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DE2802397C2 - Feed mixture containing carbadox and proteolytic enzymes - Google Patents

Feed mixture containing carbadox and proteolytic enzymes

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DE2802397C2
DE2802397C2 DE2802397A DE2802397A DE2802397C2 DE 2802397 C2 DE2802397 C2 DE 2802397C2 DE 2802397 A DE2802397 A DE 2802397A DE 2802397 A DE2802397 A DE 2802397A DE 2802397 C2 DE2802397 C2 DE 2802397C2
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Germany
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carbadox
proteolytic enzymes
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Günter Dipl.-Chem. Dr. 4006 Erkrath Hiller
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Henkel AG and Co KGaA
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Description

Hochleistungstierfutter, wie sie heute üblicherweise in der Intensiv-Tierhaltung verwendet werden, enthalten eine Reihe von Zusatzstoffen mit prophylaktischer und/oder nutritiver Wirkung. Hierzu zählen u.a. Antibiotika, Wachstumsförderer und Enzyme. Während sich die Verwendung von Antibiotika und/oder Wachstumsförderern bereits in Mischfuttern aller Typen durchgesetzt hat, werden Enzyme in der Praxis noch nicht in größerem Umfange verwendet.High-performance animal feed, as commonly used in intensive animal husbandry today, contains a number of additives with a prophylactic and/or nutritional effect. These include antibiotics, growth promoters and enzymes. While the use of antibiotics and/or growth promoters has already become established in all types of compound feed, enzymes are not yet used on a large scale in practice.

Die in der modernen Intensiv-Tierhaltung verwendeten Futtermischungen sind im allgemeinen in allen Nährstoffkomponenten so weit optimiert, daß eine weitere Verbesserung nicht ohne weiteres möglich erscheint. Überraschenderweise wurde jedoch gefunden, daß auch optimal zusammengesetzte Hochleistungsfutter hinsichtlich der Futterverwertung und/oder des damit erzielbaren Gewichtszuwachses noch verbessert werden können, wenn man diesen Futtern bestimmte Wachstumsförderer zusammen mit proteolytischen Enzymen zusetzt.The feed mixtures used in modern intensive animal husbandry are generally so optimized in all nutrient components that further improvement does not seem to be possible without further ado. Surprisingly, however, it has been found that even optimally composed high-performance feeds can be further improved in terms of feed utilization and/or the weight gain that can be achieved with them if certain growth promoters are added to these feeds together with proteolytic enzymes.

Die Verwendung von Wachstumsförderern an sich ist dem auf dem Futtermittelgebiet tätigen Fachmann bekannt. So wird beispielsweise der Wachstumsförderer Carbadox bereits in der Futtermittelverordnung der Bundesrepublik Deutschland vom 16. Juni 1976, Anlage 3, Teil 1, Absatz 1.2 erwähnt. Trotz der günstigen Wirkung dieser Substanz besteht jedoch ein Bedarf nach Futtermitteln, mit denen sich noch günstigere Ergebnisse erzielen lassen.The use of growth promoters is well known to experts working in the feed sector. For example, the growth promoter carbadox is already mentioned in the feed regulations of the Federal Republic of Germany of 16 June 1976, Annex 3, Part 1, Paragraph 1.2. Despite the beneficial effects of this substance, there is a need for feeds that can achieve even more beneficial results.

Gegenstand der älteren Patentanmeldung gemäß DE-OS 27 55 126 ist eine Tierfuttermischung auf der Basis von Kohlenhydraten, Eiweiß, Fetten und gegebenenfalls üblichen Zusatzstoffen, gekennzeichnet durch einen Gehalt an 5 - 350 ppm des Wachstumsförderers Nitrovin und einer solchen Menge an proteolytischen Enzymen, daß eine enzymatische Aktivität von 0,05 - 2,5 mTU/g vorliegt.The subject of the older patent application according to DE-OS 27 55 126 is an animal feed mixture based on carbohydrates, protein, fats and optionally conventional additives, characterized by a content of 5 - 350 ppm of the growth promoter Nitrovin and such an amount of proteolytic enzymes that an enzymatic activity of 0.05 - 2.5 mTU/g is present.

