HUT51676A - Process for producing proteins n-terminally beginning with proline - Google Patents
Process for producing proteins n-terminally beginning with proline Download PDFInfo
- Publication number
- HUT51676A HUT51676A HU891661A HU166189A HUT51676A HU T51676 A HUT51676 A HU T51676A HU 891661 A HU891661 A HU 891661A HU 166189 A HU166189 A HU 166189A HU T51676 A HUT51676 A HU T51676A
- Authority
- HU
- Hungary
- Prior art keywords
- proline
- terminal
- proteins
- plasmid
- terminally
- Prior art date
Links
Classifications
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N15/00—Mutation or genetic engineering; DNA or RNA concerning genetic engineering, vectors, e.g. plasmids, or their isolation, preparation or purification; Use of hosts therefor
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K14/00—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
- C07K14/435—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from animals; from humans
- C07K14/52—Cytokines; Lymphokines; Interferons
- C07K14/53—Colony-stimulating factor [CSF]
- C07K14/535—Granulocyte CSF; Granulocyte-macrophage CSF
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N15/00—Mutation or genetic engineering; DNA or RNA concerning genetic engineering, vectors, e.g. plasmids, or their isolation, preparation or purification; Use of hosts therefor
- C12N15/09—Recombinant DNA-technology
- C12N15/11—DNA or RNA fragments; Modified forms thereof; Non-coding nucleic acids having a biological activity
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12P—FERMENTATION OR ENZYME-USING PROCESSES TO SYNTHESISE A DESIRED CHEMICAL COMPOUND OR COMPOSITION OR TO SEPARATE OPTICAL ISOMERS FROM A RACEMIC MIXTURE
- C12P21/00—Preparation of peptides or proteins
- C12P21/06—Preparation of peptides or proteins produced by the hydrolysis of a peptide bond, e.g. hydrolysate products
Landscapes
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Genetics & Genomics (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- Organic Chemistry (AREA)
- Zoology (AREA)
- Wood Science & Technology (AREA)
- Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
- Biomedical Technology (AREA)
- General Engineering & Computer Science (AREA)
- Biotechnology (AREA)
- Molecular Biology (AREA)
- Biochemistry (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Biophysics (AREA)
- Microbiology (AREA)
- Plant Pathology (AREA)
- Physics & Mathematics (AREA)
- Medicinal Chemistry (AREA)
- Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
- Toxicology (AREA)
- Gastroenterology & Hepatology (AREA)
- Immunology (AREA)
- Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
- General Chemical & Material Sciences (AREA)
- Preparation Of Compounds By Using Micro-Organisms (AREA)
- Peptides Or Proteins (AREA)
- Medicines That Contain Protein Lipid Enzymes And Other Medicines (AREA)
- Enzymes And Modification Thereof (AREA)
Description
A találmány tárgya eljárás N-terminálisan prolinnal kezdődő fehérjék előállítására, olymódon, hogy rövid N-terminális meghosszabbítással rendelkező és géntechnológiai utón előállított előterméket aminopeptidáz-P enzimmel enzimatikusan hasítanak.
cifPzilocCö'fiL. iyo
KÖZZÉTÉTELI PÉLDÁNY
Képviselő:
DANUBIA SZABADALMI ÉS VÉDJEGY IRODA
Budapest
51676-ELJÁRÁS N-TERMINÁLISAN PROLINNAL KEZDŐDŐ PROTEINEK ELŐÁLLÍTÁSÁRA
HOECHST AG., Frankfurt am Main,
NÉMET SZÖVETSÉGI KÖZTÁRSASÁG
A feltaláló:
Dr. HABERMANN Paul, Eppstein am Taunus,
NÉMET SZÖVETSÉGI KÖZTÁRSASÁG
A bejelentés napja: 1989. 04. 06.
Elsőbbsége: | 1988. 04. 09. (P 38 11 921.8) NÉMET SZÖVETSÉGI KÖZTÁRSASÁG |
66392-1023/SL ·· ···· ···· • · · • ··· ··· • « ···· · • · • · · • · ···· ♦ ♦ ·
- 2 A találmány tárgya eljárás N-terminálisan prolinnal kezdődő proteinek előállítására.
