JP2698936B2 - Ｒ（‐）―マンデル酸誘導体の製造法 - Google Patents
Ｒ（‐）―マンデル酸誘導体の製造法Info
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Description
【発明の詳細な説明】 〔産業上の利用分野〕 本発明はＲ（−）−マンデル酸誘導体の製造法に関す
る。更に詳しくは、後記一般式〔Ｉ〕で示されるR,S−
マンデロニトリル誘導体に対してニトリル不斉加水分解
活性を有する微生物を作用させ、後記一般式〔III〕で
示されるＲ（−）−マンデル酸誘導体を製造する方法に
関する。該マンデル酸誘導体は多種の医農薬品の合成原
料として工業的に重要である。
る。更に詳しくは、後記一般式〔Ｉ〕で示されるR,S−
マンデロニトリル誘導体に対してニトリル不斉加水分解
活性を有する微生物を作用させ、後記一般式〔III〕で
示されるＲ（−）−マンデル酸誘導体を製造する方法に
関する。該マンデル酸誘導体は多種の医農薬品の合成原
料として工業的に重要である。
Ｒ（−）−マンデル酸誘導体の生物学的製造法とし
は、（１）Ｄ−オキシニトリラーゼにより不斉合成した
置換Ｒ（−）−マンデロニトリルの加水分解による製造
法（特開昭63−219388号、特開平２−5885号各公報参
照）、（２）アルカリゲネス属、シュウドモナス属、ロ
ドシュウドモナス属、コリネバクテリウム属、アシネト
バクター属、バチルス属、マイコバクテリウム属、ロド
コッカス属またはキャンディダ属の微生物による置換マ
ンデロニトリルまたは置換マンデルアミドの不斉加水分
解によるＲ（−）−マンデル酸誘導体の製造法（特開平
２−84198号公報参照）などが知られている。
は、（１）Ｄ−オキシニトリラーゼにより不斉合成した
置換Ｒ（−）−マンデロニトリルの加水分解による製造
法（特開昭63−219388号、特開平２−5885号各公報参
照）、（２）アルカリゲネス属、シュウドモナス属、ロ
ドシュウドモナス属、コリネバクテリウム属、アシネト
バクター属、バチルス属、マイコバクテリウム属、ロド
コッカス属またはキャンディダ属の微生物による置換マ
ンデロニトリルまたは置換マンデルアミドの不斉加水分
解によるＲ（−）−マンデル酸誘導体の製造法（特開平
２−84198号公報参照）などが知られている。
しかしながら、（１）のＤ−オキシニトリラーゼ法に
おいては、光学活性置換マンデロニトリルが得られたと
いう基礎的知見の開示にすぎず、未だ充分な工業化研究
は行われていない。（２）の置換マンデロニトリルまた
は置換マンデルアミドの不斉加水分解法に関しては、ラ
セミ体の原料から直接優位量の光学活性体を製造するも
のではなく、残存する他方の光学活性体の処理が必要と
なる。また、同公報には置換マンデロニトリルからのＲ
（−）−マンデル酸誘導体の製造についての具体例も無
く、Ｒ（−）−マンデル酸誘導体が効率よく高い光学純
度で得られるかどうかについては全く不明である。
おいては、光学活性置換マンデロニトリルが得られたと
いう基礎的知見の開示にすぎず、未だ充分な工業化研究
は行われていない。（２）の置換マンデロニトリルまた
は置換マンデルアミドの不斉加水分解法に関しては、ラ
セミ体の原料から直接優位量の光学活性体を製造するも
のではなく、残存する他方の光学活性体の処理が必要と
なる。また、同公報には置換マンデロニトリルからのＲ
（−）−マンデル酸誘導体の製造についての具体例も無
く、Ｒ（−）−マンデル酸誘導体が効率よく高い光学純
度で得られるかどうかについては全く不明である。
このように従来公知の方法は種々の問題点を含み、Ｒ
（−）−マンデル酸誘導体の製造に関して、いずれの方
法も工業的に有利な製造法とはなり難い。
（−）−マンデル酸誘導体の製造に関して、いずれの方
法も工業的に有利な製造法とはなり難い。
本発明者らはR,S−マンデロニトリルまたはベンズア
ルデヒドと青酸を原料とし、Ｒ（−）−マンデル酸を工
業的に有利に製造する方法の開発を目的として検討を進
めた結果、先に、R,S−マンデロニトリルまたはベンズ
アルデヒドと青酸を、中性付近ないしは塩基性の水性媒
体中で、シュードモナス（Pseudomonas）属、アルカリ
ゲネス（Alcaligenes）属、アシネトバクター（Acineto
bacter）属またはカセオバクター（Caseobacter）属等
の微生物を用いて、中性ないし塩基性の水性媒体中で、
R,S−マンデロニトリルまたはベンズアルデヒドと青酸
からほぼ化学量論的にＲ（−）−マンデル酸を生成し得
