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TW202430625A - 副乾酪乳桿菌tci077及其或其代謝產物用於調理皮膚與提升免疫力的用途 - Google Patents

副乾酪乳桿菌tci077及其或其代謝產物用於調理皮膚與提升免疫力的用途 Download PDF

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TW202430625A
TW202430625A TW112148878A TW112148878A TW202430625A TW 202430625 A TW202430625 A TW 202430625A TW 112148878 A TW112148878 A TW 112148878A TW 112148878 A TW112148878 A TW 112148878A TW 202430625 A TW202430625 A TW 202430625A
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TW
Taiwan
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lactobacillus paracasei
metabolites
skin
paracasei
tci077
Prior art date
Application number
TW112148878A
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English (en)
Inventor
林詠翔
黃琡涵
Original Assignee
大江生醫股份有限公司
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
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Publication date
Application filed by 大江生醫股份有限公司 filed Critical 大江生醫股份有限公司
Priority to US18/413,001 priority Critical patent/US20240245734A1/en
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Abstract

一種副乾酪乳桿菌為 Lacticaseibacillus Paracasei TCI077，其寄存編號為BCRC 911142。一種副乾酪乳桿菌或其代謝產物用於製備抗痘、抗菌、抗發炎、強化皮膚結構、提升皮膚保濕度、減少皮膚皺紋、減緩皮膚乾癢泛紅、提升免疫力或幫助排便組合物的用途。

Description

副乾酪乳桿菌TCI077及其或其代謝產物用於調理皮膚與提升免疫力的用途
本發明關於一種副乾酪乳桿菌，特別是涉及一種副乾酪乳桿菌及其或其代謝產物用於調理皮膚與提升免疫力的用途。
文獻統計，青春痘可能發生在任何年齡層，其中有超過六成青少年的社交問題受到青春痘（痤瘡）影響，而且在50歲以上的成年人中，仍有約7%男性及15%女性有痤瘡的困擾。
為了解決上述問題，本領域的技術人員亟需研發出具有科學依據且高效的益生菌產品，以造福有此需求的廣大族群。
在一些實施例中，一種副乾酪乳桿菌為 Lacticaseibacillus ParacaseiTCI077，其寄存編號為BCRC 911142。
在一些實施例中，一種副乾酪乳桿菌或其代謝產物用於製備抗痘組合物的用途，副乾酪乳桿菌為 Lacticaseibacillus ParacaseiTCI077，其寄存編號為BCRC 911142。
在一些實施例中，副乾酪乳桿菌或其代謝產物用以抑制及/或減少痤瘡丙酸桿菌。
在一些實施例中，副乾酪乳桿菌或其代謝產物透過促進細胞修復來消除痘疤。
在一些實施例中，副乾酪乳桿菌或其代謝產物透過促進皮膚細胞或角質細胞增生來促進細胞修復。
在一些實施例中，副乾酪乳桿菌或其代謝產物用以減少皮膚油脂含量。
在一些實施例中，副乾酪乳桿菌或其代謝產物用以提升皮膚油水平衡。
在一些實施例中，一種副乾酪乳桿菌或其代謝產物用於製備抗菌組合物的用途，副乾酪乳桿菌為 Lacticaseibacillus ParacaseiTCI077，其寄存編號為BCRC 911142。
在一些實施例中，一種副乾酪乳桿菌或其代謝產物用於製備抗發炎組合物的用途，副乾酪乳桿菌為 Lacticaseibacillus ParacaseiTCI077，其寄存編號為BCRC 911142。
在一些實施例中，副乾酪乳桿菌或其代謝產物用以抑制角質細胞發炎。
在一些實施例中，一種副乾酪乳桿菌或其代謝產物用於製備強化皮膚結構組合物的用途，副乾酪乳桿菌為 Lacticaseibacillus ParacaseiTCI077，其寄存編號為BCRC 911142。
在一些實施例中，副乾酪乳桿菌或其代謝產物用以提升角蛋白。
在一些實施例中，一種副乾酪乳桿菌或其代謝產物用於製備提升皮膚保濕度組合物的用途，副乾酪乳桿菌為 Lacticaseibacillus ParacaseiTCI077，其寄存編號為BCRC 911142。
在一些實施例中，副乾酪乳桿菌或其代謝產物用以提升玻尿酸、神經醯胺、天然保濕因子（NMF）及/或水通道蛋白。
在一些實施例中，一種副乾酪乳桿菌或其代謝產物用於製備減少皮膚皺紋組合物的用途，副乾酪乳桿菌為 Lacticaseibacillus ParacaseiTCI077，其寄存編號為BCRC 911142。
在一些實施例中，一種副乾酪乳桿菌或其代謝產物用於製備減緩皮膚乾癢泛紅組合物的用途，副乾酪乳桿菌為 Lacticaseibacillus ParacaseiTCI077，其寄存編號為BCRC 911142。
在一些實施例中，一種副乾酪乳桿菌或其代謝產物用於製備提升免疫力組合物的用途，副乾酪乳桿菌為 Lacticaseibacillus ParacaseiTCI077，其寄存編號為BCRC 911142。
在一些實施例中，副乾酪乳桿菌或其代謝產物用以增加嗜中性白血球的數量。
在一些實施例中，一種副乾酪乳桿菌或其代謝產物用於製備幫助排便組合物的用途，副乾酪乳桿菌為 Lacticaseibacillus ParacaseiTCI077，其寄存編號為BCRC 911142。
綜上，任一實施例的副乾酪乳桿菌或其代謝產物具有調理皮膚或提升免疫力的效果。換言之，任一實施例的副乾酪乳桿菌或其代謝產物適用於製備調理皮膚或提升免疫力的組合物。換言之，前述之組合物具有調理皮膚或提升免疫力的功能。換言之，施予前述之組合物於一個體上時能在此個體上產生調理皮膚或提升免疫力的作用。在一些實施例中，副乾酪乳桿菌、其代謝產物或其所製得的組合物還具有下列功能中的一種或多種功能：抗痘、抗菌、抗發炎、強化皮膚結構、提升皮膚保濕度、減少皮膚皺紋、減緩皮膚乾癢泛紅、提升免疫力、及幫助排便。
在一些實施例中，一種副乾酪乳桿菌（ Lacticaseibacillus Paracasei）為 Lacticaseibacillus ParacaseiTCI077。副乾酪乳桿菌TCI077以寄存編號BCRC 911142寄存於財團法人食品工業發展研究所，以及寄存編號CGMCC 7.532寄存於中國微生物菌種保藏管理委員會普通微生物中心，以及以寄存編號DSM 34374寄存於德國微生物菌種保藏中心（Leibniz Institute DSMZ-German Collection of Microorganisms and Cell Cultures GmbH）。
在一些實施例中，副乾酪乳桿菌TCI077分離自牛樟芝（ Taiwanofungus camphoratus）子實體。
在一些實施例中，前述的副乾酪乳桿菌或其代謝產物具有抗痘的能力。因此，副乾酪乳桿菌或其代謝產物適用於製備抗痘之組合物。
在一些實施例中，副乾酪乳桿菌或其代謝產物具有抑制及/或減少痤瘡丙酸桿菌的能力。換言之，副乾酪乳桿菌或其代謝產物施予一個體時能抑制及/或減少此個體痤瘡丙酸桿菌。因此，副乾酪乳桿菌或其代謝產物適用於製備抑制及/或減少痤瘡丙酸桿菌的組合物。
在一些實施例中，副乾酪乳桿菌或其代謝產物具有促進細胞修復來消除痘疤的能力。換言之，副乾酪乳桿菌或其代謝產物施予一個體時能促進此個體細胞修復以消除此個體痘疤。因此，副乾酪乳桿菌或其代謝產物適用於製備促進細胞修復來消除痘疤的組合物。
在一些實施例中，副乾酪乳桿菌或其代謝產物具有促進皮膚細胞或角質細胞增生來促進細胞修復的能力。換言之，副乾酪乳桿菌或其代謝產物施予一個體時能促進此個體皮膚細胞或角質細胞增生以促進此個體細胞修復。因此，副乾酪乳桿菌或其代謝產物適用於製備促進皮膚細胞或角質細胞增生來促進細胞修復的組合物。
