TW593427B

TW593427B - Synthesis of high molecular weight non-peptidic polymer derivatives

Info

Publication number: TW593427B
Application number: TW090131261A
Authority: TW
Inventors: Antoni Kozlowski; Xiaoming Shen; Michael David Bentley; Zhihao Fang
Original assignee: Nektar Therapeutics Al Corp
Priority date: 2000-12-18
Filing date: 2001-12-17
Publication date: 2004-06-21
Also published as: WO2002059179A2; EP1345982A2; US6774180B2; EP1345982B1; ATE360659T1; CA2431977A1; AU2002246705B2; CA2431977C; JP2004525212A; WO2002059179A3; DE60128135D1; MXPA03005460A; KR100807141B1; KR20030068178A; US20020082345A1; DE60128135T2; ES2284726T3

Description

593427 _案號90131261_年月日_^_ι 五、發明說明（1) 本發明是有關於聚乙烯二醇衍生物及相關之聚合物及其合成方法。更尤其是，本發明是有關於高分子量衍生物及生產高分子量衍生物的方法。水性聚合物聚乙烯二醇，簡稱PEG，亦稱為聚乙烯氧化物，簡稱PEO，共價附著於分子或表面在微生物技術及醫學具相當重要的用途。其最常見的形式，聚乙烯二醇為一種各尾端終結於羥基的線形聚合物：

HO-CH2CH20- ( CH2CH20 ) n-CH2CH2-〇H

該上述之聚合物，α ，ω-二氫氧化乙烯二醇，可以簡易地表示為HO-PEG-ΟΗ之形式而可理解-PEG -之記號是代表下列之結構單位： -CH2CH20- ( CH2CH20 ) n-CH2CH2- 其中η —般之範圍是由大約3到大約4 0 0 0之間。一般所使用的聚乙烯二醇是甲氧基-聚乙烯二醇-ΟΗ，或簡稱mPEG，其中一端為相對不活潑之甲氧基群，而另一端屬於易於受化學調變之羥基。甲氧基-聚乙烯二醇的結構示於下：

CH30- ( CH2CH20 ) n-CH2CH2-OH

聚乙烯氧化物及丙烯氧化物之異分子聚合物在化學上與聚乙烯二醇密切相關，且在聚乙烯二醇之諸多應用上可加以取代。 HO- CH2CHRO (CH2CHRO) nCH2CH2-〇H 其中R為氫或烷基，像是甲基。聚乙烯二醇通常也以多臂形式被使用，即將線形之聚乙烯二醇附著於核心：

第5頁 593427 _案號90131261_年月日_iMz_ 五、發明說明（2) R (-0-PEG-OH ) n 其中R為衍生自，舉例來說，五紅蘚醇或甘油寡聚物之核心。也可將聚乙烯二醇之主軸製備為可裂解之鍵結。聚乙烯二醇為具有可溶於水及許多有機溶劑，無毒性，且無免疫原性性質的聚合物。聚乙稀二醇的用途之一是將該聚合物共價附著於不可溶性分子產生"共軛π可溶之聚乙烯二醇分子。舉例來說，已顯示出不溶於水之藥物紫杉醇，聯結至聚乙烯二醇時，就會變成溶於水。葛林華德等人，有機化學期刊，6 0 : 3 3 1 -3 3 6 ( 1 9 9 5 )。為將聚乙烯二醇聯結至一分子，像是蛋白質，通常需π活化π該聚乙烯二醇以製備一端具有官能基之該聚乙烯二醇的衍生物。該官能基可與蛋白質上的某一部份反應，像是氨基’而形成一聚乙烯二醇-蛋白質之共耗。許多的聚乙烯二醇之活化衍生物已被敘述過。這類活化衍生物的例子之一為琥珀醯亞胺琥珀酸鹽π活性酯"： ch3o-peg-o2c-ch2ch2-co2-ns 其中NS為

一N 在下文中，該琥ίέ醯亞胺活性酯部分將以-C02-NS表示。該活化聚乙烯二醇亦可由上述之多臂形式或多分枝形

593427 _案號90131261_年月日__ 五、發明說明（3) 式製備像是：

(PEG + CO-NH ) 2LYS-NS 如哈利斯等人在美國專利編號5，9 3 2，4 6 2中所述者，在此將全文附於本文以為參考資料。

官能基可經由直接將起始之羥基轉變為其他形式或經由將有機間隔基附著於該羥基而附於聚乙烯二醇之端點。舉例來說，上述之聚乙烯二醇琥珀酸鹽的製備是經由將琥珀脫水酸附著於聚乙烯二醇。同樣的也可以膠胺酸脫水酸反應以製備聚乙烯二醇膠胺酸鹽，PEG-02C-CH2CH2CH2-C02H。即使更大的脂肪酸間隔基都可被加入。如同岡本等人所述者，歐洲聚合物期刊，1 9，3 4 1 - 3 4 6 ( 1 9 8 3 )，聚乙烯二醇可被轉變為聚乙烯二醇胺，經由將聚乙烯二醇-OH與ONC- ( CH2 ) 6-NCO反應然後將剩下的異氰酸轉變為胺產物 PEG-02CNH- ( CH2) 6-NH2 °

隨著聚乙烯二醇的化學應用益形複雜，高分子量，高純度之聚乙烯二醇衍生物之已漸形增加。合成這類化合物則因移除在多重步驟製備過程中所累積之聚合物雜質的困難度而益形複雜。小分子量之雜質一般可以諸如沈殿之簡易流程輕易去除。然而，高分子量之聚合副產物一般很難去除並需使用費時且高成本的色層分析技術。在本領域仍有改進製備高分子量聚乙烯二醇衍生物之方法的需求。本發明包括高分子量活性聚合物衍生物及製造之方法。將一小分子，雙官能之募（乙烯二醇）（n OEG")衍生物或相似之寡聚物或小分子聚合物共價鍵結至一大分子

第7頁 593427 案號 90131261 年月曰修止五、發明說明（4) 聚乙烯二醇聚合物（n PEG")衍生物或類似的聚合物。以此方式，大部分的化學轉型可在寡聚或小分子聚合化合物上處理。大分子聚合物雜質比起較小者較難由所欲之產物分離，且牽涉這些聚合物之反應產物典型上包括了未反應的試劑，可造成相互聯結之雙官能基成分，部分反應的成分，及其他聚合物雜質。本發明藉由減少製造該大分子聚合物所需的反應次數以避免這些雜質的產生。因此，如下所示者，以單一步驟製造一種複雜的聚合化合物是經由將一種複雜寡聚物，例如，Y ’ -寡（乙烯二醇）-Y，其中Y及Y’為活性部分，與一簡單的高分子量聚合化合物反應，例如，甲氧基-聚乙烯二醇-Z，其中Z與Y 或Y ’之一反應，而產生一新的聯結基X於較大的聚乙稀二醇及較小的聚乙烯二醇之間。以此方式，將不會累積聚合物雜質。Y及Y ’可為相同或不同，但不可選擇使此二部分相容者，以使其不會相互反應。在一種典型生產高分子量單一官能基大分子的反應中，將單甲氧基聚（乙烯二醇）與一較小之聚乙烯二醇聚合物的反應，其中較大單一官能基聚乙烯二醇聚合物上的官能基Z與較小之異官能基聚合物上之官能基Y’反應。該高分子量產物保留活性官能基Y。該反應物以Z及Y ’部分反應所形成的官能基X聯結。本反應可如下列說明：曱氧基-聚乙烯二醇-Z+ Y’_寡（乙烯二醇）-Y—曱氧基-聚乙烯二醇-X-募（乙烯二醇）-Υ 舉例來說，一種通常由甲基氧聚乙烯二醇-ΟΗ經由數

593427 _案號90131261_年月日__ 五、發明說明（5) 個步驟製造之分子量3 2，0 0 0的曱基氧聚乙烯二醇-丙酸，可以單一步驟經由將一種由甲基氧聚乙烯二醇-OH單一步驟製備之活化曱基氧聚乙烯二醇碳酸鹽3 0，0 0 0與分子量 2000之α -氨基-ω-碳酸反應製備。大多數的化學轉形可在小分子，不昂貴，更易於純化的聚乙烯二醇2 0 0 0上執行。單一官能基，同質功直_能基，及異質功能基之大分子可藉由實行本發明而製備，即使並不一定要有相同之結果。傾向於製造產物分子較大聚合物成分之複雜度的反應如雜質在多重反應步驟中有所增加將會降低本方法之有效性。在一種更為一般的具體實施例中，更為專一性地顯示一種聚乙烯二醇聚合物，本發明這些產物的結構可描述如下：

R-（ 0 CH2CH2 ) n-X- ( CH2CH2 -0 ) m-Y 該上述結構是以 R- ( 0 CH2CH2 ) n-Z 與 Y’ - ( CH2CH2 -0 ) m -Υ反應而製備，其中Ζ為可與Υ’反應之反應基且Υ或R皆不與Z或Y ’反應。 R可為一保護部分，包括各種烷基部分，典型上附著於聚乙烯二醇者為曱氧基。R也可為一反應基或受保護之反應基Υπ其中該反應基可在某個稍晚所需的時點將反應基去保護並得以進行反應。Υ及Υ"可相同者，如果Υπ為一以受到保護之官能基，或相異的不參與反應以創造產物分子之官能基。官能基包括，但不限定於，醛類，順丁烯二酸亞胺，活性酯類，硫代硫酸鹽，或胺類。X為一小分子，親

593427 _案號 90131261_年月日_^_ 五、發明說明（6) 水性聯結，像是醯胺或胺基碳酸鹽，η大約由2 0 0至2 0 0 0，而m則大約由1至1 2 0。X較佳者為一小分子及親水性的部分不會對生成之高分子量聚合物之化學及物理性質產生不利之衝擊。

此外，可將一雙官能基或具有額外官能的大分子聚合部分鍵結至較小之單一或多重官能分子。產物大分子之官能可源自於大分子部分或較小之寡聚物或聚合物部分，端視其需要而定。該聚合物骨架可具有用於水解或酵素裂解之官能基或聯結，如需要可建構於骨架中以為產物分子受控制之可裂解性。上述的聚合物部分可廣義地將較大聚合物部分視為 (聚合）a而較小聚合物部分則視為（聚合）b其中（聚合）可為任何的聚合物包括各種型式的聚乙烯二醇及本領域所考慮到之相似特性聚合物。因此，一高分子量聚合物可以由較低分子量聚合物製備，由此移除雜質的困難度將會較低，即一種尚未用於系列反應之較高分子量之聚合物或複雜的純化步驟以去除聚合物雜質。

現在，在下文中將更為完整的敘述本發明。本發明，然而，可以許多不同的形式實施而不應限制於本文接下來所述之具體實施例；反之，這些具體實施例是為了使所揭露者更加透徹及完整而提供的，且將對熟悉本領域者更完整地傳達本發明之範圍。 π官能基"，"活性部分π，π活化基π，π反應位

