KR101332215B1

KR101332215B1 - 삼나무 및 연잎 복합발효추출물을 유효성분으로 함유하는 여드름 개선 및 면역증강용 화장료조성물

Info

Publication number: KR101332215B1
Application number: KR1020130090322A
Authority: KR
Inventors: 최성규; 박종만; 김다애; 김윤정; 이대우; 하정욱
Original assignee: 주식회사 더마랩
Priority date: 2013-07-30
Filing date: 2013-07-30
Publication date: 2013-11-22

Abstract

본 발명은 안전성이 우수하면서 여드름의 개선 및 피부 면역증강에 효과가 있는 복합발효추출물을 함유한 화장료 조성물에 관한 것이다. 보다 상세하게는, 천연물 중에서 삼나무와 연잎이 함유된 복합발효추출물을 유효성분으로 포함하여 피부에서 발생되는 여드름에 대한 개선 및 피부면역증강 효과를 가지는 화장료 조성물에 관한 것이다.

Description

삼나무 및 연잎 복합발효추출물을 유효성분으로 함유하는 여드름 개선 및 면역증강용 화장료조성물{Cosmetic composition containing fermentated complex of extracts with Cryptomeria Japonica and Nelumbo Nucifera for acne improvement and enhancing immune system}

여드름은 피지선의 왕성한 활동으로 인해 과잉 배출된 피지가 모공 내에 각질이 쌓여 원활하게 빠져나오지 못하고 모공 속에서 세균과 결합하여 염증으로 진행되는 피부질환으로서, 환자의 70~80%는 11~25세의 연령층에 집중되며, 경미한 여드름은 피부병이라기보다는 성장기의 피부특징의 하나라고 할 수 있다. 이러한 여드름의 발생 원인은 크게 호르몬 분비의 불균형, 피지 분비의 증가, 모낭의 하이퍼케라토시스(hyperkeratosis)에 의한 협착, 여드름 균의 증식, 염증 반응 등으로 여드름 증세의 발전 정도에 따라 설명될 수 있고 또한 여러가지 메카니즘이 복합적으로 작용할 수도 있다.

그 주된 발생원인들을 살펴보면,

첫째, 호르몬의 변화이다. 남성호르몬(안드로겐)의 일종인 테스토스테론은 피지선을 자극하여 피지분비를 촉진하여 피지량이 많아지고 동시에 모공벽의 각질을 두텁게 하여 피지가 원활하게 배출되는 것을 막아 여드름을 발생시킨다. 이 남성호르몬은 사춘기때 왕성하게 분비되기 때문에 여드름이 많이 발생하게 된다. 이 남성호르몬은 남성에게만 배출되는 것이 아니라 여성에게도 적당량의 남성호르몬이 일정한 비율로 분비되는데 이런 호르몬 분비의 균형이 흐트러지면 여드름을 일으키게 된다.

둘째, 피지 분비의 증가이다. 피지선이 안드로겐 호르몬의 자극을 받게 되면 피지를 보다 더 많이 생산해내게 된다. 기름 성분의 피지는 모낭 내에 축적되었다가 모발 벽을 따라 피부 표면으로 올라가 피부 밖으로 배출되게 되는데 이때 피지는 정상 피부 박테리아 세균이나 모낭의 안쪽을 구성하는 피부 세포 중 탈락 된 죽은 피부 세포와 함께 섞여 배출되게 된다. 피지가 과도하게 많이 생산되면 피부 밖으로 다 배출되지 못하고 일부가 모낭 내에 쌓이면서 결국 여드름 병변을 일으키게 된다.

셋째, 모낭 내의 변화이다. 안드로겐 호르몬의 생산이 증가하고 피지선이 커지게 되면 모낭의 내벽을 구성하는 피부에 변화가 오게 된다. 정상적으로 모낭내의 죽은 세포들은 차례대로 피부 밖으로 빠져 나오게 되나 사춘기의 여드름 환자에서는 이러한 세포들의 탈락이 너무나 빠르게 진행되어 채 모두 빠져 나오지 못하고 서로 엉켜 피지와 뭉쳐져 모낭을 막게 된다.

넷째, 여드름균의 증식이다. 피지와 죽은 피부 세포에 의해 막힌 모낭은 박테리아가 자랄 수 있는 좋은 환경을 만들어준다. 특징적으로 여드름에서는 프로피오니박테리움 애크니(propionibacterium acne)라는 박테리아 세균이 피지를 먹고 자라면서 여드름의 주된 원인이 되는데, 여드름이 없는 정상인에서 이 균은 정상적으로 피부에 존재하면서 전혀 문제를 일으키지 않으나 모낭이 막혀 피지가 모낭 안에 쌓이게 되면 피지를 먹고 빠르게 자란다. 이 박테리아에서 생산 된 여러 가지의 화학 성분은 모낭과 주위 피부에 염증을 일으키게 한다.