Es wurde gefunden, daß man dann hochwertige Tierfuttermischungen in entsprechender wachstumsverbessernder Wirksamkeit erhält, wenn man den Wachstumsförderer der älteren Anmeldung durch den Wachstumsförderer Carbadox ersetzt.It was found that high-quality animal feed mixtures with corresponding growth-improving effectiveness are obtained if the growth promoter of the earlier application is replaced by the growth promoter Carbadox.

Gegenstand der Erfindung ist dementsprechend eine Futtermittelmischung auf der Basis von Kohlenhydraten, Eiweiß, Fetten und ggf. üblichen Zusatzstoffen sowie einem Gehalt an 5 - 350 ppm Carbadox, dadurch gekennzeichnet, daß zusätzlich proteolytische Enzyme in einer solchen Menge enthalten sind, daß eine enzymatische Aktivität von 0,05 - 2,5 mTU/g vorliegt, wobei eine Enzymeinheit (TU) diejenige Menge Enzym ist, die aus einer Caseinlösung in einer Minute Spaltprodukte freisetzt, die die gleiche Extinktion besitzen wie eine 1 mol/l Tyrosinlösung.The invention accordingly relates to a feed mixture based on carbohydrates, protein, fats and optionally conventional additives and containing 5 - 350 ppm carbadox, characterized in that proteolytic enzymes are additionally contained in such an amount that an enzymatic activity of 0.05 - 2.5 mTU/g is present, where one enzyme unit (TU) is the amount of enzyme which releases cleavage products from a casein solution in one minute which have the same extinction as a 1 mol/l tyrosine solution.

Der Wachstumsförderer Carbadox wird durch chemische Synthese hergestellt. Seine nomenklaturgerechte Bezeichnung lautet: Methyl-3-(2-chinoxalinyl-methylen)-carbazat-N[hoch]1,N[hoch]4-dioxid. Die Summenformel ist: C[tief]11H[tief]10N[tief]4O[tief]4, das Molekulargewicht beträgt 262,23.The growth promoter carbadox is produced by chemical synthesis. Its nomenclature-compliant name is: methyl-3-(2-quinoxalinyl-methylene)-carbazate-N[high]1,N[high]4-dioxide. The molecular formula is: C[low]11H[low]10N[low]4O[low]4, the molecular weight is 262.23.

Geeignete proteolytische Enzyme werden vor allem durch Züchten von Mikroorganismen und Abtrennen aus den Nährlösungen erhalten.Suitable proteolytic enzymes are mainly obtained by culturing microorganisms and separating them from the nutrient solutions.

Die Verfahren hierzu sind bekannt. Beispielsweise werden proteolytische Enzyme aus Bacillus licheniformis, Bacillus natta, Bacillus subtilis usw. verwendet. Besonders bevorzugt werden saure Proteasen, z.B. aus Aspergillus niger oder aus Rhizopus rhizopodiformis entsprechend DE-OS 25 28 490. Derartige Proteasen haben ein besonders breites Wirkungsspektrum im schwach sauren Bereich zwischen pH 2,5 - 6,5.The processes for this are known. For example, proteolytic enzymes from Bacillus licheniformis, Bacillus natta, Bacillus subtilis, etc. are used. Acidic proteases, e.g. from Aspergillus niger or from Rhizopus rhizopodiformis according to DE-OS 25 28 490, are particularly preferred. Such proteases have a particularly broad spectrum of activity in the weakly acidic range between pH 2.5 - 6.5.

