JP2000116400A - リポ蛋白中のコレステロールの定量法 - Google Patents
リポ蛋白中のコレステロールの定量法Info
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- JP2000116400A JP2000116400A JP10322772A JP32277298A JP2000116400A JP 2000116400 A JP2000116400 A JP 2000116400A JP 10322772 A JP10322772 A JP 10322772A JP 32277298 A JP32277298 A JP 32277298A JP 2000116400 A JP2000116400 A JP 2000116400A
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Abstract
(57)【要約】 （修正有）
【課題】試料中の各リポ蛋白（カイロミクロン、ＨＤ
Ｌ、ＬＤＬ、又はＶＬＤＬ）中のコレステロール量を、
リン化合物及び界面活性剤、蛋白可溶可溶化剤の存在
下、それぞれ直接選択的に測定することを特徴とする定
量法の提供。 【解決手段】リン化合物の種類と界面活性剤、蛋白可溶
化剤の種類及び濃度を選ぶことにより各リポ蛋白及び酵
素の反応に選択性を持たせた系であり、試料中に各リポ
蛋白が共存している状態でも、各リポ蛋白中のコレステ
ロールを選択的に測定出来る系である。本発明は、分画
操作をしないで各リポ蛋白、例えば高密度リポ蛋白、低
密度リポ蛋白、及び超低密度リポ蛋白中のコレステロー
ルを個別に定量する方法であり、臨床診断の分野におい
て脂質代謝の面で重要なリポ蛋白中のコレステロールの
定量法に関する。
Ｌ、ＬＤＬ、又はＶＬＤＬ）中のコレステロール量を、
リン化合物及び界面活性剤、蛋白可溶可溶化剤の存在
下、それぞれ直接選択的に測定することを特徴とする定
量法の提供。 【解決手段】リン化合物の種類と界面活性剤、蛋白可溶
化剤の種類及び濃度を選ぶことにより各リポ蛋白及び酵
素の反応に選択性を持たせた系であり、試料中に各リポ
蛋白が共存している状態でも、各リポ蛋白中のコレステ
ロールを選択的に測定出来る系である。本発明は、分画
操作をしないで各リポ蛋白、例えば高密度リポ蛋白、低
密度リポ蛋白、及び超低密度リポ蛋白中のコレステロー
ルを個別に定量する方法であり、臨床診断の分野におい
て脂質代謝の面で重要なリポ蛋白中のコレステロールの
定量法に関する。
Description
【０００１】
【技術分野】本発明は，分画操作をしないで各リポ蛋
白，例えば高密度リポ蛋白，低密度リポ蛋白，及び超低
密度リポ蛋白中のコレステロールを個別に定量する方法
であり，臨床診断の分野において脂質代謝の面で重要な
リポ蛋白中のコレステロールの定量法に関する．
白，例えば高密度リポ蛋白，低密度リポ蛋白，及び超低
密度リポ蛋白中のコレステロールを個別に定量する方法
であり，臨床診断の分野において脂質代謝の面で重要な
リポ蛋白中のコレステロールの定量法に関する．
【０００２】
【背景技術】ＨＤＬは抗動脈硬化作用を持つリポ蛋白と
して注目されるようになり，ＬＤＬは抹消細胞にコレス
テロールを供給する役割を有するとされ，冠動脈硬化症
をはじめとする各種動脈硬化症の直接的因子であり，そ
の血中レベルは動脈硬化性疾患の指標となることが知ら
れている．又ＶＬＤＬも動脈硬化との関連性が注目され
ている．従来のＨＤＬコレステロールの定量法として
は，超遠心法，電気泳動法があり，ＬＤＬコレステロー
ルの定量法としては，超遠心法，電気泳動法，換算法な
どがあり，ＶＬＤＬコレステロールの定量法としては，
超遠心法，電気泳動法がある．超遠心法は基本的定量法
として用いられており，分離用超遠心器で比重の差によ
ってＨＤＬ，ＬＤＬ，あるいはＶＬＤＬを分離し，その
コレステロール量を測定する．（アドバンスド．ィピッ
ド．リサーチ．第６巻．１頁，１９６８年）．しかしな
がら，定量性，簡便性，経済性等の面で欠点がある．電
気泳動法を用いる場合には，セルロースアセテート膜や
アガロースゲルなどを支持体として分離しコレステロー
ルを定量する．しかし，これらの定量法は，多数検体処
理，迅速定量および臨床検査の分野で多く使用されてい