이 외에 간접적 발생 원인으로 스트레스, 수면부족, 음주, 음식, 화장품, 생리, 약제부작용 등이 여드름에 관계한다. 이러한 원인들에 의해 피부는 저항력이 저하되고 예민성 또는 화농의 여드름들이 유발되게 된다.

이러한 여드름을 치료하기 위하여 경구제 또는 외용제 형태의 약제를 사용하는 방법이 있다. 구체적으로는 항 남성 호르몬제를 사용한 피지생성의 억제 방법, 스테로이드 호르몬 및 비스테로이드성 소염 진통제의 항염증작용에 의한 치료를 위시하여 레소치놀, 유황, 살리실산, 벤조일퍼옥사이드, 레티노익산이나 이소트레티노인과 같은 항균제 및 각질박리제, 테트라사이클린, 에리스로마이신, 메크로사이클린 등의 항생물질에 의한 프로피오니박테리움 아크네균의 활성억제 방법 등이 있다. 한편, 최근에는 아젤리아산을 이용한 치료방법도 많이 사용되고 있다.

그러나, 상기에서 설명한 방법들은 여드름 치료에 있어서, 어느 정도의 성과를 거두고는 있으나, 효과적인 면이나 부작용의 측면, 그리고 사용성의 면에서 몇 가지 문제점들을 가지고 있다. 호르몬제의 사용은 표피의 생장억제 등의 호르몬 남용 부작용이 보고되어 있으며, 레티노익산과 벤조일퍼옥사이드 등의 각질박리제는 각질박리에 따른 피부의 자극성과 접촉성 피부염의 우려가, 테트라사이클린을 위시한 항생물질은 내성균의 출혈 및 광과민작용의 가능성이 알려져 있다. 특히, 이소트레티노인은 태아에 최기성 작용이 있다고 알려져 있다.

따라서, 여드름 피부에 있어서 인체에 안전하면서도 개선 효과가 우수하고 피부의 면역증강을 시킬 수 있는 제품의 개발 필요성이 꾸준히 대두되고 있는 상황이다.

대한민국 공개특허 제2006-0111026호 "생약재 추출물을 함유하는 지성피부 개선용 화장료 조성물및 그 제조방법"에는 '대황, 고삼, 황련 및 창이자의 추출물을 함유하여 피부의 모공수축효과, 항염효과 및 항여드름효과를 가지는 지성피부 개선용 화장료 조성물'이 개시되어 있으며, 대한민국 등록특허 제0829729호 "병이소초 추출물을 주요 활성성분으로 함유하는 피부외용제 조성물"에는 '고사리삼목 고사리삼과의 병이소초의 전초 추출물을 활성성분으로 함유하는 것을 특징으로 하는 육모효과, 여드름방지효과, 항염효과, 자극완화 효과가 우수한 피부 외용제 조성물'이 개시되어 있다.

본 발명자들은 여드름 개선활성을 가지는 천연물에 대한 연구를 하던 중에 삼나무 및 연잎 복합추출물이 우수한 여드름개선효과를 가진다는 것을 확인하여 본 발명을 완성하였다.

이에, 본 발명은 삼나무와 연잎이 함유된 복합발효추출물을 유효성분으로 포함하여 피부에서 발생되는 여드름에 대한 개선 및 피부면역증강 효과를 갖는 화장료 조성물을 제공하는 것을 목적으로 한다. 특히, 여드름 균(P. acnes)에 대한 성장을 억제하는 항균력을 갖고, 지질합성(Lipogenesis)을 억제하며 대식세포(Macrophage)로부터 분비되는 산화질소 및 TNF-α 생성 증가로 면역증강활성화를 촉진함으로써 여드름 개선 및 피부면역증강효과를 갖는 화장료조성물을 제공하는 것을 목적으로 한다.

