용하였다.
y=a/[1+(x/IC50)s]
(상기 수학식에서, a는 최대 범위, 즉 1을 나타내고; s는 투여량반응 곡선의 기울기이며; IC50은 응고 시간을 두배로 하는 억제제의 농도임). 계산은 0은 시작 1은 끝으로 정의한 것과 같은 식을 설정한 소프트웨어 프로그램 GraFit Version 3(에리타커스 소프트웨어, 로빈 레더바로우, 영국 런던에 소재하는 임페리얼 칼리지 오브 사이언스)을 사용하여 PC로 수행하였다.
IC50APTT는 활성화된 부분 트롬보플라스틴 시간을 두배로 하는 인간 혈장 중의 농도로서 정의한다.
테스트 E
생체외 트롬빈 시간의 측정
에탄올:SolutolK:물(5:5:90) 중에 용해된 본 발명의 화합물의 경구 또는 비경구 투여 후의 트롬빈의 억제는 실험 하루 또는 이틀 전에 경동맥으로부터 혈액 샘플링을 위한 카테터를 장착한 의식이 있는 래트에서 검사하였다. 실험날에, 본 발명의 화합물을 시트르산나트륨 용액 1 부(0.13 mol/ℓ) 및 혈액 9 부를 함유하는 플라스틱 관으로 투여한 후, 혈액 샘플을 고정된 시간대로 채혈하였다. 관을 원심분리하여 혈소판이 적은 혈장을 얻었다.
혈장 샘플 50 ㎕는 냉각 아세토니트릴 100 ㎕로 침전시켰다. 샘플은 10 분 도안 4000 rpm으로 원심분리하였다. 상청액 75 ㎕를 0.2% 포름산으로 희석시켰다. 생성된 용액 10 ㎕ 부피는 LC-MS/MS로 분석하고, 트롬빈 억제제의 농도는 표준 곡선을 사용하여 측정하였다.
테스트 F
래트에서의 혈장 클리어런스의 측정
혈장 클리어런스는 수컷 Sprague Dawley rat에서 평가하였다. 화합물을 물 중에 용해시키고, 4 μmol/kg의 복용약으로 피하 환괴 주사로 투여하였다. 혈액 샘플은 약제 투여 후 5 시간 이하의 빈번한 간격으로 수집하였다. 혈액 샘플을 원심분리시키고, 혈장은 혈액 세포로부터 분리시키고, 시트르산염을 포함하는 바이알(10% 최종 농도)로 이송하였다. 혈장 샘플 50 ㎕를 냉각 아세토니트릴 100 ㎕로 침전시켰다. 샘플을 10 분 동안 4000 rpm으로 원심분리하였다. 상청액 75 ㎕는 0.2% 포름산 75 ㎕로 희석시켰다. 생성된 용액 10 ㎕ 부피는 LC-MS/MS로 분석하고, 트롬빈 억제제의 농도는 표준 곡선을 사용하여 측정하였다. 혈장 농도-시간 프로필 하의 영역은 로그/선형 사다리꼴 규칙을 사용하여 측정하고, 무한 시간으로 외삽하였다. 그 다음, 화합물의 혈장 클리어런스(CL)는
CL=투여량/AUC
로 측정하였다.
값은 ㎖/분/kg으로 기록하였다.
테스트 G
시험관내 안정성의 측정
간 미소체는 Sprague-Dawley 래트 및 인간 간 샘플로부터 SOP에 따라 제조하였다. 화합물은 37℃에서 TRIS 완충액(pH7.4) 0.05 mol/ℓ 중의 3 mg/㎖의 총 미소체 단백질 농도로 공인자 NADH(2.5 mmol/ℓ) 및 NADPH(0.8 mmol/ℓ)의 존재 하에서 항온처리하였다. 화합물의 초기 농도는 5 또는 10 μmol/ℓ이었다. 60 분 이하의 분석을 위하여 항온처리 개시 후 샘플을 취하였다. 수집한 샘플의 효소 활성은 총 샘플 부피의 3.3%에 상응하는 부피로 2-% 미리스트산을 첨가함으로써 즉시 정지시켰다. 60 분에 샘플에 남아있는 화합물의 농도(최종 농도)는 기준(개시 농도)으로서 0 시간에서 수집한 샘플을 사용하여 LCMS에 의해 측정하였다. 강등된 트롬빈 억제제의 백분율(%)은
로 계산하였다.
테스트 H
동맥 혈전증 모델
혈관 손상은 염화철을 국소 경동맥에 도포함으로써 유도된다. 래트는 나트륨 펜토바르비탈(80 mg/kg; 스웨덴 우메아에 소재하는 아포텍스보라게트(Apoteksbolaget))을 복강내 주사한 후 실험 동안 내내 연속 유입(12 mg/kg/h)하여 마취시켰다. 래트 체온은 외부 가열에 의해 실험 동안 내내 38℃로 유지시켰다. 실럼은 5 분 조절 간격으로 시작하였다. 5 분 후, 인간 125I-피브리노겐(80 kBq; IM53; 영국 버킹검셔에 소재하는 아머샴 인터내셔날(Amersham International))은 정맥내 제공하고, 피브린(노겐)의 혈전으로의 후속 혼입에 대한 마커로서 사용하였다. 경동맥 분절의 근단 말단은 FeCl3를 적신(2 ㎕; 55% w/w; 독일 담스다트에 소재하는 머크) 여과지(직경 3 mm; 1F; 스웨덴 그릭스보에 소재하는 뭉크텔(Munktell)를 포함하는 길이 방향으로 개방된 플라스틱 관(6 mm; Silastic; 미국 미네소타주에 소재하는 다우코닝)에 놓았다. 좌경동맥은 FeCl3에 10 분 동안 노출시킨 후, 플라스틱 관으로부터 제거하고, 염수 중에 적셨다. 15 분 후, 경동맥을 제거하고 염수로 세정하였다. 또한, 기준 혈액 샘플을 125I-피브리노겐의 주사 후 10 분 그리고 실험의 종결시에 혈액 125I-활성을 측정하기 위하여 취하였다. 기준 혈액 샘플 및 혈관 분절에서의 125I-활성은 실험을 수행하는 동일한 날에 감마 계수기(1282 Compugamma; 핀란드 툴쿠에 소재하는 엘케이비 왈랙 오와이(LKB Wallac Oy)로 측정하였다. 혈전 크기는 혈액 중의 125I-활성에 대하여 혈관 분절에서 혼입된 125I-활성의 양으로서 측정하였다.
일반적인 실험의 상세한 설명
TLC는 실리카 겔 상에서 수행하였다. 키랄 HPLC 분석은 5 cm 보호 컬럼을 가진 46 mm x 250 mm Chiralcel OD 컬럼을 사용하여 수행하였다. 컬럼 온도는 35℃로 유지하였다. 1.0 ㎖/분의 유속을 사용하였다. 228 nm에서의 Gilson 115 UV 검출기를 사용하였다. 헥산, 에탄올 및 삼불화아세트산으로 구성된 이동상 및 적절한 비는 각 화합물에 대해 리스트하였다. 통상적으로, 산물은 최소량의 에탄올 중에 용해시키고, 이것을 이동상으로 희석시켰다.
LC-MS/MS는 CTC-PAL 주사기 및 5 ㎛, 4x100 mm ThermoQuest, Hypersil BDS-C18 컬럼이 장착된 HP-1100 장치를 사용하여 수행하였다. API-3000(시엑스(Sciex)) MS 검출기를 사용하였다. 유속은 1.2 ㎖/분이고, 이동상(구배)은 0.2% 포름산을 모두 함유하는 90-10%의 4 mM 수성 아세트산암모늄과 10-90% 아세토니트릴로 구성되었다.
1H NMR 스펙트럼은 내부 표준으로서 테트라메틸실란을 사용하여 기록하였다. 13C NMR 스펙트럼은 내부 표준으로서 열거한 중수소 치환 용매를 사용하여 기록하였다.
실시예 1
Ph(3-Cl)(5-OCHF 2 )-(R)CH(OH)C(O)-Aze-Pab(OcBu)
(i) 3-클로로-5-메톡시벤즈알데히드
THF(200 ㎖) 중의 3,5-디클로로아니솔(74.0 g, 419 mmol)을 25℃에서 THF(100 ㎖) 중의 마그네슘 금속(14.2 g, 585 mmol, 0.5 N HCl로 전세척됨)에 적가하였다. 첨가 후, 1,2-디브로모에탄(3.9 g, 20.8 mmol)을 적가하였다. 생성된 암갈색 혼합물을 환류 하에서 3 시간 동안 가열하였다. 혼합물을 0℃로 냉각시키고, N,N-디메틸포름아미드(60 ㎖)을 한 부분으로 가하였다. 혼합물을 디에틸에테르(3 x 400 ㎖) 및 6 N HCl(500 ㎖)로 분배하였다. 합한 유기 추출물을 염수(300 ㎖)로 세척하고, 건조시켰으며(Na2SO4), 여과하고, 진공 농축하여서 오일을 얻었다. Hex:EtOAC(4:1)로 용출하면서 실리카 겔상의 플래쉬 크로마토그래피(2x)에 의해 황색 오일로서 부제 화합물(38.9 g, 54%)을 얻었다.
1H NMR (300 MHz, CDCl3) δ 9.90 (s, 1H), 7.53 (s, 1H), 7.38 (s, 1H), 7.15 (s, 1H), 3.87 (s, 3H).
(ii) 3-클로로-5-히드록시벤즈알데히드
CH2Cl2(250 ㎖) 중의 3-클로로-5-메톡시벤즈알데히드(22.8 g, 134 mmol; 상기 단계 (i) 참조)의 용액을 0℃로 냉각시켰다. 삼브롬화붕소(15.8 ㎖, 167 mmol)를 15 분에 걸쳐서 적가하였다. 반응 혼합물을 2 시간 동안 교반한 후, H2O(50 ㎖)를 서서히 가하였다. 그 다음, 용액을 Et2O(2x100 ㎖)로 추출하였다. 유기상을 합하고, 건조시켰으며(Na2SO4), 여과하고, 진공 농축시켰다. Hex:EtOAC(4:1)로 용출하면서 실리카 겔상의 플래쉬 크로마토그래피(2x)에 의해 부제 화합물(5.2 g, 25%)을 얻었다.
1H NMR (300 MHz, CDCl3) δ 9.85 (s, 1H), 7.35 (s, 1H), 7.20 (s, 1H), 7.10 (s, 1H), 3.68 (s, 1H)
(iii) 3-클로로-5-디플루오로메톡시벤즈알데히드
2-프로판올(250 ㎖) 및 30% KOH(100 ㎖) 중의 3-클로로-5-히드록시벤즈알데히드(7.5g, 48 mmol;상기 단계 (ii) 참조)의 용액을 환류로 가열하였다. 교반하면서, CHClF2를 2 시간 동안 반응 혼합물로 기포화하였다. 반응 혼합물을 냉각시키고, 1 N HCl로 산성화시켰으며, EtOAC(2 x 100 ㎖)로 추출하였다. 유기상은 염수(100 ㎖)로 세척시키고, 건조시켰으며(Na2SO4), 여과하고, 진공 농축시켰다. Hex:EtOAC(4:1)로 용출하면서 실리카 겔상의 플래쉬 크로마토그래피(2x)에 의해 부제 화합물(4.6 g, 46%)을 얻었다.
1H NMR (300 MHz, CDCl3) δ 9.95 (s, 1H), 7.72 (s, 1H), 7.52 (s, 1H), 7.40 (s, 1H), 6.60 (t, JH-F = 71.1 Hz, 1H)
(iv) Ph(3-Cl)(5-OCHF 2 )-(R,S)CH(OTMS)CN
CH2Cl2(200 ㎖) 중의 3-클로로-5-디플루오로메톡시벤즈알데히드(4.6 g, 22.3 mmol; 상기 단계 (iii) 참조)의 용액을 0℃로 냉각시켰다. ZnI2(1.8 g, 5.6 mmol) 및 트리메틸실릴 시아나이드(2.8 g, 27.9 mmol)를 가하고, 반응 혼합물을 실온으로 가온하였으며, 15 시간 동안 교반시켰다. 혼합물을 진공 부분 농축시켜서 액상으로서 부제 화합물을 얻었는데, 더 이상의 정제 또는 특징화없이 하기 단계 (v)에 직접 사용하였다.
(v) Ph(3-Cl)(5-OCHF 2 )-(R,S)CH(OH)C(NH)OEt
Ph(3-Cl)(5-OCHF2)-(R,S)CH(OTMS)CN(6.82 g, 추정상 22.3 mmol; 상기 단계 (iv) 참조)을 HCl/EtOH(500 ㎖)에 적가하였다. 반응 혼합물을 15 시간 동안 교반한 후, 진공 부분 농축시켜서 액상으로서 부제 화합물을 얻었는데, 더 이상의 정제 또는 특징화없이 하기 단계 (vi)에 직접 사용하였다.
(vi) Ph(3-Cl)(5-OCHF 2 )-(R,S)CH(OH)C(O)OEt
Ph(3-Cl)(5-OCHF2)-(R,S)CH(OH)C(NH)OEt(6.24 g, 추정상 22.3 mmol; 상기 단계 (v) 참조)를 THF(250 ㎖) 중에 용해시키고, 0.5 M H2SO4(400 ㎖)를 가하였으며, 반응물을 40℃에서 65 시간 동안 교반시키고, 냉각한 후, 진공 부분 농축하여서 THF의 대부분을 제거하였다. 그 다음, 반응 혼합물을 Et2O(3x100 ㎖)로 추출하고, 건조시켰으며(Na2SO4), 여과하고, 진공 농축시켜 액체로서 부제 화합물을 얻었는데, 더 이상의 정제 또는 특징화없이 하기 단계 (vii)에 직접 사용하였다.
(vii) Ph(3-Cl)(5-OCHF 2 )-(R,S)CH(OH)C(O)OH
2-프로판올(175 ㎖) 및 20% KOH(350 ㎖) 중의 Ph(3-Cl)(5-OCHF2)-(R,S)CH(OH)C(O)OEt(6.25 g, 추정상 22.3 mmol; 상기 단계 (vi) 참조)의 용액을 실온에서 15 시간 동안 교반하였다. 그 다음, 반응물을 진공 부분 농축시켜서 2-프로판올의 대부분을 제거하였다. 잔류 혼합물을 1 M H2SO4로 산성화시키고, Et2O(3x100 ㎖)로 추출하였으며, 건조시키고(Na2SO4), 진공 농축시켜서 고형물을 얻었다. CHCl3:MeOH:진한 NH4OH(6:3:1)로 용출하면서 실리카 겔상의 플래쉬 크로마토그래피(2x)에 의해 부제 화합물의 암모늄염을 얻었다. 그 다음, 암모늄염을 EtOAC(75 ㎖) 및 H2O (75 ㎖)의 혼합물 중에 용해시키고, 2 N HCl로 산성화시켰다. 유기층을 분리하고, 염수(50 ㎖)로 세척하였으며, 건조시키고(Na2SO4), 진공 농축시켜서 부제 화합물(3.2 g, 단계 (iv)부터 (vii)까지 57%)을 얻었다.
1H NMR (300 MHz, CD3OD) δ 7.38 (s, 1H), 7.22 (s, 1H), 7.15 (s, 1H), 6.89 (t, JH-F = 71.1 Hz, 1H), 5.16 (s, 1H)
(viii) Ph(3-Cl)(5-OCHF2)-(R)CH(OH)C(O)OH(a) 및 Ph(3-Cl)(5-OCHF 2 )-(S)CH(OAc)C(O)OH(b)
비닐 아세테이트(125 ㎖) 및 MTBE(125 ㎖) 중의 Ph(3-Cl)(5-OCHF2)-(R,S)CH(OH)C(O)OH(3.2 g, 12.7 mmol;상기 단계 (vii) 참조) 및 리파제 PS "아마노(2.0 g 이하)를 환류 하에서 48 시간 동안 가열하였다. 반응 혼합물을 냉각시키고, 셀라이트(Celite(등록상표))를 통해 여과하고, 여과 케이크를 EtOAc로 세척하였다. 여액을 진공 농축시키고, CHCl3:MeOH:진한 NH4OH(6:3:1)로 용출하면서 실리카 겔상의 플래쉬 크로마토그래피에 의해 부제 화합물 (a) 및 (b)의 암모늄염을 얻었다. 염으로서 화합물 (a)를 H2O 중에 용해시키고, 2 N HCl로 산성화시켰으며, EtOAc로 추출하였다. 유기상을 염수로 세척하고, 건조시키고(Na2SO4), 여과하고, 진공 농축시켜서 부제 화합물 (a)(1.2 g, 37%)를 얻었다.
부제 화합물 (a)의 경우
1H NMR (300 MHz, CD3OD) δ 7.38 (s, 1H), 7.22 (s, 1H), 7.15 (s, 1H), 6.89 (t, JH-F = 71.1 Hz, 1H), 5.17 (s, 1H)
(ix) Ph(3-Cl)(5-OCHF 2 )-(R)CH(OH)C(O)-Aze-Pab(Teoc)
0℃에서의 DMF(50 ㎖) 중의 Ph(3-Cl)(5-OCHF2)-(R)CH(OH)C(O)OH(1.1 g, 4.4 mmol; 상기 단계 (viii) 참조) 및 H-Aze-Pab(Teoc)(국제 특허 출원 제WO 00/42059호 참조, 2.6 g, 5.7 mmol)의 용액에 PyBOP(2.8 g, 5.3 mmol) 및 콜리딘(1.3 g, 10.6 mmol)을 가하였다. 반응물을 0℃에서 2 시간 동안 교반한 후, 실온에서 15 시간 동안 더 교반하였다. 반응 혼합물을 진공 농축시키고, 우선 CHCl3:EtOH(9:1)로 용출한 후, EtOAc:EtOH(20:1)로 용출시키고, 마지막으로 CH2Cl2:CH3OH(95:5)로 용출하면서 실리카 겔상의 플래쉬 크로마토그래피에 의해 백색 고형물로서 부제 화합물(1.0 g, 37%)을 얻었다.
1H NMR (300 MHz, CD3OD, 회전 이성질체의 혼합물) δ 7.79-7.85 (d, J= 8. 7 Hz, 2H), 7.15-7.48 (m, 5H), 6.89 및 6.91 (t, JH-F = 71.1 Hz, 1H), 5.12 및 5.20 (s, 1H), 4.75-4.85 (m, 1H), 3.97-4.55 (m, 6H), 2.10-2.75 (m, 2H), 1.05-1.15 (m, 2H), 0.09 (s, 9H)
MS (m/z) 611 (M+1)+
(x) Ph(3-Cl)(5-OCHF2)-(R)CH(OH)C(O)-Aze-Pab(OcBu, Teoc)
Ph(3-Cl)(5-OCHF2)-(R)CH(OH)C(O)-Aze-Pab(Teoc)(0.051 g, 0.08 mmol; 상기 단계 (ix) 참조)을 아세토니트릴 3 ㎖ 중에 용해시키고, O-시클로부틸히드록실아민 염산염 0.062 g(0.5 mmol)을 가하였다. 반응 혼합물을 70℃에서 4.5 시간 동안 가열하였다. 용매를 증발시키고, 잔류물을 물 및 에틸 아세테이트에 분배시켰다. 수상을 에틸 아세테이트로 2회 이상 추출하고, 합한 유기상을 물, 염수로 세척하였으며, 건조시키고(Na2SO4), 여과하였으며, 증발시켰다.
수득량: 0.054 g (95%).
1H-NMR (400 MHz; CD3OD) : δ 8.66-8.50 (m, 1H), 7.45 (d, 2H), 7.29 (m, 3H), 7.15 (m, 2H), 6.88 (t, 1H 주 회전 이성질체), 6.85 (t, 1H 부 회전 이성질체), 5.18 (s, 1H 주 회전 이성질체), 5.12 (s, 1H 부 회전 이성질체), 5.16 (m, 1H 부 회전 이성질체), 4.78 (m, 1H 주 회전 이성질체), 4.70 (m, 1H), 4.50-4.30 (m, 3H), 4.19-3.93 (m, 3H), 2.71-2.44 (m, 1H), 2.34-2.11 (m, 5H), 1.78 (m, 1H), 1.62 (m, 1H), 0.96 (m, 2H), 0.01 (s, 9H)
(xi) Ph(3-Cl)(5-OCHF 2 )-(R)CH(OH)C(O)-Aze-Pab(OcBu)
Ph(3-Cl)(5-OCHF2)-(R)CH(OH)C(O)-Aze-Pab(OcBu, Teoc)(0.054 g, 0.08 mmol;상기 단계 (x) 참조)를 CH2Cl2 0.5 ㎖ 및 TFA 3 ㎖ 중에 용해시켰다. 반응을 60 분 동안 진행시켰다. TFA를 증발시키고, 잔류물을 정제용 HPLC를 사용하여 정제하였다. 중요한 분획을 수집하고, 냉동 건조(2x)시켜서 표제 화합물 23 mg(54%)을 얻었다.
MS (m/z) 536 (M-1)-; 538 (M+1)+
1H-NMR (400 MHz; CD3OD) : δ 7.56 (d, 2H), 7.33 (m, 3H), 7.15 (m, 2H), 6.89 (t, 1H 주 회전 이성질체), 6.86 (t, 1H 부 회전 이성질체), 5.18 (s, 1H 주 회전 이성질체; 및 m, 1H 부 회전 이성질체), 5. 11 (s, 1H 부 회전 이성질체), 4.77 (m, 1H 주 회전 이성질체), 4.58 (m, 1H), 4.42 (m, 2H), 4. 34 (m, 1H 주 회전 이성질체), 4.15 (m, 1H 주 회전 이성질체), 4.06 (m, 1H 부 회전 이성질체), 3.97 (m, 1H 부 회전 이성질체), 2.66 (m, 1H 부 회전 이성질체), 2.52 (m, 1H 주 회전 이성질체), 2.33-2.25 (m, 3H), 2.01-2.20 (m, 2H), 1.75 (m, 1H), 1.59 (m, 1H)
13C-NMR (100 MHz; CD3OD)(카르보닐 탄소 및/또는 아미딘 탄소, 회전 이성질체) δ 172.4, 172.3, 171.9, 171.4, 152.3
실시예 2
Ph(3-Cl)(5-OCHF 2 )-(R)CH(OH)C(O)-Aze-Pab(OH)
(i) Ph(3-Cl)(5-OCHF 2 )-(R)CH(OH)C(O)-Aze-Pab(OH, Teoc)
Ph(3-Cl)(5-OCHF2)-(R)CH(OH)C(O)-Aze-Pab(Teoc)(0.148 g, 0.24 mmol; 상기 단계 (ix) 참조)를 아세토니트릴 9 ㎖ 중에 용해시키고, 히드록실아민 염산염 0.101 g(1.45 mmol)을 가하였다. 혼합물을 70℃에서 2.5 시간 동안 가열하고, 셀라이트를 통해 여과하고 증발시켰다. 미정제 산물(0.145 g; 75% 순수)을 더 이상의 정제없이 다음 단계에서 직접 사용하였다.
(ii) Ph(3-Cl)(5-OCHF 2 )-(R)CH(OH)C(O)-Aze-Pab(OH)
Ph(3-Cl)(5-OCHF2)-(R)CH(OH)C(O)-Aze-Pab(OH, Teoc)(0.145 g, 0.23 mmol;상기 단계 (i) 참조)을 CH2Cl2 0.5 ㎖ 및 TFA 9 ㎖ 중에 용해시켰다. 반응은 60 분 동안 진행시켰다. TFA를 증발시키고, 잔류물을 정제용 HPLC를 사용하여 정제하였다. 중요한 분획을 수집하고, 냉동 건조(2x)시켜 표제 화합물 72 mg(2 단계에 걸쳐서 62%를 얻음)을 얻었다.
MS (m/z) 482 (M-1)-; 484 (M+1)+
1H-NMR (400 MHz; CD3OD): δ 7.58 (d, 2H), 7.33 (m, 3H), 7.15 (m, 2H), 6.89 (t, 1H 주 회전 이성질체), 6.86 (t, 1H 부 회전 이성질체), 5.18 (s, 1H 주 회전 이성질체; 및 m, 1H 부 회전 이성질체), 5.12 (s, 1H 부 회전 이성질체), 4.77 (m, 1H 주 회전 이성질체), 4.42 (m, 2H), 4.34 (m, 1H 주 회전 이성질체), 4.14 (m, 1H 주 회전 이성질체), 4.06 (m, 1H 부 회전 이성질체), 3.95 (m, 1H 부 회전 이성질체), 2.66 (m, 1H 부 회전 이성질체), 2.50 (m, 1H 주 회전 이성질체), 2.27 (m, 1H 주 회전 이성질체), 2.14 (m, 1H 부 회전 이성질체)
13C-NMR (100 MHz; CD3OD) : (카르보닐 탄소 및/또는 아미딘 탄소, 회전 이성질체) δ 172.4, 172.3, 172.0, 171.4, 152.3, 152.1
실시예 3
Ph(3-Cl)(5-OCHF 2 )-(R)CH(OH)C(O)-Aze-Pab
Ph(3-Cl)(5-OCHF2)-(R)CH(OH)C(O)-Aze-Pab(Teoc)(0.045 g, 0.074 mmol; 상기 실시예 1(ix) 참조)를 TFA 3 ㎖ 중에 용해시키고, 1 시간 동안 반응시켰다. TFA를 증발시키고, 잔류물을 물/아세토니트릴로부터 냉동 건조시켜서 TFA 염으로서 부제 화합물 0.043 g(100%)을 얻었다.
1H-NMR(400 MHz; CD3OD) 회전 이성질체: δ7.8-7.75(m, 2H), 7.55-7.5(m, 2H), 7.35(m, 1H, 주 회전 이성질체), 7.31(m, 1H, 부 회전 이성질체), 7.19(m, 1H, 주 회전 이성질체), 7.15(m, 1H), 7.12(m, 1H, 부 회전 이성질체), 6.89(t, 1H, 주 회전 이성질체), 6.87(t, 1H, 부 회전 이성질체), 5.22(m, 1H, 부 회전 이성질체), 5.20(s, 1H, 주 회전 이성질체), 5.13(s, 1H, 부 회전 이성질체), 4.80(m, 1H, 주 회전 이성질체), 4.6-4.4(m, 2H), 4.37(m, 1H, 주 회전 이성질체), 4.19(m, 1H, 주 회전 이성질체), 4.07(m, 1H, 부 회전 이성질체), 3.98(m, 1H, 부 회전 이성질체), 2.70(m, 1H, 부 회전 이성질체), 2.55(m, 1H, 주 회전 이성질체), 2.29(m, 1H, 주 회전 이성질체), 2.15(m, 1H, 부 회전 이성질체)
13C-NMR(100 MHz; CD3OD):(카르보닐 탄소 및/또는 아미딘 탄소, 회전 이성질체) δ172.6, 172.5, 172.0, 171.7, 167.0
MS(m/z) 465(M-1)-, 467(M+1)+
실시예 4
Ph(3-Cl)(5-OCHF 2 )-(R)CH(OH)C(O)-Aze-Pab(COOc펜틸)
염화메틸렌(5 ㎖) 중의 Ph(3-Cl)(5-OCHF2)-(R)CH(OH)C(O)-Aze-Pab x TFA(74 mg, 0.13 mmol; 상기 실시예 3 참조) 및 시클로펜틸클로로포르메이트(44 mg, 0.30 mmol)의 용액에 수성 NaOH(0.5 ㎖, 2 M, 1 mmol)를 가하였다. 혼합물을 실온에서 교반하고, 반응을 HPLC로 모니터링하였다. 2.5 시간 후, 물을 가하고, 액상을 분리하였다. 수상을 염화메틸렌으로 2회 추출하였다. 합한 유기상을 건조시키고(MgS04), 실리카 겔 상에서 정제하였다(먼저 염화메틸렌, 그 다음 EtOAc). 용매를 진공 제거한 후, 고형 잔류물을 물/아세토니트릴 중에 용해시키고, 냉동 건조시켜서 백색 고형물로서 표제 화합물을 얻었다. 수득량: 33 mg(44%)
MS(m/z) 579(M+1)+
1H NMR(400 MHz; CD3OD): δ7.79(d, 2H), 7.43-7.30(m, 5H), 7.20-7.11(m, 2H), 6.90(t, 1H, 주 회전 이성질체), 6.87(t, 1H, 부 회전 이성질체), 5.19(dd, 1H, 부 회전 이성질체), 5.18(s, 1H, 주 회전 이성질체), 5.13(m, 1H), 5.11(s, 1H, 부 회전 이성질체), 4.78(dd, 1H, 주 회전 이성질체), 4.45(m, 2H), 4.35(m, 1H, 주 회전 이성질체), 4.16(s, 1H, 주 회전 이성질체), 4.06(s, 1H, 부 회전 이성질체), 3.97(s, 1H, 부 회전 이성질체), 2.68(m, 1H, 부 회전 이성질체), 2.52(s, 1H, 주 회전 이성질체), 2. 28(s, 1H, 주 회전 이성질체), 2.16(s, 1H, 부 회전 이성질체), 1.90(m, 2H), 1.77(m, 4H), 1.61(m, 2H)
13C NMR(카르보닐 및/또는 아미딘 양성자; 100 MHz): δ173.6, 173.1, 172.6, 170.3, 165.6
실시예 5
Ph(3-Cl)(5-OCHF 2 )-(R)CH(OH)C(O)-Aze-Pab(Z)
표제 화합물은 Ph(3-Cl)(5-OCHF2)-(R)CH(OH)C(O)-Aze-Pab x TFA(73 mg, 0.13 mmol; 상기 실시예 3 참조) 및 벤질클로로포르메이트(35 mg, 0.21 mmol)로부터 출발하여 상기 실시예 4에 기재되어 있는 절차에 따라서 제조하였다. 역상 HPLC(0.1 M 아세트산암모늄/MeCN 40/60)에 의한 추가 정제가 필요하였다. 적당한 분획을 진공 농축시키고, EtOAc로 추출하였다. 수득량: 24 mg(32%).
MS(m/z) 602(M+1)+
1H NMR(400 MHz; CD3OD): δ7.80(d, 2H), 7.43-7.25(m, 8H), 7.20-7.10(m, 2H), 6.90(t, 1H, 주 회전 이성질체), 6.88(t, 1H, 부 회전 이성질체), 5.18(dd, 1H, 부 회전 이성질체), 5.18(s, 2H), 5.17(s, 1H, 회전 이성질체), 5.11(s, 1H, 회전 이성질체), 4.78(dd, 1H, 주 회전 이성질체), 4.45(m, 2H), 4.34(m, 1H, 주 회전 이성질체), 4.15(s, 1H, 주 회전 이성질체), 4.06(s, 1H, 부 회전 이성질체), 3.97(s, 1H, 부 회전 이성질체), 2.66(m, 1H, 부 회전 이성질체), 2.51(s, 1H, 주 회전 이성질체), 2.27(s, 1H, 주 회전 이성질체), 2.15(s, 1H, 부 회전 이성질체)
13C NMR(카르보닐 및/또는 아미딘 양성자; 100 MHz): δ173.6, 173.1, 172.6, 170.5, 164.9
실시예 6
Ph(3-Cl)(5-OCF 3 )-(R)CH(OH)C(O)-Aze-Pab x TFA
(i) 2-니트로-5-트리플루오로메톡시벤조산
0℃ 미만(얼음-MeOH 욕)에서 황산(500 ㎖) 중의 3-트리플루오로메톡시벤조산(49.0 g, 0.24 mol)의 용액에 황산(200 ㎖) 중의 질산칼륨(31.3 g, 0.31 mol)의 용액을 20 분에 걸쳐서 가하였다. 생성된 용액을 0℃에서 2 시간 동안 교반한 다음, 실온으로 가온하고, 18 시간 동안 교반하였다. 반응물을 얼음에 붓고, 생성된 산성 용액을 EtOAc(5x)로 추출하였다. 합한 유기물을 H2O(1x), 염수(2x), H2O(1x) 및 염수(1x)로 세척하고, 건조시켰으며(Na2SO4), 여과하고, 진공 농축시켜서 HOAc로 오염된 고형물로서 미정제 부제 화합물(65.7 g)을 얻었다. 미정제 부제 화합물을 EtOAc 및 톨루엔 중에 용해시키고, 진공 농축시켜서 HOAc 유리 고형물(58.4 g, 97%)을 얻었으며, 이것을 더 이상의 정제없이 다음 단계에서 사용하였다.
1H NMR(300 MHz, CDCl3): δ10.10(br s, 1H), 8.02(d, 1H, J = 8 Hz), 7.69(d, 1H, J = 2 Hz), 7.54(dd, 1H, J = 2 Hz, J = 8 Hz)
(ii) 2-아미노-5-트리플루오로메톡시벤조산
EtOH(1000 ㎖) 중의 2-니트로-5-트리플루오로메톡시벤조산(56.8 g, 0.23 mol; 상기 단계(i) 참조)의 용액에 10% Pd/C(5.7 g)를 가하였다. 생성된 용액을 H2로 5 시간 동안 플러쉬하고, 셀라이트(등록 상표)를 통해 여과시켰으며, 진공 농축시켜서 고형물로서 미정제 부제 화합물(49.7 g, 98%)을 얻었고, 더 이상의 정제없이 다음 단계에서 사용하였다.
1H NMR(300 MHz, CD3OD): δ7.66(m, 1H), 7.17(d, 1H, J = 8 Hz), 6.77(d, 1H, J = 8 Hz)
(iii) 2-아미노-3-클로로-5-트리플루오로메톡시벤조산
HOAc(1200 ㎖) 중의 2-아미노-5-트리플루오로메톡시벤조산(49.0 g, 0.22 mol; 상기 단계(ii) 참조)의 용액에 염화술푸릴(41.8 g, 0.31 mol)을 서서히 가하였다. 기체 발생이 관찰되었다. 생성된 불균질 혼합물을 실온에서 1 시간 동안 교반하였다. 추가의 HOAc(300 ㎖)를 가하여 교반한 다음, TLC 분석을 기준으로 출발 물질이 소비될 때까지 염화술푸릴을 5 ㎖ 분량으로 가하였다. 반응물을 진공 농축시켜서 고형물을 얻었으며, 이것을 회전 증발기 상에서 EtOAc(2x), 이어서 Et2O(1x)로 플러쉬하여 HOAc를 제거하였다. 생성된 용액을 더 건조시켜서 미정제 부제 화합물의 HCl 염(60.5 g, 94%)을 얻었으며, 더 이상의 정제없이 다음 단계에서 사용하였다.
1H NMR(300 MHz, CD3OD): δ7.72(s, 1H), 7.44(s, 1H), 7.22(s, 호환물)
(iv) 3-클로로-5-트리플루오로메톡시벤조산
1,4-디옥산(1000 ㎖) 중의 2-아미노-3-클로로-5-트리플루오로메톡시벤조산(60.5 g, 추정상 0.22 mol; 상기 단계(iii) 참조)의 용액에 6 N HCl(750 ㎖)을 가하였다. 약간의 유기물이 용액에서 유출되었다. 디옥산 용액을 0℃ 미만(얼음-MeOH 욕)으로 냉각시켰다. H2O(250 ㎖) 중의 아질산나트륨(18.2 g, 0.26 mol)의 용액을 첨가 깔대기에 의해 15 분에 걸쳐서 가하였다. 생성된 용액을 45 분 동안 교반하였다. 차아인산(H2O 중의 50 중량% 221.5 ㎖, 291.2 g, 2.20 mol)을 첨가 깔대기에 의해 서서히 가하였다. 용액을 0℃에서 1.5 시간 동안 교반한 다음, 실온으로 가온하고(기체 발생이 관찰됨), 18 시간 동안 교반하였다. 미정제 용액을 분리 깔대기로 옮기고, Et2O(4x)로 추출하였다. 합한 유기물을 수성 NaHCO3(3x)로 추출하였다. 염기성 수층을 6 N HCl로 신중하게 산성화하고, CH2Cl2(3x)로 추출하였다. CH2Cl2 추출물을 건조시키고(Na2SO4), 여과하였으며, 진공 농축시켜서 고형물로서 미정제 부제 화합물(26.5 g, 3-트리플루오로메톡시벤조산으로부터 46%)을 얻었으며, 더 이상의 정제없이 다음 단계에서 사용하였다.
1H NMR(300 MHz, CD3OD): δ7.98(s, 1H), 7.83(s, 1H), 7.58(s, 1H)
(v) 3-클로로-5-트리플루오로메톡시벤질 알콜
N2 분위기 하에 실온에서 무수 THF(1200 ㎖) 중의 3-클로로-5-트리플루오로메톡시벤조산(22.5 g, 93.5 mmol; 상기 단계(iv) 참조)의 용액에 BH3·THF 착체(THF 중의 1 M 140 ㎖; 140.3 mmol)의 용액을 가하였다. 용액을 2 시간 동안 환류하고, 실온으로 냉각시켰으며, 18 시간 동안 교반하고, H20로 켄칭하였으며, 진공 농축시켜서 대부분의 THF를 제거하였다. 잔류물을 EtOAc로 희석시키고, 유기물을 염수(3x)로 세척하였으며, 건조시키고(Na2SO4), 여과하였으며, 진공 농축시켜서 오일로서 미정제 부제 화합물(21.2 g, 100%)을 얻고, 더 이상의 정제없이 사용하였다.
1H NMR(300 MHz, CDCl3): δ7.33(s, 1H), 7.17(s, 1H), 7.14(s, 1H), 4.72(s, 2H), 2.05(br s, 1H)
(vi) 3-클로로-5-트리플루오로메톡시벤즈알데히드
무수 CH2Cl2(300 ㎖) 중의 DMSO(16.1 g, 205.9 mmol)의 용액을 -78℃로 냉각시켰다. 염화옥살일(13.1 g, 103.0 mmol)을 주사기에 의해 가하였다(기체 발생이 관찰됨). 생성된 용액을 -78℃에서 15 분 동안 교반하였다. CH2Cl2(200 ㎖) 중의 3-클로로-5-트리플루오로메톡시벤질 알콜(21.2 g, 93.6 mmol; 상기 단계(v) 참조)의 용액을 첨가 깔대기에 의해 15 분에 걸쳐서 가하였다. 탁한 용액을 -78℃에서 40 분 동안 교반하고, DIPEA(60.5 g, 468.0 mmol)를 첨가 깔대기에 의해 10 분에 걸쳐서 가하였다. 생성된 균질 용액을 -78℃에서 1.5 시간 동안 교반한 다음, 실온으로 가온하고, 18 시간 동안 교반하였다. 미정제 용액을 진공 농축시키고, 잔류물을 EtOAc로 희석하였으며, H2O(1x), 2 N HCl(1x), 염수(1x), 수성 NaHCO3(1x) 및 염수(1x)로 세척하였다. 유기물을 건조시키고(Na2SO4), 여과하였으며, 진공 농축시켜서 부제 화합물(19.9 g, 95%)을 얻었으며, 더 이상의 정제없이 다음 단계에서 사용하였다.
1H NMR(300 MHz, CDCl3): δ10.00(s, 1H), 7.83(s, 1H), 7.66(s, 1H), 7.51(s, 1H)
(vii) Ph(3-Cl)(5-OCF 3 )-(R,S)CH(OTMS)CN
0℃에서 CH2Cl2(600 ㎖) 중의 3-클로로-5-트리플루오로메톡시벤즈알데히드(19.9 g, 88.6 mmol; 상기 단계(vi) 참조)의 용액에 ZnI2(1.4 g, 4.4 mmol) 및 트리메틸실릴 시아나이드(9.7 g, 97.5 mmol)을 가하였다. 0℃에서 1.5 시간, 그리고 실온에서 2 시간 교반한 후, TLC 분석에서 출발 물질만이 나타났다. ZnI2를 반응이 진행될 때까지 조금씩 가하였다(ZnI2 총 30.0 g 이상을 가함). 실온에서 18 시간 동안 교반한 후, 반응을 물로 켄칭하고, 유기물을 분리하였다. 유기물을 건조시키고(Na2SO4), 여과하였으며, 진공 농축시켜서 액체로서 미정제 부제 화합물(27.7 g, 96%)을 얻었으며, 더 이상의 정제없이 사용하였다.
1H NMR(300 MHz, CDCl3): δ7.43(s, 1H), 7.28(s, 1H), 7.25(s, 1H), 5.49(s, 1H), 0.38(s, 9H)
(viii) Ph(3-Cl)(5-OCF 3 )-(R,S)CH(OH)C(O)OH
진한 HCl(300 ㎖) 중의 Ph(3-Cl)(5-OCF3)-(R,S)CH(OTMS)CN(27.7 g, 85.6 mmol; 상기 단계(vii) 참조)의 현탁액을 3 시간 동안 환류시켰다. 생성된 갈색 불균질 혼합물을 실온으로 냉각시키고, Et2O(2x)로 추출하였다. 초기 유기물을 2 N NaOH(2x)로 추출한 다음, 염기성 층을 2 N HCl로 산성화하고, Et20로 추출하였다. Et20를 건조시키고(Na2SO4), 여과하였으며, 진공 농축시켜서 미정제 부제 화합물(4.9 g, 21%)을 얻었다. 초기 유기물의 TLC 분석으로 부제 화합물이 여전히 존재하는 것으로 나타나서 6 N NaOH를 사용하여 염기 추출/산성화를 반복하여 추가의 미정제 부제 화합물(2.8 g, 12%)을 얻었다. 초기 유기물의 TLC 분석으로 부제 화합물이 여전히 존재하는 것으로 나타나서 유기물을 건조시키고(Na2SO4), 진공 농축시켜서 오일로서 부제 화합물의 나트륨 염(18.3 g)을 얻었다. 그 다음, 염을 Et20 중에 재용해시키고, 유기물을 2 N HCl로 산성화하였으며, 염수로 세척하였다. 생성된 유기물을 건조시키고(Na2SO4), 활성탄으로 처리하였으며, 셀라이트(등록 상표)를 통하여 여과하고, 진공 농축시켜서 고형물로서 미정제 부제 화합물(14.3 g, 62%)을 얻었으며, 더 이상의 정제없이 다음 단계에서 사용하였다.
