TW201444869A - Ｉｌ-１２／ｐ４０結合蛋白 - Google Patents

Abstract

本發明涵蓋IL-12p40結合蛋白，尤其是結合人類介白素-12(hIL-12)及/或人類IL-23(hIL-23)之抗體。特定言之，本發明係關於為嵌合、CDR移植抗體及人化抗體。較佳抗體對hIL-12及/或hIL-23具有高親和力，且在活體外及活體內可中和hIL-12及/或hIL-23之活性。本發明抗體可為全長抗體或其抗原結合部分。本發明亦提供本發明抗體之製造方法及使用方法。本發明抗體或抗體部分可用以(例如)偵測身受hIL-12及/或hIL-23活性有害之病症的人類受檢者體內hIL-12及/或hIL-23，及用以抑制hIL-12及/或hIL-23之活性。

Description

IL-12/P40結合蛋白

本發明係關於IL-12/P40結合蛋白，且尤其係關於其用於預防及/或治療急性及慢性發炎疾病之用途。

人類介白素-12(IL-12)是一種具有獨特結構及多效作用之細胞激素(Kobayashi等人(1989)J Exp Med 170：827-845；Seder等人(1993)Proc.Natl.Acad.Sci.90：10188-10192，Ling等人(1995)J Exp Med 154：116-127；Podlaski等人(1992)Arch.Biochem.Biophys.294：230-237)。IL-12在與免疫及發炎反應之數種疾病相關之病理學中扮演關鍵的作用。對於IL-12，其生物活性及其疾病中作用之評論可在Trinchieri,G.(2003)Nat.Rev.Immun.3：133-146中找到。在結構上，IL-12為包含由二硫橋連接在一起的35kDa次單位(p35)及40kDa次單位(p40)之雜二聚蛋白(稱為"p70蛋白")。該雜二聚蛋白主要由諸如單核細胞、巨噬細胞及樹突狀細胞之抗原呈現細胞產生。此等細胞類型亦分泌相對於p70次單位過量的p40次單位。p40及p35次單位在基因上並無關聯，且均未經報導具有生物活性，但p40均二聚體可充當IL-12拮抗劑。

在功能上，IL-12在調節抗原特異性T輔助類型1(Th1)與類型2(Th2)淋巴細胞之間的平衡中扮演關鍵的作用。Th1及Th2細胞支配自體免疫病症之起始及進展，而IL-12在調節Th1-淋巴細胞之分化及成 熟作用是關鍵的。由Th1細胞釋放的細胞激素為炎性的且包括干擾素γ(IFN-γ)、IL-2及淋巴毒素(LT)。Th2細胞會分泌IL-4、IL-5、IL-6、IL-10及IL-13以促進體液性免疫、過敏反應及免疫抑止作用。與Th1反應在自體免疫疾病中之優勢及IFN-γ之促炎活性一致，IL-12可在與諸如類風濕性關節炎(RA)、多發性硬化症(MS)、牛皮癬(PS)及克羅恩病(CD)之多種自體免疫及發炎疾病相關的病理學中起主要作用。

如急性MS斑中p40 mRNA之含量所證明，患有MS的人類患者顯示IL-12表現會增加(Windhagen等人，(1995)J Exp.Med.182：1985-1996)。另外，以來自MS患者的表現CD40L之T細胞活體外刺激抗原呈現細胞導致與對照T細胞相比較IL-12產生增加，此與觀察到CD40/CD40L相互作用為IL-12的強效誘導物一致。已在RA患者之滑液中偵測到與健康對照組相比升高的IL-12p70含量(Morita等人(1998)Arth.and Rheumat.41：306-314)。RA滑液中之細胞激素信息核糖核酸(mRNA)表現譜主要係識別Th1細胞激素(Bucht等人(1996)Clin.Exp.Immunol.103：347-367)。IL-12看來似乎亦在與克羅恩病相關的病理學中起關鍵作用。已在患有此疾病患者的腸黏膜中觀察到INF-γ及IL-12之表現增加(Fais等人(1994)J Interferon Res.14：235-238；Parronchi等人(1997)Am.J.Path.150：823-832；Monteleone等人(1997)Gastroent.112：1169-1178及Berrebi等人(1998)Am.J Path 152：667-672)。來自CD患者固有層之T細胞之細胞激素分泌譜的特徵在於主要的Th1反應，包括極大升高的IFN-γ含量(Fuss等人(1996)J Immunol.157：1261-1270)。此外，來自CD患者的結腸組織切片顯示出大量表現IL-12的巨噬細胞及表現IFN-γ的T細胞(Parronchi等人(1997)Am.J.Path.150：823-832)。

IL-23亦為一種雜二聚細胞激素，且屬於包括IL-12及IL-27之5種該等雜二聚細胞激素之家族(Trinchieri等人，(2003)Immunity 19： 641-644)。IL-23與IL-12具有相同的p40次單位，但其經由二硫鍵與p19次單位相連。p19次單位在結構上與IL-6、粒細胞-群落刺激因子(G-CSF)及IL-12之p35次單位相關。IL-23由與IL-12類似的細胞類型產生，且其受體表現於T細胞、NK細胞及吞噬細胞及樹突狀造血細胞上。IL-23藉由結合包含IL-23R及IL-12β1之雜二聚受體介導信號轉導。IL-12受體同樣具有IL-12β1次單位，其包含IL-12β1及IL-12β2。IL-23與IL-12具有重疊功能(藉由誘導IFN-γ產生，Th1細胞分化及活化樹突狀細胞之抗原呈現功能)，但其選擇性誘導記憶T細胞增殖(Oppmann等人(2000)Immunity 13：715-725，Parham等人(2002)J.Immunol.168：5699-5708)。

IL-23在自體免疫炎症中之作用已部分經由p19基因剔除小鼠之研究而經仔細分析(Murphy等人J Exp Med 198：1951-1957；Cua等人(2003)Nature 421：744-748)。研究顯示IL-23會調節對感染之免疫反應(例如參見Pirhonen等人(2002)J.Immunol.169：5673-5678；Broberg等人(2002)J.Interferon Cytokine Res.22：641-651；Elkins等人(2002)Infection Immunity 70：1936-1948；Cooper等人(2002)J.Immunol.168：1322-1327)。據認為IL-23在免疫介導的發炎疾病中起一定作用(Langrish等人(2004)Immunological Reviews202：96-105)。

由於人類IL-12在各種人類病症中之作用，已經設計用以抑制或抵消IL-12活性之治療策略。特定言之，已在搜尋結合且中和IL-12之抗體作為抑制IL-12活性之方法。一些最早之抗體為由自以IL-12免疫的小鼠淋巴細胞製備之融合瘤所分泌的鼠科單株抗體(mAb)(例如參見Strober等人，PCT公開案第WO 97/15327號；Gately等人，WO 9937682 A2；Neurath等人，J Exp.Med 182：1281-1290(1995)；Duchmarm等人，J Immunol.26：934-938(1996))。由於與將小鼠抗體投予人類相關的問題，例如較短血清半衰期，不能引發特定人類效 應功能及在人體內引發對抗小鼠抗體之不當免疫反應("人抗小鼠抗體"(HAMA)反應)，此等鼠科IL-12抗體之活體內應用受到限制。

一種克服與在人體內使用完全鼠科抗體相關之問題的方法為產生諸如Salfeld等人，PCT公開案第WO 00/56772 A1號中所揭示之完全人類抗體。克服與在人體內使用完全鼠科抗體相關之問題的其他方法涉及將抗體經基因工程改造為更"類人化"。舉例而言，已製得抗體鏈可變區源於鼠科且抗體鏈恆定區源於人類之嵌合抗體(Junghans等人(1990)Cancer Res.50：1495-1502；Brown等人(1991)Proc.Natl.Acad.Sci.88：2663-2667；Kettleborough等人(1991)Prot.Engineer.4：773-783)。該等針對IL-12之嵌合抗體亦揭示於Peritt等人PCT公開案第WO 2002097048A2號中。然而，因為此等嵌合抗體仍保留鼠科可變鏈序列，因此尤其當長期投藥時其仍可引發不當的免疫反應，即人類抗嵌合抗體(HACA)反應。

此項技術中存在對能夠結合IL-12之p40次單位(IL-12p40)之改良抗體的需要。較佳地，該等抗體結合IL-12及/或IL-23。較佳地，該等抗體能夠中和IL-12及/或IL-23。本發明提供能夠結合IL-12p40，以高親和力結合且結合及中和IL-12及/或IL-23之結合蛋白、CDR移植抗體、人化抗體及其片段之新穎家族。

本發明係關於IL-12p40結合蛋白，尤其是能夠結合人類IL-12之p40次單位及人類IL-23之p40次單位的抗體。此外，本發明提供製造及使用IL-12p40結合蛋白之方法。

本發明之一態樣係關於一種包含能夠結合IL-12之p40次單位之抗原結合域的結合蛋白。在一實施例中，該抗原結合域包含至少一個包含選自由以下序列組成之群之胺基酸序列的CDR：CDR-H1. X₁-X₂-X₃-X₄-X₅-X₆-X₇(SEQ ID NO：55)，其中； X₁為D、K、T或S；X₂為Y、S或T；X₃為Y、V、G、W、S或F；X₄為I或M；X₅為H、G、E或V；X₆為V或不存在；且X₇為S或不存在；CDR-H2. X₁-X₂-X₃-X₄-X₅-X₆-X₇-X₈-X₉-X₁₀-X₁₁-X₁₂-X₁₃-X₁₄-X₁₅-X₁₆-X₁₇X₁₈-X₁₉-X₂₀(SEQ ID NO：56)，其中；X₁為H、D、G、W、S、Y或R；X₂為I或F；X₃為Y、W、L、S、N、D或G；X₄為W、P、H、T或S；X₅為D、G、E、A或I；X₆為D、G、S、T或N；X₇為D、G、S或P；X₈為K、N、S、E、T或H；X₉為Y、T、P、I或N；X₁₀為Y、N、T、H、K、S或G；X₁₁為N或Y；X₁₂為P、N、A、D或S；X₁₃為S、E、D或P；X₁₄為L、K、D、T或Y；X₁₅為K、F、V、M、R或A；X₁₆為S、K、Q、P或不存在；X₁₇為D、G、R或不存在； X₁₈為F或不存在；X₁₉為Q或不存在；且X₂₀為D或不存在；CDR-H3. X₁-X₂-X₃-X₄-X₅-X₆-X₇-X₈-X₉-X₁₀-X₁₁-X₁₂-X₁₃(SEQ ID NO：57)，其中；X₁為R、N或W；X₂為G、T、R、P或H；X₃為I、R、F、Y或Q；X₄為R、V、Y、F或A；X₅為S、N、G、A或R；X₆為A、Y、L、F或M；X₇為M、A、D、L或F；X₈為D、M、Y或W；X₉為Y、D或N；X₁₀為Y、A或不存在；X₁₁為M或不存在；X₁₂為D或不存在；且X₁₃為Y或不存在；CDR-L1. X₁-X₂-X₃-X₄-X₅-X₆-X₇-X₈-X₉-X₁₀-X₁₁-X₁₂-X₁₃-X₁₄-X₁₅(SEQ ID NO：58)，其中；X₁為K或R；X₂為A；X₃為S；X₄為Q或E；X₅為S或N；X₆為V或I； X₇為S、G或D；X₈為N、T或K；X₉為D、N或Y；X₁₀為V、G或L；X₁₁為A、I或H；X₁₂為S或不存在；X₁₃為F或不存在；X₁₄為M或不存在；且X₁₅為N或不存在；CDR-L2. X₁-X₂-X₃-X₄-X₅-X₆-X₇-X₈(SEQ ID NO：59)，其中；X₁為Y或S；X₂為A或T；X₃為S或A；X₄為N、H、S或Q；X₅為R、N或S；X₆為Y、Q或I；X₇為T、S或G；且X₈為S或不存在；及CDR-L3. X₁-X₂-X₃-X₄-X₅-X₆-X₇-X₈-X₉(SEQ ID NO：60)，其中；X₁為Q；X₂為Q；X₃為D、Y或S；X₄為Y、N、K或I；X₅為N、T、S或E；X₆為S、Y、V或W； X₇為P；X₈為W、F、Y、L或P；且X₉為T或S。

較佳地，該抗原結合域包含至少一個包含選自由以下序列組成之群之胺基酸序列的CDR：SEQ ID NO.：35之殘基31-37、SEQ ID NO.：35之殘基52-67、SEQ ID NO.：35之殘基100-108、SEQ ID NO.：36之殘基24-34、SEQ ID NO.：36之殘基50-56、SEQ ID NO.：36之殘基89-97、SEQ ID NO.：37之殘基31-37、SEQ ID NO.：37之殘基52-67、SEQ ID NO.：37之殘基100-109、SEQ ID NO.：38之殘基24-34、SEQ ID NO.：38之殘基50-56、SEQ ID NO.：38之殘基89-97、SEQ ID NO.：39之殘基31-35、SEQ ID NO.：39之殘基50-66、SEQ ID NO.：39之殘基99-106、SEQ ID NO.：40之殘基24-34、SEQ ID NO.：40之殘基50-56、SEQ ID NO.：40之殘基89-97、SEQ ID NO.：41之殘基31-35、SEQ ID NO.：41之殘基50-66、SEQ ID NO.：41之殘基99-106、SEQ ID NO.：42之殘基24-34、SEQ ID NO.：42之殘基50-56、SEQ ID NO.：42之殘基89-97、SEQ ID NO.：43之殘基31-35、SEQ ID NO.：43之殘基50-66、SEQ ID NO.：43之殘基99-106、SEQ ID NO.：44之殘基24-34、SEQ ID NO.：44之殘基50-56、SEQ ID NO.：44之殘基89-97、SEQ ID NO.：45之殘基31-35、SEQ ID NO.：45之殘基50-66、SEQ ID NO.：45之殘基99-101、SEQ ID NO.：46之殘基24-34、SEQ ID NO.：46之殘基50-56、SEQ ID NO.：46之殘基89-97、SEQ ID NO.：47之殘基31-35、SEQ ID NO.：47之殘基50-66、SEQ ID NO.：47之殘基99-106、SEQ ID NO.：48之殘基24-34、SEQ ID NO.：48之殘基50-56、SEQ ID NO.：48之殘基89-97、SEQ ID NO.：49之殘基31-35、SEQ ID NO.：49之殘基50-66、SEQ ID NO.：49之殘基99-111、SEQ ID NO.：50之殘基24-38、SEQ ID NO.：50之殘基53-60、SEQ ID NO.：50之殘基93-101、SEQ ID NO.：51之殘基31-37、SEQ ID NO.：51之殘基52-67、SEQ ID NO.：51之殘基100-109、SEQ ID NO.：52之殘基24-34、SEQ ID NO.：52之殘基50-56、SEQ ID NO.：52之殘基89-97、SEQ ID NO.：53之殘基31-35、SEQ ID NO.：53之殘基47-66、SEQ ID NO.：53之殘基99-107、SEQ ID NO.：54之殘基24-34、SEQ ID NO.：54之殘基50-56及SEQ ID NO.：54之殘基89-97。在一較佳實施例中，該結合蛋白包含至少3個選自由上文所揭示序列組成之群之CDR。更佳地，3個所選CDR係來自選自由以下序列組組成之群之可變域CDR組：

在一實施例中，本發明之結合蛋白包含至少兩個可變域CDR組。更佳地，該兩個可變域CDR組係選自由以下序列組組成之群：VH 1D4 CDR組及VL 1D4 CDR組、VH 1A6 CDR組及VL 1A6 CDR組、VH 1D8 CDR組及VL 1D8 CDR組、VH 3G7 CDR組及VL 3G7 CDR組、VH 5E8 CDR組及VL 5E8 CDR組、VH 8E1 CDR組及VL 8E1 CDR組、VH 1H6 CDR組及VL 1H6 CDR組、VH 3A11 CDR組及VL 3A11 CDR組、VH 4B4 CDR組及VL 4B4 CDR組及VH 7G3 CDR組及VL 7G3 CDR組。

在另一實施例中，上文揭示之結合蛋白另外包含人類接受體構架。較佳地，該人類接受體構架包含選自由以下序列組成之群之胺基酸序列：SEQ ID NO.：6、SEQ ID NO.：7、SEQ ID NO.：8、SEQ ID NO.：9、SEQ ID NO.：10、SEQ ID NO.：11、SEQ ID NO.：12、SEQ ID NO.：13、SEQ ID NO.：14、SEQ ID NO.：15、SEQ ID NO.：16、SEQ ID NO.：17、SEQ ID NO.：18、SEQ ID NO.：19、SEQ ID NO.：20、SEQ ID NO.：21、SEQ ID NO.：22、SEQ ID NO.：23、SEQ ID NO.：24、SEQ ID NO.：25、SEQ ID NO.：26、SEQ ID NO.：27、SEQ ID NO.：28、SEQ ID NO.：29、SEQ ID NO.：30、SEQ ID NO.：31、SEQ ID NO.：32、SEQ ID NO.：33、SEQ ID NO.：34、SEQ ID NO.：92、SEQ ID NO.：93、SEQ ID NO.：94、SEQ ID NO.：95、SEQ ID NO.：96及SEQ ID NO.：97。

在一較佳實施例中，該結合蛋白為能夠結合IL-12或IL-23之p40次單位的CDR移植抗體或其抗原結合部分。較佳地，該CDR移植抗體或其抗原結合部分包含一或多個上文揭示之CDR。更佳地，該CDR移植抗體或其抗原結合部分包含至少一個具有選自由以下序列組成之群之胺基酸序列的可變域：SEQ ID NO.：61、SEQ ID NO.：62、SEQ ID NO.：63、SEQ ID NO.：64、SEQ ID NO.：65、SEQ ID NO.：66、SEQ ID NO.：67、SEQ ID NO.：68、SEQ ID NO.：69、SEQ ID NO.：70、SEQ ID NO.：71、SEQ ID NO.：72、SEQ ID NO.：73、SEQ ID NO.：74、SEQ ID NO.：75、SEQ ID NO.：76、SEQ ID NO.：77及SEQ ID NO.：78。更佳地，該CDR移植抗體或其抗原結合 部分包含兩個選自上文揭示之群之可變域。較佳地，該CDR移植抗體或其抗原結合部分包含人類接受體構架。更佳地，該人類接受體構架為任一上文揭示之人類接受體構架。

在一較佳實施例中，該結合蛋白為能夠結合IL-12或IL-23之p40次單位的人化抗體或其抗原結合部分。較佳地，該人化抗體或其抗原結合部分包含一或多個上文所揭示併入人類接受體構架之人類抗體可變域的CDR。較佳地，該人類抗體可變域為一致人類可變域。更佳地，該人類接受體構架包含至少一關鍵殘基之構架區胺基酸取代，其中該關鍵殘基係選自由以下殘基組成之群：鄰接於CDR之殘基，糖基化位點殘基，稀有殘基，能夠與人類IL-12之p40次單位相互作用之殘基，能夠與CDR相互作用的殘基，規範殘基，介於重鏈可變區與輕鏈可變區之間的接觸殘基，微調區內之殘基及介於Chothia定義之可變重鏈CDR1與Kabat定義之第一重鏈構架之間重疊區中的殘基。較佳地，該關鍵殘基係選自由以下殘基組成之群：3H、5H、10H、11H、12H、13H、15H、16H、18H、19H、23H、24H、25H、30H、41H、44H、46H、49H、66H、68H、71H、73H、74H、75H、76H、77H、78H、79H、81H、82H、82AH、82BH、82CH、83H、84H、85H、86H、87H、89H、93H、98H、108H、109H、1L、2L、3L、7L、8L、9L、10L、11L、12L、13L、15L、17L、19L、20L、21L、22L、36L、41L、42L、43L、45L、46L、58L、60L、62L、63L、67L、70L、73L、74L、77L、78L、79L、80L、83L、85L、87L、104L及106L。較佳地，該人類接受體構架包含至少一構架區胺基酸取代，其中該構架之胺基酸序列至少65%與該人類接受體構架之序列相同且包含至少70個與該人類接受體構架相同之胺基酸殘基。

在一較佳實施例中，該結合蛋白為能夠結合IL-12或IL-23之p40次單位的人化抗體或其抗原結合部分。較佳地，該人化抗體或其抗原 結合部分包含一或多個上文揭示之CDR。更佳地，該人化抗體或其抗原結合部分包含三個或三個以上上文揭示之CDR。最佳地，該人化抗體或其抗原結合部分包含六個上文揭示之CDR。

在所主張發明之另一實施例中，該人化抗體或其抗原結合部分包含至少一個具有選自由以下序列組成之群之胺基酸序列的可變域：SEQ ID NO.：79、SEQ ID NO.：80、SEQ ID NO.：81、SEQ ID NO.：82、SEQ ID NO.：83、SEQ ID NO.：84、SEQ ID NO.：85、SEQ ID NO.：86、SEQ ID NO.：87、SEQ ID NO.：88、SEQ ID NO.：89、SEQ ID NO.：90、SEQ ID NO.：91、SEQ ID NO.：98、SEQ ID NO.：99、SEQ ID NO.：100、SEQ ID NO.：101、SEQ ID NO.：102及SEQ ID NO.：103、SEQ ID NO.：104、SEQ ID NO.：105、SEQ ID NO.：106、SEQ ID NO.：107、SEQ ID NO.：108及SEQ ID NO.：109。更佳地，該人化抗體或其抗原結合部分包含兩個選自上文揭示之群的可變域。最佳地，該人化抗體或其抗原結合部分包含兩個可變域，其中該兩個可變域具有選自由以下序列組成之群之胺基酸序列：SEQ ID NO.：67及SEQ ID NO.：79、SEQ ID NO.：80及SEQ ID NO.：81、SEQ ID NO.：82及SEQ ID NO.：83、SEQ ID NO.：84及SEQ ID NO.：85、SEQ ID NO.：86及SEQ ID NO.：87、SEQ ID NO.：88及SEQ ID NO.：89、SEQ ID NO.：90及SEQ ID NO.：91、SEQ ID NO.：98及SEQ ID NO.：99、SEQ ID NO.：100及SEQ ID NO.：101、SEQ ID NO.：102及SEQ ID NO.：103、SEQ ID NO.：104及SEQ ID NO.：105、SEQ ID NO.：106及SEQ ID NO.：107以及SEQ ID NO.：108及SEQ ID NO.：109。

在一較佳實施例中，上文揭示之結合蛋白包含選自由以下結構域組成之群之重鏈免疫球蛋白恆定域：人類IgM恆定域、人類IgG1恆定域、人類IgG2恆定域、人類IgG3恆定域、人類IgG4恆定域、人類 IgE恆定域及人類IgA恆定域。更佳地，該結合蛋白包含SEQ ID NO.：2、SEQ ID NO.：3、SEQ ID NO.：4及SEQ ID NO.：5。

本發明之結合蛋白能夠結合選自由IL-12及IL-23組成之群之目標。較佳地，該結合蛋白能夠調節選自由IL-12及IL-23組成之群之目標的生物功能。更佳地，該結合蛋白能夠中和選自由IL-12及IL-23組成之群之目標。

在一實施例中，如由表面電漿共振所量測，本發明之結合蛋白對IL-12或IL-23之結合速率常數(Kon)為至少約10²M^-1s^-1、至少約10³M^-1s^-1、至少約10⁴M^-1s^-1、至少約10⁵M^-1s^-1或至少約10⁶M^-1s^-1。較佳地，如由表面電漿共振所量測，本發明之結合蛋白對IL-12或IL-23之結合速率常數(Kon)係介於10²M^-1s^-1至10³M^-1s^-1之間、介於10³M^-1s^-1至10⁴M^-1s^-1之間、介於10⁴M^-1s^-1至10⁵M^-1s^-1之間或介於10⁵M^-1s^-1至10⁶M^-1s^-1之間。

在另一實施例中，如由表面電漿共振所量測，本發明之結合蛋白對IL-12或IL-23之解離速率常數(Koff)為至多約10^-3s^-1、至多約10^-4s^-1、至多約10^-5s^-1或至多約10^-6s^-1。較佳地，如由表面電漿共振所量測，本發明之結合蛋白對IL-12或IL-23之解離速率常數(Koff)為10^-3s^-1至10^-4s^-1、10^-4s^-1至10^-5s^-1或10^-5s^-1至10^-6s^-1。

在另一實施例中，本發明之結合蛋白對IL-12或IL-23之解離常數(K_D)為至多約10^-7M、至多約10^-8M、至多約10^-9M、至多約10^-10M、至多約10^-11M、至多約10^-12M或至多約10^-13M。較佳地，本發明之結合蛋白對IL-12或IL-23之解離常數(K_D)為10^-7M至10^-8M、10^-8M至10^-9M、10^-9M至10^-10M、10^-10至10^-11M、10^-11M至10^-12M或10^-12至M 10^-13M。本發明之一實施例提供一種包含任一上文揭示之結合蛋白及連接多肽或免疫球蛋白之抗體構造。在一較佳實施例中，該抗體構造係選自由以下物質組成之群：免疫球蛋白分子、單株抗體、嵌合抗體、 CDR-移植抗體、人化抗體、Fab、Fab'、F(ab')2、Fv、二硫鍵連Fv、scFv、單域抗體、雙功能抗體、多特異性抗體、雙重特異性抗體及雙特異性抗體。在一較佳實施例中，該抗體構造包含選自由以下結構域組成之群之重鏈免疫球蛋白恆定域：人類IgM恆定域、人類IgG1恆定域、人類IgG2恆定域、人類IgG3恆定域、人類IgG4恆定域、人類IgE恆定域及人類IgA恆定域。更佳地，該抗體構造包含SEQ ID NO.：2、SEQ ID NO.：3、SEQ ID NO.：4及SEQ ID NO.：5。在另一實施例中，本發明提供一種包含上文揭示之抗體構造及選自由以下物質組成之群之藥劑的抗體共軛物：免疫黏附分子、成像劑、治療劑及細胞毒性劑。在一較佳實施例中，該成像劑係選自由以下物質組成之群：放射性標記、酵素、螢光標記、發光標記、生物發光標記、磁性標記及生物素。更佳地，該成像劑為選自由以下物質組成之群之放射性標記：³H、¹⁴C、³⁵S、⁹⁰Y、⁹⁹Tc、¹¹¹In、¹²⁵I、¹³¹I、¹⁷⁷Lu、¹⁶⁶Ho及¹⁵³Sm。在一較佳實施例中，該治療劑或細胞毒素劑係選自由以下物質組成之群：抗代謝物、烷基化劑、抗生素、生長因子、細胞激素、抗血管生成劑、抗有絲分裂劑、蒽環黴素、毒素及細胞凋零劑。

在另一實施例中，該抗體構造經糖基化。較佳地，該糖基化作用為人類糖基化模式。

在另一實施例中，上文揭示之結合蛋白、抗體構造或抗體共軛物以晶體形式存在。較佳地，該晶體為無載劑醫藥控釋晶體。在一較佳實施例中，該結晶結合蛋白、結晶抗體構造或結晶抗體共軛物之活體內半衰期長於其可溶性對應物。在另一較佳實施例中，該結晶結合蛋白、結晶抗體結構或結晶抗體共軛物在結晶後保持生物活性。

本發明之一態樣係關於一種編碼上文揭示之任一結合蛋白、抗體構造或抗體共軛物之經分離核酸。另一實施例提供一種包含上文揭示之經分離核酸之載體，其中該載體係選自由pcDNA、pTT(Durocher 等人，Nucleic Acids Research 2002，第30卷，第2號)；pTT3(具有額外多選殖位點之pTT)、pEFBOS(Mizushima,S.及Nagata,S.,(1990)Nucleic acids Research第18卷，第17號)、pBV、pJV及pBJ組成之群。

在另一態樣中，以上文揭示之載體轉化宿主細胞。較佳地，該宿主細胞為原核細胞。更佳地，該宿主細胞為大腸桿菌(E.Coli)。在一相關實施例中，該宿主細胞為真核細胞。較佳地，該真核細胞係選自由原生生物細胞、動物細胞、植物細胞及真菌細胞組成之群。更佳地，該宿主細胞為包括(但不限於)CHO及COS之哺乳動物細胞，或諸如釀酒酵母(Saccharomyces cerevisiae)之真菌細胞，或諸如Sf9之昆蟲細胞。

本發明之另一態樣提供一種製造結合IL-12之p40次單位之結合蛋白的方法，其包含在足以產生結合IL-12之p40次單位之結合蛋白的條件下在培養基中培養任一上文揭示之宿主細胞。另一實施例提供一種根據上文揭示之方法製得的結合蛋白。

一實施例提供一種用於釋放結合蛋白之組合物，其中該組合物包含一調配物及至少一種聚合載劑，該調配物又包含如上文揭示之結晶結合蛋白、結晶抗體構造或結晶抗體共軛物及一成份。較佳地，該聚合載劑為選自一或多個由以下物質組成之群之聚合物：聚(丙烯酸)、聚(氰基丙烯酸酯)、聚(胺基酸)、聚(酐)、聚(縮肽)、聚(酯)、聚(乳酸)、聚(乳酸-共-乙醇酸)或PLGA、聚(b-羥基丁酸酯)、聚(己內酯)、聚(二氧雜環己酮)；聚(乙二醇)、聚(羥基丙基)甲基丙烯醯胺、聚[(有機)磷氮烯]、聚(原酸酯)、聚(乙烯醇)、聚(乙烯基吡咯啶酮)、順丁烯二酸酐-烷基乙烯醚共聚物、泊洛尼克(pluronic)多元醇、白蛋白、海藻酸鹽、纖維素及纖維素衍生物、膠原蛋白、纖維蛋白、明膠、玻尿酸、寡醣、甘胺基聚糖、硫酸化多醣、其摻合物及共聚物。 較佳地，該組份係選自由以下物質組成之群：白蛋白、蔗糖、海藻糖、乳糖醇、明膠、羥基丙基-β-環糊精、甲氧基聚乙二醇及聚乙二醇。另一實施例提供一種用於治療哺乳動物之方法，其包含向該哺乳動物投予有效量上文揭示之組合物之步驟。

本發明亦提供一種包含如上文揭示之結合蛋白、抗體構造或抗體共軛物及醫藥上可接受之載劑的醫藥組合物。在另一實施例中，該醫藥組合物包含至少一種用於治療IL-12及/或IL-23之活性有害之病症的額外治療劑。較佳地，該額外藥劑係選自由以下物質組成之群：治療劑、成像劑、細胞毒性劑、血管生成抑制劑(包括(但不限於)抗-VEGF抗體或VEGF-捕獲劑)、激酶抑制劑(包括(但不限於)KDR及TIE-2抑制劑)、輔助刺激分子阻斷劑(包括(但不限於)抗-B7.1、抗-B7.2、CTLA4-Ig、抗-CD20)、黏附分子阻斷劑(包括(但不限於)抗-LFA-1Ab、抗-E/L選擇素Ab、小分子抑制劑)、抗-細胞激素抗體或其功能片段(包括(但不限於)抗-IL-18、抗-TNF、抗-IL-6/細胞激素受體抗體)、甲胺喋呤、環孢素、雷帕黴素(rapamycin)、FK506、可偵測標記或報導物、TNF拮抗劑、抗風濕藥、肌肉鬆弛劑、麻醉藥、非類固醇抗炎藥(NSAID)、鎮痛劑、麻醉劑、鎮靜劑、局部麻醉劑、神經肌肉阻斷劑、抗菌劑、抗牛皮癬藥、皮質類固醇、合成代謝類固醇、紅血球生成素、免疫劑、免疫球蛋白、免疫抑止劑、生長激素、激素替代藥物、放射性藥物、抗抑鬱劑、精神抑制藥、興奮劑、哮喘藥物、β促效劑、吸入性類固醇、腎上腺素或類似物、細胞激素及細胞激素拮抗劑。

在另一態樣中，本發明提供一種用於抑制人類IL-12及/或人類IL-23活性之方法，其包含使人類IL-12及/或人類IL-23與上文揭示之結合蛋白接觸使得人類IL-12及/或人類IL-23活性受到抑制。在一相關態樣中，本發明提供一種抑制罹患IL-12及/或IL-23之活性有害之病症之人 類受檢者體內的人類IL-12及/或人類IL-23活性之方法，其包含向該人類受檢者投予上文揭示之結合蛋白使得該人類受檢者體內之人類IL-12及/或人類IL-23活性受到抑制且達成治療。較佳地，該病症係選自包含以下疾病之群：關節炎、骨關節炎、青少年慢性關節炎、敗血性關節炎、萊姆(Lyme)關節炎、牛皮癬性關節炎、反應性關節炎、脊椎關節病、全身性紅斑狼瘡症、克羅恩氏病(Crohn's disease)、潰瘍性結腸炎、炎性腸病、胰島素依賴性糖尿病、甲狀腺炎、哮喘、過敏性疾病、牛皮癬、皮炎硬皮病、移植物抗宿主疾病、器官移植排斥反應、與器官移植相關的急性或慢性免疫疾病、類肉瘤病、動脈粥樣硬化、散播性血管內凝血、川崎氏病(Kawasaki's disease)、格雷氏病(Grave's disease)、腎病症候群、慢性疲勞症候群、韋格納氏(Wegener's)肉牙腫病、亨偌-絲奇恩賴(Henoch-Schoenlein)紫癜、腎微血管炎(microscopic vasculitis of the kidneys)、慢性活動性肝炎、葡萄膜炎、敗血性休克、毒性休克症候群、敗血症症候群、惡病質、感染性疾病、寄生性疾病、後天免疫缺乏症候群、急性橫貫性脊髓炎、亨爾頓氏(Huntington's)舞蹈病、帕金森氏病(Parkinson's disease)、阿茲海默症(Alzheimer's disease)、中風、原發性膽汁性肝硬化症、溶血性貧血、惡性腫瘤、心臟衰竭、心肌梗塞、愛狄生症(Addison's disease)、偶發性疾病、I型自身免疫性多腺體功能低下及II型自身免疫性多腺體功能低下、施密特氏症候群(Schmidt's syndrome)、成人(急性)呼吸窘迫症候群、禿頭症、斑禿、血清陰性關節病、關節病、賴透氏病(Reiter's disease)、牛皮癬性關節病、潰瘍性結腸炎關節病、腸病性滑膜炎、衣原體(chlamydia)、耶氏桿菌(yersinia)及沙門氏菌(salmonella)相關之關節病、脊椎關節病、粥樣疾病/動脈硬化症、異位性過敏症、自體免疫大皰性疾病、尋常天疱瘡、落葉性天疱瘡、類天孢瘡、線性IgA疾病、自體免疫溶血性貧血、庫姆斯氏(Coombs)陽性溶血性 貧血、後天惡性貧血、青少年惡性貧血、肌痛腦炎/皇家自由病、慢性皮膚黏膜念珠菌病、巨細胞動脈炎、原發性硬化肝炎、隱性自體免疫肝炎、後天免疫缺乏疾病症候群、後天免疫缺乏相關疾病、B型肝炎、C型肝炎、普通變異性免疫缺乏(普通變異性低γ球蛋白血症)、擴張型心肌症、女性不孕、卵巢衰竭、卵巢早衰、纖維變性肺病、隱性纖維化肺泡炎、炎症後間質性肺病、間質性肺炎、結締組織疾病相關之間質性肺病、混合型結締組織疾病相關之肺病、全身性硬化症相關之間質性肺病、類風濕性關節炎相關之間質性肺病、全身性紅斑狼瘡症相關之肺病、皮肌炎/多發性肌炎相關之肺病、修格蘭氏病(Sjögren's disease)相關之肺病、強直性脊椎炎相關之肺病、血管炎彌漫性肺病、含鐵血黃素沉著相關之肺病、藥物誘導之間質性肺病、纖維化、放射性纖維化、阻塞性細支氣管炎、慢性嗜酸性肺炎、淋巴球浸潤性肺病、感染後間質性肺病、痛風性關節炎、自體免疫性肝炎、1型自體免疫性肝炎(典型自體免疫或類狼瘡性肝炎)、2型自體免疫性肝炎(抗-LKM抗體性肝炎)、自體免疫介導之低糖血症、B型胰島素抗性黑棘皮病、副甲狀腺機能減退症、與器官移植相關之急性免疫疾病、與器官移植相關之慢性免疫疾病、非炎性骨關節病、原發性硬化性膽管炎、1型牛皮癬、2型牛皮癬、特發性白血球減少症、自體免疫嗜中性白血球減少症、未分型腎病(renal disease NOS)、絲球體腎炎、腎微細血管炎、萊姆病、盤狀紅斑狼瘡、特發性或未分型男性不育、精子自體免疫症、多發性硬化症(所有次型)、交感神經性眼炎、繼發於結締組織疾病之肺循環血壓過高、古德帕斯丘氏症候群(Goodpasture's syndrome)、結節性多動脈炎之肺表現、急性風濕熱、類風濕性脊椎炎、司悌爾氏病(Still's disease)、全身性硬化症、修格蘭氏症候群、高安氏病(Takayasu's disease)/動脈炎、自體免疫性血小板減少症、特發性血小板減少症、自體免疫性甲狀腺病、甲狀腺機能 亢進症、甲狀腺腫性自體免疫性甲狀腺機能減退症(橋本氏病(Hashimoto's disease))、萎縮性自體免疫性甲狀腺機能減退症、原發性黏液水腫、晶狀體性葡萄膜炎、原發性血管炎、白斑症急性肝病、慢性肝病、酒精性肝硬化、酒精誘導之肝損傷、膽汁淤積症、特應性肝病、藥物誘導之肝炎、非酒精性脂肝炎、過敏症及哮喘、B群鏈球菌(GBS)感染、精神障礙(例如抑鬱症及精神分裂症)、Th2型及Th1型介導之疾病、急性及慢性疼痛(不同形式的疼痛)及癌症，諸如肺癌、乳癌、胃癌、膀胱癌、結腸癌、胰腺癌、卵巢癌、前列腺癌及直腸癌及造血惡性腫瘤(白血病及淋巴瘤)、無β脂蛋白血症、手足發紺、急性及慢性寄生性或感染性過程、急性白血病、急性淋巴母細胞白血病(ALL)、急性骨髓白血病(AML)、急性或慢性細菌感染、急性胰腺炎、急性腎衰竭、腺癌、心房異位搏動、AIDS癡呆綜合症、酒精誘導之肝炎、過敏性結膜炎、過敏性接觸皮炎、過敏性鼻炎、同種異體移植物排斥反應、α-1-抗胰蛋白酶缺乏、肌萎縮性側索硬化、貧血症、心絞痛、前角細胞退化症、抗cd3療法、抗磷脂症候群、抗受體過敏反應、主動脈及周邊動脈瘤、主動脈夾層、動脈高血壓、動脈硬化、動靜脈瘺、運動失調、心房顫動(持續或陣發性)、心房撲動、房室阻滯、B細胞淋巴瘤、骨移植物排斥反應、骨髓移植(BMT)排斥反應、束支阻滯、伯基特氏(Burkitt's)淋巴瘤、燒傷、心律不整、心臟頓抑症候群、心臟腫瘤、心肌症、心肺分流炎症反應、軟骨移植排斥反應、小腦皮質退化症、小腦病症、紊亂或多源性房性心跳過速、化療相關病症、慢性髓細胞白血病(CML)、慢性酒精中毒、慢性發炎病變、慢性淋巴細胞白血病(CLL)、慢性阻塞性肺病(COPD)、慢性水楊酸中毒、結腸直腸癌、充血性心臟衰竭、結膜炎、接觸性皮炎、肺原性心臟病、冠狀動脈疾病、庫賈氏病(Creutzfeldt-Jakob disease)、培養陰性的敗血症、囊性纖維化、細胞激素療法相關之病症、拳擊員癡 呆、髓鞘脫失病、出血性登革熱、皮炎、皮膚病、糖尿病(diabetes)、糖尿病(diabetes mellitus)、糖尿病性動脈硬化性疾病、彌漫性路易體疾病、擴張型充血性心肌症、基底神經節病症、中年唐氏症候群(Down's Syndrome)、由阻斷CNS多巴胺受體藥物誘導之藥物誘導性運動障礙、藥物敏感、濕疹、腦脊髓炎、心內膜炎、內分泌病、會厭炎、艾普斯坦-巴爾(epstein-barr)病毒感染、紅斑性肢痛症、錐體外及小腦病症、家族性吞噬細胞性淋巴組織細胞增多病、胎兒胸腺移植排斥反反應、弗裏德賴希氏(Friedreich's)運動失調、功能性周邊動脈病症、真菌敗血症、氣性壞疽、胃潰瘍、腎小球腎炎、任何器官或組織之移植物排斥反應、革蘭氏陰性敗血症、革蘭氏陽性敗血症、由細胞內微生物引起之肉芽瘤、毛細胞白血病、哈勒羅登-斯帕茲病(Hallerrorden-Spatz disease)、橋本氏甲狀腺炎、枯草熱、心臟移植排斥反應、血色病、血液透析、溶血性尿毒癥症候群/溶血栓性血小板減少性紫癜、出血、肝炎(A型)、希氏束心律不整、HIV感染/HIV神經病、霍奇金氏病(Hodgkin's disease)、多動障礙、過敏反應、過敏性肺炎、高血壓、運動不足症、下丘腦-垂體-腎上腺軸評估、特發性愛狄生症、特發性肺纖維化、抗體介導之細胞毒性、衰弱)、嬰兒脊髓性肌肉萎縮症、主動脈炎症、流行性感冒a、電離輻射曝露、虹膜睫狀體炎/葡萄膜炎/視神經炎、缺血-再灌注損傷、缺血性中風、青少年類風濕性關節炎、青少年脊髓性肌肉萎縮症、卡波西氏(Kaposi's)肉瘤、腎移植排斥反應、退伍軍人症(legionella)、利什曼體病(leishmaniasis)、痲瘋病、皮質脊髓系統病變、脂性水腫、肝移植排斥反應、淋巴水腫、瘧疾、惡性淋巴瘤、惡性組織細胞增多病、惡性黑色素瘤、腦膜炎、腦膜炎球菌血症、代謝性/特發性疾病、偏頭痛、粒線體多系統病症、混合型結締組織疾病、單株免疫球蛋白病(monoclonal gammopathy)、多發性骨髓瘤、多發性系統退化症 (Mencel Dejerine-Thomas Shi-Drager及Machado-Joseph)、重症肌無力、細胞內鳥分枝桿菌感染(mycobacterium avium)、結核分枝桿菌感染(mycobacterium tuberculosis)、骨髓異變症候群、心肌梗塞、心肌缺血症、鼻咽癌、新生兒慢性肺病、腎炎、腎病、神經退化性疾病、神經性I型肌肉萎縮、嗜中性白血球低下發燒、非霍奇金氏淋巴瘤、腹部主動脈及其分枝閉塞、閉塞性動脈病症、okt3療法、睪丸炎/附睪炎、睪丸炎/輸精管切除術反向程序(vasectomy reversal procedures)、內臟增大、骨疏鬆症、胰腺移植排斥反應、胰腺癌、副腫瘤症候群/惡性腫瘤高鈣血症、副甲狀腺移植排斥反應、骨盆發炎疾病、常年性鼻炎、心包病、周邊動脈粥樣硬化疾病、周邊血管病症、腹膜炎、惡性貧血、肺囊蟲(pneumocystis carinii)肺炎、肺炎、POEMS症候群(多發性神經病、內臟增大、內分泌病、單株免疫球蛋白病及皮膚改變症候群)、灌注後症候群、抽吸後症候群、MI後心切開術症候群、子癇前症、進行性核上麻痹、原發性肺循環血壓過高、放射療法、雷諾氏(Raynaud's)現象及疾病、雷諾氏病、雷弗素姆氏病、規則的狹QRS心跳過速、腎血管性高血壓、再灌注損傷、限制型心肌症、肉瘤、硬皮病、老年舞蹈病、路易體型老年癡呆、血清陰性關節病、休克、鐮狀細胞性貧血症、皮膚同種異體移植物排斥反應、皮膚改變症候群、小腸移植排斥反應、實體腫瘤、特異性心律不整、脊椎運動失調、脊髓小腦退化症、鏈球菌肌炎、小腦結構病變、亞急性硬化性全腦炎、暈厥、心血管系統梅毒、全身性過敏症、全身性發炎反應症候群、全身性青少年類風濕性關節炎、T-細胞或FAB ALL、毛細管擴張、血栓阻塞性脈管炎、血小板減少症、毒性作用、移植、外傷/出血、III型過敏反應、IV型過敏反應、不穩定型心絞痛、尿毒癥、尿性敗血症、蕁麻疹、心臟瓣膜病、靜脈曲張、血管炎、靜脈疾病、靜脈栓塞、心室纖維性顫動、病毒及真菌感染、病毒性腦炎/無菌性腦膜炎、病毒相 關噬血細胞症候群、魏尼凱-柯薩科夫症候群(Wernicke-Korsakoff syndrome)、威爾遜氏病(Wilson's disease)、任何器官或組織的異種移植物排斥反應。

