JPH1130617A - Ｌｄｌ−コレステロール測定法 - Google Patents
Ｌｄｌ−コレステロール測定法Info
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- JPH1130617A JPH1130617A JP14663698A JP14663698A JPH1130617A JP H1130617 A JPH1130617 A JP H1130617A JP 14663698 A JP14663698 A JP 14663698A JP 14663698 A JP14663698 A JP 14663698A JP H1130617 A JPH1130617 A JP H1130617A
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- cholesterol
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- ldl
- poly
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Abstract
(57)【要約】
【課題】 低比重リポタンパク（ＬＤＬ）中のコレステ
ロールを、従来法に於いて必要であった、ＬＤＬとＬＤ
Ｌ以外の不要のリポタンパクとを分離するための煩雑な
前処理操作なしに直接自動分析装置等を用いて測定し得
る方法及びそれに用いられる試薬を提供。 【解決手段】 ジメチル−α−シクロデキストリン又は
／及びポリ−β−シクロデキストリンの存在下で測定を
行うことを特徴とする、ＬＤＬ中のコレステロール測定
法。
ロールを、従来法に於いて必要であった、ＬＤＬとＬＤ
Ｌ以外の不要のリポタンパクとを分離するための煩雑な
前処理操作なしに直接自動分析装置等を用いて測定し得
る方法及びそれに用いられる試薬を提供。 【解決手段】 ジメチル−α−シクロデキストリン又は
／及びポリ−β−シクロデキストリンの存在下で測定を
行うことを特徴とする、ＬＤＬ中のコレステロール測定
法。
Description
【産業上の利用分野】本発明は、血清、血漿などの生体
試料中に存在する低比重リポタンパク（以下、ＬＤＬと
略記する。）中のコレステロールの測定方法及びこれに
用いる試薬に関する。
試料中に存在する低比重リポタンパク（以下、ＬＤＬと
略記する。）中のコレステロールの測定方法及びこれに
用いる試薬に関する。
【０００２】
【発明の背景】血清中の脂質の主な成分はコレステロー
ル、トリグリセライド、リン脂質等であり、これら血清
脂質はアポタンパクと結合してリポタンパクを形成し血
中を循環する。該リポタンパクは比重の差により高比重
リポタンパク（ＨＤＬ）、ＬＤＬ、超低比重リポタンパ
ク(ＶＬＤＬ）カイロミクロン（ＣＭ）等に分類され
る。これらリポタンパクのうち、ＨＤＬは組織に沈着し
た過剰なコレステロールを肝臓へ運搬する作用があり、
抗動脈硬化作用を有し、一方、ＬＤＬは肝臓から各組織
へのコレステロールの主たる運搬体であり、ＬＤＬの増
加は動脈硬化発生と密接な関係があると考えられてい
る。従って、ＬＤＬ中のコレステロール（以下、ＬＤＬ
−コレステロールと略記する。）は、動脈硬化症、虚血
性心疾患（冠動脈疾患）の危険因子と考えられ、該ＬＤ
Ｌ−コレステロールの含有量は、これら疾患の診断・治
療および予防の重要な指標となる。
ル、トリグリセライド、リン脂質等であり、これら血清
脂質はアポタンパクと結合してリポタンパクを形成し血
中を循環する。該リポタンパクは比重の差により高比重
リポタンパク（ＨＤＬ）、ＬＤＬ、超低比重リポタンパ
ク(ＶＬＤＬ）カイロミクロン（ＣＭ）等に分類され
る。これらリポタンパクのうち、ＨＤＬは組織に沈着し
た過剰なコレステロールを肝臓へ運搬する作用があり、
抗動脈硬化作用を有し、一方、ＬＤＬは肝臓から各組織
へのコレステロールの主たる運搬体であり、ＬＤＬの増
加は動脈硬化発生と密接な関係があると考えられてい
る。従って、ＬＤＬ中のコレステロール（以下、ＬＤＬ
−コレステロールと略記する。）は、動脈硬化症、虚血
性心疾患（冠動脈疾患）の危険因子と考えられ、該ＬＤ
Ｌ−コレステロールの含有量は、これら疾患の診断・治
療および予防の重要な指標となる。
【０００３】従来、ＬＤＬ−コレステロールの測定法と
しては、沈澱法、超遠心法、電気泳動法、算出式による
算出法等が知られている。これら従来法のうち、沈澱
法、超遠心法及び電気泳動法は、沈澱・遠心分離処理、
超遠心分離処理或いは電気泳動処理により、ＬＤＬとＬ
ＤＬ以外の不要のリポタンパクとを分離する前処理工程
が必要であるため、操作が煩雑であり、現在、臨床検査
の分野で広く普及している自動分析装置だけで直接測定
を実施することができないという問題点を有している。
また、フローデワルド（Friedewald）の式で知られてい
る総コレステロール値、ＨＤＬ−コレステロール値及び
トリグリセライド値から算出する算出法も、トリグリセ
ライドが500mg／dl以上含有する試料を用いた場合に
は、正確なＬＤＬ−コレステロール量を測定することが
できないという問題を有している。
しては、沈澱法、超遠心法、電気泳動法、算出式による
算出法等が知られている。これら従来法のうち、沈澱
法、超遠心法及び電気泳動法は、沈澱・遠心分離処理、
超遠心分離処理或いは電気泳動処理により、ＬＤＬとＬ
ＤＬ以外の不要のリポタンパクとを分離する前処理工程
が必要であるため、操作が煩雑であり、現在、臨床検査
の分野で広く普及している自動分析装置だけで直接測定
を実施することができないという問題点を有している。
また、フローデワルド（Friedewald）の式で知られてい
る総コレステロール値、ＨＤＬ−コレステロール値及び
トリグリセライド値から算出する算出法も、トリグリセ
ライドが500mg／dl以上含有する試料を用いた場合に
は、正確なＬＤＬ−コレステロール量を測定することが
できないという問題を有している。
【０００４】近年、従来法に於ける上記の如き問題点を
解消するために、種々の方法が開発されており、例えば
特開平7-280812号公報に開示された方法もその一つであ
る。即ち、ＬＤＬを凝集剤又は／及び抗体を使用して凝
集させた後に、ＬＤＬ以外のリポタンパクに含まれるコ
レステロールを定量反応に関与しない別の反応系に導い
て消去（消費）させた後、界面活性剤又は／及び無機塩
類を使用して、凝集させたＬＤＬを定量反応ができる程
度に溶解させ、ＬＤＬ−コレステロールを定量反応に付
し該溶液の吸光度を測定するという方法がそれである。
解消するために、種々の方法が開発されており、例えば
特開平7-280812号公報に開示された方法もその一つであ
る。即ち、ＬＤＬを凝集剤又は／及び抗体を使用して凝
集させた後に、ＬＤＬ以外のリポタンパクに含まれるコ
レステロールを定量反応に関与しない別の反応系に導い
て消去（消費）させた後、界面活性剤又は／及び無機塩
類を使用して、凝集させたＬＤＬを定量反応ができる程
度に溶解させ、ＬＤＬ−コレステロールを定量反応に付
し該溶液の吸光度を測定するという方法がそれである。
【０００５】しかしながら、この方法は、測定時の試薬
の形態が３試薬系又は４試薬系となるため、このような
試薬形態での測定が可能なごく一部の自動分析装置にし
か適用できず、通常の臨床検査に於いて用いられている
２試薬系での測定にしか使用できない自動分析装置を用
いては測定を実施することができないという問題点があ
る。また、この方法では、測定に用いる試薬の数が多く
なるため、測定値の再現性が低下するという問題点もあ
った。
の形態が３試薬系又は４試薬系となるため、このような
試薬形態での測定が可能なごく一部の自動分析装置にし
か適用できず、通常の臨床検査に於いて用いられている
２試薬系での測定にしか使用できない自動分析装置を用
いては測定を実施することができないという問題点があ
る。また、この方法では、測定に用いる試薬の数が多く
なるため、測定値の再現性が低下するという問題点もあ
った。
【０００６】更に、煩雑な前処理操作なしでＬＤＬ−コ
レステロールを測定する方法として特開昭５８−１６５
８００号公報に開示されている方法がある。しかしなが
ら、この方法は、試薬中の例えば界面活性剤やコレステ
ロールエステラーゼ（以下、ＣＨＥと略記する。）の使
用濃度が限定されるため試薬の調製が煩雑であり、更に
測定時のｐＨや、測定時間間隔等測定条件を厳密に設定
しなくてはならず、しかもＨＤＬ中のコレステロールも
ある程度反応することから、動力学的測定、すなわち、
レイト・アッセイでしかＬＤＬ−コレステロールの測定
を行うことができないため、実用的な測定方法とは言い
難い方法であった。
レステロールを測定する方法として特開昭５８−１６５
８００号公報に開示されている方法がある。しかしなが
ら、この方法は、試薬中の例えば界面活性剤やコレステ
ロールエステラーゼ（以下、ＣＨＥと略記する。）の使
用濃度が限定されるため試薬の調製が煩雑であり、更に
測定時のｐＨや、測定時間間隔等測定条件を厳密に設定
しなくてはならず、しかもＨＤＬ中のコレステロールも
ある程度反応することから、動力学的測定、すなわち、
レイト・アッセイでしかＬＤＬ−コレステロールの測定
を行うことができないため、実用的な測定方法とは言い
難い方法であった。
【０００７】
【発明が解決しようとする課題】上記した如き状況に鑑
み、本発明が解決しようとする課題は、生体試料中のＬ
ＤＬ−コレステロールを、従来法に於いて必要であっ
た、ＬＤＬとＬＤＬ以外の不要のリポタンパクとを分離
するための煩雑な前処理操作なしに直接自動分析装置等
を用いて測定することを可能とする方法及びそれに用い
られる試薬の提供にある。
み、本発明が解決しようとする課題は、生体試料中のＬ
ＤＬ−コレステロールを、従来法に於いて必要であっ
た、ＬＤＬとＬＤＬ以外の不要のリポタンパクとを分離
するための煩雑な前処理操作なしに直接自動分析装置等
を用いて測定することを可能とする方法及びそれに用い
られる試薬の提供にある。
【０００８】
【発明を解決するための手段】本発明は、ジメチル−α
−シクロデキストリン（以下、ＤＭ−α−ＣＤと略記す
る。）又は／及びポリ−β−シクロデキストリン（以
下、ポリ−β−ＣＤと略記する。）の存在下で測定を行
うことを特徴とする、低比重リポタンパク中のコレステ
ロール測定法の発明である。
−シクロデキストリン（以下、ＤＭ−α−ＣＤと略記す
る。）又は／及びポリ−β−シクロデキストリン（以
下、ポリ−β−ＣＤと略記する。）の存在下で測定を行
うことを特徴とする、低比重リポタンパク中のコレステ
ロール測定法の発明である。
【０００９】また、本発明は、コレステロールオキシダ
ーゼ（以下、ＣＯＤと略記する。）又はコレステロール
