CN112804993A

CN112804993A - 氯法齐明的组合物，含它们的组合，它们的制备方法，含它们的用途和方法

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Publication number: CN112804993A
Application number: CN201980064766.7A
Authority: CN
Inventors: 托马斯·霍夫曼; 斯蒂芬·厄弗; 凯文·斯泰普勒顿
Original assignee: Mankind
Current assignee: Mankind
Priority date: 2018-08-23
Filing date: 2019-04-03
Publication date: 2021-05-14
Also published as: CA3109572A1; WO2020040818A1; JP2021535124A; AU2019324330A1; EP3840737A1; KR20210090607A; JP2024012393A; JP7377259B2

Abstract

本发明涉及用于吸入的药物组合物以及它们的制备过程，药物组合物包括治疗有效剂量的氯法齐明，其中，所述氯法齐明以悬浮液的形式提供。此外，本发明提供了用于肺部吸入的气雾剂形式的含氯法齐明的药物组合。本发明提供的组合和组合物可用于治疗和/或预防肺部真菌感染和由分枝杆菌和其它革兰氏阳性菌引起的肺部感染。

Description

氯法齐明的组合物，含它们的组合，它们的制备方法，含它们的用途和方法

本申请要求2018年8月23日提交的美国临时申请号62/722,048的优先权，并且本申请还要求2019年1月25日提交的美国临时申请号62/796,322的优先权，两者内容均通过引用并入本文。

技术领域

本发明涉及用于吸入的药物组合物，其含治疗有效剂量的氯法齐明，其中，所述氯法齐明以悬浮液的形式提供；它们的制备方法；以及含它们的用途和治疗方法。此外，本发明提供了用于肺吸入的气雾剂形式的含氯法齐明的药物组合。

本发明提供的组合(combinations)和组合物(compositions)可用于治疗和/或预防肺部真菌感染和由分枝杆菌和其它革兰氏阳性菌引起的肺部感染。

背景技术

氯法齐明是一种非常疏水的具有抗分枝杆菌和抗炎活性的亚甲基吩嗪抗生素(Log P＝7.66)，并最早描述于1957年。其结构式如下：

氯法齐明发挥抗微生物作用的确切机制尚不清楚。然而，已知优先结合分枝杆菌DNA，从而抑制DNA复制和细胞生长。其他提出的作用机制包括膜损伤/不稳定化、膜不稳定溶血磷脂的产生、钾转运的干扰，和/或细胞内氧化还原循环。尽管氯法齐明在体外对包括多药耐药菌株的结核分枝杆菌(Mycobacterium tuberculosis)(MTB)具有显著的活性，但直到最近，一般认为其在治疗肺结核方面无效(参见例如，Cholo M et al.,J AntimicrobChemother,2012Feb,67(2):290-8)。

氯法齐明是世界卫生组织推荐的治疗麻风分支杆菌(Mycobacterium leprae)所致麻风病的三种主要药物之一，并且近年来越来越多地用于治疗其他分枝杆菌感染，诸如耐药性结核病和非结核分枝杆菌(NTM)所致感染。

氯法齐明几乎不溶于水，且显示出高的膜渗透性，因此已被列为生物药学分类系统(BCS)II类药物。

为了克服与药物口服吸收差和生物利用度差相关的问题，在优化口服剂型时采用了各种策略，诸如微粉化、纳米化、超临界流体重结晶、喷雾冷冻干燥成液体、固体分散体和溶液。

由于被归类为BCS II类药物，通常认为氯法齐明是将制剂制成固体分散体以提高口服生物利用度的理想候选药物(参见例如，Bhusnure et al.IJRPC 2014,4(4),906-918)。

与此相一致，由于氯法齐明的亲脂性，其通常以在油蜡基质中的微晶悬浮液的形式施用，以改善口服吸收。口服施用后人体内的吸收差异很大(45-62％)。氯法齐明的不良作用与剂量(dose)有关，并且主要影响皮肤、眼睛、胃肠道，并且QT延长副作用包括皮肤和结膜出现红棕色变色，停药后逐渐可逆。它们是慢性全身性蓄积的结果。

分枝杆菌属(Mycobacterium)是有自身属、的放线菌的属，分枝杆菌科的属。

分枝杆菌(Mycobacteria)具有特征性的杆状形状和蜡质外壳。

因此，分枝杆菌可分为三组：

·结核分枝杆菌(Mycobacterium tuberculosis)复合体-结核病的致病病原体

·麻风分枝杆菌(Mycobacterium leprae)-麻风病的致病病原体

·非结核分枝杆菌(NTM)，涵盖所有非结核分枝杆菌或麻风分枝杆菌的其他分枝杆菌，包括脓肿分枝杆菌(Mycobacterium abscessus)复合体(MABSC)、鸟分枝杆菌(Mycobacterium avium)复合体(MAC)。

结核病(TB)是由结核分枝杆菌复合体细菌引起的一种传染病。作为记载最悠久的人类传染性病原体之一，TB仍然是全球范围内死亡和发病的重要原因，2015年估计有1040万新发结核病感染病例，以及140万人死于活跃性TB(参见例如，World HealthOrganization(WHO)Global Tuberculosis Report 2016)。除了高流行率和死亡率之外，多药耐药结核病(MDR-TB)的发病率也越来越令人担忧，2015年现存有580000名出现耐药TB感染的患者。诸如人类免疫缺陷病毒(HIV)等合并症使治疗变得复杂，并且导致2015年有120万例TB病例。

为了治疗多药耐药(MDR)感染，WHO建议实施二线抗TB药物的9至12个月治疗方案。这些方案(诸如9至12个月的Bangladesh方案)，与加替沙星、乙胺丁醇、吡嗪酰胺和氯法齐明的组合一起治疗MDR-TB，其引起87.9％的患者无复发治愈(参见例如，Sotgiu,G,et al.,“Applicability of the shorter‘Bangladesh regimen’in high multidrug-resistanttuberculosis settings",International Journal of Infectious Diseases(2017)56190-193))。

研究缩短TB治疗时间的其他研究表明，口服氯法齐明2周后无临床上的处益(参见例如，Diacon,A.H.,et al.,“Bactericidal Activity of Pyrazinamide andClofazimine Alone and in Combinations with Pretomanid and Bedaquiline",American Journal of Respiratory and Critical Care Medicine(2015),191(8),943-953)。活性缺乏归因为药物的生物利用度低，因为理论上认为药物与循环血清蛋白的结合亲和力高。尽管已根据经验证明氯法齐明可有效治疗MDR-TB和广泛耐药结核病(XDR-TB)，但其全身施用后的生物利用度低似乎限制了其在短期治疗中的生物活性(参见例如，Swanson,R.V.,et al.,“Pharmacokinetics and Pharmacodynamics of Clofazimine ina Mouse Model of Tuberculosis",Antimicrobial Agents and Chemotherapy(2015),59(6),3042-3051)。

已知与全身性递送相比，用吸入抗生素治疗肺感染引起肺中更高的药物浓度和减少的不良作用(参见例如，Touw,D.J.,et al.,“Inhalation of antibiotics in cysticfibrosis",European Respiratory Journal(1995),8,1594-1604)，其引起了增加的生物活性和功效(参见例如，Hickey,A.J.,“Inhaled drug treatment for tuberculosis:Pastprogress and future prospects",Journal of Controlled Release(2016),240,127-134)。体内小鼠模型已经证明，与仅在治疗开始后口服仅施用氯法齐明28天相比，氯法齐明的气雾(aerosolized)施用显示出TB感染模型中杆菌(bacilli)清除的显著改善(参见例如，Verma,R.K.,et al.,“Inhaled microparticles containing clofazimine areefficacious in treatment of experimental Tuberculosis in Mice",AntimicrobialAgents and Chemotherapy(2013),57(2),1050-1052)。这种短期内改善的效果可能是由于氯法齐明直接递送至肺中的感染位置，引起结核病肉芽肿内肺巨噬细胞的更高的氯法齐明浓度。

因此，在MDR-TB或XDR-TB感染患者中使用氯法齐明气雾施用应该进一步改善了患者的治疗结果，并可能缩短当前治疗方案的持续时间。

非结核分枝杆菌(NTM)的群，以前被称为非典型或普遍存在的分枝杆菌，包含150多种。NTM在自然界普遍存在，并且显示出广泛的多样性。它们可以在土壤、地面、饮用水以及像巴氏杀菌乳或奶酪等食物中检测到。一般而言，NTM病被认为致病性较低。然而，它们可在人类中引起严重疾病，尤其是在免疫系统受损或既往患有肺部疾病的人中。目前，NTM根据其生长速率进行分类，并分为缓慢生长(SGM)和快速生长(RGM)分枝杆菌。

缓慢生长的鸟分枝杆菌复合体(MAC)包括以下种：鸟分枝杆菌、嵌合分枝杆菌(Mycobacterium chimaera)和胞内分枝杆菌(Mycobacterium intracellulare)，它们都是最重要和最常见的致病性NTM。与堪萨斯分枝杆菌(Mycobacterium kansasii)、莫尔门分枝杆菌(Mycobaceterium malmoense)、蟾分枝杆菌(Mycobacterium xenopi)、猴分枝杆菌(Mycobacterium.simiae)、脓肿分枝杆菌、戈登分枝杆菌(Mycobacterium gordonae)、偶发分枝杆菌(Mycobacterium fortuitum)和龟分枝杆菌(Mycobacterium chelonae)一样，它们主要引起肺部感染。海洋分枝杆菌(Mycobacterium marinum)造成皮肤和软组织感染，如水族池肉芽肿(aquarium granuloma)。

具体地，RGM引起严重的、危及生命的慢性肺部疾病，并造成播散性且往往致命的感染。感染通常由受污染的材料和涉及导管、非无菌外科手术或注射和植入异物的侵入性手术导致。接触淋浴头和按摩浴缸也有感染风险的报告。NTM通常会导致患有慢性肺部疾病(诸如慢性阻塞性肺部疾病(COPD)、囊性纤维化(CF))和其他免疫功能受损患者的机会性感染。

近年来，包括以下亚种：脓肿分枝杆菌脓肿亚种(M.a.abscessus)，Mycobacteriumabcessus bolletii.和Mycobacterium abscessus massiliense的快速生长(RGM)脓肿分枝杆菌群菌株(脓肿分枝杆菌复合体，MABSC)已成为重要的人类病原体，并且与显著高于任何其他RGM病的病死率相关。

CF患者的脓肿分枝杆菌感染尤其成问题，因为它会导致肺破坏加重，且通常无法治疗，失败率高达60-66％(参见例如，Obregon-Henao A et al,Antimicrobial Agentsand Chemotherapy,November 2015,Vol59,No11,p.6904-6912；Qvist,T.,Pressler,T.,

and Katzenstein,TL.,“Shifting paradigms of nontuberculousmycobacteria in cystic fibrosis",Respiratory Research(2014),15(1):pp.41-47)。

人类NTM感染与人类获得性免疫缺陷综合征流行的出现更加相关。来自鸟分枝杆菌复合体(MAC)的分枝杆菌被确定为感染人类免疫缺陷病毒(HIV)患者机会性感染的主要原因。

已知几种NTM种会形成生物膜。生物膜是包埋在细胞外基质中的细菌小菌落，可对人类免疫机制提供稳定性和抵抗力。近年来，已显示NTM的一些种形成生物膜，增强对消毒剂和抗微生物剂的抗性。生物膜的组装经历了几个阶段，包括可逆附着、不可逆附着、通过细菌聚集形成生物膜、组织和信号传导，并最终扩散。在这个过程中，细菌形成一个包含胞外聚合的物质(EPS)(诸如多糖、脂质和核酸)的基质，以形成一个复杂的三维结构(参见例如，Sousa S.et al.,International Journal of Mycobacteriology 4(2015),36-43)。具体而言，分枝杆菌EPS在性质上不同于其他生物膜，这是因为分枝杆菌不产生胞外多糖(参见例如，Zambrano MM,Kolter R.Mycobacterial biofilms:a greasy way to hold ittogether.Cell.2005)。分枝杆菌生物膜因种而异，但可能包含分枝菌酸、糖肽脂类、分枝杆菌基-二酰基甘油、脂寡糖、脂肽和细胞外DNA(综述和原始研究来自：Rose SJ,Babrak LM,Bermudez LE(2015)Mycobacterium avium Possesses Extracellular DNA thatContributes to Biofilm Formation,Structural Integrity,and Tolerance toAntibiotics.PLoS ONE)。已知生物膜中的组装增强了对抗微生物剂的抗性(参见例如，Faria S.et al.,Journal of Pathogens,Vol 2015,Article ID 809014)。

