[go: up one dir, main page]
More Web Proxy on the site http://driver.im/

KR20170052600A - 시스테인 가공된 항체 및 콘주게이트 - Google Patents

시스테인 가공된 항체 및 콘주게이트 Download PDF

Info

Publication number
KR20170052600A
KR20170052600A KR1020177008038A KR20177008038A KR20170052600A KR 20170052600 A KR20170052600 A KR 20170052600A KR 1020177008038 A KR1020177008038 A KR 1020177008038A KR 20177008038 A KR20177008038 A KR 20177008038A KR 20170052600 A KR20170052600 A KR 20170052600A
Authority
KR
South Korea
Prior art keywords
antibody
cysteine
cysteine engineered
seq
amino acid
Prior art date
Application number
KR1020177008038A
Other languages
English (en)
Inventor
수닐 바크타
한스 에릭슨
자가쓰 알. 주누툴라
캐서린 코작
라차나 오리
토마스 필로우
Original Assignee
제넨테크, 인크.
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by 제넨테크, 인크. filed Critical 제넨테크, 인크.
Publication of KR20170052600A publication Critical patent/KR20170052600A/ko

Links

Images

Classifications

    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K16/00—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies
    • C07K16/18—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans
    • C07K16/32—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans against translation products of oncogenes
    • A61K47/48384—
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K47/00—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient
    • A61K47/50—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates
    • A61K47/51—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent
    • A61K47/68—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent the modifying agent being an antibody, an immunoglobulin or a fragment thereof, e.g. an Fc-fragment
    • A61K47/6801—Drug-antibody or immunoglobulin conjugates defined by the pharmacologically or therapeutically active agent
    • A61K47/6803—Drugs conjugated to an antibody or immunoglobulin, e.g. cisplatin-antibody conjugates
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K47/00—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient
    • A61K47/50—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates
    • A61K47/51—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent
    • A61K47/68—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent the modifying agent being an antibody, an immunoglobulin or a fragment thereof, e.g. an Fc-fragment
    • A61K47/6801—Drug-antibody or immunoglobulin conjugates defined by the pharmacologically or therapeutically active agent
    • A61K47/6803—Drugs conjugated to an antibody or immunoglobulin, e.g. cisplatin-antibody conjugates
    • A61K47/68031—Drugs conjugated to an antibody or immunoglobulin, e.g. cisplatin-antibody conjugates the drug being an auristatin
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K47/00—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient
    • A61K47/50—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates
    • A61K47/51—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent
    • A61K47/68—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent the modifying agent being an antibody, an immunoglobulin or a fragment thereof, e.g. an Fc-fragment
    • A61K47/6801—Drug-antibody or immunoglobulin conjugates defined by the pharmacologically or therapeutically active agent
    • A61K47/6803—Drugs conjugated to an antibody or immunoglobulin, e.g. cisplatin-antibody conjugates
    • A61K47/68035—Drugs conjugated to an antibody or immunoglobulin, e.g. cisplatin-antibody conjugates the drug being a pyrrolobenzodiazepine
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K47/00—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient
    • A61K47/50—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates
    • A61K47/51—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent
    • A61K47/68—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent the modifying agent being an antibody, an immunoglobulin or a fragment thereof, e.g. an Fc-fragment
    • A61K47/6801—Drug-antibody or immunoglobulin conjugates defined by the pharmacologically or therapeutically active agent
    • A61K47/6803—Drugs conjugated to an antibody or immunoglobulin, e.g. cisplatin-antibody conjugates
    • A61K47/6807—Drugs conjugated to an antibody or immunoglobulin, e.g. cisplatin-antibody conjugates the drug or compound being a sugar, nucleoside, nucleotide, nucleic acid, e.g. RNA antisense
    • A61K47/6809—Antibiotics, e.g. antitumor antibiotics anthracyclins, adriamycin, doxorubicin or daunomycin
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K47/00—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient
    • A61K47/50—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates
    • A61K47/51—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent
    • A61K47/68—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent the modifying agent being an antibody, an immunoglobulin or a fragment thereof, e.g. an Fc-fragment
    • A61K47/6801—Drug-antibody or immunoglobulin conjugates defined by the pharmacologically or therapeutically active agent
    • A61K47/6803—Drugs conjugated to an antibody or immunoglobulin, e.g. cisplatin-antibody conjugates
    • A61K47/6811—Drugs conjugated to an antibody or immunoglobulin, e.g. cisplatin-antibody conjugates the drug being a protein or peptide, e.g. transferrin or bleomycin
    • A61K47/6817—Toxins
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K47/00—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient
    • A61K47/50—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates
    • A61K47/51—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent
    • A61K47/68—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent the modifying agent being an antibody, an immunoglobulin or a fragment thereof, e.g. an Fc-fragment
    • A61K47/6835—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent the modifying agent being an antibody, an immunoglobulin or a fragment thereof, e.g. an Fc-fragment the modifying agent being an antibody or an immunoglobulin bearing at least one antigen-binding site
    • A61K47/6849—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent the modifying agent being an antibody, an immunoglobulin or a fragment thereof, e.g. an Fc-fragment the modifying agent being an antibody or an immunoglobulin bearing at least one antigen-binding site the antibody targeting a receptor, a cell surface antigen or a cell surface determinant
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K47/00—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient
    • A61K47/50—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates
    • A61K47/51—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent
    • A61K47/68—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent the modifying agent being an antibody, an immunoglobulin or a fragment thereof, e.g. an Fc-fragment
    • A61K47/6835—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent the modifying agent being an antibody, an immunoglobulin or a fragment thereof, e.g. an Fc-fragment the modifying agent being an antibody or an immunoglobulin bearing at least one antigen-binding site
    • A61K47/6851—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent the modifying agent being an antibody, an immunoglobulin or a fragment thereof, e.g. an Fc-fragment the modifying agent being an antibody or an immunoglobulin bearing at least one antigen-binding site the antibody targeting a determinant of a tumour cell
    • A61K47/6869—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent the modifying agent being an antibody, an immunoglobulin or a fragment thereof, e.g. an Fc-fragment the modifying agent being an antibody or an immunoglobulin bearing at least one antigen-binding site the antibody targeting a determinant of a tumour cell the tumour determinant being from a cell of the reproductive system: ovaria, uterus, testes, prostate
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K49/00—Preparations for testing in vivo
    • A61K49/001—Preparation for luminescence or biological staining
    • A61K49/0013—Luminescence
    • A61K49/0017—Fluorescence in vivo
    • A61K49/005—Fluorescence in vivo characterised by the carrier molecule carrying the fluorescent agent
    • A61K49/0058—Antibodies
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K51/00—Preparations containing radioactive substances for use in therapy or testing in vivo
    • A61K51/02—Preparations containing radioactive substances for use in therapy or testing in vivo characterised by the carrier, i.e. characterised by the agent or material covalently linked or complexing the radioactive nucleus
    • A61K51/04—Organic compounds
    • A61K51/08—Peptides, e.g. proteins, carriers being peptides, polyamino acids, proteins
    • A61K51/10—Antibodies or immunoglobulins; Fragments thereof, the carrier being an antibody, an immunoglobulin or a fragment thereof, e.g. a camelised human single domain antibody or the Fc fragment of an antibody
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P35/00—Antineoplastic agents
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K16/00—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K16/00—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies
    • C07K16/18—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K16/00—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies
    • C07K16/18—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans
    • C07K16/28—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans against receptors, cell surface antigens or cell surface determinants
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K16/00—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies
    • C07K16/18—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans
    • C07K16/28—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans against receptors, cell surface antigens or cell surface determinants
    • C07K16/2803—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans against receptors, cell surface antigens or cell surface determinants against the immunoglobulin superfamily
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K16/00—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies
    • C07K16/18—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans
    • C07K16/28—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans against receptors, cell surface antigens or cell surface determinants
    • C07K16/30—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans against receptors, cell surface antigens or cell surface determinants from tumour cells
    • C07K16/3069—Reproductive system, e.g. ovaria, uterus, testes, prostate
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K16/00—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies
    • C07K16/18—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans
    • C07K16/28—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans against receptors, cell surface antigens or cell surface determinants
    • C07K16/30—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans against receptors, cell surface antigens or cell surface determinants from tumour cells
    • C07K16/3076—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans against receptors, cell surface antigens or cell surface determinants from tumour cells against structure-related tumour-associated moieties
    • C07K16/3092—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans against receptors, cell surface antigens or cell surface determinants from tumour cells against structure-related tumour-associated moieties against tumour-associated mucins
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K16/00—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies
    • C07K16/40—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against enzymes
    • G—PHYSICS
    • G01—MEASURING; TESTING
    • G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
    • G01N33/00—Investigating or analysing materials by specific methods not covered by groups G01N1/00 - G01N31/00
    • G01N33/48—Biological material, e.g. blood, urine; Haemocytometers
    • G01N33/50—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing
    • G01N33/58—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing involving labelled substances
    • G01N33/582—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing involving labelled substances with fluorescent label
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
    • A61K2039/505—Medicinal preparations containing antigens or antibodies comprising antibodies
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
    • C07K2317/40—Immunoglobulins specific features characterized by post-translational modification
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
    • C07K2317/70—Immunoglobulins specific features characterized by effect upon binding to a cell or to an antigen
    • C07K2317/73—Inducing cell death, e.g. apoptosis, necrosis or inhibition of cell proliferation
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
    • C07K2317/90—Immunoglobulins specific features characterized by (pharmaco)kinetic aspects or by stability of the immunoglobulin
    • C07K2317/94—Stability, e.g. half-life, pH, temperature or enzyme-resistance

Landscapes

  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • Immunology (AREA)
  • Engineering & Computer Science (AREA)
  • Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
  • Organic Chemistry (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • Medicinal Chemistry (AREA)
  • Molecular Biology (AREA)
  • Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
  • Biochemistry (AREA)
  • Biophysics (AREA)
  • Genetics & Genomics (AREA)
  • Animal Behavior & Ethology (AREA)
  • Public Health (AREA)
  • Veterinary Medicine (AREA)
  • Pharmacology & Pharmacy (AREA)
  • Epidemiology (AREA)
  • Cell Biology (AREA)
  • Physics & Mathematics (AREA)
  • Reproductive Health (AREA)
  • Biomedical Technology (AREA)
  • Urology & Nephrology (AREA)
  • Hematology (AREA)
  • Optics & Photonics (AREA)
  • Oncology (AREA)
  • Pregnancy & Childbirth (AREA)
  • Gynecology & Obstetrics (AREA)
  • Microbiology (AREA)
  • Analytical Chemistry (AREA)
  • Biotechnology (AREA)
  • Pathology (AREA)
  • General Physics & Mathematics (AREA)
  • Food Science & Technology (AREA)
  • Toxicology (AREA)
  • Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
  • Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
  • General Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Peptides Or Proteins (AREA)

Abstract

시스테인 가공된 항체로서, 시스테인 가공된 항체를 암호화하도록 하나 이상의 아미노산 잔기를 시스테인으로 치환함, 및 모 항체의 핵산 서열을 돌연변이생성함; 상기 시스테인 가공된 항체를 발현함; 및 상기 시스테인 가공된 항체를 단리함에 의해 제조된, 중쇄 또는 경쇄 내 유리 시스테인 아미노산을 포함하는, 시스테인 가공된 항체.