在一些實施例中，副乾酪乳桿菌或其代謝產物具有減少皮膚油脂含量的能力。換言之，副乾酪乳桿菌或其代謝產物施予一個體時能減少此個體皮膚油脂含量。因此，副乾酪乳桿菌或其代謝產物適用於製備減少皮膚油脂含量的組合物。
在一些實施例中，副乾酪乳桿菌或其代謝產物具有提升皮膚油水平衡的能力。換言之，副乾酪乳桿菌或其代謝產物施予一個體時能提升此個體皮膚油水平衡。因此，副乾酪乳桿菌或其代謝產物適用於製備提升皮膚油水平衡的組合物。
在一些實施例中，前述的副乾酪乳桿菌或其代謝產物具有抗菌的能力。因此，副乾酪乳桿菌或其代謝產物適用於製備抗菌之組合物。
在一些實施例中，前述的副乾酪乳桿菌或其代謝產物具有抗發炎的能力。因此，副乾酪乳桿菌或其代謝產物適用於製備抗發炎之組合物。
在一些實施例中，副乾酪乳桿菌或其代謝產物具有抑制角質細胞發炎的能力。換言之，副乾酪乳桿菌或其代謝產物施予一個體時能抑制此個體角質細胞發炎。因此，副乾酪乳桿菌或其代謝產物適用於製備抑制角質細胞發炎的組合物。
在一些實施例中，前述的副乾酪乳桿菌或其代謝產物具有強化皮膚結構的能力。因此，副乾酪乳桿菌或其代謝產物適用於製備強化皮膚結構之組合物。
在一些實施例中，副乾酪乳桿菌或其代謝產物具有提升角蛋白的能力。換言之，副乾酪乳桿菌或其代謝產物施予一個體時能提升此個體角蛋白。因此，副乾酪乳桿菌或其代謝產物適用於製備提升角蛋白的組合物。
在一些實施例中，前述的副乾酪乳桿菌或其代謝產物具有提升皮膚保濕度的能力。因此，副乾酪乳桿菌或其代謝產物適用於製備提升皮膚保濕度之組合物。
在一些實施例中，副乾酪乳桿菌或其代謝產物具有提升玻尿酸、神經醯胺、天然保濕因子（NMF）及/或水通道蛋白的能力。換言之，副乾酪乳桿菌或其代謝產物施予一個體時能提升此個體玻尿酸、神經醯胺、天然保濕因子（NMF）及/或水通道蛋白。因此，副乾酪乳桿菌或其代謝產物適用於製備提升玻尿酸、神經醯胺、天然保濕因子（NMF）及/或水通道蛋白的組合物。
在一些實施例中，前述的副乾酪乳桿菌或其代謝產物具有減少皮膚皺紋的能力。因此，副乾酪乳桿菌或其代謝產物適用於製備減少皮膚皺紋之組合物。
在一些實施例中，前述的副乾酪乳桿菌或其代謝產物具有減緩皮膚乾癢泛紅的能力。因此，副乾酪乳桿菌或其代謝產物適用於製備減緩皮膚乾癢泛紅之組合物。
在一些實施例中，前述的副乾酪乳桿菌或其代謝產物具有提升免疫力的能力。因此，副乾酪乳桿菌或其代謝產物適用於製備提升免疫力之組合物。
在一些實施例中，副乾酪乳桿菌或其代謝產物具有增加嗜中性白血球的能力。換言之，副乾酪乳桿菌或其代謝產物施予一個體時能增加此個體嗜中性白血球。因此，副乾酪乳桿菌或其代謝產物適用於製備增加嗜中性白血球的組合物。
在一些實施例中，前述的副乾酪乳桿菌或其代謝產物具有幫助排便的能力。因此，副乾酪乳桿菌或其代謝產物適用於製備幫助排便之組合物。
在一些實施例中，前述的副乾酪乳桿菌係以菌粉的形式包含於前述的組合物。
在一些實施例中，前述的副乾酪乳桿菌係以活菌或是死菌的形式包含於前述的組合物。
在一些實施例中，前述的副乾酪乳桿菌的有效劑量係50 mg/天。在一些實施例中，前述的副乾酪乳桿菌的有效劑量係1500CFU/天。
在一些實施例中，前述的個體可為人。
在一些實施例中，前述的組合物可為醫藥組合物、或非醫療目的的食用組合物。
在一些實施例中，當前述的組合物為醫藥組合物時，此醫藥組合物包含有效劑量的副乾酪乳桿菌。其中，此醫藥組合物可利用熟習此技藝者所詳知的技術而被製造成適合於經腸道地、非經腸道地（parenterally）、口服地（orally）、或局部地（topically）投藥劑型。
在一些實施例中，經腸道或口服的投藥劑型可為，但不限於，錠劑（tablet）、片劑（troche）、口含錠（lozenge）、丸劑（pill）、膠囊（capsule）、分散性粉末（dispersible powder）、細顆粒（granule）、溶液、懸浮液（suspension）、乳劑（emulsion）、糖漿（syrup）、酏劑（elixir）、濃漿（slurry）或類似之物。
在一些實施例中，非經腸道地或局部地投藥劑型可為，但不限於，注射品（injection）[例如，無菌的水性溶液（sterile aqueous solution）或分散液（dispersion）]、無菌的粉末（sterile powder）、外部製劑（external preparation）或類似之物。
在一些實施例中，注射品的投藥方式可為，但不限於，腹膜內注射（intraperitoneal injection）、皮下注射（subcutaneous injection）、表皮內注射（intraepidermal injection）、皮內注射（intradermal injection）、肌肉內注射（intramuscular injection）、靜脈內注射（intravenous injection）或病灶內注射（intralesional injection）。
在一些實施例中，含有效劑量的副乾酪乳桿菌的醫藥組合物可進一步包含被廣泛地使用於藥物製造技術之醫藥上可接受的載劑（pharmaceutically acceptable carrier）。在一些實施例中，醫藥上可接受的載劑可為下列載劑中一種或多種：溶劑（solvent）、緩衝液（buffer）、乳化劑（emulsifier）、懸浮劑（suspending agent）、分解劑（decomposer）、崩解劑（disintegrating agent）、分散劑（dispersing agent）、黏結劑（binding agent）、賦形劑（excipient）、安定劑（stabilizing agent）、螯合劑（chelating agent）、稀釋劑（diluent）、膠凝劑（gelling agent）、防腐劑（preservative）、潤濕劑（wetting agent）、潤滑劑（lubricant）、吸收延遲劑（absorption delaying agent）、脂質體（liposome）以及類似之物。關於選用之載劑的種類與數量是落在熟習此項技術之人士的專業素養與例行技術範疇內。其中，作為醫藥上可接受的載劑的溶劑可為水、生理鹽水（normal saline）、磷酸鹽緩衝液（phosphate buffered saline，PBS）或含有醇的水性溶液（alcohol containing aqueous solution）。
在一些實施例中，含有有效劑量的副乾酪乳桿菌的醫藥組合物可利用熟習此技藝者所詳知的技術而被製造成一適合於局部地施用於皮膚上的外部製劑（external preparation）。在一些實施例中，外部製劑包括，但不限於：乳劑（emulsion）、凝膠（gel）、軟膏（ointment）、乳霜（cream）、貼片（patch）、擦劑（liniment）、粉末（powder）、氣溶膠（aerosol）、噴霧（spray）、乳液（lotion）、乳漿（serum）、糊劑（paste）、泡沫（foam）、滴劑（drop）、懸浮液（suspension）、油膏（salve）以及繃帶（bandage）。
在一些實施例中，當前述的醫藥組合物為外部製劑時，此醫藥組合物可由有效劑量的副乾酪乳桿菌與為熟習此項技藝者所詳知的一基底（base）相混合而製成。
在一些實施例中，此基底可包含有一或多種選自於下列的添加劑（additives）：水、醇（alcohols）、甘醇（glycol）、碳氫化合物（hydrocarbons）[諸如石油膠（petroleum, jelly）以及白凡士林（white petrolatum）]、蠟（wax）[諸如石蠟（paraffin）以及黃蠟（yellow wax）]、保存劑（preserving agents）、抗氧化劑（antioxidants）、界面活性劑（surfactants）、吸收增強劑（absorption enhancers）、安定劑（stabilizing agents）、膠凝劑（gelling agents）[諸如卡波普®974P （carbopol®974P）、微結晶纖維素（microcrystalline cellulose）以及羧基甲基纖維素（carboxymethylcellulose）]、活性劑（active agents）、保濕劑（humectants）、氣味吸收劑（odor absorbers）、香料（fragrances）、pH調整劑（pH adjusting agents）、螯合劑（chelating agents）、乳化劑（emulsifiers）、閉塞劑（occlusive agents）、軟化劑（emollients）、增稠劑（thickeners）、助溶劑（solubilizing agents）、滲透增強劑（penetration enhancers）、抗刺激劑（anti-irritants）、著色劑（colorants）以及推進劑（propellants）等。有關這些添加劑的選用與數量是落在熟習此項技術之人士的專業素養與例行技術範疇內。
