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TW202204396A - 抗hbv抗體及使用方法 - Google Patents

抗hbv抗體及使用方法 Download PDF

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TW202204396A
TW202204396A TW110120748A TW110120748A TW202204396A TW 202204396 A TW202204396 A TW 202204396A TW 110120748 A TW110120748 A TW 110120748A TW 110120748 A TW110120748 A TW 110120748A TW 202204396 A TW202204396 A TW 202204396A
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TW
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seq
amino acid
antibody
cdr
acid sequence
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TW110120748A
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瑪麗琳 布爾吉娜
馬克西姆 貝瑞塔
雨果 穆凱
維麗娜 赫爾
斯塔尼斯拉斯 波爾
馬爾尚 海倫 史崔克
高葛爾特 馬力卡 艾特
納德格 派樂提爾
Original Assignee
瑞士商赫孚孟拉羅股份公司
法國巴斯特協會
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Publication date
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Abstract

本發明提供抗S-HBs抗體及其使用方法。

Description

抗HBV抗體及使用方法
本發明係關於針對B型肝炎病毒(HBV)之抗體及其使用方法。
儘管可獲得有效疫苗，慢性B型肝炎病毒(HBV)感染為一種影響全世界超過2.5億人之重大醫療問題(WHO, 2017)。由於HBV相關肝硬化、肝臟衰竭及肝細胞癌，感染每年導致大約1百萬人死亡(WHO, 2017)。HBV係屬於肝DNA病毒科(Hepadnaviridae family)之DNA病毒，其產生為感染性病毒粒子或丹恩粒子(Dane particle)，且亦產生為非感染性次病毒粒子(Seeger等人，2013)。病毒粒子及次病毒粒子在其表面呈現三種形式之HBV包膜醣蛋白或HBV表面抗原(HBsAg)：L-HBs (大)、M-HBs (中間)及S-HBs (小)。缺陷粒子數量超過感染性HBV病毒粒子，因此充當免疫誘餌(Seeger等人，2013)。治療慢性HBV之當前療法很少實現如由HBsAg損失及抗HBs抗體血清轉化所定義之功能性治癒。然而，HBV感染可藉由天然免疫反應在超過90%的成人感染患者中及在約1%的自發清除感染(稱作HBV血清轉化者或天然控制者)之長期感染患者中而得以成功控制(Bauer等人，2011; Chu及Liaw, 2016; McMahon, 2009; Rehermann及Nascimbeni, 2005)。穩固及多特異性HBV特異性CD4+ 及CD8+ T細胞反應為控制感染之關鍵免疫效應子(Bauer等人，2011)。然而，B細胞及抗體亦有助於在功能性治癒之後長期清除及防止病毒反彈(Bertoletti及Ferrari, 2016; Corti等人，2018; Rehermann及Nascimbeni, 2005)。舉例而言，儘管患者中之HBsAg- /抗HBs+ 抗體血清轉化與不可偵測含量之HBV DNA相關(McMahon, 2009)，經歷B細胞耗乏療法治療非霍奇金氏淋巴瘤(Non-Hodgkin Lymphoma)之功能上治癒之個體具有較高的HBV再活化風險，其可快速導致嚴重的肝功能障礙(Kusumoto等人，2019; Perrillo等人，2015)。因此，控制及最終消除HBV感染之關鍵免疫組分可能包括廣泛且穩固的抗原特異性T細胞反應，以及發展介導HBsAg清除及終身保護性免疫之中和抗HBs抗體(Bertoletti及Ferrari, 2016; Corti等人，2018)。
響應於HBV感染產生之中和抗體靶向全部3種HBsAg形式。其識別S-HBs抗原環區(antigenic loop)且干擾肝細胞上與硫酸乙醯肝素蛋白聚糖(heparane sulfate proteoglycan，HS)之預附接，或識別L-HBs之preS1結構域且阻斷與宿主細胞受體(牛膽酸鈉共運輸多肽(NTCP))之結合(Corti等人，2018)。針對S-HBs環區之「一決定子」部分的IgG抗體係由HBV疫苗接種(基於重組S-HBs免疫原)誘導，或被投與至處於暴露於多株HBV免疫球蛋白輸注風險下之個體，從而賦予針對HBV感染之保護(Samuel等人，1993；West及Calandra, 1996)。已自經免疫小鼠及自少數人類免疫供體分離若干中和抗preS及抗S-HBs抗體(Corti等人，2018)。S-HBs中和抗體在其用於保護疫苗接種者免於感染時，可有助於HBV血清轉化者中之病毒清除及長期遏制。然而，未進行記憶B細胞藉由選殖及特徵化人類HBsAg特異性抗體對功能上治癒的經HBV感染之個體中之HBV的反應的研究。
本發明提供抗S-HBs抗體及其使用方法。
I. 定義 出於本文之目的，「接受體人類構架」為包含來源於如下文所定義之人類免疫球蛋白構架或人類共同構架之輕鏈可變域(VL)構架或重鏈可變域(VH)構架之胺基酸序列的構架。「來源於」人類免疫球蛋白構架或人類共同構架之接受體人類構架可包含人類免疫球蛋白構架或人類共同構架之相同胺基酸序列，或其可含有胺基酸序列變化。在一些態樣中，胺基酸變化之數目為10或更少、9或更少、8或更少、7或更少、6或更少、5或更少、4或更少、3或更少或2或更少。在一些態樣中，VL受體人類構架與VL人類免疫球蛋白構架序列或人類共同構架序列具有序列一致性。
「親和力」係指分子(例如抗體)之單一結合位點與其結合搭配物(例如抗原)之間的非共價相互作用之總和之強度。除非另外指示，否則如本文所用，「結合親和力」係指反映結合對(例如，抗體與抗原)成員之間1:1相互作用之固有結合親和力。分子X對其搭配物Y之親和力通常可由解離常數(KD )表示。可藉由此項技術中已知之常用方法(包括本文所述之彼等方法)來量測親和力。用於量測結合親和力之特定說明性及例示性方法描述於以下中。
「親和力成熟」抗體係指相較於親本抗體而言在一或多個互補決定區(CDR)中具有一或多個更改之抗體，該親本抗體不具有該等更改，該等更改引起抗體對抗原之親和力改善。
術語「抗S-HBs抗體」及「結合於S-HBs之抗體」係指能夠以足夠親和性結合S-HBs的抗體，使得該抗體適用作靶向S-HBs中之診斷及/或治療劑。在一個態樣中，如例如藉由表面電漿子共振(SPR)或使用如本文所揭示之ELISA或流式細胞量測術所量測，抗S-HBs抗體與不相關非S-HBs蛋白之結合程度小於該抗體與S-HBs之結合的約10%。在某些態樣中，結合於S-HBs之抗體的解離常數(KD )為≤1μM、≤100 nM、≤10 nM、≤1 nM、≤0.1 nM、≤0.01 nM或≤0.001 nM，例如，10-8 M或更少，例如自10-8 M至10-13 M，例如自10-9 M至10-13 M)。當抗體具有1 μM或更小之KD 時，及/或若抗S-HBs抗體與不相關非S-HBs蛋白之結合程度小於該抗體與如上所述之S-HBs之結合的約10%，例如如藉由表面電漿子共振(SPR)或藉由如本文所述之流式細胞量測術或ELISA分析所量測，則稱該抗體為「特異性結合」於S-HBs。在某些態樣中，抗S-HBs抗體結合於在來自不同HBV基因型之S-HBs中保守的S-HBs之抗原決定基。
術語「抗體」本文中以最廣泛意義使用且涵蓋各種抗體結構，包括但不限於單株抗體、多株抗體、多特異性抗體(例如雙特異性抗體)、其他抗體形式(例如包含VH域、VL域及視情況存在之Fc域，呈不同於常規IgG之形式)及抗體片段，只要其呈現所需抗原結合活性即可。
「抗體片段」係指除完整抗體之外的分子，其包含完整抗體之一部分，結合完整抗體所結合之抗原。抗體片段之實例包括但不限於Fv、Fab、Fab'-SH、F(ab')2 ；雙功能抗體；線性抗體；單鏈抗體分子(例如scFv及scFab)；單域抗體(dAb)；及由抗體片段形成之多特異性抗體。對於某些抗體片段之綜述，參見Holliger及Hudson, Nature Biotechnology 23:1126-1136 (2005)。
術語「抗原決定基」表示抗S-HBs抗體所結合之蛋白或非蛋白抗原上之位點。抗原決定基可由相連胺基酸伸長段(線性抗原決定基)或包含例如由於抗原摺疊，亦即因蛋白抗原之三級摺疊而在空間上鄰近之非相連胺基酸(構形抗原決定基)來形成。線性抗原決定基通常在蛋白抗原暴露於變性劑之後仍與抗S-HBs抗體結合，而構形抗原決定基通常在用變性劑處理之後經破壞。抗原決定基在獨特空間構形中包含至少3個、至少4個、至少5個、至少6個、至少7個或8-10個胺基酸。
針對結合於特定抗原決定基之抗體(亦即結合於同一抗原決定基之抗體)之篩選可使用此項技術中之常規方法來進行，該等方法諸如但不限於丙胺酸掃描、肽墨點法(參見Meth. Mol. Biol. 248 (2004) 443-463)、肽裂解分析、抗原決定基切除、抗原決定基提取、抗原化學修飾(參見Prot. Sci. 9 (2000) 487-496)以及交叉阻斷(參見「Antibodies」, Harlow及Lane (Cold Spring Harbor Press, Cold Spring Harb., NY)。
基於抗原結構之抗體譜分析(Antigen Structure-based Antibody Profiling；ASAP)亦稱為修飾輔助譜分析(Modification-Assisted Profiling；MAP)，允許基於特異性結合於S-HBs之多種單株抗體中之每一抗體與經化學修飾或經酶修飾之抗原表面的結合譜來對該多種單株抗體進行分組(參見例如US 2004/0101920)。每一組中之抗體與相同抗原決定基結合，該抗原決定基可為與由另一組所表示之抗原決定基完全不同或部分重疊的獨特抗原決定基。
此外，競爭性結合可用於容易地確定抗體是否結合於與參考抗S-HBs抗體相同之S-HBs抗原決定基，或是否與該抗體競爭結合。舉例而言，「結合於」與參考抗S-HBs抗體「相同之抗原定基之抗體」係指在競爭分析中阻斷參考抗S-HBs抗體與其抗原之結合達50%或更高之抗體，且反之，參考抗體在競爭分析中阻斷該抗體與其抗原之結合達50%或更高。此外，舉例而言，為確定抗體是否與參考抗S-HBs抗體結合於同一抗原決定基，允許該參考抗體在飽和條件下結合於S-HBs。移除過量的參考抗S-HBs抗體之後，評定所討論之抗S-HBs抗體結合於S-HBs的能力。若抗S-HBs抗體在參考抗S-HBs抗體飽和結合之後能夠結合於S-HBs，則可得出結論，所討論之抗S-HBs抗體結合於與參考抗S-HBs抗體不同之抗原決定基。但，若所討論之抗S-HBs抗體在參考抗S-HBs抗體飽和結合之後不能結合於S-HBs，則所討論之抗S-HBs抗體可能結合於與參考抗S-HBs抗體所結合之抗原決定基相同的抗原決定基。為了確認所討論之抗體是與相同抗原決定基結合抑或僅由於空間原因而結合受阻，可使用常規實驗(例如使用ELISA之肽突變及結合分析、RIA、表面電漿子共振、流式細胞量測術或在此項技術中可獲得之任何其他定量或定性抗體結合分析)。此分析應在兩個設定下進行，亦即，在兩種抗體均為飽和抗體的情況下進行。若在兩個設定中，僅第一(飽和)抗體能夠結合於S-HBs，則可得出結論，所討論之抗S-HBs抗體及參考抗S-HBs抗體競爭結合於S-HBs。
在一些態樣中，若如在競爭結合分析中所量測，1倍、5倍、10倍、20倍或100倍過量之一個抗體抑制另一抗體之結合達至少50%、至少75%、至少90%或甚至99%或更高，則兩個抗體視為結合於相同或重疊抗原決定基(參見例如Junghans等人，Cancer Res. 50 (1990) 1495-1502)。
在一些態樣中，若抗原中減弱或消除一個抗體之結合之基本上所有胺基酸突變亦減弱或消除另一抗體之結合，則兩個抗體視為結合於同一抗原決定基。若減弱或消除一種抗體之結合的胺基酸突變的僅一個子集減弱或消除另一種抗體之結合，則認為兩種抗體具有「重疊抗原決定基」。
術語「嵌合」抗體係指重鏈及/或輕鏈之一部分來源於特定來源或物種，而重鏈及/或輕鏈之其餘部分來源於不同來源或物種之抗體。
抗體之「類別」係指其重鏈所具有之恆定域或恆定區的類型。存在五個主要抗體類別：IgA、IgD、IgE、IgG及IgM，且此等類別中之若干個類別可進一步分成子類(同型)，例如IgG1 、IgG2 、IgG3 、IgG4 、IgA1 及IgA2 。在某些態樣中，抗體係IgG1 同型。在某些態樣中，抗體係具有用於減弱Fc區效應功能之P329G、L234A及L235A突變之IgG1 同型。在其他態樣中，抗體係IgG2 同型。在某些態樣中，抗體係具有用於改善IgG4 抗體穩定性之鉸鏈區中S228P突變之IgG4 同型。對應於不同類別之免疫球蛋白之重鏈恆定域分別稱為α、δ、ε、γ及μ。抗體輕鏈可基於其恆定域之胺基酸序列而歸為兩種類型之一，稱為卡帕(kappa) (κ)及拉姆達(lambda) (λ)。
如本申請案中所用之術語「衍生自人類來源之恆定區」或「人類恆定區」表示亞類IgG1、IgG2、IgG3或IgG4之人類抗體之恆定重鏈區及/或恆定輕鏈κ或λ區。此類恆定區在目前先進技術中為熟知的，且例如由Kabat, E.A.,等人，Sequences of Proteins of Immunological Interest,第5版, Public Health Service, National Institutes of Health, Bethesda, MD (1991)描述(亦參見例如，Johnson, G.,及Wu, T.T., Nucleic Acids Res. 28 (2000) 214-218；Kabat, E.A.,等人，Proc. Natl. Acad. Sci. USA 72 (1975) 2785-2788)。除非本文中另外規定，否則恆定區中胺基酸殘基之編號係根據EU編號系統，其亦稱為Kabat之EU索引，如Kabat, E.A.等人，Sequences of Proteins of Immunological Interest,第5版, Public Health Service, National Institutes of Health, Bethesda, MD (1991), NIH Publication 91-3242中所述。
「效應功能」係指可歸因於抗體之Fc區之生物活性，其因抗體同型而異。抗體效應功能之實例包括：C1q結合及補體依賴性細胞毒性(CDC)；Fc受體結合；抗體依賴性細胞介導之細胞毒性(ADCC)；吞噬作用；細胞表面受體(例如B細胞受體)之下調；及B細胞活化。
藥劑(例如醫藥組合物)之「有效量」係指在劑量上及對於所需時段有效以實現所需治療性或預防性結果的量。
在本文中，術語「Fc區」用以定義含有至少一部分恆定區之免疫球蛋白重鏈之C端區。該術語包括原生序列Fc區及變異Fc區。在一個態樣中，人類IgG重鏈Fc區自Cys226或自Pro230延伸至重鏈之羧基端。然而，宿主細胞所產生的抗體可能在重鏈C端經歷一或多個(特定言之，一或兩個)胺基酸之轉譯後分裂。因此，宿主細胞藉由表現編碼全長重鏈之特定核酸分子產生的抗體可包括全長重鏈，或其可包括全長重鏈之裂解變體。在重鏈之最末兩個C末端胺基酸為甘胺酸(G446)及離胺酸(K447，EU編號系統)的情況下，情況可為如此。因此，Fc區之C端離胺酸(Lys447)或C端甘胺酸(Gly446)及離胺酸(K447)可存在或可不存在。若不另外指示，則包括Fc區的重鏈之胺基酸序列在本文中表示為C末端甘胺酸-離胺酸二肽。在一個態樣中，包括如本文中所指定之Fc區、包含於根據本發明之抗體中的重鏈不具有C端甘胺酸-離胺酸二肽(G446及K447，EU編號系統)。在一個態樣中，包括如本文規定之Fc區、包含於根據本發明之抗體中的重鏈不具有C端離胺酸殘基(K447，根據EU索引編號)。除非本文另外說明，否則Fc區或恆定區中之胺基酸殘基之編號係根據EU編號系統，亦稱為EU索引，如Kabat等人，Sequences of Proteins of Immunological Interest, 第5版. Public Health Service, National Institutes of Health, Bethesda, MD, 1991中所述。
「構架」或「FR」係指除互補決定區(CDR)以外之可變域殘基。可變域之FR一般由四個FR結構域組成：FR1、FR2、FR3及FR4。因此，在VH (或VL)中，CDR及FR序列一般以以下序列出現：FR1-CDR-H1(CDR-L1)-FR2- CDR-H2(CDR-L2)-FR3- CDR-H3(CDR-L3)-FR4。
術語「全長抗體」、「完整抗體」及「全抗體」在本文中可互換使用且係指一種抗體，該抗體具有實質上類似於原生抗體結構之結構或具有含有如本文所定義之Fc區之重鏈。
術語「宿主細胞」、「宿主細胞株」及「宿主細胞培養物」可互換使用且係指已引入有外源核酸之細胞，包括該等細胞之後代。宿主細胞包括「轉型體」及「經轉型細胞」，其包括初級經轉型細胞及由其衍生之後代，不考慮繼代數目。後代之核酸含量與母細胞可能不完全相同，但可能含有突變。本文包括針對初始經轉型細胞篩選或選擇具有相同功能或生物活性之突變型子代。
「人類抗體」為胺基酸序列對應於由人類或人類細胞產生或來源於利用人類抗體譜系或其他人類抗體編碼序列之非人類來源之抗體的胺基酸序列之抗體。人類抗體之此定義特定排除包含非人類抗原結合殘基之人類化抗體。
「人類共同構架」為表示所選人類免疫球蛋白VL或VH構架序列中最常出現之胺基酸殘基的構架。一般而言，人類免疫球蛋白VL或VH序列係選自可變域序列之子組。一般而言，該序列子組為如Kabat等人，Sequences of Proteins of Immunological Interest , 第五版, NIH公開案91-3242, Bethesda MD (1991), 第1-3卷中之子組。在一個態樣中，對於VL，該子組為如Kabat等人，同前文獻中之子組κ I。在一個態樣中，對於VH，該子組為如Kabat等人，同前文獻中之子組III。
「人類化」抗體係指包含來自非人類CDR之胺基酸殘基及來自人類FR之胺基酸殘基之嵌合抗體。在某些態樣中，人類化抗體將包含實質上全部至少一個且通常兩個可變域，其中全部或實質上全部CDR對應於非人類抗體之CDR，且全部或實質上全部FR對應於人類抗體之FR。人類化抗體視情況可包含來源於人類抗體之抗體恆定區之至少一部分。抗體(例如，非人類抗體)之「人類化形式」係指已經歷人類化之抗體。
如本文所用之術語「高變區」或「HVR」係指抗體可變域中之序列高變且決定抗原結合特異性之區(例如「互補決定區」(「CDR」))中之每一者。
一般而言，抗體包含六個CDR：VH中之三個CDR (CDR-H1、CDR-H2、CDR-H3)及VL中之三個CDR (CDR-L1、CDR-L2、CDR-L3)。本文中之例示性CDR包括： (a)出現在胺基酸殘基26-32 (L1)、50-52 (L2)、91-96 (L3)、26-32 (H1)、53-55 (H2)及96-101 (H3)處之高變環(Chothia及Lesk,J. Mol. Biol. 196:901-917 (1987))； (b)出現在胺基酸殘基24-34 (L1)、50-56 (L2)、89-97 (L3)、31-35b (H1)、50-65 (H2)及95-102 (H3)處之CDR (Kabat等人，Sequences of Proteins of Immunological Interest ,第5版.Public Health Service, National Institutes of Health, Bethesda, MD (1991))；及 (c)存在於胺基酸殘基27c-36 (L1)、46-55 (L2)、89-96 (L3)、30-35b (H1)、47-58 (H2)及93-101 (H3)處之抗原接點(MacCallum等人J. Mol. Biol. 262: 732-745 (1996))。
除非另外指明，否則CDR係根據Kabat等人(同上)確定。熟習此項技術者應理解，CDR名稱亦可根據以下來確定：Chothia，同前文獻；McCallum，同前文獻；或任何其他科學上所接受之命名法系統。
「免疫接合物」為接合至一或多個異源分子之抗體，包括但不限於細胞毒性劑。
「個體(individual)」或「個體(subject)」為哺乳動物。哺乳動物包括但不限於家養動物(例如牛、羊、貓、狗及馬)、靈長類動物(例如人類及非人類靈長類動物，諸如猴)、兔及嚙齒動物(例如小鼠及大鼠)。在某些態樣中，個體為人類。
「經分離」抗體為已與其天然環境之組分分離之抗體。在一些態樣中，如藉由例如電泳(例如SDS-PAGE、等電聚焦(IEF)、毛細管電泳)或層析(例如離子交換或逆相HPLC)方法所測定，抗體經純化至大於95%或99%純度。關於評定抗體純度之方法的綜述，參見例如Flatman等人，J. Chromatogr. B 848:79-87 (2007)。本文所述之任一種抗體可為經分離抗體。
術語「核酸分子」或「聚核苷酸」包括包含核苷酸聚合物之任何化合物及/或物質。各核苷酸由鹼基、特別嘌呤或嘧啶鹼基(亦即胞嘧啶(C)、鳥嘌呤(G)、腺嘌呤(A)、胸腺嘧啶(T)或尿嘧啶(U))、糖(亦即去氧核糖或核糖)及磷酸酯基構成。核酸分子通常用鹼基序列描述，因此該等鹼基代表核酸分子之一級結構(線性結構)。鹼基序列通常自5'至3'表示。在本文中，術語核酸分子涵蓋脫氧核糖核酸(DNA)，包括例如互補DNA (cDNA)及基因體DNA；核糖核酸(RNA)，特定言之信使RNA (mRNA)；合成形式之DNA或RNA；及包含兩個或更多個此等分子之混合聚合物。核酸分子可呈線性或環狀圓形。另外，術語核酸分子包括有義股與反義股，以及單股與雙股形式。另外，本文描述之核酸分子可含有天然存在或非天然存在之核苷酸。非天然存在之核苷酸之實例包括具有衍生化糖或磷酸酯主鏈鍵聯或經化學修飾之殘基的經修飾核苷酸鹼基。核酸分子亦涵蓋DNA及RNA分子，其適用作活體外及/或活體內，例如在宿主或患者中直接表現本發明之抗體之載體。此類DNA (例如cDNA)或RNA (例如mRNA)載體可以不修飾或經修飾。舉例而言，mRNA可經化學修飾以增強RNA載體之穩定性及/或經編碼分子之表現，以使得可將mRNA注射至個體中以活體內生成抗體(參見例如Stadler等人，Nature Medicine 2017, 2017年6月12日線上發佈, doi:10.1038/nm.4356或EP 2 101 823 B1)。
「經分離」核酸係指已與其天然環境之組分分離之核酸分子。經分離核酸包括通常含有核酸分子之細胞中所含的核酸分子，但該核酸分子存在於染色體外或存在於不同於其天然染色體位置之染色體位置。
「編碼抗S-HBs抗體之經分離核酸」係指一或多種編碼S-HBs抗體重鏈及輕鏈(或其片段)之核酸分子，包括單一載體或各別載體中之此類核酸分子及存在於宿主細胞中之一或多個位置處的此類核酸分子。
如本文所用，術語「單株抗體」係指自實質上均質抗體之群體獲得之抗體，亦即除可能變異抗體(例如含有天然存在之突變或在產生單株抗體製劑期間出現之變異抗體，此等變體一般以較小量存在)之外，構成該群體之個別抗體相同及/或結合同一抗原決定基。與典型地包括針對不同決定子(抗原決定基)之不同抗體的多株抗體製劑形成對比，單株抗體製劑中之各單株抗體係針對抗原上之單一決定子。因此，修飾語「單株」指示抗體之特徵為自實質上同質之抗體群體獲得，且不應解釋為需要藉由任何特定方法產生該抗體。舉例而言，本發明之單株抗體可藉由多種技術製造，該等技術包括但不限於融合瘤方法、重組DNA方法、噬菌體呈現方法及利用含有全部或部分人類免疫球蛋白基因座之基因轉殖動物之方法、本文所述之用於製造單株抗體之該等方法及其他例示性方法。
「裸抗體」係指未與異質部分(例如細胞毒性部分)或放射性標記結合之抗體。裸抗體可存在於醫藥組合物中。
「原生抗體」係指具有不同結構之天然產生之免疫球蛋白分子。舉例而言，原生IgG抗體為約150,000道爾頓(dalton)之雜四聚體醣蛋白，其由二硫化物鍵結之兩條相同輕鏈及兩條相同重鏈構成。各重鏈自N端至C端具有可變域(VH)，該VH亦稱為可變重域或重鏈可變區，接著為三個恆定重域(CH1、CH2及CH3)。類似地，各輕鏈自N端至C端具有可變域(VL)，該VL亦稱為可變輕域或輕鏈可變區，接著為恆定輕(CL)域。
術語「藥品說明書」用於指通常包括於治療性產品之商業包裝中之說明書，其含有關於與使用此類治療性產品有關之適應症、用法、劑量、投與、組合療法、禁忌症及/或警告之信息。
關於參考多肽序列之「胺基酸序列一致性百分比(%)」定義為在比對序列且必要時引入間隙以實現最大序列一致性百分比且出於比對之目的不將任何保守性取代視為序列一致性之一部分之後，候選序列中與參考多肽序列中之胺基酸殘基具有一致性之胺基酸殘基的百分比。出於測定胺基酸序列一致性百分比之目的之比對可以此項技術中之技能範圍內的各種方式實現，例如使用公開可獲得的電腦軟體，諸如BLAST、BLAST-2、Clustal W、Megalign (DNASTAR)軟體或FASTA程式包。熟習此項技術者可確定適用於比對序列之參數，包括在所比較序列之全長內實現最大比對所需的任何算法。替代地，可使用序列比較電腦程式ALIGN-2產生一致性百分比值。ALIGN-2序列比較電腦程式係由Genentech,Inc.所著，且源碼已與華盛頓哥倫比亞特區美國版權局(U.S. Copyright Office, Washington D.C.), 20559中之使用者資料一起提交，其中其以美國版權登記號TXU510087註冊，且描述於WO 2001/007611中。
出於本文之目的，除非另外指示，否則胺基酸序列一致性百分比值係使用FASTA套裝36.3.8c版或更新版之ggsearch程式，用BLOSUM50比較矩陣生成。FASTA程式套裝的作者為W. R. Pearson及D. J. Lipman (1988)，「Improved Tools for Biological Sequence Analysis」，PNAS 85:2444-2448；W. R. Pearson (1996)「Effective protein sequence comparison」 Meth. Enzymol. 266:227-258；及Pearson等人(1997) Genomics 46:24-36，且公開獲自www.fasta.bioch.virginia.edu/fasta_www2/fasta_down.shtml或www.ebi.ac.uk/Tools/sss/fasta。替代地，可使用在fasta.bioch.virginia.edu/fasta_www2/index.cgi可獲取的公共伺服器來比較序列，使用ggsearch (全域蛋白：蛋白)程式及預設選項(BLOSUM50；開端：-10；ext：-2；Ktup = 2)以確保進行全域比對而非局域比對。胺基酸一致性百分比係在輸出比對標題中給出。
術語「醫藥組合物」或「醫藥調配物」係指呈便於准許其中所含活性成分之生物活性有效之形式且不含有對投與有醫藥組合物之個體具有不可接受毒性之額外組分的製劑。
「醫藥學上可接受之載劑」係指醫藥組合物或調配物中除活性成分以外之對個體無毒的成分。醫藥學上可接受之載劑包括但不限於緩衝液、賦形劑、穩定劑或防腐劑。
如本文中可互換地使用之術語「S-HBs」或「S-HBsAg」(指較小B型肝炎表面抗原)涵蓋「全長」、未加工S-HBs以及由細胞中之加工產生的任何形式之S-HBs。該術語亦涵蓋天然存在之S-HBs變體，例如剪接變體或對偶基因變體。例示性S-HBs之胺基酸序列展示於SEQ ID NO: 253中。本發明之抗體可例如以如本文所論述之親和力或結合活性至少結合於SEQ ID NO: 253之S-HBs。視情況，本發明之抗體可另外或替代地結合於一或多種包含選自SEQ ID NO: 254-262之共有序列或由其組成的蛋白，例如結合於SEQ ID NO: 257之蛋白。
如本文所用，「治療(treatment)」(及其文法變化形式，諸如「治療(treat)」或「治療(treating)」)係指試圖改變所治療個體之疾病之自然過程的臨床介入且可出於預防或在臨床病理學過程中進行。所需治療作用包括但不限於預防疾病發生或復發、緩解症狀、減輕疾病之任何直接或間接病理性結果、減緩疾病進展速率、改善或緩和疾病病狀及緩解或改良預後。在一些態樣中，本發明抗體用於延緩疾病發展或用於減慢疾病惡化。
B型肝炎可為慢性或急性的，且本發明之抗體可用於治療任一病狀。急性肝炎一般係指在暴露於病毒之後前六個月內之感染。慢性肝炎一般係指在六個月之後發生的感染。在一些實施例中，肝炎之治療可指減少HBV病毒、消除HBV病毒、減少HBV感染所致之症狀、預防或減少肝炎向肝病(諸如肝硬化、肝纖維化、肝衰竭及/或肝癌)之進展、減少血清中可偵測之HBV表面抗原(HBsAg)及/或HBV表面抗原(HBsAg)血清轉化，亦即，血清中不存在可偵測之HBsAg。HBsAg之偵測可藉由此項技術中沿用已久的篩選分析法中之任一者進行，諸如Elecsys HBsAg II (Roche Diagnostics)、Auszyme Monoclonal [隔夜培育]版本B、IMx HBsAg (Abbott)或Monolisa S-HBsAg ULTRA (Bio-Rad, France) ELISA。
術語「可變區」或「可變域」係指涉及抗體結合於抗原的抗體重鏈或輕鏈域。原生抗體之重鏈及輕鏈之可變域(分別為VH及VL)一般具有類似結構，其中各域包含四個保守構架區(FR)及三個互補決定區(CDR)。(參見例如Kindt等人，Kuby Immunology ，第6版，W.H. Freeman and Co.，第91頁(2007))。單一VH或VL域可足以賦予抗原結合專一性。此外，結合特定抗原之抗體可使用來自結合抗原之抗體的VH域或VL域分別篩選互補VL域或VH域之庫來分離。參見例如Portolano等人，J. Immunol. 150:880-887 (1993)；Clarkson等人，Nature 352:624-628 (1991)。
如本文所用之術語「載體」係指能夠傳播至其所連接之另一核酸的核酸分子。該術語包括呈自我複製核酸結構之載體以及併入其已引入之宿主細胞之基因體中的載體。某些載體能夠導引可操作地連接其之核酸的表現。此等載體在本文中稱為「表現載體」。
II. 組合物及方法 在一個態樣中，本發明部分地基於本發明人鑑別來自可以天然地清除慢性B型肝炎病毒(HBV)感染及獲得針對再感染之保護之個體(「控制者」)及來自接種HBV之個體(「疫苗接種者」)的抗體。本發明人已確定此類抗體可具有有利特性，諸如對S-HBs抗原之高親和力或結合活性、強效中和活性及/或交叉基因型反應性。在某些態樣中，提供結合於S-HBs之抗體。本發明之抗體適用於例如診斷或治療B型肝炎。
A. 例示性抗 S-HBs 抗體 在一個態樣中，本發明提供結合於S-HBs之抗體。在一個態樣中，提供結合於S-HBs的經分離抗體。在一個態樣中，本發明提供特異性結合於S-HBs之抗體。在某些態樣中，抗S-HBs抗體具有以下特性中之一或多者： •結合於(例如SEQ ID NO: 253之) S-HBs；及/或 •結合於一或多個具有SEQ ID NO: 254至262 (例如至少SEQ ID NO: 257)的S-HBs蛋白，視情況結合於該等蛋白中之兩者或更多者(例如至少SEQ ID NO: 257及258)，視情況結合於該等蛋白中之三者、四者、五者、六者、七者、八者或更多者，視情況結合於全部該等蛋白；及/或 •結合於亞型adw及/或ayw，例如基因型D，較佳adw及ayw亞型之S-HBs； •避免針對自體抗原，諸如半乳糖凝集素-3/半乳糖凝集素-8及E3泛素-蛋白接合酶UBR2之顯著交叉反應性；及/或 •具有針對HBV基因型D之中和活性(例如活體外或活體內所量測)； •具有針對HBV基因型A至D中之每一者的中和活性(例如活體外或活體內所量測)；及/或 •可遏制活體內病毒之病毒血症。 舉例而言，在一些實施例中，活體外所量測之抗體可針對HBV基因體D具有≤1 ng/ml之中和IC50 值。
在其他例示性實施例中，抗體可具有以下特性： •與SEQ ID NO: 254至262之蛋白中之每一者交叉反應；及 •具有針對HBV基因型D之中和活性(例如活體外或活體內所量測)。
該等例示性抗體較佳亦可避免針對自體抗原，諸如半乳糖凝集素-3/半乳糖凝集素-8及E3泛素接合酶UBR2之顯著交叉反應性。
抗體可結合於S-HBs及/或一或多個具有SEQ ID NO: 254至262之S-HBs蛋白，其中KD 如本文所論述，例如≤1μM、≤100 nM、≤10 nM、≤1 nM、≤0.1 nM、≤0.01 nM或≤0.001 nM。在一些實施例中，抗體可結合於S-HBs及/或一或多個具有SEQ ID NO: 254至262之S-HBs蛋白，其中KD 如本文所論述，比針對相同抗原之參考抗體的KD 高不超過50、10、9、8、7、6、5、4、3或2倍，或小於或等於該參考抗體之該KD ，其中該參考抗體係選自由以下組成之群：Bc1.187、Bv4.115、Bc8.159、Bv6.172、Bc1.229、Bc8.111、Bc1.128、Bc3.106、Bc1.180、Bv4.104、Bc8.104、Bc4.204、Bc1.263及Bv4.105。
替代地，抗體可展示針對S-HBs及/或與一或多個具有SEQ ID NO: 254至262之S-HBs蛋白的結合活性，其為參考抗體與相同抗原之結合活性的至少25%、50%、60%、70%、75%、80%、85%、90%、95%或100%，其中參考抗體係選自由以下組成之群：Bc1.187, Bv4.115, Bc8.159, Bv6.172, Bc1.229, Bc8.111, Bc1.128, Bc3.106, Bc1.180, Bv4.104, Bc8.104, Bc4.204, Bc1.263及Bv4.105 (當在相同分析，例如ELISA分析或流式細胞量測術分析中評定時)。在一些實施例中，活性為參考抗體之活性的至少50%可為較佳的。視情況，參考抗體可為Bc1.187，亦即，當在相同分析中評定時，抗體可展示Bc1.187與參考抗原的結合活性之至少25%、50%、60%、70%、75%、80%、85%、90%、95%或100%。
在其他態樣中，抗體可結合於S-HBs/或一或多個具有SEQ ID NO: 254至262之S-HBs蛋白，其中EC50比參考抗體之EC50高不超過50、10、9、8、7、6、5、4、3或2倍，或小於或等於該參考抗體之該值，其中EC50係藉由ELISA或藉由流式細胞量測術來量測，且其中參考抗體係選自由以下組成之群：Bc1.187、Bv4.115、Bc8.159、Bv6.172、Bc1.229、Bc8.111、Bc1.128、Bc3.106、Bc1.180、Bv4.104、Bc8.104、Bc4.204、Bc1.263及Bv4.105。
「避免與……之顯著交叉反應性」意謂抗體不展示與參考蛋白之顯著結合，例如KD 大於1 μM，或例如在本文所述之分析中不具有可偵測結合。
在一些實施例中，針對HBV基因型，例如基因型D中和的根據本發明之抗體可例如具有≤50 ng/ml或≤10 ng/ml活體外病毒感染性的IC50 值。可能較佳的是，抗體之IC50 為≤1 ng/ml、≤500 pg/ml，或在一些實施例中，≤100 pg/ml、≤50 pg/ml或≤10 pg/ml。在一些實施例中，中和抗體之IC50 值可為≤1 pg/ml，視情況≤0.1 pg/ml。視情況IC50 值可大於0.01 pg/ml或0.005 pg/ml。在另一實施例中，針對特定HBV基因型，例如基因型D中和的抗體的IC50 值可比針對相同基因型之參考抗體的IC50 值高不超過50、10、9、8、7、6、5、4、3或2倍，或小於或等於參考抗體之該值，其中該參考抗體係選自由以下組成之群：Bc1.187、Bv4.115、Bc8.159、Bv6.172、Bc1.229、Bc8.111、Bc1.128、Bc3.106、Bc1.180、Bv4.104、Bc8.104、Bc4.204、Bc1.263及Bv4.105 (當在相同分析中評定時)。
在另一實施例中，當使用相同分析(例如如本文所述之分析)評定時，針對特定HBV基因型中和之抗體可具有或保持參考抗體對相同基因型之活體內中和活性或病毒血症遏制活性的至少50%、60%、70%、75%、80%、85%、90%、95%或100%，例如，參考抗體係選自由以下組成之群：Bc1.187、Bv4.115、Bc8.159、Bv6.172、Bc1.229、Bc8.111、Bc1.128、Bc3.106、Bc1.180、Bv4.104、Bc8.104、Bc4.204、Bc1.263及Bv4.105。
在一些實施例中，抗體可與SEQ ID NO: 254至262之蛋白中之每一者交叉反應(具有與每一者之結合活性，例如如上文所述)且具有≤100 pg/ml之HBV基因型D之活體外中和的IC50 。視情況，IC50 值可為≤50 pg/ml或≤10 pg/ml。在一些實施例中，IC50 值可為≤1 pg/ml，視情況≤0.1 pg/ml。
根據本發明之特定抗體的各種實施例闡述於下文A-N部分中。
A 在一個態樣中，本發明提供一種抗體，其包含：VH域，其包含至少一個、至少兩個或全部三個選自以下之VH CDR序列：(a) CDR-H1，其包含SEQ ID NO: 1之胺基酸序列；(b) CDR-H2，其包含SEQ ID NO: 2之胺基酸序列；及(c) CDR-H3，其包含SEQ ID NO: 3之胺基酸序列。在另一態樣中，抗體包含VH域，其包含以下CDR：(a) CDR-H1，其包含SEQ ID NO: 1之胺基酸序列；(b) CDR-H2，其包含SEQ ID NO: 2之胺基酸序列；及(c) CDR-H3，其包含SEQ ID NO: 3之胺基酸序列；或其變體，其中CDR-H1、CDR-H2或CDR-H3中之一或多者中之一個、兩個或三個胺基酸經另一胺基酸取代。
在一個態樣中，VH域可進一步包含選自以下之一或多個重鏈構架序列：(a) SEQ ID NO: 7之重鏈構架區1 (HC-FR1)或與其具有至少85%、86%、87%、88%、89%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%或99%序列一致性的變體，(b) SEQ ID NO: 8之重鏈構架區2 (HC-FR2)或與其具有至少85%、86%、87%、88%、89%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%或99%序列一致性的變體，(c) SEQ ID NO: 9重鏈構架區3 (HC-FR3)或與其具有至少85%、86%、87%、88%、89%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%或99%序列一致性的變體，及(d) SEQ ID NO: 10之重鏈構架區4 (HC-FR4)或與其具有至少85%、86%、87%、88%、89%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%或99%序列一致性的變體。視情況，VH域包含如(a)至(d)中所定義之重鏈構架序列中之每一者。視情況，序列一致性百分比為95%。視情況，序列一致性百分比為98%。
在另一態樣中，抗S-HBs抗體包含與SEQ ID NO: 16之胺基酸序列具有至少90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%序列一致性的重鏈可變域(VH)序列。在一個態樣中，抗S-HBs抗體包含與SEQ ID NO: 16之胺基酸序列具有至少95%序列一致性的重鏈可變域(VH)序列。在某些態樣中，具有至少90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%或99%一致性之VH序列相對於參考序列含有取代(例如保守性取代)、插入或缺失，但包含該序列之抗S-HBs抗體保持結合於S-HBs之能力。在某些態樣中，SEQ ID NO: 16中總共1至10個胺基酸已經取代、插入及/或缺失。在某些態樣中，取代、插入或缺失發生在CDR外部之區中(亦即在FR中)。視情況，抗S-HBs抗體包含SEQ ID NO: 16中之VH序列，包括彼序列之轉譯後修飾。在一個特定態樣中，VH包含一個、兩個或三個選自以下之CDR：(a) CDR-H1，其包含SEQ ID NO: 1之胺基酸序列；(b) CDR-H2，其包含SEQ ID NO: 2之胺基酸序列；及(c) CDR-H3，其包含SEQ ID NO: 3之胺基酸序列。
在另一態樣中，抗S-HBs抗體包含SEQ ID NO: 16之VH之重鏈CDR序列中之一或多者。在一個態樣中，抗S-HBs抗體包含一或多個(較佳全部三個) SEQ ID NO: 16之VH域之重鏈CDR胺基酸序列及與SEQ ID NO: 16之VH域之構架胺基酸序列至少85%、86%、87%、88%、89%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%序列一致性的構架。視情況，序列一致性為95%或98%。
在另一態樣中，本發明提供一種抗體，其包含：包含至少一個、至少兩個或全部三個選自以下之VL CDR序列的VL域：(a)包含SEQ ID NO: 4之胺基酸序列的CDR-L1；(b)包含SEQ ID NO: 5之胺基酸序列的CDR-L2；及(c)包含SEQ ID NO: 6之胺基酸序列的CDR-L3。在另一態樣中，抗體包含VL域，其包含以下CDR：(a) CDR-L1，其包含SEQ ID NO: 4之胺基酸序列；(b) CDR-L2，其包含SEQ ID NO: 5之胺基酸序列；及(c) CDR-L3，其包含SEQ ID NO: 6之胺基酸序列；或其變體，其中CDR-L1、CDR-L2或CDR-L3中之一或多者中之一個、兩個或三個胺基酸經另一胺基酸取代。
在一個態樣中，抗S-HBs抗體VL域可進一步包含一或多個輕鏈構架序列，其選自(a) SEQ ID NO: 11之輕鏈構架區1 (LC-FR1)或與其具有至少85%、86%、87%、88%、89%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%或99%序列一致性的變體，(b) SEQ ID NO: 12之輕鏈構架區2 (LC-FR2)或與其具有至少85%、86%、87%、88%、89%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%或99%序列一致性的變體，(c) SEQ ID NO: 13之輕鏈構架區3 (LC-FR3)或與其具有至少85%、86%、87%、88%、89%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%或99%序列一致性的變體，及(d) SEQ ID NO: 14之輕鏈構架區4 (LC-FR4)或與其具有至少85%、86%、87%、88%、89%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%或99%序列一致性的變體。視情況，VL域包含如(a)至(d)中所定義之輕鏈構架序列中之每一者。視情況，序列一致性百分比為95%。視情況，序列一致性百分比為98%。
在另一態樣中，提供一種抗S-HBs抗體，其中該抗體包含與SEQ ID NO: 15之胺基酸序列具有至少90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%序列一致性的輕鏈可變域(VL)序列。在一個態樣中，抗S-HBs抗體包含輕鏈可變域(VL)序列，其與胺基酸序列SEQ ID NO: 15具有至少95%序列一致性。在某些態樣中，具有至少90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%或99%一致性之VL序列相對於參考序列含有取代(例如保守性取代)、插入或缺失，但包含該序列之抗S-HBs抗體保持結合於S-HBs之能力。在某些態樣中，SEQ ID NO: 15中總共1至10個胺基酸已經取代、插入及/或缺失。在某些態樣中，取代、插入或缺失發生在CDR外部之區中(亦即在FR中)。視情況，抗S-HBs抗體包含SEQ ID NO: 15中之VL序列，包括彼序列之轉譯後修飾。在一個特定態樣中，VL包含一個、兩個或三個選自以下之CDR：(a) CDR-L1，其包含SEQ ID NO: 4之胺基酸序列；(b) CDR-L2，其包含SEQ ID NO: 5之胺基酸序列；及(c) CDR-L3，其包含SEQ ID NO: 6之胺基酸序列。
在另一實施例中，抗S-HBs抗體包含SEQ ID NO: 15之VL的CDR序列中之一或多者。在一個態樣中，抗S-HBs抗體包含一或多個(較佳全部三個) SEQ ID NO: 15之VL域之輕鏈CDR胺基酸序列及與SEQ ID NO: 15之VL域之構架胺基酸序列至少85%、86%、87%、88%、89%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%序列一致性的構架。視情況，序列一致性為95%或98%。
在另一態樣中，提供一種抗S-HBs抗體，其中該抗體包含如上文所提供之態樣中之任一者中的VH序列及如上文所提供之態樣中之任一者中的VL序列。
舉例而言，在一個例示性實施例中，抗體包含VH域，其包含SEQ ID NO: 3之CDR-H3；及VL域，其包含SEQ ID NO: 6之CDR-L3。VH域視情況進一步包含SEQ ID NO: 2之CDR-H2。
在另一例示性實施例中，抗體包含： i)包含以下CDR之VH域：(a) CDR-H1，其包含SEQ ID NO: 1之胺基酸序列；(b) CDR-H2，其包含SEQ ID NO: 2之胺基酸序列；及(c) CDR-H3，其包含SEQ ID NO: 3之胺基酸序列；或其變體，其中CDR-H1、CDR-H2或CDR-H3中之一或多者中之一個、兩個或三個胺基酸經另一胺基酸取代；及 ii)包含以下CDR之VL域：(a) CDR-L1，其包含SEQ ID NO: 4之胺基酸序列；(b) CDR-L2，其包含SEQ ID NO: 5之胺基酸序列；及(c) CDR-L3，其包含SEQ ID NO: 6之胺基酸序列；或其變體，其中CDR-L1、CDR-L2或CDR-L3中之一或多者中之一個、兩個或三個胺基酸經另一胺基酸取代。
在另一例示性實施例中，抗體包含： i)與胺基酸序列SEQ ID NO: 16具有至少90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%序列一致性的重鏈可變域(VH)序列；及 ii)與胺基酸序列SEQ ID NO: 15具有至少90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%序列一致性的輕鏈可變域(VL)序列。
在另一例示性實施例中，抗S-HBs抗體包含：(a) CDR-H1，其包含SEQ ID NO: 1之胺基酸序列；(b) CDR-H2，其包含SEQ ID NO: 2之胺基酸序列；(c) CDR-H3，其包含SEQ ID NO: 3之胺基酸序列；(d) CDR-L1，其包含SEQ ID NO: 4之胺基酸序列；(e) CDR-L2，其包含SEQ ID NO: 5之胺基酸序列；及(f) CDR-L3，其包含SEQ ID NO: 6之胺基酸序列及與SEQ ID NO: 16之胺基酸序列具有至少90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%序列一致性之VH域，及與SEQ ID NO: 15之胺基酸序列具有至少90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%序列一致性之VL域。在一個態樣中，VH域與SEQ ID NO: 16之胺基酸序列具有至少95%序列一致性。在一個態樣中，VL域與SEQ ID NO: 15之胺基酸序列具有至少95%序列一致性。在一個實施例中，抗體特異性結合於S-HBs。在另一實施例中，抗體結合於滿足以下解離常數(KD)之S-HBs：當與包含SEQ ID NO: 16之VH序列及SEQ ID NO: 15之VL序列的抗體之解離常數(KD)相比時，解離常數降低至多10倍或增加至多10倍。
在一個態樣中，抗體包含分別於SEQ ID NO: 16及SEQ ID NO: 15中VH及VL序列，包括彼等序列之轉譯後修飾。
在另一態樣中，抗體可包含SEQ ID NO: 17之全長輕鏈及/或SEQ ID NO: 18或263之全長重鏈。
在另一態樣中，本發明提供一種抗體，其與本文所提供之抗S-HBs抗體結合於相同抗原決定基。舉例而言，在某些態樣中，提供一種抗體，其與包含SEQ ID NO: 16之VH序列及SEQ ID NO: 15之VL序列的抗S-HBs抗體結合於相同抗原決定基。在某些態樣中，提供結合於SEQ ID NO: 253之S-HBs之以下殘基中之一或多者的抗體：C137；及視情況C138、K141、G145及/或C149。在一些實施例中，抗體可進一步結合於I152、N146、C147及/或T148；及視情況W156中之一或多者。抗體可包含如上文所定義之序列中之任一者。
在另一態樣中，本發明提供一種與本文所提供之抗S-HBs抗體競爭結合於S-HBs之抗體。
在一些實施例中，當在相同分析，例如ELISA分析或流式細胞量測術分析中評定時，如此部分中所述之抗體可具有或保持參考抗體Bc1.187與S-HBs (例如SEQ ID NO: 253)的結合活性之至少50%、60%、70%、75%、80%、85%、90%、95%或100%。另外或替代地，當在相同分析，例如ELISA分析或流式細胞量測術分析中評定時，如此部分中所述之抗體可具有或保持參考抗體Bc1.187與SEQ ID NO: 254-262中之一或多者(例如至少SEQ ID NO: 257)，視情況SEQ ID NO: 254至262中之蛋白中之每一者之結合活性的至少50%、60%、70%、75%、80%、85%、90%、95%或100%。
參考抗體Bc1.187為包含SEQ ID NO: 16之VH序列及SEQ ID NO: 15之VL序列的抗S-HBs抗體。其具有SEQ ID NO: 18或263之全長重鏈及SEQ ID NO: 17之全長輕鏈。如實例中所用，SEQ ID NO: 263包含由載體LT615368.1表現之IgG1恆定區。
在一些實施例中，當在相同分析中評定時，此部分中所述之抗體結合於(例如SEQ ID NO: 253)之S-HBs，其中KD 值可比針對相同抗原之參考抗體Bc1.187之KD 值高不超過50、10、9、8、7、6、5、4、3或2倍，或小於或等於該參考抗體之該KD 值。
另外或替代地，當在相同分析中評定時，此部分中所述之抗體可以結合於SEQ ID NO: 254-262中之一或多者(例如至少SEQ ID NO: 257)，視情況SEQ ID NO: 254-262之蛋白中之每一者，其中KD 值可比針對相同抗原之參考抗體Bc1.187之KD 值高不超過50、10、9、8、7、6、5、4、3或2倍，或小於或等於該參考抗體之該KD 值。
在一些實施例中，如在此部分中所述之抗體可結合於(例如SEQ ID NO: 253)之S-HBs，其中EC50比參考抗體Bc1.187之EC50高不超過50、10、9、8、7、6、5、4、3或2倍或小於或等於該參考抗體之該值，如藉由ELISA或藉由流式細胞量測術所量測。替代地或另外，抗體可結合SEQ ID NO: 254-262中之一或多者(例如至少SEQ ID NO: 257)，視情況SEQ ID NO: 254至262之蛋白中之每一者，其中EC50比參考抗體Bc1.187之EC50高不超過50、10、9、8、7、6、5、4、3或2倍或小於或等於該參考抗體之該值，如藉由ELISA或藉由流式細胞量測術所量測。
在一些實施例中，如此部分中所述之抗體可具有或保持針對HBV基因型A、B、C及/或D (視情況全部A、B、C及D)之活體外中和活性。舉例而言，如此部分中所述之抗體可以具有或保持針對HBV基因型D之活體外中和活性，其中IC50 值為≤1 pg/ml，視情況≤0.1 pg/ml。
在另一實施例中，當使用相同分析(例如，如本文所述之活體外中和分析)評定時，抗體可具有HBV基因型A、B、C及/或D，視情況至少D，視情況全部A、B、C及D之中和的IC50 值，其比針對相同基因型的參考抗體Bc1.187之IC50 值高不超過50、10、9、8、7、6、5、4、3或2倍，或小於或等於該參考抗體之該值。
在另一實施例中，當使用相同分析(例如如本文所述之分析)評定時，抗體可具有或保持針對HBV基因型A、B、C及/或D，視情況至少D，視情況全部A、B、C及D之參考抗體Bc1.187之活體內中和活性的至少50%、60%、70%、75%、80%、85%、90%、95%或100%。
視情況，抗體可以活體內遏制例如感染有HBV基因型A、B、C或D，視情況D之個體的病毒之病毒血症。視情況，當使用相同分析(例如如本文所述之分析)評定時，抗體可具有或保持針對HBV基因型A、B、C及/或D，視情況至少D，視情況全部A、B、C及D之參考抗體Bc1.187之活體內病毒血症遏制活性的至少50%、60%、70%、75%、80%、85%、90%、95%或100%。
B 在一個態樣中，本發明提供一種抗體，其包含：VH域，其包含至少一個、至少兩個或全部三個選自以下之VH CDR序列：(a) CDR-H1，其包含SEQ ID NO: 19之胺基酸序列；(b) CDR-H2，其包含SEQ ID NO: 20之胺基酸序列；及(c) CDR-H3，其包含SEQ ID NO: 21之胺基酸序列。在另一態樣中，抗體包含VH域，其包含以下CDR：(a) CDR-H1，其包含SEQ ID NO: 19之胺基酸序列；(b) CDR-H2，其包含SEQ ID NO: 20之胺基酸序列；及(c) CDR-H3，其包含SEQ ID NO: 21之胺基酸序列；或其變體，其中一或多個CDR-H1、CDR-H2或CDR-H3中之一個、兩個或三個胺基酸經另一胺基酸取代。
在一個態樣中，VH域可進一步包含選自以下之一或多個重鏈構架序列：(a) SEQ ID NO: 25之重鏈構架區1 (HC-FR1)或與其具有至少85%、86%、87%、88%、89%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%或99%序列一致性的變體，(b) SEQ ID NO: 26之重鏈構架區2 (HC-FR2)或與其具有至少85%、86%、87%、88%、89%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%或99%序列一致性的變體，(c) SEQ ID NO: 27之重鏈構架區3 (HC-FR3)，或與其具有至少85%、86%、87%、88%、89%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%或99%序列一致性的變體，及(d) SEQ ID NO: 28之重鏈構架區4 (HC-FR4)，或與其具有至少85%、86%、87%、88%、89%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%或99%序列一致性的變體。視情況，VH域包含如(a)至(d)中所定義之重鏈構架序列中之每一者。視情況，序列一致性百分比為95%。視情況，序列一致性百分比為98%。
在另一態樣中，抗S-HBs抗體包含與SEQ ID NO: 34之胺基酸序列具有至少90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%序列一致性的重鏈可變域(VH)序列。在一個態樣中，抗S-HBs抗體包含與SEQ ID NO: 34之胺基酸序列具有至少95%序列一致性的重鏈可變域(VH)序列。在某些態樣中，具有至少90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%或99%一致性之VH序列相對於參考序列含有取代(例如保守性取代)、插入或缺失，但包含該序列之抗S-HBs抗體保持結合於S-HBs之能力。在某些態樣中，SEQ ID NO: 34中總共1至10個胺基酸已經取代、插入及/或缺失。在某些態樣中，取代、插入或缺失發生在CDR外部之區中(亦即在FR中)。視情況，抗S-HBs抗體包含SEQ ID NO: 34中之VH序列，包括彼序列之轉譯後修飾。在一個特定態樣中，VH包含一個、兩個或三個選自以下之CDR：(a) CDR-H1，其包含SEQ ID NO: 19之胺基酸序列；(b) CDR-H2，其包含SEQ ID NO: 20之胺基酸序列；及(c) CDR-H3，其包含SEQ ID NO: 21之胺基酸序列。
在另一態樣中，抗S-HBs抗體包含SEQ ID NO: 34之VH之重鏈CDR序列中之一或多者。在一個態樣中，抗S-HBs抗體包含一或多個(較佳全部三個) SEQ ID NO: 34之VH域之重鏈CDR胺基酸序列及與SEQ ID NO: 34之VH域之構架胺基酸序列至少85%、86%、87%、88%、89%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%序列一致的構架。視情況，序列一致性為95%或98%。
在另一態樣中，本發明提供一種抗體，其包含：包含至少一個、至少兩個或全部三個選自以下之VL CDR序列的VL域：(a)包含SEQ ID NO: 22之胺基酸序列的CDR-L1；(b)包含SEQ ID NO: 23之胺基酸序列的CDR-L2；及(c)包含SEQ ID NO: 24之胺基酸序列的CDR-L3。在另一態樣中，抗體包含VL域，其包含以下CDR：(a) CDR-L1，其包含SEQ ID NO: 22之胺基酸序列；(b) CDR-L2，其包含SEQ ID NO: 23之胺基酸序列；及(c) CDR-L3，其包含SEQ ID NO: 24之胺基酸序列；或其變體，其中CDR-L1、CDR-L2或CDR-L3中之一或多者中之一個、兩個或三個胺基酸經另一胺基酸取代。
在一個態樣中，抗S-HBs抗體VL域可進一步包含一或多個輕鏈構架序列，其選自(a) SEQ ID NO: 29之輕鏈構架區1 (LC-FR1)或與其具有至少85%、86%、87%、88%、89%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%或99%序列一致性的變體，(b) SEQ ID NO: 30之輕鏈構架區2 (LC-FR2)或與其具有至少85%、86%、87%、88%、89%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%或99%序列一致性的變體，(c) SEQ ID NO: 31之輕鏈構架區3 (LC-FR3)或與其具有至少85%、86%、87%、88%、89%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%或99%序列一致性的變體，及(d) SEQ ID NO: 32之輕鏈構架區4 (LC-FR4)或與其具有至少85%、86%、87%、88%、89%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%或99%序列一致性的變體。視情況，VH域包含如(a)至(d)中所定義之重鏈構架序列中之每一者。視情況，序列一致性百分比為95%。視情況，序列一致性百分比為98%。
在另一態樣中，提供一種抗S-HBs抗體，其中該抗體包含與SEQ ID NO: 33之胺基酸序列具有至少90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%序列一致性的輕鏈可變域(VL)序列。在一個態樣中，抗S-HBs抗體包含輕鏈可變域(VL)序列，其與胺基酸序列SEQ ID NO: 33具有至少95%序列一致性。在某些態樣中，具有至少90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%或99%一致性之VL序列相對於參考序列含有取代(例如保守性取代)、插入或缺失，但包含該序列之抗S-HBs抗體保持結合於S-HBs之能力。在某些態樣中，SEQ ID NO: 33中總共1至10個胺基酸已經取代、插入及/或缺失。在某些態樣中，取代、插入或缺失發生在CDR外部之區中(亦即在FR中)。視情況，抗S-HBs抗體包含SEQ ID NO: 33中之VL序列，包括彼序列之轉譯後修飾。在一個特定態樣中，VL包含一個、兩個或三個選自以下之CDR：(a) CDR-L1，其包含SEQ ID NO: 22之胺基酸序列；(b) CDR-L2，其包含SEQ ID NO: 23之胺基酸序列；及(c) CDR-L3，其包含SEQ ID NO: 24之胺基酸序列。
在另一實施例中，抗S-HBs抗體包含SEQ ID NO: 33之VL的CDR序列中之一或多者。在一個態樣中，抗S-HBs抗體包含一或多個(較佳全部三個) SEQ ID NO: 33之VL域之輕鏈CDR胺基酸序列及與SEQ ID NO: 33之VL域之構架胺基酸序列至少85%、86%、87%、88%、89%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%序列一致性的構架。視情況，序列一致性為95%或98%。
