[go: up one dir, main page]
More Web Proxy on the site http://driver.im/

UA125744C2 - Фармацевтичні композиції для комбінованої терапії - Google Patents

Фармацевтичні композиції для комбінованої терапії Download PDF

Info

Publication number
UA125744C2
UA125744C2 UAA201708864A UAA201708864A UA125744C2 UA 125744 C2 UA125744 C2 UA 125744C2 UA A201708864 A UAA201708864 A UA A201708864A UA A201708864 A UAA201708864 A UA A201708864A UA 125744 C2 UA125744 C2 UA 125744C2
Authority
UA
Ukraine
Prior art keywords
compound
agonist
liver
alpha
disease
Prior art date
Application number
UAA201708864A
Other languages
English (en)
Inventor
Марк Прузанскі
Марк ПРУЗАНСКИ
Лучано Адоріні
Лучано Адорини
Original Assignee
Інтерсепт Фармасьютікалз, Інк.
Интерсепт Фармасьютикалз, Инк.
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Family has litigation
First worldwide family litigation filed litigation Critical https://patents.darts-ip.com/?family=56564878&utm_source=google_patent&utm_medium=platform_link&utm_campaign=public_patent_search&patent=UA125744(C2) "Global patent litigation dataset” by Darts-ip is licensed under a Creative Commons Attribution 4.0 International License.
Application filed by Інтерсепт Фармасьютікалз, Інк., Интерсепт Фармасьютикалз, Инк. filed Critical Інтерсепт Фармасьютікалз, Інк.
Publication of UA125744C2 publication Critical patent/UA125744C2/uk

Links

Classifications

    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K31/00—Medicinal preparations containing organic active ingredients
    • A61K31/56—Compounds containing cyclopenta[a]hydrophenanthrene ring systems; Derivatives thereof, e.g. steroids
    • A61K31/575—Compounds containing cyclopenta[a]hydrophenanthrene ring systems; Derivatives thereof, e.g. steroids substituted in position 17 beta by a chain of three or more carbon atoms, e.g. cholane, cholestane, ergosterol, sitosterol
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K31/00—Medicinal preparations containing organic active ingredients
    • A61K31/185—Acids; Anhydrides, halides or salts thereof, e.g. sulfur acids, imidic, hydrazonic or hydroximic acids
    • A61K31/19—Carboxylic acids, e.g. valproic acid
    • A61K31/192—Carboxylic acids, e.g. valproic acid having aromatic groups, e.g. sulindac, 2-aryl-propionic acids, ethacrynic acid 
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K31/00—Medicinal preparations containing organic active ingredients
    • A61K31/21—Esters, e.g. nitroglycerine, selenocyanates
    • A61K31/215—Esters, e.g. nitroglycerine, selenocyanates of carboxylic acids
    • A61K31/216—Esters, e.g. nitroglycerine, selenocyanates of carboxylic acids of acids having aromatic rings, e.g. benactizyne, clofibrate
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K31/00—Medicinal preparations containing organic active ingredients
    • A61K31/33—Heterocyclic compounds
    • A61K31/335—Heterocyclic compounds having oxygen as the only ring hetero atom, e.g. fungichromin
    • A61K31/365—Lactones
    • A61K31/366—Lactones having six-membered rings, e.g. delta-lactones
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K31/00—Medicinal preparations containing organic active ingredients
    • A61K31/33—Heterocyclic compounds
    • A61K31/395—Heterocyclic compounds having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. guanethidine or rifamycins
    • A61K31/40—Heterocyclic compounds having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. guanethidine or rifamycins having five-membered rings with one nitrogen as the only ring hetero atom, e.g. sulpiride, succinimide, tolmetin, buflomedil
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K31/00—Medicinal preparations containing organic active ingredients
    • A61K31/33—Heterocyclic compounds
    • A61K31/395—Heterocyclic compounds having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. guanethidine or rifamycins
    • A61K31/435—Heterocyclic compounds having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. guanethidine or rifamycins having six-membered rings with one nitrogen as the only ring hetero atom
    • A61K31/44—Non condensed pyridines; Hydrogenated derivatives thereof
    • A61K31/445—Non condensed piperidines, e.g. piperocaine
    • A61K31/451—Non condensed piperidines, e.g. piperocaine having a carbocyclic group directly attached to the heterocyclic ring, e.g. glutethimide, meperidine, loperamide, phencyclidine, piminodine
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K31/00—Medicinal preparations containing organic active ingredients
    • A61K31/56—Compounds containing cyclopenta[a]hydrophenanthrene ring systems; Derivatives thereof, e.g. steroids
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K45/00—Medicinal preparations containing active ingredients not provided for in groups A61K31/00 - A61K41/00
    • A61K45/06—Mixtures of active ingredients without chemical characterisation, e.g. antiphlogistics and cardiaca
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P1/00—Drugs for disorders of the alimentary tract or the digestive system
    • A61P1/04—Drugs for disorders of the alimentary tract or the digestive system for ulcers, gastritis or reflux esophagitis, e.g. antacids, inhibitors of acid secretion, mucosal protectants
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P1/00—Drugs for disorders of the alimentary tract or the digestive system
    • A61P1/12—Antidiarrhoeals
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P1/00—Drugs for disorders of the alimentary tract or the digestive system
    • A61P1/16—Drugs for disorders of the alimentary tract or the digestive system for liver or gallbladder disorders, e.g. hepatoprotective agents, cholagogues, litholytics
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P13/00—Drugs for disorders of the urinary system
    • A61P13/12—Drugs for disorders of the urinary system of the kidneys
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P3/00—Drugs for disorders of the metabolism
    • A61P3/06—Antihyperlipidemics
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P31/00—Antiinfectives, i.e. antibiotics, antiseptics, chemotherapeutics
    • A61P31/12—Antivirals
    • A61P31/14—Antivirals for RNA viruses
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P43/00—Drugs for specific purposes, not provided for in groups A61P1/00-A61P41/00
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P9/00—Drugs for disorders of the cardiovascular system
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P9/00—Drugs for disorders of the cardiovascular system
    • A61P9/10—Drugs for disorders of the cardiovascular system for treating ischaemic or atherosclerotic diseases, e.g. antianginal drugs, coronary vasodilators, drugs for myocardial infarction, retinopathy, cerebrovascula insufficiency, renal arteriosclerosis
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P9/00—Drugs for disorders of the cardiovascular system
    • A61P9/12—Antihypertensives
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K2300/00—Mixtures or combinations of active ingredients, wherein at least one active ingredient is fully defined in groups A61K31/00 - A61K41/00

Landscapes

  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • Animal Behavior & Ethology (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • Public Health (AREA)
  • Veterinary Medicine (AREA)
  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Medicinal Chemistry (AREA)
  • Pharmacology & Pharmacy (AREA)
  • Epidemiology (AREA)
  • Organic Chemistry (AREA)
  • Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
  • Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
  • General Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
  • Engineering & Computer Science (AREA)
  • Cardiology (AREA)
  • Heart & Thoracic Surgery (AREA)
  • Emergency Medicine (AREA)
  • Urology & Nephrology (AREA)
  • Virology (AREA)
  • Obesity (AREA)
  • Oncology (AREA)
  • Diabetes (AREA)
  • Hematology (AREA)
  • Molecular Biology (AREA)
  • Communicable Diseases (AREA)
  • Gastroenterology & Hepatology (AREA)
  • Vascular Medicine (AREA)
  • Medicines That Contain Protein Lipid Enzymes And Other Medicines (AREA)
  • Pharmaceuticals Containing Other Organic And Inorganic Compounds (AREA)
  • Acyclic And Carbocyclic Compounds In Medicinal Compositions (AREA)

Abstract

Даний винахід належить до застосування комбінації для лікування або попередження захворювання або стану, опосередкованого FXR, такого як первинний біліарний цироз (РВС), первинний склерозивний холангіт (PSC), портальна гіпертензія, хологенна діарея, NAFLD (неалкогольна жирова хвороба печінки), NASH (стеатогепатит, не індукований алкоголем) та інші хронічні захворювання печінки.