在一些實施例中，當前述的組合物為食用組合物時，此食用組合物包含有效劑量的副乾酪乳桿菌。其中，此食用組合物的型態可為粉末、顆粒、溶液、膠體或膏體。
在一些實施例中，含有副乾酪乳桿菌的非醫療目的的食用組合物可為食品產品或食品添加物（food additive）。
在一些實施例中，含有副乾酪乳桿菌的食用組合物可為飲料（beverages）、發酵食品（fermented foods）、烘培產品（bakery products）、健康食品（health foods）或膳食補充品（dietary supplements）等。在一些實施例中，含有副乾酪乳桿菌的食用組合物可更包括一佐劑。舉例來說，佐劑可為麥芽糖糊精（Maltodextrin）、蘋果酸、蔗糖素、檸檬酸、水果香料、蜂蜜香料、甜菊糖苷或其組合等。關於選用之載劑的種類與數量是落在熟習此項技術之人士的專業素養與例行技術範疇內。
在一些實施例中，食品添加物可為調味料、甜味料、香料、pH值調整劑、乳化劑、著色料或穩定劑等。
下列範例中若無特別敘明，所進行的實驗步驟是在室溫（約25℃）且常壓（1 atm）下進行。
例 1 ：菌種鑑定
首先，將分離自牛樟芝（ Taiwanofungus camphoratus）子實體（採購自台北市大同區迪化街一段135號中藥行，產地台灣）的分離菌株進行菌種鑑定。透過聚合酶連鎖反應（PCR）得到此分離菌株的PCR產物後，以Sanger sequencing方式進行定序，以得到16S核醣體基因（16SrDNA）序列（即SEQ ID NO:1）。接著，將SEQ ID NO:1序列以美國國家生物技術資訊中心（NCBI）網站與其他副乾酪乳桿菌（如表1所示）之16S核醣體基因（16SrDNA）序列進行比對後可知，此分離菌株的16SrDNA序列與其他副乾酪乳桿菌的16SrDNA序列的相似性為98.01%至98.17%（如表1所示）。因此，將此分離菌株命名為副乾酪乳桿菌TCI077（ Lacticaseibacillus paracaseiTCI077）。
表1
副乾酪乳桿菌 相似度（Per. Ident）
Lactobacillus  paracaseistrain MLG1-5 16S ribosomal RNA gene, partial sequence 98.09%
Lactobacillus  paracaseistrain XT8-3 16S ribosomal RNA gene, partial sequence 98.09%
Lactobacillus  paracaseistrain 6522 16S ribosomal RNA gene, partial sequence 98.17%
Lactobacillus  paracaseistrain 4894 16S ribosomal RNA gene, partial sequence 98.17%
Lactobacillus  paracaseistrain IMAU98341 16S ribosomal RNA gene, partial sequence 98.01%
Lactobacillus paracaseistrain 8034 16S ribosomal RNA gene, partial sequence 98.09%
Lactobacillus  paracaseistrain 6378 16S ribosomal RNA gene, partial sequence 98.17%
Lacticaseibacillus paracasei舊稱為 Lactobacillus paracasei。
例 2 ：副乾酪乳桿菌 TCI077 的保存及培育實驗
A. 保存及培育材料：
1. MRS Broth培養基，購自BD，產品編號288130。
B. 保存及培育流程：
1. 使用MRS Broth培養基培養例1分離所得的副乾酪乳桿菌TCI077以得到菌液，然後將菌液與甘油以4：1的比例混合。之後，將菌液與甘油的混合液置於-80℃下進行保存。
2. 將含有副乾酪乳桿菌TCI077的混合液以5%(v/v)的植菌量（約1x10 4CFU／mL）接種於MRS Broth培養基中，並於37±1℃，pH6.0±0.1，厭氧環境下培養12小時後形成副乾酪乳桿菌TCI077菌液。
3. 將副乾酪乳桿菌TCI077菌液進行離心以取得上清液，將上清液以0.22 μm的濾膜進行過濾，所得濾液即為副乾酪乳桿菌TCI077樣品（即副乾酪乳桿菌TCI077樣品含有副乾酪乳桿菌TCI077之代謝產物）。
例 3 ：抑菌試驗
A. 材料與儀器：
1. 洋菜（agar）（購自BD，產品編號288210）。
2. 1x10 8CFU/mL的痤瘡丙酸桿菌（ Propionibacterium acnes）菌液（購自BCRC（Bioresource Collection and Research Center，生物資源保存及研究中心），產品編號10723），並配製成10% 菌液，即1×10 7CFU/mL的菌液。
3. 副乾酪乳桿菌TCI077樣品：將例2所製得的含有1×10 8CFU/mL菌量的副乾酪乳桿菌TCI077菌液進行離心以取得上清液。將上清液以0.22 μm的濾膜進行過濾，所得濾液即為副乾酪乳桿菌TCI077樣品（即副乾酪乳桿菌TCI077樣品含有副乾酪乳桿菌TCI077之代謝產物）。
4. 抑菌環（購自ADVANTEC，產品編號49005030）。
B. 試驗流程：
1. 使用洋菜製得洋菜培養基盤。
2.將10%菌液均勻接種於洋菜培養基盤上，以得到10%菌盤。於此，共有兩個10%菌盤，其分別為：控制組及實驗組。
3-1. 控制組：將未浸潤樣品的抑菌環接種於控制組的10%菌盤上。
3-2. 實驗組：將抑菌環完全浸潤於200 μL 副乾酪乳桿菌TCI077樣品中，並將抑菌環接種於實驗組的10%菌盤上。
4. 將菌盤置於37°C下培養24小時。
5. 培養24小時後，測量抑菌區的直徑（毫米）。
C. 試驗結果：
請參閱圖1。控制組的抑菌區的直徑為6毫米，而實驗組的抑菌區的直徑為15毫米。也就是說，相對於空白組，實驗組的CCD-966SK細胞在添加副乾酪乳桿菌TCI077樣品後，提升約150%的抑菌區。
由實驗結果可知，副乾酪乳桿菌TCI077樣品能明顯提升痤瘡丙酸桿菌的抑菌效果。痤瘡丙酸桿菌是主要造成痤瘡的病原菌。換言之，由實驗可證，副乾酪乳桿菌TCI077或其代謝產物能抑制及/或減少痤瘡丙酸桿菌，具有調理皮膚菌相的效果，並具有抗痘、降低痘痘及/或粉刺形成的效果。副乾酪乳桿菌TCI077或其代謝產物能抑制病原菌之生長，具有抗菌的效果。
例 4 ：皮膚細胞增生試驗
A. 材料與儀器：
1. 細胞株：人類皮膚纖維母細胞，購自BCRC，細胞編號60153，以下簡稱CCD-966SK細胞。
2. 細胞培養基：Minimum essential medium (Eagle) in Earle's BSS（購自Gibco，產品編號61100-053），添加10% 胎牛血清（Fetal Bovine Serum）（購自Gibco，產品編號16000-044）、1 mM 丙酮酸鈉（sodium pyruvate）（購自Gibco，產品編號11360-070）、2.2 g/L 碳酸氫鈉（sodium bicarbonate，NaHCO 3）（購自Sigma，產品編號S5761-500G）以及0.1 mM非必需氨基酸（non-essential amino acids）。其中，0.1 mM非必需氨基酸是將MEM非必需氨基酸溶液（100X）（購自Gibco，產品編號11140050）添加至其99倍體積的MEM中稀釋配製而成。
3. 正控制組細胞培養基：Minimum essential medium (Eagle) in Earle's BSS（購自Gibco，產品編號61100-053），添加20% 胎牛血清（Fetal Bovine Serum）（購自Gibco，產品編號16000-044）、1 mM 丙酮酸鈉（sodium pyruvate）（購自Gibco，產品編號11360-070）、2.2 g/L 碳酸氫鈉（sodium bicarbonate，NaHCO 3）（購自Sigma，產品編號S5761-500G）以及0.1 mM非必需氨基酸（non-essential amino acids）。其中，0.1 mM非必需氨基酸是將MEM非必需氨基酸溶液（100X）（購自Gibco，產品編號11140050）添加至其99倍體積的MEM中稀釋配製而成。