Description

시스테인 가공된 항체 및 콘주게이트{CYSTEINE ENGINEERED ANTIBODIES AND CONJUGATES}
관련 출원에 대한 참조
본원은 2014년 9월 12일 출원된 미국 가출원 번호 62/050,022의 우선권의 이익을 주장하고, 이는 본 명세서에 그 전체가 참고로 편입된다.
발명의 분야
본 발명은 일반적으로 반응성 시스테인 잔기로 가공된 항체에 관한 것이고 더 구체적으로는 치료적 또는 진단 적용으로의 항체에 관한 것이다. 시스테인 가공된 항체는 화학치료 약물, 독소, 친화도 리간드 예컨대 비오틴, 및 검출 표지 예컨대 형광단과 콘주게이트될 수 있다. 본 발명은 또한 포유동물 세포, 또는 관련된 병태의 시험관내, 원위치, 및 생체내 진단 또는 치료를 위한 항체 및 항체-약물 콘주게이트 화합물을 사용하는 방법에 관한 것이다.
항체 약물 콘주게이트 (ADC)는 이들이 강력한 세포독성 약물을 항원-발현 종양 세포에 표적화시킴에 의해 항체 및 세포독성 약물 양자의 이상적 특성을 조합하고, 그렇게 함으로써 그것의 항종양 활성 향상시킴으로써 매력적인 표적화된 화학-치료적 분자이다. 주어진 표적 항원에 대한 성공적인 ADC 개발은 항체 선택, 링커 안정성, 세포독성 약물 효력 및 항체에 대한 링커-약물 콘주게이션의 방식의 최적화에 좌우된다.
항체에 약물 모이어티를 부착하는, 즉 공유 부착을 통해 결합하는 종래의 수단은 일반적으로 약물 모이어티가 항체 상의 수많은 부위에 부착되는 분자의 이종 혼합물을 유도한다. 예를 들면, 세포독성 약물은 전형적으로 항체의 열린-수많은 라이신 잔기를 통해 항체에 콘주게이트되어, 이종 항체-약물 콘주게이트 혼합물를 생성한다. 반응 조건에 의존하여, 이종 혼합물은 전형적으로 0 내지 약 8, 또는 그 이상의 부착된 약물 모이어티를 갖는 항체의 분포를 함유한다. 또한, 항체에 대한 약물 모이어티의 특정한 정수 비를 갖는 콘주게이트의 각 하위그룹 내에서 약물 모이어티가 항체의 다양한 부위 상에 부착되는 잠재적으로 이종 혼합물이다. 분석 및 제조 방법은 콘주게이션 반응으로부터 생성된 이종 혼합물 내에서 항체-약물 콘주게이트 종 분자를 단리하고 특성화하기에 부적절하다. 항체는, 종종 많은 반응성 작용기를 가진, 크고, 복잡하며 그리고 구조적으로 다양한 생체분자이다. 링커 시약 및 약물-링커 중간체와의 그것의 반응성은 pH, 농도, 염 농도 및 보조용매와 같은 인자에 의존적이다. 더욱이, 다단계 콘주게이션 공정은 반응 조건을 조절하고 그리고 반응물 및 중간체를 특성화하는데 있어서의 어려움에 기인하여 재생 불가능할 수 있다.
시스테인 티올은 양성자화되고 그리고 pH 7 부근에서 친핵성이 적은 대부분의 아민과는 달리, 중성 pH에서 반응성이다. 유리 티올 (RSH, 설프하이드릴) 기는 상대적으로 반응성이기 때문에, 시스테인 잔기를 갖는 단백질은 종종 디설파이드-연결된 올리고머로서 그것의 산화된 형태로 존재하거나 또는 내부적으로 브릿징된 디설파이드 기를 갖는다. 항체 시스테인 티올 기는 일반적으로 항체 아민 또는 하이드록실 기보다 친전자성 콘주게이션 시약에 대해 보다 반응성, 즉 보다 친핵성이다. 시스테인 아미노산에 대한 단백질의 다양한 아미노산 잔기의 돌연변이에 의한 시스테인 티올 기에서의 엔지니어링은 잠재적으로 문제 있으며, 특히 반응 또는 산화에 상대적으로 접근 가능한 것이나 쌍으로 되지 않은 (유리 Cys) 잔기의 경우에 문제 있다. 단백질의 농축된 용액에서, 이. 콜라이의 원형질막공간, 배양 상청액이나, 또는 부분적으로 또는 완전히 정제된 단백질에서, 단백질의 표면 상에 쌍으로 되지 않은 Cys 잔기는 쌍을 이룰 수 있고 그리고 산화되어 분자간 디설파이드 및 그래서 단백질 이량체 또는 다량체를 형성할 수 있다. 디설파이드 이량체 형성은 신규 Cys를 약물, 리간드, 또는 다른 표지에 대한 콘주게이션에 대해 무반응성으로 한다. 더욱이, 만일 단백질이 새로 가공된 Cys와 현존하는 Cys 잔기 사이에 산화적으로 분자내 디설파이드 결합을 형성하면, 양 Cys 기는 활성 부위 참여 및 상호작용에 이용할 수 없다. 더욱이, 단백질은 3차 구조의 미스폴딩 또는 손실에 의해 불활성 또는 비-특이적으로 될 수 있다 (Zhang 등 (2002) Anal. Biochem. 311:1-9).
가공된 시스테인이 콘주게이션에 이용 가능하지만 면역글로불린 폴딩 및 어셈블리를 교란시키지 않거나 항원 결합 및 효과기 기능을 변경시키지 않는 위치에서 시스테인 치환을 갖는 항체 (THIOMABTM 항체) (Junutula, 등, 2008b Nature Biotech., 26(8):925-932; Dornan 등 (2009) Blood 114(13):2721-2729; US 7521541; US 7723485; WO2009/052249). 이들 THIOMABTM 항체는 그런 다음 가공된 시스테인 티올 기를 통해 세포독성 약물에 콘주게이트될 수 있어 균일한 화학양론 (예를 들면, 단일 가공된 시스테인 부위를 갖는 항체에서 항체 당 최대 2 약물)을 갖는 THIOMABTM 항체 약물 콘주게이트 (TDC)를 수득한다. 상이한 항원에 대한 다중 항체로의 연구는 TDC가 이종이식 모델에서 종래의 ADC보다 유효하고 그리고 관련된 전임상 모델에서 보다 높은 용량으로 용인된다는 것을 밝혀냈다. THIOMABTM 항체는 항체의 상이한 위치(예를 들면, 경쇄-Fab, 중쇄-Fab 및 중쇄-Fc 내의 특정한 아미노산 위치(즉, 부위))에서 약물 부착을 위해 가공되었다. THIOMABTM 항체의 시험관내 & 생체내 안정성, 효능 및 PK 특성은 그것의 균질성 및 세포독성 약물에 대한 부위-특이적인 콘주게이션으로 인해 종래의 ADC에 비해 독특한 이점을 제공한다.
요약
본원은 중쇄 또는 경쇄 내에 유리 시스테인 아미노산을 포함하는 신규, 단리된 시스테인 가공된 항체(THIOMABTM 항체)의 개시내용을 포함한다.
본 발명의 일 측면은 시스테인 가공된 항체를 암호화하도록 1종 이상의 아미노산 잔기를 시스테인으로 치환함에 의해 모 항체의 핵산 서열을 돌연변이생성함; 시스테인 가공된 항체를 발현함; 및 시스테인 가공된 항체를 단리함에 의해 단리된 시스테인 가공된 항체 (THIOMABTM 항체)를 제조하기 위한 공정이다.
본 발명의 또 다른 측면은 단리된 시스테인 가공된 항체 (THIOMABTM 항체) 콘주게이트로 여기서 상기 항체는 포착 표지, 검출 표지, 약물 모이어티, 또는 고형 지지체에 공유결합된다.
특정 구현예에서, 본 발명은 표 1-4의 임의의 것 및 바람직하게는 표 1 또는 2 중의 어느 하나에서 확인된 시스테인 돌연변이로부터 선택된 시스테인 돌연변이를 포함하는 시스테인 가공된 항체이다. 특정 구현예에서, 시스테인 돌연변이는 유리 시스테인 아미노산이다. 특정 구현예에서, 중쇄 내 시스테인 돌연변이는 표 2 또는 3에서 확인된 시스테인 돌연변이로부터 선택되었다. 특정 구현예에서, 경쇄 내 시스테인 돌연변이는 표 1 또는 4에서 확인된 시스테인 돌연변이로부터 선택되었다. 특정 구현예에서, 시스테인 돌연변이는 (카밧 넘버링에 따른) HC-I195C, HC-S420C, HC-Y432C, 및 LC-G64C로 구성된 군으로부터 선택된다. 특정 구현예에서, 시스테인 돌연변이는 (카밧 넘버링에 따른) HC-Y432C 및 LC-G64C로 구성된 군으로부터 선택된다. 특정 구현예에서, 시스테인 돌연변이는 중쇄 돌연변이이고 그리고 (카밧 넘버링에 따른) Y33C, G162C, V184C, I195C, S420C, Y432C, 및 Q434C로 구성된 군으로부터 선택된다. 특정 구현예에서, 시스테인 돌연변이는 중쇄 돌연변이이고 그리고 (카밧 넘버링에 따른) R19C, E46C, T57C, Y59C, A60C, M100cC, W103C, G162C, I195C, V258C, S420C, H425C, 및 N430C로 구성된 군으로부터 선택된다. 특정 구현예에서, 시스테인 돌연변이는 중쇄 돌연변이이고 그리고 (카밧 넘버링에 따른) Y33C, G162C, V184C, 및 I195C로 구성된 군으로부터 선택된다. 특정 구현예에서, 시스테인 돌연변이는 중쇄 돌연변이이고 그리고 (카밧 넘버링에 따른) R19C, E46C, Y59C, A60C, M100cC, W103C, V258C, H425C, 및 N430C로 구성된 군으로부터 선택된다.
특정 구현예에서, 시스테인 돌연변이는 경쇄 돌연변이이고 그리고 (카밧 넘버링에 따른) Y55C, G64C, T85C, 및 T180C, 및 N430C로 구성된 군으로부터 선택된다. 특정 구현예에서, 시스테인 돌연변이는 경쇄 돌연변이이고 그리고 (카밧 넘버링에 따른) T31C, S52C, G64C, R66C, A193C, 및 N430C로 구성된 군으로부터 선택된다. 특정 구현예에서, 시스테인 돌연변이는 경쇄 돌연변이이고 그리고 (카밧 넘버링에 따른) G64C, T85C, 및 T180C, 및 N430C로 구성된 군으로부터 선택된다. 특정 구현예에서, 시스테인 돌연변이는 경쇄 돌연변이이고 그리고 (카밧 넘버링에 따른) S52C, G64C, R66C, 및 A193C N430C로 구성된 군으로부터 선택된다. 특정 구현예에서, 시스테인 돌연변이는 경쇄이고 그리고 카밧 넘버링에 따른 LC- I106C, LC-R108C, LC-R142C, 및 LC-K149C를 포함하는 시스테인 돌연변이의 군으로부터 선택된다 (참고 도 1a; 표 1). 바람직한 구현예에서, 경쇄 내 시스테인 돌연변이는 카밧 넘버링에 따른 LC-K149C이다 (참고 도 1a).
표 1. 예시적인 경쇄 시스테인 돌연변이
Figure pct00001
바람직한 구현예에서, 중쇄 내 시스테인 돌연변이는 EU 넘버링에 따른 HC-T114C, HC-A140C, HC-L174C, HC-L179C, HC-T187C, HC-T209C, HC-V262C, HC-G371C, HC-Y373C, HC-E382C, HC-S424C, HC-N434C, 및 HC-Q438C를 포함하는 시스테인 돌연변이의 군으로부터 선택된다 (참고 도 1b; 표 2). 바람직한 구현예에서, 중쇄 내 시스테인 돌연변이는 카밧 넘버링에 따른 HC-A143C (즉, EU 넘버링에 따른 HC-A140C)이다 (참고 도 1b 및 21; 표 2). 바람직한 구현예에서, 중쇄 내 시스테인 돌연변이는 EU 넘버링에 따른 HC-A174C이다 (참고 도 1b 및 21; 표 2).
표 2. 예시적인 중쇄 시스테인 돌연변이
Figure pct00002
특정 구현예에서, 본원에서 기재된 바와 같이 시스테인 가공된 항체는 다음을 포함하는 공정에 의해 제조된다:
(i) 시스테인 가공된 항체를 암호화하도록 1종 이상의 아미노산 잔기를 시스테인으로 대체함에 의해 모 항체의 핵산 서열을 돌연변이화함;
(ii) 시스테인 가공된 항체를 발현함; 및
(iii) 시스테인 가공된 항체를 단리함.
특정 구현예에서, 본원에서 기재된 바와 같이 시스테인 가공된 항체는 알부민-결합 펩티드 (ABP)를 포함하는 융합 단백질이다. 특정 구현예에서, ABP는:
a) CDKTHTGGGSQRLMEDICLPRWGCLWEDDF (서열 번호:144),
b) QRLMEDICLPRWGCLWEDDF (서열 번호:145),
c) QRLIEDICLPRWGCLWEDDF (서열 번호:146),
d) RLIEDICLPRWGCLWEDD (서열 번호:147), 또는
e) DICLPRWGCLW (서열 번호:148)로부터 선택된 서열을 포함한다.
특정 구현예에서, 본원에서 기재된 바와 같이 시스테인 가공된 항체는 단클론성 항체, 항체 단편, 이중특이적 항체, 키메라성 항체, 인간 항체, 및 인간화된 항체로부터 선택된다. 특정 구현예에서, 항체 단편은 Fab 단편이다.
특정 구현예에서, 본원에서 기재된 바와 같이 시스테인 가공된 항체는 항-HER2 항체이다. 특정 구현예에서, 본원에서 기재된 바와 같이 시스테인 가공된 항체는 항-MUC16 항체이다. 특정 구현예에서, 본원에서 기재된 바와 같이 시스테인 가공된 항체는 항-STEAP1 항체이다. 특정 구현예에서, 본원에서 기재된 바와 같이 시스테인 가공된 항체는 항-CD79b 항체이다. 특정 구현예에서, 본원에서 기재된 바와 같이 시스테인 가공된 항체는 항-CD22 항체이다. 특정 구현예에서, 본원에서 기재된 바와 같이 시스테인 가공된 항체는 항-B7H4 항체이다. 특정 구현예에서, 본원에서 기재된 바와 같이 시스테인 가공된 항체는 항-Ly6E 항체이다. 특정 구현예에서, 본원에서 기재된 바와 같이 시스테인 가공된 항체는 항-NaPi2b 항체이다.
특정 구현예에서, 본원에서 기재된 바와 같이 시스테인 가공된 항체는 수용체 (1)-(53) 중 1종 이상에 결합한다:
(1) BMPR1B (뼈 골형태형성 단백질 수용체-유형 IB);
(2) E16 (LAT1, SLC7A5);
(3) STEAP1 (전립선의 6개 막투과성 상피 항원);
(4) 0772P (CA125, MUC16);
(5) MPF (MPF, MSLN, SMR, 거핵구 강화 인자, 메소텔린);
(6) Napi3b (NaPi2b로도 공지됨) (NAPI-3B, NPTIIb, SLC34A2, 용질 담체 패밀리 34 (인산나트륨), 구성원 2, 유형 II 나트륨-의존적 포스페이트 수송체 3b);
(7) 세마(Sema) 5b (FLJ10372, KIAA1445, Mm.42015, SEMA5B, SEMAG, 세마포린 5b Hlog, 세마 도메인, 7개 트롬보스폰딘 반복 (1형 및 1형-유사), 막투과성 도메인 (TM) 및 짧은 세포질 도메인, (세마포린) 5B);
(8) PSCA hlg (2700050C12Rik, C530008O16Rik, RIKEN cDNA 2700050C12, RIKEN cDNA 2700050C12 유전자);
(9) ETBR (엔도텔린 유형 B 수용체);
(10) MSG783 (RNF124, 가설 단백질 FLJ20315);
(11) STEAP2 (HGNC_8639, IPCA-1, PCANAP1, STAMP1, STEAP2, STMP, 전립선암 관련 유전자 1, 전립선암 관련 단백질 1, 전립선 2의 6개 막투과성 상피 항원, 6개 막투과성 전립선 단백질);
(12) TrpM4 (BR22450, FLJ20041, TRPM4, TRPM4B, 일과성 수용체 전위 양이온 통로, 서브패밀리 M, 구성원 4);
(13) CRIPTO (CR, CR1, CRGF, CRIPTO, TDGF1, 기형암종-유도 성장 인자);
(14) CD21 (CR2 (보체 수용체 2) 또는 C3DR (C3d/엡슈타인 바르 바이러스 수용체) 또는 Hs.73792);
(15) CD79b (CD79B, CD79β, IGb (면역글로불린-관련 베타), B29);
(16) FcRH2 (IFGP4, IRTA4, SPAP1A (포스파타제 앵커 단백질 1a 함유 SH2 도메인), SPAP1B, SPAP1C);
(17) HER2;
(18) NCA;
(19) MDP;
(20) IL20Rα;
(21) 브레비칸;
(22) EphB2R;
(23) ASLG659;
(24) PSCA;
(25) GEDA;
(26) BAFF-R (B 세포-활성 인자 수용체, BLyS 수용체 3, BR3;
(27) CD22 (B-세포 수용체 CD22-B 동형체);
(28) CD79a (CD79A, CD79α, 면역글로불린-관련 알파, B 세포-특이적 단백질);
(29) CXCR5 (버킷 림프종 수용체 1, G 단백질-커플링 수용체);
(30) HLA-DOB (MHC 부류 II 분자의 베타 하위단위 (Ia 항원);
(31) P2X5 (퓨린성 수용체 P2X 리간드-관문 이온 채널 5);
(32) CD72 (B-세포 분화 항원 CD72, Lyb-2);
(33) LY64 (림프구 항원 64 (RP105), 류신 풍부 반복체 (LRR) 패밀리의 유형 I 막 단백질);
(34) FcRH1 (Fc 수용체-유사 단백질 1);
(35) IRTA2 (관련 면역글로불린 슈퍼패밀리 수용체 전좌 2);
(36) TENB2 (추정 막투과성 프로테오글리칸);
(37) PMEL17 (은 동족체; SILV; D12S53E; PMEL17; SI; SIL);
(38) TMEFF1 (EGF-유사 및 2개 폴리스타틴-유사 도메인 1을 갖는 막투과성 단백질; 토모레굴린-1);
(39) GDNF-Ra1 (GDNF 패밀리 수용체 알파 1; GFRA1; GDNFR; GDNFRA; RETL1; TRNR1; RET1L; GDNFR-알파 1; GFR-알파-1);
(40) Ly6E (림프구 항원 6 복합체, 유전자좌 E; Ly67,RIG-E,SCA-2,TSA-1)
(41) TMEM46 (시사(shisa) 동족체 2);
(42) Ly6G6D (림프구 항원 6 복합체, 유전자좌 G6D; Ly6-D, MEGT1);
(43) LGR5 (류신-풍부 반복-함유 G 단백질-커플링 수용체 5; GPR49, GPR67);
(44) RET (렛(ret) 원종양유전자; MEN2A; HSCR1; MEN2B; MTC1; PTC; CDHF12; Hs.168114; RET51; RET-ELE1);
(45) LY6K (림프구 항원 6 복합체, 유전자좌 K; LY6K; HSJ001348; FLJ35226);
(46) GPR19 (G 단백질-커플링 수용체 19; Mm.4787);
(47) GPR54 (KISS1 수용체; KISS1R; GPR54; HOT7T175; AXOR12);
(48) ASPHD1 (아스파르테이트 베타-하이드록실라제 도메인 함유 1; LOC253982);
(49) 티로시나제 (TYR; OCAIA; OCA1A; 티로시나제; SHEP3);
(50) TMEM118 (링 핑거 단백질, 막투과성 2; RNFT2; FLJ14627);
(51) GPR172A (G 단백질-커플링 수용체 172A; GPCR41; FLJ11856; D15Ertd747e);
(52) CD33; 및
(53) CLL-1 (CLEC12A, MICL, 및 DCAL2).
특정 구현예에서, 본원에서 기재된 바와 같이 시스테인 가공된 항체는 포착 표지, 검출 표지, 약물 모이어티, 또는 고형 지지체에 공유결합된다. 특정 구현예에서 본 항체는 비오틴 포착 표지에 공유결합된다. 특정 구현예에서 본 항체는 형광 염료 검출 표지에 공유결합된다. 특정 구현예에서 본 형광 염료는 플루오레신 유형, 로다민 유형, 단실, 리스사민, 시아닌, 파이코에리트린, 텍사스 레드, 및 그것의 유사체로부터 선택된다. 특정 구현예에서, 본 항체는 3H, 11C, 14C, 18F, 32P, 35S, 64Cu, 68Ga, 86Y, 89Zr, 99Tc, 111In, 123I, 124I, 125I, 131I, 133Xe, 177Lu, 211At, 및 213Bi로부터 선택된 방사선핵종 검출 표지에 공유결합된다. 특정 구현예에서 본 항체는 킬레이팅 리간드에 의해 검출 표지에 공유결합된다. 특정 구현예에서 본 킬레이팅 리간드는 DOTA, DOTP, DOTMA, DTPA 및 TETA로부터 선택된다.
특정 구현예에서, 본원에서 기재된 바와 같이 시스테인 가공된 항체는 메이탄시노이드, 오리스타틴, 돌라스타틴, 트리코테센, CC1065, 칼리키아마이신, 엔디인 항생제, 탁산, 및 안트라사이클린으로부터 선택된 약물 모이어티에 공유결합되어 구조화학식 I (즉, Ab-(L-D)p)을 갖는 항체-약물 콘주게이트를 형성하고 여기서 Ab는 항체이고, L은 링커이고, D는 약물 모이어티이고, 그리고 p는 1, 2, 3, 또는 4이다. 특정 구현예에서 본 항체-약물 콘주게이트는 다음 구조를 가진다:
Figure pct00003
특정 구현예에서, 본원에서 기재된 바와 같이 시스테인 가공된 항체에 콘주게이트되는 화학식 I의 약물 (D)는 다음 구조를 갖는 메이탄시노이드이다:
Figure pct00004
여기서 상기 파선은 링커에 D의 황 원자의 공유 부착을 나타내고; R은 H, 메틸, 에틸, 1-프로필, 2-프로필, 1-부틸, 2-메틸-1-프로필, 2-부틸, 2-메틸-2-프로필, 1-펜틸, 2-펜틸, 3-펜틸, 2-메틸-2-부틸, 3-메틸-2-부틸, 3-메틸-1-부틸, 2-메틸-1-부틸, 1-헥실, 2-헥실, 3-헥실, 2-메틸-2-펜틸, 3-메틸-2-펜틸, 4-메틸-2-펜틸, 3-메틸-3-펜틸, 2-메틸-3-펜틸, 2,3-디메틸-2-부틸, 및 3,3-디메틸-2-부틸로부터 독립적으로 선택되고; 그리고 m은 1, 2, 또는 3이다.
특정 구현예에서, 본원에서 기재된 바와 같이 시스테인 가공된 항체에 콘주게이트되는 화학식 I의 약물 (D)는 다음 구조로부터 선택된다:
Figure pct00005
및
Figure pct00006
특정 구현예에서, 본원에서 기재된 바와 같이 시스테인 가공된 항체에 콘주게이트되는 화학식 I의 약물 (D)는 하기 구조를 갖는다:
Figure pct00007
여기서 n은 0, 1, 또는 2이다.
특정 구현예에서, 본원에서 기재된 바와 같이 시스테인 가공된 항체에 콘주게이트되는 화학식 I의 약물 (D)는 다음 구조를 갖는 모노메틸오리스타틴 약물 모이어티 MMAE 또는 MMAF이다:
Figure pct00008
MMAE
Figure pct00009
MMAF.
본 발명의 특정 구현예에서, 본원에서 기재된 바와 같이 시스테인 가공된 항체는 하기 구조의 하나를 가진다:
Figure pct00010
Ab-MC-vc-PAB-MMAF
Figure pct00011
Ab-MC-vc-PAB-MMAE
Figure pct00012
Ab-MC-MMAE
Figure pct00013
Ab-MC-MMAF
여기서 Val은 발린이고; Cit는 시트룰린이고; 그리고 p는 1, 2, 3, 또는 4이다. 본 발명의 특정 구현예에서, 본원에서 기재된 바와 같이 시스테인 가공된 항체는 하기 구조를 갖는다:
Figure pct00014
특정 구현예에서, 본원에서 기재된 바와 같이 시스테인 가공된 항체는 하기 부류의 하나로 되고, 본 명세서의 이후의 섹션에서 더욱 자세히 기재되는 약물에 콘주게이트된다: 오리스타틴, 돌라스타틴, 트리코테센, CC1065, 칼리키아마이신, 엔디인 항생제, 탁산, 피롤로벤조디아제핀 (PBDs), 1-(클로로메틸)-2,3-디하이드로-1H-벤조[e]인돌 (CBI) 이량체, CBI-PBD 이종이량체, 및 안트라사이클린.
특정 구현예에서, 본원에서 기재된 바와 같이 시스테인 가공된 항체의 링커 (L)은 티올-반응성제를 포함한다. 특정 구현예에서, 본 링커 (L)은 말레이미드, 아이오도아세트아미드, 및 피리딜 디설파이드로 구성된 군으로부터 선택된다. 특정 구현예에서, 링커 (L)은 피리딜 디설파이드이다. 특정 구현예에서, 링커 (L)은 피리딜 디설파이드이고 그리고 약물 (D)는 MMAE이다.
특정 구현예에서, 본 발명은 식 (즉, Ab-(L-D)p)을 갖는 항체-약물 콘주게이트를 형성하기 위해 시스테인 가공된 항체 (Ab)의 적어도 1종의 유리 시스테인을 링커-약물 (L-D) 시약과 반응하는 것을 포함하는 항체-약물 콘주게이트를 제조하는 방법을 포함하고 여기서 Ab는 시스테인 가공된 항체이고, L은 링커이고, D는 약물 모이어티이고, 그리고 p는 1, 2, 3, 또는 4이고; 그리고 여기서 상기 시스테인 가공된 항체는 1종 이상의 유리 시스테인 아미노산을 포함하고, 여기서 적어도 1종의 유리 시스테인 아미노산은 임의의 표 1 또는 2에서 확인된 시스테인 돌연변이로부터 선택되거나 대안적으로 표 3 또는 4에서 확인된 대안적인 안정한 시스테인 돌연변이로부터 선택된다. 특정 구현예에서, 본 발명은 식 (즉, Ab-(L-D)p)을 갖는 항체-약물 콘주게이트를 형성하기 위해 시스테인 가공된 항체 (Ab)의 적어도 1종의 유리 시스테인을 링커-약물 (L-D) 시약과 반응하는 것을 포함하는 항체-약물 콘주게이트를 제조하는 방법을 포함하고 여기서 Ab는 시스테인 가공된 항체이고, L은 링커이고, D는 약물 모이어티이고, 그리고 p는 1, 2, 3, 또는 4이고; 그리고 여기서 상기 시스테인 가공된 항체는 1종 이상의 유리 시스테인 아미노산을 포함하고, 여기서 적어도 1종의 유리 시스테인 아미노산은 바람직하게는 표 1 및 2에서 확인된 시스테인 돌연변이로부터 선택되거나 대안적으로 표 3 또는 4에서 확인된 대안적인 안정한 시스테인 돌연변이로부터 선택된다.
특정 구현예에서, 본 방법은 시스테인 가공된 항체를 제작하기 위해 사용될 수 있고, 여기서 시스테인 돌연변이에서의 것은 중쇄에서 되고 그리고 표 2 또는 3에서 확인된 시스테인 돌연변이로부터 선택된다. 특정 구현예에서, 본 방법은 시스테인 가공된 항체를 제작하기 위해 사용될 수 있고, 여기서 시스테인 돌연변이에서의 것은 경쇄에서 되고 그리고 표 1 및 4에서 확인된 시스테인 돌연변이로부터 선택된다. 바람직한 구현예에서, 본 방법은 시스테인 가공된 항체를 제작하기 위해 사용될 수 있고, 여기서 시스테인 돌연변이에서의 것은 도 21에서 확인된 시스테인 돌연변이로부터 선택된다. 다른 구현예에서, 본 방법은 시스테인 가공된 항체를 제작하기 위해 사용될 수 있고, 여기서 시스테인 돌연변이에서의 것은 표 5에서 확인된 시스테인 돌연변이로부터 선택된다. 특정 구현예에서, 본 방법은 시스테인 가공된 항체를 제작하기 위해 사용될 수 있고, 여기서 시스테인 돌연변이에서의 것은 (카밧 넘버링에 따른) HC-I195C, HC-S420C, HC-Y432C, 및 LC-G64C로 구성된 군으로부터 선택된다. 특정 구현예에서, 본 방법은 시스테인 가공된 항체를 제작하기 위해 사용될 수 있고, 여기서 시스테인 돌연변이에서의 것은 (카밧 넘버링에 따른) HC-Y432C 및 LC-G64C로 구성된 군으로부터 선택된다. 특정 구현예에서, 본 방법은 시스테인 가공된 항체를 제작하기 위해 사용될 수 있고, 여기서 시스테인 돌연변이에서의 것은 중쇄 돌연변이이고 그리고 (카밧 넘버링에 따른) Y33C, G162C, V184C, I195C, S420C, Y432C, 및 Q434C로 구성된 군으로부터 선택된다. 특정 구현예에서, 본 방법은 시스테인 가공된 항체를 제작하기 위해 사용될 수 있고, 여기서 시스테인 돌연변이에서의 것은 중쇄 돌연변이이고 그리고 (카밧 넘버링에 따른) R19C, E46C, T57C, Y59C, A60C, M100cC, W103C, G162C, I195C, V258C, S420C, H425C, 및 N430C로 구성된 군으로부터 선택된다. 특정 구현예에서, 본 방법은 시스테인 가공된 항체를 제작하기 위해 사용될 수 있고, 여기서 시스테인 돌연변이에서의 것은 중쇄 돌연변이이고 그리고 (카밧 넘버링에 따른) Y33C, G162C, V184C, 및 I195C로 구성된 군으로부터 선택된다. 특정 구현예에서, 본 방법은 시스테인 가공된 항체를 제작하기 위해 사용될 수 있고, 여기서 시스테인 돌연변이에서의 것은 중쇄 돌연변이이고 그리고 (카밧 넘버링에 따른) R19C, E46C, Y59C, A60C, M100cC, W103C, V258C, H425C, 및 N430C로 구성된 군으로부터 선택된다. 특정 구현예에서, 본 방법은 시스테인 가공된 항체를 제작하기 위해 사용될 수 있고, 여기서 시스테인 돌연변이에서의 것은 중쇄에서 되고 그리고 (카밧 넘버링에 따른) Y55C, G64C, T85C, 및 T180C로 구성된 군으로부터 선택된다. 특정 구현예에서, 본 방법은 시스테인 가공된 항체를 제작하기 위해 사용될 수 있고, 여기서 시스테인 돌연변이에서의 것은 경쇄에서 되고 그리고 (카밧 넘버링에 따른) T31C, S52C, G64C, R66C, A193C로 구성된 군으로부터 선택된다. 특정 구현예에서, 본 방법은 시스테인 가공된 항체를 제작하기 위해 사용될 수 있고, 여기서 시스테인 돌연변이에서의 것은 경쇄에서 되고 그리고 (카밧 넘버링에 따른) G64C, T85C, 및 T180C로 구성된 군으로 구성된 군으로부터 선택된다. 특정 구현예에서, 본 방법은 시스테인 가공된 항체를 제작하기 위해 사용될 수 있고, 여기서 시스테인 돌연변이에서의 것은 경쇄에서 되고 그리고 (카밧 넘버링에 따른) S52C, G64C, R66C, 및 A193C로 구성된 군으로부터 선택된다.
바람직한 구현예에서, 본 방법은 시스테인 가공된 항체를 제작하기 위해 사용될 수 있고, 여기서 경쇄에서 시스테인 돌연변이에서의 것은 카밧 넘버링에 따른 LC- I106C, LC-R108C, LC-R142C, 및 LC-K149C를 포함하는 시스테인 돌연변이의 군으로부터 선택된다 (참고 도 1a 및 21). 바람직한 구현예에서, 본 방법은 시스테인 가공된 항체를 제작하기 위해 사용될 수 있고, 여기서 경쇄에서 시스테인 돌연변이에서의 것은 카밧 넘버링에 따른 LC-K149C이다 (참고 도 1a 및 21 및 표 1).
바람직한 구현예에서, 본 방법은 시스테인 가공된 항체를 제작하기 위해 사용될 수 있고, 여기서 중쇄에서 시스테인 돌연변이에서의 것은 EU 넘버링에 따른 HC-T114C, HC-A140C, HC-L174C, HC-L179C, HC-T187C, HC-T209C, HC-V262C, HC-G371C, HC-Y373C, HC-E382C, HC-S424C, HC-N434C, 및 HC-Q438C를 포함하는 시스테인 돌연변이의 군으로부터 선택된다 (참고 도 1b 및 21 및 표 2). 바람직한 구현예에서, 본 방법은 시스테인 가공된 항체를 제작하기 위해 사용될 수 있고, 여기서 중쇄에서 시스테인 돌연변이에서의 것은 EU 넘버링에 따른 HC-A140C(즉, 카밧 넘버링에 따른 HC-A136C)이다 (참고 도 1b 및 21 및 표 2). 바람직한 구현예에서, 본 방법은 시스테인 가공된 항체를 제작하기 위해 사용될 수 있고, 여기서 중쇄에서 시스테인 돌연변이에서의 것은 EU 넘버링에 따른 HC-L174C이다 (참고 도 1b 및 21 및 표 2).
특정 구현예에서, 본 방법은 본원에서 기재된 바와 같이 시스테인 가공된 항체를 제작하기 위해 사용될 수 있고, 여기서 시스테인 가공된 항체에서의 것은 다음을 포함하는 공정에 의해 제조된다:
(i) 시스테인 가공된 항체를 암호화하도록 1종 이상의 아미노산 잔기를 시스테인으로 대체함에 의해 모 항체의 핵산 서열을 돌연변이화함;
(ii) 시스테인 가공된 항체를 발현함; 및
(iii) 시스테인 가공된 항체를 단리함.
특정 구현예에서, 본 방법은 시스테인 가공된 항체를 제작하기 위해 사용될 수 있고, 여기서 시스테인 가공된 항체는 알부민-결합 펩티드 (ABP)를 포함하는 융합 단백질이다. 특정 구현예에서, 본 ABP는 다음으로부터 선택된 서열을 포함한다:
a) CDKTHTGGGSQRLMEDICLPRWGCLWEDDF (서열 번호:144),
b) QRLMEDICLPRWGCLWEDDF (서열 번호:145),
c) QRLIEDICLPRWGCLWEDDF (서열 번호:146),
d) RLIEDICLPRWGCLWEDD (서열 번호:147), 또는
e) DICLPRWGCLW (서열 번호:148).
특정 구현예에서, 본 방법은 시스테인 가공된 항체를 제작하기 위해 사용될 수 있고, 여기서 시스테인 가공된 항체는 단클론성 항체, 항체 단편, 이중특이적 항체, 키메라성 항체, 인간 항체, 및 인간화된 항체로부터 선택된다. 특정 구현예에서, 항체 단편은 Fab 단편이다.
특정 구현예에서, 본 방법은 시스테인 가공된 항체를 제작하기 위해 사용될 수 있고, 여기서 시스테인 가공된 항체는 항-HER2 항체이다. 특정 구현예에서, 본원에서 기재된 바와 같이 시스테인 가공된 항체는 항-MUC16 항체이다. 특정 구현예에서, 본원에서 기재된 바와 같이 시스테인 가공된 항체는 항-STEAP1 항체이다. 특정 구현예에서, 본원에서 기재된 바와 같이 시스테인 가공된 항체는 항-CD79b 항체이다. 특정 구현예에서, 본원에서 기재된 바와 같이 시스테인 가공된 항체는 항-CD22 항체이다. 특정 구현예에서, 본원에서 기재된 바와 같이 시스테인 가공된 항체는 항-B7H4 항체이다. 특정 구현예에서, 본원에서 기재된 바와 같이 시스테인 가공된 항체는 항-Ly6E 항체이다. 특정 구현예에서, 본원에서 기재된 바와 같이 시스테인 가공된 항체는 항-NaPi2b 항체이다.
특정 구현예에서, 본 방법은 시스테인 가공된 항체를 제작하기 위해 사용될 수 있고, 여기서 시스테인 가공된 항체는 수용체 (1)-(53) 중 1종 이상에 결합한다:
(1) BMPR1B (뼈 골형태형성 단백질 수용체-유형 IB);
(2) E16 (LAT1, SLC7A5);
(3) STEAP1 (전립선의 6개 막투과성 상피 항원);
(4) 0772P (CA125, MUC16);
(5) MPF (MPF, MSLN, SMR, 거핵구 강화 인자, 메소텔린);
(6) Napi3b (NaPi2b로도 공지됨) (NAPI-3B, NPTIIb, SLC34A2, 용질 담체 패밀리 34 (인산나트륨), 구성원 2, 유형 II 나트륨-의존적 포스페이트 수송체 3b);
(7) 세마(Sema) 5b (FLJ10372, KIAA1445, Mm.42015, SEMA5B, SEMAG, 세마포린 5b Hlog, 세마 도메인, 7개 트롬보스폰딘 반복 (1형 및 1형-유사), 막투과성 도메인 (TM) 및 짧은 세포질 도메인, (세마포린) 5B);
(8) PSCA hlg (2700050C12Rik, C530008O16Rik, RIKEN cDNA 2700050C12, RIKEN cDNA 2700050C12 유전자);
(9) ETBR (엔도텔린 유형 B 수용체);
(10) MSG783 (RNF124, 가설 단백질 FLJ20315);
(11) STEAP2 (HGNC_8639, IPCA-1, PCANAP1, STAMP1, STEAP2, STMP, 전립선암 관련 유전자 1, 전립선암 관련 단백질 1, 전립선 2의 6개 막투과성 상피 항원, 6개 막투과성 전립선 단백질);
(12) TrpM4 (BR22450, FLJ20041, TRPM4, TRPM4B, 일과성 수용체 전위 양이온 통로, 서브패밀리 M, 구성원 4);
(13) CRIPTO (CR, CR1, CRGF, CRIPTO, TDGF1, 기형암종-유도 성장 인자);
(14) CD21 (CR2 (보체 수용체 2) 또는 C3DR (C3d/엡슈타인 바르 바이러스 수용체) 또는 Hs.73792);
(15) CD79b (CD79B, CD79β, IGb (면역글로불린-관련 베타), B29);
(16) FcRH2 (IFGP4, IRTA4, SPAP1A (포스파타제 앵커 단백질 1a 함유 SH2 도메인), SPAP1B, SPAP1C);
(17) HER2;
(18) NCA;
(19) MDP;
(20) IL20Rα;
(21) 브레비칸;
(22) EphB2R;
(23) ASLG659;
(24) PSCA;
(25) GEDA;
(26) BAFF-R (B 세포 -활성 인자 수용체, BLyS 수용체 3, BR3;
(27) CD22 (B-세포 수용체 CD22-B 동형체);
(28) CD79a (CD79A, CD79α, 면역글로불린-관련 알파, B 세포 특이적 단백질);
(29) CXCR5 (버킷 림프종 수용체 1, G 단백질-커플링 수용체);
(30) HLA-DOB (MHC 부류 II 분자의 베타 하위단위 (Ia 항원);
(31) P2X5 (퓨린성 수용체 P2X 리간드-관문 이온 채널 5);
(32) CD72 (B-세포 분화 항원 CD72, Lyb-2);
(33) LY64 (림프구 항원 64 (RP105), 류신 풍부 반복체 (LRR) 패밀리의 유형 I 막 단백질);
(34) FcRH1 (Fc 수용체-유사 단백질 1);
(35) IRTA2 (관련 면역글로불린 슈퍼패밀리 수용체 전좌 2);
(36) TENB2 (추정 막투과성 프로테오글리칸);
(37) PMEL17 (은 동족체; SILV; D12S53E; PMEL17; SI; SIL);
(38) TMEFF1 (EGF-유사 및 2개 폴리스타틴-유사 도메인 1을 갖는 막투과성 단백질; 토모레굴린-1);
(39) GDNF-Ra1 (GDNF 패밀리 수용체 알파 1; GFRA1; GDNFR; GDNFRA; RETL1; TRNR1; RET1L; GDNFR-알파 1; GFR-알파-1);
(40) Ly6E (림프구 항원 6 복합체, 유전자좌 E; Ly67,RIG-E,SCA-2,TSA-1)
(41) TMEM46 (시사(shisa) 동족체 2);
(42) Ly6G6D (림프구 항원 6 복합체, 유전자좌 G6D; Ly6-D, MEGT1);
(43) LGR5 (류신-풍부 반복-함유 G 단백질-커플링 수용체 5; GPR49, GPR67);
(44) RET (렛(ret) 원종양유전자; MEN2A; HSCR1; MEN2B; MTC1; PTC; CDHF12; Hs.168114; RET51; RET-ELE1);
(45) LY6K (림프구 항원 6 복합체, 유전자좌 K; LY6K; HSJ001348; FLJ35226);
(46) GPR19 (G 단백질-커플링 수용체 19; Mm.4787);
(47) GPR54 (KISS1 수용체; KISS1R; GPR54; HOT7T175; AXOR12);
(48) ASPHD1 (아스파르테이트 베타-하이드록실라제 도메인 함유 1; LOC253982);
(49) 티로시나제 (TYR; OCAIA; OCA1A; 티로시나제; SHEP3);
(50) TMEM118 (링 핑거 단백질, 막투과성 2; RNFT2; FLJ14627);
(51) GPR172A (G 단백질-커플링 수용체 172A; GPCR41; FLJ11856; D15Ertd747e);
(52) CD33; 및
(53) CLL-1 (CLEC12A, MICL, 및 DCAL2).
특정 구현예에서, 본 방법은 시스테인 가공된 항체를 제작하기 위해 사용될 수 있고, 여기서 시스테인 가공된 항체는 포착 표지, 검출 표지, 약물 모이어티, 또는 고형 지지체에 공유결합된다. 특정 구현예에서, 본 항체는 비오틴 포착 표지에 공유결합된다. 특정 구현예에서, 본 항체는 형광 염료 검출 표지에 공유결합된다. 특정 구현예에서 본 형광 염료는 플루오레신 유형, 로다민 유형, 단실, 리스사민, 시아닌, 파이코에리트린, 텍사스 레드, 및 그것의 유사체로부터 선택된다. 특정 구현예에서, 본 항체는 3H, 11C, 14C, 18F, 32P, 35S, 64Cu, 68Ga, 86Y, 89Zr, 99Tc, 111In, 123I, 124I, 125I, 131I, 133Xe, 177Lu, 211At, 및 213Bi로부터 선택된 방사선핵종 검출 표지에 공유결합된다. 특정 구현예에서, 본 항체는 킬레이팅 리간드에 의해 검출 표지에 공유결합된다. 특정 구현예에서, 본 킬레이팅 리간드는 DOTA, DOTP, DOTMA, DTPA 및 TETA로부터 선택된다.
특정 구현예에서, 본 방법은 시스테인 가공된 항체를 제작하기 위해 사용될 수 있고, 여기서 시스테인 가공된 항체는 화학식 I (즉, Ab-(L-D)p)를 갖는 항체-약물 콘주게이트를 형성하기 위해 메이탄시노이드, 오리스타틴, 돌라스타틴, 트리코테센, CC1065, 칼리키아마이신, 엔디인 항생제, 탁산, 및 안트라사이클린으로부터 선택된 약물 모이어티에 공유결합되고, 여기서 Ab는 항체이고, L은 링커이고, D는 약물 모이어티이고, 그리고 p는 1, 2, 3, 또는 4이다.
특정 구현예에서, 본 방법은 시스테인 가공된 항체를 제작하기 위해 사용될 수 있고, 여기서 시스테인 가공된 항체는 다음 구조를 가진다:
Figure pct00015
특정 구현예에서, 본 방법은 시스테인 가공된 항체를 제작하기 위해 사용될 수 있고, 여기서 시스테인 가공된 항체의 약물 (D)는 다음 구조를 갖는 메이탄시노이드이다:
Figure pct00016
여기서 상기 파선은 링커에 D의 황 원자의 공유 부착을 나타내고; R은 H, 메틸, 에틸, 1-프로필, 2-프로필, 1-부틸, 2-메틸-1-프로필, 2-부틸, 2-메틸-2-프로필, 1-펜틸, 2-펜틸, 3-펜틸, 2-메틸-2-부틸, 3-메틸-2-부틸, 3-메틸-1-부틸, 2-메틸-1-부틸, 1-헥실, 2-헥실, 3-헥실, 2-메틸-2-펜틸, 3-메틸-2-펜틸, 4-메틸-2-펜틸, 3-메틸-3-펜틸, 2-메틸-3-펜틸, 2,3-디메틸-2-부틸, 및 3,3-디메틸-2-부틸로부터 독립적으로 선택되고; 그리고 m은 1, 2, 또는 3이다.
특정 구현예에서, 본 방법은 시스테인 가공된 항체를 제작하기 위해 사용될 수 있고, 여기서 약물 (D)는 다음 구조로부터 선택된다:
Figure pct00017
및
Figure pct00018
특정 구현예에서, 본 방법은 다음 구조를 가지는 시스테인 가공된 항체를 제작하기 위해 사용될 수 있다:
Figure pct00019
여기서 n은 0, 1, 또는 2임
또는
Figure pct00020
특정 구현예에서, 본 방법은 시스테인 가공된 항체를 제작하기 위해 사용될 수 있고 여기서 D는 다음 구조를 갖는 모노메틸오리스타틴 약물 모이어티 MMAE 또는 MMAF이다:
Figure pct00021
특정 구현예에서, 본 방법은 다음 구조로부터 선택된 시스테인 가공된 항체를 제작하기 위해 사용될 수 있다
Figure pct00022
Figure pct00023
여기서 Val은 발린이고; Cit는 시트룰린이고; 그리고 p는 1, 2, 3, 또는 4임.
특정 구현예에서, 본 방법은 하기 부류의 하나 내에 약물에 콘주게이트되고 그리고 본 명세서의 이후의 섹션에서 더욱 자세히 기재되는 시스테인 가공된 항체를 제작하기 위해 사용될 수 있다: 오리스타틴, 돌라스타틴, 트리코테센, CC1065, 칼리키아마이신, 엔디인 항생제, 탁산,피롤로벤조디아제핀 (PBDs), 1-(클로로메틸)-2,3-디하이드로-1H-벤조[e]인돌 (CBI) 이량체, CBI-PBD 이종이량체, 및 안트라사이클린.
특정 구현예에서, 본 방법은 시스테인 가공된 항체를 제작하기 위해 사용될 수 있고 여기서 링커 (L)는 티올-반응성 제제를 포함한다. 특정 구현예에서 링커 (L)은 말레이미드, 아이오도아세트아미드, 및 피리딜 디설파이드로 구성된 군으로부터 선택된다. 특정 구현예에서, 링커 (L)는 피리딜 디설파이드이다. 특정 구현예에서, 링커 (L)은 피리딜 디설파이드이고 그리고 약물 (D)는 MMAE이다.
특정 구현예에서, 본 방법은 시스테인 가공된 항체를 제작하기 위해 사용될 수 있고 여기서 시스테인 가공된 항체는 단리된 시스테인 가공된 항체이다. 특정 구현예에서, 본 방법은 시스테인 가공된 항체를 제작하기 위해 사용될 수 있고, 여기서 경쇄에서 단리된 시스테인 돌연변이에서의 것은 카밧 넘버링에 따른 LC- I106C, LC-R108C, LC-R142C, 및 LC-K149C를 포함하는 시스테인 돌연변이의 군으로부터 선택된다 (참고 도 1a 및 21). 특정 구현예에서, 본 방법은 단리된 시스테인 가공된 항체를 제작하기 위해 사용될 수 있고, 여기서 경쇄에서의 것에서 단리된 시스테인 돌연변이에서의 것은 카밧 넘버링에 따른 LC-K149C이다 (참고 도 1a 및 21 및 표 1). 특정 구현예에서, 본 방법은 단리된 시스테인 가공된 항체를 제작하기 위해 사용될 수 있고, 여기서 중쇄에서 단리된 시스테인 돌연변이에서의 것은 EU 넘버링에 따른 HC-T114C, HC-A140C, HC-L174C, HC-L179C, HC-T187C, HC-T209C, HC-V262C, HC-G371C, HC-Y373C, HC-E382C, HC-S424C, HC-N434C, 및 HC-Q438C를 포함하는 시스테인 돌연변이의 군으로부터 선택된다 (참고 도 1b 및 21과 표 2). 특정 구현예에서, 본 방법은 단리된 시스테인 가공된 항체를 제작하기 위해 사용될 수 있고, 여기서 중쇄에서의 것에서 단리된 시스테인 돌연변이에서의 것은 EU 넘버링에 따른 HC-A140C이다 (즉, 카밧 넘버링에 따른 HC-A136C) (참고 도 1b 및 21과 표 2).
바람직한 구현예에서, 본원에서 기재된 바와 같이 임의의 시스테인 가공된 항체는 하기 시스테인 돌연변이 중의 하나를 가진다: 카밧 넘버링에 따른 LC-K149C 및 EU 넘버링에 따른 HC-A140C (참고 표 1 및 2와 도 1a 및 1b).
본 발명의 특정 구현예에서, 본원에서 기재된 바와 같은 임의의 시스테인 가공된 항체는 0.8-1.0의 티올 반응성 값을 가진다. 본 발명의 특정 구현예에서, 본원에서 기재된 바와 같은 임의의 시스테인 가공된 항체는 0.9-1.0의 티올 반응성 값을 가진다. 본 발명의 특정 구현예에서, 본원에서 기재된 바와 같은 임의의 시스테인 가공된 항체는 0.6-0.9의 티올 반응성 값을 가진다. 본 발명의 특정 구현예에서, 본원에서 기재된 바와 같은 임의의 시스테인 가공된 항체는 0.5-0.7의 티올 반응성 값을 가진다. 본 발명의 특정 구현예에서, 본원에서 기재된 바와 같은 임의의 시스테인 가공된 항체는 0.4-0.6의 티올 반응성 값을 가진다. 본 발명의 특정 구현예에서, 본원에서 기재된 바와 같은 임의의 시스테인 가공된 항체는 0.3-0.5의 티올 반응성 값을 가진다. 본 발명의 특정 구현예에서, 본원에서 기재된 바와 같은 임의의 시스테인 가공된 항체는 0.2-0.4의 티올 반응성 값을 가진다.
특정 구현예에서, 본 발명은 본원에서 기재된 바와 같은 임의의 시스테인 가공된 항체를 포함하는 약제학적 조성물이다.
도 1a는 4D5 경쇄에 대한 카밧 넘버링 체계를 도시한다. 1b는 4D5 항체에 대한 카밧 넘버링 체계 (중간 행) 및 EU 넘버링 체계 (오른쪽 행)와 비교하여 N-말단에서 시작하는 순차적 넘버링 체계 (왼쪽 행)를 도시한다.
도 2는 항체 내 시스테인 돌연변이유발 및 약물 콘주게이션에 대한 예시적인 부위를 도시한다. 굵은 글씨 및 밑줄 친 잔기는 시스테인 돌연변이 유발에 대한 예시적인 부위이다. 밑줄 친 잔기는 시스테인 돌연변이 유발에 대한 추가의 예시적인 부위이다. 도 2A는 중쇄에서 시스테인 돌연변이유발에 대한 예시적인 및 추가의 예시적인 잔기를 도시한다. 도 2B는 경쇄에서 시스테인 돌연변이유발에 대한 예시적인 및 추가의 예시적인 잔기를 도시한다. 시스테인 돌연변이유발에 대한 바람직한 부위는 회색으로 채색되고 그리고 EU 넘버링에 따른 HC-T114C, HC-A140C, HC-L174C, HC-L179C, HC-T187C, HC-T209C, HC-V262C, HC-G371C, HC-Y373C, HC-E382C, HC-S424C, HC-N434C, 및 HC-Q438C (도 2A) 및 카밧 넘버링에 따른 LC- I106C, LC-R108C, LC-R142C, 및 LC-K149C (도 2B)를 포함한다. 바람직한 EU 넘버링에 따른 HC-A140C (카밧 넘버링에 따른 HC-A136C ) 및 카밧 넘버링에 따른 LC-K149C가 박스로 되고 그리고 큰 글꼴로 강조 표시되었다.
도 3은 응집 분석 및 계산을 위해 사용된 응집물 및 모노머 피크의 대표적인 플롯을 도시한다. 8분에서 10분 사이의 큰 피크는 모노머 피크이고 8분에서의 작은 피크는 응집물 피크이다.
도 4는 THIOMABTM 항체의 UV280 LC/MS 크로마토그래프를 도시한다. 도 4a는 UV280 LC/MS에 의해 검출된 콘주게이션 피크를 도시한다. 도 4b는 DAR0 (기존의 항체), DAR1, 및 DAR2 콘주게이션 피크를 도시한다.
도 5는 완전 항체 시스테인 스크린을 수행하기 위한 프로토콜을 도시한다. 완전 항체 스크린은 PDS-MMAE 및 MC-vc-MMAE 콘주게이트에서 수행된다. 따라서, 648 PDS-MMAE 및 648 MC-vc-MMAE (총 1296) THIOMABTM 항체가 제작되고 시험되었다.
도 6은 MC-vc-MMAE 및 PDS-MMAE 콘주게이트의 대표적인 안정성 그래프를 도시한다. 도 6a는 LC/MS 분석을 사용하여 0 시간, 48 시간, 및 96 시간에서 PDS-MMAE LC-R142C THIOMABTM 항체의 대표적인 안정성 그래프를 도시한다. 도 6b는 LC/MS 분석을 사용하여 0 시간, 48 시간, 및 96 시간에서 MC-vc-MMAE LC-R142C THIOMABTM 항체의 대표적인 안정성 그래프를 도시한다.
도 7은 약물 부하 퍼센트에 의해 평가된 바와 같이 상이한 PDS-MMAE THIOMABTM 항체의 안정성의 그래프를 도시한다.
도 8은 약물 부하 퍼센트에 의해 평가된 바와 같이 상이한 MC-vc-MMAE THIOMABTM 항체의 안정성의 그래프를 도시한다.
도 9는 LC-K149C, LC-V205C, 및 HC-A114C THIOMABTM 항-HER2와 항-CD33 항체의 경시적인 평균 DAR의 그래프를 도시한다.
도 10은 예시적인 THIOMABTM 항체 구조를 도시한다. 도 10a는 티오-Her2-hu7C2-HC-A118C-디설파이드-PBD 및 티오-Her2-hu7C2-LC-K149C-디설파이드-PBD THIOMABTM 항체의 구조를 도시한다. 도 10b는 티오-Her2-hu7C2-LC-K149C-CBI 이량체에 대한 구조를 도시한다. 도 10c는 티오-Her2-hu7C2-LC-K149C-디설파이드-CBI-PBD에 대한 구조를 도시한다. 도 10d는 티오-Her2-hu7C2-LC-K149C-디설파이드-PNU에 대한 구조를 도시한다. 도 10e는 티오-Her2-hu7C2-HC-A118C-말레이미드-PNU 및 티오-Her2-hu7C2-LC-K149C-말레이미드-PNU에 대한 구조를 도시한다.
도 11은 MC-vc-MMAE THIOMABTM 항체의 도면(비례하지 않음)을 도시한다.
도 12는 PDS-MMAE THIOMABTM 항체의 도면(비례하지 않음)을 도시한다.
도 13은 LC-K149C 시스테인 가공된 항체에 콘주게이트된 어떤 약물의 효소 변형의 도식을 도시한다. 본 변형 아래와 같다: 크립토파이신은 아미드 절단을 겪고, 투불리신은 아세틸 손실(즉, 탈아세틸화)을 겪고, CBI-PBD 이종이량체 링커-약물 중간체는 카바메이트 손실을 겪으며, 그리고 탁소이드는 불안정하고 다중 효소 절단을 나타냈다.
도 14a는 HC-A140C가 LC-K149C에 비교하여 투불리신의 아세틸 기의 보호를 제공한다는 것을 도시한다. 특이적으로, 24시간 배양한 후 LC-K149C보다 부착 부위로서 HC-A140C를 사용한 약물의 분해가 덜하다는 것이 LCMS를 사용하여 도시되었다. 도 14b 및 14c는 HC-A140C가 신규 전혈 검정을 사용하여 24 시간 배양한 후 LC-K149C보다 더 안정한 것을 보여준다.
도 15는 아세틸 손실이 WB 검정의 다중 라운드를 사용하여 LC-K149C에 비교하여 HC-A140C에서 급격하게 감소되었다는 것을 보여준다. HC-A140C가 아세틸 손실 변형으로부터 지키는 것이 확인되었다.
도 16a는 HC-A140C가 CBI-PBD 이종이량체 링커-약물 중간체의 카보메이트 기의 보호를 제공한다는 것을 보여준다. 특이적으로, 24시간 배양한 후 LC-K149C보다 부착 부위로서 HC-A140C를 사용한 약물의 분해가 덜하다는 것이 LCMS를 사용하여 도시되었다(도 16a). 도 16b 및 16c는 HC-A140C가 신규 전혈 검정을 사용하여 24 시간 배양한 후 LC-K149C보다 더 안정한 것을 보여준다.
도 17은 HC-A140C가 본 명세서에 기재된 신규 전혈 검정을 사용하여 LC-K149C보다 더 안정한 것을 보여준다.
도 18a는 HC-A140C가 탁소이드의 변형으로부터 보호를 제공한다는 것을 보여준다. 특이적으로, 24시간 배양한 후 LC-K149C보다 부착 부위로서 HC-A140C를 사용한 약물의 분해가 덜하다는 것이 LCMS를 사용하여 도시되었다. 도 18b 및 18c는 HC-A140C가 신규 전혈 검정을 사용하여 24 시간 배양한 후 LC-K149C보다 더 안정한 것을 보여준다.
도 19는 HC-A140C가 신규 전혈 검정을 사용하여 LC-K149C보다 더 안정한 (예를 들면, 탁소이드 의약품 손실을 보호하는 것에 관하여) 것을 보여준다.
도 20은 HC-A140C가 LC-K149C에 비교하여 아미드 및 에스테르 절단으로부터 크립토파이신을 보호한다는 것을 보여준다.
도 21은 항체의 도식에 매핑된 PDS 및 -vc 링커에 대한 바람직한 HC 및 LC 시스테인 돌연변이를 도시한다.
이제 본 발명의 특정 구현예에 대한 상세히 언급될 것이며, 그것의 예들은 첨부된 구조 및 화학식에 예시되어 진다. 본 발명은 열거된 구현예와 관련하여 기술될 것이지만, 그들은 본 발명을 이들 구현예로 한정하려는 의도가 아니라는 것이 이해될 것이다. 반대로, 본 발명은 청구범위에 의해 정의된 본 발명의 범위 내에 포함될 수 있는 모든 대안, 변형 및 등가물을 포함하는 것으로 의도된다.
당해 분야의 숙련가는 본 발명의 실시에 사용될 수 있는 본 명세서에서 기재된 것들에 유사하거나 동등한 많은 방법 및 물질을 인식할 것이다. 본 발명은 기술된 방법 및 물질에 결코 제한되지 않는다.
다르게 정의되지 않는 한, 본 명세서에서 사용된 기술 및 과학 용어들은 본 발명이 속하는 당해 분야의 숙련가에 의해 통상적으로 이해되는 바와 동일한 의미를 가지고, 그리고: 「Singleton 등 (1994) Dictionary of Microbiology and Molecular Biology, 2nd Ed., J. Wiley & Sons, New York, NY」; 및 「Janeway, C., Travers, P., Walport, M., Shlomchik (2001) Immunobiology, 5th Ed., Garland Publishing, New York」과 일치된다.
정의
다르게 언급되지 않는 한, 본 명세서에서 사용된 바와 같은 하기 용어들 및 어구는 하기 의미를 가지는 것으로 의도된다:
상표명이 본 명세서에서 사용될 때, 출원인은 독립적으로 본 상표명 제품 제형, 복제 약물, 및 본 상표명 제품의 활성 약제학적 성분(들)을 포함하는 것을 의도한다.
본 명세서에서 용어 "항체"는 가장 넓은 의미로 사용되고 그리고 특이적으로 이들이 원하는 생물학적 활성을 나타내는 한, 단클론성 항체, 다클론성 항체, 이량체, 다량체, 다중특이적 항체 (예를 들면, 이중특이적 항체), 및 항체 단편을 포함한다(Miller 등 (2003) Jour. of Immunology 170:4854-4861). 항체는 뮤린, 인간, 인간화된, 키메라성일 수 있고, 또는 다른 종으로부터 유도될 수 있다. 항체는 특이적 항원을 인식할 수 있고 그리고 결합할 수 있는 면역계에 의해 생성된 단백질이다. (Janeway, C., Travers, P., Walport, M., Shlomchik (2001) Immuno Biology, 5th Ed., Garland Publishing, New York). 표적 항원은 일반적으로 다중 항체 상에 CDRs에 의해 기술적으로 인식된, 또한 소위 에피토프로 불리는 수많은 결합 부위를 가진다. 상이한 에피토프에 특이적으로 결합하는 각 항체는 상이한 구조를 갖는다. 따라서, 하나의 항원은 1 초과의 상응하는 항체를 가질 수 있다. 항체는 전장 면역글로불린 분자 또는 전장 면역글로불린 분자의 면역학적으로 활성 부분, 즉 관심 표적 또는 이들의 일부의 항원에 면역 특이적으로 결합하는 항원 결합 부위를 함유하는 분자를 포함하며, 이러한 표적은, 비제한적으로, 암세포 또는 자가면역 질환과 관련된 자가면역 항체를 생산하는 세포를 포함한다. 본 명세서에서 개시된 면역글로불린은 면역글로불린 분자의 임의의 유형 (예를 들면, IgG, IgE, IgM, IgD, 및 IgA), 부류 (예를 들면, IgG1, IgG2, IgG3, IgG4, IgA1 및 IgA2) 또는 하위부류의 것일 수 있다. 본 면역글로불린은 임의의 종으로부터 유도될 수 있다. 일 측면에서, 그러나, 본 면역글로불린은 인간, 뮤린, 또는 래빗 기원의 것이다.
"항체 단편"은 전장 항체의 부분, 일반적으로 이들의 항원 결합 또는 가변 영역을 포함한다. 항체 단편의 예는 Fab, Fab', F(ab')2, 및 Fv 단편; 디아바디; 선형 항체; 미니바디 (Olafsen 등 (2004) Protein Eng. Design & Sel. 17(4):315-323), Fab 발현 라이브러리에 의해 생성된 단편, 항-이디오타입 (항-Id) 항체, CDR (상보적 결정 영역), 및 암 세포 항원, 바이러스 항원 또는 미생물 항원, 단일-사슬 항체 분자에 면역특이적으로 결합하는 상기의 임의의 에피토프-결합 단편; 및 항체 단편으로부터 형성된 다중특이적 항체를 포함한다.
특정 구현예에서, 본 명세서에서 제공된 항체는 다중특이적 항체, 예를 들면 이중특이적 항체이다. 본 명세서에서 사용된 바와 같이 용어 "다중특이적 항체"는 폴리에피토프 특이성을 가지는 (즉, 하나의 분자 상의 둘, 또는 그 이상의, 상이한 에피토프에 결합할 수 있거나, 둘 또는 그 이상의 상이한 분자 상에 에피토프에 결합할 수 있는) 항원-결합 도메인을 포함하는 항체를 언급한다.
일부 구현예에서, 다중특이적 항체는 (이중특이적 항체와 같이) 적어도 2개의 상이한 항원 결합 부위에 대해 결합 특이성을 가지는 단클론성 항체이다. 일부 구현예에서, 본 다중특이적 항체의 제1 항원-결합 도메인 및 제2 항원-결합 도메인은 하나의 동일한 분자 내 2개의 에피토프를 결합시킬 수 있다 (분자 내 결합). 예를 들면, 다중특이적 항체의 제1 항원-결합 도메인 및 제2 항원-결합 도메인은 동일한 분자 상의 2개의 상이한 에피토프에 결합할 수 있다. 특정 구현예에서, 다중특이성 항체가 결합하는 2개의 상이한 에피토프는, 예를 들면 종래의 항체 또는 일 면역글로불린 단일 가변 도메인과 같이, 하나의 단일특이적 항체에 의해 동시에 정상적으로 결합되지 않는 에피토프이다. 일부 구현예에서, 다중특이적 항체의 제1 항원-결합 도메인 및 제2 항원-결합 도메인은 2개의 상이한 분자 내에 위치한 에피토프를 결합할 수 있다 (분자간 결합). 예를 들면, 다중특이성 항체의 제1 항원-결합 도메인은 하나의 분자상의 하나의 에피토프에 결합할 수 있는 반면, 다중특이성 항체의 제2 항원-결합 도메인은 상이한 분자 상의 또 다른 에피토프에 결합할 수 있어 그렇게 함으로써 두 분자를 가교결합시킬 수 있다.
일부 구현예에서, 다중특이적 항체 (예컨대 이중특이적 항체)의 항원-결합 도메인은 2개의 VH/VL 단위를 포함하고, 여기서 제1 VH/VL 단위는 제1 에피토프에 결합하고 제2 VH/VL 단위는 제2 에피토프에 결합하고, 여기서 각 VH/VL 단위는 중쇄 가변 도메인 (VH) 및 경쇄 가변 도메인 (VL)을 포함한다. 이러한 다중특이적 항체는, 비제한적으로, 전장 항체, 2종 이상의 VL 및 VH 도메인을 갖는 항체 및 항체 단편 (예컨대 Fab, Fv, dsFv, scFv, 디아바디, 이중특이적 디아바디 및 트리아바디, 공유로 또는 비공유로 연결된 항체 단편)을 포함한다. 적어도 일부분의 중쇄 가변 영역 및/또는 적어도 일부분의 경쇄 가변 영역을 더 포함하는 VH/VL 단위는 또한 "암" 또는 "헤미머" 또는 "하프 항체"로 지칭될 수 있다. 일부 구현예에서, 헤미머는 분자 내 디설파이드 결합이 제2 헤미머로 형성되도록 하기 위해 중쇄 가변 영역의 충분한 부분을 포함한다. 일부 구현예에서, 헤미머는 예를 들면, 상보 적 홀 돌연변이 또는 크놉 돌연변이를 포함하는 제2 헤미머 또는 하프 항체와의 헤테로이량체화를 허용하기 위해 크놉 돌연변이 또는 홀 변이를 포함한다. 크놉 돌연변이 및 홀 돌연변이는 아래에서 더 기술된다.
특정 구현예에서, 본 명세서에서 제공된 다중특이적 항체는 이중특이적 항체일 수 있다. 본 명세서에서 사용된 바와 같이 용어 "이중특이적 항체"는 일 분자 상에 2개의 상이한 에피토프에 결합할 수 있거나 2개의 상이한 분자 상에 에피토프에 결합할 수 있는 항원-결합 도메인을 포함하는 다중특이적 항체에 대해 언급한다. 이중특이적 항체는 또한 본 명세서에서 "이중 특이성"을 가지는 것으로 또는 "이중 특이적"인 것으로 언급될 수 있다. 예시적인 이중특이적 항체는 분자 및 임의의 다른 항원 양자를 결합할 수 있다. 특정 구현예에서, 결합 특이성의 하나는 분자에 대한 것이고 그리고 다른 것은 CD3에 대한 것이다. 참고, 예를 들면, 미국 특허 번호 5,821,337. 특정 구현예에서, 이중특이적 항체는 동일한 분자의 2개의 상이한 에피토프에 결합할 수 있다. 특정 구현예에서, 이중특이적 항체는 2개의 상이한 분자 상에 2개의 상이한 에피토프에 결합할 수 있다. 이중특이적 항체는 또한 관심있는 분자를 발현하는 세포에 세포독성 약물을 위치시키기 위해 사용될 수 있다. 이중특이적 항체는 전장 항체 또는 항체 단편으로 제조될 수 있다.
다중특이적 항체를 제작하기 위한 기술은, 비제한적으로, 상이한 특이성을 갖는 두 면역글로불린 중쇄-경쇄 쌍의 재조합 공-발현 (Milstein 및 Cuello, Nature 305: 537 (1983), WO 93/08829, 그리고 Traunecker 등, EMBO J. 10: 3655 (1991) 참고), 및 "크놉-인-홀" 엔지니어링 (참고, 예를 들면, 미국 특허 번호 5,731,168, WO2009/089004, US2009/0182127, US2011/0287009, Marvin 및 Zhu, Acta Pharmacol. Sin. (2005) 26(6):649-658, 그리고 Kontermann (2005) Acta Pharmacol. Sin., 26:1-9)을 포함한다. 본 명세서에서 사용된 바와 같이 용어 "크놉-인투-홀" 또는 "KnH" 기술은 상호 작용하는 계면에서 하나의 폴리펩티드에 돌출부(크놉) 및 다른 폴리펩티드에 공동(홀)을 도입함에 의해 시험관내 또는 생체내에서 두 폴리펩티드의 쌍형성에 대한 기술을 언급한다. 예를 들면, KnH는 항체의 Fc:Fc 결합 계면, CL:CH1 계면 또는 VH/VL 계면에 도입된다 (참고, 예를 들면, US 2011/0287009, US2007/0178552, WO 96/027011, WO 98/050431, Zhu 등, 1997, Protein Science 6:781-788, 및 WO2012/106587). 일부 구현예에서, KnH는 다중특이적 항체를 제작하는 동안 2개의 상이한 중쇄를 함께 쌍형성하도록 한다. 예를 들면, 그것의 Fc 영역에 KnH를 갖는 다중특이적 항체는 더욱이 각 Fc 영역에 연결된 단일 가변 도메인을 포함할 수 있거나, 유사한 또는 상이한 경쇄 가변 도메인과 쌍형성하는 상이한 중쇄 가변 도메인을 더 포함할 수 있다. KnH 기술은 또한 2개의 상이한 수용체 세포외 도메인을 함께 또는 상이한 표적 인식 서열 (예를 들면, 아피바디, 펩티바디 및 다른 Fc 융합을 포함함)을 포함하는 임의의 다른 폴리펩티드 서열을 쌍형성하기 위해 사용될 수 있다.
본 명세서에서 사용된 바와 같이 용어 "크놉 돌연변이"는 폴리펩티드가 또 다른 폴리펩티드와 상호 작용하는 계면에서 폴리펩티드 안으로 돌출부 (크놉)를 도입하는 돌연변이를 언급한다. 일부 구현예에서, 다른 폴리펩티드는 홀 돌연변이를 가진다.
본 명세서에서 사용된 바와 같이 용어 "홀 돌연변이"는 폴리펩티드가 또 다른 폴리펩티드와 상호 작용하는 계면에서 폴리펩티드 안으로 공동 (홀)을 도입하는 돌연변이를 언급한다. 일부 구현예에서, 다른 폴리펩티드는 크놉 돌연변이를 가진다. 간단한 비제한적 논의가 아래에서 제공된다.
"돌출부"는 이종다량체를 안정화하고, 그리고 그렇게 함으로써, 예를 들면 호모다량체 형성보다 이종다량체 형성에 유리하도록, 제1 폴리펩티드의 계면로부터 돌출하고 그리고 따라서 인접한 계면 (즉 제2 폴리펩티드의 계면) 내 보상성 공동에 위치할 수 있는 적어도 1종의 아미노산 측쇄를 지칭한다. 본 돌출부는 본래 계면에 존재할 수 있거나, (예를 들면, 계면를 암호화하는 핵산을 변경시킴에 의해) 합성적으로 도입될 수 있다. 일부 구현예에서, 제1 폴리펩티드의 계면를 암호화하는 핵산은 돌촐부를 암호화하도록 변경된다. 이를 달성하기 위해, 제1 폴리펩티드의 계면 내 적어도 1종의 "본래" 아미노산 잔기를 암호화하는 핵산은 본래 아미노산 잔기보다 더 큰 측쇄 용적을 갖는 적어도 1종의 "도입" 아미노산 잔기를 암호화하는 핵산으로 대체된다. 1 초과 본래 및 상응하는 도입 잔기가 있을 수 있음을 인식할 것이다. 다양한 아미노 잔기의 측쇄 용적은, 예를 들면 US2011/0287009의 표 1에 나타나 있다. "돌출부"를 도입하는 돌연변이는 "크놉 돌연변이"로 언급될 수 있다.
일부 구현예에서, 돌출부의 형성을 위한 도입 잔기는 아르기닌 (R), 페닐알라닌 (F), 티로신 (Y) 및 트립토판 (W)으로부터 선택된 천연 발생 아미노산 잔기이다. 일부 구현예에서, 도입 잔기는 트립토판 또는 티로신이다. 일부 구현예에서, 돌출부의 형성을 위한 원래 잔기는 알라닌, 아스파라긴, 아스파르트산, 글리신, 세린, 트레오닌 또는 발린고 같은 작은 측쇄 용적을 가진다.
"공동"은 제2 폴리펩티드의 계면로부터 오목하고 따라서 제1 폴리펩티드의 인접한 계면 상의 상응하는 돌출부를 수용하는 적어도 1종의 아미노산 측쇄를 언급한다. 공동은 본래 계면에 존재할 수 있거나 (예를 들면, 계면를 암호화하는 핵산을 변경시킴에 의해) 합성적으로 도입될 수 있다. 일부 구현예에서, 제2 폴리펩티드의 계면를 암호화하는 일부 핵산은 공동을 암호화하도록 변경된다. 이를 달성하기 위해, 제2 폴리펩티드의 계면 내 적어도 1종의 "본래" 아미노산 잔기를 암호화하는 핵산은 본래 아미노산 잔기보다 더 작은 측쇄 용적을 갖는 적어도 1종의 "도입" 아미노산 잔기를 암호화하는 DNA로 대체된다. 1 초과 본래 및 상응하는 도입 잔기가 있을 수 있음을 인식할 것이다. 일부 구현예에서, 공동의 형성을 위한 도입 잔기는 알라닌 (A), 세린 (S), 트레오닌 (T) 및 발린 (V)으로부터 선택된 천연 발생 아미노산 잔기이다. 일부 구현예에서, 도입 잔기는 세린, 알라닌 또는 트레오닌이다. 일부 구현예에서, 공동의 형성을 위한 원래 잔기는 티로신, 아르기닌, 페닐알라닌 또는 트립토판과 같이 큰 측쇄 용적을 가진다. "공동"을 도입하기 위한 돌연변이는 "홀 돌연변이"로 언급될 수 있다.
돌출부는 제1 폴리펩티드 및 제2 폴리펩티드 각각의 계면 상의 돌출부 및 공동의 공간적 위치 및 돌출부 및 공동의 크기가, 돌출부가 계면에서 제1 및 제2 폴리펩티드의 정상 회합을 유의미하게 방해함에 없이 공동 내에 위치될 수 있도록 하는 것을 의미하는 공동 내에 "위치할 수" 있다. Tyr, Phe 및 Trp과 같은 이러한 돌출부는 전형적으로 계면의 축으로부터 수직으로 신장하지 않고 그리고 바람직한 형태를 가지고, 일부 사례에서, 상응하는 공동과 돌출부의 정렬은 X-선 결정학 또는 핵자기 공명 (NMR)에 의해 수득된 것과 같은 3차원 구조에 기반한 돌출부/공동 쌍을 모델링하는 것에 의존할 수 있다. 이것은 당해 기술에서 널리 허용된 기술을 사용하여 달성될 수 있다.
일부 구현예에서, IgG1 불변 영역 내 크놉 돌연변이 T366W (EU 넘버링)이다. 일부 구현예에서, IgG1 불변 영역에서 홀 돌연변이는 T366S, L368A 및 Y407V (EU 넘버링)로부터 선택된 1종 이상의 돌연변이를 포함한다. 일부 구현예에서, IgG1 불변 영역 내 홀 돌연변이는 T366S, L368A 및 Y407V (EU 넘버링)를 포함한다.
일부 구현예에서, IgG4 불변 영역 내 크놉 돌연변이는 T366W (EU 넘버링)이다. 일부 구현예에서, IgG4 불변 영역 내 홀 돌연변이는 T366S, L368A, 및 Y407V (EU 넘버링)로부터 선택된 1종 이상의 돌연변이를 포함한다. 일부 구현예에서, IgG4 불변 영역 내 홀 돌연변이는 T366S, L368A, 및 Y407V (EU 넘버링)를 포함한다.
다중특이적 항체는 또한 항체 Fc-이종이량체 분자를 제조하기 위한 정전기 조향 효과를 가공함 (WO　2009/089004A1); 2종 이상의 항체 또는 단편을 가교결합함 (예를 들면, 미국 특허 번호 4,676,980, 및 Brennan 등, Science, 229: 81 (1985) 참고); 이중특이적 항체를 생성하기 위해 류신 지퍼를 사용함 (예를 들면, Kostelny 등, J. Immunol ., 148(5):1547-1553 (1992) 참고); 이중특이적 항체 단편을 제조하기 위해 "디아바디" 기술을 사용함 (예를 들면, Hollinger 등, Proc . Natl. Acad . Sci . USA, 90:6444-6448 (1993) 참고); 및 단일-사슬 Fv (sFv) 이량체를 사용함 (예를 들면 Gruber 등, J. Immunol.,152:5368 (1994) 참고); 및 예를 들면, Tutt 등 J. Immunol .147: 60 (1991)에 기재된 바와 같은 삼중특이적 항체를 제조함에 의해 제조될 수 있다.
"옥토퍼스 항체" 또는 "이중-가변 도메인 면역글로불린" (DVDs)을 포함하는 3 또는 그 이상의 기능적 항원 결합 부위를 갖는 가공된 항체가 또한 본 명세서에 포함된다 (예를 들면, US　2006/0025576A1, 및 Wu 등 Nature Biotechnology (2007)) 참고.). 본 명세서에서 항체 또는 단편은 또한 또 다른, 상이한 항원뿐만 아니라 분자에 결합하는 항원 결합 부위를 포함하는 "이중 작용 FAb" 또는 "DAF"를 포함한다 (예를 들면, US 2008/0069820 참고).
본 명세서에서 사용된 바와 같이 용어 "단클론성 항체"는 실질적으로 균질한 항체의 집단으로부터 수득된 항체를 언급하고, 즉, 본 집단을 포함하는 개별적인 항체는 소량으로 존재할 수 있는 가능한 천연 발생 돌연변이를 제외하고 동일하다. 단클론성 항체 매우 특이적으로, 단일 항원성 부위에 대해 지향된다. 더욱이, 상이한 결정인자 (에피토프)에 대해 지향된 상이한 항체를 포함하는 다클론성 항체 제조와는 대조적으로, 각 단클론성 항체는 항원 상의 단일 결정인자에 대해 지향된다. 이들의 특이성에 부가하여, 단클론성 항체는 이들이 다른 항체에 의해 오염되지 않고 합성될 수 있다는 점에서 유리하다. 수식어 "단클론성"은 실질적으로 균질 한 항체 집단으로부터 수득된 것으로서의 항체의 특성을 나타내며, 임의의 특정 방법에 의한 항체의 생산을 요하는 것으로서 해석되지 않아야 한다. 예를 들면, 본 발명에 따라 사용되어 지는 단클론성 항체는 「Kohler 등 (1975) Nature 256:495」에 의해 처음 기재된 하이브리도마 방법에 의해 제조될 수 있거나, 재조합 DNA 방법에 의해 제조될 수 있다(예를 들면: US 4816567; US 5807715 참고). 단클론성 항체는 또한 예를 들면 「Clackson 등 (1991) Nature, 352:624-628; Marks 등 (1991) J. Mol. Biol., 222:581-597」에 기재된 기술을 사용하여 파아지 항체 라이브러리로부터 단리될 수 있다.
본 명세서에서 단클론성 항체는 특이적으로, 이들이 원하는 생물학적 활성을 나타내는 한, 중쇄 및/또는 경쇄의 일부가 특정한 종으로부터 유래되거나 특정한 항체 부류 또는 아부류에 속하는 항체에서 상응하는 서열과 동일하거나 상동성이고, 반면 사슬의 나머지는 다른 생물종으로부터 유래되거나 또 다른 항체 부류 또는 아부류에 속하는 항체뿐만 아니라 이러한 항체의 단편에서 상응하는 서열과 동일하거나 상동성인 "키메라" 항체를 포함한다 (US 4816567; 및 Morrison 등 (1984) Proc. Natl. Acad. Sci. USA, 81:6851-6855). 본 명세서에서 관심 있는 키메라성 항체는 비-인간 영장류 (예를 들면, 구대륙 원숭이, 유인원 등) 및 인간 불변 영역 서열로부터 유도된 가변 도메인 항원-결합 서열을 포함하는 "영장류화된" 항체를 포함한다.
본 명세서에서 "무손상 항체"는 VL 및 VH 도메인, 뿐만 아니라 경쇄 불변 도메인 (CL) 및 중쇄 불변 도메인, CH1, CH2 및 CH3를 포함하는 것이다. 불변 도메인은 천연 서열 불변 도메인 (예를 들면, 인간 천연 서열 불변 도메인) 또는 그것의 아미노산 서열 변이체일 수 있다. 무손상 항체는 항체의 Fc 불변 영역 (천연 서열 Fc 영역 또는 아미노산 서열 변이체 Fc 영역)에 기인하는 이들 생물학적 활성을 지칭하는 1종 이상의 "효과기 기능"을 가질 수 있다. 항체 효과기 기능의 예는 C1q 결합; 보체 의존적 세포 독성; Fc 수용체 결합; 항체-의존적 세포-매개 세포독성 (ADCC); 식균 작용; 및 B 세포 수용체 및 BCR과 같은 세포 표면 수용체의 하향 조절을 포함한다.
특정 구현예에서, 1종 이상의 아미노산 변형은 본 명세서에서 제공된 항체의 Fc 영역 안으로 도입될 수 있고, 그렇게 함으로써 Fc 영역 변이체를 생성한다. Fc 영역 변이체는 1종 이상의 아미노산 위치에 아미노산 변형 (예를 들면 치환)을 포함하는 인간 Fc 영역 서열 (예를 들면, 인간 IgG1, IgG2, IgG3 또는 IgG4 Fc 영역)을 포함할 수 있다.
특정 구현예에서, 본 발명은 생체내 항체의 반감기가 여전히 어떤 효과기 기능 (예컨대 보체 및 ADCC)이 중요한 적용에 대해 바람직한 후보자에 불필요한 또는 유해하게 하는, 모든 효과기 기능은 아니지만 일부를 보유하는 항체 변이체를 고려한다. 시험관내 및/또는 생체내 세포독성 검정은 CDC 및/또는 ADCC 활성의 감소/고갈을 확인하기 위해 수행될 수 있다. 예를 들면, Fc 수용체 (FcR) 결합 검정은 항체가 FcγR 결합을 결여하지만 (따라서 유사하게 ADCC 활성이 결핍됨), FcRn 결합능력을 유지하는 것을 확실히 하도록 수행될 수 있다. ADCC를 매개하는 1차 세포 인 NK 세포는 Fc를 발현한다 (단지 RIII만, 반면에 단핵구는 Fc(RI, Fc(RII 및 Fc(RIII를 발현한다. 조혈 세포 상에 FcR 발현은 「Ravetch 및 Kinet, Annu . Rev. Immunol. 9:457-492 (1991)」의 464 페이지의 표 3에 요약되어 있다. 관심 있는 분자의 ADCC 활성을 평가하기 위한 시험관내 검정의 비-제한적인 예는 미국 특허 번호 5,500,362 (예를 들면 Hellstrom, I. 등 Proc . Nat'l Acad . Sci . USA 83:7059-7063 (1986) 참고) 및 Hellstrom, I 등, Proc . Nat'l Acad . Sci . USA 82:1499-1502 (1985); 5,821,337 (Bruggemann, M. 등, J. Exp . Med . 166:1351-1361 (1987) 참고)에 기재된다. 대안적으로, 비-방사성 검정 방법이 이용될 수 있다 (참고로, 예를 들면, 유세포측정을 위한 ACTI™ 비-방사성 세포독성 검정(CellTechnology, Inc. Mountain View, CA; 및 CytoTox 96® 비-방사성 세포독성 검정 (Promega, Madison, WI). 이러한 검정을 위한 유용한 효과기 세포는 말초 혈액 단핵 세포 (PBMC) 및 자연 살해 (NK) 세포를 포함한다. 대안적으로, 또는 추가로, 관심 있는 분자의 ADCC 활성은 생체내, 예를 들면, 「Clynes 등 Proc . Nat'l Acad . Sci . USA 95:652-656 (1998)」에 개시된 것과 같은 동물 모델에서 평가될 수 있다. C1q 결합 검정은 또한 본 항체가 C1q에 결합될 수 없고 따라서 CDC 활성을 결한다는 것을 확인하기 위해 수행될 수 있다. 예를 들면, WO　2006/029879 및 WO　2005/100402에서 C1q 및 C3c 결합 ELISA 참고. 보체 활성화를 평가하기 위해, CDC 검정이 수행될 수 있다 (참고로, 예를 들면, Gazzano-Santoro 등, J. Immunol . Methods 202:163 (1996); Cragg, M.S. 등, Blood 101:1045-1052 (2003); 그리고 Cragg, M.S. 및 M.J. Glennie, Blood 103:2738-2743 (2004)). FcRn 결합 및 생체내 청소능/반감기 결정은 또한 당해 분야에서 공지된 방법(예를 들면, Petkova, S.B. 등, Int'l . Immunol . 18(12):1759-1769 (2006) 참고)을 사용하여 수행될 수 있다.
일부 구현예에서, 1종 이상의 아미노산 변형이 신생아 Fc 수용체에 결합하는 IgG를 증가하기 위해 본 명세서에서 제공된 항체의 Fc 부 안으로 도입될 수 있다. 특정 구현예에서, 항체는 EU 넘버링에 따른 하기 세 돌연변이를 포함한다: M252Y, S254T, 및 T256E ("YTE 돌연변이") (미국 특허 번호 8,697,650; 또한 하기를 참조한다: Dall'Acqua 등, Journal of Biological Chemistry 281(33):23514-23524 (2006). 특정 구현예에서, YTE 돌연변이는 그것의 동족 항원에 결합하는 항체의 능력에 영향을 미치지 않는다. 특정 구현예에서, YTE 돌연변이는 원상태 (즉, 비-YTE 돌연변이체) 항체에 비교하여 항체의 혈청 반감기를 증가한다. 일부 구현예에서, YTE 돌연변이는 원상태 (즉, 비-YTE 돌연변이체) 항체에 비교하여 3-배로 항체의 혈청 반감기를 증가한다. 일부 구현예에서, YTE 돌연변이는 원상태 (즉, 비-YTE 돌연변이체) 항체에 비교하여 2-배로 항체의 혈청 반감기를 증가한다. 일부 구현예에서, YTE 돌연변이는 원상태 (즉, 비-YTE 돌연변이체) 항체에 비교하여 4-배로 항체의 혈청 반감기를 증가한다. 일부 구현예에서, YTE 돌연변이는 원상태 (즉, 비-YTE 돌연변이체) 항체에 비교하여 적어도 5-배로 항체의 혈청 반감기를 증가한다. 일부 구현예에서, YTE 돌연변이는 원상태 (즉, 비-YTE 돌연변이체) 항체에 비교하여 적어도 10-배로 항체의 혈청 반감기를 증가한다. 참고, 예를 들면, 미국 특허 번호 8,697,650; 또한 하기를 참조한다: Dall'Acqua 등, Journal of Biological Chemistry 281(33):23514-23524 (2006).
특정 구현예에서, YTE 돌연변이체는 항체의 항체-의존적 세포-매개 세포독성 (ADCC) 활성을 조절하는 수단을 제공한다. 특정 구현예에서, YTEO 돌연변이체는 인간 항원에 대해 지향된 인간화된 IgG 항체의 ADCC 활성을 조절하는 수단을 제공한다. 참고, 예를 들면, 미국 특허 번호 8,697,650; 또한 하기를 참조한다: Dall'Acqua 등, Journal of Biological Chemistry 281(33):23514-23524 (2006).
특정 구현예에서, YTE 돌연변이체는 혈청 반감기, 조직 분포, 및 항체 활성 (예를 들면, IgG 항체의 ADCC 활성)의 동시의 조절을 허용한다. 참고, 예를 들면, 미국 특허 번호 8,697,650; 또한 하기를 참조한다: Dall'Acqua 등, Journal of Biological Chemistry 281(33):23514-23524 (2006).
감소된 효과기 기능을 갖는 항체는 EU 넘버링에 따른 Fc 영역 잔기 238, 265, 269, 270, 297, 327 및 329 중 1종 이상의 치환을 갖는 것들을 포함한다 (미국 특허 번호 6,737,056). 이러한 Fc 돌연변이체는, EU 넘버링에 따른 알라닌에 대해 잔기 265 및 297의 치환을 갖는 소위 "DANA" Fc 돌연변이체(즉, EU 넘버링에 따른 D265A 및 N297A)를 포함하는, EU 넘버링에 따른 아미노산 위치 265, 269, 270, 297 및 327 중 2종 이상에서 치환을 갖는 Fc 돌연변이체를 포함한다 (미국 특허 번호 7,332,581). 특정 구현예에서 Fc 돌연변이체는 하기 2개의 아미노산 치환을 포함한다: D265A 및 N297A. 특정 구현예에서 Fc 돌연변이체는 하기 2개의 아미노산 치환으로 구성된다: D265A 및 N297A.
특정 구현예에서, 야생형 인간 Fc 영역의 위치 329 (EU 넘버링 ) (P329)에서 프롤린은 글리신 또는 아르기닌 또는 Fc/Fcγ 수용체 계면 내의 프롤린 샌드위치를 파괴하기에 충분히 큰 아미노산 잔기, 즉 Fc의 P329와 FcgRIII의 트립토판 잔기 W87 및 W110 사이에 형성된 것으로 치환된다 (Sondermann 등: Nature 406, 267-273 (20 July 2000)). 추가 구현예에서, Fc 변이체 내 적어도 1종의 추가 아미노산 치환은 S228P, E233P, L234A, L235A, L235E, N297A, N297D, 또는 P331S이고 그리고 여전히 또 다른 구현예에서 상기 적어도 1종의 추가 아미노산 치환은, 모두 EU 넘버링에 따른, 인간 IgG1 Fc 영역의 L234A 및 L235A 또는 인간 IgG4 Fc 영역의 S228P 및 L235E이다 (그 전체가 참고로 편입된 미국 특허 번호 8,969,526).
특정 구현예에서, 폴리펩티드는 야생형 인간 IgG Fc 영역의 Fc 변이체를 포함하고 여기서 폴리펩티드는 인간 IgG Fc 영역의 P329가 글리신으로 치환되고 그리고 여기서 Fc 변이체는 인간 IgG1 Fc 영역의 L234A 및 L235A 또는 인간 IgG4 Fc 영역의 S228P 및 L235E에서 적어도 2종의 추가 아미노산 치환을 포함하고, 그리고 여기서 본 잔기는 EU 넘버링에 따라 넘버링된다 (그 전체가 참고로 편입된 미국 특허 번호 8,969,526). 특정 구현예에서, P329G, L234A 및 L235A (EU 넘버링) 치환을 포함하는 폴리펩티드는 야생형 인간 IgG Fc 영역을 포함하는 폴리펩티드에 의해 유도된 ADCC의 적어도 20%까지 ADCC의 다운-조절, 및/또는 ADCP의 다운-조절에 대해 인간 FcγRIIIA 및 FcγRIIA에 감소된 친화도를 나타내다 (그 전체가 참고로 편입된 미국 특허 번호 8,969,526).
특정 구현예에서 야생형 인간 Fc 폴리펩티드의 Fc 변이체를 포함하는 폴리펩티드는 삼중 돌연변이: EU 넘버링에 따른 위치 Pro329, L234A 및 L235A 돌연변이에서 아미노산 치환 (P329/LALA)를 포함한다 (그 전체가 참고로 편입된 미국 특허 번호 8,969,526). 특정 구현예에서, 폴리펩티드는 하기 아미노산 치환을 포함한다: EU 넘버링에 따른 P329G, L234A, 및 L235A.
FcRs에 대해 개선된 또는 줄어든 결합을 갖는 어떤 항체 변이체가 기재된다. (예를 들면, 미국 특허 번호 6,737,056; WO 2004/056312, 그리고 Shields 등, J. Biol. Chem. 9(2): 6591-6604 (2001) 참고.)
특정 구현예에서, 항체 변이체는 ADCC를 개선하는 1종 이상의 아미노산 치환, 예를 들면, Fc 영역의 위치 298, 333, 및/또는 334 (EU 넘버링)에서 치환을 갖는 Fc 영역을 포함한다.
일부 구현예에서, 변경은, 예를 들면, 미국 특허 번호 6,194,551, WO　99/51642, 및 「Idusogie 등 J. Immunol . 164: 4178-4184 (2000)」에 기재된 바와 같은, 변경된 (즉, 개선되거나 또는 줄어든) C1q 결합 및/또는 보체 의존적 세포독성 (CDC)을 초래하는 Fc 영역에서 만들어 진다.
태아로 모계 IgG의 전달 (Guyer 등, J. Immunol . 117:587 (1976) 및 Kim 등, J. Immunol . 24:249 (1994))을 담당하는, 신생아 Fc 수용체 (FcRn)에 대해 개선된 결합 및 증가된 반감기를 갖는 항체가 US2005/0014934A1 (Hinton 등)에 기재되어 있다. 이들 항체는 FcRn에 Fc 영역의 결합을 개선하는 그 안의 1종 이상의 치환을 갖는 Fc 영역을 포함한다. 이러한 Fc 변이체는 다음 Fc 영역 잔기 중 1종 이상에서 치환을 갖는 것들을 포함한다: EU 넘버링에 따른, 238, 256, 265, 272, 286, 303, 305, 307, 311, 312, 317, 340, 356, 360, 362, 376, 378, 380, 382, 413, 424 또는 434, 예를 들면, Fc 영역 잔기 434의 치환 (미국 특허 번호 7,371,826). 또한 하기를 참조한다: Duncan & Winter, Nature 322:738-40 (1988); 미국 특허 번호 5,648,260; 미국 특허 번호 5,624,821; 및 Fc 영역 변이체의 다른 예에 관하여 WO 94/29351.
그것의 중쇄의 불변 도메인의 아미노산 서열에 의존하여, 무손상 항체가 상이한 "부류"에 배정될 수 있다. 무손상 면역글로불린 항체의 다섯 개의 주요 부류: IgA, IgD, IgE, IgG, 및 IgM이 있고, 그리고 이들의 몇 개는 "하위부류" (아이소타입), 예를 들면, IgG1, IgG2, IgG3, IgG4, IgA, 및 IgA2로 추가로 분할될 수 있다. 항체의 상이한 부류에 상응하는 중쇄 불변 도메인은 각각 α, δ, ε, γ, 및 μ로 지칭된다. 면역글로불린의 상이한 부류의 하위단위 구조 및 3차원 입체배치가 잘 알려져 있다. Ig 형태는 힌지-변형 또는 힌지 없는 형태를 포함한다 (Roux 등 (1998) J. Immunol. 161:4083-4090; Lund 등 (2000) Eur. J. Biochem. 267:7246-7256; US 2005/0048572; US 2004/0229310).
"시스테인 가공된 항체" 또는 "시스테인 가공된 항체 변이체"는 항체의 1종 이상의 잔기가 시스테인 잔기로 치환된 항체이다. 시스테인 가공된 항체의 티올 기(들)은 약물 모이어티에 (예를 들면, 링커를 통해) 콘주게이트될 수 있어 THIOMABTM 항체를 형성한다 (즉, THIOMABTM 항체 약물 콘주게이트 (TDC)). 특정 구현예에서, 치환된 잔기는 항체의 접근가능한 부위에서 발생한다. 이들 잔기를 시스테인으로 치환함으로써, 반응성 티올 기는 그렇게 함으로써 항체의 접근가능한 부위에 배치되고, 항체를 약물 모이어티 또는 링커-약물 모이어티와 같은 다른 모이어티에 콘주게이트시켜, 본 명세서에서 더 기술되는 바와 같이 면역콘주게이트를 생성하기 위해 사용될 수 있다. 예를 들면, THIOMABTM 항체는 경쇄 (예를 들면, 카밧 넘버링에 따른 G64C, I106C, R108C, K149C 또는 R142C)에서 또는 중쇄 (예를 들면, 카밧 넘버링에 따른 HC-D101C, HC-V184C, 또는 HC-T205C, 또는 EU 넘버링에 따른 HC-T114C, HC-A140C, HC-L174C, HC-L179C, HC-T187C, HC-T209C, HC-V262C, HC-G371C, HC-Y373C, HC-E382C, HC-S424C, HC-N434C, 및 HC-Q438C (즉, 카밧 넘버링에 따른 HC-A136C는 EU 넘버링에 따른 HC-A140C이다) (도 1b 참고))에서 시스테인에 비-시스테인 원상태 잔기의 단일 돌연변이를 갖는 항체일 수 있다. 구체적인 예에서, THIOMABTM 항체는 각 전장 항체 (즉, 두 중쇄 및 두 경쇄를 갖는 항체)가 2개의 가공된 시스테인 잔기를 가지도록 중쇄 또는 경쇄 어느 하나에서 단일 시스테인 돌연변이를 가진다.
"ErbB 수용체"는 그 구성원이 세포 성장, 분화 및 생존의 중요한 매개체인 ErbB 수용체 패밀리에 속하는 수용체 단백질 티로신 키나제이다. ErbB 수용체 패밀리는 표피 성장 인자 수용체 (EGFR, ErbB1, HER1), HER2 (ErbB2 또는 p185neu), HER3 (ErbB3) 및 HER4 (ErbB4 또는 tyro2)를 포함하는 4개의 상이한 구성원을 포함한다. 항-ErbB2 항체의 패널은 인간 유방 종양 세포주 SKBR3를 사용하여 특정되어 졌다 (Hudziak 등 (1989) Mol. Cell. Biol. 9(3):1165-1172. 최대 저해는 세포성 증식이 56% 저해된 4D5로 불리는 항체로 수득되었다. 패널 내 다른 항체는 이 검정에서 보다 낮은 정도로 세포성 증식을 감소했다. 항체 4D5는 ErbB2-과발현 유방 종양 세포주를 TNF-α의 세포독성 효과에 민감하게 하는 것으로 추가로 밝혀졌다 (US 5677171). Hudziak 등에서 논의된 항-ErbB2 항체는 「Fendly 등 (1990) Cancer Research 50:1550-1558; Kotts 등 (1990) In Vitro 26(3):59A; Sarup 등 (1991) Growth Regulation 1:72-82; Shepard 등 J. (1991) Clin. Immunol. 11(3):117-127; Kumar 등 (1991) Mol. Cell. Biol. 11(2):979-986; Lewis 등 (1993) Cancer Immunol. Immunother. 37:255-263; Pietras 등 (1994) Oncogene 9:1829-1838; Vitetta 등 (1994) Cancer Research 54:5301-5309; Sliwkowski 등 (1994) J. Biol. Chem. 269(20):14661-14665; Scott 등 (1991) J. Biol. Chem. 266:14300-5; D'souza 등 Proc. Natl. Acad. Sci. (1994) 91:7202-7206; Lewis 등 (1996) Cancer Research 56:1457-1465; 및 Schaefer 등 (1997) Oncogene 15:1385-1394」에서 더욱 특정되어 진다. ErbB 수용체는 일반적으로, ErbB 리간드; 친유성 막투과성 도메인; 보존된 세포내 티로신 키나제 도메인; 및 인산화될 수 있는 몇 개의 티로신 잔기를 품는 카복실-말단 신호전달 도메인을 결합할 수 있는 세포외 도메인을 포함할 것이다. ErbB 수용체는 "천연 서열" ErbB 수용체 또는 이들의 "아미노산 서열 변이체"일 수 있다. 바람직하게는, ErbB 수용체는 천연 서열 인간 ErbB 수용체이다. 따라서, "ErbB 수용체 패밀리의 구성원"은 EGFR (ErbB1), ErbB2, ErbB3, ErbB4를 포함한다.
용어 "아미노산 서열 변이체"는 천연 서열 폴리펩티드와 어느 정도까지 다른 아미노산 서열을 갖는 폴리펩티드를 언급한다. 아미노산 서열 변이체는 원상태 아미노산 서열의 아미노산 서열 내의 어떤 위치에서 치환, 결실 및/또는 삽입을 갖는다. 아미노산은 종래의 명칭, 1-문자 및 3-문자 코드로 지정된다.
예를 들면, 특정 구현예에서 아미노산 서열 변이체는 원상태 ErbB 리간드의 적어도 1종의 수용체 결합 도메인 또는 원상태 ErbB 수용체의 적어도 1종의 리간드 결합 도메인과 적어도 약 70% 서열 동일성을 가질 것이고, 그리고 바람직하게는, 이것은 이러한 수용체 또는 리간드 결합 도메인과 서열에서 적어도 약 80%, 더 바람직하게는, 적어도 약 90% 상동성일 것이다.
"서열 동일성"은 최대 퍼센트 서열 동일성을 달성하기 위해, 서열을 정렬하고, 필요하면 갭을 도입한 후에 동일한 아미노산 서열 변이체에서 잔기의 백분율로서 정의된다. 정렬을 위한 방법 및 컴퓨터 프로그램은 당해 기술에 공지되어 있다. 이러한 컴퓨터 프로그램 중 하나는 Genentech, Inc.가 제작한 "Align 2"로 이것은 1991년 12월 10일 워싱톤 DC20559에 있는 미국 저작권청에 사용자 문서화로 제출되었다.
"원상태 항체"는 보통 2개의 동일한 가벼운 (L) 사슬 및 2개의 동일한 무거운 (H) 사슬로 구성된, 약 150,000 달톤의 헤테로사량체 당단백질이다. 각 경쇄는 하나의 공유 디설파이드 결합에 의해 중쇄에 연결되고, 반면 디설파이드 연결기의 수는 상이한 면역글로불린 아이소타입의 중쇄 중에서 다변한다. 각 중쇄 및 경쇄는 또한 규칙적으로 이격된 사슬내 디설파이드 브릿지를 가진다. 각 중쇄는 하나의 말단에 가변 도메인 (VH)과 그 다음 수많은 불변 도메인을 가진다. 각 경쇄는 가변 도메인을 일 말단 (VL)에 그리고 불변 도메인을 그것의 다른 말단에 가진다. 경쇄의 불변 도메인은 중쇄의 제1 불변 도메인과 정렬되고, 그리고 가벼운-사슬 가변 도메인은 중쇄의 가변 도메인과 정렬된다. 특정한 아미노산 잔기는 경쇄와 중쇄 가변 도메인 사이에 계면를 형성하는 것으로 여겨진다.
용어 "가변"은 가변 도메인의 특정 부분이 항체 중에 서열에서 광범위하게 상이하고 그리고 그것의 특정한 항원에 대한 각각의 특정한 항체의 결합 및 특이성에서 사용된다는 사실을 언급한다. 그러나, 가변성은 항체의 가변 도메인 전체를 통해 고르게 분포되어 있지 않다. 그것은 경쇄 및 중쇄 가변 도메인에서 모두 초가변성 영역으로 불리는 3개의 분절에 집중되어 있다. 가변 도메인의 더 고도로 보존 된 부분은 프레임워크 영역 (FR)이라고 불린다. 원상태 중쇄 및 경쇄의 가변 도메인 각각은 3개의 초가변성 영역에 의해 연결된, 크게는 β-시트 입체배치를 채택한 4개의 FR을 포함하여, β-시트 구조를 연결하고, 그리고 일부 경우에는 이의 일부를 형성하는 루프를 형성한다. 각 사슬의 초가변성 영역은 FR에 의해 근접하여 함께 유지되고, 그리고 다른 사슬로부터의 초가변성 영역과 함께 항체의 항원-결합 부위의 형성에 기여한다 (Kabat 등 (1991) Sequences of Proteins of Immunological Interest, 5th Ed. 공중 보건 서비스, 국립 보건원, 메릴랜드 베데스다, 참고). 불변 도메인은 항원에 항체를 결합하는 것에 직접적으로 관여하지는 않지만, 항체 의존성 세포 독성 (ADCC)에서의 항체의 참여와 같은 다양한 효과기 기능을 나타낸다.
본 명세서에서 사용될 때 용어 "초가변성 영역"은 항원-결합을 담당하는 항체의 아미노산 잔기를 언급한다. 본 초가변성 영역은 일반적으로 "상보성 결정 영역" 또는 "CDR" (예를 들면, 경쇄 가변 도메인에서 잔기 24-34 (L1), 50-56 (L2) 및 89-97 (L3) 그리고 중쇄 가변 도메인에서 31-35 (H1), 50-65 (H2) 및 95-102 (H3); Kabat 등 상기)로부터 아미노산 잔기 및/또는 "초가변성 루프" (예를 들면, 경쇄 가변 도메인에서 잔기 26-32 (L1), 50-52 (L2) 및 91-96 (L3) 그리고 중쇄 가변 도메인에서 26-32 (H1), 53-55 (H2) 및 96-101 (H3); Chothia 및 Lesk (1987) J. Mol. Biol., 196:901-917)로부터의 이들 잔기를 포함한다. "프레임워크 영역" 또는 "FR" 잔기는 본 명세서에서 정의된 바와 같이 초가변성 영역 잔기 이외의 이들 가변 도메인 잔기이다.
항체의 파파인 분해는, 각각이 단일 항원-결합 부위, 및 잔류 "Fc" 단편을 가지고, 그의 명칭이 쉽게 결정화하는 이들의 능력을 반영한 것으로, "Fab" 단편이라 불리는 2개의 동일한 항원-결합 단편을 생산한다. 펩신 처리는 2개의 항원-결합 부위를 가지며 여전히 항원을 가교결합시킬 수 있는 F(ab')2 단편을 생성한다.
"Fv"는 완벽한 항원-인식 및 항원-결합 부위를 함유하는 최소 항체 단편이다. 이 영역은 단단하고 비-공유 회합으로 하나의 중쇄 및 하나의 경쇄 가변 도메인의 이량체로 구성된다. VH-VL 이량체의 표면에 항원-결합 부위를 정의하기 위해 각 가변 도메인의 3개의 초가변성 영역이 상호 작용하는 것이 이 입체배치에 있다. 종합적으로, 6개의 초가변성 영역은 항체에 항원-결합 특이성을 부여한다. 그러나 단일 가변 도메인 (또는 항원에 특이적인 단지 3개의 초가변성 영역만을 포함하는 Fv의 절반)조차도, 비록 전체 결합 부위보다 낮은 친화도로 이지만, 항원을 인식하고 결합하는 능력을 갖는다.
Fab 단편은 또한 경쇄의 불변 도메인 및 중쇄의 제1 불변 도메인 (CH1)을 함유한다. Fab' 단편은 항체 힌지 영역으로부터 1종 이상의 시스테인을 포함하는 중쇄 CH1 도메인의 카르복시 말단에 몇 개의 잔기를 부가함에 의해 Fab 단편과 상이하다. Fab'-SH는 불변 도메인의 시스테인 잔기(들)가 적어도 1종의 유리 티올 기를 갖는 Fab'에 대한 본 명세서에서의 지정이다. F(ab')2 항체 단편은 본래 그들 사이에 힌지 시스테인을 갖는 Fab' 단편의 쌍으로서 생성되었다. 항체 단편의 다른 화학적 커플링이 또한 공지되어있다.
임의의 척추동물 종으로부터 항체의 "경쇄"는 그것의 불변 도메인의 아미노산 서열에 기반하여, 카파(κ) 및 람다(λ)로 불리는 2개의 명확히 상이한 유형 중 하나에 배정될 수 있다.
"단일-사슬 Fv" 또는 "scFv" 항체 단편은 항체의 VH 및 VL 도메인을 포함하고, 여기서 이들 도메인은 단일 폴리펩티드 사슬에 존재한다. 바람직하게는, Fv 폴리펩티드는 scFv가 항원 결합을 위한 원하는 구조를 형성할 수 있게 하는 VH 및 VL 도메인 사이의 폴리펩티드 링커를 추가로 포함한다. scFv의 검토에 대해서는, 「
Figure pct00024
in The Pharmacology of Monoclonal Antibodies, vol. 113, Rosenburg and Moore eds., Springer-Verlag, New York, pp. 269-315 (1994)」를 참고한다. 항-ErbB2 항체 scFv 단편은 WO 93/16185; 미국 특허 번호 5571894; 및 5587458에 기술되어 있다.
비-인간 (예를 들면, 설치류) 항체의 "인간화된" 형태는 비-인간 면역글로불린으로부터 유도된 최소 서열을 함유하는 키메라성 항체이다. 인간화는 뮤린 항원 결합 정보를 비-면역원성 인간 항체 수용체로 전달하는 방법이며, 많은 치료적으로 유용한 약물을 수득하였다. 인간화의 방법은 일반적으로 인간 항체 프레임워크에 6개의 뮤린 상보성 결정 영역 (CDRs) 모두를 이동함에 의해 시작된다 (Jones 등, (1986) Nature 321:522-525). 이들 CDR-그라프팅된 항체는 일반적으로 항원 결합에 대해 그것의 본래 친화도를 보유하지 않고, 그리고 사실상, 친화도는 때로는 심각하게 손상된다. CDR 외에도, 적절한 CDR 형태를 유지하기 위해 비-인간 항체 프레임워크 잔기를 선택하는 것이 또한 반드시 편입되어야 한다 (Chothia 등 (1989) Nature 342:877). 그라프팅된 CDR의 구조적 형태를 지지하기 위해 인간 수용체로 핵심 마우스 프레임워크 잔기의 전달은 항원 결합 및 친화도를 회복하는 것으로 나타났다 (Riechmann 등 (1992) J. Mol. Biol. 224, 487-499; Foote 및 Winter, (1992) J. Mol. Biol. 224:487-499; Presta 등 (1993) J. Immunol. 151, 2623-2632; Werther 등 (1996) J. Immunol. Methods 157:4986-4995; 및 Presta 등 (2001) Thromb. Haemost. 85:379-389). 대개, 인간화된 항체는 수령체의 초가변성 영역으로부터의 잔기가 원하는 특이성, 친화도, 및 수용력을 가지는 비-인간 종 (공여체 항체) 예컨대 마우스, 랫트, 래빗 또는 비인간 영장류의 초가변성 영역으로부터의 잔기로 대체된 인간 면역글로불린 (수령체 항체)이다. 일부 사례에서, 인간 면역글로불린의 프레임워크 영역 (FR) 잔기는 상응하는 비-인간 잔기에 의해 대체된다. 더욱이, 인간화된 항체는 수령체 항체에서 또는 공여체 항체에서 발견되지 않는 잔기를 포함할 수 있다. 이들 변형은 항체 성능을 더욱 개선하기 위해 만들어졌다. 일반적으로, 인간화된 항체는 실질적으로 적어도 하나, 그리고 전형적으로는 2개의 모든 가변 도메인을 포함할 것이며, 모든 또는 실질적으로 모든 초가변성 루프는 비-인간 면역글로불린의 것과 상응하고 모든 또는 실질적으로 모든 FR은 인간 면역글로불린 서열의 것들이다. 인간화된 항체는 임의로 또한 면역글로불린 불변 영역 (Fc)의 적어도 일부, 전형적으로 인간 면역글로불린의 부분을 포함할 것이다. 추가의 세부사항에 대해서는, US 6407213; Jones 등 (1986) Nature, 321:522-525; Riechmann 등 (1988) Nature 332:323-329; 및 Presta, (1992) Curr. Op. Struct. Biol., 2:593-596을 참고한다.
"유리 시스테인 아미노산"은 모 항체로 가공되고, 티올 작용기 (-SH)를 가지며, 분자내 또는 분자간 디설파이드 브릿지로서 쌍을 이루지 않는 시스테인 아미노산 잔기를 지칭한다.
용어 "티올 반응성 값"은 유리 시스테인 아미노산의 반응성의 정량적 특성규명이다. 티올 반응성 값은 티올-반응성 시약과 반응하여 1의 최대 값으로 전환된 시스테인 가공된 항체 중의 유리 시스테인 아미노산의 백분율이다. 예를 들면, 비오틴-표지된 항체를 형성하기 위해 티올-반응성 시약, 예컨대 비오틴-말레이미드 시약으로 100% 수율로 반응하는 시스테인 가공된 항체 상의 유리 시스테인 아미노산은 1.0의 티올 반응성 값을 가진다. 티올-반응성 시약으로 90% 수율로 반응하는 동일하거나 상이한 모 항체로 가공된 또 다른 시스테인 아미노산은 약 0.9의 티올 반응성 값을 갖는다. 티올-반응성 시약으로 80% 수율로 반응하는 동일하거나 상이한 모 항체로 가공된 또 다른 시스테인 아미노산은 약 0.8의 티올 반응성 값을 갖는다. 티올-반응성 시약으로 70% 수율로 반응하는 동일하거나 상이한 모 항체로 가공된 또 다른 시스테인 아미노산은 약 0.7의 티올 반응성 값을 갖는다. 티올-반응성 시약으로 60% 수율로 반응하는 동일하거나 상이한 모 항체로 가공된 또 다른 시스테인 아미노산은 약 0.6의 티올 반응성 값을 갖는다. 티올-반응성 시약으로 50% 수율로 반응하는 동일하거나 상이한 모 항체로 가공된 또 다른 시스테인 아미노산은 약 0.5의 티올 반응성 값을 갖는다. 티올-반응성 시약으로 40% 수율로 반응하는 동일하거나 상이한 모 항체로 가공된 또 다른 시스테인 아미노산은 약 0.4의 티올 반응성 값을 갖는다. 티올-반응성 시약으로 30% 수율로 반응하는 동일하거나 상이한 모 항체로 가공된 또 다른 시스테인 아미노산은 약 0.3의 티올 반응성 값을 갖는다. 티올-반응성 시약으로 20% 수율로 반응하는 동일하거나 상이한 모 항체로 가공된 또 다른 시스테인 아미노산은 약 0.2의 티올 반응성 값을 갖는다. 티올-반응성 시약으로 10% 수율로 반응하는 동일하거나 상이한 모 항체로 가공된 또 다른 시스테인 아미노산은 약 0.1의 티올 반응성 값을 갖는다. 티올-반응성 시약으로 완전히 반응하지 않는 동일하거나 상이한 모 항체로 가공된 또 다른 시스테인 아미노산은 0의 티올 반응성 값을 갖는다. 특정한 시스테인의 티올 반응성 값의 결정은 ELISA 검정, 질량 분광법, 액체 크로마토그래피, 자가방사기록법, 또는 다른 정량적 분석적 시험에 의해 수행될 수 있다.
"모 항체"는 1종 이상의 아미노산 잔기가 1종 이상의 시스테인 잔기로 대체된 아미노산 서열을 포함하는 항체이다. 모 항체는 원상태 또는 야생형 서열을 포함할 수 있다. 모 항체는 다른 원상태, 야생형, 또는 변형된 형태의 항체에 비해 기존의 아미노산 서열 변형 (예컨대 부가, 결실 및/또는 치환)을 가질 수 있다. 모 항체는 관심 있는 표적 항원, 예를 들면 생물학적으로 중요한 폴리펩티드에 대해 지향될 수 있다. 비폴리펩티드 항원 (예컨대 종양-관련된 당지질 항원; US 5091178 참고)에 대해 지향된 항체가 또한 고려된다.
예시적인 모 항체는 세포 표면 및 막투과성 수용체에 대한 친화도 및 선택성 그리고 종양-관련 항원 (TAA)을 갖는 항체를 포함한다.
"단리된" 항체는 그것의 천연 환경의 구성요소로부터 확인되고 단리되고 및/또는 회수된 항체이다. 그것의 천연 환경의 오염물질 구성요소는 항체에 대해 진단 또는 치료 용도를 방해하는 물질이며, 그리고 효소, 호르몬 및 다른 단백질성 또는 비단백질성 용질을 포함할 수 있다. 바람직한 구현예에서, 항체는 (1) Lowry 방법에 의해 결정된 것으로 항체의 95중량 % 초과, 가장 바람직하게는 99중량 % 이상으로, (2) 스피닝 컵 시쿼네이터의 사용에 의해 N-말단 또는 내부 아미노산 서열의 적어도 15 잔기를 얻기에 충분한 정도로, 또는 (3) 쿠마씨 청색 또는, 바람직하게는, 은 염색을 사용하여 환원 또는 비환원 조건 하에서 SDS-PAGE에 의한 균일성으로 정제될 것이다. 단리된 항체는 항체의 천연 환경의 적어도 1종의 구성요소가 존재하지 않기 때문에 재조합 세포 내에서 원위치에 항체를 포함한다. 그러나, 통상적으로, 단리된 항체는 적어도 1종의 정제 단계에 의해 제조될 것이다.
분자 표적 또는 관심 있는 항원, 예를 들면, ErbB2 항원에 "결합하는" 항체는 항체가 항원을 발현하는 세포를 표적화하는데 유용하도록 충분한 친화도로 그 항원을 결합할 수 있는 것이다. 항체가 ErbB2에 결합하는 것인 경우, 이것은 보통 다른 ErbB 수용체와 대조적으로 ErbB2에 우선적으로 결합할 것이고, 그리고 EGFR, ErbB3 또는 ErbB4와 같은 다른 단백질과 유의미하게 교차-반응하지 않는 항체일 수 있다. 그와 같은 구현예에서, 이들 비-ErbB2 단백질 (예를 들면, 내인성 수용체에 결합하는 세포 표면)에 대한 항체의 결합 정도는 형광 활성화 세포 분류 (FACS) 분석 또는 방사선면역침강 (RIA)에 의해 결정된 바와 같이 10% 미만일 것이다. 때때로, 항-ErbB2 항체는, 예를 들면, 「Schecter 등 (1984) Nature 312:513 및 Drebin 등 (1984) Nature 312:545-548」에 기재된 바와 같이, 랫트 뉴(neu) 단백질과 유의미하게 교차-반응하지 않을 것이다.
본 발명에 의해 포함되는 항체에 대한 분자 표적은 CD 단백질 및 그것의 리간드, 예컨대, 비제한적으로: (i) CD3, CD4, CD8, CD19, CD20, CD22, CD34, CD40, CD79α (CD79a), 및 CD79β (CD79b); (ii) EGF 수용체, HER2, HER3 또는 HER4 수용체와 같은 ErbB 수용체 패밀리의 구성원; (iii) 이들의 알파 또는 베타 하위단위을 포함하는, LFA-1, Mac1, p150,95, VLA-4, ICAM-1, VCAM 및 알파-v/베타-3 인테그린과 같은 세포 콘주게이트 분자 (예를 들면 항-CD11a, 항-CD18 또는 항-CD11b 항체); (iv) 성장 인자 예컨대 VEGF; IgE; 혈액형 항원; flk2/flt3 수용체; 비만 (OB) 수용체; mpl 수용체; CTLA-4; 단백질 C, BR3, c-met, 조직 인자, 등; 및 (v) 세포 표면 및 막투과성 종양-관련 항원 (TAA)을 포함한다.
용어들 "항-Ly6E 항체" 및 "Ly6E에 결합하는 항체"는 항체가 Ly6E를 표적화하는데 있어서 진단 및/또는 치료제로서 유용하도록 충분한 친화도를 가지고 Ly6E를 결합할 수 있는 항체를 언급한다. 일 구현예에서, 관련없는, 비-Ly6E 단백질에 항-Ly6E 항체의 결합 정도는, 예를 들면, 방사선면역검정 (RIA)에 의해 측정된 것으로 Ly6E에 대한 항체의 약 10% 미만의 결합이다. 특정 구현예에서, Ly6E에 결합하는 항체는 ≤ 1μM, ≤ 100 nM, ≤ 10 nM, ≤ 5 nm, ≤ 4 nM, ≤ 3 nM, ≤ 2 nM, ≤ 1 nM, ≤ 0.1 nM, ≤ 0.01 nM, 또는 ≤ 0.001 nM (예를 들면, 10-8M 또는 그 미만, 예를 들면 10-8M 내지 10-13M, 예를 들면, 10-9M 내지 10-13M)의 해리 상수 (Kd)를 갖는다. 특정 구현예에서, 항- Ly6E 항체는 상이한 종으로부터 Ly6E 중에 보존된 Ly6E의 에피토프에 결합한다.
용어들 "항-STEAP1 항체" 및 "STEAP1에 결합하는 항체"는 항체가 STEAP1을 표적화하는데 있어서 진단 및/또는 치료제로서 유용하도록 충분한 친화도를 가지고 STEAP1을 결합할 수 있는 항체를 언급한다. 일 구현예에서, 관련없는, 비-STEAP1 단백질에 항-STEAP1 항체의 결합 정도는, 예를 들면, 방사선면역검정 (RIA)에 의해 측정된 것으로 STEAP1에 대한 항체의 약 10% 미만의 결합이다. 특정 구현예에서, STEAP1에 결합하는 항체는 ≤ 1μM, ≤ 100 nM, ≤ 10 nM, ≤ 5 nm, ≤ 4 nM, ≤ 3 nM, ≤ 2 nM, ≤ 1 nM, ≤ 0.1 nM, ≤ 0.01 nM, 또는 ≤ 0.001 nM (예를 들면, 10-8M 또는 그 미만, 예를 들면 10-8M 내지 10- 13M,예를 들면, 10-9M 내지 10-13M)의 해리 상수 (Kd)를 갖는다. 특정 구현예에서, 항-STEAP1 항체는 상이한 종으로부터 STEAP1 중에 보존된 STEAP1의 에피토프에 결합한다.
용어들 "항-CD79b 항체" 및 "CD79b에 결합하는 항체"는 항체가 CD79b를 표적화하는데 있어서 진단 및/또는 치료제로서 유용하도록 충분한 친화도를 가지고 CD79b를 결합할 수 있는 항체를 언급한다. 일 구현예에서, 관련없는, 비-CD79b 단백질에 항-CD79b 항체의 결합 정도는, 예를 들면, 방사선면역검정 (RIA)에 의해 측정된 것으로 CD79b에 대한 항체의 약 10% 미만의 결합이다. 특정 구현예에서, CD79b에 결합하는 항체는 ≤ 1μM, ≤ 100 nM, ≤ 10 nM, ≤ 5 nm, ≤ 4 nM, ≤ 3 nM, ≤ 2 nM, ≤ 1 nM, ≤ 0.1 nM, ≤ 0.01 nM, 또는 ≤ 0.001 nM (예를 들면, 10-8M 또는 그 미만, 예를 들면 10-8M 내지 10- 13M,예를 들면, 10-9M 내지 10-13M)의 해리 상수 (Kd)를 갖는다. 특정 구현예에서, 항-CD79b 항체는 상이한 종으로부터 CD79b 중에 보존된 CD79b의 에피토프에 결합한다.
용어들 "항-MUC16 항체" 및 "MUC16에 결합하는 항체"는 항체가 MUC16을 표적화하는데 있어서 진단 및/또는 치료제로서 유용하도록 충분한 친화도를 가지고 MUC16을 결합할 수 있는 항체를 언급한다. 일 구현예에서, 관련없는, 비-MUC16 단백질에 항-MUC16 항체의 결합 정도는, 예를 들면, 방사선면역검정 (RIA)에 의해 측정된 것으로 MUC16에 대한 항체의 약 10% 미만의 결합이다. 특정 구현예에서, MUC16에 결합하는 항체는 ≤ 1μM, ≤ 100 nM, ≤ 10 nM, ≤ 5 nm, ≤ 4 nM, ≤ 3 nM, ≤ 2 nM, ≤ 1 nM, ≤ 0.1 nM, ≤ 0.01 nM, 또는 ≤ 0.001 nM (예를 들면, 10-8M 또는 그 미만, 예를 들면 10-8M 내지 10- 13M,예를 들면, 10-9M 내지 10-13M)의 해리 상수 (Kd)를 갖는다. 특정 구현예에서, 항-MUC16 항체는 상이한 종으로부터 MUC16 중에 보존된 MUC16의 에피토프에 결합한다.
용어들 "항-HER2 항체" 및 "HER2에 결합하는 항체"는 항체가 HER2를 표적화하는데 있어서 진단 및/또는 치료제로서 유용하도록 충분한 친화도를 가지고 HER2를 결합할 수 있는 항체를 언급한다. 일 구현예에서, 관련없는, 비-HER2 단백질에 항-HER2 항체의 결합 정도는, 예를 들면, 방사선면역검정 (RIA)에 의해 측정된 것으로 HER2에 대한 항체의 약 10% 미만의 결합이다. 특정 구현예에서, HER2에 결합하는 항체는 ≤ 1μM, ≤ 100 nM, ≤ 10 nM, ≤ 5 nm, ≤ 4 nM, ≤ 3 nM, ≤ 2 nM, ≤ 1 nM, ≤ 0.1nM, ≤ 0.01nM, 또는 ≤ 0.001 nM (예를 들면, 10-8M 또는 그 미만, 예를 들면 10-8M 내지 10- 13M,예를 들면, 10-9M 내지 10-13M)의 해리 상수 (Kd)를 갖는다. 특정 구현예에서, 항-HER2 항체는 상이한 종으로부터 HER2 중에 보존된 HER2의 에피토프에 결합한다.
용어들 "CD22 항체" 및 "CD22에 결합하는 항체"는 항체가 CD22를 표적화하는데 있어서 진단 및/또는 치료제로서 유용하도록 충분한 친화도를 가지고 CD22를 결합할 수 있는 항체를 언급한다. 일 구현예에서, 관련없는, 비-CD22 단백질에 항-CD22 항체의 결합 정도는, 예를 들면, 방사선면역검정 (RIA)에 의해 측정된 것으로 CD22에 대한 항체의 약 10% 미만의 결합이다. 특정 구현예에서, CD22에 결합하는 항체는 ≤ 1μM, ≤ 100 nM, ≤ 10 nM, ≤ 5 nm, ≤ 4 nM, ≤ 3 nM, ≤ 2 nM, ≤ 1 nM, ≤ 0.1 nM, ≤ 0.01 nM, 또는 ≤ 0.001 nM (예를 들면, 10-8M 또는 그 미만, 예를 들면 10-8M 내지 10- 13M,예를 들면, 10-9M 내지 10-13M)의 해리 상수 (Kd)를 갖는다. 특정 구현예에서, 항-CD22 항체는 상이한 종으로부터 CD22 중에 보존된 CD22의 에피토프에 결합한다.
용어들 "항-CD79b 항체" 및 "CD79b에 결합하는 항체"는 항체가 CD79b를 표적화하는데 있어서 진단 및/또는 치료제로서 유용하도록 충분한 친화도를 가지고 CD79b를 결합할 수 있는 항체를 언급한다. 일 구현예에서, 관련없는, 비-CD79b 단백질에 항-CD79b 항체의 결합 정도는, 예를 들면, 방사선면역검정 (RIA)에 의해 측정된 것으로 CD79b에 대한 항체의 약 10% 미만의 결합이다. 특정 구현예에서, CD79b에 결합하는 항체는 ≤ 1μM, ≤ 100 nM, ≤ 10 nM, ≤ 5 nm, ≤ 4 nM, ≤ 3 nM, ≤ 2 nM, ≤ 1 nM, ≤ 0.1 nM, ≤ 0.01 nM, 또는 ≤ 0.001 nM (예를 들면, 10-8M 또는 그 미만, 예를 들면 10-8M 내지 10- 13M,예를 들면, 10-9M 내지 10-13M)의 해리 상수 (Kd)를 갖는다. 특정 구현예에서, 항-CD79b 항체는 상이한 종으로부터 CD79b 중에 보존된 CD79b의 에피토프에 결합한다.
용어들 "항-NaPi2b 항체" 및 "NaPi2b에 결합하는 항체"는 항체가 NaPi2b를 표적화하는데 있어서 진단 및/또는 치료제로서 유용하도록 충분한 친화도를 가지고 NaPi2b를 결합할 수 있는 항체를 언급한다. 일 구현예에서, 관련없는, 비-NaPi2b 단백질에 항-NaPi2b 항체의 결합 정도는, 예를 들면, 방사선면역검정 (RIA)에 의해 측정된 것으로 NaPi2b에 대한 항체의 약 10% 미만의 결합이다. 특정 구현예에서, NaPi2b에 결합하는 항체는 ≤ 1μM, ≤ 100 nM, ≤ 10 nM, ≤ 5 nm, ≤ 4 nM, ≤ 3 nM, ≤ 2 nM, ≤ 1 nM, ≤ 0.1 nM, ≤ 0.01 nM, 또는 ≤ 0.001 nM (예를 들면, 10-8M 또는 그 미만, 예를 들면 10-8M 내지 10- 13M,예를 들면, 10-9M 내지 10-13M)의 해리 상수 (Kd)를 갖는다. 특정 구현예에서, 항-NaPi2b 항체는 상이한 종으로부터 NaPi2b 중에 보존된 NaPi2b의 에피토프에 결합한다.
다르게 명시되지 않는 한, 용어 "단클론성 항체 4D5"는 뮤린 4D5 항체의, 또는 이로부터 유도된 항원 결합 잔기를 가지는 항체를 언급한다 (ATCC CRL 10463). 예를 들면, 단클론성 항체 4D5는 뮤린 단클론성 항체 4D5 또는 그것의 변이체, 예컨대 인간화된 4D5일 수 있다. 예시적인 인간화된 4D5 항체는, 미국 특허 번호 5821337에서와 같은, huMAb4D5-1, huMAb4D5-2, huMAb4D5-3, huMAb4D5-4, huMAb4D5-5, huMAb4D5-6, huMAb4D5-7 및 huMAb4D5-8 (트라스투주맙, HERCEPTIN(헤르셉틴)®)을 포함한다.
다르게 명시되지 않는 한, 용어 "단클론성 항체 7C2" 또는 "7C2"는 7C2.v2.2.LA 항체의, 또는 이로부터 유도된 항원 결합 잔기를 가지는 항체를 언급한다. 본 7C2 항체는 항-HER2 항체이다.
"hu7C2.v.2.2.LA 항체-약물 콘주게이트" (hu7C2 ADC)는 약물에 콘주게이트된 인간화된 7C2 항체를 언급한다. 특정 구현예에서, 인간화된 7C2 항체는 가공된 시스테인 및 링커를 통해 약물에 콘주게이트된다. 특정 구현예에서, 인간화된 7C2 ADC는 트라스투주맙 (HERCEPTIN(헤르셉틴)®), T-DM1 (캐싸일라®) 및 페르투주맙 (페르젝타®)으로부터 선택된 1종 이상의 추가의 치료제와 함께 공-투여된다. 일부 구현예에서, hu7C2 ADC는 트라스투주맙과 함께 공-투여된다. 일부 구현예에서, hu7C2 ADC는 T-DM1과 함께 공-투여된다. 일부 구현예에서, hu7C2 ADC는 페르투주맙과 함께 공-투여된다. 일부 구현예에서, hu7C2 ADC는 트라스투주맙 및 페르투주맙과 함께 공-투여된다. 일부 구현예에서, hu7C2 ADC는 T-DM1 및 페르투주맙과 함께 공-투여된다.
용어들 "치료한다" 및 "치료"는 치료적 처치 및 예방 또는 방지 방안 양자를 언급하고, 여기서 본 목적은 원하지 않는 생리 변화 또는 장애, 예컨대 암의 전개 또는 퍼짐을 방지하거나 늦추기 (줄이기) 위한 것이다. 본 발명의 목적을 위해, 유익한 또는 원하는 임상 결과는, 비제한적으로, 검출가능하거나 또는 검출불가능하든 간에, 증상의 완화, 질환 정도의 약화, 질환의 안정화된 (즉, 악화되지 않는) 상태, 질환 진행의 지연이나 늦춤, 질환 상태의 완화 또는 일시적 처방, 및 (부분적이든 또는 전체적이든) 차도를 포함한다. "치료"는 또한 만일 치료를 받지 않은 예상된 생존에 비교하여 연장된 생존을 의미할 수 있다. 치료를 요하는 이들은 이미 병태 또는 장애가 있는 이들뿐만 아니라 병태 또는 장애를 가질 경향이 있는 이들 또는 병태 또는 장애가 예방되어야 하는 이들을 포함한다.
용어 "치료적으로 유효한 양"은 포유동물에서 질환 또는 장애를 치료하는데 유효한 약물의 양을 지칭한다. 암의 경우에, 치료적 유효량의 약물은 암세포의 수를 감소시킬 수 있고; 종양 크기를 줄일 수 있고; 주변 기관으로의 암 세포 침윤을 억제할 수 있고(즉, 어느 정도까지 느리게 할 수 있고, 바람직하게는 중지할 수 있고); 종양 전이를 억제할 수 있고(즉, 어느 정도까지 느리게 할 수 있고, 바람직하게는 중지할 수 있고); 종양 성장을 어느 정도까지 억제할 수 있고; 및/또는 암과 관련된 하나 이상의 증상을 어느 정도까지 완화시킬 수 있다. 약물이 현존하는 암세포를 성장을 방지 및/또는 죽일 수 있는 정도에서, 이것은 세포증식억제성 및/또는 세포독성일 수 있다. 암 요법에 대해, 효능은 예를 들면 질병 진행까지의 시간 (TTP)을 평가함 및/또는 반응 속도 (RR)을 결정함에 의해 측정될 수 있다.
용어들 "암" 및 "암성"은 전형적으로 조절되지 않은 세포 성장에 의해 특징되는 포유동물의 생리 조건을 언급하거나 설명한다. "종양"은 하나 이상의 암성 세포를 포함한다. 암의 예는, 비제한적으로, 암종, 림프종, 모세포종, 육종, 및 백혈병 또는 림프성 악성종양을 포함한다. 이러한 암의 보다 특정한 예는 편평상피 세포 암 (예를 들면, 상피성 편평상피 세포 암), 소-세포 폐암, 비-소세포 폐암 ("NSCLC"), 폐의 선암종 및 폐의 편평상피 암종을 포함하는 폐암, 복막의 암, 간세포 암, 위장 암을 포함하는 위 또는 위암, 췌장암, 교모세포종, 자궁경부암, 난소암, 간암, 방광암, 간종양, 유방암, 결장암, 직장암, 결장직장암, 자궁내막 또는 자궁 암종, 타액샘 암종, 신장 또는 신장 암, 전립선암, 외음부 암, 갑상선암, 간 암종, 항문 암종, 음경 암종, 뿐만 아니라 두경부 암을 포함한다.
"ErbB-발현 암"은 그것의 세포 표면에 존재하는 ErbB 단백질을 갖는 세포를 포함하는 것이다. "ErbB2-발현 암"은 항-ErbB2 항체가 이들에 결합할 수 있고 암에 대한 치료 효과를 가질 수 있도록, 그것의 세포 표면에 충분한 수준의 ErbB2를 생산하는 것이다.
항원성 수용체를 "과발현하는" 암은 동일한 조직 유형의 비암성 세포에 비교하여, 그것의 세포 표면에서 유의미하게 높은 수준의 수용체, 예컨대 ErbB2를 가지는 것이다. 이러한 과발현은 유전자 증폭이나 증가된 전사 또는 번역에 의해 야기 될 수 있다. 수용체 과발현은 세포의 표면 상에 존재하는 수용체 단백질의 증가된 수준을 (예를 들면, 면역조직화학 검정; IHC을 통해) 평가함으로써 진단 또는 예후 검정에서 결정될 수 있다. 대안적으로, 또는 추가로, 예를 들면, 형광성 원위치 하이브리드화 (FISH; WO 98/45479 참고), 서던 블랏팅, 또는 폴리머라제 연쇄 반응 (PCR) 기술, 예컨대 실시간 정량적 PCR (RT-PCR)을 통해, 세포 내 수용체-암호화 핵산의 수준을 측정할 수 있다.
"화학요법"은 암의 치료에서 유용한 화학치료제의 사용이다.
"화학치료제"는 작용 기전에 무관하게, 암의 치료에서 유용한 화합물이다. 본 명세서에서 사용된 바와 같이, 용어 "약물" 또는 "약물 모이어티"는 화학치료제의 일 예이다. 따라서, 본 명세서에서 기재된 THIOMABTM 항체가 시스테인 가공된 항체, 링커, 및 약물을 포함하는 경우, 본 약물은 본 명세서에서 기재된 임의의 화학치료제일 수 있다.
화학치료제의 부류는, 비제한적으로: 알킬화제, 항대사물질, 스핀들 독성 식물성 알칼로이드, 세포독성/항종양 항생제, 토포이소머라제 저해제, 항체, 광감작제, 및 키나제 저해제를 포함한다. 화학치료제의 예는 하기를 포함한다: 에를로티닙 (타르세바®, Genentech/OSI Pharm.), 도세탁셀 (탁소테르®, Sanofi-Aventis), 5-FU (플루오로우라실, 5-플루오로우라실, CAS No. 51-21-8), 젬시타빈 (젬자르®, Lilly), PD-0325901 (CAS No. 391210-10-9, Pfizer), 시스플라틴 (시스-디아민,디클로로백금(II), CAS No. 15663-27-1), 카보플라틴 (CAS No. 41575-94-4), 파클리탁셀 (탁솔®, Bristol-Myers Squibb Oncology, Princeton, N.J.), 테모졸로마이드 (4-메틸-5-옥소-2,3,4,6,8-펜타아자바이사이클로 [4.3.0] 노나-2,7,9-트리엔-9-카복사마이드, CAS No. 85622-93-1, 테모다르®, 테모달®, Schering Plough), 타목시펜 ((Z)-2-[4-(1,2-디페닐부트-1-에닐)페녹시]-N,N-디메틸-에탄아민, 놀바덱스®, 이쑤발®, 발로덱스®), 및 독소루비신 (아드리아마이신®), Akti-1/2, HPPD, 및 라파마이신.