在另一態樣中，提供一種抗S-HBs抗體，其中該抗體包含如上文所提供之態樣中之任一者中的VH序列及如上文所提供之態樣中之任一者中的VL序列。
舉例而言，在一個例示性實施例中，抗體包含VH域，其包含SEQ ID NO: 21之CDR-H3；及VL域，其包含SEQ ID NO: 24之CDR-L3。VH域視情況進一步包含SEQ ID NO: 20之CDR-H2。
在另一例示性實施例中，抗體包含： i)包含以下CDR之VH域：(a) CDR-H1，其包含SEQ ID NO: 19之胺基酸序列；(b) CDR-H2，其包含SEQ ID NO: 20之胺基酸序列；及(c) CDR-H3，其包含SEQ ID NO: 21之胺基酸序列；或其變體，其中CDR-H1、CDR-H2或CDR-H3中之一或多者中之一個、兩個或三個胺基酸經另一胺基酸取代；及 ii)包含以下CDR之VL域：(a) CDR-L1，其包含SEQ ID NO: 22之胺基酸序列；(b) CDR-L2，其包含SEQ ID NO: 23之胺基酸序列；及(c) CDR-L3，其包含SEQ ID NO: 24之胺基酸序列；或其變體，其中CDR-L1、CDR-L2或CDR-L3中之一或多者中之一個、兩個或三個胺基酸經另一胺基酸取代。
在另一例示性實施例中，抗體包含： i)與胺基酸序列SEQ ID NO: 34具有至少90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%序列一致性的重鏈可變域(VH)序列；及 ii)與胺基酸序列SEQ ID NO: 33具有至少90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%序列一致性的輕鏈可變域(VL)序列。
在另一例示性實施例中，抗S-HBs抗體包含：(a) CDR-H1，其包含SEQ ID NO: 19之胺基酸序列；(b) CDR-H2，其包含SEQ ID NO: 20之胺基酸序列；(c) CDR-H3，其包含SEQ ID NO: 21之胺基酸序列；(d) CDR-L1，其包含SEQ ID NO: 22之胺基酸序列；(e) CDR-L2，其包含SEQ ID NO: 23之胺基酸序列；及(f) CDR-L3，其包含SEQ ID NO: 24之胺基酸序列，及與SEQ ID NO: 34之胺基酸序列具有至少90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%序列一致性之VH域，及與SEQ ID NO: 33之胺基酸序列具有至少90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%序列一致性的VL域。在一個態樣中，VH域與SEQ ID NO: 34之胺基酸序列具有至少95%序列一致性。在一個態樣中，VL域與SEQ ID NO: 33之胺基酸序列具有至少95%序列一致性。在一個實施例中，抗體特異性結合於S-HBs。在另一實施例中，抗體結合於滿足以下解離常數(KD)之S-HBs：當與包含SEQ ID NO: 34之VH序列及SEQ ID NO: 33之VL序列的抗體之解離常數(KD)相比時，解離常數降低至多10倍或增加至多10倍。
在一個態樣中，抗體包含分別於SEQ ID NO: 34及SEQ ID NO: 33中VH及VL序列，包括彼等序列之轉譯後修飾。
在另一態樣中，抗體可包含SEQ ID NO: 35之全長輕鏈及/或SEQ ID NO: 36或264之全長重鏈。
在另一態樣中，本發明提供一種抗體，其與本文所提供之抗S-HBs抗體結合於相同抗原決定基。舉例而言，在某些態樣中，提供一種抗體，其與包含SEQ ID NO: 34之VH序列及SEQ ID NO: 33之VL序列的抗S-HBs抗體結合於相同抗原決定基。在某些態樣中，提供結合於SEQ ID NO: 253之S-HBs之以下殘基中之一或多者的抗體：C138、C139及/或C149，及視情況R169。視情況，抗體可進一步結合於L109、R122、C147、T148、I152、W156、F161及/或W165中之一或多者。抗體可包含如上文所定義之序列中之任一者。
在另一態樣中，本發明提供一種與本文所提供之抗S-HBs抗體競爭結合於S-HBs之抗體。
在一些實施例中，當在相同分析，例如ELISA分析或流式細胞量測術分析中評定時，如此部分中所述之抗體可具有或保持參考抗體Bc1.180與S-HBs (例如SEQ ID NO: 253)的結合活性之至少50%、60%、70%、75%、80%、85%、90%、95%或100%。
另外或替代地，當在相同分析，例如ELISA分析或流式細胞量測術分析中評定時，如此部分中所述之抗體可具有或保持參考抗體Bc1.180與SEQ ID NO: 254-262中之一或多者(例如至少SEQ ID NO: 257)，視情況SEQ ID NO: 254至262中之蛋白中之每一者之結合活性的至少50%、60%、70%、75%、80%、85%、90%、95%或100%。
參考抗體Bc1.180具有SEQ ID NO: 34之VH序列及SEQ ID NO: 33之VL序列。其具有SEQ ID NO: 36或264之全長重鏈及SEQ ID NO: 35之全長輕鏈。如實例中所用，SEQ ID NO: 264包含由載體LT615368.1表現之IgG1恆定區。
在一些實施例中，當在相同分析中評定時，此部分中所述之抗體結合於(例如SEQ ID NO: 253)之S-HBs，其中KD 值可比針對相同抗原之參考抗體Bc1.180之KD 值高不超過50、10、9、8、7、6、5、4、3或2倍，或小於或等於該參考抗體之該KD 值。
另外或替代地，當在相同分析中評定時，此部分中所述之抗體可以結合於SEQ ID NO: 254-262中之一或多者(例如至少SEQ ID NO: 257)，視情況SEQ ID NO: 254-262之蛋白中之每一者，其中KD 值可比針對相同抗原之參考抗體Bc1.180之KD 值高不超過50、10、9、8、7、6、5、4、3或2倍，或小於或等於該參考抗體之該KD 值。
在一些實施例中，如在此部分中所述之抗體可結合於(例如SEQ ID NO: 253)之S-HBs，其中EC50比參考抗體Bc1.180之EC50高不超過50、10、9、8、7、6、5、4、3或2倍或小於或等於該參考抗體之該值，如藉由ELISA或藉由流式細胞量測術所量測。替代地或另外，抗體可結合SEQ ID NO: 254-262中之一或多者(例如至少SEQ ID NO: 257)，視情況SEQ ID NO: 254至262之蛋白中之每一者，其中EC50比參考抗體Bc1.180之EC50高不超過50、10、9、8、7、6、5、4、3或2倍或小於或等於該參考抗體之該值，如藉由ELISA或藉由流式細胞量測術所量測。在一些實施例中，如此部分中所述之抗體可具有或保持針對HBV基因型A、B、C及/或D (視情況全部A、B、C及D)之活體外中和活性。舉例而言，如此部分中所述之抗體可具有或保持針對HBV基因型D之活體外中和活性，例如，其中IC50 值為≤1 pg/ml，視情況≤0.1 pg/ml。
在另一實施例中，當使用相同分析(例如，如本文所述之分析)評定時，抗體可具有HBV基因型A、B、C及/或D，視情況至少D，視情況全部A、B、C及D之中和的IC50 值，其比針對相同基因型的參考抗體Bc1.180之IC50 值高不超過50、10、9、8、7、6、5、4、3或2倍，或小於或等於該參考抗體之該值。
在另一實施例中，當使用相同分析(例如如本文所述之分析)評定時，抗體可具有或保持針對HBV基因型A、B、C及/或D，視情況至少D，視情況全部A、B、C及D之參考抗體Bc1.180之活體內中和活性的至少50%、60%、70%、75%、80%、85%、90%、95%或100%。
視情況，抗體可活體內遏制例如感染有HBV基因型A、B、C或D，視情況D之個體的病毒之病毒血症。視情況，當使用相同分析(例如如本文所述之分析)評定時，抗體可具有或保持針對HBV基因型A、B、C及/或D，視情況至少D，視情況全部A、B、C及D之參考抗體Bc1.180之活體內病毒血症遏制活性的至少50%、60%、70%、75%、80%、85%、90%、95%或100%。
C. 在一個態樣中，本發明提供一種抗體，其包含：VH域，其包含至少一個、至少兩個或全部三個選自以下之VH CDR序列：(a) CDR-H1，其包含SEQ ID NO: 37之胺基酸序列；b) CDR-H2，其包含SEQ ID NO: 38之胺基酸序列；及(c) CDR-H3，其包含SEQ ID NO: 39之胺基酸序列。在另一態樣中，抗體包含VH域，其包含以下CDR：(a) CDR-H1，其包含SEQ ID NO: 37之胺基酸序列；(b) CDR-H2，其包含SEQ ID NO: 38之胺基酸序列；及(c) CDR-H3，其包含SEQ ID NO: 39之胺基酸序列；或其變體，其中一或多個CDR-H1、CDR-H2或CDR-H3中之一個、兩個或三個胺基酸經另一胺基酸取代。
在一個態樣中，VH域可進一步包含選自以下之一或多個重鏈構架序列：(a) SEQ ID NO: 43之重鏈構架區1 (HC-FR1)或與其具有至少85%、86%、87%、88%、89%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%或99%序列一致性的變體，(b) SEQ ID NO: 44之重鏈構架區2 (HC-FR2)或與其具有至少85%、86%、87%、88%、89%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%或99%序列一致性的變體，(c) SEQ ID NO: 45重鏈構架區3 (HC-FR3)或與其具有至少85%、86%、87%、88%、89%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%或99%序列一致性的變體，及(d) SEQ ID NO: 46之重鏈構架區4 (HC-FR4)或與其具有至少85%、86%、87%、88%、89%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%或99%序列一致性的變體。視情況，VH域包含如(a)至(d)中所定義之重鏈構架序列中之每一者。視情況，序列一致性百分比為95%。視情況，序列一致性百分比為98%。
在另一態樣中，抗S-HBs抗體包含與SEQ ID NO: 52之胺基酸序列具有至少90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%序列一致性的重鏈可變域(VH)序列。在一個態樣中，抗S-HBs抗體包含與SEQ ID NO: 52之胺基酸序列具有至少95%序列一致性的重鏈可變域(VH)序列。在某些態樣中，具有至少90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%或99%一致性之VH序列相對於參考序列含有取代(例如保守性取代)、插入或缺失，但包含該序列之抗S-HBs抗體保持結合於S-HBs之能力。在某些態樣中，SEQ ID NO: 52中總共1至10個胺基酸已經取代、插入及/或缺失。在某些態樣中，取代、插入或缺失發生在CDR外部之區中(亦即在FR中)。視情況，抗S-HBs抗體包含SEQ ID NO: 52中之VH序列，包括彼序列之轉譯後修飾。在一個特定態樣中，VH包含一個、兩個或三個選自以下之CDR：(a) CDR-H1，其包含SEQ ID NO: 37之胺基酸序列；(b) CDR-H2，其包含SEQ ID NO: 38之胺基酸序列；及(c) CDR-H3，其包含SEQ ID NO: 39之胺基酸序列。
在另一態樣中，抗S-HBs抗體包含SEQ ID NO: 52之VH之重鏈CDR序列中之一或多者。在一個態樣中，抗S-HBs抗體包含一或多個(較佳全部三個) SEQ ID NO: 52之VH域之重鏈CDR胺基酸序列及與SEQ ID NO: 52之VH域之構架胺基酸序列至少85%、86%、87%、88%、89%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%序列一致的構架。視情況，序列一致性為95%或98%。
在另一態樣中，本發明提供一種抗體，其包含：包含至少一個、至少兩個或全部三個選自以下之VL CDR序列的VL域：(a)包含SEQ ID NO: 40之胺基酸序列的CDR-L1；(b)包含SEQ ID NO: 41之胺基酸序列的CDR-L2；及(c)包含SEQ ID NO: 42之胺基酸序列的CDR-L3。在另一態樣中，抗體包含VL域，其包含以下CDR：(a) CDR-L1，其包含SEQ ID NO: 40之胺基酸序列；(b) CDR-L2，其包含SEQ ID NO: 41之胺基酸序列；及(c) CDR-L3，其包含SEQ ID NO: 42之胺基酸序列；或其變體，其中CDR-L1、CDR-L2或CDR-L3中之一或多者中之一個、兩個或三個胺基酸經另一胺基酸取代。
在一個態樣中，抗S-HBs抗體VL域可進一步包含一或多個輕鏈構架序列，其選自(a) SEQ ID NO: 47之輕鏈構架區1 (LC-FR1)或與其具有至少85%、86%、87%、88%、89%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%或99%序列一致性的變體，(b) SEQ ID NO: 48之輕鏈構架區2 (LC-FR2)或與其具有至少85%、86%、87%、88%、89%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%或99%序列一致性的變體，(c) SEQ ID NO: 49之輕鏈構架區3 (LC-FR3)或與其具有至少85%、86%、87%、88%、89%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%或99%序列一致性的變體，及(d) SEQ ID NO: 50之輕鏈構架區4 (LC-FR4)或與其具有至少85%、86%、87%、88%、89%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%或99%序列一致性的變體。視情況，VL域包含如(a)至(d)中所定義之重鏈構架序列中之每一者。視情況，序列一致性百分比為95%。視情況，序列一致性百分比為98%。
在另一態樣中，提供一種抗S-HBs抗體，其中該抗體包含與SEQ ID NO: 51之胺基酸序列具有至少90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%序列一致性的輕鏈可變域(VL)序列。在一個態樣中，抗S-HBs抗體包含輕鏈可變域(VL)序列，其與胺基酸序列SEQ ID NO: 51具有至少95%序列一致性。在某些態樣中，具有至少90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%或99%一致性之VL序列相對於參考序列含有取代(例如保守性取代)、插入或缺失，但包含該序列之抗S-HBs抗體保持結合於S-HBs之能力。在某些態樣中，SEQ ID NO: 51中總共1至10個胺基酸已經取代、插入及/或缺失。在某些態樣中，取代、插入或缺失發生在CDR外部之區中(亦即在FR中)。視情況，抗S-HBs抗體包含SEQ ID NO: 51中之VL序列，包括彼序列之轉譯後修飾。在一個特定態樣中，VL包含一個、兩個或三個選自以下之CDR：(a) CDR-L1，其包含SEQ ID NO: 40之胺基酸序列；(b) CDR-L2，其包含SEQ ID NO: 41之胺基酸序列；及(c) CDR-L3，其包含SEQ ID NO: 42之胺基酸序列。
在另一實施例中，抗S-HBs抗體包含SEQ ID NO: 51之VL的CDR序列中之一或多者。在一個態樣中，抗S-HBs抗體包含一或多個(較佳全部三個) SEQ ID NO: 51之VL域之輕鏈CDR胺基酸序列及與SEQ ID NO: 51之VL域之構架胺基酸序列至少85%、86%、87%、88%、89%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%序列一致性的構架。視情況，序列一致性為95%或98%。
在另一態樣中，提供一種抗S-HBs抗體，其中該抗體包含如上文所提供之態樣中之任一者中的VH序列及如上文所提供之態樣中之任一者中的VL序列。
舉例而言，在一個例示性實施例中，抗體包含VH域，其包含SEQ ID NO: 39之CDR-H3；及VL域，其包含SEQ ID NO: 42之CDR-L3。VH域視情況進一步包含SEQ ID NO: 38之CDR-H2。
在另一例示性實施例中，抗體包含： i)包含以下CDR之VH域：(a) CDR-H1，其包含SEQ ID NO: 37之胺基酸序列；(b) CDR-H2，其包含SEQ ID NO: 38之胺基酸序列；及(c) CDR-H3，其包含SEQ ID NO: 39之胺基酸序列；或其變體，其中CDR-H1、CDR-H2或CDR-H3中之一或多者中之一個、兩個或三個胺基酸經另一胺基酸取代；及 ii)包含以下CDR之VL域：(a) CDR-L1，其包含SEQ ID NO: 40之胺基酸序列；(b) CDR-L2，其包含SEQ ID NO: 41之胺基酸序列；及(c) CDR-L3，其包含SEQ ID NO: 42之胺基酸序列；或其變體，其中CDR-L1、CDR-L2或CDR-L3中之一或多者中之一個、兩個或三個胺基酸經另一胺基酸取代。
在另一例示性實施例中，抗體包含： i)與胺基酸序列SEQ ID NO: 52具有至少90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%序列一致性的重鏈可變域(VH)序列；及 ii)與胺基酸序列SEQ ID NO: 51具有至少90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%序列一致性的輕鏈可變域(VL)序列。
在另一例示性實施例中，抗S-HBs抗體包含：(a) CDR-H1，其包含SEQ ID NO: 37之胺基酸序列；(b) CDR-H2，其包含SEQ ID NO: 38之胺基酸序列；(c) CDR-H3，其包含SEQ ID NO: 39之胺基酸序列；(d) CDR-L1，其包含SEQ ID NO: 40之胺基酸序列；(e) CDR-L2，其包含SEQ ID NO: 41之胺基酸序列；及(f) CDR-L3，其包含SEQ ID NO: 42之胺基酸序列，及與SEQ ID NO: 52之胺基酸序列具有至少90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%序列一致性之VH域，及與SEQ ID NO: 51之胺基酸序列具有至少90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%序列一致性的VL域。在一個態樣中，VH域與SEQ ID NO: 52之胺基酸序列具有至少95%序列一致性。在一個態樣中，VL域與SEQ ID NO: 51之胺基酸序列具有至少95%序列一致性。在一個實施例中，抗體特異性結合於S-HBs。在另一實施例中，抗體結合於滿足以下解離常數(KD)之S-HBs：當與包含SEQ ID NO: 52之VH序列及SEQ ID NO: 51之VL序列的抗體之解離常數(KD)相比時，解離常數降低至多10倍或增加至多10倍。
在一個態樣中，抗體包含分別於SEQ ID NO: 52及SEQ ID NO: 51中VH及VL序列，包括彼等序列之轉譯後修飾。
在另一態樣中，抗體可包含SEQ ID NO: 53之全長輕鏈及/或SEQ ID NO: 54或265之全長重鏈。
在另一態樣中，本發明提供一種抗體，其與本文所提供之抗S-HBs抗體結合於相同抗原決定基。舉例而言，在某些態樣中，提供一種抗體，其與包含SEQ ID NO: 52之VH序列及SEQ ID NO: 51之VL序列的抗S-HBs抗體結合於相同抗原決定基。在某些態樣中，提供結合於SEQ ID NO: 253之S-HBs之以下殘基中之一或多者的抗體：L109、C138、I152、W156及/或R169。視情況，抗體進一步結合於P111及/或F161。抗體可包含如上文所定義之序列中之任一者。
在另一態樣中，本發明提供一種與本文所提供之抗S-HBs抗體競爭結合於S-HBs之抗體。
在一些實施例中，當在相同分析，例如ELISA分析或流式細胞量測術分析中評定時，如此部分中所述之抗體可具有或保持參考抗體Bc3.106與S-HBs (例如SEQ ID NO: 253)的結合活性之至少50%、60%、70%、75%、80%、85%、90%、95%或100%。
另外或替代地，當在相同分析，例如ELISA分析或流式細胞量測術分析中評定時，如此部分中所述之抗體可具有或保持參考抗體Bc3.106與蛋白SEQ ID NO: 254-262中之一或多者(例如至少SEQ ID NO: 257)，視情況SEQ ID NO: 254至262中之蛋白中之每一者之結合活性的至少50%、60%、70%、75%、80%、85%、90%、95%或100%。
參考抗體Bc3.106具有SEQ ID NO: 52之VH序列及SEQ ID NO: 51之VL序列。其具有SEQ ID NO: 54或265之全長重鏈及SEQ ID NO: 53之全長輕鏈。如實例中所用，SEQ ID NO: 265包含由載體LT615368.1表現之IgG1恆定區。
在一些實施例中，當在相同分析中評定時，此部分中所述之抗體結合於(例如SEQ ID NO: 253)之S-HBs，其中KD 值可比針對相同抗原之參考抗體Bc3.106之KD 值高不超過50、10、9、8、7、6、5、4、3或2倍，或小於或等於該參考抗體之該KD 值。
另外或替代地，該抗體可結合於SEQ ID NO: 254-262中之一或多者(例如至少SEQ ID NO: 257)，視情況SEQ ID NO: 254-262之蛋白中之每一者，其中KD 值可比針對相同抗原之參考抗體Bc3.106之KD 值高不超過50、10、9、8、7、6、5、4、3或2倍，或小於或等於該參考抗體之該KD 值。
在一些實施例中，如在此部分中所述之抗體可結合於(例如SEQ ID NO: 253)之S-HBs，其中EC50比參考抗體Bc3.106之EC50高不超過50、10、9、8、7、6、5、4、3或2倍或小於或等於該參考抗體之該值，如藉由ELISA或藉由流式細胞量測術所量測。替代地或另外，抗體可結合SEQ ID NO: 254-262中之一或多者(例如至少SEQ ID NO: 257)，視情況SEQ ID NO: 254至262之蛋白中之每一者，其中EC50比參考抗體Bc3.106之EC50高不超過50、10、9、8、7、6、5、4、3或2倍或小於或等於該參考抗體之該值，如藉由ELISA或藉由流式細胞量測術所量測。
在一些實施例中，如此部分中所述之抗體可具有或保持針對HBV基因型A、B、C及/或D (視情況全部A、B、C及D)之活體外中和活性。舉例而言，如此部分中所述之抗體可具有或保持針對HBV基因型D之活體外中和活性，例如，其中IC50 值為≤10 pg/ml，視情況≤1 pg/ml。
在另一實施例中，當使用相同分析(例如，如本文所述之分析)評定時，抗體可具有HBV基因型A、B、C及/或D，視情況至少D，視情況全部A、B、C及D之中和的IC50 值，其比針對相同基因型的參考抗體Bc3.106之IC50 值高不超過50、10、9、8、7、6、5、4、3或2倍，或小於或等於該參考抗體之該值。
在另一實施例中，當使用相同分析(例如如本文所述之分析)評定時，抗體可具有或保持針對HBV基因型A、B、C及/或D，視情況至少D，視情況全部A、B、C及D之參考抗體Bc3.106之活體內中和活性的至少50%、60%、70%、75%、80%、85%、90%、95%或100%。
視情況，抗體可活體內遏制例如感染有HBV基因型A、B、C或D，視情況D之個體的病毒之病毒血症。視情況，當使用相同分析(例如如本文所述之分析)評定時，抗體可具有或保持針對HBV基因型A、B、C及/或D，視情況至少D，視情況全部A、B、C及D之參考抗體Bc3.106之活體內病毒血症遏制活性的至少50%、60%、70%、75%、80%、85%、90%、95%或100%。
D. 在一個態樣中，本發明提供一種抗體，其包含：VH域，其包含至少一個、至少兩個或全部三個選自以下之VH CDR序列：(a) CDR-H1，其包含SEQ ID NO: 55之胺基酸序列；b) CDR-H2，其包含SEQ ID NO: 56之胺基酸序列；及(c) CDR-H3，其包含SEQ ID NO: 57之胺基酸序列。在另一態樣中，抗體包含VH域，其包含以下CDR：(a) CDR-H1，其包含SEQ ID NO: 55之胺基酸序列；(b) CDR-H2，其包含SEQ ID NO: 56之胺基酸序列；及(c) CDR-H3，其包含SEQ ID NO: 57之胺基酸序列；或其變體，其中一或多個CDR-H1、CDR-H2或CDR-H3中之一個、兩個或三個胺基酸經另一胺基酸取代。
在一個態樣中，VH域可進一步包含選自以下之一或多個重鏈構架序列：(a) SEQ ID NO: 61之重鏈構架區1 (HC-FR1)或與其具有至少85%、86%、87%、88%、89%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%或99%序列一致性的變體，(b) SEQ ID NO: 62之重鏈構架區2 (HC-FR2)或與其具有至少85%、86%、87%、88%、89%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%或99%序列一致性的變體，(c) SEQ ID NO: 63重鏈構架區3 (HC-FR3)或與其具有至少85%、86%、87%、88%、89%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%或99%序列一致性的變體，及(d) SEQ ID NO: 64之重鏈構架區4 (HC-FR4)或與其具有至少85%、86%、87%、88%、89%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%或99%序列一致性的變體。視情況，VH域包含如(a)至(d)中所定義之重鏈構架序列中之每一者。視情況，序列一致性百分比為95%。視情況，序列一致性百分比為98%。
在另一態樣中，抗S-HBs抗體包含與SEQ ID NO: 70之胺基酸序列具有至少90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%序列一致性的重鏈可變域(VH)序列。在一個態樣中，抗S-HBs抗體包含與SEQ ID NO: 70之胺基酸序列具有至少95%序列一致性的重鏈可變域(VH)序列。在某些態樣中，具有至少90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%或99%一致性之VH序列相對於參考序列含有取代(例如保守性取代)、插入或缺失，但包含該序列之抗S-HBs抗體保持結合於S-HBs之能力。在某些態樣中，SEQ ID NO: 70中總共1至10個胺基酸已經取代、插入及/或缺失。在某些態樣中，取代、插入或缺失發生在CDR外部之區中(亦即在FR中)。視情況，抗S-HBs抗體包含SEQ ID NO: 70中之VH序列，包括彼序列之轉譯後修飾。在一個特定態樣中，VH包含一個、兩個或三個選自以下之CDR：(a) CDR-H1，其包含SEQ ID NO: 55之胺基酸序列；(b) CDR-H2，其包含SEQ ID NO: 56之胺基酸序列；及(c) CDR-H3，其包含SEQ ID NO: 57之胺基酸序列。
在另一態樣中，抗S-HBs抗體包含SEQ ID NO: 70之VH之重鏈CDR序列中之一或多者。在一個態樣中，抗S-HBs抗體包含一或多個(較佳全部三個) SEQ ID NO: 70之VH域之重鏈CDR胺基酸序列及與SEQ ID NO: 70之VH域之構架胺基酸序列至少85%、86%、87%、88%、89%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%序列一致的構架。視情況，序列一致性為95%或98%。
在另一態樣中，本發明提供一種抗體，其包含：包含至少一個、至少兩個或全部三個選自以下之VL CDR序列的VL域：(a)包含SEQ ID NO: 58之胺基酸序列的CDR-L1；(b)包含SEQ ID NO: 59之胺基酸序列的CDR-L2；及(c)包含SEQ ID NO: 60之胺基酸序列的CDR-L3。在另一態樣中，抗體包含VL域，其包含以下CDR：(a) CDR-L1，其包含SEQ ID NO: 58之胺基酸序列；(b) CDR-L2，其包含SEQ ID NO: 59之胺基酸序列；及(c) CDR-L3，其包含SEQ ID NO: 60之胺基酸序列；或其變體，其中CDR-L1、CDR-L2或CDR-L3中之一或多者中之一個、兩個或三個胺基酸經另一胺基酸取代。
在一個態樣中，抗S-HBs抗體VL域可進一步包含一或多個輕鏈構架序列，其選自(a) SEQ ID NO: 65之輕鏈構架區1 (LC-FR1)或與其具有至少85%、86%、87%、88%、89%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%或99%序列一致性的變體，(b) SEQ ID NO: 66之輕鏈構架區2 (LC-FR2)或與其具有至少85%、86%、87%、88%、89%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%或99%序列一致性的變體，(c) SEQ ID NO: 67之輕鏈構架區3 (LC-FR3)或與其具有至少85%、86%、87%、88%、89%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%或99%序列一致性的變體，及(d) SEQ ID NO: 68之輕鏈構架區4 (LC-FR4)或與其具有至少85%、86%、87%、88%、89%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%或99%序列一致性的變體。視情況，VH域包含如(a)至(d)中所定義之重鏈構架序列中之每一者。視情況，序列一致性百分比為95%。視情況，序列一致性百分比為98%。
在另一態樣中，提供一種抗S-HBs抗體，其中該抗體包含與SEQ ID NO: 69之胺基酸序列具有至少90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%序列一致性的輕鏈可變域(VL)序列。在一個態樣中，抗S-HBs抗體包含輕鏈可變域(VL)序列，其與胺基酸序列SEQ ID NO: 69具有至少95%序列一致性。在某些態樣中，具有至少90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%或99%一致性之VL序列相對於參考序列含有取代(例如保守性取代)、插入或缺失，但包含該序列之抗S-HBs抗體保持結合於S-HBs之能力。在某些態樣中，SEQ ID NO: 69中總共1至10個胺基酸已經取代、插入及/或缺失。在某些態樣中，取代、插入或缺失發生在CDR外部之區中(亦即在FR中)。視情況，抗S-HBs抗體包含SEQ ID NO: 69中之VL序列，包括彼序列之轉譯後修飾。在一個特定態樣中，VL包含一個、兩個或三個選自以下之CDR：(a) CDR-L1，其包含SEQ ID NO: 58之胺基酸序列；(b) CDR-L2，其包含SEQ ID NO: 59之胺基酸序列；及(c) CDR-L3，其包含SEQ ID NO: 60之胺基酸序列。
在另一實施例中，抗S-HBs抗體包含SEQ ID NO: 69之VL的CDR序列中之一或多者。在一個態樣中，抗S-HBs抗體包含一或多個(較佳全部三個) SEQ ID NO: 69之VL域之輕鏈CDR胺基酸序列及與SEQ ID NO: 69之VL域之構架胺基酸序列至少85%、86%、87%、88%、89%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%序列一致性的構架。視情況，序列一致性為95%或98%。
在另一態樣中，提供一種抗S-HBs抗體，其中該抗體包含如上文所提供之態樣中之任一者中的VH序列及如上文所提供之態樣中之任一者中的VL序列。
舉例而言，在一個例示性實施例中，抗體包含VH域，其包含SEQ ID NO: 57之CDR-H3；及VL域，其包含SEQ ID NO: 60之CDR-L3。VH域視情況進一步包含SEQ ID NO: 56之CDR-H2。
在另一例示性實施例中，抗體包含： i)包含以下CDR之VH域：(a) CDR-H1，其包含SEQ ID NO: 55之胺基酸序列；(b) CDR-H2，其包含SEQ ID NO: 56之胺基酸序列；及(c) CDR-H3，其包含SEQ ID NO: 57之胺基酸序列；或其變體，其中CDR-H1、CDR-H2或CDR-H3中之一或多者中之一個、兩個或三個胺基酸經另一胺基酸取代；及 ii)包含以下CDR之VL域：(a) CDR-L1，其包含SEQ ID NO: 58之胺基酸序列；(b) CDR-L2，其包含SEQ ID NO: 59之胺基酸序列；及(c) CDR-L3，其包含SEQ ID NO: 60之胺基酸序列；或其變體，其中CDR-L1、CDR-L2或CDR-L3中之一或多者中之一個、兩個或三個胺基酸經另一胺基酸取代。
在另一例示性實施例中，抗體包含： i)與胺基酸序列SEQ ID NO: 70具有至少90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%序列一致性的重鏈可變域(VH)序列；及 ii)與胺基酸序列SEQ ID NO: 69具有至少90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%序列一致性的輕鏈可變域(VL)序列。
在另一例示性實施例中，抗S-HBs抗體包含：(a) CDR-H1，其包含SEQ ID NO: 55之胺基酸序列；(b) CDR-H2，其包含SEQ ID NO: 56之胺基酸序列；(c) CDR-H3，其包含SEQ ID NO: 57之胺基酸序列；(d) CDR-L1，其包含SEQ ID NO: 58之胺基酸序列；(e) CDR-L2，其包含SEQ ID NO: 59之胺基酸序列；及(f) CDR-L3，其包含SEQ ID NO: 60之胺基酸序列，及與SEQ ID NO: 70之胺基酸序列具有至少90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%序列一致性之VH域，及與SEQ ID NO: 69之胺基酸序列具有至少90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%序列一致性的VL域。在一個態樣中，VH域與SEQ ID NO: 70之胺基酸序列具有至少95%序列一致性。在一個態樣中，VL域與SEQ ID NO: 69之胺基酸序列具有至少95%序列一致性。在一個實施例中，抗體特異性結合於S-HBs。在另一實施例中，抗體結合於滿足以下解離常數(KD)之S-HBs：當與包含SEQ ID NO: 70之VH序列及SEQ ID NO: 69之VL序列的抗體之解離常數(KD)相比時，解離常數降低至多10倍或增加至多10倍。
在一個態樣中，抗體包含分別於SEQ ID NO: 70及SEQ ID NO: 69中VH及VL序列，包括彼等序列之轉譯後修飾。
在另一態樣中，抗體可包含SEQ ID NO: 71之全長輕鏈及/或SEQ ID NO: 72或266之全長重鏈。
在另一態樣中，本發明提供一種抗體，其與本文所提供之抗S-HBs抗體結合於相同抗原決定基。舉例而言，在某些態樣中，提供一種抗體，其與包含SEQ ID NO: 70之VH序列及SEQ ID NO: 69之VL序列的抗S-HBs抗體結合於相同抗原決定基。在某些態樣中，提供結合於SEQ ID NO: 253之S-HBs之以下殘基中之一或多者的抗體：C121、R122、C124、C137、C139、K141、N146、C147及/或C149。在一些實施例中，抗體亦可結合於I110、T118、P120、C138、P142、D144、T148及/或I152中之一或多者。抗體可包含如上文所定義之序列中之任一者。
在另一態樣中，本發明提供一種與本文所提供之抗S-HBs抗體競爭結合於S-HBs之抗體。
在一些實施例中，當在相同分析，例如ELISA分析或流式細胞量測術分析中評定時，如此部分中所述之抗體可具有或保持參考抗體Bv4.104與S-HBs (例如SEQ ID NO: 253)的結合活性之至少50%、60%、70%、75%、80%、85%、90%、95%或100%。
另外或替代地，當在相同分析，例如ELISA分析或流式細胞量測術分析中評定時，如此部分中所述之抗體可具有或保持參考抗體Bv4.104與SEQ ID NO: 257及258之蛋白中之一或多者或每一者，視情況至少與SEQ ID NO: 257之蛋白的結合活性之至少50%、60%、70%、75%、80%、85%、90%、95%或100%。
參考抗體Bv4.104具有VH序列SEQ ID NO: 70及VL序列SEQ ID NO: 69。其具有SEQ ID NO: 72或266之全長重鏈及SEQ ID NO: 71之全長輕鏈。如實例中所用，SEQ ID NO: 266包含由載體LT615368.1表現之IgG1恆定區。
在一些實施例中，當在相同分析中評定時，此部分中所述之抗體結合於(例如SEQ ID NO: 253)之S-HBs，其中KD 值可比針對相同抗原之參考抗體Bv4.104之KD 值高不超過50、10、9、8、7、6、5、4、3或2倍，或小於或等於該參考抗體之該KD 值。
另外或替代地，抗體可結合於SEQ ID NO: 257及258之蛋白中之一或多者或每一者，視情況至少結合於SEQ ID NO: 257之蛋白，其中KD 值可比針對相同抗原之參考抗體Bv4.104之KD 值高不超過50、10、9、8、7、6、5、4、3或2倍，或小於或等於該參考抗體之該KD 值。
在一些實施例中，如在此部分中所述之抗體可結合於(例如SEQ ID NO: 253)之S-HBs，其中EC50比參考抗體Bv4.104之EC50高不超過50、10、9、8、7、6、5、4、3或2倍或小於或等於該參考抗體之該值，如藉由ELISA或藉由流式細胞量測術所量測。替代地或另外，抗體可結合於SEQ ID NO: 257及258之蛋白中之一或多者或每一者，視情況至少結合於SEQ ID NO: 257之蛋白，其中EC50比參考抗體Bv4.104之EC50高不超過50、10、9、8、7、6、5、4、3或2倍或小於或等於該參考抗體之該值，如藉由ELISA或藉由流式細胞量測術所量測。
在一些實施例中，如此部分中所述之抗體可具有或保持針對HBV基因型D之活體外中和活性，例如，其中IC50 值為≤100 pg/ml，視情況≤10 pg/ml。
在另一實施例中，當使用相同分析(例如，如本文所述之活體外中和分析)評定時，抗體可具有HBV基因型D之中和IC50 值，其比針對相同基因型之參考抗體Bv4.104的IC50 值高不超過50、10、9、8、7、6、5、4、3或2倍，或小於或等於該參考抗體之該值。
在另一實施例中，當使用相同分析(例如，如本文所述之分析)評定時，抗體可具有或保持針對HBV基因型D之參考抗體Bv4.104的活體內中和活性的至少50%、60%、70%、75%、80%、85%、90%、95%或100%。
視情況，抗體可活體內遏制例如感染有HBV基因型D之個體的病毒之病毒血症。視情況，當使用相同分析(例如，如本文所述之分析)評定時，抗體可具有或保持針對HBV基因型D之參考抗體Bv4.104的活體內病毒血症遏制活性的至少50%、60%、70%、75%、80%、85%、90%、95%或100%。
E. 在一個態樣中，本發明提供一種抗體，其包含：VH域，其包含至少一個、至少兩個或全部三個選自以下之VH CDR序列：(a) CDR-H1，其包含SEQ ID NO: 73之胺基酸序列；b) CDR-H2，其包含SEQ ID NO: 74之胺基酸序列；及(c) CDR-H3，其包含SEQ ID NO: 75之胺基酸序列。在另一態樣中，抗體包含VH域，其包含以下CDR：(a) CDR-H1，其包含SEQ ID NO: 73之胺基酸序列；(b) CDR-H2，其包含SEQ ID NO: 74之胺基酸序列；及(c) CDR-H3，其包含SEQ ID NO: 75之胺基酸序列；或其變體，其中一或多個CDR-H1、CDR-H2或CDR-H3中之一個、兩個或三個胺基酸經另一胺基酸取代。
在一個態樣中，VH域可進一步包含選自以下之一或多個重鏈構架序列：(a) SEQ ID NO: 79之重鏈構架區1 (HC-FR1)或與其具有至少85%、86%、87%、88%、89%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%或99%序列一致性的變體，(b) SEQ ID NO: 80之重鏈構架區2 (HC-FR2)或與其具有至少85%、86%、87%、88%、89%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%或99%序列一致性的變體，(c) SEQ ID NO: 81重鏈構架區3 (HC-FR3)或與其具有至少85%、86%、87%、88%、89%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%或99%序列一致性的變體，及(d) SEQ ID NO: 82之重鏈構架區4 (HC-FR4)或與其具有至少85%、86%、87%、88%、89%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%或99%序列一致性的變體。視情況，VH域包含如(a)至(d)中所定義之重鏈構架序列中之每一者。視情況，序列一致性百分比為95%。視情況，序列一致性百分比為98%。
在另一態樣中，抗S-HBs抗體包含與SEQ ID NO: 88之胺基酸序列具有至少90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%序列一致性的重鏈可變域(VH)序列。在一個態樣中，抗S-HBs抗體包含與SEQ ID NO: 88之胺基酸序列具有至少95%序列一致性的重鏈可變域(VH)序列。在某些態樣中，具有至少90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%或99%一致性之VH序列相對於參考序列含有取代(例如保守性取代)、插入或缺失，但包含該序列之抗S-HBs抗體保持結合於S-HBs之能力。在某些態樣中，SEQ ID NO: 88中總共1至10個胺基酸已經取代、插入及/或缺失。在某些態樣中，取代、插入或缺失發生在CDR外部之區中(亦即在FR中)。視情況，抗S-HBs抗體包含SEQ ID NO: 88中之VH序列，包括彼序列之轉譯後修飾。在一個特定態樣中，VH包含一個、兩個或三個選自以下之CDR：(a) CDR-H1，其包含SEQ ID NO: 73之胺基酸序列；(b) CDR-H2，其包含SEQ ID NO: 74之胺基酸序列；及(c) CDR-H3，其包含SEQ ID NO: 75之胺基酸序列。
在另一態樣中，抗S-HBs抗體包含SEQ ID NO: 88之VH之重鏈CDR序列中之一或多者。在一個態樣中，抗S-HBs抗體包含一或多個(較佳全部三個) SEQ ID NO: 88之VH域之重鏈CDR胺基酸序列及與SEQ ID NO: 88之VH域之構架胺基酸序列至少85%、86%、87%、88%、89%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%序列一致的構架。視情況，序列一致性為95%或98%。
在另一態樣中，本發明提供一種抗體，其包含：包含至少一個、至少兩個或全部三個選自以下之VL CDR序列的VL域：(a)包含SEQ ID NO: 76之胺基酸序列的CDR-L1；(b)包含SEQ ID NO: 77之胺基酸序列的CDR-L2；及(c)包含SEQ ID NO: 78之胺基酸序列的CDR-L3。在另一態樣中，抗體包含VL域，其包含以下CDR：(a) CDR-L1，其包含SEQ ID NO: 76之胺基酸序列；(b) CDR-L2，其包含SEQ ID NO: 77之胺基酸序列；及(c) CDR-L3，其包含SEQ ID NO: 78之胺基酸序列；或其變體，其中CDR-L1、CDR-L2或CDR-L3中之一或多者中之一個、兩個或三個胺基酸經另一胺基酸取代。
在一個態樣中，抗S-HBs抗體VL域可進一步包含一或多個輕鏈構架序列，其選自(a) SEQ ID NO: 83之輕鏈構架區1 (LC-FR1)或與其具有至少85%、86%、87%、88%、89%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%或99%序列一致性的變體，(b) SEQ ID NO: 84之輕鏈構架區2 (LC-FR2)或與其具有至少85%、86%、87%、88%、89%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%或99%序列一致性的變體，(c) SEQ ID NO: 85之輕鏈構架區3 (LC-FR3)或與其具有至少85%、86%、87%、88%、89%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%或99%序列一致性的變體，及(d) SEQ ID NO: 86之輕鏈構架區4 (LC-FR4)或與其具有至少85%、86%、87%、88%、89%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%或99%序列一致性的變體。視情況，VH域包含如(a)至(d)中所定義之重鏈構架序列中之每一者。視情況，序列一致性百分比為95%。視情況，序列一致性百分比為98%。
在另一態樣中，提供一種抗S-HBs抗體，其中該抗體包含與SEQ ID NO: 87之胺基酸序列具有至少90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%序列一致性的輕鏈可變域(VL)序列。在一個態樣中，抗S-HBs抗體包含輕鏈可變域(VL)序列，其與胺基酸序列SEQ ID NO: 87具有至少95%序列一致性。在某些態樣中，具有至少90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%或99%一致性之VL序列相對於參考序列含有取代(例如保守性取代)、插入或缺失，但包含該序列之抗S-HBs抗體保持結合於S-HBs之能力。在某些態樣中，SEQ ID NO: 87中總共1至10個胺基酸已經取代、插入及/或缺失。在某些態樣中，取代、插入或缺失發生在CDR外部之區中(亦即在FR中)。視情況，抗S-HBs抗體包含SEQ ID NO: 87中之VL序列，包括彼序列之轉譯後修飾。在一個特定態樣中，VL包含一個、兩個或三個選自以下之CDR：(a) CDR-L1，其包含SEQ ID NO: 76之胺基酸序列；(b) CDR-L2，其包含SEQ ID NO: 77之胺基酸序列；及(c) CDR-L3，其包含SEQ ID NO: 78之胺基酸序列。
在另一實施例中，抗S-HBs抗體包含SEQ ID NO: 87之VL的CDR序列中之一或多者。在一個態樣中，抗S-HBs抗體包含一或多個(較佳全部三個) SEQ ID NO: 87之VL域之輕鏈CDR胺基酸序列及與SEQ ID NO: 87之VL域之構架胺基酸序列至少85%、86%、87%、88%、89%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%序列一致性的構架。視情況，序列一致性為95%或98%。
在另一態樣中，提供一種抗S-HBs抗體，其中該抗體包含如上文所提供之態樣中之任一者中的VH序列及如上文所提供之態樣中之任一者中的VL序列。
舉例而言，在一個例示性實施例中，抗體包含VH域，其包含SEQ ID NO: 75之CDR-H3；及VL域，其包含SEQ ID NO: 78之CDR-L3。VH域視情況進一步包含SEQ ID NO: 74之CDR-H2。
在另一例示性實施例中，抗體包含： i)包含以下CDR之VH域：(a) CDR-H1，其包含SEQ ID NO: 73之胺基酸序列；(b) CDR-H2，其包含SEQ ID NO: 74之胺基酸序列；及(c) CDR-H3，其包含SEQ ID NO: 75之胺基酸序列；或其變體，其中CDR-H1、CDR-H2或CDR-H3中之一或多者中之一個、兩個或三個胺基酸經另一胺基酸取代；及 ii)包含以下CDR之VL域：(a) CDR-L1，其包含SEQ ID NO: 76之胺基酸序列；(b) CDR-L2，其包含SEQ ID NO: 77之胺基酸序列；及(c) CDR-L3，其包含SEQ ID NO: 78之胺基酸序列；或其變體，其中CDR-L1、CDR-L2或CDR-L3中之一或多者中之一個、兩個或三個胺基酸經另一胺基酸取代。
在另一例示性實施例中，抗體包含： i)與胺基酸序列SEQ ID NO: 88具有至少90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%序列一致性的重鏈可變域(VH)序列；及 ii)與胺基酸序列SEQ ID NO: 87具有至少90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%序列一致性的輕鏈可變域(VL)序列。
在另一例示性實施例中，抗S-HBs抗體包含：(a) CDR-H1，其包含SEQ ID NO: 73之胺基酸序列；(b) CDR-H2，其包含SEQ ID NO: 74之胺基酸序列；(c) CDR-H3，其包含SEQ ID NO: 75之胺基酸序列；(d) CDR-L1，其包含SEQ ID NO: 76之胺基酸序列；(e) CDR-L2，其包含SEQ ID NO: 77之胺基酸序列；及(f) CDR-L3，其包含SEQ ID NO: 78之胺基酸序列，及與SEQ ID NO: 88之胺基酸序列具有至少90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%序列一致性之VH域，及與SEQ ID NO: 87之胺基酸序列具有至少90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%序列一致性的VL域。在一個態樣中，VH域與SEQ ID NO: 88之胺基酸序列具有至少95%序列一致性。在一個態樣中，VL域與SEQ ID NO: 87之胺基酸序列具有至少95%序列一致性。在一個實施例中，抗體特異性結合於S-HBs。在另一實施例中，抗體結合於滿足以下解離常數(KD)之S-HBs：當與包含SEQ ID NO: 88之VH序列及SEQ ID NO: 87之VL序列的抗體之解離常數(KD)相比時，解離常數降低至多10倍或增加至多10倍。
在一個態樣中，抗體包含分別於SEQ ID NO: 88及SEQ ID NO: 87中VH及VL序列，包括彼等序列之轉譯後修飾。
在另一態樣中，抗體可包含SEQ ID NO: 89之全長輕鏈及/或SEQ ID NO: 90或267之全長重鏈。
在另一態樣中，本發明提供一種抗體，其與本文所提供之抗S-HBs抗體結合於相同抗原決定基。舉例而言，在某些態樣中，提供一種抗體，其與包含SEQ ID NO: 88之VH序列及SEQ ID NO: 87之VL序列的抗S-HBs抗體結合於相同抗原決定基。在某些態樣中，提供結合於SEQ ID NO: 253之S-HBs之以下殘基中之一或多者的抗體：C121及/或I110、P120、C124、C137、C139、C147、T148及/或C149中之一或多者。視情況，抗體可進一步結合於C138、K141、P142、D144、G145、P150、I152及/或W156中之一或多者。抗體可包含如上文所定義之序列中之任一者。
在另一態樣中，本發明提供一種與本文所提供之抗S-HBs抗體競爭結合於S-HBs之抗體。
在一些實施例中，當在相同分析，例如ELISA分析或流式細胞量測術分析中評定時，如此部分中所述之抗體可具有或保持參考抗體Bc8.111與S-HBs (例如SEQ ID NO: 253)的結合活性之至少50%、60%、70%、75%、80%、85%、90%、95%或100%。
另外或替代地，當在相同分析，例如ELISA分析或流式細胞量測術分析中評定時，如此部分中所述之抗體可具有或保持參考抗體Bc8.111與SEQ ID NO: 254-262之蛋白中之一或多者(例如至少SEQ ID NO: 257)，視情況SEQ ID NO: 254至262中之蛋白中之每一者之結合活性的至少50%、60%、70%、75%、80%、85%、90%、95%或100%。
參考抗體Bc8.111具有SEQ ID NO: 88之VH序列及SEQ ID NO: 87之VL序列。其具有SEQ ID NO: 90或267之全長重鏈及SEQ ID NO: 89之全長輕鏈。如實例中所用，SEQ ID NO: 267包含由載體LT615368.1表現之IgG1恆定區。在一些實施例中，當在相同分析中評定時，此部分中所述之抗體結合於(例如SEQ ID NO: 253)之S-HBs，其中KD 值可比針對相同抗原之參考抗體Bc8.111之KD 值高不超過50、10、9、8、7、6、5、4、3或2倍，或小於或等於該參考抗體之該KD 值。
另外或替代地，該抗體可結合於SEQ ID NO: 254-262中之一或多者(例如至少SEQ ID NO: 257)，視情況SEQ ID NO: 254-262之蛋白中之每一者，其中KD 值可比針對相同抗原之參考抗體Bc8.111之KD 值高不超過50、10、9、8、7、6、5、4、3或2倍，或小於或等於該參考抗體之該KD 值。
在一些實施例中，如在此部分中所述之抗體可結合於(例如SEQ ID NO: 253)之S-HBs，其中EC50比參考抗體Bc8.111之EC50高不超過50、10、9、8、7、6、5、4、3或2倍或小於或等於該參考抗體之該值，如藉由ELISA或藉由流式細胞量測術所量測。替代地或另外，抗體可結合於SEQ ID NO: 254-262之蛋白中之一或多者或每一者，視情況至少結合於SEQ ID NO: 257之蛋白，其中EC50比參考抗體Bc8.111之EC50高不超過50、10、9、8、7、6、5、4、3或2倍或小於或等於該參考抗體之該值，如藉由ELISA或藉由流式細胞量測術所量測。
在一些實施例中，如此部分中所述之抗體可具有或保持針對HBV基因型A、B、C及/或D (視情況全部A、B、C及D)之活體外中和活性。舉例而言，如此部分中所述之抗體可具有或保持針對HBV基因型D之活體外中和活性，例如，其中IC50 值為≤100 pg/ml，視情況≤10 pg/ml。
在另一實施例中，當使用相同分析(例如，如本文所述之活體外中和分析)評定時，抗體可具有HBV基因型A、B、C及/或D，視情況至少D，視情況全部A、B、C及D之中和的IC50 值，其比針對相同基因型的參考抗體Bc8.111之IC50 值高不超過50、10、9、8、7、6、5、4、3或2倍，或小於或等於該參考抗體之該值。
在另一實施例中，當使用相同分析(例如，如本文所述之分析)評定時，抗體可具有或保持針對HBV基因型A、B、C及/或D之參考抗體Bc8.111的活體內中和活性的至少50%、60%、70%、75%、80%、85%、90%、95%或100%。
視情況，抗體可活體內遏制例如感染有HBV基因型A、B、C或D，視情況D之個體的病毒之病毒血症。視情況，當使用相同分析(例如，如本文所述之分析)評定時，抗體可具有或保持針對HBV基因型A、B、C及/或D之參考抗體Bc8.111的活體內病毒血症遏制活性的至少50%、60%、70%、75%、80%、85%、90%、95%或100%。
F. 在一個態樣中，本發明提供一種抗體，其包含：VH域，其包含至少一個、至少兩個或全部三個選自以下之VH CDR序列：(a) CDR-H1，其包含SEQ ID NO: 91之胺基酸序列；b) CDR-H2，其包含SEQ ID NO: 92之胺基酸序列；及(c) CDR-H3，其包含SEQ ID NO: 93之胺基酸序列。在另一態樣中，抗體包含VH域，其包含以下CDR：(a) CDR-H1，其包含SEQ ID NO: 91之胺基酸序列；(b) CDR-H2，其包含SEQ ID NO: 92之胺基酸序列；及(c) CDR-H3，其包含SEQ ID NO: 93之胺基酸序列；或其變體，其中一或多個CDR-H1、CDR-H2或CDR-H3中之一個、兩個或三個胺基酸經另一胺基酸取代。
在一個態樣中，VH域可進一步包含選自以下之一或多個重鏈構架序列：(a) SEQ ID NO: 97之重鏈構架區1 (HC-FR1)或與其具有至少85%、86%、87%、88%、89%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%或99%序列一致性的變體，(b) SEQ ID NO: 98之重鏈構架區2 (HC-FR2)或與其具有至少85%、86%、87%、88%、89%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%或99%序列一致性的變體，(c) SEQ ID NO: 99重鏈構架區3 (HC-FR3)或與其具有至少85%、86%、87%、88%、89%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%或99%序列一致性的變體，及(d) SEQ ID NO: 100之重鏈構架區4 (HC-FR4)或與其具有至少85%、86%、87%、88%、89%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%或99%序列一致性的變體。視情況，VH域包含如(a)至(d)中所定義之重鏈構架序列中之每一者。視情況，序列一致性百分比為95%。視情況，序列一致性百分比為98%。
在另一態樣中，抗S-HBs抗體包含與SEQ ID NO: 106之胺基酸序列具有至少90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%序列一致性的重鏈可變域(VH)序列。在一個態樣中，抗S-HBs抗體包含與SEQ ID NO: 106之胺基酸序列具有至少95%序列一致性的重鏈可變域(VH)序列。在某些態樣中，具有至少90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%或99%一致性之VH序列相對於參考序列含有取代(例如保守性取代)、插入或缺失，但包含該序列之抗S-HBs抗體保持結合於S-HBs之能力。在某些態樣中，SEQ ID NO: 106中總共1至10個胺基酸已經取代、插入及/或缺失。在某些態樣中，取代、插入或缺失發生在CDR外部之區中(亦即在FR中)。視情況，抗S-HBs抗體包含SEQ ID NO: 106中之VH序列，包括彼序列之轉譯後修飾。在一個特定態樣中，VH包含一個、兩個或三個選自以下之CDR：(a) CDR-H1，其包含SEQ ID NO: 91之胺基酸序列；(b) CDR-H2，其包含SEQ ID NO: 92之胺基酸序列；及(c) CDR-H3，其包含SEQ ID NO: 93之胺基酸序列。
在另一態樣中，抗S-HBs抗體包含SEQ ID NO: 106之VH之重鏈CDR序列中之一或多者。在一個態樣中，抗S-HBs抗體包含一或多個(較佳全部三個) SEQ ID NO: 106之VH域之重鏈CDR胺基酸序列及與SEQ ID NO: 106之VH域之構架胺基酸序列至少85%、86%、87%、88%、89%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%序列一致的構架。視情況，序列一致性為95%或98%。
在另一態樣中，本發明提供一種抗體，其包含：包含至少一個、至少兩個或全部三個選自以下之VL CDR序列的VL域：(a)包含SEQ ID NO: 94之胺基酸序列的CDR-L1；(b)包含SEQ ID NO: 95之胺基酸序列的CDR-L2；及(c)包含SEQ ID NO: 96之胺基酸序列的CDR-L3。在另一態樣中，抗體包含VL域，其包含以下CDR：(a) CDR-L1，其包含SEQ ID NO: 94之胺基酸序列；(b) CDR-L2，其包含SEQ ID NO: 95之胺基酸序列；及(c) CDR-L3，其包含SEQ ID NO: 96之胺基酸序列；或其變體，其中CDR-L1、CDR-L2或CDR-L3中之一或多者中之一個、兩個或三個胺基酸經另一胺基酸取代。