Handelsübliche Futtermischungen sind für die speziellen Bedürfnisse der einzelnen Tierarten möglichst optimal zusammengestellt. Die Grundlage bilden Kohlenhydrate vor allem aus Getreidekomponenten, Mais od. dgl. Als Eiweißträger dienen in erster Linie Sojaschrot, Fischmehl, Tierkörpermehl, Kleie u. dgl. Fehlende Aminosäuren, z.B. Methionin oder Lysin, können zusätzlich zugegeben werden. Fette werden in Form von pflanzlichen oder tierischen Fetten oder Abfallfetten beigefügt. Zum Körperaufbau werden ferner Salze, wie Dicalciumphosphat, Calciumcarbonat, Kochsalz, zugesetzt. Gegebenenfalls wird die Futtermischung durch Zugabe von Spurenelementen, Vitaminen, Ballaststoffen usw. abgerundet. Auch fermentativ hergestellte Substanzen wie Einzellerproteine aus Erdölfraktionen oder Alkoholen, diverse Hefen, Algeneiweiß oder sonstige, eventuell auch aus Abfallstoffen gewonnene Substanzen können z.T. in erheblichem Maße Bestandteil der Futterrezeptur sein.Commercial feed mixtures are composed as optimally as possible for the specific needs of the individual animal species. The basis is carbohydrates, mainly from grain components, corn or similar. The main sources of protein are soya meal, fish meal, animal meal, bran etc. Missing amino acids, e.g. methionine or lysine, can also be added. Fats are added in the form of vegetable or animal fats or waste fats. Salts such as dicalcium phosphate, calcium carbonate and table salt are also added to build up the body. If necessary, the feed mixture is rounded off by adding trace elements, vitamins, fibre etc. Substances produced by fermentation such as single-cell proteins from petroleum fractions or alcohols, various yeasts, algae protein or other substances, possibly also obtained from waste materials, can also be part of the feed recipe to a considerable extent.

Die erfindungsgemäßen Tierfuttermischungen enthalten neben den üblichen jeweils für eine bestimmte Tierart abgestimmten Bestandteilen zusätzlich 5 - 350 ppm, vorzugsweise 20 - 50 ppm, des genannten Wachstumsförderers, je nach Alter des Tieres und der Art der Futtermischung, und proteolytische Enzyme in einer solchen Menge, daß die enzymatische Aktivität 0,05 - 2,5 mTU/g, vorzugsweise 0,2 - 0,5 mTU/g beträgt.The animal feed mixtures according to the invention contain, in addition to the usual components tailored to a specific animal species, an additional 5 - 350 ppm, preferably 20 - 50 ppm, of the growth promoter mentioned, depending on the age of the animal and the type of feed mixture, and proteolytic enzymes in such an amount that the enzymatic activity is 0.05 - 2.5 mTU/g, preferably 0.2 - 0.5 mTU/g.

Die genannten Additiv-Konzentrationen beziehen sich auf den Gehalt im Gesamtfutter. Bei Konzentraten oder Ergänzungsfuttern liegen die Konzentrationen entsprechend höher. Insbesondere wird eine Kombination aus einem der genannten Wachstumsförderer und einer sauren Pilz-Protease bzw. Proteasenmischung eingesetzt. Der damit erzielte Zuwachs bzw. die Verbesserung der Futterverwertung beträgt zusätzlich mehrere Prozent im Vergleich zu entsprechenden, lediglich Carbadox enthaltenden Kontrollmischungen.The additive concentrations mentioned refer to the content in the entire feed. In concentrates or supplementary feeds, the concentrations are correspondingly higher. In particular, a combination of one of the growth promoters mentioned and an acidic fungal protease or protease mixture is used. The increase or improvement in feed utilization achieved in this way is several percent more than with corresponding control mixtures containing only carbadox.

Die beanspruchte Kombination aus Carbadox und Enzymen bewährt sich vor allem in Futter für die Ferkelaufzucht und Schweinemast. Sie kann jedoch auch in Futtermischungen für andere Tierarten verwendet werden, in denen der Wachstumsförderer selbst mit Vorteil eingesetzt wird.The claimed combination of carbadox and enzymes is particularly effective in feed for piglet rearing and pig fattening. However, it can also be used in feed mixtures for other animal species in which the growth promoter itself is used to advantage.

