[go: up one dir, main page]
More Web Proxy on the site http://driver.im/

NO310411B1 - Derivater av cyklodepsipeptid PF 1022 og anvendelse derav - Google Patents

Derivater av cyklodepsipeptid PF 1022 og anvendelse derav Download PDF

Info

Publication number
NO310411B1
NO310411B1 NO19953244A NO953244A NO310411B1 NO 310411 B1 NO310411 B1 NO 310411B1 NO 19953244 A NO19953244 A NO 19953244A NO 953244 A NO953244 A NO 953244A NO 310411 B1 NO310411 B1 NO 310411B1
Authority
NO
Norway
Prior art keywords
meleu
lac
compound
added
phlac
Prior art date
Application number
NO19953244A
Other languages
English (en)
Other versions
NO953244D0 (no
NO953244L (no
Inventor
Makoto Ohyama
Maki Ohishi
Yumiko Okada
Masao Koyama
Shinjiro Sumi
Yasushi Murai
Masauki Takagi
Tadaaki Okada
Osamu Sakanaka
Toshio Yoneta
Katsuharu Iinuma
Seiji Shibahara
Original Assignee
Meiji Seika Kaisha
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by Meiji Seika Kaisha filed Critical Meiji Seika Kaisha
Publication of NO953244D0 publication Critical patent/NO953244D0/no
Publication of NO953244L publication Critical patent/NO953244L/no
Publication of NO310411B1 publication Critical patent/NO310411B1/no

Links

Classifications

    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07D—HETEROCYCLIC COMPOUNDS
    • C07D273/00—Heterocyclic compounds containing rings having nitrogen and oxygen atoms as the only ring hetero atoms, not provided for by groups C07D261/00 - C07D271/00
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K31/00—Medicinal preparations containing organic active ingredients
    • A61K31/33—Heterocyclic compounds
    • A61K31/395—Heterocyclic compounds having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. guanethidine or rifamycins
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K11/00—Depsipeptides having up to 20 amino acids in a fully defined sequence; Derivatives thereof
    • C07K11/02—Depsipeptides having up to 20 amino acids in a fully defined sequence; Derivatives thereof cyclic, e.g. valinomycins ; Derivatives thereof
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K38/00—Medicinal preparations containing peptides

Landscapes

  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Organic Chemistry (AREA)
  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Medicinal Chemistry (AREA)
  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • Molecular Biology (AREA)
  • Genetics & Genomics (AREA)
  • Biophysics (AREA)
  • Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
  • Biochemistry (AREA)
  • Pharmacology & Pharmacy (AREA)
  • Epidemiology (AREA)
  • Animal Behavior & Ethology (AREA)
  • Public Health (AREA)
  • Veterinary Medicine (AREA)
  • Medicines That Contain Protein Lipid Enzymes And Other Medicines (AREA)
  • Peptides Or Proteins (AREA)
  • Pharmaceuticals Containing Other Organic And Inorganic Compounds (AREA)