1H NMR(300 MHz, CD3OD): δ7.53(s, 1H), 7.38(s, 1H), 7.29(s, 1H), 5.23(s, 1H)
(ix) Ph(3-Cl)(5-OCF 3 )-(R)CH(OH)C(O)OH(a) 및 Ph(3-Cl)(5-OCF 3 )-(S)CH(OAc)C(O)OH(b)
MTBE(100 ㎖) 및 비닐 아세테이트(50 ㎖) 중의 Ph(3-Cl)(5-OCF3)-(R,S)CH(OH)C(O)OH(7.7 g, 28.5 mmol; 상기 단계(viii) 참조)과 리파제 PS "아마노"(3.8 g)의 혼합물을 60℃에서 26 시간 동안 교반하였다. 반응물을 냉각시키고, 셀라이트(등록 상표)를 통하여 여과하였으며, 여과 케이크를 EtOAc로 세척하였다. 합한 유기물을 진공 농축시켰다. CHCl3:MeOH:진한 NH4OH(6:3:1)로 용출하면서 실리카 겔 상의 플래쉬 크로마토그래피에 의해 부제 화합물(a) 및 부제화합물(b)의 암모늄염의 혼합물(6.7 g)과 95% e.e. 미만의 부제 화합물(a)의 암모늄염의 순수 샘플(1.2 g)을 얻었다. 각각의 분획을 Et2O 중에 용해시키고, 2 N HCl(1x) 및 염수(1x)로 세척하였으며, 건조시키고(Na2SO4), 여과하였으며, 농축시켜서 해당 카르복실산(각기 6.7 g 및 1.1 g)을 얻었다. 그 다음, 이들 분획을 재용해 상태로 별도로 재제시하고, 필요에 따라 CHCl3:MeOH:진한 NH4OH(6:3:1 또는 75:20:5 또는 145:45:10)로 용출하면서 실리카 겔 상의 크로마토그래피에 의해 필요에 따라 재정제하였다. 정제된 부제 화합물(a)을 더 사용하기 전에 수성 HCl 또는 수성 시트르산으로 산성화하였다. 부제 화합물(b)의 암모늄염을 특징화없이 사용하였다.
부제 화합물(a)의 경우
1H NMR(300 MHz, CD3OD): δ7.53(s, 1H), 7.38(s, 1H), 7.29(s, 1H), 5.23(s, 1H)
13C NMR(75 MHz, CD3OD): δ174.9, 150.9, 145.4, 136.3, 126.8, 122.0, 120.6, 118.9, 72.9
MS(m/z) 269(M-1)-
(x) Ph(3-Cl)(5-OCF 3 )-(R)CH(OH)C(O)-Aze-Pab(Teoc)
질소 분위기 하에 DMF(40 ㎖) 중의 Ph(3-Cl)(5-OCF3)-(R)CH(OH)C(O)OH(0.73 g, 2.70 mmol; 상기 단계(ix) 참조)의 용액을 0℃로 냉각시켰다. 이 용액에 H-Aze-Pab(Teoc)(1.46 g, 3.24 mmol), 콜리딘(0.82 g, 6.75 mmol) 및 PyBOP(1.83 g, 3.51 mmol)을 가하였다. 이 용액을 0℃에서 2 시간 동안 교반하고, 실온으로 가온하였으며, 18 시간 동안 교반하고, 물로 켄칭하였으며, 진공 농축시켰다. 잔류물을 EtOAc로 희석시키고, H2O(1x), 수성 NaHC03(1x), 수성 시트르산(1x) 및 염수(1x)로 세척하고, 건조시켰으며(Na2SO4), 여과하고, 진공 농축시켜서 미정제 부제 화합물을 얻었다. EtOAc:MeOH(30:1), 그 다음 CH2Cl2:MeOH(93:7)로 용출하면서 실리카 겔 상의 플래쉬 크로마토그래피(2x)에 의해 압착 가능한 폼으로서 부제 화합물(0.73 g, 43%)을 얻었다.
1H NMR(300 MHz, CD3OD, 회전 이성질체의 착체 혼합물): δ 7.78-7.82(d, 2H, J= 8 Hz), 7.25-7.54(m, 5H), 5.25 및 5.16(s, 1H), 5.22 및 4.79(m, 1H), 3.92-4.58(m, 6H), 2.20-2.76(m, 2H), 1.04-1.13(m, 2H), 0.08(s, 9H)
MS(m/z) 629(M+1)+
(xi) Ph(3-Cl)(5-OCF 3 )-(R)CH(OH)C(O)-Aze-Pab
트리플루오로아세트산(1.0 ㎖)을 염화메틸렌(10 ㎖) 중의 Ph(3-Cl)(5-OCF3)-(R)CH(OH)C(O)-Aze-Pab(Teoc)(101 mg; 160 μmol; 상기 단계(x) 참조)의 교반된 얼음/물 냉각 용액에 가하였다. 냉각욕을 1 시간 후에 제거하였다. 실온에서 1.5 시간 후, 아세토니트릴(30 ㎖)을 가하고, 용매를 감압 하에 신중하게 제거하였다. 잔류물을 물 중에 용해시키고, 냉각시켰으며, 건조시켜서 TFA 염으로서 표제 화합물 90 mg(92%)을 얻었다.
MS(m/z) 483(M-1)-; 485(M+1)+
1H NMR(300 MHz; CD3OD):(부분 입체 이성질체/회전 이성질체로 인한 착체): δ7.70-7.80(m, 2H), 7.45-7.58(m, 3H), 7.24-7.38(m, 2H), 5.26(s, 1H), 5.17(m, 1H, 부 회전 이성질체), 4.82(m, 1H, 주 회전 이성질체), 4.35-4.6(m, 3H), 4.22(m, 1H, 주 회전 이성질체), 3.92-4.12(m, 2H, 부 회전 이성질체), 2.70(m, 1H, 부 회전 이성질체), 2.55(m, 1H, 주 회전 이성질체), 2.30(m, 1H, 주 회전 이성질체), 2.16(m, 1 H, 부 회전 이성질체)
13C NMR(100 MHz; CD3OD):(카르보닐 탄소 및/또는 아미딘 탄소, 회전 이성질체): δ173.7, 173.4, 173.0, 172.8, 168.1
실시예 7
Ph(3-Cl)(5-OCF 3 )-(R)CH(OH)C(O)-Aze-Pab(OMe)
HATU(71 mg; 0.19 mmol)를 DMF(3 ㎖) 중의 Ph(3-Cl)(5-OCF3)-(R)CH(OH)C(O)OH(39 mg; 0.14 mmol; 상기 실시예 6(ix) 참조)의 교반된 얼음/물 냉각 용액에 가하였다. 30 분 후, DMF(1.5 ㎖) 중의 H-Aze-Pab(OMe) x 2HCl(69 mg; 0.21 mmol; 국제 특허 출원 WO 00/42059호 참조) 및 2,4,6-콜리딘(0.080 ㎖; 0.58 mmol)을 가하였다. 반응 혼합물을 밤새도록 방치하고, 온도를 상온으로 서서히 승온하였다. 용매를 진공 제거하고, 미정제 생성물을 역상 HPLC(아세토니트릴:0.1 M 수성 아세트산암모늄)를 사용하여 정제하여 적당한 분획을 냉동 건조시킨 후, 무색 고형물로서 표제 화합물(61 mg, 97%)을 얻었다.
MS(m/z) 513(M-1)-, 515(M+1)+
1H NMR(500 MHz; CD3OD): δ7.97(bt, 1H), 7.53(d, 2H), 7.27(t, 1H), 7.22(d, 2H), 7.19(t, 1H), 7.11(t, 2H), 6.77(s, 1H), 4.92(s, 1H), 4.9(bs, 3H), 4.81(m, 2H), 4.40(m, 2H), 4.09(m, 1H) 3. 87(s, 3H), 2.58(m, 1H), 2.37(m, 1H)
13C NMR(125 MHz; CD3OD):(카르보닐 탄소 및/또는 아미딘 탄소): δ171.8, 169.9, 156.8
실시예 8
알콕시아미딘의 병렬 합성
이 합성은 96-웰 로빈스 블록에서 수행하였다. 적당량의 0-치환 히드록실아민(구체적으로 후술됨; 이들 모두는 시중 구입 가능하거나, 또는 널리 공지된 문헌 절차를 사용하여 제조하였음)을 함유하는 웰에 아세토니트릴(1.0 ㎖) 중의 Ph(3-Cl)(5-OCF3)-(R)CH(OH)C(O)-Aze-Pab(Teoc)(10 mg; 17 μmol; 상기 실시예 6(x) 참조)의 용액을 가하였다. 블록을 밀봉하고, 반응 혼합물을 60℃ 오븐에서 밤새도록 회전시켰다. 냉각 및 여과 후, 고형물을 아세토니트릴(3 x 0.3 ㎖)로 세척하였다. 합한 액상 분획을 진공 원심분리기에서 농축시켰다. 잔류물을 물(0.4 ㎖)과 에틸 아세테이트(0.4 ㎖) 사이에 분배하였다. 액체-액체 추출을 종료한 후, 모든 물질을 HydromatrixTM 컬럼을 통하여 여과하였다. 에틸 아세테이트로 3회 세척한 후, 합한 여액을 진공 원심분리기에서 농축시켰다. 탈보호는 염화메틸렌(0.1 ㎖)과 트리플루오로아세트산(0.3 ㎖)을 가하여 수행하였다. 실온에서 3 시간 동안 교반한 후, 용매를 진공 제거하였다. 잔류물을 수성 포화 탄산수소나트륨(0.5 ㎖)과 에틸 아세테이트(0.5 ㎖) 사이에 분배하였다. 추출, HydromatrixTM에 의한 여과 및 농축 후(하기 참조), 잔류물을 이소프로판올/물(7/3)(1 ㎖) 중에 용해시켰다. 이 용액의 약 2%가 제거되었으며, LC-MS 분석을 위하여 이소프로판올/물(7/3)(1 ㎖)로 희석하였다. 용매를 진공 제거한 후, 고형 잔류물을 아세토니트릴 및 에틸 아세테이트를 사용하여 96-웰 플레이트로 옮겨서 화합물을 용해시켰다. 용매를 진공 원심분리기에서 증발시켜서 하기 표제 화합물을 얻었다:
Ph(3-Cl)(5-OCF3)-(R)CH(OH)C(O)-Aze-Pab(OCH2-3-(5-Me-이소옥사졸))
(3-[(아미노옥시)메틸]-5-메틸이소옥사졸 x HCl(18 mg; 0.11 mmol)로부터. 수득량: 3.64 mg(35%)(MS(m/z) 596(M+1)+);
Ph(3-Cl)(5-OCF3)-(R)CH(OH)C(O)-Aze-Pab(OCH2-3-피리딘)
(3-[(아미노옥시)메틸]피리딘 x 2 HCl(19 mg; 96 μmol)로부터. 수득량: 5.14 mg(50%)(MS(m/z) 592(M+1)+);
Ph(3-Cl)(5-OCF3)-(R)CH(OH)C(O)-Aze-Pab(OiBu)
(O-이소부틸 히드록실아민 x HCl(17 mg; 140 μmol)로부터. 수득량: 4.4 mg(45%). MS(m/z) 557(M+1)+);
Ph(3-Cl)(5-OCF3)-(R)CH(OH)C(O)-Aze-Pab(OEt)
(O-에틸 히드록실아민 x HCl(14 mg; 140 μmol)로부터. 수득량: 4.04 mg(42%). MS(m/z) 529(M+1)+);
Ph(3-Cl)(5-OCF3)-(R)CH(OH)C(O)-Aze-Pab(OBn)
(O-벤질히드록실아민 x HCl(17 mg; 110 μmol)로부터. 수득량: 3.22 mg(29%). MS(m/z) 591(M+1)+);
Ph(3-Cl)(5-OCF3)-(R)CH(OH)C(O)-Aze-Pab(Oc헥실)
(O-시클로헥실 히드록실아민 x HCl(15 mg; 99 μmol)로부터. 수득량: 2.9 mg(26%). MS(m/z) 583(M+1)+);
Ph(3-Cl)(5-OCF3)-(R)CH(OH)C(O)-Aze-Pab(OcBu)
(0-시클로부틸 히드록실아민 x HCl(17 mg; 140 μmol)로부터. 수득량: 3.3 mg(30%). MS(m/z) 555(M+1)+);
Ph(3-Cl)(5-OCF3)-(R)CH(OH)C(O)-Aze-Pab(OCH2CH2OPh(3-CF3))
(0-[2-[3-(트리플루오로메틸)페녹시]에틸]히드록실아민 x HCl(24 mg; 93 μmol)로부터. 수득량: 6.52 mg(46%). MS(m/z) 689(M+1)+);
Ph(3-Cl)(5-OCF3)-(R)CH(OH)C(O)-Aze-Pab(OBn(4-Cl))
(0-(4-클로로벤질)히드록실아민 x HCl(16 mg; 82 μmol)로부터. 수득량: 3.47 mg(29%). MS(m/z) 625(M+1)+);
Ph(3-Cl)(5-OCF3)-(R)CH(OH)C(O)-Aze-Pab(OBn(3-MeO))
(O-(3-메톡시벤질)히드록실아민 x HCl(18 mg; 94 μmol)로부터. 수득량: 4.33 mg(36%). MS(m/z) 621(M+1)+);
Ph(3-Cl)(5-OCF3)-(R)CH(OH)C(O)-Aze-Pab(OBn(2-Br))
(0-(2-브로모벤질)히드록실아민 x HCl(23 mg; 96 μmol)로부터. 수득량: 3.87 mg(30%). MS(m/z) 671(M+1)+);
Ph(3-Cl)(5-OCF3)-(R)CH(OH)C(O)-Aze-Pab(OBn(4-Me))
(0-(4-메틸벤질)히드록실아민 x HCl(14 mg; 81 μmol)로부터. 수득량: 2.91 mg(25%). MS(m/z) 605(M+1)+); 및
Ph(3-Cl)(5-OCF3)-(R)CH(OH)C(O)-Aze-Pab(0-4-헵틸)
(0-(4-헵틸)히드록실아민 x HCl(15 mg; 89 μmol). 수득량: 17 mg(100%). MS(m/z) 599(M+1)+).
실시예 9
Ph(3-Cl)(5-OCHF 2 )-(S)CH(CH 2 OH)C(O)-Aze-Pab x HOAc
(i) 3-클로로-5-메톡시벤조산
마그네슘 전환물(그리냐드 반응을 위한 플루카 푸룸(Fluka purum))을 하기 방식으로 전처리하였다: 전환물을 유리 소결 깔대기에 넣고, 염산 0.1 M을 이것에 부었다. 전환물을 수 초 동안 유리 막대로 교반한 다음, 산을 3 분량의 물로 세척 제거하였다. 최종적으로, 전환물을 2 분량의 아세톤으로 세척하고, 밀봉하였다.테트라히드로푸란(100 ㎖, 99.95%)은 RedAl(톨루엔 중의 1 g, 70 중량%)을 첨가함으로써 건조시켰다. 전처리된 마그네슘 전환물(5 g, 200 mmol)을 둥근 바닥 플라스크에 넣고, 질소로 3회 플러쉬하였다. 디클로로아니솔(26 g, 146 mmol)을 THF(100 ㎖, RedAl-건조됨) 중에 용해시키고, 디브로모에탄(1.8 g, 10 mmol)을 가하였다. 반응 혼합물을 질소로 플러쉬한 다음, 2 시간 동안 환류시켰다. 가열을 중단하고, 드라이 아이스(10 g)를 2 분에 걸쳐서 조금씩 가하였다. 드라이 아이스가 전부 용해되었을 때, 반응 혼합물을 염산(400 ㎖, 2 M)을 함유하는 얼음에 부었다. 추출을 종결하여(에테르, 300 ㎖) 부제 화합물 11.2 g, 60.2 mmol(수율: 41%)을 얻었다.
1H-NMR(500 MHz ; 아세톤-d6): δ7.57(m, 1H), 7.49(m, 1H), 7.23(m, 1H), 3.91(s, 3H)
(ii) 3-클로로-5-히드록시벤조산
알루미나(1.65 g, 60 mmol) 및 요오드(21 g, 82 mmol)을 톨루엔(200 ㎖) 중에서 2 시간 동안 환류시켰다. 그 다음, 톨루엔(50 ㎖) 중에 용해시킨 3-클로로-5-메톡시벤조산(11.2 g, 60.2 mmol; 상기 단계(i) 참조)을, 테트라부틸암모늄 요오다이드(1.5 g, 4 mmol)과 함께 가하고, 혼합물을 2 시간 더 환류하였다. 상온으로 냉각시킨 후, 추출을 종결하여 부제 화합물 8.7 g, 50 mmol(수율: 83%)을 얻었다.
1H-NMR(300 MHz; 아세톤-d6): δ9.27(s, 1H), 7.48(m, 1H), 7.44(m, 1H), 7.11(m, 1H)
(iii) 3-클로로-5-디플루오로메톡시벤조산
클로로포름(200 ㎖) 중에 용해시킨 3-클로로-5-히드록시벤조산(6.4 g, 37.2 mmol; 상기 단계(ii) 참조)을 드라이 아이스 콘덴서 및 가스 입구 튜브가 장착된 500 ㎖ 삼구 둥근 바닥 플라스크로 옮겼다. 수산화나트륨(100 ㎖, 5 M)을 가하고, 격렬하게 교반하였다. 클로로디플루오로메탄(프레온 22; 25 g, 290 mmol)을 상온에서 가스 입구 튜브를 통하여 조금씩 가하였다. 2 시간 후, 반응이 종결되었다. 추출을 종결하여 부제 화합물 6.2 g, 28 mmol(수율: 75%)을 얻었다.
1H-NMR(500 MHz; 아세톤-d6): δ7.87(m, 1H), 7.74(m, 1H), 7.54(m, 1H), 7.19(t, 1H, JH-F 73 Hz)
(iv) 3-클로로-5-디플루오로메톡시-N-메톡시-N-메틸벤즈아미드
3-클로로-5-디플루오로메톡시벤조산-(1.8 g, 8 mmol; 상기 단계(iii) 참조) 및 염화옥살일(1.5 g, 11.8 mmol)을 염화메틸렌(50 ㎖) 중에 용해시켰다. DMF(2 방울)를 가하고, 반응 혼합물을 상온에서 30 분 동안 교반하였다. 그 다음, N,O-디메틸히드록실아민(1 g, 10.2 mmol) 및 트리에틸아민(3 g, 30 mmol)을 가하고, 10 분 더 상온에서 교반한 후, 반응 혼합물을 감압 농축시켰다. 잔류물을 에테르(100 ㎖) 및 물(50 ㎖) 중에 용해시켰다. 분리 후, 유기상을 염수로 세척하고, 황산나트륨 상에서 건조시켰으며, 여과하고, 농축시켰다. 이 잔류물을 실리카 겔 상에서 크로마토그래피(헥산/에틸 아세테이트 2:1)를 행하여 부제 화합물 2 g, 7.5 mmol(93%)을 얻었다.
1H-NMR(400 MHz; CDCl3): δ7.54(m, 1H), 7.37(m, 1H), 7.27(m, 1H), 6.53(t, 1H, JH-F 73 Hz)
(v) 3-클로로-5-디플루오로메톡시아세토페논
3-클로로-5-디플루오로메톡시-N-메톡시-N-메틸벤즈아미드(2 g, 7.5 mmol; 상기 단계(iv) 참조)를 에테르(100 ㎖) 중에 용해시키고, 질소 하에 -70℃로 냉각시켰다. 메틸리튬(에테르 중의 7 ㎖, 11 mmol, 1.6 M)를 교반된 반응 혼합물에 1 분에 걸쳐서 주사기로 적가하였다. 드라이 아이스 욕을 제거하고, 혼합물이 상온에 도달하게 한 후, 반응을 염화암모늄 용액(물 중의 50 ㎖, 5% NH4Cl)으로 켄칭하였다. 유기상을 염수로 세척하고, 황산나트륨 사에서 건조시켰으며, 여과하고, 감압 농축시켰다. 잔류물을 실라카 겔 상의 크로마토그래피(헥산:에틸 아세테이트 2:1)를 행하여 부제 화합물 1.5 g, 6.8 mmol(수율: 90%)을 얻었다.
1H-NMR(600 MHz; CDCl3): δ7.77(m, 1H), 7.59(m, 1H), 7.35(m, 1H), 6.56(t, 1H, JH-F 73 Hz), 2.60(s, 3H)
(vi) 3-클로로-5-디플루오로메톡시페닐아세트산 메틸 에스테르
3-클로로-5-디플루오로메톡시아세토페논(1.5 g, 6.8 mmol; 상기 단계(v) 참조)를 염화메틸렌(200 ㎖) 중에 용해시켰다. K-10 몬모릴로나이트(6 g, 10 mmol(약 0.6 mmol/g); J. Am. Chem. Soc., 98, 6750(1976)) 상의 질산탈륨(III) x 3 MeOH를 가하고, 혼합물을 상온에서 20 시간 동안 교반하였다. 혼합물을 여과하고, 여액을 중탄산나트륨(100 ㎖, 0.5 M)으로 세척하였으며, 황산나트륨 상에서 건조시키고, 여과하였으며, 감압 농축시켰다. 잔류물을 실리카 상의 크로마토그래피(헥산/에틸 아세테이트 2: 1)를 행하여 부제 화합물 1 g, 4 mmol(수율: 56%)을 얻었다.
1H-NMR(500 MHz; CDCl3): δ7.14(m, 1H), 7.06(m, 1H), 6.96(m, 1H), 6.50(t, 1H, JH-F 73 Hz), 3.72(s, 3H), 3.60(s, 1H)
(vii) α-포르밀(3-클로로-5-디플루오로메톡시페닐)아세트산 메틸 에스테르
3-클로로-5-디플루오로메톡시페닐아세트산 메틸 에스테르(1 g, 4 mmol; 상기 단계(vi) 참조) 및 메틸 포르메이트(1 g, 16 mmol)를 에테르(100 ㎖) 중에 용해시키고, 빙욕(약 2℃)으로 냉각시켰다. 그 다음, 미세하게 절단한 나트륨(180 mg, 7.8 mmol) 및 메탄올(1 ㎖)을 가하고, 혼합물을 밤새도록 교반하면서 얼음욕에 방치하였다. 물(100 ㎖)을 신중하게 가하고, 상 분리하였다. 물 함유 상을 염산(2 M)으로 pH 1로 산성화하고, 에테르(2 x 100 ㎖)로 추출하였다. 추출물을 황산나트륨 상에서 건조시키고, 여과하였으며, 감압 농축시켰다. 잔류물을 실리카 상의 크로마토그래피(헥산:에틸 아세테이트(1:1))를 행하여 부제 화합물 400 mg, 1.4 mmol(수율: 36%)을 얻었다.
1H-NMR(400 MHz): δ12.10(d, 1H), 7.32(d, 1H), 7.11(m, 1H), 7.07(m, 1H), 6.94(m, 1H), 6.51(t, 1H, JF-H 73), 3.83(s, 3H)
(viii) 3-클로로-5-디플루오로메톡시트로프산
α-포르밀(3-클로로-5-디플루오로메톡시페닐)아세트산 메틸 에스테르(400 mg, 1.4 mmol; 상기 단계(vii) 참조)를 THF:메탄올(50 ㎖, 9:1) 중에 용해시켰다. 붕수화나트륨을 가하고, 혼합물을 30 분 동안 상온에서 교반하였다. 물을 가하고, 혼합물을 농축시켜서 수성 현탁액을 생성하였으며, 이를 에틸 아세테이트 및 물 중에 용해시켰다. 상 분리하고, 유기상을 염화나트륨(수중 15%)으로 세척하였으며, 황산나트륨 상에서 건조시키고, 여과하였으며, 감압 하에 농축시켰다. 잔류물을 메탄올(30 ㎖) 중에 용해시키고, 수산화나트륨(1 ㎖, 10 M)으로 상온에서 10 분 동안 가수분해하였다. 추출을 종료하여 부제 화합물 180 mg, 0.68 mmol(수율: 48%)을 얻었다.
1H-NMR(500 MHz; CDCl3): δ7.18(m, 1H), 7.10(m, 1H), 7.00(m, 1H), 6.50(t, 1H, JF-H 73), 4.11(m, 1H), 3.90(m, 1H), 3.84(m, 1H)
( ix ) Ph (3- Cl )(5- OCHF 2 )-(S) CH ( CH 2 OH )C(O)- Aze - Pab x HOAc
3-클로로-5-디플루오로메톡시트로프산(180 mg, 0.7 mmol; 상기 단계(viii) 참조), H-Aze-Pab(Teoc) x HCl(450 mg, 1 mmol) 및 PyBOP(530 mg, 1 mmol)를 DMF(10 ㎖) 중에 용해시킨 후, DIPEA(550 mg, 3.9 mmol)를 가하였다. 혼합물을 상온에서 1 시간 동안 교반한 후, 이것을 염수(20 ㎖, 15% NaCl)로 세척하고, 에틸 아세테이트(40 ㎖)로 추출하였다. 추출물을 황산나트륨 상에서 건조시키고, 여과하였으며, 증발 건조시켰다. 잔류물을 염화메틸렌(5 ㎖) 중에 용해시키고, 트리플루오로아세트산(5 ㎖)을 가하였다. 상온에서 1 시간 후, 부분 입체 이성질체의 혼합물을 증발 건조시키고, 잔류물을 역상 컬럼 상에서 크로마토그래피(아세토니트릴:물(30:70), 완충제:암모늄 아세테이트 0.1 M)를 행하였다. 냉동 건조시켜서 표제 화합물 36 mg, 0.067 mmol(수율: 10.4%)을 얻었다.
MS(ES) 481(M+1)+
1H-NMR(400 MHz; CDCl3): δ7.77(d, 2H), 7.57(d, 2H), 7.30(m, 1H), 7.13(m, 2H), 6.87(t, 1H, JF-H 73 Hz), 4.76(m, 1H), 4.55(s, 2H), 4.37(m, 1H), 4.03(m, 2H), 3.82(m, 1H), 3.72(m, 1H), 2.53(m, 1H), 2.28(m, 1H), 1.92(s, 1,5H)
13C-NMR(100 MHz; CD3OD):(카르보닐 탄소 및/또는 아미딘 탄소) δ172.3, 171.9, 167.2
실시예 10
Ph(3-Cl)(5-OCF 3 )-(S)CH(CH 2 OH)C(O)-Aze-Pab x TFA
(i) 3-클로로-5-트리플루오로메톡시벤질 메실레이트
0℃에서 질소 분위기 하에 CH2Cl2(250 ㎖) 중의 3-클로로-5-트리플루오로메톡시벤질 알콜(6.1 g, 26.9 mmol; 상기 실시예 6(v) 참조)의 용액에 DIPEA(4.2 g, 32.3 mmol) 및 메탄술포닐 클로라이드(3.4 g, 29.6 mmol)를 가하였다. 용액을 0℃에서 1.5 시간 동안 교반하고, H20로 켄칭하였다. 유기물을 분리한 다음, H2O(1x), 1 N HCl(1x), H2O(1x) 및 수성 NaHCO3(1x)로 세척한 다음, 건조시키고(Na2S04), 여과하였으며, 농축시켜서 오일로서 부제 화합물(8.2 g, 99%)을 얻었다.
1H NMR(300 MHz, CDCl3): δ7.37(s, 1H), 7.28(s, 1H), 7.18(s, 1H), 5.23(s, 2H), 3.07(s, 3H)
(ii) 3-클로로-5-트리플루오로메톡시벤질 시아나이드
DMSO(50 ㎖) 중의 3-클로로-5-트리플루오로메톡시벤질 메실레이트(8.2 g, 26.8 mmol; 상기 단계(i) 참조)의 용액에 시안화나트륨(2.6 g, 53.6 mmol)을 가하였다. 생성된 불균질 용액을 50℃로 가온하고, 1 시간 동안 초음파 처리하엿다. 반응물을 냉각시키고, Et20 and H20 사이에 분배하였다. 유기물을 H2O(2x) 및 염수(2x)로 세척하였다. 합한 수상을 Et2O(1x)로 추출하였다. 합한 유기물을 건조시키고(Na2SO4), 여과하였으며, 저 열 및 부분 진공 농축시켜서 붉은색 휘발성 오일로서 부제 화합물(6.3 g, 100%)을 얻고, 더 이상의 정제없이 다음 단계에서 사용하였다.
1H NMR(300 MHz, CDCl3) δ7.32(s, 1H), 7.24(s, 1H), 7.12(s, 1H), 3.78(s, 2H)
(iii) 3-클로로-5-트리플루오로메톡시페닐아세트산
2-프로판올(100 ㎖) 중의 3-클로로-5-트리플루오로메톡시벤질 시아나이드(6.3 g, 26.7 mmol; 상기 단계(ii) 참조)의 용액에 물(200 ㎖) 및 수산화칼륨(7.5 g, 133.5 mmol)을 가하였다. 용액을 18 시간 동안 환류시키고, 실온으로 냉각시켰으며, 2-프로판올을 진공 제거하였다. 수상을 CH2Cl2(2x)로 세척하고, 세척물을 버렸다. 염기성 수상을 2 N HCl로 산성화하고, CH2Cl2(3x)로 추출하였다. CH2Cl2 추출물을 건조시키고(Na2SO4), 여과하였으며, 진공 농축시켜서 오일로서 부제 화합물(5.2 g, 76%)을 얻고, 이것을 더 이상의 정제없이 다음 단계에서 사용하였다.
1H NMR(300 MHz, CDCl3): δ7.25(s, 1H), 7.19(s, 1H), 7.08(s, 1H), 3.68(s, 2H)
(iv) 에틸 3-클로로-5-트리플루오로메톡시페닐아세테이트
EtOH(600 ㎖) 중의 3-클로로-5-트리플루오로메톡시페닐아세트산(5.2 g, 20.4 mmol; 상기 단계(iii) 참조)의 용액에 황산(수 액적)을 가하였다. 용액을 18 시간 동안 환류시키고, 실온으로 냉각시켰으며, 고상 NaHC03로 중화시키고, EtOH를 진공 제거하였다. 잔류물을 EtOAc로 희석한 다음, H2O(1x), 수성 NaHCO3(1x) 및 염수(1x)로 세척하였다. 유기물을 건조시키고(Na2SO4), 여과하였으며, 진공 농축시켜서 오일로서 부제 화합물(5.5 g, 96%)을 얻고, 이것을 더 이상의 정제없이 다음 단계에서 사용하였다.
1H NMR(300 MHz, CDCl3) δ7.24(s, 1H), 7.16(s, 1H), 7.07(s, 1H), 4.13-4.22(q, J = 8 Hz, 2H), 3.63(s, 2H), 1.24-1.32(t, J = 8 Hz, 3H)
(v) Ph(3-Cl)(5-OCF 3 )-(R,S)CH(CHO)C(O)OEt
질소 분위기 하에 0℃ 미만(얼음-MeOH 욕)에서 무수 THF(400 ㎖) 중의 에틸 3-클로로-5-트리플루오로메톡시페닐아세테이트(4.5 g, 15.9 mmol; 상기 단계(iv) 참조)의 용액에 에톡시화나트륨(4.5 g, 63.6 mmol)을 가하였다. 차가운 용액을 40 분 동안 교반하고, 에틸 포르메이트(8.1 g, 111.3 mmol)를 가하였다. 용액을 0℃에서 30 분 동안 교반하고, 실온으로 가온하였으며, 2 시간 동안 교반하였다. 그 다음, THF를 진공 제거하였다. 잔류물을 Et20로 희석시키고, H2O(1x) 및 0.5 M NaOH(3x)로 추출하였다. 수성 추출물을 2 N HCl로 산성화하고, CH2Cl2(3x)로 추출하였다. 합한 유기물을 건조시키고(Na2SO4), 여과하였으며, 진공 농축시켜서 미정제 부제 화합물(3.9 g)을 얻었다. Hex:EtOAc(4:1)로 용출하면서 실리카 겔 상의 플래쉬 크로마토그래피에 의해 오일로서 부제 화합물(3.0 g, 61%)을 얻었다.
1H NMR(300 MHz, CDCl3, 이성질체의 혼합물): δ12.30 및 12.25(s, 1H), 7.39 및 7.34(s, 1H), 7.21(s, 1H), 7.17(s, 1H), 7.08(s, 1H), 4.27-4.37(q, J = 8 Hz, 2H), 1.28-1.38(t, J = 8 Hz, 3H)
(vi) Ph(3-Cl)(5-OCF 3 )-(R,S)CH(CH 2 OH)C(O)OEt
-10℃(얼음-MeOH 욕)에서 MeOH(200 ㎖) 중의 Ph(3-Cl)(5-OCF3)-(R,S)CH(CHO) C(O)OEt(3.0 g, 9.66 mmol; 상기 단계(v) 참조)의 용액에 붕수소화나트륨(0.7 g, 19.32 mmol)을 5 분에 걸쳐서 조금씩 가하였다. 용액을 -10℃에서 45 분 동안 교반하고, 붕수소화나트륨(0.4 g)을 더 가하였다. 15 분 후, 반응물을 수성 염화암모늄으로 켄칭하고, 2 N HCl로 약산성이 되게 하였으며, MeOH를 진공 제거하였다. 잔류물을 EtOAc로 희석하였으며, H2O(1x), 수성 NaHCO3(1x) 및 염수(1x)로 세척하였다. 유기물을 건조시키고(Na2SO4), 여과하였으며, 진공 농축시켜서 미정제 부제 화합물을 얻었다. Hex:EtOAc(5:1)로 용출하면서 실리카 겔 상의 플래쉬 크로마토그래피에 의해 오일로서 부제 화합물(2.0 g, 66%)을 얻었다.
1H NMR(300 MHz, CDCl3): δ7.26(s, 1H), 7.19(s, 1H), 7.07(s, 1H), 4.16-4.28(m, 2H), 4.04-4.15(m, 1H), 3.76-3.94(m, 2H), 2.33(t, J = 6 Hz, 1H), 1.18-1.30(t, J = 8 Hz, 3H)
(vii) Ph(3-Cl)(5-OCF 3 )-(R,S)CH(CH 2 OH)C(O)OH
THF(50 ㎖) 및 H2O(25 ㎖) 중의 Ph(3-Cl)(5-OCF3)-(R,S)CH(CH2OH)C(O)OEt(2.0 g, 6.24 mmol; 상기 단계(vi) 참조)의 용액에, 수산화리튬 일수화물(0.5 g, 12.48 mmol)을 가하였다. 용액을 실온에서 1 시간 동안 교반하고, THF를 진공 제거하였다. 잔류물을 H20로 희석시킨 다음, CHCl3(2x)로 세척하고, 세척물을 제거하였다. 염기성 수층을 2 N HCl로 산성화하고, CHCl3(4x)로 추출하였다. CHCl3 추출물을 건조시키고(Na2SO4), 여과하였으며, 진공 농축시켜서 오일로서 미정제 부제 화합물(1.5 g)을 얻었다. CHCl3:MeOH:진한 NH4OH(7.0:2.5:0.5에서 6:3:1로의 구배)로 용출하면서 실리카 겔 상의 플래쉬 크로마토그래피에 의하여 부제 화합물의 암모늄염(1.1 g)을 얻었다. 암모늄염을 1 N HCl과 CHCl3 사이에 분배하였다. 유기물을 건조시키고(Na2SO4), 여과하였으며, 진공 농축시켜서 오일로서 표제 화합물(3-클로로-5-트리플루오로메톡시트로프산이라고도 알려짐)(1.1 g, 62%)을 얻었다.
1H NMR(300 MHz, CD3OD): δ7.41(s, 1H), 7.27(s, 1H), 7.24(s, 1H), 4.03(m, 1H), 3.75-3.87(m, 2H)
(viii) Ph(3-Cl)(5-OCF 3 )-(S)CH(CH 2 OH)C(O)-Aze-Pab(Teoc)(a) 및 Ph(3-Cl)(5-OCF3)-(R)CH(CH2OH)C(O)-Aze-Pab(Teoc)(b)
0℃ 미만(얼음-MeOH 욕)에서 DMF 중의 Ph(3-Cl)(5-OCF3)-(R,S)CH(CH2OH)C(O)OH(0.65 g, 2.28 mmol; 상기 단계(vii) 참조)의 용액에 H-Aze-Pab(Teoc)(0.90 g, 2.39 mmol), 콜리딘(0.71 g, 5.70 mmol) 및 PyBOP(1.31 g, 2.51 mmol)를 가하였다. 생성된 용액을 0℃ 미만에서 1 시간 동안 교반하고, 실온으로 가온하였으며, 1 시간 동안 교반하였다. 그 다음, DMF를 진공 제거하였다. 잔류물을 EtOAc로 희석하고, 수성 HCl(1x), 염수(1x), 수성 NaHCO3(1x) 및 염수(lx)로 세척하였다. 유기물을 건조시키고(Na2SO4), 여과하였으며, 진공 농축시켜서 부분 입체 이성질체의 혼합물로서 미정제 부제 화합물(2.1 g)을 얻었다. 먼저 EtOAc:MeOH(95:5)로 용출한 다음, CH2Cl2:MeOH(97:3)로 용출하고, 마지막으로 CH2Cl2:MeOH(95:5)로 용출하면서 실리카 겔 상의 크로마토그래피에 의해 압착 가능한 폼으로서 부제 화합물 부분 입체 이성질체(a)(0.51 g, 35%) 및 부분 입체 이성질체(b)(0.45 g, 31%)를 얻었다.
부제 화합물 부분 입체 이성질체(a)의 경우,
1H NMR(300 MHz, CD3OD, 회전 이성질체의 착체 혼합물) δ7.79-7.85(d, J = 8 Hz, 2H), 7.22-7.49(m, 5H), 5.17-4.77(m, 1H), 4.53-4.18(m, 4H), 3.58-4.11(m, 5H), 2.47-2.73(m, 1H), 2.11-2.34(m, 1H), 1.08-1.12(m, 2H), 0.07(s, 9H)
MS(m/z) 643(M+1)+
(ix) Ph(3-Cl)(5-OCF 3 )-(S)CH(CH 2 OH)C(O)-Aze-Pab x TFA
Ph(3-Cl)(5-OCF3)-(S)CH(CH2OH)C(O)-Aze-Pab(Teoc)(78 mg, 0.121 mmol; 상기 단계(viii) 참조-부분 입체 이성질체(a))를 트리플루오로아세트산 5 ㎖ 중에 용해시켰다. 10 분 후, 반응을 종결시키고, 용매를 증발시켰다. 잔류물을 물과 아세토니트릴로부터 냉동 건조시켜서 소정의 생성물을 얻었다. 수득량: 70 mg(94%).
MS(m/z) 483(M-1)-; 485(M+1)+
1H-NMR(400 MHz; D2O) 회전 이성질체 1:1: δ8.83(bt, 1H), 7.79(d, 1H), 7.72(d, 1H), 7.54(d, 1H), 7.43(d, 2H), 7.35(m, 1H, 회전 이성질체), 7.28(m, 1H, 회전 이성질체), 7.20(m, 1H, 회전 이성질체), 7.05(m, 1H, 회전 이성질체), 5.22(m, 1H, 회전 이성질체), 4.83(m, 1H, 회전 이성질체), 4.57(m, 2H, 회전 이성질체), 4.38(m, 2H, 회전 이성질체), 4.3-3.7(m, 5H), 2.77(m, 1H, 회전 이성질체), 2.55(m, 1H, 회전 이성질체), 2.27(m, 1H)
13C-NMR(100 MHz; D20):(카르보닐 탄소 및/또는 아미딘 탄소, 회전 이성질체) δ172.9, 172.2, 172.0, 171.8, 166.9
실시예 11
Ph(3-Cl)(5-OCF 3 )-(S)CH(CH 2 OH)C(O)-Aze-Pab(OMe)
(i) Ph(3-Cl)(5-OCF 3 )-(S)CH(CH 2 OH)C(O)-Aze-Pab(OMe, Teoc)
Ph(3-Cl)(5-OCF3)-(S)CH(CH2OH)C(O)-Aze-Pab(Teoc)(100 mg, 0.155 mmol; 상기 실시예 10(viii) 참조)를 테트라히드로푸란 12 ㎖ 중에 용해시켰다. O-메틸히드록실아민 염산염(44 mg, 0.53 mmol)을 가하고, 반응물을 50℃로 밤새도록 가열하였다. 반응 혼합물을 증발시키고, 잔류물을 정제용 HPLC(CH3CN/0.1 M NH40Ac(70/30))에 의해 정제하였다. 적당한 분획을 증발시키고, 잔류물을 소량의 아세토니트릴과 물 중에 용해시켰으며, 냉동 건조시켰다. 냉동 건조를 1회 반복하였다. 수득량: 순수 물질 80 mg(76%).
1H-NMR(400 MHz; CD3OD) 회전 이성질체: δ7.5-7.4(m, 3H), 7.35-7.2(m, 4H), 5.15(m, 1H, 부 회전 이성질체), 4.74(m, 1H, 주 회전 이성질체), 4.5-4.25(m, 3H), 4.2-3.95(m, 4H), 3.91(b, 3H), 3.9-3.6(m, 2H), 2.63(m, 1H, 부 회전 이성질체), 2.50(m, 1H, 주 회전 이성질체), 2.3-2.1(m, 1H), 0.95(m, 2H), 0.02(s, 9H, 주 회전 이성질체), 0.01(s, 9H, 부 회전 이성질체)
(ii) Ph(3-Cl)(5-OCF 3 )-(S)CH(CH 2 OH)C(O)-Aze-Pab(OMe)
Ph(3-Cl)(5-OCF3)-(S)CH(CH2OH)C(O)-Aze-Pab(OMe, Teoc)(80 mg, 0.12 mmol; 상기 단계(i) 참조)를 염화메틸렌 1 ㎖ 중에 용해시키고, 얼음욕으로 냉각시켰다. 트리플루오로아세트산 3 ㎖를 가하고, 반응 플라스크를 얼음욕에서 2 시간 동안 유지시켰다. 혼합물을 증발시키고, 에틸 아세테이트 중에 용해시켰으며, NaHC03(aq), 그 다음 물과 염수로 3회 세척하였다. 유기상을 건조시키고(Na2SO4), 여과하였으며, 증발시켰다. 잔류물을 소량의 아세토니트릴과 물로부터 냉동 건조시켰다. 수득량: 순수 표제 화합물 60 mg(95%)
MS(m/z) 528(M-1)-; 531(M+1)+
1H-NMR(500 MHz; CD3OD) 회전 이성질체: δ7.65-7.55(m, 3H, 회전 이성질체), 7.45(m, 1H, 주 회전 이성질체), 7.4-7.2(m, 4H), 5.15(m, 1H, 부 회전 이성질체), 4.74(m, 1H, 주 회전 이성질체), 4.5-4.3(m, 3H), 4.05-3.95(m, 2H), 3.85(m, 1H, 주 회전 이성질체), 3.82(s, 3H, 주 회전 이성질체), 3.81(s, 3H, 부 회전 이성질체), 3.73(m, 1H, 주 회전 이성질체), 3.67(m, 1H, 부 회전 이성질체), 3.62(m, 1H, 부 회전 이성질체), 2.63(m, 1H, 부 회전 이성질체), 2.50(m, 1H, 주 회전 이성질체), 2.24(m, 1H, 주 회전 이성질체), 2.16(m, 1H, 부 회전 이성질체)
13C-NMR(125 MHz; CD3OD):(카르보닐 탄소 및/또는 아미딘 탄소, 회전 이성질체) δ174.0, 173.2, 172.7, 172.6, 155.1
실시예 12
Ph(3-Cl)(5-OCHF 2 )-(R)CH(OH)C(O)-Aze-Pab(OMe)
(i) Ph(3-Cl)(5-OCHF 2 )-(R)CH(OH)C(O)-Aze-Pab(OMe, Teoc)
Ph(3-Cl)(5-OCHF2)-(R)CH(OH)C(O)-Aze-Pab(Teoc)(0.40 g, 0.65 mmol; 상기 실시예 1(ix) 참조)를 아세토니트릴 20 ㎖ 중에 용해시키고, O-메틸 히드록실아민 염산염 0.50 g(6.0 mmol)을 가하였다. 혼합물을 70℃로 2 시간 동안 가열하였다. 용매를 증발시키고, 잔류물을 물과 에틸 아세테이트 사이에 분배하였다. 수상을 에틸 아세테이트로 2회 이상 추출하고, 합한 유기상을 물, 염수로 세척하고, 건조시켰으며(Na2SO4), 여과하고, 증발시켰다. 수득량: 0.41 g(91 %).
