JPH11508239A - アクチノマデュラによるコンパクチンのプラバスタチンへの変換 - Google Patents

Abstract

(57)【要約】 コンパクチンをプラバスタチンに変換する方法が記載される。コンパクチンを供給し、そしてアクチノマデュラ由来の因子と当該コンパクチンを、当該因子がコンパクチンをプラバスタチンに変換する条件下で接触させる。ささらに、アクチノマデュラの一株、アクチノマデュラの細胞不含抽出物、アクチノマデュラのヒドロキシラーゼおよび哺乳類のコレステロールレベルの低下方法も記載される。

Description

【発明の詳細な説明】 アクチノマデュラによるコンパクチンのプラバスタチンへの変換 発明の分野 本発明は、糸状バクテリアであるアクチノマデュラに由来する因子によってコ ンパクチンをプラバスタチンに変換する方法、哺乳類のコレステロール値を低下 させる方法、およびアクチノマデュラならびにアクチノマデュラのヒドロキシラ ーゼに関する。 発明の背景 アテローム性動脈硬化症および冠状動脈性疾患の大きな理由の一つは血中コレ ステロールの高値にある。体内コレステロールの約５０％は、デノボ（De novo ）コレステロール合成に由来する。コレステロール生合成経路における主たる律 速工程は、３−ヒドロキシ−３−メチルグルタリル（ＨＭＧ）−ＣｏＡリダクタ ーゼにより触媒される。コンパクチンおよびプラバスタチンはＨＭＧ−ＣｏＡリ ダクターゼの競合的インヒビターであると報告され、いずれかの存在はコレステ ロール生合成の阻害をもたらす。 コンパクチンの微生物的ヒドロキシル化は、コンパクチンのヒドロキシル化体 、例えばプラバスタチンをもたらす。ヒドロキシル化体のあるものは、ＨＭＧ− ＣｏＡリダクターゼの競合的インヒビターとして、コンパクチンより効果的であ ると報告されている。このようなヒドロキシル化は、多くの異なる真菌属、およ びバクテリアのノカルジアおよびストレプトマイセス ロゼオクロモゲナスおよ びストレプトマイセス カルボフィラスにより異なる程度に行うことができると 報告されている。例えば、米国特許5,179,013; 4,448,979; 4,346,227; 4,537,8 59；カナダ特許1,150,170; 1,186,647; Serizawa et al.，J．Antibiotics 36:8 87-891(1983)を参照。 プラバスタチンの製造に真菌を用いることの問題は、真菌は一般に培養培地中 に添加されるコンパクチンの増加に耐えられず、これはおろらくコンパクチンの 抗真菌活性によるとおもわれる。Serizawa et al.，J．Antibiotics 36: 887-89 1(1983)を参照。 ストレプトマイセス カルボフィラスでの、コンパクチンからプラバスタチン へのヒドロキシル化には、チトクローム P450 系が必要とされることが示されて いる。Matsuoka et al.，Eur．J．Biochem．184:707-713(1989)。そのような酵 素の使用に伴う問題は、当該系は単一蛋白質ではなく蛋白質の複合物であり、組 み換えＤＮＡ操作が困難であり、そしてチトクローム P450 系のインデューサー であるコンパクチンが非常に高価であることである。 発明の概要 本発明の目的は、効率的かつ比較的安価な、コンパクチンからプラバスタチン への変換方法を提供することである。 本発明の他の目的は、コンパクチンをプラバスタチンへ変換するために、アク チノマデュラ（糸状バクテリア）を用いることである。 本発明のさらに別の目的は、コンパクチンをプラバスタチンへ変換するために 、アクチノマデュラのヒドロキシラーゼを用いることである。 本発明のさらに別の目的は、コンパクチンをプラバスタチンへ変換するために 、コンパクチンをインデューサーとして必要としないアクチノマデュラの構成的 ヒドロキシラーゼを用いることである。 本発明のさらに別の目的は、哺乳類の血中コレステロール値を低下させる治療 のため、コンパクチンをプラバスタチンに変換するアクチノマデュラのヒドロキ シラーゼにより得られたプラバスタチンを用いることである。 本発明によると、コンパクチンをプラバスタチンへ変換する方法が提供される 。コンパクチンを供給し、本発明の因子、例えばヒドロシキル化酵素、例えばヒ ドロキシラーゼ（これは、例えばアクチノマデュラに由来する構成的でかつチト クローム P450 系とは独立のもの）と、該因子がコンパクチンをプラバスタチン に変換する条件下で接触させる。ある態様では、プラバスタチンは単離される。 好ましくは、コンパクチンは、例えばコンパクチンを生産する微生物、例えば 真菌またはバクテリアにより、またはコンパクチンを生産する微生物の細胞を含 まない抽出物、コンパクチンを生産する微生物を予め培養したものからの細胞を 含まない培養液、コンパクチンを含む溶液、準精製コンパクチン、または実質的 に精製されたコンパクチンとして供給される。 ある種の態様では、コンパクチンと上記因子との接触は、例えばアクチノマデ ュラの全菌体をコンパクチンと接触させることにより、アクチノマデュラの細胞 不含抽出物をコンパクチンと接触させることにより、あらかじめ培養したアクチ ノマデュラの細胞不含培養液をコンパクチンと接触させることにより、アクチノ マデュラ因子を有する溶液をコンパクチンと接触させることにより、または準精 製もしくは実質的に精製されたアクチノマデュラ因子をコンパクチンと接触させ ることにより、行われる。 変法には、例えば、コンパクチンを生産する微生物の培養物、例えば予め培養 した培養物または出発培養物、または細胞不含抽出物、または準精製もしくは実 質的に精製されたコンパクチンと、例えば、アクチノマデュラの培養物、例えば 予め培養した培養物または出発培養物、または細胞不含抽出物、または準精製も しくは実質的に精製されたアクチノマデュラ因子との接触を包含する。 