在本發明之另一態樣中，提供一種治療罹患人類IL-12及/或人類IL-23有害之病症之患者的方法，其包含在投予上文討論之第二藥劑之前、同時或之後投予任一上文揭示之結合蛋白之步驟。在一較佳實施例中，該第二藥劑係選自由以下物質組成之群：布替耐德(budenoside)、表皮生長因子、皮質類固醇、環孢素、柳氮磺吡啶、胺基水楊酸鹽、6-巰基嘌呤、硫唑嘌呤、甲硝噠唑(metronidazole)、脂肪加氧酶抑制劑、美沙拉嗪(mesalamine)、奧沙拉秦(olsalazine)、巴柳氮(balsalazide)、抗氧化劑、凝血脂素抑制劑、IL-1受體拮抗劑、抗-IL-1β單株抗體、抗-IL-6單株抗體、生長因子、彈性蛋白酶抑制劑、吡啶基-咪唑化合物、TNF、LT、IL-1、IL-2、IL-6、IL-7、IL-8、IL-15、IL-16、IL-18、EMAP-II、GM-CSF、FGF及PDGF之抗體或促效劑，CD2、CD3、CD4、CD8、CD25、CD28、CD30、CD40、CD45、CD69、CD90或其配位體之抗體、甲胺喋呤、環孢素、FK506、雷帕黴素、黴酚酸嗎啉乙酯(mycophenolate mofetil)、來氟米特(leflunomide)、NSAID、布洛芬(ibuprofen)、皮質類固醇、潑尼龍(prednisolone)、磷酸二酯酶抑制劑、腺苷促效劑、抗血栓劑、補體抑制劑、腎上腺素劑、IRAK、NIK、IKK、p38、MAP激酶抑制劑、IL-1β轉化酶抑制劑、TNF α轉化酶抑制劑、T-細胞信號轉導抑制劑、金屬蛋白酶抑制劑、柳氮磺吡啶、硫唑嘌呤、6-巰基嘌呤、血管收縮素轉化酶抑制劑、可溶性細胞激素受體、可溶性p55 TNF受體、可溶性p75 TNF受體、sIL-1RI、sIL-1RII、sIL-6R、抗炎細胞激素、IL-4、IL-10、IL-11、IL-13及TGFβ。

在一較佳實施例中，將上文揭示之醫藥組合物以至少一種選自 由以下之模式投予受檢者：非經腸、皮下、肌肉內、靜脈內、關節內、支氣管內、腹內、囊內、軟骨內、腔內、腹腔內(intracelial)、小腦內、腦室內、大腸內、子宮頸內、胃內、肝內、心肌內、骨內、骨盆內、心包內、腹膜內、胸膜內、前列腺內、肺內、直腸內、腎內、視網膜內、脊椎內、滑膜內、胸內、子宮內、膀胱內、團式、經陰道、經直腸、經口腔、舌下、鼻內及經皮。

本發明之一態樣提供至少一種IL-12抗-個體基因型抗體，其係針對至少一種本發明之IL-12結合蛋白。該抗-個體基因型抗體包括任何包含可併入本發明結合蛋白之至少一部分免疫球蛋白分子，諸如(但不限於)重鏈或輕鏈之至少一個互補決定區(CDR)或其配位體結合部分、重鏈或輕鏈可變區、重鏈或輕鏈恆定區、構架區，或其部分的含蛋白質或肽之分子。

本發明係關於IL-12p40結合蛋白，尤其係關於抗-IL-12p40抗體或其結合IL-12p40之抗原結合部分。本發明之各態樣係關於抗體及抗體片段及其醫藥組合物，以及用於製造該等抗體及片段之核酸、重組表現載體及宿主細胞。本發明亦涵蓋使用本發明之抗體偵測人類IL-12p40、人類IL-12及人類IL-23之方法，活體外或活體內抑制人類IL-12及/或人類IL-23活性之方法，及調節基因表現之方法。

除非本文另外定義，否則關於本發明使用之科技術語應具有熟習此項技術者通常理解的含義。術語之含義及範疇應為明確的，但若存在任何可能之不定性，則本文提供之定義優先於任何字典或非固有定義。此外，除非上下文另外要求，否則單數術語應包括複數且複數術語應包括單數。在此說明書中，除非另外聲明，否則使用"或"意謂"及/或"。此外，術語"包括"及其他形式，如"包括有"及"包括於"之使用為非限制性的。同樣，除非另外特加聲明，否則諸如"元素"或"組 份"之術語涵蓋包含一個單位之元素及組份及包含一個以上次單位之元素及組份兩者。

一般而言，關於本文所述之細胞及組織培養、分子生物學、免疫學、微生物學、基因學及蛋白質及核酸化學及雜交使用之命名法及其技術為此項技術中熟知且常用之彼等。除非另外指出，否則本發明之方法及技術通常根據此項技術中熟知的習知方法且如本說明書整篇中引用及討論的各種一般及更特定之參考文獻中所述來執行。酶促反應及純化技術根據製造商說明書，如此項技術中通常實施或如本文所述來執行。關於本文所述之分析化學、合成有機化學及藥物及醫藥化學使用之命名法及其實驗室程序及技術為此項技術中熟知且常用之彼等。使用標準技術進行化學合成、化學分析、醫藥製備、調配及傳遞及治療患者。

本發明可自所選術語之以下定義更容易地理解。

本文所使用之術語"多肽"係指任何胺基酸之聚合鏈。術語"肽"及"蛋白質"可與術語"多肽"互換使用且亦係指胺基酸之聚合鏈。術語"多肽"涵蓋天然或人造蛋白、蛋白片段及蛋白序列之多肽類似物。多肽可為單體或聚合的。

術語"經分離蛋白"或"經分離多肽"為具有以下特點之蛋白或多肽：由於其起源或來源與在其天然狀態中伴隨其的天然相關組份不相關，大體上不含來自相同物種之其他蛋白質，由不同物種的細胞表現，或在自然界中不存在。因此，化學合成或在不同於其天然起源之細胞的細胞系統中合成的多肽將與其天然相關組份"分離"。亦可藉由使用此項技術中熟知的蛋白純化技術分離而使蛋白質大體上不含天然相關組份。

如本文所使用之術語"回收"係指藉由分離(例如使用此項技術中熟知的蛋白純化技術)使諸如多肽之化學物質大體上不含天然相關組 份之方法。

如本文所使用，術語"人類IL-12"(在本文中簡寫為hIL-12或IL-12)包括主要由諸如單核細胞、巨噬細胞及樹突狀細胞之抗原呈現細胞分泌的人類細胞激素。該術語包括包含以二硫橋連接在一起之35kD次單位(p35)及40kD次單位(p40)的雜二聚蛋白。該雜二聚蛋白稱為"p70蛋白"。人類IL-12之結構另外描述於(例如)Kobayashi等人(1989)J.Exp Med.170：827-845，Seder等人(1993)Proc.Natl.Acad.Sci.90：10188-10192，Ling等人(1995)J.Exp Med.154：116-127，Podlaski，等人(1992)Arch.Biochem.Biophys.294：230-237中。術語人類IL-12意欲包括重組人類IL-12(rh IL-12)，其可藉由標準重組表現方法製備。

如本文所使用，術語"人類IL-23"(本文中簡寫為hIL-23或IL-23)包括屬於包括IL-12及IL-27之5個該等雜二聚細胞激素之家族的雜二聚人類細胞激素(Trinchieri等人，(2003)Immunity 19：641-644)。該術語包括包含以二硫橋連接在一起之19kD次單位(p19)及40kD次單位(p40)的雜二聚蛋白。術語人類IL-23意欲包括重組人類IL-23(rh IL-23)，其可藉由標準重組表現方法製備。

如本文所使用，與"IL-23p40"相同且亦簡稱為"p40"之術語"IL-12p40"包括人類細胞激素IL-12之40kD次單位(p40)及人類細胞激素IL-23之40kD次單位。表1顯示IL-12p40之胺基酸序列(SEQ ID No.1)，其為此項技術中已知的。

本文所使用之"生物活性"係指細胞激素所有固有的生物性質。IL-12之生物性質包括(但不限於)結合IL-12受體，誘導干擾素-γ(IFN-γ)分泌及調節抗原特異性T輔助1型(Th1)及2型(Th2)淋巴細胞之間的平衡。IL-23之生物性質包括(但不限於)結合IL-23受體，誘導IFN-γ產生，Th1細胞分化及活化樹突狀細胞之抗原呈現功能及選擇性誘導記憶T細胞增殖。

如本文所使用，關於抗體、蛋白質或肽與第二化學物質之相互作用的術語"特異性結合"意謂該相互作用係依賴於該化學物質上特定結構(例如抗原決定子或抗原決定基)的存在；舉例而言，抗體一般識別及結合至特異性蛋白結構而非蛋白。若抗體對抗原決定基"A"具有特異性，則在含有經標記"A"與抗體之反應中，含抗原決定基A之分子(或游離、未經標記之A)的存在將降低結合至該抗體的經標記A之量。

如本文所使用，術語"抗體"廣義上係指任何包含四條多肽鏈，兩條重(H)鏈及兩條輕(L)鏈之免疫球蛋白(Ig)分子，或其任何保留Ig分子之基本抗原決定基結合特徵之功能性片段、突變體、變體或衍生 物。該等突變體、變體或衍生抗體形式為此項技術中已知的。以下討論其非限制實施例。

在全長抗體中，各重鏈包含重鏈可變區(本文中簡稱為HCVR或VH)及重鏈恆定區。重鏈恆定區包含三個結構域：CH1、CH2及CH3。各輕鏈包含輕鏈可變區(本文中簡稱為LCVR或VL)及輕鏈恆定區。輕鏈恆定區包含一個結構域CL。VH及VL區可另外再分為高變區，稱為互補決定區(CDR)，其間分佈更為保守的稱為構架區(FR)之區。各VH及VL包含三個CDR及四個FR，以如下順序自胺基端向羧基端排列：FR1、CDR1、FR2、CDR2、FR3、CDR3、FR4。免疫球蛋白分子可為任何類型(例如IgG、IgE、IgM、IgD、IgA及IgY)、種類(例如IgG1、IgG2、IgG3、IgG4、IgA1及IgA2)或子類。

如本文所使用，術語抗體之"抗原結合部分"(或簡稱為"抗體部分")係指抗體之保留特異性結合至抗原(例如hIL-12)之能力的一或多個片段。已顯示抗體之抗原結合功能可由全長抗體之片段執行。該等抗體實施例亦可為雙特異性、雙重特異性或多重特異性形式，特異性結合至兩種或兩種以上不同之抗原。術語抗體之"抗原結合部分"所涵蓋的結合片段之實例包括(i)Fab片段，由VL、VH、CL及CH1域組成之單價片段；(ii)F(ab')₂片段，包含由二硫橋在鉸鏈區連接之兩個Fab片段的二價片段；(iii)Fd片段，由VH及CH1域組成；(iv)Fv片段，由抗體單邊之VL及VH域組成；(v)dAb片段(Ward等人，(1989)Nature 341：544-546，Winter等人，PCT公開案WO 90/05144 A1，其以引用方式併入本文中)，其包含單一可變域；及(vi)經分離互補決定區(CDR)。此外，雖然Fv片段的兩個結構域VL及VH由單獨基因編碼，但其可使用重組方法由可使它們成為其中VL及VH區配對形成單價分子之單一蛋白鏈(稱為單鏈Fv(scFv))之合成連接子接合；參見(例如)Bird等人(1988)Science 242：423-426及Huston等人(1988)Proc. Natl.Acad.Sci.USA 85：5879-5883)。術語抗體之"抗原結合部分"亦意欲涵蓋該等單鏈抗體。亦涵蓋諸如雙功能抗體之其他形式單鏈抗體。雙功能抗體為二價雙特異性抗體，其中VH及VL域表現於單一多肽鏈上，但使用過短而不能允許相同鏈上之兩個結構域之間配對的連接子，藉此迫使該等結構域與另一鏈之互補域配對且形成兩個抗原結合位點(參見(例如)Holliger,P.等人(1993)Proc.Natl.Acad.Sci.USA 90：6444-6448；Poljak,R.J.等人(1994)Structure 2：1121-1123)。該等抗體結合部分為此項技術中已知的(Kontermann及Dubel編輯，Antibody Engineering(2001)Springer-Verlag.New York.第790頁(ISBN 3-540-41354-5))。

如本文所使用之術語"抗體構造"係指包含一或多個連接至連接多肽或免疫球蛋白恆定域之本發明之抗原結合部分的多肽。連接多肽包含兩個或兩個以上由肽鍵接合之胺基酸殘基且用於連接一或多個抗原結合部分。該等連接多肽為此項技術中熟知的(參見(例如)Holliger,P.等人(1993)Proc.Natl.Acad.Sci.USA 90：6444-6448；Poljak,R.J.等人(1994)Structure 2：1121-1123)。免疫球蛋白恆定域係指重鏈或輕鏈恆定域。人類IgG重鏈及輕鏈恆定域胺基酸序列為此項技術中已知且表示於表2中。

另外，抗體或其抗原結合部分可為較大免疫黏附分子之部分，該等分子係由抗體或抗體部分與一或多個其他蛋白質或肽共價或非共價結合而形成。該等免疫黏附分子之實例包括使用抗生蛋白鏈菌素核 心區形成四聚scFv分子(Kipriyanov,S.M.等人(1995)Human Antibodies and Hybridomas 6：93-101)及使用半胱胺酸殘基、標記肽及C-末端多聚組胺酸標籤形成二價及生物素標記scFv分子(Kipriyanov,S.M.等人(1994)Mol.Immunol. 31：1047-1058)。諸如Fab及F(ab')₂片段之抗體部分可自整個抗體分別使用諸如木瓜蛋白酶或胃蛋白酶消化整個抗體之習知技術來製備。此外，如本文所描述，可使用標準重組DNA技術獲得抗體、抗體部分及免疫黏附分子。

如本文所使用，"經分離抗體"意欲指示大體上不含具有不同抗原特異性之其他抗體的抗體(例如，特異結合hIL-12之經分離抗體大體上不含特異結合除hIL-12外之抗原之抗體)。然而，特異結合hIL-12之經分離抗體可具有對諸如來自其他物種IL-12分子之其他抗原的交叉反應性。此外，經分離抗體可大體上不含其他細胞物質及/或化學物質。

如本文所使用，術語"人類抗體"意欲包括具有來源於人類生殖系免疫球蛋白序列之可變區及恆定區的抗體。本發明之人類抗體可在例如CDR中且尤其在CDR3中包括並非由人類生殖系免疫球蛋白序列編碼的胺基酸殘基(例如由活體外隨機或位點特異性誘變或由活體內體細胞突變引入之突變)。然而，如本文所使用，術語"人類抗體"並非意欲包括其中CDR序列係來源於另一哺乳動物物種(例如小鼠)生殖系，經移植於人類構架序列上之抗體。

如本文所使用，術語"重組人類抗體"意欲包括所有藉由重組方法製備、表現、產生或分離之人類抗體，例如使用經轉染至宿主細胞中之重組表現載體表現的抗體(另外描述於下文II C段落中)，自重組、組合人類抗體庫分離的抗體(Hoogenboom H.R.,(1997)TIB Tech.15：62-70；Azzazy H.及Highsmith W.E.,(2002)Clin.Biochem.35：425-445；Gavilondo J.V.及Larrick J.W.(2002)BioTechniques 29：128- 145；Hoogenboom H.及Chames P.(2000)Immunology Today 21：371-378)，自轉基因為人類免疫球蛋白基因之動物(例如小鼠)分離的抗體(參見(例如)Taylor,L.D.等人(1992)Nucl.Acids Res.20：6287-6295；Kellermann S-A.及Green L.L.(2002)Current Opinion in Biotechnology 13：593-597；Little M.等人(2000)Immunology Today 21：364-370)或藉由任何涉及將人類免疫球蛋白基因序列拼接至其他DNA序列之其他方法製備、表現、產生或分離的抗體。該等重組人類抗體具有源自人類生殖系免疫球蛋白序列之可變區及恆定區。然而，在某些實施例中，該等重組人類抗體在活體外經歷誘變(或當使用轉基因為人類Ig序列之動物時經歷活體內體細胞誘變)且因此該等重組抗體之VH及VL區之胺基酸序列雖然來源於人類生殖系VH及VL序列且與之相關，但不會在活體內在人類抗體生殖系集合中天然存在。

術語"嵌合抗體"係指包含來自一個物種之重鏈及輕鏈可變區序列及來自另一物種之恆定區序列之抗體，諸如具有連接至人類恆定區之鼠科重鏈及輕鏈可變區的抗體。

術語"CDR-移植抗體"係指包含來自一個物種之重鏈及輕鏈可變區序列但其中VH及/或VL之一或多個CDR區之序列經另一物種之CDR序列置換的抗體，諸如具有鼠科重鏈及輕鏈可變區其中一或多個鼠科CDR(例如CDR3)經人類CDR序列置換之抗體。

術語"人化抗體"係指包含來自非人類物種(例如小鼠)之重鏈及輕鏈可變區序列但其中至少一部分VH及/或VL序列已經改變為更"類人化"(意即更類似於人類生殖系可變序列)之抗體。一種類型人化抗體為CDR-移植抗體，其中人類CDR序列經引入非人類VH及VL序列中置換相應的非人類CDR序列。

術語"Kabat編號"、"Kabat定義"及"Kabat標記"在本文中可互換使用。此等術語在此項技術中得到認可係指對抗體或其抗原結合部分之 重鏈及輕鏈可變區中比其他胺基酸殘基更具變化性(意即高變)之胺基酸殘基編號的系統(Kabat等人(1971)Ann.NY Acad,Sci. 190：382-391及Kabat,E.A.等人(1991)Sequences of Proteins of Immunological Interest，第5版，U.S.Department of Health and Human Services,NIH公開案第91-3242號)。對於重鏈可變區而言，高變區的範圍為CDR1之胺基酸位置31至35，CDR2之胺基酸位置50至65及CDR3之胺基酸位置95至102。對於輕鏈可變區而言，高變區的範圍為CDR1之胺基酸位置24至34，CDR2之胺基酸位置50至56及CDR3之胺基酸位置89至97。

如本文所使用，術語"受體"及"受體抗體"係指提供或編碼至少80%、至少85%、至少90%、至少95%、至少98%或至少100%一或多個構架區之胺基酸序列的抗體或核酸序列。在一些實施例中，術語"受體"係指提供或編碼構恆定區之抗體胺基酸或核酸序列。在另一實施例中，術語"受體"係指提供或編碼一或多個構架區及恆定區之抗體胺基酸或核酸序列。在一特定實施例中，術語"受體"係指提供或編碼至少80%、較佳地至少85%、至少90%、至少95%、至少98%或至少100%一或多個構架區之胺基酸序列的人類抗體胺基酸或核酸序列。根據本發明，受體可含有至少1個、至少2個、至少3個、至少4個、至少5個或至少10個存在於人類抗體一或多個特異性位置的胺基酸殘基。接受體構架區及/或受體恆定區可(例如)來源於或獲得自生殖系抗體基因、成熟抗體基因、功能性抗體(例如此項技術中熟知的抗體、正在研發的抗體或市售抗體)。

如本文所使用，術語"CDR"係指抗體可變序列內之互補決定區。在重鏈及輕鏈之各可變區內存在三個CDR，對於各可變區而言其命名為CDR1、CDR2及CDR3。如本文所使用之術語"CDR組"係指能夠結合抗原的單一可變區內存在之一組三個CDR。此等CDR之確切邊界根據不同系統有不同定義。Kabat描述之系統(Kabat等人，Sequences of Proteins of Immunological Interest(National Institutes of Health,Bethesda,Md.(1987)及(1991))不僅提供可於任何抗體可變區之明確的殘基編號系統，而且提供定義三個CDR之精確的殘基邊界。此等CDR可稱為Kabat CDR。Chothia及其同事(Chothia & Lesk,J.Mol.Biol.196：901-917(1987)及Chothia等人，Nature 342：877-883(1989))發現在Kabat CDR中某些子部分採用幾乎相同的肽骨架構形，但胺基酸序列含量具有很大差異。此等子部分命名為L1、L2及L3或H1、H2及H3，其中"L"及"H"分別表示輕鏈及重鏈區。此等區可稱為Chothia CDR，其具有與Kabat CDR重疊的邊界。Padlan描述了與Kabat CDR重疊的其他定義CDR之邊界(FASEB J.9：133-139(1995))及MacCallum(J Mol Biol 262(5)：732-45(1996))。其他CDR邊界定義可不嚴格按照以上系統之一，雖然根據特定殘基或殘基之群或甚至全部CDR不顯著影響抗原結合之預測或實驗結果其可縮短或延長，但儘管如此仍與Kabat CDR重疊。本文所使用之方法可利用根據任何此等系統定義的CDR，但較佳實施例使用Kabat或Chothia定義之CDR。

如本文所使用，術語"規範"殘基係指在CDR或構架中定義如Chothia等人所定義之特定規範CDR結構之殘基(J.Mol.Biol.196：901-907(1987)；Chothia等人，J.Mol.Biol.227：799(1992)，兩者均以引用方式併入本文中)。根據Chothia等人，許多抗體之CDR的關鍵部分具有幾乎相同的肽骨架構形，但胺基酸序列含量存在很大差異。各規範結構主要指形成環的胺基酸殘基相鄰片段之一組肽骨架扭轉角。

如本文所使用，術語"供體"及"供體抗體"係指提供一或多個CDR之抗體。在一較佳實施例中，供體抗體為來自不同於自其獲得或取得抗體構架區之物種的抗體。在人化抗體上之範圍中，術語"供體抗體"係指提供一或多個CDR之非人類抗體。

如本文所使用，術語"構架"或"構架序列"係指可變區減去CDR之剩餘序列。由於CDR序列之確切定義可由不同系統確定，因此構架序列之含義具有相應不同的解釋。六個CDR(輕鏈CDR-L1、-L2及-L3及重鏈CDR-H1、-H2及-H3)亦在各鏈上將輕鏈及重鏈上的構架區劃分為四個子區(FR1、FR2、FR3及FR4)，其中CDR1位於FR1與FR2之間，CDR2位於FR2與FR3之間且CDR3位於FR3與FR4之間。不將特定子區指定為FR1、FR2、FR3或FR4，如他處所提及構架區表示單一天然存在之免疫球蛋白鏈可變區內組合的FR。如本文所使用，FR表示四個子區之一且複數個FR表示四個構成構架區之子區中的兩個或兩個以上。

人類重鏈及輕鏈受體序列為此項技術中已知的。在本發明之一實施例中，人類重鏈及輕鏈受體序列係選自表3及表4中所述之序列。

如本文所使用，術語"生殖系抗體基因"或"基因片段"係指由未經歷導致基因重排及突變以表現特定免疫球蛋白之成熟過程之非淋巴細 胞編碼的免疫球蛋白序列。(參見(例如)Shapiro等人，Crit.Rev.Immunol.22(3)：183-200(2002)；Marchalonis等人，Adv Exp Med Biol.484：13-30(2001))。本發明各種實施例提供的優勢之一係來源於如下認識：生殖系抗體基因比成熟抗體基因更傾向於保留表示物種個體特徵之基本胺基酸序列結構特徵，因此當在該物種中治療使用時較不易被識別為來自外源。

如本文所使用，術語"關鍵"殘基係指在可變區內對抗體(尤其是人化抗體)之結合特異性及/或親和力更具影響的某些殘基。關鍵殘基包括(但不限於)一或多個以下殘基：鄰接於CDR之殘基，潛在糖基化位點(可為N-或O-糖基化位點)，稀有殘基，能夠與抗原相互作用之殘基，能夠與CDR相互作用之殘基，規範殘基，介於重鏈可變區與輕鏈可變區之間的接觸殘基，微調區內的殘基及介於可變重鏈CDR1之Chothia定義與第一重鏈構架之Kabat定義之間重疊區中的殘基。

如本文所使用，術語"人化抗體"為免疫特異性結合所關注抗原且包含大體上具有人類抗體胺基酸序列之構架(FR)區及大體上具有非人類抗體胺基酸序列之互補決定區(CDR)的抗體或其變體、衍生物、類似物或其片段。如本文所使用，在CDR之範圍中術語"大體上"係指具有至少80%、較佳至少85%、至少90%、至少95%、至少98%或至少99%相同於非人類抗體CDR胺基酸序列之胺基酸序列的CDR。人化抗體包含大體上所有的至少一個且通常兩個可變域(Fab、Fab'、F(ab')2、FabC、Fv)，其中所有或大體上所有CDR區對應於非人類免疫球蛋白(意即供體抗體)之CDR區且所有或大體上所有構架區為人類免疫球蛋白一致序列之構架區。較佳地，人化抗體亦包含至少一部分免疫球蛋白恆定區(Fc)，通常為人類免疫球蛋白恆定區。在一些實施例中，人化抗體含有輕鏈以及至少重鏈可變域兩者。抗體亦可包括重鏈CH1、鉸鏈、CH2、CH3及CH4區。在一些實施例中，人化抗體僅 含有人化輕鏈。在一些實施例中，人化抗體僅含有人化重鏈。在特定實施例中，人化抗體僅含有輕鏈之人化可變域及/或人化重鏈。

人化抗體可選自任何類別之免疫球蛋白，包括IgM、IgG、IgD、IgA及IgE，及任何同型，包括(但不限於)IgG1、IgG2、IgG3及IgG4。人化抗體可包含來自一個以上種類或同型之序列，且特定恆定域可使用此項技術中熟知之技術進行選擇以使所要效應功能最佳化。

人化抗體之構架及CDR區不必精確對應於親本序列，例如供體抗體CDR或一致構架可藉由取代、插入及/或刪除至少一個胺基酸殘基經誘變而使得該位點處之CDR或構架殘基不對應於供體抗體或一致構架。然而，在一較佳實施例中，該等突變並不廣泛。通常，人化抗體殘基之至少80%、較佳至少85%、更佳至少90%且最佳至少95%將對應於親本FR及CDR序列之殘基。如本文所使用，術語"一致構架"係指一致免疫球蛋白序列中之構架區。如本文所使用，術語"一致免疫球蛋白序列"係指自相關免疫球蛋白序列家族中自最常存在之胺基酸(或核苷酸)形成的序列(參見(例如)Winnaker,From Genes to Clones(Verlagsgesellschaft,Weinheim,Germany 1987))。在免疫球蛋白家族中，一致序列中之各位置由該家族中於最常存在於該位置處的胺基酸佔據。若兩個胺基酸出現頻率相同，則一致序列中可包括任一者。

如本文所使用，如Foote及Winter(1992,J.Mol.Biol.224：487-499，其以引用方式併入本文中)所述，"微調"區係指可調節CDR結構且精細調節對抗原之配合的構架殘基之子集。微調區殘基形成CDR之底層且可影響CDR結構及抗體親和力。

如本文所使用，術語"中和"係指當結合蛋白特異性結合細胞激素時中和該細胞激素之生物活性。較佳地，中和結合蛋白為中和抗體，其與hIL-12及/或hIL-23之結合導致抑制hIL-12及/或hIL-23之生物活性。較佳地，中和結合蛋白結合hIL-12及/或hIL-23且使IL-12及/或 hIL-23之生物活性降低至少約20%、40%、60%、80%、85%或更多。藉由中和結合蛋白對hIL-12及/或hIL-23生物活性之抑制可藉由量測一或多種此項技術中熟知的hIL-12及/或hIL-23生物活性之指示劑來評估。舉例而言，在PHA母細胞干擾素-γ誘導檢定中抑制人類植物性凝血球素母細胞增殖(參見實例1.1.C)或在人類IL-12受體結合檢定中抑制受體結合(亦參見Salfeld等人，PCT公開案第WO 00/56772 A1號)。

術語"活性"包括諸如以下之活性：抗體對抗原之結合特異性/親和力，例如抗hIL-12-抗體結合IL-12抗原，及/或抗體之中和效能，例如抗hIL-12-抗體與hIL-12結合抑制hIL-12之生物活性，例如在人類IL-12受體結合檢定或PHA母細胞干擾素-γ誘導檢定中抑制PHA母細胞增殖或抑制受體結合。(參見實例1.1 C)。

術語"抗原決定基"包括任何能夠特異性結合免疫球蛋白或T-細胞受體之多肽決定子。在某些實施例中，抗原決定基決定子包括諸如胺基酸、糖側鏈、磷醯基或磺醯基之分子之化學活性表面基團，且在某些實施例中，可具有特定三維結構特徵及/或特異性電荷特徵。抗原決定基為由抗體結合的抗原區。在某些實施例中，當抗體在蛋白質及/或大分子之複雜混合物中優先識別其目標抗原時稱該抗體特異性結合抗原。

如本文所使用，術語"表面電漿共振"係指一種光學現象，其允許藉由在生物感應器基質中例如使用BIAcore系統偵測蛋白濃度改變而即時分析生物特異性相互作用(Pharmacia Biosensor AB,Uppsala,Sweden及Piscataway,NJ)。關於另外描述，參見Jönsson,U.等人(1993)Ann.Biol.Clin. 51：19-26；Jönsson,U.等人(1991)Biotechniques 11：620-627；Johnsson,B.等人(1995)J.Mol.Recognit. 8：125-131及Johnnson,B.等人(1991)Anal.Biochem. 198：268-277。

如本文所使用，如此項技術中已知，術語"K_on"意欲指示抗體與 抗原結合形成抗體/抗原複合物之結合速率常數。

如本文所使用，如此項技術中已知，術語"K_off"意欲指示抗體自抗體/抗原複合物解離之解離速率常數。

如本文所使用，如此項技術中已知，術語"K_d"意欲指示特定抗體-抗原相互作用之解離常數。

如本文所使用，術語"標記結合蛋白"係指併入用於識別結合蛋白之標記的蛋白質。較佳地，該標記為可偵測標記，例如併入放射性標記的胺基酸或將可由經標記抗生物素蛋白(例如含可由光學或比色法偵測之螢光標記或酶活性的抗生蛋白鏈菌素)偵測之生物素基部分附著至多肽。多肽標記之實例包括(但不限於)以下物質：放射性同位素或放射性核種(例如³H、¹⁴C、³⁵S、⁹⁰Y、⁹⁹Tc、¹¹¹In、¹²⁵I、¹³¹I、¹⁷⁷Lu、¹⁶⁶Ho或¹⁵³Sm)，螢光標記(例如FITC、若丹明(rhodamine)、鑭系磷光體)，酶標記(例如，辣根過氧化物酶、螢光素酶、鹼性磷酸酶)，化學發光標記，生物素基團，由第二報導物識別的預定多肽抗原決定基(例如白胺酸拉鏈配對序列、第二抗體的結合位點、金屬結合域、抗原決定基標籤)及磁性劑(例如釓螯合劑)。

術語"抗體共軛物"係指諸如抗體之結合蛋白，其化學連接至諸如治療或細胞毒性劑之第二化學部分。術語"藥劑"在本文中用於指示化學化合物、化學化合物之混合物、生物大分子或自生物材料製得之提取物。較佳地，該治療或細胞毒性劑包括(但不限於)百日咳毒素、紫杉酚、細胞遲緩素B、短桿菌素D、溴化乙錠、吐根素、絲裂黴素、依託泊苷、特諾波賽、長春新鹼、長春鹼、秋水仙鹼、羥道諾紅黴素、道諾黴素、二羥基炭疽菌素二酮、米托蒽醌、光神黴素、放線菌素D、去氫睾固酮、糖皮質激素、普魯卡因(procaine)、丁卡因(tetracaine)、利多卡因(lidocaine)、普萘洛爾(propranolol)及嘌呤黴素及其類似物或同系物。

如本文所使用之術語"晶體"及"結晶"係指以結晶形式存在之抗體或其抗原結合部分。晶體為一種物質固態形式，其不同於諸如非晶形固體狀態或液體晶體狀態之其他形式。晶體包含原子、離子、分子(例如諸如抗體之蛋白)或分子組裝(例如抗原/抗體複合物)之規則、重複三維排列。此等三維排列根據此項技術中詳細瞭解的特定數學關係排列。晶體中重複的基本單位或基本組份稱為不對稱單位。符合既定明確定義之結晶學對稱性之排列中重複的不對稱單位提供晶體之"單位晶格"。單位晶格在所有三個維度上規則轉化之重複提供晶體。參見Giege,R.及Ducruix,A.Barrett,Crystallization of Nucleic Acids and Proteins,a Practical Approach，第2版，第20頁1-16,Oxford University Press,New York,New York,(1999)。

本文所使用之術語"聚核苷酸"意謂兩個或兩個以上核苷酸(核糖核苷酸或去氧核糖核苷酸或任一類型核苷酸之修飾形式)之聚合形式。該術語包括單鏈及雙鏈形式之DNA但較佳為單鏈DNA。

如本文所使用之術語"經分離聚核苷酸"應意謂一種聚核苷酸(例如，基因組、cDNA或合成起源或其一些組合)，由於其起源，"經分離聚核苷酸"不與所有或一部分自然中發現與"經分離聚核苷酸"一起之聚核苷酸相關，可操作地連接至天然並不相連之聚核苷酸，或不作為較大序列之部分天然存在。

如本文所使用，術語"載體"意欲係指示能夠傳送與其連接之另一核酸的核酸分子。一種類型載體為"質體"，其係指環狀雙鏈DNA環，其中可接合額外的DNA片段。另一類型載體為病毒載體，其中額外的DNA片段可接合至病毒基因組。某些載體能夠在引入其之宿主細胞內自主複製(例如具有細菌複製起源的細菌載體及游離型哺乳動物載體)。其他載體(例如非游離型哺乳動物載體)可在引入宿主細胞中後即整合入宿主細胞之基因組內且藉此與宿主基因組一起複製。此外，某 些載體能夠指導與其操作連接之基因的表現。該等載體在本文中稱為"重組表現載體"(或簡稱為"表現載體")。一般而言，用於重組DNA技術之表現載體通常為質體形式。在本說明書中，由於質體為最常用之載體形式，因此"質體"及"載體"可互換使用。然而，本發明意欲包括發揮等效功能之諸如病毒載體(例如複製缺陷逆轉錄病毒、腺病毒及腺相關病毒)之該等其他形式表現載體。

術語"可操作連接的"係指其中所描述組份處於允許其以其目標方式作用之關係的鄰接位置。"可操作連接"至編碼序列的控制序列以在與控制序列相容的條件下達成編碼序列之表現的方式接合。"可操作連接"序列包括與所關注基因相鄰的表現控制序列及反式作用或在一定距離內控制所關注基因的表現控制序列。如本文所使用之術語"表現控制序列"係指實現其所接合之編碼序列之表現及處理所必需的聚核苷酸序列。表現控制序列包括適當的轉錄起始、終止、啟動子及強化子序列；有效的RNA處理信號，諸如拼接及多聚腺嘌呤化信號；穩定化細胞質mRNA之序列；增強翻譯效率之序列(即Kozak一致序列)；增強蛋白質穩定性之序列；及當需要時增強蛋白質分泌之序列。該等控制序列之性質視宿主生物體而定是不同的；在原核生物中，該等控制序列通常包括啟動子、核糖體結合位點及轉錄終止序列，在真核生物中，該等控制序列通常包括啟動子及轉錄終止序列。術語"控制序列"意欲包括其存在為表現及處理所必需之組份且亦可包括其存在為有利的之額外組份，例如引導序列及融合搭配序列。

如本文所定義，"轉化"係指任何外源性DNA藉由其進入宿主細胞之過程。轉化可在天然或人工條件下使用各種此項技術中熟知的方法發生。轉化可依賴於任何將外來核酸序列插入原核或真核宿主細胞中之已知方法。方法可根據待轉化之宿主細胞進行選擇，且可包括(但不限於)病毒感染、電穿孔、脂染及顆粒轟擊。該等"經轉化"細胞包 括穩定轉化之細胞，其中插入DNA能夠作為自主複製質體或作為宿主染色體之部分進行複製。其亦包括短暫表現插入DNA或RNA歷時有限時期的細胞。

如本文所使用，術語"重組宿主細胞"(或簡稱為"宿主細胞")意欲指示向其中引入外源性DNA之細胞。應理解希望該等術語不僅指示特定受檢者細胞而且指示該細胞之後代。因為由於突變或環境影響在隨後代中可出現某些修飾，所以該後代事實上可能與親本細胞不同但其仍包括於本文所用術語"宿主細胞"之範疇內。較佳地，宿主細胞包括選自任何生物界的原核及真核細胞。較佳的真核細胞包括原生生物、真菌、植物及動物細胞。更佳地，宿主細胞包括(但不限於)原核細胞株大腸桿菌，哺乳動物細胞株CHO、HEK 293及COS，昆蟲細胞株Sf9及真菌細胞釀酒酵母。

可使用標準技術進行重組DNA、寡核苷酸合成及組織培養及轉化(例如電穿孔、脂染)。酶促反應及純化技術可根據製造商說明書或如此項技術中通常實施或如本文所述來執行。前述技術及程序一般可根據此項技術中熟知的習知方法及如本說明書整篇中引用及討論的各種一般及更特定之參考文獻中所述來執行。參見(例如)Sambrook等人Molecular Cloning：A Laboratory Manual(第2版，Cold Spring Harbor Laboratory Press,Cold Spring Harbor,N.Y.(1989))，其以引用方式併入本文中用於任何目的。

如此項技術中已知及本文所使用，"轉基因生物體"係指具有含轉基因細胞之生物體，其中引入該生物體(或該生物體祖代)中之轉基因表現在該生物體中並不天然表現的多肽。"轉基因"為一種DNA構造，其穩定地且可操作地整合至自其發育成轉基因生物體之細胞的基因組中，在轉基因生物體之一或多種細胞類型或組織中指導所編碼基因產物的表現。

術語"調整"及"調節"可互換使用，且如本文所使用係指所關注分子活性(例如hIL-12之生物活性)之改變或變化。調節可為所關注分子特定活性或功能量值的增加或降低。例示性分子活性及功能包括(但不限於)結合特徵、酶活性、細胞受體活化及信號轉導。

因此，本文所使用，術語"調節劑"係能夠改變或變化所關注分子活性或功能(例如hIL-12之生物活性)之化合物。舉例而言，調節劑可引起分子特定活性或功能量值與不存在該調節劑時所觀察之活性或功能量值相比較增加或降低。在某些實施例中，調節劑為降低至少一種分子活性或功能之量值的抑制劑。例示性抑制劑包括(但不限於)蛋白質、肽、抗體、肽抗體、碳水化合物或小有機分子。肽抗體描述於(例如)WO01/83525中。

如本文所使用，術語"促效劑"係指當與所關注分子接觸時引起該分子特定活性或功能量值與不存在該促效劑時所觀察之活性或功能量值相比較增加之調節劑。所關注的特定促效劑可包括(但不限於)IL-12多肽或結合至hIL-12之多肽、核酸、碳水化合物或任何其他分子。

如本文所使用，術語"拮抗劑"或"抑制劑"係指當與所關注分子接觸時引起該分子特定活性或功能量值與不存在該拮抗劑時所觀察之活性或功能量值相比較降低之調節劑。所關注的特定拮抗劑為阻斷或調節hIL-12及/或hIL-23之生物或免疫活性之拮抗劑。hIL-12及/或hIL-23之拮抗劑及抑制劑可包括(但不限於)結合至hIL-12及/或hIL-23之蛋白質、核酸、碳水化合物或任何其他分子。

如本文所使用，術語"有效量"係指足以降低或改善病症或其一或多種症狀之嚴重度及/或持續時間，預防病症進展，促使病症好轉，預防與病症相關的一或多種症狀之復發、發展、發作或進展，偵測病症或增強或改良另一療法(例如預防性或治療性藥劑)之預防性或治療性作用之療法的量。

如本文所使用，術語"樣品"係以其最廣泛意義使用。如本文所使用"生物樣品"包括(但不限於)任何量的來自存活生物或死亡生物之物質。該等生物包括(但不限於)人類、小鼠、大鼠、猴、犬、家兔及其他動物。該等物質包括(但不限於)血液、血清、尿、滑液、細胞、器官、組織、骨髓、淋巴結及脾臟。

I.結合人類IL-12p40之抗體。

本發明之一態樣提供以高親和力、低解離速率及高中和能力結合IL-12p40之經分離鼠科單株抗體或其抗原結合部分。本發明之第二態樣提供結合IL-12p40之嵌合抗體。本發明之第三態樣提供結合IL-12p40之CDR移植抗體或其抗原結合部分。本發明之第四態樣提供結合IL-12p40之人化抗體或其抗原結合部分。較佳地，該等抗體或其部分為經分離抗體。較佳地，本發明之抗體為中和人類抗-IL-12及/或人類抗-IL-23之抗體。

A.製造抗IL-12p40抗體之方法

本發明之抗體可藉由任何多種此項技術中已知的技術製造。

1.使用融合瘤技術之抗-IL-12 p40單株抗體

可使用此項技術中已知的各種技術製備單株抗體，包括使用融合瘤、重組體及噬菌體呈現技術或其組合。舉例而言，單株抗體可使用融合瘤技術，包括此項技術中已知及(例如)Harlow等人，Antibodies：A Laboratory Manual,(Cold Spring Harbor Laboratory Press，第2版1988)；Hammerling等人，在：Monoclonal Antibodies and T-Cell Hybridomas 563-681(Elsevier,N.Y.,1981)(該等參考文獻之全文以引用方式併入本文中)中教示之融合瘤技術來產生。如本文所使用之術語"單株抗體"並不限於經由融合瘤技術產生的抗體。術語"單株抗體"係指來源於單一純系，包括任何真核、原核或噬菌體純系之抗體，而非產生其之方法。

使用融合瘤技術產生及篩選特異性抗體之方法為常規方法且為此項技術中熟知的。在一實施例中，本發明提供產生單株抗體之方法以及由此方法產生之抗體，該方法包含培養分泌本發明抗體之融合瘤細胞，其中該融合瘤較佳係藉由如下步驟產生：將分離自經本發明抗原免疫之小鼠的脾細胞與骨髓瘤細胞融合且接著自由融合產生之融合瘤篩選分泌能夠結合本發明多肽之抗體的融合瘤純系(參見實例1.2)。簡言之，小鼠可以IL-12抗原免疫。在一較佳實施例中，將IL-12抗原與佐劑一起投予以刺激免疫反應。該等佐劑包括完全或不完全弗氏佐劑(Freund's adjuvant)、RIBI(胞壁醯二肽)或ISCOM(免疫刺激複合物)。該等佐劑可保護多肽藉由將其錯隔於局部沈積物中而防止其快速分散，或其可含有刺激宿主分泌對於巨噬細胞及免疫系統其他組份具有趨化性之因子的物質。較佳地，若投予多肽，則免疫進程將包括分佈於數週內兩次或兩次以上投予多肽。

將動物以IL-12抗原免疫後，可自該動物獲得抗體及/或產生抗體的細胞。藉由抽血或處死動物而自該動物獲得含有抗-IL-12抗體的血清。可使用自該動物獲得之血清，因為可自血清獲得免疫球蛋白部分或可自血清純化抗-IL-12抗體。以此方式獲得的血清或免疫球蛋白為多株的，因此具有各種性質之異質排列。

一旦偵測到免疫反應，例如在小鼠血清中偵測到特異於抗原IL-12之抗體，即可收穫小鼠脾臟且分離脾細胞。接著將脾細胞藉由熟知技術與任何適當的骨髓瘤細胞(例如可自ATCC獲得之SP20細胞株的細胞)融合。選擇融合瘤且藉由有限稀釋選殖。接著藉由此項技術中已知的方法檢定融合瘤純系，篩選分泌能夠結合IL-12之抗體的細胞。一般含高含量抗體之復水可藉由以陽性融合瘤純系免疫小鼠來產生。

在另一實施例中，可自經免疫動物製備產生抗體的永生化融合瘤。如此項技術中所熟知，在免疫後處死動物且將脾B細胞與永生化 骨髓瘤細胞融合。參見(例如)上文Harlow及Lane。在一較佳實施例中，該等骨髓瘤細胞並不分泌免疫球蛋白多肽(非分泌性細胞株)。在融合及抗生素選擇後，使用IL-12或其部分或表現IL-12的細胞篩選融合瘤。在一較佳實施例中，初始篩選使用酶聯免疫檢定(ELISA)或放射性免疫檢定(RIA)來執行，較佳為ELISA。ELISA篩選之實例提供於WO 00/37504中，其以引用方式併入本文中。

