JPH0499496A

JPH0499496A - Ｒ（‐）―マンデル酸誘導体の製造法

Info

Publication number: JPH0499496A
Application number: JP21491590A
Authority: JP
Inventors: Koji Tamura; 鋼二田村; Ryuichi Endo; 隆一遠藤
Original assignee: Nitto Chemical Industry Co Ltd
Current assignee: Nitto Chemical Industry Co Ltd
Priority date: 1990-08-16
Filing date: 1990-08-16
Publication date: 1992-03-31
Anticipated expiration: 2013-01-19
Also published as: JP2698936B2

Abstract

(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。

Description

【発明の詳細な説明】〔産業上の利用分野〕本発明はＲ（−）−マンデル酸誘導体の製造法に関する
。更に詳しくは、後記一般式（１）で示されるＲ、Ｓ−
マンゾロニトリル誘導体に対してニトリル不斉加水分解
活性を有する微生物を作用させ、後記一般式（Ｉｌｌ）
で示されるＲ（−）−マンデル酸誘導体を製造する方法
に関する。該マンデル酸誘導体は多種の医農薬品の合成
原料として工業的に重要である。

〔従来の技術とその問題点〕

Ｒ（−）−マンデル酸ｇ導体の生物学的製造法としは、
（］）］Ｄ−オキシニトリラーにより不斉合成した置換
Ｒ（−）−マンゾロニトリルの加水分解による製造法（
特開昭６３−２１９３８８号、特開平２−５８８５号各
公報参照）、（２）アルカリ土類金属、シュウトモナス
属、ロドシュウドモナス属、コリネバクテリウム属、ア
シネトバクタ−属、バチルス属、マイコノ〈クテリウム
属、ロドコッカス属またはキャンデイダ属の微生物によ
る置換マンゾロニトリルまたは置換マンデルアミドの不
斉加水分解によるＲ（−）マンデル酸誘導体の製造法（
特開平２−８４１９８号公報参照）などが知られている
。

しかしながら、（］）の］Ｄ−オキシニトリラーゼにお
いては、光学活性置換マンゾロニトリルが得られたとい
う基礎的知見の開示にすぎず、未だ充分な工業化研究は
行われていない、（２）の置換マンゾロニトリルまたは
置換マンデルアミドの不斉加水分解法に関しては、ラセ
ミ体の原料から直接優位量の光学活性体を製造するもの
ではなく、残存する他方の光学活性体の処理が必要とな
る。また、同公報には置換マンゾロニトリルからのＲ（
−）−マンデル酸誘導体の製造についての具体例も無く
、Ｉｔ（−）−マンデル酸誘導体が効率よ（高い光学純
度で得られるかどうかについては全く不明である。

このように従来公知の方法は種々の問題点を含み、Ｒ（
−）−マンデル酸誘導体の製造に関して、いずれの方法
も工業的に有利な製造法とはなり難い。

〔問題点を解決するための手段］本発明者らはＲ，Ｓ−マンゾロニトリルまたはベンズア
ルデヒドと青酸を原料とし、Ｒ（−）−マンデル酸を工
業的に有利に製造する方法の開発を目的として検討を進
めた結果、先に、Ｒ，Ｓ−マンゾロニトリルまたはベン
ズアルデヒドと青酸を、中性付近ないしは塩基性の水性
媒体中で、ツユ−トモナス（Ｐｓｅｕｄｏｓｏｎａｓ）
属、アルカリゲネス（Ａｌｃａｌｉｇｅｎｅｓ）属、ア
シネトバクタ−（Ａｃｉｎｅｔｏｂａｃｔｅｒ）属また
はカセオバクタ−（Ｃａｓｅｏｂａｃｔｅｒ）　ＷＡ等
の微生物を用いて、中性ないし塩基性の水性媒体中で、
Ｒ，Ｓ−マンゾロニトリルまたはベンズアルデヒドと青
酸からほぼ化学量論的にＲ（−）−マンデル酸を生成し
得ることを見出し特許出願した（特願平２−８０６９４
号明細書参照）、その後、さらに後記一般式［１）で示
されるＲ、Ｓ−マンゾロニトリル誘導体に対してニトリ
ル不斉加水分解活性を有する微生物の探索を進めた結果
、オーレオバクテリウム（Ａｕｒｅｏｂａｃｔｅｒｉｕ
ｍ）　Ｉｉ、シュードモナス（Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ
）属、カセオバクター（Ｃａｓｅｏｂａｃｔｅｒ）属・
アルカリゲネス（Ａｌｃａｌｉｇｅｎｅｓ）属、アシネ
トバクタ−（Ａｃｉｎｅｔｏｂａｃｔｅｒ）属、ブレビ
バクテリウム（Ｂｒｅｖｉｂａｃｔｅｒｉｕ＋＋）　属
またはノカルデイア（Ｎｏｃａｒｄｉａ）属に属する微
生物が、該目的を達成し得ることを見出し本発明を完成
した。