デヒドロゲナーゼ（以下、ＣＨＤと略記する。）を用い
るＬＤＬ−コレステロール測定法であって、試料を予め
ＤＭ−α−ＣＤ又は／及びポリ−β−ＣＤを含んでなる
試薬で処理した後、該化合物の存在下でＣＯＤ又はＣＨ
Ｄを反応させることを特徴とする、ＬＤＬ−コレステロ
ール測定法の発明である。
ーゼ（以下、ＣＯＤと略記する。）又はコレステロール
デヒドロゲナーゼ（以下、ＣＨＤと略記する。）を用い
るＬＤＬ−コレステロール測定法であって、試料を予め
ＤＭ−α−ＣＤ又は／及びポリ−β−ＣＤを含んでなる
試薬で処理した後、該化合物の存在下でＣＯＤ又はＣＨ
Ｄを反応させることを特徴とする、ＬＤＬ−コレステロ
ール測定法の発明である。
【００１０】更に、本発明は、ＤＭ−α−ＣＤ又は／及
びポリ−β−ＣＤを含有させてなることを特徴とする、
低比重リポタンパク中のコレステロール測定用試薬の発
明である。
びポリ−β−ＣＤを含有させてなることを特徴とする、
低比重リポタンパク中のコレステロール測定用試薬の発
明である。
【００１１】また、本発明は、ＤＭ−α−ＣＤ又は／及
びポリ−β−ＣＤを含んでなる第一試薬と、ＣＯＤを含
んでなる第二試薬とからなるものであって、カップラ
ー、デベロッパー、ペルオキシダーゼ（以下、ＰＯＤと
略記する。）及びＣＨＥの夫々が少なくとも第一試薬と
第二試薬の何れかに含まれている低比重リポタンパク中
のコレステロール測定用試薬の発明である。
びポリ−β−ＣＤを含んでなる第一試薬と、ＣＯＤを含
んでなる第二試薬とからなるものであって、カップラ
ー、デベロッパー、ペルオキシダーゼ（以下、ＰＯＤと
略記する。）及びＣＨＥの夫々が少なくとも第一試薬と
第二試薬の何れかに含まれている低比重リポタンパク中
のコレステロール測定用試薬の発明である。
【００１２】更にまた、本発明は、ＤＭ−α−ＣＤ又は
／及びポリ−β−ＣＤ、及びＣＨＥを含んでなる第一試
薬と、ＣＯＤを含んでなる第二試薬とからなるものであ
って、カップラー、デベロッパー及びＰＯＤの夫々が少
なくとも第一試薬と第二試薬の何れかに含まれている低
比重リポタンパク中のコレステロール測定用試薬の発明
である。
／及びポリ−β−ＣＤ、及びＣＨＥを含んでなる第一試
薬と、ＣＯＤを含んでなる第二試薬とからなるものであ
って、カップラー、デベロッパー及びＰＯＤの夫々が少
なくとも第一試薬と第二試薬の何れかに含まれている低
比重リポタンパク中のコレステロール測定用試薬の発明
である。
【００１３】また、本発明は、ＤＭ−α−ＣＤ又は／及
びポリ−β−ＣＤ、ＣＨＥ、及びカップラー（又はデベ
ロッパー）を含んでなる第一試薬と、ＣＯＤ、ＣＨＥ、
ＰＯＤ、及びデベロッパー（カップラー）を含んでなる
第二試薬とを組み合わせてなることを特徴とする、低比
重リポタンパク中のコレステロール測定用キットの発明
である。
びポリ−β−ＣＤ、ＣＨＥ、及びカップラー（又はデベ
ロッパー）を含んでなる第一試薬と、ＣＯＤ、ＣＨＥ、
ＰＯＤ、及びデベロッパー（カップラー）を含んでなる
第二試薬とを組み合わせてなることを特徴とする、低比
重リポタンパク中のコレステロール測定用キットの発明
である。
【００１４】即ち、本発明者等は、ＬＤＬ−コレステロ
ールを、ＬＤＬ以外の不要なリポタンパクを分離分別す
るための前処理操作なしに直接自動分析装置で測定し得
る方法を見出すべく鋭意研究を重ねた結果、生体試料中
のＬＤＬ−コレステロールの測定を、ＤＭ−α−ＣＤ又
は／及びポリ−β−ＣＤの存在下で行えば、ＬＤＬ以外
の不要なリポタンパクを分離分別することなくＬＤＬ中
のコレステロールを特異的に測定することが可能となる
ことを見出し、本発明を完成するに至った。
ールを、ＬＤＬ以外の不要なリポタンパクを分離分別す
るための前処理操作なしに直接自動分析装置で測定し得
る方法を見出すべく鋭意研究を重ねた結果、生体試料中
のＬＤＬ−コレステロールの測定を、ＤＭ−α−ＣＤ又
は／及びポリ−β−ＣＤの存在下で行えば、ＬＤＬ以外
の不要なリポタンパクを分離分別することなくＬＤＬ中
のコレステロールを特異的に測定することが可能となる
ことを見出し、本発明を完成するに至った。
【００１５】本発明に於いて用いられるＤＭ−α−ＣＤ
及びポリ−β−ＣＤの使用濃度は、ＬＤＬ以外のリポタ
ンパクに含まれているコレステロールがコレステロール
測定反応に関与するのを抑制し得る濃度であればよく、
特に限定されないが、コレステロール測定時の反応液中
の濃度、即ち最終の反応液中の濃度が通常0.0001〜10％
（W／V）、好ましくは0.001〜１％（W／V）である。
尚、これらＣＤ誘導体は、市販のものを用いても良い
し、公知の方法に準じて合成したものを用いても良い。
また、例えば、本発明の方法を２試薬系測定法により実
施する場合の第一試薬中のＤＭ−α−ＣＤ及びポリ−β
−ＣＤの使用濃度は、試料、第一試薬及び第二試薬の液
量比等により異なるため一概には言えないが、通常0.00
01〜10％（W／V）、好ましくは0.001〜１％（W／V）で
ある。尚、これらＣＤ誘導体は単独で用いても、或はこ
れらを組み合わせて用いてもよいことは言うまでもない
が、２種類を共存させて使用する場合の夫々のＣＤ誘導
体の使用濃度は、ＬＤＬ以外のリポタンパクに含まれて
いるコレステロールがコレステロール測定反応に関与す
るのを抑制し得る濃度であればよく、コレステロール測
定時の反応液中の濃度、即ち最終の反応液中の濃度が夫
々通常0.0001〜10％（W／V）、好ましくは0.001〜１％
（W／V）である。また、これらを共存させて使用する場
合の使用割合についても、ＬＤＬ以外のリポタンパクに
含まれているコレステロールがコレステロール測定反応
に関与するのを抑制し得る割合であればよく、特に限定
されないが、通常１：１〜１：100000、好ましくは１：
１〜１：1000である。
及びポリ−β−ＣＤの使用濃度は、ＬＤＬ以外のリポタ
ンパクに含まれているコレステロールがコレステロール
測定反応に関与するのを抑制し得る濃度であればよく、
特に限定されないが、コレステロール測定時の反応液中
の濃度、即ち最終の反応液中の濃度が通常0.0001〜10％
（W／V）、好ましくは0.001〜１％（W／V）である。
尚、これらＣＤ誘導体は、市販のものを用いても良い
し、公知の方法に準じて合成したものを用いても良い。
また、例えば、本発明の方法を２試薬系測定法により実
施する場合の第一試薬中のＤＭ−α−ＣＤ及びポリ−β
−ＣＤの使用濃度は、試料、第一試薬及び第二試薬の液
量比等により異なるため一概には言えないが、通常0.00
01〜10％（W／V）、好ましくは0.001〜１％（W／V）で
ある。尚、これらＣＤ誘導体は単独で用いても、或はこ
れらを組み合わせて用いてもよいことは言うまでもない
が、２種類を共存させて使用する場合の夫々のＣＤ誘導
体の使用濃度は、ＬＤＬ以外のリポタンパクに含まれて
いるコレステロールがコレステロール測定反応に関与す
るのを抑制し得る濃度であればよく、コレステロール測
定時の反応液中の濃度、即ち最終の反応液中の濃度が夫
々通常0.0001〜10％（W／V）、好ましくは0.001〜１％
（W／V）である。また、これらを共存させて使用する場
合の使用割合についても、ＬＤＬ以外のリポタンパクに
含まれているコレステロールがコレステロール測定反応
に関与するのを抑制し得る割合であればよく、特に限定
されないが、通常１：１〜１：100000、好ましくは１：
１〜１：1000である。
【００１６】本発明の測定法は、上記した如きＤＭ−α
−ＣＤ又は／及びポリ−β−ＣＤを存在させる以外は、
自体公知のコレステロール測定法に準じて、実施すれば
良く、使用される試薬類もこれら自体公知の方法に準じ
て適宜選択すればよい。即ち、血清、血漿等の生体試料
中のＬＤＬ−コレステロールを、ＤＭ−α−ＣＤ又は／
及びポリ−β−ＣＤの存在下、自体公知のコレステロー
ル測定法に準じて測定することにより、生体試料中のＬ
ＤＬ−コレステロールを特異的に測定することができ
る。
−ＣＤ又は／及びポリ−β−ＣＤを存在させる以外は、
自体公知のコレステロール測定法に準じて、実施すれば
良く、使用される試薬類もこれら自体公知の方法に準じ
て適宜選択すればよい。即ち、血清、血漿等の生体試料
中のＬＤＬ−コレステロールを、ＤＭ−α−ＣＤ又は／
及びポリ−β−ＣＤの存在下、自体公知のコレステロー
ル測定法に準じて測定することにより、生体試料中のＬ
ＤＬ−コレステロールを特異的に測定することができ
る。
【００１７】これら自体公知のコレステロール測定法と
しては、生体試料中のコレステロールを測定し得る自体
公知のコレステロール測定法は全て挙げられるが、酵素
反応を利用する、例えば試料中のコレステロールエステ
ルをＣＨＥによって遊離コレステロールと脂肪酸に分解
し、初めから存在する遊離コレステロールと共に、ＣＯ
Ｄによって酸化して、コレステ−４−エン−３−オンと
過酸化水素にし、ＰＯＤの存在下、生成した過酸化水素
で被酸化性呈色試薬を酸化発色させて、生じた酸化色素
を比色定量する酸化呈色法、例えば試料中のコレステロ
ールエステルをＣＨＥによって遊離コレステロールと脂
肪酸に分解し、初めから存在する遊離コレステロールと
共にＣＨＤの存在下ＮＡＤ（Ｐ）と反応させて、生成す
るＮＡＤ（Ｐ）Ｈを340nmで測定する紫外部測定法等が
好ましく挙げられる。
しては、生体試料中のコレステロールを測定し得る自体
公知のコレステロール測定法は全て挙げられるが、酵素
反応を利用する、例えば試料中のコレステロールエステ
ルをＣＨＥによって遊離コレステロールと脂肪酸に分解
し、初めから存在する遊離コレステロールと共に、ＣＯ
Ｄによって酸化して、コレステ−４−エン−３−オンと
過酸化水素にし、ＰＯＤの存在下、生成した過酸化水素
で被酸化性呈色試薬を酸化発色させて、生じた酸化色素
を比色定量する酸化呈色法、例えば試料中のコレステロ
ールエステルをＣＨＥによって遊離コレステロールと脂
肪酸に分解し、初めから存在する遊離コレステロールと
共にＣＨＤの存在下ＮＡＤ（Ｐ）と反応させて、生成す
るＮＡＤ（Ｐ）Ｈを340nmで測定する紫外部測定法等が
好ましく挙げられる。
【００１８】本発明の測定法に用いられるＣＯＤは、そ
の由来は特に限定されず、通常この分野で使用されてい
るもの、例えば、ノカルディア属、シュードモナス属等
の微生物に由来するもの、牛膵臓等動物臓器に由来する
もの等は全て使用可能である。ＣＯＤの使用量は、コレ
ステロール測定時の反応液中の濃度として、通常0.02〜
10u／ml、好ましくは0.1〜２u／mlである。
の由来は特に限定されず、通常この分野で使用されてい
るもの、例えば、ノカルディア属、シュードモナス属等
の微生物に由来するもの、牛膵臓等動物臓器に由来する
もの等は全て使用可能である。ＣＯＤの使用量は、コレ
