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WO2016024566A1 - 医療器具、細胞培養方法、フッ素含有環状オレフィンポリマー、フッ素含有環状オレフィンポリマー組成物、および培養細胞 - Google Patents

医療器具、細胞培養方法、フッ素含有環状オレフィンポリマー、フッ素含有環状オレフィンポリマー組成物、および培養細胞 Download PDF

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WO2016024566A1
WO2016024566A1 PCT/JP2015/072631 JP2015072631W WO2016024566A1 WO 2016024566 A1 WO2016024566 A1 WO 2016024566A1 JP 2015072631 W JP2015072631 W JP 2015072631W WO 2016024566 A1 WO2016024566 A1 WO 2016024566A1
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WO
WIPO (PCT)
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fluorine
cells
cyclic olefin
olefin polymer
culture
Prior art date
Application number
PCT/JP2015/072631
Other languages
English (en)
French (fr)
Inventor
忠弘 須永
小田　隆志
寛 宮廻
毅 大坂
Original Assignee
三井化学株式会社
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by 三井化学株式会社 filed Critical 三井化学株式会社
Priority to JP2016542576A priority Critical patent/JP6420838B2/ja
Priority to EP15832009.3A priority patent/EP3181681A4/en
Priority to CN201580043114.7A priority patent/CN106661537B/zh
Priority to KR1020177004697A priority patent/KR101960203B1/ko
Priority to US15/502,507 priority patent/US11597910B2/en
Publication of WO2016024566A1 publication Critical patent/WO2016024566A1/ja

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    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
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    • C12M23/00—Constructional details, e.g. recesses, hinges
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    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
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    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N2535/00—Supports or coatings for cell culture characterised by topography

Definitions

  • the present invention relates to a medical instrument, a cell culture method, a fluorine-containing cyclic olefin polymer, a fluorine-containing cyclic olefin polymer composition, and cultured cells.
  • Such cell culture is usually performed together with a culture solution in a fixed container.
  • Cell culture in particular, many animal cells have adhesion dependency that grows by attaching to substances, and the culture of cells having such adhesion dependency is a base material for cell attachment. (Equipment) is required.
  • the cell culture substrate polystyrene molded products are generally used as the material, and those obtained by subjecting the surface of the substrate to low temperature plasma treatment, corona discharge treatment, etc. and imparting hydrophilicity are petri dishes, flasks, multiplates. It is commercially available as a culture instrument.
  • gel and sponge-like collagen are placed on the culture substrate and seeded and cultured with fibroblasts and keratinocytes to produce cultured mucosa and skin.
  • Patent Document 1 a method has been disclosed (Patent Document 1), most of the collagen species utilized are collagens that have been solubilized and extracted from the connective tissue of bovine or swine, and recently BSE (bovine spongiform encephalopathy) and foot-and-mouth disease Due to such problems, its use has become difficult when considering medical applications.
  • Patent Document 3 a subculture operation for adjusting the cell concentration by connecting cell bags made of a gas-permeable resin and mixing the culture solution in the bag is disclosed.
  • this subculture operation involves very complicated work such as frequent liquid exchange, and the cells adhering to the substrate are peeled off and transferred to a new culture vessel.
  • Non-Patent Document 1 when the cell density after 1 hour of the start of cultivation is measured for a substrate having a water contact angle in the range of 43 ° to 116 °, the substrate in the range of 60 ° to 70 ° is used regardless of the type of substrate. It is described that the density of the cells using the material is high and the adhesiveness of the cells is good.
  • Patent Documents 4 and 5 a culture technique using a base material in which a concavo-convex structure is formed on the surface of the base material in contact with cells.
  • the culture using the base material having a concavo-convex structure is a spheroid culture, and the cells grow in a massive form.
  • the material of the base material that shapes the concavo-convex structure is a conventionally known cell-adhesive material such as cycloolefin polymer (Patent Document 4) and polydimethylsiloxane (Patent Document 5).
  • a medical device that includes a base material and that contacts or holds cells on one surface of the base material, wherein the one surface that holds at least cells of the base material is represented by the following general formula (1)
  • a medical device composed of a fluorine-containing cyclic olefin polymer containing a repeating structural unit. (In the formula (1), at least one of R 1 to R 4 contains fluorine, alkyl having 1 to 10 carbons containing fluorine, alkoxy having 1 to 10 carbons containing fluorine, or fluorine.
  • alkoxyalkyl having 2 to 10 carbon atoms which if .R 1 ⁇ R 4 is a group containing no fluorine, R 1 ⁇ R 4 is hydrogen, alkyl of 1 to 10 carbon atoms, from 1 to 10 carbon atoms Selected from alkoxy and alkoxyalkyl having 2 to 10 carbon atoms, R 1 to R 4 may be the same or different from each other, and R 1 to R 4 are bonded to each other to form a ring structure; May be good.) (2) The medical instrument according to (1), wherein a water contact angle on the one surface that contacts or holds cells is 70 ° or more and 160 ° or less.
  • the medical device according to (1) or (2), wherein a water contact angle on the one surface that contacts or holds cells is 70 ° or more and 120 ° or less.
  • a water contact angle on the one surface that contacts or holds cells is 70 ° or more and 120 ° or less.
  • at least one surface of the base material that comes into contact with a cell has an uneven structure.
  • the medical instrument according to (4), wherein a water contact angle of the one surface that contacts the cell is 121 ° or more and 160 ° or less.
  • the one surface that contacts or holds at least cells of the substrate is constituted by a fluorine-containing cyclic olefin polymer composition containing the fluorine-containing cyclic olefin polymer, a photocurable compound, and a photocuring initiator.
  • the medical device according to any one of (1) to (5).
  • the mass ratio of the fluorine-containing cyclic olefin polymer to the photocurable compound (fluorine-containing cyclic olefin polymer / photocurable compound) in the fluorine-containing cyclic olefin polymer composition is 99.9 / 0.1 to The medical device according to (6), which is 50/50.
  • (10) The medical device according to (8) or (9), wherein the cultured cells are floated with a buffer solution and detached from the one surface.
  • (11) a step of seeding cells on the one surface of the base material of the medical device according to any one of (1) to (10) so as to contact or hold the one surface; Culturing the cells to obtain cultured cells; Adding a buffer solution on the one surface to suspend the cultured cells from the one surface;
  • a cell culture method comprising: (12) A fluorine-containing cyclic olefin polymer constituting the one surface for holding at least cells of the base material of a medical device comprising a base material and causing cells to contact or hold on one side of the base material, A fluorine-containing cyclic olefin polymer containing a repeating structural unit represented by formula (1).
  • R 1 to R 4 contains fluorine, alkyl having 1 to 10 carbons containing fluorine, alkoxy having 1 to 10 carbons containing fluorine, or fluorine. alkoxyalkyl having 2 to 10 carbon atoms which if .R 1 ⁇ R 4 is a group containing no fluorine, R 1 ⁇ R 4 is hydrogen, alkyl of 1 to 10 carbon atoms, from 1 to 10 carbon atoms Selected from alkoxy and alkoxyalkyl having 2 to 10 carbon atoms, R 1 to R 4 may be the same or different from each other, and R 1 to R 4 are bonded to each other to form a ring structure; May be good.) (13) A fluorine-containing cyclic olefin polymer composition comprising a base material and constituting the one surface for holding at least cells of the base material of a medical device that contacts or holds cells on one surface of the base material, A fluorine-containing cyclic olefin poly
  • alkoxyalkyl having 2 to 10 carbon atoms which if .R 1 ⁇ R 4 is a group containing no fluorine, R 1 ⁇ R 4 is hydrogen, alkyl of 1 to 10 carbon atoms, from 1 to 10 carbon atoms Selected from alkoxy and alkoxyalkyl having 2 to 10 carbon atoms, R 1 to R 4 may be the same or different from each other, and R 1 to R 4 are bonded to each other to form a ring structure; May be good.) (14) Cultured cells maintaining drug metabolic enzyme activity for at least 7 days.
  • Mouse embryo fibroblasts that have been immersed in phosphate buffered saline and suspended in sheet form.
  • 2 is a fluorescence micrograph of cell nuclei of human dermal fibroblasts and cytoskeletal proteins cultured in the cell culture container described in Example 23 for 7 days.
  • 2 is a fluorescence micrograph of cell nuclei of human skin fibroblasts and cytoskeletal proteins cultured in the TCPS multiwell plate described in Comparative Example 6 for 7 days.
  • 2 is a fluorescence micrograph of observing killed autofluorescence of cultured human cells cultured in the cell culture container described in Example 23 for 7 days.
  • the medical device is a medical device that includes a base material and causes cells to contact or hold on one surface of the base material. Further, at least one surface for holding the cells of the substrate is composed of a fluorine-containing cyclic olefin polymer containing a repeating structural unit represented by the following general formula (1).
  • R 1 to R 4 contains fluorine, alkyl having 1 to 10 carbons containing fluorine, alkoxy having 1 to 10 carbons containing fluorine, or fluorine.
  • alkoxyalkyl having 2 to 10 carbon atoms which if .R 1 ⁇ R 4 is a group containing no fluorine, R 1 ⁇ R 4 is hydrogen, alkyl of 1 to 10 carbon atoms, from 1 to 10 carbon atoms Selected from alkoxy and alkoxyalkyl having 2 to 10 carbon atoms, R 1 to R 4 may be the same or different from each other, and R 1 to R 4 are bonded to each other to form a ring structure; May be.
  • the substituents such as alkyl, alkoxy, and alkoxyalkyl may be described as an alkyl group, an alkoxy group, and an alkoxyalkyl group, respectively.
  • the “repeating structural unit” in this specification can be simply
  • the inventor of the present invention provides a fluorine-containing cyclic olefin polymer containing a repeating structural unit represented by the general formula (1), or the fluorine-containing cyclic olefin, on one surface for contacting or holding cells of a base material constituting a medical device. It has been newly found that, when formed using a composition containing a polymer, cells held on the one surface can be easily suspended with a buffer solution such as phosphate buffered saline. Therefore, according to the medical instrument according to the present embodiment, the cells that are in contact with or held on one surface of the substrate can be detached from the substrate without being damaged by suspending the cells using the buffer solution. Become.
  • the medical device is a medical device that includes a base material and is used in a form in which cells and / or a culture solution are in contact with or held on one surface of the base material.
  • a medical instrument is used, for example, for culturing cells that are in contact with or held on one surface of a substrate, or for performing an examination using cells that are in contact with or held on one surface of a substrate.
  • a culture bag, a culture plate, a culture dish, a culture dish, a culture flask, a culture tube, etc. can be mentioned as an example of the said medical instrument, for example.
  • the one surface can be a culture surface for culturing cells.
  • At least one surface for contacting or holding the cells of the base material is constituted by a fluorine-containing cyclic olefin polymer containing a repeating structural unit represented by the general formula (1).
  • the cells held on the single surface can be On the other hand, it is possible to realize a base material that does not adhere and adhere firmly to the one surface while forming an appropriate scaffold. Thereby, in a cell culture, a cell can be proliferated, forming a colony in the thickness direction.
  • the morphology of the cells grown while forming colonies in the thickness direction can be observed by, for example, a bright / dark field microscope, a phase contrast microscope, or a fluorescence microscope.
  • a fluorescence microscope observation that can be observed with a fluorescent color obtained by staining a cell nucleus or cytoskeletal protein of a cell with a fluorescent reagent for each site is suitable as a cell morphology observation method.
  • the proliferated cells proliferate while adhering to or adhering to the culture surface, so that the cells proliferate in a uniform plane state with respect to the thickness direction.
  • the cells cover the culture surface, there is no scaffold to which the cells adhere or adhere, so that growth is hindered by the influence of contact inhibition or the like.
  • the subculture operation involves very complicated work such as frequent liquid exchange.
  • the grown cells adhere and adhere to one surface of the base material. Can be suppressed. For this reason, even if it does not depend on a subculture operation, it becomes possible to proliferate a cell so that a colony may be formed with respect to the thickness direction. Therefore, more efficient cell culture can be performed while suppressing the occurrence of cell damage and complication of operation.
  • the cultured cell produced using the medical instrument of this embodiment is a cultured cell which maintained the drug metabolic system enzyme activity for at least 7 days.
  • viable cells can be cultured normally except for very limited cell types such as viruses or bacteria that have a high probability of causing a gene mutation.
  • the drug metabolic enzyme activity of the cell is maintained for at least 7 days without being stored at a low temperature or subjected to a special culture storage operation (for example, storage with excess oxygen, etc.), preferably a culture maintained for 10 days. It is a cell. Particularly preferred are cultured cells maintained for 14 days.
  • the shape of the cell is not particularly limited, but examples thereof include sheet-like cells, clustered (including spheroid) cells, and nervous system morphological cells.
  • the cultured cells of this embodiment can be expected to maintain a similar function for a long period of time in drug discovery, biopharmaceuticals, and beauty, and is an invention that can become a global trend.
  • the moldability of the base material can be improved, and a new industrially valuable medical device is realized.
  • That at least one surface for contacting or holding the cells of the base material is constituted by the fluorine-containing cyclic olefin polymer means, for example, a film constituted by the fluorine-containing cyclic olefin polymer on one surface of a support formed of another material. (Also referred to as a cultured cell sheet) is applied to form a base material, or a coating film composed of the above-mentioned fluorine-containing cyclic olefin polymer is applied and dried on one surface of a support formed of another material.
  • the case where the substrate is formed by forming the substrate includes the case where the entire substrate is formed of a molded article formed of the fluorine-containing cyclic olefin polymer.
  • a laminate in which the cultured cells produced on the medical device of the present embodiment are covered with cotton, cloth, nonwoven fabric, etc. may be provided.
  • the laminate may be impregnated with a humectant such as glycerin.
  • the cultured cells produced with the medical device of the present embodiment are used for a medical practice such as removing the covering provided as a laminate, pasting it directly to the affected area for regenerative medicine, and then removing the film. You can also.
  • the water contact angle on the one surface that contacts or holds the cells of the substrate can be, for example, 70 ° or more and 160 ° or less.
  • a family of proteins such as vitronectin and fibronectin (adhesion molecules and proteins) present in the extracellular matrix of the culture solution.
  • the cell and the matrix containing extracellular matrix, the main component including the extracellular matrix was grown while suppressing adhesion and adhesion.
  • Cells can be more easily suspended using, for example, a buffer such as phosphate buffered saline.
  • the water contact angle is more preferably 75 ° to 155 °, and particularly preferably 80 ° to 150 °.
  • the water contact angle on one surface of the substrate is preferably used when the water contact angle on the surface of the substrate is 70 ° or more and 120 ° or less, and in the material constituting one surface of the substrate or the method for manufacturing the substrate It is possible to control by appropriately selecting various conditions. From the viewpoint of suppressing cell damage and efficient cell culture, the water contact angle is more preferably 75 ° to 115 °, and particularly preferably 80 ° to 110 °. . In another embodiment, a higher water contact angle can be set. For example, the water contact angle on one surface of the substrate can be set in a range of 121 ° to 160 °.
  • the water contact angle is more preferably 123 ° to 155 °, and particularly preferably 125 ° to 150 °. .
  • forming one surface of the base material using the fluorine-containing cyclic olefin polymer containing the repeating structural unit represented by the general formula (1) makes the water contact angle a desired range. This is one of the important elements.
  • the water contact angle is measured in accordance with Japanese Industrial Standard JIS-R3257 (wetting test method for substrate glass surface), and the shape of the water droplet can be regarded as a spherical shape under constant temperature and humidity conditions of 25 ⁇ 5 ° C and 50 ⁇ 10%.
  • numerical values within one minute immediately after contact with water droplets can be handled as the physical property values by the above method.
  • the types of cells that can be handled by the medical device according to the present embodiment are animal cells, regardless of whether they are suspension cells or adhesion cells, for example, fibroblasts, mesenchymal stem cells, hematopoietic stem cells, neural stem cells , Nerve cells, corneal epithelial cells, oral mucosal cells, retinal pigment cells, periodontal ligament stem cells, myofibroblasts, cardiomyocytes, hepatocytes, splenic endocrine cells, skin keratinocytes, skin fibroblasts, subcutaneous fat Progenitor cells, kidney cells, bottom root sheath cells, nasal mucosal epithelial cells, mesenchymal stem cells, vascular endothelial progenitor cells, vascular endothelial cells, vascular smooth muscle cells, osteoblasts, chondrocytes, skeletal muscle cells, immortalized cells, Examples include cancer cells, keratinocytes, embryonic stem cells (ES cells), EBV-transformed B cells, induced pl
  • ⁇ cell may be either a primary cell or a passaged cell.
  • These cells are derived from various organisms such as cells of humans, dogs, rats, mice, birds, pigs, cows, insects, etc., or tissues, organs, microorganisms, viruses, etc. formed by assembling them.
  • human cervical cancer derived from Chinese hamster ovary, derived from CV-1 cells, derived from human myeloid leukemia, derived from human breast cancer, derived from human T cell leukemia, derived from African green monkey kidney, human adrenal gland From medullary brown cell types, from human myeloid leukemia, from C3H mouse subcutaneous tissue, from human fetal kidney, from human liver cancer, from human histiocytic leukemia, from human colon cancer, from human lung cancer, from mouse melanoma, from dog kidney , Balb / c mouse embryo origin, Chinese hamster lung origin, Swiss3T3 origin, NIH S iss mouse fetal origin, human Burkitt lymphoma origin, human lung non-small cell carcinoma origin, human skin Epidermoid Carcinoid origin, moth larvae ovary origin, human neuroblastoma origin, Sirian golden hamster kidney origin, mouse macrophage origin, mouse muscle Tissue-derived, mixed Swiss mouse embryo-derived, human
  • the fluorine-containing cyclic olefin polymer contains a repeating structural unit represented by the following general formula (1).
  • this fluorine-containing cyclic olefin polymer can be used to form at least one surface of the base material of a medical device in which cells are brought into contact with or held on one surface of the base material.
  • R 1 to R 4 contains fluorine, alkyl having 1 to 10 carbons containing fluorine, alkoxy having 1 to 10 carbons containing fluorine, or fluorine. alkoxyalkyl having 2 to 10 carbon atoms which if .R 1 ⁇ R 4 is a group containing no fluorine, R 1 ⁇ R 4 is hydrogen, alkyl of 1 to 10 carbon atoms, from 1 to 10 carbon atoms Selected from alkoxy and alkoxyalkyl having 2 to 10 carbon atoms, R 1 to R 4 may be the same or different from each other, and R 1 to R 4 are bonded to each other to form a ring structure; May be.)
  • R 1 to R 4 are fluorine; fluoromethyl, difluoromethyl, trifluoromethyl, trifluoroethyl, pentafluoroethyl, heptafluoropropyl, hexafluoroisopropyl, heptafluoroisopropyl, hexafluoro-2- 1 to 1 carbon atoms containing fluorine such as alkyl in which part or all of hydrogen of the alkyl group such as methylisopropyl, perfluoro-2-methylisopropyl, n-perfluorobutyl, n-perfluoropentyl, perfluorocyclopentyl is substituted with fluorine 10 alkyls; fluoromethoxy, difluoromethoxy, trifluoromethoxy, trifluoroethoxy, pentafluoroethoxy, heptafluoropropoxy, hexafluoroisopropoxy, h
  • R 1 to R 4 may be bonded to each other to form a ring structure, and a ring such as perfluorocycloalkyl or perfluorocycloether via oxygen may be formed.
  • other R 1 to R 4 not containing fluorine are hydrogen; alkyl having 1 to 10 carbon atoms such as methyl, ethyl, propyl, isopropyl, 2-methylisopropyl, n-butyl, n-pentyl, cyclopentyl, etc .; methoxy And alkoxy having 1 to 10 carbon atoms such as ethoxy, propoxy, butoxy and pentoxy; or alkoxyalkyl having 2 to 10 carbon atoms such as methoxymethyl, ethoxymethyl, propoxymethyl, butoxymethyl and pentoxymethyl.
  • the fluorine-containing cyclic olefin polymer may have only the structural unit represented by the general formula (1), or may have another structural unit together with the structural unit represented by the general formula (1). Also good.
  • the fluorine-containing cyclic olefin polymer may be a structural unit represented by the general formula (1), and may include two or more types of structural units in which at least one of R 1 to R 4 is different from each other.
  • fluorine-containing cyclic olefin polymer containing the repeating structural unit represented by the general formula (1) include poly (1-fluoro-2-trifluoromethyl-3,5-cyclopentylene ethylene), poly (1-fluoro-1-trifluoromethyl-3,5-cyclopentyleneethylene), poly (1-methyl-1-fluoro-2-trifluoromethyl-3,5-cyclopentyleneethylene), poly (1 , 1-difluoro-2-trifluoromethyl-3,5-cyclopentyleneethylene), poly (1,2-difluoro-2-trifluoromethyl-3,5-cyclopentyleneethylene), poly (1-perfluoro Ethyl-3,5-cyclopentyleneethylene), poly (1,1-bis (trifluoromethyl) -3,5-cyclopentyleneethylene) Poly (1,1,2-trifluoro-2-trifluoromethyl-3,5-cyclopentyleneethylene), poly (1,2-bis (trifluoromethyl) -3,5-cyclopent
  • the molecular weight of the fluorine-containing cyclic olefin polymer is, for example, 5,000 to 1 in terms of polystyrene-equivalent weight average molecular weight (Mw) measured by gel permeation chromatography (GPC) at a sample concentration of 3.0 to 9.0 mg / ml. It is preferably 1,000,000, more preferably 10,000 to 300,000. By making this weight average molecular weight (Mw) equal to or more than the above lower limit value, cracks caused by external stress such as bending do not occur in a molded product molded by the solution cast method or a molded product coated on a base material. It becomes possible to obtain a molded product in a stable state.
  • Mw polystyrene-equivalent weight average molecular weight
  • the weight average molecular weight (Mw) is set to be equal to or less than the above upper limit value, it becomes possible to have fluidity that facilitates melt molding.
  • the numerical range indicated by “to” includes the upper limit value and the lower limit value thereof.
  • the molecular weight distribution (Mw / Mn) to the upper limit value or less, it is possible to suppress elution of particularly low molecular weight components such as oligomers, and the water contact angle on the substrate surface is changed to change the cell of this embodiment. It becomes possible to suppress more reliably that the form of proliferation is prevented.
  • Mw weight average molecular weight
  • Mw / Mn molecular weight distribution
  • the glass transition temperature of the fluorine-containing cyclic olefin polymer by differential scanning calorimetry is preferably 50 to 300 ° C, more preferably 80 to 280 ° C, and further preferably 100 to 250 ° C.
  • heat sterilization treatment can be performed, and the shape can be maintained under the use environment. It becomes possible to suitably obtain a medical device as a base material for cell culture and examination using cells that are excellent in hue.
  • the partially fluorinated polymer of the general formula (1) of the present embodiment is different from the fully fluorinated polymer in that it has a structure in which the main chain is a partially fluorinated polymer having a hydrocarbon and a fluorine atom in a side chain. Therefore, it dissolves well in polar solvents such as commercially available ethers and ketones, which are solvents for polymer synthesis, and exhibits excellent solubility in polar compounds such as photo-curable compounds.
  • the molded product exhibits excellent adhesion to molded products made of general-purpose resins such as PET and acrylic resin, and has a hydrophobic surface property that is a characteristic of a fluorine-based polymer.
  • the fluorine-containing cyclic olefin polymer which consists of a repeating structural unit substantially represented by General formula (1) can be manufactured by the method mentioned later. Thereby, it is possible to suitably obtain a fluorine-containing cyclic olefin polymer that is a raw material of a base material for cell culture and cell-based examination characterized by suppressing cell adhesion or adhesion according to this embodiment. it can.
  • a fluorine-containing cyclic olefin polymer is obtained by polymerizing a cyclic olefin monomer represented by the following general formula (2) with a ring-opening metathesis polymerization catalyst, and hydrogenating the olefin portion of the main chain of the resulting polymer. Can be synthesized.
  • monomers other than the cyclic olefin monomer represented by the general formula (2) may be included.
  • the main chain double bond is hydrogenated after ring-opening metathesis polymerization of the monomer represented by the general formula (2).
  • This is an added fluorine-containing polymer.
  • a Schrock catalyst is preferably used, and a Grubbs catalyst may be used. This makes it possible to increase the polymerization catalytic activity for polar monomers and realize an industrially excellent production method.
  • These ring-opening metathesis polymerization catalysts may be used alone or in combination of two or more.
  • a ring-opening metathesis polymerization catalyst comprising a combination of a classic organic transition metal complex, transition metal halide or transition metal oxide and a Lewis acid as a cocatalyst can also be used.
  • the molar ratio of the cyclic olefin monomer to the ring-opening metathesis polymerization catalyst is 1 mole of the transition metal alkylidene catalyst in the case of a transition metal alkylidene catalyst such as tungsten, molybdenum, or ruthenium.
  • the monomer is preferably 100 to 30,000 mol, more preferably 1,000 to 20,000 mol.
  • an olefin or a diene can be used as a chain transfer agent in order to control the molecular weight and its distribution within the above-mentioned range.
  • the olefin include ⁇ -olefins such as ethylene, propylene, 1-butene, 1-pentene, 1-hexene, 1-octene, and fluorine-containing olefins thereof.
  • vinyltrimethylsilane, allyltrimethylsilane examples thereof include silicon-containing olefins such as allyltriethylsilane and allyltriisopropylsilane, and fluorine and silicon-containing olefins thereof.
  • diene examples include nonconjugated dienes such as 1,4-pentadiene, 1,5-hexadiene, 1,6-heptadiene, and fluorine-containing nonconjugated dienes thereof.
  • nonconjugated dienes such as 1,4-pentadiene, 1,5-hexadiene, 1,6-heptadiene, and fluorine-containing nonconjugated dienes thereof.
  • olefins, fluorine-containing olefins or dienes may be used alone or in combination of two or more.
  • the amount of the chain transfer agent used is preferably from 0.001 to 1,000 mol, more preferably from 0.01 to 100 mol, based on 1 mol of the cyclic olefin monomer.
  • the chain transfer agent is preferably 0.1 to 1,000 moles, more preferably 1 to 500 moles per mole of the transition metal alkylidene catalyst.
  • the ring-opening metathesis polymerization of the cyclic olefin monomer may be solvent-free or may use a solvent.
  • the solvent to be used includes ethers such as tetrahydrofuran, diethyl ether, dibutyl ether, dimethoxyethane or dioxane, and ethyl acetate.
  • Esters such as propyl acetate or butyl acetate, aromatic hydrocarbons such as benzene, toluene, xylene or ethylbenzene, aliphatic hydrocarbons such as pentane, hexane or heptane, cyclopentane, cyclohexane, methylcyclohexane, dimethylcyclohexane or decalin Aliphatic cyclic hydrocarbons, methylene dichloride, dichloroethane, dichloroethylene, tetrachloroethane, halogenated hydrocarbons such as chlorobenzene or trichlorobenzene, fluoro Fluorine-containing aromatic hydrocarbons such as benzene, difluorobenzene, hexafluorobenzene, trifluoromethylbenzene, metaxylene hexafluoride, fluorine-containing aliphatic hydrocarbons such as perfluorohex
  • the concentration of the cyclic olefin monomer with respect to the monomer solution is preferably 5 to 100% by mass, although it varies depending on the reactivity of the monomer and the solubility in the polymerization solvent. More preferably, it is mass%.
  • the reaction temperature is preferably ⁇ 30 to 150 ° C., more preferably 30 to 100 ° C.
  • the reaction time is preferably 10 minutes to 120 hours, more preferably 30 minutes to 48 hours.
  • the reaction can be stopped with an aldehyde such as butyraldehyde, a ketone such as acetone, an alcohol such as methanol, or a quenching agent such as water, to obtain a polymer solution.
  • the cyclic olefin polymer of this embodiment can be obtained by hydrogenating a olefin portion of the main chain of a polymer obtained by ring-opening metathesis polymerization of a cyclic olefin monomer using a catalyst.
  • the hydrogenation catalyst can be a homogeneous metal complex catalyst or a heterogeneous metal supported catalyst as long as it can hydrogenate the olefin part of the main chain of the polymer without causing a hydrogenation reaction of the solvent used.
  • Any homogeneous metal complex catalyst may be used, for example, chlorotris (triphenylphosphine) rhodium, dichlorotris (triphenylphosphine) osmium, dichlorohydridobis (triphenylphosphine) iridium, dichlorotris (triphenylphosphine).
  • Examples include ruthenium, dichlorotetrakis (triphenylphosphine) ruthenium, chlorohydridocarbonyltris (triphenylphosphine) ruthenium, dichlorotris (trimethylphosphine) ruthenium, and the heterogeneous metal-supported catalyst includes, for example, active Palladium on carbon, alumina-supported palladium, activated carbon-supported rhodium, alumina-supported rhodium, active carbon supported ruthenium, alumina-supported ruthenium and the like. These hydrogenation catalysts may be used alone or in combination of two or more. In particular, from the viewpoint of cell culture, palladium on activated carbon or palladium on alumina that can be easily removed by filtration is preferably used.
  • the amount of the hydrogenation catalyst used is that the metal component in the hydrogenation catalyst is hydrogenated.
  • the amount is preferably 5 ⁇ 10 ⁇ 4 to 100 parts by mass, more preferably 1 ⁇ 10 ⁇ 2 to 30 parts by mass with respect to 100 parts by mass of the polymer before treatment.
  • the solvent used for hydrogenation is not particularly limited as long as it dissolves the cyclic olefin polymer and the solvent itself is not hydrogenated.
  • ethers such as tetrahydrofuran, diethyl ether, dibutyl ether, dimethoxyethane, Esters such as ethyl acetate, propyl acetate or butyl acetate, aromatic hydrocarbons such as benzene, toluene, xylene and ethylbenzene, aliphatic hydrocarbons such as pentane, hexane and heptane, cyclopentane, cyclohexane, methylcyclohexane, dimethylcyclohexane, Aliphatic cyclic hydrocarbons such as decalin, methylene dichloride, halogenated hydrocarbons such as chloroform, dichloroethane, dichloroethylene, tetrachloroethane, chlorobenzene
  • the hydrogen pressure is preferably from normal pressure to 30 MPa, more preferably from 0.5 to 20 MPa, and particularly preferably from 2 to 15 MPa.
  • the reaction temperature is preferably 0 to 300 ° C., more preferably room temperature to 250 ° C., and particularly preferably 50 to 200 ° C.
  • the mode of carrying out the hydrogenation reaction is not particularly limited. For example, there are a method in which the catalyst is dispersed or dissolved in a solvent, a method in which the catalyst is packed in a column and the polymer solution is circulated as a stationary phase, and the like. Can be mentioned.
  • the hydrogenation treatment of the olefin portion of the main chain may be performed by precipitating the polymer solution of the cyclic olefin polymer before the hydrogenation treatment in a poor solvent and isolating the polymer, and then dissolving the solution again in the solvent and performing the hydrogenation treatment.
  • the hydrogenation treatment may be performed with the above hydrogenation catalyst without isolating the polymer from the polymerization solution, and there is no particular limitation.
  • the hydrogenation rate of the olefin part of the cyclic olefin polymer is preferably 50% or more, more preferably 70 to 100%, and particularly preferably 90 to 100%.
  • the method for obtaining the cyclic olefin polymer from the polymer solution after hydrogenation particularly when a solid catalyst such as palladium on activated carbon or palladium on alumina is preferably used is not particularly limited.
  • a method of obtaining a polymer by a method such as separation or decantation and discharging the reaction solution to a poor solvent under stirring a method of depositing a polymer by a method such as steam stripping in which steam is blown into the reaction solution, or a reaction solution And a method of evaporating and removing the solvent by heating or the like.
  • the cyclic olefin polymer can be obtained by the above-described method after the synthesis solution is filtered to separate the metal-supported catalyst.
  • a catalyst component having a large particle size is preliminarily settled in a polymer solution by a method such as decantation or stretch separation, the supernatant is collected, the solution from which the catalyst component is roughly removed is filtered, and the cyclic olefin polymer is obtained by the method described above. You may get it.
  • the opening of the filter is preferably 10 ⁇ m to 0.05 ⁇ m, particularly preferably 10 ⁇ m to 0.1 ⁇ m, and more preferably 5 ⁇ m to 0.1 ⁇ m. It is.
  • the medical device according to the present embodiment includes a base material made of, for example, a film or a sheet-like single layer film, or a base material obtained by forming a coat film on another material.
  • Examples of a method for producing such a substrate include a solution casting method using a varnish obtained by dissolving the fluorine-containing cyclic olefin polymer represented by the general formula (1) exemplified above in an organic solvent. Can do.
  • fluorine content such as metaxylene hexafluoride, benzotrifluoride, fluorobenzene, difluorobenzene, hexafluorobenzene, trifluoromethylbenzene, bis (trifluoromethyl) benzene, etc.
  • Fluorine-containing aliphatic hydrocarbons such as aromatic hydrocarbons, perfluorohexane and perfluorooctane, fluorine-containing aliphatic cyclic hydrocarbons such as perfluorocyclodecalin, fluorine-containing ethers such as perfluoro-2-butyltetrahydrofuran, chloroform, chlorobenzene, Halogenated hydrocarbons such as trichlorobenzene, ethers such as tetrahydrofuran, dibutyl ether, 1,2-dimethoxyethane, dioxane, esters such as ethyl acetate, propyl acetate, butyl acetate, Alternatively, ketones such as methyl ethyl ketone, methyl isobutyl ketone, and cyclohexanone can be used.
  • solubility and film forming property it can select in consideration of solubility and film forming property. Moreover, these may be used independently and may be used in combination of 2 or more types.
  • a solvent having a boiling point of 70 ° C. or higher under atmospheric pressure is preferable. Thereby, it can suppress reliably that an evaporation rate becomes too quick. For this reason, it can suppress reliably that the deterioration of film thickness precision and the nonuniformity in the film
  • the concentration at which the fluorine-containing cyclic olefin polymer is dissolved is preferably 1.0 to 99.0% by mass, more preferably 5.0 to 90.0% by mass, and 10.0 to 80.0% by mass. % Is particularly preferred.
  • the concentration may be selected in consideration of the solubility of the polymer, adaptability to the filtration process, film forming property, and film thickness.
  • other known components may be added as necessary.
  • Other components include anti-aging agents, leveling agents, wettability improvers, surfactants, modifiers such as plasticizers, stabilizers such as UV absorbers, preservatives, and antibacterial agents, photosensitizers, and silanes.
  • a coupling agent etc. are mentioned.
  • the varnish prepared by the above method is filtered through a filter.
  • a filter As a result, polymer insolubles, gels, foreign substances, etc. can be greatly reduced from the varnish, and the surface of the substrate as a culture instrument for culturing cells or a test instrument for performing tests using cells can be made smooth and hydrophobic.
  • the surface texture can be formed uniformly over the entire surface.
  • the opening of the filtration filter is preferably 10 ⁇ m to 0.05 ⁇ m, particularly preferably 10 ⁇ m to 0.1 ⁇ m, and further preferably 5 ⁇ m to 0.1 ⁇ m.
  • the filtration process may be a multistage process in which the polymer solution is sent from a filter with a large pore size to a small filter, or a single process in which the varnish is sent directly to a filter with a small pore size.
  • the material of the filter may be made of an organic material such as Teflon (registered trademark), PP, PES, or cellulose, or may be made of an inorganic material such as glass fiber or metal. You can choose from process adaptability.
  • the filtration temperature is selected in consideration of filter performance, solution viscosity, and polymer solubility, and is preferably ⁇ 10 to 200 ° C., more preferably 0 ° C. to 150 ° C., and room temperature to A temperature of 100 ° C. is particularly preferable.
  • a film is formed from the varnish.
  • a polymer solution (varnish) is applied on the support by a method such as table coating, spin coating, dip coating, die coating, spray coating, bar coating, roll coating, curtain flow coating, etc. Apply and form a film.
  • Supports include metal materials such as stainless steel and silicon, inorganic materials such as glass and quartz, polyimide, polyamide, polyester, polycarbonate, polyphenylene ether, polyphenylene sulfide, polyacrylate, polymethacrylate, polyacrylate, epoxy resin, and silicone resin. It can be selected from those made of a resin material.
  • the coating film may be dried by placing a support on which a solution has been cast on a heating plate and drying by heating, or by placing a base material to which the solution has been cast in a heated drying furnace, Hot air heated with a gas such as air or nitrogen may be applied to the coating film and dried, or may be dried using a process combining these.
  • the drying temperature is preferably 10 to 250 ° C., more preferably 20 to 220 ° C., particularly preferably 30 to 200 ° C., and characteristics of the varnish, film thickness, and heat resistance of the substrate Selected in consideration of sex.
  • the coating film may be dried by setting a multi-stage drying temperature with two or more temperature settings. The time for drying the coating film can be selected from the conditions considering the boiling point of the varnish solvent, the film thickness of the film, and the process requirements. As a result, a film is formed on the support.
  • the substrate can be produced by, for example, peeling the film from the support. Peeling of the film from the support may be performed by applying a commercially available tape to the end of the film and applying a stress to the film to release the liquid, such as water or a solvent, at the contact interface between the film and the support. The film may be peeled off by utilizing the difference in surface tension between the support surface and the contact surface of the film.
  • the support and the fluorine-containing cyclic olefin polymer of this embodiment are used.
  • the base material comprised by the coating film which consists of can be manufactured.
  • the support is particularly preferably selected from organic materials such as PET and acrylic resin, or inorganic materials such as glass and silicon.
  • a method for producing a film to be a base material by a melt molding method may be mentioned.