4. 檢測套組：細胞增生檢測試劑套組（Click-iT™ Plus EdU Flow Cytometry Assay Kits-Alexa Fluor™ 488 picolyl azide, 50 tests），購自Invitrogen，產品編號C10632。
5. 流式細胞儀，購自BD。
B. 試驗流程：
1. 將CCD-966SK細胞以每孔1×10 5個的密度，接種於6孔培養盤中，並在37℃下培養至細胞滿度達8至9成。於此，CCD-966SK細胞分為三個試驗組別，其分別為：空白組、正控制組及實驗組。各組進行三重複。
2. 培養至細胞滿度達8至9成後，將各組更換為實驗培養基，並於37℃下繼續培養24小時。其中，空白組的實驗培養基為不含樣品的細胞培養基；正控制組的實驗培養基為不含樣品的正控制組細胞培養基；以及實驗組的實驗培養基為含有0.25%(v/v)的例1製得的副乾酪乳桿菌TCI077樣品的細胞培養基。
3. 培養24小時後，使用細胞增生檢測試劑套組測定各組的DNA含量。於此，依照細胞增生檢測試劑套組所提供的試驗流程處理各組的細胞後，將流式細胞儀的激發光的參數設定為488 nm，散射光的參數設定為530/30 nm後，利用流式細胞儀檢測各組螢光訊號。
C. 試驗結果：
以各組的DNA含量作為分析各組的皮膚細胞增生率的依據。所有組別的相對皮膚細胞增生率係依下列公式計算：相對皮膚細胞增生率（%）=（各組螢光訊號/空白組螢光訊號）×100%。
空白組與其他各組的試驗結果之間的統計學顯著差異是以學生t檢驗（student t-test）統計分析得到。於圖式中，「*」代表在與空白組比較下其p值小於0.05、「**」代表在與空白組比較下其p值小於0.01，以及「***」代表在與空白組比較下其p值小於0.001。
請參閱圖2。空白組未使用樣品進行處理，因此空白組的試驗結果代表CCD-966SK細胞在正常的生理代謝情況下的表現。於此，在設定空白組的相對皮膚細胞增生率為100%的情況下，正控制組的相對皮膚細胞增生率為137.4%，而實驗組的相對皮膚細胞增生率為142.8%。也就是說，相對於空白組，正控制組的CCD-966SK細胞在添加20%胎牛血清後，顯著提升約37.4%的相對皮膚細胞增生率。相對於空白組，實驗組的CCD-966SK細胞在添加副乾酪乳桿菌TCI077樣品後，顯著提升約42.8%的相對皮膚細胞增生率。相對於正控制組，實驗組的CCD-966SK細胞在添加副乾酪乳桿菌TCI077樣品後，提升約3.9%的相對皮膚細胞增生率。
由實驗結果可知，副乾酪乳桿菌TCI077樣品能明顯促進皮膚纖維母細胞的增生。並且，副乾酪乳桿菌TCI077樣品促進皮膚纖維母細胞增生率的增生效果優於正控制組。換言之，由實驗可證，副乾酪乳桿菌TCI077或其代謝產物能促進皮膚細胞增生，促進皮膚細胞生長，進而促進皮膚細胞修復，消除痘疤。
例 5 ：角質細胞增生試驗
A. 材料與儀器：
1. 細胞株：人類角質細胞，購自BCRC，細胞編號T0020001，以下簡稱HaCaT細胞。
2. 細胞培養基：Dulbecco's modified Eagle's medium（DMEM）（購自Gibco，產品編號12100-038），添加1% 抗生素（購自Invivogen，產品編號ant-mpp）以及10% 胎牛血清（Fetal Bovine Serum）（購自Gibco，產品編號10437-028）。
3. 正控制組細胞培養基：Dulbecco's modified Eagle's medium（DMEM）（購自Gibco，產品編號12100-038），添加1% 抗生素（購自Invivogen，產品編號ant-mpp）以及20% 胎牛血清（Fetal Bovine Serum）（購自Gibco，產品編號10437-028）。
4. 檢測套組：細胞增生檢測試劑套組（Click-iT™ Plus EdU Flow Cytometry Assay Kits-Alexa Fluor™ 488 picolyl azide, 50 tests），購自Invitrogen，產品編號C10632。
5. 流式細胞儀，購自BD。
B. 試驗流程：
1. 將HaCaT細胞以每孔1×10 5個的密度，接種於6孔培養盤中，並在37℃下培養至細胞滿度達8至9成。於此，HaCaT細胞分為三個試驗組別，其分別為：空白組、正控制組及實驗組。各組進行三重複。
2. 培養至細胞滿度達8至9成後，將各組更換為實驗培養基，並於37℃下繼續培養24小時。其中，空白組的實驗培養基為不含樣品的細胞培養基；正控制組的實驗培養基為不含樣品的正控制組細胞培養基；以及實驗組的實驗培養基為含有0.25%(v/v)的例1製得的副乾酪乳桿菌TCI077樣品的細胞培養基。
3. 培養24小時後，使用細胞增生檢測試劑套組測定各組的DNA含量。於此，依照細胞增生檢測試劑套組所提供的試驗流程處理各組的細胞後，將流式細胞儀的激發光的參數設定為488 nm，散射光的參數設定為530/30 nm後，利用流式細胞儀檢測各組螢光訊號。
C. 試驗結果：
以各組的DNA含量作為分析各組的角質細胞增生率的依據。所有組別的相對角質細胞增生率係依下列公式計算：相對角質細胞增生率（%）=（各組螢光訊號/空白組螢光訊號）×100%。
空白組與其他各組的試驗結果之間的統計學顯著差異是以學生t檢驗（student t-test）統計分析得到。於圖式中，「#」代表在與空白組比較下其p值小於0.05、「##」代表在與空白組比較下其p值小於0.01，以及「###」代表在與空白組比較下其p值小於0.001。
請參閱圖3。空白組未使用樣品進行處理，因此空白組的試驗結果代表HaCaT細胞在正常的生理代謝情況下的表現。於此，在設定空白組的相對角質細胞增生率為100%的情況下，正控制組的相對角質細胞增生率為153.0%，而實驗組的相對角質細胞增生率為132.3%。也就是說，相對於空白組，正控制組的HaCaT細胞在添加20%胎牛血清後，顯著提升約53.0%的相對角質細胞增生率。相對於空白組，實驗組的HaCaT細胞在添加副乾酪乳桿菌TCI077樣品後，提升約32.3%的相對皮膚細胞增生率。
由實驗結果可知，副乾酪乳桿菌TCI077樣品能明顯促進角質細胞的增生。換言之，由實驗可證，副乾酪乳桿菌TCI077或其代謝產物能促進角質細胞增生，促進角質細胞生長，進而促進角質細胞修復，消除痘疤。
例 6 ： IL-8 分泌量 試驗
A. 材料與儀器：
1. 細胞株：人類原發性表皮角質形成細胞（Human primary epidermal keratinocytes），購自ATCC（American Type Culture Collection，美國典型培養物保藏中心），細胞編號PCS-200-010TM，以下簡稱HEKn細胞。
2. 細胞培養基：角質細胞專用之無血清培養基（Keratinocyte-SFM），購自Gibco，產品編號10724-011。
3. LPS（Lipopolysaccharide，脂多醣），購自Sigma，產品編號SI-L2880-25MG。
4. 檢測套組：Human CXCL8/IL8 ELISA assay kit，購自R&D systems，產品編號D8000C。
5. 檢測儀器：酵素免疫分析儀（ELISA reader），購自BioTek公司（美國）。
B. 試驗流程：
1. 將角質細胞以每孔5×10 4個的密度接種於每孔含500 μL的細胞培養基的24孔培養盤中，並在37℃下培養24小時。於此，角質細胞分為三個試驗組別，其分別為：空白組、控制組與實驗組。各組進行三重複。
2. 培養24小時後，將各組更換為實驗培養基，並於37℃下繼續培養24小時。其中，空白組的實驗培養基為不含LPS與樣品的細胞培養基，控制組的實驗培養基為含有4 μg/mL LPS的細胞培養基，而實驗組的實驗培養基為含有4 μg/mL LPS 與0.5%(v/v)的例1製得的副乾酪乳桿菌TCI077樣品的細胞培養基。
3. 將培養後的各組於每孔中取出120 μL的實驗培養基，並使用Human CXCL8/IL8 ELISA assay kit測定各組角質細胞的IL-8分泌量。於此，依照Human CXCL8/IL8 ELISA assay kit所提供的試驗流程處理各組取出的實驗培養基後，利用酵素免疫分析儀測量每孔450 nm的吸光值（OD 450值）。
C. 試驗結果：
所有組別的相對IL-8分泌量係依下列公式計算：相對IL-8分泌量（%）=（各組OD 450值/空白組OD 450值）×100%。