在一個態樣中，抗S-HBs抗體VL域可進一步包含一或多個輕鏈構架序列，其選自(a) SEQ ID NO: 101之輕鏈構架區1 (LC-FR1)或與其具有至少85%、86%、87%、88%、89%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%或99%序列一致性的變體，(b) SEQ ID NO: 102之輕鏈構架區2 (LC-FR2)或與其具有至少85%、86%、87%、88%、89%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%或99%序列一致性的變體，(c) SEQ ID NO: 103之輕鏈構架區3 (LC-FR3)或與其具有至少85%、86%、87%、88%、89%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%或99%序列一致性的變體，及(d) SEQ ID NO: 104之輕鏈構架區4 (LC-FR4)或與其具有至少85%、86%、87%、88%、89%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%或99%序列一致性的變體。視情況，VH域包含如(a)至(d)中所定義之重鏈構架序列中之每一者。視情況，序列一致性百分比為95%。視情況，序列一致性百分比為98%。
在另一態樣中，提供一種抗S-HBs抗體，其中該抗體包含與SEQ ID NO: 105之胺基酸序列具有至少90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%序列一致性的輕鏈可變域(VL)序列。在一個態樣中，抗S-HBs抗體包含輕鏈可變域(VL)序列，其與胺基酸序列SEQ ID NO: 105具有至少95%序列一致性。在某些態樣中，具有至少90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%或99%一致性之VL序列相對於參考序列含有取代(例如保守性取代)、插入或缺失，但包含該序列之抗S-HBs抗體保持結合於S-HBs之能力。在某些態樣中，SEQ ID NO: 105中總共1至10個胺基酸已經取代、插入及/或缺失。在某些態樣中，取代、插入或缺失發生在CDR外部之區中(亦即在FR中)。視情況，抗S-HBs抗體包含SEQ ID NO: 105中之VL序列，包括彼序列之轉譯後修飾。在一個特定態樣中，VL包含一個、兩個或三個選自以下之CDR：(a) CDR-L1，其包含SEQ ID NO: 94之胺基酸序列；(b) CDR-L2，其包含SEQ ID NO: 95之胺基酸序列；及(c) CDR-L3，其包含SEQ ID NO: 96之胺基酸序列。
在另一實施例中，抗S-HBs抗體包含SEQ ID NO: 105之VL的CDR序列中之一或多者。在一個態樣中，抗S-HBs抗體包含一或多個(較佳全部三個) SEQ ID NO: 105之VL域之輕鏈CDR胺基酸序列及與SEQ ID NO: 105之VL域之構架胺基酸序列至少85%、86%、87%、88%、89%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%序列一致性的構架。視情況，序列一致性為95%或98%。
在另一態樣中，提供一種抗S-HBs抗體，其中該抗體包含如上文所提供之態樣中之任一者中的VH序列及如上文所提供之態樣中之任一者中的VL序列。
舉例而言，在一個例示性實施例中，抗體包含VH域，其包含SEQ ID NO: 93之CDR-H3；及VL域，其包含SEQ ID NO: 96之CDR-L3。VH域視情況進一步包含SEQ ID NO: 92之CDR-H2。
在另一例示性實施例中，抗體包含： i)包含以下CDR之VH域：(a) CDR-H1，其包含SEQ ID NO: 91之胺基酸序列；(b) CDR-H2，其包含SEQ ID NO: 92之胺基酸序列；及(c) CDR-H3，其包含SEQ ID NO: 93之胺基酸序列；或其變體，其中CDR-H1、CDR-H2或CDR-H3中之一或多者中之一個、兩個或三個胺基酸經另一胺基酸取代；及 ii)包含以下CDR之VL域：(a) CDR-L1，其包含SEQ ID NO: 94之胺基酸序列；(b) CDR-L2，其包含SEQ ID NO: 95之胺基酸序列；及(c) CDR-L3，其包含SEQ ID NO: 96之胺基酸序列；或其變體，其中CDR-L1、CDR-L2或CDR-L3中之一或多者中之一個、兩個或三個胺基酸經另一胺基酸取代。
在另一例示性實施例中，抗體包含： i)與胺基酸序列SEQ ID NO: 106具有至少90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%序列一致性的重鏈可變域(VH)序列；及 ii)與胺基酸序列SEQ ID NO: 105具有至少90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%序列一致性的輕鏈可變域(VL)序列。
在另一例示性實施例中，抗S-HBs抗體包含：(a) CDR-H1，其包含SEQ ID NO: 91之胺基酸序列；(b) CDR-H2，其包含SEQ ID NO: 92之胺基酸序列；(c) CDR-H3，其包含SEQ ID NO: 93之胺基酸序列；(d) CDR-L1，其包含SEQ ID NO: 94之胺基酸序列；(e) CDR-L2，其包含SEQ ID NO: 95之胺基酸序列；及(f) CDR-L3，其包含SEQ ID NO: 96之胺基酸序列，及與SEQ ID NO: 106之胺基酸序列具有至少90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%序列一致性之VH域，及與SEQ ID NO: 105之胺基酸序列具有至少90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%序列一致性的VL域。在一個態樣中，VH域與SEQ ID NO: 106之胺基酸序列具有至少95%序列一致性。在一個態樣中，VL域與SEQ ID NO: 105之胺基酸序列具有至少95%序列一致性。在一個實施例中，抗體特異性結合於S-HBs。在另一實施例中，抗體結合於滿足以下解離常數(KD)之S-HBs：當與包含SEQ ID NO: 106之VH序列及SEQ ID NO: 105之VL序列的抗體之解離常數(KD)相比時，解離常數降低至多10倍或增加至多10倍。
在一個態樣中，抗體包含分別於SEQ ID NO: 106及SEQ ID NO: 105中VH及VL序列，包括彼等序列之轉譯後修飾。
在另一態樣中，抗體可包含SEQ ID NO: 107之全長輕鏈及/或SEQ ID NO: 108或268之全長重鏈。
在另一態樣中，本發明提供一種抗體，其與本文所提供之抗S-HBs抗體結合於相同抗原決定基。舉例而言，在某些態樣中，提供一種抗體，其與包含SEQ ID NO: 106之VH序列及SEQ ID NO: 105之VL序列的抗S-HBs抗體結合於相同抗原決定基。在某些態樣中，提供結合於SEQ ID NO: 253之S-HBs之以下殘基中之一或多者的抗體：W156及/或R169。視情況，抗體可另外結合於I152及/或C138中之一或多者。抗體可包含如上文所定義之序列中之任一者。
在另一態樣中，本發明提供一種與本文所提供之抗S-HBs抗體競爭結合於S-HBs之抗體。
在一些實施例中，當在相同分析，例如ELISA分析或流式細胞量測術分析中評定時，如此部分中所述之抗體可具有或保持參考抗體Bc8.104與S-HBs (例如SEQ ID NO: 253)的結合活性之至少50%、60%、70%、75%、80%、85%、90%、95%或100%。
另外或替代地，當在相同分析，例如ELISA分析或流式細胞量測術分析中評定時，如此部分中所述之抗體可具有或保持參考抗體Bc8.104與SEQ ID NO: 254-262之蛋白中之一或多者(例如至少SEQ ID NO: 257)，視情況SEQ ID NO: 254至262中之蛋白中之每一者之結合活性的至少50%、60%、70%、75%、80%、85%、90%、95%或100%。
參考抗體Bc8.104具有SEQ ID NO: 106之VH序列及SEQ ID NO: 105之VL序列。其具有SEQ ID NO: 108或268之全長重鏈及SEQ ID NO: 107之全長輕鏈。如實例中所用，SEQ ID NO: 268包含由載體LT615368.1表現之IgG1恆定區。
在一些實施例中，當在相同分析中評定時，此部分中所述之抗體結合於(例如SEQ ID NO: 253)之S-HBs，其中KD 值可比針對相同抗原之參考抗體Bc8.104之KD 值高不超過50、10、9、8、7、6、5、4、3或2倍，或小於或等於該參考抗體之該KD 值。
另外或替代地，此部分中所述之抗體可結合於SEQ ID NO: 254-262中之一或多者(例如至少SEQ ID NO: 257)，視情況SEQ ID NO: 254-262之蛋白中之每一者，其中KD 值可比針對相同抗原之參考抗體Bc8.104之KD 值高不超過50、10、9、8、7、6、5、4、3或2倍，或小於或等於該參考抗體之該KD 值。
在一些實施例中，如在此部分中所述之抗體可結合於(例如SEQ ID NO: 253)之S-HBs，其中EC50比參考抗體Bc8.104之EC50高不超過50、10、9、8、7、6、5、4、3或2倍或小於或等於該參考抗體之該值，如藉由ELISA或藉由流式細胞量測術所量測。替代地或另外，抗體可結合於SEQ ID NO: 254-262之蛋白中之一或多者或每一者，視情況至少結合於SEQ ID NO: 257之蛋白，其中EC50比參考抗體Bc8.104之EC50高不超過50、10、9、8、7、6、5、4、3或2倍或小於或等於該參考抗體之該值，如藉由ELISA或藉由流式細胞量測術所量測。
在一些實施例中，如此部分中所述之抗體可具有或保持針對HBV基因型A、B、C及/或D (視情況全部A、B、C及D)之活體外中和活性。舉例而言，如此部分中所述之抗體可具有或保持針對HBV基因型D之活體外中和活性，例如，其中IC50 值為≤100 pg/ml，視情況≤10 pg/ml。
在另一實施例中，當使用相同分析(例如，如本文所述之活體外中和分析)評定時，抗體可具有HBV基因型A、B、C及/或D，視情況至少D，視情況全部A、B、C及D之中和的IC50 值，其比針對相同基因型的參考抗體Bc8.104之IC50 值高不超過50、10、9、8、7、6、5、4、3或2倍，或小於或等於該參考抗體之該值。
在另一實施例中，當使用相同分析(例如如本文所述之分析)評定時，抗體可具有或保持針對HBV基因型A、B、C及/或D，視情況至少D，視情況全部A、B、C及D之參考抗體Bc8.104之中和活性的至少50%、60%、70%、75%、80%、85%、90%、95%或100%。
視情況，抗體可活體內遏制例如感染有HBV基因型A、B、C或D，視情況D之個體的病毒之病毒血症。視情況，當使用相同分析(例如如本文所述之分析)評定時，抗體可具有或保持針對HBV基因型A、B、C及/或D，視情況至少D，視情況全部A、B、C及D之參考抗體Bc8.104之活體內病毒血症遏制活性的至少50%、60%、70%、75%、80%、85%、90%、95%或100%。
G. 在一個態樣中，本發明提供一種抗體，其包含：VH域，其包含至少一個、至少兩個或全部三個選自以下之VH CDR序列：(a) CDR-H1，其包含SEQ ID NO: 109之胺基酸序列；b) CDR-H2，其包含SEQ ID NO: 110之胺基酸序列；及(c) CDR-H3，其包含SEQ ID NO: 111之胺基酸序列。在另一態樣中，抗體包含VH域，其包含以下CDR：(a) CDR-H1，其包含SEQ ID NO: 109之胺基酸序列；(b) CDR-H2，其包含SEQ ID NO: 110之胺基酸序列；及(c) CDR-H3，其包含SEQ ID NO: 111之胺基酸序列；或其變體，其中一或多個CDR-H1、CDR-H2或CDR-H3中之一個、兩個或三個胺基酸經另一胺基酸取代。
在一個態樣中，VH域可進一步包含選自以下之一或多個重鏈構架序列：(a) SEQ ID NO: 115之重鏈構架區1 (HC-FR1)或與其具有至少85%、86%、87%、88%、89%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%或99%序列一致性的變體，(b) SEQ ID NO: 116之重鏈構架區2 (HC-FR2)或與其具有至少85%、86%、87%、88%、89%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%或99%序列一致性的變體，(c) SEQ ID NO: 117重鏈構架區3 (HC-FR3)或與其具有至少85%、86%、87%、88%、89%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%或99%序列一致性的變體，及(d) SEQ ID NO: 118之重鏈構架區4 (HC-FR4)或與其具有至少85%、86%、87%、88%、89%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%或99%序列一致性的變體。視情況，VH域包含如(a)至(d)中所定義之重鏈構架序列中之每一者。視情況，序列一致性百分比為95%。視情況，序列一致性百分比為98%。
在另一態樣中，抗S-HBs抗體包含與SEQ ID NO: 124之胺基酸序列具有至少90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%序列一致性的重鏈可變域(VH)序列。在一個態樣中，抗S-HBs抗體包含與SEQ ID NO: 124之胺基酸序列具有至少95%序列一致性的重鏈可變域(VH)序列。在某些態樣中，具有至少90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%或99%一致性之VH序列相對於參考序列含有取代(例如保守性取代)、插入或缺失，但包含該序列之抗S-HBs抗體保持結合於S-HBs之能力。在某些態樣中，SEQ ID NO: 124中總共1至10個胺基酸已經取代、插入及/或缺失。在某些態樣中，取代、插入或缺失發生在CDR外部之區中(亦即在FR中)。視情況，抗S-HBs抗體包含SEQ ID NO: 124中之VH序列，包括彼序列之轉譯後修飾。在一個特定態樣中，VH包含一個、兩個或三個選自以下之CDR：(a) CDR-H1，其包含SEQ ID NO: 109之胺基酸序列；(b) CDR-H2，其包含SEQ ID NO: 110之胺基酸序列；及(c) CDR-H3，其包含SEQ ID NO: 111之胺基酸序列。
在另一態樣中，抗S-HBs抗體包含SEQ ID NO: 124之VH之重鏈CDR序列中之一或多者。在一個態樣中，抗S-HBs抗體包含一或多個(較佳全部三個) SEQ ID NO: 124之VH域之重鏈CDR胺基酸序列及與SEQ ID NO: 124之VH域之構架胺基酸序列至少85%、86%、87%、88%、89%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%序列一致的構架。視情況，序列一致性為95%或98%。
在另一態樣中，本發明提供一種抗體，其包含：包含至少一個、至少兩個或全部三個選自以下之VL CDR序列的VL域：(a)包含SEQ ID NO: 112之胺基酸序列的CDR-L1；(b)包含SEQ ID NO: 113之胺基酸序列的CDR-L2；及(c)包含SEQ ID NO: 114之胺基酸序列的CDR-L3。在另一態樣中，抗體包含VL域，其包含以下CDR：(a) CDR-L1，其包含SEQ ID NO: 112之胺基酸序列；(b) CDR-L2，其包含SEQ ID NO: 113之胺基酸序列；及(c) CDR-L3，其包含SEQ ID NO: 114之胺基酸序列；或其變體，其中CDR-L1、CDR-L2或CDR-L3中之一或多者中之一個、兩個或三個胺基酸經另一胺基酸取代。
在一個態樣中，抗S-HBs抗體VL域可進一步包含一或多個輕鏈構架序列，其選自(a) SEQ ID NO: 119之輕鏈構架區1 (LC-FR1)或與其具有至少85%、86%、87%、88%、89%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%或99%序列一致性的變體，(b) SEQ ID NO: 120之輕鏈構架區2 (LC-FR2)或與其具有至少85%、86%、87%、88%、89%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%或99%序列一致性的變體，(c) SEQ ID NO: 121之輕鏈構架區3 (LC-FR3)或與其具有至少85%、86%、87%、88%、89%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%或99%序列一致性的變體，及(d) SEQ ID NO: 122之輕鏈構架區4 (LC-FR4)或與其具有至少85%、86%、87%、88%、89%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%或99%序列一致性的變體。視情況，VL域包含如(a)至(d)中所定義之重鏈構架序列中之每一者。視情況，序列一致性百分比為95%。視情況，序列一致性百分比為98%。
在另一態樣中，提供一種抗S-HBs抗體，其中該抗體包含與SEQ ID NO: 123之胺基酸序列具有至少90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%序列一致性的輕鏈可變域(VL)序列。在一個態樣中，抗S-HBs抗體包含輕鏈可變域(VL)序列，其與胺基酸序列SEQ ID NO: 123具有至少95%序列一致性。在某些態樣中，具有至少90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%或99%一致性之VL序列相對於參考序列含有取代(例如保守性取代)、插入或缺失，但包含該序列之抗S-HBs抗體保持結合於S-HBs之能力。在某些態樣中，SEQ ID NO: 123中總共1至10個胺基酸已經取代、插入及/或缺失。在某些態樣中，取代、插入或缺失發生在CDR外部之區中(亦即在FR中)。視情況，抗S-HBs抗體包含SEQ ID NO: 123中之VL序列，包括彼序列之轉譯後修飾。在一個特定態樣中，VL包含一個、兩個或三個選自以下之CDR：(a) CDR-L1，其包含SEQ ID NO: 112之胺基酸序列；(b) CDR-L2，其包含SEQ ID NO: 113之胺基酸序列；及(c) CDR-L3，其包含SEQ ID NO: 114之胺基酸序列。
在另一實施例中，抗S-HBs抗體包含SEQ ID NO: 123之VL的CDR序列中之一或多者。在一個態樣中，抗S-HBs抗體包含一或多個(較佳全部三個) SEQ ID NO: 123之VL域之輕鏈CDR胺基酸序列及與SEQ ID NO: 123之VL域之構架胺基酸序列至少85%、86%、87%、88%、89%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%序列一致性的構架。視情況，序列一致性為95%或98%。
在另一態樣中，提供一種抗S-HBs抗體，其中該抗體包含如上文所提供之態樣中之任一者中的VH序列及如上文所提供之態樣中之任一者中的VL序列。
舉例而言，在一個例示性實施例中，抗體包含VH域，其包含SEQ ID NO: 111之CDR-H3；及VL域，其包含SEQ ID NO: 114之CDR-L3。VH域視情況進一步包含SEQ ID NO: 110之CDR-H2。
在另一例示性實施例中，抗體包含： i)包含以下CDR之VH域：(a) CDR-H1，其包含SEQ ID NO: 109之胺基酸序列；(b) CDR-H2，其包含SEQ ID NO: 110之胺基酸序列；及(c) CDR-H3，其包含SEQ ID NO: 111之胺基酸序列；或其變體，其中CDR-H1、CDR-H2或CDR-H3中之一或多者中之一個、兩個或三個胺基酸經另一胺基酸取代；及 ii)包含以下CDR之VL域：(a) CDR-L1，其包含SEQ ID NO: 112之胺基酸序列；(b) CDR-L2，其包含SEQ ID NO: 113之胺基酸序列；及(c) CDR-L3，其包含SEQ ID NO: 114之胺基酸序列；或其變體，其中CDR-L1、CDR-L2或CDR-L3中之一或多者中之一個、兩個或三個胺基酸經另一胺基酸取代。
在另一例示性實施例中，抗體包含： i)與胺基酸序列SEQ ID NO: 124具有至少90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%序列一致性的重鏈可變域(VH)序列；及 ii)與胺基酸序列SEQ ID NO: 123具有至少90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%序列一致性的輕鏈可變域(VL)序列。
在另一例示性實施例中，抗S-HBs抗體包含：(a) CDR-H1，其包含SEQ ID NO: 109之胺基酸序列；(b) CDR-H2，其包含SEQ ID NO: 110之胺基酸序列；(c) CDR-H3，其包含SEQ ID NO: 111之胺基酸序列；(d) CDR-L1，其包含SEQ ID NO: 112之胺基酸序列；(e) CDR-L2，其包含SEQ ID NO: 113之胺基酸序列；及(f) CDR-L3，其包含SEQ ID NO: 114之胺基酸序列，及與SEQ ID NO: 124之胺基酸序列具有至少90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%序列一致性之VH域，及與SEQ ID NO: 123之胺基酸序列具有至少90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%序列一致性的VL域。在一個態樣中，VH域與SEQ ID NO: 124之胺基酸序列具有至少95%序列一致性。在一個態樣中，VL域與SEQ ID NO: 123之胺基酸序列具有至少95%序列一致性。在一個實施例中，抗體特異性結合於S-HBs。在另一實施例中，抗體結合於滿足以下解離常數(KD)之S-HBs：當與包含SEQ ID NO: 124之VH序列及SEQ ID NO: 123之VL序列的抗體之解離常數(KD)相比時，解離常數降低至多10倍或增加至多10倍。
在一個態樣中，抗體包含分別於SEQ ID NO: 124及SEQ ID NO: 123中VH及VL序列，包括彼等序列之轉譯後修飾。
在另一態樣中，抗體可包含SEQ ID NO: 125之全長輕鏈及/或SEQ ID NO: 126或269之全長重鏈。
在另一態樣中，本發明提供一種抗體，其與本文所提供之抗S-HBs抗體結合於相同抗原決定基。舉例而言，在某些態樣中，提供一種抗體，其與包含SEQ ID NO: 124之VH序列及SEQ ID NO: 123之VL序列的抗S-HBs抗體結合於相同抗原決定基。在某些態樣中，提供結合於SEQ ID NO: 253之S-HBs之以下殘基中之一或多者的抗體：C137、C138及/或D144。視情況，抗體可進一步結合於P142、N146、T148、C149、I152及/或W156中之一或多者。抗體可包含如上文所定義之序列中之任一者。
在另一態樣中，本發明提供一種與本文所提供之抗S-HBs抗體競爭結合於S-HBs之抗體。
在一些實施例中，當在相同分析，例如ELISA分析或流式細胞量測術分析中評定時，如此部分中所述之抗體可具有或保持參考抗體Bv6.172與S-HBs (例如SEQ ID NO: 253)的結合活性之至少50%、60%、70%、75%、80%、85%、90%、95%或100%。
另外或替代地，當在相同分析，例如ELISA分析或流式細胞量測術分析中評定時，如此部分中所述之抗體可具有或保持參考抗體Bv6.172與SEQ ID NO: 254-262之蛋白中之一或多者(例如至少SEQ ID NO: 257)，視情況SEQ ID NO: 254至262中之蛋白中之每一者之結合活性的至少50%、60%、70%、75%、80%、85%、90%、95%或100%。
參考抗體Bv6.172具有VH序列SEQ ID NO: 124及VL序列SEQ ID NO: 123。其具有SEQ ID NO: 126或269之全長重鏈及SEQ ID NO: 125之全長輕鏈。如實例中所用，SEQ ID NO: 269包含由載體LT615368.1表現之IgG1恆定區。
在一些實施例中，當在相同分析中評定時，此部分中所述之抗體結合於(例如SEQ ID NO: 253)之S-HBs，其中KD 值可比針對相同抗原之參考抗體Bv6.172之KD 值高不超過50、10、9、8、7、6、5、4、3或2倍，或小於或等於該參考抗體之該KD 值。
另外或替代地，該抗體可結合於SEQ ID NO: 254-262中之一或多者(例如至少SEQ ID NO: 257)，視情況SEQ ID NO: 254-262之蛋白中之每一者，其中KD 值可比針對相同抗原之參考抗體Bv6.172之KD 值高不超過50、10、9、8、7、6、5、4、3或2倍，或小於或等於該參考抗體之該KD 值。
在一些實施例中，如在此部分中所述之抗體可結合於(例如SEQ ID NO: 253)之S-HBs，其中EC50比參考抗體Bv6.172之EC50高不超過50、10、9、8、7、6、5、4、3或2倍或小於或等於該參考抗體之該值，如藉由ELISA或藉由流式細胞量測術所量測。替代地或另外，抗體可結合於SEQ ID NO: 254-262之蛋白中之一或多者或每一者，視情況至少結合於SEQ ID NO: 257之蛋白，其中EC50比參考抗體Bv6.172之EC50高不超過50、10、9、8、7、6、5、4、3或2倍或小於或等於該參考抗體之該值，如藉由ELISA或藉由流式細胞量測術所量測。
在一些實施例中，如此部分中所述之抗體可具有或保持針對HBV基因型D之活體外中和活性，例如，其中IC50 值為≤100 pg/ml，視情況≤10 pg/ml。
在另一實施例中，當使用相同分析(例如，如本文所述之活體外中和分析)評定時，抗體可具有HBV基因型A、B、C及/或D之中和IC50 值，其比針對相同基因型之參考抗體Bv6.172的IC50 值高不超過50、10、9、8、7、6、5、4、3或2倍，或小於或等於該參考抗體之該值。
在另一實施例中，當使用相同分析(例如如本文所述之分析)評定時，抗體可具有或保持針對HBV基因型A、B、C及/或D，視情況至少D，視情況全部A、B、C及D之參考抗體Bv6.172之活體內中和活性的至少50%、60%、70%、75%、80%、85%、90%、95%或100%。
視情況，抗體可活體內遏制例如感染有HBV基因型A、B、C或D，視情況D之個體的病毒之病毒血症。視情況，當使用相同分析(例如如本文所述之分析)評定時，抗體可具有或保持針對HBV基因型A、B、C及/或D，視情況至少D，視情況全部A、B、C及D之參考抗體Bv6.172之活體內病毒血症遏制活性的至少50%、60%、70%、75%、80%、85%、90%、95%或100%。
H. 在一個態樣中，本發明提供一種抗體，其包含：VH域，其包含至少一個、至少兩個或全部三個選自以下之VH CDR序列：(a) CDR-H1，其包含SEQ ID NO: 127之胺基酸序列；b) CDR-H2，其包含SEQ ID NO: 128之胺基酸序列；及(c) CDR-H3，其包含SEQ ID NO: 129之胺基酸序列。在另一態樣中，抗體包含VH域，其包含以下CDR：(a) CDR-H1，其包含SEQ ID NO: 127之胺基酸序列；(b) CDR-H2，其包含SEQ ID NO: 128之胺基酸序列；及(c) CDR-H3，其包含SEQ ID NO: 129之胺基酸序列；或其變體，其中一或多個CDR-H1、CDR-H2或CDR-H3中之一個、兩個或三個胺基酸經另一胺基酸取代。
在一個態樣中，VH域可進一步包含選自以下之一或多個重鏈構架序列：(a) SEQ ID NO: 133之重鏈構架區1 (HC-FR1)或與其具有至少85%、86%、87%、88%、89%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%或99%序列一致性的變體，(b) SEQ ID NO: 134之重鏈構架區2 (HC-FR2)或與其具有至少85%、86%、87%、88%、89%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%或99%序列一致性的變體，(c) SEQ ID NO: 135重鏈構架區3 (HC-FR3)或與其具有至少85%、86%、87%、88%、89%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%或99%序列一致性的變體，及(d) SEQ ID NO: 136之重鏈構架區4 (HC-FR4)或與其具有至少85%、86%、87%、88%、89%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%或99%序列一致性的變體。視情況，VH域包含如(a)至(d)中所定義之重鏈構架序列中之每一者。視情況，序列一致性百分比為95%。視情況，序列一致性百分比為98%。
在另一態樣中，抗S-HBs抗體包含與SEQ ID NO: 142之胺基酸序列具有至少90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%序列一致性的重鏈可變域(VH)序列。在一個態樣中，抗S-HBs抗體包含與SEQ ID NO: 142之胺基酸序列具有至少95%序列一致性的重鏈可變域(VH)序列。在某些態樣中，具有至少90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%或99%一致性之VH序列相對於參考序列含有取代(例如保守性取代)、插入或缺失，但包含該序列之抗S-HBs抗體保持結合於S-HBs之能力。在某些態樣中，SEQ ID NO: 142中總共1至10個胺基酸已經取代、插入及/或缺失。在某些態樣中，取代、插入或缺失發生在CDR外部之區中(亦即在FR中)。視情況，抗S-HBs抗體包含SEQ ID NO: 142中之VH序列，包括彼序列之轉譯後修飾。在一個特定態樣中，VH包含一個、兩個或三個選自以下之CDR：(a) CDR-H1，其包含SEQ ID NO: 127之胺基酸序列；(b) CDR-H2，其包含SEQ ID NO: 128之胺基酸序列；及(c) CDR-H3，其包含SEQ ID NO: 129之胺基酸序列。
在另一態樣中，抗S-HBs抗體包含SEQ ID NO: 142之VH之重鏈CDR序列中之一或多者。在一個態樣中，抗S-HBs抗體包含一或多個(較佳全部三個) SEQ ID NO: 142之VH域之重鏈CDR胺基酸序列及與SEQ ID NO: 142之VH域之構架胺基酸序列至少85%、86%、87%、88%、89%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%序列一致的構架。視情況，序列一致性為95%或98%。
在另一態樣中，本發明提供一種抗體，其包含：包含至少一個、至少兩個或全部三個選自以下之VL CDR序列的VL域：(a)包含SEQ ID NO: 130之胺基酸序列的CDR-L1；(b)包含SEQ ID NO: 131之胺基酸序列的CDR-L2；及(c)包含SEQ ID NO: 132之胺基酸序列的CDR-L3。在另一態樣中，抗體包含VL域，其包含以下CDR：(a) CDR-L1，其包含SEQ ID NO: 130之胺基酸序列；(b) CDR-L2，其包含SEQ ID NO: 131之胺基酸序列；及(c) CDR-L3，其包含SEQ ID NO: 132之胺基酸序列；或其變體，其中CDR-L1、CDR-L2或CDR-L3中之一或多者中之一個、兩個或三個胺基酸經另一胺基酸取代。
在一個態樣中，抗S-HBs抗體VL域可進一步包含一或多個輕鏈構架序列，其選自(a) SEQ ID NO: 137之輕鏈構架區1 (LC-FR1)或與其具有至少85%、86%、87%、88%、89%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%或99%序列一致性的變體，(b) SEQ ID NO: 138之輕鏈構架區2 (LC-FR2)或與其具有至少85%、86%、87%、88%、89%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%或99%序列一致性的變體，(c) SEQ ID NO: 139之輕鏈構架區3 (LC-FR3)或與其具有至少85%、86%、87%、88%、89%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%或99%序列一致性的變體，及(d) SEQ ID NO: 140之輕鏈構架區4 (LC-FR4)或與其具有至少85%、86%、87%、88%、89%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%或99%序列一致性的變體。視情況，VL域包含如(a)至(d)中所定義之重鏈構架序列中之每一者。視情況，序列一致性百分比為95%。視情況，序列一致性百分比為98%。
在另一態樣中，提供一種抗S-HBs抗體，其中該抗體包含與SEQ ID NO: 141之胺基酸序列具有至少90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%序列一致性的輕鏈可變域(VL)序列。在一個態樣中，抗S-HBs抗體包含輕鏈可變域(VL)序列，其與胺基酸序列SEQ ID NO: 141具有至少95%序列一致性。在某些態樣中，具有至少90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%或99%一致性之VL序列相對於參考序列含有取代(例如保守性取代)、插入或缺失，但包含該序列之抗S-HBs抗體保持結合於S-HBs之能力。在某些態樣中，SEQ ID NO: 141中總共1至10個胺基酸已經取代、插入及/或缺失。在某些態樣中，取代、插入或缺失發生在CDR外部之區中(亦即在FR中)。視情況，抗S-HBs抗體包含SEQ ID NO: 141中之VL序列，包括彼序列之轉譯後修飾。在一個特定態樣中，VL包含一個、兩個或三個選自以下之CDR：(a) CDR-L1，其包含SEQ ID NO: 130之胺基酸序列；(b) CDR-L2，其包含SEQ ID NO: 131之胺基酸序列；及(c) CDR-L3，其包含SEQ ID NO: 132之胺基酸序列。
在另一實施例中，抗S-HBs抗體包含SEQ ID NO: 141之VL的CDR序列中之一或多者。在一個態樣中，抗S-HBs抗體包含一或多個(較佳全部三個) SEQ ID NO: 141之VL域之輕鏈CDR胺基酸序列及與SEQ ID NO: 141之VL域之構架胺基酸序列至少85%、86%、87%、88%、89%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%序列一致性的構架。視情況，序列一致性為95%或98%。
在另一態樣中，提供一種抗S-HBs抗體，其中該抗體包含如上文所提供之態樣中之任一者中的VH序列及如上文所提供之態樣中之任一者中的VL序列。
舉例而言，在一個例示性實施例中，抗體包含VH域，其包含SEQ ID NO: 129之CDR-H3；及VL域，其包含SEQ ID NO: 132之CDR-L3。VH域視情況進一步包含SEQ ID NO: 128之CDR-H2。
在另一例示性實施例中，抗體包含： i)包含以下CDR之VH域：(a) CDR-H1，其包含SEQ ID NO: 127之胺基酸序列；(b) CDR-H2，其包含SEQ ID NO: 128之胺基酸序列；及(c) CDR-H3，其包含SEQ ID NO: 129之胺基酸序列；或其變體，其中CDR-H1、CDR-H2或CDR-H3中之一或多者中之一個、兩個或三個胺基酸經另一胺基酸取代；及 ii)包含以下CDR之VL域：(a) CDR-L1，其包含SEQ ID NO: 130之胺基酸序列；(b) CDR-L2，其包含SEQ ID NO: 131之胺基酸序列；及(c) CDR-L3，其包含SEQ ID NO: 132之胺基酸序列；或其變體，其中CDR-L1、CDR-L2或CDR-L3中之一或多者中之一個、兩個或三個胺基酸經另一胺基酸取代。
在另一例示性實施例中，抗體包含： i)與胺基酸序列SEQ ID NO: 142具有至少90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%序列一致性的重鏈可變域(VH)序列；及 ii)與胺基酸序列SEQ ID NO: 141具有至少90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%序列一致性的輕鏈可變域(VL)序列。
在另一例示性實施例中，抗S-HBs抗體包含：(a) CDR-H1，其包含SEQ ID NO: 127之胺基酸序列；(b) CDR-H2，其包含SEQ ID NO: 128之胺基酸序列；(c) CDR-H3，其包含SEQ ID NO: 129之胺基酸序列；(d) CDR-L1，其包含SEQ ID NO: 130之胺基酸序列；(e) CDR-L2，其包含SEQ ID NO: 131之胺基酸序列；及(f) CDR-L3，其包含SEQ ID NO: 132之胺基酸序列，及與SEQ ID NO: 142之胺基酸序列具有至少90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%序列一致性之VH域，及與SEQ ID NO: 141之胺基酸序列具有至少90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%序列一致性的VL域。在一個態樣中，VH域與SEQ ID NO: 142之胺基酸序列具有至少95%序列一致性。在一個態樣中，VL域與SEQ ID NO: 141之胺基酸序列具有至少95%序列一致性。在一個實施例中，抗體特異性結合於S-HBs。在另一實施例中，抗體結合於滿足以下解離常數(KD)之S-HBs：當與包含SEQ ID NO: 142之VH序列及SEQ ID NO: 141之VL序列的抗體之解離常數(KD)相比時，解離常數降低至多10倍或增加至多10倍。
在一個態樣中，抗體包含分別於SEQ ID NO: 142及SEQ ID NO: 141中VH及VL序列，包括彼等序列之轉譯後修飾。
在另一態樣中，抗體可包含SEQ ID NO: 143之全長輕鏈及/或SEQ ID NO: 144或270之全長重鏈。
在另一態樣中，本發明提供一種抗體，其與本文所提供之抗S-HBs抗體結合於相同抗原決定基。舉例而言，在某些態樣中，提供一種抗體，其與包含SEQ ID NO: 142之VH序列及SEQ ID NO: 141之VL序列的抗S-HBs抗體結合於相同抗原決定基。在某些態樣中，提供結合於SEQ ID NO: 253之S-HBs之以下殘基中之一或多者的抗體：C137、C138及/或C139。視情況，抗體亦結合於C124，視情況進一步結合於W156，且視情況結合於N146、T148及/或I152中之一或多者。抗體可包含如上文所定義之序列中之任一者。
在另一態樣中，本發明提供一種與本文所提供之抗S-HBs抗體競爭結合於S-HBs之抗體。
在一些實施例中，當在相同分析，例如ELISA或流式細胞量測術分析中評定時，如此部分中所述之抗體可具有或保持參考抗體Bv4.115與S-HBs (例如SEQ ID NO: 253)的結合活性之至少50%、60%、70%、75%、80%、85%、90%、95%或100%。
另外或替代地，當在相同分析，例如ELISA或流式細胞量測術分析中評定時，如此部分中所述之抗體可具有或保持參考抗體Bv4.115與SEQ ID NO: 254-262之蛋白中之一或多者(例如至少SEQ ID NO: 257)，視情況SEQ ID NO: 254至262中之蛋白中之每一者之結合活性的至少50%、60%、70%、75%、80%、85%、90%、95%或100%。
參考抗體Bv4.115具有VH序列SEQ ID NO: 142及VL序列SEQ ID NO: 141。其具有SEQ ID NO: 144或270之全長重鏈及SEQ ID NO: 143之全長輕鏈。如實例中所用，SEQ ID NO: 270包含由載體LT615368.1表現之IgG1恆定區。
在一些實施例中，當在相同分析中評定時，此部分中所述之抗體結合於(例如SEQ ID NO: 253)之S-HBs，其中KD 值可比針對相同抗原之參考抗體Bv4.115之KD 值高不超過50、10、9、8、7、6、5、4、3或2倍，或小於或等於該參考抗體之該KD 值。
另外或替代地，該抗體可結合於SEQ ID NO: 254-262中之一或多者(例如至少SEQ ID NO: 257)，視情況SEQ ID NO: 254-262之蛋白中之每一者，其中KD 值可比針對相同抗原之參考抗體Bv4.115之KD 值高不超過50、10、9、8、7、6、5、4、3或2倍，或小於或等於該參考抗體之該KD 值。
在一些實施例中，如在此部分中所述之抗體可結合於(例如SEQ ID NO: 253)之S-HBs，其中EC50比參考抗體Bv4.115之EC50高不超過50、10、9、8、7、6、5、4、3或2倍或小於或等於該參考抗體之該值，如藉由ELISA或藉由流式細胞量測術所量測。替代地或另外，抗體可結合於SEQ ID NO: 254-262之蛋白中之一或多者或每一者，視情況至少結合於SEQ ID NO: 257之蛋白，其中EC50比參考抗體Bv4.115之EC50高不超過50、10、9、8、7、6、5、4、3或2倍或小於或等於該參考抗體之該值，如藉由ELISA或藉由流式細胞量測術所量測。
在一些實施例中，如此部分中所述之抗體可具有或保持針對HBV基因型A、B、C及/或D (視情況全部A、B、C及D)之活體外中和活性。舉例而言，如此部分中所述之抗體可具有或保持針對HBV基因型D之活體外中和活性，例如，其中IC50 值為≤100 pg/ml，視情況≤10 pg/ml。
在另一實施例中，當使用相同分析(例如，如本文所述之活體外中和分析)評定時，抗體可具有HBV基因型A、B、C及/或D，視情況至少D，視情況全部A、B、C及D之中和的IC50 值，其比針對相同基因型的參考抗體Bv4.115之IC50 值高不超過50、10、9、8、7、6、5、4、3或2倍，或小於或等於該參考抗體之該值。
在另一實施例中，當使用相同分析(例如如本文所述之分析)評定時，抗體可具有或保持針對HBV基因型A、B、C及/或D，視情況至少D，視情況全部A、B、C及D之參考抗體Bv4.115之活體內中和活性的至少50%、60%、70%、75%、80%、85%、90%、95%或100%。
視情況，抗體可活體內遏制例如感染有HBV基因型A、B、C或D，視情況D之個體的病毒之病毒血症。視情況，當使用相同分析(例如如本文所述之分析)評定時，抗體可具有或保持針對HBV基因型A、B、C及/或D，視情況至少D，視情況全部A、B、C及D之參考抗體Bv4.115之活體內病毒血症遏制活性的至少50%、60%、70%、75%、80%、85%、90%、95%或100%。
I. 在一個態樣中，本發明提供一種抗體，其包含：VH域，其包含至少一個、至少兩個或全部三個選自以下之VH CDR序列：(a) CDR-H1，其包含SEQ ID NO: 145之胺基酸序列；b) CDR-H2，其包含SEQ ID NO: 146之胺基酸序列；及(c) CDR-H3，其包含SEQ ID NO: 147之胺基酸序列。在另一態樣中，抗體包含VH域，其包含以下CDR：(a) CDR-H1，其包含SEQ ID NO: 145之胺基酸序列；(b) CDR-H2，其包含SEQ ID NO: 146之胺基酸序列；及(c) CDR-H3，其包含SEQ ID NO: 147之胺基酸序列；或其變體，其中一或多個CDR-H1、CDR-H2或CDR-H3中之一個、兩個或三個胺基酸經另一胺基酸取代。
在一個態樣中，VH域可進一步包含選自以下之一或多個重鏈構架序列：(a) SEQ ID NO: 151之重鏈構架區1 (HC-FR1)或與其具有至少85%、86%、87%、88%、89%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%或99%序列一致性的變體，(b) SEQ ID NO: 152之重鏈構架區2 (HC-FR2)或與其具有至少85%、86%、87%、88%、89%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%或99%序列一致性的變體，(c) SEQ ID NO: 153重鏈構架區3 (HC-FR3)或與其具有至少85%、86%、87%、88%、89%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%或99%序列一致性的變體，及(d) SEQ ID NO: 154之重鏈構架區4 (HC-FR4)或與其具有至少85%、86%、87%、88%、89%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%或99%序列一致性的變體。視情況，VH域包含如(a)至(d)中所定義之重鏈構架序列中之每一者。視情況，序列一致性百分比為95%。視情況，序列一致性百分比為98%。
在另一態樣中，抗S-HBs抗體包含與SEQ ID NO: 160之胺基酸序列具有至少90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%序列一致性的重鏈可變域(VH)序列。在一個態樣中，抗S-HBs抗體包含與SEQ ID NO: 160之胺基酸序列具有至少95%序列一致性的重鏈可變域(VH)序列。在某些態樣中，具有至少90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%或99%一致性之VH序列相對於參考序列含有取代(例如保守性取代)、插入或缺失，但包含該序列之抗S-HBs抗體保持結合於S-HBs之能力。在某些態樣中，SEQ ID NO: 160中總共1至10個胺基酸已經取代、插入及/或缺失。在某些態樣中，取代、插入或缺失發生在CDR外部之區中(亦即在FR中)。視情況，抗S-HBs抗體包含SEQ ID NO: 160中之VH序列，包括彼序列之轉譯後修飾。在一個特定態樣中，VH包含一個、兩個或三個選自以下之CDR：(a) CDR-H1，其包含SEQ ID NO: 145之胺基酸序列；(b) CDR-H2，其包含SEQ ID NO: 146之胺基酸序列；及(c) CDR-H3，其包含SEQ ID NO: 147之胺基酸序列。
在另一態樣中，抗S-HBs抗體包含SEQ ID NO: 160之VH之重鏈CDR序列中之一或多者。在一個態樣中，抗S-HBs抗體包含一或多個(較佳全部三個) SEQ ID NO: 160之VH域之重鏈CDR胺基酸序列及與SEQ ID NO: 160之VH域之構架胺基酸序列至少85%、86%、87%、88%、89%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%序列一致的構架。視情況，序列一致性為95%或98%。
在另一態樣中，本發明提供一種抗體，其包含：包含至少一個、至少兩個或全部三個選自以下之VL CDR序列的VL域：(a)包含SEQ ID NO: 148之胺基酸序列的CDR-L1；(b)包含SEQ ID NO: 149之胺基酸序列的CDR-L2；及(c)包含SEQ ID NO: 150之胺基酸序列的CDR-L3。在另一態樣中，抗體包含VL域，其包含以下CDR：(a) CDR-L1，其包含SEQ ID NO: 148之胺基酸序列；(b) CDR-L2，其包含SEQ ID NO: 149之胺基酸序列；及(c) CDR-L3，其包含SEQ ID NO: 150之胺基酸序列；或其變體，其中CDR-L1、CDR-L2或CDR-L3中之一或多者中之一個、兩個或三個胺基酸經另一胺基酸取代。
在一個態樣中，抗S-HBs抗體VL域可進一步包含一或多個輕鏈構架序列，其選自(a) SEQ ID NO: 155之輕鏈構架區1 (LC-FR1)或與其具有至少85%、86%、87%、88%、89%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%或99%序列一致性的變體，(b) SEQ ID NO: 156之輕鏈構架區2 (LC-FR2)或與其具有至少85%、86%、87%、88%、89%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%或99%序列一致性的變體，(c) SEQ ID NO: 157之輕鏈構架區3 (LC-FR3)或與其具有至少85%、86%、87%、88%、89%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%或99%序列一致性的變體，及(d) SEQ ID NO: 158之輕鏈構架區4 (LC-FR4)或與其具有至少85%、86%、87%、88%、89%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%或99%序列一致性的變體。視情況，VL域包含如(a)至(d)中所定義之重鏈構架序列中之每一者。視情況，序列一致性百分比為95%。視情況，序列一致性百分比為98%。
在另一態樣中，提供一種抗S-HBs抗體，其中該抗體包含與SEQ ID NO: 159之胺基酸序列具有至少90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%序列一致性的輕鏈可變域(VL)序列。在一個態樣中，抗S-HBs抗體包含輕鏈可變域(VL)序列，其與胺基酸序列SEQ ID NO: 159具有至少95%序列一致性。在某些態樣中，具有至少90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%或99%一致性之VL序列相對於參考序列含有取代(例如保守性取代)、插入或缺失，但包含該序列之抗S-HBs抗體保持結合於S-HBs之能力。在某些態樣中，SEQ ID NO: 159中總共1至10個胺基酸已經取代、插入及/或缺失。在某些態樣中，取代、插入或缺失發生在CDR外部之區中(亦即在FR中)。視情況，抗S-HBs抗體包含SEQ ID NO: 159中之VL序列，包括彼序列之轉譯後修飾。在一個特定態樣中，VL包含一個、兩個或三個選自以下之CDR：(a) CDR-L1，其包含SEQ ID NO: 148之胺基酸序列；(b) CDR-L2，其包含SEQ ID NO: 149之胺基酸序列；及(c) CDR-L3，其包含SEQ ID NO: 150之胺基酸序列。
在另一實施例中，抗S-HBs抗體包含SEQ ID NO: 159之VL的CDR序列中之一或多者。在一個態樣中，抗S-HBs抗體包含一或多個(較佳全部三個) SEQ ID NO: 159之VL域之輕鏈CDR胺基酸序列及與SEQ ID NO: 159之VL域之構架胺基酸序列至少85%、86%、87%、88%、89%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%序列一致性的構架。視情況，序列一致性為95%或98%。
在另一態樣中，提供一種抗S-HBs抗體，其中該抗體包含如上文所提供之態樣中之任一者中的VH序列及如上文所提供之態樣中之任一者中的VL序列。
舉例而言，在一個例示性實施例中，抗體包含VH域，其包含SEQ ID NO: 147之CDR-H3；及VL域，其包含SEQ ID NO: 150之CDR-L3。VH域視情況進一步包含SEQ ID NO: 146之CDR-H2。
在另一例示性實施例中，抗體包含： i)包含以下CDR之VH域：(a) CDR-H1，其包含SEQ ID NO: 145之胺基酸序列；(b) CDR-H2，其包含SEQ ID NO: 146之胺基酸序列；及(c) CDR-H3，其包含SEQ ID NO: 147之胺基酸序列；或其變體，其中CDR-H1、CDR-H2或CDR-H3中之一或多者中之一個、兩個或三個胺基酸經另一胺基酸取代；及 ii)包含以下CDR之VL域：(a) CDR-L1，其包含SEQ ID NO: 148之胺基酸序列；(b) CDR-L2，其包含SEQ ID NO: 149之胺基酸序列；及(c) CDR-L3，其包含SEQ ID NO: 150之胺基酸序列；或其變體，其中CDR-L1、CDR-L2或CDR-L3中之一或多者中之一個、兩個或三個胺基酸經另一胺基酸取代。
在另一例示性實施例中，抗體包含： i)與胺基酸序列SEQ ID NO: 160具有至少90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%序列一致性的重鏈可變域(VH)序列；及 ii)與胺基酸序列SEQ ID NO: 159具有至少90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%序列一致性的輕鏈可變域(VL)序列。
在另一例示性實施例中，抗S-HBs抗體包含：(a) CDR-H1，其包含SEQ ID NO: 145之胺基酸序列；(b) CDR-H2，其包含SEQ ID NO: 146之胺基酸序列；(c) CDR-H3，其包含SEQ ID NO: 147之胺基酸序列；(d) CDR-L1，其包含SEQ ID NO: 148之胺基酸序列；(e) CDR-L2，其包含SEQ ID NO: 149之胺基酸序列；及(f) CDR-L3，其包含SEQ ID NO: 150之胺基酸序列，及與SEQ ID NO: 160之胺基酸序列具有至少90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%序列一致性之VH域，及與SEQ ID NO: 159之胺基酸序列具有至少90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%序列一致性的VL域。在一個態樣中，VH域與SEQ ID NO: 160之胺基酸序列具有至少95%序列一致性。在一個態樣中，VL域與SEQ ID NO: 159之胺基酸序列具有至少95%序列一致性。在一個實施例中，抗體特異性結合於S-HBs。在另一實施例中，抗體結合於滿足以下解離常數(KD)之S-HBs：當與包含SEQ ID NO: 160之VH序列及SEQ ID NO: 159之VL序列的抗體之解離常數(KD)相比時，解離常數降低至多10倍或增加至多10倍。
在一個態樣中，抗體包含分別於SEQ ID NO: 160及SEQ ID NO: 159中VH及VL序列，包括彼等序列之轉譯後修飾。
在另一態樣中，抗體可包含SEQ ID NO: 161之全長輕鏈及/或SEQ ID NO: 162或271之全長重鏈。
在另一態樣中，本發明提供一種抗體，其與本文所提供之抗S-HBs抗體結合於相同抗原決定基。舉例而言，在某些態樣中，提供一種抗體，其與包含SEQ ID NO: 160之VH序列及SEQ ID NO: 159之VL序列的抗S-HBs抗體結合於相同抗原決定基。在某些態樣中，提供結合於SEQ ID NO: 253之S-HBs之以下殘基中之一或多者的抗體：C121、K141、D144及/或G145。視情況，抗體可進一步結合C139、C147、C149、I152及/或W156中之一或多者。抗體可包含如上文所定義之序列中之任一者。
在另一態樣中，本發明提供一種與本文所提供之抗S-HBs抗體競爭結合於S-HBs之抗體。
在一些實施例中，當在相同分析，例如ELISA或流式細胞量測術分析中評定時，如此部分中所述之抗體可具有或保持參考抗體Bc1.229與S-HBs (例如SEQ ID NO: 253)的結合活性之至少50%、60%、70%、75%、80%、85%、90%、95%或100%。
另外或替代地，當在相同分析，例如ELISA或流式細胞量測術分析中評定時，如此部分中所述之抗體可具有或保持參考抗體Bc1.229與SEQ ID NO: 254-262之蛋白中之一或多者(例如至少SEQ ID NO: 257)，視情況SEQ ID NO: 254至262中之蛋白中之每一者之結合活性的至少50%、60%、70%、75%、80%、85%、90%、95%或100%。
參考抗體Bc1.229具有SEQ ID NO: 160之VH序列及SEQ ID NO: 159之VL序列。其具有SEQ ID NO 162或271之全長重鏈及SEQ ID NO: 161之全長輕鏈。如實例中所用，SEQ ID NO: 271包含由載體LT615368.1表現之IgG1恆定區。
在一些實施例中，當在相同分析中評定時，此部分中所述之抗體結合於(例如SEQ ID NO: 253)之S-HBs，其中KD 值可比針對相同抗原之參考抗體Bc1.229之KD 值高不超過50、10、9、8、7、6、5、4、3或2倍，或小於或等於該參考抗體之該KD 值。
另外或替代地，該抗體可結合於SEQ ID NO: 254-262中之一或多者(例如至少SEQ ID NO: 257)，視情況SEQ ID NO: 254-262之蛋白中之每一者，其中KD 值可比針對相同抗原之參考抗體Bc1.229之KD 值高不超過50、10、9、8、7、6、5、4、3或2倍，或小於或等於該參考抗體之該KD 值。
在一些實施例中，如在此部分中所述之抗體可結合於(例如SEQ ID NO: 253)之S-HBs，其中EC50比參考抗體Bc1.229之EC50高不超過50、10、9、8、7、6、5、4、3或2倍或小於或等於該參考抗體之該值，如藉由ELISA或藉由流式細胞量測術所量測。替代地或另外，抗體可結合於SEQ ID NO: 254-262之蛋白中之一或多者或每一者，視情況至少結合於SEQ ID NO: 257之蛋白，其中EC50比參考抗體Bc1.229之EC50高不超過50、10、9、8、7、6、5、4、3或2倍或小於或等於該參考抗體之該值，如藉由ELISA或藉由流式細胞量測術所量測。
在一些實施例中，如此部分中所述之抗體可具有或保持針對HBV基因型A、B、C及/或D (視情況全部A、B、C及D)之活體外中和活性。舉例而言，如此部分中所述之抗體可具有或保持針對HBV基因型D之活體外中和活性，例如，其中IC50 值為≤1 ng/ml，視情況≤100 pg/ml。
在另一實施例中，當使用相同分析(例如，如本文所述之活體外中和分析)評定時，抗體可具有HBV基因型A、B、C及/或D，視情況至少D，視情況全部A、B、C及D之中和的IC50 值，其比針對相同基因型的參考抗體Bc1.229之IC50 值高不超過50、10、9、8、7、6、5、4、3或2倍，或小於或等於該參考抗體之該值。
在另一實施例中，當使用相同分析(例如如本文所述之分析)評定時，抗體可具有或保持針對HBV基因型A、B、C及/或D，視情況至少D，視情況全部A、B、C及D之參考抗體Bc1.229之活體內中和活性的至少50%、60%、70%、75%、80%、85%、90%、95%或100%。
視情況，抗體可活體內遏制例如感染有HBV基因型A、B、C或D，視情況D之個體的病毒之病毒血症。視情況，當使用相同分析(例如如本文所述之分析)評定時，抗體可具有或保持針對HBV基因型A、B、C及/或D，視情況至少D，視情況全部A、B、C及D之參考抗體Bc1.229之活體內病毒血症遏制活性的至少50%、60%、70%、75%、80%、85%、90%、95%或100%。
J. 在一個態樣中，本發明提供一種抗體，其包含：VH域，其包含至少一個、至少兩個或全部三個選自以下之VH CDR序列：(a) CDR-H1，其包含SEQ ID NO: 163之胺基酸序列；b) CDR-H2，其包含SEQ ID NO: 164之胺基酸序列；及(c) CDR-H3，其包含SEQ ID NO: 165之胺基酸序列。在另一態樣中，抗體包含VH域，其包含以下CDR：(a) CDR-H1，其包含SEQ ID NO: 163之胺基酸序列；(b) CDR-H2，其包含SEQ ID NO: 164之胺基酸序列；及(c) CDR-H3，其包含SEQ ID NO: 165之胺基酸序列；或其變體，其中一或多個CDR-H1、CDR-H2或CDR-H3中之一個、兩個或三個胺基酸經另一胺基酸取代。
在一個態樣中，VH域可進一步包含選自以下之一或多個重鏈構架序列：(a) SEQ ID NO: 169之重鏈構架區1 (HC-FR1)或與其具有至少85%、86%、87%、88%、89%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%或99%序列一致性的變體，(b) SEQ ID NO: 170之重鏈構架區2 (HC-FR2)或與其具有至少85%、86%、87%、88%、89%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%或99%序列一致性的變體，(c) SEQ ID NO: 171重鏈構架區3 (HC-FR3)或與其具有至少85%、86%、87%、88%、89%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%或99%序列一致性的變體，及(d) SEQ ID NO: 172之重鏈構架區4 (HC-FR4)或與其具有至少85%、86%、87%、88%、89%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%或99%序列一致性的變體。視情況，VH域包含如(a)至(d)中所定義之重鏈構架序列中之每一者。視情況，序列一致性百分比為95%。視情況，序列一致性百分比為98%。