る自動分析装置には不向きである．最近，リポ蛋白中の
コレステロールを直接測定する方法として，デキストラ
ン硫酸等の凝集剤を用いる方法（特開平６−２４２１１
０，特許第２，６００，０６５号），表面活性剤等を用
いる方法（特公平６−１６７２０公報，特開昭５８−１
６５８００公報），蛋白可溶化剤と糖化合物を用いる方
法（ＰＣＴ／ＪＰ９６／００６６５，ＥＰ０６９８７９
１Ａ１）等があるが，いずれの方法もトリグリセライド
（ＴＧ），Ｍ蛋白の高い試料中のリポ蛋白中のコレステ
ロールの測定を正確に行うことは出来ない．
して注目されるようになり，ＬＤＬは抹消細胞にコレス
テロールを供給する役割を有するとされ，冠動脈硬化症
をはじめとする各種動脈硬化症の直接的因子であり，そ
の血中レベルは動脈硬化性疾患の指標となることが知ら
れている．又ＶＬＤＬも動脈硬化との関連性が注目され
ている．従来のＨＤＬコレステロールの定量法として
は，超遠心法，電気泳動法があり，ＬＤＬコレステロー
ルの定量法としては，超遠心法，電気泳動法，換算法な
どがあり，ＶＬＤＬコレステロールの定量法としては，
超遠心法，電気泳動法がある．超遠心法は基本的定量法
として用いられており，分離用超遠心器で比重の差によ
ってＨＤＬ，ＬＤＬ，あるいはＶＬＤＬを分離し，その
コレステロール量を測定する．（アドバンスド．ィピッ
ド．リサーチ．第６巻．１頁，１９６８年）．しかしな
がら，定量性，簡便性，経済性等の面で欠点がある．電
気泳動法を用いる場合には，セルロースアセテート膜や
アガロースゲルなどを支持体として分離しコレステロー
ルを定量する．しかし，これらの定量法は，多数検体処
理，迅速定量および臨床検査の分野で多く使用されてい
る自動分析装置には不向きである．最近，リポ蛋白中の
コレステロールを直接測定する方法として，デキストラ
ン硫酸等の凝集剤を用いる方法（特開平６−２４２１１
０，特許第２，６００，０６５号），表面活性剤等を用
いる方法（特公平６−１６７２０公報，特開昭５８−１
６５８００公報），蛋白可溶化剤と糖化合物を用いる方
法（ＰＣＴ／ＪＰ９６／００６６５，ＥＰ０６９８７９
１Ａ１）等があるが，いずれの方法もトリグリセライド
（ＴＧ），Ｍ蛋白の高い試料中のリポ蛋白中のコレステ
ロールの測定を正確に行うことは出来ない．
【０００３】
【発明の開示】本発明者等は，リン化合物及び界面活性
剤，蛋白可溶化剤を存在させたコレステロール測定試薬
の系により，超遠心で分画されたＨＤＬ，ＬＤＬ，ＶＬ
ＤＬ及びカイロミクロン（ＣＭ）の各リポ蛋白を用いて
測定したところ，リン化合物及び界面活性剤，蛋白可溶
化剤の組み合わせによりリポ蛋白の反応性が異なり，そ
の結果ＨＤＬ中のコレステロール，ＬＤＬ中のコレステ
ロール，ＶＬＤＬ中のコレステロール及びＣＭ中のコレ
ステロールの反応性が異なることを見いだし，本発明を
完成した．本発明は，リン化合物及び界面活性剤，蛋白
可溶化剤存在下，試料中のＨＤＬコレステロール量，Ｌ
ＤＬコレステロール量，ＶＬＤＬコレステロール量，又
はＣＭコレステロール量の定量法に関する．上記測定の
際には，更に特異性を上げるために，２価の金属塩及
び，又糖燐酸化合物，糖疏酸化合物を併用して使用する
ことも出来る．又，本発明により，リン化合物及び界面
活性剤，蛋白可溶化剤を成分とするＨＤＬ中のコレステ
ロール，ＬＤＬ中のコレステロール，ＶＬＤＬ中のコレ
ステロール又はＣＭ中のコレステロールの定量試薬を作
ることが出来る．リン化合物としては，無機燐酸化合
物，有機リン化合物，有機燐酸化合物及び，又はグルカ
ン燐酸化合物等が用いられる．界面活性剤，蛋白可溶化
剤としては，陰イオン系界面活性剤，非イオン系界面活
性剤，陽イオン系界面活性剤，両性系（ベタイン型）界
面活性剤及び機能付与型界面活性剤を用いることができ
る．試料中の，ＨＤＬ中のコレステロール，ＬＤＬ中の
コレステロール，ＶＬＤＬ中のコレステロール及びＣＭ
中のコレステロールの何れの部分を測定するかに依って
界面活性剤，蛋白可溶化剤の種類と濃度，或いは界面活
性剤，蛋白可溶化剤の数種類の組み合わせと各々の濃度
の組み合わせを選択行わなけねばならない．例えば試料
中のＨＤＬ中のコレステロールを測定する場合は非イオ
ン界面活性剤のポリオキシエチレンオキシプロピレンブ