空白組與其他各組以及控制組與其他各組的試驗結果之間的統計學顯著差異是以學生t檢驗（student t-test）統計分析得到。於圖式中，「#」代表在與空白組比較下其p值小於0.05、「##」代表在與空白組比較下其p值小於0.01，以及「###」代表在與空白組比較下其p值小於0.001。而於圖式中，「*」代表在與控制組比較下其p值小於0.05、「**」代表在與控制組比較下其p值小於0.01，以及「***」代表在與控制組比較下其p值小於0.001。
請參閱圖4。空白組未使用樣品進行處理也未以LPS刺激，因此空白組的試驗結果代表細胞在正常的生理代謝情況下的表現。於此，在設定空白組的相對IL-8分泌量為100%的情況下，控制組的相對IL-8分泌量為132.2%，而實驗組的相對IL-8分泌量為86.5%。也就是說，相對於空白組，控制組的細胞經由LPS刺激後，顯著提升約32.2%的相對IL-8分泌量。相對於空白組，實驗組的細胞使用副乾酪乳桿菌TCI077樣品進行處理並經由LPS刺激後，降低約13.5%的相對IL-8分泌量。相對於控制組，實驗組的細胞使用副乾酪乳桿菌TCI077樣品進行處理並經由LPS刺激後，顯著降低約34.6%的相對IL-8分泌量。
LPS是一種內毒素，能引起強烈的免疫反應，包含發炎反應。IL-8（Interleukin-8，白血球介素-8）是一種巨噬細胞和上皮細胞等分泌的細胞因子，參與發炎反應。
由實驗結果可知，副乾酪乳桿菌TCI077樣品能明顯降低角質細胞經由LPS刺激後所提升的IL-8分泌量，還降低到遠低於角質細胞在正常的生理代謝情況下所產生的IL-8分泌量。換言之，由實驗可證，副乾酪乳桿菌TCI077或其代謝產物能抑制及/或降低角質細胞分泌IL-8，抑制及/或降低角質細胞的IL-8含量，進而降低及/或抑制角質細胞的發炎狀態。副乾酪乳桿菌TCI077或其代謝產物能降低及/或抑制皮膚發炎物質產生，抑制皮膚發炎。副乾酪乳桿菌TCI077或其代謝產物能降低及/或抑制發炎狀態，具有抗發炎的作用。
例 7 ：基因試驗
A. 材料與儀器：
1. 細胞株：人類角質細胞，購自AddexBio，細胞編號T0020001，以下簡稱HaCaT細胞。
2. 細胞培養基：Dulbecco's modified Eagle's medium（購自Gibco，產品編號12100-038），添加1% 抗生素（購自invivogen，產品編號ant-mpp）以及10% 胎牛血清（Fetal Bovine Serum）（購自Gibco，產品編號10437-028）。
3. RNA萃取試劑套組，購自Geneaid，產品編號DR100。
4. SuperScript® III反轉錄酶，購自Invitrogen公司，產品編號18080-044。
5. ABI StepOnePlus TM即時PCR系統（ABI StepOnePlus TMReal-Time PCR system），購自Thermo Fisher Scientific公司。
6. KAPA SYBR FAST qPCR Kit (2x)，購自KAPA Biosystems公司，產品編號KK4600。
B. 試驗流程：
1. 將HaCaT細胞以每孔1×10 5個的密度接種於每孔含2 mL的細胞培養基的6孔培養盤中，並在37℃下培養24小時。於此，HaCaT細胞分為兩個試驗組別，其分別為：空白組及實驗組。各組進行三重複。
2. 培養24小時後，將各組更換為實驗培養基，並於37℃下繼續培養24小時。其中，空白組的實驗培養基為不含樣品的細胞培養基，而實驗組的實驗培養基為含有0.125%(v/v)的例1製得的副乾酪乳桿菌TCI077樣品的細胞培養基。
3. 培養24小時後，收集各組的HaCaT細胞。接著，以RNA萃取試劑套組分別萃取各組的HaCaT細胞內的RNA。
4. 每組取2000奈克（ng）所萃取出的RNA作為模板，藉由SuperScript® III反轉錄酶將萃取出的RNA反轉錄為相應的cDNA。
5. 使用ABI StepOnePlus TM即時PCR系統，以KAPA SYBR FAST qPCR Kit (2x)及表2的組合引子對各組的cDNA分別進行定量即時反轉錄聚合酶連鎖反應（quantitative real-time reverse transcription polymerase chain reaction），以觀察空白組及實驗組的HaCaT細胞的各種目標基因的表現量及其解鏈曲線（melting curve）。定量即時反轉錄聚合酶連鎖反應的儀器設定條件為95°C反應20秒，95°C反應3秒，60°C反應30秒，並重複40個迴圈。
6. 使用 2 - ΔΔ Ct方法測定目標基因的相對表現量。所謂相對表現量定義為實驗組或空白組之目標基因的RNA表現量相對於空白組之同一基因的RNA表現量的倍數變化。於此，藉由cDNA進行定量即時反轉錄聚合酶連鎖反應可間接定量基因的mRNA表現量，進而推斷基因編碼的蛋白質的表現量。2- ΔΔ Ct方法以TBP（TATA-box binding protein）基因的循環閾值作為內部對照之參考基因的循環閾值（Ct），按照以下公式計算倍數變化： △Ct = Ct 實驗組之目標基因 / 空白組之目標基因– Ct TBP△△Ct= △Ct 實驗組之目標基因- △Ct 空白組之目標基因倍數變化 = 2 - ΔΔ Ct 平均值
表2
目標基因 引子名稱 序列編號 序列
HAS2 HAS2-F SEQ ID NO:2 AAGAACAACTTCCACGAAAAGGG
HAS2-R SEQ ID NO:3 GGCTGGGTCAAGCATAGTGT
HAS3 HAS3-F SEQ ID NO:4 CGCAGCAACTTCCATGAGG
HAS3-R SEQ ID NO:5 AGTCGCACACCTGGATGTAGT
GBA GBA-F SEQ ID NO:6 TCCAGTTGCACAACTTCAGC
GBA-R SEQ ID NO:7 TTGTGCTCAGCATAGGCATC
AQP3 AQP3-F SEQ ID NO:8 GGGGAGATGCTCCACATCC
AQP3-R SEQ ID NO:9 AAAGGCCAGGTTGATGGTGAG
FLG-F FLG-F-F SEQ ID NO:10 GGCAAATCCTGAAGAATCCA
FLG-F-R SEQ ID NO:11 TGCTTTCTGTGCTTGTGTCC
TGM1 TGM1-F SEQ ID NO:12 GCACCACACAGACGAGTATGA
TGM1-R SEQ ID NO:13 GGTGATGCGATCAGAGGATTC
KRT1 KRT1-F SEQ ID NO:14 AGAGTGGACCAACTGAAGAGT
KRT1-R SEQ ID NO:15 ATTCTCTGCATTTGTCCGCTT
KRT10 KRT10-F SEQ ID NO:16 ATGTCTGTTCGATACAGCTCAAG
KRT10-R SEQ ID NO:17 CTCCACCAAGGGAGCCTTTG
KRT14 KRT14-F SEQ ID NO:18 TTCTGAACGAGATGCGTGAC
KRT14-R SEQ ID NO:19 GCAGCTCAATCTCCAGGTTC
C. 試驗結果：
所有組別的相對目標基因表現量係依下列公式計算：相對目標基因表現量=（各組目標基因表現量/空白組目標基因表現量）。
空白組與實驗組的試驗結果之間的統計學顯著差異是以學生t檢驗（student t-test）統計分析得到。於圖式中，「*」代表在與空白組比較下其p值小於0.05、「**」代表在與空白組比較下其p值小於0.01，以及「***」代表在與空白組比較下其p值小於0.001。
請參閱圖5。空白組的細胞未使用樣品進行處理，因此空白組的試驗結果代表細胞在正常的生理代謝情況下的表現。於此，在設定空白組的相對 HAS2及 HAS3基因表現量為1倍的情況下，實驗組的相對 HAS2基因表現量為5.19倍；而實驗組的相對 HAS3基因表現量為2.86倍。也就是說，相對於空白組，實驗組的細胞在添加副乾酪乳桿菌TCI077樣品後，顯著提升約419%的相對 HAS2基因表現量。相對於空白組，實驗組的細胞在添加副乾酪乳桿菌TCI077樣品後，顯著提升約186%的相對 HAS3基因表現量。
由實驗結果可知，副乾酪乳桿菌TCI077樣品能提升角質細胞 HAS2及 HAS3基因的表現量。 HAS2及 HAS3基因負責製造玻尿酸合成酶，參與玻尿酸的合成。玻尿酸是細胞外基質的主要成分。換言之，由實驗可證，副乾酪乳桿菌TCI077或其代謝產物具有提升角質細胞合成玻尿酸，提升角質細胞的玻尿酸含量的效果。由於玻尿酸能於細胞外基質保存水含量，副乾酪乳桿菌TCI077或其代謝產物具有提升皮膚保濕度的效果。副乾酪乳桿菌TCI077或其代謝產物具有促進保水相關物質生合成，促進玻尿酸合成，提升玻尿酸含量的效果。玻尿酸亦能提供關節潤滑、促進傷口癒合和組織修復。