建议将射流雾化器雾化的经气雾化的脂质体阿米卡星/吸入性阿米卡星溶液的递送作为治疗NTM肺部感染的一种新方法(Rose S.et al,2014,PLoS ONE,Volume 9,Issue9,e108703，和Olivier K.et al,Ann Am Thorac Soc Vol 11,No 1,pp.30-35)以及建议抗TB药物干粉微粒的吸入用于肺部递送(Cholo M et al.,J AntimicrobChemother.2012Feb；67(2):290-8和Fourie B.and Nettey O.,2015InhalationMagazine,Verma 2013Antimicrob Agents Chemother)。

最初使用胃肠外氨基糖苷类、替加环素和其他有前景的口服抗生素(诸如利奈唑胺、迪拉马尼和贝达喹啉)治疗，随后采用经吸入的阿米卡星的多种组合方案，以及在选定的病例中进行手术干预，在治疗NTM肺疾病方面显示出有前景的结果(Lu Ryu etal.TubercRespir Dis 2016；79:74-84)。然而，NTM感染(尤其是NTM肺部疾病)的发病率和流行率不断上升，以及有限治疗方案，使得开发新的剂型/药物制剂提高目前使用的抗生素(诸如氯法齐明)的生物利用度成为了必须。与口服和胃肠外治疗相比，吸入可提高疗效并减少不良反应。

氯法齐明和阿米卡星的组合在体外对抗脓肿分枝杆菌和鸟分枝杆菌的情况下均已显示出协同作用(参见例如，van Ingen,J.,et al.,“In Vitro Synergy betweenClofazimine and Am ikacin in Treatment of Nontuberculous MycobacterialDisease",Antimicrobial Agents and Chemotherapy56(12),6324-6327(2012))。此外，已显示氯法齐明和贝达喹啉组合在对抗结核分枝杆菌时的协同作用(参见例如，Cokol,M.etal.,“Efficient Measurement and factorization of high-order drug interactionsin Mycobacterium tuberculosis",Sciences Advances 2017:3:e170881,11October2017)。还显示了氯法齐明/贝达喹啉组合对抗非结核细菌脓肿分枝杆菌的协同作用(Ruth,M.M.et al.,“A Bedaquiline/Clofazimine Combination Regimen Might AddActivity to the Treatment of Clinically Relevant Non-TuberculousMycobacteria",Journal of Antimicrobial Chemotherapy(2019),doi.org/10.1093/jac/dky526)。

真菌病原体已成为人类死亡的主要原因。目前的评估表明，因侵袭性真菌感染导致的死亡与诸如结核病等更广为人知的传染病相当。白色念珠菌(Candida albicans)、新生隐球菌(Cryptococus neoformans)和烟曲霉菌(Aspergilliis fumigatus)是人类最常见的真菌病原体。这些种中的每一种每年都导致数十万例感染，由于诊断不良和治疗方案有限，死亡率高得令人无法接受。已显示氯法齐明作为一种组合药剂对多种真菌具有疗效(参见例如，Robbins,N.,et al.,“An Antifungal Combination Matrix Identifies aRich Pool of Adjuvant Molecules that Enhance Drug Activity against DiverseFungal Pathogens",Cell Reports 13,1481-1492,November 17,2015)。真菌还在囊性纤维化中作为共生菌、定殖菌和/或病原体发挥作用(参见例如，Chotirmall,S.H.andMcElvaney,N.G.,“Fungi in the cystic fibrosis lung:Bystanders or pathogens？",The International Journal of Biochemistry&Cell Biology 52(2014),161-173)。

氯法齐明在水中的低溶解度导致低的口服生物利用度和高的微生物抗性，并且还需要特定的技术来溶解和稳定在液体水性载体中配制的药物，诸如用于通过雾化器的气雾化，以便气雾剂颗粒得以实现更向下的肺沉积。

发明内容

在本发明的一个实施方案中，提供了一种药物组合物，包括：

(a)治疗有效剂量的氯法齐明或者其药学上可接受的衍生物或盐；

(b)亲水亲油平衡值大于10的非离子表面活性剂；和

(c)选自水、等渗盐溶液、缓冲盐溶液和水性电解质溶液的水性液体载体，

其中，所述氯法齐明或者其药学上可接受的衍生物或盐以悬浮液中颗粒的形式提供，并且

其中，所述氯法齐明或其药学上可接受的衍生物或盐的颗粒中值尺寸小于5μm且D90小于6μm。

在本发明的另一实施方案中，所述氯法齐明或者其药学上可接受的衍生物或盐的颗粒的平均尺寸小于2μm且D90小于3μm。

在本发明的另一个实施方案中，提供了一种药物组合物，包括：

(a)治疗有效剂量的氯法齐明；

(b)亲水亲油平衡值大于10的非离子表面活性剂；和

其中，所述氯法齐明以悬浮液中颗粒的形式提供，

并且

其中，所述氯法齐明的颗粒的中值尺寸小于5μm且D90小于6μm。

在本发明的另一个实施方案中，所述氯法齐明的颗粒的中值尺寸小于2μm且D90小于3μm。

本发明的组合物通过合适的雾化器的气雾化提供了经气雾化的氯法齐明到下肺(lower lung)(即到中央和下外周肺的支气管、细支气管和肺泡)中的显著增加的递送，从而显著增强了治疗效果。

此外，吸入装置应当优选地进一步适于具有最佳粒径分布的气雾剂的局部肺部递送，以在下肺中均匀沉积。

因此，本发明提供了一种气雾剂，其具有便于递送至肺泡和细支气管的尺寸的气雾剂颗粒。针对肺泡和细支气管的合适空气动力学粒径介于1至5μm。比这更大的颗粒选择性地沉积在上肺(upper lungs)(即支气管和气管)以及口腔和喉咙(即口咽区)中。因此，吸入装置适于产生质量中值空气动力学直径(MMAD)在约1至约5μm范围内、且优选在约1至约3μm范围内的气雾剂。在另一个实施方案中，粒径分布窄并且几何标准偏差(GSD)小于约2.5。

具体实施方式

本发明基于意想不到的发现，即通过以悬浮液形式的氯法齐明的肺气雾剂施用，可以实现活性剂的更向下(即更深)肺沉积，从而显著增加极度疏水的BCS II类试剂的生物利用度，这引起显著的治疗功效增加与的全身副作用减少。

在另一个方面，该发现引起了对分枝杆菌和革兰氏阳性菌引起的感染，特别是NTM肺部感染(诸如CF、COPD和免疫缺陷患者(诸如HIV患者)中的机会性感染)提供改进的抗生素治疗。

此外，本发明旨在克服针对革兰氏阳性菌肺部感染，特别是肺部的TB和NTM感染的既定口服治疗方案的全身副作用，以及旨在减少氯法齐明的剂量和治疗持续时间。

本领域技术人员应当理解，本申请还公开了本文公开的各个特征的每一个和任何组合。

定义

术语“药学上可接受的盐”是指保持本发明化合物的生物有效性和性质并且其不是在生物学上或其他方面不期望的盐。在许多情况下，由于存在氨基和/或羧基或类似的基团，本发明的化合物能够形成酸盐和/或碱盐。药学可接受的酸加成盐可以用无机酸和有机酸形成。可衍生盐的无机酸包括，例如，盐酸、氢溴酸、硫酸、硝酸、磷酸等。可衍生盐的有机酸包括，例如，乙酸、丙酸、萘酸、油酸、棕榈酸、帕莫(亚甲基双羟萘(emboic))酸、硬脂酸、乙醇酸、丙酮酸、草酸、马来酸、丙二酸、琥珀酸、富马酸、酒石酸、柠檬酸、抗坏血酸、葡糖七酸、葡糖醛酸、乳酸、乳糖酸、酒石酸、苯甲酸、肉桂酸、扁桃酸、甲磺酸、乙磺酸、对甲苯磺酸、水杨酸等。

药学可接受的碱加成盐可以用无机碱和有机碱形成。可衍生盐的无机碱包括，例如，钠、钾、锂、铵、钙、镁、铁、锌、铜、锰、铝等；特别优选的是铵盐、钾盐、钠盐、钙盐和镁盐。可衍生盐的有机碱包括，例如，伯胺、仲胺和叔胺，经取代胺包括天然存在的经取代胺、环胺、碱性离子交换树脂等，特别是诸如异丙胺、三甲胺、二乙胺、三乙胺、三丙胺、组氨酸、精氨酸、赖氨酸、苄氨嘧啶、N-甲基-葡糖胺和乙醇胺。其他酸包括十二烷基硫酸、萘-1,5-二磺酸、萘-2-磺酸和糖精。

根据本发明，除了游离碱，优选使用甲磺酸、马来酸、异烟酸、烟酸、丙二酸和水杨酸的盐，特别优选是氯法齐明甲磺酸盐。

如本文所用的术语“药学上可接受的衍生物”，例如是指US9,540,336中公开的化合物，US9,540,336的公开内容全文并入本文。此外，衍生物指的是在Lu,Y.,Zhen,M.,Wang,B.,Fu,L.,Zhao,W.,Li,P.,Xu,J.,Zhu,H.,Jin,H.,Yin,D.Huang,H.,Upton,AM.And Ma,Z.,“Clofazimine Analogs with Efficacy against experimental Tuberculosis andreduced Potential for Accumulation"Antimicrobial Agents and Chemotherapy(2011),55(11):pp.5185-5193中描述的。此外，术语化合物的“药学上可接受的衍生物”是例如所述化合物的前体药物。通常，前体药物是化合物的衍生物，其在施用时能够提供化合物的活性形式。这些衍生物例如可以是羧基的酯或酰胺、羟基的羧基酯，或羟基的磷酸酯。

“治疗有效量”、“治疗有效剂量”，或“药学上有效量”是指本发明公开的具有治疗效果的氯法齐明或其药学上可接受的盐或衍生物的量。可用于治疗的氯法齐明的剂量是治疗有效量。因此，如本文所用，治疗有效量是指通过临床试验结果和/或模型动物感染研究判断产生所需治疗效果的氯法齐明的那些量。

氯法齐明的量和日剂量可以由本领域技术人员常规确定，并且将根据若干因素(诸如所涉及的特定微生物菌株)而变化。该量还可能取决于患者的身高、体重、性别、年龄和病史。对于预防性治疗，治疗有效量是指能有效预防微生物感染的量。

“治疗效果”在一定程度上缓解了感染的一种或更多种症状，并包括治愈感染。“治愈”是指活跃(active)感染的症状被消除，包括参与感染的那些微生物的存活微生物的过量成员被完全或基本消除，达到或低于传统测量的检测阈值。然而，即使治愈后，感染也可能存在某些长期或永久的影响(诸如广泛的组织损伤)。如本文所用，“治疗效果”被定义为通过人类临床结果或动物研究测量的宿主中细菌载量的统计学显著减少、耐药性的出现，或感染症状的改善。

如本文所用，术语“治疗(treat)”、“治疗(treatment)”，或“治疗(treating)”是指施用用于预防和/或治疗目的的药物组合物/组合。

术语“预防性治疗”是指治疗尚未感染、但易受特定感染或有特定感染风险的患者。术语“治疗性治疗(therapeutic treatment)”是指对已经患有感染的患者施用治疗。因此，在优选的实施方案中，治疗是(出于治疗或预防目的)对哺乳动物施用治疗有效量的氯法齐明。