針對所要特徵選擇，選殖並進一步篩選產生抗-IL-12p40抗體的融合瘤，該等特徵包括穩定的融合瘤生長、高抗體產量及所要抗體特徵，下文作進一步討論。可使融合瘤在同源動物中，在無免疫系統的動物(例如裸小鼠)中活體內或在細胞培養物中活體外培養及擴增。選擇、選殖及擴增融合瘤之方法為熟習此項技術者所熟知。

在一較佳實施例中，如上所述該融合瘤為小鼠融合瘤。在另一較佳實施例中，該融合瘤在諸如大鼠、綿羊、豬、山羊、牛或馬之非人類、非小鼠物種中產生。在另一實施例中，該融合瘤為人類融合瘤，其中將人類非分泌性骨髓瘤與表現抗-IL-12抗體之人類細胞融合。

識別特異性抗原決定基之抗體片段可藉由已知技術產生。舉例而言，本發明之Fab及F(ab')2片段可使用諸如木瓜蛋白酶(以產生Fab片段)或胃蛋白酶(以產生F(ab')2片段)之酶藉由蛋白質裂解免疫球蛋白分子而產生。F(ab')2片段含有可變區、輕鏈恆定區及重鏈CH1域。

2.使用SLAM之抗-IL-12p40單株抗體

在本發明之另一態樣中，如美國專利第5,627,052號、PCT公開案WO 92/02551及Babcock,J.S.等人(1996)Proc.Natl.Acad.Sci.USA 93：7843-7848中所描述，自單一經分離淋巴細胞使用此項技術中稱為選擇淋巴細胞抗體法(SLAM)之程序產生重組抗體。在此方法中，使用抗原特異性溶血空斑檢定篩選分泌所關注抗體之單一細胞，例如 來源於段落1中所描述之任一經免疫動物之淋巴細胞，其中使用諸如生物素之連接子使抗原IL-12、IL-12之子單位或其片段偶合至綿羊紅血球，且用以識別分泌具有針對IL-12特異性之抗體的單一細胞。在識別所關注的抗體分泌細胞之後，自該等細胞藉由逆轉錄酶-PCR回收重鏈及輕鏈可變區cDNA且接著可在諸如COS或CHO細胞之哺乳動物宿主細胞中在適當免疫球蛋白恆定區(例如人類恆定區)範圍中表現此等可變區。以經擴增免疫球蛋白序列(來源於活體內選擇的淋巴細胞)轉染的宿主細胞接著可經歷進一步之活體外分析及選擇，例如藉由淘洗經轉染細胞以分離表現抗IL-12抗體之細胞。可對經擴增免疫球蛋白序列進行另外之活體外操作，諸如藉由如PCT公開案WO 97/29131及PCT公開案WO 00/56772中所述之活體外親和性成熟法。

3.使用轉基因動物之抗-IL-12p40單株抗體

在本發明之另一實施例中，藉由以IL-12抗原免疫包含一些或全部人類免疫球蛋白基因座之非人類動物來產生抗體。在一較佳實施例中，該非人類動物為XENOMOUSE轉基因小鼠，一種包含大片段人類免疫球蛋白基因座且不能產生小鼠抗體之經基因工程改造之小鼠品系。參見(例如)Green等人Nature Genetics 7：13-21(1994)及美國專利第5,916,771號、第5,939,598號、第5,985,615號、第5,998,209號、第6,075,181號、第6,091,001號、第6,114,598號及第6,130,364號。同樣參見公開於1991年7月25日之WO 91/10741，公開於1994年2月3日之WO 94/02602，同時公開於1996年10月31日之WO 96/34096及WO 96/33735，公開於1998年4月23日之WO 98/16654，公開於1998年6月11日之WO 98/24893，公開於1998年11月12日之WO 98/50433，公開於1999年9月10日之WO 99/45031，公開於1999年10月21日之WO 99/53049，公開於2000年2月24日之WO 00 09560及公開於2000年6月29日之WO 00/037504。XENOMOUSE轉基因小鼠產生完全人類抗體 之類似於成人之人類集合，且產生抗原特異性人類Mab。經由引入人類重鏈基因座及x輕鏈基因座之百萬鹼基大小的生殖系組態YAC片段，XENOMOUSE轉基因小鼠含約80%之人類抗體集合。參見Mendez等人，Nature Genetics 15：146-156(1997)，Green及Jakobovits J.Exp.Med.188：483-495(1998)，其揭示內容以引用方式併入本文中。

4.使用重組抗體庫之抗-IL-12單株抗體

亦可使用活體外方法製造本發明之抗體，其中篩選抗體庫以識別具有所要結合特異性之抗體。該等重組抗體庫之篩選方法為此項技術中熟知的且包括描述於(例如)Ladner等人美國專利第5,223,409號，Kang等人PCT公開案第WO 92/18619號，Dower等人PCT公開案第WO 91/17271號，Winter等人PCT公開案第WO 92/20791號，Markland等人PCT公開案第WO 92/15679號，Breitling等人PCT公開案第WO 93/01288號，McCafferty等人PCT公開案第WO 92/01047號，Garrard等人PCT公開案第WO 92/09690號，Fuchs等人(1991)Bio/Technology 9：1370-1372，Hay等人(1992)Hum Antibod Hybridomas 3：81-85，Huse等人(1989)Science 246：1275-1281，McCafferty等人Nature(1990)348：552-554，Griffiths等人(1993)EMBO J 12：725-734，Hawkins等人(1992)J Mol Biol 226：889-896，Clackson等人(1991)Nature 352：624-628，Gram等人(1992)PNAS 89：3576-3580，Garrad等人(1991)Bio/Technology 9：1373-1377，Hoogenboom等人(1991)Nuc Acid Res 19：4133-4137及Barbas等人(1991)PNAS 88：7978-7982，美國專利申請公開案20030186374及PCT公開案第WO 97/29131號中之方法，各文獻之內容以引用方式併入本文中。

重組抗體庫可來自以IL-12或IL-23或IL-12或IL-23之部分免疫的受檢者。或者，重組抗體庫可來自未處理受檢者，意即未以IL-12或 IL-23免疫的受檢者，諸如來自未經人類IL-12或IL-23免疫之人類受檢者的人類抗體庫。本發明之抗體藉由如下步驟選擇：用包含人類IL-12p40之肽篩選重組抗體庫以藉此選擇識別IL-12p40之彼等抗體。實施該篩選及選擇之方法為此項技術中熟知的，諸如描述於前段之參考文獻中。為選擇對hIL-12具有特定親和力之本發明之抗體，例如以特定k_off速率常數自人類IL-12解離之抗體，可使用此項技術中已知的表面電漿共振方法選擇具有所要k_off速率常數之抗體。為選擇對hIL-12具有特定中和活性之本發明之抗體，例如具有特定IC₅₀之抗體，可使用此項技術中已知的評估hIL-12活性抑制之標準方法。

在一態樣中，本發明係關於一種結合人類IL-12及/或人類IL-23之經分離抗體或其抗原結合部分。較佳地，該抗體為中和抗體。在各實施例中，該抗體為重組抗體或單株抗體。

舉例而言，本發明之抗體亦可使用此項技術中已知的各種噬菌體呈現方法產生。在噬菌體呈現方法中，使功能性抗體域呈現於運載編碼其之聚核苷酸序列之噬菌體顆粒的表面。特定言之，可利用該噬菌體呈現自集合或組合抗體庫(例如人類或鼠科)表現的抗原結合域。可以抗原，例如使用經標記抗原或結合或捕捉至固體表面或珠粒之抗原選擇或識別表現結合所關注抗原之抗原結合域之噬菌體。用於此等方法中之噬菌體通常為包括fd及M13之絲狀噬菌體，自噬菌體表現的結合域具有重組融合至噬菌體基因III或基因VIII蛋白之Fab、Fv或二硫鍵穩定性Fv抗體域。可用於製造本發明之抗體之噬菌體呈現方法之實例包括揭示於Brinkman等人，J.Immunol.Methods 182：41-50(1995)，Ames等人，J.Immunol.Methods 184：177-186(1995)，Kettleborough等人，Eur.J.Immunol.24：952-958(1994)，Persic等人，Gene 187 9-18(1997)，Burton等人，Advances in Immunology 57：191-280(1994)，PCT申請案第PCT/GB91/01134號，PCT公開案 WO 90/02809、WO 91/10737、WO 92/01047、WO 92/18619、WO 93/11236、WO 95/15982、WO 95/20401及美國專利第5,698,426號、第5,223,409號、第5,403,484號、第5,580,717號、第5,427,908號、第5,750,753號、第5,821,047號、第5,571,698號、第5,427,908號、第5,516,637號、第5,780,225號、第5,658,727號、第5,733,743號及第5,969,108號中之方法，各文獻之全文以引用方式併入本文中。

如以上參考文獻中所描述，在噬菌體選擇後，如以下詳細描述，可分離來自噬菌體之抗體編碼區，並且使用其產生整個抗體(包括人類抗體)或任何其他所要抗原結合片段，且在包括哺乳動物細胞、昆蟲細胞、植物細胞、酵母及細菌之任何所要宿主中表現。舉例而言，亦可使用此項技術中已知之方法採用重組產生Fab、Fab'及F(ab')2片段之技術，諸如PCT公開案WO 92/22324，Mullinax等人，BioTechniques 12(6)：864-869(1992)及Sawai等人，AJRI 34：26-34(1995)及Better等人，Science 240：1041-1043(1988)(該等參考文獻之全文以引用方式併入本文中)中所揭示之方法。可用於產生單鏈Fv及抗體之技術之實例包括描述於美國專利4,946,778及5,258,498，Huston等人，Methods in Enzymology 203：46-88(1991)，Shu等人，PNAS 90：7995-7999(1993)及Skerra等人，Science 240：1038-1040(1988)中之技術。

替代以噬菌體呈現篩選重組抗體庫，則可應用此項技術中已知用於篩選較大組合庫之其他方法識別本發明之雙重特異性抗體。一種類型之替代表現系統為其中重組抗體庫以RNA-蛋白融合形式表現之系統，如Szostak及Roberts之PCT公開案第WO 98/31700號及Roberts,R.W.及Szostak,J.W.(1997)Proc.Natl.Acad.Sci.USA 94：12297-12302中所描述。在此系統中，在mRNA與其編碼之肽或蛋白質之間藉由在其3'端運載嘌呤黴素(一種肽基受體抗生素)之合成性mRNA之 活體外轉譯作用形成共價融合。因此，根據經編碼肽或蛋白質(例如抗體或其部分)之性質(例如抗體或其部分與雙重特異性抗原之結合)為基礎，從mRNA之複雜混合物(例如組合庫)富集出特異性的mRNA。自該等庫篩選所回收之編碼抗體或其部分之核酸序列可藉由上述之重組方法(例如在哺乳動物宿主細胞中)表現，另外，且該等核酸可藉由將突變引入至原始選定序列之進行額外回合之mRNA-肽融合篩選，或藉由如上所述之其他重組抗體活體外親和性成熟方法經受進一步的親和性熟成作用。

在另一種方法中，本發明之抗體亦可使用此項技術中已知的酵母呈現方法產生。在酵母呈現方法中，使用基因方法將抗體域限定於酵母細胞壁且將其呈現於酵母表面上。特定言之，可利用該酵母呈現自集合或組合抗體庫(例如人類或鼠科)表現的抗原結合域。可用於製造本發明抗體之酵母呈現方法之實例包括揭示於Wittrup等人美國專利第6,699,658號中之方法，其以引用方式併入本文中。

B.重組IL-12p40抗體之產生

本發明之抗體可藉由任何此項技術中已知的多種技術產生。舉例而言，自宿主細胞表現，其中將編碼重鏈及輕鏈之表現載體藉由標準技術轉染至宿主細胞中。術語"轉染"之各種形式意欲涵蓋通常用於將外源性DNA引入原核或真核宿主細胞中之各種技術，例如電穿孔、磷酸鈣沉澱、DEAE-葡聚糖轉染及類似技術。雖然可在原核或真核宿主細胞中表現本發明之抗體，但在真核細胞中表現抗體為較佳，且最佳在哺乳動物宿主細胞中表現抗體，因為該等真核細胞(且尤其是哺乳動物細胞)較原核細胞更傾向於組裝及分泌適當折疊且具免疫活性的抗體。

用於表現本發明之重組抗體之較佳哺乳動物宿主細胞包括中國倉鼠卵巢(CHO細胞)(包括dhfr-CHO細胞，描述於Urlaub及Chasin, (1980)Proc.Natl.Acad.Sci.USA 77：4216-4220中，與DHFR可選擇標記一起使用)，NSO骨髓瘤細胞、COS細胞及SP2細胞。當將編碼抗體基因之重組表現載體引入哺乳動物宿主細胞時，藉由將宿主細胞培養足以允許抗體在宿主細胞中表現或更佳地允許抗體分泌至宿主細胞所生長的培養基中之時期來產生抗體。可使用標準蛋白純化方法自培養基中回收抗體。

亦可使用宿主細胞產生諸如Fab片段或scFv分子之功能性抗體片段。應瞭解以上程序之變體亦在本發明之範疇內。舉例而言，可需要以編碼本發明抗體輕鏈及/或重鏈之功能性片段的DNA轉染宿主細胞。亦可使用重組DNA技術移除一些或全部編碼對於結合所關注抗原而言並非必需之輕鏈及重鏈之一或兩者的DNA。自該等截短DNA分子表現的分子亦涵蓋於本發明之抗體中。另外，可藉由以標準化學交聯方法使本發明之抗體與第二抗體交聯而製得雙功能抗體，其中一個重鏈及一個輕鏈為本發明之抗體且另一重鏈及輕鏈特異於除所關注抗原外之抗原。

在用於重組表現本發明抗體或其抗原結合部分之一較佳系統中，將編碼抗體重鏈及抗體輕鏈兩者之重組表現載體藉由磷酸鈣介導的轉染引入dhfr-CHO細胞中。在重組表現載體內，抗體重鏈及輕鏈基因各經操作連接至CMV強化子/AdMLP啟動子調節原件以驅動該等基因之高水平轉錄。重組表現載體亦運載DHFR基因，其允許使用甲胺喋呤選擇/擴增來選擇已經載體轉染的CHO細胞。培養所選轉化體宿主細胞以允許抗體重鏈及輕鏈表現且自培養基回收完整抗體。使用標準分子生物學技術製備重組表現載體，轉染宿主細胞，選擇轉化體，培養宿主細胞及自培養基回收抗體。另外，本發明提供一種藉由在適當培養基中培養本發明之宿主細胞直至合成本發明之重組抗體來合成本發明之重組抗體之方法。該方法可另外包含自培養基分離重組抗 體。

1.抗IL-12p40抗體

表5為本發明之較佳抗-hIL-12p40抗體之VH及VL區胺基酸序列之清單。

上述經分離抗-IL-12p40抗體CDR序列建立了一個根據本發明分離，且包含包括以下表6中列出之CDR序列之多肽的IL-12p40結合蛋白之新穎家族。對於產生及選擇關於hIL-12及/或hIL-23具有較佳IL-12p40結合及/或中和活性之本發明CDR，可使用此項技術中已知用於產生本發明結合蛋白及評估彼等結合蛋白之IL-12及/或IL-23結合及/或中和特徵之標準方法，其包括(但不限於)本文中特定描述之方法。

2.抗IL-12p40嵌合抗體

嵌合抗體為其中抗體之不同部分來源於不同動物物種之分子，例如具有來源於鼠科單株抗體之可變區及人類免疫球蛋白恆定區之抗體。產生嵌合抗體之方法為此項技術中已知的且在實例2.1中詳細討論。參見(例如)Morrison,Science 229：1202(1985)，Oi等人，BioTechniques 4：214(1986)，Gillies等人，(1989)J.Immunol.Methods 125：191-202，美國專利第5,807,715號、第4,816,567號及第4,816,397號，其全文以引用方式併入本文中。另外，可使用經研發的藉由將來自適當抗原特異性之小鼠抗體分子的基因與來自適當生物活性之人類抗體分子的基因拼接在一起而產生"嵌合抗體"之技術(Morrison等人，1984,Proc.Natl.Acad.Sci.81：851-855；Neuberger等人，1984,Nature 312：604-608；Takeda等人，1985,Nature 314：452-454，其全文以引用方式併入本文中)。

在一實施例中，本發明之嵌合抗體藉由以人類IgG1恆定區置換段落1中所描述之鼠科單株抗人類IL-12抗體之重鏈恆定區而產生。在一特定實施例中，本發明之嵌合抗體所包含之重鏈可變區(V_H)包含以下胺基酸序列：SEQ ID NO：35、SEQ ID NO：37、SEQ ID NO：39、SEQ ID NO：41、SEQ ID NO：43、SEQ ID NO：45、SEQ ID NO：47、SEQ ID NO：49、SEQ ID NO：51或SEQ ID NO：53，且所包含之輕鏈可變區(V_L)包含以下胺基酸序列：SEQ ID NO：36、SEQ ID NO：38、SEQ ID NO：40、SEQ ID NO：42、SEQ ID NO：44、SEQ ID NO：46、SEQ ID NO：48、SEQ ID NO：50、SEQ ID NO：52或SEQ ID NO：54。

3.抗IL-12p40 CDR移植抗體

本發明之CDR移植抗體包含來自人類抗體之重鏈及輕鏈可變區序列，其中V_H及/或V_L之一或多個CDR區經本發明鼠科抗體之CDR序列 置換。來自任何人類抗體之構架序列皆可充當CDR移植之模板。然而，該構架上之直鏈置換通常導致至損失一些抗原結合親和力。人類抗體越類似於原始鼠科抗體，鼠科CDR與人類構架之組合將失真引入CDR而降低親和力之可能性越小。因此，較佳的為選擇置換除CDR外之鼠科可變構架之人類可變構架具有與鼠科抗體可變區構架至少65%之序列相似度。更佳的為人類與鼠科可變區(除CDR外)具有至少70%之序列相似度。更佳的為人類與鼠科可變區(除CDR外)具有至少75%之序列相似度。最佳的為人類與鼠科可變區(除CDR外)具有至少80%之序列相似度。產生嵌合抗體之方法為此項技術中已知的且在實例2.2中詳細討論。(亦參見EP 239,400、PCT公開案WO 91/09967、美國專利第5,225,539號、第5,530,101號及第5,585,089)號，鑲飾法(veneering)或重塑法(resurfacing)(EP 592,106、EP 519,596，Padlan,Molecular Immunology 28(4/5)：489-498(1991)；Studnicka等人，Protein Engineering 7(6)：805-814(1994)；Roguska等人，PNAS 91：969-973(1994))及鏈改組(chain shuffling)(美國專利第5,565,352號))。

在一特定實施例中，本發明提供具有如表7中所述之V_H及/或V_L鏈之CDR移植抗體。

4.抗IL-12p40人化抗體

人化抗體為來自結合所要抗原之非人類物種抗體之抗體分子，其具有一或多個來自非人類物種之互補決定區(CDR)及來自人類免疫球蛋白分子之構架區。已知之人類Ig序列揭示於(例如)www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez-/query.fcgi；www.atcc.org/phage/hdb.html；www.sciquest.com/；www.abcam.com/；www.antibodyresource.com/onlinecomp.html；www.public.iastate.edu/.about.pedro/research_tools.html；www.mgen.uni-heidelberg.de/SD/IT/IT.html；www.whfreeman.com/immunology/CH-05/kuby05.htm；www.library.thinkquest.org/ 12429/Immune/Antibody.html；www.hhmi.org/grants/lectures/1996/vlab/；www.path.cam.ac.uk/.about.mrc7/m-ikeimages.html；www.antibodyresource.com/；mcb.harvard.edu/BioLinks/Immuno-logy.html.www.immunologylink.com/；pathbox.wustl.edu/.about.hcenter/index.-html；www.biotech.ufl.edu/.about.hcl/；www.pebio.com/pa/340913/340913.html-；www.nal.usda.gov/awic/pubs/antibody/；www.m.ehime-u.acjp/.about.yasuhito-/Elisa.html；www.biodesign.com/table.asp；www.icnet.uk/axp/facs/davies/lin-ks.html；www.biotech.ufl.edu/.about.fccl/protocol.html；www.isac-net.org/sites_geo.html；aximtl.imt.uni-marburg.de/.about.rek/AEP-Start.html；baserv.uci.kun.nl/.about.jraats/linksl.html；www.recab.uni-hd.de/immuno.bme.nwu.edu/；www.mrc-cpe.cam.ac.uk/imt-doc/pu-blic/INTRO.html；www.ibt.unam.mx/vir/V_mice.html；imgt.cnusc.fr：8104/；www.biochem.ucl.ac.uk/.about.martin/abs/index.html；antibody.bath.ac.uk/；abgen.cvm.tamu.edu/lab/wwwabgen.html；www.unizh.ch/.about.honegger/AHOsem-inar/Slide01.html；www.cryst.bbk.ac.uk/.about.ubcg07s/；www.nimr.mrc.ac.uk/CC/ccaewg/ccaewg.htm；www.path.cam.ac.uk/.about.mrc7/h-umanisation/TAHHP.html；www.ibt.unam.mx/vir/structure/stat_aim.html；www.biosci.missouri.edu/smithgp/index.html；www.cryst.bioc.cam.ac.uk/.abo-ut.fmolina/Web-pages/Pept/spottech.html；www.jerini.de/frroducts.htm；www.patents.ibm.com/ibm.html.，Kabat等人，Sequences of Proteins of Immunological Interest,U.S.Dept.Health(1983)中，各自之全文以引用方式併入本文中。如此項技術中已知，該等輸入序列 可用於降低免疫原性或降低、加強或改變結合、親和力、結合速率、解離速率、親合力、特異性、半衰期或任何其他適當特徵。

可將人類構架區中之構架殘基以來自CDR供體抗體之相應殘基取代以改變，較佳改良抗原結合。此等構架取代可由此項技術中熟知的方法識別，例如藉由CDR與構架殘基相互作用之建模識別對於抗原結合而言重要的構架殘基且藉由序列比較識別特定位置處異外之構架殘基。(參見(例如)Queen等人，美國專利第5,585,089號；Riechmann等人，Nature 332：323(1988)，其全文以引用方式併入本文中)。三維免疫球蛋白模型通常是可獲得的且為熟習此項技術者所熟悉。可利用電腦程式說明及展示所選擇候選免疫球蛋白序列之可能三維構形結構。檢查此等展示以便分析殘基在候選免疫球蛋白序列機能中之可能作用，意即分析影響候選免疫球蛋白與其抗原結合之能力的殘基。以此方式，可自一致及輸入序列選擇並組合FR殘基使得達成諸如對目標抗原增加之親和力的所要抗體特徵。一般而言，CDR殘基直接且最實質地涉及影響抗原結合。可將抗體使用各種此項技術中已知之技術人化，該等技術諸如(但不限於)Jones等人，Nature 321：522(1986)；Verhoeyen等人，Science 239：1534(1988))；Sims等人，J.Immunol.151：2296(1993)；Chothia及Lesk,J.Mol.Biol.196：901(1987)；Carter等人，Proc.Natl.Acad.Sci.U.S.A.89：4285(1992)；Presta等人，J.Immunol.151：2623(1993)；Padlan,Molecular Immunology 28(4/5)：489-498(1991)；Studnicka等人，Protein Engineering 7(6)：805-814(1994)；Roguska.等人，PNAS 91：969-973(1994)；PCT公開案WO 91/09967、PCT/：US 98/16280、US 96/18978、US 91/09630、US 91/05939、US 94/01234、GB 89/01334、GB 91/01134、GB 92/01755；WO 90/14443、WO 90/14424、WO 90/14430、EP 229246、EP 592,106；EP 519,596、EP 239,400、美國專利第5,565,332 號、第5,723,323號、第5,976,862號、第5,824,514號、第5,817,483號、第5,8144,76號、第5,763,192號、第5,723,323號、第5,766,886號、第5,714,352號、第6,204,023號、第6,180,370號、第5,693,762號、第5,530,101號、第5,585,089號、第5,225,539號、第4,816,567號中所描述之技術，各自之全文以引用方式併入本文中，包括其中所引用之參考文獻。

C.抗體之產生及產生抗體之細胞株

如此項技術中已知的數種活體外及活體內檢定中之任一種所評估(例如參見實例1.1.C)，本發明之抗-IL-12p40抗體較佳展示出降低或中和IL-12活性之較高能力。舉例而言，此等抗體中和IL-12誘導之PHA母細胞之干擾素γ產生的IC₅₀值在至少約10^-8M、約10^-9M或約10^-10M之範圍內。較佳地，本發明之抗-IL-12p40抗體亦展示降低或中和IL-23活性之較高能力。

在較佳實施例中，經分離抗體或其抗原結合部分結合人類IL-12p40，其中如表面電漿共振所測定，該抗體或其抗原結合部分以約0.1s^-1或更低之k_off速率常數自人類IL-12p40解離，或以約1×10^-6M或更低之IC₅₀抑制人類IL-12及/或人類IL-23之活性。或者，如表面電漿共振所測定，該抗體或其抗原結合片段可以約1×10^-2s^-1或更低之k_off速率常數自人類IL-12p40解離，或可以約1×10^-7M或更低之IC₅₀抑制人類IL-12及/或人類IL-23之活性。或者，如表面電漿共振所測定，該抗體或其抗原結合片段可以約1×10^-3s^-1或更低之k_off速率常數自人類IL-12p40解離，或可以約1×10^-8M或更低之IC₅₀抑制人類IL-12及/或人類IL-23之活性。或者，如表面電漿共振所測定，該抗體或其抗原結合片段可以約1×10^-4s^-1或更低之k_off速率常數自人類IL-12p40解離，或可以約1×10^-9M或更低之IC₅₀抑制人類IL-12及/或人類IL-23之活性。或者，如表面電漿共振所測定，該抗體或其抗原結合片段可以約1×10^{- 5}s^-1或更低之k_off速率常數自人類IL-12p40解離，或可以約1×10^-10M或更低之IC₅₀抑制人類IL-12及/或人類IL-23之活性。或者，如表面電漿共振所測定，該抗體或其抗原結合片段可以約1×10^-5s^-1或更低之k_off速率常數自人類IL-12p40解離，或可以約1×10^-11M或更低之IC₅₀抑制人類IL-12及/或人類IL-23之活性。

在某些實施例中，該抗體包含諸如IgG1、IgG2、IgG3、IgG4、IgA、IgE、IgM或IgD恆定區之重鏈恆定區。較佳地，該重鏈恆定區為IgG1重鏈恆定區或IgG4重鏈恆定區。此外，該抗體可包含輕鏈恆定區，κ輕鏈恆定區或λ輕鏈恆定區。較佳地，該抗體包含κ輕鏈恆定區。或者，該抗體部分可為(例如)Fab片段或單鏈Fv片段。

對改變抗體效應功能對Fc部分中胺基酸殘基之置換為此項技術中已知的(Winter等人美國專利第5,648,260號、第5624821號)。抗體之Fc部分介導數種重要之效應功能，例如細胞毒性誘導、ADCC、吞噬作用、補體依賴性細胞毒性(CDC)及抗體及抗原-抗體複合物之半衰期/清除率。在一些狀況中，此等效應功能對於治療性抗體而言為需要的，但在其他狀況中，視治療目的而定可能為不必要的或甚至有害的。某些人類IgG同型，尤其是IgG1及IgG3，分別經由結合至FcγRs及補體C1q而介導ADCC及CDC。新生兒Fc受體(FcRn)為決定抗體循環半衰期之關鍵組份。在另一實施例中，抗體恆定區(例如抗體Fc區)中至少一個胺基酸殘基經置換使得抗體效應功能改變。

一實施例提供標記結合蛋白，其中本發明之抗體或抗體部分經衍生或連接至另一功能性分子(例如另一肽或蛋白質)。舉例而言，本發明之標記結合蛋白可藉由功能上連接本發明之抗體或抗體部分(藉由化學偶合、基因融合、非共價結合或其他方式)與一或多種其他分子實體，諸如另一抗體(例如雙特異性抗體或雙功能抗體)、可偵測劑、細胞毒性劑、醫藥劑及/或可介導抗體或抗體部分與另一分子結 合之蛋白質或肽(例如抗生蛋白鏈菌素核心區或多聚組胺酸標籤)而獲得。

可用其衍生本發明之抗體或抗體部分之適用可偵測劑包括螢光化合物。例示性螢光可偵測劑包括螢光素、異硫氰酸鹽螢光素、若丹明、5-二甲胺-1-萘磺醯氯、藻紅素及其類似物。抗體亦可以可偵測酶衍生，諸如鹼性磷酸酶、辣根過氧化物酶、葡萄糖氧化酶及類似物。當抗體以可偵測酶衍生時，其可藉由添加酶可使用其產生可偵測反應產物之額外試劑來偵測。舉例而言，當存在可偵測劑辣根過氧化物酶時，添加過氧化氫及二胺基聯苯胺產生可偵測的有色反應產物。抗體亦可經生物素衍生且經由間接量測抗生物素蛋白或抗生蛋白鏈菌素結合來偵測。

本發明之另一實施例提供一種結晶結合蛋白。較佳地，本發明係關於本文所揭示之整個抗-IL-12p40抗體及其片段之晶體，及包含該等晶體之調配物及組合物。在一實施例中，該結晶結合蛋白具有長於該結合蛋白之可溶性對應物的活體內半衰期。在另一實施例中，該結合蛋白在結晶後保持生物活性。

本發明之結晶結合蛋白可根據此項技術中已知及揭示於WO 02072636中(其以引用方式併入本文中)之方法製得。

本發明之另一實施例提供一種糖基化結合蛋白，其中該抗體或其抗原結合部分包含一或多個碳水化合物殘基。初生活體內蛋白產生可經歷另外之處理，稱為翻譯後修飾。特定言之，可使用酶添加糖(糖基)殘基，此方法稱為糖基化。帶有共價連接之寡醣側鏈的所得蛋白質稱為糖基化蛋白或糖蛋白。抗體為在Fc域以及可變域具有一或多個碳水化合物殘基之糖蛋白。Fc域之碳水化合物殘基對Fc域之效應功能具有重要影響，對抗體之抗原結合或半衰期具有最小影響(R.Jefferis,Biotechnol.Prog.21(2005)，第11-16頁)。相反，可變域糖基 化可對抗體之抗原結合活性具有影響。可變域之糖基化可對抗體結合親和力具有負向影響，此很可能係歸因於位阻(Co,M.S.，等人，Mol.Immunol.(1993)30：1361-1367)或導致對抗原的親和力增加(Wallick,S.C.，等人，Exp.Med.(1988)168：1099-1109；Wright,A.，等人，EMBO J.(1991)10：27172723)。

本發明之一態樣係針對產生糖基化位點突變體，其中結合蛋白之O-或N-連接糖基化位點經突變。熟習此項技術者可使用標準熟知技術產生該等突變體。保持生物活性但具有增加或降低結合活性之糖基化位點突變體位為本發明之另一目的。

在另一實施例中，對本發明抗體或抗原結合部分之糖基化進行修飾。舉例而言，可製造無糖基化抗體(意即未糖基化之抗體)。可改變糖基化以(例如)增加抗體對抗原的親和力。該等碳水化合物修飾可藉由(例如)改變抗體序列內之一或多個糖基化位點而達成。舉例而言，可進行一或多處胺基酸取代以導致消除一或多個可變區糖基化位點藉此消除該位點之糖基化。該無糖基化(aglycosylation)可增加抗體對抗原的親和力。該方法進一步詳細描述於PCT公開案WO 2003016466A2及美國專利第5,714,350號及第6,350,861號中，各自之全文以引用方式併入本文中。

另外或其他，可製造具有改變類型糖基化之本發明之經修飾抗體，例如具有減少量岩藻糖基殘基之低岩藻糖基化抗體或具有增加的等分GlcNAc結構之抗體。該等經改變糖基化樣式已經證明增加抗體之ADCC活性。該等碳水化合物修飾可藉由(例如)在具有改變的糖基化機制之宿主細胞中表現抗體而達成。具有改變糖基化機制之細胞在此項技術中已有描述且可用作在其中表現本發明之重組抗體藉此產生具有經改變糖基化之抗體的宿主細胞。參見(例如)Shields,R.L.等人(2002)J.Biol.Chem.277：26733-26740；Umana等人(1999)Nat. Biotech.17：176-1以及歐洲專利第EP 1,176,195號，PCT公開案WO 03/035835、WO 99/54342 80，各自之全文以引用方式併入本文中。

蛋白質糖基化視所關注蛋白質之胺基酸序列以及其中表現蛋白質之宿主細胞而定。不同生物體可產生不同糖基化酶(例如糖基轉移酶及糖苷酶)且具有不同的可用受質(核苷酸糖)。由於該等因素，蛋白質糖基化樣式及糖基殘基之組成可視在其中表現特定蛋白質之宿主系統而不同。可用於本發明之糖基殘基可包括(但不限於)葡萄糖、半乳糖、甘露糖、岩藻糖、正-乙醯葡萄胺糖及唾液酸。較佳地，糖基化結合蛋白包含糖基殘基以使得糖基化樣式為人類樣式。

熟習此項技術者已知不同蛋白質糖基化可導致不同蛋白質特徵。舉例而言，在諸如酵母之微生物宿主中產生且利用酵母內源性途徑糖基化之治療性蛋白的功效與表現於諸如CHO細胞株之哺乳動物細胞中之相同蛋白質相比可降低。該等糖蛋白在人體內亦可具有免疫原性且顯示投藥後縮短的活體內半衰期。人類及其他動物體內之特異性受體可識別特定的糖基殘基且促進蛋白質自血流快速清除。其他不利作用可包括蛋白折疊之改變、溶解度、對蛋白酶之敏感度、運輸、傳送、區室化、分泌、由其他蛋白或因子識別、抗原性或過敏性。因此，實踐者可優選具有特定糖基化組成及樣式之治療性蛋白，例如相同或至少類似於在人類細胞或目標受檢動物之種屬特異性細胞中產生之糖基化組成及樣式。

不同於宿主細胞之糖基化蛋白之表現可藉由基因修飾宿主細胞以表現異源糖基化酶而達成。實踐者可使用此項技術中已知之技術產生展示人類蛋白質糖基化之抗體或其抗原結合部分。舉例而言，使酵母菌株經基因修飾而表現非天然存在的糖基化酶使得在此等酵母菌株中產生的糖基化蛋白(糖蛋白)展示與動物細胞(尤其人類細胞)相同的糖基化(美國專利申請案20040018590及20020137134及PCT公開案WO 2005100584 A2)。

除結合蛋白外，本發明亦係針對一種特異於該等本發明之結合蛋白的抗-個體基因型(抗-Id)抗體。抗-Id抗體為識別通常與另一抗體之抗原結合區相關之獨特決定子的抗體。抗-Id可藉由以結合蛋白或其含CDR之區域免疫動物而製備。經免疫動物將識別且回應於免疫抗體的個體基因型決定子並產生抗-Id抗體。抗-Id抗體亦可用作"免疫原"以在另一動物中誘導免疫反應，從而產生所謂的抗-抗-Id抗體。

此外，熟習此項技術者應瞭解可使用經基因工程化改造而表現各種糖基化酶之宿主細胞之庫來表現所關注之蛋白質，以使得該庫之成員宿主細胞產生具有各種糖基化樣式之所關注蛋白。接著實踐者可選擇且分離具有特定新穎糖基化樣式之所關注蛋白。較佳地，具有特別選擇之新穎糖基化樣式的蛋白質展示改良的或改變的生物性質。

D.抗-IL-12p40抗體之用途

由於具有結合人類IL-12p40之能力，本發明之抗-人類IL-12p40抗體或其部分可用以使用諸如酶聯免疫吸附檢定(ELISA)、放射性免疫檢定(RIA)或組織免疫組織化學之習知免疫檢定來偵測IL-12及/或人類IL-23(例如在諸如血清或血漿之生物樣品中)。本發明提供一種用於在生物樣品中偵測IL-12及/或人類IL-23之方法，其包含使生物樣品與本發明之抗體或抗體部分接觸且偵測結合至IL-12及/或人類IL-23之抗體(或抗體部分)或未結合抗體(或抗體部分)，藉此偵測生物樣品中之IL-12及/或人類IL-23。將抗體直接或間接以可偵測物質標記以促進結合或未經結合抗體之偵測。適當之可偵測物質包括各種酵素、輔基、螢光材料、發光材料及放射性材料。適當酵素之實例包括辣根過氧化物酶、鹼性磷酸酶、β-半乳糖苷酶或乙醯膽鹼酯酶；適當輔基複合物之實例包括抗生蛋白鏈菌素/生物素及抗生物素蛋白/生物素；適當螢光材料之實例包括傘酮、螢光素、異硫氰酸鹽螢光素、若丹明、二氯三 嗪基胺螢光素、丹醯基氯或藻紅素；發光材料之實例包括魯米諾(luminol)；且適當放射性材料之實例包括³H、¹⁴C、³⁵S、⁹⁰Y、⁹⁹Tc、¹¹¹In、¹²⁵I、¹³¹I、¹⁷⁷Lu、¹⁶⁶Ho或¹⁵³Sm。

作為標記抗體之替代，可在生物流體中藉由利用以可偵測物質標記之rhIL-12標準物與未經標記之抗-人類IL-12p40抗體的競爭免疫檢定來檢定人類IL-12。在此檢定中，將生物樣品、經標記rhIL-12標準物及抗-人類IL-12p40抗體組合且測定結合至未經標記抗體之經標記rhIL-12標準物的量。生物樣品中人類IL-12之量與結合至抗-IL-12p40抗體的經標記rhIL-12標準物之量成反比。類似地，亦可在生物流體中藉由利用以可偵測物質標記之rhIL-23標準物與未經標記之抗-人類IL-12p40抗體的競爭免疫檢定來檢定人類IL-23。

本發明之抗體及抗體部分較佳能夠在活體外及活體內中和人類IL-12及/或人類IL-23之活性。因此，該等本發明之抗體及抗體部分可用於(例如)在含有hIL-12及/或hIL-23的細胞培養物中，在人類受檢者體內或在具有與本發明抗體交叉反應之IL-12及/或hIL-23之其他哺乳動物受檢者體內抑制hIL-12及/或hIL-23之活性。在一實施例中，本發明提供一種抑制hIL-12及/或hIL-23活性之方法，其包含使hIL-12及/或hIL-23與本發明之抗體或抗體部分接觸使得hIL-12及/或hIL-23之活性受到抑制。舉例而言，在含或懷疑含hIL-12及/或hIL-23之細胞培養物中，可將本發明之抗體或抗體部分添加至培養基中以抑制培養物中hIL-12及/或hIL-23之活性。

在另一實施例中，本發明提供一種降低受檢者體內hIL-12及/或hIL-23活性之方法，有利的為該受檢者係罹患IL-12或IL-23活性有害之疾病或病症的受檢者。本發明提供一種降低罹患該疾病或病症之受檢者體內IL-12及/或IL-23活性之方法，該方法包含向該受檢者投予本發明之抗體或抗體部分使得該受檢者體內之IL-12及/或IL-23活性降 低。較佳地，該IL-12為人類IL-12，該IL-23為人類IL-23且該受檢者為人類受檢者。或者，該受檢者可為表現本發明抗體能夠結合之IL-12及/或IL-23之哺乳動物。另外，該受檢者可為已引入IL-12及/或IL-23(藉由投予IL-12及/或IL-23或藉由表現IL-12及/或IL-23轉基因)之哺乳動物。可將本發明之抗體投予人類受檢者用於治療目的。此外，可將本發明之抗體投予表現該抗體能夠結合之IL-12及/或IL-23的非人類哺乳動物用於獸醫目的或作為人類疾病之動物模型。關於後者，該等動物模型可用於評估本發明抗體之治療功效(例如測試投藥之劑量及時間過程)。

如本文所使用，術語"IL-12及/或IL-23活性有害之病症"意欲包括罹患該病症之受檢者體內IL-12及/或IL-23之存在已顯示或懷疑為該病症之病理生理學原因或為促使該病症惡化之因素之疾病及其他病症。因此，IL-12及/或IL-23活性有害之病症為預期降低IL-12及/或IL-23之活性可減輕病症症狀及/或減緩病症進展之病症。該等病症可(例如)由罹患該病症之受檢者生物流體中IL-12及/或IL-23濃度之增加(例如受檢者血清、血漿、滑液等中IL-12及/或IL-23濃度之增加)而證明，其可(例如)使用上述抗-IL-12p40抗體偵測。可以本發明之抗體治療之病症之非限制性實例包括下文關於本發明抗體之醫藥組合物之段落所討論的彼等病症。

D.醫藥組合物

本發明亦提供包含本發明之抗體或其抗原結合部分及醫藥上可接受之載劑的醫藥組合物。包含本發明之抗體之醫藥組合物可用於(但不限於)診斷、偵測或監控病症，預防、治療、管理或改善病症或其一或多種症狀中及/或研究。在一特定實施例中，一種組合物包含一或多種本發明之抗體。在另一實施例中，該醫藥組合物包含一或多種本發明之抗體及除本發明抗體外用於治療IL-12及/或IL-23活性有害 之病症的一或多種預防性或治療性藥劑。較佳地，該預防性或治療性藥劑已知可用於或已經或目前正在用於預防、治療、管理或改善病症或其一或多種症狀。根據此等實施例，該組合物可另外包含載劑、稀釋劑或賦形劑。

可將本發明之抗體及抗體部分併入適於向受檢者投藥之醫藥組合物。通常，該醫藥組合物包含本發明之抗體或抗體部分及醫藥上可接受之載劑。如本文所使用，"醫藥上可接受之載劑"包括任何及全部生理上相容之溶劑、分散介質、塗佈劑、抗菌劑及抗真菌劑、等張及吸收延遲劑及其類似物。醫藥上可接受之載劑之實例包括一或多種水、鹽水、磷酸鹽緩衝鹽水、右旋糖、甘油、乙醇及其類似物及其組合。在許多狀況中，較佳為該組合物中包括等張劑，例如糖，諸如甘露糖醇、山梨糖醇之多元醇或氯化鈉。醫藥上可接受之載劑可另外包含少量助劑物質，諸如濕潤劑或乳化劑、防腐劑或緩衝液，其增強抗體或抗體部分之存放期或有效性。

已知各種傳遞系統且可用其投予一或多種本發明之抗體或一或多種本發明抗體與可用於預防、管理、治療或改善病症或其一或多種症狀之預防性或治療性藥劑的組合，該等系統例如脂質體、微粒、微囊封裝、能夠表現抗體或抗體片段的重組細胞、受體介導的內飲作用(參見(例如)Wu及Wu,J.Biol.Chem.262：4429-4432(1987))，將核酸構造為逆轉錄病毒或其他載體之部分等。投予本發明之預防性或治療性藥劑之方法包括(但不限於)非經腸投藥(例如皮內、肌肉內、腹膜內、靜脈內及皮下)、硬膜外投藥、腫瘤內投藥及黏膜投藥(例如鼻內及口服路徑)。另外，可(例如)藉由使用吸入器或噴霧器及具有霧化劑之調配物而採用肺部投藥。參見(例如)美國專利第6,019,968號、第5,985,320號、第5,985,309號、第5,934,272號、第5,874,064號、第5,855,913號、第5,290,540號及第4,880,078號，及PCT公開案第WO 92/19244號、第WO 97/32572號、第WO 97/44013號、第WO 98/31346號及第WO 99/66903號，各自之全文以引用方式併入本文中。在一實施例中，本發明之抗體，組合療法或本發明之組合物係使用Alkermes AIR®肺部藥物傳遞技術(Alkermes,Inc.,Cambridge,Mass.)投予。在一特定實施例中，本發明之預防性或治療性藥劑經肌肉內、靜脈內、腫瘤內、口服、鼻內、肺部或皮下投予。該等預防性或治療性藥劑可藉由任何方便之路徑投予，例如藉由輸液或快速注射，藉由經上皮或黏膜與皮膚內襯層(例如口腔黏膜、直腸及腸黏膜等)吸收，且可與其他生物活性劑一起投予。投藥可為全身性或局部性的。

在一特定實施例中，可需要向需要治療的區域局部投予本發明之預防性或治療性藥劑，此可藉由例如(但不限於)局部輸液、注射或藉助植入物而達成，該植入物為多孔或無孔材料，包括膜及基質，例如矽橡膠膜、聚合物、纖維基質(例如Tissuel®)或膠原蛋白基質。在一實施例中，向受檢者染病區域局部投予有效量的一或多種本發明之抗體拮抗劑以預防、治療、管理及/或改善病症或其症狀。在另一實施例中，將有效量的一或多種本發明之抗體與有效量的除本發明抗體外之一或多種療法(例如一或多種預防性或治療性藥劑)組合局部投予受檢者之染病區域以預防、治療、管理及/或改善病症或其一或多種症狀。