화학치료제의 보다 많은 예는 하기를 포함한다: 옥살리플라틴 (엘록사틴®, Sanofi), 보르테조밉 (벨케이드®, Millennium Pharm.), 수텐트 (수니티닙®, SU11248, Pfizer), 레트로졸 (페마라®, Novartis), 이마티닙 메실레이트 (글리벡®, Novartis), XL-518 (MEK 저해제, 엑셀릭시스, WO 2007/044515), ARRY-886 (Mek 저해제, AZD6244, Array BioPharma, Astra Zeneca), SF-1126 (PI3K 저해제, Semafore Pharmaceuticals), BEZ-235 (PI3K 저해제, Novartis), XL-147 (PI3K 저해제, Exelixis), PTK787/ZK 222584 (Novartis), 풀베스트란트 (파슬로덱스®, AstraZeneca), 류코보린 (폴린산), 라파마이신 (시롤리무스, 라파뮨®, Wyeth), 라파티닙 (타이커브®, GSK572016, Glaxo Smith Kline), 로나파르닙 (SARASAR™, SCH 66336, Schering Plough), 소라페닙 (넥사바르®, BAY43-9006, Bayer Labs), 게피티닙 (이레싸®, AstraZeneca), 이리노테칸 (캄프토사르®, CPT-11, Pfizer), 티피파르닙 (자네스트라™, Johnson & Johnson), 아브락산™ (Cremophor-free), 파클리탁셀의 알부민-가공된 나노입자 제형(American Pharmaceutical Partners, Schaumberg, Il), 반데타닙 (rINN, ZD6474, 작티마®, AstraZeneca), 클로란암뷰실, AG1478, AG1571 (SU 5271; Sugen), 템시롤리무스 (토리셀®, Wyeth), 파조파닙 (GlaxoSmithKline), 칸포스파마이드 (텔시타®, Telik), 티오테파 및 사이클로스포스파마이드 (사이톡산®, 네오사르®); 알킬 설포네이트 예컨대 부설판, 임프로설판 및 피포설판; 아지리딘 예컨대 벤조도파, 카보쿠온, 메투레도파, 및 우레도파; 알트레타민, 트리에틸렌멜라민, 트리에틸렌포스포르아미드, 트리에틸렌티오포스포르아미드 및 트리메틸로멜라민을 포함하는 에틸렌이민 및 메틸아멜라민; 아세토게닌 (특히 불라타신 및 불라타시논); 캄프토테신 (합성 유사체 토포테칸을 포함); 브리오스타틴; 칼리스타틴; CC-1065 (그것의 아도젤레신, 카르젤레신 및 바이젤레신 합성 유사체를 포함); 크립토파이신 (특히 크립토파이신 1 및 크립토파이신 8); 돌라스타틴; 듀오카르마이신 (합성 유사체, KW-2189 및 CB1-TM1을 포함); 엘류테로빈; 판크라티스타틴; 사르코딕티인; 스폰지스타틴; 질소 머스타드 예컨대 클로르암부실, 클로르나파진, 클로로포스파마이드, 에스트라무스틴, 이포스파마이드, 메클로레타민, 메클로레타민 옥사이드 하이드로클로라이드, 멜팔란, 노벰비친, 펜에스테린, 프레드니무스틴, 트로포스파마이드, 우라실 머스타드; 니트로소우레아 예컨대 카르무스틴, 클로로조토신, 포테무스틴, 로무스틴, 니무스틴, 및 라님무스틴; 항생제 예컨대 엔디인 항생제 (예를 들면, 칼리키아마이신, 칼리키아마이신 감마1I, 칼리키아마이신 오메가I1 (Angew Chem. Intl. Ed. Engl. (1994) 33:183-186); 다이네마이신, 다이네마이신 A; 비스포스포네이트, 예컨대 클로드로네이트; 에스페라마이신; 뿐만 아니라 네오카르지노스타틴 발색단 및 관련된 색소단백질 엔디인 항생제 발색단), 아클라시노마이신, 악티노마이신, 오트라마이신, 아자세린, 블레오마이신, 칵티노마이신, 카라비신, 카르미노마이신, 카르지노필린, 크로모마이시니스, 닥티노마이신, 다우노루비신, 데토루비신, 6-디아조-5-옥소-L-노르류신, 모폴리노-독소루비신, 시아노모폴리노-독소루비신, 2-피롤리노-독소루비신 및 데옥시독소루비신), 에피루비신, 에소루비신, 이다루비신, 마르셀로마이신, 미토마이신 예컨대 미토마이신 C, 마이코페놀산, 노갈라마이신, 올리보마이신, 페플로마이신, 포르피머, 퓨로마이신, 쿠엘라마이신, 로도루비신, 스트렙토니그린, 스트렙토조신, 투베르시딘, 우베니멕스, 지노스타틴, 조루비신; 항-대사물 예컨대 메토트렉세이트 및 5-플루오로우라실 (5-FU); 엽산 유사체 예컨대 데노프테린, 메토트렉세이트, 프테로프테린, 트리메트렉세이트; 퓨린 유사체 예컨대 플루다라빈, 6-머캅토퓨린, 티아미프린, 티오구아닌; 피리미딘 유사체 예컨대 안시타빈, 아자시티딘, 6-아자우리딘, 카모푸르, 사이타라빈, 디데옥시우리딘, 독시플루리딘, 에노시타빈, 플록수리딘; 안드로겐 예컨대 칼루스테론, 드로모스타놀론 프로피오네이트, 에피티오스타놀, 메피티오스탄, 테스토락톤; 항-부신 예컨대 아미노글루테티미드, 미토탄, 트릴로스탄; 엽산 보충물 예컨대 프롤린산; 아세글라톤; 알도포스파마이드 글리코사이드; 아미노레벌린산; 에닐루라실; 암사크린; 베스트라부실; 비스안트렌; 에다트락세이트; 데포파민; 데메콜신; 디아지쿠온; 엘포르니틴; 엘립티늄 아세테이트; 에포틸론; 에토글루시드; 갈륨 니트레이트; 하이드록시우레아; 렌티난; 로니다이닌; 메이탄시노이드 예컨대 메이탄신 및 안사미토신; 미토구아존; 미톡산트론; 모피단몰; 니트라에린; 펜토스타틴; 페나메트; 피라루비신; 로소크산트론; 포도필린산; 2-에틸하이드라자이드; 프로카바진; PSK® 다당류 복합체 (JHS Natural Products, Eugene, OR); 라족산; 라이족신; 시조피란; 스피로게르마늄; 테누아진산; 트리아지쿠온; 2,2',2"-트리클로로트리에틸아민; 트리코테센 (T-2 독소, 베라쿠린 A, 로리딘 A 및 안구이딘); 우레탄; 빈데신; 다카바진; 만노무스틴; 미토브로니톨; 미토락톨; 피포브로만; 가시토신; 아라비노시드 (Ara-C); 사이클로포스파마이드; 티오테파; 6-티오구아닌; 머캅토퓨린; 메토트렉세이트; 백금 유사체 예컨대 시스플라틴 및 카보플라틴; 빈블라스틴; 에토포시드 (VP-16); 이포스파마이드; 미톡산트론; 빈크리스틴; 비노렐빈 (나벨빈®); 노반트론; 테니포시드; 데다트렉세이트; 다우노마이신; 아미노프테린; 카페시타빈 (젤로다®, Roche); 이반드로네이트; CPT-11; 토포이소머라제 저해제 RFS 2000; 디플루오로메틸오르니틴 (DMFO); 레티노이드 예컨대 레티노산; 및 상기 중 임의의 것의 약제학적으로 허용가능한 염, 산 및 유도체.
본 명세서에서 사용된 바와 같이 용어 "세포독성 약물"은 세포의 기능을 억제 또는 방지하고 및/또는 세포의 파괴를 유발하는 물질을 지칭한다. 화학치료제 (즉, "약물" 또는 "약물 모이어티")는 세포독성 약물일 수 있다. 따라서, 본 명세서에서 기재된 THIOMABTM 항체가 시스테인 가공된 항체, 링커, 및 약물을 포함하는 경우, 본 약물은 본 명세서에서 기재된 임의의 세포독성 약물일 수 있다 본 용어는 방사성 동위원소 (예를 들면, 211At, 131I, 125I, 90Y, 186Re, 188Re, 153Sm, 212Bi, 32P, 60C, 및 Lu의 방사성 동위원소), 화학치료제, 및 합성 유사체 및 그것의 유도체를 포함하는, 박테리아, 진균, 식물 또는 동물 기원의 소분자 독소 또는 효소적으로 활성 독소와 같은 독소를 포함하는 것으로 의도된다.
"파아지 디스플레이"는 변이체 폴리펩티드가 파아지, 예를 들면, 섬유상 파아지인 입자의 표면 상의 코트 단백질에 대한 융합 단백질로서 표시되는 기술이다. 파아지 디스플레이의 일 유용성은 무작위적 단백질 변이체의 큰 라이브러리가 표적 분자에 높은 친화도로 결합하는 이들 서열에 대해 신속하고 효율적으로 분류될 수 있다는 사실에 있다. 파아지 상에 펩티드 및 단백질 라이브러리의 디스플레이는 특이적 결합 특성을 가진 것에 대한 수백만의 폴리펩티드를 스크리닝하는데 사용되었다. 다가 파아지 디스플레이 방법은 전형적으로 섬유상 파아지의 pIII 또는 pVIII 중 어느 하나에 대한 융합을 통해 작은 랜덤 펩티드 및 작은 단백질을 디스플레이하는데 사용되어왔다 (Wells 및 Lowman, (1992) Curr. Opin. Struct. Biol., 3:355-362, 및 본 명세서에서 인용된 참조 문헌). 1가 파아지 디스플레이에서, 단백질 또는 펩티드 라이브러리는 파아지 코트 단백질 또는 그것의 일부에 융합되고, 야생형 단백질의 존재하에 낮은 수준으로 발현된다. 결합능 효과는 다가 파아지에 비해 감소하여 분류가 고유 리간드 친화도에 기초되며, 그리고 파아지미드 벡터가 사용되어, DNA 가공을 간소화한다. Lowman 및 Wells, Methods: A companion to Methods in Enzymology , 3:205-0216 (1991). 파아지 디스플레이는 항체-유사 분자를 생산하기 위한 기술을 포함한다 (Janeway, C., Travers, P., Walport, M., Shlomchik (2001) Immunobiology , 5th Ed., Garland Publishing, New York, p627-628; Lee 등).
"파아지미드"는 박테리아 복제 기점, 예를 들면, Co1E1 및 박테리오파아지의 유전자간 영역의 복사를 갖는 플라스미드 벡터이다. 파아지미드는 섬유상 박테리오파아지 및 람다형 박테리오파아지를 포함하는 임의의 공지된 박테리오파아지 상에서 사용될 수 있다. 플라스미드는 또한 일반적으로 항생제 내성을 위한 선별 마커를 함유할 것이다. 이들 벡터에 클로닝된 DNA의 분절은 플라스미드로서 번식될 수 있다. 이들 벡터를 보유하는 세포에 파아지 입자의 생산에 필요한 모든 유전자가 제공될 때, 플라스미드의 복제 방식은 회전환 복제로 변경되어 플라스미드 DNA 및 패키지 파아지 입자의 하나의 가닥의 복사를 생성한다. 파아지미드는 감염성 또는 비-감염성 파아지 입자를 형성할 수 있다. 이 용어는 이종성 폴리펩티드가 파아지 입자의 표면 상에 표시되도록 유전자 융합으로 이종성 폴리펩티드 유전자에 연결된 파아지 코트 단백질 유전자 또는 이것의 단편을 함유하는 파아지미드를 포함한다.
"링커", "링커 단위" 또는 "연결하다"는 항체를 약물 모이어티에 공유 부착하는 원자의 공유 부착 또는 사슬을 포함하는 화학 모이어티를 의미한다. 다양한 구현예에서, L로 명시된다. 링커는 2가 라디칼 예컨대 알킬디일, 아릴렌, 헤테로아릴렌, 모이어티 예컨대: -(CR2)nO(CR2)n-, 알킬옥시 (예를 들면 폴리에틸엔옥시, PEG, 폴리메틸렌옥시) 및 알킬아미노 (예를 들면 폴리에틸렌아미노, 제파민™)의 반복 단위; 및 석시네이트, 석신아미드, 디글라이콜레이트, 말로네이트, 및 카프로아미드를 포함하는 이산 에스테르 및 아미드를 포함한다.
용어 "표지"는 항체에 공유결합될 수 있고 그리고: (i) 검출가능한 신호를 제공하고; (ii) 제1 및 제2 표지, 예를 들면 FRET (형광 공명 에너지 전달)에 의해 제공된 검출가능한 신호를 변형하기 위해 제2 표지와 상호작용하고; (iii) 항원 또는 리간드와 상호작용을 안정화하거나 결합하는 친화도를 증가하고; (iv) 하전, 소수성, 형상, 또는 다른 물리적 파라미터에 의해, 이동도, 예를 들면 전기영동 이동도, 또는 세포-투과성에 영향을 미치고, 또는 (v) 리간드 친화도, 항체/항원 결합, 또는 이온성 복합체형성을 조절하기 위해 포착 모이어티를 제공하는 작용을 하는 임의의 모이어티를 의미한다.
본 명세서에서 사용된 입체화학적 정의 및 규약은 일반적으로 「S. P. Parker, Ed., McGraw-Hill Dictionary of Chemical Terms (1984) McGraw-Hill Book Company, New York; 및 Eliel, E. and Wilen, S., Stereochemistry of Organic Compounds (1994) John Wiley & Sons, Inc., New York」에 따른다. 많은 유기 화합물은 광학 활성 형태로 존재하는데, 즉 이들은 평면-편광의 평면을 회전시키는 능력을 갖는다. 광학 활성 화합물을 기술함에 있어서, 접두어 D 및 L, 또는 R 및 S는 그것의 키랄 중심(들)에 대한 분자의 절대 배열을 표시하기 위해 사용된다. 접두어 d 및 l 또는 (+) 및 (-)는 화합물에 의한 평면-편광의 회전의 부호를 표시하기 위해 이용되며, (-) 또는 1로 화합물이 좌측회전성임을 의미한다. (+) 또는 d로 접두어가 붙은 화합물은 우측회전성이다. 주어진 화학 구조에 대해, 이들 입체이성질체는 이들이 서로 거울상이라는 점을 제외하면 동일하다. 특정 입체이성질체는 또한 거울상이성질체로 지칭될 수 있고, 이러한 이성질체의 혼합물은 종종 거울상이성질체 혼합물로 불린다. 거울상이성질체의 50:50 혼합물은 화학 반응 또는 공정에서 입체선택 또는 입체특이성이 없는 경우에 발생할 수 있는 라세미 혼합물 또는 라 세미체라 칭한다. 용어들 "라세미 혼합물" 및 "라세미체"는 광학적 활성이 없는, 2종의 거울상이성질체 종의 등몰 혼합물을 의미한다.
본 명세서에서 사용된 바와 같이, 어구 "약제학적으로 허용가능한 염"은 ADC의 약제학적으로 허용가능한 유기 또는 무기 염을 지칭한다. 예시적인 염은, 비제한적으로, 설페이트, 시트레이트, 아세테이트, 옥살레이트, 클로라이드, 브로마이드, 아이오다이드, 니트레이트, 바이설페이트, 포스페이트, 산 포스페이트, 이소니코티네이트, 락테이트, 살리실레이트, 산 시트레이트, 타르트레이트, 올레이트, 탄네이트, 판토테네이트, 바이타르트레이트, 아스코르베이트, 석시네이트, 말레에이트, 겐티시네이트, 푸마레이트, 글루코네이트, 글루쿠로네이트, 사카레이트, 포르메이트, 벤조에이트, 글루타메이트, 메탄설포네이트, 에탄설포네이트, 벤젠설포네이트, p톨루엔설포네이트, 및 파모에이트 (즉, 1,1’메틸렌-비스-(2-하이드록시-3-나프토네이트)) 염을 포함한다. 약제학적으로 허용가능한 염은 아세테이트 이온, 석시네이트 이온 또는 다른 반대이온과 같은 또 다른 분자의 함입을 포함할 수 있다. 반대이온은 모 화합물의 전하를 안정화시키는 임의의 유기 또는 무기 모이어티일 수 있다. 더욱이, 약제학적으로 허용가능한 염은 그것의 구조 내에 1 초과의 하전된 원자를 가질 수 있다. 다중 하전된 원자가 약제학적으로 허용가능한 염의 일부인 경우 다중 반대 이온을 가질 수 있다. 그러므로, 약제학적으로 허용가능한 염은 1종 이상의 하전된 원자 및/또는 1종 이상의 반대이온을 가질 수 있다.
"약제학적으로 허용가능한 용매화물"은 1종 이상의 용매 분자 및 ADC의 회합을 언급한다. 제학적으로 허용가능한 용매화물을 형성하는 용매의 예는, 비제한적으로, 물, 이소프로판올, 에탄올, 메탄올, DMSO, 에틸 아세테이트, 아세트산, 및 에탄올아민을 포함한다.
시스테인 가공된 항체
본 발명의 화합물은 야생형 또는 모 항체의 1종 이상의 아미노산이 시스테인 아미노산 (즉, 및 "가공된 시스테인")으로 대체된 (즉, "치환된" 또는 "돌연변이된") 시스테인 가공된 항체를 포함한다. 항체의 임의의 형태는 그렇게 가공, 즉 돌연변이될 수 있다. 예를 들면, 모 단클론성 항체는 "THIOMABTM 항체"를 형성하도록 가공될 수 있다. THIOMABTM 항체의 일 예는 가공된 시스테인을 갖는 항체 단편(즉, Fab)이다. 이 Fab THIOMABTM 항체는 "ThioFab"로 언급될 수 있다. 단일 부위 돌연변이는 ThioFab에서 단일 가공된 시스테인 잔기를 생성하고, 반면 단일 부위 돌연변이는 IgG 항체의 이량체성 본성에 기인하여 THIOMABTM 항체에서 2개의 가공된 시스테인 잔기를 생성한다는 것이 유의되어야 한다. 가공된 시스테인 (Cys) 잔기를 갖는 돌연변이체는 새롭게 도입된, 가공된 시스테인 티올 기의 반응성에 대해 평가된다. 티올 반응성 값은 0 내지 1.0의 범위로 상대적인, 숫자의 용어이고 그리고 임의의 시스테인 가공 항체에 대해 측정될 수 있다. 본 발명의 시스테인 가공된 항체의 티올 반응성 값은 0.0 내지 1.0의 범위이다. 특이적으로, 본 발명의 시스테인 가공된 항체의 티올 반응성 값은 0.1 내지 1.0의 범위이다. 특정 구현예에서, 본 발명의 시스테인 가공된 항체의 티올 반응성 값은 0.0 내지 0.1, 0.1 내지 0.5, 0.1 내지 0.6, 0.1 내지 0.7, 0.1 내지 0.8, 0.1 내지 0.9, 또는 0.1 내지 1.0의 범위이다. 특정 구현예에서, 본 발명의 시스테인 가공된 항체의 티올 반응성 값은 0.2 내지 1.0, 0.3 내지 1.0, 0.4 내지 1.0, 0.5 내지 1.0, 0.6 내지 1.0, 0.7 내지 1.0, 또는 0.8 내지 1.0의 범위이다. 특정 구현예에서, 본 발명의 시스테인 가공된 항체의 티올 반응성 값은 0.6 내지 1.0의 범위이다. 특정 구현예에서, 본 발명의 시스테인 가공된 항체의 티올 반응성 값은 0.7 내지 1.0의 범위이다. 특정 구현예에서, 본 발명의 시스테인 가공된 항체의 티올 반응성 값은 0.8 내지 10의 범위이다. 특정 구현예에서, 본 발명의 시스테인 가공된 항체의 티올 반응성 값은 0.5 내지 0.8의 범위이다. 특정 구현예에서, 본 발명의 시스테인 가공된 항체의 티올 반응성 값은 0.5 내지 0.9의 범위이다. 특정 구현예에서, 본 발명의 시스테인 가공된 항체의 티올 반응성 값은 0.5 내지 0.7의 범위이다. 특정 구현예에서, 본 발명의 시스테인 가공된 항체의 티올 반응성 값은 0.5 내지 1.0의 범위이다.
본 발명의 설계, 선택, 및 제조 방법은 친전자성 기능성과 반응성인 시스테인 가공된 항체를 가능하게 한다. 이들 방법은 더욱이 지정된, 설계된, 선택적 부위에 약물 분자를 갖는 항체 콘주게이트 화합물 예컨대 항체-약물 콘주게이트 (ADC) 화합물을 가능하게 한다. 항체 표면상의 반응성 시스테인 잔기는 티올 반응성 기 예컨대 말레이미드 또는 할로아세틸을 통해 약물 모이어티를 특이적으로 콘주게이트하는 것을 허용한다. 말레이미드 기에 대한 Cys 잔기의 티올 기능성의 친핵성 반응성은 단백질 내 임의의 다른 아미노 산 작용기, 예컨대 라이신 잔기의 아미노 기 또는 N-말단 아미노 기에 비교하여 약 1000배 높다. 아이오도아세틸 및 말레이미드 시약 내 티올 특적 기능성은 아민 기와 반응할 수 있지만, 그러나 보다 높은 pH (>9.0) 및 더 긴 반응 시간이 요구된다 (Garman, 1997, Non-Radioactive Labelling: A Practical Approach, Academic Press, London).
본 발명의 시스테인 가공된 항체는 바람직하게는 그것의 야생형, 모 항체 대응물의 항원 결합 능력을 보유한다. 따라서, 시스테인 가공된 항체는 항원에, 바람직하게는 특이적으로, 결합할 수 있다. 이러한 항원은, 예를 들면, 종양-관련 항원 (TAA), 세포 표면 수용체 단백질 및 다른 세포 표면 분자, 막투과성 단백질, 신호전달 단백질, 세포 생존 조절 인자, 세포 증식 조절 인자, 조직 전개 또는 분화와 관련된 분자(예를 들면, 기능적으로 이에 기여하는 것으로 공지되거나 또는 의심되는 것), 림포카인, 사이토카인, 세포 주기 조절에 관여된 분자, 맥관형성에 관여된 분자 및 혈관신생과 관련된 분자(예를 들면, 기능적으로 이에 기여하는 것으로 공지되거나 또는 의심되는 것)를 포함한다. 종양-관련된 항원은 클러스터 분화 인자 (즉, CD 단백질)일 수 있다. 시스테인 가공된 항체가 결합할 수 있는 항원은 상기-언급된 카테고리의 하나의 하부 세트의 구성원일 수 있고, 여기서 상기 카테고리의 다른 하부 세트(들)는 (관심 대상 항원과 관련하여) 상이한 특성을 갖는 다른 분자/항원을 포함한다.
모 항체는 또한, 명확히 본 명세서에 참고로 편입된 US 5821337의 표 3에 기재된 바와 같은, huMAb4D5-1, huMAb4D5-2, huMAb4D5-3, huMAb4D5-4, huMAb4D5-5, huMAb4D5-6, huMAb4D5-7 및 huMAb4D5-8 (트라스투주맙, HERCEPTIN(헤르셉틴)®); 인간화된 520C9 (WO 93/21319) 및 본원에서 기재된 바와 같은 인간화된 2C4 항체로부터 선택된 인간화된 항체일 수 있다.
본 발명의 시스테인 가공된 항체는 티올-반응성 시약과 부위-특이적 및 효율적으로 커플링될 수 있다. 본 티올-반응성 시약은 다작용성 링커 시약, 포착, 즉 친화도, 표지 시약 (예를 들면 비오틴-링커 시약), 검출 표지 (예를 들면 형광단 시약), 고상 고정화 시약 (예를 들면 SEPHAROSE(세파로오스)™, 폴리스티렌, 또는 유리), 또는 약물-링커 중간체일 수 있다. 티올-반응성 시약의 일예는 N-에틸 말레이미드 (NEM)이다. 예시적인 구현예에서, 비오틴-링커 시약과 THIOMABTM 항체의 반응은 가공된 시스테인 잔기의 존재 및 반응성이 검출되고 측정될 수 있는 바이오티닐화된 THIOMABTM 항체를 제공한다. 다작용성 링커 시약과 THIOMABTM 항체의 반응은 약물 모이어티 시약 또는 다른 표지와 추가로 반응될 수 있는 작용화된 링커를 갖는 THIOMABTM 항체를 제공한다. 약물-링커 중간체와 THIOMABTM 항체의 반응은 THIOMABTM 항체 약물 콘주게이트를 제공한다. 특정 구현예에서, THIOMABTM 항체는 ThioFab이다.
여기에 기재된 예시적인 방법은 일반적으로 항체의 확인 및 생산에, 그리고 보다 일반적으로는 본 명세서에서 기재된 설계 및 스크리닝 단계의 적용을 통하여 다른 단백질에 적용될 수 있다.
그와 같은 접근법은 반응성 기가, 예를 들면, 말레이미드, 아이오도아세트아미드, 피리딜 디설파이드, 또는 다른 티올-반응성 콘주게이션 파트너인 다른 티올-반응성제의 콘주게이션에 적용될 수 있다 (Haugland, 2003, Molecular Probes Handbook of Fluorescent Probes and Research Chemicals, Molecular Probes, Inc.; Brinkley, 1992, Bioconjugate Chem. 3:2; Garman, 1997, Non-Radioactive Labelling: A Practical Approach, Academic Press, London; Means (1990) Bioconjugate Chem. 1:2; Hermanson, G. in Bioconjugate Techniques (1996) Academic Press, San Diego, pp. 40-55, 643-671). 파트너는 세포독성 약물 (예를 들면 독소 예컨대 독소루비신 또는 백일해 독소), 형광단 예컨대 플루오레신 또는 로다민같은 형광 염료, 영상화 또는 방사선요법 금속용 킬레이트제, 펩티딜 또는 비-펩티딜 표지 또는 검출 태그, 또는 청소능-변형제 예컨대 폴리에틸렌 글리콜, 제3 구성요소, 또는 또 다른 탄수화물에 결합하는 펩티드 또는 친유성 제제의 다양한 이성질체일 수 있다.
본 명세서에서 예시적인 항체인 hu4D5 상에서 확인된 부위는 주로 모든 종의 항체를 통해 잘 보존된 항체의 불변 도메인에 있다. 이들 부위는 특이적 항체 구조의 지식이나 구조적 설계의 추가의 요구 없이, 그리고 항체의 가변 도메인에 고유한 항원 결합 특성을 간섭함이 없이 다른 항체에 광범위하게 적용될 수 있어야 한다.
암의 치료에 유용할 수 있는 시스테인 가공된 항체는, 비제한적으로, 세포 표면 수용체 및 종양-관련 항원 (TAA)에 대한 항체를 포함한다. 이러한 항체는 순수 항체(약물 또는 표지 모이어티에 콘주게이트되지 않음)로 또는 화학식 I 항체-약물 콘주게이트 (ADC)로서 사용될 수 있다. 종양-관련 항원은 당해 기술에 공지되어 있으며, 당해 기술에 공지되어 있는 방법 및 정보를 사용하여 항체를 생성하는데 사용하기 위해 제조될 수 있다. 암 진단 및 치료법을 위한 유효한 세포성 표적을 발견하기 위한 시도에서, 연구자들은 1종 이상의 비-암성 세포(들)와 비교하여 암세포의 1종 이상의 특정한 유형(들)의 표면 상에 특이적으로 발현되는 막투과성이거나 달리 종양-관련 폴리펩티드를 동정하고자 했다. 종종, 이러한 종양-관련 폴리펩티드는 비-암성 세포의 표면과 비교하여 암 세포의 표면에서 보다 풍부하게 발현된다. 이러한 종양-관련 세포 표면 항원 폴리펩티드의 확인은 항체-기반 요법을 통한 파괴를 위해 암세포를 특이적으로 표적하는 능력에 대한 상승을 제공했다.
TAA의 예는, 비제한적으로, 아래에 열거된 TAA (1)-(53)을 포함한다. 편의상, 이들 모두가 당해 기술에 공지되어 있는, 이들 항원에 관한 정보가 아래에 열거되고 그리고 국립 생명 공학 정보 센터(NCBI)의 핵산 및 단백질 서열 확인 규약에 따라 명칭, 대안적인 명칭, 유전자은행 수탁 번호 및 1차 참조(들)를 포함한다.
TAA (1)-(53)에 상응하는 핵산 및 단백질 서열은 공공 데이터베이스 예컨대 유전자은행에서 이용가능하다. 항체에 의해 표적화된 종양-관련 항원은 인용된 참조문헌에서 확인된 서열에 대해 적어도 약 70%, 80%, 85%, 90%, 또는 95% 서열 동일성을 가지거나, 또는 인용된 참조문헌에서 발견된 서열을 갖는 TAA와 실질적으로 동일한 생물학적 특성 또는 특징을 나타내는 모든 아미노산 서열 변이체 및 동형체를 포함한다. 예를 들면, 변이체 서열을 갖는 TAA는 일반적으로 열거된 상응하는 서열을 갖는 TAA에 특이적으로 결합하는 항체에 특이적으로 결합할 수 있다. 본 명세서에서 특정하게 인용된 참고에서의 서열 및 개시내용은 명확히 참고로 편입된다.
종양-관련 항원 (1)-(53):
(1) BMPR1B (뼈 골형태형성 단백질 수용체-유형 IB, 유전자은행 수탁 번호 NM_001203) ten Dijke,P., 등 Science 264 (5155):101-104 (1994), Oncogene 14 (11):1377-1382 (1997)); WO2004063362 (청구항 2); WO2003042661 (청구항 12); US2003134790-A1 (페이지 38-39); WO2002102235 (청구항 13; 페이지 296); WO2003055443 (페이지 91-92); WO200299122 (실시예 2; 페이지 528-530); WO2003029421 (청구항 6); WO2003024392 (청구항 2; 도 112); WO200298358 (청구항 1; 페이지 183); WO200254940 (페이지 100-101); WO200259377(페이지 349-350); WO200230268 (청구항 27; 페이지 376); WO200148204 (실시예; 도 4); NP_001194 뼈 골형태형성 단백질 수용체, 유형 IB /pid=NP_001194.1. 교차-참조문헌: MIM:603248; NP_001194.1; AY065994
(2) E16 (LAT1, SLC7A5, 유전자은행 수탁 번호 NM_003486) Biochem. Biophys. Res. Commun. 255 (2), 283-288 (1999), Nature 395 (6699):288-291 (1998), Gaugitsch, H.W., 등 (1992) J. Biol. Chem. 267 (16):11267-11273); WO2004048938 (실시예 2); WO2004032842 (실시예 IV); WO2003042661 (청구항 12); WO2003016475 (청구항 1); WO200278524 (실시예 2); WO200299074 (청구항 19; 페이지 127-129); WO200286443 (청구항 27; 페이지 222, 393); WO2003003906 (청구항 10; 페이지 293); WO200264798 (청구항 33; 페이지 93-95); WO200014228 (청구항 5; 페이지 133-136); US2003224454 (도 3); WO2003025138 (청구항 12; 페이지 150); NP_003477 용질 담체 패밀리 7 (양이온성 아미노산 수송체, y+시스템), 구성원 5/pid=NP_003477.3 - 호모사피엔스; 교차-참조문헌: MIM:600182; NP_003477.3; NM_015923; NM_003486_1
(3) STEAP1 (전립선의 6개 막투과성 상피 항원, 유전자은행 수탁 번호 NM_012449); Cancer Res. 61 (15), 5857-5860 (2001), Hubert, R.S., 등 (1999) Proc. Natl. Acad. Sci. U.S.A. 96 (25):14523-14528); WO2004065577 (청구항 6); WO2004027049 (도 1L); EP1394274 (실시예 11); WO2004016225 (청구항 2); WO2003042661 (청구항 12); US2003157089 (실시예 5); US2003185830 (실시예 5); US2003064397 (도 2); WO200289747 (실시예 5; 페이지 618-619); WO2003022995 (실시예 9; 도 13A, 실시예 53; 페이지 173, 실시예 2; 도 2A); NP_036581 전립선의 6개 막투과성 상피 항원 교차-참조문헌: MIM:604415; NP_036581.1; NM_012449_1
(4) 0772P (CA125, MUC16, 유전자은행 수탁 번호 AF361486); J. Biol. Chem. 276 (29):27371-27375 (2001)); WO2004045553 (청구항 14); WO200292836 (청구항 6; 도 12); WO200283866 (청구항 15; 페이지 116-121); US2003124140 (실시예 16); 교차-참조문헌: GI:34501467; AAK74120.3; AF361486_1
(5) MPF (MPF, MSLN, SMR, 거핵구 강화 인자, 메소텔린, 유전자은행 수탁 번호 NM_005823) Yamaguchi, N., 등 Biol. Chem. 269 (2), 805-808 (1994), Proc. Natl. Acad. Sci. U.S.A. 96 (20):11531-11536 (1999), Proc. Natl. Acad. Sci. U.S.A. 93 (1):136-140 (1996), J. Biol. Chem. 270 (37):21984-21990 (1995)); WO2003101283 (청구항 14); (WO2002102235 (청구항 13; 페이지 287-288); WO2002101075 (청구항 4; 페이지 308-309); WO200271928 (페이지 320-321); WO9410312 (페이지 52-57); 교차-참조문헌: MIM:601051; NP_005814.2; NM_005823_1
(6) Napi3b (NaPi2b로도 공지됨) (NAPI-3B, NPTIIb, SLC34A2, 용질 담체 패밀리 34 (인산나트륨), 구성원 2, 유형 II 나트륨-의존적 포스페이트 수송체 3b, 유전자은행 수탁 번호 NM_006424) J. Biol. Chem. 277 (22):19665-19672 (2002), Genomics 62 (2):281-284 (1999), Feild, J.A., 등 (1999) Biochem. Biophys. Res. Commun. 258 (3):578-582); WO2004022778 (청구항 2); EP1394274 (실시예 11); WO2002102235 (청구항 13; 페이지 326); EP875569 (청구항 1; 페이지 17-19); WO200157188 (청구항 20; 페이지 329); WO2004032842 (실시예 IV); WO200175177 (청구항 24; 페이지 139-140); 교차-참조문헌: MIM:604217; NP_006415.1; NM_006424_1
(7) 세마(Sema) 5b (FLJ10372, KIAA1445, Mm.42015, SEMA5B, SEMAG, 세마포린 5b Hlog, 세마 도메인, 7개 트롬보스폰딘 반복 (1형 및 1형-유사), 막투과성 도메인 (TM) 및 짧은 세포질 도메인, (세마포린) 5B, 유전자은행 수탁 번호 AB040878); Nagase T., 등 (2000) DNA Res. 7 (2):143-150); WO2004000997 (청구항 1); WO2003003984 (청구항 1); WO200206339 (청구항 1; 페이지 50); WO200188133 (청구항 1; 페이지 41-43, 48-58); WO2003054152 (청구항 20); WO2003101400 (청구항 11); 수탁: Q9P283; EMBL; AB040878; BAA95969.1. Genew; HGNC:10737
(8) PSCA hlg (2700050C12Rik, C530008O16Rik, RIKEN cDNA 2700050C12, RIKEN cDNA 2700050C12 유전자, 유전자은행 수탁 번호 AY358628); Ross 등 (2002) Cancer Res. 62:2546-2553; US2003129192 (청구항 2); US2004044180 (청구항 12); US2004044179 (청구항 11); US2003096961 (청구항 11); US2003232056 (실시예 5); WO2003105758 (청구항 12); US2003206918 (실시예 5); EP1347046 (청구항 1); WO2003025148 (청구항 20); 교차-참조문헌: GI:37182378; AAQ88991.1; AY358628_1
(9) ETBR (엔도텔린 유형 B 수용체, 유전자은행 수탁 번호 AY275463); Nakamuta M., 등 Biochem. Biophys. Res. Commun. 177, 34-39, 1991; Ogawa Y., 등 Biochem. Biophys. Res. Commun. 178, 248-255, 1991; Arai H., 등 Jpn. Circ. J. 56, 1303-1307, 1992; Arai H., 등 J. Biol. Chem. 268, 3463-3470, 1993; Sakamoto A., Yanagisawa M., 등 Biochem. Biophys. Res. Commun. 178, 656-663, 1991; Elshourbagy N.A., 등 J. Biol. Chem. 268, 3873-3879, 1993; Haendler B., 등 J. Cardiovasc. Pharmacol. 20, s1-S4, 1992; Tsutsumi M., 등 Gene 228, 43-49, 1999; Strausberg R.L., 등 Proc. Natl. Acad. Sci. U.S.A. 99, 16899-16903, 2002; Bourgeois C., 등 J. Clin. Endocrinol. Metab. 82, 3116-3123, 1997; Okamoto Y., 등 Biol. Chem. 272, 21589-21596, 1997; Verheij J.B., 등 Am. J. Med. Genet. 108, 223-225, 2002; Hofstra R.M.W., 등 Eur. J. Hum. Genet. 5, 180-185, 1997; Puffenberger E.G., 등 Cell 79, 1257-1266, 1994; Attie T., 등, Hum. Mol. Genet. 4, 2407-2409, 1995; Auricchio A., 등 Hum. Mol. Genet. 5:351-354, 1996; Amiel J., 등 Hum. Mol. Genet. 5, 355-357, 1996; Hofstra R.M.W., 등 Nat. Genet. 12, 445-447, 1996; Svensson P.J., 등 Hum. Genet. 103, 145-148, 1998; Fuchs S., 등 Mol. Med. 7, 115-124, 2001; Pingault V., 등 (2002) Hum. Genet. 111, 198-206; WO2004045516 (청구항 1); WO2004048938 (실시예 2); WO2004040000 (청구항 151); WO2003087768 (청구항 1); WO2003016475 (청구항 1); WO2003016475 (청구항 1); WO200261087 (도 1); WO2003016494 (도 6); WO2003025138 (청구항 12; 페이지 144); WO200198351 (청구항 1; 페이지 124-125); EP522868 (청구항 8; 도 2); WO200177172 (청구항 1; 페이지 297-299); US2003109676; US6518404 (도 3); US5773223 (청구항 1a; Col 31-34); WO2004001004
(10) MSG783 (RNF124, 가설 단백질 FLJ20315, 유전자은행 수탁 번호 NM_017763); WO2003104275 (청구항 1); WO2004046342 (실시예 2); WO2003042661 (청구항 12); WO2003083074 (청구항 14; 페이지 61); WO2003018621 (청구항 1); WO2003024392 (청구항 2; 도 93); WO200166689 (실시예 6); 교차-참조문헌: LocusID:54894; NP_060233.2; NM_017763_1
(11) STEAP2 (HGNC_8639, IPCA-1, PCANAP1, STAMP1, STEAP2, STMP, 전립선암 관련 유전자 1, 전립선암 관련 단백질 1, 전립선의 6개 막투과성 상피 항원 2, 6개 막투과성 전립선 단백질, 유전자은행 수탁 번호 AF455138); Lab. Invest. 82 (11):1573-1582 (2002)); WO2003087306; US2003064397 (청구항 1; 도 1); WO200272596 (청구항 13; 페이지 54-55); WO200172962 (청구항 1; 도 4B); WO2003104270 (청구항 11); WO2003104270 (청구항 16); US2004005598 (청구항 22); WO2003042661 (청구항 12); US2003060612 (청구항 12; 도 10); WO200226822 (청구항 23; 도 2); WO200216429 (청구항 12; 도 10); 교차-참조문헌: GI:22655488; AAN04080.1; AF455138_1
(12) TrpM4 (BR22450, FLJ20041, TRPM4, TRPM4B, 일과성 수용체 전위 양이온 통로, 서브패밀리 M, 구성원 4, 유전자은행 수탁 번호 NM_017636); Xu, X.Z., 등 Proc. Natl. Acad. Sci. U.S.A. 98 (19):10692-10697 (2001), Cell 109 (3):397-407 (2002), J. Biol. Chem. 278 (33):30813-30820 (2003)); US2003143557 (청구항 4); WO200040614 (청구항 14; 페이지 100-103); WO200210382 (청구항 1; 도 9A); WO2003042661 (청구항 12); WO200230268 (청구항 27; 페이지 391); US2003219806 (청구항 4); WO200162794 (청구항 14; 도 1A-D); 교차-참조문헌: MIM:606936; NP_060106.2; NM_017636_1
(13) CRIPTO (CR, CR1, CRGF, CRIPTO, TDGF1, 기형암종-유도 성장 인자, 유전자은행 수탁 번호 NP_003203 또는 NM_003212); Ciccodicola, A., 등 EMBO J. 8 (7):1987-1991 (1989), Am. J. Hum. Genet. 49 (3):555-565 (1991)); US2003224411 (청구항 1); WO2003083041 (실시예 1); WO2003034984 (청구항 12); WO200288170 (청구항 2; 페이지 52-53); WO2003024392 (청구항 2; 도 58); WO200216413 (청구항 1; 페이지 94-95, 105); WO200222808 (청구항 2; 도 1); US5854399 (실시예 2; Col 17-18); US5792616 (도 2); 교차-참조문헌: MIM:187395; NP_003203.1; NM_003212_1
(14) CD21 (CR2 (보체 수용체 2) 또는 C3DR (C3d/엡슈타인 바르 바이러스 수용체) 또는 Hs.73792 유전자은행 수탁 번호 M26004); Fujisaku 등 (1989) J. Biol. Chem. 264 (4):2118-2125); Weis J.J., 등 J. Exp. Med. 167, 1047-1066, 1988; Moore M., 등 Proc. Natl. Acad. Sci. U.S.A. 84, 9194-9198, 1987; Barel M., 등 Mol. Immunol. 35, 1025-1031, 1998; Weis J.J., 등 Proc. Natl. Acad. Sci. U.S.A. 83, 5639-5643, 1986; Sinha S.K., 등 (1993) J. Immunol. 150, 5311-5320; WO2004045520 (실시예 4); US2004005538 (실시예 1); WO2003062401 (청구항 9); WO2004045520 (실시예 4); WO9102536 (도 9.1-9.9); WO2004020595 (청구항 1); 수탁: P20023; Q13866; Q14212; EMBL; M26004; AAA35786.1.
(15) CD79b (CD79B, CD79β, IGb (면역글로불린-관련 베타), B29, 유전자은행 수탁 번호 NM_000626 또는 11038674); Proc. Natl. Acad. Sci. U.S.A. (2003) 100 (7):4126-4131, Blood (2002) 100 (9):3068-3076, Muller 등 (1992) Eur. J. Immunol. 22 (6):1621-1625); WO2004016225 (청구항 2, 도 140); WO2003087768, US2004101874 (청구항 1, 페이지 102); WO2003062401 (청구항 9); WO200278524 (실시예 2); US2002150573 (청구항 5, 페이지 15); US5644033; WO2003048202 (청구항 1, 페이지 306 및 309); WO 99/558658, US6534482 (청구항 13, 도 17A/B); WO200055351 (청구항 11, 페이지 1145-1146); 교차-참조문헌: MIM:147245; NP_000617.1; NM_000626_1
(16) FcRH2 (IFGP4, IRTA4, SPAP1A (포스파타제 앵커 단백질 1a 함유 SH2 도메인), SPAP1B, SPAP1C, 유전자은행 수탁 번호 NM_030764, AY358130); Genome Res. 13 (10):2265-2270 (2003), Immunogenetics 54 (2):87-95 (2002), Blood 99 (8):2662-2669 (2002), Proc. Natl. Acad. Sci. U.S.A. 98 (17):9772-9777 (2001), Xu, M.J., 등 (2001) Biochem. Biophys. Res. Commun. 280 (3):768-775; WO2004016225 (청구항 2); WO2003077836; WO200138490 (청구항 5; 도 18D-1-18D-2); WO2003097803 (청구항 12); WO2003089624 (청구항 25); 교차-참조문헌: MIM:606509; NP_110391.2; NM_030764_1
(17) HER2 (ErbB2, 유전자은행 수탁 번호 M11730); Coussens L., 등 Science (1985) 230(4730):1132-1139); Yamamoto T., 등 Nature 319, 230-234, 1986; Semba K., 등 Proc. Natl. Acad. Sci. U.S.A. 82, 6497-6501, 1985; Swiercz J.M., 등 J. Cell Biol. 165, 869-880, 2004; Kuhns J.J., 등 J. Biol. Chem. 274, 36422-36427, 1999; Cho H.-S., 등 Nature 421, 756-760, 2003; Ehsani A., 등 (1993) Genomics 15, 426-429; WO2004048938 (실시예 2); WO2004027049 (도 1I); WO2004009622; WO2003081210; WO2003089904 (청구항 9); WO2003016475 (청구항 1); US2003118592; WO2003008537 (청구항 1); WO2003055439 (청구항 29; 도 1A-B); WO2003025228 (청구항 37; 도 5C); WO200222636 (실시예 13; 페이지 95-107); WO200212341 (청구항 68; 도 7); WO200213847 (페이지 71-74); WO200214503 (페이지 114-117); WO200153463 (청구항 2; 페이지 41-46); WO200141787 (페이지 15); WO200044899 (청구항 52; 도 7); WO200020579 (청구항 3; 도 2); US5869445 (청구항 3; Col 31-38); WO9630514 (청구항 2; 페이지 56-61); EP1439393 (청구항 7); WO2004043361 (청구항 7); WO2004022709; WO200100244 (실시예 3; 도 4); 수탁: P04626; EMBL; M11767; AAA35808.1. EMBL; M11761; AAA35808.1
(18) NCA (CEACAM6, 유전자은행 수탁 번호 M18728); Barnett T., 등 Genomics 3, 59-66, 1988; Tawaragi Y., 등 Biochem. Biophys. Res. Commun. 150, 89-96, 1988; Strausberg R.L., 등 Proc. Natl. Acad. Sci. U.S.A. 99:16899-16903, 2002; WO2004063709; EP1439393 (청구항 7); WO2004044178 (실시예 4); WO2004031238; WO2003042661 (청구항 12); WO200278524 (실시예 2); WO200286443 (청구항 27; 페이지 427); WO200260317 (청구항 2); 수탁: P40199; Q14920; EMBL; M29541; AAA59915.1. EMBL; M18728
(19) MDP (DPEP1, 유전자은행 수탁 번호 BC017023); Proc. Natl. Acad. Sci. U.S.A. 99 (26):16899-16903 (2002)); WO2003016475 (청구항 1); WO200264798 (청구항 33; 페이지 85-87); JP05003790 (도 6-8); WO9946284 (도 9); 교차-참조문헌: MIM:179780; AAH17023.1; BC017023_1
(20) IL20Ra (IL20Ra, ZCYTOR7, 유전자은행 수탁 번호 AF184971); Clark H.F., 등 Genome Res. 13, 2265-2270, 2003; Mungall A.J., 등 Nature 425, 805-811, 2003; Blumberg H., 등 Cell 104, 9-19, 2001; Dumoutier L., 등 J. Immunol. 167, 3545-3549, 2001; Parrish-Novak J., 등 J. Biol. Chem. 277, 47517-47523, 2002; Pletnev S., 등 (2003) Biochemistry 42:12617-12624; Sheikh F., 등 (2004) J. Immunol. 172, 2006-2010; EP1394274 (실시예 11); US2004005320 (실시예 5); WO2003029262 (페이지 74-75); WO2003002717 (청구항 2; 페이지 63); WO200222153 (페이지 45-47); US2002042366 (페이지 20-21); WO200146261 (페이지 57-59); WO200146232 (페이지 63-65); WO9837193 (청구항 1; 페이지 55-59); 수탁: Q9UHF4; Q6UWA9; Q96SH8; EMBL; AF184971; AAF01320.1.
(21) 브레비칸 (BCAN, BEHAB, 유전자은행 수탁 번호 AF229053); Gary S.C., 등 Gene 256, 139-147, 2000; Clark H.F., 등 Genome Res. 13, 2265-2270, 2003; Strausberg R.L., 등 Proc. Natl. Acad. Sci. U.S.A. 99, 16899-16903, 2002; US2003186372 (청구항 11); US2003186373 (청구항 11); US2003119131 (청구항 1; 도 52); US2003119122 (청구항 1; 도 52); US2003119126 (청구항 1); US2003119121 (청구항 1; 도 52); US2003119129 (청구항 1); US2003119130 (청구항 1); US2003119128 (청구항 1; 도 52); US2003119125 (청구항 1); WO2003016475 (청구항 1); WO200202634 (청구항 1)
(22) EphB2R (DRT, ERK, Hek5, EPHT3, Tyro5, 유전자은행 수탁 번호 NM_004442); Chan,J. 및 Watt, V.M., Oncogene 6 (6), 1057-1061 (1991) Oncogene 10 (5):897-905 (1995), Annu. Rev. Neurosci. 21:309-345 (1998), Int. Rev. Cytol. 196:177-244 (2000)); WO2003042661 (청구항 12); WO200053216 (청구항 1; 페이지 41); WO2004065576 (청구항 1); WO2004020583 (청구항 9); WO2003004529 (페이지 128-132); WO200053216 (청구항 1; 페이지 42); 교차-참조문헌: MIM:600997; NP_004433.2; NM_004442_1
(23) ASLG659 (B7h, 유전자은행 수탁 번호 AX092328); US20040101899 (청구항 2); WO2003104399 (청구항 11); WO2004000221 (도 3); US2003165504 (청구항 1); US2003124140 (실시예 2); US2003065143 (도 60); WO2002102235 (청구항 13; 페이지 299); US2003091580 (실시예 2); WO200210187 (청구항 6; 도 10); WO200194641 (청구항 12; 도 7b); WO200202624 (청구항 13; 도 1A-1B); US2002034749 (청구항 54; 페이지 45-46); WO200206317 (실시예 2; 페이지 320-321, 청구항 34; 페이지 321-322); WO200271928 (페이지 468-469); WO200202587 (실시예 1; 도 1); WO200140269 (실시예 3; 페이지 190-192); WO200036107 (실시예 2; 페이지 205-207); WO2004053079 (청구항 12); WO2003004989 (청구항 1); WO200271928 (페이지 233-234, 452-453); WO 0116318
(24) PSCA (전립선 줄기세포 항원 전구체, 유전자은행 수탁 번호 AJ297436); Reiter R.E., 등 Proc. Natl. Acad. Sci. U.S.A. 95, 1735-1740, 1998; Gu Z., 등 Oncogene 19, 1288-1296, 2000; Biochem. Biophys. Res. Commun. (2000) 275(3):783-788; WO2004022709; EP1394274 (실시예 11); US2004018553 (청구항 17); WO2003008537 (청구항 1); WO200281646 (청구항 1; 페이지 164); WO2003003906 (청구항 10; 페이지 288); WO200140309 (실시예 1; 도 17); US2001055751 (실시예 1; 도 1b); WO200032752 (청구항 18; 도 1); WO9851805 (청구항 17; 페이지 97); WO9851824 (청구항 10; 페이지 94); WO9840403 (청구항 2; 도 1B); 수탁: O43653; EMBL; AF043498; AAC39607.1
(25) GEDA (유전자은행 수탁 번호 AY260763); AAP14954 지방종 HMGIC 융합-파트너-유사 단백질 /pid=AAP14954.1 - 호모사피엔스 (인간); WO2003054152 (청구항 20); WO2003000842 (청구항 1); WO2003023013 (실시예 3, 청구항 20); US2003194704 (청구항 45); 교차-참조문헌: GI:30102449; AAP14954.1; AY260763_1
(26) BAFF-R (B 세포-활성 인자 수용체, BLyS 수용체 3, BR3, 유전자은행 수탁 번호 AF116456); BAFF 수용체 /pid=NP_443177.1 - 호모사피엔스: Thompson, J.S., 등 Science 293 (5537), 2108-2111 (2001); WO2004058309; WO2004011611; WO2003045422 (실시예; 페이지 32-33); WO2003014294 (청구항 35; 도 6B); WO2003035846 (청구항 70; 페이지 615-616); WO200294852 (Col 136-137); WO200238766 (청구항 3; 페이지 133); WO200224909 (실시예 3; 도 3); 교차-참조문헌: MIM:606269; NP_443177.1; NM_052945_1; AF132600
(27) CD22 (B-세포 수용체 CD22-B 동형체, BL-CAM, Lyb-8, Lyb8, SIGLEC(싱글렉)-2, FLJ22814, 유전자은행 수탁 번호 AK026467); Wilson 등 (1991) J. Exp. Med. 173:137-146; WO2003072036 (청구항 1; 도 1); 교차-참조문헌: MIM:107266; NP_001762.1; NM_001771_1
(28) CD79a (CD79A, CD79α, 면역글로불린-관련 알파, Ig 베타 (CD79B)와 공유적으로 상호작용하고 Ig M 분자를 갖는 표면상에 복합체를 형성하고, B-세포 분화에 관여된 신호를 전달하는 B 세포 특이적 단백질), pI: 4.84, MW: 25028 TM: 2 [P] 유전자 염색체: 19q13.2, 유전자은행 수탁 번호 NP_001774.10); WO2003088808, US20030228319; WO2003062401 (청구항 9); US2002150573 (청구항 4, 페이지 13-14); WO9958658 (청구항 13, 도 16); WO9207574 (도 1); US5644033; Ha 등 (1992) J. Immunol. 148(5):1526-1531; Mueller 등 (1992) Eur. J. Biochem. 22:1621-1625; Hashimoto 등 (1994) Immunogenetics 40(4):287-295; Preud'homme 등 (1992) Clin. Exp. Immunol. 90(1):141-146; Yu 등 (1992) J. Immunol. 148(2) 633-637; Sakaguchi 등 (1988) EMBO J. 7(11):3457-3464
(29) CXCR5 (버킷 림프종 수용체 1, CXCL13 케모카인에 의해 활성화되고, 림프구 이동 및 체액성 방어에 작용하고, HIV-2 감염 및 아마도 AIDS, 림프종, 골수종, 및 백혈병의 발병에 중요한 역할을 하는 G 단백질-커플링 수용체); 372 aa, pI: 8.54 MW: 41959 TM: 7 [P] 유전자 염색체: 11q23.3, 유전자은행 수탁 번호 NP_001707.1); WO2004040000; WO2004015426; US2003105292 (실시예 2); US6555339 (실시예 2); WO200261087 (도 1); WO200157188 (청구항 20, 페이지 269); WO200172830 (페이지 12-13); WO200022129 (실시예 1, 페이지 152-153, 실시예 2, 페이지 254-256); WO9928468 (청구항 1, 페이지 38); US5440021 (실시예 2, col 49-52); WO9428931 (페이지 56-58); WO9217497 (청구항 7, 도 5); Dobner 등 (1992) Eur. J. Immunol. 22:2795-2799; Barella 등 (1995) Biochem. J. 309:773-779
(30) HLA-DOB (펩티드를 결합하고 그리고 CD4+ T 림프구에 이들을 제공하는 MHC 부류 II 분자의 베타 하위단위(Ia 항원)); 273 aa, pI: 6.56, MW: 30820.TM: 1 [P] 유전자 염색체: 6p21.3, 유전자은행 수탁 번호 NP_002111.1); Tonnelle 등 (1985) EMBO J. 4(11):2839-2847; Jonsson 등 (1989) Immunogenetics 29(6):411-413; Beck 등 (1992) J. Mol. Biol. 228:433-441; Strausberg 등 (2002) Proc. Natl. Acad. Sci USA 99:16899-16903; Servenius 등 (1987) J. Biol. Chem. 262:8759-8766; Beck 등 (1996) J. Mol. Biol. 255:1-13; Naruse 등 (2002) Tissue Antigens 59:512-519; WO9958658 (청구항 13, 도 15); US6153408 (Col 35-38); US5976551 (col 168-170); US6011146 (col 145-146); Kasahara 등 (1989) Immunogenetics 30(1):66-68; Larhammar 등 (1985) J. Biol. Chem. 260(26):14111-14119
(31) P2X5 (세포외 ATP에 의해 게이팅된 이온 통로인, 퓨린성 수용체 P2X 리간드-관문 이온 채널 5는 시냅스 전달 및 신경발생에 관여될 수 있고, 결핍은 특발성 배뇨근 불안정의 병리생리학에 기여할 수 있음); 422 aa), pI: 7.63, MW: 47206 TM: 1 [P] 유전자 염색체: 17p13.3, 유전자은행 수탁 번호 NP_002552.2); Le 등 (1997) FEBS Lett. 418(1-2):195-199; WO2004047749; WO2003072035 (청구항 10); Touchman 등 (2000) Genome Res. 10:165-173; WO200222660 (청구항 20); WO2003093444 (청구항 1); WO2003087768 (청구항 1); WO2003029277 (페이지 82)
(32) CD72 (B-세포 분화 항원 CD72, Lyb-2); 359 aa, pI: 8.66, MW: 40225, TM: 1 [P] 유전자 염색체: 9p13.3, 유전자은행 수탁 번호 NP_001773.1); WO2004042346 (청구항 65); WO2003026493 (페이지 51-52, 57-58); WO200075655 (페이지 105-106); Von Hoegen 등 (1990) J. Immunol. 144(12):4870-4877; Strausberg 등 (2002) Proc. Natl. Acad. Sci USA 99:16899-16903.
(33) LY64 (류신 풍부 반복체 (LRR) 패밀리의 유형 I 막 단백질인, 림프구 항원 64 (RP105)는 B-세포 활성화 및 세포자멸사를 조절하고, 기능의 손실은 전신 홍반성 낭창이 있는 환자에서 증가된 질환 활성과 관련됨); 661 aa, pI: 6.20, MW: 74147 TM: 1 [P] 유전자 염색체: 5q12, 유전자은행 수탁 번호 NP_005573.1); US2002193567; WO9707198 (청구항 11, 페이지 39-42); Miura 등 (1996) Genomics 38(3):299-304; Miura 등 (1998) Blood 92:2815-2822; WO2003083047; WO9744452 (청구항 8, 페이지 57-61); WO200012130 (페이지 24-26)
(34) FcRH1 (C2 유형 Ig-유사 및 ITAM 도메인을 함유하는 면역글로불린 Fc 도메인에 대한 추정 수용체인, Fc 수용체-유사 단백질 1은 B-림프구 분화에서 역할을 할 수 있음); 429 aa, pI: 5.28, MW: 46925 TM: 1 [P] 유전자 염색체: 1q21-1q22, 유전자은행 수탁 번호 NP_443170.1); WO2003077836; WO200138490 (청구항 6, 도 18E-1-18-E-2); Davis 등 (2001) Proc. Natl. Acad. Sci USA 98(17):9772-9777; WO2003089624 (청구항 8); EP1347046 (청구항 1); WO2003089624 (청구항 7)
(35) IRTA2 (관련 면역글로불린 슈퍼패밀리 수용체 전좌 2, B 세포 전개 및 림프종기원에서 가능한 역할을 갖는 추정 면역수용체; 전좌에 의한 유전자의 조절상실이 일부 B 세포 악성종양에서 일어남); 977 aa, pI: 6.88, MW: 106468, TM: 1 [P] 유전자 염색체: 1q21, 유전자은행 수탁 번호 인간:AF343662, AF343663, AF343664, AF343665, AF369794, AF397453, AK090423, AK090475, AL834187, AY358085; 마우스:AK089756, AY158090, AY506558; NP_112571.1; WO2003024392 (청구항 2, 도 97); Nakayama 등 (2000) Biochem. Biophys. Res. Commun. 277(1):124-127; WO2003077836; WO200138490 (청구항 3, 도 18B-1-18B-2)
(36) TENB2 (TMEFF2, 토모레굴린, TPEF, HPP1, TR, 추정 막투과성 프로테오글리칸, 성장 인자 및 폴리스타틴의 EGF/헤레굴린 패밀리에 관련됨); 374 aa, NCBI 수탁: AAD55776, AAF91397, AAG49451, NCBI RefSeq: NP_057276; NCBI 유전자: 23671; OMIM: 605734; SwissProt Q9UIK5; 유전자은행 수탁 번호 AF179274; AY358907, CAF85723, CQ782436; WO2004074320; JP2004113151; WO2003042661; WO2003009814; EP1295944 (페이지 69-70); WO200230268 (페이지 329); WO200190304; US2004249130; US2004022727; WO2004063355; US2004197325; US2003232350; US2004005563; US2003124579; Horie 등 (2000) Genomics 67:146-152; Uchida 등 (1999) Biochem. Biophys. Res. Commun. 266:593-602; Liang 등 (2000) Cancer Res. 60:4907-12; Glynne-Jones 등 (2001) Int J Cancer. Oct 15; 94(2):178-84.(37) PMEL17 (은 동족체; SILV; D12S53E; PMEL17; SI; SIL); ME20; gp100) BC001414; BT007202; M32295; M77348; NM_006928; McGlinchey, R.P. 등 (2009) Proc. Natl. Acad. Sci. U.S.A. 106 (33), 13731-13736; Kummer, M.P. 등 (2009) J. Biol. Chem. 284 (4), 2296-2306;
(38) TMEFF1 (EGF-유사 및 2개의 폴리스타틴-유사 도메인 1을 갖는 막투과성 단백질; 토모레굴린-1); H7365; C9orf2; C9ORF2; U19878; X83961; NM_080655; NM_003692; Harms, P.W. (2003) Genes Dev. 17 (21), 2624-2629; Gery, S. 등 (2003) Oncogene 22 (18):2723-2727;
(39) GDNF-Ra1 (GDNF 패밀리 수용체 알파 1; GFRA1; GDNFR; GDNFRA; RETL1; TRNR1; RET1L; GDNFR-알파1; GFR-알파-1); U95847; BC014962; NM_145793 NM_005264; Kim, M.H. 등 (2009) Mol. Cell. Biol. 29 (8), 2264-2277; Treanor, J.J. 등 (1996) Nature 382 (6586):80-83;
(40) Ly6E (림프구 항원 6 복합체, 유전자좌 E; Ly67,RIG-E,SCA-2,TSA-1); NP_002337.1; NM_002346.2; de Nooij-van Dalen, A.G. 등 (2003) Int. J. Cancer 103 (6), 768-774; Zammit, D.J. 등 (2002) Mol. Cell. Biol. 22 (3):946-952;
(41) TMEM46 (시사(shisa) 동족체 2 (제노푸스 라에비스); 시사2); NP_001007539.1; NM_001007538.1; Furushima, K. 등 (2007) Dev. Biol. 306 (2), 480-492; Clark, H.F. 등 (2003) Genome Res. 13 (10):2265-2270;
(42) Ly6G6D (림프구 항원 6 복합체, 유전자좌 G6D; Ly6-D, MEGT1); NP_067079.2; NM_021246.2; Mallya, M. 등 (2002) Genomics 80 (1):113-123; Ribas, G. 등 (1999) J. Immunol. 163 (1):278-287;
(43) LGR5 (류신-풍부 반복-함유 G 단백질-커플링 수용체 5; GPR49, GPR67); NP_003658.1; NM_003667.2; Salanti, G. 등 (2009) Am. J. Epidemiol. 170 (5):537-545; Yamamoto, Y. 등 (2003) Hepatology 37 (3):528-533;
(44) RET (렛(ret) 원종양유전자; MEN2A; HSCR1; MEN2B; MTC1; PTC; CDHF12; Hs.168114; RET51; RET-ELE1); NP_066124.1; NM_020975.4; Tsukamoto, H. 등 (2009) Cancer Sci. 100 (10):1895-1901; Narita, N. 등 (2009) Oncogene 28 (34):3058-3068;
(45) LY6K (림프구 항원 6 복합체, 유전자좌 K; LY6K; HSJ001348; FLJ35226); NP_059997.3; NM_017527.3; Ishikawa, N. 등 (2007) Cancer Res. 67 (24):11601-11611; de Nooij-van Dalen, A.G. 등 (2003) Int. J. Cancer 103 (6):768-774;
(46) GPR19 (G 단백질-커플링 수용체 19; Mm.4787); NP_006134.1; NM_006143.2; Montpetit, A. 및 Sinnett, D. (1999) Hum. Genet. 105 (1-2):162-164; O'Dowd, B.F. 등 (1996) FEBS Lett. 394 (3):325-329;
(47) GPR54 (KISS1 수용체; KISS1R; GPR54; HOT7T175; AXOR12); NP_115940.2; NM_032551.4; Navenot, J.M. 등 (2009) Mol. Pharmacol. 75 (6):1300-1306; Hata, K. 등 (2009) Anticancer Res. 29 (2):617-623;
(48) ASPHD1 (아스파르테이트 베타-하이드록실라제 도메인 함유 1; LOC253982); NP_859069.2; NM_181718.3; Gerhard, D.S. 등 (2004) Genome Res. 14 (10B):2121-2127;
(49) 티로시나제 (TYR; OCAIA; OCA1A; 티로시나제; SHEP3); NP_000363.1; NM_000372.4; Bishop, D.T. 등 (2009) Nat. Genet. 41 (8):920-925; Nan, H. 등 (2009) Int. J. Cancer 125 (4):909-917;
(50) TMEM118 (링 핑거 단백질, 막투과성 2; RNFT2; FLJ14627); NP_001103373.1; NM_001109903.1; Clark, H.F. 등 (2003) Genome Res. 13 (10):2265-2270; Scherer, S.E. 등 (2006) Nature 440 (7082):346-351
(51) GPR172A (G 단백질-커플링 수용체 172A; GPCR41; FLJ11856; D15Ertd747e); NP_078807.1; NM_024531.3; Ericsson, T.A. 등 (2003) Proc. Natl. Acad. Sci. U.S.A. 100 (11):6759-6764; Takeda, S. 등 (2002) FEBS Lett. 520 (1-3):97-101.
(52) 시알산 결합, 면역글로블린-유사 렉틴 패밀리의 구성원인, CD33은 67-kDa의 당화된 막투과성 단백질이다. CD33은 수임된 골수단구 및 적혈구 선조 세포에 부가하여 대부분의 골수 및 단구성 백혈병 세포 상에서 발현된다. 이것은 가장 초기의 만능 줄기 세포, 성숙한 과립구, 림프양 세포, 또는 비조혈 세포에서 볼 수 없다 (Sabbath 등, (1985) J. Clin . Invest. 75:756-56; Andrews 등, (1986) Blood 68:1030-5). CD33은 그것의 세포질 꼬리 상에 2개의 티로신 잔기를 함유하며, 이들 각각은 많은 저해된 수용체에서 보여진 면역수용체 티로신-기반 저해된 모티프 (ITIM)에 유사한 소수성 잔기가 뒤따른다.
(53) CLL-1 (CLEC12A, MICL, 및 DCAL2)은, C-유형 렉틴/C-유형 렉틴-유사 도메인 (CTL/CTLD) 슈퍼패밀리의 구성원을 암호화한다. 이 패밀리의 구성원은 공통의 단백질 폴딩을 공유하고 다양한 기능, 예컨대 세포 부착, 세포-세포 신호전달, 당단백질 턴오버, 및 염증과 면역 반응에서 역할을 가진다. 이 유전자에 의해 인암호화된 단백질은 과립구 및 단핵구 기능의 음성 조절물질이다. 이 유전자의 몇 개의 대안적으로 스플라이싱된 전사 변이체가 기재되었지만, 이들 변이체 중 일부의 전장 특성은 결정되지 않았다. 이 유전자는 염색체 12p13 상의 자연 살해 유전자 복합체 영역에서 다른 CTL/CTLD 슈퍼패밀리 구성원에 밀접하게 연결된다 (Drickamer K (1999) Curr. Opin. Struct. Biol.9 (5):585-90; van Rhenen A, 등, (2007) Blood 110 (7):2659-66; Chen CH, 등 (2006) Blood 107 (4):1459-67; Marshall AS, 등 (2006) Eur. J. Immunol.36 (8):2159-69; Bakker AB, 등 (2005) Cancer Res.64 (22):8443-50; Marshall AS, , 등 (2004) J. Biol. Chem.279 (15):14792-802). CLL-1은 단일 C-유형 렉틴-유사 도메인(칼슘 또는 당의 어느 하나를 결합할 것으로 예상되지 않음), 줄기 영역, 막투과성 도메인 및 ITIM 모티프를 함유하는 짧은 세포질 꼬리를 포함하는 유형 II 막투과성 수용체인 것으로 밝혀졌다.
모 항체는 또한 알부민-결합 펩티드 (ABP) 서열을 포함하는 융합 단백질일 수 있다 (Dennis 등 (2002) "단백질의 약동학을 개선하기 위한 일반적인 전략으로서 알부민 결합" J Biol Chem. 277:35035-35043; WO 01/45746). 본 발명의 항체는 다음에 의해 교시된 ABP 서열을 갖는 융합 단백질을 포함한다: (i) Dennis 등 (2002) J Biol Chem. 277:35035-35043, 페이지 35038 표 III 및 IV; (ii) US 20040001827에서 [0076]; 및 (iii) WO 01/45746에서 페이지 12-13, 그리고 이들 모두는 본 명세서에 참고로 편입된다.
돌연변이생성
개시 폴리펩티드의 아미노산 서열 변이체를 암호화하는 DNA는 본 분야에 공지된 다양한 방법에 의해 제조된다. 이들 방법은, 이로써 제한되는 것은 아니지만, 폴리펩티드를 암호화하는 앞서 제조된 DNA의 부위-지정 (또는 올리고뉴클레오티드-매개된) 돌연변이 유발, PCR 돌연변이 유발, 및 카세트 돌연변이 유발을 포함한다. 재조합 항체의 변이체는 또한 제한효소 단편 가공에 의해 또는 합성 올리고뉴클레오티드에 의한 중복 확장 PCR에 의해 작제할 수 있다. 돌연변이 프라이머는 시스테인 코돈 치환(들)을 암호화한다. 표준 돌연변이 유발 기술은 이러한 돌연변이체 시스테인 가공된 항체를 암호화하는 DNA를 생성하기 위하여 이용될 수 있다. 일반적인 지침은 문헌[Sambrook et al Molecular Cloning, A Laboratory Manual, Cold Spring Harbor Laboratory Press, Cold Spring Harbor, N.Y., 1989; and Ausubel et al Current Protocols in Molecular Biology, Greene Publishing and Wiley-Interscience, New York, N.Y., 1993]에서 확인할 수 있다.
부위-지정 돌연변이 유발은 치환 변이체, 즉 변이체 단백질을 제조하는 한 방법이다. 기술이 본 분야에 잘 공지되어 있다 (참조예: Carter (1985) et al Nucleic Acids Res. 13:4431-4443; Ho et al (1989) Gene (Amst.) 77:51-59; and Kunkel et al (1987) Proc. Natl. Acad. Sci. USA 82:488). 간략하게, DNA의 부위-지정 돌연변이 유발을 수행함에 있어서, 개시 DNA는 먼저 원하는 돌연변이를 암호화하는 올리고뉴클레오티드를 상기 개시 DNA의 단일 가닥에 하이브리드화시켜 변화시킨다. 하이브리드화 후, DNA 폴리머라제는 프라이머로서 하이브리드화된 올리고뉴클레오티드를 사용하고, 주형으로서 개시 DNA의 단일 가닥을 사용하여 전체 제2 가닥을 합성하기 위해 사용된다. 이에 따라, 원하는 돌연변이를 암호화하는 올리고뉴클레오티드가 생성된 이중-가닥 DNA에 포함된다. 부위-지정 돌연변이 유발은 발현 플라스미드에서 돌연변이 유발될 단백질을 발현하는 유전자 내에서 수행할 수 있고, 생성된 플라스미드는 원하는 시스테인 치환 돌연변이의 도입을 확인하기 위하여 서열화할 수 있다 (Liu et al (1998) J. Biol. Chem. 273:20252-20260). 상용하는 것, 예를 들어, QuikChange® 다중 부위-지정 돌연변이 유발 키트 (Stratagene, La Jolla, CA)를 포함한, 프로토콜 및 포맷의 부위-지정 .
PCR 돌연변이 유발도 또한 개시 폴리펩티드의 아미노산 서열 변이체를 제조하는데 적합하다 [참조: Higuchi, (1990) in PCR Protocols, pp.177-183, Academic Press; Ito et al (1991) Gene 102:67-70; Bernhard et al (1994) Bioconjugate Chem. 5:126-132; and Vallette et al (1989) Nuc. Acids Res. 17:723-733]. 간략하게, 소량의 주형 DNA가 PCR에서 개시 물질로서 사용된 경우에, 주형 DNA의 상응하는 영역과 서열이 다소 상이한 프라이머는, 단지 프라이머가 주형과 상이한 위치에서만 주형 서열과 상이한 비교적 다량의 특정 DNA 단편을 생성하기 위해 사용될 수 있다.
변이체를 제조하는 다른 방법, 카세트 돌연변이 유발은 문헌 (Wells et al (1985) Gene 34:315-323)에 기재된 기술을 기반으로 한다. 개시 물질은 돌연변이될 개시 폴리펩티드 DNA를 포함하는 플라스미드 (또는 다른 벡터)이다. 돌연변이될 개시 DNA의 코돈(들)이 확인된다. 확인된 돌연변이 부위(들)의 각 면에 독특한 제한 엔도뉴클레아제 부위가 존재해야한 한다. 이러한 제한 부위가 존재하지 않으면, 그들은 개시 폴리펩티드 DNA의 적절한 위치에 그들을 도입시키기 위한 상기 기재한 올리고뉴클레오티드-매개된 돌연변이 유발 방법을 사용하여 생성할 수 없다. 플라스미드 DNA는 그들을 선형화하기 위해 이들 부위에서 절단된다. 제한 부위 사이에서 DNA 서열을 암호화하지만 원하는 돌연변이(들)를 함유하는 이중-가닥 올리고뉴클레오티드는 표준 방법을 사용하여 합성되며, 이때 두 가닥의 올리고뉴클레오티드는 따로 합성된 다음, 표준 기술을 사용하여 함께 하이브리드화된다. 올리고뉴클레오티드는 포스포르아미디트 합성법에 의해 제조된다 (US 4415732; US 4458066; Beaucage, S. and Iyer, R. (1992) "Advances in the synthesis of oligonucleotides by the phosphoramidite approach", Tetrahedron 48:2223-2311). 이러한 이중-가닥 올리고뉴클레오티드는 카세트로서 불리운다. 이러한 카세트는 선형화된 플라스미드의 말단과 적합성인 5' 및 3' 말단을 갖도록 설계되어, 그것이 직접 플라스미드에 결합될 수 있도록 한다. 이 플라스미드는 이제 돌연변이된 DNA 서열을 함유한다. 암호화된 시스테인 치환을 함유하는 돌연변이체 DNA는 DNA 서열화에 의해 확인할 수 있다.
단일 돌연변이는 또한 PCR 기반 돌연변이 유발에 의해 주형으로서 이중 가닥 플라스미드 DNA를 사용하여 올리고뉴클레오티드 지정 돌연변이 유발에 의해 생성된다 (Sambrook and Russel, (2001) Molecular Cloning: A Laboratory Manual, 3rd edition; Zoller et al (1983) Methods Enzymol. 100:468-500; Zoller, M.J. and Smith, M. (1982) Nucl. Acids Res. 10:6487-6500).
본 발명에서, M13 파지 상에 디스플레이된 hu4D5 (Gerstner et al (2002) "Sequence Plasticity In The Antigen-Binding Site Of A Therapeutic Anti-HER2 Antibody", J Mol Biol. 321:851-62)가 모델 시스템으로써 실험을 위해 사용되었다. 시스테인 돌연변이가 hu4D5-파지, hu4D5, 및 ABP-hu4D5 작제물에 도입되었다. hu4D5- THIOMABTM 항체-파지 preps는 앞서 기재된 바와 같은 폴리에틸렌 글리콜(PEG) 침전법을 사용하여 수행하였다 (Lowman, Henry B. (1998) Methods in Molecular Biology (Totowa, New Jersey) 87 (Combinatorial 펩티드 Library Protocols) 249-264).
PHESELECTOR 분석법
PHESELECTOR (반응성 티올의 선택을 위한 파지 ELISA) 분석법은 ELISA 파지 포맷에서 항체중 반응성 시스테인 그룹의 검출을 허용한다 (참조: 미국 특허 번호 7,521,541 및 미국 특허공보 번호 20110301334, 이들은 그들의 전문이 참조로 포함된다). 특히, PHESESLECTOR 분석법은 웰 표면에 관심있는 단백질 (예: 항체)을 코팅한 다음, 흡광도 검출과 함께 파지 입자 이어서 HRP 표지된 2차 항체를 배양하는 과정을 포함한다. 파지 상에 디스플레이된 돌연변이체 단백질은 신속하고, 강한 고속 방식으로 스크리닝할 수 있다. 시스테인 가공된 항체의 라이브러리가 제조되며, 항체 또는 다른 단백질의 랜덤 단백질-파지 라이브러리로부터 유리 Cys 혼입의 적절히 반응성인 부위를 확인하기 위하여 동일한 접근법을 사용하여 결합 선택시킬 수 있다. 이 기술은 파지 상에 디스플레이된 시스테인 돌연변이체 단백질과 또한 티올-반응성인 친화성 시약 또는 리포터 그룹과 반응시킴을 포함한다.
특정 구현예에서, PHESELECTOR 분석법은 하기의 단계를 포함한다: 1) 소 혈청 알부민 (BSA), 표적 단백질 (예: erbB2 세포외 도메인 (HER2))의 일부 또는 전체, 및 스트렙타비딘 (100 ㎕의 2 ㎍/ml)을 Maxisorp 96 웰 플레이트에 별개로 코팅시키고; 2) 0.5% Tween-20 (PBS중)으로 차단 후, 비오티닐화 및 비-비오티닐화 THIOMABTM 항체-파지 (2x1010 파지 입자)를 실온에서 1시간 동안 배양시키고 (예를 들어, 표적 단백질이 erbB2 세포외 도메인(HER2)에 이어서, hu4D5- THIOMABTM 항체-파지라면); 3) 파지와 배양시킨 다음, 서양고추냉이 퍼옥시다제 (HRP) 표지된 2차 항체 (항-M13 파지 코팅 단백질, pVIII 단백질 항체)와 배양시키고; 4) 표준 HRP 반응을 수행하고, 흡광도를 450 nm에서 측정하며; 5) 티올 반응성은 스트렙타비딘에 대한 OD450/표적 단백질 (예: HER2))에 대한 OD450 사이의 비를 계산하여 측정한다 (예를 들어, 1의 티올 반응성 값이 시스테인 티올의 완전한 비오티닐화를 나타내도록).
단백질 발현 및 정제
시스테인 가공된 항체를 암호화하는 DNA는 통상적인 방법을 사용하여 용이하게 단리시키고 서열화한다 (예를 들어, 특히 쥐 항체의 중쇄 및 경쇄를 암호화하는 유전자에 결합될 수 있는 올리고뉴클레오티드 프로브를 사용함으로써). 하이브리도마 세포는 이러한 DNA의 공급원으로서 사용된다. 단리되면, DNA는 발현 벡터에 넣은 다음, 재조합 숙주 세포에서 모노클로날 항체의 합성을 수득하기 위하여, 항체 단백질을 달리 생성하지 않는, 숙주 세포, 예를 들어, 이. 콜라이(E. coli) 세포, 원숭이 COS 세포, 차이니즈 햄스터 난소 (CHO) 세포, HEK293T 세포, 또는 다른 포유동물 숙주 세포, 예를 들어, 골수종 세포 (US 5807715; US 2005/0048572; US 2004/0229310)로 형질감염시킨다. 대부분의 경우에, 시스테인 가공된 항체의 수율은 야생형 항체와 유사했다. 항체를 암호화하는 DNA의 세균내 재조합 발현에 대한 검토 기사는 [Skerra et al (1993) Curr. Opinion in Immunol. 5:256-262 및 Pluckthun (1992) Immunol. Revs. 130:151-188]을 포함한다.
설계 및 선택 후, 시스테인 가공된 항체, 예를 들어, 상당히 반응성인 쌍을 이루지 않은 Cys 잔기를 갖는 THIOMABTM 항체는 다음에 의해 제조할 수 있다: (i) 세균, 예를 들어, 이. 콜라이 시스템 또는 포유동물 세포 배양 시스템 (WO 01/00245), 예를 들어, 차이니즈 햄스터 난소 세포 (CHO) 또는 HEK293 세포 (예: HEK293T 세포)에서 발현; 및 (ii) 통상적인 단백질 정제 기술을 사용하여 정제 (Lowman et al (1991) J. Biol. Chem. 266(17):10982-10988). 본 발명의 특정 구현예에서, THIOMABTM 항체는 포유동물 세포 발현 시스템에서 발현되었다. 특정 구현예에서, 포유동물 세포 발현 시스템은 HEK293T 세포이다.
THIOMABTM 항체는 항체 내에 디설파이드 결합을 형성하는 본래의 시스테인 잔기를 포함하는 전장 항체이다. 따라서, 이들 본래의 시스테인 잔기는 약물-말레이미드와 콘주게이트시키기 위한 어떠한 반응성 티올 그룹도 갖지 않는다 (환원제로 처리되지 않으면). 이에 따라, 새로이 가공된 Cys 잔기는 쌍을 이루지 않은 채로 남을 수 있고, 친전자성 링커 시약 또는 약물-링커 중간체 (예: 약물-말레이미드)와 반응, 즉 콘주게이트될 수 있다.
중쇄 및 경쇄의 가공된 Cys 잔기의 구조 위치는 순차적 넘버링 시스템에 따라 넘버링된다. 이러한 순차적 넘버링 시스템은 4D5 항체에 대한 카밧(Kabat) 넘버링 시스템과 상관관계가 있다 (Kabat et al., (1991) Sequences of Proteins of Immunological Interest, 5th Ed. Public Health Service, National Institutes of Health, Bethesda, MD). 카밧 넘버링 시스템을 사용하면, 실제 선형 아미노산 서열은 가변성 도메인의 FR 또는 CDR의 단축, 또는 이것으로의 삽입에 상응하는 소수 또는 부가의 아미노산을 함유할 수 있다. 시스테인 가공된 중쇄 변이체 부위 및 경쇄 변이체 부위는 도 1a 및 1b에서 순차적 넘버링 및 카밧 넘버링에 의해 확인된다.
티올 반응성은 또한 항체의 특정 도메인, 예를 들어, 경쇄 불변 도메인 (CL)및 중쇄 불변 도메인, CH1, CH2 및 CH3으로 보편화될 수 있다. 약 0.1, 0.2, 0.3, 0.4, 0.5, 0.6, 0.7, 0.8, 0.9, 및 0.95와 그 이상의 티올 반응성 값을 생성하는 시스테인 치환은 각각 IgG 하위부류: IgG1, IgG2, IgG3, IgG4, IgA, 및 IgA2를 포함하는, 무손상 항체: IgA, IgD, IgE, IgG, 및 IgM의 중쇄 불변 도메인 α, δ, ε, γ 및 μ에서 제조될 수 있다.
표지된 시스테인 가공 항체
본 발명의 시스테인 가공된 항체는 반응성 시스테인 티올 그룹을 통해 항체에 공유결합될 수 있는 어떤 표지 잔기와 콘주게이트될 수 있다 (Singh et al (2002) Anal. Biochem. 304:147-15; Harlow E. and Lane, D. (1999) Using antibodies: A Laboratory Manual, Cold Springs Harbor Laboratory Press, Cold Spring Harbor, NY; Lundblad R.L. (1991) Chemical Reagents for Protein Modification, 2nd ed. CRC Press, Boca Raton, FL). 결합된 표지는 (i) 검출가능한 신호를 제공하도록; (ii) 제1 또는 제2 표지에 의해 제공되는 검출가능한 신호를 변형하기 위해, 예를 들어, FRET (형광 공명 에너지 전이)를 제공하기 위해 제2 표지와 상호작용하도록; (iii) 항원 또는 리간드와의 상호작용을 안정화시키거나 이들과의 결합 친화성을 증가시키도록; (iv) 전하, 소수성, 형태 또는 다른 물리적 매개변수에 의해 이동성, 예를 들어, 전기영동 이동성 또는 세포-투과성에 영향을 주도록 또는 (v) 리간드 친화성, 항체/항원 결합 또는 이온성 착화합물화를 조절하기 위해 포획 모이어티를 제공하도록 작용할 수 있다.
표지된 시스테인 가공된 항체는, 예를 들어, 특정 세포, 조직 또는 혈청에서 관심있는 항원의 발현을 검출하기 위한 진단 분석에 유용할 수 있다. 진단 적용시, 항체는 통상적으로 검출가능한 모이어티로 표지될 것이다. 일반적으로 다음의 범주로 나뉠 수 있는 수많은 표지가 이용가능하다:
(a) 방사성 동위원소 (방사성 핵종), 예를 들어, 3H, 11C, 14C, 18F, 32P, 35S, 64Cu, 68Ga, 86Y, 89Zr, 99Tc, 111In, 123I, 124I, 125I, 131I, 133Xe, 177Lu, 211At, 또는 213Bi. 방사성 동위원소 표지된 항체는 수용체 표적 영상화 실험에 유용하다. 항체는 문헌 [Current Protocols in Immunology, (1991) Volumes 1 and 2, Coligen et al, Ed. Wiley-Interscience, New York, NY, Pubs.]에 기재된 기술을 사용하여, 시약이 항체의 가공된 시스테인 티올과 반응성인 경우, 방사성 동위원소 금속을 결합, 킬레이트화 또는 달리 착화합물화하는 리간드 시약으로 표지할 수 있다. 금속 이온과 착화합물화될 수 있는 킬레이트화 리간드는 DOTA, DOTP, DOTMA, DTPA 및 TETA를 포함한다 (Macrocyclics, Dallas, TX). 방사성 핵종은 본 발명의 항체-약물 콘주게이트와의 착화합물화를 통해 표적화될 수 있다 (Wu et al (2005) Nature Biotechnology 23(9):1137-1146). DOTA-말레이미드 시약은 시스테인 가공된 항체의 유리 시스테인 아미노산과 반응하여, 항체 상에 금속 착화합물화 리간드를 제공한다 (Lewis et al (1998) Bioconj. Chem. 9:72-86). 킬레이트화 링커 표지화 시약, 예를 들어, DOTA-NHS (1,4,7,10-테트라아자사이클로도데칸-1,4,7,10-테트라아세트산 모노(N-하이드록시석신이미드 에스테르)는 시판되고 있다 (Macrocyclics, Dallas, TX). 방사성 핵종 표지된 항체에 의한 수용체 표적 영상은 종양 조직에서 항체의 점진적 누적의 검출 및 정량화에 의한 경로 활성화의 마커를 제공할 수 있다 (Albert et al (1998) Bioorg. Med. Chem. Lett. 8:1207-1210).
영상 실험을 위한 항체 표지로서 적합한 금속-킬레이트 착화합물 (US 2010/0111856; US 5342606; US 5428155; US 5316757; US 5480990; US 5462725; US 5428139; US 5385893; US 5739294; US 5750660; US 5834456; Hnatowich et al (1983) J. Immunol. Methods 65:147-157; Meares et al (1984) Anal. Biochem. 142:68-78; Mirzadeh et al (1990) Bioconjugate Chem. 1:59-65; Meares et al (1990) J. Cancer1990, Suppl. 10:21-26; Izard et al (1992) Bioconjugate Chem. 3:346-350; Nikula et al (1995) Nucl. Med. Biol. 22:387-90; Camera et al (1993) Nucl. Med. Biol. 20:955-62; Kukis et al (1998) J. Nucl. Med. 39:2105-2110; Verel et al (2003) J. Nucl. Med. 44:1663-1670; Camera et al (1994) J. Nucl. Med. 21:640-646; Ruegg et al (1990) Cancer Res. 50:4221-4226; Verel et al (2003) J. Nucl. Med. 44:1663-1670; Lee et al (2001) Cancer Res. 61:4474-4482; Mitchell, et al (2003) J. Nucl. Med. 44:1105-1112; Kobayashi et al (1999) Bioconjugate Chem. 10:103-111; Miederer et al (2004) J. Nucl. Med. 45:129-137; DeNardo et al (1998) Clinical Cancer Research 4:2483-90; Blend et al (2003) Cancer Biotherapy & Radiopharmaceuticals 18:355-363; Nikula et al (1999) J. Nucl. Med. 40:166-76; Kobayashi et al (1998) J. Nucl. Med. 39:829-36; Mardirossian et al (1993) Nucl. Med. Biol. 20:65-74; Roselli et al (1999) Cancer Biotherapy & Radiopharmaceuticals, 14:209-20).
(b) 형광 표지, 예를 들어, 희토류 킬레이트 (유로퓸 킬레이트), FITC, 5-카복시플루오레신, 6-카복시 플루오레신을 포함한 플루오레신 타입; TAMRA를 포함한 로다민 타입; 단실; 리사민; 시아닌; 피코에리트린; 텍사스 레드; 및 이의 유사체. 형광 표지는, 예를 들어, 문헌[Current Protocols in Immunology, 상기]에 기재된 기술을 사용하여 항체에 콘주게이트시킬 수 있다. 형광 염료 및 형광 표지 시약은 Invitrogen/Molecular Probes (Eugene, OR) 및 Pierce Biotechnology, Inc. (Rockford, IL)로부터 시판중인 것들을 포함한다.
검출 표지, 예를 들어, 형광 염료 및 화학발광 염료 (Briggs et al (1997) "Synthesis of Functionalised Fluorescent Dyes and Their Coupling to Amines and 아미노 Acids," J. Chem. Soc., Perkin-Trans. 1:1051-1058)는 검출가능한 신호를 제공하고, 바람직하게는 하기 특성과 함께, 항체를 표지하기 위해 일반적으로 적용될 수 있다: (i) 표지된 항체는 낮은 백그라운드를 갖는 매우 높은 신호를 제공함으로써 소량의 항체가 세포-비함유 및 세포-기반 분석에서 모두 민감하게 검출될 수 있도록 해야하고; (ii) 표지된 항체는 광안정성이어서 형광 신호가 유의한 광 표백없이 관찰, 모니터 및 기록될 수 있어야 한다. 막 또는 세포 표면, 특히 살아있는 세포에 대한 표지 항체의 세포 표면 결합을 포함하는 적용을 위해, 표지는 바람직하게는 (iii) 효과적인 콘주게이트 농도 및 검출 민감성을 성취하기 위해 양호한 수용해도를 갖고, (iv) 세포의 정상적인 대사과정을 파괴하거나 조기 세포사를 유발하지 않도록 살아있는 세포에 대해 비독성이다.
(c) 다양한 효소-기질 표지가 이용가능하거나 기재되어 있다 (US 4275149). 효소는 일반적으로 다양한 기술을 사용하여 측정될 수 있는 발색성 기질의 화학적 변화를 촉매화한다. 예를 들어, 효소는 분광학적으로 측정될 수 있는 기질의 색 변화를 촉매화할 수 있다. 대안적으로, 효소는 기질의 형광 또는 화학발광을 변화시킬 수 있다. 형광 변화를 정량화하는 기술이 상기 기재되어 있다. 화학발광 기질은 화학반응에 의해 전자적으로 여기된 다음, (예를 들어, 화학발광 분석기를 사용하여) 측정될 수 있는 빛을 방출하거나 형광성 억셉터에 에너지를 기부할 수 있다. 효소적 표지의 예는 루시페라제 (예: 반딧불 루시페라제 및 세균성 루시페라제; 미국 특허 번호 4,737,456), 루시페린, 2,3-디하이드로프탈라진디온, 말레이트 데하이드로게나제, 우레아제, 퍼옥시다제 (예: 서양고추냉이 퍼옥시다제 (HRP)), 알칼리성 포스파타제 (AP), β-갈락토시다제, 글루코아밀라제, 리소자임, 사카라이드 옥시다제 (예: 글루코즈 옥시다제, 갈락토즈 옥시다제, 및 글루코즈-6-포스페이트 데하이드로게나제), 헤테로사이클릭 옥시다제 (예: 우리카제 및 크산틴 옥시다제), 락토퍼옥시다제 및 마이크로퍼옥시다제 등을 포함한다. 항체에 효소를 콘주게이트시키는 기술이 문헌 [O'Sullivan et al (1981) "Methods for the Preparation of Enzyme-Antibody Conjugates for use in Enzyme Immunoassay", in Methods in Enzym. (ed J. Langone & H. Van Vunakis), Academic Press, New York, 73:147-166]에 기재되어 있다.
효소-기질 조합의 예 (미국 특허 번호 4,275,149 및 4,318,980)는, 예를 들어, 다음을 포함한다:
(i) 기질로서 과산화수소와 서양고추냉이 퍼옥시다제 (HRP)[여기서, 과산화수소는 염료 전구체 (예: 오르토페닐렌 디아민 (OPD) 또는 3,3',5,5'-테트라메틸벤지딘 하이드로클로라이드 (TMB))를 산화시킨다];
(ii) 발색성 기질로서 파라-니트로페닐 포스페이트와 알칼리성 포스파타제 (AP); 및
(iii) 발색성 기질 (예: p-니트로페닐-β-D-갈락토시다제) 또는 플루오로겐성 기질 4-메틸움벨리페릴-β-D-갈락토시다제와 β-D-갈락토시다제 (β-D-Gal).
표지는 시스테인 가공된 항체와 직접 콘주게이트될 수 있다. 예를 들어, 항체는 비오틴과 콘주게이트될 수 있고, 상기 언급한 세 개의 광범위한 표지 범주중 어떤 것은 아비딘 또는 스트렙타비딘과, 또는 그 역으로 콘주게이트될 수 있다. 비오틴은 스트렙타비딘과 선택적으로 결합되고, 이에 따라 표지는 이러한 간접적 방식으로 항체와 콘주게이트될 수 있다. 대안적으로, 표지와 폴리펩티드 변이체의 간접적 콘주게이트을 성취하기 위하여, 폴리펩티드 변이체는 작은 합텐(예: 디곡신)과 콘주게이트되고, 상기 언급한 상이한 형태의 표지중 하나가 항-합텐 폴리펩티드 변이체 (예: 항-디곡신 항체)와 콘주게이트된다. 이에 따라, 표지와 폴리펩티드 변이체의 간접적 콘주게이트이 성취될 수 있다 (Hermanson, G. (1996) in Bioconjugate Techniques Academic Press, San Diego).
본 발명의 폴리펩티드 변이체는 어떤 공지된 분석법, 예를 들어, ELISA, 경합적 결합 분석법, 직접 및 간접 샌드위치 분석법, 및 면역침전 분석법에 사용될 수 있다 (Zola, (1987) Monoclonal Antibodies A Manual of Techniques, pp.147-158, CRC Press, Inc.).
검출 표지는 결합 또는 인지 상황을 국부화 ,가시화 및 정량화하는데 유용할 수 있다. 본 발명의 표지된 항체는 세포-표면 수용체를 검출할 수 있다. 검출가능하게 표지된 항체를 위한 다른 용도는 비드와 형광 표지 항체를 콘주게이트시키고, 리간드의 결합시 형광 신호를 검출함을 포함하는 비드-기반 면역포획법이다. 유사한 결합 검출 방법은 항체-항원 상호작용을 측정하여 검출하는 표면 플라스몬 공명 (SPR) 효과를 이용한다.
본 발명의 표지된 시스테인 가공된 항체는 생의학 및 분자 영상의 다양한 방법 및 기술 예를 들어: (i) MRI (자기 공명 영상); (ii) MicroCT (전산화 단층촬영); (iii) SPECT (단일 광자 방출 전산 단층촬영); (iv) PET (양전자 방출 단층 촬영)(Tinianow, J. et al (2010) Nuclear Medicine and Biology, 37(3):289-297; Chen et al (2004) Bioconjugate Chem. 15:41-49; US 2010/0111856); (v) 생물발광; (vi) 형광; 및 (vii) 초음파에 의한 영상 바이오마커 및 프로브로서 유용하다. 임뮤노신티그래피(Immunoscintigraphy)는 방사성 물질로 표지된 항체를 동물 또는 인간 환자에 투여하고, 항체가 국부화된 몸의 부위를 사진으로 찍는 영상 과정이다 (US 6528624). 영상 바이오마커는 치료학적 개입에 대한 정상적인 생물학적 과정, 병원성 과정 또는 약물학적 반응의 척도로서 객관적으로 측정하여 평가할 수 있다. 바이오마커는 몇몇 타입으로 존재할 수 있다: 타입 0은 질환의 자연스러운 히스토리 마커이며, 공지된 임상 지수, 예를 들어, 류마티스 관절염에서 활액 염증의 MRI 평가와 종적 상관관계가 있고; 타입 I 마커는 메카니즘이 임상적 결과와 관련이 없을 수 있음에도 불구하고, 작용 메카니즘에 따른 개입 효과를 포착하며; 타입 II 마커는 변화 또는 신호가 발생되는 대리결과 변수(surrogate endpoint)로서 작용하며, 바이오마커는 CT에 의한 류마티스 관절염에서 측정된 골 미란과 같은, 표적 반응을 "입증"하기 위한 임상적 이점을 예상한다. 이에 따라 영상 바이오마커는 다음에 대한 약역학적 (PD) 치료학적 정보를 제공할 수 있다: (i) 표적 단백질의 발현, (ii) 표적 단백질에 대한 치료제의 결합, 즉 선택성, 및 (iii) 청소율 및 반감기 약동학적 데이터. 랩-기반 바이오마커에 관한 생체내 영상 바이오마커의 이점은 다음을 포함한다: 비-침습적 치료, 정량화가능, 전체 몸 평가, 반복적 투약 및 평가, 즉 다중 시점, 및 전임상 (작은 동물)으로부터 임상 (인간) 결과까지의 잠재적으로 전이가능한 효과. 일부 적용시, 바이오영상은 전임상 연구시 동물 실험 수를 대체하거나 최소화한다.
펩티드 표지화 방법이 잘 알려져 있다 [참조: Haugland, 2003, Molecular Probes Handbook of Fluorescent Probes and Research Chemicals, Molecular Probes, Inc.; Brinkley, 1992, Bioconjugate Chem. 3:2; Garman, (1997) Non-Radioactive Labelling: A Practical Approach, Academic Press, London; Means (1990) Bioconjugate Chem. 1:2; Glazer et al (1975) Chemical Modification of Proteins. Laboratory Techniques in Biochemistry and Molecular Biology (T. S. Work and E. Work, Eds.) American Elsevier Publishing Co., New York; Lundblad, R. L. and Noyes, C. M. (1984) Chemical Reagents for Protein Modification, Vols. I and II, CRC Press, New York; Pfleiderer, G. (1985) "Chemical Modification of Proteins", Modern Methods in Protein Chemistry, H. Tschesche, Ed., Walter DeGryter, Berlin and New York; and Wong (1991) Chemistry of Protein Conjugation and Cross-linking, CRC Press, Boca Raton, Fla.); De Leon-Rodriguez et al (2004) Chem.Eur. J. 10:1149-1155; Lewis et al (2001) Bioconjugate Chem. 12:320-324; Li et al (2002) Bioconjugate Chem. 13:110-115; Mier et al (2005) Bioconjugate Chem. 16:240-237].
충분히 근접하게 두 개의 모이어티, 형광 리포터 및 켄쳐로 표지된 펩티드 및 단백질은 형광 공명 에너지 전이 (FRET)시킨다. 리포터 그룹은 통상 최대 휘도에서 방출에 대한 적절한 스토크스 편이(Stokes shift)와 함께, 특정 파장에서 빛에 의해 여기되어 에너지를 억셉터 또는 켄쳐 그룹으로 전이하는 형광 염료이다. 형광 염료는 확장된 방향성을 갖는 분자, 예를 들어, 플루오레세인 및 로다민과, 그들의 유도체를 포함한다. 형광 리포터는 무손상 펩티드에서 켄쳐 모이어티에 의해 부분적으로 또는 유의하게 소광시킬 수 있다. 펩티다제 또는 프로테아제에 의한 펩티드의 절단시, 형광의 검출가능한 증가가 측정될 수 있다 (Knight, C. (1995) "Fluorimetric Assays of Proteolytic Enzymes", Methods in Enzymology, Academic Press, 248:18-34).
본 발명의 표지 항체는 또한 친화성 정제 제제로서 사용될 수 있다. 이 과정에서, 표지된 항체는 본 분야에 잘 알려진 방법을 사용하여, 세파덱스 수지 또는 여과지와 같은 고체상 위에 고정시킨다. 고정된 항체는 정제할 항원을 함유하는 샘플과 접촉시키고, 그 후 지지체는 고정된 폴리펩티드 변이체에 결합된, 정제할 항원을 제외한, 샘플에 모든 물질을 실질적으로 제거할 적절한 용매로 세척한다. 마지막으로, 지지체는 폴리펩티드 변이체로부터 항원을 방출할 다른 적절한 용매, 예를 들어, pH 5.0의 글리신 완충제로 세척한다.
표지화 시약은 통상 (i) 표지된 항체를 형성하기 위하여 시스테인 가공된 항체의 시스테인 티올과 직접, (ii) 링커-표지 중간체를 형성하기 위하여 링커 시약과, 또는 (iii) 표지된 항체를 형성하기 위하여 링커 항체와 반응할 수 있는 반응성 관능성을 함유한다. 표지화 시약의 반응성 관능성은 다른 관능기가 또한 사용될 수 있음에도 불구하고, 다음을 포함한다: 말레이미드, 할로아세틸, 요오도아세트아미드 석신이미딜 에스테르 (예: NHS, N-하이드록시석신이미드), 이소티오시아네이트, 설포닐 클로라이드, 2,6-디클로로트리아지닐, 펜타플루오로페닐 에스테르, 및 포스포르아미디트.
THIOMABTM 항체에 대한 링커 약물의 콘주게이트
본원에 기재된 THIOMABTM 항체는 중쇄 및 경쇄 내에 모든 부위에서 가공된 시스테인의 콘주게이트 효율을 입증하기 위하여 두 개의 상이한 링커 약물에 콘주게이트시켰다.
시스테인 잔기는 THIOMABTM 항체를 생성하기 위하여 대표적인 항체 Hu Anti-Her2 4D5 ("4D5 항체")의 모든 위치에서 가공시켰다. 각각의 THIOMABTM 항체는 두 개의 링커 약물 (MC-vc-PAB-MMAE 및 PDS-MMAE)에 따로 콘주게이트시켰다. 콘주게이트는 96 웰 필터 플레이트에서 수행하였다 (용적 2 ml, 폴리프로필렌 0.45um 필터, 제조원: EK Scientific). 플레이트는 2분 동안 500xg로 원심분리시에만 수성 완충제를 유동시킬 수 있다. 20% 에탄올중 50% 슬러리로서 450 ㎕의 MabSelect SuRe 수지 (GE Healthcare)를 각각의 웰에 가했다. 수지를 3회 세척하고, 50mM Tris pH 8.0, 150mM NaCl, 2mM EDTA로 평형화시켰다 (완충제 A).
각각의 THIOMABTM 항체 (1.5 mgs)를 각각의 웰에 가하고, RT에서 600 RPM으로 플레이트 진탕기에서 30분 동안 수지에 결합시켰다. 30분 후, 플레이트를 원심분리하여 과량의 완충제를 제거하였다. THIOMABTM 항체는 실온(RT)에서 교반하에 밤새 완충제 A중 2mM 디티오트레이톨 0.9ml의 존재하에 환원시켰다. 환원제 및 임의의 시스테인 또는 글루타티온 블록은 완충제 A로 2회 세척하여 정제시켰다. 플레이트는 완충제 A중 1mM 데하이드로아스코르브산 (DHAA) 1ml 3회 세척하여 플레이트를 산화제로 포화시켰다. 완충제 A중 1mM DHAA 0.9ml의 마지막 부가 후, THIOMABTM 항체는 RT에서 플레이트 진탕기에서 3시간 동안 재산화시켰다.
산화제는 원심분리로 제거하였다. 완충제 A중 10% DMA에 용해시킨 2배 몰과량(이용가능한 티올 그룹에 대해)의 링커 약물 (MC-vc-PAB-MMAE 또는 PDS-MMAE)을 각각의 웰에 가했고, THIOMABTM 항체와 함께 RT에서 플레이트 진탕기에서 2시간 동안 배양시켰다. 과량의 링커 약물은 플레이트를 평형 완충제로 6회 세척하여 정제시켰다. 콘주게이트된 THIOMABTM 항체는 RT에서 플레이트 진탕기에서 30분 동안 0.1 M 글리신 완충제, pH 2.7로 용리시켰다. THIOMABTM 항체는 15%의 0.5M Tris, pH 8.0으로 즉시 중화시켰다. mAb당 콘주게이트된 약물의 수는 LC/MS 분석에 의해 정량화하였다. 콘주게이트의 응집은 크기 배제 크로마토그래피로 평가하였다.
질량 분광 분석
액체 크로마토그래피 전기분무 이온화 질량 분광 (LC-ESI-MS) 분석은 콘주게이트된 THIOMABTM 항체의 정확한 분자량 분포를 위해 이용되었다 (Cole, R.B. Electro Spray Ionization Mass Spectrometry: Fundamentals, Instrumentation And Applications. (1997) Wiley, New York).
LC/MS 분석은 6224 질양 Time-of-Flight (TOF) LC/MS　(Agilent Technologies) 상에서 수행하였다. 샘플은 80 °C로 가열된 PRLP-S 칼럼, 1000 Å, 8 ㎛ (50 mm
Figure pct00025
2.1 mm, Agilent Technologies)에서 크로마토그래피시켰다. 0.7 ml/min 유량으로 3분 이내에 34-42% B로부터의 선형 구배 (용매 A, 물중 0.05% TFA; 용매 B, 아세토니트릴중 0.04% TFA)가 사용되었고, 용리액은 직접 전기분무 공급원을 사용하여 이온화시켰다. 데이터를 수집하고, Agilent Mass Hunter 정성 분석 소프트웨어를 사용하여 디콘볼루션(deconvoluted)시켰다. 항체에 대한 약물 비(DAR)는 LC/MS 크로마토그램에 존재하는 디콘볼루션된 다량의 피크를 사용하여 계산하였다.
THIOMABTM 항체에 대한 응집 분석
크기 배제 크로마토그래피는 1100 시리즈 HPLC (Agilent Technologies)에서 수행하였다. 샘플은 Shodex KW 802.5 칼럼에서 크로마토그래피시켰다. 15분 동안 0.75ml/min으로 0.2M 인산칼륨, 0.25 염화칼륨, pH 6.2의 이동상을 사용하는 등용매법이 콘주게이트를 용리시키는데 사용되었다. 응집%는 UV 280nm 크로마토그램으로부터의 응집체 및 단량체성 피크의 통합 면적으로부터 계산하였다.
트라스투주맙의 티오 IgG 변이체의 가공
시스테인은 중쇄 및 경쇄의 모든 잔기 (서열 번호: 1 (4D5 중쇄) 및 서열 번호: 2 (4D5 경쇄)의 각각의 본래의, 비-시스테인 잔기)에서 전장 모노클로날 항체, 트라스투주맙 (HERCEPTIN®, Genentech Inc.)으로 도입시켰다. 대표적인 4D5 항체의 중쇄는 450개 아미노산; 12개 시스테인 잔기 및 438개 비-시스테인 잔기를 갖는다. 대표적인 4D5 항체의 경쇄는 214개 아미노산; 6개 시스테인 잔기 및 208개 비-시스테인 잔기를 갖는다. 특히, 단일 잔기는 그의 본래 아미노산으로부터 시스테인으로 돌연변이시킴으로써, 두 개의 가공된 시스테인 잔기를 갖는 전장 항체를 생성하였다. 각각의 시스테인 돌연변이를 PDS-MMAE 및 MC-vc-MMAE에 콘주게이트시켰다. 이는 총 648개의 THIOMABTM 항체를 생성하였다: 648 PDS-MMAE THIOMABTM 항체 및 648 MC-vc-MMAE THIOMABTM 항체. 이들 시스테인 가공된 항체 (THIOMABTM 항체)는 배지중 HEK293T 세포에서 발현시켰다.
EVQLVESGGGLVQPGGSLRLSCAASGFNIKDTYIHWVRQAPGKGLEWVARIYPTNGYTRYADSVKGRFTISADTSKNTAYLQMNSLRAEDTAVYYCSRWGGDGFYAMDYWGQGTLVTVSSASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKKVEPKSCDKTHTCPPCPAPELLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQYTLPPSREEMTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGK
서열 번호: 18
DIQMTQSPSSLSASVGDRVTITCRASQDVNTAVAWYQQKPGKAPKLLIYSASFLYSGVPSRFSGSRSGTDFTLTISSLQPEDFATYYCQQHYTTPPTFGQGTKVEIKRTVAAPSVFIFPPSDEQLKSGTASVVCLLNNFYPREAKVQWKVDNALQSGNSQESVTEQDSKDSTYSLSSTLTLSKADYEKHKVYACEVTHQGLSSPVTKSFNRGEC
서열 번호: 19
바람직한 구현예에서, THIOMABTM 항체는 표 2의 카밧 넘버링에 따라 하나 이상의 중쇄 돌연변이를 포함한다. 바람직한 구현예에서, THIOMABTM 항체는 4D5 서열에 따라 표 2에 제시된 것들과 동등한 위치에 가공된 시스테인을 포함한다. 바람직한 구현예에서, 표 2에서 확인된 가공된 시스테인, 또는 THIOMABTM 항체에서 위치 동등한 가공된 시스테인은 유리 시스테인이다. 바람직한 구현예에서, THIOMABTM 항체는 카밧 넘버링에 따라 위치 HC-A136C (즉, EU 넘버링에 따라 HC-A140C)에 가공된 시스테인을 포함한다 (참조: 실시예 11).
바람직한 구현예에서, THIOMABTM 항체는 도 21의 EU 넘버링에 따라 하나 이상의 중쇄 돌연변이를 포함한다. 특히, 시스테인 가공된 항체의 중쇄 시스테인 돌연변이는 EU 넘버링에 따라 HC-T110C, HC-A140C, HC-L174C, HC-L179C, HC-T187C, HC-T209C, HC-V262C, HC-G371C, HC-Y373C, HC-E382C, HC-S242C, HC-N434C, 및 Q438C로 이루어진 부위의 그룹으로부터 선택된다. 바람직한 구현예에서, THIOMABTM 항체는 EU 넘버링에 따라 HC-A140C, HC-L174C, HC-L179C, HC-G371C, HC-Y373C, HC-S424C, 및 HC-Q438C로 이루어진 그룹으로부터 선택되는 가공된 시스테인에서 PDS 링커에 의해 약물 모이어티에 콘주게이트된 시스테인 가공된 항체를 포함한다. 바람직한 구현예에서, THIOMABTM 항체는 HC-T110C, HC-T187C, HC-T209C, HC-V262C, HC-G371C, HC-E382C, 및 HC-N434C로 이루어진 그룹으로부터 선택되는 가공된 시스테인에서 vc- (즉, 말레이미드) 링커에 의해 약물 모이어티에 콘주게이트된 시스테인 가공된 항체를 포함한다.
특정 구현예에서, THIOMABTM 항체는 표 3의 카밧 넘버링에 따라 하나 이상의 중쇄 돌연변이를 포함한다. 특정 구현예에서, THIOMABTM 항체는 4D5 서열에 따라 표 3에 제시된 것들과 동등한 위치에 가공된 시스테인을 포함한다. 예를 들어, 항체가 그의 중쇄에 카밧 넘버링에 따라 위치 5에 본래의 알라닌(A)을 포함한다면 (4D5에서 본래 발린(V)과 비교하여), 알라닌은 시스테인으로 돌연변이되어 HC-A5C THIOMABTM 항체를 수득할 수 있다. 특정 구현예에서, 표 3에서 확인된 가공된 시스테인, 또는 THIOMABTM 항체에서 위치 동등한 가공된 시스테인은 유리 시스테인이다.
표 3. 카밧 넘버링에 따르는 중쇄 시스테인 돌연변이
Figure pct00026
Figure pct00027
특정 구현예에서, THIOMABTM 항체는 표 3에 열거된 서열을 포함한다. 특정 구현예에서, 표 3에 열거된 돌연변이 및/또는 서열을 갖는 THIOMABTM 항체는 PDS 링커를 포함한다. 특정 구현예에서, 표 3에 열거된 돌연변이 및/또는 서열을 갖는 THIOMABTM 항체는 말레이미드 (예: -vc) 링커를 포함한다. 특별한 구현예에서, 중쇄 부위 (카밧 넘버링에 따름)는 하기 그룹으로부터 선택되는, 시스테인으로 돌연변이되어 시스테인 가공된 항체를 형성하고, PDS 링커를 사용하여 약물에 결합된다: V2C, T29C, Y30C, A37C, E43C, Y77C, W96C, G97C, D105C, T139C, N159C, A162C, G166C, G178C, L179C, V188C, I199C, N203C, S207C, E388C, K414C, Q418C, S242C, Y436C, T437C, Q438C, L443C, 및 M104C. 특별한 구현예에서, 중쇄 부위 (카밧 넘버링에 따름)는 하기 그룹으로부터 선택되는, 시스테인으로 돌연변이되어 시스테인 가공된 항체를 형성하고, -vc (즉, 말레이미드) 링커를 사용하여 약물에 결합된다: V2C, L1C, V2C, L8C, R16C, F24C, I26C, Y30C, Q36C, A37C, K40C, L42C, E43C, T51C, G53C, T55C, R56C, Y57C, A58C, T66C, N74C, Q79C, W107C, T120C, K121C, A140C, G166C, G178C, T187C, I199C, T209C, F243C, M252C, E258C, V262C, N276C, V282C, L309C, T335C, S337C, R344C, Q347C, K360C, G371C, E382C, P387C, E388C, S403C, K414C, Q418C, G420C, N421C, S424C, N434C, Y436C, T437C, Q438C, K439C, S442C, L443C, M104C, 및 N81C.
특별한 구현예에서, 표 2에 열거된 돌연변이로부터 선택되는 중쇄 시스테인 돌연변이를 포함하는 시스테인 가공된 항체는 본원에 기재된 안정성 결정 분석을 위해 친화성-포획 LC-MS 분석을 사용하여 1.0 내지 2.0의 평균 DAR을 갖는다 (참조 실시예 12 및 13). 특별한 구현예에서, 표 2에 열거된 돌연변이로부터 선택되는 중쇄 시스테인 돌연변이를 포함하는 시스테인 가공된 항체는 1.1 내지 1.3의 평균 DAR을 갖는다. 특별한 구현예에서, 표 2에 열거된 돌연변이로부터 선택되는 중쇄 시스테인 돌연변이를 포함하는 시스테인 가공된 항체는 1.3 내지 1.5의 평균 DAR을 갖는다. 특별한 구현예에서, 표 1의 리스트로부터 선택된 시스테인 돌연변이를 갖는 THIOMABTM 항체는 1.5 내지 1.8의 평균 DAR을 갖는다. 특별한 구현예에서, 표 2에 열거된 돌연변이로부터 선택되는 중쇄 시스테인 돌연변이를 포함하는 시스테인 가공된 항체는 1.8 내지 2.0의 평균 DAR을 갖는다.
바람직한 구현예에서, 시스테인 가공된 항체는 표 2의 카밧 넘버링에 따라 하나 이상의 중쇄 돌연변이를 포함한다. 바람직한 구현예에서, 시스테인 가공된 항체는 4D5 서열에 따라 표 2에 제시된 것들과 동등한 위치에 가공된 시스테인을 포함한다. 예를 들어, 항체가 그의 중쇄에 카밧 넘버링에 따라 위치 19에 본래의 리신(K)을 포함한다면 (4D5에서 본래 아르기닌(R)과 비교하여), 리신은 시스테인으로 돌연변이되어 K 19C THIOMABTM 항체를 수득할 수 있다. 바람직한 구현예에서, 표 2에서 확인된 가공된 시스테인, 또는 THIOMABTM 항체에서 위치 동등한 가공된 시스테인은 유리 시스테인이다.
표 4. 카밧 넘버링에 따르는 경쇄 시스테인 돌연변이
Figure pct00028
Figure pct00029
바람직한 구현예에서, THIOMABTM 항체는 표 1에 카밧 넘버링에 따라 하나 이상의 경쇄 돌연변이를 포함한다. 바람직한 구현예에서, THIOMABTM 항체는 4D5 서열에 따라 표 1에 제시된 것들과 동등한 위치에 가공된 시스테인을 포함한다. 바람직한 구현예에서, 표 1에서 확인된 가공된 시스테인, 또는 THIOMABTM 항체에서 위치 동등한 가공된 시스테인은 유리 시스테인이다. 바람직한 구현예에서, THIOMABTM 항체는 카밧 넘버링에 따라 위치 LC-K149C에 가공된 시스테인을 포함한다 (참조: 실시예 2 및 7). 바람직한 구현예에서, LC-K 149C 항체는 PDS 링커를 통해 약물 모이어티에 콘주게이트된다. 바람직한 구현예에서, LC-K 149C 항체는 -vc (즉, 말레이미드) 링커를 통해 약물 모이어티에 콘주게이트된다.
특정 구현예에서, THIOMABTM 항체는 도 21의 카밧 넘버링에 따라 하나 이상의 경쇄 돌연변이를 포함한다. 특히, 시스테인 가공된 항체의 경쇄 시스테인 돌연변이는 카밧 넘버링에 따라 LC-T22C, LC-K39C, LC-Y49C, LC-Y55C, LC-T85C, LC-T97C, LC-I106C, LC-R108C, LC-R142C, LC-K149C, 및 LC-V205C로 이루어진 부위의 그룹으로부터 선택된다. 바람직한 구현예에서, THIOMABTM 항체는 카밧 넘버링에 따라 LC-I106C, LC-R108C, 및 LC-V205C로 이루어진 그룹으로부터 선택되는 가공된 시스테인에서 PDS 링커에 의해 약물 모이어티에 콘주게이트되는 시스테인 가공된 항체를 포함한다. 바람직한 구현예에서, THIOMABTM 항체는 카밧 넘버링에 따라 LC-T22C, LC-K39C, LC-Y49C, LC-Y55C, LC-T85C, LC-T97C, LC-R142C, 및 LC-K149C로 이루어진 그룹으로부터 선택되는 가공된 시스테인에서 vc- (즉, 말레이미드) 링커에 의해 약물 모이어티에 콘주게이트되는 시스테인 가공된 항체를 포함한다.
특정 구현예에서, 표 1에 열거된 돌연변이로부터 선택되는 경쇄 시스테인 돌연변이를 포함하는 시스테인 가공된 항체는 본원에 기재된 안정성 결정 분석을 위해 친화성-포획 LC-MS 분석을 사용하여 1.0 내지 2.0의 평균 DAR을 갖는다 (참조 실시예 12 및 13). 특별한 구현예에서, 표 1에 열거된 돌연변이로부터 선택되는 경쇄 시스테인 돌연변이를 포함하는 시스테인 가공된 항체는 1.1 내지 1.3의 평균 DAR을 갖는다. 특별한 구현예에서, 표 1에 열거된 돌연변이로부터 선택되는 경쇄 시스테인 돌연변이를 포함하는 시스테인 가공된 항체는 1.3 내지 1.5의 평균 DAR을 갖는다. 특별한 구현예에서, 표 1의 리스트로부터 선택된 시스테인 돌연변이를 갖는 시스테인 가공된 항체는 1.5 내지 1.8의 평균 DAR을 갖는다. 특별한 구현예에서, 표 1에 열거된 돌연변이로부터 선택되는 중쇄 시스테인 돌연변이를 포함하는 시스테인 가공된 항체는 1.8 내지 2.0의 평균 DAR을 갖는다. 특별한 구현예에서, 표 1에 열거된 돌연변이로부터 선택되는 중쇄 시스테인 돌연변이를 포함하는 시스테인 가공된 항체는 0.8 내지 1.4의 평균 DAR을 갖는다.
바람직한 구현예에서, THIOMABTM 항체는 표 1에 열거된 서열을 포함한다. 바람직한 구현예에서, 표 1에 열거된 돌연변이 및/또는 서열을 갖는 THIOMABTM 항체는 PDS 링커를 포함한다. 바람직한 구현예에서, 표 1에 열거된 돌연변이 및/또는 서열을 갖는 THIOMABTM 항체는 -vc 링커를 포함한다.
특정 구현예에서, THIOMABTM 항체는 표 4에 열거된 서열을 포함한다. 특정 구현예에서, 표 4에 열거된 돌연변이 및/또는 서열을 갖는 THIOMABTM 항체는 PDS 링커를 포함한다. 특정 구현예에서, 표 4에 열거된 돌연변이 및/또는 서열을 갖는 THIOMABTM 항체는 -vc 링커를 포함한다.