除非本文另有说明，术语“吸入”是指肺部吸入。

除非本文另有说明，本文所用术语“感染”是指肺部感染。

除非另有说明，术语“基本上”当用于指化合物的纯度时，表示化合物的95％纯度或更高纯度。

除非另有说明，术语“合适的粒径”是指组合物中，或当施用患者时提供所需治疗效果的组合物中氯法齐明的粒径。

除非另有说明，术语“合适的浓度”是指提供药学上可接受的组合物或组合的组合物或组合中组分的浓度。

药学组合物和组合

下列等级的水特别适用于本发明：无菌纯化水、注射用无菌水、冲洗用无菌水、吸入用无菌水(USP)以及符合例如欧洲药典或国家处方集的相应等级的水。

根据本发明用作水性液体载体的水性电解质溶液可进一步包括氯化钠、氯化钾、氯化锂、氯化镁、氯化钙或它们的混合物。

水性液体载体优选为等渗盐溶液(0.9％NaCl，其相当于约/大约150mM NaCl，优选154mM NaCl)。

氯法齐明已被证明以至少存在四种多晶型形式(参见例如，Bannigan,et al.,“Investigation into the Solid and Solution Properties of Known and NovelPolymorphs of the Antimicrobial Molecule Clofazimine",Cryst.Growth Des.2016,16(12),pp.7240-7250)。氯法齐明可以以三斜晶型FI、单斜晶型FII和正交晶型FIII存在。只有在高温下才能看到另一种晶型FIV。

因此，在本发明的进一步实施方案中，提供了一种药物组合物，包括：

(a)治疗有效剂量的氯法齐明；

(b)亲水亲油平衡值大于10的非离子表面活性剂；和

其中，所述氯法齐明以悬浮液中颗粒的形式提供，

并且

其中，所述氯法齐明的颗粒中值尺寸小于5μm且D90小于6μm，优选中值尺寸小于2μm且D90小于3μm，并且其中，氯法齐明以选自三斜晶型FI、单斜晶型FII和正交晶型FIII以及这些晶型的混合物的一种或多种多晶型形式提供。在另一个实施方案中，氯法齐明基本上以正交晶型FIII提供。

在本发明的进一步的实施方案中，提供了根据本文所述的任何组合物实施方案的药学组合物，其中，非离子表面活性剂选自聚山梨酯20(例如

20)、聚山梨酯60(例如

60)、聚山梨酯80(例如

80)、硬脂醇、亲水亲油平衡值为14至16的氢化蓖麻油的聚乙二醇衍生物(例如

RH 40)、亲水亲油平衡值为15至17的氢化蓖麻油的聚乙二醇衍生物(例如

RH 60)、山梨醇单月桂酸酯(例如

20)、山梨醇单棕榈酸酯(例如

40)、山梨醇单硬脂酸酯(例如

60)、聚氧乙烯(20)油醇醚(例如

020)、聚氧乙烯(20)鲸蜡醚(例如

58)、聚氧乙烯(10)鲸蜡醚(例如

C10)、聚氧乙烯(10)油醇醚(例如

O10)、聚氧乙烯(100)硬脂醚(例如

S100)、聚氧乙烯(10)硬脂醚(例如

S10)、聚氧乙烯(20)硬脂醚(例如

S20)、聚氧乙烯(4)月桂醚(例如

L4)、聚氧乙烯(20)鲸蜡醚(例如

93)、聚氧乙烯(2)鲸蜡醚(例如

S2)、辛酰己酰聚氧-8甘油酯(例如

)、聚乙二醇(20)硬脂酸酯(例如Myrj^TM 49)、聚乙二醇(40)硬脂酸酯(例如Myrj^TM S40)、聚乙二醇(100)硬脂酸酯(例如Myrj^TM S100)、聚乙二醇(8)硬脂酸酯(例如Myrj^TM S8)和聚乙二醇40硬脂酸酯(例如Myrj^TM 52)，及它们的混合物。

在本发明的另一个实施方案中，提供了根据本文所述的任何组合物实施方案的药物组合物，其中，非离子表面活性剂是聚山梨酯80，并且其中，水性液体载体是蒸馏水、高渗盐溶液或等渗盐溶液。在本发明的另一个实施方案中，提供了一种药物组合物，其中，高渗盐溶液是1％至7％(w/v)氯化钠。在本发明的进一步的实施方案中，提供了一种药物组合物，其中，非离子表面活性剂是超纯的聚山梨酯80(例如NOF公司聚山梨酯80(Hx2))，并且其中，水性液体载体是等渗盐溶液。

在本发明的另一个实施方案中，提供了根据本文所述的任一组合物实施方案中的药物组合物，其中，所述组合物的同渗重摩在200-700mOsm/kg的范围内。在另一个实施方案中，组合物的同渗重摩在300-400mOsm/kg的范围内。

在本发明的进一步的实施方案中，提供了根据本文所述的任一组合物实施方案中的药物组合物，其中，非离子表面活性剂占总组合物的0.001％至5％(v/v)，并且氯法齐明的量占总组合物的0.1％至20％(w/v)。

在本发明的另一个实施方案中，提供了根据本文所述的任一组合物实施方案中的药物组合物，其中，所述药物组合物通过包括以下步骤的方法制备：

(1)将氯法齐明、非离子表面活性剂和水的悬浮液均质化以获得含合适粒径的氯法齐明的悬浮液，

(2)将(1)得到的悬浮液的pH值调节至介于pH 5.5至pH 7.5的pH，以及

(3)将氯化钠浓度调节至合适浓度，以及

(4)将同渗重摩调节至合适水平。

在进一步的实施方案中，将pH值调节至7.4，并将氯化钠浓度调节至154mM氯化钠。在另一个实施方案中，步骤(1)中的均质化通过高压均质化、高剪切均质化、湿磨、超声均质化，或这些方法的组合进行。在另一个方面，氯法齐明的均质化在多个均质化步骤中进行。在另一个实施方案中，合适粒径的氯法齐明是平均尺寸小于5μm且D90小于6μm的颗粒。在进一步的实施方案中，合适粒径的氯法齐明是平均尺寸小于2μm且D90小于3μm的颗粒。

在本发明进一步的实施方案中，提供了根据本文所述的任一组合物实施方案中的药物组合物，其中，所述药物组合物通过包括以下步骤的方法制备：

(1)将氯法齐明和非水性液体的悬浮液均质化以获得含合适粒径的氯法齐明的悬浮液，

(2)将氯法齐明分离，

(3)将氯法齐明加入到非离子表面活性剂和水中，

(4)将(3)得到的悬浮液的pH值调节至介于pH 5.5至pH 7.5的pH，以及

(5)将氯化钠浓度调节至合适浓度。

在进一步的实施方案中，将pH值调节至7.4，并将氯化钠浓度调节至154mM氯化钠。在进一步的实施方案中，步骤(1)中的均质化通过高压均质化、高剪切均质化、湿磨、超声均质化或这些方法的组合进行。在另一个实施方案中，氯法齐明的均质化在多个均质化步骤中进行。在另一个实施方案中，合适粒径的氯法齐明是平均尺寸小于5μm且D90小于6μm的颗粒。在进一步的实施方案中，合适粒径的氯法齐明是平均尺寸小于2μm且D90小于3μm的颗粒。

在进一步的实施方案中，提供了根据本文所述的任一组合物实施方案中的药物组合物，其中，所述组合物通过包括以下步骤的方法制备：

(1)将氯法齐明微粉化以获得合适粒径的氯法齐明，

(2)将氯法齐明加入到非离子表面活性剂和水中，

(3)将(2)得到的悬浮液的pH值调节至介于pH 5.5至pH 7.5的pH，以及

(4)将氯化钠浓度调节至合适浓度。

在进一步的实施方案中，将pH值调节至7.4，并将氯化钠浓度调节至154mM氯化钠。

在另一个实施方案中，氯法齐明的微粉化通过喷射研磨、喷雾干燥、球磨，或超临界流体处理进行。在另一个实施方案中，氯法齐明的微粉化在多个微粉化步骤中进行。在另一个实施方案中，合适粒径的氯法齐明是平均尺寸小于5μm且D90小于6μm的颗粒。在进一步的实施方案中，合适粒径的氯法齐明是平均尺寸小于2μm且D90小于3μm的颗粒。

在进一步的实施方案中，提供了根据本文所述的任一组合物实施方案中的药物组合物，其中，所述组合物通过以下方法制备，包括：将非离子表面活性剂、含有合适浓度氯化钠的水中的氯法齐明悬浮液均质化，并且所述悬浮液的pH已调节至介于pH 5.5至pH 7.5的pH，以获得合适粒径的氯法齐明。在进一步的实施方案中，将pH值调节至7.4，并将氯化钠浓度调节至154mM氯化钠。在进一步的实施方案中，均质化通过高压均质化、高剪切均质化、湿磨、超声均质化或这些步骤的组合进行。在另一个实施方案中，氯法齐明的均质化在多个均质化步骤中进行。在另一个实施方案中，合适粒径的氯法齐明是平均尺寸小于5μm且D90小于6μm的颗粒。在进一步的实施方案中，合适粒径的氯法齐明是平均尺寸小于2μm且D90小于3μm的颗粒。

在另一个实施方案中，提供了制备根据本文所述的任何组合物实施方案的药物组合物的方法，包括以下步骤：

(2)将(1)得到的悬浮液的pH值调节至介于pH 5.5至pH 7.5的pH，以及

(3)将氯化钠浓度调节至合适浓度，以及

(4)将同渗重摩调节至合适水平。

在另一个实施方案中，将pH值调节至7.4，并将氯化钠浓度调节至154mM氯化钠。在进一步的实施方案中，均质化通过高压均质化、湿磨、超声均质化，或这些方法的组合进行。在进一步的实施方案中，氯法齐明的均质化在多个均质化步骤中进行。在进一步的实施方案中，合适粒径的氯法齐明是平均尺寸小于5μm且D90小于6μm的颗粒。在进一步的实施方案中，合适粒径的氯法齐明是平均尺寸小于2μm且D90小于3μm的颗粒。

在另一个实施方案中，提供了制备本文所述的任何药物组合物实施方案的过程，其中，

(2)将氯法齐明分离，

(3)将氯法齐明加入到非离子表面活性剂和水中，

(4)将(3)得到的悬浮液的pH值调节至介于pH 5.5至pH 7.5的pH，以及

(5)将氯化钠浓度调节至合适浓度。

在另一个实施方案中，将pH值调节至7.4，并将氯化钠浓度调节至154mM氯化钠。在进一步的实施方案中，均质化通过高压均质化、湿磨、超声均质化或这些方法的组合进行。在进一步的实施方案中，氯法齐明的均质化在多个均质化步骤中进行。在进一步的实施方案中，合适粒径的氯法齐明是平均尺寸小于5μm且D90小于6μm的颗粒。在进一步的实施方案中，合适粒径的氯法齐明是平均尺寸小于2μm且D90小于3μm的颗粒。

在进一步的实施方案中，提供了制备根据本文所述的任一药物组合物实施方案中的药物组合物的方法，包括以下步骤：

(1)将氯法齐明微粉化以获得合适粒径的氯法齐明，

(2)将氯法齐明加入到非离子表面活性剂和水中，

(3)将(2)得到的悬浮液的pH值调节至介于pH 5.5至pH 7.5的pH，以及

(4)将氯化钠浓度调节至合适浓度。

在另一个实施方案中，将pH值调节至7.4，并将氯化钠浓度调节至154mM氯化钠。在进一步的实施方案中，氯法齐明的微粉化通过喷射研磨、喷雾干燥、球磨，或超临界流体处理进行。在进一步的实施方案中，氯法齐明的微粉化在多个微粉化步骤中进行。在进一步的实施方案中，合适粒径的氯法齐明是平均尺寸小于5μm且D90小于6μm的颗粒。在另一个实施方案中，合适粒径的氯法齐明是平均尺寸小于2μm且D90小于3μm的颗粒。

在另一个实施方案中，提供了制备根据本文所述的任一组合物实施方案中的药物组合物的方法，包括将非离子表面活性剂、含有合适浓度氯化钠的水中的氯法齐明的悬浮液均质化，并且所述悬浮液的pH已调节至介于pH 5.5至pH 7.5的pH，以获得合适粒径的氯法齐明。在另一个实施方案中，pH为7.4，并且氯化钠的合适浓度是154mM氯化钠。在进一步的实施方案中，均质化通过高压均质化、湿磨、超声均质化或这些方法的组合进行。在进一步的实施方案中，氯法齐明的均质化在多个均质化步骤中进行。在进一步的实施方案中，合适粒径的氯法齐明是平均尺寸小于5μm且D90小于6μm的颗粒。在进一步的实施方案中，合适粒径的氯法齐明是平均尺寸小于2μm且D90小于3μm的颗粒。