상기 목적을 달성하기 위하여 본 발명에 따르면, 삼나무 및 연잎 복합발효추출물을 함유하는 여드름 개선 및 피부면역증강용 화장료 조성물이 제공된다. 상기 복합발효추출물은 삼나무 및 연잎 추출물을 각각 또는 이의 혼합물로 효모균 또는 유산균으로 발효시켜 얻어진다. 바람직하게는 상기 효모균은 사카로미세스 세레비시아(Saccharomyces cerevisiae)이다. 이때 유효성분으로서의 상기 삼나무 및 연잎 복합발효추출물은 화장료 조성물 전체 중량에 대하여 0.1~10 중량% 함유된다. 또한 바람직하게는 상기 삼나무 및 연잎 복합발효추출물은 삼나무 및 연잎을 각각 1~2 : 1~2 의 중량비로 혼합하여 발효추출되는 것이며, 더욱 바람직하게는 2:1의 비율로 혼합하여 발효 추출되는 것이다. 상기 삼나무 및 연잎 추출물은 열수추출물이거나, 물, 탄소수 1~4의 저급 알코올, 에틸아세테이트, 글리세린, 에틸렌글리콜, 프로필렌글리콜 및 부틸렌글리콜로 이루어진 군으로부터 선택된 적어도 하나의 용매에 의한 용매추출물이다. 더욱 바람직하게는 70% 에탄올 용매에 의한 추출물이다.

상기 다른 목적을 달성하기 위하여 본 발명에 따르면, (A) 삼나무 및 연잎을 1~2 : 1~2 의 중량비로 혼합하고 물, 탄소수 1~4의 저급 알코올, 에틸아세테이트, 글리세린, 에틸렌글리콜, 프로필렌글리콜 및 부틸렌글리콜로 이루어진 군으로부터 선택된 적어도 하나의 용매로 추출하여 혼합추출물을 제조하는 단계; (B)제조된 혼합추출물에 효모균, 유산균 또는 이의 혼합물을 접종하여 발효시키는 단계; 및 (C)멸균 후 여과하고 농축하는 단계를 포함하는 복합발효추출물의 제조방법이 제공된다.

바람직하게는 상기 (B)단계는 혼합추출물에 사카로미세스 세레비시아(Saccharomyces cerevisiae)를 접종 후 22~28℃에서 4~6일간 발효 시키는 것으로 이루어진다.

상기 복합발효추출물은 여드름 균(P. acnes)에 대한 성장을 억제하는 항균력을 갖고, 지질합성(Lipogenesis)을 억제하며 대식세포(Macrophage)로부터 분비되는 산화질소 및 TNF-α 생성 증가로 면역증강활성화를 촉진함으로써 여드름 개선 및 피부면역증강효과의 특징을 갖는다.

상기 복합발효추출물은 서브마이크론캡슐화, 마이크로캡슐화 또는 리포좀화 되어 용액 또는 파우더 형태의 원료로 적용될 수 있다.

또한, 삼나무 및 연잎 복합발추출물을 함유하는 상기 화장료 조성물은 스킨로션, 스킨 소프너, 스킨토너, 아스트린젠트, 로션, 밀크로션, 모이스처 로션, 영양로션, 맛사지 크림, 영양크림, 모이스처 크림, 핸드크림, 에센스, 팩, 비누, 샴푸, 클렌징 폼, 클렌징로션, 클렌징크림, 바디로션, 바디클렌저, 유액, 프레스파우더, 루스파우더 및 아이섀도로 구성된 그룹에서 선택된 어느 하나의 제형으로 적용되어질 수 있다.

삼나무 및 연잎의 복합발효추출물을 포함하는 화장료 조성물은 여드름 개선 및 면역증강활성에 효과가 있으며, 특히, 여드름 균(P. acnes)에 대한 성장을 억제하는 항균력 및 지질합성(Lipogenesis)을 억제하는 효과가 우수하고 대식세포의 산화질소 및 TNF-α 분비촉진효과가 우수하다. 이러한 삼나무 및 연잎 복합발효추출물이 함유된 화장료 조성물은 여드름 개선 및 피부면역증강용 화장료 조성물에 유용하다.

본 발명은 삼나무 및 연잎의 복합발효추출물을 유효성분으로 함유하는 여드름 개선 및 피부면역증강용 화장료 조성물에 관한 것이다.

본 발명에서 사용되는 삼나무(Cryptomeria japonica)는 낙우송과의 상록교목으로 내한성이 약해 남부지방에서만 생육 가능하며, 원산지는 일본이지만 한국에서도 제주도 등지에서 방풍림으로 많이 식재되었으며, 높이는 70m, 지름은 4m까지 자라며 잎은 바늘모양으로 0.5~1cm이다. 삼나무는 항균 효과로 널리 알려진 피톤치드가 풍부하게 함유되어 있는데, 이는 식물이 해충, 병균과 박테리아 등에 저항하려고 방출하는 물질로 항균 작용이 뛰어나 예로부터 유해한 균을 치유하는데 널리 이용되어 왔으며 구체적으로는 종기, 부스럼 치료나 아토피와 같은 알레르기성 피부 질환 개선을 위해 널리 이용되어 왔다.

