CZ299859B6 - Farmaceutická formulace a zpusob její prípravy - Google Patents

Abstract

Farmaceutická formulace pro orální aplikaci, která obsahuje iota-karagenan, jeden nebo nekolik neutrálních gelotvorných polymeru a bazickou farmaceuticky aktivní složku; pricemž tato formulace potlacuje uvolnování bazické farmaceuticky aktivní složky z formulace pri kyselém pH; zpusob prípravy zmínené formulace; a použití zmínené formulace pro lécení kardiovaskulárních poruch.

Description

Farmaceutická formulace a způsob její přípravy

Oblast techniky

Předložený vynález se týká nové farmaceutické formulace pro orální aplikaci, která obsahuje bazickou farmaceuticky aktivní složku, jejíž rozpustnost závisí na pH, což zabraňuje uvolňování bazické farmaceuticky aktivní složky z formulace při kyselém pH (zejména pod pil 3) a s výhodou umožňuje řízené uvolňování farmaceuticky aktivní složky, které je v podstatě nezávislé na širokém rozmezí pH v gastrointestinálním traktu: dále se týká způsobu přípravy zmíněné formulace a použití zmíněné formulace v medicíně.

Dosavadní stav techniky

Účinné farmaceutické formulace pro řízené uvolňování jsou žádané farmaceutické produkty, neboť umožňují: optimalizaci podávání léku. snížit frekvenci podávání léku a minimalizovat nežádoucí vedlejší účinky. Návrhy takových systémů s řízeným uvolňováním však nejsou jednoduchou záležitostí, zvláště jestliže léková formulace je zamýšlena pro orální podání a musí projít gastrointestinálním traktem, který' se mezi jiným během svého průběhu vyznačuje velkými rozdíly v pil.

Mnoho léků. které mají bazické vlastnosti, se ionizuje při nízkém pH a v teto oblasti pH se výrazně více rozpouští ve srovnání s neutrálnějším prostředím. Tento projev pl 1—závislé rozpustnosti v gastrointestinálním traktu může mít za následek různé disolučni profily léku, spolu s odpovídajícími problémy in vivo biologické dostupnosti.

Bylo popsáno několik pokusů o překonání problémů, spojených se závislostí rozpustnosti bazických léčiv na pH. Patří k nirn použití enterického polymeru, který je nerozpustný při nízkém pH, čímž se zpomalí uvolňování léčiva v prostředí o nízkém pH (viz například spis US 4 968 508, a Λ. Streubel a spol., J. Controlled Release, 67, 101-110 (2000)), nebo inkorporace organické kyseliny o nízké molekulové hmotnosti, aby se vytvořilo kysele mikroprostředí v matrici formulace, čímž se udržuje rozpustnost léčiva na konstantní úrovní (viz například K. 12 Gabr. Eur. J. Pharm. Biopharm., 38(6), 199-202 (1992), a V. K. Thoma a Th. Zimmer, Pharm. Ind. 51(1), 98-101 (1989)). Inkorporace aniontového polymeru (například alginátu sodného), vykazujícího pl i—závislou rozpustnost, do lékové formulace která rovněž obsahuje neutrální poly mer, poskytla formulaci, tvořící nerozpustný gel při nízkém pH, čímž vznikne silná bariéra vůči difúzi, a to se považuje za hlavní mechanizmus, zpomalující uvolňování léčiva při nízkém pH (US 4 792 452: a P. Timmins a spol.. Pharmaceutical Development and Technology, 2( I), 25-31 (1997)). Jiné metody používají polymery s nábojem, aby sc uvolňování léčiva ovlivňovalo buď iontovou interakcí s léčivem (viz C. Caramella a spol., Pharm. Res. 14(11), 531 (1997), II. Y. Park a spol., Drug Delivery. 5, 13 18 (1998), N. Caram-Lelliam, Ph. D. Thesis, Uppsala University (1996)), nebo aby se ovlivňovaly gelotvorné a bobtnaeí vlastnosti těchto polymerů (viz K. M. Pieker, Drug Dev. and Ind, Pharmaey. 25(3), 339-346 (1999)). Použité formulace se zpravidla zakládají najednom typu polymeru.

Baveja a spol. (Int. J. Pharmaceutics, 39, 39- 45 (1987)) nalezli, že když neiontový polymer (HPMC) se smísí s aniontovým polymerem (NaCMC). uvolňování se zpomalí. Range Rao a spol. (Drug Dev. Ind. Pharmaey, 14, 2 299(1988)) popisují směsi methylcelulózy a NaCMC, které poskytují různé profily uvolňování. Směsi lambda-karagenanu a aktivní složkv jsou popsány ve spisu WO 99/21 586.

Jsou popsány kombinace strategií, majících za cíl disolučni profil, který je nezávislý na pH (viz spisy WO 96/26 717, WO 99/29 305 a WO 99/39 698). Všechny tyto tři spisy popisují třísložkovou matricovou formulaci, obsahující tři polymery s typicky rozdílnou rozpustností ve vodě

CZ 299859 Bó a rozdílnými bobtnacími vlastnostmi, jejíž složení lze měnit a nastavením těchto vlastností lze řídit rychlost uvolňování. Dvě z těchto složek jsou gelotvorný polymer s rozpustností významně závislou na pH, jako je alginát sodný, a gelotvorný polymer s rozpustností, která je málo nebo zanedbatelně závislá na pi l, jako je hydroxypropylmethylcelulóza (HPMC) nebo polyethylenoxid. Třetí složka je buďto cnterický potahový polymer, jako je kopolymer kyseliny metakrylové (WO 96/26 717), EUDRAGIT® L nebo S, které jsou specifické typy polymerů kyseliny metakrylové (WO 99/29 305), nebo ve vodě nerozpustný polymer, jako je ethylcelulóza (WO 99/39 698). Tyto strategie však obecně nemají specificky cílená bazická léčiva a ktomu, aby alespoň zčásti zpomalovaly uvolňování léčiva pří nízkých hodnotách pil, závisejí na polymerech typu enteriekcho potahu, nebo na ve vodě nerozpustných polymerech, jako je polymer metakrylové kyseliny, nebo na pH -závislém gelotvorném polymeru, jako je alginát sodný.

Podstata vy nálezu

Předložený vynález poskytuje farmaceutickou formulaci pro orální podání, která obsahuje iotakaragenan, jeden nebo několik neutrálních gelotvomých polymerů, a bazickou farmaceuticky aktivní složku; tato formulace inhibuje uvolňování bazické farmaceuticky aktivní složky z formulace při kyselém pH (s výhodou pod pH 3; zvláště okolo pH 1).

V podstatě pH-nezávislé uvolňování znamená, že rychlost uvolňování je významně snížena při pil I a lehce zvýšena nebo nezměněna při pH 6,8, takže množství bazické farmaceuticky aktivní složky, uvolněné vjakémkoliv okamžiku, se stává méně závislé na pH.

Předložený vynález dále poskytuje farmaceutickou formulaci pro orální podání, která obsahuje iota-karagenan, jeden nebo několik gelotvomých polymerů, a bazickou farmaceuticky aktivní složku.

lota-karagenan je s výhodou přítomen ve formulaci podle vynálezu v množství přesahujícím 15 % hmotnostních, a je s výhodou přírodního původu. Jeden typ iota-karagenanu farmaceutické jakosti (dostupný od firmy FMC Biopolymer) má viskozitu ne menší než 5 centipoise (cps). s výhodou v roz,mezí 5 až 10 cps (pro 1,5% roztok, který se zahřeje na 82 °C, načež se viskozita měří při 75 °C na Brookfieldově LV viskozimetru za použití vřetene #1 při rychlosti 30 ot/min). lota-karagenan technické jakosti (od firmy fluka Biochernica) má s výhodou viskozitu ne menší než 14 MPa.s. pro 0,3% vodný roztok, který' se zahřeje na 20 °C. načež se viskozita měří metodou padající kuličky na viskozimetru typu Haake, za použití fandova termostatu C3 (Hakke Mess-Systém III) za použití pozlacených nerezových kuliček o hustotě 7,8 g/cm'.

Neutrální gelotvorný polymer je jeden, nebo směs několika neutrálních erodovatelnýcb polymerů, majících gelotvorné vlastnosti a vykazujících v podstatě pH-nezávislou rozpustnost. Tento neutrální gelotvorný polymer je s výhodou přítomen ve formulaci v množství větším než 10%, ale výhodněji větším než 20 % hmotnostních. (Termíny „erodovatelný“ a ..eroze^označují rozpouštění nebo rozpad (desintegraci) buďto polymeru samotného, nebo v kombinaci. Rozpouštění je možno urychlit mícháním a rozpad je možno urychlit mechanickou interakcí s tuhou látkou).

Vhodné neutrální gelotvorné polymery zahrnují polyethylenoxid (PEO), deriváty a členy skupiny PEO (například polyethylenglykol (PEG), který pokud možno existuje v tuhém stavu a má vhodnou molekulovou hmotnost nebo viskozitu). Tak například, neutrální gelotvorný polymer je polyethylenoxid nebo polyethylenglykol.

Jestliže se PEO používá jako samotný gelotvorný polymer, má s výhodou molekulovou hmotnost (MW) > 4 miliony (4 M) (například MW se rovná 4 až 8 milionům), eož odpovídá vodnému roztoku o viskozitě v rozmezí 1650 až 5500 MPa.s (nebo 1650 až 5500 cps, měřeno v 1% vodném roztoku při 25 °C. za použití Brookfieldova viskozimetru RVE s vřetenem ě. 2 při 2 ot/min). Jiné příklady vhodných PEO zahrnují PEO o molekulové hmotnosti přibližné 5 milionů (5 M), což

odpovídá vodnému roztoku o viskozitě v rozmezí 5500 až 7500 MPa.s, nebo PEO o molekulové hmotnosti přibližné 8 milionu (8M), eož odpovídá vodnému roztoku o viskozitě v rozmezí 10 000 až 15 000 MPa.s. Toto rozmezí pokrývá hodnotu pro typickou viskozitu roztoku (v cps), měřenou při 25 °C. udávanou pro tento polymer vlJSP24/NE, 2000 cdition. str. 2285 -2286.

PEO tedy může mít molekulovou hmotnost 4 až 8 milionů.

Jestliže PEG je použit jako jediný neutrální gelotvomý polymer, má s výhodou vysokou molekulovou hmotnost, například asi 20 000, což odpovídá rozmezí viskozity 2700 až 3500 MPa.s (nebo 2700 až 3500 cps), měřené za použití 50% vodného roztoku (hmotn./hmotn.) při 20 °C na kapiio lárním viskozimetru (dle Ubbelohdeho nebo na ekvivalentním viskozimetru). (Viz European

Pharmacopoeia 3^rd Ed.. 2000, Supplement str. 908-909.)

Jiné vhodné gelotvorné polymery zahrnují deriváty celulózy, jako je hydroxypropylmethyleelulóza (HPMC) nebo hydroxyethyleclulóza (HEC) (ale preferována je HPMC) o vhodné vysokých i? viskozitách (například „HPMC 10 000 cps“, „HPMC 15 000 cps, „HEC typu HÍCnebo „HEC typu H). Jestliže jsou použity jako jediný neutrální polymer, hydroxypropylmethylcelulózové polymery jako „IIPMC 10 0()0cpsa „IIPMC 15 000 cps Uiiaji zdánlivé viskozity 7500 až

000 MPa.s (nebo 7500 až 14 000 cps). respektive 11 250 až 21 000 MPa.s (nebo I I 250 až

000 cps), měřeno při 20 °C ve 2% (hmotn./hmotn.) vodném roztoku, vztaženo na sušenou látku, za použití kapilárního viskozimetru (dle Ubbelohdeho nebo na ekvivalentním viskozimetru). Jeden typ hydroxycthyleelulózového polymeru, například „Natrasol 250 Pharma. typ HIT' od firmy Hercules Incorporatcd (Aqualon) vykazuje typicky viskozitu přibližné 20 000 MPa.s, naměřenou na Brookfieldově viskozimetru (Synchro-Leetric Model LVI', 1% roztok, vřeteno ě. 4, rychlost 30 ot/min, faktor 200, 25 °C) (viz Natrosol Physical and Chemical Properties booklet, 33.007—E6 (1993), str. 21).

Když se použije směs neutrálních gelotvorných polymerů, může tato obsahovat například směs dvou nebo několika PEO, dvou nebo několika HPMC, směs PEO a IIPMC nebo směs PEO a PEG. Tak například PEO o molekulové hmotnosti 4, 5 nebo 8 milionů se může smísit s PEO o molekulové hmotnosti 1 milion, s PEO o molekulové hmotnosti 400 000, s PEO o molekulové hmotnosti 100 000 nebo s PEG o molekulové hmotnosti 6000.