在进一步的实施方案中，提供了制备根据本文所述的任一组合物实施方案中的药物组合物的方法，包括以下步骤：(a)将氯法齐明、非离子表面活性剂和水的悬浮液均质化以获得含合适粒径的氯法齐明的悬浮液；(b)将得到的悬浮液的pH值调节至介于pH 5.5至pH 7.5的pH；(c)将氯化钠浓度调节至合适浓度，以及(d)将同渗重摩调节至合适水平；并且其中，步骤(b)、(c)和(d)，可以(b)、(c)、(d)；(b)、(d)、(c)；(c)、(b)、(d)；(c)、(d)、(b)；(d)、(b)、(c)；或(d)、(c)、(b)的顺序发生。

在另一个实施方案中，提供了制备根据本文所述的任一组合物实施方案中的药物组合物的方法，包括以下步骤：(a)将氯法齐明和非水性液体的悬浮液均质化以获得含合适粒径的氯法齐明的悬浮液；(b)将氯法齐明分离；(c)将氯法齐明加入到非离子表面活性剂和水中；(d)将得到的悬浮液的pH值调节至介于pH 5.5至pH 7.5的pH；以及(e)将氯化钠浓度调节至合适浓度；并且其中，步骤(d)和(e)可以(d)、(e)；或(e)、(d)的顺序发生。

在另一个实施方案中，提供了制备根据本文所述的任一组合物实施方案中的药物组合物的方法，包括以下步骤：(a)将氯法齐明微粉化以获得合适粒径的氯法齐明，以及(b)将氯法齐明加入到非离子表面活性剂、含有合适浓度氯化钠的水中，并其已调节至介于pH5.5至7.5的pH。

在本发明的另一个实施方案中，提供了用于吸入的气雾剂形式的药物组合，通过使用选自超声雾化器、电子喷雾雾化器、振动膜雾化器、射流雾化器和机械软雾吸入器的雾化装置将根据本文所述的任一组合物实施方案中的组合物雾化而制备，并且

其中，由雾化装置产生的气雾剂颗粒质量中值空气动力学直径为1至5μm。在进一步实施方案中，用于吸入的气雾剂用于下肺沉积。在另一个实施方案中，雾化装置表现出0.1至1.0ml/min的输出速率。在另一个实施方案中，总吸入体积介于1ml至5ml。

在另一个实施方案中，提供了根据本文所述的任一组合物实施方案中的药物组合物，其用于与分散和/或破坏生物膜的试剂联合，与粘液溶解剂和/或粘液活性剂，和/或减少生物膜形成的试剂联合，所述分散和/或破坏生物膜的试剂、粘液溶解剂和/或粘液活性剂和/或减少生物膜形成的试剂选自：经雾化的4-7％高渗盐溶液、偏高碘酸盐、十二烷基硫酸钠、碳酸氢钠、氨丁三醇、银纳米颗粒、铋硫醇(bismuth thiols)、乙二胺四乙酸、负载庆大霉素的磷脂酰胆碱修饰的金纳米颗粒、螯合剂、顺式-2-癸烯酸、D-氨基酸、D-对映体肽、镓中卟啉IX、镓原卟啉IX、姜黄素、展青霉素、青霉酸、黄芩素、柚皮素、熊果酸、积雪草酸、科罗索酸、脂肪酸、宿主防御肽和抗微生物肽。在另一个实施方案中，用该用途的组合物在施用选自贝达喹啉或者其药学上可接受的盐或衍生物、头孢西丁、阿米卡星、克拉霉素、吡嗪酰胺、利福平、莫西沙星、左氧氟沙星和对氨基水杨酸盐及它们的混合物的试剂之前、同时或之后施用。

在另一个实施方案中，提供了根据本文所述的任何组合实施方案中的药物组合，其用于与分散和/或破坏生物膜的试剂联合，与粘液溶解剂和/或粘液活性剂，和/或减少生物膜形成的试剂联合，所述分散和/或破坏生物膜的试剂、粘液溶解剂和/或粘液活性剂和/或减少生物膜形成的试剂选自：经雾化的4-7％高渗盐溶液、偏高碘酸盐、十二烷基硫酸钠、碳酸氢钠、氨丁三醇、银纳米颗粒、铋硫醇、乙二胺四乙酸、负载庆大霉素的磷脂酰胆碱修饰的金纳米颗粒、螯合剂、顺式-2-癸烯酸、D-氨基酸、D-对映体肽、镓中卟啉IX、镓原卟啉IX、姜黄素、展青霉素、青霉酸、黄芩素、柚皮素、熊果酸、积雪草酸、科罗索酸、脂肪酸、宿主防御肽和抗微生物肽。在另一个实施方案中，用于所述用途的组合用于在在施用选自贝达喹啉或者其药学上可接受的盐或衍生物、头孢西丁、阿米卡星、克拉霉素、吡嗪酰胺、利福平、莫西沙星、左氧氟沙星和对氨基水杨酸盐及它们的混合物的试剂之前、同时或之后施用本发明的组合物的组合。在另一个实施方案中，组合物在施用选自贝达喹啉或者其药学上可接受的盐或衍生物，和阿卡米星，及其混合物的试剂之前、同时或之后施用。在进一步的实施方案中，组合物在施用贝达喹啉或者其药学上可接受的盐或衍生物之前、同时或之后施用。

在另一个实施方案中，提供了根据本文所述的任一组合物实施方案中的药物组合物，用于治疗和/或预防由分枝杆菌或其它革兰氏阳性菌引起的肺部感染。在进一步的实施方案中，感染是由选自非结核分枝杆菌和结核分枝杆菌复合体及其组合的分枝杆菌属的种引起的。在进一步的实施方案中，非结核分枝杆菌选自鸟分枝杆菌、胞内分枝杆菌、脓肿分枝杆菌和麻风分枝杆菌及它们的组合。在另一个实施方案中，所述感染是在患有囊性纤维化、慢性阻塞性肺部疾病或获得性免疫缺陷综合征的患者中，选自MAC肺部疾病和非结核性感染的机会性感染。在另一个实施方案中，感染是囊性纤维化患者中的机会性非结核分枝杆菌感染。在另一个实施方案中，用于所述用途的组合物在施用贝达喹啉或者其药学上可接受的盐或衍生物、头孢西丁、阿米卡星、克拉霉素、吡嗪酰胺、利福平、莫西沙星、左氧氟沙星和对氨基水杨酸盐及它们的混合物的试剂之前、同时或之后施用。在另一个实施方案中，组合物在施用选自贝达喹啉或者其药学上可接受的盐或衍生物，和阿卡米星，及其混合物的试剂之前、同时或之后施用。在进一步的实施方案中，组合物在施用贝达喹啉或者其药学上可接受的盐或衍生物之前、同时或之后施用。

在另一个实施方案中，提供了根据本文所述的任何组合实施方案中的药物组合，用于治疗和/或预防由分枝杆菌或其它革兰氏阳性菌引起的肺部感染。在进一步的实施方案中，感染是由选自非结核分枝杆菌和结核分枝杆菌复合体及其组合的分枝杆菌属的种引起的。在进一步的实施方案中，非结核分枝杆菌选自鸟分枝杆菌、胞内分枝杆菌、脓肿分枝杆菌和麻风分枝杆菌及它们的组合。在另一个实施方案中，所述感染是在患有囊性纤维化、慢性阻塞性肺部疾病或获得性免疫缺陷综合征的患者中，选自MAC肺部疾病和非结核性感染的机会性感染。在另一个实施方案中，感染是囊性纤维化患者中的机会性非结核分枝杆菌感染。在另一个实施方案中，用于所述用途的组合用于在施用选自贝达喹啉或者其药学上可接受的盐或衍生物、头孢西丁、阿米卡星、克拉霉素、吡嗪酰胺、利福平、莫西沙星、左氧氟沙星和对氨基水杨酸盐及它们的混合物的试剂之前、同时或之后施用本发明的组合物。在另一个实施方案中，用于所述用途的组合用于在施用选自贝达喹啉或者其药学上可接受的盐或衍生物，和阿卡米星，及其混合物的试剂之前、同时或之后施用本发明的组合物。在另一个实施方案中，用于所述用途的组合用于在施用贝达喹啉或者其药学上可接受的盐或衍生物之前、同时或之后施用本发明的组合物。

在另一个实施方案中，提供了系统，用于在治疗或提供预防由分枝杆菌或其它革兰氏阳性细菌引起的肺部感染时提供抗生素活性，其中所述系统包括：

1)经雾化的药物组合，包括：

(a)治疗有效剂量的氯法齐明；

(b)亲水亲油平衡值大于10的非离子表面活性剂；和

(c)选自水、等渗盐溶液、缓冲盐溶液和电解质水性溶液的水性液体载体，

和

2)雾化器，

其中，所述氯法齐明以悬浮液的形式提供，

并且

其中，由雾化装置产生的气雾剂颗粒质量中值空气动力学直径为1至5μm。

在进一步的实施方案中，提供了根据本文所述的任一组合物实施方案中的药物组合物，用于治疗和/或预防肺部真菌感染或艰难梭菌或其组合。在另一个实施方案中，提供了根据本文所述的组合物实施方案中任一的药物组合物，用于治疗和/或预防肺部真菌感染。在进一步的实施方案中，肺部真菌感染是白色念珠菌或烟曲霉菌或其组合。

在进一步的实施方案中，提供了根据本文所述的任一组合实施方案中的药物组合，用于治疗和/或预防肺部真菌感染或艰难梭菌或其组合。提供了根据本文所述的任一组合实施方案中药物组合，用于治疗和/或预防肺部真菌感染。在进一步的实施方案中，肺部真菌感染是白色念珠菌或烟曲霉菌或其组合。

在另一个实施方案中，提供了在有需要的患者中治疗或预防肺部感染的方法，包括通过吸入施用根据本文所述任一组合物实施方案中的组合物。在另一个实施方案中，感染是由选自非结核分枝杆菌和结核分枝杆菌复合体及其组合的分枝杆菌属的种引起的。在另一个实施方案中，非结核分枝杆菌选自鸟分枝杆菌、胞内分枝杆菌、脓肿分枝杆菌和麻风分枝杆菌及它们的组合。在进一步的实施方案中，所述感染是在患有囊性纤维化、慢性阻塞性肺部疾病或获得性免疫缺陷综合征的患者中，选自MAC肺部疾病和非结核性感染的机会性感染。在另一个实施方案中，感染是囊性纤维化患者中的机会性非结核分枝杆菌感染。

在进一步的实施方案中，提供了一种在有需要的患者中治疗或预防由分枝杆菌或其它革兰氏阳性菌引起的肺部感染的方法，包括在施用选自贝达喹啉或其衍生物的药学上可接受的盐、头孢西丁、阿米卡星、克拉霉素、吡嗪酰胺、利福平、莫西沙星、左氧氟沙星和对氨基水杨酸盐及它们的混合物的试剂之前、同时或之后，通过吸入施用根据本文所述的任一组合物实施方案的组合物。在另一个实施方案中，所述试剂是贝达喹啉或阿米卡星。在进一步的实施方案中，所述试剂是贝达喹啉。

粒径和分布

气雾化治疗的治疗效果取决于沉积的剂量及其分布。气雾剂粒径是定义肺部沉积剂量和药物气雾剂分布的重要变量之一。

通常，吸入的气雾剂颗粒会通过以下两种机制之一发生沉积：撞击(通常对较大的气雾剂颗粒起主导作用)和沉降(对较小的气雾剂颗粒起主导作用)。当吸入的气雾剂颗粒的动量足够大以至于颗粒不会跟随气流并遇到生理表面时，就会发生撞击。相比之下，当随吸入气流传播的极小气雾剂颗粒由于重力下沉而遇到生理表面时，沉降主要发生在下肺。