Description

Foreliggende oppfinnelse vedrører nye derivater med en cyklotetradepsipeptidskjelett-struktur vanlig for PF 1022 som er et cyklodepsipeptid og som har antelmintiske aktiviteter og som har gode antelmintiske aktiviteter; og også antelmintisk middel inneholdende derivatene. Nye PF 1022 derivater ifølge foreliggende oppfinnelse viser meget gode antelmintiske aktiviteter overfor ormer som er parasittiske på dyr og derfor er nyt-
tige som markmidler (antelmitisk middel).
PF 1022 forbindelsen er et cyklodepsipeptid som ble funnet som et resultat av en studie
på antelmintiske forbindelser overfor rundormer (se JP patentsøknad Laid-Open (Kokai) No. HEI 3-35796, europeisk patentsøknad publikasjon nr 0382173A2 og "J. Antibio-
tics", 45 692 (1992)). I tillegg er PF 1022 forbindelsen et fermenteringsprodukt som blir produsert av en kultur av en filamentøs sopp PF 1022 stamme (deponert under FERM BP-2671, National Institute of Bioscience and Human-Technology Agency i Tsukuba-shi under Budapestavtalen) som hører til Agonomycetaler og er et cyklodepsipeptid representert ved følgende formel (A):
PF 1022 forbindelsen er et depsipeptid som er dannet av L-N-metylleucin [(CH3)2-CH-CH2-CH(NH-CH3)COOH], D-melkesyre [CH3-CH(OH)COOH] og D-fenylmelkesyre [C6H5-CH2"CH(OH)COOH] via esterbindinger og amidobindinger og som også kan bli representert ved følgende formel (A'): hvor MeLeu er et N-metylleucinresidie representert ved følgende formel:
Lac et melkesyreresidie representert ved følgende formel: og PhLac er et fenylmelkesyreresidie representert ved formelen:
Ved dyrking av ovennevnte filamentøse sopp PF 1022 stamme blir PF 1022B forbindelsen med følgende formel (B), PF 1022C forbindelsen med formel (C), PF 1002D med formel (D) og PF 1002E forbindelsen med (E) produsert i tillegg til ovennevnte PF 1022 forbindelse. De har antelmintiske aktiviteter og ble isolert av foreliggende oppfinner (se JP patentsøknad nr HEI 3-163085, nå JP patentsøkand Laid-Open (Kokai) nr HEI 5-170749; men vedrørende PF 1022E, JP patentsøknad nr HEI 4-279094 (inngitt 19 okto-ber, 1992 men ikke "laid open").
PF 1022E forbindelsen er en ny forbindelse som enda ikke er blitt rapportert.
Ovennevnte PF 1022 forbindelse og PF 1002B til E forbindelser har alle antelmintiske aktiviteter og har et merket strukturelt karaktertrekk på grunn av at de har en stor cyklo-tetradepsipeptidstruktur som et grunnleggende skjelett, og de har, som sidekjeder, ikke bare fire N-metylgrupper og fire isobutylgrupper, men også 0-3 metylgrupper og 1-4 benzylgrupper og inneholder 8 asymmetriske karbonatomer i deres molekyler.
I skjelettcyklodepsipeptidstrukturen i gruppen til disse PF 1022 forbindelsene blir en 24-leddet ring dannet via fire esterbindinger og fire amidbindinger. Denne strukturen kan antas å spille en viktig rolle for utvikling av biologiske aktiviteter.
Såkalte helmintiske infeksjoner forårsaker alvorlig skade på mennesker og dyrehelsen og også overfor landbruket. Det er et behov mot nye og nyttige forbindelser med antelmintiske aktiviteter og også fordelaktige fremstillingsprosesser for slike antelmintiske aktive forbindelser. I lys av dette er det i foreliggende oppfinnelse studert fremstilling og tilveiebragt nye forbindelser relatert til PF 1002 forbindelsen.
PF 1022 forbindelsen er et fermenteringsprodukt av ovennevnte filamentøse sopp. Mako-to Ohyama et al foreslo, som en fremgangsmåte for fremstilling av PF 1022 forbindelsene ved totalsyntese, en fremgangsmåte som omfatter trinnene vist i følgende reaksjonsveikart (A) (se JP patentsøknad nr HEI 4-131139 (inngitt 22 mai, 1992) og JP patentsøknad Laid-Open nr HEI 5-320148 (laid open: 3 desember, 1993)).
Reaksjonsveikart (A)
Som et eksempel på kjent total fremstillingsprosesser for fremstilling av cyklodepsipeptider kan fremgangsmåten angitt i "Agric. Biol. Chem." 43(5), 1079-1083 (1979) som er relatert til totalsyntese av enniantin C, bli gitt.
For å tilveiebringe nye cyklodepsipeptider som har en cyklotetradepsipeptidskjelett-struktur felles med PF 1022 forbindelsen, men som har antelmintiske aktiviteter som er overlegne i forhold til PF 1022 forbindelsen, har foreliggende oppfinnere utført meget forskning. Som et resultat er det blitt oppdaget at en serie nye derivater eller relaterte produkter av PF 1022 forbindelsen kan hver bli fremstilt enten ved hydrogenering, i nærvær av en rhodiumkatalysator under svake reaksjonsbetingelser, en eller flere fenylgrup-per i flere benzylgrupper til PF 1022 forbindelsene eller PF 1022B forbindelsen eller PF 1022E forbindelsen for å danne cykloheksylgrupper, eller ved kjemisk modifisering av fenylgruppene gjennom substitusjonsreaksjon. Det har også blitt oppdaget at en serie nye derivater av PF 1022 forbindelsen kan hver bli fremstilt i henhold til de totale fremstil-lingsprosedyrene ved anvendelse av L-N-metylmelkesyre (L-MeLeu) eller L-melkesyre i kombinasjon med en a-hydroksykarboksylsyre, spesielt et D- eller L-melkesyrederivat, som kan inneholde en substituent på P-karbonatomet og deretter kondensering av karboksylgruppen til leucinforbindelsen med a-hydroksylgruppen til melkesyreforbindelsen gjennom en esterbinding, kondensering av karboksylgruppen til resulterende forestrede produkter med aminogruppen til leucinforbindelsen gjennom en amidbinding, fortsettelse av ytterligere kondensasjon av kondensasjonsproduktet etter behov for derved å synteti-sere et kjedelignende tetradepsipeptid, etterfulgt av cyklisering av tetradepsipeptidet.
En serie PF 1022 derivater fremstilt som beskrevet ovenfor, kan generelt bli representert ved formel (I) angitt nedenfor. Det er blitt bekreftet ved dyretester at disse syntetiserte nye derivatene har nyttige antelmintiske aktiviteter.
Foreliggende oppfinnelse vedrører et antelmintisk cyklodepsipeptid, kjennetegnet ved at det har følgende formel (F):
hvor R er H eller metylgruppe eller et salt derav.
Oppfinnelsen vedrører videre en anvendelse av en antelmintisk sammensetning som tidli-gere nevnt for behandling av høns.
For å illustrere bakgrunnsmaterialet, er et cyklodepsipeptid, dvs et PF 1022 derivat representert generelt ved følgende formel:
hvor (i) R<2> og R<4> er hver en cykloheksylmetylgruppe eller benzylgruppe, R* og R<3> er hver en metylgruppe eller cyklheksylmetylgruppe eller benzylgruppe, og X, Y, Z og Q er hver en metylgruppe, forutsatt at minst en av R<1>, R<2>, R<3> og R<4> er en cykloheksylmetylgruppe, eller (ii) R<*>, R<2> R<3> og R<4> er hver en lineær eller forgrenet alkylgruppe inneholdende 1 til 11 karbonatomer og kan være like eller forskjellige, og X, Y, Z og Q er hver en metylgruppe, eller (iii) R<*> og R<2> er hver en lineær eller forgrenet alkylgruppe inneholdende 1 til 11 karbonatomer og kan være like eller forskjellige og R<2> og R<4> er hver en usubstituert benzylgruppe, og Z, Y, Z og Q er hver en metylgruppe, forutsatt at R<3 >ikke er en metylgruppe når Ri er en metylgruppe eller (iv) R<*>, R<2>, og R<3> er hver en lineær eller forgrenet alkylgruppe inneholdende 1 til 11 karbonatomer og kan være like eller forskjellige og R<4> er en benzylgruppe som bærer eller bærer ikke substituenter på fenylkjernen til benzylgruppen, og X, Y, Z og Q er hver en metylgruppe, eller (v) begge av R<*> og R<3> er metylgrupper, mens begge av R<2> og R<4> er benzylgrupper, og minst en av X, Y, Z og Q er hydrogen, men gjenværende derav er alle metylgrupper, eller (vi) Ri, R<3>, X, Y, Z og Q er alle metylgrupper, R<2> er en benzylgruppe som bærer eller bærer ikke substituenter på fenylkjernen til benzylgruppen og R<4> er en benzylgruppe som bærer substituenter på fenylkjernen til benzylgruppen. Ovennevnte nye PF 1022 derivat ifølge formel (I) omfatter slike hydrogenene derivater av PF 1022 forbindelsen som representert ved nedenfor angitte formel (I-i-a); slike hydrogenerte derivater av PF 1022B forbindelsen som representert nedenfor angitte formel (I-i-b); cyklodepsipeptider med nedenfor angitte formel (I-ii), cyklodepsipeptider med nedenfor angitte formel (I-iii), cyklodepsipeptider med nedenfor beskrevne formel (I-iv), cyklodepsipeptider av nedenfor beskrevne formel (I-v), cyklodepsipeptider av nedenfor beskreve formel (I-vi-a) og cyklodepsipeptider av nedenfor beskrevne formel (I-vi-b). (1) Hydrogenerte derivater av PF 1022 forbindelse, som representert ved følgende formel: hvor R<2a> og R<4a> hver er en cykloheksylmetyl eller benzylgruppe, forutsatt at minst en av R2a og R<4>a er en cykloheksylmetylgruppe. (2) Hydrogenerte derivater av PF 1022B forbindelsen, som representert følgende formel:
hvor Rlb, R<2>b, R<3>b 0g R<4b> nver er en cykloheksylmetylgruppe eller benzylgruppe, forutsatt at minst en av Rlb, R2b, R3b og R4b er en cykloheksylmetylgruppe.
(3) Cyklodepsipeptider representert ved følgende formel:
hvor Rlc, R2c, R3c og R<4>c hver er en lineær eller forgrenet alkylgruppe inneholdende 1 til 11 karbonatomer, spesielt en alkylgruppe inneholdende 1 til 6 karbonatomer og kan være like eller forskjellige.
(4) Cyklodepsipeptider representert ved følgende formel:
hvor Rid og R<3d> hver er en lineær eller forgrenet alkylgruppe inneholdende 1 til 11 karbonatomer, spesielt en alkylgruppe inneholdende 1 til 6 karbonatomer, og kan være like eller forskjellige, forutsatt at R^ og R3c* ikke på samme tid står for metylgrupper.
(5) Cyklodepsipeptider representert ved følgende formel:
hvor R1 e, R<2>e ogR<3e>hver er en lineær eller forgrenet alkylgruppe inneholdende 1 til 11 karbonatomer, spesielt en alkylgruppe inneholdende 1 til 6 karbonatomer og kan være like eller forskjellige, og G, L og M angir uavhengig et hydrogen eller en substituent, spesielt en halogruppe, hydroksylgruppe, en alkoksygruppe, en lavere alkenyloksygruppe, en fenyl-lavere alkoksygruppe, en alkylkarbonyloksygruppe, tetrahydropyranyloksygruppe eller trityloksygruppe.
(6) Cyklodepsipeptider representert ved følgende formel:
hvor minst en av X<a>, Y<a>, Z<a> og Q<a> er et hydrogen og gjenværende derav er alle metylgrupper; og fortrinnsvis enten X<a> og Z<a> er metylgrupper mens Y<a> og Q<a> er hydrogener, eller X<a> og Z<a> er hydrogener mens Y<a> og Q<a> er metylgrupper.
(7) Cyklodepsipeptider representert ved følgende formel:
hvor G', L' og M' angir uavhengig en substituent, spesielt en halogruppe, hydroksylgruppe, en alkoksygruppe, en lavere alkenyloksygruppen en fenyl-lavere alkoksygruppe, en alkylkarbonyloksygruppe, tetrahydropyranyloksygruppe eller trityloksygruppe. (8) Cyklodepsipeptider representert ved følgende formel:
hvor G, L' og M' angir uavhengig en substituent, spesielt en halogruppe, hydroksylgruppe, en alkoksygruppe, en lavere alkenyloksygruppe, en fenyl-lavere alkylgruppe, en alkylkarbonyloksygruppe, tetrahydropyranyloksygruppe eller trityloksygruppe.
Eksempler på PF 1022 derivatet ifølge formel (I) er vist nedenfor i tabell 1.1 tabell 1 tilsvarer hvert eksempelnummer eksempelnummeret til den tilsvarende forbindelsen hvor fremstillingseksemplet vil bli beskrevet nedenfor.
I tabell betyr Me en metylgruppe, Bn en benzylgruppe, ChxyMe en cykloheksylmetylgruppe, i-Pr en isopropylgruppe, n-Bu en n-butylgruppe, sec-Bu en sekundær butylgruppe og i-Bu en isobutylgruppe.
I tabell 1 er forbindelsene (forbindelsekode: PF1002-AHH, -ADH og -BTH) ifølge eksempel 1 eksempler på derivatet representert ved den genrelle formel (I-i-a) eller (I-i-b), mens forbindelsene (forbindelseskode: PF 1022-209 og -217) ifølge eksempel 13 og eksempel 15 er eksempler på derivater representert ved den generelle formelen (I-ii). Forbindelsene (forbindelseskode: PF1022-203, -205, -207 og -225) ifølge eksempel 9, 10, II og 12 er eksempler på derivater representert ved den generelle formel (I-iii). Forbindelse (forbindelsekode: PF1022-216) ifølge eksempel 14 er et eksempel på derivater representert ved den generelle formel (I-iv). Forbindelsene (forbindelseskode: PF1022-218 og -219) ifølge eksempler 16 og 17 er eksempler på derivater representert ved den generelle formel (I-v). Forbindelsene (forbindelseskode: PF 1022-201 og -202) ifølge eksempler 7 og 8 er eksempler på derivater representert ved den generelle formelen (I-vi-a). Forbindelsene (forbindelseskode: PF1022-005, PF1022E, PF1022-215, -006, -011, -012, -013, -016, -018, -019, -020, -021, -022, -023, -025, -026, -029, -224 og -223) i eksemplene 5, 6 og 18-34 er eksempler på derivater representert ved den generelle formel (I-vi-b).
Fremgangsmåte for fremstilling av PF 1022 derivatet med generell formel (I) vil nedenfor
bli beskrevet.
(a)Fremstilling av PF 1022 forbindelsen eller PF1022B forbindelsen ved hydrogenering.
Blant derivatene med generell formel (I) kan hydrogenerte derivater eller hydroderivater med generell formel (I-i-a) eller (I-i-b) bli fremstilt ved anvendelse, som et utgangsmate-riale, PF 1022 forbindelsen eller PF1022B forbindelsen som fremstilt ifølge en fermente-rende metode.
Kjemisk modifikasjon, spesielt hydrogenering, av en benzenring så som en fenylgruppe anses generelt å være vanskeligere enn andre reaksjoner så som nitrering eller acylering som er reaksjon ved en elektrofil substitusjon. Generelt blir hydrogenering dannet ved høy temperatur og høyt trykk utført for å redusere en fenylgruppe til en cyklohek-sylgruppe. PF 1022 forbindelsen har en omfattende kjemisk struktur oppstått naturlig. Det antas at dersom PF 1022 forbindelsen blir utsatt for hydrogenering under konvensjo-nelle betingelser ved høy temperatur og under høyt trykk kan dekomponeringsreaksjonen også være involvert ved hydrogenolyse. Prosedyrer for hydrogenering under svakere reaksjonsbetingelser, dvs hydrogenering dannet ved normal temperatur under normalt trykk er ønskelig for å oppnå reduksjon av fenylgruppene i PF 1022 forbindelsen. Fra et slikt standpunkt har foreliggende oppfinnere utført en undersøkelse på anvendbarheten av forskjellige reduserende katalysatorer. Som et resultat er det blitt oppdaget at en rhodiumkatalysator er mest anvendbar for hydrogenering av fenylgruppene i sidekjede benzylgruppene til PF 1022 forbindelsen for å danne cykloheksylgrupper.
Eksempler på reduserende katalysatorer som kan anvendes i fremgangsmåten for fremstilling av derivatet ifølge oppfinnelsen med generell formel (I-i-a) eller (I-i-b) fra PF 1022 forbindelsen ved hydrogenering, inkluderer rhodium, og rhodiumbærerkatalysatorer så som rhodiumkarbon og rhodiumaluminiumoksyd, og kationiske rhodiumkomplekser så som tris(trifenylfosfm)rhodium. I praksis er en rhodiumkarbonkatalysator foretrukket. Denne hydrogeneringsprosessen kan også minimalisere hydrogentrykket og grad av oppvarming ved katalytisk reduksjon, men forhøyet trykk og oppvarming er til en viss grad mulig slik at reaksjonstiden kan bli forkortet og produksjonen av biprodukter bli under-trykt. For en glatt progresjon av reaksjonen er det ønskelig å oppløse utgangsmaterialene i et inert oppløsningsmiddel slik som metanol, etanol eller etylacetat og deretter utføre reaksjonen med omrøring av den resulterende oppløsningen.
Isolering av målproduktet (I-i-a) eller (I-i-b) etter reaksjon kan bli utført ved hjelp av en velkjent metode f.eks filtrering, kolonnekromatografi eller en fraksjonskrystalli-seringsmetode ved anvendelse av et inert oppløsningsmiddel.
(b) Fremstilling av en totalt syntetisk prosess
Derivatene med generell formel (I) kan bli fremstilt ved en totalt syntetisk prosess, dvs ved å tilveiebringe følgende forbindelser (1), (2), (3), (4), (5) og (6) og deretter kondensere disse suksessivt i riktige kombinasjoner gjennom en esterbinding eller en amidbinding.
Utgangsmaterialene som blir anvendt er som følger:
Forbindelse (1): N-metyl-L-leucin (strukturell formel:
(CH3)2-CH-CH2-CH(NH-CH3)COOH,
forkortelse: H-L-MeLeu-OH)
Forbindelse (2): L-leucin (strukturell formel:
(CH3)2-CH-CH2-CH(NH2)COOH,
forkortelse: H-L-Leu-OH
Forbindelse (3) . D- eller L-a-hydroksykarboksylsyre, fortrinnsvis D- eller L-melkesyre eller et melkesyrederivat som har en ønskelig substituent innført ved P-karbonatomet, idet hver er representert ved følgende formel . gruppen
vil nedenfor bli forkortet til A V
Forbindelse (4). D- eller L-a-hydroksykarboksylsyre representert ved følgende formel:
gruppen
vil nedenfor bli forkortet til A<2>.
Forbindelse (5): D- eller L-a-hydroksykarboksylsyre representert ved følgende formel:
gruppen vil nedenfor bli forkortet til A<3>. Forbindelse (6): D- eller L-a-hydroksykarboksylsyre representert ved følgende formel: gruppen
vil nedenfor bli forkortet til A<4>.
I ovennevnte formler har Rj, R<2>, R<3> og R<4> de samme betydningene som R<*>, R<2>, R<3> og R<4> definert i sammenheng med den generelle formel (I) angitt ovenfor.
I det første trinnet i den totalt syntetiske prosessen blir karboksylgruppen ifølge forbindelse (1) eller (2) omsatt med a-hydroksylgruppen til forbindelse (3), (4), (5) eller (6). I de følgende fire forbindelsene (7) - (10) har hver en aminogruppen i den ene enden og en karboksylgruppe ved den andre enden og kan derfor bli fremstilt som primære kon-densater inneholdende esterbindingen.
I det andre og påfølgende trinn av den totalt syntetiske prosessen blir to av forbindelsene (7) - (10) kondensert med hverandre i riktig kombinasjoner via et amidbinding, hvorved forbindelse (11), forbindelser (12), forbindelse (13) og forbindelse (14) blir fremstilt syntetisk i rekkefølgende som vist skjematisk i reaksjonsveikartet angitt nedenfor B eller C, eller forbindelse (15) blir oppnådd syntetisk i rekkefølgende angitt skjematisk nedenfor i reaksjonsveikart D. Ved cyklisering, via en amidbinding, kan den kjedelignende forbindelsen (13) eller forbindelse (15) som har en aminogruppe i den ene enden og en karboksylgruppe i den andre enden, et cyklisk PF 1022 derivat med generell formel (I) bli fremstilt.
Når melkesyre blir anvendt som hver av forbindelsene (3), (4), (5) og (6), kan et slikt derivat med generell formel (I) hvor R.<1>, R<2>, R<3> og R<4> individuelt representerer metylgrupper, bli oppnådd. Når 2-hydroksyisovalerinsyre blir anvendt som hver av forbindelsene (3), (4), (5) og (6), kan et slikt derivat med generell formel (I) hvor R<1>, R<2>, R<3> og R<4> individuelt representerer en isopropylgruppe, bli oppnådd. Når 2-hydroksyheksanoisk syre blir anvendt som hver av forbindelsene (3), (4), (5) og (6), kan et slikt derivat med formel (I), hvor Ri, R<2>, R<3> og R<4> individuelt representerer en n-butylgruppe, bli oppnådd. Når 2-hydroksy-3-metylpentansyre blir anvendt som hver av forbindelsene (3), (4), (5) og (6), kan et slikt derivat med formel (I) hvor R<1>, R<2>, R<3> og R<4> individuelt representerer en sekundær butylgruppe bli oppnådd. Når 2-hydroksy-4-metyl-n-valerinsyre blir anvendt som hver av forbindelsene (3), (4), (5) og (6), kan et slikt derivat med formel (I) hvor Ri, R<2>, R<3> og R<4> individuelt representerer en isobutylgruppe bli oppnådd. For eksempel når 2-hydorksyoktanoisk syre blir anvendt som forbindelse (4) kan et slikt derivat med formel (I) hvor R<2> representerer n-CgHi 3 bli oppnådd. Når fenylmelkesyre og p-hydroksyfenylmelkesyre blir anvendt som forbindelsene (4) og (6) kan et derivat med formel (I) hvor R<2> og R<4> representerer benzyl og p-hydroksybenzylgrupper, bli oppnådd.
Generelt kan ct-hydroksykarboksylsyre som er forbindelse (4), (5) eller (6) bli fremstilt ved omsetning av en tilsvarende a-aminosyre med natriumnitritt for å omdanne aminogruppen derav til en diazogruppe (-N2) og deretter omdanne diazogruppen til en hydroksylgruppe ved sur behandling.
Når gruppene R^ og R<3> til PF 1022 derivatet med generell formel (I) er de samme, mens gruppene R<2> og R<4> er de samme, dvs når R<1> til utgangsforbindelsen (3) og R<3> til forbindelse (5) er de samme, mens R<2> av utgangsforbindelsen (4) og R<4> til forbindelsen (6) er de samme, er det bare nødvendig å tilveiebringe forbindelsene (3) og (4) som utgangs a-hydroksykarboksylsyre for fremstilling av et slikt PF 1022 derivat i henhold til den totale synteseprosessen. Et slik mål PF 1022 derivat (I) (hvor R<1> = R<3>, og også R<2> = R<4>) kan bli fremstilt ved anvendelse av leucinforbindelse (1) eller (2) i kombinasjon med forbindelse (3) eller forbindelse (4), kondensering derav ved forestring, fremstilling av hver av mellomproduktene (7) og (8) med dannelse av amidbinding, produksjon av den kjedelignende forbindelsen (15) via forbindelsene (11) og deretter cyklisering av forbindelse (15) i henhold til rekkefølgende som illustrert i nedenfor angitte reaksjonveikart D. I PF 1022 derivatet med generell formel (I) og også i a-hydroksykarboksylsyreforbin-delsene (3) - (6) som utgangsmaterialer kan R<1>, R<2>, R<3> og R<4> hver være en Ci-Ci i alkylgruppe. Spesifikke eksempler på en slik alkylgruppe innbefatter metyl, etyl, propyl (spesifikt n-propyl, iso-propyl), butyl (spesifikt n-metyl, iso-butyl, sek-butyl, tert-butyl), pentyl (spesifikt n-pentyl, iso-pentyl, sek-pentyl, 1,2-dimetylpropyl, neo-pentyl, 1-etylpropyl, 1,1-dimetylpropyl), heksyl, heptyl, oktyl, nonyl og decylgrupper. Foretrukket er lavere (Cj-Cg) alkylgrupper.
Når i forbindelsen med generell formel (I) eller i forbindelsen (3), (4), (5) eller (6), R<1>, R<2>, R<3> og R<4> hver representerer en substituert eller usubstituert fenyl eller benzylgruppe, omfatter spesifikke eksempler på en slik gruppe fenyl; o-, m- og p-hydrok-syfenyl; o-, m- og p-(Ci-Cio)alkylfenyl; o-, m- og p-(Ci_io)alkoksyfenyl; o-, m- og p-halogen(F, Cl, Br, I)fenyl. Andre eksempler innbefatter benzyl; o-, m- og p-hy-droksybenzyl; o-, m- og p-(Ci_io)alkyft>enzyl; o-, m- og p-(Ci_io)alkoksybenzyl; og o-, m- og p-halogen(F, Cl, Br, I)benzyl. Antall substituenter på fenylkjernen til benzylgruppen kan være 1-4.
Fremgangsmåte for fremstilling av PF 1022 derivatet representert ved generell formel (I) i henhold til den totalsyntetiske prosessen vil nedenfor bli beskrevet med ovenfor angitte reaksjonsveikart B eller C. I det første trinnet blir forbindelsene (7), (8), (9) og (10) fremstilt ved kondensering av forbindelse (1) eller (2) med forbindelse (3); forbindelse (1) eller (2) med forbindelse (4); forbindelse (1) eller (2) med forbindelse (5); og forbindelse (1) eller (2) med forbindelse (6) via en esterbinding.
Nå blir den aminobeskyttede leucinforbindelsen (1) eller (2), og a-karboksylbeskyttede forbindelser (3), (4), (5) og (6), dvs a-karboksyl beskyttet a-hydroksykarboksylsyrer anvendt. Som en kondensasjonsmetode for anvendelse av esterbindingen er det ønskelig å utføre kondensasjonen ved anvendelse av forbindelsene (3) - (6), idet hver har a-hydroksylgruppen i fri form, i nærvær av et kondensasjonsmiddel. Når den karboksylbeskyttede forbindelsen (3), (4), (5) eller (6) er D-isomer blir kondensasjonen utført i nærvær av både DCC og et additiv (et reagens, så som N-hydroksyravsyreimid, N-hydroksybenzotriazol eller lignende, som ikke forårsaker racemisering i en ordinær pep-tiddannende reaksjon). Når den karboksylbeskyttede forbindelsen (3), (4), (5) eller (6) er L-isomer blir kondensasjonen derimot utført mens konformasjon til oc-hydroksylgruppen til forbindelse (3), (4), (5) eller (6) blir invertert. Kondensasjonsmetoden til Cohens reaksjon er ønskelig på grunn av at den ikke forårsaker racemisering.
Videre kan den aminobeskyttede leucinforbindelsen (1) eller (2) bli kondensert gjennom en esterbinding, med et reaktivt derivat ved a-OH gruppen til den karboksylbeskyttede forbindelsen (3), (4), (5) eller (6). I denne fremgangsmåten, når a-karboksylbeskyttet forbindelse (3), (4), (5) eller (6) er D-isomer, er det ønskelig at forbindelsen er blitt gjort reaktiv ved å substituere a-hydroksylgruppen med et kloratom, et bromatom eller lignende. Når forbindelsen er L-isomer er det ønskelig at a-hydroksylgruppen er blitt omdannet til en sulfonatester så som tosylat, metansulfonat eller lignende.
Ifølge ovennevnte kondenseringsmetode er det fremstilt estertypeforbindelser (7), (8), (9) eller (10) hvor karboksyl og aminogruppene begge er beskyttet. En av beskyttel-sesgruppene innført i forbindelse (1) eller (2) og forbindelsene (3) - (6), som er ut-gangsforbindelser anvendt for fremstilling av de aktive forbindelsene (7) - (10), bør fortrinnsvis være fjernbare.
Eksempler på en slik karboksylbeskyttende gruppe innbefatter de som kan fjernes under sure hydrolytiske eller reduserende betingelser, så som t-butyl, benzyl, p-metoksybenzyl, benzhydryl og tritylgrupper; og de som kan fjernes under nøytrale betingelser så som en allylgruppe.
Eksempler på aminobeskyttende grupper innbefatter de som kan fjernes under sure hydrolytiske eller reduserende betingelser så som benzyloksykarbonyl, t-butyloksykarbonyl, p-metoksybenzyloksykarbonyl og formylgrupper; og de som kan fjernes under nøytrale betingelser og som vanligvis blir anvendt innen peptidkjemi, så som en aryloksykarbonylgruppe.
Det er nødvendig å fjerne den karboksylbeskyttende gruppen og den aminobeskyttende gruppen fortrinnsvis og uavhengig fra hver av de beskyttede estertypeforbindelsene (7), (8), (9) og (10) som oppnådd. Når den karboksylbeskyttende gruppen kan fjernes under reduserende betingelser er det nødvendig å velge som aminobeskyttende gruppe en aminobeskyttende gruppe som kan fjernes under sure hydrolytiske betingelser. Det motsatte tilfelle er også mulig. Når en aminobeskyttende gruppe kan fjernes under nøytrale betingelser, f. eks, en aryloksykarbonylgruppe, er det nødvendig å velge som karboksylbeskyttende gruppe en karboksylbeskyttende gruppe som kan fjernes under sure hydrolytiske betingelser. Det motsatte tilfelle er også mulig.
Med hensyn på en fremgangsmåte for å fjerne karboksylbeskyttende grupper eller aminobeskyttende grupper, når beskyttelsesgruppen kan fjernes under sure hydrolytiske betingelser, blir den behandlet med trifluoreddiksyre, metansulfonsyre, trifluormetansulfonsyre eller lignende. Behandling med trifluoreddiksyre er mest foretrukket. Når den kan fjernes under reduserende betingelser er behandling under katalytiske reduksjonsbetingelser ved anvendelse av en palladiumkatalysator ønskelig. Når beskyttelsesgruppen kan fjernes under nøytrale betingelser kan f. eks en arylgruppe, aryloksykarbonylgruppe eller lignende, kan den bli omsatt med kalium-2-etylheksanoat i nærvær av null-valens palladiumkatalysator for avspaltning.
I det neste trinnet blir forbindelse (11) fremstilt som vist i reaksjonsveikart B, ved kondensering, av avspaltet forbindelse (7) med avspaltet forbindelse (8) gjennom en amidbinding. Som beskrevet ovenfor er det mulig å danne en amidbinding mellom aminogruppen til forbindelse (7) og karboksylgruppen til forbindelse (8) eller mellom aminogruppen til forbindelse (8) og karboksylgruppen i forbindelse (7) når kondensasjonen blir utført mellom forbindelsene (7) og (8). Forbindelse (11) oppnådd ved kondensasjon av forbindelsene (7) og (8) blir kondensert ytterligere med forbindelse (9). Her det mulig å danne en amidbinding mellom aminogruppen til forbindelse (11) og karboksylgruppen til forbindelse (9) eller mellom aminogruppen til forbindelse (9) og karboksylgruppen til forbindelse (11). Forbindelse (12) oppnådd ved kondensasjon av forbindelsene (11) og (9) blir deretter kondensert med forbindelse (10). I dette kondensasjonstrinnet er det mulig å danne en amidbinding mellom aminogruppen til forbindelse (12) og karboksylgruppen i forbindelse (10) eller mellom aminogruppen til forbindelse (10) og karboksylgruppen til forbindelse (12). Som et resultat av dette kan forbindelse (13) bli dannet.
I de ovennevnte respektive kondensasjonstrinn blir fjerning og nyinnføring av en be-skyttende gruppe utført etter behov for å oppnå en ønsket amidbinding.
Som beskrevet i reaksjonsveikart C kan forbindelse (9) også bli kondensert med forbindelse (10). I dette tilfelle er det mulig å danne en amidbinding mellom aminogruppen til forbindelse (9) og karboksylgruppen til forbindelse (10) eller mellom aminogruppen til forbindelse (10) og karboksylgruppen til forbindelse (9). Forbindelse (11) som er blitt oppnådd ved kondensering av forbindelsene (7) og (8) og bli kondensert med forbindelse (14) som er blitt oppnådd ved kondensering av forbindelse (9) og forbindelse (10). I dette tilfelle er det mulig å danne en amidbinding mellom aminogruppen til forbindelse (11) og karboksylgruppen til forbindelse (14) eller mellom aminogruppen til forbindelse (14) og karboksylgruppen til forbindelse (11). Som beskrevet i reaksjonsveikart D kan forbindelse (15) bli fremstilt ved å binde to molekyler av forbindelse (11) sammen gjennom en amidbinding.
Ved intramolekylær ringslutning av forbindelse (13) eller forbindelse (15) oppnådd på denne måten kan et derivat med generell formel (I) bli fremstilt. Den ene ringlukningen blir oppnådd ved behandling av forbindelse (13) eller forbindelse (15) ved anvendelse av dicykloheksylkarbodiimd (DCC) eller l-(3-diimetylaminopropyl)-3-etylkarbodiimid (EDCI) og et additiv [N-hydroksyravsyreimid (HOSU), 1-hydroksybenzotriazol (HPBt) eller lignende] i kombinasjon.
Eksempler på oppløsningsmidler som kan anvendes i ovennevnte ringslutningsreaksjon innbefatter eteroppløsningsmidler så som eter, tetrahydrofuran (THF) og 1,4-dioksan og aprotiske oppløsningsmidler så som N,N-dimetylformamid (DMF), acetonitril og kloroform. Foretrukket er et blandet oppløsningsmiddel av tetrahydrofuran og N,N-dimetylformamid. Ringlukningsreaksjonen kan bli utført ved 0-50°C, fortrinnsvis 20-30°C.
Den totalt syntetiske prosessen som beskrevet ovenfor er egnet for fremstilling av derivatene til formlene (I-ii), (I-iii), (I-iv) og (I-v) blant derivatene med generell formel (I). (c)Fremstilling ved innføring av substituenter inn i PF 1022 eller PF1022E forbindelsen. Blant derivater med generell formel (I) kan derivatene med formler (I-vi-a) og (I-vi-b) bli fremstilt ved innføring, i henhold til kjente kjemiske metoder, forskjellige substituenter for hydrogen på benzenringen (fenylgruppe) til benzylgruppen, dvs en sidekjede til PF 1022 forbindelsen eller i den fenoliske hydroksylgruppen på p-hydrok-syfenylmetylgruppen (dvs benzylgruppen) dvs en sidekjede til PF1022E forbindelsen (refererer til JP patentsøknad HEI 4-279094 (ikke "laid open"), og syntetisk eksempel som vil bli beskrevet i eksempel 6).
Eksempler på substituenter som kan bli innført i benzenringen, dvs fenylkjernen til benzylgruppen til PF 1022 forbindelsen eller i den fenoliske hydroksylgruppen på benzylgruppen til PF1022E forbindelsen, innbefatter lineær eller forgrenede alkylgrupper, alkenylgrupper, alkynylgrupper, substituerte eller usubstituerte benzylgrupper, difenylme-tylgrupper, trifenylmetylgrupper og acylgrupper. Spesielt foretrukket er alkanoyl, karba-moyl, metoksymetyl, metyltiometyl og tetrahydropyranylgrupper. Eksempler på substituenter) som kan erstattes med hydrogen på benzenringen innbefatter halogenatomer, så vel som slike substituenter som kan erstattes med hydrogen(er) på en aromatisk ring ved vanlig elektrofil substitusjon.
Ovennevnte substituentinfluerende reaksjon kan bli utført i et inert oppløsningsmiddel ved foretring, acylering, karbamoylering eller lignende. Foretringen kan bli utført ved en reaksjon med diazometan eller difenyldiazometan, en reaksjon med isobuten eller dihydropyran i nærvær av en sur katalysator, eller en reaksjon med et alkylhalid, et alke-nylhalid, et alkynylhalid, et benzylhalid, et substituert benzylhalid eller et trife-nylmetylklorid (dvs tritylklorid). Acyleringen kan bli utført ved en reaksjon med et acyl-halid eller alkylklorkarbonat i nærvær av en organisk base så som trietylamin eller en uorganiske base så som kaliumkarbonat. De fleste velkjente reaksjonene for modifikasjon av en fenolisk hydroksylgruppe kan bli anvendt. Til den fenoliske hydroksylgruppen ved paraposisjonen som er aktiv for den elektrofile substituerende reaksjonen kan halogene-ring eller andre velkjente elektrofile substitusjoner også bli anvendt.
Derivater av generell formel (I), dvs derivater av formlene (I-i-a), (I-i-b), (I-ii), (I-iii), (I-iv), (I-v), (I-vi-a) og (I-vi-b) har alle nyttige antelmintiske aktiviteter og viser en lav akutt toksisitet overfor pattedyr.
PF 1022 derivatene ifølge foreliggende oppfinnelsen kan bli omdannet til deres syreaddisjonssalter ved omsetning av disse med en farmasøytisk akseptabel uorganisk syre så som saltsyre, svovelsyre eller fosforsyre, eller en farmasøytisk akseptabel organisk syre så som eddiksyre, propionsyre, sitronsyre eller metansulfonsyre. I tillegg kan PF 1022 derivatene ifølge foreliggende oppfinnelse eller saltene derav bli formulert til antelmintiske sammensetninger ved blanding v/ disse med en farmasøytisk akseptabel, fast eller flytende bærer.
Det er tilveiebragt en antelmintisk sammensetning kjennetegnet ved at sammensetningen omfatter et cyklodepsipeptid representert ved generell formel (F) eller dets salt derav som en aktivt ingrediens.
De nye derivater med generell formel (I) ifølge foreliggende oppfinnelse eller sammensetningen som inneholder derivatet kan bli administrert til dyr oralt eller parenteralt, f. eks rektalt. Ved hjelp av en riktig preliminær test kan dosen av derivatet bli bestemt avhengig av typen parasitt som skal bli eliminert, hvilken type vertsdyr som skal bli behandlet og forskjellige andre faktorer. Som en generell retningslinje, når administrert oralt for eliminering av rundormer antas oral administrering av forbindelsen med formel (I) ved en dose på 0,05 mg/kg eller høyere, fortrinnsvis 0,2 mg til 3 mg/kg og utvise antelmintisk virk-ning overfor parasitter.
Forbindelsen ifølge foreliggende oppfinnelse kan bli formulert til en antelmintisk sammensetning på samme måte som PF 1022 forbindelsen som er beskrevet i JP patentsøknad Laid-Open nr HEI 3-35796 eller EP patentsøknad publikasjon nr 0382173 A2.
Eksempler på dyr som kan bli tilført PF 1022 derivatet ifølge oppfinnelsen som et antelmintisk middel kan innbefatte husdyr, fjærkre, forsøksdyr og kjeledyr, så som svin, kveg, hester, kaniner, sauer, geiter, fugler anvendt som husdyr, ender, kalkuner, mus, hvite rotter, marsvin, aper, hunder, katter og små fugler. Illustrerende parasitter på disse dyre-ne innbefatter parasitter på kveg og sau så som tvunnet maveormer, maveormer som hører til slekten Ostertagia, små hårormer, nematoder som hører til slekten Cooperia, nodularormer som hører til slekten Oesophagostomum, amfisomer, tarmbåndorm (Mo-niezia benedeni), lungeormer og leverikter; parasitter på svin så som rundormer, whipormer og nodularormer; parasitter så som rundormer, hookormer, whipormer og hjer-teormer; parasitter på katter så som rundormer og Spirometra mansoni; og parasitter på kyllinger så som rundormer, hårormer og cecalormer. Forbindelsen ifølge foreliggende oppfinnelse er også effektiv for eliminering av parasitter på det humane legemet så som rundormer, pinnormer, hookormer (Ancylostoma duodenale, Ancylostoma ceylanicum, Mecator americanus), orientale hårormer, stronglyidisormer og whipormer.