Alternativně se neutrální gelotvomý polymer (například PEO) může použít v kombinaci $ negelotvorným neutrálním polymerem (jako je nízkomolekulární PEG, například PEG o molekulo35 vé hmotnosti nižší než 10 000). Příklady nízkomolekulárních PEG v takové kombinaci zahrnují PEG o molekulové hmotnosti 8000 (odpovídající viskozitnímu rozmezí 260 až 510 MPa.s), nebo PEG o molekulové hmotnosti 6000 (odpovídající viskozitnímu rozmezí 200 až 270 mPa.s).

Směs dvou nebo několika IIPMC může zahrnovat nízkoviskóziií (ne-gclotvorné) i vysokoviskóz40 ní (gelotvorné) látky. Například, „HPMC 50 cps. „HPMC 15cpsa „IIPMC 6 cps. jejichž zdánlivé viskozity jsou 40 až 60 MPa.s, 11,3 až 21,0 MPa.s, respektive 4,8 až 7,2 MPa.s (podle výše definovaných metod), se mohou použít jako směsi s'TIPMC’ 10 000 cps“nebo s'IIPMC

000 cps.

Směs dvou nebo několika polymerů stejného druhu, ale různé molekulové hmotnosti, se vyznačuje lepším řízením eroze, když formulace je ve formě tablety. Čím vyšší je molekulová hmotnost použitého PEO, samotného nebo ve směsi, tím méně tohoto polymeru je potřeba k přípravě formulace podle vynálezu.

Přesná formulace podle vynálezu závisí na molekulové hmotnosti a distribuci molekulové hmotnosti u zvoleného gelolvorného polymeru, pravě tak jako na kvalitě každého z použitých polymerů.

V jednom i aspektů vynálezu neutrální gelotvomý polymer je PEO o molekulové hmotnosti při>5 bližně 4 miliony nebo více, PEG o molekulové hmotnosti přibližně 20 000 nebo více, nebo deri- j CZ 299859 B6 vát celulózy o zdánlivé viskozitě přibližně 7500 cps nebo vyšší (měřeno jak popsáno výše).

Poměr neutrálního gelotvomého polymeru (například PEO, PEG nebo HPMC. zvláště PEO nebo HPMC, nebo jejich vzájemné směsi, nebo 2 nebo několik PEO nebo HPMC) k iota-karagenanu sc $ výhodou pohybuje v rozmezí 20:80 až 80:20 (zvláště přibližně 40:60 až 60:40, například přibližně 50:50).

Bazické farmaceuticky aktivní složky obsahují jednu nebo několik bazických skupin, které mají pKa s výhodou od 1 do 12 (například od 1 do 10. zvláště od 1 do 7) a popřípadě obsahují také io jednu nebo několik bazických skupin majících pKa vyšší než 10. Bazická farmaceuticky aktivní složka může tak mít jednu nebo několik hodnot pKa. ale alespoň jedna z nich má hodnotu s výhodou od 1 do 12 (například od 1 do 10, zvláště od 1 do 7). Příklady bazických skupin v těchto bazických farmaceuticky aktivních složkách, majících pKa od 1 do 12 (například od 1 do 10) zahrnují hydroxyamidiny, sekundární nebo terciární aminy, nebo primární a sekundární amidy.

Vhodné bazické farmaceuticky aktivní složky vykazují s výhodou nízkou až střední rozpustnost ve vodě (například rozpustnost ve vodě až 50 mg/ml, zvláště 0,001 až 20 mg/ml. při 25 °C a při pil 7.0) a jsou kladně nabité jedním nebo několika kladnými náboji (v závislosti na počtu a pKa bazických skupin ve farmaceuticky aktivní složce) při nízkém pí! (například při pil 1 až 6, zvláš2o tě při pH 1 až 2).

Vhodná bazická farmaceuticky aktivní složka je například sloučenina, vykazující kardiovaskulární aktivitu (jako je peptidický, nebo peptidu podobný, inhibitor trombinu). Peptidické inhibitory trombinu mají molekulovou hmotnost pod 1000, obsahují 1, 2, 3 nebo 4 peptidické vazby a vyká25 zují pll-závislou rozpustnost. Zahrnují peptidické inhibitory trombinu (a jejich profarmaka), které jsou genericky, a konkrétněji, popsány v přehledném článku Claessona (Blood Coagul. Fibrin. 5, 411 (1994)). právě tak jako ty, které jsou popsány v patentovém spisu US 4 346 078; v mezinárodních patentových přihláškách WO 97/23 499, WO 97/02 284, WO 97/46 577. WO 98/01 422, WO 93/05 069, WO 93/11 152, WO 95/23 609, WO 95/35 309, WO 96/25 426.

WO 94/29 336. WO 93/18 060 a WO 95/01 168, a EP přihláškách ě. 623 596. 648 780, 468 231, 559 046, 641 779, 185 390. 526 877, 542 525, 195 212, 362 002, 364 344, 530 167, 293 881. 686 642, 669 317 a 601 459. Peptidické inhibitory trombinu (nebo jejich profarmaka) zvláště zahrnují inogatran, melagatran {HOOC-CIU-RCgl-Aze Pab-ll: glycin, N—[2—[[[[4—(amino— iminomethyI)fenyl]methvl]ammo]karbonyl]-l-azetÍdinyi]- l-cyklohexyl-2-oxoethvJ]-, [2R35 [2S]]-){ a 11376/95 {ximelagatran; EtOiC-CEU-RCgl-Aze-Pab OH; viz příklad 17 ve

WO 97/23 499; glycin. N-[1-xyklohcxyl-2-[2-[[[[4-l(liydroxyimino)aminomethyl]fenyl]methyl]amino]karbonyl]-l-azctidinyl|-2~oxoethyl]-, ethylester. [S -(R*,S*)]-|.

V jiném aspektu vynálezu peptidické inhibitory trombinu (nebo jejich profarmaka) zahrnují ino40 gatran. melagatran. H376/95, Ph(3-CI)(5-OCH₂CIUF)H(OI 1)0(0) Aze-Pab(OMe) aPh(3 -CIH5 OCHF₂)-(/ř)CH(OH)C(ObAze Pab(OMe).

V dalším aspektu předložený vynález poskytuje formulaci jak je popsána výše, ve které bazická farmaceuticky aktivní složka je:

4?

Ph(3—C 1)( 5—OCH FN)—(/?)CIl(OH)C(O)-(<V)Azc-Pab(OMe) (sloučenina A): Pb(3-CI)(5-OCHE₂ý-(7?)CH(OH)C(O)-(‘V)Aze-Pab(2.6-diF)(OMe) (sloučenina D);

Ph(3 CI)(5-OC4I<^2E)~(/?)í41(OH)C(OHó^Ť)Aze-Pab(OMe) (sloučenina E);

Ph(3 d)(5-OCHF₂)-(/?)CH(OH)C(OHWe-Pab(OH) (sloučenina F);

5(> Ph(3-CI)(5 OCHF2)-(/?)GH(OH)C(OHÁ^T)Aze-Pab(2,6- diF)(OH) (sloučenina G);

Ph(3-CI)(5-OCH₂CI UF) -(/?)CH(OH)C(OHS^f)Aze-Pab(OH) (sloučenina 11).

-4CZ 299859 B6

Sloučeninu G je možno připravit metodami, které jsou podobné metodám, popsaným níže pro přípravu sloučenin F a H.

V jiném aspektu se vynález týká farmaceutické formulace, ve které bazická farmaceuticky aktiv5 ní složka je:

4/|3-[7/3,3-dimethyl-2-oxobutyl)-9-oxa-3,7-diazabícykl0[3.3.1 |non-3-yl]propyHamino Jbenzonitril (kterážto sloučenina je v dalším označována jako sloučenina B);

to 2. terč—butyí—2 (7-[3J4-kvananilino)propyl]-9-oxa^3,7-diazabicyklol3,3 J]non--3-yl|ethv Ikarbamát;

3. terc-butyl 2/ 7-(4/4-kyanfenyl)butyl]-9-oxa-3.7-diazabicyklo[3,3,1 ]non-3-yl (etbyIkarbamát; nebo

4. terc-bulyl-2-í 7-[(2S)-3 J4-kyanfenoxy)-2-hydroxypropyl]-9-oxa-3.7-diazabicyklo[3.3.1 Jnon-3 -yl{etliyIkarbamát (kterážto sloučenina jc v dalším označována jako sloučenina C):

přičemž tyto sloučeniny byly popsány ve spisu WO 01/28 992.

V dalším aspektu vynálezu bazická farmaceuticky aktivní složka je metoprolol nebo jeho sůl (jako jc jeho sukcinát nebo tartrát).

Formulace podle předloženého vynálezu může obsahovat: přídavky pro zpracování, stabilizátory; změkčovadla, barviva. mazadla (jako je stearyl fumarát sodný), pojivá, plniva nebo povrchově aktivní látky, nebo jiné excipienty, běžně používané při přípravě farmaceutických prostředků.

V jednom z konkrétních aspektů vynálezu, formulace podle předloženého vynálezu obsahuje .w mazadlo (jako je stearyl fumarát sodný).

V jiném aspektu předloženého vynálezu, molární poměr iota-karagenanu k bazické farmaceuticky aktivní složce se pohybuje v rozmezí 3:1 až 1:3.

V dalším aspektu, farmaceutická formulace podle předloženého vynálezu obsahuje 15 až 80% iota-karagenanu.

V jiném aspektu, farmaceutická formulace podle předloženého vynálezu obsahuje 15 až 80% jednoho nebo několika gelotvorných polymerů.

V dalším aspektu, farmaceutická formulace podle předloženého vynálezu obsahuje 1 až 50 % bazické farmaceuticky aktivní složky.

V ještě dalším aspektu, farmaceutická formulace podle předloženého vynálezu obsahuje 0 až.

10 % (zvláště 1 až 10 %) přídavku pro zpracování, stabilizátoru, změkčovadla, barviva, mazadla, pojivá nebo plnidla, nebo jiného excipientů, běžně používaného při přípravě farmaceutických prostředků.

Máme za to, že inhibice uvolňování bazické farmaceuticky aktivní složky z formulace při kyše50 lem pH (zvláště v podstatě pH-nezávislého řízeného uvolňování) je založena na následujícím mechanizmu. Při nízkém pil by bazické farmaceuticky aktivní ingredientní léčivo mělo mít relativně vysokou rozpustnost, protože existuje v silně ionizovaném stavu, a proto bychom očekávali, že se bude rychle uvolňovat /Jakékoliv neutrální matrice. Domníváme se, že při kyselém pil a v přítomnosti iota-karagenanu se negativně nabitý iota-karagenan a kladně nabité léčivo přita55 bují, což zpomaluje uvolňování léčiva a tím přispívá ke konstantnějšímu disolučnímu profilu.

- 5 CZ 299859 B6

Při vyšším pH, kdy farmaceutické léčivo není tak silně ionizováno, nebo není ionizováno vůbec, a proto by se mělo pomalu uvolňovat z jakékoliv neutrální matrice, máme za to. že výše zmíněná iontová interakce je rovněž méně významná a disoluční profil je řízen převážně kombinací bobtnacích, gelotvorných a erozních profilů neutrálního gelotvorného polymeru(polymerů) a anionto5 vcho polymeru, iota-karagenanu, které jsou použity ve formulaci.

Výsledné bobtnací. gelotvomé a erozní vlastnosti formulace podle vynálezu souvisejí s vlastnostmi jako je molekulová hmotnost a distribuce molekulární hmotnosti gelotvorného polymeru(polymerů) i aniontového polymeru, a také souvisí s pl I—závislou rychlostí hydrolýzy aniontovcHi ho polymeru. Jc tedy možno získat různé rychlosti uvolňování bazické farmaceuticky aktivní složky úpravou charakteru (například molekulové hmotnosti nebo distribuce molekulové hmotnosti) gelotvorného polymeru, množství iota-karagenanu ve formulaci a/nebo poměru gelotvorného polymeru k iota-karagenanu.

i? Formulace podle předloženého vynálezu může být ve formě pevné dávkové formy (jako jsou tablety, tobolky, pelety nebo prášek, dispergovaný ve vhodném zásobníku, nebo ve formě kombinované formulace (jako jsou potahované pelety, podávané jako tablety, tobolky nebo sáčky)).

V jednom / aspektů vynález posky tuje tablety, obsahující 20 až 500 mg (zvláště 40 až 60 mg) bazické farmaceuticky aktivní složky (jako je 11376/95; nebo sloučenina A, B nebo C).

Když je farmaceutická formulace podle předloženého vynálezu ve formě tablet, jsou tyto tablety s výhodou připraveny tak. aby se všechna bazická farmaceuticky aktivní složka, v ionizované nebo neionizované formě podle pH v každé části gastrointestinálního traktu, uvolnila během při25 bližně 20 hodin, například 18 až 22 hodin (alternativně 20 až 26 hodin).

Ještě další aspekt se týká přípravy formulace podle předloženého vynálezu, spočívající ve smíšení iota-karagenanu, jednoho nebo několika neutrálních gelotvorných polymerů a bazické farmaceuticky aktivní složky, a popřípadě v komprimaci zmíněné směsi (s výhodou za přítomnosti mazadla (jako je stearylfumarát sodný, prodávaný pod jménem PRUV^IM)), za účelem přípravy tablet.