肺部药物递送可通过口腔和咽喉吸入气雾剂实现。空气动力学直径大于约5μm的气雾剂颗粒通常不会到达肺；相反，它们倾向于冲击咽喉后部并且被吞咽并且可能被口服吸收。直径为约3至约5μm的气雾剂颗粒小到足以到达上肺至中肺区域(传导气道)，但太大而无法到达肺泡。更小的气雾剂颗粒，即约0.5至约3μm，能够到达肺泡区域。直径小于约0.5μm的气雾剂颗粒倾向于在潮汐(tidal)呼吸期间呼出，但也可通过屏气沉积在肺泡区域。

肺部药物递送中使用的气雾剂由各种粒径的气雾剂组成，因此使用统计描述符。肺部药物递送中使用的气雾剂通常按其质量中值直径(MMD)进行描述，即质量的一半包含在大于MMD的气雾剂颗粒中，质量的一半包含在小于MMD的气雾剂颗粒中。对于密度均匀的颗粒，体积中值直径(VMD)可与MMD互换使用。VMD和MMD的测定是通过激光衍射进行的。分布的宽度用几何标准差(GSD)来描述。然而，通过颗粒的空气动力学直径更准确地描述了气雾剂颗粒在呼吸道中的沉积，因此，通常使用质量中值空气动力学直径。MMAD测定是通过惯性撞击或飞行时间测量进行的。对于水性颗粒，VMD、MMD和MMAD应相同。然而，如果在气雾剂通过撞击物时湿度未得到控制，由于脱水MMAD测定值将小于MMD和VMD。出于描述的目的，VMD、MMD和MMAD测量被视为处于受控条件下，使得VMD、MMD和MMAD的描述将具有可比性。

尽管如此，出于描述的目的，将按照美国药典惯例，用下一代冲击器(NGI)在室温下测量，以MMAD为单位给出气雾剂颗粒的气雾剂颗粒大小。公开于Process Revision<601>Aerosols,Nasal Sprays,Metered-Dose Inhalers,and Dry Powder Inhalers,Pharmacopeial Forum (2003),Volume Number 29,pages 1176-1210还公开于JolyonMitchell,Mark Nagel“Particle Size Analysis of Aerosols from MedicinalInhalers",KONA Powder and Particle Journal(2004),Volume 22,pages 32-65。

根据本发明，气雾剂的颗粒大小被优化以使氯法齐明在感染部位的沉积最大化并使耐受性最大化。气雾剂颗粒大小可用质量中值空气动力学直径(MMAD)表示。大颗粒(例如，MMAD＞5μm)倾向于沉积在胸腔外气道和上气道中，因为它们太大而无法在气道中的弯处通过。不耐受(例如咳嗽和支气管痉挛)可能由上气道大颗粒沉积引起。

因此，根据优选实施方案，气雾剂的MMAD应小于约5μm，优选介于约1和5μm，更优选低于3μm(<3μm)。

然而，可采用引导呼吸策略，使较大的颗粒能够通过胸腔外气道和上气道，并比潮汐呼吸时更深地进入肺部，这将增加气雾剂在中肺和下肺的沉积。引导呼吸策略可能慢至100ml/min。因此，当与引导呼吸策略一起使用时，气雾剂的优选MMAD应小于约10μm。

另一个同样重要的因素(除气雾剂颗粒大小外)是固体颗粒的颗粒大小和大小分布，在本例中为氯法齐明颗粒大小和分布。给定气雾剂颗粒中固体颗粒的大小必须小于包含其的气雾剂颗粒。较大的气雾剂可包含一个或更多个固体颗粒。此外，当处理稀释的悬浮液时，大部分气雾剂颗粒可能不包含固体颗粒。

因此，希望固体药物颗粒明显小于气雾剂颗粒的MMAD。例如，如果气雾剂颗粒的MMAD是3μm，则期望的固体颗粒是1μm或更小。

另一个需要考虑的问题是，例如使用振动网状雾化器时，将制剂泵送通过板上的孔，从而将悬浮液分解为液滴。因此，固体颗粒也必须比这些小孔小，才能通过。

悬浮液中的固体颗粒大小可由颗粒的平均大小以及颗粒的分布给出。D90值表明悬浮液中90％的颗粒具有平均尺寸或更小。

雾化器

对于水性和其他非加压液体系统，有多种雾化器(包括小容量雾化器)可用于将制剂气雾化。压缩机驱动的雾化器采用喷射技术，并使用压缩空气产生液体气雾剂。这种装置可从例如Healthdyne Technologies,Inc.；Invacare,Inc.；Mountain MedicalEquipment,Inc.；Pari Respiratory,Inc.；Mada Medical,Inc.；Puritan-Bennet；Schuco,Inc.,DeVilbiss Health Care,Inc.；和Hospitak,Inc购得。超声雾化器依靠压电晶体振动形式的机械能来产生可呼吸的液滴，并且可从例如Omron Heathcare,Inc.和DeVilbissHealth Care,Inc购得。振动网状雾化器依靠压电或机械脉冲来产生可呼吸的液滴。与本文所述的氯法齐明一起使用的雾化器的其它实例描述于美国专利4,268,460；4,253,468；4,046,146；3,826,255；4,649,911；4,510,929；4,624,251；5,164,740；5,586,550；5,758,637；6,644,304；6,338,443；5,906,202；5,934,272；5,960,792；5,971,951；6,070,575；6,192,876；6,230,706；6,349,719；6,367,470；6,543,442；6,584,971；6,601,581；4,263,907；5,709,202；5,823,179；6,192,876；6,644,304；5,549,102；6,083,922；6,161,536；6,264,922；6,557,549；和6,612,303，它们全部内容通过引用并入本文。可与本文所述氯法齐明组合物一起使用的雾化器的商业实例包括由Aerogen生产的Respirgard

Pro和

Go；由Aradigm生产的

和AERx Essence^TM；由Respironics，Inc.生产

Freeway Freedom ^TM、Sidestream，Ventstream和I-neb，；以及PARI GmbH生产的PARI

PARI

和e-Flow7m。进一步的非限制性实例公开在US 6,196,219中。

根据本发明，药物组合物可优选使用选自超声雾化器、电子喷雾雾化器、振动膜雾化器、射流雾化器或机械软雾吸入器的雾化装置雾化。

优选地，该装置通过电或机械过程控制患者的吸入流速。

在另一个优选实施方案中，通过患者的吸入来触发装置产生气雾剂，诸如使用AKITA装置。

根据本发明使用的上述雾化器/装置的优选(商购)实例是Vectura fox、ParieFlow、Pari Trek S、Philips Innospire mini、Philips InnoSpire Go、Medspraydevice、Aeroneb Go、Aerogen Ultra、Respironics Aeroneb、Akita、Medspray Ecomyst和Respimat。

用于治疗和/或预防

根据本发明的药物组合物和药物组合(气雾剂、气雾化的制剂)和系统旨在用于治疗和/或预防由分枝杆菌或其它氯法齐明敏感细菌，诸如金黄色葡萄球菌(Staphylococcusaureus)(包括甲氧西林抗性和万古霉素中间抗性菌株)、肺炎链球菌(Streptococcuspneumoniae)和肠球菌spp.(Enterococcus spp.)引起的肺部感染。本发明的药物组合物和药物组合也可用于治疗和/或预防肺部真菌感染。

氯法齐明的给药(dosing)

根据本发明，药物组合物通过雾化在约1-5ml，优选1-2ml的本发明的药物组合物来递送。

因此，基于药物组合物中约20mg/ml氯法齐明浓度，目标填充剂量为约1-5ml(对应于20-100mg的氯法齐明)。

根据本发明施用的氯法齐明的日肺剂量(即沉积在肺中的剂量)为约5-10mg，其对应于脓肿分枝杆菌感染情况下的15-30mg的标称剂量(装置剂量)。

应理解的是，本领域技术人员将基于本领域熟知的相应细菌菌株的氯法齐明的最小抑制浓度(MIC)常规地调节待施用的氯法齐明的肺剂量(并因此调节填充/标称剂量/待雾化的体积)。

根据给药频率(每日一次或两次)，将相应地分配每日肺剂量。

根据本发明，氯法齐明每天施用一次或两次，使得肺总日剂量为约5至10mg。

对本领域技术人员显而易见的是，上述量与氯法齐明游离碱有关，衍生物和盐的剂量必须根据相应化合物和菌株的MIC进行相应调整。

粘液溶解剂和/或生物膜改性剂

为了在气雾剂治疗期间降低痰液粘度并破坏已有生物膜，根据本发明的治疗和/或预防可以包括另外施用粘液溶解剂和/或生物膜破坏剂。

这些药剂可以以固定的组合形式制备，或者同时或随后施用到根据本发明的含氯法齐明的药物组合物/气雾剂组合中。

根据本发明使用的用于分散/破坏生物膜的试剂、粘液溶解剂和/或粘液活性剂和/或减少生物膜形成的试剂选自：经雾化的4-7％高渗盐溶液、偏高碘酸盐、十二烷基硫酸钠、碳酸氢钠、氨丁三醇、银纳米颗粒、铋硫醇、乙二胺四乙酸、负载庆大霉素的磷脂酰胆碱修饰的金纳米颗粒、螯合剂、顺式-2-癸烯酸、D-氨基酸、D-对映体肽、镓中卟啉IX、镓原卟啉IX、姜黄素、展青霉素、青霉酸、黄芩素、柚皮素、熊果酸、积雪草酸、科罗索酸、脂肪酸、宿主防御肽和抗微生物肽。

此外，其它药物活性剂也可以与本发明的药物组合物/气雾剂组合结合使用。此类活性剂可选自贝达喹啉或者其药学上可接受的盐或衍生物、头孢西丁、阿米卡星、克拉霉素、吡嗪酰胺、利福平、莫西沙星、左氧氟沙星和对氨基水杨酸盐及它们的混合物。

这些试剂可以以固定的组合形式制备，或者之前、同时或随后施用到根据本发明的含氯法齐明的药物组合物/气雾剂组合。

实施例

描述了本发明，并且阐述了预期用于实现本发明的各个方面的最佳模式。根据本发明的实施例是那些落入本文权利要求范围内的实施例。

实验

下面的示例性组合物和组合是根据本文所述的方法制备的。

实施例1

将200mg氯法齐明(为三斜晶型I)、90mg氯化钠和9.5ml水在Ultra-Turrax均质器中以10000rpm的速度混合两次，每次5分钟。加入0.5ml的聚山梨酯80(NOF Hx2)。使用超声探头(Branson Digital Sonifier^TM 250D配合Bandelin Sonoplus Probe MS73)处理此混合物七次，每次3分钟，振幅为70％。用水将体积调节至10ml。将该悬浮液通过VWR折叠定性滤纸(303，颗粒保留5-13μm，尺寸：150mm)过滤，得到实施例1的组合物。实施例1的组合物的氯法齐明的中值粒径为3.9μm，D90为6.7μm。通过280nm紫外/可见分光光度法测定氯法齐明的浓度，使用流动相稀释的1mg/ml氯法齐明原液(stock)校准，测定结果为7.16mg/ml。

表1中示出了实施例1中的组合物

表1

正交III型氯法齐明的制备

将氯法齐明(10g)在甲苯(20ml)中的浆液在油浴中于40℃下用磁力搅拌器以800rpm的速度搅拌72小时。通过坩埚过滤收集浆料的固体部分，并在最高温度40℃下真空烘箱中干燥。得到8.64g基本上纯(98％)的正交晶型III的氯法齐明。

实施例2

在100ml含有0.5％聚山梨酯80(NOF Hx2)和0.6％氯化钠的水中，加入6g正交晶型III的氯法齐明，使用Ultra-Turrax在10000rpm转速下预微粉化约40秒。通过在水中加入0.6％氯化钠以得到300ml的体积来制备预制剂。将300ml该悬浮液加入均质器(M-110EH-30微流化器(Microfluidics，Westwood，MA，USA))的入口，并通过使悬浮液在5000psi下循环通过H30Z室进行15分钟的预均质化步骤。随后，第二个H10Z室与第一个室串联安装，悬浮液在25000psi下进一步均质化23分钟。使用HORIBA LA 950进行粒径分析，结果表明中值粒径为0.83μm，D90值为1.17μm。使用流动相稀释的1mg/ml氯法齐明原液校准，通过280nm紫外/可见光谱测定氯法齐明浓度16.05mg/ml。