  • the method for producing a film by the melt molding method include a method in which the fluorine-containing cyclic olefin polymer exemplified above is formed into a film through a T die using a melt kneader, an inflation method, and the like.
  • a melt-extruded film using a T-die for example, a cyclic olefin polymer blended with additives as necessary is put into an extruder, and is preferably 50 to 200 ° C.
  • the glass transition temperature higher than the glass transition temperature, more preferably 80 It can be processed into a film by melt-kneading at a high temperature of 150 ° C. to 150 ° C., extruding from a T-die, and cooling the molten polymer with a cooling roll or the like.
  • additives such as a ultraviolet absorber, antioxidant, a flame retardant, an antistatic agent, and a coloring agent, in the range which does not impair the effect of this invention.
  • the thickness of the film produced using the fluorine-containing cyclic olefin polymer is preferably 1 to 1000 ⁇ m, more preferably 5 to 500 ⁇ m, and particularly preferably 10 to 200 ⁇ m. These are suitable ranges from the viewpoint of producing medical instruments used for cell culture such as culture bags, culture plates, and culture dishes. Moreover, the film thickness of a film can be set according to the process which produces those instruments.
  • medical devices in the form of bags, tubes, etc. can be manufactured from films manufactured by the solution casting method or melt molding method by heat sealing method or sealing method using adhesive, etc.
  • a medical device such as a petri dish can be manufactured.
  • the melt molding temperature is preferably 330 ° C. or less, more preferably 300 ° C. or less, and particularly preferably 280 ° C. or less.
  • the medical device using the fluorine-containing cyclic olefin polymer according to the present embodiment is, for example, a base material made of a film or a sheet-like single layer film having a concavo-convex structure formed on one surface for holding or contacting cells, or other It may be provided with a base material obtained by sticking a film or sheet-shaped single layer film with a concavo-convex structure on the material with an adhesive or an adhesive, and in particular, water contact at 121 ° to 160 ° It is preferably used to realize a corner.
  • the size of the concavo-convex structure is obtained by shaping a pattern having a convex-convex distance of 40 nm to 90 ⁇ m, preferably 60 nm to 80 ⁇ m, particularly preferably 80 nm to 70 ⁇ m, so that the water contact angle is within a desired range.
  • the shape is not particularly limited.
  • the concavo-convex structure may be formed by various methods such as screen printing, embossing, submicron imprint, and nanoimprint.
  • the various patterns of the mold made of quartz, silicon, nickel, resist, and the like contain, for example, the structural unit represented by the general formula (1) exemplified above.
  • Examples thereof include a solution casting method in which a varnish obtained by dissolving a fluorine-containing cyclic olefin polymer in an organic solvent is applied.
  • a varnish is prepared by dissolving a fluorine-containing cyclic olefin polymer containing a structural unit represented by the general formula (1) in an organic solvent in a manner similar to the above-described method for producing a substrate using the solution casting method. And filter through a filter.
  • the substrate having the concavo-convex structure can be obtained by transferring the pattern of the mold by bringing the varnish and the pattern surface of the mold having the concavo-convex structure into contact with each other and evaporating the solvent.
  • a metal material such as nickel, iron, stainless steel, germanium, titanium, silicon, glass, etc.
  • Inorganic materials such as quartz and alumina
  • resin materials such as polyimide, polyamide, polyester, polycarbonate, polyphenylene ether, polyphenylene sulfide, polyacrylate, polymethacrylate, polyarylate, epoxy resin and silicone resin, carbon materials such as diamond and graphite, etc. Is mentioned.
  • a table coat A method of applying a polymer solution (varnish) on the fine pattern surface of the mold by spin coating, die coating, spray coating, bar coating, roll coating, or a metal material such as stainless steel or silicon, glass, quartz Table coat, spin coat, etc. on substrates such as inorganic materials such as polyimide, polyamide, polyester, polycarbonate, polyphenylene ether, polyphenylene sulfide, polyacrylate, polymethacrylate, polyarylate, epoxy resin, silicone resin, etc.
  • Die coat, Playing coating, bar coating, a polymer solution was applied by a method such as roll coating, a fine pattern surface of the mold may be any of a method of contacting covered therewith.
  • (1) a method comprising a step of applying a solution (varnish) comprising a fluorine-containing cyclic olefin polymer and an organic solvent to a mold surface having a fine pattern, and a step of evaporating the solvent from the solution; (2) A step of applying a solution (varnish) comprising a fluorine-containing cyclic olefin polymer and an organic solvent to a support (base material), a step of pressing the upper surface of the coating layer with a mold surface on which a fine pattern is formed, And a method including a step of evaporating the solvent from the coating layer.
  • the solvent can be evaporated from the coating layer and then pressed with a mold.
  • the temperature for evaporating the solvent from the transfer body and drying is usually 10 to 300 ° C., preferably 50 to 200 ° C.
  • the pressure is usually 133 Pa to atmospheric pressure
  • the drying time is usually 10 ° C.
  • the reaction time is from min to 120 hours, preferably from 30 minutes to 48 hours. Further, the drying temperature, pressure, and time may be changed stepwise according to each setting.
  • the method includes the step of evaporating the solvent to form a transfer body on the mold and then peeling the transfer body. Peeling of the transfer body is preferably performed at a temperature not higher than the glass transition temperature, and more preferably at a temperature not higher than (glass transition temperature ⁇ 20 ° C.), whereby the pattern shape formed on the transfer body is reduced. Holds accurately and can be easily peeled off.
  • the mold can be released from the mold by peeling, or after the mold and the transfer body are brought into contact with a medium such as water by a method such as immersion or spraying, peeling can be performed using surface tension. .
  • a resin material or an inorganic material such as glass may be attached to the back surface of the transfer body, and the substrate may be peeled off from the support.
  • the one-sided base material that holds or contacts the cells in which the uneven structure of the present embodiment is formed is a film made of a fluorine-containing cyclic olefin polymer containing a structural unit represented by the general formula (1). It can also be obtained by transferring the pattern of the mold by pressing in contact with the pattern surface.
  • a method in which a mold heated to a glass transition temperature or higher is pressure-bonded to a film a method in which a film is heated to a glass transition temperature or higher and a mold is pressure-bonded, or a film and a mold are heated to a glass transition temperature or higher to
  • the method of pressure bonding is preferred, and the heating temperature is in the range of glass transition temperature to (glass transition temperature + 100 ° C.), preferably (glass transition temperature + 5 ° C.) to (glass transition temperature + 50 ° C.).
  • the pressure is usually from 1 MPa to 100 MPa, preferably from 1 MPa to 60 MPa.
  • the transfer body formed on the mold by pressure bonding is preferably peeled at a temperature not higher than the glass transition temperature, and more preferably at a temperature not higher than (glass transition temperature ⁇ 20 ° C.).
  • the pattern shape formed on the transfer body can be held with high accuracy and easily separated.
  • the mold can be peeled off by peeling, or after the mold and the transfer body are brought into contact with a medium such as water by a method such as immersion or spraying, peeling can be performed using surface tension.
  • a resin material or an inorganic material such as glass may be attached to the back surface of the transfer body, and the substrate may be peeled off from the support.
  • a method of producing a film to be a base material on which a concavo-convex structure is formed by melt molding examples include a method in which the fluorine-containing cyclic olefin polymer exemplified above is formed into a film through a T die using a melt kneader.
  • a melt-extruded film using a T-die for example, a cyclic olefin polymer blended with additives as necessary is put into an extruder, and is preferably 50 to 200 ° C.
  • the heating temperature of the roll having a fine pattern on the surface is used in the same range as the heating temperature when forming the concavo-convex structure by thermocompression bonding of the above-mentioned film and the mold.
  • additives such as a ultraviolet absorber, antioxidant, a flame retardant, an antistatic agent, and a coloring agent, in the range which does not impair the effect of this invention.
  • the film thickness of the one-sided substrate film that holds or contacts the cells having the concavo-convex structure produced using the fluorine-containing cyclic olefin polymer is preferably 1 to 1000 ⁇ m, and more preferably 5 to 500 ⁇ m. More preferred is 10 to 200 ⁇ m. These are suitable ranges from the viewpoint of producing medical instruments used for cell culture such as culture bags, culture plates, and culture dishes. Moreover, the film thickness of a film can be set according to the process which produces those instruments.
  • a film or sheet having a concavo-convex structure produced by a solution casting method, a thermocompression bonding method, or a melt molding method for example, in the form of a bag, a tube, or the like by a heat sealing method or a sealing method using an adhesive.
  • the uneven structure of this embodiment is formed on the surface of a substrate made of other materials such as polystyrene, polyethylene, metal, etc., for holding or contacting cells of medical instruments such as petri dishes, multiwell plates, flasks, etc. It is also possible to manufacture a medical device in a form in which a film or sheet is attached.
  • the fluorine-containing cyclic olefin polymer composition includes a fluorine-containing cyclic olefin polymer represented by the general formula (1) exemplified above (hereinafter also referred to as a fluorine-containing cyclic olefin polymer (A)), and a photocurable compound (B). And a photocuring initiator (C).
  • a fluorine-containing cyclic olefin polymer represented by the general formula (1) exemplified above
  • B a photocurable compound
  • C photocuring initiator
  • the medical device includes a base material made of, for example, a film or a sheet-like single layer film, or a base material obtained by forming a coat film on another material.
  • a method for producing such a substrate include a solution casting method using a varnish obtained by dissolving a fluorine-containing cyclic olefin polymer composition containing the fluorine-containing cyclic olefin polymer (A) in an organic solvent. it can.
  • a varnish is obtained by dissolving a fluorine-containing cyclic olefin polymer composition containing a fluorine-containing cyclic olefin polymer (A) in an organic solvent.
  • the varnish of the fluorine-containing cyclic olefin polymer composition according to the present embodiment is prepared, for example, by preparing a fluorine-containing cyclic olefin polymer (A) in a solution at an arbitrary concentration in advance, and then adding the fluorine-containing cyclic olefin polymer (A) and photocuring described later.
  • the mass ratio (A) / (B) of the functional compound (B) is preferably 99.9 / 0.1 to 50/50, more preferably 99.9 / 0.1 to 55/45, particularly preferably 99. It can be obtained by adding and mixing the photocurable compound (B) so that the ratio becomes 0.9 / 0.1 to 60/40.
  • the organic solvent used in preparing the fluorine-containing cyclic olefin polymer composition is not particularly limited.
  • metaxylene hexafluoride, benzotrifluoride, fluorobenzene, difluorobenzene, hexafluorobenzene, trifluoromethylbenzene Fluorine-containing aromatic hydrocarbons such as bis (trifluoromethyl) benzene and meta-xylene hexafluoride, fluorine-containing aliphatic hydrocarbons such as perfluorohexane and perfluorooctane, fluorine-containing aliphatic cyclic hydrocarbons such as perfluorocyclodecalin, and perfluoro Fluorine-containing ethers such as -2-butyltetrahydrofuran, halogenated hydrocarbons such as chloroform, chlorobenzene, trichlorobenzene, tetrahydrofuran, dibutyl ether
  • solubility and film forming property it can select in consideration of solubility and film forming property. Moreover, these may be used independently and may be used in combination of 2 or more types.
  • a solvent having a boiling point of 70 ° C. or higher under atmospheric pressure is preferable. Thereby, it can suppress reliably that an evaporation rate becomes too quick. For this reason, it can suppress reliably that the deterioration of film thickness precision and the nonuniformity in the film
  • the fluorine-containing cyclic olefin polymer composition may contain other known components other than the fluorine-containing cyclic olefin polymer (A), the photocurable compound (B), and the photocuring initiator (C) as necessary. It can also be added. Examples of such components include anti-aging agents, leveling agents, wettability improvers, surfactants, modifiers such as plasticizers, stabilizers such as ultraviolet absorbers, preservatives, and antibacterial agents, and photosensitization. Agents, silane coupling agents and the like.
  • the mass ratio (A) / (B) of the fluorine-containing cyclic olefin polymer (A) and the photocurable compound (B) is 99.9 / 0.1 to 50/50. It is preferably 99.9 / 0.1 to 55/45, more preferably 99.9 / 0.1 to 60/40.
  • the photocurable compound (B) include a compound having a reactive double bond group and a ring-opening polymerizable compound capable of cationic polymerization.
  • a ring-opening polymerizable compound that can be cationically polymerized is selected from the viewpoint of suppressing deformation of the base material due to volume shrinkage after curing when used by coating and compatibility with the fluorine-containing cyclic olefin polymer (A). It is.
  • the compound having a reactive double bond group and the ring-opening polymerizable compound capable of cationic polymerization may have one or more reactive groups in one molecule. Moreover, you may mix and use the compound of a different reactive group number in arbitrary ratios in a photocurable compound (B). Furthermore, as the photocurable compound (B), a compound in which a compound having a reactive double bond group and a ring-opening polymerizable compound capable of cationic polymerization are mixed in an arbitrary ratio may be used. By these, it becomes possible to make the fluorine-containing cyclic olefin polymer composition of this embodiment closely adhere to a member made of another material with high dimensional accuracy. In addition, it is possible to suitably obtain a medical device as a base material for inspecting cells or cell culture capable of expressing the effects of the present embodiment.
  • examples of the ring-opening polymerizable compound capable of cationic polymerization include, for example, cyclohexene epoxide, dicyclopentadiene oxide, limonene dioxide, 4-vinylcyclohexene dioxide, and 3,4-epoxycyclohexylmethyl.
  • Epoxy compounds such as: 3-methyl-3- (butoxymethyl) oxetane, 3-methyl-3- (pentyloxymethyl) oxetane, 3-methyl-3- (hexyloxymethyl) oxetane 3-methyl-3- (2-ethylhexyloxymethyl) oxetane, 3-methyl-3- (octyloxymethyl) oxetane, 3-methyl-3- (decanyloxymethyl) oxetane, 3-methyl-3- (Dodecanyloxymethyl) oxetane, 3-methyl-3- (phenoxymethyl) oxetane, 3-ethyl-3- (butoxymethyl) oxetane, 3-ethyl-3- (pentyloxymethyl) oxetane, 3-ethyl-3 -(Hexyloxymethyl) oxetane, 3-ethyl-3- (2-ethylhexyloxymethyl)
  • Photocuring initiator (C) examples include a photocationic initiator that generates cations when irradiated with light, and a photoradical initiator that generates radicals when irradiated with light.
  • the amount of the photocuring initiator (C) used is preferably 0.05 parts by mass or more, more preferably 0.1 to 10 parts by mass with respect to 100 parts by mass of the photocurable compound (B). .
  • the photocation initiator that generates cations by light irradiation may be any compound that initiates cationic polymerization of the ring-opening polymerizable compounds capable of cationic polymerization by light irradiation.
  • a compound that reacts with light and releases a Lewis acid is preferable, such as an onium salt with an anion paired with an onium cation.
  • onium cations include diphenyliodonium, 4-methoxydiphenyliodonium, bis (4-methylphenyl) iodonium, bis (4-tert-butylphenyl) iodonium, bis (dodecylphenyl) iodonium, triphenylsulfonium, diphenyl -4-thiophenoxyphenylsulfonium, bis [4- (diphenylsulfonio) -phenyl] sulfide, bis [4- (di (4- (2-hydroxyethyl) phenyl) sulfonio) -phenyl] sulfide, ⁇ 5- 2,4- (cyclopentagenyl) [1,2,3,4,5,6- ⁇ - (methylethyl) benzene] -iron (1+) and the like.
  • photocationic initiators may be used alone or in combination of two or more.
  • anions include tetrafluoroborate, hexafluorophosphate, hexafluoroantimonate, hexafluoroarsenate, hexachloroantimonate, tetra (fluorophenyl) borate, tetra (difluorophenyl) borate, tetra (trifluoro).
  • Phenyl) borate tetra (tetrafluorophenyl) borate, tetra (pentafluorophenyl) borate, tetra (perfluorophenyl) borate, tetra (trifluoromethylphenyl) borate, tetra [di (trifluoromethyl) phenyl] borate, etc. It is done. Moreover, these photocationic initiators may be used alone or in combination of two or more.
  • photocation initiators that are more preferably used include, for example, Irgacure 250 (BASF), Irgacure 784 (BASF), Esacure 1064 (Lamberti), WPI-124 (Wako Pure Chemicals).
  • CYRAURE UVI 6990 manufactured by Union Carbide Japan
  • CPI-100P manufactured by Sun Apro
  • Adekaoptomer SP-172 made by ADEKA
  • Adeka optomer SP-170 made by ADEKA
  • Optomer SP-152 manufactured by ADEKA
  • Adeka optomer SP-150 manufactured by ADEKA
  • photocationic initiators may be used alone or in combination of two or more.
  • examples of the photoradical initiator that generates radicals upon irradiation with light include acetophenone, p-tert-butyltrichloroacetophenone, chloroacetophenone, 2,2-diethoxyacetophenone, Acetophenones such as hydroxyacetophenone, 2,2-dimethoxy-2′-phenylacetophenone, 2-aminoacetophenone, dialkylaminoacetophenone; benzoin, benzoin methyl ether, benzoin ethyl ether, benzoin isopropyl ether, benzoin isobutyl ether, 1-hydroxycyclohexyl Phenylketone, 2-hydroxy-2-methyl-1-phenyl-2-methylpropan-1-one, 1- (4-isopropylphenyl) -2-hydroxy-2 Benzoins such as methylpropan-1-one; benzophenone, benzoylbenzoic acid, methyl benzoylbenzoic acid, methyl benzoyl
  • photo radical initiators that are preferably used include, for example, Irgacure 651 (manufactured by BASF), Irgacure 184 (manufactured by BASF), Darocur 1173 (manufactured by BASF), benzophenone, 4-phenylbenzophenone, and Irga.
  • Cure 500 (made by BASF), Irgacure 2959 (made by BASF), Irgacure 127 (made by BASF), Irgacure 907 (made by BASF), Irgacure 369 (made by BASF), Irgacure 1300 (BASF) Irgacure 819 (BASF), Irgacure 1800 (BASF), Darocur TPO (BASF), Darocur 4265 (BASF), Irgacure OXE01 (BASF), Irgacure O E02 (BASF), Esacure KT55 (Lamberti), Esacure KIP150 (Lamberti), Esacure KIP100F (Lamberti), Esacure KT37 (Lamberti), Esacure KTO46 (Lamberti) ), Esacure 1001M (Lamberti), Esacure KIP / EM (Lamberti), Esacure DP250 (Lamberti
  • radical photopolymerization initiator that is preferably used, Irgacure 184 (manufactured by BASF), Darocur 1173 (manufactured by BASF), Irgacure 500 (manufactured by BASF), Irgacure 819 (manufactured by BASF) ), Darocur TPO (BASF), Esacure KIP100F (Lamberti), Esacure KT37 (Lamberti) and Esacure KTO46 (Lamberti). These photo radical initiators may be used alone or in combination of two or more.
  • the photocurable compound (B) and the photocuring initiator (C) can be used as a photocurable composition containing them.
  • the photocurable composition can be obtained by dissolving the photocuring initiator (C) in the photocurable compound (B), and the photocurable compound (B) and the photocuring initiator (C) together. It can also be obtained by dissolving in an organic solvent.
  • other known components as a third component as required, for example, anti-aging agents, leveling agents, wettability improvers, surfactants, modifiers such as plasticizers, ultraviolet absorbers, preservatives, antibacterial agents You may add stabilizers, such as an agent, a photosensitizer, a silane coupling agent.
  • the organic solvent used for preparing the photocurable composition is not particularly limited.
  • Fluorine-containing aromatic hydrocarbons such as bis (trifluoromethyl) benzene and metaxylene hexafluoride, fluorine-containing aliphatic hydrocarbons such as perfluorohexane and perfluorooctane, fluorine-containing aliphatic cyclic hydrocarbons such as perfluorocyclodecalin, Fluorine-containing ethers such as perfluoro-2-butyltetrahydrofuran, halogenated hydrocarbons such as chloroform, chlorobenzene, trichlorobenzene, tetrahydrofuran, dibutyl ether, 1,2-dimethoxyethane, dioxa , Ethers such as propylene glycol monomethyl ether, dipropylene glycol monomethyl ether and propylene glycol monomethyl ether acetate, esters such as ethyl acetate, propyl acetate and butyl acetate, or ketones such as
  • solubility and film-forming property it can be selected in consideration of solubility and film-forming property, and may be the same as or different from the organic solvent for dissolving the fluorine-containing cyclic olefin polymer (A), or may be used in combination of two or more.
  • a solvent having a boiling point of 70 ° C. or higher under atmospheric pressure is preferable from the viewpoint of film forming properties.
  • the fluorine-containing cyclic olefin polymer composition in the present embodiment uses a specific fluorine-containing cyclic olefin polymer having a hydrocarbon structure in the main chain and a fluorine-containing aliphatic ring structure in the side chain, it has a large polarity and is photocurable.
  • a transparent substrate can also be produced in a form after curing with good compatibility with the compound and the photocuring initiator.
  • the material is based on a fluorine-containing cyclic olefin polymer, the water contact angle on the substrate surface can be maintained at 70 ° to 160 °.
  • inspection of various cells can proliferate, the adhesion
  • the fluorine-containing cyclic olefin polymer composition is in a form after curing, and the photocurable compound forms a three-dimensional network structure, so that the surface hardness can be modified to be hard. For this reason, when it mounts on a medical instrument etc., the damage property can be improved, and when using as a base material for a cell culture or a test
  • the varnish prepared by the above method is filtered through a filter.
  • polymer insolubles, gels, foreign substances, and the like can be greatly reduced from the varnish, and the surface of the substrate as a culture instrument for culturing cells can be made smooth and the hydrophobic surface properties can be uniformly formed over the entire surface.
  • the opening of the filtration filter is preferably 10 ⁇ m to 0.05 ⁇ m, particularly preferably 10 ⁇ m to 0.1 ⁇ m, and further preferably 5 ⁇ m to 0.1 ⁇ m.
  • the filtration process may be a multistage process in which the polymer solution is sent from a filter with a large pore size to a small filter, or a single process in which the varnish is sent directly to a filter with a small pore size.
  • the material of the filter may be made of an organic material such as Teflon (registered trademark), PP, PES, or cellulose, or may be made of an inorganic material such as glass fiber or metal. You can choose from process adaptability.
  • the filtration temperature is selected in the range considering filter performance, solution viscosity, thermal stability of the photocurable compound, and polymer solubility, and is preferably ⁇ 10 to 200 ° C., preferably 0 ° C. to 150 ° C. It is more preferable that the temperature is in the range of room temperature to 100 ° C.
  • a film is formed from the varnish.
  • a polymer solution (varnish) is applied on the support by a method such as table coating, spin coating, dip coating, die coating, spray coating, bar coating, roll coating, curtain flow coating, etc. Apply and form a film.
  • Supports include metal materials such as stainless steel and silicon, inorganic materials such as glass and quartz, polyimide, polyamide, polyester, polycarbonate, polyphenylene ether, polyphenylene sulfide, polyacrylate, polymethacrylate, polyacrylate, epoxy resin, and silicone resin. The thing which consists of resin materials, etc. can be mentioned.
  • the coating film may be dried by placing a substrate on which a solution is cast on a heating plate and drying by heating, or by placing a support in which the solution is cast in a heated drying furnace, Hot air heated with a gas such as air or nitrogen may be applied to the coating film and dried, or may be dried using a process combining these.
  • the drying temperature is preferably 10 to 250 ° C., more preferably 20 to 220 ° C., particularly preferably 30 to 200 ° C., and characteristics of the varnish, film thickness, and heat resistance of the substrate Selected in consideration of sex.
  • the coating film may be dried by setting a multi-stage drying temperature with two or more temperature settings. The time for drying the coating film can be selected from the conditions considering the boiling point of the varnish solvent, the film thickness of the film, and the process requirements. Thereby, a film is formed on the support.
  • Irradiation light is not particularly limited as long as energy that causes radical reaction or ionic reaction can be given by irradiating light to the photocuring initiator (C).
  • this light source light having a wavelength of 400 nm or less, for example, a low pressure mercury lamp, a medium pressure mercury lamp, a high pressure mercury lamp, an ultrahigh pressure mercury lamp, a chemical lamp, a black light lamp, a microwave excitation mercury lamp and a metal halide lamp, i-line, G-line, KrF excimer Laser light or ArF excimer laser light can be used.
  • the irradiation intensity to the film made of the fluorine-containing cyclic olefin polymer composition is controlled for each target product and is not particularly limited.
  • the light irradiation intensity of the light wavelength region effective for activation of the photocuring initiator (C) described later (which varies depending on the photocuring initiator (C), but, for example, 300 to 420 nm light) is 0.1. It is preferably ⁇ 100 mW / cm 2 . By setting the irradiation intensity to 0.1 mW / cm 2 or more, it is possible to reliably suppress the reaction time from becoming too long.
  • the irradiation intensity 100 mW / cm 2 or less, the heat radiated from the lamp and the decrease in the cohesive force of the cured product resulting from the heat generated during polymerization of the composition, yellowing, or the support It is possible to more reliably suppress the occurrence of deterioration.
  • the light irradiation time is controlled for each target product and is not particularly limited.
  • the integrated light amount expressed as the product of the light irradiation intensity and the light irradiation time in the light wavelength region is calculated.
  • it can be set to 3 to 1000 mJ / cm 2 . More preferably, it is 5 to 500 mJ / cm 2 , and particularly preferably 10 to 300 mJ / cm 2 .
  • active species can be sufficiently generated from the photopolymerization initiator (C), and the properties of the obtained cured product can be improved.
  • it can contribute to productivity improvement by making integrated light quantity below into the said upper limit.
  • the temperature when curing the curable resin by irradiating light is usually preferably 0 to 150 ° C., more preferably 0 to 60 ° C.
  • the substrate can be produced by, for example, peeling the film from the support. Peeling of the film from the support may be performed by applying a commercially available tape to the end of the film and applying a stress to the film to release the liquid, such as water or a solvent, at the contact interface between the film and the support. The film may be peeled off by utilizing the difference in surface tension between the support surface and the contact surface of the film.
  • the support and the fluorine-containing cyclic olefin polymer of this embodiment are used.
  • the base material comprised by the coating film which consists of can be manufactured.
  • the support is particularly preferably selected from organic materials such as PET and acrylic resin, or inorganic materials such as glass and silicon.
  • the film thickness of the cured film obtained by forming a fluorine-containing cyclic olefin polymer composition on a support, heating, and then curing by irradiation with light is not particularly limited, but is preferably 1 ⁇ m to 10 mm. More preferably, it is 5 ⁇ m to 1 mm, and even more preferably 10 ⁇ m to 0.5 mm. Within these ranges, a self-supporting single layer film or a coating film can be obtained. Moreover, the volume shrinkage at the time of photocuring is small, and the deformation of the substrate can be surely suppressed. Moreover, it is a suitable range from a viewpoint of producing medical instruments used for cell culture, such as a culture bag, a culture plate, and a culture dish. Moreover, the film thickness of a film can be set according to the process which produces those instruments.
  • an uneven structure made of the fluorine-containing cyclic olefin polymer composition of the present embodiment is formed on one surface for holding or contacting cells.
  • a material may be provided, and is particularly preferably used to realize a water contact angle of 121 ° to 160 °.
  • the size of the concavo-convex structure is obtained by shaping a pattern having a convex-convex distance of 40 nm to 90 ⁇ m, preferably 60 nm to 80 ⁇ m, particularly preferably 80 nm to 70 ⁇ m, so that the water contact angle is within a desired range.
  • the shape is not particularly limited.
  • the concavo-convex structure may be formed by various methods such as screen printing, embossing, submicron imprint, and nanoimprint.
  • the general formula (1) which is the fluorine-containing cyclic olefin polymer composition exemplified above, for example, in various patterns of a mold made of quartz, silicon, nickel, resist or the like.
  • a solution casting method in which a varnish obtained by dissolving a photocurable compound (B) and a photocuring initiator (C) in an organic solvent is applied. Can do.
  • the fluorine-containing cyclic olefin polymer (A) represented by the general formula (1), the photocurable compound (B), and the photocuring initiator (C) are dissolved in an organic solvent.
  • the solution obtained by letting it pass is filtered through a filter to prepare a varnish.
  • the pattern of the mold was transferred by bringing the solution (varnish) composed of the above-mentioned fluorine-containing cyclic olefin polymer composition into contact with the pattern surface of the mold on which the concavo-convex structure was formed, evaporating the solvent and irradiating with UV to peel it off.
  • a base material having an uneven structure can be obtained.
  • the method includes (1) a step of applying a solution (varnish) comprising a fluorine-containing cyclic olefin polymer composition and an organic solvent to the mold surface having a fine pattern, and a step of evaporating the solvent from the solution.
  • a solution (varnish) comprising a fluorine-containing cyclic olefin polymer composition and an organic solvent to a support (base material), and pressing the upper surface of the coating layer with a mold surface on which a fine pattern is formed.
  • the solvent can be evaporated from the coating layer and then pressed with a mold.
  • the material of the base material of the mold in which the fine pattern is formed on the surface used for the production of the base material on which the uneven structure of the present embodiment is formed, the method of contacting the varnish composed of the mold and the fluorine-containing cyclic olefin polymer composition, and The method for drying the coating film is not particularly limited, and can be carried out in the same manner as the method for producing a substrate on which an uneven structure is formed from a varnish obtained by dissolving the above-mentioned fluorine-containing cyclic olefin polymer in an organic solvent.
  • a UV irradiation step is performed on the fluorine-containing cyclic olefin polymer composition formed on the mold to cure the photocurable compound (B). Further, the UV irradiation process may also be sterilized.
  • Each condition of the light source, the irradiation intensity, the irradiation time, and the temperature at the time of irradiation in the UV irradiation step is not particularly limited, and can be performed by the same method as the method for producing a substrate from the above-described fluorine-containing cyclic olefin polymer composition. .
  • the base material can be produced by peeling the film from the mold after UV irradiation. Peeling of the film from the support may be performed by applying a commercially available tape to the end of the film and applying a stress to the film to release the liquid, such as water or a solvent, at the contact interface between the film and the support. The film may be peeled off by utilizing the difference in surface tension between the support surface and the contact surface of the film.
  • the process up to the drying step of the coating film coated on the support is performed among the above steps.
  • the fluorine-containing cyclic olefin polymer composition is coated on the support.
  • the fluorine-containing cyclic olefin polymer composition of this embodiment is placed on the support by bringing the pattern surface of the mold into contact with the coating surface of the fluorine-containing cyclic olefin polymer composition, pressing as necessary, UV irradiation, and peeling.
  • the base material which formed the coating film which formed the uneven structure which consists of can be manufactured.
  • the support is particularly preferably selected from organic materials such as polyethylene terephthalate (PET) and acrylic resin, or inorganic materials such as glass, silicon, and aluminum.
  • the pressure at the time of bringing the pattern surface of the mold into contact with the coated surface of the fluorine-containing cyclic olefin polymer composition is 0.01 to 5 MPa, preferably 0.05 to 4 MPa, more preferably 0.1 to 3 MPa.
  • UV irradiation may be performed while pressure bonding, or UV irradiation may be performed after pressure bonding using a pressure bonding apparatus such as a laminator.
  • the film thickness of the cured film obtained by forming a fluorine-containing cyclic olefin polymer composition on a support, heating, press-bonding as necessary, and curing by irradiation with light is not particularly limited, but preferably Is 1 ⁇ m to 10 mm, more preferably 5 ⁇ m to 1 mm, and still more preferably 10 ⁇ m to 0.5 mm. Within these ranges, a self-supporting monolayer film or a coating film on the support can be obtained. Moreover, volume shrinkage at the time of photocuring is small, and deformation of the substrate can be reliably suppressed while transferring the pattern with high accuracy. Moreover, it is a suitable range from a viewpoint of producing medical instruments used for cell culture, such as a culture bag, a culture plate, and a culture dish. Furthermore, the film thickness of the film can be set in accordance with the process for producing these instruments.
  • a medical device in the form of a bag, a tube, or the like can be produced by a heat sealing method or a sealing method using an adhesive.
  • the film or sheet of the present embodiment is applied to the surface of a base material that is made of other materials such as polystyrene, polyethylene, metal, and holds or contacts cells of a medical device such as a petri dish, a multi-well plate, and a flask.
  • a pasted medical device can also be manufactured.
  • the cell culturing method includes a step of seeding cells on one surface of a base material constituting the medical device according to the present embodiment so as to be in contact with or held on the one surface, and culturing and culturing the cells. A step of obtaining cells, and a step of adding a buffer solution on the one surface to suspend the cultured cells from the one surface. Thereby, the cultured cells can be detached from the base material without damage, and a cell culture capable of efficient proliferation can be realized.
  • floating cells can be cultured in a stationary state after seeding the cells in a medical instrument.
  • one surface that contacts or holds the cells of the substrate is constituted by the fluorine-containing cyclic olefin polymer or the fluorine-containing cyclic olefin polymer composition according to this embodiment, and in particular, the water contact angle of the one surface.
  • the cells may be cultured with vibration, cultured while flowing the culture solution, or cultured with stirring, and there is no particular limitation.
  • a culture method for example, a stationary culture, a rotary culture, a microcarrier culture, a swivel culture, a spheroid culture, an in-gel culture using a medical device in which the substrate according to the present embodiment is processed into a container according to various culture methods.
  • Cell culture can be carried out by methods such as culture, three-dimensional carrier culture, and pressure circulation culture. Among these, it is preferably selected in consideration of cell characteristics, culture form, or productivity, and may be used alone or in combination of two or more.
  • the temperature in these various culture methods is preferably 35 to 40 ° C., more preferably 36 to 38 ° C., and particularly preferably 36.5 to 37.5 ° C.
  • the pressure is preferably 0.02 to 0.5 MPa, more preferably 0.05 to 0.3 MPa, and particularly preferably 0.08 to 0.2 MPa.
  • the hydrogen ion index (pH) is preferably 8 to 6, and more preferably 7.5 to 6.5.
  • Sterilization methods when using the medical device according to this embodiment as a culture device include, for example, wet sterilization immersed in alcohol, etc., gas sterilization with ethylene oxide, ultraviolet sterilization, radiation sterilization, autoclave sterilization with high-temperature, high-pressure steam, and direct Dry heat sterilization used for items that should not be exposed to steam, filter sterilization suitable for base materials containing components that are unstable to heat can be raised.
  • wet sterilization immersed in alcohol, etc. gas sterilization with ethylene oxide, ultraviolet sterilization, radiation sterilization, autoclave sterilization with high-temperature, high-pressure steam, and direct Dry heat sterilization used for items that should not be exposed to steam, filter sterilization suitable for base materials containing components that are unstable to heat can be raised.
  • filter sterilization suitable for base materials containing components that are unstable to heat can be raised.
  • two or more sterilization methods may be used in combination.
  • the type of medium used for the culture can be selected according to the characteristics of the cell and the culture form, regardless of the form of liquid, gel, solid (powder), for example, BME medium, MEM medium, DMEM medium, 199 medium, RPMI medium, Ham F10 medium, Ham F12 medium, MCDB104, 107, 131, 151, 170, 202 medium, RITC80-7 medium, MCDB153 medium and the like. These may be used singly or in combination of two or more, and may be further used by mixing with serum derived from organisms such as humans, dogs, rats, mice, birds, pigs and cows.
  • collagen such as laminin-5, laminin-511, laminin-521, fluorine-containing cyclic olefin polymer of the present embodiment, or fluorine-containing cyclic An olefin polymer composition or the like may be applied to the inner wall of the substrate of the present embodiment, a part of one surface that contacts or holds cells, or the entire surface. You may use these individually or in mixture of 2 or more types.
  • a cell culture solution or a buffer solution can be selected according to the type of cell and the application of the cultured cell, and a fluorescent dye or a cell immobilization reagent may be freely selected.
  • any buffer that does not change the hydrogen ion index (pH) in the system during cell growth may be used.
  • phosphate buffer phosphate buffered saline, hydrochloric acid buffer, acetate buffer, citrate buffer, borate buffer, tartaric acid buffer, Tris buffer, Tris hydrochloride buffer, ethylenediaminetetraacetic acid buffer Solution, Tris EDTA buffer, Tris acetate EDTA buffer, Tris borate EDTA buffer, Concentrated SSC buffer, Concentrated SSPE buffer, Sodium citrate buffer, Carbonate bicarbonate buffer, Sodium borate buffer, Maleic acid buffer The solution may be used alone or containing an enzyme such as trypsin, pepsin, rennet, chymotrypsin, elastase, NADPH dehydrogenase or NADH dehydrogenase.
  • enzymes such as trypsin, pepsin, rennet, chymotrypsin, elastase, NADPH dehydrogenase or NADH dehydrogenase.
  • phosphate buffer phosphate buffered saline, Tris hydrochloride buffer, ethylenediaminetetraacetic acid buffer, Tris EDTA buffer, Tris acetate EDTA buffer, trisborate EDTA buffer, concentrated SSC buffer, concentrated SSPE buffer, sodium citrate buffer, carbonate bicarbonate buffer, sodium borate buffer, etc. alone or enzymes such as trypsin, pepsin, rennet, chymotrypsin, elastase, NADPH dehydrogenase or NADH dehydrogenase May be used.
  • the present inventor for example, in the process of culturing mouse embryo fibroblasts and collecting cells for examination using the culture instrument of the present embodiment, for example, phosphate buffered saline
  • a buffer solution such as was added
  • cells were found to detach from the substrate in a state of floating naturally. That is, according to the present embodiment, by culturing cells using a culture instrument comprising a specific fluorine-containing cyclic olefin polymer or a fluorine-containing cyclic olefin polymer composition, the cells proliferate while forming colonies.