在另一實施例中，可將該預防性或治療性藥劑以控制釋放或持續釋放系統傳遞。在一實施例中，可使用泵達成控制或持續釋放(參見Langer，上文；Sefton,1987,CRC Crit.Ref.Biomed.Eng.14：20；Buchwald等人，1980,Surgery 88：507；Saudek等人，1989,N.Engl.J.Med.321：574)。在另一實施例中，可使用聚合材料達成本發明療法之控制或持續釋放(參見(例如)Medical Applications of Controlled Release,Langer及Wise(編輯)，CRC Pres.,Boca Raton,Fla.(1974)； Controlled Drug Bioavailability,Drug Product Design and Performance,Smolen及Ball(編輯)，Wiley,New York(1984)；Ranger及Peppas,1983,J.,Macromol.Sci.Rev.Macromol.Chem.23：61；亦參見Levy等人，1985,Science 228：190；During等人，1989,Ann.Neurol.25：351；Howard等人，1989,J.Neurosurg.7 1：105))；美國專利第5,679,377號、美國專利第5,916,597號、美國專利第5,912,015號、美國專利第5,989,463號、美國專利第5,128,326號、PCT公開案第WO 99/15154號及PCT公開案第WO 99/20253號)。用於持續釋放調配物之聚合物之實例包括(但不限於)聚(甲基丙烯酸2-羥乙酯)、聚(甲基丙烯酸甲酯)、聚(丙烯酸)、聚(乙烯-共-乙酸乙烯酯)、聚(甲基丙烯酸)、聚乙交酯(PLG)、聚酐、聚(N-乙烯基吡咯啶酮)、聚(乙烯醇)、聚丙烯醯胺、聚(乙二醇)、聚丙交酯(PLA)、聚(丙交酯-共-乙交酯)(PLGA)及聚原酸酯。在一較佳實施例中，用於持續釋放調配物之聚合物為惰性的，不含可濾雜質、儲存穩定、無菌且生物可降解。在另一實施例中，控制或持續釋放系統可鄰近預防或治療目標置放，因此僅需要全身性劑量之一部分(參見(例如)Goodson在Medical Applications of Controlled Release，上文，第2卷，第115-138頁(1984)中)。

Langer之評論討論了控制釋放系統(1990,Science 249：1527-1533)。可使用任何熟習此項技術者已知的技術製造包含一或多種本發明之治療劑之持續釋放調配物。參見(例如)美國專利第4,526,938號、PCT公開案WO 91/05548、PCT公開案WO 96/20698，Ning等人，1996,"Intratumoral Radioimmunotheraphy of a Human Colon Cancer Xenograft Using a Sustained-Release Gel," Radiotherapy &Oncology 39：179-189，Song等人，1995,"Antibody Mediated Lung Targeting of Long-Circulating Emulsions," PDA Journal of Pharmaceutical Science &Technology 50：372-397，Cleek等人，1997,"Biodegradable Polymeric Carriers for a bFGF Antibody for Cardiovascular Application," Pro.Int'l.Symp.Control.Rel.Bioact.Mater.24：853-854及Lam等人，1997,"Microencapsulation of Recombinant Humanized Monoclonal Antibody for Local Delivery," Proc.Int'l.Symp.Control Rel.Bioact.Mater.24：759-760，各自全文以引用方式併入本文中。

在一特定實施例中，本發明之組合物為編碼預防性或治療性藥劑之核酸，其中可將核酸藉由將其構造為適當核酸表現載體之部分且投予該載體使其進入細胞內而活體內投藥以促進其編碼之預防性或治療性藥劑之表現，投藥可例如藉由使用逆轉錄病毒載體(參見美國專利4,980,286)，或藉由直接注射或藉由使用微粒轟擊(例如基因槍；Biolistic,Dupont)，或以脂質或細胞表面受體或轉染劑塗佈，或藉由與已知進入細胞核之類同源盒肽連接投予(參見(例如)Joliot等人，1991,Proc.Natl.Acad.Sci.USA 88：1864-1868)。或者，可將核酸細胞內引入且將其併入宿主細胞DNA中藉由同源重組而表現。

本發明之醫藥調配物可經調配而與其目標投藥路徑相容。投藥路徑之實例包括(但不限於)非經腸，例如靜脈內、皮內、皮下、口服、鼻內(例如吸入)、經皮(例如局部)、經黏膜及直腸投藥。在一特定實施例中，將組合物根據常規程序調配物為適於靜脈內、皮下、肌肉內、口服、鼻內或局部向人類投藥之醫藥調配物。通常，用於靜脈內投藥之組合物為無菌等張水性緩衝液中之溶液。若必需，則該組合物亦可包括增溶劑及諸如力諾卡姆(lignocamne)之局部麻醉劑以緩解注射位點的疼痛。

若本發明之組合物待局部投藥，則可將組合物調配成軟膏、乳膏、經皮貼片、洗劑、凝膠、洗髮精、噴霧劑、氣溶膠、溶液、乳液形式或熟習此項技術者熟知的其他形式。參見(例如)Remington's Pharmaceutical Sciences and Introduction to Pharmaceutical Dosage Forms，第19版，Mack Pub.Co.,Easton,Pa.(1995)。對於不可噴霧之局部劑型而言，通常採用包含與局部施用相容之載劑或一或多種賦形劑且動態黏度較佳大於水之黏性至半固體或固體之形式。適當調配物包括(但不限於)溶液、懸浮液、乳液、乳膏、軟膏、粉末、擦劑、藥膏及類似物，若需要可將其經滅菌且與助劑(例如防腐劑、穩定劑、濕潤劑、緩衝液或鹽)混合用於影響諸如滲透壓之各種性質。其他適當局部劑型包括可噴霧氣溶膠製劑，其中活性成份(較佳與固體或液體惰性載劑組合)係包裝於與加壓揮發性物質(例如氣態推進劑，諸如氟氯烷)之混合物中或壓擠瓶中。若需要亦可將保濕液或保濕劑添加至醫藥組合物及劑型中。該等添加成份之實例為此項技術中熟知的。

若本發明之方法包含鼻內投予組合物，則可將組合物調配成氣溶膠形式、噴霧劑、霧劑或滴劑之形式。特定言之，根據本發明使用之預防性或治療性藥劑可方便地以氣溶膠噴霧製劑之形式自加壓包裝或噴霧器藉用適當推進劑(例如二氯二氟甲烷、三氯氟甲烷、二氯四氟乙烷、二氧化碳或其他適當氣體)來傳遞。在加壓氣溶膠之狀況下，劑量單位可藉由提供閥傳遞經計量之量來確定。用於吸入器或吹入器中之膠囊及藥筒(例如包含明膠)可經調配成含有該化合物與諸如乳糖或澱粉之適當粉末基劑之粉末混合物。

若本發明之方法包含口服投藥，則可將組合物調配成錠劑、膠囊、扁膠劑、膠囊錠、溶液、懸浮液及其類似物之口服形式。錠劑或膠囊可藉由習知方式以醫藥上可接受之賦形製備，該等賦形劑諸如黏合劑(例如預先動物膠化之玉米澱粉、聚乙烯吡咯啶酮或羥丙基甲基纖維素)，填充劑(例如乳糖、微晶纖維素或磷酸氫鈣)，潤滑劑(例如硬脂酸鎂、滑石粉或二氧化矽)，崩解劑(例如馬鈴薯澱粉或羥基乙酸澱粉鈉)或濕潤劑(例如十二烷基硫酸鈉)。可將錠劑以此項技術中熟知的方法包衣。用於口服投藥之液體製劑可採用的形式為(但不限於)溶 液、糖漿或懸浮液，或可將其提供為用前以水或其他適當媒劑組構之乾產物形式。該等液體製劑可藉由習知方式以醫藥上可接受之添加劑製備，該等添加劑諸如懸浮劑(例如山梨糖醇糖漿、纖維素衍生物或氫化可食用脂肪)，乳化劑(例如卵磷脂或阿拉伯膠)，非水性媒劑(例如杏仁油、油酯、乙醇或分餾植物油)及防腐劑(例如對羥基苯甲酸甲酯或丙酯或山梨酸)。若需要該等製劑亦可含有緩衝鹽、調味劑、著色劑及甜味劑。用於口服投藥之製劑可經適當調配用於緩慢釋放、控制釋放或持續釋放預防性或治療性藥劑。

本發明之方法可包含(例如)藉由使用吸入器或噴霧器肺部投予以氣溶膠化劑調配之組合物。參見(例如)美國專利第6,019,968號、第5,985,320號、第5,985,309號、第5,934,272號、第5,874,064號、第5,855,913號、第5,290,540號及第4,880,078號，及PCT公開案第WO 92/19244號、第WO 97/32572號、第WO 97/44013號、第WO 98/31346號及第WO 99/66903號，各自之全文以引用方式併入本文中。在一特定實施例中，本發明之抗體，組合療法及/或本發明之組合物係使用Alkermes AIR®肺部藥物傳遞技術(Alkermes,Inc.,Cambridge,Mass.)投予。

本發明之方法可包含藉由注射(例如藉由快速注射或連續輸液)投予經調配用於非經腸投藥之組合物。注射用調配物可以具有添加防腐劑之單位劑型(例如安瓶或多劑容器)提供。該等組合物可採用諸如油性或水性媒劑中之懸浮液、溶液或乳液之形式，且可含有諸如懸浮劑、穩定劑及/或分散劑之調配劑。或者，活性成份可為用前以適當媒劑(例如無菌無熱源質水)組構之粉末形式。本發明之方法可另外包含投予經調配為儲槽式製劑之組合物。該等長效調配物可藉由植入(例如皮下或肌肉內)或藉由肌肉內注射投予。因此，舉例而言，該等組合物可以適當聚合或疏水性材料(例如可接受油中乳液之形式)或離 子交換樹脂調配，或調配為微溶衍生物(例如微溶鹽)之形式。

本發明之方法涵蓋投予調配為中性或鹽形式之組合物。醫藥上可接受之鹽包括與諸如衍生自鹽酸、磷酸、乙酸、草酸、酒石酸等之陰離子形成的鹽，及與諸如衍生自鈉、鉀、銨、鈣、鐵、氫氧化物、異丙胺、三乙胺、2-乙胺基乙醇、組胺酸、普魯卡因等之陽離子形成的鹽。

一般而言，組合物之成份係單獨或混合在一起以單位劑型提供，例如作為凍乾粉末或無水濃縮物在諸如安瓶或藥囊之指示活性劑量之密封容器中提供。若投藥模式為輸液，則組合物可用含有無菌醫藥級水或鹽水之輸液瓶分配。若投藥模式為注射，則可提供無菌注射用水或鹽水之安瓶以便在投藥前混合該等成份。

特定言之，本發明亦提供將一或多種本發明之預防性或治療性藥劑或醫藥組合物包裝於諸如安瓶或藥囊之指示藥劑量之密封容器中。在一實施例中，將一或多種本發明之預防性或治療性藥劑或醫藥組合物以無菌凍乾粉末或無水濃縮物形式提供於密封容器中且可經復水(例如以水或鹽水)為適當濃度用於向受檢者投藥。較佳地，將一或多種本發明之預防性或治療性藥劑或醫藥組合物以無菌凍乾粉末形式以至少5mg、更佳至少10mg、至少15mg、至少25mg、至少35mg、至少45mg、至少50mg、至少75mg或至少100mg之單位劑量提供於在密封容器中。本發明之凍乾預防性或治療性藥劑或醫藥組合物在其原始容器中應儲存於2℃與8℃之間，且本發明之預防性或治療性藥劑或醫藥組合物應在復水1週內、較佳5日內、72小時內、48小時內、24小時內、12小時內、6小時內、5小時內、3小時內或1小時內投藥。在一替代實施例中，將一或多種本發明之預防性或治療性藥劑或醫藥組合物以液體形式提供於指示藥劑量及濃度之密封容器中。較佳地，將液體形式之投藥組合物以至少0.25mg/ml、更佳至少0.5 mg/ml、至少1mg/ml、至少2.5mg/ml、至少5mg/ml、至少8mg/ml、至少10mg/ml、至少15mg/ml、至少25mg/ml、至少50mg/ml、至少75mg/ml或至少100mg/ml提供於密封容器中。該液體形式在其原始容器中應儲存於2℃與8℃之間。

可將本發明之抗體及抗體部分併入適於非經腸投藥之醫藥組合物。較佳地，應將該抗體或抗體部分製備為含有0.1-250mg/ml抗體之可注射溶液。該可注射溶液可包含燧石玻璃或棕色定量瓶、安瓶或預填充注射器中之液體或凍乾劑型。緩衝液可為L-組胺酸(1-50mM)，最佳5-10mM，pH 5.0至7.0(最佳pH 6.0)。其他適當緩衝液包括(但不限於)琥珀酸鈉、檸檬酸鈉、磷酸鈉或磷酸鉀。可使用0-300mM(對於液體劑型而言最佳為150mM)濃度之氯化鈉改變溶液之毒性。凍乾劑型中可包括低溫保護劑，主要為0-10%之蔗糖(最佳地0.5-1.0%)。其他適當低溫保護劑包括海藻糖及乳糖。凍乾劑型中可包括膨化劑，主要為1-10%甘露糖醇(最佳2-4%)。可將穩定劑用於液體及凍乾劑型中，主要為1-50mM L-甲硫胺酸(最佳5-10mM)。其他適當膨化劑包括甘胺酸、精胺酸，可包括0-0.05%聚山梨醇酯-80(最佳0.005-0.01%)。額外界面活性劑包括(但不限於)聚山梨醇酯20及BRIJ界面活性劑。製備為用於非經腸投藥之可注射溶液的包含本發明抗體及抗體部分之醫藥組合物可另外包含可用作佐劑之藥劑，諸如用於增加治療性蛋白(例如抗體)吸收或分散之彼藥劑。尤其可用的佐劑為玻尿酸酶，例如Hylenex®(重組人類玻尿酸酶)。在可注射溶液中添加玻尿酸酶可在非經腸投藥尤其是皮下投藥後提高人類生物可利用性。其亦允許更大的注射位點體積(意即大於1ml)同時降低痛苦及不適，且將注射位點反應的發生率降至最低。(參見WO 2004078140、US 2006104968，其以引用方式併入本文中)。

本發明之組合物可為各種形式。此等形式包括(例如)液體、半液 體及固體劑型，諸如液體溶液(例如可注射及可輸液溶液)分散液或懸浮液、錠劑、丸劑、粉末、脂質體及栓劑。較佳形式視目標投藥模式及治療應用而定。典型較佳組合物為可注射或可輸液溶液之形式，諸如類似於用於以其他抗體使人類被動免疫之組合物。較佳投藥模式為非經腸(例如靜脈內、皮下、腹膜內、肌肉內)。在一較佳實施例中，藉由靜脈內輸液或注射投予抗體。在另一較佳實施例中，藉由肌肉內或皮下注射投予抗體。

治療性組合物在製造及儲存條件下通常必須為無菌且穩定的。可將組合物調配為溶液、微乳液、分散液、脂質體或其他適於高藥物濃度之規則結構。無菌可注射溶液可藉由將活性化合物(意即抗體或抗體部分)以所要量併入具有一種上文列舉之成份或其組合之適當溶劑中，視需要隨後過濾滅菌而製備。一般而言，分散液係藉由將活性化合物併入含有基本分散介質及來自上文所列舉之所要其他組份之無菌媒劑中而製備。在用於製備無菌可注射溶液之無菌、凍乾粉末之狀況中，較佳之製備方法為真空乾燥及噴霧乾燥，其自預先滅菌過濾之溶液產生活性成份及任何額外所要成份之粉末。溶液之適當流動性可(例如)藉由使用諸如卵磷脂之塗層，在分散液之狀況下藉由維持所要的粒度且藉由使用界面活性劑來維持。可注射組合物之延長吸收可藉由在組合物中包括例如單硬脂酸鹽及明膠之延遲吸收之藥劑來達成。

本發明之抗體及抗體部分可藉由此項技術中已知的各種方法投予，但對於許多治療應用而言，較佳投藥路徑/模式為皮下注射、靜脈內注射或輸液。如熟習此項技術所瞭解，投藥路徑及/或模式將視所要結果而變化。在某些實施例中，可將活性化合物以將保護該化合物防止其快速釋放之載劑製備，諸如控制釋放調配物，包括植入物、經皮貼片及微膠囊傳遞系統。可使用生物可降解、生物相容性聚合物，例如乙烯乙酸乙烯酯、聚酐、聚乙醇酸、膠原蛋白、聚原酸酯及 聚乳酸。許多用於製備該等調配物之方法已取得專利或通常為熟習此項技術者已知的。參見(例如)Sustained and Controlled Release Drug Delivery Systems,J.R.Robinson，編輯，Marcel Dekker,Inc.,New York,1978。

在某些實施例中，本發明之抗體或抗體部分可(例如)以惰性稀釋劑或可吸收可食用載劑口服投藥。亦可將該化合物(及若需要之其他成份)封入硬殼或軟殼明膠膠囊中，壓縮為錠劑或直接併入受檢者飲食中。對於口服治療投藥而言，可將該等化合物與賦形劑合併且以可攝食錠劑、口腔錠劑、口含錠、膠囊、酒劑、懸浮液、糖漿、糯米紙囊劑及類似物之形式使用。對於藉由除非經腸投藥外之形式投予本發明之化合物，可需要以防止其失活之材料塗佈該化合物或與其共投藥。

亦可將輔助活性化合物併入該等組合物中。在某些實施例中，可將本發明之抗體或抗體部分與一或多種可用於治療IL-12活性有害之病症的額外治療劑共調配及/或共投予。舉例而言，可將本發明之抗-hIL-12抗體或抗體部分與一或多種結合其他目標之額外抗體(例如結合其他細胞激素或結合細胞表面分子之抗體)共調配及/或共投予。此外，可將一或多種本發明之抗體與兩種或兩種以上前述治療劑組合使用。該等組合療法可有利地利用較低劑量之投藥治療劑，因此避免與各種單一療法相關的可能之毒性或併發症。

在某些實施例中，將抗IL-12抗體或其片段連接至此項技術中已知的半衰期延長媒劑。該等媒劑包括(但不限於)Fc域、聚乙二醇及葡聚糖。該等媒劑描述於(例如)美國申請案第09/428,082號及已公開之PCT申請案第WO 99/25044號中，其以引用方式併入本文中用於任何目的。

在一特定實施例中，投予包含編碼本發明之抗體或另一本發明 之預防性或治療性藥劑之核苷酸序列的核酸序列以藉由基因療法治療、預防、管理或改善病症或其一或多種症狀。基因療法係指藉由向受檢者投予已表現或可表現之核酸來執行的療法。在本發明之此實施例中，該等核酸產生介導預防性或治療性作用的其所編碼之本發明之抗體或預防性或治療性藥劑。

根據本發明可使用此項技術中可用的任何用於基因療法之方法。關於基因療法之方法的一般評論，參見Goldspiel等人，1993,Clinical Pharmacy 12：488-505；Wu及Wu,1991,Biotherapy 3：87-95；Tolstoshev,1993,Ann.Rev.Pharmacol.Toxicol.32：573-596；Mulligan,Science 260：926-932(1993)；及Morgan及Anderson,1993,Ann.Rev.Biochem.62：191-217；May,1993,TIBTECH 11(5)：155-215。可用的重組DNA技術領域中通常已知的方法描述於Ausubel等人(編輯)，Current Protocols in Molecular Biology,John Wiley &Sons,NY(1993)及Kriegler,Gene Transfer and Expression,A Laboratory Manual,Stockton Press,NY(1990)中。基因療法之各種方法的詳細描述揭示於US20050042664 A1中，其以引用方式併入本文中。

介白素12在與涉及免疫及發炎元素之多種疾病相關的病理學中起關鍵作用。此等疾病包括(但不限於)：類風濕性關節炎、骨關節炎、青少年慢性關節炎、敗血性關節炎、萊姆關節炎、牛皮癬性關節炎、反應性關節炎、脊椎關節病、全身性紅斑狼瘡症、克羅恩氏病、潰瘍性結腸炎、炎性腸病、胰島素依賴性糖尿病、甲狀腺炎、哮喘、過敏性疾病、牛皮癬、皮炎硬皮病、移植物抗宿主疾病疾病、器官移植排斥反應、與器官移植相關的急性或慢性免疫疾病、類肉瘤病、動脈粥樣硬化、散播性血管內凝血、川崎氏病、格雷氏病、腎病症候群、慢性疲勞症候群、韋格納氏肉牙腫病、亨偌-絲奇恩賴紫癜、腎微血管炎、慢性活動性肝炎、葡萄膜炎、敗血性休克、毒性休克症候 群、敗血症症候群、惡病質、感染性疾病、寄生性疾病、後天免疫缺乏症候群、急性橫貫性脊髓炎、亨爾頓氏舞蹈病、帕金森氏病、阿茲海默症、中風、原發性膽汁性肝硬化症、溶血性貧血、惡性腫瘤、心臟衰竭、心肌梗塞、愛狄生症、偶發性疾病、I型自身免疫性多腺體功能低下及II型自身免疫性多腺體功能低下、施密特氏症候群、成人(急性)呼吸窘迫症候群、禿頭症、斑禿、血清陰性關節病、關節病、賴透氏病、牛皮癬性關節病、潰瘍性結腸炎關節病、腸病性滑膜炎、衣原體、耶氏桿菌及沙門氏菌相關之關節病、脊椎關節病、粥樣疾病/動脈硬化症、異位性過敏症、自體免疫大皰性疾病、尋常天疱瘡、落葉性天疱瘡、類天孢瘡、線性IgA疾病、自體免疫溶血性貧血、庫姆斯氏陽性溶血性貧血、後天惡性貧血、青少年惡性貧血、肌痛腦炎/皇家自由病、慢性皮膚黏膜念珠菌病、巨細胞動脈炎、原發性硬化肝炎、隱性自體免疫肝炎、後天免疫缺乏疾病症候群、後天免疫缺乏相關疾病、B型肝炎、C型肝炎、普通變異性免疫缺乏(普通變異性低γ球蛋白血症)、擴張型心肌症、女性不孕、卵巢衰竭、卵巢早衰、纖維變性肺病、隱性纖維化肺泡炎、炎症後間質性肺病、間質性肺炎、結締組織疾病相關之間質性肺病、混合型結締組織疾病相關之肺病、全身性硬化症相關之間質性肺病、類風濕性關節炎相關之間質性肺病、全身性紅斑狼瘡症相關之肺病、皮肌炎/多發性肌炎相關之肺病、修格蘭氏病相關之肺病、強直性脊椎炎相關之肺病、血管炎彌漫性肺病、含鐵血黃素沉著相關之肺病、藥物誘導之間質性肺病、纖維化、放射性纖維化、阻塞性細支氣管炎、慢性嗜酸性肺炎、淋巴球浸潤性肺病、感染後間質性肺病、痛風性關節炎、自體免疫性肝炎、1型自體免疫性肝炎(典型自體免疫或類狼瘡性肝炎)、2型自體免疫性肝炎(抗-LKM抗體性肝炎)、自體免疫介導之低糖血症、B型胰島素抗性黑棘皮病、副甲狀腺機能減退症、與器官移植相關之急性免疫疾 病、與器官移植相關之慢性免疫疾病、非炎性骨關節病、原發性硬化性膽管炎、1型牛皮癬、2型牛皮癬、特發性白血球減少症、自體免疫嗜中性白血球減少症、未分型腎病、絲球體腎炎、腎微細血管炎、萊姆病、盤狀紅斑狼瘡、特發性或未分型男性不育、精子自體免疫症、多發性硬化症(所有次型)、交感神經性眼炎、繼發於結締組織疾病之肺循環血壓過高、古德帕斯丘氏症候群、結節性多動脈炎之肺表現、急性風濕熱、類風濕性脊椎炎、司悌爾氏病、全身性硬化症、修格蘭氏症候群、高安氏病/動脈炎、自體免疫性血小板減少症、特發性血小板減少症、自體免疫性甲狀腺病、甲狀腺機能亢進症、甲狀腺腫性自體免疫性甲狀腺機能減退症(橋本氏病)、萎縮性自體免疫性甲狀腺機能減退症、原發性黏液水腫、晶狀體性葡萄膜炎、原發性血管炎、白斑症急性肝病、慢性肝病、酒精性肝硬化、酒精誘導之肝損傷、膽汁淤積症、特應性肝病、藥物誘導之肝炎、非酒精性脂肝炎、過敏症及哮喘、B群鏈球菌(GBS)感染、精神障礙(例如抑鬱症及精神分裂症)、Th2型及Th1型介導之疾病、急性及慢性疼痛(不同形式的疼痛)及癌症，諸如肺癌、乳癌、胃癌、膀胱癌、結腸癌、胰腺癌、卵巢癌、前列腺癌及直腸癌及造血惡性腫瘤(白血病及淋巴瘤)、無β脂蛋白血症、手足發紺、急性及慢性寄生性或感染性過程、急性白血病、急性淋巴母細胞白血病(ALL)、急性骨髓白血病(AML)、急性或慢性細菌感染、急性胰腺炎、急性腎衰竭、腺癌、心房異位搏動、AIDS癡呆綜合症、酒精誘導之肝炎、過敏性結膜炎、過敏性接觸皮炎、過敏性鼻炎、同種異體移植物排斥反應、α-1-抗胰蛋白酶缺乏、肌萎縮性側索硬化、貧血症、心絞痛、前角細胞退化症、抗cd3療法、抗磷脂症候群、抗受體過敏反應、主動脈及周邊動脈瘤、主動脈夾層、動脈高血壓、動脈硬化、動靜脈瘺、運動失調、心房顫動(持續或陣發性)、心房撲動、房室阻滯、B細胞淋巴瘤、骨移植物排斥反應、骨髓 移植(BMT)排斥反應、束支阻滯、伯基特氏淋巴瘤、燒傷、心律不整、心臟頓抑症候群、心臟腫瘤、心肌症、心肺分流炎症反應、軟骨移植排斥反應、小腦皮質退化症、小腦病症、紊亂或多源性房性心跳過速、化療相關病症、慢性髓細胞白血病(CML)、慢性酒精中毒、慢性發炎病變、慢性淋巴細胞白血病(CLL)、慢性阻塞性肺病(COPD)、慢性水楊酸中毒、結腸直腸癌、充血性心臟衰竭、結膜炎、接觸性皮炎、肺原性心臟病、冠狀動脈疾病、庫賈氏病、培養陰性的敗血症、囊性纖維化、細胞激素療法相關之病症、拳擊員癡呆、髓鞘脫失病、出血性登革熱、皮炎、皮膚病、糖尿病、糖尿病、糖尿病性動脈硬化性疾病、彌漫性路易體疾病、擴張型充血性心肌症、基底神經節病症、中年唐氏症候群、由阻斷CNS多巴胺受體藥物誘導之藥物誘導性運動障礙、藥物敏感、濕疹、腦脊髓炎、心內膜炎、內分泌病、會厭炎、艾普斯坦-巴爾病毒感染、紅斑性肢痛症、錐體外及小腦病症、家族性吞噬細胞性淋巴組織細胞增多病、胎兒胸腺移植排斥反反應、弗裏德賴希氏運動失調、功能性周邊動脈病症、真菌敗血症、氣性壞疽、胃潰瘍、腎小球腎炎、任何器官或組織之移植物排斥反應、革蘭氏陰性敗血症、革蘭氏陽性敗血症、由細胞內微生物引起之肉芽瘤、毛細胞白血病、哈勒羅登-斯帕茲病、橋本氏甲狀腺炎、枯草熱、心臟移植排斥反應、血色病、血液透析、溶血性尿毒癥症候群/溶血栓性血小板減少性紫癜、出血、肝炎(A型)、希氏束心律不整、HIV感染/HIV神經病、霍奇金氏病、多動障礙、過敏反應、過敏性肺炎、高血壓、運動不足症、下丘腦-垂體-腎上腺軸評估、特發性愛狄生症、特發性肺纖維化、抗體介導之細胞毒性、衰弱)、嬰兒脊髓性肌肉萎縮症、主動脈炎症、流行性感冒a、電離輻射曝露、虹膜睫狀體炎/葡萄膜炎/視神經炎、缺血-再灌注損傷、缺血性中風、青少年類風濕性關節炎、青少年脊髓性肌肉萎縮症、卡波西氏肉瘤、腎移值排斥反 應、退伍軍人症、利什曼體病、痲瘋病、皮質脊髓系統病變、脂性水腫、肝移植排斥反應、淋巴水腫、瘧疾、惡性淋巴瘤、惡性組織細胞增多病、惡性黑色素瘤、腦膜炎、腦膜炎球菌血症、代謝性/特發性疾病、偏頭痛、粒線體多系統病症、混合型結締組織疾病、單株免疫球蛋白病、多發性骨髓瘤、多發性系統退化症(Mencel Dejerine-Thomas Shi-Drager及Machado-Joseph)、重症肌無力、細胞內鳥分枝桿菌感染、結核分枝桿菌感染、骨髓異變症候群、心肌梗塞、心肌缺血症、鼻咽癌、新生兒慢性肺病、腎炎、腎病、神經退化性疾病、神經性I型肌肉萎縮、嗜中性白血球低下發燒、非霍奇金氏淋巴瘤、腹部主動脈及其分枝閉塞、閉塞性動脈病症、okt3療法、睪丸炎/附睪炎、睪丸炎/輸精管切除術反向程序、內臟增大、骨疏鬆症、胰腺移植排斥反應、胰腺癌、副腫瘤症候群/惡性腫瘤高鈣血症、副甲狀腺移植排斥反應、骨盆發炎疾病、常年性鼻炎、心包病、周邊動脈粥樣硬化疾病、周邊血管病症、腹膜炎、惡性貧血、肺囊蟲肺炎、肺炎、POEMS症候群(多發性神經病、內臟增大、內分泌病、單株免疫球蛋白病及皮膚改變症候群)、灌注後症候群、抽吸後症候群、MI後心切開術症候群、子癇前症、進行性核上麻痹、原發性肺循環血壓過高、放射療法、雷諾氏現象及疾病、雷諾氏病、雷弗素姆氏病、規則的狹QRS心跳過速、腎血管性高血壓、再灌注損傷、限制型心肌症、肉瘤、硬皮病、老年舞蹈病、路易體型老年癡呆、血清陰性關節病、休克、鐮狀細胞性貧血症、皮膚同種異體移植物排斥反應、皮膚改變症候群、小腸移植排斥反應、實體腫瘤、特異性心律不整、脊椎運動失調、脊髓小腦退化症、鏈球菌肌炎、小腦結構病變、亞急性硬化性全腦炎、暈厥、心血管系統梅毒、全身性過敏症、全身性發炎反應症候群、全身性青少年類風濕性關節炎、T-細胞或FAB ALL、毛細管擴張、血栓阻塞性脈管炎、血小板減少症、毒性作用、移植、外傷/出 血、III型過敏反應、IV型過敏反應、不穩定型心絞痛、尿毒癥、尿性敗血症、蕁麻疹、心臟瓣膜病、靜脈曲張、血管炎、靜脈疾病、靜脈栓塞、心室纖維性顫動、病毒及真菌感染、病毒性腦炎/無菌性腦膜炎、病毒相關噬血細胞症候群、魏尼凱-柯薩科夫症候群、威爾遜氏病、任何器官或組織的異種移植物排斥反應。(參見Peritt等人PCT公開案第WO 2002097048A2號，Leonard等人PCT公開案第WO 9524918 A1號及Salfeld等人PCT公開案第WO 00/56772A1號)。

本發明之抗體及抗體部分可用於治療罹患自體免疫疾病之人類，尤其是與炎症相關的自體免疫疾病，包括類風濕性脊椎炎、過敏症、自體免疫糖尿病、自體免疫葡萄膜炎。較佳地，本發明之抗體或其抗原結合部分可用於治療類風濕性關節炎、克羅恩病、多發性硬化症、胰島素依賴性糖尿病及牛皮癬。

本發明之抗體或抗體部分亦可與一或多種可用於治療自體免疫及發炎疾病之額外治療劑一起投藥。

本發明之抗體或其抗原結合部分可單獨或組合使用治療該等疾病。應瞭解本發明之抗體或其抗原結合部分可單獨使用或與例如治療劑之額外藥劑組合使用，該額外藥劑係由熟習此項技術者針對吾人所需目的來選擇。舉例而言，該額外藥劑可為此項技術中確認可用於治療待由本發明抗體治療之疾病或病況的治療劑。該額外藥劑亦可為賦予治療組合物有益屬性之藥劑，例如影響組合物黏度之藥劑。

另外應瞭解應包括於本發明中之組合為可用於吾人所需目的之組合。以下列出之藥劑僅處於說明目的且並不意欲受其限制。作為本發明之部分之組合可為本發明之抗體及至少一個選自以下清單之額外藥劑。該組合亦可包括一種以上之額外藥劑，例如兩種或三種額外藥劑，只要該組合為可使得所形成組合物執行目標功能。

本文描述之結合蛋白可與諸如改變病情抗風濕藥物(DMARD)或 非類固醇抗炎藥(NSAID)或類固醇或其任何組合之額外治療劑組合使用。DMARD之較佳實例為羥基氯奎、來氟米特、甲胺喋呤、非經腸金製劑(parenteral gold)、口服金製劑(oral gold)及柳氮磺吡啶。非類固醇抗炎藥(亦稱為NSAIDS)之較佳實例包括如之藥物。其他較佳組合為包括潑尼龍之皮質類固醇，可藉由逐漸減少與本發明之抗-IL-12抗體組合治療患者時所需要之類固醇劑量而降低或甚至消除類固醇使用之熟知副作用。可與本發明之抗體或抗體部分組合之類風濕性關節炎之治療劑的非限制性實例包括以下藥物：細胞激素抑止性抗炎藥(CSAID)；針對其他人類細胞激素或生長因子之抗體或其拮抗劑，例如TNF、LT、IL-1、IL-2、IL-3、IL-4、IL-5、IL-6、IL-7、IL-8、IL-15、IL-16、IL-18、IL-21、IL-23、干擾素、EMAP-II、GM-CSF、FGF及PDGF。本發明之抗體或其抗原結合部分可與針對細胞表面分子，諸如CD2、CD3、CD4、CD8、CD25、CD28、CD30、CD40、CD45、CD69、CD80(B7.1)、CD86(B7.2)、CD90、CTLA或其配位體，包括CD154(gp39或CD40L)之抗體組合。

治療劑之較佳組合可於不同點干擾自體免疫及隨後之發炎級聯反應；較佳實例包括TNF拮抗劑，諸如可溶性p55或p75TNF受體、其衍生物(p75TNFR1gG(Enbrel^TM)或p55TNFR1gG(Lenercept))，嵌合、人化或人類TNF抗體或其片段，包括英利昔單抗(infliximab)(Remicade^®，Johnson and Johnson；描述於美國專利第5,656,272號中，其以引用方式併入本文)、CDP571(人化單株抗-TNF-α IgG4抗體)、CDP 870(人化單株抗-TNF-α抗體片段)、抗-TNF dAb(Peptech)、CNTO 148(格利姆單抗(golimumab)；Medarex and Centocor，參見WO 02/12502)及阿達木單抗(adalimumab)(Humira^® Abbott Laboratories，人類抗-TNF mAb，US 6,090,382中描述為D2E7)。可用於本發明之額外TNF抗體描述於美國專利第6,593,458 號、第6,498,237號、第6,451,983號及第6,448,380號中，各以引用方式併入本文中。其他組合，包括TNFα轉化酶(TACE)抑制劑，IL-1抑制劑(介白素-1-轉化酶抑制劑、IL-1RA等)可由於相同原因而有效。其他較佳組合包括介白素11。另一較佳組合為可與IL-12功能平行，視其而定或與其協同作用的自體免疫反應之其他關鍵參與者；尤其較佳的為IL-18拮抗劑，包括IL-18抗體或可溶性IL-18受體或IL-18結合蛋白。已顯示IL-12與IL-18具有重疊但功能不同且兩者拮抗劑之組合可最為有效。另一較佳組合為非刪除性抗-CD4抑制劑。另一較佳組合包括共刺激途徑CD80(B7.1)或CD86(B7.2)之拮抗劑，包括抗體、可溶性受體或拮抗性配位體。

本發明之抗體或其抗原結合部分亦可與以下藥劑組合：甲胺喋呤、6-MP、硫唑嘌呤、柳氮磺胺吡啶、美沙拉秦(mesalazine)、奧沙拉秦、氯奎/羥基氯奎、青黴胺(pencillamine)、金硫蘋果酸鹽(肌肉內及口服)、硫唑嘌呤、秋水仙素(cochicine)、皮質類固醇(口服、吸入或局部注射)、β-2腎上腺素能受體促效劑(沙丁胺醇(salbutamol)、特布他林(terbutaline)、沙美特羅(salmeteral))、黃嘌呤(茶鹼(theophylline)、胺茶鹼(aminophylline))、色甘酸鹽、奈多羅米(nedocromil)、酮替芬(ketotifen)、異丙托(ipratropium)及氧托(oxitropium)、環孢素、FK506、雷帕黴素、黴酚酸嗎啉乙酯、來氟米特、NSAID(例如布洛芬)、皮質類固醇(諸如潑尼龍)、磷酸二酯酶抑制劑、腺苷促效劑、抗血栓劑、補體抑制劑、腎上腺素劑，干擾諸如TNFα或IL-1之促炎細胞激素信號轉導之藥劑(例如IRAK、NIK、IKK、p38或MAP激酶抑制劑)、IL-1β轉化酶抑制劑、TNFα轉化酶(TACE)抑制劑、T-細胞信號轉導抑制劑(諸如激酶抑制劑)、金屬蛋白酶抑制劑、柳氮磺吡啶、硫唑嘌呤、6-巰基嘌呤、血管收縮素轉化酶抑制劑、可溶性細胞激素受體及其衍生物(例如可溶性p55或p75 TNF 受體及衍生物p75TNFRIgG(Enbrel^TM及p55TNFRIgG(Lenercept))、sIL-1RI、sIL-1RII、sIL-6R)、抗炎細胞激素(例如IL-4、IL-10、IL-11、IL-13及TGFβ)、塞內昔布(celecoxib)、葉酸、硫酸羥基氯奎、羅非考昔(rofecoxib)、依那西普(etanercept)、英利昔單抗、萘普生(naproxen)、伐地昔布(valdecoxib)、柳氮磺吡啶、甲基潑尼龍、美洛昔康(meloxicam)、乙酸甲基潑尼龍、硫代蘋果酸鈉、阿司匹靈(aspirin)、曲安奈德(triamcinolone acetonide)、萘磺酸右丙氧芬(propoxyphene)/apap、葉酸鹽、萘丁美酮(nabumetone)、雙氯芬酸(diclofenac)、吡羅昔康(piroxicam)、依託度酸(etodolac)、雙氯芬酸鈉、噁丙嗪(oxaprozin)、鹽酸羥考酮(oxycodone hcl)、酸式酒石酸氫可酮(hydrocodone bitartrate)/apap、雙氯芬酸鈉/米索前列醇(misoprostol)、芬太尼(fentanyl)、阿那白滯素(anakinra)、人類重組體、鹽酸曲馬多(tramadol hcl)、雙水楊酯(salsalate)、舒林酸(sulindac)、氰鈷維生素/fa/吡哆醇、乙醯胺苯酚(acetaminophen)、阿侖膦酸(alendronate)鈉、潑尼龍、硫酸嗎啡(morphine sulfate)、鹽酸利多卡因、吲哚美辛(indomethacin)、硫酸葡糖胺/軟骨素、鹽酸阿米曲替林(amitriptyline hcl)、磺胺嘧啶(sulfadiazine)、鹽酸羥考酮/乙醯胺苯酚、鹽酸奧洛他定(olopatadine hcl)、米索前列醇、萘普生鈉、奧美拉唑(omeprazole)、環磷醯胺(cyclophosphamide)、利妥昔單抗(rituximab)、IL-1 TRAP、MRA、CTLA4-IG、IL-18 BP、抗-IL-18、抗-IL15、BIRB-796、SCIO-469、VX-702、AMG-548、VX-740、羅氟司特(Roflumilast)、IC-485、CDC-801及美索普蘭(Mesopram)。較佳組合包括甲胺喋呤或來氟米特，且在中度或重度類風濕性關節炎狀況下包括環孢素。

亦可與IL-12或IL-23抗體或其抗原-結合部分組合使用治療類風濕性關節炎之非限制性額外藥劑包括(但不限於)以下藥劑：非類固醇抗 炎藥(NSAID)；細胞激素抑止性抗炎藥(CSAID)；CDP-571/BAY-10-3356(人化抗-TNFα抗體；Celltech/Bayer)；cA2/英利昔單抗(嵌合抗-TNFα抗體；Centocor)；75 kdTNFR-IgG/依那西普(etanercept)(75kD TNF受體-IgG融合蛋白；Immunex；參見(例如)Arthritis & Rheumatism(1994)第37卷，S295；J.Invest.Med.(1996)第44卷，235A)；55 kdTNF-IgG(55kD TNF受體-IgG融合蛋白；Hoffmann-LaRoche)；IDEC-CE9.1/SB 210396(非刪除性靈長化抗-CD4抗體；IDEC/SmithKline；參見(例如)Arthritis & Rheumatism(1995)第38卷，S185)；DAB 486-IL-2及/或DAB 389-IL-2(IL-2融合蛋白；Seragen；參見(例如)Arthritis & Rheumatism(1993)第36卷，1223)；抗-Tac(人化抗-IL-2Rα；Protein Design Labs/Roche)；IL-4(抗炎細胞激素；DNAX/Schering)；IL-10(SCH 52000；重組IL-10，抗炎細胞激素；DNAX/Schering)；IL-4、IL-10及/或IL-4促效劑(例如促效劑抗體)；IL-1RA(IL-1受體拮抗劑；Synergen/Amgen)；阿那白滯素(Kineret^®/Amgen)；TNF-bp/s-TNF(可溶性TNF結合蛋白；參見(例如)Arthritis & Rheumatism(1996)第39卷，No.9(增補)，S284；Amer.J.Physiol.-Heart and Circulatory Physiology(1995)第268卷，第37-42頁)；R973401(IV型磷酸二酯酶抑制劑；參見(例如)Arthritis & Rheumatism(1996)第39卷，No.9(增補)，S282)；MK-966(COX-2抑制劑；參見(例如)Arthritis & Rheumatism(1996)第39卷，No.9(增補)，S81)；伊洛前列素(Iloprost)(參見(例如)Arthritis & Rheumatism(1996)第39卷，No.9(增補)，S82)；甲胺喋呤；撒利多胺(thalidomide)(參見(例如)Arthritis & Rheumatism(1996)第39卷，No.9(增補)；S282)及撒利多胺-相關藥物(例如Celgen)；來氟米特(抗炎及細胞激素抑制劑；參見(例如)Arthritis & Rheumatism(1996)第39卷，No.9(增補)，S131；Inflammation Research(1996)第45卷，第103-107頁；胺甲環酸 (血漿素原活化抑制劑；參見(例如)Arthritis & Rheumatism(1996)第39卷，No.9(增補)，S284)；T-614(細胞激素抑制劑；參見(例如)Arthritis & Rheumatism(1996)第39卷，No.9(增補)，S282)；前列腺素E1(參見(例如)Arthritis & Rheumatism(1996)第39卷，No.9(增補)，S282)；替尼達普(Tenidap)(非類固醇抗炎藥；參見(例如)Arthritis & Rheumatism(1996)第39卷，No.9(增補)，S280)；萘普生(非類固醇抗炎藥；參見(例如)Neuro Report(1996)第7卷，第1209-1213頁)；美洛昔康(非類固醇炎藥物)；布洛芬(非類固醇抗炎藥)；吡羅昔康(非類固醇抗炎藥)；雙氯芬酸(非類固醇抗炎藥)；吲哚美辛(非類固醇抗炎藥)；柳氮磺吡啶(參見(例如)Arthritis & Rheumatism(1996)第39卷，No.9(增補)，S281)；硫唑嘌呤(參見(例如)Arthritis & Rheumatism(1996)第39，No.9(增補)，S281)；ICE抑制劑(酶介白素-1β轉化酶之抑制劑)；zap-70及/或lck抑制劑(酪胺酸激酶zap-70或lck之抑制劑)；VEGF抑制劑及/或VEGF-R抑制劑(血管內皮細胞生長因子或血管內皮細胞生長因子受體之抑制劑；血管生成抑制劑)；皮質類固醇抗炎藥(例如SB203580)；TNF-轉化酶抑制劑；抗-IL-12抗體；抗-IL-18抗體；介白素-11(參見(例如)Arthritis & Rheumatism(1996)第39卷，No.9(增補)，S296)；介白素-13(參見(例如)Arthritis & Rheumatism(1996)第39卷，No.9(增補)，S308)；介白素-17抑制劑(參見(例如)Arthritis & Rheumatism(1996)第39卷，No.9(增補)，S120)；金製劑；青黴胺；氯奎；苯丁酸氮芥(chlorambucil)；羥基氯奎；環孢素；環磷醯胺；全淋巴照射；抗-胸腺細胞球蛋白；抗-CD4抗體；CD5-毒素；口服投藥的肽及膠原蛋白；氯苯紮利(lobenzarit)二鈉；細胞激素調節劑(CRA)HP228及HP466(Houghten Pharmaceuticals,Inc.)；ICAM-1反義硫代磷酸酯寡-去氧核苷酸(ISIS 2302；Isis Pharmaceuticals,Inc.)；可溶性補體受體1(TP10；T Cell Sciences,Inc.)；潑尼松(prednisone)；奧 古蛋白(orgotein)；葡糖胺聚糖多硫酸鹽；二甲胺四環素(minocycline)；抗-IL2R抗體；海洋生物及植物脂質(魚及作物種子脂肪酸；參見(例如)DeLuca等人(1995)Rheum.Dis.Clin.North Am. 21：759-777)；金諾芬(auranofin)；苯基丁氮酮(phenylbutazone)；甲氯芬那酸(meclofenamic acid)；氟芬那酸(flufenamic acid)；靜脈內免疫球蛋白；齊羅噻尿(zileuton)；阿紮立平(azaribine)；黴酚酸(RS-61443)；他克莫司(tacrolimus)(FK-506)；西羅莫司(sirolimus)(雷帕黴素)；胺普立糖(amiprilose)(塞拉芬汀(therafectin))；克拉屈濱(cladribine)(2-氯去氧腺苷)；甲胺喋呤；抗病毒劑及免疫調節劑。