Tabletová formulace se může připravit například přímou komprimací nebo granulaci za vlhka.

Při přímé komprimaci se bazická farmaceuticky aktivní složka pečlivě smísí s gelotvorným polymerem a iota-karagenanem a podle potřeby s přídavnými excipienty. Prosáté mazadlo (jako je stearylfumarát sodný) se přidá k této směsi a znovu se sní promíchá. Výsledná směs se pak komprimuje do tablet.

Při granulaci za vlhka se bazická farmaceuticky aktivní složka pečlivě smísí s gelotvorným polymerem a iota-karagenanem. Výsledná směs se pak může zvlhčit:

Roztokem vhodného pojivá (jako je polyvinylpyrrolidon (PVP), rozpuštěný ve vhodném rozpouštědle (jako je ethanol nebo voda)); nebo vhodným rozpouštědlem (jako je ethanol nebo

4? voda); a vzniklá směs se granuluje za použití standardních nebo modifikovaných postupů (jako jc sprejová granulace). Po vysušení vzniklého granulátu (například v sušárně při vhodné teplotě (jako například přibližně 50 °C) po vhodnou dobu (jako je 20 až 24 hodin)) se granulát rozemele (například mletím za sucha nebo za vlhka), smísí se s mazadlem (jako je stearylfumarát sodný, stearát hořečnatý' nebo talek) a vzniklá kompozice se lisuje do tablet. Vysušený granulát se může použit k plnění tobolek (jako jsou želatinové tobolky).

Další aspekt předloženého vynálezu se týká způsobu přípravy formulace jak byla popsána výše.

Sloučeniny, aktivní vůči trombinu, a jejich profarmaka se mohou použít pro terapii a/nebo profv55 laxi trombózy a nadměrné sráží ivosti v krvi a/nebo tkáních živočichů, včetně člověka. Je známo,

-6CZ 299859 ΰό že nadměrná sráží i vost může vést k trombo-embolickým onemocněním. Stavy, související s nadměrnou sráží i vostí a trombo-em holickými onemocněními, které je možno zmínit, zahrnují zděděnou nebo získanou rezistenci vůči aktivovanému proteinu C, jako je mutace faktoru v („factor v Leiden) a zděděné nebo získané deficience antitrombinu III, proteinu C, proteinu s nebo hcparinového kofaktoru II. Jiné stavy, o kterých je známo, že souvisejí s nadměrnou srážlivostí a trombo-embolickým onemocněním, zahrnují cirkulující antifosfolipidové protilátky („Lupus anticoagulant), homocysteinémii, heparinem indukovanou trombocytopenii a defekty fibrinolýzy, právě tak jako koagulaění syndromy (například roztroušenou intravaskulární koagulaci (DIC) a obecně vaskulární poranění (například v důsledku chirurgického zákroku).

V dalším aspektu se předložený vynález týká formulace, jak byla výše popsána, pro použití v terapii (léčbě i profylaxí), například jako léčivo (jakoje léčivo pro kardiovaskulární poruchy, například tromboembolismus).

Formulace podie předloženého vynálezu je užitečná pro přípravu léčebného prostředku, použitelného v terapii.

Jiný aspekt předloženého vynálezu se týká způsobu terapie kardiovaskulárních poruch (například tromboembol i zniu) u teplokrevných živočichů, trpících nebo ohrožených uvedenými poruchami, který spočívá v podání terapeuticky účinné dávky sloučeniny podle vynálezu jedinci, který takovou terapii potřebuje.

Jisté peptid ické inhibitory trombinu, nebo jejich profarmaka, se mohou připravit postupy, popsanými níže.

Obecné postupy

TLC se provádí na silikagelu. Chirální HPLC analýza se provádí na 46 mm x 250 mm koloně Chiracel OD s Sem předkolonkou. Teplota kolony se udržuje na 35 °C, průtok 1,0 ml/min. Používá se LV detektor Gilson 115 UV při vlnové délce 228 nm. Jako mobilní fáze se používají hexany, ethanol a kyselina trifluoroctová, jejichž příslušné poměry jsou udány u jednotlivých sloučenin. Typicky, produkt se rozpustí v minimálním množství ethanolu a tento roztok se zředí mobilní fází,

V níže uvedených preparacích se LC-MS/MS provádí na přístroji 11P-1100 s injektorem CTCPAL a s použitím kolony 5 Tm, 4x100 mm ThermoQuest, llypersil BDS Cl8. Použije se MS detektor ΛΡΙ-3000 (Seiex). průtok 1,2 ml/min a mobilní fáze (gradient) sestává z 10 až 90% acetonitrilu s 90 až 10 % 4 mM vodného octanu amonného, přičemž oba obsahují 0,2 % kyseliny mravenčí.

Hmotová spektra o nízkém rozlišení (LRMS) se měří na spektrometru MieromassZQ v ESI posneg switching ion modu (hmotnostní rozsah m/z 100 až 800); a hmotnostní spektra o vysokém rozlišení (1IRMS) sc měří na spektrometru Micromass LTC v FS negativním ionizačním modu (rozsah m/z 100 až 1000); jako vnitřní hmotový standard se použije Leueine Enkefalin (C2JL7NA).

II NMR spektra se měří za použití tetramcthylsilanu jako vnitřního standardu.

-7CZ 299859 Bó

Příprava Ph(3-CI)(5-0CHF₂H/?O<0H)C(()HSTAze-Pab(0Me) (sloučenina A)

(i) 3-Chlor-5-mcthoxybenzaldehyd

3,5 -Oichloranisol (74.0 g; 419 mmol) v THF (200 ml) se přikape ke kovovému hořčíku (14.2 g; 585 mmol. promyty (),5N HCI) v THF (100 ml) při 25 °C. Po přidání se přikape 1.2 -dibromethan (3.9 g; 20.8 mmol). Výsledná tmavohnědá směs se zahřívá k refluxu 3 hodiny. Pak se směs io zchladí na 0 °C' a přidá se Ν,Ν -dimethylformamid (60 ml) v jedné dávce. Směs se rozdělí mezi diethylether (3 x 400 ml) a 6N HCl (500 ml). Spojené organické extrakty se protnyjí solankou (300 ml), vysuší se nad Na_?SO₄, /filtrují se a zahustí ve vakuu. Zbylý olej se podrobí flash chromatografii (2 x) na silikagelu v soustavě hexan-ethylacetát (4:1). čímž se získá 38,9 g (54%) subtitulní sloučeniny ve formě žlutého oleje.

¹H NMR (300 Mllz, CDCl·,), δ 9,90 (s. 1H); 7,53 (s. 1 iI); 7,38 (s, IH); 7,15 (s, 1II): 3,87 {s. 3H).

(i i) 3-Chlor-5-hydro,\y benzaldehyd

Roztok 3-ehlor-5 metlioxybenzaldehydíi (22,8 g; 134 mmol; viz stupen (i) výše) v dichlormethanu (250 ml) se ochladí na 0 °C. Pak se kněmu během 15 minut přikape bromid boritý (15,8 ml; 167 mmol). Směs se míchá 2 hodiny a pak se pomalu přidá voda (50 ml). Roztok se extrahuje ethyletherem (2 x 100 ml), organické vrstvy sc spojí, vysuší se nad Na₂SO₄, zfiltrují se a zahustí ve vakuu. Flash chromatografie na silikagelu v soustavě hexan-ethylacetál (4:1) poskytne subtitulní sloučeninu (5,2 g; 25 %).

'H NMR (300 MHz. CDCh). δ 9,85 (s. III): 7.35 (s, 1H): 7,20(s, IH): 7.10(s. IH);3,68(s. IH).

(iii) 3-Chlor-5 difiuormethoxybenzaldehyd so

Roztok 3-chlor-5- hydroxybenzaldehydu (7.5 g; 48 mmol; viz stupeň (ii) výše) ve 2-propanolu (250 ml) a 30% KOH (100 ml) se zahřívá k refluxu. Do této reakční směsi se 2 hodiny uvádí za míchání CHC1F₂. Reakční směs se ochladí, okyselí IN HCl a extrahuje ethylacetátem (2 x 100 ml). Organické vrstvy se promyjí solankou (100 ml), vysuší se nad Na₂SO₄, zfiltrují se a zahustí ve vakuu. Zbytek se podrobí flash chromatografií na silikagelu v soustavě hexanzethylaeetát (4:1), čímž. se získá subtitulní sloučenina (4,6 g; 46 %).

'll NMR (300 MHz, CDCI,). δ9.95 (s, IH); 7.72 (s, IH); 7.52 (s. IH); 7,40 (s, IH); 6,60 (1. J,| F - 71.1 Hz, IH).

(iv) Ph(3-CI)(5-OCHF₂H^^)CH(OrMS)CN

Roztok 3-chlor-5-difluormethoxybenzaIdehydu (4,6 g; 22,3 mmol; viz stupeň (iii) výše) v dichlormethanu (200 ml) se ochladí na 0 ^QC. Pak se přidá ZnF (1.8 g: 5,6 mmol) a trimethyl-8CZ 299859 B6 silylkyanid (2,8 g; 27,9 mmol) a reakční smés se nechá ohřát na laboratorní teplotu a míchá se 15 hodin. Pak se směs částečně zahustí ve vakuu, čímž se získá subtitulní sloučenina ve formě kapaliny, která se použije přímo ve stupni (v), bez dalšího čištění nebo charakterizace.

(v) Ph(3-CIX5-OCHF_?H7?,WH(OlI)C(NH)OEt

Ph(3-CI)(5-OCHF_?H7?_tlS^f)CH(OTMS)CN (6,82 g; předpokládáno 22,3 mmol; viz stupeň (iv) výše) se přikape ke HCl/EtOH (500 ml). Reakční sines se míchá 15 hodin a pak se částečně zahustí ve vakuu, čímž se získá subtitulní sloučenina ve formě kapaliny, která se použije přímo ío ve slupni (vi), bez dalšího čištění nebo charakterizace.

(vi) Ph(3-CI)(5-OCHF₂)-(7?,y)CH(OH)C(O)OEt

Ph(3-(4)(5-OCHF2H^ó^r)CH(OH)C(NH)OEt (6.24 g; předpokládáno 22,3 mmol; viz stupeň (v) is výše) se rozpustí v THF (250 ml), přidá se 0,5M Na₂S()₄ (400 ml) a reakční směs sc míchá hodin při 40 °C. Pak sc reakční směs částečně zahustí ve vakuu, aby sc odstranila většina THF a zbytek se extrahuje Et>0 (3 x lOOml), vysuší se nad zfiltruje se a zahustí ve vakuu.

Získá sc tak subtitulní sloučenina ve formě tube látky, která se použije ve stupni (vii) bez dalšího čištění nebo charakterizace.

(vii) Ph(3-CI)(5 OCIl[^;.)-(/?,\)CH(OH)C(())OH

Roztok Ph(3-Cl)(5-OCHF₂) (/čS)CH(()H)C(O)OEt (6,25 g; předpokládáno 22,3 mmol; viz stupeň (vi) výše) vc 2-propanoIu (175 ml) a 20% KOH (350 ml) se míchá při teplotě místnosti

15 hodin. Reakční směs sc pak částečně zahustí ve vakuu, aby se odstranila většina 2-propanolu.

Zbylá směs se okyselí IM Na₂SO₄, extrahuje se F,t_?O (3 x 100 ml), vysuší se nad Na₂S()₄ a zahustí se ve vakuu. Získaný tuhý zbytek se podrobí flash chromatografii na silikagelu v soustavě ClICf-MeOH-konc.NH₄OH (6:3:1), čímž se získá amonná sůl subtitulní sloučeniny. Tato amonná sůl se pak rozpustí ve směsi ethylacetátu (75 ml) a vody (75 ml) a okyselí se 2N 11CI.

3u Organická vrstva se oddělí a promyje solankou (50 ml), vysuší sc nad Na₂SO₄ a zahustí se ve vakuu. Získá sc tak subtitulní sloučenina (3.2 g; 57 %. stupeň (iv) až (vii)).

'lINMR (300 MHz. CDiOD). δ 7.38 (s. III): 7.22 (s. III); 7,15 (s. IH); 6.89 (t, J„ , = 71.1 Hz, IH): 5.16 (s. IH).

(viii) Ph(3-Cl)(5-OCHF₂H/?)CHíOH)C(O)OH (a) a Ph(3-Cl)(5-OCHE₂)-(.S^T)CH(OAc)C(O)OH(b)

Směs Ph(3-Cl)(5-OCHF_;)%/í_;lV)CH(OH)C(O)OH (3,2 g; 12.7 mmol; viz stupeň (vii) výše)

-to a lipázy PS ..Amano('2,0 g) vc vinylacetátu (125 ml) a MTBE (125 ml) se refluxuje 48 hodin, Reakční směs se ochladí, zfiltruje se přes celiť‘* a filtrační koláč se promyje ethylacetátem. Filtrát se zahustí ve vakuu a zbytek se podrobí flash chromatografii na silikagelu v soustavě CHCl₃MeOH-konc.NH₄OH (6:3:1). čímž se získají amonné soli subtitulních sloučenin (a) a (b). Sloučenina (a) ve formě svč soli se rozpustí ve vodě, okyselí se 2N HCI a extrahuje se ethylacetátem.