  • a culture instrument comprising a specific fluorine-containing cyclic olefin polymer or a fluorine-containing cyclic olefin polymer composition
  • Weight average molecular weight (Mw), molecular weight distribution (Mw / Mn) The weight average molecular weight (Mw) and number average molecular weight (Mn) of the polymer dissolved in tetrahydrofuran (THF) or trifluoromethylbenzene (TFT) using gel permeation chromatography (GPC) under the following conditions was measured with a molecular weight calibrated by polystyrene standards.
  • Detector RI-2031 and 875-UV manufactured by JASCO Corporation or Model 270 manufactured by Viscotec, series connection column: Shodex K-806M, 804, 803, 802.5, column temperature: 40 ° C., flow rate: 1.0 ml / min Sample concentration: 3.0-9.0 mg / ml
  • the cured coating film was cured by irradiating LED light having a wavelength of 365 nm using a UV irradiation device manufactured by CCS as a light source or 375 nm LED light using a UV-type imprinting device manufactured by Engineering System.
  • BALB / 3T3 cells mouse embryo fibroblasts (hereinafter abbreviated as BALB / 3T3 cells), 10% calf serum (Calf Bovine Serum, CBS), high glucose, D-MEM medium (L-glutamine, phenol red, pyruvate) All subcultures and cell proliferation tests were performed in a solution containing sodium (containing sodium) (hereinafter also referred to as BALB / 3T3 cell solution).
  • BALB / 3T3 cell solution a solution containing sodium (containing sodium)
  • the frozen cell suspension was thawed by immersing in a 37 ° C. water bath, and 10% calf serum D-MEM medium cooled on ice was added to the thawed cell suspension and centrifuged. After centrifugation, the supernatant was removed and the cell mass was loosened by tapping, and 10% calf serum D-MEM medium kept warm in a 37 ° C. water bath was added. The number of cells was counted with a hemocytometer, a cell suspension was prepared using 10% calf serum D-MEM medium kept warm in a water bath, the cells were seeded in a culture flask, and then cultured in a humidified incubator.
  • a cell suspension was prepared with 10% calf serum D-MEM medium, the cells were seeded in a culture flask, and cultured in a humidified incubator. In the cell growth evaluation described in the Examples, those having passage numbers 3 to 20 were used.
  • a circular culture film cut to a diameter of 15 mm is placed in a hole of a TCPS multiwell plate (Corning), 70% ethanol aqueous solution is added and immersed for 40 minutes to 1 hour, then the 70% ethanol aqueous solution is removed and Dulbecco PBS It was immersed in ( ⁇ ) for 15 to 40 minutes. Next, PBS (-) was removed, the culture device was turned over, and the same operation was performed to sterilize the front and back surfaces of the culture device. After completion of the sterilization treatment, it was dried overnight in a clean bench.
  • BALB / 3T3 cells which were about 60% confluent in a 25 cm 2 culture flask, were detached by treatment with 0.025 w / v% trypsin-EDTA in the same manner as in the above-described cell passage operation. The number of cells was counted with a hemocytometer, and a cell suspension of 7500 cells / mL was prepared with 10% calf serum D-MEM medium.
  • the obtained polymer 1 contained a repeating structural unit represented by the general formula (1).
  • the hydrogenation rate was 100%, the weight average molecular weight (Mw) was 83000, the molecular weight distribution (Mw / Mn) was 1.73, and the glass transition temperature was 109 ° C.
  • Culture film 3 A culture film 3 having a coating film thickness of 5 ⁇ m was prepared in the same manner as in Production Example 3 except that the coating substrate was changed to an acrylic film (Acryprene, Mitsubishi Rayon) and the drying conditions after coating were changed to 90 ° C. and 40 minutes. Produced. The water contact angle of the film was 94.1 ° in 15 seconds. Furthermore, no change was observed in the time until the water droplet disappeared at 88.0 ° after 10 minutes.
  • the solution was filtered through a filter to prepare a methyl isobutyl ketone solution of polymer 1, a photocurable compound and a photocuring initiator.
  • a PET film Limirror, Toray
  • the cured film was cured by irradiating with UV to produce a culture film 4 having a coating thickness of 5 ⁇ m.
  • the water contact angle of the coated surface was 88.1 ° in 15 seconds. Furthermore, no change was observed in the time until the water droplet disappeared at 84.9 ° after 10 minutes.
  • Culture film 6 A culture film 6 having a coating film thickness of 5 ⁇ m was prepared in the same manner as in Production Example 6 except that the coating substrate was changed to an acrylic film (Acryprene, Mitsubishi Rayon) and the drying conditions after coating were changed to 90 ° C. and 40 minutes. Produced. The water contact angle of the film was 84.3 ° in 15 seconds. Furthermore, there was no change in the time until the water droplet disappeared after 8 minutes at 81.0 °.
  • Example 1 Place the sterilized culture film 1 produced in Production Example 2 on the bottom of the hole of the 24-well TCPS multiwell plate and attach it to the SUS O-ring (11 mm inner diameter) with sterilized grease (Toray Dow Corning). After fixing, the BALB / 3T3 cell solution (1 mL) was seeded on the culture film 1. The same operation was performed nine times to prepare nine samples by the number of specimens. Then, the lid was capped and moved to a humidified incubator, and the culture was started under sterilized air with an internal temperature of 37 ° C. and a carbon dioxide gas concentration of 5%.
  • SUS O-ring 11 mm inner diameter
  • sterilized grease Toray Dow Corning
  • the absorbance after 1 day was 0.10 ⁇ 0.02, 0.35 ⁇ 0.08 after 3 days, and 0.73 ⁇ after 7 days. 0.24.
  • the absorbance increased linearly with respect to the number of days elapsed, and no change was observed in the proliferation even after 7 days.
  • the cells cultured for 7 days were observed with a microscope, the cells grew in the form of a sheet in the form of a colony in the thickness direction, and the sheet-like form was maintained when phosphate buffered saline was added. Floated in the state.
  • Example 2 The sterilized culture film 2 produced in Production Example 3 was fixed to a 24-well TCPS multiwell plate in the same manner as in Example 1, and seeded with a thawed BALB / 3T3 cell solution (1 mL). The same operation was repeated 9 times to prepare 9 samples by the number of specimens. Thereafter, the lid was put on, moved to an incubator, and the culture was started under sterilized air with an internal temperature of 37 ° C. and a carbon dioxide concentration of 5%.
  • the absorbance after 1 day was 0.11 ⁇ 0.02, 0.33 ⁇ 0.05 after 3 days, and 0.78 ⁇ after 7 days. It was 0.13.
  • the absorbance increased linearly with respect to the number of days elapsed, and no change was observed in the proliferation even after 7 days.
  • the cells cultured for 7 days were observed with a microscope, the cells grew in the form of a sheet in the form of a colony in the thickness direction, and the sheet-like form was maintained when phosphate buffered saline was added. Floated in the state.
  • Example 3 The sterilized culture film 3 produced in Production Example 4 was fixed to a 24-well TCPS multiwell plate in the same manner as in Example 1, and seeded with a thawed BALB / 3T3 cell solution (1 mL). The same operation was repeated 9 times to prepare 9 samples by the number of specimens. Thereafter, the lid was put on, moved to an incubator, and the culture was started under sterilized air with an internal temperature of 37 ° C. and a carbon dioxide concentration of 5%.
  • the absorbance after 1 day was 0.11 ⁇ 0.04, 0.38 ⁇ 0.04 after 3 days, and 0.83 ⁇ after 7 days. It was 0.11. The absorbance increased linearly with respect to the number of days elapsed, and no change was observed in the proliferation even after 7 days.
  • the cells cultured for 7 days were observed with a microscope, the cells grew in the form of a sheet in the form of a colony in the thickness direction, and the sheet-like form was maintained when phosphate buffered saline was added. Floated in the state.
  • Example 4 The sterilized culture film 4 produced in Production Example 5 was fixed to a 24-well TCPS multiwell plate in the same manner as in Example 1, and seeded with the thawed BALB / 3T3 cell solution (1 mL). The same operation was repeated 9 times to prepare 9 samples by the number of specimens. Thereafter, the lid was put on, moved to an incubator, and the culture was started under sterilized air with an internal temperature of 37 ° C. and a carbon dioxide concentration of 5%.
  • the absorbance after 1 day was 0.11 ⁇ 0.03, 0.23 ⁇ 0.04 after 3 days, and 0.51 ⁇ after 7 days. It was 0.11. The absorbance increased linearly with respect to the number of days elapsed, and no change was observed in the proliferation even after 7 days.
  • the cells cultured for 7 days were observed with a microscope, the cells grew in the form of a sheet in the form of a colony in the thickness direction, and the sheet-like form was maintained when phosphate buffered saline was added. Floated in the state.
  • Example 5 The sterilized culture film 5 produced in Production Example 6 was fixed to a 24-well TCPS multiwell plate in the same manner as in Example 1, and seeded with a thawed BALB / 3T3 cell solution (1 mL). The same operation was repeated 9 times to prepare 9 samples by the number of specimens. Thereafter, the lid was put on, moved to an incubator, and the culture was started under sterilized air with an internal temperature of 37 ° C. and a carbon dioxide concentration of 5%.
  • the absorbance after 1 day was 0.11 ⁇ 0.02, 0.27 ⁇ 0.04 after 3 days, and 0.55 ⁇ after 7 days. It was 0.18.
  • the absorbance increased linearly with respect to the number of days elapsed, and no change was observed in the proliferation even after 7 days.
  • the cells cultured for 7 days were observed with a microscope, the cells grew in the form of a sheet in the form of a colony in the thickness direction, and the sheet-like form was maintained when phosphate buffered saline was added. Floated in the state.
  • Example 6 The sterilized culture film 6 produced in Production Example 7 was fixed to a 24-well TCPS multiwell plate in the same manner as in Example 1, and seeded with a thawed BALB / 3T3 cell solution (1 mL). The same operation was repeated 9 times to prepare 9 samples by the number of specimens. Thereafter, the lid was put on, moved to an incubator, and the culture was started under sterilized air with an internal temperature of 37 ° C. and a carbon dioxide concentration of 5%.
  • the absorbance after 1 day was 0.11 ⁇ 0.04, 0.23 ⁇ 0.02 after 3 days, and 0.53 ⁇ after 7 days. It was 0.13.
  • the absorbance increased linearly with respect to the number of days elapsed, and no change was observed in the proliferation even after 7 days.
  • the cells cultured for 7 days were observed with a microscope, the cells grew in the form of a sheet in the form of a colony in the thickness direction, and the sheet-like form was maintained when phosphate buffered saline was added. Floated in the state.
  • Example 7 Place the sterilized culture film 7 produced in Production Example 8 on the bottom of the hole of the 24-hole TCPS multiwell plate and fix it in close contact with the SUS O-ring (inner diameter 16 mm) with sterilized grease (Toray Dow Corning). After that, thawed BALB / 3T3 cell solution (1 mL) was seeded on the culture film 7. The same operation was performed nine times to prepare nine samples by the number of specimens. Thereafter, the lid was put on, moved to an incubator, and the culture was started under sterilized air with an internal temperature of 37 ° C. and a carbon dioxide concentration of 5%.
  • SUS O-ring inner diameter 16 mm
  • sterilized grease Toray Dow Corning
  • the absorbance after 1 day was 0.11 ⁇ 0.05, 0.42 ⁇ 0.15 after 3 days, and 0.96 ⁇ after 7 days. 0.06.
  • the absorbance increased linearly with respect to the number of days elapsed, and no change was observed in the proliferation even after 7 days.
  • the cells cultured for 7 days were observed with a microscope, the cells grew in the form of a sheet in the form of a colony in the thickness direction, and the sheet-like form was maintained when phosphate buffered saline was added. Floated in the state.
  • Example 8 Same as Production Example 1 except that the type of fluorine-containing cyclic olefin monomer was changed to 5,6-difluoro-5-pentafluoroethyl-6-trifluoromethylbicyclo [2.2.1] hept-2-ene 97 g of polymer 2 was obtained by a simple method.
  • the obtained polymer 2 contained a repeating structural unit represented by the general formula (1).
  • the hydrogenation rate was 100%
  • the weight average molecular weight (Mw) was 91000
  • the molecular weight distribution (Mw / Mn) was 1.93
  • the glass transition temperature was 104 ° C.
  • a culture film 8 having a thickness of 55 ⁇ m was produced by the same method as in Production Example 2.
  • the water contact angle of the film was 101.6 ° in 15 seconds. Furthermore, it was 99.7 ° after 10 minutes, and no change was observed in the time until the water droplets disappeared.
  • the culture of BALB / 3T3 cells performed in the same manner as in Example 1 using the culture film 8 has an absorbance of 0.10 ⁇ 0.01 after 1 day in the evaluation of cell proliferation by the WST-8 method. It was 0.33 ⁇ 0.05 after 7 days and 0.74 ⁇ 0.17 after 7 days. The absorbance increased linearly with respect to the number of days elapsed, and no change was observed in the proliferation even after 7 days.
  • the cells cultured for 7 days were observed with a microscope, the cells grew in the form of a sheet in the form of a colony in the thickness direction, and the sheet-like form was maintained when phosphate buffered saline was added. Floated in the state.
  • the culture film 9 was produced by coating a PET film (Lumilar, Toray). The water contact angle of the film was 95.3 ° in 15 seconds. Furthermore, it was 94.9 ° after 10 minutes, and no change was observed in the time until the water droplets disappeared.
  • the culture of BALB / 3T3 cells carried out by the culture film 9 in the same manner as in Example 1 has an absorbance of 0.10 ⁇ 0.01 after 1 day in the evaluation of cell proliferation by the WST-8 method. It was 0.25 ⁇ 0.07 after elapse of day, and 0.60 ⁇ 0.13 after elapse of 7 days. The absorbance increased linearly with respect to the number of days elapsed, and no change was observed in the proliferation even after 7 days.
  • the cells cultured for 7 days were observed with a microscope, the cells grew in the form of a sheet in the form of a colony in the thickness direction, and the sheet-like form was maintained when phosphate buffered saline was added. Floated in the state.
  • Example 10 Production examples except that the type of fluorine-containing cyclic olefin monomer was changed to 5,6-difluoro-5-heptafluoro-iso-propyl-6-trifluoromethylbicyclo [2.2.1] hept-2-ene
  • 98 g of Polymer 3 was obtained.
  • the obtained polymer 3 contained a repeating structural unit represented by the general formula (1).
  • the hydrogenation rate was 100%
  • the weight average molecular weight (Mw) was 142000
  • the molecular weight distribution (Mw / Mn) was 1.40
  • the glass transition temperature was 137 ° C.
  • a culture film 10 having a thickness of 58 ⁇ m was produced in the same manner as in Production Example 2.
  • the water contact angle of the film was 103.9 ° in 15 seconds. Furthermore, there was no change in the time until the water droplet disappeared at 102.2 ° after 10 minutes.
  • the culture of BALB / 3T3 cells performed in the same manner as in Example 1 using the culture film 10 has an absorbance of 0.11 ⁇ 0.03 after 1 day in the evaluation of cell proliferation by the WST-8 method. It was 0.32 ⁇ 0.03 after elapse of day, and 0.79 ⁇ 0.21 after elapse of 7 days. The absorbance increased linearly with respect to the number of days elapsed, and no change was observed in the proliferation even after 7 days.
  • the cells cultured for 7 days were observed with a microscope, the cells grew in the form of a sheet in the form of a colony in the thickness direction, and the sheet-like form was maintained when phosphate buffered saline was added. Floated in the state.
  • Example 11 The culture film 13 produced in Production Example 9 is sterilized, the pattern surface is placed on the bottom of the hole of the 24-hole TCPS multiwell plate, and an SUS O-ring (inner diameter 11 mm) is prepared with sterilized grease (Toray Dow Corning).
  • the BALB / 3T3 cell solution (1 mL) was seeded on the pattern surface of the culture film 13. The same operation was performed nine times to prepare nine samples by the number of specimens. Then, the lid was capped and moved to a humidified incubator, and the culture was started under sterilized air with an internal temperature of 37 ° C. and a carbon dioxide gas concentration of 5%.
  • the absorbance after 1 day was 0.10 ⁇ 0.03, 0.33 ⁇ 0.06 after 3 days, and 0.68 ⁇ after 7 days. 0.09. The absorbance increased linearly with respect to the number of days elapsed, and no change was observed in the proliferation even after 7 days.
  • the cells cultured for 7 days were observed with a microscope, the cells proliferated in the form of colonies in the thickness direction, and when phosphate-buffered saline was added, the cells floated while maintaining the formation of the colonies .
  • Example 12 The culture film 14 produced in Production Example 10 is sterilized, fixed to a 24-well TCPS multiwell plate in the same manner as in Example 1, and the thawed BALB / 3T3 cell solution (1 mL) is applied to the pattern surface of the culture film 14 Sowing. The same operation was repeated 9 times to prepare 9 samples by the number of specimens. Thereafter, the lid was put on, moved to an incubator, and the culture was started under sterilized air with an internal temperature of 37 ° C. and a carbon dioxide concentration of 5%. In the evaluation of cell proliferation by the WST-8 method, the absorbance after 1 day was 0.10 ⁇ 0.01, 0.33 ⁇ 0.06 after 3 days, and 0.67 ⁇ after 7 days. It was 0.10.
  • the absorbance increased linearly with respect to the number of days elapsed, and no change was observed in the proliferation even after 7 days.
  • the cells cultured for 7 days were observed with a microscope, the cells proliferated in the form of colonies in the thickness direction, and when phosphate-buffered saline was added, the cells floated while maintaining the formation of the colonies .
  • Example 13 The culture film 15 produced in Production Example 11 is sterilized, fixed to a 24-well TCPS multiwell plate in the same manner as in Example 1, and the thawed BALB / 3T3 cell solution (1 mL) is applied to the pattern surface of the culture film 15 Sowing. The same operation was repeated 9 times to prepare 9 samples by the number of specimens. Thereafter, the lid was put on, moved to an incubator, and the culture was started under sterilized air with an internal temperature of 37 ° C. and a carbon dioxide concentration of 5%. In the evaluation of cell proliferation by the WST-8 method, the absorbance after 1 day was 0.10 ⁇ 0.02, 0.34 ⁇ 0.03 after 3 days, and 0.70 ⁇ after 7 days. 0.09.
  • the absorbance increased linearly with respect to the number of days elapsed, and no change was observed in the proliferation even after 7 days.
  • the cells cultured for 7 days were observed with a microscope, the cells proliferated in the form of colonies in the thickness direction, and when phosphate-buffered saline was added, the cells floated while maintaining the formation of the colonies .
  • Example 14 The culture film 16 produced in Production Example 12 is sterilized, fixed to a 24-well TCPS multiwell plate in the same manner as in Example 1, and the thawed BALB / 3T3 cell solution (1 mL) is applied to the pattern surface of the culture film 16. Sowing. The same operation was repeated 9 times to prepare 9 samples by the number of specimens. Thereafter, the lid was put on, moved to an incubator, and the culture was started under sterilized air with an internal temperature of 37 ° C. and a carbon dioxide concentration of 5%. In the evaluation of cell proliferation by the WST-8 method, the absorbance after 1 day was 0.09 ⁇ 0.02, 0.33 ⁇ 0.03 after 3 days, and 0.66 ⁇ after 7 days. 0.08.
  • the absorbance increased linearly with respect to the number of days elapsed, and no change was observed in the proliferation even after 7 days.
  • the cells cultured for 7 days were observed with a microscope, the cells proliferated in the form of colonies in the thickness direction, and when phosphate-buffered saline was added, the cells floated while maintaining the formation of the colonies .
  • Example 15 The culture film 17 produced in Production Example 13 is sterilized, fixed to a 24-well TCPS multiwell plate in the same manner as in Example 1, and the thawed BALB / 3T3 cell solution (1 mL) is applied to the pattern surface of the culture film 17 Sowing. The same operation was repeated 9 times to prepare 9 samples by the number of specimens. Thereafter, the lid was put on, moved to an incubator, and the culture was started under sterilized air with an internal temperature of 37 ° C. and a carbon dioxide concentration of 5%. In the evaluation of cell proliferation by the WST-8 method, the absorbance after 1 day was 0.10 ⁇ 0.04, 0.26 ⁇ 0.02 after 3 days, and 0.52 ⁇ after 7 days. It was 0.12.
  • the absorbance increased linearly with respect to the number of days elapsed, and no change was observed in the proliferation even after 7 days.
  • the cells cultured for 7 days were observed with a microscope, the cells proliferated in a state of forming a colony in the thickness direction, and when phosphate buffered saline was added, the cells floated in a state of maintaining the formation of the colony. .
  • Example 16 Using the polymer 2 produced in Example 8, a pillar-shaped culture film 18 having a thickness of 55 ⁇ m was produced in the same manner as in Production Example 9. The water contact angle of the culture film 18 (when 15 seconds had elapsed) was 150.5 °.
  • the culture of BALB / 3T3 cells carried out using the culture film 18 in the same manner as in Example 1 has an absorbance of 0.10 ⁇ 0.03 after one day in the evaluation of cell proliferation by the WST-8 method. It was 0.32 ⁇ 0.03 after 3 days and 0.72 ⁇ 0.10 after 7 days. The absorbance increased linearly with respect to the number of days elapsed, and no change was observed in the proliferation even after 7 days.
  • the cells cultured for 7 days were observed with a microscope, the cells proliferated in a state of forming a colony in the thickness direction, and when phosphate buffered saline was added, the cells floated in a state of maintaining the formation of the colony. .
  • Example 17 A hole-shaped culture film 19 having a thickness of 58 ⁇ m was produced in the same manner as in Production Example 9 except that the polymer 3 produced in Example 10 was used and the mold was changed to the pillar-shaped nickel mold used in Production Example 11. did.
  • the water contact angle of the culture film 19 (when 15 seconds had elapsed) was 130.3 °.
  • the absorbance after 1 day was 0.09 ⁇ 0.02 in the evaluation of cell proliferation by the WST-8 method. It was 0.32 ⁇ 0.04 after the lapse of days, and 0.78 ⁇ 0.19 after the lapse of 7 days.
  • the absorbance increased linearly with respect to the number of days elapsed, and no change was observed in the proliferation even after 7 days.
  • the cells cultured for 7 days were observed with a microscope, the cells proliferated in a state of forming a colony in the thickness direction, and when phosphate buffered saline was added, the cells floated in a state of maintaining the formation of the colony. .
  • Example 18 A film having a thickness of 50 ⁇ m prepared from the polymer 1 synthesized in Production Example 1 was placed on the pattern surface of the hole-shaped nickel mold used in Production Example 9, heated to 150 ° C., thermocompression bonded at 10 MPa, and held for 5 seconds. After cooling to 50 ° C., the mold was removed to produce a pillar-shaped culture film 20. The water contact angle of the culture film 20 (when 15 seconds had elapsed) was 148.1 °.
  • the culture of BALB / 3T3 cells carried out in the same manner as in Example 1 using the culture film 20 has an absorbance of 0.11 ⁇ 0.03 after one day in the evaluation of cell proliferation by the WST-8 method.
  • the water contact angle of the culture film 21 (when 15 seconds had elapsed) was 146.9 °.
  • the culture of BALB / 3T3 cells carried out by the culture film 21 in the same manner as in Example 1 has an absorbance of 0.11 ⁇ 0.02 after one day in the evaluation of cell proliferation by the WST-8 method. It was 0.26 ⁇ 0.03 after 7 days and 0.53 ⁇ 0.10 after 7 days. The absorbance increased linearly with respect to the number of days elapsed, and no change was observed in the proliferation even after 7 days.
  • the cells cultured for 7 days were observed with a microscope, the cells proliferated in a state of forming a colony in the thickness direction, and when phosphate buffered saline was added, the cells floated in a state of maintaining the formation of the colony. .
  • Example 20 The cell type was changed to human skin fibroblasts (hereinafter abbreviated as Hs-68 cells), and cells were thawed, passaged, and prepared by the same method as mouse embryo fibroblasts. A cell suspension of 7500 cells / mL was prepared in serum D-MEM medium. Next, using the sterilized culture film 1 prepared in Production Example 2, the thawed Hs-68 cell solution (1 mL) was seeded by the same method as in Example 1. The same operation was repeated 9 times to prepare 9 samples by the number of specimens. Thereafter, the lid was put on, moved to an incubator, and the culture was started under sterilized air with an internal temperature of 37 ° C. and a carbon dioxide concentration of 5%.
  • Hs-68 cells human skin fibroblasts
  • the absorbance after 1 day was 0.34 ⁇ 0.07, 1.55 ⁇ 0.10 after 3 days, and 4.27 ⁇ after 7 days. It was 0.16.
  • the absorbance increased linearly with respect to the number of days elapsed, and no change was observed in the proliferation even after 7 days.
  • the cells cultured for 7 days were observed with a microscope, the cells grew in a sheet-like form in the form of a colony in the thickness direction.
  • trypsin-containing phosphate buffered saline was added, the sheet-like morphology was observed. It floated while keeping.
  • Example 21 Using the sterilized culture film 5 produced in Production Example 6, the thawed Hs-68 cell solution (1 mL) was seeded in the same manner as in Example 20. The same operation was repeated 9 times to prepare 9 samples by the number of specimens. Thereafter, the lid was put on, moved to an incubator, and the culture was started under sterilized air with an internal temperature of 37 ° C. and a carbon dioxide concentration of 5%.
  • the absorbance after 1 day was 0.31 ⁇ 0.03, 1.49 ⁇ 0.09 after 3 days, and 3.77 ⁇ after 7 days. It was 0.19.
  • the absorbance increased linearly with respect to the number of days elapsed, and no change was observed in the proliferation even after 7 days.
  • the cells cultured for 7 days were observed with a microscope, the cells grew in a sheet-like form in the form of a colony in the thickness direction.
  • trypsin-containing phosphate buffered saline was added, the sheet-like morphology was observed. It floated while keeping.
  • the drug metabolism enzyme activity was evaluated with NADPH dehydrogenase of the cultured cells, it was found that almost 100% had the drug metabolism enzyme activity similar to that of the ecosystem. Further, when autofluorescence was observed, it was confirmed that 100% of the cultured cells were living cells.
  • Example 22 Using the sterilized culture film 10 described in Example 10, the thawed Hs-68 cell solution (1 mL) was seeded in the same manner as in Example 20. The same operation was repeated 9 times to prepare 9 samples by the number of specimens. Thereafter, the lid was put on, moved to an incubator, and the culture was started under sterilized air with an internal temperature of 37 ° C. and a carbon dioxide concentration of 5%.
  • the absorbance after 1 day was 0.33 ⁇ 0.04, 1.53 ⁇ 0.05 after 3 days, and 4.17 ⁇ after 7 days. It was 0.11. The absorbance increased linearly with respect to the number of days elapsed, and no change was observed in the proliferation even after 7 days.
  • Example 23 The bottom surface of the concave portion of a 6-hole TCPS multiwell plate (manufactured by Corning) was cut out, and the film 1 prepared in Production Example 2 was attached to the bottom surface of all 6 holes to prepare a cell culture container, which was sterilized with ethanol. Subsequently, the thawed Hs-68 cell solution was seeded by the same method as in Example 20 except that the amount of the cell solution was changed to 10 mL. The same operation was repeated 9 times to prepare 9 samples by the number of specimens. Thereafter, the lid was put on, moved to an incubator, and the culture was started under sterilized air with an internal temperature of 37 ° C. and a carbon dioxide concentration of 5%.
  • the absorbance after 1 day was 0.52 ⁇ 0.03, 1.70 ⁇ 0.03 after 3 days, and 4.35 ⁇ after 7 days. 0.09. The absorbance increased linearly with respect to the number of days elapsed, and no change was observed in the proliferation even after 7 days.
  • the cells cultured for 7 days were observed with a microscope, the cells grew in a sheet-like form in the form of a colony in the thickness direction, and when trypsin-containing phosphate buffered saline was added, the sheet-like morphology was obtained. It floated while keeping.
  • Example 24 Using the sterilized culture film 15 described in Example 13, the thawed Hs-68 cell solution (1 mL) was seeded in the same manner as in Example 20. The same operation was repeated 9 times to prepare 9 samples by the number of specimens. Thereafter, the lid was put on, moved to an incubator, and the culture was started under sterilized air with an internal temperature of 37 ° C. and a carbon dioxide concentration of 5%.
  • the absorbance after 1 day was 0.25 ⁇ 0.02, 0.78 ⁇ 0.04 after 3 days, and 1.80 ⁇ after 7 days. 0.09. The absorbance increased linearly with respect to the number of days elapsed, and no change was observed in the proliferation even after 7 days.
  • the absorbance after 1 day was 0.27 ⁇ 0.03, 1.08 ⁇ 0.11 after 3 days, and 1.51 ⁇ after 7 days. It was 0.23. Absorbance tended to gradually decline with respect to the number of days elapsed, and the degree of cell proliferation decreased with the number of days elapsed. In addition, when the cells cultured for 7 days were observed with a microscope, the cells grew in the form of a sheet in a uniform plane state with respect to the thickness direction, and even if phosphate-buffered saline was added, the cells floated without change. There wasn't.
  • Example 2 A low-density polyethylene film (manufactured by Mitsui Chemicals, water contact angle 96.8 ° after 15 seconds, and 59.5 ° after 10 minutes) was cut out and sterilized in the same manner as the culture film handling method of the example. Next, BALB / 3T3 cells were cultured by the same method as in Example 1.
  • the absorbance after 1 day was 0.22 ⁇ 0.02, 0.71 ⁇ 0.09 after 3 days, and 1.11 ⁇ after 7 days. It was 0.18. Absorbance tended to gradually decline with respect to the number of days elapsed, and the degree of cell proliferation decreased with the number of days elapsed. In addition, when the cells cultured for 7 days were observed with a microscope, the cells grew in the form of a sheet in a uniform plane state with respect to the thickness direction, and even if phosphate-buffered saline was added, the cells floated without change. There wasn't.
  • the solution was pressure filtered through a filter with a pore size of 5 ⁇ m, the solution was added to methanol, the white polymer was filtered off and dried to obtain 51 g of polymer 4.
  • the hydrogenation rate was 100%, the weight average molecular weight (Mw) was 82000, the molecular weight distribution (Mw / Mn) was 2.26, and the glass transition temperature was 104 ° C.
  • a culture film 11 having a thickness of 55 ⁇ m was produced in the same manner as in Production Example 2 except that the solvent was changed to cyclohexane.
  • the water contact angle of the film was 92.1 ° in 15 seconds. Furthermore, it was 55.4 degrees after 10 minutes, and the water contact angle changed.
  • BALB / 3T3 cells were cultured by the same method as in Example 1.
  • the absorbance after 1 day was 0.20 ⁇ 0.04, 0.53 ⁇ 0.10 after 3 days, and 0.85 ⁇ after 7 days. It was 0.13. Absorbance tended to gradually decline with respect to the number of days elapsed, and the degree of cell proliferation decreased with the number of days elapsed. In addition, when the cells cultured for 7 days were observed with a microscope, the cells grew in the form of a sheet in a uniform plane state with respect to the thickness direction, and even if phosphate-buffered saline was added, the cells floated without change. There wasn't.
  • Example 4 A Teflon (registered trademark) AF1600 (manufactured by Aldrich) powder was hot-pressed under a heating condition of 200 ° C. to produce a culture film 12 having a thickness of 200 ⁇ m.
  • the water contact angle at the time of preparing the substrate was 111.6 ° after 15 seconds. Further, it was 110.3 ° after 10 minutes.
  • BALB / 3T3 cells were cultured by the same method as in Example 1.
  • the absorbance after 1 day was 0.06 ⁇ 0.02, 0.14 ⁇ 0.11 after 3 days, and 0.18 ⁇ after 7 days. 0.09. Absorbance tended to gradually decline with respect to the number of days elapsed, and the degree of cell proliferation decreased with the number of days elapsed.
  • the cells cultured for 7 days were observed with a microscope, the cells were scattered and proliferated, and even when phosphate buffered saline was added, the cells did not change in shape and did not float.
  • Comparative Example 6 Incubation was started under sterile air with an incubator temperature of 37 ° C. and a carbon dioxide gas concentration of 5%, as in Comparative Example 1, except that the cell suspension was changed to Hs-68 cell solution (10 mL).
  • the absorbance after 1 day was 0.33 ⁇ 0.06, 1.49 ⁇ 0.11 after 3 days, and 3.10 ⁇ after 7 days. It was 0.13. Absorbance tended to gradually decline with respect to the number of days elapsed, and the degree of cell proliferation decreased with the number of days elapsed.