1H-NMR(400 MHz; CDCl3): δ7.83(bt, 1H), 7.57(bs, 1H), 7.47(d, 2H), 7.30(d, 2H), 7.20(m, 1H), 7.14(m, 1H), 7.01(m, 1H), 6.53(t, 1H), 4.89(s, 1H), 4.87(m, 1H), 4.47(m, 2H), 4.4-4.2(b, 1H), 4.17-4.1(m, 3H), 3.95(s, 3H), 3.67(m, 1H), 2.68(m, 1H), 2.42(m, 1H) 0.97(m, 2H), 0.01(s, 9H).
(ii) Ph(3-Cl)(5-OCHF 2 )-(R)CH(OH)C(O)-Aze-Pab(OMe)
Ph(3-Cl)(5-OCHF2)-(R)CH(OH)C(O)-Aze-Pab(OMe, Teoc)(0.40 g, 0.62 mmol; 상기 단계(i) 참조)를 TFA 5 ㎖ 중에 용해시키고, 30 분 동안 반응시켰다. TFA를 증발시키고, 잔류물을 에틸 아세테이트와 NaHCO3(aq) 사이에 분배하였다. 수상을 에틸 아세테이트로 2회 추출하고, 합한 유기상을 물, 염수로 세척하였으며, 건조시키고(Na2SO4), 여과하였으며, 증발시켰다. 생성물을 물/아세토니트릴로부터 냉동 건조시켰다. 순도는 불필요하였다. 수득량: 0.28 g(85%).
1H-NMR(600 MHz; CDCl3): δ7.89(bt, 1H), 7.57(d, 2H), 7.28(d, 2H), 7.18(m, 1H), 7.13(m, 1H), 6.99(m, 1H), 6.51(t, 1H), 4.88(s, 1H), 4.87(m, 1H), 4.80(bs, 2H), 4.48(dd, 1H), 4.43(dd, 1H), 4.10(m, 1H), 3.89(s, 3H), 3.68(m, 1H), 2.68(m, 1H), 2.40(m, 1H).
13C-NMR(125 MHz; CDCl3):(카르보닐 탄소 및/또는 아미딘 탄소, 회전 이성질체) δ172.9, 170.8, 152.7, 152.6
MS(m/z) 495(M-1)-, 497(M+1)+
실시예 13
Ph(3-OCHF 2 )-(R)CH(OH)C(O)-Aze-Pab x HOAc
Ph(3-Cl)(5-OCHF2)-(R)CH(OH)C(O)-Aze-Pab(OMe)(13 mg, 0.026 mmol; 상기 실시예 12 참조)를 무수 에탄올(5 ㎖) 중에 용해시키고, 10% Pd/C 30 mg을 가하였다. 최종적으로, 아세트산(5 ㎕)을 가하고, 혼합물을 대기압에서 20 시간 동안 수소화하였다. 혼합물을 셀라이트(등록 상표)를 통하여 여과하고, 증발시켰으며, 역상 HPLC(0.1 M 수성 아세트산암모늄/MeCN)에 의해 정제하였다. 적당한 분획을 냉동 건조시켜서 백색 고형물로서 표제 화합물을 얻었다: 8.5 mg(66%).
1H-NMR(400 MHz; CD3OD) 회전 이성질체: δ7.73-7.78(m, 2H), 7.55(d, 2H), 7.19-7.43(m, 3H), 7.06-7.13(m, 1H), 6.83(t, 1H, JH-F = 74 Hz, 주 회전 이성질체), 6.81(t, 1H, 주 회전 이성질체), 5.20(s, 1H, 주 회전 이성질체), 5.19(m, 1H, 부 회전 이성질체), 5.15(s, 1H, 부 회전 이성질체), 4.78(m, 1H, 주 회전 이성질체), 4.4-4.6(수 개의 피크, 2H), 4.35(m, 1H, 주 회전 이성질체), 4.08(m, 1H), 3.99(m, 1H, 부 회전 이성질체), 2.70(m, 1H, 부 회전 이성질체), 2.52(m, 1H, 주 회전 이성질체), 2.30(m, 1H, 주 회전 이성질체), 2.15(m, 1H, 부 회전 이성질체), 1. 89(s, 3H).
13C-NMR(100 MHz; CD3OD):(카르보닐 탄소 및/또는 아미딘 탄소, 회전 이성질체) δ173.7, 172.9, 168.3
MS(m/z) 433(M+1)+; 431(M-1)-
실시예 14
Ph(3-OCF 3 )-(R)CH(OH)C(O)-Aze-Pab x TFA
Ph(3-Cl)(5-OCF3)-(R)CH(OH)C(O)-Aze-Pab x TFA(34 mg, 0.057 mmol, 상기 실시예 6)를 에탄올 5 ㎖ 중에 용해시키고, 10% Pd/C 20 mg을 가하였다. 혼합물을 대기압에서 밤새도록 수소화하였다. 혼합물을 셀라이트(등록 상표)를 통하여 여과하고, 증발시켰으며, 물/아세토니트릴로부터 냉동 건조시켰다.
1H-NMR(400 MHz; CD3OD) 회전 이성질체: δ7.8-7.7(m, 2H), 7.55(m, 2H), 7.5-7.2(m, 4H), 5.24(s, 1H, 주 회전 이성질체), 5.23(m, 1H, 부 회전 이성질체), 5.18(s, 1H, 부 회전 이성질체), 4.77(m, 1H, 주 회전 이성질체), 4.6-4.45(m, 2H), 4.36(m, 1H, 주 회전 이성질체), 4.08(m, 1H), 3.99(m, 1H, 부 회전 이성질체), 2.70(m, 1H, 부 회전 이성질체), 2.52(m, 1H, 주 회전 이성질체), 2.30(m, 1H, 주 회전 이성질체), 2.15(m, 1 H, 부 회전 이성질체).
13C-NMR(100 MHz; CD3OD):(카르보닐 탄소 및/또는 아미딘 탄소, 회전 이성질체) δ174.1, 173.9, 173.5, 172.9, 168.2
19-F NMR(282 MHz; CD3OD): -59.8 및 -59.9(3F, 각각 부 및 주 회전 이성질체), -77.4(3F)는 염이 TFA라는 것을 가리킨다.
MS(m/z) 451.3(M+1)+
실시예 15
Ph(3-Cl)(5-OCH 2 CF 3 )-(R)CH(OH)C(O)-Aze-Pab x TFA
(i) 3-클로로-5-트리플루오로에톡시벤즈알데히드
질소 하에 DMF(35 ㎖) 중의 3-클로로-5-히드록시벤즈알데히드(2.0 g, 12.8 mmol; 상기 실시예 1(ii) 참조) 및 탄산칼륨(2.3 g, 16.6 mmol)의 자기 교반 용액에 2,2,2-트리플루오로에틸 p-톨루엔술포네이트(4.2 g, 16.6 mmol)를 실온에서 가하였다. 혼합물을 7 시간 동안 110℃로 가열한 다음, 실온에서 밤새도록 교반하였다. 반응물을 0℃로 냉각시키고, 빙냉 2 N HCl(100 ㎖)에 부었으며, EtOAc(2 x 75 ㎖)로 추출하였다. 합한 유기 추출물을 0.5 N HCl(2 x 50 ㎖)로 세척하고, 건조시켰으며(Na2SO4), 여과하고, 진공 농축시켰다. 갈색 오일을 Hex:EtOAc(6:1)로 용출하면서 실리카 겔 상의 크로마토그래피를 행하여 황색 오일로서 부제 화합물(1.9 g, 61%)을 얻었다.
1H NMR(300 MHz, CDCl3) δ9.44(s, 1H), 7.56(s, 1H), 7.33(s, 1H), 7.28(s, 1H), 4.42(q, J = 8 Hz, 2H)
(ii) Ph(3-Cl)(5-OCH 2 CF 3 )-(R,S)CH(OTMS)CN
질소 하에 CH2Cl2(200 ㎖) 중의 3-클로로-5-트리플루오로에톡시벤즈알데히드 (5.2 g, 21.7 mmol; 상기 단계(i) 참조) 및 요오드화아연(1.7 g, 5.4 mmol)의 용액에 0℃에서 주사기에 의해 트리메틸실릴 시아나이드(4.3 g, 43.3 mmol)를 적가하였다. 혼합물을 0℃에서 3 시간 동안 교반한 다음, H20(150 ㎖)로 희석하였다. 유기층을 분리하고, 건조시켰으며(Na2SO4), 여과하고, 진공 농축시켜서 황색 오일로서 부제 화합물(6.9 g, 95%)을 얻고, 더 이상의 정제없이 사용하였다.
1H NMR(300 MHz, CDCl3) δ7.27(s, 1H), 6.98(s, 2H), 5.44(s, 1H), 4.38(q, J = 8 Hz, 2H), 0.30(s, 9 H)
(iii) Ph(3-Cl)(5-OCH 2 CF 3 )-(R,S)CH(OH)C(O)OH
진한 염산(170 ㎖)을 Ph(3-Cl)(5-OCH2CF3)-(R,S)CH(OTMS)CN(6.9 g, 20.4 mmol; 상기 단계(ii) 참조)에 가하고, 100℃에서 1 시간 동안 교반하였다. 실온으로 냉각시킨 후, 반응물을 0℃로 더 냉각시키고, 3 N NaOH(300 ㎖)로 서서히 염기화하였다. 이 혼합물을 Et2O(2 x 100 ㎖)로 세척하고, 수층을 2 N HCl(50 ㎖)로 산성화하였다. 그 후, 수층을 EtOAc(2 x 100 ㎖)로 추출하고, 건조시켰으며(Na2SO4), 여과하고, 진공 농축시켜서 담황색 오일로서 부제 화합물(5.3 g, 92%)을 얻고, 더 이상의 정제없이 사용하였다.
1H NMR(300 MHz, CD3OD) δ7.18(s, 1H), 7.07(s, 1H), 7.02(s, 1H), 5. 13(s, 1H), 4.58(q, J = 8 Hz, 2H)
(iv) Ph(3-Cl)(5-OCH 2 CF 3 )-(R)CH(OH)C(O)OH(a) 및 Ph(3-Cl)(5-OCH 2 CF 3 )-(S)CH(OAc)C(O)OH(b)
비닐 아세테이트(250 ㎖) 및 MTBE(250 ㎖) 중의 Ph(3-Cl)(5-OCH2CF3)-(R,S)CH(OH)C(O)OH(7.06 g, 24.8 mmol; 상기 단계(iii) 참조) 및 리파제 PS "아마노"(4.30 g)의 용액을 질소 하에서 40 시간 동안 70℃로 가열하였다. 반응물을 실온으로 냉각시키고, 효소를 EtOAc로 여과 세척함으로써 제거하였으며, 여액을 진공 농축시켰다. CHCl3:MeOH:Et3N(92:6:2)로 용출하면서 실리카 겔 상의 크로마토그래피에 의해 황색 오일로서 부제 화합물(a)의 트리에틸아민 염을 얻었다. 부제 화합물(a)의 염을 H20(150 ㎖) 중에 용해시키고, 2 N HCl로 산성화하였으며, EtOAc(2 x 75 ㎖)로 추출하였다. 합한 유기 추출물을 건조시키고(Na2SO4), 여과하였으며, 진공 농축시켜서 회백색 고형물로서 부제 화합물(a)(2.18 g)을 얻었다. 또한, 부제 화합물(b)의 트리에틸아민 염(4.73 g)은 전술한 컬럼 크로마토그래피로부터 얻었다.
부제 화합물(a)에 대한 데이타:
mp: 98-103℃
1H NMR(300 MHz, CD3OD) δ7.18(s, 1H), 7.07(s, 1H), 7.02(s, 1H), 5.13(s, 1H), 4.58(q, J = 8 Hz, 2H).
13C NMR(75 MHz, CD3OD) δ175.4, 159.6, 144.6, 136.2, 125.0(q, J = 277 Hz), 121.8, 115.9, 113.1, 73.3, 67.0(q, J = 35 Hz)
HPLC 분석: 98.6%, > 99% ee, 키랄셀 OD 컬럼(97:3:0.5 Hex:EtOH:TFA 이동상)
[a]25 D = -81. 5°(c = 1.0, MeOH)
APCI-MS:(M-1) = 283 m/z
(v) Ph(3-Cl)(5-OCH 2 CF 3 )-(R)CH(OH)C(O)-Aze-Pab(Teoc)
질소 하에 DMF(20 ㎖) 중의 Ph(3-Cl)(5-OCH2CF3)-(R)CH(OH)C(O)OH(0.50 g, 1.8 mmol; 상기 단계(iv) 참조(화합물(a))의 용액에 0℃에서 H-Aze-Pab(Teoc) x HCl(1.03 g, 2.3 mmol), PyBOP(1.01 g, 1.9 mmol) 및 DIPEA(0.57 g, 4.4 mmol)를 가하였다. 반응물을 0℃에서 2 시간 동안 교반한 다음, 실온에서 20 시간 동안 교반하였다. 혼합물을 진공 농축시키고, 잔류물을 먼저 CHCl3:EtOH(10:1)로 용출한 다음, EtOAc:EtOH(10:1)로 용출하면서 실리카 겔 상에서 크로마토그래피를 2회 수행하여 압착 가능한 백색 폼으로서 부제 화합물(0.55 g, 48%)을 얻었다.
mp: 90-95℃
Rf = 0.42(10:1 CHCl3:EtOH)
1H NMR(300 MHz, CD3OD, 회전 이성질체의 착체 혼합물) δ7.78-7.81(m, 2H), 7.38-7.41(m, 2H), 7.12-7.16(m, 1H), 7.00-7.06(m, 2H), 5.09-5.22 및 4.75-4.79(m, 2H), 3.94-4.61(m, 8H), 2.09-2.75(m, 2H), 1.04-1.11(m, 2H), 0.70(s, 9H)
APCI-MS:(M+1)= 643 m/z
(vi) Ph(3-Cl)(5-OCH 2 CF 3 )-(R)CH(OH)C(O)-Aze-Pab x TFA
Ph(3-Cl)(5-OCH2CF3)-(R)CH(OH)C(O)-Aze-Pab(Teoc)(0.066 g, 0.103 mmol; 상기 단계(v) 참조)를 TFA 3 ㎖ 중에 용해시키고, 30 분 동안 반응시켰다. TFA를 증발시키고, 잔류물을 물/아세토니트릴로부터 냉동 건조시켜서 TFA 염으로서 표제 화합물 0.060 g(94%)을 얻었다.
1H-NMR(400 MHz; CD3OD) 회전 이성질체: δ7.8-7.7(m, 2H), 7.6-7.5(m, 2H), 7.2-7.0(m, 3H), 5.21(m, 1H, 부 회전 이성질체), 5.17(s, 1H, 주 회전 이성질체), 5.11(s, 1H, 부 회전 이성질체), 4.81(m, 1H, 주 회전 이성질체), 4.6-4.4(m, 4H), 4.37(m, 1H, 주 회전 이성질체), 4.16(m, 1H, 주 회전 이성질체), 4.06(m, 1H, 부 회전 이성질체), 3.99(m, 1H, 부 회전 이성질체), 2.70(m, 1H, 부 회전 이성질체), 2.54(m, 1H, 주 회전 이성질체), 2.29(m, 1H, 주 회전 이성질체), 2.15(m, 1H, 부 회전 이성질체)
13C-NMR(100 MHz; CD3OD):(카르보닐 탄소 및/또는 아미딘 탄소, 회전 이성질체) δ172.2, 171.8, 171.7, 167.0
MS(m/z) 499.3(M+1)+
실시예 16
Ph(3-Cl)(5-OCH 2 CF 3 )-(R)CH(OH)C(O)-Aze-Pab(OMe)
질소 하에 DMF(20 ㎖) 중의 Ph(3-Cl)(5-OCH2CF3)-(R)CH(OH)C(O)OH(0.48 g, 1.7 mmol; 상기 실시예 15(iv) 참조(화합물(a)))의 용액에 0℃에서 H-Aze-Pab(OMe) x 2HCl(0.74 g, 2.2 mmol), PyBOP(0.97 g, 1. 9 mmol) 및 DIPEA(0.55 g, 4.2 mmol)를 가하였다. 반응물을 0℃에서 2 시간 동안 교반한 다음, 실온에서 20 시간 동안 교반하였다. 혼합물을 진공 농축시키고, 잔류물을 먼저 CHCl3:EtOH(10:1)로 용출한 다음, EtOAc:EtOH(10:1)로 용출하면서 실리카 겔 상에서 크로마토그래피를 2회 수행하여 압착 가능한 폼으로서 표제 화합물(0.62 g, 69%)을 얻었다.
mp: 75-80℃
Rf = 0.43(10:1 CHCl3:EtOH)
1H NMR(300 MHz, CD3OD, 회전 이성질체의 착체 혼합물) δ7.57-7.60(m, 2H), 7.32-7.36(m, 2H), 7.13-7.17(m, 1H), 7.00-7.06(m, 2H), 5.09-5.19 및 4.74-4.80(m, 2H), 3.93-4.62(m, 6H), 3.81(s, 3H), 2.10-2.73(m, 2H)
APCI-MS:(M+1) = 529 m/z
실시예 17
Ph(3-Cl)(5-OCH 2 CHF 2 )-(R)CH(OH)C(O)-Aze-Pab x TFA
(i) 2,2-디플루오로에틸 에스테르 메탄술폰산
질소 하에 CH2Cl2(20 ㎖) 중의 2,2-디플루오로에탄올(1.52 g, 18.5 mmol)의 자기 교반 용액에 0℃에서 트리에틸아민(5.61 g, 55.5 mmol) 및 메탄술포닐 클로라이드(2.54 g, 22.2 mmol)를 가하였다. 혼합물을 0℃에서 1.5 시간 동안 교반하고, CH2Cl2(50 ㎖)로 희석하였으며, 2 N HCl(50 ㎖)로 세척하였다. 수층을 CH2Cl2(30 ㎖)로 세척하고, 합한 유기 추출물을 염수(30 ㎖)로 세척하였으며, 건조시키고(Na2SO4), 여과하였으며, 진공 농축시켜서 황색 오일로서 부제 화합물(2.52 g, 85%)을 얻고, 더 이상의 정제없이 사용하였다.
1H NMR(300 MHz, CDCl3) δ6.02(tt, J = 3 Hz, J = 55 Hz, 1H), 4.39(dt, J = 3 Hz, J = 13 Hz, 2H), 3.13(s, 3H)
(ii) 3-클로로-5-디플루오로에톡시벤즈알데히드
질소 하에 DMF(10 ㎖) 중의 3-클로로-5-히드록시벤즈알데히드(1.50 g, 9.6 mmol; 상기 실시예 1(ii) 참조) 및 탄산칼륨(1.72 g, 12.5 mmol)의 용액에 실온에서 DMF(10 ㎖) 중의 2,2-디플루오로에틸 에스테르 메탄술폰산(2.0 g, 12.5 mmol; 상기 단계(i) 참조)을 적가하였다. 혼합물을 100℃로 6 시간 동안 가열한 다음, 실온에서 밤새도록 교반하였다. 반응물을 0℃로 냉각시키고, 빙냉 2 N HCl(100 ㎖)에 주입하였으며, EtOAc(2 x 75 ㎖)로 추출하였다. 합한 유기 추출물을 0.5 N HCl(2 x 50 ㎖)로 세척하고, 건조시켰으며(Na2SO4), 여과하고, 진공 농축시켰다. 갈색 오일을 Hex:EtOAc(5:1)로 용출하면서 실리카 겔 상의 크로마토그래피에 의해 황색 오일로서 부제 화합물(1.35 g, 64%)을 얻었다.
1H NMR(300 MHz, CDCl3) δ9.92(s, 1H), 7.52(s, 1H), 7.31(s, 1H), 7.22(s, 1H), 6.12(tt, J = 3 Hz, J = 55 Hz, 1H), 4.26(dt, J = 3 Hz, J = 15 Hz, 2H)
(iii) Ph(3-Cl)(5-OCH 2 CHF 2 )-(R,S)CH(OTMS)CN
CH2Cl2(50 ㎖) 중의 3-클로로-5-디플루오로에톡시벤즈알데히드(1.35 g, 6.1 mmol; 상기 단계(ii) 참조) 및 요오드화아연(0.48 g, 1.5 mmol)의 용액에 0℃에서 질소 하에 트리메틸실릴 시아나이드(1.21 g, 12.2 mmol)를 적가하였다. 혼합물을 0℃에서 3 시간 동안 교반한 다음, H20(50 ㎖)로 희석하였다. 유기층을 분리하고, 건조시켰으며(Na2SO4), 여과하고, 진공 농축시켜서 갈색 오일로서 부제 화합물(1.85 g, 95%)을 얻고, 더 이상의 정제없이 사용하였다.
1H NMR(300 MHz, CDCl3) δ7.13(s, 1H), 6.94(s, 2H), 6.10(tt, J = 3 Hz, J= 55 Hz, 1H), 5.43(s, 1H), 4.20(dt, J= 3 Hz, J = 15 Hz, 2H), 0.28(s, 9H)
(iv) Ph(3-Cl)(5-OCH 2 CHF 2 )-(R,S)CH(OH)C(O)OH
진한 염산(60 ㎖)을 Ph(3-Cl)(5-OCH2CHF2)-(R,S)CH(OTMS)CN(1.85 g, 5.8 mmol; 상기 단계(iii) 참조)에 가하고, 100℃에서 1 시간 동안 교반하였다. 실온으로 냉각시킨 후, 반응물을 0℃로 더 냉각시키고, 3 N NaOH(∼180 ㎖)로 서서히 염기화하였으며, Et2O(2 x 75 ㎖)로 세척하였다. 수층을 2 N HCl(20 ㎖)로 산성화하고, EtOAc(2 x 75 ㎖)로 추출하였다. 합한 유기 추출물을 건조시키고(Na2SO4), 여과하였으며, 진공 농축시켜서 담황색 고형물로서 부제 화합물(1.50 g, 97%)을 얻고, 더 이상의 정제없이 사용하였다.
1H NMR(300 MHz, CD3OD) δ7.15(s, 1H), 7.05(s, 1H), 6.98(s, 1H), 6.19(tt, J = 4 Hz, J = 55 Hz, 1H), 5.12(s, 1H), 4.25(dt, J = 4 Hz, J = 17 Hz, 2H)
(v) Ph(3-Cl)(5-OCH 2 CHF 2 )-(S)CH(OAc)C(O)OH(a) 및 Ph(3-Cl)(5-OCH 2 CHF 2 )-(R)CH(OH)C(O)OH(b)
비닐 아세테이트(140 ㎖) 및 MTBE(140 ㎖) 중의 Ph(3-Cl)(5-OCH2CHF2)-(R,S)CH(OH)C(O)OH(3.90 g, 14.6 mmol; 상기 단계(iv) 참조) 및 리파제 PS "아마노"(2.50 g)의 용액을 질소 하에 40 시간 동안 70℃로 가열하였다. 반응물을 실온으로 냉각시키고, 효소를 EtOAc로 여과 세척함으로써 제거하였으며, 여액을 진공 농축시켰다. CHCl3:MeOH:Et3N(92:6:2)로 용출하면서 실리카 겔 상의 크로마토그래피에 의해 황색 오일로서 부제 화합물(a)의 트리에틸아민 염을 얻었다. 또한, 부제 화합물(b)의 트리에틸아민 염(1.47 g)을 얻었으며, 염을 H20(100 ㎖) 중에 용해시키고, 2 N HCl로 산성화시켰으며, EtOAc(2 x 75 ㎖)로 추출하였다. 합한 유기 추출물을 건조시키고(Na2SO4), 여과하였으며, 진공 농축시켜서 회백색 고형물로서 부제 화합물(b)(1.00 g)을 얻었다.
부제 화합물(b)에 대한 데이타:
mp: 103-106℃
Rf = 0.39(90:8:2 CHCl3:MeOH:Et3N)
1H NMR(300 MHz, CD3OD) δ7.13(s, 1H), 7.04(s, 1H), 6.97(s, 1H), 6.17(tt, J = 4 Hz, J = 55 Hz, 1H), 5.12(s, 1H), 4.24(dt, J = 4 Hz, J = 8 Hz, 2H).
13C NMR(75 MHz, CD3OD) δ175.5, 160.3, 144.5, 136.1, 121.3, 115.7, 115.3(t, J = 240 Hz), 112.9, 73.4, 68.6(t, J = 29 Hz)
HPLC 분석: 96.2%, > 95.0% ee, ChiralPak AD 컬럼(95:5:0.5 Hex:EtOH:TFA 이동상)
[a]25 D = -84.0(c = 0. 85 MeOH)
APCI-MS: (M-1) = 265 m/z
(vi) Ph(3-Cl)(5-OCH 2 CHF 2 )-(R)CH(OH)C(O)-Aze-Pab(Teoc)
질소 하에 DMF(18 ㎖) 중의 Ph(3-Cl)(5-OCH2CHF2)-(R)CH(OH)C(O)OH(0.35 g, 1.3 mmol; 상기 단계(v) 참조(화합물(b)))의 용액에 0℃에서 H-Aze-Pab(Teoc) x HCl(0.76 g, 1.7 mmol), PyBOP(0.75 g, 1.4 mmol) 및 DIPEA(0.43 g, 3.3 mmol)를 가하였다. 반응물을 0℃에서 2 시간 동안 교반한 다음, 실온에서 20 시간 동안 교반하였다. 혼합물을 진공 농축시키고, 잔류물을 먼저 CHCl3:EtOH(10:1)로 용출한 다음, EtOAc:EtOH(10:1)로 용출하면서 실리카 겔 상의 크로마토그래피를 2회 수행하여 압착 가능한 백색 폼으로서 부제 화합물(0.69 g, 84%)을 얻었다.
mp: 108-118℃
Rf = 0.48(10:1 CHCl3:EtOH)
1H NMR(300 MHz, CD3OD, 회전 이성질체의 착체 혼합물) δ7.78-7.81(m, 2H), 7.40-7.43(m, 2H), 7.09-7.12(m, 1H), 6.96-7.02(m, 2H), 6.16(t, J = 57 Hz, 1H), 5.09-5.20 및 4.75-4.80(m, 2H), 3.95-4.55(m, 8H), 2.10-2.75(m, 2H), 1.04-1.11(m, 2H), 0.07(s, 9H)
APCI-MS: (M+1) = 625 m/z
(vii) Ph(3-Cl)(5-OCH 2 CHF 2 )-(R)CH(OH)C(O)-Aze-Pab x TFA
Ph(3-Cl)(5-OCH2CHF2)-(R)CH(OH)C(O)-Aze-Pab(Teoc)(0.086 g, 0.138 mmol; 상기 단계(vi) 참조)를 TFA 3 ㎖ 중에 용해시키고, 1 시간 동안 반응시켰다. TFA를 증발시키고, 잔류물을 물/아세토니트릴로부터 냉동 건조시켜서 TFA 염으로서 표제 화합물 0.080 g(98%)을 얻었다.
1H-NMR(300 MHz; CD3OD) 회전 이성질체: δ7.8-7.7(m, 2H), 7.6-7.5(m, 2H), 7.15-6.95(m, 3H), 6.35-5.95(m, 1H), 5.20(m, 1H, 부 회전 이성질체), 5.14(s, 1H, 주 회전 이성질체), 5.10(s, 1H, 부 회전 이성질체), 4.80(m, 1H, 주 회전 이성질체), 4.6-4.0(m, 6H), 2.70(m, 1H, 부 회전 이성질체), 2.53(m, 1H, 주 회전 이성질체), 2.29(m, 1H, 주 회전 이성질체), 2.15(m, 1H, 부 회전 이성질체).
13C-NMR(100 MHz; CD3OD):(카르보닐 탄소 및/또는 아미딘 탄소, 회전 이성질체) δ174.0, 173.8, 173.4, 172.9, 168.2
MS(m/z) 481.2(M+1)+
실시예 18
Ph(3-Cl)(5-OCH 2 CHF 2 )-(R)CH(OH)C(O)-Aze-Pab(OMe)
질소 하에 DMF(15 ㎖) 중의 Ph(3-Cl)(5-OCH2CHF2)-(R)CH(OH)C(O)OH(0.30 g, 1.7 mmol; 상기 실시예 17(v) 참조(화합물(b))의 용액에 0℃에서 H-Aze-Pab(OMe) x 2HCl(0.49 g, 1.5 mmol), PyBOP(0.65 g, 1.2 mmol) 및 DIPEA(0.36 g, 2.8 mmol)를 가하였다. 반응물을 0℃에서 2 시간 동안 교반한 다음, 실온에서 20 시간 동안 교반하였다. 혼합물을 진공 농축시키고, 잔류물을 먼저 CHCl3:EtOH(10:1)로 용출한 다음, EtOAc:EtOH(10:1)로 용출하고, 최종적으로 CHCl3:MeOH(20:1)로 용출하면서 실리카 겔 상에서 크로마토그래피를 3회 수행하여 압착 가능한 폼으로서 표제 화합물(0.47 g, 81%)을 얻었다.
mp: 65-75℃
Rf = 0.37(10:1 CHCl3:EtOH)
1H NMR(300 MHz, CD3OD, 회전 이성질체의 착체 혼합물) δ7.58-7.60(m, 2H), 7.32-7.35(m, 2H), 7.09-7.12(m, 1H), 6.96-7.02(m, 2H), 6.16(t, J = 55 Hz, 1H), 5.08-5.18 및 4.74-4.80(m, 2H), 3.96-4.50(m, 6H), 3.80(s, 3H), 2.10-2.75(m, 2H)
APCI-MS: (M+1)= 511 m/z.
실시예 19
Ph(3-Cl)(5-OCH 2 F)-(R)CH(OH)C(O)-Aze-Pab x TFA
(i) Ph(3-Cl)(5-TMSO)-(R,S)CH(OTMS)CN
0℃에서 무수 CH2Cl2(500 ㎖) 중의 3-클로로-5-히드록시벤즈알데히드(9.8 g, 62.6 mmol; 상기 실시예 1(ii) 참조) 및 ZnI2(5.0 g, 15.7 mmol)의 용액에 트리메틸실릴 시아나이드(13.7 g, 138 mmol)를 가하였다. 반응 혼합물을 실온으로 가온하고, 밤새도록 교반하였다. 물(250 ㎖)을 가하고, 층 분리하였다. 수층을 CH2Cl2(2 x 300 ㎖)로 추출하였다. 합한 유기 추출물을 건조시키고(Na2SO4), 여과하였으며, 진공 농축시켜서 황색 오일로서 부제 화합물(16.9 g, 83%)을 얻고, 더 이상의 정제없이 사용하였다.
Rf = 0.42(3:1 Hex:EtOAc)
1H NMR(300 MHz, CDCl3) δ7.06(s, 1H), 6.86(s, 2H), 5.40(s, 1H), 0.30(s, 9H), 0.24(s, 9H).
(ii) Ph(3-Cl)(5-OH)-(R,S)CH(OH)C(O)OH
진한 HCl(200 ㎖) 중의 Ph(3-Cl)(5-OTMS)-(R,S)CH(OTMS)CN(22.6 g, 68.8 mmol; 상기 단계(i) 참조)의 용액을 질소 하에 3 시간 동안 환류시켰다. 반응물을 0℃로 냉각시키고, 2 N NaOH로 서서히 염기화하였다. 혼합물을 Et2O(3 x 100 ㎖)로 세척하여 유기 불순물을 제거하였다. 수층을 2 N HCl로 산성화하고, EtOAc(3 x 200 ㎖)로 추출하였다. 합한 유기 추출물을 건조시키고(Na2SO4), 여과하였으며, 진공 농축시켜서 갈색 오일로서 부제 화합물(9.3 g, 67%)을 얻고, 더 이상의 정제없이 사용하였다.
Rf = 0.23(6:3:1 CHCl3:MeOH:진한 NH4OH)
1H NMR(300 MHz, CD3OD) δ7.05(s, 1H), 6.94(s, 1H), 6.73(s, 1H), 5.03(s, 1H).
(iii) Ph(3-Cl)(5-OH)-(R,S)CH(OH)C(O)OEt
무수 EtOH(200 ㎖) 중의 Ph(3-Cl)(5-OH)-(R,S)CH(OH)C(O)OH(9.3 g, 46.0 mmol; 상기 단계(ii) 참조)의 용액에 진한 황산(0.25 ㎖)을 가하고, 반응물을 질소 하에 4 시간 동안 환류시켰다. 반응물을 0℃로 냉각시키고, 고형 NaHCO3(0.2 g)를 가하였다. 반응물을 진공 농축시키고, 포화 NaHCO3(100 ㎖) 및 Et2O(3 x 50 ㎖)로 분배하였다. 합한 유기 추출물을 건조시키고(Na2SO4), 여과하였으며, 진공 농축시켜서 황색 오일로서 부제 화합물(6.9 g, 65%)을 얻고, 더 이상의 정제없이 사용하였다.
Rf = 0.62(6:3:1 CHCl3:MeOH:진한 NH4OH).
1H NMR(300 MHz, CDCl3) δ6.99(s, 1H), 6.81(s, 2H), 5.07(s, 1H), 4.16-4.32(m, 2H), 1.23(t, J = 7 Hz, 3H).
(iv) Ph(3-Cl)(5-OCH 2 F)-(R,S)CH(OH)C(O)OEt
질소 하에 0℃의 밀봉된 플라스크 내에서 DMF(100 ㎖) 중의 Ph(3-Cl)(5-OH)-(R,S)CH(OH)C(O)OEt(6.1 g, 26.8 mmol; 상기 단계(iii) 참조)의 용액에 탄산세슘(13.1 g, 40.2 mmol)을 가하였다. 반응 혼합물을 0℃에서 15 분 동안 교반한 후, 요오드화칼륨(0.5 g, 2.7 mmol)을 가하였다. 반응물을 -78℃로 냉각시키고, 클로로플루오로메탄(18.4 g, 268 mmol)을 용기로 기포화하였다. 그 다음, 밀봉된 플라스크를 실온으로 가온하고, 18 시간 동안 교반하였다. 반응 혼합물을 0℃로 냉각시키고, 신중하게 배기하여 임의의 과량의 클로로플루오로메탄을 제거하였으며, H2O(20 ㎖) 및 Et2O(3 x 50 ㎖)로 분배하였다. 합한 유기물을 염수(2 x 50 ㎖)로 세척하고, 건조시켰으며(Na2SO4), 여과하고, 진공 농축시켰다. Hex:EtOAc(9:1로부터 3:1로의 구배)로 용출하면서 실리카 겔 상의 플래쉬 크로마토그래피에 의해 담황색 오일로서 부제 화합물(2.4 g, 35%)을 얻었다.
주: 화합물은 TLC에 대하여 약간 uv-가시성이다. 이것은 브로모크레솔 그린으로 TLC를 염색함으로써 가시화될 수 있다.
Rf = 0.46(2:1 Hex:EtOAc)
1H NMR(300 MHz, CDCl3) δ7.21(s, 1H), 7.08(s, 1H), 7.05(s, 1H), 5.70(d, JH-F = 54 Hz, 2H), 5.12(d, J = 5 Hz, 1H), 3.80-4.35(m, 2H), 3.50(d, J = 5 Hz, 1H), 1.26(t, J= 7 Hz, 3H).
(v) Ph(3-Cl)(5-OCH 2 F)-(R,S)CH(OH)C(O)OH
0℃에서 질소 하에 H20:THF(30 ㎖, 1:2) 중의 Ph(3-Cl)(5-OCH2F)-(R,S)CH(OH)C(O)OEt(1.8 g, 6.8 mmol; 상기 단계(iv) 참조)의 용액에 수산화리튬 일수화물(0.40 g, 10.3 mmol)을 가하였다. 혼합물을 0℃에서 2 시간 동안 교반하였다. 반응 혼합물을 진공 농축시키고, H2O(5 ㎖) 및 Et2O(2 x 20 ㎖)로 분배하였다. 수층을 0℃에서 0.2 N HCl로 신중하게 산성화하고, EtOAc(3 x 30 ㎖)로 추출하였다. 합한 유기물을 건조시키고(Na2SO4), 여과하였으며, 진공 농축시켜서 무색 오일로서 부제 화합물(1.4 g, 87%)을 얻었으며, 방치시 백색 고형물로 고화되었다.
Rf = 0.43(6:2:1 CHCl3:MeOH:Et3N)
1H NMR(300 MHz, CD3OD) δ7.24(s, 1H), 7.17(s, 1H), 7.07(s, 1H), 5.78(d, JH-F = 54 Hz, 2H), 5.13(s, 1H).
(vi) Ph(3-Cl)(5-OCH 2 F)-(R)CH(OH)C(O)OH(a) 및 Ph(3-Cl)(5-OCH 2 F)-(S)CH(OAC)C(O)OH(b)
비닐 아세테이트(150 ㎖) 및 MTBE(150 ㎖) 중의 Ph(3-Cl)(5-OCH2F)-(R,S)CH(OH)C(O)OH(3.2 g, 13.9 mmol; 상기 단계(v) 참조) 및 리파제 PS "아마노"(1.9 g)의 혼합물을 질소 분위기 하에 3 일 동안 70℃로 가열하였다. 반응 혼합물을 냉각시키고, 셀라이트(등록 상표)를 통하여 여과하였으며, 여과 케이크를 EtOAc로 세척하였다. 여액을 진공 농축시키고, CHCl3:MeOH:Et3N(15:1:0.5)로 용출하면서 실리카 겔 상의 플래쉬 크로마토그래피를 행하여 부제 화합물(a)의 트리에틸아민 염(0.50 g, 21%)을 얻고, 중화시키지 않고 사용하였다. 또한, 부제 화합물(b)의 트리에틸아민 염(0.46 g, 20%)을 얻었다.
부제 화합물(a)에 대한 데이타:
Rf = 0.19(15:1:0.5 CHCl3:MeOH:Et3N)
1H NMR(300 MHz, CD3OD) δ7.26(s, 1H), 7.18(s, 1H), 6.97(s, 1H), 5.74(d, JH-F = 54 Hz, 2H), 4.81(s, 1H), 3.17(q, J = 7 Hz, 6H), 1.28(t, J= 7 Hz, 9H).
부제 화합물(b)에 대한 데이타:
Rf = 0.33(15:1:0.5 CHCl3:MeOH:Et3N)
1H NMR(300 MHz, CD3OD) δ7.28(s, 1H), 7.19(s, 1H), 7.09(s, 1H), 5.76(d, JH-F = 54 Hz, 2H), 5.75(s, 1H), 3.17(q, J = 7 Hz, 6H), 2.16(s, 3H), 1.28(t, J = 7 Hz, 9H).
(vii) Ph(3-Cl)(5-OCH 2 F(R)CH(OH)C(O)-Aze-Pab(Teoc)
질소 하에 0℃에서 무수 DMF(15 ㎖) 중의 Ph(3-Cl)(5-OCH2F)-(R)CH(OH)C(O)OH(0.50 g, 1.50 mmol; 상기 단계(vi) 참조)의 트리에틸아민 염 및 HAze-Pab(Teoc)-HCl(0.87 g, 1.90 mmol)의 용액에 PyBOP(0.85 g, 2.60 mmol) 및 DIPEA(0.48 g, 3.70 mmol)를 가하였다. 반응물을 실온으로 가온하고, 밤새도록 교반하였다. 반응 혼합물을 진공 농축시키고, 먼저 CHCl3:EtOH(9:1)로 용출한 다음, EtOAc:EtOH(20:1)로 용출하면서 실리카 겔 상의 플래쉬 크로마토그래피를 2회 수행하여 압착 가능한 백색 폼으로서 부제 화합물(0.23 g, 26%)을 얻었다.
Mp: 88-92℃
Rf = 0. 61(9:1 CHCl3:EtOH)
1H NMR(300 MHz, CD3OD, 회전 이성질체의 착체 혼합물) δ7.81(d, J = 8 Hz, 2H); 7.40-7.42(m, 2H), 7.06-7.23(m, 3H), 5.76(d, JH-F = 51 Hz, 2H), 5.10-5.16 및 4.77-4.83(m, 2H), 3.80-4.49(m, 6H), 2.30-2.53(m, 2H), 1.08(t, J = 7 Hz, 2H), 0.08(s, 9H).
APCI-MS (M+1) = 593 m/z
(viii) Ph(3-Cl)(5-OCH 2 F)-(R)CH(OH)C(O)-Aze-Pab x TFA
Ph(3-Cl)(5-OCH2F)-(R)CH(OH)C(O)-Aze-Pab(Teoc)(0.051 g, 0.086 mmol; 상기 단계(vii) 참조)를 TFA 3 ㎖ 중에 용해시키고, 20 분 동안 반응시켰다. TFA를 증발시키고, 잔류물을 물/아세토니트릴로부터 냉동 건조시켰다. 생성물은 95% 순도였는데, 5%는 탈플루오로메틸화 물질이었다. CH3CN:0.1 M NH40Ac로 조제용 RPLC에 의해 그것을 정제하려는 시도는 실패하였으며, 부분적으로 아세테이트인 물질을 TFA 5 ㎖ 중에 용해시키고, 증발시켰으며, 냉동 건조시켜서 TFA 염으로서 표제 화합물 26 mg(51%)을 얻었다. 순도: 95%.