Description

(54) ФАРМАЦЕВТИЧНІ КОМПОЗИЦІЇ ДЛЯ КОМБІНОВАНОЇ ТЕРАПІЇ (57) Реферат:
Даний винахід належить до застосування комбінації для лікування або попередження захворювання або стану, опосередкованого ЕХВ, такого як первинний біліарний цироз (РВС), первинний склерозивний холангіт (РОС), портальна гіпертензія, хологенна діарея, МАРІО (неалкогольна жирова хвороба печінки), МАЗН (стеатогепатит, не індукований алкоголем) та інші хронічні захворювання печінки.
ПЕРЕДУМОВИ ВИНАХОДУ
Ряд станів супроводжується підвищеними концентраціями ліпідних сполук, які циркулюють у крові, таких як холестерин і тригліцериди. Такі стани включають цукровий діабет ІЇ типу, первинний біліарний цироз (РВС), первинний склерозивний холангіт (РБС), різноманітні хронічні гепатитні стани (гепатит В іс) МАбБН (неалкогольний стеатогепатит) і артеріальні захворювання, у тому числі захворювання коронарних артерій, цереброваскулярне захворювання артерій, захворювання периферичних судин, форми аневризми аорти та стани атеросклеротичного ураження сонної артерії. Раніше для лікування та попередження судинних явищ (таких як серцева недостатність, емболія, серцеві напади та інсульти), якими супроводжуються гіперліпідемічні стани, застосовувались різноманітні методики зниження рівня ліпідів. Такі види лікування включали зміни режиму харчування та контроль високих рівнів тригліцеридів і холестерину, які циркулюють у крові. Лікування останнього здійснювали, як правило, фармакологічно, а пізніше з використанням різноманітних "статинів". Терапевтичні засоби, застосовні для лікування станів, пов'язаних із підвищеними рівнями ліпідів, включають різноманітні похідні фіброєвої кислоти. Деякі більш ранні похідні фіброєвої кислоти, у тому числі клофібрат, нетривалий час використовувались для лікування станів, асоційованих із підвищеними рівнями ліпідів, але останнім часом до числа засобів протиліпідної терапії увійшли нові фібрати, у тому числі фенофібрат, гемфіброзил, ципрофібрат, а зовсім нещодавно - фібрати, що містять піперидин, 4-гідроксипіперидин, піперидин-3-ен і піперазин. Ці більш нові молекули мають перспективні властивості щодо зниження як рівня холестерину, так і рівня тригліцеридів. Однак у деяких випадках похідне фіброєвої кислоти окремо є непридатним для контролю важкого ступеня гіперліпідемії, присутньої у багатьох пацієнтів. Профіль побічних ефектів похідного фіброєвої кислоти також може бути поліпшений у результаті зниження дози, як, наприклад, в умовах комбінованої терапії.
Відповідно, існує потреба в поліпшеній терапії для лікування станів, що характеризуються підвищеними концентраціями ліпідних сполук, які циркулюють у крові, таких як холестерин і тригліцериди.
КОРОТКИЙ ОПИС ГРАФІЧНИХ МАТЕРІАЛІВ
Фігура 1А являє собою ілюстративну мікрофотографію зрізу печінки, забарвленого сіріусом
Зо червоним, мишей із імітацією ВО.
Фігура 18 являє собою ілюстративну мікрофотографію зрізу печінки, забарвленого сіріусом червоним, мишей із ВОЇ,, оброблених середовищем.
Фігура 1С являє собою ілюстративну мікрофотографію зрізу печінки, забарвленого сіріусом червоним, мишей із ВОЇ,, оброблених ОСА.
Фігура 10 являє собою ілюстративну мікрофотографію зрізу печінки, забарвленого сіріусом червоним, мишей із ВОЇ,, оброблених аторвастатином.
Фігура 1Е являє собою ілюстративну мікрофотографію зрізу печінки, забарвленого сіріусом червоним, мишей із ВОЇ,, оброблених ОСА та аторвастатином.
Фігура 2 являє собою гістограму, на якій показана зона, позитивна за сіріусом червоним (95), у мишей із ВОЇ,, оброблених ОСА та аторвастатином окремо та в комбінації.
Фігура ЗА являє собою гістограму, на якій показано кількість осередків із запальними клітинами після обробки ОСА та низькодозовим фенофібратом окремо та в комбінації у мишей
АРОЕ"ЗІ відеп.СЕТР.
Фігура ЗВ являє собою гістограму, на якій показано кількість осередків із запальними клітинами після обробки ОСА та високодозовим фенофібратом окремо та в комбінації у мишей
АРОЕ"ЗІ відеп.СЕТР.
Фігура 4 являє собою гістограму, на якій показані ефекти ОСА та аторвастатину окремо та в комбінації щодо стадії фіброзу в мишей із генотипом ор/об за лептином.
Фігура 5А являє собою гістограму, на якій показані рівні тригліцеридів у плазмі крові в мишей із генотипом ор/0Б5 за лептином, оброблених ОСА та аторвастатином окремо та в комбінації.
Фігура 58 являє собою гістограму, на якій показано зміну рівнів тригліцеридів у плазмі крові порівняно з вихідним рівнем у мишей із генотипом ор/05 за лептином, оброблених ОСА та аторвастатином окремо та в комбінації.
Фігура бА являє собою гістограму, на якій показано аналіз представленості канонічних метаболічних шляхів у мишей на комбінації НЕС - ОСА порівняно з мишами
АРОЕ"ЗІ відеп.СЕТР, яких утримували на НЕС.
Фігура 6В являє собою гістограму, на якій показано аналіз представленості канонічних метаболічних шляхів у мишей на комбінації НЕС ї- ОСА ж низькодозовий фенофібрат порівняно з мишами АРОЕ"ЗІ відеп.СЕТР, яких утримували на НЕС. бо Фігура 7А являє собою діаграму Венна, на якій показано кількість нових диференційно експресованих генів, регульованих комбінацією ОСА ж низькодозовий фенофібрат, порівняно з монотерапією у мишей АРОЕ"ЗІ єідеп.СЕТР.
Фігура 7В являє собою гістограму, на якій показана представленість у метаболічних шляхах генів, регульованих комбінацією ОСА - низькодозовий фенофібрат, порівняно з монотерапією у мишей АРОЕ"ЗІ відеп.СЕТР.
Фігура 8 являє собою графік, на якому показано ефект ОСА та комбінації статину(статинів) щодо рівня холестерину І 0. у людей.
КОРОТКИЙ ОПИС ВИНАХОДУ
Дана заявка відноситься до фармацевтичної композиції, що містить (ї) першу сполуку, (ії) щонайменше один агоніст РРАВ-альфа, агоніст РРАВ-дельта та/або подвійний агоніст РРАВ- альфа та дельта і (ії) необов'язково один або декілька фармацевтично прийнятних носіїв, де перша сполука є агоністом ЕХВ.
Даний винахід також відноситься до фармацевтичної композиції, що містить (ї) першу сполуку, (її) щонайменше один фібрат і необов'язково (ії) один або декілька фармацевтично прийнятних носіїв, де перша сполука є агоністом ЕХВА.
Даний винахід також відноситься до фармацевтичної композиції, що містить (ї) першу сполуку, (її) щонайменше один гіполіпідемічний засіб і необов'язково (ії) один або декілька фармацевтично прийнятних носіїв, де перша сполука є агоністом ЕХА.
Даний винахід також відноситься до фармацевтичної композиції, що містить (ї) першу сполуку, (її) щонайменше один статин і необов'язково (ії) один або декілька фармацевтично прийнятних носіїв, де перша сполука є агоністом ЕХВ.
Даний винахід також відноситься до фармацевтичної композиції, що містить (ї) першу сполуку, (її) щонайменше один агоніст РРАВ-альфа, агоніст РРАВ-дельта та/або подвійний агоніст РРАВ-альфа та дельта, (ії) щонайменше один гіполіпідемічний засіб і необов'язково (ім) один або декілька фармацевтично прийнятних носіїв, де перша сполука є агоністом ЕХВ.
Даний винахід також відноситься до фармацевтичної композиції, що містить (ї) першу сполуку, (її) щонайменше один фібрат, (ії) щонайменше один гіполіпідемічний засіб і необов'язково (ім) один або декілька фармацевтично прийнятних носіїв, де перша сполука є агоністом ЕХВ.
Зо Даний винахід також відноситься до фармацевтичної композиції, що містить (ї) першу сполуку, (її) щонайменше один агоніст РРАВ-альфа, агоніст РРАВ-дельта та/або подвійний агоніст РРАВ-альфа та дельта, (ії) щонайменше один статин і необов'язково (їм) один або декілька фармацевтично прийнятних носіїв, де перша сполука є агоністом ЕХВ.
Даний винахід також відноситься до фармацевтичної композиції, що містить (ї) першу сполуку, (її) щонайменше один фібрат, (ії) щонайменше один статин і необов'язково (ім) один або декілька фармацевтично прийнятних носіїв, де перша сполука є агоністом ЕХА.
Даний винахід також відноситься до терапевтичного застосування фармацевтичних композицій згідно з даним винаходом.
В одному варіанті здійснення перша сполука являє собою сполуку формули А: т . 1 ик ДВ
Н - 7 до (А), або її фармацевтично прийнятну сіль або кон'югат з амінокислотою, де Ні, В», Ва, В; і Х визначені в даному документі.
Даний винахід також відноситься до способів лікування або попередження захворювання або стану, опосередкованого ЕХА, або захворювання або стану, що характеризується підвищеними концентраціями ліпідних сполук, які циркулюють у крові, зниження рівня ферменту печінки або інгібування або забезпечення регресії фіброзу, які включають уведення терапевтично ефективної кількості фармацевтичної композиції згідно з даним винаходом суб'єкту, який потребує цього.
Даний винахід також відноситься до застосування фармацевтичної композиції згідно з даним винаходом для лікування або попередження захворювання або стану, опосередкованого
ЕХВ, або захворювання або стану, що характеризується підвищеними концентраціями ліпідних сполук, які циркулюють у крові, зниження рівня ферменту печінки або інгібування або забезпечення регресії фіброзу.
Даний винахід також відноситься до застосування фармацевтичної композиції згідно з даним винаходом у виробництві лікарського препарату для лікування або попередження захворювання або стану, опосередкованого ЕХА, або захворювання або стану, що характеризується підвищеними концентраціями ліпідних сполук, які циркулюють у крові, зниження рівня ферменту печінки або інгібування або забезпечення регресії фіброзу.
Композиції та способи згідно з даним винаходом спрямовані на нереалізовані потреби в лікуванні або попередженні захворювання або порушення, що характеризується підвищеними концентраціями ліпідних сполук, які циркулюють у крові, таких як холестерин і тригліцериди.
ДОКЛАДНИЙ ОПИС ВИНАХОДУ
Дана заявка спрямована на фармацевтичну композицію, що містить першу сполуку, щонайменше один агоніст РРАВ-альфа, агоніст РРАВ-дельта та/або подвійний агоніст РРАВ- альфа та дельта або РРАН-альфа та гамма та необов'язково один або декілька фармацевтично прийнятних носіїв, де перша сполука є агоністом ЕХА.
В одному прикладі фармацевтична композиція містить щонайменше один агоніст РРАВ- альфа. В одному прикладі фармацевтична композиція містить щонайменше один агоніст РРАВ- дельта. В одному прикладі фармацевтична композиція містить щонайменше один подвійний агоніст РРАН-альфа та дельта. В одному прикладі фармацевтична композиція містить щонайменше один подвійний агоніст РРАВ-альфа та гамма. В одному прикладі фармацевтична композиція містить щонайменше один агоніст РРАН-альфа та щонайменше один агоніст РРАВ- дельта. В одному прикладі фармацевтична композиція містить щонайменше один агоніст РРАВ- альфа та щонайменше один подвійний агоніст РРАН-альфа та дельта. В одному прикладі фармацевтична композиція містить щонайменше один агоніст РРАВ-дельта та щонайменше один подвійний агоніст РРАВ- альфа та дельта або РРАВ-альфа та гамма. В одному прикладі фармацевтична композиція містить щонайменше один агоніст РРАВ-альфа, щонайменше один агоніст РРАВ-дельта та щонайменше один подвійний агоніст РРАВ-альфа та дельта. В одному прикладі агоніст РРАН-альфа являє собою фібрат, такий як фібрати, описані в даному документі В одному прикладі агоніст РРАВ-дельта являє собою (4-((4-метил-2-|4- (трифторметил)феніл|-1,3-тіазол-5-ілуметил)сульфаніл|-2-метилфеноксиюцтову кислоту (також
Зо відому як УУ501516, (1Му/1516 та "ендуробол"), (2-метил-4-(5-метил-2-(4-трифторметилфеніл)- 2Н- 01,2, )триазол-4-ілметилсульфаніл|-фенокси) оцтову кислоту або (|4-((2-ІЗ-фтор-4- (трифторметил)феніл|-4-метил-5-тіазоліл|метилігіо|-2-метилфенокси|- оцтову кислоту або їхню фармацевтично прийнятну сіль. В одному прикладі подвійний агоніст РРАВ-альфа та дельта являє собою 2-(2,6-диметил-4-|3-(4-(метилтіо)феніл|-3-оксо-1(Е)-пропеніл|феноксил|-2- метилпропанову кислоту (також відому як СЕТ505). В одному прикладі подвійний агоніст РРАВ- альфа та гамма являє собою алеглітазар ((25)-2- метокси-3-(4-(2-(5-метил-2-феніл-4- оксазоліл)етокси)| -7-бензотіофеніл)| пропанову кислоту), мураглітазар (М-Ка4- метоксифенокси)карбоніл|-М-(4-(2-(5-метил-2-феніл-1,3-оксазол-4-ілуетокси|бензил)угліцин), тезаглітазар (25)-2-етокси-3-І4-(2-(4-метилсульфонілоксифеніл)етокси|феніл|пропанову кислоту) або сароглітазар ((25)-2-етокси-3-(4-(2-ї-2-метил-5-(4-(метилсульфаніл)феніл|-1 Н-пірол- 1-іліетокси)феніл|Іпропанову кислоту) або їхню фармацевтично прийнятну сіль. В одному прикладі подвійний агоніст РРАНК-альфа та дельта являє собою 2-(2,6-диметил-4-|3-|4- (метилтіо)феніл|-3-оксо-1(Е)-пропеніл|феноксил|-2-метилпропанову кислоту або її фармацевтично прийнятну сіль.
Дана заявка також спрямована на фармацевтичну композицію, що містить першу сполуку, щонайменше один фібрат і необов'язково один або декілька фармацевтично прийнятних носіїв, де перша сполука є агоністом ЕХВА. Агоніст ЕХА може являти собою будь-який агоніст ЕХВ.
Фібрат може являти собою будь-який фібрат. В одному прикладі фібрат вибраний із будь-якого з фібратів, описаних у даному документі.
Дана заявка також спрямована на фармацевтичну композицію, що містить першу сполуку, щонайменше один гіполіпідемічний засіб і необов'язково один або декілька фармацевтично прийнятних носіїв, де перша сполука є агоністом ЕХА. Агоніст ЕХА може являти собою будь- який агоніст ЕХЕВ. Гіполіпідемічний засіб може являти собою будь- який гіполіпідемічний засіб. В одному прикладі гіполіпідемічний засіб вибраний із будь- якого з гіполіпідемічних засобів, описаних у даному документі.
Дана заявка також спрямована на фармацевтичну композицію, що містить першу сполуку, щонайменше один статин і необов'язково один або декілька фармацевтично прийнятних носіїв, де перша сполука є агоністом ЕХВА. Агоніст ЕХА може являти собою будь-який агоніст ЕХВ.
Статин може являти собою будь-який статин. В одному прикладі статин вибраний із будь-якого 60 зі статинів, описаних у даному документі.
Дана заявка також спрямована на фармацевтичну композицію, що містить першу сполуку, щонайменше один агоніст РРАВ-альфа, агоніст РРАВ-дельта та/або подвійний агоніст РРАВ- альфа та дельта або РРАВН-альфа та гамма, щонайменше один гіполіпідемічний засіб і необов'язково один або декілька фармацевтично прийнятних носіїв, де перша сполука є агоністом ЕХА. Дана заявка також спрямована на фармацевтичну композицію, що містить першу сполуку, щонайменше один агоніст РРАВ- альфа, агоніст РРАВ-дельта та/або подвійний агоніст РРАН-альфа та дельта або РРАВ- альфа та гамма, щонайменше один статин і необов'язково один або декілька фармацевтично прийнятних носіїв, де перша сполука є агоністом ЕХА. В одному прикладі агоніст РРАВ-альфа являє собою фібрат, такий як фібрати, описані в даному документі. В одному прикладі агоніст РРАВ-дельта являє собою /4-(((4-метил- 2-(4-(трифторметил)феніл|-1,3-тіазол-5-ілуметил)сульфаніл|-2-метилфенокси оцтову кислоту, (2-метил-4-(5-метил-2-(4-трифторметилфеніл)-2Н-І1,2,3)|)гриазол-4-ілметилсульфаніл|-фенокси)- оцтову кислоту або ІЦІ4-((2-І(З-фтор-4-«трифторметил)феніл|4-метил-5- тіазоліл|метил/гіо|-2- метилфенокси|- оцтову кислоту або їхню фармацевтично прийнятну сіль. В одному прикладі подвійний агоніст РРАВ-альфа та дельта являє собою 2-(2,6-диметил-4-(3-(4-(метилтіо)феніл|-
З-оксо-1(Е)-пропеніл|феноксил|-г-метилпропанову кислоту. В одному прикладі подвійний агоніст РРАН-альфа та гамма являє собою алеглітазар, мураглітазар, тезаглітазар або сароглітазар або їхню фармацевтично прийнятну сіль. В одному прикладі подвійний агоніст
РРАН-альфа та дельта являє собою 2-(2,6-диметил-4-І3-(4-(метилтіо)феніл|-3-оксо-1(Е)- пропеніл|феноксил|-2-метилпропанову кислоту або її фармацевтично прийнятну сіль. В одному прикладі гіполіпідемічний засіб вибраний із будь-якого з гіполіпідемічних засобів, описаних у даному документі. В одному прикладі статин вибраний із будь-якого зі статинів, описаних у даному документі.
В одному прикладі перша сполука фармацевтичної композиції являє собою сполуку формули А:
Ко 7 Х це ОКА но НІ т
Кк (А), або її фармацевтично прийнятну сіль або кон'югат з амінокислотою, де:
В: являє собою водень або незаміщений Сі1-Св-алкіл;
В» являє собою водень або а-гідроксил;
Зо Х являє собою С(О)ОН, С(О)МН(СНо)яЗОзН, С(О)МН(СН2)аСО»Н або О5ОзН;
Ва являє собою гідроксил або водень;
В; являє собою гідроксил або водень; т дорівнює 1, 2 або 3; та п дорівнює 1, 2 або 3.
У додатковому прикладі перша сполука фармацевтичної композиції вибрана з формул | і ІА: же о5ОзН Но овОзН . щи . й но дов но н Он
КА (Зі КА (ІА), або їхньої фармацевтично прийнятної солі або кон'югату з амінокислотою, де
Віл являє собою водень або незаміщений С:-Св-алкіл;
В» являє собою водень або а-гідроксил;
Ва являє собою гідроксил або водень; і
В; являє собою гідроксил або водень.
В одному аспекті перша сполука являє собою фармацевтично прийнятну сіль. В одному варіанті здійснення перша сполука являє собою натрієву сіль формули І або ІА. В іншому варіанті здійснення перша сполука являє собою амонійну сіль сполуки формули І або ІА. В іншому варіанті здійснення перша сполука являє собою триетиламонійну сіль сполуки формули
Ї або ІА.
У ще одному прикладі перша сполука фармацевтичної композиції вибрана з формул ЇЇ ії ПА: ., о . о
Ва 007 Во 07
Ка Ка 7 я с ЩО но св, но ї ОН
КА . КА (11 (ПА) або їхньої фармацевтично прийнятної солі або кон'югату з амінокислотою, де:
Віл являє собою водень або незаміщений С:-Сг2-алкіл;
Вг являє собою водень або а-гідроксил;
Аз являє собою гідроксил, МН(СНе)т5ОзН або МН(ІСНо) СО» Н;
Ва являє собою гідроксил або водень;
В; являє собою гідроксил або водень; т дорівнює 1, 2 або 3; та п дорівнює 1, 2 або 3.
В одному прикладі композиція містить першу сполуку формули А, І, ІА, ІІ або ПА, де Р» являє собою водень.
У додатковому прикладі композиція містить першу сполуку формули А, де В; являє собою незаміщений С1-Св-алкіл. В одному аспекті композиція містить першу сполуку формули А, де Ві являє собою незаміщений С:1-Сз-алкіл. В одному аспекті композиція містить першу сполуку формули А, де НІ1 вибраний із метилу, етилу та пропілу. В одному аспекті композиція містить першу сполуку формули А, де Ві являє собою етил.
У додатковому прикладі композиція містить першу сполуку формули І, ІА, ЇЇ або ПА, де ВА являє собою незаміщений Сі-Св-алкіл. В одному аспекті композиція містить першу сполуку формули І, ІА, П або ПА, де Нд являє собою незаміщений Сі-Сз-алкіл. В одному аспекті композиція містить першу сполуку формули І, ІА, Ії або ІА, де Вуд вибраний із метилу, етилу та пропілу. В одному аспекті композиція містить першу сполуку формули І, ІА, ЇЇ або ПА, де Від являє собою етил.
У додатковому прикладі композиція містить першу сполуку формули А, де Х вибраний із
С(ФООН, С(О)МН(СНо)нЗОзН ії С(О)МН(СНг)пСО»Н. В одному аспекті композиція містить першу сполуку формули А, де Х вибраний із С(О)ОН, С(О)МН(СНаЗОзЗнН, С(ОМН(СНг)СОН,
С(О)МН(СН2г)аЗОзЗН, С(О)МН(СНг)»СО»Н. В одному аспекті композиція містить першу сполуку
Зо формули А, де Х являє собою С(О)ОН. В одному аспекті композиція містить першу сполуку формули А, де Х являє собою О50Оз3Н. В одному аспекті композиція містить першу сполуку формули А, де перша сполука являє собою фармацевтично прийнятну сіль. Фармацевтично прийнятна сіль може являти собою будь-яку сіль. В одному аспекті композиція містить першу сполуку формули А, де Х являє собою О5О3 Ма". В одному аспекті композиція містить першу сполуку формули А, де Х являє собою О5О3"МНЕзз'. В одному аспекті кон'югат з амінокислотою являє собою кон'югат із гліцином. В одному аспекті кон'югат з амінокислотою являє собою кон'югат із таурином.
У ще одному прикладі композиція містить першу сполуку формули ЇЇ або ІА, де Вз вибраний із ОН, МН(СНг)ЗОзН, МН(СНгСО»нН, МН(СНг»БОзН ої МН(СНг»СО»Н. В одному аспекті композиція містить першу сполуку формули ІІ або ПА, де Аз являє собою ОН.
У додатковому прикладі композиція містить першу сполуку формули А, І або ІЇ, де Ва являє собою гідроксил, і В; являє собою водень.
У додатковому прикладі композиція містить першу сполуку формули А, де Ні вибраний із метилу, етилу та пропілу, Ва являє собою ОН, НВ» являє собою Н, і В» являє собою Н.
У додатковому прикладі композиція містить першу сполуку формули І або ІІ, де Від вибраний із метилу, етилу та пропілу, НА являє собою ОН, В? являє собою Н, і В» являє собою
Н.
У додатковому прикладі композиція містить першу сполуку формули ІА або ІА, де Від вибраний із метилу, етилу та пропілу, і В» являє собою Н
У додатковому прикладі композиція містить першу сполуку, вибрану з коза коза ща - ЩО ще що но но он но ЩІ ОН - (а - с) або її фармацевтично прийнятну сіль або кон'югат з амінокислотою.
У ще одному додатковому прикладі композиція містить першу сполуку, яка являє собою фармацевтично прийнятну сіль, вибрану з не Н : Ко: но" йх "он п- (зі - (9.
Сполуки формул І, ІА, ІІ ї НА являють собою підкласи сполук формули А. Ознаки, описані в даному документі для сполук формули А, однаково застосовні до сполук формул І, ІА, Її ї ПА. У даній заявці також описані фармацевтичні композиції, упаковки або набори та шляхи терапевтичного застосування комбінації.
Одним із завдань, що виконуються за допомогою даного винаходу, є ідентифікація засобів комбінованої терапії для лікування або попередження станів, пов'язаних із підвищеними концентраціями ліпідних сполук, які циркулюють у крові, таких як холестерин і тригліцериди, наприклад, холестатичного стану печінки, такого як РВС, а також для зниження рівня ліпідних сполук, які циркулюють у крові, (наприклад, холестерину, ГІ ОЇ. і тригліцеридів) та для зниження рівня білірубіну та/"або ферментів печінки, таких як лужна фосфатаза (АГ Р, АР або АЇїЇК Рпоз), аланінамінотрансфераза (АІ Т), аспартатамінотрансфераза (АТ), гамма- глутамілтранспептидаза (СС), лактатдегідрогеназа (ІОН) та 5'--нуклеотидаза. Хоча лікарські засоби від станів, пов'язаних із підвищеними рівнями ліпідів та/або рівнями ферментів печінки, є доступними, ці лікарські засоби часто не є придатними для багатьох пацієнтів із багатьох причин. Наприклад, певні лікарські засоби є неефективними для пацієнтів, у яких розвинулась стійкість до лікарського засобу, наприклад, до урсодезоксихолевої кислоти. Як інший приклад, велика кількість лікарських засобів на основі статинів спричиняють небажані ефекти, такі як проблеми з м'язами, втрата когнітивних здібностей, нейропатія, дисфункція підшлункової залози та печінки й порушення статевої функції. Деякі лікарські засоби можуть бути непридатними для лікування у випадку введення окремо. Наприклад, у деяких випадках один гіполіпідемічний засіб окремо є непридатним для контролю важкого ступеня гіперліпідемії, наявної у багатьох пацієнтів. Для деяких лікарських засобів може потребуватися введення високих доз або більш часте введення внаслідок екстенсивного метаболізму до неактивних або менш активних метаболітів. За допомогою засобів комбінованої терапії, описаних у даному документі, можна виконати вищезгадані завдання, і при цьому вони можуть мати одну або декілька переваг, які полягають, наприклад, у синергізмі, зниженні кількості денних доз без утрати ефективності лікарського засобу, зниженні рівня ліпідів (як холестерину, так і тригліцеридів) у пацієнтів із підвищеними рівнями ліпідів, стійкими до терапії під час РВС, поліпшенні активності, селективності, проникнення в тканини, періоду напіввиведення та/або метаболічної стабільності.
У композиціях, упаковках або наборах, способах і шляхах застосування даного винаходу перша сполука може являти собою вільну кислоту, або вона може являти собою фармацевтично прийнятну сіль або кон'югат з амінокислотою (наприклад, кон'югат із гліцином або таурином). В одному аспекті перша сполука являє собою будь-який агоніст ЕХА. В одному аспекті перша сполука являє собою сполуку формули А. В одному аспекті перша сполука являє собою сполуку формули І або ІА. В одному аспекті перша сполука являє собою сполуку формули ІА. В одному аспекті перша сполука являє собою сполуку формули ІІ або ПА. В одному аспекті перша сполука являє собою сполуку формули ПА. В одному аспекті перша сполука являє собою обетихолеву кислоту (сполуку 1). В одному аспекті перша сполука являє собою сполуку 2. В одному аспекті перша сполука являє собою сполуку 3, яка являє собою фармацевтично прийнятну сіль. В одному аспекті перша сполука являє собою сполуку 4, яка являє собою фармацевтично прийнятну сіль.
У композиціях, упаковках або наборах, способах і шляхах застосування даного винаходу фібрат може являти собою будь-який фібрат. В одному аспекті фібрат вибраний із групи, що складається з фенофібрату, безафібрату, беклобрату, бініфібрату, ципрофібрату, клінофібрату, клофібрату, клофібринової кислоти, етофібрату, гемфіброзилу, нікофібрату, пірифібрату, роніфібрату, симфібрату, теофібрату, токофібрату, плафібриду та їхньої фармацевтично прийнятної солі й оестеру та похідних 2-фенокси-2-метилпропанової кислоти, в яких феноксифрагмент заміщений необов'язково заміщеним залишком опіперидину, ш4- гідроксипіперидину, піперид-З-ену або піперазину, як розкрито в публікації заявки на європейський патент Мо ЕРО6О7536. В одному аспекті фібрат вибраний із групи, що складається з безафібрату, ципрофібрату, клофібрату, фенофібрату, гемфіброзилу, бініфібрату, клінофібрату, клофібринової кислоти, нікофібрату, пірифібрату, плафібриду, роніфібрату, теофібрату, токофібрату та їхньої фармацевтично прийнятної солі й естеру та похідних 2- фенокси-2-метилпропанової кислоти, в яких феноксифрагмент заміщений необов'язково заміщеним залишком піперидину, 4-гідроксипіперидину, піперид-З-ену або піперазину, як розкрито в публікації заявки на європейський патент Мо ЕРО6О7536. Прикладом останньої групи речовин є /2-І3- (|1-(4-фторбензоїл)піперидин-4-іл|ренокси-2-метилпропанова кислота.
Наприклад, фібрат являє собою безафібрат, фенофібрат, гемфіброзил, ципрофібрат, клофібрат, клофібринову кислоту або їхню фармацевтично прийнятну сіль або естер.
Наприклад, фібрат являє собою фенофібрат або його фармацевтично прийнятну сіль, вибрану з холінової, етаноламінової, діетаноламінової, піперазинової, кальцієвої та трометамінової солі.
Наприклад, фібрат являє собою клофібрат або його фармацевтично прийнятну сіль або естер, як, наприклад, етофібрат або клофібрат алюмінію. Наприклад, фібрат являє собою безафібрат.
Наприклад, фібрат являє собою похідне 2-фенокси-2-метилпропанової кислоти, таке як 2-І3-(1- (4-фторбензоїл)-піперидин-4-ілреноксил-2-метилпропанова кислота.
В одному варіанті здійснення перша сполука являє собою сполуку формули А у формі вільної кислоти, та щонайменше один фібрат вибраний із безафібрату, фенофібрату, гемфіброзилу, ципрофібрату, клофібрату та їхньої фармацевтично прийнятної солі або естеру.
Зо В одному варіанті здійснення перша сполука являє собою фармацевтично прийнятну сіль сполуки формули А, та щонайменше один фібрат вибраний із безафібрату, фенофібрату, гемфіброзилу, ципрофібрату, клофібрату та їхньої фармацевтично прийнятної солі або естеру.
В одному варіанті здійснення перша сполука являє собою кон'югат сполуки формули А з гліцином, та щонайменше один фібрат вибраний із безафібрату, фенофібрату, гемфіброзилу, ципрофібрату, клофібрату та їхньої фармацевтично прийнятної солі або естеру.
В одному варіанті здійснення перша сполука являє собою кон'югат сполуки формули А з таурином, та щонайменше один фібрат вибраний із безафібрату, фенофібрату, гемфіброзилу, ципрофібрату, клофібрату та їхніх фармацевтично прийнятних солей або естерів.
В одному варіанті здійснення перша сполука являє собою сполуку формули А або її фармацевтично прийнятну сіль або кон'югат з амінокислотою, та щонайменше один фібрат являє собою 2-І3-(11-(4-фторбензоїл)-піперидин-4-ілІІфреноксил-2-метилпропанову кислоту.
В одному варіанті здійснення перша сполука являє собою сполуку формули А або її фармацевтично прийнятну сіль або кон'югат з амінокислотою, та щонайменше один агоніст
РРАВ-дельта являє собою 14-І(4-метил-2-І4-«трифторметил)феніл|-1,3-тіазол-5- ілуметил)сульфаніл|-2-метилфенокси роцтову кислоту, 12-метил-4-І5-метил-2-(4- трифторметилфеніл)-2Н-П1,2,З)|гриазол-4-ілметилсульфаніл|-фенокси)-оцтову кислоту або (|4-
ІЦ2-І3-фтор-4-(«трифторметил)феніл|-4-метил-5-тіазоліл|метилігіо|-2-метилфенокси|-оцтову кислоту або їхню фармацевтично прийнятну сіль.
В одному варіанті здійснення перша сполука являє собою сполуку формули А або її фармацевтично прийнятну сіль або кон'югат з амінокислотою, та щонайменше один подвійний агоніст РРАВ-альфа та дельта являє собою 2-(2,6-диметил-4-(3-(4-(метилтіо)феніл|-3-оксо-1(Е)- пропенілІфеноксил|-2-метилпропанову кислоту. В одному варіанті здійснення перша сполука являє собою сполуку формули А або її фармацевтично прийнятну сіль або кон'югат з амінокислотою, та щонайменше один подвійний агоніст РРАВ-альфа та гамма являє собою алеглітазар, мураглітазар, тезаглітазар або сароглітазар або їхню фармацевтично прийнятну сіль. В одному прикладі подвійний агоніст РРАВ- альфа та дельта являє собою 2-(2,6-диметил- 4-І3-(4-(метилтіо)феніл|-3-оксо-1(Е)- пропеніл|феноксил|-2-метилпропанову кислоту або її фармацевтично прийнятну сіль.
У композиціях, упаковках або наборах, способах і шляхах застосування даного винаходу бо статин може являти собою будь-який статин. В одному аспекті статин вибраний із групи, що складається із симвастатину, флувастатину, правастатину, ривастатину, мевастатину, аторвастатину, церивастатину, ловастатину, пітавастатину, флуїндостатину, велостатину, далвастатину, розувастатину, дигідрокомпактину та компактину.
В одному варіанті здійснення перша сполука являє собою сполуку формули А у формі вільної кислоти, та щонайменше один статин вибраний із симвастатину, флувастатину, правастатину, ривастатину, мевастатину, аторвастатину, церивастатину, ловастатину, пітавастатину, флуїндостатину, велостатину, далвастатину, розувастатину, дигідрокомпактину та компактину.
В одному варіанті здійснення перша сполука являє собою фармацевтично прийнятну сіль сполуки формули А, та щонайменше один статин вибраний із симвастатину, флувастатину, правастатину, ривастатину, мевастатину, аторвастатину, церивастатину, ловастатину, пітавастатину, флуїндостатину, велостатину, далвастатину, розувастатину, дигідрокомпактину та компактину.
В одному варіанті здійснення перша сполука являє собою кон'югат сполуки формули А з гліцином, та щонайменше один статин вибраний із симвастатину, флувастатину, правастатину, ривастатину, мевастатину, аторвастатину, церивастатину, ловастатину, пітавастатину, флуїндостатину, велостатину, далвастатину, розувастатину, дигідрокомпактину та компактину.
В одному варіанті здійснення перша сполука являє собою кон'югат сполуки формули А з таурином, та щонайменше один статин вибраний із симвастатину, флувастатину, правастатину, ривастатину, мевастатину, аторвастатину, церивастатину, ловастатину, пітавастатину, флуїндостатину, велостатину, далвастатину, розувастатину, дигідрокомпактину та компактину.
Даний винахід також охоплює ізотопно мічену першу сполуку або її фармацевтично прийнятну сіль або кон'югат з амінокислотою, які мають структуру, ідентичну структурі першої сполуки згідно з даним винаходом (наприклад, сполуки формули А, І, ІА, ІІ або ПА), за винятком того, що один або декілька атомів замінені атомом, що має атомну масу або масове число, відмінні від атомної маси або масового числа, які найчастіше зустрічаються в природі. Приклади ізотопів, які можуть бути включені до складу першої сполуки або її фармацевтично прийнятної солі або кон'югату з амінокислотою, включають ізотопи водню, вуглецю, азоту, фтору, такі як ЗН, по, 190 ве.
Зо Перша сполука або її фармацевтично прийнятна сіль або кон'югат з амінокислотою, які містять вищевказані ізотопи та/або інші ізотопи інших атомів, входять в обсяг даного винаходу.
Ізотопно мічена перша сполука або її фармацевтично прийнятна сіль або кон'югат з амінокислотою, наприклад, перша сполука, до складу якої включені радіоактивні ізотопи, такі як
ЗН та/або 7хб, є застосовними для аналізів розподілу лікарського засобу та/або субстрату в тканинах. Ізотопи тритій, тобто ЗН, та вуглець-14, тобто 770, застосовуються з урахуванням простоти їх одержання та виявлення. Крім того, заміна на більш важкі ізотопи, такі як дейтерій, тобто 2Н, може забезпечувати певні терапевтичні переваги, зумовлені більш високою метаболічною стабільністю, наприклад, збільшення періоду напіввиведення іп мімо або зниження необхідних доз, та, отже, може застосовуватися за певних умов. Ізотопно мічену першу сполуку або її фармацевтично прийнятну сіль або кон'югат з амінокислотою, як правило, можна одержати за допомогою здійснення процедур, розкритих на схемах та/або в прикладах у даному винаході, за допомогою заміни не міченого ізотопами реагенту легкодоступним ізотопно міченим реагентом. В одному варіанті здійснення обетихолева кислота або її фармацевтично прийнятні солі або кон'югати з амінокислотами не є ізотопно міченими.
У даному винаході також представлено спосіб лікування або попередження захворювання або стану, який включає введення терапевтично ефективної кількості фармацевтичної композиції згідно з даним винаходом суб'єкту, який потребує цього.
В одному варіанті здійснення захворювання або стан являють собою захворювання або стан, опосередковані ЕХА. Приклади захворювань або станів, опосередкованих ЕХНЕ, включають без обмеження захворювання печінки (у тому числі холестатичні та нехолестатичні захворювання печінки), такі як первинний біліарний цироз (РВС), первинний склерозивний холангіт (РБС), біліарна атрезія, портальна гіпертензія, хологенна діарея, хронічна печінкова недостатність, неалкогольна жирова хвороба печінки (МАРІО), неалкогольний стеатогепатит (МАЗН), інфікування гепатитом С, алкогольна хвороба печінки, ураження печінки внаслідок фіброзу, що прогресує, та фіброз печінки. Приклади захворювань, опосередкованих ЕХА, також включають гіперліпідемію, високий рівень холестерину ГО, високий рівень холестерину НОЇ, високий рівень тригліцеридів і серцево-судинне захворювання.
МАРІО являє собою медичний стан, який характеризується накопиченням жиру (що називається жировою інфільтрацією) в печінці. МАРІО є однією з найбільш поширених причин 60 хронічної печінкової недостатності та охоплює спектр станів, асоційованих із відкладенням ліпідів у гепатоцитах. Вона охоплює діапазон від стеатозу (простої жирової хвороби печінки) до неалкогольного стеатогепатиту (МАБ5Н), до вираженого фіброзу та цирозу. Дане захворювання є здебільшого безсимптомним і часто виявляється випадково за підвищеними рівнями ферментів печінки. МАНІ О значною мірою асоційована з ожирінням та інсулінорезистентністю і на сьогодні багатьма вважається печінковою складовою метаболічного синдрому.
Неалкогольний стеатогепатит (МАБН) являє собою стан, який спричиняє запалення та накопичення жирової та фіброзної (рубцевої) тканини в печінці. Рівні ферментів печінки у крові можуть бути підвищені більшою мірою, ніж у випадку незначних підвищень, які спостерігаються під час неалкогольної жирової хвороби печінки (МАР). Хоча аналогічні стани можуть бути наявні в людей, які зловживають алкоголем, МА5Н наявний у людей, які вживають алкоголь у незначних кількостях або не вживають його. МАБН вражає 2-5 відсотків американців і найчастіше спостерігається у людей з одним або декількома з наступних станів: ожиріння, цукрового діабету, гіперліпідемії, інсулінорезистентності, застосування певних медикаментів і дії токсинів. МА5Н стає все більш поширеною причиною хронічної печінкової недостатності у світі та асоційований із підвищеною смертністю, пов'язаною з ураженням печінки, та гепатоцелюлярною карциномою, навіть за відсутності цирозу. МАЗН прогресує до цирозу в 15- 20956 уражених індивідуумів і на сьогодні є одним з основних показань для трансплантації печінки в США. До сьогодні не існує схвалених методів терапії МА5Н.
В одному варіанті здійснення захворювання або стан являють собою гіперліпідемію.
Водному варіанті здійснення захворювання або стан являють собою холестатичне захворювання печінки. В одному варіанті здійснення захворювання або стан являть собою РВС.
В іншому варіанті здійснення захворювання або стан являють собою серцево-судинне захворювання. В іншому варіанті здійснення серцево-судинне захворювання являє собою атеросклероз, гіперхолестеринемію або гіпертригліцеридемію.