Ismert olyan eljárás, amellyel géntechnológiai utón N-terminélisan prolinnal kezdődő fehérjéket állítanak elő, azaz először egy hosszabb fehérjét állítanak elő, amelyben a prolin előtt, amely a kívánt fehérje kezdő aminosavja, aszparaginsav vagy rövid, C-terminálisan aszparaginsavat tartalmazó aminosav szekvencia áll. Ezt a köztiterméket proteolitikusan hasítja, amelynek során felszabadul a prolinnal kezdődő kívánt fehérje. Ilyen eljárásokat ismertet a 0 219 781., a 0 227 938. és 0 228 018. számú európai közrebocsátás! irat.
Ezek az eljárások azonban csak akkor alkalmazhatók, ha a felszabaduló fehérje savval szemben megfelelően stabil. De még savval szemben viszonylag stabil fehérjék esetében is fennáll az a veszély, hogy olyan mellékreakciók játszódnak le, amelyek egyrészt közvetlenül csökkentik a kitermelést, másrészt olyan termékelegyet eredményeznek, amelyből a fehérje csak nehezen választható el a nemkivánt melléktermékektől, és ez tovább csökkenti a kitermelést.
Azt találtuk, hogy a fenti korlátok és hátrányok kiküszöbölhetők, ha N-terminálisan prolinnal kezdődő fehérjék előállítása során úgy járunk el, hogy a rövid N-terminális meghosszabbítással rendelkező és géntechnológiailag nyert előterméket aminopeptidáz-P segítségével enzimatikusan ha3 ···· · ·· ···· ···· • · · · · · • · · · ··· ··· • · ···· · · ·♦ · ···· ··· ··· altjuk.
Az előtermékben található rövid N-terminális meghoszszabbitás előnyösen egy metionincsoportból áll a baktériumokból a szokásos közvetlen kifejezéssel nyert fehérjéknél szokásos formában. Kiindulási anyagként előnyösen alkalmazhatók továbbá a közvetlen kifejezéssel nyert termékek feldolgozásánál keletkező olyan fehérjékből álló olyan fehérjeelegyek, amelyek csak részben hordoznak N-terminális metionincsoportot. Az ilyen tipusu fehérjeelegyek az ismert eljárásokkal csak nagyon nehezen dolgozhatók fel.
A kivánt fehérjéknek aminopeptidáz-P enzimmel történő elválasztásánál az enzim méretéből nehézségek nem származnak. Lehetséges továbbá az is, hogy a hasításhoz alkalmazott enzimet önmagában ismert módon immobilizáljuk, például a 0 141 223. és 0 141 224. számú európai szabadalmi leírásban ismertetett eljárással.
Az aminopeptidáz-P enzim A. Yaron és munkatársai; Biochemical and Biophysical Research Communications 32, 658-663 /1968/ irodalomból ismert, ahol leírják azt is, hogy ez az enzim a peptideket végállásu prolinig N-terminálisan támadja. Leválasztott aminosavként azonban csak a semleges glicin, alanin, valin, izoleucin és további prolin aminosavakat, amennyiben ez utóbbit egy újabb prolin követi, valamint a bázikus arginin aminosavat említik.
···· · ·· ···· ···· • · · · · · • · · « ··· ··· • · ···· · · ♦ ♦ · ···· ··· ···
Az amlnopeptldáz-P enzim Yaron és munkatársai által ismertetett eljárással könnyen izolálható. A móltömeg mintegy 2 x 10^ nagyságrendbe esik, amely lehetővé teszi, hogy a kívánt fehérjéktől immobllizálás nélkül elkülönítsük. Ez az enzim tehát kiválóan alkalmas géntechnológiai utón nyert előtermékekből, elsősorban baktériumokból közvetlen kifejezéssel kapott termékekből N-terminálisan prolinnal kezdődő fehérjék előállítására, mivel ez az enzim a metionint is gyorsan és kvantitative lahasitja.
A találmány szerinti eljárást közelebbről az alábbi példákkal világítjuk meg.
1. példa
Az aminopeptidáz-P enzim izolálását és tisztítását Yaron és munkatársai módszerével végezzük az alábbi módosításokkal :
E. coli B-sejteket 50 mmól/liter nátrium-foszfát pufferben feltárjuk, centrifugáljuk és a nyers sejtextraktumot 50 °C hőmérsékleten 15 percen keresztül inkubáljuk. Az elegyet ismét centrifugáljuk és 45 H-os telítettséggel ammónium-szulfáttal kicsapatjuk. Centrifugálás után az enzim a felüluszóban található. A további tisztítást az ismert eljárással analóg módon végezzük.