すなわち、本発明は、オーレオバクテリウム（Ａｕｒｅ
ｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ）属、シュードモナス（Ｐｓｅｕ
ｄｏｓ。

ｎａｓ）属、カセオバクター（Ｃａｓｅｏｂａｃｔｅｒ
）　Ｉ、アルカリゲネス（Ａｌｃａｌｉｇｅｎｅｓ）　
Ｉｉ、アンネトバクター（Ａｃｉｎｅｔｏｂａｃｔｅｒ
）属、ブレビバクテリウム（Ｂｒｅｖｉｂａｃｔｅｒｉ
ｕｍ）属またはノカルデイア（Ｎｏｃａｒｄｉａ）属に
属し、下記一般式〔Ｉ〕で示されるＲ、Ｓ−マンゾロニ
トリル誘導体のニトリル基を立体選択的に加水分解する
能力を有する微生物または該処理物を、中性付近ないし
塩基性の水性媒体中で、一般式〔Ｉ〕で示されるＲ、Ｓ
−マンゾロニトリル誘導体または下記一般式（ＩＮで示
されるベンズアルデヒド誘導体と青酸の混合物に作用さ
せることにより、原料の一般式ＣＩ）で示されるＲ、Ｓ
−マンゾロニトリル誘導体または一般式［１１）で示さ
れるベンズアルデヒド誘導体と青酸から直接優位量の下
記−般式（Ｉｌｌ）で示されるＲ（−）−マンデル酸誘
導体を生成せしめることを特徴とするＲ（−）−マンデ
ル酸誘導体の製造法、である。

Ｈ（１）　　　　　　　　　　　　　［Ｉｌ）〔式中、Ｘ
はオルト位、メタ位またはパラ位置換を意味し、置換基
はハロゲン原子、ヒドロキシ基、炭素数１〜３個の脂肪
族飽和アルキル基、炭素数１〜３個の脂肪族飽和アルコ
キシ基、チオアルキル基、アミノ基、ニトロ基、フェニ
ル基またはフェノキシ基を表す。〕ＨＣＩ［ｌ）〔式中、χの定義は上記一般式〔ｌ）および［１１）と
同しである。〕上記したところを要旨とする本発明は、一般式（１）で
示されるＲ、Ｓ−マンゾロニトリル誘導体が、中性ない
し塩基性の水性媒体中で、−ａ式〔■〕で示されるベン
ズアルデヒド誘導体と青酸との間で解Ｍ平衡することに
より容易にラセミ化するという性質を利用し、このラセ
ミ化反応の系と該マンゾロニトリル誘導体の不斉加水分
解活性を存する微生物とを共役させることにより、一般
式〔１〕で示されるＲ、Ｓ−マンゾロニトリル誘導体ま
たは一般式［■）で示されるベンズアルデヒド誘導体と
青酸とを、直接Ｒ一体優位に一般式［１［１）で示され
るマンデル酸誘導体に変換し得るとの本発明者らにより
見出された知見に基づくものである。

本発明で使用する微生物は、例えば、オーレオバクテリ
ウム　テスタセウム（Ａｕｒｅｏｂａｃｔｅｒｉｕ＋＋
ｔｅｓｔａｃｅｕ＋ｉ）　ＪＡＭ　１５６１　、シュー
ドモナス（Ｐｓｅｕｄ。