在一實施例中，將IL-12抗體或其抗原-結合部分與以下藥劑之一組合投藥用以治療類風濕性關節炎：小分子KDR抑制劑(ABT-123)、小分子Tie-2抑制劑；甲胺喋呤、潑尼松、塞內昔布、葉酸、硫酸羥基氯奎、羅非考昔、依那西普、英利昔單抗、來氟米特、萘普生、伐地昔布、柳氮磺吡啶、甲基潑尼龍、布洛芬、美洛昔康、乙酸甲基潑尼龍、金硫蘋果酸鈉、阿司匹靈、硫唑嘌呤、曲安奈德、萘磺酸右丙氧芬/apap、葉酸鹽、萘丁美酮、雙氯芬酸、吡羅昔康、依託度酸、雙氯芬酸鈉、噁丙嗪、鹽酸羥考酮、酸式酒石酸氫可酮/apap、雙氯芬酸鈉/米索前列醇、芬太尼、阿那白滯素、人類重組體、鹽酸曲馬多、雙水楊酯、舒林酸、氰鈷維生素/fa/吡哆醇、乙醯胺苯酚、阿侖膦酸鈉、潑尼龍、硫酸嗎啡、鹽酸利多卡因、吲哚美辛、硫酸葡糖胺/軟骨素、環孢素、鹽酸阿米曲替林、磺胺嘧啶、鹽酸羥考酮/乙醯胺苯酚、鹽酸奧洛他定、米索前列醇、萘普生鈉、奧美拉唑、黴酚酸嗎啉乙酯、環磷醯胺、利妥昔單抗、IL-1 TRAP、MRA、CTLA4-IG、IL-18 BP、ABT-874、ABT-325(抗-IL 18)、抗-IL 15、BIRB-796、SCIO-469、VX-702、AMG-548、VX-740、羅氟司特、IC-485、CDC-801及美索普蘭。在另一實施例中，可將IL-12或IL-23抗體或其抗原結 合部分與用於治療類風濕性關節炎的上文揭示之藥劑之一組合投藥用以治療與IL-12或IL-23相關之病症。

可與本發明抗體或抗體部分組合使用之炎性腸病治療劑的非限制性實例包括以下藥劑：布替耐德、表皮生長因子、皮質類固醇、環孢素、柳氮磺吡啶、胺基水楊酸鹽、6-巰基嘌呤、硫唑嘌呤、甲硝噠唑、脂肪加氧酶抑制劑、美沙拉嗪、奧沙拉秦、巴柳氮、抗氧化劑、凝血脂素抑制劑、IL-1受體拮抗劑、抗-IL-1β單株抗體、抗-IL-6單株抗體、生長因子、彈性蛋白酶抑制劑、吡啶基-咪唑化合物、針對其他人類細胞激素或生長因子之抗體或其拮抗劑，例如TNF、LT、IL-1、IL-2、IL-6、IL-7、IL-8、IL-15、IL-16、IL-17、IL-18、EMAP-II、GM-CSF、FGF及PDGF。本發明之抗體或其抗原結合部分可與針對細胞表面分子，諸如CD2、CD3、CD4、CD8、CD25、CD28、CD30、CD40、CD45、CD69、CD90或其配位體之抗體組合。本發明之抗體或其抗原結合部分亦可與以下藥劑組合：甲胺喋呤、環孢素、FK506、雷帕黴素、黴酚酸嗎啉乙酯、來氟米特、NSAID(例如布洛芬)、皮質類固醇(諸如潑尼龍)、磷酸二酯酶抑制劑、腺苷促效劑、抗血栓劑、補體抑制劑、腎上腺素劑、干擾諸如TNFα或IL-1之促炎細胞激素信號轉導之藥劑(例如IRAK、NIK、IKK、p38或MAP激酶抑制劑)、IL-1β轉化酶抑制劑、TNFα轉化酶抑制劑、T-細胞信號轉導抑制劑(諸如激酶抑制劑)、金屬蛋白酶抑制劑、柳氮磺吡啶、硫唑嘌呤、6-巰基嘌呤、血管收縮素轉化酶抑制劑、可溶性細胞激素受體及其衍生物(例如可溶性p55或p75 TNF受體、sIL-1RI、sIL-1RII、sIL-6R)及抗炎細胞激素(例如IL-4、IL-10、IL-11、IL-13及TGF β)。

可與抗體或抗原結合部分組合使用之克羅恩病治療劑的較佳實例包括以下藥劑：TNF拮抗劑，例如抗-TNF抗體、D2E7(PCT公開案第WO 97/29131號；HUMIRA)、CA2(REMICADE)、CDP 571、TNFR- Ig構造、(p75TNFRIgG(ENBREL)及p55TNFRIgG(LENERCEPT))抑制劑及PDE4抑制劑。本發明之抗體或其抗原結合部分可與例如布替耐德及地塞米松(dexamethasone)之皮質類固醇組合。本發明之抗體或其抗原結合部分亦可與諸如柳氮磺吡啶、5-胺基水楊酸及奧沙拉秦之藥劑，及干擾諸如IL-1之促炎細胞激素合成或作用之藥劑，例如IL-1β轉化酶抑制劑及IL-1ra組合。本發明之抗體或其抗原結合部分亦可與例如酪胺酸激酶抑制劑6-巰基嘌呤之T細胞信號轉導抑制劑一起使用。本發明之抗體或其抗原結合部分可與IL-11組合。本發明之抗體或其抗原結合部分可與以下藥劑組合：美沙拉嗪、潑尼松、硫唑嘌呤、巰基嘌呤、英利昔單抗、甲基潑尼龍琥珀酸鈉、苯乙哌啶(diphenoxylate)/硫酸阿托品(atrop sulfate)、鹽酸洛哌丁胺(loperamide hydrochloride)、甲胺喋呤、奧美拉唑、葉酸鹽、環氧沙星(ciprofloxacin)/右旋糖-水、酸式酒石酸氫可酮/apap、鹽酸四環素、乙酸氟輕鬆(fluocinonide)、甲硝噠唑、硫柳汞(thimerosal)/硼酸、消膽胺/蔗糖、鹽酸環氧沙星、硫酸茛菪素(hyoscyamine sulfate)、鹽酸嘜啶(meperidine hydrochloride)、鹽酸咪達唑侖(midazolam hydrochloride)、鹽酸羥考酮/乙醯胺苯酚、鹽酸普敏太定(promethazine hydrochloride)、磷酸鈉、磺胺甲噁唑(sulfamethoxazole)/三甲氧苄氨嘧啶(trimethoprim)、塞內昔布、聚卡波非(polycarbophil)、萘磺酸右丙氧芬、氫化可的松(hydrocortisone)、維他液(multivitamins)、巴柳氮二鈉、磷酸可待因(codeine phosphate)/apap、鹽酸考來維侖(colesevelam hcl)、氰鈷維生素、葉酸、左氧氟沙星(levofloxacin)、甲基潑尼龍、整合素(natalizumab)及干擾素-γ。

可與本發明抗體或抗體部分組合使用之多發性硬化症治療劑的非限制性實例包括以下藥劑：皮質類固醇、潑尼龍、甲基潑尼龍、硫 唑嘌呤、環磷醯胺、環孢素、甲胺喋呤、4-胺基吡啶、替紮尼定(tizanidine)、干擾素-β 1a(AVONEX；Biogen)、干擾素-β1b(BETASERON；Chiron/Berlex)、干擾素α-n3(Interferon Sciences/Fujimoto)、干擾素-α(Alfa Wassermann/J&J)、干擾素β1A-IF(Serono/Inhale Therapeutics)、聚乙二醇化干擾素α2b(Enzon/Schering-Plough)、共聚物1(Cop-1；COPAXONE；Teva Pharmaceutical Industries,Inc.)、高壓氧、靜脈內免疫球蛋白、克拉比濱(clabribine)，針對其他人類細胞激素或生長因子及其受體之抗體或其拮抗劑，例如TNF、LT、IL-1、IL-2、IL-6、IL-7、IL-8、IL-23、IL-15、IL-16、IL-18、EMAP-II、GM-CSF、FGF及PDGF。本發明之抗體或其抗原結合部分可與針對細胞表面分子，諸如CD2、CD3、CD4、CD8、CD19、CD20、CD25、CD28、CD30、CD40、CD45、CD69、CD80、CD86、CD90或其配位體之抗體組合。本發明之抗體或其抗原結合部分亦可與以下藥劑組合：甲胺喋呤、環孢素、FK506、雷帕黴素、黴酚酸嗎啉乙酯、來氟米特、NSAID(例如布洛芬)、皮質類固醇(諸如潑尼龍)、磷酸二酯酶抑制劑、腺苷促效劑、抗血栓劑、補體抑制劑、腎上腺素劑、干擾諸如TNFα或IL-1之促炎細胞激素信號轉導之藥劑(例如IRAK、NIK、IKK、p38或MAP激酶抑制劑)、IL-1β轉化酶抑制劑、TACE抑制劑、T-細胞信號轉導抑制劑(諸如激酶抑制劑)、金屬蛋白酶抑制劑、柳氮磺吡啶、硫唑嘌呤、6-巰基嘌呤、血管收縮素轉化酶抑制劑、可溶性細胞激素受體及其衍生物(例如可溶性p55或p75 TNF受體、sIL-1RI、sIL-1RII、sIL-6R)及抗炎細胞激素(例如IL-4、IL-10、IL-11、IL-13及TGFβ)。

可與本發明抗體或其抗原結合部分組合使用之多發性硬化症治療劑的較佳實例包括干擾素-β(例如IFNβ1a及IFNβ 1b)、克帕松(copaxone)、皮質類固醇、卡斯蛋白酶(caspase)抑制劑(例如卡斯蛋白 酶-1抑制劑)、IL-1抑制劑、TNF抑制劑及針對CD40配位體及CD80之抗體。

本發明之抗體或其抗原結合部分亦可與以下藥劑組合：諸如阿來組單抗(alemtuzumab)、屈大麻酚(dronabinol)、尤邁(Unimed)、達利珠單抗(daclizumab)、米托蒽醌、鹽酸紮利羅登(xaliproden hydrochloride)、胺吡啶(fampridine)、乙酸格拉替雷(glatiramer acetate)、整合素、辛那比哆(sinnabidol)、a-免疫因子(a-immunokine)NNSO3、ABR-215062、AnergiX.MS、趨化因子受體拮抗劑、BBR-2778、卡拉哌啉(calagualine)、CPI-1189、LEM(脂質體封裝米托蒽醌)、THC.CBD(大麻鹼(cannabinoid)促效劑)MBP-8298、美索普蘭(PDE4抑制劑)、MNA-715、抗-IL-6受體抗體、紐若伐斯(neurovax)、吡非尼酮(pirfenidone)allotrap 1258(RDP-1258)、sTNF-R1、他侖帕奈(talampanel)、特立氟胺(teriflunomide)、TGF-β2、替利莫德(tiplimotide)、VLA-4拮抗劑(例如TR-14035、VLA4 Ultrahaler、Antegran-ELAN/Biogen)、干擾素γ拮抗劑、IL-4促效劑。

可與本發明抗體或抗體部分組合使用之絞痛症治療劑的非限制性實例包括以下藥劑：阿司匹靈、硝化甘油、單硝酸異山梨醇酯、琥珀酸美托洛爾、阿替洛爾(atenolol)、酒石酸美托洛爾、胺氯地平苄磺酸鹽(amlodipine besylate)、鹽酸地爾硫(diltiazem hydrochloride)、二硝酸異山梨醇酯、氯吡格雷硫酸氫鹽(clopidogrel bisulfate)、硝苯地平(nifedipine)、阿托伐他汀(atorvastatin)鈣、氯化鉀、呋塞米(furosemide)、斯伐他汀(simvastatin)、鹽酸維拉帕米、地高辛(digoxin)、鹽酸普萘洛爾、卡維地洛(carvedilol)、賴諾普利(lisinopril)、螺內酯(spironolactone)、氫氯噻嗪(hydrochlorothiazide)、順丁烯二酸依那普利(enalapril maleate)、納多洛爾(nadolol)、雷米普利(ramipril)、依諾肝素(enoxaparin)鈉、肝素 (heparin)鈉、纈沙坦(valsartan)、鹽酸索他洛(sotalol hydrochloride)、非諾貝特(fenofibrate)、依澤替米貝(ezetimibe)、布美他尼(bumetanide)、洛沙坦(losartan)鉀、賴諾普利/氫氯噻嗪、非洛地平(felodipine)、卡托普利(captopril)、反丁烯二酸比索洛爾(bisoprolol fumarate)。

可與本發明之抗體或抗體部分組合之用於強直性脊椎炎之治療劑的非限制性實例包括以下藥劑：布洛芬、雙氯芬酸及米索前列醇、萘普生、美洛昔康、吲哚美辛、雙氯芬酸、塞內昔布、羅非考昔、柳氮磺吡啶、甲胺喋呤、硫唑嘌呤、二甲胺四環素(minocyclin)、潑尼松、依那西普、英利昔單抗。

可與本發明抗體或抗體部分組合使用之哮喘治療劑的非限制性實例包括以下藥劑：沙丁胺醇、沙美特羅(salmeterol)/氟替卡松(fluticasone)、孟魯司特(montelukast)鈉、氟替卡松丙酸酯(fluticasone propionate)、布地奈德(budesonide)、潑尼松、沙美特羅羥萘甲酸鹽(salmeterol xinafoate)、鹽酸左沙丁胺醇(levalbuterol hcl)、硫酸沙丁胺醇/異丙托銨、潑尼龍磷酸鈉、曲安奈德、倍氯米松(beclomethasone)二丙酸酯、溴化異丙托銨、阿奇黴素(azithromycin)、乙酸吡布特羅(pirbuterol acetate)、潑尼龍、無水茶鹼、甲基潑尼龍琥珀酸鈉、克拉黴素(clarithromycin)、紮魯司特(zafirlukast)、反丁烯二酸福莫特羅(formoterol fumarate)、流行性感冒病毒疫苗、甲基潑尼龍、三水合阿莫西林(amoxicillin trihydrate)、氟尼縮松(flunisolide)、過敏症注射劑、色甘酸鈉(cromolyn sodium)、鹽酸非索非那定(fexofenadine)、氟尼縮松/薄荷腦(menthol)、阿莫西林/克拉維酸鹽(clavulanate)、左氧氟沙星、吸入協助設備、哌芬那辛(guaifenesin)、地塞米松磷酸鈉、鹽酸莫喜沙星、鹽酸強力黴素(doxycycline hyclate)、哌芬那辛/右甲嗎喃(d-methorphan)、對麻黃鹼 /cod/氯芬尼(chlorphenir)、加替沙星(gatifloxacin)、鹽酸西替利嗪(cetirizine hydrochloride)、糠酸莫米松(mometasone furoate)、沙美特羅羥萘甲酸鹽、苯佐那酯(benzonatate)、頭孢力新(cephalexin)、pe/氫可酮/氯芬尼、鹽酸西替利嗪/假麻黃素(pseudoephed)、苯腎上腺素(phenylephrine)/cod/普敏太定、可待因/普敏太定、頭孢丙烯(cefprozil)、地塞米松、哌芬那辛/假麻黃鹼、氯芬尼拉明(chlorpheniramine)/氫可酮、奈多羅米鈉、硫酸特布他林、腎上腺素、甲基潑尼龍、硫酸奧西那林(metaproterenol sulfate)。

可與本發明抗體或抗體部分組合使用之COPD治療劑的非限制性實例包括以下藥劑：硫酸沙丁胺醇/異丙托銨、溴化異丙托銨、沙美特羅/氟替卡松、沙丁胺醇、沙美特羅羥萘甲酸鹽、氟替卡松丙酸酯、潑尼松、無水茶鹼、甲基潑尼龍琥珀酸鈉、孟魯司特鈉、布地奈德、反丁烯二酸福莫特羅、曲安奈德、左氧氟沙星、哌芬那辛、阿奇黴素、倍氯米松二丙酸酯、鹽酸左沙丁胺醇、氟尼縮松、頭孢曲松(ceftriaxone)鈉、三水合阿莫西林、加替沙星、紮魯司特、阿莫西林/克拉維酸鹽、氟尼縮松/薄荷腦、氯芬尼拉明/氫可酮、硫酸奧西那林、甲基潑尼龍、糠酸莫米松、對麻黃鹼/cod/氯芬尼、乙酸吡布特羅、對麻黃鹼/洛拉他定(loratadine)、硫酸特布他林、噻托溴銨(tiotropium bromide)、(R,R)-福莫特羅、TgAAT、西洛司特(Cilomilast)、羅氟司特。

可與本發明抗體或抗體部分組合使用之HCV治療劑的非限制性實例包括以下藥劑：干擾素-α-2a、干擾素-α-2b、干擾素-α con1、干擾素-α-n1、聚乙二醇化干擾素-α-2a、聚乙二醇化干擾素-α-2b、病毒唑(ribavirin)、聚乙二醇化干擾素α-2b+病毒唑、熊去氧膽酸(Ursodeoxycholic Acid)、甘草酸(Glycyrrhizic Acid)、胸腺法新(Thymalfasin)、組胺二鹽酸鹽(Maxamine)、VX-497及任何用於經由干 擾以下目標治療HCV之化合物；HCV聚合酶、HCV蛋白酶、HCV解螺旋酶、HCV IRES(內部核糖體進入位點)。

可與本發明抗體或抗體部分組合使用之特發性肺纖維化治療劑的非限制性實例包括以下藥劑：潑尼松、硫唑嘌呤、沙丁胺醇、秋水仙鹼、硫酸沙丁胺醇、地高辛、γ干擾素、甲基潑尼龍sod succ、勞拉西泮(lorazepam)、呋塞米、賴諾普利、硝化甘油、螺內酯、環磷醯胺、溴化異丙托銨、放線菌素d、阿替普酶(alteplase)、氟替卡松丙酸酯、左氧氟沙星、硫酸奧西那林、硫酸嗎啡、鹽酸羥考酮、氯化鉀、曲安奈德、無水他克莫司、鈣、干擾素-α、甲胺喋呤、黴酚酸嗎啉乙酯、干擾素-γ-1β。

可與本發明抗體或抗體部分組合使用之心肌梗塞治療劑的非限制性實例包括以下藥劑：阿司匹靈、硝化甘油、酒石酸美托洛爾、依諾肝素鈉、肝素鈉、氯吡格雷硫酸氫鹽、卡維地洛、阿替洛爾、硫酸嗎啡、美托洛爾琥珀酸鹽、華法林(warfarin)鈉、賴諾普利、異山梨醇酯單硝酸、地高辛、呋塞米、斯伐他汀、雷米普利、替特普酶(tenecteplase)、依那普利順丁烯二酸酯、托西邁(torsemide)、瑞替普酶(retavase)、洛沙坦鉀、鹽酸喹那普利(quinapril hcl)/mag carb、布美他尼、阿替普酶(alteplase)、依那普拉特(enalaprilat)、鹽酸胺碘酮(amiodarone hydrochloride)、間水合鹽酸替羅非班(tirofiban hcl m-hydrate)、鹽酸地爾硫、卡托普利、依貝沙坦(irbesartan)、纈沙坦、鹽酸普萘洛爾、福辛普利(fosinopril)鈉、鹽酸利多卡因、埃替非巴肽(eptifibatide)、頭孢唑啉鈉、硫酸阿托品、胺基己酸、螺內酯、干擾素、鹽酸索他洛、氯化鉀、多庫酯(docusate)鈉、鹽酸多巴酚丁胺(dobutamine hcl)、阿普唑倫(alprazolam)、普伐他汀(pravastatin)鈉、阿托伐他汀鈣、鹽酸咪達唑侖、鹽酸嘜啶、二硝酸異山梨醇酯、腎上腺素、鹽酸多巴胺、比伐盧定(bivalirudin)羅素他汀(rosuvastatin)、依 澤替米貝/斯伐他汀、阿伐麥布(avasimibe)、卡立泊來德(cariporide)。

可與本發明抗體或抗體部分組合使用之牛皮癬治療劑的非限制性實例包括以下藥劑：KDR之小分子抑制劑(ABT-123)、Tie-2之小分子抑制劑、鈣泊三醇(calcipotriene)、氯倍他索(clobetasol)丙酸酯、曲安奈德、烏倍他索(halobetasol)丙酸酯、他佐羅汀(tazarotene)、甲胺喋呤、乙酸氟輕鬆、擴增倍他米松二丙酸酯(betamethasone diprop augmented)、氟輕鬆(fluocinolone acetonide)、阿曲汀(acitretin)、焦油洗髮精(tar shampoo)、倍他米松戊酸酯、糠酸莫米松、酮康唑(ketoconazole)、普莫卡因(pramoxine)/氟輕鬆、氫皮質酮戊酸酯、氟氫縮松(flurandrenolide)、尿素、倍他米松、氯倍他索丙酸酯/潤膚劑、氟替卡松丙酸酯、阿奇黴素、氫皮質酮、滋潤配方(moisturizing formula)、葉酸、地索奈德(desonide)、吡美莫司(pimecrolimus)、煤焦油(coal tar)、二乙酸雙氟拉松(diflorasone)、依那西普葉酸鹽、乳酸、甲氧沙林(methoxsalen)、hc/鹼式水楊酸鉍(bismuth subgal)/znox/resor、乙酸甲基潑尼龍、潑尼松、防曬劑(sunscreen)、哈西奈德(halcinonide)、水楊酸、蒽三酚(anthralin)、氯可托龍(clocortolone)特戊酸酯、煤提取物、煤焦油/水楊酸、煤焦油/水楊酸/硫、去羥米松(desoximetasone)、安定、潤膚劑、乙酸氟輕鬆/潤膚劑、礦物油/蓖麻油/na lact、礦物油/花生油、石油/十四烷酸異丙酯、補骨脂素(psoralen)、水楊酸、肥皂/三溴沙侖(tribromsalan)、硫柳汞/硼酸、塞內昔布、英利昔單抗、環孢素、阿法賽特(alefacept)、依法珠單抗(efalizumab)、他克莫司、吡美莫司、PUVA、UVB、柳氮磺吡啶。

可與本發明抗體或抗體部分組合使用之牛皮癬性關節炎治療劑的非限制性實例包括以下藥劑：甲胺喋呤、依那西普、羅非考昔、塞內昔布、葉酸、柳氮磺吡啶、萘普生、來氟米特、乙酸甲基潑尼龍、 吲哚美辛、硫酸羥基氯奎、潑尼松、舒林酸、擴增倍他米松二丙酸酯、英利昔單抗、甲胺喋呤、葉酸鹽、曲安奈德、雙氯芬酸、二甲亞碸、吡羅昔康、雙氯芬酸鈉、酮洛芬(ketoprofen)、美洛昔康、甲基潑尼龍、萘丁美酮、托美汀(tolmetin)鈉、鈣泊三醇、環孢素、雙氯芬酸鈉/米索前列醇、乙酸氟輕鬆、硫酸葡糖胺、金硫蘋果酸鈉、酸式酒石酸氫可酮/apap、布洛芬、利塞膦酸鈉(risedronate)、磺胺嘧啶、硫鳥嘌呤(thioguanine)、伐地昔布、阿法賽特、依法珠單抗。

可與本發明抗體或抗體部分組合使用之再狹窄(Restenosis)治療劑的非限制性實例包括以下藥劑：西羅莫司、紫杉醇(paclitaxel)、依維莫司(everolimus)、他克莫司、ABT-578、乙醯胺苯酚。

可與本發明抗體或抗體部分組合使用之坐骨神經痛(Sciatica)治療劑的非限制性實例包括以下藥劑：酸式酒石酸氫可酮/apap、羅非考昔、鹽酸環苯紮平(cyclobenzaprine hcl)、甲基潑尼龍、萘普生、布洛芬、鹽酸羥考酮/乙醯胺苯酚、塞內昔布、伐地昔布、乙酸甲基潑尼龍、潑尼松、磷酸可待因/apap、鹽酸曲馬多/乙醯胺苯酚、美他沙酮(metaxalone)、美洛昔康、美索巴莫(methocarbamol)、鹽酸利多卡因、雙氯芬酸鈉、加巴噴丁(gabapentin)、地塞米松、肌安寧(carisoprodol)、酮絡酸緩血酸胺(ketorolac tromethamine)、吲哚美辛、乙醯胺苯酚、安定、萘丁美酮、鹽酸羥考酮、鹽酸替紮尼定、雙氯芬酸鈉/米索前列醇、萘磺酸右丙氧芬/apap、asa/oxycod/對苯二甲酸羥考酮、布洛芬/酸式酒石酸氫可酮、鹽酸曲馬多、依託度酸、鹽酸右丙氧芬、鹽酸阿米曲替林、肌安寧/磷酸可待因/asa、硫酸嗎啡、維他液、萘普生鈉、檸檬酸鄰甲苯海明(orphenadrine citrate)、替馬西泮(temazepam)。

可與抗體或抗原結合部分組合使用之SLE(狼瘡)之治療劑的較佳實例包括以下藥劑：NSAIDS，例如雙氯芬酸、萘普生、布洛芬、吡 羅昔康、吲哚美辛；COX2抑制劑，例如塞內昔布、羅非考昔、伐地昔布；抗瘧疾藥，例如羥基氯奎；類固醇，例如潑尼松、潑尼龍、布替耐德、地塞米松；細胞毒性劑，例如硫唑嘌呤、環磷醯胺、黴酚酸嗎啉乙酯、甲胺喋呤；PDE4抑制劑或嘌呤合成抑制劑，例如驍悉(Cellcept)。本發明之抗體或其抗原結合部分亦可與諸如柳氮磺吡啶、5-胺基水楊酸、奧沙拉秦、依木蘭(Imuran)之藥劑及干擾諸如IL-1之促炎細胞激素合成、產生或作用之藥劑，例如像IL-1β轉化酶抑制劑及IL-1ra之類的卡斯蛋白酶抑制劑組合。本發明之抗體或其抗原結合部分亦可與例如酪胺酸激酶抑制劑之T細胞信號轉導抑制劑，或以T細胞活化分子為目標之分子，例如CTLA-4-IgG或抗-B7家族抗體、抗-PD-1家族抗體一起使用。本發明之抗體或其抗原結合部分可與IL-11或例如弗諾妥立茲單抗(fonotolizumab)(抗-IFNg抗體)之抗-細胞激素抗體或例如抗-IL-6受體抗體及抗B細胞表面分子之抗體的抗-受體抗體組合。本發明之抗體或其抗原結合部分亦可與LJP 394(阿貝莫司(abetimus))、例如利妥昔單抗(抗-CD20抗體)、貝裏單抗(lymphostat-B)(抗-BlyS抗體)之使B細胞耗盡或失活的藥劑，例如抗-TNF抗體、D2E7(PCT公開案第WO 97/29131號；HUMIRA)、CA2(REMICADE)、CDP 571、TNFR-Ig構造、(p75TNFRIgG(ENBREL)及p55TNFRIgG(LENERCEPT))之TNF拮抗劑一起使用。

本發明之醫藥組合物可包括"治療有效量"或"預防有效量"之本發明抗體或抗體部分。"治療有效量"係指為達成所要治療效果所需的劑量及時期之有效量。抗體或抗體部分之治療有效量可由熟習此項技術者確定且可根據諸如個體疾病狀態、年齡、性別及重量以及抗體或抗體部分在個體中引發所要反應之能力等因素而改變。治療有效量亦為抗體或抗體部分之治療有益效果超過其任何毒性或有害作用之量。"預防有效量"係指為達成所要預防效果所需的劑量及時期之有效量。 一般而言，由於預防性劑量係在疾病之前或早期用於受檢者，因此預防有效量降低於治療有效量。

亦可對給藥方案進行調節以提供最佳所要反應(例如治療或預防反應)。舉例而言，可投予單次劑量，可經一段時間投予若干分劑量或可根據治療狀況的緊要按比例降低或增加劑量。尤其有利的為調配單位劑型之非經腸組合物以便於投藥及達成劑量均一性。如本文所使用之單位劑型係指適用於待治療哺乳動物受檢者單一劑量之實體上離散的單元，各單元含有與所需醫藥載劑結合的經計算用以產生所要治療效果之預定量活性化合物。本發明之單位劑型之規格標準由(a)活性化合物之獨特特徵及待達成之特定治療或預防效果，及(b)此項技術中對於混配用於治療個體敏感性之該活性化合物的固有限制來決定，且直接取決於以上因素。

舉例而言，本發明之抗體或抗體部分之治療或預防有效量之非限制性範圍為0.1-20mg/kg，更佳為1-10mg/kg。應注意劑量值可隨待改善病況之類型及嚴重度而改變。另外應瞭解對於任何特定受檢者而言，應根據個體需要及投予或監督投予組合物之人的職業判斷隨時間調整特定給藥方案，且本文提出的劑量範圍僅為例示性的且並不意欲限制所主張組合物之範疇或實踐。

對於熟習此項技術者而言本文所述的本發明之方法的其他適當修改及改動為顯而易見的且可使用適當等價物在不脫離本發明或本文所揭示實施例之範疇的狀況下作出。現已詳細描述本發明，參考以下實例將更清晰的理解其，該等實例僅係出於說明目的且並不意欲限制本發明。

實例 實例1：抗人類IL-12單株抗體之產生及分離 實例1.1：識別抗人類IL-12抗體之檢定

除非另外指出，否則在整個實例1中使用以下檢定識別及表徵抗人類IL-12抗體。

實例1.1.A：ELISA

如下執行用於篩選結合人類IL-12之抗體之酶聯免疫吸附檢定。

實例1.1.A.1：偵測抗人類IL-12抗體與IL-12 p70之結合之ELISA

將ELISA盤(Corning Costar,Acton,MA)於攝氏4度以50μL/孔之磷酸鹽緩衝鹽水(PBS)中之5μg/ml山羊抗小鼠IgG Fc特異性抗體(Pierce # 31170,Rockford,IL.)塗佈隔夜。將盤以含0.05% Tween-20之PBS洗滌一次。於室溫下藉由以200μL/孔添加在PBS中稀釋至2%的阻斷溶液(BioRad #170-6404,Hercules,CA.)將盤阻斷1小時。阻斷後將盤以含0.05% Tween-20之PBS洗滌一次。

以每孔50微升將稀釋於含0.1%牛血清白蛋白(BSA)(Sigma,St.Louis,MO.)之PBS中之小鼠血清或融合瘤上清液添加至如上製備的ELISA盤中且於室溫培育1小時。將孔以含0.05% Tween-20之PBS洗滌3次。將50微升在含0.1% BSA之PBS中稀釋至100ng/mL之生物素標記重組純化人類IL-12 p70添加至每孔且於室溫培育1小時。將盤以含0.05% Tween-20之PBS洗滌3次。將抗生蛋白鏈菌素HRP(Pierce # 21126,Rockland,IL)在含0.1% BSA之PBS中稀釋至1：20000稀釋，添加50μL/孔且盤於室溫培育1小時。將盤以含0.05% Tween-20之PBS洗滌3次。將50微升TMB溶液(Sigma # T0440,St.Louis,MO.)添加至每孔且於室溫培育10分鐘。藉由添加1N硫酸終止反應。將盤於450nm波長使用分光光度計讀數。

實例1.1.A.2：評估IL-12 p70或IL-12 p40與抗人類IL-12抗體競爭結合至IL-12 p70之能力之ELLISA

將ELISA盤於攝氏4度以50μL/孔之PBS中之5μg/ml山羊抗小鼠IgG Fc特異性抗體(Pierce # 31170,Rockford,IL.)塗佈隔夜。將盤以PBS+ 0.05% Tween-20洗滌一次。在室溫下藉由添加PBS+10%奶粉將盤阻斷1小時。阻斷後將盤以PBS+0.05% Tween-20洗滌3次。

實例1.1.A2(a)：IL-12 p70競爭ELISA實驗程序

視預期抗體力價而定將小鼠血清或融合瘤上清液稀釋於含0.1% BSA(Sigma,St.Louis,MO.)之PBS中。將生物素標記重組純化人類IL-12 p70製備為含0.1% BSA之PBS中0.1μg/ml之3倍濃度(3×)儲備液。在含0.1% BSA之PBS中以0.1至10μg/ml範圍內之各種濃度製備重組純化人類IL-12 p70。混合等體積(75μL)的以下各溶液：經稀釋小鼠血清或融合瘤上清液，生物素標記重組純化人類IL-12 p70及重組純化人類IL-12 p70。將50微升此混合物添加至上述經塗佈之ELISA盤中且於室溫培育1小時。將孔以含0.05% Tween-20之PBS洗滌3次。將抗生蛋白鏈菌素HRP(Pierce # 21126,Rockland,IL)在含0.1% BSA之PBS中稀釋至1：20000，添加50μL/孔且將盤於室溫培育1小時。將盤以含0.05% Tween-20之PBS洗滌3次。將50微升TMB溶液(Sigma # T0440,St.Louis,MO.)添加至每孔且於室溫培育10分鐘。藉由添加1N硫酸終止反應。將盤於450nm波長使用分光光度計讀數。

實例1.1.A2(b)：IL-12 p40競爭ELISA實驗程序

視預期抗體力價而定將小鼠血清或融合瘤上清液稀釋於含0.1% BSA(Sigma,St.Louis,MO.)之PBS中。將生物素標記重組純化人類IL-12 p70製備為含0.1% BSA之PBS中0.1μg/ml之3倍濃度(3×)儲備液。在含0.1% BSA之PBS中以0.1至10μg/ml範圍內之各種濃度製備重組純化人類IL-12 p40。混合等體積(75μL)的以下各溶液：經稀釋小鼠血清或融合瘤上清液，生物素標記重組純化人類IL-12 p70及重組純化人類IL-12 p40。將50微升此混合物添加至經塗佈之ELISA盤中且於室溫培育1小時。將孔以含0.05% Tween-20之PBS洗滌3次。將抗生蛋白鏈菌素HRP(Pierce # 21126,Rockland,IL)在含0.1% BSA之PBS中稀釋至1： 20000，添加50μL/孔且將盤於室溫培育1小時。將盤以含0.05% Tween-20之PBS洗滌3次。將50微升TMB溶液(Sigma # T0440,St.Louis,MO.)添加至每孔且於室溫培育10分鐘。藉由添加1N硫酸終止反應。將盤於450nm波長使用分光光度計讀數。

實例1.1.B：使用BIACORE技術之親和力測定

BIACORE檢定(Biacore,Inc,Piscataway,NJ)根據結合、解離速率常數之動力學量測結果測定抗體親和力。於25℃以Biacore® 3000儀器(Biacore® AB,Uppsala,Sweden)使用電泳HBS-EP(10mM HEPES[pH 7.4]，150mM NaCl，3mM EDTA及0.005%界面活性劑P20)根據基於表面電漿共振的量測結果測定抗體與重組純化人類IL-12 p70或重組純化人類IL-12 p40之結合。所有化學物質均獲自Biacore® AB(Uppsala，Sweden)或另外獲得自本文中所描述的不同來源。將稀釋於10mM乙酸鈉(pH 4.5)中之約5000 RU山羊抗小鼠IgG(Fcγ)片段特異性多株抗體(Pierce Biotechnology Inc,Rockford,IL)使用標準胺偶合套組根據製造商的說明及程序以25μg/ml直接跨越CM5研究級生物感應器晶片固定。將生物感應器表面上未經反應的部分以乙醇胺阻斷。使用流槽2及4中之經改質羧甲基葡聚糖表面作為反應表面。使用流槽1及3中無山羊抗小鼠IgG的未經改質羧甲基葡聚糖作為參考表面。對於動力學分析而言，使用Biaevaluation 4.0.1軟體，將源於1：1 Langmuir結合模型之速率方程同時擬合所有8次注射之結合及解離相(使用全擬合(global fit)分析)。將經純化抗體稀釋於HEPES-緩衝鹽水中用於沿山羊抗小鼠IgG特異性反應表面捕捉。將待捕捉小鼠抗體作為配位體(25μg/ml)以5μl/min之速率注射於反應基質上。於25μl/min之連續流率下測定結合及解離速率常數k_on(單位M^-1s^-1)及k_off(單位s^-1)。速率常數藉由以10-200nM範圍內10種不同的抗原濃度進行動力學結合量測而獲得。接著藉由下式自動力學速率常數計算小鼠抗體與 重組純化人類IL-12 p70或重組純化人類IL-12 p40間反應的平衡解離常數(單位M)：K_D' =k_off/k_on。記錄作為時間函數之結合且算得動力學速率常數。在此檢定中，可測得結合速率快達10⁶M^-1s^-1且解離速率慢至10^-6s^-1。

實例1.1.C：抗人類IL-12抗體之功能活性

為檢測本發明之抗人類IL-12抗體之功能活性，在用於量測抗體抑制IL-12活性能力之以下檢定中使用該等抗體。

實例1.1.C.1：人類PHA活化之淋巴母細胞之製備

如Immunology,Unit 7.1之Current Protocols中所述，藉由於1500rpm進行Ficoll-Hypaque梯度離心45分鐘而自由健康供體收集之白血球濃縮物分離人類周邊血液單核細胞(PBMC)。收集血液水溶液與淋巴細胞分離介質之界面處的PBMC且將其以磷酸緩衝鹽水(PBS)藉由於1500rpm離心15分鐘而洗滌3次以移除Ficoll-Paque顆粒。

如Immunology,Unit 6.16之Current Protocols中所述，接著活化PBMC形成淋巴母細胞。將經洗滌PBMC以0.5-1×10⁶個細胞/mL再懸浮於補充0.01mg/mL PHA-P(Sigma #L8754,St.Louis,MO)之RPMI完全培養基中(RPMI 1640培養基、10%胎牛血清(FBS)、100U/ml盤尼西林(penicillin)、100tg/ml鏈菌素中且在CO₂氣氛中於37℃培養4日。四日後，接著將細胞培養物再次以1×10⁶個細胞/mL接種於具有0.01mg/mL PHA-P及50U/mL重組人類IL-2(R&D Systems #202-IL,Minneapolis,MN.)之培養基中。將細胞於37℃培育24小時，以RPMI完全培養基洗滌，接著以1×10⁷個細胞/ml冷凍於95% FBS、5% DMSO中。

實例1.1.C.2：PHA母細胞IFN-γ誘導檢定：人類IL-12活性之抑制

抗-人類IL-12抗體抑制人類IL-12誘導的PHA母細胞產生IFN-γ之能力如下分析。將各種濃度的經免疫小鼠血清、鼠科融合瘤上清液或經純化抗-人類IL-12抗體於攝氏37度與400pg/ml重組純化人類IL-12 p70一起在微量滴定盤(U-底，96-孔，Costar)中之100μL RPMI完全培養基中預培育一小時。將如上所述分離的PHA母細胞洗滌一次且再懸浮於RPMI完全培養基中至1×10⁷個細胞/ml之細胞密度。將PHA母細胞(100μL，1×10⁶個細胞/ml)添加至抗體與重組純化人類IL-12 p70之混合物中(IL-12 p70最終濃度為200pg/ml)且於攝氏37度培育18小時。培育後，自每孔取出150μL無細胞上清液且使用人類IFN-γ ELISA(R&D Systems Cat#DIF50)量測所產生的人類IFN-γ之含量。

實例1.1.C.3：PHA母細胞IFN-γ誘導檢定：石蟹獼猴(cynomolgus monkey)(cyno)IL-12活性之抑制

抗-人類IL-12抗體抑制石蟹獼猴IL-12誘導的PHA母細胞產生IFN-γ之能力如下分析。將各種濃度的經免疫小鼠血清、鼠科融合瘤上清液或經純化抗-人類IL-12抗體於攝氏37度與150pg/ml重組純化cyno IL-12 p70在微量滴定盤(U-底，96-孔，Costar)中之100μL RPMI完全培養基中預培育一小時。將如上所述分離的PHA母細胞洗滌一次且再懸浮於RPMI完全培養基中至1×10⁷個細胞/ml之細胞密度。將PHA母細胞(100μL，1×10⁷個細胞/ml)添加至抗體與重組純化cyno IL-12 p70之混合物中(cyno IL-12 p70最終濃度為75μg/ml)且於攝氏37度培育18小時。培育後，自每孔取出150μL無細胞上清液且使用人類IFN-γ ELISA(R&D Systems Cat#DIF50)量測所產生的人類IFN-γ之含量。

實例1.2：抗人類IL-12單株抗體之產生

抗人類IL-12小鼠單株抗體如下獲得：

實例1.2.A：以人類IL-12抗原免疫小鼠

將20微克與完全弗氏佐劑(Rockland Immunochemicals,Gilbertsville,PA)混合之重組純化人類IL-12 p70於第1日皮下注射至5隻6-8週齡Balb/C及5隻AJ小鼠體內。第24、38及49日，將20微克與Immunoeasy佐劑(Qiagen,Valencia,CA)混合之重組純化人類IL-12 p70 皮下注射至相同的5隻Balb/C及5隻AJ小鼠體內。第84或第112或第144日，將10μg重組純化人類IL-12 p70或2μg重組純化人類IL-12 p40(R & D Systems,Minneapolis,MN)皮下注射至小鼠體內。

實例1.2.B：融合瘤之產生

根據Kohler,G.及Milstein 1975,Nature,256：495中所描述已確立的方法使自實例1.2.A中所述之經免疫小鼠獲得的脾細胞與SP2/O-Ag-14細胞以5：1之比率融合以產生融合瘤。將融合產物以每孔2.5×10⁶個脾細胞之密度塗佈於96孔盤中含偶氮絲胺酸及次黃嘌呤之選擇培養基中。融合後7至10，觀察到肉眼可見的融合瘤集落。藉由ELISA測試來自各孔含融合瘤集落之上清液中抗IL-12 p70抗體之存在(如實例1.1.A.1中所描述)。接著藉由IL-12 p70或IL-12 p40競爭ELISA測試對結合IL-12 p70測試呈陽性的上清液以確定其是否具有p40-特異性(如實例1.1.A.2中所描述)。接著測試展示IL-12 p40-特異活性之上清液在IFN-γ之PHA母細胞檢定中中和IL-12之能力(如實例1.1.C中所描述)。

實例1.2.C：抗人類IL-12p40單株抗體之識別及表徵

將根據實例1.2.B及1.2.C產生且能夠特異性結合IL-12 p40的產生結合IL-12之抗體的融合瘤且尤其是在PHA母細胞檢定中IC₅₀值為12nM或小於12nM之融合瘤按比例擴增加且藉由限制稀釋選殖。

使融合瘤細胞擴增至含10%低IgG胎牛血清(Hyclone #SH30151,Logan,UT.)之培養基中。平均收穫250ml各融合瘤上清液(源自純系群)，將其濃縮且藉由蛋白A親和層析純化，如Harlow,E.及Lane,D.1988 "Antibodies：A Laboratory Manual"中所描述。純化mAb抑制IL-12活性之能力使用如實例1.1.C.2及1.1.C.3中所描述之PHA母細胞檢定來測定。表9顯示來自10種單株抗體之PHA母細胞檢定的IC₅₀值。

該等單株抗體對重組純化人類IL-12 p70之結合親和力使用如實例1.1.B中所述之表面電漿共振(Biacore®)量測法來測定。表10顯示上文所述之10種單株抗體對人類IL-12 p70之親和力。