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Abstract

　本発明の医療器具は、基材を備え、かつ前記基材の一面に細胞を接触または保持させる医療器具であって、前記基材の少なくとも細胞を保持する前記一面は、下記一般式（１）で表される繰返し構造単位を含有するフッ素含有環状オレフィンポリマーにより構成される。 （式（１）中、Ｒ１～Ｒ４のうち、少なくとも１つは、フッ素、フッ素を含有する炭素数１～１０のアルキル、フッ素を含有する炭素数１～１０のアルコキシ、またはフッ素を含有する炭素数２～１０のアルコキシアルキルである。Ｒ１～Ｒ４がフッ素を含有しない基である場合、Ｒ１～Ｒ４は、水素、炭素数１～１０のアルキル、炭素数１～１０のアルコキシ、または炭素数２～１０のアルコキシアルキルから選ばれる。Ｒ１～Ｒ４は互いに同一であっても異なっていてもよい。Ｒ１～Ｒ４は互いに結合して環構造を形成していてもよい。）

Description

医療器具、細胞培養方法、フッ素含有環状オレフィンポリマー、フッ素含有環状オレフィンポリマー組成物、および培養細胞
　本発明は、医療器具、細胞培養方法、フッ素含有環状オレフィンポリマー、フッ素含有環状オレフィンポリマー組成物、および培養細胞に関する。
　動植物の細胞は、従来から多くのものが培養されており、培養技術も様々な形態のものが検討されている。細胞培養技術は、特に、生命科学の分野において、医薬品の開発や病態メカニズムの解明などに欠くことのできない技術となっており、研究目的の細胞培養技術のみならず、生物学、医学、薬学、免疫学などの分野での利用を目的とした工業生産的培養方法も種々検討されている。また、近年では医療などの分野において、組織細胞を培養し、これを人工臓器、人工歯骨、人工皮膚などの代替組織として利用する研究も盛んに行われている。
　このような細胞培養は、通常一定の容器の中で培養液とともに培養が行われる。細胞培養は、特に動物細胞の多くは、物質に付着して育成される接着依存性を有しており、このような接着依存性を有する細胞の培養には、細胞が付着するための基材（器具）が必要とされる。細胞培養用基材としては、その材料で主としてポリスチレン成形品が一般的であり、基材の表面に低温プラズマ処理、コロナ放電処理などを施し、親水性を付与したものがシャーレ、フラスコ、マルチプレートなどの培養器具として市販されている。
　しかしながら、付着性細胞種の重要な性質として、培養器具を用いて細胞培養をした場合に培養容器の培養面を細胞が覆いつくしてしまうと細胞増殖が停止してしまう接触阻害が知られている。また、播種される細胞濃度が低すぎると、栄養分や酸素等が細胞に十分供給されている環境であっても細胞の接着や増殖に影響が生じるという密度効果も知られている。さらには、細胞は培養容器の培養面に付着しながら平面的に増殖する態様を示すため、特に組織培養に応用される細胞増殖が群体を形成した状態の細胞シートを作製する方法として、播種を繰り返して培養する操作（以下、継代操作と略す）が用いられているが、操作が煩雑で、細胞を損傷なく再現良く培養することが困難である。
　このような問題を解決するために、ゲル、スポンジ状に架橋したコラーゲンを培養基材の上に配置して線維芽細胞や角化細胞などを播種、培養することで培養粘膜・皮膚を製造する方法が開示されているが（特許文献１）、利用されるコラーゲン種の多くは、ウシあるいはブタの結合組織から可溶化し、抽出されたコラーゲンであり、近年ＢＳＥ（牛海綿状脳症）や口蹄疫などの問題により、医療応用などを考慮する場合にその使用が困難になってきている。
　継代操作について従来の技術では、分裂を繰り返す付着性細胞を培養するために培養容器で細胞を適当な時間培養して目的の細胞濃度まで増殖する度に、細胞を培養面から剥離し、その一部を新たな培養容器に移し替える操作を継続的に行なう方法が一般的である（例えば、特許文献２、３）。特許文献２では、面積が異なる複数の培養面を有する培養容器を用い、最小面積を有する培養面から細胞培養を開始し、増殖が進行するにつれて細胞をスクレーパーで剥離して徐々に面積の大きな培養面へと細胞を移動しながら培養を閉鎖系で行なう方法が開示されている。また、ガス透過性の樹脂で作製された細胞バッグ同士を接続し、バッグ内の培養液を混合させることで、細胞濃度を調整する継代操作が開示されている（特許文献３）。しかしながら、何れの方法であっても、この継代操作は、頻繁な液交換などの非常に煩雑な作業を伴うものであり、また、基材に付着した細胞を剥がして新たな培養容器に移し替える操作を行うため、細胞を損傷させ、増殖した形態を崩壊させてしまうなど潜在的に多くの問題がある。
　なお、細胞を培養する基材表面の性状と増殖性については、Ｌ細胞（胃腸内分泌細胞）を培養した例で、細胞の増殖形態と基材の水接触角との関係を評価した結果が開示されている（非特許文献１）。この中では、水接触角が４３°～１１６°の範囲の基材について、培養開始１時間経過後の細胞密度を計測すると、基材の種類に寄らず６０°～７０°の範囲にある基材を用いた細胞の密度が高く、細胞の接着性が良好であると記載されている。
　また、最近では細胞が接触する基材の表面に、凹凸構造を形成した基材を用いた培養技術が提案されている（例えば、特許文献４、５）。凹凸構造を付形した基材を用いる培養は、多くの場合、スフェロイド培養であり細胞は塊状の形態で増殖する態様を示す。しかしながら、凹凸構造を付形する基材の材料は、シクロオレフィンポリマー（特許文献４）、ポリジメチルシロキサン（特許文献５）などの従来から知られた細胞接着性の材料であり、基材の凹凸構造によるスフェロイド培養において、細胞が基材と接触する面積が小さくなっていても本質的に接着性の態様は変わらず細胞は足場を形成する。これにより、培養した細胞を基材から離脱させる際に、細胞を損傷させ、増殖した形態を崩壊させてしまうなど潜在的な問題がある。さらには、凹凸構造を付形した基材を用いる細胞培養では、細胞が足場を形成する上での効果的な凹凸構造の形状、サイズについて報告されているものの、基材表面の水接触角と接着性或いは、増殖性の関係についての記載は無い。
特開２００４－１４７５８５号公報 特開２００４－１２９５５８号公報 特開平７－０４７１０５号公報 国際公開第２００７／０９７１２１号パンフレット 特開２０１０－８８３４７号公報
Ｙ．Ｔａｍａｄａ，Ｙ．Ｉｋａｄａ，Ｊｏｕｒｎａｌ　ｏｆ　Ｃｏｌｌｏｉｄ　ａｎｄ　Ｉｎｔｅｒｆａｃｅ　Ｓｃｉｅｎｃｅ　１５５，３３４－３３９（１９９３）．
　本発明は、基材の一面に接触または保持させた細胞を、損傷させること無く基材から離脱させることができる医療器具を提供することを課題とする。
　また本発明は、薬物代謝系酵素活性を長期間維持可能な培養細胞を提供することを課題とする。薬物代謝系酵素活性維持出来る培養細胞は、再生医療などに好適に展開出来ると考えられるので、本発明の意義は極めて大きい。
　本発明は、以下に示される。
（１）　基材を備え、かつ前記基材の一面に細胞を接触または保持させる医療器具であって、前記基材の少なくとも細胞を保持する前記一面は、下記一般式（１）で表される繰返し構造単位を含有するフッ素含有環状オレフィンポリマーにより構成される医療器具。
Figure JPOXMLDOC01-appb-C000004
 （式（１）中、Ｒ１～Ｒ４のうち、少なくとも１つは、フッ素、フッ素を含有する炭素数１～１０のアルキル、フッ素を含有する炭素数１～１０のアルコキシ、またはフッ素を含有する炭素数２～１０のアルコキシアルキルである。Ｒ１～Ｒ４がフッ素を含有しない基である場合、Ｒ１～Ｒ４は、水素、炭素数１～１０のアルキル、炭素数１～１０のアルコキシ、または炭素数２～１０のアルコキシアルキルから選ばれる。Ｒ１～Ｒ４は互いに同一であっても異なっていてもよい。Ｒ１～Ｒ４は互いに結合して環構造を形成していてもよい。）
（２）細胞を接触または保持する前記一面の水接触角が７０°以上１６０°以下である（１）に記載の医療器具。
（３）細胞を接触または保持する前記一面の水接触角が７０°以上１２０°以下である（１）または（２）に記載の医療器具。
（４）　前記基材の少なくとも細胞と接触する前記一面が、凹凸構造を備える（１）に記載の医療器具。
（５）　細胞と接触する前記一面の水接触角が１２１°以上１６０°以下である（４）に記載の医療器具。
（６）　前記基材の少なくとも細胞を接触または保持する前記一面は、前記フッ素含有環状オレフィンポリマーと、光硬化性化合物と、光硬化開始剤と、を含むフッ素含有環状オレフィンポリマー組成物により構成される（１）～（５）のいずれか一項に記載の医療器具。
（７）　前記フッ素含有環状オレフィンポリマー組成物中における前記フッ素含有環状オレフィンポリマーと前記光硬化性化合物の質量比（フッ素含有環状オレフィンポリマー／光硬化性化合物）が、９９．９／０．１～５０／５０である（６）に記載の医療器具。
（８）　前記一面に接触または保持させた細胞を培養するために用いられる（１）～（７）のいずれか一項に記載の医療器具。
（９）　細胞培養において、細胞が群体を形成しながら増殖する（８）に記載の医療器具。
（１０）　培養した細胞を緩衝液により浮遊して前記一面から離脱させる（８）または（９）に記載の医療器具。
（１１）　（１）～（１０）のいずれか一項に記載の医療器具の前記基材の前記一面上に、前記一面に接触または保持するよう細胞を播種する工程と、
　前記細胞を培養して培養細胞を得る工程と、
　前記一面上に緩衝液を添加して、前記一面から前記培養細胞を浮遊させる工程と、
　を備える細胞培養方法。
（１２）　基材を備え、かつ前記基材の一面に細胞を接触または保持させる医療器具の、前記基材の少なくとも細胞を保持させる前記一面を構成するフッ素含有環状オレフィンポリマーであって、下記一般式（１）で表される繰返し構造単位を含有するフッ素含有環状オレフィンポリマー。
Figure JPOXMLDOC01-appb-C000005
 （式（１）中、Ｒ１～Ｒ４のうち、少なくとも１つは、フッ素、フッ素を含有する炭素数１～１０のアルキル、フッ素を含有する炭素数１～１０のアルコキシ、またはフッ素を含有する炭素数２～１０のアルコキシアルキルである。Ｒ１～Ｒ４がフッ素を含有しない基である場合、Ｒ１～Ｒ４は、水素、炭素数１～１０のアルキル、炭素数１～１０のアルコキシ、または炭素数２～１０のアルコキシアルキルから選ばれる。Ｒ１～Ｒ４は互いに同一であっても異なっていてもよい。Ｒ１～Ｒ４は互いに結合して環構造を形成していてもよい。）
（１３）　基材を備え、かつ前記基材の一面に細胞を接触または保持させる医療器具の、前記基材の少なくとも細胞を保持させる前記一面を構成するフッ素含有環状オレフィンポリマー組成物であって、
　下記一般式（１）で表される繰返し構造単位を含有するフッ素含有環状オレフィンポリマーと、
　光硬化性化合物と、
　光硬化開始剤と、
　を含むフッ素含有環状オレフィンポリマー組成物。
Figure JPOXMLDOC01-appb-C000006
 （式（１）中、Ｒ１～Ｒ４のうち、少なくとも１つは、フッ素、フッ素を含有する炭素数１～１０のアルキル、フッ素を含有する炭素数１～１０のアルコキシ、またはフッ素を含有する炭素数２～１０のアルコキシアルキルである。Ｒ１～Ｒ４がフッ素を含有しない基である場合、Ｒ１～Ｒ４は、水素、炭素数１～１０のアルキル、炭素数１～１０のアルコキシ、または炭素数２～１０のアルコキシアルキルから選ばれる。Ｒ１～Ｒ４は互いに同一であっても異なっていてもよい。Ｒ１～Ｒ４は互いに結合して環構造を形成していてもよい。）
（１４）　薬物代謝系酵素活性を少なくとも７日間維持した培養細胞。
　基材の一面に接触または保持させた細胞を、損傷させること無く基材から離脱させることができる医療器具を提供することができる。
　上述した目的、およびその他の目的、特徴および利点は、以下に述べる好適な実施の形態、およびそれに付随する以下の図面によってさらに明らかになる。
リン酸緩衝生理食塩水に浸漬してシート状に浮遊したマウス胚繊維芽細胞である。 実施例２３に記載の細胞培養容器で７日間培養したヒト皮膚繊維芽細胞の細胞核、および細胞骨格タンパクの蛍光顕微鏡写真である。 比較例６に記載のＴＣＰＳマルチウェルプレートで７日間培養したヒト皮膚繊維芽細胞の細胞核、および細胞骨格タンパクの蛍光顕微鏡写真である。 実施例２３に記載の細胞培養容器で７日間培養したヒト培養細胞の死滅自家蛍光発光を観察した蛍光顕微鏡写真である。
　以下、実施の形態について、図面を用いて説明する。尚、すべての図面において、同様な構成要素には同様の符号を付し、適宜説明を省略する。
　本実施形態に係る医療器具は、基材を備え、かつ当該基材の一面に細胞を接触または保持させる医療器具である。また、上記基材の細胞を保持させる少なくとも一面は、下記一般式（１）で表される繰返し構造単位を含有するフッ素含有環状オレフィンポリマーにより構成される。
Figure JPOXMLDOC01-appb-C000007
 （式（１）中、Ｒ１～Ｒ４のうち、少なくとも１つは、フッ素、フッ素を含有する炭素数１～１０のアルキル、フッ素を含有する炭素数１～１０のアルコキシ、またはフッ素を含有する炭素数２～１０のアルコキシアルキルである。Ｒ１～Ｒ４がフッ素を含有しない基である場合、Ｒ１～Ｒ４は、水素、炭素数１～１０のアルキル、炭素数１～１０のアルコキシ、または炭素数２～１０のアルコキシアルキルから選ばれる。Ｒ１～Ｒ４は互いに同一であっても異なっていてもよい。また、Ｒ１～Ｒ４は互いに結合して環構造を形成していてもよい。）
　尚、前記のアルキル、アルコキシ、アルコキシアルキル等の置換基は、本明細書においてはそれぞれアルキル基、アルコキシ基、アルコキシアルキル基と記載することがある。
　また、本明細書中の「繰り返し構造単位」について、単に「構造単位」と表現することもできる。
　本発明者は、医療器具を構成する基材の細胞を接触または保持させる一面を、上記一般式（１）により表される繰り返し構造単位を含有するフッ素含有環状オレフィンポリマー、または当該フッ素含有環状オレフィンポリマーを含む組成物を用いて形成した場合に、当該一面に保持させた細胞を、例えば、リン酸緩衝生理食塩水のような緩衝液によって容易に浮遊させることができることを新たに知見した。したがって、本実施形態に係る上記医療器具によれば、基材の一面に接触または保持させた細胞を、緩衝液を用いて浮遊させることによって、損傷させること無く基材から離脱させることが可能となる。
　以下、本実施形態に係る医療器具について詳細に説明する。
　本実施形態に係る医療器具は、基材を備え、基材の一面に細胞および／または培養液が接触または保持される形態で使用される医療器具を示す。このような医療器具は、たとえば基材の一面に接触または保持させた細胞を培養する、または基材の一面に接触または保持させた細胞を利用した検査を行うために用いられるものである。本実施形態においては、たとえば培養バッグ、培養プレート、培養シャーレ、培養ディッシュ、培養フラスコ、培養チューブなどを上記医療器具の例として挙げることができる。細胞を培養するための医療器具においては、上記一面を、細胞を培養するための培養面とすることができる。
　本実施形態に係る医療器具において、基材の細胞を接触または保持させる少なくとも一面は、上記一般式（１）で表される繰返し構造単位を含有するフッ素含有環状オレフィンポリマーにより構成される。これにより、上述のとおり、基材の一面に保持させた細胞や、一面上において培養した細胞を、緩衝液を用いることによって基材から浮遊させることができる医療器具が得られる。このため、基材の一面に接触または保持させた細胞を損傷させること無く基材から離脱させることが可能となる。ここでは、基材の一面上にある種の緩衝液、例えば、リン酸緩衝生理食塩水を添加する場合や、基材をリン酸緩衝生理食塩水内へ浸漬させる場合等により細胞を基材から浮遊させることができる。
　また、上記一般式（１）で表される繰返し構造単位を含有するフッ素含有環状オレフィンポリマーにより基材の細胞を接触または保持させる少なくとも一面を構成することによって、一面に保持させた細胞が基材に対して適度な足場を形成しながら、一方で、当該一面に強固に接着および付着しない基材を実現することができる。これにより、細胞培養において、細胞を厚み方向へ群体を形成しながら増殖させることができる。
　ここでの厚み方向に群体を形成しながら増殖した細胞の形態は、培養した細胞を、例えば、明暗視野顕微鏡、位相差顕微鏡、蛍光顕微鏡などにより観察することができる。特に、細胞の細胞核や細胞骨格タンパクなどを部位別に蛍光発光試薬で染色した蛍光色で観察できる蛍光顕微鏡観察は細胞の形態観察法として好適である。
　通常の細胞を培養するために用いられる医療器具においては、増殖した細胞が培養面に接着または付着しながら増殖するため、厚み方向に対して均一な平面状態で細胞が増殖する。この場合、細胞が培養面を覆いつくしてしまうと細胞が接着または付着する足場が無くなるため、接触阻害等の影響により増殖が妨げられることとなる。一方で、効率的な細胞培養を行うために播種を繰り返して培養する継代操作を用いることが考えられるが、細胞を剥がして新たな培養容器に移し替える作業により細胞を損傷させるおそれがある。また、継代操作は頻繁な液交換などの非常に煩雑な作業を伴うものである。
　これに対し、本実施形態によれば、上記一般式（１）のフッ素含有環状オレフィンポリマーによって細胞を保持させる基材の一面を構成することにより、増殖した細胞が基材の一面に接着および付着することを抑制することができる。このため、継代操作によらずとも、厚み方向に対して群体を形成するように細胞を増殖させることが可能となる。したがって、細胞の損傷の発生や操作の煩雑化を抑えつつ、より効率的な細胞培養を行うことが可能となる。
　また、本実施形態の医療器具を用いて作製した培養細胞は、薬物代謝系酵素活性を少なくとも７日間維持した培養細胞である。すなわち、生体内での細胞増殖とほぼ同じ機能を維持したまま成長させた培養細胞であり、細胞の種類を限定的に選ばない。もしくは、遺伝子変異を起こす確率の高いウイルスまたは細菌などごく限られた細胞の種類を除いて正常に生細胞を培養することができる。その細胞の薬物代謝系酵素活性は、低温下で保存するまたは特別な培養保存操作（例えば、酸素過多で保存するなど）をすることなく、少なくとも７日間維持され、好ましくは、１０日間維持した培養細胞である。特に好ましくは１４日間維持された培養細胞である。一方、細胞の形状は、特に限定する必要は無いが、例示するならば、例えば、シート状細胞、群生状（含むスフェロイド）細胞、神経系形態細胞などである。特に、再生医療の分野では、短期間で、かつ、生体細胞と同様な薬物代謝系酵素活性を維持していることが望まれており、本実施形態の培養細胞のように好適に生産できることが、重要な訴求点になる。
　また、本実施形態の培養細胞は、創薬やバイオ薬品、美容においても同様の機能を長期間維持することが期待でき、世界的な潮流となりうる発明である。
　また、上記フッ素含有環状オレフィンポリマーにより基材を構成することによって、基材の成形性を向上させることができ、工業的に価値のあるあらたな医療器具が実現される。
　基材の細胞を接触または保持させる少なくとも一面が上記フッ素含有環状オレフィンポリマーにより構成されるとは、たとえば他の材料により形成される支持体の一面上に上記フッ素含有環状オレフィンポリマーにより構成されるフィルム（培養細胞シートとも称す。）が貼り付けられて基材が構成される場合や、他の材料により形成される支持体の一面上に上記フッ素含有環状オレフィンポリマーにより構成されるコート膜が塗布乾燥により形成されて基材が構成される場合、基材全体が上記フッ素含有環状オレフィンポリマーにより構成される成形物により形成される場合を含む。
　また、本実施形態の医療器具上で作製された培養細胞を綿、布、不織布などで覆い積層された積層体も提供してもよい。または、この積層体は、グリセリンなどの保湿剤を含侵させてもよい。すなわち、本実施形態の医療器具で作製された培養細胞としては、積層体として設けられた覆いを外し、再生医療の用途として直接患部に貼り合わせ、その後フィルムを離脱させるような医療行為に用いることもできる。
　基材の細胞を接触または保持する一面における水接触角は、たとえば７０°以上１６０°以下とすることができる。これにより、培養液の細胞外マトリックス中に存在するビトロネクチンやフィブロネクチン等のタンパク質のファミリー（付着分子やタンパク質）を介して引き起こされる基材への細胞の付着または接着を抑制することができる。これにより、細胞と細胞外マトリックスを含む主成分が水である培養液との親和性が適度に小さな基材を細胞の培養基材として用いることで、一面に接着および付着が抑制されつつ増殖した細胞を、例えば、リン酸緩衝生理食塩水のような緩衝液を用いてより容易に浮遊させることができる。このため、細胞を基材から離脱させる際に、細胞に損傷が発生することをより確実に抑えることが可能となる。また、細胞の増殖過程においては、厚み方向に対して群体を形成するように細胞を増殖させることがより容易となり、さらに効率的な細胞培養が可能となる。すなわち、上述の範囲で水接触角を調整した基材を備える医療器具により細胞を培養することで、基材表面、細胞、および培養液それぞれの界面の相互作用を保ちながら、細胞の培養器具への付着、または密着が抑制されつつ群体を形成しながら増殖することができる。細胞の損傷を抑える観点や、効率的な細胞培養を行う観点からは、上記水接触角が７５°以上１５５°以下であることがより好ましく、８０°以上１５０°以下とすることがとくに好ましい。
　基材の一面における水接触角は、一態様においては、基材表面の水接触角が７０°以上１２０°以下で好ましく用いられ、基材の一面を構成する材料や、基材の作製方法における種々の条件を適切に選択することにより制御することが可能である。細胞の損傷を抑える観点や、効率的な細胞培養を行う観点からは、上記の水接触角が７５°以上１１５°以下であることがより好ましく、８０°以上１１０°以下とすることが特に好ましい。
　また、他の態様においては、より高い水接触角とすることもでき、たとえば、基材の一面における水接触角を１２１°～１６０°の範囲に設定することもできる。このように１２１°～１６０°の水接触角を実現するためには、基材の一面に凹凸構造を形成させて制御する方法が好ましく用いられる。細胞の損傷を抑える観点や、効率的な細胞培養を行う観点からは、上記の水接触角が１２３°以上１５５°以下であることがより好ましく、１２５°以上１５０°以下とすることが特に好ましい。本実施形態においては、上記一般式（１）で表される繰返し構造単位を含有するフッ素含有環状オレフィンポリマーを用いて上記基材の一面を形成することが、水接触角を所望の範囲とするために重要な要素の一つである。
　水接触角の測定は、日本工業規格ＪＩＳ－Ｒ３２５７（基板ガラス表面のぬれ性試験方法）に準じて、２５±５℃、５０±１０％の恒温恒湿条件下で水滴の形状を球形とみなせる４μｌ以下の容量の水滴を基材表面に滴下し、静滴法により、基材表面に水滴が接触した直後から１分以内の基材と水滴の接触界面の角度を計測する方法で行うことができる。本実施形態においては、たとえば種々のプラスチック材料の物性値に利用される数値と同様に、上記方法により水滴が接触した直後から１分以内の数値を物性値として取り扱うことができる。
　本実施形態に係る医療器具で取扱うことができる細胞の種類としては、動物細胞の場合で浮遊系細胞、接着系細胞に関わらず、例えば、線維芽細胞、間葉系幹細胞、造血幹細胞、神経幹細胞、神経細胞、角膜上皮細胞、口腔粘膜上細胞、網膜色素上細胞、歯根膜幹細胞、筋繊維芽細胞、心筋細胞、肝細胞、脾内分泌細胞、皮膚角化細胞、皮膚繊維芽細胞、皮下脂肪由来前駆細胞、腎臓細胞、底部毛根鞘細胞、鼻粘膜上皮細胞、間葉系幹細胞、血管内皮前駆細胞、血管内皮細胞、血管平滑筋細胞、骨芽細胞、軟骨細胞、骨格筋細胞、不死化細胞、がん細胞、角化細胞、胚性幹細胞（ＥＳ細胞）、ＥＢＶ形質転換Ｂ細胞、人工多能性幹細胞（ｉＰＳ細胞）などが例示され、より具体的にはＨｅＬａ細胞、ＣＨＯ細胞、Ｃｏｓ細胞、ＨＬ－６０細胞、Ｈｓ－６８細胞、ＭＣＦ７細胞、Ｊｕｒｋａｔ細胞、Ｖｅｒｏ細胞、ＰＣ－１２細胞、Ｋ５６２細胞、Ｌ細胞、２９３細胞、ＨｅｐＧ２細胞、Ｕ－９３７細胞、Ｃａｃｏ－２細胞、ＨＴ－２９細胞、Ａ５４９細胞、Ｂ１６細胞、ＭＤＣＫ細胞、ＢＡＬＢ／３Ｔ３細胞、Ｖ７９細胞、３Ｔ３－Ｌ１細胞、ＮＩＨ／３Ｔ３細胞、Ｒａｊｉ細胞、ＮＳＣＬＣ細胞、Ａ４３１細胞、Ｓｆ９細胞、ＳＨ－ＳＹ５Ｙ細胞、ＢＨＫ－２１細胞、Ｊ７７４細胞、Ｃ２Ｃ１２細胞、３Ｔ３－Ｓｗｉｓｓ　ａｌｂｉｎｏ細胞、ＭＯＬＴ－４細胞、ＣＶ－１細胞、Ｆ９細胞、ＭＣ３Ｔ３－Ｅ１細胞、ＨａＣａＴ細胞、Ｌ５１７８Ｙ細胞、ＨｕＨ－７細胞、Ｒａｔ１細胞、Ｓａｏｓ－２細胞、ＴＩＧ細胞、ＣＨＬ細胞、ＷＩ－３８細胞、ＭＲＣ－５細胞、Ｈｅｐ３Ｂ細胞、ＳＫ－Ｎ－ＳＨ細胞、ＭＩＮ６細胞、ＫＡＴＯ細胞、Ｃ３Ｈ／１０Ｔ１／２細胞、ＤＴ４０細胞、ＰＬＣ／ＰＲＦ／５細胞、ＩＭＲ－９０細胞、ＦＭ３Ａ細胞、などが例示される。また、初代細胞あるいは継代された細胞のいずれであっても良い。
　これらの細胞の由来としては各種生物、例えば、ヒト、イヌ、ラット、マウス、トリ、ブタ、ウシ、昆虫等の細胞、または、これらが集合して形成された組織、器官、微生物、ウイルスなどが挙げられ、より具体的には、ヒト子宮頚部癌由来、Ｃｈｉｎｅｓｅ　ｈａｍｓｔｅｒ卵巣由来、ＣＶ－１細胞由来、ヒト骨髄性白血病由来、ヒト乳癌由来、ヒトＴ細胞白血病由来、Ａｆｒｉｃａ　ｇｒｅｅｎ　ｍｏｎｋｅｙ腎由来、ヒト副腎髄褐色細胞種由来、ヒト骨髄性白血病由来、Ｃ３Ｈマウス皮下組織由来、ヒト胎児腎由来、ヒト肝癌由来、ヒト組織球性白血病由来、ヒト大腸癌由来、ヒト肺癌由来、マウスメラノーマ由来、イヌ腎臓由来、Ｂａｌｂ／ｃマウス胎仔由来、Ｃｈｉｎｅｓｅ　ｈａｍｓｔｅｒ肺由来、Ｓｗｉｓｓ３Ｔ３由来、ＮＩＨ　Ｓｗｉｓｓマウス胎仔由来、ヒトバーキットリンパ腫由来、ヒト肺非小細胞癌由来、ヒト皮膚Ｅｐｉｄｅｒｍｏｉｄ　Ｃａｒｃｉｎｏｉｄ由来、蛾の幼虫卵巣由来、ヒト神経芽細胞腫由来、Ｓｉｒｉａｎ　ｇｏｌｄｅｎ　ｈａｍｓｔｅｒ腎由来、マウスマクロファージ由来、マウス筋組織由来、雑系Ｓｗｉｓｓマウス胎仔由来、ヒト急性Ｔ細胞白血病由来、マウスＥＣ細胞ＯＴＴ６０５０由来、マウスｃａｌｖａｒｉａ由来、ヒト表皮角化細胞由来、ＤＢＡ／２マウス胸腺腫瘍由来、ヒト幹細胞癌由来、ラット結合織由来、ヒト骨肉腫由来、ヒト胎児肺由来、ヒト胎児肺由来、ヒト神経芽細胞腫由来、マウスインスリノーマ由来、ヒト胃癌由来、Ｃ３Ｈマウス胎仔由来、ニワトリＢ細胞白血病由来、マウス自然発生乳癌由来、などが例示される。
　次に、フッ素含有環状オレフィンポリマーについて詳細に説明する。
（フッ素含有環状オレフィンポリマー）
　フッ素含有環状オレフィンポリマーは、上述したとおり、下記一般式（１）で表される繰返し構造単位を含有するものである。本実施形態においては、このフッ素含有環状オレフィンポリマーを用いて、基材の一面に細胞を接触または保持させる医療器具の当該基材の少なくとも一面を形成することができる。
Figure JPOXMLDOC01-appb-C000008
 （式（１）中、Ｒ１～Ｒ４のうち、少なくとも１つは、フッ素、フッ素を含有する炭素数１～１０のアルキル、フッ素を含有する炭素数１～１０のアルコキシ、またはフッ素を含有する炭素数２～１０のアルコキシアルキルである。Ｒ１～Ｒ４がフッ素を含有しない基である場合、Ｒ１～Ｒ４は、水素、炭素数１～１０のアルキル、炭素数１～１０のアルコキシ、または炭素数２～１０のアルコキシアルキルから選ばれる。Ｒ１～Ｒ４は互いに同一であっても異なっていてもよい。また、Ｒ１～Ｒ４は互いに結合して環構造を形成していてもよい。）
　一般式（１）においてＲ１～Ｒ４は、フッ素；フルオロメチル、ジフルオロメチル、トリフルオロメチル、トリフルオロエチル、ペンタフルオロエチル、ヘプタフルオロプロピル、ヘキサフルオロイソプロピル、ヘプタフルオロイソプロピル、ヘキサフルオロ－２－メチルイソプロピル、ペルフルオロ－２－メチルイソプロピル、ｎ－ペルフルオロブチル、ｎ－ペルフルオロペンチル、ペルフルオロシクロペンチル等のアルキル基の水素の一部または全てがフッ素で置換されたアルキル等のフッ素を含有する炭素数１～１０のアルキル；フルオロメトキシ、ジフルオロメトキシ、トリフルオロメトキシ、トリフルオロエトキシ、ペンタフルオロエトキシ、ヘプタフルオロプロポキシ、ヘキサフルオロイソプロポキシ、ヘプタフルオロイソプロポキシ、ヘキサフルオロ－２－メチルイソプロポキシ、ペルフルオロ－２－メチルイソプロポキシ、ｎ－ペルフルオロブトキシ、ｎ－ペルフルオロペントキシ、ペルフルオロシクロペントキシ等のアルコキシの水素の一部または全てがフッ素で置換されたアルコキシ等のフッ素を含有する炭素数１～１０のアルコキシ；またはフルオロメトキシメチル、ジフルオロメトキシメチル、トリフルオロメトキシメチル、トリフルオロエトキシメチル、ペンタフルオロエトキシメチル、ヘプタフルオロプロポキシメチル、ヘキサフルオロイソプロポキシメチル、ヘプタフルオロイソプロポキシメチル、ヘキサフルオロ－２－メチルイソプロポキシメチル、ペルフルオロ－２－メチルイソプロポキシメチル、ｎ－ペルフルオロブトキシメチル、ｎ－ペルフルオロペントキシメチル、ペルフルオロシクロペントキシメチル等のアルコキシアルキルの水素の一部または全てがフッ素で置換されたアルコキシアルキル等のフッ素を含有する炭素数２～１０のアルコキシアルキルが例示される。
　また、Ｒ１～Ｒ４が互いに結合して環構造を形成していてもよく、ペルフルオロシクロアルキル、酸素を介したペルフルオロシクロエーテル等の環を形成してもよい。
　さらに、フッ素を含有しないその他のＲ１～Ｒ４は、水素；メチル、エチル、プロピル、イソプロピル、２－メチルイソプロピル、ｎ－ブチル、ｎ－ペンチル、シクロペンチル等の炭素数１～１０のアルキル；メトキシ、エトキシ、プロポキシ、ブトキシ、ペントキシ等の炭素数１～１０のアルコキシ；またはメトキシメチル、エトキシメチル、プロポキシメチル、ブトキシメチル、ペントキシメチル等の炭素数２～１０のアルコキシアルキルが例示される。
　フッ素含有環状オレフィンポリマーは、一般式（１）で表される構造単位のみを有するものであってもよく、一般式（１）で表される構造単位とともに他の構造単位を有するものであってもよい。また、フッ素含有環状オレフィンポリマーは、一般式（１）で表される構造単位であって、Ｒ１～Ｒ４の少なくとも１つが互いに異なる二種類以上の構造単位を含んでいてもよい。
　一般式（１）で表される繰り返し構造単位を含有するフッ素含有環状オレフィンポリマーの具体的な例として、ポリ（１－フルオロ－２－トリフルオロメチル－３，５－シクロペンチレンエチレン）、ポリ（１－フルオロ－１－トリフルオロメチル－３，５－シクロペンチレンエチレン）、ポリ（１－メチル－１－フルオロ－２－トリフルオロメチル－３，５－シクロペンチレンエチレン）、ポリ（１，１－ジフルオロ－２－トリフルオロメチル－３，５－シクロペンチレンエチレン）、ポリ（１，２－ジフルオロ－２－トリフルオロメチル－３，５－シクロペンチレンエチレン）、ポリ（１－ペルフルオロエチル－３，５－シクロペンチレンエチレン）、ポリ（１，１－ビス（トリフルオロメチル）－３，５－シクロペンチレンエチレン）、ポリ（１，１，２－トリフルオロ－２－トリフルオロメチル－３，５－シクロペンチレンエチレン）、ポリ（１，２－ビス（トリフルオロメチル）－３，５－シクロペンチレンエチレン）、ポリ（１－ペルフルオロプロピル－３，５－シクロペンチレンエチレン）、ポリ（１－メチル－２－ペルフルオロプロピル－３，５－シクロペンチレンエチレン）、ポリ（１－ブチル－２－ペルフルオロプロピル－３，５－シクロペンチレンエチレン）、ポリ（１－ペルフルオロ－ｉｓｏ－プロピル－３，５－シクロペンチレンエチレン）、ポリ（１－メチル－２－ペルフルオロ－ｉｓｏ－プロピル－３，５－シクロペンチレンエチレン）、ポリ（１，２－ジフルオロ－１，２－ビス（トリフルオロメチル）－３，５－シクロペンチレンエチレン）、ポリ（１，１，２，２，３，３，３a, ６a－オクタフルオロシクロペンチル－４，６－シクロペンチレンエチレン）、ポリ（１，１，２，２，３，３，４，４，３a, ７a－デカフルオロシクロヘキシル－５，７－シクロペンチレンエチレン）、ポリ（１－ペルフルオロブチル－３，５－シクロペンチレンエチレン）、ポリ（１－ペルフルオロ－ｉｓｏ－ブチル－３，５－シクロペンチレンエチレン）、ポリ（１－ペルフルオロ－ｔｅｒｔ－ブチル－３，５－シクロペンチレンエチレン）、ポリ（１－メチル－２－ペルフルオロ－ｉｓｏ－ブチル－３，５－シクロペンチレンエチレン）、ポリ（１－ブチル－２－ペルフルオロ－ｉｓｏ－ブチル－３，５－シクロペンチレンエチレン）、ポリ（１，２－ジフルオロ－１－トリフルオロメチル－２－ペルフルオロエチル－３，５－シクロペンチレンエチレン）、ポリ（１－(１－トリフルオロメチル－２，２，３，３，４，４，５，５－オクタフルオロ－シクロペンチル）－３，５－シクロペンチレンエチレン)）、ポリ（（１，１，２－トリフルオロ－２－ペルフルオロブチル）－３，５－シクロペンチレンエチレン）、ポリ（１，２－ジフルオロ－１－トリフルオロメチル－２－ペルフルオロブチル－３，５－シクロペンチレンエチレン）、ポリ（１－フルオロ－１－ペルフルオロエチル－２，２－ビス（トリフルオロメチル）－３，５－シクロペンチレンエチレン）、ポリ（１，２－ジフルオロ－１－ペルフルオロプロパニル－２－トリフルオロメチル－３，５－シクロペンチレンエチレン）、ポリ（１－ペルフルオロヘキシル－３，５－シクロペンチレンエチレン）、ポリ（１－メチル－２－ペルフルオロヘキシル－３，５－シクロペンチレンエチレン）、ポリ（１－ブチル－２－ペルフルオロヘキシル－３，５－シクロペンチレンエチレン）、ポリ（１－ヘキシル－２－ペルフルオロヘキシル－３，５－シクロペンチレンエチレン）、ポリ（１－オクチル－２－ペルフルオロヘキシル－３，５－シクロペンチレンエチレン）、ポリ（１－ペルフルオロヘプチル－３，５－シクロペンチレンエチレン）、ポリ（１－ペルフルオロオクチル－３，５－シクロペンチレンエチレン）、ポリ（１－ペルフルオロデカニル－３，５－シクロペンチレンエチレン）、ポリ（１，１，２－トリフルオロ－ペルフルオロペンチル－３，５－シクロペンチレンエチレン）、ポリ（１，２－ジフルオロ－１－トリフルオロメチル－２－ペルフルオロブチル－３，５－シクロペンチレンエチレン）、ポリ（１，１，２－トリフルオロ－ペルフルオロヘキシル－３，５－シクロペンチレンエチレン）、ポリ（１，２－ジフルオロ－１－トリフルオロメチル－２－ペルフルオロペンチル－３，５－シクロペンチレンエチレン）、ポリ（１，２－ビス（ペルフルオロブチル）－３，５－シクロペンチレンエチレン）、ポリ（１，２－ビス（ペルフルオロヘキシル）－３，５－シクロペンチレンエチレン）、ポリ（１－メトキシ－２－トリフルオロメチル－３，５－シクロペンチレンエチレン）、ポリ（１－ｔｅｒｔ－ブトキシメチル－２－トリフルオロメチル－３，５－シクロペンチレンエチレン）、ポリ（１，１，３，３，３a, ６a－ヘキサフルオロフラニル－３，５－シクロペンチレンエチレン）、ポリ（１－フルオロ－２－トリフルオロメトキシ－３，５－シクロペンチレンエチレン）、ポリ（１－フルオロ－１－トリフルオロメトキシ－３，５－シクロペンチレンエチレン）、ポリ（１－メチル－１－フルオロ－２－トリフルオロメトキシ－３，５－シクロペンチレンエチレン）、ポリ（１，１－ジフルオロ－２－トリフルオロメトキシ－３，５－シクロペンチレンエチレン）、ポリ（１，２－ジフルオロ－２－トリフルオロメトキシ－３，５－シクロペンチレンエチレン）、ポリ（１－ペルフルオロエトキシ－３，５－シクロペンチレンエチレン）、