ｍｏｎａｓ）　ｓｐ、　ＢＣｌ３−２　　（微工研菌寄
第１１２６６号〕、カセオバクター（Ｃａｓｅｏｂａｃ
ｔｅｒ）　ｓｐ、　ＢＣ４Ｃ微工研菌寄第１１２６０号
〕、アルカリゲネス（Ａｌｃａｌｉｇｅｎｅｓ）ｓｐ、
　ＢＣ３５−２（微工研菌寄第１１２６５号〕、アシネ
トバクタ−（Ａｃｉｎｅｔｏｂａｃｔｅｒ）　ｓｐ、　
ＢＣ９−２（微工研菌寄第１１２６２号〕、ブレビバク
テリウム　アセチリカム（Ｂｒｅｖｉｂａｃｔｅｒｉｕ
ｓ　５ｃｅｔｙｌｉｃｕ−）　ＩＡＭ　１７９０および
ノカルデイア　アステロイデス（Ｎｏｃａｒｄｉａ　ａ
ｓｔｅｒｏｉｄｅｓ）　ＩＦＯ３３８４が挙げられ、ま
たこれらの変異株を用いることもできる。

これらの微生物のうち、オーレオバクテリウムテスタセ
ウム　ＩＡＭ　１５６１　、ブレビバクテリウムアセチ
リカムＪＡＭ　１７９０およびノカルデイア　アステロ
イデスＩＦ０３３８４　は公知であり、東京大学応用微
生物研究所（ＪＡＭ）または財団法人醗酵研究所（ＩＦ
Ｏ）から容易に入手できる。

シュードモナスｓｐ、　ＢＣｌ３−２　、カセオハクタ
ーｓｐ、　ＢＣ４アルカリゲネスｓｐ、　ＢＣ３５−２
およびアシネトバクターｓｐ、　ＢＣ９−２は、本出願
人により新たに土壌中より分離されたものであり、いず
れも上記番号にて工業技術院　微生物工業技術研究所（
微工研）に寄託されており、それぞれの菌学的性質は以
下に示すとおりである。

ＢＣｌ３ユム厘」東形　　　　態ダラム染色性芽　　　　胞運　　動　　性鞭毛オキシダーゼ桿　　菌十極　　毛＋カタラーゼ十Ｆシｆｆｌ形　　　　態多形性桿菌ダラム染色性＋芽　　　　胞運　　動　　性オキシダーゼカタラーゼｒｏｄ−ｃｏｃｃｕｓ　ｃｙｃｌｅ集落の周辺細胞の伸長嫌気下での生育細胞壁のジアミノ酸＋＋認めず ■ｅｓｏ−ジアミノピメリ　ン６変クリフリル試験（アセチル型）ｔＨｍＷ（ｒ）ｔ！ＩＭ成アラビノースガラクトースキノン系 ■１Ｌ月１床形　　　　態＋十ＨＫ−８（１１２）桿　　菌ダラム染色性芽　　　胞運　　動　　性鞭毛オキシダーゼカタラーゼＦ３−ケトラクトース　の産生キノン系影Ｊ二月１淋− 形　　　　態ダラム染色性芽　　　　胞十周　　毛十＋アルカリ化桿　　菌運　　動　　性オキシダーゼカタラーゼ　　　　　　　　　　＋ ○　Ｆ以上の菌学的性質をバージニーズ　マニュアルオフ　ン
ステマテインク　バクテリオロジー（Ｂｅｒｇｅｙ’ｓ
　Ｍａｎｕａｌ　ｏｆ　Ｓｙｓｔｅｍａｔｉｃ　Ｂａｃ
ｔｅｒｉｏｌｏｇｙ１９８６）に従って分類すると、Ｂ
Ｃｌ３−２はシュードモナス（Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ
）属、ＢＣ４はカセオバクター（Ｃａｓｅｏｂａｃｔｅ
ｒ）属、ＢＣ３５−２はアルカリゲネス（＾ｌ−ｃａｌ
ｉｇｅｎｅｓ）属およびＢＣ９−２はアシネトバクタ−
（Ａｃｉｎｅｔｏｂａｃｔｅｒ）属に属する細菌とそれ
ぞれ同定された。

次に本発明の実施態様について説明する。

本発明に使用される微生物の培養は責化し得るグリセロ
ール、グルコース、サッカロースなどの炭素源、尿素、
硫酸アンモニウム、硝酸アンモニウムなどの窒素源、微
生物の生育に必須の塩化マグネシウム、塩化カルシウム
、塩化鉄などの無機栄養素などを含有した通常の培地を
用いて行なゎれる。また、これらの培地に酵母エキス、
肉エキス、糖蜜などの天然培地を添加したものも使用す
ることができる。