ることを見出し特許出願した（特願平２−80694号明細
書参照）。その後、さらに後記一般式〔Ｉ〕で示される
R,S−マンデロニトリル誘導体に対してニトリル不斉加
水分解活性を有する微生物の探索を進めた結果、オーレ
オバクテリウム（Aureobacterium）属、シュードモナス
（Pseudomonas）属、カセオバクター（Caseobacter）
属、アルカリゲネス（Alcaligenes）属、アシネトバク
ター（Acinetobacter）属、ブレビバクテリウム（Brevi
bacterium）属またはノカルディア（Nocardia）属に属
する微生物が、該目的を達成し得ることを見出し本発明
を完成した。
ルデヒドと青酸を原料とし、Ｒ（−）−マンデル酸を工
業的に有利に製造する方法の開発を目的として検討を進
めた結果、先に、R,S−マンデロニトリルまたはベンズ
アルデヒドと青酸を、中性付近ないしは塩基性の水性媒
体中で、シュードモナス（Pseudomonas）属、アルカリ
ゲネス（Alcaligenes）属、アシネトバクター（Acineto
bacter）属またはカセオバクター（Caseobacter）属等
の微生物を用いて、中性ないし塩基性の水性媒体中で、
R,S−マンデロニトリルまたはベンズアルデヒドと青酸
からほぼ化学量論的にＲ（−）−マンデル酸を生成し得
ることを見出し特許出願した（特願平２−80694号明細
書参照）。その後、さらに後記一般式〔Ｉ〕で示される
R,S−マンデロニトリル誘導体に対してニトリル不斉加
水分解活性を有する微生物の探索を進めた結果、オーレ
オバクテリウム（Aureobacterium）属、シュードモナス
（Pseudomonas）属、カセオバクター（Caseobacter）
属、アルカリゲネス（Alcaligenes）属、アシネトバク
ター（Acinetobacter）属、ブレビバクテリウム（Brevi
bacterium）属またはノカルディア（Nocardia）属に属
する微生物が、該目的を達成し得ることを見出し本発明
を完成した。
すなわち、本発明は、オーレオバクテリウム（Aureob
acterium）属、シュードモナス（Pseudomonas）属、カ
セオバクター（Caseobacter）属、ブレビバクテリウム
（Brevibacterium）属またはノカルディア（Nocardia）
属に属し、下記一般式〔Ｉ〕で示されるR,S−マンデロ
ニトリル誘導体のニトリル基を立体選択的に加水分解す
る能力を有する微生物または該処理物を、中性付近ない
し塩基性の水性媒体中で、一般式〔Ｉ〕で示されるR,S
−マンデロニトリル誘導体または下記一般式〔II〕で示
されるベンズアルデヒド誘導体と青酸の混合物に作用さ
せることにより、原料の一般式〔Ｉ〕で示されるR,S−
マンデロニトリル誘導体または一般式〔II〕で示される
ベンズアルデヒド誘導体の青酸から直接優位量の下記一
般式〔III〕で示されるＲ（−）−マンデル酸誘導体を
生成せしめることを特徴とするＲ（−）−マンデル酸誘
導体の製造法、である。
acterium）属、シュードモナス（Pseudomonas）属、カ
セオバクター（Caseobacter）属、ブレビバクテリウム
（Brevibacterium）属またはノカルディア（Nocardia）
属に属し、下記一般式〔Ｉ〕で示されるR,S−マンデロ
ニトリル誘導体のニトリル基を立体選択的に加水分解す
る能力を有する微生物または該処理物を、中性付近ない
し塩基性の水性媒体中で、一般式〔Ｉ〕で示されるR,S
−マンデロニトリル誘導体または下記一般式〔II〕で示
されるベンズアルデヒド誘導体と青酸の混合物に作用さ
せることにより、原料の一般式〔Ｉ〕で示されるR,S−
マンデロニトリル誘導体または一般式〔II〕で示される
ベンズアルデヒド誘導体の青酸から直接優位量の下記一
般式〔III〕で示されるＲ（−）−マンデル酸誘導体を
生成せしめることを特徴とするＲ（−）−マンデル酸誘
導体の製造法、である。
〔式中、Ｘはオルト位、メタ位またはパラ位置換を意味
し、置換基はハロゲン原子、ヒドロキシ基、炭素数１〜
３個の脂肪族飽和アルキル基、炭素数１〜３個の脂肪族
飽和アルコキシ基、チオアルキル基、アミノ基、ニトロ
基、フェニル基またはフェノキシ基を示す。〕 〔式中、Ｘの定義は上記一般式〔Ｉ〕および〔II〕と同
じである。〕 上記したところを要旨とする本発明は、一般式〔Ｉ〕
で示されるR,S−マンデロニトリル誘導体が、中性ない
し塩基性の水性媒体中で、一般式〔II〕で示されるベン
ズアルデヒド誘導体と青酸との間で解離平衡することに