ポリ（１，１－ビス（トリフルオロメトキシ）－３，５－シクロペンチレンエチレン）、ポリ（１，１，２－トリフルオロ－２－トリフルオロメトキシ－３，５－シクロペンチレンエチレン）、ポリ（１，２－ビス（トリフルオロメトキシ）－３，５－シクロペンチレンエチレン）、ポリ（１－ペルフルオロプロポキシ－３，５－シクロペンチレンエチレン）、ポリ（１－メチル－２－ペルフルオロプロポキシ－３，５－シクロペンチレンエチレン）、ポリ（１－ブチル－２－ペルフルオロプロポキシ－３，５－シクロペンチレンエチレン）、ポリ（１－ペルフルオロ－ｉｓｏ－プロポキシ－３，５－シクロペンチレンエチレン）、ポリ（１－メチル－２－ペルフルオロ－ｉｓｏ－プロポキシ－３，５－シクロペンチレンエチレン）、ポリ（１，２－ジフルオロ－１，２－ビス（トリフルオロメトキシ）－３，５－シクロペンチレンエチレン）、ポリ（１－ペルフルオロブトキシ－３，５－シクロペンチレンエチレン）、ポリ（１－ペルフルオロ－ｉｓｏ－ブトキシ－３，５－シクロペンチレンエチレン）、ポリ（１－ペルフルオロ－ｔｅｒｔ－ブトキシ－３，５－シクロペンチレンエチレン）、ポリ（１－メチル－２－ペルフルオロ－ｉｓｏ－ブトキシ－３，５－シクロペンチレンエチレン）、ポリ（１－ブチル－２－ペルフルオロ－ｉｓｏ－ブトキシ－３，５－シクロペンチレンエチレン）、ポリ（１，２－ジフルオロ－１－トリフルオロメトキシ－２－ペルフルオロエトキシ－３，５－シクロペンチレンエチレン）、ポリ（１，１，２－トリフルオロ－２－ペルフルオロブトキシ－３，５－シクロペンチレンエチレン）、ポリ（１，２－ジフルオロ－１－トリフルオロメトキシ－２－ペルフルオロブトキシ－３，５－シクロペンチレンエチレン）、ポリ（１－フルオロ－１－ペルフルオロエトキシ－２，２－ビス（トリフルオロメトキシ）－３，５－シクロペンチレンエチレン）、ポリ（１，２－ジフルオロ－１－ペルフルオロプロポキシ－２－トリフルオロメトキシ－３，５－シクロペンチレンエチレン）、ポリ（１－ペルフルオロヘトキシ－３，５－シクロペンチレンエチレン）、ポリ（１－メチル－２－ペルフルオロヘトキシ－３，５－シクロペンチレンエチレン）、ポリ（１－ブチル－２－ペルフルオロヘトキシ－３，５－シクロペンチレンエチレン）、ポリ（１－ヘキシル－２－ペルフルオロヘトキシ－３，５－シクロペンチレンエチレン）、ポリ（１－オクチル－２－ペルフルオロヘトキシ－３，５－シクロペンチレンエチレン）、ポリ（１－ペルフルオロヘプトキシ－３，５－シクロペンチレンエチレン）、ポリ（１－ペルフルオロオクトキシ－３，５－シクロペンチレンエチレン）、ポリ（１－ペルフルオロデトキシ－３，５－シクロペンチレンエチレン）、ポリ（１，１，２－トリフルオロ－ペルフルオロペントキシ－３，５－シクロペンチレンエチレン）、ポリ（１，２－ジフルオロ－１－トリフルオロメトキシ－２－ペルフルオロブトキシ－３，５－シクロペンチレンエチレン）、ポリ（１，１，２－トリフルオロ－２－ペルフルオロヘトキシ－３，５－シクロペンチレンエチレン）、ポリ（１，２－ジフルオロ－１－トリフルオロメトキシ－２－ペルフルオロペンチル－３，５－シクロペンチレンエチレン）、ポリ（１，２－ビス（ペルフルオロブトキシ）－３，５－シクロペンチレンエチレン）、ポリ（１，２－ビス（ペルフルオロへトキシ）－３，５－シクロペンチレンエチレン）、ポリ（１－メトキシ－２－トリフルオロメトキシ－３，５－シクロペンチレンエチレン）、ポリ（１－ｔｅｒｔ－ブトキシメチル－２－トリフルオロメトキシ－３，５－シクロペンチレンエチレン）、ポリ（１－（２´, ２´, ２´－トリフルオロエトキシ）－３，５－シクロペンチレンエチレン）、ポリ（１－(２´, ２´, ３´, ３´ , ３´-ペンタフルオロプロポキシ)－３，５－シクロペンチレンエチレン）、ポリ（１－メチル－２－(２´, ２´, ３´, ３´ , ３´－ペンタフルオロプロポキシ)－３，５－シクロペンチレンエチレン）、ポリ（１－ブチル－２－(２´, ２´, ３´, ３´ , ３´－ペンタフルオロプロポキシ)－３，５－シクロペンチレンエチレン）、ポリ（１－（１´,１´,１´－トリフルオロ－ｉｓｏ－プロポキシ）－３，５－シクロペンチレンエチレン）、ポリ（１－メチル－（１´,１´,１´－トリフルオロ－ｉｓｏ－プロポキシ）－３，５－シクロペンチレンエチレン）、ポリ（１－(２´, ２´, ３´, ３´ , ４´，４´，４´－ヘプタフルオロブトキシ)－３，５－シクロペンチレンエチレン）、ポリ（１－(１´,１´,１´-トリフルオロ－ｉｓｏ－ブトキシ)－３，５－シクロペンチレンエチレン）、ポリ（１－(１´,１´,１´－トリフルオロ－ｉｓｏ－ブトキシ)－３，５－シクロペンチレンエチレン）、ポリ（１－メチル－２－(１´,１´,１´-トリフルオロ－ｉｓｏ－ブトキシ)－３，５－シクロペンチレンエチレン）、ポリ（１－ブチル－２－(１´,１´,１´－トリフルオロ－ｉｓｏ－ブトキシ)－３，５－シクロペンチレンエチレン）、ポリ（１，２－ジフルオロ－１－トリフルオロメトキシ－２－（２´,２´,２´－トリフルオロエトキシ）－３，５－シクロペンチレンエチレン）、ポリ（１，１，２－トリフルオロ－２－（２´, ２´, ３´, ３´ , ４´，４´，４´－ヘプタフルオロブトキシ）－３，５－シクロペンチレンエチレン）、ポリ（１，２－ジフルオロ－１－トリフルオロメトキシ－２－（２´, ２´, ３´, ３´ , ４´，４´，４´－ヘプタフルオロブトキシ）－３，５－シクロペンチレンエチレン）、ポリ（１－フルオロ－１－（２´, ２´, ２´－トリフルオロエトキシ）－２，２－ビス（トリフルオロメトキシ））－３，５－シクロペンチレンエチレン）、ポリ（１，２－ジフルオロ－１－(２´, ２´, ３´, ３´ , ３´-ペンタフルオロプロポキシ)－２－トリフルオロメトキシ－３，５－シクロペンチレンエチレン）、ポリ（１－（２´, ２´, ３´, ３´ , ４´，４´，５´，５´，６´，６´，６´－ウンデカフルオロヘトキシ）－３，５－シクロペンチレンエチレン）、ポリ（１－メチル－２－（２´, ２´, ３´, ３´ , ４´，４´，５´，５´，６´，６´，６´－ウンデカフルオロヘトキシ）－３，５－シクロペンチレンエチレン）、ポリ（１－ブチル－２－（２´, ２´, ３´, ３´ , ４´，４´，５´，５´，６´，６´，６´－ウンデカフルオロヘトキシ）－３，５－シクロペンチレンエチレン）、ポリ（１－ヘキシル－２－（２´, ２´, ３´, ３´ , ４´，４´，５´，５´，６´，６´，６´－ウンデカフルオロヘトキシ）－３，５－シクロペンチレンエチレン）、ポリ（１－オクチル－２－（２´, ２´, ３´, ３´ , ４´，４´，５´，５´，６´，６´，６´－ウンデカフルオロヘトキシ）－３，５－シクロペンチレンエチレン）、ポリ（１－（２´, ２´, ３´, ３´ , ４´，４´，５´，５´，６´，６´，７´，７´，７´－トリデカフルオロヘプトキシ）－３，５－シクロペンチレンエチレン）、ポリ（１－（２´, ２´, ３´, ３´ , ４´，４´，５´，５´，６´，６´，７´，７´，８´，８´，８´－ペンタデカフルオロオクトキシ）－３，５－シクロペンチレンエチレン）、ポリ（１－（２´, ２´, ３´, ３´ , ４´，４´，５´，５´，６´，６´，７´，７´，８´，８´，９´，９´，９´－ヘプタデカフルオロデトキシ）－３，５－シクロペンチレンエチレン）、ポリ（１，１，２－トリフルオロ－２－（１´,１´,１´－トリフルオロ－ｉｓｏ－プロポキシ）－３，５－シクロペンチレンエチレン）、ポリ（１，２－ジフルオロ－１－トリフルオロメトキシ－２－（２´, ２´, ３´, ３´ , ４´，４´，４´－ヘプタフルオロブトキシ）－３，５－シクロペンチレンエチレン）、ポリ（１，１，２－トリフルオロ－（２´, ２´, ３´, ３´ , ４´，４´，５´，５´，６´，６´，６´－ウンデカフルオロヘトキシ）－３，５－シクロペンチレンエチレン）、ポリ（１，２－ビス（２´, ２´, ３´, ３´ , ４´，４´，４´－ヘプタフルオロブトキシ）－３，５－シクロペンチレンエチレン）、ポリ（１，２－ビス（２´, ２´, ３´, ３´ , ４´，４´，５´，５´，６´，６´，６´－ウンデカフルオロヘトキシ）－３，５－シクロペンチレンエチレン）、ポリ（１，２－ジフルオロ－１－ペルフルオロエチル－２－トリフルオロメチル－３，５－シクロペンチレンエチレン）、ポリ（１，２－ジフルオロ－１－ペルフルオロ－ｉｓｏ－プロピル－２－トリフルオロメチル－３，５－シクロペンチレンエチレン）等が挙げられる。
　フッ素含有環状オレフィンポリマーの分子量は、たとえば試料濃度３．０～９．０ｍｇ／ｍｌでゲルパーミュエーションクロマトグラフィー（ＧＰＣ）によって測定したポリスチレン換算の重量平均分子量（Ｍｗ）において、５,０００～１,０００,０００であることが好ましく、１０,０００～３００,０００であることがより好ましい。この重量平均分子量（Ｍｗ）を上記下限値以上とすることにより、溶液キャスト法により成形した成形物、あるいは基材にコートした成形物において曲げなどの外部応力に起因したヒビなどの発生しない、良好な状態の成形物をより確実に得る事が可能になる。また、重量平均分子量（Ｍｗ）を上記上限値以下とすることにより、溶融成形が容易な流動性を持つことが可能になる。
　なお、本明細書中において、「～」で示した数値範囲は、その上限値および下限値を含むものとする。
　また、重量平均分子量（Ｍｗ）と数平均分子量（Ｍｎ）との比である分子量分布（Ｍｗ／Ｍｎ）は、１．３～５．０とすることが好ましく、１．５～４．５とすることがより好ましく、１．７～４．０とすることがとくに好ましい。この分子量分布（Ｍｗ／Ｍｎ）を上記下限値以上とすることにより、溶液キャスト法や溶融成形法などの各種成形法で作製したフィルムまたは成形物の靱性を向上させ、外部応力に起因したクラックや割れの発生をより効果的に抑制することが可能になる。一方で、分子量分布（Ｍｗ／Ｍｎ）を上記上限値以下とすることにより、オリゴマーなどの特に低分子量成分が溶出することを抑え、基材表面の水接触角が変化して本実施形態の細胞増殖の形態が妨げられることをより確実に抑制することが可能となる。重量平均分子量（Ｍｗ）、および分子量分布（Ｍｗ／Ｍｎ）を上記した範囲とすることにより、細胞培養および細胞を利用した検査に用いられるものとしてとくに好適な医療器具を得ることが可能になる。
　示差走査熱量分析によるフッ素含有環状オレフィンポリマーのガラス転移温度は、５０～３００℃とすることが好ましく、８０～２８０℃とすることがより好ましく、１００～２５０℃とすることがさらに好ましい。ガラス転移温度が上記範囲であると、加熱滅菌処理が行え、また使用環境下で形状を維持することができ、さらに溶融成形において加熱温度に対して優れた流動性を有し製造安定性良く、色相にも優れた細胞培養および細胞を利用した検査のための基材としての医療器具を好適に得ることが可能になる。
　本実施形態の一般式（１）の部分化フッ素化ポリマーは、全フッ素化ポリマーとは異なり、主鎖が炭化水素で側鎖にフッ素原子を有する部分的なフッ素化ポリマーである構造に起因して極性が大きく、これにより、ポリマー合成時の溶剤である通常市販されているエーテル、ケトンなどの極性溶剤に対して良く溶解し、光硬化性化合物などの極性化合物にも優れた溶解性を示しながら、その成形物は、ＰＥＴ、アクリル樹脂などの汎用樹脂からなる成形物に対して優れた密着性を示し、かつ、フッ素系ポリマーとしての特徴である疎水な表面性状を有する。
　次に、フッ素含有環状オレフィンポリマーの製造方法について説明する。
　以下に記載の製造方法によって得られるフッ素含有環状オレフィンポリマーからなるフィルム、または成形物を、細胞培養および細胞を利用した検査のための基材として用いる事により、本実施形態の細胞が接着および付着しづらいことを特徴とする医療器具を好適に得ることができる。
（フッ素含有環状オレフィンポリマーの製造方法）
　本実施形態において、実質的に一般式（１）で表される繰返し構造単位からなるフッ素含有環状オレフィンポリマーは、後述する方法で製造することができる。これにより、本実施形態の細胞の接着または付着が抑制されることを特徴とする細胞培養および細胞を利用した検査のための基材の原料となる、フッ素含有環状オレフィンポリマーを好適に得ることができる。
　具体的には、下記一般式（２）で表わされる環状オレフィンモノマーを開環メタセシス重合触媒によって重合し、得られる重合体の主鎖のオレフィン部を水素添加することによって、フッ素含有環状オレフィンポリマーを合成することができる。
Figure JPOXMLDOC01-appb-C000009
 （式（２）中、Ｒ１～Ｒ４は、上記式（１）と同義である。）
　なお、本実施形態の効果を損なわない範囲であれば、一般式（２）で表される環状オレフィンモノマー以外のモノマーを含んでいてもよい。
　本実施形態の一般式（１）で表される構造単位を含有するフッ素含有環状オレフィンポリマーは、一般式（２）で表されるモノマーを開環メタセシス重合した後に、主鎖二重結合を水素添加したフッ素含有ポリマーである。開環メタセシス重合は、Ｓｃｈｒｏｃｋ触媒が好ましく用いられ、Ｇｒｕｂｂｓ触媒を用いても良く、これにより極性モノマーに対する重合触媒活性を高め、工業的に優れた製造方法を実現することが可能となる。なお、これらの開環メタセシス重合触媒は、単独で用いてもよく、二種以上を組み合わせて用いてもよい。また、古典的な有機遷移金属錯体、遷移金属ハロゲン化物または遷移金属酸化物と、助触媒としてのルイス酸との組み合せからなる開環メタセシス重合触媒を用いることもできる。
　環状オレフィンモノマーの開環メタセシス重合において、環状オレフィンモノマーと開環メタセシス重合触媒とのモル比は、タングステン、モリブデン、またはルテニウム等の遷移金属アルキリデン触媒の場合は、遷移金属アルキリデン触媒１モルに対して、該モノマーを１００～３０,０００モルとすることが好ましく、１,０００～２０,０００モルとすることがより好ましい。
　また、上記した範囲に分子量、およびその分布を制御するために、連鎖移動剤としてオレフィンまたはジエンを使用することができる。オレフィンとしては、例えば、エチレン、プロピレン、１－ブテン、１－ペンテン、１－ヘキセン、１－オクテン等のα－オレフィンまたはこれらのフッ素含有オレフィンがあげられ、さらに、ビニルトリメチルシラン、アリルトリメチルシラン、アリルトリエチルシラン、アリルトリイソプロピルシラン等のケイ素含有オレフィンまたはこれらのフッ素およびケイ素含有オレフィンがあげられる。また、ジエンとしては、１，４－ペンタジエン、１，５－ヘキサジエン、１，６－ヘプタジエン等の非共役系ジエンまたはこれらのフッ素含有非共役系ジエンがあげられる。これらオレフィン、フッ素含有オレフィンまたはジエンはそれぞれ単独で用いてもよく、２種類以上を併用しても良い。
　上記連鎖移動剤の使用量は、連鎖移動剤が環状オレフィンモノマー１モルに対して０．００１～１,０００モルであることが好ましく、０．０１～１００モルであることがより好ましい。また、連鎖移動剤は、遷移金属アルキリデン触媒１モルに対して０．１～１,０００モルであることが好ましく、１～５００モルであることがより好ましい。
　また、環状オレフィンモノマーの開環メタセシス重合は、無溶媒でも溶媒を使用しても良いが、特に使用する溶媒としては、テトラヒドロフラン、ジエチルエーテル、ジブチルエーテル、ジメトキシエタンもしくはジオキサン等のエーテル類、酢酸エチル、酢酸プロピルもしくは酢酸ブチル等のエステル類、ベンゼン、トルエン、キシレンもしくはエチルベンゼン等の芳香族炭化水素、ペンタン、ヘキサンもしくはヘプタン等の脂肪族炭化水素、シクロペンタン、シクロヘキサン、メチルシクロヘキサン、ジメチルシクロヘキサンもしくはデカリン等の脂肪族環状炭化水素、メチレンジクロライド、ジクロロエタン、ジクロロエチレン、テトラクロロエタン、クロロベンゼンもしくはトリクロロベンゼン等のハロゲン化炭化水素、フルオロベンゼン、ジフルオロベンゼン、ヘキサフルオロベンゼン、トリフルオロメチルベンゼン、メタキシレンヘキサフルオライド等のフッ素含有芳香族炭化水素、ペルフルオロヘキサン等のフッ素含有脂肪族炭化水素、ペルフルオロシクロデカリン等のフッ素含有脂肪族環状炭化水素、またはペルフルオロ－２－ブチルテトラヒドロフラン等のフッ素含有エーテル類が挙げられる。これらは、単独で用いてもよく、２種類以上を組み合わせて使用しても良い。
　環状オレフィンモノマーの開環メタセシス重合では、該モノマーの反応性および重合溶媒ヘの溶解性によっても異なるが、モノマー溶液に対する環状オレフィンモノマーの濃度は５～１００質量％であることが好ましく、１０～６０質量％であることがより好ましい。また、反応温度は、－３０～１５０℃であることが好ましく、３０～１００℃であることがより好ましい。また、反応時間は、１０分～１２０時間であることが好ましく、３０分～４８時間であることがより好ましい。さらに、ブチルアルデヒド等のアルデヒド類、アセトン等のケトン類、メタノール等のアルコール類、水等の失活剤で反応を停止し、重合体の溶液を得ることができる。
　本実施形態の環状オレフィンポリマーは、環状オレフィンモノマーを開環メタセシス重合して得られたポリマーの主鎖のオレフィン部を、触媒によって水素添加反応することによって得られる。また、その水素添加触媒は使用する溶媒の水素添加反応を起こさずに、該ポリマーの主鎖のオレフィン部を水素添加できる触媒であれば、均一系金属錯体触媒でも不均一系の金属担持触媒のいずれであってもよく、均一系金属錯体触媒として、例えば、クロロトリス（トリフェニルホスフィン）ロジウム、ジクロロトリス（トリフェニルホスフィン）オスミウム、ジクロロヒドリドビス（トリフェニルホスフィン）イリジウム、ジクロロトリス（トリフェニルホスフィン）ルテニウム、ジクロロテトラキス（トリフェニルホスフィン）ルテニウム、クロロヒドリドカルボニルトリス（トリフェニルホスフィン）ルテニウム、ジクロロトリス（トリメチルホスフィン）ルテニウム等が挙げられ、また、不均一系金属担持触媒として、例えば、活性炭担持パラジウム、アルミナ担持パラジウム、活性炭担持ロジウム、アルミナ担持ロジウム、活性炭担持ルテニウム、アルミナ担持ルテニウム等が挙げられる。これら水素添加触媒は、単独で用いてもよく、または二種類以上を組合せて使用することもできる。特に、細胞培養の観点からは、ろ過で簡単に除去できる活性炭担持パラジウム、またはアルミナ担持パラジウムが好適に用いられる。
　上記の主鎖のオレフィン部の水素添加処理をするに際して、不均一系または均一系水素添加触媒を使用する場合には、水素添加触媒の使用量は、水素添加触媒中の金属成分が、水素添加処理前のポリマー１００質量部に対して５×１０－４質量部～１００質量部であることが好ましく、１×１０－２質量部～３０質量部であることがより好ましい。
　水素添加に用いられる溶媒としては、環状オレフィンポリマーを溶解し、かつ、溶媒自身が水素添加されないものであれば特に制限はなく、例えば、テトラヒドロフラン、ジエチルエーテル、ジブチルエーテル、ジメトキシエタンなどのエーテル類、酢酸エチル、酢酸プロピルまたは酢酸ブチル等のエステル類、ベンゼン、トルエン、キシレン、エチルベンゼンなどの芳香族炭化水素、ペンタン、ヘキサン、ヘプタンなどの脂肪族炭化水素、シクロペンタン、シクロヘキサン、メチルシクロヘキサン、ジメチルシクロヘキサン、デカリンなどの脂肪族環状炭化水素、メチレンジクロリド、クロロホルム、ジクロロエタン、ジクロロエチレン、テトラクロロエタン、クロロベンゼン、トリクロロベンゼンなどのハロゲン化炭化水素、フルオロベンゼン、ジフルオロベンゼン、ヘキサフルオロベンゼン、トリフルオロメチルベンゼン、メタキシレンヘキサフルオライド等のフッ素含有芳香族炭化水素、ペルフルオロヘキサン等のフッ素含有脂肪族炭化水素、ペルフルオロシクロデカリン等のフッ素含有脂肪族環状炭化水素、ペルフルオロ－２－ブチルテトラヒドロフラン等のフッ素含有エーテル類等が挙げられる。これらは単独で用いてもよく、２種以上を組合せて使用してもよい。
　上記の主鎖のオレフィン部の水素添加反応は、水素圧力が常圧～３０ＭＰａであることが好ましく、０．５～２０ＭＰａであることがより好ましく、２～１５ＭＰａであることがとくに好ましい。また、反応温度は、０～３００℃の温度であることが好ましく、室温～２５０℃であることがより好ましく、５０～２００℃であることがとくに好ましい。水素添加反応の実施様式は、特に制限はないが、例えば、触媒を溶媒中に分散または溶解して行う方法、触媒をカラムなどに充填し、固定相としてポリマー溶液を流通させて行う方法などが挙げられる。
　さらに、主鎖のオレフィン部の水素添加処理は、水素添加処理前の環状オレフィンポリマーの重合溶液を貧溶媒に析出させポリマーを単離した後に、再度溶媒に溶解して水素添加処理を行なっても、重合溶液からポリマーを単離することなく、上記の水素添加触媒で水素添加処理を行なってもよく、特に制限はない。
　また、環状オレフィンポリマーのオレフィン部の水素添加率は５０％以上であることが好ましく、７０～１００％であることがより好ましく、９０～１００％であることがとくに好ましい。水素添加率を上記下限値以上とすることにより、オレフィン部において、光吸収に起因した劣化や成形時の加熱に起因した酸化が生じることを抑制し、水接触角などの基材表面の性状を良好なものとすることを容易にすることができる。
　本実施形態において水素添加後の、特に、活性炭担持パラジウム、アルミナ担持パラジウムなどの固体触媒を好ましく用いる場合のポリマー溶液から環状オレフィンポリマーを取得する方法は、特に制限はないが、例えば、ろ過、遠心分離、デカンテーション等の方法でポリマーを取得し、撹拌下の貧溶媒に反応溶液を排出する方法、反応溶液中にスチームを吹き込むスチームストリッピング等の方法によってポリマーを析出させる方法、または、反応溶液から溶媒を加熱等によって蒸発除去する方法等が挙げられる。
　また、不均一系金属担持触媒を利用して水素添加反応を実施した場合は、合成液をろ過して金属担持触媒をろ別した後に、上記した方法で環状オレフィンポリマーを取得する事ができる。なお、粒径の大きな触媒成分を予めデカンテーション、延伸分離などの方法でポリマー溶液中に沈降させ、上澄みを採取し、触媒成分を粗取りした溶液をろ過し、上記した方法で環状オレフィンポリマーを取得しても良い。特に、触媒成分を精密ろ過することが、好適であり、ろ過フィルターの目開きは、好ましくは、１０μｍ～０．０５μｍ、特に好ましくは、１０μｍ～０．１μｍ、さらに好ましくは、５μｍ～０．１μｍである。
　次に、医療器具の作製方法について説明する。
（フッ素含有環状オレフィンポリマーを用いた医療器具の作製方法）
　本実施形態において上述のように製造したフッ素含有環状オレフィンポリマーから、細胞の培養、または細胞の検査のために用いる医療器具を作製する方法について記載する。たとえば、以下に示す方法により、本実施形態の基材表面の水接触角が７０°以上１２０°以下である医療器具を作製することが可能になる。本実施形態に係る医療器具は、たとえばフィルムやシート状の単層膜からなる基材や、他の材料の上にコート膜を形成して得られる基材を備える。このような基材を作製する方法としては、たとえば上記において例示した一般式（１）で表されるフッ素含有環状オレフィンポリマーを有機溶剤に溶解させて得られるワニスを用いた溶液キャスト法を挙げることができる。
　以下に、溶液キャスト法を用いた基材の作製方法について説明する。
　まず、上述したとおり、上記において例示した一般式（１）で表されるフッ素含有環状オレフィンポリマーを有機溶剤に溶解させてワニスを得る。
　有機溶媒としては、特に制限はないが、例えば、メタキシレンヘキサフロライド、ベンゾトリフロライド、フルオロベンゼン、ジフルオロベンゼン、ヘキサフルオロベンゼン、トリフルオロメチルベンゼン、ビス（トリフルオロメチル）ベンゼン等のフッ素含有芳香族炭化水素、ペルフルオロヘキサン、ペルフルオロオクタン等のフッ素含有脂肪族炭化水素、ペルフルオロシクロデカリン等のフッ素含有脂肪族環状炭化水素、ペルフルオロ－２－ブチルテトラヒドロフラン等のフッ素含有エーテル類、クロロホルム、クロルベンゼン、トリクロルベンゼンなどのハロゲン化炭化水素、テトラヒドロフラン、ジブチルエーテル、１,２－ジメトキシエタン、ジオキサン等のエーテル類、酢酸エチル、酢酸プロピル、酢酸ブチル等のエステル類、または、メチルエチルケトン、メチルイソブチルケトン、シクロヘキサノン等のケトン類等を挙げることができる。これらのうちから、溶解性、製膜性を考慮して選択することができる。また、これらは単独で用いてもよく、二種類以上を組み合わせて用いてもよい。特に、製膜性の観点からは、大気圧下で７０℃以上の沸点をもつ溶媒が好ましい。これにより、蒸発速度が速くなりすぎることを確実に抑えることができる。このため、塗布する際に部分的に溶媒が乾き始めてしまう等に起因して膜厚精度の悪化や膜表面におけるムラが生じてしまうことを、確実に抑制することができる。
　フッ素含有環状オレフィンポリマーを溶解させる濃度は、１.０～９９.０質量％であることが好ましく、５.０～９０.０質量％であることがより好ましく、１０.０～８０.０質量％であることがとくに好ましい。濃度は、ポリマーの溶解性、ろ過プロセスへの適応性、製膜性、フィルムの膜厚を考慮して選択してもよい。
　さらに、本実施形態においてフィルム特性を損なわない範囲であれば、必要に応じて他の公知の成分を加えてよい。他の成分としては、老化防止剤、レベリング剤、濡れ性改良剤、界面活性剤、可塑剤等の改質剤、紫外線吸収剤、防腐剤、抗菌剤などの安定剤、光増感剤、シランカップリング剤等が挙げられる。
　次いで、上記した方法で調製したワニスを、フィルターを通過させてろ過する。これによって、ワニスからポリマー不溶分、ゲル、異物等を大きく低減することができ、細胞を培養する培養器具や、細胞を利用した検査を行う検査器具としての基材表面を平滑に、そして疎水な表面性状を全面にわたって均一に形成できる。
　ろ過フィルターの目開きは、好ましくは、１０μｍ～０．０５μｍ、特に好ましくは、１０μｍ～０．１μｍ、さらに好ましくは、５μｍ～０．１μｍである。ろ過のプロセスは、孔径の大きなフィルターから小さなフィルターへポリマー溶液を送る多段プロセスでも、直接、孔径の小さなフィルターへワニスを送る単一プロセスでも良い。フィルターの材質は、テフロン（登録商標）、ＰＰ、ＰＥＳ、セルロースなどの有機材料からなるものでも、ガラス繊維、金属などの無機材料からなるものでも良く、細胞培養に悪影響を与えなければワニス特性、プロセス適応性から選ぶことができる。
　また、ワニスをフィルターへ送る方法としては、圧力差を利用する方法でも、スクリューなどを介して機械的な駆動によってワニスをフィルターへ送液する方法でも良い。さらに、ろ過の温度は、フィルター性能、溶液粘度、ポリマーの溶解性を考慮した範囲で選ばれ、－１０～２００℃であることが好ましく、０℃～１５０℃であることがより好ましく、室温～１００℃であることがとくに好ましい。
　前記のようにワニスをろ過した後、ワニスからフィルムを製膜する。溶液キャスト法で製造する場合は、まず、支持体の上に、テーブルコート、スピンコート、ディップコート、ダイコート、スプレーコート、バーコート、ロールコート、カーテンフローコートなどの方法でポリマー溶液（ワニス）を塗布し、製膜する。支持体としては、ステンレス鋼、シリコン等の金属材料、ガラス、石英等の無機材料、ポリイミド、ポリアミド、ポリエステル、ポリカーボネート、ポリフェニレンエーテル、ポリフェニレンスルフィド、ポリアクリレート、ポリメタクリレート、ポリアクリレート、エポキシ樹脂、シリコーン樹脂等の樹脂材料等からなるものから選ぶことができる。
　塗膜の乾燥は、加熱板の上に、溶液がキャストされた支持体を置いて加熱乾燥させても良く、加熱した乾燥炉に溶液をキャストした基材を入れて加熱乾燥させても良く、空気、窒素などの気体を加熱した温風を塗布膜にあてて乾燥させても良く、これらを組み合わせたプロセスを利用して乾燥させても良い。乾燥時の温度は１０～２５０℃であることが好ましく、２０～２２０℃であることがより好ましく、３０～２００℃であることがとくに好ましく、ワニスの特性、フィルムの膜厚、基材の耐熱性を考慮して選ばれる。また、温度設定が２種類以上である多段の乾燥温度を設定して塗膜を乾燥させても良い。塗膜を乾燥する時間は、ワニス溶剤の沸点、フィルムの膜厚、プロセス要件を考慮した条件から選択する事ができる。これらによって、支持体上にフィルムが形成される。
　フィルムやシート状の単層膜からなる基材を得る場合には、たとえば支持体からフィルムを剥離させることにより基材を製造することができる。支持体からのフィルムの剥離は、フィルムの端部に市販のテープを貼り付け、これに応力を加えて剥離することにより行ってもよく、水、溶剤などの液体をフィルムと支持体の接触界面に接触させて支持体表面とフィルムの接触面の表面張力の差を利用してフィルムを剥離することにより行っても良い。
　他の材料の上にコート膜を形成して基材を得る場合には、たとえば前記工程のうち塗膜の乾燥工程までを実施することにより、支持体と、本実施形態のフッ素含有環状オレフィンポリマーからなるコート膜により構成される基材を製造することができる。この場合、支持体は、ＰＥＴ、アクリル樹脂などの有機材料、もしくはガラス、シリコンなどの無機材料から選択されることがとくに好ましい。
　また、他の医療器具を構成する基材を作製する方法としては、溶融成形法により基材となるフィルムを作製する方法が挙げられる。溶融成形法でフィルム製造する方法としては、上記に例示したフッ素含有環状オレフィンポリマーを溶融混練機を用いてＴダイを経てフィルム化する方法や、インフレーション法等が挙げられる。Ｔダイによる溶融押出しフィルム製造においては、例えば、必要に応じて添加剤を配合した環状オレフィンポリマーを押出機に投入し、ガラス転移温度よりも好ましくは５０℃～２００℃高い温度、より好ましくは８０℃～１５０℃高い温度で溶融混練し、Ｔダイから押出し、冷却ロールなどで溶融ポリマーを冷却することでフィルムに加工することができる。また、本発明の効果を損なわない範囲で、紫外線吸収剤、酸化防止剤、難燃剤、帯電防止剤、着色剤等の添加剤を添加してもよい。
　フッ素含有環状オレフィンポリマーを用いて作製されるフィルムの膜厚は、１～１０００μｍであることが好ましく、５～５００μｍであることがより好ましく、１０～２００μｍであることがとくに好ましい。これらは、例えば、培養バッグ、培養プレート、培養シャーレなどの細胞培養に用いられる医療器具を作製する観点から好適な範囲となる。また、フィルムの膜厚は、それら器具を作製するプロセスに合わせて設定することができる。
　溶液キャスト法、もしくは溶融成形法で製造したフィルムからは、ヒートシール法や、接着剤を利用したシール法などにより、例えば、袋、チューブなどの形態の医療器具を製造でき、また、溶融プレスなどの方法で、例えば、シャーレなどの形態の医療器具を製造することもできる。
　さらには、上記に例示したフッ素含有環状オレフィンポリマーを用いて、例えば、射出成形、プレス成形、圧縮成形、射出圧縮成形、押出成形、ブロー成形などの方法により、細胞培養用のシャーレ、マルチウェルプレート、フラスコなどの培養器具を製造することもできる。この際の溶融成形温度は、３３０℃以下であることが好ましく、３００℃以下であることがより好ましく、２８０℃以下であることがとくに好ましい。この範囲の温度でポリマーを溶融し、成形することでポリマーの熱分解に伴う黄変や、分解ガスの発生などをより確実に抑制できる。さらに、本発明の効果を損なわない範囲で、紫外線吸収剤、酸化防止剤、難燃剤、帯電防止剤、着色剤等の添加剤を添加してもよい。
　また、本実施形態に係るフッ素含有環状オレフィンポリマーを用いた医療器具は、たとえば、細胞を保持または接触させる一面に凹凸構造を形成したフィルムやシート状の単層膜からなる基材や、他の材料の上に凹凸構造を形成したフィルムやシート状の単層膜を接着剤または粘着剤などで貼り付けて形成して得られる基材を備えてもよく、特に１２１°～１６０°の水接触角を実現するために好ましく用いられる。
　この凹凸構造のサイズは、凸凸間距離が４０ｎｍ～９０μｍのパターンを賦型したものであり、好ましくは６０ｎｍ～８０μｍ、特に好ましくは８０ｎｍ～７０μｍとすることで水接触角を所望の範囲とすることができ、形状は特に限定されない。
　ここで、凹凸構造は、スクリーン印刷、エンボス加工、サブミクロンインプリント、ナノインプリントなど様々な方法で凹凸構造を形成してもよい。
　特に、凹凸構造をインプリント方法で形成するときは、石英、シリコン、ニッケル、レジストなどからなるモールドの様々なパターンに、たとえば上記において例示した一般式（１）で表される構造単位を含有するフッ素含有環状オレフィンポリマーを有機溶剤に溶解させて得られるワニスを塗布する溶液キャスト法を挙げることができる。
　以下に、溶液キャスト法によるワニスからの凹凸構造を形成した基材の作製方法について説明する。