本発明の他の観点は、アクチノマデュラに由来する細胞不含抽出物であって、 コンパクチンをプラバスタチンに変換する因子、例えばヒドロキシラーゼを含む ものに関する。 本発明の他の観点は、コンパクチンをプラバスタチンに変換するアクチノマデ ュラ由来のヒドロキシラーゼ、例えば準精製したものまたは実質的に精製したも のに関し、該ヒドロキシラーゼの活性はＡＴＰ、アスコルビン酸またはＭｇ⁺⁺の いずれによっても刺激されるが、Ｆｅ⁺⁺またはＦｅ⁺⁺⁺によっては刺激されず、 且つ当該ヒドロキシラーゼはチトクローム P450 系とは独立のものである。 本発明の別の観点は、コンパクチンをプラバスタチンへ変換する因子を有する 精製されたアクチノマデュラＡＴＣＣ５５６７８に関する。 本発明のさらに別の観点は、哺乳類の血中コレステロール値を低下させるため に該哺乳類を治療する方法に関する。コンパクチンをプラバスタチンへ変換する アクチノマデュラ由来の因子、例えばヒドロキシラーゼとコンパクチンを接触さ せることによりコンパクチンから誘導されたプラバスタチンが提供される。 このプラバスタチンを上記治療を必要とする哺乳類に投与して該哺乳類の血中 コレステロール値を低下させる。 本発明の上記及びその他の目的、構成及び効果は以下の記載により、良く理解 されよう。 詳細な説明 本発明はコンパクチンをプラバスタチンに変換する方法を提供する。コンパク チンを供給し、アクチノマデュラ由来の因子と当該因子がコンパクチンをプラバ スタチンに変換する条件下で接触させる。幾つかの態様では、プラバスタチンは 単離される。 コンパクチン（メバスタチン、ＭＬ−２３６Ｂ及びＣＳ−５００としても知ら れている）には、例えば酸体（ＭＬ−２３６Ｂカルボン酸としても知られている ）、ラクトン体（ＭＬ−２３６Ｂラクトンとしても知られている）、および塩及 びエステルも含まれる。ラクトン体のコンパクチンは次式（Ｉ）で表される： 好ましいコンパクチンはコンパクチンのナトリウム塩である。 プラバスタチン（エプタスタチン、メザロチン、プラバコール、ＣＳ−５１４ 、及びＳＱ−３１０００としても知られている）には、例えば、酸体、ラクトン 体、及び塩並びにエステルも含まれる。プラバスタチンの３β−ヒドロキシラク トン体は次式（II）で表される： ヒドロキシル化コンパクチンの他の型には、コンパクチン分子の他の位置、例 えば６位にヒドロキシ基が付加されたものが含まれる。 コンパクチンは、上記因子が作用できる任意の方法で供給してよい。例えば、 コンパクチンは、コンパクチンを生産する微生物、例えば真菌またはバクテリア として供給して良い。微生物には、例えばそのままの微生物細胞、固定化したも のまたは浸透性としたもの（ｐｅｒｍｅａｂｉｌｉｚｅｄ）も含まれる。微生物 によるコンパクチンの製造とは、微生物自身の遺伝子もしくは遺伝子群を用いて またはそれらの断片を用いてコンパクチンを製造すること、および／または微生 物が外来遺伝子もしくは遺伝子群を用いてまたはそれらの断片を用いてコンパク チンを製造することも含む。外来遺伝子の微生物への導入は、この技術分野で知 られている標準的分子生物学的技術により、またはコンパクチン製造遺伝子また は遺伝子群もしくはその断片の発現を該微生物にもたらす任意の方法で、行うこ とができる。幾つかの態様では、コンパクチンはコンパクチンを生産する微生物 の細胞不含抽出物を用いて供給される。細胞不含抽出物は、当該技術分野で知ら れている種々の方法、例えば物理的または化学的手段により、細胞を破壊するこ とにより調製可能である。そのような方法には、例えば、磨砕、超音波処理、ま たは酵素もしくは表面活性剤処理が含まれる。好ましくは、細胞不含抽出物は、 フレンチプレスで調製する。細胞不含抽出物とは、任意の調製方法による材料、 または任意の調製方法による溶解画分を含む。好ましくは、細胞不含抽出物は、 粒状の細胞屑、例えば細胞壁を含まない細胞成分よりなり、例えば細胞壁は実質 的に除去されている。細胞不含抽出物は、細胞の活発な増殖の前、間、または後 に調製できる。他の態様においては、コンパクチンは、コンパクチンを産生する 微生物を予め培養した培養物からの細胞不含培養培地を用意することにより供給 できる。他の態様では、コンパクチンはコンパクチンを含む溶液を用意すること により供給できる。さらに別の態様では、コンパクチンは準精製されたまたは実 質的に精製されたコンパクチンを用いることにより供給できる。コンパクチンは 遊離でも固定化されていてもよい。本発明においては他の任意のコンパクチンの 供給源も使用できる。コンパクチンは、本発明においてプラバスタチンの製造を もたらす任意の濃度で用いることができる。好ましくは、コンパクチン濃度は、 約０．１ないし約１００ｇ／リットル、より好ましくは約０．２ないし約２５ｇ ／リットルであり、最も好ましくは約１及び約１０ｇ／リットルである。いくつ かの態様では、コンパクチンはアクチノマデュラ因子に対して、分割的に添加さ れる。分割的とは、該因子を何回か連続添加することを意味する。実施例３を参 照のこと。 コンパクチンをアクチノマデュラ由来の因子と接触させる。アクチノマデュラ は糸状バクテリアのアクチノミセテスに属する一属である。アクチノマデュラは 、野性型のものまたはコンパクチンをプラバスタチンに変換する能力を有する任 意の変異体を含む。変異体は、例えば自然に、または物理的要因（例えば紫外線 照射、高周波の電磁波または放射線照射）により、または化学的要因により、ま たは遺伝子操作技術により誘導できる。 本発明に含まれる新たに単離された株の形態学的及び化学分類学的特性を、類 似した分類の菌と比較したところ、結果は、当該株がアクチノマデュラ属に属す ることを示した。これらのアクチノマデュラ細胞（２９６６株）の寄託は、１９ ９５年６月１日に、１２３０１ Ｐａｒｋｌａｗｎ Ｄｒｉｖｅ， Ｒｏｃｋｖ ｉｌｌｅ， ＭＤ ２０８５２の、ＡＴＣＣになされ、受託番号ＡＴＣＣ５５６ ７８が付与された。 