より容易にラセミ化するという性質を利用し、このラセ
ミ化反応の系と該マンデロニトリル誘導体の不斉加水分
解活性を有する微生物とを共役させることにより、一般
式〔Ｉ〕で示されるR,S−マンデロニトリル誘導体また
は一般式〔II〕で示されるベンズアルデヒド誘導体と青
酸とを、直接Ｒ−体優位に一般式〔III〕で示されるマ
ンデル酸誘導体に変換し得るとの本発明者らにより見出
された知見に基づくものである。
し、置換基はハロゲン原子、ヒドロキシ基、炭素数１〜
３個の脂肪族飽和アルキル基、炭素数１〜３個の脂肪族
飽和アルコキシ基、チオアルキル基、アミノ基、ニトロ
基、フェニル基またはフェノキシ基を示す。〕 〔式中、Ｘの定義は上記一般式〔Ｉ〕および〔II〕と同
じである。〕 上記したところを要旨とする本発明は、一般式〔Ｉ〕
で示されるR,S−マンデロニトリル誘導体が、中性ない
し塩基性の水性媒体中で、一般式〔II〕で示されるベン
ズアルデヒド誘導体と青酸との間で解離平衡することに
より容易にラセミ化するという性質を利用し、このラセ
ミ化反応の系と該マンデロニトリル誘導体の不斉加水分
解活性を有する微生物とを共役させることにより、一般
式〔Ｉ〕で示されるR,S−マンデロニトリル誘導体また
は一般式〔II〕で示されるベンズアルデヒド誘導体と青
酸とを、直接Ｒ−体優位に一般式〔III〕で示されるマ
ンデル酸誘導体に変換し得るとの本発明者らにより見出
された知見に基づくものである。
本発明で使用する微生物は、例えば、オーレオバクテ
リウム テスタセウム（Aureobacterium testaceum）I
AM 1561、シュードモナス（Pseudomonas）sp.BC13−２
〔微工研条寄第3319号〕、カセオバクター（Caseobacte
r）sp.BC4〔微工研条寄第3316号〕、ブレビバクテリウ
ム アセチリウム（Brevibacterium acetylicum）IAM 1
790およびノカルディア アステロイデス（Nocardia as
teroides）IFO 3384が挙げられ、またこれらの変異株を
用いることもできる。
リウム テスタセウム（Aureobacterium testaceum）I
AM 1561、シュードモナス（Pseudomonas）sp.BC13−２
〔微工研条寄第3319号〕、カセオバクター（Caseobacte
r）sp.BC4〔微工研条寄第3316号〕、ブレビバクテリウ
ム アセチリウム（Brevibacterium acetylicum）IAM 1
790およびノカルディア アステロイデス（Nocardia as
teroides）IFO 3384が挙げられ、またこれらの変異株を
用いることもできる。
これらの微生物のうち、オーレオバクテリウム テス
タセウム IAM 1561、ブレビバクテリウム アセチリカ
ム IAM 1790およびノカルディア アステロイデス IFO
3384は公知であり、東京大学応用微生物研究所（IAM）
または財団法人醗酵研究所（IFO）から容易に入手でき
る。
タセウム IAM 1561、ブレビバクテリウム アセチリカ
ム IAM 1790およびノカルディア アステロイデス IFO
3384は公知であり、東京大学応用微生物研究所（IAM）
または財団法人醗酵研究所（IFO）から容易に入手でき
る。
シュードモナスsp.BC13−２およびカセオバクターsp.
BC4は、本出願人により新たに土壌中より分離されたも
のであり、いずれも上記番号にて工業技術院 微生物工
業技術研究所（微工研）に寄託されており、それぞれの
菌学的性質は以下に示すとおりである。
BC4は、本出願人により新たに土壌中より分離されたも
のであり、いずれも上記番号にて工業技術院 微生物工
業技術研究所（微工研）に寄託されており、それぞれの
菌学的性質は以下に示すとおりである。
以上の菌学的性質をバージェーズ マニュアル オブ
システマティック バクテリオロジー〔Bergey′s Ma
nual of Systematic Bacteriology,1986〕に従って分類
すると、BC13−２はシュードモナス（Pseudomonas）属
およびBC4はカセオバクター（Caseobacter）属に属する
細菌とそれぞれ同定された。
システマティック バクテリオロジー〔Bergey′s Ma
nual of Systematic Bacteriology,1986〕に従って分類
すると、BC13−２はシュードモナス（Pseudomonas）属
およびBC4はカセオバクター（Caseobacter）属に属する
細菌とそれぞれ同定された。