請參閱圖6。空白組的細胞未使用樣品進行處理，因此空白組的試驗結果代表細胞在正常的生理代謝情況下的表現。於此，在設定空白組的相對 GBA基因表現量為1倍的情況下，實驗組的相對 GBA基因表現量為6.81倍。也就是說，相對於空白組，實驗組的細胞在添加副乾酪乳桿菌TCI077樣品後，顯著提升約581%的相對 GBA基因表現量。
由實驗結果可知，副乾酪乳桿菌TCI077樣品能提升角質細胞 GBA基因的表現量。 GBA基因負責製造的酵素有助於將葡萄糖腦苷脂的大分子分解為葡萄糖和神經醯胺。神經醯胺是角質層的主要成分，與膽固醇和脂肪酸一起穩固細胞之間的空間，進而形成不透水層，防止水分過多蒸發流失。換言之，由實驗可證，副乾酪乳桿菌TCI077或其代謝產物具有提升角質細胞生成神經醯胺，提升角質細胞的神經醯胺含量的效果。由於神經醯胺能夠形成保護層鎖住水分，副乾酪乳桿菌TCI077或其代謝產物具有提升皮膚保濕度的效果。副乾酪乳桿菌TCI077或其代謝產物具有促進保水相關物質生合成，促進神經醯胺生成，提升神經醯胺含量的效果。並且，由於神經醯胺大量存在於皮膚的角質層當中，神經醯胺亦能維持皮膚結構，鞏固皮膚屏障並提升皮膚的穩定性。
請參閱圖7。空白組的細胞未使用樣品進行處理，因此空白組的試驗結果代表細胞在正常的生理代謝情況下的表現。於此，在設定空白組的相對 AQP3及 FLG-F基因表現量為1倍的情況下，實驗組的相對 AQP3基因表現量為5.56倍；而實驗組的相對 FLG-F基因表現量為6.10倍。也就是說，相對於空白組，實驗組的細胞在添加副乾酪乳桿菌TCI077樣品後，顯著提升約456%的相對 AQP3基因表現量。相對於空白組，實驗組的細胞在添加副乾酪乳桿菌TCI077樣品後，顯著提升約510%的相對 FLG-F基因表現量。
由實驗結果可知，副乾酪乳桿菌TCI077樣品能提升角質細胞 AQP3基因的表現量。 AQP3基因負責製造水通道蛋白3，一種細胞膜上跨膜運輸水、甘油和尿素等小分子物質的轉運蛋白，其參與皮膚水合、提升皮膚屏障以及促進創傷癒合，維持皮膚的正常形態和功能。換言之，由實驗可證，副乾酪乳桿菌TCI077或其代謝產物具有提升角質細胞水通道蛋白含量，促進水通過細胞膜的運輸，提升皮膚含水量、提升皮膚屏障以及促進創傷癒合的效果。副乾酪乳桿菌TCI077或其代謝產物具有促進天然保濕因子生成，提升水通道蛋白含量的效果。
由實驗結果可知，副乾酪乳桿菌TCI077樣品能提升角質細胞 FLG-F基因的表現量。 FLG-F基因負責製造聚角蛋白微絲（filaggrin），建構皮膚屏障並產生天然保濕因子（NMF，Natural Moisturizing Factor）。NMF於角質層中的保水功能扮演很重要的角色。換言之，由實驗可證，副乾酪乳桿菌TCI077或其代謝產物具有提升角質細胞聚角蛋白微絲含量，提升皮膚屏障的效果。副乾酪乳桿菌TCI077或其代謝產物具有提升角質細胞天然保濕因子（NMF）含量，提升皮膚保水效果。副乾酪乳桿菌TCI077或其代謝產物具有提升聚角蛋白微絲含量及天然保濕因子（NMF）含量的效果。
請參閱圖8。空白組的細胞未使用樣品進行處理，因此空白組的試驗結果代表細胞在正常的生理代謝情況下的表現。於此，在設定空白組的相對 TGM1、 KRT1、 KRT10及 KRT14基因表現量為1倍的情況下，實驗組的相對 TGM1基因表現量為7.33倍；實驗組的相對 KRT1基因表現量為3.65倍；實驗組的相對 KRT10基因表現量為4.37倍；而實驗組的相對 KRT14基因表現量為5.85倍。也就是說，相對於空白組，實驗組的細胞在添加副乾酪乳桿菌TCI077樣品後，顯著提升約633%的相對 TGM1基因表現量。相對於空白組，實驗組的細胞在添加副乾酪乳桿菌TCI077樣品後，顯著提升約265%的相對 KRT1基因表現量。相對於空白組，實驗組的細胞在添加副乾酪乳桿菌TCI077樣品後，顯著提升約337%的相對 KRT10基因表現量。相對於空白組，實驗組的細胞在添加副乾酪乳桿菌TCI077樣品後，顯著提升約485%的相對 KRT14基因表現量。
由實驗結果可知，副乾酪乳桿菌TCI077樣品能提升角質細胞 TGM1、 KRT1、 KRT10及 KRT14基因的表現量。 TGM1基因負責製造的酵素參與角化細胞包膜（cornified cell envelope）的形成，為表皮提供了強度和穩定性，以形成保護屏障。 KRT 基因負責製造角蛋白（keratin），此角蛋白與其他角蛋白一起形成上皮細胞的細胞骨架，為皮膚的主要構成物，對於皮膚形成天然屏障具有重要的功能，能夠維持皮膚角質細胞結構。並且，角質細胞的緊密性取決於角蛋白。換言之，由實驗可證，副乾酪乳桿菌TCI077或其代謝產物具有提升角質細胞角蛋白含量，鞏固皮膚屏障，強化皮膚結構，減少水分散失的效果。副乾酪乳桿菌TCI077或其代謝產物具有提升角質細胞緊密性、強度及穩定性的效果。
例 8 ：人體試驗
A. 試驗流程：
令9位20至50歲的油性皮膚的成人受試者每日服用一粒試驗膠囊，並連續服用4週（即28日）。試驗膠囊含有5x10 9CFU的副乾酪乳桿菌TCI077活菌。並且，受試者於開始服用前（以下稱第0週）、服用14日後（以下稱第2週）及服用28日後（以下稱第4週）進行皮膚檢測及抽血檢測。受試者於服用28日後（以下稱第4週）進行體感問卷調查。
皮膚檢測為依據不同皮膚檢測項目，使用對應的儀器及測量方式，紀錄臉部皮膚之數值、並拍攝服用前及服用後的照片。皮膚檢測項目為皮膚含水量、皮膚油脂含量及皮膚皺紋程度。並且，不論是第0週、第2週、還是第4週，在進行檢測時，受試者所在的測試區域的溫度與濕度為一致，以減少外界的溫濕度等因素對皮膚所造成的影響。
皮膚含水量係使用購自德國Courage+Khazaka electronic公司的皮膚含水量檢測探頭Corneometer® CM825 （C+K Multi Probe Adapter System，Germany）對同一受試者在服用前及服用後的面部皮膚進行檢測。此檢測探頭係基於電容的原理進行測量。當水分含量發生變化時，皮膚的電容值亦發生變化，故可透過測定皮膚電容值以得到可代表皮膚的含水量的一數值（以下稱皮膚含水量值）。於此，所得到的皮膚含水量值越高，說明皮膚含水量越高。然後，再以下列公式計算出相對皮膚含水量：相對皮膚含水量（%）=（各組皮膚含水量值 /服用前皮膚含水量值）×100%。
皮膚油脂含量係使用購自德國Courage+Khazaka electronic公司的皮膚油脂含量檢測探頭Sebumeter® SM815（C+K Multi Probe Adapter System，Germany) 對同一受試者在服用前及服用後的面部皮膚進行檢測。此探頭係利用光度計原理，先以探頭中的試紙吸取皮膚油脂後，根據試紙透光程度計算出可代表皮膚的油脂含量的一數值（以下稱皮膚油脂含量值）。並且，得到的皮膚油脂含量值越高，說明皮膚油脂含量越高。然後，再以下列公式計算出相對皮膚油脂含量：相對皮膚油脂含量（%）=（各組皮膚油脂含量值 /使用前皮膚油脂含量值）×100%。
皮膚皺紋程度係使用購自美國Canfield scientific公司的VISIA高階數位膚質檢測儀（VISIA Complexion Analysis System）對同一受試者在服用前及服用後的面部皮膚進行檢測。此檢測儀係透過高解析度之相機鏡頭對面部皮膚進行拍攝，藉由可見光（白光）照射、偵測皮膚陰影的變化，即可分析計算皺紋之長度與深度並得到可代表皮膚的皺紋程度的一數值（以下稱皮膚皺紋程度值）。於此，所得到的皮膚皺紋程度值越高，說明皮膚皺紋程度越嚴重。然後，再以下列公式計算出相對皮膚皺紋程度：相對皮膚皺紋程度（%）=（各組皮膚皺紋程度值 /服用前皮膚皺紋程度值）×100%。
抽血檢測係委由立人醫事檢驗所（台灣） 測定受試者於服用前及服用後血液中的嗜中性白血球（Neutrophils）數量的變化量。
體感問卷調查係使用體感問卷令受試者於服用28日後進行自我評估，體感問卷如下表3、表4及表5所示。
如下表3所示，受試者針對皮膚狀況進行自我評估。各受試者自我評估後，並於非常有感、輕微有感、無感以及更嚴重此四個選項中擇一。
表3
皮膚狀況 非常有感 輕微有感 無感 更嚴重
服用28日後，感到皮膚細紋獲得改善
服用28日後，感到皮膚摸起來較細嫩光滑
服用28日後，感到皮膚乾癢、泛紅狀況獲得改善
服用28日後，感到皮膚乾燥缺水狀況改善
服用28日後，感到皮膚較不易出油
如下表4所示，受試者針對排便頻率及排便所需時間進行自我評估。各受試者自我評估後，並於各題目的選項中擇一。
表4
排便頻率 一天兩次以上 一天一次 兩天一次
服用前，平均多久排便一次?