在另一態樣中，抗S-HBs抗體包含與SEQ ID NO: 178之胺基酸序列具有至少90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%序列一致性的重鏈可變域(VH)序列。在一個態樣中，抗S-HBs抗體包含與SEQ ID NO: 178之胺基酸序列具有至少95%序列一致性的重鏈可變域(VH)序列。在某些態樣中，具有至少90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%或99%一致性之VH序列相對於參考序列含有取代(例如保守性取代)、插入或缺失，但包含該序列之抗S-HBs抗體保持結合於S-HBs之能力。在某些態樣中，SEQ ID NO: 178中總共1至10個胺基酸已經取代、插入及/或缺失。在某些態樣中，取代、插入或缺失發生在CDR外部之區中(亦即在FR中)。視情況，抗S-HBs抗體包含SEQ ID NO: 178中之VH序列，包括彼序列之轉譯後修飾。在一個特定態樣中，VH包含一個、兩個或三個選自以下之CDR：(a) CDR-H1，其包含SEQ ID NO: 163之胺基酸序列；(b) CDR-H2，其包含SEQ ID NO: 164之胺基酸序列；及(c) CDR-H3，其包含SEQ ID NO: 165之胺基酸序列。
在另一態樣中，抗S-HBs抗體包含SEQ ID NO: 178之VH之重鏈CDR序列中之一或多者。在一個態樣中，抗S-HBs抗體包含一或多個(較佳全部三個) SEQ ID NO: 178之VH域之重鏈CDR胺基酸序列及與SEQ ID NO: 178之VH域之構架胺基酸序列至少85%、86%、87%、88%、89%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%序列一致的構架。視情況，序列一致性為95%或98%。
在另一態樣中，本發明提供一種抗體，其包含：包含至少一個、至少兩個或全部三個選自以下之VL CDR序列的VL域：(a)包含SEQ ID NO: 166之胺基酸序列的CDR-L1；(b)包含SEQ ID NO: 167之胺基酸序列的CDR-L2；及(c)包含SEQ ID NO: 168之胺基酸序列的CDR-L3。在另一態樣中，抗體包含VL域，其包含以下CDR：(a) CDR-L1，其包含SEQ ID NO: 166之胺基酸序列；(b) CDR-L2，其包含SEQ ID NO: 167之胺基酸序列；及(c) CDR-L3，其包含SEQ ID NO: 168之胺基酸序列；或其變體，其中CDR-L1、CDR-L2或CDR-L3中之一或多者中之一個、兩個或三個胺基酸經另一胺基酸取代。
在一個態樣中，抗S-HBs抗體VL域可進一步包含一或多個輕鏈構架序列，其選自(a) SEQ ID NO: 173之輕鏈構架區1 (LC-FR1)或與其具有至少85%、86%、87%、88%、89%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%或99%序列一致性的變體，(b) SEQ ID NO: 174之輕鏈構架區2 (LC-FR2)或與其具有至少85%、86%、87%、88%、89%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%或99%序列一致性的變體，(c) SEQ ID NO: 175之輕鏈構架區3 (LC-FR3)或與其具有至少85%、86%、87%、88%、89%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%或99%序列一致性的變體，及(d) SEQ ID NO: 176之輕鏈構架區4 (LC-FR4)或與其具有至少85%、86%、87%、88%、89%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%或99%序列一致性的變體。視情況，VH域包含如(a)至(d)中所定義之重鏈構架序列中之每一者。視情況，序列一致性百分比為95%。視情況，序列一致性百分比為98%。
在另一態樣中，提供一種抗S-HBs抗體，其中該抗體包含與SEQ ID NO: 177之胺基酸序列具有至少90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%序列一致性的輕鏈可變域(VL)序列。在一個態樣中，抗S-HBs抗體包含輕鏈可變域(VL)序列，其與胺基酸序列SEQ ID NO: 177具有至少95%序列一致性。在某些態樣中，具有至少90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%或99%一致性之VL序列相對於參考序列含有取代(例如保守性取代)、插入或缺失，但包含該序列之抗S-HBs抗體保持結合於S-HBs之能力。在某些態樣中，SEQ ID NO: 177中總共1至10個胺基酸已經取代、插入及/或缺失。在某些態樣中，取代、插入或缺失發生在CDR外部之區中(亦即在FR中)。視情況，抗S-HBs抗體包含SEQ ID NO: 177中之VL序列，包括彼序列之轉譯後修飾。在一個特定態樣中，VL包含一個、兩個或三個選自以下之CDR：(a) CDR-L1，其包含SEQ ID NO: 166之胺基酸序列；(b) CDR-L2，其包含SEQ ID NO: 167之胺基酸序列；及(c) CDR-L3，其包含SEQ ID NO: 168之胺基酸序列。
在另一實施例中，抗S-HBs抗體包含SEQ ID NO: 177之VL的CDR序列中之一或多者。在一個態樣中，抗S-HBs抗體包含一或多個(較佳全部三個) SEQ ID NO: 177之VL域之輕鏈CDR胺基酸序列及與SEQ ID NO: 177之VL域之構架胺基酸序列至少85%、86%、87%、88%、89%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%序列一致性的構架。視情況，序列一致性為95%或98%。
在另一態樣中，提供一種抗S-HBs抗體，其中該抗體包含如上文所提供之態樣中之任一者中的VH序列及如上文所提供之態樣中之任一者中的VL序列。
舉例而言，在一個例示性實施例中，抗體包含VH域，其包含SEQ ID NO: 165之CDR-H3；及VL域，其包含SEQ ID NO: 168之CDR-L3。VH域視情況進一步包含SEQ ID NO: 164之CDR-H2。
在另一例示性實施例中，抗體包含： i)包含以下CDR之VH域：(a) CDR-H1，其包含SEQ ID NO: 163之胺基酸序列；(b) CDR-H2，其包含SEQ ID NO: 164之胺基酸序列；及(c) CDR-H3，其包含SEQ ID NO: 165之胺基酸序列；或其變體，其中CDR-H1、CDR-H2或CDR-H3中之一或多者中之一個、兩個或三個胺基酸經另一胺基酸取代；及 ii)包含以下CDR之VL域：(a) CDR-L1，其包含SEQ ID NO: 166之胺基酸序列；(b) CDR-L2，其包含SEQ ID NO: 167之胺基酸序列；及(c) CDR-L3，其包含SEQ ID NO: 168之胺基酸序列；或其變體，其中CDR-L1、CDR-L2或CDR-L3中之一或多者中之一個、兩個或三個胺基酸經另一胺基酸取代。
在另一例示性實施例中，抗體包含： i)與胺基酸序列SEQ ID NO: 178具有至少90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%序列一致性的重鏈可變域(VH)序列；及 ii)與胺基酸序列SEQ ID NO: 177具有至少90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%序列一致性的輕鏈可變域(VL)序列。
在另一例示性實施例中，抗S-HBs抗體包含：(a) CDR-H1，其包含SEQ ID NO: 163之胺基酸序列；(b) CDR-H2，其包含SEQ ID NO: 164之胺基酸序列；(c) CDR-H3，其包含SEQ ID NO: 165之胺基酸序列；(d) CDR-L1，其包含SEQ ID NO: 166之胺基酸序列；(e) CDR-L2，其包含SEQ ID NO: 167之胺基酸序列；及(f) CDR-L3，其包含SEQ ID NO: 168之胺基酸序列，及與SEQ ID NO: 178之胺基酸序列具有至少90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%序列一致性之VH域，及與SEQ ID NO: 177之胺基酸序列具有至少90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%序列一致性的VL域。在一個態樣中，VH域與SEQ ID NO: 178之胺基酸序列具有至少95%序列一致性。在一個態樣中，VL域與SEQ ID NO: 177之胺基酸序列具有至少95%序列一致性。在一個實施例中，抗體特異性結合於S-HBs。在另一實施例中，抗體結合於滿足以下解離常數(KD)之S-HBs：當與包含SEQ ID NO: 178之VH序列及SEQ ID NO: 177之VL序列的抗體之解離常數(KD)相比時，解離常數降低至多10倍或增加至多10倍。
在一個態樣中，抗體包含分別於SEQ ID NO: 178及SEQ ID NO: 177中VH及VL序列，包括彼等序列之轉譯後修飾。
在另一態樣中，抗體可包含SEQ ID NO: 179之全長輕鏈及/或SEQ ID NO: 180或272之全長重鏈。
在另一態樣中，本發明提供一種抗體，其與本文所提供之抗S-HBs抗體結合於相同抗原決定基。舉例而言，在某些態樣中，提供一種抗體，其與包含SEQ ID NO: 178之VH序列及SEQ ID NO: 177之VL序列的抗S-HBs抗體結合於相同抗原決定基。在某些態樣中，提供結合於SEQ ID NO: 253之S-HBs之以下殘基的抗體：C121、C138、C139、C147及/或C149。視情況，抗體可另外結合於L109、R122、T123、C124、M133、Y134、S136、K141及/或I152中之一或多者。抗體可包含如上文所定義之序列中之任一者。
在另一態樣中，本發明提供一種與本文所提供之抗S-HBs抗體競爭結合於S-HBs之抗體。
在一些實施例中，當在相同分析，例如ELISA分析或流式細胞量測術分析中評定時，如此部分中所述之抗體可具有或保持參考抗體Bc8.159與S-HBs (例如SEQ ID NO: 253)的結合活性之至少50%、60%、70%、75%、80%、85%、90%、95%或100%。
另外或替代地，當在相同分析，例如ELISA分析或流式細胞量測術分析中評定時，如此部分中所述之抗體可具有或保持參考抗體Bc8.159與SEQ ID NO: 254-262之蛋白中之一或多者(例如至少SEQ ID NO: 257)，視情況SEQ ID NO: 254至262中之蛋白中之每一者之結合活性的至少50%、60%、70%、75%、80%、85%、90%、95%或100%。
參考抗體Bc8.159具有SEQ ID NO: 178之VH序列及SEQ ID NO: 177之VL序列。其具有SEQ ID NO: 180或272之全長重鏈及SEQ ID NO: 179之全長輕鏈。如實例中所用，SEQ ID NO: 272包含由載體LT615368.1表現之IgG1恆定區。
在一些實施例中，當在相同分析中評定時，此部分中所述之抗體結合於(例如SEQ ID NO: 253)之S-HBs，其中KD 值可比針對相同抗原之參考抗體Bc8.159之KD 值高不超過50、10、9、8、7、6、5、4、3或2倍，或小於或等於該參考抗體之該KD 值。
另外或替代地，該抗體可結合於SEQ ID NO: 254-262中之一或多者(例如至少SEQ ID NO: 257)，視情況SEQ ID NO: 254-262之蛋白中之每一者，其中KD 值可比針對相同抗原之參考抗體Bc8.159之KD 值高不超過50、10、9、8、7、6、5、4、3或2倍，或小於或等於該參考抗體之該KD 值。
在一些實施例中，如在此部分中所述之抗體可結合於(例如SEQ ID NO: 253)之S-HBs，其中EC50比參考抗體Bc8.159之EC50高不超過50、10、9、8、7、6、5、4、3或2倍或小於或等於該參考抗體之該值，如藉由ELISA或藉由流式細胞量測術所量測。替代地或另外，抗體可結合於SEQ ID NO: 254-262之蛋白中之一或多者或每一者，視情況至少結合於SEQ ID NO: 257之蛋白，其中EC50比參考抗體Bc8.159之EC50高不超過50、10、9、8、7、6、5、4、3或2倍或小於或等於該參考抗體之該值，如藉由ELISA或藉由流式細胞量測術所量測。
在一些實施例中，如此部分中所述之抗體可具有或保持針對HBV基因型A、B、C及/或D (視情況全部A、B、C及D)之活體外中和活性。舉例而言，如此部分中所述之抗體可具有或保持針對HBV基因型D之活體外中和活性，例如，其中IC50 值為≤1 ng/ml，視情況≤100 pg/ml。
在另一實施例中，當使用相同分析(例如，如本文所述之活體外中和分析)評定時，抗體可具有HBV基因型A、B、C及/或D，視情況至少D，視情況全部A、B、C及D之中和的IC50 值，其比針對相同基因型的參考抗體Bc8.159之IC50 值高不超過50、10、9、8、7、6、5、4、3或2倍，或小於或等於該參考抗體之該值。
在另一實施例中，當使用相同分析(例如如本文所述之分析)評定時，抗體可具有或保持針對HBV基因型A、B、C及/或D，視情況至少D，視情況全部A、B、C及D之參考抗體Bc8.159之活體內中和活性的至少50%、60%、70%、75%、80%、85%、90%、95%或100%。
視情況，抗體可活體內遏制例如感染有HBV基因型A、B、C或D，視情況D之個體的病毒之病毒血症。視情況，當使用相同分析(例如如本文所述之分析)評定時，抗體可具有或保持針對HBV基因型A、B、C及/或D，視情況至少D，視情況全部A、B、C及D之參考抗體Bc8.159之活體內病毒血症遏制活性的至少50%、60%、70%、75%、80%、85%、90%、95%或100%。
K. 在一個態樣中，本發明提供一種抗體，其包含：VH域，其包含至少一個、至少兩個或全部三個選自以下之VH CDR序列：(a) CDR-H1，其包含SEQ ID NO: 181之胺基酸序列；b) CDR-H2，其包含SEQ ID NO: 182之胺基酸序列；及(c) CDR-H3，其包含SEQ ID NO: 183之胺基酸序列。在另一態樣中，抗體包含VH域，其包含以下CDR：(a) CDR-H1，其包含SEQ ID NO: 181之胺基酸序列；(b) CDR-H2，其包含SEQ ID NO: 182之胺基酸序列；及(c) CDR-H3，其包含SEQ ID NO: 183之胺基酸序列；或其變體，其中一或多個CDR-H1、CDR-H2或CDR-H3中之一個、兩個或三個胺基酸經另一胺基酸取代。
在一個態樣中，VH域可進一步包含選自以下之一或多個重鏈構架序列：(a) SEQ ID NO: 187之重鏈構架區1 (HC-FR1)或與其具有至少85%、86%、87%、88%、89%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%或99%序列一致性的變體，(b) SEQ ID NO: 188之重鏈構架區2 (HC-FR2)或與其具有至少85%、86%、87%、88%、89%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%或99%序列一致性的變體，(c) SEQ ID NO: 189重鏈構架區3 (HC-FR3)或與其具有至少85%、86%、87%、88%、89%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%或99%序列一致性的變體，及(d) SEQ ID NO: 190之重鏈構架區4 (HC-FR4)或與其具有至少85%、86%、87%、88%、89%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%或99%序列一致性的變體。視情況，VH域包含如(a)至(d)中所定義之重鏈構架序列中之每一者。視情況，序列一致性百分比為95%。視情況，序列一致性百分比為98%。
在另一態樣中，抗S-HBs抗體包含與SEQ ID NO: 196之胺基酸序列具有至少90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%序列一致性的重鏈可變域(VH)序列。在一個態樣中，抗S-HBs抗體包含與SEQ ID NO: 196之胺基酸序列具有至少95%序列一致性的重鏈可變域(VH)序列。在某些態樣中，具有至少90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%或99%一致性之VH序列相對於參考序列含有取代(例如保守性取代)、插入或缺失，但包含該序列之抗S-HBs抗體保持結合於S-HBs之能力。在某些態樣中，SEQ ID NO: 196中總共1至10個胺基酸已經取代、插入及/或缺失。在某些態樣中，取代、插入或缺失發生在CDR外部之區中(亦即在FR中)。視情況，抗S-HBs抗體包含SEQ ID NO: 196中之VH序列，包括彼序列之轉譯後修飾。在一個特定態樣中，VH包含一個、兩個或三個選自以下之CDR：(a) CDR-H1，其包含SEQ ID NO: 181之胺基酸序列；(b) CDR-H2，其包含SEQ ID NO: 182之胺基酸序列；及(c) CDR-H3，其包含SEQ ID NO: 183之胺基酸序列。
在另一態樣中，抗S-HBs抗體包含SEQ ID NO: 196之VH之重鏈CDR序列中之一或多者。在一個態樣中，抗S-HBs抗體包含一或多個(較佳全部三個) SEQ ID NO: 196之VH域之重鏈CDR胺基酸序列及與SEQ ID NO: 196之VH域之構架胺基酸序列至少85%、86%、87%、88%、89%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%序列一致的構架。視情況，序列一致性為95%或98%。
在另一態樣中，本發明提供一種抗體，其包含：包含至少一個、至少兩個或全部三個選自以下之VL CDR序列的VL域：(a)包含SEQ ID NO: 184之胺基酸序列的CDR-L1；(b)包含SEQ ID NO: 185之胺基酸序列的CDR-L2；及(c)包含SEQ ID NO: 186之胺基酸序列的CDR-L3。在另一態樣中，抗體包含VL域，其包含以下CDR：(a) CDR-L1，其包含SEQ ID NO: 184之胺基酸序列；(b) CDR-L2，其包含SEQ ID NO: 185之胺基酸序列；及(c) CDR-L3，其包含SEQ ID NO: 186之胺基酸序列；或其變體，其中CDR-L1、CDR-L2或CDR-L3中之一或多者中之一個、兩個或三個胺基酸經另一胺基酸取代。
在一個態樣中，抗S-HBs抗體VL域可進一步包含一或多個輕鏈構架序列，其選自(a) SEQ ID NO: 191之輕鏈構架區1 (LC-FR1)或與其具有至少85%、86%、87%、88%、89%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%或99%序列一致性的變體，(b) SEQ ID NO: 192之輕鏈構架區2 (LC-FR2)或與其具有至少85%、86%、87%、88%、89%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%或99%序列一致性的變體，(c) SEQ ID NO: 193之輕鏈構架區3 (LC-FR3)或與其具有至少85%、86%、87%、88%、89%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%或99%序列一致性的變體，及(d) SEQ ID NO: 194之輕鏈構架區4 (LC-FR4)或與其具有至少85%、86%、87%、88%、89%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%或99%序列一致性的變體。視情況，VL域包含如(a)至(d)中所定義之重鏈構架序列中之每一者。視情況，序列一致性百分比為95%。視情況，序列一致性百分比為98%。
在另一態樣中，提供一種抗S-HBs抗體，其中該抗體包含與SEQ ID NO: 195之胺基酸序列具有至少90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%序列一致性的輕鏈可變域(VL)序列。在一個態樣中，抗S-HBs抗體包含輕鏈可變域(VL)序列，其與胺基酸序列SEQ ID NO: 195具有至少95%序列一致性。在某些態樣中，具有至少90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%或99%一致性之VL序列相對於參考序列含有取代(例如保守性取代)、插入或缺失，但包含該序列之抗S-HBs抗體保持結合於S-HBs之能力。在某些態樣中，SEQ ID NO: 195中總共1至10個胺基酸已經取代、插入及/或缺失。在某些態樣中，取代、插入或缺失發生在CDR外部之區中(亦即在FR中)。視情況，抗S-HBs抗體包含SEQ ID NO: 195中之VL序列，包括彼序列之轉譯後修飾。在一個特定態樣中，VL包含一個、兩個或三個選自以下之CDR：(a) CDR-L1，其包含SEQ ID NO: 184之胺基酸序列；(b) CDR-L2，其包含SEQ ID NO: 185之胺基酸序列；及(c) CDR-L3，其包含SEQ ID NO: 186之胺基酸序列。
在另一實施例中，抗S-HBs抗體包含SEQ ID NO: 195之VL的CDR序列中之一或多者。在一個態樣中，抗S-HBs抗體包含一或多個(較佳全部三個) SEQ ID NO: 195之VL域之輕鏈CDR胺基酸序列及與SEQ ID NO: 195之VL域之構架胺基酸序列至少85%、86%、87%、88%、89%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%序列一致性的構架。視情況，序列一致性為95%或98%。
在另一態樣中，提供一種抗S-HBs抗體，其中該抗體包含如上文所提供之態樣中之任一者中的VH序列及如上文所提供之態樣中之任一者中的VL序列。
舉例而言，在一個例示性實施例中，抗體包含VH域，其包含SEQ ID NO: 183之CDR-H3；及VL域，其包含SEQ ID NO: 186之CDR-L3。VH域視情況進一步包含SEQ ID NO: 182之CDR-H2。
在另一例示性實施例中，抗體包含： i)包含以下CDR之VH域：(a) CDR-H1，其包含SEQ ID NO: 181之胺基酸序列；(b) CDR-H2，其包含SEQ ID NO: 182之胺基酸序列；及(c) CDR-H3，其包含SEQ ID NO: 183之胺基酸序列；或其變體，其中CDR-H1、CDR-H2或CDR-H3中之一或多者中之一個、兩個或三個胺基酸經另一胺基酸取代；及 ii)包含以下CDR之VL域：(a) CDR-L1，其包含SEQ ID NO: 184之胺基酸序列；(b) CDR-L2，其包含SEQ ID NO: 185之胺基酸序列；及(c) CDR-L3，其包含SEQ ID NO: 186之胺基酸序列；或其變體，其中CDR-L1、CDR-L2或CDR-L3中之一或多者中之一個、兩個或三個胺基酸經另一胺基酸取代。
在另一例示性實施例中，抗體包含： i)與胺基酸序列SEQ ID NO: 196具有至少90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%序列一致性的重鏈可變域(VH)序列；及 ii)與胺基酸序列SEQ ID NO: 195具有至少90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%序列一致性的輕鏈可變域(VL)序列。
在另一例示性實施例中，抗S-HBs抗體包含：(a) CDR-H1，其包含SEQ ID NO: 181之胺基酸序列；(b) CDR-H2，其包含SEQ ID NO: 182之胺基酸序列；(c) CDR-H3，其包含SEQ ID NO: 183之胺基酸序列；(d) CDR-L1，其包含SEQ ID NO: 184之胺基酸序列；(e) CDR-L2，其包含SEQ ID NO: 185之胺基酸序列；及(f) CDR-L3，其包含SEQ ID NO: 186之胺基酸序列，及與SEQ ID NO: 196之胺基酸序列具有至少90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%序列一致性之VH域，及與SEQ ID NO: 195之胺基酸序列具有至少90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%序列一致性的VL域。在一個態樣中，VH域與SEQ ID NO: 196之胺基酸序列具有至少95%序列一致性。在一個態樣中，VL域與SEQ ID NO: 195之胺基酸序列具有至少95%序列一致性。在一個實施例中，抗體特異性結合於S-HBs。在另一實施例中，抗體結合於滿足以下解離常數(KD)之S-HBs：當與包含SEQ ID NO: 196之VH序列及SEQ ID NO: 195之VL序列的抗體之解離常數(KD)相比時，解離常數降低至多10倍或增加至多10倍。
在一個態樣中，抗體包含分別於SEQ ID NO: 196及SEQ ID NO: 195中VH及VL序列，包括彼等序列之轉譯後修飾。
在另一態樣中，抗體可包含SEQ ID NO: 197之全長輕鏈及/或SEQ ID NO: 198或273之全長重鏈。
在另一態樣中，本發明提供一種抗體，其與本文所提供之抗S-HBs抗體結合於相同抗原決定基。舉例而言，在某些態樣中，提供一種抗體，其與包含SEQ ID NO: 196之VH序列及SEQ ID NO: 195之VL序列的抗S-HBs抗體結合於相同抗原決定基。在某些態樣中，提供結合於SEQ ID NO: 253之S-HBs之以下殘基的抗體：C121、C124、C137、C138、C139、C147及/或C149，亦視情況結合於I152。視情況，抗體進一步結合於V106、P108、W156及/或F161中之一或多者。抗體可包含如上文所定義之序列中之任一者。
在另一態樣中，本發明提供一種與本文所提供之抗S-HBs抗體競爭結合於S-HBs之抗體。
在一些實施例中，當在相同分析，例如ELISA分析或流式細胞量測術分析中評定時，如此部分中所述之抗體可具有或保持參考抗體Bc1.128與S-HBs (例如SEQ ID NO: 253)的結合活性之至少50%、60%、70%、75%、80%、85%、90%、95%或100%。
另外或替代地，當在相同分析，例如ELISA分析或流式細胞量測術分析中評定時，如此部分中所述之抗體可具有或保持參考抗體Bc1.128與SEQ ID NO: 254-262之蛋白中之一或多者(例如至少SEQ ID NO: 257)，視情況SEQ ID NO: 254至262中之蛋白中之每一者之結合活性的至少50%、60%、70%、75%、80%、85%、90%、95%或100%。
參考抗體Bc1.128具有SEQ ID NO: 196之VH序列及SEQ ID NO: 195之VL序列。其具有SEQ ID NO: 198或273之全長重鏈及SEQ ID NO: 197之全長輕鏈。如實例中所用，SEQ ID NO: 273包含由載體LT615368.1表現之IgG1恆定區。
在一些實施例中，當在相同分析中評定時，此部分中所述之抗體結合於(例如SEQ ID NO: 253)之S-HBs，其中KD 值可比針對相同抗原之參考抗體Bc1.128之KD 值高不超過50、10、9、8、7、6、5、4、3或2倍，或小於或等於該參考抗體之該KD 值。
另外或替代地，該抗體可結合於SEQ ID NO: 254-262中之一或多者(例如至少SEQ ID NO: 257)，視情況SEQ ID NO: 254-262之蛋白中之每一者，其中KD 值可比針對相同抗原之參考抗體Bc1.128之KD 值高不超過50、10、9、8、7、6、5、4、3或2倍，或小於或等於該參考抗體之該KD 值。
在一些實施例中，如在此部分中所述之抗體可結合於(例如SEQ ID NO: 253)之S-HBs，其中EC50比參考抗體Bc1.128之EC50高不超過50、10、9、8、7、6、5、4、3或2倍或小於或等於該參考抗體之該值，如藉由ELISA或藉由流式細胞量測術所量測。替代地或另外，抗體可結合於SEQ ID NO: 254-262之蛋白中之一或多者或每一者，視情況至少結合於SEQ ID NO: 257之蛋白，其中EC50比參考抗體Bc1.128之EC50高不超過50、10、9、8、7、6、5、4、3或2倍或小於或等於該參考抗體之該值，如藉由ELISA或藉由流式細胞量測術所量測。
在一些實施例中，如此部分中所述之抗體可具有或保持針對HBV基因型A、B、C及/或D (視情況全部A、B、C及D)之活體外中和活性。舉例而言，如此部分中所述之抗體可具有或保持針對HBV基因型D之活體外中和活性，例如，其中IC50 值為≤10 ng/ml，視情況≤1 ng/ml。
在另一實施例中，當使用相同分析(例如，如本文所述之活體外中和分析)評定時，抗體可具有HBV基因型A、B、C及/或D，視情況至少D，視情況全部A、B、C及D之中和的IC50 值，其比針對相同基因型的參考抗體Bc1.128之IC50 值高不超過50、10、9、8、7、6、5、4、3或2倍，或小於或等於該參考抗體之該值。
在另一實施例中，當使用相同分析(例如如本文所述之分析)評定時，抗體可具有或保持針對HBV基因型A、B、C及/或D，視情況至少D，視情況全部A、B、C及D之參考抗體Bc1.128之活體內中和活性的至少50%、60%、70%、75%、80%、85%、90%、95%或100%。
視情況，抗體可活體內遏制例如感染有HBV基因型A、B、C或D，視情況D之個體的病毒之病毒血症。視情況，當使用相同分析(例如如本文所述之分析)評定時，抗體可具有或保持針對HBV基因型A、B、C及/或D，視情況至少D，視情況全部A、B、C及D之參考抗體Bc1.128之活體內病毒血症遏制活性的至少50%、60%、70%、75%、80%、85%、90%、95%或100%。
L. 在一個態樣中，本發明提供一種抗體，其包含：VH域，其包含至少一個、至少兩個或全部三個選自以下之VH CDR序列：(a) CDR-H1，其包含SEQ ID NO: 199之胺基酸序列；b) CDR-H2，其包含SEQ ID NO: 200之胺基酸序列；及(c) CDR-H3，其包含SEQ ID NO: 201之胺基酸序列。在另一態樣中，抗體包含VH域，其包含以下CDR：(a) CDR-H1，其包含SEQ ID NO: 199之胺基酸序列；(b) CDR-H2，其包含SEQ ID NO: 200之胺基酸序列；及(c) CDR-H3，其包含SEQ ID NO: 201之胺基酸序列；或其變體，其中一或多個CDR-H1、CDR-H2或CDR-H3中之一個、兩個或三個胺基酸經另一胺基酸取代。
在一個態樣中，VH域可進一步包含選自以下之一或多個重鏈構架序列：(a) SEQ ID NO: 205之重鏈構架區1 (HC-FR1)或與其具有至少85%、86%、87%、88%、89%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%或99%序列一致性的變體，(b) SEQ ID NO: 206之重鏈構架區2 (HC-FR2)或與其具有至少85%、86%、87%、88%、89%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%或99%序列一致性的變體，(c) SEQ ID NO: 207重鏈構架區3 (HC-FR3)或與其具有至少85%、86%、87%、88%、89%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%或99%序列一致性的變體，及(d) SEQ ID NO: 208之重鏈構架區4 (HC-FR4)或與其具有至少85%、86%、87%、88%、89%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%或99%序列一致性的變體。視情況，VH域包含如(a)至(d)中所定義之重鏈構架序列中之每一者。視情況，序列一致性百分比為95%。視情況，序列一致性百分比為98%。
在另一態樣中，抗S-HBs抗體包含與SEQ ID NO: 214之胺基酸序列具有至少90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%序列一致性的重鏈可變域(VH)序列。在一個態樣中，抗S-HBs抗體包含與SEQ ID NO: 214之胺基酸序列具有至少95%序列一致性的重鏈可變域(VH)序列。在某些態樣中，具有至少90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%或99%一致性之VH序列相對於參考序列含有取代(例如保守性取代)、插入或缺失，但包含該序列之抗S-HBs抗體保持結合於S-HBs之能力。在某些態樣中，SEQ ID NO: 214中總共1至10個胺基酸已經取代、插入及/或缺失。在某些態樣中，取代、插入或缺失發生在CDR外部之區中(亦即在FR中)。視情況，抗S-HBs抗體包含SEQ ID NO: 214中之VH序列，包括彼序列之轉譯後修飾。在一個特定態樣中，VH包含一個、兩個或三個選自以下之CDR：(a) CDR-H1，其包含SEQ ID NO: 199之胺基酸序列；(b) CDR-H2，其包含SEQ ID NO: 200之胺基酸序列；及(c) CDR-H3，其包含SEQ ID NO: 201之胺基酸序列。
在另一態樣中，抗S-HBs抗體包含SEQ ID NO: 214之VH之重鏈CDR序列中之一或多者。在一個態樣中，抗S-HBs抗體包含一或多個(較佳全部三個) SEQ ID NO: 214之VH域之重鏈CDR胺基酸序列及與SEQ ID NO: 214之VH域之構架胺基酸序列至少85%、86%、87%、88%、89%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%序列一致的構架。視情況，序列一致性為95%或98%。
在另一態樣中，本發明提供一種抗體，其包含：包含至少一個、至少兩個或全部三個選自以下之VL CDR序列的VL域：(a)包含SEQ ID NO: 202之胺基酸序列的CDR-L1；(b)包含SEQ ID NO: 203之胺基酸序列的CDR-L2；及(c)包含SEQ ID NO: 204之胺基酸序列的CDR-L3。在另一態樣中，抗體包含VL域，其包含以下CDR：(a) CDR-L1，其包含SEQ ID NO: 202之胺基酸序列；(b) CDR-L2，其包含SEQ ID NO: 203之胺基酸序列；及(c) CDR-L3，其包含SEQ ID NO: 204之胺基酸序列；或其變體，其中CDR-L1、CDR-L2或CDR-L3中之一或多者中之一個、兩個或三個胺基酸經另一胺基酸取代。
在一個態樣中，抗S-HBs抗體VL域可進一步包含一或多個輕鏈構架序列，其選自(a) SEQ ID NO: 209之輕鏈構架區1 (LC-FR1)或與其具有至少85%、86%、87%、88%、89%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%或99%序列一致性的變體，(b) SEQ ID NO: 210之輕鏈構架區2 (LC-FR2)或與其具有至少85%、86%、87%、88%、89%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%或99%序列一致性的變體，(c) SEQ ID NO: 211之輕鏈構架區3 (LC-FR3)或與其具有至少85%、86%、87%、88%、89%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%或99%序列一致性的變體，及(d) SEQ ID NO: 212之輕鏈構架區4 (LC-FR4)或與其具有至少85%、86%、87%、88%、89%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%或99%序列一致性的變體。視情況，VL域包含如(a)至(d)中所定義之重鏈構架序列中之每一者。視情況，序列一致性百分比為95%。視情況，序列一致性百分比為98%。
在另一態樣中，提供一種抗S-HBs抗體，其中該抗體包含與SEQ ID NO: 213之胺基酸序列具有至少90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%序列一致性的輕鏈可變域(VL)序列。在一個態樣中，抗S-HBs抗體包含輕鏈可變域(VL)序列，其與胺基酸序列SEQ ID NO: 213具有至少95%序列一致性。在某些態樣中，具有至少90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%或99%一致性之VL序列相對於參考序列含有取代(例如保守性取代)、插入或缺失，但包含該序列之抗S-HBs抗體保持結合於S-HBs之能力。在某些態樣中，SEQ ID NO: 213中總共1至10個胺基酸已經取代、插入及/或缺失。在某些態樣中，取代、插入或缺失發生在CDR外部之區中(亦即在FR中)。視情況，抗S-HBs抗體包含SEQ ID NO: 213中之VL序列，包括彼序列之轉譯後修飾。在一個特定態樣中，VL包含一個、兩個或三個選自以下之CDR：(a) CDR-L1，其包含SEQ ID NO: 202之胺基酸序列；(b) CDR-L2，其包含SEQ ID NO: 203之胺基酸序列；及(c) CDR-L3，其包含SEQ ID NO: 204之胺基酸序列。
在另一實施例中，抗S-HBs抗體包含SEQ ID NO: 213之VL的CDR序列中之一或多者。在一個態樣中，抗S-HBs抗體包含一或多個(較佳全部三個) SEQ ID NO: 213之VL域之輕鏈CDR胺基酸序列及與SEQ ID NO: 213之VL域之構架胺基酸序列至少85%、86%、87%、88%、89%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%序列一致性的構架。視情況，序列一致性為95%或98%。
在另一態樣中，提供一種抗S-HBs抗體，其中該抗體包含如上文所提供之態樣中之任一者中的VH序列及如上文所提供之態樣中之任一者中的VL序列。
舉例而言，在一個例示性實施例中，抗體包含VH域，其包含SEQ ID NO: 201之CDR-H3；及VL域，其包含SEQ ID NO: 204之CDR-L3。VH域視情況進一步包含SEQ ID NO: 200之CDR-H2。
在另一例示性實施例中，抗體包含： i)包含以下CDR之VH域：(a) CDR-H1，其包含SEQ ID NO: 199之胺基酸序列；(b) CDR-H2，其包含SEQ ID NO: 200之胺基酸序列；及(c) CDR-H3，其包含SEQ ID NO: 201之胺基酸序列；或其變體，其中CDR-H1、CDR-H2或CDR-H3中之一或多者中之一個、兩個或三個胺基酸經另一胺基酸取代；及 ii)包含以下CDR之VL域：(a) CDR-L1，其包含SEQ ID NO: 202之胺基酸序列；(b) CDR-L2，其包含SEQ ID NO: 203之胺基酸序列；及(c) CDR-L3，其包含SEQ ID NO: 204之胺基酸序列；或其變體，其中CDR-L1、CDR-L2或CDR-L3中之一或多者中之一個、兩個或三個胺基酸經另一胺基酸取代。
在另一例示性實施例中，抗體包含： i)與胺基酸序列SEQ ID NO: 214具有至少90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%序列一致性的重鏈可變域(VH)序列；及 ii)與胺基酸序列SEQ ID NO: 213具有至少90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%序列一致性的輕鏈可變域(VL)序列。
在另一例示性實施例中，抗S-HBs抗體包含：(a) CDR-H1，其包含SEQ ID NO: 199之胺基酸序列；(b) CDR-H2，其包含SEQ ID NO: 200之胺基酸序列；(c) CDR-H3，其包含SEQ ID NO: 201之胺基酸序列；(d) CDR-L1，其包含SEQ ID NO: 202之胺基酸序列；(e) CDR-L2，其包含SEQ ID NO: 203之胺基酸序列；及(f) CDR-L3，其包含SEQ ID NO: 204之胺基酸序列，及與SEQ ID NO: 214之胺基酸序列具有至少90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%序列一致性之VH域，及與SEQ ID NO: 213之胺基酸序列具有至少90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%序列一致性的VL域。在一個態樣中，VH域與SEQ ID NO: 214之胺基酸序列具有至少95%序列一致性。在一個態樣中，VL域與SEQ ID NO: 213之胺基酸序列具有至少95%序列一致性。在一個實施例中，抗體特異性結合於S-HBs。在另一實施例中，抗體結合於滿足以下解離常數(KD)之S-HBs：當與包含SEQ ID NO: 214之VH序列及SEQ ID NO: 213之VL序列的抗體之解離常數(KD)相比時，解離常數降低至多10倍或增加至多10倍。
在一個態樣中，抗體包含分別於SEQ ID NO: 214及SEQ ID NO: 213中VH及VL序列，包括彼等序列之轉譯後修飾。
在另一態樣中，抗體可包含SEQ ID NO: 215之全長輕鏈及/或SEQ ID NO: 216或274之全長重鏈。
在另一態樣中，本發明提供一種抗體，其與本文所提供之抗S-HBs抗體結合於相同抗原決定基。舉例而言，在某些態樣中，提供一種抗體，其與包含SEQ ID NO: 214之VH序列及SEQ ID NO: 213之VL序列的抗S-HBs抗體結合於相同抗原決定基。在某些態樣中，提供結合於SEQ ID NO: 253之S-HBs之殘基F179的抗體。抗體可包含如上文所定義之序列中之任一者。
在另一態樣中，本發明提供一種與本文所提供之抗S-HBs抗體競爭結合於S-HBs之抗體。
在一些實施例中，當在相同分析，例如ELISA分析或流式細胞量測術分析中評定時，如此部分中所述之抗體可具有或保持參考抗體Bc4.204與S-HBs (例如SEQ ID NO: 253)的結合活性之至少50%、60%、70%、75%、80%、85%、90%、95%或100%。另外或替代地，當在相同分析，例如ELISA分析或流式細胞量測術分析中評定時，如此部分中所述之抗體可具有或保持參考抗體Bc4.204與具有SEQ ID NO: 254、255、256、257、258、260及/或262，視情況至少與SEQ ID NO: 257之序列的蛋白的結合活性之至少50%、60%、70%、75%、80%、85%、90%、95%或100%。
參考抗體Bc4.204具有SEQ ID NO: 214之VH序列及SEQ ID NO: 213之VL序列。其具有SEQ ID NO: 216或274之全長重鏈及SEQ ID NO: 215之全長輕鏈。如實例中所用，SEQ ID NO: 274包含由載體LT615368.1表現之IgG1恆定區。
在一些實施例中，當在相同分析中評定時，此部分中所述之抗體結合於(例如SEQ ID NO: 253)之S-HBs，其中KD 值可比針對相同抗原之參考抗體Bc4.204之KD 值高不超過50、10、9、8、7、6、5、4、3或2倍，或小於或等於該參考抗體之該KD 值。另外或替代地，抗體可結合於SEQ ID NO: 254、255、256、257、258、260及/或262中之一或多者(例如至少SEQ ID NO: 257)，視情況SEQ ID NO: 254-262之蛋白中之每一者，其中KD 值可比針對相同抗原之參考抗體Bc4.204之KD 值高不超過50、10、9、8、7、6、5、4、3或2倍，或小於或等於該參考抗體之該KD 值。
在一些實施例中，如在此部分中所述之抗體可結合於(例如SEQ ID NO: 253)之S-HBs，其中EC50比參考抗體Bc4.204之EC50高不超過50、10、9、8、7、6、5、4、3或2倍或小於或等於該參考抗體之該值，如藉由ELISA或藉由流式細胞量測術所量測。替代地或另外，抗體可結合於具有SEQ ID NO: 254、255、256、257、258、260及/或262之序列的蛋白中之一或多者或每一者，視情況至少結合於SEQ ID NO: 257之蛋白，其中EC50比參考抗體Bc4.204之EC50高不超過50、10、9、8、7、6、5、4、3或2倍或小於或等於該參考抗體之該值，如藉由ELISA或藉由流式細胞量測術所量測。
在一些實施例中，如此部分中所述之抗體可具有或保持針對HBV基因型A、B、C及/或D (視情況全部A、B、C及D)之活體外中和活性。舉例而言，如此部分中所述之抗體可具有或保持針對HBV基因型D之活體外中和活性，例如，其中IC50 值為≤10 ng/ml，視情況≤1 ng/ml。
在另一實施例中，當使用相同分析(例如，如本文所述之活體外中和分析)評定時，抗體可具有HBV基因型A、B、C及/或D，視情況至少D，視情況全部A、B、C及D之中和的IC50 值，其比針對相同基因型的參考抗體Bc4.204之IC50 值高不超過50、10、9、8、7、6、5、4、3或2倍，或小於或等於該參考抗體之該值。
在另一實施例中，當使用相同分析(例如如本文所述之分析)評定時，抗體可具有或保持針對HBV基因型A、B、C及/或D，視情況至少D，視情況全部A、B、C及D之參考抗體Bc4.204之活體內中和活性的至少50%、60%、70%、75%、80%、85%、90%、95%或100%。
視情況，抗體可活體內遏制例如感染有HBV基因型A、B、C或D，視情況D之個體的病毒之病毒血症。視情況，當使用相同分析(例如如本文所述之分析)評定時，抗體可具有或保持針對HBV基因型A、B、C及/或D，視情況至少D，視情況全部A、B、C及D之參考抗體Bc4.204之活體內病毒血症遏制活性的至少50%、60%、70%、75%、80%、85%、90%、95%或100%。
M. 在一個態樣中，本發明提供一種抗體，其包含：VH域，其包含至少一個、至少兩個或全部三個選自以下之VH CDR序列：(a) CDR-H1，其包含SEQ ID NO: 217之胺基酸序列；b) CDR-H2，其包含SEQ ID NO: 218之胺基酸序列；及(c) CDR-H3，其包含SEQ ID NO: 219之胺基酸序列。在另一態樣中，抗體包含VH域，其包含以下CDR：(a) CDR-H1，其包含SEQ ID NO: 217之胺基酸序列；(b) CDR-H2，其包含SEQ ID NO: 218之胺基酸序列；及(c) CDR-H3，其包含SEQ ID NO: 219之胺基酸序列；或其變體，其中一或多個CDR-H1、CDR-H2或CDR-H3中之一個、兩個或三個胺基酸經另一胺基酸取代。
在一個態樣中，VH域可進一步包含選自以下之一或多個重鏈構架序列：(a) SEQ ID NO: 223之重鏈構架區1 (HC-FR1)或與其具有至少85%、86%、87%、88%、89%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%或99%序列一致性的變體，(b) SEQ ID NO: 224之重鏈構架區2 (HC-FR2)或與其具有至少85%、86%、87%、88%、89%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%或99%序列一致性的變體，(c) SEQ ID NO: 225重鏈構架區3 (HC-FR3)或與其具有至少85%、86%、87%、88%、89%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%或99%序列一致性的變體，及(d) SEQ ID NO: 226之重鏈構架區4 (HC-FR4)或與其具有至少85%、86%、87%、88%、89%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%或99%序列一致性的變體。視情況，VH域包含如(a)至(d)中所定義之重鏈構架序列中之每一者。視情況，序列一致性百分比為95%。視情況，序列一致性百分比為98%。
在另一態樣中，抗S-HBs抗體包含與SEQ ID NO: 232之胺基酸序列具有至少90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%序列一致性的重鏈可變域(VH)序列。在一個態樣中，抗S-HBs抗體包含與SEQ ID NO: 232之胺基酸序列具有至少95%序列一致性的重鏈可變域(VH)序列。在某些態樣中，具有至少90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%或99%一致性之VH序列相對於參考序列含有取代(例如保守性取代)、插入或缺失，但包含該序列之抗S-HBs抗體保持結合於S-HBs之能力。在某些態樣中，SEQ ID NO: 232中總共1至10個胺基酸已經取代、插入及/或缺失。在某些態樣中，取代、插入或缺失發生在CDR外部之區中(亦即在FR中)。視情況，抗S-HBs抗體包含SEQ ID NO: 232中之VH序列，包括彼序列之轉譯後修飾。在一個特定態樣中，VH包含一個、兩個或三個選自以下之CDR：(a) CDR-H1，其包含SEQ ID NO: 217之胺基酸序列；(b) CDR-H2，其包含SEQ ID NO: 218之胺基酸序列；及(c) CDR-H3，其包含SEQ ID NO: 219之胺基酸序列。
在另一態樣中，抗S-HBs抗體包含SEQ ID NO: 232之VH之重鏈CDR序列中之一或多者。在一個態樣中，抗S-HBs抗體包含一或多個(較佳全部三個) SEQ ID NO: 232之VH域之重鏈CDR胺基酸序列及與SEQ ID NO: 232之VH域之構架胺基酸序列至少85%、86%、87%、88%、89%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%序列一致的構架。視情況，序列一致性為95%或98%。
在另一態樣中，本發明提供一種抗體，其包含：包含至少一個、至少兩個或全部三個選自以下之VL CDR序列的VL域：(a)包含SEQ ID NO: 220之胺基酸序列的CDR-L1；(b)包含SEQ ID NO: 221之胺基酸序列的CDR-L2；及(c)包含SEQ ID NO: 222之胺基酸序列的CDR-L3。在另一態樣中，抗體包含VL域，其包含以下CDR：(a) CDR-L1，其包含SEQ ID NO: 220之胺基酸序列；(b) CDR-L2，其包含SEQ ID NO: 221之胺基酸序列；及(c) CDR-L3，其包含SEQ ID NO: 222之胺基酸序列；或其變體，其中CDR-L1、CDR-L2或CDR-L3中之一或多者中之一個、兩個或三個胺基酸經另一胺基酸取代。
在一個態樣中，抗S-HBs抗體VL域可進一步包含一或多個輕鏈構架序列，其選自(a) SEQ ID NO: 227之輕鏈構架區1 (LC-FR1)或與其具有至少85%、86%、87%、88%、89%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%或99%序列一致性的變體，(b) SEQ ID NO: 228之輕鏈構架區2 (LC-FR2)或與其具有至少85%、86%、87%、88%、89%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%或99%序列一致性的變體，(c) SEQ ID NO: 229之輕鏈構架區3 (LC-FR3)或與其具有至少85%、86%、87%、88%、89%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%或99%序列一致性的變體，及(d) SEQ ID NO: 230之輕鏈構架區4 (LC-FR4)或與其具有至少85%、86%、87%、88%、89%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%或99%序列一致性的變體。視情況，VL域包含如(a)至(d)中所定義之重鏈構架序列中之每一者。視情況，序列一致性百分比為95%。視情況，序列一致性百分比為98%。
在另一態樣中，提供一種抗S-HBs抗體，其中該抗體包含與SEQ ID NO: 231之胺基酸序列具有至少90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%序列一致性的輕鏈可變域(VL)序列。在一個態樣中，抗S-HBs抗體包含輕鏈可變域(VL)序列，其與胺基酸序列SEQ ID NO: 231具有至少95%序列一致性。在某些態樣中，具有至少90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%或99%一致性之VL序列相對於參考序列含有取代(例如保守性取代)、插入或缺失，但包含該序列之抗S-HBs抗體保持結合於S-HBs之能力。在某些態樣中，SEQ ID NO: 231中總共1至10個胺基酸已經取代、插入及/或缺失。在某些態樣中，取代、插入或缺失發生在CDR外部之區中(亦即在FR中)。視情況，抗S-HBs抗體包含SEQ ID NO: 231中之VL序列，包括彼序列之轉譯後修飾。在一個特定態樣中，VL包含一個、兩個或三個選自以下之CDR：(a) CDR-L1，其包含SEQ ID NO: 220之胺基酸序列；(b) CDR-L2，其包含SEQ ID NO: 221之胺基酸序列；及(c) CDR-L3，其包含SEQ ID NO: 222之胺基酸序列。
在另一實施例中，抗S-HBs抗體包含SEQ ID NO: 231之VL的CDR序列中之一或多者。在一個態樣中，抗S-HBs抗體包含一或多個(較佳全部三個) SEQ ID NO: 231之VL域之輕鏈CDR胺基酸序列及與SEQ ID NO: 231之VL域之構架胺基酸序列至少85%、86%、87%、88%、89%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%序列一致性的構架。視情況，序列一致性為95%或98%。
在另一態樣中，提供一種抗S-HBs抗體，其中該抗體包含如上文所提供之態樣中之任一者中的VH序列及如上文所提供之態樣中之任一者中的VL序列。
舉例而言，在一個例示性實施例中，抗體包含VH域，其包含SEQ ID NO: 219之CDR-H3；及VL域，其包含SEQ ID NO: 222之CDR-L3。VH域視情況進一步包含SEQ ID NO: 218之CDR-H2。
在另一例示性實施例中，抗體包含： i)包含以下CDR之VH域：(a) CDR-H1，其包含SEQ ID NO: 217之胺基酸序列；(b) CDR-H2，其包含SEQ ID NO: 218之胺基酸序列；及(c) CDR-H3，其包含SEQ ID NO: 219之胺基酸序列；或其變體，其中CDR-H1、CDR-H2或CDR-H3中之一或多者中之一個、兩個或三個胺基酸經另一胺基酸取代；及 ii)包含以下CDR之VL域：(a) CDR-L1，其包含SEQ ID NO: 220之胺基酸序列；(b) CDR-L2，其包含SEQ ID NO: 221之胺基酸序列；及(c) CDR-L3，其包含SEQ ID NO: 222之胺基酸序列；或其變體，其中CDR-L1、CDR-L2或CDR-L3中之一或多者中之一個、兩個或三個胺基酸經另一胺基酸取代。
在另一例示性實施例中，抗體包含： i)與胺基酸序列SEQ ID NO: 232具有至少90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%序列一致性的重鏈可變域(VH)序列；及 ii)與胺基酸序列SEQ ID NO: 231具有至少90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%序列一致性的輕鏈可變域(VL)序列。
在另一例示性實施例中，抗S-HBs抗體包含：(a) CDR-H1，其包含SEQ ID NO: 217之胺基酸序列；(b) CDR-H2，其包含SEQ ID NO: 218之胺基酸序列；(c) CDR-H3，其包含SEQ ID NO: 219之胺基酸序列；(d) CDR-L1，其包含SEQ ID NO: 220之胺基酸序列；(e) CDR-L2，其包含SEQ ID NO: 221之胺基酸序列；及(f) CDR-L3，其包含SEQ ID NO: 222之胺基酸序列，及與SEQ ID NO: 232之胺基酸序列具有至少90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%序列一致性之VH域，及與SEQ ID NO: 231之胺基酸序列具有至少90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%序列一致性的VL域。在一個態樣中，VH域與SEQ ID NO: 232之胺基酸序列具有至少95%序列一致性。在一個態樣中，VL域與SEQ ID NO: 231之胺基酸序列具有至少95%序列一致性。在一個實施例中，抗體特異性結合於S-HBs。在另一實施例中，抗體結合於滿足以下解離常數(KD)之S-HBs：當與包含SEQ ID NO: 232之VH序列及SEQ ID NO: 231之VL序列的抗體之解離常數(KD)相比時，解離常數降低至多10倍或增加至多10倍。
在一個態樣中，抗體包含分別於SEQ ID NO: 232及SEQ ID NO: 231中VH及VL序列，包括彼等序列之轉譯後修飾。
在另一態樣中，抗體可包含SEQ ID NO: 233之全長輕鏈及/或SEQ ID NO: 234或275之全長重鏈。
在另一態樣中，本發明提供一種抗體，其與本文所提供之抗S-HBs抗體結合於相同抗原決定基。舉例而言，在某些態樣中，提供一種抗體，其與包含SEQ ID NO: 232之VH序列及SEQ ID NO: 231之VL序列的抗S-HBs抗體結合於相同抗原決定基。在某些態樣中，提供結合於SEQ ID NO: 253之S-HBs之以下殘基的抗體：W165及/或R169，及視情況M103。抗體可包含如上文所定義之序列中之任一者。
在另一態樣中，本發明提供一種與本文所提供之抗S-HBs抗體競爭結合於S-HBs之抗體。
在一些實施例中，當在相同分析，例如ELISA分析或流式細胞量測術分析中評定時，如此部分中所述之抗體可具有或保持參考抗體Bc1.263與S-HBs (例如SEQ ID NO: 253)的結合活性之至少50%、60%、70%、75%、80%、85%、90%、95%或100%。
另外或替代地，當在相同分析，例如ELISA分析或流式細胞量測術分析中評定時，如此部分中所述之抗體可具有或保持參考抗體Bc1.263與SEQ ID NO: 254-262之蛋白中之一或多者(例如至少SEQ ID NO: 257)，視情況SEQ ID NO: 254至262中之蛋白中之每一者之結合活性的至少50%、60%、70%、75%、80%、85%、90%、95%或100%。
參考抗體Bc1.263具有SEQ ID NO: 232之VH序列及SEQ ID NO: 231之VL序列。其具有SEQ ID NO: 234或275之全長重鏈及SEQ ID NO: 233之全長輕鏈。如實例中所用，SEQ ID NO: 275包含由載體LT615368.1表現之IgG1恆定區。
在一些實施例中，當在相同分析中評定時，此部分中所述之抗體結合於(例如SEQ ID NO: 253)之S-HBs，其中KD 值可比針對相同抗原之參考抗體Bc1.263之KD 值高不超過50、10、9、8、7、6、5、4、3或2倍，或小於或等於該參考抗體之該KD 值。
另外或替代地，該抗體可結合於SEQ ID NO: 254-262中之一或多者(例如至少SEQ ID NO: 257)，視情況SEQ ID NO: 254-262之蛋白中之每一者，其中KD 值可比針對相同抗原之參考抗體Bc1.263之KD 值高不超過50、10、9、8、7、6、5、4、3或2倍，或小於或等於該參考抗體之該KD 值。
在一些實施例中，如在此部分中所述之抗體可結合於(例如SEQ ID NO: 253)之S-HBs，其中EC50比參考抗體Bc1.263之EC50高不超過50、10、9、8、7、6、5、4、3或2倍或小於或等於該參考抗體之該值，如藉由ELISA或藉由流式細胞量測術所量測。替代地或另外，抗體可結合於SEQ ID NO: 254-262之蛋白中之一或多者或每一者，視情況至少結合於SEQ ID NO: 257之蛋白，其中EC50比參考抗體Bc1.263之EC50高不超過50、10、9、8、7、6、5、4、3或2倍或小於或等於該參考抗體之該值，如藉由ELISA或藉由流式細胞量測術所量測。
在一些實施例中，如此部分中所述之抗體可具有或保持針對HBV基因型A、B、C及/或D (視情況全部A、B、C及D)之活體外中和活性。舉例而言，如此部分中所述之抗體可具有或保持針對HBV基因型D之活體外中和活性，例如，其中IC50 值為≤100 pg/ml，視情況≤10 pg/ml。