アクチノマデュラ由来の因子とは、例えば酵素（例えばヒドロキシル化酵素、 例えばヒドロキシラーゼ）またはその任意の部分で、コンパクチンをプラバスタ チンに変換する能力を有するものを含む。アクチノマデュラの因子は、ｉｎ ｖ ｉｖｏまたはｉｎ ｖｉｔｒｏのいずれで調製してもよく、例えば細胞不含系ま たは化学合成のいずれで調製してもよい。この因子は野性型及び変異型を含む。 変異型の因子は、天然に、アクチノマデュラを変異させて（例えば物理的要素ま たは化学的要素により）、または当業者に知られている遺伝子工学技術を用いて 、得られるいずれの変異でもよい。変異型の因子は当業者に知られている化学技 術で合成することもできる。当該因子はまた、例えば遺伝子工学操作により、当 該因子またはその任意の活性部分をコードする核酸が当該因子の野性型の制御領 域と異なる制御領域またはその一部に機能的に結合されたアクチノマデュラ株か ら 得られたものも含む。幾つかの態様では、アクチノマデュラの因子をコードする 核酸は、別のタイプの細胞、例えばバクテリア（例えば大腸菌、枯草菌、Ｂａｃ ｉｌｌｕｓ ｂｒｅｖｉｓまたはＳｔｒｅｐｔｏｍｙｃｅｓ ｌｉｖｉｄａｎｓ ）、真菌（例えばサッカロミセス セレビシエ、ピキア パストリス、ハンセヌ ラ ポリモルファ）、昆虫細胞、トランスジェニック植物、またはトランスジェ ニック動物の細胞内にクローニングされる。好ましい態様においては、アクチノ マデュラの因子は、コンパクチンを生産する能力を有する（例えば、その微生物 自身の遺伝子（群）により、または外来遺伝子（群）により）微生物中にクロー ニングされる。 本発明の因子は構成的酵素であり、したがって、コンパクチンによる誘導を必 要としない。実施例６を参照のこと。Ｍｇ⁺⁺、ＡＴＰ及びアスコルビン酸は単独 または協力して当該因子の酵素活性を刺激するが、Ｆｅ⁺⁺またはＦｅ⁺⁺⁺は酵素 活性を刺激しない。実施例８を参照のこと。好ましくは、ＮＡＤＰＨをＨ⁺ドナ ーとして用いるが、ＮＡＤＨまたは他のＨ⁺ドナーを用いることもできる。コフ ァクター類、例えばα−ケトグルタレート、ＣｏＣｌ₂、ＮｉＣｌ₂、ＣＵＳＯ₄ 、ＦＭＮまたはＦＡＤは当該因子の酵素活性を刺激しない。この因子はチトクロ ームＰ４５０の系とは独立のものである。実施例７参照。 コンパクチンは当該因子がコンパクチンをプラバスタチンへ変換することを可 能ならしめる任意の方法で当該因子に接触させることができ。例えば、コンパク チンをアクチノマデュラの全菌体と、またはアクチノマデュラの細胞不含抽出物 と、またはアクチノマデュラを予め培養した培養物からの細胞不含培養培地と、 またはアクチノマデュラの因子を含有する溶液と、または準精製したもしくは実 質的に精製したアクチノマデュラ因子と接触させてよい。 いくつかの態様においては、コンパクチンを生産する微生物を予め培養した培 養物を、予め培養したアクチノマデュラの培養物と接触させる。予め培養した培 養物とは、細胞を接種した後ある長さの期間、好ましくは約１ないし約８日、よ り好ましくは約１ないし約５日、そして最も好ましくは約２ないし約４日間培養 したものをいう。他の態様においては、予め培養した微生物の培養物を、アクチ ノマデュラの出発培養物と接触させる。出発培養物とは、例えばスラント培養物 、 凍結培養物、凍結乾燥培養物または液状種培養物からの細胞を接種した培養物を 意味する。他の態様においては、コンパクチンを生産する微生物の出発培養物を 、アクチノマデュラの予め培養した培養物と接触させる。他の態様においては、 コンパクチンを生産する微生物の出発培養物を、アクチノマデュラの出発培養物 と接触させる。この培養物混合物をある長さの時間、好ましくは約０．５ないし 約８日、より好ましくは約１日ないし５日、そして最も好ましくは約２ないし約 ４日間増殖させる。 他の態様においては、コンパクチンを生産する微生物の細胞不含抽出物を、ア クチノマデュラの例えば出発培養物または予め培養した培養物と接触させる。他 の態様においては、コンパクチンを生産する微生物の例えば出発培養物または予 め培養した培養物を、アクチノマデュラの細胞不含抽出物と接触させる。さらに 別の態様においては、コンパクチンを生産する微生物の細胞不含抽出物を、アク チノマデュラの細胞不含抽出物と接触させる。他の態様においては、コンパクチ ンを生産する微生物の培養物、例えば出発培養物または予め培養した培養物を、 アクチノマデュラの細胞不含抽出物と接触させる。準精製または実質的に精製し たコンパクチン、または準精製または実質的に精製したアクチノマデュラ因子の 組み合わせ使用も本発明に含まれる。 コンパクチンからプラバスタチンへの変換反応は、プラバスタチンの生産を生 じる任意の条件で行うことができる。任意の培養方法を用いてよく、例えば発酵 法（例えばバッチ培養法、供給式バッチ培養法（ｆｅｄ−ｂａｔｃｈ ｃｕｌｔ ｕｒｅ）、連続培養法または固相培養法を用いて良い。好ましくは、攪拌液面下 培養を用い、最も好ましくは大量の工業的発酵に適するタイプの培養法を用いる 。細胞内でのヒドロキシル化系の発達に寄与する添加剤を、増殖の間に用いても よい。 好ましい温度は約１８℃ないし約５０℃、より好ましくは約２５℃ないし約３ ７℃、そして最も好ましくは約２８℃ないし約３１℃である。好ましいpHは約５ ないし約１０、より好ましくは約６ないし約８．５、そして最も好ましくは約７ ．２ないし約８．０である。好ましくは、例えば攪拌および／または通気による 好気性条件を与える。好ましい浸透条件は約０ｒｐｍないし約４００ｒｐｍ、よ り 好ましくは約２００ｒｐｍないし約２５０ｒｐｍ、そして最も好ましくは約２２ ０ｒｐｍである。 