1H-NMR(600 MHz; CD3OD) 회전 이성질체: δ7.8-7.7(m, 2H), 7.6-7.5(m, 2H), 7.21(s, 1H, 주 회전 이성질체), 7.17(s, 1H, 부 회전 이성질체), 7.13(s, 1H, 주 회전 이성질체), 7.09(s, 1H, 부 회전 이성질체), 7.07(m, 1H, 주 회전 이성질체), 7.04(m, 1H, 부 회전 이성질체), 5.73(d, 2H), 5.18(m, 1H, 부 회전 이성질체), 5.16(s, 1H, 주 회전 이성질체), 5.09(s, 1H, 부 회전 이성질체), 4.78(m, 1H, 부 회전 이성질체), 4.56(d, 1H, 주 회전 이성질체), 4.50(d, 1H, 부 회전 이성질체), 4.46(d, 1H, 부 회전 이성질체), 4.45(d, 1H, 주 회전 이성질체), 4.35(m, 1H, 주 회전 이성질체), 4.14(m, 1H, 주 회전 이성질체), 4.05(m, 1H, 부 회전 이성질체), 3.97(m, 1H, 부 회전 이성질체), 2.68(m, 1H, 부 회전 이성질체), 2.52(m, 1H, 주 회전 이성질체), 2.28(m, 1H, 주 회전 이성질체), 2.19(m, 1H, 부 회전 이성질체).
13C-NMR(150 MHz; CD3OD):(카르보닐 탄소 및/또는 아미딘 탄소, 회전 이성질체) δ173.9, 173.3, 172.9, 168.2
ESI-MS+: (M+1) = 449(m/z)
실시예 20
Ph(3-Cl)(5-OCH 2 F)-(R)CH(OH)C(O)-Aze-Pab(OMe)
질소 하에 0℃에서 DMF(15 ㎖) 중의 Ph(3-Cl)(5-OCH2F)-(R)CH(OH)C(O)OH(0.60 g, 1.80 mmol; 상기 실시예 19(vi)) 및 HAze-Pab(OMe)·2HCl(0.79 g, 2.30 mmol)의 트리에틸아민 염의 용액에 PyBOP(1.04 g, 1.90 mmol) 및 DIPEA(0.58 g, 4.50 mmol)를 가하였다. 반응물을 실온으로 가온하고, 밤새도록 교반하였다. 반응 혼합물을 진공 농축시키고, 먼저 CHCl3:EtOH(9:1)로 용출한 다음, EtOAc:EtOH(20:1)로 2회 용출하면서 실리카 겔 상의 플래쉬 크로마토그래피를 행하여 압착 가능한 백색 폼으로서 표제 화합물(0.22 g, 26%)을 얻었다.
Mp: 66-70℃
Rf = 0.45(9:1 CHCl3:EtOH)
1H NMR(300 MHz, CD3OD, 회전 이성질체의 착체 혼합물) δ7.59(d, J = 8 Hz, 2H), 7.32(d, J = 7 Hz, 2H), 7.06-7.23(m, 3H), 5.75(s, JH-F = 54 Hz, 1H), 5.10-5.16 및 4.78-4.84(m, 2H), 4.11-4.45(m, 4H), 3.80(s, 3H), 2.10-2.75(m, 2H).
13C-NMR(150 MHz; CD3OD):(카르보닐 탄소 및/또는 아미딘 탄소, 회전 이성질체) δ173.0, 170.8, 170.7, 152.5
APCI-MS: (M+1) = 479 m/z
실시예 21
Ph(3-Cl)(5-OCH 2 CH 2 F)-(R)CH(OH)C(O)-Aze-Pab x TFA
(i)(2-모노플루오로에틸)메탄술포네이트
질소 하에 0℃에서 CH2Cl2(90 ㎖) 중의 2-플루오로에탄올(5.0 g, 78.0 mmol)의 자기 교반 용액에 트리에틸아민(23.7 g, 234 mmol) 및 메탄술포닐 클로라이드(10.7 g, 93.7 mmol)를 가하였다. 혼합물을 0℃에서 1.5 시간 동안 교반하고, CH2Cl2(100 ㎖)로 희석하였으며, 2 N HCl(100 ㎖)로 세척하였다. 수층을 CH2Cl2(50 ㎖)로 추출하고, 합한 유기 추출물을 염수(75 ㎖)로 세척하였으며, 건조시키고(Na2SO4), 여과하였으며, 진공 농축시켜서 황색 오일로서 부제 화합물(9.7 g, 88%)을 얻고, 더 이상의 정제없이 사용하였다.
1H NMR(300 MHz, CDCl3) δ4.76(t, J = 4 Hz, 1H), 4.64(t, J = 4 Hz, 1H), 4.52(t, J = 4 Hz, 1H), 4.43(t, J= 4 Hz, 1H), 3.09(s, 3H).
(ii) 3-클로로-5-모노플루오로에톡시벤즈알데히드
질소 하에 DMF(10 ㎖) 중의 3-클로로-5-히드록시벤즈알데히드(8.2 g, 52.5 mmol, 상기 실시예 1(ii) 참조) 및 탄산칼륨(9.4 g, 68.2 mmol)의 용액에 실온에서 DMF(120 ㎖) 중의 (2-모노플루오로에틸)메탄술포네이트(9.7 g, 68.2 mmol; 상기 단계(i) 참조)의 용액을 적가하였다. 혼합물을 100℃에서 5 시간 동안 가열한 다음, 실온에서 밤새도록 교반하였다. 반응물을 0℃로 냉각시키고, 빙냉 2 N HCl에 부었으며, EtOAc로 추출하였다. 합한 유기 추출물을 염수로 세척하고, 건조시켰으며(Na2SO4), 여과하고, 진공 농축시켰다. 갈색 오일을 Hex:EtOAc(4:1)로 용출하면서 실리카 겔 상의 크로마토그래피를 행하여 황색 오일로서 부제 화합물(7.6 g, 71 %)을 얻었다.
1H NMR(300 MHz, CDCl3) δ9.92(s, 1H), 7.48(s, 1H), 7.32(s, 1H), 7.21(s, 1H), 4.87(t, J= 4 Hz, 1H), 4.71(t, J = 3 Hz, 1H), 4.33(t, J= 3 Hz, 1H), 4.24(t, J = 3 Hz, 1H).
(iii) Ph(3-Cl)(5-OCH 2 CH 2 F)-(R,S)CH(OTMS)CN
CH2Cl2(310 ㎖) 중의 3-클로로-5-모노플루오로에톡시벤즈알데히드(7.6 g, 37.5 mmol; 상기 단계(ii) 참조) 및 요오드화아연(3.0 g, 9.38 mmol)의 용액에 0℃에서 질소 하에 트리메틸실릴 시아나이드(7.4 g, 75.0 mmol)를 적가하였다. 혼합물을 0℃에서 3 시간 동안 교반하고, 실온에서 밤새도록 교반하였다. 반응물을 H2O(300 ㎖)로 희석시키고, 유기층을 분리하였으며, 건조시키고(Na2SO4), 여과하였으며, 진공 농축시켜서 갈색 오일로서 부제 화합물(10.6 g, 94%)을 얻고, 더 이상의 정제 또는 특징화없이 사용하였다.
(iv) Ph(3-Cl)(5-OCH 2 CH 2 F)-(R,S)CH(OH)C(O)OH
진한 염산(100 ㎖)을 Ph(3-Cl)(5-OCH2CH2F)-(R,S)CH(OTMS)CN(10.6 g, 5.8 mmol; 상기 단계(iii) 참조)에 가하고, 용액을 100℃에서 3 시간 동안 교반하였다. 실온으로 냉각시킨 후, 반응물을 0℃로 더 냉각시키고, 3 N NaOH(∼300 ㎖)로 서서히 염기화하였으며, Et2O(3 x 200 ㎖)로 세척하였다. 수층을 2 N HCl(80 ㎖)로 산성화하고, EtOAc(3 x 300 ㎖)로 추출하였다. 합한 EtOAc 추출물을 건조시키고(Na2SO4), 여과하였으며, 진공 농축시켜서 담황색 고형물로서 부제 화합물(8.6 g, 98%)을 얻고, 더 이상의 정제없이 사용하였다.
Rf = 0.28(90:8:2 CHCl3:MeOH:진한 NH4OH)
1H NMR(300 MHz, CD3OD) δ7.09(s, 1H), 7.02(s, 1H), 6.93(s, 1H), 5.11(s, 1H), 4.77-4.81(m, 1H), 4.62-4.65(m, 1H), 4.25-4.28(m, 1H), 4.15-4.18(m, 1H).
(v) Ph(3-Cl)(5-OCH 2 CH 2 F)-(S)CH(OAc)C(O)OH(a) 및 Ph(3-Cl)(5-OCH 2 CH 2 F)-(R)CH(OH)C(O)OH(b)
비닐 아세테이트(250 ㎖) 및 MTBE(250 ㎖) 중의 Ph(3-Cl)(5-OCH2CH2F)-(R,S)CH(OH)C(O)OH(8.6 g, 34.5 mmol; 상기 단계(iv) 참조) 및 리파제 PS "아마노"(4.0 g)의 용액을 질소 하에 3 일 동안 70℃로 가열하였다. 반응물을 실온으로 냉각시키고, 효소를 셀라이트(등록 상표)를 통하여 여과하였다. 여과 케이크를 EtOAc로 세척하고, 여액을 진공 농축시켰다. CHCl3:MeOH:Et3N(90:8:2)로 용출하면서 실리카 겔 상의 크로마토그래피에 의해 황색 오일로서 부제 화합물(a)의 트리에틸아민 염을 얻었다. 또한, 부제 화합물(b)의 트리에틸아민 염(4.0 g)을 얻었다. 부제 화합물(b)의 염을 H2O(250 ㎖) 중에 용해시키고, 2 N HCl로 산성화시켰으며, EtOAc(3 x 200 ㎖)로 추출하였다. 합한 유기 추출물을 건조시키고(Na2S04), 여과하였으며, 진공 농축시켜서 황색 오일로서 부제 화합물(b)(2.8 g, 32%)을 얻었다.
부제 화합물(b)에 대한 데이타:
Rf = 0.28(90:8:2 CHCl3:MeOH:진한 NH4OH)
1H NMR(300 MHz, CD3OD) δ7.09(s, 1H), 7.02(s, 1H), 6.93(s, 1H), 5.11(s, 1H), 4.77-4.81(m, 1H), 4.62-4.65(m, 1H), 4.25-4.28(m, 1H), 4.15-4.18(m, 1H).
(vi) Ph(3-Cl)(5-OCH 2 CH 2 F)-(R)CH(OH)C(O)-Aze-Pab(Teoc)
질소 하에 0℃에서 DMF(30 ㎖) 중의 Ph(3-Cl)(5-OCH2CH2F)-(R)CH(OH)C(O)OH(940 mg, 3.78 mmol; 상기 단계(v) 참조)의 용액에 HAze-Pab(Teoc)·HCl(2.21 g, 4.91 mmol), PyBOP(2.16 g, 4.15 mmol) 및 DIPEA(1.22 g, 9.45 mmol)를 가하였다. 반응물을 0℃에서 2 시간 동안 교반한 다음, 실온에서 4 시간 동안 교반하였다. 혼합물을 진공 농축시키고, 잔류물을 먼저 CHCl3:EtOH(15:1)로 용출한 다음, EtOAc:EtOH(20:1)로 용출하면서 실리카 겔 상의 크로마토그래피를 2회 수행하여 압착 가능한 백색 폼으로서 부제 화합물(450 mg, 20%)을 얻었다.
Mp: 80-88℃
Rf = 0.60(10:1 CHCl3:EtOH)
1H NMR(300 MHz, CD3OD, 회전 이성질체의 착체 혼합물) δ7.79(d, J = 8 Hz, 2H), 7.42(d, J = 8 Hz, 2H), 7.05-7.08(m, 1H), 6.93-6.99(m, 2H), 5.08-5.13(m, 1H), 4.75-4.80(m, 2H), 4.60-4.68(m, 1H), 3.95-4.55(m, 8H), 2.10-2.75(m, 2H), 1.05-1.11(m, 2H), 0.08(s, 9H).
APCI-MS: (M+1) = 607 m/z.
(vii) Ph(3-Cl)(5-OCH 2 CH 2 F)-(R)CH(OH)C(O)-Aze-Pab x TFA
Ph(3-Cl)(5-OCH2CH2F)-(R)CH(OH)C(O)-Aze-Pab(Teoc)(0.357 g, 0.589 mmol; 상기 단계(vi) 참조)를 TFA 10 ㎖ 중에 용해시키고, 40 분 동안 반응시켰다. TFA를 증발시키고, 잔류물을 물/아세토니트릴로부터 냉동 건조시켜서 TFA 염으로서 표제 화합물 0.33 g(93%)을 얻었다.
1H-NMR(600 MHz; CD3OD) 회전 이성질체: δ7.8-7.7(m, 2H), 7.54(d, 2H), 7.08(s, 1H, 주 회전 이성질체), 7.04(s, 1H, 부 회전 이성질체), 6.99(s, 1H, 주 회전 이성질체), 6.95(s, 1H), 6.92(s, 1H, 부 회전 이성질체), 5.18(m, 1H, 부 회전 이성질체), 5.14(s, 1H, 주 회전 이성질체), 5.08(s, 1H, 부 회전 이성질체), 4.80(m, 1H, 주 회전 이성질체), 4.73(m, 1H), 4.65(m, 1H), 4.6-4.4(m, 2H), 4.35(m, 1H, 주 회전 이성질체), 4.21(다중선의 이중선; 2H), 4.12(m, 1H, 주 회전 이성질체), 4.06(m, 1H, 부 회전 이성질체), 3.99(m, 1H, 부 회전 이성질체), 2.69(m, 1H, 부 회전 이성질체), 2.53(m, 1H, 주 회전 이성질체), 2.29(m, 1H, 주 회전 이성질체), 2.14(m, 1H, 부 회전 이성질체).
13C-NMR(150 MHz; CD3OD):(카르보닐 탄소 및/또는 아미딘 탄소) δ172.8, 172.1, 167.4
ESI-MS+: (M+1) = 463(m/z)
실시예 22
Ph(3-Cl)(5-OCH 2 CH 2 F)-(R)CH(OH)C(O)-Aze-Pab(OMe)
질소 하에 0℃에서 DMF(30 ㎖) 중의 Ph(3-Cl)(5-OCH2CH2F)-(R)CH(OH)C(O)OH(818 mg, 3.29 mmol; 상기 실시예 21(v) 참조)의 용액에 HAze-Pab(OMe)·2HCl(1.43 g, 4.27 mmol), PyBOP(1.89 g, 3.68 mmol) 및 DIPEA(1.06 g, 8.23 mmol)를 가하였다. 반응물을 0℃에서 2 시간 동안 교반한 다음, 실온에서 밤새도록 교반하였다. 혼합물을 진공 농축시키고, 잔류물을 먼저 CHCl3:EtOH(15:1)로 용출한 다음, EtOAc:EtOH(20:1)로 용출하면서 실리카 겔 상의 크로마토그래피를 2회 행하여 압착 가능한 백색 폼으로서 표제 화합물(880 mg, 54%)을 얻었다.
Mp: 65-72℃
Rf = 0.60(10:1 CHCl3:EtOH)
1H NMR(300 MHz, CD3OD, 회전 이성질체의 착체 혼합물) δ7.58-7.60(d, J = 8 Hz, 2H), 7.34(d, J = 7 Hz, 2H), 7.05-7.08(m, 2H), 6.95-6.99(m, 1H), 5.08-5.13(m, 1H), 4.77-4.82(m, 1H), 4.60-4.68(m, 1H), 3.99-4.51(m, 7H), 3.82(s, 3H), 2.10-2.75(m, 2H).
13C-NMR(150 MHz; CD3OD):(카르보닐 탄소 및/또는 아미딘 탄소) δ173.3, 170.8, 152.5
APCI-MS: (M+1) = 493 m/z.
실시예 23
Ph(3-Cl)(5-OCH(CH 2 F) 2 )-(R)CH(OH)C(O)-Aze-Pab x TFA
(i) 1,3-디플루오로이소프로필 메탄술포네이트
질소 하에 0℃에서 CH2Cl2(100 ㎖) 중의 1,3-디플루오로-2-프로판올(7.0 g, 72.8 mmol)의 자기 교반 용액에 트리에틸아민(22.1 g, 219 mmol) 및 메탄술포닐 클로라이드(10.0 g, 87.4 mmol)를 가하였다. 혼합물을 0℃에서 3 시간 동안 교반하였다. 혼합물을 2 N HCl(150 ㎖)로 세척하고, 층 분리하였다. 수층을 CH2Cl2(200 ㎖)로 추출하고, 합한 유기 추출물을 염수(100 ㎖)로 세척하였으며, 건조시키고(Na2SO4), 여과하였으며, 진공 농축시켜서 황색 오일로서 부제 화합물(11.5 g, 91%)을 얻고, 더 이상의 정제없이 사용하였다.
1H NMR(300 MHz, CDCl3) δ4.97-5.08(m, 1H), 4.75-4.77(m, 2H), 4.59-4.61(m, 2H), 3.12(s, 3H).
( ii ) Ph (3- Cl )(5- OCH ( CH 2 F ) 2 )CHO
질소 하에 DMF(75 ㎖) 중의 3-클로로-5-히드록시벤즈알데히드(8.0 g, 50.7 mmol; 상기 실시예 1(ii) 참조) 및 탄산칼륨(9.1 g, 66.0 mmol)의 용액에 실온에서 DMF(75 ㎖) 중의 1,3-디플루오로이소프로필메탄술포네이트(11.5 g, 66.0 mmol; 상기 단계(i) 참조)의 용액을 적가하였다. 혼합물을 110℃에서 18 시간 동안 가열하였다. 반응물을 0℃로 냉각시키고, 빙냉 2 N HCl(200 ㎖)에 부었으며, EtOAc(3 x 250 ㎖)로 추출하였다. 합한 유기 추출물을 건조시키고(Na2SO4), 여과하였으며, 진공 농축시켰다. 갈색 오일을 Hex:EtOAc(4:1)로 용출하면서 실리카 겔 상의 크로마토그래피를 수행하여 황색 오일로서 부제 화합물(4.4 g, 37%)을 얻었다.
1H NMR(300 MHz, CDCl3) δ9.92(s, 1H), 7.51(s, 1H), 7.36(s, 1H), 7.26(s, 1H), 4.70-4.89(m, 3H), 4.63-4.68(m, 2H).
(iii) Ph(3-Cl)(5-OCH(CH 2 F) 2 )-(R,S)CH(OTMS)CN
0℃에서 질소 하에 CH2Cl2(200 ㎖) 중의 Ph(3-Cl)(5-OCH(CH2F)2)CHO(4.4 g, 18.7 mmol; 상기 단계(ii) 참조) 및 요오드화아연(1.5 g, 4.67 mmol)의 용액에 트리메틸실릴 시아나이드(3.7 g, 37.3 mmol)를 적가하였다. 혼합물을 0℃에서 3 시간 동안 교반하고, 실온에서 밤새도록 교반한 다음, H2O(200 ㎖)로 희석시켰다. 유기층을 분리하고, 건조시켰으며(Na2SO4), 여과하고, 진공 농축시켜서 갈색 오일로서 부제 화합물(5.5 g, 87%)을 얻고, 더 이상의 정제없이 사용하였다.
1H NMR(300 MHz, CDCl3) δ7.12(s, 1H), 7.00(s, 2H), 5.42(s, 1H), 4.70-4.80(m, 3H), 4.59-4.64(m, 2H), 0.26(s, 9H).
(iv) Ph(3-Cl)(5-OCH(CH 2 F) 2 )-(R,S)CH(OH)C(O)OH
진한 염산(50 ㎖)을 Ph(3-Cl)(5-OCH(CH2F)2)-(R,S)CH(OTMS)CN(5.5 g, 16.3 mmol; 상기 단계(iii) 참조)에 가하고, 용액을 100℃에서 1.5 시간 동안 교반하였다. 실온으로 냉각시킨 후, 반응물을 0℃로 더 냉각시키고, 3 N NaOH(∼200 ㎖)로 서서히 염기화하였으며, Et2O(3 x 200 ㎖)로 세척하였다. 수층을 2 N HCl(75 ㎖)로 산성화하였으며, EtOAc(3 x 200 ㎖)로 추출하였다. 합한 EtOAc 추출물을 건조시키고(Na2SO4), 여과하였으며, 진공 농축시켜서 갈색 오일로서 부제 화합물(4.6 g, 100%)을 얻고, 더 이상의 정제없이 사용하였다.
1H NMR(300 MHz, CD3OD) δ7.14(s, 1H), 7.08(s, 1H), 7.02(s, 1H), 5.12(s, 1H), 4.70-4.90(m, 3H), 4.52-4.67(m, 2H).
(v) Ph(3-Cl)(5-OCH(CH 2 F) 2 )-(S)CH(OAc)C(O)OH(a) 및 Ph(3-Cl)(5-OCH(CH 2 F 2 )-(R)CH(OH)C(O)OH(b)
비닐 아세테이트(150 ㎖) 및 MTBE(150 ㎖) 중의 Ph(3-Cl)(5-OCH(CH2F)2)-(R,S)CH(OH)C(O)OH(4.6 g, 16.4 mmol; 상기 단계(iv) 참조) 및 리파제 PS "아마노"(3.0 g)의 용액을 질소 하에 2.5 일 동안 가열하였다. 반응물을 실온에서 냉각시키고, 효소를 셀라이트(등록 상표)를 통하여 여과함으로써 제거하였다. 여과 케이크를 EtOAc로 세척하고, 여액을 진공 농축시켰다. CHCl3:MeOH:Et3N(90:8:2)로 용출하면서 실리카 겔 상의 크로마토그래피에 의해 황색 오일로서 부제 화합물(a)의 트리에틸아민 염을 얻었다. 또한, 부제 화합물(b)의 트리에틸아민 염(2.2 g)을 얻었으며, 그 염을 H2O(100 ㎖) 중에 용해시키고, 2 N HCl로 산성화하였으며, EtOAc(3 x 200 ㎖)로 추출하였다. 합한 유기 추출물을 건조시키고(Na2SO4), 여과하였으며, 진공 농축시켜서 황색 오일로서 부제 화합물(b)(1.4 g, 29%)을 얻었다.
부제 화합물(b)에 대한 데이타:
1H NMR(300 MHz, CD3OD) δ7.14(s, 1H), 7.08(s, 1H), 7.02(s, 1H), 5.12(s, 1H), 4.70-4.90(m, 3H), 4.52-4.67(m, 2H).
(vi) Ph(3-Cl)(5-OCH(CH 2 F) 2 )-(R)CH(OH)C(O)-Aze-Pab(Teoc)
질소 하에 0℃에서 DMF(30 ㎖) 중의 Ph(3-Cl)(5-OCH(CH2F)2)-(R)CH(OH)C(O)OH(824 mg, 2.94 mmol; 상기 단계(v) 참조)의 용액에 HAze-Pab(Teoc)-HCl(1.71 g, 3.81 mmol), PyBOP(1.68 g, 3.23 mmol) 및 DIPEA(949 mg, 7.34 mmol)를 가하였다. 반응물을 0℃에서 2 시간 동안 교반한 다음, 실온에서 밤새도록 교반하였다. 혼합물을 진공 농축시키고, 잔류물을 먼저 CHCl3:EtOH(15:1)로 용출한 다음, EtOAc:EtOH(20:1)로 용출하면서 실리카 겔 상의 크로마토그래피를 2회 행하여 압착 가능한 백색 폼으로서 부제 화합물(720 mg, 38%)을 얻었다.
Mp: 78-84℃
Rf = 0.62(10:1 CHCl3:EtOH)
1H NMR(300 MHz, CD3OD, 회전 이성질체의 착체 혼합물) δ7.79(d, J = 8 Hz, 2H), 7.42(d, J = 8 Hz, 2H), 7.00-7.12(m, 3H), 5.08-5.20(m, 1H), 3.97-4.80(m, 12H), 2.10-2.75(m, 2H), 1.05-1.11(m, 2H), 0.08(s, 9H).
APCI-MS: (M+1) = 639 m/z.
(vii) Ph(3-Cl)(5-OCH(CH 2 F) 2 )-(R)CH(OH)C(O)-Aze-Pab x TFA
Ph(3-Cl)(5-OCH(CH2F)2)-(R)CH(OH)C(O)-Aze-Pab(Teoc)(0.129 g, 0.202 mmol; 상기 단계(vi) 참조)를 TFA 3 ㎖ 중에 용해시키고, 20 분 동안 반응시켰다. TFA를 증발시키고, 잔류물을 물/아세토니트릴로부터 냉동 건조시켜서 TFA 염으로서 표제 화합물 0.123 g(100%)을 얻었다.
1H-NMR(400 MHz; CD3OD) 회전 이성질체: δ 7.8-7.7(m, 2H), 7.55(d, 2H), 7.2-7.0(m, 3H), 5.18(m, 1H, 부 회전 이성질체), 5.15(s, 1H, 주 회전 이성질체), 5.08(s, 1H, 부 회전 이성질체), 4.80(m, 1H, 주 회전 이성질체, CD3OH 피크에 의해 부분적으로 모호함), 4.75-4.4(m, 7H), 4.38(m, 1H, 주 회전 이성질체), 4.15(m, 1H, 주 회전 이성질체), 4.1-3.9(m, 2H, 부 회전 이성질체로부터의 2 시그널), 2.70(m, 1H, 부 회전 이성질체), 2.53(m, 1H, 주 회전 이성질체), 2.30(m, 1H, 주 회전 이성질체), 2.15(m, 1H, 부 회전 이성질체).
13C-NMR(100 MHz; CD3OD):(카르보닐 탄소 및/또는 아미딘 탄소, 회전 이성질체) δ172.9, 172.6, 172.2, 171.7, 167.1
ESI-MS+: (M+1) = 495(m/z) ·
실시예 24
Ph(3-Cl)(5-OCH(CH 2 F) 2 )-(R)CH(OH)C(O)-Aze-Pab(OMe)
질소 하에 0℃에서 DMF(30 ㎖) 중의 Ph(3-Cl)(5-OCH(CH2F)2)-(R)CH(OH)C(O)OH(513 mg, 1.83 mmol; 상기 실시예 23(v) 참조)의 용액에 HAze-Pab(OMe)·2HCl(797 mg, 2.38 mmol), PyBOP(1.04 g, 2.01 mmol) 및 DIPEA(591 mg, 4.57 mmol)를 가하였다. 반응물을 0℃에서 2 시간 동안 교반한 다음, 실온에서 밤새도록 교반하였다. 혼합물을 진공 농축시키고, 잔류물을 먼저 CHCl3:EtOH(15:1)로 용출한 다음, EtOAc:EtOH(20:1)로 용출하면서 실리카 겔 상의 크로마토그래피를 2회 수행하여 압착 가능한 백색 폼으로 표제 화합물(370 mg, 39%)을 얻었다.
Mp: 58-63℃
Rf = 0.66(10:1 CHCl3:EtOH)
1H NMR(300 MHz, CD3OD, 회전 이성질체의 착체 혼합물) δ7.58-7.60(d, J = 8 Hz, 2H), 7.34(d, J = 8 Hz, 2H), 7.00-7.12(m, 3H), 5.08-5.20(m, 1H), 4.65-4.82(m, 3H), 4.28-4.65(m, 5H), 3.92-4.18(m, 2H), 3.82(s, 3H), 2.10-2.75(m, 2H).
13C-NMR(150 MHz; CD3OD):(카르보닐 탄소 및/또는 아미딘 탄소) δ173.2, 170.8, 152.5
APCI-MS: (M+1) = 525 m/z.
실시예 25
Ph(3-F)(5-OCHF 2 )-(R)CH(OH)C(O)-Aze-Pab x TFA
(i) 1-브로모-3-플루오로-5-벤질옥시벤젠
수소화나트륨(오일 중 60% 분산, 24.0 g, 0.48 mol)을 THF(1 ℓ) 중의 무수 벤질 알콜(64.5 g, 0.60 mol)의 교반 용액에 조금씩 가하였다. 혼합물을 1 시간 동안 교반한 후, THF(100 ㎖) 중의 1-브로모-3,5-디플루오로벤젠(76.8 g, 0.40 mmol)의 용액을 1 시간에 걸쳐서 적가하였다. 반응물을 실온에서 2 일 동안 교반하였다. 물(400 ㎖)을 가하고, THF를 진공 제거하였다. 수층을 헥산(3 x 150 ㎖)으로 추출하였다. 합한 유기 추출물을 2 N NaOH(2 x 100 ㎖)로 세척한 다음, 건조시키고(Na2SO4), 여과하였으며, 진공 농축시켜서 담황색 오일로서 부제 화합물(110.7 g, 98%)을 얻고, 더 이상의 정제없이 사용하였다.
Rf = 0.47(Hex)
1H NMR(300 MHz, CDCl3) δ7.36-7.41(m, SH), 6.94(bs, 1H), 6.87(d, JH-F = 8 Hz, 1H), 6.63(d, JH-F = 10 Hz, 1H), 5.03(s, 2H).
(ii) 3-브로모-5-플루오로페놀
0℃에서 무수 CH2Cl2(1.0 ℓ) 중의 1-브로모-3-플루오로-5-벤질옥시벤젠 (110.0 g, 0.39 mol; 상기 단계(i) 참조) 및 N,N-디메틸아닐린(474.0 g, 3.92 mol)의 용액에 염화알루미늄(156.0 g, 1.17 mol)을 가하였다. 10 분 후, 얼음욕을 제거하고, 교반을 2 시간 동안 계속하였다. 반응은 3 N HCl(600 ㎖)을 신중하게 가하여 켄칭하였다. 층 분리하고, 수층을 CH2Cl2(2 x 150 ㎖)로 추출하였다. 합한 유기 추출물을 2 N HCl(250 ㎖) 및 H2O(3 x 250 ㎖)로 세척하였다. 유기층에 15% KOH(500 ㎖)를 가하고, 층 분리하였다 유기층을 2 N KOH(2 x 70 ㎖)로 추출하였다. 합한 수층을 CH2Cl2(3 x 100 ㎖)로 세척한 다음, 4 N HCl로 산성화하였다. 수층을 Et2O(3 x 125 ㎖)로 추출한 다음, 합한 Et20 추출물을 건조시키고(Na2SO4), 여과하였으며, 진공 농축시켜서 갈색 오일로서 부제 화합물(69.0 g, 92%)을 얻고, 더 이상의 정제없이 사용하였다.
Mp: 33-35℃
Rf = 0.25(CHCl3)
1H NMR(300 MHz, DMSO-d6) δ10.38(s, 1H), 6.90(dd, JH-F = 11 Hz, J = 2 Hz, 1H), 6.81(s, 1H), 6.59(dt, JH-F = 11 Hz, J = 2 Hz, 1H).
APCI-MS: (M-1) = 189 m/z
(iii) 1-브로모-3-플루오로-5-디플루오로메톡시벤젠
i-PrOH(100 ㎖) 및 30% KOH(80 ㎖) 중의 3-브로모-5-플루오로페놀(6.1 g, 31.0 mmol; 상기 단계(ii) 참조) 및 클로로디플루오로메탄(13.0 g, 150.0 mmol)의 혼합물을 밀봉 플라스크 내에서 18 시간 동안 80 내지 85℃로 가열하였다. 반응 혼합물을 실온으로 냉각시키고, 층 분리하였다. 유기층을 진공 농축시켜서 무색 오일을 얻었다. 수층을 Et2O(3 x 30 ㎖)로 추출하였다. 미정제 오일 및 합한 유기 추출물을 2 N NaOH(3 x 30 ㎖) 및 H2O(3 x 30 ㎖)로 세척하였다. 그 다음, 유기물을 건조시키고(Na2SO4), 소형 실리카 겔 플러그를 통하여 여과하였으며, 진공 농축시켜서 무색 오일로서 부제 화합물(6.1 g, 79%)을 얻고, 더 이상의 정제없이 사용하였다.
1H NMR(300 MHz, CDCl3) δ7.11-7.14(m, 2H), 6.84(dt, J = 9 Hz, J = 2 Hz, 1H), 6.50(t, JH-F = 72 Hz, 1H).
(iv) 1-플루오로-3-디플루오로메톡시-5-비닐벤젠
트리(부틸)비닐스타난(7.0 g, 22.2 mmol)을 질소 하에 65℃에서 THF(40 ㎖) 중의 1-브로모-3-플루오로-5-디플루오로메톡시벤젠(4.9 g, 20.2 mmol; 상기 단계(iii) 참조), 디클로로비스(트리페닐포스핀)팔라듐(II)(1.42 g, 2.02 mmol) 및 무수 염화리튬(0.90 g, 20.2 mmol)의 현탁액에 가하고, 혼합물을 5 시간 동안 교반하였다. 반응 혼합물을 0℃로 냉각시키고, 1 N NaOH(90 ㎖)를 가하였다. 2상 혼합물을 1 시간 동안 격렬하게 교반한 다음, 층 분리하였다. 수층을 Et2O(3 x 70 ㎖)로 추출하였다. 합한 유기층을 2 N NaOH(2 x 40 ㎖) 및 H2O(40 ㎖)로 세척한 다음, 건조시키고(Na2SO4), 여과하였으며, 진공 농축시켰다. 헥산으로 용출하면서 실리카 겔 상의 플래쉬 크로마토그래피에 의해 무색 오일로서 부제 화합물(2.2 g, 57%)을 얻었다.
Rf = 0.47(Hex)
1H NMR(300 MHz, CDCl3) δ6.93-6.99(m, 2H), 6.73-6.78(m, 1H), 6.67(dd, J = 18 Hz, J = 11 Hz, 1H), 6.51(t, JH-F = 73 Hz, 1H), 5.77(d, J = 18 Hz, 1H), 5.36(d, J = 11 Hz, 1H).
(v) Ph(3-F)(5-OCHF 2 )-(R)CH(OH)CH 2 OH
2-메틸-2-프로판올(140 ㎖), H2O(140 ㎖) 및 AD-mix-P(39.2 g)를 함께 배합하고, 0℃로 냉각시켰다. 소량의 2-메틸-2-프로판올 중에 용해시킨 1-플루오로-3-디플루오로메톡시-5-비닐벤젠(5.0 g, 26.4 mmol; 상기 단계(iv) 참조)을 한번에 가하고, TLC가 출발 물질의 부재를 나타낼 때까지 불균질 슬러리를 0℃에서 격렬하게 교반하였다. 반응을 0℃에서 아황산나트륨(42.0 g)의 첨가에 의해 켄칭한 다음, 실온으로 가온하고, 60 분 동안 교반하였다. 반응 혼합물을 Et2O(3 x 120 ㎖)로 추출하였다. 합한 유기 추출물을 건조시키고(Na2SO4), 여과하였으며, 진공 농축시켰다. CHCl3:EtOAc(3:2)로 용출하면서 실리카 겔 상의 플래쉬 크로마토그래피에 의해 무색 오일로서 부제 화합물(5.8 g, 98%)을 얻었다.
Rf = 0.41(3:2 CHCl3:EtOAc)
1H NMR(300 MHz, CDCl3) δ6.96-6.99(m, 2H), 6.77-6.82(m, 1H), 6.51(t, JH-F = 73 Hz, 1H), 4.79-4.85(m, 1H), 3.76-3.84(m, 1H), 3.58-3.66(m, 1H), 2.66(d, J = 3 Hz, 1H), 2.00(t, J = 6 Hz, 1H).
HPLC 분석: 89.2%, > 99% ee, ChiralPak AD 컬럼(95:5 Hex:EtOH 이동상).
(vi) Ph(3-F)(5-OCHF 2 )-(R)CH(OH)CH 2 OTBS
무수 CH2Cl2(100 ㎖) 중의 Ph(3-F)(5-OCHF2)-(R)CH(OH)CH2OH(5.5 g, 24.7 mmol; 상기 단계(v) 참조), 4-(디메틸아미노)피리딘(121 mg, 1.0 mmol) 및 트리에틸아민(3.0 g, 29.6 mmol)의 용액을 0℃로 냉각시켰다. CH2Cl2(26.0 ㎖, 26.0 mmol) 중의 t-부틸디메틸실릴 클로라이드의 1.0 M 용액을 적가하고, 반응 혼합물을 실온으로 가온하였으며, 밤새도록 교반하였다. 포화 염화암모늄 용액(60 ㎖)을 가하고, 층 분리하였다. 유기층을 포화 염화암모늄 용액(60 ㎖) 및 H2O(2 x 35 ㎖)로 세척한 다음, 건조시키고(Na2SO4), 여과하였으며, 진공 농축시켰다. CHCl3:Hex(3:1) 황색 오일로서 부제 화합물(7.9 g, 85%)을 얻었다.
Rf = 0.47(3:1 CHCl3:Hex)
1H NMR(300 MHz, CDCl3) δ6.95-6.98(m, 2H), 6.76-6.79(m, 1H), 6.51(t, JH-F = 73 Hz, 1H), 4.71-4.74(m, 1H), 3.75-3.80(m, 1H), 3.48-3.54(m, 1H), 2.99(bs, 1H), 0.91(s, 9H), 0.05(s, 3H), 0.00(s, 3H).
(vii) Ph(3-F)(5-OCHF 2 )-(R)CH(OMEM)CH 2 OTBS
0℃에서 질소 하에 무수 CH2Cl2(50 ㎖) 중의 Ph(3-F)(5-OCHF2)-(R)CH(OH)CH2OTBS(7.9 g, 0.51 mmol; 상기 단계(vi) 참조) 및 DIPEA(4.9 g, 48.1 mmol)의 용액에 2-메톡시에톡시메틸 클로라이드(6.6 g, 48.1 mmol)를 적가하였다. 혼합물을 24 시간 동안 교반하였다. 포화 염화암모늄 용액(70 ㎖)을 가하고 층 분리하였다. 유기층을 포화 염화암모늄 용액(70 ㎖) 및 H2O(3 x 60 ㎖)로 세척한 다음, 건조시키고(Na2SO4), 여과하였으며, 진공 농축시켜서 황색 오일로서 부제 화합물(8.8 g, 99%)을 얻고, 더 이상의 정제없이 사용하였다.
Rf = 0.41(4:1 CHCl3:EtOAc)
1H NMR(300 MHz, CDCl3) δ7.20(s, 1H), 7.06(s, 1H), 7.02(s, 1H), 6.50(t, JH-F = 73 Hz, 1H), 4.79-4.81(m, 1H), 4.66-4.68(m, 2H), 3.47-3.82(m, 6H), 3.36(s, 3H), 0.85(s, 9H), 0.01(s, 3H), 0.00(s, 3H).
(viii) Ph(3-F)(5-OCHF 2 )-(R)CH(OMEM)CH 2 OH
실온에서 THF(60 ㎖) 중의 Ph(3-F)(5-OCHF2)-(R)CH(OMEM)CH2OTBS(9.3 g, 21.9 mmol; 상기 단계(vii) 참조)의 용액에 THF(70.0 ㎖, 70.0 mmol) 중의 테트라부틸암모늄 플루오라이드의 1.0 M 용액을 가하고, 질소 하에 밤새도록 교반하였다. 반응물을 진공 농축시켰다. 황색 잔류물을 Et20(100 ㎖) 및 헥산(100 ㎖) 중에 용해시키고, 포화 염화암모늄 용액(2 x 150 ㎖) 및 H2O(3 x 70 ㎖)로 연속적으로 세척하였다. 유기층을 건조시키고(Na2SO4), 여과하였으며, 진공 농축시켰다. Hex:EtOAc(1:1)로 용출하면서 실리카 겔 상의 플래쉬 크로마토그래피에 의해 황색 오일로서 부제 화합물(4.2 g, 62%)을 얻었다.
Rf = 0.42(1:1 Hex:EtOAc)
1H NMR(300 MHz, CDCl3) δ6.91-6.95(m, 2H), 6.75-6.81(m, 1H), 6.51(t, JH-F = 73 Hz, 1H), 4.80-4.82(m, 1H), 4.70-4.74(m, 2H), 3.88-3.93(m, 1H), 3.67-3.71(m, 3H), 3.53-3.56(m, 2H), 3.39(s, 3H), 2.96-2.99(m, 1H).
( ix ) Ph (3-F)(5- OCHF 2 )-(R) CH ( OMEM )C(O) OH
아세톤(100 ㎖) 중의 Ph(3-F)(5-OCHF2)-(R)CH(OMEM)CH2OH(4.2 g, 13.4 mmol ; 상기 단계(viii) 참조)의 용액에 5% NaHC03 수용액(35 ㎖)을 가하였다. 이 자기 교반된 불균질 혼합물을 0℃로 냉각시키고, 브롬화칼륨(159 mg, 1.3 mmol) 및 2,2,6,6-테트라메틸-1-피페리딘일옥시 유리 라디칼(2.2 g, 14.1 mmol)을 가하였다. 그 다음, 차아염소산나트륨(5.25%, 30 ㎖)을 20 분에 걸쳐 적가하는 한편, 혼합물을 격렬하게 교반하고, 0℃로 유지시켰다. 1 시간 후, 추가의 차아염소산(30 ㎖) 및 5% NaHCO3 용액(35 ㎖)을 가하고, 0℃에서 2 시간 동안 교반을 계속하였다. 아세톤을 진공 제거하였다. 수층을 Et2O(4 x 40 ㎖)로 세척하였다. 수층을 10% 시트르산으로 pH 3.5로 산성화하고, EtOAc(4 x 50 ㎖)로 추출하였다. 합한 EtOAc 추출물을 H2O(4 x 30 ㎖) 및 염수(60 ㎖)로 연속적으로 세척한 다음, 건조시키고(Na2SO4), 여과하였으며, 진공 농축시켜서 무색 오일로서 부제 화합물(4.3 g, 98%)을 얻고, 더 이상의 정제없이 사용하였다.
Rf = 0.74(8.0:1.5:0.5 CHCl3:MeOH:Et3N)
1H NMR(300 MHz, 아세톤-d6) δ7.16-7.18(m, 2H), 7.16(t, JH-F = 89 Hz, 1H), 7.00-7.03(m, 1H), 5.30(s, 1H), 4.88(d, J = 7 Hz, 1H), 4.80(d, J = 7 Hz, 1H), 3.54-3.75(m, 2H), 3.46-3.49(m, 2H), 3.28(s, 3H).
(x) Ph(3-F)(5-OCHF 2 )-(R)CH(OMEM)C(O)-Aze-Pab(Teoc)
질소 하에 0℃에서 DMF(20 ㎖) 중의 Ph(3-F)(5-OCHF2)-(R)CH(OMEM)C(O)OH(1.1 g, 3.4 mmol; 상기 단계(ix) 참조)의 용액에 HAze-Pab(Teoc)·HCl(2.0 g, 4.4 mmol), PyBOP(1.9 g, 3.7 mmol) 및 DIPEA(1.1 g, 8.4 mmol)을 가하였다. 반응물을 0℃에서 2 시간 동안 교반한 다음, 실온에서 밤새도록 교반하였다. 혼합물을 진공 농축시키고, 잔류물을 먼저 CHCl3:EtOH(15:1)로 용출한 다음, EtOAc:EtOH(20:1)로 용출하면서 실리카 겔 상의 크로마토그래피를 2회 수행하여 압착 가능한 백색 폼으로서 부제 화합물(1.3 g, 56%)을 얻었다.