У даному винаході також представлено спосіб лікування або попередження МАРІО або
МАБН. В одному варіанті здійснення в даному винаході представлено спосіб лікування або попередження МАРІО або МАБ5Н, асоційованих із гіперліпідемією. В одному варіанті здійснення в даному винаході представлено спосіб лікування або попередження МА5Н.
В одному варіанті здійснення в даному винаході представлено спосіб лікування або попередження МАБН, асоційованого з гіперліпідемією.
У даному винаході також представлено спосіб інгібування або забезпечення регресії фіброзу, який включає введення терапевтично ефективної кількості фармацевтичної композиції згідно з даним винаходом суб'єкту, який потребує цього. В одному варіанті здійснення суб'єкт не страждає від холестатичного стану. В іншому варіанті здійснення суб'єкт страждає від
З5 холестатичного стану.
В одному варіанті здійснення суб'єкт не страждає від холестатичного стану, асоційованого із захворюванням або станом, вибраним із групи, що складається з первинного раку печінки та жовчовивідних шляхів (у тому числі гепатоцелюлярної карциноми), раку ободової та прямої кишки, метастатичного раку, сепсису, хронічного повного парентерального харчування, муковісцидозу та гранулематозного захворювання печінки. У варіантах здійснення фіброз, який підлягає інгібуванню або регресії, наявний в органі, в якому експресується ЕХВ.
В одному варіанті здійснення холестатичний стан визначений як наявність аномально підвищеного рівня лужної фосфатази, у-глутамілтранспептидази (СТ) та/або 5'--чуклеотидази в сироватці крові. В іншому варіанті здійснення холестатичний стан додатково визначений як такий, що виявляється у вигляді щонайменше одного клінічного симптому. В одному варіанті здійснення симптом являє собою сверблячку (свербіж) В іншому варіанті здійснення холестатичний стан вибраний із групи, що складається з первинного біліарного цирозу (РВС), первинного склерозивного холангіту (РВ5), холестазу, індукованого лікарськими засобами, спадкового холестазу, біліарної атрезії та внутрішньопечінкового холестазу вагітних.
В одному варіанті здійснення фіброз вибраний із групи, що складається з фіброзу печінки, фіброзу нирки та фіброзу кишечника.
В одному варіанті здійснення суб'єкт має фіброз печінки, асоційований із захворюванням, вибраним із групи, що складається з гепатиту В; гепатиту С; паразитарних захворювань печінки; посттрансплантаційних бактеріальних, вірусних і грибкових інфекцій; алкогольної хвороби печінки (АЇ 0); неалкогольної жирової хвороби печінки (МАРІ 0); неалкогольного стеатогепатиту (МАЗН); захворювань печінки, індукованих метотрексатом, ізоніазидом, оксифеністатином, метилдопою, хлорпромазином, толбутамідом або аміодароном; аутоїмунного гепатиту; саркоїдозу; хвороби Вільсона; гемохроматозу; хвороби Гоше; хвороб накопичення глікогену ПІ,
ЇМ, МІ, ІХ ї Х типів; дефіциту «1-антитрипсину; синдрому Цельвегера; тирозинемії; фруктоземії; 60 галактоземії; судинного розладу, асоційованого із синдромом Бадда-Кіарі, венооклюзійною хворобою або тромбофлебітом ворітної вени; та вродженого фіброзу печінки.
В іншому варіанті здійснення суб'єкт має фіброз кишечника, асоційований із захворюванням, вибраним із групи, що складається з хвороби Крона, неспецифічного виразкового коліту, променевого коліту та мікроскопічного коліту.
В іншому варіанті здійснення суб'єкт має ренальний фіброз, асоційований із захворюванням, вибраним із групи, що складається з діабетичної нефропатії, гіпертонічного нефросклерозу, хронічного гломерулонефриту, хронічної посттрансплантаційної гломерулопатії, хронічного інтерстиціального нефриту та полікістозного захворювання нирок.
У даному винаході також представлено спосіб лікування або попередження всіх форм станів, пов'язаних із підвищеними рівнями ліпідів. В одному варіанті здійснення стан являє собою гіперліпідемію, яка асоційована зі станом, вибраним із резистентного первинного біліарного цирозу; первинного біліарного цирозу, з яким асоційовані підвищення показників функціональних проб печінки та гіперліпідемія, первинного склерозивного холангіту, стеатогепатиту, не індукованого алкоголем; і хронічної печінкової недостатності, асоційованої з гепатитом В, С або вживанням алкоголю. В іншому варіанті здійснення в даному винаході представлено спосіб лікування або попередження гіперліпідемії, де гіперліпідемія являє собою первинну гіперліпідемію з генетичною складовою або без неї або гіперліпідемію, асоційовану із захворюванням коронарних артерій, цереброваскулярним захворюванням артерій, захворюванням периферичних судин, формами аневризми аорти або атеросклерозом сонної артерії.
В одному аспекті в даному винаході представлено спосіб лікування або попередження первинного склерозивного холангіту з аналогічними біохімічними аномаліями, а також хронічного гепатиту, спричиненого вірусом гепатиту В, С або вживанням алкоголю. В одному аспекті в даному винаході представлено спосіб лікування або попередження інших артеріальних порушень, асоційованих із гіперліпідемією. В одному аспекті в даному винаході представлено спосіб лікування або попередження гіпертригліцеридемії.
У даному винаході також представлено спосіб зниження рівнів ліпідів (тобто кількості ліпідів), як, наприклад, у крові, який включає введення терапевтично ефективної кількості фармацевтичної композиції згідно з даним винаходом суб'єкту, який потребує цього. В одному варіанті здійснення спосіб згідно з даним винаходом забезпечує зниження рівнів ліпідів щонайменше на 1095, 2095, ЗО 90, 40965, 5095, бО Зо, 7095, 8095 або 9095 порівняно з контрольним суб'єктом (наприклад, суб'єктом, якому не вводили композицію згідно з даним винаходом). В одному варіанті здійснення суб'єкт має підвищені рівні ліпідів порівняно зі здоровим суб'єктом (наприклад, індивідуумом без захворювання або стану, таких як захворювання або стани, описані в даному документі). В одному варіанті здійснення спосіб згідно з даною заявкою забезпечує зниження рівнів ліпідів до нормальних рівнів (наприклад, подібних до рівнів ліпідів у індивідуума без захворювання або стану, таких як захворювання або стани, описані в даному документі).
В одному варіанті здійснення ліпід являє собою холестерин. В одному варіанті здійснення спосіб згідно з даним винаходом забезпечує зниження рівнів холестерину щонайменше на 10 95, 2096, ЗО 96, 40 95, 50 96, 60 о, 7095, 8095 або 90 95 порівняно з контрольним суб'єктом (наприклад, суб'єктом, якому не вводили композицію згідно з даним винаходом). В одному варіанті здійснення суб'єкт має підвищені рівні холестерину порівняно зі здоровим суб'єктом (наприклад, індивідуумом без захворювання або стану, таких як захворювання або стани, описані в даному документі). В одному варіанті здійснення спосіб згідно з даним винаходом забезпечує зниження рівнів холестерину нижче 400 мг/л, 350 мг/л, 300 мг/л, 250 мг/л, 240 мг/л, 230 мг/л, 220 мг/л, 210 мг/л, 200 мг/л, 190 мг/л, 180 мг/л, 170 мг/л, 160 мг/л або 150 мг/л. В одному варіанті здійснення спосіб згідно з даним винаходом забезпечує зниження рівнів холестерину нижче 200 мг/л, 190 мг/л, 180 мг/л, 170 мг/л, 160 мг/л або 150 мг/л.
В одному варіанті здійснення холестерин являє собою 10. В одному варіанті здійснення спосіб згідно з даним винаходом забезпечує зниження рівнів ОЇ щонайменше на 10 95, 20 95,
ЗО бо, 40 95, 50 90, 60 95, 70 90, 80 96 або 90 95 порівняно з контрольним суб'єктом (наприклад, суб'єктом, якому не вводили композицію згідно з даним винаходом). В одному варіанті здійснення суб'єкт має підвищені рівні ЇОЇ порівняно зі здоровим суб'єктом (наприклад, індивідуумом без захворювання або стану, таких як захворювання або стани, описані в даному документі). В одному варіанті здійснення спосіб згідно з даним винаходом забезпечує зниження рівнів ОЇ нижче 300 мг/л, 200 мг/л, 190 мг/л, 180 мг/л, 170 мг/л, 160 мг/л, 150 мг/л, 140 мг/л, 130 мг/л, 120 мг/л, 110 мг/л, 100 мг/л, 90 мг/л, 80 мг/л, 70 мг/л, 60 мг/л або 50 мг/л. В одному 60 варіанті здійснення спосіб згідно з даним винаходом забезпечує зниження рівнів ОЇ нижче
160 мг/л, 150 мг/л, 140 мг/л, 130 мг/л, 120 мг/л, 110 мг/л, 100 мг/л, 90 мг/л, 80 мг/л, 70 мг/л, 60 мг/л або 50 мг/л. В одному варіанті здійснення спосіб згідно з даним винаходом забезпечує зниження рівнів ОЇ нижче 130 мг/л, 120 мг/л, 110 мг/л, 100 мг/л, 90 мг/л, 80 мг/л, 70 мг/л, 60 мг/л або 50 мг/л. В одному варіанті здійснення спосіб згідно з даним винаходом забезпечує зниження рівнів ОЇ нижче 100 мг/л, 90 мг/л, 80 мг/л, 70 мг/л, 60 мг/л або 50 мг/л. В одному варіанті здійснення спосіб згідно з даним винаходом забезпечує зниження рівнів ОЇ нижче 70 мг/л, 60 мг/л або 50 мг/л.
В одному варіанті здійснення ліпід являє собою тригліцерид. В одному варіанті здійснення спосіб згідно з даним винаходом забезпечує зниження рівнів тригліцеридів щонайменше на 10 96, 20 96, 30 Зо, 40 95, 50 90, 60 95, 70 95, 80 96 або 90 95 порівняно з контрольним суб'єктом (наприклад, суб'єктом, якому не вводили композицію згідно з даним винаходом). В одному варіанті здійснення суб'єкт має підвищені рівні тригліцеридів порівняно зі здоровим суб'єктом (наприклад, індивідуумом без захворювання або стану, таких як захворювання або стани, описані в даному документі). В одному варіанті здійснення спосіб згідно з даним винаходом забезпечує зниження рівнів тригліцеридів нижче 800 мг/л, 700 мг/л, 600 мг/л, 500 мг/л, 400 мг/л, 300 мг/л, 200 мг/л, 190 мг/л, 180 мг/л, 170 мг/л, 160 мг/л, 150 мг/л, 140 мг/л, 130 мг/л, 120 мг/л, 110 мг/л або 100 мг/л. В одному варіанті здійснення спосіб згідно з даним винаходом забезпечує зниження рівнів тригліцеридів нижче 200 мг/л, 190 мг/л, 180 мг/л, 170 мг/л, 160 мг/л, 150 мг/л, 140 мг/л, 130 мг/л, 120 мг/л, 110 мг/л або 100 мг/л. В одному варіанті здійснення спосіб згідно з даним винаходом забезпечує зниження рівнів тригліцеридів нижче 150 мг/л, 140 мг/л, 130 мг/л, 120 мг/л, 110 мг/л або 100 мг/л.
У даному винаході також представлено спосіб зниження кількості білірубіну та/або одного або декількох ферментів печінки, який включає введення терапевтично ефективної кількості фармацевтичної композиції згідно з даним винаходом суб'єкту, який потребує цього.
В одному варіанті здійснення спосіб згідно з даною заявкою забезпечує зниження кількості білірубіну щонайменше на 10 95, 20 У, 30 Фо, 40 95, 50 Фо, 60 У, 70 95, 80 95 або 90 95 порівняно з контрольним суб'єктом (наприклад, суб'єктом, якому не вводили композицію згідно з даним винаходом). В одному варіанті здійснення суб'єкт має підвищений рівень білірубіну порівняно зі здоровим суб'єктом (наприклад, індивідуумом без захворювання або стану, таких як
Зо захворювання або стани, описані в даному документі). В одному варіанті здійснення спосіб згідно з даною заявкою забезпечує зниження рівня білірубіну до нормального рівня (наприклад, подібного до рівня білірубіну в індивідуума без захворювання або стану, таких як захворювання або стани, описані в даному документі). У додатковому варіанті здійснення спосіб згідно з даною заявкою забезпечує зниження рівня білірубіну нижче 10 мг/л, 9 мг/л, 8 мг/л, 7 мг/л, 6 мг/л, 5 мг/л, 4 мг/л, З мг/л, 2 мг/л, 1,5 мг/л, 1,2 мг/л або 1 мг/л. У додатковому варіанті здійснення спосіб згідно з даною заявкою забезпечує зниження рівня білірубіну нижче 2 мг/л, 1,5 мг/л, 1,2 мг/л або 1 мг/л.
В одному варіанті здійснення фермент печінки вибраний із групи, що складається з лужної фосфатази (АЇ Р, АР або АїК Ріоз5), аланінамінотрансферази (АГ Т), аспартатамінотрансферази (А5Т), гамма-глутамілтранспептидази (С(І1Т), лактатдегідрогенази (ОН) та 5'-чуклеотидази.
В одному варіанті здійснення спосіб згідно з даною заявкою забезпечує зниження кількості одного або декількох ферментів печінки щонайменше на 10 95, 20 95, 30 95, 40 9, 50 о, 60 95, 7096, 8095 або 9095 порівняно з контрольним суб'єктом (наприклад, суб'єктом, якому не вводили композицію згідно з даним винаходом). В одному варіанті здійснення суб'єкт має підвищені рівні одного або декількох ферментів печінки порівняно зі здоровим суб'єктом (наприклад, індивідуумом без захворювання або стану, таких як захворювання або стани, описані в даному документі). В одному варіанті здійснення спосіб згідно з даною заявкою забезпечує зниження рівнів одного або декількох ферментів печінки (наприклад, АЇ Р, АГ Т, А5Т, сат, І ОН і 5'-чуклеотидази) до нормальних рівнів (наприклад, подібних до рівнів ферментів печінки в індивідуума без захворювання або стану, таких як захворювання або стани, описані в даному документі).
У додатковому варіанті здійснення спосіб згідно з даною заявкою забезпечує зниження рівня
АЇ Р нижче 500 МО/л (міжнародних одиниць на літр), 400 МО/л, 300 МоО/л, 200 МО/л, 180 МоО/л, 160 МоО/л або 150 МоО/л. У додатковому варіанті здійснення спосіб згідно з даною заявкою забезпечує зниження рівня АЇ Р до від приблизно 40 МО/л до приблизно 150 МоО/л.
У додатковому варіанті здійснення спосіб згідно з даною заявкою забезпечує зниження рівня
АЇ Т нижче 200 МО/л (міжнародних одиниць на літр), 150 МоО/л, 100 Мо/л, 80 МО/л, 60 МоО/л або 50 Мо/л. У додатковому варіанті здійснення спосіб згідно з даною заявкою забезпечує зниження рівня АЇ Т до від приблизно 5 МО/л до приблизно 50 МоО/л. 60 У додатковому варіанті здійснення спосіб згідно з даною заявкою забезпечує зниження рівня
А5Т нижче 200 МО/л (міжнародних одиниць на літр), 150 МО/л, 100 МО/л, 80 МО/л, 60 МО/л, 50 МО/л або 40 Мо/л. У додатковому варіанті здійснення спосіб згідно з даною заявкою забезпечує зниження рівня АЄТ до від приблизно 10 МО/л до приблизно 50 МоО/л.
У додатковому варіанті здійснення спосіб згідно з даною заявкою забезпечує зниження рівня
СОТ нижче 200 МО/л (міжнародних одиниць на літр), 150 МоО/л, 100 МО/л, 90 МО/л, 80 МО/л, 70 МО/л або 60 МоО/л. У додатковому варіанті здійснення спосіб згідно з даною заявкою забезпечує зниження рівня СОТ до від приблизно 15 МО/л до приблизно 50 МоО/л або від приблизно 5 МО/л до приблизно 30 МоО/л.
У додатковому варіанті здійснення спосіб згідно з даною заявкою забезпечує зниження рівня
ГОН нижче 500 МО/л (міжнародних одиниць на літр), 400 МоО/л, 300 МоО/л, 200 МоО/л, 180 МоО/л, 160 МоО/л, 150 МоО/л, 140 МО/л або 130 МоО/л. У додатковому варіанті здійснення спосіб згідно з даною заявкою забезпечує зниження рівня ОН до від приблизно 120 МоО/л до приблизно 220 МоО/л.
У додатковому варіанті здійснення спосіб згідно з даною заявкою забезпечує зниження рівня
Б'-нуклеотидази нижче 50 МоО/л (міжнародних одиниць на літр), 40 МО/л, 30 МО/л, 20 МоО/л, 18 Мо/л, 17 МО/л, 16 МоО/л, 15 Мо/л, 14 МО/л, 13 МоО/л, 12 МоО/л, 11 Мо/л, 10 МО/л, 9 МО/л, 8 МоО/л, 7 МоО/л, 6 МО/л або 5 МоО/л. У додатковому варіанті здійснення спосіб згідно з даною заявкою забезпечує зниження рівня 5'--чуклеотидази до від приблизно 2 МО/л до приблизно 15 МоО/л.
В одному варіанті здійснення способи згідно з даним винаходом включають введення суб'єкту, який потребує цього, ефективної кількості першої сполуки, яка являє собою агоніст
ЕХВ, у комбінації щонайменше з одним агоністом РРАВ-альфа, агоністом РРАВ-дельта та/або подвійним агоністом РРАНК-альфа та дельта та необов'язково одним або декількома фармацевтично прийнятними носіями. У додатковому варіанті здійснення спосіб включає введення суб'єкту, який потребує цього, ефективної кількості першої сполуки в комбінації щонайменше з одним агоністом РРАВ-альфа, агоністом РРАНВ-дельта та/або подвійним агоністом РРАВ-альфа та дельта, де перша сполука являє собою сполуку, описану в даному документі (наприклад, сполуку формули А, І, ІА, Ії або ПА або сполуку 1, 2, З або 4), або її
Зо фармацевтично прийнятну сіль або кон'югат з амінокислотою.
В одному варіанті здійснення способи згідно з даним винаходом включають уведення суб'єкту, який потребує цього, ефективної кількості першої сполуки, яка являє собою агоніст
ЕХВ, у комбінації щонайменше з одним фібратом і необов'язково одним або декількома фармацевтично прийнятними носіями. У додатковому варіанті здійснення спосіб включає введення суб'єкту, який потребує цього, ефективної кількості першої сполуки в комбінації щонайменше з одним фібратом, де перша сполука являє собою сполуку, описану в даному документі (наприклад, сполуку формули А, І, ІА, Ії або ПА або сполуку 1, 2, З або 4), або її фармацевтично прийнятну сіль або кон'югат з амінокислотою.
В одному варіанті здійснення способи згідно з даним винаходом включають уведення суб'єкту, який потребує цього, ефективної кількості першої сполуки, яка є агоністом ЕХВ, у комбінації щонайменше з одним о статином і необов'язково одним або декількома фармацевтично прийнятними носіями. У додатковому варіанті здійснення спосіб включає введення суб'єкту, який потребує цього, ефективної кількості першої сполуки в комбінації щонайменше з одним статином, де перша сполука являє собою сполуку, описану в даному документі (наприклад, сполуку формули А, І, ІА, ЇЇ або ПА або сполуку 1, 2, З або 4), або її фармацевтично прийнятну сіль або кон'югат з амінокислотою.
В одному варіанті здійснення способи згідно з даним винаходом включають уведення суб'єкту, який потребує цього, ефективної кількості першої сполуки, яка є агоністом ЕХВ, у комбінації щонайменше з одним агоністом РРАВ-альфа, агоністом РРАВ-дельта та/або подвійним агоністом РРАН-альфа та дельта, щонайменше одним статином і необов'язково одним або декількома фармацевтично прийнятними носіями. У додатковому варіанті здійснення спосіб включає введення суб'єкту, який потребує цього, ефективної кількості першої сполуки в комбінації щонайменше з одним агоністом РРАВ- альфа, агоністом РРАВ-дельта та/або подвійним агоністом РРАН-альфа та дельта та щонайменше одним статином, де перша сполука являє собою сполуку, описану в даному документі (наприклад, сполуку формули А, |,
ІА, ІЇ або ПА або сполуку 1, 2, З або 4), або її фармацевтично прийнятну сіль або кон'югат з амінокислотою.
В одному варіанті здійснення способи згідно з даним винаходом включають уведення суб'єкту, який потребує цього, ефективної кількості першої сполуки, яка є агоністом ЕХВ, у бо комбінації щонайменше з одним фібратом, щонайменше одним статином і необов'язково одним або декількома фармацевтично прийнятними носіями. У додатковому варіанті здійснення спосіб включає введення суб'єкту, який потребує цього, ефективної кількості першої сполуки в комбінації щонайменше з одним фібратом і щонайменше одним статином, де перша сполука являє собою сполуку, описану в даному документі (наприклад, сполуку формули А, І, ІА, ІЇ або
ПА або сполуку 1, 2, З або 4), або її фармацевтично прийнятну сіль або кон'югат з амінокислотою.
В одному варіанті здійснення суб'єктом є ссавець. В одному варіанті здійснення ссавець є людиною.
В одному варіанті здійснення першу сполуку та агоніст(агоністи) РРАВ-альфа, агоніст(агоністи) РРАВ-дельта, подвійний(подвійні) агоніст(агоністи) РРАВ-альфа та дельта або
РРАВ-альфа та гамма, фібрат(фібрати) або статин(статини) вводять у двокомпонентній комбінації, тобто без будь-якого терапевтичного засобу, відмінного від першої сполуки та агоніста(агоністів) РРАНВ-альфа, агоніста(агоністів) РРАВ-дельта, подвійного(подвійних) агоніста(агоністів) РРАВ-альфа та дельта або РРАВ-альфа та гамма, фібрату(фібратів) або статину(статинів). У додатковому варіанті здійснення першу сполуку та фібрат(фібрати) вводять у двокомпонентній комбінації, тобто без будь-якого терапевтичного засобу, відмінного від першої сполуки та фібрату(фібратів). В іншому варіанті здійснення першу сполуку та статин(статини) вводять у двокомпонентній комбінації, тобто без будь-якого терапевтичного засобу, відмінного від першої сполуки та статину(статинів).
В іншому варіанті здійснення першу сполуку та агоніст(агоністи) РРАВ-альфа, агоніст(агоністи) РРАВ-дельта, подвійний(подвійні) агоніст(агоністи) РРАВ-альфа та дельта або
РРАВ-альфа та гамма або фібрат(фібрати) вводять у трикомпонентній комбінації зі статином.
У додатковому варіанті здійснення першу сполуку та фібрат(фібрати) вводять у трикомпонентній комбінації зі статином.
За допомогою першої сполуки разом з агоністом(агоністами) РРАН-альфа, агоністом(агоністами) РРАВ-дельта, подвійним(подвійними) агоністом(агоністами) РРАВ- альфа та дельта або РРАВН-альфа та гамма або фібратом(фібратами) та/або статином(статинами) можна досягати значних синергічних ефектів, таких як синергічне зниження інтенсивності важких комбінованих і стійких до окремих засобів терапії гіперліпідемічних станів і рівнів одного
Зо або декількох ферментів печінки. Отже, з урахуванням надзвичайно важкого контролю гіперліпідемій переважною є комбінація першої сполуки, агоніста РРАВ-альфа, агоніста РРАВ- дельта, подвійного агоніста РРАВ- альфа та дельта або РРАВ-альфа та гамма або фібрату та/або статину. Може бути особливо переважним, щоб така комбінація першої сполуки, фібрату та/або статину була представлена у вигляді однієї фармацевтичної композиції з фармацевтично прийнятним носієм (як, наприклад, у формі однієї капсули), призначеної для підвищення прихильності до лікування та, отже, ефективності. Відповідно, в даному винаході додатково передбачається фармацевтична композиція, яка містить ефективну кількість першої сполуки, ефективну кількість щонайменше одного агоніста РРАВ-альфа, агоніста РРАВ- дельта або подвійного агоніста РРАН-альфа та дельта або РРАН-альфа та гамма та ефективну кількість щонайменше одного статину разом з одним або декількома фармацевтично прийнятними носіями, розріджувачами, допоміжними засобами або наповнювачами. В одному варіанті здійснення в даному винаході додатково представлена фармацевтична композиція, яка містить ефективну кількість першої сполуки, ефективну кількість щонайменше одного фібрату та ефективну кількість щонайменше одного статину разом з одним або декількома фармацевтично прийнятними носіями, розріджувачами, допоміжними засобами або наповнювачами.
В одному варіанті здійснення першу сполуку та агоніст(агоністи) РРАВ-альфа, агоніст(агоністи) РРАВ-дельта, подвійний(подвійні) агоніст(агоністи) РРАВ-альфа та дельта або
РРАВ-альфа та гамма або фібрат(фібрати) вводять одночасно. Наприклад, першу сполуку та агоніст(агоністи) РРАНВ-альфа, агоніст(агоністи) РРАВ-дельта, подвійний(подвійні) агоніст(агоністи) РРАН-альфа та дельта або РРАН-альфа та гамма або фібрат(фібрати) вводять разом в одній фармацевтичній композиції з фармацевтично прийнятним носієм. В іншому варіанті здійснення першу сполуку та агоніст(агоністи) РРАВ-альфа, агоніст(агоністи)
РРАВ-дельта, подвійний(подвійні) агоніст(агоністи) РРАВ- альфа та дельта або РРАВ-альфа та гамма або фібрат(фібрати) вводять послідовно. Наприклад, першу сполуку вводять до або після агоніста(агоністів) РРАВ-альфа, агоніста(агоністів) РРАВ-дельта, подвійного(подвійних) агоніста(агоністів) РРАВ-альфа та дельта або РРАВ-альфа та гамма або фібрату(фібратів).
В одному варіанті здійснення першу сполуку та статин вводять одночасно. Наприклад, першу сполуку та статин вводять разом в одній фармацевтичній композиції з фармацевтично бо прийнятним носієм. В іншому варіанті здійснення першу сполуку та статин уводять послідовно.
Наприклад, першу сполуку вводять до або після статину.
В одному варіанті здійснення першу сполуку вводять у першій дозі протягом першого періоду часу з наступним уведенням першої сполуки в другій дозі протягом другого періоду часу. В одному варіанті здійснення першу сполуку або її фармацевтично прийнятну сіль або кон'югат з амінокислотою вводять у загальній денній кількості, що становить 0,1-1500 мг, 0,2- 1200 мг, 0,3-1000 мг, 0,4-800 мг, 0,5-600 мг, 0,6-500 мг, 0,7400 мг, 0,8-300 мг, 1-200 мг, 1-100 мг, 1-50 мг, 1-30 мг, 4-26 мг або 5-25 мг, протягом першого періоду часу з наступним уведенням першої сполуки в загальній денній кількості, що становить 0,1-1500 мг, 0,2-1200 мг, 0,3-1000 мг, 0,4-800 мг, 0,5-600 мг, 0,6500 мг, 0,7-400 мг, 0,8-300 мг, 1-200 мг, 1-100 мг, 1-50 мг, 1-30 мг, 4- 26 мг або 5-25 мг. В одному варіанті здійснення загальну кількість вводять перорально один раз на день. В одному варіанті здійснення перша доза є відмінною від другої дози. У додатковому варіанті здійснення перша доза є більш низькою, ніж друга доза. В іншому варіанті здійснення перша доза є більш високою, ніж друга доза. В одному варіанті здійснення перша доза становить приблизно 5 мг (наприклад, від 4,8 мг до 5,2 мг), і друга доза становить приблизно 10 мг (наприклад, від 9,8 мг до 10,2 мг). В одному варіанті здійснення перший період часу становить приблизно б місяців. В одному варіанті здійснення другий період часу становить приблизно 6 місяців.
В одному варіанті здійснення фармацевтичну композицію вводять перорально, парентерально або місцево. В іншому варіанті здійснення фармацевтичну композицію вводять перорально.
Композиція відповідно до даного винаходу, як правило, буде містити достатню кількість першої сполуки або її фармацевтично прийнятної солі або кон'югату з амінокислотою, агоніста(агоністів) РРАНВ-альфа, агоніста(агоністів) РРАВ-дельта, подвійного(подвійних) агоніста(агоністів) РРАН-альфа та дельта або РРАН-альфа та гамма або фібрату(фібратів) та/або статину(статинів) для забезпечення введення необхідної денної дози кожного з них суб'єкту, який потребує цього, в одній стандартній лікарській формі, такій як таблетка або капсула, або у двох або більше стандартних лікарських формах, що підлягають уведенню одночасно або з інтервалами протягом дня.
У даному винаході також представлена фармацевтична композиція, де перша сполука та
Зо агоніст(агоністи) РРАНВ-альфа, агоніст(агоністи) РРАВ-дельта, подвійний(подвійні) агоніст(агоністи) РРАН-альфа та дельта або РРАН-альфа та гамма або фібрат(фібрати) вводять у комбінації з ШОСА. В одному аспекті ПШОСА вводять у трикомпонентній комбінації.
Віншому аспекті двокомпонентну комбінацію першої сполуки та агоніста(агоністів) РРАВ- альфа, агоніста(агоністів) РРАВ-дельта, подвійного(подвійних) агоніста(агоністів) РРАВ-альфа
З5 та дельта або РРАН-альфа та гамма або фібрату(фібратів) вводять для лікування або попередження захворювання або стану замість ОСА суб'єкту, в якого спостерігається неадекватна терапевтична відповідь на ШОСА окремо.
У способах згідно з даним винаходом активні речовини можна вводити в одній денній дозі або у двох, трьох, чотирьох або більше ідентичних або різних розділених дозах на день, і їх можна вводити одночасно або в різний час протягом дня. Зазвичай активні речовини вводять одночасно, частіше в одній комбінованій лікарській формі.
В одному аспекті першу сполуку, агоніст(агоністи) РРАВ-альфа, агоніст(агоністи) РРАВ- дельта, подвійний(подвійні) агоніст(агоністи) РРАВ-альфа та дельта або РРАВ- альфа та гамма або фібрат(фібрати) та/або статин(статини) вводять у дозах, по суті аналогічних дозам, у яких їх вводять за відповідних режимів монотерапії. В одному аспекті першу сполуку вводять у дозі, меншій, ніж її доза в режимі монотерапії (наприклад, що становить менше 90 95, менше 80 95, менше 70 95, менше 60 95, менше 50 95, менше 40 95, менше 30 95, менше 20 95 або менше 10 95 від неї). В одному аспекті агоніст(агоністи) РРАВ-альфа, агоніст(агоністи) РРАВ-дельта, подвійний(подвійні) агоніст(агоністи) РРАНВ-альфа та дельта або РРАВ-альфа та гамма або фібрат(фібрати) вводять у дозі, меншій, ніж їхня доза в режимі монотерапії (наприклад, що становить менше 90 95, менше 80 95, менше 70 95, менше 60 95, менше 50 95, менше 40 95, менше 30 95, менше 20 95 або менше 10 95 від неї). В одному аспекті як першу сполуку, так і агоніст(агоністи) РРАВ-альфа, агоніст(агоністи) РРАВ-дельта, подвійний(подвійні) агоніст(агоністи) РРАН-альфа та дельта або РРАН-альфа та гамма або фібрат(фібрати) вводять у дозах, менших, ніж їхні відповідні дози в режимі монотерапії (наприклад, що становлять менше 90 956, менше 80 95, менше 70 95, менше 60 95, менше 50 95, менше 40 95, менше 30 95, менше 20 95 або менше 10 95 від них). В одному аспекті статин(статини) вводять у дозі, меншій, ніж його доза в режимі монотерапії (наприклад, що становить менше 90 95, менше 80 95, менше 70 95, менше 60 95, менше 50 95, менше 40 95, менше 30 95, менше 20 95 або бо менше 10 95 від неї). В одному аспекті як першу сполуку, так і статин(статини) вводять у дозах,
менших, ніж їхні відповідні дози в режимі монотерапії (наприклад, що становлять менше 90 95, менше 80 95, менше 70 95, менше 60 95, менше 50 95, менше 40 95, менше 30 95, менше 20 95 або менше 10 95 від них). В одному аспекті першу сполуку, агоніст(агоністи) РРАВ-альфа, агоніст(агоністи) РРАВ-дельта, подвійний(подвійні) агоніст(агоністи) РРАВ-альфа та дельта або
РРАВ-альфа та гамма або фібрат(фібрати) та/або статин(статини) вводять у дозах, менших, ніж їхні відповідні дози в режимі монотерапії (наприклад, що становлять менше 90 95, менше 80 95, менше 70 95, менше 60 95, менше 50 95, менше 40 95, менше 30 95, менше 20 95 або менше 10 95 від них).
Фармацевтична композиція згідно з даним винаходом може бути представлена в будь-якій зручній формі для перорального введення, такій як таблетка, капсула, порошок, коржик, пілюля, пастилка, еліксир, ліофілізований порошок, розчин, гранула, суспензія, емульсія, сироп або настойка. Форми з уповільненим вивільненням, модифікованим вивільненням або відстроченим вивільненням також можна одержати, наприклад, у формі покритих частинок, багатошарових таблеток, капсул, вкладених у капсули, таблеток, вкладених у капсули, або мікрогранул.
Тверді форми для перорального введення можуть містити фармацевтично прийнятні зв'язувальні речовини, підсолоджувачі, розпушувачі, розріджувачі, ароматизувальні засоби, засоби для покриття, консерванти, змащувальні речовини та/або засоби, що відстрочують вивільнення. Придатні зв'язувальні речовини включають аравійську камедь, желатин, кукурудзяний крохмаль, трагакантову камедь, альгінат натрію, карбоксиметилцелюлозу або поліеєтиленгліколь. Придатні підсолоджувачі включають сахарозу, лактозу, глюкозу, аспартам або сахарин. Придатні розпушувачі включають кукурудзяний крохмаль, метилцелюлозу, полівінілпіролідон, ксантанову камедь, бентоніт, альгінову кислоту або агар. Придатні розріджувачі включають лактозу, сорбіт, маніт, декстрозу, каолін, целюлозу, карбонат кальцію, силікат кальцію або фосфат дикальцію. Придатні ароматизувальні засоби включають олію перцевої м'яти, олію грушанки, вишневий, апельсиновий або малиновий ароматизатор.
Придатні засоби для покриття включають полімери або співполімери акрилової кислоти та/або метакрилової кислоти та/або їхні естери, воски, жирні спирти, зеїн, шелак або глютен. Придатні консерванти включають бензоат натрію, вітамін Е, альфа-токоферол, аскорбінову кислоту, метилпарабен, пропілларабен або бісульфіт натрію. Придатні змащувальні речовини
Зо включають стеарат магнію, стеаринову кислоту, олеат натрію, хлорид натрію або тальк.
Придатні засоби, що відстрочують вивільнення, включають гліцерилмоностеарат або гліцерилдистеарат.
Рідкі форми для перорального введення можуть містити, додатково до вищевказаних засобів, рідкий носій. Придатні рідкі носії включають воду, олії, такі як оливкова олія, арахісова олія, кунжутна олія, соняшникова олія, сафлорова олія, олія земляного горіха, кокосова олія, рідкий парафін, етиленгліколь, пропіленгліколь, поліетиленгліколь, етанол, пропанол, ізопропанол, гліцерин, жирні спирти, тригліцериди або їхні суміші.
Суспензії для перорального введення можуть додатково містити диспергувальні засоби та/або суспендувальні засоби. Придатні суспендувальні засоби включають карбоксиметилцелюлозу натрію, метилцелюлозу, гідроксипропілметилцелюлозу, полівінілпіролідон, альгінат натрію або цетиловий спирт. Придатні диспергувальні засоби включають лецитин, естери поліоксиетилену та жирних кислот, таких як стеаринова кислота, поліоксиетиленсорбітмоно- або діолеат, -стеарат або -лаурат, поліоксиетиленсорбітанмоно- або діолеат, -стеарат або -лаурат тощо.
Емульсії для перорального введення можуть додатково містити один або декілька емульгувальних засобів. Придатні емульгувальні засоби включають диспергувальні засоби, проілюстровані вище, або природні камеді, такі як аравійська камедь або трагакантова камедь.
Фармацевтичні композиції згідно з даним винаходом можна одержати за допомогою сухого змішування, подрібнення, гомогенізації суспендування, розчинення, емульгування, диспергування та/або змішування першої сполуки або її фармацевтично прийнятної солі або кон'югату з амінокислотою та щонайменше одного гіполіпідемічного засобу, наприклад фібрату, та необов'язково статину(статинів) разом із вибраними наповнювачем(наповнювачами), носієм(носіями), допоміжним(ідопоміжними) засобом(засобами) та/або розріджувачем(розріджувачами). Один тип фармацевтичної композиції згідно з даним винаходом у формі таблетки або капсули можна одержати шляхом (а) одержання першої таблетки, що містить щонайменше одну з активних речовин, вибраних із першої сполуки або її фармацевтично прийнятної солі або кон'югату з амінокислотою, та щонайменше один гіполіпідемічний засіб разом із будь-якими бажаними наповнювачем(наповнювачами), носієм(носіями), допоміжним(ідопоміжними) засобом(засобами) та/або бо розріджувачем(розріджувачами), та (б) одержання другої таблетки або капсули, де друга таблетка або капсула містить решту кількості активної(активних) речовини(речовин) і першу таблетку. Інший тип фармацевтичної композиції згідно з даним винаходом у формі капсули можна одержати шляхом (а) одержання першої капсули, що містить щонайменше одну з активних речовин, вибраних із першої сполуки або її фармацевтично прийнятної солі або кон'югату з амінокислотою, та гіполіпідемічний(гіполіпідемічні) засіб(засоби) разом із будь-якими бажаними наповнювачем(наповнювачами), носієм(носіями), допоміжним(ідопоміжними) засобом(засобами) та/або розріджувачем(розріджувачами), та (р) одержання другої капсули, де друга капсула містить решту кількості активної(активних) речовини(речовин) і першу капсулу.
Додатковий тип фармацевтичної композиції згідно з даним винаходом у формі таблетки можна одержати шляхом (а) одержання капсули, що містить щонайменше одну з активних речовин, вибраних із першої сполуки або її фармацевтично прийнятної солі або кон'югату з амінокислотою, та щонайменше один гіполіпідемічний засіб разом із будь-якими бажаними наповнювачем(наповнювачами), носієм(носіями), допоміжним(допоміжними) засобом(засобами) та/або розріджувачем(розріджувачами), та (б) одержання таблетки, де таблетка містить решту кількості активної(активних) речовини(речовин) і капсулу.
У варіантах здійснення агоніст(агоністи) РРАВ-альфа, агоніст(агоністи) РРАВ- дельта, подвійний(подвійні) агоніст(агоністи) РРАНВ-альфа та дельта або РРАВ-альфа та гамма або фібрат(фібрати) та/або статин(статини) застосовують як таблетку з негайним вивільненням або як таблетку з уповільненим вивільненням. Вони є особливо ефективними, якщо представлені у вигляді таблетки з уповільненим вивільненням. Таблетки з уповільненим вивільненням із різноманітними гіполіпідемічними засобами є комерційно доступними. Для пролонгованої дії бажано, щоб таблетка була представлена у форматі з уповільненим вивільненням.
В іншому варіанті здійснення фармацевтична композиція згідно з даним винаходом містить капсулу, що містить агоніст(агоністи) РРАВ-альфа, агоніст(агоністи) РРАВ- дельта, подвійний(подвійні) агоніст(агоністи) РРАВ-альфа та дельта або РРАВ-альфа та гамма або фібрат(фібрати) та/або статин(статини), вкладені в капсулу, що містить першу сполуку або її фармацевтично прийнятну сіль або кон'югат з амінокислотою. Як правило, в цій формі агоніст(агоністи) РРАВ-альфа, агоніст(агоністи) РРАВ-дельта, подвійний(подвійні) агоніст(агоністи) РРАВ-альфа та дельта або РРАВ-альфа та гамма або фібрат(фібрати) та/або
Зо статин(статини) представлені у формі з негайним вивільненням. У цьому випадку звичайним є введення композиції три рази на день. Інший режим уведення полягає в наданні композиції, що містить агоніст(агоністи) РРАВ-альфа, агоніст(агоністи) РРАВ-дельта, подвійний(подвійні) агоніст(агоністи) РРАВ-альфа та дельта або РРАВ- альфа та гамма або фібрат(фібрати) та/або статин(статини), у формі з уповільненим вивільненням або з неуповільненим вивільненням, описаній вище, два рази на день, де денна кількість композиції, що вводиться, містить достатню кількість активних речовин для надання пацієнту необхідної денної дози.