實例1.2.C.1：鼠科單株抗-人類IL-12p40抗體之種屬特異性

為確定上文所述之10種單株抗體是否識別鼠科IL-12，建立兩個ELISA。首先，藉由直接以5μg/ml重組純化小鼠IL-12(Peprotech)塗佈ELISA盤而建立直接ELISA。在含0.1% BSA(Sigma,St.Louis,MO)之PBS中以3至200ng/m範圍內之各種濃度製備鼠科-抗-人類IL-12 p40 mAb。將50μl各抗體稀釋液添加至經塗佈之ELISA盤中且於室溫培育1小時。將孔以含0.05% Tween-20之PBS洗滌3次。將抗-小鼠IgG-HRP抗體(R&D #HAF007,Minneapolis,MN)在含0.1% BSA之PBS中稀釋至1：2000，添加50μl/孔且將盤於室溫培育1小時。將50微升TMB溶液(Sigma # T0440,St.Louis,MO.)添加至每孔且於室溫培育10分鐘。藉由添加2N硫酸終止反應。將盤於450nm波長使用分光光度計讀數。

其次，藉由以5μg/ml山羊抗小鼠IgG，Fc片段特異性抗體(Pierce # 31170,Rockland,IL)塗佈ELISA盤而建立間接ELISA。在含0.1% BSA之PBS中以0.1至100ng/ml範圍內之各種濃度製備鼠科抗-人類IL-12 p40 mAb，將50μl各抗體稀釋液添加至經塗佈之ELISA盤中且於室 溫培育1小時。將孔以含0.05% Tween-20之PBS洗滌3次。將重組純化小鼠IL-12(Preprotech)以0.2μg/ml稀釋於含0.1% BSA之PBS中，添加50μl/孔且將盤於室溫培育1小時。將孔以含0.05% Tween-20之PBS洗滌3次。將生物素標記抗-小鼠IL-12抗體(R&D # BAF419)以0.2μg/ml稀釋於含0.1% BSA之PBS中，添加50μl/孔且將盤於室溫培育1小時。將孔以含0.05% Tween-20之PBS洗滌3次。將抗生蛋白鏈菌素HRP(Pierce # 21126,Rockland,IL)在含0.1% BSA之PBS中稀釋至1：20000，添加50μL/孔且將盤於室溫培育1小時。將盤以含0.05% Tween-20之PBS洗滌3次。將50微升TMB溶液添加至每孔且於室溫培育10分鐘。藉由添加2N硫酸終止反應。將盤於450nm波長使用分光光度計讀數。來自以該等10種單株抗體執行之直接及間接ELISA的結果顯示於表11中。

實例1.2.D：各鼠科抗-人類IL-12 p40 mAb可變區胺基酸序列之測定

對於各胺基酸序列測定而言，離心分離約10×10⁶個融合瘤細胞且將其使用Trizol(Gibco BRL/Invitrogen,Carlsbad,CA.)按照製造商說明 處理以分離總RNA。使用SuperScript第一鏈合成系統(Invitrogen,Carlsbad,CA)按照製造商說明使總RNA經歷第一鏈DNA合成。使用寡(dT)引發第一鏈合成以選擇聚(A)⁺RNA。接著將第一鏈cDNA產物以針對鼠科免疫球蛋白可變區擴增設計之引子藉由PCR(Ig-引子組，Novagen,Madison,WI)擴增。將PCR產物經瓊脂糖凝膠解析，切離及純化且接著以TOPO選殖套組次選殖至pCR2.1-TOPO載體(Invitrogen,Carlsbad,CA)中且轉化至TOP10化學感受態大腸桿菌(Invitrogen,Carlsbad,CA)中。對轉化體執行集落PCR以識別含有插入物的純系。使用QIAprep Miniprep套組(Qiagen,Valencia,CA)自含有插入物的純系分離質體DNA。使用M13正向引子及M13反向引子(Fermentas Life Sciences,Hanover MD)在兩條鏈上對質體中之插入物測序以測定可變重鏈或可變輕鏈之DNA序列。實例1.2.C中描述的10種單株抗體之可變重鏈及可變輕鏈序列描述於表1中。

實例2：重組抗人類IL-12p40抗體 實例2.1：重組嵌合抗人類IL-12p40抗體之構造及表現

將編碼鼠科抗-人類IL-12p40單株抗體3G7、8E1、1A6及1D4重鏈恆定區之DNA藉由在細菌中同源重組以編碼含有2處鉸鏈區胺基酸突變之人類IgG1恆定區之cDNA片段置換。此等突變為位置234(EU編號)處的白胺酸至丙胺酸改變及位置235處的白胺酸至丙胺酸改變(Lund等人，1991,J.Immunol.,147：2657)。將各此等抗體之輕鏈恆定區以人類κ鏈恆定區置換。使全長嵌合抗體藉由接合至pBOS表現質體之嵌合重鏈及輕鏈cDNA的共轉染而短暫表現於COS細胞中(Mizushima及Nagata,Nucleic Acids Research 1990，第18卷，pg 5322)，該等cDNA包含重鏈信號序列MEFGLSWLFLVAILKGVQC(SEQ ID NO.110)及輕鏈信號序列MDMRVPAQLLGLLLLWFPGSRC(SEQ ID NO.111)。

將含有重組嵌合抗體之細胞上清液藉由蛋白A Sepharose層析純 化且藉由添加酸緩衝液溶離結合抗體。將抗體中和且透析至PBS中。

將編碼嵌合3G7之重鏈cDNA(如上描述)與1D4嵌合輕鏈cDNA(兩者均接合至pBOS載體中)一起共轉染至COS細胞中。將含有重組嵌合抗體之細胞上清液藉由蛋白A Sepharose層析純化且藉由添加酸緩衝液溶離結合抗體。將抗體經中和且透析至PBS中。

接著如實例1.1.C.2及1.1.C.3中所述測試純化嵌合抗-人類IL-12單株抗體之抑制IL-12誘導的PHA母細胞產生IFN-γ之能力。表12顯示來自5種嵌合抗體之PHA母細胞檢定的IC₅₀值。

實例2.2：CDR移植抗人類IL-12p40抗體之構造及表現

CDR-移植抗-人類IL-12抗體如下產生。

實例2.2.1：人類抗體構架之選擇

將各鼠科可變重鏈及可變輕鏈基因序列(如表3中所述)分別使用Vector NTI軟體與44人類免疫球蛋白生殖系可變重鏈或46生殖系可變輕鏈序列(來源於NCBI Ig Blast網站http：//www.ncbi.nlm.nih.gov/igblast/retrieveig.html.)比對。對於各重鏈及輕鏈序列選擇與原始鼠科序列具有最高總體同源性(以及在已知對於抗原結合重要的位置具有最高同源性)之人類可變域序列(Welschof,M.及Krauss,J.Methods In Molecular Biology，第207卷)以提供用於CDR-移植目的之構架(FW)1、2及3序列。藉由將各鼠科重鏈及輕鏈 FW4區分別與NCBI資料庫中之6人類免疫球蛋白生殖系連接重鏈及5生殖系連接輕鏈序列比對而達成對適當人類可變重鏈及輕鏈FW4區(亦稱為"連接"區)之識別。完全CDR移植抗體之電腦模擬(In silico)構造藉由以各3'端添加FW4區(來源於NCBI網站)之鼠科CDR序列(來源於融合瘤)取代人類可變域CDR序列(來源於NCBI網站)而達成。

實例2.2.2：CDR移植抗體之構造

將上文所述之電腦模擬構造的CDR移植抗體使用寡核苷酸重新(de novo)構造。對於各可變區cDNA而言，設計6個每個60-80核苷酸之寡核苷酸以使其於各寡核苷酸的5'及/或3'端彼此重疊20個核苷酸。在黏接反應中，使所有6個寡核苷酸在dNTP存在下組合、煮沸且黏接。接著添加DNA聚合酶I，大片段(Klenow)(New England Biolabs #M0210,Beverley,MA.)以填充重疊寡核苷酸之間的約40bp空隙。接著使用兩個含有與經修飾pBOS載體中多選殖位點互補之外伸序列(overhanging sequence)的最外側引子執行PCR以擴增全部可變區基因(Mizushima,S.及Nagata,S.,(1990)Nucleic acids Research第18卷，No.17)。

將來源於各cDNA組裝之PCR產物於瓊脂糖凝膠上分離且切離並純化對應於經預測可變區cDNA尺寸的帶。將可變區重鏈藉由在細菌內同源重組而在讀框內插入編碼含有2處鉸鏈區胺基酸突變之人類IgG1恆定區的cDNA片段(SEQ ID NO.3)內。此等突變為位置234(EU編號)處的白胺酸至丙胺酸改變及於位置235處的白胺酸至丙胺酸改變(Lund等人，1991,J.Immunol.,147：2657)。將可變區輕鏈與人類κ恆定區(SEQ ID NO.4)一起藉由同源重組在讀框內插入。分離細菌集落且提取質體DNA，對cDNA插入物整體測序。將對應於抗體之正確CDR移植重鏈及輕鏈共轉染至COS細胞中以短暫產生全長CDR移植抗-人類IL-12抗體。對於1A6而言，將含有1A6重鏈移植cDNA及1D4輕 鏈移植cDNA之pBOS載體共轉染至COS細胞中(移植時1A6輕鏈序列與1D4輕鏈序列相同)。將含有重組嵌合抗體之細胞上清液藉由蛋白A Sepharose層析純化且藉由添加酸緩衝液溶離結合抗體。將抗體中和且透析至PBS中。表5中描述了9種CDR移植抗體。

純化CDR移植抗體抑制IL-12活性之能力使用如實例1.1.C.2及1.1.C.3中所述之PHA母細胞檢定來測定。純化CDR移植抗體對重組純化人類IL-12p70之結合親和力使用如實例1.1.B中所述之表面電漿共振(Biacore®)量測法來測定。表13顯示對於人類IL-12p70及石蟹獼猴IL-12p70表7描述的9種CDR移植抗體之PHA母細胞檢定IC₅₀值及親和力。

實例2.3：人化抗人類IL-12抗體之構造

對抗人類IL-12抗體如下進行人化。

實例2.3.1：使用CDR-移植抗體之同源建模

使用同源建模識別對於預測為對抗體結合位點(CDR)結構關鍵之鼠科抗體序列而言獨特的殘基。

同源建模方法為一種藉以為蛋白質產生近似三維座標之計算方法。最初座標之來源及其進一步改進之指導為第二蛋白(即參考蛋白)，其三維座標為已知的且其序列與第一蛋白之序列相關。使用兩種蛋白序列之間的關係在參考蛋白與需要座標之蛋白(即目標蛋白)之間產生相應性。對參考及目標蛋白之一級序列進行比對，其中將兩種蛋白相同部分之座標直接自參考蛋白轉移至目標蛋白。例如來自殘基突變、插入或刪除的兩種蛋白質失配部分之座標根據通用結構模板建構且經能量改進以確保與已轉移模型座標一致。此計算蛋白結構可經進一步改良或直接用於建模研究中。自此說明應清楚模型結構之品質係由參考蛋白與目標蛋白相關之競爭精確度及序列比對建構的準確度決定。

對於鼠科序列1A6、8E1及1D4而言，使用BLAST搜尋及目視檢查之組合識別適當的參考結構。對於1A6及1D4選定的參考結構為PDB進入1JRH。對於8E1而言，重鏈參考結構為PDB進入1FL3且輕鏈參考為1MEX。將參考與目標胺基酸序列之間25%的序列相似度視為嘗試同源建模實踐之最低需要。人工建構序列比對且以Jackal程式產生模型座標(參見Petrey,D.,Xiang,Z.,Tang,C.L.,Xie,L.,Gimpelev,M.,Mitros,T.,Soto,C.S.,Goldsmith-Fischman,S.,Kernytsky,A.,Schlessinger,A.等人2003.Using multiple structure alignments,fast model building,and energetic analysis in fold recognition and homology modeling.Proteins 53(增補6)：430-435)。

所選抗體之鼠科及人類構架區之一級序列具有顯著的相似度。不同的殘基位置為在人化序列中包括鼠科殘基以保留所觀察的鼠科抗體結合效能之候選。人工建構人類與鼠科序列之間不同的構架殘基之清單。

既定構架殘基將影響抗體結合性質之可能性視與CDR殘基之接近度而定。因此，使用模型結構將鼠科與人類序列之間不同的殘基根據其與CDR中任何原子之距離分級。任何CDR原子4.5Å範圍內之彼等殘基經識別為最重要的且推薦為在人化抗體中保持鼠科殘基之候選(意即回復突變)。

對電腦模型之檢查指示在抗體1A6.1中，輕鏈(1D4.1 VKB3)殘基L1、L2、L36及L67與CDR具有顯著接觸且因此指示於此等位置應保留鼠科殘基。在1D4.1之狀況下，重鏈(1D4.1 VH2-70)殘基H1及H98以及輕鏈(1D4.1 VKB3)L2及L67經識別為回復突變位置。

實例2.3.2：雜交抗體之產生

為確定哪條CDR-移植鏈(VH、VL或兩者)可自構架回復突變獲益，藉由使CDR-移植H或L鏈與適當嵌合鼠科H或L鏈配對接著共轉染至COS細胞中來構造"雜交"抗體。表14顯示雜交抗體1A6.3、1A6.4、1A6.7、1A6.8、1D4.4及1D4.5之VH及VL胺基酸序列。

將雜交抗體藉由蛋白A親和層析純化(實例1.2.C)且如實例1.1.C.2及1.1.C.3測試其於PHA母細胞檢定中之效能。如實例1.1.B使用BIAcore測定動力學量測結果。表15顯示雜交抗體之K_D及IC₅₀值。將來源於雜交mAb之效能及親和力資料與以適當CDR-移植mAb(實例2.3.1)產生的資料相比較以識別由特定VH或VL鏈所引起的效能及親和力之改變。使用實例2.3.1中描述的方法評估人化VH或VL鏈是否為最佳鏈。在一些實施例中，不在任何CDR原子4.5Å範圍內之殘基為回復突變之額外目標。

表15：抗-IL-12p40雜交抗體對IL-12之中和及抗-IL-12p40雜交抗體之親和力

實例2.3.3：CDR-移植抗體中構架回復突變之構造

為產生人化抗體，使用誘變引子及QuikChange多位點定點突變套組(Stratagene #200513,La Jolla,CA)按照製造商說明將構架回復突變引入CDR-移植抗體中。對於各CDR-移植構造回復突變之不同組合以識別各殘基之相對重要性。1A6.1輕鏈VKB3變體1(L1-D→S、L2-I→V、L36-Y→F、L67-S→Y)，1D4.1 VKB3變體2(L1-D→S、L36-Y→F、L67-S→Y)，1D4.1 VKB3變體3(L1-D→S、L67-S→Y)，1D4.1 VKB3變體4(L2-I→V、L67-S→Y)及1D4.1 VKB3變體5(L67-S→Y)。1D4.1重鏈VH2-70變體1(H1-E→Q、H93-A→T)及1D4.1 VH2-70變體2(H93-A→T)。接著將突變單鏈DNA轉化至XL10-Gold超感受態細胞中。對轉化體執行集落測序以識別帶有所要突變之純系。使用Qiagen Maxiprep套組(Qiagen,Valencia,CA)自陽性純系分離質體DNA且對可變區及恆定區整體測序。

如上所述，對於各CDR移植抗體構造回復突變之數種額外組合。如下文實例2.3.4中所揭示對如上所述產生之人化抗體進行表徵。

實例2.3.4：人化抗體之表現及表徵

將攜帶含構架回復突變之重鏈及輕鏈的PBOS表現載體(參見實例2.1及2.2.2)轉染至COS細胞中以短暫產生全長人化抗體。人化抗體VH及VL區之胺基酸序列揭示於表16中。

CDR-移植抗體之VH及VL中回復突變的胺基酸位置列於表17中。

將含有人化抗體之細胞上清液如實例1.2.C中所述純化。純化人化抗體活體外中和IL-12之能力如實例1.1.C.2及1.1.C.3中所描述使用PHA母細胞檢定來測定。純化抗體對重組純化人類IL-12p70之結合親和力如實例1.1.B中所述使用BIAcore來測定。表18顯示來自PHA母細胞檢定之IC₅₀值及來自BIAcore之K_D。

實例2.4：額外人化抗人類IL-12抗體之產生

鼠科單株抗體8E1及1A6之可變區之人化大體上根據Queen,C.，等人，Proc.Natl.Acad.Sci.USA 86：10029-10033(1989)之程序進行。首先，識別與鼠科單株抗體VH或VL胺基酸序列具有高度同源性之人類V片段。接著，將互補決定區(CDR)序列連同對於維持CDR結構重要的構架胺基酸移植至所選人類構架序列。另外，將相應V區子群中發現為稀有的之人類構架胺基酸以一致胺基酸取代以降低可能的免疫原性。使所得人化單株抗體表現於細胞中，純化且如下表徵。

如下產生人化單株抗體8E1.4、8E1.5、8E1.6、1A6.10、1A6.11及1A6.12。

實例2.4.1：人化單株抗體8E1.4、8E1.5、8E1.6之產生

對於8E1可變區之人化而言，基於序列同源性選擇用作8E1 CDR之受體的人類V區構架。首先，藉助於電腦程式ABMOD及ENCAD(Levitt,M.,J.Mol.Biol.168：595-620(1983))構造8E1可變區之分子模型。接著，基於同源性搜尋人類V及J片段序列，選擇VH片段HA3D1(Olee,T.，等人，J.Exp.Med.175：831-842(1992))及J片段JH4(Ravetch,J.V.，等人，Cell 27：583-591(1981))提供8E1.4、8E1.5及8E1.6重鏈可變區之構架。對於8E1.4、8E1.5及8E1.6輕鏈可變區而言，使用VL片段HK137(Bentley,D.L.，及Rabbitts,T.H.,Cell 32：181-189(1983))及J片段JK2(Hieter,P.A.，等人，J.Biol.Chem.257：1516-1522(1982))。8E1 VH與受體人類HA3D1及JH4片段之間的構架胺基酸相似度為84%，而8E1 VL與受體人類HK137及JK4片段之間的相似度為67%。用於產生額外人化抗-人類IL-12抗體之人類抗體重鏈及輕鏈受體序列列於表19及20中。

表19：用於額外人化抗體之重鏈受體序列

實例2.4.2：8E1.4、8E1.5及8E1.6抗體之構造

按照公開方法(Rouillard,J.-M.，等人，Nucleic Acids Res.32：W176-W180(2004))使用約30個長度在約20至40鹼基範圍內之重疊合成寡核苷酸構造且擴增重鏈及輕鏈可變區基因。將寡核苷酸黏接且以擴增高保真PCR系統(Expand High Fidelity PCR System，Roche Diagnostics Corporation,Indianapolis,IN)組裝產生全長產物。將所得產物使用擴增高保真PCR系統藉由聚合酶鏈式反應(PCR)擴增。將PCR擴增的片段凝膠純化，以MluI及XbaI消化，凝膠純化且分別次選殖至經修飾形式之pVg1.D.Tt(Cole,M.S.，等人，J.Immunol.159：3613-3621(1997)；且參見下文)及pVk(Co,M.S.，等人，J.Immunol.148：1149-1154(1992))中。

在電腦模型表明與CDR顯著接觸之構架位置，用小鼠V區之胺基酸取代原始人類構架胺基酸。對於8E1.4及8E1.5重鏈而言此於殘基49處達成，且對於8E1.6之重鏈而言此另外於殘基74處達成。對於8E1.5及8E1.6之輕鏈而言於殘基46處達成置換，且對於8E1.5而言另外於殘基60處達成置換。將於相應人類V區子群中之各自位置僅稀少出現的構架殘基以彼等位置之人類一致胺基酸置換。對於8E1.5及8E1.6重鏈而言此於殘基78處達成，且對於8E1.5及8E1.6輕鏈而言此於殘基36處達成。

合成V基因之定點誘變使用QuikChange II定點誘變套組(Stratagene,La Jolla,CA)按照製造商推薦來進行。8E1.6 VH基因中之特異性突變使用此項技術中熟知的誘變寡核苷酸及PCR方法產生。PCR步驟使用PfuUltra HF DNA聚合酶(Stratagene)按照製造商推薦藉由於95℃培育30秒，接著為95℃歷時30秒、55℃歷時1分鐘及68℃歷時1分鐘之18個循環，接著於68℃培育7分鐘來進行。以DpnI消化後，以小部分PCR產物轉化大腸桿菌菌株TOP10化學感受態細胞(Invitrogen Corporation,Carlsbad,CA)。將經測序確認的miniprep DNA以MluI及XbaI消化且將含突變8E1.6 VH基因之所得限制片段次選殖至下述經修飾pVg1.D.Tt表現載體中。

類似地，使用此項技術中熟知的誘變寡核苷酸及PCR方法產生8E1.5 VL基因中之特異性突變。PCR步驟如上所述進行，且在以MluI及XbaI消化後，將所得限制片段次選殖至pVk表現載體中。由核苷酸測序確認突變。

編碼人化VH或VL之基因經設計為包括信號肽、剪接供體信號及用於隨後次選殖至哺乳動物表現載體中之適當限制酶位點的小外顯子。VH及VL小外顯子內之剪接供體信號分別來源於相應的人類生殖系JH及JK序列。人化VH小外顯子內之信號肽序列為 MEFGLSWLFLVAILKGVQC(SEQ ID NO.110)且人化VL小外顯子內為MDMRVPAQLLGLLLLWFPGSRC(SEQ ID NO.111)。8E1.4、8E1.5及8E1.6 VH及VL基因藉由此項技術中熟知的重疊合成寡核苷酸之組裝及PCR方法來構造。

實例2.4.3：人化單株抗體1A6.10、1A6.11及1A6.12之產生

對於1A6.10、1A6.11及1A6.12可變區之人化而言，本發明中如下提供通用方法。首先，藉助於電腦程式ABMOD及ENCAD(Levitt,M.,J.Mol.Biol.168：595-620(1983))構造1A6可變區之分子模型。接著，基於同源性搜尋人類V及J片段序列，選擇VH片段M60(Schroeder,Jr.,H.W.及Wang,J.Y.,Proc.Natl.Acad.Sci.USA 87：6146-6150(1990))及J片段JH4(Ravetch,J.V.，等人，Cell 27：583-591(1981))提供1A6.10及1A6.12重鏈可變區之構架。對於1A6.10、1A6.11及1A6.12輕鏈可變區而言，使用VL片段III-3R(Manheimer-Lory,A.，等人，J.Exp.Med.174：1639-1652(1991))及J片段JK4(Hieter,P.A.，等人，J.Biol.Chem.257：1516-1522(1982))。1A6 VH與受體人類M60及JH4片段之間的構架胺酸相似度為74%，而1A6 VL與受體人類III-3R及JK4片段之間的相似度為71%。如實例2.3.3中所揭示產生抗體序列。

在電腦模型表明與CDR顯著接觸之構架位置，用小鼠V區之胺基酸取代原始人類構架胺基酸。對於1A6.10、1A6.11及1A6.12重鏈而言此於胺基68處達成。對於輕鏈而言，對於1A6.11及1A6.12於殘基36及67處達成置換，且對於1A6.12另外於殘基60處達成置換。將於相應人類V區子群中之各自位置僅稀有出現的構架殘基以於彼等位置之人類一致胺基酸置換。此於1A6.10、1A6.11及1A6.12重鏈之殘基10、46、83、84、86及87處及輕鏈之殘基62處達成。使用如上所述之誘變寡核苷酸及PCR方法執行定點誘變。

所產生額外人化抗-IL-12抗體之所得VH及VL區的胺基酸序列列 於表21中。

構架中突變的胺基酸位置列出於表22中。

實例2.4.4：額外人化抗體之表現

將表現質體pVg1.D.Tt中之人類γ-1恆定區基因之異型自G1m(z,a)修飾為z、非a異型。以重疊-延伸PCR方法(Higuchi,R.，在"PCR Technology：Principles and Applications for DNA Amplification",Stockton Press,New York(1989)，第61-70頁中)使用誘變引子產生胺基酸取代D356E及L358M(根據Kabat,E.A.，等人，"Sequences of Proteins of Immunological Interest"，第5版，National Institutes of Health,Bethesda,MD(1991)之EU索引編號)。PCR步驟使用QuikChange II定點誘變套組(Stratagene)來進行。在以SfiI及EagI消化PCR產生的產物後，將所得限制片段次選殖至在鉸鏈與CH2外顯子間之內含子中含NheI限制位點之經修飾形式之pVg1.D.Tt表現載體中。

γ-1恆定區基因之低鉸鏈區(lower hinge region)之突變亦藉由定點 誘變產生。使用誘變寡核苷酸產生特異胺基酸取代L234A及L235A(根據Kabat,E.A.，等人之EU索引編號)。如上所述，PCR步驟使用QuikChange II定點誘變套組(Stratagene)來進行。在以NheI及EagI消化PCR產生的產物後，將所得限制片段次選殖至含有D356E及L358M突變及在鉸鏈與CH2外顯子間之內含子中含有NheI位點之上述經修飾pVg1.D.Tt表現載體中。由核苷酸測序確認突變。

人化VH及VL小外顯子之胺基酸序列顯示於表21中。將所得V基因片段分別選殖至經修飾形式之pVg1.D.Tt及pVk中。

將人類腎細胞株293T/17(American Type Culture Collection,Manassus,VA)維持於37℃下7.5% CO₂恆溫箱中之含有10%胎牛血清(FBS)(HyClone,Logan,UT)、0.1mM MEM非必需胺基酸(Invitrogen Corporation)及2mM L-麩醯胺酸(Invitrogen Corporation)之DMEM(BioWhittaker,Walkersville,MD)(下文稱為293培養基)中。為在短暫轉染後表現及純化單株抗體，在含有10%低-IgG FBS(HyClone)、0.1mM MEM非必需胺基酸及2mM L-麩醯胺酸之DMEM(下文稱為低-IgG 293培養基)中培育293T/17細胞。

293T/17細胞之短暫轉染使用Lipofectamine 2000(Invitrogen公司)按照製造商推薦來進行。每次轉染將約2×10⁷個細胞塗佈於T-175燒杯的50ml 293培養基中且使其生長隔夜以融合。第2天，將35μg輕鏈質體及35μg重鏈質體與3.75ml融合瘤-SFM(HSFM)(Life Technologies,Rockville,MD)組合。在另一管中，將175μl Lipofectamine 2000試劑與3.75ml HSFM組合且於室溫培育5分鐘。將3.75ml Lipofectamine 2000-HSFM混合物與3.75ml DNA-HSFM混合物輕輕混合且於室溫培育20分鐘。抽出轉化293T/17細胞之培養基且以低-IgG 293培養基替代，接著將lipofectamine-DNA複合物逐滴添加至該等細胞，藉由旋渦輕輕混合且將細胞於37℃下7.5% CO₂恆溫箱中培育7天，隨後收穫上 清液。

如上所述產生用於產生8E1.4、8E1.5及8E1.6之短暫轉染子。

人化8E1.4、8E1.5及8E1.6抗體之表現藉由夾心ELISA量測。將MaxiSorp ELISA盤(Nunc Nalge International,Rochester,NY)於4℃以100μl/孔之於0.2M碳酸鈉-碳酸氫鈉緩衝液(pH 9.4)中1：1000稀釋的AffiniPure山羊抗-人類IgG Fcγ-鏈特異性多株抗體(Jackson ImmunoResearch Laboratories,Inc.,West Grove,PA)塗佈隔夜，以洗滌緩衝液(含0.1% Tween 20之PBS)洗滌且以300μl/孔之TBS中的SuperBlock阻斷緩衝液(Pierce Chemical Company,Rockford,IL)於室溫阻斷1小時。在以洗滌緩衝液洗滌後，將含8E1.4、8E1.5或8E1.6之樣品以ELISA緩衝液(含1% BSA及0.1% Tween 20之PBS)適當稀釋且以100μl/孔施加於ELISA盤。作為標準物，使用人化IgG1/κ抗體達利珠單抗(PDL BioPharma,Inc.)。將盤於室溫培育1小時且以洗滌緩衝液洗滌後，使用100μl/孔1：1000稀釋的HRP-共軛山羊抗-人類κ抗體輕鏈特異性多株抗體(Southern Biotechnology Associates,Inc.,Birmingham,AL)偵測結合抗體。於室溫培育1小時後且以洗滌緩衝液洗滌後，藉由以100μl/孔添加ABTS過氧化物酶受質/過氧化物酶溶液B(KPL,Inc.,Gaithersburg,MD)進行顯色。於室溫培育7分鐘後，藉由以50μl/孔添加2%草酸終止顯色。使用VersaMax微板讀數器(Molecular Devices Corporation,Sunnyvale,CA)於415nm讀取吸光度。對自短暫轉染之293T/17細胞獲得的培養上清液藉由ELISA分析其8E1.4、8E1.5及8E1.6之產生。通常觀察到約30-50μg/ml之表現量。使陽性樣品如下所述經歷純化。

實例2.4.5：額外人化抗體之純化

自取出的培養上清液以蛋白A瓊脂糖管柱如下純化8E1.4、8E1.5及8E1.6 IgG1/κ單株抗體。離心收穫來自短暫轉染之培養上清液且將 其無菌過濾。將經過濾上清液之pH值藉由添加1/50體積之1M檸檬酸鈉(pH 7.0)進行調節。將上清液在以20mM檸檬酸鈉、150mM NaCl(pH 7.0)預平衡的1ml HiTrap蛋白A HP柱(GE Healthcare Bio-Sciences Corporation,Piscataway,NJ)上操作。將管柱以相同緩衝液洗滌，且以20mM檸檬酸鈉(pH 3.5)溶離結合抗體。在藉由添加1/50體積之1.5M檸檬酸鈉(pH 6.5)中和後，將混合抗體部分使用15ml Amicon Ultra-15離心過濾設備(30,000道爾頓MWCO)(Millipore公司，Bedford,MA)濃縮至約0.5-1.0mg/ml。接著將樣品使用具有HT Tuffryn膜之0.2μm Acrodisc針筒過濾器(Pall Corporation,East Hills,NY)無菌過濾。經純化抗體之濃度藉由UV光譜法經量測280nm下之吸光度來測定(1mg/ml=1.4A₂₈₀)。

非還原條件下之SDS-PAGE分析指示抗體之分子量為約150-160kD。還原條件下之分析指示抗體包含分子量為約50kD之重鏈及分子量為約25kD之輕鏈。抗體純度顯示為高於95%。

實例2.4.6：使用競爭ELISA對額外人化抗體之表徵

將MaxiSorp ELISA盤(Nalge Nunc International)於4℃以100μl/孔之0.2M碳酸鈉-碳酸氫鈉緩衝液(pH 9.4)中之10μg/ml人類IL-12塗佈隔夜，以洗滌緩衝液(含0.1% Tween 20之PBS)洗滌且以300μl/孔之TBS中的SuperBlock阻斷緩衝液(Pierce Chemical Company)於室溫阻斷1小時。在以洗滌緩衝液洗滌後，雙重複添加100μl/孔ELISA緩衝液中的生物素標記8E1(0.8μg/ml終濃度)與競爭抗體(8E1或8E1.4或8E1.5或8E1.6，以100μg/ml終濃度起始且連續稀釋3倍)之混合物。作為同型對照，使用100μl/孔之ELISA緩衝液中之100μg/ml小鼠IgG1/κ(MuFd79)或人化IgG1/κ(HuFd79)單株抗體。作為非競爭對照，使用100μl/孔之ELISA緩衝液。將盤於室溫培育1小時且以洗滌緩衝液洗滌後，使用100μl/孔之ELISA緩衝液中之1μg/ml HRP-共軛抗生 蛋白鏈菌素(Pierce Chemical Company)偵測結合抗體。於室溫培育1小時且以洗滌緩衝液洗滌後，藉由以100μl/孔添加ABTS過氧化物酶受質/過氧化物酶溶液B(KPL,Inc.)進行顯色。於室溫培育5分鐘後，藉由以50μl/孔添加2%草酸終止顯色。於415nm讀取吸光度。

8E1.4、8E1.5及8E1.6對人類IL-12之親和力藉由上文所述之競爭ELISA分析。8E1及3種人化變體以濃度依賴方式與生物素標記8E1競爭。表23顯示使用電腦軟體GraphPad Prism(GraphPad Software Inc.,San Diego,CA)獲得的8E1、8E1.4、8E1.5及8E1.6之IC₅₀值。

該等值表示與0.8(μg/ml)生物素標記8E1抗體競爭所需要的IC₅₀(μg/ml)。

抗體1A6.10、1A6.11、1A6.12、8E1.4及8E1.5亦可使用實例2.3中所述之方法產生。使抗體表現於COS細胞中且分別如實例2.2.2及1.2.C中所述藉由蛋白A親和層析純化。根據實例1.1.B及1.1.C.2關於IC₅₀及K_D表徵此等經純化mAb。表24顯示1A6.10、1A6.11、1A6.12、8E1.4及8E1.5之結合性質。

本發明藉由引用方式全文併入分子生物學技術中熟知的技術。此等技術包括(但不限於)以下出版物中描述的技術：

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Immunol. 151: 2623 (1993), Queen, C.，等人，Proc. Natl. Acad. Sci. USA 86: 10029-10033 (1989), R. Jefferis, Biotechnol. Prog. 21 (2005)，第11-16頁，R.J. Kaufman及P.A. Sharp (1982) Mol. Biol. 159: 601-621, Ranger及Peppas, 1983, J., Macromol. Sci. Rev. Macromol. Chem. 23: 61, Ravetch, J.V.，等人，Cell 27: 583-591 (1981), Remington's Pharmaceutical Sciences及Introduction to Pharmaceutical Dosage Forms，第19版，Mack Pub. Co., Easton, Pa. (1995), Riechmann等人，Nature 332: 323 (1988), Roberts, R.W.及Szostak, J.W. (1997) Proc. Natl. Acad. Sci. USA 94: 12297-12302, Roguska.等人，PNAS 91: 969-973 (1994), Rouillard, J.-M.，等人，Nucleic Acids Res. 32: W176-W180 (2004), Saudek等人，1989, N. Engl. J. Med. 321: 574, Sawai等人，AJRI 34: 26-34 (1995), Schroeder, Jr., H.W.及Wang, J.Y., Proc. Natl. Acad. Sci. USA 87: 6146-6150 (1990), Seder，等人(1993) Proc. Natl. Acad. Sci. 90: 10188-10192, Sefton, 1987, CRC Crit. Ref. Biomed. Eng. 14: 20, Shapiro等人，Crit. Rev. Immunol. 22(3): 183-200 (2002), Shields, R. L.等人(2002) J. Biol. Chem. 277: 26733-26740, Shu等人，PNAS 90: 7995-7999 (1993), Sims等人，J. Immunol. 151: 2296 (1993), Skerra等人，Science 240: 1038-1040 (1988), Smolen及Ball (編輯), Wiley, New York (1984), Song等人，1995, "Antibody Mediated Lung Targeting of Long- Circulating Emulsions," PDA Journal of Pharmaceutical Science &Technology 50: 372-397, Studnicka等人，Protein Engineering 7(6): 805-814 (1994), Sustained及Controlled Release Drug Delivery Systems, J.R. Robinson，編輯，Marcel Dekker, Inc., New York, 1978, Takeda等人，1985, Nature 314: 452-454, Taylor, L. D.，等人(1992) Nucl. Acids Res. 20: 6287-6295, Tolstoshev, 1993, Ann. Rev. Pharmacol. Toxicol. 32: 573-596, Trinchieri等人，(2003) Immunity 19: 641-644, Trinchieri, G. (2003) Nat. Rev. Immun. 3: 133-146, U.，等人.(1991) Biotechniques 11: 620-627, Umana等人(1999) Nat. Biotech. 17: 176-1, Urlaub及Chasin, (1980) Proc. Natl. Acad. Sci. USA 77: 4216-4220, Verhoeyen等人，Science 239: 1534 (1988), Wallick, S.C.，等人，Exp. Med. 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雖然上文已描述多種實施例及特徵，但熟習此項技術者應瞭解可在不脫離本揭示內容及所附申請專利範圍所定義之本發明的狀況下對所述實施例及特徵作出修改及改變。本文所提及之各公開案以引用方式併入本文中。

<110> 美商亞培公司

<120> IL-12/P40結合蛋白

<130> 7825 US P1

<140> 095123725

<141> 2006-06-29

<150> US 60/695,679

<151> 2005-06-30

<160> 111

<170> Patent In version 3.3

<210> 1

<211> 326

<212> PRT

<213> 人類

<220>

<221> PEPTIDE

<222> (1)..(326)

<223> IL-12及IL-23的p40次單位之序列

<400> 1

<210> 2

<211> 330

<212> PRT

<213> 人造

<220>

<223> 人類Igγ-1恆定區序列

<400> 2

<210> 3

<211> 330

<212> PRT

<213> 人造

<220>

<223> 人類突變體Igγ-1恆定區序列

<400> 3

<210> 4

<211> 106

<212> PRT

<213> 人造

<220>

<223> 人類Igκ恆定區序列

<400> 4

<210> 5

<211> 105

<212> PRT

<213> 人造

<220>

<223> 人類Igλ恆定區序列

<400> 5

<210> 6

<211> 30

<212> PRT

<213> 人類

<220>

<221> PEPTIDE

<222> (1)..(30)

<223> (人類)重鏈受體序列

<400> 6

<210> 7

<211> 14

<212> PRT

<213> 人類

<220>

<221> PEPTIDE

<222> (1)..(14)

<223> (人類)重鏈受體序列

<400> 7

<210> 8

<211> 32

<212> PRT

<213> 人類

<220>

<221> PEPTIDE

<222> (1)..(32)

<223> (人類)重鏈受體序列

<400> 8

<210> 9

<211> 11

<212> PRT

<213> 人類

<220>

<221> PEPTIDE

<222> (1)..(11)

<223> (人類)重鏈受體序列

<400> 9

<210> 10

<211> 30

<212> PRT

<213> 人類

<220>

<221> PEPTIDE

<222> (1)..(30)

<223> (人類)重鏈受體序列

<400> 10

<210> 11

<211> 32

<212> PRT

<213> 人類

<220>

<221> PEPTIDE

<222> (1)..(32)

<400> 11

<210> 12

<211> 30

<212> PRT

<213> 人類

<220>

<221> PEPTIDE

<222> (1)..(30)

<223> (人類)重鏈受體序列

<400> 12

<210> 13

<211> 14

<212> PRT

<213> 人類

<220>

<221> PEPTIDE

<222> (1)..(14)

<223> (人類)重鏈受體序列

<400> 13

<210> 14

<211> 32

<212> PRT

<213> 人類

<220>

<221> PEPTIDE

<222> (1)..(32)

<223> (人類)重鏈受體序列

<400> 14

<210> 15

<211> 30

<212> PRT

<213> 人類

<220>

<221> PEPTIDE

<222> (1)..(30)

<223> (人類)重鏈受體序列

<400> 15

<210> 16

<211> 14

<212> PRT

<213> 人類

<220>

<221> PEPTIDE

<222> (1)..(14)

<223> (人類)重鏈受體序列

<400> 16

<210> 17

<211> 32

<212> PRT

<213> 人類

<220>

<221> PEPTIDE

<222> (1)..(32)

<223> (人類)重鏈受體序列

<400> 17

<210> 18

<211> 30

<212> PRT

<213> 人類

<220>

<221> PEPTIDE

<222> (1)..(30)

<223> (人類)重鏈受體序列

<400> 18

<210> 19

<211> 14

<212> PRT

<213> 人類

<220>

<221> PEPTIDE

<222> (1)..(14)

<223> (人類)重鏈受體序列

<400> 19

<210> 20

<211> 32

<212> PRT

<213> 人類

<220>

<221> PEPTIDE

<222> (1)..(32)

<223> (人類)重鏈受體序列

<400> 20

<210> 21

<211> 30

<212> PRT

<213> 人類

<220>

<221> PEPTIDE

<222> (1)..(30)

<223> (人類)重鏈受體序列

<400> 21

<210> 22

<211> 32

<212> PRT

<213> 人類

<220>

<221> PEPTIDE

<222> (1)..(32)

<223> (人類)重鏈受體序列

<400> 22

<210> 23

<211> 23

<212> PRT

<213> 人類

<220>

<221> PEPTIDE

<222> (1)..(23)

<223> (人類)輕鏈受體序列

<400> 23

<210> 24

<211> 15

<212> PRT

<213> 人類

<220>

<221> PEPTIDE

<222> (1)..(15)

<223> (人類)輕鏈受體序列

<400> 24

<210> 25

<211> 32

<212> PRT

<213> 人類

<220>

<221> PEPTIDE

<222> (1)..(32)

<223> (人類)輕鏈受體序列

<400> 25

<210> 26

<211> 11

<212> PRT

<213> 人類

<220>

<221> PEPTIDE

<222> (1)..(11)

<223> (人類)輕鏈受體序列

<400> 26

<210> 27

<211> 23

<212> PRT

<213> 人類

<220>

<221> PEPTIDE

<222> (12)..(23)

<223> (人類)輕鏈受體序列

<400> 27

<210> 28

<211> 15

<212> PRT

<213> 人類

<220>

<221> PEPTIDE

<222> (1)..(15)

<223> (人類)輕鏈受體序列

<400> 28

<210> 29

<211> 32

<212> PRT

<213> 人類

<220>

<221> PEPTIDE

<222> (1)..(32)

<223> (人類)輕鏈受體序列

<400> 29

<210> 30

<211> 23

<212> PRT

<213> 人類

<220>

<221> PEPTIDE

<222> (1)..(23)

<223> (人類)輕鏈受體序列

<400> 30

<210> 31

<211> 15

<212> PRT

<213> 人類

<220>

<221> PEPTIDE

<222> (1)..(15)

<223> (人類)輕鏈受體序列

<400> 31

<210> 32

<211> 32

<212> PRT

<213> 人類

<220>

<221> PEPTIDE

<222> (1)..(32)

<223> (人類)輕鏈受體序列

<400> 32

<210> 33

<211> 23

<212> PRT

<213> 人類

<220>

<221> PEPTIDE

<222> (1)..(23)

<223> (人類)輕鏈受體序列

<400> 33

<210> 34

<211> 15

<212> PRT

<213> 人類

<220>

<221> PEPTIDE

<222> (1)..(15)

<223> (人類)輕鏈受體序列

<400> 34

<210> 35

<211> 119

<212> PRT

<213> 小鼠

<220>

<221> PEPTIDE

<222> (1)..(119)

<223> VH 1D4區胺基酸序列

<400> 35

<210> 36

<211> 108

<212> PRT

<213> 小鼠

<220>

<221> PEPTIDE

<222> (1)..(108)

<223> VL 1D4區胺基酸序列

<400> 36

<210> 37

<211> 120

<212> PRT

<213> 小鼠

<220>

<221> PEPTIDE

<222> (1)..(120)

<223> VH 1A6區胺基酸序列

<400> 37

<210> 38

<211> 108

<212> PRT

<213> 小鼠

<220>

<221> PEPTIDE

<222> (1)..(108)

<223> VL 1A6區胺基酸序列

<400> 38

<210> 39

<211> 117

<212> PRT

<213> 小鼠

<220>

<221> PEPTIDE

<222> (11)..(117)

<223> VH 1D8區胺基酸序列

<400> 39

<210> 40

<211> 108

<212> PRT

<213> 小鼠

<220>

<221> PEPTIDE

<222> (1)..(108)

<223> VL 1D8區胺基酸序列

<400> 40

<210> 41

<211> 117

<212> PRT

<213> 小鼠

<220>

<221> PEPTIDE

<222> (1)..(117)

<223> VH 3G7區胺基酸序列

<400> 41

<210> 42

<211> 108

<212> PRT

<213> 小鼠

<220>

<221> PEPTIDE

<222> (1)..(108)

<223> VL 3G7區胺基酸序列

<400> 42

<210> 43

<211> 117

<212> PRT

<213> 小鼠

<220>

<221> PEPTIDE

<222> (1)..(117)

<223> VH 5E8區胺基酸序列

<400> 43

<210> 44

<211> 108

<212> PRT

<213> 小鼠

<220>

<221> PEPTIDE

<222> (1)..(108)

<223> VL 5E8區胺基酸序列

<400> 44

<210> 45

<211> 112

<212> PRT

<213> 小鼠

<220>

<221> PEPTIDE

<222> (1)..(112)

<223> VH 8E1區胺基酸序列

<400> 45

<210> 46

<211> 108

<212> PRT

<213> 小鼠

<220>

<221> PEPTIDE

<222> (1)..(108)

<223> VL 8E1區胺基酸序列

<400> 46

<210> 47

<211> 117

<212> PRT

<213> 小鼠

<220>

<221> PEPTIDE

<222> (1)..(117)