在另一實施例中，當使用相同分析(例如，如本文所述之活體外中和分析)評定時，抗體可具有HBV基因型A、B、C及/或D，視情況至少D，視情況全部A、B、C及D之中和的IC50 值，其比針對相同基因型的參考抗體Bc1.263之IC50 值高不超過50、10、9、8、7、6、5、4、3或2倍，或小於或等於該參考抗體之該值。
在另一實施例中，當使用相同分析(例如如本文所述之分析)評定時，抗體可具有或保持針對HBV基因型A、B、C及/或D，視情況至少D，視情況全部A、B、C及D之參考抗體Bc1.263之中和活性的至少50%、60%、70%、75%、80%、85%、90%、95%或100%。
視情況，抗體可活體內遏制例如感染有HBV基因型A、B、C或D，視情況D之個體的病毒之病毒血症。視情況，當使用相同分析(例如如本文所述之分析)評定時，抗體可具有或保持針對HBV基因型A、B、C及/或D，視情況至少D，視情況全部A、B、C及D之參考抗體Bc1.263之活體內病毒血症遏制活性的至少50%、60%、70%、75%、80%、85%、90%、95%或100%。
N. 在一個態樣中，本發明提供一種抗體，其包含：VH域，其包含至少一個、至少兩個或全部三個選自以下之VH CDR序列：(a) CDR-H1，其包含SEQ ID NO: 235之胺基酸序列；b) CDR-H2，其包含SEQ ID NO: 236之胺基酸序列；及(c) CDR-H3，其包含SEQ ID NO: 237之胺基酸序列。在另一態樣中，抗體包含VH域，其包含以下CDR：(a) CDR-H1，其包含SEQ ID NO: 235之胺基酸序列；(b) CDR-H2，其包含SEQ ID NO: 236之胺基酸序列；及(c) CDR-H3，其包含SEQ ID NO: 237之胺基酸序列；或其變體，其中一或多個CDR-H1、CDR-H2或CDR-H3中之一個、兩個或三個胺基酸經另一胺基酸取代。
在一個態樣中，VH域可進一步包含選自以下之一或多個重鏈構架序列：(a) SEQ ID NO: 241之重鏈構架區1 (HC-FR1)或與其具有至少85%、86%、87%、88%、89%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%或99%序列一致性的變體，(b) SEQ ID NO: 242之重鏈構架區2 (HC-FR2)或與其具有至少85%、86%、87%、88%、89%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%或99%序列一致性的變體，(c) SEQ ID NO: 243重鏈構架區3 (HC-FR3)或與其具有至少85%、86%、87%、88%、89%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%或99%序列一致性的變體，及(d) SEQ ID NO: 244之重鏈構架區4 (HC-FR4)或與其具有至少85%、86%、87%、88%、89%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%或99%序列一致性的變體。視情況，VH域包含如(a)至(d)中所定義之重鏈構架序列中之每一者。視情況，序列一致性百分比為95%。視情況，序列一致性百分比為98%。
在另一態樣中，抗S-HBs抗體包含與SEQ ID NO: 250之胺基酸序列具有至少90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%序列一致性的重鏈可變域(VH)序列。在一個態樣中，抗S-HBs抗體包含與SEQ ID NO: 250之胺基酸序列具有至少95%序列一致性的重鏈可變域(VH)序列。在某些態樣中，具有至少90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%或99%一致性之VH序列相對於參考序列含有取代(例如保守性取代)、插入或缺失，但包含該序列之抗S-HBs抗體保持結合於S-HBs之能力。在某些態樣中，SEQ ID NO: 250中總共1至10個胺基酸已經取代、插入及/或缺失。在某些態樣中，取代、插入或缺失發生在CDR外部之區中(亦即在FR中)。視情況，抗S-HBs抗體包含SEQ ID NO: 250中之VH序列，包括彼序列之轉譯後修飾。在一個特定態樣中，VH包含一個、兩個或三個選自以下之CDR：(a) CDR-H1，其包含SEQ ID NO: 235之胺基酸序列；(b) CDR-H2，其包含SEQ ID NO: 236之胺基酸序列；及(c) CDR-H3，其包含SEQ ID NO: 237之胺基酸序列。
在另一態樣中，抗S-HBs抗體包含SEQ ID NO: 250之VH之重鏈CDR序列中之一或多者。在一個態樣中，抗S-HBs抗體包含一或多個(較佳全部三個) SEQ ID NO: 250之VH域之重鏈CDR胺基酸序列及與SEQ ID NO: 250之VH域之構架胺基酸序列至少85%、86%、87%、88%、89%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%序列一致的構架。視情況，序列一致性為95%或98%。
在另一態樣中，本發明提供一種抗體，其包含：包含至少一個、至少兩個或全部三個選自以下之VL CDR序列的VL域：(a)包含SEQ ID NO: 238之胺基酸序列的CDR-L1；(b)包含SEQ ID NO: 239之胺基酸序列的CDR-L2；及(c)包含SEQ ID NO: 240之胺基酸序列的CDR-L3。在另一態樣中，抗體包含VL域，其包含以下CDR：(a) CDR-L1，其包含SEQ ID NO: 238之胺基酸序列；(b) CDR-L2，其包含SEQ ID NO: 239之胺基酸序列；及(c) CDR-L3，其包含SEQ ID NO: 240之胺基酸序列；或其變體，其中CDR-L1、CDR-L2或CDR-L3中之一或多者中之一個、兩個或三個胺基酸經另一胺基酸取代。
在一個態樣中，抗S-HBs抗體VL域可進一步包含一或多個輕鏈構架序列，其選自(a) SEQ ID NO: 245之輕鏈構架區1 (LC-FR1)或與其具有至少85%、86%、87%、88%、89%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%或99%序列一致性的變體，(b) SEQ ID NO: 246之輕鏈構架區2 (LC-FR2)或與其具有至少85%、86%、87%、88%、89%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%或99%序列一致性的變體，(c) SEQ ID NO: 247之輕鏈構架區3 (LC-FR3)或與其具有至少85%、86%、87%、88%、89%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%或99%序列一致性的變體，及(d) SEQ ID NO: 248之輕鏈構架區4 (LC-FR4)或與其具有至少85%、86%、87%、88%、89%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%或99%序列一致性的變體。視情況，VL域包含如(a)至(d)中所定義之重鏈構架序列中之每一者。視情況，序列一致性百分比為95%。視情況，序列一致性百分比為98%。
在另一態樣中，提供一種抗S-HBs抗體，其中該抗體包含與SEQ ID NO: 249之胺基酸序列具有至少90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%序列一致性的輕鏈可變域(VL)序列。在一個態樣中，抗S-HBs抗體包含輕鏈可變域(VL)序列，其與胺基酸序列SEQ ID NO: 249具有至少95%序列一致性。在某些態樣中，具有至少90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%或99%一致性之VL序列相對於參考序列含有取代(例如保守性取代)、插入或缺失，但包含該序列之抗S-HBs抗體保持結合於S-HBs之能力。在某些態樣中，SEQ ID NO: 249中總共1至10個胺基酸已經取代、插入及/或缺失。在某些態樣中，取代、插入或缺失發生在CDR外部之區中(亦即在FR中)。視情況，抗S-HBs抗體包含SEQ ID NO: 249中之VL序列，包括彼序列之轉譯後修飾。在一個特定態樣中，VL包含一個、兩個或三個選自以下之CDR：(a) CDR-L1，其包含SEQ ID NO: 238之胺基酸序列；(b) CDR-L2，其包含SEQ ID NO: 239之胺基酸序列；及(c) CDR-L3，其包含SEQ ID NO: 240之胺基酸序列。
在另一實施例中，抗S-HBs抗體包含SEQ ID NO: 249之VL的CDR序列中之一或多者。在一個態樣中，抗S-HBs抗體包含一或多個(較佳全部三個) SEQ ID NO: 249之VL域之輕鏈CDR胺基酸序列及與SEQ ID NO: 249之VL域之構架胺基酸序列至少85%、86%、87%、88%、89%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%序列一致性的構架。視情況，序列一致性為95%或98%。
在另一態樣中，提供一種抗S-HBs抗體，其中該抗體包含如上文所提供之態樣中之任一者中的VH序列及如上文所提供之態樣中之任一者中的VL序列。
舉例而言，在一個例示性實施例中，抗體包含VH域，其包含SEQ ID NO: 237之CDR-H3；及VL域，其包含SEQ ID NO: 240之CDR-L3。VH域視情況進一步包含SEQ ID NO: 236之CDR-H2。
在另一例示性實施例中，抗體包含： i)包含以下CDR之VH域：(a) CDR-H1，其包含SEQ ID NO: 235之胺基酸序列；(b) CDR-H2，其包含SEQ ID NO: 236之胺基酸序列；及(c) CDR-H3，其包含SEQ ID NO: 237之胺基酸序列；或其變體，其中CDR-H1、CDR-H2或CDR-H3中之一或多者中之一個、兩個或三個胺基酸經另一胺基酸取代；及 ii)包含以下CDR之VL域：(a) CDR-L1，其包含SEQ ID NO: 238之胺基酸序列；(b) CDR-L2，其包含SEQ ID NO: 239之胺基酸序列；及(c) CDR-L3，其包含SEQ ID NO: 240之胺基酸序列；或其變體，其中CDR-L1、CDR-L2或CDR-L3中之一或多者中之一個、兩個或三個胺基酸經另一胺基酸取代。
在另一例示性實施例中，抗體包含： i)與胺基酸序列SEQ ID NO: 250具有至少90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%序列一致性的重鏈可變域(VH)序列；及 ii)與胺基酸序列SEQ ID NO: 249具有至少90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%序列一致性的輕鏈可變域(VL)序列。
在另一例示性實施例中，抗S-HBs抗體包含：(a) CDR-H1，其包含SEQ ID NO: 235之胺基酸序列；(b) CDR-H2，其包含SEQ ID NO: 236之胺基酸序列；(c) CDR-H3，其包含SEQ ID NO: 237之胺基酸序列；(d) CDR-L1，其包含SEQ ID NO: 238之胺基酸序列；(e) CDR-L2，其包含SEQ ID NO: 239之胺基酸序列；及(f) CDR-L3，其包含SEQ ID NO: 240之胺基酸序列，及與SEQ ID NO: 250之胺基酸序列具有至少90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%序列一致性之VH域，及與SEQ ID NO: 249之胺基酸序列具有至少90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%序列一致性的VL域。在一個態樣中，VH域與SEQ ID NO: 250之胺基酸序列具有至少95%序列一致性。在一個態樣中，VL域與SEQ ID NO: 249之胺基酸序列具有至少95%序列一致性。在一個實施例中，抗體特異性結合於S-HBs。在另一實施例中，抗體結合於滿足以下解離常數(KD)之S-HBs：當與包含SEQ ID NO: 250之VH序列及SEQ ID NO: 249之VL序列的抗體之解離常數(KD)相比時，解離常數降低至多10倍或增加至多10倍。
在一個態樣中，抗體包含分別於SEQ ID NO: 250及SEQ ID NO: 249中VH及VL序列，包括彼等序列之轉譯後修飾。
在另一態樣中，抗體可包含SEQ ID NO: 251之全長輕鏈及/或SEQ ID NO: 252或276之全長重鏈。
在另一態樣中，本發明提供一種抗體，其與本文所提供之抗S-HBs抗體結合於相同抗原決定基。舉例而言，在某些態樣中，提供一種抗體，其與包含SEQ ID NO: 250之VH序列及SEQ ID NO: 249之VL序列的抗S-HBs抗體結合於相同抗原決定基。在某些態樣中，提供結合於SEQ ID NO: 253之S-HBs之以下殘基的抗體：C124、C137、C138及/或C139；視情況R122、C149及/或I152；及視情況W156。抗體可包含如上文所定義之序列中之任一者。
在另一態樣中，本發明提供一種與本文所提供之抗S-HBs抗體競爭結合於S-HBs之抗體。
在一些實施例中，當在相同分析，例如ELISA分析或流式細胞量測術分析中評定時，如此部分中所述之抗體可具有或保持參考抗體Bv4.105與S-HBs (例如SEQ ID NO: 253)的結合活性之至少50%、60%、70%、75%、80%、85%、90%、95%或100%。
另外或替代地，當在相同分析，例如ELISA分析或流式細胞量測術分析中評定時，如此部分中所述之抗體可具有或保持參考抗體Bv4.105與SEQ ID NO: 257、258、259、260及/或261之蛋白中之一或多者或視情況之每一者，視情況至少與SEQ ID NO: 257的結合活性之至少50%、60%、70%、75%、80%、85%、90%、95%或100%。
參考抗體Bv4.105具有VH序列SEQ ID NO: 250及VL序列SEQ ID NO: 249。其具有SEQ ID NO: 252或276之全長重鏈及SEQ ID NO: 251之全長輕鏈。如實例中所用，SEQ ID NO: 276包含由載體LT615368.1表現之IgG1恆定區。
在一些實施例中，當在相同分析中評定時，此部分中所述之抗體結合於(例如SEQ ID NO: 253)之S-HBs，其中KD 值可比針對相同抗原之參考抗體Bv4.105之KD 值高不超過50、10、9、8、7、6、5、4、3或2倍，或小於或等於該參考抗體之該KD 值。
另外或替代地，抗體可結合於SEQ ID NO: 257、258、259、260及/或261之蛋白中之一或多者或視情況之每一者，視情況至少結合於SEQ ID NO: 257。其中KD 值可比針對相同抗原之參考抗體Bv4.105之KD 值高不超過50、10、9、8、7、6、5、4、3或2倍，或小於或等於該參考抗體之該KD 值。
在一些實施例中，如在此部分中所述之抗體可結合於(例如SEQ ID NO: 253)之S-HBs，其中EC50比參考抗體Bv4.105之EC50高不超過50、10、9、8、7、6、5、4、3或2倍或小於或等於該參考抗體之該值，如藉由ELISA或藉由流式細胞量測術所量測。替代地或另外，抗體可結合於SEQ ID NO: 257、258、259、260及/或261之蛋白中一或多者或視情況之每一者，視情況至少結合於SEQ ID NO: 257。其中EC50比參考抗體Bv4.105之EC50高不超過50、10、9、8、7、6、5、4、3或2倍或小於或等於該參考抗體之該值，如藉由ELISA或藉由流式細胞量測術所量測。
在一些實施例中，如此部分中所述之抗體可具有或保持針對HBV基因型D、E、F及/或H (視情況全部基因型D、E、F及H)之活體外中和活性。舉例而言，如此部分中所述之抗體可具有或保持針對HBV基因型D之活體外中和活性，例如，其中IC50 值為≤100 pg/ml，視情況≤10 pg/ml。
在另一實施例中，當使用相同分析(例如，如本文所述之活體外中和分析)評定時，抗體可具有HBV基因型D、E、F、G及/或H，視情況至少D，視情況全部D、E、F、G及/或H之中和的IC50 值，其比針對相同基因型的參考抗體Bv4.105之IC50 值高不超過50、10、9、8、7、6、5、4、3或2倍，或小於或等於該參考抗體之該值。
在另一實施例中，當使用相同分析(例如如本文所述之分析)評定時，抗體可具有或保持針對HBV基因型D、E、F、G及/或H，視情況至少D，視情況全部D、E、F、G及H之參考抗體Bv4.105之中和活性的至少50%、60%、70%、75%、80%、85%、90%、95%或100%。
視情況，抗體可活體內遏制例如感染有HBV基因型D、E、F、G或H，視情況D之個體的病毒之病毒血症。視情況，當使用相同分析(例如如本文所述之分析)評定時，抗體可具有或保持針對HBV基因型D、E、F、G及/或H，視情況至少D，視情況全部D、E、F、G及H之參考抗體Bv4.105之活體內病毒血症遏制活性的至少50%、60%、70%、75%、80%、85%、90%、95%或100%。
一般而言，根據本發明之任何態樣之抗S-HBs抗體(包括以上A-N中之任一者)可為單株抗體，包括嵌合抗體、人類化抗體或人類抗體。在一個態樣中，抗S-HBs抗體為抗體片段，例如Fv、Fab、Fab'、scFv、雙功能抗體或F(ab')2片段。
在另一通用態樣中，抗體可為全長抗體，例如完整IgG1、IgG2、IgG3抗體或如本文所定義之其他抗體類別或同型。
可存在或不存在全長抗體之C端離胺酸(Lys447)。在另一態樣中，可存在或不存在C端甘胺酸(Gly446)及C端離胺酸(Lys447)。
在另一態樣中，根據上述態樣中之任一者之抗S-HBs抗體可合併如以下部分1-7中所述之單一或組合的特徵中之任一者： 1.抗體親和力  在某些態樣中，本文所提供之抗體對目標蛋白之解離常數(KD )為≤1μM、≤100 nM、≤10 nM、≤1 nM、≤0.1 nM、≤0.01 nM或≤0.001 nM (例如10-8 M或更小，例如10-8 M至10-13 M，例如10-9 M至10-13 M)。
在其他態樣中，在相同分析中評定時，本文所提供之抗體具有或保持的KD 比針對該目標蛋白之參考抗體的KD 值高不超過50、10、9、8、7、6、5、4、3或2倍，或小於或等於該參考抗體之該值，其中該參考抗體係選自由以下組成之群：Bc1.187、Bv4.115、Bc8.159、Bv6.172、Bc1.229、Bc8.111、Bc1.128、Bc3.106、Bc1.180、Bv4.104、Bc8.104、Bc4.204、Bc1.263及Bv4.105。
在一個態樣中，使用BIACORE®表面電漿子共振分析來量測KD 。舉例而言，使用BIACORE® -2000或BIACORE® -3000 (BIAcore, Inc., Piscataway, NJ)之分析係在25℃下用固定抗原CM5晶片以約10個反應單位(RU)進行。在一個態樣中，根據供應商之說明書，用N -乙基-N' -(3-二甲胺基丙基)-碳化二亞胺鹽酸鹽(EDC)及N -羥基丁二醯亞胺(NHS)來活化羧基甲基化葡聚糖生物感測器晶片(CM5, BIACORE, Inc.)。用10 mM乙酸鈉(pH 4.8)將抗原稀釋至5 μg/ml (約0.2 μM)，隨後以5微升/分鐘之流動速率注射以獲得大約10個反應單位(RU)之偶合蛋白。在注入抗原後，注入1 M乙醇胺以阻斷未反應之基團。關於動力學量測，在25℃下以大約25 µl/min之流動速率注射Fab於含0.05 %聚山梨醇酯20 (TWEEN-20TM )界面活性劑之PBS (PBST)中之兩倍連續稀釋液(0.78 nM至500 nM)。使用簡單的一比一朗格繆爾結合模型(one-to-one Langmuir binding model) (BIACORE® 評估軟體3.2版)、藉由同時擬合結合及解離感測圖譜來計算結合速率(kon )及解離速率(koff )。平衡解離常數(KD )按比率koff /kon 來計算。參見例如Chen等人，J. Mol. Biol. 293:865-881 (1999)。若根據上文表面電漿子共振分析，締合速率(on-rate)超過106 M-1 s-1 ，則可藉由使用螢光淬滅技術測定締合速率，該螢光淬火技術在存在如於諸如具有攪拌式光析槽之停流裝備型分光光度計(Aviv Instruments)或8000-系列SLM-AMINCOTM 分光光度計(ThermoSpectronic))之光譜儀中所量測之漸增濃度之抗原情況下，在25℃下量測含20 nM抗抗原抗體(Fab形式)之PBS (pH 7.2)之螢光發射強度(激發=295 nm；發射=340 nm，16 nm帶通)的增加或降低。
在另一態樣中，ELISA可用於計算KD 值，例如，如Friguet等人 J Immunol. Methods (1985) 77 (2): 305-19中所述。
2.抗體片段  在某些態樣中，本文所提供之抗體為抗體片段。
在一個態樣中，抗體片段為Fab、Fab'、Fab'-SH或F(ab')2 片段，特定言之為Fab片段。完整抗體之番木瓜蛋白酶分解產生兩個一致抗原結合片段，稱作「Fab」片段，Fab片段各含有重鏈可變域及輕鏈可變域(分別為VH及VL)且亦含有輕鏈之恆定域(CL)及重鏈之第一恆定域(CH1)。因此，術語「Fab片段」係指包含有包含VL域及CL域之輕鏈以及包含VH域及CH1域之重鏈片段的抗體片段。「Fab'片段」與Fab片段之不同之處在於，在包括一或多個來自抗體鉸鏈區之半胱胺酸之CH1域之羧基端處添加有殘基。Fab'-SH為其中恆定域之半胱胺酸殘基帶有游離硫醇基之Fab'片段。胃蛋白酶處理得到F(ab')2 片段，其具有兩個抗原結合位點(兩個Fab片段)及Fc區之一部分。對於包含救助受體結合抗原決定基殘基且具有延長之活體內半衰期之Fab及F(ab')2 片段的論述，參見美國專利第5,869,046號。
在另一態樣中，抗體片段為雙功能抗體、三功能抗體或四功能抗體。「雙功能抗體」為兩個抗原結合位點可為二價或雙特異性之抗體片段。參見例如EP 404,097；WO 1993/01161；Hudson等人，Nat. Med. 9:129-134 (2003)；及Hollinger等人，Proc. Natl. Acad. Sci. USA 90: 6444-6448 (1993)。三功能抗體及四功能抗體亦描述於Hudson等人，Nat. Med. 9:129-134 (2003)中。
在另一態樣中，抗體片段為單鏈Fab片段。「單鏈Fab片段」或「scFab」係由抗體重鏈可變域(VH)、抗體重鏈恆定域1 (CH1)、抗體輕鏈可變域(VL)、抗體輕鏈恆定域(CL)及連接子組成之多肽，其中該等抗體結構域及該連接子在N端至C端方向上具有以下次序中之一者：a) VH-CH1-連接子-VL-CL；b) VL-CL-連接子-VH-CH1；c) VH -CL-連接子-VL-CH1；或d) VL-CH1-連接子-VH -CL。特定言之，該連接子為具有至少30個胺基酸，較佳地32至50個胺基酸之多肽。該單鏈Fab片段經由CL結構域與CH1結構域之間的天然二硫鍵穩定化。另外，此等單鏈Fab片段可藉由經由插入半胱胺酸殘基(例如可變重鏈中之位置44及可變輕鏈中之位置100，根據Kabat編號)而產生鏈間二硫鍵來進一步穩定化。
在另一態樣中，抗體片段為單鏈可變片段(scFv)。「單鏈可變片段」或「scFv」為藉由連接子連接的抗體之重鏈(VH)與輕鏈(VL)之可變域之融合蛋白。特定言之，連接子為具有10至25個胺基酸之短多肽，且通常富含甘胺酸以獲得可撓性以及富含絲胺酸或蘇胺酸以獲得溶解度，且可連接VH之N端與VL之C端，反之亦然。儘管移除恆定區且引入連接子，但此蛋白保持初始抗體之特異性。關於scFv片段之綜述，參見例如Plückthun,The Pharmacology of Monoclonal Antibodies , 第113卷, Rosenburg及Moore編, (Springer-Verlag, New York), 第269-315頁(1994)；亦參見WO 93/16185；及美國專利第5,571,894號及第5,587,458號。
在另一態樣中，抗體片段為單域抗體。「單域抗體」為包含抗體之重鏈可變域之全部或一部分或輕鏈可變域之全部或一部分的抗體片段。在某些態樣中，單域抗體為人類單域抗體(Domantis, Inc., Waltham, MA；參見例如美國專利第6,248,516 B1號)。
抗體片段可藉由各種技術製得，包括但不限於完整抗體之蛋白水解分解以及藉由重組宿主細胞(例如大腸桿菌)重組產生，如本文所述。
3.嵌合及人類化抗體  在某些態樣中，本文所提供之抗體為嵌合抗體。某些嵌合抗體描述於例如美國專利第4,816,567號；及Morrison等人，Proc. Natl. Acad. Sci. USA , 81:6851-6855 (1984))中。在一個實例中，嵌合抗體包含非人類可變區(例如，來源於小鼠、大鼠、倉鼠、兔或非人類靈長類動物(諸如猴)之可變區)及人類恆定區。在另一個實例中，嵌合抗體為「類別轉換」抗體，其中類別或子類已自親本抗體之類別或子類變化。嵌合抗體包括其抗原結合片段。
在某些態樣中，嵌合抗體為人類化抗體。典型地，對非人類抗體進行人類化以降低對人類之免疫原性，同時保持親本非人類抗體之特異性及親和力。一般而言，人類化抗體包含一或多個可變域，其中CDR (或其部分)來源於非人類抗體，且FR (或其部分)來源於人類抗體序列。人類化抗體視情況亦將包含人類恆定區之至少一部分。在一些態樣中，人類化抗體中之一些FR殘基經來自非人類抗體(例如，CDR殘基所來源於之抗體)之對應殘基取代，例如以恢復或改良抗體特異性或親和力。
人類化抗體及製造其之方法評述於例如Almagro及Fransson,Front. Biosci. 13:1619-1633 (2008)中，且進一步描述於例如Riechmann等人，Nature 332:323-329 (1988)；Queen等人，Proc. Nat'l Acad. Sci. USA 86:10029-10033 (1989)；美國專利第5,821,337號、第7,527,791號、第6,982,321號及第7,087,409號；Kashmiri等人，Methods 36:25-34 (2005) (描述特異性決定區(SDR)移植)；Padlan,Mol. Immunol. 28:489-498 (1991) (描述「表面再塑」)；Dall'Acqua等人，Methods 36:43-60 (2005) (描述「FR改組」)；及Osbourn等人，Methods 36:61-68 (2005)及Klimka等人，Br. J. Cancer, 83:252-260 (2000) (描述FR改組之「導引選擇」方法)。
可用於人類化之人類構架區包括但不限於：使用「最佳擬合(best-fit)」方法選擇之構架區(參見例如Sims等人，J. Immunol . 151:2296 (1993))；來源於具有輕鏈或重鏈可變區之特定子組之人類抗體的共有序列之構架區(參見例如Carter等人，Proc. Natl. Acad. Sci. USA , 89:4285 (1992)；及Presta等人，J. Immunol ., 151:2623 (1993))；人類成熟(體細胞突變)構架區或人類生殖系構架區(參見例如Almagro及Fransson,Front. Biosci . 13:1619-1633 (2008))；及來源於篩選FR庫之構架區(參見例如Baca等人，J. Biol. Chem . 272:10678-10684 (1997)及Rosok等人，J. Biol. Chem . 271:22611-22618 (1996))。
4.人類抗體  在某些態樣中，本文所提供之抗體為人類抗體。可使用此項技術中已知之各種技術產生人類抗體。人類抗體一般描述於van Dijk及van de Winkel,Curr. Opin. Pharmacol. 5: 368-74 (2001)及Lonberg,Curr. Opin. Immunol. 20:450-459 (2008)中。
人類抗體可藉由將免疫原投與已經改造可響應於抗原攻毒而產生完整人類抗體或具有人類可變區之完整抗體的轉殖基因動物來製備。此類動物通常含有人類免疫球蛋白基因座之全部或一部分，其置換內源性免疫球蛋白基因座，或存在於染色體外或隨機整合至動物染色體中。在此類轉殖基因小鼠中，內源性免疫球蛋白基因座一般已失活。對於自轉殖基因動物獲得人類抗體之方法的綜述，參見Lonberg, Nat. Biotech. 23:1117-1125 (2005)。另外，參見例如美國專利第6,075,181號及第6,150,584號，描述XENOMOUSETM 技術；美國專利第5,770,429號，描述HUMAB®技術；美國專利第7,041,870號，描述K-M MOUSE®技術；及美國專利申請公開案第US 2007/0061900號，描述VELOCIMOUSE®技術。由此類動物產生之完整抗體的人類可變區可進一步加以修飾，例如藉由與不同人類恆定區組合。
人類抗體亦可藉由基於融合瘤之方法製備。用於產生人類單株抗體之人類骨髓瘤及小鼠-人類融合骨髓瘤細胞株已有描述。(參見例如KozborJ. Immunol. , 133: 3001 (1984)；Brodeur等人，Monoclonal Antibody Production Techniques and Applications , 第51-63頁 (Marcel Dekker, Inc.，New York，1987)；及Boerner等人，J. Immunol ., 147: 86 (1991))。經由人類B細胞融合瘤技術產生的人類抗體亦描述於Li等人，Proc. Natl. Acad. Sci. USA , 103:3557-3562 (2006)中。其他方法包括例如美國專利第7,189,826號(描述自融合瘤細胞株產生單株人類IgM抗體)及Ni,Xiandai Mianyixue 26(4):265-268 (2006) (描述人類-人類融合瘤)中所述之彼等方法。人類融合瘤技術(三源融合瘤技術(Trioma technology))亦描述於Vollmers及Brandlein,Histology and Histopathology , 20(3):927-937 (2005)以及Vollmers及Brandlein,Methods and Findings in Experimental and Clinical Pharmacology , 27(3):185-91 (2005)中。
人類抗體亦可藉由分離選自人源噬菌體呈現庫之可變域序列產生。此類可變域序列接著可與所需人類恆定域組合。下文描述用於自抗體庫選擇人類抗體之技術。
5.庫來源之抗體  在某些態樣中，本文所提供之抗體來源於庫。本發明之抗體可藉由針對具有所需一或多種活性之抗體的篩選組合庫來分離。用於篩選組合庫之方法評述於例如Lerner等人之Nature Reviews 16:498-508 (2016)中。舉例而言，用於生成噬菌體呈現庫及篩選具有所需結合特徵之抗體的此類庫之各種方法在本領域中已知。此類方法綜述於例如Frenzel等人之mAbs 8:1177-1194 (2016)；Bazan等人之Human Vaccines and Immunotherapeutics 8:1817-1828 (2012)及Zhao等人之Critical Reviews in Biotechnology 36:276-289 (2016)以及Hoogenboom等人之Methods in Molecular Biology 178:1-37 (O'Brien等人編, Human Press, Totowa, NJ, 2001)及Marks及Bradbury之Methods in Molecular Biology 248:161-175 (Lo編, Human Press, Totowa, NJ, 2003)中。
在某些噬菌體呈現方法中，VH及VL基因之譜系分別藉由聚合酶鏈反應(PCR)選殖且在噬菌體庫中隨機重組，接著可如Winter等人之Annual Review of Immunology 12: 433-455 (1994)中所述，針對抗原結合噬菌體篩選。噬菌體通常以單鏈Fv (scFv)片段或Fab片段形式呈現抗體片段。來自免疫來源之庫提供抗免疫原之高親和力抗體而無需構築融合瘤。替代地，可選殖(例如自人類)原生譜系以提供對廣泛範圍之非自體抗原以及自體抗原之單一抗體來源而無需任何免疫接種，如Griffiths等人之EMBO Journal 12: 725-734 (1993)中所述。此外，原初庫亦可藉由自幹細胞選殖未經重排V基因區段及使用含有無規序列之PCR引子編碼高度可變CDR3區及實現活體外重排來以合成方式製得，如Hoogenboom及Winter之Journal of Molecular Biology 227: 381-388 (1992)所述。描述人類抗體噬菌體庫的專利公開案包括例如美國專利第5,750,373號、第7,985,840號、第7,785,903號及第8,679,490號以及美國專利公開案第2005/0079574號、第2007/0117126號、第2007/0237764號及第2007/0292936號。
此項技術中已知之用於在組合庫中篩選具有一或多種所需活性之抗體的方法之其他實例包括核糖體及mRNA呈現，以及用於細菌、哺乳動物細胞、昆蟲細胞或酵母細胞上之抗體呈現及選擇的方法。用於酵母菌表面呈現之方法綜述於例如Scholler等人之Methods in Molecular Biology 503:135-56 (2012)及Cherf等人之Methods in Molecular biology 1319:155-175 (2015)以及Zhao等人之Methods in Molecular Biology 889:73-84 (2012)中。核糖體呈現方法描述於例如He等人之Nucleic Acids Research 25:5132-5134 (1997)及Hanes等人之PNAS 94:4937-4942 (1997)中。
自人類抗體庫分離之抗體或抗體片段在本文中視為人類抗體或人類抗體片段。
6.多特異性抗體  在某些態樣中，本文所提供之抗體為多特異性抗體，例如雙特異性抗體。「多特異性抗體」為具有針對至少兩個不同位點(亦即不同抗原上之不同抗原決定基或同一抗原上之不同抗原決定基)之結合特異性的單株抗體。在某些態樣中，多特異性抗體具有三個或更多個結合特異性。在某些態樣中，結合特異性中之一者係針對S-HBs，且其他特異性係針對任何其他抗原。在某些態樣中，雙特異性抗體可結合S-HBs之兩個(或更多個)不同抗原決定基。多特異性(例如雙特異性)抗體亦可用於將細胞毒性劑或細胞定位至表現S-HBs之細胞。多特異性抗體可呈全長抗體或抗體片段形式製備。
用於製得多特異性抗體之技術包括但不限於對具有不同特異性之兩個免疫球蛋白重鏈-輕鏈對進行重組共表現(參見Milstein及Cuello,Nature 305: 537 (1983))；以及「臼包杵(knob-in-hole)」工程改造(參見例如美國專利第5,731,168號，及Atwell等人，J. Mol. Biol. 270:26 (1997))。多特異性抗體亦可藉由以下方式製得：對靜電轉向效應進行工程改造來製得抗體Fc-異二聚體分子(參見例如WO 2009/089004)；使兩種或更多種抗體或片段交聯(參見例如美國專利第4,676,980號，及Brennan等人，Science 229: 81 (1985))；使用白胺酸拉鏈來產生雙特異性抗體(參見例如Kostelny等人，J. Immunol. , 148(5):1547-1553 (1992)，及WO 2011/034605)；使用共同輕鏈技術以避免輕鏈錯配問題(參見例如WO 98/50431)；使用「雙功能抗體」技術來製得雙特異性抗體片段(參見例如Hollinger等人，Proc. Natl. Acad. Sci. USA , 90:6444-6448 (1993))；以及使用單鏈Fv (sFv)二聚體(參見例如Gruber等人，J. Immunol. , 152:5368 (1994))；以及例如Tutt等人J. Immunol . 147: 60 (1991)中所述製備三特異性抗體。
本文中亦包括經工程改造的具有三個或更多個抗原結合位點之抗體(包括例如「章魚抗體(Octopus antibodies)」或DVD-Ig) (參見例如WO 2001/77342及WO 2008/024715)。具有三個或更多個抗原結合位點之多特異性抗體的其他實例可見於WO 2010/115589、WO 2010/112193、WO 2010/136172、WO 2010/145792及WO 2013/026831中。雙特異性抗體或其抗原結合片段亦包括「雙重作用FAb」或「DAF」，其包含結合於S-HBs以及另一不同抗原或結合於S-HBs之兩個不同抗原決定基的一抗原結合位點(參見例如US 2008/0069820及WO 2015/095539)。
亦可提供呈不對稱形式之多特異性抗體，其在具有相同抗原特異性之一或多個結合臂中具有結構域交叉，亦即交換VH/VL域(參見例如WO 2009/080252及WO 2015/150447)、CH1/CL結構域(參見例如WO 2009/080253)或完整Fab臂(參見例如WO 2009/080251、WO 2016/016299，亦參見Schaefer等人，PNAS, 108 (2011) 1187-1191, 及Klein等人，MAbs 8 (2016) 1010-20)。在一個態樣中，多特異性抗體包含交叉Fab片段。術語「交叉Fab片段」或「xFab片段」或「交叉型Fab片段」係指其中重鏈及輕鏈之可變區或恆定區互換之Fab片段。交叉Fab片段包含由輕鏈可變區(VL)及重鏈恆定區1 (CH1)構成之多肽鏈以及由重鏈可變區(VH)及輕鏈恆定區(CL)構成之多肽鏈。不對稱Fab臂亦可藉由將帶電或不帶電胺基酸突變引入域界面中以導引正確Fab配對來進行工程改造。參見例如WO 2016/172485。
多特異性抗體之各種其他分子形式為此項技術中已知的且包括在本文中(參見例如Spiess等人，Mol Immunol 67 (2015) 95-106)。
本文中亦包括之一種特定類型之多特異性抗體為經設計以同時結合目標細胞(例如感染細胞)上之表面抗原及T細胞受體(TCR)複合物(諸如CD3)之活化性不變組分來再靶向T細胞以殺滅目標細胞的雙特異性抗體。因此，在某些態樣中，本文所提供之抗體為多特異性抗體，特定言之，雙特異性抗體，其中結合特異性中之一者係針對S-HBs且另一者係針對CD3。
可適用於此目的之雙特異性抗體型式的實例包括但不限於所謂的「BiTE」(雙特異性T細胞接合子)分子，其中兩個scFv分子藉由可撓性連接子融合(參見例如WO 2004/106381、WO 2005/061547、WO 2007/042261及WO 2008/119567，Nagorsen及Bäuerle, Exp Cell Res 317, 1255-1260 (2011))；雙功能抗體(Holliger等人，Prot Eng 9, 299-305 (1996))及其衍生物，諸如串聯雙功能抗體(「TandAb」；Kipriyanov等人，J Mol Biol 293, 41-56 (1999))；「DART」(雙重親和力再靶向)分子，其係基於雙功能抗體型式但以用於額外穩定化之C端二硫橋鍵為特徵(Johnson等人，J Mol Biol 399, 436-449 (2010))，及所謂的三功能單抗(triomab)，其為完全雜合小鼠/大鼠IgG分子(綜述於Seimetz等人，Cancer Treat Rev 36, 458-467 (2010)中)。本文所包括之特定T細胞雙特異性抗體型式描述於WO 2013/026833、WO 2013/026839、WO 2016/020309；Bacac等人，Oncoimmunology 5(8) (2016) e1203498中。
7.抗體變體 在某些態樣中，涵蓋本文所提供之抗體之胺基酸序列變體。舉例而言，可能需要改變抗體之結合親和力及/或其他生物特性。抗體之胺基酸序列變體可藉由將適當修飾引入編碼該抗體之核苷酸序列中或藉由肽合成來製備。此類修飾包括例如在抗體之胺基酸序列內的殘基之缺失及/或插入及/或取代。可進行缺失、插入及取代之任何組合以獲得最終構築體，其限制條件為最終構築體具有所需特徵，例如抗原結合。
a) 取代、插入及缺失變體 在某些態樣中，提供具有一或多個胺基酸取代之抗體變體。用於取代型突變誘發之相關位點包括CDR及FR。保守性取代展示於表1中標題「較佳取代」下。更實質性變化提供於表1中標題「例示性取代」下，且如下文參考胺基酸側鏈類別進一步描述。胺基酸取代可引入相關抗體中，且針對如下所需活性篩選產物：例如保持/改進之抗原結合、降低之免疫原性或改進之ADCC或CDC。表1
初始殘基 例示性取代 較佳取代
Ala (A) Val；Leu；Ile Val
Arg (R) Lys；Gln；Asn Lys
Asn (N) Gln；His；Asp, Lys；Arg Gln
Asp (D) Glu；Asn Glu
Cys (C) Ser；Ala Ser
Gln (Q) Asn；Glu Asn
Glu (E) Asp；Gln Asp
Gly (G) Ala Ala
His (H) Asn；Gln；Lys；Arg Arg
Ile (I) Leu；Val；Met；Ala；Phe；正白胺酸 Leu
Leu (L) 正白胺酸；Ile；Val；Met；Ala；Phe Ile
Lys (K) Arg；Gln；Asn Arg
Met (M) Leu；Phe；Ile Leu
Phe (F) Trp；Leu；Val；Ile；Ala；Tyr Tyr
Pro (P) Ala Ala
Ser (S) Thr Thr
Thr (T) Val；Ser Ser
Trp (W) Tyr；Phe Tyr
Tyr (Y) Trp；Phe；Thr；Ser Phe
Val (V) Ile；Leu；Met；Phe；Ala；正白胺酸 Leu
胺基酸可根據共有側鏈特性來進行分組： (1) 疏水性：正白胺酸、Met、Ala、Val、Leu、Ile； (2) 中性親水性：Cys、Ser、Thr、Asn、Gln； (3) 酸性：Asp、Glu； (4) 鹼性：His、Lys、Arg； (5) 影響鏈取向之殘基：Gly、Pro； (6) 芳族：Trp、Tyr、Phe。
非保守性取代必然伴有此等類別中之一者之一員與另一類別之一員的交換。
一種類型之取代型變體涉及取代親本抗體(例如人類化或人類抗體)之一或多個高變區殘基。一般而言，選用於進一步研究之所得變體相對於親本抗體將在某些生物特性方面具有修飾(例如改善) (例如親和力提高、免疫原性降低)及/或將實質上保留親本抗體之某些生物特性。一種示例性取代型變體為親和力成熟抗體，其可例如使用基於噬菌體呈現之親和力成熟技術(諸如本文所述之技術)便利地產生。簡言之，使一或多個CDR殘基突變且在噬菌體上呈現變異抗體且針對特定生物活性(例如結合親和力)篩選。
改變(例如取代)可於CDR中進行以例如改善抗體親和力。可以在CDR「熱點」，亦即由在體細胞成熟過程期間經受高頻突變之密碼子編碼的殘基(參見例如Chowdhury, Methods Mol. Biol. 207:179-196 (2008))及/或接觸抗原之殘基中進行此等改變，其中測試所得變異VH或VL之結合親和力。藉由構築二級庫及自二級庫再選擇來實現親和力成熟已描述於Hoogenboom等人之Methods in Molecular Biology 178:1-37 (O'Brien等人編, Human Press, Totowa, NJ, (2001))。在親和力成熟之一些態樣中，藉由各種方法(例如易錯PCR、鏈改組或寡核苷酸導引之突變誘發)中之任一種將多樣性引入經選擇以用於成熟之可變基因中。隨後產生二級庫。隨後篩選該庫以鑑別具有所需親和力之任何抗體變體。引入多樣性之另一方法涉及CDR導引途徑，其中將若干CDR殘基(例如一次4-6個殘基)隨機分組。涉及抗原結合之CDR殘基可特定鑑別，例如使用丙胺酸掃描突變誘發或模型化來鑑別。常常尤其以CDR-H3及CDR-L3為目標。
在某些態樣中，取代、插入或缺失可發生在一或多個CDR內，只要該等更改不實質上減弱抗體結合抗原之能力即可。舉例而言，不實質上減弱結合親和力之保守更改(例如如本文所提供之保守取代)可在CDR中進行。此等改變可在例如CDR中接觸抗原之殘基外部進行。在上文所提供之某些變異VH及VL序列中，各CDR未經更改或含有不超過一個、兩個或三個胺基酸取代。
如Cunningham及Wells (1989)Science , 244:1081-1085所述，可用於識別可針對突變誘發進行靶向之抗體殘基或區之方法稱為「丙胺酸掃描突變誘發」。在此方法中，殘基或靶殘基之群(例如，帶電殘基，諸如arg、asp、his、lys及glu)經鑑別出，且經中性或帶負電胺基酸(例如丙胺酸或聚丙胺酸)置換以確定抗體與抗原之相互作用是否受影響。可在對初始取代展現功能敏感性之胺基酸位置處引入其他取代。可替代地或另外，抗原-抗體複合物之晶體結構可用於識別抗體與抗原之間的接觸點。此類接觸殘基及鄰近殘基可作為取代候選物之標靶或排除在取代候選物之外。可篩選變體以確定其是否含有所需特性。
胺基酸序列插入包括長度在一個殘基至含有一百個或超過一百個殘基之多肽範圍內的胺基末端及/或羧基末端融合，以及單一或多個胺基酸殘基之序列內插入。末端插入之實例包括具有N端甲硫胺醯基殘基之抗體。抗體分子之其他插入變體包括與抗體之N端或C端至延長抗體血清半衰期之酶(例如針對ADEPT (抗體導引之酶前驅藥療法))或多肽的融合。
b) 糖基化變體 在某些態樣中，本文所提供之抗體經更改以提高或降低抗體糖基化之程度。向抗體中添加糖基化位點或使抗體缺失糖基化位點可藉由改變胺基酸序列以便產生或移除一或多個糖基化位點來便利地實現。
在抗體包含Fc區之情況下，可更改與其附接之寡醣。由哺乳動物細胞產生之原生抗體通常包含分支鏈雙觸角寡醣，其通常藉由N鍵附接至Fc區之CH2域的Asn297。參見例如Wright等人TIBTECH 15:26-32 (1997)。寡醣可包括各種碳水化合物，例如甘露糖、N-乙醯基葡糖胺(GlcNAc)、半乳糖及唾液酸，以及附接至雙觸寡醣結構之「主幹」中之GlcNAc的岩藻醣。在一些態樣中，可對本發明抗體中之寡醣進行修飾以便產生具有某些經改善特性之抗體變體。
在一個態樣中，提供具有非岩藻糖基化寡醣，亦即缺乏(直接地或間接地)連接至Fc區之岩藻醣之寡醣結構的抗體變體。特定言之，此等非岩藻糖基化寡醣(亦稱為「去岩藻糖基化」寡醣)為缺少附接至雙觸寡醣結構之主幹中之第一GlcNAc的岩藻醣殘基之N連接寡醣。在一個態樣中，提供相較於原生或親本抗體而言具有經增加比例之Fc區中非岩藻糖基化寡醣之抗體變體。舉例而言，非岩藻糖基化寡醣之比例可為至少約20%、至少約40%、至少約60%、至少約80%或甚至約100% (亦即不存在岩藻糖基化寡醣)。非岩藻糖基化寡醣之百分比為如藉由例如WO 2006/082515中所述之MALDI-TOF質譜法所量測，相對於連接至Asn 297之所有寡醣(例如複合、雜交及高甘露糖結構)的總和，缺少岩藻醣殘基之寡醣的(平均)量。Asn297係指位於Fc區中約位置297 (Fc區殘基之EU編號)處的天冬醯胺殘基；然而，由於抗體之輕微序列變化，Asn297亦可位於位置297上游或下游約±3個胺基酸處，亦即位置294與300之間。Fc區中之非岩藻糖基化寡醣之比例增加的此類抗體可具有FcγRIIIa受體結合改良及/或效應功能改良，尤其ADCC功能改良。參見例如，US 2003/0157108；US 2004/0093621。
能夠產生具有降低之岩藻糖基化之抗體的細胞株之實例包括缺乏蛋白岩藻糖基化之Lec13 CHO細胞(Ripka等人Arch. Biochem. Biophys. 249:533-545 (1986)；US 2003/0157108；以及WO 2004/056312，尤其在實例11處)；及基因剔除細胞株，諸如α-1,6-岩藻糖基轉移酶基因、FUT8 、基因剔除CHO細胞(參見例如Yamane-Ohnuki等人Biotech. Bioeng. 87:614-622 (2004)；Kanda, Y.等人，Biotechnol. Bioeng ., 94(4):680-688 (2006)；以及WO 2003/085107)；或具有經減弱或消除之GDP-岩藻醣合成或轉運蛋白活性之細胞(參見例如US2004259150、US2005031613、US2004132140、US2004110282)。
在另一態樣中，提供具有對分寡醣之抗體變體，例如其中附接至抗體之Fc區之雙觸角寡醣經GlcNAc對分。此等抗體變體可具有降低之岩藻糖基化及/或改良之ADCC，如上文所述。該等抗體變體之實例描述於例如以下中：Umana等人，Nat Biotechnol 17, 176-180 (1999)；Ferrara等人，Biotechn Bioeng 93, 851-861 (2006)；WO 99/54342；WO 2004/065540；WO 2003/011878。
亦提供寡醣中之至少一個半乳糖殘基與Fc區附接之抗體變體。此類抗體變體可具有經改良之CDC功能。該等抗體變體描述於例如WO 1997/30087；WO 1998/58964；及WO 1999/22764中。
c) Fc 區變體 在某些態樣中，可將一或多個胺基酸修飾引入至本文所提供之抗體的Fc區中，從而產生Fc區變體。Fc區變體可包含人類Fc區序列(例如人類IgG1 、IgG2 、IgG3 或IgG4 Fc區)該人類Fc區序列在一或多個胺基酸位置處包含胺基酸修飾(例如取代基)。
在某些態樣中，本發明涵蓋擁有一些但並非所有效應功能之抗體變體，該等效應功能使其成為抗體在活體內之半衰期至關重要且某些效應功能(諸如補體依賴性細胞毒性(CDC)及抗體依賴性細胞介導之細胞毒性(ADCC))不必要或有害之應用的所需候選。可進行活體外及/或活體內細胞毒性分析以確認CDC及/或ADCC活性之降低/消耗。舉例而言，可進行Fc受體(FcR)結合分析以確保抗體不具有FcγR結合能力(因此可能不具有ADCC活性)，但保留FcRn結合能力。用於調節ADCC之初級細胞NK細胞僅表現FcγRIII，而單核細胞表現FcγRI、FcγRII及FcγRIII。FcR在造血細胞上之表現概述於Ravetch及Kinet,Annu. Rev. Immunol. 9:457-492 (1991)之第464頁之表3中。用於評定所關注分子之ADCC活性之活體外分析之非限制性實例描述於以下中：美國專利第5,500,362號(參見例如Hellstrom, I.等人Proc. Nat ' l Acad. Sci. USA 83:7059-7063 (1986))及Hellstrom, I等人，Proc. Nat ' l Acad. Sci. USA 82:1499-1502 (1985)；美國專利第5,821,337號(參見Bruggemann, M.等人，J. Exp. Med. 166:1351-1361 (1987))。替代地，可採用非放射性分析方法(參見例如用於流動式細胞量測術之ACTI™非放射性細胞毒性分析(CellTechnology, Inc. Mountain View, CA)；及CytoTox 96® 非放射性細胞毒性分析(Promega, Madison, WI))。適用於此類分析之效應細胞包括周邊血液單核細胞(PBMC)及自然殺手(NK)細胞。替代地或另外，可評定相關分子在活體內(例如在動物模型中，諸如Clynes等人，Proc. Nat'l Acad. Sci. USA 95:652-656 (1998)中所揭示者)的ADCC活性。亦可進行C1q結合分析以確認抗體不能結合C1q且因此缺乏CDC活性。參見例如WO 2006/029879及WO 2005/100402中之C1q及C3c結合ELISA。為了評定補體活化，可進行CDC分析(參見例如Gazzano-Santoro等人，J. Immunol. Methods 202:163 (1996)；Cragg, M.S.等人，Blood 101:1045-1052 (2003)；及Cragg, M.S.及M.J. Glennie,Blood 103:2738-2743 (2004))。亦可使用此項技術中已知之方法執行FcRn結合及活體內清除率/半衰期測定(參見例如Petkova, S.B.等人，Int ' l. Immunol. 18(12):1759-1769 (2006)；WO 2013/120929 Al)。
效應功能減小之抗體包括具有Fc區殘基238、265、269、270、297、327及329中之一或多者之取代的彼等抗體(美國專利第6,737,056號)。該等Fc突變體包括具有胺基酸位置265、269、270、297及327中之兩個或更多個處之取代的Fc突變體，包括具有殘基265及297成丙胺酸之取代的所謂「DANA」Fc突變體(美國專利第7,332,581號)。
描述具有提高或降低之與FcR之結合的某些抗體變體。(參見例如，美國專利第6,737,056號；WO 2004/056312及Shields等人，J. Biol. Chem . 9(2): 6591-6604 (2001))。
在某些態樣中，抗體變體包含Fc區，該Fc區具有一或多個改良ADCC之胺基酸取代，例如Fc區之位置298、333及/或334 (殘基之EU編號)處之取代。
在某些態樣中，抗體變體包含Fc區，該Fc區具有一或多個降低FcγR結合之胺基酸取代，例如Fc區之位置234及235 (殘基之EU編號)處之取代。在一個態樣中，取代為L234A及L235A (LALA)。在某些態樣中，抗體變體進一步在來源於人類IgG1 Fc區之Fc區中包含D265A及/或P329G。在一個態樣中，取代為來源於人類IgG1 Fc區之Fc區中之L234A、L235A及P329G (LALA-PG)。(參加例如WO 2012/130831)。在另一態樣中，取代為來源於人類IgG1 Fc區之Fc區中的L234A、L235A及D265A (LALA-DA)。
在一些態樣中，進行Fc區中之改變，該改變使得C1q結合及/或補體依賴性細胞毒性(Complement Dependent Cytotoxicity；CDC)產生變化(亦即增加或降低)，例如如美國專利第6,194,551號、WO 99/51642及Idusogie等人J. Immunol. 164: 4178-4184 (2000)中所述。
半衰期延長且改善與負責將母體IgG轉移至胎兒之新生兒Fc受體(FcRn) (Guyer等人，J. Immunol. 117:587 (1976)及Kim等人，J. Immunol. 24:249 (1994))之結合的抗體描述於US2005/0014934 (Hinton等人)中。彼等抗體包含具有一或多個取代之Fc區，在其中Fc區與FcRn之結合得以改良。此等Fc變體包括具有以下Fc區殘基中之一或多者處之取代的彼等變體：238、252、254、256、265、272、286、303、305、307、311、312、317、340、356、360、362、376、378、380、382、413、424或434，例如Fc區殘基434之取代(參見例如美國專利第7,371,826號；Dall'Acqua, W.F.,等人. J. Biol. Chem. 281 (2006) 23514-23524)。
已藉由定點突變誘發來鑑別出對於小鼠Fc-小鼠FcRn相互作用至關重要的Fc區殘基(參見例如Dall'Acqua, W.F.等人 J. Immunol 169 (2002) 5171-5180)。殘基I253、H310、H433、N434及H435 (殘基之EU編號)參與該相互作用(Medesan, C.等人，Eur. J. Immunol. 26 (1996) 2533；Firan, M.等人，Int. Immunol. 13 (2001) 993；Kim, J.K.等人，Eur. J. Immunol. 24 (1994) 542)。經發現殘基I253、H310及H435對於人類Fc與鼠類FcRn之相互作用至關重要(Kim, J.K.等人，Eur. J. Immunol. 29 (1999) 2819)。對人類Fc-人類FcRn複合物之研究已展示殘基I253、S254、H435及Y436對於相互作用至關重要(Firan, M.等人，Int. Immunol. 13 (2001) 993；Shields, R.L.等人，J. Biol. Chem. 276 (2001) 6591-6604)。在Yeung, Y.A.等人(J. Immunol. 182 (2009) 7667-7671)中，已報告並檢查出殘基248至259及301至317及376至382及424至437之各種突變體。
在某些態樣中，抗體變體包含Fc區(在一些實施例中，IgG1之Fc區)，該Fc區具有一或多個降低FcRn結合之胺基酸取代，例如Fc區之位置253及/或310及/或435 (殘基之EU編號)處之取代。在某些態樣中，抗體變體包含具有位置253、310及435處之胺基酸取代的Fc區。在一個態樣中，取代為來源於人類IgG1 Fc區之Fc區中的I253A、H310A及H435A。參見例如Grevys, A.等人，J. Immunol. 194 (2015) 5497-5508。
在某些態樣中，抗體變體包含Fc區(在一些實施例中，IgG1之Fc區)，該Fc區具有一或多個降低FcRn結合之胺基酸取代，例如Fc區之位置310及/或433及/或436 (殘基之EU編號)處之取代。在某些態樣中，抗體變體包含具有位置310、433及436處之胺基酸取代的Fc區。在一個態樣中，取代為來源於人類IgG1 Fc區之Fc區中之H310A、H433A及Y436A。(參見例如WO 2014/177460 Al)。
在某些態樣中，抗體變體包含Fc區(在一些實施例中，IgG1之Fc區)，該Fc區具有一或多個增加FcRn結合之胺基酸取代，例如Fc區之位置252及/或254及/或256 (殘基之EU編號)處之取代。在某些態樣中，抗體變體包含具有位置252、254及256處之胺基酸取代的Fc區。在一個態樣中，取代為來源於人類IgG1 Fc區之Fc區中的M252Y、S254T及T256E。關於Fc區變體之其他實例，亦參見Duncan及Winter,Nature 322:738-40 (1988)；美國專利第5,648,260號；美國專利第5,624,821號；及WO 94/29351。
在某些其他態樣中，抗體變體包含Fc區(在一些實施例中，IgG1之Fc區)，該Fc區具有一或多個增加FcRn結合之胺基酸取代，例如Fc區之位置428及/或434及/或436 (殘基之EU編號)處之取代。在某些態樣中，抗體變體包含具有位置428、434及436處之胺基酸取代的Fc區。在一個態樣中，取代為來源於人類IgG1 Fc區的Fc區中之N428L、N434A及Y436T。在另一態樣中，抗體變體包含具有位置434處之胺基酸取代，例如N434A的Fc區。
在某些其他態樣中，抗體變體包含Fc區(在一些實施例中，IgG1之Fc區)，該Fc區具有一或多個增加FcRn結合之胺基酸取代，例如位置307及/或434處之取代，例如T307H及/或N434H，例如T307H及N434H。
在某些特定實施例中，抗體變體包含如本文所述之重鏈，該重鏈藉由取代i) M252Y、S254T及T256E；ii) N428L、N434A及Y436T；iii) N434A；或iv) T307H及N434H修飾。
舉例而言，抗體可包含SEQ ID NO: 17之輕鏈及SEQ ID NO: 18或263之重鏈，該等鏈藉由選自由以下組成之群的取代修飾：i) M252Y、S254T及T256E；ii) N428L、N434A及Y436T；iii) N434A；及iv) T307H及N434H。
在另一特定實施例中，抗體可包含SEQ ID NO: 35之輕鏈及SEQ ID NO: 36或264之重鏈，該等鏈藉由選自由以下組成之群的取代修飾：i) M252Y、S254T及T256E；ii) N428L、N434A及Y436T；iii) N434A；及iv) T307H及N434H。
在另一特定實施例中，抗體可包含SEQ ID NO: 53之輕鏈及SEQ ID NO: 54或265之重鏈，該等鏈藉由選自由以下組成之群的取代修飾：i) M252Y、S254T及T256E；ii) N428L、N434A及Y436T；iii) N434A；及iv) T307H及N434H。
在另一特定實施例中，抗體可包含SEQ ID NO: 71之輕鏈及SEQ ID NO: 72或266之重鏈，該等鏈藉由選自由以下組成之群的取代修飾：i) M252Y、S254T及T256E；ii) N428L、N434A及Y436T；iii) N434A；及iv) T307H及N434H。
在另一特定實施例中，抗體可包含SEQ ID NO: 89之輕鏈及SEQ ID NO: 90或267之重鏈，該等鏈藉由選自由以下組成之群的取代修飾：i) M252Y、S254T及T256E；ii) N428L、N434A及Y436T；iii) N434A；及iv) T307H及N434H。
在另一特定實施例中，抗體可包含SEQ ID NO: 107之輕鏈及SEQ ID NO: 108或268之重鏈，該等鏈藉由選自由以下組成之群的取代修飾：i) M252Y、S254T及T256E；ii) N428L、N434A及Y436T；iii) N434A；及iv) T307H及N434H。