В одному варіанті здійснення фармацевтичні композиції згідно з даним винаходом являють собою лікарську форму, яка містить першу сполуку або її фармацевтично прийнятну сіль або кон'югат з амінокислотою в загальній денній кількості, що становить 0,1-1500 мг, 0,2-1200 мг, 0,3-1000 мг, 0,4-800 мг, 0,5-600 мг, 0,6-500 мг, 0,7-400 мг, 0,8-300 мг, 1-200 мг, 1-100 мг, 1-50 мг, 1-30 мг, 4-26 мг або 5-25 мг. В одному варіанті здійснення загальну кількість уводять перорально один раз на день.
В одному варіанті здійснення фармацевтичні композиції згідно з даним винаходом являють собою лікарську форму, яка містить агоніст РРАВ-альфа, агоніст РРАВ-дельта, подвійний агоніст РРАВ-альфа та дельта або РРАВ-альфа та гамма або фібрат та/або статин в загальній денній кількості, що становить 10-1000 мг, 20-800 мг, 50-500 мг, 80400 мг або 100-300 мг, частіше за все приблизно 200 мг. В одному варіанті здійснення загальну кількість вводять перорально один раз на день. В одному варіанті здійснення фармацевтичні композиції згідно з даним винаходом являють собою лікарську форму, яка містить статин у кількості, що становить 5-1000 мг, 10-800 мг, 20-500 мг, 30-400 мг або 40200 мг.
У варіантах здійснення композиції згідно з даним винаходом являють собою лікарську форму, яка містить агоніст РРАВ-альфа, агоніст РРАВ-дельта, подвійний агоніст РРАН-альфа та дельта або РРАВ-альфа та гамма або фібрат та/або статин у кількості, що становить 10- 1000 мг, 20-800 мг, 50-500 мг, 80-400 мг або 100-300 мг, найчастіше приблизно 200 мг, що міститься в капсулі, яка містить першу сполуку у кількості, що становить 0,1-1500 мг, 0,2- 1200 мг, 0,3-1000 мг, 0,4-800 мг, 0,5-600 мг, 0,6500 мг, 0,7-400 мг, 0,8-300 мг, 1-200 мг, 1-100 мг, 1-50 мг, 1-30 мг, 4-26 мг або 5-25 мг. В одному варіанті здійснення агоніст РРАВ-альфа, агоніст
РРАВ-дельта, подвійний агоніст РРАВ-альфа та дельта або РРАВ-альфа та гамма або фібрат та/або статин представлений у формі з уповільненим вивільненням. 60 У варіантах здійснення композиції згідно з даним винаходом являють собою лікарську форму, яка містить таблетку безафібрату з уповільненим вивільненням у кількості, що становить 10-1000 мг, 20-800 мг, 50-500 мг, 80-400 мг або 100-300 мг, найчастіше приблизно 200 мг, що міститься в капсулі, яка містить першу сполуку у кількості, що становить 0,1-1500 мг, 0,2-1200 мг, 0,3-1000 мг, 0,4-800 мг, 0,5-600 мг, 0,6500 мг, 0,7-400 мг, 0,8-300 мг, 1-200 мг, 1- 100 мг, 1-50 мг, 1-30 мг, 4-26 мг або 5-25 мг. У цьому випадку пацієнт, якому вводять лікарську форму, приймає таблетку безафібрату з уповільненим вивільненням, який доставляється в дистальний антральний відділ шлунка у міру того, як капсула розкривається й вивільняє першу сполуку.
Фармацевтична композиція згідно з даним винаходом може застосовуватися протягом усього життя пацієнтом, при цьому продовжує його виживання та відкладає трансплантацію печінки. Зниження інтенсивності гіперліпідемії та рівнів ферментів печінки забезпечує уповільнення розвитку асоційованого судинного захворювання. Як перша сполука, так і гіполіпідемічні засоби, такі як фібрати та/або статини, характеризуються достатньо незначним профілем довгострокових побічних ефектів (за деякими винятками для безафібрату), і, таким чином, дана комбінація, імовірно, є найбільш придатним засобом терапії первинного біліарного цирозу (РВС) з гіперліпідемією та резистентного первинного біліарного цирозу (РВС). Зважаючи на спрощене дозування, представлене в даному винаході, комбіновану терапію згідно з даним винаходом можна застосовувати в дозах, що зростають, залежно від ваги пацієнта та клінічного ефекту.
Композиція згідно з даним винаходом, яка містить першу сполуку або її фармацевтично прийнятну сіль або кон'югат з амінокислотою, агоніст РРАВ-альфа, агоніст РРАВ-дельта, подвійний агоніст РРАВ-альфа та дельта або РРАВ-альфа та гамма або фібрат та/або статин, може бути представлена у вигляді трьох активних речовин, вкладених в одну капсулу. В одній формі такої композиції статин може бути змішаний із першою сполукою у внутрішній капсулі, при цьому внутрішня капсула оточена агоністом РРАН-альфа, агоністом РРАВ-дельта, подвійним агоністом РРАН-альфа та дельта або РРАН-альфа та гамма або фібратом, що містяться в зовнішній капсулі. Розташування в капсулах може бути зворотним. Інакше кажучи, суміш статину та першої сполуки може міститися в зовнішній капсулі, а агоніст РРАВ-альфа, агоніст РРАВ-дельта, подвійний агоніст РРАВ-альфа та дельта або РРАВ-альфа та гамма або
Зо фібрат можуть міститися у внутрішній капсулі. Даний порядок розташування буде особливо бажаним у випадку, якщо кількість статину, що підлягає введенню, є порівняно великою.
Можливі інші комбінації для введення комбінації трьох активних речовин.
Першу сполуку, розкриту в даному документі, можна одержати за допомогою традиційних способів (наприклад, розкритих у публікації заявки на патент США Мо 2009/0062526, в патенті
США Мо 7138390 і в МО 2006/122977), як, наприклад, за допомогою б-стадійного синтезу з наступною однією стадією очищення з одержанням сполуки 1 (обетихолевої кислоти, або ОСА) високого ступеня чистоти, як показано на схемі 1 нижче.
Схема І утосом усну ри ав а Я н | рі Стадія і І с 7 ра я рані -- - в пер Ін» у в я Ф т Те но о но зо н Н
КІСА а
Стадія 2 утво уовоюь, рин ра
Н Ї р; Г Н і У ро у ва тт риття
Ос Ос (несвеює "О(СН») (нзєзв8Вю" ша хо е ь
Стадія З у осоюн, в а реве ! | У т Л р Стадія 4 ри: теюдфиття
І ін -- І "ше нот то ноти то
І А ра - а е
Сталія 5 ш- т -соОзН у, сов «І о-со» рай Щ - ся н ся ій У Стадія 6 ко Ї АС я : дні В.ШЙШЙШЙШЙШШИ- т - і Іс Ін те» й . дит но и он но н: о нн: р т І кристалічна ОСА (наприклад, форма Є)
Стадія 7
І утосоя н риття Ді Го ( нія ноти зон
Но
Форма 1 ОСА
Вищевказаний спосіб був описаний у УМО 2013/192097, уміст якої включено в даний документ за допомогою посилання у всій своїй повноті. Даний спосіб являє собою 6б-стадійний синтез із наступною однією стадією очищення. Стадія 1 являє собою етерифікацію С-24- карбонової кислоти, що являє собою 7-кетолітохолеву кислоту (КІСА), з одержанням метилового естеру, який являє собою сполуку а. Стадія 2 являє собою утворення силіленолового етеру зі сполуки 1 з одержанням сполуки с. Стадія З являє собою реакцію альдольної конденсації силіленолового етеру, який являє собою сполуку с, та ацетальдегіду з одержанням сполуки й. Стадія 4 являє собою омилення сполуки 4 з одержанням сполуки е.
Стадія 5 являє собою гідрогенізацію сполуки є з одержанням сполуки Її. Стадія 6 являє собою вибіркове відновлення 7-кетогрупи сполуки Її з одержанням кристалічної сполуки 1. Стадія 7 являє собою перетворення кристалічної сполуки на аморфну сполуку 1 (форму 1 обетихолевої кислоти або форму 1 ОСА).
Як альтернатива, першу сполуку, розкриту в даному документі, можна одержати за допомогою традиційних способів (наприклад, описаних у патенті США Мо 7932244) або за допомогою способу, показаного на схемі 2 (і розкритого у МО 2014/066819). Схему 2 можна використовувати для одержання сполук 2, З або 4, розкритих у даному документі. та
Її» в з тео во шк до ря
Ф . ї мно т, у х-соме ? Г-
І ТТ ЩО Стадія І д 1 | и Стадія 2 Ї 15 Ї Й
Ст і т рн - но ва "Ов ноє з ї ин но - та т од т "и Ш м
Стадія 3 ть ; - з а р ся В во ся / ту тон ї сон тру ! У о, й 7 ту -и Стадія 5 п т Стадія 4 ор ті шк ше тов сої ва Ще дсо вала тон й В. ке В, мі м М
Стадія 6
В | ово ї г оон ра -- : ? Форми вільної основи або І | У тд и тня ІННИ форми солі ри ав рин пова Ов
Н: Не
Кк. На
І-Ма І
Стадія 1 являє собою етерифікацію сполуки формули ЇЇ з одержанням сполуки формули ЇЇ.
Стадія 2 являє собою реакцію утворення сполуки формули ІМ зі сполуки формули І. Стадія З являє собою введення захисної групи для гідроксильної групи в положенні ССЗ сполуки формули
ІМ з одержанням сполуки формули М. Стадія 4 являє собою окиснювальне розщеплення сполуки формули М з одержанням сполуки формули МІ. Стадія 5 являє собою відновлення сполуки формули МІ з одержанням сполуки формули МІІ. Стадія б являє собою сульфування сполуки формули МІ! з одержанням солі формули І-Ма. Сіль формули І-Ма можна перетворити на її форму вільної основи (тобто сполуку формули І) або інші форми солі (наприклад, сіль формули І--Є)ЗМН).
Визначення.
Для зручності певні терміни, які використовуються в описі, прикладах і формулі винаходу, що додається, зібрані тут.
Використовуваний у даному документі термін "фібрат" означає будь-які похідні фіброєвої кислоти та фармацевтично активні похідні 2-фенокси-2-метилпропанової кислоти, застосовні в способах, описаних у даному документі. Приклади фібратів включають без обмеження фенофібрат, безафібрат, беклобрат, бініфібрат, ципрофібрат, клінофібрат, клофібрат, клофібринову кислоту, етофібрат, гемфіброзил, нікофібрат, пірифібрат, роніфібрат, симфібрат, теофібрат, токофібрат, плафібрид і т. д. Приклади фібратів також описані в патентах США
МоМо 3781328, 3948973, 3869477, 3716583, 3262580, 3723446, 4058552, 3674836, 3369025, 3984413, 3971798, 6384062, 7119198 і 7259186; публікації заявки на патент США
Мо 20090131395; УМО 2008/039829; патенті Бельгії Мо 884722; патенті Великої Британії Мо 860303 та публікації заявки на європейський патент Мо ЕРО6О7536, повне розкриття кожного з яких включене в даний документ за допомогою посилання.
Альфа-рецептор, що активується проліфератором пероксисом (РРАН-альфа), також відомий як МАТС1 (член 1 групи С підродини ядерних рецепторів 1), являє собою ядерний рецепторний білок. Агоніст РРАВ-альфа зв'язується з РРАВ-альфа та активує його. Приклади агоніста РРАН-альфа включають без обмеження фібрат, такий як фібрати, описані в даному документі.
Дельта-рецептор, що активується проліфератором пероксисом (РРАН-дельта), також відомий як МАТС2 (член 2 групи С підродини ядерних рецепторів 1), являє собою ядерний рецепторний білок. Агоніст РРАВ-дельта зв'язується з РРАВ-дельта та активує його. Приклади агоніста РРАВ-дельта включають без обмеження (14-(((4-метил-2-І(4-«трифторметил)феніл|-1,3- тіазол-5-ілу метил)сульфаніл|-2-метилфенокси)оцтову кислоту (також відому з рівня техніки як
СМУБО1516, СаМУ1516 та ендуробол), (2-метил-4-(5-метил-2-(4--трифторметилфеніл)-2Н-
П1,2,3Ітриазол-4-ілметилсульфаніл|-фенокси)-оцтову кислоту та І4-(Ц2-ІЗ-фтор-4- (трифторметил)феніл|-4-метил-5-тіазоліл|метилігіо|-2-метилфенокси|-оцтову кислоту.
Подвійний агоніст РРАВ-альфа та дельта або РРАВ-альфа та гамма зв'язується як із РРАВ- альфа, так і з РРАВ-дельта або як із РРАВ-альфа, так і з РРАВ-гамма та активує їх. Приклади подвійного агоніста РРАВ-альфа та дельта включають без обмеження 2-(2,6- диметил-4-|3-(4- (метилтіо)феніл|-3-оксо-1(Е)-пропенілфеноксил|-2-метилпропанову кислоту (також відому як
СЕТ505). Приклади подвійних агоністів РРАН-альфа та гамма включають без обмеження алеглітазар ((25)-2-метокси-3-(4-(2-(5-метил-2-феніл-4- оксазоліл)етокси|-7- бензотіофеніл|Іпропанову кислоту, Мо СА5 475479-34-6), мураглітазар (БІ-К4- метоксифенокси)карбошл|-М-14-(2-(5-метил-2-фешл-1,3-оксазол-4-ілуетокси|бензил)гліцин,
Мо САБ5 331741-94-7), тезаглітазар (25)-2-етокси-3-(4-(2-(4- метилсульфонілоксифеніл)етокси|феніл|Іпропанову кислоту, Мо САбБ 251565-85-2) та сароглітазар ((25)-2-етокси-3-(4-(2-ї2-метил-5-(4-(метилсульфаніл)феніл|-Ш-пірол-1-
Зо іл)етокси)феніл|пропанову кислоту, Мо СА5 495399-09-2).
Використовуваний у даному документі термін "агоніст ЕХА" відноситься до будь- якої сполуки, яка активує ЕХНА. В одному аспекті за допомогою агоніста ЕХА досягається щонайменше 5095 активація ЕХА порівняно з СОСА, відповідним позитивним контролем у аналітичних способах, описаних у М/О 2000/037077. В іншому аспекті за допомогою агоніста
ЕХЕ досягається 100 95 активація ЕХВА у сцинтиляційному аналізі зближення або НТАРЕ-аналізі, описаних у МО 2000/037077. |Приклади агоністів ЕХА включають без обмеження агоністи ЕХА, описані в патентних документах США 7138390; 7932244; 20120283234; 20120232116; 20120053163; 20110105475; 20100210660; 20100184809; 20100172870; 20100152166; 20100069367; 20100063018; 20100022498; 20090270460; 20090215748; 20090163474; 20090093524; 20080300235; 20080299118; 20080182832; 20080039435; 20070142340; 20060069070; 20050080064; 20040176426; 20030130296; 20030109467; 20030003520; 20020132223 і 20020120137|.
Використовуваний у даному документі термін "обетихолева кислота" або "ОСА" відноситься до сполуки, що має наступну хімічну структуру:
Ссо,н о но ДІ он т .
Обетихолева кислота також згадується як форма 1 обетихолевої кислоти, ІМТ-747, За,7а- дигідрокси-ба-етил-5Д-холан-24-ова кислота, ба-етилхенодезоксихолева кислота, б-етил-СОСА, бЕСОСА, б-етил-3,7-дигідрокси-(За,5р,ба, 7а)-холан-24-ова кислота, та її можна одержати за допомогою способів, описаних у публікації заявки на патент США Мо 2009/0062526 А, патенті
США Мо 7138390 і МО 2006/122977. Реєстраційним номером САб обетихолевої кислоти є 459789-99-2.
Використовуваний у даному документі термін "кристалічна обетихолева кислота" відноситься до будь-якої кристалічної форми сполуки, що має наступну хімічну структуру:
сон
Ос
С Що но НІ он ай
Кристалічна обетихолева кислота означає, що сполука кристалізується у вигляді певної упорядкованої структури з упаковкою кристала в трьох просторових вимірах або сполука має площини зовнішніх граней. Кристалічна форма обетихолевої кислоти (або її фармацевтично прийнятної солі) може кристалізуватися у вигляді різноманітних упорядкованих структур із упаковкою кристала, при цьому всі вони мають той самий елементний склад обетихолевої кислоти. Різноманітні кристалічні форми зазвичай характеризуються різноманітними дифракційними рентгенограмами, інфрачервоними спектрами, точками плавлення, густиною, твердістю, формою кристалів, оптичними та електричними властивостями, стабільністю та розчинністю. Розчинник для перекристалізації, швидкість кристалізації, температура зберігання й інші фактори можуть зумовлювати домінування однієї кристалічної форми. Кристали обетихолевої кислоти можна одержати шляхом кристалізації за різноманітних умов, наприклад, із різноманітними розчинниками, температурами і т. д. Приклади кристалічних форм ОСА описані в патенті США Ме 9238673.
Термін "перша сполука" означає сполуку формули А, І, ІА, ІЇ або ПА або сполуку 1, 2, З або 4 або її фармацевтично прийнятну сіль або кон'югат з амінокислотою. У всіх випадках, коли даний термін використовується в контексті даного винаходу, слід розуміти, що посилання робиться на вільну основу, ізотопно мічену сполуку, кристалічну сполуку або її відповідні фармацевтично прийнятну сіль або кон'югати з амінокислотою, за умови, що таке є можливим та/або прийнятним за даних обставин.
Використовуваний у даному документі термін "кон'югати з амінокислотами" відноситься до кон'югатів першої сполуки згідно з даним винаходом (наприклад, сполуки формули А) з будь- якою придатною амінокислотою. Наприклад, такий придатний кон'югат сполуки формули А з амінокислотою буде мати додаткову перевагу, яка полягає в підвищеній цілісності в жовчі або кишковому соку. Придатні амінокислоти включають без обмеження гліцин і таурин. Таким чином, даний винахід охоплює кон'югати першої сполуки згідно з даним винаходом (наприклад, сполуки 1) з гліцином і таурином.
Термін "статин" є синонімічним щодо термінів "інгібітор З-гідрокси-3- метилглутарил- кофермент А-редуктази" та "інгібітор НМОа-СоА-редуктази". Ці терміни використовуються взаємозамінно в даному документі. Як свідчить синонімічність, статини являють собою інгібітори
З-гідрокси-3-метилглутарил-кофермент А-редуктази і в зв'язку з цим є ефективними в зниженні рівня холестерину в плазмі крові та, відповідно, для лікування або попередження серцево- судинних захворювань. Статини та їхні фармацевтично прийнятні солі є особливо застосовними в зниженні рівнів холестерину ліпопротеїнів низької щільності (101 -С) у ссавців і, зокрема, в людей. У своїй структурі статини або їхні похідні мають загальну 4-гідрокси-6-оксо-2Н-піранову систему, яка також може знаходитися у формі дигідроксикислоти та яка взаємодіє з активним центром НМа-СоА-редуктази, та ліпофільну частину, яка представлена, зокрема, у вигляді полізаміщеної гексагідронафталінової системи, але також може бути замінена полізаміщеною гетероароматичною системою, як у аторвастатину або флувастатину. Статин, придатний для застосування в даному документі, включає без обмеження симвастатин, флувастатин, правастатин, ривастатин, мевастатин, аторвастатин, церивастатин, ловастатин, пітавастатин, флуїндостатин, велостатин, далвастатин, розувастатин, дигідрокомпактин і компактин або їхню фармацевтично прийнятну сіль.
Термін "гіполіпідемічний засіб" відноситься до будь-якого засобу, який здатний знижувати концентрацію ліпіду (наприклад, холестерину, ОЇ і тригліцериду) в рідині, яка циркулює (наприклад, у крові). Гіполіпідемічний засіб включає без обмеження (ії) секвестрант жовчних кислот, такий як смола (наприклад, холестирамін, колестипол, колесевелам), (її) інгібітор всмоктування холестерину, який попереджує поглинання холестерину (наприклад, із тонкого кишечника в систему кровообігу), такий як езетиміб (тобто (ЗА, 45)-1-(4-фторфеніл)-3-(35)-3-(4- фторфеніл)-3-гідроксипропіл|-4-(4-гідроксифеніл)азетидин-2-он) і (ЗА, 45)-1,4-біс(4- метоксифеніл)-3-(3-фенілпропіл)-2-азетидинон), (ії) етилові естери омега-зЗ-жирних кислот, у тому числі похідні вільних жирних кислот (наприклад, ОтасогФ), | омагаф, Мазсера "М, Ераадвеї,
Ерапома"М) або омега-З-поліненасичені жирні кислоти, одержані з морепродуктів (РОЕА), (ім)
інгібітори РСОБКОУ, (м) нікотинову кислоту, (мі) фітостерини (наприклад, рослинні стерини та станоли), такі як р-ситостерин, кампестерин, стигмастерин, брасикастерин, ергостерин, ВД- ситостанол, кампестанол, стигмастанол, циклоартенол і лупеол, (мії) інгібітори СЕТР (білка- переносника холестеринових естерів), такі як анацетрапіб, евацетрапіб, торцетрапіб і далцетрапіб, (мії) інгібітори скваленсинтази, (їх) антисенсові олігонуклеотиди, які діють на синтез, розкладання, всмоктування та метаболізм ліпідів (наприклад, антисенсові олігонуклеотиди, які зв'язуються з мРНК, яка кодує аполіпопротеїн В або РОБ5КО) (наприклад, міпомерсен (кінамро)), (х) інгібітори апопротеїну В, (хі) інгібітори мікросомального білка- транспортера тригліцеридів (наприклад, ломітапід (джукстапід)) та (хії) інші сполуки, такі як колесевелам, авазиміб та імплітапід. "Здійснення лікування" включає будь-який ефект, наприклад, зменшення інтенсивності, зниження інтенсивності модулювання або усунення, який приводить в результаті до поліпшення перебігу стану, захворювання, порушення і т. д. "Здійснення лікування" або "лікування" хворобливого стану включає інгібування хворобливого стану, тобто припинення розвитку хворобливого стану або його клінічних симптомів, або полегшення хворобливого стану, тобто зумовлення тимчасової або постійної ремісії хворобливого стану або його клінічних симптомів. "Попередження" хворобливого стану включає зумовлення відсутності розвитку клінічних симптомів хворобливого стану в суб'єкта, який може бути схильний до хворобливого стану або піддаватися йому, але який ще не відчуває або в якого ще не виявляються симптоми хворобливого стану.
Термін "здійснення інгібування" або "інгібування", використовуваний у даному документі, відноситься до будь-якого позитивного ефекту, що виявляється, щодо розвитку або прогресування захворювання або стану. Такий позитивний ефект може включати затримку або попередження початку вияву щонайменше одного симптому або ознаки захворювання або стану, пом'якшення або забезпечення регресії симптому(симптомів) або ознаки(ознак) і уповільнення або попередження подальшого погіршення симптому(симптомів) або ознаки(ознак). "Хворобливий стан" означає будь-яке захворювання, порушення, стан, симптом або
Зо показання.
Термін "ефективна кількість" або "терапевтично ефективна кількість", використовуваний у даному документі, відноситься до кількості першої сполуки (наприклад, ліганду, який активує
ЕХВ), або фібрату, або гіполіпідемічного засобу, або статину, яка викликає короткочасний або тривалий терапевтичний ефект у разі введення відповідної дози окремо або в комбінації.
В одному варіанті здійснення ефективна кількість або терапевтично ефективна кількість першої сполуки (наприклад, ліганду, який активує ЕХА) викликає короткочасний або тривалий терапевтичний ефект у разі введення відповідної дози в комбінації щонайменше з одним фібратом. Даний ефект включає попередження, корекцію, інгібування або забезпечення регресії симптомів, ознак захворювання/стану (наприклад, фіброзу печінки, нирки або кишечника) і патологічного процесу, що лежить у його основі, а також пов'язаних із ним ускладнень, у будь- якій виявлюваній мірі. "Ефективна кількість" або "терапевтично ефективна кількість" буде варіювати залежно від першої сполуки, фібрату, гіполіпідемічного засобу, статину, захворювання та його важкості та віку, ваги і т. д. суб'єкта, лікування якого здійснюється.
Терапевтично ефективна кількість першої сполуки може бути складена разом з одним або декількома фібратами та необов'язково з одним або декількома фармацевтично прийнятними носіями для введення людині або тварині, що не є людиною. Відповідно, фармацевтичну композицію згідно з даним винаходом можна вводити, наприклад, за допомогою перорального, парентерального або місцевого шляхів із наданням ефективної кількості першої сполуки та фібрату(фібратів). В альтернативних варіантах здійснення композиції згідно з даним винаходом можна застосовувати для покриття або просочування медичного виробу, наприклад, стенту. "Фармакологічний ефект", як використовується в даному документі, охоплює ефекти, одержані в суб'єкта, за допомогою яких досягається передбачувана мета терапії. В одному варіанті здійснення фармакологічний ефект означає, що в суб'єкта, лікування якого здійснюється, має місце попередження, пом'якшення або зниження інтенсивності вияву первинних показань. Наприклад, фармакологічний ефект буде являти собою ефект, який приводить у результаті до попередження, пом'якшення або зниження інтенсивності вияву первинних показань у суб'єкта, лікування якого здійснюється. В іншому варіанті здійснення фармакологічний ефект означає, що в суб'єкта, лікування якого здійснюється, наявне попередження, пом'якшення або зниження інтенсивності вияву порушень або симптомів як бо первинних показань. Наприклад, фармакологічний ефект буде являти собою ефект, який приводить у результаті до попередження, пом'якшення або зниження інтенсивності вияву порушень або симптомів у суб'єкта, лікування якого здійснюється.
Слід розуміти, що ізомери, існування яких зумовлене наявністю асиметричних атомів вуглецю (наприклад, усі енантіомери та діастереомери), включені в обсяг даного винаходу, якщо не вказано інше. Такі ізомери можна одержати в практично чистій формі за допомогою класичних методик розділення та шляхом стереохімічно контрольованого синтезу. "Фармацевтична композиція" являє собою склад, що містить терапевтичні засоби, такі як перша сполука та гіполіпідемічний засіб, такий як фібрат, у формі, придатній для введення суб'єкту. В одному варіанті здійснення фармацевтична композиція знаходиться у вигляді нерозфасованої або стандартної лікарської форми. Може бути переважним складання композицій у вигляді стандартної лікарської форми для полегшення введення та забезпечення рівномірності дозування. Стандартна лікарська форма, як використовується в даному документі, відноситься до фізично окремих одиниць, придатних як одиничні дози для суб'єкта, лікування якого здійснюється; при цьому кожна одиниця містить попередньо визначену кількість активного реагенту, розраховану для одержання бажаного терапевтичного ефекту, спільно з необхідним фармацевтичним носієм. Технічні вимоги до стандартних лікарських форм згідно з даним винаходом продиктовані унікальними характеристиками активних засобів, а також конкретним терапевтичним ефектом, який повинен бути досягнутий, і обмеженнями, притаманними галузі приготування такого активного засобу для лікування індивідуумів, і безпосередньо залежать від них.
Термін "стандартна лікарська форма" відноситься до фізично окремих одиниць, придатних як одиничні дози для людей та інших ссавців, при цьому кожна одиниця містить попередньо визначену кількість активного матеріалу, розраховану для одержання бажаного терапевтичного ефекту, спільно з придатним фармацевтичним наповнювачем, описаним у даному документі.
Стандартна лікарська форма являє собою будь-яку з багатьох форм, у тому числі, наприклад, капсулу, пакет для ІМ-вливання, таблетку, одноциліндровий насос в аерозольному інгаляторі або флакон. Кількість першої сполуки або її фармацевтично прийнятної солі або кон'югату з амінокислотою у разовій дозі композиції являє собою ефективну кількість і варіює залежно від конкретного виду лікування, що розглядається, та/або
Зо гіполіпідемічного(гіполіпідемічних) засобу(засобів), застосовуваного(застосовуваних) для лікування. Фахівцеві в даній галузі буде зрозуміло, що іноді необхідно здійснювати стандартні зміни дози залежно від віку та стану пацієнта. Доза також буде залежати від шляху введення.
Передбачається велика кількість шляхів, у тому числі пероральний, внутрішньолегеневий, ректальний, парентеральний, трансдермальний, підшкірний, внутрішньовенний, внутрішньом'язовий, внутрішньочеревний, інгаляційний, трансбукальний, сублінгвальний, інтраплевральний, інтратекальний, інтраназальний тощо. Лікарські форми для місцевого або трансдермального введення сполуки згідно з даним винаходом включають порошки, спреї, мазі, пасти, креми, лосьйони, гелі, розчини, пластирі та засоби для інгаляції. В одному варіанті здійснення першу сполуку та/або гіполіпідемічний засіб змішують у стерильних умовах із фармацевтично прийнятним носієм і з будь-якими консервантами, буферами або розпилювальними речовинами, які є необхідними.
Термін "миттєва доза" відноситься до складів, які являють собою лікарські форми, які швидко диспергуються.
Термін "негайне вивільнення" визначається як вивільнення терапевтичного засобу (такого як перша сполука або гіполіпідемічний засіб) із лікарської форми за порівняно короткий період часу, як правило, до приблизно 60 хвилин. Термін "модифіковане вивільнення" визначається як такий, що включає відстрочене вивільнення, подовжене вивільнення та переривчасте вивільнення. Термін "переривчасте вивільнення" визначається як серія подій вивільнення лікарського засобу з лікарської форми. Термін "уповільнене вивільнення" або "подовжене вивільнення" визначається як безперервне вивільнення терапевтичного засобу з лікарської форми протягом тривалого періоду. "Суб'єкт" включає ссавців, наприклад, людей, тварин-компаньйонів (наприклад, собак, котів, птахів тощо), сільськогосподарських тварин (наприклад, корів, овець, свиней, коней, домашніх птахів тощо) і лабораторних тварин (наприклад, щурів, мишей, морських свинок, птахів тощо).
В одному варіанті здійснення суб'єкт являє собою людину. В одному аспекті суб'єкт являє собою особину жіночої статі. В одному аспекті суб'єкт являє собою особину чоловічої статі.
Використовувана в даному документі фраза "фармацевтично прийнятний" відноситься до таких сполук, матеріалів, композицій, носіїв та/або лікарських форм, які за результатами ретельної медичної оцінки є придатними для застосування в контакті з тканинами людей і бо тварин за відсутності надмірної токсичності, подразнення, алергічної реакції або іншої проблеми або ускладнення відповідно до логічного співвідношення користь/ризик. "Фармацевтично прийнятний носій або наповнювач" означає носій або наповнювач, який є застосовним в одержанні фармацевтичної композиції, яка загалом є безпечною, нетоксичною й ані з біологічного, ані з іншого погляду не є небажаною, і включає наповнювач, який є прийнятним для застосування у ветеринарії, а також для фармацевтичного застосування щодо людини. "тФармацевтично прийнятний наповнювач", як використовується в описі та формулі винаходу, включає як один, так і більше за один такий наповнювач.
Хоча можливо вводити першу сполуку безпосередньо без будь-якого складання, першу сполуку можна вводити у формі фармацевтичного складу, який містить фармацевтично прийнятний наповнювач. Даний склад можна вводити за допомогою багатьох шляхів, у тому числі перорального, трансбукального, ректального, інтраназального, трансдермального, підшкірного, внутрішньовенного, внутрішньом'язового та інтраназального.
В одному варіанті здійснення першу сполуку можна вводити трансдермально. Для трансдермального введення необхідний засіб трансдермальної доставки ("пластир"). Такі трансдермальні пластирі можна застосовувати для забезпечення безперервної або переривчастої інфузії сполуки згідно з даним винаходом у контрольованих кількостях.
Конструкція і застосування трансдермальних пластирів для доставки фармацевтичних засобів широко відомі з рівня техніки. Див., наприклад, патент США Мо 5023252. Такі пластирі можуть бути сконструйовані для безперервної, пульсуючої доставки фармацевтичних засобів або доставки фармацевтичних засобів у міру необхідності.
В одному варіанті здійснення фармацевтична композиція згідно з даним винаходом пристосована для трансбукального та/або сублінгвального або назального введення. У даному варіанті здійснення представлено введення першої сполуки таким чином, що це дозволяє уникнути ускладнень із боку шлунка, таких як ефект першого проходження через шлункову систему та/або через печінку. Цей спосіб введення також може зумовлювати зменшення часу всмоктування, при цьому із забезпеченням більш швидкого початку вияву терапевтичних корисних ефектів.
Першу сполуку можна вводити в межах широкого діапазону доз. Наприклад, денні дози зазвичай знаходяться в діапазоні від приблизно 0,0001 до приблизно 30 мг/кг ваги тіла. Під час лікування дорослих людей можна використовувати діапазон від приблизно 0,1 до приблизно 15 мг/кг/день у вигляді однократної дози або розділеної дози. В одному варіанті здійснення склад містить від приблизно 0,1 мг до приблизно 1500 мг першої сполуки. В іншому варіанті здійснення склад містить від приблизно 1 мг до приблизно 100 мг першої сполуки. В іншому варіанті здійснення склад містить від приблизно 1 мг до приблизно 50 мг першої сполуки.
В іншому варіанті здійснення склад містить від приблизно 1 мг до приблизно 30 мг першої сполуки. В іншому варіанті здійснення склад містить від приблизно 4 мг до приблизно 26 мг першої сполуки. В іншому варіанті здійснення склад містить від приблизно 5 мг до приблизно 25 мг першої сполуки. Однак буде зрозуміло, що фактично кількість першої сполуки, що вводиться, буде визначатися лікарем із урахуванням відповідних обставин, у тому числі стану, який підлягає лікуванню, вибраного шляху введення, форми першої сполуки, що вводиться, гіполіпідемічного(гіполіпідемічних) засобу(засобів), що вводиться(вводяться), віку, ваги та відповіді окремого пацієнта, а також важкості симптомів пацієнта. Отже, вищевказані діапазони доз не призначені для обмеження обсягу даного винаходу будь-яким чином. У деяких випадках рівні дози, більш низькі, ніж нижня межа вищевказаного діапазону, можуть бути більш ніж достатніми, при цьому в інших випадках, як і раніше, можуть використовуватися більш високі дози без зумовлення будь-якого згубного побічного ефекту, за умови, що такі більш високі дози спочатку розділяють на декілька менших доз для введення протягом дня. "Фіброз" відноситься до стану, що передбачає формування надмірної кількості грубоволокнистої сполучної тканини, наприклад рубцевої тканини, в тканині або органі. Таке утворення рубцевої тканини може відбуватися у відповідь на інфекцію, запалення або пошкодження органа внаслідок захворювання, травми, хімічної токсичної дії тощо. Фіброз може розвиватися у багатьох різноманітних тканинах і органах, у тому числі печінці, нирці, кишечнику, легені, серці і т. д.
Як використовується в даному документі, "холестатичний стан" відноситься до будь-якого захворювання або стану, за якого погіршується або блокується виведення жовчі з печінки, що може бути наявним у печінці або в жовчних протоках. Внутрішньопечінковий холестаз і зовнішньопечінковий холестаз являють собою два типи холестатичних станів.
Внутрішньопечінковий холестаз (який наявний усередині печінки) найбільш часто спостерігається за первинного біліарного цирозу, первинного склерозивного холангіту, сепсису бо (генералізованої інфекції), гострого алкогольного гепатиту, токсичної дії лікарських засобів,
повного парентерального харчування (що подається внутрішньовенно), злоякісного новоутворення, муковісцидозу, біліарної атрезії та вагітності. Зовнішньопечінковий холестаз (який наявний зовні печінки) може бути спричинений пухлинами, звуженням каналів, кістами, дивертикулами жовчних протоків, утворенням каменів у загальній жовчовивідній протоці, панкреатитом, пухлиною або псевдокістою підшлункової залози і здавлюванням унаслідок наявності об'ємного утворення або пухлини в прилеглому органі.
Клінічні симптоми та ознаки холестатичного стану включають: сверблячку (свербіж), стомлюваність, жовтушні шкіру або очі, нездатність до перетравлювання деяких видів їжі, нудоту, блювання, бліді випорожнення, темну сечу та біль у животі у ділянці правого верхнього квадранта. Щодо пацієнта з холестатичним станом можна проводити діагностику та здійснювати наступний нагляд у клінічних умовах із використанням набору стандартних клінічних лабораторних тестів, у тому числі вимірювання рівнів лужної фосфатази, у- глутамілтранспептидази (СТ), 5'-нуклеотидази, білірубіну, жовчних кислот і холестерину в сироватці крові пацієнта. Як правило, у пацієнта діагностують наявність холестатичного стану у випадку, якщо рівні всіх трьох діагностичних маркерів, лужної фосфатази, СОТ і 5- нуклеотидази, в сироватці крові вважаються аномально підвищеними. Нормальний рівень цих маркерів у сироватці крові може деякою мірою варіювати серед різноманітних лабораторій і серед різноманітних процедур залежно від протоколу випробувань. Таким чином, лікар буде здатний визначити з урахуванням конкретної лабораторії та процедури тестування, яким є аномально підвищений рівень у крові для кожного з маркерів. Наприклад, пацієнт, що страждає від холестатичного стану, як правило, має більше за приблизно 125 МО/л лужної фосфатази, більше за приблизно 65 МО/л (21 і більше за приблизно 17 МО/л 5'--чуклеотидази у крові.
Зважаючи на варіабельність рівня маркерів у сироватці крові, холестатичний стан можна діагностувати на підставі аномальних рівнів цих трьох маркерів додатково щонайменше до одного із симптомів, згаданих вище, таких як сверблячка (свербіж).
Термін "первинний біліарний цироз", який часто скорочується як РВС, являє собою аутоїмунне захворювання печінки, для якого є характерним руйнування, що повільно прогресує, малих жовчних протоків печінки під час ураження внутрішньодолькових протоків (канальців
Герінга) на ранній стадії захворювання. Якщо ці протоки уражені, то жовч накопичується в
Зо печінці (холестаз) і з плином часу призводить до ураження тканини. Це може призводити до рубцювання, фіброзу та цирозу. Первинний біліарний цироз характеризується руйнуванням міждолькових жовчних протоків. Гістопатологічні спостереження первинного біліарного цирозу включають: запалення жовчних протоків, що характеризуються наявністю інтраепітеліальних лімфоцитів, і перидуктальні епітеліоїдні численні гранулеми. Існує 4 стадії РВО.
Стадія 1 - портальна стадія. Тріади нормального розміру; портальне запалення, незначне ураження жовчних протоків. На цій стадії часто виявляються гранулеми.
Стадія 2 - перипортальна стадія. Збільшені тріади; перипортальний фіброз та/або запалення. Як правило, ця стадія характеризується спостереженням проліферації малих жовчних протоків.
Стадія З - стадія перегородок. Активні та/або пасивні фіброзні перегородки.
Стадія 4 - біліарний цироз. Присутні вузлики у вигляді гірлянд.