　まず、上述した溶液キャスト法を用いた基材の作製方法と同様な方法で、一般式（１）で表される構造単位を含有するフッ素含有環状オレフィンポリマーを有機溶剤に溶解させてワニスを調製し、フィルターを通過させてろ過を行う。
　次に、上記ワニスと凹凸構造を形成したモールドのパターン面を接触させ、溶剤を蒸発させることによってモールドのパターンを転写することにより凹凸構造を形成した基材を得ることができる。
　本実施形態の凹凸構造を形成した基材の作製に用いられる表面に微細パターンを形成させたモールドの基材材質としては、ニッケル、鉄、ステンレス鋼、ゲルマニウム、チタン、シリコン等の金属材料、ガラス、石英、アルミナ等の無機材料、ポリイミド、ポリアミド、ポリエステル、ポリカーボネート、ポリフェニレンエーテル、ポリフェニレンスルフィド、ポリアクリレート、ポリメタクリレート、ポリアリレート、エポキシ樹脂、シリコーン樹脂等の樹脂材料、ダイヤモンド、黒鉛等の炭素材料等が挙げられる。
　本実施形態の一般式（１）で表される構造単位を含有するフッ素含有環状オレフィンポリマーを有機溶剤に溶解したワニスと、モールドとを接触させる方法としては特に制限はなく、例えば、テーブルコート、スピンコート、ダイコート、スプレーコート、バーコート、ロールコートなどの方法でモールドの微細なパターン面の上にポリマー溶液（ワニス）を塗布する方法、または、ステンレス鋼、シリコン等の金属材料、ガラス、石英等の無機材料、ポリイミド、ポリアミド、ポリエステル、ポリカーボネート、ポリフェニレンエーテル、ポリフェニレンスルフィド、ポリアクリレート、ポリメタクリレート、ポリアリレート、エポキシ樹脂、シリコーン樹脂等の樹脂材料等の基材の上にテーブルコート、スピンコート、 ダイコート、スプレーコート、バーコート、ロールコートなどの方法でポリマー溶液を塗布し、モールドの微細なパターン面をそれに被せて接触させる方法のいずれであってもよい。
　具体的には、（１）微細パターンを有するモールド表面に、フッ素含有環状オレフィンポリマーと有機溶剤からなる溶液(ワニス)を塗布する工程と、前記溶液から溶剤を蒸発させる工程と、を含む方法、（２）支持体（基材）にフッ素含有環状オレフィンポリマーと有機溶剤からなる溶液（ワニス）を塗布する工程と、塗布層の上面を微細パターンが形成されたモールド表面で押圧する工程と、前記塗布層から溶剤を蒸発させる工程と、を含む方法、等を挙げることができる。尚、（２）の方法においては、塗布層から溶剤を蒸発させた後、モールドで押圧することもできる。
　転写体から溶剤を蒸発させ、乾燥する温度は通常１０～３００℃であり、好ましくは５０～２００℃の範囲であり、圧力は通常１３３Ｐａから大気圧の範囲であり、さらに、乾燥時間は通常１０分～１２０時間であり、好ましくは３０分～４８時間の範囲で実施することができる。また、乾燥温度、圧力および時間はそれぞれの設定で段階的に変化させても良い。
　本実施形態においては、溶媒を蒸発させてモールド上に転写体を形成させた後、この転写体を剥離する工程を備える。転写体の剥離は、ガラス転移温度以下の温度で行なうことが好ましく、さらに、（ガラス転移温度－２０℃）以下の温度で剥離することがより好ましく、これによって転写体に形成されたパターン形状を精度よく保持し、容易に剥離することができる。剥離の方法は、モールドから剥離によって離型しても、または、モールドと転写体を例えば水などの媒体と浸漬、スプレーなどの方法で接触させた後に表面張力を利用して剥離することができる。また、転写体背面に樹脂材、或いは、ガラス等の無機材を貼り付け該基板を支持体に剥離しても良い。
　また、本実施形態の凹凸構造を形成した細胞を保持または接触させる前記一面の基材は、一般式（１）で表される構造単位を含有するフッ素含有環状オレフィンポリマーからなるフィルムを、モールドのパターン面と接触させて押圧することによってモールドのパターンを転写させることにより得ることもできる。
　例えば、フィルムにガラス転移温度以上に加熱したモールドを圧着する方法、または、フィルムをガラス転移温度以上に加熱しモールドを圧着させる方法、または、フィルム及びモールドをガラス転移温度以上に加熱し、モールドを圧着する方法が好ましく、加熱温度は、ガラス転移温度～（ガラス転移温度＋１００℃）の範囲であり、好ましくは、（ガラス転移温度＋５℃）～（ガラス転移温度＋５０℃）であり、また、圧着圧力は、通常１ＭＰａ～１００ＭＰａであり、好ましくは、１ＭＰａ～６０ＭＰａの範囲である。これにより、転写体に形成されたパターン形状を精度よく形成することができる。
　圧着によってモールド上に形成させた転写体の剥離は、ガラス転移温度以下の温度で行なうことが好ましく、さらに、（ガラス転移温度－２０℃）以下の温度で剥離することがより好ましい。これによって転写体に形成されたパターン形状を精度よく保持し、容易に離脱することができる。剥離の方法は、モールドから剥離によって剥離しても、または、モールドと転写体を例えば水などの媒体と浸漬、スプレーなどの方法で接触させた後に表面張力を利用して剥離することができる。また、転写体背面に樹脂材、或いは、ガラス等の無機材を貼り付け該基板を支持体に剥離しても良い。
　さらに、溶融成形法により凹凸構造を形成した基材となるフィルムを作製する方法が挙げられる。溶融成形法でフィルム製造する方法としては、上記に例示したフッ素含有環状オレフィンポリマーを溶融混練機を用いてＴダイを経てフィルム化する方法が挙げられる。Ｔダイによる溶融押出しフィルム製造においては、例えば、必要に応じて添加剤を配合した環状オレフィンポリマーを押出機に投入し、ガラス転移温度よりも好ましくは５０℃～２００℃高い温度、より好ましくは８０℃～１５０℃高い温度で溶融混練し、Ｔダイから押出し、冷却ロールで送りながらポリマーのガラス転移温度以上に加熱した表面に微細なパターンを有するロール形状のモールドをフィルムに押し当てることで凹凸構造を形成したフィルムに加工する。この際の、表面に微細なパターンを有するロールの加熱温度は、上述のフィルムとモールドを加熱圧着することにより凹凸構造を形成する際の加熱温度と同じ範囲で用いられる。また、本発明の効果を損なわない範囲で、紫外線吸収剤、酸化防止剤、難燃剤、帯電防止剤、着色剤等の添加剤を添加してもよい。
　フッ素含有環状オレフィンポリマーを用いて作製される凹凸構造を形成した細胞を保持または接触させる前記一面の基材のフィルムの膜厚は、１～１０００μｍであることが好ましく、５～５００μｍであることがより好ましく、１０～２００μｍであることがとくに好ましい。これらは、例えば、培養バッグ、培養プレート、培養シャーレなどの細胞培養に用いられる医療器具を作製する観点から好適な範囲となる。また、フィルムの膜厚は、それら器具を作製するプロセスに合わせて設定することができる。
　溶液キャスト法、加熱圧着法もしくは溶融成形法で製造した凹凸構造を形成したフィルムまたはシートからは、ヒートシール法や、接着剤を利用したシール法などにより、例えば、袋、チューブなどの形態の医療器具を製造できる。また、ポリスチレン、ポリエチレン、金属などの他の材料で作製された、例えばシャーレ、マルチウェルプレート、フラスコなどの医療器具の細胞を保持または接触させる基材の表面に、本実施形態の凹凸構造を形成したフィルム、またはシートを貼り付けた形態の医療器具を製造することもできる。
（フッ素含有環状オレフィンポリマー組成物を用いた医療器具の作製方法）
　次に、本実施形態においてはフッ素含有環状オレフィンポリマー組成物から、細胞の培養、または細胞の検査のために用いる医療器具を作製する方法について記載する。たとえば、以下に示す方法により、本実施形態の基材表面の水接触角が７０°以上１２０°以下である医療器具を作製することが可能になる。
　フッ素含有環状オレフィンポリマー組成物は、上記において例示した一般式（１）で表されるフッ素含有環状オレフィンポリマー（以下、フッ素含有環状オレフィンポリマー（Ａ）とも呼ぶ）と、光硬化性化合物（Ｂ）と、光硬化開始剤（Ｃ）とを含む。本実施形態によれば、このようなフッ素含有環状オレフィンポリマー組成物を用いて、基材の一面に細胞を接触または保持させる医療器具の当該基材の少なくとも一面を形成することができる。
　これにより、各種部材との強固な密着性を発現しつつ、細胞培養バッグ、またはプレートなどの各種培養器具の細胞を接触または保持する基材表面の性状を改質することができ、細胞の接着および付着を抑制しつつ増殖させることが可能な医療器具を提供することができる。
　本実施形態に係る医療器具は、たとえばフィルムやシート状の単層膜からなる基材や、他の材料の上にコート膜を形成して得られる基材を備える。このような基材を作製する方法としては、たとえばフッ素含有環状オレフィンポリマー（Ａ）を含むフッ素含有環状オレフィンポリマー組成物を有機溶剤に溶解させて得られるワニスを用いた溶液キャスト法を挙げることができる。
　以下に、溶液キャスト法を用いた基材の作製方法について説明する。
　まず、上述したとおり、フッ素含有環状オレフィンポリマー（Ａ）を含むフッ素含有環状オレフィンポリマー組成物を有機溶剤に溶解させてワニスを得る。
　本実施形態に係るフッ素含有環状オレフィンポリマー組成物のワニスは、たとえばフッ素含有環状オレフィンポリマー（Ａ）を予め任意の濃度で溶液に調製し、それにフッ素含有環状オレフィンポリマー（Ａ）と後述する光硬化性化合物（Ｂ）の質量比（Ａ）／（Ｂ）が、好ましくは９９.９／０.１～５０／５０、より好ましくは９９.９／０.１～５５／４５、とくに好ましくは９９.９／０.１～６０／４０となるように光硬化性化合物（Ｂ）を加え、混合することで得られる。
　フッ素含有環状オレフィンポリマー組成物を調製する際に用いる有機溶剤は、特に制限はないが、たとえばメタキシレンヘキサフロライド、ベンゾトリフロライド、フルオロベンゼン、ジフルオロベンゼン、ヘキサフルオロベンゼン、トリフルオロメチルベンゼン、ビス（トリフルオロメチル）ベンゼン、メタキシレンヘキサフルオリド等のフッ素含有芳香族炭化水素、ペルフルオロヘキサン、ペルフルオロオクタン等のフッ素含有脂肪族炭化水素、ペルフルオロシクロデカリン等のフッ素含有脂肪族環状炭化水素、ペルフルオロ－２－ブチルテトラヒドロフラン等のフッ素含有エーテル類、クロロホルム、クロルベンゼン、トリクロルベンゼンなどのハロゲン化炭化水素、テトラヒドロフラン、ジブチルエーテル、１，２－ジメトキシエタン、ジオキサン、プロピレングリコールモノメチルエーテル、ジプロピレングリコールモノメチルエーテル、プロピレングリコールモノメチルエーテルアセテート等のエーテル類、酢酸エチル、酢酸プロピル、酢酸ブチル等のエステル類、または、メチルエチルケトン、メチルイソブチルケトン、シクロヘキサノン等のケトン類、メタノール、エタノール、イソプロピルアルコール、２－メトキシエタノール、３－メトキシプロパノール等のアルコール類などが挙げられる。これらのうちから、溶解性、製膜性を考慮して選択することができる。また、これらは単独で用いてもよく、二種類以上を組み合わせて用いてもよい。特に、製膜性の観点からは、大気圧下で７０℃以上の沸点をもつ溶媒が好ましい。これにより、蒸発速度が速くなりすぎることを確実に抑えることができる。このため、塗布する際に部分的に溶媒が乾き始めてしまう等に起因して膜厚精度の悪化や膜表面におけるムラが生じてしまうことを、確実に抑制することができる。
　なお、フッ素含有環状オレフィンポリマー組成物には、必要に応じて、フッ素含有環状オレフィンポリマー（Ａ）、光硬化性化合物（Ｂ）、および光硬化開始剤（Ｃ）以外の他の公知の成分を添加することもできる。このような成分としては、例えば、老化防止剤、レベリング剤、濡れ性改良剤、界面活性剤、可塑剤等の改質剤、紫外線吸収剤、防腐剤、抗菌剤などの安定剤、光増感剤、シランカップリング剤等が挙げられる。
（光硬化性化合物（Ｂ））
　フッ素含有環状オレフィンポリマー組成物において、フッ素含有環状オレフィンポリマー（Ａ）と光硬化性化合物（Ｂ）の質量比（Ａ）／（Ｂ）は、９９.９／０.１～５０／５０であることが好ましく、９９.９／０.１～５５／４５であることがより好ましく、９９.９／０.１～６０／４０であることがさらに好ましい。光硬化性化合物（Ｂ）としては、反応性二重結合基を有する化合物、カチオン重合可能な開環重合性化合物等が挙げられる。好ましくは、コートして用いる際の硬化後の体積収縮にともなう基材の変形の抑制や、フッ素含有環状オレフィンポリマー（Ａ）との相溶性の観点からカチオン重合可能な開環重合性化合物が選ばれる。
　反応性二重結合基を有する化合物およびカチオン重合可能な開環重合性化合物は、１分子中に反応性基を１個有していてもよく、複数個有していてもよい。また、光硬化性化合物（Ｂ）中には、異なる反応性基数の化合物を任意の割合で混合して用いても良い。さらに、光硬化性化合物（Ｂ）として、反応性二重結合基を有する化合物とカチオン重合可能な開環重合性化合物を任意の割合で混合したものを用いても良い。これらにより、本実施形態のフッ素含有環状オレフィンポリマー組成物を、他の材料からなる部材と寸法精度良く、かつ強固に密着させる事が可能になる。また、本実施形態の効果を発現可能な細胞培養、もしくは細胞を検査するための基材としての医療器具を好適に得る事ができる。
　光硬化性化合物（Ｂ）のうち、カチオン重合可能な開環重合性化合物としては、例えば、シクロヘキセンエポキシド、ジシクロペンタジエンオキサイド、リモネンジオキサイド、４－ビニルシクロヘキセンジオキサイド、３，４－エポキシシクロヘキシルメチル－３'，４'－エポキシシクロヘキサンカルボキシレート、ジ（３，４－エポキシシクロヘキシル）アジペート、（３，４－エポキシシクロヘキシル）メチルアルコール、（３，４－エポキシ－６－メチルシクロヘキシル）メチル－３，４－エポキシ－６－メチルシクロヘキサンカルボキシレート、エチレン－１，２－ジ（３，４－エポキシシクロヘキサンカルボン酸）エステル、（３，４－エポキシシクロヘキシル）エチルトリメトキシシラン、フェニルグリシジルエーテル、ジシクロヘキシル－３，３´－ジエポキシド、１，７－オクタジエンジエポキシド、ビスフェノールＡ型エポキシ樹脂、ハロゲン化ビスフェノールＡ型エポキシ樹脂、ビスフェノールＦ型エポキシ樹脂、ｏ－、ｍ－、ｐ－クレゾールノボラック型エポキシ樹脂、フェノールノボラック型エポキシ樹脂、多価アルコールのポリグリシジルエーテル、３，４－エポキシシクロヘキセニルメチル－３´，４´－エポキシシクロヘキセンカルボキシレートといった脂環式エポキシ樹脂あるいは水素添加ビスフェノールＡのグリシジルエーテル等のエポキシ化合物等の、エポキシ化合物類；さらに、３－メチル－３－（ブトキシメチル）オキセタン、３－メチル－３－（ペンチロキシメチル）オキセタン、３－メチル－３－（ヘキシロキシメチル）オキセタン、３－メチル－３－（２－エチルヘキシロキシメチル）オキセタン、３－メチル－３－（オクチロキシメチル）オキセタン、３－メチル－３－（デカニロキシメチル）オキセタン、３－メチル－３－（ドデカニロキシメチル）オキセタン、３－メチル－３－（フェノキシメチル）オキセタン、３－エチル－３－（ブトキシメチル）オキセタン、３－エチル－３－（ペンチロキシメチル）オキセタン、３－エチル－３－（ヘキシロキシメチル）オキセタン、３－エチル－３－（２－エチルヘキシロキシメチル）オキセタン、３－エチル－３－（オクチロキシメチル）オキセタン、３－エチル－３－（デカニロキシメチル）オキセタン、３－エチル－３－（ドデカニロキシメチル）オキセタン、３－（シクロヘキシロキシメチル）オキセタン、３－メチル－３－（シクロヘキシロキシメチル）オキセタン、３－エチル－３－（シクロヘキシロキシメチル）オキセタン、３－エチル－３－（フェノキシメチル）オキセタン、３，３－ジメチルオキセタン、３－ヒドロキシメチルオキセタン、３－メチル－３－ヒドロキシメチルオキセタン、３－エチル－３－ヒドロキシメチルオキセタン、３－エチル－３－フェノキシメチルオキセタン、３－ｎ－プロピル－３－ヒドロキシメチルオキセタン、３－イソプロピル－３－ヒドロキシメチルオキセタン、３－ｎ－ブチル－３－ヒドロキシメチルオキセタン、３－イソブチル－３－ヒドロキシメチルオキセタン、３－ｓｅｃ－ブチル－３－ヒドロキシメチルオキセタン、３－ｔｅｒｔ－ブチル－３－ヒドロキシメチルオキセタン、３－エチル－３－（２－エチルヘキシル）オキセタン等があり、オキセタニル基を２個以上有する化合物としてビス（３－エチル－３－オキセタニルメチル）エーテル、１，２－ビス［（３－エチル－３－オキセタニルメトキシ）］エタン、１，３－ビス［（３－エチル－３－オキセタニルメトキシ）］プロパン、１，３－ビス［（３－エチル－３－オキセタニルメトキシ）］－２，２－ジメチル－プロパン、１，４－ビス（３－エチル－３－オキセタニルメトキシ）ブタン、１，６－ビス（３－エチル－３－オキセタニルメトキシ）ヘキサン、１，４－ビス［（３－メチル－３－オキセタニル）メトキシ］ベンゼン、１，３－ビス［（３－メチル－３－オキセタニル）メトキシ］ベンゼン、１，４－ビス｛［（３－メチル－３－オキセタニル）メトキシ］メチル｝ベンゼン、１，４－ビス｛［（３－メチル－３－オキセタニル）メトキシ］メチル｝シクロヘキサン、４，４´－ビス｛［（３－メチル－３－オキセタニル）メトキシ］メチル｝ビフェニル、４，４´－ビス｛［（３－メチル－３－オキセタニル）メトキシ］メチル｝ビシクロヘキサン、２，３－ビス［（３－メチル－３－オキセタニル）メトキシ］ビシクロ［２．２．１］ヘプタン、２，５－ビス［（３－メチル－３－オキセタニル）メトキシ］ビシクロ［２．２．１］ヘプタン、２，６－ビス［（３－メチル－３－オキセタニル）メトキシ］ビシクロ［２．２．１］ヘプタン、１，４－ビス［（３－エチル－３－オキセタニル）メトキシ］ベンゼン、１，３－ビス［（３－エチル－３－オキセタニル）メトキシ］ベンゼン、１，４－ビス｛［（３－エチル－３－オキセタニル）メトキシ］メチル｝ベンゼン、１，４－ビス｛［（３－エチル－３－オキセタニル）メトキシ］メチル｝シクロヘキサン、４，４´－ビス｛［（３－エチル－３－オキセタニル）メトキシ］メチル｝ビフェニル、４，４'－ビス｛［（３－エチル－３－オキセタニル）メトキシ］メチル｝ビシクロヘキサン、２，３－ビス［（３－エチル－３－オキセタニル）メトキシ］ビシクロ［２．２．１］ヘプタン、２，５－ビス［（３－エチル－３－オキセタニル）メトキシ］ビシクロ［２．２．１］ヘプタン、２，６－ビス［（３－エチル－３－オキセタニル）メトキシ］ビシクロ［２．２．１］ヘプタン等のオキセタン化合物類が挙げられる。これらは、単独で用いても、２種以上組み合わせで用いてもよい。
　また、光硬化性化合物（Ｂ）のうち、反応性二重結合基を有する化合物としては、例えば、フルオロジエン（ＣＦ２＝ＣＦＯＣＦ２ＣＦ２ＣＦ＝ＣＦ２、ＣＦ２＝ＣＦＯＣＦ２ＣＦ（ＣＦ３）ＣＦ＝ＣＦ２、ＣＦ２＝ＣＦＣＦ２Ｃ（ＯＨ）（ＣＦ３）ＣＨ２ＣＨ＝ＣＨ２、ＣＦ２＝ＣＦＣＦ２Ｃ（ＯＨ）（ＣＦ３）ＣＨ＝ＣＨ２、ＣＦ２＝ＣＦＣＦ２Ｃ（ＣＦ３）（ＯＣＨ２ＯＣＨ３）ＣＨ２ＣＨ＝ＣＨ２、ＣＦ２＝ＣＦＣＨ２Ｃ（Ｃ（ＣＦ３）２ＯＨ）（ＣＦ３）ＣＨ２ＣＨ＝ＣＨ２等）などのオレフィン類；ノルボルネン、ノルボルナジエンなどの環状オレフィン類；シクロヘキシルメチルビニルエーテル、イソブチルビニルエーテル、シクロヘキシルビニルエーテル、エチルビニルエーテルなどのアルキルビニルエーテル類；酢酸ビニルなどのビニルエステル類；（メタ）アクリル酸、フェノキシエチルアクリレート、ベンジルアクリレート、ステアリルアクリレート、ラウリルアクリレート、２－エチルヘキシルアクリレート、アリルアクリレート、１，３－ブタンジオールジアクリレート、１，４－ブタンジオールジアクリレート、１，６－ヘキサンジオールジアクリレート、トリメチロールプロパントリアクリレート、ペンタアエリスリトールトリアクリレート、ジペンタエリスリトールヘキサアクリレート、エトキシエチルアクリレート、メトキシエチルアクリレート、グリシジルアクリレート、テトラヒドロフルフリールアクリレート、ジエチレングリコールジアクリレート、ネオペンチルグリコールジアクリレート、ポリオキシエチレングリコールジアクリレート、トリプロピレングリコールジアクリレート、２－ヒドロキシエチルアクリレート、２－ヒドロキシプロピルアクリレート、４ － ヒドロキシブチルビニルエーテル、Ｎ，Ｎ－ジエチルアミノエチルアクリレート、Ｎ，Ｎ－ジメチルアミノエチルアクリレート、Ｎ－ビニルピロリドン、ジメチルアミノエチルメタクリレートなどの（メタ）アクリル酸及びその誘導体またはそれらのフッ素含有アクリレート類などが挙げられる。これらは、単独で用いても、２種以上組み合わせで用いてもよい。
（光硬化開始剤（Ｃ））
　光硬化開始剤（光重合開始剤）（Ｃ）としては、光の照射によってカチオンを生成する光カチオン開始剤、光の照射によってラジカルを生成する光ラジカル開始剤、などが挙げられる。光硬化開始剤（Ｃ）の使用量は、光硬化性化合物（Ｂ）１００質量部に対して０.０５質量部以上であることが好ましく、０.１～１０質量部であることがより好ましい。
　光硬化開始剤（Ｃ）のうち、光の照射によってカチオンを生成する光カチオン開始剤としては、光照射により、前記カチオン重合可能な開環重合性化合物類のカチオン重合を開始させる化合物であれば特に限定はないが、例えば、オニウム陽イオンと対を成す陰イオンとのオニウム塩のように光反応しルイス酸を放出する化合物が好ましい。
　オニウム陽イオンの具体例としては、ジフェニルヨードニウム、４－メトキシジフェニルヨードニウム、ビス（４－メチルフェニル）ヨードニウム、ビス（４－ｔｅｒｔ－ブチルフェニル）ヨードニウム、ビス（ドデシルフェニル）ヨードニウム、トリフェニルスルホニウム、ジフェニル－４－チオフェノキシフェニルスルホニウム、ビス〔４－（ジフェニルスルフォニオ）－フェニル〕スルフィド、ビス〔４－（ジ（４－（２－ヒドロキシエチル）フェニル）スルホニオ）－フェニル〕スルフィド、η５－２，４－（シクロペンタジェニル）〔１，２，３，４，５，６－η－（メチルエチル）ベンゼン〕－鉄（１＋）等が挙げられる。また、オニウム陽イオン以外に、過塩素酸イオン、トリフルオロメタンスルホン酸イオン、トルエンスルホン酸イオン、トリニトロトルエンスルホン酸イオン等が挙げられる。また、これらの光カチオン開始剤は、単独で用いても、２種以上組み合わせて用いてもよい。
　一方、陰イオンの具体例としては、テトラフルオロボレート、ヘキサフルオロホスフェート、ヘキサフルオロアンチモネート、ヘキサフルオロアルセネート、ヘキサクロロアンチモネート、テトラ（フルオロフェニル）ボレート、テトラ（ジフルオロフェニル）ボレート、テトラ（トリフルオロフェニル）ボレート、テトラ（テトラフルオロフェニル）ボレート、テトラ（ペンタフルオロフェニル）ボレート、テトラ（ペルフルオロフェニル）ボレート、テトラ（トリフルオロメチルフェニル）ボレート、テトラ〔ジ（トリフルオロメチル）フェニル〕ボレート等が挙げられる。また、これらの光カチオン開始剤は、単独で用いても、２種以上組み合わせて用いてもよい。
　さらに好ましく用いられる光カチオン開始剤の具体例としては、例えば、イルガキュアー２５０（ＢＡＳＦ社製）、イルガキュアー７８４（ＢＡＳＦ社製）、エサキュアー１０６４（ランベルティー社製）、ＷＰＩ－１２４（和光純薬工業社製）、ＣＹＲＡＵＲＥ ＵＶＩ６９９０（ユニオンカーバイト日本社製）、ＣＰＩ－１００Ｐ（サンアプロ社製）、アデカオプトマーＳＰ－１７２（ＡＤＥＫＡ社製）、アデカオプトマーＳＰ－１７０（ＡＤＥＫＡ社製）、アデカオプトマーＳＰ－１５２（ＡＤＥＫＡ社製）、アデカオプトマーＳＰ－１５０（ＡＤＥＫＡ社製）が挙げられる。また、これらの光カチオン開始剤は、単独で用いても、２種以上組み合わせて用いてもよい。
　また、光硬化開始剤（Ｃ）のうち、光の照射によってラジカルを生成する光ラジカル開始剤としては、例えば、アセトフェノン、ｐ－ｔｅｒｔ－ブチルトリクロロアセトフェノン、クロロアセトフェノン、２，２－ジエトキシアセトフェノン、ヒドロキシアセトフェノン、２，２－ジメトキシ－２'－フェニルアセトフェノン、２－アミノアセトフェノン、ジアルキルアミノアセトフェノンなどのアセトフェノン類；ベンゾイン、ベンゾインメチルエーテル、ベンゾインエチルエーテル、ベンゾインイソプロピルエーテル、ベンゾインイソブチルエーテル、１－ヒドロキシシクロヘキシルフェニルケトン、２－ヒドロキシ－２－メチル－１－フェニル－２－メチルプロパン－１－オン、１－（４－イソプロピルフェニル）－２－ヒドロキシ－２－メチルプロパン－１－オンなどのベンゾイン類；ベンゾフェノン、ベンゾイル安息香酸、ベンゾイル安息香酸メチル、メチル－ｏ－ベンゾイルベンゾエート、４－フェニルベンゾフェノン、ヒドロキシベンゾフェノン、ヒドロキシプロピルベンゾフェノン、アクリルベンゾフェノン、４，４´－ビス（ジメチルアミノ）ベンゾフェノンなどのベンゾフェノン類；チオキサントン、２－クロロチオキサントン、２－メチルチオキサントン、ジエチルチオキサントン、ジメチルチオキサントンなどのチオキサントン類；ペルフルオロ（ｔｅｒｔ－ブチルペルオキシド）、ペルフルオロベンゾイルペルオキシドなどのフッ素系ペルオキド類；α－アシルオキシムエステル、ベンジル－（ｏ－エトキシカルボニル）－α－モノオキシム、アシルホスフィンオキサイド、グリオキシエステル、３－ケトクマリン、２－エチルアンスラキノン、カンファーキノン、テトラメチルチウラムスルフィド、アゾビスイソブチロニトリル、ベンゾイルペルオキシド、ジアルキルペルオキシド、ｔｅｒｔ－ブチルペルオキシピバレート等が挙げられる。
　さらに好ましく用いられる光ラジカル開始剤の具体例としては、例えば、イルガキュアー６５１（ＢＡＳＦ社製）、イルガキュアー１８４（ＢＡＳＦ社製）、ダロキュアー１１７３（ＢＡＳＦ社製）、ベンゾフェノン、４－フェニルベンゾフェノン、イルガキュアー５００（ＢＡＳＦ社製）、イルガキュアー２９５９（ＢＡＳＦ社製）、イルガキュアー１２７（ＢＡＳＦ社製）、イルガキュアー９０７（ＢＡＳＦ社製）、イルガキュアー３６９（ＢＡＳＦ社製）、イルガキュアー１３００（ＢＡＳＦ社製）、イルガキュアー８１９（ＢＡＳＦ社製）、イルガキュアー１８００（ＢＡＳＦ社製）、ダロキュアーＴＰＯ（ＢＡＳＦ社製）、ダロキュアー４２６５（ＢＡＳＦ社製）、イルガキュアーＯＸＥ０１（ＢＡＳＦ社製）、イルガキュアーＯＸＥ０２（ＢＡＳＦ社製）、エサキュアーＫＴ５５（ランベルティー社製）、エサキュアーＫＩＰ１５０（ランベルティー社製）、エサキュアーＫＩＰ１００Ｆ（ランベルティー社製）、エサキュアーＫＴ３７（ランベルティー社製）、エサキュアーＫＴＯ４６（ランベルティー社製）、エサキュアー１００１Ｍ（ランベルティー社製）、エサキュアーＫＩＰ／ＥＭ（ランベルティー社製）、エサキュアーＤＰ２５０（ランベルティー社製）、エサキュアーＫＢ１（ランベルティー社製）、２，４－ジエチルチオキサントンが挙げられる。これらの中で、さらに好ましく用いられる光ラジカル重合開始剤としては、イルガキュアー１８４（ＢＡＳＦ社製）、ダロキュアー１１７３（ＢＡＳＦ社製）、イルガキュアー５００（ＢＡＳＦ社製）、イルガキュアー８１９（ＢＡＳＦ社製）、ダロキュアーＴＰＯ（ＢＡＳＦ社製）、エサキュアーＫＩＰ１００Ｆ（ランベルティー社製）、エサキュアーＫＴ３７（ランベルティー社製）およびエサキュアーＫＴＯ４６（ランベルティー社製）が挙げられる。また、これらの光ラジカル開始剤は、単独で用いても、２種以上組み合わせて用いてもよい。
　光硬化性化合物（Ｂ）および光硬化開始剤（Ｃ）は、これらを含有する光硬化性組成物として用いることができる。光硬化性組成物は、光硬化開始剤（Ｃ）を前記の光硬化性化合物（Ｂ）に溶解して得ることができ、光硬化性化合物（Ｂ）と光硬化開始剤（Ｃ）を共に有機溶剤に溶解して得ることもできる。さらに、必要に応じて第３成分として他の公知の成分、例えば、老化防止剤、レベリング剤、濡れ性改良剤、界面活性剤、可塑剤等の改質剤、紫外線吸収剤、防腐剤、抗菌剤などの安定剤、光増感剤、シランカップリング剤等を加えてもよい。
　光硬化性組成物を調製するために使用する有機溶媒としては、特に制限はないが、例えば、メタキシレンヘキサフロライド、ベンゾトリフロライド、フルオロベンゼン、ジフルオロベンゼン、ヘキサフルオロベンゼン、トリフルオロメチルベンゼン、ビス（トリフルオロメチル）ベンゼン、メタキシレンヘキサフルオリド等のフッ素含有芳香族炭化水素、ペルフルオロヘキサン、ペルフルオロオクタン等のフッ素含有脂肪族炭化水素、ペルフルオロシクロデカリン等のフッ素含有脂肪族環状炭化水素、ペルフルオロ－２－ブチルテトラヒドロフラン等のフッ素含有エーテル類、クロロホルム、クロルベンゼン、トリクロルベンゼンなどのハロゲン化炭化水素、テトラヒドロフラン、ジブチルエーテル、１，２－ジメトキシエタン、ジオキサン、プロピレングリコールモノメチルエーテル、ジプロピレングリコールモノメチルエーテル、プロピレングリコールモノメチルエーテルアセテート等のエーテル類、酢酸エチル、酢酸プロピル、酢酸ブチル等のエステル類、または、メチルエチルケトン、メチルイソブチルケトン、シクロヘキサノン等のケトン類、メタノール、エタノール、イソプロピルアルコール、２－メトキシエタノール、３－メトキシプロパノール等のアルコール類などが挙げられる。これらのうちから溶解性、製膜性を考慮して選択でき、フッ素含有環状オレフィンポリマー（Ａ）を溶解する有機溶剤と同一でも異なってもよく、二種類以上を組み合わせて用いてもよい。特に、製膜性の観点から大気圧下で７０℃以上の沸点をもつ溶媒が好ましい。これにより、蒸発速度が速くなりすぎることを確実に抑えることができる。このため、塗布する際に部分的に溶媒が乾き始めてしまう等に起因して膜厚精度の悪化や膜表面におけるムラが生じてしまうことを、確実に抑制することができる。
　本実施形態におけるフッ素含有環状オレフィンポリマー組成物は、主鎖に炭化水素構造、側鎖にフッ素含有脂肪族環構造を有する特定のフッ素含有環状オレフィンポリマーを用いているので、極性が大きく光硬化性化合物および光硬化開始剤との相溶性良く、硬化後の形態で透明形状の基材を作製することもできる。また、フッ素含有環状オレフィンポリマーを基盤とする材料であることで、基材表面の水接触角を７０°～１６０°に保つことができる。これにより、各種細胞の培養または各種細胞の検査のための細胞が、フッ素含有環状オレフィンポリマー組成物からなる基材に接着または付着が抑制されつつ増殖することができる。
　また、フッ素含有環状オレフィンポリマー組成物は硬化後の形態で、光硬化性化合物が３次元の網目構造を形成することで、表面硬度を硬く改質することができる。このため、医療器具等に実装した場合の傷付き性を改善でき、細胞培養や細胞の検査のための基材として用いる際に、利便性良く使用することができる。
　次いで、上記した方法で調製したワニスを、フィルターを通過させてろ過する。これによって、ワニスからポリマー不溶分、ゲル、異物等を大きく低減することができ、細胞を培養する培養器具としての基材表面を平滑に、そして疎水な表面性状を全面にわたって均一に形成できる。
　ろ過フィルターの目開きは、好ましくは、１０μｍ～０．０５μｍ、特に好ましくは、１０μｍ～０．１μｍ、さらに好ましくは、５μｍ～０．１μｍである。ろ過のプロセスは、孔径の大きなフィルターから小さなフィルターへポリマー溶液を送る多段プロセスでも、直接、孔径の小さなフィルターへワニスを送る単一プロセスでも良い。フィルターの材質は、テフロン（登録商標）、ＰＰ、ＰＥＳ、セルロースなどの有機材料からなるものでも、ガラス繊維、金属などの無機材料からなるものでも良く、細胞培養に悪影響を与えなければワニス特性、プロセス適応性から選ぶことができる。
　また、ワニスをフィルターへ送る方法としては、圧力差を利用する方法でも、スクリューなどを介して機械的な駆動によってワニスをフィルターへ送液する方法でも良い。さらに、ろ過の温度は、フィルター性能、溶液粘度、光硬化性化合物の熱安定性、ポリマーの溶解性を考慮した範囲で選ばれ、－１０～２００℃であることが好ましく、０℃～１５０℃であることがより好ましく、室温～１００℃の範囲であることがとくに好ましい。
　前記のようにワニスをろ過した後、ワニスからフィルムを製膜する。溶液キャスト法で製造する場合は、まず、支持体の上に、テーブルコート、スピンコート、ディップコート、ダイコート、スプレーコート、バーコート、ロールコート、カーテンフローコートなどの方法でポリマー溶液（ワニス）を塗布し、製膜する。支持体としては、ステンレス鋼、シリコン等の金属材料、ガラス、石英等の無機材料、ポリイミド、ポリアミド、ポリエステル、ポリカーボネート、ポリフェニレンエーテル、ポリフェニレンスルフィド、ポリアクリレート、ポリメタクリレート、ポリアクリレート、エポキシ樹脂、シリコーン樹脂等の樹脂材料等、からなるものを挙げることができる。
　塗膜の乾燥は、加熱板の上に、溶液がキャストされた基材を置いて加熱乾燥させても良く、加熱した乾燥炉に溶液をキャストした支持体を入れて加熱乾燥させても良く、空気、窒素などの気体を加熱した温風を塗布膜にあてて乾燥させても良く、これらを組み合わせたプロセスを利用して乾燥させても良い。乾燥時の温度は１０～２５０℃であることが好ましく、２０～２２０℃であることがより好ましく、３０～２００℃であることがとくに好ましく、ワニスの特性、フィルムの膜厚、基材の耐熱性を考慮して選ばれる。また、温度設定が２種類以上である多段の乾燥温度を設定して塗膜を乾燥させても良い。塗膜を乾燥する時間は、ワニス溶剤の沸点、フィルムの膜厚、プロセス要件を考慮した条件から選択する事ができる。これにより、支持体上にフィルムが形成される。
　次いで、得られたフィルムに対してＵＶ照射工程を行い、光硬化性化合物（Ｂ）を硬化させる。また、ＵＶ照射工程は滅菌を兼ねても良い。照射光としては、光硬化開始剤（Ｃ）に光を照射することによってラジカル反応またはイオン反応を引起すエネルギーを与えることができれば特に限定されるものではない。この光源としては、波長４００ｎｍ以下の光線、例えば、低圧水銀灯、中圧水銀灯、高圧水銀灯、超高圧水銀灯、ケミカルランプ、ブラックライトランプ、マイクロウェーブ励起水銀灯およびメタルハライドランプ、ｉ線、Ｇ線、ＫｒＦエキシマレーザ光、ＡｒＦエキシマレーザ光を用いることができる。