在另一特定實施例中，抗體可包含SEQ ID NO: 125之輕鏈及SEQ ID NO: 126或269之重鏈，該等鏈藉由選自由以下組成之群的取代修飾：i) M252Y、S254T及T256E；ii) N428L、N434A及Y436T；iii) N434A；及iv) T307H及N434H。
在另一特定實施例中，抗體可包含SEQ ID NO: 143之輕鏈及SEQ ID NO: 144或270之重鏈，該等鏈藉由選自由以下組成之群的取代修飾：i) M252Y、S254T及T256E；ii) N428L、N434A及Y436T；iii) N434A；及iv) T307H及N434H。
在另一特定實施例中，抗體可包含SEQ ID NO: 161之輕鏈及SEQ ID NO: 162或271之重鏈，該等鏈藉由選自由以下組成之群的取代修飾：i) M252Y、S254T及T256E；ii) N428L、N434A及Y436T；iii) N434A；及iv) T307H及N434H。
在另一特定實施例中，抗體可包含SEQ ID NO: 179之輕鏈及SEQ ID NO: 180或272之重鏈，該等鏈藉由選自由以下組成之群的取代修飾：i) M252Y、S254T及T256E；ii) N428L、N434A及Y436T；iii) N434A；及iv) T307H及N434H。
在另一特定實施例中，抗體可包含SEQ ID NO: 197之輕鏈及SEQ ID NO: 198或273之重鏈，該等鏈藉由選自由以下組成之群的取代修飾：i) M252Y、S254T及T256E；ii) N428L、N434A及Y436T；iii) N434A；及iv) T307H及N434H。
在另一特定實施例中，抗體可包含SEQ ID NO: 215之輕鏈及SEQ ID NO: 216或274之重鏈，該等鏈藉由選自由以下組成之群的取代修飾：i) M252Y、S254T及T256E；ii) N428L、N434A及Y436T；iii) N434A；及iv) T307H及N434H。
在另一特定實施例中，抗體可包含SEQ ID NO: 233之輕鏈及SEQ ID NO: 234或275之重鏈，該等鏈藉由選自由以下組成之群的取代修飾：i) M252Y、S254T及T256E；ii) N428L、N434A及Y436T；iii) N434A；及iv) T307H及N434H。
在另一特定實施例中，抗體可包含SEQ ID NO: 251之輕鏈及SEQ ID NO: 252或276之重鏈，該等鏈藉由選自由以下組成之群的取代修飾：i) M252Y、S254T及T256E；ii) N428L、N434A及Y436T；iii) N434A；及iv) T307H及N434H。
如本文所報導之抗體之重鏈的C末端可為以胺基酸殘基PGK結束之完整C末端。重鏈之C末端可為縮短C末端，其中已移除一或兩個C末端胺基酸殘基。在一個較佳態樣中，重鏈之C末端係以PG結束之縮短C末端。在如本文所報導之所有態樣之一個態樣中，包含包括如本文指定之C-末端CH3域的重鏈之抗體包含C-末端甘胺酸-離胺酸二肽(G446及K447，胺基酸位置之EU索引編號)。在如本文所報導之全部態樣中之一個態樣中，如本文所規定，包含包括C端CH3域之重鏈之抗體包含C端甘胺酸殘基(G446，胺基酸位置之EU索引編號)。
d) 半胱胺酸工程改造抗體變體 在某些態樣中，可能需要產生經半胱胺酸工程改造之抗體，例如THIOMABTM 抗體，其中抗體之一或多個殘基經半胱胺酸殘基取代。在特定態樣中，經取代之殘基存在於抗體之可接近位點處。藉由用半胱胺酸取代彼等殘基，反應性硫醇基進而定位於抗體之可近接位點且可用於使抗體與其他部分(諸如藥物部分或連接子-藥物部分)結合以產生如本文中進一步描述之免疫結合物。經半胱胺酸工程改造之抗體可如例如美國專利第7,521,541號、第8,30,930號、第7,855,275號、第9,000,130號或WO 2016040856中所述來產生。
e) 抗體衍生物 在某些態樣中，可對本文所提供之抗體進行進一步修飾以含有此項技術中已知且可易於獲得之額外非蛋白部分。適用於抗體之衍生作用之部分包括但不限於水溶性聚合物。水可溶聚合物之非限制性實例包括但不限於聚乙二醇(PEG)、乙二醇/丙二醇共聚物、羧甲基纖維素、葡聚糖、聚乙烯醇、聚乙烯吡咯啶酮、聚-1,3-二氧雜環戊烷、聚-1,3,6-三㗁烷、乙烯/順丁烯二酸酐共聚物、聚胺基酸(均聚物或無規共聚物)及葡聚糖或聚(n-乙烯吡咯啶酮)聚乙二醇、聚丙二醇均聚物、聚氧化丙烯/氧化乙烯共聚物、聚氧乙烯多元醇(例如，甘油)、聚乙烯醇及其混合物。聚乙二醇丙醛因其於水中之穩定性而可在製造中具有優勢。聚合物可具有任何分子量，且可為分支鏈或非分支鏈的。附接於抗體上之聚合物的數目可變化，且若附接超過一個聚合物，則其可為相同或不同分子。一般而言，用於衍生作用之聚合物之數目及/或類型可基於包括但不限於待改善抗體之特殊特性或功能，抗體衍生物是否將用於指定病症下之療法等考慮因素來確定。
B. 重組方法及組合物 可以使用重組方法及組合物(例如如美國專利第4,816,567號中所述)產生抗體。對於此等方法，提供編碼抗體之一或多個經分離核酸。
在原生抗體或原生抗體片段之情況下，需要兩個核酸，一個用於輕鏈或其片段且一個用於重鏈或其片段。此類核酸編碼包含抗體之VL的胺基酸序列及/或包含抗體之VH的胺基酸序列(例如抗體之輕鏈及/或重鏈)。此等核酸可以在同一表現載體上或在不同表現載體上。
在具有異二聚體重鏈之雙特異性抗體的情況下，需要四個核酸，一個用於第一輕鏈，一個用於包含第一異單體Fc區多肽之第一重鏈，一個用於第二輕鏈，及一個用於包含第二異單體Fc區多肽之第二重鏈。該四個核酸可以包含在一或多個核酸分子或表現載體中。此類核酸編碼包含抗體之第一VL之胺基酸序列，及/或包含抗體之包括第一異單體Fc區之第一VH的胺基酸序列，及/或包含抗體之第二VL之胺基酸序列，及/或包含抗體之包括第二異單體Fc區之第二VH的胺基酸序列(例如抗體之第一及/或第二輕鏈及/或第一及/或第二重鏈)。此等核酸可以在同一表現載體上或在不同表現載體上，通常此等核酸係位於兩個或三個表現載體上，亦即，一個載體可以包含此等核酸中之多於一者。此等雙特異性抗體之實例為互換單抗(參見例如Schaefer, W.等人，PNAS, 108 (2011) 11187-1191)。舉例而言，異單體重鏈中之一者包含所謂的「杵突變」(T366W以及視情況存在之S354C或Y349C中之一者)，且另一者包含所謂的「臼突變」(T366S、L368A及Y407V以及視情況存在之Y349C或S354C) (參見例如Carter, P.等人，Immunotechnol. 2 (1996) 73)，其根據EU索引編號。
在一個態樣中，提供如本文所報導之方法中所用之編碼抗體的經分離核酸。
在一個態樣中，提供一種製造抗S-HBs抗體之方法，其中該方法包含在適合於表現抗體之條件下培養如上文所提供之包含編碼該抗體之核酸的宿主細胞，且視情況自宿主細胞(或宿主細胞培養基)回收抗體。
針對抗S-HBs抗體之重組產生，分離例如如上文所述的編碼抗體之核酸且將其插入至一或多個載體中以用於在宿主細胞中進一步選殖及/或表現。此等核酸可容易地使用習知程序(例如藉由使用能夠特異性地結合編碼抗體之重鏈及輕鏈之基因的寡核苷酸探針)分離及定序，或藉由重組方法產生，或藉由化學合成獲得。
適合於選殖或表現編碼抗體之載體的宿主細胞包括本文所述之原核或真核細胞。舉例而言，抗體可於細菌中產生，在不需要糖基化及Fc效應功能時尤其如此。關於抗體片段及多肽在細菌中之表現，參見例如US 5,648,237、US 5,789,199及US 5,840,523。(亦參見Charlton, K.A., In: Methods in Molecular Biology,第248卷, Lo, B.K.C. (編), Humana Press, Totowa, NJ (2003), 第245-254頁，其描述抗體片段在大腸桿菌中之表現)在表現之後，抗體可以可溶性溶離份自細菌細胞糊狀物分離在且可進一步進行純化。
除原核生物之外，諸如絲狀真菌或酵母之真核微生物為適合於編碼抗體之載體的選殖或表現宿主，包括糖基化路徑已經「人類化」從而產生具有部分或完全人類糖基化型態之抗體的真菌及酵母菌株。參看Gerngross, T.U., Nat. Biotech. 22 (2004) 1409-1414；及Li, H.等人，Nat. Biotech. 24 (2006) 210-215。
適用於表現(糖基化)抗體之宿主細胞亦來源於多細胞生物體(無脊椎動物及脊椎動物)。無脊椎動物細胞之實例包括植物及昆蟲細胞。已鑑別出多種桿狀菌株，其可與昆蟲細胞結合使用，尤其用於轉染草地黏蟲(Spodoptera frugiperda)細胞。
植物細胞培養物亦可用作宿主。參看例如US 5,959,177、US 6,040,498、US 6,420,548、US 7,125,978及US 6,417,429 (描述在轉殖基因植物中產生抗體之PLANTIBODIESTM 技術)。
脊椎動物細胞亦可用作宿主。舉例而言，適於在懸浮液中生長之哺乳動物細胞株可為適用的。適用哺乳動物宿主細胞株之其他實例為由SV40 (COS-7)轉型之猴腎CV1細胞株；人類胚腎細胞株(如例如在Graham, F.L.等人，J. Gen Virol. 36 (1977) 59-74中所述之293或293T細胞)；幼倉鼠腎細胞(BHK)；小鼠塞特利氏細胞(mouse sertoli cell) (如例如在Mather, J.P., Biol. Reprod. 23 (1980) 243-252中所述之TM4細胞)；猴腎細胞(CV1)；非洲綠猴腎細胞(VERO-76)；人類子宮頸癌細胞(HELA)；犬腎細胞(MDCK；水牛鼠肝細胞(buffalo rat liver cell) (BRL 3A)；人類肺細胞(W138)；人類肝細胞(Hep G2)；小鼠乳腺腫瘤(MMT 060562)；TRI細胞(如例如在Mather, J.P.等人，Annals N.Y. Acad. Sci. 383 (1982) 44-68中所述)；MRC 5細胞；及FS4細胞。其他適用之哺乳動物宿主細胞株包括中國倉鼠卵巢(CHO)細胞，其包括DHFR- CHO細胞(Urlaub, G.等人，Proc. Natl. Acad. Sci. USA 77 (1980) 4216-4220)；及骨髓瘤細胞株，諸如Y0、NS0及Sp2/0。關於適合於抗體產生之某些哺乳動物宿主細胞株之綜述，參見例如Yazaki, P.及Wu, A.M., Methods in Molecular Biology, 第248卷, Lo, B.K.C. (編), Humana Press, Totowa, NJ (2004), 第255-268頁。
在一個態樣中，宿主細胞為真核細胞，例如中國倉鼠卵巢(CHO)細胞或淋巴細胞(例如Y0、NS0、Sp20細胞)。
C. 分析 本文所提供之抗S-HBs抗體可藉由此項技術中已知之各種分析，針對其物理/化學特性及/或生物活性進行鑑別、篩選或表徵。
1.結合分析及其他分析  在一個態樣中，例如藉由已知方法，諸如ELISA、流動式細胞量測術、西方墨點法等測試本發明抗體之抗原結合活性。
用於ELISA之S-HBs抗原可呈粒子形式。可藉由抗原(例如S-HBs)在宿主細胞中之重組表現及抗原自組裝成粒子來提供用於ELISA方案中之粒子。舉例而言，抗原可在酵母宿主細胞(諸如甲醇酵母)或哺乳動物細胞(諸如中國倉鼠卵巢(CHO)細胞)中表現。
ELISA分析可包含以下步驟：i)用S-HBs抗原塗佈ELISA盤，ii)用BSA阻斷該盤；iii)洗滌；iv)與IgG抗體之連續稀釋液一起培育；v)洗滌；vi)與山羊-抗人類IgG-HRP抗體一起培育；vii)用HRP顯色基質使盤顯影；及viii)量測在405 nm下之光學密度(OD405nM)。
藉由ELISA量測之結合活性可定量為如自OD405nM-濃度曲線測定的曲線下面積(AUC)。因此，該方法可包含ix)自OD405nM-濃度曲線測定AUC。可比較此等值以比較呈百分比形式的測試抗體與參考抗體之活性。替代地，EC50值可根據ELISA分析確定，如獲得OD450 nm之半最大值所用的濃度。
流動式細胞量測術分析可包含以下步驟：i)在人類細胞株中表現S-SBs；ii)固定及滲透細胞；iii)使細胞與IgG抗體一起培育；iv)洗滌；v)使細胞與AF647結合之山羊抗人類IgG抗體一起培育；vi)洗滌及再懸浮於PBS中；及vii)藉由流動式細胞量測術測定結合之表現S-HBs之細胞或平均螢光強度(MFI)的%。
在流式細胞量測術分析中，抗體之連續稀釋液可用於測定EC50。替代地，當測試抗體及參考抗體以相同濃度，例如以10 μg/ml或替代地以參考抗體之EC50 (如流式細胞量測術分析中所測定)使用時，可比較所獲得的結合之表現S-HBs之細胞或MFI的%值，以參考抗體之活性百分比形式表現測試抗體之活性。
當評定相對結合活性時，應使用相同方法測試抗體。其亦可以相同形式，例如均呈IgG形式評定。在此類實施例中，參考抗體將具有如本文所提供之該參考抗體的全長序列。包含如本文所定義之VH及VL域(例如，包含VH及/或VL域，其為參考抗體的VH及/或VL域之變體)之測試抗體之結合活性可以包含參考抗體之恆定域及鉸鏈序列之IgG形式評定。
例示性方案闡述於下文中。
方案 1 用純化抗原(例如在PBS中125奈克/孔)塗佈高度結合96孔ELISA盤(Costar, Corning)隔夜。在洗滌(例如用0.05% Tween 20-PBS (PBST))之後，盤用2% BSA、1mM EDTA-PBST (阻斷溶液)阻斷2小時，洗滌，且與連續稀釋之抗體/PBS一起培育。在洗滌之後，盤藉由添加山羊HRP結合之抗人類IgG (例如最終0.8 µg/ml於阻斷溶液中，Immunology Jackson ImmunoReseach)及HRP顯色基質(例如ABTS溶液，Euromedex)顯露。在405 nm (OD405nm)下進行光密度量測。結合可定量為OD405nm-濃度曲線之曲線下面積(AUC)，且可比較兩種抗體之AUC，以百分比形式評定相對活性。替代地，抗體之EC50可測定為獲得OD450 nm之半最大值的濃度。
實驗可使用HydroSpeed™微量盤洗滌器及Sunrise™微量盤吸光度讀取器(Tecan Männedorf)進行。陰性對照抗體mGO53及適合陽性對照(諸如HB1 (Kucinskaite-Kodze等人，2016))可包括於各實驗中。
方案 2 在使用流式細胞量測術量測結合活性之例示性方案中，例如使用如先前所述之PEI-沈澱方法(Lorin及Mouquet，2015)用編碼S-HBs之載體(每106 個細胞0.65 µg質體DNA)轉染人類細胞株(例如Freestyle™ 293-F)。四十八小時轉染後，例如使用Cytofix/Cytoperm™溶液套組(BD Biosciences)使經轉染及未經轉染之對照細胞固定及滲透，且在4℃下將0.5×106 個細胞與IgG抗體一起培育45分鐘(例如在Perm/Wash™溶液中；BD Biosciences)。在一個實施例中，測試及參考抗體係以10 μg/ml使用。在另一實施例中，可使用在如流式細胞量測術分析中所測定的參考抗體之EC50下之測試抗體及參考抗體。在洗滌之後，細胞在4℃下與AF647結合之山羊抗人類IgG抗體(1:1000稀釋；Thermo Fisher Scientific)一起培育20分鐘，洗滌且再懸浮於PBS中。藉由流式細胞量測術評定結合之表現S-HBs之細胞及/或信號之平均螢光強度(MFI)的百分比，且比較兩種抗體所獲得之值，以百分比形式評定相對值。資料可使用CytoFLEX流式細胞儀(Beckman Coulter)獲取，且使用FlowJo軟體(v10.3；FlowJo LLC)分析。
方案3 在使用流式細胞量測術評定EC50之例示性方案中，例如使用如先前所述之PEI-沈澱方法(Lorin及Mouquet，2015)用編碼Ss-HBs之載體(每106 個細胞0.65 µg質體DNA)轉染人類細胞株(例如Freestyle™ 293-F)。四十八小時轉染後，例如使用Cytofix/Cytoperm™溶液套組(BD Biosciences)使經轉染及未經轉染之對照細胞固定及滲透，且在4℃下將0.5×106 個細胞與IgG抗體一起培育45分鐘(例如，在Perm/Wash™溶液中；BD Biosciences)。在洗滌之後，細胞在4℃下與AF647結合之山羊抗人類IgG抗體(1:1000稀釋；Thermo Fisher Scientific)一起培育20分鐘，洗滌且再懸浮於PBS中。結合之表現S-HBs之細胞的百分比或信號之平均螢光強度(MFI)係藉由流式細胞量測術評定，且EC50測定為獲得結合之細胞或MFI的半最大百分比之濃度。
在另一態樣中，競爭分析可用於鑑別與選自由以下組成之群的參考抗體競爭結合於S-HBs之抗體：Bc1.187、Bv4.115、Bc8.159、Bv6.172、Bc1.229、Bc8.111、Bc1.128、Bc3.106、Bc1.180、Bv4.104、Bc8.104、Bc4.204、Bc1.263及Bv4.105。在某些態樣中，此類競爭抗體結合於與選自由以下組成之群的參考抗體結合的相同抗原決定基(例如線性或構形抗原決定基)：Bc1.187、Bv4.115、Bc8.159、Bv6.172、Bc1.229、Bc8.111、Bc1.128、Bc3.106、Bc1.180、Bv4.104、Bc8.104、Bc4.204、Bc1.263及Bv4.105。用於對抗體所結合之抗原決定基進行定位的詳細例示性方法提供於Morris (1996) 「Epitope Mapping Protocols」, 於Methods in Molecular Biology 第66卷 (Humana Press, Totowa, NJ)中。
在例示性競爭分析中，在包含結合於S-HBs (例如選自由以下組成之群的參考抗體：Bc1.187、Bv4.115、Bc8.159、Bv6.172、Bc1.229、Bc8.111、Bc1.128、Bc3.106、Bc1.180、Bv4.104、Bc8.104、Bc4.204、Bc1.263及Bv4.105)之第一經標記抗體的溶液中培育固定S-HBs，且測試第二未標記抗體與第一抗體競爭結合於S-HBs的能力。第二抗體可存在於融合瘤上清液中。作為對照，在包含第一經標記抗體但無第二未標記抗體之溶液中培育固定S-HBs。在允許第一抗體結合於S-HBs之條件下進行培育之後，移除過量的未結合抗體，且量測與固定S-HBs相關之標記的量。若測試樣品中與固定S-HBs相關之標記的量相對於對照樣品中實質上減少，則其指示第二抗體與第一抗體競爭結合於S-HBs。參見Harlow及Lane (1988)Antibodies: A Laboratory Manual 第14章 (Cold Spring Harbor Laboratory, Cold Spring Harbor, NY)。
另一例示性競爭分析為競爭ELISA。經純化抗體(例如選自由以下組成之群的參考抗體：Bc1.187、Bv4.115、Bc8.159、Bv6.172、Bc1.229、Bc8.111、Bc1.128、Bc3.106、Bc1.180、Bv4.104、Bc8.104、Bc4.204、Bc1.263及Bv4.105)使用EZ-Link Sulfo-NHS-Biotin套組(Thermo Fisher Scientific)進行生物素標記。抗原或抗原粒子(例如，rS-HBs)塗佈之盤經阻斷、洗滌、與經生物素標記之抗體(濃度0.33 nM)一起在1:2連續稀釋的抗體競爭者於PBS (IgG濃度在0.83至106.7 nM範圍內)中之溶液中培育2小時，且使用HRP結合抗生蛋白鏈菌素顯露。實驗使用HydroSpeed™微量盤洗滌器及Sunrise™微量盤吸光度讀取器(Tecan Männedorf)進行，其中在405 nm (OD405nm)下進行光密度量測。
2.活性分析  在一個態樣中，提供用於鑑別具有生物活性之抗S-HBs抗體的分析。生物活性可包括例如活體外或活體內中和活性及/或降低活體內病毒血症之能力。亦提供在活體內及/或活體外具有此生物活性之抗體。
活體外中和活性可為對HBV感染初級人類肝細胞或人類肝細胞株之抑制。此可測定為上清液S-HBs相比於不存在抗體之減少量。活體內中和活性可測定為感染HBV之循環S-HBs動物(例如小鼠或人類)之減少量。
病毒之病毒血症之減少可測定為經HBV感染之動物(例如小鼠或人類)之血清中HBV DNA的減少量。
抗體可例如具有的活體外抑制特定基因型，例如基因型D之HBV的感染性的之IC50 值為≤50 µg/ml、≤10 µg/ml、≤1 µg/ml、≤500ng/ml、≤100ng/ml、≤50 ng/ml、≤10 ng/ml、≤1 ng/ml、≤500 pg/ml、≤100 pg/ml、≤50 pg/ml、≤10 pg/ml或≤1 pg/ml。在一些實施例中，較佳抗體之IC50 可為≤50 ng/ml或≤10 ng/ml。可能較佳的是，抗體之IC50 為≤1 ng/ml、≤500 pg/ml，或在一些實施例中，≤100 pg/ml、≤50 pg/ml或≤10 pg/ml。在一些實施例中，中和抗體之IC50 值可為≤1 pg/ml，視情況≤0.1 pg/ml。
在另一實施例中，抗體可具有針對特定基因型(例如基因型D)之IC50 值，該特定基因型比針對相同基因型之參考抗體之IC50 值高不超過50、10、9、8、7、6、5、4、3或2倍，或小於或等於該參考抗體之該值，其中該參考抗體係選自由以下組成之群：Bc1.187、Bv4.115、Bc8.159、Bv6.172、Bc1.229、Bc8.111、Bc1.128、Bc3.106、Bc1.180、Bv4.104、Bc8.104、Bc4.204、Bc1.263及Bv4.105 (當在相同活體外分析中評定時)。
在另一實施例中，當使用相同分析(例如如本文所述之活體內分析)評定時，抗體可具有或保持參考抗體對特定HBV基因型之中和活性的至少50%、60%、70%、75%、80%、85%、90%、95%或100%。
在一些實施例中，本發明之抗體具有或保持參考抗體針對HBV基因型A、B、C及/或D病毒之活體內中和活性之至少50%、60%、70%、75%、80%、85%、90%、95%或100%，其中參考抗體係選自由以下組成之群：Bc1.187、Bv4.115、Bc8.159、Bv6.172、Bc1.229、Bc8.111、Bc1.128、Bc3.106、Bc1.180、Bv4.104、Bc8.104、Bc4.204、Bc1.263及Bv4.105。在一些實施例中，本發明抗體具有或保持參考抗體針對HBV基因型A、B、C及/或D病毒之病毒血症遏制活性的至少50%、60%、70%、75%、80%、85%、90%、95%或100%，其中參考抗體係選自由以下組成之群：Bc1.187、Bv4.115、Bc8.159、Bv6.172、Bc1.229、Bc8.111、Bc1.128、Bc3.106、Bc1.180、Bv4.104、Bc8.104、Bc4.204、Bc1.263及Bv4.105。
在某些態樣中，測試本發明抗體之此類生物活性。
例示性活體外中和分析描述於下文中作為方案4。例示性活體內中和分析描述於下文中作為方案5。病毒血症遏制之例示性分析描述於方案6中。
當評定相對活性時，應使用相同方法測試抗體。抗體均可以IgG形式評定：在此類實施例中，參考抗體將具有如本文所提供之該參考抗體的全長序列。包含如本文所定義之VH及VL域(例如，包含VH及/或VL域，其為參考抗體的VH及/或VL域之變體)之測試抗體之結合活性可以包含參考抗體之恆定域及鉸鏈序列之IgG形式評定。
方案4 ( 用於評定活體外中和之IC50 值) 在例示性方案中，HBV抗體之活體外中和活性係藉由在室溫下與連續稀釋之測試抗體一起培育HBV病毒粒子(MOI 20-30) 1小時來評估。隨後將HBV-抗體混合物添加至96孔盤中之肝細胞中，最終濃度為4% PEG 8000 (Sigma)。感染細胞在37℃下培育20小時，且接著用PBS洗滌4次以移除HBV接種物且用完全培養基再填充。感染後六天，根據製造商之說明書，例如使用S-HBs CLIA套組(Autobio)定量上清液中S-HBs抗原含量。中和活性測定為上清液S-HBs相比於不存在抗體之對照之減少量。IC50 值為半最大抑制濃度，量測對感染性之抑制。
細胞可為初級人類肝細胞或人類肝細胞株。可用於該方案中之例示性肝細胞為藉由膠原蛋白酶灌注方法自具有人類化肝臟之嵌合uPA/SCID小鼠分離之初級人類肝細胞(PHH) (Tateno等人，2015)，其獲自PhoenixBio (Hiroshima, Japan)。其他例示性肝細胞為可獲自Biopredic International (Saint-Gregoire，France)之HepaRG細胞株。
方案5 ( 用於評定活體內中和活性) 在用於評定活體內中和活性之例示性方案中，在用0.5 mg測試抗體靜脈內處理一次之經AAV-HBV轉導之小鼠中監測循環血液S-HBs含量。循環血液S-HBs係藉由ELISA量測。中和活性測定為最低點(最大降低)處循環血液S-HBs之量的減少。
方案6 ( 用於評定活體內病毒血症遏制) 選擇攜帶高含量循環S-HBsAg (＞104 IU/ml)之AAV-HBV小鼠作為個體。測試抗體之單次靜脈內(i.v.)注射係以20 mg/kg投與。使用QIAamp Blood小型套組(Qiagen, Germany)自小鼠血清純化HBV DNA，且藉由如先前所述之定量PCR定量(Cougot等人，2012)。病毒血症遏制活性係藉由評定最低點(最大降低)處之HBV DNA之量來測定。
D. 用於診斷及偵測之方法及組合物 在某些態樣中，本文所提供之抗S-HBs抗體中之任一者適用於偵測生物樣品中之S-HBs的存在。如本文所用之術語「偵測」涵蓋定量或定性偵測。在某些態樣中，生物樣品包含血液、血漿或血清樣品。
在一個態樣中，提供一種用於診斷或偵測方法之抗S-HBs抗體。在另一態樣中，提供一種偵測生物樣品中S-HBs之存在的方法。在某些態樣中，該方法包含使生物樣品與如本文所述之抗S-HBs抗體在允許抗S-HBs抗體結合於S-HBs的條件下接觸，且偵測在抗S-HBs抗體與S-HBs之間是否形成複合物。此方法可為活體外或活體內方法。在一個態樣中，抗S-HBs抗體用於選擇符合用抗S-HBs抗體進行之療法之條件(例如其中S-HBs係用於選擇患者之生物標記)的個體。
可使用本發明抗體來診斷之例示性病症包括B型肝炎，例如慢性B型肝炎。
在某些態樣中，提供經標記抗S-HBs抗體。標記包括但不限於直接檢測之標記或部分(諸如螢光、發色、電子緻密、化學發光及放射性標記)，以及例如經由酶反應或分子相互作用間接檢測之部分(諸如酶或配體)。例示性標記包括但不限於放射性同位素32 P、14 C、125 I、3 H及131 I；螢光團，諸如稀土螯合物或螢光素及其衍生物；若丹明(rhodamine)及其衍生物；丹醯基；傘酮；螢光素酶，例如螢火蟲螢光素酶及細菌螢光素酶(美國專利第4,737,456號)；螢光素；2,3-二氫呔𠯤二酮；辣根過氧化酶(HRP)；鹼性磷酸酶；β-半乳糖苷酶；葡糖澱粉酶；溶菌酶；醣氧化酶，例如葡萄糖氧化酶、半乳糖氧化酶及葡萄糖-6-磷酸去氫酶；雜環氧化酶，諸如尿酸酶及黃嘌呤氧化酶，其與採用過氧化氫氧化染料前驅體之酶(諸如HRP、乳過氧化酶或微過氧化酶)偶合；生物素/抗生物素蛋白；自旋標記；噬菌體標記；穩定自由基及其類似標記。
E. 醫藥組合物 在另一態樣中，提供包含本文所提供之任何抗體的醫藥組合物，例如以用於以下任何治療方法。在一個態樣中，醫藥組合物包含本文所提供之任何抗體及醫藥學上可接受的載劑。在另一態樣中，醫藥組合物包含本文所提供之任何抗體及至少一種額外治療劑，例如如下文所述的。
如本文所述之抗S-HBs抗體之醫藥組合物係藉由將具有所要純度之此類抗體與一或多種視情況存在之醫藥學上可接受之載劑混合(Remington's Pharmaceutical Sciences 第16版, Osol, A.編(1980))，以凍乾組合物或水溶液形式來製備。醫藥學上可接受之載劑在所採用之劑量及濃度下一般對接受者無毒性，且包括但不限於：緩衝劑，諸如組胺酸、磷酸、檸檬酸、乙酸及其他有機酸；抗氧化劑，包括抗壞血酸及甲硫胺酸；防腐劑(諸如十八烷基二甲基苯甲基氯化銨；氯化六羥季銨；氯化苯甲烴銨；苄索氯銨；苯酚、丁醇或苯甲醇；對羥基苯甲酸烷基酯，諸如對羥苯甲酸甲酯或對羥苯甲酸丙酯；兒茶酚；間苯二酚；環己醇；3-戊醇；及間甲酚)；低分子量(小於約10個殘基)多肽；蛋白，諸如血清白蛋白、明膠或免疫球蛋白；親水性聚合物，諸如聚乙烯吡咯啶酮；胺基酸，諸如甘胺酸、麩醯胺酸、天冬醯胺、組胺酸、精胺酸或離胺酸；單醣、雙糖及其他碳水化合物，包括葡萄糖、甘露糖或糊精；螯合劑，諸如EDTA；糖類，諸如蔗糖、甘露糖醇、海藻糖或山梨糖醇；成鹽相對離子，諸如鈉；金屬錯合物(例如Zn-蛋白錯合物)；及/或非離子型界面活性劑，諸如聚乙二醇(PEG)。本文中之例示性醫藥學上可接受之載劑進一步包括間質性藥物分散劑，諸如可溶性中性活性玻尿酸酶醣蛋白(sHASEGP)，例如人類可溶性PH-20玻尿酸酶醣蛋白，諸如rHuPH20 (HYLENEX® , Halozyme, Inc.)。某些示例性sHASEGP及使用方法，包括rHuPH20，描述於美國專利公開案第2005/0260186號及第2006/0104968號中。在一個態樣中，sHASEGP與一或多種其他葡萄糖胺聚糖酶(諸如軟骨素酶)組合。
例示性凍乾抗體組合物描述於美國專利第6,267,958號中。水性抗體組合物包括美國專利第6,171,586號及WO 2006/044908中所述之水性抗體組合物，後者組合物包括組胺酸-乙酸鹽緩衝液。
本文之醫藥組合物亦可含有一種以上為所治療之特定適應症所必需之活性成分，較佳為具有不會對彼此產生不利影響之補充性活性的活性成分。舉例而言，可能需要進一步提供一或多種選自以下之額外治療劑：抗病毒藥品，諸如核苷酸類似物逆轉錄酶抑制劑或核苷類似物，例如因提弗、反丁烯二酸替諾福韋二吡呋酯(tenofovir disoproxil fumarate)、替諾福韋艾拉酚胺(tenofovir alafenamide)、拉美芙錠(lamivudine)、阿丹弗(adefovir)或替比夫定(telbivudine)；靶向HBV序列之siRNA；旨在恢復宿主先天性或適應性免疫反應之藥劑，例如INFα或聚乙二醇化IFNα；治療性疫苗，諸如GS-4774、ABX-203、TG-1050、INO-1800；TLR促效劑，諸如抗TLR抗體、脂肽、脂多糖、聚胞啶酸(聚I:C (Polyriboinosinic-polyribocytidylic acid))、聚I:C-聚-l-離胺酸(聚ICLC)、咪喹莫特(imiquimod)、GSK2245035、GSK2445053、RO6864018、RO7020531、GS-9620、GS-9688、852A (合成咪唑并喹啉仿效病毒ssRNA)、雷西莫特(Resiquimod)、VTX-2337 (小分子選擇性TLR8促效劑仿效病毒ssRNA)、芽孢桿菌卡莫特-蓋蘭(Bacillus Calmette-Guérin，BCG)、MPL (單磷醯基脂質A)及/或CpG寡去氧核苷酸；及/或檢查點抑制劑，諸如(例如靶向CTLA4之)抗體(例如拮抗劑或阻斷抗體) (例如伊派利單抗(ipilimumab)、曲美單抗(tremelimumab))、PD-1 (例如納武單抗(nivolumab)、皮立珠單抗(pidilizumab))、PD-L1 (例如MPDL3280A、MEDI4736、MSB0010718C)、TIM-3、2B4、A2AR、B7-H3、B7-H4、BTLA、IDO、KIR、LAG3、NOX2、VISTA、SIGLEC7或SIGLEC9 (Fanning等人，2019; Gehring及Protzer，2019; Maini及Burton，2019)。此類活性成分宜以有效實現預期目的之量組合存在。
活性成分可包覆於微膠囊中，例如藉由凝聚技術或藉由界面聚合所製備之微膠囊，例如分別為羥基甲基纖維素或明膠微膠囊及聚(甲基丙烯酸甲酯)微膠囊；包覆於膠態藥物傳遞系統(例如脂質體、白蛋白微球體、微乳液、奈米粒子及奈米膠囊)中或巨乳液中。此類技術揭示於Remington's Pharmaceutical Sciences 第16版, Osol, A.編(1980)中。
可製備持續釋放之醫藥組合物。持續釋放製劑之適合實例包括含有抗體之固體疏水性聚合物之半滲透基質，該等基質呈成形製品形式，例如薄膜或微膠囊。
待用於活體內投與之醫藥組合物一般為無菌的。無菌性可容易地藉由例如經由無菌過濾膜過濾來實現。
F. 治療方法及投與途徑 本文所提供之抗S-HBs抗體中之任一者可用於治療方法中。
在一個態樣中，提供一種適用作藥劑之抗S-HBs抗體。在其他態樣中，提供一種用於治療B型肝炎之抗S-HBs抗體，例如用於治療慢性B型肝炎病毒感染。在某些態樣中，提供一種用於治療方法之抗S-HBs抗體。在某些態樣中，本發明提供一種用於治療患有B型肝炎，例如慢性B型肝炎病毒感染之個體之方法的抗S-HBs抗體，其包含向該個體投與有效量之抗S-HBs抗體。在一個此態樣中，該方法進一步包含向個體投與有效量之至少一種額外治療劑(例如一種、兩種、三種、四種、五種或六種額外治療劑)，例如如下文所述的。在其他態樣中，本發明提供一種用於減少B型肝炎病毒負荷、減少可偵測血清HBsAg或提供HBV功能性治癒之抗S-HBs抗體。在某些態樣中，本發明提供一種用於減少個體中B型肝炎病毒負荷、減少可偵測血清HBsAg或提供HBV功能性治癒之方法中的抗S-HBs抗體，該方法包含向個體投與有效量之抗S-HBs抗體以減少病毒負荷、減少可偵測血清HBsAg或提供HBV功能性治癒。HBV功能性治癒係指B型肝炎表面抗原(HBsAg)之血清清除，亦即，血清中不存在可偵測HBsAg。如上文態樣中任一個之「個體」較佳為人類。
在另一態樣中，本發明提供抗S-HBs抗體在藥劑製造或製備中之用途。在一個態樣中，藥劑係用於治療B型肝炎，例如慢性B型肝炎。在另一態樣中，藥劑係用於治療B型肝炎，例如慢性B型肝炎之方法中，該方法包含向患有該病狀之個體投與有效量之藥劑。在一個此類態樣中，該方法進一步包含向個體投與有效量之至少一種額外治療劑，例如如下文所述。在另一態樣中，藥劑係用於減少B型肝炎病毒負荷、減少可偵測血清HBsAg或提供HBV功能性治癒。在另一態樣中，藥劑係用於減少個體中B型肝炎病毒負荷、減少可偵測血清HBsAg或提供HBV功能性治癒之方法中，該方法包含向個體投與有效量之藥劑以減少病毒負荷、減少可偵測血清HBsAg或提供HBV功能性治癒。根據上述態樣中之任一者之「個體」可為人類。
在另一態樣中，本發明提供一種用於治療B型肝炎，例如慢性B型肝炎之方法。在一個態樣中，該方法包含向患有B型肝炎，例如慢性B型肝炎之個體投與有效量之抗S-HBs抗體。在一個此類態樣中，該方法進一步包含向個體投與有效量之至少一種額外治療劑，如下文所述。
根據上述態樣中之任一者之「個體」可為人類。
在另一態樣中，本發明提供一種用於減少B型肝炎病毒負荷、減少可偵測血清HBsAg或提供HBV功能性治癒之方法。在一個態樣中，該方法包含向個體投與有效量之抗S-HBs抗體以減少病毒負荷/減少可偵測血清HBsAg/提供功能性治癒。在一個態樣中，「個體」係人類。
在另一態樣中，本發明提供包含本文所提供之抗S-HBs抗體中之任一者的醫藥組合物，其例如用於上述治療方法中之任一者中。在一個態樣中，醫藥組合物包含本文所提供之抗S-HBs抗體中的任一者及醫藥學上可接受之載劑。在另一態樣中，醫藥組合物包含本文所提供之抗S-HBs抗體中之任一者及至少一種例如如下文所述之額外治療劑。
本發明之抗體可單獨投與或用於組合療法。舉例而言，組合療法包括投與本發明之抗體及投與至少一種額外治療劑(例如一種、兩種、三種、四種、五種或六種額外治療劑)。在某些態樣中，組合療法包含投與本發明之抗體及投與至少一種額外治療劑，諸如：抗病毒藥品，諸如核苷酸類似物逆轉錄酶抑制劑或核苷類似物，例如因提弗、反丁烯二酸替諾福韋二吡呋酯、替諾福韋艾拉酚胺、拉美芙錠、阿丹弗或替比夫定；靶向HBV序列之siRNA；旨在恢復宿主先天性或適應性免疫反應之藥劑，例如INFα或聚乙二醇化IFNα；治療性疫苗，諸如GS-4774、ABX-203、TG-1050、INO-1800；TLR促效劑，諸如抗TLR抗體、脂肽、脂多糖、聚胞啶酸(聚I:C)、聚I:C-聚-l-離胺酸(聚ICLC)、咪喹莫特、GSK2245035、GSK2445053、RO6864018、RO7020531、GS-9620、GS-9688、852A (合成咪唑并喹啉仿效病毒ssRNA)、雷西莫特、VTX-2337 (小分子選擇性TLR8促效劑仿效病毒ssRNA)、芽孢桿菌卡莫特-蓋蘭(BCG)、MPL (單磷醯基脂質A)及/或CpG寡去氧核苷酸；及/或檢查點抑制劑，諸如(例如靶向CTLA4之)抗體(例如拮抗劑或阻斷抗體) (例如伊派利單抗、曲美單抗)、PD-1 (例如納武單抗、皮立珠單抗)、PD-L1 (例如MPDL3280A、MEDI4736、MSB0010718C)、TIM-3、2B4、A2AR、B7-H3、B7-H4、BTLA、IDO、KIR、LAG3、NOX2、VISTA、SIGLEC7或SIGLEC9 (Fanning等人，2019; Gehring及Protzer，2019; Maini及Burton，2019)。
上述該等組合療法涵蓋組合投與(其中兩種或兩種以上治療劑包括在同一或獨立醫藥組合物中)及獨立投與，在此情況下，本發明抗體之投與可在投與額外治療劑之前、同時及/或之後進行。在一個態樣中，抗S-HBs抗體之投與及額外治療劑之投與彼此在約一個月內；或在約一週、兩週或三週內；或在約一天、兩天、三天、四天、五天或六天內進行。在一個態樣中，在治療之第1天向患者投與抗體及額外治療劑。
本發明抗體(及任何額外治療劑)可藉由任何適合的手段投與，包括非經腸、肺內及鼻內投與，且必要時針對局部治療，包括病灶內投與。非經腸輸注包括肌肉內、靜脈內、動脈內、腹膜內或皮下投與。部分視投與之短期或長期性而定，可藉由任何適合的途徑(例如藉由注射，諸如靜脈內或皮下注射)給藥。本文中涵蓋各種給藥時程，包括但不限於單次投與或經各個時間點多次投與、推注投與及脈衝式輸注。
本發明抗體將以與良好醫療實踐一致之方式調配、給藥及投與。在此情形下，考慮因素包括所治療之特定病症、所治療之特定哺乳動物、個別患者之臨床病狀、病症之病因、藥劑遞送部位、投與方法、投與時程及醫學從業者已知之其他因素。抗體無需但視情況可與一或多種當前用於預防或治療所述病症之藥劑一起調配。此等其他藥劑之有效量視存在於醫藥組合物中的抗體之量、病症或治療之類型及上文所論述之其他因素而定。其一般係以相同劑量且以如本文所述之投與途徑使用，或以約1至99%的本文所述之劑量，或以憑經驗/在臨床上確定適當之任何劑量及任何途徑使用。
為預防或治療疾病，本發明抗體之適當劑量(當單獨或與一或多種其他額外治療劑組合使用時)將視以下而定：待治療疾病之類型、抗體類型、疾病之嚴重度及病程、是否出於預防或治療目的投與抗體、先前療法、患者之臨床病史及對抗體之反應及主治醫師之判斷。一次性或歷經一系列治療適合地向患者投與該抗體。視疾病之類型及嚴重度而定，約1 µg/kg至15 mg/kg (例如0.1 mg/kg至10 mg/kg)之抗體可為向患者投與之初始候選劑量，例如藉由一或多次獨立投與抑或藉由連續輸注。一種典型日劑量可在約1 μg/kg至100 mg/kg或更多之範圍內，視上文所提及之因素而定。經歷若干日或更長時間重複投與時，視病狀而定，治療一般持續至疾病症狀發生所需抑制為止。抗體之一種例示性劑量將在約0.05 mg/kg至約10 mg/kg範圍內。因此，可向患者投與約0.5 mg/kg、2.0 mg/kg、4.0 mg/kg或10 mg/kg (或其任何組合)之一或多種劑量。此等劑量可間歇投與，例如每週或每三週(例如以使得患者接受約兩個至約二十個或例如約六個劑量之抗體)。最初可投與較高起始劑量，隨後可投與一或多種較低劑量。此療法之進程容易藉由習知技術及分析來監視。
G. 製品 在本發明之另一態樣中，提供含有適用於治療、預防及/或診斷上述病症之材料的製品。製品包含容器及容器上或容器隨附之標籤或藥品說明書。適合之容器包括例如瓶子、小瓶、注射器、IV溶液袋等。容器可由多種材料(諸如玻璃或塑膠)形成。容器容納單獨組合物或與有效治療、預防及/或診斷病狀之另一組合物組合之組合物，且可具有無菌接取口(例如容器可為具有可由皮下注射針刺穿之塞子的靜脈內溶液袋或小瓶)。組合物中至少一種活性劑為本發明之抗體。標記或藥品說明書指示組合物用於治療所選病狀。此外，製品可包含(a)其中含有組合物之第一容器，其中該組合物包含本發明之抗體；及(b)其中含有組合物之第二容器，其中該組合物包含另一種細胞毒性劑或其他治療劑。本發明之此態樣中之製品可進一步包含指示組合物可用於治療特定病狀之藥品說明書。替代地或另外，製品可進一步包含第二(或第三)容器，其包含醫藥學上可接受之緩衝液，諸如抑菌性注射用水(BWFI)、磷酸鹽緩衝鹽水、林格氏溶液(Ringer's solution)及右旋糖溶液。其可進一步包括就商業及使用者觀點而言所期望之其他材料，包括其他緩衝劑、稀釋劑、過濾器、針及注射器。
序列 下表中圓括號中展示之胺基酸可存在或不存在。
SEQ ID NO 描述 序列
1 Bc1.187 CDR-H1 NYGMQ
2 Bc1.187 CDR-H2 IIWADGTKQYYGDSVKG
3 Bc1.187 CDR-H3 DGLYASAPNDV
4 Bc1.187 CDR-L1 RASQRISTYLN
5 Bc1.187-CDR-L2 GASSLQS
6 Bc1.187 CDR-L3 QQTYTLPPN
7 Bc1.187 H-FW1 QVQLVESGGGVVQPGRSLRLSCEASGFTFS
8 Bc1.187 H-FW2 WVRQAPGKGLEWVA
9 Bc1.187 H-FW3 FTISRDNFKNTLYLQMNSLRGEDTAMYFCAR
10 Bc1.187 H-FW4 WGQGTLVTVSS
11 Bc1.187 L-FW1 DIQMTQSPSSLSAYVGDRVTITC
12 Bc1.187 L-FW2 WYHQRPGKSPSLLIY
13 Bc1.187 L-FW3 GVPSRFSASASGTDFTLTISSLRPEDLGTYYC
14 Bc1.187 L-FW4 SGGGTKVEIK
15 Bc1.187 VL DIQMTQSPSSLSAYVGDRVTITCRASQRISTYLNWYHQRPGKSPSLLIYGASSLQSGVPSRFSASASGTDFTLTISSLRPEDLGTYYCQQTYTLPPNSGGGTKVEIK
16 Bc1.187 VH QVQLVESGGGVVQPGRSLRLSCEASGFTFSNYGMQWVRQAPGKGLEWVAIIWADGTKQYYGDSVKGRFTISRDNFKNTLYLQMNSLRGEDTAMYFCARDGLYASAPNDVWGQGTLVTVSS
17 Bc1.187全長輕鏈 DIQMTQSPSSLSAYVGDRVTITCRASQRISTYLNWYHQRPGKSPSLLIYGASSLQSGVPSRFSASASGTDFTLTISSLRPEDLGTYYCQQTYTLPPNSGGGTKVEIKRTVAAPSVFIFPPSDEQLKSGTASVVCLLNNFYPREAKVQWKVDNALQSGNSQESVTEQDSKDSTYSLSSTLTLSKADYEKHKVYACEVTHQGLSSPVTKSFNRGEC
18 Bc1.187全長重鏈 QVQLVESGGGVVQPGRSLRLSCEASGFTFSNYGMQWVRQAPGKGLEWVAIIWADGTKQYYGDSVKGRFTISRDNFKNTLYLQMNSLRGEDTAMYFCARDGLYASAPNDVWGQGTLVTVSSASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKKVEPKSCDKTHTCPPCPAPELLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAK(G)QPREPQVYTLPPSRDELTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGK
19 Bc1.180 CDR-H1 RSAVS
20 Bc1.180 CDR-H2 RTIPLLRIAEYSQTFQG
21 Bc1.180 CDR-H3 EGDGLDM
22 Bc1.180 CDR-L1 RASQSVTSNYFA
23 Bc1.180-CDR-L2 GASSRAT
24 Bc1.180 CDR-L3 QQFGSLPYT
25 Bc1.180 H-FW1 QVQLVQSGAEVKKPGSSVKVSCKASGGTFG
26 Bc1.180 H-FW2 WVRHAPGQRLEWMG
27 Bc1.180 H-FW3 RVTITADKFTNTVYMELRSLTYEDTAVYYCAR
28 Bc1.180 H-FW4 WGQGTMVTVSS
29 Bc1.180 L-FW1 EIVLTQSPGTLSLSPGNRATLSC
30 Bc1.180 L-FW2 WYQHKPGQAPRVLIY
31 Bc1.180 L-FW3 GIPDRFSGSGSGTDFTLTISRLEPEDFAVYYC
32 Bc1.180 L-FW4 FGQGTKLEIK
33 Bc1.180 VL EIVLTQSPGTLSLSPGNRATLSCRASQSVTSNYFAWYQHKPGQAPRVLIYGASSRATGIPDRFSGSGSGTDFTLTISRLEPEDFAVYYCQQFGSLPYTFGQGTKLEIK
34 Bc1.180 VH QVQLVQSGAEVKKPGSSVKVSCKASGGTFGRSAVSWVRHAPGQRLEWMGRTIPLLRIAEYSQTFQGRVTITADKFTNTVYMELRSLTYEDTAVYYCAREGDGLDMWGQGTMVTVSS
35 Bc1.180全長輕鏈 EIVLTQSPGTLSLSPGNRATLSCRASQSVTSNYFAWYQHKPGQAPRVLIYGASSRATGIPDRFSGSGSGTDFTLTISRLEPEDFAVYYCQQFGSLPYTFGQGTKLEIKRTVAAPSVFIFPPSDEQLKSGTASVVCLLNNFYPREAKVQWKVDNALQSGNSQESVTEQDSKDSTYSLSSTLTLSKADYEKHKVYACEVTHQGLSSPVTKSFNRGEC
36 Bc1.180全長重鏈 QVQLVQSGAEVKKPGSSVKVSCKASGGTFGRSAVSWVRHAPGQRLEWMGRTIPLLRIAEYSQTFQGRVTITADKFTNTVYMELRSLTYEDTAVYYCAREGDGLDMWGQGTMVTVSSASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKKVEPKSCDKTHTCPPCPAPELLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAK(G)QPREPQVYTLPPSRDELTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGK
37 Bc3.106 CDR-H1 SYAMS
38 Bc3.106 CDR-H2 AFSGTGGSTYYADSVKG
39 Bc3.106 CDR-H3 DPGHTSNWRDNYQYYQMDV
40 Bc3.106 CDR-L1 RASQGIRNDLG
41 Bc3.106-CDR-L2 AASSLQS
42 Bc3.106 CDR-L3 LQHNSYPRT
43 Bc3.106 H-FW1 EVQLLESGGGLVQPGGSLRLSCTASGFTFG
44 Bc3.106 H-FW2 WVRQAPGKGLKWVS
45 Bc3.106 H-FW3 RFTISRDNSKNTLYLQMNNLRAEDTAVYFCAK
46 Bc3.106 H-FW4 WGQGTTVTVSS
47 Bc3.106 L-FW1 DIQMTQSPSSLSASVGDRVTITC
48 Bc3.106 L-FW2 WYQQKPGKAPKRLIY
49 Bc3.106 L-FW3 GVPSRFSGSGSGTEFTLTISSLQPEDFATYYC
50 Bc3.106 L-FW4 FGQGTKVEIK
51 Bc3.106 VL DIQMTQSPSSLSASVGDRVTITCRASQGIRNDLGWYQQKPGKAPKRLIYAASSLQSGVPSRFSGSGSGTEFTLTISSLQPEDFATYYCLQHNSYPRTFGQGTKVEIK
52 Bc3.106 VH EVQLLESGGGLVQPGGSLRLSCTASGFTFGSYAMSWVRQAPGKGLKWVSAFSGTGGSTYYADSVKGRFTISRDNSKNTLYLQMNNLRAEDTAVYFCAKDPGHTSNWRDNYQYYQMDVWGQGTTVTVSS
53 Bc3.106全長輕鏈 DIQMTQSPSSLSASVGDRVTITCRASQGIRNDLGWYQQKPGKAPKRLIYAASSLQSGVPSRFSGSGSGTEFTLTISSLQPEDFATYYCLQHNSYPRTFGQGTKVEIKRTVAAPSVFIFPPSDEQLKSGTASVVCLLNNFYPREAKVQWKVDNALQSGNSQESVTEQDSKDSTYSLSSTLTLSKADYEKHKVYACEVTHQGLSSPVTKSFNRGEC
54 Bc3.106全長重鏈 EVQLLESGGGLVQPGGSLRLSCTASGFTFGSYAMSWVRQAPGKGLKWVSAFSGTGGSTYYADSVKGRFTISRDNSKNTLYLQMNNLRAEDTAVYFCAKDPGHTSNWRDNYQYYQMDVWGQGTTVTVSSASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKKVEPKSCDKTHTCPPCPAPELLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAK(G)QPREPQVYTLPPSRDELTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGK
55 Bv4.104 CDR-H1 GYGMH
56 Bv4.104 CDR-H2 FLWHDGTSKDYADSVKG
57 Bv4.104 CDR-H3 EDYYDSNAFDY
58 Bv4.104 CDR-L1 TGTSSDVGNYKSVS
59 Bv4.104-CDR-L2 EGTQRPS
60 Bv4.104 CDR-L3 CSYAGSSTWL
61 Bv4.104 H-FW1 QVQLVESGGGVVQPGRSLRLSCAASGFTFS
62 Bv4.104 H-FW2 WVRQAPGKGLEWVA
63 Bv4.104 H-FW3 RFTISRDNSKNTLYMQMNSLRAEDTAVYYCAR
64 Bv4.104 H-FW4 WGQGTLVTVSS
65 Bv4.104 L-FW1 QSALTQPASVSGSPGQSITISC
66 Bv4.104 L-FW2 WYQHHPGKAPKFMIY
67 Bv4.104 L-FW3 GVSNRFSGSKSGNTASLTISGLQAEDEAHYYC
68 Bv4.104 L-FW4 FGGGTKLTVL
69 Bv4.104 VL QSALTQPASVSGSPGQSITISCTGTSSDVGNYKSVSWYQHHPGKAPKFMIYEGTQRPSGVSNRFSGSKSGNTASLTISGLQAEDEAHYYCCSYAGSSTWLFGGGTKLTVL
70 Bv4.104 VH QVQLVESGGGVVQPGRSLRLSCAASGFTFSGYGMHWVRQAPGKGLEWVAFLWHDGTSKDYADSVKGRFTISRDNSKNTLYMQMNSLRAEDTAVYYCAREDYYDSNAFDYWGQGTLVTVSS
71 Bv4.104全長輕鏈 QSALTQPASVSGSPGQSITISCTGTSSDVGNYKSVSWYQHHPGKAPKFMIYEGTQRPSGVSNRFSGSKSGNTASLTISGLQAEDEAHYYCCSYAGSSTWLFGGGTKLTVLGQPKAAPSVTLFPPSSEELQANKATLVCLISDFYPGAVTVAWKADSSPVKAGVETTTPSKQSNNKYAASSYLSLTPEQWKSHRSYSCQVTHEGSTVEKTVAPTECS
72 Bv4.104全長重鏈 QVQLVESGGGVVQPGRSLRLSCAASGFTFSGYGMHWVRQAPGKGLEWVAFLWHDGTSKDYADSVKGRFTISRDNSKNTLYMQMNSLRAEDTAVYYCAREDYYDSNAFDYWGQGTLVTVSSASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKKVEPKSCDKTHTCPPCPAPELLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAK(G)QPREPQVYTLPPSRDELTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGK
73 Bc8.111 CDR-H1 RYAMS
74 Bc8.111 CDR-H2 ATSGSGADTYYADSVKG
75 Bc8.111 CDR-H3 PYMVAAVARTVDY
76 Bc8.111 CDR-L1 TRSSGSIASNYVQ
77 Bc8.111-CDR-L2 EDNERPS
78 Bc8.111 CDR-L3 QSYESSNWV
79 Bc8.111 H-FW1 EVQLVESGGGLVQPGGSLRLSCAASGFTFS
80 Bc8.111 H-FW2 WVRQAPGKGLEWVS
81 Bc8.111 H-FW3 RFTISRDNSKNTVYLQMNSLRADDTAFYYCAK
82 Bc8.111 H-FW4 WGQGTLVTVSS
83 Bc8.111 L-FW1 QSVLTQPHSVSESPGKTVTISC
84 Bc8.111 L-FW2 WYQQRPGSAPTTVIY
85 Bc8.111 L-FW3 GVPARFSGSIDSSSNSASLTISGLKTEDEADYYC
86 Bc8.111 L-FW4 FGGGTKLTVL
87 Bc8.111 VL QSVLTQPHSVSESPGKTVTISCTRSSGSIASNYVQWYQQRPGSAPTTVIYEDNERPSGVPARFSGSIDSSSNSASLTISGLKTEDEADYYCQSYESSNWVFGGGTKLTVL
88 Bc8.111 VH EVQLVESGGGLVQPGGSLRLSCAASGFTFSRYAMSWVRQAPGKGLEWVSATSGSGADTYYADSVKGRFTISRDNSKNTVYLQMNSLRADDTAFYYCAKDPYMVAAVARTVDYWGQGTLVTVSS
89 Bc8.111全長輕鏈 QSVLTQPHSVSESPGKTVTISCTRSSGSIASNYVQWYQQRPGSAPTTVIYEDNERPSGVPARFSGSIDSSSNSASLTISGLKTEDEADYYCQSYESSNWVFGGGTKLTVLGQPKAAPSVTLFPPSSEELQANKATLVCLISDFYPGAVTVAWKADSSPVKAGVETTTPSKQSNNKYAASSYLSLTPEQWKSHRSYSCQVTHEGSTVEKTVAPTECS
90 Bc8.111全長重鏈 EVQLVESGGGLVQPGGSLRLSCAASGFTFSRYAMSWVRQAPGKGLEWVSATSGSGADTYYADSVKGRFTISRDNSKNTVYLQMNSLRADDTAFYYCAKDPYMVAAVARTVDYWGQGTLVTVSSASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKKVEPKSCDKTHTCPPCPAPELLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAK(G)QPREPQVYTLPPSRDELTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGK
91 Bc8.104 CDR-H1 NYGVT
92 Bc8.104 CDR-H2 GIIPIFGTTNYAQKFLG
93 Bc8.104 CDR-H3 QGSSTWFATLYAFPI
94 Bc8.104 CDR-L1 RASQRVSGNYLA
95 Bc8.104-CDR-L2 GASSRAT
96 Bc8.104 CDR-L3 HQYGSSPPT
97 Bc8.104 H-FW1 QVQLVQSGAEVKKAGSSVKVSCKAFGGTSN
98 Bc8.104 H-FW2 WVRQAPGQGLQWMG
99 Bc8.104 H-FW3 RVTITADKSTRTAYMELSSLRSEDTAVYYCAS
100 Bc8.104 H-FW4 WGQGTMVTVSS
101 Bc8.104 L-FW1 EIVLTQSPGTLSLSPGERATLSC
102 Bc8.104 L-FW2 WYQQKVGQAPRLLIY
103 Bc8.104 L-FW3 GIPDRFSGSGSGTDFTLTISRLQPEDFAVYSC
104 Bc8.104 L-FW4 FGQGTKVEIK
105 Bc8.104 VL EIVLTQSPGTLSLSPGERATLSCRASQRVSGNYLAWYQQKVGQAPRLLIYGASSRATGIPDRFSGSGSGTDFTLTISRLQPEDFAVYSCHQYGSSPPTFGQGTKVEIK
106 Bc8.104 VH QVQLVQSGAEVKKAGSSVKVSCKAFGGTSNNYGVTWVRQAPGQGLQWMGGIIPIFGTTNYAQKFLGRVTITADKSTRTAYMELSSLRSEDTAVYYCASQGSSTWFATLYAFPIWGQGTMVTVSS
107 Bc8.104全長輕鏈 EIVLTQSPGTLSLSPGERATLSCRASQRVSGNYLAWYQQKVGQAPRLLIYGASSRATGIPDRFSGSGSGTDFTLTISRLQPEDFAVYSCHQYGSSPPTFGQGTKVEIKRTVAAPSVFIFPPSDEQLKSGTASVVCLLNNFYPREAKVQWKVDNALQSGNSQESVTEQDSKDSTYSLSSTLTLSKADYEKHKVYACEVTHQGLSSPVTKSFNRGEC
108 Bc8.104全長重鏈 QVQLVQSGAEVKKAGSSVKVSCKAFGGTSNNYGVTWVRQAPGQGLQWMGGIIPIFGTTNYAQKFLGRVTITADKSTRTAYMELSSLRSEDTAVYYCASQGSSTWFATLYAFPIWGQGTMVTVSSASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKKVEPKSCDKTHTCPPCPAPELLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAK(G)QPREPQVYTLPPSRDELTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGK
109 Bv6.172 CDR-H1 NYWIT
110 Bv6.172 CDR-H2 RIDTRDSYTNYSPSFQG
111 Bv6.172 CDR-H3 LSTTYPLNYYGMDV
112 Bv6.172 CDR-L1 TGSSSNIGANYDVN
113 Bv6.172-CDR-L2 GNTNRPS
114 Bv6.172 CDR-L3 QSYDTSLSGWV
115 Bv6.172 H-FW1 EVQLVQSGAAVRKPGESLRISCQASGFSFT
116 Bv6.172 H-FW2 WVRQRPGKGLEWMG
117 Bv6.172 H-FW3 HVTISIDRSINTAYLQWSSLKASDTAMYYCAR
118 Bv6.172 H-FW4 WGQGTTVTVSS
119 Bv6.172 L-FW1 QSVLTQPPSVSGTPGQRVTISC
120 Bv6.172 L-FW2 WYQQLPGTAPKVLIY
121 Bv6.172 L-FW3 GVPDRFSGSKSGTSASLAITGLQAEDEADYYC
122 Bv6.172 L-FW4 FGGGTKLTVL
123 Bv6.172 VL QSVLTQPPSVSGTPGQRVTISCTGSSSNIGANYDVNWYQQLPGTAPKVLIYGNTNRPSGVPDRFSGSKSGTSASLAITGLQAEDEADYYCQSYDTSLSGWVFGGGTKLTVL
124 Bv6.172 VH EVQLVQSGAAVRKPGESLRISCQASGFSFTNYWITWVRQRPGKGLEWMGRIDTRDSYTNYSPSFQGHVTISIDRSINTAYLQWSSLKASDTAMYYCARLSTTYPLNYYGMDVWGQGTTVTVSS
125 Bv6.172全長輕鏈 QSVLTQPPSVSGTPGQRVTISCTGSSSNIGANYDVNWYQQLPGTAPKVLIYGNTNRPSGVPDRFSGSKSGTSASLAITGLQAEDEADYYCQSYDTSLSGWVFGGGTKLTVLGQPKAAPSVTLFPPSSEELQANKATLVCLISDFYPGAVTVAWKADSSPVKAGVETTTPSKQSNNKYAASSYLSLTPEQWKSHRSYSCQVTHEGSTVEKTVAPTECS