Термін "первинний склерозивний холангіт" (РОС) являє собою захворювання жовчних протоків, яке спричиняє запалення і наступне порушення прохідності жовчних протоків як на внутрішньопечінковому (всередині печінки), так і на зовнішньопечінковому (зовні печінки) рівні.
Запалення перешкоджає потоку жовчі в кишечник, що в підсумку може призвести до цирозу печінки, печінкової недостатності та раку печінки.
Термін "неалкогольний стеатогепатит" (МА5Н) являє собою запалення печінки, спричинене накопиченням жиру в печінці. У деяких людей накопичення жиру спричиняє запалення печінки.
Унаслідок запалення печінка не функціонує так добре, як повинна. МА5Н може посилитися і спричинити рубцювання печінки, що призводить до цирозу. МАН є аналогічним виду захворювання печінки, що спричиняється тривалим важким пияцтвом. Однак МА5ЗН наявний у людей, які не зловживають алкоголем.
Термін "орган" відноситься до диференційованої структури (як у серці, легені, нирці, печінці і т. д.), що складається з клітин і тканин і що виконує деяку певну функцію в організмі. Цей термін також охоплює частини тіла, що виконують функцію або взаємодіють у діяльності (наприклад, око і пов'язані з ним структури, які утворюють органи зору). Термін "орган" додатково охоплює будь-яку часткову структуру з диференційованих клітин і тканин, яка потенційно здатна розвинутися в повну структуру (наприклад, частку або зріз печінки).
Усі публікації й патентні документи, цитовані в даному документі, включені в даний документ 60 за допомогою посилання, як якби кожна така публікація або документ були конкретно та окремо вказані як включені в даний документ за допомогою посилання. Цитування публікацій і патентних документів не передбачає визнання того, що будь-який із них має стосунок до попереднього рівня техніки, а також не є будь-яким визнанням щодо їхнього вмісту або дати публікації. Після того як даний винахід був описаний тут шляхом письмового опису, фахівцям у даній галузі буде зрозуміло, що даний винахід може бути здійснений на практиці в безлічі варіантів здійснення і що опис і приклади, представлені в даному документі, призначені для ілюстрації, а не для обмеження наступної формули винаходу.
У даному описі форми однини також включають форми множини, якщо в контексті чітко не вказано інше. Якщо не визначено інше, всі технічні та наукові терміни, що використовуються в даному документі, мають таке ж значення, яке зазвичай є зрозумілим для фахівця в галузі техніки, до якої належить даний винахід. У випадку протиріч даний опис буде мати переважну силу. Усі відсоткові вмісти та співвідношення, застосовувані в даному документі, якщо не вказано інше, наведені за вагою.
Приклади.
Приклад 1. Модель лігування жовчної протоки (ВО).
Цей експеримент здійснювали для оцінки ефектів ОСА і аторвастатину окремо та в комбінації щодо фіброзу, індукованого лігуванням загальної жовчної протоки в мишей.
Тварини, умови утримання та раціон.
Самців мишей С57ВІ /6 (у віці б тижнів) одержували від дарап 5І С. Тварин утримували в спеціальному приміщенні за відсутності патогенів у контрольованих умовах температури (2312 "С), вологості (45-10 Ус), освітлення (12-годинні цикли штучного світла й темряви; світло з 8:00 до 20:00) і повітрообміну (кратність повітрообміну: більше від 40 разів/годину).
В експериментальній кімнаті підтримували високий тиск (20:24 Па) для запобігання забрудненню приміщення. Тварин утримували в КМ-600 (Маїзите беїзаКкиб5нпо, Японія) за не більш ніж 6 мишей у кожній клітці. Як підстилку застосовували стерилізований Рарег-СІвап (Чарап 51 С), який замінювали один раз на тиждень. Протягом З тижнів перед днем хірургічної операції в необмеженій кількості надавали стерилізований твердий раціон із високим умістом жирів (НЕО) і воду.
Групи обробки.
Зо Група 1: імітація.
Мишам із імітацією операції (п-8) перорально вводили середовище (0,5 95 СМС) в об'ємі 5 мл/кг один раз на день із дня 0 по день 6 після хірургічної операції ВОЇ. Група 2: ВО - середовище
Мишам після операції ВОЇ (п-12) перорально вводили середовище (0,5 95 СМС) в об'ємі 5 мл/кг один раз на день із дня 0 по день 6 після хірургічної операції ВО. Група 3: ВО -ОСА
Мишам після операції ВО (пП-12) перорально вводили середовище, доповнене ОСА в дозі 5 мг/кг, один раз на день із дня 0 по день 6 після хірургічної операції ВОЇ.
Група 4: ВОЇ -аторвастатин.
Мишам після операції ВОЇ (п-12) перорально вводили середовище, доповнене аторвастатином в дозі 10 мг/кг, один раз на день із дня 0 по день 6 після хірургічної операції
ВО.
Група 5: ОСА-ВОЇ -аторвастатин.
Мишам після операції ВО (пП-12) перорально вводили середовище, доповнене ОСА в дозі 5 мг/кг і аторвастатином в дозі 10 мг/кг, один раз на день із дня 0 по день 6 після хірургічної операції ВОЇ.
Хірургічна операція лігування жовчної протоки.
Хірургічну операцію лігування жовчної протоки здійснювали в день 0. Холестаз, який із плином часу призводить до фіброзу печінки, формували у мишей шляхом лігування загальної жовчної протоки в умовах анестезії пентобарбіталом. Мишей ділили на дві операційні групи на підставі їхньої ваги перед днем хірургічної операції. Після збривання шерсті розкривали черевну порожнину і двічі лігували загальну жовчну протоку за допомогою хірургічного шовку 5-0 ї між лігатурами розрізали загальну жовчну протоку. Черевну порожнину та шкіру закривали за допомогою швів. Мишей переносили в чисту клітку (клітку для відпочинку) для відновлення після анестезії. Мишей з імітацією оперували аналогічно іншим групам, але жовчну протоку не лігували.
Моніторинг і умертвіння тварин.
Щоденно відстежували життєздатність, клінічні ознаки та поведінку. Протягом періоду обробки щоденно реєстрували вагу тіла. Протягом періоду обробки два рази на тиждень вимірювали споживання їжі на клітку. У день б тварин умертвляли кровопусканням шляхом бо прямої пункції серця в умовах етерної анестезії (М/ако Риге Спетісаї! Іпдивійієв).
ПГістологічний аналіз.
Для візуалізації відкладання колагену зрізи лівих латеральних секторів печінки, фіксовані в рідині Буена, забарвлювали за допомогою розчину пікросіріусу червоного (УМаїдеск, Німеччина).
Для кількісного аналізу ділянки фіброзу за допомогою цифрового фотоапарата (ОБЕС295; І віса,
Німеччина) під час 100-кратного збільшення захоплювали світлопольні зображення зрізів, забарвлених сіріусом червоним, навколо центральної вени і позитивні ділянки в 5 полях/зріз вимірювали за допомогою програмного забезпечення Ітаде./ (Національний інститут здоров'я,
США). Статистичні аналізи здійснювали за допомогою програмного забезпечення Ргізт 6 (СтарипРайд 5оймаге, Іпс., США).
Результати.
Гістопатологічні аналізи здійснювали на зрізах печінки (згідно зі стандартними способами) шляхом забарвлювання сіріусом червоним для визначення відсоткової величини ділянки фіброзу. Ілюстративні мікрофотографії зрізів печінки, забарвлених сіріусом червоним, показані на фігурах ТА-1Е. Група ВОЇ-середовище продемонструвала значне збільшення ділянки, позитивної за сіріусом червоним, порівняно з групою з імітацією ВО. Як вказано в таблиці 1 і на фігурі 2, група ВОЇ-ОСАжаторвастатин продемонструвала значне зменшення ділянки, позитивної за сіріусом червоним, порівняно з групою ВОЇ -середовище.
Таблиця 1 значення х 50 п-8 п-11 п-12 п-12 п-12 сіріусом червоним (95) р-е0,05
Результати в таблиці 1 вказують, що комбінація ОСА та аторвастатину значно знижувала інтенсивність виявів фіброзу.
Приклад 2. МА5Н, індукований раціоном, у мишей АРОЕ"ЗІ відеп.СЕТР
Цей експеримент здійснювали для оцінювання ефектів ОСА і фенофібрату окремо або в комбінації щодо розвитку МА5Н та фіброзу печінки, індукованих раціоном, у трансгенних мишей
АРОЕЄЕ"ЗІ єїдеп"СЕТР. Визначення профілю експресії генів печінки та наступний аналіз метаболічних шляхів здійснювали, щоб визначити, чи регулює комбінація нові гени, які не регулюються будь-яким із монотерапевтичних засобів лікування, талабо чи регулює вона сильніше гени, на які також впливає монотерапія.
Тварини, умови утримання та раціон.
Одержували самців трансгенних мишей АРОЕ"ЗІ відеп.СЕТР (у віці 9-21 тижня) і утримували по 2-5 мишей у клітці. Мишам давали раціон із високим умістом жирів, що містив 24 95 свинячого
Зо жиру і 1 Фо (вага/вага) холестерину. Підготовчий період становив 15 тижнів на раціоні з високим умістом жирів. У тиждень 16 мишей розподіляли на підставі віку, ваги тіла, рівня холестерину і тригліцеридів у плазмі крові після 4 годин голодування.
Групи обробки.
Група 1: еталонна група, що одержала НЕС перед початком обробки
Мишам (п-15) давали раціон із високим умістом жирів протягом підготовчого періоду в тижні 0-14.
Група 2: контрольна група, що одержала НЕС
Мишам (п-:15) давали раціон із високим умістом жирів у тижні 0-24.
Група 3: НЕС-ОСА
Мишам (п-15) давали раціон із високим умістом жирів, доповнений ОСА у дозі 10 мг/кг один раз на день, у тижні 16-24.
Група 4: НЕС ж низькодозовий фенофібрат
Мишам (п-15) давали раціон із високим умістом жирів, доповнений фенофібратом у дозі 10 мг/кг один раз на день, у тижні 16-24.
Група 5: НЕС ж високодозовий фенофібрат
Мишам (п-15) давали раціон із високим умістом жирів, доповнений фенофібратом у дозі 40 мг/кг один раз на день, у тижні 16-24.
Група 6: НЕС-ОСА «з низькодозовий фенофібрат
Мишам (п-15) давали раціон із високим умістом жирів, доповнений ОСА в дозі 10 мг/кг один раз на день і фенофібратом у дозі 10 мг/кг один раз на день, у тижні 16-24.
Група 7: НЕС-ОСА «з високодозовий фенофібрат
Мишам (п-15) давали раціон із високим умістом жирів, доповнений ОСА в дозі 10 мг/кг один раз на день і фенофібратом у дозі 40 мг/кг один раз на день, у тижні 16-24.
Група 8: контрольна група, що одержала корм Мишам (п-8) давали корм у тижні 0-24.
План дослідження.
Мишам давали раціон на основі корму з високим умістом жирів (НЕС) протягом 14 тижнів.
Через 15 тижнів на раціоні на основі НЕС мишей на НЕС розподіляли по 7 групах на підставі віку, ваги тіла, рівня холестерину і тригліцеридів у плазмі крові після 4 годин голодування.
Мишей обробляли ОСА і фенофібратом окремо або в комбінації починаючи з тижня 15 і умертвляли на тиждень 25 у стані не натщесерце. За один тиждень до умертвіння мишей мітили за допомогою 020 за допомогою і.р. ін'єкції болюсної дози 020 і наступного додавання 4 95 020 у питну воду. Плазму крові (ЕОТА) одержували шляхом пункції серця та зберігали за - 7076. Печінку зважували та відокремлювали 4 фрагменти печінки: 1 фрагмент (із середньої частки) фіксували в 10 95 формаліні (для гістологічного аналізу МА5Н і фіброзу) і З фрагменти (з лівої частки) миттєво заморожували в рідкому М2 та зберігали окремо за -70 "С.
Бальна оцінка запалення печінки.
Запалення є ключовою ознакою МА5ЗН. Запалення класифікували відповідно до процедури за Гіапа єї аї., РіохОпе 2014 ес, 9(12) і оцінювали в балах за допомогою кількісного аналізу кількості накопичень запальних клітин. Зокрема, рівень запалення оцінювали шляхом підрахунку кількості осередків запалення на поле із застосуванням збільшення 100 х (розмір поля зору 3,1 мм; середнє значення для п'яти різних полів). Результати. Короткий опис ефектів комбінації ОСА -/- фенофібрат щодо запалення в мишей АРОЕ"З3-Ї відеп. СЕТР
Досліджували ефекти 10 мг/кг ОСА окремо та в комбінації з фенофібратом (10 ї 40 мг/кг) щодо запалення в мишей АРОЕ"З-Ї відеп.СЕТР на раціоні, що сприяє розвитку МАЗН. Після 10 тижнів уведення лікарського засобу за низької дози ані ОСА (10 мг/кг), ані фенофібрат (10 мг/кг) не забезпечували зниження кількості осередків із запальними клітинами (фігури ЗА Її
ЗВ і таблиця 2). Навпаки, дана комбінація забезпечувала значне зменшення запалення порівняно з контрольною групою, що одержала середовище, а також із кожною групою монотерапії. Більш висока доза фенофібрату (40 мг/кг/'день) також забезпечувала значне зниження інтенсивності запалення порівняно з представниками контрольної групи, що одержали
Зо середовище. У комбінації з ОСА жодних додаткових протизапальних ефектів не спостерігалось, оскільки висока доза фенофібрату сама по собі виявляла ефект, близький до максимального.
Таким чином, під час використання комбінації ОСА т низькодозовий фенофібрат спостерігалось значне зниження інтенсивності запалення (-63 95). Крім того, спостерігалось значне зниження інтенсивності під час використання високодозового фенофібрату (-74 95) і схоже зниження інтенсивності під час використання комбінації з ОСА (-79 95). Див. таблицю 2 і фігури ЗА і ЗВ.
Таблиця 2 (Мо осередків із запальними клітинами)
Результати в таблиці 2 дозволяють припустити, що ефективність комбінації ОСА та високої дози фенофібрату зумовлена високою дозою фенофібрату та досягає верхньої межі за її рахунок.
Виділення та секвенування РНК.
Екстракцію нуклеїнових кислот здійснювали, як докладно описано раніше (Мег5сПпигеп еї аї., 2014). Коротко кажучи, загальну РНК екстрагували з окремих зразків печінки за допомогою скляних гранул і ВМА?ої (Сатрго 5сіепійіс, Венендал, Нідерланди). Концентрацію та якість РНК визначали за допомогою Егадтепі Апаїугег (Адмапсей Апаїуїїса! Тесппоїодієх, США), а також набору АМА 6000 Мапо для лабораторії на чипі та Віоапаіулег 2100 (Аадійепі ТесНнпоіодіев,
Амстелвен, Нідерланди). Усі зразки відповідали вимогам якості та застосовувались у процедурі секвенування РНК.
Для обробки зразків застосовували набір для одержання спрямованих бібліотек РНК
МЕВМехі Опйга для Шитіпа. Одержання зразка здійснювали відповідно до протоколу "МЕВМехі
Ма Оігесіопа! АМА Гіргагу Ргер Кії ог Шитіпа" (МЕВ Ме Е74205/Л). Коротко кажучи, мРНК виділяли із загальної РНК із застосуванням магнітних гранул із оліго-ЯТ. Після фрагментації
МРНК здійснювали синтез кКДНК. Це застосовували для лігування адаптерів для секвенування та ПЛР-ампліфікації одержаного продукту. Якість і вихід після одержання зразка вимірювали за допомогою Егтадтепі Апаїугег (Адмапсей Апаїуїїса! Тесппоіодіеєх, США). Розмір одержаних продуктів відповідав очікуваному розподілу за розміром (широкий пік від 300 до 500 п.о.).
Кластеризацію та секвенування ДНК із застосуванням ПШитіпа Мехібед 2500 здійснювали згідно з протоколами виробника. Дані генерували із застосуванням протоколу секвенування за принципом однокінцевого читання з одержанням приблизно 15 мільйонів ридів на зразок і 75 п. о. на рид. Аналіз зображень, розпізнавання основ і перевірку якості здійснювали за допомогою конвеєра для аналізу даних ВАТА м2.4.11 для Шитіпа для генерування первинних даних (файлів ".Тавід).
Риди картували на еталонну послідовність СНАСтЗ8.р3 Мив тивсціи5 за допомогою вирівнювача коротких ридів на основі перетворення Берроуза-Вілера. Використовували показник незбігу за замовчуванням, що дорівнює 2 95 (З незбіги на рид із 150 основ). На підставі місць розташування картованих ридів у файлах вирівнювання (файлах ".рат) була визначена частота того, як часто рид картувався на транскрипт. Результати підрахунку зберігали у файлах підрахунку, які слугували як вихідні дані для наступного аналізу диференційної експресії шляхом секвенування мРНК. Результати підрахунку для ридів завантажували в пакет ОЕ5еа, пакет програм обробки статистичних даних на платформі Я. ОЕбед був спеціально розроблений для нормалізації даних секвенування РНК для різних зразків і пошуку диференційно експресованих генів серед двох станів за даними секвенування РНК для оцінки взаємозв'язку між середнім значенням і дисперсією для кожного гена (Апаегз сеї аї., 2013). Крім того, він дозволяє легко включати коефіцієнти масштабування в статистичний тест.
Диференційно експресовані гени ідентифікували із застосуванням порога значущості Р«О,01 і гени застосовували як вихідні дані для аналізу метаболічних шляхів за допомогою пакета
Зо програм Іпдепийу Раїпжау Апаїувів (ІРА) (доступного за станом на 2016 р.).
Аналіз розташованих вище регуляторів здійснювали за допомогою програмного забезпечення ІРА (Ктатег еї аї!., 2014). У цьому аналізі визначають стан активації факторів транскрипції на підставі спостережуваної диференційної експресії генів. У результаті цього одержують Р-значення перекривання і 2-оцінку активації за кожним фактором транскрипції в інформаційній базі даних ІРА. Р-значення перекривання вказує на значущість перекривання між відомими цільовими генами факторів транскрипції і диференційно експресованими генами, вимірювання яких здійснюють в експерименті. 7-оцінка активації вказує на активацію (позитивна 2-оцінка) або інгібування (негативна 727- оцінка) певного фактора транскрипції. 2-оцінка активації «-2 або »2 вказує на значуще інгібування або активацію метаболічного шляху або процесу.
Результати застосування омік.
Секвенування нового покоління здійснювали на зразках мРНК печінки оброблених мишей для одержання уявлення про механізми, що лежать в основі, та метаболічні шляхи. Два аналізи здійснювали для одержання уявлення про механізми, що лежать в основі, та метаболічні шляхи.
По-перше, аналіз представленості канонічних метаболічних шляхів виявив, що ОСА регулювала декілька запальних процесів (фігура бА). На фігурі графічно представлений кожен метаболічний шлях залежно від -Іо4 р-значення (для довідки: перетворене значення для р-е0,05 становить 1,3, для р«0,0001 становить 4, для р«0,000005 становить 5,3 і т. д.). Метаболічні шляхи, регульовані ОСА в режимі монотерапії, були пов'язані з передачею сигналу в Т- і В- клітинах, передачею сигналу, що активує екстравазацію лейкоцитів, передачею сигналу в природних клітинах-кілерах і т. д. Низька доза фенофібрату не виявляє ефект щодо цих метаболічних шляхів. У тих випадках, коли ОСА комбінували з низькою дозою фенофібрату, для деяких із тих самих метаболічних шляхів спостерігалась сильна регуляція (у випадку передачі сигналу за допомогою ІбО5-їСбО5БІ у Т-клітинах-хелперах, передачі сигналу, що активує екстравазацію лейкоцитів, патерн-розпізнавальних рецепторів, фагоцитозу, опосередкованого ЕС-рецепторами, у макрофагах і утворення фагосом). Крім того, інші метаболічні шляхи (наприклад, І і ІЇ шляхи біосинтезу холестерину, ВД-окиснення жирних кислот), регуляція яких будь-яким із засобів окремо була незначною, регулювались комбінацією (фігура 6В). Як і у випадку з бо гістологічними даними, висока доза фенофібрату виявляла стійкий ефект щодо цих метаболічних шляхів, який, однак, не посилювався під час спільного введення з ОСА.
Більш докладний аналіз здійснювали щодо метаболічних шляхів, що беруть участь у передачі сигналу, який активує екстравазацію лейкоцитів. Екстравазація лейкоцитів має суттєве значення в патофізіологічних процесах під час МАН (й інших захворювань). Ці процеси включають міграцію Т-лімфоцитів для імунного нагляду, залучення активованих лімфоцитів і гранулоцитів під час гострих і хронічних запальних реакцій, а також хомінг і мобілізацію гемопоетичних клітин-попередників. Ефекти утримання мишей на раціоні з високим умістом жирів із дослідження ілюструють ці процеси, за яких спостерігається значне підвищення та зниження експресії генів. У таблиці З описані ефекти раціону з високим умістом жирів щодо передачі сигналу, що активує екстравазацію лейкоцитів, у мишей, утримуваних на раціоні з високим умістом жирів, порівняно з мишами, утримуваними на стандартному кормі, а також ефекти комбінованої обробки порівняно з раціоном із високим умістом жирів.
Таблиця З
Значна регуляція Значна "гуляц регуляція раціоном, що ми . комбінацією
Повна(повні) . сприяє :
Ген Передбачена функція порівняно з назва(назви) розвитку :
МАЄН раціоном, що порівняно З сприяє розвитку МА5Н кормом
Основний сіалоглікопротеїн,
Кластер розташований на поверхні
Сраз диференціювання 43, | Т-лімфоцитів, моноцитів, Ї 3 або лейкосіалін гранулоцитів і деяких
В- лімфоцитів
Глікопротеїн клітинної соай Кластер поверхні, що бере участь у х і диференціювання 44 |міжклітинних взаємодіях, адгезії та міграції клітин
Надає клітинам здатність до гемофільного прилипання та
СсОоНнь Кадгерин 5, або СО144| контролює зчеплення й Ї -» організацію міжклітинних контактів . Адаптерний білок
Регулятор кінази СТ10, даптер й У
СсАК внутрішньоклітинних Цй - або р38 сигнальних шляхах
Рецептор 4 хемокінів із Рецептор для хемотаксичної
СховА мотивом С-Х-С, або ц ! й . Їй 1 активності щодо лімфоцитів
СбОр184
Родина білків а.
Зшиває актинові філаменти з
ЕВНМ езрин/радиксин/моези 3 3
Н плазматичними мембранами
Білок обмін (о) Внутрішньоклітинні сенсори
ЕРАС у ур р і -з активується САМР для САМР
Внутрішньоклітинна | Глікопротеїн клітинної
ІСАМ-1 молекула адгезії 1, або| поверхні, який зв'язує Ї Цй 6бо54 інтегрини
ІТСАХ Альфа-субодиниця Велика субодиниця хомінг- х і інтегрину рецептора лімфоцитів а4р1
Інтегрин альфа-Ї, або | Адгезія клітин і передача
ІТОАЇ. Ї 3
СОТТА костимулюючого сигналу
Інтегрин альфа-М, або | Регулює адгезію та міграцію
ІТадм . - Їй ІЙ
СО118в лейкоцитів
Зо
Таблиця З (продовження)
Значна Значна регуляція . раціоном, що омбінацією г Повна(повні) . сприяє : ен Передбачена функція порівняно з назва(назви) розвитку :
МАН, раціоном, що порівняно з сприяє кооМОМ розвитку МА5Н
Інтегрини беруть участь в ітеви Інтегрин бета-1, або адгезії клітин і передачі Щ сого сигналів, опосередкованій ІЙ - рецепторами клітинної поверхні
Інтегрини беруть участь в адгезії клітин і передачі
Ітава2 Сравин бета-2, або сигналів, опосередкованій 1 1 рецепторами клітинної поверхні
Адгезивний ліганд для
АМ2 Молекула адгезійних |взаємодії з великою кількістю х ех контактів 2, або СОЗ322 | типів імунних клітин і хомінгу лімфоцитів контактів З регулювання адгезії
Функціонально- Молекула адгезії на Т-
І ЕА-1 пов'язаний антиген клітинах, В-клітинах, - ІЙ лімфоцитів 1 макрофагах і нейтрофілах нейтрофілів 1 оксидази нейтрофілів нейтрофілів 2 оксидази нейтрофілів нейтрофілів 4 оксидази нейтрофілів
Ферменти, які транспортують електрони через плазматичну
МОХ МАОРН-оксидаза мембрану та забезпечують ; і утворення супероксидів і розташованих нижче активних форм кисню
Молекула адгезії т й й їй й й рансміграція лейкоцитів,
РЕСАМІ тромбоцитів ! . ангіогенез і активація Ї - ендотеліальних клітин, |. - або СОЗІ інтегринів
Член родини ферментів, що контролюють
РКО Протеїнкіназа С фосфорилування амінокислот - - серину та треоніну в інших білках
РІЗК являють собою родину споріднених ферментів, що
РІЗК РВ-кінази являють собою - ІЙ внутрішньоклітинні переносники сигналу
Таблиця З (продовження)
Значна Значна регуляція . раціоном, що Кт ионецію
Повна(повні) . сприяє лінац
Ген Передбачена функція порівняно з назва(назви) розвитку :
МАЄН раціоном, що порівняно з сприяє кооМОМ розвитку МА5Н
Каталізує утворення інозитол- 1,4,5-трифосфату та
РІС Фосфоліпаза С діацилгліцерину з - ІЙ фосфатиділінозитол-4,5- бісфосфату
Роль у переміщенні лейкоцитів під час запалення
Глікопротеїновий шляхом фіксації лейкоцитів на
РОЇ -1 . Їй 1 ліганд 1 Р-селектину |активованих тромбоцитах або ендотелії, що експресує селектини . - Регулює різноманітні клітинні
Споріднений Нав 2 х. події, у тому числі ріст,
Кас2 субстрат пОш . Їй ІЙ реорганізацію цитоскелету й ботулотоксину СЗ . с. активацію протеїнкіназ
Біло що вивільняє ад регилоє розситох
ВАЗ 1 |гуанілові нуклеотиди дірегу розвиток, Їй ІЙ гомеостаз і диференціювання
ВА5 . .
Т- і В- клітин динаміку актину
Білковий домен білків, що
ВпосСАР |ГТФази ВНО активують ГТФази - Цй
Білок 1, пов'язаний їз. | іти циклу, індуковані.
ЗРА-1 проліферацією, . циклу, Інду . Їй - - мітогенами, за аномальної індукованою сигналом що експресії
Міжклітинні взаємодії та взаємодії між клітинами та
Диференційний матриксом, може впливати на тТНУ-1 антиген тимоцитів 1, |розростання нейритів, Ї 3 або СрОО0 регенерацію нервів, апоптоз, метастазування, запалення та фіброз металопротеїназ металопротеїнази
Бере участь у
Фосфопротеїн, внутрішньоклітинних
М сигнальних шляхах, які
МАР стимульований шо Їй ІЙ регулюють взаємодії між вазодилататором Я й інтегринами та позаклітинним матриксом
Протоонкоген, що
МАУ УАМ опосередковує активацію В- х і лімфоцитів, індуковану антигеном
Таблиця З (продовження)
Значна регуляція Значна й регуляція . раціоном, що комбінацією
Ген Повна(повні) Передбачена функція сприяє порівняно з назва(назви) розвитку :
МАН, раціоном, що порівняно з сприяє розвитку МА5Н кормом й що. Адгезія лімфоцитів, судин, або СО106 я. . базофілів до ендотелію судин
Віскота-Олдрича лейкоцитів іп мімо
Трансміграція й екстравазація лейкоцитів через ендотелій відбувається за допомогою декількох окремих стадій, які включають перекочування лейкоцитів через ендотеліальні клітини, опосередковане нестійкими слабкими взаємодіями між молекулами адгезії. У результаті цього слабко зв'язані лейкоцити знаходяться в такій безпосередній близькості від ендотелію, що вони активуються хемотаксичними цитокінами, присутніми на апікальній поверхні ендотелію. Потім активовані лейкоцити поширюються і щільно прилипають до ендотелію, який утворює стикувальні структури, і в підсумку мігрують через міжклітинні щілини між ендотеліальними клітинами в тканину, що лежить нижче.
Уведення ОСА знижує експресію численних генів, що беруть участь у перебігу цього каскаду запалення в лейкоцитах (М/АР, Вас2, ВАЗОаВРІ, Мам, РКС, РІЗК, ЕВМ, ІТОСАЇ їі РБОИЇ -1), а також в ендотеліальних клітинах (МСАМ'І, РІЗК, ЕВМ, МОХ, СУВА, РКС, МСНТ і 2). Регуляція генів у цих метаболічних шляхах не була вираженою після введення низької дози фенофібрату окремо.
Під час комбінування ОСА із дозою фенофібрату, яка була неефективною в регулюванні цих метаболічних шляхів, тепер регулювались декілька додаткових генів, що вказувало на синергічний ефект. У лейкоцитах ці додаткові гени включали СО43, РОБИ -1, СХОВА4, ІТСАМ,
Ітаваг, Варії, ІТОА4. В ендотеліальних клітинах ці додаткові гени включали ІСАМІ, АпосіАР,
МАБР, МОЕ4, ІТаАМ, ІТаВаг, ІТОАЯ і ІСАМ-1.
Як відзначалось вище, висока доза фенофібрату виявляла численні ефекти щодо даного метаболічного шляху, які не посилювались під час спільного введення з ОСА. У всіх наступних аналізах увага була зосереджена на низькодозових монотерапевтичних засобах і комбінації (ОСА 10 мг/кг /- фенофібрат 10 мг/кг).
У другому аналізі порівнювали гени, диференційно регульовані низькодозовою комбінацією і кожним відповідним монотерапевтичним засобом. Він відрізняється від перших аналізів експресії генів (описаних вище), у яких увагу зосереджено на порівняннях щодо групи, що одержала середовище; в аналізі нижче кожен монотерапевтичний засіб порівнюється з комбінацією. На діаграмі Венна (фігура 7А) показано, що ОСА регулювала 109 унікальних генів,
Зо фенофібрат регулював 92 унікальних гени, і 6 генів регулювалися ними спільно. Комбінація регулювала 517 генів, що перекриваються з ОСА, 75 генів, що перекриваються з фенофібратом, і 5 генів регулювались спільно всіма з них. Слід відзначити, що комбінація регулювала загалом 912 унікальних генів. На наступній картині представленості метаболічних шляхів відзначені біологічні процеси, в яких беруть участь гени, регульовані комбінацією (фігура 7В).
Наступні аналізи метаболічних шляхів проводили в обох випадках щодо екстравазації лейкоцитів (наприклад, як указано вище), але цього разу порівняння проводили між комбінацією і кожним монотерапевтичним засобом. Щодо екстравазації лейкоцитів порівняння комбінації з кожним монотерапевтичним засобом виявили наявність ряду унікально регульованих генів, що відповідало спостережуваним посиленим протизапальним змінам, відзначеним шляхом гістологічного аналізу в мишей, що одержали лікування комбінацією (таблиця 4).
Таблиця 4
Комбінація Комбінація г Повна(повні) п б . оно З порівняно з ен назва(назви) ередбачена функція фенофі ратом ОСА у режимі у режим! монотерапії монотерапії
Глікопротеїн клітинної соай Кластер поверхні, що бере участь у і диференціювання 44 |міжклітинних взаємодіях, адгезії та міграції клітин
Рецептор 4 хемокінів із Рецептор для хемотаксичної
СховА мотивом С-Х-С, або ц рд . . І
СсО184 активності щодо лімфоцитів
Кодує легкий ланцюг
СУВА 1 Цитохром Б(-245) цитохрому Б(-245), який є 1 компонентом комплексу МОХ
Родина білків а.
ЕВМ езрин/радиксин/моези Зшиває актинові філаменти з і
Н плазматичними мембранами
Внутрішньоклітинна Глікопротеїн клітинної
ІСАМ-1 молекула адгезії 1, або | поверхні, який зв'язує Цй Цй 6бор54 інтегрини том ння ти 11 - і - ІЙ ІЙ інтегрин рецептора лімфоцитів а4р1 пох денне 10310
СОТТА костимулюючого сигналу
Інтегрин альфа-М, або | Регулює адгезію та міграцію пе Нв едо01
Інтегрини беруть участь в адгезії клітин і передачі
Ітава2 Сравин бета-2, або сигналів, опосередкованій 1 1 рецепторами клітинної поверхні
Функціонально- Молекула адгезії на Т-
І ЕА-1 пов'язаний антиген клітинах, В-клітинах, 3 3 лімфоцитів 1 макрофагах і нейтрофілах мее (Кооррнни: При 11 металопротеїназа 9 матриксу
СОДИ іні іній ННЯ НОГУ нейтрофілів 1 нейтрофілів
ССС інн ііійіінйнй ННЯ НИНІ нейтрофілів 2 нейтрофілів тен ел рренюнеяя 1 нейтрофілів 4 нейтрофілів
Ферменти, які транспортують електрони через плазматичну
МОХ МАОРН-оксидаза мембрану та забезпечують і утворення супероксидів і розташованих нижче активних форм кисню
Член родини ферментів, що контролюють
РКО Протеїнкіназа С фосфорилування амінокислот Цй серину та треоніну в інших білках
Таблиця 4 (продовження)
Комбінація Комбінація
Ген Повна(повні) Передбачена функція Королі порівняно з назва(назви) ред ункц ож ОСА у режимі ур - | монотерапії монотерапії
РІЗК являють собою родину споріднених ферментів, що
РІЗК РІЗ-кінази являють собою Цй Цй внутрішньоклітинні переносники сигналу
Каталізує утворення інозитол- 1,4,5-трифосфату та
РІ СО Фосфоліпаза С діацилгліцерину з Цй фосфатиділінозитол-4,5- бісфосфату
Роль у переміщенні лейкоцитів під час запалення шляхом
Глікопротеїновий фіксації лейкоцитів на
РБОИЇ 4-1 : ї 1 ліганд Її Р-селектину |активованих тромбоцитах або ендотелії, що експресує селектини . - Регулює різноманітні клітинні
Споріднений Нав 2 х. події, у тому числі ріст,
Насг субстрат еорганізацію цитоскелету й і ботулотоксину СЗ реорганізацію цито: У активацію протеїнкіназ
ВАР становить особливий
Білок 1, що активує інтерес, оскільки він, як було
Варта АР ГТтФазу ВАРІ показано, є антагоністом ВА5Іі Цй здатен пригнічувати трансформацію клітин . . Активує ЕІК/МАР-кіназний
Білок, що вивільняє каскад і регулює розвиток
ВАБОВРІ |гуанілові нуклеотиди ГУ. прощ ІЙ гомеостаз і диференціювання
ВА5 . .
Т- і В- клітин динаміку актину
Білковий домен білків, що
ВпоСАР | ГТтФази ВНО Білковий домен і ще металопротеїназ металопротеїнази
Бере участь у
Фосфопротеїн, внутрішньоклітинних
М сигнальних шляхах, які
МАР стимульований шо ІЙ регулюють взаємодії між вазодилататором Я й інтегринами та позаклітинним матриксом
Протоонкоген, що
МАУ УАМ опосередковує активацію В- і лімфоцитів, індуковану антигеном й що. Адгезія лімфоцитів, моноцитів,
МСАМІ о |Білок 1 адгезії клітин еозинофілів і базофілів до і судин, або СО106 . ендотелію судин
Білок синдрому Важливий для рухливості
МАБР - й пд І
Віскота-Олдрича лейкоцитів іп мімо
З урахуванням прогресування від запалення до фіброзу під час МА5Н і спостереження того,
що метаболічні шляхи, які беруть участь у розвитку фіброзу печінки, в Н5ОС, як виявляється, піддаються значній регуляції з боку комбінації, автори даного винаходу також вивчили метаболічні шляхи в НС. Порівняно з монотерапією ясно, що комбінація порівняно з фенофібратом окремо регулює більшу кількість генів, і комбінація порівняно з ОСА регулює меншу кількість генів. Інакше кажучи, щодо цих метаболічних шляхів, що беруть участь у розвитку фіброзу, очевидною є взаємодія між обома засобами, однак частина комбінації, що являє собою ОСА, може більш сильно керувати цими ефектами.
Пояснення та значущість.
Важливість активації ЕХА для попередження фіброзу та запалення продемонстрована на зразках печінки мишей, нокаутних за ЕХА, які характеризуються підвищеною експресією запальних генів (Кіт 2007) із віковим пошкодженням, що прогресує, і запаленням (Мапа 2007).
ОСА виявляє протизапальні властивості в клітинах Нерсіаг і первинних гепатоцитах миші, що відповідає цим повідомленням. Клітини Нерсг, попередньо оброблені ОСА, а потім піддані дії прозапальних стимулів, демонстрували 50 95 - 60 96 зниження рівнів мРНК, що кодує ТМЕР-а, індукції циклооксигенази-2 (СОХ-2) й експресії індукованої синтази оксиду азоту (МОБ), стимульованої ТМЕ-са. Аналогічно первинні гепатоцити, оброблені ОСА, характеризувалися послабленою індукцією (40 95- 50 95) експресії генів ІМО5 і моноцитарного хемоатрактантного білка 1 (МОР-1) у відповідь на прозапальний стимул (У/апд 2008). Ефекти ОСА щодо механізмів міграції клітин безпосередньо не вивчалися, однак ОСА інгібувала вироблення ЇМО5 або СОХ-2, індуковане 7-1рД, і усувала фармакологічно індуковану міграцію клітин гладких м'язів аорти щура (2007). Аналогічне інгібування утворення запальних інфільтратів за допомогою ОСА було продемонстровано в тканині кишечника у двох тваринних моделях запального захворювання кишечника (індукованого 055 і тринітробензолсульфоновою кислотою) (Садаї!еїа 2011) і в нирці в щурячій моделі цукрового діабету 1 типу (МУапуд 2010). Таким чином, спостереження посилених протизапальних ефектів ОСА дозволяє припустити, що зміни експресії генів під дією
ОСА в комбінації з фенофібратом можуть посилити інгібування запалення та міграції запальних клітин за ряду хворобливих станів.
Приклад 3. МА5Н, індукований раціоном, у мишей оБ/оБЬ із дефіцитом лептину.
Цей експеримент здійснювали для оцінювання ефекту 8 тижнів обробки ОСА та
Зо аторвастатином окремо та в комбінації щодо стадії фіброзу (стан перед біопсією порівняно зі станом після біопсії) у самців мишей ор/оБб із дефіцитом лептину з МАН.
Тварини, умови утримання та раціон.
Самців мишей Іереб/ ерсь (у віці 5 тижнів) купували в Чдапмієї, Франція. Під час періоду акліматизації й індукції раціоном мишей утримували в групах по п'ять на клітку у виготовлених на замовлення шафах із циклом чергування світла та темряви 12:12 (світло було ввімкнено з З години ночі до З години дня) в контрольованих температурних умовах (22:51 "С; відносна вологість 50-10 95). Протягом усього періоду індукції раціоном і дослідження в мишей був необмежений доступ до виготовленого на замовлення раціону, який сприяє розвитку МАБН (58189, 55пій, Німеччина) (40 95 жиру, 40 95 вуглеводів (20 95 фруктози) і 2 95 холестерину), або звичайного корму для гризунів (корму для оБ/об) (Айготіп 1324, Вгодаагдеп, Данія) та водопровідної води. Тварин утримували на раціоні загалом протягом 18 тижнів перед втручанням і утримували на раціоні протягом усього періоду дослідження. Тварин утримували окремо під час відновлення після операції та протягом усього періоду дослідження.
Групи обробки.
Група 1: І ере/ ерсг-МАБН, середовище.
Мишам (п-10) перорально вводили середовище (0,5 95 СМС) в об'ємі 5 мл/кг один раз на день у тижні 0-8.
Група 2: І ерб/ ерж-МАБН, ОСА.
Мишам (п-10) перорально вводили середовище, доповнене ОСА в дозі 30 мг/кг, один раз на день у тижні 0-8.
Група 3: І ерб/ ер-МАБН.
Мишам (п-11) перорально вводили середовище, доповнене аторвастатином у дозі 10 мг/кг, один раз на день у тижні 0-8.
Група 4: І ере/ ере-МАБН, ОСА «з аторвастатин.
Мишам (п-9) перорально вводили середовище, доповнене комбінацією ОСА в дозі 30 мг/кг і аторвастатину в дозі 30 мг/кг, один раз на день.
Розподіл у дослідження, стратифікована рандомізація та моніторинг вихідного рівня.
Через 15 тижнів індукції раціоном (за З тижні до початку дослідження) одержували біоптат бо печінки для оцінки прогресування фіброзу та стеатозу в печінці, а також для оцінювання стадії
Зб фіброзу печінки. На тиждень -1 здійснювали стратифіковану рандомізацію в групи обробки згідно зі стадією фіброзу печінки, бальною оцінкою стеатозу та вагою тіла.
Процедура перед біопсією.
У день операції мишей анестезували ізофлураном (2-3 95) у 100 95 кисні. Робили невеликий абдомінальний розріз по серединній лінії й відкривали ліву латеральну частку печінки.