<223> VH 1H6區胺基酸序列

<400> 47

<210> 48

<211> 108

<212> PRT

<213> 小鼠

<220>

<221> PEPTIDE

<222> (1)..(108)

<223> VL 1H6區胺基酸序列

<400> 48

<210> 49

<211> 122

<212> PRT

<213> 小鼠

<220>

<221> PEPTIDE

<222> (1)..(122)

<223> VH 3A11區胺基酸序列

<400> 49

<210> 50

<211> 112

<212> PRT

<213> 小鼠

<220>

<221> PEPTIDE

<222> (1)..(112)

<223> VL 3A11區胺基酸序列

<400> 50

<210> 51

<211> 120

<212> PRT

<213> 小鼠

<220>

<221> PEPTIDE

<222> (1)..(120)

<223> VH 4B4區胺基酸序列

<400> 51

<210> 52

<211> 108

<212> PRT

<213> 小鼠

<220>

<221> PEPTIDE

<222> (1)..(108)

<223> VL 4B4區胺基酸序列

<400> 52

<210> 53

<211> 118

<212> PRT

<213> 小鼠

<220>

<221> PEPTIDE

<222> (1)..(118)

<223> VH 7G3區胺基酸序列

<400> 53

<210> 54

<211> 108

<212> PRT

<213> 小鼠

<220>

<221> PEPTIDE

<222> (1)..(108)

<223> VL 7G3區胺基酸序列

<400> 54

<210> 55

<211> 7

<212> PRT

<213> 人造

<220>

<223> 小鼠IgG一致IL-12P40 CDR親和配位體胺基酸序列

<220>

<221> PEPTIDE

<222> (1)..(1)

<223> Xaa=Asp,Lys,Thr,Ser

<220>

<221> PEPTIDE

<222> (2)..(2)

<223> Xaa=Tyr,Ser,Thr

<220>

<221> PEPTIDE

<222> (3)..(3)

<223> Xaa=Tyr,Val,Gly,Trp,Ser,Phe

<220>

<221> PEPTIDE

<222> (4)..(4)

<223> Xaa=Ile,Met

<220>

<221> PEPTIDE

<222> (5)..(5)

<223> Xaa=His,Gly,Glu,Val

<220>

<221> PEPTIDE

<222> (6)..(6)

<223> Xaa=Val或不存在

<220>

<221> PEPTIDE

<222> (7)..(7)

<223> Xaa=Ser或不存在

<400> 55

<210> 56

<211> 20

<212> PRT

<213> 人造

<220>

<223> 小鼠IgG一致I1-12P40 CDR親和配位體胺基酸序列

<220>

<221> PEPTIDE

<222> (1)..(1)

<223> Xaa=His,Asp,Gly,Trp,Ser,Tyr,Arg

<220>

<221> PEPTIDE

<222> (2)..(2)

<223> Xaa=Ile,Phe

<220>

<221> PEPTIDE

<222> (3)..(3)

<223> Xaa=Tyr,Trp,Leu,Ser,Asn,Asp,Gly

<220>

<221> PEPTIDE

<222> (4)..(4)

<223> Xaa=Trp,Pro,His,Thr,Ser

<220>

<221> PEPTIDE

<222> (5)..(5)

<223> Xaa=Asp,Gly,Glu,Ala,Ile

<220>

<221> PEPTIDE

<222> (6)..(6)

<223> Xaa=Asp,Gly,Ser,Thr,Asn

<220>

<221> PEPTIDE

<222> (7)..(7)

<223> Xaa=Asp,Gly,Ser,Pro

<220>

<221> PEPTIDE

<222> (8)..(8)

<223> Xaa=Lys,Asn,Ser,Glu,Thr,His

<220>

<221> PEPTIDE

<222> (9)..(9)

<223> Xaa=Tyr,Thr,Pro,Ile,Asn

<220>

<221> PEPTIDE

<222> (10)..(10)

<223> Xaa=Tyr,Asn,Thr,His,Lys,Ser,Gly

<220>

<221> PEPTIDE

<222> (11)..(11)

<223> Xaa=Asn,Tyr

<220>

<221> PEPTIDE

<222> (12)..(12)

<223> Xaa=Pro,Asn,Ala,Asp,Ser

<220>

<221> PEPTIDE

<222> (13)..(13)

<223> Xaa=Ser,Glu,Asp,Pro

<220>

<221> PEPTIDE

<222> (14)..(14)

<223> Xaa=Leu,Lys,Asp,Thr,Tyr

<220>

<221> PEPTIDE

<222> (15)..(15)

<223> Xaa=Lys,Phe,Val,Met,Arg,Ala

<220>

<221> PEPTIDE

<222> (16)..(16)

<223> Xaa=ser、Lys、Gln、Pro或不存在

<220>

<221> PEPTIDE

<222> (17)..(17)

<223> Xaa=Asp、Gly、Arg或不存在

<220>

<221> PEPTIDE

<222> (18)..(18)

<223> Xaa=Phe或不存在

<220>

<221> PEPTIDE

<222> (19)..(19)

<223> Xaa=Gln或不存在

<220>

<221> PEPTIDE

<222> (20)..(20)

<223> Xaa=Asp或不存在

<400> 56

<210> 57

<211> 13

<212> PRT

<213> 人造

<220>

<223> 小鼠IgG一致I1-12P40 CDR親和配位體胺基酸序列

<220>

<221> PEPTIDE

<222> (1)..(1)

<223> Xaa=Arg,Asn,Trp

<220>

<221> PEPTIDE

<222> (2)..(2)

<223> Xaa=Gly,Thr,Arg,Pro,His

<220>

<221> PEPTIDE

<222> (3)..(3)

<223> Xaa=Ile,Arg,Phe,Tyr,Gln

<220>

<221> PEPTIDE

<222> (4)..(4)

<223> Xaa=Arg,Val,Tyr,Phe,Ala

<220>

<221> PEPTIDE

<222> (5)..(5)

<223> Xaa=Ser,Asn,Gly,Ala,Arg

<220>

<221> PEPTIDE

<222> (6)..(6)

<223> Xaa=Ala,Tyr,Leu,Phe,Met

<220>

<221> PEPTIDE

<222> (7)..(7)

<223> Xaa=Met,Ala,Asp,Leu,Phe

<220>

<221> PEPTIDE

<222> (8)..(8)

<223> Xaa=Asp,Met,Tyr,Trp

<220>

<221> PEPTIDE

<222> (9)..(9)

<223> Xaa=Tyr,Asp,Asn

<220>

<221> PEPTIDE

<222> (10)..(10)

<223> Xaa=Tyr、Ala或不存在

<220>

<221> PEPTIDE

<222> (11)..(11)

<223> Xaa=Met或不存在

<220>

<221> PEPTIDE

<222> (12)..(12)

<223> Xaa=Asp或不存在

<220>

<221> PEPTIDE

<222> (13)..(13)

<223> Xaa=Tyr或不存在

<400> 57

<210> 58

<211> 15

<212> PRT

<213> 人造

<220>

<223> 小鼠IgG一致I1-12P40 CDR親和配位體胺基酸序列

<220>

<221> PEPTIDE

<222> (1)..(1)

<223> Xaa=Lys或Arg

<220>

<221> PEPTIDE

<222> (2)..(2)

<223> Xaa=Ala

<220>

<221> PEPTIDE

<222> (3)..(3)

<223> Xaa=Ser

<220>

<221> PEPTIDE

<222> (4)..(4)

<223> Xaa=Gln,Glu

<220>

<221> PEPTIDE

<222> (5)..(5)

<223> Xaa=Ser,Asn

<220>

<221> PEPTIDE

<222> (6)..(6)

<223> Xaa=Val,Ile

<220>

<221> PEPTIDE

<222> (7)..(7)

<223> Xaa=Ser,Gly,Asp

<220>

<221> PEPTIDE

<222> (8)..(8)

<223> Xaa=Asn,Thr,Lys

<220>

<221> PEPTIDE

<222> (9)..(9)

<223> Xaa=Asp,Asn,Tyr

<220>

<221> PEPTIDE

<222> (10)..(10)

<223> Xaa=Val,Gly,Leu

<220>

<221> PEPTIDE

<222> (11)..(11)

<223> Xaa=Ala,Ile,His

<220>

<221> PEPTIDE

<222> (12)..(12)

<223> Xaa=Ser或不存在

<220>

<221> PEPTIDE

<222> (13)..(13)

<223> Xaa=Phe或不存在

<220>

<221> PEPTIDE

<222> (14)..(14)

<223> Xaa=Met或不存在

<220>

<221> PEPTIDE

<222> (15)..(15)

<223> Xaa=Asn或不存在

<400> 58

<210> 59

<211> 8

<212> PRT

<213> 人造

<220>

<223> 小鼠IgG一致I1-12P40 CDR親和配位體胺基酸序列

<220>

<221> PEPTIDE

<222> (1)..(1)

<223> Xaa=Tyr,Ser

<220>

<221> PEPTIDE

<222> (2)..(2)

<223> Xaa=Ala,Thr

<220>

<221> PEPTIDE

<222> (3)..(3)

<223> Xaa=Ser,Ala

<220>

<221> PEPTIDE

<222> (4)..(4)

<223> Xaa=Asn,His,Ser,Gln

<220>

<221> PEPTIDE

<222> (5)..(5)

<223> Xaa=Arg,Asn,Ser

<220>

<221> PEPTIDE

<222> (6)..(6)

<223> Xaa=Tyr,Gln,Ile

<220>

<221> PEPTIDE

<222> (7)..(7)

<223> Xaa=Thr,Ser,Gly

<220>

<221> PEPTIDE

<222> (8)..(8)

<223> Xaa=Ser或不存在

<400> 59

<210> 60

<211> 9

<212> PRT

<213> 人造

<220>

<223> 小鼠IgG一致I1-12P40 CDR親和配位體胺基酸序列

<220>

<221> PEPTIDE

<222> (1)..(1)

<223> Xaa=Gln

<220>

<221> PEPTIDE

<222> (2)..(2)

<223> Xaa=Gln

<220>

<221> PEPTIDE

<222> (3)..(3)

<223> Xaa=Asp,Tyr,Ser

<220>

<221> PEPTIDE

<222> (4)..(4)

<223> Xaa=Tyr,Asn,Lys,Ile

<220>

<221> PEPTIDE

<222> (5)..(5)

<223> Xaa=Asn,Thr,Ser,Glu

<220>

<221> PEPTIDE

<222> (6)..(6)

<223> Xaa=Ser,Tyr,Val,Trp

<220>

<221> PEPTIDE

<222> (7)..(7)

<223> Xaa=Pro

<220>

<221> PEPTIDE

<222> (8)..(8)

<223> Xaa=Trp,Phe,Tyr,Leu,Pro

<220>

<221> PEPTIDE

<222> (9)..(9)

<223> Xaa=Thr,Ser

<400> 60

<210> 61

<211> 119

<212> PRT

<213> 人造

<220>

<223> VH 1D4.1區胺基酸序列

<400> 61

<210> 62

<211> 108

<212> PRT

<213> 人造

<220>

<223> VL 1D4區胺基酸序列

<400> 62

<210> 63

<211> 119

<212> PRT

<213> 人造

<220>

<223> VH 1D4.2區胺基酸序列

<400> 63

<210> 64

<211> 108

<212> PRT

<213> 人造

<220>

<223> VL 1D4.2區胺基酸序列

<400> 64

<210> 65

<211> 119

<212> PRT

<213> 人造

<220>

<223> VH 1D4.3區胺基酸序列

<400> 65

<210> 66

<211> 108

<212> PRT

<213> 人造

<220>

<223> VL 1D4.3區胺基酸序列

<400> 66

<210> 67

<211> 120

<212> PRT

<213> 人造

<220>

<223> VH 1A6.1區胺基酸序列

<400> 67

<210> 68

<211> 108

<212> PRT

<213> 人造

<220>

<223> VL 1A6.1區胺基酸序列

<400> 68

<210> 69

<211> 120

<212> PRT

<213> 人造

<220>

<223> VH 1A6.2區胺基酸序列

<400> 69

<210> 70

<211> 108

<212> PRT

<213> 人造

<220>

<223> VL 1A6.2區胺基酸序列

<400> 70

<210> 71

<211> 112

<212> PRT

<213> 人造

<220>

<223> VH 8E1.1區胺基酸序列

<400> 71

<210> 72

<211> 108

<212> PRT

<213> 人造

<220>

<223> VL 8E1.1區胺基酸序列

<400> 72

<210> 73

<211> 112

<212> PRT

<213> 人造

<220>

<223> VH 8E1.2區胺基酸序列

<400> 73

<210> 74

<211> 108

<212> PRT

<213> 人造

<220>

<223> VL 8E1.2區胺基酸序列

<400> 74

<210> 75

<211> 117

<212> PRT

<213> 人造

<220>

<223> VH 3G7.1區胺基酸序列

<400> 75

<210> 76

<211> 108

<212> PRT

<213> 人造

<220>

<223> VL 3G7.1區胺基酸序列

<400> 76

<210> 77

<211> 117

<212> PRT

<213> 人造

<220>

<223> VH 3G7.2區胺基酸序列

<400> 77

<210> 78

<211> 108

<212> PRT

<213> 人造

<220>

<223> VL 3G7.2區胺基酸序列

<400> 78

<210> 79

<211> 108

<212> PRT

<213> 人造

<220>

<223> VL 1A6.9區胺基酸序列

<400> 79

<210> 80

<211> 119

<212> PRT

<213> 人造

<220>

<223> VH 1D4.6區胺基酸序列

<400> 80

<210> 81

<211> 108

<212> PRT

<213> 人造

<220>

<223> VL 1D4.6區胺基酸序列

<400> 81

<210> 82

<211> 119

<212> PRT

<213> 人造

<220>

<223> VH 1D4.7區胺基酸序列

<400> 82

<210> 83

<211> 108

<212> PRT

<213> 人造

<220>

<223> VL 1D4.7區胺基酸序列

<400> 83

<210> 84

<211> 119

<212> PRT

<213> 人造

<220>

<223> VH 1D4.8區胺基酸序列

<400> 84

<210> 85

<211> 108

<212> PRT

<213> 人造

<220>

<223> VL 1D4.8區胺基酸序列

<400> 85

<210> 86

<211> 119

<212> PRT

<213> 人造

<220>

<223> VH 1D4.9區胺基酸序列

<400> 86

<210> 87

<211> 108

<212> PRT

<213> 人造

<220>

<223> VL 1D4.9區胺基酸序列

<400> 87

<210> 88

<211> 112

<212> PRT

<213> 人造

<220>

<223> VH 8E1.3區胺基酸序列

<400> 88

<210> 89

<211> 108

<212> PRT

<213> 人造

<220>

<223> VL 8E1.3區胺基酸序列

<400> 89

<210> 90

<211> 117

<212> PRT

<213> 人造

<220>

<223> VH 3G7.3區胺基酸序列

<400> 90

<210> 91

<211> 108

<212> PRT

<213> 人造

<220>

<223> VL 3G7.3區胺基酸序列

<400> 91

<210> 92

<211> 30

<212> PRT

<213> 人類

<220>

<221> PEPTIDE

<222> (1)..(30)

<223> (人類)重鏈受體序列

<400> 92

<210> 93

<211> 11

<212> PRT

<213> 人類

<220>

<221> PEPTIDE

<222> (1)..(11)

<223> (人類)重鏈受體序列

<400> 93

<210> 94

<211> 30

<212> PRT

<213> 人類

<220>

<221> PEPTIDE

<222> (1)..(30)

<223> (人類)重鏈受體序列

<400> 94

<210> 95

<211> 11

<212> PRT

<213> 人類

<220>

<221> PEPTIDE

<222> (1)..(11)

<223> (人類)輕鏈受體序列

<400> 95

<210> 96

<211> 32

<212> PRT

<213> 人類

<220>

<221> PEPTIDE

<222> (1)..(32)

<223> (人類)輕鏈受體序列

<400> 96

<210> 97

<211> 15

<212> PRT

<213> 人類

<220>

<221> PEPTIDE

<222> (1)..(15)

<223> (人類)輕鏈受體序列

<400> 97

<210> 98

<211> 120

<212> PRT

<213> 人造

<220>

<223> VH 1A6.10區胺基酸序列

<400> 98

<210> 99

<211> 108

<212> PRT

<213> 人造

<220>

<223> VL 1A6.10區胺基酸序列

<400> 99

<210> 100

<211> 120

<212> PRT

<213> 人造

<220>

<223> VH 1A6.11區胺基酸序列

<400> 100

<210> 101

<211> 108

<212> PRT

<213> 人造

<220>

<223> VL 1A6.11區胺基酸序列

<400> 101

<210> 102

<211> 120

<212> PRT

<213> 人造

<220>

<223> VH 1A6.12區胺基酸序列

<400> 102

<210> 103

<211> 108

<212> PRT

<213> 人造

<220>

<223> VL 1A6.12區胺基酸序列

<400> 103

<210> 104

<211> 112

<212> PRT

<213> 人造

<220>

<223> VH 8E1.4區胺基酸序列

<400> 104

<210> 105

<211> 108

<212> PRT

<213> 人造

<220>

<223> VL 8E1.4區胺基酸序列

<400> 105

<210> 106

<211> 112

<212> PRT

<213> 人造

<220>

<223> VH 8E1.5區胺基酸序列

<400> 106

<210> 107

<211> 108

<212> PRT

<213> 人造

<220>

<223> VL 8E1.5區胺基酸序列

<400> 107

<210> 108

<211> 112

<212> PRT

<213> 人造

<220>

<223> VH 8E1.6區胺基酸序列

<400> 108

<210> 109

<211> 108

<212> PRT

<213> 人造

<220>

<223> VL 8E1.6區胺基酸序列

<400> 109

<210> 110

<211> 19

<212> PRT

<213> 人造

<220>

<223> (人類)重鏈受體序列

<400> 110

<210> 111

<211> 22

<212> PRT

<213> 人造

<220>

<223> (人類)輕鏈受體序列

<400> 111

Claims (134)