ステロール測定時の反応液中の濃度として、通常0.02〜
10u／ml、好ましくは0.1〜２u／mlである。
【００１９】本発明の測定法に用いられるＣＨＥは、そ
の由来は特に限定されず、通常この分野で使用されてい
るもの、例えば、キャンディダ属、シュードモナス属等
の微生物に由来するもの、牛膵臓等動物臓器に由来する
もの等は全て使用可能である。ＣＨＥの使用量は、コレ
ステロール測定時の反応液中の濃度として、通常0.02〜
10u／ml、好ましくは0.1〜２u／mlである。
の由来は特に限定されず、通常この分野で使用されてい
るもの、例えば、キャンディダ属、シュードモナス属等
の微生物に由来するもの、牛膵臓等動物臓器に由来する
もの等は全て使用可能である。ＣＨＥの使用量は、コレ
ステロール測定時の反応液中の濃度として、通常0.02〜
10u／ml、好ましくは0.1〜２u／mlである。
【００２０】本発明の測定法に用いられるＰＯＤは、そ
の由来は特に限定されず、通常この分野で使用されてい
るもの、例えば、西洋ワサビ、大根等の植物に由来する
もの、カビ、酵母等の微生物に由来するもの、動物の白
血球、甲状腺等に由来するもの等は全て使用可能であ
る。ＰＯＤの使用量は、コレステロール測定時の反応液
中の濃度として、通常0.01〜50u／ml、好ましくは0.1〜
５u／mlの範囲である。
の由来は特に限定されず、通常この分野で使用されてい
るもの、例えば、西洋ワサビ、大根等の植物に由来する
もの、カビ、酵母等の微生物に由来するもの、動物の白
血球、甲状腺等に由来するもの等は全て使用可能であ
る。ＰＯＤの使用量は、コレステロール測定時の反応液
中の濃度として、通常0.01〜50u／ml、好ましくは0.1〜
５u／mlの範囲である。
【００２１】本発明の測定法に用いられる被酸化性呈色
試薬としては、ＰＯＤの存在下、過酸化水素と反応して
呈色するものであれば何れにても良いが、４−アミノア
ンチピリン（４−ＡＡ）等のカップラー及び、該カップ
ラーと酸化縮合して色素を生ずるデベロッパーとの組合
せ、即ち、例えば４−ＡＡとフェノール系化合物，ナフ
トール系化合物若しくはアニリン系化合物との組合せ、
３−メチル−２−ベンゾチアゾリノンヒドラゾンとアニ
リン系化合物との組合せ等や、例えば２，２’−アジノ
ビス（３−エチルベンゾチアゾリン−６−スルホン
酸）、トリフェニルメタン系ロイコ色素、ジフェニルア
ミン誘導体、ベンジジン誘導体、トリアリルイミダゾー
ル誘導体、ロイコメチレンブルー誘導体、ｏ−フェニレ
ンジアミン誘導体等の酸化によってそれ自体が発色する
発色剤等が挙げられる。デベロッパーとしてのフェノー
ル系化合物の具体例としては、例えばフェノール、ｐ−
クロロフェノール、２，４−ジクロロフェノール等が挙
げられ、ナフトール系化合物の具体例としては、例えば
１−ナフトール、１−ナフトール−２−スルホン酸、１
−ナフトール−２−カルボン酸等が挙げられ、また、ア
ニリン系化合物の具体例としては、例えばＮ，Ｎ−ジエ
チルアニリン、Ｎ−エチル−Ｎ−（β−ヒドロキシエチ
ル）−ｍ−トルイジン、Ｎ−エチル−Ｎ−（２−ヒドロ
キシ−３−スルホプロピル）−３，５−ジメトキシアニ
リン（ＤＡＯＳ）、Ｎ−エチル−Ｎ−（２−ヒドロキシ
−３−スルホプロピル）−３，５−ジメトキシ−４−フ
ルオロアニリン（ＦＤＡＯＳ）、Ｎ−（２−ヒドロキシ
−３−スルホプロピル）−３，５−ジメトキシアニリン
（ＨＤＡＯＳ）、Ｎ−エチル−Ｎ−（２−ヒドロキシ−
３−スルホプロピル）−ｍ−トルイジン（ＴＯＯＳ）、
Ｎ−エチル−Ｎ−（３−メチルフェニル）−Ｎ’−サク
シニル−エチレンジアミン（ＥＭＳＥ）等が挙げられ
る。カップラーとデベロッパーとの組合せを用いる場
合、カップラーの使用量は、用いるカップラーの種類や
組み合わせるデベロッパーの種類等により異なるため一
概には言えないが、コレステロール測定時の反応液中の
濃度として、通常0.01〜100mM、好ましくは0.1〜10mMで
あり、カップラーとして４−ＡＡを使用する場合の使用
量は、コレステロール測定時の反応液中の濃度として、
通常0.01〜50mM、好ましくは0.1〜５mMである。また、
デベロッパーの使用量は、用いるデベロッパーの種類や
組み合わせるカップラーの種類等により異なるため一概
には言えないが、コレステロール測定時の反応液中の濃
度として、通常0.01〜50mM、好ましくは0.1〜５mMであ
る。トリフェニルメタン系ロイコ色素の具体例として
は、例えばロイコマラカイトグリーン、ビス（ｐ−ジエ
チルアミノフェニル）−２−スルホフェニルメタン、ビ
ス（ｐ−ジエチルアミノフェニル）−３，４−ジスルホ
プロポキシフェニルメタン・ジナトリウム塩等が挙げら
れ、ジフェニルアミン誘導体の具体例としては、例えば
ビス〔４−ジ（２−ブトキシエチル）アミノ−２−メチ
ルフェニル〕アミン、Ｎ，Ｎ−ビス（４−ジエチルアミ
ノ−２−メチルフェニル）−Ｎ’−ｐ−トルエンスルホ
ニル尿素等が挙げられ、また、ロイコメチレンブルー誘
導体の具体例としては、例えば10−（カルボキシメチル
アミノカルボニル）−３，７−ビス（ジメチルアミノ）
フェノチアジン・ナトリウム塩、10−〔３−（メトキシ
カルボニルアミノメチル）フェニルメチルアミノカルボ
ニル〕−３，７−ビス（ジメチルアミノ）フェノチアジ
ン等が挙げられる。更に、ベンジジン誘導体の具体例と
しては、例えばベンジジン、ｏ−トリジン、ｏ−ジアニ
シジン、３，３’−ジアミノベンジジン、３，３’，
５，５’−テトラアミノベンジジン等が挙げられ、トリ
アリルイミダゾール誘導体の具体例としては、例えば２
−（４−カルボキシフェニル）−３−Ｎ−メチルカルバ
モイル−４，５−ビス（４ージエチルアミノフェニル）
イミダゾール、２−（３−メトキシ−４−ジエチルアミ
ノフェニル）−３−Ｎ−メチルカルバモイル−４，５−
ビス（２−メチル−４−ジエチルアミノフェニル）イミ
ダゾール等が挙げられる。これら発色剤の使用量は、通
常この分野で用いられる濃度である。
試薬としては、ＰＯＤの存在下、過酸化水素と反応して
呈色するものであれば何れにても良いが、４−アミノア
ンチピリン（４−ＡＡ）等のカップラー及び、該カップ
ラーと酸化縮合して色素を生ずるデベロッパーとの組合
せ、即ち、例えば４−ＡＡとフェノール系化合物，ナフ
トール系化合物若しくはアニリン系化合物との組合せ、
３−メチル−２−ベンゾチアゾリノンヒドラゾンとアニ
リン系化合物との組合せ等や、例えば２，２’−アジノ
ビス（３−エチルベンゾチアゾリン−６−スルホン
酸）、トリフェニルメタン系ロイコ色素、ジフェニルア
ミン誘導体、ベンジジン誘導体、トリアリルイミダゾー
ル誘導体、ロイコメチレンブルー誘導体、ｏ−フェニレ
ンジアミン誘導体等の酸化によってそれ自体が発色する
発色剤等が挙げられる。デベロッパーとしてのフェノー
ル系化合物の具体例としては、例えばフェノール、ｐ−
クロロフェノール、２，４−ジクロロフェノール等が挙
げられ、ナフトール系化合物の具体例としては、例えば
１−ナフトール、１−ナフトール−２−スルホン酸、１
−ナフトール−２−カルボン酸等が挙げられ、また、ア
ニリン系化合物の具体例としては、例えばＮ，Ｎ−ジエ
チルアニリン、Ｎ−エチル−Ｎ−（β−ヒドロキシエチ
ル）−ｍ−トルイジン、Ｎ−エチル−Ｎ−（２−ヒドロ
キシ−３−スルホプロピル）−３，５−ジメトキシアニ
リン（ＤＡＯＳ）、Ｎ−エチル−Ｎ−（２−ヒドロキシ
−３−スルホプロピル）−３，５−ジメトキシ−４−フ
ルオロアニリン（ＦＤＡＯＳ）、Ｎ−（２−ヒドロキシ
−３−スルホプロピル）−３，５−ジメトキシアニリン
（ＨＤＡＯＳ）、Ｎ−エチル−Ｎ−（２−ヒドロキシ−
３−スルホプロピル）−ｍ−トルイジン（ＴＯＯＳ）、
Ｎ−エチル−Ｎ−（３−メチルフェニル）−Ｎ’−サク
シニル−エチレンジアミン（ＥＭＳＥ）等が挙げられ
る。カップラーとデベロッパーとの組合せを用いる場
合、カップラーの使用量は、用いるカップラーの種類や
組み合わせるデベロッパーの種類等により異なるため一
概には言えないが、コレステロール測定時の反応液中の
濃度として、通常0.01〜100mM、好ましくは0.1〜10mMで
あり、カップラーとして４−ＡＡを使用する場合の使用
量は、コレステロール測定時の反応液中の濃度として、
通常0.01〜50mM、好ましくは0.1〜５mMである。また、
デベロッパーの使用量は、用いるデベロッパーの種類や
組み合わせるカップラーの種類等により異なるため一概
には言えないが、コレステロール測定時の反応液中の濃
度として、通常0.01〜50mM、好ましくは0.1〜５mMであ
る。トリフェニルメタン系ロイコ色素の具体例として
は、例えばロイコマラカイトグリーン、ビス（ｐ−ジエ
チルアミノフェニル）−２−スルホフェニルメタン、ビ
ス（ｐ−ジエチルアミノフェニル）−３，４−ジスルホ
プロポキシフェニルメタン・ジナトリウム塩等が挙げら
れ、ジフェニルアミン誘導体の具体例としては、例えば
ビス〔４−ジ（２−ブトキシエチル）アミノ−２−メチ
ルフェニル〕アミン、Ｎ，Ｎ−ビス（４−ジエチルアミ
ノ−２−メチルフェニル）−Ｎ’−ｐ−トルエンスルホ
ニル尿素等が挙げられ、また、ロイコメチレンブルー誘
導体の具体例としては、例えば10−（カルボキシメチル
アミノカルボニル）−３，７−ビス（ジメチルアミノ）
フェノチアジン・ナトリウム塩、10−〔３−（メトキシ
カルボニルアミノメチル）フェニルメチルアミノカルボ
ニル〕−３，７−ビス（ジメチルアミノ）フェノチアジ
ン等が挙げられる。更に、ベンジジン誘導体の具体例と
しては、例えばベンジジン、ｏ−トリジン、ｏ−ジアニ
シジン、３，３’−ジアミノベンジジン、３，３’，
５，５’−テトラアミノベンジジン等が挙げられ、トリ
アリルイミダゾール誘導体の具体例としては、例えば２
−（４−カルボキシフェニル）−３−Ｎ−メチルカルバ
モイル−４，５−ビス（４ージエチルアミノフェニル）
イミダゾール、２−（３−メトキシ−４−ジエチルアミ
ノフェニル）−３−Ｎ−メチルカルバモイル−４，５−
ビス（２−メチル−４−ジエチルアミノフェニル）イミ
ダゾール等が挙げられる。これら発色剤の使用量は、通
常この分野で用いられる濃度である。
【００２２】本発明の測定法に用いられるＣＨＤは、そ
の由来は特に限定されず、通常この分野で使用されてい
るもの、例えば、ノカルディア属に由来するもの等が使
用可能である。ＣＨＤの使用量は、コレステロール測定
時の反応液中の濃度として、通常0.1〜100u／ml、好ま
しくは１〜50u／mlである。
の由来は特に限定されず、通常この分野で使用されてい
るもの、例えば、ノカルディア属に由来するもの等が使
用可能である。ＣＨＤの使用量は、コレステロール測定
時の反応液中の濃度として、通常0.1〜100u／ml、好ま
しくは１〜50u／mlである。