ロックポリマー系を選び，試料中のＬＤＬ中のコレステ
ロールを測定する場合は非イオン界面活性剤のポリオキ
シエチレン誘導体と非イオン界面活性剤のポリオキシエ
チレンポリオキシプロピレン誘導体を選ぶことが出来
る．金属塩としては，０．００１ ５０ Ｍのマグネシ
ュウム塩，カルシュウム塩，マンガン塩，コバルト塩等
が用いられる．本発明は，リン化合物及び界面活性剤，
蛋白可溶化剤をリポ蛋白中のコレステロールを測定する
試薬中に共存させて直接リポ蛋白中のコレステロールを
分別定量する方法で有りコレステロール測定系は酵素的
測定系であれば，何れの方法でも可能である．本発明方
法は血液，尿などの試料中のリポ蛋白中コレステロール
を直接分別測定することが出来る．次に，実施例によっ
て本発明の方法を説明する．
剤，蛋白可溶化剤を存在させたコレステロール測定試薬
の系により，超遠心で分画されたＨＤＬ，ＬＤＬ，ＶＬ
ＤＬ及びカイロミクロン（ＣＭ）の各リポ蛋白を用いて
測定したところ，リン化合物及び界面活性剤，蛋白可溶
化剤の組み合わせによりリポ蛋白の反応性が異なり，そ
の結果ＨＤＬ中のコレステロール，ＬＤＬ中のコレステ
ロール，ＶＬＤＬ中のコレステロール及びＣＭ中のコレ
ステロールの反応性が異なることを見いだし，本発明を
完成した．本発明は，リン化合物及び界面活性剤，蛋白
可溶化剤存在下，試料中のＨＤＬコレステロール量，Ｌ
ＤＬコレステロール量，ＶＬＤＬコレステロール量，又
はＣＭコレステロール量の定量法に関する．上記測定の
際には，更に特異性を上げるために，２価の金属塩及
び，又糖燐酸化合物，糖疏酸化合物を併用して使用する
ことも出来る．又，本発明により，リン化合物及び界面
活性剤，蛋白可溶化剤を成分とするＨＤＬ中のコレステ
ロール，ＬＤＬ中のコレステロール，ＶＬＤＬ中のコレ
ステロール又はＣＭ中のコレステロールの定量試薬を作
ることが出来る．リン化合物としては，無機燐酸化合
物，有機リン化合物，有機燐酸化合物及び，又はグルカ
ン燐酸化合物等が用いられる．界面活性剤，蛋白可溶化
剤としては，陰イオン系界面活性剤，非イオン系界面活
性剤，陽イオン系界面活性剤，両性系（ベタイン型）界
面活性剤及び機能付与型界面活性剤を用いることができ
る．試料中の，ＨＤＬ中のコレステロール，ＬＤＬ中の
コレステロール，ＶＬＤＬ中のコレステロール及びＣＭ
中のコレステロールの何れの部分を測定するかに依って
界面活性剤，蛋白可溶化剤の種類と濃度，或いは界面活
性剤，蛋白可溶化剤の数種類の組み合わせと各々の濃度
の組み合わせを選択行わなけねばならない．例えば試料
中のＨＤＬ中のコレステロールを測定する場合は非イオ
ン界面活性剤のポリオキシエチレンオキシプロピレンブ
ロックポリマー系を選び，試料中のＬＤＬ中のコレステ
ロールを測定する場合は非イオン界面活性剤のポリオキ
シエチレン誘導体と非イオン界面活性剤のポリオキシエ
チレンポリオキシプロピレン誘導体を選ぶことが出来
る．金属塩としては，０．００１ ５０ Ｍのマグネシ
ュウム塩，カルシュウム塩，マンガン塩，コバルト塩等
が用いられる．本発明は，リン化合物及び界面活性剤，
蛋白可溶化剤をリポ蛋白中のコレステロールを測定する
試薬中に共存させて直接リポ蛋白中のコレステロールを
分別定量する方法で有りコレステロール測定系は酵素的
測定系であれば，何れの方法でも可能である．本発明方
法は血液，尿などの試料中のリポ蛋白中コレステロール
を直接分別測定することが出来る．次に，実施例によっ
て本発明の方法を説明する．
【０００４】
【実施例 １】直接ＨＤＬコレステロールを定量する方
法と超遠心法とを比較した． 本法の試薬組成． 本法は，血清試料６μｌを，あらかじめ３７度で加温し
た第１試薬３００μｌに加え３７度で５分間加温し，得
られた溶液の５８５ｎｍにおける吸光度を測定した（Ｅ
１）．次いで，あらかじめ３７度に加温した第２試薬１
００μｌを添加攪拌し，５分後に同波長における吸光度
を測定した（Ｅ２，濃度補正後の値）．ＨＤＬコレステ
ロールの量は，ＨＤＬコレステロール５０ｍｇ／ｄｌの
標準液を用いて同様の操作を行い，（Ｅ２−Ｅ１）の値
を比較することにより算出した．超遠心法はＣＤＣの方
法にしたがって測定した．その 結果を表１に示す．
法と超遠心法とを比較した． 本法の試薬組成． 本法は，血清試料６μｌを，あらかじめ３７度で加温し