　フッ素含有環状オレフィンポリマー組成物からなる上記フィルムへの照射強度は、目的とする製品毎に制御されるものであって特に限定されるものではない。例えば、後述の光硬化開始剤（Ｃ）の活性化に有効な光波長領域（光硬化開始剤（Ｃ）によって異なるが、たとえば３００～４２０ｎｍの光が用いられる）の光照射強度が０．１～１００ｍＷ／ｃｍ２であることが好ましい。照射強度を０．１ｍＷ／ｃｍ２以上とすることにより、反応時間が長くなり過ぎることを確実に抑制できる。一方で、照射強度を１００ｍＷ／ｃｍ２以下とすることにより、ランプから輻射される熱および組成物の重合時の発熱に起因して得られる硬化物の凝集力の低下や黄変あるいは支持体の劣化が生じることを、より確実に抑制することが可能となる。
　この光の照射時間は、目的とする製品毎に制御されるものであって特に限定されるものではないが、光波長領域での光照射強度と光照射時間の積として表される積算光量を、たとえば３～１０００ｍＪ／ｃｍ２に設定することが出来る。更に好ましくは５～５００ｍＪ／ｃｍ２であり、特に好ましくは１０～３００ｍＪ／ｃｍ２である。積算光量を上記下限値以上とすることにより、光重合開始剤（Ｃ）からの活性種の発生を十分なものとし、得られる硬化物の特性の向上を図ることができる。一方で、積算光量を上記上限値以下とすることにより、生産性向上に寄与することができる。また、重合反応を促進するために加熱を併用することも場合によっては好ましい。また、光を照射して硬化性樹脂を硬化させる場合の温度は、通常０～１５０℃が好ましく、０～６０℃がより好ましい。
　フィルムやシート状の単層膜からなる基材を得る場合には、たとえば支持体からフィルムを剥離させることにより基材を製造することができる。支持体からのフィルムの剥離は、フィルムの端部に市販のテープを貼り付け、これに応力を加えて剥離することにより行ってもよく、水、溶剤などの液体をフィルムと支持体の接触界面に接触させて支持体表面とフィルムの接触面の表面張力の差を利用してフィルムを剥離することにより行っても良い。
　他の材料の上にコート膜を形成して基材を得る場合には、たとえば前記工程のうち塗膜の乾燥工程までを実施することにより、支持体と、本実施形態のフッ素含有環状オレフィンポリマーからなるコート膜と、により構成される基材を製造することができる。この場合、支持体は、ＰＥＴ、アクリル樹脂などの有機材料、もしくはガラス、シリコンなどの無機材料から選択されることがとくに好ましい。
　フッ素含有環状オレフィンポリマー組成物を支持体に製膜し、加熱し、次いで光を照射して硬化させて得られる硬化膜の膜厚は、特に制限はないが、好ましくは１μｍ～１０ｍｍであり、より好ましくは５μｍ～１ｍｍであり、さらに好ましくは１０μｍ～０．５ｍｍである。これらの範囲であると、自立した単層フィルムや、コート膜を得ることができる。また、光硬化の際の体積収縮が小さく基材の変形を確実に抑制することもできる。また、例えば、培養バッグ、培養プレート、培養シャーレなどの細胞培養に用いられる医療器具を作製する観点から好適な範囲となる。また、フィルムの膜厚は、それら器具を作製するプロセスに合わせて設定することができる。
　さらに、本実施形態に係るフッ素含有環状オレフィンポリマー組成物を用いた医療器具は、たとえば、細胞を保持または接触させる一面に、本実施形態のフッ素含有環状オレフィンポリマー組成物からなる凹凸構造を形成したフィルムやシート状の単層膜からなる基材や、他の材料の上に凹凸構造を形成したフィルムやシート状の単層膜を接着剤または粘着剤などで貼り付けて形成して得られる基材を備えてもよく、特に１２１°～１６０°の水接触角を実現するために好ましく用いられる。
　この凹凸構造のサイズは、凸凸間距離が４０ｎｍ～９０μｍのパターンを賦型したものであり、好ましくは６０ｎｍ～８０μｍ、特に好ましくは８０ｎｍ～７０μｍとすることで水接触角を所望の範囲とすることができ、形状は特に限定されない。
　ここで、凹凸構造は、スクリーン印刷、エンボス加工、サブミクロンインプリント、ナノインプリントなど様々な方法で凹凸構造を形成してもよい。
　特に、凹凸構造をインプリント方法で形成するときは、石英、シリコン、ニッケル、レジストなどからなるモールドの様々なパターンに、たとえば、上記において例示したフッ素含有環状オレフィンポリマー組成物である一般式（１）で表されるフッ素含有環状オレフィンポリマー（Ａ）と、光硬化性化合物（Ｂ）と、光硬化開始剤（Ｃ）を有機溶剤に溶解させて得られるワニスを塗布する溶液キャスト法を挙げることができる。
　まず、上記において例示した方法と同様に一般式（１）で表されるフッ素含有環状オレフィンポリマー（Ａ）と、光硬化性化合物（Ｂ）と、光硬化開始剤（Ｃ）を有機溶剤に溶解させて得られる溶液を、フィルターを通過させてろ過を行いワニスを調製する。
　次に、上記フッ素含有環状オレフィンポリマー組成物からなる溶液（ワニス）と凹凸構造を形成したモールドのパターン面を接触させ、溶剤を蒸発させてＵＶ照射し剥離することによって、モールドのパターンを転写した凹凸構造を形成した基材を得ることができる。
　具体的には、（１）微細パターンを有するモールド表面に、フッ素含有環状オレフィンポリマー組成物と有機溶剤からなる溶液(ワニス)を塗布する工程と、前記溶液から溶剤を蒸発させる工程と、を含む方法、（２）支持体（基材）にフッ素含有環状オレフィンポリマー組成物と有機溶剤からなる溶液（ワニス）を塗布する工程と、塗布層の上面を微細パターンが形成されたモールド表面で押圧する工程と、前記塗布層から溶剤を蒸発させる工程と、を含む方法、等を挙げることができ、何れの方法であってもモールドとフッ素含有環状オレフィンポリマー組成物を接触させた後にＵＶ照射工程を経て、剥離することで凹凸構造を形成した基材を得る。尚、（２）の方法においては、塗布層から溶剤を蒸発させた後、モールドで押圧することもできる。
　本実施形態の凹凸構造を形成した基材の作製に用いられる表面に微細パターンを形成させたモールドの基材の材質、モールドとフッ素含有環状オレフィンポリマー組成物からなるワニスを接触させる方法、および、塗膜の乾燥方法は特に制限無く、上述のフッ素含有環状オレフィンポリマーを有機溶剤に溶解したワニスからの凹凸構造を形成した基材の作製方法と同様に行うことができる。
　次いで、モールドの上に形成したフッ素含有環状オレフィンポリマー組成物に対してＵＶ照射工程を行い、光硬化性化合物（Ｂ）を硬化させる。また、ＵＶ照射工程は滅菌を兼ねても良い。ＵＶ照射工程における、光源、照射強度、照射時間、照射時の温度の各条件は特に制限無く、上述のフッ素含有環状オレフィンポリマー組成物からの基材の作製方法と同様な方法で行うことができる。
　フィルムやシート状の単層膜からなる基材を得る場合には、ＵＶ照射後にモールドからフィルムを剥離させることにより基材を製造することができる。支持体からのフィルムの剥離は、フィルムの端部に市販のテープを貼り付け、これに応力を加えて剥離することにより行ってもよく、水、溶剤などの液体をフィルムと支持体の接触界面に接触させて支持体表面とフィルムの接触面の表面張力の差を利用してフィルムを剥離することにより行っても良い。
　他の支持体（基材）の上に凹凸構造を形成したコート膜を形成した基材を得る場合には、たとえば前記工程のうち支持体の上にコートした塗膜の乾燥工程までを実施して、支持体の上にフッ素含有環状オレフィンポリマー組成物をコートする。次いで、モールドのパターン面とフッ素含有環状オレフィンポリマー組成物のコート面を接触させ、必要に応じ圧着し、ＵＶ照射、剥離することによって支持体の上に本実施形態のフッ素含有環状オレフィンポリマー組成物からなる凹凸構造を形成したコート膜を形成した基材を製造することができる。この場合、支持体は、ポリエチレンテレフタレート（ＰＥＴ）、アクリル樹脂などの有機材料、もしくはガラス、シリコン、アルミなどの無機材料から選択されることがとくに好ましい。
　モールドのパターン面とフッ素含有環状オレフィンポリマー組成物のコート面を接触させる際の圧力は、０．０１～５ＭＰａ、好ましくは０．０５～４ＭＰａ、より好ましくは０．１～３ＭＰａの範囲で用いられ、圧着しながらＵＶ照射しても、ラミネーターなどの圧着装置を利用して圧着した後にＵＶ照射してもよい。これにより、パターンの形状、サイズに寄らず、モールドのパターンを高い精度で転写した細胞を保持または接触させるための凹凸構造を有する基材を作製することができる。
　フッ素含有環状オレフィンポリマー組成物を支持体に製膜し、加熱して、必要に応じ圧着した後に、光を照射して硬化させて得られる硬化膜の膜厚は、特に制限はないが、好ましくは１μｍ～１０ｍｍであり、より好ましくは５μｍ～１ｍｍであり、さらに好ましくは１０μｍ～０．５ｍｍである。これらの範囲であると、自立した単層フィルムや、支持体上のコート膜を得ることができる。また、光硬化の際の体積収縮が小さく、精度良くパターンを転写しながら基材の変形を確実に抑制することもできる。また、例えば、培養バッグ、培養プレート、培養シャーレなどの細胞培養に用いられる医療器具を作製する観点から好適な範囲となる。さらに、フィルムの膜厚は、それら器具を作製するプロセスに合わせて設定することができる。
　フッ素含有環状オレフィンポリマー組成物から製造したフィルムまたはシートからは、ヒートシール法や、接着剤を利用したシール法などにより、例えば、袋、チューブなどの形態の医療器具を製造できる。また、ポリスチレン、ポリエチレン、金属などの他材料で作製された、例えばシャーレ、マルチウェルプレート、フラスコなどの医療器具の細胞を保持または接触させる基材の表面に、本実施形態のフィルム、またはシートを貼り付けた形態の医療器具を製造することもできる。
　次に、本実施形態に係る医療器具を用いた細胞培養方法を説明する。
（細胞培養方法）
　本実施形態に係る細胞培養方法は、本実施形態に係る医療器具を構成する基材の一面上に、当該一面に接触または保持されるよう細胞を播種する工程と、当該細胞を培養して培養細胞を得る工程と、上記一面上に緩衝液を添加して、前記一面から前記培養細胞を浮遊させる工程と、を備える。これにより、培養細胞を損傷なく基材から離脱させることができ、かつ効率的な増殖が可能な細胞培養を実現することができる。
　本実施形態においては、細胞培養の形態として、医療器具内に細胞を播種した後、静置した状態で浮遊細胞を培養することができる。これは、基材の細胞を接触または保持する一面が本実施形態に係るフッ素含有環状オレフィンポリマー、またはフッ素含有環状オレフィンポリマー組成物により構成されていることにより実現され、とくに当該一面の水接触角が７０°～１６０°である場合により好適に実現され得る。また、細胞の形態や増殖性を考慮して振動を与えて培養しても良く、培養液を流動させながら培養しても良く、撹拌しながら培養しても良く、特に制限はない。これらの中から、細胞の特性、装置の形態、生産性を考慮して好適に選ばれる。何れの形態であっても、本実施形態に係る医療器具で細胞を培養することにより、細胞の培養器具への付着、または密着を抑制しつつ群体を形成しながら増殖することができる。
　培養方法としては、本実施形態に係る基材を各種培養方法に応じた容器に加工した医療器具を用いて、例えば、静置培養、回転培養、マイクロキャリア培養、旋回培養、スフェロイド培養、ゲル内培養、三次元担体培養、加圧循環培養などの方法で細胞培養を実施する事ができる。これらのうち、細胞の特性、培養形態、または生産性を考慮して好適に選ばれ、単独で用いても２種類以上を併用しても良い。
　これらの各種培養方法における温度は、３５～４０℃であることが好ましく、３６～３８℃であることがより好ましく、３６．５～３７．５℃であることがとくに好ましい。また、圧力は、０．０２～０．５ＭＰａであることが好ましく、０．０５～０．３ＭＰａであることがより好ましく、０．０８～０．２ＭＰａであることがとくに好ましい。さらに、水素イオン指数（ｐＨ）は、８～６であることが好ましく、７．５～６．５であることがより好ましい。
　本実施形態に係る医療器具を培養器具として用いる際の滅菌方法としては、例えば、アルコールなどに浸漬する湿式滅菌、エチレンオキシドによるガス滅菌、紫外線滅菌、放射線滅菌、高温、高圧の水蒸気によるオートクレーブ滅菌、直接蒸気に触れてはいけないものに用いる乾熱滅菌、熱に不安定な成分を含む基材に適したろ過滅菌などを上げることができる。これらの中から、本発明の効果を損なわない範囲でプロセス適合性を考慮して、好適に選ばれ、２種類以上の滅菌方法を組み合わせて用いても良い。
　また、培養に用いる培地の種類としては、液状、ゲル状、固形（粉末）などの形態に寄らず、細胞の特性、培養形態に応じて選択でき、例えば、ＢＭＥ培地、ＭＥＭ培地、ＤＭＥＭ培地、１９９培地、ＲＰＭＩ培地、ハムＦ１０培地、ハムＦ１２培地、ＭＣＤＢ１０４、１０７、１３１、１５１、１７０、２０２培地、ＲＩＴＣ８０－７培地、ＭＣＤＢ１５３培地などが挙げられる。これらは、単独で用いても２種類以上を混合して用いても良く、さらにはヒト、イヌ、ラット、マウス、トリ、ブタ、ウシなどの生物由来の血清と混合して用いても良い。
　さらに、細胞培養の目的に応じて本発明の効果を損なわない範囲で、例えば、ラミニン－５、ラミニン－５１１、ラミニン－５２１などのコラーゲン、本実施形態のフッ素含有環状オレフィンポリマー、またはフッ素含有環状オレフィンポリマー組成物などを、本実施形態の前記基材の内壁や、細胞を接触または保持する一面の一部、もしくは全面に塗工して用いてもよい。これらは単独、あるいは２種類以上を混合して用いても良い。また、本実施形態において、細胞の種類、培養細胞の応用に応じて、細胞の培養液や緩衝液を選択することができ、蛍光色素や細胞の固定化試薬も自由に選択しても良い。
　さらには、培養、もしくは培養した細胞を浮遊させて基材から離脱させる際に用いる緩衝液としては、細胞が増殖する過程において、系内の水素イオン指数(ｐＨ)を変化させないものであれば良く、通常は、例えば、リン酸緩衝液、リン酸緩衝生理食塩水、塩酸緩衝液、酢酸緩衝液、クエン酸緩衝液、ホウ酸緩衝液、酒石酸緩衝液、トリス緩衝液、トリス塩酸緩衝液、エチレンジアミン四酢酸緩衝液、トリスＥＤＴＡ緩衝液、トリス酢酸ＥＤＴＡ緩衝液、トリスホウ酸ＥＤＴＡ緩衝液、濃縮ＳＳＣ緩衝液、濃縮ＳＳＰＥ緩衝液、クエン酸ナトリウム緩衝液、炭酸重炭酸緩衝液、ホウ酸ナトリウム緩衝液、マレイン酸緩衝液、ＣＡＢＳ緩衝液、ピペリジン緩衝液、グリシン緩衝液、リンゴ酸緩衝液、ギ酸緩衝液、コハク酸緩衝液、酢酸緩衝液、プロピオン酸緩衝液、ピペラジン緩衝液、ピリジン緩衝液、カコジル酸緩衝液、ＭＥＳ緩衝液、ヒスチジン緩衝液、エタノールアミン緩衝液、ＡＤＡ緩衝液、炭酸緩衝液、ＡＣＥＳ緩衝液、ＰＩＰＥＳ緩衝液、イミダゾール緩衝液、ビス－トリスプロパン緩衝液、ＢＥＳ緩衝液、ＭＯＰＳ緩衝液、ＨＥＰＥＳ緩衝液、ＴＥＳ緩衝液、ＭＯＰＳＯ緩衝液、ＭＯＢＳ緩衝液、ＤＩＰＳＯ緩衝液、ＴＡＰＳＯ緩衝液、ＴＥＡ緩衝液、ピロリン酸緩衝液、ＨＥＰＰＳＯ緩衝液、ＰＯＰＳＯ緩衝液、トリシン緩衝液、ヒドラジン緩衝液、グリシルグリシン緩衝液、ＥＰＰＳ緩衝液、ビシン緩衝液、ＨＥＰＢＳ緩衝液、ＴＡＰＳ緩衝液、ＡＭＰＤ緩衝液、ＴＡＢＳ緩衝液、ＡＭＰＳＯ緩衝液、タウリン緩衝液、ＣＨＥＳ緩衝液、グリシン緩衝液、水酸化アンモニウム緩衝液、ＣＡＰＳＯ緩衝液、メチルアミン緩衝液、ＣＡＰＳ緩衝液などが単独もしくはトリプシン、ペプシン、レンネット、キモトリプシン、エラスターゼ、ＮＡＤＰＨデハイドロゲナアゼまたはＮＡＤＨデハイドロゲナアゼなどの酵素を含有させて用いてもよく、
　好ましくは、リン酸緩衝液、リン酸緩衝生理食塩水、塩酸緩衝液、酢酸緩衝液、クエン酸緩衝液、ホウ酸緩衝液、酒石酸緩衝液、トリス緩衝液、トリス塩酸緩衝液、エチレンジアミン四酢酸緩衝液、トリスＥＤＴＡ緩衝液、トリス酢酸ＥＤＴＡ緩衝液、トリスホウ酸ＥＤＴＡ緩衝液、濃縮ＳＳＣ緩衝液、濃縮ＳＳＰＥ緩衝液、クエン酸ナトリウム緩衝液、炭酸重炭酸緩衝液、ホウ酸ナトリウム緩衝液、マレイン酸緩衝液などが単独もしくはトリプシン、ペプシン、レンネット、キモトリプシン、エラスターゼ、ＮＡＤＰＨデハイドロゲナアゼまたはＮＡＤＨデハイドロゲナアゼなどの酵素を含有させて用いてもよい。
　さらに好ましくは、リン酸緩衝液、リン酸緩衝生理食塩水、トリス塩酸緩衝液、エチレンジアミン四酢酸緩衝液、トリスＥＤＴＡ緩衝液、トリス酢酸ＥＤＴＡ緩衝液、トリスホウ酸ＥＤＴＡ緩衝液、濃縮ＳＳＣ緩衝液、濃縮ＳＳＰＥ緩衝液、クエン酸ナトリウム緩衝液、炭酸重炭酸緩衝液、ホウ酸ナトリウム緩衝液などを単独もしくはトリプシン、ペプシン、レンネット、キモトリプシン、エラスターゼ、ＮＡＤＰＨデハイドロゲナアゼまたはＮＡＤＨデハイドロゲナアゼなどの酵素を含有させて用いてもよい。
　鋭意検討の結果、本発明者は、本実施形態の培養器具を用いて、例えば、マウス胚繊維芽細胞を培養し、検査のために細胞を採取する過程において、例えば、リン酸緩衝生理食塩水のような緩衝液を添加すると、細胞が自然に浮遊した状態で基材から離脱する現象を発見した。つまり、本実施形態によれば、特定のフッ素含有環状オレフィンポリマー、またはフッ素含有環状オレフィンポリマー組成物からなる培養器具を用いて細胞培養することにより、細胞は浮遊して群体を形成しながら増殖し、増殖した細胞は浮遊させて細胞を損傷させること無く基材から離脱できるという優れた細胞培養方法を実現することが可能となる。
　なお、本発明は前述の実施形態に限定されるものではなく、本発明の目的を達成できる範囲での変形、改良等は本発明に含まれるものである。
　以下、実施例において、本発明を説明するが、本発明はこれらの例によって何ら限定されるものではない。なお、実施例におけるポリマー分析値測定方法、細胞の取り扱い方法、培養器具の滅菌方法および培養評価方法を以下に記載した。
［重量平均分子量（Ｍｗ）、分子量分布（Ｍｗ／Ｍｎ）］
　下記の条件下でゲルパーミュエーションクロマトグラフィー（ＧＰＣ）を使用して、テトラヒドロフラン（ＴＨＦ）または、トリフルオロメチルベンゼン（ＴＦＴ）に溶解したポリマーの重量平均分子量（Ｍｗ）および数平均分子量（Ｍｎ）を、ポリスチレンスタンダードによって分子量を較正して測定した。
検出器：日本分光社製ＲＩ－２０３１および８７５－ＵＶまたはＶｉｓｃｏｔｅｃ社製Ｍｏｄｅｌ２７０、直列連結カラム：Ｓｈｏｄｅｘ　Ｋ－８０６Ｍ、８０４、８０３、８０２．５、カラム温度：４０℃、流量：１.０ｍｌ／分、試料濃度：３.０～９.０　ｍｇ/ｍｌ
［ガラス転移温度］
　島津製作所社製ＤＳＣ－５０を用い、測定試料を窒素雰囲下で１０℃／分の昇温速度で加熱し測定した。
［水接触角測定］
　協和界面科学社製固体表面エナジー解析装置ＣＡ－ＸＥ型を使用してＪＩＳ　Ｒ３２５７（基板ガラス表面のぬれ性試験方法）に準拠し、２μｌの水滴を基材表面に滴下し、静滴法により、基材表面に水滴が接触してから１分以内に接触角を測定した。
［ＵＶ硬化］
　塗布膜の硬化には光源として、シーシーエス社製ＵＶ照射装置を用いて波長３６５ｎｍのＬＥＤ光、またはエンジニアリングシステム社製ＵＶ式インプリント装置を用いて３７５ｎｍのＬＥＤ光を照射して硬化した。
［細胞種および培養液について］
　マウス胚繊維芽細胞（以下、ＢＡＬＢ／３Ｔ３細胞と略す）を用い、１０％仔ウシ血清（Ｃａｌｆ　Ｂｏｖｉｎｅ Ｓｅｒｕｍ、ＣＢＳ）と、高グルコースと、Ｄ－ＭＥＭ培地（Ｌ-グルタミン、フェノールレッド、ピルビン酸ナトリウム含有）と、を含む溶液（以下、ＢＡＬＢ／３Ｔ３細胞液とも呼ぶ）中で、すべての継代培養および細胞増殖性試験を行った。
［細胞の解凍］
　凍結した細胞懸濁液を３７℃ウォーターバスに浸けて解凍し、解凍した細胞懸濁液に氷上冷却した１０％仔ウシ血清Ｄ－ＭＥＭ培地を添加して遠心分離した。遠心後、上澄み液を除去して細胞塊をタッピングによりほぐした後、３７℃ウォーターバスで保温した１０％仔ウシ血清Ｄ－ＭＥＭ培地を添加した。血球計算盤で細胞数を計数し、ウォーターバスで保温した１０％仔ウシ血清Ｄ－ＭＥＭ培地を用いて細胞懸濁液を調製し培養フラスコに細胞を播種した後、加湿インキュベーターで培養した。
［細胞の継代］
　加湿インキュベーターから培養フラスコを取り出して培地をアスピレーターで除去し、３７℃ウォーターバス中で保温したダルベッコＰＢＳ（－）を加え、上澄みをアスピレーターで除去した。再度、同様な操作行った後、３７℃ウォーターバス中で保温した０．０２５ｗ／ｖ％トリプシン-ＥＤＴＡ溶液を加えて加湿インキュベーター内で静置した後、１０％仔ウシ血清Ｄ－ＭＥＭ培地を加えて剥がれた細胞を回収して遠沈管に移し遠心分離して上澄み液を除去し、タッピングにより細胞塊をほぐした後、１０％仔ウシ血清Ｄ－ＭＥＭ培地を加えた。血球計算盤で細胞数を計数した後、１０％仔ウシ血清Ｄ－ＭＥＭ培地で細胞懸濁液を調製し、培養フラスコに細胞を播種して、加湿インキュベーターで培養した。実施例に記載の細胞胞増殖性評価では、継代数３～２０代のものを用いた。
［細胞培養器具の滅菌方法］
　直径１５ｍｍに切り出した円形の培養フィルムをＴＣＰＳマルチウェルプレート（コーニング社製）穴部に置き、７０％エタノール水溶液を加えて４０分～1時間浸漬した後、７０％エタノール水溶液を除去してダルベッコＰＢＳ（－）に１５分～４０分間浸漬した。次に、ＰＢＳ（－）を除去して、培養器具をひっくり返し、同様な操作を行い、培養器具の表裏面を滅菌処理した。滅菌処理終了後、クリーンベンチ内で一晩乾燥させた。
［細胞懸濁液の調製］
　２５ｃｍ２培養フラスコで約６０％コンフレント状態になったＢＡＬＢ／３Ｔ３細胞を、上記、細胞の継代操作と同様な方法で０．０２５ｗ／ｖ％トリプシン-ＥＤＴＡで処理して剥がした。血球計算盤で細胞数を計数して、１０％仔ウシ血清Ｄ－ＭＥＭ培地で７５００ ｃｅｌｌｓ／ｍＬの細胞懸濁液を調製した。
［細胞増殖性の評価］
　培養開始後１、３、および７日経過後のＴＣＰＳマルチウェルプレートを加湿インキュベーターから取り出して培地を除去し、１０％ＷＳＴ－８（Ｃｅｌｌ　Ｃｏｕｎｔｉｎｇ　Ｋｉｔ－８）／１０％仔ウシ血清Ｄ－ＭＥＭ培地の混合溶液を添加して、加湿インキュベーターで３時間インキュベートした。その後、培地２００μｌを９６ウェルプレートに移し、プレートリーダー（ＳＰＥＣＴＲＡ　ｍａｘ　ＰＬＵＳ３８４、Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ　Ｄｅｖｉｃｅｓ社製）で波長４５０ｎｍの吸光度を測定した。各培養器具の細胞増殖性は、吸光度の経時変化により確認した。
［有意差検定］
　各種培養器具について、細胞を播種したサンプルを９検体準備して培養し、吸光度の測定結果をＰｒｉｓｍ　６　ｆｏｒ　Ｗｉｎｄｏｗｓ（登録商標）　６．０１（エムデーエフ社製）により数値解析して、結果の平均値を吸光度として算出し、標準偏差に±の符号を付しバラツキの範囲とした。
［蛍光顕微鏡観察］
　７日間細胞培養した容器から培地を除去して、４％グルタルアルデヒド／リン酸緩衝液を添加し１時間静置した後、４％グルタルアルデヒド／リン酸緩衝液を除去した。その後、滅菌水で洗浄し、Ｉｍａｇｅ－ｉＴ　Ｆｉｘａｔｉｏｎ／Ｐｅｒｍｅａｂｉｌｉｚａｔｉｏｎキット（ライフサイエンス社製）を使用し細胞核、および細胞骨格タンパクを染色して蛍光顕微鏡観察に用いる試料を調製した。蛍光顕微鏡観察は、オールインワン蛍光顕微鏡ＢＺ－Ｘ７００（キーエンス社製）を使用した。
［製造例１］ポリマー１
　５，５，６－トリフルオロ－６－（トリフルオロメチル）ビシクロ［２．２．１］ヘプト－２－エン（１００ｇ）と１－ヘキセン（０．２６８ｇ）のテトラヒドロフラン溶液に、Ｍｏ（Ｎ－２，６－Ｐｒｉ ２Ｃ６Ｈ３）（ＣＨＣＭｅ２Ｐｈ）（ＯＢｕt）２（５０ｍｇ）のテトラヒドロフラン溶液を添加し、７０℃で開環メタセシス重合を行った。得られたポリマーのオレフィン部を、パラジウムアルミナ（５ｇ）によって１６０℃で水素添加反応を行い、ポリ（１，１，２－トリフルオロ－２－トリフルオロメチル－３，５－シクロペンチレンエチレン）のテトラヒドロフラン溶液を得た。その溶液を孔径５μｍのフィルターで加圧ろ過しパラジウムアルミナを除去した溶液をメタノールに加え、白色のポリマーをろ別、乾燥し９９ｇのポリマー１を得た。得られたポリマー１は、上記一般式（１）により表される繰り返し構造単位を含有していた。また、水素添加率は１００％、重量平均分子量（Ｍｗ）は８３０００、分子量分布（Ｍｗ／Ｍｎ）は１.７３、ガラス転移温度は１０９℃であった。
［製造例２］培養フィルム１
　製造例１で合成したポリマー１をメチルイソブチルケトンに３０質量％濃度で溶解し、その溶液を孔径１μｍのフィルターで加圧ろ過し、次いで０．１μｍのフィルターでろ過してポリマー１のメチルイソブチルケトン溶液を調製した。次いで、ポリマー１のメチルイソブチルケトン溶液をガラス基板に塗布し、アプリケーターを用いて均一にコートした後、１４０℃で６０分乾燥して剥離する事で厚み６０μｍのフィルムを作製した。フィルムの水接触角は１５秒で９３．６°であった。さらに、１０分経過後で８８．１°であり水滴が消失するまでの時間において変化は見られなかった。
［製造例３］培養フィルム２
　製造例２で調製したポリマー１のメチルイソブチルケトン溶液を、コート基材であるＰＥＴフィルム（ルミラー、東レ）にバーコーターを用いて均一に塗布し、１００℃で２０分乾燥して室温まで放冷し、コート膜の厚みが５μｍの培養フィルム２を作製した。フィルムの水接触角は１５秒で９３．７°であった。さらに、１０分経過後で８７．７°であり水滴が消失するまでの時間において変化は見られなかった。
［製造例４］培養フィルム３
　コート基材をアクリルフィルム（アクリプレン、三菱レイヨン）に、コート後の乾燥条件を９０℃、４０分に変更したこと以外は製造例３と同じ方法で、コート膜の厚みが５μｍの培養フィルム３を作製した。フィルムの水接触角は１５秒で９４．１°であった。さらに、１０分経過後で８８．０°であり水滴が消失するまでの時間において変化は見られなかった。
［製造例５］培養フィルム４
　製造例１で合成したフッ素含有環状オレフィンポリマー（Ａ）であるポリマー１を３０質量％濃度で溶解したメチルイソブチルケトン溶液１００ｇに、光硬化性化合物（Ｂ）として３－エチル－３{[(３－エチルオキセタン－３－イル)メトキシ]メチル}オキセタンと１，７－オクタジエンジエポキシドの質量比９／１の混合物を７．５ｇ[（Ａ）／（Ｂ）＝８０／２０]、および光重合開始剤（Ｃ）として光カチオン開始剤（アデカオプトマーＳＰ－１７２、旭電化社製）を０．４ｇ加えた溶液を調製し、孔径１μｍのフィルターで加圧ろ過し、次いで０．１μｍのフィルターでろ過してポリマー１と光硬化性化合物および光硬化開始剤のメチルイソブチルケトン溶液を調製した。次いで、コート基材であるＰＥＴフィルム（ルミラー、東レ）に塗布して、バーコーターを用いて均一にコートし、１００℃で１０分乾燥して室温まで放冷した後、２００ｍＪ/ｃｍ２の光量でＵＶ照射して硬化樹脂を硬化させコート厚み５μｍの培養フィルム４を作製した。コート面の水接触角は１５秒で８８．１°であった。さらに、１０分経過後で８４．９°であり水滴が消失するまでの時間において変化は見られなかった。
［製造例６］培養フィルム５
　フッ素含有環状オレフィンポリマー（Ａ）であるポリマー１と、光硬化性化合物（Ｂ）である３－エチル－３{[(３－エチルオキセタン－３－イル)メトキシ]メチル}オキセタンと１、７－オクタジエンジエポキシドの質量比９／１の混合物と、の質量比を［（Ａ）／（Ｂ）＝６０／４０］に変更した以外は製造例５と同様な方法でコート厚み５μｍの培養フィルム５を作製した。コート面の水接触角は１５秒で８４．２°であった。さらに、１０分経過後で８１．３°であり水滴が消失するまでの時間において変化は見られなかった。
［製造例７］培養フィルム６
　コート基材をアクリルフィルム（アクリプレン、三菱レイヨン）に、コート後の乾燥条件を９０℃、４０分に変更したこと以外は製造例６と同じ方法で、コート膜の厚みが５μｍの培養フィルム６を作製した。フィルムの水接触角は１５秒で８４．３°であった。さらに、１０分経過後で８１．０°であり水滴が消失するまでの時間において変化は見られなかった。
［製造例８］培養フィルム７
　製造例１で合成したポリマー１に耐熱酸化防止剤としてスミライザーＧＰ（住友化学社製）を０．５質量％添加して、ペレタイザーによりペレット化した後、メイホー製小型射出成型機Ｍｉｃｒｏ－１を用いて、加熱混練部の温度を２６０℃、金型の温度を９０℃に設定し、射出速度２０ｍｍ／ｓｅｃ、射出圧力４０ＭＰａの条件で直径２０ｍｍ×厚み３ｍｍの培養フィルム７を作製した。基材表面の水接触角は１５秒で９４．０°であった。さらに、１０分経過後で８８．４°であり水滴が消失するまでの時間において変化は見られなかった。
［実施例１］
　製造例２で作製した滅菌済みの培養フィルム１を２４穴ＴＣＰＳマルチウェルプレートの穴部底面に置き、滅菌グリース（東レ・ダウコーニング社製）でＳＵＳ製Ｏ－リング（内径１１ｍｍ）と密着させて固定した後、ＢＡＬＢ／３Ｔ３細胞液（１ｍＬ）を培養フィルム１の上に播種した。同操作を９回実施して、検体数で９個のサンプルを準備した。その後、蓋をして加湿インキュベーターに移動し、庫内温度３７℃、炭酸ガス濃度５％の滅菌空気下で培養を開始した。
　ＷＳＴ－８法による細胞増殖性の評価では、1日経過後の吸光度が０．１０±０．０２であり、３日経過後で０．３５±０．０８であり、７日経過後で０．７３±０．２４であった。経過日数に対して吸光度は直線的に増大しており、７日経過しても増殖性に変化は見られなかった。また、7日間培養した細胞を顕微鏡観察すると、細胞はシート状に、厚み方向に対して群体を形成した状態で増殖しており、リン酸緩衝生理食塩水を添加するとシート状の形態を保った状態で浮遊した。
［実施例２］
　製造例３で作製した滅菌済みの培養フィルム２を実施例１と同様な方法で２４穴ＴＣＰＳマルチウェルプレートに固定し、解凍済みのＢＡＬＢ／３Ｔ３細胞液（１ｍＬ）を播種した。同操作を９回繰り返し、検体数で９個のサンプルを準備した。その後、蓋をしてインキュベーターに移動し庫内温度３７℃、炭酸ガス濃度５％の滅菌空気下で培養を開始した。
　ＷＳＴ－８法による細胞増殖性の評価では、1日経過後の吸光度が０．１１±０．０２であり、３日経過後で０．３６±０．０５であり、７日経過後で０．７８±０．１３であった。経過日数に対して吸光度は直線的に増大しており、７日経過しても増殖性に変化は見られなかった。また、7日間培養した細胞を顕微鏡観察すると、細胞はシート状に、厚み方向に対して群体を形成した状態で増殖しており、リン酸緩衝生理食塩水を添加するとシート状の形態を保った状態で浮遊した。
［実施例３］
　製造例４で作製した滅菌済みの培養フィルム３を実施例１と同様な方法で２４穴ＴＣＰＳマルチウェルプレートに固定し、解凍済みのＢＡＬＢ／３Ｔ３細胞液（１ｍＬ）を播種した。同操作を９回繰り返し、検体数で９個のサンプルを準備した。その後、蓋をしてインキュベーターに移動し庫内温度３７℃、炭酸ガス濃度５％の滅菌空気下で培養を開始した。
　ＷＳＴ－８法による細胞増殖性の評価では、1日経過後の吸光度が０．１１±０．０４であり、３日経過後で０．３８±０．０４であり、７日経過後で０．８３±０．１１であった。経過日数に対して吸光度は直線的に増大しており、７日経過しても増殖性に変化は見られなかった。また、7日間培養した細胞を顕微鏡観察すると、細胞はシート状に、厚み方向に対して群体を形成した状態で増殖しており、リン酸緩衝生理食塩水を添加するとシート状の形態を保った状態で浮遊した。
［実施例４］
　製造例５で作製した滅菌済みの培養フィルム４を実施例１と同様な方法で２４穴ＴＣＰＳマルチウェルプレートに固定し、解凍済みのＢＡＬＢ／３Ｔ３細胞液（１ｍＬ）を播種した。同操作を９回繰り返し、検体数で９個のサンプルを準備した。その後、蓋をしてインキュベーターに移動し庫内温度３７℃、炭酸ガス濃度５％の滅菌空気下で培養を開始した。
　ＷＳＴ－８法による細胞増殖性の評価では、1日経過後の吸光度が０．１１±０．０３であり、３日経過後で０．２３±０．０４であり、７日経過後で０．５１±０．１１であった。経過日数に対して吸光度は直線的に増大しており、７日経過しても増殖性に変化は見られなかった。また、7日間培養した細胞を顕微鏡観察すると、細胞はシート状に、厚み方向に対して群体を形成した状態で増殖しており、リン酸緩衝生理食塩水を添加するとシート状の形態を保った状態で浮遊した。
［実施例５］
　製造例６で作製した滅菌済みの培養フィルム５を実施例１と同様な方法で２４穴ＴＣＰＳマルチウェルプレートに固定し、解凍済みのＢＡＬＢ／３Ｔ３細胞液（１ｍＬ）を播種した。同操作を９回繰り返し、検体数で９個のサンプルを準備した。その後、蓋をしてインキュベーターに移動し庫内温度３７℃、炭酸ガス濃度５％の滅菌空気下で培養を開始した。
　ＷＳＴ－８法による細胞増殖性の評価では、1日経過後の吸光度が０．１１±０．０２であり、３日経過後で０．２７±０．０４であり、７日経過後で０．５５±０．１８であった。経過日数に対して吸光度は直線的に増大しており、７日経過しても増殖性に変化は見られなかった。また、7日間培養した細胞を顕微鏡観察すると、細胞はシート状に、厚み方向に対して群体を形成した状態で増殖しており、リン酸緩衝生理食塩水を添加するとシート状の形態を保った状態で浮遊した。
［実施例６］
　製造例７で作製した滅菌済みの培養フィルム６を実施例１と同様な方法で２４穴ＴＣＰＳマルチウェルプレートに固定し、解凍済みのＢＡＬＢ／３Ｔ３細胞液（１ｍＬ）を播種した。同操作を９回繰り返し、検体数で９個のサンプルを準備した。その後、蓋をしてインキュベーターに移動し庫内温度３７℃、炭酸ガス濃度５％の滅菌空気下で培養を開始した。
　ＷＳＴ－８法による細胞増殖性の評価では、1日経過後の吸光度が０．１１±０．０４であり、３日経過後で０．２３±０．０２であり、７日経過後で０．５３±０．１３であった。経過日数に対して吸光度は直線的に増大しており、７日経過しても増殖性に変化は見られなかった。また、7日間培養した細胞を顕微鏡観察すると、細胞はシート状に、厚み方向に対して群体を形成した状態で増殖しており、リン酸緩衝生理食塩水を添加するとシート状の形態を保った状態で浮遊した。
［実施例７］
　製造例８で作製した滅菌済みの培養フィルム７を２４穴ＴＣＰＳマルチウェルプレートの穴部底面に置き、滅菌グリース（東レ・ダウコーニング製）でＳＵＳ製Ｏ－リング（内径１６ｍｍ）と密着させて固定した後、解凍済みのＢＡＬＢ／３Ｔ３細胞液（１ｍＬ）を培養フィルム７の上に播種した。同操作を９回実施して、検体数で９個のサンプルを準備した。その後、蓋をしてインキュベーターに移動し庫内温度３７℃、炭酸ガス濃度５％の滅菌空気下で培養を開始した。