次に本発明の実施態様について説明する。
本発明に使用される微生物の培養は資化し得るグリセ
ロール、グルコース、サッカロースなどの炭素源、尿
素、硫酸アンモニウム、硝酸アンモニウムなどの窒素
源、微生物の生育に必須の塩化マグネシウム、塩化カル
シウム、塩化鉄などの無機栄養素などを含有した通常の
培地を用いて行なわれる。また、これらの培地に酵母エ
キス、肉エキス、糖蜜などの天然培地を添加したものも
使用することができる。
ロール、グルコース、サッカロースなどの炭素源、尿
素、硫酸アンモニウム、硝酸アンモニウムなどの窒素
源、微生物の生育に必須の塩化マグネシウム、塩化カル
シウム、塩化鉄などの無機栄養素などを含有した通常の
培地を用いて行なわれる。また、これらの培地に酵母エ
キス、肉エキス、糖蜜などの天然培地を添加したものも
使用することができる。
培養初期または中期に生育を大きく阻害しない濃度の
ケイ皮酸ニトリル、ベンジルシアニド、イソブチロニト
リル、ベンゾニトリル、１−シクロヘキセニルアセトニ
トリル、β−フェニルプロピオニトリル、４−シアノピ
リジン、フェニルスルフォニルアセトニトリル、γ−ブ
チロニトリルなどのニトリル類またはイソブチルアミ
ド、４−ピリジンカルボン酸アミド、フェニルアセトア
ミドなどのアミド類を酵素誘導物質として添加すること
により高い酵素活性が得られる。
ケイ皮酸ニトリル、ベンジルシアニド、イソブチロニト
リル、ベンゾニトリル、１−シクロヘキセニルアセトニ
トリル、β−フェニルプロピオニトリル、４−シアノピ
リジン、フェニルスルフォニルアセトニトリル、γ−ブ
チロニトリルなどのニトリル類またはイソブチルアミ
ド、４−ピリジンカルボン酸アミド、フェニルアセトア
ミドなどのアミド類を酵素誘導物質として添加すること
により高い酵素活性が得られる。
使用する培地のpHは４〜10、培養温度は５〜50℃の範
囲で選べばよく、培養は１〜14日程度、好気的に行い、
活性が最大となるまで継続すればよい。
囲で選べばよく、培養は１〜14日程度、好気的に行い、
活性が最大となるまで継続すればよい。
R,S−マンデロニトリル誘導体の不斉加水分解反応
は、上記の方法において培養した微生物の菌体または菌
体処理物（菌体の破砕物、粗・精製酵素、固定化菌体・
酵素等）を水または緩衝液等の水性媒体中で、R,S−マ
ンデロニトリル誘導体またはベンズアルデヒドと青酸の
混合物に接触させることによって行われる。本発明にお
いては、前述のようにマンデロニトリル誘導体をラセミ
化するために、反応系を中性付近ないしは塩基性に保つ
ことが必須であり、pHを４〜11、好ましくは６〜10に調
整する。その他、本発明における反応条件はベンズアル
デヒド誘導体や青酸に対する酵素の感受性により一概に
特定し得ないが、通常、反応液中マンデロニトリル誘導
体は0.1〜10重量％、好ましくは0.2〜5.0重量％、ベン
ズアルデヒド誘導体は0.1〜10重量％、好ましくは0.2〜
5.0重量％、青酸は0.1〜1.0重量％、好ましくは0.1〜0.
5重量％であり、マンデロニトリル誘導体等基質に対す
る微生物の使用量は、乾燥菌体として0.01〜5.0重量
％、反応温度は０〜50℃、好ましくは10〜30℃で0.1〜1
00時間反応させればよい。また、R,S−マンデロニトリ
ル誘導体もしくはベンズアルデヒド誘導体が、水性媒体
に対する溶解度が著しく小さい場合には、反応は均一相
でも行えるが、反応液中に0.1〜10重量％の濃度となる
ようにTriton X−100,Tween 60などの界面活性剤または
混合溶媒としてエタノール、ジメチルスルホキシド（以
下、DMSOと省略する。）を添加することにより、反応を
効率よく行うことができる。
は、上記の方法において培養した微生物の菌体または菌
体処理物（菌体の破砕物、粗・精製酵素、固定化菌体・
酵素等）を水または緩衝液等の水性媒体中で、R,S−マ
ンデロニトリル誘導体またはベンズアルデヒドと青酸の
混合物に接触させることによって行われる。本発明にお
いては、前述のようにマンデロニトリル誘導体をラセミ
化するために、反応系を中性付近ないしは塩基性に保つ
ことが必須であり、pHを４〜11、好ましくは６〜10に調
整する。その他、本発明における反応条件はベンズアル
デヒド誘導体や青酸に対する酵素の感受性により一概に
特定し得ないが、通常、反応液中マンデロニトリル誘導
体は0.1〜10重量％、好ましくは0.2〜5.0重量％、ベン
ズアルデヒド誘導体は0.1〜10重量％、好ましくは0.2〜
5.0重量％、青酸は0.1〜1.0重量％、好ましくは0.1〜0.