本発明は、アクチノマデュラ因子によるコンパクチンのいかなる変換率％も含 み、好ましくは少なくとも約１０％、より好ましくは少なくとも約２５％、さら により好ましくは少なくとも約４０％、さらにより好ましくは少なくとも約５０ ％、さらにより好ましくは少なくとも約６０％、さらにより好ましくは少なくと も約７０％、そして最も好ましくは少なくとも約８０％の変換率である。変換率 ％は、プラバスタチン濃度を、投入した（最初に添加した）コンパクチンの濃度 で割ってさらに１００倍した値として計算される。 好ましい態様では、プラバスタチンは単離される。単離とは、例えば、濃縮さ れ、分離されまたは精製されることを意味する。単離は当業者に知られる任意の 方法で行うことができ、例えば、沈殿、抽出（例えば酢酸エチルまたはブタノー ルなどの溶媒による抽出及び例えば蒸留による溶媒除去）、クロマトグラフィー （例えば、アルミナまたはシリカゲルのような支持体を用いて行われる、例えば 薄層クロマトグラフィーまたはカラムクロマトグラフィー）及び引き続く溶出、 により行うことができる。好ましいクロマトグラフィー法は、例えば高圧液体ク ロマトグラフィー（ＨＰＬＣ）を含む。例えばＳｅｒｉｚａｗａ ｅｔ ａｌ． ，Ｊ．Ａｎｔｉｂｉｏｔｉｃｓ（１９８３）を参照。 本発明はさらに、コンパクチンをプラバスタチンへ変換する因子、例えばヒド ロキシラーゼを含む、アクチノマデュラからの細胞不含抽出物も包含する。細胞 不含抽出物は、上記方法を含めて、任意の方法で得られたものでよい。好ましく は、細胞不含抽出物は、粒状の細胞屑、実質的に例えば壁を含まない細胞成分か らなり、例えば、壁は実質的に除去されている。好ましくは細胞不含抽出物によ るコンパクチンのプラバスタチンへの変換率は少なくとも約１０％、より好まし くは少なくとも約２５％、さらにより好ましくは少なくとも約４０％、さらによ り好ましくは少なくとも約５０％、さらにより好ましくは少なくとも約６０％、 さらにより好ましくは少なくとも約７０％、そして最も好ましくは少なくとも約 ８０％である。 本発明はまた、アクチノマデュラからのコンパクチンをプラバスタチンへ変換 するヒドロキシラーゼを包含し、例えば準精製または実質的に精製されたもので ある。このヒドロキシラーゼは構成的酵素である。ヒドロキシラーゼの活性は、 ＡＴＰ、アスコルビン酸及びＭｇ⁺⁺またはこれらの組み合わせにより刺激される が、Ｆｅ⁺⁺またはＦｅ⁺⁺⁺によっては刺激されない。好ましくは、ＮＡＤＰＨを Ｈ⁺ドナーとして用いるが、ＮＡＤＨまたは他のＨ⁺ドナーを用いることもできる 。コファクター類、例えばα−ケトグルタレート、ＣｏＣｌ₂、ＮｉＣｌ₂、Ｃｕ ＳＯ₄、ＦＭＮまたはＦＡＤはヒドロキシラーゼの活性を刺激しない。ヒドロキ シラーゼはチトクロームＰ４５０の系とは独立のものである。 本発明はまた、コンパクチンをプラバスタチンへ変換するための因子、例えば ヒドロキシラーゼを有するアクチノマデュラＡＴＣＣ５５６７８も包含する。 本発明はさらに、哺乳類の血中コレステロールレベルを低下させるための当該 哺乳類の治療方法も包含する。コンパクチンをコンパクチンをプラバスタチンへ 変換するアクチノマデュラに由来する当該因子、例えばヒドロキシラーゼと接触 させることにより、コンパクチンから誘導されたプラバスタチンが与えられる。 上記治療を要する哺乳類にプラバスタチンを投与し、当該哺乳類の血中コレステ ロールレベルの低下を生じさせる。 哺乳類とは、ヒト並びに非ヒト哺乳類も含む。血中コレステロールレベルの低 下のために哺乳類を治療するとは、例えば高血中コレステロールレベルを防止ま たは低下させることを含む。 プラバスタチンの投与は、プラバスタチンをその標的に到達させることを可能 にする任意の方法で行うことができる。標的とは、プラバスタチンが哺乳類内に おけるコレステロール生合成経路を阻止できる任意の場所を意味する。投与方法 は、例えば注射、デポ、移植、座剤、経口投与、吸入、局所投与、またはプラバ スタチンによる標的への到達が達成できる他の任意の投与方法を含む。注射は、 例えば静注、皮内、皮下、筋注、または腹腔投与であってよい。移植は、移植可 能薬剤配給システム、例えばミクロスフェア、ヒドロゲル、ポリマー性のリザー バ、コレステロールマトリックス、ポリマーシステム（例えばマトリックス崩壊 および／または拡散性システム）及び非ポリマーシステム（例えば圧縮、溶融ま たは部分溶融ペレット）を挿入することを含む。座剤は、グリセリン座剤を含む 。 経口投与剤、例えばピルは腸溶コーティングを施してよい。吸入剤は、吸入器中 の噴霧として、単独でまたは吸入可能な担体とともにプラバスタチンを投与する ことを含む。 プラバスタチンは液体に懸濁させてもよく、例えば溶解形態またはコロイド形 態にしてもよい。液体は溶剤、部分溶剤、または非溶剤であってよい。多くの場 合、水または有機の液体を用いることができる。いくつかの態様においては、プ ラバスタチンを適当な担体、例えば薬学的に許容される担体と混合してもよい。 いくつかの態様においては、プラバスタチンはリポソーム中に包含させ、または ポリマー性の放出システムに包含させる。 本発明のある態様においては、投与は或る時間の間、例えば何時間、何日、何 週間、何ヵ月または何年間、連続的なプラバスタチンへの暴露をもたらすように 計画できる。このことはプラバスタチンを上記の方法のいずれかで繰返投与する ことにより、または繰返投与することなくプラバスタチンを哺乳類に長期間配給 する制御放出供給システムの使用により達成される。そのようなシステムによる 投与は、例えば長期作用性経口投与剤型、大量注射、経皮パッチ、及び皮下移植 であってよい。 プラバスタチンは、高血中コレステロールレベルの出現の前または後に投与で きる。ある態様においては、プラバスタチンは高血中コレステロールレベルの家 族歴を有する患者に、または高血中コレステロールレベルの遺伝傾向を有する患 者に投与される。他の態様においては、プラバスタチンは一定の年齢に達し、そ のため高血中コレステロールレベルを生じやすい患者に投与される。