培養初期または中期に生育を大きく阻害しないｆｉ度の
ケイ皮酸ニトリル、ペンジルンアニド、イソブチロニト
リル、ペンヅニトリル、１−シクロへキセニルアセトニ
トリル、β−フェニルプロピオニトリル、４−ンアノピ
リジン、フェニルスルフォニルアセトニトリル、γ−ブ
チロニトリルなどのニトリル類またはイソブチルアミド
、４−ピリジンカルボン酸アミド、フェニルアセトアミ
ドなどのアミド類を酵素誘導物質として添加することに
より高い酵素活性が得られる。

使用する培地のｐＨは４〜】０、培養温度は５〜５０℃
の範囲で選べばよく、培養は１〜１４日程度、好気的に
行い、活性が最大となるまで継続すればよい。

Ｒ・Ｓ−マンゾロニトリル誘導体の不斉加水分解反応は
、上記の方法において培養した微生物の菌体または菌体
処理物（Ｍ体の破砕物、粗・精製酵素、固定化菌体・酵
素等）を水または緩衝液等の水性媒体中で、Ｒ，Ｓ−マ
ンゾロニトリル誘導体またはベンズアルデヒドと青酸の
混合物に接触させる二さによって行われる０本発明にお
いては、前述のようにマンゾロニトリル誘導体をラセミ
化するために、反応系を中性付近ないしは塩基性に保つ
ことが必須であり、ｐＨを４〜１１、好ましくは６〜１
０に調整する。その他、本発明における反応条件はベン
ズアルデヒド誘導体や青酸に対する酵素の感受性により
一概に特定し得ないが、通常、反応液中マンゾロニトリ
ル誘導体はｏ、１〜１０重置％、好ましくは０２〜５．
０重量％、ベンズアルデヒド誘導体＋！　０．１〜１０
重１％、好マＬ　＜　ハ０．２〜５．０１！ｉ量％、青
酸は０．１〜１．０重量％、好ましくは０．１〜０．５
重量％であり、マンゾロニトリル誘導体等基質に対する
微生物の使用量は、乾燥菌体として０．０１〜５．０重
蓋％、反応温度は０〜５０’Ｃ２好ましくは１０〜３０
゛Ｃで０．１〜１００時間反応させればよい。

また、Ｒ，Ｓ−マンゾロニトリル誘導体もしくはベンズ
アルデヒド誘導体が、水性媒体に対する溶解度が著しく
小さい場合には、反応は均一相でも行えるが、反応液中
に０．１〜１０重量％の濃度となるようにＴｒｉｔｏｎ
　Ｘ−１００，丁−ｅｅｎ　６０などの界面活性剤また
は混合溶媒としてエタノール、ジメチルスルホキシド（
以下、Ｄ？ＩＳＯと省略する。）を添加することにより
、反応を効率よく行うことができる。

かくして、Ｉｔ、Ｓ−マンゾロニトリル誘導体またはベ
ンズアルデヒド誘導体と青酸は水性媒体中で起こる解離
平衡反応によるラセミ化反応と微生物によるニトリルの
不斉加水分解反応との共役により高収率で光学活性なマ
ンデル酸誘導体に変換され蓄積される。生成物の単離は
、菌体等の不溶物を除去した反応液につき、濃縮、イオ
ン交換、電気透析、抽出、晶析などの公知の方法を利用
して行なうことができる。

〔発明の効果〕

本発明によれば、ラセミ体のＲ，Ｓ−マンゾロニトリル
誘導体またはベンズアルデヒド誘導体と青酸から直接優
位量（５０〜１００χ）のＲ（−）−マンデル酸誘導体
が製造でき、化学量論的に全ての原料をＲ（−）−マン
デル酸誘導体に変換することも可能であり、極めて効率
のよいＲ（−）−マンデル酸誘導体の製造法を提供し得
る。

〔実験例〕

次に、本発明を実施例により更に詳細に説明するが、本
発明はこれら実施例に限定されるものではない。

実施例１（１）　　　培　　養オーレオバクテリウム　テスタセウム　ｒＡＭ１５６１
株を下記の条件で培養した。

ｉ）培　地（Ａ培地）グリセロール　　　　　２０　　ｇ／ｌ酵母エキス　　
　　　　　６ｇ／ｌリン酸−カリウム　　　　６．８ｇ／ｌリン酸二ナトリ
ウム　　　７．１ｇ／ｊ１！硫酸ナトリウム　　　　　
２．８ｇ／ｊ！塩化マグネシウム　　　　０．４ｇ／ｌ
塩化カルシウム　　　４　Ｘｌ０−”　ｇ　／　ｆ硫酸
マンガン　　　　４Ｘ１０′□’ｇ／ｌ塩化鉄　　　　
　　　６Ｘ１０−’ｇ／ｆｇ酸亜鉛　　　　　　３　ｘ
ｌＯ−’　ｇ　／　１蒸留水　　　　　　　　１０００
　　ｄｐＨ７，５（Ｂ培地）Ａ培地に０．０２重量％の１−シクロへキセニルアセト
ニトリルを添加した。