특정 구현예에서, 표 4에 열거된 돌연변이로부터 선택되는 경쇄 시스테인 돌연변이를 포함하는 시스테인 가공된 항체는 본원에 기재된 안정성 결정 분석을 위해 친화성-포획 LC-MS 분석을 사용하여 1.0 내지 2.0의 평균 DAR을 갖는다 (참조 실시예 12 및 13). 특별한 구현예에서, 표 4의 리스트로부터 선택된 시스테인 돌연변이를 갖는 THIOMABTM 항체는 1.3 내지 1.9의 평균 DAR을 갖는다. 특별한 구현예에서, 표 4의 리스트로부터 선택된 시스테인 돌연변이를 갖는 THIOMABTM 항체는 1.3 내지 1.8의 평균 DAR을 갖는다. 특별한 구현예에서, 표 4의 리스트로부터 선택된 시스테인 돌연변이를 갖는 THIOMABTM 항체는 1.5 내지 1.9의 평균 DAR을 갖는다. 특별한 구현예에서, 표 4의 리스트로부터 선택된 시스테인 돌연변이를 갖는 THIOMABTM 항체는 0.8 내지 1.0의 평균 DAR을 갖는다.
바람직한 구현예에서, THIOMABTM 항체는 도 21의 EU 넘버링에 따라 하나 이상의 경쇄 돌연변이를 포함한다. 특히, 시스테인 가공된 항체의 경쇄 시스테인 돌연변이는 EU 넘버링에 따라 LC-T22C, LC-K39C, LC-Y49C, LC-Y55C, LC-T85C, LC-T97C, LC-I106C, LC-R108C, LC-R142C, LC-K149C, 및 LC-V205C로 이루어진 부위의 그룹으로부터 선택된다. 바람직한 구현예에서, THIOMABTM 항체는 EU 넘버링에 따라 LC-T22C, LC-K39C, LC-Y49C, LC-Y55C, LC-T85C, LC-T97C, LC-R142C, 및 LC-K149C 로 이루어진 그룹으로부터 선택되는 가공된 시스테인에서 PDS 링커에 의해 약물 모이어티에 콘주게이트되는 시스테인 가공된 항체를 포함한다. 바람직한 구현예에서, THIOMABTM 항체는 LC-I106C, LC-R108C, 및 LC-V205C로 이루어진 그룹으로부터 선택되는 가공된 시스테인에서 vc- (즉, 말레이미드) 링커에 의해 약물 모이어티에 콘주게이트되는 시스테인 가공된 항체를 포함한다.
특정 구현예에서, THIOMABTM 항체는 표 5에 제시된 서열을 포함한다. 특정 구현예에서, THIOMABTM 항체는 4D5 서열에 따라 표 5에 제시된 것들과 동등한 위치에 가공된 시스테인을 포함한다. 예를 들어, 항체가 그의 중쇄에 카밧 넘버링에 따라 위치 40에 본래의 세린(S)을 포함한다면 (4D5에서 본래 알라닌(A)과 비교하여), 세린은 시스테인으로 돌연변이되어 S40C THIOMABTM 항체를 수득할 수 있다. 특정 구현예에서, 표 5에서 확인된 가공된 시스테인, 또는 THIOMABTM 항체에서 위치 동등한 가공된 시스테인은 유리 시스테인이다.
표 5. 카밧 넘버링에 따르는 중쇄 및 경쇄 시스테인 돌연변이
Figure pct00030
특정 구현예에서, THIOMABTM 항체는 표 5에 열거된 서열을 포함한다. 특정 구현예에서, 표 5에 열거된 돌연변이 및/또는 서열을 갖는 THIOMABTM 항체는 -vc 또는 PDS 링커를 포함한다.
특별한 구현예에서, 표 5의 리스트로부터 선택된 시스테인 돌연변이를 갖는 THIOMABTM 항체는 1.0 내지 2.0의 평균 DAR을 갖는다. 표 5의 리스트로부터 선택된 시스테인 돌연변이를 갖는 THIOMABTM 항체는 1.3 내지 1.9의 평균 DAR을 갖는다. 특별한 구현예에서, 표 5의 리스트로부터 선택된 시스테인 돌연변이를 갖는 THIOMABTM 항체는 1.3 내지 1.8의 평균 DAR을 갖는다. 특별한 구현예에서, 표 5의 리스트로부터 선택된 시스테인 돌연변이를 갖는 THIOMABTM 항체는 1.5 내지 1.9의 평균 DAR을 갖는다.
다른 구현에에 따라, THIOMABTM 항체는 표 1 내지 5중 어느 하나에서 확인된 가공된 시스테인을 포함한다. 바람직한 구현예에서, THIOMABTM 항체는 표 1 및 2중 어느 하나에서 확인된 가공된 시스테인을 포함한다. 다른 구현예에 따라, THIOMABTM 항체는 임의의 표적 항원에 대해 설계될 수 있다.
THIOMABTM 항체 설계 및 가공
단일 시스테인 치환은 항-HER2 hu4D5 항체 (즉, PDS 링커가 있는 총 648개 항체 및 -vc 링커가 있는 총 648개 항체가 제조되었다)의 중쇄 및 경쇄의 각각의 위치로 도입시켰다 (실시예 1). 단일 시스테인 치환은 또한 항-CD33 항체, 항-STEAP1 항체, 항-MUC16 항체, 항-NaPi2b 항체, 항-Ly6E 항체, 항-CD22 항체, 항-CD79b 항체, 항-B7H4 항체, 및 부가의 항-HER2 항체의 선택 위치로 도입시켰다. 중쇄 돌연변이체 및 경쇄 돌연변이체는 모두 본원에 기재된 방법에 따라 제조하였다. 중쇄 및 경쇄 서열은 카밧 넘버링에 따라 넘버링한다. 각 카밧 위치의 순차적 넘버링 및 EU 넘버링에 따르는 위치 동등성이 도 1a 및 1b에 제공된다. 경쇄에서, 카밧, 순차적, 및 EU 넘버링은 모두 동일한 번호를 나타낸다.
중쇄 및 경쇄 4D5 THIOMABTM 항체는 PDS 또는 vc 링커를 통해 약물에 콘주게이트시켰다 (즉, PDS 링커가 있는 총 648개 항체 및 -vc 링커가 있는 총 648개 항체가 제조되었다). 각각의 THIOMABTM 항체는 평균 약물-항체 비 (DAR), 농도 (mg/mL), 응집 (총 %), 및 안정성에 대해 스크리닝했다 (실시예 2). 따라서, 각각의 THIOMABTM 항체는 PDS 및 vc 콘주게이트에 대한 DAR, 농도, 응집 및 안정성 측정치를 가졌다. PDS 콘주게이트 및 측정치는 본원에 제공된 표에 제공되고, vc 콘주게이트 및 측정치도 본원에 제공된 표에 제공된다.
표 6. PDS-링커와 콘주게이트된 표 3 및 4의 시스테인 가공된 항체의 평균 DAR, 농도, 응집, 및 안정성 (ELISA 래트 플라즈마 안정성)
Figure pct00031
Figure pct00032
Figure pct00033
표 7. PDS-링커와 콘주게이트된 표 3 및 4의 시스테인 가공된 항체의 평균 DAR, 농도, 응집, 및 안정성 (질량 분석 래트 플라즈마 안정성)
Figure pct00034
Figure pct00035
표 8. - vc -링커와 콘주게이트된 표 3 및 4의 시스테인 가공된 항체의 평균 DAR, 농도, 응집, 및 안정성 (ELISA 래트 플라즈마 안정성)
Figure pct00036
Figure pct00037
Figure pct00038
Figure pct00039
표 9. - vc -링커와 콘주게이트된 표 3 및 4의 시스테인 가공된 항체의 평균 DAR/안정성 (질량 분석 래트 플라즈마 안정성)
Figure pct00040
Figure pct00041
Figure pct00042
표 6 및 7에서 확인된 PDS-MMAE THIOMABTM 항체는 공급원 물질 (즉, PDS-MMAE THIOMABTM 항체) ≥1mg/mL의 개시 농도로 분석하였다. 표 6 및 7에서 확인된 PDS-MMAE THIOMABTM 항체에 대한 DAR 계산은 모두 ≥ DAR1이었다. 표 6 및 7에서 확인된 PDS-MMAE THIOMABTM 항체는 모두 ≤ 50% 응집, 재산화되었다. 표 6에서 확인된 PDS-MMAE THIOMABTM 항체는 ELISA 복제물에 대해 시간에 따라 래트 매트릭스에서 적어도 ≥77 % 안정성을 나타냈다. 표 6에서 분석된 동일한 샘플이 표 7에 대해 수행된 실험에 사용되었다. 표 7은 표 6의 ELISA 안정성 결과의 LCSM 확인을 보여준다.
표 8 및 9에서 확인된 MC-VC-MMAE THIOMABTM 항체는 공급원 물질 (즉, MC-VC-MMAE THIOMABTM 항체) ≥1mg/mL의 개시 농도로 분석하였다. 표 8 및 9에서 확인된 MC-VC-MMAE THIOMABTM 항체에 대한 DAR 계산은 모두 ≥ DAR1이었다. 표 8 및 9에서 확인된 MC-VC-MMAE THIOMABTM 항체는 모두 ≤ 50% 응집, 재산화되었다. 표 8에서 확인된 MC-VC-MMAE THIOMABTM 항체는 ELISA 복제물에 대해 시간에 따라 래트 매트릭스에서 적어도 ≥77 % 안정성을 나타냈다. 표 9는 표 8의 ELISA 안정성 결과의 LCSM 확인을 보여준다.
표 10. 표 1 및 2의 바람직한 시스테인 가공된 항체의 평균 DAR, 농도, 및 응집 (표 11 및 12에 제시된 것들과 동일한 샘플)
Figure pct00043
표 11. 표 1 및 2의 바람직한 시스테인 가공된 항체의 ELISA 및 MS 안정성 결과 (표 10 및 12에 제시된 것들과 동일한 샘플)
Figure pct00044
Figure pct00045
표 12. 표 1 및 2의 바람직한 시스테인 가공된 항체의 시스테인 환원 분석 결과 (표 10 및 11에 제시된 것들과 동일한 샘플)
Figure pct00046
Figure pct00047
표 8 내지 10에서 확인된 PDS-MMAE 및 -vc-MMAE THIOMABTM 항체에 대한 DAR 계산은 모두 > DAR0이었다. 표 8에서 확인된 PDS-MMAE THIOMABTM 항체는 두 개의 ELISA 복제물중 적어도 하나에 대해 시간에 따라 래트 매트릭스에서 적어도 ≥80 % 안정성을 나타냈다.
흥미롭게도, DAR, 농도, 응집 및 안정성은 vc- 및 PDS-콘주게이트된 시스테인 가공 항체 (즉, THIOMABTM 항체)에 대해 동일하지 않았다. 예를 들어, 표 6 및 7 (PDS 링커) 및 표 8 및 9 (vc 링커)의 바람직한 시스테인 가공된 항체는 동일하지 않았다. 예를 들어, 약물 모이어티에 대한 PDS 링커 콘주게이트을 위해 바람직한 상부 안정한 부위는 LC-T22C, LC-K39C, LC-Y49C, LC-Y55C, LC-T85C, LC-T97C, LC-R142C, LC-K149C, HC-A140C, HC-L174C, HC-L179C, HC-G371C, HC-Y373C, 및 HC-S424C인 반면에, 약물 모이어티에 대한 -vc 링커 콘주게이트을 위해 바람직한 상부 안정한 부위는 EU 넘버링에 따르는 LC-I106C, LC-R108C, LC-V205C, HC-T110C (카밧 넘버링), HC-T187C, HC-T209C, HC-V262C, HC-G371C, HC-E382C, HC-N434C이다 (참조 도 21). 이에 따라, 단지 HC-G371C가 스크린시 PDS 및 -vc에 대한 상부 부위였다. 따라서, PDS 또는 -vc 링커를 갖는 시스테인 가공된 항체에 대해 약물 모이어티를 콘주게이트시키는 경우 안정성에 대해 최상으로 작업되는 부위의 결정은 광범위한 실험이 예상 및 필요치도 않을 수 있었다.
THIOMABTM 항체의 티올 반응성
전장, IgG 시스테인 가공된 항체 (THIOMABTM 항체)의 티올 반응성은 그의 전문이 참조로 포함된 미국 특허 번호 7,521,541에 기재된 바와 같이 비오티닐화 및 스트렙타비딘 결합에 의해 측정할 수 있다. 특히, 웨스턴 블롯 분석은 비오틴-말레이미드와 특히 콘주게이트된 THIOMABTM 항체를 스크리닝하도록 셋업될 수 있다. 이 분석에서, 항체는 환원 SDS-PAGE로 분석할 수 있고, 비오틴의 존재는 특히 스트렙타비딘-HRP와 배양시켜 탐침한다. 스트렙타비딘-HRP 상호작용은 가공된 Cys 변이체가 사용되고 있음에 따라 중쇄 또는 경쇄에서 관찰될 수 있고, 결합은 가공된 시스테인없는 야생형 IgG의 비오틴-스트렙타비딘 상호작용과 비교할 수 있으며, 이에 의해 THIOMABTM 항체는 특히 야생형 항체의 어떤 백그라운드 결합과 비교시 비오틴을 콘주게이트함을 나타낸다.
항체-약물 콘주게이트
본 발명의 시스테인 가공된 항체는 어떤 치료학적 제제, 즉 반응성 시스테인 티올 그룹을 통해 항체에 공유결합될 수 있는 약물 모이어티와 콘주게이트될 수 있다. 예시적 목적으로, 본원에 제공된 표에 기술된 시스테인 가공된 항체는 메이탄시노이드 약물, 특히 MMAE에 콘주게이트되었다.
항체-약물 콘주게이트 (ADC) 화합물의 예시적 구현예는 시스테인 가공된 항체 (Ab) 및 약물 모이어티 (D)를 포함하고, 이때 항체는 하나 이상의 유리 시스테인 아미노산을 가지며, 항체는 하나 이상의 유리 시스테인 아미노산을 통해 링커 모이어티 (L)에 의해 D에 결합되고; 조성물은 하기 화학식 I을 갖는다:
Ab-(L-D)p
상기 식에서, p는 1, 2, 3 또는 4이다. 항체 분자에 티올 반응성 링커 모이어티를 통해 콘주게이트될 수 있는 약물 모이어티의 수는 본원에 기재된 방법에 의해 도입되는 시스테인 잔기의 수에 의해 제한된다. 따라서, 화학식 I의 예시적인 ADC는 1, 2, 3 또는 4개의 가공된 시스테인 아미노산을 갖는 항체를 포함한다.
항체-약물 콘주게이트 화합물 (ADC)의 다른 예시적 구현예는 시스테인 가공된 항체 (Ab), 알부민-결합 펩티드 (ABP) 및 약물 모이어티 (D)를 포함하고, 이때 항체는 링커 모이어티 (L)에 의해 약물 모이어티에 결합되고, 항체는 아미드 결합 또는 제2 링커 모이어티에 의해 알부민-결합 펩티드에 결합되며; 조성물은 하기 화학식 Ia을 갖는다:
Figure pct00048
상기 식에서, p는 1, 2, 3 또는 4이다.
본 발명의 ADC 화합물은 항암 활성에 대한 유용성을 갖는 것들을 포함한다. 특히, 화합물은 약물 모이어티, 즉 독소에 콘주게이트된, 즉 링커에 의해 공유결합된 시스테인-가공된 항체를 포함한다. 약물이 항체에 콘주게이트되지 않은 경우, 약물은 세포독성 또는 세포증식 억제 효과를 갖는다. 이에 따라 약물 모이어티의 생물학적 활성은 항체에 대한 콘주게이트에 의해 조절된다. 본 발명의 항체-약물 콘주게이트 (ADC)는 선택적으로 유효량의 세포독성제를 종양 조직에 전달함으로써, 더 큰 선택성, 즉 보다 낮은 유효 용량이 성취될 수 있다.
약물 모이어티
항체-약물 콘주게이트 (ADC)의 약물 모이어티 (D)는 세포독성 또는 세포증식 억제 효과를 갖는 어떤 화합물, 모이어티 또는 그룹을 포함한다. 약물 모이어티는 다음을 포함한다: (i) 마이크로튜불린 억제제, 유사분열 억제제, 토포아이소머라제 억제제 또는 DNA 인터칼레이트로서 작용할 수 있는 화학요법제; (ii) 효소적으로 작용할 수 있는 단백질 독소; 및 (iii) 방사성 동위원소.
예시적인 약물 모이어티는, 이로써 제한되는 것은 아니지만, 메이탄시노이드, 오리스타틴, 돌라스타틴, 트리코테센, CC1065, 칼리키아미신 및 다른 에네딘 항생제, 탁산, 피롤로벤조디아제핀 (PBD), 1-(클로로메틸)-2,3-디하이드로-1H-벤조[e]인돌 (CBI) 이량체, CBI-PBD 이종이량체, 안트라사이클린, 및 이의 입체이성체, 이소스테르, 유사체 또는 유도체를 포함한다.
메이탄시노이드 약물 모이어티로서 사용하기에 적합한 메이탄신 화합물이 본 분야에 잘 알려져 있고, 공지된 방법에 따라 천연 공급원으로부터 단리시킬 수 있으며, 유전공학 기술 (참조: Yu et al (2002) PROC. NAT. ACAD. SCI. (USA) 99:7968-7973), 또는 공지된 방법에 따라 합성적으로 제조된 메이탄시놀 및 메이탄시놀 유사체를 사용하여 제조할 수 있다.
예시적인 메이탄시노이드 약물 모이어티는 개질된 방향족 환, 예를 들어: C-19-데클로로 (US 4256746) (안사미토신 P2의 수소화리튬알루미늄 환원에 의해 제조됨; C-20-하이드록시 (또는 C-20-데메틸) +/-C-19-데클로로 (미국 특허 번호 4361650 및 4307016) [스트렙토마이세스 ( Streptomyces ) 또는 악티노마이세스(Act티omyces)를 사용한 탈메틸화 또는 LAH를 사용한 탈염소화에 의해 제조됨]; 및 C-20-데메톡시, C-20-아실옥시 (-OCOR), +/- 데클로로 (미국 특허 번호 4,294,757) (아실 클로라이드를 사용한 아실화에 의해 제조됨)를 갖는 것들, 및 다른 위치에서 개질된 것들을 포함한다.
예시적인 메이탄시노이드 약물 모이어티는 또한 개질된, 예를 들어: C-9-SH (US 4424219) (메이탄시놀과 H2S 또는 P2S5의 반응에 의해 제조됨); C-14-알콕시메틸(데메톡시/CH2OR)(US 4331598); C-14-하이드록시메틸 또는 아실옥시메틸 (CH2OH 또는 CH2OAc) (US 4450254) (Nocardia로부터 제조됨); C-15-하이드록시/아실옥시 (US 4364866) (스트렙토마이세스에 의한 메이탄시놀의 전환에 의해 제조됨); C-15-메톡시 (미국 특허 번호 4313946 및 4315929) (Trewia nudlflora로부터 단리됨); C-18-N-데메틸 (미국 특허 번호 4362663 및 4322348) (스트렙토마이세스에 의한 메이탄시놀의 탈메틸화에 의해 제조됨); 및 4,5-데옥시 (US 4371533) (메이탄시놀의 삼염화티탄/LAH 환원에 의해 제조됨)를 갖는 것들을 포함한다. 메이탄신 화합물의 많은 위치가 결합의 형태에 따라 결합 위치로서 유용한 것으로 알려져 있다. 예를 들어, 에스테르 결합을 형성하기 위하여, 하이드록실 그룹을 갖는 C-3 위치, 하이드록시메틸로 개질된 C-14 위치, 하이드록실 그룹으로 개질된 C-15 위치 및 하이드록실 그룹을 갖는 C-20 위치가 모두 적합하다.
화학식 I의 항체-약물 콘주게이트 (ADC)의 약물 모이어티(D)기 화학식의 메이탄시노이드를 포함한다:
Figure pct00049
상기 식에서,
파선은 항체-약물 콘주게이트 (ADC)의 링커 (L)에 대한 D의 황 원자의 공유결합을 나타낸다. R은 독립적으로 H, 또는 메틸, 에틸, 1-프로필, 2-프로필, 1-부틸, 2-메틸-1-프로필, 2-부틸, 2-메틸-2-프로필, 1-펜틸, 2-펜틸, 3-펜틸, 2-메틸-2-부틸, 3-메틸-2-부틸, 3-메틸-1-부틸, 2-메틸-1-부틸, 1-헥실, 2-헥실, 3-헥실, 2-메틸-2-펜틸, 3-메틸-2-펜틸, 4-메틸-2-펜틸, 3-메틸-3-펜틸, 2-메틸-3-펜틸, 2,3-디메틸-2-부틸, 및 3,3-디메틸-2-부틸로부터 선택된 C1-C6 알킬일 수 있다. 황 원자에 아미드 그룹을 결합시키는 알킬렌 쇄는 메타닐, 에타닐 또는 프로필일 수 있다, 즉 m은 1, 2 또는 3이다.
메이탄신 화합물은 마이크로튜불린 단백질, 튜불린의 중합 억제를 통해 유사분열 동안 마이크로튜불의 형성을 억제함으로써 세포 증식을 억제한다 (Remillard et al (1975) Science 189:1002-1005). 메이탄신 및 메이탄시노이드는 상당히 세포독성이지만, 암 치료법에서 그들의 임상적 용도는 주로 그들의 종양에 대한 불량한 선택성에 기인하는 그들의 심한 전신 부작용에 의해 상당히 제한되었다. 메이탄신에 의한 임상적 시도는 중추신경계 및 위장계에 대한 심각한 반작용으로 인해 중단되었다 (Issel et al (1978) Can. Treatment. Rev. 5:199-207).
메이탄시노이드 약물 모이어티는 그들이: (i)또는 화학적 개질, 발효 생성물의 유도체화에 의해 비교적 제조하기 쉽고; (ii) 항체에 비-디설파이드 링커를 통해 콘주게이트시키기에 적합한 관능기로 유도체화시키기 쉽고; (iii) 혈장에서 안정하며; (iv) 다양한 종양 세포주에 대해 효과적이기 때문에 항체-약물 콘주게이트에서 매력적인 약물 모이어티이다 (US 2005/0169933; WO 2005/037992; US 5208020).
다른 약물 모이어티와 마찬가지로, 메이탄시노이드 약물 모이어티의 모든 입체이성체, 즉 D의 키랄 탄소에서 R 및 S 배위의 임의 조합이 본 발명의 화합물에 대해 시도된다. 한 구현예에서, 메이탄시노이드 약물 모이어티 (D)는 하기의 입체화학을 가질 것이다:
Figure pct00050
메이탄시노이드 약물 모이어티의 예시적인 구현예는 하기 화학식을 갖는 DM1, (CR2)m = CH2CH2; DM3, (CR2)m = CH2CH2CH(CH3); 및 DM4, (CR2)m = CH2CH2C(CH3)2를 포함한다:
Figure pct00051
Figure pct00052
링커는 결합 형태에 따라 다양한 위치에서 메이탄시노이드 분자에 결합될 수 있다. 예를 들어, 에스테르 결합은 통상적인 커플링 기술을 사용하여 하이드록실 그룹과의 반응에 의해 형성할 수 있다. 반응은 하이드록실 그룹을 갖는 C-3 위치, 하이드록시메틸로 개질된 C-14 위치, 하이드록실 그룹으로 개질된 C-15 위치 및 하이드록실 그룹을 갖는 C-20 위치에서 일어날 수 있다. 바람직한 구현예에서, 결합은 메이탄시놀 또는 메이탄시놀 유사체의 C-3 위치에서 형성된다.
화학식 I의 항체-약물 콘주게이트 (ADC)의 약물 모이어티 (D)는 또한 돌라스타틴 및 그들의 펩티드 유사체와 유도체, 오리스타틴을 포함한다 (미국 특허 번호 5635483; 5780588). 돌라스타틴 및 오리스타틴은 미세관 동적패턴, GTP 가수분해, 및 핵과 세포분할에 의해 간섭받고 (Woyke et al (2001) Antimicrob. Agents and Chemother. 45(12):3580-3584), 항암 (US 5663149) 및 항진균 활성 (Pettit et al (1998) Antimicrob. Agents Chemother. 42:2961-2965)을 갖는 것으로 나타났다. 다양한 형태의 돌라스타틴 또는 오리스타틴 약물 모이어티는 펩티드 약물 모이어티의 N (아미노) 말단 또는 C (카복시) 말단을 통해 항체에 공유결합될 수 있다 (WO 02/088172; Doronina et al (2003) Nature Biotechnology 21(7):778-784; Francisco et al (2003) Blood 102(4):1458-1465).
약물 모이어티는 돌라스타틴, 오리스타틴 (US 5635483; US 5780588; US 5767237; US 6124431), 및 이의 유사체와 유도체를 포함한다. 돌라스타틴 및 오리스타틴은 미세관 동적패턴, GTP 가수분해, 및 핵과 세포분할에 의해 간섭받고 (Woyke et al (2001) Antimicrob. Agents and Chemother. 45(12):3580-3584), 항암 (US 5663149) 및 항진균 활성 (Pettit et al (1998) Antimicrob. Agents Chemother. 42:2961-2965)을 갖는 것으로 나타났다. 돌라스타틴 또는 오리스타틴 약물 모이어티는 펩티드 약물 모이어티의 N (아미노) 말단 또는 C (카복시) 말단을 통해 항체에 결합될 수 있다 (WO 02/088172).
예시적인 오리스타틴 구현예는 US 7498298 및 US 7659241에 기술된, N-말단 결합된 모노메틸오리스타틴 약물 모이어티 DE 및 DF를 포함하며, 이들 각각의 기술은 그들의 전문이 참조로 명확히 포함된다.
화학식 I의 항체-약물 콘주게이트 (ADC)의 약물 모이어티 (D)는 항체에 N-말단을 통해 결합되고 하기 화학식을 갖는 모노메틸오리스타틴 약물 모이어티 MMAE 및 MMAF를 포함한다:
Figure pct00053
예시적인 MMAE ADC가 도 11 및 12에 제시되어 있다. 통상적으로, 펩티드-기반 약물 모이어티는 둘 이상의 아미노산 및/또는 펩티드 단편 사이에 펩티드 결합을 형성하여 제조할 수 있다. 상기 펩티드 결합은, 예를 들어, 펩티드 화학 분야에 잘 알려진 액상 합성법 (참조: E. Schroder and K. Lubke, "The Peptides", volume 1, pp 76-136, 1965, Academic Press)에 따라 제조할 수 있다.
약물 모이어티는 칼리키아미신, 및 이의 유사체와 유도체를 포함한다. 항생제의 칼리키아미신 그룹은 서브피코몰 농도로 이중-가닥 DNA 절단물을 생성할 수 있다. 칼리키아미신 그룹의 콘주게이트 제조를 위해, US 5712374; US 5714586; US 5739116; US 5767285; US 5770701, US 5770710; US 5773001; US 5877296을 참조하라. 사용될 수 있는 칼리키아미신의 구조적 유사체는, 이로써 제한되는 것은 아니지만, γ1 I, α2 I, α3 I, N-아세틸-γ1 I, PSAG 및 θI 1을 포함한다 (Hinman et al Cancer Research 53:3336-3342 (1993), Lode et al Cancer Research 58:2925-2928 (1998).
일부 구현예에서, ADC는 피롤로벤조디아제핀 (PBD)을 포함한다. 일부 구현예에서, PDB 이량체는 특정 DNA 서열을 인지하여 결합한다. 천연 생성물 안트라마이신, PBD는 먼저 1965년에 보고되었다 (Leimgruber, et al., (1965) J. Am. Chem . Soc., 87:5793-5795; Leimgruber, et al., (1965) J. Am. Chem . Soc., 87:5791-5793). 그 이후, 트리사이클릭 PBD 스캐폴드의 이량체 (US 6884799; US 7049311; US 7067511; US 7265105; US 7511032; US 7528126; US 7557099)를 포함한 천연-발생 및 유사체인, 수많은 PBD가 보고되고 있다 (Thurston, et al., (1994) Chem. Rev. 1994, 433-465). 어떤 특별한 이론으로 제한하고자 하는 것은 아니지만, 이량체 구조는 B-형 DNA의 마이너 그루브(minor groove)를 가진 이소헬리서티(isohelicity)를 위한 적절한 3차원 형태를 부여하여, 결합 부위에 스너그 핏(snug fit)을 유도하리라 여겨진다 (Kohn, In Antibiotics III. Springer-Verlag, New York, pp. 3-11 (1975); Hurley and Needham-VanDevanter, (1986) Acc. Chem . Res., 19:230-237). C2 아릴 치환체를 함유하는 이량체성 PBD 화합물은 세포독성제로서 유용한 것으로 나타났다 (Hartley et al (2010) Cancer Res. 70(17):6849-6858; Antonow (2010) J. Med . Chem. 53(7):2927-2941; Howard et al (2009) Bioorganic and Med . Chem . Letters 19(22):6463-6466).
일부 구현예에서, PBD 화합물은 생체내 제거될 수 있는 질소 보호 그룹으로 N10 위치에서 그들을 보호함으로써 전구약물로서 이용될 수 있다 (WO 00/12507; WO 2005/023814).
일부 구현예에서, 면역콘주게이트는 하나 이상의 칼리키아미신 분자에 콘주게이트된 항체를 포함한다. 항생제의 칼리키아미신 그룹 및 이의 유사체는 서브피코몰 농도로 이중-가닥 DNA 절단물을 생성할 수 있다 (Hinman et al., (1993) Cancer Research 53:3336-3342; Lode et al., (1998) Cancer Research 58:2925-2928). 칼리키아미신은 세포내 작용 부위를 갖지만, 어떤 경우에, 혈장 막을 용이하게 통과하지 못한다. 따라서, 항체-매개 내부화를 통해 이들 제제의 세포 흡수가 일부 구현예에서, 그들의 세포독성 효과를 상당히 개선할 수 있다. 칼리키아미신 약물 모이어티를 갖는 항체-약물 콘주게이트의 비제한적 예시적 제조 방법이, 예를 들어, US 5712374; US 5714586; US 5739116; 및 US 5767285에 기재되어 있다.
일부 구현예에서, 항체에 콘주게이트된 칼리키아미신 약물 모이어티는 하기 식을 갖는 화합물이다:
Figure pct00054
상기 식에서,
X는 Br 또는 I이고;
L은 링커이며; R은 수소, C1-6 알킬, 또는 -C(=O) C1-6 알킬이고; Ra는 수소 또는 C1-6 알킬이다.
일부 구현예에서, X는 Br이고, Ra는 수소이며, R은 이소프로필이다.
다른 구현예에서, X는 Br이고, Ra는 수소이며, R은 에틸이다.
다른 구현예에서, X는 I이고, Ra는 수소이며, R은 이소프로필이다.
다른 구현예에서, X는 I이고, Ra는 수소이며, R은 에틸이다.
일부 구현예에서, X는 Br이고, Ra는 수소이며, R은 -C(=O)CH3이다.
다른 구현예에서, X는 I이고, Ra는 수소이며, R은 -C(=O)CH3이다.
다른 구현예에서, X는 I이고, Ra는 에틸이며, R은 -C(=O)CH3이다.
다른 구현예에서, X는 Br이고, Ra는 에틸이며, R은 -C(=O)CH3이다.
PBD 이량체는 항체에 콘주게이트되었고, 생성된 ADC는 항암 특성을 갖는 것으로 나타났다(US 2010/0203007). PBD 이량체 상에 비제한적인 예시적인 결합 부위는 5-원 피롤로 환, PBD 단위 사이에 연결기, 및 N10-C111 이민 그룹을 포함한다 (WO 2009/016516; US 2009/304710; US 2010/047257; US 2009/036431; US 2011/0256157; WO 2011/130598).
일부 구현예에서, ADC는 피롤로벤조디아제핀 (PBD)을 포함한다. PDB 이량체는 특정 DNA 서열을 인지하여 그에 결합한다. 천연 생성물 안트라마이신, PBD는 먼저 1965년에 보고되었다 (Leimgruber, et al., (1965) J. Am. Chem . Soc., 87:5793-5795; Leimgruber, et al., (1965) J. Am. Chem . Soc., 87:5791-5793). 그 이후, 트리사이클릭 PBD 스캐폴드의 이량체 (US 6884799; US 7049311; US 7067511; US 7265105; US 7511032; US 7528126; US 7557099)를 포함한 천연-발생 및 유사체인, 수많은 PBD가 보고되고 있다 (Thurston, et al., (1994) Chem. Rev. 1994, 433-465). 어떤 특별한 이론으로 제한하고자 하는 것은 아니지만, 이량체 구조는 B-형 DNA의 마이너 그루브를 가진 이소헬리서티를 위한 적절한 3차원 형태를 부여하여, 결합 부위에 스너그 핏 유도하리라 여겨진다 (Kohn, In Antibiotics III. Springer-Verlag, New York, pp. 3-11 (1975); Hurley and Needham-VanDevanter, (1986) Acc . Chem . Res., 19:230-237). C2 아릴 치환체를 함유하는 이량체성 PBD 화합물은 세포독성제로서 유용한 것으로 나타났다 (Hartley et al (2010) Cancer Res. 70(17):6849-6858; Antonow (2010) J. Med. Chem. 53(7):2927-2941; Howard et al (2009) Bioorganic and Med . Chem . Letters 19(22):6463-6466).
일부 구현예에서, PBD 화합물은 생체내 제거될 수 있는 질소 보호 그룹으로 N10 위치에서 그들을 보호함으로써 전구약물로서 이용될 수 있다 (WO 00/12507; WO 2005/023814).
PBD 이량체는 항체에 콘주게이트되어, 생성된 ADC는 항암 특성을 갖는 것으로 나타났다 (US 2010/0203007). PBD 이량체 상에 비제한적인 예시적인 결합 부위는 5-원 피롤로 환, PBD 단위 사이에 연결기, 및 N10-C111 이민 그룹을 포함한다 (WO 2009/016516; US 2009/304710; US 2010/047257; US 2009/036431; US 2011/0256157; WO 2011/130598).
ADC의 비제한적인 예시적 PBD 이량체 성분은 하기 화학식 A 및 그의 염과 용매화물로 존재한다:
Figure pct00055
상기 식에서,
파선은 링커에 대한 공유결합 부위를 나타내고;
점선은 C1과 C2 또는 C2와 C3 사이에 이중결합의 임의 존재를 나타내며;
R2는 독립적으로 H, OH, =O, =CH2, CN, R, OR, =CH-RD, =C(RD)2, O-SO2-R, CO2R 및 COR로부터 선택되며, 선택적으로 할로 또는 디할로로부터 추가로 선택되고, 여기서 RD는 독립적으로 R, CO2R, COR, CHO, CO2H, 및 할로로부터 선택되며;
R6 및 R9는 독립적으로 H, R, OH, OR, SH, SR, NH2, NHR, NRR', NO2, Me3Sn 및 할로로부터 선택되고;
R7은 독립적으로 H, R, OH, OR, SH, SR, NH2, NHR, NRR', NO2, Me3Sn 및 할로로부터 선택되며;
Q는 독립적으로 O, S 및 NH로부터 선택되고;
R11은 H 또는 R이거나, 또는 여기서 Q가 O, SO3M이고, 이때 M은 금속 양이온이며;
R 및 R'는 각각 독립적으로 임의로 치환된 C1-8 알킬, C1-12 알킬, C3-8　헤테로사이클릴, C3-20 헤테로사이클, 및 C5-20 아릴 그룹으로부터 선택되고, 선택적으로 그룹 NRR'와 관련하여, R 및 R'는 그들이 결합된 질소 원자와 함께 임의로 치환된 4-, 5-, 6- 또는 7-원 헤테로사이클릭 환을 형성하며;
R12, R16, R19 및 R17은 각각 R2, R6, R9 및 R7에 대해 정의한 바와 같고;
R"는 C3-12 알킬렌 그룹이며, 이 쇄는 하나 이상의 헤테로 원자, 예를 들어, O, S, N(H), NMe 및/또는 방향족 환, 예를 들어, 임의로 치환된 벤젠 또는 피리딘에 의해 차단될 수 있고;
X 및 X'는 독립적으로 O, S 및 N(H)로부터 선택된다.
일부 구현예에서, R 및 R'는 각각 독립적으로 임의로 치환된 C1-12 알킬, C3-20 헤테로사이클, 및 C5-20 아릴 그룹으로부터 선택되며, 선택적으로 그룹 NRR'와 관련하여, R 및 R'는 그들이 결합된 질소 원자와 함께 임의로 치환된 4-, 5-, 6- 또는 7-원 헤테로사이클릭 환을 형성한다.
일부 구현예에서, R9 및 R19는 H이다.
일부 구현예에서, R6 및 R16은 H이다.
일부 구현예에서, R7, R17은 모두 OR7A이고, 이때 R7A은 임의로 치환된 C1-4　알킬이다. 일부 구현예에서, R7A는 Me이다. 일부 구현예에서, R7A는 Ch2Ph이며, 이때 Ph는 페닐 그룹이다.
일부 구현예에서, X는 O이다.
일부 구현예에서, R11은 H이다.
일부 구현예에서, 각 단량체 단위의 C2와 C3 사이에 이중결합이 존재한다.
일부 구현예에서, R2 및 R12는 독립적으로 H 및 R로부터 선택된다. 일부 구현예에서, R2 및 R12는 독립적으로 R이다. 일부 구현예에서, R2 및 R12는 독립적으로 임의로 치환된 C5-20 아릴 또는 C5-7 아릴 또는 C8-10 아릴이다. 일부 구현예에서, R2 및 R12는 독립적으로 임의로 치환된 페닐, 티에닐, 나프틸, 피리딜, 퀴놀리닐 또는 이소퀴놀리닐이다. 일부 구현예에서, R2 및 R12는 독립적으로 =O, =CH2, =CH-RD, 및 =C(RD)2로부터 선택된다. 일부 구현예에서, R2 및 R12는 각각 =CH2이다. 일부 구현예에서, R2 및 R12는 각각 H이다. 일부 구현예에서, R2 및 R12는 각각 =O이다. 일부 구현에서, R2 및 R12는 각각 =CF2이다. 일부 구현예에서, R2 및/또는 R12는 독립적으로 =C(RD)2이다. 일부 구현예에서, R2 및/또는 R12는 독립적으로 =CH-RD이다.
일부 구현예에서, R2 및/또는 R12가 =CH-RD인 경우, 각 그룹은 독립적으로 하기 제시된 각각의 배위를 가질 수 있다:
Figure pct00056
일부 구현예에서, =CH-RD는 배위 (I)에 존재한다.
일부 구현예에서, R"는 C3 알킬렌 그룹 또는 C5 알킬렌 그룹이다.
일부 구현예에서, ADC의 예시적인 PBD 이량체 성분은 하기 화학식 A(I)의 화학식을 갖는다:
Figure pct00057
식 A(I)
상기 식에서, n은 0 또는 1이다.
일부 구현예에서, ADC의 예시적인 PBD 이량체 성분은 하기 화학식 A(II)의 화학식을 갖는다:
Figure pct00058
식 A(II)
상기 식에서, n은 0 또는 1이다.
일부 구현예에서, ADC의 예시적인 PBD 이량체 성분은 하기 화학식 A(III)의 화학식을 갖는다:
Figure pct00059
식 A(III)
상기 식에서,
RE 및 RE"는 각각 독립적으로 H 또는 RD,로부터 선택되며, 이때 RD는 상기 정의한 바와 같고;
n은 0 또는 1이다.
일부 구현예에서, n은 0이다. 일부 구현예에서, n은 1이다. 일부 구현예에서, RE 및/또는 RE는 H이다. 일부 구현예에서, RE 및 RE"는 H이다. 일부 구현예에서, RE 및/또는 RE"는 RD이고, 이때 RD는 임의로 치환된 C1-12 알킬이다. 일부 구현예에서, RE 및/또는 RE"는 RD이고, 이때 RD는 메틸이다.
일부 구현예에서, ADC의 예시적인 PBD 이량체 성분은 하기 화학식 A(IV)의 화학식을 갖는다:
Figure pct00060
식 A(IV)
상기 식에서,
Ar1 및 Ar2는 각각 독립적으로 임의로 치환된 C5-20 아릴이며; 이때 Ar1 및 Ar2는 동일하거나 상이할 수 있고;
n은 0 또는 1이다.
일부 구현예에서, ADC의 예시적인 PBD 이량체 성분은 하기 화학식 A(V)의 화학식을 갖는다:
Figure pct00061
식 A(V)
상기 식에서,
Ar1 및 Ar2는 각각 독립적으로 임의로 치환된 C5-20 아릴이며; 이때 Ar1 및 Ar2는 동일하거나 상이할 수 있고;
n은 0 또는 1이다.
일부 구현예에서, Ar1 및 Ar2는 각각 독립적으로 임의로 치환된 페닐, 푸라닐, 티오페닐 및 피리딜로부터 선택된다. 일부 구현예에서, Ar1 및 Ar2 는 각각 독립적으로 임의로 치환된 페닐이다. 일부 구현예에서, Ar1 및 Ar2 는 각각 독립적으로 임의로 치환된 티엔-2-일 또는 티엔-3-일이다. 일부 구현예에서, Ar1 및 Ar2 는 각각 독립적으로 임의로 치환된 퀴놀리닐 또는 이소퀴놀리닐이다. 퀴놀리닐 또는 이소퀴놀리닐 그룹은 어떤 이용가능한 환 위치를 통해 PBD 코어에 결합될 수 있다. 예를 들어, 퀴놀리닐은 퀴놀린-2일, 퀴놀린-3-yl, 퀴놀린-4-일, 퀴놀린-5-일, 퀴놀린-6-일, 퀴놀린-7-일 및 퀴놀린-8-일일 수 있다. 일부 구현예에서, 퀴놀리닐은 퀴놀린-3-일 및 퀴놀린-6-일로부터 선택된다. 이소퀴놀리닐은 이소퀴놀린-1-일, 이소퀴놀린-3-일, 이소퀴놀린-4-일, 이소퀴놀린-5-일, 이소퀴놀린-6-일, 이소퀴놀린-7-일 및 이소퀴놀린-8-일일 수 있다. 일부 구현예에서, 이소퀴놀리닐은 이소퀴놀린-3-일 및 이소퀴놀린-6-일로부터 선택된다.
ADC의 추가로 비제한적인 예시적 PBD 이량체 성분은 하기 화학식 B 및 그의 염과 용매화물로 존재한다:
Figure pct00062
식 B
상기 식에서,
파선은 링커에 대한 공유결합 부위를 나타내고;
OH에 연결된 파선은 S 또는 R 배위를 나타내며;
RV1 및 RV2는 독립적으로 H, 메틸, 에틸 및 페닐 (이 페닐은 특히 4번 위치에서 플루오로에 의해 임의로 치환될 수 있다)과 C5-6 헤테로사이클릴로부터 선택되며; 여기서 RV1 및 RV2는 동일하거나 상이할 수 있고;
n은 0 또는 1이다.
일부 구현예에서, RV1 및 RV2는 독립적으로 H, 페닐 및 4-플루오로페닐로부터 선택된다.
일부 구현예에서, 링커는 B 환의 N10 이민, C 환의 C-2 엔도/엑소 위치, 또는 A 환을 결합하는 연결기 단위를 포함한, PBD 이량체 약물 모이어티의 다양한 부위중 하나에 결합될 수 있다 (참조: 하기 화학식 C(I) 및 C(II)).
ADC의 비제한적인 예시적 PBD 이량체 성분은 하기 화학식 C(I) 및 C(II)를 포함한다:
Figure pct00063
[화학식 C(I)]
Figure pct00064
[화학식 C(II)]
화학식 C(I) 및 C(II)는 그들의 N10-C11 이민 형태로 제시된다. 예시적인 PBD 약물 모이어티는 또한 하기 표에 제시된 바와 같이, 카비놀아민 및 또한 보호된 카비놀아민 형태를 포함한다:
Figure pct00065
Figure pct00066
Figure pct00067
이민 카비놀아민 보호된 카비놀아민
상기 식에서,
X는 CH2 (n = 1 내지 5), N, 또는 O이고;
Z 및 Z'는 독립적으로 OR 및 NR2로부터 선택되며, 이때 R은 1 내지 5개의 탄소 원자를 함유하는 1차, 2차 또는 3차 알킬 쇄이고;
R1, R'1, R2 및 R'2는 각각 독립적으로 H, C1-C8 알킬, C2-C8 알케닐, C2-C8 알키닐, C5-20 아릴 (치환된 아릴 포함), C5-20 헤테로아릴 그룹, -NH2, -NHMe, -OH, 및 -SH로부터 선택되며, 이때 일부 구현예에서, 알킬, 알케닐 및 알키닐 쇄는 5개 이하의 탄소 원자를 포함하고;
R3 및 R'3은 독립적으로 H, OR, NHR, 및 NR2로부터 선택되며, 이때 R은 1 내지 5개의 탄소 원자를 함유하는 1차, 2차 또는 3차 알킬 쇄이고;
R4 및 R'4 는 독립적으로 H, Me, 및 OMe로부터 선택되며;
R5는 C1-C8 알킬, C2-C8 알케닐, C2-C8 알키닐, C5-20 아릴 (할로, 니트로, 시아노, 알콕시, 알킬, 헤테로사이클릴에 의해 치환된 아릴을 포함함) 및 C5-20 헤테로아릴 그룹으로부터 선택되고, 이때 일부 구현예에서, 알킬, 알케닐 및 알키닐은 5개 이하의 탄소 원자를 포함하며;
R11은 H, C1-C8 알킬, 또는 보호 그룹 [예: 아세틸, 트리플루오로아세틸, t-부톡시카보닐 (BOC), 벤질옥시카보닐 (CBZ), 9-플루오레닐메틸렌옥시카보닐 (Fmoc), 또는 자기-희생 단위를 포함하는 모이어티 (예: 발린-시트룰린-PAB)]이고;
R12는 H, C1-C8 알킬, 또는 보호 그룹이며;
여기서, R1, R'1, R2, R'2, R5, 또는 R12 중 하나의 수소 또는 A 환 사이에 -OCH2CH2(X)nCH2CH2O- 스페이서의 수소는 ADC의 링커에 연결된 결합으로 치환된다.
ADC의 예시적인 PDB 이량체 부분은, 이로써 제한되는 것은 아니지만 하기를 포함한다 (파선은 링커에 대한 공유결합 부위를 나타낸다):
Figure pct00068
PBD 이량체;
PBD 이량체를 포함하는 ADC의 비제한적인 예시적 구현예는 하기 화학식을 갖는다:
Figure pct00069
PBD 이량체-val-cit-PAB-Ab;
Figure pct00070
PBD 이량체-Phe-Lys-PAB-Ab,
상기 식에서,
n은 0 내지 12이다. 일부 구현에서, n은 2 내지 10이다. 일부 구현예에서, n은 4 내지 8이다. 일부 구현예에서, n은 4, 5, 6, 7 및 8로부터 선택된다.
일부 구현예에서, 본원에 기재된 PBD 이량체를 포함하는 ADC는 피리딘 이탈 그룹을 포함하는 링커-약물 중간체를 황 원자를 통해 항체의 시스테인 티올에 콘주게이트시켜 디설파이드 결합을 형성함으로써 제조할 수 있다. 추가로, 일부 구현예에서, 본원에 기재된 PBD 이량체를 포함하는 ADC는 티오피리딜 이탈 그룹을 포함하는 링커-약물 중간체를 콘주게이트시켜 제조할 수 있으며, 이때 피리딘 환은 하나 이상의 니트로 그룹에 의해 치환된다. 일부 구현예에서, 피리딜 환은 -NO2에 의해 일치환된다. 일부 구현예에서, -NO2 일치환은 디설파이드에 대해 파라이다. 일부 구현예에서, PBD 이량체는 N10 위치를 통해 연결된다. 예를 들어, PBD 이량체를 포함하는 비제한적인 예시적 ADC는 모노메틸에틸 피리딜 디설파이드, N10-결합된 PBD 링커 중간체 (하기 제시됨)를 항체에 콘주게이트시켜 제조할 수 있다:
Figure pct00071
PBD 이량체-val-cit-PAB-Ab 및 PBD 이량체-Phe-Lys-PAB-Ab의 링커는 프로테아제 절단가능한 반면, PBD 이량체-말레이미드-아세탈의 링커는 산-불안정성이다.
PBD 이량체 및 PBD 이량체를 포함하는 ADC는 본원에 공지된 방법에 따라 제조할 수 있다 [참고, 예를 들어: WO 2009/016516; US 2009/304710; US 2010/047257; US 2009/036431; US 2011/0256157; WO 2011/130598; WO 2013/055987].
일부 구현예에서, 안트라사이클린을 포함하는 ADC. 안트라사이클린은 세포독성 활성을 나타내는 항생제 화합물이다. 어떤 특별한 이론으로 제한하고자 하는 것은 아니지만, 연구는 안트라사이클린이 1) 세포의 DNA로 약물 분자를 인터칼레이션시킴으로써 DNA-의존성 핵산 합성을 억제하고; 2) 세포에 대한 손상을 유발하기 위하여 이어서 세포 거대분자와 반응하는 유리 라디칼의 약물에 의한 생성, 및/또는 3) 약물 분자와 세포막의 상호작용을 포함한, 수많은 상이한 메카니즘에 의해 세포를 죽이도록 작용할 수 있다고 제시하였다 [참고, 예를 들어: C. Peterson et al., "Transport And Storage Of Anthracycline In Experimental Systems And Human Leukemia" in Anthracycline Antibiotics In Cancer Therapy; N.R. Bachur, "Free Radical Damage" id. at pp.97-102). 그들의 세포독성 잠재성으로 인하여, 안트라사이클린은 백혈병, 유방암, 폐암, 난소 선암 및 육종과 같은, 수많은 암의 치료에 사용되어 왔다 (참조예: P.H- Wiernik, in Anthracycline : Current Status And New Developments p 11).
비제한적인 예시적인 안트라사이클린은 독소루비신, 에피루비신, 이다루비신, 다우노마이신, 네모루비신 및 그의 유도체를 포함한다. 다우노루비신 및 독소루비신의 면역콘주게이트 및 전구약물이 제조되고 연구되었다 (Kratz et al (2006) Current Med . Chem. 13:477-523; Jeffrey et al (2006) Bioorganic & Med . Chem . Letters 16:358-362; Torgov et al (2005) Bioconj . Chem. 16:717-721; Nagy et al (2000) Proc . Natl . Acad . Sci. USA 97:829-834; Dubowchik et al (2002) Bioorg . & Med . Chem . Letters 12:1529-1532; King et al (2002) J. Med . Chem. 45:4336-4343; EP 0328147; US 6630579). 항체-약물 콘주게이트 BR96-독소루비신은 특히 종양-관련 항원 루이스-Y와 반응하며, 상 I 및 II 연구로 평가되었다 (Saleh et al (2000) J. Clin . Oncology 18:2282-2292; Ajani et al (2000) Cancer Jour. 6:78-81; Tolcher et al (1999) J. Clin . Oncology 17:478-484).
PNU-159682는 네모루비신의 효능있는 대사물질 (또는 유도체)이다 (Quintieri, et al. (2005) Clinical Cancer Research 11(4):1608-1617). 네모루비신은 독소루비신의 글리코시드 아미노 상의 2-메톡시모르폴리노 그룹과 독소루비신의 반합성 유사체로, 간세포 암종에 대한 상 II/III 시도 (Sun et al (2003) Proceedings of the American Society for Clinical Oncology 22, Abs1448; Quintieri (2003) Proceedings of the American Society for Clinical Oncology 22, Abs1448; Quintieri (2003) Proceedings of the American Association of Cancer Research , 44 :1st Ed, Abs 4649; Pacciarini et al (2006) Jour. Clin. Oncology 24:14116)를 포함한, 임상적 평가하에 있다 (Grandi et al (1990) Cancer Treat. Rev. 17:133; Ripamonti et al (1992) Brit. J. Cancer 65:703; ).
네모루비신 또는 네모루비신 유도체를 포함하는 비제한적인 예시적 ADC는 하기 화학식 Ia 또는 그의 약학적으로 허용되는 염으로 제시된다:
Figure pct00072
상기 식에서,
R1은 수소 원자, 하이드록시 또는 메톡시 그룹이며, R2는 C1-C5 알콕시 그룹이고;
L1 및 Z는 함께 본원에 기재된 바와 같은 링커 (L)이며;
T는 본원에 기재된 바와 같은 항체 (Ab)이고;
m은 1 내지 약 20이다. 일부 구현예에서, m은 1 내지 10, 1 내지 7, 1 내지 5 또는 1 내지 4이다.
일부 구현예에서, R1 및 R2는 모두 메톡시 (-OMe)이다.
네모루비신 또는 네모루비신 유도체를 포함하는 추가의 비제한적인 예시적 ADC는 하기 화학식 Ib 또는 그의 약학적으로 허용되는 염으로 제시된다:
Figure pct00073
상기 식에서,
R1은 수소 원자, 하이드록시 또는 메톡시 그룹이며, R2는 C1-C5 알콕시 그룹이고;
L1 및 Z는 함께 본원에 기재된 바와 같은 링커 (L)이며;
T는 본원에 기재된 바와 같은 항체 (Ab)이고;
m은 1 내지 약 20이다. 일부 구현예에서, m은 1 내지 10, 1 내지 7, 1 내지 5 또는 1 내지 4이다.
일부 구현예에서, R1 및 R2는 모두 메톡시 (-OMe)이다.
네모루비신-함유 ADC의 네모루비신 성분은 PNU-159682이다. 일부 이러한 구현예에서, ADC의 약물 부분은 하기 화학식중 하나를 가질 수 있다:
Figure pct00074
; 또는
Figure pct00075
상기 식에서, 파선은 링커 (L)에 대한 결합을 나타낸다.
PNU-159682를 포함한, 안트라사이클린은 몇 개의 결합 부위 및 본원에 기재된 링커를 포함한, 다양한 링커를 통해 항체에 콘주게이트시킬 수 있다 (US 2011/0076287; WO2009/099741; US 2010/0034837; WO 2010/009124).
네모루비신 및 링커를 포함하는 예시적인 ADC는, 이로써 제한되는 것은 아니지만 다음을 포함한다:
Figure pct00076
PNU-159682 말레이미드 아세탈-Ab;
Figure pct00077
PNU-159682-val-cit-PAB-Ab;
Figure pct00078
PNU-159682-val-cit-PAB-스페이서-Ab
Figure pct00079
PNU-159682-val-cit-PAB-스페이서(R1R2)-Ab
상기 식에서, R1 및 R2는 독립적으로 H 및 C1-C5 알킬로부터 선택된다; 그리고
Figure pct00080
PNU-159682 말레이미드-Ab
PNU-159682 말레이미드 아세탈-Ab의 링커는 산-불안정성인 반면에, PNU-159682-val-cit-PAB-Ab, PNU-159682-val-cit-PAB-스페이서-Ab, 및 PNU-159682-val-cit-PAB-스페이서(R1R2)-Ab는 프로테아제 절단가능하다.
예시적인 PNU ADC가 도 10d 및 10e에 제시되어 있다.
일부 구현예에서, ADC는 1-(클로로메틸)-2,3-디하이드로-1H-벤조[e]인돌 (CBI) 포함한다. DNA 마이너 그루브 알킬레이터의 5-아미노-1-(클로로메틸)-1,2-디하이드로-3H-벤즈[e]인돌 (아미노 CBI) 그룹은 효능있는 세포독소이고 (Atwell, et al (1999) J. Med. Chem., 42:3400), 암 치료법에 대해 설계된 수많은 전구약물 그룹에서 이펙터로서 이용되어 왔다. 이들은 항체 콘주게이트 (Jeffrey, et al. (2005) J. Med. Chem., 48:1344), 니트로벤질 카바메이트를 기반으로 하는 유전자 치료법에 대한 전구약물 (Hay, et al (2003) J. Med. Chem. 46:2456) 및 저산소증-활성화된 전구약물로서의 상응하는 니트로-CBI 유도체 (Tercel, et al (2011) Angew. Chem., Int. Ed., 50:2606-2609)를 포함하였다. CBI 및 피롤로[2,1-c][1,4]벤조디아제핀 (PBD) 약리 작용단은 알킬 쇄에 의해 함께 결합되었다 (Tercel et al (2003) J. Med. Chem 46:2132-2151).
일부 구현예에서, ADC는 1-(클로로메틸)-2,3-디하이드로-1H-벤조[e]인돌 (CBI) 이량체를 포함한다 (WO 2015/023355).
예시적인 CBI 이량체 ADC가 도 10b에 제시되어 있다.
일부 이러한 구현예에서, 이량체는 이종이량체로, 여기서 이량체의 반은 CBI 모이어티이고, 이량체의 다른 반은 PBD 모이어티이다.
예시적인 CBI-PBD 이종이량체 ADC가 도 10c에 제시되어 있다.
일부 구현예에서, CBI 이량체는 하기 식을 포함한다:
Figure pct00081
상기 식에서,
R1은 H, P(O)3H2, C(O)NRaRb, 또는 링커 (L)에 대한 결합으로부터 선택되고;
R2는 H, P(O)3H2, C(O)NRaRb, 또는 링커 (L)에 대한 결합으로부터 선택되며;
Ra 및 Rb는 독립적으로 H 및 하나 이상의 F에 의해 임의로 치환된 C1-C6 알킬로부터 선택되거나, 또는 Ra 및 Rb는 5 또는 6원 헤테로사이클릴 그룹을 형성하고;
T는 C3-C12 알킬렌, Y, (C1-C6 알킬렌)-Y-(C1-C6 알킬렌), (C1-C6 알킬렌)-Y-(C1-C6 알킬렌)-Y-(C1-C6 알킬렌), (C2-C6 알케닐렌)-Y-(C2-C6 알케닐렌), 및 (C2-C6 알키닐렌)-Y-(C2-C6 알키닐렌)으로부터 선택되는 연결기 그룹이며;
여기서, Y는 독립적으로 O, S, NR1, 아릴 및 헤테로아릴로부터 선택되고;
알킬렌, 알케닐렌, 아릴, 및 헤테로아릴은 독립적으로 및 선택적으로 F, OH, O(C1-C6 알킬), NH2, NHCH3, N(CH3)2, OP(O)3H2, 및 C1-C6 알킬에 의해 치환되며, 이때 알킬은 하나 이상의 F에 의해 임의로 치환되거나; 또는
알킬렌, 알케닐렌, 아릴, 및 헤테로아릴은 독립적으로 및 선택적으로 L에 대한 결합에 의해 치환되고;
D'는 하기의 그룹으로부터 선택되는 약물 모이어티이다:
Figure pct00082
Figure pct00083
및
Figure pct00084
(여기서, 파선은 T에 대한 결합 부위를 나타내고; X1 및 X2은 독립적으로 O 및 NR3으로부터 선택되며, 이때 R3은 H 및 하나 이상의 F에 의해 임의로 치환된 C1-C6 알킬로부터 선택되고; R4는 H, CO2R, 또는 링커 (L)에 대한 결합이며, 여기서 R은 C1-C6 알킬 또는 벤질이고; R5는 H 또는 C1-C6 알킬이다.
일부 구현예에서, 면역콘주게이트는 하나 이상의 아마톡신 분자에 콘주게이트된 항체를 포함한다. 아마톡신은 8개의 아미노산으로 구성된 사이클릭 펩티드이다. 그들은 알광대 버섯(Amanita phalloides mushrooms)으로부터 단리하거나 합성적으로 제조할 수 있다. 아마톡신은 특히 포유동물 세포의 DNA-의존성 RNA 폴리머라제 II, 및 이에 의해 감염된 세포의 전사 및 단백질 생합성을 억제한다. 세포에서 전사 억제는 성장 및 증식의 정지를 유발한다 [참조예: Moldenhauer et al. JNCI 104:1-13 (2012), WO2010115629, WO2012041504, WO2012119787, WO2014043403, WO2014135282, 및 WO2012119787, 이들은 본원에 그의 전문이 참조로 포함된다]. 일부 구현예에서, 하나 이상의 아마톡신 분자는 하나 이상의 α-아마니틴 분자이다.
다른 약물 모이어티는 단백질 독소, 예를 들어: 디프테리아 A 쇄, 디프테리아 독소의 비결합 활성 단편, 엑소톡신 A 쇄 [슈도모나스 아에루기노사(Pseudomonas aeruginosa)로부터], 리신 A 쇄 (Vitetta et al (1987) Science, 238:1098), 아브린 A 쇄, 모데신 A 쇄, 알파-사르신, 유동(Aleurites fordii) 단백질, 디안틴 단백질, 파이톨라카 아메리카나(Phytolaca americana) 단백질 (PAPI, PAPII, 및 PAP-S), 모모르디카 카란티아 억제제, 쿠르신, 크로틴, 사파오나리아 오피시날리스(sapaonaria officinalis) 억제제, 젤로닌, 미토젤린, 레스트릭토신, 페노마이신, 에노마이신 및 트리코테센을 포함한다 (WO 93/21232).
1개 초과의 친핵성 그룹이 약물-링커 중간체 또는 링커 시약과 반응하는 경우, 생성된 생성물은 항체에 결합된 하나 이상의 약물 모이어티의 분포를 갖는 ADC 화합물의 혼합물임을 이해해야 한다. 항체당 평균 약물 수(DAR)는 항체에 특이적이고 약물에 특이적인 이중 ELISA 항체 분석으로 혼합물로부터 계산할 수 있다. 개개 ADC 분자는 질량 분석법에 의해 혼합물에서 확인될 수 있고, HPLC, 예를 들어, 소수성 상호작용 크로마토그래피에 의해 단리시킬 수 있다 (참조예: McDonagh et al (2006) Prot . Engr . Design & Selection 19(7):299-307; Hamblett et al (2004) Clin. Cancer Res. 10:7063-7070; Hamblett, K.J., et al. "Effect of drug loading on the pharmacology, pharmacokinetics, and toxicity of an anti-CD30 antibody-drug conjugate," Abstract No. 624, American Association for Cancer Research, 2004 Annual Meeting, March 27-31, 2004, Proceedings of the AACR, Volume 45, March 2004; Alley, S.C., et al. "Controlling the location of drug attachment in antibody-drug conjugates," Abstract No. 627, American Association for Cancer Research, 2004 Annual Meeting, March 27-31, 2004, Proceedings of the AACR, Volume 45, March 2004). 특정 구현예에서, 단일 부하값을 갖는 균질한 ADC는 전기영동 또는 크로마토그래피에 의해 콘주게이트 혼합물로부터 단리시킬 수 있다.
표 18의 항체 약물 콘주게이트 51-58 (참조: 실시예 16)은 약물 모이어티를 링커 시약과 커플링시키고, WO 2013/055987; WO 2015/023355; WO 2010/009124; WO 2015/095227의 방법에 따라 제조할 수 있고, 본원에 기재된 시스테인 가공된 항체를 포함하는, 항체중 어떤 것과 콘주게이트시킬 수 있다. 특정 항체-약물 콘주게이트가 표 19에 인용되어 있다 (참조: 실시예 16).
약물 모이어티는 또한 뉴클레오리틱(nucleolytic) 활성을 갖는 화합물을 포함한다 (예: 리보뉴클레아제 또는 DNA 엔도뉴클레아제).
치료학적 방사성 동위원소는 32P, 33P, 90Y, 125I, 131I, 131In, 153Sm, 186Re, 188Re, 211At, 212Bi, 212Pb, 및 Lu의 방사성 동위원소를 포함한다.
방사성 동위원소 또는 다른 표지가 공지된 방법으로 콘주게이트에 혼입될 수 있다 (Fraker et al (1978) Biochem. Biophys. Res. Commun. 80: 49-57; "Monoclonal Antibodies in Immunoscintigraphy" Chatal, CRC Press 1989). 탄소-14-표지된 1-이소티오시아네이토벤질-3-메틸디에틸렌 트리아민펜타아세트산 (MX-DTPA)은 항체에 방사성 핵종의 콘주게이트을 위한 예시적인 킬레이트화제이다 (WO 94/11026).
부가의 ADC의 특정 예가 실시예 16에 제시되어 있다.
링커
"링커" (L)은 화학식 I의 항체-약물 콘주게이트 (ADC)를 형성하기 위하여 항체 (Ab)에 하나 이상의 약물 모이어티 (D)를 결합시키기 위해 사용될 수 있는 이관능성 또는 관능성 모이어티이다. 일부 구현예에서, 항체-약물 콘주게이트 (ADC)는 약물 및 항체에 공유결합시키기 위한 반응성 관능성을 갖는 링커를 사용하여 제조할 수 있다. 예를 들어, 일부 구현예에서, 항체 (Ab)의 시스테인 티올은 ADC를 제조하기 위하여 링커 또는 약물-링커 중간체의 반응성 관능기와의 결합을 형성할 수 있다.
한 측면에 있어서, 링커는 공유결합을 형성하기 위하여 항체 상에 존재하는 유리 시스테인과 반응할 수 있는 관능성을 갖는다. 이러한 반응성 관능성의 비제한적 예시는 말레이미드, 할로아세트아미드, α-할로아세틸, 활성화된 에스테르, 예를 들어, 석신이미드 에스테르, 4-니트로페닐 에스테르, 펜타플루오로페닐 에스테르, 테트라플루오로페닐 에스테르, 무수물, 산 클로라이드, 설포닐 클로라이드, 이소시아네이트 및 이소티오시아네이트를 포함한다. 예를 들어, 문헌 (at page 766 of Klussman, et al (2004), Bioconjugate Chemistry 15(4):765-773)의 콘주게이트법 및 본원의 실시예를 참조하라.
일부 구현예에서, 링커는 항체 상에 존재하는 친전자성 그룹과 반응할 수 있는 관능성을 갖는다. 예시적인 이러한 친전자성 그룹은, 이로써 제한되는 것은 아니지만, 알데히드 및 케톤 카보닐 그룹을 포함한다. 일부 구현예에서, 링커의 반응성 관능성의 헤테로 원자는 항체 상의 친전자성 그룹과 반응하여, 항체 단위에 공유결합을 형성할 수 있다. 이러한 반응성 관능성의 비제한적 예시는, 이로써 제한되는 것은 아니지만, 하이드라지드, 옥심, 아미노, 하이드라진, 티오세미카바존, 하이드라진 카복실레이트, 및 아릴하이드라지드를 포함한다.
링커는 하나 이상의 링커 성분을 포함할 수 있다. 예시적인 링커 성분은 6-말레이미도카프로일 ("MC"), 말레이미도프로파노일 ("MP"), 발린-시트룰린 ("val-cit" 또는 "vc"), 알라닌-페닐알라닌 ("ala-phe"), p-아미노벤질옥시카보닐 ("PAB"), N-석신이미딜 4-(2-피리딜티오)펜타노에이트 ("SPP"), 및 4-(N-말레이미도메틸)사이클로헥산-1 카복실레이트 ("MCC")를 포함한다. 다양한 링커 성분이 본 분야에 공지되어 있고, 이들중 일부는 하기에 기재된다.
링커는 약물의 방출을 용이하게 하는, "절단가능한(cleavable) 링커"일 수 있다. 비제한적인 예시적 절단가능한 링커는 산-불안정성 링커 (예를 들어, 하이드라존을 포함), 프로테아제-민감성 (예: 펩티다제-민감성) 링커, 광불안정성 링커, 또는 디설파이드-함유 링커를 포함한다 (Chari et al., Cancer Research 52:127-131 (1992); US 5208020).
특정 구현예에서, 링커는 하기 화학식 II를 갖는다:
Figure pct00085
상기 식에서, A는 "연신부(stretcher) 단위"이고, a는 0 내지 1의 정수이며; W는 "아미노산 단위"이며, w는 0 내지 12의 정수이고; Y는 "스페이서 단위"이며, y는 0, 1 또는 2이고, Ab, D 및 p는 화학식 I에 대해 상기 정의한 바와 같다. 상기 링커의 예시적인 구현예는 본원에 참조로 명확히 포함된, 미국 특허 번호 7,498,298에 기재되어 있다.
일부 구현예에서, 링커 성분은 다른 링커 성분 또는 약물 모이어티에 항체를 결합시키는 "연신부 단위"를 포함한다. 비제한적인 예시적 연신부 단위가 하기에 제시되어 있다 (여기서, 파선은 항체, 약물 또는 부가의 링커 성분에 대한 공유결합 부위를 나타낸다):
Figure pct00086
MC
Figure pct00087
MP
Figure pct00088
mPEG
Figure pct00089
.
일부 구현예에서, 링커는 WO2015/095227, WO2015/095124 또는 WO2015/095223에 기재된 것들과 같은 펩티도미메틱(peptidomimetic) 링커일 수 있으며, 이들 문서는 본 명세서에 그들의 전문이 참조로 포함된다.
한 측면에 있어서, 링커는 항체 상에 존재하는 친핵성 시스테인과 반응성인 친전자성 그룹을 갖는 반응성 부위를 갖는다. 항체의 시스테인 티올은 링커 상의 친전자성 그룹과 반응성이고, 링커에 대한 공유결합을 형성한다. 유용한 친전자성 그룹은, 이로써 제한되는 것은 아니지만, 말레이미드 및 할로아세트아미드 그룹을 포함한다.
시스테인 가공된 항체는 문헌(page 766 of Klussman, et al (2004), Bioconjugate Chemistry 15(4):765-773)의 콘주게이트법에 따라 및 실시예 4의 프로토콜에 따라, 링커 시약 또는 약물-항체 중간체와, 친전자성 관능기 (예: 말레이미드 또는 α-할로 카보닐)와 반응한다.
또 다른 구현예에서, 링커 시약 또는 약물-항체 중간체의 반응성 그룹은 항체의 유리 시스테인 티올과 결합을 형성할 수 있는 티올-반응성 관능기를 함유한다. 티올-반응 관능기의 예는, 이로써 제한되는 것은 아니지만, 말레이미드, α-할로아세틸, 활성화된 에스테르, 예를 들어, 석신이미드 에스테르, 4-니트로페닐 에스테르, 펜타플루오로페닐 에스테르, 테트라플루오로페닐 에스테르, 무수물, 산 클로라이드, 설포닐 클로라이드, 이소시아네이트 및 이소티오시아네이트를 포함한다.
다른 구현예에서, 링커는 항체에 분지화, 다관능성 링커-모이어티를 통해 1개 초과의 약물 모이어티를 공유결합시키기 위한 수지상 타입 링커일 수 있다 (Sun et al (2002) Bioorganic & Medicinal Chemistry Letters 12:2213-2215; Sun et al (2003) Bioorganic & Medicinal Chemistry 11:1761-1768; King (2002) Tetrahedron Letter 43:1987-1990). 수지상 링커는 항체에 대한 약물의 몰 비, 즉 ADC의 효능에 관련된 부하를 증가시킬 수 있다. 이에 따라, 시스테인 가공된 항체가 단지 1개의 반응성 시스테인 티올 그룹을 함유하는 경우, 약물 모이어티의 배수가 수지상 링커를 통해 결합될 수 있다.
링커는 본 발명의 시스테인 가공된 항체-약물 콘주게이트 (ADC)의 약물 모이어티 (D)에 항체 (Ab)를 결합시키는 아미노산 잔기를 포함할 수 있다. 아미노산 잔기는 디펩티드, 트리펩티드, 테트라펩티드, 펜타펩티드, 헥사펩티드, 헵타펩티드, 옥타펩티드, 노나펩티드, 데카펩티드, 운데카펩티드 또는 도데카펩티드 단위를 형성할 수 있다. 아미노산 잔기는 소수의 아미노산 및 비-천연적 발생 아미노산 유사체 (예: 시트룰린)뿐만 아니라, 천연적으로 발생되는 것들을 포함한다.
유용한 아미노산 잔기 단위는 특별한 효소에 의해 효소적 절단을 위한 그들의 선택성으로, 예를 들어, 활성 약물 모이어티를 유리시키기 위해 종양-관련 프로테아제로 설계하고 최적화할 수 있다. 한 구현예에서, 아미노산 잔기 단위, 예를 들어, 발린-시트룰린 (vc 또는 val-cit)은 이의 절단이 카텝신 B, C 및 D, 또는 플라스민 프로테아제에 의해 촉매화되는 것이다.
링커 단위는 자기-희생형, 예를 들어, ADC가 하기의 예시적 구조를 갖는 경우 p-아미노벤질카바모일 (PAB) 단위로 존재할 수 있다:
Figure pct00090
상기 식에서, Q는 C1-C8 알킬, -O-(C1-C8 알킬), -할로겐, -니트로 또는 -시아노이고; m은 0 내지 4 범위의 정수이며; p는 1 내지 4의 범위이다.
자기-희생 스페이서의 다른 예는, 이로써 제한되는 것은 아니지만, PAB 그룹과 친전자적으로 유사한 방향족 화합물, 예를 들어, 2-아미노이미다졸-5-메탄올 유도체 (US 7375078; Hay et al. (1999) Bioorg. Med. Chem. Lett. 9:2237) 및 오르토 또는 파라-아미노벤질아세탈을 포함한다. 아미드 결합 가수분해시 폐환되는 스페이서, 예를 들어, 치환 및 비치환 4-아미노부티르산 아미드 (Rodrigues et al (1995) Chemistry Biology 2:223), 적절히 치환된 비사이클로[2.2.1] 및 비사이클로[2.2.2] 환 시스템 (Storm et al (1972) J. Amer. Chem. Soc. 94:5815) 및 2-아미노페닐프로피온산 아미드 (Amsberry, et al (1990) J. Org. Chem. 55:5867)가 사용될 수 있다. 글리신에서 치환된 아민-함유 약물의 제거 (Kingsbury et al (1984) J. Med. Chem. 27:1447)가 또한 ADC에 유용한 자기-희생 스페이서의 예이다.
다른 구현예에서, 링커 L은 항체에 분지화, 다관능성 링커-모이어티를 통해 1개 초과의 약물 모이어티를 공유결합시키기 위한 수지상 타입 링커일 수 있다 (Sun et al (2002) Bioorganic & Medicinal Chemistry Letters 12:2213-2215; Sun et al (2003) Bioorganic & Medicinal Chemistry 11:1761-1768). 수지상 링커는 항체에 대한 약물의 몰 비, 즉 ADC의 효능에 관련된 부하를 증가시킬 수 있다. 이에 따라, 시스테인 가공된 항체가 단지 1개의 반응성 시스테인 티올 그룹을 함유하는 경우, 약물 모이어티의 배수가 수지상 링커를 통해 결합될 수 있다 (WO 2004/01993; Szalai et al (2003) J. Amer. Chem. Soc. 125:15688-15689; Shamis et al (2004) J. Amer. Chem. Soc. 126:1726-1731; Amir et al (2003) Angew. Chem. Int. Ed. 42:4494-4499).
화학식 Ia 항체-약물 콘주게이트 화합물의 구현예는 하기 화학식의 (val-cit), (MC-val-cit), 및 (MC-val-cit-PAB)를 포함한다:
Figure pct00091
val-cit
Figure pct00092
MC-val-cit
Figure pct00093
MC-val-cit-PAB
화학식 Ia 항체-약물 콘주게이트 화합물의 다른 예시적 구현예는 하기의 구조를 포함한다:
Figure pct00094
상기 식에서, X는 다음과 같고:
Figure pct00095
Figure pct00096
또는
Figure pct00097
Y는 다음과 같고:
Figure pct00098
또는
Figure pct00099
R은 독립적으로 H 또는 C1-C6 알킬이며; n은 1 내지 12이다.
다른 구현예에서, 링커는 항체 상에 존재하는 친전자성 그룹과 반응성인 친핵성 그룹을 갖는 반응성 관능기를 갖는다. 항체 상의 유용한 친전자성 그룹은, 이로써 제한되는 것은 아니지만, 알데히드 및 케톤 카보닐 그룹을 포함한다. 링커의 친핵성 그룹의 헤테로 원자는 항체 상의 친전자성 그룹과 반응하여, 항체 단위에 공유결합을 형성할 수 있다. 링커 상의 유용한 친핵성 그룹은, 이로써 제한되는 것은 아니지만, 하이드라지드, 옥심, 아미노, 하이드라진, 티오세미카바존, 하이드라진 카복실레이트, 및 아릴하이드라지드를 포함한다. 항체 상의 친전자성 그룹은 링커에 대한 결합을 위해 용이한 부위를 제공한다.
통상적으로, 펩티드-타입 링커는 둘 이상의 아미노산 및/또는 펩티드 단편 사이에 펩티드 결합을 형성함으로써 제조될 수 있다. 이러한 펩티드 결합은, 예를 들어, 펩티드 화학 분야에 잘 알려진 액상 합성법 (E. Schroder and K. Lubke (1965) "The Peptides", volume 1, pp 76-136, Academic Press)에 따라 제조할 수 있다.
다른 구현예에서, 링커는 용해도 또는 반응성을 조절한 그룹에 의해 치환될 수 있다. 예를 들어, 하전된 치환체, 예를 들어, 설포네이트 (-SO3 -) 또는 암모늄은 시약의 수용해도를 증가시키고, ADC를 제조하는데 이용되는 합성 경로에 따라, 항체 또는 약물 모이어티와 링커 시약의 커플링 반응을 용이하게 하거나, Ab-L (항체-링커 중간체)과 D, 또는 D-L (약물-링커 중간체)와 Ab의 커플링 반응을 용이하게 할 수 있다.
본 발명의 화합물은 링커 시약: BMPEO, BMPS, EMCS, GMBS, HBVS, LC-SMCC, MBS, MPBH, SBAP, SIA, SIAB, SMCC, SMPB, SMPH, 설포-EMCS, 설포-GMBS, 설포-KMUS, 설포-MBS, 설포-SIAB, 설포-SMCC, 및 설포-SMPB, 및 SVSB (석신이미딜-(4-비닐설폰)벤조에이트에 의해 제조되고, 비스-말레이미드 시약: DTME, BMB, BMDB, BMH, BMOE, BM(PEO)3, 및 BM(PEO)4 [이들은 Pierce Biotechnology, Inc.에서 시판중이다 (Customer Service Department, P.O. Box 117, Rockford, IL. 61105 U.S.A, 1-800-874-3723, International +815-968-0747)]를 포함하는 ADC를 확실히 시도하였으나 이것으로 제한되지 않는다 [참조: pages 467-498, 2003-2004 Applications Handbook and Catalog]. 비스-말레이미드 시약은 순차적 또는 동시 방식으로 티올-함유 약물 모이어티, 표지 또는 링커 중간체에 대한 시스테인 가공된 항체의 티올 그룹의 결합을 허용한다. 시스테인 가공된 항체, 약물 모이어티, 표지 또는 링커 중간체의 티올 그룹과 반응성인, 말레이미드 이외에 다른 관능기는 요오도아세트아미드, 브로모아세트아미드, 비닐 피리딘, 디설파이드, 피리딜 디설파이드, 이소시아네이트 및 이소티오시아네이트를 포함한다.
Figure pct00100
유용한 링커 시약은 또한 다른 상용 공급처, 예를 들어, Molecular Biosciences Inc.(Boulder, CO)로부터 입수하거나, 또는 문헌[Toki et al (2002) J. Org. Chem. 67:1866-1872; Walker, M.A. (1995) J. Org. Chem. 60:5352-5355; Frisch et al (1996) Bioconjugate Chem. 7:180-186; US 6214345; WO 02/088172; US 2003130189; US2003096743; WO 03/026577; WO 03/043583; 및 WO 04/032828]에 기재된 과정에 따라 합성할 수 있다.
말레이미드 연신부 및 파라-아미노벤질카바모일 (PAB) 자기-희생형 스페이서를 갖는 예시적인 발린-시트룰린 (val-cit 또는 vc) 디펩티드 링커 시약은 하기의 화학식을 갖는다:
Figure pct00101
상기 식에서, Q는 C1-C8 알킬, -O-(C1-C8 알킬), -할로겐, -니트로 또는 -시아노이고; m은 0 내지 4 범위의 정수이다.
말레이미드 연신부 단위 및 p-아미노벤질 자기-희생형 스페이서 단위를 갖는 예시적인 phe-lys(Mtr) 디펩티드 링커 시약은 문헌 (Dubowchik, et al. (1997) Tetrahedron Letters, 38:5257-60)에 따라 제조할 수 있고, 하기의 화학식을 가졌다:
Figure pct00102
상기 식에서, Mtr은 모노-4-메톡시트리틸이고, Q는 C1-C8 알킬, -O-(C1-C8 알킬), -할로겐, -니트로 또는 -시아노이며; m은 0 내지 4 범위의 정수이다.
본 발명의 예시적인 항체-약물 콘주게이트 화합물은 다음을 포함한다:
Figure pct00103
상기 식에서, Val은 발린이고; Cit는 시트룰린이며; p는 1, 2, 3 또는 4이고; Ab는 시스테인 가공된 항체이다. 메이탄시노이드 약물 모이어티 DM1이 BMPEO 링커를 통해 트라스투주맙의 티올 그룹에 결합된 다른 예시적인 항체 약물 콘주게이트는 하기의 화학식을 갖는다:
Figure pct00104
상기 식에서, Ab는 시스테인 가공된 항체이고; n은 0, 1 또는 2이며; p는 1, 2, 3 또는 4이다.
항체-약물 콘주게이트의 제조
화학식 I의 ADC는 다음을 포함하는, 본 분야의 숙련가에게 공지된 유기 화학 반응, 조건 및 시약을 사용하여 몇 개의 경로에 의해 제조할 수 있다: (1) 공유결합을 통해 항체-링커 중간체 Ab-L을 형성하기 위한, 시스테인 가공된 항체와 링커 시약의 반응에 이어서, 활성화된 약물 모이어티 D와의 반응; 및 (2) 공유결합을 통해 약물-링커 중간체 D-L을 형성하기 위한, 약물 모이어티의 친핵성 그룹과 링커 시약의 반응에 이어서, 시스테인 가공된 항체의 시스테인 그룹과의 반응. 콘주게이트 방법 (1) 및 (2)는 다양한 시스테인 가공된 항체, 약물 모이어티, 및 링커를 사용하여 화학식 I의 항체-약물 콘주게이트를 제조할 수 있다.
항체 시스테인 티올 그룹은 친핵성이고, 다음을 포함하는 링커 시약 및 약물-링커 중간체 상에 친전자성 그룹과 공유결합을 형성하기 위해 반응할 수 있다: (i) 활성 에스테르, 예를 들어, NHS 에스테르, HOBt 에스테르, 할로포르메이트, 및 산 할라이드; (ii) 알킬 및 벤질 할라이드, 예를 들어, 할로아세트아미드; (iii) 알데히드, 케톤, 카복실 및 말레이미드 그룹; 및 (iv) 설파이드 교환을 통한, 피리딜 디설파이드를 포함한, 디설파이드. 약물 모이어티 상의 친핵성 그룹은, 이로써 제한되는 것은 아니지만, 링커 모이어티 및 링커 시약 상의 친전자성 그룹과 공유결합을 형성하기 위해 반응할 수 있는 아민, 티올, 하이드록실, 하이드라지드, 옥심, 하이드라진, 티오세미카바존, 하이드라진 카복실레이트, 및 아릴하이드라지드 그룹을 포함한다.
메이탄신은, 예를 들어, 유리 티올, May-SH로 환원될 수 있는 May-SSCH3로 전환시키고, 개질된 항체와 반응시켜 (Chari et al (1992) Cancer Research 52:127-131) 디설파이드 링커와 메이탄시노이드-항체 면역콘주게이트를 생성할 수 있다. 디설파이드 링커와 항체-메이탄시노이드 콘주게이트가 보고되었다 (WO 04/016801; US 6884874; US 2004/039176 A1; WO 03/068144; US 2004/001838 A1; 미국 특허 6441163, 5208020, 5416064; WO 01/024763). 디설파이드 링커 SPP는 링커 시약 N-석신이미딜 4-(2-피리딜티오)펜타노에이트를 사용하여 작제한다.
특정 조건하에, 시스테인 가공된 항체는 환원제, 예를 들어, DTT (Cleland's 시약, 디티오트레이톨) 또는 TCEP (트리스(2-카복시에틸)포스핀 하이드로클로라이드; Getz et al (1999) Anal. Biochem. Vol 273:73-80; Soltec Ventures, Beverly, MA)로 처리함으로써 링커 시약과의 콘주게이트을 위해 반응성으로 만들 수 있다. CHO 세포에서 발현되는 전장의, 시스테인 가공된 모노클로날 항체 (THIOMABTM 항체)는 37℃에서 3시간 동안 약 50배 과량의 TCEP에 의해 환원시켜 새로이 도입된 시스테인 잔기와 배양 배지에 존재하는 시스테인 사이에 형성될 수 있는 디설파이드 결합을 환원시켰다. 환원된 THIOMABTM 항체는 희석시키고, 10 mM 나트륨 아세테이트, pH 5중 HiTrap S 칼럼으로 부하시켜, 0.3M 염화나트륨을 함유하는 PBS로 용리시켰다. 디파이드 결합은 실온에서 밤새 묽은 (200 nM) 수성 황산구리 (CuSO4)를 사용하여 모 Mab에 존재하는 시스테인 잔기 사이에 재구성하였다. 다른 산화제, 즉 본 분야에 공지된 산화제 및 산화 조건이 사용될 수 있다. 주위 공기 산화가 또한 효과적이다. 이러한 부드럽고, 부분적인 재산화 단계는 높은 충실도와 함께 효율적으로 쇄내 디설파이드를 형성한다. 대략 10배 과량의 약물-링커 중간체, 예를 들어, BM(PEO)4-DM1을 가하고, 혼합하여, 실온에서 약 1시간 동안 방치시켜 콘주게이트을 수행하고, 항체-약물 콘주게이트 (즉, 콘주게이트된 THIOMABTM 항체)를 형성하였다. 콘주게이트 혼합물을 겔 여과하고 부하하여, HiTrap S 칼럼을 통해 용리시켜 과량의 약물-링커 중간체 및 다른 불순물을 제거하였다.
예를 들어, 그의 전문이 참조로 포함된 미국 특허공보 20110301334는 콘주게이트을 위해 세포 배양물로부터 발현된 시스테인 가공된 항체를 제조하기 위한 일반적인 과정을 보여준다. 아마도 다양한 쇄간 디설파이드 결합을 따라, 시스테인 부가물이 환원적으로 절단되어 항체의 환원된 형태를 제공한다. 쌍을 이룬 시스테인 잔기 사이에 쇄간 디설파이드 결합은 주위 산소에 노출과 같은, 부분 산화 조건하에 재형성된다. 새로이 도입되고 가공되며 쌍을 이루지 않은 시스테인 잔기는 본 발명의 항체 콘주게이트를 형성하기 위한 링커 시약 또는 약물-링커 중간체와의 반응을 위해 이용가능하게 남는다. 포유동물 세포주에서 발현되는 THIOMABTM 항체는 -S-S- 결합 형성을 통해 가공된 Cys에 대한 외부적으로 콘주게이트된 Cys 부가물을 생성한다. 이에 따라, 정제된 THIOMABTM 항체는 반응성 THIOMABTM 항체를 제조하기 위하여 환원 및 산화 과정으로 처리하여야 한다. 이들 THIOMABTM 항체는 세포독성 약물, 형광단 및 다른 표지를 함유하는 말레이미드와 콘주게이트시키기 위해 사용된다.
예시적인 THIOMABTM 항체 콘주게이트를 제조하였고, 본원에 제공된 표에서 확인할 수 있다.
시험관내 세포 증식 분석법
일반적으로, 항체-약물 콘주게이트 (ADC)의 세포독성 또는 세포증식 억제 활성은: 수용체 단백질 (예: HER2)을 갖는 포유동물 세포를 세포 배지에서 ADC의 항체에 노출시키고; 세포를 약 6시간 내지 약 5일의 기간 동안 배양시키고; 세포 생존률을 측정함으로써 측정된다. 세포-기반 시험관내 분석은 본 발명의 ADC의 생존률 (증식), 세포독성 및 세포사멸의 유도 (카스파제 활성화)를 측정하기 위해 사용되었다.
항체-약물 콘주게이트의 시험관내 효능은 세포 증식 분석법에 의해 측정할 수 있다. 예를 들어, CellTiter-Glo® 발광 세포 생존률 분석법이 상용화되고 (Promega Corp., Madison, WI), 콜레프테라 루시페라제 (Coleoptera luciferase)의 재조합 발현을 기반으로 하는 균질한 분석법이다 (미국 특허 5583024; 5674713 및 5700670). 이러한 세포 증식 분석법은 대사적으로 활성인 세포의 척도인, 존재하는 ATP의 정량화를 기반으로 하여 배양액에서 살아있는 세포의 수를 결정한다 (Crouch et al (1993) J. Immunol. Meth. 160:81-88; US 6602677). CellTiter-Glo® 분석법은 96 웰 포맷에서 수행하여, 자동화된 고속 스크리닝 (HTS)을 하기 쉽게 만든다 (Cree et al (1995) AntiCancer Drugs 6:398-404). 균질 분석 과정은 단일 시약 (CellTiter-Glo® 시약)을 혈청-보충된 배지에서 배양된 세포에 직접 첨가함을 포함한다. 세포 세척, 배지의 제거 및 다중 피펫팅 단계는 필요치 않다. 시스템은 시약을 가하고 혼합 후 10분 내에 384-웰 포맷에서 15 cells/well만큼 적게 검출한다. 세포는 계속해서 ADC로 처리할 수 있고, 또는 그들은 처리되어 ADC로부터 단리시킬 수 있다. 일반적으로, 짧게, 즉 3시간 처리된 세포는 계속해서 처리된 세포와 동일한 효능 효과를 나타냈다.
균질한 "첨가-혼합-측정(add-mix-measure)" 포맷은 세포 용해 및 존재하는 ATP 양에 비례한 발광 신호의 생성을 유발한다. ATP의 양은 배양액에 존재하는 세포의 수에 직접 비례한다. CellTiter-Glo® 분석법은 사용된 세포 형태 및 배지에 따라, 일반적으로 반감기가 5시간보다 긴, 루시페라제 반응에 의해 발생된, "글로우-타입(glow-type)" 발광 신호를 생성한다. 살아있는 세포는 상대적 발광 단위 (RLU)에 반영된다. 기질, 딱정벌레 루시페린은 ATP의 AMP로의 수반되는 전환 및 광자의 생성과 함께 재조합 반딧불 루시페라제에 의해 산화적으로 탈카복실화된다.
생체내 효능
본원에 기재된 THIOMABTM 항체의 생체내 효능은 고발현 형질전환 외식편 마우스 모델에 의해 측정할 수 있다 (예를 들어, 항-HER2 4D5 항체로부터 제조된 본원에 제공된 THIOMABTM 항체는 고발현 HER2 형질전환 외식편 마우스 모델에 의해 측정할 수 있다). 동종 이식편은, 예를 들어, HERCEPTIN® 치료법에 대해 반응하지 않거나, 이에 불량하게 반응하는 Fo5 mmtv 형질전환 마우스로부터 증식시킬 수 있다. 대상은 항-HER2 4D5 THIOMABTM 항체 및 위약 PBS 완충제 대조군 (비히클)으로 1회 치료할 수 있고, 종양 배가, 로그 세포 치사 및 종양 수축에 대한 시간을 측정하기 위하여 3주에 걸쳐 모니터할 수 있다.
항체-약물 콘주게이트의 투여
본 발명의 항체-약물 콘주게이트 (ADC)는 치료할 상태에 적합한 어떤 경로에 의해 투여될 수 있다. ADC는 통상적으로 비경구, 즉 주입, 피하, 근육내, 정맥내, 피내, 척수강내 및 경막외 투여될 것이다.
약학적 제형
본 발명의 치료학적 항체-약물 콘주게이트 (ADC)의 약학적 제형은 통상 약학적으로 허용되는 비경구 비히클과 함께 및 단위 용량 주사가능 형태로 비경구 투여, 즉 볼루스, 정맥내, 종양내 주사를 위해 제조된다. 원하는 정도의 순도를 갖는 항체-약물 콘주게이트 (ADC)는 선택적으로 동결건조 제형 또는 수용액의 형태로, 약학적으로 허용되는 희석제, 담체, 부형제 또는 안정화제와 혼합된다 (Remington's Pharmaceutical Sciences (1980) 16th edition, Osol, A. Ed.).
본원에 기재된 시스테인 가공된 항체의 약학적 제형은 동결건조 제형 또는 수용액의 형태로, 원하는 정도의 순도를 갖는 이러한 항체 (즉, THIOMABTM 항체)와 하나 이상의 임의 약학적으로 허용되는 담체를 혼합함으로써 제조될 수 있다 (Remington's Pharmaceutical Sciences 16th edition, Osol, A. Ed. (1980)). 약학적으로 허용되는 담체는 일반적으로 사용된 용량 및 농도에서 수령자에 대해 비독성이고, 이로써 제한되는 것은 아니지만, 완충제, 예를 들어, 포스페이트, 시트레이트 및 다른 유기산; 아스코르브산 및 메티오닌을 포함한 항산화제; 보존제 (예: 옥타데실디메틸벤질 암모늄 클로라이드; 헥사메토늄 클로라이드; 벤즈알코늄 클로라이드; 벤즈에토늄 클로라이드; 페놀, 부틸 또는 벤질 알콜; 알킬 파라벤, 예를 들어, 메틸 또는 프로필 파라벤; 카테콜; 레조르시놀; 사이클로헥산올; 3-펜탄올; 및 m-크레졸); 저분자량 (약 10개 잔기 미만) 폴리펩티드; 단백질, 예를 들어, 혈청 알부민, 젤라틴 또는 면역글로불린; 친수성 중합체, 예를 들어, 폴리비닐피롤리돈; 아미노산, 예를 들어, 글리신, 글루타민, 아스파라긴, 히스티딘, 아르기닌 또는 리신; 단당류, 이당류 및 글루코즈, 만노즈 또는 덱스트린을 포함하는 다른 탄수화물; 킬레이트화제, 예를 들어, EDTA; 당, 예를 들어, 수크로즈, 만니톨, 트레할로즈 또는 소르비톨; 염-형성 카운터-이온, 예를 들어, 나트륨; 금속 착화합물 (예: Zn-단백질 착화합물); 및/또는 비독성 계면활성제, 예를 들어, 폴리에틸렌 글리콜 (PEG)을 포함한다. 본 원에서 예시적인 약학적으로 허용되는 담체는 간극성 약물 분산제, 예를 들어, 가용성 중성-활성 히알루로니다제 당단백질 (sHASEGP), 예를 들어, 인간 가용성 PH-20 히알루로니다제 당단백질, 예를 들어, rHuPH20 (HYLENEX®, Baxter International, Inc.)을 추가로 포함한다. rHuPH20을 포함한, 특정 예시적인 sHASEGP 및 사용 방법이 미국 특허공보 2005/0260186 및 2006/0104968에 기재되어 있다. 한 측면에 있어서, sHASEGP는 하나 이상의 부가의 글리코사미노글리카나제 (예: 콘드로이티나제)와 조합된다.
예시적인 동결건조된 항체 및 면역콘주게이트 제형이 미국 특허 6,267,958에 기재되어 있으며, 이는 본원에 그의 전문이 포함된다. 수성 항체 또는 면역콘주게이트 제형은 본원에 그들의 전문이 포함된, 미국 특허 6,171,586 및 WO2006/044908에 기재된 것들을 포함하며, 후자의 제형은 히스티딘-아세테이트 완충제를 포함한다.
본원의 제형은 또한 치료할 특별한 징후에 대해 필요한 경우 1개 초과의 활성 성분, 바람직하게는 서로 반작용을 갖지 않는 상보적 활성을 갖는 것들을 함유할 수 있다.
활성 성분은 콜로이드성 약물 전달 시스템 (예: 리포좀, 알부민 마이크로구, 마이크로에멀젼, 나노-입자 및 나노캡슐)으로 또는 마크로에멀젼으로, 예를 들어, 코아세르베이션(coacervation) 기술에 의해 또는 계면 중합에 의해 제조된 마이크로캡슐에, 예를 들어, 각각 하이드록시셀룰로즈 또는 젤라틴-마이크로캡슐 및 폴리(메틸메타크릴레이트) 마이크로캡슐에 포함시킬 수 있다. 상기 기술은 문헌[Remington's Pharmaceutical Sciences 16th edition, Osol, A. Ed. (1980)]에 기술되어 있다.
서방출 제제가 제조될 수 있다. 서방출 제제의 적절한 예는 항체 또는 면역콘주게이트를 함유하는 고체 소수성 중합체의 반투과성 매트릭스를 포함하며, 이 매트릭스는 성형 제품, 예를 들어, 필름 또는 마이크로캡슐의 형태로 존재한다.
생체내 투여에 사용되는 제형은 일반적으로 멸균된다. 멸균성은, 예를 들어, 멸균 여과막을 통한 여과에 의해 용이하게 성취될 수 있다.
항체-약물 콘주게이트 치료학적 방법 및 조성물
본 발명의 항체-약물 콘주게이트 (ADC)는, 예를 들어, 종양 항원의 과발현을 특징으로 하는 다양한 질환 또는 장애를 치료하기 위해 사용될 수 있다. 예시적인 병증은 양성 또는 악성 종양 및 백혈병과 림프성 종양을 포함하는 과증식성 장애이다. 다른 것은 뉴런, 교의, 성상, 사상하부, 선, 마크로파지, 상피, 간질, 할강, 염증성, 혈관신생 및 자가면역을 포함한 면역학적 장애를 포함한다.
일반적으로, 치료할 질환 또는 장애는 암과 같은 과증식성 질환이다. 본원에서 치료할 암의 예는, 이로써 제한되는 것은 아니지만, 암종, 림프종, 아세포종, 육종 및 백혈병 또는 림프성 종양을 포함한다. 이러한 암의 보다 특별한 예는 편평세포암(예: 상피 편평세포암), 소-세포 폐암, 비-소세포 폐암, 폐의 선암 및 폐의 편평세포암을 포함한 폐암, 복막암, 간세포암, 소화기 암을 포함한 위(gastric 또는 stomach)암, 췌장암, 교모세포종, 경부암, 난소암, 간암, 방광암, 간종양, 유방암, 결장암, 직장암, 대장암, 자궁내막 또는 자궁암, 침샘암, 신장(kidney 또는 renal)임, 전립선암, 외음부암, 갑상선암, 간암, 항문암, 음경암 및 두경부암을 포함한다.
ADC 화합물이 치료에 사용될 수 있는 자가면역 질환은 류마티스 장애 [예: 류마티스 관절염, 쇼그렌(Sjogren) 증후군, 경피증, 루프스, 예를 들어, SLE 및 루프스 신염, 다발성근염/피부근염, 한랭글로불린혈증, 항-인지질 항체 증후군, 및 건선 관절염], 골관절염, 자가면역 위장 및 간 장애 [예를 들어, 염증성 장 질환 (예: 궤양성 대장염 및 크론병), 자가면역 위염 및 악성 빈혈, 자가면역 간염, 원발성 담즙성 간경화증, 원발성 경화성 담관염 및 셀리악병], 혈관염 (예: ANCA-관련 혈관염, 처그-스트라우스(Churg-Strauss) 혈관염, 베게너 육아종증, 및 폴리아테리티스(polyarteriitis), 자가면역 신경학적 장애 (예: 다발성 경화증, 근간대경련 증후군, 중증근무력증, 시신경 척수염, 파킨슨병, 알쯔하이머병, 및 자가면역 다발신경병증), 신장 장애 [예: 사구체신염, 굿파스처 증후군(Goodpasture's syndrome), 버거스씨병(Berger's disease)], 자가면역 피부학적 장애 (예: 건선, 두드러기, 발진, 심상성 천포창, 유천포창 및 피부 홍반 루프스), 혈액학적 장애 (예: 혈소판감소 자반증, 혈전성 혈소판감소 자반증, 수혈후 자반증 및 자가면역 용혈성 빈혈), 아테롬성 동맥경화증, 포도막염, 자가면역 청각 질환 (예: 내이 질환 및 청력 손실), 베체트병(Behcet's disease), 레이노 증후군(Raynaud's syndrome), 기관 이식, 및 자가면역 내분비 장애 [예: 당뇨-관련 자가면역 질환, 예를 들어, 인슐린-의존성 당뇨병 (IDDM), 에디슨병(Addison's disease), 및 자가면역 갑상선 질환 (예: 그레이브스병(Graves' disease) 및 갑상선염)]를 포함한다. 보다 바람직한 상기 질환은, 예를 들어, 류마티스 관절염, 궤양성 대장염, ANCA-관련 혈관염, 루푸스, 다발성 경화증, 쇼그렌 증후군, 그레이브스병, IDDM, 악성 빈혈, 갑상선염 및 사구체신염을 포함한다.
질환의 예방 또는 치료를 위해, ADC의 적절한 용량은 상기 정의한 바와 같은 치료할 질환의 형태, 분자가 예방학적 또는 치료학적 목적으로 투여되든지 간에, 질환의 중증정도 및 과정, 선행 치료법, 환자의 임상적 히스토리 및 항체에 대한 반응과, 주치의 판단에 따라 좌우될 것이다. 분자는 한번에 또는 일련의 치료에 걸쳐 환자에 적절히 투여된다. 질환의 형태 및 중증정도에 따라, 약 1 μg/kg 내지 15 mg/kg (예: 0.1-20 mg/kg)의 분자가, 예를 들어, 하나 이상의 별도 투여에 의해 또는 연속 주입에 의하든 간에, 환자에 투여하기 위한 초기 후보 용량이다. 통상적인 하루 용량은 상기 언급한 요인에 따라, 약 1 ㎍/kg 내지 100 mg/kg 또는 그 이상의 범위일 수 있다. 환자에 투여될 ADC의 예시 용량은 환자 체중 kg당 약 0.1 내지 약 10 mg의 범위이다.
조건에 따라 며칠 또는 그 이상에 걸친 반복 투여를 위해, 치료는 원하는 질환 증상의 억제가 일어날 때까지 유지한다. 예시적 투약 계획은 약 4 mg/kg의 초기 부하 용량에 이어서, 약 2 mg/kg 의 매주 유지 용량으로 항-ErbB2 항체를 투여함을 포함한다. 다른 투약 계획이 유용할 수 있다. 이 치료법의 과정은 통상적인 기술 및 분석법으로 용이하게 모니터할 수 있다.
한 측면에 있어서, 본원에 제공된 THIOMABTM 항체는 세포 증식을 억제하는 방법에 사용될 수 있다. 예를 들어, 항-HER2 THIOMABTM 항체는 HER2-포지티브 세포의 세포 증식을 억제하는데 사용될 수 있다. 두번째 예로서, 항-CD33 THIOMABTM 항체는 CD33-포지티브 세포의 세포 증식을 억제하는데 사용될 수 있다. 따라서, 항체는 종양 세포에서 발현되는 어떤 폴리펩티드에 대해 제조될 수 있고, 그 항체는 약물 콘주게이트에 대한 비-본래 시스테인을 포함하도록 가공될 수 있다 (즉, 항체는 THIOMABTM 항체로 가공될 수 있다). THIOMABTM 항체가 제조되면, 세포 증식의 억제 방법은 표적 (예: HER2)에 대한 THIOMABTM 항체의 결합에 대해 허용되는 조건하에 THIOMABTM 항체 (예: 항-HER2 THIOMABTM 항체)에 세포를 노출시킴으로써, 세포 증식을 억제함을 포함한다. 특정 구현예에서, 방법은 시험관내 또는 생체내 방법이다.
시험관내 세포 증식의 억제는 Prmega (Madison, WI)로부터 상용화된, CellTiter-GloTM 발광 세포 생존률 분석법을 사용하여 분석할 수 있다. 그 분석법은 대사적으로 활성인 세포의 척도인, 존재하는 ATP의 정량화를 기반으로 하여 배양액에서 살아있는 세포의 수를 결정한다 (참조: Crouch et al (1993) J. Immunol . Meth. 160:81-88; US 6602677). 분석법은 96- 또는 384-웰 포맷에서 수행하여, 자동화된 고속 스크리닝 (HTS)을 하기 쉽게 만든다 (참조: Cree et al (1995) AntiCancer Drugs 6:398-404). 분석 과정은 단일 시약 (CellTiter-Glo® 시약)을 배양된 세포에 직접 가함을 포함한다. 이는 세포 용해 및 루시페라제 반응에 의해 발생된 발광 신호의 생성을 일으킨다. 발광 신호는 존재하는 ATP의 양에 비례하며, 이는 배양액에 존재하는 살아있는 세포의 수에 직접 비례한다. 데이터는 루미노미터 또는 CCD 카메라 영상 장치에 의해 기록할 수 있다. 발광 아웃풋은 상대적 광 단위 (RLU)로서 표현된다.
다른 측면에 있어서, 약제로서 사용하기 위한 THIOMABTM 항체가 제공된다 (예: 항-HER2 THIOMABTM 항체). 추가의 측면에 있어서, 치료 방법에 사용하기 위한 THIOMABTM 항체가 제공된다. 비-제한적인 구현예에서, HER2-양성 암을 치료하는데 사용하기 위한 항-HER2 THIOMABTM 항체가 제공된다. 특정 구현예에서, 본 발명은 유효량의 항-THIOMABTM 항체를 개체에 투여함을 포함하는, HER2-양성 암을 가진 개체의 치료 방법에 사용하기 위한 항-HER2 THIOMABTM 항체를 제공한다. 상기 한 구현예에서, 방법은 예를 들어 하기 기술되는 바와 같은 적어도 한 종의 부가 치료학적 제제를 유효량으로 개체에 투여함을 추가로 포함한다. 비-제한적인 구현예에서, CD33-양성 암을 치료하는데 사용하기 위한 항-CD33 THIOMABTM 항체가 제공된다. 특정 구현예에서, 본 발명은 유효량의 항-THIOMABTM 항체를 개체에 투여함을 포함하는, CD33-양성 암을 가진 개체의 치료 방법에 사용하기 위한 항-CD33 THIOMABTM 항체를 제공한다. 상기 한 구현예에서, 방법은 예를 들어 하기 기술되는 바와 같은 적어도 한 종의 부가 치료학적 제제를 유효량으로 개체에 투여함을 추가로 포함한다.
추가의 측면에 있어서, 본 발명은 약제 (예: 항-HER2 THIOMABTM 항체)의 제조 또는 제제 (manufacture 또는 preparation)에 있어서 THIOMABTM 항체의 사용을 대비한다. 예를 들어, 항-HER2 THIOMABTM 항체 약제는 유효량의 약제를 HER2-양성 암이 있는 개체에 투여함을 포함하는, HER2-양성 암의 치료방법에 사용하기 위한 것이다. 상기 한 구현예에서, 방법은 예를 들어 하기 기술되는 바와 같은 적어도 한 종의 부가 치료학적 제제를 유효량으로 개체에 투여함을 추가로 포함한다.
추가의 측면에 있어서, 본 발명은 약제 (예: 항-MUC16 THIOMABTM 항체)의 제조 또는 제제에 있어서 THIOMABTM 항체의 사용을 대비한다. 예를 들어, 항-MUC16 THIOMABTM 항체 약제는 유효량의 약제를 MUC16-양성 암이 있는 개체에 투여함을 포함하는, MUC16-양성 암의 치료방법에 사용하기 위한 것이다. 상기 한 구현예에서, 방법은 예를 들어 하기 기술되는 바와 같은 적어도 한 종의 부가 치료학적 제제를 유효량으로 개체에 투여함을 추가로 포함한다.
추가의 측면에 있어서, 본 발명은 약제 (예: 항-STEAP1 THIOMABTM 항체)의 제조 또는 제제에 있어서 THIOMABTM 항체의 사용을 대비한다. 예를 들어, 항-STEAP1 THIOMABTM 항체 약제는 유효량의 약제를 STEAP1-양성 암이 있는 개체에 투여함을 포함하는, STEAP1-양성 암의 치료방법에 사용하기 위한 것이다. 상기 한 구현예에서, 방법은 예를 들어 하기 기술되는 바와 같은 적어도 한 종의 부가 치료학적 제제를 유효량으로 개체에 투여함을 추가로 포함한다.
추가의 측면에 있어서, 본 발명은 약제 (예: 항-NAPI2B THIOMABTM 항체)의 제조 또는 제제에 있어서 THIOMABTM 항체의 사용을 대비한다. 예를 들어, 항-NAPI2B THIOMABTM 항체 약제는 유효량의 약제를 NAPI2B-양성 암이 있는 개체에 투여함을 포함하는, NAPI2B-양성 암의 치료방법에 사용하기 위한 것이다. 상기 한 구현예에서, 방법은 예를 들어 하기 기술되는 바와 같은 적어도 한 종의 부가 치료학적 제제를 유효량으로 개체에 투여함을 추가로 포함한다.
추가의 측면에 있어서, 본 발명은 약제 (예: 항-LY6E THIOMABTM 항체)의 제조 또는 제제에 있어서 THIOMABTM 항체의 사용을 대비한다. 예를 들어, 항-LY6E THIOMABTM 항체 약제는 유효량의 약제를 LY6E-양성 암이 있는 개체에 투여함을 포함하는, LY6E-양성 암의 치료방법에 사용하기 위한 것이다. 상기 한 구현예에서, 방법은 예를 들어 하기 기술되는 바와 같은 적어도 한 종의 부가 치료학적 제제를 유효량으로 개체에 투여함을 추가로 포함한다.
추가의 측면에 있어서, 본 발명은 약제 (예: 항-B7H4 THIOMABTM 항체)의 제조 또는 제제에 있어서 THIOMABTM 항체의 사용을 대비한다. 예를 들어, 항-B7H4 THIOMABTM 항체 약제는 유효량의 약제를 B7H4-양성 암이 있는 개체에 투여함을 포함하는, B7H4-양성 암의 치료방법에 사용하기 위한 것이다. 상기 한 구현예에서, 방법은 예를 들어 하기 기술되는 바와 같은 적어도 한 종의 부가 치료학적 제제를 유효량으로 개체에 투여함을 추가로 포함한다.
추가의 측면에 있어서, 본 발명은 약제 (예: 항-CD79B THIOMABTM 항체)의 제조 또는 제제에 있어서 THIOMABTM 항체의 사용을 대비한다. 예를 들어, 항-CD79B THIOMABTM 항체 약제는 유효량의 약제를 CD79B-양성 암이 있는 개체에 투여함을 포함하는, CD79B-양성 암의 치료방법에 사용하기 위한 것이다. 상기 한 구현예에서, 방법은 예를 들어 하기 기술되는 바와 같은 적어도 한 종의 부가 치료학적 제제를 유효량으로 개체에 투여함을 추가로 포함한다.
추가의 측면에 있어서, 본 발명은 약제 (예: 항-CD22 THIOMABTM 항체)의 제조 또는 제제에 있어서 THIOMABTM 항체의 사용을 대비한다. 예를 들어, 항-CD22 THIOMABTM 항체 약제는 유효량의 약제를 CD22-양성 암이 있는 개체에 투여함을 포함하는, CD22-양성 암의 치료방법에 사용하기 위한 것이다. 상기 한 구현예에서, 방법은 예를 들어 하기 기술되는 바와 같은 적어도 한 종의 부가 치료학적 제제를 유효량으로 개체에 투여함을 추가로 포함한다.
추가의 측면에 있어서, 본 발명은 THIOMABTM 항체 또는 이의 약제의 투여에 의한 암에 대한 방법을 제공한다. 특별한 구현예에서, THIOMABTM 항체 또는 이의 약제는 암 세포의 증식을 방지한다. 특별한 구현예에서, THIOMABTM 항체 또는 이의 약제는 암 세포의 세포자멸을 촉진한다. 특별한 구현예에서, THIOMABTM 항체 또는 이의 약제는 암 세포의 종양 용적을 감소시킨다. 상기 한 구현예에서, 방법은 예를 들어 하기 기술되는 바와 같은 적어도 한 종의 부가 치료학적 제제를 유효량으로 개체에 투여함을 추가로 포함한다.
본 발명의 THIOMABTM 항체는 치료법에서 단독으로 또는 다른 제제와 병용하여 사용될 수 있다. 예를 들어, 본 발명의 항체 또는 면역콘주게이트는 적어도 한 종의 부가 치료학적 제제와 함께 투여될 수 있다. 예를 들어, 부가 치료학적 제제는 제2 THIOMABTM 항체 또는 본원에서 정의한 바와 같은 화학요법제일 수 있다.
상기 주시한 병용요법은 병용 투여 (둘 이상의 치료학적 제제가 동일하거나 별도의 제형에 포함되는 경우) 및 별도의 투여를 포함하며, 이 경우에, 본 발명의 항체 또는 면역콘주게이트의 투여는 부가의 치료학적 제제 및/또는 보조제의 투여 전에, 동시에 및/또는 이후 일어날 수 있다. 본 발명의 항체 또는 면역콘주게이트는 또한 방사선 요법과 병용하여 사용될 수 있다.
본 발명의 THIOMABTM 항체 (및 어떤 부가의 치료학적 제제)는 비경구, 폐내, 및 비내와, 국부 치료를 원한다면, 병변내 투여를 포함한 어떤 적절한 방법에 의해 투여할 수 있다. 비경구 주입은 근육내, 정맥내, 동맥내, 복강내 또는 피하 투여를포함한다. 투약은 부분적으로 투여가 짧거나 만성이든지 간에 따라, 어떤 적절한 경로로, 예를 들어, 정맥내 또는 피하 주사와 같은 주사에 의해 이루어질 수 있다. 이로써 제한되는 것은 아니지만, 다양한 시점에 걸친 단일 또는 다중 투여, 볼루스 투여 및 펄스 주입을 포함한 다양한 투약 스케쥴이 본원에서 시도된다.
본 발명의 THIOMABTM 항체는 양호한 의학적 실행과 일관된 방식으로 제형화, 투약 및 투여된다. 이와 관련하여 고려되는 요인은 치료할 특별한 장애, 치료할 특별한 포유동물, 개개 환자의 임상적 상태, 장애 원인, 제제의 전달 부위, 투여 방법, 투여 스케쥴, 및 의료 행위자에게 공지된 다른 요인을 포함한다. THIOMABTM 항체는 필요치 않치만, 선택적으로 해당 장애를 예방 또는 치료하기 위해 통상 사용되는 하나 이상의 제제와 함께 제형화된다. 이러한 다른 제제의 유효량은 제형에 존재하는 항체 또는 면역콘주게이트의 양, 장애 또는 치료 형태 및 상기 논의된 다른 요인에 따라 좌우된다. 이들은 일반적으로 본원에 기재된 바와 동일한 용량으로 및 투여 경로로, 또는 본원에 기재된 용량의 약 1 내지 99%, 또는 적절하다고 경험적/임상적으로 결정된 임의 용량으로 및 임의 경로에 의해 사용된다.
질환의 예방 또는 치료를 위해, 본 발명의 THIOMABTM 항체의 적절한 용량 (단독으로 또는 하나 이상의 다른 부가 치료학적 제제와 병용하여 사용하는 경우)은 치료할 질환 상태, 항체 또는 면역콘주게이트의 형태, THIOMABTM 항체가 예방학적 또는 치료학적 목적으로 투여되든지 간에, 질환의 중증정도 및 과정, 선행 치료법, 환자의 임상적 히스토리 및 THIOMABTM 항체에 대한 반응과, 주치의 판단에 따라 좌우될 것이다. THIOMABTM 항체는 한 번에 또는 일련의 치료에 걸쳐 환자에 적절히 투여된다. 질환의 형태 및 중증정도에 따라, 약 1 ㎍/kg 내지 15 mg/kg (예: 0.1-10 mg/kg)의 THIOMABTM 항체가, 예를 들어, 하나 이상의 별도 투여에 의해 또는 연속 주입에 의하든 간에, 환자에 투여하기 위한 초기 후보 용량일 수 있다. 한 통상적인 하루 용량은 상기 언급한 요인에 따라, 약 1 ㎍/kg 내지 100 mg/kg 또는 그 이상의 범위일 수 있다. 상태에 따라 며칠 또는 그 이상에 걸친 반복 투여를 위해, 치료는 일반적으로 원하는 질환 증상의 억제가 일어날 때까지 유지한다. THIOMABTM 항체의 한 예시적 용량은 약 0.05 mg/kg 내지 약 10 mg/kg의 범위이다. 이에 따라, 약 0.5 mg/kg, 2.0 mg/kg, 4.0 mg/kg 또는 10 mg/kg (또는 이의 임의 조합)중 하나 이상의 용량이 환자에 투여될 수 있다. 상기 용량은 간헐적으로, 예를 들어, 매주 또는 3주 마다 투여될 수 있다 (예를 들어, 환자가 약 2 내지 약 20회, 또는 예를 들어, 약 6회 용량의 항체를 투여받도록). 초기 더 높은 부하 용량에 이어서, 1회 이상의 저용량이 투여될 수 있다. 그러나, 다른 투약 계획이 유용할 수 있다. 이 치료법의 과정은 통상적인 기술 및 분석에 의해 용이하게 모니터된다.
상기 제형 또는 치료학적 방법중 어떤 것은 본 발명의 THIOMABTM 항체 및 본원에 정의한 바와 같은 제2 화학요법제를 모두 사용하여 수행할 수 있음을 이해한다.
표지된 항체 영상법
본 발명의 다른 구현예에서, 시스테인 가공된 항체는 시스테인 티올을 통해 방사성 핵종, 형광 염료, 생물발광-트리거링 기질 모이어티, 화학발광-트리거링 기질 모이어티, 효소, 및 진단, 약역학적 및 치료학적 적용에 의한 영상 실험용 다른 검출 표지로 표지화할 수 있다. 일반적으로, 표지된 시스테인 가공 항체, 즉 "바이오마커" 또는 "프로브"는 살아있는 유기체, 예를 들어, 인간, 설치류 또는 다른 작은 동물, 관류 기관 또는 조직 샘플에 주사, 수혈 또는 경구 섭취에 의해 투여된다. 프로브의 분포는 시간 경과에 따라 검출하고 영상으로 나타낸다.
제조 제품
본 발명의 다른 구현예에서, 상기 기재된 장애 치료에 유용한 물질을 함유하는 제조 제품 또는 "키트"가 제공된다. 제조 제품은 용기 및 용기상에 또는 이와 관련하여 표지 또는 패키지 삽입물을 포함한다. 적절한 용기는, 예를 들어, 병, 바이알, 시린지, 석고팩 등을 포함한다. 용기는 유리 또는 플라스틱과 같은 다양한 물질로부터 형성될 수 있다. 병태를 치료하는데 효과적이고, 멸균 접속구를 가질 수 있는 용기가 본 발명의 THIOMABTM 항체를 유지한다 (예를 들어, 용기는 피하 주사 바늘이 뚫을 수 있는 마개가 있는 정맥내 용액 백 또는 바이알일 수 있다). 조성물중 적어도 한 종의 활성제는 THIOMABTM 항체이다. 표지 또는 패키지 삽입물은 조성물이 암과 같은, 선택된 병태를 치료하는데 사용됨을 나타낸다. 대안적으로, 또는 부가적으로, 제조 제품은 약학적으로-허용되는 완충제, 예를 들어, 세균발육저지 주사용수 (BWFI), 인산염-완충된 염수, 링거액 및 덱스트로즈 용액을 포함하는 제2 (또는 제3) 용기를 추가로 포함할 수 있다. 다른 완충제, 희석제, 필터, 바늘 및 시린지를 포함한, 상용 및 사용자 관점으로부터 바람직한 다른 물질을 추가로 포함할 수 있다.
실시예
실시예 1 - THIOMAB TM 항체의 제조
THIOMABTM 항체는 hu4D5 플라스미드를 이중 가닥 DNA 주형으로 사용하여 생성하였다. PCR 기반 부위-특이적 돌연변이 유발은 Agilent Technologies로부터의 Quick Change II XL 키트를 사용하여 수행하였다.
부위 특이적 돌연변이 유발을 위한 방법을 사용하여 THIOMABTM 항체를 제조하였다: 1) Hu4D5 플라스미드 DNA (50-100　ng)를 사용하고, 2) 목적하는 돌연변이를 함유하는 전방 및 후방 프라이머 (1μM each)를 사용하며, 3) dNTP (0.4　mM) 및 PfuUltra HF DNA 폴리머라제 (2.5 units)를 25㎕ 반응 혼합물에 가하고, 4) 샘플을 유전자 증폭기(Applied Biosystems, Foster City, CA)에서 초기 변성(94℃에서 4　min)에 이어 20회의 0.5　min 변성(94℃), 0.5　min 어닐링(52℃) 및 10　min 쇄 연장(68℃)을 위해 배양하고, 5) PCR 증폭된 DNA 샘플을 DpnI 제한 효소와 37℃에서 4　h 동안 배양하고, 6) 적격 세포 (Novablue Singles, 50㎕)를 DpnI 처리된 PCR 샘플 (2㎕)로 형질전환시키고, 7) 단일 콜로니를 형질전환된 플레이트로부터 골라내어 카베니실린 (50ug/ml)을 함유하는 5ml 2YT 배지에서 성장시키고, 8) 플라스미드 DNA를 정제하고 수득된 콜로니를 DNA 시퀀싱에 의해 스크리닝하여 항체 서열의 경쇄 및 중쇄 영역에서의 비-특이적 돌연변이의 부재 및 시스테인 치환을 확인하였다.
시스테인 가공된 hu4D5 플라스미드를 단백질 생산을 위해 포유동물 세포주에 안정적으로 형질감염시켰다. 이 연구에 사용되는 293T 세포주는 SV40 거대 T-항원으로 안정적으로 형질감염된 현탁액 적응된 HEK293 세포주이었다.　 세포를 일시적인 형질감염 전에 80% 가습된 인큐베이터 중에서 25mm 트루 직경에서 37℃, 5% CO2, 및 150rpm 교반 속도의 조건하에 진탕 플라스크 속에서 씨드 트레인으로서 재배하였다. 1% 초저 IgG 혈청(Sigma, St. Louis, MO)으로 보충된 Gibco Freestyle 293 발현 배지(Life Sciences, Carlsbad CA)를 씨드 트레인 및 생산 배지로서 사용하였다. 달리 명시되지 않는 한, 모든 일시적인 형질감염은 30mL 최종 작업 용적을 갖는 50mL 튜브스핀(Stettler et al., 2007)에서 수행하였으며 96개의 배치에서 처리하였다.　 효율성을 위해 Biomek FXP　액체 취급 로봇을 사용하여 세포를 96개 튜브스핀에 대량 분산시켰다. 형질감염 후, 세포를 80% 가습된 Kuhner ISF1-X 인큐베이터 중에서 50 mm 트루 직경으로 37℃, 5% CO2　및 225rpm 교반 속도에서 7일간 배양하였다.
형질감염을 위해, 세포를 1.0e6개 세포/mL로 시딩하고 형질감염 전 2시간 동안 37℃, 5% CO2에서 배양하였다. 시딩 시에 발프로산을 생산 배양물에 75 mM의 농도로 가하였다. 선택된 THIOMABTM hu IgG1 항체를 암호화하는 플라스미드 DNA를 최대 프렙 규모에서 정제하였다(Sigma, St. Louis, MO).　 표준 일시적 형질감염 방법을 사용하여, 30 ug의 DNA를 DMEM-기본 배지에서 3mL의 최종 용적으로 되도록 희석시켰다.　 그후 60 ul의 7.5 mM 25 kDa 선형 PEI를 DNA 용액에 가하고, 혼합하고, 세포에 가하기 전에 실온에서 10 mins 동안 배양하였다.
실시예 2 - THIOMAB TM 항체의 콘주게이트
실시예 1에 따라 제조된 각각의 시스테인 가공된 항체(THIOMABTM 항체)를 두 개의 링커 약물에 별도로 콘주게이트시켰다: MC-vc-PAB-MMAE 및 PDS-MMAE. 예를 들면, 4D5 LC-K149C 시스테인 가공된 항체를 두 개의 상이한 THIOMABTM 항체로 만들었다: 1) 4D5 LC-K149C-MC-vc-PAB-MMAE 및 2) 4D5 LC-K149C-PDS-MMAE. 바람직한 콘주게이트의 추가의 예는 표 1과 2 및 본원의 상세한 설명에서 찾아볼 수 있으며, EU 넘버링에 따라 4D5 HC-A140C-MC-vc-PAB-MMAE 및 4D5 HC-A140C-PDS-MMAE 및 EU 넘버링에 따라 4D5 HC-L174C-MC-vc-PAB-MMAE 및 4D5 HC-L174C-PDS-MMAE를 포함하지만 이에 제한되지 않는다. 전체 항체 스크린에서 확인된 상부의 안정한 콘주게이트의 또 다른 예는 표 3과 4에서 참고할 수 있다. -vc 및 PDS 콘주게이트을 위한 바람직한 부위에 대해서는 도 21 참조.
THIOMABTM 항체의 콘주게이트는 96 웰 필터 플레이트(용적 2 ml, 폴리프로필렌 0.45um 필터, 제조원; EK Scientific)에서 수행하였다. 플레이트는 수성 완충제가 500xg에서 2 min 동안 원심분리시에는 유동하도록 하였다. 450㎕의 MabSelect SuRe 수지(GE Healthcare)를 20% 에탄올 중의 50% 슬러리의 형태로 각 웰에 가하였다. 수지를 3회 세척하고, 50mM Tris pH 8.0, 150mM NaCl, 2mM EDTA (완충제 A)에서 평형화시켰다. 1.5mg의 각각의 THIOMABTM 항체를 각 웰에 가하고, 플레이트 진탕기 상에서 600 RPM에서 RT에서 30 min 동안 수지에 결합되도록 하였다. 30 min 후 플레이트를 원심분리하여 과량의 완충제를 제거하였다. 그후, THIOMABTM 항체를 완충제 A 중의 0.9 ml의 2 mM 디티오트레이톨 (DTT)의 존재하에 RT에서 밤새 교반하면서 환원시켰다. 환원제(즉, DTT) 및 임의의 시스테인 또는 글루타티온 블럭은 완충제 A로 2회 세척하여 제거하였다.
그후, 플레이트를 완충제 A 중의 1ml의 1 mM 데하이드로아스코르브산 (DHAA)으로 3회 세척하여 플레이트를 산화제로 포화시켰다. 완충제 A 중의 0.9 ml의 1 mM DHAA의 마지막 첨가 후 THIOMABTM 항체를 플레이트 진탕기 상에서 RT에서 3 시간 동안 재산화되도록 하였다. 산화제는 원심분리에 의해 제거하였다.
완충제 A 중의 10% DMA에 용해시킨 (이용 가능한 티올 그룹에 비해) 두 배 몰 과량의 링커 약물(MC-vc-PAB-MMAE 또는 PDS-MMAE)을 가하고 플레이트 진탕기 상에서 RT에서 2 시간 동안 THIOMABTM 항체와 함께 배양하였다. 과량의 링커 약물은 플레이트를 평형화 완충제(완충제 A)로 6회 세척함으로써 제거하였다.
THIOMABTM 항체를 플레이트 진탕기 상에서 RT에서 30 min 동안 0.1 M 글리신 완충제, pH 2.7로 용리시켰다. 그후, THIOMABTM 항체를 15%의 0.5M Tris, pH 8.0로 즉시 중화시켰다. THIOMABTM 항체당 콘주게이트된 약물의 수는 LC/MS 분석으로 정량하였다. 콘주게이트의 응집은 크기 배제 크로마토그래피로 평가하였다.
실시예 3 - THIOMAB TM 항체의 질량 분광 분석
각각의 THIOMABTM 항체의 약물-항체 비(DAR)는 질량 분광 분석(즉, LC/MS 분석)을 사용하여 결정하였다.
LC/MS 분석은 6224 질량 이동시보 (TOF) LC/MS 기기(Agilent Technologies) 상에서 수행하였다. 샘플을 80℃로 가열한 PRLP-S 컬럼, 1000Å, 8㎛ (50 mm
Figure pct00105
2.1 mm, Agilent Technologies) 상에서 크로마토그래피하였다. 0.7 ml/min 유량 (용매 A, 물 중의 0.05% TFA; 용매 B, 아세토니트릴 중의 0.04% TFA)에서 3분간 34-42% B의 선형 구배를 사용하고 용리제를 전자분무 공급원을 사용하여 바로 이온화시켰다. 데이터를 수집하고 Agilent Mass Hunter 정량 분석 소프트웨어를 사용하여 디콘볼루션하였다. 약물 DAR을 LC/MS 크로마토그램에 존재하는 디콘볼루션 피크의 풍부(abundance)를 사용하여 계산하였다. DAR 계산은, 예를 들면, 상기 표 6-12에서 찾아볼 수 있다.
게다가, LC/MS 분석을 항체의 모든 위치에 단일의 가공된 시스테인 돌연변이를 함유하는 4D5 시스테인 가공된 항체에 대해 수행하였다. 표 13-16에서 블랭크 셀은 0 DAR이 아니라 결정적이지 않은 실험을 나타낸다.
표 13. 중쇄 시스테인 치환을 가진 PDS- 결합된 THIOMAB TM 항체의 DAR .
Figure pct00106
Figure pct00107
Figure pct00108
Figure pct00109
표 14. 경쇄 시스테인 치환을 가진 PDS- 결합된 THIOMAB TM 항체의 DAR .
Figure pct00110
Figure pct00111
Figure pct00112
표 15. 중쇄 시스테인 치환을 가진 vc - 결합된 THIOMAB TM 항체의 DAR .
Figure pct00113
Figure pct00114
Figure pct00115
Figure pct00116
Figure pct00117
표 16. 경쇄 시스테인 치환을 가진 vc - 결합된 THIOMAB TM 항체의 DAR .
Figure pct00118
Figure pct00119
Figure pct00120
실시예 4 - MC - vc - MMAE 및 PDS- MMAE THIOMAB TM 항체의 응집 분석
응집 분석은 표 6-10에 나타낸 THIOMABTM 항체의 각각에 대해 크기 배제 검정을 통해 수행하였다.
크기 배제 크로마토그래피는 1100 시리즈 HPLC(Agilent Technologies) 상에서 수행하였다. 샘플을 Shodex KW 802.5 컬럼 상에서 크로마토그래피하였다. 0.75 mL/min에서 15 min 동안 0.2 M 인산칼륨, 0.25 M 염화칼륨, pH 6.2의 이동상을 사용하는 등용매법을 사용하여 콘주게이트를 용리시켰다. 응집 퍼센트는 UV 280nm 크로마토그램으로부터의 응집물 및 단량체 피크의 통합 면적으로부터 계산하였다. 도 3은 응집 분석 및 계산에 사용되는 응집체 및 단량체 피크의 대표적인 플롯을 보여준다.
실시예 5- THIOMAB TM 항체의 콘주게이트 분석.
THIOMABTM 항체의 콘주게이트 분석은 액체 크로마토그래피-질량 분광법(LC/MS 또는 LCMS)을 사용하여 수행하였다. 도 4a 및 도 4b에 도시된 바와 같이, THIOMABTM 항체의 UV280 LC/MS 크로마토그래프는 DAR0(네이키드 항체), DAR1, 및 DAR2 콘주게이트을 보여준다. 적격 항체 시스테인(여기서 항체 내의 모든 위치에 단일 시스테인 돌연변이를 지닌 4D5 항체를 제조하여 ADC를 만들기 위해 링커-약물을 부착시킬 목적으로 항체 내에 예측할 수 없는 가장 안정한 부위를 결정하였다) 스크린의 가장 안정한 부위에 대한 LCMS 결과가 표 7 및 9에 나타내어져 있다.
실시예 6 - MC-vc-MMAE 및 PDS-MMAE THIOMAB TM 항체의 안정성 분석.
PDS-MMAE 및 MC-vc-MMAE THIOMABTM 항체의 안정성 샘플을 세 가지 시점(0 시간, 48 시간 및 96 시간)에서의 래트 혈장 및 완충제(0 시간) 둘 다를 위해 듀플리케이트로 생산하였다. 안정성 스크린에 대한 실험 과정의 플로우 차트가 도 5에 제공되어 있다. 안정성 샘플을 생성하기 위해, 9㎕의 각각의 THIOMABTM 항체(즉, 공급원 물질)를 351㎕의 래트 혈장 또는 완충제 (1X PBS, 0.5% BSA, 15PPM Proclin)에 가한 다음 완전히 혼합하였다. 공급원 물질의 농도(Conc.)가, 예를 들면, 표 6, 8, 및 10에 제공되어 있다. 일단 혼합되면, 120㎕의 래트 혈장 안정성 샘플을 세 가지 다른 시점을 위한 세 개의 별도의 튜브 세트에 분취하였다. 그후, 래트 혈장 및 완충제를 위한 0 시간 시점은 -80℃ 냉동고에 배치하는 반면, 래트 혈장 및 완충제를 위한 48 시간 및 96 시간 시점은 37℃ 인큐베이터에서 진탕기 상에 배치하였다. 48 시간 및 96 시간 샘플이 소정의 시점에 도달할 때, 이들을 또한 -80℃ 냉동고에 배치하였다. 0시간, 48 시간, 및 96 시간에서 질량 분광 분석을 사용하여 MC-vc-MMAE 및 PDS-MMAE LC-R142C THIOMABTM 항체의 안정성을 보여주는 대표적인 그래프가 도 6a 및 6b에 제공되어 있다.
ELISA 검정을 사용하여 PDS-MMAE 및 MC-vc-MMAE THIOMABTM 항체의 안정성을 측정하였다. 래트 혈장에서의 전체 항체(콘주게이트된 및 비콘주게이트된 THIOMABTM 항체)의 농도는 포획 항체로서 인간 erb2의 세포외 도메인(ECD)을 사용하고 검출 항체로서 염소 항-인간 IgG 호스래디쉬 퍼옥사이드(HRP)를 사용하여 ELISA에 의해 측정하였다. 검정은 0.5 mg/mL의 검출 한계(LOD)와 800배의 최소 희석도를 가졌다.
래트 혈장에서 콘주게이트된 PDS-MMAE 및 MC-vc-MMAE THIOMABTM 항체의 농도는 포획을 위해 항약물 단클론성 항체를 사용하고 검출을 위해 염소 항-인간 IgG-HRP를 사용하여 ELISA에 의해 측정하였다. 검정은 0.5 mg/mL의 검출 한계(LOD)와 800배의 최소 희석도를 가졌다.
