TWI401086B

TWI401086B - 胚芽乳酸桿菌及其用途

Info

Publication number: TWI401086B
Application number: TW099123851A
Authority: TW
Inventors: Wen Hsin Lin
Original assignee: Univ China Medical
Priority date: 2010-07-20
Filing date: 2010-07-20
Publication date: 2013-07-11
Also published as: TW201204374A; US20120020943A1; US8415135B2; KR101255894B1; JP2012024074A; JP5134060B2; KR20120010080A; MY151204A

Description

胚芽乳酸桿菌及其用途

本發明係關於乳酸桿菌菌株及其用途，尤其關於經分離之胚芽乳酸桿菌菌株(Lactobacillus plantarum )CMU995及其用途。

乳酸桿菌為存在於人類和動物腸道中的主要細菌，由於其具有許多有益於人體及動物體的生理活性，故常應用於各種益生菌(probiotic)產品中。舉例言之，乳酸桿菌可抑制腸內病原菌(例如沙門氏菌或大腸桿菌)之生長，或抵抗病原菌之入侵，例如可防止沙門氏菌屬之傷寒桿茵(Salmonella typhimurium )侵入腸胃道上皮細胞。

目前已有許多乳酸桿菌於抑制病原菌之應用的相關專利，例如美國專利第5,603,930號中所揭露之約氏乳酸桿菌菌株(Lactobacillus johnsonii )，可抑制腸毒素及腸侵入性病原菌；美國專利第3,953,609號中所揭露之雷特氏乳酸桿菌菌株(Lactobacillus lactis )，可抑制消化系统中大腸桿菌之生長；以及美國專利第6,491,956號中所揭露之嗜酸乳酸桿菌菌株(Lactobacillus acidophilus )，可預防及治療由幽門螺旋桿菌感染所造成的胃炎、十二指腸潰瘍及胃潰瘍。

乳酸桿菌若欲於動物體內有效地發揮功能，除須具備基本之生理/藥理活性外，尚須具有兩個重要特性。首先，該乳酸桿菌須對動物腸胃道所分泌之胃酸和膽鹼具有耐受性，始可存活於消化系統中而到達腸道，進而發揮作用。再者，該乳酸桿菌對動物宿主之腸道上皮細胞須有牢固的吸附能力，始可於腸胃道中與病原菌競爭吸附，免於因遭病原菌排除，而無法發揮功能。此外，由於病原菌亦係藉由吸附腸道上皮細胞之方式來感染動物體，若乳酸桿菌對腸道上皮細胞具有相對牢固的吸附能力，亦可達到排除病原菌，保護腸胃道免受感染之效果。

本案發明人自新生兒的糞便中，篩選出一種新穎胚芽乳酸桿菌菌株，且經由活體內(in vivo )及活體外(in vitro )之相關實驗，發現其除具有抑制病原菌之功效外，尚具有優異之腸胃道及泌尿道細胞之附著性，故可持久且有效地保護腸胃道及泌尿道免受病原菌之感染。另發現，該菌株甚至可以直接抑制病原菌生長，積極預防及治療由該病原菌所致之疾病。

本發明之一目的在於提供一種經分離之胚芽乳酸桿菌菌株(Lactobacillus plantarum )CMU995，其寄存於財團法人食品工業發展研究所，寄存編號為BCRC 910472，及寄存於德國國家菌種保藏中心(Deutsche Sammlung von Mikroorganismen und Zellkulturen GmbH，DSMZ)，寄存編號為DSM 23780。

本發明之另一目的在於提供一種組合物，其包含胚芽乳酸桿菌菌株CMU995。

本發明之又一目的在於使用胚芽乳酸桿菌菌株CMU995於製成抑制病原菌、保護腸胃道、及預防或治療泌尿道感染之藥物或保健食品等用途。

本發明之技術及較佳實施態樣，將描述於以下內容中，以供本發明所屬領域具通常知識者據以明瞭本發明之特徵。

本案發明人自健康新生兒的糞便中，篩選並分離出一種新穎之乳酸桿菌菌株，經菌種鑑定為Lactobacillus plantarum (中文名稱為胚芽乳酸桿菌或植物乳酸桿菌)，且經命名為Lactobacillus plantarum CMU995(以下稱為胚芽乳酸桿菌菌株CMU995)。