服用28日後，平均多久排便一次?
排便所需時間 ＜5分鐘 10~20分鐘 ＞20分鐘
服用前，平均於廁所中排便所需時間?
服用28日後，平均於廁所中排便所需時間?
如下表5所示，受試者針對排便狀況進行自我評估。各受試者自我評估後，並於非常同意、同意、普通、不同意以及非常不同意此五個選項中擇一。
表5
排便狀況 非常同意 同意 普通 不同意 非常不同意
排便較乾淨且順暢
排便較不易感到疼痛
排便較輕鬆
糞質變得較鬆軟
B. 試驗結果：
第0週與其他各週的試驗結果之間的統計學顯著差異是以學生t檢驗（student t-test）統計分析得到。於圖式中，「*」代表在與第0週比較下其p值小於0.05、「**」代表在與第0週比較下其p值小於0.01，以及「***」代表在與第0週比較下其p值小於0.001。
請參閱圖9。將9位受試者在服用前所測得的皮膚含水量值視為100%的相對皮膚含水量。此時，在第2週（即持續服用試驗膠囊2週後）的相對皮膚含水量為106.6%，而在第4週（即持續服用試驗膠囊4週後）的相對皮膚含水量為106.3%。換言之，相較於服用前，持續服用2週副乾酪乳桿菌TCI077活菌後可使此些受試者的相對皮膚含水量顯著增加6.6%，而持續服用4週副乾酪乳桿菌TCI077活菌後可使此些受試者的相對皮膚含水量顯著增加6.3%。並且，改善人數比例為77.8%（7人）。由此可知，副乾酪乳桿菌TCI077活菌確實可增加皮膚含水量。換言之，由實驗可證，副乾酪乳桿菌TCI077或其代謝產物具有提升皮膚保濕度的效果。
請參閱圖10。將9位受試者在服用前所測得的皮膚油脂含量值視為100%的相對皮膚油脂含量。此時，在第2週（即持續服用試驗膠囊2週後）的相對皮膚油脂含量為84.9%，而在第4週（即持續服用試驗膠囊4週後）的相對皮膚含水量為86.3%。換言之，相較於服用前，持續服用2週副乾酪乳桿菌TCI077活菌後可使此些受試者的相對皮膚油脂含量減少15.1%，而持續服用4週副乾酪乳桿菌TCI077活菌後可使此些受試者的相對皮膚油脂含量減少13.7%。並且，改善人數比例為66.7%（6人）。由此可知，副乾酪乳桿菌TCI077活菌確實可減少皮膚油脂含量。換言之，由實驗可證，副乾酪乳桿菌TCI077或其代謝產物具有減少皮膚油脂的效果。
由於副乾酪乳桿菌TCI077或其代謝產物能夠同時增加皮膚含水量以及減少皮膚油脂含量，副乾酪乳桿菌TCI077或其代謝產物具有提升皮膚油水平衡，調控油水平衡的效果。而由於皮膚油水失衡會導致痘痘及/或粉刺的產生，副乾酪乳桿菌TCI077或其代謝產物具有降低痘痘及/或粉刺形成的效果。
請參閱圖11。將9位受試者在服用前所測得的皮膚皺紋程度值視為100%的相對皮膚皺紋程度。此時，在第2週（即持續服用試驗膠囊2週後）的相對皮膚皺紋程度為98.3%，而在第4週（即持續服用試驗膠囊4週後）的相對皮膚皺紋程度為93.1%。換言之，相較於服用前，持續服用2週副乾酪乳桿菌TCI077活菌後可使此些受試者的相對皮膚皺紋程度減少1.7%，而持續服用4週副乾酪乳桿菌TCI077活菌後可使此些受試者的相對皮膚皺紋程度減少6.9%。並且，改善人數比例為66.7%（6人）。由此可知，副乾酪乳桿菌TCI077活菌確實可減少皮膚皺紋。換言之，由實驗可證，副乾酪乳桿菌TCI077或其代謝產物具有減少皮膚皺紋、撫平皮膚細紋的效果。
請參閱圖12。第0週時的嗜中性白血球數量為約57.32%，第2週（即持續服用試驗膠囊2週後）時的嗜中性白血球數量為約58.81%，而第4週（即持續服用試驗膠囊4週後）時的嗜中性白血球數量為約62.49%。換言之，相較於服用前，持續服用2週副乾酪乳桿菌TCI077活菌後可使此些受試者的嗜中性白血球數量增加2.6%，而持續服用4週副乾酪乳桿菌TCI077活菌後可使此些受試者的嗜中性白血球數量顯著增加9.0%。並且，改善人數比例為77.8%（7人）。由此可知，副乾酪乳桿菌TCI077活菌確實可增加嗜中性白血球數量，增強免疫力。換言之，由實驗可證，副乾酪乳桿菌TCI077或其代謝產物具有增加嗜中性白血球數量，提升免疫力的效果。
請參閱圖13。於第4週時，44.4%（4位）的受試者認為沒有改善皮膚細紋，而55.6%（5位）的受試者認為有改善皮膚細紋。33.3%（3位）的受試者認為沒有改善皮膚細嫩度，而66.7%（6位）的受試者認為有改善皮膚細嫩度。22.2%（2位）的受試者認為沒有改善皮膚乾癢泛紅狀況，而77.8%（7位）的受試者認為有改善皮膚乾癢泛紅狀況。11.1%（1位）的受試者認為沒有改善皮膚乾燥缺水狀況，而88.9%（8位）的受試者認為有改善皮膚乾燥缺水狀況。55.6%（5位）的受試者認為沒有較不易出油，而44.4%（4位）的受試者認為有較不易出油。由此可知，副乾酪乳桿菌TCI077活菌確實可改善膚況，包含改善皮膚細紋、皮膚細嫩度、皮膚乾癢泛紅、皮膚乾燥缺水及皮膚出油狀況。換言之，由實驗可證，副乾酪乳桿菌TCI077或其代謝產物具有改善膚況的效果，包含改善皮膚細紋、改善皮膚細嫩度、減緩皮膚乾癢泛紅、改善皮膚乾燥缺水及改善皮膚出油狀況的效果。其中，「有感改善」為體感問卷的表3中選擇的「非常有感」及「輕微有感」的人數總和。
請參閱圖14。於第0週時，有11.1%（1位）的受試者的排便頻率為一天兩次以上，有55.6%（5位）的受試者的排便頻率為一天一次，而有33.3%（3位）的受試者的排便頻率為兩天一次。於第4週時，有33.3%（3位）的受試者的排便頻率為一天兩次以上，而有66.7%（6位）的受試者的排便頻率為一天一次。由此可知，副乾酪乳桿菌TCI077活菌確實可提升排便頻率，幫助排便並使排便順暢。換言之，由實驗可證，副乾酪乳桿菌TCI077或其代謝產物具有提升排便頻率，幫助排便並使排便順暢的效果。
請參閱圖15。於第0週時，有33.3%（3位）的受試者的排便所需時間為小於5分鐘，有33.3%（3位）的受試者的排便所需時間為10~20分鐘，而有33.3%（3位）的受試者的排便所需時間為大於20分鐘。於第4週時，有44.4%（4位）的受試者的排便所需時間為小於5分鐘，而有55.6%（5位）的受試者的排便所需時間為10~20分鐘。由此可知，副乾酪乳桿菌TCI077活菌確實可減少排便所需時間，幫助排便並使排便順暢。換言之，由實驗可證，副乾酪乳桿菌TCI077或其代謝產物具有減少排便所需時間，幫助排便並使排便順暢的效果。