특이 시스테인 가공된 부위에서의 콘주게이트에 기초한 약물 부하 안정성을 계산하였다. 전체 항체에 대해 정규화된 0시간에서의 콘주게이트 항체 농도는 [C0]/[T0] = nC0으로 되도록 (ELISA에 의해 측정되는 바와 같은) 0시간에서의 전체 항체 농도에 대한 시간 0시간에서의 콘주게이트 항체 농도의 비를 사용하여 계산하였다. 전체 항체에 대해 정규화된 48시간에서의 콘주게이트 항체 농도는 [C48]/[T48] = nC48로 되도록 (ELISA에 의해 측정되는 바와 같은) 48시간에서의 전체 항체 농도에 대한 시간 48시간에서의 콘주게이트 항체 농도의 비를 사용하여 계산하였다.
약물 부하 안정성 퍼센트는, nC48 / nC0 = 퍼센트 약물 부하 안정성으로 되도록 (ELISA에 의해 측정되는 바와 같은) 0시간에서의 콘주게이트 항체에 대한 48시간에서의 콘주게이트 항체의 비를 계산하여 안정성 퍼센트를 구함으로써 계산하였다.
도 7은 48 시간 시점에서 측정한 바람직한 PDS-MMAE THIOMABTM 항체의 안정성의 그래프를 보여준다. 도 8은 48 시간 시점에서 측정한 바람직한 MC-vc-MMAE THIOMABTM 항체의 안정성의 그래프를 보여준다. 모든 스크리닝된 PDS-MMAE 및 MC-vc-MMAE THIOMABTM 항체의 안정성은 본원에 제공된 표에서 찾아볼 수 있다.
실시예 7 - LC-K149C, LC-V205C, 및 HC-A114C THIOMAB TM 항체의 제조
LC-K149C, LC-V205C, 및 HC-A114C THIOMABTM 항체를 항-CD33 및 항-HER2 항체를 사용하여 제조하고 이들 THIOMABTM 항체의 안정성은 평균 DAR에 기초하여 평가하였다(도 9). 항-HER2 LC-K149C THIOMABTM 항체는 HC-A114C 및 LC-V205C에 비해 항-HER2 항체에서 놀라운 안정성을 나타내었다. 특히, 항-HER2 LC-K149C THIOMABTM 항체의 약물 콘주게이트는 안정하였으며 THIOMABTM 항체는 콘주게이트 후 6일 동안 2의 DAR을 유지하였다. 유사하게, 항-CD33 LC-K149C THIOMABTM 항체 또한 6일 동안 2의 DAR을 유지하였다. 이와 달리, 항-HER2 LC-V205C 및 HC-A114C THIOMABTM 항체.
실시예 8 - 콘주게이트 한지 48 시간 및 96 시간 후의 PDS- MMAE THIOMAB TM 항체의 안정성
항체의 시스테인 스크린은 생성된 PDS-THIOMABTM 항체가 ≥ 1DAR, ≥　1mg/mL 공급원 스톡 농도, ≤ 50% 응집, 재산화, ELISA(둘 다 듀플리케이트로)에 기초하여 48시간에 걸친 래트 혈장에서의 VC 변이체 약물 부하에 대한 ≥ 80% 안정성, ELISA(둘 다 듀플리케이트로)에 기초하여 48시간에 걸친 래트 혈장에서의 PDS 변이체 약물 부하에 대한 ≥　70% 안정성, 및 신뢰할 수 있는 MS 스펙트럼에 의해 확인된 96시간까지의 안정성을 갖는지를 측정하기 위해 수행하였다. 구체적으로, 4D5 항체가, 당업계의 숙련가가 임의의 항체가 4D5 항체를 치환할 수 있는지 알 수 있도록 제안된 예시를 위해 사용되었다.
안정한 ADC를 생산하기 위한 링커-약물 부착 및 시스테인 가공에 대한 경쇄 및 중쇄 내의 스크린 확인된 바람직한 후보물질(표 1 및 2 참조) 및 추가의 안정한 부위(표 3 및 4 참조). 실험 결과는 표 6-12에 제공되어 있다.
실시예 9 - 콘주게이트 한지 48 시간 및 96 시간 후의 MC-vc- MMAE THIOMAB TM 항체의 안정성
항체의 시스테인 스크린은 생성된 MC-vc-THIOMABTM 항체가 ≥ 1DAR, ≥　1mg/mL 공급원 스톡 농도, ≤ 50% 응집, 재산화, ELISA(둘 다 듀플리케이트로)에 기초하여 48시간에 걸친 래트 혈장에서의 VC 변이체 약물 부하에 대한 ≥ 80% 안정성, ELISA(둘 다 듀플리케이트로)에 기초하여 48시간에 걸친 래트 혈장에서의 PDS 변이체 약물 부하에 대한 ≥　70% 안정성, 및 신뢰할 수 있는 MS 스펙트럼에 의해 확인된 96시간까지의 안정성을 갖는지를 측정하기 위해 수행하였다. 구체적으로, 4D5 항체가, 당업계의 숙련가가 임의의 항체가 4D5 항체를 치환할 수 있는지 알 수 있도록 제안된 예시를 위해 사용되었다.
스크린은 안정한 ADC를 생산하기 위한 링커-약물 부착 및 시스테인 가공에 대한 경쇄 및 중쇄 내의 바람직한 후보물질(표 1 및 2 참조) 및 추가의 안정한 부위(표 3 및 4 참조)를 확인하였다. 실험 결과는 표 6-12에 제공되어 있다.
실시예 10 - 시험관내 세포 증식 검정
THIOMABTM 항체의 효능은 하기 프로토콜을 사용한 세포 증식 검정에 의해 측정할 수 있다(문헌 참조; CellTiter Glo Luminiscent Cell Viability Assay, Promega Corp. Technical Bulletin TB288; Mendoza et al (2002) Cancer Res. 62:5485-5488):
1. 배지 중에 약 104개 세포(SKBR-3, BT474, MCF7 또는 MDA-MB-468)를 함유하는 100 μl 분취량의 세포 배양물을 96-웰, 불투명한 벽이 있는 플레이트의 각 웰에 침착시킬 수 있다.
2. 배지는 함유하고 세포는 없는 대조군 웰을 제조할 수 있다.
3. THIOMABTM 항체를 실험 웰에 가하여 3-5일간 배양할 수 있다.
4. 플레이트를 대략 30분 동안 실온으로 평형화시킬 수 있다.
5. 각 웰에 존재하는 세포 배양 배지의 용적과 동일한 용적의 CellTiter-Glo 시약을 가할 수 있다.
6. 내용물을 오비탈 진탕기 상에서 2분간 혼합하여 세포 용해를 유도할 수 있다.
7. 플레이트를 실온에서 10분 동안 배양하여 발광 신호를 안정화시킬 수 있다.
8. 발광을 기록하고 RLU = 상대 발광 단위로서 그래프에 보고할 수 있다.
특정 세포를 96-웰 플레이트, 50 μL/웰에서 1000-2000/웰(PC3 라인) 또는 2000-3000/웰(OVCAR-3)로 시딩할 수 있다. 1일(PC3) 또는 2일(OVCAR-3) 후, THIOMABTM 항체를 50 μL 용적으로 9000, 3000, 1000, 333, 111, 37, 12.4, 4.1, 또는 1.4 ng/mL의 최종 농도로 되도록 가할 수 있으며, "ADC 없음(no ADC)" 대조군 웰에는 배지만을 제공한다. 조건은 3일(PC3) 또는 4-5일(OVCAR-3) 후 듀플리케이트 또는 트리플리케이트이며, 100 μL/웰 Cell TiterGlo II를 가하고(루시퍼라제-기반 검정; 증식은 ATP 수준에 의해 측정함) 세포 계수는 광도계를 사용하여 측정할 수 있다. 데이터는, 예를 들면, 각 세트의 리플리케이트에 대한 광도의 평균과 표준 편차 오차 막대로서 플롯팅할 수 있다. 대안적으로, CellTiter Glo 발광 세포 생존력 검정(Promega)은 Promega의 프로토콜에 따라 수행할 수 있다:
1. 1000개 세포/웰의 PC3/Muc16, PC3/ neo (50㎕/웰)의 배지를 평판배양한다. Ovcar3 세포는 2000개 세포/웰(50㎕)의 배지로 평판배양해야 한다(PC3/ neo 및 PC3/MUC16는 50/50/10%FBS/글루타민/250㎍/mL에서 성장시키고 G-418 OVCAR-3은 RPMI/20%FBS/글루타민에서 성장시킴). 세포를 밤새 부착되도록 한다.
2. THIOMABTM 항체를 1:3 18㎍/ml의 작업 농도에서 시작하여 배지에서 1:3 연속 희석시킨다(이것은 9㎍/ml의 최종 농도를 초래한다). 50㎕의 희석된 ADC를 50㎕의 세포에 가하며, 배지는 이미 웰에 있다.
3. 72-96 시간 배양한다(표준은 72시간이지만, 세포가 85-95% 융합될 경우 검정을 중단시키기 위해 0 ug/mL 농도를 주시함).
4. 100㎕/웰의 Promega Cell Titer Glo 시약을 가하고, 3 min 진탕시키고, 광도계에서 판독한다.
실시예 11 - 고 발현 HER2 형질전환 외식편 마우스에서의 종양 성장 억제, 생체내 효능
형질전환 실험에 적합한 동물은 Taconic (Germantown, N.Y.)과 같은 표준 상업 공급원으로부터 입수할 수 있다. 여러 품종이 적합하지만, FVB 암컷 마우스가, 종양 형성에 대한 이들의 보다 높은 감수성 때문에 바람직하다. FVB 수컷은 교미를 위해 사용하였으며 정관 절제 수술을 한 CD.1 스터드(studs)는 가임신을 자극하기 위해 사용하였다. 정관 절제 수술을 한 마우스는 임의의 상업 공급처로부터 입수할 수 있다. 창립자(founder)를 FVB 마우스 또는 129/BL6 x FVB p53 이형콘주게이트 마우스와 함께 길렀다. p53 대립형질에 이형콘주게이트성을 가진 마우스를 사용하여 종양 형성을 잠재적으로 증가시켰다. 그러나, 이것은 불필요한 것으로 판명되었다. 따라서, 일부 F1 종양은 혼합 균주이다. 창립자 종양은 FVB 단독이다. 한배를 갖지 않는 어느 정도 발달한 종양을 가진 6마리의 창립자가 수득되었다.
종양을 갖는 동물(Fo5 mmtv 형질전환 마우스로부터 번식된 동종이식편)을 ADC의 IV 주사에 의해 단일 또는 다중 용량으로 처리하였다. 종양 체적을 주사 후 다양한 시점에서 평가하였다.
종양은 돌연변이적으로 활성화된 형태의 neu, HER2의 래트 상동기관을 발현하는 형질전환 마우스에서 쉽게 발생하지만, 사람 유방암에서 과발현되는 HER2는 돌연변이되지 않으며 종양 형성은 돌연변이되지 않은 HER2를 과발현하는 형질전환 마우스에서 훨씬 덜 왕성하다(문헌 참조; Webster et al (1994) Semin. Cancer Biol. 5:69-76).
돌연변이되지 않은 HER2로 종양 형성을 개선시키기 위해서는, 이러한 업스트림 ATG 코돈의 번역의 개시를 방지하기 위해 형질전환 마우스를 업스트림 ATG가 결실된 HER2 cDNA 플라스미드를 사용하여 생산하였으며, 이는 달리 HER2의 다운스트림 정통 개시 코돈으로부터의 번역 개시의 빈도를 감소시킨다(예를 들면, 문헌 참조; Child et al (1999) J. Biol. Chem. 274: 24335-24341). 추가로, 키메릭 인트론을 5' 말단에 부가하였으며, 이것 또한 이전에 보고된 바와 같이 발현이 수준을 증진시킨다(문헌 참조; Neuberger and Williams (1988) Nucleic Acids Res. 16:6713; Buchman and Berg (1988) Mol. Cell. Biol. 8:4395; Brinster et al (1988) Proc. Natl. Acad. Sci. USA 85:836). 키메릭 인트론은 Promega 벡터, Pci-neo 포유동물 발현 벡터(bp 890-1022)로부터 유도되었다. cDNA 3'-말단은 인간 성장 호르몬 엑손 4 및 5, 및 폴리아데닐화 서열에 의해 플랭크되어 있다. 게다가, FVB 마우스는 이 품종이 종양 발달에 더욱 감소성이 있기 때문에 사용되었다. MMTV-LTR로부터의 프로모터를 사용하여 유선에서 조직-특이적 HER2 발현을 보장하였다. 종양 형성에 대한 감수성을 증가시키기 위해 동물에게 AIN 76A 식이를 공급하였다(문헌 참조; Rao et al (1997) Breast Cancer Res. and Treatment 45:149-158).
유사한 생체내 모델을 만들고 추가의 종양 타입에 대해 연구할 수 있다. 예를 들면, 생체내 모델을 만들어 CD33 발현 모델을 사용한 항-CD33 THIOMABTM 항체의 효능을 연구할 수 있다.
실시예 12 - 링커-약물 불안정성을 구제하기 위한 HC-A140C의 사용
본원에 논의된 바와 같이, (Kabat 넘버링에 따라) LC-K149C가 링커 약물을 보유하는데 있어서의 이들의 안정성 때문에 시스테인 치환에 바람직한 부위인 것으로 밝혀졌다(즉, 링커-약물은 가공된 LC-K149C 위치에서 항체에 결합된 채로 있다). 그러나, 예기치 못하게도, 비록 링커가 LC-K149C에서 시스테인 가공된 항체에 결합된 채로 있더라도, 특정 약물은 LC-K149C 위치에서 시스테인 가공된 항체에 결합되는 경우 효소적 변성에 적용되는 것으로 밝혀졌다. 특히, 링커를 통해 LC-K149C에 부착된 특정 약물은 카바메이트 그룹 소실, 아세틸 소실(즉, 탈아세틸화), 포스페이트 소실, 당 소실, 및 에테르 분해와 같은 효소적 변성에 적용되는 것으로 놀랍게도 밝혀졌다.
LC-K149C에서 시스테인 가공된 항체에 부착된 경우 (크립토피신, 투불리신 M, 탁소이드 약물, 및 CBI-PBD 이종이합체 링커-약물 중간체를 포함하지만 이에 제한되지 않는) 특정 약물의 변성을 관찰한 후, (HC-A118C, LC-V205C, HC-S121C, 및 HC-A140C를 포함한) 표 1-4로부터의 추가의 부위를 이들의 사용이 약물 변성을 감소시키고/시키거나 없앨 수 있는지를 알아보기 위해 실험하였다. 특히, 트립토피신은 아미드 절단을 겪고, 투불리신은 아세틸 소실(즉, 탈아세틸화)을 겪으며, CBI-PBD 이종이합체 링커-약물 중간체는 카바메이트 소실을 겪고, 탁소이드는 불안정하며 시스테인 가공된 항체에서 링커를 통해 LC-K149C에 콘주게이트되는 경우 절단을 보이는 것으로 관찰되었다(도 13 참조).
예기치 못하게도, HC-A140C는 투불리신의 아세틸 그룹의 보호를 제공하는 것으로 밝혀졌다(도 14a-14c 참조). 특히, LCMS를 사용하여, 24시간의 배양 후 LC-K149C 보다 부착 부위로서 HC-A140C를 사용하면 약물이 덜 분해되는 것으로 나타났다(도 14a). HC-A140C는 유사하게, 신규한 전혈 검정을 사용하여 보다 안정한 것으로 나타났다.
신규한 전혈(WB) 검정(본래로 본원에 기재됨)을 위해 샘플을 마우스 (CB17 SCID), 래트 (Sprague-Dawley), 시노몰구스 원숭이 및/또는 인간 전혈 혈장 뿐만 아니라 완충제 (0 및 24시간)에서 생성하였다.　 혈액을 생물재생(Bioreclamation)에 의해 수집한 다음 밤새 냉장 운송하여 전혈 도착 즉시 샘플을 생산하였다. 안정성 샘플을 생성하기 위해, 모든 분자가 농도가 1mg/mL로 되도록 공급원 물질의 초기 희석을 완충제 (1X PBS, 0.5% BSA, 15PPM Proclin) 중에서 수행하였다. 그후 1:10x 희석(36uL의 1mg/mL 초기 희석물 + 324uL 혈액 또는 완충제)을 수행하여 최종 농도가 100ug/mL인 안정성 샘플을 생성하였다.　 일단 혼합되면, 150㎕의 전혈/완충제 안정성 샘플을 두 가지 다른 시점에 대해 두 개의 별도의 튜브 세트에 분취하였다. 그후, 0시간 시점을 -80℃에 배치하였다.
HC-A140C 및 LC-K149C에서의 아세틸 소실은 3개 라운드의 WB 검정에서 확인하였다. HC-A140C가 아세틸 소실 변성을 구제하는 것으로 확인되었다(도 15).
예상치 못하게도, HC-A140C가 CBI-PBD 이종이합체 링커-약물 중간체의 카바메이트 그룹의 보호를 제공하는 것으로 밝혀졌다(도 16a-16c 참조). 특히, LCMS를 사용하여, 24시간의 배양 후 부착 부위로서 HC-A140C를 사용하는 약물의 분해가 LC-K149C보다 덜한 것으로 나타났다(도 16a). HC-A140C가 유사하게 신규한 전혈 검정을 사용하여 보다 안정한 것으로 나타났다(도 17).
또한 예기치 못하게도, HC-A140C는 탁소이드의 변성으로부터의 보호를 제공하는 것으로 밝혀졌다(도 18a-18c 참조). 특히, LCMS를 사용하여, 24시간의 배양 후 부착 부위로서 HC-A140C를 사용하는 약물의 분해가 LC-K149C보다 덜한 것으로 나타났다(도 18a). HC-A140C가 유사하게 신규한 전혈 검정을 사용하여 (예를 들어, 탁소이드 약물 소실을 보호하는 측면에서) 보다 안정한 것으로 나타났다(도 19).
LC-K149C 대신에 HC-A140C에 약물을 결합시킴으로써 보호가 투불리신, CBI-PBD 이종이합체 링커-약물 중간체, 및 탁소이드 약물에 대해 예기치 못하게도 관찰된 것처럼, HC-A140C가 아미드 및 에스테르 절단으로부터 크립토피신을 보호하는 것으로 또한 밝혀졌다(도 20 참조).
실험을 PDS 및/또는 말레이미드 (즉, vc-) 링커를 갖는 항-HER2 항체(특히 4D5) 및/또는 항-CD22 항체 상에서 수행하였다.
실시예 13 - PDS 결합을 위한 가장 안정한 부위의 확인
ELISA 스크린으로부터 가장 안정한 변이체를 친화도-포획 LC-MS 검정을 사용하여 0, 48 및 96 시간 혈장 안정성 샘플을 분석함으로써 추가로 평가하였다. 먼저, 스트렙타비딘-코팅된 자성 비드(Life Technologies Corporation, Grand Island, NY)를 HBS-EP 완충제 (GE Healthcare, Sunnyvale, CA)로 2x 세척한 다음 KingFisher Flex (Thermo Fisher Scientific, Waltham, MA)를 사용하여 인간 erb2의 비오티닐화 세포외 도메인(ECD)과 혼합하고 부드럽게 교반하면서 실온에서 2시간 동안 배양하였다. 2시간 후, SA-비드/비오틴-ECD 복합체를 HBS-EP 완충제로 2x 세척하고, 희석된 혈장 안정성 샘플과 혼합한 다음 부드럽게 교반하면서 실온에서 2시간 동안 배양하였다. 2시간 후, SA-비드/비오틴-ECD/샘플 복합체를 HBS-EP 완충제로 2x 세척한 다음 물(Optima H2O, Fisher Scientific, Pittsburgh, PA)로 2x 세척하고 마지막으로 10% 아세토니트릴로 1x 세척하였다. 그후, 비드를 용리를 위해 30% 아세토니트릴/0.1% 포름산 중에 배치하고, 여기서 비드를 수집하기 전에 부드럽게 교반하면서 실온에서 30mins 동안 이들을 배양하였다. 그후, 용리된 샘플을 분석을 위해 LC-MS (Synapt-G2S, Waters, Milford, MA)에 부하하였다.
가장 안정한 PDS-MMAE 변이체를 또한 시스테인 환원 검정을 사용하여 평가하였으며, 여기서는 샘플을 물로 100 ug/mL로 되도록 희석시키고 50 uM 시스테인 및 50 mM 중탄산암모늄의 최종 농도를 위해 100 uM 시스테인 및 100 mM 중탄산암모늄 완충제와 1:1 혼합하였다. 그후, 샘플을 실온에서 18시간 동안 밤새 암흑에서 배양한 다음 등용적의 60% 아세토니트릴/0.2% 포름산을 가하여 반응을 켄칭시켰다. 그후, 샘플을 분석을 위해 LC-MS (Synapt-G2S, Waters, Milford, MA)에 부하하였다.
바람직한 안정한 PDS-MMAE 변이체는 표 1 및 2)에서 확인되며 추가의 안정한 변이체는 표 3 및 4에서 확인된다. 구체적으로, 상부 PDS-MMAE 변이체는 도 21 및 실시예 2에서 명확히 확인된다.
실시예 14 - -vc ( 즉 , 말레이미드 ) 결합을 위한 가장 안정한 부위의 확인
ELISA 스크린으로부터 가장 안정한 변이체를 친화도-포획 LC-MS 검정을 사용하여 0, 48 및 96 시간 혈장 안정성 샘플을 분석함으로써 추가로 평가하였다. 먼저, 스트렙타비딘-코팅된 자성 비드(Life Technologies Corporation, Grand Island, NY)를 HBS-EP 완충제 (GE Healthcare, Sunnyvale, CA)로 2x 세척한 다음 KingFisher Flex (Thermo Fisher Scientific, Waltham, MA)를 사용하여 인간 erb2의 비오티닐화 세포외 도메인(ECD)과 혼합하고 부드럽게 교반하면서 실온에서 2시간 동안 배양하였다. 2시간 후, SA-비드/비오틴-ECD 복합체를 HBS-EP 완충제로 2x 세척하고, 희석된 혈장 안정성 샘플과 혼합한 다음 부드럽게 교반하면서 실온에서 2시간 동안 배양하였다. 2시간 후, SA-비드/비오틴-ECD/샘플 복합체를 HBS-EP 완충제로 2x 세척한 다음 물(Optima H2O, Fisher Scientific, Pittsburgh, PA)로 2x 세척하고 마지막으로 10% 아세토니트릴로 1x 세척하였다. 그후, 비드를 용리를 위해 30% 아세토니트릴/0.1% 포름산 중에 배치하고, 여기서 비드를 수집하기 전에 부드럽게 교반하면서 실온에서 30mins 동안 이들을 배양하였다. 그후, 용리된 샘플을 분석을 위해 LC-MS (Synapt-G2S, Waters, Milford, MA)에 부하하였다.
바람직한 안정한 vc-MMAE 변이체는 표 1 및 2)에서 확인되며 추가의 안정한 변이체는 표 3 및 4에서 확인된다. 구체적으로, 상부 vc-MMAE 변이체는 도 21 및 실시예 2에서 명확히 확인된다.
실시예 15 - 단일 시스테인 돌연변이 (즉, 항체당 두 개의 시스테인)를 갖도록 가공될 수 있는 예시적인 항체
항체를 단일 시스테인 돌연변이 (즉, 항체당 두 개의 시스테인)를 갖도록 가공할 수 있다. 본원에 기재된 방법을 사용하여 단일 시스테인 돌연변이 (즉, 항체당 두 개의 시스테인)를 갖도록 가공된 예시적인 항체는 다음의 항원에 대한 항체를 포함하지만, 이에 제한되지 않는다: HER2, MUC16, STEAP1, NaPi2b, CD22, Ly6E, CLL-1, B7H4, 및 CD79.
시스테인 가공된 특정 항-HER2 항체는 4D5 및 7C2를 포함한다(본원의 실시예 및 도면 참조). 유사하게, 단일 시스테인 돌연변이는 항-CD33, 항-MUC16, 항-STEAP1, 항-Ly6E, 항-B7H4, 항-CD22, 및 항-CD79b 항체에서 이루어졌다.
단일 시스테인 돌연변이 (즉, 항체당 두 개의 시스테인)를 갖도록 가공된 항-MUC16 항체의 예는 다음의 서열을 갖는 항체를 포함한다:
Figure pct00121
단일 시스테인 돌연변이 (즉, 항체당 두 개의 시스테인)를 갖도록 가공된 항-STEAP1 항체의 예는 다음의 서열을 갖는 항체를 포함한다:
Figure pct00122
단일 시스테인 돌연변이 (즉, 항체당 두 개의 시스테인)를 갖도록 가공된 항-NaPi2b 항체의 예는 다음의 서열을 갖는 항체를 포함한다:
Figure pct00123
단일 시스테인 돌연변이 (즉, 항체당 두 개의 시스테인)를 갖도록 가공된 항-Ly6E 항체의 예는 다음의 서열을 갖는 항체를 포함한다:
Figure pct00124
단일 시스테인 돌연변이 (즉, 항체당 두 개의 시스테인)를 갖도록 가공된 항-CD79b 항체의 예는 다음의 서열을 갖는 항체를 포함한다:
Figure pct00125
단일 시스테인 돌연변이 (즉, 항체당 두 개의 시스테인)를 갖도록 가공된 항-CD22 항체의 예는 다음의 서열을 갖는 항체를 포함한다:
Figure pct00126
실험을 LC-K149C 돌연변이를 갖도록 가공된 상기한 항-Ly6E 항체 상에서 수행하였다. 실험을 LC-K149C 돌연변이를 갖도록 가공된 상기한 항-NaPi2b 항체 상에서 수행하였다. 유사하게, 실험을 LC-K149C 돌연변이를 갖도록 가공된 상기한 항-CD22 항체 상에서 수행하였다.
게다가, 본원에 기재된 항-CD22 항체를 또한 EU 넘버링에 따라 HC-L174C 돌연변이를 갖도록 가공하였다.
실험을 (EU 넘버링에 따라) HC-A140C 돌연변이를 갖도록 가공된 상기한 항-CD22 항체 상에서 수행하였다. 실험을 (EU 넘버링에 따라) HC-L174C 돌연변이를 갖도록 가공된 상기한 항-CD22 항체 상에서 수행하였다.
특정 항-CLL1 항체를 표 1 또는 2의 바람직한 부위 중의 하나를 포함하도록 시스테인 가공하였고 표 3 및 4에 개시된 안정한 부위 중의 하나로 가공할 수 있다. 특히, 항-CLL1 항체를 LC-K149C 시스테인 돌연변이를 포함하도록 시스테인 가공하였다.
특정 항-B7H4 항체를 표 1 또는 2의 바람직한 부위 중의 하나를 포함하도록 시스테인 가공할 수 있고 표 3 및 4에 개시된 안정한 부위 중의 하나로 가공할 수 있다.
본원에 기재된 실험들 이외에, 본원에 기재된 항체들 중의 어느 하나를 표 1 또는 2에 기재된 바람직한 가공된 시스테인 부위들 중의 어느 하나를 갖도록 가공하여 시스테인 가공된 항체 (즉, THIOMABTM 항체)로 되게 할 수 있다. 게다가, 본원에 기재된 항체들 중의 어느 하나를 표 3 또는 4에 기재된 안정한 가공된 시스테인 부위들 중의 어느 하나를 갖도록 가공하여 시스테인 가공된 항체 (즉, THIOMABTM 항체)로 되게 할 수 있다. 특히, 본원에 기재된 항체들 중의 어느 하나를 LC-K149C, HC-A140C (EU 넘버링에 따라), 또는 HC-L174C (EU 넘버링에 따라)를 갖도록 가공할 수 있고 PDS 또는 -vc 링커로 본원에 기재된 약물 중의 하나에 콘주게이트시킬 수 있다.
실시예 16 - 예시적인 ADC
본원에 기재된 항체들 중의 어느 하나를 약물을 가공된 시스테인 잔기에 부착시키는 링커를 사용하여 본원에 기재된 약물의 종류 중의 어느 하나에 콘주게이트시킬 수 있다. 이러한 ADC의 예는 약물 모이어티를 링커 시약과 커플링시킴으로써, 및 제WO 2013/055987호; 제WO 2015/023355호; 제WO 2010/009124호; 제WO 2015/095227호의 과정에 따라 제조할 수 있으며, 본원에 기재된 시스테인 가공된 항체 중의 어느 하나와 콘주게이트시킬 수 있다.
다음의 용어들 및 약어들이 아래 표에서 사용된다: DAR = 약물/항체 비 평균, A118C (중쇄, EU 넘버링) (대안적으로 GNE 서열 넘버링(도 1b 참조)에 따라 A121C라고 하고, 대안적으로 Kabat 넘버링에 따라 A114C라고 함), K149C (경쇄, Kabat 넘버링), 중쇄 야생형("WT")의 A140C (EU 넘버링), 시스테인 가공된 돌연변이 항체 ("thio"), 경쇄 ("LC"), 중쇄 ("HC"), 6-말레이미도카프로일 ("MC"), 말레이미도프로파노일 ("MP"), 발린-시트룰린 ("val-cit" 또는 "vc"), 알라닌-페닐알라닌 ("ala-phe"), p-아미노벤질 ("PAB"), p-아미노벤질옥시카보닐 ("PABC"), 1-(클로로메틸)-2,3-디하이드로-1H-벤조[e]인돌 ("CBI"), 피롤로벤조디아제핀 ("PBD"), 및 모노메틸오리스타틴 ("MMAE").
이러한 추가의 ADC의 예는 아래 표 17에 제공된 것들을 포함하지만, 이에 제한되지 않는다.
표 17. 예시적인 항체 약물 콘주게이트 # 51-69의 구조
Figure pct00127
Figure pct00128
Figure pct00129
Figure pct00130
Figure pct00131
간소화를 위해 상기 구조 및 ADCs 51 내지 63의 구조는 단지 항체에 부착된 하나의 링커-약물 그룹만을 보여줌을 주지한다. 앞서 언급한 바와 같이, 하나 이상의 링커-약물 그룹이 항체에 부착될 수 있다.
Figure pct00132
Figure pct00133
Figure pct00134
Figure pct00135
, 및
Figure pct00136
제조된 ADC의 구체적인 예는 표 18 및 19에 제공되어 있다. 표 18은 제조된 ADC의 예를 제공하며, 여기서 L-D는 시스테인 가공된 부위 LC-K149C에서 항체에 부착된다. 표 19는 제조된 ADC의 예를 제공하며, 여기서 L-D는 시스테인 가공된 부위 HC-A140C에서 항체에 부착된다.
표 18. L-D가 시스테인 가공된 부위 LC- K149C에서 항체에 부착되어 제조된 ADC의 예
Figure pct00137
Figure pct00138
표 19. L-D가 시스테인 가공된 부위 HC- A140C에서 항체에 부착되어 제조된 ADC의 예
Figure pct00139
표 18 및 19 둘 다에서, DAR은 완충 염수에서 계산된다.
본 발명은 발명의 몇몇 측면의 예시로서 의도된 실시예에 개시된 특정 구현예에 의해 범위가 제한되는 것은 아니며 기능적으로 등가인 어떠한 구현예도 본 발명의 범위내에 든다. 사실상, 제시되고 본원에 기재된 것들 이외의 발명의 다양한 변형들은 당업계의 숙련가들에게 자명해질 것이며 첨부된 청구항의 범위내에 드는 것으로 의도된다.
명세서 전반에 걸쳐 인용된 모든 특허, 특허 출원 및 참고문헌은 명백히 모든 목적을 위해 전문이 참고로 포함된다.
<110> GENENTECH, INC. BHAKTA, Sunil ERICKSON, Hans JUNUTULA, Jagath R. KOZAK, Katherine OHRI, Rachana PILLOW, Thomas <120> CYSTEINE ENGINEERED ANTIBODIES AND CONJUGATES <130> 01146-0052-00US <150> US 62/050,022 <151> 2014-09-12 <160> 199 <170> KoPatentIn 3.0 <210> 1 <211> 11 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic peptide: LC-I106C <400> 1 Gly Thr Lys Val Glu Cys Lys Arg Thr Val Ala 1 5 10 <210> 2 <211> 11 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic peptide: LC-R108C <400> 2 Lys Val Glu Ile Lys Cys Thr Val Ala Ala Pro 1 5 10 <210> 3 <211> 11 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic peptide: LC-R142C <400> 3 Asn Asn Phe Tyr Pro Cys Glu Ala Lys Val Gln 1 5 10 <210> 4 <211> 11 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic peptide: LC-K149C <400> 4 Ala Lys Val Gln Trp Cys Val Asp Asn Ala Leu 1 5 10 <210> 5 <211> 11 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic peptide: HC-T114C <400> 5 Gln Gly Thr Leu Val Cys Val Ser Ser Ala Ser 1 5 10 <210> 6 <211> 11 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic peptide: HC-A140C <400> 6 Thr Ser Gly Gly Thr Cys Ala Leu Gly Cys Leu 1 5 10 <210> 7 <211> 11 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic peptide: HC-L174C <400> 7 Thr Phe Pro Ala Val Cys Gln Ser Ser Gly Leu 1 5 10 <210> 8 <211> 11 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic peptide: HC-L179C <400> 8 Leu Gln Ser Ser Gly Cys Tyr Ser Leu Ser Ser 1 5 10 <210> 9 <211> 11 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic peptide: HC-T187C <400> 9 Leu Ser Ser Val Val Cys Val Pro Ser Ser Ser 1 5 10 <210> 10 <211> 11 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic peptide: HC-T209C <400> 10 His Lys Pro Ser Asn Cys Lys Val Asp Lys Lys 1 5 10 <210> 11 <211> 11 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic peptide: HC-V262C <400> 11 Pro Glu Val Thr Cys Cys Val Val Asp Val Ser 1 5 10 <210> 12 <211> 11 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic peptide: HC-G371C <400> 12 Thr Cys Leu Val Lys Cys Phe Tyr Pro Ser Asp 1 5 10 <210> 13 <211> 11 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic peptide: HC-Y373C <400> 13 Leu Val Lys Gly Phe Cys Pro Ser Asp Ile Ala 1 5 10 <210> 14 <211> 11 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic peptide: HC-E382C <400> 14 Ile Ala Val Glu Trp Cys Ser Asn Gly Gln Pro 1 5 10 <210> 15 <211> 11 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic peptide: HC-S424C/HC-S420C <400> 15 Gln Gly Asn Val Phe Cys Cys Ser Val Met His 1 5 10 <210> 16 <211> 11 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic peptide: HC-N434C <400> 16 His Glu Ala Leu His Cys His Tyr Thr Gln Lys 1 5 10 <210> 17 <211> 11 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic peptide: HC-Q438C <400> 17 His Asn His Tyr Thr Cys Lys Ser Leu Ser Leu 1 5 10 <210> 18 <211> 449 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic polypeptide: cysteine engineered antibodies <400> 18 Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly 1 5 10 15 Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Asn Ile Lys Asp Thr 20 25 30 Tyr Ile His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val 35 40 45 Ala Arg Ile Tyr Pro Thr Asn Gly Tyr Thr Arg Tyr Ala Asp Ser Val 50 55 60 Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Ala Asp Thr Ser Lys Asn Thr Ala Tyr 65 70 75 80 Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys 85 90 95 Ser Arg Trp Gly Gly Asp Gly Phe Tyr Ala Met Asp Tyr Trp Gly Gln 100 105 110 Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val 115 120 125 Phe Pro Leu Ala Pro Ser Ser Lys Ser Thr Ser Gly Gly Thr Ala Ala 130 135 140 Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser 145 150 155 160 Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val 165 170 175 Leu Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro 180 185 190 Ser Ser Ser Leu Gly Thr Gln Thr Tyr Ile Cys Asn Val Asn His Lys 195 200 205 Pro Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys Lys Val Glu Pro Lys Ser Cys Asp 210 215 220 Lys Thr His Thr Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Leu Leu Gly Gly 225 230 235 240 Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile 245 250 255 Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser His Glu 260 265 270 Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His 275 280 285 Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr Arg 290 295 300 Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys 305 310 315 320 Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu Pro Ala Pro Ile Glu 325 330 335 Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Tyr Thr 340 345 350 Leu Pro Pro Ser Arg Glu Glu Met Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr 355 360 365 Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu 370 375 380 Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu 385 390 395 400 Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys 405 410 415 Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu 420 425 430 Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly 435 440 445 Lys <210> 19 <211> 214 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic polypeptide: cysteine engineered antibodies <400> 19 Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly 1 5 10 15 Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Arg Ala Ser Gln Asp Val Asn Thr Ala 20 25 30 Val Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu Leu Ile 35 40 45 Tyr Ser Ala Ser Phe Leu Tyr Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly 50 55 60 Ser Arg Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro 65 70 75 80 Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln His Tyr Thr Thr Pro Pro 85 90 95 Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys Arg Thr Val Ala Ala 100 105 110 Pro Ser Val Phe Ile Phe Pro Pro Ser Asp Glu Gln Leu Lys Ser Gly 115 120 125 Thr Ala Ser Val Val Cys Leu Leu Asn Asn Phe Tyr Pro Arg Glu Ala 130 135 140 Lys Val Gln Trp Lys Val Asp Asn Ala Leu Gln Ser Gly Asn Ser Gln 145 150 155 160 Glu Ser Val Thr Glu Gln Asp Ser Lys Asp Ser Thr Tyr Ser Leu Ser 165 170 175 Ser Thr Leu Thr Leu Ser Lys Ala Asp Tyr Glu Lys His Lys Val Tyr 180 185 190 Ala Cys Glu Val Thr His Gln Gly Leu Ser Ser Pro Val Thr Lys Ser 195 200 205 Phe Asn Arg Gly Glu Cys 210 <210> 20 <211> 11 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic peptide: V2C <400> 20 Glu Cys Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu 1 5 10 <210> 21 <211> 11 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic peptide: L4C <400> 21 Glu Val Gln Cys Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu 1 5 10 <210> 22 <211> 11 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic peptide: V5C <400> 22 Glu Val Gln Leu Cys Glu Ser Gly Gly Gly Leu 1 5 10 <210> 23 <211> 11 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic peptide: L11C <400> 23 Glu Ser Gly Gly Gly Cys Val Gln Pro Gly Gly 1 5 10 <210> 24 <211> 11 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic peptide: R19C <400> 24 Pro Gly Gly Ser Leu Cys Leu Ser Cys Ala Ala 1 5 10 <210> 25 <211> 11 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic peptide: F27C <400> 25 Cys Ala Ala Ser Gly Cys Asn Ile Lys Asp Thr 1 5 10 <210> 26 <211> 11 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic peptide: I29C <400> 26 Ala Ser Gly Phe Asn Cys Lys Asp Thr Tyr Ile 1 5 10 <210> 27 <211> 11 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic peptide: T32C <400> 27 Phe Asn Ile Lys Asp Cys Tyr Ile His Trp Val 1 5 10 <210> 28 <211> 11 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic peptide: Y33C <400> 28 Asn Ile Lys Asp Thr Cys Ile His Trp Val Arg 1 5 10 <210> 29 <211> 11 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic peptide: Q39C <400> 29 Ile His Trp Val Arg Cys Ala Pro Gly Lys Gly 1 5 10 <210> 30 <211> 11 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic peptide: A40C <400> 30 His Trp Val Arg Gln Cys Pro Gly Lys Gly Leu 1 5 10 <210> 31 <211> 11 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic peptide: K43C <400> 31 Arg Gln Ala Pro Gly Cys Gly Leu Glu Trp Val 1 5 10 <210> 32 <211> 11 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic peptide: L45C <400> 32 Ala Pro Gly Lys Gly Cys Glu Trp Val Ala Arg 1 5 10 <210> 33 <211> 10 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic peptide: E46C <400> 33 Gly Lys Gly Leu Cys Trp Val Ala Arg Ile 1 5 10 <210> 34 <211> 11 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic peptide: T53C <400> 34 Ala Arg Ile Tyr Pro Cys Asn Gly Tyr Thr Arg 1 5 10 <210> 35 <211> 11 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic peptide: G55C <400> 35 Ile Tyr Pro Thr Asn Cys Tyr Thr Arg Tyr Ala 1 5 10 <210> 36 <211> 11 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic peptide: T57C <400> 36 Pro Thr Asn Gly Tyr Cys Arg Tyr Ala Asp Ser 1 5 10 <210> 37 <211> 11 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic peptide: R58C <400> 37 Thr Asn Gly Tyr Thr Cys Tyr Ala Asp Ser Val 1 5 10 <210> 38 <211> 11 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic peptide: Y59C <400> 38 Asn Gly Tyr Thr Arg Cys Ala Asp Ser Val Lys 1 5 10 <210> 39 <211> 11 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic peptide: A60C <400> 39 Gly Tyr Thr Arg Tyr Cys Asp Ser Val Lys Gly 1 5 10 <210> 40 <211> 11 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic peptide: T68C <400> 40 Val Lys Gly Arg Phe Cys Ile Ser Ala Asp Thr 1 5 10 <210> 41 <211> 11 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic peptide: N76N <400> 41 Ala Asp Thr Ser Lys Cys Thr Ala Tyr Leu Gln 1 5 10 <210> 42 <211> 11 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic peptide: Y79C <400> 42 Ser Lys Asn Thr Ala Cys Leu Gln Met Asn Ser 1 5 10 <210> 43 <211> 11 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic peptide: Q81C <400> 43 Asn Thr Ala Tyr Leu Cys Met Asn Ser Leu Arg 1 5 10 <210> 44 <211> 11 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic peptide: W95C <400> 44 Tyr Tyr Cys Ser Arg Cys Gly Gly Asp Gly Phe 1 5 10 <210> 45 <211> 11 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic peptide: G96C <400> 45 Tyr Cys Ser Arg Trp Cys Gly Asp Gly Phe Tyr 1 5 10 <210> 46 <211> 11 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic peptide: D101C <400> 46 Gly Phe Tyr Ala Met Cys Tyr Trp Gly Gln Gly 1 5 10 <210> 47 <211> 11 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic peptide: W103C <400> 47 Tyr Ala Met Asp Tyr Cys Gly Gln Gly Thr Leu 1 5 10 <210> 48 <211> 11 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic peptide: T116C <400> 48 Val Ala Ser Ala Ser Cys Lys Gly Pro Ser Val 1 5 10 <210> 49 <211> 11 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic peptide: K117C <400> 49 Ser Ser Ala Ser Thr Cys Gly Pro Ser Val Phe 1 5 10 <210> 50 <211> 11 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic peptide: T135C <400> 50 Ser Thr Ser Gly Gly Cys Ala Ala Leu Gly Cys 1 5 10 <210> 51 <211> 11 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic peptide: N155C <400> 51 Val Thr Val Ser Trp Cys Ser Gly Ala Leu Thr 1 5 10 <210> 52 <211> 11 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic peptide: A158C <400> 52 Ser Trp Asn Ser Gly Cys Leu Thr Ser Gly Val 1 5 10 <210> 53 <211> 11 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic peptide: G162C <400> 53 Gly Ala Leu Thr Ser Cys Val His Thr Phe Pro 1 5 10 <210> 54 <211> 11 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic peptide: G174C <400> 54 Val Leu Gln Ser Ser Cys Leu Tyr Ser Leu Ser 1 5 10 <210> 55 <211> 11 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic peptide: L175C <400> 55 Leu Gln Ser Ser Gly Cys Tyr Ser Leu Ser Ser 1 5 10 <210> 56 <211> 11 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic peptide: T183C <400> 56 Leu Ser Ser Val Val Cys Val Pro Ser Ser Ser 1 5 10 <210> 57 <211> 11 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic peptide: V184C <400> 57 Ser Ser Val Val Thr Cys Pro Ser Ser Ser Leu 1 5 10 <210> 58 <211> 11 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic peptide: I195C <400> 58 Gly Thr Gln Thr Tyr Cys Cys Asn Val Asn His 1 5 10 <210> 59 <211> 11 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic peptide: N199C <400> 59 Tyr Ile Cys Asn Val Cys His Lys Pro Ser Asn 1 5 10 <210> 60 <211> 11 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic peptide: S203C <400> 60 Val Asn His Lys Pro Cys Asn Thr Lys Val Asp 1 5 10 <210> 61 <211> 11 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic peptide: F239C <400> 61 Pro Ser Val Phe Leu Cys Pro Pro Lys Pro Lys 1 5 10 <210> 62 <211> 11 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic peptide: M248C <400> 62 Pro Lys Asp Thr Leu Cys Ile Ser Arg Thr Pro 1 5 10 <210> 63 <211> 11 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic peptide: E254C <400> 63 Ile Ser Arg Thr Pro Cys Val Thr Cys Val Val 1 5 10 <210> 64 <211> 11 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic peptide: V258C <400> 64 Pro Glu Val Thr Cys Cys Val Val Asp Val Ser 1 5 10 <210> 65 <211> 11 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic peptide: N272C <400> 65 Pro Glu Val Lys Phe Cys Trp Tyr Val Asp Gly 1 5 10 <210> 66 <211> 11 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic peptide: V278C <400> 66 Trp Tyr Val Asp Gly Cys Glu Val His Asn Ala 1 5 10 <210> 67 <211> 11 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic peptide: L305C <400> 67 Ser Val Leu Thr Val Cys His Gln Asp Trp Leu 1 5 10 <210> 68 <211> 11 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic peptide: T331C <400> 68 Ala Pro Ile Glu Lys Cys Ile Ser Lys Ala Lys 1 5 10 <210> 69 <211> 11 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic peptide: S333C <400> 69 Ile Glu Lys Thr Ile Cys Lys Ala Lys Gly Gln 1 5 10 <210> 70 <211> 11 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic peptide: R340C <400> 70 Ala Lys Gly Gln Pro Cys Glu Pro Gln Val Tyr 1 5 10 <210> 71 <211> 11 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic peptide: Q343C <400> 71 Gln Pro Arg Glu Pro Cys Val Tyr Thr Leu Pro 1 5 10 <210> 72 <211> 11 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic peptide: K356C <400> 72 Arg Asp Glu Leu Thr Cys Asn Gln Val Ser Leu 1 5 10 <210> 73 <211> 11 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic peptide: E384C <400> 73 Ser Asn Gly Gln Pro Cys Asn Asn Tyr Lys Thr 1 5 10 <210> 74 <211> 11 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic peptide: S399C <400> 74 Leu Asp Ser Asp Gly Cys Phe Phe Leu Tyr Ser 1 5 10 <210> 75 <211> 11 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic peptide: K410C <400> 75 Lys Leu Thr Val Asp Cys Ser Arg Trp Gln Gln 1 5 10 <210> 76 <211> 11 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic peptide: Q414C <400> 76 Asp Lys Ser Arg Trp Cys Gln Gly Asn Val Phe 1 5 10 <210> 77 <211> 11 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic peptide: G416C <400> 77 Ser Arg Trp Gln Gln Cys Asn Val Phe Ser Cys 1 5 10 <210> 78 <211> 11 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic peptide: N417C <400> 78 Arg Trp Gln Gln Gly Cys Val Phe Ser Cys Ser 1 5 10 <210> 79 <211> 11 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic peptide: Y432C <400> 79 Ala Leu His Asn His Cys Thr Gln Lys Ser Leu 1 5 10 <210> 80 <211> 11 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic peptide: T433C <400> 80 Leu His Asn His Tyr Cys Gln Lys Ser Leu Ser 1 5 10 <210> 81 <211> 11 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic peptide: K435C <400> 81 Asn His Tyr Thr Gln Cys Ser Leu Ser Leu Ser 1 5 10 <210> 82 <211> 11 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic peptide: S438 <400> 82 Thr Gln Lys Ser Leu Cys Leu Ser Pro Gly Lys 1 5 10 <210> 83 <211> 10 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic peptide: L439C <400> 83 Gln Lys Ser Leu Ser Cys Ser Pro Gly Lys 1 5 10 <210> 84 <211> 11 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic peptide: M100cC <400> 84 Asp Gly Phe Tyr Ala Cys Asp Tyr Trp Gly Gln 1 5 10 <210> 85 <211> 11 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic peptide: N82aC <400> 85 Ala Tyr Leu Gln Met Cys Ser Leu Arg Ala Glu 1 5 10 <210> 86 <211> 11 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic peptide: S12C <400> 86 Ser Pro Ser Ser Leu Cys Ala Ser Val Gly Asp 1 5 10 <210> 87 <211> 11 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic peptide: S14C <400> 87 Ser Ser Leu Ser Ala Cys Val Gly Asp Arg Val 1 5 10 <210> 88 <211> 11 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic peptide: G16C <400> 88 Leu Ser Ala Ser Val Cys Asp Arg Val Thr Ile 1 5 10 <210> 89 <211> 11 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic peptide: R18C <400> 89 Ala Ser Val Gly Asp Cys Val Thr Ile Thr Cys 1 5 10 <210> 90 <211> 11 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic peptide: T22C <400> 90 Asp Arg Val Thr Ile Cys Cys Arg Ala Ser Gln 1 5 10 <210> 91 <211> 11 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic peptide: R24C <400> 91 Val Thr Ile Thr Cys Cys Ala Ser Gln Asp Val 1 5 10 <210> 92 <211> 11 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic peptide: Q27C <400> 92 Thr Cys Arg Ala Ser Cys Asp Val Asn Thr Ala 1 5 10 <210> 93 <211> 11 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic peptide: T31C <400> 93 Ser Gln Asp Val Asn Cys Ala Val Ala Trp Tyr 1 5 10 <210> 94 <211> 11 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic peptide: A32C <400> 94 Gln Asp Val Asn Thr Cys Val Ala Trp Tyr Gln 1 5 10 <210> 95 <211> 11 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic peptide: Q38C <400> 95 Val Ala Trp Tyr Gln Cys Lys Pro Gly Lys Ala 1 5 10 <210> 96 <211> 11 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic peptide: K39C <400> 96 Ala Trp Tyr Gln Gln Cys Pro Gly Lys Ala Pro 1 5 10 <210> 97 <211> 11 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic peptide: G41C <400> 97 Tyr Gln Gln Lys Pro Cys Lys Ala Pro Lys Leu 1 5 10 <210> 98 <211> 11 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic peptide: K42C <400> 98 Gln Gln Lys Pro Gly Cys Ala Pro Lys Leu Leu 1 5 10 <210> 99 <211> 11 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic peptide: P44C <400> 99 Lys Pro Gly Lys Ala Cys Lys Leu Leu Ile Tyr 1 5 10 <210> 100 <211> 11 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic peptide: Y49C <400> 100 Pro Lys Leu Leu Ile Cys Ser Ala Ser Phe Leu 1 5 10 <210> 101 <211> 11 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic peptide: S50C <400> 101 Lys Leu Leu Ile Tyr Cys Ala Ser Phe Leu Tyr 1 5 10 <210> 102 <211> 11 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic peptide: S52C <400> 102 Leu Ile Tyr Ser Ala Cys Phe Leu Tyr Ser Gly 1 5 10 <210> 103 <211> 11 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic peptide: F53C <400> 103 Ile Tyr Ser Ala Ser Cys Leu Tyr Ser Gly Val 1 5 10 <210> 104 <211> 11 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic peptide: L54C <400> 104 Tyr Ser Ala Ser Phe Cys Tyr Ser Gly Val Pro 1 5 10 <210> 105 <211> 11 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic peptide: Y55C <400> 105 Ser Ala Ser Phe Leu Cys Ser Gly Val Pro Ser 1 5 10 <210> 106 <211> 11 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic peptide: S63C <400> 106 Val Pro Ser Arg Phe Cys Gly Ser Arg Ser Gly 1 5 10 <210> 107 <211> 11 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic peptide: G64C <400> 107 Pro Ser Arg Phe Ser Cys Ser Arg Ser Gly Thr 1 5 10 <210> 108 <211> 11 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic peptide: R66C <400> 108 Arg Phe Ser Gly Ser Cys Ser Gly Thr Asp Phe 1 5 10 <210> 109 <211> 11 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic peptide: D70C <400> 109 Ser Arg Ser Gly Thr Cys Phe Thr Leu Thr Ile 1 5 10 <210> 110 <211> 11 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic peptide: T72C <400> 110 Ser Gly Thr Asp Phe Cys Leu Thr Ile Ser Ser 1 5 10 <210> 111 <211> 11 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic peptide: T74C <400> 111 Thr Asp Phe Thr Leu Cys Ile Ser Ser Leu Gln 1 5 10 <210> 112 <211> 11 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic peptide: S76C <400> 112 Phe Thr Leu Thr Ile Cys Ser Leu Gln Pro Glu 1 5 10 <210> 113 <211> 11 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic peptide: Q79C <400> 113 Thr Ile Ser Ser Leu Cys Pro Glu Asp Phe Ala 1 5 10 <210> 114 <211> 11 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic peptide: T85C <400> 114 Pro Glu Asp Phe Ala Cys Tyr Tyr Cys Gln Gln 1 5 10 <210> 115 <211> 11 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic peptide: H91C <400> 115 Tyr Tyr Cys Gln Gln Cys Tyr Thr Thr Pro Pro 1 5 10 <210> 116 <211> 11 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic peptide: Y92C <400> 116 Tyr Cys Gln Gln His Cys Thr Thr Pro Pro Thr 1 5 10 <210> 117 <211> 11 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic peptide: P95C <400> 117 Gln His Tyr Thr Thr Cys Pro Thr Phe Gly Gln 1 5 10 <210> 118 <211> 11 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic peptide: T97C <400> 118 Tyr Thr Thr Pro Pro Cys Phe Gly Gln Gly Thr 1 5 10 <210> 119 <211> 11 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic peptide: F98C <400> 119 Thr Thr Pro Pro Thr Cys Gly Gln Gly Thr Lys 1 5 10 <210> 120 <211> 11 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic peptide: K103C <400> 120 Phe Gly Gln Gly Thr Cys Val Glu Ile Lys Arg 1 5 10 <210> 121 <211> 11 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic peptide: E105C <400> 121 Gln Gly Thr Lys Val Cys Ile Lys Arg Thr Val 1 5 10 <210> 122 <211> 11 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic peptide: K107C <400> 122 Thr Lys Val Glu Ile Cys Arg Thr Val Ala Ala 1 5 10 <210> 123 <211> 11 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic peptide: P119C <400> 123 Ser Val Phe Ile Phe Cys Pro Ser Asp Glu Gln 1 5 10 <210> 124 <211> 11 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic peptide: K126C <400> 124 Ser Asp Glu Gln Leu Cys Ser Gly Thr Ala Ser 1 5 10 <210> 125 <211> 11 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic peptide: T129C <400> 125 Gln Leu Lys Ser Gly Cys Ala Ser Val Val Cys 1 5 10 <210> 126 <211> 11 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic peptide: S131C <400> 126 Lys Ser Gly Thr Ala Cys Val Val Cys Leu Leu 1 5 10 <210> 127 <211> 11 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic peptide: Q147C <400> 127 Arg Glu Ala Lys Val Cys Trp Lys Val Asp Asn 1 5 10 <210> 128 <211> 11 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic peptide: W148C <400> 128 Glu Ala Lys Val Gln Cys Lys Val Asp Asn Ala 1 5 10 <210> 129 <211> 11 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic peptide: A153C <400> 129 Trp Lys Val Asp Asn Cys Leu Gln Ser Gly Asn 1 5 10 <210> 130 <211> 11 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic peptide: Q155C <400> 130 Val Asp Asn Ala Leu Cys Ser Gly Asn Ser Gln 1 5 10 <210> 131 <211> 11 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic peptide: S156C <400> 131 Asp Asn Ala Leu Gln Cys Gly Asn Ser Gln Glu 1 5 10 <210> 132 <211> 11 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic peptide: S159C <400> 132 Leu Gln Ser Gly Asn Cys Gln Glu Ser Val Thr 1 5 10 <210> 133 <211> 11 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic peptide: Q160C <400> 133 Gln Ser Gly Asn Ser Cys Glu Ser Val Thr Glu 1 5 10 <210> 134 <211> 11 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic peptide: S162C <400> 134 Gly Asn Ser Gln Glu Cys Val Thr Glu Gln Asp 1 5 10 <210> 135 <211> 11 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic peptide: Q166C <400> 135 Glu Ser Val Thr Glu Cys Asp Ser Lys Asp Ser 1 5 10 <210> 136 <211> 11 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic peptide: T172C <400> 136 Asp Ser Lys Asp Ser Cys Tyr Ser Leu Ser Ser 1 5 10 <210> 137 <211> 11 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic peptide: T180C <400> 137 Leu Ser Ser Thr Leu Cys Leu Ser Lys Ala Asp 1 5 10 <210> 138 <211> 11 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic peptide: V191C <400> 138 Tyr Glu Lys His Lys Cys Tyr Ala Cys Glu Val 1 5 10 <210> 139 <211> 11 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic peptide: A193C <400> 139 Lys His Lys Val Tyr Cys Cys Glu Val Thr His 1 5 10 <210> 140 <211> 11 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic peptide: E195C <400> 140 Lys Val Tyr Ala Cys Cys Val Thr His Gln Gly 1 5 10 <210> 141 <211> 11 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic peptide: V205C <400> 141 Gly Leu Ser Ser Pro Cys Thr Lys Ser Phe Asn 1 5 10 <210> 142 <211> 11 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic peptide: T206C <400> 142 Leu Ser Ser Pro Val Cys Lys Ser Phe Asn Arg 1 5 10 <210> 143 <211> 11 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic peptide: N210C <400> 143 Pro Val Thr Lys Ser Phe Cys Arg Gly Glu Cys 1 5 10 <210> 144 <211> 30 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic peptide: albumin-binding peptide <400> 144 Cys Asp Lys Thr His Thr Gly Gly Gly Ser Gln Arg Leu Met Glu Asp 1 5 10 15 Ile Cys Leu Pro Arg Trp Gly Cys Leu Trp Glu Asp Asp Phe 20 25 30 <210> 145 <211> 20 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic peptide: albumin-binding peptide <400> 145 Gln Arg Leu Met Glu Asp Ile Cys Leu Pro Arg Trp Gly Cys Leu Trp 1 5 10 15 Glu Asp Asp Phe 20 <210> 146 <211> 20 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic peptide: albumin-binding peptide <400> 146 Gln Arg Leu Ile Glu Asp Ile Cys Leu Pro Arg Trp Gly Cys Leu Trp 1 5 10 15 Glu Asp Asp Phe 20 <210> 147 <211> 18 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic peptide: albumin-binding peptide <400> 147 Arg Leu Ile Glu Asp Ile Cys Leu Pro Arg Trp Gly Cys Leu Trp Glu 1 5 10 15 Asp Asp <210> 148 <211> 11 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic peptide: albumin-binding peptide <400> 148 Asp Ile Cys Leu Pro Arg Trp Gly Cys Leu Trp 1 5 10 <210> 149 <211> 11 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic peptide: Anti-Muc16 antibody HVR-L1 <400> 149 Lys Ala Ser Asp Leu Ile His Asn Trp Leu Ala 1 5 10 <210> 150 <211> 8 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic peptide: Anti-Muc16 antibody HVR-L2 <400> 150 Tyr Gly Ala Thr Ser Leu Glu Thr 1 5 <210> 151 <211> 9 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic peptide: Anti-Muc16 antibody HVR-L3 <400> 151 Gln Gln Tyr Trp Thr Thr Pro Phe Thr 1 5 <210> 152 <211> 11 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic peptide: Anti-Muc16 antibody HVR-H1 <400> 152 Gly Tyr Ser Ile Thr Asn Asp Tyr Ala Trp Asn 1 5 10 <210> 153 <211> 17 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic peptide: Anti-Muc16 antibody HVR-H2 <400> 153 Gly Tyr Ile Ser Tyr Ser Gly Tyr Thr Thr Tyr Asn Pro Ser Leu Lys 1 5 10 15 Ser <210> 154 <211> 9 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic peptide: Anti-Muc16 antibody HVR-H3 <400> 154 Ala Arg Trp Ala Ser Gly Leu Asp Tyr 1 5 <210> 155 <211> 108 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic polypeptide: Anti-Muc16 antibody light chain variable region <400> 155 Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly 1 5 10 15 Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Lys Ala Ser Asp Leu Ile His Asn Trp 20 25 30 Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu Leu Ile 35 40 45 Tyr Gly Ala Thr Ser Leu Glu Thr Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly 50 55 60 Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro 65 70 75 80 Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln Tyr Trp Thr Thr Pro Phe 85 90 95 Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys Arg 100 105 <210> 156 <211> 116 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic polypeptide: Anti-Muc16 antibody heavy chain variable region <400> 156 Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly 1 5 10 15 Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Tyr Ser Ile Thr Asn Asp 20 25 30 Tyr Ala Trp Asn Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp 35 40 45 Val Gly Tyr Ile Ser Tyr Ser Gly Tyr Thr Thr Tyr Asn Pro Ser Leu 50 55 60 Lys Ser Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Thr Ser Lys Asn Thr Leu Tyr 65 70 75 80 Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys 85 90 95 Ala Arg Trp Ala Ser Gly Leu Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val 100 105 110 Thr Val Ser Ser 115 <210> 157 <211> 11 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic peptide: Anti-STEAP-1 HVR-H1 <400> 157 Gly Tyr Ser Ile Thr Ser Asp Tyr Ala Trp Asn 1 5 10 <210> 158 <211> 17 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic peptide: Anti-STEAP-1 HVR-H2 <400> 158 Gly Tyr Ile Ser Asn Ser Gly Ser Thr Ser Tyr Asn Pro Ser Leu Lys 1 5 10 15 Ser <210> 159 <211> 15 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic peptide: Anti-STEAP-1 HVR-H3 <400> 159 Glu Arg Asn Tyr Asp Tyr Asp Asp Tyr Tyr Tyr Ala Met Asp Tyr 1 5 10 15 <210> 160 <211> 17 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic peptide: Anti-STEAP-1 HVR-L1 <400> 160 Lys Ser Ser Gln Ser Leu Leu Tyr Arg Ser Asn Gln Lys Asn Tyr Leu 1 5 10 15 Ala <210> 161 <211> 7 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic peptide: Anti-STEAP-1 HVR-L2 <400> 161 Trp Ala Ser Thr Arg Glu Ser 1 5 <210> 162 <211> 9 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic peptide: Anti-STEAP-1 HVR-L3 <400> 162 Gln Gln Tyr Tyr Asn Tyr Pro Arg Thr 1 5 <210> 163 <211> 124 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic polypeptide: Anti-STEAP1 heavy chain variable region <400> 163 Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly 1 5 10 15 Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Val Ser Gly Tyr Ser Ile Thr Ser Asp 20 25 30 Tyr Ala Trp Asn Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp 35 40 45 Val Gly Tyr Ile Ser Asn Ser Gly Ser Thr Ser Tyr Asn Pro Ser Leu 50 55 60 Lys Ser Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Thr Ser Lys Asn Thr Leu Tyr 65 70 75 80 Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys 85 90 95 Ala Arg Glu Arg Asn Tyr Asp Tyr Asp Asp Tyr Tyr Tyr Ala Met Asp 100 105 110 Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser 115 120 <210> 164 <211> 113 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic polypeptide: Anti-STEAP1 light chain variable region <400> 164 Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly 1 5 10 15 Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Lys Ser Ser Gln Ser Leu Leu Tyr Arg 20 25 30 Ser Asn Gln Lys Asn Tyr Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys 35 40 45 Ala Pro Lys Leu Leu Ile Tyr Trp Ala Ser Thr Arg Glu Ser Gly Val 50 55 60 Pro Ser Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr 65 70 75 80 Ile Ser Ser Leu Gln Pro Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln 85 90 95 Tyr Tyr Asn Tyr Pro Arg Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Val Glu Ile 100 105 110 Lys <210> 165 <211> 10 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic peptide: Anti-NaPi2b HVR-H1 <400> 165 Gly Phe Ser Phe Ser Asp Phe Ala Met Ser 1 5 10 <210> 166 <400> 166 000 <210> 167 <211> 18 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic peptide: Anti- NaPi2b HVR-H2 <400> 167 Ala Thr Ile Gly Arg Val Ala Phe His Thr Tyr Tyr Pro Asp Ser Met 1 5 10 15 Lys Gly <210> 168 <211> 13 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic peptide: Anti- NaPi2b HVR-H3 <400> 168 Ala Arg His Arg Gly Phe Asp Val Gly His Phe Asp Phe 1 5 10 <210> 169 <211> 16 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic peptide: Anti- NaPi2b HVR-L1 <400> 169 Arg Ser Ser Glu Thr Leu Val His Ser Ser Gly Asn Thr Tyr Leu Glu 1 5 10 15 <210> 170 <211> 7 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic peptide: Anti- NaPi2b HVR-L2 <400> 170 Arg Val Ser Asn Arg Phe Ser 1 5 <210> 171 <211> 9 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic peptide: Anti- NaPi2b HVR-L3 <400> 171 Phe Gln Gly Ser Phe Asn Pro Leu Thr 1 5 <210> 172 <211> 120 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic polypeptide: Anti- NaPi2b heavy chain variable region <400> 172 Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly 1 5 10 15 Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Ser Phe Ser Asp Phe 20 25 30 Ala Met Ser Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val 35 40 45 Ala Thr Ile Gly Arg Val Ala Phe His Thr Tyr Tyr Pro Asp Ser Met 50 55 60 Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr Leu Tyr 65 70 75 80 Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys 85 90 95 Ala Arg His Arg Gly Phe Asp Val Gly His Phe Asp Phe Trp Gly Gln 100 105 110 Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser 115 120 <210> 173 <211> 113 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic polypeptide: Anti- NaPi2b light chain variable region <400> 173 Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly 1 5 10 15 Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Arg Ser Ser Glu Thr Leu Val His Ser 20 25 30 Ser Gly Asn Thr Tyr Leu Glu Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala 35 40 45 Pro Lys Leu Leu Ile Tyr Arg Val Ser Asn Arg Phe Ser Gly Val Pro 50 55 60 Ser Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile 65 70 75 80 Ser Ser Leu Gln Pro Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Phe Gln Gly 85 90 95 Ser Phe Asn Pro Leu Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys 100 105 110 Arg <210> 174 <211> 107 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic polypeptide: anti-Ly6E antibody hu9B12 v12 light chain variable region <400> 174 Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly 1 5 10 15 Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Ser Ala Ser Gln Gly Ile Ser Asn Tyr 20 25 30 Leu Asn Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Thr Val Lys Leu Leu Ile 35 40 45 Tyr Tyr Thr Ser Asn Leu His Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly 50 55 60 Ser Gly Ser Gly Thr Asp Tyr Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro 65 70 75 80 Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln Tyr Ser Glu Leu Pro Trp 85 90 95 Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys 100 105 <210> 175 <211> 120 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic polypeptide: anti-Ly6E antibody hu9B12 v12 heavy chain variable region <400> 175 Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Pro Ala Leu Val Lys Pro Thr Gln 1 5 10 15 Thr Leu Thr Leu Thr Cys Thr Val Ser Gly Phe Ser Leu Thr Gly Tyr 20 25 30 Ser Val Asn Trp Ile Arg Gln Pro Pro Gly Lys Ala Leu Glu Trp Leu 35 40 45 Gly Met Ile Trp Gly Asp Gly Ser Thr Asp Tyr Asn Ser Ala Leu Lys 50 55 60 Ser Arg Leu Thr Ile Ser Lys Asp Thr Ser Lys Asn Gln Val Val Leu 65 70 75 80 Thr Met Thr Asn Met Asp Pro Val Asp Thr Ala Thr Tyr Tyr Cys Ala 85 90 95 Arg Asp Tyr Tyr Phe Asn Tyr Ala Ser Trp Phe Ala Tyr Trp Gly Gln 100 105 110 Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser 115 120 <210> 176 <211> 11 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic peptide: anti-Ly6E antibody hu9B12 v12 HVR-L1 <400> 176 Ser Ala Ser Gln Gly Ile Ser Asn Tyr Leu Asn 1 5 10 <210> 177 <211> 7 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic peptide: anti-Ly6E antibody hu9B12 v12 HVR-L2 <400> 177 Tyr Thr Ser Asn Leu His Ser 1 5 <210> 178 <211> 9 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic peptide: anti-Ly6E antibody hu9B12 v12 HVR-L3 <400> 178 Gln Gln Tyr Ser Glu Leu Pro Trp Thr 1 5 <210> 179 <211> 10 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic peptide: anti-Ly6E antibody hu9B12 v12 HVR-H1 <400> 179 Gly Phe Ser Leu Thr Gly Tyr Ser Val Asn 1 5 10 <210> 180 <211> 16 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic peptide: anti-Ly6E antibody hu9B12 v12 HVR-H2 <400> 180 Met Ile Trp Gly Asp Gly Ser Thr Asp Tyr Asn Ser Ala Leu Lys Ser 1 5 10 15 <210> 181 <211> 12 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic peptide: anti-Ly6E antibody hu9B12 v12 HVR-H3 <400> 181 Asp Tyr Tyr Val Asn Tyr Ala Ser Trp Phe Ala Tyr 1 5 10 <210> 182 <211> 214 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic polypeptide: anti-Ly6E antibody hu9B12 v12 K149C kappa light chain <400> 182 Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly 1 5 10 15 Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Ser Ala Ser Gln Gly Ile Ser Asn Tyr 20 25 30 Leu Asn Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Thr Val Lys Leu Leu Ile 35 40 45 Tyr Tyr Thr Ser Asn Leu His Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly 50 55 60 Ser Gly Ser Gly Thr Asp Tyr Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro 65 70 75 80 Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln Tyr Ser Glu Leu Pro Trp 85 90 95 Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys Arg Thr Val Ala Ala 100 105 110 Pro Ser Val Phe Ile Phe Pro Pro Ser Asp Glu Gln Leu Lys Ser Gly 115 120 125 Thr Ala Ser Val Val Cys Leu Leu Asn Asn Phe Tyr Pro Arg Glu Ala 130 135 140 Lys Val Gln Trp Cys Val Asp Asn Ala Leu Gln Ser Gly Asn Ser Gln 145 150 155 160 Glu Ser Val Thr Glu Gln Asp Ser Lys Asp Ser Thr Tyr Ser Leu Ser 165 170 175 Ser Thr Leu Thr Leu Ser Lys Ala Asp Tyr Glu Lys His Lys Val Tyr 180 185 190 Ala Cys Glu Val Thr His Gln Gly Leu Ser Ser Pro Val Thr Lys Ser 195 200 205 Phe Asn Arg Gly Glu Cys 210 <210> 183 <211> 450 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic polypeptide: anti-Ly6E antibody hu9B12 v12 IgG1 heavy chain <400> 183 Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Pro Ala Leu Val Lys Pro Thr Gln 1 5 10 15 Thr Leu Thr Leu Thr Cys Thr Val Ser Gly Phe Ser Leu Thr Gly Tyr 20 25 30 Ser Val Asn Trp Ile Arg Gln Pro Pro Gly Lys Ala Leu Glu Trp Leu 35 40 45 Gly Met Ile Trp Gly Asp Gly Ser Thr Asp Tyr Asn Ser Ala Leu Lys 50 55 60 Ser Arg Leu Thr Ile Ser Lys Asp Thr Ser Lys Asn Gln Val Val Leu 65 70 75 80 Thr Met Thr Asn Met Asp Pro Val Asp Thr Ala Thr Tyr Tyr Cys Ala 85 90 95 Arg Asp Tyr Tyr Phe Asn Tyr Ala Ser Trp Phe Ala Tyr Trp Gly Gln 100 105 110 Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val 115 120 125 Phe Pro Leu Ala Pro Ser Ser Lys Ser Thr Ser Gly Gly Thr Ala Ala 130 135 140 Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser 145 150 155 160 Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val 165 170 175 Leu Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro 180 185 190 Ser Ser Ser Leu Gly Thr Gln Thr Tyr Ile Cys Asn Val Asn His Lys 195 200 205 Pro Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys Lys Val Glu Pro Lys Ser Cys Asp 210 215 220 Lys Thr His Thr Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Leu Leu Gly Gly 225 230 235 240 Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile 245 250 255 Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser His Glu 260 265 270 Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His 275 280 285 Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr Arg 290 295 300 Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys 305 310 315 320 Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu Pro Ala Pro Ile Glu 325 330 335 Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr 340 345 350 Thr Leu Pro Pro Ser Arg Glu Glu Met Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu 355 360 365 Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp 370 375 380 Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val 385 390 395 400 Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp 405 410 415 Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His 420 425 430 Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro 435 440 445 Gly Lys 450 <210> 184 <211> 117 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic polypeptide: huMA79bv28 heavy chain variable region <400> 184 Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly 1 5 10 15 Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Ser Ser Tyr 20 25 30 Trp Ile Glu Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Ile 35 40 45 Gly Glu Ile Leu Pro Gly Gly Gly Asp Thr Asn Tyr Asn Glu Ile Phe 50 55 60 Lys Gly Arg Ala Thr Phe Ser Ala Asp Thr Ser Lys Asn Thr Ala Tyr 65 70 75 80 Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys 85 90 95 Thr Arg Arg Val Pro Ile Arg Leu Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Leu 100 105 110 Val Thr Val Ser Ser 115 <210> 185 <211> 112 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic polypeptide: huMA79bv28 light chain variable region <400> 185 Asp Ile Gln Leu Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly 1 5 10 15 Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Lys Ala Ser Gln Ser Val Asp Tyr Glu 20 25 30 Gly Asp Ser Phe Leu Asn Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro 35 40 45 Lys Leu Leu Ile Tyr Ala Ala Ser Asn Leu Glu Ser Gly Val Pro Ser 50 55 60 Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser 65 70 75 80 Ser Leu Gln Pro Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln Ser Asn 85 90 95 Glu Asp Pro Leu Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys Arg 100 105 110 <210> 186 <211> 10 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic peptide: huMA79bv28 HVR H1 <400> 186 Gly Tyr Thr Phe Ser Ser Tyr Trp Ile Glu 1 5 10 <210> 187 <211> 18 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic peptide: huMA79bv28 HVR H2 <400> 187 Gly Glu Ile Leu Pro Gly Gly Gly Asp Thr Asn Tyr Asn Glu Ile Phe 1 5 10 15 Lys Gly <210> 188 <211> 10 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic peptide: huMA79bv28 HVR H3 <400> 188 Thr Arg Arg Val Pro Ile Arg Leu Asp Tyr 1 5 10 <210> 189 <211> 15 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic peptide: huMA79bv28 HVR L1 <400> 189 Lys Ala Ser Gln Ser Val Asp Tyr Glu Gly Asp Ser Phe Leu Asn 1 5 10 15 <210> 190 <211> 7 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic peptide: huMA79bv28 HVR L2 <400> 190 Ala Ala Ser Asn Leu Glu Ser 1 5 <210> 191 <211> 9 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic peptide: huMA79bv28 HVR L3 <400> 191 Gln Gln Ser Asn Glu Asp Pro Leu Thr 1 5 <210> 192 <211> 10 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic peptide: Anti-CD22 HVR-H1 <400> 192 Gly Tyr Glu Phe Ser Arg Ser Trp Met Asn 1 5 10 <210> 193 <211> 18 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic peptide: Anti- CD22 HVR-H2 <400> 193 Gly Arg Ile Tyr Pro Gly Asp Gly Asp Thr Asn Tyr Ser Gly Lys Phe 1 5 10 15 Lys Gly <210> 194 <211> 11 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic peptide: Anti- CD22 HVR-H3 <400> 194 Asp Gly Ser Ser Trp Asp Trp Tyr Phe Asp Val 1 5 10 <210> 195 <211> 16 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic peptide: Anti- CD22 HVR-L1 <400> 195 Arg Ser Ser Gln Ser Ile Val His Ser Val Gly Asn Thr Phe Leu Glu 1 5 10 15 <210> 196 <211> 7 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic peptide: Anti- CD22 HVR-L2 <400> 196 Lys Val Ser Asn Arg Phe Ser 1 5 <210> 197 <211> 10 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic peptide: Anti- CD22 HVR-L3 <400> 197 Gly Tyr Glu Phe Ser Arg Ser Trp Met Asn 1 5 10 <210> 198 <211> 450 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic polypeptide: Fig. 2A - cysteine mutagenesis in the heavy chain <400> 198 Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly 1 5 10 15 Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Asn Ile Lys Asp Thr 20 25 30 Tyr Ile His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val 35 40 45 Ala Arg Ile Tyr Pro Thr Asn Gly Tyr Thr Arg Tyr Ala Asp Ser Val 50 55 60 Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Ala Asp Thr Ser Lys Asn Thr Ala Tyr 65 70 75 80 Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys 85 90 95 Ser Arg Trp Gly Gly Asp Gly Phe Tyr Ala Met Asp Tyr Trp Gly Gln 100 105 110 Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val 115 120 125 Phe Pro Leu Ala Pro Ser Ser Lys Ser Thr Ser Gly Gly Thr Ala Ala 130 135 140 Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser 145 150 155 160 Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val 165 170 175 Leu Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro 180 185 190 Ser Ser Ser Leu Gly Thr Gln Thr Tyr Ile Cys Asn Val Asn His Lys 195 200 205 Pro Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys Lys Val Glu Pro Lys Ser Cys Asp 210 215 220 Lys Thr His Thr Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Leu Leu Gly Gly 225 230 235 240 Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile 245 250 255 Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser His Glu 260 265 270 Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His 275 280 285 Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr Arg 290 295 300 Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys 305 310 315 320 Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu Pro Ala Pro Ile Glu 325 330 335 Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr 340 345 350 Thr Leu Pro Pro Ser Arg Glu Glu Met Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu 355 360 365 Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp 370 375 380 Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val 385 390 395 400 Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp 405 410 415 Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His 420 425 430 Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro 435 440 445 Gly Lys 450 <210> 199 <211> 214 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic polypeptide: Fig. 2B - cysteine mutagenesis in the light chain <400> 199 Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly 1 5 10 15 Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Arg Ala Ser Gln Asp Val Asn Thr Ala 20 25 30 Val Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu Leu Ile 35 40 45 Tyr Ser Ala Ser Phe Leu Tyr Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly 50 55 60 Ser Arg Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro 65 70 75 80 Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln His Tyr Thr Thr Pro Pro 85 90 95 Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys Arg Thr Val Ala Ala 100 105 110 Pro Ser Val Phe Ile Phe Pro Pro Ser Asp Glu Gln Leu Lys Ser Gly 115 120 125 Thr Ala Ser Val Val Cys Leu Leu Asn Asn Phe Tyr Pro Arg Glu Ala 130 135 140 Lys Val Gln Trp Lys Val Asp Asn Ala Leu Gln Ser Gly Asn Ser Gln 145 150 155 160 Glu Ser Val Thr Glu Gln Asp Ser Lys Asp Ser Thr Tyr Ser Leu Ser 165 170 175 Ser Thr Leu Thr Leu Ser Lys Ala Asp Tyr Glu Lys His Lys Val Tyr 180 185 190 Ala Cys Glu Val Thr His Gln Gly Leu Ser Ser Pro Val Thr Lys Ser 195 200 205 Phe Asn Arg Gly Glu Cys 210