第10頁 593427 案號90131261 年月日修正五、發明說明（7)

置π，”化學反應基π及"化學反應部分"等名詞被使用於本領域且本文是指一分子個別，可界定的部分或單位。在化學領域中這些名詞多少為同義者且在本文是用來指示分子的部位並執行某些官能或活性且可與其他分子反應。π活性"一詞，連同官能基一同使用時，傾向於包括這些易於與其他分子上親電子性或親核性基反應之官能基，對比於需要強勢催化劑或高度不活化之反應情況（例如，”非反應性”或”鈍性π基）的官能基。舉例來說，如本領域所能瞭解者，Η活性酯π包括易於與親核性基反應之官能基像是胺類反應者。活性胺類之範例包括氮-氫氧化琥珀醯亞胺酯或1 -苯基三嘧唑酯。典型上，一活性酯將與一胺類在液態基質中反應數分鐘，而某些酯類，諸如甲基或乙基酯， i則需要一種強勢催化劑以與一親核性基反應。

π烷基π —詞是指典型上由大約1至大約1 2個碳原子長度的碳氫鏈，且包括直鏈及枝鏈。該碳氫鏈可為飽和或不飽和者。π飽和烷基π —詞則是指一烷基被一或多個非干擾取代基取代，像是，但不限定於，C3-C6環烷基，例如，環丙基，環丁基，之類者；乙炔；氰··烷氧基，例如甲氧基，乙氧基，之類者；較低分子量之氧化酮類，例如，氧化丙酮；氫氧基；羧基；氨基；較低分子量之烷氨基，例如，甲基氨；酮類；鹵素，例如氯或溴；酚；取代酚，之類者。如同本文所使用的，π非肽"是指一種骨架實質上不含胜肽鍵結的聚合物。然而，該聚合物骨架可包括一少數之

第11頁 593427 案號90131261 年月日修正五、發明說明（8) 胜肽鍵散佈於骨架上，像是，舉例來說，大約每5 0個單分子單位不多於大約一胜肽鍵。 ”聚合物共軛"是指一可溶於水之聚合物骨架共價附著至一具生物活性的分子。如本文所定義者。在一聚合物共軛與一第二聚合物反應以形成一延展之聚合物骨架的例子中，不論該聚合物的聯結是否具有胜肽或其他鍵結，”聚合物共輛"一詞指的是鍵結至生物活性劑之聚合物的全長。

η聯結”聯結子π或η聯結官能基"等詞在本文用以表示一般因化學反應形成之官能基或聯結且典型上為共價鍵結。抗水解的聯結表示實質上在水中穩定的聯結且在有用的pH值之下不會與水發生反應，例如在生理情況下能長期，並以永久為較佳。不抗水解或可裂解的聯結表示該聯結可在水中或液態溶液中可被裂解，包括舉例來說，血液。不抗酵素或可分解之聯結表示聯結可被一或多種酵素裂解。

π生物活性分子"，π生物活性部分"，”生物活性劑”，或π藥π等詞在本文中被使用時表示任何可影響一種生物體之任何生理或生物化學性質的物質，包括但不限定於病毒，細菌，黴菌，植物，動物，及人類。尤其是，當用於本文時，生物活性分子包括任何傾向於診斷，治療緩解，治療，或預防人類或其他動物之疾病，或者是提昇人類或動物之生理或心理完好的物質。生物活性分子之範例包括，但不限定於，胜肽，蛋白質，酵素，小分子藥，染

第12頁 593427 案號90131261 年月日修正五、發明說明（9) 劑，脂肪，核苷，寡核苷酸，細胞，病毒，脂肪體，微粒及分子團。適於本發明使用的生物活性劑之類別包括，但不限定於，抗生素，殺黴菌藥，抗病毒劑，抗發炎反應劑，抗腫瘤劑，心血管藥劑，抗焦慮劑，荷爾蒙，生長因子，類固醇要劑之類者。

π低重量聚合物π及”低分子量聚合物π等詞廣義地表示一線性，分枝，多臂，或分叉之聚合物骨架，包含一具有由1至大約1 2 0個重複單位的水溶性及非肽聚合物。這些聚合物典型上具有少者為一到二個官能基，典型上位於線形聚合物之相對端點，上至3 0 0個，可位於高分枝性或多臂構造的端點，即使是較少者可沿聚合物骨架分佈。適當之聚合物包括，但不限定於聚烷烯二醇，像是聚乙烯二醇 (PEG )，聚丙烯二醇（PPG )，乙烯二醇及丙烯二醇的共聚物之類者，聚氧化乙基多元醇，聚烯族醇聚乙稀嘻烧酮，聚氫氧丙基曱基丙烯樹脂，聚（α -氫氧酸），聚乙烯醇，聚墻腈，聚氧氮雜戊酮及共聚物，四聚物，衍生物及其混和物。應瞭解寡聚物及甚至單位長度皆應包括於上述者。即使該小聚合物或寡聚物之分子量可能不同，典型上仍在大約1 0 0道爾頓至大約1 0，0 0 0道爾頓之間，端看，當然地，個別之重複單位的分子量。在聚乙烯二醇的例子中，一聚乙烯二醇單位具有大約44道爾頓的分子量而低重量聚合物將具大約4 4道爾頓至大約5 2 8 0道爾頓之分子量。2000，3200，及5000之分子量為普遍之商業產品。一般熟悉本領域者將可辨識前述名單中可實質上溶於水且為非肽聚合物骨架絕非毫無遺漏的且說明不足，而所有具有

第13頁 593427 _案號90131261_年月日_修正 _ 五、發明說明（10) 上述品質的聚合物材質皆為受期待的。

"高重量聚合物"及π高分子量聚合物π等詞乃廣義表示一線形，分枝，或多臂聚合物骨架包括一可溶於水且非之聚合物並具有多於大約2 0 0個重複單位。這些聚合物典型上具有少者為一到二個功t能基，典型上位於線形聚合物之相對端點，上至3 0 0個，可位於聚合物骨架上或高分枝性或多臂構造的端點。分叉結構亦以其端點分枝提供二功直_能基而被期待。適當之聚合物包括，但不限定於低分子量聚合物所選擇之相同聚合物。即使聚合物之分子量可能各異，典型上為大於大約8，0 0 0道爾頓，端視，當然地，各單位之分子量。在聚乙烯二醇的例子中，高分子量聚合物分子量為大約大於8，8 0 0道爾頓。商業出品之聚乙烯二醇包括各種分子量1 0，0 0 0，1 2，0 0 0，1 5，0 0 0， 1 8，0 0 0，及 2 0，0 0 0，3 0，0 0 0，4 0，0 0 0 及更高者。分枝聚乙烯二醇則有更高分子量之產品。一般熟悉本領域者將可辨識前述名單中可實質上溶於水且為非肽聚合物骨架絕非毫無遺漏的且說明不足，而所有具有上述品質的聚合物材質皆為受期待的。

如同本文所使用者，"聚乙烯二醇"乃泛指一種線形，多臂，或分之的聚合物骨架，包括一具有CH2CH20重複單位之水溶性非肽聚合物。聚合物α， ω -二氫氧化聚乙烯二醇，可以簡式HO-PEG-OH表示其中可理解-PEG-記號表示下列結構單位- CH2CH20- ( CH2CH20 ) n-CH2CH2-其中η的範圍典型

第14頁 593427 _ 案號90131261_年月曰修正_ 五、發明說明（11) 上是由大約3至大約2 0 0 0。聚乙烯二醇聚合物族群一般表現出溶於水及許多有機溶劑，無毒，且無免疫原性。應理解聚乙烯二醇一詞為概括性且應包括聚乙烯二醇的任何線形，分枝或多臂形式，包括烷氧基聚乙烯二醇，雙功t能聚乙烯二醇，分叉聚乙烯二醇，分枝聚乙烯二醇，附著聚乙烯二醇，或帶有可裂解鍵結之聚乙烯二醇。

聚乙烯二醇，以任何本文所數之形式，典型地乃透明，無色，無味，可溶於水，财熱，對許多化學藥劑遲鈍，不水解或腐壞（除非設計使其如此），且一般皆無毒性。聚乙烯二醇被認為是生物相容的，也就是聚乙烯二醇可與活體組織或生物共存而不造成傷害。更特別的是，聚乙烯二醇為實質上之無免疫原性，也就是說聚乙烯二醇在體内沒有製造免疫反應的傾向。當其附著至一賦有某種在體内有預期之功：能的分子上時，像是生物活性劑，該聚乙烯二醇傾向於遮蔽該藥劑並可降低或減少任何免疫反應使得該生物可对受該要劑之存在。聚乙稀二醇共輛傾向於不產生一實質之免疫反應或造成凝血或其他非預期之效應。

氧化乙烯及氧化丙烯的任意或塊狀共聚物，顯示於下，與聚乙烯二醇之化學特性密切相關，且亦可作為本發明之高分子量或低分子量聚合物之聚合物骨架，其中-聚乙烯二醇-取代以： - CH2CHRO (CH2CHRO) c-CH2CHR- 且其中各R為各自獨立之Η或CH3，而C如上所述者為m或 η，是該分子為大或小者。

第15頁 593427 _案號90131261_年月曰修正_ 五、發明說明（12) π聚合物衍生物"一詞有時會用以描述本發明含有以一鍵結聯結之高分子量聚合物部分及低分子量聚合物部分之高分子量聚合產物。該名詞只圖便利其一，並用以在標示時分辨該產物聚合物與其高分子量及低分子量聚合物部分。在對本發明用於的形式之一中，該高分子量聚合物為線形聚乙烯二醇一端以氫氧機終結而另一端則為官能基， Ζ ：

H〇-CH2CH2〇- ( CH2CH20 ) n-CH2CH2-Z 該上述聚合物可以簡式HO-PEG-Z表示其中可理解該-PEG-符號代表下列結構單位： -CH2CH2〇- ( CH2CH20 ) n-CH2CH2- 其中η大於200，且典型上對於高分子量聚合物之範圍是由大約2 0 0至大約2 0 0 0。此聚合物亦可更普及地表示為 R-(聚合）a-Z，其中（聚合）a表示本發明之大聚合物部分而R則為一保護部分或一適當的反應基或受保護之反應基Y"。

另一種對本發明有用的聚乙烯二醇之類型高分子量聚合物，（聚合）&為甲氧基-聚乙烯二醇-Z，或簡稱為mPEG-Z，其中其一端為相對較不活潑之甲氧基，而另一端則為官能基，Z。曱氧基聚乙烯二醇的結構氏為：

CH30-（ CH2CH20 ) n-CH2CH2-Z 其中η如上所述。將所使用之具有一功i能基，Ζ，的曱氧基聚乙烯二醇，或具有其他不是Ζ的之聚合物活性位置以烷基，環基，或其他非反應性官能基或保護性基保護可避