１１）培養条件好気的条件下にＡ培地にて３０°Ｃ１７２時間培養後、
得られた菌体を更にＢ培地にて３０°Ｃ２９０時間培養
した。

（２）　　Ｒ，５−２−クロロマンゾロニトリルからの
Ｒ（−）２−クロロマンデル酸の生産得られた培養液から菌体を分離して５０＋＊Ｍ−リン酸
緩衝液（ｐ）ｌ　７．５）で洗浄し、同リン酸緩衝液１
０紙にＰ！濁し、休止菌体反応液を調製した（００ｔｈ
３゜＝２６）　。

この液にＩｔ、５−２−クロロマンゾロニトリルを１４
．５ｍ門の濃度となるように添加し、３０℃で３時間反
応を行った１反応終了液から遠心分離により菌体を除去
した後、その上清を液体クロマトグラフィー（カーｙ　
ム、　５ＨＯＤＥＸ　ＯＤＳ　Ｐ５１１Ａ、キャリア；
０．２ＭＨ３ＰＯ４：　アセトニトリル＝４：１　モニ
ター；２０８ｎｍ）で分析したところ、１２．９ｍＭの
２−クロロマンデル酸が生成していた（収率；８９％）
、また、生成した２−クロロマンデル酸の光学純度を光
学分割用キラルセル（ＣＨＩＲＡＬＰＡＫ　ＷＨｃｏｌ
ｕｍｎ）により分析したところ、９８．２％ｅｅのＲ（
−）−２−クロロマンデル酸が確認された。

実施例２（１）　　培養と菌体の調製オーレオバクテリウム　テスタセウムＩＡＭ　１５６１
株を実施例１と同様の条件で培養し、菌体懸濁液（ＯＤ
、３゜＝２６）を調製した。

（２）２−クロロベンズアルデヒドと青酸からのＲ（−
）２−クロロマンデル酸の生産２−クロロベンズアルデヒドと青酸を各々について１４
ｍＭとなるように菌体懸濁液に添加し、３０’Ｃで３時
間振盪しながら反応を行った０反応終了液から菌体を除
去した後、実施例１と同様の分析条件により分析したと
ころ、１３，２■Ｈの２−クロロマンデル酸が生成して
おり（収率、　９４．３％）、光学純度は９日、１％ｅ
ｅであった。

実施例３（１）培養と菌体の調製オーレオバクテリウム　テスタセウムＪＡＭ　１５６１
株を実施例１と同様の条件で培養し、菌体懸濁液（ＯＤ
ａｉｏ＝５８．１）を調製した。

（２）４−フェニルベンズアルデヒドと青酸からのＲ（
−）−４−フェニルマンデル酸の生産菌体懸濁液に対し
４−フェニルベンズアルデヒドと青酸を各々１．０日Ｍ
　、［１門ＳＯが１．４Ｍ　（１０重量％）となるよう
に添加し、３０°Ｃで２３時間反応を行った。

反応終了液から菌体を除去した後、実施例１と同様に液
体クロマトグラフィーで分析したところ、０．７１ｍＭ
の４−フェニルマンデル酸が生成していた（収率；７１
％）。また、その光学純度を分析したところ、７６．７
％ｅｅのＲ（−）−４−フェニルマンデル酸であった。

実施例４オーレオバクテリウム　テスタセウムＪＡＮ　１５６１
株を用いて、表−１に示した各種１？（−）−マンデル
酸誘導体の生産を行った。

（１）　　培養と菌体の調製オーレオバクテリウム　テスタセウムＪＡＭ　１５６１
株を実施例１と同様の条件で培養し、菌体懸濁液を調製
した。

（２）　　）ｌ（−）−マンデル酸誘導体の生産菌体懸
濁ｅ（ＯＤ、！、　＝　５〜７９．３）　４：　対し、
Ｉｌ、Ｓ−７ンデロニトリル誘導体、またはベンズアル
デヒド誘導体と青酸とを表−１に示した濃度で各々添加
し、３０°Ｃで２〜２０時間振盪しながら反応した。