Claims (66)

  1. 시스테인 가공된 항체로서,
    EU 넘버링에 따라, T114C, A140C, L174C, L179C, T187C, T209C, V262C, G371C, Y373C, E382C, S424C, N434C 및 Q438C로 이루어진 군으로부터 선택된 중쇄 내 시스테인 아미노산, 또는
    카밧 넘버링에 따라, I106C, R108C, R142C, 및 K149C로 이루어진 군으로부터 선택된 경쇄 내 시스테인 아미노산을 포함하는, 시스테인 가공된 항체.
  2. 청구항 1에 있어서, 상기 시스테인 가공된 항체는 하기로 이루어진 군으로부터 선택되는, 시스테인 가공된 항체:
    HC-T114C QGTLV C VSSAS 서열 번호.:5,
    HC-A140C TSGGT C ALGCL 서열 번호.:6,
    HC-L174C TFPAV C QSSGL 서열 번호.:7,
    HC-L179C LQSSG C YSLSS 서열 번호.:8,
    HC-T187C LSSVV C VPSSS 서열 번호.:9,
    HC-T209C HKPSN C KVDKK 서열 번호.:10,
    HC-V262C PEVTC C VVDVS 서열 번호.:11,
    HC-G371C TCLVK C FYPSD 서열 번호.:12,
    HC-Y373C LVKGF C PSDIA 서열 번호.:13,
    HC-E382C IAVEW C SNGQP 서열 번호.:14,
    HC-S424C QGNVF C CSVMH 서열 번호.:15,
    HC-N434C HEALH C HYTQK 서열 번호.:16,
    HC-Q438C HNHYT C KSLSL 서열 번호.:17,
    LC-I106C GTKVE C KRTVA 서열 번호.:1,
    LC-R108C KVEIK C TVAAP 서열 번호.:2,
    LC-R142C NNFYP C EAKVQ 서열 번호.:3, 및
    LC-K149C AKVQW C VDNAL 서열 번호.:4.
  3. 청구항 1 또는 2에 있어서, 상기 중쇄 내 상기 시스테인 돌연변이는, EU 넘버링에 따라, L174C, A140C, 및 Y373C로 이루어진 군으로부터 선택된, 시스테인 가공된 항체.
  4. 청구항 1 또는 2에 있어서, 상기 중쇄 내 상기 시스테인 돌연변이는, EU 넘버링에 따라, A140C인, 시스테인 가공된 항체.
  5. 청구항 1 또는 2에 있어서, 상기 중쇄 내 상기 시스테인 돌연변이는, EU 넘버링에 따라, L174C인, 시스테인 가공된 항체.
  6. 청구항 1 또는 2에 있어서, 상기 중쇄 내 상기 시스테인 돌연변이는, EU 넘버링에 따라, Y373C인, 시스테인 가공된 항체.
  7. 청구항 1 또는 2에 있어서, 상기 경쇄 내 상기 시스테인 돌연변이는, K149C인, 시스테인 가공된 항체.
  8. 하기를 포함하는 방법에 의하여 제조된, 청구항 1 내지 7 중 어느 한 항의 시스테인 가공된 항체:
    (i) 상기 시스테인 가공된 항체를 암호화하는 시스테인으로, 하나 이상의 아미노산 잔기를 대체함으로써 모 항체의 핵산 서열을 돌연변이생성(mutagenizing)하는 단계;
    (ii) 상기 시스테인 가공된 항체를 발현하는 단계; 및
    (iii) 상기 시스테인 가공된 항체를 단리시키는 단계.
  9. 청구항 8에 있어서, 상기 돌연변이생성은 부위 지시된 돌연변이생성(mutagenesis)을 포함하는, 시스테인 가공된 항체.
  10. 청구항 8에 있어서, 상기 시스테인은 유리 시스테인이며, 그리고
    상기 방법은 하기를 추가로 포함하는, 시스테인 가공된 항체:
    (i) 상기 시스테인 가공된 항체의 상기 유리 시스테인을 티올-반응성 친화성 시약과 반응시켜, 상기 유리 시스테인에 공유 부착된 상기 친화성 시약을 포함하는 친화성 표지된, 시스테인 가공된 항체를 생성하는 단계; 및
    (ii) 포획 배지에 대한, 상기 친화성 표지된, 시스테인 가공된 항체의 결합을 측정하는 단계.
  11. 청구항 10에 있어서, 상기 티올-반응성 시약은 말레이미드 모이어티를 포함하는, 시스테인 가공된 항체.
  12. 청구항 10에 있어서, 상기 티올-반응성 시약은 비오틴 모이어티를 포함하고, 그리고 상기 포획 배지는 스트렙타비딘을 포함하는, 시스테인 가공된 항체.
  13. 청구항 1 내지 12 중 어느 한 항에 있어서, 상기 시스테인 가공된 항체는 하기로부터 선택된, 시스테인 가공된 항체: 단클론성 항체, 항체 단편, 이중특이적 항체, 키메라 항체, 인간 항체, 및 인간화 항체.
  14. 청구항 1 내지 13 중 어느 한 항에 있어서, 상기 단편은 Fab 단편인, 시스테인 가공된 항체.
  15. 청구항 1 내지 14 중 어느 한 항에 있어서, 상기 시스테인 가공된 항체는 항-HER2 항체인, 시스테인 가공된 항체.
  16. 청구항 15에 있어서, 상기 항-HER2 항체는 트라스투주맙인, 시스테인 가공된 항체.
  17. 청구항 1 내지 14 중 어느 한 항에 있어서, 상기 시스테인 가공된 항체는 항-Ly6E 항체인, 시스테인 가공된 항체.
  18. 청구항 17에 있어서, 상기 항-Ly6E 항체는 하기를 포함하는, 시스테인 가공된 항체:
    (i) 서열 번호: 179의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H1, 및 서열 번호: 180의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H2; 서열 번호: 181의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H3; 서열 번호: 176의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-L1; 서열 번호: 177의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-L2; 및 서열 번호: 178의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-L3; 또는
    (ii) 서열 번호: 175의 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 가변 영역 및 서열 번호: 174의 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 가변 영역.
  19. 청구항 1 내지 14 중 어느 한 항에 있어서, 상기 시스테인 가공된 항체는 항-CD79b 항체인, 시스테인 가공된 항체.
  20. 청구항 19에 있어서, 상기 항-CD79b 항체는 하기를 포함하는, 시스테인 가공된 항체:
    (i) 서열 번호: 186의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H1, 및 서열 번호: 187의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H2; 서열 번호: 188의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H3; 서열 번호: 189의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-L1; 서열 번호: 190의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-L2; 및 서열 번호: 191의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-L3; 또는
    (ii) 서열 번호: 184의 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 가변 영역 및 서열 번호: 185의 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 가변 영역.
  21. 청구항 1 내지 14 중 어느 한 항에 있어서, 상기 시스테인 가공된 항체는 항-MUC16 항체인, 시스테인 가공된 항체.
  22. 청구항 21에 있어서, 상기 항-MUC16 항체는 하기를 포함하는, 시스테인 가공된 항체:
    (i) 서열 번호: 152의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H1, 및 서열 번호: 153의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H2; 서열 번호: 154의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H3; 서열 번호: 150의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-L1; 서열 번호: 151의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-L2; 및 서열 번호: 152의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-L3; 또는
    (ii) 서열 번호: 156의 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 가변 영역 및 서열 번호: 157의 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 가변 영역.
  23. 청구항 1 내지 14 중 어느 한 항에 있어서, 상기 시스테인 가공된 항체는 항-STEAP1 항체인, 시스테인 가공된 항체.
  24. 청구항 23에 있어서, 상기 항-STEAP1 항체는 하기를 포함하는, 시스테인 가공된 항체:
    (i) 서열 번호: 157의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H1, 및 서열 번호: 158의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H2; 서열 번호: 159의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H3; 서열 번호: 160의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-L1; 서열 번호: 161의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-L2; 및 서열 번호: 162의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-L3; 또는
    (ii) 서열 번호: 163의 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 가변 영역 및 서열 번호: 164의 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 가변 영역.
  25. 청구항 1 내지 14 중 어느 한 항에 있어서, 상기 시스테인 가공된 항체는 항-NaPi2b 항체인, 시스테인 가공된 항체.
  26. 청구항 25에 있어서, 상기 항-STEAP1 항체는 하기를 포함하는, 시스테인 가공된 항체:
    (i) 서열 번호: 165의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H1, 및 서열 번호: 167의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H2; 서열 번호: 168의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H3; 서열 번호: 169의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-L1; 서열 번호: 170의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-L2; 및 서열 번호: 171의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-L3; 또는
    (ii) 서열 번호: 172의 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 가변 영역 및 서열 번호: 173의 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 가변 영역.
  27. 청구항 1 내지 14 중 어느 한 항에 있어서, 상기 시스테인 가공된 항체는 항-CD22 항체인, 시스테인 가공된 항체.
  28. 청구항 25에 있어서, 상기 항-CD22 항체는 하기를 포함하는, 시스테인 가공된 항체:
    (i) 서열 번호: 192의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H1, 및 서열 번호: 193의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H2; 서열 번호: 194의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H3; 서열 번호: 195의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-L1; 서열 번호: 196의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-L2; 및 서열 번호: 197의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-L3.
  29. 청구항 1 내지 14 중 어느 한 항에 있어서, 상기 시스테인 가공된 항체는 하기 수용체 (1)-(53) 중 하나 이상에 결합하는, 시스테인 가공된 항체:
    (1) BMPR1B (골 형태형성 단백질 수용체-유형 IB);
    (2) E16 (LAT1, SLC7A5);
    (3) STEAP1 (전립선의 6개 막투과성 상피 항원);
    (4) 0772P (CA125, MUC16);
    (5) MPF (MPF, MSLN, SMR, 거핵구 강화 인자, 메소텔린);
    (6) Napi3b (NaPi2b, NAPI-3B, NPTIIb, SLC34A2, 용질 담체 패밀리 34 (인산 나트륨), 구성원 2, 유형 II 나트륨-의존적 포스페이트 수송체 3b);
    (7) 세마(Sema) 5b (FLJ10372, KIAA1445, Mm.42015, SEMA5B, SEMAG, 세마포린 5b Hlog, 세마 도메인, 7 개의 트롬보스폰딘 반복체 (유형 1 및 유형 1-형), 막투과성 도메인 (TM) 및 짧은 세포질 도메인, (세마포린) 5B)
    (8) PSCA hlg (2700050C12Rik, C530008O16Rik, RIKEN cDNA 2700050C12, RIKEN cDNA 2700050C12 유전자);
    (9) ETBR (엔도텔린 유형 B 수용체);
    (10) MSG783 (RNF124, 가상 단백질 FLJ20315);
    (11) STEAP2 (HGNC_8639, IPCA-1, PCANAP1, STAMP1, STEAP2, STMP, 전립선암 연관된 유전자 1, 전립선암 연관된 단백질 1, 전립선 2의 6개 막투과성 상피 항원, 6개 막투과성 전립선 단백질);
    (12) TrpM4 (BR22450, FLJ20041, TRPM4, TRPM4B, 일시적 수용체 전위 양이온 채널, 서브패밀리 M, 구성원 4);
    (13) CRIPTO (CR, CR1, CRGF, CRIPTO, TDGF1, 기형암종-유래 성장 인자);
    (14) CD21 (CR2 (보체 수용체 2) 또는 C3DR (C3d/엡스타인 바 바이러스 수용체) 또는 Hs.73792);
    (15) CD79b (CD79B, CD79β, IGb (면역글로불린-연관된 베타), B29);
    (16) FcRH2 (IFGP4, IRTA4, SPAP1A (SH2 도메인 함유 포스파타아제 앵커 단백질 1a), SPAP1B, SPAP1C);
    (17) HER2;
    (18) NCA;
    (19) MDP;
    (20) IL20Rα;
    (21) Brevican;
    (22) EphB2R;
    (23) ASLG659;
    (24) PSCA;
    (25) GEDA;
    (26) BAFF-R (B 세포-활성화 인자 수용체, BLyS 수용체 3, BR3;
    (27) CD22 (B-세포 수용체 CD22-B 이소형);
    (28) CD79a (CD79A, CD79a, 면역글로불린-연관된 알파, B 세포-특이적 단백질);
    (29) CXCR5 (버킷(Burkitt's) 림프종 수용체 1, G 단백질-커플링 수용체);
    (30) HLA-DOB (베타 하위단위의 MHC 부류 II 분자 (Ia 항원);
    (31) P2X5 (퓨린 수용체 P2X 리간드-게이트 이온 채널 5);
    (32) CD72 (B-세포 분화 항원 CD72, Lyb-2);
    (33) LY64 (림프구 항원 64 (RP105), 류신 풍부 반복체 (LRR) 패밀리의 유형 I 막 단백질);
    (34) FcRH1 (Fc 수용체-유사 단백질 1);
    (35) IRTA2 (관련 면역글로블린 슈퍼패밀리 수용체 전좌 2);
    (36) TENB2 (추정 막투과성 프로테오글리칸);
    (37) PMEL17 (은 동족체; SILV; D12S53E; PMEL17; SI; SIL);
    (38) TMEFF1 (EGF-유사 및 2개 폴리스타틴-유사 도메인 1을 갖는 막투과성 단백질; 토모레굴린-1);
    (39) GDNF-Ra1 (GDNF 패밀리 수용체 알파 1; GFRA1; GDNFR; GDNFRA; RETL1; TRNR1; RET1L; GDNFR-알파 1; GFR-알파-1);
    (40) Ly6E (림프구 항원 6 복합체, 유전자좌 E; Ly67,RIG-E,SCA-2,TSA-1)
    (41) TMEM46 (시사(shisa) 동족체 2);
    (42) Ly6G6D (림프구 항원 6 복합체, 유전자좌 G6D; Ly6-D, MEGT1);
    (43) LGR5 (류신-풍부 반복-함유 G 단백질-커플링 수용체 5; GPR49, GPR67);
    (44) RET (렛(ret) 원종양유전자(proto-oncogene); MEN2A; HSCR1; MEN2B; MTC1; PTC; CDHF12; Hs.168114; RET51; RET-ELE1);
    (45) LY6K (림프구 항원 6 복합체, 유전자좌 K; LY6K; HSJ001348; FLJ35226);
    (46) GPR19 (G 단백질-커플링 수용체 19; Mm.4787);
    (47) GPR54 (KISS1 수용체; KISS1R; GPR54; HOT7T175; AXOR12);
    (48) ASPHD1 (아스파르테이트 베타-하이드록실라제 도메인 함유 1; LOC253982);
    (49) 티로시나제 (TYR; OCAIA; OCA1A; 티로시나제; SHEP3);
    (50) TMEM118 (링 핑거 단백질, 막투과성 2; RNFT2; FLJ14627);
    (51) GPR172A (G 단백질-커플링 수용체 172A; GPCR41; FLJ11856; D15Ertd747e);
    (52) CD33; 및
    (53) CLL-1 (CLEC12A, MICL, 및 DCAL2).
  30. 청구항 1 내지 29 중 어느 한 항에 있어서, 상기 항체는 포획 표지, 검출 표지, 약물 모이어티, 또는 고형 지지체에 공유 부착되는, 시스테인 가공된 항체.
  31. 청구항 30에 있어서, 상기 항체는 비오틴 포획 표지에 공유 부착되는, 시스테인 가공된 항체.
  32. 청구항 30에 있어서, 상기 항체는 형광 염료 검출 표지에 공유 부착되는, 시스테인 가공된 항체.
  33. 청구항 30에 있어서, 상기 형광 염료는 하기로부터 선택되는, 시스테인 가공된 항체: 플루오레신 유형, 로다민 유형, 단실, 리스사민, 시아닌, 파이코에리트린, 텍사스 레드(Texas Red), 및 이의 유사체.
  34. 청구항 30에 있어서, 상기 항체는 하기로부터 선택된 방사선핵종 검출 표지에 공유 부착되는, 시스테인 가공된 항체: 3H, 11C, 14C, 18F, 32P, 35S, 64Cu, 68Ga, 86Y, 89Zr, 99Tc, 111In, 123I, 124I, 125I, 131I, 133Xe, 177Lu, 211At, 및 213Bi.
  35. 청구항 30에 있어서, 상기 항체는 킬레이팅 리간드에 의해 검출 표지에 공유 부착되는, 시스테인 가공된 항체.
  36. 청구항 35에 있어서, 상기 킬레이팅 리간드는 DOTA, DOTP, DOTMA, DTPA 및 TETA로부터 선택되는, 시스테인 가공된 항체.
  37. 청구항 1 내지 36 중 어느 한 항에 있어서, 상기 항체는 하기 화학식 I를 갖는 항체-약물 콘주게이트를 형성하기 위해 약물 모이어티에 공유부착되고:
    Figure pct00140