第16頁 593427 _案號90131261_年月曰修正_ 五、發明說明（13) 免該高分子量聚合物自我聚合即與其他反應混和物中之分子非預期聚合。該高分子量聚合物之官能基，Z，的選擇是為了使Z功官能基可輕易地與一出現於低分子量聚合物上相關之反應種類，Y或Y ’，形成一共價鍵，以便於反應時形成一聯結，X，於高分子量聚合物及低分子量聚合物之間。適當之官能基將討論於下。 # 如同一種適用於本發明之實施的範例形式，低分子量聚合物為一線形聚乙烯二醇聚合物一端終於一官能基，Y 或γ ’，在與高分子量聚合物之z部分反應時可輕易地形成一抗水解之聯結基，而一額外的官能基，Y或Y ’，可與一生物活性劑形成一共價鍵或被調變為可與一生物活性劑形成共價鍵的形式：

Y’ -CH2CH2〇- ( CH2CH20 ) m-CH2CH2-Y 上述聚合物可以簡化為Y’ -PEG-Y之形式，其中可理解-PEG-記號可以下列結構單位表現：

-CH2CH2〇- ( CH2CH20 ) m-CH2CH2-而m是分佈於1至大約120的範圍，且典型上為少於大約 6 0，對於低分子量聚合物來說。更普遍說來，該聚合物可以Y’ -(聚合）b -Y表示，其中（聚合）b表示本發明的小分子聚合物部分。低分子量聚合物的官能基Y ’及Y之顯則是為了使其不會在反應條件下輕易地相互鍵結，而避免低分子量聚合物的自相聚合。可接受的Y’及Y官能基將特別於下面更完整敘述。該聚合物骨架亦可包含一種分枝結構，典型上為具有

第17頁 593427 _案號 90131261_年月日__ 五、發明說明（14) 一中心分枝核部分及一些聚合物鏈，較佳者為線形聚合物鏈，聯結至該中心核。在一具體實施例中，聚乙烯二醇被用於一分枝形式的製備，舉例來說，經由將氧化以烯加成至各種二醇中心結構，像是甘油，甘油寡聚物，五紅蘚醇及山梨醇。任何聚合醇類提供可供聯結至聚合物鏈之眾氫氧基皆可用於本發明之實施。聚合醇類分枝中心結構可提供由大約3到100個可用氫氧基，而典型上為大約提供3至丨 20個，使得分枝聚合物結構具有大約3至100個聚合物 ί

鏈。此行之分枝聚乙烯二醇分子一般可以R (-PEG-OH) &表| 示其中R為由中心核部分所衍生，像是甘油，甘油募聚物，或五紅蘚醇，而n a"表示分枝數，典型上大約為3到 20。丨為了作為高分子量聚合物之用途，分枝聚乙稀二醇之氫氧基一般再與低分子量聚合物結合之前會被轉換為官能基Z。分枝或多臂式高分子量聚合物具有R ( -PEG-Z ) a之外型，並可結合大約3到2 0個本發明之低分子量聚合物，端賴分枝程度或支臂所具有之活性基的數目。該分枝分子的中心核部分可由數種氨基酸任何一種所衍生而來，像是離胺酸，其中該中心核部分典型上提供了二或多個位置，例如氨基，以為聚合物鏈之附著。多臂聚乙烯二醇分子，像是在美國專利編號5，9 3 2，4 6 2中所描述者，附於本文參考資料以資其完整性，亦可被用為聚合物骨架。

第18頁 593427 _案號 90131261_年月日__ 五、發明說明（15)

此外高分子量聚合物之聚合物骨架可包括一分叉的聚乙烯二醇。分叉的聚乙烯二醇範例之一表現於PEG-ACHZ 2，其中A為聯結官能基而Z為經由一既定長度之原子鏈聯結至CH之活化的端點官能基。國際申請專利編號 PCT/US9 9 / 0 5 3 3 3，其内容附於本文之參考資料中，揭露出各種分叉的聚乙烯二醇結構以資本發明之一具體實施例之利用。將Z聯結至分枝碳原子的原子鏈是作為約束官能基，並可包括，舉例來說，烧鏈，醚鏈，酯鏈，酸胺鏈及其綜合者。該Z官能基可被用於本發明中和低分子量聚合物上之官能基之一，Y或Y’，反應以形成低分子量及高分子量聚合物之間的鍵結。低或高分子量聚合物之聚合物骨架可能包括一具有官能基Z，Y，或Y’，之懸垂聚乙烯二醇分子可能共價附著於聚乙烯二醇的整個骨架上而非聚乙烯二醇鏈的尾端。該懸垂反應官能基可直接附著於聚乙烯二醇骨架上或經由一聯結部分，像是烷烯基。

在具有多於一官能基，Z，的高分子量聚合物的例子中，該聚合物上有許多的位置可供相對應之低分子量聚合物上的官能基Y或Y ’結合。所產生的聚合物衍生物為求方便表示為： PEG-[X- ( CH2CH20) m-Y] q 其中PEG為一種線形聚乙烯二醇，烷氧基-聚乙烯二醇，一種分枝的聚乙烯二醇，或一分叉的聚乙烯二醇其中聚乙烯二醇的聚合程度為最少大約2 0 0，較佳者為大於約1 0 0 0，

第19頁 593427 案號90131261 年月日修正五、發明說明（16) 且以少於大約2 0 0 0者為較佳，X為聯結部分，m是由1到大約1 2 0，而以少於6 0較佳，Y為一種用以附著於生物活性劑上的官能基，而q等於聚和物端點官能基之數目且可為由1 到大約5 0 0。當q為2，則Y可為相當或不同，但如果q遠大於3或4，則Y應全都為相同的官能基。更常見的是，在上述之結構中，PEG可表示為（聚合）b以包括相似的小分子聚合物，共聚物，募聚物，及之類者。在上面所述之各種聚乙烯二醇的形式之外，也可將任何上述之聚合物的骨架製備為含有一或多個弱或可裂解鍵結者。舉例來說，可製備聚合物骨架含有用於水解的酯類鍵結之聚乙烯二醇。如下所示，水解將導致該聚合物裂解為較低分子量之聚合物片段： -PEG-CO「PEG- + H 20一-PEG-CO 2H + H〇-PEG-同樣的，可藉由一弱或可裂解的聯結部分將一聚合物骨架共價附著在一生物活性劑上。舉例來說，經由將聚乙烯二醇羧酸或活化的聚乙烯二醇羧酸與生物活性劑上之醇基反應形成的酯類鍵結通常可在生理條件下水解而釋出該藥劑。其他可水解之鍵結，可被用為一種聚合物骨架中可裂解的鍵結或聯結聚合物骨架或生物活性劑之間的可裂解鍵結，包括碳酸鍵結；亞胺鍵結導致，舉例來說，由胺和醛類反應而來（請見，例如，倣其等人，聚合物前出版，3 8 (1 ) : 5 8 2 - 3 ( 1 9 9 7 )，附於本文以為參考資料。）；磷酸酯類鍵結之形成，舉例來說，經由將一酒精類與一磷酸

593427 _案號 90131261_年月日_^__ |五、發明說明（17) 類反應；（月宗）鍵結典型上是將醯胼與一醛類反應形成；縮醛鍵結則典型上是由一醛類及一種醇類反應所得；鄰位酯類鍵結，舉例來說，則是經由曱醛鹽及一種醇類之間的反應而形成；肽鍵則經由胺基，例如位於諸如聚合物聚乙烯二醇之一端，與一胜肽類之羧基反應；而一寡核苷酸鍵結，舉例來說，則是一 p h 〇 s p h 〇 r a m i d i t e基，例如，在聚合物之一端，與一募核苷酸之5’端氫氧基反應而形成。

此外還有許多也適用於本發明的聚合物。非肽及溶於水之聚合物骨架尤其對本發明有用。利用上述之方法取代聚乙烯二醇的合適聚合物範例包括，但不限定於，其他聚烯二醇，像是聚丙烯二醇（PPG )，乙烯二醇及丙烯二醇之共聚物及之類者，聚烯醇，聚乙烯一氮五圜酮，聚氫氧烷基曱基丙烯醯胺，聚氫氧烷基甲基丙烯鹽，多醣，聚 (α -氫氧酸），聚乙烯醇，聚磷腈，聚噁唑啉，聚（氮-丙烯酸對氧氮己環），諸如美國專利編號5，6 2 9，3 8 4中所 I述者，並附於本文參考資料以為其完整性，及共聚物，四丨聚物，及其混和物。

一般熟悉本領域者將可辨識前述之實質可溶於水的聚合物列表決非完整無疑的且僅為說明性的，所有具有上述性質之聚合物材質皆列入考慮。形成X聯結基之成分如上所提示者，方法及形成的功官能性聚合物可表示

第21頁 593427 案號90131261 年月日修正五、發明說明（18)

R -（聚合）a-z + Y’-(聚合）Y-(聚合）b-X-(聚合） a-X-(聚合）b-Y Z為高分子量聚合物（聚合）a尾端官能基而Y和Y ’則為低分子量聚合物（聚合）b尾端官能基。R可依預期包括一尾端官能基Z以產生一種如所示之同質雙官能基聚合物，或一種受保護的活性基以為猶晚聯結至另一活化的較小聚合物，被不同的官能基Y"活化，如果預期一大分子量異質雙官能基聚合物。

各種反應基Y ，Y ’，Υπ及Z包括但不限定於，氮-琥珀醯亞胺碳酸鹽（請見例如，美國專利編號5，2 8 1，6 9 8，

5，4 6 8，4 7 8 )，胺（請見例如，伯克曼等人，巨分子化學，1 8 2 : 1 3 7 9 ( 1 9 8 1 )，柴普力普斯基等人，歐洲聚合物期刊，1 9 : 1 1 7 7 ( 1 9 8 3 ))，S藍胼（請見例如，安得理司等人，巨分子化學，1 8 9 : 3 0 1 ( 1 9 78 ))，琥珀醯亞胺丙酸鹽及琥珀醯亞胺丁酸鹽（請見例如，傲森等人於聚乙烯二醇化學及生物應用，頁1 7 0 - 1 8 1，哈力.司及柴普力普斯基編輯，美國化學協會，華盛頓首府，1 9 9 7 ;亦可見於美國專利編號5，6 7 2，6 6 2 )，琥珀醯亞胺琥珀酸鹽（請見例如，阿普珠斯基等人，癌症生物化學生物物理，7 : 1 7 5 (1 9 8 4 )及橋比其等人，巨分子醇類化學1 8 0 : 1 3 8 1 (1 9 7 9 ))，琥珀醯亞胺酯類（請見例如，美國專利編號 4，6 7 0，4 1 7 )，苯三噁唑碳酸鹽（請見例如，美國專利編號5，6 5 0，2 3 4 )，縮水甘油醚（請見例如，培尚等人，歐洲生物化學期刊，9 4 ·· 1 1 ( 1 9 7 9 )，愛林等人，生物技術