Organická vrstva se promyje solankou, vysuší se nad Na_?SO₄, zfiltruje se a zahustí ve vakuu, čímž se získá subtitulní sloučenina (a) (1,2 g; 37 %),

Pro sloučeninu (a):

5(1 'H NMR (300 MHz. CD-.OD). δ 7,38 (s, IH); 7.22 (s, IH); 7.15 (s. IH): 6,89 (I. J„ _t = 71.1 Hz, IH): 5.17 (s, IH).

.. o .

(ix) Ph(3-CI)(5-OCHF₂)-(/?)CH(OH)C(0)-Aze-Pab( Ieoc)

K roztoku Ph(3-Cl)(5-OClIF₂)-ý/?)CH(OlI)C(O)OH (1,1 g; 4,4 mmol; viz stupeň (viii) výše) a H-Aze-Pab(Teoc) (viz mezinárodní patentovou přihlášku WO 00/42 059; 2.6 g; 5,7 mmol) v dimethylformamidu (50 ml) se při 0 ^QC přidá PyBOP (2,8 g; 5,3 mmol) a kolidin (l,3g; 10,6 mmol). Reakční směs se míchá 2 hodiny při 0 °C a pak při teplotě místnosti dalších 15 hodin. Pak se reakční směs zahustí ve vakuu a zbytek podrobí flash chromalografíi na silikagelu (3 x), napřed v soustavě CHCI-EtOH (9:1), pak v soustavě EtOAc-EtOH (20:1). a nakonec v soustavě CHiChrCEbOH (95:5). čímž se získá subtitulní sloučenina (1.0 g; 37%) ve formě bílé tuhé látky.

H NMR (300 MHz. CD,OD. směs rolamerů). δ 7,79 až 7,85 (d. .1 - 8.7 liz, 2H): 7.15 až 7.48 (lil. 5H); 6.89 a 6,91 (t. J„ ,= 71.1 Hz. 1H): 5.12 a 5.20 (s. 1H); 4.75 až 4,85 (m, 1H): 3,97 až i? 4.55 (m. 6H); 2.10 až 2.75 (m. 211); 1.05 až 1,15 (m,2H); 0,09 (s.9H). MS (m/z): 611 (Μ i 1)'.

(x) Pb(3 C'l)(5-OCHFi)-(/í)CH(OH)C(())-Aze-Pab(OMe.Teoc)

Ph(3 CI)(5-OCHF₂) ý/ř)CII(OH)C(O)-Aze Pab(Teoc) (0,40 g; 0.65 mmol; viz stupeň (ix) výše) se rozpustí ve 20 ml acetonitrilu a přidá se 0.50 g (6,0 mmol) hydroehloridu O-methylhydroxylatninu. Směs se zahřívá 2 hodiny při 70 °C, pak se rozpouštědlo odpaří a zbytek se rozdělí mezi vodu a cthylacetát. Vodná fáze se ještě dvakrát extrahuje ethylaeetátem a spojené organické fáze se promyjí vodou, solankou, vysuší se nad Na₂SO₄, /filtrují se a odpaří. Výtěžek produktu je 0.41 g (91%).

Ή NMR (400 MHz, CDCl·,), 6 7,83 (bt, 1H); 7,57 (bs. 111): 7,47 (d. 211): 7,30 (d. 2H): 7,20 (m. 1H): 7,14 (m, IH); 7,01 (m, 1H); 6,53 (I. 1H): 4,89 (s, 1H): 4,87 (m, 1H): 4,47 (m. 211): 4.4až4,2 (b, IH): 4,17 až 4,1 (m, 3H), 3.95 (s. 311); 3,67 (m, lH);2,68(m, IH); 2.42 (m. IH): 0,97(111, 2H); 0,01 (s. 9H).

.1(1 (xi) Ph(3-CI)(5-OCHF₂H/?)CH(OH)C(O)-CS’)Aze-Pab(OMe)

Ph(3-CI)(5-OCHF₂)-(7?)CH(OH)C(O)-Aze -Pab(OMeJeoc) (0,40 g; 0,62 mmol; viz stupeň (x) výše) se rozpustí v 5 ml TFA a nechá se 30 minut reagovat, TFA se odpaří a zbytek se rozdělí mezi ethylacctát a vodný roztok NaHCO.v Vodná fáze se dvakrát extrahuje ethylaeetátem a spojené organické fáze se promyjí vodou, solankou, vysuší se nad Na₂SO.,. zfiltrují se a rozpouštědlo se odpaří. Produkt se podrobí lyofilizaei ze směsi voda-acetonitril. Není nutné žádné čištění: výtěžek 0,28 g (85 %), ‘H NMR(600 MHz, CDCl,),67.89 (bl, 111); 7.57 (d. 211); 7,28 (d. 211); 7,18 (m, IH); 7,13 (m. IH): 6,99(m, IH); 6,51 (t, 1H); 4,88 (s, lH);4.87(m, 1H); 4,80 (bs, 211); 4,48 (dd, 111):4,43 (dd, lH):4.IO(m. IH):3.89(s. 311); 3.68(m. IH); 2,68(m, IH): 2,40(m, IH).

^l C NMR (125 MHz; CDCl,): (karbonylové a/nebo amidinové uhlíkové atomy, rotamery)

4í Ó 172,9; 170.8; 152.7: 152,6.

HRMS: vypočteno pro C₂₂H₂iCIF₂N.iO_s (Μ - H) 495.1242, nalezeno 495.1247.

Příprava sloučeniny D (Ph(3-CI)(5-OCl IE₂HA)CH(OH)C(OKSýAze Pab(2,6-diF)(OMe) (i) 2,6- Difiuor-4-[(methylsulfínyl)(mcthy lthio)mcthyl]benzon itri I (Methvlsullmyl)(methylthio)methaii (7.26 g; 0,0584 mol) se rozpustí ve 100 ml suchého THE v atmosféře argonu a roztok se ochladí na - 78 °C. Pak se přikape za míchání butyllithium v hexa55 nu (ló ml ],6M roztoku; 0,0256 mol). Směs se míchá 15 minut. Mezitím se roztok 3,4.5-trifluor- 10 .

benzonitrilu (4,0 g; 0,025 mmol) ve 100 ml suchého THF ochladí na -78 °C v atmosféře argonu a kanylou se do něho během 35 minut přidá první roztok. Po 30 minutách se odstraní chladící lázeň a když (eplota reakční směsi dosáhne teploty místnosti, směs se nalije do 400 ml vody. THF sc odpaří a zbylá vodná fáze se extrahuje třikrát diethyletherem. Spojené etherické fáze se pro5 myjí vodou, vysuší se nad Na^SCC a odpaří se. Získá se 2.0 g (30 %) produktu.

'fl NMR (500 MHz, CDCh), 5 7.4 až 7,25 (m. 211): 5,01 (s. IH. diastcrcomer): 4,91 (s. IH, diastereomer), 2,88 (s, 311, diastereomer); 2,52 (s, 3H, diastereomer); 2,49 (s, 3H, diasiereomer); 2,34 (s. 3H, diastcrcomer); 1,72 (br, IH).

io (ii) 2.6-Difluor 4 forniylbenzonitril

2.6- DifiuoM-[(methylsulfinyI)(methylthio)methyl]bcnzonilril (2,17 g; 8,32 mmol; viz stupeň (i) výše) se rozpustí v 90 ml THF a přidá se 3,5 ml koncentrované kyseliny sírové. Směs se nechá i? stát 3 dny při teplotě místnosti a pak se nalije do 450 ml vody. Extrahuje se třikrát ethylacetátem a spojené organické fáze se promyjí dvakrát vodným roztokem hydrogenuhličitanu sodného a solankou, vysuší se nad Na^SOj a rozpouštědlo se odpaří. Výtěžek 1,36 g (98%). Poloha formy love skupiny se určí pomocí ^l3C NMR spektroskopie. Signál fluorovaných atomu uhlíku při 162,7 ppm vykazuje očekávané interakční schéma se dvěma interakčními konstantami velikosti

2o 260 Hz a 6,3 Hz. odpovídajícími ipso-, respektive mcta-interakci atomů fluoru.

'H NMR (400 MHz, CDCh). δ 10.35 (s, IH); 7.33 (m, 211).

(iii) 2,6-Difluor 4-hydroxymelhylbenzonitril

2.6- Difluor 4-formylbcnzonitril (1,36 g; 8,13 mmol; viz stupeň (ii) výše) se rozpustí ve 25 ml methanolu a roztok se vychladí v ledové lázni. K roztoku se po částech přidává borohydrid sodný (0,307 g: 8,12 mmol) za míchání a reakční směs se pak ponechá 65 minut. Rozpouštědlo se odpaří a zbytek se rozdělí mezí diethylether a vodný roztok hydrogenuhličitanu sodného, Etherická vrstva se promyje ještě vodným roztokem hydrogenuhličitanu sodného a solankou, vysuší se nad Na:SOj a rozpouštědlo se odpaří. Surový produkt brzy zkrystaluje a může se použít bez čištění dále. Výtěžek 1,24 g (90 %).

'HNMR (400 MHz, CDCh). « 7.24 (m. 211); 4,81 (s.2H); 2.IO(br, IH).

(iv) 4-Kyan-2.6 difluorbenzyl methansulfonát

K ledem chlazenému roztoku 2,6-difluor-4 hydroxymethylbenzonitrilu (1.24 g; 7,32 mmol; viz stupeň (iii) výše) a methansulfonylchloridu (0.93 g; 8.1 mmol) v 60 ml methylenchloridu se za míchání přidá triethylamin (0.81 g; 8.1 mmol). Po 3 hodinách při 0 °C se směs promyje dvakrát IM HCI a jednou vodou, vysuší se nad Na_?S(J a rozpouštědlo se odpaří. Produkt se může použít bez dalšího čištění, výtěžek 1,61 g (89 %).

'HNMR (300 MHz. CDCh). íi 7.29 (m. 211); 5.33 (s. 211); 3.07 (s. 311).

(v) 4-Azidomethyl 2,6-diťluorbenzonitnl

Směs 4-kyan-2,6 difluorbenzyl-methaiisulíonátu (1,61 g; 6,51 mmol; viz stupeň (iv) výše) a azidu sodného (0,72 g; 0,0111 mol) v 10 ml vody a 20 ml dimethylfonnamidu se míchá přes noc při teplotě místnosti. Výsledná směs se pak nalije do 200 ml vody a extrahuje se třikrát diethyletherem. Spojené etherické fáze se promyjí pětkrát vodou, vysuší se nad Na^SO., a rozpouštědlo se odpaří. Malý vzorek se odpaří pro účely NMR analýzy a produkt se zkrystaluje. Zbytek se opatrně odpaří, ale ne zcela dosucha. Podle NMR spektra a analytické HPLC se předpokládá téměř kvantitativní výtěžek (teorie 1.26 g).

-11.

CZ 299859 Bó 'H NMR (400 MHz, CDCIJ. δ 7.29 (in, 2H); 4,46 (s, 2H).

(vi) 4-Aminomethyl-2.6-difluorbenzonitriI

Reakce se provede způsobem, popsaným v J. Chem. Res. (M) (1992). 3 128. K suspenzi 520 mg 10% Pd/C (50% vlhkosti) ve 20 ml vody se přidá roztok borohydridu sodného (0.834 g; 0,0221 mol) ve 20 ml vody. Dojde k vývoji malého množství plynu. 4-Azidomethyl-2,6-dífluorbenzon itril (1,26 g; 6,49 mmol: viz stupeň (v) výše) se rozpustí v 50 ml THF a během 15 minut se přidá k výše uvedené vodné směsi v ledové lázni. Smés se míchá 4 hodiny, načež se k ní přidá io 20 ml 2M HCI a zfiltruje se přes celit. Celit se promyje ještě vodou a spojené vodné táze sc promyjí ethy lacetátem a pak se zalkalizují 2M NaOH. Extrahuje se třikrát methy lenchloridem a spojené organické fáze se promyjí vodou, vysuší nad Na₂SO₄ a rozpouštědlo se odpaří. Výtěžek je

0.87 g (80%).

'HNMR (400 MHz. CDCh), δ 7.20 (m, 211); 3.96 (s,2H); 1,51 (br, 211).

(v ii) 2,6 D i fluor-4-terc-butoxy karbony lam i noinclhyl benzonitril

K roztoku 4-aminomethyl 2.6 difluorbenzonitrílu (0,876 g; 5,21 mmol; viz stupeň (vi) výše)

2i) v 50 ml THF se přidá roztok di-terc butyldikarbonátu (1,14 g; 5,22 mmol) v 10 ml THE. Směs sc míchá 3.5 hodiny, pak se THF odpaří a zbytek se rozdělí mezi vodu a ethylacetát. Organická vrstva se promyje třikrát 0.5M HCI a vodou, vysuší se nad Na₂SO₄ a rozpouštědlo se odpaří. Produkt se může použít bez dalšího čištění. Výtěžek je 1,38 (99 %), '11 NMR (300 MHz. CDCIJ, δ 7,21 (m. 211); 4,95 (br, I H); 4,43 (br, 2H); 1,52 (s, 9H).