5重量％であり、マンデロニトリル誘導体等基質に対す
る微生物の使用量は、乾燥菌体として0.01〜5.0重量
％、反応温度は０〜50℃、好ましくは10〜30℃で0.1〜1
00時間反応させればよい。また、R,S−マンデロニトリ
ル誘導体もしくはベンズアルデヒド誘導体が、水性媒体
に対する溶解度が著しく小さい場合には、反応は均一相
でも行えるが、反応液中に0.1〜10重量％の濃度となる
ようにTriton X−100,Tween 60などの界面活性剤または
混合溶媒としてエタノール、ジメチルスルホキシド（以
下、DMSOと省略する。）を添加することにより、反応を
効率よく行うことができる。
かくして、R,S−マンデロニトリル誘導体またはベン
ズアルデヒド誘導体と青酸は水性媒体中で起こる解離平
衡反応によるラセミ化反応と微生物によるニトリルの不
斉加水分解反応との共役により高収率で光学活性なマン
デル酸誘導体に変換され蓄積される。生成物の単離は、
菌体等の不溶物を除去した反応液につき、濃縮、イオン
交換、電気透析、抽出、晶析などの公知の方法を利用し
て行なうことができる。
ズアルデヒド誘導体と青酸は水性媒体中で起こる解離平
衡反応によるラセミ化反応と微生物によるニトリルの不
斉加水分解反応との共役により高収率で光学活性なマン
デル酸誘導体に変換され蓄積される。生成物の単離は、
菌体等の不溶物を除去した反応液につき、濃縮、イオン
交換、電気透析、抽出、晶析などの公知の方法を利用し
て行なうことができる。
本発明によれば、ラセミ体のR,S−マンデロニトリル
誘導体またはベンズアルデヒド誘導体と青酸から直接優
位量（50〜100％）のＲ（−）−マンデル酸誘導体が製
造でき、化学量論的に全ての原料をＲ（−）−マンデル
酸誘導体に変換することも可能であり、極めて効率のよ
いＲ（−）−マンデル酸誘導体の製造法を提供し得る。
誘導体またはベンズアルデヒド誘導体と青酸から直接優
位量（50〜100％）のＲ（−）−マンデル酸誘導体が製
造でき、化学量論的に全ての原料をＲ（−）−マンデル
酸誘導体に変換することも可能であり、極めて効率のよ
いＲ（−）−マンデル酸誘導体の製造法を提供し得る。
次に、本発明を実施例により更に詳細に説明するが、
本発明はこれら実施例に限定されるものではない。
本発明はこれら実施例に限定されるものではない。
実施例１ （１） 培養 オーレオバクテリウム テスタセウム IAM 1561株を
下記の条件で培養した。
下記の条件で培養した。
ｉ）培 地 （Ａ培地） グリセロール 20 g/ 酵母エキス 6 g/ リン酸一カリウム 6.8g/ リン酸二ナトリウム 7.1g/ 硫酸ナトリウム 2.8g/ 塩化マグネシウム 0.4g/ 塩化カルシウム ４×10-2g/ 硫酸マンガン ４×10-3g/ 塩化鉄 ６×10-4g/ 硫酸亜鉛 ３×10-4g/ 蒸留水 1000 ml pH 7.5 （Ｂ培地） Ａ培地に0.02重量％の１−シクロヘキセニルアセトニ
トリルを添加した。
トリルを添加した。
ii）培養条件 好気的条件下にＡ培地にて30℃、72時間培養後、得ら
れた菌体を更にＢ培地にて30℃、90時間培養した。
れた菌体を更にＢ培地にて30℃、90時間培養した。
（２） R,S−クロロマンデロニトリルからのＲ（−）
−２−クロロマンデル酸の生産 得られた培養液から菌体を分離して50mM−リン酸緩衝
液（pH7.5）で洗浄し、同リン酸緩衝液10mlに懸濁し、
休止菌体反応液を調製した（OD630＝26）。この液にR,S
−クロロマンデロニトリルを14.5mMの濃度となるように
添加し、30℃で３時間反応を行った。反応終了液から遠
心分離により菌体を除去した後、その上清を液体クロマ
トグラフィー（カラム;SHODEX ODS F511A、キャリア;0.
2M H3PO4:アセトニトリル＝4:1、モニター;208nm）で分
析したところ、12.9mMの２−クロロマンデル酸が生成し
ていた（収率;89％）。また、生成した２−クロロマン
デル酸の光学純度を光学分割用キラルセル（CHIRALPAK
WH column）により分析したところ、98.2％eeのＲ
（−）−２−クロロマンデル酸が確認された。
−２−クロロマンデル酸の生産 得られた培養液から菌体を分離して50mM−リン酸緩衝
液（pH7.5）で洗浄し、同リン酸緩衝液10mlに懸濁し、
休止菌体反応液を調製した（OD630＝26）。この液にR,S
−クロロマンデロニトリルを14.5mMの濃度となるように
添加し、30℃で３時間反応を行った。反応終了液から遠
心分離により菌体を除去した後、その上清を液体クロマ
トグラフィー（カラム;SHODEX ODS F511A、キャリア;0.