본 발명에서 사용되는 연잎은 미나리아재비목 수련과의 여러해살이 수초로서 연(Nelumbo nucifera)이라고도 하고, 비타민 C와 비타민 B12 및 아스파라긴, 아르기닌, 티로신 같은 아미노산이 함유되어 있어 피로회복 및 피부미용 개선작용 등에 효과가 있음은 물론 로에메린(roemerine)과 누시페린(nuciferine) 성분의 진통 진정작용이 있어 신경과민이나 스트레스 등에 효과가 있고, 민간에서는 폐렴, 기관지천식, 임질, 강장, 소화불량 뿐만 아니라, 뱀과 독벌레에 물렸을 때 사용하는 것으로 알려져 왔다. 연잎은 가능한 6월 초순부터 10월 중순에 채취하게 되는데 통상 연잎은 6월 초순에 나기 시작해서 10월 중순이 되면 연잎이 퇴색하기 때문에 가능한 그 전에 채취하여 사용한다. 본 발명에서 사용되는 연잎은, 하엽(荷葉)이라고도 하며 약리적인 작용으로는 설사, 두통과 어지럼증, 토혈, 코피 등 출혈증, 산후 어혈치료, 야뇨증에 쓰이고 있으며, 각종 독성물질에 대한 중화작용을 한다. 특히, 흡연자에게는 니코틴을 제거시켜 주는 해독작용이 있다. 또한, 일반적으로 연잎은 해독효과와 함께 피를 맑게 해주며, 지혈작용, 항균작용과 혈압저하 작용이 있는 것으로 알려져 있고 특히, 동의보감에서는 연잎의 꼭지를 특별히 하비(荷鼻)라 부르며 이 부분이 임신한 여성의 태를 편안하게 해주고 나쁜 피를 없애주는 효과가 있다고 일러준다. 연잎을 이용한 차로는 중국 고래의 감비차(減肥茶)(연잎, 율무, 산사자, 진피 등 함유)가 있는데, 다이어트와 피부미용에 효과가 있는 것으로 알려져 있다.

본 발명의 삼나무 및 연잎 복합발효추출물은 여드름 균(P. acnes)에 대한 성장을 억제하는 항균력을 갖고, 지질합성(Lipogenesis)을 억제하며 대식세포(Macrophage)로부터 분비되는 산화질소 및 TNF-α 생성 증가로 면역증강활성화를 촉진함으로써 여드름 개선 및 피부면역증강효과를 갖는다.

본 발명의 구체적인 예에 따르면 상기 삼나무 및 연잎 혼합추출물은 물, 탄소수 1 내지 4의 무수 또는 함수알코올, 에틸아세테이트, 글리세린, 에틸렌글리콜, 프로필렌글리콜 및 부틸렌글리콜 중에서 선택된 하나 이상의 용매로 추출하여 제조된다. 또는 발명의 다른 구체적인 예에 따르면 삼나무 및 연잎 혼합 추출물은 삼나무 및 연잎을 세절하여 물, 에탄올, 메탄올, 부탄올, 프로판올, 부틸렌글리콜, 글리세린, 클로로포름, 에틸아세테이트, 디클로로메탄, 헥산, 아세톤, 아세토나이트릴, 페트로레움에테르 및 디에틸에테르로 이루어진 군으로부터 선택된 1종 이상의 용매로 추출한 것이다.

이와 같이 제조된 삼나무 및 연잎 혼합추출물을 효모균, 유산균 또는 이의 혼합물로 발효시킨다. 바람직하게는 상기 효모균은 사카로미세스 세레비시아(Saccharomyces cerevisiae) 이다. 상기 미생물의 발효에 의하여 피부 흡수가 촉진되며, 여드름 개선 및 피부면역증강활성 효과가 더욱 증가된다.

본 발명의 화장료 조성물에서 상기 삼나무 및 연잎 복합발효추출물은 화장료 조성물의 총 중량에 대하여 0.001~10.0중량%의 양으로 화장료 조성물에 첨가될 수 있고, 바람직하게는 0.001∼5.0 중량%의 양으로 화장료 조성물에 첨가될 수 있다. 상기 삼나무 및 연잎은 각각 1~2 : 1~2의 중량비율로 혼합되어 발효추출되는 것이며, 더욱 바람직하게는 2:1의 비율로 혼합 발효추출되는 경우에 여드름 균(P. acnes)에 대한 성장을 억제하는 항균력과 지질합성(Lipogenesis)을 억제효과가 가장 우수하며, 피부면역증강 활성이 우수하였다.