(viii) Boc Pab(2,6-diF)(OH)

Směs 2.6—difIuor—4—tere butoxykarbonylaininomethylbenzonitrilu (1,38 g; 5.16 mmol; viz stupeň (vii) výše), hydrochloridu hydroxylamínu (1.08 g; 0,0155 mol) a triethylaminu (1,57 g; 0.0155 mol) ve 20 ml ethanolu se míchá 36 hodin při laboratorní teplotě. Pak se rozpouštědlo odpaří a zbytek se rozdělí mezi vodu a methylenchlorid. Organická vrstva se promyje vodou, vysuší nad Na₂SO₄ a rozpouštědlo se odpaří. Produkt sc může použít bez dalšího čištění. Výtěžek E43g(92%).

'H NMR (500 MHz. CDW).8 7,I4 (m, 2H): 4.97 (br. IH); 4.84 (br. 2H); 4,40 (br, 2H); 1,43 (s. 9H).

(ix) Boe-Pab(2,6-diF).HOAe

4(1

Reakce se provede postupem, popsaným Judkinsem a spol. (Synth. Comni. (1998), 4351). BocPab(2,6-diF)(OH) (1,32 g; 4,37 mmol; viz stupeň (viii) výše), anhydrid kyseliny octové (0,477 g; 4,68 mmol) a 442 mg 10% Pd/C (50% vlhkosti) ve 100 m! kyseliny octové se hydrogenuje 3,5 hodiny při tlaku 0,506625 MPa (5 atm). Smés se zfiltruje přes celit, promyje se ethanolem a rozpouštědlo se odpaří. Zbytek se podrobí lyofílizaci z acetonitrilu a vody s několika kapkami ethanolu. Subtitulní produkt je možno použít bez dalšího čištění. Výtěžek produktu je 1,49 g (99 %).

'11 NMR (400 MHz, CD,OD), δ 7,45 (m, 2H); 4,34 (s, 211); 1,90 (s, 3H); I,40 (s, 911).

(x) Boc-Pab(2,6-diF)(Teoc)

K. roztoku Boc Pab(2.6 dilj.HOAc (1,56 g; 5.49 mmol; viz stupeň (ix) výše) ve 100 ml THF a 1 ml vodv se přidá 2 (trimethylsilyl)ethy l-p-nitrofenvlkarbonát (1,67 g; 5,89 mmol). Pak se

5? během 5 minut přikape roztok uhličitanu draselného (1,57 g; 0,0114 mol) ve 20 ml vody a směs

- p.

C.7. 299859 B6 se míchá přes noc. TI 1F se odpaří a zbytek sc rozdělí mezi vodu a methylenchlorid. Vodná vrstva se extrahuje methylenchloridem a spojené organické fáze se promyjí dvakrát vodným roztokem hydrogenuhličitanu sodného, vysuší se nad Na₂SO₄ a rozpouštědlo se odpaří. Zbytek se podrobí flash chromatografíí na silikagelu v soustavě heptanethylacetát (2:1). čímž se získá 1,71 g (73 %) čistého produktu.

'11 NMR(400MHz. CDCl·,), δ 7.43 (m, 2H); 4,97 (br, lil): 4,41 (br, 2H); 4,24 (m. 2H); 1,41 (s,9H); IJ 1 (m, 2H); 0,06 (s. 911).

io (xi) Boc-Aze Pab(2,ó-diF)(Teoc)

Boc-Pab(2.6-diF)(Teoc) (1,009 g; 2,35 mmol; viz stupeň (x) výše) se rozpustí v 50 ml ethylacetátu, nasyceného plynným chlorovodíkem. Směs se nechá stát 10 minut, rozpouštědlo se odpaří, odparek se rozpustí v 18 ml DMF a pak se ochladí v ledové lázni. Přidá se Boc-Aze-OH (0.450 g; 2.24 mmol), PyBOP (1,24 g; 2,35 mmol) a nakonec diisopropylethylamin (1,158 g;

8,96 mmol). Reakční směs se 2 hodiny míchá, pak se nalije do 350 mi vody a extrahuje se třikrát ethylacetátem. Spojené organické fáze se promyjí solankou, vysuší se nad Na₂SO₍ a rozpouštědlo sc odpaří. Zbytek se podrobí flash chromatografíí na silikagelu v soustavě heptan-ethylacetát (1:3), čímž se získá 1,097 g (96 %) žádaného produktu.

'HNMR (500 MHz, CDCl.;). δ 7.46 (ni. 2H); 4,65 až 4,5 (m, 3H); 4,23 (m, 2H): 3,87 (m, III); 3.74 (m. 111):2.45 až 2,3 (m, 2H); 1,40 (s,9H); 1,10 (m. 2H): 0,05 (s. 911).

(xii) Ph(3-d)(5-OCHF₂)-(Á)CH(OH)C(O) Aze- Pab(2,6-diF)(Tcoc)

Boc-Aze-Pab(2,6-diF)(Teoc) (0.256 g; 0,500 mmol; viz stupeň (xi) výše) se rozpustí vc 20 ml ethy lacetátu, nasyceného plynným chlorovodíkem. Směs se nechá stát 10 minut, rozpouštědlo se odpaří a odparek se rozpustí v 5 ml DMF. Pak se přidá Ph(3-Cl)(5 OCHF₂) (Z?)CH(OH)C(O)OH (0,120 g; 0,475 mmol; viz přípravu sloučeniny A (viii) výše), PyBOP (0,263 g; 0,498 mmol) a nakonec diisopropylethylamin (0,245 g; 1,89 mmol). Reakční smčs se míchá 2 hodiny a pak sc nalije do 350 ml vody a extrahuje se třikrál ethylacetátem. Spojené organické fáze se promyjí solankou, vy suší se nad Na₂SO₄ a rozpouštědlo se odpaří. Zbytek se podrobí flash chromatografíí na silikagelu v ethylacetátu, čímž se získá 0,184 g (60 %) žádaného podtitulního produktu.

'HNMR (400 MHz, CD;OD, smčs rotamerú). δ 7,55 až 7,45 (ni, 211); 7.32 (m, IH, majoritní rotainer); 7,27 (m, IH, minoritní rotamer); 7,2 až 7,1 (m, 2H); 6,90 (t, 1H, majoritní rotamer); 6,86 (t. 111, minoritní rotamer); 5.15 (s, 111, majoritní rotamer); 5,12 (m. IH, minoritní rotamer); 5,06 (s. IH, minoritní rotamer); 4,72 (m. IH, majoritní rotamer); 4,6 až 4,45 (m, 211); 4,30 (ni, 1Π. majoritní rotamer); 4,24 (m, 211); 4,13 (m. lil, majoritní rotamer); 4,04 (m, IH, mino40 řitní rotamer); 3,95 (m, IH, minoritní rotamer); 2,62 (m, IH. minoritní rotamer); 2,48 (m, IH, majoritní rotamer); 2,22 (m, lil, majoritní rotamer); 2,10 (m, IH. minoritní rotamer); 1,07 (m, 2H); 0,07 (m,9H).

(xiii) Ph(3-d)(5-OCHF₂H/?)CH(OH)C(())-Aze~Pah(2,6-diF)(OMe,Teoc)

Směs Ph(3-CI)(5-OCHF₂H/?)CH(OlI)C(O)-Aze-Pab(2,6-diF)(Teoc) (64 mg; 0,099 mmol; viz stupeň (xii) výše) a hydrochlorid O-methylhy droxy laminu (50 mg; 0,60 mmol) ve 4 ml acetonitrilu se zahřívá 3 hodiny na 70 °C. Rozpouštědlo sc odpaří a zbytek se rozdělí mezi vodu a ethylacetát. Vodná vrstva se extrahuje dvakrát ethylacetátem a spojené organické fáze sc promyjí vodou, vysuší se nad Na₂SO₄ a rozpouštědlo se odpaří. Produkt je možno použít bez dalšího čištění. Výtěžek 58 mg (87 %).

'HNMR (400 MHz. CDClJ, ό 7.90 (bt. IH); 7.46 (m. lil); 7,25 až 6,95 (m. 5H); 6,51 (t, IH); 4,88 (s, III); 4,83 (m, IH); 4,6 až 4,5 <m, 2H); 4.4 až 3,9 (m. 4H); 3,95 (s, 311): 3.63 (m. IIi);

2.67(111. lH);2.38(m. IH); 1,87 (br, III); 0,98 (m, 211); 0.01 ($, 911).

(xiv)Ph(3-CI)(5-OCHF₂)-(/?)CH(OH)C(OH.S')Aze-Pab(2.6-diF)(OMe)

Ph(3-CI)(5-OCHF₂)-(/?)CH(OH)C(O)-Aze-Pab(2,6-diF)(OMe.Teoc) (58 mg; 0,086 mmol; viz stupeň (xiíi) výše) se rozpustí ve 3 ml TFA, ochladí sc v ledové lázni a nechá se 2 hodiny reagovat. Pak se TFA odpaří a zbytek se rozpustí v ethylacetátu. Organická vrstva se promyje dvakrát vodným roztokem uhličitanu sodného a vodou, vysuší se nad Na₂SO₄ a rozpouštědlo se odpaří. Zbytek se podrobí lyofilizaei z vody a acetonitrilu, čímž se získá 42 mg (92 %) titulní sloučeniny .

io '11 NMR (300 Mi Iz. CDCb), 6 7.95 (bt. 1H); 7.2 až 7.1 (m, 411); 6,99 (m, t H); 6,52 (t, 1H); 4,88 (s, l H); 4,85 až 4,75 (m. 311); 4,6 až 4,45 (m, 2H); 4,29 (br. 1H); 4.09 (m, 1H): 3.89 (s. 3 H): 3.69 (m. III); 2,64 (m. 1H): 2.38 (m,lH): 1.85 (br, 111).

^I?C NMR (100 MHz; CDCb): (karbonylovc a/nebo amidinové uhlíky ) 6 172,1; 169,8; 151,9.

APCI-MS: (IVH 1) = 533/535 m/z.

Příprava sloučeniny b (Ph(3 Cl)(5 OCH₂CH₂F)-(/?)Cl hOHjCíOH^Aze-Pab/OMe)) io (i) (2-Monoíluorelhyl)methansulťonát

K magneticky míchanému roztoku 2-fluorethanolu (5,0 g; 78,0 mmol) v dichlormethanu (90 ml) se v dusíkové atmosféře při 0 °C přidá triethy lamin (23.7 g; 234 mmol) a incthansulfonyl chlorid (10,7 g; 93,7 mmol). Směs se míchá 1,5 hodiny při 0 °C. zředí se dichlormethanem (100 ml) a promyje se 2N HCI (100 ml). Vodná vrstva se extrahuje dichlormethanem (50 ml) a spojené organické extrakty se promyjí solankou (75 ml), vysuší se nad Na,SO₄. zfiltrují se a zahustí ve vakuu, čímž se získá subtitulní sloučenina (9,7 g; 88 %) ve formě žlutého oleje, který se použije bez dalšího čištění.

to Ή NMR (300 MHz. CDC1,). δ4.76 (t. J - 4 liz, IH); 4.64 (l. .1 - 4 Hz. IH); 4.52 (t. J - 4 Hz. IH): 4,43 (l. J = 4 Hz. IH); 3.09 (s, 3H).

(ii) 3-Chlor-5-nionofluorcthoxybenzaldehyd

K roztoku 3-chlor-5-hydroxybenzaldehydu (8,2 g; 52,5 mmol); (viz experiment (ii) v přípravě sloučeniny A) a uhličitanu draselného (9.4 g; 68,2 mmol) v DMF (10 ml) se v atmosféře dusíku přikape při teplotě místnosti roztok (2-monofluorethyl)methansulfonátu (9,7 g; 68,2 mmol; viz stupeň (i) výše) v DMF (120 ml). Směs se zahřívá 5 hodin na 100 °C a pak se míchá přes noc při teplotě místnosti. Reakční směs se ochladí na 0 °C, nalije se do ledové 2N HCI a extrahuje se to ethylacetátem. Spojené organické extrakty se promyjí solankou, vysuší se nad Na₂SO₄. zfiltrují se a zahustí se ve vakuu. Hnědý olej se podrobí chromatografii na silikagelu v soustavě hexanethylacetát (4:1), čímž se získá subtitulní sloučenina (7,6 g; 71 %) ve formě žlutého oleje.

¹II NMR (300 MHz. CDCb). 6 9.92 (s. IH): 7.48 (s. IH); 7,32 (s, IH); 7,21 (s. IH); 4,87 (t, J - 4 Hz, 1H); 4,71 (t, J = 3 Hz, IH); 4.33 (t, J3IIz, IH); 4,24 (t, J = 3Hz, IH).