Det nye PF 1022 derivatet ifølge foreliggende oppfinnelse kan bli anvendt for behandling og forhindring av parasittiske infeksjoner. For behandling kan derivatet bli administrert oralt eller parenteralt. Ved oral administrering kan et flytende preparat av derivatet bli tvangsadministrert ved anvendelse av et mavekateter eller lignende, eller administrert etter blanding av dette med daglig for eller drikkevann, eller administrert i en ordinær doseringsform egnet for oral administrering, så som tabletter, kapsler, peletter, boluser, pulvere eller bløte kapsler. Ved parenteral administrering kan det bli administrert subku-tant, intramuskulært, intravenøst, intraperetonealt eller gjennom en lignende injeksjonsvei ved injisering av derivatet med formel (I) fremstilt i form av et vannuoppløselig preparat i peanøttolje, soyabønneolje eller lignende eller i form av et vannoppløselig preparat i glyserol, polyetylenglykol osv.
For forhindring av parasittiske infeksjoner er det vanlig praksis å administrere PF 1022 derivatet oralt som en blanding med daglig for. Til tross for at det ikke er noen begrens-ninger på administreirngsperioden når det gjelder preventive formål er det i de fleste til-fellene tilstrekkelig å administrere det i omtrent 2 måneder når det gjelder broilerkyllinger og i omtrent 5 måneder når det gjelder svin.
Dosen av PF 1022 derivatet ifølge foreliggende oppfinnelse kan variere avhengig av type dyr som blir behandlet og type parasitt og administreringsmetode. Når hønerundormer skal bli eliminert ved oral administrering av et flytende preparat ved anvendelse av et mavekateter kan det bli administrert ved 0,05 mg/kg eller mer. For preventive formål kan derivatet bli blandet med foret i en konsentrasjon på 1 ppm eller høyere, fortrinnsvis 5 til 10 ppm og administrert kontinuerlig.
En oppløsning eller suspensjon av PF 1022 derivatet ifølge foreliggende oppfinnelse i en
flytende bærer kan bli administrert til dyr ved subkutan eller intramuskulær injeksjon osv. For parenteral administrering blir ikke-vandige formuleringer ved anvendelse av en vege-tabilsk olje så som peanøttolje eller soyabønneolje anvendt. Vandige parenterale formuleringer som inneholder en vannoppløselig bærer så som glyserol eller polyetylenglykol kan også bli anvendt for parenteral administrering. Disse formuleringene inneholder generelt forbindelsen ifølge foreliggende oppfinnelse i en mengde på 0,1 til 10 vekt-%. Selv når PF 1022 derivatet ifølge foreliggende oppfinnelse blir administrert oralt til mus i en dose på 300 mg/kg blir normale økninger i kroppsvekten oppnådd uten at noe er unormalt. Dette indikerer den lave toksisiteten til denne forbindelsen.
Antelmintiske aktiviteter til PF 1022 derivatet med generell formel (I) vil bli beskrevet i følgende forsøk.
Forsøk 1
Elimineringsforsøk for hønserundorm.
Høns (tre høns pr gruppe) som var blitt kunstig infisert med hønserundorm og hvor in-feksjonen dermed var blitt bekreftet ved skatoskopi ble anvendt som eksperimentelle dyr. Ved administrering av hver forsøksforbindelse, idet forsøksforbindelsen ble veid i en dose (mg) nøyaktig beregnet på grunnlag av kroppsvekten (kg) til hver høne ble suspendert i karboksymetylcelluloseinneholdende vann og den resulterende suspensjonen ble administrert oralt som en enkeltdoseenhet ved anvendelse av et maverør. Etter administrering ble ormene som ble eliminert fra hønsene opptelt daglig. Syv dager etter administreringen ble hønsene avlivet og obdusert og ormene som var igjen i tarmkanalen ble telt. Prosent eliminering ble beregnet i henhold til følgende beregningsligning:
Forsøksresultatene er oppsummert i tabell 2 vist nedenfor. Hver forsøksforbindelse er indikert med tilsvarende forbindelseskodenavn vist ovenfor i tabell 1.
Forsøk 2
In vivo antelmintisk aktivitetsforsøk på nematoer
Til hver sau som var blitt kunstig infisert med Trichostrongylus colubriformis (nedenfor forkortet som "T") og Haemonchus contortus (nedenfor forkortet som "T"), ble en for-søksforbindelse oppveid i en dose nøyaktig beregnet utfra vekten (mg) til sauen administrert i form av en gelatinkapsel.
Antall parasittegg utskilt med avføringen fra sauen ble opptelt kvantitativt før og etter administrering slik at grad av antelmintiske effekter ble bestemt. De antelmintiske effektene ble vurdert med ratetall på 0, 1,2 eller 3. De antelmintiske effektene er gradert "0" når det ikke var noen antelmintiske aktiviteter, "2" når utskillelse av parasittegg ble observert og "3" når utskillelse av parasittegg var stoppet, dvs parasittormer ble fullstendig fjernet.
Tabell 3 viser resultatene til forsøket på antelmintiske aktiviteter overfor overnevnte to typer av saueparasittiske ormer.
Forsøk 3
Antelmintiske effekter av visse PF 1022 derivater på en tarmnematode fra rotte ble testet i henhold til følgende metode. 16 hann Wistar rotter ble delt inn i 8 grupper (2 rotter pr gruppe) og omtrent 2000 lar-veormer av Nippostrongylus brasillensis ble hypodermisk inokulert pr rotte. 7 dater etter inokulering ble PF1022, PF1022E, PF1022-002, PF1022-003, PF1022-209, PF1022-218 og PF 1022-219 tvangsmessig administrert som forsøksforbindelser p.o. til rotter i gruppe og i en mengde på 10 mg/kg pr rotte. Ved administrering ble hver forsøksforbindelse (8 mg) løst opp i 0,2 ml dimetylsuifoksyd og deretter ble den resulterende oppløsningen fortynnet med destillert vann for å tilveiebringe en 2 ml suspensjon. 10 dager etter inoku-leringen ble rottene utsatt for obduksjon og imaginalormer parasittiske på tynntarmen ble opptelt.
Som forsøksresultater er gjennomsnittet av gjenværende ormer i hver av de 8 gruppene og prosent effektivitet av testforbindelse i hver gruppe sammenlignet med den til den infiserte kontrollgruppen som vist i tabell 4. PF 1022 viser prosent effektivitet på 80 %, men PF 1022-003 og PF 1022-209 viste effektivitet på henholdsvis 66,1 % og 59,3 %.
Eksempler for fremstilling av de nye derivatene med generell formel (I) vil bli beskrevet spesifikt i følgende eksempler hvor følgende forkortelser har følgende betydninger:
Bn: benzylgruppe
Boe: t-butoksykarbonylgruppe
BH: benzyhydrylgruppe
Cbz: karbobenzoksygruppe
All: allylgruppe (1-propenylgruppe)
THP: tetrahydropyranylgruppe
Tr: trifenylmetylgruppe (tritylgruppe)
TYR: tyrosinresidie
TYRA: p-hydroksyfenylmelkesyreresidie
Lac: melkesyreresidie
PhLac: fenylmelkesyreresidie MeLeu: N-metylleucinresidie Leu: leucinresidie LEUA: 2-hydroksy-4-metyl-n-valerinsyreresidie syntetisert fra leucin norLeu: norleucinresidie norLEAU: 2-hydroksy-L-heksansyreresidie isoLEAU: 2-hydroksy-3-metyl-L-pentansyreresidie VALA: 2-hydroksyisovalerinsyreresidie OctA: 2-hydroksyoktanoisksyreresidie
HOBt: 1-hydroksybenzotriazol
BOP-C1: N,N-bis(2-okso-3-oksazolidinyl)fosfinsyreresidie
DCC: dicykloheksylkarbodiimid
EDCI: l-(3-dimetyaminpropyl)-3-etylkarbodiimid
TF A: trifluoreddiksyre
THF: tetrahydrofuran
DMF: N,N-dimetylformamid
DMSO: dimetylsulfoksyd
NMM: N-metylmorfolin
DEAD: dietylazodikarbonat
Illustrert i følgende eksempler 1-2 er fremstillingsmetoder ved hydrogenering.
Eksempel 1
Fremstilling av hydrogeneringsprodukter av PF1022 og PF1022B forbindelser.
Til 2,20 g av en blanding av PF1022 og PF1022B forbindelser ble 70 ml etanol og 30 ml etylacetat tilsatt for å oppløse førstnevnte i sistnevnte. En reaksjonsblanding som var blitt fremstilt ved tilsetning av 1,0 g 5 % rhodiumkarbonkatalysator til den resulterende oppløsningen ble omrørt under hydrogengass ved et atmosfærisk trykk slik at blandingen ble utsatt for katalytisk reduksjon. 22 timer etter den begynnende omrøringen, dvs ved det tidspunkt når 222 ml hydrogen var blitt konsumert ble omrøringen avsluttet og katalysatoren ble filtrert ut fra reaksjonsblandingen. Filtratet ble konsentrert under redusert trykk, idet resten ble oppnådd i en farveløs harpiks-lignende form. Resten ble løst opp i 10 ml heksanetylacetat (1:1) blandet oppløs-ningsmiddel etterfulgt av utsettelse av den resulterende oppløsningen for kromatografi på en silikagelkolonne pakket med et 1 kg silikagel ("Silica Gel 60", produkt fra Merck & CO). Eluering ble deretter utført ved anvendelse som elueringsmiddel 0,9 1 heksanetylacetat (2:1), 1,0 1 heksanetylacetat (3:2) og 4,0 1 heksanetylacetat (1:1), og følgende fire fraksjoner ble samlet som eluater.
Fraksjon 1 (0,7 1): Delhydrogeneringsprodukter av PF1022B ble innbefattet deri; Fraksjon 2 (0,9 1): Hydrogeneringsproduktet til PF1022 ble innbefattet deri; Fraksjon 3 (0,9 1): Delhydrogeneringsprodukter til PF1022 ble innbefattet deri; og Fraksjon 4 (1,5 1): En blanding av delhydrogeneringsproduktet til PF1022 og utgangsmaterialet PF1022 ble innbefattet deri. (1) Fraksjon 2 ble konsentrert under redusert trykk for å oppnå en farveløs rest. Til resten ble 10 ml vann tilsatt etterfulgt av omrøring i 5 timer. Krystallene presipitert på denne måten (448 mg) ble samlet ved filtrering.
I et NMR spektrum av denne forbindelsen (i CD3OD) ble ingen topp som skyldtes aromatiske hydrogener observert. I et EI massespektrum ble molekylære ionetopper (M<+>) ved 960, 905 og en fragmenttopp ved 864 observert. I UV spekteret (metanol-oppløsning) ble de maksimale absorbsjonene som var blitt observert ved 263,6 nm og 257,6 nm for PF1022 forbindelsen borte. Nevnte forbindelse ble følgelig funnet å være dodecahydro-PF1022, dvs en forbindelse (forbindelseskode: PF1022-ADH) med generell formel (I-i-a) hvor cykloheksylmetylgruppene er tilstede som henholdsvis R2a og R4a
Molekylær formel: C52HggN4<0>i2-
Spesifikk rotasjon: [a]j) -56,6° (c=0,15, metanol)
<1>h NMR spektra (deuterometanol), 8 (ppm):
(2) Til en fargeløs rest, som var blitt oppnådd ved konsentrering av fraksjon 3 under redusert trykk, ble 20 ml heksan og 0,5 ml metanol tilsatt. Den resulterende blandingen ble latt stå og fargeløste krystaller presipiterte ut. Krystallene ble samlet ved filtrering i et utbytte på 457 mg. Forbindelsen oppnådd på denne måten ble beregnet å inneholde 5 aromatiske hydrogenatomer som er observert fra NMR spektret derav (i CD3OD). På et UV spekter ble svake maksimale absorbsjoner observert ved 263,6 og 257,6 nm. I et EI massespektrum hadde derimot forbindelsen molekylære ionetopper ved 954 (M<+>), 899 og 858. Forbindelsen er blitt funnet å være heksahydro PF1022 (forbindelseskode: PF1022-AHH), dvs en forbindelse med generell formel (I-i-a) hvor en benzylgruppe er tilstede som R<2a> og en cykloheksylmetylgruppe som R4a.
Molekylær formel: C52H82N4O12
Spesifikk rotasjon: [a]j) -79,6° (c = 0,15, metanol)
<*>H NMR spektra (i deuterometanol), 8 (ppm):
(3) Fraksjon 1 ble konsentrert og resten oppnådd på denne måten ble løst opp i et oppløsningsmiddel. Som beskrevet ovenfor ble den resulterende oppløsningen utsatt for kromatografi på en silikagelkolonne etterfulgt av eluering med heksanetylacetat (1:1). Fra eluatfraksjonene ble et hydrogeneringsprodukt av PF1022B forbindelsen oppnådd. Det faste produktet oppnådd på denne måten ble bestemt å være et hydrogeneringsprodukt (forbindelseskode: PF1022-BTH) med formel (I-i-b) hvor de fire benzylgruppene til PF1022B forbindelsen var blitt redusert til fire cykloheksylmetyl-grupper.
Eksempel 2
Fremstilling av dodecahydrod-PF1022
Til 500 mg av PF1022 forbindelsen ble 30 ml etanol og 250 mg 5 % rhodiumkarbon tilsatt etterfulgt av katalytisk reduksjon i 2 dager under hydrogengass ved 1 atm. Etter at stopp av forbruk av hydrogen ble bekreftet ble reaksjonen avsluttet. Fra reaksjonsblandingen ble katalysatoren fjernet ved anvendelse av celitt som et filtreringshjelpe-middel. Filtratet ble konsentrert under redusert trykk. Resten oppnådd på denne måten ble tilsatt med vann og små mengder metanol og isopropyleter etterfulgt av omrøring. Krystallene som presipiterte ble samlet ved filtrering i et utbytte på 499 mg.
Forbindelsen oppnådd på denne måten ble bestemt å være dodecahydro PF1022 (dvs PF1022-ADH). Som et resultat av tynnsjiktskromatografi på silikagel (elueringsmiddel: heksan-etylacetat, 1:1), ble det ikke bestemt noe gjenværende utgangsfor-bindelse PF1022 eller heksahydro PF1022.
Fremstilling av derivater med de generelle formlene (I-ii) - (I-v) ved total syntetisk fremgangsmåte som vil bli illustrert i følgende eksempler 3-4 og eksemplene 6-17.
Eksempel 3
Fremstilling av cyklo-(L-MeLeu-D-Lac-)4 (kode: PF1022-002)
a. Fremstilling av Boc-L-MeLeu-D-Lac-OH
110 ml metanol ble 1,065 g (2,54 mmol) Boc-L-MeLeu-D-Lac-OBn oppløst etterfulgt av tilsetning av 128 mg 10 % Pd-C. Den resulterende blandingen ble utsatt for katalytisk reduksjon under en hydrogenstrøm (for debenzylering). Reaksjonsblandingen oppnådd ble filtrert og deretter ble filtratet konsentrert hvorved 800 mg av tittelforbindelsen ble oppnådd (utbytte 99 %). Forbindelsen oppnådd på denne måten ble tilført for anvendelse i neste reaksjon uten rensing.
b. Fremstilling av H-L-MeLeu-D-Lac-OBn
I 5 ml metylenklorid ble 1,065 g (1,68 mol) Boc-L-MeLeu-D-Lac-OBn oppløst etterfulgt av avkjøling til 5°C. Til den resulterende oppløsningen ble 2 ml TFA tilsatt ved samme temperatur etterfulgt av omsetning ved romtemperatur i 30 minutter (for fjerning av Boe). Den oppnådde reaksjonsblandingen ble konsentrert og konsentratet ble løst opp i 50 ml etylacetat. Oppløsningen oppnådd på denne måten ble vasket med en mettet vandig oppløsning av natriumbikarbonat og en mettet vandig oppløsning av natriumklorid, etterfulgt av tørking over natriumsulfat. Oppløsningsmidlet ble deretter destillert av fra den tørkede oppløsningen for å tilveiebringe 822 mg av tittelforbindelsen (utbytte: 100 %). Forbindelsen oppnådd på denne måten ble tilført for anvendelse i neste reaksjon uten rensing.
c. Boc-(-L-MeLeu-D-Lac-)2-OBn
110 ml THF ble 800 mg (2,54 mmol) av forbindelsen syntetisert i fremgangsmåte a) og 822 mg (2,68 mmol) av forbindelsen syntetisert i fremgangsmåte b) oppløst. Til den resulterende oppløsningen ble 542 mg HOBt, 0,3 ml NMM og 0,86 g DCC tilsatt, etterfulgt av dannelse av kondensasjonsreaksjon ved 4°C i 2 dager (for dannelse
av amidobinding). Uoppløselig materiale ble filtrert av fra den resulterende reaksjonsblandingen og filtratet ble deretter tilsatt med 50 ml etylacetat og 30 ml heksan. Den
resulterende oppløsningen ble vasket med en 5 % vandig oppløsning av kaliumhydrogensulfat, en mettet vandig oppløsning av natriumbikarbonat og en mettet vandig opp-løsning av natriumklorid etterfulgt av tørking over natriumsulfat. Etter at oppløsnings-midlet var destillert av fra den tørkede oppløsningen ble resten utsatt for kromatografi på en silikagelkolonne (kloroform:etylacetat, 50:1) for isolering og rensing av målforbindelsen. 1,20 g av tittelforbindelsen ble oppnådd (utbytte: 78 %).
[a]D<21>: A4, 7° (c = 0,12, CHC13)
EI-MS m/s: 607 (M<+>)
<i>H NMR (CDCI3) 5 0,88 (d, 3H, J ? 6,4 Hz), 0,92 (d, 3H, J = 6,4 Hz), 0,93 (d, 6H, J ? 6,4 Hz), 1,44 og 1,46 (hver s, 9H), 1,51 (d, 3H, J = 6,4 Hz), 1,53 (d, 3H, J = 6,4 Hz), 1,40-1,84 (m, 6H), 2,81-2,83, 2,93 og 2,95 (hver s, 6H), 4,74 og 4,93 (dd og t, J = 4,11 Hz), 5,20 (d, 1H, J = 12,2 Hz), 5,25-5,36 (m, 2H), 7,30-7,39 (m, 5H).
d. Fremstilling av Boc-(-L-MeLeu-D-Lac-)2-OH
På lignende måte som fremgangsmåte a) i eksempel 3 ble 595 mg (0,98 mmol) Boc-(-L-MeLeu-D-Lac-)2-OBn utsatt for katalytisk reduksjon for debenzylering, hvorved 505 mg av tittelforbindelsen ble oppnådd (utbytte: 100 %). Forbindelsen oppnådd på denne måten ble tilført for anvendelse i neste reaksjon uten rensing.
e. Fremstilling av H-(-LMeLeu-D-Lac-)2-OBn
På lignende måte som fremgangsmåte b) i eksempel 3 ble 634 mg (1,04 mmol) Boc-(-L-MeLeu-D-Lac-)2-OBn utsatt for Boc-fjerningsreaksjonen hvorved 526 mg av tittelforbindelsen ble oppnådd (utbytte: 100 %). Forbindelsen oppnådd på denne måten ble tilveiebragt for anvendelse i neste reaksjon uten rensing.
f. Boc-(-L-MeLeu-D-Lac-)4-OBn
I 6 ml THF ble 505 mg (0,98 mmol) av forbindelsen syntetisert i fremgangsmåte d) og også 526 mg (1,04 mmol) av forbindelsen syntetisert i fremgangsmåte e) løst opp. Til den resulterende oppløsningen ble 204 mg HOBt, 0,11 ml NMM og 0,33 g DCC tilsatt, etterfulgt av utførelse av kondensasjonsreaksjon ved 4°C i 24 timer. Reaksjonsblandingen oppnådd på denne måten ble utsatt for en lignende behandling som fremgangsmåte c) i eksempel 3 hvorved 832 mg av tittelforbindelsen ble oppnådd (utbytte: 83 %).
[a]D<21> : -58,3° (c = 0,28, CHC13)
EI-MS m/z: 1005 (M<+>)
<!>H NMR (CDCI3) 5: 0,86-,03 (10 d, 24H, J = 6,4 og 6,7 Hz), 1,45 og 1,46 (hver s, 9H), 1,38-1,58 (m, 16H), 1,64-1,85 (m, 8H), 2,83-3,11 (hver s, 12H), 4,45-4,56 og 4,74 (m og dd, 1H, J = 4,1 og 11,1), 4,94 (t, 0,5H, J = 8,1 Hz), 5,10 (q, 1H, J = 7,1 Hz), 5,12 (d, 1H, J = 12,2 Hz), 5,20 (d, 1H, J = 12,2 Hz), 5,13-5,40 (m, 5,5 H), 7,30-7,39 (m, 5H).
g. Fremstilling av cyklo-(-L-MeLeu-D-Lac-)4
På en lignende måte som fremgangsmåte b) i eksempel 3 ble 813 mg (0,89 mmol) Boc-(-L-MeLeu-D-Lac-)4-OBn avspaltet ved omsetning med TF A. Reaksjonsblandingen oppnådd på denne måten ble postbehandlet på lignende måte og råproduktet oppnådd på denne måten ble utsatt for katalytisk reduksjon og postbehandling lik fremgangsmåte d) i eksempel 3.
I 200 ml THF ble aminosyrederivatet H-(L-MeLeu-D-Lac-)4-OH oppnådd på denne
måten oppløst, etterfulgt av tilsetning av 0,55 g HOBt og 0,18 ml NMM. Den resulterende blandingen ble tilsatt til en suspensjon av 0,60 g kaliumklorid, 1,55 g cesiumklorid og 1,56 g EDCI HC1 i DMF (200 ml) - THF (400 ml), etterfulgt av omsetning i 5 dager for å tilveiebringe ringlukningsreaksjonen.
Den resulterende reaksjonsblandingen ble tilsatt med 150 ml etylacetat, etterfulgt av vasking med 80 ml vann, 80 ml av en mettet vandig oppløsningen av natriumbikarbonat, 80 ml av en 5 % vandig oppløsning av kaliumhydrogensulfat og 80 ml av en mettet vandig oppløsning av natriumklorid og tørking over natriumsulfat. Oppløs-ningsmidlet ble fjernet fra den tørkede oppløsningen. Resten ble utsatt for kromatografi på en silikagelkolonne (kloroform:etylacetat = 5:1 —> 1:1) for isolering og rensing av målforbindelsen hvorved 559 mg av tittelforbindelsen ble oppnådd (utbytte: 86 %).
[a]D21: -68,2° (c = 0,15, metanol)
smp 168-170°C
FAB-MS m/z: 797 (M<+>)
<*>H NMR (CDCI3) 5: 0,85 og 0,95 (hver d, 6H, J = 6,6 Hz), 0,89 og 0,98 (hver d, 6H, J = 6,8 Hz), 0,91 og 0,98 (hver d, 6H, J = 6,8 Hz), 1,01 og 1,07 (hver d, 6H, J = 6,6 Hz), 0,99 (d, 3H, J = 6,8 Hz), 1,36-1,51 (m, 3H, J = 6,4 Hz), 1,55-1,65 (m, 1H), 1,42 (d, 3H, J = 6,8 Hz), 1,44 (d, 3H, J = 6,8), 1,45 (d, 3H, J = 6,8 Hz), 1,67-1,99 (m, 8H), 2,85 (s, 3H), 2,96 (s, 3H), 3,07 (s, 3H), 3,16 (s, 3H), 4,78 (dd, 1H, J = 4,3 og 11,1 Hz), 5,19 (q, 1H, J = 6,8 Hz), 5,29 (dd, 1H, J = 5,6 og 10,4 Hz), 5,44 (dd, 1H, J = 5,4 og 11,1 Hz), 5,48 (dd, 1H, J = 5,8 og 10,0 Hz), 5,58 (q, 1H, J = 6,8 Hz), 5,64 (q, 1H, J = 6,8 Hz), 5,69 (q, 1H, J = 6,8 Hz).
Eksempel 4
Fremstilling av cyklo-(-L-MeLeu-D-Lac-L-MeLeu-D-PhLac-L-MeLeu-D-Lac-L-MeLeu-D-LEUA-) (kode: PF1022-003)
a. Fremstilling av Boc-L-MeLeu-D-PhLac-L-MeLeu-D-Lac-OBn
I 15 ml THF ble Boc-L-MeLeu-D-PhLac-OH syntetisert på lignende måte som fremgangsmåte a) i eksempel 3 og også 1,016 g, (3,3 mmol) H-L-MeLeu-D-Lac-OBn ble syntetisert i fremgangsmåte b) i eksempel 3 ble oppløst, etterfulgt av tilsetning av 1,5 ml pyridin, 535 mg (3,6 mmol) HOBt og 817 mg (3,6 mmol) DCC under isavkjøling. Den resulterende blandingen ble omsatt i 15 timer hvorved reaktantene ble kondensert av en amidbinding. Uoppløselig materiale ble fjernet fra reaksjonsblandingen etterfulgt av postbehandling som i fremgangsmåte c) i eksempel 3. Etter fjerning av opp-løsningsmidlet fra oppløsningen ble det oppnådd residier utsatt for kromatografi på silikagelkolonne (toluemetylacetat = 10:1 -> 5:1) for isolering og rensing, hvorved 1,37 g av tittelforbindelsen ble oppnådd (utbytte: 67 %). Forbindelsen oppnådd på denne måten ble tilført for anvendelse i neste reaksjon uten ytterligere rensing.
b. Fremstilling av H-L-MeLeu-D-PhLac-L-MeLeu-D-Lac-OBn
På en lignende måte som fremgangsmåte e) i eksempel 3 ble 1,15 g av tittelforbindelsen oppnådd (utbytte: 98 %) fra 1,37 g (2 mmol) av den beskyttede forbindelsen oppnådd ovenfor i fremgangsmåte a). Forbindelsen ble tilført for anvendelse i neste reaksjon uten ytterligere rensing.
c. Fremstilling av Boc-L-MeLeu-D-Lac-L-MeLeu-D-PhLac-L-MeLeu-D-Lac-OBn
På en lignende måte som fremgangsmåte a) i eksempel 4 ble 1,15 g (1,97 mmol) H-L-MeLeu-D-PhLac-L-MeLeu-D-Lac-OBn syntetisert i fremgangsmåte b) i eksempel 4 og 720 mg (1,97 mmol) Boc-L-MeLeu-D-Lac-OH syntetisert i fremgangsmåte a) i eksempel 3 kondensert med hverandre av amidbindingen, hvorved 1,30 g av tittelforbindelsen ble oppnådd (utbytte: 75 %). Forbindelsen ble tilført for anvendelse i neste reaksjon uten ytterligere rensing.
d. Fremstilling av H-L-MeLeu-D-Lac-L-MeLeu-D-PhLac-L-MeLeu-D-Lac-OBn
På lignende måte som fremgangsmåte e) i eksempel 3 ble 1,30 g (1,47 mmol) av den beskyttede forbindelsen oppnådd ovenfor i fremgangsmåte c) behandlet for fjerning av Boe, hvorved 1,28 g av tittelforbindelsen ble oppnådd. Forbindelsen ble tilført for anvendelse i neste reaksjon uten ytterligere rensing.
e. Fremstilling av Boc-L-MeLeu-D-LEUA-L-MeLeu-D-Lac-L-MeLeu-D-PhLac-L-MeLeu-D-Lac-OBn
På lignende måte som fremgangsmåte a) i eksempel 4 ble 1,28 g (1,47 mmol) av råproduktet H-L-MeLeu-D-Lac L-MeLeu-D-PhLac-L-MeLeu-D-Lac-OBn fremstilt ovenfor i fremgangsmåte d) i eksempel 4 og 590 mg (1,64 mmol) Boc-L-MeLeu-D-LEUA-OH fremstilt som fremgangsmåte b) i eksempel 3 kondensert med hverandre, hvorved 1,2 g av tittelforbindelsen ble oppnådd (utbytte: 73 %). Forbindelsen ble til-ført for anvendelse i neste reaksjon uten ytterligere rensing.
f. Fremstilling av cyklo-(-L-MeLeu-D-Lac-L-MeLeu-D-PhLac-L-MeLeu-D-Lac-L-MeLeu-D-LEUA-)
På lignende måte som fremgangsmåte g) i eksempel 3 ble 1,2 g (1,07 mmol) av forbindelsen fremstilt i fremgangsmåte e) ifølge eksempel 4 utsatt for avspaltning og ringlukningsreaksjon, hvorved 433 mg av tittelforbindelsen ble oppnådd (utbytte: 44 %).
[ajD2<1>: -66,2° (c, = 0,15, metanol)
FAB-MS m/s: 915 (M<+>)
<!>h NMR (CD3OD) 8: 0,81 og 0,85 (hver d, 6H, J = 6,4 Hz), 0,86 og 0,95 (hver d, 6H, J = 6,6 Hz), 0,89 og 0,98 (hver d, 6H, J = 6,8 Hz), 0,91 og 0,98 (hver d, 6H, J = 6,8 Hz), 1,01 og 1,07 (hver d, 6H, J = 6,6 Hz), 0,99 (d, 3H, J = 6,8 Hz), 1,36-1,65 (m, 6H), 1,44 (d, 3H, J = 6,8 Hz), 1,45 (d, 3H, J = 6,8 Hz), 1,67-1,99 (m, 8H), 2,85 (s, 3H), 2,96 (s, 3H), 3,07 (s, 2H), 3,16 (s, 3H), 4,78 (dd, 1H, J = 4,3 og 11,1 Hz), 5,19 (q, 1H, J = 6,8 Hz), 5,29 (dd, 1H, J = 5,6 og 10,4 Hz), 5,44 (dd, 1H, J = 5,4 og 11,1 Hz), 5,48 (dd, 1H, J = 5,8 og 10,0 Hz), 5,58 (q, 1H, J = 6,8 Hz), 5,64 (q, 1H, J = 6,8 Hz), 5,69 (q, 1H, J = 6,8 Hz), 7,23-7,34 (5H, m).
Eksempel 5
Fremstilling av cyklo-(-L-MeLeu-D-Lac-L-MeLeu-D-PhLac-L-MeLeu-D-Lac-L-MeLeu-D-TYRA(OMe) (kode: PF1022-005)
I 3 ml THF ble 99,2 mg (0,103 mmol) PF1022E forbindelsen, som også kan uttrykkes som "cyldo-(-L-MeLeu-D-Lac-L-MeLeu-D-PhLac-L-MeLeu-D-Lac-L-MeLeu-D-TYRA)", løst opp, etterfulgt av isavkjøling. Under en nitrogenstrøm ble den resulterende oppløsningen tilsatt med 0,02 ml (0,32 mmol) metyliodid og 9 mg (60 % i olje, 0,23 ) natriumhydrid ble tilsatt, etterfulgt av omsetning i 40 minutter (for O-metylering). Den oppnådde reaksjonsblandingen ble tilsatt med 20 ml etylacetat, etterfulgt av vasking med 10 ml av en mettet vandig oppløsning av natriumklorid og tørking over magnesiumsulat. Etter fjerning av oppløsningsmidlet fra opp-løsningen ble den oppnådde resten utsatt for preparativ TLC (kloroform: etylacetat = 3:1) for isolering og rensing, hvorved 88,4 mg av tittelforbindelsen ble oppnådd (utbytte: 88 %).
[a]D21: -104° (c = 0,13, metanol)
smp: 103-105°C (omkrystallisert fra MeOH-H20-AcOEt)
FAJ3-MS m/z: 979 (M+)
<J>H NMR (CD3OD) 8: 0,78-1,05 (hver d, 27H, J = 6,4-7,0 Hz), 1,38 (d, 3H, J = 7,0 Hz), 1,3-1,5 (m, 4H), 1,5-1,9 (m, 8H), 2,81 (s, 3H), 2,88 (s, 3H), 2,90 (s, 3H), 2,99 (s, 3H), 3,08 (dd, 1H, J = 8,0 og 13,2 Hz), 3,09 (dd, 1H, J = 7,8 og 13,2 Hz), 3,17 (dd, 1H, J = 7,3 og 13,2 Hz), 3,18 (dd, 1H, J = 7,2 og 13,2 Hz), 3,30 (s, 3H), 4,78 (dd, 1H, J = 4,3 og 11,1 Hz), 5,19 (q, 1H, J = 6,8 Hz), 5,29 (dd, 1H, J = 5,6 og 10,4 Hz), 5,44 (dd, 1H, J = 5,4 og 11,1 Hz), 5,48 (dd, 1H, J = 5,8 og 10,0 Hz), 5,58 (q, 1H, J = 6,8 Hz), 5,64 (q, 1H, J = 6,8 Hz), 5,69 (q, 1H, J = 6,8 Hz), 6,80 (d, 2H, J = 8,3 Hz), 7,20 (d, 2H, J = 8,3 Hz), 7,24-7,34 (5H, m).
Eksempel 6
Fremstilling av PF1022E forbindelse, dvs PF1022E som også kan uttrykkes som "cyldo-(-L-MeJ^u-D-Lac-L-MeI^u-D-T^
a. Boc-L-MeLeu-D-Lac-L-MeLeu-D-TYRA(OBn)-L-MeLeu-D-Lac-L-MeLeu-D-PhLac-OBn
I 14 ml THF ble det oppløst 1,40 g Boc-L-MeLeu-D-Lac-L-MeLeu-D-TYRA(OBn)-OH, 1,66 g H-L-MeLeu-D-Lac-L-MeLeu-D-PhLac-OBn og 247 mg HOBt.
Den resulterende oppløsningen ble tilsatt 410 mg DCC under isavkjøling, etterfulgt av omrøring over natt ved romtemperatur (for kondensasjonsreaksjon). Etter at presipitatet oppnådd på denne måten ble fjernet filtrering ble filtratet konsentrert. Resten ble tilsatt med 50 ml etylacetat. Den resulterende blandingen ble suksessivt vasket med en 5 % oppløsning av natriumsulfitt, en mettet vandig oppløsning av natriumbikarbonat og en mettet vandig oppløsning av natriumklorid og deretter tørket over vannfri magnesiumsulfat etterfulgt av filtrering. Filtratet ble konsentrert og resten ble separert og renset ved kromatografi på en silikagelkolonne (toluen: etylacetat = 5:1), hvorved 1,16 g av tittelforbindelsen ble oppnådd som en fargeløs olje (utbytte: 46,0 %).
b. H-L-MeLeu-D-Lac-L-MeLeu-D-TYRA(OBn)-L-MeLeu-D-Lac-L-MeLeu-D-PhLac-OBn
I 11 ml diklormetan ble det oppløst Boc-L-MeLeu-D-Lac-L-MeLeu-D-TYRA(OBn)-L-MeLeu-D-Lac-L-MeLeu-D-PhLac-OBn (1,10 g). Den resulterende oppløsningen ble tilført 4 ml TF A under isavkjøling, etterfulgt av omrøring ved romtemperatur i 1 time. Reaksjonsblandingen oppnådd ble tilsatt små mengder toluen og ble deretter konsentrert. Etylacetat (50 ml) ble tilsatt til konsentratet, etterfulgt av sukssesiv vasking med en mettet vandig oppløsning av natriumbikarbonat og vann og tørking over vannfri magnesiumsulfat. Etter filtrering ble filtratet konsentrert og resten ble tilført for anvendelse i neste reaksjon.
c. H-L-Mel^u-D-Lac-L-Mel^u-D-TYRA-L-Mel^u-D-Lac-L-MeLeu-D-PhLac-OH
I en blandet oppløsning av 10 ml metanol og 1 ml vann ble H-L-MeLeu-D-Lac-L-MeLeu-D-TYRA(OBn)-L-MeLeu-D-lac-L-MeLeu-D-PhLac-OBn oppløst. I en nitro-genatomsfære ble den resulterende oppløsningen tilsatt med 100 mg 10 % PD-C etterfulgt av katalytisk hydrogenering med hydrogen ved romtemperatur under normalt trykk i 5 timer. Katalysatoren ble filtrert av ved anvendelse av Hyflo Super Cel og filtratet ble konsentrert. Resten ble tilført for anvendelse i neste reaksjon. d. Cyklo-(-L-MeLeu-D-Lac-L-MeLeu-D-TYRA-L-MeLeu-D-Lac-L-MeLeu-D-PhLac) (dvs PF1022E forbindelsen).
I en flytende blanding av 800 ml THF og 240 ml DMF ble 477 mg litiumklorid, 840 mg kaliumklorid, 610 mg natriumklorid, 1,75 g cesiumklorid og 4,1 g EDCI HC1 tilsatt. Til den resulterende blandingen ble en oppløsning av 1,01 g H-L-MeLeu-D-Lac-L-MeLeu-D-TYRA-L-MeLeu-D-Lac-L-MeLeu-D-PhLac-OH, 720 mg HOBt og 0,24 ml NMM i 120 ml THF tilsatt, etterfulgt av omrøring over natt. Etter at oppløsnings-midlene var destillert av ble 450 ml etylacetat og 220 ml vann tilsatt til den resulterende resten. Den resulterende blandingen ble separert i to lag. Det organiske laget oppnådd på denne måten ble vasket suksessivt med en mettet vandig oppløsning av natriumbikarbonat, en 5 % oppløsning av natriumsulfitt og en mettet vandig oppløs-ning av natirumklorid, etterfulgt av tørking under vannfri magnesiumsulfat og filtrering av den organiske oppløsningen.
Filtratet ble deretter konsentrert. Resten oppnådd på denne måten ble renset ved kromatografi på en silikagelkolonne (kloroform:etylacetat = 3:1) og deretter ved revers fasekromatografi på en silysert silikagelkolonne (CH3CN-H2O = 85:15), hvorved 324 mg av tittelforbindelsen ble oppnådd som hvitt pulver (utbytte: 33 %).
Md21: -100° (c = 1,0, MeOH)
<i>H NMR(CD3OD): 8: 0,78-1,00 (m, 24H, 8-Me(MeLeu)), 1,04, 1,05, 1,38, 1,39 (hver d, totalt 6H, (3-Me(Lac)), 1,28-1,90 (m, 12H, p<->CH2, t-H(MeLeu)), 2,82-3,00 (m, 12H, NMe), 2,93-3,20 (m, 4H, p-CH2, (TYRA, PhLac)), 4,76-5,81 (m, 8H, a-H), hver 2H, J = 8,4, aromatisk (TYRA)), 7,24
MS (EI): M<+> = 964.
Eksempel 7
Fremstilling av cyklo-(L-MeLeu-D-Lac-L-MeLeu-D-TYRA(OBn))2 (kode: PF1022-210)
a. Syntese av O-benzyloksy-L-fenylmelkesyre (H-L-TYRA(OBn)-OH, dvs
<^^-CH20-^^-CH2-CH (OH) COOH)
I en blandet oppløsning av 75 ml 1,4-dioksan og 50 ml vann, ble 5,46 g O-benzyl-L-tyrosin (H-L-TYR(OBn)-OH) suspendert. Til den resulterende suspensjonen ble 25 ml 2,4 N saltsyre tilsatt under isavkjøling for å oppløse sistnevnte i førstnevnte. Den resulterende oppløsningen ble tilsatt med en vandig oppløsning av 4,14 g natriumnitritt og deretter med 75 ml 1,4-dioksan, 15 ml vann og 10 ml 2 N vandig saltsyre, etterfulgt av omsetning i 30 minutter (for diazotisering av aminogruppen til tyrosin). Reaksjonsblandingen som ble oppnådd ble tilført en vandig oppløsning av 1,38 g natriumnitritt og 10 ml 2 N saltsyre etterfulgt av omsetning ved romtemperatur i 2 timer (for omdannelse av diazogruppen til hydroksylgruppe).
Den resulterende reaksjonsblandingen ble tilsatt 200 ml etylacetat. Den resulterende blandingen ble separert i to lag. Vannlaget oppnådd på denne måten ble ekstrahert på ny med etylacetat. Etylacetatekstraktet ble kombinert med det organiske laget, etterfulgt av vasking to ganger med 50 ml porsjoner av en 30 % vandig oppløsning av natriumklorid, tørking over vannfri magnesiumsulfat og deretter konsentrasjon under redusert trykk, hvorved 1,33 g av tittelforbindelsen ble oppnådd (utbytte: 24,3 %).
<i>H NMR (DMSO-d6): 5 2,78 (ddd, 2H, J = 0,4, 0,8, 1,4, 4,4, p-CH2), 4,08 (q, 1H, J = 0,4, 0,8, a-H), 5,06 (s, 2H, CH2Ph), 7,01 (dx2, 4H, J = 0,8, C6H4), 7m41 (m, 5H, Ph).
b. Fremstilling av H-L-TYRA(OBn)-OK (kalium-O-benzyl-L-fenyllaktat)
I en blandet oppløsning av 5,5 ml metanol og 7,65 ml kloroform, ble 1,10 g H-L-TYRA(OBn)-OH oppløst under oppvarming, etterfulgt av tilsetning av en oppløsning (1 g/10 ml) kalium-2-etylheksanoat i etylacetat. Når et presipitat begynte å frem-komme ble 15 ml etylacetat ytterligere tilsatt til den resulterende oppløsningen etterfulgt av omrøring i 17 timer. Presipitatet oppnådd på denne måten ble samlet ved filtrering, etterfulgt av vasking med etylacetat og tørking under redusert trykk, hvorved 950 mg av tittelforbindelsen ble oppnådd (utbytte: 76,6 %).
c. H-L-TYRA(OBn)-0-All (allyl-O-benzyl-L-fenyllaktat)
I 15 ml DMF, 2,5 g H-L-TYRA(OBn)-OK og 0,34 natriumbikarbonat oppløst under isavkjøling. Til den resulterende oppløsningen ble 0,91 ml allyliodid tilsatt og ble omsatt ved samme temperatur i 12 timer. Reaksjonsblandingen ble tilsatt 75 ml etylacetat, etterfulgt av vasking en gang med 50 ml vann og to ganger med 50 ml porsjoner av en 30 % vandig oppløsning av natriumklorid, tørking over vannfri magnesiumsulfat og deretter konsentrering. Resten oppnådd på denne måten ble renset ved kromatografi på silikagelkolonne (toluen:etylacetat = 6:1) hvorved 2,15 g av tittelforbindelsen ble oppnådd (utbytte: 86,0 %).
<i>H NMR (CDC13): 5 = 3,00 (ddd, 2H, J = 0,5, 0,7, 1,4, 4,1, P-CH2), 4,443 (q, 1H, J = 0,4, 0,7, a-H), 4,64 (m, 2H, CH2 (allyl)), 5,03 (S, 2H, CH2Oh), 5,32 (m, 2H, CH2 (allyl)), 5,90 (m, 1H, CH (allyl)), 7,02 (dx2, 4H, J = 0,9, C6H4), 7,37 (m, 5H, Ph).
d. Fremstilling av Boc-L-MeLeu-D-TYRA(OBn)-0-All
I 8 ml THF ble 1,71 g Boc-L-MeLeu-OH og 1,75 g trifenylfosfin løst opp. Den resulterende oppløsningen ble tilsatt dråpevis med en oppløsning av 2,08 g H-L-TYRA(OBn)-0-All og 1,09 ml DEAD i 4 ml THF under isavkjøling, etterfulgt av omsetning ved samme temperatur i 16 timer (for å danne kondensasjon via en esterbinding). Reaksjonsblandingen oppnådd ble konsentrert og resten ble renset ved kromatografi på en silikagelkolonne (toluen:etylacetat = 20:1), hvorved 3,51 g av tittelforbindelsen ble oppnådd (utbytte: 98,0 %).
<!>h NMR (CDCI3): 5 0,91 (sx2, 6H, 8-CH3 (Me-Leu)), 1,47 (sx2, 9H, CH3 (Boe)), 1,38-1,64 (m, 3H, p-CH2, y-H(MeLeu), 2,72 (d, 3H, J = 1,24, N-CH3), 3,10 (m, 2H, P-CH2 (TYRA)), 4,59 (m, 2H, CH2 (allyl)), 4,7-5,0 (m, 1H, a-H(MeLeu)), 5,03 (s, 2H, CH2Ph), 5,17-5,32 (m, 3H, a-H(TYRA), CH2 (allyl)), 5,83 (m, 1H, CH (allyl), 7,02 (dx2, 4H, J = 0,8, C6H4), 7,36 (m, 5H, pH).
e. Fremstilling av H-L-MeLeu-D-TYRA(OBn)-0-AU
I 15 ml TFA ble 3,49 g Boc-L-MeLeu-D-TYRA(OBn)-0-All løst opp, etterfulgt av omsetning ved 20°C i 20 minutter (for fjerning av Boe). Den resulterende reaksjons-oppløsningen ble konsentrert. Toluen ble tilsatt til konsentratet og TFA ble fjernet azeotrofisk. Resten ble løst opp i 50 ml etylacetat. Den resulterende oppløsningen ble suksessivt vasket med en 7 % vandig oppløsning av natriumbikarbonat, vann og en 30 % vandig oppløsning av natriumklorid, hver i en mengde på 50 ml, tørket over vannfri magnesiumsulfat og konsentrert under redusert trykk, hvorved 2,68 g av tittelforbindelsen ble oppnådd (94,4 %). Produktet oppnådd på denne måten ble anvendt i neste reaksjon.
f. Fremstilling av Boc-L-MeLeu-D-Lac-L-MeLeu-D-TYRA(OBn)-0-AU
I en blandet oppløsning av 20 ml THF og 2 ml pyridin ble 1,98 g H-L-MeLeu-D-TYRA(OBn)-0-Al og 2,47 g Bov-L-MeLeu-D-Lac-OH løst opp. Den resulterende oppløsningen ble tilsatt med 0,96 g HOBt og 1,13 g DCC under isavkjøling, etterfulgt av omrøring ved samme temperatur i 16,5 timer. Etter at presipitatet ble filtrert av ble filtratet konsentrert. Resten oppnådd på denne måten ble renset ved kromatografi på en silikagelkolonne (toluen:etylacetat = 6,1), hvorved 2,58 g av tittelforbindelsen ble oppnådd (utbytte: 77,4 %).
g. Fremstilling av H-L-MeLeu-D-Lac-L-MeLeu-D-TYRA(OBn)-0-All