　ＷＳＴ－８法による細胞増殖性の評価では、1日経過後の吸光度が０．１１±０．０５であり、３日経過後で０．４２±０．１５であり、７日経過後で０．９６±０．０６であった。経過日数に対して吸光度は直線的に増大しており、７日経過しても増殖性に変化は見られなかった。また、7日間培養した細胞を顕微鏡観察すると、細胞はシート状に、厚み方向に対して群体を形成した状態で増殖しており、リン酸緩衝生理食塩水を添加するとシート状の形態を保った状態で浮遊した。
［実施例８］
　フッ素含有環状オレフィンモノマーの種類を５，６－ジフルオロ－５－ペンタフルオロエチル－６－トリフルオロメチルビシクロ［２．２．１］ヘプト－２－エンに変更したこと以外は、製造例１と同様な方法により９７ｇのポリマー２を得た。得られたポリマー２は、上記一般式（１）により表される繰り返し構造単位を含有していた。また、水素添加率は１００％、重量平均分子量（Ｍｗ）は９１０００、分子量分布（Ｍｗ／Ｍｎ）は１.９３、ガラス転移温度は１０４℃であった。
　次に、製造例２と同様な方法により厚み５５μｍの培養フィルム８を作製した。フィルムの水接触角は１５秒で１０１．６°であった。さらに、１０分経過後で９９．７°であり水滴が消失するまでの時間において変化は見られなかった。
　培養フィルム８による実施例１と同様な方法で実施したＢＡＬＢ／３Ｔ３細胞の培養は、ＷＳＴ－８法による細胞増殖性の評価で1日経過後の吸光度が０．１０±０．０１であり、３日経過後で０．３３±０．０５であり、７日経過後で０．７４±０．１７であった。経過日数に対して吸光度は直線的に増大しており、７日経過しても増殖性に変化は見られなかった。また、7日間培養した細胞を顕微鏡観察すると、細胞はシート状に、厚み方向に対して群体を形成した状態で増殖しており、リン酸緩衝生理食塩水を添加するとシート状の形態を保った状態で浮遊した。
［実施例９］
　フッ素含有環状オレフィンポリマー（Ａ）である実施例８で製造したポリマー２と、光硬化性化合物（Ｂ）として３－エチル－３{[(３－エチルオキセタン－３－イル)メトキシ]メチル}オキセタンと１、７－オクタジエンジエポキシドの質量比９／１の混合物と、を製造例５と同じ方法で混合し、［質量比（Ａ）／（Ｂ）＝８０／２０］の組成物を調製した。次に、ＰＥＴフィルム（ルミラー、東レ）にコートして、培養フィルム９を作製した。フィルムの水接触角は１５秒で９５．３°であった。さらに、１０分経過後で９４．９°であり水滴が消失するまでの時間において変化は見られなかった。
　培養フィルム９による実施例１と同様な方法で実施したＢＡＬＢ／３Ｔ３細胞の培養は、ＷＳＴ－８法による細胞増殖性の評価で1日経過後の吸光度が０．１０±０．０１であり、３日経過後で０．２５±０．０７であり、７日経過後で０．６０±０．１３であった。経過日数に対して吸光度は直線的に増大しており、７日経過しても増殖性に変化は見られなかった。また、7日間培養した細胞を顕微鏡観察すると、細胞はシート状に、厚み方向に対して群体を形成した状態で増殖しており、リン酸緩衝生理食塩水を添加するとシート状の形態を保った状態で浮遊した。
［実施例１０］
　フッ素含有環状オレフィンモノマーの種類を５，６－ジフルオロ－５－へプタフルオロ－ｉｓｏ－プロピル－６－トリフルオロメチルビシクロ［２．２．１］ヘプト－２－エンに変更したこと以外は、製造例１と同様な方法により９８ｇのポリマー３を得た。得られたポリマー３は、上記一般式（１）により表される繰り返し構造単位を含有していた。また、水素添加率は１００％、重量平均分子量（Ｍｗ）は１４２０００、分子量分布（Ｍｗ／Ｍｎ）は１.４０、ガラス転移温度は１３７℃であった。
　次に、製造例２と同様な方法により厚み５８μｍの培養フィルム１０を作製した。フィルムの水接触角は１５秒で１０３．９°であった。さらに、１０分経過後で１０２．２°であり水滴が消失するまでの時間において変化は見られなかった。
　培養フィルム１０による実施例１と同様な方法で実施したＢＡＬＢ／３Ｔ３細胞の培養は、ＷＳＴ－８法による細胞増殖性の評価で1日経過後の吸光度が０．１１±０．０３であり、３日経過後で０．３２±０．０３であり、７日経過後で０．７９±０．２１であった。経過日数に対して吸光度は直線的に増大しており、７日経過しても増殖性に変化は見られなかった。また、7日間培養した細胞を顕微鏡観察すると、細胞はシート状に、厚み方向に対して群体を形成した状態で増殖しており、リン酸緩衝生理食塩水を添加するとシート状の形態を保った状態で浮遊した。
 ［製造例９］培養フィルム１３
　製造例１で合成したポリマー１をメチルイソブチルケトンに３０質量％濃度で溶解し、その溶液を孔径１μｍのフィルターで加圧ろ過し、次いで０．１μｍのフィルターでろ過してポリマー１のメチルイソブチルケトン溶液を調製した。次いで、直径１５０ｎｍ、ピッチ２５０ｎｍのホール形状を有するサイズが４ｃｍ×４ｃｍのニッケルモールドにポリマー１のメチルイソブチルケトン溶液を塗布し、アプリケーターを用いて均一にコートした後、１４０℃で６０分乾燥して剥離する事で、厚み５０μｍのピラー形状の培養フィルム１３を作製した。培養フィルム１３の水接触角（１５秒経過時）は１４７．０°であった。
［製造例１０］培養フィルム１４
　製造例９で使用したポリマー１のメチルイソブチルケトン溶液を、ライン幅２００ｎｍ、ピッチ４００ｎｍでラインとスペースが２μｍ周期で縦横最密充填配列したサイズが５ｃｍ×５ｃｍのシリコンモールドに塗布し、アプリケーターを用いて均一にコートした後、１４０℃で６０分乾燥して剥離する事で、厚み５０μｍのホール形状の培養フィルム１４を作製した。培養フィルム１４の水接触角（１５秒経過時）は１３６．０°であった。
 ［製造例１１］培養フィルム１５
 　製造例９で使用したポリマー１のメチルイソブチルケトン溶液を、直径１５０ｎｍ、ピッチ２５０ｎｍのピラー形状を有するサイズが４ｃｍ×４ｃｍのニッケルモールドに塗布し、アプリケーターを用いて均一にコートした後、１４０℃で６０分乾燥して剥離する事で、厚み５０μｍのホール形状の培養フィルム１５を作製した。培養フィルム１５の水接触角（１５秒経過時）は１２４．３°であった。
［製造例１２］培養フィルム１６
　製造例９で使用したポリマー１のメチルイソブチルケトン溶液を、直径が２５μｍのドーム形状の反転パターンを有するサイズが４ｃｍ×４ｃｍの石英モールドにポリマー１のメチルイソブチルケトン溶液を塗布し、アプリケーターを用いて均一にコートした後、１４０℃で６０分乾燥して剥離する事で、厚み６０μｍのドーム形状の培養フィルム１６を作製した。培養フィルム１６の水接触角（１５秒経過時）は１２７．３°であった。
［製造例１３］培養フィルム１７
　製造例１で合成したポリマー１を３０質量％濃度で溶解したメチルイソブチルケトン溶液１００ｇに、光硬化性化合物（Ｂ）として３－エチル－３{[(３－エチルオキセタン－３－イル)メトキシ]メチル}オキセタンと１，７－オクタジエンジエポキシドの質量比９／１の混合物を２０ｇ［（Ａ）／（Ｂ）＝６０／４０］、および光硬化開始剤（Ｃ）として（アデカオプトマーＳＰ－１７２、ＡＤＥＫＡ社製）を０．８ｇ加えた溶液を調製し、孔径１μｍのフィルターで加圧ろ過し、次いで０．１μｍのフィルターでろ過して光硬化性組成物１を調製した。次いで、製造例１２で使用した石英モールドに光硬化性組成物１をアプリケーターを用いて均一にコートした後、１４０℃で３０分乾燥し、コート面の背面から波長３６５ｎｍのＵＶ光を２００ｍＪ／ｃｍ２の積算光量で照射し、その後モールドから剥離する事で、厚み６０μｍのドーム形状の培養フィルム１７を作製した。培養フィルム１７の水接触角（１５秒経過時）は１２９．５°であった。
［実施例１１］
　製造例９で作製した培養フィルム１３を滅菌し、パターン面を上方に２４穴ＴＣＰＳマルチウェルプレートの穴部底面に置き、滅菌グリース（東レ・ダウコーニング社製）でＳＵＳ製Ｏ－リング（内径１１ｍｍ）と密着させて固定した後、ＢＡＬＢ／３Ｔ３細胞液（１ｍＬ）を培養フィルム１３のパターン面に播種した。同操作を９回実施して、検体数で９個のサンプルを準備した。その後、蓋をして加湿インキュベーターに移動し、庫内温度３７℃、炭酸ガス濃度５％の滅菌空気下で培養を開始した。
　ＷＳＴ－８法による細胞増殖性の評価では、1日経過後の吸光度が０．１０±０．０３であり、３日経過後で０．３３±０．０６であり、７日経過後で０．６８±０．０９であった。経過日数に対して吸光度は直線的に増大しており、７日経過しても増殖性に変化は見られなかった。また、7日間培養した細胞を顕微鏡観察すると、細胞は厚み方向に対して群体を形成した状態で増殖しており、リン酸緩衝生理食塩水を添加すると群体形成の形態を保った状態で浮遊した。
［実施例１２］
　製造例１０で作製した培養フィルム１４を滅菌し、実施例１と同様な方法で２４穴ＴＣＰＳマルチウェルプレートに固定し、解凍済みのＢＡＬＢ／３Ｔ３細胞液（１ｍＬ）を培養フィルム１４のパターン面に播種した。同操作を９回繰り返し、検体数で９個のサンプルを準備した。その後、蓋をしてインキュベーターに移動し庫内温度３７℃、炭酸ガス濃度５％の滅菌空気下で培養を開始した。
　ＷＳＴ－８法による細胞増殖性の評価では、1日経過後の吸光度が０．１０±０．０１であり、３日経過後で０．３２±０．０６であり、７日経過後で０．６７±０．１０であった。経過日数に対して吸光度は直線的に増大しており、７日経過しても増殖性に変化は見られなかった。また、7日間培養した細胞を顕微鏡観察すると、細胞は厚み方向に対して群体を形成した状態で増殖しており、リン酸緩衝生理食塩水を添加すると群体形成の形態を保った状態で浮遊した。
［実施例１３］
　製造例１１で作製した培養フィルム１５を滅菌し、実施例１と同様な方法で２４穴ＴＣＰＳマルチウェルプレートに固定し、解凍済みのＢＡＬＢ／３Ｔ３細胞液（１ｍＬ）を培養フィルム１５のパターン面に播種した。同操作を９回繰り返し、検体数で９個のサンプルを準備した。その後、蓋をしてインキュベーターに移動し庫内温度３７℃、炭酸ガス濃度５％の滅菌空気下で培養を開始した。
　ＷＳＴ－８法による細胞増殖性の評価では、1日経過後の吸光度が０．１０±０．０２であり、３日経過後で０．３４±０．０３であり、７日経過後で０．７０±０．０９であった。経過日数に対して吸光度は直線的に増大しており、７日経過しても増殖性に変化は見られなかった。また、7日間培養した細胞を顕微鏡観察すると、細胞は厚み方向に対して群体を形成した状態で増殖しており、リン酸緩衝生理食塩水を添加すると群体形成の形態を保った状態で浮遊した。
［実施例１４］
　製造例１２で作製した培養フィルム１６を滅菌し、実施例１と同様な方法で２４穴ＴＣＰＳマルチウェルプレートに固定し、解凍済みのＢＡＬＢ／３Ｔ３細胞液（１ｍＬ）を培養フィルム１６のパターン面に播種した。同操作を９回繰り返し、検体数で９個のサンプルを準備した。その後、蓋をしてインキュベーターに移動し庫内温度３７℃、炭酸ガス濃度５％の滅菌空気下で培養を開始した。
　ＷＳＴ－８法による細胞増殖性の評価では、1日経過後の吸光度が０．０９±０．０２であり、３日経過後で０．３２±０．０３であり、７日経過後で０．６６±０．０８であった。経過日数に対して吸光度は直線的に増大しており、７日経過しても増殖性に変化は見られなかった。また、7日間培養した細胞を顕微鏡観察すると、細胞は厚み方向に対して群体を形成した状態で増殖しており、リン酸緩衝生理食塩水を添加すると群体形成の形態を保った状態で浮遊した。
［実施例１５］
　製造例１３で作製した培養フィルム１７を滅菌し、実施例１と同様な方法で２４穴ＴＣＰＳマルチウェルプレートに固定し、解凍済みのＢＡＬＢ／３Ｔ３細胞液（１ｍＬ）を培養フィルム１７のパターン面に播種した。同操作を９回繰り返し、検体数で９個のサンプルを準備した。その後、蓋をしてインキュベーターに移動し庫内温度３７℃、炭酸ガス濃度５％の滅菌空気下で培養を開始した。
　ＷＳＴ－８法による細胞増殖性の評価では、1日経過後の吸光度が０．１０±０．０４であり、３日経過後で０．２６±０．０２であり、７日経過後で０．５２±０．１２であった。経過日数に対して吸光度は直線的に増大しており、７日経過しても増殖性に変化は見られなかった。また、７日間培養した細胞を顕微鏡観察すると、細胞は厚み方向に対して群体を形成した状態で増殖しており、リン酸緩衝生理食塩水を添加すると群体形成の形態を保った状態で浮遊した。
［実施例１６］
　実施例８で製造したポリマー２を用いて、製造例９と同様な方法により厚み５５μｍのピラー形状の培養フィルム１８を作製した。培養フィルム１８の水接触角（１５秒経過時）は１５０．５°であった。
　培養フィルム１８を用い、実施例１と同様な方法で実施したＢＡＬＢ／３Ｔ３細胞の培養は、ＷＳＴ－８法による細胞増殖性の評価で1日経過後の吸光度が０．１０±０．０３であり、３日経過後で０．３２±０．０３であり、７日経過後で０．７２±０．１０であった。経過日数に対して吸光度は直線的に増大しており、７日経過しても増殖性に変化は見られなかった。また、７日間培養した細胞を顕微鏡観察すると、細胞は厚み方向に対して群体を形成した状態で増殖しており、リン酸緩衝生理食塩水を添加すると群体形成の形態を保った状態で浮遊した。
［実施例１７］
　実施例１０で製造したポリマー３を用いてモールドを製造例１１で使用したピラー形状のニッケルモールドに変更したこと以外は、製造例９と同様な方法により厚み５８μｍのホール形状の培養フィルム１９を作製した。培養フィルム１９の水接触角（１５秒経過時）は１３０．３°であった。
　培養フィルム１９による実施例１と同様な方法で実施したＢＡＬＢ／３Ｔ３細胞の培養は、ＷＳＴ－８法による細胞増殖性の評価で1日経過後の吸光度が０．０９±０．０２であり、３日経過後で０．３２±０．０４であり、７日経過後で０．７８±０．１９であった。経過日数に対して吸光度は直線的に増大しており、７日経過しても増殖性に変化は見られなかった。また、７日間培養した細胞を顕微鏡観察すると、細胞は厚み方向に対して群体を形成した状態で増殖しており、リン酸緩衝生理食塩水を添加すると群体形成の形態を保った状態で浮遊した。
［実施例１８］
　製造例１で合成したポリマー１から作製した厚み５０μｍのフィルムを製造例９で使用したホール形状のニッケルモールドのパターン面に被せ、１５０℃に加熱し１０ＭＰａで熱圧着しそのまま５秒間保持した。５０℃に冷却後、モールドを離脱させピラー形状の培養フィルム２０を作製した。培養フィルム２０の水接触角（１５秒経過時）は１４８．１°であった。
　培養フィルム２０を用い、実施例１と同様な方法で実施したＢＡＬＢ／３Ｔ３細胞の培養は、ＷＳＴ－８法による細胞増殖性の評価で1日経過後の吸光度が０．１１±０．０３であり、３日経過後で０．３９±０．０４であり、７日経過後で０．８１±０．１１であった。経過日数に対して吸光度は直線的に増大しており、７日経過しても増殖性に変化は見られなかった。また、７日間培養した細胞を顕微鏡観察すると、細胞は厚み方向に対して群体を形成した状態で増殖しており、リン酸緩衝生理食塩水を添加すると群体形成の形態を保った状態で浮遊した。
［実施例１９］
　製造例１３で調製した光硬化性組成物１［（Ａ）／（Ｂ）＝６０／４０］をＰＥＴフィルムにスピンコートして、１００℃で１分間加熱した後に、製造例９で使用したホール形状のニッケルモールドのパターン面と光硬化性組成物１のコート面が接触するようにＰＥＴフィルムを被せ、０．３ＭＰａの圧力で圧着しながら波長３７５ｎｍのＵＶ光を２００ｍＪ／ｃｍ２の積算光量で照射した。次いで、ニッケルモールドからＰＥＴフィルムを剥離して、ＰＥＴフィルムの表面にピラー形状を形成した培養フィルム２１を作製した。培養フィルム２１の水接触角（１５秒経過時）は１４６．９°であった。
　培養フィルム２１による実施例１と同様な方法で実施したＢＡＬＢ／３Ｔ３細胞の培養は、ＷＳＴ－８法による細胞増殖性の評価で1日経過後の吸光度が０．１１±０．０２であり、３日経過後で０．２６±０．０３であり、７日経過後で０．５３±０．１０であった。経過日数に対して吸光度は直線的に増大しており、７日経過しても増殖性に変化は見られなかった。また、７日間培養した細胞を顕微鏡観察すると、細胞は厚み方向に対して群体を形成した状態で増殖しており、リン酸緩衝生理食塩水を添加すると群体形成の形態を保った状態で浮遊した。
［実施例２０］
　細胞種をヒト皮膚繊維芽細胞（以下、Ｈｓ－６８細胞と略す）に変更し、マウス胚繊維芽細胞と同様な方法により細胞の解凍、継代、懸濁液を調製し、１０％仔ウシ血清Ｄ－ＭＥＭ培地で７５００ ｃｅｌｌｓ／ｍＬの細胞懸濁液を調製した。
　次に、製造例２で作製した滅菌済みの培養フィルム１を使用して、実施例１と同様な方法により、解凍済みのＨｓ－６８細胞液（１ｍＬ）を播種した。同操作を９回繰り返し、検体数で９個のサンプルを準備した。その後、蓋をしてインキュベーターに移動し庫内温度３７℃、炭酸ガス濃度５％の滅菌空気下で培養を開始した。
　ＷＳＴ－８法による細胞増殖性の評価では、1日経過後の吸光度が０．３４±０．０７であり、３日経過後で１．５５±０．１０であり、７日経過後で４．２７±０．１６であった。経過日数に対して吸光度は直線的に増大しており、７日経過しても増殖性に変化は見られなかった。また、７日間培養した細胞を顕微鏡観察すると、細胞はシート状に、厚み方向に対して群体を形成した状態で増殖しており、トリプシン含有リン酸緩衝生理食塩水を添加するとシート状の形態を保った状態で浮遊した。
　この培養細胞のＮＡＤＰＨデハイドロゲナーゼで薬物代謝系酵素活性評価を行うとほぼ１００％が、生態系と同様の薬物代謝系酵素活性があることが分かった。さらに、自家蛍光を観察すると同様に１００％の培養細胞が生細胞であることを確認した。
［実施例２１］
　製造例６で作製した滅菌済みの培養フィルム５を使用して、実施例２０と同様な方法により、解凍済みのＨｓ－６８細胞液（１ｍＬ）を播種した。同操作を９回繰り返し、検体数で９個のサンプルを準備した。その後、蓋をしてインキュベーターに移動し庫内温度３７℃、炭酸ガス濃度５％の滅菌空気下で培養を開始した。
　ＷＳＴ－８法による細胞増殖性の評価では、1日経過後の吸光度が０．３１±０．０３であり、３日経過後で１．４９±０．０９であり、７日経過後で３．７７±０．１９であった。経過日数に対して吸光度は直線的に増大しており、７日経過しても増殖性に変化は見られなかった。また、７日間培養した細胞を顕微鏡観察すると、細胞はシート状に、厚み方向に対して群体を形成した状態で増殖しており、トリプシン含有リン酸緩衝生理食塩水を添加するとシート状の形態を保った状態で浮遊した。
　この培養細胞のＮＡＤＰＨデハイドロゲナーゼで薬物代謝系酵素活性評価を行うとほぼ１００％が、生態系と同様の薬物代謝系酵素活性があることが分かった。さらに、自家蛍光を観察すると同様に１００％の培養細胞が生細胞であることを確認した。
［実施例２２］
　実施例１０で記載した滅菌済みの培養フィルム１０を使用して、実施例２０と同様な方法により、解凍済みのＨｓ－６８細胞液（１ｍＬ）を播種した。同操作を９回繰り返し、検体数で９個のサンプルを準備した。その後、蓋をしてインキュベーターに移動し庫内温度３７℃、炭酸ガス濃度５％の滅菌空気下で培養を開始した。
　ＷＳＴ－８法による細胞増殖性の評価では、1日経過後の吸光度が０．３３±０．０４であり、３日経過後で１．５３±０．０５であり、７日経過後で４．１７±０．１１であった。経過日数に対して吸光度は直線的に増大しており、７日経過しても増殖性に変化は見られなかった。また、７日間培養した細胞を顕微鏡観察すると、細胞はシート状に、厚み方向に対して群体を形成した状態で増殖しており、トリプシン含有リン酸緩衝生理食塩水を添加するとシート状の形態を保った状態で浮遊した。
　この培養細胞のＮＡＤＰＨデハイドロゲナーゼで薬物代謝系酵素活性評価を行うとほぼ１００％が、生態系と同様の薬物代謝系酵素活性があることが分かった。さらに、自家蛍光を観察すると同様に１００％の培養細胞が生細胞であることを確認した。
［実施例２３］
　６穴ＴＣＰＳマルチウェルプレート（コーニング社製）の凹部底面を切り抜き、製造例２で作製したフィルム１を６穴全ての凹部底面に貼り付け細胞培養容器を作製し、エタノールにより滅菌処理した。
　次いで、細胞液の量を１０ｍＬに変更したこと以外は、実施例２０と同様な方法により、解凍済みのＨｓ－６８細胞液を播種した。同操作を９回繰り返し、検体数で９個のサンプルを準備した。その後、蓋をしてインキュベーターに移動し庫内温度３７℃、炭酸ガス濃度５％の滅菌空気下で培養を開始した。
　ＷＳＴ－８法による細胞増殖性の評価では、1日経過後の吸光度が０．５２±０．０３であり、３日経過後で１．７０±０．０３であり、７日経過後で４．３５±０．０９であった。経過日数に対して吸光度は直線的に増大しており、７日経過しても増殖性に変化は見られなかった。また、7日間培養した細胞を顕微鏡観察すると、細胞はシート状に、厚み方向に対して群体を形成した状態で増殖しており、トリプシン含有リン酸緩衝生理食塩水を添加するとシート状の形態を保った状態で浮遊した。
　さらに、７日間培養した細胞を蛍光発光試薬で染色して細胞核、および細胞骨格タンパクの形態を蛍光顕微鏡観察すると、青色蛍光発光（図２の白色部）した細胞核、および緑色蛍光発光（図２の灰色部）した細胞骨格タンパクは、二次元的に密度斑を伴いながら、三次元的には厚み方向に細胞が重なった状態の群体を形成した形態で観察された（図２参照）。
　この培養細胞のＮＡＤＰＨデハイドロゲナーゼで薬物代謝系酵素活性評価を行うとほぼ１００％が、生態系と同様の薬物代謝系酵素活性があることが分かった。さらに、自家蛍光を観察しても、殆ど蛍光が観察されないことから、同様に９９．９８％の培養細胞が生細胞であることを確認した（図４参照）。
［実施例２４］
　実施例１３で記載した滅菌済みの培養フィルム１５を使用して、実施例２０と同様な方法により、解凍済みのＨｓ－６８細胞液（１ｍＬ）を播種した。同操作を９回繰り返し、検体数で９個のサンプルを準備した。その後、蓋をしてインキュベーターに移動し庫内温度３７℃、炭酸ガス濃度５％の滅菌空気下で培養を開始した。
　ＷＳＴ－８法による細胞増殖性の評価では、１日経過後の吸光度が０．２５±０．０２であり、３日経過後で０．７８±０．０４であり、７日経過後で１．８０±０．０９であった。経過日数に対して吸光度は直線的に増大しており、７日経過しても増殖性に変化は見られなかった。また、7日間培養した細胞を顕微鏡観察すると、細胞は厚み方向に対して群体を形成した状態で増殖しており、トリプシン含有リン酸緩衝生理食塩水を添加するとシート状の形態を保った状態で浮遊した。
　この培養細胞のＮＡＤＰＨデハイドロゲナーゼで薬物代謝系酵素活性評価を行うとほぼ１００％が、生態系と同様の薬物代謝系酵素活性があることが分かった。さらに、自家蛍光を観察すると同様に１００％の培養細胞が生細胞であることを確認した。
　［比較例１］
　γ線滅菌済み２４穴ＴＣＰＳマルチウェルプレート（コーニング製、水接触角は１５秒後で４６．１°。さらに、１０分後で１１．２°）の穴部底面に解凍済みのＢＡＬＢ／３Ｔ３細胞液（１ｍＬ）を播種した。同操作を９回繰り返し、検体数９個のサンプルを準備した。その後、蓋をしてインキュベーターに移動し庫内温度３７℃、炭酸ガス濃度５％の滅菌空気下で培養を開始した。
　ＷＳＴ－８法による細胞増殖性の評価では、1日経過後の吸光度が０．２７±０．０３であり、３日経過後で１．０８±０．１１であり、７日経過後で１．５１±０．２３であった。経過日数に対して吸光度は徐々に減衰する傾向を示し、経過日数に応じて細胞増殖の程度は小さくなった。また、7日間培養した細胞を顕微鏡観察すると、細胞はシート状に、厚み方向に対して均一な平面状態で増殖しており、リン酸緩衝生理食塩水を添加しても形態に変化なく浮遊しなかった。
［比較例２］
　低密度ポリエチレンフィルム（三井化学製、水接触角は１５秒後で９６．８°。さらに１０分後で５９．５°）を実施例の培養フィルムの取扱法と同様に切出して滅菌処理した。次に、実施例１と同様な方法によりＢＡＬＢ／３Ｔ３細胞を培養した。
　ＷＳＴ－８法による細胞増殖性の評価では、1日経過後の吸光度が０．２２±０．０２であり、３日経過後で０．７１±０．０９であり、７日経過後で１．１１±０．１８であった。経過日数に対して吸光度は徐々に減衰する傾向を示し、経過日数に応じて細胞増殖の程度は小さくなった。また、7日間培養した細胞を顕微鏡観察すると、細胞はシート状に、厚み方向に対して均一な平面状態で増殖しており、リン酸緩衝生理食塩水を添加しても形態に変化なく浮遊しなかった。
［比較例３］
　製造例１に記載のモノマーを５－メチル－ビシクロ［２．２．１］ヘプト－２－エン（２０.０ｇ）と８－メチル－テトラシクロ[４．４．０．１２,５．１７,１０]－３－ドデセン（３２.２ｇ）に、溶媒をシクロヘキサンに変更した以外は製造例１と同様な方法によって、ポリ（１－メチル－シクロペンチレンエチレン）とポリ（３－メチル－トリシクロ[４.３.０.１２,５]デカニレンエチレン）のシクロヘキサン溶液を得た。その溶液を孔径５μｍのフィルターで加圧ろ過し、溶液をメタノールに加え、白色のポリマーをろ別、乾燥し５１ｇのポリマー４を得た。水素添加率は１００％、重量平均分子量（Ｍｗ）は８２０００、分子量分布（Ｍｗ／Ｍｎ）は２.２６、ガラス転移温度は１０４℃であった。
　次に、溶剤をシクロヘキサンに変更した以外は、製造例２と同様な方法により、厚み５５μｍの培養フィルム１１を作製した。フィルムの水接触角は１５秒で９２．１°であった。さらに、１０分経過後で５５．４°であり、水接触角は変化した。さらに、実施例１と同様な方法によりＢＡＬＢ／３Ｔ３細胞を培養した。
　ＷＳＴ－８法による細胞増殖性の評価では、1日経過後の吸光度が０．２０±０．０４であり、３日経過後で０．５１±０．１０であり、７日経過後で０．８５±０．１３であった。経過日数に対して吸光度は徐々に減衰する傾向を示し、経過日数に応じて細胞増殖の程度は小さくなった。また、7日間培養した細胞を顕微鏡観察すると、細胞はシート状に、厚み方向に対して均一な平面状態で増殖しており、リン酸緩衝生理食塩水を添加しても形態に変化なく浮遊しなかった。
［比較例４］
　テフロン（登録商標）ＡＦ１６００（アルドリッチ製）の粉末を２００℃の加熱条件で熱プレスして厚み２００μｍの培養フィルム１２を作製し、実施例の培養フィルムの取扱法と同様に切出して滅菌処理した。基材作製時の水接触角は１５秒後で１１１．６°であった。さらに、１０分後で１１０．３°であった。次に、実施例１と同様な方法によりＢＡＬＢ／３Ｔ３細胞を培養した。
　ＷＳＴ－８法による細胞増殖性の評価では、1日経過後の吸光度が０．０６±０．０２であり、３日経過後で０．１４±０．１１であり、７日経過後で０．１８±０．０９であった。経過日数に対して吸光度は徐々に減衰する傾向を示し、経過日数に応じて細胞増殖の程度は小さくなった。また、7日間培養した細胞を顕微鏡観察すると、細胞は点在して増殖しており、リン酸緩衝生理食塩水を添加しても形態に変化なく浮遊しなかった。
［比較例５］
　滅菌済み２４穴ナノカルチャープレート（Ｓ社製、水接触角（１５秒経過時）は１２５°）の穴部底面のパターン面に解凍済みのＢＡＬＢ／３Ｔ３細胞液（１ｍＬ）を播種した。同操作を９回繰り返し、検体数９個のサンプルを準備した。その後、蓋をしてインキュベーターに移動し庫内温度３７℃、炭酸ガス濃度５％の滅菌空気下で培養を開始した。
　ＷＳＴ－８法による細胞増殖性の評価では、1日経過後の吸光度が０．０７±０．０３であり、３日経過後で０．０９±０．０２であり、７日経過後で０．１０±０．０９であった。経過日数に対して吸光度は徐々に減衰する傾向を示し、経過日数に応じて細胞増殖の程度は小さくなった。また、7日間培養した細胞を顕微鏡観察すると、細胞は厚み方向に対して群体を形成して増殖し、リン酸緩衝生理食塩水を添加しても形態に変化なく浮遊しなかった。
［比較例６］
　細胞懸濁液をＨｓ－６８細胞液（１０ｍＬ）に変更したこと以外は、比較例１と同様にインキュベーターの庫内温度３７℃、炭酸ガス濃度５％の滅菌空気下で培養を開始した。
　ＷＳＴ－８法による細胞増殖性の評価では、１日経過後の吸光度が０．３３±０．０６であり、３日経過後で１．４９±０．１１であり、７日経過後で３．１０±０．１３であった。経過日数に対して吸光度は徐々に減衰する傾向を示し、経過日数に応じて細胞増殖の程度は小さくなった。また、7日間培養した細胞を顕微鏡観察すると、シート状に細胞は増殖しており、トリプシン含有リン酸緩衝生理食塩水を添加しても形態に変化なく浮遊しなかった。
　さらに、７日間培養した細胞を蛍光発光試薬で染色して細胞核、および細胞骨格タンパクの形態を蛍光顕微鏡観察すると、青色蛍光発光（図３の白色部）した細胞核、および緑色蛍光発光（図３の灰色部）した細胞骨格タンパクは、二次元的に広がったシート形状の蛍光発光分布が観察された（図３参照）。実施例２３に記載の細胞培養容器で培養したＨｓ－６８細胞に見られる厚み方向に細胞が重なった群体形成は確認できなかった。
　この培養細胞のＮＡＤＰＨデハイドロゲナーゼで薬物代謝系酵素活性評価を行うとほぼ０％が、生態系と同様の薬物代謝系酵素活性があることが分かった。さらに、自家蛍光観察は、γ線滅菌済み２４穴ＴＣＰＳマルチウェルプレートの蛍光吸収で測定することができず、酵素活性評価のみで実証した。
　この出願は、２０１４年８月１３日に出願された日本出願特願２０１４－１６４９１２号及び２０１５年２月４日に出願された日本出願特願２０１５－０１９９９６号を基礎とする優先権を主張し、その開示の全てをここに取り込む。

Claims (14)

  1. 　基材を備え、かつ前記基材の一面に細胞を接触または保持させる医療器具であって、
    　前記基材の少なくとも細胞を保持する前記一面は、下記一般式（１）で表される繰返し構造単位を含有するフッ素含有環状オレフィンポリマーにより構成される医療器具。
    Figure JPOXMLDOC01-appb-C000001
     （式（１）中、Ｒ１～Ｒ４のうち、少なくとも１つは、フッ素、フッ素を含有する炭素数１～１０のアルキル、フッ素を含有する炭素数１～１０のアルコキシ、またはフッ素を含有する炭素数２～１０のアルコキシアルキルである。Ｒ１～Ｒ４がフッ素を含有しない基である場合、Ｒ１～Ｒ４は、水素、炭素数１～１０のアルキル、炭素数１～１０のアルコキシ、または炭素数２～１０のアルコキシアルキルから選ばれる。Ｒ１～Ｒ４は互いに同一であっても異なっていてもよい。Ｒ１～Ｒ４は互いに結合して環構造を形成していてもよい。）
  2. 　細胞を接触または保持する前記一面の水接触角が７０°以上１６０°以下である請求項１に記載の医療器具。
  3. 　細胞を接触または保持する前記一面の水接触角が７０°以上１２０°以下である請求項１または２に記載の医療器具。
  4. 　前記基材の少なくとも細胞と接触する前記一面が、凹凸構造を備える請求項１に記載の医療器具。
  5. 　細胞と接触する前記一面の水接触角が１２１°以上１６０°以下である請求項４に記載の医療器具。
  6. 　前記基材の少なくとも細胞を接触または保持する前記一面は、前記フッ素含有環状オレフィンポリマーと、光硬化性化合物と、光硬化開始剤と、を含むフッ素含有環状オレフィンポリマー組成物により構成される請求項１～５のいずれか一項に記載の医療器具。
  7. 　前記フッ素含有環状オレフィンポリマー組成物中における前記フッ素含有環状オレフィンポリマーと前記光硬化性化合物の質量比（フッ素含有環状オレフィンポリマー／光硬化性化合物）が、９９．９／０．１～５０／５０である請求項６に記載の医療器具。
  8. 　前記一面に接触または保持させた細胞を培養するために用いられる請求項１～７のいずれか一項に記載の医療器具。
  9. 　細胞培養において、細胞が群体を形成しながら増殖する請求項８に記載の医療器具。
  10. 　培養した細胞を緩衝液により浮遊して前記一面から離脱させる請求項８または９に記載の医療器具。
  11. 　請求項１～１０のいずれか一項に記載の医療器具の前記基材の前記一面上に、前記一面に接触または保持するよう細胞を播種する工程と、
    　前記細胞を培養して培養細胞を得る工程と、
    　前記一面上に緩衝液を添加して、前記一面から前記培養細胞を浮遊させる工程と、
    　を備える細胞培養方法。
  12. 　基材を備え、かつ前記基材の一面に細胞を接触または保持させる医療器具の、前記基材の少なくとも細胞を保持させる前記一面を構成するフッ素含有環状オレフィンポリマーであって、下記一般式（１）で表される繰返し構造単位を含有するフッ素含有環状オレフィンポリマー。
    Figure JPOXMLDOC01-appb-C000002
     （式（１）中、Ｒ１～Ｒ４のうち、少なくとも１つは、フッ素、フッ素を含有する炭素数１～１０のアルキル、フッ素を含有する炭素数１～１０のアルコキシ、またはフッ素を含有する炭素数２～１０のアルコキシアルキルである。Ｒ１～Ｒ４がフッ素を含有しない基である場合、Ｒ１～Ｒ４は、水素、炭素数１～１０のアルキル、炭素数１～１０のアルコキシ、または炭素数２～１０のアルコキシアルキルから選ばれる。Ｒ１～Ｒ４は互いに同一であっても異なっていてもよい。Ｒ１～Ｒ４は互いに結合して環構造を形成していてもよい。）
  13. 　基材を備え、かつ前記基材の一面に細胞を接触または保持させる医療器具の、前記基材の少なくとも細胞を保持させる前記一面を構成するフッ素含有環状オレフィンポリマー組成物であって、
    　下記一般式（１）で表される繰返し構造単位を含有するフッ素含有環状オレフィンポリマーと、
    　光硬化性化合物と、
    　光硬化開始剤と、
    　を含むフッ素含有環状オレフィンポリマー組成物。
    Figure JPOXMLDOC01-appb-C000003
     （式（１）中、Ｒ１～Ｒ４のうち、少なくとも１つは、フッ素、フッ素を含有する炭素数１～１０のアルキル、フッ素を含有する炭素数１～１０のアルコキシ、またはフッ素を含有する炭素数２～１０のアルコキシアルキルである。Ｒ１～Ｒ４がフッ素を含有しない基である場合、Ｒ１～Ｒ４は、水素、炭素数１～１０のアルキル、炭素数１～１０のアルコキシ、または炭素数２～１０のアルコキシアルキルから選ばれる。Ｒ１～Ｒ４は互いに同一であっても異なっていてもよい。Ｒ１～Ｒ４は互いに結合して環構造を形成していてもよい。）
  14. 　薬物代謝系酵素活性を少なくとも７日間維持した培養細胞。
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