第22頁 593427 案號90131261 年月日修正五、發明說明（19)

應用生物化學，1 3 : 3 5 4 ( 1 9 9 1 )，氧化碳醯咪唑（請見例如，包強等人，分析生物化學，1 3 1 : 2 5 ( 1 9 8 3 )，東地利等人，控制釋放期刊，1 : 25 1 ( 1 9 8 5 ))，鄰-氨基酚碳酸鹽（請見例如，培隆尼茲等人，應用生物化學生物技術，1 1 : 1 4 1 ( 1 9 8 5 ):及薩多等人，應用生物化學生物技術，2 7 : 4 5 ( 19 9 1 ))，醛類（請見例如，哈理司等人，聚合物科學化學編輯期刊，22 ·· 34 1 ( 1 9 84 )，美國專利編號5，8 2 4，7 8 4，美國專利編號5，2 5 2，7 1 4 )，順丁烯二酸亞胺（請見例如，古德森等人，生物技術，8 : 343 (1 9 9 0 )，羅曼妮等人，胜及蛋白質化學2 : 2 9 (1 9 84 )，及科根，合成通訊，2 2 : 24 1 7 ( 1 9 9 2 ))，雙硫正嘧啶（請見例如，華夫輪等人，生物共軛化學，4 : 3 1 4 ( 1 9 9 3 ))，丙稀醇（請見例如，沙尼等人，巨分子，2 6 : 5 8 1 ( 1 9 9 3 ))，乙醯磺基（請見例如，美國專利編號5，9 0 0，4 6 1 )。上述之所有資料接附於本文以為參考資料。

選擇末端基Z及可與Z反應的官能基Y，Y’或Y"使得該 i 末端基部分互補，也就是說該末端基在反應條件下可輕易| 形成一種典型上在生理條件下可抗水解之聯結基X。聯結 i 基X之形成將高分子量聚合物與低分子量聚合物結合，因此而形成一整體上官能基化的高分子量聚合物衍生物。只要不互相反應，Y，Y’和Y”可為相同或不同者。此外，最少一反應機Y或Y ’不應和Z反應以提供完成之聚合物的功能。

第23頁 593427 案號 90131261 年月曰修正五、發明說明（20) 低分子量聚合物上的官能基或化學反應基應由氫氧基，受保護的氫氧基，活性酯類，活性碳酸類，縮醛，醛類，醛類水和物，烯基，丙烯酸鹽，甲基丙烯酸樹脂，丙烯醯胺，活性磺基，胺，受保護的胺，醯胼，受保護的醯胼，硫醇，受保護的硫醇，羧酸，受保護的羧酸，異氰酸鹽，異硫化氰酸鹽，順丁烯二酸亞胺，乙醯磺基，二硫吡啶，乙醯吡啶，碘乙醯胺，環氧化物，乙二醛，二酮，曱磺酸，苯磺酸，硫化硫酸鹽，乙磺酸群組中選擇。反應末端基可選下列者選出一種或其混和：-（CH2) rC02H，- ( CH2) r，C02 NS，-（ CH2) r，C02 Bt，-（ CH2) rCH (OR) 2，-（ CH2) rCH0，- ( CH2) 2-NH2，-（ CH2) rM，-(CH2 ) r-S-S02-R，其中r等於1至5，r’等於0至5，R為環烷基或烧基，NS為氮-破拍酷亞胺基，Bt為1-苯三°惡0坐，而Μ 為氮-順丁烯二酸亞胺基。 # 典型上，聯結部分X為親水性且為短鏈。然而，該聯結基可由斥水性成分製備使得，不論親水性或斥水性，該件結基並不實質上地改變該聚合物的性質。也就是，在聚乙烯二醇的例子中，該件結基不應改變前述所定義之聚乙烯二醇性質。反應條件適當的溶劑提供了一種Ζ及Υ，Υ，或’ Υ"末端基的形成 X聯結基的反應基質，其包括但不限定於，甲苯，四氫呋喃，雙氧二次乙基，乙腈，氣化甲烯，氣仿，二曱基曱醯胺，二甲基亞風，苯，二甲基苯，及具有相似化學特性的

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593427 案號 90131261 年月曰修正五、發明說明（21) 溶劑。參以發現本發明之經調變共軛之低分子量聚合物比過往相似之經調變共軛的高分子量聚合物的過渡，分離，並純化之結果較有效且較佳。整體來說，分離低分子量聚合物混和物為各種類成分比相似之高分子量聚合物來得容易。末端基調變及共軛一般為多重步驟流程，各官能基化步驟皆形成聚合物雜質。如果純化效果不佳，就像在處理高分子聚合務實，在整個聚合物官能基化流程中該雜質將累積至無法忍受的程度。根據本發明經由先在低分子量聚合物上實施官能基化及純化流程並接著將純化的低分子量聚合物與一高分子量聚合物接合，將牽涉高分子量聚合物的處理步驟降至最低，而得一預期純度之官能基化或共軛高分子量聚合物衍生物。本發明形成活化的高分子量聚合物之方法一種高分子量，水溶性，非肽，的聚合物具有最少一官能基，Z，共價附著於一低分子量，典型上為寡聚物，水溶性，非肽，的聚合物，其具有最少二個官能基，Y ’及 Y，可為相同或不同，只要Y不會和Y ’反應而Z則最少會與Y 或Y ’其中之一反應。本發明亦在該官能基化聚合物衍生物依本發明生產之後將該聚合物衍生物和一生物活性劑之共軛具體實施。一般說來，官能基化聚合物之方法及結果表示為： (聚合）a-Z + Y’-（聚合）b-Y—(聚合）a-x-(聚合）b-Y 其中（聚合）a具有最少大約2 0 0個重複單位，典型上為最少

第25頁 593427 案號90131261 年月日修正五、發明說明（22) _ 大約1 0 0 0個，而更典型者則介於1 0 0 0及2 0 0 0之間；而（聚合）b則大約上至1 2 0，且典型上為少於6 0個重複單位。Y 及Y’可為相同或不同者，只要Y不會和Y’反應，且為官能基，而X為一種經由Z與Y或Y ’部分反應形成的聯結分子。在上述之範例中，Z與Y ’反應形成一聯結X。另可額外地將 (聚合）a官能基化以和Y之反應基產生一種同質雙官能基聚合物於各端點。如果將此額外的官能基保護以免於反應，則可將該保護基自產生軛聚合物共軛移除以製造一種異質雙官能基聚合物。本發明所得之聚合物衍生物包括一種高分子量水溶性聚合物部分共價聯結至，經由一聯結基，至一種低分子量水溶性聚合物部分。該低分子量聚合物部分具有一官能基化之末端基，Y，除了提供與高分子量聚合物部分鍵結的末端基以外。該額外的官能基化末端基，Y，位於該低分子量聚合物部分，提供了一種與生物活性劑共價鍵結或轉變為這種官能基之鍵結基。下面提供的是本發明非限制性的範例。

範例1 · α -1 - 丁烷氧化碳醯氨基-ω -曱烷硫酸鹽聚乙烯二醇（3 4 0 0 )之合成將α -Ν-t-丁烧氧化碳醯氨基-ω-氫氧基聚乙稀二醇 (3400)(分子量3318道爾頓，4.0克，0.0012莫耳） (海鷗公司）在一旋轉蒸發器於攝氏3 5度下於氯仿中（8 0 毫升）沸點固定至乾燥並將氯仿（5 0毫升）加入殘餘液中。將該溶液在氬氣中冷卻至攝氏4度並注入三乙基胺

第26頁 593427 案號90131261 年月日修正五、發明說明（23) (0 · 3毫升，0 · 0 0 2 2莫耳），接著將甲烷磺醯氯（0 · 1 5毫升，0 · 0 0 1 9莫耳）緩緩注入。將該反應混和物在氬氣中攪拌一晚而所浴之溫度可升至室溫。將去水碳酸鈉（4. 0 克）加至反應混和物並將所得之溶液於室溫下攪拌一小時。然後將混和物過濾並將過濾液濃縮至乾燥。加入異丙醇（4 0毫升）並經由過濾收集沈澱之產物且以真空乾燥之。產生3.7克的α-t -丁烷氧化碳醯氨基-ω-甲烷硫酸鹽聚乙烯二醇（340 0 )。核磁共振（DMSO-d6) : 1· 37ppm (s，-OC ( CH3 ) 3) ，3 · 51 ppm (s，聚乙稀二醇骨架）， 4. 31 ppm ( t，-CH2SO「），6 · 7 6 ppm (-CH2NH-CO-)。本範例說明如何將低分子量聚合物，α - N _ t - 丁烷氧化碳醯氨基-ω-氫氧基聚乙稀二醇（3400)，的官能基，Y，在高調變之低分子量聚合物產率下加以調變。摩色例2 · 0； - t - 丁烧氧化碳驢氨基--鄰-甲苯硫代硫酸聚乙烯二醇（3400)之合成

將a -1 - 丁烷氧化碳醯氨基-ω -甲基硫酸聚乙烯二醇 (340 0 )(範例1之產物）（1· 0克，〇· 30毫莫耳）在氯仿中（3 0毫升）以旋轉蒸發器以攝氏3 5度沸點固定至乾燥並在殘餘液中加入無水乙醇（1 5毫升）。將鄰-甲苯硫代硫酸鉀（2 9 2毫克，1 · 2 5毫莫耳）加入並將混和物在氬氣下回流一晚。以旋轉蒸發器在攝氏4 0渡下江溶劑移除並將殘餘物以真空乾燥3 0分鐘。將粗產物溶解於1 0 0毫升的1 Μ磷酸二氫鈉-磷酸氫鈉緩衝溶液ρΗ5. 8中（含有10重量百分比之氣化鈉）並將所得之溶液乙二氯甲烷萃取（100毫升三