表2中示出了实施例2中的组合物

表2

实施例3

使用M-110EH-30微流化器处理器(室：H30Z和G10Z)处理氯法齐明(晶体修饰正交晶型III)在水、氯化钠和聚山梨酯80溶液中的悬浮液，在28250psi的压力下操作30分钟，以H30Z-G10Z构造生产实施例3的组合物，所得氯法齐明颗粒的中值粒径为1.28μm，并且D90低于2μm。

表3中示出了实施例3中的组合物

表3

黏度测量

使用应力控制模式下的STRESSTECH流变仪测试实施例3的组合物的黏度。采用了双间隙几何结构，并连续旋转主轴，以确保颗粒在温度点期间保持悬浮。跨0.01、0.05和0.1Pa应力分别在20℃、25℃和30℃分别于下测量的黏度。进行两次单独上样以获得下表4所示的平均黏度。

表4

动物模型和效力测试

已经测试了本发明的组合物在急性体内肺部感染小鼠模型中抑制临床NTM种生长的能力，以获得初步数据，从而建立与全身性施用相反的直接呼吸递送后肺组织中的氯法齐明浓度水平。根据感兴趣的细菌种类，使用两个单独的小鼠模型来研究肺NTM感染。测试中，使用了鸟分枝杆菌2285和脓肿分枝杆菌103菌株(菌株详情见提交(2014年9月)至EMBL/GenBank/DDBJ数据库的“Phylogenetic analysis of Mycobacterial species usingwhole genome sequences".Hazbon M.H.,Riojas M.A.,Damon A.M.,Alalade R.,Cantwell B.J.Monaco A.,King S.,Sohrabi A.)。这两个种以前在文献中被用作NTM感染的模型(Obregon-Henao et al.2015Antimicrob Agents Chemother；和Chan etal.Animal Models of Non-Tuberculous Mycobacterial Infections,Mycobact Dis2016)。

Balb/C小鼠中的体内安全性研究：

为确保体内安全性和耐受性，从Charles River获得了6-8周龄的Balb/C雌性小鼠。给药前，让小鼠休息一周。对于每种氯法齐明剂量，每隔一天向三只健康小鼠给予总共三剂。以10.0、5.01和2.51mg/kg的氯法齐明剂量向小鼠给药实施例1的组合物。通过

气雾剂气管内施用，向3只健康小鼠给药这些化合物，每隔一天，共3剂。

发现氯法齐明在20mg/kg剂量下是安全的(管饲(gavage)，200μl)。实施例1的组合物在测试的最高剂量(10.0mg/kg；35μl气管内0.2506mg/剂量)显示无毒性。因此，在10.0mg/kg的剂量下，式I组合物被视为安全且耐受性良好。

最低抑制浓度的测定

通过使用

Hinton(MH)肉汤(阳离子调整)使钙和镁离子浓度达到CLSI标准M7-A7(Becton Dickinson)中推荐的浓度的微肉汤(microbroth)稀释法来进行最小抑制浓度(MIC)的测试。MIC测试也通过使用7H9肉汤(Sigma-Aldrich)的微肉汤稀释法进行。使用MH和7H9肉汤进行化合物筛选的理由是，已显示抗分枝杆菌化合物展示出不同的MIC活性，这取决于MIC分析中使用的肉汤。脓肿分枝杆菌在环境空气中于35-37℃在7H11琼脂平板(Sigma-Aldrich)上生长3天(取决于细菌菌株)，以及鸟分枝杆菌在环境空气中于37℃在7H11琼脂平板(Sigma-Aldrich)上生长21-30天。

从琼脂平板中取出菌落形成单位(CFU)，将其置于含有0.05％tween-80的MH或7H9肉汤中，并在环境空气中于35-37℃下生长，直至生长3天后(脓肿分枝杆菌)或12天后(鸟分枝杆菌)测得的光密度(OD)吸光度为(OD)0.08-0.1(0.5McFarland标准品)。然后通过在盐溶液中制备细菌细胞悬液进行确认，与(OD)0.08-0.1(0.5McFarland标准品)匹配。通过以浓度为1.28mg/ml将化合物悬浮于的DMSO中制备化合物原液，并立即用于测试范围64-0.062pg/ml。此后，向96孔板的第一栏中加入180μl肉汤(MH或7H9)，向96孔板的其余栏中加入100μl肉汤。将20μl的化合物原液加入第一列的孔中，并连续稀释。最后，将100μl NTM细胞悬液加入除仅培养基对照孔之外的所有孔中。特定于每种生物的QC试剂1)仅细菌阴性对照2)仅培养基阴性对照3)克拉霉素阳性药物对照。

脓肿分枝杆菌于第三天分析OD，而鸟分枝杆菌于第12天分析OD。在这些测量后，使用刃天青微量滴定板分析法对板进行分析。简言之，该方法使用向96孔板中添加刃天青(7-羟基-3H-吩噻嗪-3-酮10-氧化物)。刃天青是一种蓝色染料，本身呈弱荧光，直至不可逆地还原为粉红色和高度红色荧光的间苯二酚。在MIC分析中，它被用作氧化还原指示剂来测定细菌细胞的存活率。

分析重复进行三次。将实施例1的组合物在4℃储存2个月后进行分析#1，在4个月时进行分析#2，在5个月时进行分析#3。

存在和不存在CF痰时的最小抑制浓度

最小抑制浓度分析如上所述进行。

为了调查囊性纤维化(CF)患者痰液对氯法齐明(CFZ)和实施例1的组合物的抗微生物活性的影响，从之前48小时内未接受过抗生素治疗的患者中采集了痰液，并通过暴露于紫外线对其痰液进行消毒以清除内源性细菌。灭菌后，在进行MIC测试前，将脓肿分枝杆菌、鸟分枝杆菌、胞内分枝杆菌和嵌合分枝杆菌培养在10％CF痰液中。在存在和不存在囊性纤维化患者痰的情况下，按照与上述相同的CLSI方案测量实施例1的组合物的MIC。所有研究均重复进行两次。

表5显示了存在和不存在痰时氯法齐明和实施例1的组合物的MIC值。

表5

表5中的结果表明，氯法齐明和实施例1的组合物均对一系列非结核分枝杆菌种的MIC一致。

这些数据表明，实施例1的组合物显示出针对脓肿分枝杆菌和鸟分枝杆菌的有效体外活性，并且至少在该时间段内是稳定的。

SCID小鼠中的脓肿分枝杆菌小鼠模型

从Charles River订购了6-8周龄的SCID雌性小鼠。小鼠在感染前一周休息。

使用前，将脓肿分枝杆菌菌株103的原液冷冻在1ml等分试样中，并在-80℃下储存。对于感染，将等分试样解冻，用配有26g针头的1ml luer-lok注射器破碎20次，并置于无菌1×PBS中稀释。

急性SCID小鼠模型接受了1×10⁶CFU/小鼠(脓肿分枝杆菌菌株103)的非侵入性气管内滴注肺部感染。

感染后第1天处死3只小鼠，测定细菌摄取量。提取整个肺、脾和肝，在4.5ml的1×PBS中均质化。均质化以1:10的稀释度连续稀释，并将稀释液(0-1-2-3-4-5-6-7)置于7H11琼脂平板上。将平板置于32℃干燥空气培养箱(取决于菌株)中7天。

实施例1的组合物10.0mg/kg通过肺部途径由

(35μl)施用，而氯法齐明(管饲)、阿米卡星(皮下)以每只小鼠200μl的体积施用，从感染后第2天开始，每隔一天持续8天。

最后一剂化合物施用2天后处死小鼠。处死所有组的6只小鼠(未处理的对照组、氯法齐明(管饲)、实施例1的组合物，和阿米卡星处理的小鼠)并测定细菌载量。将肺匀浆以0-1-2-3-4-5-6-7放置，脾匀浆以0-1-2-3-4-5-6-7放置，且肝匀浆以0-1-2-3-4-5-6-7放置。

至少0.60的Log 10保护值表明活性具有统计学意义。首先将CFU转换为对数进行统计分析，然后通过单因素方差分析对其进行评估，然后通过单因素Tukey检验(GraphPadPrism分析软件)对方差进行多重比较分析。在95％置信水平下，差异被视为显著。

表6显示SCID小鼠脓肿分枝杆菌感染后的平均Log₁₀ CFU数据和平均标准误(SEM)，其中“n”是处死时组中动物的总数。

表6

表6中的数据表明，用实施例1的组合物处理使得最大地减少了感染脓肿分枝杆菌的动物的肺和脾中细菌恢复。与阿米卡星或口服氯法齐明治疗相比，这种细菌减少在统计学上有所改善。

Beige小鼠中鸟分枝杆菌感染的小鼠模型

从Charles River订购了6-8周龄的Beige雌性小鼠。小鼠在感染前一周休息。

急性Beige小鼠模型接受了1×10⁸菌落形成单位(CFU)/ml(鸟分枝杆菌菌株2285rough)的非侵入性气雾剂暴露肺部感染。使用前，将鸟分枝杆菌菌株2285的工作原液冷冻在1ml等分试样中，并在-80℃下储存。对于感染，将等分试样解冻，用配有26g针头的1ml luer-lok注射器破碎20次，并置于无菌1×磷酸缓冲盐溶液(PBS)中稀释。

感染后第1天和第7天处死3只小鼠，测定细菌摄取量。提取整个肺、脾和肝，在4.5ml的1×PBS中均质化，并稀释至1:10。将稀释液(0-1-2-3-4-5-6-7)置于在7H11/OADC、TSA和炭琼脂平板上，并在32℃的干燥空气培养箱(取决于菌株)中培养30天。

实施例1的组合物10.0mg/kg通过肺部途径由

(35μl)施用，而氯法齐明(管饲)以每只小鼠200μl的体积施用，从感染后第7天开始，每隔一天持续10天。

最后一剂化合物施用5天后处死小鼠。处死所有组的6只小鼠(未处理的对照组、氯法齐明(管饲)、和实施例1的组合物的小鼠)并测定细菌载量。将肺匀浆以0-1-2-3-4-5-6-7放置，脾匀浆以0-1-2-3-4-5-6-7放置，且肝匀浆以0-1-2-3-4-5-6-7放置。

至少0.60的Log10保护值表明活性具有统计学意义。首先将CFU转换为对数进行统计分析，然后通过单因素方差分析对其进行评估，然后通过单因素Tukey检验(SigmaStat软件程序)对方差进行多重比较分析。在95％置信水平下，差异被视为显著。

表7显示了Beige小鼠鸟分枝杆菌感染后的平均Log₁₀CFU数据。

表7

表7中的数据表明，用实施例1的组合物处理使得更多地减少了感染鸟分枝杆菌的动物的肺和脾中细菌恢复。

慢性Beige小鼠模型

6至8周龄的Beige小鼠在感染前一周休息。在第0天，小鼠接受了1×10⁸CFU的鸟分枝杆菌2285rough的肺感染。第1天处死3只小鼠，且第27天处死6只小鼠，测定细菌摄取量和治疗前细菌载量。提取全肺、脾和肝，在4.5ml 1×PBS中均质化，并以(0-1-2-3-4-5-6-7)稀释度放置于7H11和炭琼脂平板上。将平板置于37℃干燥空气培养箱中25至30天。

从第28天开始，每隔一天对其余感染的Beige小鼠进行一次处理，共进行14次处理。动物接受以下处理之一：生理盐溶液(

35μl)；氯法齐明(口服管饲，20mg/kg，200μl)；实施例1的组合物(IT，

10mg/kg，35μl)。

第57天(最终处理后两天)处死小鼠。将平板置于37℃干燥空气培养箱中30天。

首先将CFU转换为对数进行统计分析，然后通过单因素方差分析对其进行评估，然后通过单因素Tukey检验对方差进行多重比较分析。在95％置信水平下，差异被视为显著。

表8示出了Beige小鼠鸟分枝杆菌慢性感染之后的平均Log₁₀CFU数据。

表8

这些数据表明，氯法齐明很难穿透由已建立的“慢性”动物NTM感染模型形成的肉芽肿样结构。似乎本发明的组合物不存在相同的问题，并且即使在感染已经很好地建立之后也能够保持抗分枝杆菌活性。