I 6,5 ml metylenklorid ble 1,29 g Boc-L-MeLeu-D-Lac-L-MeLeu-D-TYRA(OBn)-0-All løst opp. TFA (6,45 ml) ble dråpevis tilsatt til den resulterende oppløsningen under isavkjøling, etterfulgt av omrøring i 20 minutter. Reaksjonsblandingen ble konsentrert under redusert trykk. Toluen ble tilsatt til konsentratet og TFA ble fjernet azeotrofisk. Resten ble løst opp i etylacetat. Den resulterende oppløsningen ble vasket suksessivt med en 7 % vandig oppløsning av natriumbikarbonat, vann og en 30 % vandig oppløsning av natriumklorid, tørket over vannfri magnesiumsulfat og deretter konsentrert, hvorved 1,05 g av tittelforbindelsen ble oppnådd (utbytte: 94,0 %). Produktet ble anvendt i neste reaksjon.
h. Fremstilling av Boc-L-MeLeu-D-Lac-L-MeLeu-D-TYPvA(OBn)-OH
I 6,5 ml metylenklorid ble 1,29 g Boc-L-MeLeu-D-Lac-L-MeLeu-D-TYRA(OBn)-0-All løst opp, etterfulgt av tilsetning av 44 mg trifenylfosfin. Til den resulterende opp-løsningen ble 8,7 mg tetrakis(trifenylfosfin)palladium tilsatt i en nitrogenatmosfære for å oppløse sistnevnte i førstnevnte. Den resulterende oppløsningen ble tilført 0,87 ml 2 N kalium-2-etylheksanoat etterfulgt av omrøring i 5 minutter. Reaksjonsblandingen ble konsentrert og resten løst opp i etylacetat. Den resulterende oppløsningen ble surgjort med saltsyre. Den surgjorte oppløsningen ble vasket suksessivt med vann og en 30 % vandig oppløsning av natriumklorid, tørket over vannfri natriumsulfat og deretter konsentrert, hvorved tittelforbindelsen ble oppnådd. Produktet oppnådd på denne måten ble tilført som den er for anvendelse i neste reaksjon.
i. Fremstilling av Boc-(L-MeLeu-D-Lac-L-MeLeu-D-TYRA(OBn))2-0-AU
I 16 ml tetrahydrofuran ble 1,51 g Boc-L-MeLeu-D-Lac-L-MeLeu-D-TYRA(OBn)-OH, 1,04 g H-L-MeLeu-D-Lac-L-MeLeu-D-TYR(OBn)-0-AU, 260 mg HOBt og 0,27 ml trietylamin løst opp. Den resulterende oppløsningen ble tilført 428 mg DCC under isavkjøling, etterfulgt av omrøring i 13 timer (for å kondensere). Presipitatet oppnådd ble filtrert av og filtratet ble deretter konsentrert. Resten ble løst opp i etylacetat. Den resulterende oppløsningen ble vasket suksessivt med 5 % kaliumbisulfat, en 7 % vandig oppløsning av natriumbikarbonat og en 20 % vandig oppløsning av natriumklorid, tørket over vannfri magnesiumsulfat og deretter konsentrert under redusert trykk. Resten ble renset ved kromatografi på en silikagelkolonne (toluen: etylacetat = 4:1), hvorved 950 mg av tittelforbindelsen ble oppnådd (utbytte: 44,4 <%>)<.>
j. Fremstilling av Boc-(L-MeLeu-D-Lac-L-MeLeu-D-TYRA(OBn))2-0-BH
I 4,75 ml metylenklorid ble 950 mg Boc-(L-MeLeu-D-Lac-L-Me Leu(D-TYRA-(OBn))2-0-AU løst opp. Den resulterende oppløsningen ble tilsatt 18 mg trifenylfosfin etterfulgt av tilsetning av 4 mg tetrakis(trifenylfosfin)palladium i en nitrogenatmosfære. Etter at det var oppløst fullstendig ble 0,36 ml 2 N kalium-2-etylheksanoat tilsatt til den resulterende oppløsningen etterfulgt av omrøring i 5 minutter.
Reaksjonsblandingen oppnådd ble surgjort med 2 N saltsyre etterfulgt av suksessiv vasking med vann og en 30 % vandig oppløsning av natriumklorid og tørking over vannfri natriumsulfat. Etter fjerning av vannfri natriumsulfat ved filtrering ble en opp-løsning av 196 mg difenyldeazometan i etylacetat tilsatt til det resulterende filtratet. Den resulterende blandingen ble konsentrert og resten ble renset ved kromatografi på en silikagelkolonne (benzen:etylacetat = 5:1), hvorved 1,08 g av tittelforbindelsen ble oppnådd (utbytte: 100 %).
k. Fremstilling av H-(L-MeLeu-D-Lac-L-MeLeu-D-TYRA(OBn))2-OH
I 5,4 ml metylenklorid ble 900 mg Boc-(L-MeLeu-D-Lac-L-MeLeu-D-TYRA-(OBn))2-0-BH løst opp. Den resulterende oppløsningen ble dråpevis tilsatt 2,7 ml TFA under isavkjøling, etterfulgt av omsetning ved samme temperatur i 1,5 timer. Reaksjonsblandingen ble konsentrert under redusert trykk. Toluen ble tilsatt til konsentratet og TFA ble fjernet azeotrofisk hvorved 1,12 g av tittelforbindelsen ble oppnådd. Forbindelsen oppnådd på denne måten ble anvendt som den er i neste reaksjon.
1. Fremstilling av cyklo-(L-MeLeu-D-Lac-L-MeLeu-D-TYRA(OBn))2 (kode: PF1022-201)
Til en blanding av 263 mg litiumklorid ble 362 mg natriumklorid, 463 mg kaliumklorid, 1,04 g cesiumklorid, 1,19 g EDCI HC1, 650 ml THF og 190 ml DMF tilsatt en oppløsning av 734 mg H-(L-MeLeu-D-Lac-L-MeLeu-D-TYRA(OBn))2-OH, 419 mg HOBt og 0,2 ml NMM i 100 ml THF. Den resulterende blandingen ble omrørt ved romtemperatur i 36 timer.
Reaksjonsblandingen ble konsentrert. Resten ble deretter løst opp i 200 ml etylacetat. Den resulterende oppløsningen ble suksessivt vasket med vann, en 7 % vandig opp-løsning av natriumbikarbonat, en 5 % vandig oppløsning av kaliumhydrogensulfat og en 30 % vandig oppløsning av natriumklorid, hver i 200 ml porsjoner, tørket over vannfri natriumsulfat og deretter konsentrert under redusert trykk. Resten oppnådd på denne måten ble renset ved kromatografi på silikagelkolonne (kloroform:etylacetat = 3:1), hvorved 436 mg av tittelforbindelsen ble oppnådd (utbytte: 60,5 %).
[a]D2<0>: -84,5° (c = 1,0, metanol)
<!>H NMR (CD3OD) 5: 0,82-1,05 (m, 27H, 5-CH3 (MeLeu), p<->CH3(Lac)), 1,38 (d, 3H, J = 7,0, p-CH3(Lac)), 1,40-1,90 (m, 12H, p-CH2, y-H(MeLeu)), 2,82, 2,86, 2,91, 2,99 (hver s, 12H, N-CH3), 2,90-3,20 (m, 4H, p-CH2(TYRA)), 5,05 (s, 4H, CH2Ph), 4,70-5,82 (m, 8H, a-H(MeLeu-TYRA-Lac)), 7,08 (dx2, 8H, J = 0,9, C6H4), 7,35 (m, 10H, Ph).
Eksempel 8
Fremstilling av cyklo-(L-MeLeu-D-lac-L-MeLeu-D-TYRA)2 (kode: PF1022-202)
I 3 ml metanol ble 271 mg cyklo-(L-MeLeu-D-Lac-L-MeLeu-D-TYRA)2 (kode: PF1022-202)
I 3 ml metanol ble 271 mg cyklo-(L-MeLeu-D-Lac-L-MeLeu-D-TYRA(OBn»2 løst opp. Til den resulterende oppløsningen ble 27 mg 10 % Pd/C tilsatt for å utføre katalytisk hydrogenering. Omtrent 30 minutter etter initiering av den katalytiske hydrogeneringen fremkom et hvitt presipitat. Presipitatet dannet på denne måten ble løst opp i 0,75 ml THF og en liten mengde eddiksyre ble tilsatt. Den resulterende oppløsningen ble på ny utsatt for hydrogenering i 22 timer. Reaksjonsblandingen ble tilsatt 27 mg 10 % Pd/C og hydrogeneringen ble fortsatt i ytterligere 30 timer. Etter fjerning av katalysatoren ved filtrering ble filtratet konsentrert under redusert trykk. Resten ble renset ved kromatografi på en silikagelkolonne (kloroform:etylacetat = 2:1 -> 1:1), hvorved 142 mg av tittelforbindelsen ble oppnådd som hvitt pulver (utbytte: 63,0 %).
[a]D20: -110° (c = 0,1, metanol)
<*>H NMR (CD3OD): 8 = 0,83-1,06 (m, 27H, 6-CH3(MeLeu), p<->CH3(Lac)), 1,38 (d, 3H, (d, 3H, J = 0,6, p-CH3(Lac)), 1,39-1,95 (m, 12H, p-CH2), y-H(MeLeu)), 2,81, 2,86, 2,92, 2,99 (hver s, 12H, N-CH3), 2,70-3,15 (m, 4H, p<->CH2(TYRA)), 4,80-5,80 (m, 8H, ct-H(MeLeu, TYRA, Lac)), 6,91 (dx2, 8H, J = 0,9, C6H4).
Eksempel 9
Fremstilling av cyklo-(L-MeLeu-D-VALA-L-MeLeu-D-PhLac)2 (kode: PF1022-203)
a. L-2-hydroksyisovalerinsyre
Til en flytende blanding av 170 ml vann, 170 ml eddiksyre og 40 ml 1,4-dioksan ble det tilsatt 23,4 g (0,2 mol) L-valin etterfulgt av oppvarming til 40°C for å oppløse valin i nevnte væske. Til den resulterende oppløsningen ble det dråpevis tilsatt en oppløsning av 41,4 g natriumnitritt i 50 ml. vann. Den resulterende blandingen ble omrørt og omsatt ved romtemperatur i 3 timer. Under isavkjøling ble den oppnådde reaksjonsblandingen tilsatt til den flytende blandingen av 300 ml av en mettet vandig oppløsning av natriumklorid og 750 ml etylacetat. Den resulternede blandingen ble separert i to lag. Vannlaget oppnådd på denne måten ble ekstrahert fire ganger med 100 ml porsjoner etylacetat. De kombinerte organiske lagene ble tørket over vannfri magnesiumsulfat. Magnesiumsulfat ble filtrert av og filtratet konsentrert under redusert trykk hvorved tittelforbindelsen ble oppnådd.
b. Difenylmetyl-L-2-hydroksyisovalerat (H-L-VALA-O-BH)
Etylacetat (300 ml) ble tilsatt til forbindelsen oppnådd i fremgangsmåte a) for å opp-løse sistnevnte i førstnevnte. Til den resulterende oppløsningen ble en oppløsning av difenyldiazometan i etylacetat (38,8 g/400 ml) tilsatt dråpevis etterfulgt av omrøring over natt ved romtemperatur. Eddiksyresyre (30 ml) ble tilsatt til reaksjonsblandingen etterfulgt av vasking tre ganger med 300 ml porsjoner av en mettet vandig oppløsning av natriumbikarbonat. Det organiske laget ble tørket over vannfri magnesiumsulfat etterfulgt av filtrering. Filtratet ble konsentrert under redusert trykk og resten oppnådd på denne måten ble deretter renset ved kromatografi på en silikagelkolonne (toluen:etylacetat = 20:1), hvorved 28,3 g av tittelforbindelsen ble oppnådd som en olje (utbytte: 49,7 %).
lH-NMR(CT>30D): 5 = 0,76 (d, 3H, J = 7,0, Me), 1,02 (d, 3H, J = 7,0, Me), 2,67 (d, J ? 6,2, OH), 6,96 (s, 1H, CHPh2), 7,25-7,40 (m, 10H, Ph)
c. Difenylmetyl-L-2-(p-tosyloksy)isovalerat
1270 ml diklormetan ble 26,8 g (94 mmol) av forbindelsen oppnådd i forbindelse b) løst opp. Til den resulterende oppløsningen ble 57,3 g tosylklorid og 32,4 ml pyridin tilsatt, etterfulgt av omrøring over natt ved romtemperatur. Diklormetan og vann (hver 250 ml) ble tilsatt til reaksjonsblandingen. Den resulterende blandingen ble separert i to lag. Det organiske laget ble vasket suksessivt med en 2 % vandig opp-løsning av natriumbikarbonat, 200 ml vann og deretter tørket over vannfri magnesiumsulfat. Magnesiumsulfatet ble fjernet fra det organiske laget ved filtrering. Filtratet ble konsentrert under redusert trykk og resten ble deretter renset ved kromatografi på en silikagelkolonne (tolulen:etylacetat = 10:1), hvorved 29,5 g av tittelforbindelsen ble oppnådd som svakt gule krystaller (utbytte: 69,9 %).
<i>H NMR (CDC13): 8 = 2,37 (s, 3H, CH3C6H4S02), 6,79 (s, 1H, CHPh2), 7,18 (d, 2H, J = 8,4, CH3C6H4S02), 7,22-7,35 (m, 10H, Ph), 7,70 (d, 2H, J = 8,4, CH3C6H4S02).
d. Boc-L-MeLeu-D-VALA-OBH
I 20 ml DMSO ble 4,90 g (20 mmol) Boc-L-MeLeu-OH og 13,2 g av forbindelsen (tosylat) oppnådd ovenfor i fremgangsmåten c) løst opp under oppvarming ved 50°C, etterfulgt av gradvis tilsetning av 5,52 g av kaliumkarbonat. Den resulternede blandingen ble omrørt og omsatt ved 50°C i 4,5 timer (for forestring). Til reaksjonsblandingen ble det tilsatt etylacetat og vann (hver 50 ml). Den resulterende blandingen ble separert i to lag. Vannlaget oppnådd på denne måten ble på ny ekstrahert med 50 ml etylacetat. Kombinerte organiske lag (ekstraktene) ble vasket med en 10 % vandig oppløsning av natriumklorid og deretter tørket over vannfri magnesiumsulfat. Etter filtrering ble filtratet konsentrert og resten som ble oppnådd ble deretter renset ved kromatografi på en silikagelkolonne (kloroform:etylacetat = 50:1), hvorved 3,75 g av tittelforbindelsen ble oppnådd som svakt gule krystaller (utbytte: 36,6 %).
[a]D: -57,1 (c = 0,15, CHC13)
<i>H NMR (CDCI3): 8 = 1,46 (s, 9H, t-Bu), 2,72 (d, 3H, NMe), 6,91 (s, 1H, CHPh2), 7,26-7,34 (m, 10H, Ph)
e. Boc-L-MeLeu-D-VALA-OH
I en flytende blanding av 30 ml metanol og 3 ml vann ble 3,0 g (5,86 mmol) av forbindelsen oppnådd i fremgangsmåte d) løst opp. Den resulterende oppløsningen ble tilsatt med 300 mg 10 % Pd-C i en nitrogenatmosfære etterfulgt av katalytisk hydrogenering med hydrogengass ved romtemperatur under en atm i 5 timer (for fjerning av benzhydrylgruppen BH). Katalysatoren ble filtrert ut ved hjelp av Hgflo Super Cel og filtratet ble konsentrert. Konsentratet ble tilført som det var i neste reaksjon.
f. H-L-MeLeu-D-PhLac-OBn
I 5 ml diklormetan ble 4,51 g (9,33 mmol) Boc-L-meLeu-D-PhLac-OBn løst opp. Den resulternede oppløsningen ble tilført 4 ml TFA under isavkjøling, etterfulgt av omrøring ved romtemperatur i 3 timer. Reaksjonsblandingen ble deretter tilsatt med en liten mengde toluen og konsentrert. Etylacetat (75 ml) ble deretter tilsatt til konsentratet. Den resulterende blandingen ble vasket med en mettet vandig oppløsning av natriumbikarbonat og vann, tørket over vannfri magnesiumsulfat og deretter filtrert. Filtratet ble konsentrert og tilført som det var i neste reaksjon.
g. Boc-L-Mel^u-D-VALA-L-MeLeu-D-PhLac-OBn
Til en flytende blanding av 30 ml THF og 3 ml pyridin ble 2,8 g Boc-L-MeLeu-D-VALA-OH, 2,47 g H-L-MeLeu-D-PhLac-OBn og 950 g HOBt løst opp. Den resulterende oppløsningen ble tilsatt med 1,452 g DCC under isavkjøling etterfulgt av om-røring over natt ved romtemperautr. Presipitatet ble fjernet fra reaksjonsblandingen ved filtrering og filtratet ble konsentrert. Etyacetat (280 ml) ble deretter tilsatt til resten. Den resulterende blandingen ble vasket suksessivt med 140 ml av en 5 % opp-løsning av natriumsulfitt, 140 ml av en mettet vandig oppløsning av natriumbikarbonat og 140 ml av en mettet vandig oppløsning av natriumklorid, tørket over vannfri magnesiumsulfat og deretter filtrert. Filtratet ble konsentrert. Konsentratet som ble oppnådd ble deretter renset ved kromatografi på en silikagelkolonne (toluen -> toluen:etylacetat = 10:1), hvorved 3,20 g av tittelforbindelsen ble oppnådd som en farveløs olje (utbytte: 74,2 %).
[a]D: -38,5° (c = 0,5, CHCI3)
<i>H NMR (CDCI3): 5 = 0,82-1,08 (m, 18H, 5-Me(MeLeu), y-Me(VALA)), 1,43, 1,45 (hver s, 9H, t-Bu), 2,85, 2,86 (hver s, hver 3H, NMe), 7,16-7,36 (m, 10H, Ph)
h. H-L-MeLeu-D-VALA-L-MeLeu-D-PhLac-OBn
I 2 ml diklormetan ble 1,1 g (1,74 mmol) Boc-L-MeLeu-D-VALA-L-MeLeu-D-PhLac-OBn løst opp. Den resulterende oppløsningen ble tilsatt 2 ml TFA under isavkjøling etterfulgt av omrøring ved romtemperatur i 1,5 timer. Reaksjonsblandingen ble tilsatt med en liten mengde toluen og konsentrert. Etylacetat (50 ml) ble deretter tilsatt til konsentratet. Den resulterende balndingen ble vasket med en mettet vandig oppløsning av natriumbikarbonat og vann, tørket over vannfri magneisum-sulfat og deretter filtrert. Filtratet ble konsentrert. Konsentratet inneholdende tittelforbindelsen ble anvendt i neste reaksjon.
i. Boc-L-MeLeu-D-VALA-L-MeLeu-D-PhLac-OH
I en flytende blanding av 10 ml metanol og 1 ml vann ble 1,1 g (1,74 mmol) Boc-L-meLeu-D-VALA-L-MeLeu-D-PhLac-OBn løst opp. Den resulterende oppløsningen ble tilsatt 110 mg 10 % Pd-C i en nitrogenatmosfære etterfulgt av katalytisk hydrogenering med hydrogengass ved romtemperatur under normalt trykk i 2 timer. Katalysatoren ble fjernet ved filtrering ved hjelp av Hyflo Super Cel og filtratet ble konsentrert. Resten ble anvendt i neste reaksjon.
j. Boc-(L-MeI^u-D-VALA-L-MeI^u-D-PhLac)2-OBn
110 ml THF ble 990 mg L-Boc-MeLeu-D-VALA-L-MeLeu-D-PhLac-OH, 9,87 mg H-L-Mel^u-D-VALA-L-Mel^u-D-PhLac-OBn og 282 mg HOBt løst opp. Den resulterende oppløsningen ble tilsatt 431 mg DCC under isavkjøling etterfulgt av omrøring over natt ved romtemperatur (for kondensasjonsreaksjon). Presipitatet ble filtrert av og filtratet ble konsentrert. Etylacetat (30 ml) ble tilsatt til konsentratet. Den resulterende blandingen ble vasket suksessivt med en 5 % oppløsning av natriumsulfitt, en mettet vandig oppløsning av natriumbikarbonat og en mettet vandig opp-løsning av natriumklorid, tørket over vannfri magnesiumsulfat og deretter filtrert. Filtratet ble konsentrert. Resten oppnådd på denne måten ble deretter renset ved kromatografi på en silikagelkolonne (toluemetylacetat = 5,1), hvorved 1,38 g av tittelforbindelsen ble oppnådd (utbytte: 67 %).
[a]D: -63,9° (c = 0,1, CHC13)
k. H-(L-MeLeu-D-VALA-L-MeLeu-D-PhLac)20Bn
14 ml diklormetan ble 1,20 g (1,02 mmol) Boc-(L-MeLeu-D-VALA-L-MeLeu-D-PhLac)2-OBn oppløst. Den resulterende oppløsningen ble tilsatt 2 ml TFA under isav-kjøling, etterfulgt av omrøring ved romtemperatur i 1 time. Reaksjonsblandingen ble tilsatt en liten mengde toluen og konsentrert. Etylacetat (30 ml) ble deretter tilsatt til konsentratet. Den resulterende blandingen ble vasket suksessivt med en mettet vandig oppløsning av natriumbikarbonat og vann, tørket over vannfri magnesiumsulfat og filtrert. Filtratet ble konsentrert og resten oppnådd på denne måten ble anvendt i neste reaksjon.
1. H-(L-MeLeu-D-VALA-L-MeLeu-D-PhLac)2-OH
I en flytende blanding av 10 ml metanol og 1 ml vann ble 1,15 g H-(L-MeLeu-D-VALA-L-MeLeu-D-PhLac)2-OBn oppløst, etterfulgt av tilsetning av 110 mg 10 % Pd-C i en nitrogenatmosfære. Den resulterende blandingen ble utsatt for katalytisk hydrogenering med hydrogen ved romtemperatur under normalt trykk i 2 timer. Katalysatoren ble fjernet ved filtrering ved hjelp av Hyflo Super Cel og filtratet konsentrert. Resten ble anvendt i neste reaksjon.
m. Cyklo-(L-MeI^u-D-VALA-L-MeLeu-D-PhLac)2 (kode: PF1022-203)
Til en flytende blanding av 680 ml THF og 200 ml DMF ble det tilsatt 390 mg litiumklorid, 685 mg natriumklorid, 537 mg kaliumklorid, 1,55 g cesiumklorid og 1,76 g EDCI HC1. Til den resulterende blandingen ble en oppløsning av 910 mg H-(L-MeLeu-D-V AL A-L-MeLeu-D-PhLac)2-OH, 620 mg HOBt og 0,2 ml NMM i 110 ml THF tilsatt, etterfulgt av omrøring over natt ved romtemperatur (for ringslutningsreaksjon).
Etter at oppløsningsmidlene var destillert av fra reaksjonsblandingen ble 230 ml etylacetat og 110 ml vann tilsatt til resten. Den resulterende blandingen ble separert i to lag. Det organiske laget oppnådd på denne måten ble vasket suksessivt med en mettet vandig oppløsning av natriumbikarbonat, en 5 % oppløsning av natriumsulfitt og en mettet vandig oppløsning av natriumklorid, tørket over vannfri magnesiumsulfat og deretter filtrert. Filtratet ble konsentrert. Resten oppnådd på denne måten ble renset ved kromatografi på en silikagelkolonne, hvorved 645 mg av tittelforbindelsen ble oppnådd som farveløst pulver (utbytte: 56,5 %)
[a]D: -71,6° (c = 0,2, MeOH)
<i>H-NMR (CDC13): 8 0,79-1,01 (m, 36H, 8-CH3) (MeLeu), y-CH3 (VALA)), 1,38 (d, 3H, J = 0,6, P-CH3) (Lac)), 1,53-2,05 (m, 12H, p-CH2, y-H (MeLeu), p-H (VALA)), 2,60, 2,79, 2,82, 2,90, 3,11 (hver s, 12H, N-CH2), 2,70-3,27 (m, 4H, p-CH2 (PhLac), 4,36-5,98 (m, 8H, a-H (MeLeu, VALA, PhLac)), 7,24-7,28 (m, 10H, Ph) MS (FD): M<+> = 1004.
Eksempel 10
Fremstilling av cyklo-(L-MeLeu-D-isoLEUA-L-MeLeu-D-PhLac)2 (kode: PF1022-205)
a. 2-hydroksy-3-metyl-L-pentanoisk syre (H-L-isoLEUA-OH, dvs CH3CH2CH(CH3)-CH(OH)COOH)
I en flytende blanding av 500 ml 1 N saltsyre og 500 ml 1,4 dioksan ble 25 g (0,2 mol) L-isoleucin løst opp under oppvarming ved 40°C, etterfulgt av avkjøling til romtemperatur. Den resulterende oppløsningen ble dråpevis tilsatt med en vandig oppløsning av natriumnitritt (39,5 g/50 ml) og ble omrørt ved romtemperatur i 5 timer. Den resulterende reaksjonsblandingen ble tilsatt til en is-avkjølt oppløsnings-blanding av 300 ml av en mettet vandig oppløsning av natriumklorid og 750 ml etylacetat. Den resulterende blandingen ble separert i to lag. Vannlaget ble ekstrahert fire ganger med 100 ml porsjoner etylacetat. Kombinerte organiske lag ble tørket over vannfri magnesiumsulfat. Etter at magnesiumsulfat var filtrert av ble filtratet konsentrert under redusert trykk. Resten ble anvendt i neste reaksjon.
b. Benzhydryl-2-hydroksy-3-metyl-L-pentanoat (H-L-isoLEUA-OBH)
I 300 ml etylacetat ble 2-hydroksy-3-metyl-L-pentanoisk syre oppnådd i ovennevnte fremgangsmåte løst opp. En oppløsning av difenyldiazometan i etylacetat (41,2 g/60 ml) ble dråpevis tilsatt til den resulterende oppløsningen etterfulgt av omrøring over natt ved romtemperatur. Den resulterende reaksjonsblandingen ble tilsatt 30 ml eddiksyre etterfulgt av vasking tre ganger med 300 ml porsjoner av en mettet vandig opp-løsning av natriumbikarbonat. Det organiske laget ble tørket over vannfri magnesiumsulfat og deretter filtrert. Filtratet ble konsentrert under redusert trykk. Resten oppnådd på denne måten ble renset ved å bli utsatt for kromatografi på en silikagelkolonne (toluen:etylacetat = 20:1) hvorved 9,97 g av tittelforbindelsen ble oppnådd som en olje (utbytte: 17 %).
<i>H-NMR (CDC13): 8 = 0,82 (t, 3H, J = 7,3, 8-Me), 0,97 (d, 3H, J = 6,6, y-Me), 1,19 (m, 2H, CH2), 1,90 (m, 1H, p-H), 2,70 (d, 1H, J = 5,90, OH), 4,2 (m, 1H, a-H), 7,0 (s, 1H, CHPh2), 7,26-7,40 (m, 10H, Ph)
c. Boc-L-MeLeu-D-isoLEUA-OBH
I 30 ml THF ble det oppløst 5,25 g trifenylfosfin og 5,97 g (20 mmol) H-L-isoLEUA-OBH. En oppløsning av 5,89 g Boc-L-MeLeu-OH og 3,78 ml DEAD i 10 ml THF ble tilsatt dråpevis til den resulterende oppløsningen etterfulgt av omrøring over natt ved romtemperatur. Presipitatet ble filtrert av og 300 ml etylacetat ble tilsatt til resten. Den resulterende blandingen ble vasket suksessivt med en mettet vandig opp-løsning av natriumbikarbonat, mettet vandig oppløsning av natriumklorid og vann, etterfulgt av tørking over vannfri magnesiumsulfat. Etter filtrering ble filtratet konsentrert. Resten ble renset ved kromatografi på en silikagelkolonne (toluen: etylacetat = 50:1 -» 10:1), hvorved 7,01 g av tittelforbindelsen ble oppnådd som en olje (utbytte: 66,7 %).
<i>H-NMR (CDCI3): 8 = 1,44 (s, 9H, t-Bu), 4,8, 5,1 (hver m, 1H, a-H (MeLeu)), 5,14 (t, 1H, a-H (isoLEUA)), 6,96 (s, 1H, CHPh2), 7,26-7,37 (m, 10H, Ph)
[ct]D = -13,8° (c = 0,55, CHCI3)
d. Boc-L-MeLeu-D-isoLEUA-OH
Til en flytende blanding av 50 ml metanol og 5 ml vann ble 5,26 g (10 mmol) Boc-L-MeLeu-D-isoLEUA-OBH løst opp. Den resulterende oppløsningen ble tilsatt 530 mg 10 % Pd-C i en nitrogenatmosfære etterfulgt av katalytisk hydrogenering med hydrogen ved romtemperatur under normalt trykk i 5 timer. Katalysatoren ble filtrert av ved hjelp av Hy flo Super Cel og filtratet ble konsentrert. Resten ble anvendt i neste reaksjon.
e. H-L-MeLeu-D-PhLac-OBn
I 2 ml diklormetan ble 2,90 g (6,0 mmol) Boc-L-MeLeu-D-PhLac-OBn løst opp. Den resulterende oppløsningen ble tilsatt 2 ml TFA under isavkjøling etterfulgt av omrør-ing ved romtemperatur i 3 timer. Reaksjonsblandingen ble tilsatt med en liten mengde toluen og konsentrert. Etylacetat (50 ml) ble tilsatt til konsentratet. Den resulterende blandingen ble vasket suksessivt med en mettet vandig oppløsning av natriumbikarbonat og vann, tørket over vannfri magnesiumsulfat og deretter filtrert. Filtratet ble konsentrert og resten som ble oppnådd ble anvendt i neste reaksjon.
f. Boc-L-MeLeu-D-isoLEUA-L-MeLeu-D-PhLac-OBn
I 30 ml THF ble 2,93 g Boc-L-MeLeu-D-isoLEUA-OH, 2,14 g H-L-MeLeu-D-PhLac-OBn og 904 mg HOBt løst opp. Den resulterende oppløsningen ble tilsatt 1,38 g DCC under isavkjøling etterfulgt av omrøring over natt ved rometmperatur (for kondensasjon). Etter at presipitatet var filtrert av fra reaksjonsblandingen ble filtratet konsentrert. Til resten ble det tilsatt 100 ml etylacetat. Den resulterende blandingen ble vasket suksessivt med 100 ml av en 5 % vandig oppløsning av natriumsulfitt, 100 ml av en mettet vandig oppløsning av natriumbikarbonat og 100 ml av en mettet vandig oppløsning av natriumklorid, tørket over vannfri magnesiumsulfat og filtrert. Filtratet ble deretter konsentrert. Resten som ble oppnådd ble renset ved utsetting for kromatografi på en silikagelkolonne (toluen:etylacetat = 10:1), hvorved 1,80 g av tittelforbindelsen ble oppnådd som en fargeløs olje (utbytte: 47,9 %).
g. H-L-Mel^u-D-isoLEUA-L-MeLeu-D-PhLac-OBn
I 20 ml diklormetan ble 875 mg (1,2 mmol) Boc-L-MeLeu-D-isoLEUA-L-meLeu-D-PhLac-OBn løst opp. Den resulterende oppløsningen ble tilsatt 2 ml TFA under isav-kjøling etterfulgt av omrøring ved romtemperatur i 1,5 timer. Reaksjonsblandingen ble tilsatt en liten mengde toluen og konsentrert. Etylacetat (30 ml) ble tilsatt til konsentratet. Den resulterende blandingen ble suksessivt vasket med en mettet vandig oppløsning av natriumbikarbonat og vann, tørket over vannfri magnesiumsulfat og deretter filtrert. Filtratet ble konsentrert og resten som ble oppnådd ble anvendt i neste reaksjon.
h. Boc-L-meLeu-D-isoLEUA-L-MeLeu-D-PhLac-OH
I en flytende blanding av 10 ml metanol og 1 ml vann ble 875 mg (1,2 mmol) Boc-L-MeLeu-D-isoLEUA-L-MeLeu-D-PhLac-OBn løst opp. Den resulterende oppløsningen ble tilført 85 mg 10 % Pd/C under en nitrogenatmosfære etterfulgt av katalytisk hydrogenering med hydrogen ved romtemperatur under normalt trykk i 3 timer. Katalysatoren ble filtrert av ved hjelp av Hyflo Super Cel og filtratet ble konsentrert. Resten som ble oppnådd ble anvendt i neste reaksjon.
i. Boc-(L-MeLeu-D-isoLEUA-L-MeLeu-L-D-PhLac)2-OBn
I 10 ml THF ble 668 mg Boc-L-MeLeu-D-isoLEUA-L-MeLeu-D-PhLac-OH, 732 mg H-L-MeLeu-D-isoLEUA-L-MeLeu-D-PhLac-OBn og 194 mg HOBt løst opp. Den resulterende oppløsningen ble tilsatt 297 mg DCC under isavkjøling etterfulgt av om-røring over natt ved romtemperatur (for kondensering). Etter at presipitatet var filtrert av ble filtratet konsentrert. Etylacetat (30 ml) ble tilsatt til resten. Den resulterende blandingen ble vasket suksessivt med en 5 % vandig oppløsning av natriumsulfitt, en mettet vandig oppløsning av natriumbikarbonat og en mettet vandig oppløsning av natriumklorid, tørket over vannfri magnesiumsulfat og filtrert. Filtratet ble konsentrert etterfulgt av rensing av den resulterende resten ved kromatografi på en silikagelkolonne (toluenretylacetat = 10:1 -» 5:1), hvorved 555 mg av tittelforbindelsen ble oppnådd som en fargeløs olje (utbytte: 37,3 %).
j. H-(L-MeI^u-D-isoLEUA-L-MeLeu-D-PhLac)20Bn
I 2 ml diklormetan ble 555 mg (0,45 mmol) Boc-(L-MeLeu-D-isoLEUA-L-MeLeu-D-PhLac)2-OBn oppløst. Den resulterende opplsøningen ble tilført 2 ml TFA under isavkjøling etterfulgt av omrøring ved romtemperatur i ltime. Reaksjonsblandingen ble tilført små mengder toluen og konsentrert. Etylacetat (30 ml) ble tilsatt til konsentratet. Den resulterende blandingen ble vasket suksessivt med en mettet vandig opp-løsning av natriumbikarbonat og vann, tørket over vannfri magnesiumsulfat og filtrert. Filtratet ble deretter konsentrert. Resten oppnådd ble anvendt som det er i neste reaksjon.
k. H-(L-MeLeu-D-isoLEUA-L-MeLeu-D-PhLac)20H
I en flytende blanding av 5 ml metanol og 0,5 ml vann ble 506 mg H-(L-MeLeu-D-isoLEUA-L-MeLeu-D-PhLac)2-OBn løst opp. Den resulterende oppløsningen ble tilført 50 mg 10 % Pd-C under en nitrogenatmosfære etterfulgt av katalytisk hydrogenering med hydrogen ved romtemperatur under normalt trykk i 2 timer. Katalysatoren ble filtrert av ved hjelp av Hyflo Super Cel og filtratet ble konsentert. Resten oppnådd ble anvendt som det er i neste reaksjon.
1. Cyklo-(L-MeLeu-D-isoLEUA-L-MeLeu-D-PhLac)2 (kode: PF1022-205)
Til en flytende blanding av 400 ml THF og 120 ml DMF ble det tilsatt 216 mg litiumklorid, 380 mg kaliumklorid, 298 mg natriumklorid, 859 mg cesiumklorid og 977 mg EDCI HC1. Den resulterende blandingen ble tilsatt ved romtemperatur til en opp-løsning som var blitt oppnådd på forhånd ved oppløsning av 529 mg H-(L-MeLeu-D-isoLEUA-L-MeLeu-D-PhLac)2-OH, 345 mg HOBt og 0,11 ml NMM i 60 ml THF, etterfulgt av omrøring over natt (for rmglukningsreaksjon). Etter at oppløsningsmidlet var destillert av ble resten tilført 230 ml etylacetat og 110 ml vann. Den resulterende blandingen ble separert i to lag. Det organiske laget oppnådd på denne måten ble vasket suksessivt med en mettet vandig oppløsning av natriumbikarbonat, en 5 % vandig oppløsning av natriumsulfitt og en mettet vandig oppløsning av natriumklorid, tørket over vannfri magnesiumsulfat og deretter filtrert. Filtratet ble konsentrert etterfulgt av rensing av resten ved kromatografi på en silikagelkolonne (kloroform: etylacetat = 10:1 -» 5:1) og deretter ved revers fasekromatografi på en silylisert silikagelkolonne (C^CN^O = 85:15 90:10). Den rensede produktet ble lyofili-sert hvorved 134 mg av tittelforbindelsen ble oppnådd som hvitt pulver (utbytte: 29,0 <%>)<.>
[a]D = -74° (c = 0,37, MeOH)
MS(FD): M<+> = 1032
Eksempel 11
Fremstilling av cyklo-(L-MeLeu-D-norLEUA-L-MeLeu-D-PhLac)2 (kode: PF1022-207)
a. 2-hydroksy-L-heksansyre (forkortet: H-L-norLEUA-OH, dvs CH3-(CH2)3-CH(OH)COOH)
I en flytende blandinge av 140 ml 1N-CH1 og 10 ml 1,4-dioksan ble 9,18 g (70 mmol) L-norleucin løst opp. En vandig oppløsning av natriumsulfitt (14,5 g/20 ml) ble tilsatt dråvis til den resulterende oppløsningen etterfulgt av omrøring ved romtemperatur i 3 timer. Etter isavkjøling ble den resulterende reaksjonsblandingen tilsatt til en flytende blanding av 200 ml av en mettet vandig oppløsning av natriumklorid og 400 ml etylacetat. Den resulterende blandingen ble separert i to lag. Vannlaget oppnådd på denne måten ble ekstrahert to ganger med 100 ml porsjoner av etylacetat. Kombinerte organiske lag ble tørket over vannfri magnesiumsulfat. Magnesiumsulfat ble filtrert av filtratet ble konsentrert under redusert trykk. Det oppnådde konsentratet ble anvendt som det er i neste reaksjon.
b. Benzhydryl-2-hydroksy-L-heksanoat (H-L-norLEUA-OBH)
I 90 ml etylacetat ble 2-hydroksy-L-heksansyre (H-L-norLEUA-OH) løst opp. En oppløsning (15,1 g/30 ml) difenyldiazometan i etylacetat ble tilsatt dråpevis til den
resulterende oppløsningen etterfulgt av omrøring over natt ved romtemperatur. Reaksjonsblandingen ble justert til pH 2 med 2N-HC1 etterfulgt av vasking tre ganger med 200 ml porsjoner av en mettet vandig oppløsning av natriumbikarbonat. Det organiske laget oppnådd på denne måten ble tørket over vannfri magnesiumsulfat og deretter filtrert. Filtratet ble deretter konsentrert under redusert trykk. Den oppnådde resten ble deretter renset ved utsetting for kromatografi på en silikagelkolonne (toluen: etylacetat = 20:1), hvorved 11,35 g av tittelforbindelsen ble oppnådd som svakt gule krystaller (utbytte: 54,7 %).
<i>H-NMR (CDC13): 8 = 0,85 (t, 3H, J = 7,0, Me), 1,28-1,83 (m, 6H, p-, y-, 8-CH2), 2,70 (d, 1H, J = 6,2, OH), 4,30 (dd, 1H, J = 2,9, 6,2, a-H), 6,95 (s, 1H, CHPh2), 7,25-7,38 (m, 10H, Ph)
c. Boc-L-MeLeu-D-norLEUA-OBH
I 30 ml THF ble 3,98 g trifenylfosfin og 5,37 g H-L-norLEUA-OBH løst opp. Til den resulterende oppløsningen ble en oppløsning av 3,68 g Boc-L-MeLeu-OH og 2,36 ml DEAD i 10 ml THF tilsatt dråpevis, etterfulgt av omrøring over natt ved romtemperatur. Fra reaksjonsoppløsningen oppnådd ved hjelp av denne kondenserings-reaksjonen ble presipitatet filtrert ut. Etylacetat (200 ml) ble tilsatt til filtratet. Den resulterende blandingen ble vasket suksessivt med en mettet vandig oppløsning av natriumbikarbonat, en mettet vandig oppløsning av natriumklorid og vann, tørket over vannfri magnesiumsulfat og filtrert. Filtratet ble konsentrert. Den oppnådde resten ble renset ved utsetting for kromatografi på en silikagelkolonne (toluenretylacetat = 20:1 -> 10:1), hvorved 7,5 g av tittelforbindelsen ble oppnådd som en olje (utbytte: 95 %).
<i>H-NMR (CDCI3): 5 = 0,82-0,94 (m, 9H, 5-Me(MeLeu), E-Me(norLEUA)), 1,44
(d, 9H, t-Bu), 2,71 (d, 3H, NMe), 4,74-4,78, 4,98-5,02 (hver m, 1H, oc-H(MeLeu)), 5,11 (t, 1H, a-H(norLEUA)), 6,96 (s, 1H, CHPh2), 7,26-7,37 (m, 10H, ph)
[<x]d = -9,4° (c = 0,55, CHCI3)
d. Boc-L-MeLeu-D-norLEUA-OH
I en flytende blanding av 50 ml metanol og 5 ml vann ble 5,00 g (9,52 mmol) Boc-L-MeLeu-D-norLEUA-OBH løs* opp. Til den resulterende oppløsningen ble 500 mg 10 % Pd-C tilsatt under nitrogenatmosfære, etterfulgt av katalytisk hydrogenering med hydrogen ved romtemperatur under normalt trykk i 2 timer. Katalysatoren ble filtrert av ved hjelp av Hyflo Super Cel og filtratet ble konsentrert. Resten oppnådd ble anvendt som den er i neste reaksjon.
d. H-L-MeLeu-D-PhLac-OBn
I 2 ml diklormetan ble 2,41 g (5,0 mmol) Boc-L-MeLeu-D-PhLac-OBn løst opp. Til den resulterende oppløsningen ble 2 ml TFA tilsatt under isavkjøling etterfulgt av om-røring ved romtemperatur i 1 time. Reaksjonsblandingen ble tilsatt med en liten mengde toluen og deretter konsentrert. Etylacetat (50 ml) ble tilsatt til konsentratet. Den resulterende blandingen ble vasket fortløpende med en mettet vandig oppløsning av natriumbikarbonat og vann, tørket over vannfri magnesiumsulfat og filtrert. Filtratet ble konsentrert og resten oppnådd ble anvendt som den er i neste reaksjon.
e. Boc-L-MeLeu-D-norLE U A-L-MeLeu-D-PhLac-OBn
I 30 ml THF ble 3,0 g Boc-L-MeLeu-D-norLEUA-OH, 2,19 g H-L-MeLeu-D-PhLac-OBn og 924 mg HOBt løst opp. Til den resulterende oppløsningen ble 1,41 DCC tilsatt under isavkjøling etterfulgt av omrøring over natt ved romtemperatur. Etter at presipitatet var filtrert av ble filtratet konsentrert. Resten ble tilsatt 100 ml etylacetat. Den resulterende blandingen ble vasket fortløpende med 100 ml av en 5 % vandig oppløsning av natriumsulfitt, 100 ml av en mettet vandig oppløsning av natriumbikarbonat og 100 ml av en mettet vandig oppløsning av natriumklorid, tørket over vannfri magnesiumsulfat og deretter filtrert. Filtratet ble konsentrert. Resten som ble oppnådd ble deretter renset ved å utsette den for kromatografi på en silikagelkolonne (toluen: etylacetat = 10:1 = , hvorved 2,17 g av tittelforbindelsen ble oppnådd som en fargeløs olje (utbytte: 52,5 %).
<i>H-NMR (CDC13): 6 = 0,83-0,98 (m, 15H, 5-Me(MeLeu), s-Me(norLEUA), 1,44 (d, t-Bu), 2,80 (m, 6H, NMe), 7,13-7,36 (m, 10H, Ph).
f. H-L-MeLeu-D-norLEUA-L-MeLeu-D-PhLac-OBn
I 2 ml diklormetan ble 985 mg (1,36 mmol) Boc-L-MeLeu-D-norLEUA-L-meLeu-D-PhLac-OBn løst opp. TFA (2 ml) ble tilsatt til den resulterende oppløsningen og isav-kjølt, etterfulgt av omrøring ved romtemperatur i 30 minutter. Reaksjonsblandingen ble tilsatt en liten mengde toluen og deretter konsentrert. Etylacetat (30 ml) ble tilsatt til konsentratet. Den resulterende blandingen ble vasket suksessivt med en mettet vandig oppløsning av natriumbikarbonat og vann, tørket over vannfri magnesiumsulfat og deretter filtrert. Filtratet ble konsentrert og resten som ble oppnådd ble anvendt som den er i neste reaksjon.
g. Boc-L-MeLeu-D-norLEUA-L-MeLeu-D-PhLac-OH
I en flytende blanding av 10 ml metanol og 1 ml vann ble 1,10 g (1,52 mmol) Boc-L-MeLeu-D-norLEUA-L-MeLeu-D-PhLac-OBn løst opp. Den resulterende oppløsnin-gen ble tilsatt med 110 mg 10 % Pd-C under en nitrogenatmosfære, etterfulgt av katalytisk hydrogenering med hydrogen ved romtemperatur under normalt trykk i 4 timer. Katalysatoren ble filtrert av ved hjelp av Hyflo Super Cel og filtratet ble konsentrert. Resten som ble oppnådd ble anvendt som den er i neste reaksjon.
h. Boc-(L-MeUu-D-norLEUA-L-MeI^u-D-PhLac)2-OBn
110 ml THF ble 892 mg Boc-L-Mel^u-D-norLEUA-L-MeLeu-D-PhLac-OH, 800 mg L-MeLeu-D-norLEUA-L-Mel^u-D-PhLac-OBn og 220 mg HOBt løst opp. Den resulterende oppløsningen ble tilsatt med 337 mg DCC under isavkjøling etterfulgt av omrøring over natt ved romtemperatur. Presipitatet som ble dannet ble filtrert av og filtratet ble konsentrert. Etylacetat (30 ml) ble tilsatt til resten. Den resulterende blandingen ble vasket suksessivt med en 5 % vandig oppløsning av natriumsulfitt, en mettet vandig oppløsning av natriumbikarbonat og en mettet vandig oppløsning av natriumklorid, tørket over vannfri magnesiumsulfat og deretter filtrert. Etter at filtratet var konsentrert ble resten renset ved å utsette den for kromatografi på en silikagelkolonne (toluen:etylacetat = 10:1 -> 5:1) hvorved 920 mg av tittelforbindelsen ble oppnådd som en farveløs olje (utbytte: 54,5 %).