Rf = 0.65(15:1 CHCl3:EtOH)
1H NMR(300 MHz, CD3OD, 회전 이성질체의 착체 혼합물) δ7.80-7.84(m, 2H), 7.40-7.46(m, 2H), 6. 95-7.16(m, 3H), 6.92 및 6.88(t, JH-F = 73 Hz, 1H), 5.28 및 5.08(s, 1H), 5.18-5.22 및 4.70-4.78(m, 1H), 4.50-4.75(m, 1H), 4.30-4.49(m, 2H), 4.21-4.26(m, 3H), 3.97-4.08(m, 1H), 3.35-3.72(m, 6H), 3.30(s, 3H), 2.10-2.75(m, 2H), 1.05-1.11(m, 2H), 0.08(s, 9H).
(xi) Ph(3-F)(5-OCHF 2 )-(R)CH(OH)C(O)-Aze-Pab(Teoc)
2-프로판올(20 ㎖) 중의 Ph(3-F)(5-OCHF2)-(R)CH(OMEM)C(O)-Aze-Pab(Teoc)(590 mg, 0.87 mmol; 상기 단계(x) 참조) 및 사브롬화탄소(287 mg, 0.87 mmol)의 혼합물을 1.5 시간 동안 환류시켰다. 혼합물을 진공 농축시킨 다음, H2O(50 ㎖) 및 EtOAc(3 x 50 ㎖)로 분배하였다. 수층을 추가의 EtOAc(2 x 10 ㎖)로 추출하였다. 합한 유기 추출물을 염수(30 ㎖)로 세척한 다음, 건조시키고(Na2SO4), 여과하였으며, 진공 농축시켰다. CHCl3:EtOH(15:1)로 용출하면서 실리카 겔 상의 플래쉬 크로마토그래피에 의해 압착 가능한 백색 폼으로서 화합물(60 mg, 12%)을 얻었다.
Rf = 0.46(15:1 CHCl3:EtOH)
1H NMR(300 MHz, CD3OD, 회전 이성질체의 착체 혼합물) δ7.74(d, J= 8 Hz, 2H), 7.35-7.37(m, 2H), 6.97-7.07(m, 2H), 6.80-6.84(m, 1H), 6.82 및 6.80(t, JH-F = 73 Hz, 1H), 5.10 및 5. 06(s, 1H), 4.68-4.70(m, 1H), 3.97-4.60(m, 6H), 2.10-2.75(m, 2H), 1.05-1.11(m, 2H), 0.08(s, 9H).
APCI-MS: (M+1) = 595 m/z
(xii)Ph(3-F)(5-OCHF 2 )-(R)CH(OH)C(O)-Aze-Pab x TFA
Ph(3-F)(5-OCHF2)-(R)CH(OH)C(O)-Aze-Pab(Teoc)(0.053 g, 0.089 mmol; 상기 단계(xi) 참조)를 TFA 3 ㎖ 중에 용해시키고, 80 분 동안 반응시키는 한편, 얼음욕 상에서 냉각시켰다. TFA를 증발시키고, 잔류물을 물/아세토니트릴로부터 냉동 건조시켜서 TFA 염으로서 표제 화합물 0.042 g(80%)을 얻었다.
1H-NMR(300 MHz; CD3OD) 회전 이성질체: δ7.7-7.6(m, 2H), 7.5-7.4(m, 2H), 7.1-6.6(m, 4H), 5.2-5.0(m, 1H + 1H의 부 회전 이성질체), 약 4.8(CD3OH 시그널에 의해 모호해진 기존의 시그널의 주 회전 이성질체), 4.6-4.3(m, 2H), 4.26(m, 1H, 주 회전 이성질체), 4.10(m, 1H, 주 회전 이성질체), 3.96(m, 1H, 부 회전 이성질체), 3.89(m, 1H, 부 회전 이성질체), 2.60(m, 1H, 부 회전 이성질체), 2.44(m, 1H, 주 회전 이성질체), 2.19(m, 1H, 주 회전 이성질체), 2.05(m, 1H, 부 회전 이성질체).
13C-NMR(100 MHz; CD3OD):(카르보닐 탄소 및/또는 아미딘 탄소) δ172.8, 172.0, 167.0
ESI-MS+: (M+1) = 451(m/z)
실시예 26
Ph(3-F)(5-OCHF 2 )-(R)CH(OH)C(O)-Aze-Pab(OMe)
(i) Ph(3-F)(5-OCHF 2 )-(R)CH(OMEM)C(O)-Aze-Pab(OMe)
질소 하에 0℃에서 DMF(30 ㎖) 중의 Ph(3-F)(5-OCHF2)-(R)CH(OMEM)C(O)OH(1.0 g, 3.1 mmol; 상기 실시예 25(ix) 참조)의 용액에 HAze-Pab(OMe)-2HCl(1.4 g, 4.1 mmol), PyBOP(1.8 g, 3.4 mmol) 및 DIPEA(1.0 g, 7.8 mmol)를 가하였다. 반응물을 0℃에서 2 시간 동안 교반한 다음, 실온에서 밤새도록 교반하였다. 혼합물을 진공 농축시키고, 잔류물을 먼저 CHCl3:EtOH(15:1)로 용출한 다음, EtOAc로 용출하면서 실리카 겔 상의 크로마토그래피를 2회 수행하여 압착 가능한 백색 폼으로서 부제 화합물(1.5 g, 79%)을 얻었다.
Rf = 0.24(EtOAc)
1H NMR(300 MHz, CD3OD, 회전 이성질체의 착체 혼합물) δ7.58-7.62(m, 2H), 7.32-7.38(m, 2H), 7.03-7.16(m, 3H), 6.92 및 6.88(d, JH-F = 73 Hz, 1H), 5.27 및 5.08(s, 1H), 5.22-5.15 및 4.75-4.80(m, 1H), 4.38-4.65(m, 5H), 3.92-4.27(m, 1H), 3.82(s, 3H), 3.43-3.68(m, 4H), 3.29(s, 3H), 2.28-2.85(m, 2H).
(ii) Ph(3-F)(5-OCHF 2 )-(R)CH(OH)C(O)-Aze-Pab(OMe)
2-프로판올(20 ㎖) 중의 Ph(3-F)(5-OCHF2)-(R)CH(OMEM)C(O)-Aze-Pab(OMe)(828 mg, 2.33 mmol; 상기 단계(i) 참조) 및 사브롬화탄소(525 mg, 2.33 mmol)의 혼합물을 8 시간 동안 환류시킨 다음, 실온에서 밤새도록 교반하였다. 혼합물을 진공 농축시키고, 잔류물을 H2O(70 ㎖) 및 EtOAc(50 ㎖)로 분배하였다. 수층을 EtOAc(2 x 25 ㎖)로 추출하였다. 합한 유기 추출물을 염수(35 ㎖)로 세척한 다음, 건조시키고(Na2SO4), 여과하였으며, 진공 농축시켰다. CHCl3:EtOH(15:1)로 용출하면서 실리카 겔 상의 플래쉬 크로마토그래피에 의해 압착 가능한 백색 폼으로서 표제 화합물(520 mg, 74%)을 얻었다.
Mp: 73-81℃
Rf = 0.43(15:1 CHCl3:EtOH)
1H NMR(300 MHz, CD3OD, 회전 이성질체의 착체 혼합물) δ7.59(d, J= 8 Hz, 2H), 7.32-7.37(m, 2H), 7.05-7.14(m, 2H), 6.87-6.92(m, 1H), 6.90 및 6.86(t, JH-F = 73 Hz, 1H), 5.13-5.18 및 4.75-4.85(m, 2H), 4.15-4.45(m, 4H), 3.81(s, 3H), 2.10-2.75(m, 2H).
13C-NMR(100 MHz; CD3OD):(카르보닐 탄소 및/또는 아미딘 탄소) δ172.0, 171.4, 153.9
APCI-MS: (M+1) = 481 m/z
실시예 27
Ph(3-Br)(5-OCH 2 F)-(R)CH(OH)C(O)-Aze-Pab x TFA
(i) 1,3-디브로모-5-벤질옥시벤젠
질소 분위기 하에 실온에서 THF(1.0 ℓ) 중의 벤질 알콜(41.0 g, 0.394 mol)의 교반 용액에 수소화나트륨(9.9 g, 0.414 mol, 95% 건조)을 조금씩 가하고, 1 시간 동안 교반하였다. 이 용액에 1,3-디브로모-5-플루오로벤젠(100.0 g, 0.394 mol)을 적가하였다. 밤새도록 교반한 후, 이 혼합물을 H2O(600 ㎖)와 EtOAc(4 x600 ㎖) 사이에 분배하였다. 합한 유기 추출물을 건조시키고(Na2SO4), 여과하였으며, 진공 농축시켰다. 헥산으로 용출하면서 실리카 겔 상의 플래쉬 크로마토그래피에 의해 황색 오일로서 부제 화합물(101.3 g, 75%)을 얻었다.
1H NMR(300 MHz, CDCl3) δ7.30-7.48(m, 5H), 7.18(s, 1H), 7.06(s, 2H), 4.99(s, 2H).
(ii) 3,5-디브로모페놀
질소 분위기 하에 실온에서 CH2Cl2(100 ㎖) 중의 1,3-디브로모-5-벤질옥시벤젠(10.0 g, 29.2 mmol; 상기 단계(i) 참조) 및 N,N-디메틸아닐린(35.4 g, 292 mmol)의 용액에 염화알루미늄(11.7 g, 87.6 mmol)을 조금씩 가하였다. 30 분 후, 이 혼합물을 1 N HCl(300 ㎖)과 EtOAc(5 x 150 ㎖) 사이에 분배하였다. 합한 유기 추출물을 포화 NaHCO3(150 ㎖)와 염수(150 ㎖)로 세척한 후, 건조시키고(Na2SO4), 여과하였으며, 진공 농축시켰다. Hex:EtOAc(9:1)로 용출하면서 실리카 겔 상의 플래쉬 크로마그래피에 의해 백색 고체로서 부제 화합물(6.1 g, 82%)을 얻었다.
1H NMR(300 MHz, CDCl3) δ7.21(s, 1H), 6.97(s, 2H), 5.88(bs, 1H).
(iii) 1,3-디브로모-5-모노플루오로메톡시벤젠
-78℃에서 DMF(150 ㎖) 중의 3,5-디브로모페놀(10.0 g, 39.7 mmol; 상기 단계(ii) 참조) 및 Cs2CO3(20.7 g, 63.5 mmol)의 현탁액을 함유하는 타르가 칠해지고 밀봉된 350 ㎖ 둥근 바닥 압력 플라스크에 클로로플루오로메탄을 격막(septum)을 통한 5 분 동안의 기포화 과정을 통해 가하였다. 이 격막을 테플론 마개로 대체한 후, 플라스크를 밀봉하고, 실온으로 가온시킨 다음, 플라스크의 무게를 달아 클로로플루오로메탄 9.0 g(131 mmol)을 함유하고 있는 지의 여부를 측정하였다. 용액을 70℃로 설정된 유욕(oil bath)에서 밤새 가열하였다. 플라스크를 실온으로 냉각하고, 압력을 주의하여 배출하며, 내용물을 물(100 ㎖)로 희석시켰다. 수층을 Et2O(3 x200 ㎖)로 추출한 후, 합한 유기층을 건조시키고(Na2SO4), 여과하였으며, 진공 농축시켰다. 헥산으로 용출하면서 실리카 겔 상의 플래쉬 크로마토그래피에 의해 백색 고체로서 부제 화합물(7.9 g, 71%)을 얻었다.
1H NMR(300 MHz, CDCl3) δ7.40(s, 1H), 7.18(s, 2H), 5. 67(d, JH-F = 53 Hz, 2H).
(iv) 1-브로모-3-모노플루오로메톡시-5-비닐벤젠
질소 하에 톨루엔(100 ㎖) 중의 1,3-디브로모-5-모노플루오로메톡시벤젠(8.5 g, 29.9 mmol; 상기 단계(iii) 참조), 테트라키스(트리페닐포스핀)팔라듐(O)(690 mg, 0.599 mmol) 및 2,6-디-t-부틸-4-메틸페놀(spatula 팁 사용)의 용액에 트리(부틸)비닐주석(10.0 g, 31.4 mmol)을 적가하였다. 이 혼합물을 70℃에서 8 시간 동안 교반하였다. 혼합물을 0℃로 냉각하고, 1 N NaOH(70 ㎖)을 가하였다. 1 시간 후, 혼합물을 CH2Cl2(3 x300 ㎖)로 추출한 다음, 합한 유기물을 건조시키고(Na2SO4), 여과하였으며, 진공 농축시켰다. 헥산으로 용출하면서 실리카 겔 상의 플래쉬 크로마토그래피에 의해 무색 오일로서 부제 화합물(4.3 g, 57%)을 얻었다.
1H NMR(300 MHz, CDCl3) δ7.30(s, 1H), 7.16(s, 1H), 7.01(s, 1H), 6.60(dd, J = 6 Hz, J = 11 Hz, 1H), 5.74(d, J = 16 Hz, 1H), 5.67(d, JH-F = 53 Hz,2H), 5.32(d, J = 8 Hz, 1H).
(v) Ph(3-Br)(5-OCH 2 F)-(R)CH(OH)CH 2 OH
2-메틸-2-프로판올(100 ㎖), H2O(100 ㎖) 및 AD-mix-β(27.5 g)을 함께 배합하고 0℃로 냉각시켰다. 1-브모로-3-모노플루오로메톡시-5-비닐벤젠(4.3 g, 17.3 mmol; 상기 단계(iv) 참조)을 한번에 가하고, 불균질한 슬러리를 TLC가 출발 물질의 부재를 나타낼 때까지 0℃에서 강력하게 교반하였다. 이 반응을 포화 아황산나트륨(200 ㎖)을 가함으로써 반응을 켄칭(quenching)한 후, 실온으로 가온하고 60 분 동안 교반하였다. 반응 혼합물을 EtOAc(3 x150 ㎖)로 추출하였다. 합한 유기 추출물을 건조시키고(Na2SO4), 여과하였으며, 진공 농축시켜서 무색 오일로서 부제 화합물(4.9 g, 100%)을 얻고, 더 이상의 정제없이 사용하였다.
1H NMR(300 MHz, CD3OD) δ7.30(s, 1H), 7.15(s, 1H), 7.11(s, 1H), 5.70(d, JH-F = 53 Hz, 2H), 4.62-4.70(m, 1H), 3.52-3.70(m, 2H).
HPLC 분석: 92.1%, 96.9% ee, 키랄팩 AD 컬럼(ChiralPak AD Column)(95:5 Hex:EtOH 이동상).
(vi) Ph(3-Br)(5-OCH 2 F)-(R)CH(OMEM)CH 2 OTBS
무수 CH2Cl2(200 ㎖) 중의 Ph(3-Br)(5-OCH2F)-(R)CH(OH)CH2OH(4.9 g, 18.6 mmol; 상기 단계(v) 참조), 4-(디메틸아미노)피리딘(453 mg, 3.71 mmol) 및 DIPEA(8.9 g, 93.0 mmol)의 용액에 CH2Cl2(22.3 ㎖, 22.3 mmol) 중의 t-부틸디메틸실릴 클로라이드의 1.0 M 용액을 적가하였다. 이 반응 혼합물을 실온에서 10 시간 동안 교반하였다. 혼합물에 DIPEA(8.9 g, 93.0 mmol) 및 2-메톡시에톡시메틸 클로라이드(13.9 g, 111 mmol)를 적가하였다. 16 시간 후, 추가의 2-메톡시에톡시메틸 클로라이드(2.2 g)을 가하고, 이 반응물을 밤새도록 교반하였다. 혼합물을 H2O(100 ㎖)로 희석하고, 층을 분리하였다. 수층을 CH2Cl2(3 x 200 ㎖)로 추출한 후, 합한 유기층을 건조시키고(Na2SO4), 여과하였으며, 진공 농축시켰다. Hex:EtOAc(5:1)로 용출하면서 실리카 겔 상의 플래쉬 크로마토그래피에 의해 무색 오일로서 부제 화합물(4.8 g, 55%)을 얻었다.
1H NMR(300 MHz, CDCl3) δ7.29(s, 1H), 7.22(s, 1H), 7.05(s, 1H), 5.74(d, JH-F = 53 Hz, 2H), 4.84(d, J = 7 Hz, 1H), 4.70-4.74(m, 2H), 3.50-3.91(m, 6H), 3.42(s, 3H), 0.90(s, 9H), 0.05(s, 3H), 0.01(s, 3H).
(vii) Ph(3-Br)(5-OCH 2 F)-(R)CH(OMEM)CH 2 OH
THF(100 ㎖) 중의 Ph(3-Br)(5-OCH2F)-(R)CH(OMEM)CH2OTBS(4.7 g, 10.1 mmol; 상기 단계(vi) 참조)의 용액에 실온에서 THF(13.1 ㎖, 13.1 mmol) 중의 테트라부틸암모늄 플루오라이드의 1.0 M 용액을 가한 후, 이 혼합물을 1 시간 동안 교반하였다. 혼합물을 H2O(100 ㎖)와 EtOAc(3 x 100 ㎖) 사이에 분배한 후, 합한 유기물을 건조시키고(Na2SO4), 여과하였으며, 진공 농축시켜서 무색 오일로서 부제 화합물(3.3 g, 92%)을 얻고, 더 이상의 정제없이 사용하였다.
1H NMR(300 MHz, CD3OD) δ7.22(s, 1H), 7.14(s, 1H), 7.03(s, 1H), 5.71(d, JH-F = 53 Hz, 2H), 4.80-4.82(m, 1H), 4.58-4.66(m, 2H), 3.71-3.77(m, 1H), 3.39-3.65(m, 5H), 3.27(s, 3H).
(viii) Ph(3-Br)(5-OCH 2 F)-(R)CH(OMEM)C(O)OH
아세톤(40 ㎖) 중의 Ph(3-Br)(5-OCH2F)-(R)CH(OMEM)CH2OH(2.1 g, 6.0 mmol; 상기 단계(vii) 참조)의 용액에 5% NaHC03 수용액(15 ㎖)을 가하였다. 이것의 자기 교반된 불균질 혼합물을 0℃로 냉각하고, 브롬화칼륨(70 mg, 0.60 mmol) 및 2,2,6,6-테트라메틸-1-피페리딘일옥시 유리 라디칼(976 mg, 5.8 mmol)을 가하였다. 이어서, 차아염소산나트륨(5.25%, 15 ㎖)을 10 분에 걸쳐서 적가하는 한편, 이 혼합물을 강력하게 교반하고, 0℃로 유지하였다. 1 시간 후, 추가의 아염소산나트륨(10 ㎖) 및 NaHCO3 용액(20 ㎖)을 가하고, 0℃에서 4 시간 동안 계속 교반하였다. 아세톤을 회전식 증발기에서 제거하였다. 수층을 10% NaHCO3 용액(30 ㎖)로 희석하고, Et2O(3 x 20 ㎖)로 세척하였다. 수층은 10% 시트르산으로 pH 3.5로 산성화시키고, EtOAc(3 x 40 ㎖)로 추출하였다. 합한 EtOAc 추출물을 H2O(3 x 50 ㎖) 및 염수(50 ㎖)로 세척한 후, 건조시키고(Na2SO4), 여과하였으며, 진공 농축시켜서 부제 화합물(1.7 g, 78%)을 무색 오일로서 얻고, 더 이상의 정제없이 사용하였다.
1H NMR(300 MHz, CD3OD) δ7.38(s, 1H), 7.25(s, 1H), 7.18(s, 1H), 5.76(d, JH-F = 53 Hz, 2H), 5.21(s, 1H), 4.83(d, J = 7 Hz, 1H), 4.75(d, J = 7 Hz, 1H), 3.62-3.78(m, 2H), 3.48-3.52(m, 2H), 3.32(s, 3H).
(ix) Ph(3-Br)(5-OCH 2 F)-(R)CH(OMEM)C(O)-Aze-Pab(Teoc)
질소 하에 0℃에서 DMF(20 ㎖) 중의 Ph(3-Br)(5-OCH2F)-(R)CH(OMEM)C(O)OH(1.0 g, 2.72 mmol; 상기 단계(viii) 참조)의 용액에 HAze-Pab(Teoc)-HCl(1.6 g, 3.5 mmol), PyBOP(1.6 g, 3.0 mmol) 및 DIPEA(880 mg, 6.81 mmol)을 가하였다. 이 반응물을 0℃에서 2 시간 동안 교반한 후, 실온에서 밤새도록 교반하였다. 혼합물을 진공 농축시키고, 잔류물을 먼저 CHCl3:EtOH(15:1)로 용출한 다음, EtOAc:EtOH(20:1)로 용출하면서 실리카 겔 상의 크로마토그래피를 2회 수행하여 압착 가능한 백색 폼으로서 부제 화합물(1.2 g, 62%)을 얻었다.
1H NMR(300 MHz, CD3OD, 회전 이성질체의 착체 혼합물) δ7.80-7.84(m, 2H), 7.40-7.46(m, 2H), 7.13-7.32(m, 3H), 5.84-5.87(m, 1H), 5.67-5.69(m, 1H), 5.25 및 5.07(s, 1H), 5.18-5.23 및 4.80-4.88(m, 1H), 3.97-4.79(m, 8H), 3.60-3.71(m, 2H), 3.40-3.53(m, 2H), 3.32(s, 3H), 2.10-2.75(m, 2H), 1.05-1.11(m, 2H), 0.08(s, 9H).
(x) Ph(3-Br)(5-OCH 2 F)-(R)CH(OH)C(O)-Aze-Pab(Teoc)
2-프로판올(10 ㎖) 중의 Ph(3-Br)(5-OCH2F)-(R)CH(OMEM)C(O)-Aze-Pab(Teoc)(347 mg, 0.478 mmol; 상기 단계(ix) 참조)와 사브롬화탄소(159 mg, 0.478 mmol)의 혼합물을 1.5 시간 동안 환류시켰다. 이 혼합물을 진공 농축한 후, H2O(20 ㎖)와 EtOAc(3 x 30 ㎖) 사이에 분배하였다. 합한 유기물을 건조시키고(Na2SO4), 여과하였으며, 진공 농축시켰다. CHCl3:EtOH(15:1)로 용출하면서 실리카 겔 상의 플래쉬 크로마토그래피에 의해 압착 가능한 백색 폼으로서 부제 화합물(59 mg, 19%)을 얻었다.
Mp: 81-87℃.
Rf = 0.58(9:1 CHCl3:EtOH).
1H NMR(300 MHz, CD3OD, 회전 이성질체의 착체 혼합물) δ7.84(d, J = 8 Hz, 2H), 7.40-7.48(m, 2H), 7.18-7.30(m, 3H), 5.80(d, JH-F = 53 Hz, 2H), 5.21 및 5.15(s, 1H), 5.18-5.24 및 4.80-4.88(m, 1H), 3.98-4.54(m, 6H), 2.10-2.70(m, 2H), 1.05-1.11(m, 2H), 0.08(s, 9H).
APCI-MS:(M+1) = 637 m/z.
(xi) Ph(3-Br)(5-OCH 2 F)-(R)CH(OH)C(O)-Aze-Pab x TFA
Ph(3-Br)(5-OCH2F)-(R)CH(OH)C(O)-Aze-Pab(Teoc)(0.073 g, 0.11 mmol; 상기 단계(x) 참조)를 TFA 5 ㎖ 중에 용해시키고, 빙욕에서 냉각하면서 90 분 동안 반응시켰다. TFA를 증발시키고, 잔류물은 CH3CN:0.1 M NH40Ac(30:70)를 사용하는 정제용 RPLC로 정제하였다. 적절한 분획을 증발시키고, 물/아세토니트릴로부터 냉동 건조시켜서 아세트산염으로서 표제 화합물(49 mg, 77%)을 얻었다.
1H-NMR(300 MHz; CD3OD) 회전 이성질체: δ7.8-7.7(m, 2H), 7.54(m, 2H), 7.37(s, 1H, 주 회전 이성질체), 7.33(s, 1H, 부 회전 이성질체), 7.25-7.1(m, 2H), 5.75(d, 2H), 5.22(m, 1H, 부 회전 이성질체), 5.18(s, 1H, 주 회전 이성질체), 5.11(s, 1H, 부 회전 이성질체), 4.80(m, 1H, 주 회전 이성질체), 4.6-4.4(m, 2H), 4.37(m, 1H, 주 회전 이성질체), 4.16(m, 1H, 주 회전 이성질체), 4.1-3.9(m, 2H, 부 회전 이성질체로부터 2가지 시그날), 2.70(m, 1H, 부 회전 이성질체), 2.52(m, 1H, 주 회전 이성질체), 2.30(m, 1H, 주 회전 이성질체), 2.15(m, 1H, 부 회전 이성질체), 1.89(s, 3H).
ESI-MS+:(M+1) = 493/495(m/z).
실시예 28
Ph(3-Br)(5-OCHF 2 )-(R)CH(OH)C(O)-Aze-Pab x TFA
(i) 1,3-디브로모-5-디플루오로메톡시벤젠
-78℃에서 2-프로판올(100 ㎖) 및 30% KOH(80 ㎖) 중의 3,5-디브로모페놀(10.0 g, 39.7 mmol; 상기 실시예 27의 단계(ii) 참조)의 용액을 함유하는 타르가 칠해지고 밀봉된 350 ㎖ 둥근 바닥 압력 플라스크에 클로로디플루오로메탄을 격막을 통한 15 분의 기포화 과정을 통해 가하였다. 상기 격막을 테플론 마개로 대체한 후, 플라스크를 밀봉하고 실온으로 가온하였으며, 플라스크의 무게를 달아 클로로디플루오로메탄 12.0 g(138 mmol)을 함유하는지의 여부를 측정하였다. 용액을 80℃로 설정된 유욕에서 밤새도록 환류시켰다. 플라스크를 실온으로 냉각하고, 압력을 신중하게 방출하며, 내용물을 H2O(200 ㎖)로 희석하였다. 수층을 CHCl3(2 x 150 ㎖)로 추출한 후, 합한 유기물을 건조시키고(Na2SO4), 여과하였으며, 진공 농축시켰다. 잔류물은 80℃ 및 0.2 mmHg에서 Kugelrohr 증류에 의해 정제하여 투명한 액체로서 부제 화합물(9.6 g, 80%)을 얻었다.
1H NMR(300 MHz, CDCl3) δ7.55(s, 1H), 7.26(s, 2H), 6.52(t, JH-F = 68 Hz, 1H).
(ii) 1-브로모-3-디플루오로메톡시-5-비닐벤젠
질소 하에 톨루엔(125 ㎖) 중의 1,3-디브로모-5-디플루오로메톡시벤젠(9.1 g, 30.1 mmol; 상기 단계(i) 참조), 테트라키스(트리페닐포스핀)팔라듐(0)(700 mg, 0.60 mmol) 및 2,6-디-t-부틸-4-메틸페놀(spatula 팁)의 용액에 트리(부틸)비닐주석(10.5 g, 33.1 mmol)을 적가하였다. 이 혼합물을 50℃에서 밤새도록 교반하였다. 혼합물을 0℃로 냉각하고, 1 N NaOH(70 ㎖)를 가하였다. 1 시간 후, 이 혼합물을 CH2Cl2(3 x 300 ㎖)로 추출한 후, 합한 유기물을 건조시키고(Na2SO4), 여과하였으며, 진공 농축시켰다. 헥산으로 용출하면서 실리카 겔 상의 플래쉬 크로마토그래피에 의해 무색 오일로서 부제 화합물(5.1 g, 68%)을 얻었다.
1H NMR(300 MHz, CDCl3) δ7.53(s, 1H), 7.18(s, 1H), 7.08(s, 1H), 6.60(dd, J = 6 Hz, J = 11 Hz, 1H), 6.57(t, JH-F = 68 Hz, 1H), 5.77(d, J = 11 Hz, 1H), 5.36(d, J = 8 Hz, 1H).
(iii) Ph(3-Br)(5-OCHF 2 )-(R)CH(OH)CH 2 OH
2-메틸-2-프로판올(150 ㎖), H2O(150 ㎖) 및 AD-mix-β(27.8 g)을 함께 배합하고 0℃로 냉각시켰다. 1-브로모-3-디플루오로메톡시-5-비닐벤젠(4.6 g, 18.6 mmol; 상기 단계(ii) 참조)을 한번에 가하고, 불균질 슬러리를 TLC가 출발 물질의 부재를 나타낼 때까지 강력하게 교반한 후, 용액을 실온으로 가온하고 밤새도록 교반하였다. 반응물을 아황산나트륨(300 ㎖)의 첨가함으로써 0℃에서 켄칭한 후, 실온으로 가온하고 60 분 동안 교반하였다. 반응 혼합물을 EtOAc(3 x 200 ㎖)로 추출하였다. 합한 유기 추출물을 건조시키고(Na2SO4), 여과하였으며, 진공 농축시켜서 부제 화합물(5.0 g, 95%)을 무색 오일로서 얻고, 더 이상의 정제없이 사용하였다.
1H NMR(300 MHz, CD3OD) δ7.43(s, 1H), 7.23(s, 1H), 7.16(s, 1H), 6.86(t, JH-F = 75 Hz, 1H), 4.64-4.67(m, 1H), 3.54-3.59(m, 2H).
HPLC 분석: 88.6%, 96.3% ee, 키랄팩 AD 컬럼(95:5 Hex:EtOH 이동상).
(iv) Ph(3-Br)(5-OCHF 2 )-(R)CH(OMEM)CH 2 OTBS
무수 CH2Cl2(250 ㎖) 중의 Ph(3-Br)(5-OCHF2)-(R)CH(OH)CH2OH(4.9 g, 17.3 mmol; 상기 단계(iii) 참조), 4-(디메틸아미노)피리딘(420 mg, 3.5 mmol) 및 DIPEA(11.2 g, 86.3 mmol)의 용액에 CH2Cl2(20.7 ㎖, 20.7 mmol) 중의 t-부틸디메틸실릴 클로라이드의 1.0 M 용액을 적가하였다. 이 반응 혼합물을 실온에서 밤새도록 교반하였다. 이 혼합물에 DIPEA(11.2 g, 86.3 mmol) 및 2-메톡시에톡시메틸 클로라이드(12.9 g, 104 mmol)를 적가하였다. 3 일 후, 추가의 2-메톡시에톡시메틸 클로라이드(3.3 g)를 가하고, 이 반응물을 밤새도록 교반하였다. 혼합물을 물(250 ㎖)로 희석시키고, 층 분리하였다. 수층을 CH2Cl2(2 x 250 ㎖)로 추출한 후, 합한 유기물을 건조시키고(Na2SO4), 여과하였으며, 진공 농축시켰다. Hex:EtOAc(4:1)로 용출하면서 실리카 겔 상의 플래쉬 크로마토그래피에 의해 무색 오일로서 부제 화합물(4.3 g, 51%)을 얻었다.
1H NMR(300 MHz, CDCl3) δ7.40(s, 1H), 7.25(s, 1H), 7.08(s, 1H), 6.58(t, JH-F = 75 Hz, 1H), 4.84(d, J= 7 Hz, 1H), 4.70-4.74(m, 2H), 3.50-3.91(m, 6H), 3.42(s, 3H), 0.90(s, 9H), 0.12(s, 3H), 0.05(s, 3H).
(v) Ph(3-Br)(S-OCHF 2 )-(R)CH(OMEM)CH 2 OH
THF(60 ㎖) 중의 Ph(3-Br)(5-OCHF2)-(R)CH(OMEM)CH2OTBS(3.3 g, 6.9 mmol; 상기 단계(iv) 참조)의 용액에 실온에서 THF(9.0 ㎖, 9.0 mmol) 중의 테트라부틸암모늄 플루오라이드의 1.0 M 용액을 가하였다. 반응물을 45 분 동안 교반한 후, 혼합물을 물(150 ㎖)과 EtOAc(2 x 120 ㎖) 사이에 분배하였다. 합한 유기물을 건조시키고(Na2SO4), 여과하였으며, 진공 농축시켜서 황색 오일로서 부제 화합물(2.5 g, 98%)을 얻고, 더 이상의 정제없이 사용하였다.
1H NMR(300 MHz, CD3OD) δ7.35(s, 1H), 7.21(s, 1H), 7.08(s, 1H), 6.83(t, JH-F = 73 Hz, 1H), 4.73(d, J = 7 Hz, 1H), 4.59-4.68(m, 2H), 3.40-380(m, 6H), 3.26(s, 3H).
(vi) Ph(3-Br)(5-OCHF 2 )-(R)CH(OMEM)C(O)OH
아세톤(60 ㎖) 중의 Ph(3-Br)(5-OCHF2)-(R)CH(OMEM)CH2OH(3.0 g, 8.1 mmol; 상기 단계(v) 참조)의 용액을 5% NaHCO3 수용액(25 ㎖)에 가하였다. 이 자기 교반된 불균질 혼합물을 0℃로 냉각한 후, 브롬화칼륨(100 mg, 0.81 mmol) 및 2,2,6,6-테트라메틸-1-피페리딘일옥시 유리 라디칼(1.3 g, 8.5 mmol)을 가하였다. 이어서, 혼합물을 강력하게 교반하면서 차아염소산나트륨(5.25%, 19 ㎖)을 10 분에 걸쳐 적가하고, 0℃로 유지하였다. 1 시간 후, 추가의 차아염소산나트륨(17 ㎖) 및 NaHCO3 용액(34 ㎖)을 가하고, 0℃에서 4 시간 동안 계속 더 교반하였다. 아세톤을 회전식 증발기 상에서 제거하였다. 수층을 10% NaHCO3 용액(30 ㎖)으로 희석시키고, Et2O(3 x 20 ㎖)로 추출하였다. 수층은 10% 시트르산으로 pH 3.5로 산성화시키고, EtOAc(3 x 40 ㎖)로 추출하였다. 합한 EtOAc 층을 H2O(3 x 50 ㎖) 및 염수(50 ㎖)로 세척한 후, 건조시키고(Na2SO4), 여과하였으며, 진공 농축시켜서 무색 오일로서 부제 화합물(2.1 g, 66%)을 얻고, 더 이상의 정제없이 사용하였다.
1H NMR(300 MHz, CD3OD) δ7.51(s, 1H), 7.32(s, 1H), 7.24(s, 1H), 6.88(t, JH-F = 73 Hz, 1H), 5.21(s, 1H), 4.84(d, J = 7 Hz, 1H), 4.76(d, J = 7 Hz, 1H), 3.62-3.80(m, 2H), 3.48-3.52(m, 2H), 3.32(s, 3H).
(vii) Ph(3-Br)(5-OCHF 2 )-(R)CH(OMEM)C(O)-Aze-Pab(Teoc)
0℃에서 질소 하에 DMF(50 ㎖) 중의 Ph(3-Br)(5-OCHF2)-(R)CH(OMEM)C(O)OH(1.0 g, 2.62 mmol; 상기 단계(vi) 참조)의 용액에 HAze-Pab(Teoc)ㆍHCl(1.5 g, 3.38 mmol), PyBOP(1.5 g, 2.9 mmol) 및 DIPEA(840 mg, 6.50 mmol)를 가하였다. 이 반응 혼합물을 0℃에서 2 시간 동안 교반한 후, 실온에서 밤새도록 교반하였다. 혼합물을 진공 농축시키고, 잔류물은 CHCl3:EtOH(15:1)로 용출하면서 실리카 겔 상의 크로마토그래피에 의해 압착 가능한 백색 폼으로서 부제 화합물(1.1 g, 59%)을 얻었다.
1H NMR(300 MHz, CD3OD, 회전 이성질체의 착체 혼합물) δ7.79-7.83(m, 2H), 7.26-7.52(m, 5H), 6.94 및 6.91(t, JH-F = 73 Hz, 1H), 5.27 및 5.07(s, 1H), 5.20-5.23 및 4.80-4.88(m, 1H), 4.01-4.79(m, 8H), 3.60-3.71(m, 2H), 3.40-3.53(m, 2H), 3.32(s, 3H), 2.10-2.75(m, 2H), 1.05-1.11(m, 2H), 0.08(s, 9H).
(viii) Ph(3-Br)(5-OCHF 2 )-(R)CH(OH)C(O)-Aze-Pab(Teoc)
2-프로판올(10 ㎖) 중의 Ph(3-Br)(5-OCHF2)-(R)CH(OMEM)C(O)-Aze-Pab(Teoc)(369 mg, 0.496 mmol; 상기 단계(vii) 참조)와 사브롬화탄소(165 mg, 0.496 mmol)의 혼합물을 12 시간 동안 환류시켰다. 이 혼합물을 진공 농축한 후, H2O(15 ㎖)와 EtOAc(5 x 20 ㎖) 사이에 분배하였다, 합한 유기물을 건조시키고(Na2SO4), 여과하였으며, 진공 농축시켰다. CHCl3:EtOH(15:1)로 용출하면서 실리카 겔 상의 플래쉬 크로마토그래피에 의해 압착 가능한 백색 폼으로서 부제 화합물(134 mg, 41%)을 얻었다.
Mp: 92-98℃.
Rf = 0.37(9:1 CHCl3:EtOH).
1H NMR(300 MHz, CD3OD, 회전 이성질체의 착체 혼합물) δ7.80-7.86(m, 2H), 7.40-7.48(m, 2H) 7.10-7.33(m, 3H), 6.92 및 6.88(t, JH-F = 73 Hz, 1H), 5.18 및 5.11(s, 1H), 5.18-5.24 및 4.76-4.80(m, 1H), 3.98-4.54(m, 6H), 2.10-2.70(m, 2H), 1.05-1.11(m, 2H), 0.08(s, 9H).
APCI-MS:(M+1) = 655 m/z.
(ix) Ph(3-Br)(5-OCHF 2 )-(R)CH(OH)C(O)-Aze-Pab x TFA
Ph(3-Br)(5-OCHF2)-(R)CH(OH)C(O)-Aze-Pab(Teoc)(0.081 g, 0.124 mmol; 상기 단계(viii) 참조)를 TFA 5 ㎖ 중에 용해시키고, 빙욕에서 냉각하면서 80 분 동안 반응시켰다. TFA를 증발시키고, 잔류물은 CH3CN:0.1 M NH40Ac(30:70)를 사용하는 정제용 RPLC로 정제하였다. 적절한 분획을 증발시키고, 물/아세토니트릴로부터 냉동 건조시켜서 아세트산염으로서 표제 화합물(59 mg, 83%)을 얻었다.
1H-NMR(300 MHz; CD3OD) 회전 이성질체: δ7.8-7.7(m, 2H), 7.6-7.4(m, 3H), 7.3-7.2(m, 2H), 6.89(t, 1H, 주 회전 이성질체), 6.87(t, 1H, 부 회전 이성질체), 5.23(m, 1H, 부 회전 이성질체), 5.21(s, 1H, 주 회전 이성질체), 5.13(s, 1H, 부 회전 이성질체), 4.80(m, 1H, 주 회전 이성질체), 4.6-4.4(m, 2H), 4.38(m, 1H, 주 회전 이성질체), 4.20(m, 1H, 주 회전 이성질체), 4.1-3.9(m, 2H, 부 회전 이성질체로부터 2가지 시그날), 2.70(m, 1H, 부 회전 이성질체), 2.54(m, 1H, 주 회전 이성질체), 2.29(m, 1H, 주 회전 이성질체), 2.15(m, 1H, 부 회전 이성질체), 1.89(s, 3H).
13C-NMR(75 MHz; CD3OD): (카르보닐 탄소 및/또는 아미딘 탄소) δ 172.0, 171.7, 167.0
MS(m/z) 511/513(M+1)+.
실시예 29
Ph(3-Br)(5-OCHF 2 )-(R)CH(OH)C(O)-Aze-Pab(OMe)
(i) Ph(3-Br)(5-OCHF 2 )-(R)CH(OMEM)C(O)-Aze-Pab(OMe)
0℃에서 질소 하에 DMF(30 ㎖) 중의 Ph(3-Br)(5-OCHF2)-(R)CH(OMEM)C(O)OH(957 mg, 2.48 mmol; 상기 실시예 28의 단계(vi) 참조)의 용액에 HAze-Pab(OMe)ㆍ2HCl(1.1 g, 3.2 mmol), PyBOP(1.4 g, 2.7 mmol) 및 DIPEA(804 mg, 6. 2 mmol)를 가하였다. 반응물을 0℃에서 2 시간 동안 교반한 후, 실온에서 밤새도록 교반하였다. 혼합물을 진공 농축시키고, 잔류물을, 먼저 CHCl3:EtOH(9:1)로 용출한 후 EtOAc:EtOH(15:1)로 용출하면서 실리카 겔 상의 크로마토그래피를 2회 수행하여 압착 가능한 백색 폼으로서 부제 화합물(1.1 g, 72%)을 얻었다.
1H NMR(300 MHz, CD3OD, 회전 이성질체의 착체 혼합물) δ7.59-7.65(m, 2H), 7.20-7.55(m, 5H), 6.95 및 6.91(t, JH-F = 73 Hz, 1H), 5.27 및 5.07(s, 1H), 5.18-5.23 및 4.75-4.84(m, 1H), 3.87-4.89(m, 6H), 3.84(s, 3H), 3.60-3.71(m, 2H), 3.40-3.53(m, 2H), 3.32(s, 3H), 2.10-2.75(m, 2H).
(ii) Ph(3-Br)(5-OCHF 2 )-(R)CH(OH)C(O)-Aze-Pab(OMe)
2-프로판올(30 ㎖) 중의 Ph(3-Br)(5-OCHF2)-(R)CH(OMEM)C(O)-Aze-Pab(OMe)(1.1 g, 1.8 mmol; 상기 단계(i) 참조)와 사브롬화탄소(583 mg, 1.8 mmol)의 혼합물을 2.5 일 동안 환류시켰다. 이 시간 동안, 추가의 사브롬화탄소(추가의 0.90 mmol의 경우, 일정 간격으로 50 mg의 5회 분량)을 가하여 반응을 확실히 종결시켰다. 이 혼합물을 진공 농축한 후, H2O(50 ㎖)와 EtOAc(5 x 25 ㎖) 사이에 분배하였다. 합한 유기물을 건조시키고(Na2SO4), 여과하였으며, 진공 농축시켰다. CHCl3:EtOH(15:1)로 용출하면서 실리카 겔 상의 플래쉬 크로마토그래피에 의해 압착 가능한 백색 폼으로서 표제 화합물(460 mg, 50%)을 얻었다.