实施例3的组合物在体外暴露于肺上皮细胞后对屏障完整性和炎症的影响

细胞存活率

在两种体外条件下，使用三种不同的细胞类型来评估肺上皮细胞的存活率：Calu-3；A549；和hAELVi细胞。在“浸没条件”(即在Transwel^TM平板上的细胞培养基中)或“气-液界面”模拟条件(ALI)下处理细胞，从细胞的顶侧取出细胞培养基。在“浸没条件”下，将Calu-3细胞暴露于三个剂量的实施例3组合物(10％、50％或100％)4小时。为了评估细胞存活率，使用吖啶橙/碘化丙锭(AO/PI)染色将细胞染色，以区分活细胞/死细胞。红色荧光表示细胞死亡。

巨噬细胞摄取

在用124ng/ml佛波醇12-肉豆蔻酸13乙酸酯(ΜMA)孵育3天后，THP-1细胞分化为巨噬细胞样细胞。一旦细胞成熟，将其暴露于实施例3的组合物(在Hank缓冲盐溶液(HBSS)中以1:200稀释)4小时。如上所述，通过AO/PI对细胞进行染色，以测定暴露后的细胞存活率。

跨上皮电阻(TEER)测量

在Transwel^TM 3460上以1×10⁵细胞/孔接种Calu-3细胞，并静置12天以生长至汇合。根据制造商的说明，使用EVOM2(World Precision Instruments，Friedberg，Germany)进行TEER测量。接种后，将Calu-3细胞暴露于盐溶液(阴性对照)或实施例3的组合物(浓度：20mg/ml、10mg/ml或20±2mg/ml)。在测量TEER之前，将细胞暴露2至4小时。

炎性细胞因子的产生

将经分化的THP-1细胞(dTHP-1)暴露于实施例3的组合物4小时或24小时(1:200HBSS稀释)。单独使用HBSS暴露作为阴性对照，施用脂多糖(LPS)(100ng/ml)作为阳性对照。

孵育后，在t＝4小时或24小时后，从细胞中取出上清液，合并上清液。对混合的上清液样本进行了酶联免疫吸附试验(ELISA)。根据制造商的说明，使用了单独的TNF-α、IL-6、IL-8的ELISA试剂盒。

通过变量的单因素分析(ANOVA)并通过随后的Tukey事后检验进行统计学分析。确定概率值<0.05时具有统计学意义。

结果

在“浸没”条件下，在任何施用浓度下，实施例3的组合物在4小时培养中没有导致细胞存活率的视觉降低。

在“ALI”条件下，在三个不同的时间点(五小时、两天和七天)研究了三种不同的细胞类型(Calu-3、A549和HAELVi细胞)。任何细胞中在第4小时观察到的细胞毒性很少或没有，Calu-3细胞中在第2天观察到的细胞毒性也很少或没有。A549细胞中在第2天和第7天以及Calu-3细胞中在第7天观察到一些毒性。技术限制不允许对细胞死亡进行量化。

关于巨噬细胞摄取，将经分化的THP-1细胞在1:200HBSS孵育4小时，以测定暴露后的巨噬细胞存活率。实施例3的组合物不诱导细胞死亡，但显示巨噬细胞摄取了氯法齐明。

关于TEER测量，将Calu-3细胞暴露于HBSS或三种浓度的实施例3的组合物4小时，并在整个暴露过程的不同时间点对TEER测量值进行采样。与对照组相比，在任何给定时间点的TEER减少≥50％被视为屏障完整性的显著损失。

将实施例3的组合物暴露于Calu-3细胞中一小时后，对屏障的完整性没有影响。20mg/ml的暴露量导致两小时后显著(即≥50％)减少。浓度为10mg/ml时，在两小时后的所有时间点显示轻微减少(即25-35％)。在整个研究期间，2mg/ml的暴露量未显示屏障功能有任何降低。

炎性细胞因子产生

阳性对照LPS在此模型中表现与预期一致。实施例3的组合物在所研究的任何时间点都没有表现出细胞因子的显著变化。

结果在表9中示出。

dTHP-1细胞暴露后细胞因子的产生

表9(*p＜0.05)

体内安全性和耐受性

6-8周pld Balb/C雌性小鼠每隔一天共服用三剂。以10.0、5.01和2.51mg/kg的氯法齐明剂量向小鼠给药实施例1的组合物。该组合物以35μl/只小鼠的体积通过

气雾剂气管内(IT)施用。滴注后，在给药后10分钟、1、2和4小时观察小鼠，并且之后每天观察。

表10显示了施用后的大体观察结果。“BAR”表示动物欢快、活跃且有反应。

表10

表11显示了测试三天期间动物的体重。

表11

这些数据表明在三天处理期间，体重并没有显著性的改变。

这些结果表明本发明的组合物在所测试的剂量下是良好耐受的。

Claims

1.药物组合物，包括：

(b)亲水亲油平衡值大于10的非离子表面活性剂；和

其中，所述氯法齐明或者其药学上可接受的衍生物或盐的颗粒中值尺寸小于5μm且D90小于6μm。

2.根据权利要求1所述的药物组合物，其中，所述氯法齐明或者其药学上可接受的衍生物或盐的颗粒的平均尺寸小于2μm且D90小于3μm。

3.药物组合物，包括：

(a)治疗有效剂量的氯法齐明；

(b)亲水亲油平衡值大于10的非离子表面活性剂；和

其中，所述氯法齐明以悬浮液中颗粒的形式提供，

并且

4.根据权利要求3所述的药物组合物，其中，所述颗粒的平均尺寸小于2μm且D90小于3μm。

5.根据权利要求3或4中任一项所述的药物组合物，其中，所述氯法齐明以选自三斜晶型FI、单斜晶型FII和正交晶型FIII以及这些晶型的混合物的一种或多种多晶型形式提供。

6.根据权利要求5所述的药物组合物，其中，所述氯法齐明基本上以正交晶型FIII提供。

7.根据权利要求1至6中任一项所述的药物组合物，其中，所述非离子表面活性剂选自聚山梨酯20、聚山梨酯60、聚山梨酯80、硬脂醇、亲水-亲油平衡值为14至16的氢化蓖麻油的聚乙二醇衍生物、亲水-亲油平衡值为15至17的氢化蓖麻油的聚乙二醇衍生物、山梨醇单月桂酸酯、山梨醇单棕榈酸酯、山梨醇单硬脂酸酯、聚氧乙烯(20)油醇醚、聚氧乙烯(20)鲸蜡醚、聚氧乙烯(10)鲸蜡醚、聚氧乙烯(10)油醇醚、聚氧乙烯(100)硬脂醚、聚氧乙烯(10)硬脂醚、聚氧乙烯(20)硬脂醚、聚氧乙烯(4)月桂醚、聚氧乙烯(20)鲸蜡醚、聚氧乙烯(2)鲸蜡醚、辛酰己酰聚氧-8甘油酯、聚乙二醇(20)单硬脂酸酯、聚乙二醇(40)硬脂酸酯、聚乙二醇(100)硬脂酸酯、聚乙二醇(8)硬脂酸酯，和聚乙二醇40硬脂酸酯，及它们的混合物。

8.根据权利要求1至7中任一项所述的药物组合物，

其中，所述非离子表面活性剂是聚山梨酯80，并且

其中，所述水性液体载体是蒸馏水、高渗盐溶液或等渗盐溶液。

9.根据权利要求8所述的药物组合物，其中，所述高渗盐溶液为1％至7％(w/v)氯化钠。

10.根据权利要求8所述的药物组合物，其中，所述非离子表面活性剂是超纯的聚山梨酯80，并且其中，所述水性液体载体是等渗盐溶液。

11.根据权利要求1至10中任一项所述的药物组合物，其中，所述组合物的同渗重摩为200-700mOsm/kg。

12.根据权利要求1至10中任一项所述的药物组合物，其中，所述组合物的同渗重摩为300-400mOsm/kg。

13.根据权利要求1至10中任一项所述的药物组合物，其中，

所述非离子表面活性剂占总组合物的0.001％至5％(v/v)，并且

所述氯法齐明的量占总组合物的0.1％至20％(w/v)。

14.根据权利要求1至13中任一项所述的药物组合物，其通过包括以下步骤的方法制备：

(2)将(1)得到的悬浮液的pH值调节至介于pH 5.5至pH 7.5的pH，以及

(3)将所述氯化钠浓度调节至合适浓度以及

(4)将所述同渗重摩调节至合适水平。

15.根据权利要求1至13中任一项所述的药物组合物，其通过包括以下步骤的方法制备：

(1)将氯法齐明和非水性液体的悬浮液均质化以获得含合适粒径的氯法齐明的悬浮液；

(2)将所述氯法齐明分离，

(3)将所述氯法齐明加入到所述非离子表面活性剂和水中，

(4)将(3)得到的悬浮液的pH值调节至介于pH 5.5至pH 7.5的pH，以及

(5)将所述氯化钠浓度调节至合适浓度。

16.根据权利要求1至13中任一项所述的药物组合物，其通过包括以下步骤的方法制备：

(1)将氯法齐明微粉化以获得合适粒径的氯法齐明，

(2)将所述氯法齐明加入到所述非离子表面活性剂和水中，

(3)将(2)得到的悬浮液的pH值调节至介于pH 5.5至pH 7.5的pH，以及

(4)将所述氯化钠浓度调节至合适浓度。

17.根据权利要求1至13中任一项所述的药物组合物，所述组合物通过以下方法制备，所述方法包括：将非离子表面活性剂、含有合适浓度氯化钠的水中的氯法齐明的悬浮液均质化以获得合适粒径的氯法齐明，并且所述悬浮液的pH已调节至介于pH 5.5至pH 7.5的pH。

18.根据权利要求14、15或16中任一项所述的药物组合物，其中，将所述pH调节至7.4，并将所述氯化钠浓度调节至154mM氯化钠。

19.根据权利要求17所述的药物组合物，其中，所述pH为7.4，并且所述氯化钠的合适浓度为154mM氯化钠。

20.根据权利要求16所述的药物组合物，其中，所述氯法齐明的微粉化通过喷射研磨、喷雾干燥、球磨，或超临界流体处理进行。

21.根据权利要求14、15、17或19中任一项所述的药物组合物，其中，所述步骤(1)中的均质化通过高压均质化、高剪切均质化、湿磨、超声均质化，或这些方法的组合进行。

22.根据权利要求14、15、17、18、19或21中任一项所述的药物组合物，其中，所述氯法齐明的均质化在多个均质化步骤中进行。

23.根据权利要求16或20中任一项所述的药物组合物，其中，所述氯法齐明的微粉化在多个微粉化步骤中进行。

24.根据权利要求14至23中任一项所述的药物组合物，其中，所述合适粒径的氯法齐明是平均尺寸小于5μm且D90小于6μm的颗粒。

25.根据权利要求14至23中任一项所述的药物组合物，其中，所述合适粒径的氯法齐明是平均尺寸小于2μm且D90小于3μm的颗粒。

26.用于吸入的气雾剂形式的药物组合，其通过选自超声雾化器、电子喷雾雾化器、振动膜雾化器、射流雾化器和机械软雾吸入器的雾化装置将根据权利要求1至25中任一项所述的组合物气雾化而制备，并且

其中，由所述雾化装置产生的所述气雾剂颗粒质量中值空气动力学直径为1至5μm。

27.根据权利要求26所述的药物组合，其中，所述用于吸入的气雾剂用于下肺沉积。

28.根据权利要求1至25中任一项所述的药物组合物，其用于与分散和/或破坏生物膜的试剂联合，与粘液溶解剂和/或粘液活性剂，和/或减少生物膜形成的试剂联合，所述分散和/或破坏生物膜的试剂、粘液溶解剂和/或粘液活性剂和/或减少生物膜形成的试剂选自：经雾化的4-7％高渗盐溶液、偏高碘酸盐、十二烷基硫酸钠、碳酸氢钠、氨丁三醇、银纳米颗粒、铋硫醇、乙二胺四乙酸、负载庆大霉素的磷脂酰胆碱修饰的金纳米颗粒、螯合剂、顺式-2-癸烯酸、D-氨基酸、D-对映体肽、镓中卟啉IX、镓原卟啉IX、姜黄素、展青霉素、青霉酸、黄芩素、柚皮素、熊果酸、积雪草酸、科罗索酸、脂肪酸、宿主防御肽，和抗微生物肽。