如上所述，乳酸桿菌對動物宿主之腸道上皮細胞須有牢固之附著能力，始可於腸胃道中與病原菌競爭吸附，進而排除病原菌，以達成所欲之生理效果。經發現，胚芽乳酸桿菌菌株CMU995可附著於腸胃道之上皮細胞，且相較於市面上常見之Lactobacillus rhamnosus GG(LGG)乳酸菌，對腸胃道上皮細胞具有更強之吸附力。

胚芽乳酸桿菌菌株CMU995除可附著於腸胃道之上皮細胞外，亦可牢固地附著於泌尿道之上皮細胞，故可於泌尿道中與病原菌競爭吸附，進而排除病原菌，以達成保護泌尿道之功效。

由於胚芽乳酸桿菌菌株CMU995對腸胃道及泌尿道具良好附著性，其可用於預防或治療病原菌之感染。就預防之應用而言，可將胚芽乳酸桿菌菌株CMU995添加於如飼料、飲料、營養補充品、或保健食品中，使此菌株附著及保護食用者之腸胃道或泌尿道，而當病原菌入侵腸胃道或泌尿道時，由於無法與胚芽乳酸桿菌菌株CMU995競爭吸附，遂無法啟動感染機制，而進一步被排出體外。就治療應用方面，當人體或動物體之腸胃道或泌尿道遭病原菌感染時，舉例言之，可服用包含胚芽乳酸桿菌菌株CMU995之藥物，透過胚芽乳酸桿菌菌株CMU995對腸胃道及泌尿道之吸附特性，排除附著於腸胃道或泌尿道內之病原菌，達成治療效果。因此，胚芽乳酸桿菌菌株CMU995可藉由其強烈吸附力來抑制病原菌對腸胃道或泌尿道細胞之附著，進而預防或治療病原菌之感染。

胚芽乳酸桿菌菌株CMU995除可拮抗病原菌對腸胃道或泌尿道之吸附，間接地抑制感染外，尚可直接地抑制病原菌之生長，經由此二種抑制機制之加乘作用來保護腸胃道及/或泌尿道。因此，於本文中，『抑制病原菌』乙詞，係包含抑制病原菌對腸胃道之附著、抑制病原菌對泌尿道之附著、以及抑制病原菌之生長。

胚芽乳酸桿菌菌株CMU995可用於抑制腸胃道及/或泌尿道中之各式病原菌；舉例言之，可抑制選自以下群組之病原菌：幽門螺旋桿菌(Helicobacter pylori )、空腸彎曲桿菌(Campylobacter jejuni )、沙門氏菌屬(Salmonella spp.)、大腸桿菌屬(Escherichia spp.)、金黃色葡萄球菌屬(Staphylococcus spp.)、志賀氏桿菌(Shigella flexneri )、產氣莢膜梭菌(Clostridium perfringens )、白色念珠球菌(Candida albicans )、及前述之組合，尤其是用於抑制幽門螺旋桿菌。

幽門螺旋桿菌為革蘭氏陰性、微須氧之致病菌，可生存於胃部及十二指腸的各區域內。幽門螺旋桿菌的傳染途徑迄今仍不明確，其會引起胃黏膜的慢性發炎，造成胃潰瘍及十二指腸潰瘍，甚至導致胃癌，因此，世界衛生組織宣佈幽門螺旋桿菌為微生物型的致癌物質，也是第一個被發現可致癌的原核生物。全世界有超過五成的人口為幽門螺旋桿菌之帶原者，尤其於發展中國家更為盛行。目前主要係使用抗生素來治療由幽門螺旋桿菌所引起的疾病，然而，由於其抗藥性之產生，許多抗生素已無法達到令人滿意的治療效果。由於胚芽乳酸桿菌菌株CMU995可明顯地抑制幽門螺旋桿菌之生長及其對腸道上皮細胞之附著，故可用於結合、甚或取代傳統之抗生素治療方法，以有效地預防或治療由幽門螺旋桿菌所引起的各種疾病。