Mp: 71-75℃.
Rf = 0.63(9:1 CHCl3:EtOH).
1H NMR(300 MHz, CD3OD, 회전 이성질체의 착체 혼합물) δ7.59(d, J = 8 Hz, 2H), 7.20-7.54(m, 5H), 6.90 및 6.87(t, JH-F = 73 Hz, 1H), 5.18 및 5.11(s, 1H), 4.76-4.80(m, 1H), 3.98-4.54(m, 4H), 3.82(s, 3H), 2.10-2.70(m, 2H).
13C-NMR(100 MHz; CD3OD): (카르보닐 탄소 및/또는 아미딘 탄소, 회전 이성질체) δ 172.5, 172.1, 171.6, 154.1
APCI-MS:(M+1) = 542 m/z.
실시예 30
Ph(3-Cl)(5-OCH 2 CHF 2 )-(R)CH(OH)C(O)-Aze-Pab(OH)
(i) Ph(3-Cl)(5-OCH 2 CHF 2 )-(R)CH(OH)C(O)-Aze-Pab(Z)
Boc-Aze-Pab(Z)(국제 특허 출원 제WO 97/02284호 참조, 92 mg, 0.197 mmol)를 HCl(g)로 포화된 EtOAc 10 ㎖ 중에 용해시키고, 10 분 동안 반응시켰다. 용매를 증발시키고, 잔류물을 DMF 2 ㎖ 중의 Ph(3-Cl)(5-OCH2CHF2)-(R)CH(OH)C(O)OH(50 mg, 0.188 mmol; 실시예 17의 단계(v) 참조), PyBOP(109 mg, 0.209 mmol) 및 최종적으로 디이소프로필에틸 아민(96 mg, 0.75 mmol)과 혼합하였다. 이 혼합물을 2 시간 동안 교반한 후, 물 50 ㎖ 내에 붓고, EtOAc로 3회 추출하였다. 합한 유기상을 물로 세척하고, 건조시켜며(Na2SO4), 증발시켰다. 미정제 생성물은 EtOAc:MeOH(9:1)로 용출하면서 실리카 겔 상의 플래쉬 크로마토그래피를 수행하였다.
수득량: 100 mg(87%).
1H NMR(300 MHz, CD3OD, 회전 이성질체의 혼합물) δ7.85-7.75(m, 2H), 7.45-7.25(m, 7H), 7.11(m, 1H, 주 회전 이성질체), 7.08(m, 1H, 부 회전 이성질체), 7.05-6.9(m, 2H), 6.13(bt, 1H), 5.25-5.05(m, 3H), 4.77(m, 1H, CD3OH 시그날에 의해 부분적으로 장애됨), 4.5-3.9(m, 7H), 2.64(m, 1H, 부 회전 이성질체), 2.47(m, 1H, 주 회전 이성질체), 2.25(m, 1H, 주 회전 이성질체), 2.13(m, 1 H, 부 회전 이성질체).
(ii) Ph(3-Cl)(5-OCH 2 CHF 2 )-(R)CH(OH)C(O)-Aze-Pab(OH)
히드록실아민 염산염(65 mg, 0.94 mmol) 및 트리에틸아민(0.319 g, 3.16 mmol)을 THF 8 ㎖ 중에 혼합하고, 40℃에서 1 시간 동안 초음파 처리하였다. Ph(3-Cl)(5-OCH2CHF2)-(R)CH(OH)C(O)-Aze-Pab(Z)(96 mg, 0.156 mmol; 상기 단계(i) 참조)를 8 ㎖ 이상의 THF와 함께 가하였다. 이 혼합물을 40℃에서 4.5 일 동안 교반하였다. 용매를 증발시키고, 미정제 생성물은 CH3CN:0.1 M NH40Ac(40:60)을 사용하는 정제용 RPLC로 정제하였다.
수득량: 30 mg(38%).
순도: 99%.
1H NMR(300 MHz, CD3OD, 회전 이성질체의 혼합물) δ7.6-7.55(m, 2H), 7.35-7.3(m, 2H), 7.12(m, 1H, 주 회전 이성질체), 7.09(m, 1H, 부 회전 이성질체), 7.05-6.9(m, 2H), 6.15(다중 피이크 중 삼중 피이크, 1H), 5.15(m, 1H, 부 회전 이성질체), 5.13(s, 1H, 주 회전 이성질체), 5.08(s, 1H, 부 회전 이성질체), 4.77(m, 1H, 주 회전 이성질체), 4.5-4.2(m, 5H), 4.08(m, 1H, 주 회전 이성질체), 3.97(m, 1H, 부 회전 이성질체), 2.66(m, 1H, 부 회전 이성질체), 2.50(m, 1H, 주 회전 이성질체), 2.27(m, 1H, 주 회전 이성질체), 2.14(m, 1H, 부 회전 이성질체).
13C-NMR(100 MHz; CD3OD): (카르보닐 탄소 및/또는 아미딘 탄소, 회전 이성질체의 혼합물) δ 172.8, 172.2, 171.4, 159.1, 158.9, 154.2
APCI-MS: (M+1) = 497/499 m/z.
실시예 31
Ph(3-Cl)(5-OCH 2 CH 2 F)-(R)CH(OH)C(O)-Aze-Pab(OH)
(i) Ph(3-Cl)(S-OCH 2 CH 2 F)-(R)CH(OH)C(O)-Aze-Pab(Z)
Boc-Aze-Pab(Z)(130 mg, 0.279 mmol)를 HCl(g)로 포화된 EtOAc 15 ㎖ 중에 용해시키고, 10 분 동안 반응시켰다. 용매를 증발시키고, 잔류물을 DMF 3 ㎖ 중의 Ph(3-Cl)(5-OCH2CH2F)-(R)CH(OH)-C(O)OH(63 mg, 0.188 mmol; 실시예 21의 단계(v) 참조), PyBOP(147 mg, 0.279 mmol) 및 최종적으로 디이소프로필에틸 아민(134 mg, 1.03 mmol)과 혼합하였다. 이 혼합물을 130 분 동안 교반한 후, 물 75 ㎖에 붓고, EtOAc로 3회 추출하였다. 합한 유기상을 물로 세척하고, 건조시켰으며(Na2SO4), 증발시켰다. 미정제 생성물은 EtOAc/MeOH = 95/5로 용출하면서 실리카 겔 상의 플래쉬 크로마토그래피를 수행하여 얻었다.
수득량: 119 mg(79%).
1H NMR(400 MHz, CDCl3) δ8.06(bt, 1H), 7.67(d, 2H), 7.45-7.25(m, 5H), 7.18(d, 2H), 6.89(m, 1H), 6.84(m, 1H), 6.76(m, 1H), 5.16(s, 2H), 4.84(s, 1H), 4.79(m, 1H), 4.66(다중 피이크 중 이중 피이크, 2H), 4.4-4.3(m, 2H), 4.10(다중 피이크 중 이중 피이크, 2H), 4.02(m, 1H), 3.67(m, 1H), 2.46(m, 1H), 2.28(m, 1H).
(ii) Ph(3-Cl)(5-OCH 2 CH 2 F)-(R)CH(OH)C(O)-Aze-Pab(OH)
히드록실아민 염산염(80 mg, 1.16 mmol) 및 트리에틸아민(0.392 g, 3.87 mmol)을 THF 9 ㎖ 중에 혼합하고, 40℃에서 1 시간 동안 초음파 처리하였다. Ph(3-Cl)(5-OCH2CH2F)-(R)CH(OH)C(O)-Aze-Pab(Z)(96 mg, 0.156 mmol; 상기 단계(i) 참조)를 9 ㎖ 이상의 THF와 함께 가하였다. 이 혼합물을 40℃에서 48 시간 동안 교반하고, 실온에서 3 일 동안 교반하였다. 용매를 증발시키고, 미정제 생성물은 CH3CN:0.1 M NH40Ac(30:70)를 사용하는 정제용 RPLC로 정제하였다.
수득량: 72 mg(78%).
순도: 100%.
1H NMR(400 MHz, CD3OD, 회전 이성질체의 혼합물) δ7.6-7.55(m, 2H), 7.35-7.25(m, 4H), 7.07(m, IH, 주 회전 이성질체), 7.04(m, 1H, 부 회전 이성질체), 7.0-6.9(M, 2H), 5.12(m, 1H, 부 회전 이성질체), 5.08(s, 1H, 부 회전 이성질체), 5.04(s, 1H), 4.78(m, 1H, 주 회전 이성질체), 4.68(다중 피이크 중 이중 피이크, 2H), 4.5-4.25(m, 3H), 4.20(다중 피이크 중 이중 피이크, 2H) 4.06(m, 1H, 주 회전 이성질체), 3.97(m, 1H, 부 회전 이성질체), 2.65(m, 1H, 부 회전 이성질체), 2.48(m, 1H, 주 회전 이성질체), 2.27(m, 1H, 주 회전 이성질체), 2.14(m, 1H, 부 회전 이성질체).
13C-NMR(100 MHz; CD3OD): (카르보닐 탄소 및/또는 아미딘 탄소, 회전 이성질체의 혼합물) δ 172.3, 171.5, 159.8, 154.3
APCI-MS:(M+1) = 479/481 m/z.
실시예 32
Ph(3-Cl)(5-OCHF 2 )-(R)CH(OH)-C(O)-Pro-Pab
(i) Boc-Pro-Pab(Teoc)
Boc-Pro-Pab(Z)(국제 특허 출원 제WO 97/02284호 참조, 15.0 g, 0.0321 mol)를 에탄올 150 ㎖ 중에 용해시키고, 10% Pd/C(50% 수분) 200 mg을 가하였다. 이 혼합물을 교반하고, 대기압에서 2 시간 동안 수소화하였으며, Hyflo를 통해 여과하고, 농축시켰다. 생성물은 더 이상의 정제없이 사용하였다. 이들 생성물 중에서 10 g(0.029 mol)을 취하고, 이것을 THF 300 ㎖ 중에 용해시켰다. Teoc-p-니트로페닐 카르보네이트(10 g, 0.035 mol)를 가하였다. 물 50 ㎖ 중의 탄산칼륨(5.2 g, 0.038 mol)의 용액을 3 분에 걸쳐서 가하고, 생성된 용액을 3 일 동안 교반하였으며, 농축시키고, 잔류물을 EtOAc로 3회 추출하였다. 합한 유기층을 물로 세척하고, 건조시켰으며(Na2SO4), 증발시켰다. 미정제 생성물은 염화메틸렌:아세톤(4:1)을 사용하여 실리카 겔 상의 플래쉬 크로마토그래피를 수행하였다.
수득량: 9.8 g(69%).
(ii) Ph(3-Cl)(5-OCHF 2 )-(R)CH(OH)-C(O)-Pro-Pab(Teoc)
Boc-Pro-Pab(Teoc)(107 mg, 0.218 mmol; 상기 단계(i) 참조)를 HCl(g)로 포화된 EtOAc 10 ㎖ 중에 용해시키고, 10 분 동안 반응시켰다. 용매를 증발시키고, 잔류물을 DMF 3 ㎖ 중의 Ph(3-Cl)(5-OCHF2)-(R)CH(OH)C(O)OH(50 mg, 0.198 mmol; 실시예 1의 단계(viii) 참조), PyBOP(115 mg, 0.218 mmol) 및 최종적으로 디이소프로필에틸 아민(104 mg, 0.80 mmol)과 혼합하였다. 혼합물을 2 시간 동안 교반한 후, 물 75 ㎖에 붓고, EtOAc로 3회 추출하였다. 합한 유기상을 물로 세척하고, 건조시켰으며(Na2SO4), 증발시켰다. 미정제 생성물은 EtOAc:MeOH(95:5)를 사용하여 실리카 겔 상의 플래쉬 크로마토그래피를 수행하였다.
수득량: 89 mg(72%).
1H NMR(400 MHz, CDCl3) δ7.54(bt, 1H), 7.47(d, 2H), 7.12(m, 1H), 7.08(d, 2H), 7.02(m, 1H), 6.95(m, 1H), 6.50(t, 1H), 5.21(s, 1H), 4.42(m, 1H), 4.35-4.15(m, 3H), 3.59(m, 1H), 2.94(m, 1H), 2.1-1.7(m, 4H), 1.06(m, 2H), 0.04(s, 9H).
(iii) Ph(3-Cl)(5-OCHF 2 )-(R)CH(OH)-C(O)-Pro-Pab x TFA
Ph(3-Cl)(5-OCHF2)-(R)CH(OH)C(O)-Pro-Pab(Teoc)(85 mg, 0.136 mmol; 상기 단계(ii) 참조)를 염화메틸렌 1 ㎖ 중에 용해시키고, 빙욕에서 냉각시켰다. TFA(4 ㎖)를 가하고, 반응물을 90 분 동안 교반하였다. TFA를 증발시키고, 잔류물을 물과 아세토니트릴로부터 냉동 건조시켰다.
수득량: 79 mg(92%).
순도: 94%.
1H NMR(400 MHz, CD3OD, 회전 이성질체의 혼합물) δ 7.85-7.7(m, 2H), 7.58(d, 2H, 주 회전 이성질체), 7.47(d, 2H, 부 회전 이성질체), 7.35(m, 1H, 주 회전 이성질체), 7.27(m, 1H, 부 회전 이성질체), 7.2-7.1(m, 2H), 6.88(t, 1H), 5.38(s, 1H, 주 회전 이성질체), 5.22(s, 1H, 부 회전 이성질체), 4.58(d, 1H), 4.5-4.2(m, 2H), 3.8-3.5(m, 1H), 3.35(m, 1H), 2.2-1.8(m, 4H).
13C-NMR(100 MHz; CD3OD): (카르보닐 탄소 및/또는 아미딘 탄소) δ 173.6, 171.1, 167.0
APCI-MS:(M+1) = 481/483 m/z.
실시예 33
Ph(3-Cl)(5-OCHF 2 )-(R)CH(OH)-C(O)-Pro-Pab(OMe)
(i) 4-아지도메틸-N-메톡시-벤즈아미딘
4-아지도메틸벤조니트릴(17.3 g, 0.109 mol; Nishiyama et al; Chem. Lett. (1982) 1477)]을 톨루엔 500 ㎖ 및 절대 에탄올 200 ㎖ 중에 용해시켰다. 용액을 -10℃로 냉각하고, HCl(g)를 사용하여 포화될 때까지 기포화시켰다. 이 혼합물을 냉장기에 2 일 동안 유지하였는데, 이때 대부분의 용매가 증발되었다. 디에틸 에테르를 가하고, 경사 분리하였다. 생성물을 메탄올 200 ㎖ 중의 O-메틸히드록실 아민(10.5 g, 0.125 mol) 및 트리에틸아민(56 ㎖)의 용액 중에 재용해시켰다. 이 혼합물을 3 일 동안 방치하였는데, 이때 메탄올은 EtOAc를 가하여 증발시켰다. 유기상을 물, 희석된 HOAc 및 수성 중탄산나트륨으로 세척하고, 건조시켰으며(Na2SO4), 총 부피 500 ㎖에 이르는 보다 많은 양의 EtOAc로 희석시켰다. 샘플 25 ㎖를 증발 건조시켰다. 잔류량은 932 mg이었다.
총 수득량: 18.6 g(83%).
(ii) 4-아미노메틸-N-메톡시-벤즈아미딘
에탄올 200 ㎖ 중의 4-아지도메틸-N-메톡시-벤즈아미딘(11.3 g, 0.055 mol; 상기 단계(i) 참조)의 용액에 Pt02 200 mg을 가하였다. 이 혼합물을 수소의 일정한 기포화 과정에 의해 4 시간 동안 수소화하고, 이어서 셀라이트(등록상표)를 통해 여과하였으며, 증발시켰다.
수득량: 7.34 g(74%).
(iii) Boc-Pro-Pab(OMe)
아세토니트릴 300 ㎖ 중의 Boc-Pro-OH(9.7 g, 0.045 mol), 4-아미노메틸-N-메톡시-벤즈아미딘(7.34 g, 0.041 mol; 상기 단계(ii) 참조) 및 디메틸아미노피리딘(7.8 g, 0.064 mol)의 현탁액에 EDC 염기(11.7 ㎖, 0.068 mol)를 가하였다. 이 혼합물을 18 시간 동안 교반하고, 농축시켰며, 물과 EtOAc 사이에 분배하였다. 유기층을 물, 수성 중탄산나트륨으로 세척하고, MgS04로 건조시켰으며, 증발시켰다. 미정제 생성물은 EtOAc로 실리카 겔 상의 플래쉬 크로마토그래피를 수행하였다.
수득량: 9.73 g(63%).
(iv) H-Pro-Pab(OMe) x 2 HCl
Boc-Pro-Pab(OMe)(9.7 g, 0.026 mol; 상기 단계(iii) 참조)를 EtOAc 250 ㎖ 중에 용해시켰다. 빙냉된 용액은 HCl(g)을 사용하여 5 분 동안 기포화시킴으로써 포화시켰다. 생성물은 즉각적으로 침전되었고, 여기에 절대 에탄올 125 ㎖를 가하였다. 이 혼합물은 대부분의 물질이 고화될 때까지 초음파 처리하였다. 디에틸 에테르(200 ㎖)를 가하고, 이 현탁액을 여과하였다. 고화되지 않은 몇개의 집합체(lump)를 절대 에탄올과 디에틸 에테르로 다시 처리하였다. 고체를 건조시켰다.
수득량: 7.57 g(86%).
1H NMR(400 MHz, CD3OD) δ 7.74(d, 2H), 7.58(d, 2H), 4.55(s, 2H), 4.38(m, 1H), 3.98(s, 3H), 3.45-3.3(m, 2H), 2.50(m, 1H), 2.15-2.0(m, 3H).
(v) Ph(3-Cl)(5-OCHF 2 )-(R)CH(OH)-C(O)-Pro-Pab(OMe)
Ph(3-Cl)(5-OCHF2)-(R)CH(OH)C(O)OH(50 mg, 0.198 mmol; 상기 실시예 1의 단계(viii) 참조), H-Pro-Pab(OMe)(76 mg, 0.218 mmol; 상기 단계(iv) 참조) 및 PyBOP(115 mg, 0.218 mmol)를 DMF 2 ㎖ 중에 용해시켰다. 디이소프로필에틸 아민(104 mg, 0.80 mmol)을 가하고, 이 혼합물을 2.5 시간 동안 교반하였다. 혼합물을 물 50 ㎖에 붓고, EtOAc로 3회 추출하였며, 합한 유기상을 염수로 세척하고, 건조시켰으며(Na2SO4), 증발시켰다. 잔류물은 EtOAc:MeOH(95:5)를 사용하여 실리카 겔 상의 플래쉬 크로마토그래피를 수행하였다.
수득량: 37 mg(36%).
순도: 98%.
1 H NMR(400 MHz, CD3OD, 회전 이성질체의 혼합물) δ7.60(d, 2H, 주 회전 이성질체), 7.57(d, 2H, 부 회전 이성질체), 7.4-7.1(m, 5H), 6.89(t, 1H, 주 회전 이성질체), 6.87(t, 1H, 부 회전 이성질체), 5.35(s, 1H, 주 회전 이성질체), 5.21(s, 1H, 부 회전 이성질체), 4.72(m, 1H, 부 회전 이성질체), 4.5-4.35(m, 1H 및 2H, 주 회전 이성질체), 4.3-4.25(m, 2H, 부 회전 이성질체), 3.814(s, 3H, 주 회전 이성질체), 3.807(s, 3H, 부 회전 이성질체), 3.75-3.5(m, 1H), 3.35(m, 1H), 2.21.8(m, 4H).
13C-NMR(100 MHz; CD3OD): (카르보닐 탄소 및/또는 아미딘 탄소, 회전 이성질체의 혼합물) δ 173.3, 173.2, 171.3, 171.0, 153.9, 152.4
APCI-MS:(M+1) = 511/513 m/z.
실시예 34
Ph(3-Cl)(5-OCHF 2 )-(R)CH(OH)C(O)-Aze-NH-CH 2 -((2-아미디노)-5-피리딘일)
(i) 6-시아노니코틴산
DMF 1.2 ℓ 중의 니코틴산 N-옥사이드(51 g, 0.37 mol)의 용액에 NaCN(54 g, 1.1 mol)을 가하고, 이어서 트리에틸아민(255 ㎖, 1.83 mol) 및 TMSCl(185 ㎖)을 가하였다. 이 반응 혼합물을 110℃에서 10 시간 동안 교반하고, 여과하였으며, 여액을 농축시켰다. 잔류물을 2 N HCl 100 ㎖ 중에 용해시키고, 염화메틸렌으로 추출하였다. 유기층을 합하고, 농축하였으며, 물로부터 재결정화시켜서 생성물 12 g(22%)을 얻었다.
(ii) 5-(히드록시메틸)피리딘-2-카르보니트릴
0℃에서 THF 중의 6-시아노니코틴산(12 g, 0.081 mol; 상기 단계(i) 참조)의 용액에 Et3N(12.4 ㎖, 0.0892 mol)을 가하고, 이어서 에틸 클로로포르메이트(8.53 ㎖, 0.0892 mol)를 가하였다. 반응 혼합물을 15 분 동안 교반하고, NaBH4(6.14 g, 0.162 mol)를 가하였다. 이어서, 혼합물을 실온에서 밤새도록 교반하고, 물로 켄칭 처리하며, 염화메틸렌으로 추출하였다. 유기층을 농축시키고, 컬럼 크로마토그래피로 정제하여 알콜 4 g(20%)을 얻었다.
(iii) 5-(아지도메틸)피리딘-2-카르보니트릴
5-(히드록시메틸)피리딘-2-카르보니트릴(4 g, 0.03 mol; 상기 단계(ii) 참조)을 염화메틸렌 25 ㎖ 중에 용해시키고, 빙욕에서 냉각시켰다. 염화메실(2.32 ㎖, 0.0300 mol)을 적가한 후, 트리에틸아민(4.6 ㎖, 0.033 mol)을 적가하였다. 이 반응 혼합물을 교반하고, 후처리 후 미정제 메실레이트를 DMF 20 ㎖ 중의 NaN3(7.35 g, 0.113 mol)로 처리하였다. 반응 혼합물을 40℃에서 2 시간 동안 교반하고, 물로 희석하였으며, 에틸 아세테이트로 추출하였다. 유기층을 농축하여 미정제 아지드 3.95 g(83%)을 얻었다.
(iv) 5-(t-부톡시카르보닐아미노메틸)피리딘-2-카르보니트릴
THF 30 ㎖ 및 물 10 ㎖ 중의 5-(아지도메틸)피리딘-2-카르보니트릴(3.95 g, 0.0248 mol; 상기 단계(iii) 참조)의 용액에 트리페닐 포스핀(7.8 g, 0.0298 mol)을 가하고, 생성물을 24 시간 동안 교반하였다. 이어서, 트리에틸아민(3.8 ㎖, 0.027 mol)을 가한 다음, Boc 무수물(5.4 g, 0.025 mol)을 가하고 2 시간 동안 교반하였다. 반응 혼합물을 물과 에틸 아세테이트 사이에 분배하였다. 유기층을 농축시키고, 컬럼 크로마토그래피로 정제하여 부제 화합물 2.1 g(36%)을 얻었다.
1H NMR(300 MHz, CDCl3) δ8.6(s, 1H), 8.0(d, 1H), 8.9(d, 1H), 4.1(m, 2H), 1.4(s, 9H).
(v) 5-(아미노메틸)피리딘-2-카르보니트릴 x 2 HCl
5-(t-부톡시카르보닐아미노메틸)피리딘-2-카르보니트릴(0.200 g, 0.86 mmol, 상기 단계(iv) 참조)을 HCl(g)로 포화된 EtOAc 10 ㎖ 중에 용해시키고, 30 분 동안 교반하였다. 용매를 증발시키고, 부제 화합물 0.175 g(99%)을 2염산염으로서 얻었다.
1H NMR(500 MHz, D2O) δ 8.79(s, 1H), 8.17(d, 1H), 8.05(d, 1H), 4.38(s,
2H).
(vi) Boc-Aze-NH-CH 2 -5-Py(2-CN)
DMF 5 ㎖ 중의 5-(아미노메틸)피리딘-2-카르보니트릴 x 2 HCl(0.175 g, 0.85 mmol; 상기 단계(v) 참조), Boc-Aze-OH(0.201 g, 1.00 mmol) 및 TBTU(0.321 g, 1.00 mmol)의 혼합물에 디메틸아미노피리딘(0.367 g, 3.00 mmol)을 가하였다. 이 혼합물을 밤새도록 교반하고, 이어서 물에 부었으며, EtOAc로 3회 추출하였다. 합한 유기상을 수성 중탄산나트륨으로 세척하고, 건조시켰으며(Na2SO4), 증발시켰다. 미정제 생성물은 재결정화되기 시작하였는데, 이것을 다음 단계에서 그대로 사용하였다.
수득량: 0.23 g(73%).
1H NMR(500 MHz, CDCl3) δ8.66(s, 1H), 8.2-7.8(br, 1H), 7.79(d, 1H), 7.67(d, 1H), 4.73(m, 1H), 4.65-4.5(m, 2H), 3.94(m, 1H), 3.81(m, 1H), 2.6-2. 35(m, 2H), 1.8(br, 1H), 1.45(s, 9H).
(vii) H-Aze-NH-CH 2 -5-Py(2-CN) x 2 HCl
Boc-Aze-NH-CH2-5-Py(2-CN)(0.23 g, 0.73 mmol; 상기 단계(vi) 참조)을 HCl(g)로 포화된 EtOAc 10 ㎖ 중에 용해시키고, 30 분 동안 교반하였다. 용매를 증발시키고, 부제 화합물 0.21 g(100%)을 2염산염으로서 얻었다.
1H NMR(500 MHz, D2O) δ8.64(s, 1H), 8.0-7.9(m, 2H), 5.19(m, 1H), 4.65-4. 55(m, 2H), 4.20(m, 1H), 4.03(m, 1H), 2.88(m, 1H), 2.64(m, 1H).
(viii) Ph(3-Cl)(5-OCHF 2 )-(R)CH(OH)-C(O)-Aze-NH-CH 2 -5-Py(2-CN)
DMF 5 ㎖ 중의 H-Aze-NH-CH2-5-Py(2-CN) x 2 HCl(0.206 g, 0.713 mmol; 상기 단계(vii) 참조), Ph(3-Cl)(5-OCHF2)-(R)CH(OH)C(O)OH(0.180 g, 0.713 mmol; 상기 실시예 1의 단계(viii) 참조) 및 PyBOP(0.408 g, 0.784 mmol)의 혼합물에 디메틸아미노피리딘(0.367 g, 3.00 mmol)을 가하였다. 혼합물을 밤새도록 교반하고, 이어서 물에 부었으며, EtOAc로 3회 추출하였다. 합한 유기상을 수성 중탄산나트륨으로 세척하고, 건조시켰으며(Na2SO4), 증발시켰다. 미정제 생성물은 EtOAc를 사용하여 실리카 겔 상의 플래쉬 크로마토그래피를 수행하여 순수한 생성물을 얻었다.
수득량: 0.197 g(61%).
1H NMR(500 MHz, CDCl3) δ8.63(m, 1H), 8.22(bt, 1H), 7.78(m, 1H), 7.67(m, 1H), 7.21(m, 1H), 7.16(m, 1H), 7.04(m, 1H), 6.56(t, 1H), 4.97(bd, 1H), 4.92(m, 1H), 4.6-4.5(m, 2H), 4.40(bd, 1H), 4.18(m, 1H), 3.80(m, 1H), 2.69(m, 1H), 2.46(m, 1H), 1.92(s, 1H).
APCI-MS:(M+1) = 451/453 m/z.
(ix) Ph(3-Cl)(5-OCHF 2 )-(R)CH(OH)-C(O)-Aze-NH-CH 2 -((2-아미디노)-5-피리딘일) x HOAc
메탄올 10 ㎖ 중의 Ph(3-Cl)(5-OCHF2)-(R)CH(OH)-C(O)-Aze-NH-CH2-5-Py(2-CN)(0.200 g, 0.444 mmol; 상기 단계(viii) 참조), 아세트산암모늄(1.00 g, 0.0130 mol) 및 N-아세틸시스테인(2.00 g, 0.0122 mol)을 50℃에서 2 일 동안 가열하였다. CH3CN:0.1 M NH40Ac(30:79)을 사용하는 정제용 RPLC로 처리하고, 적당한 분획을 다시 CH3CN:0.1 M NH40Ac(5:95 내지 40:60)로 운전하여 물 및 아세토니트릴로부터 냉동 건조시킨 후 아세트산염으로서 순수한 표제 화합물 60 mg(26%)을 얻었다.
순도: 100%.
1H NMR(500 MHz, D2O, 회전 이성질체의 혼합물) δ 8.68(s, 1H, 주 회전 이성질체), 8.62(s, 1H, 부 회전 이성질체), 8.05-7.9(m, 2H), 7.33(m, 1H, 회전 이성질체), 7.27(m, 1H, 회전 이성질체), 7.22(m, 1H, 회전 이성질체), 7.17(m, 1H, 회전 이성질체), 7.01(m, 1H, 회전 이성질체), 6.84(t, 1H), 5.32(s, 1H, 주 회전 이성질체), 5.20(m, 1H, 부 회전 이성질체), 5.13(s, 1H, 부 회전 이성질체), 4.88(m, 1H, 주 회전 이성질체), 4.65-4.55(m, 2H, 주 회전 이성질체), 4.45-4.35(m, 1H, 회전 이성질체 중 여분의 1H, 부 회전 이성질체), 4.31(d, 1H, 부 회전 이성질체), 4.2-4.05(m, 1H, 여분의 1H, 회전 이성질체), 2.80(m, 1H, 부 회전 이성질체), 2.61(m, 1H, 주 회전 이성질체), 2.33(m, 1H, 주 회전 이성질체), 2.24(m, 1H, 부 회전 이성질체), 1.93(s, 3H).
13C-NMR(100 MHz; D2O): (카르보닐 탄소 및/또는 아미딘 탄소, 회전 이성질체의 혼합물) δ 181.6, 173.3, 172.7, 172.6, 172.3, 162.6, 162.3
APCI-MS:(M+1) = 468/470 m/z.
실시예 35
Ph(3-Cl)(5-OCHF 2 )-(R)CH(OH)C(O)-Aze-NH-CH 2 -((2-메톡시아미디노)-5-피리딘일)
(i) Boc-NH-CH 2 -[(2-(아미노(히드록실이미노)메틸))-5-피리딘일]
5-(t-부톡시카르보닐아미노메틸)피리딘-2-카르보니트릴(1.00 g, 4.29 mmol; 상기 실시예 34의 단계(iv) 참조)을 에탄올 10 ㎖ 중에 용해시키고, 히드록실아민 염산염(0.894 g, 0.0129 mol) 및 트리에틸아민(1.30 g, 0.0129 mol)을 가하였다. 이 혼합물을 실온에서 6 일 동안 교반하였다. 혼합물을 물과 염화메틸렌 사이에 분배하였다. 수층을 염화메틸렌으로 추출하고, 합한 유기상을 물로 세척하였으며, 건조시키고(Na2SO4), 증발시켰다.
수득량: 0.96 g(84%).
1H NMR(400 MHz, 아세톤-d6) δ 9.01(bs, 1H), 8.50(bs, 1H), 7.87(m, 1H), 7.70(m, 1H), 6.58(br, 1H), 5.70(br, 2H), 4.31(d, 2H), 1.41(s, 9H).
(ii) Boc-Aze-NH-CH 2 -(2-(아미디노)-5-피리딘일) x HOAc
이 반응은 문헌[Judkins et al, Synth: Comm.(1998) 4351]에 설명된 방법에 따라 실시하였다. 아세트산(100 ㎖) 중의 Boc-NH-CH2-[(2-(아미노(히드록실이미노)메틸)-5-피리딘일(0.910 g, 3.42 mmol; 상기 단계(i) 참조), 아세트산 무수물(0.35 ㎖, 3.7 mmol) 및 10% Pd/C(50% 수분) 0.35 g의 현탁액을 5 atm의 압력에서 5 시간 동안 수소화하였다. 이 혼합물을 셀라이트를 통해 여과하고 농축시켰다. 잔류물은 물과 아세토니트릴로부터 냉동 건조시켜서 부제 화합물 0.97 g(92%)을 얻었다.
1H NMR(500 MHz, CD3OD) δ8.74(s, 1H), 8.12(d, 1H), 7.98(d, 1H), 4.38(s, 2H), 1.92(s, 3H), 1.46(s, 9H).
(iii) Boc-NH-CH 2 -(2-(아미노(트리메틸실릴에틸이미노)메틸)-5-피리딘일)
THF 75 ㎖ 중의 Boc-NH-CH2-(2-(아미디노)-5-피리딘일) x HOAc(0.96 g, 3.1 mmol; 상기 단계(ii) 참조)의 현탁액에 물 15 ㎖ 중의 탄산칼륨(1.07 g, 7.7 mmol) 및 Teoc-p-니트로페닐 카르보네이트(1.14 g, 4.02 mmol)의 용액을 가하였다. 혼합물을 밤새도록 교반하였다. 과량의 글리신 및 탄산칼륨을 가하고, 반응을 계속해서 2 시간 동안 지속하였다. THF를 증발시키고, 잔류물을 EtOAc로 3회 추출하였다. 합한 유기상을 물로 세척하고, 건조시켰으며(Na2SO4), 증발시켰다. 생성물은 더 이상의 정제없이 사용할 수 있었다.
1H NMR(500 MHz, CDCl3) δ9.31(br, 1H), 8.52(s, 1H), 8.41(d, 1H), 8.35(br, 1H), 7.74(d, 1H), 4.97(br, 1H), 4.39(m, 2H), 4.26(m, 2H), 1.46(s, 9H), 1.14(m, 2H), 0.07(s, 9H).
(iv) H 2 N-CH 2 -(2-(아미노(트리메틸실릴에틸이미노)메틸)-5-피리딘일) x 2 HCl
Boc-NH-CH2-(2-(아미노(트리메틸실릴에틸이미노)메틸)-5-피리딘일)(0.23 g, 0.58 mmol; 상기 단계(iii) 참조)을 HCl(g)로 포화된 EtOAc 25 ㎖ 중에 용해시키고, 30 분 동안 교반하였다. 용매를 증발시키고, 생성물을 더 이상의 정제없이 사용하였다.
수득량: 0.21 g(98%).
1H NMR(500 MHz, D2O) δ 8.89(s, 1H), 8.25(s, 2H), 4.55(m, 2H), 4.42(s, 2H), 1.20(m, 2H), 0.09(s, 9H).
(v) Boc-Aze-NH-CH 2 -(2-(아미노(트리메틸실릴에틸이미노)메틸)-5-피리딘일)
DMF 5 ㎖ 중의 H2N-CH2-(2-(아미노(트리메틸실릴에틸이미노)메틸)-5-피리딘일) x 2 HCl(0.21 g, 0.57 mmol; 상기 단계(iv) 참조), Boc-Aze-OH(0.127 g, 0.631 mmol) 및 TBTU(233 mg, 0.726 mmol)의 용액에 디메틸아미노피리딘(269 mg, 2.20 mmol)을 가하였다. 이 혼합물을 밤새도록 교반하고, 물 100 ㎖에 부었으며, EtOAc로 3회 추출하였다. 합한 유기상을 수성 중탄산나트륨과 물로 세척하고, 건조시켰으며(Na2SO4), 증발시켰다. 미정제 생성물은 EtOAc를 사용하여 실리카 겔 상의 플래쉬 크로마토그래피를 수행하여 소정의 생성물 170 mg(56%)을 얻었다.
1H NMR(500 MHz, CDCl3) δ9.33(br, 1H), 8.54(s, 1H), 8.41(d, 1H), 8.36(br, 1H), 7.75(m, 1H), 4.72(m, 1H), 4.56(m, 2H), 4.26(m, 2H), 3.93(m, 1H), 3.80(m, 1H), 2.6-2.4(m, 2H), 1.42(s, 9H), 1.14(m, 2H), 0.07(s, 9H).
(vi) H-Aze-NH-CH 2 -(2-(아미노(트리메틸실릴에틸이미노)메틸)-5-피리딘일) x 2 HCl
Boc-Aze-NH-CH2-(2-(아미노(트리메틸실릴에틸이미노)메틸)-5-피리딘일)(170 mg, 0.356 mmol; 상기 단계(v) 참조)을 HCl(g)로 포화된 EtOAc 25 ㎖ 중에 용해시키고, 30 분 동안 교반하였다. 용매를 증발시키고, 생성물을 더 이상의 정제없이 사용하였다.
수득량: 160 mg(100%).
1H NMR(500 MHz, CD3OD) δ9.00(m, 1H), 8.84(m, 1H), 8.23(d, 2H), 8.10(m, 1H), 5.09(m, 1H), 4.7-4.6(m, 2H), 4.51(m, 2H), 4.14(m, 1H), 3.97(m, 1H), 2.86(m, 1H), 2. 58(m, 1H), 1.22(m, 2H), 0.11(s, 9H).
(vii) Ph(3-Cl)(5-OCHF 2 )-(R)CH(OH)C(O)-Aze-NH-CH 2 -(2-(아미노(트리메틸실릴에틸이미노)메틸)-5-피리딘일)
DMF 5 ㎖ 중의 H-Aze-NH-CH2-(2-(아미노(트리메틸실릴에틸이미노)메틸)-5-피리딘일) x 2 HCl(160 mg, 0.462 mmol; 상기 단계(vi) 참조), Ph(3-Cl)(5-OCHF2)-(R) CH(OH)C(O)OH(131 mg, 0.462 mmol; 상기 실시예 1의 단계(viii) 참조) 및 PyBOP(263 mg, 0.505 mmol)의 용액에 디이소프로필에틸 아민(0.30 ㎖, 1.71 mmol)을 가하였다. 이 혼합물을 밤새도록 교반하고, 물 100 ㎖에 부었으며, EtOAc로 3회 추출하였다. 합한 유기상을 수성 중탄산나트륨과 물로 세척하고, 건조시켰으며(Na2SO4), 증발시켰다. 미정제 생성물은 EtOAc:MeOH(95:5)를 사용하여 실리카 겔 상의 플래쉬 크로마토그래피를 수행하여 소정의 생성물 148 mg(52%)을 얻었다.
(viii) Ph(3-Cl)(5-OCHF 2 )-(R)CH(OH)C(O)-Aze-NH-CH 2 -(2-(메톡시아미노(트리메틸실릴에틸이미노)메틸)-5-피리딘일)
아세토니트릴 10 ㎖ 중의 Ph(3-Cl)(5-OCHF2)-(R)CH(OH)-C(O)-Aze-NH-CH2-(2-(메톡시아미노(트리메틸실릴에틸이미노)메틸)-5-피리딘일)(148 mg, 0.242 mmol; 상기 단계(vii) 참조) 및 O-메틸히드록실 아민(202 mg, 2.42 mmol)의 현탁액을 70℃에서 3 시간 동안 가열하였다. 혼합물을 물과 EtOAc 사이에 분배하였다. 수층을 EtOAc로 2회 추출하고, 합한 유기상을 물로 세척하였으며, 건조시켰으며(Na2SO4), 증발시켰다. 미정제 생성물은 EtOAc:MeOH(95:5)를 사용하여 실리카 겔 상의 플래쉬 크마토그래피를 수행하여 순수한 물질 44 mg(28%)을 얻었다.
1H NMR(500 MHz, CDCl3) δ8.55(m, 1H), 8.05(bt, 1H), 7.70(m, 1H), 7.58(s, 1H), 7.56(d, 1H), 7.22(m, 1H), 7.16(m, 1H), 7.03(m, 1H), 6.50(t, 1H), 4.92(s, 1H), 4.89(m, 1H), 4.55-4.45(m, 2H), 4.38(br, 1H), 4.2-4.1(m, 3H), 4.00(s, 3H), 3.73(m, 1H), 2.69(m, 1H), 2.44(m, 1H), 0.97(m, 2H), 0.02(s, 9H).
(ix) Ph(3-Cl)(5-OCHF 2 )-(R)CH(OH)C(O)-Aze-NH-CH 2 -((2-메톡시아미디노)-5-피리딘일)
Ph(3-Cl)(5-OCHF2)-(R)CH(OH)C(O)-Aze-NH-CH2-(2-(메톡시아미노(트리메틸실릴에틸이미노)메틸)-5-피리딘일)(44 mg, 0.069 mmol; 상기 단계(viii) 참조)을 TFA 2 ㎖ 중에 용해시키고, 1 시간 동안 반응시켰다. TFA를 증발시키고, 잔류물을 EtOAc와 수성 중탄산나트륨 사이에 분배하였다. 수층을 EtOAc로 추출하고, 합한 유기상을 물로 세척하였으며, 건조시키고(Na2SO4), 증발시켰다.
수득량: 30 mg(88%).
순도: > 95%.
1H NMR(500 MHz, CDCl3) δ 8.44(m, 1H), 8.03(bt, 1H), 7.91(m, 1H), 7. 60(m, 1H), 7.19(m, 1H), 7.13(m, 1H), 7.00(m, 1H), 6.52(t, 1H), 5.6-5.45(br, 2H), 4.90(s, 1H), 4.89(m, 1H), 4.55-4.4(m, 2H), 4.27(br, 1H), 4.12(m, 1H), 3.92(s, 3H), 2.68(m, 1H), 2.41(m, 1H).
13C-NMR(100 MHz; CDCl3): (카르보닐 탄소 및/또는 아미딘 탄소) δ 173.0, 170.9, 152.6
APCI-MS:(M+1) = 498/500 m/z.
실시예 36
Ph(3-Cl)(5-OCHF 2 )-(R)CH(OH)C(O)-Aze-NH-CH 2 -((5-아미디노)-2-피리미디닐)
(i) 2-아미노-2-이미노에틸카르바메이트ㆍAcOH
N-Boc-아미노아세토니트릴(40.2 g, 257.4 mmol) 및 N-아세틸시스테인(42.0 g, 257.4 mmol)을 메탄올(300 ㎖) 중에 60℃에서 용해시키고, 암모니아를 18 시간 동안 통과시켰다. 용매를 진공 제거하였다. 이온 교환 크로마토그래피(Amberlite IRA-400(AcOH)) 및 아세톤으로부터의 재결정화로 처리한 후, 부제 화합물 28.4 g(53%)을 백색 고형물로서 얻었다.
1H NMR(300 MHz, CD3OD) δ 4.41(t, J = 4.9 Hz, 1H), 4.01(s, 2H), 2.91(d, J = 5.O Hz, 2H), 2.01(s, 3H), 1.46(s, 9H).