• » · * ♦ · • · · · ··♦ ··· • ··· · · · ·· · ······· ···
2. példa
A plazmid előállításához kiindulási anyagként a
228 018. számú európai szabadalmi leírásból ismert pS203 és pPH160 plazmidokat alkalmazzuk.
A pS203 plazmidot a 0 228 018. számú európai szabadalmi leirás 10a. ábrája a 78 szám alatt ismerteti. A plazmid a humán granulocita makrofág colony stimulating faktort (GM-CSF) termelő szintetikus gént tartalmazza. Ez a gén nagyszámú restrikciós hasitóhelyet tartalmaz, mint ez a 0 228 018. számú európai közrebocsátási irat 9-11. oldalán megadott táblázatból látható. A következő eljáráshoz az 1. ábrán megjelölt hasítási helyeket alkalmazzuk.
A pS203 plazmidot Smal enzimmel és részlegesen Sáli enzimmel hasítjuk és a mintegy 380 bp nagyságú fragmenst izoláljuk, amely a 9/10 aminosavtól a GM-CSF-nek megfelelő szintetikus gént tartalmazza. A fragmenst a kereskedelmi forgalomban hozzáférhető pUC18 vektorba építjük be, amit Sáli és Smal enzimekkel nyitunk fel. E. coli 79/02 sejteket a ligáló eleggyel inkubálunk és a transzformáns elegyet IPTG-Xgal lemezre kenjük fel, amely 20 mikrogramm/ml ampicillint tartalmaz. Egy éjszakán keresztül inkubálva fehér telepeket kapunk, amelyeket izolálunk és a plazmid DNS-t kinyerjük. A plazmid DNS-t restrikciós analízissel jellemezzük. A kívánt restrikciós mintát mutató plazmid a pS499 jelet kapja.
A pS499 plazmidot EcoRI-gyel és részlegesen Sall-gyel emésztjük, és a szintetikus GM-CSF gént tartalmazó fragmenst izoláljuk. Ezt a fragmenst a pPH160 kifejező plazmidba építjük be. Ehhez (1) képletű oligonukleotidot szintetizálunk
8
Met Pro Alá Pro Alá Arg Ser Pro Ser Pro
5’ - C ATG CCG GCG CCG GCC CGA TCG CCG TCT CCG - 3’
GGC CGC GGC CGG GCT AGC GGC AGA GGC AGC T (Sáli) (1) és az izolált fragmenssel és az Ncol és EcoRI enzimekkel felnyitott pPH160 plazmiddal ligáljuk. így elroncsoljuk az Ncol hasitóhelyet (a 2. ábrában Ncol). A ligálóeleggyel E. coli MM294-sejteket transzformálunk és a plazmidokat restrikcikós és DNS szekvenáló analízissel azonosítjuk. A kivánt restrikciós mintát mutató plazmid a pS500 jelet kapja (2. ábra). Ez a plazmid olyan GM-CSF származékot kódol, amely N-terminálisan Met-Pro szakasszal van meghosszabbítva.
3. példa
A példában további, a GM-CSF származékok közvetlen kifejezésére alkalmas és a 0 228 018. számú európai közrebocsátás! iratból ismert analóg plazmid előállítását ismertetjük.
- Ί Az eljáráshoz a pS203, illetve pS499 plazmidok Hpa-I hssltóhelyét alkalmazzuk.
A 2. példával analóg módon a pS499 plazmidot EcoRI-gyel és Hpal-gyel emésztjük, és a szintetikus GM-CSF gént tartalmazó fragmenst izoláljuk. Az (1) oligonukleotid helyett az alábbi (2) oligonukleotidot alkalmazzuk.
10
Met Pro | Alá | Arg | Ser | Pro | Ser Pro | Ser | Thr Gin |
ATG CCG GCC CGA TCG CCG TCT CCG TCG ACC CAG - | |||||||
GGC | GGG | GGT | AGC | GGC | AGA GGC | AGC | TGG GTC |
16 | |||||||
Pro | Trp | Glu | His | Val | |||
CCC | TGG | GAA | CAC | GTT | - 3’ | ||
GGG | ACC | CTT | GTG | CAA |
(Hpal) így a pS502 plazmidot kapjuk.