[a]D = -50,5° (c = 0,3 CHC13)
i. H-(L-MeLeu-D-norLEUA-L-MeLeu-D-PhLac)2-OBn
I 2 ml diklormetan ble 920 mg (0,74 mmol) Boc-(L-MeLeu-D-norLEUA-L-MeLeu-D-PhLac)2-OBn løst opp. Den resulterende oppløsningen ble tilsatt med 1 ml TFA under isavkjøling etterfulgt av omrøring ved romtemperatur i 1 time. Reaksjonsblandingen ble tilsatt med en liten mengde toluen og deretter konsentrert, etterfulgt av tilsetning av 30 ml etylacetat. Den resulterende blandingen ble vasket suksessivt med en mettet vandig oppløsning av natriumbikarbonat og vann, tørket over vannfri magnesiumsulfat og filtrert. Filtratet ble konsentrert og resten ble som ble oppnådd ble anvendt i neste reaksjon.
j. H-(L-MeLeu-D-norLEU A-L-MeLeu-D-PhLac)2-OH
I en flytende blanding av 10 ml metanol og 1 ml vann ble 850 mg H-(L-MeLeu-D-norLEUA-L-MeLeu-D-PhLac)2-OBn løst opp. Den resulterende oppløsningen ble tilsatt med 10 % Pd-C under en nitrogenatmosfære etterfulgt av katalytisk hydrogenering med hydrogen ved romtemperatur under normalt trykk i 2 timer. Katalysatoren ble filtrert av ved hjelp av Hy flo Super Cel. Filtratet ble deretter konsentrert. Resten ble anvendt i neste reaksjon.
k. Cyklo-(L-MeI^u-D-norLEUA-L-MeLeu-D-PhLac)2 (kode: PF1022-207)
I en flytende blanding av 500 ml THF og 150 ml DMF ble det oppløst 270 mg litiumklorid, 4,7 g kaliumklorid, 370 mg natriumklorid, 1,06 g cesiumklorid og 1,2 EDO HC1. Blandingen oppnådd på denne måten ble tilsatt til en oppløsning av 633 mg (L-MeLeu-D-norLEUA-L-MeLeu-D-PhLac)2-OH, 426 mg HOBt og 0,13 ml NMM i 80 ml THF, etterfulgt av omrøring over natt ved romtemperatur. Etter at oppløsnings-midlene var destillert av ble resten tilsatt med 150 ml etylacetat og 80 ml vann. Den resulterende blandingen ble separert til to lag. Det organiske laget ble vasket suksessivt med en mettet vandig oppløsning av natriumbikarbonat, en 5 % vandig oppløs-ning av natriumsulfitt og en mettet vandig oppløsning av natriumklorid, tørket over vannfri magnesiumsulfat og deretter filtrert. Filtratet ble konsentrert. Resten oppnådd på denne måten ble renset ved kromatografi på en silikagelkolonne (kloroform: etylacetat = 10:1 —> 5:1), hvorved 274 mg av tittelforbindelsen ble oppnådd som et svakt gulhvitt pulver (utbytte: 35,8 %)
[a]D = -57,2° (c = 0,1, MeOH)
AH-NMR (CDCI3): 8 = 0,79-1,04 (m, 30H, 6-Me(MeLeu), s-Me(norLEUA)), 1,37-1,70 (m, (3-, Y-, 8-CH2(norLEUA), (3-CH2, y-H(MeLeu)), 2,72-3,20 (m, 12H, NMe), 4,88 (d, 4H, CH2-Ph), 5,09-5,92 (m, 8H, a-H), 7,27-7,31 (m, 10H, Ph) MS(FD): M<+> = 1032
Eksempel 12
Fremstilling av cyklo-(L-MeLeu-D-Lac-L-MeLeu-D-PhLac-L-MeLeu-D-norLEUA-L-meLeu-D-PhLac) (kode: PF1022-225)
a. Boc-L-mel^u-D-I^c-L-Mel^u-D-PhLac-L-MeLeu-D-norLEUA-L-MeLeu-D-PhLac-OBn
I 20 ml metylenklorid ble 1,02 g Boc-L-MeLeu-D-Lac-L-MeLeu-D-PhLac-OH og 0,98 g H-L-meLeu-D-norLEUA-L-MeLeu-D-PhLac-OBn løst opp. Den resulterende oppløsningen ble tilsatt 0,74 ml diisopropyletylamin og 0,52 g BOP-C1 under isav-kjøling, etterfulgt av omrøring ved samme temperatur i 16 timer (for kondensasjon). Reaksjonsblandingen ble tilsatt med 50 ml metylenklorid. Den resulterende blandingen ble deretter vasket suksessivt med en 5 % vandig oppløsning av kaliumbisulfat, en 7 % vandig oppløsning av natriumbikarbonat og en 20 % vandig oppløsning av natriumklorid, hver 50 ml, tørket over vannfri magnesiumsulfat og deretter konsentrert under redusert trykk. Resten ble renset ved kromatografi på en silikagelkolonne (toluen:etylacetat = 6:1 -» 5:1), hvorved 1,52 g av tittelforbindelsen ble oppnådd som et hvitt pulver (utbytte: 80,5 %)
[a]D2<0> : -58,1° (c = 0,21, CHC13)
<i>H-NMR (CDCI3): 5 = 0,70-1,00 (m, 27H, 5-Me(MeLeu), s-Me(norLEUA)), 1,44 (s, 9H, t-Bu), 1,15-1,85 (m, 21H, p-Me(Lac), p-CH2, y-H(MeLeu), p-CH2-y-CH2, 8
-CH2(norLEUA), 2,65-3,30 (m, 16H, N-Me, p-CH2(PhLac)), 4,30-5,50 (m, 8H, a-H(MeLeu), a-H(PhPac), a-H(Lac), a-H(norLEUA)), 5,12 (d, 2H, J = 0,89, CH2Ph), 7,10-7,40 (m, 15H, Ph)
b. H-L-Mel^u-D-Lac-L-MeLeu-D-PhLac-L-MeLeu-D-norLEUA-L-MeLeu-D-PhLac-OBn
I 6 ml metylenklorid ble 1,48 g Boc-L-MeLeu-D-Lac-L-meLeu-D-PhLac-L-MeLeu-D-norLEUA-L-MeLeu-D-PhLac-OBn løst opp. Til den resulterende oppløsningen ble 3 ml TFA dråpevis tilsatt under isavkjøling etterfulgt av omsetning ved romtemperatur i 30 minutter (for fjerning av Boe). Reaksjonsblandingen ble konsentrert, etterfulgt av tilsetning av toluen og azeotrofisk fjerning av TFA. Resten som ble oppnådd ble løst opp i 100 ml etylacetat. Den resulterende oppløsningen ble vasket suksessivt med en 7 % vandig oppløsning av natriumbikarbonat og en 20 % vandig oppløsning av natriumklorid, hver 100 ml, tørket over vannfri magnesiumsulfat og deretter konsentrert under redusert trykk, hvorved 1,37 g av tittelforbindelsen ble oppnådd som en fargeløs olje. Denne oljen ble tilveiebragt uten rensing for anvendelse i neste reaksjon.
<i>H-NMR (CDCI3): 8 = 0,82-0,99 (m, 27H, 8-Me(MeLeu), e-Me(norLEUA)), 1,20-1,81 (m, 21H, p-Me(Lac), p-CH2(MeLeu), y-H(MeLeu), p-CH2, y-CH2, 8-CH2 (norLEUA)), 2,73-3,35 (m, 16H, N-Me, p-CH2 (PhLac)), 5,06-5,55 (m, 8H, ot-H(MeLeu), a-H(PhLac), a-H(Lac), a-H (norLEUA)), 5,12 (d, 2H, J = 0,89, CH2Ph), 7,18-7,37 (m, 15H, Ph)
c. H-L-MeLeu-D-Pac-L-MeLeu-D-PhLac-L-MeLeu-D-norLEUA-L-MeLeu-D-PhLac-OH
I 26 ml metanol ble 1,32 g H-L-MeLeu-D-Lac-L-MeLeu-D-PhLac-L-MeLeu-D-norLEUA-L-MeLeu-D-PhLac-OBn løst opp. Til den resulterende oppløsningen ble 0,13 g 10 % palladiumkarbon og en dråpe eddiksyre tilsatt under en nitrogenatmosfære etterfulgt av katalytisk hydrogenering med hydrogen ved romtemperatur under normalt trykk i 1 time.
Katalysatoren ble filtrert ut og deretter ble filtratet konsentrert, hvorved 1,21 g av tittelforbindelsen ble oppnådd som hvitt pulver. Forbindelsen ble tilveiebragt uten rensing for anvendelse i neste reaksjon.
[a]D20 : -22,1° (c = 0,21, CHC13)
<i>H-NMR (CDCI3): 8 = 0,70-1,05 (m, 27H, S-Me(MeLeu), e-Me(norLEUA)), 1,15-1,85 (m, 21H, p-Me(Lac), p-CH2(MeLeu), y-H(MeLeu), p-CH2, y<->CH2, 8-CH2 (norLEUA), 2,40-3,15 (m, 16H, N-Me, p-CH2 (PhLac)), 5,05-5,70 (m, 8H, a-H(MeLeu), a-H(PhLac), a-H(Lac), a-H(norLEUA)), 7,25 (m, 10H, Ph)
d. Cyklo-(L-MeLeu-D-Lac-L-MeLeu-D-PhLac-L-MeLeu-D-norLEU A-L-MeLeu-D-PhLac (kode: PF1022-225)
1165 ml THF ble 1,18 g H-L-MeLeu-D-Lac-L-MeLeu-D-PhLac-L-MeLeu-D-norLEUA-L-MeLeu-D-PhLac-OH, 0,79 g HOBt og 0,51 ml NMM løst opp. Den resulterende oppløsningen ble tilsatt til en blanding av 0,50 g litiumklorid, 0,68 g natriumklorid, 0,87 g kaliumklorid, 1,97 g cesiumklorid, 2,24 g EDCI HC1, 1060 ml THF og 307 ml DMF, etterfulgt av omrøring ved romtemperatur i 16 timer (for ringlukningsreaksjon). Reaksjonsblandingen ble konsentrert og resten som ble oppnådd ble løst opp i 120 ml etylacetat. Den resulterende oppløsningen ble vasket suksessivt med en 7 % vandig oppløsning av natriumbikarbonat, en 5 % vandig oppløsning av kaliumbisulfat og en 20 % vandig oppløsning av natriumklorid, hver 120 ml, tørket over vannfri magnesiumsulfat og deretter konsentrert under redusert trykk. Resten ble renset ved kromatografi på en silikagelkolonne (toluemetylacetat = 3:1 -> 2:1), hvorved 0,95 g av tittelforbindelsen ble oppnådd som hvitt pulver (utbytte: 82,0 %).
[a]D20 : -70,6° (c = 0,23, CHCI3)
<!>H-NMR (CDCI3): 8 = 0,80-1,05 (m, 27H, 8-Me(MeLeu), e-Me(norLEUA)), 1,23-1,76 (m, 21H, p-Me(Lac), p-CH2(MeLeu), y-H(MeLeu), p-CH2, y-CH2, 8-CH2 (norLEUA), 2,67-3,15 (m, 16H, N-Me, p-CH2 (PhLac)), 5,00-5,70 (m, 8H, a-H (MeLeu), a-H(PhLac), a-H(Lac), a-H
Eksempel 13
Fremstilling av cyklo-(L-MeLeu-D-VALA-L-MeLeu-D-Lac)2 (kode:PF1022-209)
a. Boc-L-MeLeu-D-VALA-L-MeLeu-D-Lac-OBn
I 35 ml THF ble 2,22 g Boc-L-MeLeu-D-VALA-OH, 2,22 g H-L-MeLeu-D-Lac-OBn og 1,04 g HOBt Løst opp. Til den resulterende oppløsningen ble 1,59 g DCC tilsatt under isavkjøling, etterfulgt av omrøring ved 5°C i 47 timer. Presipitatet dannet på denne måten ble filtrert av og filtratet ble deretter konsentrert. Resten ble oppløst i 100 ml etylacetat. Den resulterende oppløsningen ble vasket suksessivt med 100 ml av en 20 % vandig oppløsning av natriumbikarbonat og 100 ml av en 30 % vandig opp-løsning av natriumklorid, tørket over vannfri natriumsulfat og deretter konsentrert. Resten ble renset ved kromatografi på en silikagelkolonne (toluemetylacetat = 10:1 5:1), hvorved 2,12 g av tittelforbindelsen ble oppnådd (utbytte: 52 %)
[a]D20 : -50° (c = 0,17, CHC13)
<i>H-NMR (CDCI3): 5 = 0,87-1,02 (m, 18H, 8-Me(MeLeu), y-Me(VALA)), 1,45 (m, 9H, t-Bu), 1,51 (d, 3H, p-Me(Lac)), 1,41-1,74 (m, 7H, p-CH2, y-H(MeLeu), P-H (VALA), 2,84 (m, 3H, NMe), 2,97 (d, 3H, NMe), 5,15 (d, 2H, CH2Ph), 5,01-5,23 (m, 4H, a-H(MeLeu), ct-H(VALA), a-H(Lac)), 7,35 (s, 5H, Ph).
b. Boc-L-meLeu-D-VALA-L-MeLeu-D-Lac-OH
I 15 ml metanol ble 1,48 g Boc-L-MeLeu-D-VALA-L-MeLeu-D-Lac-OBn oppløst under en nitrogenatmosfære. Til den resulterende oppløsningen ble 0,15 g 10 % Pd/C tilsatt etterfulgt av katalytisk hydrogenering med hydrogen ved romtemperatur under normalt trykk i 1 time. Katalysatoren ble filtrert av ved hjelp Hyflo Super Cel. Filtratet ble konsentrert, hvorved tittelforbindelsen ble oppnådd som en fargeløs olje. Forbindelsen ble tilveiebragt uten rensing for anvendelse i neste reaksjon.
<i>H-NMR (CDCI3): 5 = 0,90-0,98 (m, 18H, 6-Me(MeLeu), y-Me(VALA), 1,45 (s, 9H, t-Bu), 1,58 (d, 3H, p-Me(Lac)), 2,81 (s, 3H, NMe), 3,06 (d, 3H, NMe), 4,91-5,30 (m, 4H, a-H(MeLeu), ot-H(VALA), a-H(Lac)
c. H-L-MeLeu-D-VALA-L-MeLeu-D-Lac-OBn
I 8 ml metylenklorid ble 1,62 g Boc-L-MeLeu-D-VALA-L-MeLeu-D-Lac-OBn løst opp. Til den resulterende oppløsningen ble 2,4 ml TFA dråpevis tilsatt under isav-kjøling, etterfulgt av omrøring ved romtemperatur i 1 time. Reaksjonsblandingen ble konsentrert, etterfulgt av tilsetning av toluen til resten og ved azeotrofisk destillering fra TFA og toluen. Resten oppnådd på denne måten ble løst opp i 80 ml etylacetat. Den resulterende oppløsningen ble vasket med 80 ml av en 7 % vandig oppløsning av natriumbikarbonat og en 30 % vandig oppløsning av natriumklorid, tørket over vannfri magnesiumsulfat og deretter konsentrert, idet tittelforbindelsen ble oppnådd som en fargeløs olje. Forbindelsen ble tilveiebragt uten rensing for anvendelse i neste reaksjon.
<!>H-NMR (CDC13): 6 = 0,88-0,99 (dx2, 12H, 8-Me(MeLeu)), 1,02 (d, 6H, y-Me (VALA), 2,37 (s, 3H, NMe), 3,01 (d, 3H, NMe), 5,20 (d, 2H, CH2Ph), 5,06-5,34 (m, 4H, a-H(MeLeu), a-H(VALA), a-H(Lac)), 7,35 (s, 5H, pH)
d. Boc-(L-MeLeu-D-VALA-L-MeLeu-D-Lac)2-OBn
I 28 ml THF ble det oppløst 1,12 g L-MeLeu-D-VALA-L-MeLeu-D-Lac-OBn, 0,33 g HOBt og 0,30 ml trietylamin. Til den resulterende oppløsningen ble 0,55 g DCC tilsatt under isavkjøling etterfulgt av omrøring ved 5°C i 2 dager. Etter at presipitatet var filtrert av ble filtratet konsentrert. Resten ble deretter oppløst i 75 ml etylacetat. Den resulterende oppløsningen ble vasket suksessivt med 75 ml av en 5 % vandig oppløsning av kaliumbisulfat, 75 ml av en 7 % vandig oppløsning av natriubikarbonat og 75 ml av en 30 % vandig oppløsning av natriumklorid, tørket over vannfri magnesiumsulfat og deretter konsentrert. Resten ble renset ved kromatografi på en silikagelkolonne (toluemetylacetat = 5:1), hvorved 1,40 g av tittelforbindelsen ble oppnådd som hvite prismekrystaller (utbytte: 64,0 %).
[ct]D20 : -61,1° (c = 0,2, CHCI3)
<i>H-NMR (CDCI3): 5 = 0,87-0,95 (m, 24H, 6-Me(MeLeu)), 1,00 (d, 12H, y-Me
(VALA), 1,45 (d, 9H, t-Bu), 1,44-1,53 (dx2, 6H, p-Me(Lac)), 1,50-1,76 (m, 12H, p
-CH2, y-H(MeLeu)), 2,13 (m, 2H, p-H(VALA)), 2,83-3,12 (m, 12H, NMe), 5,15 (d, 2H, CH2Ph), 5,02-5,33 (m, 8H, a-H(MeLeu), a-H(VALA), a-H(Lac)), 7,36 (s, 5H, Ph)
e. H-(L-MeLeu-D-VALA-L-MeLeu-D-Lac)2-0Bn
I 8 ml metylenklorid ble 1,30 g Boc-(L-MeLeu-D-VALA-L-MeLeu-D-Lac)2-OBn løst opp. Til den resulterende oppløsningen ble 4 ml TFA tilsatt dråpevis under isav-kjøling, etterfulgt av omrøring ved samme temperatur i 1 time. Reaksjonsblandingen ble konsentrert, etterfulgt av tilsetning av toluen og ved azeotrofisk destillering av TFA og toluen. Resten oppnådd på denne måten ble løst opp i 65 ml etylacetat. Den resulternede blandingen ble vasket med 65 ml av en 7 % vandig oppløsning av natriumbikarbonat og 35 ml av en 30 % vandig oppløsning av natriumklorid, tørket over vannfri magnesiumsulfat og deretter konsentrert, idet tittelforbindelsen ble oppnådd som hvite prismekrystaller. Forbindelsen ble tilveiebragt uten rensing for anvendelse i neste reaksjon.
<i>H-NMR (CDC13): 6 = 0,87-1,04 (m, 36H, 5-Me(MeLeu), y-Me(VALA)), 1,45 (dx2, 6H, p-Me(Lac)), 1,70-1,80 (m, 12H, P-CH2, y-H-(MeLeu)), 2,15 (m, 2H, p-H (VALA), 2,92-3,16 (m, 12H, NMe), 7,15 (d, 2H, CH2PI1), 5,02-5,37 (m, 8H, otH (MeLeu), a-H(VALA), ct-H(Lac)), 7,32 (s, 5H, Ph)
f. H-(MeLeu-D-VALA-L-MeLeu-D-Lac)2-OH
I 12 ml metanol ble 1,15 g H-(L-MeLeu-D-VALA-L-MeLeu-D-Lac)2-OBn løst opp under nitrogenatmosfære. Til den resulterende oppløsningen ble 0,12 g 10 % Pd/C tilsatt etterfulgt av katalytisk hydrogenering med hydrogen ved romtemperatur under normalt trykk i 1,5 timer. Katalysatoren ble filtrert av ved hjelp av Hyflo Super Cel. Filtratet ble konsentrert og tittelforbindelsen ble oppnådd som en fargeløs olje. Forbindelsen ble tilveiebragt uten rensing for anvendelse i neste reaksjon.
AH-NMR (CDCI3): 8 = 0,85-1,06 (m, 36H, 8-Me(MeLeu), y-Me(VALA)), 1,45 (d, 6H, P-Me(Lac)), 1,71-1,86 (m, 12H, p-CH2, y-H(MeLeu)), 2,20 (m, 2H, p-H (VALA)), 2,51-3,14 (m, 12H, NMe), 5,16-5,28 (m, 8H, a-H(MeLeu), a-H(VALA), a-H(Lac))
g. Cyklo-(L-MeLeu-D-VALA-L-MeLeu-D-Lac)2
I 140 ml THF ble 1,0 g H-(L-MeLeu-D-VALA-L-MeLeu-D-Lac)2, 0,77 g HOBt og 0,51 ml NMM løst opp. Den resulterende oppløsningen ble tilsatt til en oppløsning som var blitt fremstilt separat ved oppløsning av 0,49 g litiumklorid, 0,67 g natriumklorid, 0,85 kaliumklorid, 1,93 cesiumklorid og 2,20 g EDCI HC1 i en flytende blanding av 900 ml THF og 260 ml DMF. Den resulterende sammenblandingen ble omrørt ved romtemperatur i 23 timer. Reaksjonsblandingen som ble oppnådd ble konsentrert og resten ble løst opp i 100 ml etylacetat. Den resulterende oppløsningen ble vasket suksessivt med 100 ml av en 7 % vandig oppløsning av natriumbikarbonat, 100 ml av en 5 % vandig oppløsning av kaliumbisulfat og 100 ml av en 30 % vandig oppløsning av natriumklorid, tørket over vannfri magnesiumsulfat og konsentrert. Resten ble renset ved kromatografi på en silikagelkolonne (toluen:etylacetat = 3:1), idet 0,90 g av tittelforbindelsen ble oppnådd (utbytte :92 %).
[a]D20 : -65,1° (c = 0,1, MeOH)
<i>H-NMR (CDCI3): 8 = 0,86-1,08 (m, 36H, 8-Me(MeLeu), y-Me(VALA)), 1,43 (d, 6H, p-Me(Lac)), 1,60-2,30 (m, 14H, (3-CH2, y-H(MeLeu), P-H(VALA)), 2,86-3,22 (m, 12H, NMe), 4,82-5,90 (m, 8H, a-H(MeLeu), a-H(VALA), a-H(Lac))
Eksempel 14
Fremstilling av cyklo-(L-MeLeu-D-OctA-L-MeLeu-D-Lac-L-MeLeu-D-PhLac-L-MeLeu-D-Lac) (kode: PF1022 - 216)
a. H-L-MeLeu-D-PhLac-L-MeLeu-D-Lac-OBn
I 2 ml diklormetan ble 993 mg (1,45 mmol) Boc-L-MeLeu-D-PhLac-L-MeLeu-D-Lac-OBn oppløst. Den resutlerende oppløsningen ble tilsatt med 2 ml TFA under isav-kjøling, etterfulgt av omrøring ved romtemperatur i 1 time. Reaksjonsblandingen ble tilsatt med en liten mengde toluen og konsentrert. Etylacetat (25 ml) ble deretter tilsatt til konsentratet. Den resulterende blandingen ble vasket suksessivt med en mettet vandig oppløsning av natriumbikarbonat og vann, tørket over vannfri magnesiumsulfat og filtrert. Filtratet ble konsentrert og resten ble oppbevart til neste reaksjon.
b. Boc-L-MeLeu-D-OctA-L-MeLeu-D-Lac-OH
I en flytende blanding av 10 ml metanol og 1 ml vann ble 984 mg (1,45 mmol) Boc-L-MeLeu-D-OctA-L-MeLeu-D-Lac-OBn (hvor OctA representerer ovennevnte 2-hydroksyoktansyreresidie) oppløst. Den resulterende blandingen ble tilsatt 98 mg 10 % Pd-C under en nitrogenatmosfære etterfulgt av katalytisk hydrogenering med hydrogen ved romtemperatur under normalt trykk i 3 timer. Katalysatoren ble filtrert av ved hjelp av Hyflo Super Cel og filtratet ble konsentrert. Resten ble anvendt i neste reaksjon.
c. Boc-L-mel^u-D-OctA-L-Mel^u-D-Lac-L-Mel^u-D-Priac-L-MeLeu-D-Lac-OBn
I 20 ml THF ble 845 mg Boc-L-MeLeu-D-OctA-L-MeLeu-D-Lac-OH, 844 mg H-L-mel^u-D-PhLac-L-MeLeu-D-Lac-OBn og 235 mg HOBt løst opp. Den resulterende oppløsningen ble tilsatt 359 mg DCC under isavkjøling, etterfulgt av omrøring ved romtemperatur i 4 timer. Etter at presipitatet var filtrert av ble filtratet konsentrert. Metylacetat (100 ml) ble tilsatt til resten. Den resulterende blandingen ble vasket suksessivt med en 5 % vandig oppløsning av natriumsulfitt, en mettet vandig opp-løsning av natriumbikarbonat og en mettet vandig oppløsning av natriumklorid, tørket over vannfri magnesiumsulfat og filtrert. Filtratet ble deretter konsentrert. Resten oppnådd ble deretter renset ved å utsette den for kromatografi på en siligelkolonne (toluemetylacetat = 10:1), hvorved 1,14 g av tittelforbindelsen ble oppnådd som en fargeløs olje (utbytte: 68,4 %)
[a]D = -45,7° (c = 0,1, MeOH)
d. H-L-Mel^u-D-OctA-L-Mel^u-D-Lac-L-Mel^u-D-PriLac-L-Mel^u-D-Lac-OBn
I 2 ml diklormetan ble 1,13 g (0,984 mmol) Boc-L-meLeu-D-OctA-L-meLeu-D-Lac-L-MeLeu-D_PhLac-L-MeLeu D-Lac-OBn løst opp. Den resulterende oppløsningen ble tilsatt 2 ml TFA under isavkjøling, etterfulgt av omrøring ved romtemperatur i 30 minutter. Reaksjonsblandingen ble tilsatt en liten mengde toluen og deretter konsentrert. Etylacetat (30 ml) ble deretter tilsatt til konsentratet. Den resulterende blandingen ble vasket suksessivt med en mettet vandig oppløsning av natriumbikarbonat og vann, tørket over vannfri magnesiumsulfat og filtrert. Filtratet ble konsentrert og resten ble oppbevart for anvendelse i neste reaksjon.
e. H-L-MeLeu-D-OctA-L-Mel^u-D-Lac-L-Mel^u-D-PhLac-L-MeLeu-D-Lac-OH
I en flytende blanding av 10 ml metanol og 1 ml vann ble 1,140 g H-L-MeLeu-D-OctA-L-meLeu-D-Lac-L-MeLeu-D-PhLac-L-MeLeu-D-Lac-OBn løst opp. Den resulterende oppløsningen ble tilsatt 114 mg 10 % Pd-C under en nitrogenatmosfære etterfulgt av katalytisk hydrogenering med hydrogen ved romtemperatur under normalt trykk i 2 timer. Katalysatoren ble filtrert av ved hjelp av Hy flo Super Cel. Filtratet ble deretter konsentrert. Resten ble tilveiebragt som den er til neste reaksjon.
f. CyMo-(L-MeI^u-D-OctA-L-MeI^^ Lac) (kode: PF1022-216)
Til en flytende blanding av 650 ml THF og 195 ml DMF ble 417mg litiumklorid, 733 mg kaliumklorid, 575 mg natriumklorid, 1,66 cesiumklorid go 1,89 g EDCI HC1 tilsatt. Den resulterende blandingen ble tilsatt en oppløsning som var blitt oppnådd på forhånd ved oppløsning av 865 mg H-L-MeLeu-D-OctA-L-meleu-D-Lac-L-MeLeu-D-PhLac-L-Mel^u-D-I^c-L-MeLeu-D-PhLac-L-MeLeu-D-Lac-OH, 664 mg HOBt og 0,22 ml NMM i 100 ml THF, etterfulgt av omrøring over natt ved romtemperatur.
Etter at oppløsningsmidlet var destillert av fra reaksjonsblandingen ble resten tilsatt 400 ml etylacetat og 400 ml vann. Den resulterende blandingen ble separert i to lag. Det organiske laget oppnådd på denne måten ble vasket suksessivt med en mettet vandig oppløsning av natriumbikarbonat, en 5 % vandig oppløsning av natriusulfitt og en mettet vandig oppløsning av natriumklorid, tørket over vannfri magnesiumsulfat og deretter filtrert. Filtratet ble konsentrert. Filtratet ble renset ved kromatografi på en silikagelkolonne (klorofornv.etylacetat = 10:1 —> 4:1) og deretter ved revers fasekromatografi på en silylisert silikagelkolonne (MeCN:H2 = 9:1), hvorved 210 mg av tittelforbindelsen ble oppnådd som et hvitt pulver.
[a]D = -73° (c = 0,17, MeOH)
<i>H-NMR (CDC13): 5 = 0,80-1,05 (m, 27H, Me(OctA), 5-Me(MeLeu)), 1,29-1,37 (m, 8H, Cr, s-, 6-, y-, CH2(OctA)), 1,41 d, 6H, p-Me(Lac)), 1,68-1,85 (m, 14H, p-CH2, y-H(MeLeu), P-CH2(OctA)), 2,74-3,17 (m, 12H, NMe), 4,46-4,52, 5,07-5,71 (m, 8H, a-H(MeLeu, OctA, Lac)), 7,27 (bs, 5H, Ph)
MS(FD): M<+> =942
Eksempel 15
Fremstilling av cyklo-(L-MeLeu-D-OctA-L-MeLeu-D-Lac)2 (kode: PF1022-217)
a. Benzhydryl-2-hydroksy-D-oktanoat (H-D-OctA-OBH)
I 25,5 ml etylacetat, 1,68 g 2-hydroksy-D-oktansyre oppløst. Til den resulterende
oppløsningen ble en oppløsning av (2,14 g/19 ml) difenyldiazometan i etylacetat tilsatt dråpevis ved romtemperatur over 1 time etterfulgt av omrøring i 4 timer. Reaksjonsblandingen ble tilført 0,63 ml eddiksyre, etterfulgt av omrøring i 3 timer for å dekom-ponere overskudd difenyldiazometan. Reaksjonsoppløsningen ble deretter justert til
pH 6,5 med en 7 % vandig oppløsning av NaHC03 under isavkjøling. Den på denne måten behandlede oppløsningen ble separert i to lag. Det organiske laget oppnådd på denne måten ble vasket med vann, tørket over vannfri magnesiumsulfat og konsentrert. Resten ble renset ved kromatografi på en silikagelkolonne (toluen: etylacetat = 100:1 -> 50:1), hvorved 3,27 g av tittelforbindelsen ble oppnådd som hvite krystaller
(utbytte: 95,5 %)
[a]D2<0> : +22,0° (c = 0,28, CHC13)
<i>H-NMR (CDCI3). 6 = 0,86 (t, 3H, Me), 1,23-1,42 (m, 8H, s-, 8-, y-CH2), 1,62-1,86 (m, 2H, p-CH2), 2,75 (d, 1H, OH), 4,30 (m, 1H, a-H), 6,95 (s, 1H, CHPh2), 7,33 (s, 10H, Ph)
b. Boc-L-MeLeu-D-OctA-OBH
I 30 ml pyridin ble 2,46 g Boc-L-MeLeu-OH oppløst. Den resulterende oppløsningen ble tilført 3,27 g H-D-OctA-OBH, 1,62 g HOBt og 2,48 g DCC under isavkjøling, etterfulgt av omrøring ved samme temperatur i 37 timer. Etter at presipitatet fra filtrert av ble filtratet konsentert, resten ble løst opp i 150 ml etylacetat. Den resulterende oppløsningen ble vasket suksessivt med 150 ml av en 5 % vandig oppløsning av kaliumbisulfat, 150 ml av en 7 % vandig oppløsning av natriumbikarbonat og 150 ml av 5 % vandig oppløsning av natriumklorid, tørket over vannfri magnesiumsulfat og deretter konsentrert. Resten ble renset ved kromatografi på en silikagelkolonne (toluemetylacetat = 100:1 -> 50:1), hvorved 4,72 g av tittelforbindelsen ble oppnådd som en fargeløs olje (utbytte: 85,4 %)
[a]D20 : -8,5° (c, = 0,84, CHCI3)
<i>H-NMR (CDCI3) : 8 = 0,85 (t, 3H, Me(OctA)), 0,92 (dd, 6H, 8-Me(MeLeu)), 1,23 (m, 8H, <;-, e-, 8-, y-CH2(OctA)), 1,44 (d, 9H, t-Bu), 2,72 (d, 3H, NMe), 4,74-5,02 (ddx2, 1H, a-H(MeLeu)), 5,12 (t, 1H, OH(OctA)), 6,90 (s, 2H, CHPh2), 7,32
(s, 10H, Ph)
c. Boc-L-MeLeu-D-OctA-OH
I 47 ml metanol ble 4,66 g Boc-L-meLeu-D-OctA-OBH oppløst under en nitrogenatmosfære. Den resulterende oppløsningen ble tilført 0,47 g 10 % Pd/C og en dråpe eddiksyre, etterfulgt av katalytisk hydrogenering med hydrogen ved romtemperatur under normalt trykk i 1 time. Katalysatoren ble filtrert av ved hjelp av Hyflo Super Cel. Filtratet ble konsentrert og tittelforbindelsen ble oppnådd som en fargeløs olje. Forbindelsen ble tilveiebragt uten rensing for anvendelse i neste reaksjon.
<!>h-NMR (CDCI3): 8 = 0,88 (t, 3H, Me(OctA)), 0,95 (t, 6H, S-Me(MeLeu)), 1,28 (m, 8H, Cr, e-, 8-, y-CH2(OctA)), 1,45 (d, 9H, t-Bu), 2,81 (s, 3H, NMe), 4,80 (ddx2, 1H, a-H(MeLeu)), 5,01 (t, 1H, a-H(OctA)
d. Boc-L-MeLeu-D-OctA-L-MeLeu-D-Lac-OBn
I 50 ml tetrahydrofuran ble 3,26 g Boc-L-meLeu-D-OctA-OH, 2,81 g H-L-meLeu-D-Lac-OBn og 1,37 g HOBt oppløst. Den resulterende oppløsningen ble tilsatt 2,08 g DCC og 2,7 ml pyridin under isavkjøling etterfulgt av omrøring ved romtemperatur i 40 timer. Etter at presipitatet var filtrert av ble filtratet konsentrert. Resten ble løst opp i 300 ml etylacetat. Den resulterende oppløsningen ble vasket sukssesivt med 300 ml av en 5 % vandig oppløsning av kaliumbisulfat, 300 ml av en 7 % vandig opp-løsning av natriumbikarbonat og 300 ml av en 20 % vandig oppløsning av natriumklorid, tørket over vannfri magnesiumsulfat og konsentrert. Resten ble renset ved kromatografi på en silikagelkolonne (toluen:etylacetat = 10:1), hvorved 3,23 g av tittelforbindelsen ble oppnådd som hvite krystaller (utbytte: 56,8 %).
[a]D2<0>: -37,9° (c = 0,27, CHCI3)
<i>H-NMR (CDCI3): 8 = 0,87-1,01 (m, 15H, Me(OctA), 8-Me(MeLeu), 1,28 (m, 8H, Cr, e-, 8-, y-CH2(OctA), 1,45 (d, 9H, t-Bu), 1,51 (d, 3H, P-Me(Lac)), 1,64-1,79 (m, 8H, P-CH2, y-H(MeLeu), p-CH2(OctA)), 2,87 (d, 3H, NMe), 2,95 (d, 3H, NMe), 5,07-5,34 (m, 6H, CH2Ph), a-H(MeLeu), a-H(OctA), a-H(Lac), 7,38 (s, 5H, Ph)
e. Boc-L-MeLeu-D-OctA-L-MeLeu-D-Lac-OH
110 ml metanol ble 990 mg Boc-L-MeLeu-D-OctA-L-MeLeu-D-Lac-OBn oppløst under nitrogenatmosfære. Den resulterende oppløsningen ble tilsatt 99 mg 10 % Pd/C og en dråpe eddiksyre, etterfulgt av katalytisk hydrogenering med hydrogen ved romtemperatur under normalt trykk i 1 time. Katalysatoren ble filtrert av ved hjelp av
Hyflo Super Cel. Filtratet ble deretter konsentrert, idet tittelforbindelsen ble oppnådd som en fargeløs olje. Forbindelsen ble tilveiebragt uten rensing for anvendelse i neste reaksjon.
<i>H-NMR (CDCI3): 8 = 0,84-0,92 (m, 15H, Me(OctA), 8-Me(MeLeuI), 1,23 (m, 8H, Cr, e-, 8-, y-CH2(OctA)), 1,41 (d, 9H, t-Bu), 1,43 (d, 3H, P-Me(Lac)), 1,62-
I, 72 (m, 8H, p-CH2, y-H(MeLeu), p-CH(OctA)), 2,77 (s, 3H, NMe), 3,97 (d, 3H, NMe), 4,80-5,32 (m, 4H, cc-H(MeLeu), ct-H(OctA), a-H(Lac))
f. H-L-MeLeu-D-OctA-L-MeLeu-D-Lac-OBn
II, 5 ml TFA ble 962,4 mg Boc-L-MeLeu-D-OctA-L-MeLeu-D-Lac-OBn løst opp under isavkjøling. Den resulterende oppløsningen ble omrørt ved samme temperatur i 30 minutter, etterfulgt av ytterligere omrøring ved romtemperatur i 30 minutter. Reaksjonsblandingen ble konsentrert. Toluen ble deretter tilsatt til konsentratet som deretter ble azeotrofisk destillert for å fjerne TFA. Resten som ble oppnådd ble løst opp i 75 ml etylacetat. Den resulterende oppløsningen ble vasket suksessivt med 75 ml av en 7 % vandig oppløsning av natriumbikarbonat og 75 ml av en 30 % vandig oppløsning av natriumklorid, tørket over vannfri magnesiumsulfat og konsentrert, idet tittelforbindelsen ble oppnådd som en fargeløs olje. Forbindelsen ble tilveiebragt uten rensing for anvendelse i neste reaksjon.
<i>H-NMR (CDCI3): 8 = 0,85-0,99 (m, 15H, Me(OctA), S-Me(MeLeu)), 1,27 (m, 8H, Cj-, s-, 8-, y-CH2(OctA)), 1,46 (d, 6H, p-Me(Lac)), 1,66-1,82 (m, 8H, p-CH2, y-H(MeLeu), p-CH2(OctA)), 2,39 (s, 3H, NMe), 2,96 (s, 3H, NMe), 5,07-5,36 (m, 2H, CH2Ph), a-H(OctA), a-H(Lac)), 7,37 (s, 5H, Ph)
g. Boc-(L-MeLeu-D-OctA-L-MeLeu-D-Lac)2-OBn
I 13 ml THF ble 857 mg Boc-L-meLeu-D-OctA-L-MeLeu-D-Lac-OH, 819 mg H-L-MeLeu-D-OctA-L-MeLeu-D-Lac-OBn, 237 mg HOBt og 0,24 ml pyridin løst opp. Den resulterende oppløsningen ble tilsatt 362 mg DCC under isavkjøling etterfulgt av omrøring ved romtemperatur i 16 timer. Presipitatet ble filtrert av og filtratet ble konsentrert. Resten ble oppløst i 75 ml etylacetat. Den resulterende oppløsningen ble vasket suksessivt med 75 ml av en 5 % vandig oppløsning av kaliumbisulfat, 75 ml av en 7 % vandig oppløsning av natriumbikarbonat og 75 ml av en 20 % vandig opp-løsning av natriumklorid, tørket over vannfri magnesiumsulfat og konsentrert. Resten ble renset ved kromatografi på en silikagelkolonne (toluen: etylacetat = 5:1), hvorved 875 mg av tittelforbindelsen ble oppnådd som hvite krystaller (utbytte: 53,8 %).
[ct]D20 : -48,8° (c = 0,1, CHCI3)
<i>H-NMR (CDCI3): 8 = 0,85-1,01 (m, 30H, Me(OctA), 8-Me(MeLeu)), 1,28 (bs, 16H, C-, s-, 5-, Y-CH2(OctA)), 1,45 (d, 9H, t-Bu), 1,52 (d, 6H, P-Me(Lac)), 1,72-1,77 (m, 16H, P-CH2, y-H(MeLeu), P-CH2(OctA)), 2,83-3,10 (s, 12H, N-Me), 5,14-5,30 (m, 10H, CH2Ph), a-H(MeLeu), a-H(OctA), a-H(Lac)), 7,36 (s, 5H, Ph)
h. H-(L-MeLeu-D-OctA-L-MeLeu-D-Lac)2-OBn
I 4,4 ml metylenklorid ble 870 mg Boc-(L-MeLeu-D-OctA-L-MeLeu-D-Lac)2-OBn løst opp. Den resulterende oppløsningen ble dråpevis tilført 26 ml TFA under isav-kjøling, etterfulgt av omrøring ved romtemperatur i 1 time. Reaksjonsblandingen ble deretter konsentrert. Toluen ble tilsatt til konsentratet som ble azeotrofisk destillert for å fjerne TFA. Resten oppnådd på denne måten ble løst opp i 50 ml etylacetat. Den resulterende oppløsningen ble vasket med 50 ml av en 7 % vandig oppløsning av natriumbikarbonat og 50 ml av en 20 % vandig oppløsning av natriumklorid, tørket over vannfri magnesiumsulfat og konsentrert, idet tittelforbindelsen ble oppnådd som en fargeløs olje. Forbindelsen ble tilveiebragt uten rensing for anvendelse i neste reaksjon.
<i>H-NMR (CDCI3): 8 = 0,86-1,01 (m, 30H, Me(OctA), 8-Me(MeLeu)), 1,26 (d, 16H, Cr, s-, 8-, y-CH2(OctA)), 1,41-1,77 (m, 22H, p-Me(Lac), P-CH2, y-H(MeLeu), p<->CH2(OctA)), 2,93 (s, 6H, NMe), 3,10 (d, 6H, NMe), 5,20 (d, 2H, CH2Ph), 5,08-5,35 (m, 8H, a-H(OctA), a-H(Lac)), 7,35 (s, 5H, Ph)
i. H-(L-MeLeu-D-OctA-L-MeLeu-D-Lac)2-OH
I 8 ml metanol ble 784 mg H-(L-Meleu-D-OctA-L-meLeu-D-Lac)2-OBn oppløst
under en nitrogenatmosfære. Til den resulterende oppløsningen ble 80 mg 10 % Pd/C og en dråpe eddiksyre tilsatt, etterfulgt av katalytisk hydrogenering med hydrogen ved romtemperatur under normalt trykk i 1,5 timer. Katalysatoren ble filtrert av ved hjelp av Hyflo Super Cel. Filtratet ble konsentrert idet tittelforbindelsen ble oppnådd som
en fargeløs olje. Forbindelsen ble tilveiebragt uten rensing for anvendelse i neste reaksjon.
<i>H-NMR (CDCI3): 8-= 0,88-1,06 (m, 30H, Me(OctA), 8-CH3(MeLeu)), 1,26 (bs, 16H, Cr, e-, 8-, Y-CH2(OctA)), 1,46 (d, 6H, p-Me(Lac), 1,60-1,95 (m, 16H, p-CH2, Y-H(MeLeu), p-CH2(OctA)), 3,02 (t, 6H, NMe), 3,08 (d, 6H, NMe), 4,50-5,44 (m, 8H, a-(MeLeu), ct-H(OctA), a-H(Lac))
j. Cyklo-(L-MeLeu-D-OctA-L-MeLeu-D-Lac)2
1140 ml THF ble 1,00 g H-(L-MeLeu-D-OctA-L-MeLeu-D-Lac)2-OH, 0,77 g HOBt og 0,51 ml NMM oppløst. Den resulterende oppløsningen ble tilsatt til en blanding av 0,47 g litiumklorid, 0,67 g natriumklorid, 0,85 g kaliumklorid, 1,93 g cesiumklorid, 2,20 g EDCI HC1, 900 ml THF og 260 ml DMF, etterfulgt av omrøring ved romtemperatur i 23 timer. Etter at reaksjonsblandingen var konsentrert ble resten oppløst i 100 ml etylacetat. Den resulterende oppløsningen ble vasket suksessivt med 100 ml av en 7 % vandig oppløsning av natriumbikarbonat, 100 ml 5 % kaliumbisulfat og 100 ml av en 30 % vandig oppløsning av natriumklorid, tørket over vannfri magnesiumsulfat og konsentrert. Resten ble renset ved kromatografi på en silikagelkolonne (toluen:etylacetat = 3:1), hvorved 0,90 g av tittelforbindelsen ble oppnådd (utbytte: 92 %).
[a]D2<0> : -46,3° (c = 0,1, MeOH)
iH-NMR (CDCI3): 5 = 0,84-1,06 (m, 30H, Me(OctA), 8-Me(MeLeu)), 1,29 (bs, 16H, S-, s-, 8-, y-CH2(OctA)), 1,43 (d, 6H, p-Me(Lac), 1,68-1,85 (m, 16H, P-CH2, y-H(MeLeu), p-CH2(OctA)), 2,87 (d, 6H, NMe), 3,08 (d, 6H, NMe), 5,41-5,53 (m, 8H, ct-H(MeLeu), a-H(OctA), a-H(Lac)
Eksempel 16
Fremstilling av cyklo-(L-MeLeu-D-PhLac-L-Leu-D-Lac)2 (kode: PF1022-218)
a. Boc-L-Leu-D-Lac-OBH
I 30 ml THF ble 5,13 g (20 mmol) H-L-Lac-OBH og 10,5 g trifenylfosfin oppløst. Til den resulterende oppløsningenen ble en oppløsning av 5,64 g Boc-L-Leu-OH og 6,08 ml DEAD i THF tilsatt dråpevis under isavkjøling, etterfulgt av omrøring i rom-temeraptur i 3 dager. Reaksjonsblandingen ble deretter konsentrert. Presipitatet ble filtrert av etterfulgt av ytterligere konsentrering. Etylacetat (300 ml) ble tilsatt til resten. Den resulterende blandingen ble vasket suksessivt med en mettet vandig oppløsning av natriumbikarbonat, en mettet vandig oppløsning av natriumklorid og vann, tørket over vannfri magnesiumsulfat og filtrert. Filtratet ble deretter konsentrert. Resten som ble oppnådd ble renset ved å utsette den for kromatografi på en silikagelkolonne (toluen: etylacetat = 20:1 -> 10:1), hvorved 9,57 g av tittelforbindelsen ble oppnådd i et støkiometrisk utbytte (9,75 g).
<i>H-NMR: 8 = 1,5 (s, 9H, t-Bu), 4,4 (m, 1H, CH), 4,9 (d, 1H, J = 6,3, CH), 5,2 (d, 2H, J = 4,9, CH2Ph), 7,26-7,30 (m, 10H, Ph)
b. Boc-L-Leu-D-Lac-OH
I en flytende blanding av 100 ml metanol og 10 ml vann ble 9,56 g (20,4 mmol) Boc-L-Leu-D-Lac-OH oppløst, etterfulgt av tilsetning av 956 mg 10 % Pd-C under en nitrogenatmosfære. Den resulterende blandingen ble utsatt for katalytisk hydrogenering med hydrogen ved romtemperatur under normalt trykk i 2 timer. Katalysatoren ble filtrert av ved hjelp av Hyflo Super Cel og filtratet ble konsentrert. Resten ble tilveiebragt slik og anvendt i neste reaksjon.
c. Boc-L-Leu-D-Lac-OBn
I 35 ml DMSO ble 5,0 g Boc-L-Leu-D-Lac-OH oppløst. Til den resulterende opp-løsningen ble 1,52 ml benzylbromid tilsatt ved 35 °C. Etter at temperaturen ble øket til 40°C ble den resulterende blandingen tilført 2,94 g kaliumkarbonat, etterfulgt av omrøring ved samme temperatur i 5 timer. Etylaceatat (200 ml) ble tilsatt til reaksjonsblandingen. Den resulternede blandingen ble vasket suksessivt med vann og en 10 % vandig oppløsning av natriumklorid, tørket over vannfri magnesiumsulfat og filtrert. Filtratet ble deretter konsentrert. Resten oppnådd ble renset ved å utsette den for kromatografi på en silikagelkolonne, idet 4,19 g av tittelforbindelsen ble oppnådd som en fargeløs olje (utbytte: 100 %).
d. Boc-L-Leu-D-Lac-OH
I 4 ml diklormetan ble 4,0 g (10,2 mmol) Boc-L-Leu-D-Lac-OBn oppløst. Den resulterende oppløsningen ble tilsatt 6 ml TFA under isavkjøling, etterfulgt av omrøring ved romtemperatur i 3 timer. En liten mengde toluen ble tilsatt til reaksjonsblandingen etterfulgt av konsentrering. Etylacetat (200 ml) ble tilsatt til den oppnådde resten. Den resulterende blandingen ble vasket suksessivt med en mettet vandig oppløsning av natriumbikarbonat og vann, tørket over vannfri magnesiumsulfat og filtrert. Filtratet ble deretter konsentrert. Resten tilveiebragt og anvendt i neste reaksjon.
e. Boc-L-MeLeu-D-PhLac-OH
I en flytende blanding av 60 ml metanol og 6 ml vann ble 5,84 g (12 mmol) Boc-L-MeLeu-D-PhLac-OBn oppløst. Til den resulterende oppløsningen ble 584 mg 10 % Pd-C tilsatt under en nitrogenatmosfære etterfulgt av katalytisk hydrogenering med hydrogen ved romtemperatur under normalt trykk i 4 timer. Katalysatoren ble filtrert av ved hjelp av Hyflo Super Cel. Filtratet ble konsentrert. Resten ble tilveiebragt og anvendt i neste reaksjon.
f. Boc-L-MeLeu-D-PhLac-L-Leu-D-Lac-OBn
I 50 ml THF ble 4,45 g Boc-L-MeLeu-D-PhLac-OH, 2,87 g H-L-Leu-D-Lac-OBn og 1,95 g HOBt oppløst. Til den resulterende oppløsningen ble 2,97 g DCC tilsatt under isavkjøling, etterfulgt av omrøring ved romtemperatur i 3 timer. Etter at presipitatet var filtrert av ble filtratet konsentrert. Etylacetat (100 ml) ble tilsatt til konsentratet. Den resulterende blandingen ble vasket suksessivt med vann, en mettet vandig opp-løsning av natriumbikarbonat og en mettet vandig oppløsning av natriumklorid, tørket over vannfri magnesiumsulfat og filtrert. Filtratet ble deretter konsentrert. Resten som ble oppnådd ble renset ved kromatografi på en silikagelkolonne (toluen:etylacetat = 50:1 -> 10:1), hvorved 6,12 g av tittelforbindelsen ble oppnådd som en fargeløs olje (utbytte: 90 %).