第27頁 593427 _案號90131261_年月日__ 五、發明說明（24) 次）。將二氯曱烷曾以無水硫酸鈉乾燥，過濾，並將過濾液以旋轉蒸發器濃縮至近乎乾燥。加入異丙醇/乙醚（4 0 毫升/ 2 0毫升）沈澱，過濾回收，並以真空乾燥。產生： 0 · 7克α -1 - 丁烷氧化碳醯氨基-ω -鄰-甲苯硫代硫酸聚乙稀二醇(3 4 0 0 )。核磁共振(DMSO -d6 ) : 1.37ppm (s，- OC ( CH3 ) 3 ) ，2. 4 3 ppm ( s，CH3-CH2vCH2/Ar) ， 3. 51 ppm (s，聚乙稀二醇骨架），6.76ppm (-CH2NH-CO-）， 7.49 ppm (dd，CH3-CH2= CH2/Ar)。本範例再次地說明如何將低分子量聚合物，α -1 - 丁烷氧化碳醯氨基-ω -甲磺酸聚乙烯二醇（3 4 0 0 )，的官能基，Υ，在高調變之低分子量聚合物產率下加以調變。範例3· α -ΝΗ?- ω -曱苯硫代硫酸聚乙烯二醇（340 0 ) 之合成將a -1 - 丁烷氧化碳醯氨基-ω -鄰-曱苯硫代硫酸聚乙烯二醇（3 4 0 0 )(範例2之產物）（0 · 7克）於氬氣中溶解在無水二氯甲烷（3 · 5毫升)及三氟醋酸（3 · 5毫升）。將該溶液在室溫下攪拌一小時並濃縮至乾燥。加入異丙醇 (2 0毫升）過濾收集沈澱產物並以真空乾燥。產生：〇. 6 克α - Ν Η2- ω -曱苯硫代硫酸聚乙烯二醇（3 4 0 0 )。核磁共振（DMS〇-d6 ) : 2. 43 ppm ( s，CH3-CH2= CH2/Ar ) ，2· 95 ppm ( t 5 -〇CH2CH2NH2 ) ，3.51 ppm (s，聚乙稀二醇骨架）9 7.49 ppm ( dd，CH3-CH2二 CH2/Ar ) ，7. 82ppm ( dd， CH3-CH2= CH2/Ar )。本範例再次地說明如何將低分子量聚合物，α -1 - 丁烷氧化碳醯氨基-ω -鄰-甲苯硫代硫酸聚乙

593427 案號 9ϋ131261 年月曰修正五、發明說明（25) ，在高調變之低分子量聚 23.4千道爾頓）-鄰-甲苯烯二醇（3400)，的官能基，合物產率下加以調變。範例4,甲氧基聚乙烯二醇硫代硫酸將甲氧基聚乙烯二醇（2 0千道爾頓）-1 -苯三噁唑碳酸鹽（813克，分子量21千道爾頓，0. 0 3 9莫耳）（海鷗公司及聚乙稀二醇（3400) - -氛基鄰-曱苯硫代硫酸（範例3的產物）（分子量3 8 0 5道爾頓，2 0 0毫克， # 0.053毫莫耳）隨著氬氣及三乙基胺（30.8微升，0.22毫莫耳）之注入溶解在無水二氯曱烷中（2 0毫升）。將該溶液於氬氣中在室溫下攪拌一晚，然後濃縮至乾燥。加入2 -異丙醇（1 0毫升）沈澱並以過濾收集產物並在真空下乾燥一晚。產生843毫克。將在50毫升去離子水的粗甲氧基聚乙烯二醇（2 3 · 4千道爾頓）-鄰-甲苯硫代硫酸（.5 6 0毫克）注入以5 0毫升Ρ 〇 r 〇 s基質製備的純化柱中。以1 0 0毫升去離子水沖g是該柱。在析出液中加入氯化納（1 5克）並將所的溶液以二氯曱烷（1 0 0毫升三次）萃取。將該萃取物以無水硫酸鈉乾燥一晚，過濾，並將過濾液在旋轉蒸餾器上濃縮至幾近乾燥。加入乙醚（50毫升）沈澱產物。過濾收集該產物並在真空下加以乾燥。產生4 9 5毫克的甲氧基聚乙烯二醇（2 3 · 4千道爾頓）-鄰-曱苯硫代硫酸。核磁共 ^ ( DMSO - d6 ) : 2· 43 ppm ( s，CH3-CH2= CH2/Ar )， 3.51 ppm ( s，聚乙稀二醇骨架），7· 23 ppm(t，-NHCOO-)，7·49 ppm(dd，CH2/Ar)，7·82 ppm

第29頁 593427 案號90131261 年月日修正五、發明說明（26) (dd，CH3-CH2= CH2/Ar )。本範例說明如何將高分子量聚合物，曱氧基聚乙烯二醇（2 0千道爾頓）-；1 -苯三噁唑碳酸鹽，與一經調變的低分子量聚合物，聚乙烯二醇 (3 4 0 0 ) - a -氨基-ω -鄰-曱苯硫代硫酸納，經由功皇_能基Ζ，苯三嗔嗤，及官能基Υ ’，氨基，的反應形成高分子量及低分子量部分之間的聯結基。範例5 . α 1 -抗胰蛋白酶之聚乙烯二醇化在αΐ -抗胰蛋白酶（1毫克，西格瑪，分子量25千道爾頓）之lOOmM填酸納（ρΗ7·2，1毫升）溶液中加入2.8毫克的鄰-甲苯硫代硫酸甲氧基聚乙烯二醇（範例4之產物）

(2 4千道爾頓）並將溶液在室溫下攪拌一晚。毛細管電泳指出聚乙烯二醇αΐ -抗胰蛋白海之共軛產物之形成為百分之三十六之產率。月桂醇硫酸鈉膠體電泳亦說明了聚乙烯二醇之共輛產物的存在。將聚乙烯二純共軛以b -硫基乙醇處理可得如膠體電泳所證明之α 1 -抗胰蛋白酶的形成，而指出在聚乙烯二醇α 1 -抗胰蛋白酶共軛中雙硫鍵之存在。本範例說明將一生物活性劑，α 1 -抗騰蛋白酶，與範例4. 之高分子量聚合物衍生物經由功官能基化之末端官能基 Υ，鄰-曱苯硫代硫酸鹽，結合。範例6 ·曱氧基聚乙稀二醇（2 2千道爾頓）-丙酸將曱氧基聚乙烯二醇（2 0千道爾頓）-笨三噁唑碳酸鹽（2 · 0克，0 · 0 0 0 1莫耳）（海鷗公司）之曱烯氯（2 0毫升）溶液加入聚乙烯二醇（2千道爾頓）-α -氨基-ω -丙酸（0.24克，0.00012莫耳）（海鷗公司）及三乙基胺

第30頁 593427 案號90131261 年月日修正五、發明說明（27) (0 . 0 6 0毫升）並將反應混和物於氬氣中在室溫下攪拌一晚。然後將混和物過濾並將溶劑真空乾燥。將粗產物溶解於曱烯氣中並以異丙醇沈澱。將潮濕產物減壓乾燥。產生 1. 9 克。核磁共振（d「DMSO) : 2. 44 ppm ( t，-CH「丨 COO- )，3· 1 1 ppm ( q，-CH2-NH-），3. 24ppm ( s，-0CH3 ) ，3 · 5 1 ppm ( s，聚乙稀二醇骨架），4 · 0 4ppm (m，-CH2-0 (〇0)-) ，7.11ppm (t，- (OO) - NH-)、陰丨

離子交換樹脂色層分析產生曱氧基-聚乙烯二醇（22千道爾頓）-丙酸（93%)及曱氧基-聚乙烯二醇-20千道爾頓丨 i (7% )。本範例說明如何將高分子量聚合物，曱氧基-聚i 乙烯二醇（20千道爾頓）-苯三嗔嗤碳酸鹽，與一低分子丨量聚合物，聚乙烯二醇（2千道爾頓）-α-氨基-ω -丙酸，經由官能基化之碳酸，Ζ，及氨基，Υ ’，末端官能基結合。範例7 ·曱氧基聚乙烯二醇（2 2千道爾頓）-丙酸，氮- 氮氧基號拍亞胺醋

將曱氧基聚乙烯二醇（2 2千道爾頓）-丙酸（範例6之產物）（1· 1克，0· 0 0 0 0 5 0莫耳）之無水曱烯氣（10毫升）溶液加入氮-氫氧基琥珀亞胺（0 · 0 0 6 3克，0 . 0 0 0 0 5 5 莫耳）及1,3 -二環己烷碳二亞胺（1.0Μ之甲烯氯溶液， 0 · 0 5毫升，0 · 0 0 0 0 5 5莫耳）。將反應混和物於氬氣中在室溫下攪拌一晚。然後將混和物過濾並將溶劑蒸發。將粗產物溶解於曱烯氣中並以異丙醇沈澱，減壓乾燥。產生0. 9 克。核# 共 I ( d6一DMS0 ) ·· 2· 81ppm ( s ，一CH2 — CH2_ ( 王白

第31頁 593427 _案號 90131261 五、發明說明（28) 年月曰修正酸鹽））5 2.92 ppm -CH厂COO-) •11 ppm ( q CH2-NH- ) ，3.24ppm (s，- 0CH3) ，3.51 ppm (s，聚乙稀二醇骨架），4.03ppm (m，-CH2-〇 (〇0)-) j 7.11 ppm (t，-（ C = 0 ) - N H -)。本範例說明如何將範例6所產生聚合物的官能基，Y，由丙酸調變為丙酸，，氮-氫氧基琥珀亞胺酯。範例8 ·聚乙烯二醇（2千道爾頓）-α -氨基- ω -丙酉复，曱酉旨

將聚乙烯二醇（2千道爾頓）-α-氨基-ω-丙酸（10 克，0 · 0 0 5 0莫耳）（海鷗公司）之無水曱烯氣（1 〇〇毫升）溶液加入卜氫氧基苯三噁唑（0· 30克），4-(二曱基氨）吡啶（1.0克），甲醇（3.2克，0.100莫耳）及1，3-二環己烷碳二亞胺（1.0Μ之甲烯氯溶液，7. 5毫升， 0 · 0 0 7 5莫耳）。將反應混和物於氬氣中在室溫下攪拌一晚。然後將混和物濃縮至大約50毫升，過濾並以冷二乙基醚加至8 0 0毫升。將沈澱產物過濾並減壓乾燥。產生9. 5 克。核磁共振（d「DMS0 ) : 2· 53 ppm ( t，-CH2-C00-)，

2.95ppm (t，-CH2-胺），3.51ppm (s，聚乙稀二醇骨架）。本範例說明將低分子量聚合物，聚乙烯二醇（2千道爾頓）-α-氨基-ω-丙酸，之末端官能基，Y，由丙酸調變為丙酸，甲酯。範例9 ·甲氧基聚乙稀二醇（3 2千道爾頓）-丙酸，甲將甲氧基聚乙烯二醇（3 0千道爾頓）-苯三噁唑碳酸