反応終了液から菌体を除去した後、実施例１に示した方
法により、液体クロマトグラフィーで分析し反応収率と
生成物の光学純度を求めた。

結果を表−１に示した。

実施例５シュードモナスｓｐ、　ＢＣｌ３−２株を用いてＲ（−
）マンデル酸誘導体の生産を行った。

（１）　　培養と菌体の調製シュードモナスｓｐ、　ＢＣｌ３−２株を実施例１と同
様の条件で培養し菌体懸濁液を調製した。

（２）　　Ｉ？（−）−マンデル酸誘導体の生産実施例
４と同様に菌体懸濁液（ＯＤ６ｉｏ　＝　９〜９９．７
）に対し、Ｒ，Ｓ−マンゾロニトリル誘導体またはベン
ズアルデヒド誘導体と青酸とを表−２に示した濃度で各
々添加し、３０°Ｃで４〜２４時間振盪しながら反応し
た。反応終了液から菌体を除去した後、実施例１に示し
た方法により液体クロマトグラフィーで分析し、反応収
率と生成物の光学純度を求めた。

結果を表−２に示した。

実施例６カセオバクター　ｓｐ、　ＢＣＪ株を用いて、Ｒ（−）
マンデル酸誘導体の生産を行った。

（１）　　培養と菌体の調製カセオバクターｓｐ、　ＢＣＪ株を実施例１と同様の条
件で培養し、菌体懸濁液を調製した。

ｆ２）　　Ｒ（−）−マンデル酸誘導体の生産実施例４
と同様に菌体？ＡｆＡ液（ＯＤｌ。＝１３または３９）
に対し、Ｒ，Ｓ−マンゾロニトリル誘導体またはベンズ
アルデヒド誘導体と青酸とを表−３に示した濃度で各々
添加し、３０°Ｃで２〜２０時間振盪しながら反応した
１反応終了液から菌体を除去した後、実施例１に示した
方法により液体クロマトグラフィーで分析し、反応収率
と生成物の光学純度を求めた。

結果を表−３に示した。

実施例７アルカリゲネスｓｐ、　ＢＣ３５−２株を用いて、Ｒ（
−）マンデル酸誘導体の生産を行った。

（１）　　培養と菌体の調製アルカリゲネスｓｐ、　ＢＣ３５−２株を実施例１と同
様の条件で培養し、菌体懸濁液を調製した。

（２）　　Ｒ（−）−マンデル酸誘導体の生産実施例４
と同様に菌体懸濁液（ＯＤｔｈ３゜＝　１４．８または
２８）に対し、Ｒ，Ｓ−マンゾロニトリル誘導体または
ベンズアルデヒド誘導体と青酸とを表−４に示した濃度
で各々添加し、３０℃で２〜１７時間振盪しながら反応
した０反応終了液から菌体を除去した後、実施例１に示
した方法により液体クロマトグラフィーで分析し、反応
収率と生成物の光学純度を求めた。

結果を表−４に示した。

実施例８アシ７トバクターｓｐ、　ＢＣ９−２株を用いて、Ｒ（
−）マンデル酸誘導体の生産を行った。

（１）　　培養と菌体の調製アシネトバクタ−ｓｐ、　ＢＣ９−２株を実施例１と同
様の条件で培養し菌体懸濁液を調製した。

（２）　　Ｒ（−）−マンデル酸誘導体の生産実施例４
と同様に菌体懸濁液（ＯＤｌ。＝７．１〜２８．２）に
対し、Ｒ，Ｓ−マンゾロニトリル誘導体または置換ベン
ズアルデヒドと青酸とを表−５に示した濃度で各々添加
し、３０°Ｃで９〜２０時間振盪しながら反応した０反
応終了液から菌体を除去した後、実施例１に示した方法
により液体クロマトグラフィーで分析し、反応収率と生
成物の光学純度を求めた。