126 Bv6.172全長重鏈 EVQLVQSGAAVRKPGESLRISCQASGFSFTNYWITWVRQRPGKGLEWMGRIDTRDSYTNYSPSFQGHVTISIDRSINTAYLQWSSLKASDTAMYYCARLSTTYPLNYYGMDVWGQGTTVTVSSASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKKVEPKSCDKTHTCPPCPAPELLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAK(G)QPREPQVYTLPPSRDELTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGK
127 Bv4.115 CDR-H1 NYHIH
128 Bv4.115 CDR-H2 IINPRRLSTAYAPKFQG
129 Bv4.115 CDR-H3 DAGDDTSGPFDS
130 Bv4.115 CDR-L1 RASQSINTWLA
131 Bv4.115-CDR-L2 KASSLES
132 Bv4.115 CDR-L3 QQYNTFS
133 Bv4.115 H-FW1 QVQLVQSGAEVKKPGSSVKVSCRSSGYRFT
134 Bv4.115 H-FW2 WVRQAPGQGLEWVG
135 Bv4.115 H-FW3 RVTMTRDTSTSTVYMELSSLRSDDTAVYYCAR
136 Bv4.115 H-FW4 WGQGTLVTVSS
137 Bv4.115 L-FW1 DIQMTQSPSTLSASVGDRVTITC
138 Bv4.115 L-FW2 WYQQKPGKAPKLLIS
139 Bv4.115 L-FW3 GVPSRFSGSGSGTEFTLSISSLQPDDFATYYC
140 Bv4.115 L-FW4 FGQGTKLEIK
141 Bv4.115 VL DIQMTQSPSTLSASVGDRVTITCRASQSINTWLAWYQQKPGKAPKLLISKASSLESGVPSRFSGSGSGTEFTLSISSLQPDDFATYYCQQYNTFSFGQGTKLEIK
142 Bv4.115 VH QVQLVQSGAEVKKPGSSVKVSCRSSGYRFTNYHIHWVRQAPGQGLEWVGIINPRRLSTAYAPKFQGRVTMTRDTSTSTVYMELSSLRSDDTAVYYCARDAGDDTSGPFDSWGQGTLVTVSS
143 Bv4.115全長輕鏈 DIQMTQSPSTLSASVGDRVTITCRASQSINTWLAWYQQKPGKAPKLLISKASSLESGVPSRFSGSGSGTEFTLSISSLQPDDFATYYCQQYNTFSFGQGTKLEIKRTVAAPSVFIFPPSDEQLKSGTASVVCLLNNFYPREAKVQWKVDNALQSGNSQESVTEQDSKDSTYSLSSTLTLSKADYEKHKVYACEVTHQGLSSPVTKSFNRGEC
144 Bv4.115全長重鏈 QVQLVQSGAEVKKPGSSVKVSCRSSGYRFTNYHIHWVRQAPGQGLEWVGIINPRRLSTAYAPKFQGRVTMTRDTSTSTVYMELSSLRSDDTAVYYCARDAGDDTSGPFDSWGQGTLVTVSSASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKKVEPKSCDKTHTCPPCPAPELLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAK(G)QPREPQVYTLPPSRDELTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGK
145 Bc1.229 CDR-H1 NYGMH
146 Bc1.229 CDR-H2 VIWNDGSNKYYADSVKG
147 Bc1.229 CDR-H3 EGLTSVTMLDS
148 Bc1.229 CDR-L1 RASQYISSFLN
149 Bc1.229-CDR-L2 VASSLQS
150 Bc1.229 CDR-L3 QQSYSTPLFT
151 Bc1.229 H-FW1 QVQLVESGGGVVQPGRSLRVSCAASGFTFS
152 Bc1.229 H-FW2 WVRQAPGKGLEWLA
153 Bc1.229 H-FW3 RFIISRDNSKNTLYLQMNSLGAEDTAMYYCAR
154 Bc1.229 H-FW4 WGQGALVTVSS
155 Bc1.229 L-FW1 DIQMTQSPSSLSASVGDRVTITC
156 Bc1.229 L-FW2 WYQQKPGKAPKLLIH
157 Bc1.229 L-FW3 GVPSRFSGSGSGTHFTLTISSLQPEDFATYYC
158 Bc1.229 L-FW4 FGPGTKVDIK
159 Bc1.229 VL DIQMTQSPSSLSASVGDRVTITCRASQYISSFLNWYQQKPGKAPKLLIHVASSLQSGVPSRFSGSGSGTHFTLTISSLQPEDFATYYCQQSYSTPLFTFGPGTKVDIK
160 Bc1.229 VH QVQLVESGGGVVQPGRSLRVSCAASGFTFSNYGMHWVRQAPGKGLEWLAVIWNDGSNKYYADSVKGRFIISRDNSKNTLYLQMNSLGAEDTAMYYCAREGLTSVTMLDSWGQGALVTVSS
161 Bc1.229全長輕鏈 DIQMTQSPSSLSASVGDRVTITCRASQYISSFLNWYQQKPGKAPKLLIHVASSLQSGVPSRFSGSGSGTHFTLTISSLQPEDFATYYCQQSYSTPLFTFGPGTKVDIKRTVAAPSVFIFPPSDEQLKSGTASVVCLLNNFYPREAKVQWKVDNALQSGNSQESVTEQDSKDSTYSLSSTLTLSKADYEKHKVYACEVTHQGLSSPVTKSFNRGEC
162 Bc1.229全長重鏈 QVQLVESGGGVVQPGRSLRVSCAASGFTFSNYGMHWVRQAPGKGLEWLAVIWNDGSNKYYADSVKGRFIISRDNSKNTLYLQMNSLGAEDTAMYYCAREGLTSVTMLDSWGQGALVTVSSASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKKVEPKSCDKTHTCPPCPAPELLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAK(G)QPREPQVYTLPPSRDELTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGK
163 Bc8.159 CDR-H1 TNNWWS
164 Bc8.159 CDR-H2 EIHHIGSTNYNPSLKS
165 Bc8.159 CDR-H3 GRLGITRDRYYFDS
166 Bc8.159 CDR-L1 QASQDISNYLN
167 Bc8.159-CDR-L2 DTSSLER
168 Bc8.159 CDR-L3 QQYYNLPHT
169 Bc8.159 H-FW1 QVQLQESGPGLVKPSGTLSLTCAVSGGTIR
170 Bc8.159 H-FW2 WVRQPPGKGLEWIG
171 Bc8.159 H-FW3 QVTISVDKSKNQFSLNLSSVTAADTALYYCVR
172 Bc8.159 H-FW4 WGRGTLVTVSS
173 Bc8.159 L-FW1 DIQMTQSPSPLSVSVGDRVTITC
174 Bc8.159 L-FW2 WYQQKPGQAPKLLIY
175 Bc8.159 L-FW3 GVPSRFSGSGSGTDFTLTISSLQPEDIATYHC
176 Bc8.159 L-FW4 FGQGTKLEIK
177 Bc8.159 VL DIQMTQSPSPLSVSVGDRVTITCQASQDISNYLNWYQQKPGQAPKLLIYDTSSLERGVPSRFSGSGSGTDFTLTISSLQPEDIATYHCQQYYNLPHTFGQGTKLEIK
178 Bc8.159 VH QVQLQESGPGLVKPSGTLSLTCAVSGGTIRTNNWWSWVRQPPGKGLEWIGEIHHIGSTNYNPSLKSQVTISVDKSKNQFSLNLSSVTAADTALYYCVRGRLGITRDRYYFDSWGRGTLVTVSS
179 Bc8.159全長輕鏈 DIQMTQSPSPLSVSVGDRVTITCQASQDISNYLNWYQQKPGQAPKLLIYDTSSLERGVPSRFSGSGSGTDFTLTISSLQPEDIATYHCQQYYNLPHTFGQGTKLEIKRTVAAPSVFIFPPSDEQLKSGTASVVCLLNNFYPREAKVQWKVDNALQSGNSQESVTEQDSKDSTYSLSSTLTLSKADYEKHKVYACEVTHQGLSSPVTKSFNRGEC
180 Bc8.159全長重鏈 QVQLQESGPGLVKPSGTLSLTCAVSGGTIRTNNWWSWVRQPPGKGLEWIGEIHHIGSTNYNPSLKSQVTISVDKSKNQFSLNLSSVTAADTALYYCVRGRLGITRDRYYFDSWGRGTLVTVSSASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKKVEPKSCDKTHTCPPCPAPELLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAK(G)QPREPQVYTLPPSRDELTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGK
181 Bc1.128 CDR-H1 NYGMH
182 Bc1.128 CDR-H2 FTIYDGSHKYYADSVKG
183 Bc1.128 CDR-H3 DSNGFGVLS
184 Bc1.128 CDR-L1 RASQGIRSDLG
185 Bc1.128-CDR-L2 GASNLQR
186 Bc1.128 CDR-L3 LQHNSFPWT
187 Bc1.128 H-FW1 EVQLVESGGGVVQPGRSLRLSCAASGFIFS
188 Bc1.128 H-FW2 WVRQAPGKGLEWVA
189 Bc1.128 H-FW3 RFTISRDNSKNTLYLQMNSLRYEDTAVYYCAT
190 Bc1.128 H-FW4 WGQGTLVTVSS
191 Bc1.128 L-FW1 DIQLTQSPSSLSASVGDRVTITC
192 Bc1.128 L-FW2 WYQQKPGKAPKRLIY
193 Bc1.128 L-FW3 GVPSRFSGSGSGTEFTLTISSLQPEDFASYYC
194 Bc1.128 L-FW4 FGQGTKVEIK
195 Bc1.128 VL DIQLTQSPSSLSASVGDRVTITCRASQGIRSDLGWYQQKPGKAPKRLIYGASNLQRGVPSRFSGSGSGTEFTLTISSLQPEDFASYYCLQHNSFPWTFGQGTKVEIK
196 Bc1.128 VH EVQLVESGGGVVQPGRSLRLSCAASGFIFSNYGMHWVRQAPGKGLEWVAFTIYDGSHKYYADSVKGRFTISRDNSKNTLYLQMNSLRYEDTAVYYCATDSNGFGVLSWGQGTLVTVSS
197 Bc1.128全長輕鏈 DIQLTQSPSSLSASVGDRVTITCRASQGIRSDLGWYQQKPGKAPKRLIYGASNLQRGVPSRFSGSGSGTEFTLTISSLQPEDFASYYCLQHNSFPWTFGQGTKVEIKRTVAAPSVFIFPPSDEQLKSGTASVVCLLNNFYPREAKVQWKVDNALQSGNSQESVTEQDSKDSTYSLSSTLTLSKADYEKHKVYACEVTHQGLSSPVTKSFNRGEC
198 Bc1.128全長重鏈 EVQLVESGGGVVQPGRSLRLSCAASGFIFSNYGMHWVRQAPGKGLEWVAFTIYDGSHKYYADSVKGRFTISRDNSKNTLYLQMNSLRYEDTAVYYCATDSNGFGVLSWGQGTLVTVSSASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKKVEPKSCDKTHTCPPCPAPELLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAK(G)QPREPQVYTLPPSRDELTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGK
199 Bc4.204 CDR-H1 SYGMN
200 Bc4.204 CDR-H2 IIWFDGSQTYYGDSVKG
201 Bc4.204 CDR-H3 GGAEESTNWRFLWVPRYYYYMDV
202 Bc4.204 CDR-L1 IGTNSDFGRYDYVS
203 Bc4.204-CDR-L2 DVSQRPS
204 Bc4.204 CDR-L3 CSYAGSFNLV
205 Bc4.204 H-FW1 QVQLVESGGGVVQPGRSLRLSCTASGFAFN
206 Bc4.204 H-FW2 WVRQAPGKGLEWVA
207 Bc4.204 H-FW3 RFTISRDRSTNTLFLQMNNLRADDTAMYYCAR
208 Bc4.204 H-FW4 WGKGTTVTVSS
209 Bc4.204 L-FW1 QSALTQPRSVSGSPGQSVTISC
210 Bc4.204 L-FW2 WYQQHPDKAPKLLIY
211 Bc4.204 L-FW3 GVPDRFSGSKSGYTASLIISGLQADDEAEYFC
212 Bc4.204 L-FW4 FGGGTKVTVL
213 Bc4.204 VL QSALTQPRSVSGSPGQSVTISCIGTNSDFGRYDYVSWYQQHPDKAPKLLIYDVSQRPSGVPDRFSGSKSGYTASLIISGLQADDEAEYFCCSYAGSFNLVFGGGTKVTVL
214 Bc4.204 VH QVQLVESGGGVVQPGRSLRLSCTASGFAFNSYGMNWVRQAPGKGLEWVAIIWFDGSQTYYGDSVKGRFTISRDRSTNTLFLQMNNLRADDTAMYYCARGGAEESTNWRFLWVPRYYYYMDVWGKGTTVTVSS
215 Bc4.204全長輕鏈 QSALTQPRSVSGSPGQSVTISCIGTNSDFGRYDYVSWYQQHPDKAPKLLIYDVSQRPSGVPDRFSGSKSGYTASLIISGLQADDEAEYFCCSYAGSFNLVFGGGTKVTVLGQPKAAPSVTLFPPSSEELQANKATLVCLISDFYPGAVTVAWKADSSPVKAGVETTTPSKQSNNKYAASSYLSLTPEQWKSHRSYSCQVTHEGSTVEKTVAPTECS
216 Bc4.204全長重鏈 QVQLVESGGGVVQPGRSLRLSCTASGFAFNSYGMNWVRQAPGKGLEWVAIIWFDGSQTYYGDSVKGRFTISRDRSTNTLFLQMNNLRADDTAMYYCARGGAEESTNWRFLWVPRYYYYMDVWGKGTTVTVSSASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKKVEPKSCDKTHTCPPCPAPELLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAK(G)QPREPQVYTLPPSRDELTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGK
217 Bc1.263 CDR-H1 NYGVN
218 Bc1.263 CDR-H2 KIIPILGIVNYAQKFQG
219 Bc1.263 CDR-H3 DRGGKPLYSYGYGLDY
220 Bc1.263 CDR-L1 RASLSVSTYLA
221 Bc1.263-CDR-L2 DASKRAT
222 Bc1.263 CDR-L3 QQRSTT
223 Bc1.263 H-FW1 QVQLVQSGAEVKKPGSSVKVSCRASGGTFS
224 Bc1.263 H-FW2 WVRQAPGQGLEWMG
225 Bc1.263 H-FW3 RVTITADKSTSTAYMELSSLRSEDTAVYYCAR
226 Bc1.263 H-FW4 WGQGTLVTVSS
227 Bc1.263 L-FW1 EIVLTQSPATLSLSPGERATLSC
228 Bc1.263 L-FW2 WYQKKPGQPPRLLIY
229 Bc1.263 L-FW3 GIPARFSGSGSGTDFTLTISSLEPEDFAVYYC
230 Bc1.263 L-FW4 FGQGTKVEIK
231 Bc1.263 VL EIVLTQSPATLSLSPGERATLSCRASLSVSTYLAWYQKKPGQPPRLLIYDASKRATGIPARFSGSGSGTDFTLTISSLEPEDFAVYYCQQRSTTFGQGTKVEIK
232 Bc1.263 VH QVQLVQSGAEVKKPGSSVKVSCRASGGTFSNYGVNWVRQAPGQGLEWMGKIIPILGIVNYAQKFQGRVTITADKSTSTAYMELSSLRSEDTAVYYCARDRGGKPLYSYGYGLDYWGQGTLVTVSS
233 Bc1.263全長輕鏈 EIVLTQSPATLSLSPGERATLSCRASLSVSTYLAWYQKKPGQPPRLLIYDASKRATGIPARFSGSGSGTDFTLTISSLEPEDFAVYYCQQRSTTFGQGTKVEIKRTVAAPSVFIFPPSDEQLKSGTASVVCLLNNFYPREAKVQWKVDNALQSGNSQESVTEQDSKDSTYSLSSTLTLSKADYEKHKVYACEVTHQGLSSPVTKSFNRGEC
234 Bc1.263全長重鏈 QVQLVQSGAEVKKPGSSVKVSCRASGGTFSNYGVNWVRQAPGQGLEWMGKIIPILGIVNYAQKFQGRVTITADKSTSTAYMELSSLRSEDTAVYYCARDRGGKPLYSYGYGLDYWGQGTLVTVSSASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKKVEPKSCDKTHTCPPCPAPELLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAK(G)QPREPQVYTLPPSRDELTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGK
235 Bv4.105 CDR-H1 DYPIM
236 Bv4.105 CDR-H2 FIRSKAYGGTAEYAASVKG
237 Bv4.105 CDR-H3 EGGHSGFWSGFNKIPTFDY
238 Bv4.105 CDR-L1 RASETIRTYLN
239 Bv4.105-CDR-L2 AASSVQS
240 Bv4.105 CDR-L3 QQSYTSPWVT
241 Bv4.105 H-FW1 QVQLVESGGGLVQSGRSLRLSCSAFGFTFG
242 Bv4.105 H-FW2 WVRLAPGKGLEWVG
243 Bv4.105 H-FW3 RFTTSRDDSRSTAYLQMNSLKTEDTAVYYCTR
244 Bv4.105 H-FW4 WGQGSLVTVSS
245 Bv4.105 L-FW1 DIQMTQSPSSLSASIGDRVSITC
246 Bv4.105 L-FW2 WYQHKPGKAPQLLIY
247 Bv4.105 L-FW3 GVPSRFSGSGSGTDFTLTISNLQPEDFATYYC
248 Bv4.105 L-FW4 FGPGTKVDIK
249 Bv4.105 VL DIQMTQSPSSLSASIGDRVSITCRASETIRTYLNWYQHKPGKAPQLLIYAASSVQSGVPSRFSGSGSGTDFTLTISNLQPEDFATYYCQQSYTSPWVTFGPGTKVDIK
250 Bv4.105 VH QVQLVESGGGLVQSGRSLRLSCSAFGFTFGDYPIMWVRLAPGKGLEWVGFIRSKAYGGTAEYAASVKGRFTTSRDDSRSTAYLQMNSLKTEDTAVYYCTREGGHSGFWSGFNKIPTFDYWGQGSLVTVSS
251 Bv4.105全長輕鏈 DIQMTQSPSSLSASIGDRVSITCRASETIRTYLNWYQHKPGKAPQLLIYAASSVQSGVPSRFSGSGSGTDFTLTISNLQPEDFATYYCQQSYTSPWVTFGPGTKVDIKRTVAAPSVFIFPPSDEQLKSGTASVVCLLNNFYPREAKVQWKVDNALQSGNSQESVTEQDSKDSTYSLSSTLTLSKADYEKHKVYACEVTHQGLSSPVTKSFNRGEC
252 Bv4.105全長重鏈 QVQLVESGGGLVQSGRSLRLSCSAFGFTFGDYPIMWVRLAPGKGLEWVGFIRSKAYGGTAEYAASVKGRFTTSRDDSRSTAYLQMNSLKTEDTAVYYCTREGGHSGFWSGFNKIPTFDYWGQGSLVTVSSASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKKVEPKSCDKTHTCPPCPAPELLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAK(G)QPREPQVYTLPPSRDELTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGK
SEQ ID 描述 序列
253 S-SHBs Genbank AAA45488.1 MENITSGFLGPLLVLQAGFFLLTRILTIPQSLDSWWTSLNFLGGTTVCLGQNSQSPTSNH SPTSCPPTCPGYRWMCLRRFIIFLFILLLCLIFLLVLLDYQGMLPVCPLIPGSSTTSTGP CRTCMTTAQGTSMYPSCCCTKPSDGNCTCIPIPSSWAFGKFLWEWASARFSWLSLLVPFV QWFVGLSPTVWLSVIWMMWYWGPSLYSILSPFLPLLPIFFCLWVYI
254 ConsHBAg_A MENITSGFLGPLLVLQAGFFLLTRILTIPQSLDSWWTSLNFLGGSPVCLGQNSQSPTSNHSPTSCPPI CPGYRWMCLRRFIIFLFILLLCLIFLLVLLDYQGMLPVCPLIPGSTTTSTGPCKTCTTPAQGNSMFPSCCCTKPTDGNCTCIPIPSSWAFAKYLWEWASVRFSWLSLLVPFVQWFVGLSPTVWLSAIWMMWYWGPSL YSIVSPFIPLLPIFFCLWVYI
255       ConsHBAg_B MENIASGLLGPLLVLQAGFFLLTKILTIPQSLDSWWTSLNFLGGTPVCLGQNSQSQISSHSPTCCPPICPGYRWMCLRRFIIFLCILLLCLIFLLVLLDYQGMLPVCPLIPGSSTTSTGPCKTCTTPAQGTSMFPSCCCTKPTDGNCTCIPIPSSWAFAKYLWEWASVRFSWLSLLVPFVQWFVGLSPTVWLSVIWMMWFWGPSLYNILSPFMPLLPIFFCLWVYI
256 ConsHBAg_C MENTTSGFLGPLLVLQAGFFLLTRILTIPQSLDSWWTSLNFLGGAPTCPGQNSQSPTSNHSPT SCPPICPGYRWMCLRRFIIFLFILLLCLIFLLVLLDYQGMLPVCPLLPGTSTTSTGPCKTCTIPAQGT SMFPSCCCTKPSDGNCTCIPIPSSWAFARFLWEWASVRFSWLSLLVPFVQWFVGLSPTVWLSVI WMMWYWGPSLYNILSPFLPLLPIFFCLWVYI
257 ConsHBAg_D MENITSGFLGPLLVLQAGFFLLTRILTIPQSLDSWWTSLNFLGGTTVCLGQNSQSPTSNHSPTSCPPT CPGYRWMCLRRFIIFLFILLLCLIFLLVLLDYQGMLPVCPLIPGSSTTSTGPCRTCTTTAQGTSMYP SCCCTKPSDGNCTCIPIPSSWAFGKFLWEWASARFSWLSLLVPFVQWFVGLSPTVWLSVIWMMWYWGPSLYSILSPFLPLLPIFFCLWVYI
258 ConsHBAg_E MESITSGFLGPLLVLQAGFFLLTKILTIPQSLDSWWTSLNFLGGAPVCLGQNSQSPTSNHSPTSCPPICPGYRWMCLRRFIIFLFILLLCLIFLLVLLDYQGMLPVCPLIPGSSTTSTGPCRTCTTLAQGTSMFPSCCCSKPSDGNCTCIPIPSSWAFGKFLWEWASARFSWLSLLVPFVQWFAGLSPTVWLSVIWMMWYWGPSLYNILSPFIPLLPIFFCLWVYI
259 ConsHBAg_F MDNITSGLLGPLLVLQAVCFLLTKILTIPQSLDSWWTSLNFLGGLPGCPGQNSQSPTSNHLPTSCPPTCPGYRWMCLRRFIIFLFILLLCLIFLLVLLDYQGMLPVCPLLPGSTTTSTGPCKTCTTLAQGTSMFPSCCCSKPSDGNCTCIPIPSSWALGKYLWEWASARFSWLSLLVQFVQWCVGLSPTVWLLVIWMIWYWGPNLCSILSPFIPLLPIFCYLWVSI
260 ConsHBAg_G MENITSGFLGPLLVLQAGFFLLTRILTIPQSLDSWWTSLNFLGGVPVCPGLNSQSPTSNHSPISCPPTCPGYRWMCLRRFIIFLFILLLCLIFLLVLLDYQGMLPVCPLIPGSSTTSTGPCKTCTTPAQGNSMYPSCCCTKPSDGNCTCIPIPSSWAFAKYLWEWASVRFSWLSLLVPFVQWFVGLSPTVWLSAIWMMWYWGPNLYNILSPFIPLLPIFFCLWVYI
261 ConsHBAg_H MENITSGLLGPLLVLQAVCFLLTKILTIPQSLDSWWTSLNFLGVPPGCPGQNSQSPISNHLPTSCPPTCPGYRWMCLRRFIIFLFILLLCLIFLLVLLDYQGMLPVCPLLPGSTTTSTGPCKTCTTLAQGTSMFPSCCCTKPSDGNCTCIPIPSSWAFGKYLWEWASARFSWLSLLVQFVQWCVGLSPTVWLLVIWMIWYWGPNLCSILSPFIPLLPIFCYLWASI
262 ConsHBAg_I MENITSGFLGPLLVLQAGFFLLTKILTIPQSLDSWWTSLNFLGGAPVCLGQNSQSPTSNHSPTSCPPICPGYRWMCLRRFIIFLFILLLCLIFLLVLLDYQGMLPVCPLIPGSSTTSTGPCKTCTTPAQGNSMYPSCCCTKPTDGNCTCIPIPSSWAFAKYLWEWASARFSWLSLLVPFVQWFVGLSPTVWLSVI WMMWYWGPSLYNILSPFIPLLPIFFCLWVYI
263 Bc1.187全長重鏈 QVQLVESGGGVVQPGRSLRLSCEASGFTFSNYGMQWVRQAPGKGLEWVAIIWADGTKQYYGDSVKGRFTISRDNFKNTLYLQMNSLRGEDTAMYFCARDGLYASAPNDVWGQGTLVTVSSASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKRVEPKSCDKTHTCPPCPAPELLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSREEMTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGK
264 Bc1.180全長重鏈 QVQLVQSGAEVKKPGSSVKVSCKASGGTFGRSAVSWVRHAPGQRLEWMGRTIPLLRIAEYSQTFQGRVTITADKFTNTVYMELRSLTYEDTAVYYCAREGDGLDMWGQGTMVTVSSASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKRVEPKSCDKTHTCPPCPAPELLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSREEMTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGK
265 Bc3.106全長重鏈 EVQLLESGGGLVQPGGSLRLSCTASGFTFGSYAMSWVRQAPGKGLKWVSAFSGTGGSTYYADSVKGRFTISRDNSKNTLYLQMNNLRAEDTAVYFCAKDPGHTSNWRDNYQYYQMDVWGQGTTVTVSSASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKRVEPKSCDKTHTCPPCPAPELLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSREEMTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGK
266 Bv4.104全長重鏈 QVQLVESGGGVVQPGRSLRLSCAASGFTFSGYGMHWVRQAPGKGLEWVAFLWHDGTSKDYADSVKGRFTISRDNSKNTLYMQMNSLRAEDTAVYYCAREDYYDSNAFDYWGQGTLVTVSSASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKRVEPKSCDKTHTCPPCPAPELLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSREEMTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGK
267 Bc8.111全長重鏈 EVQLVESGGGLVQPGGSLRLSCAASGFTFSRYAMSWVRQAPGKGLEWVSATSGSGADTYYADSVKGRFTISRDNSKNTVYLQMNSLRADDTAFYYCAKDPYMVAAVARTVDYWGQGTLVTVSSASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKRVEPKSCDKTHTCPPCPAPELLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSREEMTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGK
268 Bc8.104全長重鏈 QVQLVQSGAEVKKAGSSVKVSCKAFGGTSNNYGVTWVRQAPGQGLQWMGGIIPIFGTTNYAQKFLGRVTITADKSTRTAYMELSSLRSEDTAVYYCASQGSSTWFATLYAFPIWGQGTMVTVSSASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKRVEPKSCDKTHTCPPCPAPELLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSREEMTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGK
269 Bv6.172全長重鏈 EVQLVQSGAAVRKPGESLRISCQASGFSFTNYWITWVRQRPGKGLEWMGRIDTRDSYTNYSPSFQGHVTISIDRSINTAYLQWSSLKASDTAMYYCARLSTTYPLNYYGMDVWGQGTTVTVSSASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKRVEPKSCDKTHTCPPCPAPELLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSREEMTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGK
270 Bv4.115全長重鏈 QVQLVQSGAEVKKPGSSVKVSCRSSGYRFTNYHIHWVRQAPGQGLEWVGIINPRRLSTAYAPKFQGRVTMTRDTSTSTVYMELSSLRSDDTAVYYCARDAGDDTSGPFDSWGQGTLVTVSSASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKRVEPKSCDKTHTCPPCPAPELLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSREEMTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGK
271 Bc1.229全長重鏈 QVQLVESGGGVVQPGRSLRVSCAASGFTFSNYGMHWVRQAPGKGLEWLAVIWNDGSNKYYADSVKGRFIISRDNSKNTLYLQMNSLGAEDTAMYYCAREGLTSVTMLDSWGQGALVTVSSASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKRVEPKSCDKTHTCPPCPAPELLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSREEMTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGK   
272 Bc8.159全長重鏈 QVQLQESGPGLVKPSGTLSLTCAVSGGTIRTNNWWSWVRQPPGKGLEWIGEIHHIGSTNYNPSLKSQVTISVDKSKNQFSLNLSSVTAADTALYYCVRGRLGITRDRYYFDSWGRGTLVTVSSASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKRVEPKSCDKTHTCPPCPAPELLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSREEMTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGK
273 Bc1.128全長重鏈 EVQLVESGGGVVQPGRSLRLSCAASGFIFSNYGMHWVRQAPGKGLEWVAFTIYDGSHKYYADSVKGRFTISRDNSKNTLYLQMNSLRYEDTAVYYCATDSNGFGVLSWGQGTLVTVSSASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKRVEPKSCDKTHTCPPCPAPELLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSREEMTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGK
274 Bc4.204全長重鏈 QVQLVESGGGVVQPGRSLRLSCTASGFAFNSYGMNWVRQAPGKGLEWVAIIWFDGSQTYYGDSVKGRFTISRDRSTNTLFLQMNNLRADDTAMYYCARGGAEESTNWRFLWVPRYYYYMDVWGKGTTVTVSSASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKRVEPKSCDKTHTCPPCPAPELLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSREEMTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGK
275 Bc1.263全長重鏈 QVQLVQSGAEVKKPGSSVKVSCRASGGTFSNYGVNWVRQAPGQGLEWMGKIIPILGIVNYAQKFQGRVTITADKSTSTAYMELSSLRSEDTAVYYCARDRGGKPLYSYGYGLDYWGQGTLVTVSSASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKRVEPKSCDKTHTCPPCPAPELLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSREEMTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGK
276 Bv4.105全長重鏈 QVQLVESGGGLVQSGRSLRLSCSAFGFTFGDYPIMWVRLAPGKGLEWVGFIRSKAYGGTAEYAASVKGRFTTSRDDSRSTAYLQMNSLKTEDTAVYYCTREGGHSGFWSGFNKIPTFDYWGQGSLVTVSSASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKRVEPKSCDKTHTCPPCPAPELLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSREEMTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGK
IV. 實例 以下為本發明之方法及組合物的實例。應瞭解，考慮到上文提供之一般描述，可實施各種其他實施例。
材料 及方法 人類樣品 來自HBV疫苗接種者及HBV血清轉化者之血液樣品係根據2012年5月24日由法國國家藥品安全機構(Agence Nationale de S écurit é du M édicament ，ANSM)及2014年1月17日由個人保護委員會(Comit é de Protection des Personnes ，CPP)批准之CoSimmGen方案自ICAReB生物庫平台(Institut Pasteur)之健康供體組獲得。供體之主要臨床生物特徵概述於圖6中。所有來自HBV疫苗接種者及血清轉化者之樣品均作為臨床研究方案RAPIVIB 之一部分獲得，該方案係根據所有法國法規及監管當局之倫理批准且在批准之後進行。RAPIVIB 方案在2015年7月30日接收到Institut Pasteur之臨床研究委員會(Comit é de Recherche Clinique ) (#2014-058)、2015年4月29日ANSM (#150457B-41)、2015年6月10日CPP Ile-de-France III (#2015-100220-49/3267)的批准。該方案採用國家信息技術和公民自由委員會(Commission Nationale de l 'Informatique et des Libert és ，CNIL)的MR-001參考方法。所有提供書面同意書之供體參與此研究，且在偽匿名條件下使用個體編碼收集資料。使用Ficoll® Plaque Plus (GE Healthcare)自供體之血液分離周邊血液單核細胞(PBMC)，且使用蛋白G瓊脂糖4快速流動珠粒(GE Healthcare, Chicago, IL)藉由批次/重力流動親和性層析法純化血漿或血清IgG抗體。
抗原及抗體對照 製備自感染個體及重組S-HBsAg粒子(ayw亞型)純化之原生S-HBsAg且藉由Roche對其進行生物素標記。重組HBsAg粒子(ayw)係在中國倉鼠卵巢細胞(Aventis Pasteur, Val de Reuil, France) (Michel等人，1984)中產生。亞型HBsAg粒子(HBV基因型A)係在酵母甲醇酵母表現系統中產生，且在基因工程改造及生物技術生產設施之中心處純化(＜95%純度) (CIGB, Havana, Cuba; 來自Dr. J. Aguilar的好禮物)。共同基因型特異性S-HBs片段係藉由使用CLC Main Workbench 7軟體(v7.5.3, QIAGEN Aarhus A/S)進行個別HBV基因型序列(A，n=205；B，n=495；C，n=1322；D，n=382；E，n=314；F，n=271；G，n=6；H，n=40；I，n=7)之多個胺基酸比對來構築。使用Anza 5及11限制酶(Thermo Fisher Scientific)將編碼共同S-HBs、G3 S連接子、10xHis標籤及Avi標籤之密碼子最佳化核苷酸片段選殖入pcDNA™3.1/Zeo(+) 表現載體(Thermo Fisher Scientific)中。為了產生跨膜(TM)結構域缺失之S-HBs蛋白(ΔTM-S-HBs)，產生相同的但S-HBs DNA片段缺乏TM1、TM3、TM4結構域且TM2經(G3 S)5 連接子置換的構築體。將二硫化物橋聯之S-HBs/D 122-137 (RTC TTTAQGTSMYPSC )及139-148 (C TKPSDGNC T)環肽，以及涵蓋整個ConsD S-HBs區但一個跨膜域2肽具有高疏水性(IFLFILLLCLIF)之3個胺基酸重疊之12聚體肽(n=24)合成及去鹽(GenScript HK公司)。將非HBV抗體mGO53 (Wardemann及Nussenzweig, 2007)用作同型對照。作為陽性對照，使用下文描述之表現選殖系統，產生對S-HBsAg (Kucinskaite-Kodze等人，2016)之「a」決定子之119-GPCRTCT-125線性抗原決定基具有特異性的中和鼠類HB1抗體，作為具有人類Fc之嵌合重組IgG1。產生鼠類抗前S2抗體1F6 (Kuttner等人，1999)，作為用作下文所述之丙胺酸掃描映射中之捕獲分子的嵌合人類Fab片段。
單一B 細胞FACS 分選及抗體之表現選殖 周邊血液人類B細胞係藉由CD19 MACS (Miltenyi Biotec)自供體PBMC分離，且用LIVE/DEAD可固定死細胞染色套組(Thermo Fisher Scientific)染色。接著，將經純化B細胞在4℃下與經生物素標記之重組或原生S-HBs抗原一起培育30分鐘，用1% FBS-PBS (FACS緩衝液)洗滌，且在4℃下與小鼠抗人類抗體(CD19 A700 (HIB19)、IgG BV786 (G18-145)、CD27 PE-CF594 (M-T271) (BD Biosciences)、IgA FITC (IS11-8E10，Miltenyi Biotec))及抗生蛋白鏈菌素R-PE結合物一起培育30分鐘。洗滌經染色細胞且再懸浮於1 mM EDTA FACS緩衝液中。使用FACS Aria III分選儀(Becton Dickinson, Franklin Lakes, NJ)將單一S-HBs+ CD19+ IgG+ B細胞分選至96孔PCR盤中，如先前所述(Tiller等人，2008)。如先前所述，使用SuperScript IV逆轉錄酶(Thermo Fisher Scientific)進行單一細胞cDNA合成，之後進行IgH、Igκ及Igλ基因之巢式PCR擴增以及對Ig基因特徵之序列分析(Tiller等人，2008)。如先前所述，為逆轉至所選抗體之生殖系(GL)，藉由將突變VH -(DH )-JH 及VL -JL 基因區段用其GL對應物置換來構築序列(Mouquet等人，2012)。如先前所述，將經純化分解之PCR產物選殖入人類Igγ1表現載體、Igκ表現載體或Igλ表現載體(分別GenBank# LT615368.1、LT615369.1及LT615370.1)中(Tiller等人，2008)。鼠類Igγ2表現載體及Igκ表現載體藉由用小鼠Igγ2及Igκ之DNA序列(合成DNA片段, GeneArt, Thermo Fisher Scientific)取代編碼人類Igγ1/Igκ恆定區之DNA序列而自初始IgG1表現載體(Tiller等人，2008)產生，且接著用於選殖嵌合mGO53及Bc1.187抗體。重組抗體係藉由使用如先前所述之PEI沈澱方法(Lorin及Mouquet, 2015)短暫共轉染Freestyle™ 293-F懸浮細胞(Thermo Fisher Scientific)而產生。重組人類IgG抗體係藉由蛋白G親和性層析法(Protein G Sepharose® 4 Fast Flow, GE Healthcare, Chicago, IL)純化。經純化抗體針對PBS透析。用於活體內輸注之製劑經微過濾(Ultrafree®-CL裝置-0.1 µm PVDF膜，Merck-Millipore, Darmstadt, Germany)，且使用ToxinSensorTM Chromogenic LAL內毒素分析套組(GenScript)檢查內毒素含量。
ELISA 如先前所述進行ELISA (Planchais等人，2019)。簡言之，用經純化rS-HBs及nS-HBs (125奈克/孔於PBS中)塗佈高結合96孔ELISA盤(Costar, Corning)隔夜)。用0.05% Tween 20-PBS (PBST)洗滌之後，盤用2% BSA、1 mM EDTA-PBST (阻斷溶液)阻斷2小時，洗滌且與連續稀釋之經純化血清IgG及重組單株抗體在PBS中一起培育。對於夾層ELISA，盤用經純化IgG抗體(250奈克/孔於PBS中)塗佈隔夜，且如上述處理，隨後與經生物素標記之rS-HBs (100奈克/孔於PBS中)一起培育。在洗滌之後，盤藉由添加山羊HRP結合之抗人類IgG或HRP結合之抗生蛋白鏈菌素(最終0.8 µg/ml於阻斷溶液中，Immunology Jackson ImmunoReseach)及HRP顯色基質(ABTS溶液，Euromedex)顯露。對於競爭ELISA，使用EZ-Link Sulfo-NHS-Biotin套組(Thermo Fisher Scientific)生物素標記經純化抗體。rS-HBs盤經阻斷，洗滌，與經生物素標記之抗體(濃度0.33 nM)一起在1:2連續稀釋的抗體競爭者於PBS (IgG濃度在0.83至106.7 nM範圍內)中之溶液中培育2小時，且使用HRP結合之抗生蛋白鏈菌素顯露。實驗使用HydroSpeed™微量盤洗滌器及Sunrise™微量盤吸光度讀取器(Tecan Männedorf)進行，其中在405 nm (OD405nm )下進行光密度量測。使用與先前所述相同的程序測試抗S-HBs抗體與環狀及重疊線性肽的結合(Mouquet等人，2006)。在至少兩個獨立實驗中重複兩次或重複三次地測試所有抗體，該實驗包括mGO53陰性及適當陽性對照。
丙胺酸掃描映射 如先前所述，突變型HBV包膜蛋白係使用FuGENE 6試劑(Roche)，藉由用psVLD3及pT7HB2.7質體共轉染Huh-7細胞而產生(Salisse及Sureau, 2009)。用經純化人類S-HBs抗體(0.5微克/孔於PBS中)塗佈高度結合之96孔ELISA盤(Costar，Corning)隔夜。在PBST洗滌及2小時阻斷步驟之後，將盤與含有HBsAg野生型及突變型蛋白之培養上清液層一起培育2小時。在洗滌之後，盤與經純化His標記之1F6 Fab片段(125奈克/孔)一起培育1小時，洗滌且藉由添加兔HRP結合之抗6xHis標籤抗體(1:4,000-稀釋於阻斷溶液中，ab1187，Abcam)及HRP顯色基質(ABTS溶液，Euromedex)來顯露，如上文所述。根據下式計算結合百分比：([OD]突變型 /[OD]野生型 )×100。
流式細胞量測術結合分析 使用如先前所述之PEI沈澱方法，用編碼S-HBs之載體(每106 個細胞0.65 µg質體DNA)轉染Freestyle™ 293-F (Lorin及Mouquet，2015)。四十八小時轉染後，使用Cytofix/Cytoperm™溶液套組(BD Biosciences)使經轉染及未經轉染之對照細胞固定及滲透，且在4℃下將0.5×106 個細胞與IgG抗體一起培育45分鐘(10 μg/mL，除非另有規定，否則在Perm/Wash™溶液中；BD Biosciences)。在洗滌之後，細胞與AF647結合之山羊抗人類IgG抗體(1:1000稀釋；Thermo Fisher Scientific)在4℃下一起培育20分鐘，洗滌且再懸浮於PBS中。資料使用CytoFLEX流式細胞儀(Beckman Coulter)獲取，且使用FlowJo軟體(v10.3；FlowJo LLC)分析。
蛋白微陣列 所有實驗均在4℃下使用ProtoArray人類蛋白微陣列(Thermo Fisher Scientific)進行。如先前所述，將微陣列在阻斷溶液(Thermo Fisher)中阻斷1小時，洗滌且與2.5 µg/ml下之IgG抗體一起培育1小時30分鐘(Planchais等人，2019)。如先前所述，在洗滌之後，將陣列與AF647結合之山羊抗人類IgG抗體一起培育1小時30分鐘(1 µg/ml於PBS中；Thermo Fisher Scientific)，且使用GenePix 4000B微陣列掃描儀(Molecular Devices)及GenePix Pro 6.0軟體(Molecular Devices)顯露(Planchais等人，2019)。使用Spotxel®軟體(SICASYS Software GmbH, Germany)定量螢光強度，且使用GraphPad Prism軟體(v8.1.2, GraphPad Prism Inc.)繪製相對於參考抗體mGO53 (非多反應性同型對照)之各抗體(來自重複兩次蛋白點)之平均螢光強度(MFI)信號。對於各抗體，使用ProtoArray® Prospector軟體(v5.2.3, Thermo Fisher Scientific)計算Z分數，且如先前所述計算與對角線之偏差(σ)及多反應性指數(PI)值(Planchais等人，2019)。當PI＞0.21時，抗體定義為多反應性的。
Hep-2 細胞結合分析 人類抗S-HBs及對照IgG抗體(mGO53及ED38 (Meffre等人，2004; Wardemann等人，2003))與表現HEp-2細胞之自體抗原的結合係藉由ELISA (AESKULISA® ANA-HEp-2, Aesku.Diagnostics, Wendelsheim, Germany)及間接免疫螢光法分析(IFA) (ANA HEp-2 AeskuSlides®, Aesku.Diagnostics)根據製造商之說明書在50 µg/ml下分析。使用螢光顯微鏡Axio成像儀2 (Zeiss, Jena, Germany)檢查IFA切片，且以5000 ms在放大率×40下獲取圖片——使用ZEN成像軟體(Zen 2.0藍色版本, Zeiss)在Imagopole平台(Institut Pasteur)獲取。
HBV 中和分析 HepaRG及HepG2.2.15細胞株分別獲自Biopredic International (Saint-Gregoire, France)及Dr. Michael Nassal (University Hospital Freiburg, Germany)。HepaRG細胞在補充有10% HepaRG生長補充劑(Biopredic)之威廉姆斯E培養基(Williams E medium) (Gibco® , Thermo Fisher Scientific)中培養，且在感染之前使用1.8% DMSO分化至少2週。藉由膠原蛋白酶灌注方法(Tateno等人，2015)自人類化肝臟之嵌合uPA/SCID小鼠分離之初級人類肝細胞(PHH)係自PhoenixBio (Hiroshima, Japan)獲得。PHH以7×104 個細胞/孔之濃度塗鋪於I型膠原蛋白塗佈之96孔盤上在由Phoenix Bio提供之培養基中。HBV基因型D病毒產生於HepG2.2.15細胞培養物上清液中，且使用聚乙二醇沈澱濃縮(Hantz等人，2009)。藉由梯度超速離心自含HBV之血清(American Red Cross)純化基因型A至C之HBV病毒。簡言之，以OptiPrep™梯度(10-50%，Sigma)施加1.5 ml血清，且在4℃下以32,000 rpm離心3小時。收集溶離份(2 ml)且使用S-HBs CLIA套組(Autobio)及qPCR定量來分析HBs抗原表現。所有純化病毒分離株之全基因體序列係藉由超深度定序(DDL Diagnostic Laboratory, Netherlands)獲得，且HBV基因型係使用B型肝炎病毒資料庫HBVdb (http://hbvdb.ibcp.fr)確定(Hayer等人，2013)。HBV抗體之中和活性係藉由用連續稀釋之抗體在HepaRG或PHH完全培養基中在室溫下培育HBV病毒粒子(MOI 20-30) 1小時來評估。隨後將HBV-抗體混合物添加至96孔盤中之細胞中，最終濃度為4% PEG 8000 (Sigma)。感染細胞在37℃下培育20小時，且隨後用PBS洗滌4次以移除HBV接種物且用完全培養基再填充。感染後六天，根據製造商之說明書，使用S-HBs CLIA套組(Autobio)定量上清液中S-HBs抗原含量。
HDV 中和分析 活體外中和分析使用如先前所述之HDV模型進行(Sureau，2010)，不同之處在於表現NTCP-之Huh-106細胞取代HepaRG細胞(Verrier等人，2016)。在接種後第1天，在4%聚乙二醇(PEG) 8000存在下，使Huh-106細胞(1×105 個細胞/20 mm直徑孔)暴露於HDV病毒粒子之5×107 個基因體等效物(GE)下16小時。為了分析中和，將接種物與500 ng/ml單株抗體之1:2稀釋液混合，且在接種之前在37℃下培育混合物1小時。接種後9天(dpi)收集細胞以量測充當感染標記物的胞內HDV RNA。HDV RNA信號藉由北方墨點分析使用經32 P標記之RNA探針偵測且使用磷光成像儀儀器r (BAS-1800 II; Fuji)定量。
慢性HBV 小鼠模型 慢性HBV感染係藉由單次靜脈內注射(眶後靜脈鼻竇)攜帶複製勝任型HBV-DNA基因體之腺相關血清型2/8的5×1010 個病毒基因體，在6-8週齡C57BL/6小鼠(Janvier Labs, Le Genest-Saint-Isle, France)中建立(Dion等人，2013)。病毒儲備液係藉由基因治療平台(Plateforme de Thérapie Génique) (INSERM U1089, Nantes, France)產生且作為每毫升病毒基因體等效物(GE Healthcare)及病灶形成單元滴定。轉導後六週，向HBV載子小鼠靜脈內投與抗體(每隻小鼠每次注射0.25、0.5或1 mg)。收集血液樣品且在-20℃下儲存。血清S-HBsAg及HBeAg含量分別使用Monolisa S-HBsAg ULTRA (Bio-Rad, France) ELISA套組及ETI-EBK Plus NO140 (Diasorin SA, Italy)測定。濃度係藉由參考用S-HBsAg之已知濃度(Architect S-HBsAg校正器, Bio-Rad, France)及Paul-Ehrlich-Institut標準確立之標準曲線來計算且分別以IU/mL及PEI U/mL為單位表示。使用QIAamp Blood小型套組(Qiagen, Germany)自小鼠血清純化HBV DNA，且藉由如先前所述之定量PCR定量(Cougot等人，2012)。使用含有HBV基因體之1.2個複本的payw1.2質體之連續稀釋液作為定量標準物。結果以IU/ml為單位表示，其中偵測閾值為1000 IU/ml。已審查所有實驗動物方案且由Institut Pasteur之動物機構護理委員會(institutional animal care committee)批准以遵從法國及歐洲對動物福祉之法規及公共衛生處建議(APAFIS#15408-2018060517005070 v1)。所有關於HBV感染之實驗均在A3動物設施中進行。
HBV HUHEP 小鼠模型 為產生HUHEP模型，對BALB/c Rag2-/- IL-2Rγc-/- NOD.sirpa uPAtg/tg (BRGS-uPA)小鼠脾內注射7×105 新鮮解凍之人類肝細胞(BD Biosciences, Corning) (Strick-Marchand等人，2015)。測定具有物種特異性人類白蛋白(hAlb) ELISA (Bethyl Laboratories)之血漿樣品的肝臟嵌合，且使具有≥100 microg/ml hAlb之HUHEP小鼠腹膜內感染1×107 個HBV基因體等效物(Dusseaux等人，2017)。對具有＞106 個HBV DNA複本/毫升之經HBV感染之小鼠每3-4天以20毫克/公斤小鼠，或每週以1毫克/小鼠，給予腹膜內注射bNAb CH1-187或同型對照(mGO53) IgG，或經口遞送於MediDrop蔗糖素(Clear H2O)中之因提弗(ETV) 0.3毫克/公斤/天(Baraclude, BMS)。對於反彈階段，使小鼠返回飲用水。動物在有人護理之無病原體條件下圈養在隔離器中。實驗經Institut Pasteur (Paris, France)處之機構倫理委員會批准且藉由法國教育和研究部(French Ministry of Education and Research) (MENESR # 02162.02)驗證。
統計分析 關於Ig基因譜系分析，使用雙側2×2及2×5費希爾精確檢驗(Fisher's Exact test)比較各組。使用非配對史都登氏試驗法(student t-test)與韋爾奇氏校正(Welch's correction)對所有抗體組的VH 、Vκ及Vλ突變數目進行比較。藉由比較206個各組之間的個別抗體基因特徵進行火山圖分析，且報導以下各參數：Δ平均值(x軸)及藉由雙側2×2費希爾精確檢驗給出之log10 p值(y軸)。使用GraphPad Prism軟體(v8.1.2, GraphPad Prism Inc.)及用於2×5費希爾檢驗之SISA線上工具進行統計分析(http://www.quantitativeskills.com/sisa)。
實例1 ： 來自HBV 疫苗接種者及控制者之人類S-HBs 單株抗體 為了表徵針對HBV表面糖蛋白之記憶B細胞抗體反應，用螢光標記之重組或原生S-HBs粒子染色(圖1A及圖8)六名疫苗接種者及八名血清轉化者的具有較高血清抗HBsAg抗體力價之周邊血液B細胞(圖6)。自藉由單細胞流動式細胞量測術分選捕獲之3,452 S-HBs結合IgG+記憶B細胞，吾等藉由重組表現選殖產生總共170種獨特人類單株抗體(參見上文)。對自HBV疫苗接種者及控制者選殖至S-HBs粒子的S-HBs+記憶B細胞抗體的ELISA結合分析展示僅21.1% (0-61.5%)及55.2% (33.3-90.9%)分別對HBsAg具有高親和力(p=0.011，圖1B及圖9)。在HBV控制者中，循環HBsAg抗體之高力價與HBV特異性B細胞之較大回收率相關(35.2%相對於64.7%，p=0.036)。藉由ELISA缺乏S-HBs反應性之旁觀者B細胞幾乎均為多反應性的(未示出)，且因此可藉由與病毒粒子之非包膜組分相互作用捕獲。HBV特異性記憶B細胞主要為純系擴增之一部分且表現呈現抗原驅動之成熟標誌的體細胞突變之免疫球蛋白基因(圖1C、圖10F及圖10G)。對免疫球蛋白基因特徵與來自健康對照之IgG+記憶B細胞的比較揭露VH1 (亦即VH1-69及VH1-18，p=0.041)、JH4 (p=0.0017)及重排VH1(DH)JH4 (p=0.017)基因以及IgG1/IgG3子類表現(p=0.019)之HBV特異性B細胞譜系利用率增加(圖1D、圖7及圖10)。在利用VH1-69個基因之HBV抗體(總計14%)中，60%在疏水性CRDH2尖端中之位置54處具有生殖系編碼之苯丙胺酸(圖8C)，其展示對針對流感病毒、HCV及HIV-1之許多人類中和抗體而言為必需的(Chen等人，2019)。僅四種抗S-HBs IgG抗體(n=72)藉由免疫墨點識別變性S-HBs抗原，且不結合於「a」決定子肽，而兩種與側接「a」區之線性抗原決定基反應(圖11)，指示大部分S-HBs記憶抗體靶向構形抗原決定基(圖1E)。吾等得出結論，大部分人類S-HBs IgG記憶B細胞表現富集於編碼VH1之免疫球蛋白中之構形依賴性IgG1及IgG3抗體。