2M H3PO4:アセトニトリル＝4:1、モニター;208nm）で分
析したところ、12.9mMの２−クロロマンデル酸が生成し
ていた（収率;89％）。また、生成した２−クロロマン
デル酸の光学純度を光学分割用キラルセル（CHIRALPAK
WH column）により分析したところ、98.2％eeのＲ
（−）−２−クロロマンデル酸が確認された。
実施例２ （１） 培養と菌体の調製 オーレオバクテリウム テスタセウム IAM 1561株を
実施例１と同様の条件で培養し、菌体懸濁液（OD630＝2
6）を調製した。
実施例１と同様の条件で培養し、菌体懸濁液（OD630＝2
6）を調製した。
（２） ２−クロロベンズアルデヒドと青酸からのＲ
（−）−２−クロロマンデル酸の生産 ２−クロロベンズアルデヒドと青酸を各々について14
mMとなるように菌体懸濁液に添加し、30℃で３時間振盪
しながら反応を行った。反応終了液から菌体を除去した
後、実施例１と同様の分析条件により分析したところ、
13.2mMの２−クロロマンデル酸が生成しており（収率;9
4.3％）、光学純度は98.1％eeであった。
（−）−２−クロロマンデル酸の生産 ２−クロロベンズアルデヒドと青酸を各々について14
mMとなるように菌体懸濁液に添加し、30℃で３時間振盪
しながら反応を行った。反応終了液から菌体を除去した
後、実施例１と同様の分析条件により分析したところ、
13.2mMの２−クロロマンデル酸が生成しており（収率;9
4.3％）、光学純度は98.1％eeであった。
実施例３ （１） 培養と菌体の調製 オーレオバクテリウム テスタセウム IAM 1561株を
実施例１と同様の条件で培養し、菌体懸濁液（OD630＝5
8.1）を調製した。
実施例１と同様の条件で培養し、菌体懸濁液（OD630＝5
8.1）を調製した。
（２） ４−フェニルベンズアルデヒドと青酸からのＲ
（−）−４−フェニルマンデル酸の生産 菌体懸濁液に対し４−フェニルベンズアルデヒドと青
酸を各々1.0mM、DMSOが1.4M（10重量％）となるように
添加し、30℃で23時間反応を行った。反応終了液から菌
体を除去した後、実施例１と同様に液体クロマトグラフ
ィーで分析したところ、0.71mMの４−フェニルマンデル
酸が生成していた（収率;71％）。また、その光学純度
を分析したところ、76.7％eeのＲ（−）−４−フェニル
マンデル酸であった。
（−）−４−フェニルマンデル酸の生産 菌体懸濁液に対し４−フェニルベンズアルデヒドと青
酸を各々1.0mM、DMSOが1.4M（10重量％）となるように
添加し、30℃で23時間反応を行った。反応終了液から菌
体を除去した後、実施例１と同様に液体クロマトグラフ
ィーで分析したところ、0.71mMの４−フェニルマンデル
酸が生成していた（収率;71％）。また、その光学純度
を分析したところ、76.7％eeのＲ（−）−４−フェニル
マンデル酸であった。
実施例４ オーレオバクテリウム テスタセウム IAM 1561株を
用いて、表−１に示した各種Ｒ（−）−マンデル酸誘導
体の生産を行った。
用いて、表−１に示した各種Ｒ（−）−マンデル酸誘導
体の生産を行った。
（１） 培養と菌体の調製 オーレオバクテリウム テスタセウム IAM 1561株を
実施例１と同様の条件で培養し、菌体懸濁液を調製し
た。
実施例１と同様の条件で培養し、菌体懸濁液を調製し
た。
（２） Ｒ（−）−マンデル酸誘導体の生産 菌体懸濁液（OD630＝５〜79.3）に対し、R,S−マンデ
ロニトリル誘導体、またはベンズアルデヒド誘導体と青
酸とを表−１に示した濃度で各々添加し、30℃で２〜20
時間振盪しながら反応した。
ロニトリル誘導体、またはベンズアルデヒド誘導体と青
酸とを表−１に示した濃度で各々添加し、30℃で２〜20
時間振盪しながら反応した。
反応終了液から菌体を除去した後、実施例１に示した
方法により、液体クロマトグラフィーで分析し反応収率
と生成物の光学純度を求めた。
方法により、液体クロマトグラフィーで分析し反応収率
と生成物の光学純度を求めた。
結果を表−１に示した。
実施例５ シュードモナス sp.BC13−２株を用いてＲ（−）−マ
ンデル酸誘導体の生産を行った。
ンデル酸誘導体の生産を行った。
（１） 培養と菌体の調製 シュードモナス sp.BC13−２株を実施例１と同様の条
件で培養し菌体懸濁液を調製した。
件で培養し菌体懸濁液を調製した。
（２） Ｒ（−）−マンデル酸誘導体の生産 実施例４と同様に菌体懸濁液（OD630＝９〜99.7）に
対し、R,S−マンデロニトリル誘導体またはベンズアル
デヒド誘導体と青酸とを表−２に示した濃度で各々添加
し、30℃で４〜24時間振盪しながら反応した。反応終了
液から菌体を除去した後、実施例１に示した方法により
液体クロマトグラフィーで分析し、反応収率と生成物の
光学純度を求めた。
対し、R,S−マンデロニトリル誘導体またはベンズアル
デヒド誘導体と青酸とを表−２に示した濃度で各々添加
し、30℃で４〜24時間振盪しながら反応した。反応終了
液から菌体を除去した後、実施例１に示した方法により
液体クロマトグラフィーで分析し、反応収率と生成物の
光学純度を求めた。
結果を表−２に示した。
実施例６ カセオバクター sp.BC4株を用いて、Ｒ（−）−マン
デル酸誘導体の生産を行った。
デル酸誘導体の生産を行った。
（１） 培養と菌体の調製 カセオバクター sp.BC4株を実施例１と同様の条件で
培養し、菌体懸濁液を調製した。
培養し、菌体懸濁液を調製した。
（２） Ｒ（−）−マンデル酸誘導体の生産 実施例４と同様に菌体懸濁液（OD630＝13または39）
に対し、R,S−マンデロニトリル誘導体またはベンズア
ルデヒド誘導体と青酸とを表−３に示した濃度で各々添
加し、30℃で２〜20時間振盪しながら反応した。反応終
了液から菌体を除去した後、実施例１に示した方法によ
り液体クロマトグラフィーで分析し、反応収率と生成物