Конусоподібний клиноподібний фрагмент тканини печінки («100 мг) відрізали від дистальної частини частки, зважували та фіксували в 4 95 параформальдегіді (РЕА) для гістологічного аналізу. Поверхню розрізу печінки негайно електрокоагулювали за допомогою біполярної коагуляції (апарат для електрохірургії ЕВВЕ МІО 100). Печінку повертали в черевну порожнину і черевну порожнину зашивали, а шкіру закривали за допомогою апаратів для накладання скобок. У день операції миші одержували теплий сольовий розчин (0,5 мл) для регідратації. Для відновлення після операції підшкірно вводили карпрофен (5 мг/мл - 0,01 мл/10 г) і енрофлоксацин (5 мг/мл - 1 мл/кг) у день операції та дні 1 і 2 після операції.
Попередній скринінг для оцінки рівня стеатозу та фіброзу в печінці.
Підготовка біоптату печінки для гістологічної оцінки. Після зберігання протягом ночі в 4 95
РЕА біоптати печінки просочували протягом ночі парафіном в автоматичному гістопроцесорі
Тівзие-ТЕК МІР від Мііе5 бсієпійіс і потім заливали в парафінові блоки. В один блок заливали біоптати від п'яти різних тварин. Потім блоки підрізали і на мікротомі Місгот НМЗ40Е (Тнегто
Зсіепійіс) відрізали два зрізи на З мкм (один для забарвлення сіріусом червоним і один для забарвлення НУЕ). Два блоки поміщали на одне предметне скло з одержанням загалом 10 біоптатів на предметне скло, що являють собою 10 різних тварин. Зрізи залишали висихати протягом ночі. Оцінювання стадії фіброзу для стратифікації й рандомізації у групи обробки здійснювали відповідно до описаних у загальних рисах у Ківїпег єї а. (2005) (див. нижче).
Вихідні й кінцеві біомаркери плазми крові.
Зразки крові для вимірювання рівнів тригліцеридів у плазмі крові не натщесерце (після їжі) одержували вранці (о 7-8 годині ранку) в початковий момент і у тиждень 8 обробки. Зразки крові збирали із хвостової вени (шляхом обрізання) у свідомому стані. Останню дозу лікарського засобу вводили за -- 18 годин до взяття зразків крові. Після взяття зразків крові мишей повторно годували.
Зо Виведення з експерименту та розтин.
Тварин виводили з експерименту у тиждень 8 у стані не натщесерце. Останню дозу лікарського засобу вводили за - 18 годин до виведення з експерименту, і тварини не одержували дозований лікарський засіб до виведення з експерименту. У тварин індукували анестезію за допомогою СО»/О2 і під час анестезії (ізофлураном) розкривали черевну порожнину та одержували серцеву кров для збирання кінцевої плазми крові. Під час розтину цільну печінку збирали та зважували. Біоптат лівої латеральної частки відрізали та фіксували в 4 95 РЕА для гістологічного та біохімічного аналізу. Середню частку розділяли на фрагменти та миттєво заморожували в рідкому азоті для біохімічного аналізу (ТО). Тканину печінки, що залишилася, потім фіксували в 4 95 РЕА для наступного необов'язкового гістологічного аналізу.
Обробка тканини печінки.
Біопсія перед дослідженням. Приблизно за три тижні до початку дослідження конусоподібний клиноподібний фрагмент тканини печінки (х- 100 мг) відрізали від дистальної частини лівої латеральної частки, зважували та негайно поміщали в 4 95 РЕА.
Кінцева тканина печінки. Після 8 тижнів обробки цільну печінку збирали, зважували і біоптат лівої латеральної частки печінки (їх 150-200 мг) відрізали та негайно поміщали в 4 95 РЕА.
Фрагменти середньої частки миттєво заморожували в кріопробірках (для секвенування РНК) (-- 100 мг) і в пробірках РазіРгер для визначення Та (-- 100 мг) і для визначення ТС (- 50 мг).
Фіксація, заливання й одержання зрізів для гістологічного аналізу. Після фіксації протягом ночі в 495 РЕА біоптати печінки просочували протягом ночі парафіном в автоматичному гістопроцесорі Тізвие-ТЕК МІР від Мііе5 Зсієпійіс і потім заливали в парафінові блоки. В один блок заливали біоптати від п'яти різних тварин. Блоки підрізали і на мікротомі Місгот НМЗ340ОЕ (Тнегто 5сіепійіс) відрізали два зрізи на З мкм на блок. По одному зрізу із двох різних блоків поміщали на одне предметне скло з одержанням загалом 10 біоптатів на предметне скло, як викладено в загальних рисах вище.
Стадія фіброзу.
Тканину з лівої латеральної частки печінки перед біопсією і після біопсії збирали для оцінки стадії фіброзу шляхом застосування клінічних критеріїв, викладених у загальних рисах Ківіпе" і співавторами (Оеєзідп апа маїїдайнйоп ої а Півіоіодіса! 5согіпуд зубівт ог попаїЇсопоїїс Тацу Імег дізеазе, Кієїпег еї а), Нераюіоду 41; 2005) і відтворених у таблиці 5 нижче. На фігурі 4 описаний 60 ефект ОСА та аторвастатину окремо та в комбінації щодо бальної оцінки фіброзу. Комбінація
ОСА та аторвастатину демонструє тенденцію до зниження бальної оцінки фіброзу порівняно із середовищем, хоча й незначущого (р-значення -0,09).
Таблиця 5
Фіброз///////Відсутнй/////177111111111111101111111СсСсС перипортальний перисинусоїдальний перисинусоїдальний портальний/перипортальний (Відсутній //777777711Ї1111111111111101111111111
Тригліцериди в плазмі крові.
Рівні тригліцеридів. 100 мкл крові збирали в пробірки з літій-гепарином. Плазму крові відокремлювали і зразки зберігали за -80 градусів за Цельсієм до аналізу. Рівні тригліцеридів вимірювали шляхом однократних визначень із використанням автоаналізатора Сора5 С-111 за допомогою комерційного набору (Босне Оіадпозіїсв, Німеччина) згідно з інструкціями виробника.
Як указано на фігурах 5А і 5В, комбінація ОСА та аторвастатину забезпечувала статистично значуще зниження рівнів тригліцеридів.
Приклад 4. Багатошарова культура гепатоцитів.
Цей експеримент здійснювали для оцінювання ефекту ОСА в комбінації з агоністом РРАВ або статином для визначення їхньої здатності до зміни синтезу колагену в гепатоцитах людини.
Реагенти та розчини.
Придатне середовище для культивування клітин включає середовище Веймаута МВ-752/1, середовище Хема Е12, ВРМІ 1640, середовище Ігла в модифікації Дульбекко, середовище
Вільямса Е, середовище Лейбовіца 15 і модифіковане середовище Чі. Колагеназу ІМ типу, колаген І типу, перкол, культуральне середовище та добавки, що додаються до культурального середовища (наприклад, сироватку крові, антибіотики, амінокислоти, гормони, такі як ОЕХ, інсулін і фактори росту), буфер для перфузії й інші розчини були комерційно доступними або одержаними з комерційно доступних матеріалів.
У багатошаровій культурі гепатоцитів можна застосовувати інші типи колагену (типи І-ІМ), ламінін, фібронектин і гепарансульфатумісні протеоглікани. Однак було показано, що колаген | і
ЇМ типу перевершував фібронектин і ламінін.
Виділення гепатоцитів.
Для виділення гепатоцитів використовують двостадійний спосіб перфузії колагеназою іп взйи.
Коротко кажучи, гепатоцити виділяють із самок щурів І емі5. Тварин анестезують. Печінку спочатку перфузують через ворітну вену іп зйй за допомогою буфера для перфузії. Перфузат
Зо будуть урівноважувати перед уведенням у печінку. Потім печінку перфузують колагеназою в буфері для перфузії. Потім печінку розрізають і переносять у льодяний буфер для перфузії.
Капсулу печінки відокремлюють і одержану суспензію клітин будуть фільтрувати. Клітинний осад збирають за допомогою центрифугування та ресуспендують. До суспензії додають перкол і гепатоцити відокремлюють із застосуванням методики центрифугування в градієнті густини перколу. Суміш центрифугують і клітинний осад двічі промивають середовищем.
Життєздатність гепатоцитів визначають за витісненням трипанового синього. Як альтернатива, замість свіжовиділених гепатоцитів можна застосовувати кріоконсервовані гепатоцити.
Багатошарова культура гепатоцитів.
Виділені гепатоцити культивують на покритих колагеном планшетах для культур тканин і підтримують у культуральному середовищі, доповненому сироваткою крові, пеніциліном, стрептоміцином, епідермальним фактором росту, інсуліном, глюкагоном і гідрокортизоном.
Гелеутворюючий розчин колагену одержують шляхом змішування розчину колагену І! типу і культурального середовища. Планшети для культур тканин покривають гелеутворюючим розчином та інкубують за 37 "С для забезпечення утворення гелю. Гепатоцити висівають за належної щільності і підтримують за 37" С. Культуральне середовище замінюють кожні
24 години.
Для багатошарової системи додатковий гелевий розчин колагену розподіляють по клітинах через 1 день культивування. Культуральне середовище обережно видаляють, щоб гарантувати рівномірне поширення другого шару колагенового гелю по всьому планшету. Культуральні планшети інкубують за 37 "С для забезпечення гелеутворення і прикріплення другого шару гелю до заміни середовища. Культуральне середовище змінюють щодня. Зразки середовища зберігають за -20 "С для додаткового аналізу.
Гепатоцити, що культивуються між шарами гелеподібного колагену, зберігають тривимірну кубічну форму і розподілення білків цитоскелету, подібне до спостережуваного іп мімо.
Оптимізація утворення мережі жовчних проточків.
Для оптимізації накопичення таурохолату та виведення жовчі в багатошаровій культурі гепатоцитів можна застосовувати певне культуральне середовище, таке як середовище
Вільямса Е і середовище Ігла в модифікації Дульбекко.
Тестовані препарати.
Агоніст ЕХЕ, призначений для дослідження, являє собою обетихолеву кислоту, також відому як "ОСА" і 6-етилхенодезоксихолева кислота (6-ЕСОСА).
Агоністи РРАН-альфа, призначені для дослідження, включають один або декілька з клофібрату, гемфіброзилу, ципрофібрату, безафібрату і фенофібрату.
Подвійний агоніст РРАВ-альфа/дельта являє собою 2-(2,6-диметил-4-І3-(4-(метилтіо)феніл|-
З оксо-1(Е)-пропеніл| феноксилі| -2-метилпропанову кислоту.
Агоніст РРАНб(дельта), призначений для дослідження, являє собою СМУ501516.
Статини (інгібітори НМаИ-СоА-редуктази), призначені для дослідження, включають аторвастатин (ліпітор), розувастатин (крестор) і симвастатин (зокор).
Приклад 5. Оцінювання ефектів введення тестованих препаратів окремо щодо ліпідних профілів
Оцінюють потенціал 5 тестованих препаратів, агоніста ЕХЕ, агоніста РРАВ-альфа, агоніста
РРАВ-дельта, подвійного агоніста РРАВ-альфа/дельта (або, як альтернатива, агоніста РРАВ- альфа і агоніста РРАВ-дельта разом) і статину для визначення здатності до зміни синтезу холестерину та ліпідного профілю в гепатоцитах людини. Зміни оцінюють у гепатоцитах людини
Зо в багатошаровій культурі (ЗСНН) після 72 годин дії тестованих препаратів у З різних концентраціях. Дозовані розчини одержують свіжими щодня в культуральному середовищі, і дозування в 5СНН відбувається щодня протягом З днів. Експеримент здійснюють у 24- лунковому форматі із застосуванням однієї (1) партії гепатоцитів людини Тгтапзропег Сепіеса м (М-1). Кожну умову тестування виконують у трьох (3) лунках з одержанням даних у трьох повторностях (виражених як середнє значення х середньоквадратичне відхилення). Планшети, оброблені розчинником- контролем, застосовують як контроль і оцінюють щодо функції на вихідному рівні. У кінці періоду тестування в окремі лунки додають внутрішній стандарт, після чого додають екстракційний реагент для визначення глобального ліпідного профілю. Зразки струшують протягом 1 години за кімнатної температури та центрифугують. Надосадову рідину випарюють до сухого стану в атмосфері азоту, ресуспендують і аналізують.
Визначення глобального ліпідного профілю здійснюють за допомогою надвисокоефективної рідинної хроматографії (ОРІ С) та М5 високої роздільної здатності. Екстракти зразків, одержані шляхом екстракції метил-трет-бутиловим етером, аналізують на приладі для ИШОРІС-М5 (спектрометрі іонної рухливості Зупарі С2 ОТОР) в режимі Е5І-- і ЕБІ- для охоплення широкого діапазону полярності та хімічного складу ліпідів. Спочатку ОРІ С застосовують для оцінювання ефектів сполук щодо широкого спектру (5000-8000) ліпідів, у тому числі декількох естерів холестерину. Колориметричний аналіз здійснюють для вимірювання загального рівня холестерину. За поширеністю більшість є гліцерофосфоліпідами, однак оцінюють велику кількість класів. Профілі оцінюють для ідентифікації потенційних ефектів щодо окремих ліпідів.
Ідентифікацію конкретних ліпідів можна проводити порівняно зі стандартами із застосуванням часу утримання в аналізі, точної маси та фрагментації. Залежно від результату можна ідентифікувати конкретні ліпіди або класи ліпідів для оцінювання в прикладах 6 і 7.
Підтверджувальне дослідження повторюють із двома додатковими партіями гепатоцитів людини Тгапзропег Сепійеа м (М-2).
Приклад 6. Оцінювання ефектів подвійних комбінацій тестованих препаратів щодо ліпідних профілів
Комбінації агоніста ЕХА із кожним із агоніста РРАН-альфа, агоніста РРАВ-дельта, подвійного агоніста РРАВ-альфа та дельта (або, як альтернатива, агоніста ЕХВ із агоністом
РРАВ-альфа і агоністом РРАВ-дельта) та/або статину оцінюють щодо їхнього потенціалу до бо зміни синтезу холестерину та ліпідного профілю в гепатоцитах людини. Конкретні оцінювані комбінації являють собою: - агоніст ЕХК з агоністом РРАК-альфа - агоніст ЕХЕ з агоністом РРАК-дельта - агоніст ЕХЕ із подвійним агоністом РРАК-альфа та дельта та/або агоніст ЕХЕ з агоністом
РРАВ-альфоа і агоністом РРАК-дельта - агоніст ЕХК зі статином
Зміни оцінюють у гепатоцитах людини в багатошаровій культурі (ЗСНН) після 72 годин дії тестованих препаратів у З різних концентраціях. Дозовані розчини одержують свіжими щодня в культуральному середовищі, і дозування в 5СНН відбувається щодня протягом З днів.
Експеримент здійснюють у 24-лунковому форматі із застосуванням однієї (1) партії гепатоцитів людини Тгапзропег Сепійватм (М-1). Кожну умову тестування виконують у трьох (3) лунках з одержанням даних у трьох повторностях (виражених як середнє значення /-жЖ середньоквадратичне відхилення). Зразки одержують і аналізують для визначення глобального профілю ліпідів, як докладно описано в прикладі 5. Зміни ліпідних профілів і синтезу холестерину порівнюють із ефектами від введення окремо в прикладі 2.
Приклад 7. Оцінювання ефектів потрійних комбінацій тестованих препаратів щодо ліпідних профілів.
Потрійну комбінацію агоніста ЕХЕ, агоніста РРАВ-альфа, агоніста РРАВ-дельта, подвійного агоніста РРАВ-альфа та дельта (або агоніста РРАВ-альфа в комбінації з агоністом РРАВ- дельта) та/або статину оцінюють щодо потенціалу до зміни синтезу холестерину і ліпідного профілю в гепатоцитах людини. Зміни оцінюють у гепатоцитах людини в багатошаровій культурі (ЗСНН) після 72 годин дії тестованих препаратів у З різних концентраціях. Дозовані розчини одержують свіжими щодня в культуральному середовищі, і дозування в 5СНН відбувається щодня протягом З днів. Експеримент здійснюють у 24-лунковому форматі із застосуванням однієї (1) партії гепатоцитів людини Тгапзропег Сепійватм (М-1). Кожну умову тестування виконують у трьох (3) лунках з одержанням даних у трьох повторностях (виражених як середнє значення х середньоквадратичне відхилення). Зразки одержують і аналізують для визначення глобального профілю ліпідів, як докладно описано в прикладі 2. Зміни ліпідних профілів і синтезу холестерину порівнюють з ефектами від комбінацій, що вводять у прикладі 2. Конкретні
Зо оцінювані комбінації являють собою: - агоніст ЕХК з агоністом РРАК-альфа і статином - агоніст ЕХЕ з агоністом РРАЕК-дельта і статином - агоніст ЕХ із подвійним агоністом РРАК-альфа та дельта (або, як альтернатива, агоністом РРАК-альфіа і агоністом РРАК-дельта) і статином.
Зразки одержують і аналізують для визначення глобального профілю ліпідів, як докладно описано в прикладі 4. Зміни ліпідних профілів і синтезу холестерину порівнюють з ефектами від комбінацій, що вводять у прикладах 4 і 5.
Приклад 8. Дослідження на тваринах.
Тварини.
Тварин утримують окремо в стандартних клітках за 22 "С із циклом чергування світла та темряви 12 год.: 12 год. Самцям мишей С57ВІ/6 (ЧасКзоп І арогаюгієх, Бар- Харбор, Мен) забезпечують необмежений доступ до раціону, збагаченого жирами (40 95 ккал, шортенінг
Ріїтех на основі частково гідрогенізованої рослинної олії), фруктозою (2295 за вагою) та холестерином (295 за вагою) (Невеєагсі Оівї5, Нью-Брансуїк, Нью- Джерсі, Мо за кат. ро9100301). Раціон із низьким умістом жирів (10 95 ккал; далі в даному документі називається як ГЕО) без фруктози або холестерину застосовують як контрольний раціон (Кезєагсі Оівїв, Мо за кат. 009100304). Застосування цього затвердженого І ЕО визначає групу контрольних мишей, яка зберігає "нормальний" фенотип печінки, для порівняння з тваринами, яким давали експериментальний раціон.
Групи обробки.
Контрольна група НЕО
Контрольна група ГЕО
НЕО «з агоніст ЕХ!
НЕО-РРАКа (тобто фенофібрат, гемфіброзил, безафібрат або ципрофібрат)
НЕОУРРАКб (тобто СМУ50О1516)
НЕО-РРАКа - РРАНО
НЕО - подвійний РРАКО/б (тобто СЕТ505)
НЕО « статин (тобто аторвастатин, симвастатин, розувастатин)
НЕО « агоніст ЕХВ-РРАКа 60 НЕО х агоніст ЕХВАРРАНКО
НЕО х агоніст ЕХВ-РРАКа - РРАКб
НЕО -- агоніст ЕХВ -- подвійний РРАКа/б
НЕО -- агоніст ЕХА -- статин.
Гістологічний аналіз і аналіз цифрових зображень.
Під час виведення з експерименту праву медіальну та/або ліву латеральну частки печінки (25095 кожної зібраної частки) відрізають і фіксують у 10 95 нейтральному забуференому формаліні (протягом щонайменше 7 днів за кімнатної температури). Тканину печінки обережно відрізають для вибору зрізів схожого розміру, характерних як для краю, так і для центру тканини. Тканину печінки заливають у парафін, нарізають на зрізи (5 мкм) і монтують.
Забарвлення гематоксиліном і еозином застосовують для морфологічних аналізів, а забарвлення трихромом за Масоном і сірі усом червоним застосовують для оцінки фіброзу печінки. Гістопатологічний аналіз здійснює патологоанатом у сліпому режимі дослідження.
МАРІО ії МА5Н оцінюють у балах шляхом застосування критеріїв, викладених у загальних рисах
КіІвїпег і співавторами. Для кількісної оцінки фіброзу цільні зрізи, забарвлені сіріусом червоним, сканують шляхом застосування системи сканування цільних мікропрепаратів 5сапосоре С5 (Арегпіо, Віста, Каліфорнія) під час збільшення х20. Вилучають зображення і профілі експресії колагену, забарвленого сіріусом червоним, із цілих тканин вимірюють за допомогою способу на основі колірного куба із застосуванням програмного забезпечення Ітаде-Ргто Апаїуег (МедіаСурегтпеїісз м.6б.2, Бетесда, Меріленд). Загальне забарвлення колагену (представлене як бо від загальної площі) оцінюють за трьома-чотирма ілюстративними зрізами від кожної тварини (за винятком комплексного експерименту з оцінки фіброзу печінки, де оцінюють додаткові зрізи). Усі гістологічні аналізи здійснюють у сліпому режимі.
Біопсія печінки.
Мишей анестезують ізофлураном (2-3 95) у 100 95 кисні. Роблять невеликий абдомінальний розріз на «0,5 см лівіше від серединної лінії і відкривають ліву латеральну частку печінки.
Клиноподібний фрагмент тканини печінки (50 мг) відрізають від дистальної частини частки, негайно поміщають у флакон і миттєво заморожують у рідкому азоті. Клиноподібний фрагмент желатинової губки, що розсмоктується (СсеІРоат, Рії2ег, Нью-
Йорк), вставляють між краями розрізу печінки. Як тільки досягається гемостаз (як правило,
Зо протягом 1 хв.) і желатинова губка добре прилипає до місця біопсії, печінку повертають у черевну порожнину, стінку черевної порожнини зашивають, а шкіру з'єднують скобами. Миші одержують однократну ін'єкцію бупренорфіну (0,05 мг/кг, підшкірно) під час хірургічної операції для контролю болю після операції. Миші з імітацією операції піддаються ідентичній процедурі, за винятком того, що в печінці не здійснюється розріз.
Аналіз плазми та сироватки крові.
Рівні глюкози, тригліцеридів, загального холестерину, аланінамінотрансферази (АЛ) і аспартатамінотрансферази (АБТ) у плазмі крові вимірюють шляхом застосування біоаналізатора Оїутрих АО4Обе (Оіутрив Атегіса Оіадповіїс5, Сентер-Веллі, Пенсильванія).
Зразки плазми крові розводять 1:10 у РВ5 для вимірювання рівнів АТ і А5Т. Загальний адипонектин плазми крові та інсулін у сироватці крові натщесерце вимірюють згідно з інструкціями виробника за допомогою комерційно доступних наборів для електрохемілюмінесцентного аналізу (Мезо 5саїє Різсомегу, Гейтерсберг, Меріленд).
Кількісна оцінка загального вмісту ліпідів і колагену в печінці.
Загальні ліпіди печінки екстрагують із печінки із застосуванням протоколу на основі матеріалу в РоїЇсп єї ам. Заморожену тканину печінки (0,3 г) гомогенізують у 10 мл розчину хлороформ-метанол 2:1. Гомогенат фільтрують із застосуванням знежиреного фільтрувального паперу і переливають через лійку в попередньо зважений скляний флакон об'ємом 15 мл.
Додають додаткові 5 мл розчину хлороформ-метанол 2:1, а потім 2,5 мл 0,9 95 Масі. Ліпіди розділяють за допомогою центрифугування за 1800 9, 10 С протягом 5 хв., водний шар зливають і пробірку продувають азотом доти, доки ліпідний осад не стане сухим. Пробірку, що містить ліпідний осад, повторно зважують і розраховують загальну кількість екстрагованих ліпідів на грам цілої печінки. Загальний уміст колагену в печінці вимірюють шляхом колориметричного визначення гідроксипролінових залишків за допомогою кислотного гідролізу колагену (Оціскгуте, Лейден, Нідерланди).
Визначення екстрагованого білка колагену 141 за допомогою білкового блота.
Серцевини тканини (50-100 мг) відбирають із лівої латеральної частки печінки, миттєво заморожують у рідкому азоті та зберігають за -80 "С до обробки. Тканину гомогенізують у лізуючому буфері, що містить інгібітори протеази. Концентрацію білка в очищеній надосадовій рідині вимірюють за допомогою набору для аналізу білка з використанням ВСА (Ріеєгсе, бо Рокфорд, Іллінойс). Лізати тканини печінки (х50 мкг) розділяють у 4-12 95 гелях МІРАСЕ (І її
Тесппоіодієз, Карлобад, Каліфорнія) у відновлювальних умовах і переносять на нітроцелюлозні мембрани. Мембрани розрізають між маркерами розміром 50 і 60 кДа і блокують за допомогою 96 Віойо. Верхню половину зондують антитілом до колагену Т21 (1:1000; Мо за кат. МВР1- 30054; Момив ВіоіодісаІ5, Літглтон, Колорадо), яке виявляє СООН-кінцеву тілопептидну частину 5 білка колагену 1а1. Для нормалізації нижню половину зондують антитілом до гліцеральдегід-3- фосфатдегідрогенази (ЗАРОН, 1:7500; Мо за кат. 3683; Сеї! Бідпаїїпуд Тесппо!іодієв,
Данверс, Массачусетс). Після інкубування з антитілом до імуноглобуліну кролика, кон'югованого з пероксидазою хріну, експресію білка виявляють за допомогою посиленої хемілюмінесценції (ТНепто зЗсієпійіс, Рокфорд, Іллінойс) і денситометрію здійснюють за допомогою системи РіпогОНет (Сеї! Віозсіеєпсе5, Санта-Клара, Каліфорнія). Денситометричний аналіз колагену 141 охоплює як зрілий білок розміром 140 кДа, так і дещо більшу смугу, що відповідає глікозильованій формі або частково процесованому білку колагену 1а1.
Зміни експресії генів печінки.
Зразки тканини лівої латеральної частки печінки збирають за допомогою пробовідбірника для тканин розміром 6 мм або за допомогою способу біопсії, миттєво заморожують у рідкому азоті та зберігають за -80"С до обробки. Загальну РНК із зразків печінки (450-150 мг) екстрагують шляхом застосування реагенту ТВ (ее Тесппо!іодієв) і потім додатково очищують із застосуванням набору Оіадеп ВАМеазу Різ Міпі (Оіадеп, Валенсія, Каліфорнія). Цілісність РНК визначають із застосуванням набору Адієпі 6000 Мапо на Віоапаулег 2100 (Адіепі
Тесппоіодіе5, Санта-Клара, Каліфорнія). КДНК одержують шляхом застосування набору для високопродуктивного синтезу КДНК шляхом зворотної транскрипції (І їе ТесПппоіодієв5). Зміни експресії генів підтверджують за допомогою продуктів для аналізу експресії генів Авзаув-оп-
Ретагпа і універсального майстер-міксу у форматі ТадМап (те Тесппоіодієз) на приладі АВІ
Ріїзт 7900ОНТ (Арріїєй Віозувієтв, Фостер-Сіті, Каліфорнія). Зміну експресії генів розраховують за допомогою порівняльного способу розрахунку значень порогового циклу (СТ) з використанням пептидилпролілізомерази А (Рріа) і Сарай для нормалізації. Під час використання генних чипів зразки кКДНК проганяють на чипах для ПЛР НТ2 Ргойег для дослідження фіброзу в мишей (РАММ-120С, майстер-мікс із БУВА Стееп/ВОХ для кількісної
ПЛР на ВТ2; ЗАВіозсієпсев) шляхом застосування системи АВІ Ргіїзт 7900НТ для швидкої ПЛР
Зо у режимі реального часу (Арріїєд Віозувбієтб5). Зміни експресії генів на чипі розраховують за допомогою порівняльного способу розрахунку значень СТ із застосуванням програмного забезпечення ОаїаАввібї м3.0 (Арріїєй Віозувівт5/ ее ТесПпоіодіеєї). Серед п'яти генів "домашнього господарства", включених у чип для ПЛР ВТ Ргоїег для дослідження фіброзу в мишей, гіпоксантинфосфорибозилтрансфераза 1 (Нри) і Саран характеризуються найбільш стабільною експресією відповідно до бальних оцінок стабільності, розрахованих за допомогою
РаїаАввіві «3.0. Середнє значення для вибраних ендогенних контрольних генів застосовують як коефіцієнт нормалізації для розрахунку відносної експресії кожного гена. Для підтвердження результатів, одержаних шляхом застосування чипа для дослідження фіброзу, проводять аналізи експресії генів у форматі ТадМап для вибору генів, визначених за допомогою чипа як такі, що характеризуються підвищеною, зниженою або незмінною експресією.
Приклад 9. Клінічне дослідження.
Багатоцентрове, подвійне сліпе, плацебо-контрольоване, рандомізоване клінічне дослідження в паралельних групах проводили за участі пацієнтів із нециротичним неалкогольним стеатогепатитом для оцінки лікування обетихолевою кислотою, що дається перорально (25 мг щодня), або плацебо протягом 72 тижнів. Пацієнтів рандомізовано розділяли 11 за допомогою комп'ютерної централізовано керованої процедури зі стратифікацією за клінічним центром і діабетичним статусом. Первинною кінцевою точкою дослідження було поліпшення централізовано оцінюваних у балах гістологічних показників печінки, що визначається як зменшення бальної оцінки активності неалкогольної жирової хвороби печінки щонайменше на 2 пункти без посилення фіброзу від початкового моменту до завершення лікування. Вимірювали зміну рівня аланінамінотрансферази через 24 тижні: відносну зміну рівня аланінамінотрансферази -24 95, 95 95 СІ від -45 до -3.
План дослідження та учасники.
Пацієнтів включали в дослідження відповідно до наступних критеріїв включення: вік 18 або більше років на момент скринінгу, гістологічні вияви чітко вираженого або граничного неалкогольного стеатогепатиту на підставі результатів біопсії печінки, одержаних за 90 днів або менше до рандомізації, і гістологічна бальна оцінка активності неалкогольної жирової хвороби печінки (МАРІО) 4 або більше з бальною оцінкою 1 або більше для кожного компонента бальної оцінки (бальна оцінка стеатозу 0-3, балонування 0-2 і часткового запалення 0-3). Визначення 60 ступеня та стадії захворювання за біоптатами для цілей включення в дослідження здійснювали в дослідному центрі, в якому відбувалося включення в дослідження. Критерії виключення включають наявність цирозу, інші причини захворювання печінки, значне вживання алкоголю (х20 г/день для жінок або »30 г/день для чоловіків) або інші умови, що спричиняють викривлення результатів (див. нижче).
Рандомізація та маскування.
Пацієнтів, що задовольняють критерії відбору, рандомізовано розділяли (1:1) на тих, що приймають перорально обетихолеву кислоту по 25 мг один раз на день або плацебо.
Обетихолева кислота та плацебо були представлені у вигляді ідентичних таблеток в ідентичних контейнерах, позначених кодовими числами. Розподіл у групи лікування замаскований для пацієнтів, дослідників, співробітників клінічних дослідних центрів і патологоанатомів.
Процедури.
Після рандомізації пацієнти поверталися з візитами, передбаченими дослідженням, у тижні 2,4 і 12 і потім кожні 12 тижнів до завершення лікування на тиждень 72, а потім 24 тижні потому.
Під час цих візитів одержували зразки крові для стандартних біохімічних тестів та оцінки концентрацій ліпідів, глюкози й інсуліну натщесерце. Вагу тіла, зріст та обхват талії й стегон вимірювали під час первинної оцінки і в призначені проміжні моменти часу. Усі пацієнти одержували стандартні рекомендації про навички здорового харчування, зниження ваги, фізичні вправи та контроль гіпертензії, гіперхолестеринемії та цукрового діабету за наявності показань.
Біоптати печінки в початковий момент і в конці лікування централізовано оцінювалися групою експертів для одержання консенсусної бальної оцінки кожного компонента бальної оцінки активності МАРІО, визначення стадії фіброзу та встановлення діагнозу неалкогольного стеатогепатиту, граничного неалкогольного стеатогепатиту або відсутності неалкогольного стеатогепатиту.
Критерії включення та виключення.
Пацієнти, які задовольняли будь-які із наступних критеріїв виключення, вважалися непридатними для включення в дослідження: 1) наявне на даний момент або таке, що має місце в анамнезі, значне споживання алкоголю протягом періоду більше від трьох послідовних місяців у межах 1 року до скринінгу (значне вживання алкоголю визначали як у середньому більше за 20 г/день у жінок і більше за 30 г/день у чоловіків); 2) нездатність достовірно кількісно
Зо оцінити вживання алкоголю на підставі думки дослідника центру; 3) вживання лікарських засобів, за наявними відомостями асоційованих із розвитком МАРІО, протягом більше від 2 тижнів на рік перед рандомізацією; 4) раніше проведена або планована баріатрична хірургічна операція або процедура; 5) неконтрольований цукровий діабет, який визначається як рівень
НЬБАТс, що становить 80,3 ммоль/моль або вище, у межах 60 днів до включення в дослідження; 6) наявність цирозу за результатами біопсії печінки, 7) кількість тромбоцитів «100х109/л; 8) клінічні вияви декомпенсації печінки, що визначається за наявністю будь-яких із наступних аномалій: рівень альбуміну в сироватці крові менше за 32 г/л, ІМА більше за 1,3, рівень прямого білірубіну більше за 22,2 мкмоль/л або варикозне розширення вен стравоходу, асцит або печінкова енцефалопатія в анамнезі; 9) вияв інших форм хронічної печінкової недостатності: гепатит В, що визначається за наявністю поверхневого антигена вірусу гепатиту В (НВзА)З), гепатит С, що визначається за наявністю РНК вірусу гепатиту С (НСУ) або позитивним результатом тесту на антитіла до вірусу гепатиту С (антитіла до НСУ), вияв аутоїмунного захворювання печінки, яке триває, що визначається за відповідними гістологічними показниками печінки, первинний біліарний цироз, що визначається за наявністю щонайменше 2 критеріїв (біохімічних виявів холестазу переважно на підставі підвищення рівня лужної фосфатази, наявності антимітохондріального антитіла Ц(АМАЇ)| та гістологічних виявів негнійного деструктивного холангіту та руйнування міждолькових жовчних протоків), первинний склерозивний холангіт, хвороба Вільсона, що визначається за рівнем церулоплазміну, нижчим від меж норми та відповідними гістологічними показниками печінки, дефіцит альфа-1- антитрипсину (АТАТ), що визначається за діагностичними ознаками в гістологічному аналізі печінки (що підтверджується рівнем альфа-1-антитрипсину, нижчим від нормального, виключення на розсуд дослідника центра), гемохроматоз або перевантаження залізом в анамнезі, що визначається за наявністю в біоптаті печінки забарвлюваного заліза зі ступенем відкладання З- або 4-, захворювання печінки, індуковане лікарськими засобами, що визначається на підставі звичайної дії й анамнезу, відоме порушення прохідності жовчних протоків, імовірний або підтверджений рак печінки або будь-який інший тип захворювання печінки, відмінний від МА5Н; 10) рівень аланінамінотрансферази (АЇ Т) в сироватці крові більше від 300 од./л; 11) рівень креатиніну в сироватці крові, що становить 176,8 мкмоль/л або більше; 12) неможливість безпечного одержання біоптату печінки; 13) відведення жовчі в анамнезі; 14) бо відомий позитивний результат тесту на інфекцію, що спричиняється вірусом імунодефіциту людини (НІМ); 15) активне, серйозне захворювання внутрішніх органів із імовірною очікуваною тривалістю життя менше від 5 років; 16) активне зловживання хімічними речовинами, у тому числі інгаляційними або ін'єкційними лікарськими засобами, у рік перед скринінгом; 17) вагітність, запланована вагітність, імовірність вагітності й небажання застосовувати ефективні протизаплідні засоби під час випробування або годування груддю; 18) участь у випробуванні
ІМО в період 30 днів до рандомізації; 19) будь-який інший стан, який, на думку дослідника центра, буде перешкоджати дотриманню режиму або заважати завершенню дослідження; або 20) відмова дати інформовану згоду.
Статистичний аналіз.
Первинну кінцеву точку та бінарні вторинні кінцеві точки аналізували із застосуванням критерію Мантеля-Гензеля; безперервні вторинні кінцеві точки аналізували із застосуванням моделей АМСОМА, що встановлюють зв'язок зміни безперервної кінцевої точки від початкового моменту до 72 тижнів із групою лікування й вихідним значенням кінцевої точки. Статистичні аналізи здійснювали за допомогою 5А5 (5АБ Іпзійше 2011, Вазе 5А5 9.3 Ргосєедигев Сіціає) і аа (сіаіаСогр 2013, аа 5іаїівіїса! Боїмаге: геІєазе 13).
Кінцеві точки.
Первинною кінцевою точкою дослідження було поліпшення централізовано оцінюваних у балах гістологічних показників печінки, що визначаються як зменшення бальної оцінки активності МАРІО щонайменше на 2 пункти без посилення фіброзу від початкового моменту до кінця лікування. Посилення фіброзу визначали як будь-яке збільшення номера стадії. Вторинні гістологічні кінцеві точки включають роздільну здатність неалкогольного стеатогепатиту, зміну бальної оцінки активності МАРІО і зміни індивідуальних бальних оцінок гепатоцелюлярного балонування, стеатозу, часткового та портального запалення та фіброзу. Поліпшення перебігу фіброзу визначали як будь-яке зменшення номера стадії. Стадії фіброзу Та, 16 і 1с розглядали як стадію 1 для цілей аналізу. Інші вторинні кінцеві точки включають зміни концентрацій амінотрансферази та у-глутамілтранспептидази в сироватці крові від початкового моменту до 72 тижнів, індекс гомеостатичної моделі оцінки інсулінорезистентності натщесерце (НОМА-ІВ), антропометричні показники (вага, індекс маси тіла, співвідношення окружностей талії та стегон, обхват талії) та бальні оцінки якості життя, пов'язаної зі здоров'ям.
Приклад 10. Аналіз даних.
Субаналіз даних, одержаних у прикладі 9, здійснювали для оцінки ефекту статинів щодо рівнів холестерину ліпопротеїнів низької щільності (101-С). Цілі цих вторинних аналізів полягали у визначенні ефекту ОСА порівняно з плацебо в підгрупі пацієнтів із більш тяжким
МА5Н їі в оцінці ефектів поєднаного застосування статинів щодо рівня холестерину ОЇ в сироватці крові. Дані про суб'єктів оцінювали в трьох групах, як указано нижче. - Група А (п-64, що не приймали статин) включала суб'єктів із групи лікування обетихолевою кислотою (ОСА), які не приймали статин у початковий момент (день 0) і які не починали приймати статин впродовж усього перебігу дослідження до тижня 72 включно. - Група В (п-47, що приймали статин у початковий момент) включала суб'єктів із групи лікування за допомогою ОСА, які приймали статин у початковий момент і які продовжували приймати статин під час дослідження до тижня 72 включно. - Група С (п-23, що перейшли до прийому статину) включала суб'єктів із групи лікування за допомогою ОСА, які не приймали статин у початковий момент, але почали лікування статином у момент часу після початкового моменту до тижня 72 включно.
Наступні розрахунки здійснювали для суб'єктів, що одержали лікування за допомогою ОСА в групах А, Ві б. - Середні та медіанні характеристики, перераховані нижче, оцінюють у початковий момент і на тиждень 72. о Дані лабораторних аналізів: рівні 0-0, холестерину ліпопротеїнів високої щільності (НОІ-С), аланін- і аспартатамінотрансферази, гамма- глутамілтрансферази о Вік о Стать: відсоткова частка чоловіків, відсоткова частка жінок о Відсоткова частка хворих на цукровий діабет о Гістологічні показники: стеатоз, балонування, запалення, фіброз - Оцінюють середню та медіанну відсоткову зміну перерахованих вище характеристик у тиждень 72 порівняно із початковим моментом.
Результати.
Рівень холестерину І 0. підвищувався під час лікування за допомогою ОСА у пацієнтів, що приймали статини в початковий момент, але ці рівні не перевищували такі в пацієнтів, що одержували лікування плацебо і що не приймали статини. Початок прийому статинів під час лікування за допомогою ОСА сприяв регресії рівня І ОЇ до значень, нижчих від вихідних рівнів бо до введення ОСА. Як показано на фігурі 8, початок терапії статинами під час лікування за допомогою ОСА, очевидно, сприяє регресії підвищення рівня І ОЇ, пов'язаного з прийомом ОСА.