結果を表−５に示した。

実施例９ブレビバクテリウム　アセチリウム■＾Ｍ　１７９０株
を用いて、Ｒ（−）−マンデル酸誘導体の生産を行った
。

（］）　　　培　　養ブレビバクテリウム　アセチリウムＩＡＭ　１７９０株
を下記の条件で培養した。

）培　地グリセロール　　　　　　５　ｇ／ｌ酵母エキス　　　　　　　　０．２ｇ／ｌリン酸−カリ
ウム　　　　　５．８ｇ／ｊ！リン酸二ナトリウム　　
　　７．１ｇ／ｊ！硫酸ナトリウム　　　　　　２．８
ｇ／ｌ塩化マグネシウム　　　　　０．４ｇ／ｌ塩化カ
ルシウム４×１０−１ｇ／ＩＶ。

硫酸マンガン　　　　　４Ｘ１０−３ｇ／４１！塩化鉄
　　　　　　　　６　Ｘｌ０−’　ｇ　／　ｆ硫酸亜鉛
　　　　　　　３Ｘ１０−’ｇ／ｌベンジルシアニド　
　　　　０．５ｇ／ｌ寒　　天　　　　　　　　　　　
　　　　　　１８　　　　ｇ／ｌ蒸留水　　　　　　　
　　１０００　　ａｔＰＨ７，５ｉｉ　）培養条件培地を調製し３０℃、７２時間培養した。

（２）Ｒ（−）−マンデル酸誘導体の生産平板培地から
菌体を採取し５０ｍＭリン酸緩衝液（ｐＨ７，５）で１
回洗浄し、同リン酸緩衝液１０ａｆに懸濁して反応用休
止菌体懸濁液（００６３゜＝３０）を調製した。この液
に表−６に示したベンズアルデヒド誘導体と青酸とを各
々添加し、３０’Ｃで２０時間振盪しながら反応させた
０反応終了液は菌体を除去した後、実施例１に示した方
法により分析し反応収率と生成物の光学純度を求めた。

結果を表−６に示した。

実施例１Ｏノカルデイア　アステロイデスＩＦ０３３８４株を用い
て、Ｒ（−）−マンデル酸誘導体の生産を行った。

（１）　　培養と菌体の調製ノカルデイア　アステロイデスＩＦ０３３８４株を実施
例９と同様の条件で培養し、菌体懸濁液（ＯＤｔｈ３゜
＝３０）を調製した。

（２１１１（−）−マンデル酸誘導体の生産菌体懸濁液
に表−７に示したベンズアルデヒド誘導体と青酸とを各
々添加し、実施例９と同様に反応を行い生成物の分析を
行った。

結果を表−７に示した。

Claims

【特許請求の範囲】オーレオバクテリウム（Ａｕｒｅｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ
）属、シュードモナス（Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ）属、
カセオバクター（Ｃａｓｅｏｂａｃｔｅｒ）属、アルカ
リゲネス（Ａｌｃａｌｉｇｅｎｅｓ）属、アシネトバク
ター（Ａｃｉｎｅｔｏｂａｃｔｅｒ）属、ブレビバクテ
リウム（Ｂｒｅｖｉｂａｃｔｅｒｉｕｍ）属またはノカ
ルディア（Ｎｏｃａｒｄｉａ）属に属し、下記一般式〔
I 〕で示されるＲ，Ｓ−マンデロニトリル誘導体のニ
トリル基を立体選択的に加水分解する能力を有する微生
物または該処理物を、中性付近ないし塩基性の水性媒体
中で、一般式〔 I 〕で示されるＲ，Ｓ−マンデロニト
リル誘導体または下記一般式〔II〕で示されるベンズア
ルデヒド誘導体と青酸の混合物に作用させることにより
、原料の一般式〔 I 〕で示されるＲ，Ｓ−マンデロニ
トリル誘導体または一般式〔II〕で示されるベンズアル
デヒド誘導体と青酸から直接優位量の下記一般式〔III
〕で示されるＲ（−）−マンデル酸誘導体を生成せしめ
ることを特徴とするＲ（−）−マンデル酸誘導体の製造
法。 ▲数式、化学式、表等があります▼▲数式、化学式、表
等があります▼ 〔 I 〕〔II〕〔式中、Ｘはオルト位、メタ位またはパラ位置換を意味
し、置換基はハロゲン原子、ヒドロキシ基、炭素数１〜
３個の脂肪族飽和アルキル基、炭素数１〜３個の脂肪族
飽和アルコキシ基、チオアルキル基、アミノ基、ニトロ
基、フェニル基またはフェノキシ基を表す。〕 ▲数式、化学式、表等があります▼ 〔III〕〔式中、Ｘの定義は上記一般式〔 I 〕および〔II〕と
同じである。〕