<i>H-NMR: 8 = 0,85-0,91 (m, 12H, Mex4), 1,45 (s, 9H, t-Bu), 2,8 (s, 3H, NMe), 5,07-5,18 (m, 2H, CH2Ph), 7,19-7,39 (m, 10H, Ph)
g. H-L-MeLeu-D-PhLac-L-Leu-D-Lac-OBn
I 3 ml diklormetan ble 2,68 g (1,74 mmol) Boc-L-meLeu-D_PhLac-L-Leu-D-Lac-OBn oppløst. Til den resulterende oppløsningen ble 3 ml TFA tilsatt under isavkjøling etterfulgt av omrøring ved romtemperatur i 3 timer. En liten mengde toluen ble tilsatt til reaksjonsblandingen etterfulgt av konsentrering. Etyacetat (50 ml) ble tilsatt til resten som ble oppnådd. Den resulterende blandingen ble vasket med en mettet vandig oppløsning av natriumbikarbonat, tørket over vannfri magnesiumsulfat og filtrert. Filtratet ble deretter konsentrert. Resten ble tilveiebragt som den er i neste reaksjon.
h. Boc-L-MeLeu-D-PhLac-L-Leu-D-Lac-OH
I en flytende blanding av 30 ml metanol og 3 ml vann ble 2,68 (4 mmol) Boc-L-MeLeu-D_PhLac-L-Leu-D-Lac-OBn oppløst. Den resulterende oppløsningen ble til-ført 268 mg 10 % Pd-C under en nitrogenatmosfære etterfulgt av katalytisk hydrogenering med hydrogen ved romtemperatur under normalt trykk i 3 timer. Katalysatoren ble filtrert av ved hjelp av Hyflo Super Cel. Resten ble anvendt som den er i neste reaksjon.
i. Boc-(L-MeLeu-D-PhLac-L-Leu-D-Lac)2-OBn
I 30 ml THF ble 2,20 g Boc-L-MeLeu-D-PhLac-L-Leu-D-Lac-OH, 2,18 g H-L-MeLeu-D-PhLac-L-leu-D-Lac-OBn og 649 mg HOBt oppløst. Den resulterende opp-løsningen ble tilført 990 mg DCC under isavkjøling, etterfulgt av omrøring ved romtemperatur i 4 timer. Presipitatet ble filtrert av og filtratet ble konsentrert. Etylacetat
(100 ml) ble tilsatt til konsentratet. Den resulterende blandingen ble vasket suksessivt med en 5 % oppløsning av natriumbisulfat, en mettet vandig oppløsning av natriumbikarbonat og en mettet vandig oppløsning av natriumklorid, tørket over vannfri magnesiumsulfat og filtrert. Filtratet ble konsentrert. Etylacetat (100 ml) ble tilsatt til konsentratet. Den resulterende blandingen ble vasket suksessivt med en 5 % opp-løsning av natriumbisulfat, en mettet vandig oppløsning av natriumbikarbonat og en mettet vandig oppløsning av natriumklorid, tørket over vannfri magnesiumsulfat og filtrert. Filtratet ble konsentrert. Resten ble renset ved kromatografi på en silikagelkolonne (toluen:etylacetat = 10:1), hvorved 3,18 g av tittelforbindelsen ble oppnådd som en fargeløs olje (utbytte: 70,4 %).
j. H-(L-MeLeu-D-PhLac-L-Leu-D-Lac)2-OBn
I 6 ml diklormetan ble 3,10 g (2,75 mmol) Boc-(L-MeLeu-D-PhLac-L-Leu-D-Lac)2-OBn oppløst. Til den resulterende oppløsningen ble 5 ml TFA tilsatt under isavkjøling etterfulgt av omrøring ved romtemperatur i 1 time. En liten mengde toluen ble tilsatt til reaksjonsblandingen, etterfulgt av konsentrering. Etylacetat (100 ml) ble tilsatt til den oppnådde resten. Den resulterende blandingen ble vasket suksessivt med en mettet vandig oppløsning av natriumbikarbonat og vann, tørket over vannfri magnesiumsulfat og filtrert. Filtratet ble deretter konsentrert. Resten ble anvendt som den er i neste reaksjon.
k. H-(L-MeLeu-D-PhLac-L-Leu-D-Lac)2-OH
I en flytende blanding av 30 ml metanol og 3 ml vann ble 3,06 g H-(L-MeLeu-D-PhLac-L-Leu-D-Lac)2-OBn oppløst. Den resulterende oppløsningen ble tilført 306 mg 10 % Pd-C under en nitrogenatmosfære, etterfulgt av katalytisk hydrogenering med hydrogen ved romtemperatur under normalt trykk i 3 timer. Katalysatoren ble filtrert av ved hjelp av Hyflo Super Cel og filtratet ble konsentrert. Resten oppnådd ble tilveiebragt som den er for anvendelse i neste reaksjon.
1. Cyklo-(L-MeLeu-D_PhLac-L-leu-D-Lac)2 (kode: PF1022-218)
Til en flytende blanding av 1875 mg THF og 563 ml DMF ble 1,16 g litiumklorid, 2,05 g kaliumklorid, 1,6 g natriumklorid, 4,62 g cesiumklorid og 5,262 g EDCI HC1 tilsatt. Den resulterende blandingen ble tilsatt ved romtemperatur med en oppløsning som var blitt fremstilt separat ved oppløsning av 2,47 g H-(L-MeLeu-D-PhLac-L-leu-D-Lac)2-OH, 1,85 g HOBt og 0,6 ml NMM i 300 ml THF. Den oppnådd blandingen ble omrørt over natt ved romtemperatur. Etter at oppløsningsmidlene var destillert av ble resten tilført 400 ml etylacetat og 400 ml vann. Den resulterende blandingen ble separert til to lag. Det organiske laget som ble oppnådd ble vasket suksessivt med en mettet vandig oppløsning av natriumbikarbonat, en 5 % vandig oppløsning av natriumsulfitt og en mettet vandig oppløsning av natriumklorid, tørket over vannfri magnesiumsulfat og deretter filtrert. Filtratet ble konsentrert og resten som ble oppnådd ble renset ved kromatografi på en silikagelkolonne (kloroform:etylacetat = 10:1), hvorved 1,57 mg av tittelforbindelsen ble oppnådd som fargeløst pulver (utbytte: 62 %).
Md = -41° (c = 0,5, MeOH)
<!>H-NMR (CD3OD) : 8 = 0,83-0,94 (m, 24H, 8-Me(MeLeu, Leu), 1,39-1,42 (bd, 6H, Me(Lac)), 1,69-2,22 (m, 12H, p-CH2, y-H(MeLeu, Leu)), 2,93-3,34 (m, 10H, N-Me(MeLeu), CH2(PhLac), 3,74-3,77, 4,52-4,58, 4,80-4,85, 5,10-5,31 (m, 8H, |-H(MeLeu, Leu, PhLac, Lac)), 7,21-7,36 (m, 10H, Ph)
MS(FD): M<+> =920
Eksempel 17
Fremstilling av cyklo-(L-MeLeu-D-Lac-L-Leu-D-PhLac)2 (kode: PF1022-219)
a. Boc-L-Leu-D-PhLac-OBn
I 30 ml pyridin ble 2,33 g Boc-L-Leu-OH, 2,30 g H-D-PhLac-OBn og 1,34 g HOBt oppløst. Til den resulterende oppløsningen ble 2,23 g DCC tilsatt under isavkjøling og blandingen ble omrørt over natt. Presipitatet ble filtrert av og filtratet ble tilført 400 ml etylacetat. Den resulterende blandingen ble vasket med en 5 % vandig opp-løsning av kaliumbisulfat, en mettet vandig oppløsning av natriumbikarbonat og en 5 % vandig oppløsning av natriumklorid, tørket over vannfri magnesiumsulfat og filtrert. Filtratet ble deretter konsentrert. Resten oppnådd ble deretter renset ved å bli utsatt for kromatografi på en silikagelkolonne (toluemetylacetat = 10:1), idet 3,57 g av tittelforbindelsen ble oppnådd som en olje (utbytte: 84,5 %).
<i>H-NMR (CDC13): 8 = 0,69 (d, 3H, J = 6,5, Me), 0,78 (d, 3H, J = 6,5, Me), 1,43 (s, 9H, t-Bu), 2,35 (s, 1H, NH), 3,1-3,25 (m, 1H, CH), 4,36, 4,81 (m, 1H, CH), 5,14 (s, 2H, CH2Ph), 7,13-7,40 (m, 10H, Ph)
b. H-L-Leu-D-PhLac-OBn
I 2 ml diklormetan ble 3,14 g (6,7 mmol) Boc-L-leu-D-PhLac-OBn oppløst. Den resulterende oppløsningen ble tilsatt 4 ml TFA under isavkjøling, etterfulgt av om-røring ved romtemperatur i 2 timer. En liten mengde toluen ble tilsatt til reaksjonsblandingen etterfulgt av konsentrering. Etylacetat (50 ml) ble tilsatt til den resulterende resten. Den resulterende blandingen ble vasket suksessivt med en mettet vandig oppløsning av natriumbikarbonat og vann, tørket over vannfri magnesiumsulfat og filtrert. Filtratet ble deretter konsentrert. Resten ble gitt og anvendt i neste reaksjon.
c. Boc-L-MeLeu-D-Lac-OH
I en flytende blanding av 30 ml metanol og 3 ml vann ble 2,85 g (7 mmol) Boc-L-meLeu-D-Lac-OBn oppløst. Til den resulterende oppløsningen ble 285 mg 10 % Pd-C tilsatt under en nitrogenatmosfære etterfulgt av katalytisk hydrogenering med hydrogen ved romtemperatur under et normalt trykk i 15 timer. Katalysatoren ble filtrert av ved hjelp av Hyflo Super Cel. Filtratet ble konsentrert. Resten ble tilveiebragt og anvendt i neste reaksjon.
d. Boc-L-MeLeu-D-Lac-L-Leu-D-PhLac-OBn
I 30 ml THF ble 2,20 g Boc-L-MeLeu-D-Lac-OH, 2,21 g H-Leu-L-D-PhLac-OBn og 948 mg HOBt oppløst. Den resulterende oppløsningen ble tilsatt 1,73 g DCC under isavkjøling etterfulgt av omrøring ved romtemperatur i 3 timer. Etter at presipitatet var filtrert av ble filtratet konsentrert. Etylacetat (100 ml) ble tilsatt til resten som oppnådd. Den resulterende blandingen ble vasket suksessivt med vann, en mettet vandig oppløsning av natriumbikarbonat og en mettet vandig oppløsning av natriumklorid, tørket over vannfri magnesiumsulfat og filtrert. Filtratet ble deretter konsentrert. Resten som ble oppnådd ble deretter renset ved å utsette den for kromatografi på en silikagelkolonne (toluemetylacetat = 10:1 -» 5:1), idet 6,38 g av tittelforbindelsen ble oppnådd som en fargeløs olje (utbytte: 72,2 %).
e. H-L-MeLeu-D-Lac-L-Leu-D-PhLac-OBn
I 3 ml diklormetan ble 1,55 g (2,31 mmol) Boc-L-Mel^u-D-Lac-L-I^u-D-PhLac-OBn oppløst. Til den resulterende oppløsningen ble 3 ml TFA tilsatt under isavkjøling etterfulgt av omrøring ved romtemperatur i 3 timer. En liten mengde toluen ble tilsatt til reaksjonsblandingen etterfulgt av konsentrering. Etylacetat (50 ml) ble tilsatt til den oppnådde resten. Den resulterende blandingen ble vasket med en mettet vandig opp-løsning av natriumbikarbonat, tørket over vannfri magnesiumsulfat og filtrert. Filtratet ble deretter konsentrert. Resten ble anvendt slik i den neste reaksjonen.
f. Boc-L-meLeu-D-Lac-L-Leu-D-PhLac-OH
I en flytende blanding av 15 ml metanol go 1,5 ml vann ble 1,61 g (2,4 mmol) Boc-L-MeLeu-D-Lac-L-Leu-D-PhLac-OBn oppløst. Den resulterende oppløsningen ble til-ført 160 mg 10 % Pd-C under en nitrogenatmosfære etterfulgt av katalytisk hydrogenering med hydrogen ved romtemperatur under normalt trykk i 3 timer. Katalysatoren ble filtrert av ved hjelp av Hyflo Super Cel. Resten ble tilført og anvendt i neste reaksjon.
g. Boc-(L-MeLeu-D-Lac-L-Leu-D-PhLac)2-OBn
I 20 ml THF ble 1,25 g Boc-L-MeLeu-D-Lac-L-Leu-D-PhLac-OH, 1,29 g L-MeLeu-D-Lac-L-Leu-D-PhLac-OBn og 373 mg HOBt oppløst. Den resulternede oppløs-ningen ble tilsatt 569 mg DCC under isavkjøling etterfulgt av omrøring ved romtemperatur i 4 timer. Etter at presipitatet var filtrert av ble filtratet konsentrert. Etylacetat (100 ml) ble tilsatt til resten. Den resulterende blandingen ble vasket sukessivt med en 5 % vandig oppløsning av natriumsulfitt, en mettet vandig oppløsning av natriumbikarbonat og en mettet vandig oppløsning av natriumklorid, tørket over vannfri magnesiumsulfat og filtrert. Filtratet ble deretter konsentrert. Resten som ble oppnådd ble renset ved å utsette den for kromatografi på en silikagelkolonne (toluen: etylacetat = 3:1), idet 1,29 g av tittelforbindelsen ble oppnådd som en fargeløs olje (utbytte: 49,7 %).
h. H-(L-MeLeu-D-Lac-L-Leu-D-PhLac)2-OBn
I 4 ml diklormetan ble 1,28 g (1,13 mol) Boc-(L-MeI^u-D-Lac-L-Leu-D_PhLac)2-OBn oppløst. Til den resulternede oppløsningen ble 2 ml TFA tilsatt under isavkjøling etterfulgt av omrøring ved romtemperatur i 1 time. En liten mengde toluen ble tilsatt til reaksjonsblandingen etterfulgt av konsentrering. Etylacetat (100 ml) ble tilsatt til den oppnådde resten. Den resulterende blandingen ble vasket suksessivt med en mettet vandig oppløsning av natriumbikarbonat og vann, tørket over vannfri magnesiumsulfat og filtrert. Filtratet ble deretter konsentrert. Resten ble anvendt slik den er i neste reaksjon.
i. H-(L-MeLeu-D-Lac-L-Leu-D-PhLac)2-OH
I en flytende blanding av 10 ml metanol og 1 ml vann ble 1,22 g H-(L-MeLeu-D-Lac-L-Leu-D-PhLac)2-OBn oppløst. Til den resulterende oppløsningen ble 122 mg 10 % Pd-C tilsatt under en nitrogenatmosfære, etterfulgt av katalytisk hydrogenering med hydrogen ved romtemperatur under normalt trykk i 3 timer. Katalysatoren ble filtrert av ved hjelp av Hyflo Super Cel. Filtratet ble konsentrert. Resten ble tilført som den er og anvendt i neste reaksjon.
j. Cyklo-(L-Meleu-D-Lac-L-Leu-D-PhLac)2 (kode: PF1022-219)
Til en flytende blanding av 750 ml THF og 225 ml DMF ble det tilsatt 446 mg litiumklorid, 786 mg kalium, 615 mg natriumklorid, 1,7 g cesiumklorid og 2,02 g EDCI-HC1. Den resulterende blandingen ble tilført en oppløsning som var blitt fremstilt ved oppløsning av 990 mg H-(L-MeLeu-D-Lac-L-Leu-D-PhLac)2-OH, 712 mg HOBt og 0,23 ml NMM i 120 ml THF. Sammenblandingen som ble oppnådd ble omrørt over natt ved romtemperatur. Etter at oppløsningsmidlene var destillert derifra ble den resulterende resten tilført 200 ml etylacetat og 100 ml vann. Den resulterende blandingen ble separert i to lag. Det resulterende organiske laget ble vasket suksessivt med en mettet vandig oppløsning av natriumbikarbonat, en 5 % vandig oppløsning av natriumsulfitt og en mettet vandig oppløsning av natriumklorid, tørket over vannfri magnesiumsulfat og deretter filtrert. Filtratet ble konsentrert. Resten som ble oppnådd ble deretter renset ved å utsette dem for kromatografi på en silikagelkolonne (kloroform: etylacetat = 10:1), idet 586 mg av tittelforbindelsen ble oppnådd som hvitt pulver (utbytte: 55,8 %),
[a]D = -94° (c = 0,48, MeOH)
<i>H-NMR (CD3OD): 8 = 0,86-0,99 (m, 24H, 8-Me(MeLeu, Leu), 1,34-1,37 (bd, 6H, Me(lac)), 1,70-2,27 (m, 12H, (3-CH2, y-H(MeLeu, Leu)), 3,18-3,31 (m, 10H, N-Me(MeLeu), CH2(PhLac), 4,02-4,08, 4,55-4,62, 4,80-4,95, 5,45-5,55 (m, 8H, <x-H(MeLeu, Leu, PhLac, Lac)), 7,12-7,22 (m, 10H, Ph)
MS(FD): M<+> =920
Illustrert i følgende eksempler 18-24 er fremgangsmåter for fremstilling av PF 1022 derivatene ved introduksjon av substituent(er).
Eksempel 18
Fremstilling av cyklo-(L-MeLeu-D-PhLac-L-MeLeu-D-Lac-L-MeLeu-D-TYRA-(0-t-Bu)-L-meLeu-D-Lac) (kode PF1022-215)
I metylenklorid (10 ml) plassert i et rør ble 701 mg cyklo-(L-MeLeu-D-PhLac-L-MeLeu-D-Lac-L-MeLeu-D-TYRA-L-MeLeu-D-Lac) (dvs PF1022E forbindelsen) oppløst, etterfulgt av tilsetning av 1,4 ml isobuten og 0,11 ml konsentrert sovelsyre ved -40 °C. Etter rørforsegling ble temperaturen til den resulterende blandingen øket tilbake til romtemperatur. Den resulterende blandingen ble omrørt i 2 timer. Reaksjonsblandingen ble isavkjølt og deretter justert til pH 9,0 med 0,6 ml trietylamin etterfulgt av konsentrering. Resten ble løst opp i 70 ml etylacetat, etterfulgt av vasking suksessivt med 70 ml av en 5 % vandig oppløsning av kaliumbisulfat og 70 ml av en 30 % vandig oppløsning av natriumklorid, tørking over vannfri magnesiumsulfat og konsentrering. Resten ble renset ved kromatografi på en silikagelkolonen (kloroform:etylacetat = 4:1), idet 578 mg av tittelforbindelsen oppnådd (utbytte: 77,6 %).
[a]D20 : -92,0° (c = 0,1, MeOH)
tø-NMR (CDC13): 8 = 0,80-1,05 (m, 24H, 8-Me(MeLeu)), 1,32 (d, 9H, t-Bu), 1,40 (d, 6H, P-Me(Lac)), 1,10-1,80 (m, 12H, p-CH2, y-H(MeLeu), 2,70-3,20 (m, 16H, NMe, p-CH2(PhLac)), 5,30-5,80 (m, 8H, a-H(MeLeu), a-H(PhLac), ct-H(Lac)), 7,00 (dd, 4H, t-BuOC6H4), 7,26 (d, 5H, Ph)
Eksempel 19
Fremstilling av cyklo-(L-MeLeu-D-PhLac-L-MeLeu-D-Lac-L-MeLeu-D-TYRA (OCOCi7H35)-L-MeLeu-D-Lac) (kode: PF 1022-006)
I 1,8 ml THF ble 202 mg PF1022E forbindelse, 105 mg stearinsyre, 59,2 mg HOBt og 0,05 ml NMM oppløst, etterfulgt av tilsetning av 82,3 mg EDCI HC1 under isav-kjøling. Den resulterende blandingen ble omrørt ved 4°C i 24 timer. Reaksjonsblandingen ble fortynnet med 40 ml etylacetat og 20 ml heksan, etterfulgt av vasking suksessivt med 40 ml vann, 40 ml av en mettet vandig oppløsning av natriumbikarbonat og 40 ml av en mettet vandig oppløsning av natriumklorid, filtrering ved anvendelse av en liten mengde silikagel for kromatografi og tørking over vannfri magnesiumsulfat. Oppløsningsmidlet ble destillert av under redusert trykk. Det resulterende hvite krystallinske pulveret ble renset ved kromatografi på en silikagelkolonne (kloroform:heksan = 1:1 -> kloroform:etylacetat = 5:1), etterfulgt av krystallisering fra heksan-metanol-vann, idet en 173 mg av tittelforbindelsen ble oppnådd som hvite krystaller (smp 47-48°C, utbytte: 67,1 %).
[a]D22: -71° (c = 0,15, MeOH)
iH-NMR (CD3OD): 8 = 0,79-1,28 (m, 60H, C16H33CH2), 1,25-1,88 (12H, p-CH2, Y-H(MeLeu)), 1,38 (dx2, 3H, P-Me(Lac)), 2,27-2,56 (m, 2H, a-H, C16H33CH2), 3,05-3,21 (m, 4H, p<->CH2(PhLac, TYRA), 2,82-3,04 (m, 12H, NMe), 4,77-5,81 (m, 8H, a-H), 7,04-7,35 (m, 9H, aromatisk)
MS(FAB): (M+H)<+> = 1231
Eksempel 20
Fremstilling av cyklo-(L-MeLeu-D-PhLac-L-MeLeu-D-Lac-L-MeLeu-D-TYRA (3,5-diiod)-L-MeLeu-D-Lac) (kode: PF1022-011)
Til en oppløsning av 203 mg PF1022E forbindelse i 5 ml metylenklorid, 130 mg natriumacetat tilsatt. Den resulterende blandingen ble isavkjølt etterfulgt av tilsetning av 210 mg iod. Etter isavkjøling i 30 minutter ble temperaturen til reaksjonsblandingen øket tilbake til romtemperatur. Trietylamin (0,06 ml) ble tilsatt til reaksjonsblandingen etterfulgt av omrøring ved samme temperatur i 2,5 timer. Reaksjonsblandingen ble tilført 3 ml av en 10 % vandig oppløsning av natriumtiosulfat, etterfulgt av tilsetning av 20 ml vann og 300 ml kloroform. Den resulterende blandingen ble separert i to lag. Vannlaget ble ekstrahert med en flytende blanding av 20 ml etylacetat og 8 ml heksan. De kombinerte organiske lagene ble filtrert ved anvendelse av en liten mengde silikagel for kromatografi, etterfulgt av tørking over vannfri natriumsulfat. Oppløsningsmidlene ble deretter destillert av under redusert trykk. Resten oppnådd på denne måten ble renset ved kromatografi på en silikagelkolonne (kloroform: etylacetat = 5:1), idet 109 mg av tittelforbindelsen ble oppnådd som krystaller (smp 124-126°C, utbytte: 42,4 %)
[a]D20: - 91° (c = 0,08, MeOH)
<*>H-NMR (CD3OD): 8 = 0,78-1,08 (m, 27H, y-Me(MeLeu), p-Me(Lac)), 1,33-1,91 (m, 12H, p-CH2, y-H(MeLeu)), 1,39 (dx2, 3H, p-Me(Lac)), 2,82-3,04 (m, 12H, NMe), 2,91-3,21 (m, 4H, P-CH2 (PhLac, TYRA), 4,77-5,82 (m, 8H, a-H), 7,24-7,70 (m, 7H, aromatisk)
MS(FAB): (M+H)<+> = 1217
Eksempel 21
Fremstilling av cyklo-(L-MeLeu-D-PhLac-L-MeLeu-D-Lac-L-meLeu-D-TYRA(0-Me, 3,5-di-I)-L-MeLeu-D-Lac) (kode: PF1022-012)
I 2 ml THF ble 70 mg 3,5-diiod av PF1022E forbindelsen oppløst, etterfulgt av tilsetning av 0,02 ml metyliodid og 7 mg 60 % natriumhydrid under isavkjøling. Den resulterende blandingen ble omrørt ved 0°C i 3,5 timer. Reaksjonsblandingen ble fortynnet med 20 ml etylacetat etterfulgt av vasking med 10 ml av en mettet vandig oppløsning av natriumklorid, filtrert gjennom en liten mengde silikagel for kromao-grafi og tørking over vannfri natriumsulfat. Opplsøningsmidlet ble deretter av under redusert trykk. Resten oppnådd på denne måten ble renset ved preparativ kromago-grafi på en silikagelkolonne (kloroform:etylacetat = 4,1), idet 43,8 mg av tittelforbindelsen ble oppnådd som et hvitt pulver (smp 108-110°C, utbytte: 61,9 %)
[a]D<20>: -98° (c, 0,11, MeOH)
<i>H-NMR (CD3OD): 8 = 0,79-1,08 (m, 27H, y-Me(MeLeu), p-Me(Lac)), 1,12-1,90 (m, 12H, p-CH2, y-H(MeLeu)), 1,38, 1,39 (dx2, 3H, p-Me(Lac)), 2,81-3,14 (m, 12H, NMe), 4,76-5,82 (m, 8H, a-H), 7,24-7,81 (m, 7H, aromatisk)
MS(FAB): (M+H)<+> = 1231
Eksempel 22
Fremstilling av cyklo-(L-MeLeu-D-PhLac-L-MeLeu-D-Lac-L-meLeu-D-TYRA (OCOO-isoBu)-L-MeLeu-D-Lac) (kode: PF1022-013)
I en flytende blanding av 5 ml etyleter og 5 ml metylenklorid ble 263 mg Cbz-GABA (dvs y-aminosmørsyre) oppløst. Til den resulterende oppløsningen ble 0,3 ml trietylamin og 0,15 ml isobutylklorformat tilsatt under isavkjøling. 5 minutter etter til-setningen ble 640 mg PF1022E tilsatt til den resulterende blandingen som deretter ble omrørt i 1 time under isavkjøling. Reaksjonsblandingen ble fortynnet med etylacetat etterfulgt av vasking en gang med 50 ml av en 5 % vandig oppløsning av kaliumbisulfat og to ganger ganger med 50 ml porsjoner av en mettet vandig oppløsning av natriumbikarbonat, filtrering gjennom en liten mengde silikagel for kromatografi og tørking over vannfri natriumsulfat. Oppløsningsmidlet ble deretter destillert av under redusert trykk. Resten oppnådd på denne måten ble renset ved kromatografi på en silikagelkolonne (kloroform:etylacetat = 20:1 -» 10:1 -» 8.1), etterfulgt av krystallisering fra eter-heksan, hvorved 414 mg av tittelforbindelsen ble oppnådd som prismekrystaller (smp 95-97°C, utbytte: 58,6 %)
<i>H-NMR (CDCI3): 8 = 0,80-1,04 (m, 27H, y-Me(MeLeu), p-Me(Lac)), 1,00 (d, 6H, J = 6,7, y-Me(isobutyl)), 1,40 (dx2, 3H, p-Me(Lac)), 1,42-1,79 (m, 12H, p-CH2, y-H(MeLeu)), 2,05 (m, 1H, p-H(isobutyl)), 2,72-3,06 (m, 12H, NMe), 3,05-3,18 (m, 4H, p-CH2 (PhLac, TYRA), 4,02 (dx2, 2H, a-CH2 (isobutyl)), 4,48-5,71 (m, 8H, a-H), 7,08-7,14, 7,21-7,40 (m, 9H, aromatisk)
MS(FAB): (M+H) + = 1065
Eksempel 23
Fremstilling av cyklo-(L-MeLeu-D-PhLac-L-MeLeu-D-Lac-L-meLeu-D-TYRA(OEt)-L-MeLeu-D-Lac) (kode: PF1022-016) 14 ml THF ble 153 mg PF1022E forbindelse oppløst, etterfulgt av tilsetning av 0,02 ml etyliodid og 15 mg 60 % natriumhydrid under isavkjøling. Den resulterende blandingen ble omrørt ved 0°C i 30 minutter. Reaksjonsblandingen ble fortynnet med 30 ml etylacetat etterfulgt av vasking med en flytende blanding av en 20 % vandig opp-løsning av natriumklorid og 10 ml av en 10 % vandig oppløsning av natriumtiosulfat, filtrering gjennom en liten mengde silikagel for kromatografi og tørking over vannfri natriumsulfat. Oppløsningsmidlet ble deretter destillert av under redusert trykk. Resten som oppsto på denne måten ble renset ved kromatografi på en silikagelkolonne (kloroform:etylacetat = 8:1 -> 5:1), etterfulgt av lyofilisering ved anvendelse av 1,4-dioksan, idet 158 mg av tittelforbindelsen ble oppnådd.
[a]D<20>: -67° (c = 0,11, CHC13)
<i>H-NMR (CD3OD): 8 = 0,78-1,05 (m, 27H, 8-Me(MeLeu), p-Me(Lac)), 1,37 (t, 3H, Me(etyl)), 1,38 (dx2, 3H, p-Me(Lac)), 1,46-1,90 (m, 12H, p-CH2, y-H (MeLeu)), 2,81-3,00 (m, 12H, NMe), 3,01-3,20 (m, 4H, p<->CH2 (PhLac, TYRA)), 4,00 (q, 2H, CH2 (etyl)), 4,76-5,81 (m, 8H, a-H), 6,85-7,33 (m, 9H, aromatisk) MS(FAB): (M+H)<+> = 993
Eksempel 24
Fremstilling av cyklo-(L-MeLeu-D-PhLac-L-MeLeu-D-Lac-L-MeLeu-D-TYRA(0-n-Pr)-L-MeLeu-D-Lac) (kode: PF1022-018)
I 8 ml THF ble 217 mg av PF1022E forbindelsen oppløst, etterfulgt av tilsetning av 0,2 ml n-propyliodid og 27 mg 60 % natriumhydrid under isavkjøling. Den resulterende blandingen ble omrørt ved 0°C i 2 timer og deretter ved romtemperatur i 4 timer. Reaksjonsblandingen ble fortynnet med 50 ml etylacetat, etterfulgt av vasking med 30 ml av en mettet vandig oppløsning av natriumklorid, filtrering gjennom en liten mengde silikagel for kromatografi og tørking over vannfri natriumsulfat. Opp-løsningsmidlet ble deretter destillert av under redusert trykk. Resten oppnådd på denne måten ble renset ved kromatografi på en silikagelkolonne (kloroform:etylacetat = 7:1 -> 3:1), etterfulgt av lyofilisering ved anvendelse 1,4-dioksan, idet 107 mg av tittelforbindelsen ble oppnådd (utbytte: 47 %).
<*>H-NMR (CD3OD): 6 = 0,78-1,11 (m, 30H, 8-Me(MeLeu), (3-Me(lac), OCH2CH2CH3), 1,30-1,89 (m, 14H, p-CH2-, y-H(MeLeu), OCH2CH2CH3), 1,38, 1,39 (dx2, J = 7,0, 3H, p-Me(Lac)), 2,82-3,00 (m, 12H, NMe), 2,92-3,21 (m, 4H, P-CH2(PhLac, TYRA), 3,90, 3,97 (hver t, 2H, OCH2CH2CH3)., 4-75-5,83 (m, 8H, a-H), 6,85-7,33 (m, 9H, aromatisk)
MS(FAB): (M+H) + = 1007
Eksempel 25
Fremstilling av cyklo-(L-MeLeu-D-PhLac-L-MeLeu-D-Lac-L-MeLeu-D-TYRA(0-iso-Pr)-L-meLeu-D-Lac) (kode: PF1022-019)
I 8 ml THF ble 206 ml av PF1022E forbindelsen oppløst, etterfulgt av tilsetning av 0,2 ml isopropyliodid og 19 mg 60 % natriumhydrid under isavkjøling. Den resulterende blandingen ble omrørt ved 0°C i 2 timer og deretter ved romtemperatur i 4 timer. Reaksjonsblandingen ble fortynnet med 50 ml etylacetat etterfulgt av vasking suksessivt med 12 ml av en mettet vandig oppløsning av natriumklorid og 28 ml av en 5 % vandig oppløsnig av natriumtiosulfat, filtrering gjennom en liten mengde silikagel for kromatografi og tørking over vannfri natriumsulfat. Oppløsningsmidlét ble destillert av under redusert trykk. Resten oppnådd på denne måten ble renset ved kromatografi på en silikagelkolonne (kloroform:etylacetat = 8:1 -» 4:1), etterfulgt av lyofilisering ved anvendelse av 1,4-dioksan hvorved 108 mg av tittelforbindelsen ble oppnådd (utbytte: 50 %)
<i>H-NMR (CD3OD): 5 = 0,78-1,06 (m, 27H, y-Me(MeLeu), p-Me(Lac), 1,29, 1,30 (dx2, 6H, Me (isopropyl), 1,38, 1,39 (dx2, 3H, P-Me(Lac)), 1,45-1,89 (m, 12H, p-CH2, y-H(MeLeu)), 2,82-3,00 (m, 12H, NMe), 2,91-3,21 (m, 4H, P-CH2(PhLac, TYRA), 4,55 (m, 1H, CH (isopropyl)), 4,74-5,82 (m, 8H, a-H), 6,84-7,34 (m, 9H, aromatisk
MS(FAB): (M+H)<+> = 1007
Eksempel 26
Fremstilling av cyklo-(L-MeLeu-D-PhLac-L-MeLeu-D-Lac-L-MeLeu-D-TYRA(0-All)-L-meLeu-D-Lac) (kode: PF1022-020)
I 8 ml THF ble 206 mg PF1022E forbindelsen oppløst, etterfulgt av tilsetning av 0,18 ml allyliodid og 20 mg 60 % natriumhydrid under isavkjøling. Den resulterende blandingen ble omrørt ved 0°C i 1 time. Reaksjonsblandingen ble fortynnet med 50 ml etylacetat etterfulgt av vasking med 30 ml av en mettet vandig oppløsning av natriumklorid, filtrert gjennom en liten mengde silikagel for kromatografi og tørking over vannfri natriumsulfat. Oppløsningsmidlet ble destillert av under redusert trykk. Resten oppnådd på denne måten ble renset ved kromatografi på en silikagelkolonne (kloroform:etylacetat = 7:1 -> 4:1), etterfulgt av krystallisering fra eter-heksan, idet 158 mg av tittelforbindelsen ble oppnådd (utbytte: 73,8 %)
<i>H-NMR (CD3OD): 5 = 0,78-1,07 (m, 27H, y-Me(MeLeu), p-Me(Lac), 1,30-1,90 (m, 12H, p-CH2, y-H(MeLeu)), 1,48, 1,39 (dx2, 3H, p-Me(Lac)), 2,81-3,00 (m, 12H, NMe), 2,90-3,20 (m, 4H, p-CH2 (PhLac, TYRA), 4,52 (m, 2H, allyl), 4,74-5,17, 5,44-5,82 (m, 8H, a-H), 5,20-5,25, 5,34-5,41, 6,05 (hver m, hver 1H, allyl), 6,88-7,35 (m, 9H, aromatisk)
MS(FAB): (M+H)<+> = 1005
Eksempel 27
Fremstilling av cyklo-(L-MeLeu-D-PhLac-L-MeLeu-D-Lac-L-MeLeu-D-TYRA(0-n-Bu)-L-MeLeu-D-Lac) (kode: PF1022-021)
I 8 ml THF ble 204 mg PF1022E forbindelse oppløst etterfulgt av tilsetning av 0,24 ml n-butyliodid og 16 mg 60 % natriumhydrid under isavkjøling. Den resulterende blandingen ble omrørt ved 0°C i 1 time og deretter ved romtemperatur i 1 time. Reaksjonsblandingen ble fortynnet med 50 ml etylacetat etterfulgt av vasking med 30 ml av en mettet vandig oppløsning av natriumklorid, filtrert gjennom en liten mengde silikagel for kromatografi og tørket over vannfri natriumsulfat. Oppløsningsmidlet ble deretter destillert av under redusert trykk. Resten oppnådd på denne måten ble renset ved kromatografi på en silikagelkolonne (kloroform:etylacetat = 8:1 -> 4:1), etterfulgt av lyofilisering ved anvendelse av 1,4-dioksan, idet 159 mg av tittelforbindelsen ble oppnådd (utbytte: 73,7 %).
<i>H-NMR (CD3OD): 8 = 0,77-1,05 (m, 30H, S-Me(MeLeu), p-Me(Lac), Me(butyl)), 1,28-1,90 (m, 16H, P-CH2, y-H(MeLeu), OCH2CH2CH3), 1,38, 1,39 (dx2, 3H, p-Me(Lac)), 2,82-3,00 (m, 12H, NMe), 2,92-3,20 (m, 4H, p-CH2(PhLac, TYRA), 3,94 (m, 1H, OCH2CH2CH3), 4,75-5,81 (, 8H, a-H), 6,85-7,33 (m, 9H, aromatisk) MS(FAB): (M+H)<+> = 1021
Eksempel 28
Fremstilling av cyklo-(L-MeI^u-D-PhLac-L-MeLeu-D-Lac-L-MeLey-D-TYRA (OBn)-L-MeLeu-D-Lac) (kode: PF1022-022)
I 9 ml THF ble 305 mg PF1022E forbindelsen oppløst, etterfulgt av tilsetning av 0,07 ml benzyliodid og 28 mg 60 % natriumhydrid under isavkjøling. Den resulternede blandingen ble omrørt ved 0°C i 1,5 timer. Reaksjonsblandingen ble fortynnet med 50 ml etylacetat etterfulgt av vasking med 40 ml av en mettet vandig oppløsning av natriumklorid, filtrering gjennom en liten mengde silikagel for kromatografi og tørking over vannfri natriumsulfat. Oppløsningsmidlet ble deretter destillert av under redusert trykk. Resten oppnådd på denne måten ble renset ved kromatografi på en silikagelkolonne (kloroform:etylacetat = 10:1 = , etterfulgt av lyofilisering ved anvendelse av en flytende blanding av 1,4-dioksan og vann, idet 320 mg av tittelforbindelsen ble oppnådd (utbytte: 95,8 %)
<i>H-NMR (CD3OD): 8 = 0,78-1,06 (m, 27H, 8-Me(MeLeu), p-Me(Lac)), 1,25-1,90 (m, 12H, p-CH2, y-H(MeLeu)), 1,38, 1,39 (dx2, 3H, P-Me(Lac)), 2,82-3,00 (m, 12H, NMe), 2,86-3,20 (m, 4H, p<->CH2(PhLac, TYRA)), 4,74-4,78, 5,17-5,82 (m, 8H, a-H), 5,05 (s, 2H, CH2Ph), 6,95-7,50 (m, 14H, aromtisk)
MS(FAB): (M+H)<+> = 1055
Eksempel 29
Fremstilling av cyklo-(L-MeLeu-D_PhLac-L-MeLeu-D-Lac-L-MeLeu-D-TYRA(3,5-di-Cl)-L-MeLeu-D-Lac) (kode: PF1022-023)
I 15 ml metylenklorid ble 301 mg PF1022E forbindelsen oppløst etterfulgt av tilsetning av 0,22 ml t-butylhypokloritt under isavkjøling. Den resulterende blandingen ble omrørt ved samme temperatur i 40 minutter. Reaksjonsblandingen ble tilsatt 30 ml av en 5 % vandig oppløsning av natriumtiosulfat og 30 ml metylenklorid. Den resulterende blandingen ble separert i to lag. Det organiske laget oppnådd på denne måten ble filtrert gjennom en liten mengde silikagel for kromatografi, etterfulgt av tørking over vannfri natriumsulfat. Oppløsningsmidlet ble deretter destillert av under redusert trykk. Resten oppnådd på denne måten ble renset ved kromatografi på en silikagelkolonne (kloroform:etylacetat = 8:1 -» 4:1), idet 120 mg av tittelforbindelsen ble oppnådd (utbytte: 37,2 %).
iH-NMR (CD3OD): 6 = 0,78-1,07 (m, 27H, 5-Me(MeLeu), p-Me(Lac)), 1,26-1,90 (m, 12H, p-CH2, y-H(MeLeu)), 1,40, 1,41 (dx2, 3H, p-Me(Lac)), 2,80-3,18 (m, 12H, NMe), 2,80-3,20 (m, 4H, p-CH2 (PhLac, TYRA)), 4,78-5,85 (m, 8H, a-H), 7,24-7,35 (m, 7H, aroma-tic)
MS(FAB): (M+H)<+> = 1033, 1035
Eksempel 30
Fremstilling av cyklo-(L-MeLeu-D-PhLac-L-MeLeu-D-Lac-L-meleu-D-TYRA(3,5-di-Br)-L-MeLeu-D-Lac) (kode: PF1022-025)
I 20 ml metylenklorid ble 406 mg PF1022E forbindelsen oppløst. Den resulterende oppløsningen ble tilsatt 0,12 ml trietylamin og 0,07 ml bromin under isavkjøling etterfulgt av omrøring ved 0°C i 20 minutter. Reaksjonsblandingen ble tilsatt 40 ml kloroform og 30 ml av en 5 % vandig oppløsning av natriumtiosulfat. Den resulterende blandingen ble separert i to lag. Vannlaget oppnådd på denne måten ble ekstrahert med en flytende blandingen av 20 ml etylacetat og 10 ml heksan. De kombinerte organiske lagene ble filtrert gjennom en liten mengde silikagel for kromatografi, etterfulgt av tørking over vannfri natriumsulfat. Oppløsnigsmidlet ble deretter destillert av under redusert trykk. Resten oppnådd på denne måten ble renset ved kromatografi på en silikagelkolonne (kloroform:etylacetat = 9:1 -> 7:1), idet 420 mg av tittelforbindelsen ble oppnådd (utbytte: 89,0 %)
[a]D2<0>: -90° (c = 0,2, MeOH)
<i>H-NMR (CD3OD): 5 = 0,78-1,07 (m, 27H, 6-Me(MeLeu), p-Me(Lac)), 1,38 (d, J = 6,7, p-Me(Lac)), 1,28-1,91 (m, 12H, p-CH2, y-H(MeLeu)), 2,82-3,01 (m, 12H, NMe), 2,92-3,21 (m, 4H, p-CH2 (PhLac, TYRA), 4,77-5,82 (m, 8H, a-H), 7,26-7,46 (m, 7H, aromatisk)
MS(FAB): (M+H)<+> = 1121, 1123, 1125
Eksempel 31
Fremstilling av cyklo-(L-MeLeu-D-PhLac-L-MeLeu-D-Lac-L-MeLeu-D-TYRA(3,5-di-Br, 0-Me)-L-MeLeu-D-Lac) (kode: PF1022-026)
I 8 ml THF ble 200 mg 3,5-dibromid av PF1022E forbindelsen oppløst. Den resulterende oppløsningen ble tilført 0,1 ml metyliodid og 16 mg 60 % natriumhydrid under isavkjøling etterfulgt av omrøring ved 0°C i 1,5 timer. Reaksjonsblandingen ble fortynnet med 50 ml etylacetat etterfulgt av vasking med 30 ml av en mettet vandig oppløsning av natriumklorid, filtrering gjennom en liten mengde silikagel for kromatografi og tørking over vannfri natriumsulfat. Oppløsningsmidlene ble deretter destillert av under redusert trykk. Resten oppnådd på denne måten ble renset ved kromatografi på en silikagelkolonne (kloroform:etylacetat = 10:1), idet 108 mg av tittelforbindelsen ble oppnådd (utbytte: 53,1 %)
AH-NMR (CD3OD): 6 = 0,78-1,08 (m, 27H, 6-Me(MeLeu), p-Me(Lac)), 1,28-1,90 (m, 12H, 8-Me(MeLeu), (3-Me(Lac)), 1,28-1,90 (m, 12H, p-CH2, y-H(MeLeu)), 1,38, 1,39 (dx2, J = 6,7, p-Me(Lac)), 2,81-3,13 (m, 12H, NMe), 2,90-3,20 (m, 4H, P-CH2 (PhLac, TYRA)), 4,77-5,82 (m, 8H, a-H), 7,24-7,59 (m, 7H, aromatisk) MS(FAB): (M+H)<+> = 1135, 1137, 1139
Eksempel 32
Fremstilling av cyklo-(L-MeLeu-D-PhLac-L-MeLeu-D-Lac-L-meleu-D-TYRA(0-Ocf)-L-MeLeu-D-Lac) (kode: PF1022-029)
I 5 ml THF ble 253 mg PF1022E forbindelse oppløst. Den resulterende oppløsningen ble tilsatt 2,4 ml oktyliodid og 23 mg 60 % natriumhydrid under isavkjøling etterfulgt av omrøring ved 0°C i 1 time. Reaksjonsblandingen ble fortynnet med 40 ml etylacetat og 10 ml heksan etterfulgt av vasking med 30 ml av en mettet vandig oppløs-ning av natriumklorid, filtrering gjennom en liten mengde silikagel for kromatografi og tørking over vannfri natriumsulfat. Oppløsningsmidlene ble deretter destillert av under redusert trykk. Resten oppnådd på denne måten ble renset ved kromatografi på en silikagelkolonne (kloroform: etylacetat = 20:1-» 10:1-»5:1), idet 199 mg av tittelforbindelsen ble oppnådd (utbytte: 70,6 %).
Eksempel 33
Fremstilling av cyklo-(L-MeLeu-D-PhLac-L-MeLeu-D-Lac-L-MeLeu-D-TYRA(0-THP)-L-MeLeu-D-Lac) (kode: PF1022-224)
I 5 ml metylenklorid, 202 mg PF1022E forbindelse oppløst. Den resulterende opp-løsningen ble tilsatt 4,5 mg p-toluensulfonsyrehydrat og 0,04 ml 2,3-dihydropyran etterfulgt av omrøring ved romtemperatur i 40 minutter. Reaksjonsblandingen ble tilsatt 0,01 ml trietylamin etterfulgt av konsentrering. Resten oppnådd på denne måten ble renset ved kromatografi på en silikagelkolonne (etylacetat:heksan = 1:1), idet 200 mg av tittelforbindelsen ble oppnådd (utbytte: 91 %).
AH-NMR (CDCI3): 8 = 0,79-1,05 (m, 27H, 8-Me(MeLeu), p<->Me(Lac)), 1,23-2,05 (m, 18H, P-CH2, y-H(MeLeu), OCH2(CH2)3(THP)), 1,40 (d, J = 6,7, p-Me(Lac)), 2,72-3,01 (sxlO, 12H, NMe), 3,02-3,18 (m, 4H, p-CH2(PhLac, TYRA), 3,57-3,62, 3,85-3,91 (m, hver 1H, OCH2CH2(THP)), 4,47-5,70 (m, 9H, a-H, OCHO(THP)), 6,94-6,99, 7,11-7,15, 7,21-7,31 (m, 9H, aromatisk)
MS(FAB): (M+H)<+> = 1049
Eksempel 34
Fremstilling av cyklo-(L-MeLeu-D-PhLac-L-MeLeu-D-Lac-L-meLeu-D-TYRA(0-Tr)-L-meLeu-D-Lac) (kode: PF1022-223)
116 ml metylenklorid ble 410 mg PF1022E forbindelse oppløst. Den resulterende oppløsningen ble tilsatt 210 mg trietylklorid, 0,08 ml trietylamin og 16 mg 4-dimetylaminopyridin, etterfulgt av omrøring ved romtemperatur i 24 timer. Reaksjonsblandingen ble fortynnet med 8 ml toluen etterfulgt av rensing ved kromatografi på en silikagelkolonne (etylacetat:heksan = 2:1), hvorved 287 mg av tittelforbindelsen ble oppnådd som et hvitt pulver (utbytte: 56 %)
smp 109-115°C (dekomp.)
<i>H-NMR (CD3OD): 8 = 0,78-1,05 (m, 27H, 8-Me(MeLeu), p-Me(Lac)), 1,24-1,80 (m, 12H, P-CH2, y-H(MeLeu)), 1,40 (d, 3H, J = 7, p-Me(Lac)), 2,51-3,01 (sxlO, 12H, NMe), 2,77-3,18 (m, 4H, p-CH2(PhLac, TYRA)), 4,41-5,70 (m, 8H, a-H), 6,57-6,62, 6,81-6,84, 7,18-7,31, 7,41-7,45 (m, 24H, aromatisk)
MS(FAB): (M+H)<+> = 1207
INDUSTRIELT ANVENDELSESOMRÅDE
PF1022 derivatene representert ved generell formel (I) som er angitt heri i foreliggende oppfinnelse har hver og en antelmintiske aktiviteter overfor forskjellige parasittiske ormer som er parasitter på menneskekroppen og husdyr. De er derfor nyttige som antelmintiske midler for å forhindre eller behandling av parasittiske infeksjoner.