さらに別の 態様においては、プラバスタチンは高血中コレステロールレベルの初期症状また は進行症状を呈する患者に投与される。プラバスタチンはまた予防手段としての 投与も可能である。 プラバスタチンは哺乳類に治療有効量で投与される。治療有効量とは、高血中 コレステロールレベルを少なくとも部分的に予防もしくは改善できる量を意味す る。治療有効量は、個々の患者毎に決定され、少なくとも一部は、哺乳類の種、 哺乳類の大きさ、使用する供給システムの種類、血中コレステロールレベルとの 関連における投与時間、及び採用する投与法が一回投与、複数回投与または制御 放出投与であるか、等を考慮して決定される。これらの要因を考慮し、そして日 常的検査を用いるだけで当業者が治療有効量を決定することができる。 好ましくは、ヒトに対するプラバスタチンの用量は、約０．１ないし約５００ ０mg／日、より好ましくは約１ないし約５００mg／日、そして最も好ましくは約 １０ないし約５０mg／日である。好ましくは、用量は哺乳類に実質的な悪影響を 与えない量である。 実施例 実施例１： アクチノマデュラの健全細胞によるコンパクチンのプラバスタチン への生物学的変換 本実施例は、アクチノマデュラ細胞によるコンパクチンのプラバスタチンへの 生物学的変換を記載する。アクチノマデュラＡＴＣＣ５５６７８はＹＭ培地（１ リットル当たり、イーストエキス３ｇ、麦芽エキス３ｇ、ペプトン５ｇ、グルコ ース１０ｇ，pH６．５）中で、４８時間、２８℃で、２２０ｒｐｍの振とうで培 養した。次いで、５００μg／mlのＮａコンパクチン（ニューヨーク，ＮＹのＦ ｌｕｋａ Ｃｈｅｍｉｃａｌ Ｃｏｒｐ．から入手）を添加した。アクチノマデ ュラ培養物を同じ培地中で、さらに１、２、３、４または５日インキュベートし た。各インキュベート時間の後、ＨＰＬＣによりコンパクチン（ＣＰ）及びプラ バスタチン（ＰＶ）の量を測定した。 使用したＨＰＬＣ条件は、３μm Ｌｉｃｈｒｏｓｐｈｅｒ １００ ＲＰ−１ ８カラム（ジブスタウン，ＮＪのＥＭ Ｓｅｐａｒａｔｉｏｎｓ Ｔｅｃｈｎｏ ｌｏｇｙから入手）；移動相Ａ：８００mlのＭｉｌｌｉ−Ｑ水中の２．５ｇ Ｎ ａＨ₂ＰＯ₄にアセトニトリル２００ml及びメタノール１１０mlを添加し、８５％ Ｈ₃ＰＯ₄でpHを２．５に調整；移動相Ｂ：水２００ml、アセトニトリル８００ml 、メタノール１１０ml及び８５％Ｈ₃ＰＯ₄１mlの混合物；注入容積１０μｌ；流 速１ml／分；及びＵＶ２３７nmでの検出。勾配は下表のとおり： ＨＰＬＣの結果は表１に示す。ＰＶはプラバスタチン；ＣＰはコンパクチン。 単位：μg／ml 変換％は、使用したコンパクチンではなく投入したコンパクチンに基づいて計 算した（添加前にコンパクチンを秤量したが、投入量は時間０におけるＨＰＬＣ アッセイにより決定した）。 実施例２： アクチノマデュラの健全細胞によるコンパクチンのプラバスタチン への生物学的変換のカイネティック 本実施例は、アクチノマデュラの健全細胞によるコンパクチンのプラバスタチ ンへの生物学的変換のカイネティックを記載する。グルコース２％、ペプトン０ ．５％、イーストエキス０．３％、及び麦芽エキス０．３％を含有する培養培地 を調製し、pHを５．５に調整した。容量２５０mlのエルレンマイヤーフラスコ（ 各々、２０mlの培地を含む）を１２１℃で１５分間滅菌した。次いで、各フラス コにスラント培養したアクチノマデュラＡＴＣＣ５５６７８の細胞を含むプラチ ナ ループで接種し、２５０ｒｐｍの振とうを行いながら２８℃で５日間培養した。 この方法によりペレットと濁った液を含む懸濁液を得た。培養物の濁った液部分 ２mlを、培地２０mlを含む別の２５０mlエルレンマイヤーフラスコに接種し、２ ５０ｒｐｍで振とうしながら、２８℃で２日間インキュベートし、種培養物を得 た。上記培地の５０mlアリコートを５００mlエルレンマイヤーフラスコに加え、 １２１℃で１５分間滅菌した。各フラスコに５mlの種培養物を添加した。２日後 、コンパクチンを各フラスコに５００μg／mlの量で添加し、さらに３６時間培 養を続けた。３６時間の生物学的変換の間に、種々の時間間隔で、プラバスタチ ン生産率を実施例１に記載の方法で測定した。結果を表２に示す。 単位：μg／ml １６時間の間、プラバスタチンの生産及びコンパクチンの消費は共に直線的で あった。 さらなる実験を行って、コンパクチン濃度２００μg／ml及び５００μg／mlに おいて、より短い７時間のインターバルでの生物学的変換を調べた。 結果を表３及び表４に示す。 単位：μg／ml 単位：μg／ml 上記の結果より、二種のコンパクチン濃度の間にプラバスタチン生産速度の点 で実質的差異がないことが明らかである。 実施例３： コンパクチンを分割的に添加したときの、アクチノマデュラの健全 細胞によるコンパクチンのプラバスタチンへの生物学的変換 本実施例は、アクチノマデュラの健全細胞によるコンパクチンのプラバスタチ ンへの生物学的変換により得られるプラバスタチンの濃度は、コンパクチンを分 割的に添加した場合に増大することを説明する。アクチノマデュラＡＴＣＣ５５ ６７８を実施例２に記載したようにして、５００μg／mlコンパクチンを記載の ように添加して増殖させた。最初の日に３００μg／mlの追加量のコンパクチン を添加し、そしてさらに第２日目にさらなる追加量３００μg／mlのコンパクチ ンを添加した。コンパクチン及びプラバスタチンの量を実施例１の記載の方法に より測定した。結果を表５に示す。 単位：μg／ml この結果は、コンパクチンを分割的に添加すると７日後に非常に高濃度のプラ バスタチン（８２１μg／ml）が得られることを示した。コンパクチンを一度に （非分割的に）添加した点を除いて類似の条件下で行った実験では、プラバスタ チンの産生濃度は低かった。加えて、表５に示されているとおり、分割的添加実 験では生物学的変換の率は７８％まで増大した。