請參閱圖16。於第4週時，11.1%（1位）的受試者認為排便沒有較乾淨順暢，而88.9%（8位）的受試者認為排便有較乾淨順暢。22.2%（2位）的受試者認為排便沒有較不易疼痛，而77.8%（7位）的受試者認為排便有較不易疼痛。22.2%（2位）的受試者認為排便沒有較輕鬆，而77.8%（7位）的受試者認為排便有較輕鬆。33.3%（3位）的受試者認為糞質沒有較鬆軟，而66.7%（6位）的受試者認為糞質有較鬆軟。由此可知，副乾酪乳桿菌TCI077活菌確實可使排便乾淨順暢、排便不易疼痛、排便輕鬆以及糞質鬆軟。換言之，由實驗可證，副乾酪乳桿菌TCI077或其代謝產物具有提升排便乾淨順暢、排便不易疼痛、排便輕鬆以及糞質鬆軟的效果。副乾酪乳桿菌TCI077或其代謝產物具有幫助排便，提升排便順暢度及減少糞質堅硬度的效果。其中，「有感改善」為體感問卷的表5中選擇的「非常同意」及「同意」的人數總和，而「無感」為體感問卷的表5中選擇的「普通」的人數。
綜上，任一實施例的副乾酪乳桿菌或其代謝產物具有調理皮膚或提升免疫力的效果。換言之，任一實施例的副乾酪乳桿菌或其代謝產物適用於製備調理皮膚或提升免疫力的組合物。換言之，前述之組合物具有調理皮膚或提升免疫力的功能。換言之，施予前述之組合物於一個體上時能在此個體上產生調理皮膚或提升免疫力的作用。在一些實施例中，副乾酪乳桿菌、其代謝產物或其所製得的組合物還具有下列功能中的一種或多種功能：抗痘、抗菌、抗發炎、強化皮膚結構、提升皮膚保濕度、減少皮膚皺紋、減緩皮膚乾癢泛紅、提升免疫力、及幫助排便。
無
圖1是抑菌試驗結果的柱狀圖。 圖2是相對皮膚細胞增生率的細胞實驗結果的柱狀圖。 圖3是相對角質細胞增生率的細胞實驗結果的柱狀圖。 圖4是相對IL-8分泌量的細胞實驗結果的柱狀圖。 圖5是相對基因表現量的細胞實驗結果的柱狀圖（一）。 圖6是相對 GBA基因表現量的細胞實驗結果的柱狀圖。 圖7是相對基因表現量的細胞實驗結果的柱狀圖（二）。 圖8是相對基因表現量的細胞實驗結果的柱狀圖（三）。 圖9是第0週、第2週及第4週的相對皮膚含水量的人體實驗結果的柱狀圖。 圖10是第0週、第2週及第4週的相對皮膚油脂含量的人體實驗結果的柱狀圖。 圖11是第0週、第2週及第4週的相對皮膚皺紋程度的人體實驗結果的柱狀圖。 圖12是第0週、第2週及第4週的嗜中性白血球數量的人體實驗結果的柱狀圖。 圖13是人體試驗的皮膚狀況的體感問卷結果圖。 圖14是人體試驗的排便頻率的體感問卷結果圖。 圖15是人體試驗的排便所需時間的體感問卷結果圖。 圖16是人體試驗的排便狀況的體感問卷結果圖。
1. TW中華民國；財團法人食品工業發展研究所；2022/08/08；寄存編號：BCRC 911142。 2. DE德國；德國微生物菌種保藏中心；2022/09/07；寄存編號：DSM 34374。
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Claims (19)

  1. 一種副乾酪乳桿菌，其中該副乾酪乳桿菌為 Lacticaseibacillus ParacaseiTCI077，寄存編號BCRC 911142。
  2. 一種副乾酪乳桿菌或其代謝產物用於製備抗痘組合物的用途，其中該副乾酪乳桿菌為 Lacticaseibacillus ParacaseiTCI077，寄存編號BCRC 911142。
  3. 如請求項2所述的用途，其中該副乾酪乳桿菌或其代謝產物用以抑制及/或減少痤瘡丙酸桿菌。
  4. 如請求項2所述的用途，其中該副乾酪乳桿菌或其代謝產物透過促進細胞修復來消除痘疤。
  5. 如請求項4所述的用途，其中該副乾酪乳桿菌或其代謝產物透過促進皮膚細胞或角質細胞增生來促進細胞修復。
  6. 如請求項2所述的用途，其中該副乾酪乳桿菌或其代謝產物用以減少皮膚油脂含量。
  7. 如請求項2所述的用途，其中該副乾酪乳桿菌或其代謝產物用以提升皮膚油水平衡。
  8. 一種副乾酪乳桿菌或其代謝產物用於製備抗菌組合物的用途，其中該副乾酪乳桿菌為 Lacticaseibacillus ParacaseiTCI077，寄存編號BCRC 911142。
  9. 一種副乾酪乳桿菌或其代謝產物用於製備抗發炎組合物的用途，其中該副乾酪乳桿菌為 Lacticaseibacillus ParacaseiTCI077，寄存編號BCRC 911142。
  10. 如請求項9所述的用途，其中該副乾酪乳桿菌或其代謝產物用以抑制角質細胞發炎。
  11. 一種副乾酪乳桿菌或其代謝產物用於製備強化皮膚結構組合物的用途，其中該副乾酪乳桿菌為 Lacticaseibacillus ParacaseiTCI077，寄存編號BCRC 911142。
  12. 如請求項11所述的用途，其中該副乾酪乳桿菌或其代謝產物用以提升角蛋白。
  13. 一種副乾酪乳桿菌或其代謝產物用於製備提升皮膚保濕度組合物的用途，其中該副乾酪乳桿菌為 Lacticaseibacillus ParacaseiTCI077，寄存編號BCRC 911142。
  14. 如請求項13所述的用途，其中該副乾酪乳桿菌或其代謝產物用以提升玻尿酸、神經醯胺、天然保濕因子（NMF）及/或水通道蛋白。
  15. 一種副乾酪乳桿菌或其代謝產物用於製備減少皮膚皺紋組合物的用途，其中該副乾酪乳桿菌為 Lacticaseibacillus ParacaseiTCI077，寄存編號BCRC 911142。
  16. 一種副乾酪乳桿菌或其代謝產物用於製備減緩皮膚乾癢泛紅組合物的用途，其中該副乾酪乳桿菌為 Lacticaseibacillus ParacaseiTCI077，寄存編號BCRC 911142。
  17. 一種副乾酪乳桿菌或其代謝產物用於製備提升免疫力組合物的用途，其中該副乾酪乳桿菌為 Lacticaseibacillus ParacaseiTCI077，寄存編號BCRC 911142。
  18. 如請求項17所述的用途，其中該副乾酪乳桿菌或其代謝產物用以增加嗜中性白血球的數量。
  19. 一種副乾酪乳桿菌或其代謝產物用於製備幫助排便組合物的用途，其中該副乾酪乳桿菌為 Lacticaseibacillus ParacaseiTCI077，寄存編號BCRC 911142。
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