(ii) 1,3-비스(디메틸아미노)-2-시아노트리메티늄 퍼클로레이트
클로로포름(75 ㎖) 중의 3-디메틸아미노아크릴로니트릴(25.0 g, 260.0 mmol)을 0℃에서 클로로포름(175 ㎖) 중의 (클로로메틸렌)디메틸암모늄 클로라이드(50.0 g, 390.1 mmol)의 용액에 적가하였다. 이 반응 혼합물을 0℃에서 2 시간 동안 더 교반한 후, 실온으로 밤새 가온하고, 이어서 8 시간 동안 환류 하에 가열하였다. 용매를 진공 증발시켰다. 잔류물은 물(150 ㎖) 및 에탄올(300 ㎖) 중의 나트륨 퍼클로레이트(110 g, 0.898 mmol)의 혼합물에 가하였다. 이 혼합물을 환류 하에 15 분 동안 가열한 후, 냉각하고 냉장기에 밤새도록 방치하였다. 침전물을 수집하고, 에탄올로부터 제결정화시켜서 무색 침상으로서 부제 화합물 23.8 g(52%)을 얻었다.
1H NMR(300 MHz, CDCl3) δ8.24(s, 2H), 3.59(s, 6H), 3.51(s, 6H).
(iii) Boc-NH-CH 2 -(5-시아노)-2-피리미딘
피리딘(300 ㎖) 중의 t-부틸 2-아미노-2-이미노에틸카르바메이트ㆍAcOH(5.0 g, 23.8 mmol; 상기 단계(i) 참조) 및 1,3-비스(디메틸아미노)-2-시아노트리메티늄 퍼클로레이트(6.0 g, 23.8 mmol; 상기 단계(ii) 참조)의 혼합물을 70-75℃에서 16 시간 동안 질소 하에 교반한 후, 6 시간 동안 환류 하에 가열하였다. 이 혼합물을 실온으로 냉각하고, 용매를 진공 증발시켰다. 잔류물을 에틸 아세테이트와 클로로포름의 고온 혼합물(1:1)로 추출하고, 여과하였으며, 실리카의 소형 패드를 통해 여과하고, 농축하여서 미정제 생성물을 얻었다. 클로로포름으로 용출하면서 실리카 겔 상의 플래쉬 크로마토그래피에 의해 무색 오일로서 표제 화합물 4.0 g(71%)을 얻고, 이것을 방치하여 고형화시켰다.
mp: 86-87℃.
Rf = 0.77(실리카, 3:2 에틸 아세테이트:클로로포름).
1H NMR(300 MHz, DMSO-d6) δ 9.25(s, 2H), 7.39(bt, 1H), 4.39(d, J = 6 Hz, 2H), 1.38(s, 9H).
13C NMR(750 MHz, DMSO-d6) δ170.4, 160.3, 155.8, 115.2, 106.9, 80.0, 46.3, 28.1
APCI-MS:(M+1) = 235 m/z.
(iv) Boc-Aze-NH-CH 2 -((5-시아노)-2-피리미디닐)
Boc-NH-CH2-(5-시아노)-2-피리미딘(1.14 g, 4.87 mmol; 상기 단계(iii) 참조)을 HCl(g)로 포화된 EtOAc 50 ㎖ 중에 용해시키고, 1 시간 동안 반응시켰으며, 농축시켰다. 잔류물을 DMF 20 ㎖ 중에 용해시키고, 빙욕에서 냉각시켰다. 디이소프로필에틸 아민(3.5 ㎖, 0.020 mol), Boc-Aze-OH(1.08 g, 5.37 mmol) 및 HATU(2.80 g, 5.38 mmol)을 가하고, 이 반응 혼합물을 실온에서 밤새도록 교반하였다. 용매를 증발시키고, 생성물은 CH3CN:0.1 M NH40Ac(40:60)을 사용하영 정제용 RPLC로 처리하였다. 아세토니트릴을 증발시키고, 수층을 EtOAc로 3회 추출하였다. 합한 유기층을 건조시키고(MgS04), 증발시켰다.
수득량: 1.12 g(72%).
1H NMR(400 MHz, CDCl3) δ8.95(s, 2H), 4.82(d, 2H), 4.74(m, 1H), 3.95(m, 1H), 3.84(m, 1H), 2.6-2.4(m, 2H), 1.47(s, 9H).
(v) Boc-Aze-NH-CH 2 -((5-아미디노)-2-피리미디닐) x HOAc
메탄올 10 ㎖ 중의 Boc-Aze-NH-CH2-((5-시아노)-2-피리미디닐)(0.83 g, 2.6 mmol; 상기 단계(iv) 참조), N-아세틸시스테인(0.43 g, 2.6 mmol) 및 아세트산암모늄(0.60 g, 7.8 mmol)의 용액을 질소 하에 60℃에서 2 일 동안 가열하였다. 용매를 증발시키고, 미정제 물질은 CH3CN:0.1 M NH40Ac(5:95 내지 100:0)의 구배를 사용하는 정제용 RPLC로 정제하였다. 중요한 분획을 냉동 건조시켜서 소정의 물질 1.0 g(93%)을 얻었다.
1H NMR(300 MHz, D2O, HDO 시그날에 의해 모호해진 시그날) δ 9.17(s, 2H), 4.1-3.9(m, 2H), 2.60(m, 1H), 2.29(m, 1H), 1.93(s, 3H), 1.44(s, 9H).
(vi) Boc-Aze-NH-CH 2 -[(5-(아미노(트리메틸실릴에틸이미노)메틸))-2-피리미디닐]
THF 50 ㎖ 중의 Boc-Aze-NH-CH2-((5-아미디노)-2-피리미디닐) x HOAc(0.95 g, 2.41 mmol; 상기 단계(v) 참조)의 현탁액에 물 10 ㎖ 중의 Teoc-p-니트로페닐 카르보네이트(0.85 g, 3.0 mmol) 및 탄산칼륨(1.0 g, 7.2 mmol)의 용액을 가하였다, 이 혼합물을 24 시간 동안 교반하고, 농축하였으며, 물과 염화메틸렌 사이에 분배하였다. 유기층을 포화 수성 중탄산나트륨으로 2회 세척하고, 건조시켰으며(Na2SO4), 증발시켰다. 미정제 생성물은 헵탄:EtOAc(1:1)을 사용하여 실리카 겔 상의 플래쉬 크로마토그래피를 수행하였다.
수득량: 1.04 g(90%).
1H NMR(300 MHz, CDCl3) δ 9.16(s, 2H), 4.80(d, 2H), 4.73(m, 1H), 4.26(m, 2H), 4.0-3.8(m, 2H), 2.6-2.4(m, 2H), 1.47(s, 9H), 1.12(m, 2H), 0.07(s, 9H).
(vii) Ph(3-Cl)(5-OCHF 2 )-(R)CH(OH)C(O)-Aze-NH-CH 2 -[(5-(아미노(트리메틸실릴에틸이미노)메틸))-2-피리미디닐]
Boc-Aze-NH-CH2-[(5-(아미노(트리메틸실릴에틸이미노)메틸))-2-피리미디닐](0.209 g, 0.437 mmol; 상기 단계(vi) 참조)을 HCl(g)로 포화된 EtOAc 25 ㎖ 중에 용해시키고, 15 분 동안 반응시켰다. 용매를 증발시키고, 잔류물을 DMF 4 ㎖ 중에 용해시켰다. Ph(3-Cl)(5-OCHF2)-(R)CH(OH)C(O)OH(0.100 g, 0.396 mmol; 상기 실시예 1 (viii) 참조), PyBOP(0.231 g, 0.444 mmol) 및 디이소프로필에틸 아민(0.208 g, 1.61 mmol)을 가하고, 이 혼합물을 80 분 동안 교반하였다. 반응 혼합물을 물 100 ㎖에 부었으며, EtOAc로 3회 추출하였다. 합한 유기층을 염수로 세척하고,건조시켰으며(Na2SO4), 증발시켰다. 미정제 생성물은 CH3CN:0.1 M NH40Ac(1:1)을 사용하여 정제용 RPLC로 정제하였다.
수득량: 63 mg(26%).
1H NMR(400 MHz, CDCl3, 회전 이성질체의 혼합물) δ 9.3(br, 1H), 9.03(s, 2H, 부 회전 이성질체), 9.00(s, 2H, 주 회전 이성질체), 8.25(m, 1H, 주 회전 이성질체), 7.9(br, 1H), 7.80(m, 1H, 부 회전 이성질체), 7.2-6.9(m, 3H), 6.50(t, 1H), 5.14(s, 1H, 부 회전 이성질체), 5.08(m, 1H, 부 회전 이성질체), 4.94(s, 1H, 주 회전 이성질체), 4.80(m, 1H, 주 회전 이성질체), 4.7-4.4(m, 2H), 4.3-3.9(m, 3H), 3.74(m, 1H, 주 회전 이성질체), 2.7-2.1(m, 2H), 1.03(m, 2H), 0.01(s, 9H).
(viii) Ph(3-Cl)(5-OCHF 2 )-(R)CH(OH)C(O)-Aze-NH-CH 2 -((5-아미디노)-2-피리미디닐) x TFA
Ph(3-Cl)(5-OCHF2)-(R)CH(OH)C(O)-Aze-NH-CH2-[(5-(아미노(트리메틸실릴에틸이미노)메틸))-2-피리미디닐](21 mg, 0.034 mmol; 상기 단계(vii) 참조)을 염화메틸렌 0.5 ㎖ 중에 용해시키고, 빙욕에서 냉각시켰다. TFA(2 ㎖)를 가하고, 이 혼합물을 60 분 동안 교반한 후, 농축시켰다. 생성물은 물 및 아세토니트릴로부터 냉동 건조시켰다.
수득량: 20 mg(100%).
순도: 100%.
1H NMR(400 MHz, CD3OD, 회전 이성질체의 혼합물, HDO 시그날에 의해 모호해진 시그날) δ 9.08(s, 2H), 7.4-7.1(m, 3H), 6.88(t, 1H, 주 회전 이성질체), 6.85(t, 1H, 부 회전 이성질체), 5.30(m, 1H, 부 회전 이성질체), 5.22(s, 1H, 부 회전 이성질체), 5.20(s, 1H, 주 회전 이성질체), 4.73(m, 1H, 주 회전 이성질체), 4.34(m, 1H, 회전 이성질체), 4.21(m, 1H, 회전 이성질체), 4.15-3.95(m, 2H, 회전 이성질체), 2.73(m, 1H, 회전 이성질체), 2.57(m, 1H, 회전 이성질체), 2.45-2.25(m, 2H, 회전 이성질체).
13C-NMR(100 MHz; CD3OD): (카르보닐 탄소 및/또는 아미딘 탄소, 회전 이성질체의 혼합물) δ 173.0, 172.6, 172.1, 171.0, 163.4
APCI-MS:(M+1) = 469/471 m/z.
실시예 37
Ph(3-Cl)(5-OCHF 2 )-(R)CH(OH)C(O)-Aze-NH-CH 2 -((5-메톡시아미디노)-2-피리미디닐)
(i) Ph(3-Cl)(5-OCHF 2 )-(R)CH(OH)C(O)-Aze-NH-CH 2 -[(5-(메톡시아미노-(트리메틸실릴에틸이미노)메틸))-2-피리미디닐]
아세토니트릴 3 ㎖ 중의 Ph(3-Cl)(5-OCHF2)-(R)CH(OH)C(O)-Aze-NH-CH2-[(5-(아미노(트리메틸실릴에틸이미노)메틸))-2-피리미디닐](40 mg, 0.065 mmol; 상기 실시예 36의 단계(vii) 참조) 및 O-메틸히드록실 아민(33 mg, 0.40 mmol)의 현탁액을 70℃에서 3 시간 동안 가열하였다. 이 혼합물을 물과 EtOAc 사이에 분배하였다. 수층을 EtOAc로 2회 추출하고, 합한 유기상을 물로 세척하였으며, 건조시키고(Na2SO4), 증발시켰다.
수득량: 33 mg(79%).
1H NMR(400 MHz, CDCl3, 회전 이성질체의 혼합물) δ 8.76(s 2H, 주 회전 이성질체), 8.70(s, 2H, 회전 이성질체), 8.18(m, 1H), 7.62(s, 1H), 7.4-6.9(m, 4H), 6.50(bt, 1H), 5.3-4.5(m, 4H), 4.2-4.05(m, 3H), 3.96(s, 3H), 3.68(m, 1H), 2.8-2.2(m, 2H), 2.1(br, 1H), 0.96(m, 2H), 0.01(s, 9H).
(ii) Ph(3-Cl)(5-OCHF 2 )-(R)CH(OH)C(O)-Aze-NH-CH 2 -((5-메톡시아미디노)-2-피리미디닐)
Ph(3-Cl)(5-OCHF2)-(R)CH(OH)C(O)-Aze-NH-CH2-[(5-(메톡시아미노-(트리메틸실릴에틸이미노)메틸))-2-피리미디닐](33 mg, 0.052 mmol; 상기 단계(i) 참조)을 염화메틸렌 0.5 ㎖ 중에 용해시키고, 빙욕에서 냉각시켰다. TFA(2 ㎖)를 가하고, 이 혼합물을 2 시간 동안 교반한 후, 농축시켰다. 생성물은 물과 아세토니트릴로부터 냉동 건조시켰다.
수득량: 31 mg(81%).
순도: 100%.
1H NMR(400 MHz, CD3OD, 회전 이성질체의 혼합물, HDO 시그날에 의해 모호해진 시그날) δ 8.96(s, 2H, 회전 이성질체), 8.94(s, 2H, 회전 이성질체), 7.4-7.3(m, 1H), 7.2-7.1(m, 2H), 6.88(t, 1H, 회전 이성질체), 6.85(t, 1H, 회전 이성질체), 5.29(m, 1H, 회전 이성질체), 5.24(s, 1H, 회전 이성질체), 5.20(s, 1H, 회전 이성질체), 4.75-4.55(m, 2H), 4.33(m, 1H, 회전 이성질체), 4.19(m, 1H, 회전 이성질체), 4.15-3.95(m, 2H, 회전 이성질체), 3.88(s, 3H, 회전 이성질체), 3.86(s, 3H, 회전 이성질체), 2.72(m, 1H, 회전 이성질체), 2.56(m, 1H, 회전 이성질체), 2.45-2.25(m, 2H, 회전 이성질체).
13C-NMR(100 MHz; CD3OD): (카르보닐 탄소 및/또는 아미딘 탄소, 회전 이성질체의 혼합물) δ 172.8, 172.6, 172.1, 171.8, 167.8, 167.7, 155.1, 152.3, 152.1
APCI-MS:(M+1) = 499/501 m/z.
실시예 38
Ph(3-Cl)(5-OCHF 2 )-(R)CH(OH)C(O)-Aze-Pab(3-F)
(i) 2-플루오로-4-비닐벤조니트릴
톨루엔 250 ㎖ 중의 4-브로모-2-플루오로벤조니트릴(4.92 g, 0.0246 mol), 비닐트리부틸주석(0.78 g, 0.246 mol) 및 테트라키스트리페닐포스핀(0.67 g, 0.58 mmol)의 용액을 질소 하에 밤새도록 환류시켰다. 용매를 증발시키고, 잔류물은 헵탄:CH2Cl2(1:1) 내지 순수한 CH2Cl2를 사용하여 실리카 겔 상의 플래쉬 크로마토그래피를 수행하였다. 무색 오일을 얻고, 이것을 결정화시켰다.
수득량: 3.0 g(82%).
1H NMR(300 MHz, CDCl3) δ 7.56(m, 1H), 7.3-7.2(m, 2H), 6.69(m, 1H),
5.89(d, 1H), 5.51(d, 1H).
(ii) 2-플루오로-4-히드록시메틸벤조니트릴
CH2Cl2 40 ㎖ 및 메탄올 5 ㎖ 중의 2-플루오로-4-비닐벤조니트릴(1.3 g, 8.8 mmol; 상기 단계(i) 참조)의 냉각된 용액(-78℃) 내로 오존(5 ℓ/h, 29 g/m3)을 사용하여 30 분 동안 기포화시켰다. 이어서, 아르곤을 사용하여 기포화시킴으로써 과량의 오존을 제거하였다. 붕수소화나트륨(0.67 g, 0.018 mol)을 가하고, 냉각욕을 제거하였다. 혼합물을 교반하고, 1 시간 동안 반응시켰다, 혼합물을 증발시키고, 2 M HCl를 가하였다. 혼합물을 디에틸 에테르로 2회 추출하고, 합한 에테르 분획을 건조시켰으며(Na2SO4), 증발시켰다. 미정제 생성물을 결정화시켰다.
수득량: 1.1 g(81%).
1H NMR(300 MHz, CDCl3) δ 7.59(m, 1H), 7.3-7.2(m, 2H), 4.79(d, 2H), 2.26(t, 1H).
(iii) 4-시아노-3-플루오로벤질 메탄술포네이트
2-플루오로-4-히드록시메틸벤조니트릴(1.3 g, 8.6 mmol; 상기 단계(ii) 참조)을 CH2Cl2 50 ㎖ 중에 용해시키고, 빙욕에서 냉각시켰다. 트리메틸아민(0.87 g, 8.6 mmol)과 메탄술포닐 클로라이드(0.99 g, 8.7 mmol)를 가하였다. 1.5 시간 동안 교반한 후, 반응 혼합물을 1M HCl로 세척하였다. 유기상을 건조시키고(Na2SO4), 증발시켰다. 생성물은 더 이상의 정제없이 사용할 수 있었다.
무색 오일의 수득량: 1.8 g(92%).
1H NMR(400 MHz, CDCl3) δ 7.66(m, 1H), 7.35-7.3(m, 2H), 5.26(s, 2H),
3.07(s, 3H).
(iv) 4-아지도메틸-2-플루오로벤조니트릴
4-시아노-3-플루오로벤질 메탄술포네이트(1.8 g, 7.9 mmol; 상기 단계(iii) 참조)의 빙냉된 용액에 아지드화나트륨(0.80 g, 0.012 mol)을 가하였다. 혼합물을 밤새도록 교반한 후, 물 200 ㎖ 중에 붓고, 디에틸 에테르로 3회 추출하였다. 합한 에테르상을 물로 5회 세척하고, 건조시켰으며(Na2SO4), 증발시켰다. 미정제 무색 오일은 더 이상의 정제없이 사용할 수 있었다.
수득량: 1.2 g(87%).
1H NMR(300 MHz, CDCl3) δ 7.64(m, 1H), 7.25-7.18(m, 2H), 4.47(s, 2H).
(v) 4-아미노메틸-2-플루오로벤조니트릴
교반 하에 아세토니트릴 20 ㎖ 중의 염화주석(II) 2수화물(0.45 g, 2.4 mmol)의 현탁액에 티오페놀(1.07 g, 9.7 mmol)과 트리에틸아민(0.726 g, 7.17 mmol)을 가하였다. 이후에는 아세토니트릴 수 ㎖ 중의 4-아지도메틸-2-플루오로벤조니트릴(0.279 g, 1.58 mmol; 상기 단계(iv) 참조)의 용액을 가하였다. 1.5 시간 후, 상기 아지드화물을 소비시키고, 용매를 증발시켰다. 잔류물을 염화메틸렌 중에 용해시키고, 2 M NaOH로 3회 세척하였다. 유기상을 1M HCl로 2회 추출하였다. 합한 산성 수상을 염화메틸렌으로 세척한 후, 2 M NaOH를 사용하여 알칼리성으로 만들고, 염화메틸렌으로 3회 추출하였다. 유기상을 건조시키고(Na2SO4), 증발시켜서 소정의 부제 화합물 0.172 g(72%)을 얻고, 더 이상의 정제없이 사용할 수 있었다.
1H NMR(400 MHz, CDCl3) δ 7.58(m, 1H), 7.3-7.2(m, 2H), 3.98(s, 2H), 1.55-1.35(br, 2H).
(vi) Boc-Aze-NHCH 2 -Ph(3-F, 4-CN)
DMF 5 ㎖ 중의 Boc-Aze-OH(0.194 g, 0.96 mmol)의 빙냉된 용액에 TBTU(0.50 g, 9.6 mmol)을 가하였다. 30 분 후, DMF 7 ㎖ 중에 4-아미노메틸-2-플루오로벤조니트릴(0.17 g, 0.81 mmol; 상기 단계(v) 참조) 및 디이소프로필에틸 아민(0.326 g, 2.53 mmol)을 포함하는 또 다른 용액을 가하였다. 생성된 용액을 실온에서 밤새도록 교반하였다. 용매를 증발시키고, 생성물은 CH3CN:0.lM NH40Ac(50:50)을 사용하여 정제용 RPLC로 정제하였다. 냉동 건조에 의해 소정의 부제 화합물 0.237 g(74%)을 얻었다.
1H NMR(300 MHz, CD3OD) δ7.70(m, 1H), 7.35-7.25(m, 2H), 4.65-4.35(m, 3H), 4.0-3.85(m, 2H), 2.51(m, 1H), 2.19(m, 1H), 1.40(s, 9H).
(vii) Ph(3-Cl)(5-OCHF 2 )-(R)CH(OH)C(O)-Aze-NHCH 2 -Ph(3-F, 4-CN)
Boc-Aze-NHCH2-Ph(3-F, 4-CN)(0.118 g, 0.354 mmol; 상기 단계(vi) 참조)을 HCl(g)로 포화된 EtOAc 30 ㎖ 중에 용해시켰다. 이 반응물을 20 분 동안 교반하고, 증발시켰다. 형성된 2염산염 및 HATU(0.152 g, 0.400 mmol)을 DMF 5 ㎖ 중에 용해시켰다. 이 용액을 DMF 5 ㎖ 중의 Ph(3-Cl)(5-OCHF2)-(R)CH(OH)C(O)OH(0.101 g, 0.400 mmol; 상기 실시예 1의 단계(viii) 참조)의 빙냉된 용액에 가하였다. 반응물을 상온에서 밤새도록 교반하였다. 용매를 증발시키고, 생성물은 CH3CN:0.1 M NH40Ac(50:50)로 용출하면서 정제용 RPLC로 정제하였다. 냉동 건조에 의해 소정의 부제 화합물 0.130 g(77%)을 얻었다.
1H NMR(500 MHz, CD3OD, 회전 이성질체의 혼합물) δ7.7-7.6(m, 1H), 7.35-7.1(m, 5H), 6.88(t, 1H, 회전 이성질체), 6.86(t, 1H, 회전 이성질체), 5.25-5.1(m, 1H, 다음에 계속되는 프로톤으로 인한 여분의 부 회전 이성질체), 4.80(m, 1H, 주 회전 이성질체), 4.6-4.4(m, 2H), 4.36(m, 1H, 주 회전 이성질체), 4.18(m, 1H, 주 회전 이성질체), 4.07(m, 1H, 부 회전 이성질체), 3.98(m, 1H, 부 회전 이성질체), 2.70(m, 1H, 부 회전 이성질체), 2.53(m, 1H, 주 회전 이성질체), 2.29(m, 1H, 주 회전 이성질체), 2.16(m, 1H, 부 회전 이성질체).
(viii) Ph(3-Cl)(5-OCHF 2 )-(R)CH(OH)C(O)-Aze-Pab(3-F)
Ph(3-Cl)(5-OCHF2)-(R)CH(OH)C(O)-Aze-NHCH2-Ph(3-F, 4-CN)(0.130 g, 0.278 mmol; 상기 단계(vii) 참조)을 HCl(g)로 포화된 에탄올 80 ㎖ 중에 용해시켰다. 혼합물을 실온에서 밤새도록 반응시켰다. 용매를 증발시키고, 잔류물을 NH3(g)로 포화된 에탄올 100 ㎖ 중에 재용해시켰다. 반응을 실온에서 2 일 동안 서서히 진행시켰다. 온도를 50℃로 승온시키고, 반응을 3 일 동안 더 계속 진행시켰다. 출발 물질을 소비시키고, 용매를 증발시켰다. 생성물은 정제용 PRLC로 정제하고, 냉동 건조시켜서 HOAc 염으로서 표제 화합물 17 mg(13%)을 얻었다.
1H NMR(600 MHz, CD3OD, 회전 이성질체의 혼합물) δ 7.65-7.6(m, 1H), 7.4-7.3(m, 3H), 7.25-7.1(m, 2H), 7.15-6.7(m, 1H), 5.25-5.1(m, 1H, 다음에 계속되는 프로톤으로 인한 여분의 부 회전 이성질체), 4.8(m, 1H, CD3OH에 의해 부분적으로 장애된 주 회전 이성질체), 4.6-3.95(m, 4H), 2.69(m, 1H, 부 회전 이성질체), 2.56(m, 1H, 주 회전 이성질체), 2.28(m, 1H, 주 회전 이성질체), 2.14(m, 1H, 부 회전 이성질체), 1.90(s, 3H).
13C-NMR(100 MHz; CD3OD): (카르보닐 탄소 및/또는 아미딘 탄소, 회전 이성질체의 혼합물) δ 180.6, 173.4, 173.1, 172.9, 164.5, 162.3, 159.8
APCI-MS:(M+1) = 485/487 m/z.
실시예 39
Ph(3-Cl)(5-OCHF 2 )-(R)CH(OH)C(O)-Aze-Pab(2,6-디F)
(i) 2,6-디플루오로-4[(메틸술피닐)(메틸티오)메틸]벤조니트릴
(메틸술피닐)(메틸티오)메탄(7.26g, 0.0584 mol)을 질소 하에 무수 THF 100 ㎖ 중에 용해시키고, -78℃로 냉각시켰다. 헥산 중의 부틸리튬(16 ㎖, 1.6 M, 0.0256 mol)을 교반하면서 적가하였다. 이 혼합물을 15 분 동안 교반하였다. 한편, 무수 THF 100 ㎖ 중의 3,4,5-트리플루오로벤조니트릴(4.0 g, 0.025 mmol)의 용액을 아르곤 하에 -78℃로 냉각시키고, 전자의 용액을 35 분에 걸쳐서 캐눌라(cannula)를 통해 후자의 용액에 가하였다. 30 분 후, 냉각욕을 제거하고, 반응물이 실온에 도달했을 때, 반응물을 물 400 ㎖ 중에 부었다. THF를 증발시키고, 잔류 수층을 디에틸 에테르로 3회 추출하였다. 합한 에테르상을 물로 세척하고, 건조시켰으며(Na2SO4), 증발시켰다.
수득량: 2.0 g(30%).
1H NMR(500 MHz, CDCl3) δ 7.4-7.25(m, 2H), 5.01(s, 1H, 부분 입체 이성질체), 4.91(s, 1H, 부분 입체 이성질체), 2.88(s, 3H, 부분 입체 이성질체), 2.52(s, 3H, 부분 입체 이성질체), 2.49(s, 3H, 부분 입체 이성질체), 2.34(s, 3H, 부분 입체 이성질체), 1.72(br, 1H).
(ii) 2,6-디플루오로-4-포르밀벤조니트릴
2,6-디플로오로-4[(메틸술피닐)(메틸티오)메틸]벤조니트릴(2.17 g, 8.32 mmol; 상기 단계(i) 참조)을 THF 90 ㎖ 중에 용해시키고, 진한 황산 3.5 ㎖를 가하였다. 이 혼합물을 실온에서 3 일 동안 방치하고, 이어서 물 450 ㎖ 중에 부었다. 이것을 EtOAc로 3회 추출하고, 합한 에테르상을 수성 중탄산나트륨으로 2회 세척하였으며, 염수로 세척하고, 건조시켰으며(Na2SO4), 증발시켰다. 수득량: 1.36 g(98%). 포르밀기의 위치는 13C NMR에 의해 확증되었다. 162.7 ppm에서 플루오르화된 탄소로부터의 시그날은 불소 원자로부터 입소(ipso) 및 메타 커플링에 각각 해당하는 26O Hz 및 6.3 Hz의 순서의 2가지 커플링 상수를 지닌 예상된 커플링 패턴을 나타내었다.
1H NMR(400 MHz, CDCl3) δ 10.35(s, 1H), 7.33(m, 2H).
(iii) 2,6-디플로오로-4-히드록시메틸벤조니트릴
2,6-디플루오로-4-포르밀벤조니트릴(1.36 g, 8.13 mmol; 상기 단계(ii) 참조)을 메탄올 25 ㎖ 중에 용해시키고, 빙욕에서 냉각시켰다. 붕수소화나트륨(0.307 g, 8.12 mmol)을 교반하면서 조금씩 가하고, 이 반응물을 65 분 동안 방치하였다. 용매를 증발시키고, 잔류물을 디에틸 에테르와 수성 중탄산나트륨 사이에 분배하였다. 에테르 층을 보다 많은 양의 수성 중탄산나트륨과 염수로 세척하고, 건조시켰으며(Na2SO4), 증발시켰다. 미정제 생성물은 바로 결정화되었는데, 이것은 더 이상의 정제없이 사용할 수 있었다.
수득량: 1.24 g(90%).
1H NMR(400 MHz, CDCl3) δ 7.24(m, 2H), 4.81(s, 2H), 2.10(br, 1H).
(iv) 4-시아노-2,6-디플루오로벤질 메탄술포네이트
염화메틸렌 60 ㎖ 중의 2,6-디플루오로-4-히드록시메틸벤조니트릴(1.24 g, 7.32 mmol; 상기 단계(iii) 참조) 및 메탄술포닐 클로라이드(0.93 g, 8.1 mmol)의 빙냉된 용액에 트리에틸아민(0.81 g, 8.1 mmol)을 교반하면서 가하였다. 0℃에서 3 시간 후, 이 혼합물을 1M HCl로 2회, 그리고 물로 1회 세척하고, 건조시켰으며(Na2SO4), 증발시켰다. 생성물은 더 이상의 정제없이 사용할 수 있었다.
수득량: 1.61 g(89%).
1H NMR(300 MHz, CDCl3) δ 7.29(m, 2H), 5.33(s, 2H), 3.07(s, 3H).
(v) 4-아지도메틸-2,6-디플루오로벤조니트릴
물 10 ㎖ 및 DMF 20 ㎖ 중의 4-시아노-2,6-디플루오로벤질 메탄술포네이트(1.61 g, 6.51 mmol; 상기 단계(iv) 참조) 및 아지드화나트륨(0.72 g, 0.0111 mol)의 혼합물을 실온에서 밤새도록 교반하였다. 이어서, 생성물을 물 200 ㎖ 중에 붓고, 디에틸 에테르로 3회 추출하였다. 합한 에테르상을 물로 5회 세척하고, 건조시켰으며(Na2SO4), 증발시켰다. 소량의 샘플을 NMR 목적으로 증발시키고, 생성물을 결정화시켰다. 나머지 잔량을 주의깊게 증발시키지만, 완전 건조될 때까지는 증발시키지 않았다. 수득량(이론적으로 1.26 g)은 NMR 및 분석용 HPLC에 근거하여 거의 정량적인 값일 것으로 추정되었다.
1H NMR(400 MHz, CDCl3) δ 7.29(m, 2H), 4.46(s, 2H).
(vi) 4-아미노메틸-2,6-디플루오로벤조니트릴
이 반응은 문헌[J. Chem. Res.(M)(1992) 3128]에 설명된 절차에 따라 실시하였다. 물 20 ㎖ 중의 10% Pd/C(50% 수분)의 현탁액에 물 20 ㎖ 중의 붕수소화나트륨(0.834 g, 0.0221 mol)의 용액을 가하였다. 일부 기체가 발생하였다. 4-아지도메틸-2,6-디플루오로벤조니트릴(1.26 g, 6.49 mmol; 상기 단계(v) 참조)을 THF 50 ㎖ 중에 용해시키고, 빙욕 상의 수성 혼합물에 15 분에 걸쳐 가하였다. 이 혼합물을 4 시간 동안 교반한 후, 2 M HCl 20 ㎖를 가하고, 이 혼합물을 셀라이트를 통해 여과하였다. 셀라이트를 보다 많은 물로 세정하고, 합한 수상을 EtOAc로 세척하였으며, 이어서 2 M NaOH를 사용하여 알칼리성으로 만들었다. 이것을 염화메틸렌으로 3회 추출한 다음, 합한 유기상을 물로 세척하고, 건조시켰으며(Na2SO4), 증발시켰다.
수득량: 0.87 g(80%).
1H NMR(400 MHz, CDCl3) δ7.20(m, 2H), 3.96(s, 2H), 1.51(br, 2H).
(vii) 2,6-디플루오로-4-t-부톡시카르보닐아미노메틸벤조니트릴
4-아미노메틸-2,6-디플루오로벤조니트릴(0.876 g, 5.21 mmol; 상기 단계(vi) 참조)의 용액을 THF 50 ㎖ 중에 용해시키고, THF 10 ㎖ 중의 di-t-부틸 디카르보네이트(1.14 g, 5.22 mmol)를 가하였다. 이 혼합물을 3.5 시간 동안 교반하였다. THF를 증발시키고, 잔류물을 물과 EtOAc 사이에 분배하였다. 유기층을 0.5 M HCl로 3회, 그리고 물로 세척하고, 건조시켰으며(Na2SO4), 증발시켰다. 생성물은 더 이상의 정제없이 사용할 수 있었다.
수득량: 1.38 g(99%).
1H NMR(300 MHz, CDCl3) δ7.21(m, 2H), 4.95(br, 1H), 4.43(br, 2H), 1.52(s, 9H).
(viii) Boc-Pab(2, 6-디F)(OH)
에탄올 20 ㎖ 중의 2,6-디플로오로-4-t-부톡시카르보닐아미노메틸벤조니트릴(1.38 g, 5.16 mmol; 상기 단계(vii) 참조), 히드록실아민 염산염(1.08 g, 0.0155 mol) 및 트리에틸아민(1.57 g, 0.0155 mol)의 혼합물을 실온에서 36 시간 동안 교반하였다. 용매를 증발시키고, 잔류물을 물과 염화메틸렌 사이에 분배하였다. 유기층을 물로 세척하고, 건조시켰으며(Na2SO4), 증발시켰다. 생성물은 더 이상의 정제없이 사용할 수 있었다.
수득량: 1.43 g(92%).
1H NMR(500 MHz, CD3OD) δ 7.14(m, 2H), 4.97(br, 1H), 4.84(br, 2H), 4.40(br, 2H), 1.43(s, 9H).
(ix) Boc-Pab(2,6-디F) x HOAc
이 반응은 문헌[Judkins et al, Synth. Comm.(1998) 4351]에 설명된 절차에 따라 실시하였다. 아세트산 100 ㎖ 중의 Boc-Pab(2,6-디F)(OH)(1.32 g, 4.37 mmol; 상기 단계(viii) 참조), 아세트산 무수물(0.477 g, 4.68 mmol) 및 10% Pd/C(50% 수분) 442 mg을 3.5 시간 동안 압력 5 atm로 수소화하였다. 혼합물을 셀라이트를 통해 여과하고, 에탄올로 세정하였으며, 증발시켰다. 잔류물은 아세토니트릴과 물 , 그리고 몇방울의 에탄올로부터 냉동 건조시켰다. 부제 화합물은 더 이상의 정제없이 사용할 수 있었다.
수득량: 1.49 g(99%).
1H NMR(400 MHz, CD3OD) δ 7.45(m, 2H), 4.34(s, 2H), 1.90(s, 3H), 1.40(s, 9H).
(x) Boc-Pab(2,6-디F)(Teoc)
THF 100 ㎖ 및 물 100 ㎖ 중의 Boc-Pab(2,6-디F) x HOAc(1.56 g, 5.49 mmol; 상기 단계(ix) 참조)의 용액에 2-(트리메틸실릴)에틸 p-니트로페닐 카르보네이트(1.67 g, 5.89 mmol)를 가하였다. 물 20 ㎖ 중의 탄산칼륨(1.57 g, 0.0114 mol)의 용액을 5 분에 걸쳐 적가하였다. 이 혼합물을 밤새도록 교반하였다. THF를 증발시키고, 잔류물을 물과 염화메틸렌 사이에 분배하였다. 수층을 염화메틸렌으로 추출하고, 합한 유기상을 수성 중탄산나트륨으로 2회 세척하였으며, 건조시키고(Na2SO4), 증발시켰다. 헵탄/EtOAc = 2/1을 사용하여 실리카 겔 상의 플래쉬 클로마토그래피로 정제하여 순수한 화합물 1.71 g(73%)을 얻었다.
1H NMR(400 MHz, CDCl3) δ 7.43(m, 2H), 4.97(br, 1H), 4.41(br, 2H), 4.24(m, 2H), 1.41(s, 9H), 1.11(m, 2H), 0.06(s, 9H).
(xi) Boc-Aze-Pab(2,6-디F)(Teoc)
Boc-Pab(2,6-디F)(Teoc)(1.009 g, 2.35 mmol; 상기 실시예 단계(x) 참조)를 HCl(g)로 포화된 EtOAc 50 ㎖ 중에 용해시켰다. 이 혼합물을 10 분 동안 방치하고, 증발시켰으며, DMF 18 ㎖ 중에 용해시킨 후, 빙욕에서 냉각시켰다. Boc-Aze-OH(0.450 g, 2.24 mmol), PyBOP(1.24 g, 2.35 mmol) 및 마지막으로 디이소프로필에틸 아민(1.158 g, 8.96 mmol)을 가하였다. 이 반응 혼합물을 2 시간 동안 교반한 후, 물 350 ㎖ 중에 붓고, EtOAc로 3회 추출하였다. 합한 유기상을 염수로 세척하고, 건조시켰으며(Na2SO4), 증발시켰다. 헵탄:EtOAc(1:3)을 사용하여 실리카 겔 상의 플래쉬 크로마토그래피를 수행하여 소정의 화합물 1.097 g(96%)을 얻었다.
1H NMR(500 MHz, CDCl3) δ 7.46(m, 2H), 4.65-4.5(m, 3H), 4.23(m, 2H), 3.87(m, 1H), 3.74(m, 1H), 2.45-2.3(m, 2H), 1.40(s, 9H), 1.10(m, 2H), 0.05(s, 9H).
(xii) Ph(3-Cl)(5-OCHF 2 )-(R)CH(OH)C(O)-Aze-Pab(2,6-디F)(Teoc)
Boc-Aze-Pab(2,6-디F)(Teoc)(0.256 g, 0.500 mmol; 상기 단계(xi) 참조)를 HCl(g)로 포화된 EtOAc 20 ㎖ 중에 용해시켰다. 이 혼합물을 10 분 동안 방치하고, 증발시켰으며, DMF 5 ㎖ 중에 용해시켰다. Ph(3-Cl)(5-OCHF2)-(R)CH(OH)C(O)OH(0.120 g, 0.475 mmol; 상기 실시예 1의 단계(viii) 참조), PyBOP(0.263 g, 0.498 mmol) 및 마지막으로 디이소프로필에틸 아민(0.245 g, 1.89 mmol)을 가하였다. 이 반응 혼합물을 2 시간 동안 교반한 후, 물 350 ㎖ 중에 붓고, EtOAc로 3회 추출하였다. 합한 유기상을 염수로 세척하고, 건조시켰으며(Na2SO4), 증발시켰다. EtOAc를 사용하여 실리카 겔 상의 플래쉬 크로마토그래피로 정제하여 소정의 부제 화합물 0.184 g(60%)을 얻었다.
1H NMR(400 MHz, CD3OD, 회전 이성질체의 혼합물) δ 7.55-7.45(m, 2H), 7.32(m, 1H, 주 회전 이성질체), 7.27(m, 1H, 부 회전 이성질체), 7.2-7.1(m, 2H), 6.90(t, 1H, 주 회전 이성질체), 6.86(t, 1H, 부 회전 이성질체), 5.15(s, 1H, 주 회전 이성질체), 5.12(m, 1H, 부 회전 이성질체), 5.06(s, 1H, 부 회전 이성질체), 4.72(m, 1H, 주 회전 이성질체), 4.6-4.45(m, 2H), 4.30(m, 1H, 주 회전 이성질체), 4.24(m, 2H), 4.13(m, 1H, 주 회전 이성질체), 4.04(m, 1H, 부 회전 이성질체), 3.95(m, 1H, 부 회전 이성질체), 2.62(m, 1H, 부 회전 이성질체), 2.48(m, 1H, 주 회전 이성질체), 2. 22(m, 1H, 주 회전 이성질체), 2.10(m, 1H, 부 회전 이성질체), 1.07(m, 2H), 0.07(m, 9H).
(xiii) Ph(3-Cl)(5-OCHF 2 )-(R)CH(OH)C(O)-Aze-Pab(2,6-디F)
Ph(3-Cl)(5-OCHF2)-(R)CH(OH)C(O)-Aze-Pab(2,6-디F)(Teoc)(81 mg, 0.127 mmol; 상기 단계(xii) 참조)를 염화메틸렌 0.5 ㎖ 중에 용해시키고, 빙욕에서 냉각시켰다. TFA(3 ㎖)를 가하고, 이 반응물을 75 분 동안 방치하였다. TFA를 증발시키고, 잔류물을 물과 아세토니트릴로부터 냉동 건조시켰다. 미정제 생성물은 CH3CN:0.1 M NH40Ac(35:65)를 사용하는 정제용 RPLC로 정제하여 HOAc 염으로서 표제 화합물 39 mg(55%)을 얻었다.
순도: 99%.
1H NMR(400 MHz, CD3OD, 회전 이성질체의 혼합물) δ 7.5-7.4(m, 2H), 7.32(m, 1H, 주 회전 이성질체), 7.28(m, 1H, 부 회전 이성질체), 7.2-7.1(m, 3H) 6.90(t, 1H, 주 회전 이성질체), 6.86(t, 부 회전 이성질체), 5.15(s, 1H, 주 회전 이성질체), 5.14(m, 1H, 부 회전 이성질체), 5.07(s, 1H, 부 회전 이성질체), 4.72(m, 1H, 주 회전 이성질체), 4.65-4.45(m, 2H), 4.30(m, 1H, 주 회전 이성질체), 4.16(m, 1H, 주 회전 이성질체), 4.03(m, 1H, 부 회전 이성질체), 3.95(m, 1H, 부 회전 이성질체), 2.63(m, 1H, 부 회전 이성질체), 2.48(m, 1H, 주 회전 이성질체), 2.21(m, 1H, 주 회전 이성질체), 2.07(m, 1H, 부 회전 이성질체), 1.89(s, 3H).
13C-NMR(75 MHz; CD3OD): (카르보닐 탄소 및/또는 아미딘 탄소, 회전 이성질체의 혼합물) δ 171.9, 171.2, 165.0, 162.8, 160.4
APCI-MS:(M+1) = 503/505 m/z.