したがって、コンパクチンを分 割的に添加するとプラバスタチンの濃度及び変換率が高まった。コンパクチンか らプラバスタチンへの生物学的変換の速度は増大しなかった。 実施例４： 規定培地で増殖させたアクチノマデュラの細胞による増殖及びコン パクチンからプラバスタチンへの生物学的変換 本実施例では、規定培地がアクチノマデュラの増殖を支持し、複雑な培地に比 べてコンパクチンのプラバスタチンへの生物学的変換のためにより効果的である ことを示す。化学的に規定された培地（培地Ａと命名する）は次の成分を含有す る： グラム／リットル スクロース ３０ ＮａＮＯ₃ ２ Ｋ₂ＨＰＯ₄ １ ＭｇＳＯ₄・７Ｈ₂Ｏ ０．５ ＫＣｌ ０．５ ＦｅＳＯ₄ ０．０１ pHを７．２に調節 アクチノマデュラＡＴＣＣ５５６７８を、培地Ａ、及び複雑なＹＭ培地（リッ トル当たりイーストエキス３ｇ、麦芽エキス３ｇ、ペプトン５ｇ、グルコース１ ０ｇ、pH６．５）中で４５時間、５ml／２５０mlフラスコ、２８℃、２２０ｒｐ ｍの振とうにより増殖させた。４５時間目にコンパクチン（２５０μg／ml）を 添加した。インキュベートを８時間継続した。バイオマスを測定すると、培地Ａ での細胞増殖はＹＭ培地での細胞増殖に比べて約２５％少なかった。細胞数は少 なかったにもかかわらず、培地Ａで増殖した細胞はＹＭ培地で増殖したものに比 べて、コンパクチンのプラバスタチンへの生物学的変換は大きかった。ＹＭ培地 では６．７％の変換であり、培地Ａでは１３％の変換が見られた。 実施例５： ＮＡＤＰＨに依存するアクチノマデュラの細胞不含抽出物によるコ ンパクチンのプラバスタチンへの酵素的変換 本実施例は、アクチノマデュラの細胞不含抽出物がコンパクチンをプラバスタ チンへ変換し、かつこの酵素的変換において、ＮＡＤＰＨがＮＡＤＨよりも優れ たＨ⁺ドナーであることを示す。 アクチノマデュラの細胞不含抽出物は、アクチノマデュラＡＴＣＣ５５６７８ をＹＭ培地中で実施例１に記載したようにして２日間増殖させて得た。細胞を１ ５，０００ｒｐｍで３０分の遠心により収穫した。細胞を２０mlの新たなＹＭ培 地に再懸濁させ、Ｎａコンパクチンを約５００μg／mlに添加し、２９℃で２２ ０ｒｐｍ、３時間のインキュベートを行った。この間に、１９６μg／mlのコン パクチンが消失し、７０μg／mlのプラバスタチンが生じた。細胞を遠心で収穫 し、冷水で２回、そしてバッファーＡ（８０mMのトリス−塩酸バッファー，pH７ ．４に２０％グリセロール及び２mMのＤＴＴを添加したもの）で一回、洗浄した 。細胞を５mlのバッファーＡに再懸濁し、−８０℃で貯蔵した。その後、細胞懸 濁液を解凍し、フレンチプレスで破砕した。ホモジネートを３０，０００ｒｐｍ で６０分間遠心した。上清を細胞不含抽出物として−８０℃で保存した。 反応条件は、１６０μｌの細胞不含抽出物、０．２６mM ＮＡＤＨまたはＮＡ ＤＰＨ、０．２３mMのコンパクチン、総量２２０μｌ、３０℃、２５０ｒｐｍ。 コントロールとして、細胞不含抽出物を含まないバッファーＡを含めた。プラバ スタチンの量は、実施例１に記載したようにして、ＨＰＬＣで測定した。結果を 表６に示す。 この結果は、細胞不含抽出物によりコンパクチンからプラバスタチンへの酵素 変換が生じること、及びＨ⁺ドナーとしてＮＡＤＰＨを用いる方がＮＡＤＨより も優れていることを示している。 実施例６： 細胞不含抽出物で測定した場合の、誘導及び非誘導アクチノマデュ ラによるコンパクチンからのプラバスタチンへの酵素的変換 本実施例は、細胞不含抽出物で測定したとき、アクチノマデュラにおけるコン パクチンからプラバスタチンへの酵素的変換には、誘導の必要がないこと、及び したがってアクチノマデュラのヒドロキシラーゼは構成的酵素であることを示す ものである。 コンパクチンにより誘導した細胞及び誘導しない細胞の両者から細胞不含抽出 物を調製した。アクチノマデュラＡＴＣＣ５５６７８細胞は実施例２に記載した 様に、但し温度は２９℃で２日間増殖させ、収穫し，そして二つのフラスコに分 け入れた。次いで、一方のフラスコにコンパクチンを約３００μg／mlの濃度に 添加した（これを誘導培養物とする）。両方のフラスコを２９℃、２５０ｒｐｍ ，３時間インキュベートした。細胞を収穫し、そして実施例４に記載したように して、フレンチプレスを用いて細胞不含抽出物を調製した。反応条件は次のよう に した：１６０μｌ細胞不含抽出物、０．２６mM ＮＡＤＰＨ，０．２３mM コン パクチン，全量２２０μｌ，３０℃，２５０ｒｐｍで６０分のインキュベート。 細胞不含抽出物による酵素変換反応は、０、１０、３０及び６０分目に、実施例 １に記載したＨＰＬＣにより測定した。結果を表７に示す。 この結果、誘導は酵素的変換速度を増加させなかった。したがって、アクチノ マデュラのヒドロキシラーゼ酵素は構成的酵素である。 実施例７： アクチノマデュラ細胞不含抽出物中のチトクロームＰ４５０の測定 本実施例は、アクチノマデュラのヒドロキシラーゼ活性がチトクロームＰ４５ ０酵素でないことを示すものである。アクチノマデュラＡＴＣＣ５５６７８の細 胞不含抽出物を実施例５のようにして調製した。調製物１、２および３をバッフ ァーＡ（８０mMのトリス−塩酸バッファー，pH７．４に２mMのＤＴＴ及び２０％ グリセロールを添加したもの）に再懸濁し、調製物４はリン酸バッファーに再懸 濁した。反応条件は次のようにした：１６０μｌ細胞不含抽出物、０．２６mM ＮＡＤＰＨ，０．２３mM コンパクチン，全量２２０μｌ，３０℃，２５０ｒｐ ｍ。ヒドロキシラーゼ活性は実施例１に記載のようにしてＨＰＬＣで測定した。 チトクロームＰ４５０活性は次のようにして測定した。２mgのソディウム・ジ チオネートをアクチノマデュラＡＴＣＣ５５６７８の細胞不含抽出物３mlに添加 してＰ４５０を還元した。細胞不含抽出物をベックマンモデル２４スペトクロフ ォトメーター内に置いたサンプル細胞および対照細胞に加えた。