(iii) Ph(3-CI)(5-OCH₂CH₂F)-(A_llS’)CII(OTMS)CN

K roztoku 3-chlor-5-monofluorethoxybenzaldehydu (7.6 g: 37,5 mmol; viz stupen (ii) výše) so a jodidu zinečnatého (3,0 g; 9,38 mmol) v dichlormethanu (3 10 ml) se při 0 °C v atmosféře dusíku přikape trimelhylsilylkyanid (7.4 g; 75,0 mmol). Směs se míchá při 0 °C 3 hodiny a při teplotě místnosti přes noc. Pak sc směs zředí vodou (300 ml), organická vrstva se oddělí, vysuší se nad

Na₂S(_)₄, /filtruje sc a zahustí sc ve vakuu, čímž se získá subtitulní sloučenina (10,6 g; 94 %) ve formě hnědého oleje, který se použije bez dalšího čištění nebo charakterizace.

i i

CZ 299859 Bó (iv) Ph(3-C4)(5-OCH₂CH₂FH/?,Y)CH(OH)C{O)OH

Koncentrovaná kyselina chlorovodíková (100 ml) se přidá k Ph(3-Cl)(5-OCH₂CH₂F)-(/?.,S’)CH(OTMS)CN (10,6 g; 5,8 mmol; viz stupeň (iii) výše) a roztok se míchá 3 hodiny při 100 °C.

Po ochlazení na teplotu místnosti sc reakční směs dále ochladí na 0 °C, pomalu se zalkalizuje 3N NaOH (-300 ml) a promyje se etherem (3 x200 ml). Vodná vrstva se okyselí 2M HCI (80 ml) a extrahuje ethylacetátem (3 x 300 ml). Spojené elhvlacetátové extrakty se vysuší nad Na_?SO₄, zfiltrují se a zahustí se ve vakuu, čímž se získá subtitulní sloučenina (8,6 g; 98 %) jako slabě žlutá tuhá látka, která se použije bez dalšího čištění. R_t - 0.28 (Cl ICh-MeOH-kone.

ío NH₄OH 90:8:2).

'H NMR (300 MHz, CD3OD), Ů 7.09 (s. IH); 7.02 (s. IH); 6,93 (s. IH); 5,11 (s, IH): 4.77 až

4.81 (m. 111): 4,62 až 4.65 (m. IH); 4,25 až 4,28 (m, 1H); 4,15 až 4.18(m. 1H).

(v) Ph(3A7l)(5-OCH₂CH₂F) (Λ^Η(ΟΛε)€(Ο)ΟΗ (a) a

Ph(3-CI)-(5-()CH<H₂FHR)CH(OH)C(O)OH(b)

Roztok Ph(3-CI)(5-OCH.CIΙ_?Γ>-(7?.Λ^ΧΚΊ1(()[ 1)C(()>OII (8,6 g; 34,5 mmol; viz stupeň (iv) výše) a lipázy PS „Amano (4.0 g) ve vinylaeetálu (250 ml) a MTBE (250 ml) se zahřívá v atmosféře dusíku 3 dny na 70 °C. Po ochlazení na teplotu místnosti se enzym odstraní filtrací přes celit®. Filtrační koláč se promyje ethylacetátem a filtrát se zahustí ve vakuu. Zbytek se chromatografuje 11a silikagelu v soustavě CHCI; MeOH-EfiN (90:8:2), čímž se získá triethylamoniová sůl subtilním sloučeniny (a) ve formě žlutého oleje. Navíc se získá i trimelhylamoniová sůl subtitulní sloučeniny (b) (4.0 g). Sul subtitulní sloučeniny (b) se rozpustí ve vodě (250 ml), okyselí se

2N HCI a extrahuje se ethylacetátem (3 x 200 ml). Spojené organické extrakty se vysuší nad Na?SO₄, zfiltrují se a zahustí ve vakuu, čímž se získá subtitulní sloučenina (b) (2,8 g; 32 %) jako žlutý olej.

Pro sloučeninu (b):

R_f- 0,28 (CHCI-MeOH-konc. NlfiOH 90:8:2) '11 NMR (300 MHz. CD,OD).8 7.09 (s. III); 7.02 (s. IH); 6.93 (s. IH); 5,11 (s. IH); 4,77 až

4.81 (m. IH); 4.62 až4.65(111. IH); 4.25 až4.28 (m. IH); 4,15 až4.18 (ni, lil).

(vi) Ph(3-CIX5-OCH₂CH₂FH/í)CH(OH)C(O)-(S3Aze Pab (OMc)

K roztoku Ph(3-CD(5-OCH₂Cn₂FH^)CH{011)C(0)01i (818 mg; 3,29 mmol; viz stupeň (v) výše) v DMF (30 ml) se v atmosféře dusíku při 0 °C přidá HAze-Pab(()Me).2HCI (1,43 g; to 4,27 mmol; viz mezinárodní patentovou přihlášku WO 00/42 059), PyBOP (1,89 g; 3,68 mmol) a DIPFA (1,06 g; 8,23 mmol). Reakční směs se míchá 2 hodiny při 0 °C a pak při teplotě místnosti přes noc. Pak se reakční směs zahustí ve vakuu a zbytek se dvakrát podrobí chromatografii na silikagelu, napřed v soustavě CHCI,; EtOH (15:1) a pak v soustavě EtOAc-EtOH (20:1), čímž se získá titulní sloučenina (880 mg; 54 %).

R_t -0,60 (CHCE EtOH 10:1).

'H NMR (300 MHz, CD;OD, složitá směs rotamerů), δ 7,58 až 7,60 (d. J - 8 Hz, 2H); 7,34 (d, J = 7 Hz, 2H); 7,05 až. 7,08 (m, 2H); 6.95 až 6,99 (m, 1H); 5,08 a 5,13 (m, 111); 4,77 až 4,82 (m, 1H); 4,60 až 4,68 (m, 1H); 3,99 až 4,51 (m, 7H); 3,82 (s, 3H); 2,10 až 2,75 (m. 2H).

^HC NMR (150 MHz; CD_?1OD): (karbonvlové a/nebo amidinovc atomv uhlíku), δ 173,3; 170,8; 152.5. APCI-MS: (Μ + 1) - 493 m/z.

.15.

Příprava sloučeniny F (Ph(3-ClX5-OCHE₂)-(^)CH(OH)C(O)-Aze-Pab (OH)) (i) Ph(3-CI)(5-OCHF₂H/ř)CH(OH)C(O)-Aze-Pab (Ol I, Teoc)

Ph(3-Cl)(5-0CHF₂)-(/GCH(01I)C(0)-Aze-Pab(Teoc) (0.148 g; 0,24 mmol: viz přípravu sloučeniny D, stupeň (ix)) se rozpustí v 9 ml acetonitrilu a přidá se 0,101 g (1,45 mmol) hydrochloridu hydroxylaminu. Směs se zahřívá 2,5 hodiny na 70 °C. zfiltruje se přes celif⁵ a rozpouštědlo se odpaří. Surový produkt (0,145 g; 75% čistota) se bez čištění použije přímo v dalším stupni.

io (ii) Ph(3-CI)(5-OCHF4)-(/?)CH(OH)C(0)-Azc-Pab(OH)

Ph(3--Cl )(5-00IF₂)--(/?)CH(OH)C(O) Aze Pab(OH.Tcoc) (0.145 g; 0.23 mmol: viz stupeň (i) výše) se rozpustí v 0.5 ml dichlormethanu a 9 ml TFA. Reakční směs se nechá reagovat 60 minut. Pak se TFA odpaří a zbytek se přečistí preparativní 1 IPLC. Frakce produktu se spojí a podrobí se lyofil izaci (2 x), čímž sc získá 72 mg (celkový výtěžek dvou stupňů 62 %) titulní sloučeniny.

MS (m/z) 482 (M-l) ; 484 (M+l) .

'H NMR (400 MHz. CDOD). δ 7,58 (d. 211): 7,33 (m. 3H); 7,15 (m. 2H): 6.89 (l. IH. majoritní rotamer); 6.86 (t. IH, minoritní rotamer); 5.18 (s. IH, majoritní rotamer; a m, 111. minoritní rotamer); 5.12 (s, IH. minoritní rotamer); 4,77 (m, IH. majoritní rotamer); 4,42 (m. 2H); 4.34 (ni, 111. majoritní rotamer); 4.14 (m, 1Fl. majoritní rotamer); 4,06 (m, IH, minoritní rotamer); 3,95 (m, IH, minoritní rotamer); 2,66 (ιη, 1 H, minoritní rotamer); 2,50 (m, IH. majoritní rotamer); 2,27 (m, 1H, majoritní rotamer); 2,14 (m, 111. minoritní rotamer).

2?

C NMR (100 MHz; CDOD): (karbonylové a/nebo amidinové atomy uhlíku, rotamery) δ 172,4; 172,3; 172,0; 171,4; 152,3; 152,1.

Příprava sloučeniny H (Ph(3-CI)(5-0CH_?CHF₂)-(7?)CH(0H)C{0) Aze.....Pab(OH)) (i) Ph(3 C1)(5-OC1I₂CHF44/?)CH(OH)C(O) Aze Pab(Z)

Boe-Aze-Pab(Z) (víz. mezinárodní patentovou přihlášku WO 97/02 284; 92 mg; 0,197 mmol) sc rozpustí v 10 ml ethylacetátu, nasyceného plynným chlorovodíkem, a nechá se reagovat 10 mi35 nut. Rozpouštědlo se odpaří a zbytek se smíchá s Ph(3-0)(5-00 l₂CHF₂)-(fl)CH(OH)C(O)OH (50 nig; 0.188minol), PvBOP (109 mg; 0.209 mmol) a nakonec s diisopropv lethylaminem (96 mg; 0,75 mmol) ve 2 ml DMF, Směs se míchá 2 hodiny, pak se nalije do 50 ml vody a extrahuje se třikrát ethylacetátem. Spojené organické fáze sc promyjí vodou, vysuší se nad Na₂SO₄ a rozpouštědlo se odpaří. Surový produkt se podrobí flasli chromatografii na silikagelu v soustavě

Et()Ac:MeOH (9:1). Získá se 100 mg (87 %) produktu.

^lH NMR (300 MHz, CD,OD. směs rolamerů). δ 7.85 až 7.75 (m. 211); 7,45 až 7,25 (m. 711): 7.11 (m, 1 H. majoritní rotamer); 7,08 (m. IH, minoritní rotamer); 7,05 až 6.9 (m. 2H); 6.13 (bt, IH); 5.25 až 5,05 (m, 311); 4,77 (m, IH. částečně překryt signálem CD,OH); 4,5 až 3,9 (m, 7H): 2,64 (m, IH, minoritní rotamer); 2,47 (m, IH, majoritní rotamer); 2.25 (m, IH, majoritní rotamer);

2,13 (ni, IH, minoritní rotamer).

(ii) Ph(3 Cl)(5-OCH₂CHF₂)-(/?)CH(OH)C(O)-Aze-Pab(011)

5o Hydrochlorid hydroxylaminu (65 mg; 0.94 mmol) a tríethylamin (0.319 g; 3,16 mmol) se smísí v 8 ml THF a podrobí se sontkaci 1 hodinu při 40 °C. Přidá se Ph(3-CI)(5-()CH₂CHF₂)-(/?)CH(OH)C(O)-Aze-Pab(Z) (96 mg; 0,156 mmol; viz stupeň (i) výše) a dalších 8 ml THF. Směs se míchá 4,5 dne při 40 °C. Rozpouštědlo se odpaří a surový produkt se přečistí preparativní RPLC v soustavě CH3CN-0.1M NH.,OAe (40:60). Výtěžek 30 mg (38 %), čistota 99 %, i x

C.Z 299859 B6 'Π NMR (300 MHz, CD₃OD, směs rotameru), δ 7.6 až 7,55 (m. 2H); 7,35 až 7,3 (m. 2H); 7,12 (m. IH, majoritní rotamer); 7,09 (m, 1H, minoritní rotamer); 7,05 až 6,9 (m, 2H); 6,15 (triplet multipletu. IH); 5,15 (m, IH, minoritní rotamer); 5,13 (s, IH, majoritní rotamer); 5,08 (s, I H, minoritní rotamer); 4,77 (m. IH, majoritní rotamer); 4.5 až 4,2 (m. 5H); 4.08 (m. IH. majoritní rotamer); 3,97 (m. lil. minoritní rotamer); 2,66 (m, IH. minoritní rotamer); 2.50 (m, IH, majoritní rotamer); 2.27 (m. IH, majoritní rotamer); 2,14 (m. IH, minoritní rotamer).

^bC NMR (100 MHz; CDOD): (karbonylové a/nebo amidinové atomy uhlíku, směs rotameru) δ 172,8; 172,2; 171,4; 159,1; 158.9; 154,2.

APC1-MS; (M+l) - 497/499 m/z.