실시예 40
Ph(3-Cl)(5-OCHF 2 )-(R)CH(OH)C(O)-Aze-Pab(2,6-디F)(OMe)
(i) Ph(3-Cl)(5-OCHF 2 )-(R)CH(OH)C(O)-Aze-Pab(2,6-디F)(OMe, Teoc)
아세토니트릴 4 ㎖ 중의 Ph(3-Cl)(5-OCHF2)-(R)CH(OH)C(O)-Aze-Pab(2,6-디F)(Teoc)(64 mg, 0.099 mmol; 상기 실시예 39의 단계(xii) 참조) 및 0-메틸 히드록실아민 염산염(50 mg, 0.60 mmol)의 혼합물을 70℃에서 3 시간 동안 가열하였다. 용매를 증발시키고, 잔류물을 물과 EtOAc 사이에 분배하였다. 수층을 EtOAc로 2회 세척하고, 합한 유기상을 물로 세척하였으며, 건조시키고(Na2SO4), 증발시켰다. 생성물은 더 이상의 정제없이 사용할 수 있었다.
수득량: 58 mg(87%).
1H NMR(400 MHz, CDCl3) δ 7.90(bt, 1H), 7.46(m, 1H), 7.25-6.95(m, 5H), 6.51(t, 1H), 4.88(s, 1H), 4.83(m, 1H), 4.6-4.5(m, 2H), 4.4-3.9(m, 4H), 3.95(s, 3H), 3.63(m, 1H), 2.67(m, 1H), 2.38(m, 1H), 1.87(br, 1H), 0.98(m, 2H), 0.01(s, 9H).
(ii) Ph(3-Cl)(5-OCHF 2 )-(R)CH(OH)C(O)-Aze-Pab(2,6-디F)(OMe)
Ph(3-Cl)(5-OCHF2)-(R)CH(OH)C(O)-Aze-Pab(2,6-디F)(OMe, Teoc)(58 mg, 0.086 mmol; 상기 단계(i) 참조)을 TFA 3 ㎖ 중에 용해시키고, 빙욕에서 냉각하였으며, 2 시간 동안 반응시켰다. TFA를 증발시키고, 잔류물을 EtOAc 중에 용해시켰다. 유기층을 수성 탄산나트륨과 물로 2회 세척하였으며, 건조시키고(Na2SO4), 증발시켰다. 잔류물을 물과 아세토니트릴로부터 냉동 건조시켜서 표제 화합물 42 mg(92%)을 얻었다.
순도: 94%.
1H NMR(300 MHz, CDCl3) δ 7.95(bt, 1H), 7.2-7.1(m, 4H), 6.99(m, 1H), 6. 52(t, 1H), 4.88(s, 1H), 4.85-4.75(m, 3H), 4.6-4.45(m, 2H), 4.29(br, 1H), 4.09(m, 1H), 3.89(s, 3H), 3.69(m, 1H), 2.64(m, 1H), 2.38(m, 1H), 1.85(br, 1H)
13C-NMR(100 MHz; CDCl3): (카르보닐 탄소 및/또는 아미딘 탄소) δ 172.1, 169.8, 151.9
APCI-MS:(M+1) = 533/535 m/z.
실시예 41
Ph(3-Cl)(5-OCHF 2 )-(R)CH(OH)C(O)-Aze-Pab(2,5-디F)
(i) 2,5-디플루오로-4[(메틸술피닐)(메틸티오)메틸]벤조니트릴
(메틸술피닐)(메틸티오)메탄(3.16 g, 0.0255 mol)을 아르곤 하에 무수 THF 50 ㎖ 중에 용해시킨 후, -78℃로 냉각시켰다. 헥산 중의 부틸리튬(16 ㎖, 1.6 M, 0.0256 mol)을 교반하면서 적가하였다. 이 혼합물을 15 분 동안 교반하였다. 한편, 무수 THF 50 ㎖ 중의 2,4,5-트리플루오로벤조니트릴(2.0 g; 0.013 mol)의 용액을 아르곤 하에 -78℃로 냉각하고, 전자의 용액을 캐눌라를 통해 후자의 용액에 3-5 분에 걸쳐 가하였다. 30 분 후, 냉각욕을 제거하고, 반응물이 실온에 도달할 때, 그 반응물을 물 200 ㎖ 중에 부었다. THF를 증발시키고, 잔류 수층을 디에틸 에테르로 3회 추출하였다. 합한 에테르상을 물로 세척하고, 건조시켰으며(Na2SO4), 증발시켰다. 미정제 생성물은 결정화되기 시작했는데, 이것을 다음 단계에서 그대로 사용할 수 있었다.
수득량: 2.8 g(84%).
1H NMR(500 MHz, CDCl3) δ 7.51-7.44(m, 2H, 주 부분 입체 이성질체), 7.39(dd, 1H, 부 부분 입체 이성질체), 5.00(s, 1H, 부 부분 입체 이성질체), 4.92(s, 1 H, 주 부분 입체 이성질체), 2.59(s, 3H, 부 부분 입체 이성질체), 2.56(s, 1H, 주 부분 입체 이성질체), 2.46(s, 1H, 부 부분 입체 이성질체), 2.40(s, 1H, 주 부분 입체 이성질체).
(ii) 2,5-디플루오로-4-포르밀벤조니트릴
2,5-디플루오로-4[(메틸술피닐)(메틸티오)메틸]벤조니트릴(2.8 g, 0.0107 mol; 상기 단계(i) 참조)을 THF 100 ㎖ 중에 용해시키고, 진한 황산 6.5 g을 가하였다. 이 혼합물을 실온에서 6 일 동안 방치하고, 이어서 물 500 ㎖ 중에 부었다. 디에틸 에테르로 3회 추출한 다음, 합한 에테르상을 물로 수회 세척하고,건조시켰으며(Na2SO4), 증발시켰다. 미정제 생성물은 헵탄:EtOAc(8:2)을 사용하여 실리카 겔 상의 플래쉬 크로마토그래피를 수행하였다. 수득량: 1.2 g(67%). 포르밀기의 위치는 13C NMR에 의해 확증되었다. 각각 160.1 및 158.4에서 플루오르화된 탄소로부터의 탄소 시그날은 사중 피이크가 아닌 이중 피이크였는데, 이것은 포르밀기가 2번 위치에 존재하는 경우에 나타났다.
1H NMR(300 MHz, CDCl3) δ 10.36(d, 1H), 7.72(dd, 1H), 7.54(dd, 1H).
(iii) 2,5-디플루오로-4-히드록시메틸벤조니트릴
2,5-디플루오로-4-포르밀벤조니트릴(3.60 g, 0.0215 mol; 상기 단계(ii) 참조)을 메탄올 50 ㎖ 중에 용해시키고, 빙욕에서 냉각시켰다. 붕수소화나트륨(0.815 g, 0.0215 mol)을 교반하면서 조금씩 가하고, 이 반응물을 45 분 동안 방치하였다. 물(300 ㎖)을 가하고, 이후에는 주의깊게 2 M HCl을 산성 pH가 얻어질 때까지 가하였다. 이 혼합물을 디에틸 에테르로 3회 추출하고, 합한 에테르상을 물로 세척하였으며, 건조시키고(Na2SO4), 증발시켰다. 미정제 생성물은 바로 결정화되었는데, 더 이상의 정제없이 사용할 수 있었다.
수득량: 3.1 g(85%).
1H NMR(300 MHz, CDCl3) δ 7.45(dd, 1H), 7.30(dd, 1H), 4.85(s, 2H), 2.10(br, 1H).
(iv) 4-시아노-2,5-디플루오로벤질 메탄술포네이트
염화메틸렌 60 ㎖ 중의 2,5-디플루오로-4-히드록시메틸벤조니트릴(3.10 g, 0.0183 mol; 상기 단계(iii) 참조) 및 메탄술포닐 클로라이드(2.21 g, 0.0192 mol)의 빙냉된 용액에 트리에틸아민(1.95 g, 0.0192 mol)을 교반하면서 가하였다. 0℃에서 1.5 시간 후, 혼합물을 물로 세척하고, 건조시켰으며(Na2SO4), 증발시켰다. 생성물은 더 이상의 정제없이 사용할 수 있었다.
수득량: 4.5 g(99%).
1H NMR(300 MHz, CDCl3) δ 7.45-7.35(m, 2H), 5.32(s, 2H), 3.13(s, 3H).
(v) 4-아지도메틸-2,5-디플루오로벤조니트릴
물 20 ㎖와 DMF 40 ㎖ 중의 4-시이노-2,5-디플루오로벤질 메탄술포네이트(4.5 g, 0.0182 mol; 상기 단계(iv) 참조) 및 아지드화나트륨(2.0 g, 0.031 mol)의 혼합물을 실온에서 2 시간 동안 교반하였다. 이어서, 이것을 물 300 ㎖ 중에 붓고, 디에틸 에테르로 3회 추출하였다. 합한 에테르상을 물로 수회 세척하고, 건조시켰으며(Na2SO4), 증발시켰다. 소량의 샘플을 NMR 목적으로 증발시켰는데, 생성물이 결정화되었다. 나머지 잔량을 주의깊게 증발시키지만, 완전 건조될 때까지는 증발시키지 않았다. 수율(이론적으로 3.5 g)은 NMR 및 분석용 HPLC에 근거하여 거의 정량적인 것으로 추정되었다.
1H NMR(500 MHz, CDCl3) δ 8.38(dd, 1H), 7.32(dd, 1H), 4.54(s, 2H).
(vi) 4-아미노메틸-2,5-디플루오로벤조니트릴
이 반응은 문헌[J. Chem. Res.(M)(1992) 3128]에 설명된 절차에 따라 실시하였다. 물 20 ㎖ 중의 10% Pd/C(50% 수분) 300 mg의 현탁액에 물 20 ㎖ 중의 붕수소화나트륨(0.779 g, 0.0206 mol)의 용액을 가하였다. 일부 기체가 발생하였다. 4-아지도메틸-2,5-디플루오로벤조니트릴(1.00 g, 5.15 mmol; 상기 단계(v) 참조)을 THF 60 ㎖ 중에 용해시키고, 빙욕 상의 수성 혼합물에 가하였다. 이 혼합물을 1.5 시간 동안 교반한 후, 2 M HCl 10 ㎖를 가하고, 이 혼합물은 셀레이트를 통해 여과하였다. 셀라이트를 보다 많은 물로 세정하고, 합한 수상을 EtOAc로 세척하였으며, 이어서 2 M NaOH를 사용하여 알칼리성으로 만들었다. 염화메틸렌으로 3회 추출한 다음, 합한 유기상을 물로 세척하고, 건조시켰으며(Na2SO4), 증발시켰다.
수득량: 0.47 g(54%).
1H NMR(300 MHz, CDCl3) δ7.39(dd, 1H), 7.29(dd, 1H), 3.99(s, 2H), 1.45(br, 2H).
(vii) 2,5-디플루오로-4-t-부톡시카르보닐아미노메틸벤조니트릴
THF 10 ㎖ 중의 4-아미노메틸-2,5-디플루오로벤조니트릴(0.46 g, 2.7 mmol; 상기 단계(vi) 참조) 및 디-t-부틸 디카르보네이트(0.60 g, 2.7 mmol)의 용액을 밤새도록 교반하였다. THF를 증발시키고, 잔류물을 물과 EtOAc 사이에 분배하였다. 유기층을 물로 세척하고, 건조시켰으며(Na2SO4), 증발시켰다. 생성물은 더 이상의 정제없이 사용할 수 있었다.
수득량: 0.71 g(97%).
1H NMR(300 MHz, CDCl3) δ 7.35-7.2(m, 2H), 5.11(br 삼중 피크, 1H), 4.38(d, 2H), 1.45(s, 9H).
(viii) Boc-Pab(2,5-디F)(OH)
에탄올 10 ㎖ 중의 2,5-디플루오로-4-t-부톡시카르보닐아미노메틸벤조니트릴(0.70 g, 2.6 mmol; 상기 단계(vii) 참조), 히드록실아민 염산염(0.54 g, 7.8 mmol) 및 트리에틸아민(0.79 g, 7.8 mmol)의 혼합물을 실온에서 6 일 동안 교반하였다. 이어서, 이것을 물과 염화메틸렌 사이에 분배하였다. 수층을 염화메틸렌으로 추출하고, 합한 유기상을 물로 세척하였으며, 건조시키고(Na2SO4), 증발시켰다. 생성물은 더 이상의 정제없이 사용할 수 있었다.
수득량: 0.72 g(92%).
1H NMR(500 MHz, CD3OD) δ 7.27(dd, 1H), 7.12(dd, 1H), 4.29(s, 2H), 1.47(s, 9H).
(ix) Boc-Pab(2,5-디F) x HOAc
이 반응은 문헌[Judkins et al., Synth. Comm.(1998) 4351]에 설명된 절차에 따라 실시하였다. 아세트산 70 ㎖ 중의 Boc-Pab(2,5-디F)(OH)(0.70 g, 2.3 mmol; 상기 단계(viii) 참조 ), 아세트산 무수물(0.25 g, 2.4 mmol) 및 10% Pd/C(50% 수분) 230 mg을 2.5 시간 동안 압력 5 atm으로 수소화하였다. 혼합물을 셀라이트를 통해 여과하고, 증발시켰다. 잔류물을 아세토니트릴과 물로부터 냉동 건조시켰다. 생성물은 더 이상의 정제없이 다음 단계에서 사용할 수 있었다.
수득량: 0.80 g(100%).
1H NMR(500 MHz, CD3OD) δ 7.49(dd, 1H), 7.31(dd, 1H), 4.33(s, 2H), 1.91(s, 3H), 1.46(s, 9H).
(x) Boc-Pab(2,5-디F)(Teoc)
THF 50 ㎖ 중의 Boc-Pab(2,5-디F) x HOAc(0.80 g, 2.3 mmol; 상기 단계(ix) 참조)의 현탁액에 2-(트리메틸실릴)에틸 p-니트로페닐 카르보네이트(0.85 g, 3.0 mmol)를 가하였다. 물 10 ㎖ 중의 탄산칼륨(0.80 g, 5.8 mmol)의 용액을 적가하였다. 이 혼합물을 밤새도록 교반하였다. 과량의 Teoc 시약은 글리신(0.100 g) 및 탄산칼륨(0.75 g)을 상기 용액에 가함으로써 소실시키고, 이것을 2 시간 동안 더 반응시켰다. THF를 증발시키고, 잔류물을 물과 염화메틸렌 사이에 분배하였다. 수층을 염화메틸렌으로 추출하고, 합한 유기상을 물로 세척하였으며, 건조시키고(Na2SO4), 증발시켰다. 헵탄:EtOAc(2:1)을 사용하여 실리카 겔 상의 플래쉬 크로마토그래피를 수행하여 순수한 화합물 0.72 g(72%)을 얻었다.
1H NMR(400 MHz, CDCl3) δ 8.00(dd, 1H), 7.15(dd, 1H), 4.98(br, 1H), 4.36(bd, 2H), 4.24(m, 2H), 1.45(s, 9H), 1.12(m, 2H), 0.07(s, 9H).
( xi ) H- Pab (2,5-디F)( Teoc ) x 2 HCl
Boc-Pab(2,5-디F)(Teoc)(0.38 g, 0.88 mmol; 상기 단계(x) 참조)을 HCl(g)로 포화된 EtOAc 50 ㎖ 중에 용해시켰다. 이 혼합물을 30 분 동안 방치하고, 증발시켰다.
1H NMR(500 MHz, CD3OD) δ 7.75-7.6(m, 2H), 4.46(m, 2H), 4.3(s, 2H), 1.15(m, 2H), 0.07(s, 9H).
(xii) Boc-Aze-Pab(2,5-디F)(Teoc)
DMF 5 ㎖ 중의 Boc-Aze-OH(0.189 g, 0.94 mmol), H-Pab(2,5-디F)(Teoc) x 2 HCl(0.36 g, 0.89 mmol; 상기 단계(xi) 참조) 및 PyBOP(0.54 g, 1.03 mmol)의 교반된 용액에 디이소프로필에틸 아민(0.49 g, 3.8 mmol)을 가하고, 이 혼합물을 밤새도록 반응시켰다. 이어서, 생성물을 수성 중탄산나트륨에 붓고, EtOAc로 3회 추출하였다. 합한 유기상을 물로 세척하고, 건조시켰으며(Na2SO4), 증발시켰다. 헵탄:EtOAc(3:7)을 사용하여 실리카 겔 상의 플래쉬 크로마토그래피에 의해 충분하게 순수한 화합물을 얻었다.
수득량: 0.25 g(48%).
1H NMR(500 MHz, CDCl3) δ7.98(dd, 1H), 7.13(dd, 1H), 4.69(m, 1H), 4.53(m, 2H), 4.22(m, 2H), 3.92(m, 1H), 3.79(m, 1H), 2.55-2.35(m, 2H), 1.44(s, 9H), 1.11(m, 2H), 0.06(s, 9H).
(xiii) H-Aze-Pab(2,5-디F)(Teoc) x 2 HCl
Boc-Aze-Pab(2,5-디F)(Teoc)(0.25 g, 0.49 mmol; 상기 단계(xii) 참조)를 HCl(g)로 포화된 EtOAc 50 ㎖ 중에 용해시켰다. 이 혼합물을 30 분 동안 방치하고, 증발시켰다. 생성물은 더 이상의 정제없이 다음 단계에서 사용하였다
수득량: 0.23 g(97%).
1H NMR(400 MHz, CD3OD) δ 7.59(dd, 1H), 7.47(dd, 1H), 5.14(m, 1H), 4.54(m, 2H), 4.48(m, 2H), 4.15(m, 1H), 3.96(m, 1H), 2.87(m, 1H), 2.56(m, 1H), 1.17(m, 2H), 0.05(s, 9H).
(xiv) Ph(3-Cl)(5-OCHF 2 )-(R)CH(OH)C(O)-Aze-Pab(2,5-디F)(Teoc)
DMF 10 ㎖ 중의 Ph(3-Cl)(5-OCHF2)-(R)CH(OH)C(O)OH(0.12 g, 0.47 mmol; 상기 실시예 1의 단계(viii) 참조), H-Aze-Pab(2,5-디F)(Teoc) x 2 HCl(0.23 g, 0.47 mmol; 상기 단계(xiii) 참조) 및 PyBOP(0.27 g, 0.52 mmol)의 용액에 디이소프로필에틸 아민(0.245 g, 1.90 mmol)을 가하고, 이 혼합물을 밤새도록 교반하였다. 생성물을 수중에 붓고, EtOAc로 3회 추출하였다. 합한 유기상을 물로 세척하고, 건조시켰으며(Na2SO4), 증발시켰다. EtOAc를 사용하여 실리카 겔 상의 플래쉬 크로마토그래피에 의해 순수한 분획 100 mg 및 90% 순수한 분획 30 mg을 얻었다.
총 수득량: 0.13 g(41%).
1H NMR(400 MHz, CDCl3) δ 9.80(br, 1H), 8.05(bt, 1H), 7.94(dd, 1H), 7.20(m, 1H), 7.2-7.1(m, 2H), 7.02(m, 1H), 6.54(t, 1H), 4.93(s, 1H), 4.91(m, 1H), 4.51(m, 2H), 4.28(br, 1H), 4.23(m, 2H), 4.13(m, 1H), 3.74(m, 1H), 2. 69(m, 1H), 2.43(m, 1H), 1.73(br, 1H), 1.11(m, 2H), 1.11(s, 9H).
(xv) Ph(3-Cl)(5-OCHF 2 )-(R)CH(OH)C(O)-Aze-Pab(2,5-디F)
Ph(3-Cl)(5-OCHF2)-(R)CH(OH)C(O)-Aze-Pab(2,5-디F)(Teoc)[상기 단계(xiv)로부터 얻은 순수한 분획 60 mg(0.093 mmol)]을 THF 3 ㎖ 중에 용해시키고, 실온에서 1 시간 동안 방치하였다. TFA를 증발시키고, 잔류물을 물과 아세토니트릴로부터 냉동 건조시켜서 TFA 염으로서 표제 화합물 55 mg(96%)을 얻었다.
순도: > 99%.
1H NMR(500 MHz, CD3OD, 회전 이성질체의 혼합물) δ 7.55-7.3(m, 3H), 7.2-7.1(m, 2H), 6.88(t, 1H, 주 회전 이성질체), 6.86(t, 1H, 부 회전 이성질체), 5.22(m, 1H, 부 회전 이성질체), 5.20(s, 1H, 주 회전 이성질체), 5.13(s, 1H, 부 회전 이성질체), 4.80(m, 1H, 주 회전 이성질체), 4.6-4.45(m, 2H), 4.36(m, 1H, 주 회전 이성질체), 4.19(m, 1H, 주 회전 이성질체), 4.07(m, 1H, 부 회전 이성질체), 3.98(m, 1H, 부 회전 이성질체), 2.70(m, 1H, 부 회전 이성질체), 2.54(m, 1H, 주 회전 이성질체), 2.28(m, 1H, 주 회전 이성질체), 2.14(m, 1H, 부 회전 이성질체).
13C-NMR(75 MHz; CD3OD): (카르보닐 탄소 및/또는 아미딘 탄소, 회전 이성질체의 혼합물) δ 173.0, 172.6, 1.72.1, 172.0, 162.4
APCI-MS:(M+1) = 503/505 m/z.
실시예 42
Ph(3-Cl)(5-OCHF 2 )-(R)CH(OH)C(O)-Aze-Pab(2,5-디F)(OMe)
(i) Ph(3-Cl)(5-OCHF 2 )-(R)CH(OH)C(O)-Aze Pab(2,5-디F)(OMe, Teoc)
아세토니트릴 5 ㎖ 중의 Ph(3-Cl)(5-OCHF2)-(R)CH(OH)C(O)-Aze-Pab(2,5-디F)(Teoc)(40 mg, 0.062 mmol; 상기 실시예 41의 단계(xiv) 참조) 및 O-메틸 히드록실아민 염산염(58 mg, 0.70 mmol)의 혼합물을 70℃에서 2 시간 동안 가열하였다. 용매를 증발시키고, 잔류물을 물과 EtOAc 사이에 분배하였다. 수층을 EtOAc로 추출하고, 합한 유기상을 물로 세척하였으며, 건조시키고(Na2SO4), 증발시켰다. 생성물은 더 이상의 정제없이 사용할 수 있었다.
수득량: 35 mg(84%).
1H NMR(600 MHz, CDCl3) δ 7.99(bt, 1H), 7.72(s, 1H), 7.20(m, 1H) 7.15-7.1(m, 1H), 7.07(dd, 1H), 7.01(m, 1H), 6.53(t, 1H), 4.90(s, 1H), 4.88 m, 1H), 4.48(m, 2H), 4.2-4.1(m, 3H), 3.95(s, 3H), 3.67(m, 1H), 2.68(m, 1H), 2.41(m, 1H), 0.97(m, 2H), 0.07(s, 9H).
(ii) Ph(3-Cl)(5-OCHF 2 )-(R)CH(OH)C(O)-Aze-Pab(2,5-디F)(OMe)
Ph(3-Cl)(5-OCHF2)-(R)CH(OH)C(O)-Aze-Pab(2,5-디F)(OMe, Teoc)(35 mg, 0.052 mmol; 상기 단계(i) 참조)를 TFA 3 ㎖ 중에 용해시키고, 30 분 동안 반응시켰다. TFA를 증발시키고, 잔류물을 물과 아세토니트릴로부터 증발시켜서 표제 화합물 29 mg(99%)을 얻었다.
순도: 97%.
1H NMR(300 MHz, CDCl3) δ 8.01(bt, 1H), 7.45(dd, 1H), 7.20(m, 1H), 7.15(m, 1H), 7.09(dd, 1H), 7.02(m, 1H), 6.54(t, 1H), 5.2-5.0(m, 2H), 4.95-4.85(m, 2H), 4.6-4.4(m, 2H), 4.25(br, 1H), 4.13(m, 1H), 3.90(s, 3H), 3.71(m, 1H), 2.69(m, 1H), 2.43(m, 1H).
13C-NMR(75 MHz; CDCl3): (카르보닐 탄소 및/또는 아미딘 탄소) δ 173.0, 170.9, 152.6
APCI-MS:(M+1) = 533/535 m/z.
실시예 43
Ph(3-Cl)(5-OCHF 2 )-(R)CH(OH)C(O)-Aze-Pab(OEt)
(i) Ph(3-Cl)(5-OCHF 2 )-(R)CH(OH)C(O)-Aze-Pab(OEt, Teoc)
Ph(3-Cl)(5-OCHF2-(R)CH(OH)C(O)-Aze-Pab(Teoc)(55 mg, 0.090 mmol; 상기 실시예 1의 단계(ix) 참조) 및 O-에틸히드록실 아민 염산염(53 mg, 0.54 mmol)를 THF 4 ㎖ 중에 용해시켰다. 이 혼합물을 60℃에서 5 시간 동안 교반하였다. 용매를 증발시켰다. 잔류물은 염화메틸:메탄올(95:5)을 사용하여 용출하면서 실리카 겔 상의 크로마토그래피를 수행하여 부제 화합물 55 mg(93%)을 얻었다.
1H-NMR(400 MHz; CDCl3): δ 7.84(bt, 1H), 7.59(bs, 1H), 7.47(bd, 1H), 7.29(bd, 1H), 7.21(m, 1H), 7.14(m, 1H), 7.02(m, 1H), 6.53(t, 1H), 4.90(s, 1H), 4.86(m, 1H), 4.55-4.4(m, 2H), 4.25-4.1(m, 5H), 3.69(m, 1H), 2.66(m, 1H), 2.41(m, 1H), 1.33(t, 3H), 0.98(m, 2H), 0.02(s, 9H).
(ii) Ph(3-Cl, 5-OCHF 2 )-(R)CH(OH)C(O)-Aze-Pab(OEt)
염화메틸렌 0.5 ㎖ 중의 Ph(3-Cl)(5-OCHF2)-(R)CH(OH)C(O)-Aze-Pab(OEt, Teoc)(55 mg, 0.084 mmol; 상기 단계(i) 참조)의 빙냉된 용액에 TFA 3 ㎖를 가하였다. 이 혼합물을 빙욕에서 160 분 동안 교반하였다. 물질은 정제용 HPLC를 사용하여 정제하였다. 중요한 분획을 수집하고, 냉동 건조시켜서(2x), 표제 화합물 20 mg을 얻었다.
1H-NMR(400 MHz; CD3OD) 회전 이성질체: δ7.59(bd, 2H), 7.35(m, 1H), 7.32(bd, 2H), 7.25-7.1(m, 2H), 6.89(t, 1H, 주 회전 이성질체), 6.86(t, 1H, 부 회전 이성질체), 5.18(s, 1H, 주 회전 이성질체), 5.18(m, 1H, 부 회전 이성질체), 5.11(s, 1H, 부 회전 이성질체), 4.77(m, 1H), 4.5-4.3(m, 3H), 4.2-3.9(m, 3H), 2.67(m, 1H, 부 회전 이성질체), 2.52(m, 1H, 주 회전 이성질체), 2.28(m, 1H, 주 회전 이성질체), 2.15(m, 1H, 부 회전 이성질체), 1.28(t, 3H).
13C-NMR(100 MHz; CD3OD): (카르보닐 탄소 및/또는 아미딘 탄소, 회전 이성질체) δ 172.4, 171.9, 171.4, 153.8, 152.3
MS(m/z) 509(M-1)_, 511(M+1)+.
실시예 44
Ph(3-Cl)(5-OCHF 2 )-(R)CH(OH)C(O)-Aze-Pab(OnPr)
(i) Ph(3-Cl)(5-OCHF 2 )-(R)CH(OH)C(O)-Aze-Pab(OnPr, Teoc)
Ph(3-Cl)(5-OCHF2)-(R)CH(OH)C(O)-Aze-Pab(Teoc)(53 mg, 0.087 mmol; 상기 실시예 1의 단계(ix) 참조) 및 O-n-프로필히드록실 아민 염산염 58 mg(0.52 mmol)를 THF 4 ㎖ 중에 용해시켰다. 이 혼합물을 60℃에서 5 시간 동안 교반하였다. 용매를 증발시켰다. 잔류물은 염화메틸:메탄올(95:5)을 사용하여 용출하면서 실리카 겔 상의 크로마토그래피를 수행하여 부제 화합물 51 mg(88%)을 얻었다.
1H-NMR(400 MHz; CDCl3): δ7.84(m, 1H), 7.59(bs, 1H), 7.47(bd, 2H), 7.28(bd, 2H), 7.21(m, 1H), 7.14(m, 1H), 7.02(m, 1H), 6.53(t, 1H), 4.90(s, 1H), 4.85(m, 1H), 4.55-4.4(m, 2H), 4.2-4.05(m, 5H), 3.69(m, 1H), 2.65(m, 1H), 2.41(m, 1H), 1.74(m, 2H), 1.05-0.95(m, 5H), 0.03(s, 9H).
(ii) Ph(3-Cl)(5-OCHF 2 )-(R)CH(OH)C(O)-Aze-Pab(OnPr)
염화메틸렌 0.5 ㎖ 중의 Ph(3-Cl)(5-OCHF2)-(R)CH(OH)C(O)-Aze-Pab(OnPr, Teoc)(51 mg, 0.078 mmol; 상기 단계(i) 참조)의 빙냉된 용액에 TFA 3 ㎖를 가하였다. 이 혼합물을 빙욕에서 110 분 동안 교반하였다. 물질은 정제용 HPLC를 사용하여 정제하였다. 중요한 분획을 증발시키고, 냉동 건조시켜서 표제 화합물 20 mg(47%)을 얻었다.
1H-NMR(500 MHz; CD3OD) 회전 이성질체: δ 7.61(bd, 2H), 7.38(m, 1H), 7.35(bd, 2H), 7.22(m, 1H, 주 회전 이성질체), 7.18(m, 1H), 7.15(m, 1H, 부 회전 이성질체), 6.92(t, 1H, 주 회전 이성질체), 6.89(t, 1H, 부 회전 이성질체), 5.20(s, 1H, 주 회전 이성질체), 5.20(m, 1H, 부 회전 이성질체), 4.80(m, 1H, 주 회전 이성질체), 4.5-4.4(m, 2H, 4.37에서 주 회전 이성질체에 상응하는 부 회전 이성질체를 포함함), 4.37(m, 1H, 주 회전 이성질체), 4.18(m, 1H, 주 회전 이성질체), 4.09(m, 1H, 부 회전 이성질체), 3.99(m, 2H), 2.70(m, 1H, 부 회전 이성질체), 2.54(m, 1H, 주 회전 이성질체), 2.30(m, 1H, 주 회전 이성질체), 2.18(m, 1H, 부 회전 이성질체), 1. 73(m, 2H), 1.01(t, 3H).
13C-NMR(125 MHz; CD3OD): (카르보닐 탄소 및/또는 아미딘 탄소, 회전 이성질체) δ 171.4, 153.8, 152.3
MS(m/z) 523(M-1)-, 525(M+1)+ .
실시예 45
Ph(3-Cl)(5-OCHF 2 )-(R)CH(OH)C(O)-Aze-Pab(OiPr)
(i) Ph(3-Cl)(5-OCHF 2 )-(R)CH(OH)C(O)-Aze-Pab(OiPr, Teoc)
Ph(3-Cl)(5-OCHF2)-(R)CH(OH)C(O)-Aze-Pab(Teoc)(50 mg, 0.082 mmol; 상기 실시예 1의 단계(ix) 참조) 및 O-i-이소프로필히드록실 아민 염산염 55 mg(0.49 mmol)을 THF 4 ㎖ 중에 용해시켰다. 혼합물을 60℃에서 5 시간 동안 교반하였다. 용매를 증발시켰다. 잔류물은 염화메틸렌:메탄올(95:5)을 사용하여 용출하면서 실리카 겔 상의 크로마토그래피를 수행하여 부제 화합물 46 mg(84%)을 얻었다.
1H-NMR(400 MHz; CDCl3): δ 7.84(m, 1H), 7.57(bs, 1H), 7.48(bd, 2H), 7.29(bd, 2H), 7.21(m, 1H), 7.14(m, 1H), 7.02(m, 1H), 6.53(t, 1H), 4.91(s, 1H), 4.87(m, 1H), 4.55-4.45(m, 2H), 4.42(m, 1H), 4.2-4.1(m, 3H), 3.69(m, 1H), 2.66(m, 1H), 2. 42(m, 1H), 1.30(d, 6H), 0.98(m, 2H), 0.02(s, 9H).
(ii) Ph(3-Cl)(5-OCHF 2 )-(R)CH(OH)C(O)-Aze-Pab(OiPr)
염화메틸렌 0.5 ㎖ 중의 Ph(3-Cl)(5-OCHF2)-(R)CH(OH)C(O)-Aze-Pab(OiPr, Teoc)(46 mg, 0.069 mmol; 상기 단계(i) 참조)의 빙냉된 용액에 TFA 3 ㎖를 가하였다. 혼합물을 빙욕에서 150 분 동안 교반하였다. 물질은 정제용 HPLC를 사용하여 정제하였다. 중요한 분획을 증발시키고, 냉동 건조시켜서(2x), 표제 화합물 22 mg(58%)을 얻었다.
1H-NMR(400 MHz; CD3OD) 회전 이성질체: δ7.59(d, 2H), 7.35(m, 1H), 7.32(d, 2H), 7.19(m, 1H, 주 회전 이성질체), 7.15(m, 1H), 7.12(m, 1H, 부 회전 이성질체), 6.89(t, 1H, 주 회전 이성질체), 6.86(t, 1H, 부 회전 이성질체), 5.18(s, 1H, 주 회전 이성질체), 5.18(m, 1H, 부 회전 이성질체), 5.12(s, 1H, 부 회전 이성질체), 4.78(m, 1H, 주 회전 이성질체), 4.5-3.9(m, 5H), 2.67(m, 1H, 부 회전 이성질체), 2.52(m, 1H, 주 회전 이성질체), 2.28(m, 1H, 주 회전 이성질체), 2.15(m, 1H, 부 회전 이성질체), 1.26(d, 6H).
13C-NMR(100 MHz; CD3OD): (카르보닐 탄소 및/또는 아미딘 탄소, 회전 이성질체) δ 171.9, 171.4, 153.6
MS(m/z) 523(M-1)_, 525(M+1)+ .
실시예 46
실시예 3, 6, 9, 10, 13 내지 15, 17, 19, 21, 23, 25, 27, 28, 32, 34, 36, 38, 39 및 41의 표제 화합물은 상기 테스트 A에서 시험하였는데, 3.5 μM 미만의 IC50 TT 값을 나타내는 것으로 밝혀졌다. 실시예 3, 6, 9, 10, 13, 15, 17, 19, 21, 23, 27, 32, 34 및 39의 표제 화합물은 0.02 μM 미만의 값을 나타내고, 실시예 25 및 28의 표제 화합물은 0.03 μM 미만의 값을 나타내며, 실시예 14의 표제 화합물은 0.04 μM 미만의 값을 나타내고, 실시예 38 및 및 41의 표제 화합물은 0.15 μM 미만의 값을 나타내는 것으로 밝혀 졌다.
실시예 47
실시예 3, 6, 13, 15, 17, 19, 21, 23, 25, 27, 28, 32 및 34의 표제 화합물은 상기 테스트 D로 시험하였는데, 1 μM 미만의 IC50 APTT 값을 나타내는 것으로 밝혀졌다.
실시예 48
실시예 1, 2, 4, 5, 7, 12, 16, 18, 20, 22, 24, 26, 29, 30, 33 및 43 내지 45의 표제 화합물은 상기 E 테스트에서 시험하였는데, 상응하는 활성 억제제(유리 아미딘)로서 래트에 있어 경구 및/또는 비경구 생체이용율을 나타내는 것으로 밝혀졌다.
실시예 49
실시예 1, 2, 7, 8, 11, 12, 16, 18, 20, 22, 24, 26, 29, 33, 37, 40, 43 및 45의 표제 화합물은 상기 G 테스트에서 시험하였는데, 사람으로부터 및 래트로부터 얻은 간 마이크로솜 내에서 상응하는 활성 억제제(유리 아미딘)로 전환되는 것으로 밝혀졌다.
약어
Ac = 아세틸
AcOH = 아세트산
APCI = (MS와 관련된) 대기압 화학적 이온화
API = (MS와 관련된) 대기압 이온화
aq. = 수성
AUC = 곡선 아래의 면적
Aze = (달리 특별하게 언급이 없는 한) (S)-아제티딘-2-카르복실레이트
AzeOH = 아제티딘-2-카르복실산
Bn = 벤질
Boc = t-부틸옥시카르보닐
BSA = 소 혈청 알부민
Bu = 부틸
Bzl = 벤질
CI = (MS와 관련된) 화학적 이온화
d = 일(들)
DCC = 디시클로헥실 카르보디이미드
DIBAL-H = di-이소부틸알루미늄 히드라이드
DIPEA = 디이소프로필에틸아민
DMAP = 4-(NN-디메틸 아미노)피리딘
DMF = 디메틸포름아미드
DMSO = 디메틸술폭사이드
DVT = 심정맥 혈전증
EDC = 1-(3-디메틸아미노프로필)-3-에틸카르보디이미드 염산염
e. e. = 과량의 거울상 이성질체
Et = 에틸
에테르 = 디에틸 에테르
EtOAc = 에틸 아세테이트
EtOH = 에탄올
Et2O = 디에틸 에테르
h = 시간(들)
HATU = O-(아자벤조트리아졸-1-일)-N,N,N',N'-테트라메틸우로늄 헥사플루오로포스페이트
HBTU = [N,N,N',N'-테트라메틸-O-(벤조트라아졸-1-일)우로늄 헥사플루오로포스페이트]
HCl = (문맥에 따라) 염산, 염화수소 기체 또는 염산염
Hex = 헥산
HOAc = 아세트산
HPLC = 고성능 액체 크로마토그래피
LC = 액체 크로마토그래피
Me = 메틸
MEM = 메톡시에톡시메틸
MeOH = 메탄올
min = 분(들)
MS = 질량 분광법
MTBE = 메틸 t-부틸 에테르
NADH = 니코틴아미드 아데닌 디뉴클레오티드, 환원된 형태
NADPH = 니코틴아미드 아데닌 디뉴클레오티드 포스페이트, 환원된 형태
NIH = National Institute of Heath(US)
NIHU = National Institute of Health units
NMR = 핵자기 공명
OAc = 아세테이트
Pab = 파라-아미디노벤질아미노
H-Pb = 파라-아미디노벤질아민
Ph = 페닐
Pr = 프로필
Pro = (S)-프롤린일
PyBOP = (벤조트리아졸-1-일옥시)트리피롤리디노포스포늄 헥사플루오로포스페이트
QF = 테트라부틸암모늄 플루오라이드
RedA1 = 나트륨 비스(2-메톡시에톡시)알루미늄 히드라이드
RPLC = 역상 고성능 액체 크로마토그래피
rt/RT = 실온
SOPs = 표준 작업 절차
TBTU = [N,N,N',N'-테트라메틸-O-(벤조트리아졸-1-일)우로늄 테트라플루오로보레이트]
TEA = 트리에틸아민
Teoc = 2-(트리메틸실릴)에톡시카르보닐
TEMPO = 2,2,6,6-테트라메틸-1-피페리딘일옥시 유리 라디칼
TFA = 트리플루오로아세트산
THF = 테트라히드로푸란
THP = 테트라히드로피란일
TLC = 박층 크로마토그래피
TMSCl = 트리메틸실릴 클로라이드
TMSCN = 트리메틸실릴 시아나이드
UV = 자외선
Z = 벤질옥시카르보닐
접두사 n, s, i 및 t는 이들의 통상적인 의미, 즉 정상(normal), 2차(secondary), 이소(iso) 및 3차(tertiary)를 갖는다. 접두사 c는 시클로(cyclo)를 의미한다.

Claims (24)

  1. 하기 화학식 Ia의 (3-Cl)(5-OCHF2)페닐-(R)CH(OH)C(O)-(S)-아제티딘-2-카르복실레이트-(파라-(2,6-디플루오로)아미디노벤질아미노); 및
    하기 화학식 Ib의 (3-Cl)(5-OCHF2)페닐-(R)CH(OH)C(O)-(S)-아제티딘-2-카르복실레이트-(파라-(OMe)(2,6-디플루오로)아미디노벤질아미노)로부터 선택된 화합물 또는 이들 중 어느 하나의 약학적으로 허용 가능한 염.
    (Ia)
    (Ib)
  2. 제1항에 있어서, 화합물 (3-Cl)(5-OCHF2)페닐-(R)CH(OH)C(O)-(S)-아제티딘-2-카르복실레이트-(파라-(OMe)(2,6-디플루오로)아미디노벤질아미노) 또는 이의 약학적으로 허용 가능한 염.
  3. 약학적으로 허용 가능한 보조제, 희석제 또는 담체와 혼합하여, 제1항에 정의된 화합물들 중 어느 하나 또는 이의 약학적으로 허용 가능한 염을 포함하는 정맥 혈전증, 폐동맥 색전증, 동맥 혈전증 또는 전신 색전증의 치료용 또는 예방 처치용 또는 치료 및 예방 처치용 약학제제.
  4. 제3항에 있어서, 약학적으로 허용 가능한 보조제, 희석제 또는 담체와 혼합하여, 화합물 (3-Cl)(5-OCHF2)페닐-(R)CH(OH)C(O)-(S)-아제티딘-2-카르복실레이트-(파라-(OMe)(2,6-디플루오로)아미디노벤질아미노) 또는 이의 약학적으로 허용 가능한 염을 포함하는 약학제제.
  5. 약학적으로 허용 가능한 보조제, 희석제 또는 담체와 혼합하여, 제1항에 정의된 화합물들 중 어느 하나 또는 이의 약학적으로 허용 가능한 염을 포함하는 심방 세동의 치료용 또는 예방 처치용 또는 치료 및 예방 처치용 약학제제.
  6. 제5항에 있어서, 약학적으로 허용 가능한 보조제, 희석제 또는 담체와 혼합하여, 화합물 (3-Cl)(5-OCHF2)페닐-(R)CH(OH)C(O)-(S)-아제티딘-2-카르복실레이트-(파라-(OMe)(2,6-디플루오로)아미디노벤질아미노) 또는 이의 약학적으로 허용 가능한 염을 포함하는 약학제제.
  7. 제3항 또는 제4항에 있어서, 상기 보조제, 희석제 및/또는 담체가 화합물의 변형된 방출을 발생시키는 것인 약학제제.
  8. 제3항 또는 제4항에 있어서, 경구 투여용으로 적용되는 것인 약학제제.
  9. 제7항에 있어서, 친수성 겔화 성분 및 활성 성분을 포함하는 겔화 매트릭스 변형된 방출 시스템 형태인 약학제제.
  10. 제8항에 있어서, 친수성 겔화 성분 및 활성 성분을 포함하는 겔화 매트릭스 변형된 방출 시스템 형태인 약학제제.
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