の光学純度を求めた。
に対し、R,S−マンデロニトリル誘導体またはベンズア
ルデヒド誘導体と青酸とを表−３に示した濃度で各々添
加し、30℃で２〜20時間振盪しながら反応した。反応終
了液から菌体を除去した後、実施例１に示した方法によ
り液体クロマトグラフィーで分析し、反応収率と生成物
の光学純度を求めた。
結果を表−３に示した。
実施例７ ブレビバクテリウム アセチリウム IAM 1790株を用
いて、Ｒ（−）−マンデル酸誘導体の生産を行った。
いて、Ｒ（−）−マンデル酸誘導体の生産を行った。
（１） 培養 ブレビバクテリウム アセチリウム IAM 1790株を下
記の条件で培養した。
記の条件で培養した。
ｉ）培 地 グリセロール 5 g/ 酵母エキス 0.2g/ リン酸一カリウム 6.8g/ リン酸二ナトリウム 7.1g/ 硫酸ナトリウム 2.8g/ 塩化マグネシウム 0.4g/ 塩化カルシウム ４×10-2g/ 硫酸マンガン ４×10-3g/ 塩化鉄 ６×10-4g/ 硫酸亜鉛 ３×104g/ ベンジルシアニド 0.5g/ 寒 天 18 g/ 蒸留水 1000 ml pH 7.5 ii）培養条件 培地を調製し30℃、72時間培養した。
（２） Ｒ（−）−マンデル酸誘導体の生産 平板培地から菌体を採取し50mMリン酸緩衝液（pH7.
5）で１回洗浄し、同リン酸緩衝液10mlに懸濁して反応
用休止菌体懸濁液（OD630＝30）を調製した。この液に
表−４に示したベンズアルデヒド誘導体と青酸とを各々
添加し、30℃で20時間振盪しながら反応させた。反応終
了液は菌体を除去した後、実施例１に示した方法により
分析し反応収率と生成物の光学純度を求めた。
5）で１回洗浄し、同リン酸緩衝液10mlに懸濁して反応
用休止菌体懸濁液（OD630＝30）を調製した。この液に
表−４に示したベンズアルデヒド誘導体と青酸とを各々
添加し、30℃で20時間振盪しながら反応させた。反応終
了液は菌体を除去した後、実施例１に示した方法により
分析し反応収率と生成物の光学純度を求めた。
結果を表−４に示した。
実施例８ ノカルディア アステロイデス IFO 3384株を用い
て、Ｒ（−）−マンデル酸誘導体の生産を行った。
て、Ｒ（−）−マンデル酸誘導体の生産を行った。
（１） 培養と菌体の調製 ノカルディア アステロイデス IFO 3384株を実施例
７と同様の条件で培養し、菌体懸濁液（OD630＝30）を
調製した。
７と同様の条件で培養し、菌体懸濁液（OD630＝30）を
調製した。
（２） Ｒ（−）−マンデル酸誘導体の生産 菌体懸濁液に表−５に示したベンズアルデヒド誘導体
と青酸とを各々添加し、実施例９と同様に反応を行い生
成物の分析を行った。
と青酸とを各々添加し、実施例９と同様に反応を行い生
成物の分析を行った。
結果を表−５に示した。
───────────────────────────────────────────────────── フロントページの続き (51)Int.Cl.6 識別記号 庁内整理番号 ＦＩ 技術表示箇所 (Ｃ１２Ｐ 41/00 Ｃ１２Ｒ 1:13） (Ｃ１２Ｐ 41/00 Ｃ１２Ｒ 1:365）
Claims (2)
- 【請求項１】オーレオバクテリウム（Aureobacterium）
属、シュードモナス（Pseudomonas）属、カセオバクタ
ー（Caseobacter）属、ブレビバクテリウム（Brevibact
erium）属またはノカルディア（Nocardia）属に属し、
下記一般式〔Ｉ〕で示されるR,S−マンデロニトリル誘
導体のニトリル基を立体選択的に加水分解する能力を有
する微生物または該処理物を、中性付近ないし塩基性の
水性媒体中で、一般式〔Ｉ〕で示されるR,S−マンデロ
ニトリル誘導体に作用させることにより、原料の一般式
〔Ｉ〕で示されるR,S−マンデロニトリル誘導体から直
接優位量の下記一般式〔III〕で示されるＲ（−）−マ
ンデル酸誘導体を生成せしめることを特徴とするＲ
（−）−マンデル酸誘導体の製造法。 〔式中、Ｘはオルト位、メタ位またはパラ位置換を意味
し、置換基はハロゲン原子、ヒドロキシ基、炭素数１〜
３個の脂肪族飽和アルキル基、炭素数１〜３個の脂肪族
飽和アルコキシ基、チオアルキル基、アミノ基、ニトロ
基、フェニル基またはフェノキシ基を表す。〕 - 【請求項２】オーレオバクテリウム（Aureobacterium）
属、シュードモナス（Pseudomonas）属、カセオバクタ
ー（Caseobacter）属、ブレビバクテリウム（Brevibact
erium）属またはノカルディア（Nocardia）属に属し、
下記一般式〔Ｉ〕で示されるR,S−マンデロニトリル誘
導体のニトリル基を立体選択的に加水分解する能力を有
する微生物または該処理物を、中性付近ないし塩基性の
水性媒体中で、下記一般式〔II〕で示されるベンズアル
デヒド誘導体と青酸の混合物に作用させることにより、
原料の一般式〔II〕で示されるベンズアルデヒド誘導体
と青酸から直接優位量の下記一般式〔III〕で示される
Ｒ（−）−マンデル酸誘導体を生成せしめることを特徴
とするＲ（−）−マンデル酸誘導体の製造法。 〔式中、Ｘはオルト位、メタ位またはパラ位置換を意味
し、置換基はハロゲン原子、ヒドロキシ基、炭素数１〜
３個の脂肪族飽和アルキル基、炭素数１〜３個の脂肪族
飽和アルコキシ基、チオアルキル基、アミノ基、ニトロ
基、フェニル基またはフェノキシ基を表す。〕
Priority Applications (4)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP2214915A JP2698936B2 (ja) | 1990-08-16 | 1990-08-16 | Ｒ（‐）―マンデル酸誘導体の製造法 |
| DE69131217T DE69131217T2 (de) | 1990-03-30 | 1991-03-28 | Verfahren zur Herstellung von R(-)Mandelsäure und deren Derivaten |