Zkratky

4o

Ac	= acelvl;
APCI	= chemická ionizace při atmosférickém tlaku (ve vztahu k MS);
API	= ionizace při atmosférickém tlaku (ve vztahu k MS);
Aze(&(.Sj-Aze)	= (N)-azetidin-2-karboxylát (pokud není uvedeno jinak);
Boc	~ terc-butyloxykarbonyl;
Br	= široký (ve vztahu k NMR);
Cgl	= eyklohexylglycin:
Cl	- chemická ionizace (ve vztahu k MS);
D	- dublet (ve vztahu k NMR);
DCC	= dicyklohexylkarbodiimid;
Dd	= dublet dubletu (ve vztahu k NMR);
DIBAL-H	- diisobutylaluminiumhydrid;
DIPEA	= diisopropylethylamin;
DMAP	= 4-(N,N-d imethy lamino)pyrid i n;
DMF	= Ν,Ν-dimethy Iformamid;
DMSO	= dimethylsulfoxid;
DSC	= diferenciální skenovací kolorimetrie;
DVT	- trombóza hluboké žíly;
EDC ES	= hydrochlorid 1 (3-dimethy1aminopropyl)-3-ethylkarbodiimidu: = elektrospray;
ESI	= „electrospray interface;
Et	- ethy l;
ether	= dicthylcther;
EtOAc	= ethylacetát;
EtOH	= ethanol;
Et?O	- dielhylether;
HATU	= OJazabenzotriazol 1 yl)-N,N,N\N -tetramethy1 uroň ium-hexafluorfosfát;
HBTU	= [Ν,Ν.Ν'.Ν' tetramethy l-0-(bcnzotriazol-l-yl)uron i um-hexafluorfosfát];
Hex	hexany;
HOAe	- kyselina octová;
HPLC	- vysoce účinná kapalinová chromatografie;
EC	= kapalinová chromatografie;
M	- multiplet (ve vztahu k NMR);
Me	= methyl;
MeOH	- methanol;

I 7 κι

MS = hmotnostní spektroskopie:

ΜTBE - methy l-terc-butylether:

NMR = nukleární magnetická rezonance;

Oac = acetát;

Pab ~ para-amidinobenzylamino;

Pab-OH 4-aminomethyl-benzamidoxini (4-aminomethy 1-1 -(amino-hydroxyiminomethyl) benzen;

Ι-Pab = para-amidinobenzylamin;

Pd/C = pa 11 ad i u m na u h l í;

Ph = fenvl;

r¹

Py BO P = (benzot r i azo 1-1 -y loxy )tr i py rro I i d i n o fosfon i u m hexa fl u or fos fá t:

q - kvartet (ve vztahu k NMR);

QE tetrabutylamoniumfluorid;

s = singlet (ve vztahu k NMR);

t = triplet (ve vztahu k NMR);

TBTIJ - [ N. N.NN'-tetramethy l-O-( benzotr i azo I-1-y I) uroň i um-tetra 11 uorborát;

ΤΕΛ = triethy lamin;

Teoc = 2-(trimcthylsilyl)elhoxykarbonyl;

TEMPO 2,2.6,6-tetramethyl-1 -piperidinyloxylovy volný radikál;

TFA - kyselina trifluoroctová;

I GA termogravimetrická analýza;

THF = tetrahydrofuran;

TLC = tenkovrstvé chromatografie;

l J V = ultrafialový.

Předpony η-, i , t a terč- mají obvykle významy, a to: normální, sekundární, iso a terciární.

Příklady provedení vynálezu

Příklady I až 5 a 8 až 14 ilustrují vynález, zatímco příklady 6 a 7 jsou uvedeny pouze pro účely porovnání a nejsou součástí předloženého vynálezu. V příkladech a obrázcích poměry v závorkách se vztahují k hmotnostním poměrům neutrálního gelotvorného polymeru k iota-karagenanu a neberou v úvahu bazickou farmaceuticky aktivní složku nebo jakoukoliv jinou složku, která může být přítomna.

Doprovodné obrázky:

Obrázek 1. Uvolňování H376/95 ze směsí s různými poměry iotakaragenanu ku PEO, 4M. 4o Tablety se analyzují 2 hodiny při pH 1 a zbývající dobu při pH 6,8.

Obrázek 2. Uvolňování H376/95 ze směsí, s poměrem 20:80 PEO s různou molekulovou hmotností ku iota-karagenanu. Tablety se analyzují 2 hodiny při pH 1 a zbývající dobu při pH 6.8.

Obrázek 3. Uvolňování H376/95 ze směsí s poměrem 80:20 PEO s různou molekulovou hmotností ku iota-karagenanu. Tablety se analyzují 2 hodiny při pil 1 a zbývající dobu při pH 6,8.

Obrázek 4. Uvolňování H376/95 ze směsí s různými poměry' iotakaragenanu ku HPMC,

000 cps. Tablety se analyzují 2 hodin) při pH 1 a zbývající dobu při pH 6,8.

Q

Obrázek 5. Uvolňování H3 76/95 ze směsí s poměrem 50:50 PEO. 4M ku iola-karagenanu. Tablety se analyzují 24 hodiny v různých artificiálních médiích.

Obrázek 6. Uvolňování H376/95 z neutrálního gelotvomého polymeru PEO, 4M, analyzované v různých artificiálních mediích.

Obrázek 7. Uvolňování H376/95 z aniontového polymeru iota-karagenanu, analyzované v různých artificiálních médiích.

io

Obrázek 8. Uvolňování sloučeniny A ze směsí s poměrem 50:50 iota-karagenanu ku PEO.

4M. při pH 1 a 6,8. Tablety sc analyzují 24 hodiny v různých artificiálních médiích.

Obrázek 9. Uvolňování sloučeniny A ze směsí s poměrem 50:50 iota-karagenanu ku HPMC, 10 000 eps, při pH 1 a 6.8. Tablety se analyzují 24 hodiny v různých artificiálních médiích.

Obrázek 10. Uvolňování sloučeniny B z iola karagenanu. smíchaného s neutrálním polymerem PEO. 4M. v poměrech 50.50 a 80:20. Tablety sc analyzují 2 hodiny při pH 1 a zbývající dobu při pH 6.8.

Obrázek 1 I. Uvolňování sloučeniny B z iota-karagenanu, smíchaného s neutrálním polymerem IIPMC, 10 000 eps, v poměru 50:50, Tablety se analyzují 2 hodiny při pil 1 a zbý25 vaj íeí dobu při pl I 6.8.

Příklad I

Tento příklad ukazuje uvolňování H376/95 ze směsí o různém poměru PEO. 4M. ku iota karagenanu. Tablety se analyzují 2 hodiny při pH 1 a zbývající dobu při pl I 6,8.

Poměr PEO, 4M k iota-karagenanu	80:20	50:50	20:80
H376/95	50,5 mg	50.5 mg	50.5 mg
polyetbylenoxid, 4M	160,0 mg	100,0 mg	40.0 mg
iota karagenan	40,0 mg	100,0 mg	160,0 mg
steary lfumarát sodný	2.5 mg	2,5 mg	2,5 mg
hmotnost tablety	253 mg	253 mg	253 mg

Tablety sc připraví přímou kompresí. Aktivní složka, PEO 4M a iota-karagenan se pečlivě smísí a mazadlo (stearylfumarát sodný) se přidá přes sílo 0.7 mm. Po dalším konečném smísení se směs lisuje v jednoduchém tabletovacím tisu za použití 9 mm razníku. Tablety se analyzují 2 hodiny v rozpouštěcí lázni UPS II (50 ot/min, 37 °C, artifíciální média), obsahující 0,lM HCI, pil 1. Pak se tablety přenesou do rozpouštěcí lázně sO,IM fosfátovým pufrem, pH 6,8, a jsou analyzovány dále. Výsledky analýzy jsou uvedeny v obrázku 1. Formulace s poměrem 50:50 vykazuje v podstatě pH-nczávislý disoluční profil v rozmezí pH mezi I až 6,8. Dodatečně se dá usoudit, že smísením aniontového polymeru iota karagenanu a neutrálního gelotvorncho polymeru PEO 4M v různých poměrech lze modifikovat rychlost uvolňování v prostředích o různém pil.

i n

Příklad 2

Tento příklad ukazuje uvolňování H376/95 ze směsí o poměru 20:80 PEO různé molekulové hmotnosti k íota-karagenanu. Tablety se analyzují 2 hodiny při pH 1 a zbývající dobu při pH 6.8.

Poměr PEC) 4M nebo 8M k íota-karagenanu 20:80

H376/95 50,5 mg polyethylenoxid 40.0 mg iu iola-karagenan 160,0 mg steary Ifumarát sodný 2.5 mg hmotnost tablety 253 mg

Tablety se připraví a analyzují jak je popsáno v příkladu 1. Výsledky analýzy' jsou uvedeny i? v obrázku 2 a ukazují, že použití neutrálního gelotvorného polymeru o vyšší molekulové hmotnosti poskytuje nižší rychlost uvolňování při neutrálním pil. Rychlost uvolňování v oblasti nízkého pH není ovlivněna, protože formulace obsahuje dostatečné množství au iontového polymeru.

Příklad 3

Tento příklad ukazuje uvolňování El376/95 ze směsí o poměru 80:20 PEO různé molekulové hmotnosti k iota-karagenanu. lab lety se analyzují 2 hodiny při pH 1 a zbývající dobu při pH 6,8.

Poměr PEO 1M nebo 4M k iota-karagenanu 80:20

H376/95 50,5 mg polyethylenoxid 160,0 mg iota-karagenan 40,0 mg so steary Ifumarát sodný 2,5 mg hmotnost tablety 253 mg

Tablety se připraví a analyzují jak je popsáno v příkladu 1. Obrázek 3 ukazuje, jak použití gelotvorného polymeru o vyšší molekulové hmotnosti může snížit rychlost uvolňování při neutrálním pH. Současně zpomalovací účinek při pH 1 je méně zřetelný, protože je použito menší množství iota-karagenanu ve srovnání s příklady na obrázku 2.

Příklad 4 íento příklad ukazuje uvolňování H3 76/95 ze směsí o různém poměru iota-karagenanu k HPMC, 10 000 eps. 'Tablety se analyzují 2 hodiny při pH 1 a zbývající dobu při pl I 6,8.

Poměr HPMC k iota-karagenanu	80:20	50:50	20:80
H3 76/95	50,5 mg	50,5 mg	50,5 mg
HPMC. 10 000 eps	160,0 mg	100,0 mg	40,0 mg
iota-karagenan	40,0 mg	100.0 mg	160,0 mg
steary Ifumarát sodný	2,5 mg	2,5 mg	2,5 mg
hmotnost tablety	253 mg	253 mg	253 mg

TA

Tablety se připraví a analyzují jak je popsáno v příkladu 1. Výsledky analýzy v různých rozpouštěcíeh médiích jsou uvedeny na obrázku 4. Formulace s poměrem 50:50 znovu ukazuje v podstatě pll-nezávisly disoluění profil v oblasti pil 1 až 6,8. Můžeme vyvodit závěr, že rychlost uvolňování může být opět modifikována smísením jiných neutrálních gelotvorných polymerů, v tomto případě HPMC. lOOOOcps. san iontovým polymerem, iota-karagenanem, v různých poměrech.

Příklad 5 io

Tento příklad ukazuje uvolňování H 3 76/95 ze směsí o poměru 50:50 ΡΙ.Ό 4M k iota-karagenanu. Tablety se analyzují 24 hodiny v různých médiích.

Poměr ΡΕΟ 4M k iota-karagenanu á0:á0

H376/95 50.5 mg polyethylenoxid, 4M 100,0 ing iota-karagenan 100,0 mg stearylfumarát sodný 2,5 mg

2(i hmotnost tablety 253 mg

Tablety se připraví přímým lisováním, jak je popsáno v příkladu I. Analýzy se provádějí v rozpouštěeích lázních (USP přístroj 2 s tabletami, umístěnými v košíku¹ po proudu kapaliny), kde se tři tablety analyzují 24 hodiny v každém z médií: 0,1M HCl, a 0,lM fosfátový pufr pH 6,8 s 5 % ethanolu (EtOTI), přidaného pro lepší rozpustnost léčiva. Výsledky, uvedené na obrázku 5, jasně ukazují, že je možno připravit tablety s pH-nezávislým disolučním profilem, když se použije kompozice se stejnými díly ΡΕΟ, 4M a iota karagenanu.

[' Na zakázku zhotovený čtverhranný košík z pletivového drátu, který' v jedné z hořejších úzkých .ta stran je při letován ke konci ocelové tyčky. Tyčka se protáhne krytem rozpouštěci nádoby a upevní se dvěma teflonovými matkami 3.2 cm od středu nádoby. Nižší okraj dna košíku se umístí I cm nad lopatkou míchadla. Košík se orientuje po proudu a zkoumaná tableta je v jeho rohu.]

Příklad 6

Tento příklad ukazuje uvolňováni H376/95 z neutrálního gelotvorného polymeru ΡΕΟ 4M v nepřítomnosti iota-karagenanu v různých artifteiálníeh médiích.