상기 삼나무 및 연잎 복합발효추출물은 서브마이크론캡슐화, 마이크로캡슐화 또는 리포좀화 되어 용액 또는 파우더 형태의 원료로 적용될 수 있다. 또한, 삼나무 및 연잎 복합발추출물을 함유하는 상기 화장료 조성물은 스킨로션, 스킨 소프너, 스킨토너, 아스트린젠트, 로션, 밀크로션, 모이스처 로션, 영양로션, 맛사지 크림, 영양크림, 모이스처 크림, 핸드크림, 에센스, 팩, 비누, 샴푸, 클렌징 폼, 클렌징로션, 클렌징크림, 바디로션, 바디클렌저, 유액, 프레스파우더, 루스파우더 및 아이섀도로 구성된 그룹에서 선택된 어느 하나의 제형으로 적용되어질 수 있다.

[실시예]

이하, 하기의 실시예와 시험예들을 통하여 본 발명을 상세하게 설명하지만, 본 발명이 이 예들에 의하여 한정되는 것은 아니다.

실시예 1: 삼나무 및 연잎 혼합 추출물 제조

각각의 삼나무 잎과 연잎을 채취하여 건조한 후 세척한 삼나무 잎 50g, 연잎 50g(건조중량비=1:1)을 혼합한 시료에 70% 함수 에탄올 1㎏을 넣고 냉각 콘덴서가 달린 추출기에서 100℃로 8시간 끓여서 추출하였다. 이어서, 에드벤텍 5번 여과지와 GFC 47mm 여과지로 2번 여과시켰다. 그리고 감압 농축기를 이용하여 50℃에서 농축한 후 스프레이드라이어(BUCHI사 제품)를 이용하여 건조시켜 건조 중량 7.5g의 혼합추출물을 얻었다.

실시예 2 ~ 3: 삼나무 및 연잎 혼합 추출물 제조

하기 표 1의 조성과 같이 삼나무 잎 및 연잎의 혼합 중량비율을 달리하여 실시예 1과 동일한 방법으로 추출 및 여과하여 혼합추출물을 제조하였다.

실시예 4: 삼나무 및 연잎 복합발효추출물 제조

각각의 삼나무 잎과 연잎을 채취하여 건조한 후 세척한 삼나무 잎 50g, 연잎 50g(건조중량비=1:1)을 혼합한 시료에 70% 함수 에탄올 3㎏을 넣고 냉각 콘덴서가 달린 추출기에서 100℃로 8시간 끓여서 추출하였다. 추출물에 사카로미세스 세레비지에(Saccharomyces cerevisiae)를 접종 후 25℃에서 5일간 발효 시킨 뒤 95℃에서 2시간 동안 멸균 후 300메쉬 여과지로 여과하고, 하루 실온에서 방치하여 침전물을 에드벤텍 5번 여과지와 와트만 GFC 47mm 여과지로 2번 여과시켰다. 그리고 감압 농축기를 이용하여 50℃에서 농축한 후 스프레이드라이어(BUCHI사 제품)를 이용하여 건조시켜 건조 중량 6.8g의 복합발효추출물 을 얻었다.

실시예 5 ~ 6: 삼나무 및 연잎 복합발효추출물 제조

하기 표 1의 조성과 같이 삼나무 잎 및 연잎의 혼합 중량비율을 달리하여 실시예 4와 동일한 방법으로 추출, 발효 및 여과하여 복합발효추출물을 제조하였다

(중량비)	혼합추출물			복합발효추출물
(중량비)	실시예 1	실시예 2	실시예 3	실시예 4	실시예 5	실시예 6
삼나무	1	1	2	1	1	2
연잎	1	2	1	1	2	1

비교예 1: 삼나무 추출물의 제조

음지에서 건조한 삼나무 잎을 분쇄한 뒤, 100g을 70% 함수 에탄올 1㎏에 넣고 냉각 콘덴서가 달린 추출기에서 100℃로 8시간 끓여서 추출하였다. 이어서, 에드벤텍 5번 여과지와 GFC 47mm 여과지로 2번 여과시켰다. 그리고 감압 농축기를 이용하여 50℃에서 농축한 후 스프레이드라이어(BUCHI사 제품)를 이용하여 건조시켜 건조 중량 6.2g의 삼나무추출물을 얻었다.

비교예 2: 연잎 추출물의 제조

음지에서 건조한 연잎을 분쇄한 뒤, 100g을 70% 함수 에탄올 1㎏에 넣고 냉각 콘덴서가 달린 추출기에서 100℃로 8시간 끓여서 추출하였다. 이어서, 에드벤텍 5번 여과지와 GFC 47mm 여과지로 2번 여과시켰다. 그리고 감압 농축기를 이용하여 50℃에서 농축한 후 스프레이드라이어(BUCHI사 제품)를 이용하여 건조시켜 건조 중량 7.8g의 연잎추출물을 얻었다.