第32頁 593427 _案號 90131261_年月曰_^_· 五、發明說明（29) ·, 鹽（3 · 0克，0 · 0 0 0 1莫耳）（海鷗公司）之曱烯氯（2 0毫升）溶液加入聚乙烯二醇（2千道爾頓）-α-氨基-ω-丙 · 酸，甲酯（範例8的產物）（0 · 24克，0 · 0 0 0 1 2莫耳）及三乙基胺（0. 0 6 0毫升）並將反應混和物於氬氣中在室溫下攪拌一晚。然後將混和物過濾並將溶劑蒸發。將粗產物溶解在甲烯氯中，以異丙醇沈澱，並減壓乾燥。產生2. 8 克。核磁共振（d「DMSO ) : 2· 53 ppm ( t，-CH2-C00-)， 3.11 ppm ( q，-CH2-NH- ) ，3. 2 4ppm ( s，-〇CH3) ，3. 51 ppm(s，聚乙烯二醇骨架），4.04ppm(m，-CH2-0 ^ (C = 0)-) ’7.11 ppm(t，-（C:0) - NH-)。本範例說明將範例8所產生的低分子量聚合物和高分子量聚合物，曱氧基聚乙烯二醇（3 0千道爾頓）-苯三噁唑碳酸鹽，經由Z，苯三ϋ惡唾碳酸鹽，及Y ’，氨基，功直_能基結合。範例1 0 ·甲氧基聚乙烯二醇（3 2千道爾頓）-丙酸 -

將甲氧基聚乙烯二醇（32千道爾頓）-丙酸，甲酯 (範例9·之產物）（2.8克，0.000082莫耳）溶解在去離丨子水中並將酸鹼度以0.5Μ氫氧化鈉溶液調整至12.0。將反 I

I 應混和物於ρΗ= 12. 0 + /-0· 1下攪拌1. 5小時。然後加入氣化 i 鈉（3克）並將酸鹼度以5 _ %磷酸調整至3。以曱烯氣萃取產物三次並將合併的萃取物以無水氯化鎂乾燥。以減壓乾 I 燥移除溶劑並以減壓乾燥產物。產生1. 6克。核磁共振 (d「DMSO ) ·· 2· 44 ppm ( t，-CH2-C00- ) ，3· 1 1 ppm (q，-CH2-NH-) ，3.24ppm (s，-〇CH3) ，3.51 ppm (s，聚乙烯二醇骨架），4.04ppm(m，-CH2-0(C = 0)-) ，7·11

第33頁 593427 案號90131261 年月日修正五、發明說明（30) ppm(t，-(O0)-NH-)。陰離子交換色層分析可得曱氧基聚乙烯二醇（32千道爾頓）-丙酸（97.5%)，曱氧基聚乙烯二醇-3 0千道爾頓（2 · 5 % )。本範例說明將範例9 ·所產生的聚合物之官能基，Y，由丙酸，甲酯調變為丙酸。範例1 1.曱氧基聚乙烯二醇（3 2千道爾頓）-丙酸，氮-氫氧基琥珀亞胺酯

將曱氧基聚乙烯二醇（3 2千道爾頓）-丙酸（範例1 0 · 之產物）（1.6克，0.000050莫耳）之無水甲烯氯（10毫升）溶液加入氮-氫氧基琥珀亞胺（0 . 0 0 6 3克，0 . 0 0 0 0 5 5 莫耳）及1,3 -二環己烷碳二亞胺（1.0M之甲烯氯溶液， 0 . 0 5毫升，0 . 0 0 0 0 5 5莫耳）。將反應混和物於氬氣中在室溫下攪拌一晚，過濾並將溶劑蒸發。將粗產物溶解於甲烯氣中，以異丙醇沈澱，並減壓乾燥。產生〇. 9克。核磁共振（d6-DMSO) · 2·81ρρπι (s，-CH2-CH2_ (破 ί白酸鹽））， 2· 92 ppm ( t，-CH2-COO-），3 · 1 1 ppm ( q，-CH2-NH - )， | 3.24ppm(s，-〇CH3) ，3.51 ppm(s，聚乙烯二醇骨 ! 架）’ 4.03ppm (m 5 - CH2 - Ο (C^O)- ) ’ 7.11 ppm (t，- 丨

(〇0)-NH-)。本範例說明如何將範例9所產生聚合物的官丨能基，Y，由丙酸調變為丙酸，氮-氫氧基琥珀亞胺酯。丨範例1 2 ·甲氧基聚乙烯二醇（2 3 · 4千道爾頓）-丁酸；將甲氧基聚乙烯二醇（20千道爾頓）-苯三噁唑碳酸 i 鹽（2 · 0克，0 · 0 0 0 1莫耳）（海鷗公司）之曱烯氯（2 0毫升）溶液加入聚乙稀二Sf· (3.4千道爾頓）- -氨基- 丁酸（0·45克，0.00012莫耳）（海鷗公司）及三乙基胺

第34頁 593427 _案號9Q131261_年月曰修正_ 五、發明說明（31) (0 · 0 6 0毫升）並將反應混和物於氬氣中在室溫下攪拌一晚。然後過濾並將溶劑蒸發乾燥。將粗產物溶解於甲烯氣丨中，以異丙醇沈澱，並將產物減壓乾燥。產生2. 2克。核磁共振（d「DMSO) : 1.72 ppm(q，CH2-CH2-C00-）， ι 2. 24ppm ( t，-CH「COO - ) ，3· 1 1 ppm ( q，-CH2-NH-）， 3. 2 4ppm ( s 5 - OCH3) ，3.51 ppm (s，聚乙稀二醇骨架），4.04ppm(m，-CH2-〇(C = 0)-) ，7.11ppm(t，- 丨 (C = 0)-NH-)。陰離子交換色層分析可得甲氧基聚乙烯二 | 醇（23.4千道爾頓）-丁酸（92%)，甲氧基聚乙烯二醇-i 20千道爾頓（8%)。本範例說明將低分子量聚合物，聚 | 乙烯二醇（3.4千道爾頓）_α -氨基-ω_ 丁酸，和高分子 | 量聚合物，曱氧基聚乙烯二醇（20千道爾頓）-苯三噁唑丨碳酸鹽，經由苯三噁唑碳酸鹽，Ζ，及氨基，Υ ’，官能基結合。範例1 3 ·甲氧基聚乙烯二醇（2 2千道爾頓）_丙酸，氮-氫氧基琥珀亞胺酯將甲氧基聚乙烯二醇（2 3 · 4千道爾頓）-丙酸（範例 1 2 ·之產物）（1 · 1 7克，0 · 0 0 0 0 5 0莫耳）之無水曱烯氯 (10毫升）溶液加入氮-氫氧基琥珀亞胺（0· 0 0 6 3克， 0.0 0 0 0 5 5莫耳）及1，3-二環己烷碳二亞胺（1.0Μ之甲烯氣溶液，0 . 0 5毫升，0 . 0 0 0 0 5 5莫耳）。將反應混和物於氬氣中在室溫下攪拌一晚，過濾並將溶劑蒸發乾燥。將粗產物溶解於甲烯氣中，以異丙醇沈澱，並減壓乾燥。產生1.0 克。核磁共振（d「DMSO) : 1.83 ppm(q，CH2-CH2- | 593427 _案號90131261_年月曰修正_ 五、發明說明（32) COO-) ，2.70 ppm ( t 5 -CH2-C00-) ，2.81 ppm ( s 5 -CH2- CH「（破珀酸鹽）），2.92ppm，3.11 ppm(q，-CH2-NH- ) ，3· 24ppm ( s，-0CH3) ，3 · 5 1 ppm ( s，聚乙烯二醇

骨架），4.03ppm (m，-CH2 - 0 (OO)-），7.11 ppm (t，-(〇0)-NH-)。本範例說明如何將範例12.所產生聚合物的官能基，Y，由丁酸調變為丁酸，氮-氫氧基琥珀亞胺S旨。範例1 4 ·甲氧基聚乙烯二醇（2 0千道爾頓）-胺將甲氧基聚乙烯二醇（2 0千道爾頓）-苯三噁唑碳酸鹽（2.0克，0.0001莫耳）（海鷗公司）之曱烯氯（20毫升）溶液加入三乙烯二醇二胺分子量= 148.21 (0.3克， 0 · 0 0 2 0莫耳）（海鷗公司）並將反應混和物於氬氣中在室溫下攪拌二小時。然後將溶劑蒸發乾燥並將粗產物溶解於甲烯氯中並以異丙醇沈澱。將產物減壓乾燥。產生1. 8 克。核磁共振（d6-DMS0) : 2.64 ppm (t，-CH2-胺-）， 3. 1 1 ppm ( q，-CH2-NH - ) ，3· 2 4ppm ( s，-〇CH3 ) ，3. 51

I ppm ( s 5 聚乙稀二醇骨架），4.0 4ppm(m，-CH2-〇 | (C:0)-) ，7.11ppm(t，-（C = 0)-NH-)。陽離子交換樹

脂色層分析產生甲氧基-聚乙烯二醇（20千道爾頓）-胺丨 (97.5%)。本範例說明如何將低分子量聚合物，三乙烯丨二醇二胺，與一高分子量聚合物，甲氧基-聚乙烯二醇 i

I (20千道爾頓）-苯三噁唑碳酸鹽，經由苯三噁唑碳酸 | 鹽，Z，及氨基，Y’，官能基結合。範例15·聚乙烯二醇（3.4千道爾頓）-α-胺-ω -丙醛，二乙基縮醛

第36頁 593427 案號90131261 年月日修正五、發明說明（33) 將聚乙稀二醇（3.4千道爾頓）-氫氧基-ω-丙醛，二乙基縮醛（NOF ) ( 1· 0克，0· 0 0 0 2 9 4莫耳）溶液加

入曱苯（20毫升）及二氯甲烷（5毫升），三乙基胺 (0.07毫升，0.000502莫耳，171%元素量）及氯化甲基磺（0 · 0 2 8毫升，0 · 0 0 0 3 6 2莫耳，1 2 3 %元素量）並將所得之反應混和物於氮氣中攪拌一晚。將混和物過濾並將溶劑減壓蒸餾乾燥。將殘餘物加入1 6毫升濃縮氫氧化銨及1. 6 克氯化銨混和物中並在室溫下攪拌4 2小時。以二氣曱烷 (三次2 0毫升）萃取反應產物。將萃取物以5毫升1 Μ鹽酸，5毫升蒸德水沖洗並以無水硫酸納乾燥。然後再將溶劑在減壓下蒸發得0 · 7 8克聚乙烯二醇（3 · 4千道爾頓）-α -胺鹽酸-ω -丙醛，二乙基縮醛。核磁共振（d6-DMSO) : 1.10 ppm(t，CH3-，縮酸），1.74 ppm(q，-OCH2 CH2 CH-，縮酸），2. 94ppm ( t，-CH2-胺鹽酸）， 3.51 ppm (s，聚乙稀二醇骨架），4.55ppm (t，- CH-縮搭），7.11ppm(t，-(O0)-NH-)。本範例說明將低分子量聚合物，聚乙烯二醇（3.4千道爾頓）- α-氫氧基- ω-丙醛，二乙基縮醛的官能基，Υ ’，由氫氧基調變為胺。