【００２３】本発明の測定法に用いられるＮＡＤ（Ｐ）
は、特に限定されず、通常この分野で使用されているも
のは全て使用可能である。ＮＡＤ（Ｐ）の使用量は、コ
レステロール測定時の反応液中の濃度として、通常0.02
〜50mM、好ましくは0.1〜10mMである。
は、特に限定されず、通常この分野で使用されているも
のは全て使用可能である。ＮＡＤ（Ｐ）の使用量は、コ
レステロール測定時の反応液中の濃度として、通常0.02
〜50mM、好ましくは0.1〜10mMである。
【００２４】本発明のＬＤＬ−コレステロール測定用試
薬は、例えば血清や血漿等の生体由来試料中のＬＤＬ−
コレステロ−ルを測定するために使用されるもので、Ｄ
Ｍ−α−ＣＤ又は／及びポリ−β−ＣＤを使用する以外
は、上記した如き自体公知のコレステロール測定法に使
用される試薬類、例えば酸化呈色法に於いて使用される
ＣＯＤ、ＣＨＥ、ＰＯＤ、被酸化性呈色試薬等の試薬
類、例えば紫外部測定法に於いて使用されるＣＨＥ、Ｃ
ＨＤ、ＮＡＤ（Ｐ）等の試薬類を、この分野で使用され
る濃度範囲で含有するように調製されたものであり、構
成要件の好ましい態様や使用濃度等は、上で述べた通り
である。
薬は、例えば血清や血漿等の生体由来試料中のＬＤＬ−
コレステロ−ルを測定するために使用されるもので、Ｄ
Ｍ−α−ＣＤ又は／及びポリ−β−ＣＤを使用する以外
は、上記した如き自体公知のコレステロール測定法に使
用される試薬類、例えば酸化呈色法に於いて使用される
ＣＯＤ、ＣＨＥ、ＰＯＤ、被酸化性呈色試薬等の試薬
類、例えば紫外部測定法に於いて使用されるＣＨＥ、Ｃ
ＨＤ、ＮＡＤ（Ｐ）等の試薬類を、この分野で使用され
る濃度範囲で含有するように調製されたものであり、構
成要件の好ましい態様や使用濃度等は、上で述べた通り
である。
【００２５】本発明のＬＤＬ−コレステロ−ル測定用試
薬は、１試薬系測定法用として調製されたものでも２試
薬系測定法用として調製されたものでも又それ以上に分
けたものでも何れにてもよく、特に限定されない。尚、
２試薬以上の試薬に分けた場合には、特異性、測定精度
等の点を考慮すると、以下のような組成としておくこと
が望ましい。即ち、先ず、酸化呈色法用の試薬の場合、
第一試薬にＤＭ−α−ＣＤ又は／及びポリ−β−ＣＤ
を、第二試薬にＣＯＤを含有させておくことが望まし
く、これ以外のＣＨＥ、ＰＯＤ等の酵素類、カップラー
及びデベロッパー等は少なくとも何れかの試薬に含まれ
ていればよい。また、紫外部測定法用の試薬の場合、第
一試薬にＤＭ−α−ＣＤ又は／及びポリ−β−ＣＤを、
第二試薬にＣＨＤを含有させておくことが望ましく、こ
れ以外のＮＡＤ（Ｐ）等は少なくとも何れかの試薬に含
まれていればよい。
薬は、１試薬系測定法用として調製されたものでも２試
薬系測定法用として調製されたものでも又それ以上に分
けたものでも何れにてもよく、特に限定されない。尚、
２試薬以上の試薬に分けた場合には、特異性、測定精度
等の点を考慮すると、以下のような組成としておくこと
が望ましい。即ち、先ず、酸化呈色法用の試薬の場合、
第一試薬にＤＭ−α−ＣＤ又は／及びポリ−β−ＣＤ
を、第二試薬にＣＯＤを含有させておくことが望まし
く、これ以外のＣＨＥ、ＰＯＤ等の酵素類、カップラー
及びデベロッパー等は少なくとも何れかの試薬に含まれ
ていればよい。また、紫外部測定法用の試薬の場合、第
一試薬にＤＭ−α−ＣＤ又は／及びポリ−β−ＣＤを、
第二試薬にＣＨＤを含有させておくことが望ましく、こ
れ以外のＮＡＤ（Ｐ）等は少なくとも何れかの試薬に含
まれていればよい。
【００２６】本発明の方法を、２試薬系測定法により実
施する場合には、試料とＣＯＤ又はＣＨＤを反応させる
前に、試料とＤＭ−α−ＣＤ又は／及びポリ−β−ＣＤ
を含んでなる第一試薬とを混合する等して試料を第一試
薬で処理した後、該化合物の存在下で、第二試薬に含有
させたＣＯＤ又はＣＨＤを反応させる方が、特異性、測
定精度等の点から望ましい。
施する場合には、試料とＣＯＤ又はＣＨＤを反応させる
前に、試料とＤＭ−α−ＣＤ又は／及びポリ−β−ＣＤ
を含んでなる第一試薬とを混合する等して試料を第一試
薬で処理した後、該化合物の存在下で、第二試薬に含有
させたＣＯＤ又はＣＨＤを反応させる方が、特異性、測
定精度等の点から望ましい。
【００２７】例えば酸化呈色法の場合、上記した如き試
薬の組合せとしては、例えば以下の如きものが挙げられ
る。 （ｉ）ＤＭ−α−ＣＤ又は／及びポリ−β−ＣＤを含ん
でなる第一試薬と、ＣＯＤを含んでなる第二試薬とから
なるものであって、カップラー、デベロッパー、ＰＯＤ
及びＣＨＥの夫々が少なくとも第一試薬と第二試薬の何
れかに含まれている試薬からなるもの。 （ii）ＤＭ−α−ＣＤ又は／及びポリ−β−ＣＤ、及び
ＣＨＥを含んでなる第一試薬と、ＣＯＤを含んでなる第
二試薬とからなるものであって、カップラー、デベロッ
パー及びＰＯＤの夫々が少なくとも第一試薬と第二試薬
の何れかに含まれている試薬からなるもの。また、例え
ば紫外部測定法の場合、上記した如き試薬の組合せとし
ては、例えば以下の如きものが挙げられる。 （ｉ'）ＤＭ−α−ＣＤ又は／及びポリ−β−ＣＤを含
んでなる第一試薬と、ＣＨＤを含んでなる第二試薬とか
らなるものであって、ＮＡＤ（Ｐ）及びＣＨＥの夫々が
少なくとも第一試薬と第二試薬の何れかに含まれている
試薬からなるもの。 （ii'）ＤＭ−α−ＣＤ又は／及びポリ−β−ＣＤ、及
びＣＨＥを含んでなる第一試薬と、ＣＨＤを含んでなる
第二試薬とからなるものであって、ＮＡＤ（Ｐ）が少な
くとも第一試薬と第二試薬の何れかに含まれている試薬
からなるもの。尚、本発明のＬＤＬ−コレステロール測
定用試薬を２液法用として調製する場合には、ＣＨＥ
を、ＤＭ−α−ＣＤ又は／及びポリ−β−ＣＤと共に第
一試薬に含有させて用いる方が、ＬＤＬ−コレステロー
ルへの特異性及びＬＤＬ−コレステロールの測定精度を
向上させる上で、望ましい。また、上記した如き本発明
の酸化呈色法用試薬の組合せに於いては、試薬の安定性
（試薬盲検の安定性）を考慮すると、カップラーとデベ
ロッパーの一方を第一試薬に含有させ、他方を第二試薬
に含有させることが望ましい。
薬の組合せとしては、例えば以下の如きものが挙げられ
る。 （ｉ）ＤＭ−α−ＣＤ又は／及びポリ−β−ＣＤを含ん
でなる第一試薬と、ＣＯＤを含んでなる第二試薬とから
なるものであって、カップラー、デベロッパー、ＰＯＤ
及びＣＨＥの夫々が少なくとも第一試薬と第二試薬の何
れかに含まれている試薬からなるもの。 （ii）ＤＭ−α−ＣＤ又は／及びポリ−β−ＣＤ、及び
ＣＨＥを含んでなる第一試薬と、ＣＯＤを含んでなる第
二試薬とからなるものであって、カップラー、デベロッ
パー及びＰＯＤの夫々が少なくとも第一試薬と第二試薬
の何れかに含まれている試薬からなるもの。また、例え
ば紫外部測定法の場合、上記した如き試薬の組合せとし
ては、例えば以下の如きものが挙げられる。 （ｉ'）ＤＭ−α−ＣＤ又は／及びポリ−β−ＣＤを含
んでなる第一試薬と、ＣＨＤを含んでなる第二試薬とか
らなるものであって、ＮＡＤ（Ｐ）及びＣＨＥの夫々が
少なくとも第一試薬と第二試薬の何れかに含まれている
試薬からなるもの。 （ii'）ＤＭ−α−ＣＤ又は／及びポリ−β−ＣＤ、及
びＣＨＥを含んでなる第一試薬と、ＣＨＤを含んでなる
第二試薬とからなるものであって、ＮＡＤ（Ｐ）が少な
くとも第一試薬と第二試薬の何れかに含まれている試薬
からなるもの。尚、本発明のＬＤＬ−コレステロール測
定用試薬を２液法用として調製する場合には、ＣＨＥ
を、ＤＭ−α−ＣＤ又は／及びポリ−β−ＣＤと共に第
一試薬に含有させて用いる方が、ＬＤＬ−コレステロー
ルへの特異性及びＬＤＬ−コレステロールの測定精度を
向上させる上で、望ましい。また、上記した如き本発明
の酸化呈色法用試薬の組合せに於いては、試薬の安定性
（試薬盲検の安定性）を考慮すると、カップラーとデベ
ロッパーの一方を第一試薬に含有させ、他方を第二試薬
に含有させることが望ましい。
【００２８】本発明のＬＤＬ−コレステロール測定用試
薬中には、緩衝剤が含まれていても良い。本発明に於い
て使用される緩衝剤としては、用いられる各種酵素類及
び被酸化性呈色試薬等の組合せ等により異なるが、この
分野に於いて通常用いられるものであればよく、pH５〜
11の範囲で緩衝作用を有するものが使用される。また、
これら緩衝剤の使用濃度は、通常１mM〜５Ｍ、好ましく
は５mM〜１Ｍである。これら緩衝剤のうち、特にＬＤＬ
−コレステロールへの特異性の点から、例えばＮ−（２
−アセトアミド）−２−アミノエタンスルホン酸（ＡＣ
ＥＳ）、Ｎ，Ｎ−ビス（２−ヒドロキシエチル）−２−
アミノエタンスルホン酸（ＢＥＳ）、Ｎ−シクロヘキシ
ル−２−アミノエタンスルホン酸（ＣＨＥＳ）、２−
〔４−（２−ヒドロキシエチル）−１−ピペラジニル〕
エタンスルホン酸（ＨＥＰＥＳ）、２−モルホリノエタ
ンスルホン酸（ＭＥＳ）、ピペラジン−１，４−ビス
（２−エタンスルホン酸）（ＰＩＰＥＳ）、Ｎ−トリス
（ヒドロキシメチル）メチル−２−アミノエタンスルホ
ン酸（ＴＥＳ）等のアミノエタンスルホン酸誘導体、例
えばＮ−シクロヘキシル−３−アミノプロパンスルホン
酸（ＣＡＰＳ）、Ｎ−シクロヘキシル−２−ヒドロキシ
−３−アミノプロパンスルホン酸（ＣＡＰＳＯ）、３−
〔Ｎ，Ｎ−ビス（２−ヒドロキシエチル）アミノ〕−２
−ヒドロキシプロパンスルホン酸（ＤＩＰＳＯ）、３−
〔４−（２−ヒドロキシエチル）−１−ピペラジニル〕
プロパンスルホン酸（ＥＰＰＳ）、２−ヒドロキシ−３
−〔４−（２−ヒドロキシエチル）−１−ピペラジニ
ル〕プロパンスルホン酸（ＨＥＰＰＳＯ）、３−モルホ
リノプロパンスルホン酸（ＭＯＰＳ）、２−ヒドロキシ
−３−モルホリノプロパンスルホン酸（ＭＯＰＳＯ）、
ピペラジン−１，４−ビス（２−ヒドロキシ−３−プロ
パンスルホン酸）（ＰＯＰＳＯ）、Ｎ−トリス（ヒドロ
キシメチル）メチル−３−アミノプロパンスルホン酸
（ＴＡＰＳ）、２−ヒドロキシ−Ｎ−トリス（ヒドロキ
シメチル）メチル−３−アミノプロパンスルホン酸（Ｔ
ＡＰＳＯ）等のアミノプロパンスルホン酸誘導体、例え
ばＮ−（２−アセトアミド）イミノ二酢酸（ＡＤＡ）、
Ｎ，Ｎ−ビス（２−ヒドロキシエチル）グリシン（Ｂｉ
ｃｉｎｅ）、Ｎ−〔トリス（ヒドロキシメチル）メチ
ル〕グリシン（Ｔｒｉｃｉｎｅ）等のグリシン誘導体等
のカルボキシル基又はスルホン酸基を有する脂肪族アミ
ン類を緩衝剤として用いることが好ましい。
薬中には、緩衝剤が含まれていても良い。本発明に於い
て使用される緩衝剤としては、用いられる各種酵素類及
び被酸化性呈色試薬等の組合せ等により異なるが、この
分野に於いて通常用いられるものであればよく、pH５〜
11の範囲で緩衝作用を有するものが使用される。また、
これら緩衝剤の使用濃度は、通常１mM〜５Ｍ、好ましく