實例2 ： 人類S-HBs 記憶B 細胞 抗體之活體外及活體內HBV 中和 為了確定S-HBs記憶B細胞抗體是否中和HBV，吾等在基於HepaRG細胞之分析中量測其針對基因型D病毒之活體外中和活性。總體而言，61%之S-HBs抗體阻斷HBV感染，其中50%抑制濃度(IC50 )在50 µg/ml下降至0.05 pg/ml範圍內(圖2A、圖7及圖12)。在HBV控制者中，69%抗體中和，包括35%強效中和劑，其中IC50 值低於50 ng/ml (圖2A及圖7)。具有較高超突變負荷及對S-HBs抗原具有較廣泛反應性之S-HBs抗體更易於抑制HBV感染(圖2B)。HBV中和劑同樣表現VH1-69 F54及L54對偶基因。D型肝炎病毒(HDV)係包覆有HBV包膜蛋白之δ病毒屬(Deltavirus genus)的缺陷性HBV衛星病毒(Sureau及Negro, 2016)。吾等由此詢問HBV中和抗體是否亦可預防活體外HDV感染。如所預期，所選抗體在Huh-106細胞分析中如同HBV一樣高效地中和HDV (圖2C)。
為評估中和抗S-HBs抗體之活體內活性，吾等基於重組編碼HBV之腺相關病毒(AAV)之肝臟靶向轉導，產生HBV持續小鼠(Dion等人，2013)。選擇四種強效HBV中和劑且將該等中和劑被動地轉移至攜帶高含量循環S-HBsAg (＞104 IU/ml)的AAV-HBV小鼠中。單次靜脈內(i.v.)注射約20 mg/kg之抗體引起注射後2天顯著之病毒血症降低(dpi)，而較低抗體劑量之治療由於抗體藉由超過數量之HBV粒子而快速耗盡而具有更溫和作用(圖2D、圖2E及圖13)。兩種最強強效抗體Bc1.187及Bv4.104分別誘導最低點處之1.7及2.1 log10的平均降低值(dpi2) (圖2E)。在下降後2天之病毒反彈伴隨著抗體衰變，其中在dpi7時恢復至循環HBsAg之基線水準(圖2D及13B)。因為活體內病毒血症之減退取決於所投與之抗體的量，所以接下來吾等想確定增加劑量之HBV交叉中和抗體Bc1.187之作用。接受單次注射以約40 mg/kg (每隻小鼠1 mg靜脈內)之Bc1.187的病毒血症AAV-HBV小鼠展示平均在dpi2時2.8 log10之病毒血症之最大降低(圖2F)，HBsAg含量保持在基線以下持續至少12天(圖2F)。在經治療之動物中，HBV DNA負荷遵循血清HBsAg力價之演進且下降平均3.6 log10，直至在病毒反彈之前在4/6隻小鼠中最後注射Bc1.187之後至多一週達到不可偵測之含量(圖2F)。
實例3 ： 強效人類HBV 中和抗體之交叉基因型活性 HBV基於在「a」決定子中之特定胺基酸變化而分類為四種主要血清型(adr、adw、ayr、ayw)，且根據基於病毒基因體之系統發生學而分類為十種基因型(A至J) (Kato等人，2016)。結合分析展示，最強效HBV中和抗體(71%)能夠分別識別用於GenHevac-B及Engerix-B疫苗中之adw與ayw HBsAg粒子兩者(圖3A)。重要地，約一半中和劑與來自9種不同基因型(A至I)之共同S-HBs蛋白進行同等地交叉反應(圖3B)。其他呈現更異質的結合概況，其中抗體不與F及H基因型(19%，全部來自供體Bc4)反應，或與D-F及H結合，或僅與D及E結合(圖3B)。為驗證交叉基因型HBV結合反映交叉中和潛力，吾等量測HBV交叉反應性中和劑Bc1.187針對由基因型A、B、C及D之HBV病毒粒子所致之初級人類肝細胞之感染的活體外中和活性。如所預期，Bc1.187中和所有4種基因型之HBV病毒，但基因型A及C比B及D更高效(圖3D)。在HepaRG細胞分析中，相對於符合其反應性概況之Bv4.104，基因型A及C病毒粒子亦對Bc1.187高度敏感，僅強效地中和基因型D HBV (圖3E)。
在人類中，已描述若干HBV逃逸突變，其中G145R為S蛋白區中最普遍之取代(Chotiyaputta及Lok, 2009；Huang等人，2012)。吾等因此評估此等突變中之一些是否可藉由強效中和劑影響HBV識別(圖3E及圖16)。對於G145R突變蛋白，僅偵測到約一半抗體之S-HBs結合的顯著減少或損失，指示已知使「a」決定子抗原性去穩定化的G145R突變(Huang等人，2012; Salisse及Sureau, 2009)可能對一些HBV抗體之中和活性有害。突變型結合分析亦展示，中和抗體均不與位置N146處發現之S-HBs上的獨特N-聚糖相互作用(圖3E及圖16)。總體而言，此等資料展示HBV控制者中之S-HBs特異性記憶B細胞可以產生能夠消除循環HBsAg粒子及遏制HBV病毒血症之強效交叉中和抗體。
實例4 ： 強效人類HBV 中和抗體之結合特徵 為了定位由強效中和HBV抗體靶向之抗原決定基，吾等使用取代涵蓋HBsAg之主要親水性區的突變型HBsAg蛋白庫進行丙胺酸篩選ELISA實驗。儘管所有測試抗體均呈現獨特的識別模式，但可基於突變敏感性鑑別共同結合概況(圖4A)。關鍵抗原決定基區主要發現於「a」決定子內部以及N端及C端S-HBs區中之外部(分別為Bc8.109及Bc1.263)。一些其他區不可明確地被識別出(Bc4.204、Bc4.194、Bc4.178、Bc3.106及Bc8.104) (圖4A)。「a」決定子中之中和抗原決定基非常複雜，包含位於以下中之主要相互作用殘基：(i)「微型」及第二環(Bc8.159及Bc1.130)、(ii)第一及第二環(Bv4.105及Bv4.106)、全部3個環(Bv4.104、Bc8.111、Bc1.128及Bc1.156)或主要在第二環(Bv4.115、Bv6.172、Bc1.187、Bc1.229及Bc1.180)中(圖4A)。隨後，吾等進行競爭S-HBs結合ELISA分析以評估中和抗原決定基之間的重疊程度。在各前述抗體類別中，主要發現交叉競爭分子為獨立串接體：Bv4.104/Bc8.111、Bc8.128/Bv4.106、Bc1.180/Bc1.263及Bc3.106/Bc6.149 (圖4C)。三組中和劑Bc4.194/Bc4.204/Bc4.178識別未由定位明確界定之共同非構形抗原決定基(圖1E、圖4A及圖4B)，但該抗原決定基可能位於HBsAg N端或C端之最遠端部分中。就此而言，全部3種抗體不能結合F及H基因型，其主要在被預測為跨膜域3 (Q178-Y225)之區中與其他基因型相異(圖11)。此外，Bc4.204之結合藉由F179A突變而降低且亦在C端(191-200)中弱結合於線性肽(圖4A及圖15)。較大抗原決定基叢集含有具有更以第二環為中心之抗原決定基的中和抗體(Bv4.115、Bv6.172、Bc1.187、Bc1.229)，且亦能夠干擾其他中和劑之S-HBs結合(圖4B)。
為了檢驗體細胞突變是否有助於HBV中和抗體之活性，吾等恢復三種代表性強效中和劑中之突變以產生其推定生殖系前驅體(GL)。代表性GL版本展示異質HBV識別概況：Bc4.204-GL不能與S-HBs反應，而Bc1.187-GL及Bv4.104-GL仍結合但與其成熟對應物相比具有低得多的相對親和力(圖4C)。與突變抗體相比，GL IgG呈現針對由基因型D HBV所致之活體外HepaRG細胞感染的較弱但顯著之抑制活性，尤其Bc1.187-GL，其中IC50 為0.08 µg/ml (圖4D)。此暗示儘管由B細胞前驅體表現之某些生殖系抗體可以高濃度結合及中和HBV，但其高親和力HBsAg結合及強效HBV中和需要體細胞突變。
包括針對病毒抗原之高親和力B細胞純系之人類分類交換記憶B細胞可與自體抗原交叉反應(Andrews等人，2015; Prigent等人，2018; Prigent等人，2016; Tiller等人，2007)。吾等因此使用臨床自體抗體分析(HEp-2細胞IFA及ELISA)及微陣列免疫墨點(＞9,000人類蛋白)評估10種所選擇之強效HBV中和劑之自體反應性。除Bc1.263之外，如藉由微陣列螢光信號之整體偏移所量測，相較於同型對照，無HBV中和劑展示多反應性(圖18A)。僅Bc1.263及Bc4.204抗體分別呈現針對半乳糖凝集素-3/半乳糖凝集素-8及E3泛素蛋白接合酶UBR2之顯著交叉反應性(Z分數＞5) (圖4D及圖18B)。無HBV中和劑展示陽性HEp-2 ELISA反應性(圖18C)，儘管與HEp-2細胞抗原之較低(Bc1.187、Bc1.263)至適中(Bc4.194、Bc4.204)結合使用較高抗體濃度藉由IFA偵測(圖18C)。
實例5：強效交叉中和抗體Bc1.187之活體內HBV遏制 為了確定來自天然控制者之強效HBV中和劑是否可活體內穩定遏制HBV病毒血症，用Bc1.187抗體(0.5 mg，靜脈內，約20 mg/kg，一週兩次)處理AAV-HBV小鼠17天(圖19A)。病毒血症小鼠在用Bc1.187處理但不用同型對照處理時經歷循環HBsAg含量之減少(圖19A)。然而，鼠類抗人類IgG抗體(稱為抗藥物抗體，ADA)之研發快速改變療法有效性(圖19B)。為克服或限制ADA產生，吾等藉由將抗體可變域與鼠類Igγ2a及IgK恆定區組合，產生Bc1.187之嵌合版本。嵌合Bc1.187抗體(c-Bc1.187)在未經轉導之野生型小鼠中具有3.9天之血清半衰期(圖19C)，且對AAV-HBV小鼠每週投與時產生可再現病毒血症降低(在連續3週期間dpi2時平均0.88±0.07 log10) (圖19D)。每2天用0.5 mg靜脈內注射cBc1.187但無對照抗體處理十六天，使得自第4天所有AAV-HBV小鼠中之循環HBsAg損失，其中相比於設定點平均2.5 log10倍降低(圖5A)。在cBc1.187療法期間，HBV病毒血症(如病毒DNA IU/ml)亦以平均2.5 log10倍大幅度降低，且在第21天在除一隻小鼠外之全部小鼠中達到不可偵測之含量(圖5A)。最後一次抗體注射之後HBsAg及HBV病毒血症仍遏制兩週，隨後升回至基線水準(圖5A)。如此模型中所預期，在療法期間，HBe抗原(用於病毒複製之替代標記物)之血清含量保持不變(圖5A)。
吾等隨後考慮Bc1.187是否可改變活體內HBV感染之自然過程。用基因型D HBV感染穩定移植有人類肝細胞(HUHEP)之BALB/c Rag2-/-SirpaNODAlb-uPAtg/tg小鼠。一旦確定感染，小鼠接受每兩週(每隻小鼠20 mg/kg)或每週(每隻小鼠50 mg/kg)注射Bc1.187持續3週。與AAV-HBV活體內模型一致，用Bc1.187但非HBV抗體及核苷逆轉錄酶抑制劑對照之處理誘導病毒血症HUHEP小鼠中之循環HBsAg含量減少，對於20 mg/kg及50 mg/kg給藥方案在dpi21時分別減少平均2.1及2 log10倍(圖5B及圖19A)。然而，在每週接受50 mg/kg之Bc1.187注射之組中HBV病毒血症更有效降低(對於20 mg/kg，dpi21時平均下降為1.76 log10相對0.64 log10) (圖5B)。在追蹤結束時，兩個具有低治療前病毒血症之小鼠響應於20 mg/kg給藥方案展示完全病毒遏制(28.6%，n=7) (圖5B及圖19B)。循環HBsAg含量下降且在60%小鼠(n=5)中在最後一次注射50 mg/kg Bc1.187之後保持不可偵測2週。在此等小鼠中，一隻死亡，另一隻經歷病毒反彈且最後一隻在處理後在HBV病毒血症復發之前仍控制感染超過一個月(圖5B及19B)。HBeAg之循環量亦在Bc1.187抗體治療時減少，但程度低於HbsAg (對於20 mg/kg，dpi21時0.26 log10之平均倍數變化及對於50 mg/kg，0.49 log10) (圖5B)。在監測期期間人類白蛋白之血清力價保持不變(圖19C)，指示移植穩定且不受處理影響。
概述 罕見個體可自然地清除慢性B型肝炎病毒(HBV)感染且獲得保護以免於如藉由疫苗接種賦予之再感染。為了檢查針對HBV之保護性體液反應，吾等將人類抗體自HBV疫苗接種者及控制者之記憶B細胞選殖至病毒表面糖蛋白S-SHBs。吾等發現來自天然控制者之S-SHBs記憶B細胞產生主要中和抗體，能夠與若干病毒基因型交叉反應。人類中和HBV抗體係由不同的一組免疫球蛋白基因編碼且識別S-SHBs抗原上之各種構形抗原決定基。引人注目地，用自控制者Bc1.187分離之強效交叉中和劑在HBV小鼠模型中進行之單一療法遏制活體內病毒血症且在一些動物中引起感染之療法後控制。因此，中和S-SHBs抗體可在HBV之自發控制中起關鍵作用且表示用於在長期感染人類中實現HBV功能性治癒之有前景的免疫治療劑。
本文所述之某些抗體的結果概述於下表2中。此概述圖3之結果。因此，「血清型」資料報導HBV中和抗體針對Adw及Ayw基因型D S-HBs蛋白之ELISA反應性(量測為來自圖14之AUC值)。「交叉基因型結合」報導HBV中和抗體針對來自指定基因型之S-HBs抗原的反應性，以結合之表現S-HBs之細胞的%為單位，藉由流式細胞量測術測定。除所描繪之S-HBs突變蛋白以外，「突變體結合」與「交叉基因型結合」相同。IC50 值係用於針對由基因型D之HBV病毒引起的初級人類肝細胞感染之中和活性。表3提供由ELISA圖計算的EC50值，該圖展示所選抗體針對重組HBV疫苗Engerix-B (Ayw)及GenHevac (Adw)的反應性(圖3)。表2
   血清型結合(AUC)    交叉基因型結合    突變體結合    HBV-gD活體外中和
   Adw Ayw    A B C D E F G H I    T126A M133T Y134V G145R N146S    (IC50 μg/ml)
Bv4.115 36 37 88 83 82 89 85 73 83 77 71 71 67 66 60 67 3.87E-06
Bc8.159 32 25 85 79 76 76 79 73 79 79 68 70 58 61 48 61 5.28E-05
Bv6.172 34 31 83 71 76 78 77 72 82 79 69 75 71 69 24 77 3.06E-06
Bc1.229 35 34 75 68 76 73 71 68 79 74 64 70 62 67 3 56 2.53E-05
Bc8.111 35 36 65 64 72 71 68 66 60 67 52 55 54 56 0 55 2.51E-06
Bc1.187 36 35 73 70 67 66 66 58 64 59 54 60 52 57 17 48 5.00E-08
Bc1.128 35 37 64 67 67 64 65 58 58 59 47 53 48 47 0 46 5.44E-04
Bc3.106 36 37 70 55 83 62 59 55 65 59 53 71 66 69 67 63 1.39E-07
Bc1.180 30 23 57 45 43 47 46 42 39 55 22 38 25 25 14 27 5.00E-08
Bv4.104 7 37 1 1 5 73 73 1 1 1 1 64 64 60 54 63 1.21E-06
Bc8.104 ND ND ND ND ND ND ND ND ND ND ND ND ND ND ND ND 2.61E-06
Bc4-204 36 36 74 65 65 68 65 0 71 1 58 60 59 57 55 53 2.29E-04
Bc1.263 ND ND ND ND ND ND ND ND ND ND ND ND ND ND ND ND 3.96E-06
Bv4.105 8 33 21 16 1 52 51 46 24 55 10 45 39 46 40 43 2.95E-06
表3
血清型結合 (EC50 μg/ml)
Adw Ayw
Bv4.115 0.0277 0.0051
Bc8.159 0.0108 0.7844
Bv6.172 0.0065 0.0040
Bc1.229 0.0261 0.0123
Bc8.111 0.0089 0.0095
Bc1.187 0.0049 0.0035
Bc1.128 0.0072 0.0057
Bc3.106 0.0421 0.0193
Bc1.180 0.0653 0.3095
Bv4.104 6.5840 0.0046
Bc8.104 ND ND
Bc4-204 0.0156 0.0150
Bc1.263 ND ND
Bv4.105 8.9210 0.0048
論述 在慢性HBV感染中，大部分HBsAg特異性B細胞為展現若干B細胞功能障礙，諸如分化成產抗體細胞且因此可能產生HBV中和抗體之能力改變的非典型記憶淋巴球(Burton等人，2018；Salimzadeh等人，2018)。相比之下，在急性期與慢性期期間，在解決了感染之個體中的循環B細胞分泌可能參與血清轉化之HBsAg抗體(Salimzadeh等人，2018；Xu等人，2015)。為了表徵針對免疫供體中之HBV表面抗原的記憶B細胞，吾等研究了自單一S-HBs特異性IgG+ 選殖的重組人類抗體在HBV控制者及疫苗接種者之血液中循環的分子特性及功能特性。吾等研究揭示，儘管編碼VH 1-JH 4之純系適中富集，但來自HBV控制者以及疫苗接種者之循環S-HBs特異性記憶B細胞表現主要識別HBV表面糖蛋白上之構形抗原決定基的免疫球蛋白之不同基因譜系。自控制者選殖之大部分抗S-HBs IgG可活體外中和HBV，其中一些在極低濃度下具有活性，包括針對HDV感染。活體內評估之強效中和劑亦藉由降低血清HBsAg含量及HBV病毒血症而展示抗病毒作用，表明在受感染之人類中此等抗體在功能上可為重要的。大部分HBV中和抗體針對各種病毒基因型具有廣泛反應性且所識別之抗原決定基定位於「a」決定子中，但其他抗原決定基亦定位於此區外部。鑑別出若干中和抗原決定基，包括涉及由強效交叉中和抗體Bc1.187識別之S-HBs第二環的主要區。活體內Bc1.187單次被動輸注在小鼠慢性HBV感染模型中尤其有效，完全遏制血清HBsAg及HBV病毒血症持續幾天。有趣的是，吾等在此展示Bc1.187之生殖系版本仍可以IC50 ＜0.1 µg/ml結合及中和HBV。此表明，表現此類免疫球蛋白之B細胞前驅體可快速親和力成熟且因此容易地在中和HBV中具有活性。
用於治療慢性HBV感染之當前療法包括強效直接抗病毒劑及PEG-IFNα。然而，抗病毒治療主要由於缺陷型次病毒粒子數量超過感染性HBV病毒粒子而對血清HBsAg含量無顯著影響。因此，為避免在長期感染個體中觀測到免疫耐受性，且因此誘導有效抗HBV抗體反應仍係重大挑戰。一種有前景的策略為研發基於使用強效HBV中和抗體之免疫療法(Corti等人，2018；Gao等人，2017；Tu及Urban, 2018)。小鼠及猴之臨床前模型以及慢性感染人類之若干I期臨床試驗已展示中和HBV單株抗體之活體內功效，其在感染受體中投與時藉由遏制HBsAg及減少HBV DNA含量改變感染病程(Eren等人，2000; Galun等人，2002; Lee等人，2019; Lever等人，1990; Li等人，2017; van Nunen等人，2001; Zhang等人，2016; Zhu等人，2016)。在此研究中，吾等展示使用兩種不同小鼠模型用強效人類交叉中和抗體處理病毒血症動物對HBV感染具有深遠作用。Bc1.187療法誘導在治療後若干天至數週存留於大部分小鼠中的循環HBsAg及HBV DNA之快速損失及/或實質性減少。活體內實驗亦證實，攜帶較低病毒血症之小鼠可在Bc1.187抗體治療時清除HBV感染。抗體為多功能免疫效應子。除中和以外，其可發揮多種免疫效應功能，諸如抗體依賴性細胞毒性(ADCC)，其允許藉由諸如自然殺手細胞(NK)之先天性免疫細胞殺滅感染細胞。ADCC活性為人類中和抗體對諸如HIV-1及流感之病毒之治療特性的關鍵組分(Bruel等人，2016；DiLillo等人，2014)。早期，互補依賴性溶解及ADCC已涉及使用活體外及活體內系統進行鼠類抗S-HBs抗體之肝細胞殺滅活性(Shouval等人，1982a；Shouval等人，1982b)。近年來，針對前S1區之人類中和HBV抗體已展示在部分藉由引發Fc依賴性效應功能而持續病毒遏制下發揮治療活性(Li等人，2017)。最後，藉由接合宿主免疫系統之抗體療法可引起免疫反應刺激，此為一種更好地瞭解且稱為疫苗類作用的特性(Pelegrin等人，2015)，一種可為阻斷HBV誘導之免疫耐受性所必需的特性。因此，吾等提出除經由Fc依賴性機制阻止新生感染且可能地消除受感染肝細胞以外，本文所述之一些強效人類交叉中和HBV抗體可用於長期感染患者以大大減少血清HBsAg含量。此類抗體實際上可充當有效的「抗原槽(antigenic sink)」，其在與旨在恢復宿主先天性及適應性免疫反應之療法，亦即INFα、治療性疫苗、TLR促效劑、檢查點抑制劑(Fanning等人，2019; Gehring及Protzer, 2019; Maini及Burton, 2019)組合時，可促進病毒清除且最終使得HBV感染得以長期控制。
實例6-Bc1.187 之活體外及活體內藥物動力學(PK) 評定及Bc1.187 工程改造之構築體 量測抗體再循環及轉胞吞作用之活體外脈衝追蹤分析(抗體再循環及清除(ARC)分析)用於標誌由兩種已知機制驅動之潛在清除傾向：1)非特異性清除——由非特異性結合/內化驅動至細胞中(在pH=7.4下之ARC分數，及2) FcRn介導之作用(在pH=6下之ARC分數及ARC倍數偏移)。此分析提供此等參數相對於在人類中展示IgG類藥物動力學之對照的評定( 關於分析之進一步描述，參見MAbs. 2017 年7 月;9(5):781-791. doi: 10.1080/19420862.2017.1320008) 。野生型IgG1 Bc1.187分別在pH 7.4及pH 6下呈現0.28及4.97之ARC分數，產生17.8之ARC倍數偏移。此等值指示非特異性結合/內化至細胞中及與IgG分子一起之FcRn再循環的可能性較低。亦在分析中評定基於Bc1.187 IgG，但具有額外FcRn修飾以增強FcRn結合(及再循環)之類似構築體，且結果概述於表4中。資料展示FcRn工程改造可增加ARC倍數偏移，其預測在活體內較低清除率。
第二活體外分析，使用大分子非特異性清除分析(LUCA)評定人類初級內皮細胞中之抗體清除。此分析係關於mAb吸收至表現F內源性cRn量之內皮細胞中的速率，且提供由非特異性吸收、FcRn再循環及蛋白降解產生之相對LUCA速率。Bc1.187具有0.05之相對LUCA速率，指示在標準化化合物莫維珠單抗(motavizumab)-YTE (相對LUCA速率0)與CD20-TCB (相對LUCA速率1)之間的細胞積聚速率。此亦指向人類中Bc1.187之預測IgG類特性。另外，在分析中測試基於Bc1.187之FcRn工程改造之構築體，且結果概述於表4中。關於ARC分析，預測FcRn工程改造之構築體在活體內具有較低清除率。
最後，在表現人類新生Fc受體之轉殖基因小鼠(huFcRn-Tg小鼠)中評定野生型Bc1.187 IgG及FcRn工程改造之Bc1.187 IgG構築體之活體內藥物動力學，因為此等小鼠已展示出可預測人類PK。( 關於小鼠模型之進一步描述 ， 參見28.Proetzel 等人 Methods. 2014;65:148-53; Roopenian 等人 Methods Mol Biol. 2016;1438:103-14; Avery LB 等人 MAbs. 2016;8:1064-78) 。 所有構築體以5 mg/kg之劑量靜脈內投與，且清除參數概述於表4中。對於所有測試構築體，觀測到此等小鼠中IgG之典型範圍內的清除率。綜合而言，此等活體外及活體內藥物動力學基準校正研究指示，基於Bc1.187序列之中和抗體可能在人類中呈現IgG類藥物動力學。蛋白工程改造會引起低預測清除率，其將向中和抗體賦予顯著優勢，因為預期其轉譯為在臨床中HBsAg中和之更長持續時間或更長給藥間隔(亦即提高便利性及順應性)。表 4 ：對評定清除過程之活體外及活體內分析的概述
活體外分析 活體內
ARC分析 Luca分析 hFcRn-Tg小鼠
A在pH=6下之RC分數 在pH=7.4下之ARC分數 ARC倍數偏移 相對LUCA速率 清除率(毫升/天/公斤)
Bc1.187_huIgG1_wt 4.97 0.28 17.8 0.05 8.70
Bc1.187_huIgG1_YTE 28.2 0.55 51.1 -0.22 5.29
Bc1.187_huIgG1_HH 18.6 0.60 31.3 -0.14 8.30
Bc1.187_huIgG1_LAT 20.9 0.55 38.4 -0.25 6.24
Bc1.187_huIgG1_N434A 17.9 0.26 69.5 -0.14 9.08
雖然出於清楚理解之目的，已藉助於說明及實例相當詳細地描述前述本發明，但描述及實例不應解釋為限制本發明之範疇。本文所引用的所有專利及科學文獻之揭示內容以全文引用的方式明確併入本文中。
圖 1. 自 HBV 疫苗接種者及 HBV 控制者選殖之 S-HBs 記憶抗體 (A )HBV疫苗接種者(HBVv，n=6，底部曲線)及HBV控制者(HBVc，n=8，頂部曲線)之血清IgG的平均S-HBsAg反應性. 陰影區指示值範圍。展示HBV疫苗接種者及HBV控制者中之S-HBs結合IgG+ 記憶B細胞的代表性流式細胞量測術圖(展示Bv4及Bc3)。nS-HBsAg及rS-HBsAg分別為人類衍生之原生及重組型S-HBs抗原。 (B )S-HBsAg捕獲IgG+ 記憶B細胞抗體之S-HBsAg-ELISA反應性(左)及自HBVv及HBVc分離之S-HBs特異性單株抗體(S-HBsAg+ %)百分比(右). 指示HBVc (＜150及＞900 IU/ml)中根據S-HBs抗體力價的S-HBsAg+ %。capt-rHBAgs、rHBAgs捕獲ELISA。 (C )泡泡圖展示根據S-HBs特異性IgG抗體之IgH及IgL鏈可變域中體細胞突變百分比的純系擴增含量. 各供體之擴增尺寸指示於以下條形圖中。 (D )火山圖分析比較來自HBV免疫供體之S-HBsAg特異性B細胞及來自健康個體之IgG記憶B細胞的免疫球蛋白(Ig)基因譜系(頂部). 虛線上方的點指示兩種Ig基因譜系之間的統計顯著差異。展示VH (DH )JH 重排頻率之比較(底部)。pV，p值；FC，倍數變化。 (E ) S-HBs記憶IgG中的構形依賴性抗體與非構形抗體的分佈. 在餅圖之中心指示所測試抗體之總數。紅外免疫墨點法展示對變性S-HBs蛋白具有反應性的抗S-HBs IgG記憶B細胞抗體(右上)。展示肽反應性S-HBs抗體之ELISA結合曲線(右下，重複四次之平均值±SD)。圖 2. 人類 S-HBs 記憶抗體之中和活性 (A ) S-HBs IgG抗體針對基因型D HBV活體外感染HepaRG細胞之中和活性. 展示各抗體之百分之五十抑制濃度(IC50 )值(n=72) (左上)及中和抗體與非活性抗體之分佈(左下)。(B )指示根據結合之S-HBs抗原之中和能力(右上)及體細胞超突變百分比(SHM%) (右下)。 (C )在HepaRG細胞中藉由北方墨點法使用HDV RNA定量得到所選S-HBs IgG抗體針對HDV之活體外中和活性。基因體等效物，ge (genome equivalent)。 (D )人類S-HBs抗體在經AAV-HBV轉導之小鼠中之活體內中和活性. 在用0.5 mg抗S-HBs抗體PIBv4.104 (n=9)、Bc1.187 (n=9)、Bc1.263 (n=6)、Bc4.204 (n=4)或mGO53同型對照(n=5)靜脈內處理一次之經AAV-HBV轉導之小鼠中監測循環血液S-HBs含量。粗線表示平均值。 (E )展示在每隻小鼠投與0.25 mg (白色)及0.5 mg (黑色)抗體後最低點(注射後第2天，dpi2)之S-HBs力價之Log10 變化. 用線指示平均值。 (F )在靜脈內注射有1 mg抗S-HBs抗體Bc1.187一次的經AAV-HBV轉導之小鼠(n=6)中監測循環血液S-HBs及HBV DNA含量.在右側展示S-HBs及HBV DNA含量隨時間之平均log10 變化。圖 3. 人類 HBV 中和抗體之交叉反應性 (A )熱圖比較HBV中和抗體針對Adw及Ayw基因型D S-HBs蛋白之ELISA反應性(量測為來自圖14之AUC值). 右側代表性ELISA圖展示所選抗體針對重組HBV疫苗Engerix-B (Ayw)及GenHevac (Adw)之反應性。誤差桿指示重複兩次分析之SD。 (B )熱圖比較HBV中和抗體針對來自系統發生樹中所描繪之基因型的S-HBs抗原之反應性(左上)，以結合之表現S-HBs之細胞的%為單位，藉由流式細胞量測術測定。資料代表兩個獨立實驗中之一者。HB1及mGO53分別為陽性及陰性對照。左下方之細胞圖展示HB1抗體之代表性反應性概況。右側ELISA圖展示所選抗體針對來自除G以外全部基因型之重組S-HBs抗原的反應性。誤差桿指示重複兩次分析之SD。 (C )除在左上方圖上描繪S-HBs突變蛋白以外，與(B)中相同。 (D )圖式比較Bc1.187針對由來自A至D基因型之HBV病毒引起的初級人類肝細胞感染之中和活性. 誤差桿指示重複三次分析之SEM。 (E )圖式展示如由HepaRG中和分析所測定，基因型A、C及D之HBV病毒藉由PIBv4.104及Bc1.187的中和曲線. 誤差桿指示重複三次分析之SEM。圖 4. 人類 HBV 中和抗體之結合特徵 (A )熱圖展示所選擇HBV中和抗體與重組HBsAg突變蛋白之ELISA結合. 色值與反應性水準成比例。 (B )熱圖展示HBV中和抗體之S-HBs結合之競爭. 較亮顏色指示較強抑制；黑色指示無競爭。 (C )圖式比較與所選HBV中和抗體及其生殖系對應物之S-HBs的結合，如藉由流式細胞量測術(頂部)及ELISA (底部)所量測。 (D ) Bc1.187、Bc4.204及PIBv4.104之生殖系版本針對基因型D HBV病毒之中和活性，如藉由HepaRG中和分析所測定。誤差桿指示重複三次分析之SD。 (E )所選S-HBs人類抗體在人類蛋白微陣列上之反應性概況. 各點對應於參考抗體(Ref：mGO53，y軸)及測試抗體(x軸)在單一蛋白上給出之z分數。標記指示免疫反應性蛋白(z＞5)。圖 5. 使用強效 HBV 交叉中和抗體 Bc1.187 之活體內療法 . (A )在每2天用0.5 mg靜脈內抗S-HBs Bc1.187或同型對照mGO53嵌合抗體處理持續16天的經AAV-HBV轉導之小鼠(n=7隻/組)中，HBV感染隨時間之演進。展示循環血液HBsAg、HBeAg及HBV DNA含量。粗線指示平均值。 (B )在接受每週一次腹膜內注射人類抗S-HBs抗體Bc1.187 (20 mg/kg約0.4 mg，n=7，直線；50 mg/kg約1 mg，n=5，點線)持續3週之HUHEP小鼠中，HBV感染隨時間之演進。展示循環血液HBsAg、HBeAg及HBV DNA含量(左)及與基線(右)相比之Δlog10 值。粗線指示平均值。圖 6. 展示 HBV 免疫供體之臨床及免疫病毒學特徵的表 . 圖 7A 及圖 7B. 展示免疫球蛋白基因譜系及人類抗 S-HBs 抗體之中和活性的表 . 圖 8. 經純化血清 IgG 及血液 IgG+ 記憶 B 細胞與 S-HBs 抗原之結合 . (A )代表性ELISA圖展示來自HBV疫苗接種者(HBVv)及HBV控制者(HBVc)之經純化血清IgG抗體針對重組(rS-HBs)及人類衍生之原生(nS-HBs) S-HBs顆粒之反應性. 誤差桿指示具有重複兩次之值的SEM。(B )流動式細胞量測術細胞圖展示用於單細胞分選結合於用作誘餌的經螢光標記之rS-HBs及nS-HBs蛋白的IgG+記憶B細胞的閘控策略. 展示所有供體之S-HBs反應性IgG+記憶B細胞群。圖 9. S-HBs 捕獲之 IgG+ 記憶 B 細胞 抗體的 S-HBs 反應性 . (A )熱圖展示針對自HBV疫苗接種者及血清轉化者選殖之S-HBs結合記憶抗體之nS-HBs及rS-HBs (固定及捕獲)的ELISA反應性. 展示重複三次光密度值之平均值。(B )小提琴圖(Violin plot)展示(A)中所示之結合的累積ELISA光密度(COD)值. 每個供體展示自S-HBs捕獲之IgG+記憶B細胞選殖的S-HBs特異性抗體之比例(右)。圖 10.S-HBs 特異性 IgG+ 記憶 B 細胞之免疫球蛋白基因譜系 . (A )餅圖比較來自健康個體之血液S-HBs特異性IgG+記憶B細胞及IgG+記憶B細胞的VH/JH基因使用率的分佈(Prigent等人，2016). 在各餅圖中心指示所分析之抗體序列之數目。(B )條形圖比較由S-HBs特異性及對照IgG+記憶B細胞表現之單一免疫球蛋白VH基因之分佈。(C )表現VH1-69之S-HBs抗體的CDRH2區(由Kabat定義)之胺基酸比對. 以灰色呈現之殘基指示相比於生殖系VH基因(頂部)之取代。(D )除IgG亞型(左)及κ相對於λ-Ig鏈使用率(右)以外，與(B)相同。(E )除CDRH3長度及正電荷數目以外，與(B)相同。CDRH3長度之平均值在各直方圖下方指示。(F )除Vκ/Jκ及Vλ/Jλ基因使用率以外，與(A)相同。(G )小提琴圖比較S-HBs特異性及對照IgG+記憶B細胞中VH、Vκ及Vλ基因之突變數目. 突變(mut.)之平均數目在各點陣圖下方指示。使用非配對史都登氏試驗法(student t-test)與韋爾奇氏校正(Welch's correction)對所有抗體組的突變數目進行比較。(H )圖式展示基於抗S-HBs IgH及IgL序列的抗原驅動選擇之貝士估計(Bayesian estimation). 使用2×2及2×5費希爾精確檢驗(Fisher's Exact test)比較組(在A、B、D、E及F中)。圖 11. 人類抗 S-HBs 抗體針對變性之 S-HBsAg 及 S-HBsAg 肽的反應性 . (A )抗S-HBs抗體針對跨膜結構域缺失之S-HBsAg蛋白(ΔTM-rS-HBsAg)的ELISA反應性. HB1及mGO53分別為陽性及陰性對照。點線指示正反應性之截止OD405nm 。(B )除對應於推定之S-HBsAg環122-137及139-148的環狀肽以外，與(A)相同。(C )抗S-HBs抗體針對S-HBsAg重疊線性肽的熱映射反應性. 指示S-HBsAg肽之胺基酸序列(右)及親水性(GRAVY)總平均值(下文)。圖 12A 及圖 12B. 人類 S-HBs 抗體之活體外 HBV 中和 . 圖式展示所選人類S-HBs抗體之基因型D HBV病毒之中和曲線，如活體外HepaRG分析中所量測。水平虛線指示50%中和，其中IC50值可來源於x軸上之抗體濃度。圖 13. 在 HBV-AAV 小鼠中被動投與人類 S-HBs 抗體 . (A )人類S-HBs抗體在經AAV-HBV轉導之小鼠中之活體內中和活性. 在用0.25 mg抗S-HBs抗體Bv4.104 (n=6)、Bc1.187 (n=6)、Bc1.263 (n=6)、Bc4.204 (n=6)或mGO53同型對照(n=5)靜脈內處理一次的經AAV-HBV轉導之小鼠中監測循環血液HBsAg含量。粗線指示平均值。展示在每隻小鼠靜脈內投與0.25 mg抗體時HBsAg力價(Δlog10 S-HBs)隨時間之log10變化。(B )圖式展示在用0.25 mg (左)及0.5 mg (右) S-HBs抗體處理一次之小鼠中人類IgG力價隨時間之演進. 粗線指示平均值。圖 14.HBV 中和抗體與重組血清蛋白特異性 S-HBs 蛋白之結合 . 代表性ELISA圖展示所選擇HBV中和抗體與經純化重組Adw (直線)及Ayw (點線) S-HBs蛋白之結合。HB1及mGO53分別為陽性及陰性對照。展示來自兩個獨立實驗中之一者的重複兩次分析之平均值±SEM。圖 15.HBV 中和抗體針對基因型特異性 S-HBs 蛋白之交叉反應性 . (A )來自(B)中所用不同HBV基因型之共同S-HBs蛋白序列的胺基酸比對. 殘基變化以灰色突出顯示。(B )細胞圖比較所選擇HBV中和抗體針對基因型特異性S-HBs抗原之反應性概況. 資料代表兩個獨立實驗中之一者。HB1及mGO53分別為陽性及陰性對照。Ctr，未經轉染之細胞對照(第一次來自底部)；FI，螢光強度。圖 16. HBV 中和抗體針對 S-HBs 突變蛋白之反應性 . (A )細胞圖比較所選擇HBV中和抗體針對呈現天然存在之逃逸突變的基因型D S-HBs突變蛋白(T126A、M133T、Y134V或G145R)或S-HBs N-糖基化位點中之突變(N126S)的反應性. 資料代表兩個獨立實驗中之一者。HB1及mGO53分別為陽性及陰性對照。Ctr，未經轉染之細胞對照(第一次來自底部)；FI，螢光強度。圖 17. 強效 HBV 中和抗體之多反應性及自行反應性 . (A )所選人類S-HBs抗體(n=8)人類蛋白微陣列的反應性概況. 對於各蛋白點，參考(Ref：mGO53)及測試給出之平均螢光強度(MFI)分別描繪於y軸及x軸上。各點表示重複兩次陣列蛋白之平均值。對角線指示參考抗體及測試抗體的相等結合。經標記之點指示具有z分數＞5之免疫反應性蛋白。(B )頻率直方圖展示S-HBs抗體相比於不反應性抗體mGO53之MFI信號的log10蛋白位移(σ). 多反應性指數(PI)對應於所有陣列蛋白位移之高斯平均值(Gaussian mean)。(C )藉由IFA及ELISA分析所選S-HBs抗體與表現HEp2之自體抗原的結合. Ctr+，套組之陽性對照。mGO53及ED38分別為陰性及陽性對照抗體。比例尺表示40 μM。右下方之條形圖展示如藉由ELISA所量測之Hep-2反應性。展示來自重複兩次進行之兩個獨立實驗之平均值±SD值。圖 18. 在經 HBV 感染之小鼠中被動投與中和抗體 . (A )在每3-4天用0.5 mg腹膜內人類抗S-HBs抗體Bc1.187或mGO53同型對照處理持續17天之經AAV-HBV轉導之小鼠(n=7)中隨時間推移之循環血液HBsAg含量. 展示平均Δlog10 HBsAg值(右)。陰影區域指示抗體治療期。(B )如(A)中所示藉由ELISA所量測，經處理小鼠中的鼠類抗人類IgG抗體含量。(C ) B6小鼠(n=4)中被動投與之嵌合Bc1.187抗體(0.5 mg，靜脈內)之IgG濃度. muBc1.187抗體之半衰期以天為單位(t1/2)在右上角指定。(D )在接受每週靜脈內注射(0.5 mg)嵌合抗S-HBs抗體Bc1.187及mGO53同型對照之C57BL/6J小鼠中隨時間推移之Δlog10 S-HBs含量. 粗線指示平均值。(E )在每2天用0.5 mg靜脈內嵌合抗S-HBs抗體Bc1.187或mGO53同型對照處理持續16天之經AAV-HBV轉導之小鼠(n=7)中隨時間推移之Δlog10 HBsAg及HBV DNA含量. 粗線指示平均值。陰影區域指示抗體治療期。圖 19. 經 HBV 感染之 HUHEP 小鼠之 Bc1.187 抗體治療 . (A )經基因型D HBV感染且用抗HBs Bc1.187以及腹膜內用20 mg/kg或50 mg/kg人類抗體處理3週之每一個別HUHEP小鼠的隨時間推移之血液HBsAg、HBeAg及HBV DNA含量。(B )在每3-4天接受非HBV同型對照mGO53 (20 mg/kg腹膜內)或因提弗(Entecavir，ETV)處理3週之HUHEP小鼠中HBV感染隨時間之演進. 展示HBsAg、HBeAg及HBV DNA之血液含量。(C )展示在感染HUHEP小鼠中且腹膜內用20 mg/kg (直線)及50 mg/kg (點線) Bc1.187處理17天(陰影區域)的人類血清白蛋白隨時間推移之含量。
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Figure 12_A0101_SEQ_0183
Figure 12_A0101_SEQ_0184
Figure 12_A0101_SEQ_0185
Figure 12_A0101_SEQ_0186
Figure 12_A0101_SEQ_0187
Figure 12_A0101_SEQ_0188

Claims (89)

  1. 一種結合於S-HBs之抗體，其中該抗體對SEQ ID NO: 254至262之HBV蛋白中每一者具有交叉反應性；及/或其中活體外所量測的該抗體針對HBV基因體D之中和IC50 值為≤1 ng/ml。
  2. 如請求項1之抗體，其中活體外所量測的該抗體針對HBV基因體D之中和IC50 值為≤100 pg/ml。
  3. 一種結合於S-HBs之抗體，其中該抗體包含 包含以下之重鏈可變域(VH)：(a)包含SEQ ID NO: 1之胺基酸序列的CDR-H1；(b)包含SEQ ID NO: 2之胺基酸序列的CDR-H2；及(c)包含SEQ ID NO: 3之胺基酸序列的CDR-H3，及 包含以下之輕鏈可變域(VL)：(d)包含SEQ ID NO: 4之胺基酸序列的CDR-L1；(e)包含SEQ ID NO: 5之胺基酸序列的CDR-L2；及(f)包含SEQ ID NO: 6之胺基酸序列的CDR-L3。
  4. 如請求項3之抗體，其包含選自由以下組成之群的序列： (a)與SEQ ID NO: 16之胺基酸序列具有至少95%序列一致性的VH序列； (b)與SEQ ID NO: 15之胺基酸序列具有至少95%序列一致性的VL序列；及 (c)如(a)中所定義之VH序列及如(b)中所定義之VL序列。
  5. 如請求項3或請求項4之抗體，其包含SEQ ID NO: 16之VH序列及SEQ ID NO: 15之VL序列。
  6. 一種結合於S-HBs之抗體，其中該抗體包含 包含以下之重鏈可變域(VH)：(a)包含SEQ ID NO: 19之胺基酸序列的CDR-H1；(b)包含SEQ ID NO: 20之胺基酸序列的CDR-H2；及(c)包含SEQ ID NO: 21之胺基酸序列的CDR-H3，及 包含以下之輕鏈可變域(VL)：(d)包含SEQ ID NO: 22之胺基酸序列的CDR-L1；(e)包含SEQ ID NO: 23之胺基酸序列的CDR-L2；及(f)包含SEQ ID NO: 24之胺基酸序列的CDR-L3。
  7. 如請求項6之抗體，其包含選自由以下組成之群的序列： (a)與胺基酸序列SEQ ID NO: 34具有至少95%序列一致性之VH序列； (b)與SEQ ID NO: 33之胺基酸序列具有至少95%序列一致性的VL序列；及 (c)如(a)中所定義之VH序列及如(b)中所定義之VL序列。
  8. 如請求項6或請求項7之抗體，其包含SEQ ID NO: 34之VH序列及SEQ ID NO: 33之VL序列。
  9. 一種結合於S-HBs之抗體，其中該抗體包含 包含以下之重鏈可變域(VH)：(a)包含SEQ ID NO: 37之胺基酸序列的CDR-H1；(b)包含SEQ ID NO: 38之胺基酸序列的CDR-H2；及(c)包含SEQ ID NO: 39之胺基酸序列的CDR-H3，及 包含以下之輕鏈可變域(VL)：(d)包含SEQ ID NO: 40之胺基酸序列的CDR-L1；(e)包含SEQ ID NO: 41之胺基酸序列的CDR-L2；及(f)包含SEQ ID NO: 42之胺基酸序列的CDR-L3。
  10. 如請求項9之抗體，其包含選自由以下組成之群的序列： (a)與胺基酸序列SEQ ID NO: 52具有至少95%序列一致性之VH序列； (b)與胺基酸序列SEQ ID NO: 51具有至少95%序列一致性之VL序列；及 (c)如(a)中所定義之VH序列及如(b)中所定義之VL序列。
  11. 如請求項9或請求項10之抗體，其包含SEQ ID NO: 52之VH序列及SEQ ID NO: 51之VL序列。
  12. 一種結合於S-HBs之抗體，其中該抗體包含 包含以下之重鏈可變域(VH)：(a)包含SEQ ID NO: 55之胺基酸序列的CDR-H1；(b)包含SEQ ID NO: 56之胺基酸序列的CDR-H2；及(c)包含SEQ ID NO: 57之胺基酸序列的CDR-H3，及 包含以下之輕鏈可變域(VL)：(d)包含胺基酸序列SEQ ID NO: 58之CDR-L1；(e)包含胺基酸序列SEQ ID NO: 59之CDR-L2；及(f)包含胺基酸序列SEQ ID NO: 60之CDR-L3。
  13. 如請求項12之抗體，其包含選自由以下組成之群的序列： (a)與胺基酸序列SEQ ID NO: 70具有至少95%序列一致性之VH序列； (b)與SEQ ID NO: 69之胺基酸序列具有至少95%序列一致性的VL序列；及 (c)如(a)中所定義之VH序列及如(b)中所定義之VL序列。
  14. 如請求項12或請求項13之抗體，其包含SEQ ID NO: 70之VH序列及SEQ ID NO: 69之VL序列。
  15. 一種結合於S-HBs之抗體，其中該抗體包含 包含以下之重鏈可變域(VH)：(a)包含SEQ ID NO: 73之胺基酸序列的CDR-H1；(b)包含SEQ ID NO: 74之胺基酸序列的CDR-H2；及(c)包含SEQ ID NO: 75之胺基酸序列的CDR-H3，及 包含以下之輕鏈可變域(VL)：(d)包含SEQ ID NO: 76之胺基酸序列的CDR-L1；(e)包含SEQ ID NO: 77之胺基酸序列的CDR-L2；及(f)包含SEQ ID NO: 78之胺基酸序列的CDR-L3。
  16. 如請求項15之抗體，其包含選自由以下組成之群的序列： (a)與SEQ ID NO: 88之胺基酸序列具有至少95%序列一致性的VH序列； (b)與SEQ ID NO: 87之胺基酸序列具有至少95%序列一致性的VL序列；及 (c)如(a)中所定義之VH序列及如(b)中所定義之VL序列。
  17. 如請求項15或請求項16之抗體，其包含SEQ ID NO: 88之VH序列及SEQ ID NO: 87之VL序列。
  18. 一種結合於S-HBs之抗體，其中該抗體包含 包含以下之重鏈可變域(VH)：(a)包含SEQ ID NO: 91之胺基酸序列的CDR-H1；(b)包含SEQ ID NO: 92之胺基酸序列的CDR-H2；及(c)包含SEQ ID NO: 93之胺基酸序列的CDR-H3，及 包含以下之輕鏈可變域(VL)：(d)包含SEQ ID NO: 94之胺基酸序列CDR-L1；(e)包含SEQ ID NO: 95之胺基酸序列的CDR-L2；及(f)包含SEQ ID NO: 96之胺基酸序列的CDR-L3。
  19. 如請求項18之抗體，其包含選自由以下組成之群的序列： (a)與SEQ ID NO: 106之胺基酸序列具有至少95%序列一致性的VH序列； (b)與SEQ ID NO: 105之胺基酸序列具有至少95%序列一致性的VL序列；及 (c)如(a)中所定義之VH序列及如(b)中所定義之VL序列。
  20. 如請求項18或請求項19之抗體，其包含SEQ ID NO: 106之VH序列及SEQ ID NO: 105之VL序列。
  21. 一種結合於S-HBs之抗體，其中該抗體包含 包含以下之重鏈可變域(VH)：(a)包含SEQ ID NO: 109之胺基酸序列的CDR-H1；(b)包含SEQ ID NO: 110之胺基酸序列的CDR-H2；及(c)包含SEQ ID NO: 111之胺基酸序列的CDR-H3，及 包含以下之輕鏈可變域(VL)：(d)包含SEQ ID NO: 112之胺基酸序列的CDR-L1；(e)包含SEQ ID NO: 113之胺基酸序列的CDR-L2；及(f)包含SEQ ID NO: 114之胺基酸序列的CDR-L3。
  22. 如請求項21之抗體，其包含選自由以下組成之群的序列： (a)與胺基酸序列SEQ ID NO: 124具有至少95%序列一致性之VH序列； (b)與SEQ ID NO: 125之胺基酸序列具有至少95%序列一致性的VL序列；及 (c)如(a)中所定義之VH序列及如(b)中所定義之VL序列。
  23. 如請求項21或請求項22之抗體，其包含SEQ ID NO: 124之VH序列及SEQ ID NO: 123之VL序列。
  24. 一種結合於S-HBs之抗體，其中該抗體包含 包含以下之重鏈可變域(VH)：(a)包含SEQ ID NO: 127之胺基酸序列的CDR-H1；(b)包含SEQ ID NO: 128之胺基酸序列的CDR-H2；及(c)包含SEQ ID NO: 129之胺基酸序列的CDR-H3，及 包含以下之輕鏈可變域(VL)：(d)包含SEQ ID NO: 130之胺基酸序列的CDR-L1；(e)包含SEQ ID NO: 131之胺基酸序列的CDR-L2；及(f)包含SEQ ID NO: 132之胺基酸序列的CDR-L3。
  25. 如請求項24之抗體，其包含選自由以下組成之群的序列： (a)與胺基酸序列SEQ ID NO: 142具有至少95%序列一致性之VH序列； (b)與胺基酸序列SEQ ID NO: 141具有至少95%序列一致性之VL序列；及 (c)如(a)中所定義之VH序列及如(b)中所定義之VL序列。
  26. 如請求項24或請求項25之抗體，其包含SEQ ID NO: 142之VH序列及SEQ ID NO: 141之VL序列。
  27. 一種結合於S-HBs之抗體，其中該抗體包含 包含以下之重鏈可變域(VH)：(a)包含SEQ ID NO: 145之胺基酸序列的CDR-H1；(b)包含SEQ ID NO: 146之胺基酸序列的CDR-H2；及(c)包含SEQ ID NO: 147之胺基酸序列的CDR-H3，及 包含以下之輕鏈可變域(VL)：(d)包含SEQ ID NO: 148之胺基酸序列的CDR-L1；(e)包含SEQ ID NO: 149之胺基酸序列的CDR-L2；及(f)包含SEQ ID NO: 150之胺基酸序列的CDR-L3。
  28. 如請求項27之抗體，其包含選自由以下組成之群的序列： (a)與胺基酸序列SEQ ID NO: 160具有至少95%序列一致性之VH序列； (b)與胺基酸序列SEQ ID NO: 159具有至少95%序列一致性的VL序列；及 (c)如(a)中所定義之VH序列及如(b)中所定義之VL序列。
  29. 如請求項27或請求項28之抗體，其包含SEQ ID NO: 160之VH序列及SEQ ID NO: 159之VL序列。
  30. 一種結合於S-HBs之抗體，其中該抗體包含 包含以下之重鏈可變域(VH)：(a)包含SEQ ID NO: 163之胺基酸序列的CDR-H1；(b)包含SEQ ID NO: 164之胺基酸序列的CDR-H2；及(c)包含SEQ ID NO: 165之胺基酸序列的CDR-H3，及 包含以下之輕鏈可變域(VL)：(d)包含胺基酸序列SEQ ID NO: 166之CDR-L1；(e)包含胺基酸序列SEQ ID NO: 167之CDR-L2；及(f)包含胺基酸序列SEQ ID NO: 168之CDR-L3。
  31. 如請求項30之抗體，其包含選自由以下組成之群的序列： (a)與胺基酸序列SEQ ID NO: 178具有至少95%序列一致性的VH序列； (b)與SEQ ID NO: 177之胺基酸序列具有至少95%序列一致性的VL序列；及 (c)如(a)中所定義之VH序列及如(b)中所定義之VL序列。
  32. 如請求項30或請求項31之抗體，其包含SEQ ID NO: 178之VH序列及SEQ ID NO: 177之VL序列。
  33. 一種結合於S-HBs之抗體，其中該抗體包含 包含以下之重鏈可變域(VH)：(a)包含SEQ ID NO: 181之胺基酸序列的CDR-H1；(b)包含SEQ ID NO: 182之胺基酸序列的CDR-H2；及(c)包含SEQ ID NO: 183之胺基酸序列的CDR-H3，及 包含以下之輕鏈可變域(VL)：(d)包含SEQ ID NO: 184之胺基酸序列的CDR-L1；(e)包含SEQ ID NO: 185之胺基酸序列的CDR-L2；及(f)包含SEQ ID NO: 186之胺基酸序列的CDR-L3。
  34. 如請求項33之抗體，其包含選自由以下組成之群的序列： (a)與胺基酸序列SEQ ID NO: 196具有至少95%序列一致性之VH序列； (b)與胺基酸序列SEQ ID NO: 195具有至少95%序列一致性之VL序列；及 (c)如(a)中所定義之VH序列及如(b)中所定義之VL序列。
  35. 如請求項33或請求項34之抗體，其包含SEQ ID NO: 196之VH序列及SEQ ID NO: 195之VL序列。
  36. 一種結合於S-HBs之抗體，其中該抗體包含有包含以下之重鏈可變域(VH)：(a)包含SEQ ID NO: 199之胺基酸序列的CDR-H1；(b)包含SEQ ID NO: 200之胺基酸序列的CDR-H2；及(c)包含SEQ ID NO: 201之胺基酸序列的CDR-H3；及包含以下之輕鏈可變域(VL)：(d)包含SEQ ID NO: 202之胺基酸序列的CDR-L1；(e)包含SEQ ID NO: 203之胺基酸序列的CDR-L2；及(f)包含SEQ ID NO: 204之胺基酸序列的CDR-L3。
  37. 如請求項36之抗體，其包含選自由以下組成之群的序列： (a)與胺基酸序列SEQ ID NO: 214具有至少95%序列一致性之VH序列； (b)與SEQ ID NO: 213之胺基酸序列具有至少95%序列一致性的VL序列；及 (c)如(a)中所定義之VH序列及如(b)中所定義之VL序列。
  38. 如請求項36或請求項37之抗體，其包含SEQ ID NO: 214之VH序列及SEQ ID NO: 213之VL序列。
  39. 一種結合於S-HBs之抗體，其中該抗體包含有包含以下之重鏈可變域(VH)：(a)包含SEQ ID NO: 217之胺基酸序列的CDR-H1；(b)包含SEQ ID NO: 218之胺基酸序列的CDR-H2；及(c)包含SEQ ID NO: 219之胺基酸序列的CDR-H3；及包含以下之輕鏈可變域(VL)：(d)包含SEQ ID NO: 220之胺基酸序列的CDR-L1；(e)包含SEQ ID NO: 221之胺基酸序列的CDR-L2；及(f)包含SEQ ID NO: 222之胺基酸序列的CDR-L3。
  40. 如請求項39之抗體，其包含選自由以下組成之群的序列： (a)與胺基酸序列SEQ ID NO: 232具有至少95%序列一致性之VH序列； (b)與SEQ ID NO: 231之胺基酸序列具有至少95%序列一致性的VL序列；及 (c)如(a)中所定義之VH序列及如(b)中所定義之VL序列。
  41. 如請求項39或請求項40之抗體，其包含SEQ ID NO: 232之VH序列及SEQ ID NO: 231之VL序列。
  42. 一種結合於S-HBs之抗體，其中該抗體包含有包含以下之重鏈可變域(VH)：(a)包含SEQ ID NO: 235之胺基酸序列的CDR-H1；(b)包含SEQ ID NO: 236之胺基酸序列的CDR-H2；及(c)包含SEQ ID NO: 237之胺基酸序列的CDR-H3；及包含以下之輕鏈可變域(VL)：(d)包含SEQ ID NO: 238之胺基酸序列的CDR-L1；(e)包含SEQ ID NO: 239之胺基酸序列的CDR-L2；及(f)包含SEQ ID NO: 240之胺基酸序列的CDR-L3。
  43. 如請求項42之抗體，其包含選自由以下組成之群的序列： (a)與胺基酸序列SEQ ID NO: 250具有至少95%序列一致性之VH序列； (b)與SEQ ID NO: 249之胺基酸序列具有至少95%序列一致性的VL序列；及 (c)如(a)中所定義之VH序列及如(b)中所定義之VL序列。
  44. 如請求項42或請求項43之抗體，其包含SEQ ID NO: 250之VH序列及SEQ ID NO: 249之VL序列。
  45. 如請求項3至11、15至35或39至41中任一項之抗體，其對SEQ ID NO: 254至262之HBV蛋白中每一者具有交叉反應性。
  46. 如請求項3至45中任一項之抗體，其在活體內或活體外具有針對基因體D HBV之中和活性。
  47. 如請求項3至46中任一項之抗體，其活體外所量測的針對HBV基因體D之中和IC50 值為≤1 ng/ml。
  48. 如請求項1至47中任一項之抗體，其為單株抗體。
  49. 如請求項1至48中任一項之抗體，其為人類或嵌合抗體。
  50. 如請求項1至49中任一項之抗體，其為結合S-HBs之抗體片段。
  51. 如請求項1至49中任一項之抗體，其為全長IgG抗體。
  52. 如請求項3至5中任一項之抗體，其包含SEQ ID NO: 18或263之重鏈及SEQ ID NO: 17之輕鏈。
  53. 如請求項6至8中任一項之抗體，其包含SEQ ID NO: 36或264之重鏈及SEQ ID NO: 35之輕鏈。
  54. 如請求項9至11中任一項之抗體，其包含SEQ ID NO: 54或265之重鏈及SEQ ID NO: 53之輕鏈。
  55. 如請求項12至14中任一項之抗體，其包含SEQ ID NO: 72或266之重鏈及SEQ ID NO: 71之輕鏈。
  56. 如請求項15至17中任一項之抗體，其包含SEQ ID NO: 90或267之重鏈及SEQ ID NO: 89之輕鏈。
  57. 如請求項18至20中任一項之抗體，其包含SEQ ID NO: 108或268之重鏈及SEQ ID NO: 107之輕鏈。
  58. 如請求項21至23中任一項之抗體，其包含SEQ ID NO: 126或269之重鏈及SEQ ID NO: 125之輕鏈。
  59. 如請求項24至26中任一項之抗體，其包含SEQ ID NO: 144或270之重鏈及SEQ ID NO: 143之輕鏈。
  60. 如請求項27至29中任一項之抗體，其包含SEQ ID NO: 162或271之重鏈及SEQ ID NO: 161之輕鏈。
  61. 如請求項30至32中任一項之抗體，其包含SEQ ID NO: 180或272之重鏈及SEQ ID NO: 179之輕鏈。
  62. 如請求項33至35中任一項之抗體，其包含SEQ ID NO: 198或273之重鏈及SEQ ID NO: 197之輕鏈。
  63. 如請求項36至38中任一項之抗體，其包含SEQ ID NO: 216或274之重鏈及SEQ ID NO: 215之輕鏈。
  64. 如請求項39至41中任一項之抗體，其包含SEQ ID NO: 234或275之重鏈及SEQ ID NO: 233之輕鏈。
  65. 如請求項42至44中任一項之抗體，其包含SEQ ID NO: 252或276之重鏈及SEQ ID NO: 251之輕鏈。
  66. 如請求項51之抗體，其包含其中具有一或多個取代之Fc區，該等取代改良該Fc區與FcRn之結合。
  67. 如請求項66之抗體，其中該等取代係選自由以下組成之群： i) M252Y、S254T及T256E； ii) N428L、N434A及Y436T； iii) N434A；及 iv) T307H及N434H。
  68. 如請求項67之抗體，其包含藉由選自由以下組成之群之取代修飾的SEQ ID NO: 17之輕鏈及SEQ ID NO: 18或263之重鏈： i) M252Y、S254T及T256E； ii) N428L、N434A及Y436T； iii) N434A；及 iv) T307H及N434H。
  69. 如請求項67之抗體，其包含藉由選自由以下組成之群之取代修飾的如請求項53至65中任一項中所述之輕鏈及如請求項53至65中任一項中所述之重鏈： i) M252Y、S254T及T256E； ii) N428L、N434A及Y436T； iii) N434A；及 iv) T307H及N434H。
  70. 一種經分離核酸，其編碼如請求項1至70中任一項之抗體。
  71. 一種宿主細胞，其包含如請求項70之核酸。
  72. 一種產生結合於S-HBs之抗體的方法，其包含在適合於表現該抗體之條件下培養如請求項71之宿主細胞。
  73. 如請求項72之方法，其進一步包含自該宿主細胞回收該抗體。
  74. 一種藉由如請求項73之方法產生的抗體。
  75. 一種醫藥組合物，其包含如請求項1至69或請求項74中任一項之抗體及醫藥學上可接受之載劑。
  76. 如請求項75之醫藥組合物，其進一步包含額外治療劑。
  77. 如請求項76之醫藥組合物，其中該額外治療劑係選自：靶向HBV序列之siRNA；核苷酸類似物逆轉錄酶抑制劑或核苷類似物；INFα或聚乙二醇化INF-α；治療性疫苗；TLR促效劑；及/或檢查點抑制劑。
  78. 如請求項1至69或請求項74中任一項之抗體或如請求項75至77中任一項之醫藥組合物，其用作藥劑。
  79. 如請求項1至69或請求項74中任一項之抗體或如請求項75至77中任一項之醫藥組合物，其用於治療B型肝炎。
  80. 如請求項1至69或請求項74中任一項之抗體或如請求項75之醫藥組合物，其係用於治療B型肝炎，其中該治療進一步包含投與額外治療劑。
  81. 如請求項80之抗體或醫藥組合物，其中該額外治療劑係選自由以下組成之群：靶向HBV序列之siRNA；核苷酸類似物逆轉錄酶抑制劑或核苷類似物；INFα或聚乙二醇化IFN-α；治療性疫苗；TLR促效劑；及/或檢查點抑制劑。
  82. 一種治療劑，其選自：INFα；治療性疫苗；TLR促效劑；及/或檢查點抑制劑，該治療劑用於治療B型肝炎，其中該治療進一步包含投與如請求項1至69或請求項74中任一項之抗體或如請求項75之醫藥組合物。
  83. 如供請求項79至82中任一項使用之請求項79至82中任一項之抗體、醫藥組合物或治療劑，其中該B型肝炎係慢性B型肝炎。
  84. 一種如請求項1至69或請求項74中任一項之抗體或如請求項75至77中任一項之醫藥組合物之用途，其用於製造用於治療B型肝炎之藥劑。
  85. 如請求項84之用途，其中該B型肝炎為慢性B型肝炎。
  86. 一種治療患有B型肝炎之個體之方法，其包含向該個體投與有效量之如請求項1至69中任一項之抗體或如請求項75之醫藥組合物。
  87. 如請求項86之方法，其進一步包含向該個體投與額外治療劑。
  88. 如請求項87之方法，其中該額外治療劑係選自由以下組成之群：靶向HBV序列之siRNA；核苷酸類似物逆轉錄酶抑制劑或核苷類似物；INFα或聚乙二醇化IFN-α；治療性疫苗；TLR促效劑；及/或檢查點抑制劑。
  89. 如請求項84至88中任一項之方法，其中該B型肝炎為慢性B型肝炎。
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