４００nmから５ ００nm迄の吸光を記録した。サンプルセル内の細胞不含抽出物に、ＣＯを泡立つ ように１分間吹き込んで、Ｐ４５０−ＣＯ複合体を形成させた。スペクトルを再 度記録した。これらの二つのスペクトルの相違はＰ４５０の差スペクトルである 。 異なる細胞不含抽出物調製物中のＰ４５０含量およびヒドロキシラーゼ活性は 表８に示されている。細胞不含抽出物（ＣＦＥ）調製物の番号は、独立の細胞不 含抽出物調製物を示す。 ヒドロキシラーゼ活性とチトクロームＰ４５０活性の間に相関は認められなか った。したがって、アクチノマデュラ由来のヒドロキシラーゼ活性はチトクロー ムＰ４５０酵素によるものではない。 実施例８： アクチノマデュラの細胞不含抽出物中でのコンパクチンからプラバ スタチンへの変換に対する種々の因子の影響 本実施例は、Ｍｇ⁺⁺、ＡＴＰおよびアスコルビン酸は単独または協力して、ア クチノマデュラのコンパクチンからプラバスタチンへの変換を刺激するが、Ｆｅ⁺⁺ またはＦｅ⁺⁺⁺は刺激しないことを示すものである。Ｍｇ⁺⁺は多くの酵素のコ ファクターである。ＡＴＰは種々の酵素反応に与えられる共通エネルギー源であ る。Ｆｅ⁺⁺およびＦｅ⁺⁺⁺は、多くのオキシゲナーゼの活性部位に存在する。ア スコルビン酸は、オキシゲナーゼ反応にしばしば必要とされる還元剤である。反 応条件は次のようにした：１６０μｌ細胞不含抽出物、０．７２mM ＮＡＤＰＨ ，０．２mM コンパクチン，全量２１１μｌ，３０℃，２５０ｒｐｍ，６０分。 各因子を０時間に次の濃度になるよう添加した：ＭｇＣｌ₂ ２．４mM、ＦｅＳ Ｏ₄ ０．０９mM、ＦｅＣｌ₃ ０．１mM、ＡＴＰ １．９mMおよびアスコルビン 酸 １２mM。結果を表９および１０に示す。 実施例９： 予め培養したピーシロマイセス(Peacilomyces)をアクチノマデュラ の出発培養物と接触させることによるプラバスタチン製造 ピーシロマイセス sp.M2016(Endo et al.，J．Antibiotics 39:1609-1610(198 6))の真菌を、グルコース３．５％、スターチ１％、ソイビーンミール２％、肉 エキス０．５％、ペプトン０．５％、ＮａＣｌ ０．２％、ＫＨ₂ＰＯ₄０．０５ ％およびＭｇＳＯ₄・７Ｈ₂Ｏ ０．０５％を含み、pHを５．８に調節した培地で 増殖させた。容量２５０mlのエルレンマイヤーフラスコの各々に２０mlの培地を 添加して、１２１℃で１５分間滅菌した。各フラスコにピーシロマイセス sp.M2 016 のスラント培養物を白金ループで接種し、２５℃、７日間、２５０ｒｐｍで 振とう培養した。製造されたコンパクチンは実施例１に記載したようにしてＨＰ ＬＣで検出した。製造されたコンパクチンは４０μg ／mlであった。次にpHを７ ．２に調節した。アクチノマデュラＡＴＣＣ５５６７８の種培養物は実施例２に 記載したようにして調製し、ピーシロマイセス sp.の７日培養物に添加した。２ ８℃、２５０ｒｐｍで１日インキュベートした後、培養物中のプラバスタチンを 実施例１に記載したようにしてＨＰＬＣで検出した。培養物中のプラバスタチン の濃度は３０μg ／mlであった。 実施例１０： ピーシロマイセスの出発培養物をアクチノマデュラの細胞不含抽 出物と接触させることによるプラバスタチンの製造 ピーシロマイセス sp.M2016 真菌の培養物は、実施例９に記載のようにして調 製したが、但し培養物はスラント培養物からの接種直後に（７日間の予備培養な しに）混合した。アクチノマデュラＡＴＣＣ５５６７８の細胞不含抽出物は、実 施例５に記載したようにして調製した。ピーシロマイセス sp.の培養物をpH７． ５に調節し、ピーシロマイセス sp.の培養物２０mlに対してアクチノマデュラの 細胞不含抽出物５mlを添加した。混合物を３０℃、２５０ｒｐｍで２時間インキ ュベートした。コンパクチンから製造されたプラバスタチンは、実施例１に記載 し たようにして、ＨＰＬＣで調べた。培養物中のプラバスタチンの濃度は３０μg ／mlであった。 実施例１１： 高血中コレステロールレベルの治療 本実施例は、コンパクチンをプラバスタチンに変換するアクチノマデュラヒド ロキシラーゼにより製造されたプラバスタチンによる、ヒトの高コレステロール レベルを低下させる方法の説明である。患者にピルの形で２０mgのプラバスタチ ンを１日２回毎日経口投与する。投与は３ケ月行われる。この治療により患者の 血中コレステロールレベルの低下がもたらされる。 当業者は、日常的実験を用いる以上の作業を必要とせず、本明細書に記載され ている特定の態様について多くの均等態様を確認することができる。そのような ものを含めて全ての均等な態様は、本出願の請求の範囲に含まれる。

───────────────────────────────────────────────────── フロントページの続き (51)Int.Cl.⁶ 識別記号 ＦＩ (Ｃ１２Ｐ 17/06 Ｃ１２Ｒ 1:01） (Ｃ１２Ｐ 17/06 Ｃ１２Ｒ 1:645） (72)発明者 ペン，ユーリン アメリカ合衆国マサチューセッツ州02139, ケンブリッジ，ウィンザー・ストリート 183 (72)発明者 ヤシュペ，ヤコブ イスラエル国 90805 メヴァッセレト− ズィオン，ヤスミン・ストリート 11 (72)発明者 デーヴィス，ジョセフ アメリカ合衆国テキサス州76020，アズレ, シルバークリーク・ロード 1820

Claims (1)