は５mM〜１Ｍである。これら緩衝剤のうち、特にＬＤＬ
−コレステロールへの特異性の点から、例えばＮ−（２
−アセトアミド）−２−アミノエタンスルホン酸（ＡＣ
ＥＳ）、Ｎ，Ｎ−ビス（２−ヒドロキシエチル）−２−
アミノエタンスルホン酸（ＢＥＳ）、Ｎ−シクロヘキシ
ル−２−アミノエタンスルホン酸（ＣＨＥＳ）、２−
〔４−（２−ヒドロキシエチル）−１−ピペラジニル〕
エタンスルホン酸（ＨＥＰＥＳ）、２−モルホリノエタ
ンスルホン酸（ＭＥＳ）、ピペラジン−１，４−ビス
（２−エタンスルホン酸）（ＰＩＰＥＳ）、Ｎ−トリス
（ヒドロキシメチル）メチル−２−アミノエタンスルホ
ン酸（ＴＥＳ）等のアミノエタンスルホン酸誘導体、例
えばＮ−シクロヘキシル−３−アミノプロパンスルホン
酸（ＣＡＰＳ）、Ｎ−シクロヘキシル−２−ヒドロキシ
−３−アミノプロパンスルホン酸（ＣＡＰＳＯ）、３−
〔Ｎ，Ｎ−ビス（２−ヒドロキシエチル）アミノ〕−２
−ヒドロキシプロパンスルホン酸（ＤＩＰＳＯ）、３−
〔４−（２−ヒドロキシエチル）−１−ピペラジニル〕
プロパンスルホン酸（ＥＰＰＳ）、２−ヒドロキシ−３
−〔４−（２−ヒドロキシエチル）−１−ピペラジニ
ル〕プロパンスルホン酸（ＨＥＰＰＳＯ）、３−モルホ
リノプロパンスルホン酸（ＭＯＰＳ）、２−ヒドロキシ
−３−モルホリノプロパンスルホン酸（ＭＯＰＳＯ）、
ピペラジン−１，４−ビス（２−ヒドロキシ−３−プロ
パンスルホン酸）（ＰＯＰＳＯ）、Ｎ−トリス（ヒドロ
キシメチル）メチル−３−アミノプロパンスルホン酸
（ＴＡＰＳ）、２−ヒドロキシ−Ｎ−トリス（ヒドロキ
シメチル）メチル−３−アミノプロパンスルホン酸（Ｔ
ＡＰＳＯ）等のアミノプロパンスルホン酸誘導体、例え
ばＮ−（２−アセトアミド）イミノ二酢酸（ＡＤＡ）、
Ｎ，Ｎ−ビス（２−ヒドロキシエチル）グリシン（Ｂｉ
ｃｉｎｅ）、Ｎ−〔トリス（ヒドロキシメチル）メチ
ル〕グリシン（Ｔｒｉｃｉｎｅ）等のグリシン誘導体等
のカルボキシル基又はスルホン酸基を有する脂肪族アミ
ン類を緩衝剤として用いることが好ましい。
【００２９】また、本発明のＬＤＬ−コレステロ−ル測
定用試薬中には、イオン性化合物、例えばデキストラン
硫酸、ヘパリン、ヘパラン硫酸、リンタングステン酸等
のポリアニオン等が含まれていても良い。これらは単独
または混合して使用することができる。更に、イオン性
化合物と、Ｍｇ2+、Ｍｎ2+、Ｃａ2+等の２価のカチオン
（或いはこれら２価のカチオンを生じさせ得る金属塩）
とを組み合わせて使用してもよい。これらの使用濃度は
特に限定されないが、イオン性化合物等の使用濃度は、
反応液中の濃度が、通常0.01〜10％（w／v）であり、ま
た、２価カチオンの使用濃度は、反応液中の濃度が、通
常0.1〜200mMである。また、本発明のＬＤＬ−コレステ
ロ−ル測定用試薬中にはＬＤＬ以外のリポタンパク中の
コレステロールがコレステロール測定反応に関与するこ
とを防止するために、ポリクロ−ナル抗体またはモノク
ロ−ナル抗体の１種または２種以上を共存させてもよ
い。このような目的で使用可能な抗体としては、例えば
抗アポリポタンパクＡ抗体、抗アポリポタンパクＣ抗
体、抗アポリポタンパクＥ抗体、抗αリポタンパク抗体
等が挙げられる。これら抗体の使用濃度は、ＬＤＬ以外
のリポタンパク中に含まれるコレステロールがコレステ
ロール測定反応に関与するのを防止し得る濃度以上であ
ればよく、特に限定されないが、最終の反応液中の濃度
が通常0.001〜10mgAb/ml、好ましくは0.01〜１mgAb/ml
となるように反応液中に添加される。また、本発明のＬ
ＤＬ−コレステロール測定用試薬中には、この分野に於
いて通常用いられる界面活性剤、例えばアルキルベタイ
ン誘導体（例えばラウリルベタイン、ステアリルベタイ
ン、ラウリルジメチルアンモニウムベタイン、ココナッ
トベタイン、ヤシ油脂肪酸アミドプロピルベタイン、ラ
ウリン酸アミドプロピルベタイン等）、イミダゾリニウ
ムベタイン誘導体（例えばラウリルカルボキシメチルヒ
ドロキシエチルイミダゾリニウムベタイン、２−アルキ
ル−Ｎ−カルボキシメチル−Ｎ−ヒドロキシエチルイミ
ダゾリニウムベタイン、２−アルキル−Ｎ−カルボキシ
エチル−Ｎ−ヒドロキシエチルイミダゾリニウムベタイ
ン、２−ウンデシル−Ｎ−カルボキシメチル−Ｎ−ヒド
ロキシエチルイミダゾリニウムベタイン等）等のベタイ
ン誘導体、例えばアルキルグリシン、アルキルジ（アミ
ノエチル）グリシン、ジオクチルポリアミノエチルグリ
シン、Ｎ−アルキルポリアミノエチルグリシン、β−ア
ラニン誘導体等のアミノカルボン酸誘導体、例えばビス
（２−ウンデシル，Ｎ−ヒドロキシエチルイミダゾリ
ン）クロル酢酸錯体、アルキルイミダゾリン誘導体等の
イミダゾリン誘導体、例えばラウリルジメチルアミンオ
キサイド等のアミンオキサイド誘導体等の両性界面活性
剤、例えばポリオキシエチレンイソオクチルフェニルエ
ーテル、ポリオキシエチレンアルキルフェニルエーテ
ル、ポリオキシエチレンノニルフェニルエーテル、ポリ
オキシエチレンセチルエーテル、ポリオキシエチレンオ
レイルエーテル、ポリエチレングリコールモノラウレー
ト、ポリオキシエチレンラウリルエーテル等の非イオン
性界面活性剤、例えば塩化ステアリルトリメチルアンモ
ニウム、塩化アルキルベンジルジメチルアンモニウム等
の陽イオン性界面活性剤、例えばコール酸、デオキシコ
ール酸、ポリオキシエチレンアルキルフェニルエーテル
硫酸ナトリウム等の陰イオン性界面活性剤等の界面活性
剤が含まれていても良い。これらは単独又は二種以上組
み合わせて用いることができ、その使用濃度は、特に限
定されないが、反応液中の濃度が、通常0.0001〜10％
（w／v）、好ましくは0.001〜１％（w／v）である。
尚、ＬＤＬ−コレステロールに対する特異性やＬＤＬ−
コレステロールの測定精度等の点から、これら界面活性
剤のうち、両性界面活性剤を本発明に係るＣＤ誘導体と
共存させて用いることが望ましい。
定用試薬中には、イオン性化合物、例えばデキストラン
硫酸、ヘパリン、ヘパラン硫酸、リンタングステン酸等
のポリアニオン等が含まれていても良い。これらは単独
または混合して使用することができる。更に、イオン性
化合物と、Ｍｇ2+、Ｍｎ2+、Ｃａ2+等の２価のカチオン
（或いはこれら２価のカチオンを生じさせ得る金属塩）
とを組み合わせて使用してもよい。これらの使用濃度は
特に限定されないが、イオン性化合物等の使用濃度は、
反応液中の濃度が、通常0.01〜10％（w／v）であり、ま
た、２価カチオンの使用濃度は、反応液中の濃度が、通
常0.1〜200mMである。また、本発明のＬＤＬ−コレステ
ロ−ル測定用試薬中にはＬＤＬ以外のリポタンパク中の
コレステロールがコレステロール測定反応に関与するこ
とを防止するために、ポリクロ−ナル抗体またはモノク
ロ−ナル抗体の１種または２種以上を共存させてもよ
い。このような目的で使用可能な抗体としては、例えば
抗アポリポタンパクＡ抗体、抗アポリポタンパクＣ抗
体、抗アポリポタンパクＥ抗体、抗αリポタンパク抗体
等が挙げられる。これら抗体の使用濃度は、ＬＤＬ以外
のリポタンパク中に含まれるコレステロールがコレステ
ロール測定反応に関与するのを防止し得る濃度以上であ
ればよく、特に限定されないが、最終の反応液中の濃度
が通常0.001〜10mgAb/ml、好ましくは0.01〜１mgAb/ml
となるように反応液中に添加される。また、本発明のＬ
ＤＬ−コレステロール測定用試薬中には、この分野に於
いて通常用いられる界面活性剤、例えばアルキルベタイ
ン誘導体（例えばラウリルベタイン、ステアリルベタイ
ン、ラウリルジメチルアンモニウムベタイン、ココナッ
トベタイン、ヤシ油脂肪酸アミドプロピルベタイン、ラ
ウリン酸アミドプロピルベタイン等）、イミダゾリニウ
ムベタイン誘導体（例えばラウリルカルボキシメチルヒ
ドロキシエチルイミダゾリニウムベタイン、２−アルキ
ル−Ｎ−カルボキシメチル−Ｎ−ヒドロキシエチルイミ
ダゾリニウムベタイン、２−アルキル−Ｎ−カルボキシ
エチル−Ｎ−ヒドロキシエチルイミダゾリニウムベタイ
ン、２−ウンデシル−Ｎ−カルボキシメチル−Ｎ−ヒド
ロキシエチルイミダゾリニウムベタイン等）等のベタイ
ン誘導体、例えばアルキルグリシン、アルキルジ（アミ
ノエチル）グリシン、ジオクチルポリアミノエチルグリ
シン、Ｎ−アルキルポリアミノエチルグリシン、β−ア
ラニン誘導体等のアミノカルボン酸誘導体、例えばビス
（２−ウンデシル，Ｎ−ヒドロキシエチルイミダゾリ
ン）クロル酢酸錯体、アルキルイミダゾリン誘導体等の
イミダゾリン誘導体、例えばラウリルジメチルアミンオ
キサイド等のアミンオキサイド誘導体等の両性界面活性
剤、例えばポリオキシエチレンイソオクチルフェニルエ
ーテル、ポリオキシエチレンアルキルフェニルエーテ
ル、ポリオキシエチレンノニルフェニルエーテル、ポリ
オキシエチレンセチルエーテル、ポリオキシエチレンオ
レイルエーテル、ポリエチレングリコールモノラウレー
ト、ポリオキシエチレンラウリルエーテル等の非イオン
性界面活性剤、例えば塩化ステアリルトリメチルアンモ
ニウム、塩化アルキルベンジルジメチルアンモニウム等
の陽イオン性界面活性剤、例えばコール酸、デオキシコ
ール酸、ポリオキシエチレンアルキルフェニルエーテル
硫酸ナトリウム等の陰イオン性界面活性剤等の界面活性
剤が含まれていても良い。これらは単独又は二種以上組
み合わせて用いることができ、その使用濃度は、特に限
定されないが、反応液中の濃度が、通常0.0001〜10％
（w／v）、好ましくは0.001〜１％（w／v）である。
尚、ＬＤＬ−コレステロールに対する特異性やＬＤＬ−
コレステロールの測定精度等の点から、これら界面活性
剤のうち、両性界面活性剤を本発明に係るＣＤ誘導体と
共存させて用いることが望ましい。
【００３０】本発明のＬＤＬ−コレステロ−ルの測定法
を、２試薬系測定法により実施するには、例えば以下の
如く行えばよい。即ち、酸化呈色法の場合、例えば血
清、血漿等の生体試料と、例えばＤＭ−α−ＣＤ又は／
及びポリ−β−ＣＤ、ＣＨＥ及びカップラー（又はデベ
ロッパー）、要すれば両性界面活性剤、緩衝剤、抗体、
イオン性化合物、２価のカチオン等を含有する第一試薬
とを混合して生体試料を処理し、２〜40℃で１〜30分間
反応させた後に吸光度（ＯＤ1）を測定する。次いで、
該反応液と、 例えばＣＯＤ、ＰＯＤ及びデベロッパー
（又はカップラー）、要すれば緩衝剤等を含有する第二
試薬とを混合し、２〜40℃で１〜60分反応させた後に吸
光度（ＯＤ2）を測定する。上記のＯＤ2からＯＤ1に由
来する値（例えばＯＤ1に補正係数を掛けて求めた値）
を差し引いた吸光度（ＯＤ3）を求め、得られたＯＤ
3を、例えば予めＬＤＬ−コレステロール濃度既知の標
準液等を試料として上記と同様にして求めた、ＬＤＬ−