Der Wachstumsförderer wird zweckmäßig in Form einer Vormischung dem Futter zugesetzt, z.B. gebunden an Sojaextrationsschrot. Bei Verwendung von mehlförmigen Futterzusammensetzungen wird auch die Enzymkomponente als Vormischung appliziert. Als Trägersubstanz fungiert eine beliebige Futterkomponente, z.B. ebenfalls Sojaschrot oder auch ein inerter Träger. Bei Verwendung dampfpelletierten Futters muß die Zumischung der Enzyme in geeignet stabilisierter Form erfolgen, um eine Desaktivierung durch Feuchtigkeit und Hitze während des Pelletierens zu verhindern. Ein derartiges Verfahren ist z.B. Gegenstand der DE-OS 26 02 260.The growth promoter is best added to the feed in the form of a premix, e.g. bound to soya meal. When using meal-like feed compositions, the enzyme component is also applied as a premix. Any feed component, e.g. soya meal or an inert carrier, acts as a carrier substance. When using steam-pelleted feed, the enzymes must be added in a suitably stabilized form to prevent deactivation by moisture and heat during pelleting. Such a process is the subject of DE-OS 26 02 260, for example.

Zur Bestimmung der Enzymeinheit (TU) wird die proteolytische Aktivität der Protease nach dem bekannten Prinzip von Anson ermittelt: eine geeignet verdünnte Menge Enzymlösung wird bei 40°C 20 Minuten mit einem gleichen Volumen einer 1,2%igen Caseinlösung inkubiert, wobei diese 0,6 % Milchsäure, 6 mol/l Harnstoff und 0,1 mol/l Zitronen- oder Essigsäure enthält. Der pH-Wert der Caseinlösung wird durch Zusatz von 2 mol/l Natronlauge auf 4,5 eingestellt. Nach der Inkubation wird im Volumenverhältnis 1 : 1 mit 0,4 mol/l Trichloressigsäure versetzt, der sich bildende Niederschlag von unverdautem Casein abfiltriert und im Filtrat die beim Abbau entstandenen Protein-Spaltstücke nach einer beliebigen Eiweißbestimmungsmethode ermittelt. Geeignet hierfür ist z.B. das von Layne in Methods in Enzymology 3 (1957), Seiten 448 ff., beschriebene Verfahren.To determine the enzyme unit (TU), the proteolytic activity of the protease is determined according to the well-known Anson principle: a suitably diluted amount of enzyme solution is incubated at 40°C for 20 minutes with an equal volume of a 1.2% casein solution containing 0.6% lactic acid, 6 mol/l urea and 0.1 mol/l citric or acetic acid. The pH of the casein solution is adjusted to 4.5 by adding 2 mol/l sodium hydroxide solution. After incubation, 0.4 mol/l trichloroacetic acid is added in a volume ratio of 1:1, the precipitate of undigested casein that forms is filtered off and the protein fragments formed during degradation in the filtrate are determined using any protein determination method. The method described by Layne in Methods in Enzymology 3 (1957), pages 448 ff., is suitable for this.

Für jede Meßprobe muß ein Blindwert angefertigt werden, bei dem zuerst Trichloressigsäure und dann Caseinlösung zugesetzt wird. Dieser Blindwert gibt neben dem Reagenzien-Leerwert den Anteil an niedermolekularen Peptiden an, der bereits vor der Verdauung in der Enzymlösung vorhanden ist. Die Differenz zwischen Haupt- und Blindwert wird bei der angegebenen Methode dann mit der Extinktion verglichen, die eine bestimmte Menge Tyrosin bei dieser Bestimmung liefert. Diese Menge Tyrosin ist dann ein Maß für die proteolytische Aktivität des vorliegenden Enzyms: eine Enzymeinheit (TU) ist diejenige Menge Enzym, die aus einer Caseinlösung in einer Minute Spaltprodukte freisetzt, die die gleiche Extinktion besitzen, wie eine 1 mol/l Tyrosinlösung. Üblich ist die Angabe in mTU = 10[hoch]-3 TU.A blank value must be prepared for each sample, in which trichloroacetic acid and then casein solution are added first. This blank value indicates, in addition to the reagent blank value, the proportion of low molecular weight peptides that are already present in the enzyme solution before digestion. The difference between the main value and the blank value is then compared with the extinction that a certain amount of tyrosine produces in this determination using the specified method. This amount of tyrosine is then a measure of the proteolytic activity of the enzyme in question: one enzyme unit (TU) is the amount of enzyme that releases cleavage products from a casein solution in one minute that have the same extinction as a 1 mol/l tyrosine solution. The usual indication is in mTU = 10[to the power of]-3 TU.