Ha a (2) oligonukleotid helyett az alábbi (3) oligonukleotidot alkalmazzuk,
10 lő
Met Pro Ser Pro Ser Thr Gin Pro Trp Glu His Val
5’ - C ATG CCG TCT CCC TCG ACC CAG CCC TGG GAA CAC GTT - 3*
GGC AGA GGG AGC TGG GTC GGG ACC CTT GTG CAA (Hpal) (3) a pS503 plazmidot kapjuk.
Ugyanígy a (4) oligonukleotid felhasználásával a pS504 plazmidot kapjuk.
10 16
Met Pro Ser Thr Gin Pro Trp Glu His Val
5* - C ATG CCG TCG ACC CAG CCC TGG GAA CAC GTT - 3’
GGC AGC TGG GTC GGG ACC CTT GTG CAA (Hpal) (4)
Végül az (5) oligonukleotid felhasználásával a pS505 plazmidot kapjuk.
16
Met Pro Trp Glu His Val
5’ - C ATG CCG TGG GAA CAC GTT - 3’
GGC ACC CTT GTG CAA (Hpal) (5)
A jobb érthetőség kedvéért az aminosavak számozását az ollgonukleotidokban a GM-CSF-nek megfelelően adjuk meg.
A GM-CSF származékok kifejezését a 0 228 018. számú európai közrebocsátás! irat 1. példájának megfelelően végezzük. A fermentációs körülményektől függően a GM-CSF származék a sejben, oldatban vagy oldhatatlan zárványtest formájában található.
Ez utóbbi esetben a fehérje a sejt feltárása után cent rifugálással az üledékben feldúsítható. Az üledéket vízzel mossuk és dezoxikolát oldatban ismét szuszpendáljuk. Ezt a szuszpenziót centrifugáljuk, a maradékot ismét mossuk, és 6 mól/liter karbamidot tartalmazó 50 mmól/liter trisz-pufferben (pH « 8) oldjuk (50 mg fehérje 4 ml vízre számolva).
A fehérje szulfonát-származékának előállításához a felüluszóhoz, illetve az oldathoz mintegy 15 mg nátrium-szulfitot adunk és az elegyet mintegy 120 percen keresztül szobahőmérsékleten állni hagyjuk. 10 ml térfogatra hígítjuk és pH = 4,7 értékre állítjuk, majd egy éjszakán keresztül állni hagyjuk. A csapadékot centrifugáljuk, az üledéket vízzel mossuk, és ismét pufferben (5 mól/liter karbamid, mmól/liter nátrium-klorid, 50 mmól/liter trisz) oldjuk.
Az oldatot anioncserélő oszlopra visszük, amelyet FRACTOGEL DEAE TSK-anyaggal (45-90 mikrométer, Merek) töltünk, és 6 mól/liter karbamid, 50 mmól/liter trisz, 50 mmól/liter nátrium-klorid, 0,1 vegyest tenzid (Tween) és 2 mmól/liter etilén-diamid elegyével (pH * 8,7) szemben egyensúlyozunk ki. A GM-CSF S-szulfonát 140-210 mmól/liter nátrium-klorid frakcióban eluálódik.
A GM-CSF S-szulfonátot tartalmazó frakciókat elegyítjük, a fehérjekoncentrációt 10“5 értékre állítjuk és mangán-titrát reagens pufferrel (pH » 8,6, Mn koncentráció 3 x 105 mól/liter) szemben dializáljuk. Ezután GM-CSF
S-szulfonátot 10’^ mól/liter koncentrációra állítjuk, és 0,5-1 mikrogramm/ml aminopeptldáz-P enzimmel 1 órán keresztül 37-40 °C hőmérsékleten reagáltatjuk. A reakciőpartnereket ezután gélkromatográfiásan (Sephadex G 75 oszlop, Pharmacia) elválasztjuk. A GM-CSF-t hígítással 50 mmől/liter glicin pufferben oxigén jelenlétében renaturáljuk.
A renaturált terméket koncentráljuk és fehérjeszekvenciaanalizishez HPLC-vel (oszlop: Waters C18, 250 x 4,6 mm, A puffer: 0,1 tömeg* trifluor-ecetsav, B puffer: 80 tömeg* acetonitril és 0,1 tömeg* trifluor-ecetsav) tisztítjuk. Az oszlopot 1,5 ml áramlás és 30 perc alatt 35 tömeg*-ről 75 tömeg*-ra gradiens mellett B pufferrel eluáljuk. A GM-CSF-t tartalmazó frakciókat automatizált fehérjeszekvenáló eljárásnak vetjük alá. A mérések szerint a metionln gyakorlatilag kvantitative lehasadt. Ezzel szemben a nem aminopeptidáz-P enzimmel kezelt termékek N-terminális aminosavként több mint 50 tömeg* metionlnt tartalmaznak.