    식 중, L은 링커이고, D는 약물 모이어티이고, 그리고 p는 1, 2, 3, 또는 4이고; 그리고 상기 약물 모이어티는 청구항 1 또는 2의 시스테인 가공된 아미노산에 콘주게이트되는, 시스테인 가공된 항체.
  38. 청구항 37에 있어서, L은 하기로부터 선택된 군을 포함하는, 항체 약물 콘주게이트: 6-말레이미도카프로일 (MC), 말레이미도프로파노일 (MP), 발린-시트룰린 (val-cit (-vc)), 알라닌-페닐알라닌 (ala-phe), 및 p-아미노벤질옥시카보닐 (PAB).
  39. 청구항 37에 있어서, 하기로부터 선택된 링커 시약으로부터 제조된, 항체 약물 콘주게이트: N-숙신이미딜 4-(2-피리딜티오) 프로피오네이트(SPP), 숙신이미딜-4-(N-말레이미도메틸) 사이클로헥산-1-카복실레이트(SMCC), 4-(2-피리딜디티오)부티르산-N-하이드록시석신이미드 에스테르 (SPDB), 및 N-석신이미딜 (4-아이오도-아세틸) 아미노벤조에이트 (SIAB).
  40. 청구항 37에 있어서, 말레이미드, 아이오도아세트아미드, 브로모아세트아미드 또는 디설파이드를 포함하는 링커 시약으로부터 제조된, 항체 약물 콘주게이트.
  41. 청구항 37에 있어서, L은 디설파이드 링커를 형성하는, 항체 약물 콘주게이트.
  42. 청구항 40에 있어서, 상기 링커 시약은 피리딜 디설파이드 (PDS)를 포함하는, 항체 약물 콘주게이트.
  43. 청구항 37에 있어서, L은 발린-시트룰린 (val-cit (-vc))를 포함하는, 항체 약물 콘주게이트.
  44. 청구항 37 내지 43 중 어느 한 항에 있어서, 상기 약물 모이어티 (D)는 메이탄시노이드, 오리스타틴, 돌라스타틴, 트리코테센, CC1065, 칼리키아미신, 에네딘 항생제, 탁산, 피롤로벤조디아제핀 (PBD) 이량체, 1-(클로로메틸)-2,3-디하이드로-1H-벤조[e]인돌 (CBI) 이량체, CBI-PBD 이종이량체, 또는 안트라사이클린인, 항체 약물 콘주게이트.
  45. 청구항 44에 있어서, D는 하기 구조를 갖는 모노메틸오리스타틴 약물 모이어티 MMAE인, 항체 약물 콘주게이트:
    Figure pct00141

    식 중, 상기 파선은 상기 링커에 대한 공유부착 부위를 표지한다.
  46. 청구항 44에 있어서, 상기 항체-약물 콘주게이트는 하기 구조로부터 선택되는, 항체 약물 콘주게이트:
    Figure pct00142

    식 중, Val은 발린이고; Cit는 시트룰린이고; 그리고 p는 1, 2, 3, 또는 4이다.
  47. 청구항 44에 있어서, D는 하기 구조를 갖는 PBD 이량체 약물 및 이의 염 및 용매화물인, 항체 약물 콘주게이트:
    Figure pct00143

    식 중,
    상기 파선은 상기 링커에 대한 공유 부착 부위를 표지하며;
    상기 점선은 C1과 C2 또는 C2와 C3 사이의 이중 결합의 임의의 존재를 나타내고;
    R2 는 독립적으로 H, OH, =O, =CH2, CN, R, OR, =CH-RD, =C(RD)2, O-SO2-R, CO2R 및 COR로부터 선택되고, 그리고 임의로 추가로 할로 또는 디할로로부터 선택되고, RD 는 독립적으로 R, CO2R, COR, CHO, CO2H 및 할로로부터 선택되며;
    R6 및 R9 는 독립적으로 H, R, OH, OR, SH, SR, NH2, NHR, NRR’, NO2, Me3Sn 및 할로로부터 선택되며;
    R7 은 독립적으로 H, R, OH, OR, SH, SR, NH2, NHR, NRR’, NO2, Me3Sn 및 할로로부터 선택되며;
    Q 는 독립적으로 O, S 및 NH로부터 선택되며;
    R11 은 H 또는 R이거나, Q 는 O, SO3M이며, M 은 금속 양이온이며;
    R 및 R’ 는 각각 독립적으로 임의로 치환된 C1-8 알킬, C1-12 알킬, C3-8　헤테로사이클릴, C3-20 헤테로환, 및 C5-20 아릴 기로부터 선택되고, 그리고 임의로 NRR’ 기와 연관되고, R 및 R’ 은 이들이 부착된 질소 원자와 함께 임의로 치환된 4-, 5-, 6- 또는 7-원 헤테로환식 환을 형성하며;
    R12, R16, R19 및 R17 은 각각, R2, R6, R9 및 R7 에 대해 정의된 바와 같으며;
    R″ 는 C3-12 알킬렌 기이며, 이의 쇄는 임의로 치환된 하나 이상의 헤테로원자, 예컨대 O, S, N(H), NMe 및/또는 방향족 환, 예컨대 벤젠 또는 피리딘에 의해 저해될 수 있으며; 그리고
    X 및 X’ 는 독립적으로 O, S 및 N(H)로부터 선택된다.
  48. 청구항 47항에 있어서, 상기 PBD 이량체의 구조는 하기 (이의 염 및 용매화물 포함)인, 항체 약물 콘주게이트:
    Figure pct00144

    식 중,
    상기 파선은 상기 링커에 대한 공유 부착 부위를 표지하며; 상기 OH에 연결된 상기 파선은 S 또는 R 입체배치를 표지하며; RV1 및 RV2 는 독립적으로 하기로부터 선택되며: H, 메틸, 에틸 및 페닐 (여기서 페닐은 특히 4 위치에서 플루오로로 임의로 치환될 수 있음) 및 C5-6 헤테로사이클릴; RV1 및 RV2 는 상동 또는 상이할 수 있으며; 그리고 n은 0 또는 1이다.
  49. 청구항 47항에 있어서, 하기로부터 선택되는, 항체 약물 콘주게이트:
    Figure pct00145

    Figure pct00146
    및
    Figure pct00147
  50. 청구항 44에 있어서, D는 하기 구조를 갖는 CBI 이량체 약물인, 시스테인 가공된 항체:
    Figure pct00148

    식 중,
    R1 는 H, P(O)3H2, C(O)NRaRb 로부터 선택되거나, 또는 링커(L)에 대한 결합이며;
    R2 는 H, P(O)3H2, C(O)NRaRb 로부터 선택되거나, 또는 링커(L)에 대한 결합이며;
    Ra 및 Rb 는 독립적으로 하나 이상의 F로 임의로 치환된, H 및 C1-C6 로부터 선택되거나, Ra 및 Rb 는 5원 또는 6원 헤테로사이클릴 기를 형성하며;
    T는 하기로부터 선택된 연결기이며: C3-C12 알킬렌, Y, (C1-C6 알킬렌)-Y-(C1-C6 알킬렌), (C1-C6 알킬렌)-Y-(C1-C6 알킬렌)-Y-(C1-C6 알킬렌), (C2-C6 알케닐렌)-Y-(C2-C6 알케닐렌), 및 (C2-C6 알키닐렌)-Y-(C2-C6 알키닐렌);
    Y 는 독립적으로 O, S, NR1, 아릴, 및 헤테로아릴로부터 선택되며;
    알킬렌, 알케닐렌, 아릴, 및 헤테로아릴은 독립적으로, 그리고 임의로, F, OH, O(C1-C6 알킬), NH2, NHCH3, N(CH3)2, OP(O)3H2, 및 C1-C6 알킬로 치환되며, 여기서 알킬은 하나 이상의 F로 임의로 치환되며;
    또는 알킬렌, 알키닐렌, 아릴, 및 헤테로아릴은 독립적으로, 그리고 임의로 L에 대한 결합으로 치환되며;
    D' 는 하기로부터 선택되는 약물 모이어티이며:
    Figure pct00149

    Figure pct00150
    및
    Figure pct00151

    상기 파선은 T에 대한 부착 부위를 표지하며;
    X1 및 X2 는 독립적으로 O 및 NR3 로부터 선택되며, R3 은 하나 이상의 F로 임의로 치환된 H 및 C1-C6 알킬로부터 선택되며;
    R4 는 H, CO2R, 또는 링커 (L)에 대한 결합이며, R은 C1-C6 알킬 또는 벤질이며; 그리고
    R5 는 H 또는 C1-C6 알킬이다.
  51. 청구항 50항에 있어서, 하기로부터 선택되는, 항체 약물 콘주게이트:
    Figure pct00152

    Figure pct00153

    Figure pct00154
    및
    Figure pct00155
    .
  52. 항체-약물 콘주게이트를 제조하는 방법으로서,
    하기 화학식 I을 갖는 항체-약물 콘주게이트를 형성하기 위해 시스테인 가공된 항체 (Ab)의 적어도 하나의 시스테인을 링커-약물 중간체와 반응시키는 단계를 포함하고,
    Figure pct00156

    식 중, Ab는 청구항 1 내지 50 중 어느 한 항의 시스테인 가공된 항체이고, L은 링커이고, D는 약물 모이어티이고, 그리고 p는 1, 2, 3, 또는 4이고; 그리고 상기 시스테인 가공된 항체는 하나 이상의 시스테인 아미노산을 포함하는, 방법.
  53. 청구항 52에 있어서, 상기 시스테인 돌연변이는 EU 넘버링에 따라서, HC-L174C, HC-A140C, 및 HC-Y373C로 구성된 군으로부터 선택되는, 방법.
  54. 청구항 52에 있어서, 상기 시스테인 돌연변이는 EU 넘버링에 따라서, HC-A140C인, 방법.
  55. 청구항 52에 있어서, 상기 시스테인 돌연변이는 EU 넘버링에 따라서, HC-L174C인, 방법.
  56. 청구항 52에 있어서, 상기 시스테인 돌연변이는 EU 넘버링에 따라서, HC-Y373C인, 방법.
  57. 청구항 52에 있어서, 상기 시스테인 돌연변이는 LC-K149C인, 방법.
  58. 청구항 37에 있어서, 상기 시스테인 가공된 항체는 EU 넘버링에 따라서, A140C의 중쇄 돌연변이를 갖고, L은 피리딜 디설파이드 (PDS)를 포함하고, 그리고 D는 CBI - PBD 이종이량체, 크립토파이신, 탁소이드, 및 툴부리신 M으로 이루어진 군으로부터 선택되는, 항체 약물 콘주게이트.
  59. 청구항 37에 있어서, 상기 시스테인 가공된 항체는 EU 넘버링에 따라서, A140C의 중쇄 돌연변이를 갖고, L은 -vc 링커를 포함하고, 그리고 D는 CBI-PBD 이종이량체, 크립토파이신, 탁소이드, 및 툴부리신 M으로 이루어진 군으로부터 선택되는, 항체 약물 콘주게이트.
  60. 청구항 59에 있어서, D는 하기 구조를 갖는 CBI-PBD 이종이량체인, 항체 약물 콘주게이트:
    Figure pct00157
  61. 청구항 37에 있어서, 상기 시스테인 가공된 항체는 EU 넘버링에 따라서, R142C 및 K149C로 이루어진 군으로부터 선택된 경쇄 돌연변이를 갖고, 그리고 L은 피리딜 디설파이드 (PDS)를 포함하는, 항체 약물 콘주게이트.
  62. 청구항 37에 있어서, 상기 시스테인 가공된 항체는 EU 넘버링에 따라서, A140C, L174C, L179C, G371C, Y373C, 및 S424C로 이루어진 군으로부터 선택된 중쇄 돌연변이를 갖고, 그리고 L은 피리딜 디설파이드 (PDS)를 포함하는, 항체 약물 콘주게이트.
  63. 청구항 37에 있어서, 상기 시스테인 가공된 항체는 EU 넘버링에 따라서, L106C 및 R108C로 이루어진 군으로부터 선택된 경쇄 돌연변이를 갖고, 그리고 L은 -vc 링커인, 항체 약물 콘주게이트.
  64. 청구항 37에 있어서, 상기 시스테인 가공된 항체는 EU 넘버링에 따라서, T114C, T187C, T209C, V262C, G371C, E382C, 및 N434C로 이루어진 군으로부터 선택된 중쇄 돌연변이를 갖고, 그리고 L은 -vc 링커인, 항체 약물 콘주게이트.
  65. 항체-약물 콘주게이트로서, 상기 항체 약물 콘주게이트는 표 18 또는 표 19에 인용된 항체 약물 콘주게이트 중 하나로부터 선택되는, 항체 약물 콘주게이트.
  66. 청구항 1 내지 65 중 어느 한 항의 시스테인 가공된 항체 또는 항체 약물 콘주게이트를 포함하는, 약제학적 조성물.