1. 【特許請求の範囲】 １．コンパクチンを供給し：そして 該コンパクチンをアクチノマデュラに由来する因子と、該因子がコンパク チンをプラバスタチンに変換する条件下で、接触させることよりなる コンパクチンのプラバスタチンへの変換方法。 ２．プラバスタチンを単離する工程をさらに含む、請求項１の方法。 ３．アクチノマデュラに由来する因子が、アクチノマデュラが生産するヒドキ シル化酵素である、請求項１の方法。 ４．ヒドキシル化酵素が、チトクロームＰ４５０システムとは独立のヒドロキ シラーゼである、請求項３の方法。 ５．ヒドキシル化酵素が構成的に発現される酵素である、請求項３の方法。 ６．コンパクチンが、コンパクチンを生産する微生物により供給される、請求 項１の方法。 ７．コンパクチンを生産する微生物が、菌類（ｆｕｎｇｕｓ）およびバクテリ アからなる群から選択される、請求項６の方法。 ８．コンパクチンが、コンパクチンを生産する微生物の細胞不含抽出物として 供給される、請求項１の方法。 ９．コンパクチンが、コンパクチンを生産する微生物を予め培養したものの細 胞不含培養培地として供給される、請求項１の方法。 １０．コンパクチンが、コンパクチンを含有する溶液として供給される、請求 項１の方法。 １１．コンパクチンが、実質的に精製されたコンパクチンとして供給される、 請求項１の方法。 １２．コンパクチンが、何回かに分割して供給される、請求項１の方法。 １３．コンパクチンとアクチノマデュラに由来する因子との接触が、アクチノ マデュラの全菌体とコンパクチンを接触させることにより行われる、請求項１の 方法。 １４．コンパクチンとアクチノマデュラに由来する因子との接触が、アクチノ マデュラの細胞不含抽出物とコンパクチンを接触させることにより行われる、請 求項１の方法。 １５．コンパクチンとアクチノマデュラに由来する因子との接触が、アクチノ マデュラを予め培養したものの細胞不含培養培地とコンパクチンを接触させるこ とにより行われる、請求項１の方法。 １６．コンパクチンとアクチノマデュラに由来する因子との接触が、アクチノ マデュラに由来する因子を含む溶液とコンパクチンを接触させることにより行わ れる、請求項１の方法。 １７．コンパクチンとアクチノマデュラに由来する因子との接触が、コンパク チンを生産する微生物を予め培養したものの細胞不含培養培地をアクチノマデュ ラを予め培養したものと接触させることにより行われる、請求項６の方法。 １８．コンパクチンとアクチノマデュラに由来する因子との接触が、コンパク チンを生産する微生物を予め培養したものの細胞不含培養培地をアクチノマデュ ラの出発培養物と接触させることにより行われる、請求項６の方法。 １９．コンパクチンとアクチノマデュラに由来する因子との接触が、コンパク チンを生産する微生物の出発培養物をアクチノマデュラを予め培養したものと接 触させることにより行われる、請求項６の方法。 ２０．コンパクチンとアクチノマデュラに由来する因子との接触が、コンパク チンを生産する微生物の出発培養物をアクチノマデュラの出発培養物と接触させ ることにより行われる、請求項６の方法。 ２１．コンパクチンとアクチノマデュラに由来する因子との接触が、コンパク チンを生産する微生物の細胞不含抽出物をアクチノマデュラの培養物と接触させ ることにより行われる、請求項６の方法。 ２２．コンパクチンとアクチノマデュラに由来する因子との接触が、コンパク チンを生産する微生物の培養物をアクチノマデュラの細胞不含抽出物と接触させ ることにより行われる、請求項６の方法。 ２３．コンパクチンとアクチノマデュラに由来する因子との接触が、コンパク チンを生産する微生物の細胞不含抽出物をアクチノマデュラの細胞不含抽出物と 接触させることにより行われる、請求項６の方法。 ２４．コンパクチンのプラバスタチンへの変換が少なくとも約５０％である、 請求項１の方法。 ２５．コンパクチンのプラバスタチンへの変換が少なくとも約８０％である、 請求項１の方法。 ２６．コンパクチンをプラバスタチンへ変換する因子を含む、アクチノマデュ ラ由来の細胞不含抽出物。 ２７．アクチノマデュラ由来の細胞不含抽出物が、アクチノマデュラの破砕細 胞から粒状の細胞屑を実質的に除去したものである、請求項２６の細胞不含抽出 物。 ２８．コンパクチンをプラバスタチンへ変換する因子がヒドロキシラーゼであ る、請求項２６の細胞不含抽出物。 ２９．ヒドロキシラーゼが構成的に発現される酵素であり、該ヒドロキシラー ゼの酵素活性は、ＡＴＰ、アスコルビン酸、およびＭｇ⁺⁺のいずれによっても刺 激されるが、Ｆｅ⁺⁺およびＦｅ⁺⁺⁺のいずれによっても刺激されず、且つ該ヒド ロキシラーゼはチトクロームＰ４５０システムとは独立した酵素である、請求項 ２８の細胞不含抽出物。 ３０．コンパクチンのプラバスタチンへの変換が少なくとも約５０％である、 請求項２６の細胞不含抽出物。 ３１．コンパクチンのプラバスタチンへの変換が少なくとも約８０％である、 請求項２６の細胞不含抽出物。 ３２．コンパクチンをプラバスタチンに変換するアクチノマデュラ由来のヒド ロキシラーゼにおいて、 該ヒドロキシラーゼは構成的に発現される酵素であり； 該ヒドロキシラーゼ活性はＡＴＰ、アスコルビン酸およびＭｇ⁺⁺のいずれによ っても刺激されるが、Ｆｅ⁺⁺およびＦｅ⁺⁺⁺のいずれによっても刺激されず、そ して、 該ヒドロキシラーゼはチトクロームＰ４５０システムとは独立した酵素である 、上記アクチノマデュラ由来のヒドロキシラーゼ。 ３３．コンパクチンをプラバスタチンに変換する因子を含有する、純化された アクチノマデュラＡＴＣＣ５５６７８。 ３４．コンパクチンをプラバスタチンに変換する因子がヒドロキシラーゼであ る、請求項３３のアクチノマデュラ。 ３５．哺乳類の血中コレステロールレベルを低下させるために哺乳類を治療す る方法において、 プラバスタチンを用意し； 該プラバスタチンは、コンパクチンをプラバスタチンに変換するアクチノマデ ュラ由来の因子とコンパクチンを接触させることにより、該コンパクチンから生 じたものであり；そして 該プラバスタチンを上記治療を必要とする哺乳類に投与して、該哺乳類の血中 コレステロールレベルを低下させる ことよりなる上記治療方法。 ３６．アクチノマデュラ由来の因子がヒドロキシラーゼである、請求項３５の 方法。