範例1 6 ·甲氧基聚乙烯二醇（2 3 · 4千道爾頓）-丙醛，二乙基縮酸將甲氧基聚乙烯二醇（2 0千道爾頓）_苯三噁唑碳酸鹽（2 · 0克，0 · 0 0 0 1莫耳）（海鷗公司）之曱烯氯（2 0毫升）溶液加入聚乙烯二醇（3.4千道爾頓）- α-胺- ω-丙醛，二乙基縮醛（0 · 3 6克，0 · 0 0 0 1 0 6莫耳）並將反應混和

第37頁 593427 案號 90131261 年月曰修正五、發明說明（34) 物於氬氣中在室溫下攪拌一晚。然後將溶劑蒸發乾燥粗產物溶解於曱烯氯中並以異丙醇沈澱。將潮濕產物乾燥。產生1.8克。核磁共振（d6-DMSO) : 1·10 ppm CH3-，縮醛），1· 74 ppm ( q，-OCH2 CH2 CH-，縮醛） 3. 1 1 ppm ( q 5 -CH2-NH- ) ，3. 2 4 ppm ( s ? - OCH3) ，3. ppm ( s，聚乙稀二醇骨架），4. 04ppm ( m，-CH2-0 (C = 0 ) - ) ，4.55ppm (t，-CH-縮搭），7 . 1 1 ppm ( t 5 (C = 0 ) - N H -)。本範例說明將範例1 5 .所產生之低分子合物，聚乙烯二醇（3.4千道爾頓）-α-胺-ω-丙醛。將減壓 51 基縮醛，與一高分子量聚合物，甲氧基-聚乙烯二醇千道爾頓）-苯三噁唑碳酸鹽，經由苯三噁唑碳酸鹽及氨基，Υ’，官能基結合。範例1 7 ·甲氧基聚乙烯二醇（2 3 · 4千道爾頓）-丙量聚二乙(20 將甲氧基聚乙烯二醇（23.4千道爾頓）-丙醛，二乙基縮酸（範例1 6 ·之產物）（1 · 8克）溶解在2 0毫升水中並將溶液之酸鹼度以稀釋之磷酸調整至3。將溶液在室溫下攪拌3小時並使用0. 5 Μ氫氧化鈉將溶液酸鹼度調整至7。將產物以甲烯氣萃取，並以無水硫酸鎂乾燥萃取物，並減壓蒸發溶劑。產生1 · 6克。核磁共振（d6-DMSO ) : 2· 60ppm (dt，-OCH2 CH2 CH-，乙酸），3· 24ppm ( q，-CH2- NH— ) ，0 r 1 …/ 甘…’一—一 j … • 51 ppm(s，聚乙缔二醇骨架） .0 4ppm m -CH2-0 (〇0)- 7 . 1 1 ppm - （OO) -NH-）

第38頁 593427 __案號 90131261_年月日_^_ 五、發明說明（35) 盤。範例1 8 ·分枝聚乙烯二醇2 ( 4 3 · 4千道爾頓）-丙醛，二乙基縮醛

將分枝聚乙烯二醇2 ( 4 0千道爾頓）-氮-氫氧基琥珀亞胺酯（1 · 0克，0 · 0 0 0 0 2 5莫耳）（海鷗公司）之曱烯氣 (8毫升）溶液加入聚乙烯二醇（3 · 4千道爾頓）-α -胺鹽酸-ω -丙醛，二乙基縮醛（0.12克，0.0000352莫耳）及三乙基胺（0· 0 1毫升）並將反應混和物於氬氣中在室溫下攪拌一晚。然後將溶劑蒸發乾燥。將粗產物溶解於甲烯氯中並以二乙基醚沈澱。將潮濕產物減壓乾燥。產生0. 8 3 克。核磁共振（d6-DMSO) ·· 1.10 ppm ( t 5 CH3-，縮酸）5 1.74 ppm ( q，-〇CH2 CH2 CH-，縮酸），3· 24ppm (s，-0CH3 ) ，3 · 5 1 ppm (s，聚乙稀二醇骨架）， 4 · 5 5 p p in ( t，- C Η -縮醛）。本範例說明將低分子量聚合物，聚乙烯二醇（3.4千道爾頓）-α-胺鹽酸- ω-丙醛二乙基縮醛，與一高分子量分枝聚合物，聚乙烯二醇2 (40 千道爾頓）-氮-氫氧基破珀亞胺酯，經由氮-氫氧基琥珀亞胺酯，Ζ，及胺鹽酸，Υ ’，官能基結合。

範例1 9 ·分枝聚乙烯二醇2 ( 4 3 · 4千道爾頓）-丙醛將分枝聚乙烯二醇2 (23.4千道爾頓）-丙醛，二乙基縮醛（範例1 8 ·之產物）（0 · 4克）溶解在1 0毫升水中並將溶液之酸鹼度以稀釋之磷酸調整至3。將溶液在室溫下攪拌3小時並使用0. 5 Μ氫氧化鈉將溶液酸鹼度調整至7。將產物以曱稀氣萃取，並以無水硫酸鎮乾燥萃取物，並減壓蒸

第39頁 593427 _案號90131261_年月日___ 五、發明說明（36) 發溶劑。產生0.35克。核磁共振（d6-DMSO) : 2.60ppm (dt，-OCH2 CH2 CH-，乙醛），3· 24ppm ( s，-OCH3)， 3.51 ppm(s，聚乙稀二醇骨架），9.65ppm(t，-CH，乙醛）。本範例說明將範例1 8.所產生之聚合物之官能基， Y，由丙醛，二乙基縮醛調變為丙醛。範例20.曱氧基聚乙烯二醇20K ( 43· 4千道爾頓）-順丁烯二酸亞胺

將曱氧基聚乙烯二醇（2 0千道爾頓）-苯三噁唑碳酸鹽（2 · 0克，0 · 0 0 1莫耳）（海鷗公司）之甲烯氯（2 0 0毫升）溶液加入順丁烯二酸亞胺三乙基二醇胺TFA (0.68 克，0.002莫耳）及4 -曱基對氧氮己環（0·44毫升，0.004 莫耳）。將反應混和物於氬氣中在室溫下攪拌四小時。然後將溶劑蒸發乾燥並以異丙醇沈澱（1 0 0 0毫升）。將沈澱物過濾收集並以真空乾燥一晚。產生1 9. 5克。核磁共振 (d6-DMSO ) : 3· 1 lppm ( q，-CH2-NH-），3.24ppm(s，- OCH3) ，3·51 ppm(s，聚乙稀二醇骨架），4.04ppm (t，-CH「0 (〇0)-) ，7.04ppm (s，-(C二0)-CH = CH- (〇0)-) ，7.11ppm (t，- (C:0)-NH-)。本範例說明將

高分子量聚合物，曱氧基聚乙烯二醇（2 0千道爾頓）-苯三噁唑碳酸鹽，與一低分子量聚合物，順丁烯二酸亞胺三乙基二醇胺TFA，經由苯三噁唑碳酸鹽，Z，及胺，Y’，官能基結合。

第40頁 593427 案號90131261 年月日修正圖式簡單說明 III·

Claims

593427 _案號90131261_年月日__ 六、申請專利範圍 1. 一種活化的聚合物衍生物，該聚合物衍生物包括一第一水溶性，非肽聚合物部分，其包含最少2 0 0個重複單位，經由一親水性聯結部分共價結合至一第二水溶性，非肽聚合物部分，其包含不超過1 20個重複單位，其中該第一及第二聚合物部分的該等重複單位為相同者或不同者，其中該一親水性種聯結部分實質上並不會改變該聚合物衍生物的性質，該第二聚合物部分係包含親電子性或親核性的一活性部分，其中該第一及第二聚合物部分是各自獨立地由聚稀二醇，聚稀醇，聚乙烯一氮五圜賴I，聚氫氧烧基甲基丙烯醯胺，聚氳氧烷基甲基丙烯鹽，多醣，聚（α-氳氧酸），聚乙烯醇，聚填腈，聚°惡吐啉，聚（氮-丙嫌酸對氧氣己環），及共聚物，四聚物，及其混和物中選取。 2. 如申請專利範圍第1項之聚合物衍生物其中該最少一種活性部分為位於該第二聚合物部分上之單一部分。 3. 如申請專利範圍第1項之聚合物衍生物其中該第一聚合物部分更進一步包括一受保護的官能基。 4. 如申請專利範圍第1項之聚合物衍生物，其中該第一聚合物部分具有由大約2 0 0至2 0 0 0個重複的單分子物單位。 5. 如申請專利範圍第1項之聚合物衍生物，其中該第一聚合物部分具有由大約2 0 0至7 0 0個重複的單位。 6. 如申請專利範圍第1項之聚合物衍生物，其中該第二聚合物部分具有由1至大約1 2 0個重複單位。

第42頁 593427 案號 90131261 年月曰修正六、申請專利範圍其中該第二聚其中該第一及其中該介於第 7. 如申請專利範圍第1項之聚合物衍生物合物部分具有由4 0至大約8 0個重複單位。 8. 如申請專利範圍第1項之聚合物衍生物第二聚合物部分為聚乙烯二醇。 9. 如申請專利範圍第1項之聚合物衍生物一及第二聚合物部分的聯結部分為一種選取自一種醯胺或胺基碳酸鹽聯結的親水性部分。 1 0.如申請專利範圍第1項之聚合物衍生物，其中該活性部分是選取自由氫氧基，受保護的氳氧基，活性酯類，活性碳酸類，縮醛，醛類，醛類水和物，烯基，丙烯酸鹽，甲基丙烯酸樹脂，丙稀驢胺，活性石黃基，胺，受保護的胺，醯胼，受保護的醯胼，硫醇，受保護的硫醇，羧酸，受保護的羧酸，異氰酸鹽，異硫化氰酸鹽，順丁烯二酸亞胺，乙醯磺基，二硫吡啶，乙醯吡啶，碘乙醯胺，環氧化物，乙二醛，二酮，甲磺酸，苯磺酸，硫化硫酸鹽，乙磺酸所組成的群組。 11. 如申請專利範圍第1項之聚合物衍生物，其中該聚合物部分是選取自由線形，分枝，及多臂聚合物部分所組成的群組。 12. —種活化的聚合物衍生物，該聚合物衍生物包括一種具有由大約2 0 0至7 0 0個重複單分子單位的線形單甲氧基聚乙烯二醇部分經由最少一醯胺或胺基碳酸鹽聯結部分共價附著至一種具有由1到1 2 0個重複單分子單位的線形聚乙烯二醇部分的一端，且其中該1至1 2 0個重複單分子單位之聚