コレステロール濃度とＯＤ3との関係を示す検量線に当
て はめることにより、生体試料中のＬＤＬ−コレステ
ロールの値が求められる。また、紫外部測定法の場合、
例えば血清、血漿等の生体試料と、例えばＤＭ−α−Ｃ
Ｄ又は／及びポリ−β−ＣＤ、及びＣＨＥ、要すれば両
性界面活性剤、緩衝剤、抗体、イオン性化合物、２価の
カチオン等を含有する第一試薬とを混合して生体試料を
処理し、２〜40℃で１〜30分間反応させた後に340nmに
於ける吸光度（ＯＤ1'）を測定する。次いで、該反応液
と、例えばＣＨＤ、 及びＮＡＤ（Ｐ）、要すれば緩衝
剤等を含有する第二試薬とを混合し、２〜40℃で１〜60
分反応させた後に340nmに於ける吸光度（ＯＤ2'）を測
定する。上記の ＯＤ2'からＯＤ1'に由来する値（例え
ばＯＤ1'に補正係数を掛けて求めた値）を差し引いた吸
光度（ＯＤ3'）を求め、得られたＯＤ3'を、例えば予め
ＬＤＬ−コレステロール濃度既知の標準液等を試料とし
て上記と同様にして求めた、ＬＤＬ−コレステロール濃
度とＯＤ3との関係を示す検量線に当てはめることによ
り、 生体試料中のＬＤＬ−コレステロールの値が求め
られる。
を、２試薬系測定法により実施するには、例えば以下の
如く行えばよい。即ち、酸化呈色法の場合、例えば血
清、血漿等の生体試料と、例えばＤＭ−α−ＣＤ又は／
及びポリ−β−ＣＤ、ＣＨＥ及びカップラー（又はデベ
ロッパー）、要すれば両性界面活性剤、緩衝剤、抗体、
イオン性化合物、２価のカチオン等を含有する第一試薬
とを混合して生体試料を処理し、２〜40℃で１〜30分間
反応させた後に吸光度（ＯＤ1）を測定する。次いで、
該反応液と、 例えばＣＯＤ、ＰＯＤ及びデベロッパー
（又はカップラー）、要すれば緩衝剤等を含有する第二
試薬とを混合し、２〜40℃で１〜60分反応させた後に吸
光度（ＯＤ2）を測定する。上記のＯＤ2からＯＤ1に由
来する値（例えばＯＤ1に補正係数を掛けて求めた値）
を差し引いた吸光度（ＯＤ3）を求め、得られたＯＤ
3を、例えば予めＬＤＬ−コレステロール濃度既知の標
準液等を試料として上記と同様にして求めた、ＬＤＬ−
コレステロール濃度とＯＤ3との関係を示す検量線に当
て はめることにより、生体試料中のＬＤＬ−コレステ
ロールの値が求められる。また、紫外部測定法の場合、
例えば血清、血漿等の生体試料と、例えばＤＭ−α−Ｃ
Ｄ又は／及びポリ−β−ＣＤ、及びＣＨＥ、要すれば両
性界面活性剤、緩衝剤、抗体、イオン性化合物、２価の
カチオン等を含有する第一試薬とを混合して生体試料を
処理し、２〜40℃で１〜30分間反応させた後に340nmに
於ける吸光度（ＯＤ1'）を測定する。次いで、該反応液
と、例えばＣＨＤ、 及びＮＡＤ（Ｐ）、要すれば緩衝
剤等を含有する第二試薬とを混合し、２〜40℃で１〜60
分反応させた後に340nmに於ける吸光度（ＯＤ2'）を測
定する。上記の ＯＤ2'からＯＤ1'に由来する値（例え
ばＯＤ1'に補正係数を掛けて求めた値）を差し引いた吸
光度（ＯＤ3'）を求め、得られたＯＤ3'を、例えば予め
ＬＤＬ−コレステロール濃度既知の標準液等を試料とし
て上記と同様にして求めた、ＬＤＬ−コレステロール濃
度とＯＤ3との関係を示す検量線に当てはめることによ
り、 生体試料中のＬＤＬ−コレステロールの値が求め
られる。
【００３１】また、本発明のＬＤＬ−コレステロ−ルの
測定法は、１試薬系測定法により実施しても良く、この
場合は、例えば以下の如く行えばよい。即ち、酸化呈色
法の場合、例えば血清, 血漿等の生体試料と、例えばＣ
ＨＥ、ＣＯＤ、ＰＯＤ、被酸化性呈色試薬、ＤＭ−α−
ＣＤ又は／及びポリ−β−ＣＤ、要すれば両性界面活性
剤、緩衝剤、抗体、イオン性化合物、カチオン等を含有
する試液とを混合し、２〜40℃で１〜30分間反応させた
後に吸光度（ＯＤS）を測定する。また、生体試料の代
わりに生理食塩水等を使用し、上 記と同じ試薬を用い
上記と同様の操作を行って盲検値（ＯＤBl）を求める。
次いで、ＯＤSからＯＤB lを差し引いた吸光度（ＯＤR）
を求め、これを、例えば予めＬＤＬ−コレステロール濃
度既知の標準液等を試料として上記と同様にして求め
た、ＬＤＬ−コレステロール濃度とＯＤRとの関係を示
す検量線に当てはめるこ とにより、生体試料中のＬＤ
Ｌ−コレステロールの値が求められる。また、紫外部測
定法の場合、例えば血清, 血漿等の生体試料と、例えば
ＣＨＥ、ＣＨＤ、ＮＡＤ（Ｐ）、及びＤＭ−α−ＣＤ又
は／及びポリ−β−ＣＤ、要すれば両性界面活性剤、緩
衝剤、抗体、イオン性化合物、カチオン等を含有する試
液とを混合し、２〜40℃で１〜30分間反応させた後に34
0nmに於 ける吸光度（ＯＤS'）を測定する。また、生体
試料の代わりに生理食塩水等を使用し、上記と同じ試薬
を用い上記と同様の操作を行って盲検値（ＯＤBl'）を
求 める。次いで、ＯＤS'からＯＤBl'を差し引いた吸光
度（ＯＤR'）を求め、これ を、例えば予めＬＤＬ−コ
レステロール濃度既知の標準液等を試料として上記と同
様にして求めた、ＬＤＬ−コレステロール濃度とＯＤR'
との関係を示す検量線に当てはめることにより、生体試
料中のＬＤＬ−コレステロールの値が求められる。
測定法は、１試薬系測定法により実施しても良く、この
場合は、例えば以下の如く行えばよい。即ち、酸化呈色
法の場合、例えば血清, 血漿等の生体試料と、例えばＣ
ＨＥ、ＣＯＤ、ＰＯＤ、被酸化性呈色試薬、ＤＭ−α−
ＣＤ又は／及びポリ−β−ＣＤ、要すれば両性界面活性
剤、緩衝剤、抗体、イオン性化合物、カチオン等を含有
する試液とを混合し、２〜40℃で１〜30分間反応させた
後に吸光度（ＯＤS）を測定する。また、生体試料の代
わりに生理食塩水等を使用し、上 記と同じ試薬を用い
上記と同様の操作を行って盲検値（ＯＤBl）を求める。
次いで、ＯＤSからＯＤB lを差し引いた吸光度（ＯＤR）
を求め、これを、例えば予めＬＤＬ−コレステロール濃
度既知の標準液等を試料として上記と同様にして求め
た、ＬＤＬ−コレステロール濃度とＯＤRとの関係を示
す検量線に当てはめるこ とにより、生体試料中のＬＤ
Ｌ−コレステロールの値が求められる。また、紫外部測
定法の場合、例えば血清, 血漿等の生体試料と、例えば
ＣＨＥ、ＣＨＤ、ＮＡＤ（Ｐ）、及びＤＭ−α−ＣＤ又
は／及びポリ−β−ＣＤ、要すれば両性界面活性剤、緩
衝剤、抗体、イオン性化合物、カチオン等を含有する試
液とを混合し、２〜40℃で１〜30分間反応させた後に34
0nmに於 ける吸光度（ＯＤS'）を測定する。また、生体
試料の代わりに生理食塩水等を使用し、上記と同じ試薬
を用い上記と同様の操作を行って盲検値（ＯＤBl'）を
求 める。次いで、ＯＤS'からＯＤBl'を差し引いた吸光
度（ＯＤR'）を求め、これ を、例えば予めＬＤＬ−コ
レステロール濃度既知の標準液等を試料として上記と同
様にして求めた、ＬＤＬ−コレステロール濃度とＯＤR'
との関係を示す検量線に当てはめることにより、生体試
料中のＬＤＬ−コレステロールの値が求められる。
【００３２】本発明のＬＤＬ−コレステロール測定用キ
ットは、例えば血清や血漿等の生体由来試料中のＬＤＬ
−コレステロ−ルを測定するために使用されるもので、
このようなキットとしては以下の如きものが望ましい。
即ち、酸化呈色法用の場合、ＤＭ−α−ＣＤ又は／及び
ポリ−β−ＣＤ、ＣＨＥ、及びカップラー（又はデベロ
ッパー）を含んでなる第一試薬と、ＣＯＤ、ＰＯＤ、及
びデベロッパー（カップラー）を含んでなる第二試薬と
を含んでなるものが挙げられる。 また、紫外部測定法
用の場合、ＤＭ−α−ＣＤ又は／及びポリ−β−ＣＤ、
及びＣＨＥを含んでなる第一試薬と、ＣＨＤ、及びＮＡ
Ｄ（Ｐ）を含んでなる第二試薬とを含んでなるものが挙
げられる。尚、夫々の構成要素の好ましい態様、具体例
については上で述べた通りである。また、当該キットに
は、必要に応じて、ＬＤＬ−コレステロール標準品等が
組み合わされていても良いことは言うまでもない。
ットは、例えば血清や血漿等の生体由来試料中のＬＤＬ
−コレステロ−ルを測定するために使用されるもので、
このようなキットとしては以下の如きものが望ましい。
即ち、酸化呈色法用の場合、ＤＭ−α−ＣＤ又は／及び
ポリ−β−ＣＤ、ＣＨＥ、及びカップラー（又はデベロ
ッパー）を含んでなる第一試薬と、ＣＯＤ、ＰＯＤ、及
びデベロッパー（カップラー）を含んでなる第二試薬と
を含んでなるものが挙げられる。 また、紫外部測定法
用の場合、ＤＭ−α−ＣＤ又は／及びポリ−β−ＣＤ、
及びＣＨＥを含んでなる第一試薬と、ＣＨＤ、及びＮＡ
Ｄ（Ｐ）を含んでなる第二試薬とを含んでなるものが挙
げられる。尚、夫々の構成要素の好ましい態様、具体例
については上で述べた通りである。また、当該キットに
は、必要に応じて、ＬＤＬ−コレステロール標準品等が
組み合わされていても良いことは言うまでもない。
【００３３】本発明のＬＤＬ−コレステロールの測定法
は、ＤＭ−α−ＣＤ又は／及びポリ−β−ＣＤの存在下
で、コレステロールの測定を行わせるために、ＨＤＬの
みならずＶＬＤＬ、カイロミクロン等のＬＤＬ以外のリ
ポタンパク中のコレステロールとも実質的に反応せず、
ＬＤＬ−コレステロールのみと特異的に反応するので、
従来法では困難であったエンドポイント・アッセイでの
ＬＤＬ−コレステロール測定を可能ならしめるものであ
る。また、標準品についてもＬＤＬ−コレステロールの
純品を用いる必要はなく、コレステロールを含む、標準
液あるいは粘度、比重等が正常血清と同様の物性を持つ
標準血清を使用することができる。
は、ＤＭ−α−ＣＤ又は／及びポリ−β−ＣＤの存在下
で、コレステロールの測定を行わせるために、ＨＤＬの
みならずＶＬＤＬ、カイロミクロン等のＬＤＬ以外のリ
ポタンパク中のコレステロールとも実質的に反応せず、
ＬＤＬ−コレステロールのみと特異的に反応するので、
従来法では困難であったエンドポイント・アッセイでの
ＬＤＬ−コレステロール測定を可能ならしめるものであ
る。また、標準品についてもＬＤＬ−コレステロールの
純品を用いる必要はなく、コレステロールを含む、標準
液あるいは粘度、比重等が正常血清と同様の物性を持つ
標準血清を使用することができる。
【００３４】以下に、実施例及び参考例を挙げて本発明
を更に詳細に説明するが、本発明はこれらにより何ら限
定されるものではない。
を更に詳細に説明するが、本発明はこれらにより何ら限
定されるものではない。
【００３５】
実施例１ 日立７１７０形自動分析装置〔（株）日立製作所製〕を
使用して、本発明の測定法により、超遠心法で分画した
各種リポタンパク中のコレステロールを測定し、その反
応性を検討した。 〔試料〕自体公知の超遠心法で血清より分画して得たＬ
ＤＬ画分、ＨＤＬ画分、ＶＬＤＬ画分及びＣＭ画分を試
料とした。尚、各試料中のコレステロールを、予め、市