···· · ·· ···· ···· • e · ♦ · · • · · · ··· ··· • · ···· · · •· · ···· ··· ···
Claims (4)
1. Eljárás N-terminálisan prolinnal kezdődő fehérjék előállítására, azzal jellemezve , hogy rövid N-terminális meghosszabbítással rendelkező és géntechnológiai utón előállított előterméket aminopeptidáz-P enzimmel enzlmatikusan hasltunk.
2. Az 1. igénypont szerinti eljárás, azzal jellemezve , hogy rövid N-terminális meghosszabbításként egy metionincsoportot alkalmazunk.
3. Az 1. vagy 2. igénypont szerinti eljárás, azzal jellemezve , hogy kiindulási anyagként olyan fehérjék elegyét alkalmazzuk, amelyek csak részben tartalmaznak N-terminális metionincsoportot.
4. Az 1-3. igénypontok bármelyike szerinti eljárás, azzal jellemezve , hogy a humán granulocita makrofág colony stimulating faktor N-terminálisan meghosszabbított és prolinnal kezdődő származékát alkalmazzuk.
/66/
Applications Claiming Priority (1)
Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
---|---|---|---|
DE3811921A DE3811921A1 (de) | 1988-04-09 | 1988-04-09 | Verfahren zur herstellung von proteinen, die n-terminal mit prolin beginnen |
Publications (1)
Publication Number | Publication Date |
---|---|
HUT51676A true HUT51676A (en) | 1990-05-28 |
Family
ID=6351689
Family Applications (1)
Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
---|---|---|---|
HU891661A HUT51676A (en) | 1988-04-09 | 1989-04-06 | Process for producing proteins n-terminally beginning with proline |
Country Status (12)
Country | Link |
---|---|
EP (1) | EP0337264A3 (hu) |
JP (1) | JPH01304895A (hu) |
KR (1) | KR890016171A (hu) |
AU (1) | AU3253689A (hu) |
DE (1) | DE3811921A1 (hu) |
DK (1) | DK169889A (hu) |
FI (1) | FI891652A (hu) |
HU (1) | HUT51676A (hu) |
IL (1) | IL89877A0 (hu) |
NO (1) | NO891451L (hu) |
PT (1) | PT90225A (hu) |
ZA (1) | ZA892551B (hu) |
Families Citing this family (4)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
DE3822045A1 (de) * | 1988-06-30 | 1990-01-11 | Hoechst Ag | Verfahren zur herstellung von proteinen |
GB9017008D0 (en) * | 1990-08-02 | 1990-09-19 | Erba Carlo Spa | Process for the enzymatic preparation of basic fibroblast growth factor |
DE102004043360A1 (de) | 2004-09-08 | 2006-03-09 | Clariant Gmbh | Bleichaktivator-Mischungen |
DE502005008002D1 (de) | 2004-09-08 | 2009-10-08 | Clariant Produkte Deutschland | Bleichmittel-mischungen |
Family Cites Families (6)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
IL60184A (en) * | 1979-05-31 | 1984-05-31 | Schering Ag | Process for the specific cleavage of protein sequences from proteins |
EP0127658B1 (en) * | 1982-12-10 | 1987-10-14 | Nordisk Gentofte A/S | A process for preparing ripe proteins from fusion proteins, synthetized in pro- or eukaryotic cells |
DE122004000009I2 (de) * | 1984-08-16 | 2006-09-07 | Savient Pharmaceuticals Inc | Methode zur Herstellung von menschlichen Wachstumshormonen |
WO1986007380A1 (en) * | 1985-06-04 | 1986-12-18 | Takeda Chemical Industries, Ltd. | Process for preparing polypeptide |
US4865974A (en) * | 1985-09-20 | 1989-09-12 | Cetus Corporation | Bacterial methionine N-terminal peptidase |
DE3822045A1 (de) * | 1988-06-30 | 1990-01-11 | Hoechst Ag | Verfahren zur herstellung von proteinen |
-
1988
- 1988-04-09 DE DE3811921A patent/DE3811921A1/de not_active Withdrawn
-
1989
- 1989-04-05 EP EP89105927A patent/EP0337264A3/de not_active Withdrawn
- 1989-04-06 HU HU891661A patent/HUT51676A/hu unknown