H376/95 50,5 mg polyethylenoxid, 4M 200.0 mg steary lfumarát sodný 2,5 mg hmotnost tablety 253 mg

Tablety se připraví přímým lisováním, jak je popsáno v příkladu 1, Analýzy se provádějí odděleně v různých rozpouštěeích lázních. Tablety v nádobách obsahujících 0.ΙΜ HCl se analyzují 2 hodiny. Když se jako rozpouštěci médium použije 0. IM fosfátový pufr pH 6,8, tablety se analyzují 20 hodin. Výsledky na obrázku 6 ukazují, že rychlost uvolňování při pH 1 jc výrazně vyšší než rychlost při pH 6,8, což naznačuje, že použití samotného neutrálního polymeru nestačí k dosažení pH-nezávislého disolučního profilu pro bazické léčivo s pl [-závislou rozpustností.

Příklad 7

I ento příklad ukazuje uvolňování H376/95 z aniontového polymeru iota-karagenanu v nepřítomnosti neutrálního gelotvorného polymeru v různých artificiálních médiích.

H3 76/95 50,5 mg iota-karagenan 200.0 mg stearylfumarát sodný 2,5 mg hmotnost tablety 253 mg io

Tablety se připraví přímým lisováním, jak je popsáno v příkladu 1. Analýzy se provádějí odděleně v různých rozpouštěcích lázních, podobně jako v příkladu 6. Obrázek 7 ukazuje, jak rychlost uvolňování při pH I je nižší ve srovnání s rychlostí při pH 6.8. Tento efekt jsme nepozorovali při použití jakéhokoliv jiného homopolymeru, testovaného jako matricový poly mer.

Příklad 8 len to příklad ukazuje uvolňování sloučeniny A ze směsi PFO 4M a iota-karagenanu v poměru 20 50:50. Tablety se analyzují 24 hodin v různých médiích.

I Imotnost (mg)

Sloučenina A 50.0;

iota-karagenan (Fluka) 100,0;

PEO, 4M (Union Carbide) 100,0;

PRIJV^im 2.5.

Aktivní složka se smísí manuálně s polymery a mazadlem. Směs se pak přímo lisuje do tablet.

Příklad 9

Tento příklad ukazuje uvolňování sloučeniny A ze směsi HPMC, lOOOOeps, a iota-karagenanu 35 v poměru 50:50. Tablety se analyzují 24 hodin v různých médiích.

Hmotnost (mg)

Sloučenina A 50,0;

4o iota-karagenan (Fluka) 100.0;

HPMC, 10 000 cps 100,0;

PRUV^iM 2.5.

Aktivní složka se smísí manuálně s polymery a mazadlem. Směs se pak přímo lisuje do tablet.

Určení kumulativního uvolnění sloučeniny A z tablet v příkladech 8 a 9

Dvě individuální tablety se testují na uvolňování léčiva v 900 ml média za použití USP rozpouštecího přístroje 2 (lopatka a košík¹) při 50 ot/niín a 37 °C. Použitá rozpouštěcí média jsou

5o OJ M kyselina chlorovodíková (pH 1) a OJ M natři um fosfátový pufr (pH 6,8) s 5 % ethanolu pro zlepšení rozpustnosti léčiva. Je ověřeno, že přídavek ethanolu neovlivňuje významně rychlost uvolňování z těchto kompozic. In line kvantitativní stanovení se provede za použití systému

- T> _

CZ. 299859 Bó vláknové optiky (C Technologies) při analytické vlnové délce 235 nm pro 0,1 M HCl jako rozpouštěcí médium, a při analytické vlnové délce 250 nm. když se jako rozpouštěcí médium použije modifikovaný fosfátový pufr pH 6,8. Vlnová délka 350 nm se použije jako referenční vlnová délka pro obě média.

[' Na zakázku zhotovený čtverhranný košík z pletivového drátu, který v jedné z hořejších úzkých stran je při letován ke konci ocelové tyčky. Tyčka se protáhne krytem rozpouštěcí nádoby a upevní se dvěma teflonovými matkami 3,2 cm od středu nádoby. Nižší okraj dna košíku se umístí 1 cm nad lopatkou míchadla. Košík se orientuje po proudu a zkoumaná tableta je v jeho rohu.]

Příklad 10

Tento přiklad ukazuje uvolňování sloučeniny B ze směsi ΡΕΟ 4M a iota-karagenanu v poměru 15 50:50.

	Hmotnost (mg)	Množství (%)
S '1 oučern na B	41,0	16
lota-karaqenan (Fluka)	3 04,0	41 („50)
ΡΕΟ, 4M (Union Carbide)	104,0	41 („50)
PRUV	2,5	1 1 J

Tablety se připraví jak je popsáno v příkladu 9. Uvolňovací data jsou uvedena na obrázku 10.

Příklad 1 l

Tento příklad ukazuje uvolňování sloučeniny B ze směsi ΡΕΟ 4M a iota-karagenanu v poměru 80:20.

	Hmotnost (mg)	Množství (%)
Sloučenina B	41,0	16
iot.a-karagenan (Fluka)	41,8	17 („20)
peo, 4M (Union Carbide)	167,2	66 („80) t
PRUV	2,5	1

Tablety se připraví jak je popsáno v příkladu 9. Uvolňovací data jsou uvedena na obrázku 10.

CZ 299859 Bó

Příklad 12

Tento příklad ukazuje uvolňování sloučeniny B ze směsi HPMC. 10 000 eps, a iota-karagenanu v poměru 50:50.

	Hmotnost (mg)	Množství (%)
Sloučenina B	41,0	16
i oo a--karagenan (Fluka)	104,0	41 („50)
HPMC, 10 000 eps (60S1I)	104,0	41 („50)
PBUV	2,5	1

Tablety se připraví jak je popsáno v příkladu 9. Uvolňovací data jsou uvedena na obrázku 11.

Příklad 13

Přímé lisováni sloučeniny C s HPMC 10 000 eps

Aktivní látka se smísí s excipientv. Stearylfumarát sodný sc použije jako mazadlo. Směs se lisuje do tablet ve výstředníkovém lisu.

	Hmotnost	Množství
Sloučenina C	50 mg	16,2 £
HPMC, 10 000 eps	255, 0 mg	82,8 %
stearylfumaráL· sodný	2,5 mg	1,0 %

C.7 299859 B6

Uvolňování:

Čas (min)	% uvolněná v pufru pH 1,1	% uvolněná v pufru pH 6,8
0	0	0
15	-	-
30	8	-
45	-	-
60	13	7
120	20	12
180	26	-
240	31	19
360	40	25
480	48	31
600	55	36
720	61	41
840	66	45
960	71	49
1080	75	53
1200	79	56

Přímé lisování sloučeniny C s 1IPMC 10 000 cps a iota-karagcnanem v poměru 50:50

Aktivní látka se smísí s excipienty, Stearylfumarát sodný se použije jako mazadlo. Směs se lisuje do tablet ve výstředníkovém lisu.

	Hmotnost	Množství
Sloučenina C	50 mg	16,2 %
HPMC, 10 000 cps	127,0 mg	41, 4 %
iota-karagenan (Fluka)	127,0 mg	41,4 %
stearylfumaráL sodný	3, 0 mg	1,0 %

Uvolňování

čas (min)	% uvolněná v pufru pil 1,1	! 1 % 'jvolněná v puiru pil 6,8
0	0	-
15	-	-
30	3	-
4 5	-	-
60	4	4
J20	7	8
180	10	1
240	12	16
; 360	17	27
480	22	38
600	27	51
720	32	63
840	37	7 5
960	41	37
loso ;	46	94
1200	50	97

Rychlost uvolňování se stanoví následovně. Tři individuální tablety se testují na uvolňování léčiva v 900 ml média za použití USP rozpouštěcí ho přístroje 2 (lopatka a košík') při 50 ot/min ? a 37 °C. Použitá rozpouštěcí média jsou OJM kyselina chlorovodíková (pH 1) a OJM natriumfbsfálový pufr (pH 6.8). 1 n-l i ne kvantitativní stanovení se provede za použití systému vláknové optiky (C Technologies) při analytické vlnové délce 220 nm pro OJM HCI jako rozpouštěcí médium, a při analytické vlnové dclcc 260 nm. když se jako rozpouštěcí médium použije fosfátový pufr pH 6,8. Vlnová délka 350 nm se použije jako referenční vlnová délka pro obě média, io Během prvních dvou hodin analýzy se uvolňování měří každých 15 minut a pak každou hodinu až do konce analýzy.

[' Na zakázku zhotovený čtverhranný košík z pletivového drátu, který v jedné z hořejších úzkých stran je při letován ke konci ocelové tyčky. Tyčka se protáhne krytem rozpouštěcí nádoby a upevI? ní se dvěma teflonovými matkami 3,2 cm od středu nádoby. Nižší okraj dna košíku se umístí 1 cm nad lopatkou míchadla. Košík sc orientuje po proudu a zkoumaná tableta je v jeho rohu.]

- >λ CL 299859 Bó

Příklad 14

1	Hmotnost	Množství
Sloučenina D	100 mg	20 %
HPMC, 10 000 eps	200 mg	40 %
iota-karagenan	200 mg	40 %
stearylfumarát sodný	5 mg	1 %

Tato formulace se může připravit jak je popsáno v příkladu 13.

Claims (11)

1. PATENTOVÉ NÁROKY

   1. Farmaceutická formulace pro orální aplikaci, vyznačující se tím. že obsahuje iota-karagenan, jeden nebo několik neutrálních gelotvorných polymerů a bazickou farmaceuticky aktivní složku, přičemž tato formulace potlačuje uvolňování bazické farmaceuticky aktivní složky z formulace při kyselém plh
2. 2. Formulace podle nároku I. vyznačující se tím, že v tií bazická farmaceuticky aktivní složka obsahuje bazickou skupinu, mající pKa od 1 do 10.
3. 3. Formulace podle nároku 1 nebo 2. vyznačující se t í ni. že v ní bazická farmaceu2o ticky aktivní složka je ximelagatran nebo Ph(3-CI)($-OCliF₂Htf)CH(OH)C(O) (\)AzePab(OMe); Ph(3-C l)(5 OC1 IF_?H*)CH(OI I)C(O)-(5)Az.e-Pab(2.6-7ÍíF)(OMe) nebo Ph(3-CI)(S-OCTLCI FFty(A)CI I(OH)C(OH^Aze-Pab{OMe), kde Ph je fenylová skupina, Aze je Sazetidin 2-karboxy lová kyselina, Cgl je cyklohexylglycin, Pab je /x/ro-amidinobenzylaminoskupina a Pab-OH je 4-aminomethyl-bcnzamidoxim.
4. 4. Formulace podle nároku í. vyznačující sc tím, že v ní bazická farmaceuticky aktivní složka je:

   4-([3-[7j3.3 dimethyl-2-oxobutyl)-9 oxa-3.7-diazabicykIo[3.3.1 ]non-3-y I] propyl jainino)3(i benzonitril:

   terč butyl—2—{7-[3J4-kyananiIino)propyl]-9-oxa-3,7-diazabicyklo[3.3.1 Jnon—3—yl}ethylkarbamát:

   35 terč-buty 12-{7—[4 <4—kyanfenyl)butyl]—9 oxa-3,7 diazabicyklo[3.3.1 ]non-3-vl(ethylkarbamát: nebo tcrc-bu ty 1-2-17-[( 2s)-3-(4-kyanfenoxy )-2-hydroxy propy l]-9-oxa-3,7-d iazabicyklo[3.3.1 ]non-3-yl fethy Ikarbamát.
5. 5. Formulace podle nároků 1, 2, 3 nebo 4, vyznačující sc tím, že v ní neutrální gelotvorný polymer je polyethylenoxid, polyethylenglykol nebo směs dvou nebo několika různých polyethylenoxidů.

   -27 CZ 299859 B6
6. 6. Formulace podle nároků 1. 2, 3 nebo 4, vyznačující se tím, že v ní neutrální gelotvorný polymer je hydroxy propy Imethy Iee lulóza nebo směs dvou nebo několika hydroxypropy Imethy leelulóz.

   5
7. 7. Formulace podle nároků 1, 2, 3 nebo 4, vyznačující se tím, že v ní neutrální gelotvorný polymer je směs hydroxypropylmethylcclulózy a polyethylenoxidu.
8. 8. Formulace podle kteréhokoliv z předcházejících nároků, vyznačující se tím, že v ní poměr neutrálního gelotvorncho polymeru k iota-karagenanu se pohybuje v rozmezí 20:80 in až 80:20.
9. 9. Formulace podle kteréhokoliv z předcházejících nároků, vyznačující se tím. že v ní bazická farmaceuticky aktivní složka je metoprolol.

   ís
10. 10. Způsob přípravy formulace podle nároku I, vyznačující se tím, že se smísí iotakaragenan, jeden nebo několik neutrálních gelotvorných polymeru a bazická farmaceuticky aktivní složka.
11. 11. Použití formulace podle nároku 1 pro přípravu léčebného prostředku pro terapii kardio20 vaskulámí poruchy.