第43頁 593427 案號 90131261 年月曰修正六、申請專利範圍乙烯二醇部分的端點最少包括一選取自親電子性部分及親核性部分所組成的群組之活性部分，而對立於該2 0 0至7 0 0 個重複單分子單位之該聚乙烯二醇部分之一端。 1 3. —種聚合物衍生物選取自單甲氧基聚乙烯二醇-鄰-甲苯硫代硫酸鹽；單甲氧基聚乙烯二醇-丙酸；單甲氧基聚乙烯二醇-丙酸，氮-氫氧基琥珀亞胺醋；單甲氧基聚乙烯二醇-丙酸，甲酯；單甲氧基聚乙烯二醇-丁酸；單甲氧基聚乙烯二醇-丁酸，氮-氫氧基琥珀亞胺酯；單甲氧基聚乙烯二醇-丁酸，曱酯；單曱氧基聚乙烯二醇-胺；單甲氧基聚乙烯二醇-丙醛；單甲氧基聚乙烯二醇-丙醛，二乙基縮醛；二甲氧基聚乙烯二醇-離胺酸丙醛；二甲氧基聚乙烯二醇-離胺酸丙醛，二乙酯；及單甲氧基聚乙烯二醇-順丁烯二酸亞胺所組成的群組；其中該聚合物衍生物具有最少大約1 0，0 0 0道爾頓之分子量及最少二個經由聯結基附著的不同聚乙烯二醇部分。 1 4.如專利申請範圍第1 3項之聚合物衍生物與一生物活性分子共輛。 15.如專利申請範圍第1 3項之聚合物衍生物具有（聚合）a-X-(聚合）b_Y的結構，其中（聚合八為水溶性，非肽具有大於大約2 0 0個重複單位的聚合物部分，X為一種實質上不改變該聚合物衍生物之性質的聯結部分，（聚合）b為水溶性，非肽具有由1到大約1 2 0個重複單位可能和（聚合）&相同或不同的聚合物部分，而Y為一種親電子性或親核性部分。 1 6 ·如專利申請範圍第1 3項之聚合物衍生物具有Y-(聚合）

第44頁 593427 _案號90131261_年月日_«_ 六、申請專利範圍 q為由1到大約5 0 0。 20. 如專利申請範圍第1 9項之聚合物，其中Y是選取自由氫氧基，受保護的氫氧基，活性酯類，活性碳酸類，縮

醛，醛類，醛類水和物，烯基，丙烯酸鹽，甲基丙烯酸樹脂，丙烯醯胺，活性磺基，胺，受保護的胺，醯胼，受保護的醯胼，硫醇，受保護的硫醇，羧酸，受保護的羧酸，異氰酸鹽，異硫化氰酸鹽，順丁烯二酸亞胺，乙醯磺基，二硫毗啶，乙醯毗啶，碘乙醯胺，環氧化物，乙二醛，二酮，曱磺酸，苯續酸，硫化硫酸鹽，乙績酸所組成的群組。

21. 如專利申請範圍第1 9項之聚合物其中q = 2，而Y是獨立地選取自由鼠乳基’受保護的氮氧基’活性§旨類，活性碳酸類，縮醛，醛類，醛類水和物，烯基，丙烯酸鹽，甲基丙烯酸樹脂，丙烯醯胺，活性磺基，胺，受保護的胺，醯胼，受保護的醯胼，硫醇，受保護的硫醇，羧酸，受保護的羧酸，異氰酸鹽，異硫化氰酸鹽，順丁烯二酸亞胺，乙醯磺基，二硫吡啶，乙醯吡啶，碘乙醯胺，環氧化物，乙二醛，二酮，甲磺酸，苯磺酸，硫化硫酸鹽，乙磺酸所組成的群組。 22. 如專利申請範圍第1 9項之聚合物，其中Y是選取自- (CH2 ) rC02H，-（ CH2 ) r，C02 NS，-（ CH2 ) r，C02 Bt，- (CH2) rCH ( OR ) 2，-（ CH2 ) rCH0，-（ CH2 ) 2-NH2，-(CH2) rM，-（ CH2 ) r-S-S02-R所組成的群組，其中r等於1 至5，r’等於0至5，R為環烷基或烷基，NS為氮-琥珀醯亞

第46頁 593427 _ 案號90131261_年月日_«_ 六、申請專利範圍 23. 如專利申請範圍第1 9項之聚合物，其中X為一種醯胺或胺基碳酸鹽聯結。 24. 如專利申請範圍第1 9項之聚合物，其中該聚乙烯二醇具有自大約200至2000個的重複單位。 25. 一種具有 R- ( 0 CH2CH2) n-X- ( CH2CH20 ) E-Y 組成的聚合物其中： R選取自1到5個碳原子的烷基及具有末端親電子性或親核性基的官能基部分， N大於2 0 0， m為由1到大約1 2 0， X為一聯結部分，且 Y是一種具有末端親電子性或親核性基的部分，可和R — 樣或不同。 26. 一種方法可形成一種水溶性，非肽聚合物，最少具有一官能基，該方法包括的步驟為：提供第一水溶性，非肽聚合物包括最少大約2 0 0個重複單位並具有最少一第一官能基； I 提供第二水溶性，非肽聚合物包括由1到120個重複單位 | 及具有最少一第二官能基，該第二官能基最少可與該高分I 子量聚合物的第一官能基反應；且其中最少該第一及第二| 聚合物之一更進一步包括一種不會與該第一及第二官能基 | 任何之一反應的官能基，將該第一及第二官能基反應，可得該第一及第二聚合物的共價鍵結而提供一種最少具有一官能基的水溶性，非肽聚合物。 593427 _案號90131261_年月曰修正_ 六、申請專利範圍 2 7如申請專利範圍第2 6項之方法，其中該第一及第二官能基是選取自氮-琥珀亞胺碳酸鹽，胺，醯胼，琥珀醯亞胺丙酸鹽及琥珀醯亞胺丁酸鹽，琥珀醯亞胺琥珀酸鹽，琥珀醯亞胺酯類，苯三噁唑碳酸鹽，縮水甘油醚，氧化碳醯咪唑，鄰-氨基酚碳酸鹽，醛類，順丁烯二酸亞胺，雙硫正σ密咬，丙稀醇，乙酸績基。

2 8.如專利申請範圍第2 6項之方法，其中不與第一及第二官能基反應的官能基是選取自氫氧基，受保護的氫氧基，活性酯類，活性碳酸類，縮醛，醛類，醛類水和物，烯基，丙烯酸鹽，甲基丙烯酸樹脂，丙烯醯胺，活性磺基，胺，受保護的胺，醯胼，受保護的醯胼，硫醇，受保護的硫醇，羧酸，受保護的羧酸，異氰酸鹽，異硫化氰酸鹽，順丁烯二酸亞胺，乙醯磺基，二硫吡啶，乙醯吡啶，碘乙醯胺，環氧化物，乙二醛，二酮，甲磺酸，苯磺酸，硫化硫酸鹽，乙磺酸所組成的群組。

29. 如專利申請範圍第2 6項之方法，其中該第一及第二官能基是在選取自甲苯，四氫呋喃，雙氧二次乙基，乙腈，氯化甲烯，氯仿，二甲基甲醯胺，二甲基亞風，苯，二甲基苯，及其綜合之溶劑下反應。 30. 如專利申請範圍第2 6項之方法，其中該聚合物各為選取自包括單官能基，雙官能基之線形，分枝，多臂，及分叉形式群組的聚乙烯二醇。 31. 如專利申請範圍第2 6項之方法，其中該第一聚合物為線形之甲氧基聚乙烯二醇。

第48頁 593427 _案號90131261 _年月日_^_ 六、申請專利範圍線形之甲氧基聚乙烯二醇。 32. 如專利申請範圍第2 6項之方法，更進一步地包括將不與第一及第二官能基反應之官能基及一種生物活性劑共軛之步驟。 33. 如專利申請範圍第32項之方法，其中該生物活性劑是選取自蛋白質，胜肽，碳水化合物，寡核苷酸，去氧核糖核酸，核糖核酸，及脂肪。

34. 如專利申請範圍第2 6項之方法，其中該第一聚合物包括一種受保護的反應基並更進一步地包括由共價鍵結的高分子量及低分子量聚合物移除該受保護部分以製造一額外的官能基之步驟。

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修正

(以上各欄由本局填註) 發明專利說明書中文高分子量非肽聚合物衍生物之合成發明名稱 Synthesis of High Molrcular Weight Non~Peptidic Polymer Derivatives 英文姓名 (中文） 1·安透尼•克勞斯基 2.沈煦明 3·麥可•大衛•班特雷姓名 (英文）發明人 (共4人）國籍 (中英文) 1. Antoni Kozlowski 2. Xiaoming Shen 3. Michael David Bentley 1·波蘭PL 2·中國CN 3.美國US 住居所 (中文) 1.美國阿拉巴馬州35811獵郡費爾費克斯街2209號 2·美國阿拉巴馬州35758梅地森石園道215號 3·美國阿拉巴馬州35801獵郡諾藍大道4017號住居所 (英文) 申請人 (共1人）名稱或姓名名稱或姓名 (英文） (中英文) 1.内格塔治療阿拉巴馬州公司 l.Nektar Therapeutics AL, Corporation 1.美國US 住居所(1*5 1·美國阿拉巴馬州35806獵郡發現道490號（本地址與前向貴局申請者相同）代表人 (中文） 1.寶拉卡斯勒 1. Paula Kasler

第1頁 593427 _案號90131261 可3年4月叫日修正_ 六、申請專利範圍非肽具有大於大約2 0 0個重複單位的聚合物部分，X為一種實質上不改變該聚合物衍生物之性質的聯結部分，（聚合）b 為水溶性，非肽具有由1到大約1 2 0個重複單位可能和（聚合）a相同或不同的聚合物部分，而其中Y為一種親電子性或親核性部分。

17·如專利申請範圍第1 3項之聚合物，其中該活性部分是選取自一（CH2) rC02H，-（ CH2) r，C02 NS，-（ CH2) r，C02 Bt，-（ CH2) rCH ( OR) 2，-（ CH2) rCHO，-（ CH2) 2-NH2，-(CH2 ) rM，- ( CH2 ) r-S-S02-R所組成的群組，其中r等於1 至5，r’等於0至5，R為環烧基或烧基，NS為氮-琥珀醯亞胺基，B t為1 -苯三噁唑，而Μ為氮-順丁烯二酸亞胺基。 18·如專利申請範圍第13項之聚合物其中第一及第二聚合物部分的其中之一或二者更進一步地包含該單分子之間可水解或酵素分解的群組。 19· 一種具有聚乙烯二醇- [X- ( CH2CH20 ) m_Y]q組成的聚合物其中：

聚乙烯二醇為一種水溶性非肽聚合物選取自線形聚乙烯二醇，烷氧基聚乙烯二醇，分枝聚乙烯二醇，及分叉聚乙烯 i二醇，帶有或不帶有可水解或酵素分解聯結，而其中該聚 |乙烯二醇最少有200個重複的單分子單位， | X為一聯結部分， m為由1到大約120， Y是一種具有末端親電子性或親核性基的部分，及 q為由1到大約5 0 0。

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