Claims (8)

ФОРМУЛА ВИНАХОДУ
1. Застосування фармацевтичної композиції, яка містить агоніст ЕХА, щонайменше один фібрат і, необов'язково, один або декілька фармацевтично прийнятних носіїв, для лікування або попередження захворювання або стану, опосередкованого ЕХКЕ, що включає введення фармацевтичної композиції суб'єкту, який потребує цього, де агоніст ЕХК являє собою сполуку формули (1) 7, хе що но НІ он - (1) або її фармацевтично прийнятну сіль, де фармацевтична композиція не містить будь- якого іншого терапевтичного засобу, крім агоніста ЕХЕ і щонайменше одного фібрату; і де захворювання або стан, опосередкований ЕХРЕ, вибрано з: а) первинного біліарного цирозу (РВС), первинного склерозуючого холангіту (РЗС), портальної гіпертензії, хологенної діареї, хронічної печінкової недостатності, неалкогольної жирової хвороби печінки (МАРІО), неалкогольного стеатогепатиту (МАЗН), інфікування гепатитом С, алкогольної хвороби печінки, ураження печінки в результаті прогресуючого фіброзу, фіброзу печінки, серцево-судинного захворювання і гіперліпідемії; або Юр) холестатичного захворювання печінки, вибраного з первинного біліарного цирозу (РВС), первинного склерозуючого холангіту (РВ5), холестазу, індукованого лікарськими засобами, спадкового холестазу, біліарної атрезії і внутрішньопечінкового холестазу вагітних.
2. Застосування за п. 1, де щонайменше один фібрат вибраний з безафібрату, ципрофібрату, клофібрату, фенофібрату, гемфіброзилу і їхніх фармацевтично прийнятних солей або складних ефірів.
3. Застосування за п. 2, де фібрат являє собою безафібрат.
4. Застосування за будь-яким з пп. 1-3, де агоніст ЕХК являє собою вільну кислоту сполуки формули (1).
5. Застосування за будь-яким з пп. 1-3, де агоніст ЕХЕ являє собою фармацевтично прийнятну сіль сполуки формули (1).
б. Застосування за будь-яким з пп. 1-5, де захворювання або стан, опосередкований ЕХВ, вибрано з первинного біліарного цирозу (РВС), первинного склерозуючого холангіту (РБС), портальної гіпертензії, хологенної діареї, хронічної печінкової недостатності, неалкогольної жирової хвороби печінки (МАРІО), неалкогольного стеатогепатиту (МАЗБН), інфікування гепатитом С, алкогольної хвороби печінки, ураження печінки в результаті прогресуючого фіброзу, фіброзу печінки, серцево-судинного захворювання і гіперліпідемії.
7. Застосування за будь-яким з пп. 1-5, де захворювання або стан, опосередкований ЕХВ, являє собою холестатичне захворювання печінки, вибране з первинного біліарного цирозу (РВС), первинного склерозуючого холангіту (РВ5), холестазу, індукованого лікарськими засобами, спадкового холестазу, біліарної атрезії і внутрішньопечінкового холестазу вагітних.
8. Застосування за п. 7, де холестатичне захворювання печінки являє собою РВС.
її.
с . я с о с о о с о. с с у о с 0 є
Фіг. 1А СИМ УКХ Зо Се : КО ОХ М ї У. в ПОМ Я КОХ ОКХ Ск СІК Я а с о - с г с о с ЕХ ду МЕККА СУ АЖ КИ СКК ЗВ МК в к М Я Х с ХХ З о о ож. с . о є з с г о о . с З о. і . о г Е ще ех о З х сх о А ще я 5 о. Я і. о. . с о. с ; . о Х о
: 0. о с . с С
Фіг. 18 с с Ох шо МОЗ ПВ бе ОХ КК З ж Ох ККМО с г о с х С СО С 5. і а с. ОО . . 1 с ОО о . о. ПК о З ДК о КО «0 с с с й , . С п с ККУ щ З с їх о . . С 0 ОКХ с. Ка у во с с о с Оу с 0 З о. с Ме о с ХО ЩО МОЄ . 0 СО ОХ що Кох до З МОХ ОО ТО МО» о МО о ОО п. МОХ
Фіг. 1С космнех знекново п ос с с о о З 5 що АК щ3 ХХ СХ М Я що . о. с су 3 с У о УС ОХ : . о ХОКАКХ о ОО ЗО ОК Б ї с о о с с В М с ОО о. . . о ві с с В о . шо с с о - с с у: УКОККО ОК Ух КОКО ще СЯ З КОЖ в о с с сх о с с
0. с о с о п 5 с с о. З у З ОВ С У ЗУ МО ОКХ АХ СОУх У Х с с
Фіг. 10
25744 С2 й А ї- МОХ З с о с . о що ОНА ОВ ех с . х г . с : о З с ї с с З с С їй с . о. с : с о Ох Ман у Ор х с ее я ОА ЗО ЗО Ох о. н АК СС. . й СКД ее; ОК ЕХ МКК с : с . с і с с й Е с СХ хх с о З ОКО З М о. с не . с о. с о ОО ЖЕО о МО
304 Ж Ех ЩЕ ! . З ; З - СБ хх їх З ! ше . - б ЗВ. оо Во ев я ; щока ГО І З і и ШІ о ши в МОЗ о щі М: ! Ф.Ф Ф Фо0о0« Б КБ е | і ОО о. о Ов в рення ВШ с і. . 5. ї2 Ш і щщ о . - ЩО ж а. У с Б Е ей В с в. Б о ї З ї щО о. . о Гей і ші що 00 00 ш Б. з Ії 3 ПЕВ о У о Зк З МЕД КОКО: ВО ОО КУ оо
В. що с . ш Е ш . дпдпїйїй апа Ж: ї ша ЦІЙ
ОО. сення - ВШ ш !/ шо й -- хх к ся С в у « кН Ж дк ке че а КУ як хх зх З ше г) КУ ее ой КО рос 0.5 порівняно х контрольною соУпою з імітавією хірургічної опериції "вх ОБОХ порівняно з контрольною групою з ВО, що олержала середовище
Фіг. 2
Ж ж М КЗ Ж Е; як Е ї - 1 їх що » і : ЖЕ Я ю | ! я | | і і : Я вх : : : чо | | З З ШИ - й поши шниє ще ту пев п: пан тв 0. с и Шк ОО п. с і З ЗЕ ОХ : ніс я с БОНН нВ ОО М Я й 4 Дон ВНИААНННК НС 5 ее А В Є о Е Е Стовичих А: еталонна група, що одержала НЕС Ор 005 порівняно з кожтрольною» групою х : А з вх 005 порівняно з ОС Стовпчик В: контрольна група, що одержала НЕС ОО? 0,05 порівняно з ОСА ще Й од. Хр 005 ворівняно з фФенофібраком Стовичнк СТООСА Стоничик Сх назькодозоний фенодібрат Стовичик БООСА т низькодезовий фенофібрит Стовичик Е: контрольна група, що одержала корм
Фіг. ЗА 50 З і Ж ! - ш ! : Ж : кла З : мов шо Й що : шо ж В мож : ж вх пня що іє ОК СЕ ПОС е тт в дрооввонва ввввнво: я З повин МО х. За венах ОО я Ф ПО ОККО Х я ря пен ПК Я ц п ШИ х я | 5 ши . з | п ПО вон вна Е пен М кох они. з ІОН рни ЕОМ с ПИШИ т СОМ ОО ОО х АХ В ЕМ Не Е Е Стовачик А: втазовна груба, ще держава НЕС вх 005 порівняно з контрольною групою Є в нс вх ВО порівняно З ОСА лтовичнх В; вонтрозьна груп, що одержала НС «Ва пплівити сік о 3 конІрельна гру, ШОУ ОЛОДЖЕАЛВ хв «бо порівняно з фенофібратюм Словичик СООСА Смовичнк Їх низькодозовий веновинах Стовжичнж КОСА є незьковоовні фенофієрах словичнк У: контрольна грима, що одержала корм
Фіг. ЗВ
« хм же ж З. з "уч ххх ка вецх Єтазія віброзу печівки 2,5 "п, Ома ення са й ППП ИИ КИ ж КО ща ж і В пегесереєсооє с І: ОО І п Ф ш : с ши Я ; і ОО ВОІВ ї Б о . Е і ВО з с а ВОМ МО ОК оо ке ох до 154 о М КО о Не КО п м ШЕ ОК ОО БО ЗХ ОО У с х КОН МОХ ЗКУ Е З ОХ п. я х ЕК КО КК КО хх п м ії ОБ о. ОО о ум ППППНННННН ОК Он о і В І | вв ввв с ЗХ М ОКО У, ї Воно ОК ОО ХО ОКО т-ї ї ПІН ОО ОККО З щу і ОВО ОКО ж ХК і. ХХ ОХ о Я ПОП ОХ МК МО м І М о с ! с о що ш- ОМ ПОЗОВ о -й й 5 х них ОКО ЕВ о о. |і мк Ох ОКО МО КОХ о ЗХ х у ППП ОККО х ОО СУ З ОО : ППД АК ОО КК Я ОКО Ії МО ОО ЗО ХО я ' шк щ- т ої ВО ОО мккко шк Н а с НАНУ ОКОМ я У «й й Кк в хе С
Ф. Кк г 5 Ж х З а ща т жк їх ХУ є й 2 Ум х хх К З й як Е ги Кк - є й х «й а У ї- 5 ОА зу ст А У Середнє значення я Км (пон ТК ще Ум тег ножинного порівняння Поокі й ї Ох й АМС з критерієм множниного ОН МУ; одвофакторннй АМОМА з критеу
Фіг. 4
Се ВЕ : й то : вв : ! плазмі на крові 0,5 лждень В й я ок, Х Ко І З с я Ь6 шщ : я З о з ї Я п ПЕ ШИ е о м і о о
Фо. і с о ве я о с о с дн ПЕ вн ОКХ ХУ ме . о " : ще І с о с реа ще ВО г ОО 0 і п о. о. о. У В с с Є Ф «пн о. І 7 ш х х ОО СЯ о І и ОК дала с І і - й с й Є й с. і й Й Се й пе рецне Зі у. ще значен ї ові те ня КМ й т Ус 005 во рівня сережої Одвпефакт во 305 поріян ово з -е чи торний А порів: чно з ОС о мг ; АМОУА няно З до Сл «і поро ори. «30 мя ритері вста о ерієм ми нвон Мо ший «0 мий тво» МУК Й заго порі : ще рівняння Тож
Змінз вівнів ТО в плазмі крові порівняно з х у: х ї кум х Ша вихідним рівнем (тиждень й али о мк Вааак С СоПппИИИИИИИ и, мамі КК боооіввовво Кох ке кемео мо ИШ М Ж ШИ м о У х Ж КИ ОЕМ ОК СО ве ШЕ ОО о, с Ох у З ПККИМКН З ЕК й се З меж ПО ОО ОО й МОХ о о в В ; і М т-т-00 З МО шо 5 ; ЗОМ ШОК ДУ я о Щ «До а ! ш З настання ве ; Ж - м г г я я СМ о:
«е. що я а ях в щи ж же Ж ще у-я г с я ке я ча Я Б «ел в я Ж " Кз Ку Кз х т Ки м м Серелиє значення 5 ЗЕМ (по МІК х Кк ; ; ї чия й В ОХ ворівняно ІЗ евредонищем; Ку ке усну вчих р, ще що т я ОФ порівняно з втоввастятином,. НО меле; Однефакторний АМОХА з критерієм миджниного порівняння Теокі,
Фіг. 5
ЗЛУ т и УК ТИ ЗАМ КИ ПИТ КА КУ М КОТУ НИ К в й Ж ще нн У с ко о о Еш т ке що щ ЖК - Ж шини ши; т полку то що і щ- и й їі м. - диня | кох і те - Б. шинининии ше ш як шк жк шк щк шк ЩА Кк. ' І ж що що ще ще що що іш ш ш ш ш ш ш ш ш іще ян ш шк чн ши я су їх ще У ри я Ух оз «5 ї З 5 5 В Я хх Б 5 ВЕ ше: ни І В я п ВЕ ника шк ше шк НИ НИ «Е то Ж М о ге 5 У м їм СЕ Ж й Е Р Шк Е -оожт Б ВО ож вив . ом ни и ни: ОСС 5 6 вм ОВО ско ВО - аа я Ж В я Ве їх щі Ж ВОМ моїх ве з пох Ко р ш Ко зни З З . ШИ Ши « ШЕ п» - В р ох ре У а - ж В Кк. о 5 й 3 Ко м їв В СУШУ З - ке, ран Е Щ
Фіг. БА щк ї кети. пе Аня ХХ іх ван : Ж ; ОХ 3 пежтАх уча тжн Ах Кн нн Ко дванни ДО м д ох ШЕ ШУ І м ОХ КА ЗХ ії х З М ОЇ З ХУ У Ох ре рлютююючюти кю я поуте ючи влив зютю мютя пдюсютюю З я с Е х ек КОНИКА х и т У Х х Я КЗ о м ШК ШЕ ШЕ г в Б 5 6 ЦІ 2 З - 35 З З З 5 гх «Ве в я КИ ет ХО КЕ КЗ З ох КО ще З; --- ВХ шк ШЕ ШЕ. щі в с 5 5 55 5 ЩО х ШЕ ше ше ши ши щ ов ше ши ШИ Са ХХ же С щХ В 5 МО У З - шк шк ше ше ше ше щ ще Є ХХ З Ух М Я ох хх ОК ХХ се ще кни ща мен М ксжкхх ВЕ Кк хо КО КО 5 зе З що хх ЗО ее ВК кн я ХК ус с ОК що 5 Зх 5 ВС КИ м ж С 5 ще о ще 5 Ко СЕ СХ що В 3 ж й щ щ ш ш ш її «Мах я Зно М. З У НЕК кн с з ту Я У : М ОК су ї - М т. сб ве ВДВ» м о и г щоб Є Ко х шо б з Ж в й по В ок о У ш сх Тк КЕ ве М ХО еШ ся «Ох ве Ва ий ти я 5 ; ОБО Е що ПЕ ЖЕНЕ щих Б В Й х деку у; : ц З ЖОВ шодо ще що шк В'яВЕ Б Ви В й - МЕ ї ж Ж У В що те БЖ 0 Я й 8 "ооо що що БК Моб В. м кине: я НЕ НН и о ВИ «5 ВЕ 5 МВ 5 ге ш що ом. Мк Ж йо щ- Кк - : ощї з г тв ях З Б - 5 ж що г о шо щ щ БУ ме я лежу р 5 ФО Тюсд М ОС В у КОже м ї Бе Го щ г 7 ж ГО Кк х З що М гу що 5 Гту це є ; ; р З Е Ж х а В сі го ГІ г. я 5 «ОЇ с Еко Ж Ко м ж ря м. - СУ к-т хх м Б й - 2 -Ж Я ге БЕ й Ж х 5 БУ не Е хе ри "м ш хі ЕІ 5 « м 5 Мк КЕ ща Е "7 о х З «і Є вод ш ш й Е 5 їх З Ще ї С г по Ух
Х. Що - Е я Кк пу щ їх - во о В, 5 х м В З в що Бо в Ь їж Й
Фіг. 68
ОСА порівняно їз сереловищем «бенофібрат ворівняне із середовнщем Ко Й сс В я» «4 ко ОО В с А М с о ОЦ о о ОККО КК КК ВК ЗОВ ВЕ о СУ с І о З. . ОК ОХ ОМ в с СУК ХХ У с 5 ХО о. СОМ КК В В о хх у
0. ЗО а с а с 000; в,
шо. хх МЖК МОХ Комбінації порівняно із середовищем
Фіг. 7А
UAA201708864A 2015-02-06 2016-02-05 Фармацевтичні композиції для комбінованої терапії UA125744C2 (uk)