Beispiel 1example 1

An 216 Ferkel wurde im Gewichtsabschnitt von Durchmesserzeichen 6,5 kg bis Durchmesserzeichen 24,8 kg ein identisch zusammengesetztes Aufzuchtfutter verfüttert, das jedoch216 piglets in the weight range from 6.5 kg to 24.8 kg were fed an identically composed rearing feed, but

a) ohne Zusatz von Carbadox oder Enzym war,a) without the addition of carbadox or enzyme,

b) einen Zusatz von 50 ppm Carbadox bzw.b) an addition of 50 ppm carbadox or

c) einen Zusatz von 50 ppm Carbadox und 0,45 mTU/g Futter saure Proteasen aus Rhizopus rhizopodiformis und Aspergillus.(c) an addition of 50 ppm carbadox and 0,45 mTU/g feed acid proteases from Rhizopus rhizopodiformis and Aspergillus.

Die Tiere waren in Flachkäfigen zu 7 oder 8 Tieren aufgestellt. Die Fütterung erfolgte ad libidum. Zur Eingewöhnung wurde allen Gruppen ein identisch zusammengesetztes Starterfutter verabreicht. Anschließend erhielten die Tiere die eigentlichen Versuchsmischungen (s.o.).The animals were kept in flat cages of 7 or 8 animals. Feeding was ad libitum. To get used to the new food, all groups were given a starter feed of the same composition. The animals were then given the actual test mixtures (see above).

Über regelmäßige Wägungen wurde der Wachstumsverlauf und die Futterverwertung bestimmt. Unter "Futterverwertung" wird dabei das Verhältnis Futterverbrauch zu Zuwachs verstanden.The growth rate and feed conversion were determined through regular weighing. "Feed conversion" is understood to mean the ratio of feed consumption to growth.

Futterzusammensetzung (%):Feed composition (%):

Eiweißfutter, bestehend aus: 18 %Protein feed, consisting of: 18 %

62,5 % Sojaschrot (44 % Rohprotein),62.5 % soya meal (44 % crude protein),

25 % Fischmehl,25 % fish meal,

12,5 % Mineralstoff u. Vitaminprämix12.5% mineral and vitamin premix

Hafer 14 %Oats 14%

Weizenkleie 10 %Wheat bran 10%

Gerste 28 %Barley 28%

Weizen 15 %Wheat 15%

Mais 15 %Corn 15%

__________

100 %100%

Ergebnis:Result:

________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________

a) b) c)a) b) c)

ohne mit mitwithout with with

Zusatz Carbadox CarbadoxAdditive Carbadox Carbadox

+ Enzym+ Enzym

________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________

Tägl. 461 g 526 g 543 gDaily 461 g 526 g 543 g

Zunahmeincrease

Futter- 2,11 1,98 1,91Feed- 2.11 1.98 1.91

verwertungrecycling

Beispiel 2Example 2

Insgesamt 48 Ferkel wurden in strohloser Haltung auf Spaltenböden ab ca. 30 kg Anfangsgewicht in zwei Mastabschnitten bis zum Endgewicht von ca. 100 kg mit jeweils identisch zusammengesetzter Futtermischung gefüttert, die im Mastabschnitt I (30 - 60 kg)A total of 48 piglets were kept in straw-free conditions on slatted floors from an initial weight of approx. 30 kg in two fattening periods up to a final weight of approx. 100 kg, each with an identically composed feed mixture, which in fattening period I (30 - 60 kg)

a) ohne Zusatz von Carbadox oder Enzym war,a) without the addition of carbadox or enzyme,

b) einen Zusatz von 50 ppm Carbadox bzw.b) an addition of 50 ppm carbadox or

c) einen Zusatz von 50 ppm Carbadox und 0,6 mTU/g Futter saure Proteasen aus Rhizopus rhizopodiformis aufwies.(c) an addition of 50 ppm carbadox and 0.6 mTU/g feed acid proteases from Rhizopus rhizopodiformis.