販の総コレステロール測定用試薬キット Ｌタイプワコ
ーＣＨＯ・Ｈ（和光純薬工業(株)製）を用いて、同キッ
トの現品説明書の標準操作法に従い測定した。 〔試薬〕 Ｒ−１；N-（2-ヒドロキシ-3-スルホプロピル）-3,5-ジ
メトキシアニリン Ｎａ塩（ＨＤＡＯＳ：(株)同仁化学
研究所製。） 0.6mM、ＮａＳＯ40.4M及び所定のＣＤ誘
導体を所定濃度含有する100mM ピペラジン-1,4-ビス
（2-エタンスルホン酸）（PIPES）−ＮａＯＨ緩衝液（p
H7.0）をＲ−１とした。 Ｒ−２；ＣＯＤ（天野製薬(株)製。） ４U／ml、ＣＨ
Ｅ（旭化成工業(株)製）４U／ml、ＰＯＤ（東洋紡(株)
製。） ６U／ml及び４−ＡＡ ３mMを含有する100mM
ＰＩＰＥＳ−ＮａＯＨ緩衝液（pH7.0）をＲ−２とし
た。 〔ＣＤ誘導体〕以下のＣＤ誘導体を使用した。 ・ＤＭ−α−ＣＤ（和光純薬工業(株)製） ・ポリ−β−ＣＤ（和光純薬工業(株)製） 〔測定条件〕測定パラメータを以下のように設定して、
各試料中のコレステロールを測定した。 測定方法 ；２ポイント エンド[１６]−[３４] 試料量 ；３μｌ Ｒ−１ ；２７０μｌ Ｒ−２ ； ９０μｌ 測定波長 ；７００／６００ｎｍ 測定温度 ；３７℃ 標準品濃度；１００ｍｇ／ｄｌ 〔結果〕各種試料について得られたコレステロール値
と、市販のキットを用いて測定した各種試料中のコレス
テロール値とを、下記式に当てはめて、各リポタンパク
の反応率を求めた。 その結果を表１に示す。
使用して、本発明の測定法により、超遠心法で分画した
各種リポタンパク中のコレステロールを測定し、その反
応性を検討した。 〔試料〕自体公知の超遠心法で血清より分画して得たＬ
ＤＬ画分、ＨＤＬ画分、ＶＬＤＬ画分及びＣＭ画分を試
料とした。尚、各試料中のコレステロールを、予め、市
販の総コレステロール測定用試薬キット Ｌタイプワコ
ーＣＨＯ・Ｈ（和光純薬工業(株)製）を用いて、同キッ
トの現品説明書の標準操作法に従い測定した。 〔試薬〕 Ｒ−１；N-（2-ヒドロキシ-3-スルホプロピル）-3,5-ジ
メトキシアニリン Ｎａ塩（ＨＤＡＯＳ：(株)同仁化学
研究所製。） 0.6mM、ＮａＳＯ40.4M及び所定のＣＤ誘
導体を所定濃度含有する100mM ピペラジン-1,4-ビス
（2-エタンスルホン酸）（PIPES）−ＮａＯＨ緩衝液（p
H7.0）をＲ−１とした。 Ｒ−２；ＣＯＤ（天野製薬(株)製。） ４U／ml、ＣＨ
Ｅ（旭化成工業(株)製）４U／ml、ＰＯＤ（東洋紡(株)
製。） ６U／ml及び４−ＡＡ ３mMを含有する100mM
ＰＩＰＥＳ−ＮａＯＨ緩衝液（pH7.0）をＲ−２とし
た。 〔ＣＤ誘導体〕以下のＣＤ誘導体を使用した。 ・ＤＭ−α−ＣＤ（和光純薬工業(株)製） ・ポリ−β−ＣＤ（和光純薬工業(株)製） 〔測定条件〕測定パラメータを以下のように設定して、
各試料中のコレステロールを測定した。 測定方法 ；２ポイント エンド[１６]−[３４] 試料量 ；３μｌ Ｒ−１ ；２７０μｌ Ｒ−２ ； ９０μｌ 測定波長 ；７００／６００ｎｍ 測定温度 ；３７℃ 標準品濃度；１００ｍｇ／ｄｌ 〔結果〕各種試料について得られたコレステロール値
と、市販のキットを用いて測定した各種試料中のコレス
テロール値とを、下記式に当てはめて、各リポタンパク
の反応率を求めた。 その結果を表１に示す。
【００３６】
【表１】
【００３７】
【００３８】表１の結果から明らかな如く、本発明に係
るＣＤ誘導体の存在下でコレステロールの測定を行う
と、ＬＤＬ以外のリポタンパクとの反応が著しく抑制さ
れていることが判る。特にＤＭ−α−ＣＤとポリ−β−
ＣＤを併用した場合には、ＬＤＬ以外のリポタンパクと
は殆ど反応していないことが判る。これに対して、ＣＤ
非存在下で測定を行った場合には、ＶＬＤＬ及びＣＭと
の反応が全く抑制されておらず、ＬＤＬ−コレステロー
ルを特異的に測定することは不可能であることが判る。
以上のことから、ＤＭ−α−ＣＤ又は／及びポリ−β−
ＣＤからなるＣＤ誘導体の存在下でリポタンパク中のコ
レステロールの測定を行うと、ＬＤＬ中のコレステロー
ルを特異的に測定し得ることが判る。
るＣＤ誘導体の存在下でコレステロールの測定を行う
と、ＬＤＬ以外のリポタンパクとの反応が著しく抑制さ
れていることが判る。特にＤＭ−α−ＣＤとポリ−β−
ＣＤを併用した場合には、ＬＤＬ以外のリポタンパクと
は殆ど反応していないことが判る。これに対して、ＣＤ
非存在下で測定を行った場合には、ＶＬＤＬ及びＣＭと
の反応が全く抑制されておらず、ＬＤＬ−コレステロー
ルを特異的に測定することは不可能であることが判る。
以上のことから、ＤＭ−α−ＣＤ又は／及びポリ−β−
ＣＤからなるＣＤ誘導体の存在下でリポタンパク中のコ
レステロールの測定を行うと、ＬＤＬ中のコレステロー
ルを特異的に測定し得ることが判る。
【００３９】実施例２ 日立７１７０形自動分析装置〔（株）日立製作所製〕を
使用して、本発明の測定法により、超遠心法で分画した
各種リポタンパク中のコレステロールを測定し、その反
応性を検討した。 〔試料〕実施例１と同じ。 〔試薬〕 Ｒ−１；４−ＡＡ 1.2mM、ＣＨＥ（旭化成工業(株)
製） １U／ml及び所定のＣＤ誘導体を所定濃度含有す
る25mM ＰＩＰＥＳ−ＮａＯＨ緩衝液（pH7.2）をＲ−
１とした。 Ｒ−２；ＣＯＤ（天野製薬(株)製。） ４U／ml、ＰＯ
Ｄ（東洋紡(株)製。）６U／ml及びＨＤＡＯＳ 1.2mMを
含有する25mM ＰＩＰＥＳ−ＮａＯＨ緩衝液（pH7.2）
をＲ−２とした。 〔ＣＤ誘導体〕ポリ−β−ＣＤ（和光純薬工業(株)製） 〔測定条件〕実施例１と同じ。 〔結果〕実施例１と同様にして各リポタンパクの反応率
を求めた。その結果を表２に示す。
使用して、本発明の測定法により、超遠心法で分画した
各種リポタンパク中のコレステロールを測定し、その反
応性を検討した。 〔試料〕実施例１と同じ。 〔試薬〕 Ｒ−１；４−ＡＡ 1.2mM、ＣＨＥ（旭化成工業(株)
製） １U／ml及び所定のＣＤ誘導体を所定濃度含有す
る25mM ＰＩＰＥＳ−ＮａＯＨ緩衝液（pH7.2）をＲ−
１とした。 Ｒ−２；ＣＯＤ（天野製薬(株)製。） ４U／ml、ＰＯ
Ｄ（東洋紡(株)製。）６U／ml及びＨＤＡＯＳ 1.2mMを
含有する25mM ＰＩＰＥＳ−ＮａＯＨ緩衝液（pH7.2）
をＲ−２とした。 〔ＣＤ誘導体〕ポリ−β−ＣＤ（和光純薬工業(株)製） 〔測定条件〕実施例１と同じ。 〔結果〕実施例１と同様にして各リポタンパクの反応率
を求めた。その結果を表２に示す。
【００４０】
【表２】
【００４１】
【００４２】表２の結果から明らかな如く、ポリ−β−
ＣＤとＣＨＥとを第一試薬に共存させてコレステロール
の測定を行うと、ＬＤＬとの反応には全く影響せずに、
ＬＤＬ以外のリポタンパクとの反応が著しく抑制されて
おり、ＬＤＬ中のコレステロールを特異的に測定し得る
ことが判る。これに対して、ＣＨＥのみを第一試薬に添
加した場合には、ＬＤＬ以外のリポタンパク、特にＨＤ
Ｌ及びＶＬＤＬとの反応を殆ど抑制することができない
だけでなく、ＬＤＬとの反応をも若干抑制してしまい、
ＬＤＬ中のコレステロールを特異的に測定することは不
可能であることが判る。
ＣＤとＣＨＥとを第一試薬に共存させてコレステロール
の測定を行うと、ＬＤＬとの反応には全く影響せずに、
ＬＤＬ以外のリポタンパクとの反応が著しく抑制されて
おり、ＬＤＬ中のコレステロールを特異的に測定し得る
ことが判る。これに対して、ＣＨＥのみを第一試薬に添
加した場合には、ＬＤＬ以外のリポタンパク、特にＨＤ
Ｌ及びＶＬＤＬとの反応を殆ど抑制することができない
だけでなく、ＬＤＬとの反応をも若干抑制してしまい、
ＬＤＬ中のコレステロールを特異的に測定することは不
可能であることが判る。
【００４３】実施例３ 日立７１７０形自動分析装置〔（株）日立製作所製〕を
使用して、本発明の測定法により、血清中のＬＤＬ−コ
レステロールを測定した。 〔試料〕新鮮ヒト血清８検体を試料とした。 〔試薬〕 （試薬１） Ｒ−１；４−ＡＡ 1.2mM及びポリ−β−ＣＤ 0.13％
を含有する25mM ＰＩＰＥＳ−ＮａＯＨ緩衝液（pH7.
2）をＲ−１とした。 Ｒ−２；ＣＯＤ（天野製薬(株)製。） ４U／ml、ＣＨ
Ｅ ４U／ml、ＰＯＤ（東洋紡(株)製。） ６U／ml、Ｈ
ＤＡＯＳ 1.2mM及びリポミンＬＡ0.4％を含有する25mM
ＰＩＰＥＳ−ＮａＯＨ緩衝液（pH7.2）をＲ−２とし
た。 （試薬２） Ｒ−１；４−ＡＡ 1.2mM、ＣＨＥ（旭化成工業(株)
製） １U／ml、ポリ−β−ＣＤ 0.13％及びリポミン
ＬＡ（アミノカルボン酸誘導体：ライオン(株)製、商品
名）含有する25mM ＰＩＰＥＳ−ＮａＯＨ緩衝液（pH7.
2）をＲ−１とした。 Ｒ−２；ＣＯＤ（天野製薬(株)製。） ４U／ml、ＰＯ
Ｄ（東洋紡(株)製。）６U／ml及びＨＤＡＯＳ 1.2mMを
含有する25mM ＰＩＰＥＳ−ＮａＯＨ緩衝液（pH7.2）
をＲ−２とした。 （試薬３） Ｒ−１；４−ＡＡ 1.2mM、ポリ−β−ＣＤ 0.13％、
ＣＨＥ １U／ml及びリポミンＬＡ 0.1％を含有する25
mM ＰＩＰＥＳ−ＮａＯＨ緩衝液（pH7.2）をＲ−１と
した。 Ｒ−２；ＣＯＤ（天野製薬(株)製。） ４U／ml、ＣＨ
Ｅ ４U／ml、ＰＯＤ（東洋紡(株)製。） ６U／ml及び
ＨＤＡＯＳ 1.2mMを含有する25mMＰＩＰＥＳ−ＮａＯ
Ｈ緩衝液（pH7.2）をＲ−２とした。 （試薬４） Ｒ−１；４−ＡＡ 1.2mM、ＣＨＥ １U／ml及びリポミ
ンＬＡ 0.1％を含有する25mM ＰＩＰＥＳ−ＮａＯＨ
緩衝液（pH7.2）をＲ−１とした。 Ｒ−２；ＣＯＤ（天野製薬(株)製。） ４U／ml、ＰＯ
Ｄ（東洋紡(株)製。）６U／ml及びＨＤＡＯＳ 1.2mMを
含有する25mM ＰＩＰＥＳ−ＮａＯＨ緩衝液（pH7.2）
をＲ−２とした。 〔測定条件〕実施例１と同じ。 〔結果〕測定結果を表３に示す。
使用して、本発明の測定法により、血清中のＬＤＬ−コ
レステロールを測定した。 〔試料〕新鮮ヒト血清８検体を試料とした。 〔試薬〕 （試薬１） Ｒ−１；４−ＡＡ 1.2mM及びポリ−β−ＣＤ 0.13％
を含有する25mM ＰＩＰＥＳ−ＮａＯＨ緩衝液（pH7.
2）をＲ−１とした。 Ｒ−２；ＣＯＤ（天野製薬(株)製。） ４U／ml、ＣＨ
Ｅ ４U／ml、ＰＯＤ（東洋紡(株)製。） ６U／ml、Ｈ
ＤＡＯＳ 1.2mM及びリポミンＬＡ0.4％を含有する25mM
ＰＩＰＥＳ−ＮａＯＨ緩衝液（pH7.2）をＲ−２とし
た。 （試薬２） Ｒ−１；４−ＡＡ 1.2mM、ＣＨＥ（旭化成工業(株)
製） １U／ml、ポリ−β−ＣＤ 0.13％及びリポミン
ＬＡ（アミノカルボン酸誘導体：ライオン(株)製、商品
名）含有する25mM ＰＩＰＥＳ−ＮａＯＨ緩衝液（pH7.