1. 一種包含抗原結合域之結合蛋白，該結合蛋白能夠結合IL-12之p40次單位，該抗原結合域包含至少一個包含選自由以下序列組成之群之胺基酸序列的CDR：CDR-H1. X₁-X₂-X₃-X₄-X₅-X₆-X₇(SEQ ID NO：55)，其中：X₁為D、K、T或S；X₂為Y、S或T；X₃為Y、V、G、W、S或F；X₄為I或M；X₅為H、G、E或V；X₆為V或不存在；且X₇為S或不存在；CDR-H2. X₁-X₂-X₃-X₄-X₅-X₆-X₇-X₈-X₉-X₁₀-X₁₁-X₁₂-X₁₃-X₁₄-X₁₅-X₁₆-X₁₇-X₁₈-X₁₉-X₂₀(SEQ ID NO：56)，其中：X₁為H、D、G、W、S、Y或R；X₂為I或F；X₃為Y、W、L、S、N、D或G；X₄為W、P、H、T或S；X₅為D、G、E、A或I；X₆為D、G、S、T或N；X₇為D、G、S或P；X₈為K、N、S、E、T或H；X₉為Y、T、P、I或N；X₁₀為Y、N、T、H、K、S或G；X₁₁為N或Y； X₁₂為P、N、A、D或S；X₁₃為S、E、D或P；X₁₄為L、K、D、T或Y；X₁₅為K、F、V、M、R或A；X₁₆為S、K、Q、P或不存在；X₁₇為D、G、R或不存在；X₁₈為F或不存在；X₁₉為Q或不存在；及X₂₀為D或不存在；CDR-H3. X₁-X₂-X₃-X₄-X₅-X₆-X₇-X₈-X₉-X₁₀-X₁₁-X₁₂-X₁₃(SEQ ID NO：57)，其中：X₁為R、N或W；X₂為G、T、R、P或H；X₃為I、R、F、Y或Q；X₄為R、V、Y、F或A；X₅為S、N、G、A或R；X₆為A、Y、L、F或M；X₇為M、A、D、L或F；X₈為D、M、Y或W；X₉為Y、D或N；X₁₀為Y、A或不存在；X₁₁為M或不存在；X₁₂為D或不存在；及X₁₃為Y或不存在；CDR-L1. X₁-X₂-X₃-X₄-X₅-X₆-X₇-X₈-X₉-X₁₀-X₁₁-X₁₂-X₁₃-X₁₄-X₁₅(SEQ ID NO：58)，其中： X₁為K或R；X₂為A；X₃為S；X₄為Q或E；X₅為S或N；X₆為V或I；X₇為S、G或D；X₈為N、T或K；X₉為D、N或Y；X₁₀為V、G或L；X₁₁為A、I或H；X₁₂為S或不存在；X₁₃為F或不存在；X₁₄為M或不存在；及X₁₅為N或不存在；CDR-L2. X₁-X₂-X₃-X₄-X₅-X₆-X₇-X₈(SEQ ID NO：59)，其中：X₁為Y或S；X₂為A或T；X₃為S或A；X₄為N、H、S或Q；X₅為R、N或S；X₆為Y、Q或I；X₇為T、S或G；及X₈為S或不存在；及 CDR-L3. X₁-X₂-X₃-X₄-X₅-X₆-X₇-X₈-X₉(SEQ ID NO：60)，其中：X₁為Q；X₂為Q；X₃為D、Y或S；X₄為Y、N、K或I；X₅為N、T、S或E；X₆為S、Y、V或W；X₇為P；X₈為W、F、Y、L或P；及X₉為T或S。
2. 如請求項1之結合蛋白，其中該至少一個CDR包含選自由以下序列組成之群之胺基酸序列：SEQ ID NO.：35之殘基31-37；SEQ ID NO.：35之殘基52-67；SEQ ID NO.：35之殘基100-108；SEQ ID NO.：36之殘基24-34；SEQ ID NO.：36之殘基50-56；SEQ ID NO.：36之殘基89-97；SEQ ID NO.：37之殘基31-37；SEQ ID NO.：37之殘基52-67；SEQ ID NO.：37之殘基100-109；SEQ ID NO.：38之殘基24-34；SEQ ID NO.：38之殘基50-56；SEQ ID NO.：38之殘基89-97；SEQ ID NO.：39之殘基31-35； SEQ ID NO.：39之殘基50-66；SEQ ID NO.：39之殘基99-106；SEQ ID NO.：40之殘基24-34；SEQ ID NO.：40之殘基50-56；SEQ ID NO.：40之殘基89-97；SEQ ID NO.：41之殘基31-35；SEQ ID NO.：41之殘基50-66；SEQ ID NO.：41之殘基99-106；SEQ ID NO.：42之殘基24-34；SEQ ID NO.：42之殘基50-56；SEQ ID NO.：42之殘基89-97；SEQ ID NO.：43之殘基31-35；SEQ ID NO.：43之殘基50-66；SEQ ID NO.：43之殘基99-106；SEQ ID NO.：44之殘基24-34；SEQ ID NO.：44之殘基50-56；SEQ ID NO.：44之殘基89-97；SEQ ID NO.：45之殘基31-35；SEQ ID NO.：45之殘基50-66；SEQ ID NO.：45之殘基99-101；SEQ ID NO.：46之殘基24-34；SEQ ID NO.：46之殘基50-56；SEQ ID NO.：46之殘基89-97；SEQ ID NO.：47之殘基31-35；SEQ ID NO.：47之殘基50-66；SEQ ID NO.：47之殘基99-106； SEQ ID NO.：48之殘基24-34；SEQ ID NO.：48之殘基50-56；SEQ ID NO.：48之殘基89-97；SEQ ID NO.：49之殘基31-35；SEQ ID NO.：49之殘基50-66；SEQ ID NO.：49之殘基99-111；SEQ ID NO.：50之殘基24-38；SEQ ID NO.：50之殘基53-60；SEQ ID NO.：50之殘基93-101；SEQ ID NO.：51之殘基31-37；SEQ ID NO.：51之殘基52-67；SEQ ID NO.：51之殘基100-109；SEQ ID NO.：52之殘基24-34；SEQ ID NO.：52之殘基50-56；SEQ ID NO.：52之殘基89-97；SEQ ID NO.：53之殘基31-35；SEQ ID NO.：53之殘基47-66；SEQ ID NO.：53之殘基99-107；SEQ ID NO.：54之殘基24-34；SEQ ID NO.：54之殘基50-56；及SEQ ID NO.：54之殘基89-97。
3. 如請求項1之結合蛋白，其中該結合蛋白包含至少3個CDR。
4. 如請求項3之結合蛋白，其中該至少3個CDR係選自由以下組成之群之可變域CDR組：
5. 如請求項4之結合蛋白，其包含至少2個可變域CDR組。
6. 如請求項5之結合蛋白，其中該至少2個可變域CDR組係選自由以下組成之群：VH 1D4 CDR組及VL 1D4 CDR組；VH 1A6 CDR組及VL 1A6 CDR組；VH 1D8 CDR組及VL 1D8 CDR組；VH 3G7 CDR組及VL 3G7 CDR組；VH 5E8 CDR組及VL 5E8 CDR組；VH 8E1 CDR組及VL 8E1 CDR組；VH 1H6 CDR組及VL 1H6 CDR組；VH 3A11 CDR組及VL 3A11 CDR組； VH 4B4 CDR組及VL 4B4 CDR組；及VH 7G3 CDR組及VL 7G3 CDR組。
7. 如請求項3之結合蛋白，其另外包含人類接受體構架。
8. 如請求項4之結合蛋白，其另外包含人類接受體構架。
9. 如請求項5之結合蛋白，其另外包含人類接受體構架。
10. 如請求項6之結合蛋白，其另外包含人類接受體構架。
11. 如請求項7之結合蛋白，其中該人類接受體構架包含選自由以下序列組成之群之胺基酸序列：SEQ ID NO：6、SEQ ID NO：7、SEQ ID NO：8、SEQ ID NO：9、SEQ ID NO：10、SEQ ID NO：11、SEQ ID NO：12、SEQ ID NO：13、SEQ ID NO：14、SEQ ID NO：15、SEQ ID NO：16、SEQ ID NO：17、SEQ ID NO：18、SEQ ID NO：19、SEQ ID NO：20、SEQ ID NO：21、SEQ ID NO：22、SEQ ID NO：23、 SEQ ID NO：24、SEQ ID NO：25、SEQ ID NO：26、SEQ ID NO：27、SEQ ID NO：28、SEQ ID NO：29、SEQ ID NO：30、SEQ ID NO：31、SEQ ID NO：32、SEQ ID NO：33、SEQ ID NO：34、SEQ ID NO：92、SEQ ID NO：93、SEQ ID NO：94、SEQ ID NO：95、SEQ ID NO：96、及SEQ ID NO：97。
12. 如請求項8之結合蛋白，其中該人類接受體構架包含選自由以下序列組成之群之胺基酸序列：SEQ ID NO：6、SEQ ID NO：7、SEQ ID NO：8、SEQ ID NO：9、SEQ ID NO：10、SEQ ID NO：11、 SEQ ID NO：12、SEQ ID NO：13、SEQ ID NO：14、SEQ ID NO：15、SEQ ID NO：16、SEQ ID NO：17、SEQ ID NO：18、SEQ ID NO：19、SEQ ID NO：20、SEQ ID NO：21、SEQ ID NO：22、SEQ ID NO：23、SEQ ID NO：24、SEQ ID NO：25、SEQ ID NO：26、SEQ ID NO：27、SEQ ID NO：28、SEQ ID NO：29、SEQ ID NO：30、SEQ ID NO：31、SEQ ID NO：32、SEQ ID NO：33、SEQ ID NO：34、SEQ ID NO：92、SEQ ID NO：93、SEQ ID NO：94、 SEQ ID NO：95、SEQ ID NO：96、及SEQ ID NO：97。
13. 如請求項9之結合蛋白，其中該人類接受體構架包含選自由以下序列組成之群之胺基酸序列：SEQ ID NO：6、SEQ ID NO：7、SEQ ID NO：8、SEQ ID NO：9、SEQ ID NO：10、SEQ ID NO：11、SEQ ID NO：12、SEQ ID NO：13、SEQ ID NO：14、SEQ ID NO：15、SEQ ID NO：16、SEQ ID NO：17、SEQ ID NO：18、SEQ ID NO：19、SEQ ID NO：20、SEQ ID NO：21、SEQ ID NO：22、SEQ ID NO：23、SEQ ID NO：24、SEQ ID NO：25、 SEQ ID NO：26、SEQ ID NO：27、SEQ ID NO：28、SEQ ID NO：29、SEQ ID NO：30、SEQ ID NO：31、SEQ ID NO：32、SEQ ID NO：33、SEQ ID NO：34、SEQ ID NO：92、SEQ ID NO：93、SEQ ID NO：94、SEQ ID NO：95、SEQ ID NO：96、及SEQ ID NO：97。
14. 如請求項10之結合蛋白，其中該人類接受體構架包含選自由以下序列組成之群之胺基酸序列：SEQ ID NO：6、SEQ ID NO：7、SEQ ID NO：8、SEQ ID NO：9、SEQ ID NO：10、SEQ ID NO：11、SEQ ID NO：12、SEQ ID NO：13、 SEQ ID NO：14、SEQ ID NO：15、SEQ ID NO：16、SEQ ID NO：17、SEQ ID NO：18、SEQ ID NO：19、SEQ ID NO：20、SEQ ID NO：21、SEQ ID NO：22、SEQ ID NO：23、SEQ ID NO：24、SEQ ID NO：25、SEQ ID NO：26、SEQ ID NO：27、SEQ ID NO：28、SEQ ID NO：29、SEQ ID NO：30、SEQ ID NO：31、SEQ ID NO：32、SEQ ID NO：33、SEQ ID NO：34、SEQ ID NO：92、SEQ ID NO：93、SEQ ID NO：94、SEQ ID NO：95、SEQ ID NO：96、 及SEQ ID NO：97。
15. 如請求項1之結合蛋白，其中該結合蛋白包含至少一個具有選自由以下序列組成之群之胺基酸序列的可變域：SEQ ID NO：61、SEQ ID NO：62、SEQ ID NO：63、SEQ ID NO：64、SEQ ID NO：65、SEQ ID NO：66、SEQ ID NO：67、SEQ ID NO：68、SEQ ID NO：69、SEQ ID NO：70、SEQ ID NO：71、SEQ ID NO：72、SEQ ID NO：73、SEQ ID NO：74、SEQ ID NO：75、SEQ ID NO：76、SEQ ID NO：77、及SEQ ID NO.：78。
16. 如請求項15之結合蛋白，其中該結合蛋白包含兩個可變域，其中該兩個可變域具有選自由以下序列組成之群之胺基酸序列：SEQ ID NO：61及SEQ ID NO：62、 SEQ ID NO：63及SEQ ID NO：64、SEQ ID NO：65及SEQ ID NO：66、SEQ ID NO：67及SEQ ID NO：68、SEQ ID NO：69及SEQ ID NO：70、SEQ ID NO：71及SEQ ID NO：72、SEQ ID NO：73及SEQ ID NO：74、SEQ ID NO：75及SEQ ID NO：76、SEQ ID NO.：77及SEQ ID NO.：78、SEQ ID NO：67及SEQ ID NO：70，及SEQ ID NO：69及SEQ ID NO：68。
17. 如請求項7之結合蛋白，其中該人類接受體構架包含至少一處關鍵殘基之構架區胺基酸取代，該關鍵殘基係選自由以下殘基組成之群：鄰接於CDR之殘基；糖基化位點殘基；稀有殘基；能夠與人類IL-12之p40次單位相互作用之殘基；能夠與CDR相互作用之殘基；標準殘基；介於重鏈可變區與輕鏈可變區之間的接觸殘基；微調區內之殘基；及介於Chothia定義之可變重鏈CDR1與Kabat定義之第一重鏈構架之間重疊區中的殘基。
18. 如請求項10之結合蛋白，其中該人類接受體構架包含至少一處關鍵殘基之構架區胺基酸取代，該關鍵殘基係選自由以下殘基組成之群： 鄰接於CDR之殘基；糖基化位點殘基；稀有殘基；能夠與人類IL-12之p40次單位相互作用之殘基；能夠與CDR相互作用之殘基；標準殘基；介於重鏈可變區與輕鏈可變區之間的接觸殘基；微調區內之殘基；及介於Chothia定義之可變重鏈CDR1與Kabat定義之第一重鏈構架之間重疊區中的殘基。
19. 如請求項16之結合蛋白，其中該人類接受體構架包含至少一處關鍵殘基之構架區胺基酸取代，該關鍵殘基係選自由以下殘基組成之群：鄰接於CDR之殘基；糖基化位點殘基；稀有殘基；能夠與人類IL-12之p40次單位相互作用之殘基；能夠與CDR相互作用之殘基；標準殘基；介於重鏈可變區與輕鏈可變區之間的接觸殘基；微調區內之殘基；及介於Chothia定義之可變重鏈CDR1與Kabat定義之第一重鏈構架之間重疊區中的殘基。
20. 如請求項17之結合蛋白，其中關鍵殘基係選自由3H、5H、10H、11H、12H、13H、15H、16H、18H、19H、23H、24H、25H、30H、41H、44H、46H、49H、66H、68H、71H、73H、 74H、75H、76H、77H、78H、79H、81H、82H、82AH、82BH、82CH、83H、84H、85H、86H、87H、89H、93H、98H、108H、109H、1L、2L、3L、7L、8L、9L、10L、11L、12L、13L、15L、17L、19L、20L、21L、22L、36L、41L、42L、43L、45L、46L、58L、60L、62L、63L、67L、70L、73L、74L、77L、78L、79L、80L、83L、85L、87L、104L及106L所組成之群。
21. 如請求項18之結合蛋白，其中關鍵殘基係選自由3H、5H、10H、11H、12H、13H、15H、16H、18H、19H、23H、24H、25H、30H、41H、44H、46H、49H、66H、68H、71H、73H、74H、75H、76H、77H、78H、79H、81H、82H、82AH、82BH、82CH、83H、84H、85H、86H、87H、89H、93H、98H、108H、109H、1L、2L、3L、7L、8L、9L、10L、11L、12L、13L、15L、17L、19L、20L、21L、22L、36L、41L、42L、43L、45L、46L、58L、60L、62L、63L、67L、70L、73L、74L、77L、78L、79L、80L、83L、85L、87L、104L及106L所組成之群。
22. 如請求項19之結合蛋白，其中關鍵殘基係選自由3H、5H、10H、11H、12H、13H、15H、16H、18H、19H、23H、24H、25H、30H、41H、44H、46H、49H、66H、68H、71H、73H、74H、75H、76H、77H、78H、79H、81H、82H、82AH、82BH、82CH、83H、84H、85H、86H、87H、89H、93H、98H、108H、109H、1L、2L、3L、7L、8L、9L、10L、11L、12L、13L、15L、17L、19L、20L、21L、22L、36L、41L、42L、43L、45L、46L、58L、60L、62L、63L、67L、70L、73L、74L、77L、78L、79L、80L、83L、85L、87L、104L及 106L所組成之群。
23. 如請求項17之結合蛋白，其中該結合蛋白為一致的人類可變域。
24. 如請求項18之結合蛋白，其中該結合蛋白為一致的人類可變域。
25. 如請求項19之結合蛋白，其中該結合蛋白為一致的人類可變域。
26. 如請求項7之結合蛋白，其中該人類接受體構架包含至少一處構架區胺基酸取代，其中該構架之胺基酸序列至少65%與該人類接受體構架之序列相同，且包含至少70個與該人類接受體構架相同之胺基酸殘基。
27. 如請求項10之結合蛋白，其中該人類接受體構架包含至少一處構架區胺基酸取代，其中該構架之胺基酸序列至少65%與該人類接受體構架之序列相同，且包含至少70個與該人類接受體構架相同之胺基酸殘基。
28. 如請求項16之結合蛋白，其中該人類接受體構架包含至少一處構架區胺基酸取代，其中該構架之胺基酸序列至少65%與該人類接受體構架之序列相同且包含至少70個與該人類接受體構架相同之胺基酸殘基。
29. 如請求項1之結合蛋白，其中該結合蛋白包含至少一個具有選自由以下序列組成之群之胺基酸序列的可變域：SEQ ID NO：79、SEQ ID NO：80、SEQ ID NO：81、SEQ ID NO：82、SEQ ID NO：83、 SEQ ID NO：84、SEQ ID NO：85、SEQ ID NO：86、SEQ ID NO：87、SEQ ID NO：88、SEQ ID NO：89、SEQ ID NO：90、SEQ ID NO：91、SEQ ID NO：98、SEQ ID NO：99、SEQ ID NO：100、SEQ ID NO：101、SEQ ID NO：102、SEQ ID NO：103、SEQ ID NO：104、SEQ ID NO：105、SEQ ID NO：106、SEQ ID NO：107、SEQ ID NO：108、及SEQ ID NO：109。
30. 如請求項29之結合蛋白，其中該結合蛋白包含兩個可變域，其中該兩個可變域具有選自由以下序列組成之群之胺基酸序列：SEQ ID NO：67及SEQ ID NO：79、SEQ ID NO：80及SEQ ID NO：81、SEQ ID NO：82及SEQ ID NO：83、 SEQ ID NO：84及SEQ ID NO：85、SEQ ID NO：86及SEQ ID NO：87、SEQ ID NO：88及SEQ ID NO：89、SEQ ID NO：90及SEQ ID NO：91、SEQ ID NO：98及SEQ ID NO：99、SEQ ID NO：100及SEQ ID NO：101、SEQ ID NO：102及SEQ ID NO：103、SEQ ID NO：104及SEQ ID NO：105、SEQ ID NO：106及SEQ ID NO：107，及SEQ ID NO：108及SEQ ID NO：109。
31. 如請求項20之結合蛋白，其中該結合蛋白包含至少一個具有選自由以下序列組成之群之胺基酸序列的可變域：SEQ ID NO：79、SEQ ID NO：80、SEQ ID NO：81、SEQ ID NO：82、SEQ ID NO：83、SEQ ID NO：84、SEQ ID NO：85、SEQ ID NO：86、SEQ ID NO：87、SEQ ID NO：88、SEQ ID NO：89、SEQ ID NO：90、SEQ ID NO：91、SEQ ID NO：98、 SEQ ID NO：99、SEQ ID NO：100、SEQ ID NO：101、SEQ ID NO：102、SEQ ID NO：103、SEQ ID NO：104、SEQ ID NO：105、SEQ ID NO：106、SEQ ID NO：107、SEQ ID NO：108，及SEQ ID NO：109。
32. 如請求項21之結合蛋白，其中該結合蛋白包含至少一個具有選自由以下序列組成之群之胺基酸序列的可變域：SEQ ID NO：79、SEQ ID NO：80、SEQ ID NO：81、SEQ ID NO：82、SEQ ID NO：83、SEQ ID NO：84、SEQ ID NO：85、SEQ ID NO：86、SEQ ID NO：87、SEQ ID NO：88、SEQ ID NO：89、SEQ ID NO：90、SEQ ID NO：91、 SEQ ID NO：98、SEQ ID NO：99、SEQ ID NO：100、SEQ ID NO：101、SEQ ID NO：102、SEQ ID NO：103、SEQ ID NO：104、SEQ ID NO：105、SEQ ID NO：106、SEQ ID NO：107、SEQ ID NO：108，及SEQ ID NO：109。
33. 如請求項22之結合蛋白，其中該結合蛋白包含至少一個具有選自由以下序列組成之群之胺基酸序列的可變域：SEQ ID NO：79、SEQ ID NO：80、SEQ ID NO：81、SEQ ID NO：82、SEQ ID NO：83、SEQ ID NO：84、SEQ ID NO：85、SEQ ID NO：86、SEQ ID NO：87、SEQ ID NO：88、SEQ ID NO：89、SEQ ID NO：90、 SEQ ID NO：91、SEQ ID NO：98、SEQ ID NO：99、SEQ ID NO：100、SEQ ID NO：101、SEQ ID NO：102、SEQ ID NO：103、SEQ ID NO：104、SEQ ID NO：105、SEQ ID NO：106、SEQ ID NO：107、SEQ ID NO：108，及SEQ ID NO.：109。
34. 如請求項1之結合蛋白，其中該結合蛋白能夠結合選自由IL-12及IL-23組成之群之目標物。
35. 如請求項4之結合蛋白，其中該結合蛋白能夠結合選自由IL-12及IL-23組成之群之目標物。
36. 如請求項6之結合蛋白，其中該結合蛋白能夠結合選自由IL-12及IL-23組成之群之目標物。
37. 如請求項7之結合蛋白，其中該結合蛋白能夠結合選自由IL-12及IL-23組成之群之目標物。
38. 如請求項11之結合蛋白，其中該結合蛋白能夠結合選自由IL-12及IL-23組成之群之目標物。
39. 如請求項15之結合蛋白，其中該結合蛋白能夠結合選自由IL-12及IL-23組成之群之目標物。
40. 如請求項17之結合蛋白，其中該結合蛋白能夠結合選自由IL-12 及IL-23組成之群之目標物。
41. 如請求項20之結合蛋白，其中該結合蛋白能夠結合選自由IL-12及IL-23組成之群之目標物。
42. 如請求項26之結合蛋白，其中該結合蛋白能夠結合選自由IL-12及IL-23組成之群之目標物。
43. 如請求項29之結合蛋白，其中該結合蛋白能夠結合選自由IL-12及IL-23組成之群之目標物。
44. 如請求項34之結合蛋白，其中該結合蛋白能夠調節選自由IL-12及IL-23組成之群之目標物的生物功能。
45. 如請求項39之結合蛋白，其中該結合蛋白能夠調節選自由IL-12及IL-23組成之群之目標物的生物功能。
46. 如請求項43之結合蛋白，其中該結合蛋白能夠調節選自由IL-12及IL-23組成之群之目標物的生物功能。
47. 如請求項34之結合蛋白，其中該結合蛋白能夠中和選自由IL-12及IL-23組成之群之目標物。
48. 如請求項39之結合蛋白，其中該結合蛋白能夠中和選自由IL-12及IL-23組成之群之目標物。
49. 如請求項43之結合蛋白，其中該結合蛋白能夠中和選自由IL-12及IL-23組成之群之目標物。
50. 如請求項34之結合蛋白，其中該結合蛋白對該目標物之結合速率常數(Kon)藉由表面電漿共振所量測者係選自由以下數值組成之群：至少約10²M^-1s^-1、至少約10³M^-1s^-1、至少約10⁴M^-1s^-1、至少約10⁵M^-1s^-1及至少約10⁶M^-1s^-1。
51. 如請求項39之結合蛋白，其中該結合蛋白對該目標物之結合速率常數(Kon)藉由表面電漿共振所量測者係選自由以下數值組成之群：至少約10²M^-1s^-1、至少約10³M^-1s^-1、至少約10⁴M^-1s^-1、 至少約10⁵M^-1s^-1及至少約10⁶M^-1s^-1。
52. 如請求項42之結合蛋白，其中該結合蛋白對該目標物之結合速率常數(Kon)藉由表面電漿共振所量測者係選自由以下數值組成之群：至少約10²M^-1s^-1、至少約10³M^-1s^-1、至少約10⁴M^-1s^-1、至少約10⁵M^-1s^-1及至少約10⁶M^-1s^-1。
53. 如請求項43之結合蛋白，其中該結合蛋白對該目標物之結合速率常數(Kon)藉由表面電漿共振所量測者係選自由以下數值組成之群：至少約10²M^-1s^-1、至少約10³M^-1s^-1、至少約10⁴M^-1s^-1、至少約10⁵M^-1s^-1及至少約10⁶M^-1s^-1。
54. 如請求項34之結合蛋白，其中該結合蛋白對該目標物之解離速率常數(Koff)藉由表面電漿共振所量測者係選自由以下數值組成之群：至多約10^-3s^-1、至多約10^-4s^-1、至多約10^-5s^-1及至多約10^-6s^-1。
55. 如請求項39之結合蛋白，其中該結合蛋白對該目標物之解離速率常數(Koff)藉由表面電漿共振所量測者係選自由以下數值組成之群：至多約10^-3s^-1、至多約10^-4s^-1、至多約10^-5s^-1及至多約10^-6s^-1。
56. 如請求項42之結合蛋白，其中該結合蛋白對該目標物之解離速率常數(Koff)藉由表面電漿共振所量測者係選自由以下數值組成之群：至多約10^-3s^-1、至多約10^-4s^-1、至多約10^-5s^-1及至多約10^-6s^-1。
57. 如請求項43之結合蛋白，其中該結合蛋白對該目標物之解離速率常數(K_off)藉由表面電漿共振所量測者係選自由以下數值組成之群：至多約10^-3s^-1、至多約10^-4s^-1、至多約10^-5s^-1及至多約10^-6s^-1。
58. 如請求項34之結合蛋白，其中該結合蛋白對該目標物之解離常 數(K_D)係選自由以下數值組成之群：至多約10^-7M、至多約10^-8M、至多約10^-9M、至多約10^-10M、至多約10^-11M、至多約10^-12M及至多約10^-13M。
59. 如請求項39之結合蛋白，其中該結合蛋白對該目標物之解離常數(K_D)係選自由以下數值組成之群：至多約10^-7M、至多約10^-8M、至多約10^-9M、至多約10^-10M、至多約10^-11M、至多約10^-12M及至多約10^-13M。
60. 如請求項42之結合蛋白，其中該結合蛋白對該目標物之解離常數(K_D)係選自由以下數值組成之群：至多約10^-7M、至多約10^-8M、至多約10^-9M、至多約10^-10M、至多約10^-11M、至多約10^-12M及至多約10^-13M。
61. 如請求項43之結合蛋白，其中該結合蛋白對該目標物之解離常數(K_D)係選自由以下數值組成之群：至多約10^-7M、至多約10^-8M、至多約10^-9M、至多約10^-10M、至多約10^-11M、至多約10^-12M及至多約10^-13M。
62. 一種抗體構造，其包含如請求項1至61中任一項之結合蛋白，該抗體構造另外包含連接多肽或免疫球蛋白恆定域。
63. 如請求項62之抗體構造，其中該結合蛋白係選自由以下物質組成之群：免疫球蛋白分子、單株抗體、嵌合抗體、CDR-移植抗體、人化抗體、Fab、Fab'、 F(ab')2、Fv、二硫鍵連接Fv、scFv、單域抗體、雙功能抗體、多特異性抗體、雙重特異性抗體，及雙特異性抗體。
64. 如請求項62之抗體構造，其中該結合蛋白包含選自由以下結構域組成之群的重鏈免疫球蛋白恆定域：人類IgM恆定域、人類IgG1恆定域、人類IgG2恆定域、人類IgG3恆定域、人類IgG4恆定域、人類IgE恆定域，及人類IgA恆定域。
65. 如請求項62之抗體構造，其包含一具有選自由以下序列組成之群之胺基酸序列的免疫球蛋白恆定域：SEQ ID NO：2、SEQ ID NO：3、SEQ ID NO：4、及SEQ ID NO：5。
66. 一種抗體共軛物，其包含如請求項62至65中任一項之抗體構 造，該抗體共軛物另外包含選自由以下物質組成之群之藥劑：免疫黏附分子、成像劑、治療劑及細胞毒性劑。
67. 如請求項66之抗體共軛物，其中該藥劑為選自由以下物質組成之群之成像劑：放射性標記、酵素、螢光標記、發光標記、生物發光標記、磁性標記及生物素。
68. 如請求項66之抗體共軛物，其中該成像劑為選自由以下物質組成之群之放射性標記：³H、¹⁴C、³⁵S、⁹⁰Y、⁹⁹Tc、¹¹¹In、¹²⁵I、¹³¹I、¹⁷⁷Lu、¹⁶⁶Ho及¹⁵³Sm。
69. 如請求項66之抗體共軛物，其中該藥劑為選自由以下物質組成之群之治療劑或細胞毒素劑：抗代謝物、烷基化劑、抗生素、生長因子、細胞激素、抗血管生成劑、抗有絲分裂劑、蒽環黴素、毒素及細胞凋零劑。
70. 如請求項64之抗體構造，其中該結合蛋白具有人類糖基化模式。
71. 如請求項66之抗體共軛物，其中該結合蛋白具有人類糖基化模式。
72. 如請求項3之結合蛋白，其中該結合蛋白以晶體形式存在。
73. 如請求項62之抗體構造，其中該抗體構造以晶體形式存在。
74. 如請求項66之抗體共軛物，其中該抗體構造以晶體形式存在。
75. 如請求項72之結合蛋白，其中該晶體為不含載劑之醫藥控制釋放晶體。
76. 如請求項73之抗體構造，其中該晶體為不含載劑之醫藥控制釋放晶體。
77. 如請求項74之抗體共軛物，其中該晶體為不含載劑之醫藥控制釋放晶體。
78. 如請求項72之結合蛋白，其中該結合蛋白具有長於該結合蛋白 之可溶性對應物的活體內半衰期。
79. 如請求項73之抗體構造，其中該抗體構造具有長於該抗體構造之可溶性對應物的活體內半衰期。
80. 如請求項74之抗體共軛物，其中該抗體共軛物具有長於該抗體共軛物之可溶性對應物的活體內半衰期。
81. 如請求項72之結合蛋白，其中該結合蛋白保有生物活性。
82. 如請求項73之抗體構造，其中該抗體構造保有生物活性。
83. 如請求項74之抗體共軛物，其中該抗體共軛物保有生物活性。
84. 一種經分離核酸，其編碼如請求項1至61中任一項之結合蛋白胺基酸序列。
85. 一種經分離核酸，其編碼如請求項62至65中任一項之抗體構造胺基酸序列。
86. 一種經分離核酸，其編碼如請求項66至69中任一項之抗體共軛物胺基酸序列。
87. 一種載體，其包含如請求項84至86中任一項之經分離核酸。
88. 如請求項87之載體，其中該載體係選自由pcDNA、pTT、pTT3、pEFBOS、pBV、pJV及pBJ組成之群。
89. 一種宿主細胞，其包含如請求項87至88中任一項之載體。
90. 如請求項89之宿主細胞，其中該宿主細胞為原核細胞。
91. 如請求項90之宿主細胞，其中該宿主細胞為大腸桿菌(E.Coli)。
92. 如請求項89之宿主細胞，其中該宿主細胞為真核細胞。
93. 如請求項92之宿主細胞，其中該真核細胞係選自由原生生物細胞、動物細胞、植物細胞及真菌細胞組成之群。
94. 如請求項92之宿主細胞，其中該真核細胞為選自由哺乳動物細胞、鳥類細胞及昆蟲細胞組成之群之動物細胞。
95. 如請求項92之宿主細胞，其中該宿主細胞為CHO細胞。
96. 如請求項92之宿主細胞，其中該宿主細胞為COS。
97. 如請求項92之宿主細胞，其中該宿主細胞為酵母細胞。
98. 如請求項97之宿主細胞，其中該酵母細胞為釀酒酵母(Saccharomyces cerevisiae)。
99. 如請求項92之宿主細胞，其中該宿主細胞為昆蟲Sf9細胞。
100. 一種製造能夠結合IL-12之p40次單位之蛋白質的方法，其包含於培養基中在足以產生能夠結合IL-12之p40次單位之結合蛋白的條件下，培養如請求項89至99中任一項之宿主細胞。
101. 一種蛋白質，其係由如請求項100之方法製得。
102. 一種用於釋放結合蛋白之組合物，該組合物包含：(a)一調配物，其中該調配物包含如請求項72至83中任一項之晶體化結合蛋白及一成分；及(b)至少一種聚合載劑。
103. 如請求項102之組合物，其中該聚合載劑為選自一或多個由以下物質組成之群之聚合物：聚(丙烯酸)、聚(氰基丙烯酸酯)、聚(胺基酸)、聚(酐)、聚(縮肽)、聚(酯)、聚(乳酸)、聚(乳酸-共-乙醇酸)或PLGA、聚(b-羥基丁酸酯)、聚(己內酯)、聚(二氧雜環己酮)；聚(乙二醇)、聚((羥基丙基)甲基丙烯醯胺、聚[(有機)磷氮烯]、聚(原酸酯)、聚(乙烯醇)、聚(乙烯基吡咯啶酮)、順丁烯二酸酐-烷基乙烯醚共聚物、泊洛尼克(pluronic)多元醇、白蛋白、海藻酸鹽、纖維素及纖維素衍生物、膠原蛋白、纖維蛋白、明膠、玻尿酸、寡醣、甘胺基聚糖、硫酸化多醣、其摻合物及共聚物。
104. 如請求項102之組合物，其中該成份係選自由以下物質組成之群：白蛋白、蔗糖、海藻糖、乳糖醇、明膠、羥基丙基-β-環糊精、甲氧基聚乙二醇及聚乙二醇。
105. 一種用於治療哺乳動物之方法，其包含投與該哺乳動物有效量之如請求項102之組合物之步驟。
106. 一種醫藥組合物，其包含如請求項1至61中任一項之結合蛋白及醫藥上可接受之載劑。
107. 如請求項106之醫藥組合物，其中該醫藥上可接受之載劑具有用以增加該結合蛋白吸收或分散之佐劑的功能。
108. 如請求項107之醫藥組合物，其中該佐劑為玻尿酸酶。
109. 如請求項106之醫藥組合物，其另外包含至少一種用於治療IL-12活性有害之病症之額外治療劑。
110. 如請求項109之醫藥組合物，其中該額外藥劑係選自由以下藥劑組成之群：治療劑、成像劑、細胞毒性劑、血管生成抑制劑、激酶抑制劑、輔助刺激分子阻斷劑、黏附分子阻斷劑、抗-細胞激素抗體或其功能片段、甲胺喋呤、環孢素、雷帕黴素(rapamycin)、FK506、可偵測標記或報導物、TNF拮抗劑、抗風濕藥、肌肉鬆弛劑、麻醉藥、非-類固醇抗炎藥(NSAID)、鎮痛劑、麻醉劑、鎮靜劑、局部麻醉劑、神經肌肉阻斷劑、抗菌劑、抗牛皮癬藥、皮質類固醇、合成代謝類固醇、紅血球生成素、免疫劑、免疫球蛋白、免疫抑止劑、生長激素、激素替代藥物、放射性藥物、抗抑鬱劑、精神抑制藥、興奮劑、哮喘藥物、β促效劑、吸入性類固醇、腎上腺素或類似物、細胞激素及細胞激素拮抗劑。
111. 一種降低人類IL-12活體外活性之方法，其包含使人類IL-12與如請求項1至61中任一項之結合蛋白接觸，致使人類IL-12活性降低。
112. 一種如請求項1至61中任一項之結合蛋白之用途，其係用於製造用以降低罹患IL-12活性有害之病症之人類受檢者體內人類IL-12 活性之藥劑。
113. 一種如請求項1至61中任一項之結合蛋白之用途，其係用於製造用以治療受檢者之IL-12活性有害之疾病或病症之藥劑。
114. 如請求項113之用途，其中該病症係選自包含以下病症之群：類風濕性關節炎、骨關節炎、青少年慢性關節炎、敗血性關節炎、萊姆(Lyme)關節炎、牛皮癬性關節炎、反應性關節炎、脊椎關節病、全身性紅斑狼瘡症、克羅恩氏病(Crohn's disease)、潰瘍性結腸炎、炎性腸病、胰島素依賴性糖尿病、甲狀腺炎、哮喘、過敏性疾病、牛皮癬、皮炎硬皮病、移植物抗宿主疾病、器官移植排斥反應、與器官移植相關的急性或慢性免疫疾病、類肉瘤病、動脈粥樣硬化、散播性血管內凝血、川崎氏病(Kawasaki's disease)、格雷氏病(Grave's disease)、腎病症候群、慢性疲勞症候群、韋格納氏(Wegener's)肉牙腫病、亨偌-絲奇恩賴(Henoch-Schoenlein)紫癜、腎微血管炎(microscopic vasculitis of the kidneys)、慢性活動性肝炎、葡萄膜炎、敗血性休克、毒性休克症候群、敗血症症候群、惡病質、感染性疾病、寄生性疾病、後天免疫缺乏症候群、急性橫貫性脊髓炎、亨爾頓氏(Huntington's)舞蹈病、帕金森氏病(Parkinson's disease)、阿茲海默症(Alzheimer's disease)、中風、原發性膽汁性肝硬化症、溶血性貧血、惡性腫瘤、心臟衰竭、心肌梗塞、愛狄生症(Addison's disease)、偶發性疾病、I型自身免疫性多腺體功能低下及II型自身免疫性多腺體功能低下、施密特氏症候群(Schmidt's syndrome)、成人(急性)呼吸窘迫症候群、禿頭症、斑禿、血清陰性關節病、關節病、賴透氏病(Reiter's disease)、牛皮癬性關節病、潰瘍性結腸炎關節病、腸病性滑膜炎、與衣原體(chlamydia)、耶氏桿菌(yersinia)及沙門氏菌(salmonella)相關之 關節病、脊椎關節病、粥樣疾病/動脈硬化症、異位性過敏症、自體免疫大皰性疾病、尋常天疱瘡、落葉性天疱瘡、類天孢瘡、線性IgA疾病、自體免疫溶血性貧血、庫姆斯氏(Coombs)陽性溶血性貧血、後天惡性貧血、青少年惡性貧血、肌痛腦炎/皇家自由病、慢性皮膚黏膜念珠菌病、巨細胞動脈炎、原發性硬化肝炎、隱性自體免疫肝炎、後天免疫缺乏疾病症候群、後天免疫缺乏相關疾病、B型肝炎、C型肝炎、普通變異性免疫缺乏(普通變異性低γ球蛋白血症)、擴張型心肌症、女性不孕、卵巢衰竭、卵巢早衰、纖維變性肺病、隱性纖維化肺泡炎、炎症後間質性肺病、間質性肺炎、結締組織疾病相關之間質性肺病、混合型結締組織疾病相關之肺病、全身性硬化症相關之間質性肺病、類風濕性關節炎相關之間質性肺病、全身性紅斑狼瘡症相關之肺病、皮肌炎/多發性肌炎相關之肺病、修格蘭氏病(Sjögren's disease)相關之肺病、強直性脊椎炎相關之肺病、血管炎彌漫性肺病、含鐵血黃素沉著相關之肺病、藥物誘導之間質性肺病、纖維化、放射性纖維化、阻塞性細支氣管炎、慢性嗜酸性肺炎、淋巴球浸潤性肺病、感染後間質性肺病、痛風性關節炎、自體免疫性肝炎、1型自體免疫性肝炎(典型自體免疫或類狼瘡性肝炎)、2型自體免疫性肝炎(抗-LKM抗體性肝炎)、自體免疫介導之低糖血症、B型胰島素抗性黑棘皮病、副甲狀腺機能減退症、與器官移植相關之急性免疫疾病、與器官移植相關之慢性免疫疾病、非炎性骨關節病、原發性硬化性膽管炎、1型牛皮癬、2型牛皮癬、特發性白血球減少症、自體免疫嗜中性白血球減少症、未分型腎病(renal diseasel NOS)、絲球體腎炎、腎微細血管炎、萊姆病、盤狀紅斑狼瘡、特發性或未分型男性不育、精子自體免疫症、多發性硬化症(所有次型)、交感神經性眼 炎、繼發於結締組織疾病之肺循環血壓過高、古德帕斯丘氏症候群(Goodpasture's syndrome)、結節性多動脈炎之肺表現、急性風濕熱、類風濕性脊椎炎、司悌爾氏病(Still's disease)、全身性硬化症、修格蘭氏症候群、高安氏病(Takayasu's disease)/動脈炎、自體免疫性血小板減少症、特發性血小板減少症、自體免疫性甲狀腺病、甲狀腺機能亢進症、甲狀腺腫性自體免疫性甲狀腺機能減退症(橋本氏病(Hashimoto's disease))、萎縮性自體免疫性甲狀腺機能減退症、原發性黏液水腫、晶狀體性葡萄膜炎、原發性血管炎、白斑症急性肝病、慢性肝病、酒精性肝硬化、酒精誘導之肝損傷、膽汁淤積症、特應性肝病、藥物誘導之肝炎、非酒精性脂肝炎、過敏症及哮喘、B群鏈球菌(GBS)感染、精神障礙(例如抑鬱症及精神分裂症)、Th2型及Th1型介導之疾病、急性及慢性疼痛(不同形式的疼痛)及癌症(諸如肺癌、乳癌、胃癌、膀胱癌、結腸癌、胰腺癌、卵巢癌、前列腺癌及直腸癌及造血惡性腫瘤(白血病及淋巴瘤))、無β脂蛋白血症、手足發紺、急性及慢性寄生性或感染性過程、急性白血病、急性淋巴母細胞白血病(ALL)、急性骨髓白血病(AML)、急性或慢性細菌感染、急性胰腺炎、急性腎衰竭、腺癌、心房異位搏動、AIDS癡呆綜合症、酒精誘導之肝炎、過敏性結膜炎、過敏性接觸皮炎、過敏性鼻炎、同種異體移植物排斥反應、α-1-抗胰蛋白酶缺乏、肌萎縮性側索硬化、貧血症、心絞痛、前角細胞退化症、抗cd3療法、抗磷脂症候群、抗受體過敏反應、主動脈及周邊動脈瘤、主動脈夾層、動脈高血壓、動脈硬化、動靜脈瘺、運動失調、心房顫動(持續或陣發性)、心房撲動、房室阻滯、B細胞淋巴瘤、骨移植物排斥反應、骨髓移植(BMT)排斥反應、束支阻滯、伯基特氏(Burkitt's)淋巴瘤、燒傷、心律不整、心臟頓 抑症候群、心臟腫瘤、心肌症、心肺分流炎症反應、軟骨移植排斥反應、小腦皮質退化症、小腦病症、紊亂或多源性房性心跳過速、化療相關病症、慢性髓細胞白血病(CML)、慢性酒精中毒、慢性發炎病變、慢性淋巴細胞白血病(CLL)、慢性阻塞性肺病(COPD)、慢性水楊酸中毒、結腸直腸癌、充血性心臟衰竭、結膜炎、接觸性皮炎、肺原性心臟病、冠狀動脈疾病、庫賈氏病(Creutzfeldt-Jakob disease)、培養陰性的敗血症、囊性纖維化、細胞激素療法相關之病症、拳擊員癡呆、髓鞘脫失病、出血性登革熱、皮炎、皮膚病、糖尿病(diabetes)、糖尿病(diabetes mellitus)、糖尿病性動脈硬化性疾病、彌漫性路易體疾病、擴張型充血性心肌症、基底神經節病症、中年唐氏症候群(Down's Syndrome in middle age)、由阻斷CNS多巴胺受體藥物誘導之藥物誘導性運動障礙、藥物敏感、濕疹、腦脊髓炎、心內膜炎、內分泌病、會厭炎、艾普斯坦-巴爾(epstein-barr)病毒感染、紅斑性肢痛症、錐體外及小腦病症、家族性吞噬細胞性淋巴組織細胞增多病、胎兒胸腺移植排斥反反應、弗裏德賴希氏(Friedreich's)運動失調、功能性周邊動脈病症、真菌敗血症、氣性壞疽、胃潰瘍、腎小球腎炎、任何器官或組織之移植物排斥反應、革蘭氏陰性敗血症、革蘭氏陽性敗血症、由細胞內微生物引起之肉芽瘤、毛細胞白血病、哈勒羅登-斯帕茲病(Hallerrorden-Spatz disease)、橋本氏甲狀腺炎、枯草熱、心臟移植排斥反應、血色病、血液透析、溶血性尿毒癥症候群/溶血栓性血小板減少性紫癜、出血、肝炎(A型)、希氏束心律不整、HIV感染/HIV神經病症、霍奇金氏病(Hodgkin's disease)、多動障礙、過敏反應、過敏性肺炎、高血壓、運動不足症(hypokinetic movement disorders)、下丘腦-垂體-腎上腺軸評估、特發性愛狄 生症、特發性肺纖維化、抗體介導之細胞毒性、衰弱)、嬰兒脊髓性肌肉萎縮症、主動脈炎症、流行性感冒a、電離輻射曝露、虹膜睫狀體炎/葡萄膜炎/視神經炎、缺血-再灌注損傷、缺血性中風、青少年類風濕性關節炎、青少年脊髓性肌肉萎縮症、卡波西氏(Kaposi's)肉瘤、腎移植排斥反應、退伍軍人症(legionella)、利什曼體病(leishmaniasis)、痲瘋病、皮質脊髓系統病變、脂性水腫、肝移植排斥反應、淋巴水腫、瘧疾、惡性淋巴瘤、惡性組織細胞增多病、惡性黑色素瘤、腦膜炎、腦膜炎球菌血症、代謝性/特發性疾病、偏頭痛、粒線體多系統病症、混合型結締組織疾病、單株免疫球蛋白病(monoclonal gammopathy)、多發性骨髓瘤、多發性系統退化症(Mencel Dejerine-Thomas Shi-Drager及Machado-Joseph)、重症肌無力、細胞內鳥分枝桿菌感染(mycobacterium avium)、結核分枝桿菌感染(mycobacterium tuberculosis)、骨髓異變症候群、心肌梗塞、心肌缺血症、鼻咽癌、新生兒慢性肺病、腎炎、腎病、神經退化性疾病、神經性I型肌肉萎縮、嗜中性白血球低下發燒、非霍奇金氏淋巴瘤、腹部主動脈及其分枝閉塞、閉塞性動脈病症、okt3療法、睪丸炎/附睪炎、睪丸炎/輸精管切除術反向程序(vasectomy reversal procedures)、內臟增大、骨疏鬆症、胰腺移植排斥反應、胰腺癌、副腫瘤症候群/惡性腫瘤高鈣血症、副甲狀腺移植排斥反應、骨盆發炎疾病、常年性鼻炎、心包病、周邊動脈粥樣硬化疾病、周邊血管病症、腹膜炎、惡性貧血、肺囊蟲(pneumocystis carinii)肺炎、肺炎、POEMS症候群(多發性神經病、內臟增大、內分泌病、單株免疫球蛋白病及皮膚改變症候群)、灌注後症候群、抽吸後症候群、MI後心切開術症候群、子癇前症、進行性核上麻痹、原發性肺循環血壓過高、放射療法、雷諾氏 (Raynaud's)現象及疾病、雷諾氏病、雷弗素姆氏病、規則的狹QRS心跳過速、腎血管性高血壓、再灌注損傷、限制型心肌症、肉瘤、硬皮病、老年舞蹈病、路易體型老年癡呆、血清陰性關節病、休克、鐮狀細胞性貧血症、皮膚同種異體移植物排斥反應、皮膚改變症候群、小腸移植排斥反應、實體腫瘤、特異性心律不整、脊椎運動失調、脊髓小腦退化症、鏈球菌肌炎、小腦結構病變、亞急性硬化性全腦炎、暈厥、心血管系統梅毒、全身性過敏症、全身性發炎反應症候群、全身性青少年類風濕性關節炎、T-細胞或FAB ALL、毛細管擴張、血栓阻塞性脈管炎、血小板減少症、毒性作用、移植、外傷/出血、III型過敏反應、IV型過敏反應、不穩定型心絞痛、尿毒癥、尿性敗血症、蕁麻疹、心臟瓣膜病、靜脈曲張、血管炎、靜脈疾病、靜脈栓塞、心室纖維性顫動、病毒及真菌感染、病毒性腦炎/無菌性腦膜炎、病毒相關噬血細胞症候群、魏尼凱-柯薩科夫症候群(Wernicke-Korsakoff syndrome)、威爾遜氏病(Wilson's disease)、任何器官或組織的異種移植物排斥反應。
115. 一種如請求項1至61中任一項之結合蛋白之用途，其係用於製造用以治療罹患IL-12造成傷害之病症之患者之藥劑，其中該藥劑係於第二藥劑投藥之前、同時或之後投藥，其中該第二藥劑係選自由以下藥劑組成之群：布替耐德(budenoside)、表皮生長因子、皮質類固醇、環孢素、柳氮磺吡啶(sulfasalazine)、胺基水楊酸鹽、6-巰基嘌呤、硫唑嘌呤(azathioprine)、甲硝噠唑(metronidazole)、脂肪加氧酶抑制劑、美沙拉嗪(mesalamine)、奧沙拉秦(olsalazine)、巴柳氮(balsalazide)、抗氧化劑、凝血脂素抑制劑、IL-1受體拮抗劑、抗-IL-1β單株抗體、抗-IL-6單株抗體、生長因子、彈性蛋白酶抑制劑、吡啶基-咪唑化合物、 TNF、LT、IL-1、IL-2、IL-6、IL-7、IL-8、IL-15、IL-16、IL-18、EMAP-II、GM-CSF、FGF及PDGF之抗體或促效劑，CD2、CD3、CD4、CD8、CD25、CD28、CD30、CD40、CD45、CD69、CD90或其配位體之抗體、甲胺喋呤(methotrexate)、環孢素、FK506、雷帕黴素(rapamycin)、黴酚酸嗎啉乙酯(mycophenolate mofetil)、來氟米特(leflunomide)、NSAID、布洛芬(ibuprofen)、皮質類固醇、潑尼龍(prednisolone)、磷酸二酯酶抑制劑、腺苷促效劑、抗血栓劑、補體抑制劑、腎上腺素劑、IRAK、NIK、IKK、p38、MAP激酶抑制劑、IL-1β轉化酶抑制劑、TNFα轉化酶抑制劑、T-細胞信號轉導抑制劑、金屬蛋白酶抑制劑、柳氮磺吡啶、硫唑嘌呤、6-巰基嘌呤、血管收縮素轉化酶抑制劑、可溶性細胞激素受體、可溶性p55 TNF受體、可溶性p75 TNF受體、sIL-1RI、sIL-1RII、sIL-6R、抗炎細胞激素、IL-4、IL-10、IL-11、IL-13及TGFβ。
116. 如請求項113之用途，其中投藥予該受檢者係藉由至少一種選自以下之模式：非經腸、皮下、肌肉內、靜脈內、關節內、支氣管內、腹內、囊內、軟骨內、腔內、腹腔內(intracerebellar)、小腦內、腦室內、大腸內、子宮頸內、胃內、肝內、心肌內、骨內、骨盆內、心包內、腹膜內、胸膜內、前列腺內、肺內、直腸內、腎內、視網膜內、脊椎內、滑膜內、胸內、子宮內、膀胱內、大藥丸方式、經陰道、經直腸、經口腔、舌下、鼻內及經皮。
117. 一種包含抗原結合域之結合蛋白，該結合蛋白能夠結合人類IL-12之p40次單位，其中該結合蛋白對該目標物之結合速率常數(K_on)係選自由以下數值組成之群：10²M^-1s^-1至10³M^-1s^-1之間、10³M^-1s^-1至10⁴M^-1s^-1之間、10⁴M^-1s^-1至10⁵M^-1s^-1之間及10⁵M^-1s^-1至 10⁶M^-1s^-1之間。
118. 如請求項117之結合蛋白，其中該結合蛋白對該目標物之結合速率常數(K_on)係選自由以下數值組成之群：1x10⁵M^-1s^-1、1.2x10⁵M^-1s^-1、3.2x10⁵M^-1s^-1、3.5x10⁵M^-1s^-1、4.8x10⁵M^-1s^-1、5.3x10⁵M^-1s^-1、7.4x10⁵M^-1s^-1、7.8x10⁵M^-1s^-1、8.0x10⁵M^-1s^-1、1.3x10⁶M^-1s^-1、1.6x10⁶M^-1s^-1、1.6x10⁶M^-1s^-1及1.7x10⁶M^-1s^-1。
119. 一種包含抗原結合域之結合蛋白，該結合蛋白能夠結合人類IL-12之p40次單位，其中該結合蛋白具有對該目標物之解離速率常數(K_off)藉由表面電漿共振所量測者係選自由以下數值組成之群：10^-3s^-1至10^-4s^-1、10^-4s^-1至10^-5s^-1及10^-5s^-1至10^-6s^-1。
120. 如請求項119之結合蛋白，其中該結合蛋白對該目標物之解離速率常數(K_off)藉由表面電漿共振所量測者係選自由以下數值組成之群：1x10^-3s^-1、1.24x 10^-3s^-1、1.5x10^-4s^-1、3x10^-4s^-1、1x10^-5s^-1、8x10^-5s^-1、1x10^-6s^-1及7.6x10^-6s^-1。
121. 一種包含抗原結合域之結合蛋白，該結合蛋白能夠結合人類IL-12之p40次單位，其中該結合蛋白對該目標物之解離常數(K_D)係選自由以下數值組成之群：10^-7M至10^-8M、10^-8M至10^-9M、10^-9M至10^-10M、10^-10至10^-11M、10^-11M至10^-12M及10^-12 to M 10^-13M。
122. 如請求項121之結合蛋白，其中該結合蛋白對該目標物之解離常數(K_D)係選自由以下數值組成之群：1.3x10^-9M、2x10^-10M、4x10^-10M、7.5x10^-10M、7.6x10^-10M、1x10^-11M、2.4x10^-11M及4.6x10^-11M。
123. 如請求項117至122中任一項之結合蛋白，其中該結合蛋白能夠結合選自由IL-12及IL-23組成之群之目標物。
124. 如請求項117至122中任一項之結合蛋白，其中該結合蛋白能夠調 節選自由IL-12及IL-23組成之群之目標物的生物功能。
125. 如請求項117至122中任一項之結合蛋白，其中該結合蛋白能夠中和選自由IL-12及IL-23組成之群之目標物。
126. 如請求項117至122中任一項之結合蛋白，其中該結合蛋白係選自由免疫球蛋白分子、單株抗體、嵌合抗體、CDR-移植抗體、人化抗體、Fab、Fab'、F(ab')2、Fv、二硫鍵連接Fv、scFv、單域抗體、雙功能抗體、多特異性抗體、雙重特異性抗體及雙特異性抗體組成之群。
127. 如請求項126之結合蛋白，其中該結合蛋白係人化抗體。
128. 一種醫藥組合物，其中包含如請求項117至122中任一項之結合蛋白及醫藥上可接受之載劑。
129. 如請求項128之醫藥組合物，其另外包含至少一種用於治療IL-12活性有害之病症之額外治療劑。
130. 如請求項129之醫藥組合物，其中該額外藥劑係選自由下藥劑組成之群：治療劑、成像劑、細胞毒性劑、血管生成抑制劑、激酶抑制劑、輔助刺激分子阻斷劑、黏附分子阻斷劑、抗-細胞激素抗體或其功能片段、甲胺喋呤、環孢素、雷帕黴素(rapamycin)、FK506、可偵測標記或報導物、TNF拮抗劑、抗風濕藥、肌肉鬆弛劑、麻醉藥、非-類固醇抗炎藥(NSAID)、鎮痛劑、麻醉劑、鎮靜劑、局部麻醉劑、神經肌肉阻斷劑、抗菌劑、抗牛皮癬藥、皮質類固醇、合成代謝類固醇、紅血球生成素、免疫劑、免疫球蛋白、免疫抑止劑、生長激素、激素替代藥物、放射性藥物、抗抑鬱劑、精神抑制藥、興奮劑、哮喘藥物、β促效劑、吸入性類固醇、腎上腺素或類似物、細胞激素及細胞激素拮抗劑。
131. 一種如請求項117至127中任一項之結合蛋白之用途，其係用於製 造用以治療受檢者之IL-12活性有害之疾病或病症之藥劑。
132. 如請求項131之用途，其中該病症係選自包含以下病症之群：類風濕性關節炎、骨關節炎、青少年慢性關節炎、敗血性關節炎、萊姆關節炎、牛皮癬性關節炎、反應性關節炎、脊椎關節病、全身性紅斑狼瘡症、克羅恩氏病、潰瘍性結腸炎、炎性腸病、胰島素依賴性糖尿病、甲狀腺炎、哮喘、過敏性疾病、牛皮癬、皮炎硬皮病、移植物抗宿主疾病、器官移植排斥反應、與器官移植相關的急性或慢性免疫疾病、類肉瘤病、動脈粥樣硬化、散播性血管內凝血、川崎氏病、格雷氏病、腎病症候群、慢性疲勞症候群、韋格納氏肉牙腫病、亨偌-絲奇恩賴紫癜、腎微血管炎、慢性活動性肝炎、葡萄膜炎、敗血性休克、毒性休克症候群、敗血症症候群、惡病質、感染性疾病、寄生性疾病、後天免疫缺乏症候群、急性橫貫性脊髓炎、亨爾頓氏舞蹈病、帕金森氏病、阿茲海默症、中風、原發性膽汁性肝硬化症、溶血性貧血、惡性腫瘤、心臟衰竭、心肌梗塞、愛狄生症、偶發性疾病、I型自身免疫性多腺體功能低下及II型自身免疫性多腺體功能低下、施密特氏症候群、成人(急性)呼吸窘迫症候群、禿頭症、斑禿、血清陰性關節病、關節病、賴透氏病、牛皮癬性關節病、潰瘍性結腸炎關節病、腸病性滑膜炎、與衣原體、耶氏桿菌及沙門氏菌相關之關節病、脊椎關節病、粥樣疾病/動脈硬化症、異位性過敏症、自體免疫大皰性疾病、尋常天皰瘡、落葉性天皰瘡、類天孢瘡、線性IgA疾病、自體免疫溶血性貧血、庫姆斯氏陽性溶血性貧血、後天惡性貧血、青少年惡性貧血、肌痛腦炎/皇家自由病、慢性皮膚黏膜念珠菌病、巨細胞動脈炎、原發性硬化肝炎、隱性自體免疫肝炎、後天免疫缺乏疾病症候群、後天免疫缺乏相關疾病、B型肝炎、C型肝 炎、普通變異性免疫缺乏(普通變異性低γ球蛋白血症)、擴張型心肌症、女性不孕、卵巢衰竭、卵巢早衰、纖維變性肺病、隱性纖維化肺泡炎、炎症後間質性肺病、間質性肺炎、結締組織疾病相關之間質性肺病、混合型結締組織疾病相關之肺病、全身性硬化症相關之間質性肺病、類風濕性關節炎相關之間質性肺病、全身性紅斑狼瘡症相關之肺病、皮肌炎/多發性肌炎相關之肺病、修格蘭氏病相關之肺病、強直性脊椎炎相關之肺病、血管炎彌漫性肺病、含鐵血黃素沈著相關之肺病、藥物誘導之間質性肺病、纖維化、放射性纖維化、阻塞性細支氣管炎、慢性嗜酸性肺炎、淋巴球浸潤性肺病、感染後間質性肺病、痛風性關節炎、自體免疫性肝炎、1型自體免疫性肝炎(典型自體免疫或類狼瘡性肝炎)、2型自體免疫性肝炎(抗-LKM抗體性肝炎)、自體免疫介導之低糖血症、B型胰島素抗性黑棘皮病、副甲狀腺機能減退症、與器官移植相關之急性免疫疾病、與器官移植相關之慢性免疫疾病、非炎性骨關節病、原發性硬化性膽管炎、1型牛皮癬、2型牛皮癬、特發性白血球減少症、自體免疫嗜中性白血球減少症、未分型腎病、絲球體腎炎、腎微細血管炎、萊姆病、盤狀紅斑狼瘡、特發性或未分型男性不育、精子自體免疫症、多發性硬化症(所有次型)、交感神經性眼炎、繼發於結締組織疾病之肺循環血壓過高、古德帕斯丘氏症候群、結節性多動脈炎之肺表現、急性風濕熱、類風濕性脊椎炎、司悌爾氏病、全身性硬化症、修格蘭氏症候群、高安氏病/動脈炎、自體免疫性血小板減少症、特發性血小板減少症、自體免疫性甲狀腺病、甲狀腺機能亢進症、甲狀腺腫性自體免疫性甲狀腺機能減退症(橋本氏病)、萎縮性自體免疫性甲狀腺機能減退症、原發性黏液水腫、晶狀體性葡萄膜炎、原發性血管炎、白斑症急性 肝病、慢性肝病、酒精性肝硬化、酒精誘導之肝損傷、膽汁淤積症、特應性肝病、藥物誘導之肝炎、非酒精性脂肝炎、過敏症及哮喘、B群鏈球菌(GBS)感染、精神障礙(例如抑鬱症及精神分裂症)、Th2型及Th1型介導之疾病、急性及慢性疼痛(不同形式的疼痛)及癌症(諸如肺癌、乳癌、胃癌、膀胱癌、結腸癌、胰腺癌、卵巢癌、前列腺癌及直腸癌及造血惡性腫瘤(白血病及淋巴瘤))、無β脂蛋白血症、手足發紺、急性及慢性寄生性或感染性過程、急性白血病、急性淋巴母細胞白血病(ALL)、急性骨髓白血病(AML)、急性或慢性細菌感染、急性胰腺炎、急性腎衰竭、腺癌、心房異位搏動、AIDS癡呆綜合症、酒精誘導之肝炎、過敏性結膜炎、過敏性接觸皮炎、過敏性鼻炎、同種異體移植物排斥反應、α-1-抗胰蛋白酶缺乏、肌萎縮性側索硬化、貧血症、心絞痛、前角細胞退化症、抗cd3療法、抗磷脂症候群、抗受體過敏反應、主動脈及周邊動脈瘤、主動脈夾層、動脈高血壓、動脈硬化、動靜脈瘺、運動失調、心房顫動(持續或陣發性)、心房撲動、房室阻滯、B細胞淋巴瘤、骨移植物排斥反應、骨髓移植(BMT)排斥反應、束支阻滯、伯基特氏淋巴瘤、燒傷、心律不整、心臟頓抑症候群、心臟腫瘤、心肌症、心肺分流炎症反應、軟骨移植排斥反應、小腦皮質退化症、小腦病症、紊亂或多源性房性心跳過速、化療相關病症、慢性髓細胞白血病(CML)、慢性酒精中毒、慢性發炎病變、慢性淋巴細胞白血病(CLL)、慢性阻塞性肺病(COPD)、慢性水楊酸中毒、結腸直腸癌、充血性心臟衰竭、結膜炎、接觸性皮炎、肺原性心臟病、冠狀動脈疾病、庫賈氏病、培養陰性的敗血症、囊性纖維化、細胞激素療法相關之病症、拳擊員癡呆、髓鞘脫失病、出血性登革熱、皮炎、皮膚病、糖尿病、糖尿病(diabetes mellitus)、糖 尿病性動脈硬化性疾病、彌漫性路易體疾病、擴張型充血性心肌症、基底神經節病症、中年唐氏症候群、由阻斷CNS多巴胺受體藥物誘導之藥物誘導性運動障礙、藥物敏感、濕疹、腦脊髓炎、心內膜炎、內分泌病、會厭炎、艾普斯坦-巴爾病毒感染、紅斑性肢痛症、錐體外及小腦病症、家族性吞噬細胞性淋巴組織細胞增多病、胎兒胸腺移植排斥反反應、弗裏德賴希氏運動失調、功能性周邊動脈病症、真菌敗血症、氣性壞疽、胃潰瘍、腎小球腎炎、任何器官或組織之移植物排斥反應、革蘭氏陰性敗血症、革蘭氏陽性敗血症、由細胞內微生物引起之肉芽瘤、毛細胞白血病、哈勒羅登-斯帕茲病、橋本氏甲狀腺炎、枯草熱、心臟移植排斥反應、血色病、血液透析、溶血性尿毒癥症候群/溶血栓性血小板減少性紫癜、出血、肝炎(A型)、希氏束心律不整、HIV感染/HIV神經病症、霍奇金氏病、多動障礙、過敏反應、過敏性肺炎、高血壓、運動不足症、下丘腦-垂體-腎上腺軸評估、特發性愛狄生症、特發性肺纖維化、抗體介導之細胞毒性、衰弱、嬰兒脊髓性肌肉萎縮症、主動脈炎症、流行性感冒a、電離輻射曝露、虹膜睫狀體炎/葡萄膜炎/視神經炎、缺血-再灌注損傷、缺血性中風、青少年類風濕性關節炎、青少年脊髓性肌肉萎縮症、卡波西氏肉瘤、腎移植排斥反應、退伍軍人症、利什曼體病、痲瘋病、皮質脊髓系統病變、脂性水腫、肝移植排斥反應、淋巴水腫、瘧疾、惡性淋巴瘤、惡性組織細胞增多病、惡性黑色素瘤、腦膜炎、腦膜炎球菌血症、代謝性/特發性疾病、偏頭痛、粒線體多系統病症、混合型結締組織疾病、單株免疫球蛋白病、多發性骨髓瘤、多發性系統退化症(Mencel Dejerine-Thomas Shi-Drager及Machado-Joseph)、重症肌無力、細胞內鳥分枝桿菌感染、結核分枝桿菌感染、骨髓異變 症候群、心肌梗塞、心肌缺血症、鼻咽癌、新生兒慢性肺病、腎炎、腎病、神經退化性疾病、神經性I型肌肉萎縮、嗜中性白血球低下發燒、非霍奇金氏淋巴瘤、腹部主動脈及其分枝閉塞、閉塞性動脈病症、okt3療法、睪丸炎/附睪炎、睪丸炎/輸精管切除重接術、內臟增大、骨疏鬆症、胰腺移植排斥反應、胰腺癌、副腫瘤症候群/惡性腫瘤高鈣血症、副甲狀腺移植排斥反應、骨盆發炎疾病、常年性鼻炎、心包病、周邊動脈粥樣硬化疾病、周邊血管病症、腹膜炎、惡性貧血、肺囊蟲肺炎、肺炎、POEMS症候群(多發性神經病、內臟增大、內分泌病、單株免疫球蛋白病及皮膚改變症候群)、灌注後症候群、抽吸後症候群、MI後心切開術症候群、子癇前症、進行性核上麻痹、原發性肺循環血壓過高、放射療法、雷諾氏現象及疾病、雷諾氏病、雷弗素姆氏病、規則的狹QRS心跳過速、腎血管性高血壓、再灌注損傷、限制型心肌症、肉瘤、硬皮病、老年舞蹈病、路易體型老年癡呆、血清陰性關節病、休克、鐮狀細胞性貧血症、皮膚同種異體移植物排斥反應、皮膚改變症候群、小腸移植排斥反應、實體腫瘤、特異性心律不整、脊椎運動失調、脊髓小腦退化症、鏈球菌肌炎、小腦結構病變、亞急性硬化性全腦炎、暈厥、心血管系統梅毒、全身性過敏症、全身性發炎反應症候群、全身性青少年類風濕性關節炎、T-細胞或FAB ALL、毛細管擴張、血栓阻塞性脈管炎、血小板減少症、毒性作用、移植、外傷/出血、III型過敏反應、IV型過敏反應、不穩定型心絞痛、尿毒癥、尿性敗血症、蕁麻疹、心臟瓣膜病、靜脈曲張、血管炎、靜脈疾病、靜脈栓塞、心室纖維性顫動、病毒及真菌感染、病毒性腦炎/無菌性腦膜炎、病毒相關噬血細胞症候群、魏尼凱-柯薩科夫症候群、威爾遜氏病、任何器官或組織的 異種移植物排斥反應。
133. 一種如請求項117至122中任一項之結合蛋白之用途，其係用於製造用以治療罹患IL-12造成傷害之病症之患者之藥劑，其中該藥劑係於第二藥劑投藥之前、同時或之後投藥，其中該第二藥劑係選自由以下藥劑組成之群：布替耐德、表皮生長因數、皮質類固醇、環孢素、柳氮磺吡啶、胺基水楊酸鹽、6-巰基嘌呤、硫唑嘌呤、甲硝噠唑、脂肪加氧酶抑制劑、美沙拉嗪、奧沙拉秦、巴柳氮、抗氧化劑、凝血脂素抑制劑、IL-1受體拮抗劑、抗-IL-1β單株抗體、抗-IL-6單株抗體、生長因數、彈性蛋白酶抑制劑、吡啶基-咪唑化合物、TNF、LT、IL-1、IL-2、IL-6、IL-7、IL-8、IL-15、IL-16、IL-18、EMAP-II、GM-CSF、FGF及PDGF之抗體或促效劑，CD2、CD3、CD4、CD8、CD25、CD28、CD30、CD40、CD45、CD69、CD90或其配位體之抗體、甲胺喋呤、環孢素、FK506、雷帕黴素、黴酚酸嗎啉乙酯、來氟米特、NSAID、布洛芬、皮質類固醇、潑尼龍、磷酸二酯酶抑制劑、腺苷促效劑、抗血栓劑、補體抑制劑、腎上腺素劑、IRAK、NIK、IKK、p38、MAP激酶抑制劑、IL-1β轉化酶抑制劑、TNFα轉化酶抑制劑、T-細胞信號轉導抑制劑、金屬蛋白酶抑制劑、柳氮磺吡啶、硫唑嘌呤、6-巰基嘌呤、血管收縮素轉化酶抑制劑、可溶性細胞激素受體、可溶性p55 TNF受體、可溶性p75 TNF受體、sIL-1RI、sIL-1RII、sIL-6R、抗炎細胞激素、IL-4、IL-10、IL-11、IL-13及TGF β。
134. 如請求項131之用途，其中投藥予該受檢者係藉由至少一種選自以下之模式：非經腸、皮下、肌肉內、靜脈內、關節內、支氣管內、腹內、囊內、軟骨內、腔內、腹腔內、小腦內、腦室內、大腸內、子宮頸內、胃內、肝內、心肌內、骨內、骨盆 內、心包內、腹膜內、胸膜內、前列腺內、肺內、直腸內、腎內、視網膜內、脊椎內、滑膜內、胸內、子宮內、膀胱內、大藥丸方式、經陰道、經直腸、經口腔、舌下、鼻內及經皮。