Im Mastabschnitt II (60 - 100 kg) wurden in den entsprechenden Gruppen folgende Additivmengen verwendet:In fattening stage II (60 - 100 kg) the following additive quantities were used in the corresponding groups:

a) ohne Zusatz von Carbadox oder Enzym,a) without addition of carbadox or enzyme,

b) Zusatz von 25 ppm Carbadox,b) Addition of 25 ppm Carbadox,

c) Zusatz von 25 ppm Carbadox und 0,3 mTU/g Futter saure Proteasen aus Rhizopus rhizopodiformis.c) Addition of 25 ppm carbadox and 0.3 mTU/g feed acid proteases from Rhizopus rhizopodiformis.

Über regelmäßige Wägungen wurde der Wachstumsverlauf und die Futterverwertung bestimmt. Unter Futterverwertung wird dabei das Verhältnis Futterverbrauch/Zuwachs verstanden. Die Fütterung der Tiere erfolgte rationiert (2 x tägl.) nach den DLG-Empfehlungen.The growth rate and feed conversion were determined through regular weighing. Feed conversion is understood to be the ratio of feed consumption to growth. The animals were fed rationed (twice daily) in accordance with DLG recommendations.

Futterzusammensetzung (%):Feed composition (%):

______________________________________________________________________________________________________________________________________________________

Anfangsmast EndmastInitial mast Final mast

30 - 60 kg 60 - 100 kg30 - 60kg 60 - 100kg

______________________________________________________________________________________________________________________________________________________

Gerste 20 22Barley 20 22

Mais 20 22Corn 20 22

Weizen 15 22Wheat 15 22

Hafer 15 --Oats 15 --

Weizenkleie 9 21,5Wheat bran 9 21.5

Fischmehl 7 3Fish meal 7 3

Sojaschrot 12 8Soya meal 12 8

Mineralfutter 2 1,5Mineral feed 2 1.5

Ergebnis: 30 - 100 kg GesamtmastResult: 30 - 100 kg total mast

________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________

a) b) c)a) b) c)

ohne mit mitwithout with with

Zusatz Carbadox CarbadoxAdditive Carbadox Carbadox

+ Enzym+ Enzym

________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________

Tägl. 674 g 722 g 753 gDaily 674 g 722 g 753 g

Zunahmeincrease

Futter- 3,31 3,18 3,14Feed- 3.31 3.18 3.14

verwertungrecycling

Claims (2)

1. Futtermittelmischung auf der Basis von Kohlenhydraten, Eiweiß, Fetten und ggf. üblichen Zusatzstoffen sowie einem Gehalt an 5 - 350 ppm Carbadox, dadurch gekennzeichnet, daß zusätzlich proteolytische Enzyme in einer solchen Menge enthalten sind, daß eine enzymatische Aktivität von 0,05 - 2,5 mTU/g vorliegt, wobei eine Enzymeinheit (TU) diejenige Menge Enzym ist, die aus einer Caseinlösung in einer Minute Spaltprodukte freisetzt, die die gleiche Extinktion besitzen wie eine 1 ml/l Tyrosinlösung.1. Feed mixture based on carbohydrates, protein, fats and, if appropriate, conventional additives and containing 5 - 350 ppm carbadox, characterized in that proteolytic enzymes are additionally contained in such an amount that an enzymatic activity of 0.05 - 2.5 mTU/g is present, where one enzyme unit (TU) is the amount of enzyme which releases cleavage products from a casein solution in one minute which have the same extinction as a 1 ml/l tyrosine solution. 2. Futtermittelmischung nach Anspruch 1, dadurch gekennzeichnet, daß die proteolytischen Enzyme saure Proteasen mit einem Wirkungsspektrum zwischen pH 2,5 - 6,5 sind.2. Feed mixture according to claim 1, characterized in that the proteolytic enzymes are acid proteases with an activity spectrum between pH 2.5 - 6.5.
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