| EP91302802A EP0449648B1 (en) | 1990-03-30 | 1991-03-28 | Process for producing R(-)-mandelic acid and derivatives thereof |
| US07/677,175 US5223416A (en) | 1990-03-30 | 1991-03-29 | Process for producing r(-)-mandelic acid and derivatives thereof |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP2214915A JP2698936B2 (ja) | 1990-08-16 | 1990-08-16 | Ｒ（‐）―マンデル酸誘導体の製造法 |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| JPH0499496A JPH0499496A (ja) | 1992-03-31 |
| JP2698936B2 true JP2698936B2 (ja) | 1998-01-19 |
Family
ID=16663689
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| JP2214915A Expired - Lifetime JP2698936B2 (ja) | 1990-03-30 | 1990-08-16 | Ｒ（‐）―マンデル酸誘導体の製造法 |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| JP (1) | JP2698936B2 (ja) |
Families Citing this family (7)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| JP2696127B2 (ja) * | 1990-03-22 | 1998-01-14 | 旭化成工業株式会社 | 光学活性な２―ヒドロキシカルボン酸の製造法 |
| DE69620847T3 (de) | 1995-11-10 | 2008-11-27 | Mitsubishi Rayon Co., Ltd. | Verfahren zur Herstellung einer alpha-Hydroxy-säure oder eines alpha-Hydroxy-amids mittels Mikroorganismen |
| EP1103812B1 (en) * | 1998-08-07 | 2015-11-18 | Sekisui Chemical Co., Ltd. | Method for determining hemoglobins |
| WO2001017944A1 (fr) | 1999-09-07 | 2001-03-15 | Mitsubishi Rayon Co., Ltd. | Procede relatif a l'elaboration d'aminoalcool optiquement actif |
| US6582943B1 (en) | 2002-02-05 | 2003-06-24 | E. I. Du Pont De Nemours And Company | Method for producing 2-hydroxyisobutyric acid and methacrylic acid from acetone cyanohydrin |
| US7871802B2 (en) | 2007-10-31 | 2011-01-18 | E.I. Du Pont De Nemours And Company | Process for enzymatically converting glycolonitrile to glycolic acid |
| WO2010098505A1 (ja) * | 2009-02-27 | 2010-09-02 | 学校法人慶應義塾 | 新規な光学活性マンデル酸及びその誘導体の製造方法 |
Citations (2)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| JPH0284198A (ja) * | 1988-06-27 | 1990-03-26 | Asahi Chem Ind Co Ltd | 光学活性なα―置換有機酸の製造方法 |
| JPH03277292A (ja) * | 1990-03-22 | 1991-12-09 | Asahi Chem Ind Co Ltd | 光学活性な２―ヒドロキシカルボン酸の製造法 |
-
1990
- 1990-08-16 JP JP2214915A patent/JP2698936B2/ja not_active Expired - Lifetime
Patent Citations (2)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| JPH0284198A (ja) * | 1988-06-27 | 1990-03-26 | Asahi Chem Ind Co Ltd | 光学活性なα―置換有機酸の製造方法 |
| JPH03277292A (ja) * | 1990-03-22 | 1991-12-09 | Asahi Chem Ind Co Ltd | 光学活性な２―ヒドロキシカルボン酸の製造法 |
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| JPH0499496A (ja) | 1992-03-31 |
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