Applications Claiming Priority (2)

Application Number Priority Date Filing Date Title
US201562113134P 2015-02-06 2015-02-06
PCT/US2016/016694 WO2016127019A2 (en) 2015-02-06 2016-02-05 Pharmaceutical compositions for combination therapy

Publications (1)

Publication Number Publication Date
UA125744C2 true UA125744C2 (uk) 2022-06-01

Family

ID=56564878

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
UAA201708864A UA125744C2 (uk) 2015-02-06 2016-02-05 Фармацевтичні композиції для комбінованої терапії

Country Status (31)

Country Link
US (3) US11311557B2 (uk)
EP (2) EP4035665A1 (uk)
JP (2) JP7306791B2 (uk)
KR (1) KR20170115071A (uk)
CN (1) CN107405325B (uk)
AR (1) AR103624A1 (uk)
AU (2) AU2016215179B2 (uk)
BR (1) BR112017016766B1 (uk)
CA (1) CA2976056C (uk)
CL (3) CL2017001983A1 (uk)
CO (1) CO2017007959A2 (uk)
CR (1) CR20170356A (uk)
DK (1) DK3253382T3 (uk)
EA (1) EA036404B1 (uk)
EC (1) ECSP17057848A (uk)
ES (1) ES2905872T3 (uk)
GT (1) GT201700174A (uk)
HK (1) HK1246191A1 (uk)
IL (2) IL253719B (uk)
MA (1) MA40814A1 (uk)
MX (1) MX2017010131A (uk)
NI (1) NI201700100A (uk)
PE (1) PE20180027A1 (uk)
PH (1) PH12017501384A1 (uk)
SG (1) SG11201706347SA (uk)
SV (1) SV2017005512A (uk)
TN (1) TN2017000344A1 (uk)
TW (1) TW201628625A (uk)
UA (1) UA125744C2 (uk)
WO (1) WO2016127019A2 (uk)
ZA (1) ZA201706007B (uk)

Families Citing this family (20)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
SG11201706347SA (en) 2015-02-06 2017-09-28 Intercept Pharmaceuticals Inc Pharmaceutical compositions for combination therapy
JP6879931B2 (ja) * 2015-04-07 2021-06-02 インターセプト ファーマシューティカルズ， インコーポレイテッド 併用療法用の医薬組成物
MX2018003649A (es) * 2015-09-24 2018-05-11 Intercept Pharmaceuticals Inc Metodos e intermedios para la preparacion de derivados de acido biliar.
US11331292B2 (en) 2016-03-31 2022-05-17 Genfit Methods of treatment of cholestatic diseases
MX2021015783A (es) * 2016-03-31 2022-12-09 Genfit Metodos de tratamiento de enfermedades colestaticas.
US12053445B2 (en) 2016-03-31 2024-08-06 Genfit Methods of treatment of cholestatic diseases
ES2894261T3 (es) * 2016-12-09 2022-02-14 Cadila Healthcare Ltd Tratamiento de la colangitis biliar primaria
CA3051776A1 (en) * 2017-02-21 2018-08-30 Genfit Combination of a ppar and fxr agonist for the treatment of liver disorders
US20190076500A1 (en) * 2017-09-13 2019-03-14 Novartis Ag Combinations comprising fxr agonists
GB201812382D0 (en) 2018-07-30 2018-09-12 Nzp Uk Ltd Compounds
JP2022528549A (ja) * 2019-04-10 2022-06-14 ジェンフィット 式（ｉ）の化合物及びｇｌｐ－１受容体アゴニストを含む組合せ療法
JP2022536060A (ja) * 2019-05-30 2022-08-12 インターセプト ファーマシューティカルズ， インコーポレイテッド 胆汁鬱滞性肝疾患の処置で使用するためのｆｘｒアゴニストおよびフィブラートを含む医薬組成物
CN110287493B (zh) * 2019-06-28 2023-04-18 中国科学技术信息研究所 风险短语识别方法、装置、电子设备及存储介质
CA3139291A1 (en) * 2019-07-18 2021-01-21 Jacky Vonderscher Method for decreasing adverse-effects of interferon
JP2022548725A (ja) * 2019-09-20 2022-11-21 レネオ ファーマシューティカルズ，インク． 腎臓病の治療におけるｐｐａｒデルタアゴニストの使用
US20220387467A1 (en) * 2019-11-22 2022-12-08 Avolynt Use of sglt2 inhibitors to treat primary billiary cholangitis
CN111690731B (zh) * 2020-05-22 2021-09-28 河南大学 Fxr激动剂在治疗肝性脑病中的应用
CN112885471B (zh) * 2021-03-12 2023-01-24 上海中医药大学附属岳阳中西医结合医院 基于贝叶斯网络最大熵自学习扩展集对分析的银屑病疗效评价系统
WO2023147141A1 (en) * 2022-01-28 2023-08-03 Intercept Pharmaceuticals, Inc. Combination therapy
WO2024132001A1 (en) * 2022-12-21 2024-06-27 Charles University, Faculty Of Pharmacy In Hradec Kralove Multitarget nuclear receptor ligands based on 2-(4-(quinolin-2-yloxy)phenoxy)propanoic acid and 2-(4-(quinoxalin-2-yloxy)phenoxy)propanoic acid for the treatment of metabolic and liver diseases

Family Cites Families (65)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
GB860303A (en) 1958-06-20 1961-02-01 Ici Ltd Pharmaceutical compositions comprising ª‡-aryloxy-aliphatic carboxylic acids and/or ª
US3262580A (en) 1964-06-23 1966-07-26 Mcdowell Wellman Eng Co Slewable gantry crane
FR1498459A (uk) 1965-07-30 1968-01-08
US3674836A (en) 1968-05-21 1972-07-04 Parke Davis & Co 2,2-dimethyl-{11 -aryloxy-alkanoic acids and salts and esters thereof
US4058552A (en) 1969-01-31 1977-11-15 Orchimed Sa Esters of p-carbonylphenoxy-isobutyric acids
FI52570C (fi) 1969-04-16 1977-10-10 Sumitomo Chemical Co Menetelmä veren kolesteroli- tai lipoidipitoisuutta alentavien fenoxia lifaattisten karboksyylihappoyhdisteiden ja -esteriyhdisteiden valmist amiseksi.
AT296986B (de) 1969-08-13 1972-03-10 Merz & Co Verfahren zur Herstellung von neuen α-Halogenphenoxy-isobutyroyl-β-nicotinoyl-glykolen
DE2230383C3 (de) 1971-10-01 1981-12-03 Boehringer Mannheim Gmbh, 6800 Mannheim Phenoxyalkylcarbonsäurederivate und Verfahren zur Herstellung derselben
JPS5118954B2 (uk) 1972-02-04 1976-06-14
US3948973A (en) 1972-08-29 1976-04-06 Sterling Drug Inc. Halocyclopropyl substituted phenoxyalkanoic acids
DE2308826C3 (de) 1973-02-22 1980-03-27 Ludwig Merckle Kg Chem. Pharm. Fabrik, 7902 Blaubeuren Phenoxyalkancarbonsäureester von Oxyalkyltheophyllinen, Verfahren zu ihrer Herstellung und Arzneimittel
FR2244511B1 (uk) 1973-07-05 1977-07-15 Roussel Uclaf
ES488665A0 (es) 1980-02-15 1980-12-16 Especialidades Farmaco Terape Procedimiento de obtencion de un nuevo compuesto antiateros-clerotico
US5023252A (en) 1985-12-04 1991-06-11 Conrex Pharmaceutical Corporation Transdermal and trans-membrane delivery of drugs
ES2156120T3 (es) 1992-12-08 2001-06-16 Ss Pharmaceutical Co Derivados arilamidicos.
TW438587B (en) 1995-06-20 2001-06-07 Takeda Chemical Industries Ltd A pharmaceutical composition for prophylaxis and treatment of diabetes
JP2001509165A (ja) 1997-01-24 2001-07-10 ザ リージェンツ オブ ザ ユニバーシティ オブ カリフォルニア バリヤ機能の回復、表皮の分化の促進及び増殖の抑制のためのＦＸＲ、ＰＰＡＲα及びＬＸＲαの活性剤の使用
KR20010022385A (ko) * 1997-08-29 2001-03-15 실버스타인 아써 에이. 암로디핀 및 스타틴 화합물을 포함하는 복합 조성물
BR9812772A (pt) 1997-10-27 2000-10-10 Reddy Research Foundation "compostos tricìclicos inéditos e o seu emprego na medicina;processo para a sua preparação e composições farmacêuticas contendo os mesmos"
US20030109467A1 (en) 2001-11-15 2003-06-12 Isis Pharmaceuticals Inc. Antisense modulation of human FXR expression
EP1140036A2 (en) 1998-12-18 2001-10-10 Abbott Laboratories Novel formulations comprising lipid-regulating agents
CA2356887A1 (en) 1998-12-23 2000-06-29 Glaxo Group Limited Assays for ligands for nuclear receptors
WO2000040965A1 (en) 1999-01-07 2000-07-13 Tularik, Inc. Fxr receptor-mediated modulation of cholesterol metabolism
US6071955A (en) * 1999-02-25 2000-06-06 The Regents Of The University Of California FXR, PPARA and LXRA activators to treat acne/acneiform conditions
US20020132223A1 (en) 1999-03-26 2002-09-19 City Of Hope Methods for modulating activity of the FXR nuclear receptor
WO2001080852A1 (en) 2000-04-19 2001-11-01 Borody Thomas J Compositions and therapies for hyperlipidaemia-associated disorders
US6777446B2 (en) 2000-09-05 2004-08-17 Tularik, Inc. FXR modulators
WO2002024632A2 (en) 2000-09-18 2002-03-28 Glaxo Group Limited Substituted aminopropoxyaryl derivatives useful as agonists for lxr
AU2002308295B2 (en) 2001-03-12 2007-08-23 Intercept Pharmaceuticals, Inc. Steroids as agonists for FXR
ATE381542T1 (de) 2001-08-13 2008-01-15 Phenex Pharmaceuticals Ag Nr1h4-kern-rezeptor-bindende verbindungen
US7259186B2 (en) 2002-12-17 2007-08-21 Abbott Laboratories Salts of fenofibric acid and pharmaceutical formulations thereof
EP1568706A1 (en) 2004-02-26 2005-08-31 Intercept Pharmaceuticals, Inc. Novel steroid agonist for FXR
GB0405349D0 (en) * 2004-03-10 2004-04-21 Univ Birmingham Cancer therapy and medicaments therefor
ES2609395T5 (es) 2004-03-12 2021-08-06 Intercept Pharmaceuticals Inc Tratamiento de la fibrosis usando ligandos de Fxr
PE20060315A1 (es) * 2004-05-24 2006-05-15 Irm Llc Compuestos de tiazol como moduladores de ppar
US20060252670A1 (en) * 2004-10-14 2006-11-09 Intercept Pharmaceuticals Inc. Method of reducing drug-induced adverse side effects in a patient
US20090131395A1 (en) 2005-05-05 2009-05-21 Microbia, Inc. Biphenylazetidinone cholesterol absorption inhibitors
ITMI20050912A1 (it) 2005-05-19 2006-11-20 Erregierre Spa Processo di preparazione di acidi 3-a-ya(b)-diidrossi-6-a(b)-alchil-5b-colanici
JP2010517931A (ja) 2006-02-14 2010-05-27 インターセプト ファーマシューティカルズ， インコーポレイテッド Ｆｘｒ媒介性の疾患または状態の予防または治療用のｆｘｒリガンドとしての胆汁酸誘導体
US20070197606A1 (en) 2006-02-22 2007-08-23 Burczynski Frank J Use of ppar agonists as anti-oxidants
CA2679608A1 (en) * 2006-03-22 2007-10-04 President And Fellows Of Harvard College Methods and compositions for treating hypercholesterolemia and atherosclerosis
ES2340221T3 (es) 2006-05-24 2010-05-31 Eli Lilly And Company Compuestos y procedimientos para modular fxr.
EA015632B9 (ru) 2006-05-24 2012-08-30 Эли Лилли Энд Компани Агонисты fxr
PL2040713T3 (pl) 2006-06-27 2014-11-28 Intercept Pharmaceuticals Inc Pochodne kwasów żółciowych jako ligandy FXR do zapobiegania lub leczenia chorób lub stanów, w których pośredniczy FXR
CN101534825A (zh) 2006-08-04 2009-09-16 Aska制药株式会社 含有贝特类药物的制剂及其制备方法
EP1886685A1 (en) 2006-08-11 2008-02-13 INSERM (Institut National de la Santé et de la Recherche Médicale) Methods, uses and compositions for modulating replication of hcv through the farnesoid x receptor (fxr) activation or inhibition
EP1894924A1 (en) 2006-08-29 2008-03-05 Phenex Pharmaceuticals AG Heterocyclic FXR binding compounds
EP1894928A1 (en) 2006-08-29 2008-03-05 PheneX Pharmaceuticals AG Heterocyclic fxr binding compounds
WO2008039829A2 (en) 2006-09-26 2008-04-03 Ironwood Pharmaceuticals, Inc. Diphenylheterocycle cholesterol absorption inhibitors
CL2007003035A1 (es) * 2006-10-24 2008-05-16 Smithkline Beechman Corp Compuestos derivados de isoxazol sustituidos, agonistas de receptores farnesoid x; procedimiento de preparacion; composicion farmaceutica que lo comprende; y uso del compuesto en el tratamiento de la obesidad, diabetes mellitus, fibrosis en organos,
AU2007333194A1 (en) 2006-12-08 2008-06-19 Exelixis, Inc. LXR and FXR modulators
US20080300235A1 (en) 2007-06-01 2008-12-04 Wyeth FXR Agonists for Reducing LOX-1 Expression
US20080299118A1 (en) 2007-06-01 2008-12-04 Wyeth FXR Agonists for the Treatment of Malignancies
TW200906823A (en) 2007-07-16 2009-02-16 Lilly Co Eli Compounds and methods for modulating FXR
US8338628B2 (en) 2007-08-28 2012-12-25 City Of Hope Method of synthesizing alkylated bile acid derivatives
US20090163474A1 (en) 2007-10-19 2009-06-25 Wyeth FXR Agonists for the Treatment of Nonalcoholic Fatty Liver and Cholesterol Gallstone Diseases
US20090215748A1 (en) 2007-12-20 2009-08-27 Wyeth FXR agonists for treating vitamin D associated diseases
EP2110374A1 (en) 2008-04-18 2009-10-21 Merck Sante Benzofurane, benzothiophene, benzothiazol derivatives as FXR modulators
EP2289883A1 (en) 2009-08-19 2011-03-02 Phenex Pharmaceuticals AG Novel FXR (NR1H4) binding and activity modulating compounds
LT2641596T (lt) * 2009-11-26 2018-08-10 Genfit 1,3-difenilprop-2-en-1-ono darinių panaudojimas kepenų sutrikimų gydymui
NZ703072A (en) 2012-06-19 2016-06-24 Intercept Pharmaceuticals Inc Preparation, uses and solid forms of obeticholic acid
PT2912013T (pt) 2012-10-26 2018-01-03 Intercept Pharmaceuticals Inc Processo de preparação de derivados de ácidos biliares
SI3360881T1 (sl) * 2013-05-14 2021-06-30 Intercept Pharmaceuticals, Inc. 11-hidroksil-6-substituirani derivati žolčnih kislin in aminokislinski konjugati le-teh kot modulatorji receptorja farnezoid X
US10077268B2 (en) * 2014-03-13 2018-09-18 Salk Institute For Biological Studies FXR agonists and methods for making and using
SG11201706347SA (en) 2015-02-06 2017-09-28 Intercept Pharmaceuticals Inc Pharmaceutical compositions for combination therapy

Also Published As

Publication number Publication date
TW201628625A (zh) 2016-08-16
PH12017501384A1 (en) 2018-01-08
US11311557B2 (en) 2022-04-26
BR112017016766A2 (pt) 2018-04-10
JP7306791B2 (ja) 2023-07-11
SV2017005512A (es) 2018-06-12
MA40814A1 (fr) 2019-08-30
EP3253382A2 (en) 2017-12-13
US20220280534A1 (en) 2022-09-08
EA036404B1 (ru) 2020-11-06
CL2018003604A1 (es) 2019-02-22
US20180008616A1 (en) 2018-01-11
CL2018001006A1 (es) 2018-06-15
US20220280533A1 (en) 2022-09-08
CA2976056A1 (en) 2016-08-11
ECSP17057848A (es) 2017-10-31
EA201791770A1 (ru) 2017-12-29
TN2017000344A1 (en) 2019-01-16
IL290823A (en) 2022-04-01
DK3253382T3 (da) 2022-02-14
ZA201706007B (en) 2019-01-30
JP2022000483A (ja) 2022-01-04
AU2021201015A1 (en) 2021-03-11
EP3253382A4 (en) 2018-10-31
SG11201706347SA (en) 2017-09-28
ES2905872T3 (es) 2022-04-12
EP3253382B1 (en) 2021-11-17
PE20180027A1 (es) 2018-01-09
WO2016127019A3 (en) 2016-11-03
CA2976056C (en) 2024-02-06
KR20170115071A (ko) 2017-10-16
EP4035665A1 (en) 2022-08-03
BR112017016766B1 (pt) 2023-11-07
MX2017010131A (es) 2017-11-01
AR103624A1 (es) 2017-05-24
CN107405325B (zh) 2021-11-12
WO2016127019A2 (en) 2016-08-11
NI201700100A (es) 2018-09-06
HK1246191A1 (zh) 2018-09-07
CL2017001983A1 (es) 2018-04-20
IL253719B (en) 2022-04-01
AU2016215179B2 (en) 2021-02-25
AU2016215179A1 (en) 2017-08-24
CN107405325A (zh) 2017-11-28
CR20170356A (es) 2018-02-28
GT201700174A (es) 2018-11-13
JP2018504438A (ja) 2018-02-15
IL253719A0 (en) 2017-09-28
CO2017007959A2 (es) 2017-10-31

Similar Documents

Publication Publication Date Title
UA125744C2 (uk) Фармацевтичні композиції для комбінованої терапії
US8853277B2 (en) Nitroxide therapy for the treatment of von Hippel—Lindau disease (VHL) and renal clear cell carcinoma (RCC)
MX2012009855A (es) Composicion farmaceutica para la prevencion o el tratamiento de la efermedad de higado graso no alcoholico y el metodo para la prevencion o tratamiento de la enfermedad higado graso no alcoholico utilizando la composicion.
TW201818935A (zh) 治療肝臟疾病之方法
US11202783B2 (en) Use of aminoalkylbenzothiazepine derivatives
US10933038B2 (en) Use of (benzenesulfonamido) benzamide compounds for inhibiting liver fibrosis
KR102487075B1 (ko) 비알코올성 지방성 간 질환의 예방 및 치료약
Shi et al. Autophagy and ER stress in LPS/GalN‑induced acute liver injury
US20220184172A1 (en) Ampk/caspase-6 axis controls liver damage in nonalcoholic steatohepatitis
KR20150130352A (ko) 지방간 질환을 치료하는 방법
Zhou et al. Treatment of experimental non-alcoholic steatohepatitis by targeting α7 nicotinic acetylcholine receptor-mediated inflammatory responses in mice
US20210379003A1 (en) Treatment of diseases associated with biliary system destruction
JP7048863B2 (ja) 非アルコール性脂肪肝疾患の治療法
JP2024538323A (ja) 腸炎と腸癌の予防又は治療に用いる薬物
CN118903119A (zh) 转录因子zbtb20抑制剂在制备预防和/或治疗骨关节炎药物中的用途
JP2020510001A (ja) 非アルコール性脂肪性肝疾患と非アルコール性脂肪性肝炎の予防および／または処置に使用するための化合物