た第１試薬３００μｌに加え３７度で５分間加温し，得
られた溶液の５８５ｎｍにおける吸光度を測定した（Ｅ
１）．次いで，あらかじめ３７度に加温した第２試薬１
００μｌを添加攪拌し，５分後に同波長における吸光度
を測定した（Ｅ２，濃度補正後の値）．ＨＤＬコレステ
ロールの量は，ＨＤＬコレステロール５０ｍｇ／ｄｌの
標準液を用いて同様の操作を行い，（Ｅ２−Ｅ１）の値
を比較することにより算出した．超遠心法はＣＤＣの方
法にしたがって測定した．その 結果を表１に示す．
【０００５】 第１表に示したように，本発明の方法の測定結果は，超
遠心法の結果と良く一致した．
遠心法の結果と良く一致した．
【０００６】
【実施例２】第１試薬及び第２試薬で使用するリン化合
物及び界面活性剤，蛋白可溶化剤を組み替える以外は，
実施例１の本法と同様の操作を行い血清試料３検体につ
き，超遠心法との比較をおこなった． 本法では，それぞれの測定値は，自動分析計で取得し
た．結果を表２にしめす．
物及び界面活性剤，蛋白可溶化剤を組み替える以外は，
実施例１の本法と同様の操作を行い血清試料３検体につ
き，超遠心法との比較をおこなった． 本法では，それぞれの測定値は，自動分析計で取得し
た．結果を表２にしめす．
【０００７】
【０００８】
【実施例３】直接ＬＤＬコレステロールを測定する本法
とＣＤＣ法とを比較した． 本法の試薬組成 本法では，血清試料６μｌを，３７度にあらかじめ加温
した第１試薬３００μｌに加え，３７度で５分間加温後
５８５ｎｍにおける吸光度を測定した（Ｅ１）．次い
で，３７度であらかじめ加温した第２試薬１００μｌを
添加，攪拌し，５分後に同波長における吸光度を測定し
た（Ｅ２，濃度補正後の値）．ＬＤＬコレステロール量
はＬＤＬコレステロール濃度２００ｍｇ／ｄｌの標準液
を用いて，同様の操作をし，その値を比較することによ
り算出した．その結果を表３に示した．
とＣＤＣ法とを比較した． 本法の試薬組成 本法では，血清試料６μｌを，３７度にあらかじめ加温
した第１試薬３００μｌに加え，３７度で５分間加温後
５８５ｎｍにおける吸光度を測定した（Ｅ１）．次い
で，３７度であらかじめ加温した第２試薬１００μｌを
添加，攪拌し，５分後に同波長における吸光度を測定し
た（Ｅ２，濃度補正後の値）．ＬＤＬコレステロール量
はＬＤＬコレステロール濃度２００ｍｇ／ｄｌの標準液
を用いて，同様の操作をし，その値を比較することによ
り算出した．その結果を表３に示した．
【０００９】 表３から明らかなように，本発明の方法による結果は，
ＣＤＣ法に良く一致した．
ＣＤＣ法に良く一致した．
【００１０】
【実施例４】主として，第１試薬及び第２試薬に使用す
るリン化合物及び界面活性剤，蛋白可溶化剤の組み合わ
せを変える以外は，実施例３と同様の操作を行い血清試
料５検体について測定値を比較した． 結果を表４にしめした．
るリン化合物及び界面活性剤，蛋白可溶化剤の組み合わ
せを変える以外は，実施例３と同様の操作を行い血清試
料５検体について測定値を比較した． 結果を表４にしめした．
【００１１】 表４に示した様に，本発明の方法による測定結果は，Ｃ
ＤＣ法による測定結果と良く一致した．
ＤＣ法による測定結果と良く一致した．
【００１２】
【実施例５】主として，発色剤，リン化合物及び界面活
性剤，蛋白可溶化剤等の組み合わせを変える以外は，実
施例３の本法と同様の測定を行い，血清試料５検体につ
き，ＣＤＣほうとの比較をおこなった． 測定結果を表５に示した．
性剤，蛋白可溶化剤等の組み合わせを変える以外は，実
施例３の本法と同様の測定を行い，血清試料５検体につ
き，ＣＤＣほうとの比較をおこなった． 測定結果を表５に示した．
【００１３】 表５に示すように，本発明の方法による測定結果は，Ｃ
ＤＣ法による測定結果と良く一致した．
ＤＣ法による測定結果と良く一致した．
Claims (10)
- 【請求項１】 リン化合物及び界面活性剤，蛋白可溶化
剤存在下，試料中の各リポ蛋白（カイロミクロン，ＨＤ
Ｌ，ＬＤＬ，ＶＬＤＬ）中のコレステロール量をそれぞ
れ選択的に測定することを特徴とする，カイロミクロ
ン，ＨＤＬ，ＬＤＬ，又はＶＬＤＬ中のコレステロール
の定量法． - 【請求項２】 リン化合物及び界面活性剤，蛋白可溶化
剤存在下，試料中のＨＤＬ中のコレステロール量を測定