상기 비교예 1과 2에서 제조한 삼나무추출물과 연잎추출물, 실시예 1 내지 3에서 제조한 삼나무 및 연잎 혼합추출물 그리고 실시예 4 내지 6에서 제조한 삼나무 및 연잎 복합발효추출물을 농도별로 디메틸설폭사이드에 희석하여 제조한 희석용액을 실험에 사용하였다.

시험예 1 : 여드름 균(P. acne )에 대한 항균력 시험

여드름 균을 대상으로 삼나무 잎 및 연잎을 이용해 만든 각각의 추출물과 화학합성 항균제로 대표적인 트리클로산을 양성대조군으로하여 항균효과를 비교 시험하였다. 공시균으로 여드름 균인 Propionibacterium acnes ATCC 6919 를 사용하였다. 여드름 균(P. acnes)에 대한 항균력 시험은 액체 배지 희석 방법으로 하였다. 액체 BHI배지 2ml에 각 시료를 0에서 1000ppm까지 100ppm 간격으로 희석한 후, 10⁶CFU/ml의 균액 20㎕를 접종하여 48시간 동안 배양시켰다. 혼탁도를 기준으로 성장이 저해된 최소농도를 최저 성장 저해 농도(MIC)라고 정의하였다. 얻어진 결과는 하기 표 2에 나타내었다.

	최저성장 저해농도 (MIC)
시료	비교예 1	비교예 2	실시예 1	실시예 2	실시예 3	실시예 4	실시예 5	실시예 6
P. acne	1200	1700	1000	1200	1000	600	700	400

표 2에 나타낸 바와 같이, 각각의 추출물이 여드름 균에 대한 항균력이 있음을 알 수 있으며, 그 중에서도 실시예 6(삼나무 잎 및 연잎의 비율을 2:1로 하여 제조된 복합발효추출물)의 항균력이 특히 우수함을 알 수 있었다.

시험예 2 : 지질합성(Lipogenesis) 억제 시험

지질 합성에 필요한 탄소 원소의 소비(uptake) 정도를 정량하여 지질 합성 저해 정도를 평가하는 방법으로 피지선에서의 지질합성 저해정도를 평가하기 위하여 피지선이 많은 햄스터 귀 조직을 생검(biopsy)하여 C¹⁴가 라벨된 배지에서 6시간 동안 배양하고 방사능 측정기로 대조군과 시료군을 비교 정량하여 저해 정도를 평가하였다. 시료군으로는 햄스터 오른쪽 귀 조직을 이용 배지에 시료 용액 0.01%를 가하여 사용하였고, 대조군으로는 햄스터 왼쪽 귀 조직을 이용 배지에 생리 식염수 0.01%를 가하여 사용하였다. 그 결과는 표 3과 같다. 표 3에서 저해율은 하기 식으로 계산하였고, 그 값은 5마리의 햄스터에 대하여 수행한 평균값이다.

저해율(%)=시료군/대조군×100

	Lipogenesis inhibition assay
시료	비교예 1	비교예 2	실시예 1	실시예 2	실시예 3	실시예 4	실시예 5	실시예 6
저해율(%)	24	18	43	38	42	66	64	72

표 3에 나타낸 바와 같이, 각각의 추출물이 지질합성 저해 효과가 있음을 알 수 있으며, 그 중에서도 실시예 6(삼나무 잎 및 연잎의 비율을 2:1로 하여 제조된 복합발효추출물)의 지질합성 저해효과가 특히 우수함을 알 수 있었다. 따라서, 지질합성이 억제됨으로써 피지가 감소되어 여드름 발생을 억제할 수 있다.

시험예 3 : Nitric oxide 측정 시험

Macrophage(Raw 264.7 mouse cell)를 96웰 마이크로 플레이트에 웰 당 4×10⁵cells 씩 분주한 후 1000 ㎍/㎖ 농도로 각각의 추출물을 처리한 후 37℃, 5% CO₂ 조건에서 24시간 후에 상층액을 취하여 Griess reagent를 이용하여 550 nm에서 흡광도를 측정하여 nitric oxide의 농도를 구하였다. LPS는 대조군으로 1 ㎍/㎖을 처리하였다. 얻어진 결과는 하기 표 4에 나타내었다.