2）をＲ−１とした。 Ｒ−２；ＣＯＤ（天野製薬(株)製。） ４U／ml、ＰＯ
Ｄ（東洋紡(株)製。）６U／ml及びＨＤＡＯＳ 1.2mMを
含有する25mM ＰＩＰＥＳ−ＮａＯＨ緩衝液（pH7.2）
をＲ−２とした。 （試薬３） Ｒ−１；４−ＡＡ 1.2mM、ポリ−β−ＣＤ 0.13％、
ＣＨＥ １U／ml及びリポミンＬＡ 0.1％を含有する25
mM ＰＩＰＥＳ−ＮａＯＨ緩衝液（pH7.2）をＲ−１と
した。 Ｒ−２；ＣＯＤ（天野製薬(株)製。） ４U／ml、ＣＨ
Ｅ ４U／ml、ＰＯＤ（東洋紡(株)製。） ６U／ml及び
ＨＤＡＯＳ 1.2mMを含有する25mMＰＩＰＥＳ−ＮａＯ
Ｈ緩衝液（pH7.2）をＲ−２とした。 （試薬４） Ｒ−１；４−ＡＡ 1.2mM、ＣＨＥ １U／ml及びリポミ
ンＬＡ 0.1％を含有する25mM ＰＩＰＥＳ−ＮａＯＨ
緩衝液（pH7.2）をＲ−１とした。 Ｒ−２；ＣＯＤ（天野製薬(株)製。） ４U／ml、ＰＯ
Ｄ（東洋紡(株)製。）６U／ml及びＨＤＡＯＳ 1.2mMを
含有する25mM ＰＩＰＥＳ−ＮａＯＨ緩衝液（pH7.2）
をＲ−２とした。 〔測定条件〕実施例１と同じ。 〔結果〕測定結果を表３に示す。
【００４４】参考例１ 実施例３で用いた血清検体について、従来法のＦｒｉｅ
ｄｅｗａｌｄ式によりＨＤＬ−コレステロール値を算出
した。尚、測定操作は、自体公知の操作法に従って行っ
た。 〔結果〕測定結果を表３に併せて示す。
ｄｅｗａｌｄ式によりＨＤＬ−コレステロール値を算出
した。尚、測定操作は、自体公知の操作法に従って行っ
た。 〔結果〕測定結果を表３に併せて示す。
【００４５】
【表３】
【００４６】
【００４７】表３の結果から明らかな如く、ポリ−β−
ＣＤ非共存下でのＬＤＬ中のコレステロール測定値、即
ち、試薬４を用いて得られたコレステロール値に比べ
て、本発明のポリ−β−ＣＤを含有する試薬、即ち、試
薬１〜３を用いて得られたＬＤＬ中のコレステロール測
定値の方が、従来法、即ち、参考例１のＦｒｉｅｄｅｗ
ａｌｄ式で算出したＬＤＬ−コレステロール値により近
いこと、即ち、より特異的にＬＤＬ中のコレステロール
を測定し得ることが判る。更に、ポリ−β−ＣＤと両性
界面活性剤及びＣＨＥとを共存させた場合（試薬２及び
３）には、ポリ−β−ＣＤのみに比べてＦｒｉｅｄｅｗ
ａｌｄ式で算出したＬＤＬ−コレステロール値により近
づくこと、即ち、ＬＤＬ−コレステロールへの特異性が
より向上することが判る。
ＣＤ非共存下でのＬＤＬ中のコレステロール測定値、即
ち、試薬４を用いて得られたコレステロール値に比べ
て、本発明のポリ−β−ＣＤを含有する試薬、即ち、試
薬１〜３を用いて得られたＬＤＬ中のコレステロール測
定値の方が、従来法、即ち、参考例１のＦｒｉｅｄｅｗ
ａｌｄ式で算出したＬＤＬ−コレステロール値により近
いこと、即ち、より特異的にＬＤＬ中のコレステロール
を測定し得ることが判る。更に、ポリ−β−ＣＤと両性
界面活性剤及びＣＨＥとを共存させた場合（試薬２及び
３）には、ポリ−β−ＣＤのみに比べてＦｒｉｅｄｅｗ
ａｌｄ式で算出したＬＤＬ−コレステロール値により近
づくこと、即ち、ＬＤＬ−コレステロールへの特異性が
より向上することが判る。
【００４８】実施例４ 血清、血漿等生体試料中のＬＤＬ−コレステロールの測
定を実施するために使用される、測定用キットの代表的
な例としては、以下のようなものが挙げられる。 （１）第一試薬（pH６〜８）：ＤＭ−α−ＣＤ又は／及
びポリ−β−ＣＤ、ＣＨＥ、カップラー（又はデベロッ
パー）。 （２）第二試薬（pH６〜８）：ＣＯＤ、ＣＨＥ、ＰＯ
Ｄ、デベロッパー（カップラー）。
定を実施するために使用される、測定用キットの代表的
な例としては、以下のようなものが挙げられる。 （１）第一試薬（pH６〜８）：ＤＭ−α−ＣＤ又は／及
びポリ−β−ＣＤ、ＣＨＥ、カップラー（又はデベロッ
パー）。 （２）第二試薬（pH６〜８）：ＣＯＤ、ＣＨＥ、ＰＯ
Ｄ、デベロッパー（カップラー）。
【００４９】
【発明の効果】以上述べた如く、本発明は生体試料中の
ＬＤＬ−コレステロ−ルを特異的に且つ精度良く測定し
得る方法並びにそれに用いられる試薬を提供するもので
あり、本発明を利用することにより、従来の方法では不
可能であったＬＤＬ−コレステロ−ルを直接、しかも汎
用の自動分析装置を用いて測定し得る。
ＬＤＬ−コレステロ−ルを特異的に且つ精度良く測定し
得る方法並びにそれに用いられる試薬を提供するもので
あり、本発明を利用することにより、従来の方法では不
可能であったＬＤＬ−コレステロ−ルを直接、しかも汎
用の自動分析装置を用いて測定し得る。
フロントページの続き (51)Int.Cl.6 識別記号 ＦＩ Ｃ１２Ｑ 1/60 Ｃ１２Ｑ 1/60 (72)発明者 花田 寿郎 兵庫県尼崎市高田町６番１号 和光純薬工 業株式会社大阪研究所内
Claims (11)
- 【請求項１】 ジメチル−α−シクロデキストリン又は
／及びポリ−β−シクロデキストリンの存在下で測定を
行うことを特徴とする、低比重リポタンパク中のコレス
テロール測定法。 - 【請求項２】 コレステロールオキシダーゼ又はコレス
テロールデヒドロゲナーゼを用いる低比重リポタンパク
中のコレステロールの測定方法であって、試料を予めジ
メチル−α−シクロデキストリン又は／及びポリ−β−
シクロデキストリンを含んでなる試薬で処理した後、該
化合物の存在下でコレステロールオキシダーゼ又はコレ
ステロールデヒドロゲナーゼを反応させることを特徴と
する、低比重リポタンパク中のコレステロール測定法。 - 【請求項３】 ジメチル−α−シクロデキストリン又は
／及びポリ−β−シクロデキストリンのコレステロール
測定時の反応液中の濃度が、0.0001〜20％（W／V）であ
る、請求項１又は２に記載の低比重リポタンパク中のコ
レステロール測定法。 - 【請求項４】 ジメチル−α−シクロデキストリン又は
／及びポリ−β−シクロデキストリンを含有させてなる
ことを特徴とする、低比重リポタンパク中のコレステロ
ール測定用試薬。 - 【請求項５】 ジメチル−α−シクロデキストリン又は
／及びポリ−β−シクロデキストリンを含んでなる第一
試薬と、コレステロールオキシダーゼを含んでなる第二
試薬とからなるものであって、カップラー、デベロッパ
ー、ペルオキシダーゼ及びコレステロールエステラーゼ
の夫々が少なくとも第一試薬と第二試薬の何れかに含ま
れている低比重リポタンパク中のコレステロール測定用
試薬。 - 【請求項６】 コレステロールエステラーゼが第一試薬
に含まれている、請求項５に記載の低比重リポタンパク
中のコレステロール測定用試薬。 - 【請求項７】 コレステロールエステラーゼが第二試薬
に含まれている、請求項５に記載の低比重リポタンパク
中のコレステロール測定用試薬。 - 【請求項８】 コレステロールエステラーゼが第一試薬
及び第二試薬に含まれている、請求項５に記載の低比重
リポタンパク中のコレステロール測定用試薬。 - 【請求項９】 ジメチル−α−シクロデキストリン又は
／及びポリ−β−シクロデキストン、及びコレステロー
ルエステラーゼを含んでなる第一試薬と、コレステロー
ルオキシダーゼを含んでなる第二試薬とからなるもので
あって、カップラー、デベロッパー及びペルオキシダー
ゼの夫々が少なくとも第一試薬と第二試薬の何れかに含
まれている低比重リポタンパク中のコレステロール測定
用試薬。 - 【請求項１０】 カップラーとデベロッパーの一方が第
一試薬に含まれ、他方が第二試薬に含まれている、請求
項５〜９に記載の低比重リポタンパク中のコレステロー
ル測定用試薬。 - 【請求項１１】 ジメチル−α−シクロデキストリン又
は／及びポリ−β−シクロデキストリン、コレステロー
ルエステラーゼ、及びカップラー（又はデベロッパー）
を含んでなる第一試薬と、コレステロールオキシダー
ゼ、コレステロールエステラーゼ、ペルオキシダーゼ、
及びデベロッパー（又はカップラー）を含んでなる第二
試薬とを組み合わせてなることを特徴とする、低比重リ
ポタンパク中のコレステロール測定用キット。 【０００１】
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP14663698A JPH1130617A (ja) | 1997-05-13 | 1998-05-12 | Ｌｄｌ−コレステロール測定法 |
Applications Claiming Priority (3)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP13771397 | 1997-05-13 | ||
| JP9-137713 | 1997-05-13 | ||
| JP14663698A JPH1130617A (ja) | 1997-05-13 | 1998-05-12 | Ｌｄｌ−コレステロール測定法 |
Publications (1)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| JPH1130617A true JPH1130617A (ja) | 1999-02-02 |
Family
ID=26470940
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| JP14663698A Withdrawn JPH1130617A (ja) | 1997-05-13 | 1998-05-12 | Ｌｄｌ−コレステロール測定法 |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| JP (1) | JPH1130617A (ja) |
Cited By (7)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| WO2000052480A1 (fr) * | 1999-03-01 | 2000-09-08 | International Reagents Corporation | Dosage de composant d'un echantillon biologique |
| JPWO2005073401A1 (ja) * | 2004-01-29 | 2007-09-13 | 協和メデックス株式会社 | 超低密度リポ蛋白レムナント（ｖｌｄｌレムナント）中のコレステロールの定量方法、試薬およびキット |
| WO2010055916A1 (ja) | 2008-11-14 | 2010-05-20 | 協和メデックス株式会社 | 低密度リポ蛋白中のコレステロールの測定方法、測定用試薬及び測定用キット |
| JP2011174721A (ja) * | 2010-02-23 | 2011-09-08 | Fujifilm Corp | 低密度リポ蛋白コレステロールの測定方法 |
| WO2019044973A1 (ja) | 2017-09-01 | 2019-03-07 | 協和メデックス株式会社 | 低密度リポ蛋白中のコレステロールの測定方法、測定用試薬及び測定用キット |
| CN110029145A (zh) * | 2018-01-11 | 2019-07-19 | 北京瑞正善达生物工程技术有限公司 | 低密度脂蛋白胆固醇测定试剂、其制备方法及其使用方法 |
| CN112980921A (zh) * | 2019-12-12 | 2021-06-18 | 旭化成制药株式会社 | 测定用试剂组合物和试样中的物质的测定方法 |
-
1998
- 1998-05-12 JP JP14663698A patent/JPH1130617A/ja not_active Withdrawn
Cited By (10)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| WO2000052480A1 (fr) * | 1999-03-01 | 2000-09-08 | International Reagents Corporation | Dosage de composant d'un echantillon biologique |
| JPWO2005073401A1 (ja) * | 2004-01-29 | 2007-09-13 | 協和メデックス株式会社 | 超低密度リポ蛋白レムナント（ｖｌｄｌレムナント）中のコレステロールの定量方法、試薬およびキット |
| JP4690200B2 (ja) * | 2004-01-29 | 2011-06-01 | 協和メデックス株式会社 | 超低密度リポ蛋白レムナント（ｖｌｄｌレムナント）中のコレステロールの定量方法、試薬およびキット |
| WO2010055916A1 (ja) | 2008-11-14 | 2010-05-20 | 協和メデックス株式会社 | 低密度リポ蛋白中のコレステロールの測定方法、測定用試薬及び測定用キット |
| US8685663B2 (en) | 2008-11-14 | 2014-04-01 | Kyowa Medex Co., Ltd. | Method, reagent and kit for measuring cholesterol in low-density lipoproteins |
| JP2011174721A (ja) * | 2010-02-23 | 2011-09-08 | Fujifilm Corp | 低密度リポ蛋白コレステロールの測定方法 |
| WO2019044973A1 (ja) | 2017-09-01 | 2019-03-07 | 協和メデックス株式会社 | 低密度リポ蛋白中のコレステロールの測定方法、測定用試薬及び測定用キット |
| KR20200043375A (ko) | 2017-09-01 | 2020-04-27 | 히타치카세이 다이어그노스틱스 시스템즈 가부시키가이샤 | 저밀도 리포단백 중의 콜레스테롤의 측정 방법, 측정용 시약 및 측정용 키트 |
| CN110029145A (zh) * | 2018-01-11 | 2019-07-19 | 北京瑞正善达生物工程技术有限公司 | 低密度脂蛋白胆固醇测定试剂、其制备方法及其使用方法 |
| CN112980921A (zh) * | 2019-12-12 | 2021-06-18 | 旭化成制药株式会社 | 测定用试剂组合物和试样中的物质的测定方法 |
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Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| A300 | Withdrawal of application because of no request for examination |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A300 Effective date: 20050802 |