Claims (4)

1. Antelmintisk cyklodepsipeptid, karakterisert ved at det har formelen (F): hvor R er H eller metylgruppe eller et salt derav.
2. Antelmintisk sammensetning, karakterisert ved at den omfatter et cyklodepsipeptid ifølge krav 1.
3. Antelmintisk sammensetning ifølge krav 2, karakterisert ved at cyklodepsipeptidet er i form av et syretilsetningssalt.
4. Anvendelse av en antelmintisk sammensetning ifølge krav 2 eller 3, for behandling av høns.
NO19953244A 1993-02-19 1995-08-17 Derivater av cyklodepsipeptid PF 1022 og anvendelse derav NO310411B1 (no)

Applications Claiming Priority (3)

Application Number Priority Date Filing Date Title
JP2950593 1993-02-19
JP2949893 1993-02-19
PCT/JP1994/000252 WO1994019334A1 (en) 1993-02-19 1994-02-18 Pf1022 derivative, cyclic depsipeptide

Publications (3)

Publication Number Publication Date
NO953244D0 NO953244D0 (no) 1995-08-17
NO953244L NO953244L (no) 1995-10-11
NO310411B1 true NO310411B1 (no) 2001-07-02

Family

ID=26367704

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
NO19953244A NO310411B1 (no) 1993-02-19 1995-08-17 Derivater av cyklodepsipeptid PF 1022 og anvendelse derav

Country Status (9)

Country Link
US (1) US5747448A (no)
EP (1) EP0685469A4 (no)
KR (1) KR100309091B1 (no)
CN (1) CN1073560C (no)
AU (1) AU695021B2 (no)
CA (1) CA2155871A1 (no)
NO (1) NO310411B1 (no)
NZ (1) NZ261630A (no)
WO (1) WO1994019334A1 (no)