29.根据权利要求26或27中任一项所述的药物组合，其用于与分散和/或破坏生物膜的试剂联合，与粘液溶解剂和/或粘液活性剂，和/或减少生物膜形成的试剂联合，所述分散和/或破坏生物膜的试剂、粘液溶解剂和/或粘液活性剂和/或减少生物膜形成的试剂选自：经雾化的4-7％高渗盐溶液、偏高碘酸盐、十二烷基硫酸钠、碳酸氢钠、氨丁三醇、银纳米颗粒、铋硫醇、乙二胺四乙酸、负载庆大霉素的磷脂酰胆碱修饰的金纳米颗粒、螯合剂、顺式-2-癸烯酸、D-氨基酸、D-对映体肽、镓中卟啉IX、镓原卟啉IX、姜黄素、展青霉素、青霉酸、黄芩素、柚皮素、熊果酸、积雪草酸、科罗索酸、脂肪酸、宿主防御肽，和抗微生物肽。

30.根据权利要求1至25中任一项所述的药物组合物，其用于治疗和/或预防由分枝杆菌或其它革兰氏阳性菌引起的肺部感染。

31.根据权利要求26或27中任一项所述的药物组合，其用于治疗和/或预防由分枝杆菌或其它革兰氏阳性菌引起的肺部感染。

32.根据权利要求30所述的药物组合物，其中，所述感染是由选自非结核分枝杆菌和结核分枝杆菌复合体及其组合的分枝杆菌属的种引起的。

33.根据权利要求31所述的用于所述用途的药物组合，其中，所述感染是由选自非结核分枝杆菌和结核分枝杆菌复合体及其组合的分枝杆菌属的种引起的。

34.根据权利要求32所述的用于所述用途的药物组合物，其中，所述非结核分枝杆菌选自鸟分枝杆菌、胞内分枝杆菌、脓肿分枝杆菌和麻风分枝杆菌，及它们的组合。

35.根据权利要求33所述的用于所述用途的药物组合，其中，所述非结核分枝杆菌选自鸟分枝杆菌、胞内分枝杆菌、脓肿分枝杆菌和麻风分枝杆菌，及它们的组合。

36.根据权利要求32所述的用于所述用途的药物组合物，其中，所述感染是在患有囊性纤维化、慢性阻塞性肺部疾病或获得性免疫缺陷综合征的患者中，选自MAC肺部疾病和非结核性感染的机会性感染。

37.根据权利要求33所述的用于所述用途的药物组合，其中，所述感染是在患有囊性纤维化、慢性阻塞性肺部疾病或获得性免疫缺陷综合征的患者中，选自MAC肺部疾病和非结核性感染的机会性感染。

38.根据权利要求36所述的用于所述用途的药物组合物，其中，所述感染是在患有囊性纤维化患者中的机会性非结核分枝杆菌感染。

39.根据权利要求37所述的药物组合，其中，所述感染是在患有囊性纤维化患者中的机会性非结核分枝杆菌感染。

40.系统，所述系统用于在治疗或提供预防由分枝杆菌或其它革兰氏阳性细菌引起的肺部感染时提供抗生素活性，其中，所述系统包括：

1)经雾化的药物组合，包括：

(a)治疗有效剂量的氯法齐明；

(b)亲水亲油平衡值大于10的非离子表面活性剂；和

和

2)雾化器，

其中，所述氯法齐明以悬浮液的形式提供，

并且

其中，由所述系统产生的气雾剂颗粒质量中值空气动力学直径为1至5μm。

41.根据权利要求28至39中任一项所述的用途，其中，所述雾化装置表现出0.1-1.0ml/min的输出速率。

42.根据权利要求28至39，或41中任一项所述的用途，其中，所述总吸入体积介于1ml至5ml。

43.根据权利要求28、30、32、34、36或38中任一项所述的用途，其中，所述组合物在施用选自贝达喹啉或者其药学上可接受的盐或衍生物、头孢西丁、阿米卡星、克拉霉素、吡嗪酰胺、利福平、莫西沙星、左氧氟沙星和对氨基水杨酸盐及它们的混合物的试剂之前、同时或之后施用。

44.根据权利要求29、31、33、35、37或39中任一项所述的用途，其中，所述组合在施用选自贝达喹啉或者其药学上可接受的盐或衍生物、头孢西丁、阿米卡星、克拉霉素、吡嗪酰胺、利福平、莫西沙星、左氧氟沙星和对氨基水杨酸盐及它们的混合物的试剂之前、同时或之后施用。

45.根据权利要求1至25中任一项所述的药物组合物，所述药物组合物用于治疗和/或预防肺部真菌感染或艰难梭菌，或其组合。

46.根据权利要求26、27、29、31、33、35、37或39中任一项所述的药物组合，所述药物组合用于治疗和/或预防肺部真菌感染或艰难梭菌，或其组合。

47.根据权利要求45所述的药物组合物，所述药物组合物用于治疗和/或预防肺部真菌感染。

48.根据权利要求46所述的药物组合，所述药物组合用于治疗和/或预防肺部真菌感染。

49.根据权利要求45或47中任一项所述的药物组合物，其中，所述肺部真菌感染是白色念珠菌或烟曲霉菌，或其组合。

50.根据权利要求46或48中任一项所述的药物组合，其中，所述肺部真菌感染是白色念珠菌或烟曲霉菌，或其组合。

51.根据权利要求43所述的用途，其中，所述组合物在施用选自贝达喹啉或者其药学上可接受的盐或衍生物，和阿卡米星，及它们的混合物的试剂之前、同时或之后施用。

52.根据权利要求43所述的用途，其中，所述组合物在施用贝达喹啉或者其药学上可接受的盐或衍生物之前、同时或之后施用。

53.在有需要的患者中治疗或预防肺部感染的方法，包括通过吸入施用根据权利要求1至25中任一项所述的组合物。

54.根据权利要求53所述的治疗或预防的方法，其中，所述感染是由选自非结核分枝杆菌和结核分枝杆菌复合体及其组合的分枝杆菌属的种引起的。

55.根据权利要求54所述的治疗或预防的方法，其中，所述非结核分枝杆菌选自鸟分枝杆菌、胞内分枝杆菌、脓肿分枝杆菌和麻风分枝杆菌，及它们的组合。

56.根据权利要求53所述的治疗或预防的方法，其中，所述感染是在患有囊性纤维化、慢性阻塞性肺部疾病或获得性免疫缺陷综合征的患者中，选自MAC肺部疾病和非结核性感染的机会性感染。

57.根据权利要求56所述的治疗或预防的方法，其中，所述感染是在患有囊性纤维化患者中的机会性非结核分枝杆菌感染。

58.在有需要的患者中治疗或预防由分枝杆菌或其它革兰氏阳性菌引起的肺部感染的方法，包括在施用选自贝达喹啉或其衍生物的药学上可接受的盐、头孢西丁、阿米卡星、克拉霉素、吡嗪酰胺、利福平、莫西沙星、左氧氟沙星和对氨基水杨酸盐及它们的混合物的试剂之前、同时或之后，通过吸入施用根据权利要求1至25中任一项所述的组合物。

59.根据权利要求58所述的治疗或预防的方法，其中，所述试剂是贝达喹啉或阿米卡星。

60.根据权利要求59所述的治疗或预防的方法，其中，所述试剂是贝达喹啉。

61.制备根据权利要求1至13中任一项所述的药物组合物的方法，包括以下步骤：

(1)将氯法齐明、非离子表面活性剂和水的悬浮液均质化以获得含合适粒径的氯法齐明的悬浮液；

(2)将(1)得到的悬浮液的pH值调节至介于pH 5.5至pH 7.5的pH，以及

(3)将所述氯化钠浓度调节至合适浓度，以及

(4)将所述同渗重摩调节至合适水平。

62.制备根据权利要求1至13中任一项所述的药物组合物的方法，包括以下步骤：

(2)将所述氯法齐明分离，

(3)将所述氯法齐明加入到非离子表面活性剂和水中，

(4)将(3)得到的悬浮液的pH值调节至介于pH 5.5至pH 7.5的pH，以及

(5)将所述氯化钠浓度调节至合适浓度。

63.制备根据权利要求1至13中任一项所述的药物组合物的方法，包括以下步骤：

(1)将氯法齐明微粉化以获得合适粒径的氯法齐明，

(2)将所述氯法齐明加入到非离子表面活性剂和水中，

(3)将(2)得到的悬浮液的pH值调节至介于pH 5.5至pH 7.5的pH，以及

(4)将所述氯化钠浓度调节至合适浓度。

64.制备根据权利要求1至13中任一项所述的药物组合物的方法，包括将非离子表面活性剂、含有合适浓度氯化钠的水中的氯法齐明悬浮液均质化以获得合适粒径的氯法齐明，并且所述悬浮液的pH已调节至介于pH 5.5至pH 7.5的pH。

65.根据权利要求61、62或63中任一项所述的方法，其中，将所述pH调节至7.4，并将所述氯化钠浓度调节至154mM氯化钠。

66.根据权利要求64所述的方法，其中，所述pH为7.4，并且所述氯化钠的合适浓度为154mM氯化钠。

67.根据权利要求63所述的方法，其中，所述氯法齐明的微粉化通过喷射研磨、喷雾干燥、球磨，或超临界流体处理进行。

68.根据权利要求61、62、64或66中任一项所述的方法，其中，所述步骤(1)中的均质化通过高压均质化、湿磨、超声均质化，或这些方法的组合进行。

69.根据权利要求61、62、64、65、66或68中任一项所述的方法，其中，所述氯法齐明的均质化在多个均质化步骤中进行。

70.根据权利要求63或20中任一项所述的方法，其中，所述氯法齐明的微粉化在多个微粉化步骤中进行。

71.根据权利要求61至70中任一项所述的方法，其中，所述合适粒径的氯法齐明是平均尺寸小于5μm且D90小于6μm的颗粒。

72.根据权利要求61至70中任一项所述的方法，其中，所述合适粒径的氯法齐明是平均尺寸小于2μm且D90小于3μm的颗粒。

73.制备根据权利要求1至13中任一项所述的药物组合物的方法，包括以下步骤：(a)将氯法齐明、非离子表面活性剂和水的悬浮液均质化以获得含合适粒径的氯法齐明的悬浮液；(b)将得到的悬浮液的pH值调节至介于pH 5.5至pH 7.5的pH；(c)将所述氯化钠浓度调节至合适浓度，以及(d)将所述同渗重摩调节到合适水平；并且其中，步骤(b)、(b)和(d)，可以(b)、(c)、(d)；(b)、(d)、(c)；(c)、(b)、(d)；(c)、(d)、(b)；(d)、(b)、(c)；或(d)、(c)、(b)的顺序发生。

74.制备根据权利要求1至13中任一项所述的药物组合物的方法，包括以下步骤：(a)将氯法齐明和非水性液体的悬浮液均质化以获得含合适粒径的氯法齐明的悬浮液；(b)将所述氯法齐明分离；(c)将所述氯法齐明加入到非离子表面活性剂和水中；(d)将得到的悬浮液的pH值调节至介于pH 5.5至pH 7.5的pH；以及(e)将所述氯化钠浓度调节至合适浓度；并且其中，步骤(d)和(e)可以(d)、(e)；或(e)、(d)的顺序发生。

75.制备根据权利要求1至13中任一项所述的药物组合物的方法，包括以下步骤：(a)将氯法齐明微粉化以获得合适粒径的氯法齐明，以及(b)将所述氯法齐明添加到非离子表面活性剂、含有合适浓度氯化钠的水中，并已将其pH调节至介于pH 5.5至pH 7.5的pH。