することを特徴とするＨＤＬ中のコレステロールの定量
法． - 【請求項３】 リン化合物及び界面活性剤，蛋白可溶化
剤存在下，試料中のＬＤＬ中のコレステロール量を測定
することを特徴とするＬＤＬ中のコレステロールの定量
法． - 【請求項４】 リン化合物及び界面活性剤，蛋白可溶化
剤存在下，ＶＬＤＬ中のコレステロール量を測定するこ
とを特徴とするＶＬＤＬ中のコレステロールの定量法． - 【請求項５】 リン化合物が無機燐酸，無機燐酸塩，有
機燐酸塩，及び有機リン化合物である請求の範囲１〜
４記載の定量法． - 【請求項６】 蛋白可溶化剤がアニオン系界面活性剤，
カチオン系界面活性剤及び，又はノニオン系界面活性剤
である請求の範囲１〜５記載の定量法． - 【請求項７】 試料中にコレステロールエステル加水分
解酵素及びコレステロール酸化酵素又はコレステロール
脱水素酵素を作用させ生成する過酸化水素又は還元型補
講素を定量することからなるコレステロール量を測定す
る方法において，使用するコレステロールエステル加水
分解酵素，コレステロール酸化酵素又はコレステロール
脱水素酵素が化学修飾された，又は未修飾のコレステロ
ールエステラーゼ，化学修飾された又は未修飾のコレス
テロール酸化酵素，又は化学修飾された若しくは未修飾
のコレステロール脱水素酵素である請求の範囲１〜 ６
記載の定量法． - 【請求項８】 コレステロール量を測定する際に１〜
３価の金属塩を存在させる請求の範囲１〜 ７記載の定
量法． - 【請求項９】 コレステロール量を測定する際に糖化合
物を存在させる請求の範囲１−８記載の定量法． - 【請求項１０】 界面活性剤がポリオキシエチレンポリ
オキシプロピレン共重合化合物，ポリオキシエチレン重
合化合物及び，又はポリプロピレン重合化合物である請
求の範囲１〜９記載の定量法．
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP10322772A JP2000116400A (ja) | 1998-10-09 | 1998-10-09 | リポ蛋白中のコレステロールの定量法 |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP10322772A JP2000116400A (ja) | 1998-10-09 | 1998-10-09 | リポ蛋白中のコレステロールの定量法 |
Publications (1)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| JP2000116400A true JP2000116400A (ja) | 2000-04-25 |
Family
ID=18147478
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| JP10322772A Pending JP2000116400A (ja) | 1998-10-09 | 1998-10-09 | リポ蛋白中のコレステロールの定量法 |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| JP (1) | JP2000116400A (ja) |
Cited By (11)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
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-
1998
- 1998-10-09 JP JP10322772A patent/JP2000116400A/ja active Pending
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| US12055554B2 (en) | 2007-06-08 | 2024-08-06 | Quest Diagnostics Investments Incorporated | Lipoprotein analysis by differential charged-particle mobility |
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