Families Citing this family (198)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
JP2874342B2 (ja) * 1992-03-17 1999-03-24 藤沢薬品工業株式会社 デプシペプチド誘導体，その製法およびその用途
PT718293E (pt) * 1993-09-06 2002-08-30 Fujisawa Pharmaceutical Co Composto ciclodepsipeptidico
DE4400464A1 (de) * 1994-01-11 1995-07-13 Bayer Ag Endoparasitizide Mittel
US6221894B1 (en) 1995-03-20 2001-04-24 Merck & Co., Inc. Nodulisporic acid derivatives
DE19520275A1 (de) * 1995-06-02 1996-12-05 Bayer Ag Endoparasitizide Mittel
ATE425973T1 (de) * 1995-06-30 2009-04-15 Astellas Pharma Inc Depsipeptid-derivat, verfahren zu dessen herstellung und zwischenprodukt dafur
DE19529604A1 (de) * 1995-08-11 1997-02-13 Bayer Ag Endoparasitizide Mittel auf Basis von Didepsipeptiden, neue Didepsipeptide und ein Verfahren zu ihrer Herstellung
CN1196056A (zh) * 1995-09-07 1998-10-14 法玛西雅厄普约翰公司 环化蠕虫抑制剂
EP0903347B1 (en) * 1995-09-22 2005-07-20 Meiji Seika Kaisha Ltd. Novel cyclic depsipeptide pf1022 derivatives
DE19545639A1 (de) * 1995-12-07 1997-06-12 Bayer Ag Verfahren zur Herstellung von substituierten Arylmilchsäure-haltigen Cyclodepsipeptiden mit 24 Ringatomen
KR20000029822A (ko) * 1996-08-07 2000-05-25 이치로 키타사토 환상데프시펩티드화합물의제조방법과새로운환상데프시펩티드
DE19713626A1 (de) * 1997-04-02 1998-10-08 Bayer Ag Neue Thiodepsipeptide zur Bekämpfung von Endoparasiten und ein einfaches Verfahren zu ihrer Herstellung
US5975893A (en) * 1997-06-20 1999-11-02 Align Technology, Inc. Method and system for incrementally moving teeth
KR100551651B1 (ko) * 1997-11-10 2006-02-13 아스텔라스세이야쿠 가부시키가이샤 뎁시펩티드 유도체의 신규 결정 및 그의 제조 방법
DE19811559A1 (de) * 1998-03-17 1999-09-23 Bayer Ag Cyclooctadepsipeptide
US6136838A (en) * 1998-03-19 2000-10-24 Merck & Co., Inc. Sulfurpentafluorophenylpyrazoles for controlling ectoparasitic infestations
DE19828047A1 (de) * 1998-06-24 1999-12-30 Bayer Ag Substituierte Cyclooctadepsipeptide
US6311134B1 (en) * 1999-02-09 2001-10-30 Mallinckrodt Inc. Process and apparatus for comparing chemical products
CN100489095C (zh) * 1999-09-29 2009-05-20 明治制果株式会社 生产被官能团修饰的次级代谢产物的转化体和新的生物合成基因
DE19962145A1 (de) * 1999-12-22 2001-06-28 Bayer Ag Schädlingsbekämpfungsmittel/Depsipeptide
DE19962147A1 (de) * 1999-12-22 2001-06-28 Bayer Ag Schädlingsbekämpfungsmittel / PF 1022-221
DE10031044A1 (de) * 2000-06-26 2002-01-03 Bayer Ag Endoparasitizide Mittel zur freiwilligen oralen Aufnahme durch Tiere
US6559335B2 (en) * 2000-09-22 2003-05-06 Dr. Reddy's Laboratories Limited Process for the preparation of 3-aryl-2-hydroxy propanoic acid
DE102004055316A1 (de) * 2004-11-16 2006-05-18 Bayer Healthcare Ag Verhinderung vertikaler Endoparasiten-Infektionen
DE102008022520A1 (de) 2008-05-07 2009-11-12 Bayer Animal Health Gmbh Feste Arzneimittelformulierung mit verzögerter Freisetzung
DE102008030764A1 (de) 2008-06-28 2009-12-31 Bayer Animal Health Gmbh Kombination von Amidin-Derivaten mit cyclischen Depsipeptiden
DE102008031284A1 (de) * 2008-07-02 2010-01-07 Bayer Schering Pharma Aktiengesellschaft Neue Bekämpfungsmöglichkeit der Giardiose
DE102008031283A1 (de) 2008-07-02 2010-01-07 Bayer Schering Pharma Aktiengesellschaft Neue Bekämpfungsmöglichkeit von durch Trichomonadida hervorgerufenen Krankheiten
DE102009012423A1 (de) 2009-03-10 2010-09-16 Bayer Animal Health Gmbh Zubereitung auf Ölbasis
TWI487486B (zh) 2009-12-01 2015-06-11 Syngenta Participations Ag 以異唑啉衍生物為主之殺蟲化合物
BR112012020521B1 (pt) 2010-02-17 2017-12-26 Syngenta Participations Ag Derivative compounds of isoxazoline, its intermediaries and method for controlling insects, mites, nematodes, or molluscs
CN102770419A (zh) 2010-02-22 2012-11-07 先正达参股股份有限公司 作为杀虫化合物的二氢呋喃衍生物
MX2012009707A (es) 2010-02-25 2012-09-12 Syngenta Ltd Proceso para preparar derivados isoxazolinicos.
WO2012028556A1 (en) 2010-08-31 2012-03-08 Bayer Animal Health Gmbh Macrocyclic lactones and their use and their combinations with other active substances
DE102010064245A1 (de) 2010-12-28 2012-06-28 Bayer Animal Health Gmbh Makrocylischen Lactone und deren Verwendung und deren Kombinationen mit anderen Wirkstoffen
EP2625165B1 (en) 2010-10-05 2018-07-04 Syngenta Participations AG Insecticidal pyrrolidin-yl-aryl-carboxamides
WO2012049327A2 (en) 2010-10-15 2012-04-19 Syngenta Participations Ag Pesticidal mixtures
EP2643302A1 (en) 2010-11-23 2013-10-02 Syngenta Participations AG Insecticidal compounds
EP2651921A1 (en) 2010-12-17 2013-10-23 Syngenta Participations AG Insecticidal compounds
EP2673270A1 (en) 2011-02-09 2013-12-18 Syngenta Participations AG Insecticidal compounds
BR112013023798A2 (pt) 2011-03-22 2016-09-20 Syngenta Participations Ag compostos inseticidas
WO2012156400A1 (en) 2011-05-18 2012-11-22 Syngenta Participations Ag Insecticidal compounds based on arylthioacetamide derivatives
US9339505B2 (en) 2011-05-31 2016-05-17 Syngenta Participations Ag Pesticidal mixtures including isoxazoline derivatives
AR086587A1 (es) 2011-05-31 2014-01-08 Syngenta Participations Ag Compuestos insecticidas
WO2012175474A1 (en) 2011-06-20 2012-12-27 Syngenta Participations Ag 1,2,3 triazole pesticides
WO2013026724A1 (en) 2011-08-22 2013-02-28 Syngenta Participations Ag Dihydrofuran derivatives as insecticidal compounds
EP2748137A1 (en) 2011-08-22 2014-07-02 Syngenta Participations AG Dihydrofuran derivatives as insecticidal compounds
WO2013026930A1 (en) 2011-08-25 2013-02-28 Syngenta Participations Ag Process for the preparation of thietane derivatives
US9307766B2 (en) 2011-08-25 2016-04-12 Syngenta Participations Ag Isoxazoline derivatives as insecticidal compounds
WO2013026695A1 (en) 2011-08-25 2013-02-28 Syngenta Participations Ag Isoxazoline derivatives as insecticidal compounds
AU2012298448A1 (en) 2011-08-25 2014-03-06 Syngenta Participations Ag Isoxazoline derivatives as insecticidal compounds
WO2013026929A1 (en) 2011-08-25 2013-02-28 Syngenta Participations Ag Dihydropyrrole derivatives as insecticidal compounds
EP2755969B1 (en) 2011-09-13 2017-01-18 Syngenta Participations AG Isothiazoline derivatives as insecticidal compounds
UA112556C2 (uk) 2011-10-03 2016-09-26 Сінгента Партісіпейшнс Аг Інсектицидні похідні 2-метоксибензамідів
CN103842346A (zh) 2011-10-03 2014-06-04 先正达参股股份有限公司 作为杀虫化合物的异噁唑啉衍生物
BR112014009220A8 (pt) 2011-10-19 2017-06-20 Zoetis Llc uso de derivados de aminoacetonitrila contra endoparasitas
SG11201404764VA (en) * 2012-02-08 2014-10-30 Stella Pharma Corp Method for producing cereulide and derivative thereof, intermediate for production of cereulide, and cereulide derivative
WO2013135674A1 (en) 2012-03-12 2013-09-19 Syngenta Participations Ag Insecticidal 2-aryl-acetamide compounds
HUE042661T2 (hu) * 2012-06-13 2019-07-29 Meiji Seika Pharma Co Ltd Új ciklusos depszipeptid származék és ezt tartalmazó kártevõirtó szer
WO2014001121A1 (en) 2012-06-25 2014-01-03 Syngenta Participations Ag Isothiazole derivatives as insecticidal compounds
WO2014001120A1 (en) 2012-06-25 2014-01-03 Syngenta Participations Ag Isothiazole derivatives as insecticidal compounds
MX2015004675A (es) 2012-10-31 2015-08-07 Syngenta Participations Ag Compuestos insecticidas.
WO2014079935A1 (en) 2012-11-21 2014-05-30 Syngenta Participations Ag Insecticidal compounds based on arylthioacetamide derivatives
US9635853B2 (en) 2013-04-02 2017-05-02 Syngenta Participations Ag Insecticidal compounds
CN105102433B (zh) 2013-04-02 2017-12-15 先正达参股股份有限公司 杀虫化合物
WO2015007451A1 (en) 2013-07-15 2015-01-22 Syngenta Participations Ag Microbiocidal heterobicyclic derivatives
MX2016008348A (es) 2013-12-23 2016-09-08 Syngenta Participations Ag Compuestos insecticidas.
ES2682743T3 (es) 2014-03-20 2018-09-21 Technische Universität Berlin Procedimiento de obtención de péptidos no ribosómicos mediante expresión heteróloga de al menos una sintetasa de péptido no ribosómico en Aspergillus niger
WO2016087593A1 (en) 2014-12-05 2016-06-09 Syngenta Participations Ag Novel fungicidal quinolinylamidines
CN107428722B (zh) 2015-03-27 2021-04-20 先正达参股股份有限公司 杀微生物的杂二环衍生物
WO2016155831A1 (en) 2015-04-02 2016-10-06 Syngenta Participations Ag Isoxazoline-styrene derivatives as insecticidal compounds
WO2016187534A1 (en) * 2015-05-20 2016-11-24 Merial, Inc. Anthelmintic depsipeptide compounds
JP6864675B2 (ja) 2015-10-02 2021-04-28 シンジェンタ パーティシペーションズ アーゲー 殺微生物オキサジアゾール誘導体
BR112018008467A2 (pt) 2015-10-28 2018-11-06 Syngenta Participations Ag derivados de oxadiazol microbiocidas
EP3371153A1 (en) 2015-11-04 2018-09-12 Syngenta Participations AG Microbiocidal anilide derivatives
CN108289448B (zh) 2015-12-02 2021-10-22 先正达参股股份有限公司 杀微生物的噁二唑衍生物
CN108368099B (zh) 2015-12-17 2021-11-12 先正达参股股份有限公司 杀微生物的噁二唑衍生物
MY194716A (en) 2015-12-28 2022-12-15 Merial Inc Anthelmintic depsipeptide compounds
CN108779109B (zh) 2016-03-15 2022-03-11 先正达参股股份有限公司 杀微生物的噁二唑衍生物
BR112018069412B1 (pt) 2016-03-24 2022-09-20 Syngenta Participations Ag Compostos derivados de oxadiazol microbiocidas, composição agroquímica, método de controle ou prevenção de infestação de plantas úteis por microrganismos fitopatogênicos e uso do referido composto
CN109068652A (zh) 2016-04-08 2018-12-21 先正达参股股份有限公司 杀微生物的噁二唑衍生物
CN109071522B (zh) 2016-04-12 2022-04-12 先正达参股股份有限公司 杀微生物的噁二唑衍生物
WO2017178408A1 (en) 2016-04-15 2017-10-19 Syngenta Participations Ag Microbiocidal silicon containing aryl derivatives
DK3464284T3 (da) 2016-05-30 2021-01-11 Syngenta Participations Ag Mikrobiocide thiazolderivater
WO2017207757A1 (en) 2016-06-03 2017-12-07 Syngenta Participations Ag Microbiocidal oxadiazole derivatives
AR108745A1 (es) 2016-06-21 2018-09-19 Syngenta Participations Ag Derivados de oxadiazol microbiocidas
CN109476613A (zh) 2016-07-22 2019-03-15 先正达参股股份有限公司 杀微生物的噁二唑衍生物
CN109476651A (zh) 2016-07-22 2019-03-15 先正达参股股份有限公司 杀微生物的噁二唑衍生物
EP3487843A1 (en) 2016-07-22 2019-05-29 Syngenta Participations AG Microbiocidal oxadiazole derivatives
WO2018029242A1 (en) 2016-08-11 2018-02-15 Syngenta Participations Ag Microbiocidal oxadiazole derivatives
WO2018055133A1 (en) 2016-09-23 2018-03-29 Syngenta Participations Ag Microbiocidal tetrazolone derivatives
EP3515908A1 (en) 2016-09-23 2019-07-31 Syngenta Participations AG Microbiocidal oxadiazole derivatives
ES2862453T3 (es) 2016-10-06 2021-10-07 Syngenta Participations Ag Derivados de oxadiazol microbiocidas
WO2018093920A1 (en) 2016-11-16 2018-05-24 Merial, Inc. Anthelmintic depsipeptide compounds
UY37623A (es) 2017-03-03 2018-09-28 Syngenta Participations Ag Derivados de oxadiazol tiofeno fungicidas
WO2018162643A1 (en) 2017-03-10 2018-09-13 Syngenta Participations Ag Microbiocidal oxadiazole derivatives
CN110506040A (zh) 2017-04-03 2019-11-26 先正达参股股份有限公司 杀微生物的噁二唑衍生物
BR112019020739B1 (pt) 2017-04-05 2023-12-19 Syngenta Participations Ag Compostos derivados de oxadiazol microbiocidas e seu uso, composição agroquímica, método para controlar ou prevenir a infestação de plantas úteis por microrganismos fitopatogênicos
WO2018184988A1 (en) 2017-04-05 2018-10-11 Syngenta Participations Ag Microbiocidal oxadiazole derivatives
BR112019020735B1 (pt) 2017-04-05 2023-12-05 Syngenta Participations Ag Compostos derivados de oxadiazol microbiocidas e seu uso, composição agroquímica e método para controlar ou prevenir a infestação de plantas úteis por microrganismos fitopatogênicos
BR112019020756B1 (pt) 2017-04-05 2023-11-28 Syngenta Participations Ag Compostos derivados de oxadiazol microbicidas, composição agroquímica compreendendo os mesmos, método para controlar ou prevenir a infestação de plantas úteis por microrganismos fitopatogênicos e uso desses compostos
WO2018184987A1 (en) 2017-04-05 2018-10-11 Syngenta Participations Ag Microbiocidal oxadiazole derivatives
BR112019020734B1 (pt) 2017-04-05 2023-12-05 Syngenta Participations Ag Compostos derivados de oxadiazol, composição agroquímica, método para controlar ou prevenir a infestação de plantas úteis por microrganismos fitopatogênicos e uso dos referidos compostos
WO2018185211A1 (en) 2017-04-06 2018-10-11 Syngenta Participations Ag Microbiocidal oxadiazole derivatives
WO2018206419A1 (en) 2017-05-12 2018-11-15 Syngenta Participations Ag Microbiocidal heterobicyclic derivatives
CN110709395A (zh) 2017-06-02 2020-01-17 先正达参股股份有限公司 杀微生物的噁二唑衍生物
WO2019011928A1 (en) 2017-07-11 2019-01-17 Syngenta Participations Ag MICROBIOCIDE OXADIAZOLE DERIVATIVES
WO2019011926A1 (en) 2017-07-11 2019-01-17 Syngenta Participations Ag MICROBIOCIDE OXADIAZOLE DERIVATIVES
BR112020000465B1 (pt) 2017-07-11 2024-02-20 Syngenta Participations Ag Derivados oxadiazol microbiocidas
BR112020000456A2 (pt) 2017-07-11 2020-07-21 Syngenta Participations Ag derivados oxadiazol microbiocidas
WO2019012011A1 (en) 2017-07-12 2019-01-17 Syngenta Participations Ag MICROBIOCIDE OXADIAZOLE DERIVATIVES
BR112020000414A2 (pt) 2017-07-12 2020-07-21 Syngenta Participations Ag derivados de oxadiazol microbicidas
WO2019012003A1 (en) 2017-07-13 2019-01-17 Syngenta Participations Ag MICROBIOCIDE OXADIAZOLE DERIVATIVES
US11266146B2 (en) 2017-09-13 2022-03-08 Syngenta Participations Ag Microbiocidal quinoline (thio)carboxamide derivatives
US20200267978A1 (en) 2017-09-13 2020-08-27 Syngenta Participations Ag Microbiocidal quinoline (thio)carboxamide derivatives
JP7158469B2 (ja) 2017-09-13 2022-10-21 シンジェンタ パーティシペーションズ アーゲー 殺微生物性キノリン（チオ）カルボキサミド誘導体
WO2019053016A1 (en) 2017-09-13 2019-03-21 Syngenta Participations Ag MICROBIOCIDE DERIVATIVES OF QUINOLINE (THIO) CARBOXAMIDE
CN111164076A (zh) 2017-09-13 2020-05-15 先正达参股股份有限公司 杀微生物的喹啉(硫代)甲酰胺衍生物
ES2906980T3 (es) 2017-09-13 2022-04-21 Syngenta Participations Ag Derivados de quinolina (tio)carboxamida microbiocidas
ES2894762T3 (es) 2017-09-13 2022-02-15 Syngenta Participations Ag Derivados de quinolina (tio)carboxamida microbiocidas
UY37913A (es) 2017-10-05 2019-05-31 Syngenta Participations Ag Derivados de picolinamida fungicidas que portan un grupo terminal cuaternario
UY37912A (es) 2017-10-05 2019-05-31 Syngenta Participations Ag Derivados de picolinamida fungicidas que portan grupos terminales heteroarilo o heteroariloxi
WO2019091975A1 (en) 2017-11-07 2019-05-16 Bayer Animal Health Gmbh Method for the synthesis of cyclic depsipeptides
EP3710429B1 (en) 2017-11-15 2023-04-05 Syngenta Participations AG Microbiocidal picolinamide derivatives
CN111356679A (zh) 2017-11-20 2020-06-30 先正达参股股份有限公司 杀微生物的噁二唑衍生物
CA3082950A1 (en) 2017-11-29 2019-06-06 Syngenta Participations Ag Microbiocidal thiazole derivatives
RU2747149C9 (ru) 2017-11-29 2021-06-29 ЗОЕТИС СЕРВИСИЗ ЭлЭлСи Анти-эндопаразитарные депсипептиды
GB201721235D0 (en) 2017-12-19 2018-01-31 Syngenta Participations Ag Polymorphs
US11535594B2 (en) 2017-12-19 2022-12-27 Syngenta Participations Ag Microbiocidal picolinamide derivatives
BR112020021645A2 (pt) 2018-04-26 2021-01-26 Syngenta Participations Ag derivados de oxadiazol microbicidas
NZ769696A (en) 2018-05-10 2023-12-22 Zoetis Services Llc Endoparasitic depsipeptides
US11629129B2 (en) 2018-05-25 2023-04-18 Syngenta Participations Ag Microbiocidal picolinamide derivatives
CN112351981A (zh) 2018-06-29 2021-02-09 先正达农作物保护股份公司 杀微生物的噁二唑衍生物
BR112020027003A2 (pt) 2018-07-02 2021-04-06 Syngenta Crop Protection Ag Derivados de 3-(2-tienil)-5-(trifluorometil)-1,2,4-oxadiazol como fungicidas agroquímicos
WO2020016180A1 (en) 2018-07-16 2020-01-23 Syngenta Crop Protection Ag Microbiocidal oxadiazole derivatives
GB201812692D0 (en) 2018-08-03 2018-09-19 Syngenta Participations Ag Microbiocidal compounds
ES2935972T3 (es) 2018-09-19 2023-03-13 Syngenta Crop Protection Ag Derivados de quinolina carboxamida microbiocidas
WO2020070132A1 (en) 2018-10-06 2020-04-09 Syngenta Participations Ag Microbiocidal quinoline dihydro-(thiazine)oxazine derivatives
US12012399B2 (en) 2018-10-06 2024-06-18 Syngenta Participations Ag Microbiocidal quinoline dihydro-(thiazine)oxazine derivatives
BR112021007156A2 (pt) 2018-10-17 2021-07-20 Syngenta Crop Protection Ag derivados de oxadiazol microbiocidas
AR116628A1 (es) 2018-10-18 2021-05-26 Syngenta Crop Protection Ag Compuestos microbiocidas
AR117200A1 (es) 2018-11-30 2021-07-21 Syngenta Participations Ag Derivados de tiazol microbiocidas
AR117183A1 (es) 2018-11-30 2021-07-14 Syngenta Crop Protection Ag Derivados de tiazol microbiocidas
EP3908330A1 (en) 2019-01-10 2021-11-17 Zoetis Services LLC Anthelmintic laboratory animal model for heartworm
WO2020165403A1 (en) 2019-02-15 2020-08-20 Syngenta Crop Protection Ag Phenyl substituted thiazole derivatives as microbiocidal compounds
GB201903942D0 (en) 2019-03-22 2019-05-08 Syngenta Crop Protection Ag Microbiocidal compounds
ES2971486T3 (es) 2019-03-27 2024-06-05 Syngenta Crop Protection Ag Derivados de tiazol microbiocidas
WO2020208095A1 (en) 2019-04-10 2020-10-15 Syngenta Crop Protection Ag Microbiocidal picolinamide derivatives
AR119009A1 (es) 2019-05-29 2021-11-17 Syngenta Crop Protection Ag Derivados de alcoxipiridina y alcoxipirimidina microbicidas
ES2978895T3 (es) 2019-05-29 2024-09-23 Syngenta Crop Protection Ag Derivados microbiocidas
US20220227763A1 (en) 2019-05-29 2022-07-21 Syngenta Crop Protection Ag Microbiocidal derivatives
AR119011A1 (es) 2019-05-29 2021-11-17 Syngenta Crop Protection Ag DERIVADOS DE [1,3]DIOXOLO[4,5-c]PIRIDIN-4-CARBOXAMIDA, COMPOSICIONES AGROQUÍMICAS QUE LOS COMPRENDEN Y SU EMPLEO COMO FUNGICIDA PARA CONTROLAR O PREVENIR LA INFESTACIÓN DE PLANTAS ÚTILES
US20220264877A1 (en) 2019-07-05 2022-08-25 Syngenta Crop Protection Ag Microbiocidal picolinamide derivatives
GB201910037D0 (en) 2019-07-12 2019-08-28 Syngenta Crop Protection Ag Microbiocidal compounds
WO2021032632A1 (en) 2019-08-21 2021-02-25 Syngenta Participations Ag Apparatus and method for converting existing sowing equipment
CA3146919A1 (en) 2019-08-21 2021-02-25 Jamie RICKARD Apparatus and method for reducing dust development in precision drill sowing
BR112022003062A2 (pt) 2019-08-21 2022-05-10 Syngenta Participations Ag Tratamento de alta precisão de sementes e mudas em estufa
US20220287221A1 (en) 2019-08-21 2022-09-15 Syngenta Participations Ag Precision treatment and sowing or planting method and device
AU2020332746A1 (en) 2019-08-21 2022-03-03 Syngenta Crop Protection Ag Sowing device and method for treating seeds during planting
AR121734A1 (es) 2020-04-08 2022-07-06 Syngenta Crop Protection Ag Derivados microbicidas de tipo dihidropirrolopirazina de quinolina
BR112022020239A2 (pt) 2020-04-08 2022-11-22 Syngenta Crop Protection Ag Derivados de quinolina di-hidro-(tiazina)oxazina microbiocidas
AR121733A1 (es) 2020-04-08 2022-07-06 Syngenta Crop Protection Ag Derivados microbiocidas de tipo dihidro-(tiazina)oxazina de quinolina
GB202006386D0 (en) 2020-04-30 2020-06-17 Syngenta Crop Protection Ag Microbiocidal Compounds
GB202006399D0 (en) 2020-04-30 2020-06-17 Syngenta Crop Protection Ag Microbiocidal compounds
GB202006480D0 (en) 2020-05-01 2020-06-17 Syngenta Crop Protection Ag Microbiocidal compounds
GB202006606D0 (en) 2020-05-05 2020-06-17 Syngenta Crop Protection Ag Microbiocidal compounds
CR20220613A (es) 2020-06-03 2023-01-17 Syngenta Crop Protection Ag Derivados microbiocidas
GB202014840D0 (en) 2020-09-21 2020-11-04 Syngenta Crop Protection Ag Microbiocidal compounds
AU2021410052A1 (en) 2020-12-21 2023-08-03 Boehringer Ingelheim Vetmedica Gmbh Parasiticidal collar comprising isoxazoline compounds
AU2022251771A1 (en) 2021-03-27 2023-09-21 Syngenta Crop Protection Ag Microbiocidal isonicotinic amide derivatives
UY39696A (es) 2021-03-31 2022-10-31 Syngenta Crop Protection Ag Derivados microbiocidas de quinolin/quinoxalin-benzotiazina como agentes fungicidas, en particular c
BR112023021626A2 (pt) 2021-04-20 2024-02-20 Syngenta Crop Protection Ag Derivados microbiocidas de quinolina/quinoxalina isoquinolina
BR112024001979A2 (pt) 2021-08-02 2024-04-30 Syngenta Crop Protection Ag Derivados de pirazol microbicidas
WO2023089049A2 (en) 2021-11-19 2023-05-25 Syngenta Crop Protection Ag Microbiocidal isonicotinic amide derivatives
WO2023094303A1 (en) 2021-11-25 2023-06-01 Syngenta Crop Protection Ag Microbiocidal heterobiaryl amide derivatives
WO2023094304A1 (en) 2021-11-25 2023-06-01 Syngenta Crop Protection Ag Microbiocidal heterobiaryl amide derivatives
AR127922A1 (es) 2021-12-15 2024-03-13 Syngenta Crop Protection Ag Derivados heterocíclicos bicíclicos microbiocidas
CN118368986A (zh) 2021-12-17 2024-07-19 先正达农作物保护股份公司 杀微生物的吡唑衍生物
WO2023111215A1 (en) 2021-12-17 2023-06-22 Syngenta Crop Protection Ag Microbiocidal pyridine-substituted benzothiazine derivatives
WO2023118011A1 (en) 2021-12-22 2023-06-29 Syngenta Crop Protection Ag Microbiocidal aza-heterobiaryl derivatives
WO2023139166A1 (en) 2022-01-19 2023-07-27 Syngenta Crop Protection Ag Methods for controlling plant pathogens
WO2023148206A1 (en) 2022-02-02 2023-08-10 Syngenta Crop Protection Ag Microbiocidal n-amide derivatives
WO2023166067A1 (en) 2022-03-02 2023-09-07 Syngenta Crop Protection Ag Microbiocidal pyridazinone amide derivatives
AR129535A1 (es) 2022-06-21 2024-09-04 Syngenta Crop Protection Ag Derivados de carboxamida heterocíclicos bicíclicos microbiocidas
WO2024018016A1 (en) 2022-07-21 2024-01-25 Syngenta Crop Protection Ag Crystalline forms of 1,2,4-oxadiazole fungicides
WO2024068656A1 (en) 2022-09-28 2024-04-04 Syngenta Crop Protection Ag Fungicidal compositions
WO2024068655A1 (en) 2022-09-28 2024-04-04 Syngenta Crop Protection Ag Fungicidal compositions
TW202430031A (zh) 2022-09-30 2024-08-01 瑞士商先正達農作物保護股份公司 殺微生物之吡唑衍生物
TW202430514A (zh) 2022-09-30 2024-08-01 瑞士商先正達農作物保護股份公司 殺微生物之吡唑衍生物
WO2024089191A1 (en) 2022-10-27 2024-05-02 Syngenta Crop Protection Ag Microbiocidal heterobicyclic dihydrooxadiazine derivatives
WO2024100069A1 (en) 2022-11-08 2024-05-16 Syngenta Crop Protection Ag Microbiocidal pyridine derivatives
WO2024100115A1 (en) 2022-11-09 2024-05-16 Syngenta Crop Protection Ag Microbiocidal pyrazole derivatives
WO2024105104A1 (en) 2022-11-16 2024-05-23 Syngenta Crop Protection Ag Microbiocidal tetrahydroisoquinoline derivatives
WO2024115509A1 (en) 2022-11-29 2024-06-06 Syngenta Crop Protection Ag Microbiocidal tetrahydroisoquinoline derivatives
WO2024115512A1 (en) 2022-11-30 2024-06-06 Syngenta Crop Protection Ag Microbiocidal tetrahydroisoquinoline derivatives
WO2024132895A1 (en) 2022-12-19 2024-06-27 Syngenta Crop Protection Ag Microbiocidal dihydrooxadiazinyl pyridazinone compounds
WO2024132901A1 (en) 2022-12-19 2024-06-27 Syngenta Crop Protection Ag Microbiocidal pyridazine dihydrooxadiazine derivatives
WO2024156886A1 (en) 2023-01-27 2024-08-02 Syngenta Crop Protection Ag Microbiocidal pyrazole derivatives

Family Cites Families (5)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
NO176766C (no) * 1989-02-07 1995-05-24 Meiji Seika Kaisha Fremgangsmåte for fremstilling av en forbindelse med anthelmintaktivitet
JPH0570366A (ja) * 1991-03-08 1993-03-23 Meiji Seika Kaisha Ltd 薬用組成物
JP3207870B2 (ja) * 1991-04-15 2001-09-10 明治製菓株式会社 環状デプシペプチドおよびその製造法
JP3132167B2 (ja) * 1991-08-23 2001-02-05 藤沢薬品工業株式会社 デプシペプチド誘導体の製造法
JP2874342B2 (ja) * 1992-03-17 1999-03-24 藤沢薬品工業株式会社 デプシペプチド誘導体，その製法およびその用途

Also Published As

Publication number Publication date
EP0685469A1 (en) 1995-12-06
CA2155871A1 (en) 1994-09-01
AU6045794A (en) 1994-09-14
NO953244D0 (no) 1995-08-17
KR100309091B1 (ko) 2001-12-28
KR960701030A (ko) 1996-02-24
AU695021B2 (en) 1998-08-06
US5747448A (en) 1998-05-05
EP0685469A4 (en) 1996-04-03
CN1073560C (zh) 2001-10-24
NZ261630A (en) 1998-05-27
NO953244L (no) 1995-10-11
CN1119437A (zh) 1996-03-27
WO1994019334A1 (en) 1994-09-01

Similar Documents

Publication Publication Date Title
NO310411B1 (no) Derivater av cyklodepsipeptid PF 1022 og anvendelse derav
AU2005326770B2 (en) Peptide antibiotics and methods for making same
JP4163746B2 (ja) 内部寄生虫を駆除するためのジオキソモルホリンの使用、新規ジオキソモルホリンおよびそれらの製造方法
ES2615813T3 (es) Derivados de Polimixina de ácido graso de cola corta y usos de los mismos
FR2540118A1 (fr) Nouvelles amidines
AU727532B2 (en) Novel derivatives of cyclodepsipeptide PF1022 substance
US6790935B1 (en) Cyclosporin derivatives and method for the production of said derivatives
JPH07223951A (ja) 内寄生性生物防除剤である組成物
Harusawa et al. Diethyl phosphorocyanidate (DEPC): a versatile reagent for organic synthesis
JP3626233B2 (ja) １２の環原子を有する環状デプシペプチドの内部寄生虫の防除のための利用、１２の環原子を有する新規環状デプシペプチド及びそれらの製造法
JP5204779B2 (ja) アクチノマデュラ・ナミビエンシス由来の抗菌性・抗ウイルス性ペプチド
Dahiya Synthesis of a phenylalanine-rich peptide as potential anthelmintic and cytotoxic agent
KR101612275B1 (ko) 악티노마두라 나미비엔시스로부터 유래된 고도로 브릿징된 펩타이드
CA2612482A1 (en) Biologically active compounds obtainable from sorangium cellulosum
EP0792875B1 (en) Cryptophycin derivatives and their use as anti-microtubule agents
WO1998037088A1 (en) Derivatives of cyclodepsipeptide, pf1022 substance
US5478809A (en) TAN-1511, its derivatives, production and use thereof
JP2008266282A (ja) 制癌剤の有効成分としての環状デプシペプチドおよび当該環状デプシペプチドを有効成分として含有する制癌剤。
CA2975293A1 (en) Cystargolide compounds and uses thereof
JP2008247806A (ja) Ｐｆ１０２２類の製造法
Chen et al. Total synthesis of cis, cis-ceratospongamide
CN115043902A (zh) 氮取代大环nannocystin类似物、及其制备方法和用途
JP2001517604A (ja) ドラスタチン１５から誘導された合成アンチネオプラスチック剤とその製造方法
US20040033940A1 (en) Cyclic hepta-peptide derivative from colonial ascidians, lissoclinum SP
Horner–Wadsworth–Emmons Ac acetyl ACT artemisinin-based combination therapy Bn benzyl Boc tert-butyloxycarbonyl Bu butyl

Legal Events

Date Code Title Description
MM1K Lapsed by not paying the annual fees

Free format text: LAPSED IN AUGUST 2003