KR1020177008038A 2014-09-12 2015-09-11 시스테인 가공된 항체 및 콘주게이트 KR20170052600A (ko)

Applications Claiming Priority (3)

Application Number Priority Date Filing Date Title
US201462050022P 2014-09-12 2014-09-12
US62/050,022 2014-09-12
PCT/US2015/049771 WO2016040856A2 (en) 2014-09-12 2015-09-11 Cysteine engineered antibodies and conjugates

Publications (1)

Publication Number Publication Date
KR20170052600A true KR20170052600A (ko) 2017-05-12

Family

ID=54200088

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
KR1020177008038A KR20170052600A (ko) 2014-09-12 2015-09-11 시스테인 가공된 항체 및 콘주게이트

Country Status (17)

Country Link
US (3) US10077318B2 (ko)
EP (2) EP3191521A2 (ko)
JP (5) JP2017531620A (ko)
KR (1) KR20170052600A (ko)
CN (1) CN107108724A (ko)
AR (1) AR101844A1 (ko)
AU (1) AU2015314826A1 (ko)
BR (1) BR112017003236A2 (ko)
CA (1) CA2957354A1 (ko)
HK (1) HK1243103A1 (ko)
IL (1) IL250449A0 (ko)
MX (1) MX2017003123A (ko)
RU (1) RU2017107502A (ko)
SG (1) SG11201701128YA (ko)
TW (1) TW201625688A (ko)
WO (1) WO2016040856A2 (ko)
ZA (1) ZA201700944B (ko)

Families Citing this family (97)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
AR098126A1 (es) 2013-10-21 2016-05-04 Genentech Inc Anticuerpos anti-ly6e (locus e del complejo del antígeno 6 linfocítico), inmunoconjugados y métodos para usarlos
CR20160271A (es) 2013-12-16 2016-12-02 Genentech Inc Compuestos peptidométicos y sus conjugados de anticuerpo-fármaco
CN105848685B (zh) 2013-12-16 2020-09-22 健泰科生物技术公司 拟肽化合物及其抗体药物偶联物
JP7085837B2 (ja) 2014-09-12 2022-06-17 ジェネンテック， インコーポレイテッド 抗ｈｅｒ２抗体及び免疫複合体
ES2796903T3 (es) * 2014-09-23 2020-11-30 Hoffmann La Roche Procedimiento de uso de inmunoconjugados anti-CD79b
EP3259285A2 (en) 2015-02-16 2017-12-27 Lonza Ltd Cl and/or ch1 mutated antibodies for drug conjugation
TW201709934A (zh) * 2015-06-15 2017-03-16 建南德克公司 抗體及免疫結合物
MA43345A (fr) 2015-10-02 2018-08-08 Hoffmann La Roche Conjugués anticorps-médicaments de pyrrolobenzodiazépine et méthodes d'utilisation
EP3383420B1 (en) 2015-12-04 2022-03-23 Seagen Inc. Conjugates of quaternized tubulysin compounds
US11793880B2 (en) 2015-12-04 2023-10-24 Seagen Inc. Conjugates of quaternized tubulysin compounds
KR20180089433A (ko) 2015-12-21 2018-08-08 브리스톨-마이어스 스큅 컴퍼니 부위-특이적 접합을 위한 변이체 항체
US10745487B2 (en) 2016-03-22 2020-08-18 Bionomics Limited Method of treating cancer by administering an anti-LGR5 monoclonal antibody
US11046776B2 (en) 2016-08-05 2021-06-29 Genentech, Inc. Multivalent and multiepitopic antibodies having agonistic activity and methods of use
US20200048347A1 (en) * 2016-09-01 2020-02-13 Immunomab, Inc. Bispecific antibodies
MX2019004717A (es) * 2016-11-07 2019-08-05 Seattle Genetics Inc Distribucion de casquetes de cisteina modificados.
US20200368364A1 (en) * 2016-12-06 2020-11-26 City Of Hope Cysteine peptide-enabled antibodies
WO2018114578A1 (de) * 2016-12-21 2018-06-28 Bayer Pharma Aktiengesellschaft Binder-wirkstoff-konjugate (adcs) mit enzymatisch spaltbaren gruppen
KR102697394B1 (ko) * 2017-02-28 2024-08-20 씨젠 인크. 컨쥬게이션을 위한 시스테인 변이된 항체
SG11201908650PA (en) 2017-03-22 2019-10-30 Genentech Inc Optimized antibody compositions for treatment of ocular disorders
AU2018247767A1 (en) 2017-04-03 2019-09-19 F. Hoffmann-La Roche Ag Antibodies binding to STEAP-1
TW201836647A (zh) * 2017-04-06 2018-10-16 美商艾伯維有限公司 抗－ｐｒｌｒ抗體藥物軛合物（ａｄｃ）及其用途
US20200114017A1 (en) * 2017-06-16 2020-04-16 Bionomics Limited Antibody drug conjugates that bind lgr5
AU2018288030B2 (en) * 2017-06-20 2022-02-03 Baili-Bio (Chengdu) Pharmaceutical Co., Ltd. Screening of fixed-point coupling sites of cysteine-modified antibody-toxin conjugate (TDC)
GB201711208D0 (en) 2017-07-12 2017-08-23 Iontas Ltd Ion channel inhibitors
JP7117088B2 (ja) * 2017-08-04 2022-08-12 シスメックス株式会社 抗体及びその製造方法、並びに抗体の熱安定性を向上させる方法
CN107446050A (zh) 2017-08-11 2017-12-08 百奥泰生物科技(广州)有限公司 Trop2阳性疾病治疗的化合物及方法
CN111278461A (zh) 2017-08-16 2020-06-12 百时美施贵宝公司 可前药化抗体、其前药以及使用和制备方法
KR20200086312A (ko) * 2017-11-08 2020-07-16 야페이 상하이 바이오로그 메디신 사이언스 앤드 테크놀로지 컴퍼니 리미티드 생체분자의 컨쥬게이트 및 이의 용도
CN111527107B (zh) 2017-12-21 2024-10-01 豪夫迈·罗氏有限公司 结合hla-a2/wt1的抗体
JP2021508471A (ja) 2017-12-29 2021-03-11 エフ．ホフマン−ラ ロシュ アーゲーＦ． Ｈｏｆｆｍａｎｎ−Ｌａ Ｒｏｃｈｅ Ａｋｔｉｅｎｇｅｓｅｌｌｓｃｈａｆｔ 抗ｖｅｇｆ抗体のｖｅｇｆ受容体遮断選択性を改善する方法
US20200339686A1 (en) 2018-01-16 2020-10-29 Lakepharma, Inc. Bispecific antibody that binds cd3 and another target
JP2021511333A (ja) * 2018-01-18 2021-05-06 マジェンタ セラピューティクス インコーポレイテッドＭａｇｅｎｔａ Ｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃｓ， Ｉｎｃ． Ｃｄ１３４＋細胞の枯渇のための組成物および方法
TWI829667B (zh) 2018-02-09 2024-01-21 瑞士商赫孚孟拉羅股份公司 結合gprc5d之抗體
CA3091231A1 (en) 2018-03-29 2019-10-03 Genentech, Inc. Modulating lactogenic activity in mammalian cells
MX2021000163A (es) 2018-07-02 2021-05-27 Amgen Inc Proteina de union al antigeno anti-steap1.
KR20210040989A (ko) 2018-08-03 2021-04-14 추가이 세이야쿠 가부시키가이샤 서로 연결된 2개의 항원 결합 도메인을 포함하는 항원 결합 분자
KR20210097101A (ko) * 2018-09-20 2021-08-06 아리조나 보드 오브 리전츠 온 비해프 오브 더 유니버시티 오브 아리조나 표적화 모이어티-약물 이식된 면역 세포 조성물 및 사용 방법
CN113365664A (zh) * 2018-10-29 2021-09-07 梅尔莎纳医疗公司 具有含肽接头的半胱氨酸工程化的抗体-药物缀合物
WO2020127619A1 (en) 2018-12-21 2020-06-25 F. Hoffmann-La Roche Ag Antibodies binding to cd3
WO2020127873A1 (en) 2018-12-21 2020-06-25 F. Hoffmann-La Roche Ag Antibody that binds to vegf and il-1beta and methods of use
BR112021014420A2 (pt) 2019-01-28 2021-09-21 Tuojie Biotech (Shanghai) Co., Ltd. Anticorpo anti-cd79b, fragmento de ligação ao antígeno do mesmo e uso farmacêutico do mesmo
CN117843795A (zh) * 2019-03-11 2024-04-09 凯惠科技发展(上海)有限公司 一种含半胱氨酸的抗体、药物偶联物及其应用
JP2022527449A (ja) 2019-03-21 2022-06-02 イミュノジェン・インコーポレーテッド 細胞結合剤－薬物複合体の調製方法
AR119393A1 (es) 2019-07-15 2021-12-15 Hoffmann La Roche Anticuerpos que se unen a nkg2d
JP2022543551A (ja) 2019-07-31 2022-10-13 エフ・ホフマン－ラ・ロシュ・アクチェンゲゼルシャフト Ｇｐｒｃ５ｄに結合する抗体
CN114174342B (zh) 2019-07-31 2024-08-16 豪夫迈·罗氏有限公司 与gprc5d结合的抗体
EP4019544A4 (en) * 2019-08-19 2023-10-18 Shenyang Pharmaceutical University ANTIBODY MUTANT AND APPLICATION THEREOF
WO2021046331A1 (en) * 2019-09-05 2021-03-11 Memorial Sloan Kettering Cancer Center Anti-steap1 antibodies and uses thereof
CA3150999A1 (en) 2019-09-18 2021-03-25 James Thomas Koerber Anti-klk7 antibodies, anti-klk5 antibodies, multispecific anti-klk5/klk7 antibodies, and methods of use
MX2022007635A (es) 2019-12-18 2022-07-19 Hoffmann La Roche Anticuerpos que se unen a hla-a2/mage-a4.
KR20220137923A (ko) 2020-02-05 2022-10-12 추가이 세이야쿠 가부시키가이샤 재조합 항원 결합 분자를 제조 및/또는 농축하기 위한 방법
JP2023514727A (ja) 2020-02-21 2023-04-07 シルバーバック セラピューティックス インコーポレイテッド ネクチン－４抗体コンジュゲートおよびその使用
JP7481856B2 (ja) * 2020-02-25 2024-05-13 シスメックス株式会社 改変抗体及びその製造方法、並びに抗体の熱安定性を向上させる方法
CA3169908A1 (en) 2020-03-26 2021-09-30 Genentech, Inc. Modified mammalian cells having reduced host cell proteins
EP4126940A1 (en) 2020-03-30 2023-02-08 F. Hoffmann-La Roche AG Antibody that binds to vegf and pdgf-b and methods of use
PE20230077A1 (es) 2020-03-31 2023-01-11 Chugai Pharmaceutical Co Ltd Moleculas de union al antigeno multiespecificas dirigidas a ligando de tipo delta 3 (dll3) y sus usos
TW202204396A (zh) 2020-06-08 2022-02-01 瑞士商赫孚孟拉羅股份公司 抗hbv抗體及使用方法
JP2023530961A (ja) 2020-06-19 2023-07-20 エフ・ホフマン－ラ・ロシュ・アクチェンゲゼルシャフト Ｃｄ３に結合する抗体
BR112022025856A2 (pt) 2020-06-19 2023-01-10 Hoffmann La Roche Anticorpo que se liga a cd3 e cd19, polinucleotídeo isolado, célula hospedeira, método de produção de um anticorpo que se liga a cd3 e cd19, composição farmacêutica, uso do anticorpo, método para tratar uma doença em um indivíduo e invenção
WO2021255146A1 (en) 2020-06-19 2021-12-23 F. Hoffmann-La Roche Ag Antibodies binding to cd3 and cea
AR122656A1 (es) 2020-06-19 2022-09-28 Hoffmann La Roche Anticuerpos que se unen a cd3 / folr1
JP2023533217A (ja) 2020-06-24 2023-08-02 ジェネンテック， インコーポレイテッド アポトーシス耐性細胞株
TW202216211A (zh) 2020-07-01 2022-05-01 美商希沃爾拜克治療公司 抗asgr1抗體共軛物及其用途
KR20230038735A (ko) 2020-07-17 2023-03-21 제넨테크, 인크. 항-notch2 항체 및 이용 방법
CN116648507A (zh) 2020-08-28 2023-08-25 基因泰克公司 宿主细胞蛋白的CRISPR/Cas9多重敲除
IL300616A (en) 2020-09-04 2023-04-01 Hoffmann La Roche Antibody that binds to VEGF-A and ANG2 and methods of use
AR123855A1 (es) 2020-10-20 2023-01-18 Genentech Inc Anticuerpos anti-mertk conjugados con peg y métodos de uso
EP4288458A1 (en) 2021-02-03 2023-12-13 Genentech, Inc. Multispecific binding protein degrader platform and methods of use
EP4304732A1 (en) 2021-03-12 2024-01-17 Genentech, Inc. Anti-klk7 antibodies, anti-klk5 antibodies, multispecific anti-klk5/klk7 antibodies, and methods of use
WO2022217022A1 (en) 2021-04-10 2022-10-13 Profoundbio Us Co. Folr1 binding agents, conjugates thereof and methods of using the same
EP4326855A1 (en) 2021-04-19 2024-02-28 Genentech, Inc. Modified mammalian cells
AU2022262644A1 (en) 2021-04-23 2023-11-09 Profoundbio Us Co. Anti-cd70 antibodies, conjugates thereof and methods of using the same
JP2024521107A (ja) 2021-05-21 2024-05-28 ジェネンテック， インコーポレイテッド 目的の組換え産物を産生するための修飾細胞
JP2024530402A (ja) 2021-07-12 2024-08-21 ジェネンテック， インコーポレイテッド 抗体－リパーゼ結合を減少させるための構造
TW202309097A (zh) 2021-07-14 2023-03-01 美商建南德克公司 抗ｃ－ｃ模體趨化因子受體８（ｃｃｒ８）抗體及其使用方法
CN117730102A (zh) 2021-07-22 2024-03-19 豪夫迈·罗氏有限公司 异二聚体Fc结构域抗体
CA3226393A1 (en) * 2021-07-28 2023-02-02 Doron Shabat Water soluble prodrug, conjugates and uses thereof
CN117794953A (zh) 2021-08-03 2024-03-29 豪夫迈·罗氏有限公司 双特异性抗体及使用方法
JP2024540536A (ja) 2021-11-19 2024-10-31 アーディアジェン コーポレーション Ｇｐｃ３結合剤、そのコンジュゲートおよびその使用方法
AR127887A1 (es) 2021-12-10 2024-03-06 Hoffmann La Roche Anticuerpos que se unen a cd3 y plap
TW202340251A (zh) 2022-01-19 2023-10-16 美商建南德克公司 抗ｎｏｔｃｈ２抗體及結合物及其使用方法
KR20240141760A (ko) 2022-02-09 2024-09-27 고쿠리츠 켄큐 카이하츠 호진 이야쿠 키반 켄코 에이요 켄큐쇼 Fcrl1에 결합하는 항체 또는 해당 항체 단편
AU2023264069A1 (en) * 2022-05-03 2024-10-24 Genentech, Inc. Anti-ly6e antibodies, immunoconjugates, and uses thereof
AR129268A1 (es) 2022-05-11 2024-08-07 Hoffmann La Roche Anticuerpo que se une a vegf-a e il6 y métodos de uso
WO2023240067A2 (en) * 2022-06-07 2023-12-14 Ngb Biopharmaceuticals, Inc. Multimerization of binding molecules having an antibody constant region variant and mutations that reduce effector functions
WO2024028282A1 (en) 2022-08-01 2024-02-08 Gate2Brain, S.L. Site-specific modification by a bbb-shuttle of antibody-based entities for crossing the blood-brain barrier
CN115850449A (zh) * 2022-09-29 2023-03-28 苏州智核生物医药科技有限公司 抗体和缀合物
TW202421664A (zh) 2022-10-07 2024-06-01 美商建南德克公司 用抗ｃ—ｃ模體趨化因子受體８（ｃｃｒ８）抗體治療癌症之方法
US20240165257A1 (en) 2022-11-01 2024-05-23 Heidelberg Pharma Research Gmbh Anti-gucy2c antibody and uses thereof
WO2024100170A1 (en) 2022-11-11 2024-05-16 F. Hoffmann-La Roche Ag Antibodies binding to hla-a*02/foxp3
WO2024108178A1 (en) 2022-11-18 2024-05-23 Genentech, Inc. Signal amplification and multiplexing using mass tags for ia-lc-ms/ms based assays
US20240360229A1 (en) 2023-01-18 2024-10-31 Genentech, Inc. Multispecific antibodies and uses thereof
WO2024156672A1 (en) 2023-01-25 2024-08-02 F. Hoffmann-La Roche Ag Antibodies binding to csf1r and cd3
WO2024191785A1 (en) 2023-03-10 2024-09-19 Genentech, Inc. Fusions with proteases and uses thereof
WO2024189048A1 (en) 2023-03-13 2024-09-19 Heidelberg Pharma Research Gmbh Subcutaneously administered antibody-drug conjugates for use in cancer treatment
US20240327522A1 (en) 2023-03-31 2024-10-03 Genentech, Inc. Anti-alpha v beta 8 integrin antibodies and methods of use
CN116650660B (zh) * 2023-07-27 2023-11-03 上海偌妥生物科技有限公司 制备抗体偶联小分子药物的方法及其应用

Family Cites Families (405)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US4307016A (en) 1978-03-24 1981-12-22 Takeda Chemical Industries, Ltd. Demethyl maytansinoids
US4275149A (en) 1978-11-24 1981-06-23 Syva Company Macromolecular environment control in specific receptor assays
US4318980A (en) 1978-04-10 1982-03-09 Miles Laboratories, Inc. Heterogenous specific binding assay employing a cycling reactant as label
US4256746A (en) 1978-11-14 1981-03-17 Takeda Chemical Industries Dechloromaytansinoids, their pharmaceutical compositions and method of use
JPS55102583A (en) 1979-01-31 1980-08-05 Takeda Chem Ind Ltd 20-acyloxy-20-demethylmaytansinoid compound
JPS55162791A (en) 1979-06-05 1980-12-18 Takeda Chem Ind Ltd Antibiotic c-15003pnd and its preparation
JPS5645483A (en) 1979-09-19 1981-04-25 Takeda Chem Ind Ltd C-15003phm and its preparation
EP0028683A1 (en) 1979-09-21 1981-05-20 Takeda Chemical Industries, Ltd. Antibiotic C-15003 PHO and production thereof
JPS5645485A (en) 1979-09-21 1981-04-25 Takeda Chem Ind Ltd Production of c-15003pnd
US4458066A (en) 1980-02-29 1984-07-03 University Patents, Inc. Process for preparing polynucleotides
WO1982001188A1 (en) 1980-10-08 1982-04-15 Takeda Chemical Industries Ltd 4,5-deoxymaytansinoide compounds and process for preparing same
US4450254A (en) 1980-11-03 1984-05-22 Standard Oil Company Impact improvement of high nitrile resins
US4315929A (en) 1981-01-27 1982-02-16 The United States Of America As Represented By The Secretary Of Agriculture Method of controlling the European corn borer with trewiasine
US4313946A (en) 1981-01-27 1982-02-02 The United States Of America As Represented By The Secretary Of Agriculture Chemotherapeutically active maytansinoids from Trewia nudiflora
US4415732A (en) 1981-03-27 1983-11-15 University Patents, Inc. Phosphoramidite compounds and processes
JPS57192389A (en) 1981-05-20 1982-11-26 Takeda Chem Ind Ltd Novel maytansinoid
US4816567A (en) 1983-04-08 1989-03-28 Genentech, Inc. Recombinant immunoglobin preparations
JPS6098584A (ja) 1983-11-02 1985-06-01 Canon Inc カメラ―体形ｖｔｒ
US5807715A (en) 1984-08-27 1998-09-15 The Board Of Trustees Of The Leland Stanford Junior University Methods and transformed mammalian lymphocyte cells for producing functional antigen-binding protein including chimeric immunoglobulin
US5342606A (en) 1984-10-18 1994-08-30 Board Of Regents, The University Of Texas System Polyazamacrocyclic compounds for complexation of metal ions
US5316757A (en) 1984-10-18 1994-05-31 Board Of Regents, The University Of Texas System Synthesis of polyazamacrocycles with more than one type of side-chain chelating groups
US4737456A (en) 1985-05-09 1988-04-12 Syntex (U.S.A.) Inc. Reducing interference in ligand-receptor binding assays
US4676980A (en) 1985-09-23 1987-06-30 The United States Of America As Represented By The Secretary Of The Department Of Health And Human Services Target specific cross-linked heteroantibodies
US5583024A (en) 1985-12-02 1996-12-10 The Regents Of The University Of California Recombinant expression of Coleoptera luciferase
US5091178A (en) 1986-02-21 1992-02-25 Oncogen Tumor therapy with biologically active anti-tumor antibodies
IL85035A0 (en) 1987-01-08 1988-06-30 Int Genetic Eng Polynucleotide molecule,a chimeric antibody with specificity for human b cell surface antigen,a process for the preparation and methods utilizing the same
WO1988007089A1 (en) 1987-03-18 1988-09-22 Medical Research Council Altered antibodies
GB8720833D0 (en) 1987-09-04 1987-10-14 Celltech Ltd Recombinant dna product
US5770701A (en) 1987-10-30 1998-06-23 American Cyanamid Company Process for preparing targeted forms of methyltrithio antitumor agents
US5606040A (en) 1987-10-30 1997-02-25 American Cyanamid Company Antitumor and antibacterial substituted disulfide derivatives prepared from compounds possessing a methyl-trithio group
WO1989006692A1 (en) 1988-01-12 1989-07-27 Genentech, Inc. Method of treating tumor cells by inhibiting growth factor receptor function
FI102355B1 (fi) 1988-02-11 1998-11-30 Bristol Myers Squibb Co Menetelmä yhdistävän välikappaleen omaavien antrasykliini-immunokonjugaattien valmistamiseksi
CA2023779A1 (en) 1989-08-23 1991-02-24 Margaret D. Moore Compositions and methods for detection and treatment of epstein-barr virus infection and immune disorders
US5208020A (en) 1989-10-25 1993-05-04 Immunogen Inc. Cytotoxic agents comprising maytansinoids and their therapeutic use
US5256643A (en) 1990-05-29 1993-10-26 The Government Of The United States Human cripto protein
AU9016591A (en) 1990-10-25 1992-05-26 Tanox Biosystems, Inc. Glycoproteins associated with membrane-bound immunoglobulins as antibody targets on B cells
US5571894A (en) 1991-02-05 1996-11-05 Ciba-Geigy Corporation Recombinant antibodies specific for a growth factor receptor
US5440021A (en) 1991-03-29 1995-08-08 Chuntharapai; Anan Antibodies to human IL-8 type B receptor
US5543503A (en) 1991-03-29 1996-08-06 Genentech Inc. Antibodies to human IL-8 type A receptor
WO1992017497A1 (en) 1991-03-29 1992-10-15 Genentech, Inc. Human pf4a receptors and their use
CA2103059C (en) 1991-06-14 2005-03-22 Paul J. Carter Method for making humanized antibodies
JP3050424B2 (ja) 1991-07-12 2000-06-12 塩野義製薬株式会社 ヒトエンドセリンリセプター
US5264557A (en) 1991-08-23 1993-11-23 The United States Of America As Represented By The Department Of Health And Human Services Polypeptide of a human cripto-related gene, CR-3
US5587458A (en) 1991-10-07 1996-12-24 Aronex Pharmaceuticals, Inc. Anti-erbB-2 antibodies, combinations thereof, and therapeutic and diagnostic uses thereof
WO1993008829A1 (en) 1991-11-04 1993-05-13 The Regents Of The University Of California Compositions that mediate killing of hiv-infected cells
US6153408A (en) 1991-11-15 2000-11-28 Institut Pasteur And Institut National De La Sante Et De La Recherche Medicale Altered major histocompatibility complex (MHC) determinant and methods of using the determinant
US5976551A (en) 1991-11-15 1999-11-02 Institut Pasteur And Institut Nationale De La Sante Et De La Recherche Medicale Altered major histocompatibility complex (MHC) determinant and method of using the determinant
US5428139A (en) 1991-12-10 1995-06-27 The Dow Chemical Company Bicyclopolyazamacrocyclophosphonic acid complexes for use as radiopharmaceuticals
US5739294A (en) 1991-12-10 1998-04-14 The Dow Chemical Company Bicyclopol yazamacrocyclophosphonic acid complexes for use as contrast agents
US5480990A (en) 1991-12-10 1996-01-02 The Dow Chemical Company Bicyclopolyazamacrocyclocarboxylic acid complexes for use as contrast agents
AU675929B2 (en) 1992-02-06 1997-02-27 Curis, Inc. Biosynthetic binding protein for cancer marker
WO1993021319A1 (en) 1992-04-08 1993-10-28 Cetus Oncology Corporation HUMANIZED C-erbB-2 SPECIFIC ANTIBODIES
ZA932522B (en) 1992-04-10 1993-12-20 Res Dev Foundation Immunotoxins directed against c-erbB-2(HER/neu) related surface antigens
AU4924893A (en) 1992-09-16 1994-04-12 Galagen, Inc. Antibody treatment of (helicobacter pylori)
IL107366A (en) 1992-10-23 2003-03-12 Chugai Pharmaceutical Co Ltd Genes coding for megakaryocyte potentiator
ES2152483T3 (es) 1992-11-13 2001-02-01 Idec Pharma Corp Aplicacion terapeutica en anticuerpos quimericos y radiomarcados contra el antigeno de diferenciacion restringida de los linfocitos b humanos para el tratamiento del linfoma de celulas b.
US5635483A (en) 1992-12-03 1997-06-03 Arizona Board Of Regents Acting On Behalf Of Arizona State University Tumor inhibiting tetrapeptide bearing modified phenethyl amides
US5644033A (en) 1992-12-22 1997-07-01 Health Research, Inc. Monoclonal antibodies that define a unique antigen of human B cell antigen receptor complex and methods of using same for diagnosis and treatment
US5780588A (en) 1993-01-26 1998-07-14 Arizona Board Of Regents Elucidation and synthesis of selected pentapeptides
US5801005A (en) 1993-03-17 1998-09-01 University Of Washington Immune reactivity to HER-2/neu protein for diagnosis of malignancies in which the HER-2/neu oncogene is associated
US5869445A (en) 1993-03-17 1999-02-09 University Of Washington Methods for eliciting or enhancing reactivity to HER-2/neu protein
US5385893A (en) 1993-05-06 1995-01-31 The Dow Chemical Company Tricyclopolyazamacrocyclophosphonic acids, complexes and derivatives thereof, for use as contrast agents
US5462725A (en) 1993-05-06 1995-10-31 The Dow Chemical Company 2-pyridylmethylenepolyazamacrocyclophosphonic acids, complexes and derivatives thereof, for use as contrast agents
US6214345B1 (en) 1993-05-14 2001-04-10 Bristol-Myers Squibb Co. Lysosomal enzyme-cleavable antitumor drug conjugates
WO1994029351A2 (en) 1993-06-16 1994-12-22 Celltech Limited Antibodies
US5773223A (en) 1993-09-02 1998-06-30 Chiron Corporation Endothelin B1, (ETB1) receptor polypeptide and its encoding nucleic acid methods, and uses thereof
DE69434136T2 (de) 1993-10-01 2005-12-01 Teikoku Hormone Mfg. Co., Ltd. Dolastatin-derivate
US5773001A (en) 1994-06-03 1998-06-30 American Cyanamid Company Conjugates of methyltrithio antitumor agents and intermediates for their synthesis
US5750370A (en) 1995-06-06 1998-05-12 Human Genome Sciences, Inc. Nucleic acid encoding human endothlein-bombesin receptor and method of producing the receptor
US5663149A (en) 1994-12-13 1997-09-02 Arizona Board Of Regents Acting On Behalf Of Arizona State University Human cancer inhibitory pentapeptide heterocyclic and halophenyl amides
US5731168A (en) 1995-03-01 1998-03-24 Genentech, Inc. Method for making heteromultimeric polypeptides
JPH08336393A (ja) 1995-04-13 1996-12-24 Mitsubishi Chem Corp 光学活性なγ−置換−β−ヒドロキシ酪酸エステルの製造法
US5712374A (en) 1995-06-07 1998-01-27 American Cyanamid Company Method for the preparation of substantiallly monomeric calicheamicin derivative/carrier conjugates
US5714586A (en) 1995-06-07 1998-02-03 American Cyanamid Company Methods for the preparation of monomeric calicheamicin derivative/carrier conjugates
US5707829A (en) 1995-08-11 1998-01-13 Genetics Institute, Inc. DNA sequences and secreted proteins encoded thereby
US6267958B1 (en) 1995-07-27 2001-07-31 Genentech, Inc. Protein formulation
US20020193567A1 (en) 1995-08-11 2002-12-19 Genetics Institute, Inc. Secreted proteins and polynucleotides encoding them
AU7240096A (en) 1995-09-18 1997-04-09 Government Of The United States Of America, As Represented By The Secretary Of The Department Of Health And Human Services, The Neutralizing monoclonal antibodies to respiratory syncytial virus
US5834456A (en) 1996-02-23 1998-11-10 The Dow Chemical Company Polyazamacrocyclofluoromonoalkylphosphonic acids, and their complexes, for use as contrast agents
JP3646191B2 (ja) 1996-03-19 2005-05-11 大塚製薬株式会社 ヒト遺伝子
SK157498A3 (en) 1996-05-17 1999-10-08 Schering Corp Isolated and recombinant nucleic acid, bas-1 protein or peptide thereof, and agent, antibody, expression vector, host cell and method of their use
US5945511A (en) 1997-02-20 1999-08-31 Zymogenetics, Inc. Class II cytokine receptor
US7033827B2 (en) 1997-02-25 2006-04-25 Corixa Corporation Prostate-specific polynucleotide compositions
US20030185830A1 (en) 1997-02-25 2003-10-02 Corixa Corporation Compositions and methods for the therapy and diagnosis of prostate cancer
US6541212B2 (en) 1997-03-10 2003-04-01 The Regents Of The University Of California Methods for detecting prostate stem cell antigen protein
US6261791B1 (en) 1997-03-10 2001-07-17 The Regents Of The University Of California Method for diagnosing cancer using specific PSCA antibodies
EP0981541B1 (en) 1997-03-10 2004-06-02 The Regents Of The University Of California Psca: prostate stem cell antigen
US5994071A (en) 1997-04-04 1999-11-30 Albany Medical College Assessment of prostate cancer
US6555339B1 (en) 1997-04-14 2003-04-29 Arena Pharmaceuticals, Inc. Non-endogenous, constitutively activated human protein-coupled receptors
US6319688B1 (en) 1997-04-28 2001-11-20 Smithkline Beecham Corporation Polynucleotide encoding human sodium dependent phosphate transporter (IPT-1)
DE69830901T2 (de) 1997-05-02 2006-05-24 Genentech Inc., San Francisco ein verfahren zur herstellung multispezifischer antikörper die heteromultimere und gemeinsame komponenten besitzen
WO1998051824A1 (en) 1997-05-15 1998-11-19 Abbott Laboratories Reagents and methods useful for detecting disease of the urinary tract
WO1998051805A1 (en) 1997-05-15 1998-11-19 Abbott Laboratories Reagents and methods useful for detecting diseases of the prostate
US6171586B1 (en) 1997-06-13 2001-01-09 Genentech, Inc. Antibody formulation
US6753165B1 (en) 1999-01-14 2004-06-22 Bolder Biotechnology, Inc. Methods for making proteins containing free cysteine residues
US6248564B1 (en) 1997-08-29 2001-06-19 Harvard University Mutant MHC class I molecules
US6602677B1 (en) 1997-09-19 2003-08-05 Promega Corporation Thermostable luciferases and methods of production
US20030060612A1 (en) 1997-10-28 2003-03-27 Genentech, Inc. Compositions and methods for the diagnosis and treatment of tumor
US20020034749A1 (en) 1997-11-18 2002-03-21 Billing-Medel Patricia A. Reagents and methods useful for detecting diseases of the breast
US6110695A (en) 1997-12-02 2000-08-29 The Regents Of The University Of California Modulating the interaction of the chemokine, B Lymphocyte Hemoattractant, and its Receptor, BLR1
US7005504B2 (en) 1998-01-22 2006-02-28 Genentech, Inc. Antibody fragment-peg conjugates
CA2323071C (en) 1998-03-13 2011-06-21 The Burnham Institute Molecules that home to various selected organs or tissues
US6528624B1 (en) 1998-04-02 2003-03-04 Genentech, Inc. Polypeptide variants
US6194551B1 (en) 1998-04-02 2001-02-27 Genentech, Inc. Polypeptide variants
DE69937291T2 (de) 1998-04-02 2008-07-10 Genentech, Inc., South San Francisco Antikörpervarianten und fragmente davon
CA2685270C (en) 1998-05-13 2014-07-29 Pharmexa Inc. Expression vectors for stimulating an immune response and methods of using the same
US20020187472A1 (en) 2001-03-09 2002-12-12 Preeti Lal Steap-related protein
US20030064397A1 (en) 1998-05-22 2003-04-03 Incyte Genomics, Inc. Transmembrane protein differentially expressed in prostate and lung tumors
WO2000012130A1 (en) 1998-08-27 2000-03-09 Smithkline Beecham Corporation Rp105 agonists and antagonists
GB9818731D0 (en) 1998-08-27 1998-10-21 Univ Portsmouth Compounds
ATE240334T1 (de) 1998-08-27 2003-05-15 Spirogen Ltd Pyrrolobenzodiazepine
JP4689781B2 (ja) 1998-09-03 2011-05-25 独立行政法人科学技術振興機構 アミノ酸輸送蛋白及びその遺伝子
AU5963699A (en) 1998-10-02 2000-04-26 Mcmaster University Spliced form of (erb)b-2/neu oncogene
WO2001057188A2 (en) 2000-02-03 2001-08-09 Hyseq, Inc. Novel nucleic acids and polypeptides
US6962980B2 (en) 1999-09-24 2005-11-08 Corixa Corporation Compositions and methods for the therapy and diagnosis of ovarian cancer
US6468546B1 (en) 1998-12-17 2002-10-22 Corixa Corporation Compositions and methods for therapy and diagnosis of ovarian cancer
US20020119158A1 (en) 1998-12-17 2002-08-29 Corixa Corporation Compositions and methods for the therapy and diagnosis of ovarian cancer
US6858710B2 (en) 1998-12-17 2005-02-22 Corixa Corporation Compositions and methods for the therapy and diagnosis of ovarian cancer
US20030091580A1 (en) 2001-06-18 2003-05-15 Mitcham Jennifer L. Compositions and methods for the therapy and diagnosis of ovarian cancer
US20030009013A1 (en) 1998-12-30 2003-01-09 Genentech, Inc. Secreted and transmembrane polypeptides and nucleic acids encoding the same
DE69939553D1 (de) 1998-12-30 2008-10-23 Beth Israel Hospital Charakterisierung der proteinfamilie von soc/crac kalziumkanälen
US6737056B1 (en) 1999-01-15 2004-05-18 Genentech, Inc. Polypeptide variants with altered effector function
EP1141024B1 (en) 1999-01-15 2018-08-08 Genentech, Inc. POLYPEPTIDE COMPRISING A VARIANT HUMAN IgG1 Fc REGION
CZ20012587A3 (cs) 1999-01-29 2002-05-15 Corixa Corporation Izolovaný protein, nukleová kyselina, virový vektor, farmaceutický prostředek, izolovaná populace T buněk, způsob posílení imunitní odpovědi, způsob odstranění nádorových buněk, způsob stimulace a/nebo namnoľení T buněk a způsob přípravy fúzního proteinu
GB9905124D0 (en) 1999-03-05 1999-04-28 Smithkline Beecham Biolog Novel compounds
AU3395900A (en) 1999-03-12 2000-10-04 Human Genome Sciences, Inc. Human lung cancer associated gene sequences and polypeptides
US7304126B2 (en) 1999-05-11 2007-12-04 Genentech, Inc. Secreted and transmembrane polypeptides and nucleic acids encoding the same
AU4952600A (en) 1999-06-03 2000-12-28 Takeda Chemical Industries Ltd. Screening method with the use of cd100
KR20020012292A (ko) 1999-06-25 2002-02-15 제넨테크, 인크. 항-ＥｒｂＢ 항체-메이탄시노이드 결합체를 사용한 치료방법
CN101121750A (zh) 1999-06-25 2008-02-13 杰南技术公司 人源化抗ErbB2抗体及用抗ErbB2抗体进行的治疗
US7589172B2 (en) 1999-07-20 2009-09-15 Genentech, Inc. PRO256 polypeptides
US7297770B2 (en) 1999-08-10 2007-11-20 Genentech, Inc. PRO6496 polypeptides
US7294696B2 (en) 1999-08-17 2007-11-13 Genentech Inc. PRO7168 polypeptides
AU7573000A (en) 1999-09-01 2001-03-26 Genentech Inc. Secreted and transmembrane polypeptides and nucleic acids encoding the same
US20030129192A1 (en) 1999-09-10 2003-07-10 Corixa Corporation Compositions and methods for the therapy and diagnosis of ovarian cancer
US20030232056A1 (en) 1999-09-10 2003-12-18 Corixa Corporation Compositions and methods for the therapy and diagnosis of ovarian cancer
US20030206918A1 (en) 1999-09-10 2003-11-06 Corixa Corporation Compositions and methods for the therapy and diagnosis of ovarian cancer
EP1229934B1 (en) 1999-10-01 2014-03-05 Immunogen, Inc. Compositions and methods for treating cancer using immunoconjugates and chemotherapeutic agents
DE60039448D1 (de) 1999-10-29 2008-08-21 Genentech Inc Gegen das prostata-stammzellantigen (psca) gerichtete antikörper und deren verwendung
EP2363403B1 (en) 1999-11-29 2016-04-20 The Trustees of Columbia University in the City of New York Isolation of five novel genes coding for new fc receptors-type melanoma involved in the pathogenesis of lymphoma/melanoma
WO2001040269A2 (en) 1999-11-30 2001-06-07 Corixa Corporation Compositions and methods for therapy and diagnosis of breast cancer
EP1568373A3 (en) 1999-12-10 2005-12-21 Epimmune Inc. Inducing cellular immune responses to HER2/neu using peptide and nucleic acid compositions
AU783473B2 (en) 1999-12-23 2005-10-27 Zymogenetics Inc. Soluble interleukin-20 receptor
NZ502058A (en) 1999-12-23 2003-11-28 Ovita Ltd Isolated mutated nucleic acid molecule for regulation of ovulation rate
EP1616575B1 (en) 1999-12-23 2012-06-06 ZymoGenetics, Inc. Method for treating inflammation
US6610286B2 (en) 1999-12-23 2003-08-26 Zymogenetics, Inc. Method for treating inflammation using soluble receptors to interleukin-20
US20040001827A1 (en) 2002-06-28 2004-01-01 Dennis Mark S. Serum albumin binding peptides for tumor targeting
DE60041564D1 (de) 1999-12-24 2009-03-26 Genentech Inc Verfahren und Zusammensetzungen zur Verlängerung der Entsorgungshalbwertszeit von biowirksamen Verbindungen
ATE344801T1 (de) 1999-12-29 2006-11-15 Immunogen Inc Doxorubicin- und daunorubicin-enthaltende, zytotoxische mittel und deren therapeutische anwendung
US7294695B2 (en) 2000-01-20 2007-11-13 Genentech, Inc. PRO10268 polypeptides
CA2398102A1 (en) 2000-01-21 2001-07-26 Corixa Corporation Compounds and methods for prevention and treatment of her-2/neu associated malignancies
US20030224379A1 (en) 2000-01-21 2003-12-04 Tang Y. Tom Novel nucleic acids and polypeptides
US20030219806A1 (en) 2000-02-22 2003-11-27 Millennium Pharmaceuticals, Inc. Novel 18607, 15603, 69318, 12303, 48000, 52920, 5433, 38554, 57301, 58324, 55063, 52991, 59914, 59921 and 33751 molecules and uses therefor
WO2001062794A2 (en) 2000-02-22 2001-08-30 Millennium Pharmaceuticals, Inc. 18607, a human calcium channel
US20040005561A1 (en) 2000-03-01 2004-01-08 Corixa Corporation Compositions and methods for the detection, diagnosis and therapy of hematological malignancies
US20040002068A1 (en) 2000-03-01 2004-01-01 Corixa Corporation Compositions and methods for the detection, diagnosis and therapy of hematological malignancies
CA2402293A1 (en) 2000-03-07 2001-09-13 Hyseq, Inc. Novel nucleic acids and polypeptides
US7097840B2 (en) 2000-03-16 2006-08-29 Genentech, Inc. Methods of treatment using anti-ErbB antibody-maytansinoid conjugates
CA2403637A1 (en) 2000-03-24 2001-10-04 Fahri Saatcioglu Novel prostate-specific or testis-specific nucleic acid molecules, polypeptides, and diagnostic and therapeutic methods
US20030186889A1 (en) 2000-03-31 2003-10-02 Wolf-Georg Forssmann Diagnostic and medicament for analysing the cell surface proteome of tumour and inflammatory cells and for treating tumorous and inflammatory diseases, preferably using a specific chemokine receptor analysis and the chemokine receptor-ligand interaction
US7279294B2 (en) 2000-04-03 2007-10-09 The United States Of America As Represented By The Secretary, Dept. Of Health And Human Services, Nih Tumor markers in ovarian cancer
CA2402392A1 (en) 2000-04-07 2001-10-18 Arena Pharmaceuticals, Inc. Non-endogenous, constitutively activated known g protein-coupled receptors
CN101289511A (zh) 2000-04-11 2008-10-22 杰南技术公司 多价抗体及其应用
US20030119115A1 (en) 2000-05-17 2003-06-26 Genentech, Inc. Secreted and transmembrane polypeptides and nucleic acids encoding the same
WO2001088133A2 (en) 2000-05-18 2001-11-22 Lexicon Genetics Incorporated Human semaphorin homologs and polynucleotides encoding the same
WO2001090304A2 (en) 2000-05-19 2001-11-29 Human Genome Sciences, Inc. Nucleic acids, proteins, and antibodies
AU2001275437A1 (en) 2000-06-09 2001-12-17 Idec Pharmaceuticals Corporation Gene targets and ligands that bind thereto for treatment and diagnosis of ovarian carcinomas
CA2409776A1 (en) 2000-06-16 2001-12-27 Incyte Genomics, Inc. G-protein coupled receptors
AU2001273194A1 (en) 2000-06-30 2002-01-14 Amgen Inc. B7-Like Molecules and Uses Thereof
WO2002002587A1 (en) 2000-06-30 2002-01-10 Human Genome Sciences, Inc. B7-like polynucleotides, polypeptides, and antibodies
AU2001273151A1 (en) 2000-06-30 2002-01-14 Incyte Genomics, Inc. Human extracellular matrix and cell adhesion polypeptides
WO2002006339A2 (en) 2000-07-03 2002-01-24 Curagen Corporation Proteins and nucleic acids encoding same
US20040044179A1 (en) 2000-07-25 2004-03-04 Genentech, Inc. Secreted and transmembrane polypeptides and nucleic acids encoding the same
WO2002010187A1 (en) 2000-07-27 2002-02-07 Mayo Foundation For Medical Education And Research B7-h3 and b7-h4, novel immunoregulatory molecules
AU2001287639A1 (en) 2000-07-28 2002-02-13 Ulrich Wissenbach Trp8, trp9 and trp10, markers for cancer
US7229623B1 (en) 2000-08-03 2007-06-12 Corixa Corporation Her-2/neu fusion proteins
WO2002013847A2 (en) 2000-08-14 2002-02-21 Corixa Corporation Methods for diagnosis and therapy of hematological and virus-associated malignancies
EP1366153A2 (en) 2000-08-14 2003-12-03 Corixa Corporation Compositions and methods for the therapy and diagnosis of her-2/neu-associated malignancies
GB0020953D0 (en) 2000-08-24 2000-10-11 Smithkline Beecham Biolog Vaccine
JP2004520806A (ja) 2000-08-24 2004-07-15 ジェネンテック・インコーポレーテッド 腫瘍の診断と治療のための組成物と方法
WO2002022660A2 (en) 2000-09-11 2002-03-21 Hyseq, Inc. Novel nucleic acids and polypeptides
AR030612A1 (es) 2000-09-12 2003-08-27 Smithkline Beecham Corp Procedimiento e intermedios
WO2002022153A2 (en) 2000-09-15 2002-03-21 Zymogenetics, Inc. Use of a polypeptide comprising the extracellular domains of il-20rb for the treatment of inflammation
US20060073551A1 (en) 2000-09-15 2006-04-06 Genentech, Inc. Pro4487 polypeptides
US6613567B1 (en) 2000-09-15 2003-09-02 Isis Pharmaceuticals, Inc. Antisense inhibition of Her-2 expression
EP1320604A2 (en) 2000-09-18 2003-06-25 Biogen, Inc. Cripto mutant and uses thereof
UA83458C2 (uk) 2000-09-18 2008-07-25 Байоджен Айдек Ма Інк. Виділений поліпептид baff-r (рецептор фактора активації в-клітин сімейства tnf)
WO2002030268A2 (en) 2000-10-13 2002-04-18 Eos Biotechnology, Inc. Methods of diagnosis of prostate cancer, compositions and methods of screening for modulators of prostate cancer
DK1407017T3 (en) 2000-11-07 2009-09-21 Zymogenetics Inc Human receptor for tumor nekrose faktor
US20020150573A1 (en) 2000-11-10 2002-10-17 The Rockefeller University Anti-Igalpha-Igbeta antibody for lymphoma therapy
WO2002061087A2 (en) 2000-12-19 2002-08-08 Lifespan Biosciences, Inc. Antigenic peptides, such as for g protein-coupled receptors (gpcrs), antibodies thereto, and systems for identifying such antigenic peptides
AU2002243495A1 (en) 2001-01-12 2002-07-24 University Of Medicine And Dentistry Of New Jersey Bone morphogenetic protein-2 in the treatment and diagnosis of cancer
US20030119119A1 (en) 2001-01-16 2003-06-26 Genentech, Inc. Secreted and transmembrane polypeptides and nucleic acids encoding the same
US20030119126A1 (en) 2001-01-16 2003-06-26 Genentech, Inc. Secreted and transmembrane polypeptides and nucleic acids encoding the same
US7754208B2 (en) 2001-01-17 2010-07-13 Trubion Pharmaceuticals, Inc. Binding domain-immunoglobulin fusion proteins
MXPA03006617A (es) 2001-01-24 2004-12-02 Protein Design Labs Inc Metodos de diagnostico de cancer de pecho, composiciones y metodos de rastreo de moduladores de cancer de pecho.
AU2002251841A1 (en) 2001-01-30 2002-08-12 Corixa Corporation Compositions and methods for the therapy and diagnosis of pancreatic cancer
US20040170994A1 (en) 2001-02-12 2004-09-02 Callen David Frederick DNA sequences for human tumour suppressor genes
WO2002071928A2 (en) 2001-03-14 2002-09-19 Millennium Pharmaceuticals, Inc. Nucleic acid molecules and proteins for the identification, assessment, prevention, and therapy of ovarian cancer
AU2002311787A1 (en) 2001-03-28 2002-10-15 Zycos Inc. Translational profiling
WO2003008537A2 (en) 2001-04-06 2003-01-30 Mannkind Corporation Epitope sequences
US6820011B2 (en) 2001-04-11 2004-11-16 The Regents Of The University Of Colorado Three-dimensional structure of complement receptor type 2 and uses thereof
MXPA03009510A (es) 2001-04-17 2005-04-29 Univ Arkansas Secuencias de repeticion del gen ca125 y su uso para intervenciones de diagnosticos y terapeuticas.
AU2002309583A1 (en) 2001-04-18 2002-11-05 Protein Desing Labs, Inc. Methods of diagnosis of lung cancer, compositions and methods of screening for modulators of lung cancer
CN100352501C (zh) 2001-04-26 2007-12-05 比奥根艾迪克Ma公司 Cripto阻断抗体及其用途
US6884869B2 (en) 2001-04-30 2005-04-26 Seattle Genetics, Inc. Pentapeptide compounds and uses related thereto
JP2005504513A (ja) 2001-05-09 2005-02-17 コリクサ コーポレイション 前立腺癌の治療及び診断のための組成物及び方法
US20030078399A1 (en) 2001-05-11 2003-04-24 Sloan-Kettering Institute For Cancer Research Nucleic acid sequence encoding ovarian antigen, CA125, and uses thereof
RS52228B (en) 2001-05-24 2012-10-31 Zymogenetics, Inc. TACI-IMUNOGLOBULINSKI PROTEIN FUNCTIONS
US6441163B1 (en) 2001-05-31 2002-08-27 Immunogen, Inc. Methods for preparation of cytotoxic conjugates of maytansinoids and cell binding agents
JP2005518185A (ja) 2001-06-04 2005-06-23 キュラジェン コーポレイション 新規タンパク質およびそれをコード化する核酸
WO2002098358A2 (en) 2001-06-04 2002-12-12 Eos Biotechnology, Inc. Methods of diagnosis and treatment of androgen-dependent prostate cancer, prostate cancer undergoing androgen-withdrawal, and androgen-independent prostate cancer
CA2449136A1 (en) 2001-06-05 2002-12-12 Exelixis Inc. Igs as modifiers of the p53 pathway and methods of use
WO2002099044A2 (en) 2001-06-05 2002-12-12 Exelixis, Inc. B3galts as modifiers of the p53 pathway and methods of use
US7235358B2 (en) 2001-06-08 2007-06-26 Expression Diagnostics, Inc. Methods and compositions for diagnosing and monitoring transplant rejection
US7125663B2 (en) 2001-06-13 2006-10-24 Millenium Pharmaceuticals, Inc. Genes, compositions, kits and methods for identification, assessment, prevention, and therapy of cervical cancer
US7189507B2 (en) 2001-06-18 2007-03-13 Pdl Biopharma, Inc. Methods of diagnosis of ovarian cancer, compositions and methods of screening for modulators of ovarian cancer
EP1517998A2 (en) 2001-06-18 2005-03-30 EOS Biotechnology, Inc. Methods of diagnosis of ovarian cancer, compositions and methods of screening for modulators of ovarian cancer
US7705120B2 (en) 2001-06-21 2010-04-27 Millennium Pharmaceuticals, Inc. Compositions, kits, and methods for identification, assessment, prevention, and therapy of breast cancer
WO2003002717A2 (en) 2001-06-28 2003-01-09 Schering Corporation Biological activity of ak155
US20030120040A1 (en) 2001-06-29 2003-06-26 Genentech, Inc. Secreted and Transmembrane polypeptides and nucleic acids encoding the same
AU2002314433A1 (en) 2001-07-02 2003-01-21 Licentia Ltd. Ephrin-tie receptor materials and methods
US20040076955A1 (en) 2001-07-03 2004-04-22 Eos Biotechnology, Inc. Methods of diagnosis of bladder cancer, compositions and methods of screening for modulators of bladder cancer
WO2003003984A2 (en) 2001-07-05 2003-01-16 Curagen Corporation Novel proteins and nucleic acids encoding same
WO2003055439A2 (en) 2001-07-18 2003-07-10 The Regents Of The University Of California Her2/neu target antigen and use of same to stimulate an immune response
WO2003009814A2 (en) 2001-07-25 2003-02-06 Millennium Pharmaceuticals, Inc. Novel genes, compositions, kits, and methods for identification, assessment, prevention, and therapy of prostate cancer
IL160127A0 (en) 2001-08-03 2004-06-20 Genentech Inc Tacis and br3 polypeptides and uses thereof
US20070015145A1 (en) 2001-08-14 2007-01-18 Clifford Woolf Nucleic acid and amino acid sequences involved in pain
US20030092013A1 (en) 2001-08-16 2003-05-15 Vitivity, Inc. Diagnosis and treatment of vascular disease
AU2002313559A1 (en) 2001-08-23 2003-03-10 Oxford Biomedica (Uk) Limited Genes
US6902930B2 (en) 2001-08-29 2005-06-07 Vanderbilt University Human Mob-5 (IL-24) receptors and uses thereof
US20030124579A1 (en) 2001-09-05 2003-07-03 Eos Biotechnology, Inc. Methods of diagnosis of ovarian cancer, compositions and methods of screening for modulators of ovarian cancer
US20040235068A1 (en) 2001-09-05 2004-11-25 Levinson Arthur D. Methods for the identification of polypeptide antigens associated with disorders involving aberrant cell proliferation and compositions useful for the treatment of such disorders
WO2003022995A2 (en) 2001-09-06 2003-03-20 Agensys, Inc. Nucleic acid and corresponding protein entitled steap-1 useful in treatment and detection of cancer
CA2459219A1 (en) 2001-09-17 2003-03-27 Protein Design Labs, Inc. Methods of diagnosis of cancer compositions and methods of screening for modulators of cancer
KR101008758B1 (ko) 2001-09-18 2011-01-14 제넨테크, 인크. 종양의 진단 및 치료를 위한 방법 및 이를 위한 조성물
US20050004017A1 (en) 2001-09-18 2005-01-06 Yuval Reiss Methods and compositions for treating hcap associated diseases
CA2460621A1 (en) 2001-09-19 2003-03-27 Nuvelo, Inc. Novel nucleic acids and polypeptides
US7091186B2 (en) 2001-09-24 2006-08-15 Seattle Genetics, Inc. p-Amidobenzylethers in drug delivery agents
WO2003026577A2 (en) 2001-09-24 2003-04-03 Seattle Genetics, Inc. P-amidobenzylethers in drug delivery agents
AU2002327792A1 (en) 2001-09-28 2003-04-07 Bing Yang Diagnosis and treatment of diseases caused by mutations in cd72
WO2003029277A2 (en) 2001-10-03 2003-04-10 Rigel Pharmaceuticals, Inc. Modulators of lymphocyte activation and migration
US20040249144A1 (en) 2001-10-03 2004-12-09 Zairen Sun Regulated breast cancer genes
US20050089957A1 (en) 2001-10-19 2005-04-28 Audrey Goddard Compositions and methods for the diagnosis and treatment of inflammatory bowel disorders
US20050123925A1 (en) 2002-11-15 2005-06-09 Genentech, Inc. Compositions and methods for the diagnosis and treatment of tumor
CA2465268A1 (en) 2001-10-24 2003-05-01 National Jewish Medical And Research Center Three-dimensional structures of tall-1 and its cognate receptors and modified proteins and methods related thereto
US20050118585A1 (en) 2001-10-31 2005-06-02 Clark Abbot F. Bone morphogenic proteins (bmp),bmp receptors and bmp binding proteins and their use in the diagnosis and treatment of glaucoma
US20030232350A1 (en) 2001-11-13 2003-12-18 Eos Biotechnology, Inc. Methods of diagnosis of cancer, compositions and methods of screening for modulators of cancer
WO2003042661A2 (en) 2001-11-13 2003-05-22 Protein Design Labs, Inc. Methods of diagnosis of cancer, compositions and methods of screening for modulators of cancer
EP1482972A4 (en) 2001-11-20 2005-11-23 Seattle Genetics Inc TREATMENT OF IMMUNOLOGICAL DISORDERS USING ANTI-CD30 ANTIBODIES
WO2003045422A1 (en) 2001-11-29 2003-06-05 Genset S.A. Agonists and antagonists of prolixin for the treatment of metabolic disorders
AU2002349784A1 (en) 2001-12-03 2003-06-17 Asahi Kasei Pharma Corporation Nf-kappab activating genes
AU2002366951A1 (en) 2001-12-10 2003-07-09 Nuvelo,Inc. Novel nucleic acids and polypeptides
US7935338B2 (en) 2001-12-11 2011-05-03 University Of Massachusetts Antibodies to treat cancer
US7261890B2 (en) 2001-12-21 2007-08-28 Idexx Laboratories, Inc. Methods for using canine immunoglobulin variable domains and caninized antibodies
US6716821B2 (en) 2001-12-21 2004-04-06 Immunogen Inc. Cytotoxic agents bearing a reactive polyethylene glycol moiety, cytotoxic conjugates comprising polyethylene glycol linking groups, and methods of making and using the same
US20030134790A1 (en) 2002-01-11 2003-07-17 University Of Medicine And Dentistry Of New Jersey Bone Morphogenetic Protein-2 And Bone Morphogenetic Protein-4 In The Treatment And Diagnosis Of Cancer
US7452675B2 (en) 2002-01-25 2008-11-18 The Queen's Medical Center Methods of screening for TRPM4b modulators
AU2003224624B2 (en) 2002-02-21 2008-08-28 Duke University Reagents and treatment methods for autoimmune diseases
EP1575480A4 (en) 2002-02-22 2008-08-06 Genentech Inc COMPOSITIONS AND METHODS FOR TREATING DISEASES RELATED TO THE IMMUNE SYSTEM
AU2003223207A1 (en) 2002-03-01 2003-09-16 Exelixis, Inc. SCDs AS MODIFIERS OF THE p53 PATHWAY AND METHODS OF USE
US20050287147A1 (en) 2002-05-15 2005-12-29 Reinhard Ebner Cancer-linked gene as target for chemotherapy
US20050220798A1 (en) 2002-06-04 2005-10-06 Reinhard Ebner Cancer-linked gene as target for chemotherapy
WO2003104399A2 (en) 2002-06-07 2003-12-18 Avalon Pharmaceuticals, Inc Cancer-linked gene as target for chemotherapy
EP2258712A3 (en) 2002-03-15 2011-05-04 Multicell Immunotherapeutics, Inc. Compositions and Methods to Initiate or Enhance Antibody and Major-histocompatibility Class I or Class II-restricted T Cell Responses by Using Immunomodulatory, Non-coding RNA Motifs
WO2004000997A2 (en) 2002-03-19 2003-12-31 Curagen Corporation Therapeutic polypeptides, nucleic acids encoding same, and methods of use
JP2005534286A (ja) 2002-03-21 2005-11-17 サネシス ファーマシューティカルズ， インコーポレイテッド キナーゼインヒビターの同定
US7193069B2 (en) 2002-03-22 2007-03-20 Research Association For Biotechnology Full-length cDNA
EP1494693B1 (en) 2002-03-22 2010-12-08 Biogen Idec MA Inc. Cripto-specific antibodies
EP1490085A2 (en) 2002-03-25 2004-12-29 Uab Research Foundation Fc receptor homolog, reagents, and uses thereof
AU2003222103A1 (en) 2002-03-28 2003-10-13 Idec Pharmaceuticals Corporation Novel gene targets and ligands that bind thereto for treatment and diagnosis of colon carcinomas
US20030194704A1 (en) 2002-04-03 2003-10-16 Penn Sharron Gaynor Human genome-derived single exon nucleic acid probes useful for gene expression analysis two
MXPA04009728A (es) 2002-04-05 2005-06-08 Agenysys Inc Acido nucleico y proteina correspondiente titulada 98p4b6 en el tratamiento y deteccion del cancer.
AU2003223520A1 (en) 2002-04-12 2003-10-27 Mitokor Targets for therapeutic intervention identified in the mitochondrial proteome
MXPA04010092A (es) 2002-04-16 2004-12-13 Genentech Inc Composiciones y metodos para el diagnostico y tratamiento de tumores.
US20030224467A1 (en) 2002-04-17 2003-12-04 Osborne C. Kent AIB1 as a prognostic marker and predictor of resistance to endocrine therapy
AU2003228869A1 (en) 2002-05-03 2003-11-17 Incyte Corporation Transporters and ion channels
US20030224454A1 (en) 2002-05-30 2003-12-04 Ryseck Rolf Peter Human solute carrier family 7, member 11 (hSLC7A11)
WO2003101283A2 (en) 2002-06-04 2003-12-11 Incyte Corporation Diagnostics markers for lung cancer
WO2003104270A2 (en) 2002-06-06 2003-12-18 Ingenium Pharmaceuticals Ag Dudulin 2 genes, expression products, non-human animal model: uses in human hematological disease
SG145559A1 (en) 2002-06-06 2008-09-29 Oncotherapy Science Inc Genes and polypeptides relating to human colon cancers
AU2003245441A1 (en) 2002-06-12 2003-12-31 Avalon Pharmaceuticals, Inc. Cancer-linked gene as target for chemotherapy
US20040249130A1 (en) 2002-06-18 2004-12-09 Martin Stanton Aptamer-toxin molecules and methods for using same
WO2003106659A2 (en) 2002-06-18 2003-12-24 Archemix Corp. Aptamer-toxin molecules and methods for using same
WO2004000221A2 (en) 2002-06-20 2003-12-31 The Regents Of The University Of California Compositions and methods for modulating lymphocyte activity
ATE552656T1 (de) 2002-06-20 2012-04-15 Snaptrack Inc Interferenzunterdrückung in einem kombinierten gps-empfänger- und kommunikationssystem
EP1534331B1 (en) 2002-06-21 2014-10-29 Johns Hopkins University School of Medicine Membrane associated tumor endothelium markers
AU2003253048A1 (en) 2002-07-09 2004-01-23 Morphochem Aktiengellschaft Fur Kombinatorische Chemie Tubulysin conjugates
WO2004009622A2 (en) 2002-07-19 2004-01-29 Cellzome Ag Protein complexes of cellular networks underlying the development of cancer and other diseases
NZ537781A (en) 2002-07-25 2008-04-30 Genentech Inc Taci antibodies and uses thereof
EP1545613B9 (en) 2002-07-31 2012-01-25 Seattle Genetics, Inc. Auristatin conjugates and their use for treating cancer, an autoimmune disease or an infectious disease
AU2003294210A1 (en) 2002-07-31 2004-05-04 Seattle Genetics, Inc Anti-cd20 antibody-drug conjugates for the treatment of cancer and immune disorders
JP2004121218A (ja) 2002-08-06 2004-04-22 Jenokkusu Soyaku Kenkyusho:Kk 気管支喘息または慢性閉塞性肺疾患の検査方法
WO2004015426A1 (en) 2002-08-06 2004-02-19 Bayer Healthcare Ag Diagnostics and therapeutics for diseases associated with human cxc chemokine receptor 5(cxcr5)
JP2006500364A (ja) 2002-08-16 2006-01-05 イムノージェン インコーポレーテッド 高い反応性と溶解度を有する架橋剤および小分子薬物の標的化送達用コンジュゲートの調製におけるそれらの使用
KR20050048615A (ko) 2002-08-19 2005-05-24 제넨테크, 인크. 종양의 진단 및 치료를 위한 조성물 및 방법
EP1572957A4 (en) 2002-08-27 2007-10-10 Bristol Myers Squibb Pharma Co IDENTIFICATION OF POLYNUCLEOTIDES FOR PREDICTING THE ACTIVITY OF COMPOUNDS INTERACTING WITH AND / OR MODULATING TYROSINE KINASE PROTEINS AND / OR TYROSINE KINASE PROTEIN PATHWAYS IN MAMMARY CELLS
WO2004020595A2 (en) 2002-08-29 2004-03-11 Five Prime Therapeutics, Inc. Novel human polypeptides encoded by polynucleotides
AU2002951346A0 (en) 2002-09-05 2002-09-26 Garvan Institute Of Medical Research Diagnosis of ovarian cancer
US20040180354A1 (en) 2002-09-06 2004-09-16 Simard John J.L. Epitope sequences
US20060134109A1 (en) 2002-09-09 2006-06-22 Nura Inc. G protein coupled receptors and uses thereof
JP2004113151A (ja) 2002-09-27 2004-04-15 Sankyo Co Ltd 癌遺伝子及びその用途
EP1554309A2 (en) 2002-10-03 2005-07-20 McGILL UNIVERSITY Antibodies and cyclic peptides which bind cea (carcinoembryonic antigen) and their use as cancer therapeutics
US20060183120A1 (en) 2002-10-04 2006-08-17 Teh Bin T Molecular sub-classification of kidney tumors and the discovery of new diagnostic markers
US7361740B2 (en) 2002-10-15 2008-04-22 Pdl Biopharma, Inc. Alteration of FcRn binding affinities or serum half-lives of antibodies by mutagenesis
EP1578447A4 (en) 2002-10-31 2009-06-03 Genentech Inc METHODS AND COMPOSITIONS THAT CAN INCREASE ANTIBODY PRODUCTION
CA2503748A1 (en) 2002-11-08 2004-05-27 Genentech, Inc. Compositions and methods for the treatment of natural killer cell related diseases
CA2503621A1 (en) 2002-11-13 2004-05-27 Genentech, Inc. Methods and compositions for diagnosing dysplasia
CN100594037C (zh) 2002-11-15 2010-03-17 Musc研究发展基金会 通过补体受体2定向的补体调节剂
JP2006516189A (ja) 2002-11-15 2006-06-29 ザ ボード オブ トラスティーズ オブ ザ ユニバーシティ オブ アーカンソー Ｃａ１２５遺伝子、および診断および治療のためのその使用
WO2004046342A2 (en) 2002-11-20 2004-06-03 Biogen Idec Inc. Novel gene targets and ligands that bind thereto for treatment and diagnosis of carcinomas
EP2410332A1 (en) 2002-11-21 2012-01-25 The University Of Utah Method for identifying purinergic modulators of the olfactory system
AU2003298786A1 (en) 2002-11-26 2004-06-18 Protein Design Labs, Inc. Methods of detecting soft tissue sarcoma, compositions and methods of screening for soft tissue sarcoma modulators
EP1567556A4 (en) 2002-12-02 2006-03-22 Us Gov Health & Human Serv RECOMBINANT IMMUNOTOXIN AND USE IN THE TREATMENT OF TUMORS
WO2004053079A2 (en) 2002-12-06 2004-06-24 Diadexus, Inc. Compositions, splice variants and methods relating to ovarian specific genes and proteins
JP2004198419A (ja) 2002-12-13 2004-07-15 Bayer Healthcare Llc Ｔｉｍｐ１を用いた検出方法
HU227217B1 (en) 2002-12-16 2010-11-29 Genentech Inc Immunoglobulin variants and uses thereof
US7276372B2 (en) 2002-12-20 2007-10-02 Pdl Biopharma, Inc. Antibodies against GPR64 and uses thereof
AU2003299819A1 (en) 2002-12-23 2004-07-22 Human Genome Sciences, Inc. Neutrokine-alpha conjugate, neutrokine-alpha complex, and uses thereof
WO2004063709A2 (en) 2003-01-08 2004-07-29 Bristol-Myers Squibb Company Biomarkers and methods for determining sensitivity to epidermal growth factor receptor modulators
WO2004063355A2 (en) 2003-01-10 2004-07-29 Protein Design Labs, Inc. Novel methods of diagnosis of metastatic cancer, compositions and methods of screening for modulators of matastatic cancer
US20050227301A1 (en) 2003-01-10 2005-10-13 Polgen Cell cycle progression proteins
US20040171823A1 (en) 2003-01-14 2004-09-02 Nadler Steven G. Polynucleotides and polypeptides associated with the NF-kappaB pathway
WO2004065576A2 (en) 2003-01-15 2004-08-05 Millennium Pharmaceuticals, Inc. Methods and compositions for the treatment of urological disorder using differential expressed polypeptides
AU2004205684A1 (en) 2003-01-23 2004-08-05 Genentech, Inc. Methods for producing humanized antibodies and improving yield of antibodies or antigen binding fragments in cell culture
AU2004213432A1 (en) 2003-02-14 2004-09-02 Sagres Discovery, Inc. Novel therapeutic targets in cancer
US7871607B2 (en) 2003-03-05 2011-01-18 Halozyme, Inc. Soluble glycosaminoglycanases and methods of preparing and using soluble glycosaminoglycanases
US20060104968A1 (en) 2003-03-05 2006-05-18 Halozyme, Inc. Soluble glycosaminoglycanases and methods of preparing and using soluble glycosaminogly ycanases
US20030224411A1 (en) 2003-03-13 2003-12-04 Stanton Lawrence W. Genes that are up- or down-regulated during differentiation of human embryonic stem cells
CA2520898C (en) 2003-03-31 2009-10-20 Council Of Scientific And Industrial Research Non-cross-linking pyrrolo(2,1-c)(1,4)benzodiazepines as potential antitumour agents and process thereof
US8088387B2 (en) 2003-10-10 2012-01-03 Immunogen Inc. Method of targeting specific cell populations using cell-binding agent maytansinoid conjugates linked via a non-cleavable linker, said conjugates, and methods of making said conjugates
GB0321295D0 (en) 2003-09-11 2003-10-15 Spirogen Ltd Synthesis of protected pyrrolobenzodiazepines
EP1675857B1 (en) 2003-10-22 2011-07-13 THE GOVERNMENT OF THE UNITED STATES OF AMERICA, as represented by THE SECRETARY, DEPARTMENT OF HEALTH AND HUMAN SERVICES Pyrrolobenzodiazepine derivatives, compositions comprising the same and methods related thereto
ES2534185T3 (es) 2003-11-06 2015-04-20 Seattle Genetics, Inc. Compuestos de monometilvalina conjugados con anticuerpos
EP1718667B1 (en) 2004-02-23 2013-01-09 Genentech, Inc. Heterocyclic self-immolative linkers and conjugates
GB0404577D0 (en) 2004-03-01 2004-04-07 Spirogen Ltd Pyrrolobenzodiazepines
US7528126B2 (en) 2004-03-09 2009-05-05 Spirogen Limited Pyrrolobenzodiazepines
WO2005092925A2 (en) 2004-03-24 2005-10-06 Xencor, Inc. Immunoglobulin variants outside the fc region
CA2559870A1 (en) * 2004-04-07 2005-10-27 Genetech,Inc. Mass spectrometry of antibody conjugates
EP2357201B1 (en) 2004-04-13 2017-08-30 F. Hoffmann-La Roche AG Anti-P-selectin antibodies
CA2567520A1 (en) 2004-06-01 2005-12-15 Genentech, Inc. Maytansinoid-antibody conjugates
TWI380996B (zh) 2004-09-17 2013-01-01 Hoffmann La Roche 抗ｏｘ４０ｌ抗體
US20100111856A1 (en) 2004-09-23 2010-05-06 Herman Gill Zirconium-radiolabeled, cysteine engineered antibody conjugates
ES2579805T3 (es) 2004-09-23 2016-08-16 Genentech, Inc. Anticuerpos y conjugados modificados por ingeniería genética con cisteína
US7442778B2 (en) 2004-09-24 2008-10-28 Amgen Inc. Modified Fc molecules
JO3000B1 (ar) 2004-10-20 2016-09-05 Genentech Inc مركبات أجسام مضادة .
CA2587589A1 (en) 2004-11-29 2006-06-22 Seattle Genetics, Inc. Engineered antibodies and immunoconjugates
WO2008020827A2 (en) 2005-08-01 2008-02-21 Biogen Idec Ma Inc. Altered polypeptides, immunoconjugates thereof, and methods related thereto
US8008453B2 (en) 2005-08-12 2011-08-30 Amgen Inc. Modified Fc molecules
CA2927656C (en) 2005-10-07 2019-09-24 Exelixis, Inc. Mek inhibitors and methods of their use
DK1813614T3 (da) 2006-01-25 2012-01-23 Sanofi Sa Cytotoksiske midler, der omfatter nye tomaymycinderivater
CN101037475B (zh) 2006-03-15 2012-08-15 上海中信国健药业股份有限公司 一种嵌合受体及其制备方法和用途
TWI523864B (zh) 2006-05-30 2016-03-01 建南德克公司 抗體及免疫接合物及其用途
WO2007147901A1 (en) 2006-06-22 2007-12-27 Novo Nordisk A/S Production of bispecific antibodies
MY157757A (en) 2006-07-18 2016-07-15 Sanofi Aventis Antagonist antibody against epha2 for the treatment of cancer
US10118970B2 (en) 2006-08-30 2018-11-06 Genentech, Inc. Multispecific antibodies
GB0619291D0 (en) 2006-09-29 2006-11-08 Ucb Sa Altered antibodies
EP1914242A1 (en) 2006-10-19 2008-04-23 Sanofi-Aventis Novel anti-CD38 antibodies for the treatment of cancer
PT2099823E (pt) 2006-12-01 2014-12-22 Seattle Genetics Inc Agentes de ligação ao alvo variantes e suas utilizações
AU2008216495A1 (en) 2007-02-09 2008-08-21 Genentech, Inc. Anti-Robo4 antibodies and uses therefor
TW200902554A (en) 2007-05-08 2009-01-16 Genentech Inc Cysteine engineered anti-MUC16 antibodies and antibody drug conjugates
AR067543A1 (es) 2007-07-16 2009-10-14 Genentech Inc Anticuerpos anti-cd79b e inmunoconjugados humanizados y metodos de uso
CA3065968C (en) 2007-07-16 2022-08-09 Genentech, Inc. Anti-cd79b antibodies and immunoconjugates and methods of use
EP2019104B1 (en) 2007-07-19 2013-09-04 Sanofi Cytotoxic agents comprising new tomaymycin derivatives and their therapeutic use
RU2505544C2 (ru) 2007-10-19 2014-01-27 Дженентек, Инк. Антитела против tenb2, сконструированные с цистеином, и конъюгаты антитело - лекарственное средство
EP3061770B8 (en) 2008-01-07 2020-02-12 Amgen Inc. Method for making antibody fc-heterodimeric molecules using electrostatic steering effects
US20110033378A1 (en) 2008-01-18 2011-02-10 Medlmmune, Llc. Cysteine Engineered Antibodies For Site-Specific Conjugation
EP2240495B1 (en) 2008-02-01 2015-07-15 Genentech, Inc. Nemorubicin metabolite and analog reagents, antibody-drug conjugates and methods
JP6067222B2 (ja) 2008-07-15 2017-01-25 ジェネンテック， インコーポレイテッド アントラサイクリン誘導体コンジュゲート、その調製方法及び抗腫瘍化合物としてのその用途
PL2700651T3 (pl) 2008-07-18 2019-09-30 Bristol-Myers Squibb Company Kompozycje jednowartościowe dla wiązania cd28 i sposoby stosowania
EP3100745B1 (en) 2009-02-05 2018-04-18 Immunogen, Inc. Novel benzodiazepine derivatives
KR20110137819A (ko) 2009-03-27 2011-12-23 글락소 그룹 리미티드 약물 융합체 및 컨쥬게이트
EP3485912A1 (en) 2009-04-08 2019-05-22 Faulstich, Heinz, Dr. Amatoxin-armed therapeutic cell surface binding components designed for tumour therapy
ES2643446T3 (es) 2009-06-04 2017-11-22 Novartis Ag Métodos para la identificación de sitios para conjugación de IgG
US20120213705A1 (en) 2009-06-22 2012-08-23 Medimmune, Llc ENGINEERED Fc REGIONS FOR SITE-SPECIFIC CONJUGATION
DE102009035875A1 (de) 2009-08-03 2011-02-24 Dge Dr.-Ing. Günther Engineering Gmbh Verfahren zur Herstellung von Bio- oder Klärgas
US8394922B2 (en) 2009-08-03 2013-03-12 Medarex, Inc. Antiproliferative compounds, conjugates thereof, methods therefor, and uses thereof
GB0920127D0 (en) 2009-11-17 2009-12-30 Ucb Pharma Sa Antibodies
EP2536756B1 (en) 2010-02-16 2018-04-25 MedImmune, LLC Hsa-related compositions and methods of use
JP5767207B2 (ja) * 2010-03-26 2015-08-19 協和発酵キリン株式会社 新規修飾部位導入抗体および抗体フラグメント
SI2528625T1 (sl) 2010-04-15 2013-11-29 Spirogen Sarl Pirolobenzodiazepini in njihovi konjugati
WO2011133886A2 (en) 2010-04-23 2011-10-27 Genentech, Inc. Production of heteromultimeric proteins
US9000130B2 (en) * 2010-06-08 2015-04-07 Genentech, Inc. Cysteine engineered antibodies and conjugates
BR112013001043A2 (pt) 2010-07-15 2016-05-24 Thomson Ind Inc mancal de movimento linear com estrutura de travamento mútuo
ES2402254T3 (es) 2010-09-30 2013-04-30 Heidelberg Pharma Ag Conjugados de amatoxinas con ligadores mejorados
ES2544608T3 (es) * 2010-11-17 2015-09-02 Genentech, Inc. Conjugados de anticuerpo y de alaninil-maitansinol
KR101913448B1 (ko) 2011-02-04 2018-10-30 제넨테크, 인크. Fc 변이체 및 그의 생산 방법
EP2497499A1 (en) 2011-03-10 2012-09-12 Heidelberg Pharma GmbH Amatoxin-conjugates with improved linkages
JP5926791B2 (ja) 2011-03-29 2016-05-25 ロシュ グリクアート アーゲー 抗体Ｆｃ変種
HUE025661T2 (en) 2011-10-14 2016-04-28 Medimmune Ltd Pyrrolobenzodiazepines and their conjugates
CA3111357A1 (en) * 2011-12-23 2013-06-27 Pfizer Inc. Engineered antibody constant regions for site-specific conjugation and methods and uses therefor
AU2013266604B2 (en) 2012-05-21 2016-09-08 Genentech, Inc. Anti-Ly6E antibodies and immunoconjugates and methods of use
WO2014011518A1 (en) 2012-07-09 2014-01-16 Genentech, Inc. Immunoconjugates comprising anti-cd22 antibodies
BR112015002193A2 (pt) 2012-08-02 2017-07-04 Genentech Inc anticorpos anti-etbr e imunoconjugados
WO2014043403A1 (en) 2012-09-12 2014-03-20 Agensys, Inc. Amatoxin derivatives and cell-permeable conjugates thereof as inhibitors of rna polymerase
SG11201506025RA (en) 2013-02-08 2015-08-28 Irm Llc Specific sites for modifying antibodies to make immunoconjugates
EP2774624A1 (en) 2013-03-04 2014-09-10 Heidelberg Pharma GmbH Amatoxin derivatives
CN105636612B (zh) 2013-08-12 2020-01-14 基因泰克公司 抗体-药物缀合物及使用和治疗方法
CN105848685B (zh) 2013-12-16 2020-09-22 健泰科生物技术公司 拟肽化合物及其抗体药物偶联物
CR20160271A (es) 2013-12-16 2016-12-02 Genentech Inc Compuestos peptidométicos y sus conjugados de anticuerpo-fármaco
MX2016007578A (es) 2013-12-16 2016-10-03 Genentech Inc Compuestos de conjugado anticuerpo-farmaco dimerico de 1-(clorometil)-2,3-dihidro-1h-benzo [e] indol, y metodos de uso y tratamiento.
JP6671292B2 (ja) 2013-12-16 2020-03-25 ジェネンテック， インコーポレイテッド ペプチド模倣化合物及びその抗体−薬物コンジュゲート
MY180257A (en) 2014-01-27 2020-11-26 Pfizer Bifunctional cytotoxic agents
IL285102B2 (en) 2014-09-11 2024-06-01 Seagen Inc Targeted administration of medicinal substances containing a tertiary amine
JP7085837B2 (ja) * 2014-09-12 2022-06-17 ジェネンテック， インコーポレイテッド 抗ｈｅｒ２抗体及び免疫複合体

Also Published As

Publication number Publication date
CA2957354A1 (en) 2016-03-17
AR101844A1 (es) 2017-01-18
CN107108724A (zh) 2017-08-29
US20230130874A1 (en) 2023-04-27
BR112017003236A2 (pt) 2017-11-28
JP2017531620A (ja) 2017-10-26
EP3388449A2 (en) 2018-10-17
EP3191521A2 (en) 2017-07-19
JP2022137034A (ja) 2022-09-21
JP2020143067A (ja) 2020-09-10
RU2017107502A (ru) 2018-10-12
AU2015314826A1 (en) 2017-03-02
SG11201701128YA (en) 2017-03-30
MX2017003123A (es) 2017-05-12
US20200017601A1 (en) 2020-01-16
RU2017107502A3 (ko) 2019-07-24
JP2024150467A (ja) 2024-10-23
EP3388449A3 (en) 2018-10-24
IL250449A0 (en) 2017-03-30
HK1243103A1 (zh) 2018-07-06
WO2016040856A2 (en) 2016-03-17
JP2021073176A (ja) 2021-05-13
ZA201700944B (en) 2019-06-26
WO2016040856A3 (en) 2016-05-06
US20160130358A1 (en) 2016-05-12
TW201625688A (zh) 2016-07-16
US10077318B2 (en) 2018-09-18

Similar Documents

Publication Publication Date Title
US20230130874A1 (en) Cysteine Engineered Antibodies and Conjugates
JP4948413B2 (ja) システイン操作抗体および結合体
KR101839163B1 (ko) 시스테인 조작된 항체 및 접합체
MX2007003404A (es) Anticuerpos y conjugados diseñados de cisteina