	NO assay
시료	비교예 1	비교예 2	실시예 1	실시예 2	실시예 3	실시예 4	실시예 5	실시예 6
NO 생성 증가율(%)	14	8	22	17	23	46	44	58

표 4에 나타낸 바와 같이, 각각의 추출물이 NO 생성을 유도하는 효과가 있음을 알 수 있으며, 그 중에서도 실시예 6(삼나무 잎 및 연잎의 비율을 2:1로 하여 제조된 복합발효추출물)의 NO 생성 유도로 대식세포의 활성을 증가시켜 면역증강 효과가 특히 우수함을 알 수 있었다.

시험예 4 : TNF -α 측정 시험

Macrophage(Raw 264.7 mouse cell)를 96 웰 마이크로 플레이트에 웰 당 4×10⁵cells씩 분주한 후 1000 ㎍/㎖ 농도로 각각의 추출물을 37℃, 5% CO₂ 조건에서 24시간 처리하였다. LPS는 대조군으로 1 ㎍/㎖을 처리하였다. 상층액을 취하여 sandwich ELISA 방법으로 TNF-α의 양을 측정하였다. 얻어진 결과는 하기 표 5에 나타내었다.

	TNF-α assay
시료	비교예 1	비교예 2	실시예 1	실시예 2	실시예 3	실시예 4	실시예 5	실시예 6
TNF-α 발현율(%)	24	18	33	28	32	56	54	68

표 5에 나타낸 바와 같이, 각각의 추출물이 TNF-α를 유도하는 효과가 있음을 알 수 있으며, 그 중에서도 실시예 6(삼나무 잎 및 연잎의 비율을 2:1로 하여 제조된 복합발효추출물)은 TNF-α 생성 유도로 대식세포의 활성을 증가시켜 면역증강 효과가 특히 우수함을 알 수 있었다.

자연 면역 반응에 관여하는 중요한 면역세포는 대식세포이다. 활성화된 대식세포는 염증서 매개물질과 사이토카인을 분비하게 된다. 우리는 대식세포로부터 분비되는 중요한 매개불질인 NO와 TNF-α의 생성 증가 확인을 통해 삼나무 및 연잎 복합발효추출물이 대식세포의 활성화를 통한 선천 면역반응에 관여함을 확인할 수 있었다.

실시예 7:에멀젼 베이스 제조

본 발명의 삼나무 및 연잎 복합발효추출물을 함유하는 화장료의 여드름 개선효과와 피부안전성에 대한 임상시험을 위해 하기 표 6의 조성에 따라 에멀젼 베이스를 제조하였다.

비교예 3, 4, 5:에멀젼 베이스 제조

하기의 표 6의 조성과 같이 삼나무 및 연잎 추출물만을 함유하거나 본 발명의 추출물을 함유하지 않는 에멀젼 베이스를 제조하여 비교예로 하였다.

성분	중량%
성분	실시예 7	비교예 3	비교예 4	비교예 5
글리세린	3.00	3.00	3.00	3.00
디소듐이디티에이	0.02	0.02	0.02	0.02
폴리글리세릴-3-메틸글루코스 디스테아레이트	1.50	1.50	1.50	1.50
세테아릴알코올	0.50	0.50	0.50	0.50
카프릴릭/카프릭트리글리세라이드	7.00	7.00	7.00	7.00
폴리아크릴아마이드 & C13-14이소파라핀 & 라우레스-7	0.60	0.60	0.60	0.60
삼나무 및 연잎 복합발효추출물	1.00	-	-	-
삼나무추출물	-	1.00	-	-
연잎추출물	-	-	1.00	-
향, 방부제	미량	미량	미량	미량
정제수	잔량	잔량	잔량	잔량
계	100	100	100	100

시험예 5: 여드름에 대한 개선 정도 측정

19 ~ 26세의 여성중 여드름을 가진 20명에 대하여 각 4주간 일상적인 로션과 같은 사용방법으로 실시예 7, 및 비교예 3 ~ 5의 에멀젼베이스를 사용하게 하였으며, 사용자의 의견에 따라 개선 정도를 하기의 평가기준에 따라 판정하였다. 시험 결과는 표 7에 나타내었다.

<평가 기준>

+++: 매우 양호한 개선 효과가 있음.

++: 상당한 개선 효과가 있음.

+ : 약간의 개선 효과가 있음.

± : 개선 효과는 없으나 악화되지도 않음.

- : 개선 효과 없고 오히려 악화됨.

시료	1 주	2 주	3 주	4 주
실시예 7	+	++	++	+++
비교예 3	±	+	+	+
비교예 4	±	±	+	+
비교예 5	±	±	±	±

표 7 에서 알 수 있는 바와 같이 삼나무 및 연잎 복합발효추출물을 함유하는 에멀젼베이스가 여드름에 대한 개선정도가 매우 우수함을 알 수 있었다.