- 1989-04-06 FI FI891652A patent/FI891652A/fi not_active Application Discontinuation
- 1989-04-07 NO NO89891451A patent/NO891451L/no unknown
- 1989-04-07 DK DK169889A patent/DK169889A/da not_active IP Right Cessation
- 1989-04-07 PT PT90225A patent/PT90225A/pt not_active Application Discontinuation
- 1989-04-07 IL IL89877A patent/IL89877A0/xx unknown
- 1989-04-07 ZA ZA892551A patent/ZA892551B/xx unknown
- 1989-04-07 AU AU32536/89A patent/AU3253689A/en not_active Abandoned
- 1989-04-07 JP JP1089576A patent/JPH01304895A/ja active Pending
- 1989-04-08 KR KR1019890004645A patent/KR890016171A/ko not_active Application Discontinuation
Also Published As
Publication number | Publication date |
---|---|
FI891652A (fi) | 1989-10-10 |
EP0337264A2 (de) | 1989-10-18 |
NO891451L (no) | 1989-10-10 |
FI891652A0 (fi) | 1989-04-06 |
DE3811921A1 (de) | 1989-10-19 |
KR890016171A (ko) | 1989-11-28 |
JPH01304895A (ja) | 1989-12-08 |
IL89877A0 (en) | 1989-12-15 |
AU3253689A (en) | 1989-10-12 |
DK169889D0 (da) | 1989-04-07 |
DK169889A (da) | 1989-10-10 |
EP0337264A3 (de) | 1990-08-01 |
PT90225A (pt) | 1989-11-10 |
NO891451D0 (no) | 1989-04-07 |
ZA892551B (en) | 1989-12-27 |
Similar Documents
Publication | Publication Date | Title |
---|---|---|
EP0347845B1 (en) | Insulin precursors, their preparation, and dna sequences, expression vehicles and primers and a process for producing human insulin and analogues | |
DE69210645T2 (de) | Verfahren zur Herstellung von cysteinfreien Peptiden | |
JPH01156998A (ja) | 血清担体タンパク質との結合力が減少しているヒトインスリン様成長因子類以体及び酵母におけるそれらの産生 | |
IE62511B1 (en) | Mini-proinsulin, its preparation and use | |
US6051399A (en) | Production of C-terminal amidated peptides from recombinant protein constructs | |
DE69700561T2 (de) | Verfahren zur Entfernung von N-Terminalem Methionin | |
US5457033A (en) | Preparation of polypeptides having an amide carboxyl terminal end | |
DE3686365T3 (de) | Herstellungsverfahren für humanes atriales natriuretisches Polypeptid. | |
JPS6394991A (ja) | 酸性繊維芽細胞成長因子のクロ−ニング及び発現 | |
JP3531947B2 (ja) | ペプチドの製造方法 | |
HU196846B (en) | Process for producing biologically active derivatives of human gamma-interferon and pharmaceutical compositions comprising the same | |
DE3751081T2 (de) | [Leu 13] Motilin, dessen kodierende DNS-Moleküle und Verfahren zu dessen Herstellung. | |
JPH05271279A (ja) | ヒト副甲状腺ホルモンムテインおよびその製造法 | |
AU617999B2 (en) | A genetic engineering process for the preparation of angiogenins | |
HUT51676A (en) | Process for producing proteins n-terminally beginning with proline | |
DE3687470T2 (de) | Expression in e.coli von hybridpolypeptiden, die die sequenz des wachstumshormons ausloesenden faktors enthalten. | |
JP2506322B2 (ja) | Grf前駆体をコ―ドするdna | |
DE3151738A1 (de) | Peptid fuer die analyse des menschlichen hormons der nebenschilddruese | |
DD294500A5 (de) | Verfahren zur herstellung einer grossen anzahl von peptid-analogen | |
DE3328793A1 (de) | Herstellung von sekretin | |
DE69219242T2 (de) | Muteine des menschlichen Parathormons und ihre Herstellung | |
HUT51328A (en) | Process for producing proteins | |
US5695952A (en) | Method for producing Leu13 !motilin | |
US5420113A (en) | [Leu13]motilin, DNAs coding for same and methods for producing same | |
JPH057995B2 (hu) |
Legal Events
Date | Code | Title | Description |
---|---|---|---|
DFA9 | Temporary protection cancelled due to abandonment |