시험예 6 : 피부안전성시험

본 발명의 삼나무 및 연잎 복합발효추출물을 함유한 화장료 조성물의 피부안전성을 확인하기 위하여 과거력상 피부자극에 과민 반응을 보인 적이 없으며, 현재 피부병 내지 피부 알러지 증상이 없는 20~30대 여성 20명을 대상으로 인체 피부첩포시험을 하였다. 우선 시험 부위를 70% 에탄올로 닦아낸 뒤 건조시켰다. 실시예 7 및 비교예 3 내지 5의 물질을 15㎍씩 핀챔버(Finn chamber, 100x 10, EPITEST, 핀란드) 내에 적하시킨 후, 시험대상자의 전박(forearm) 안쪽 부위에 밀폐 첩포하였다. 24시간 동안 첩포하고, 첩포를 제거한 후, 펜으로 시험부위를 표시하였다. 표시 후 각각 1시간 및 24시간 후에 확대경(8MC-150, DAZOR, 미합중국)을 이용하여 시험부위를 관찰하여 홍반 및 부종 유무를 관찰하였다. 피부 반응은 국제접촉피부염연구회(ICDRG, Internatiolnal Contact Dermaitis Research Group)의 규정에 따라 판정하고, 하기식에 따라 평균피부반응도(mean response rate)를 구하고, 그 결과를 표 8에 기재하였다.

평균피부반응도 = (점수 × 반응 수 × 100 × 1/2) × [3(최대점수) × 총 피검자수(n)]

* 피부 반응의 평가 기준, 기호 및 점수

무반응: -(0)

희미한 또는 가벼운 홍반:±(0.5)

경계가 뚜렷하나 약한 홍반, 부종 및 구진:+(1)

뚜렷한 홍반, 구진 및 소수포:++(2)

심한 홍반 및 대수포, 가피 형성:+++(3)

시험물질	1시간 후			24시간 후			반응도(%) (n=20)
시험물질	±	+	++	±	+	++	반응도(%) (n=20)
실시예 7	-	-	-	-	-	-	0.00
비교예 3	-	-	-	-	-	-	0.00
비교예 4	-	-	-	-	-	-	0.00
비교예 5	-	-	-	-	-	-	0.00

상기 표 8로부터 알 수 있는 바와 같이 삼나무 및 연잎 복합발효추출물을 함유하는 화장료에서 피부자극이 나타나지 않아 피부안전성이 우수하였다.

Claims

삼나무 및 연잎 복합발효추출물을 유효성분으로 함유하는 것을 특징으로 하는 여드름 개선 및 피부면역증강용 화장료 조성물.
제1항에 있어서, 상기 복합발효추출물은 삼나무 및 연잎 추출물을 효모균, 유산균 또는 이의 혼합물로 발효시켜 얻어진 것임을 특징으로 하는 여드름 개선 및 피부면역증강용 화장료 조성물.
제1항에 있어서, 상기 삼나무 및 연잎 복합발효추출물은 삼나무 및 연잎을 각각 1~2 : 1~2의 중량비로 혼합하여 발효추출되는 것임을 특징으로 하는 여드름 개선 및 피부면역증강용 화장료 조성물.
제1항에 있어서, 상기 조성물은 여드름균인 프로피오니박테리움 애크니(Propionibacterium acnes)를 억제하는 것을 특징으로 하는 여드름 개선 및 피부면역증강용 화장료 조성물.
제1항에 있어서, 상기 조성물은 지질합성(lipogenesis)을 억제하는 것을 특징으로 하는 여드름 개선 및 피부면역증강용 화장료 조성물.
제1항에 있어서, 상기 조성물은 대식세포로부터 분비되는 매개물질인 NO와 TNF-α의 생성 유도를 특징으로 하는 여드름 개선 및 피부면역증강용 화장료 조성물.
(A) 삼나무 및 연잎을 1~2 : 1~2 의 중량비로 혼합하고 물, 탄소수 1~4의 저급 알코올, 에틸아세테이트, 글리세린, 에틸렌글리콜, 프로필렌글리콜 및 부틸렌글리콜로 이루어진 군으로부터 선택된 적어도 하나의 용매로 추출하여 혼합추출물을 제조하는 단계;
(B)제조된 혼합추출물에 효모균, 유산균 또는 이의 혼합물을 접종하여 발효시키는 단계; 및
(C)멸균 후 여과하고 농축하는 단계를 포함하는 삼나무 및 연잎 복합발효추출물의 제조방법.