此外，由於胚芽乳酸桿菌菌株CMU995可直接抑制病原菌之生長，故可運用於預防及治療由病原菌所引起之疾病，而不限於腸胃道相關疾病。舉例言之，已知金黃色葡萄球菌屬除可感染腸胃道外，亦可感染如呼吸道、尿道、靜脈及傷口等部位，故可利用胚芽乳酸桿菌菌株CMU995抑制金黃色葡萄球菌屬生長的特性，將其應用於上述感染部位之治療或感染預防。另一方面，白色念珠球菌除可感染腸胃道外，亦可感染如口腔及泌尿道之黏膜組織，故亦可利用胚芽乳酸桿菌菌株CMU995抑制白色念珠球菌生長的特性，將其應用於經感染之口腔或泌尿道之治療或感染預防。

由於胚芽乳酸桿菌菌株CMU995之抑制病原菌生長及附著的特性，其可廣泛地運用於各種醫療及保健產品中。因此，本發明亦提供一種組合物，其包含胚芽乳酸桿菌菌株CMU995。基於胚芽乳酸桿菌菌株CMU995之上述特性，本發明之組合物可用於抑制病原菌、保護腸胃道、保護泌尿道、或前述之組合。

本發明組合物可呈任何形式，舉例言之，其可呈一選自以下群組之形式：醫藥組合物、飼料、飲料、營養補充品、噴劑、食品、保健食品、乳製品及塞劑。於本發明之一實施態樣中，胚芽乳酸桿菌菌株CMU995可添加於食品中，例如製成包含此菌株之乳製品等。有關乳酸桿菌於醫藥組合物及食品之應用，可參考如台灣專利公開第200708622號及台灣專利公開第200611973號，該文獻全文倂於此處，以供參考。

可視需要於本發明組合物中添加任何適宜之添加物，進一步加強抑制病原菌生長及附著之效果，或者，添加其他營養或藥性成分，以增加組合物之運用靈活性與調配度。舉例言之，本發明組合物可另含有一或多種如制酸劑及其他益生菌等其他活性成分，只要該活性成分對胚芽乳酸桿菌菌株CMU995之效益沒有不利的影響即可。

本發明亦提供一種胚芽乳酸桿菌菌株CMU995於製造藥物或保健食品的用途，例如，其可用以製備成具任何合宜形式之用於抑制病原菌、保護腸胃道、及預防或治療泌尿道感染之藥物或保健食品。

茲以下列具體實施態樣以進一步例示說明本發明。其中該些實施態樣僅提供作為說明，而非用以限制本發明之範疇。

[實施例1]附著力分析

實驗A、製備乳酸桿菌菌株

進行腸胃道細胞之附著力分析所使用之乳酸桿菌菌株包括：本發明之Lactobacillus plantarum CMU995、Lactobacillus rhamnosus GG(LGG，鼠李糖乳酸桿菌)及本實驗室分離之B7P3、A7G1、B1T4、IA5、HT5菌株。以MRS培養液(Difco，底特律，密西根州，美國)活化所有受試乳酸桿菌兩次後，分別將其接種至5毫升之MRS培養液中進行培養。24小時後，取1毫升菌液，並以6000轉/分鐘離心10分鐘，以pH 7.2之磷酸鹽緩衝溶液(PBS，phosphate buffer solution)清洗兩次，再進行吸附試驗。以Lactobacillus rhamnosus GG作為對照組。

實驗B、培養腸胃道/泌尿道之細胞株

本試驗使用之腸胃道細胞株為Caco-2人體腸癌細胞株(human colon adenocarcinoma，寄存編號：ATCC CRL 2102)及AGS胃癌細胞株(gastric adenocarcinoma，寄存編號：ATCC CRL 1739)；使用之泌尿道細胞株為Hela人類子宮頸上皮細胞(寄存編號：ATCC CCL-2)，皆購自台灣生物資源保存及研究中心(Bioresource Collection and Research Center，BCRC)，且已通過細菌、黴菌及黴漿菌(mycoplasma)污染測試。取得細胞株後，迅速將其移至37℃之恆溫水浴槽中使其回溫解凍，並培養於25平方公分之培養皿中，再靜置於37℃、含有5體積%二氧化碳之細胞培養箱中進行培養。細胞活化後繼代數次，待細胞株穩定後才進行後續實驗。Caco-2細胞之培養基為Dulbecco’s Modified Eagle培養基(DMEM，購自Gibco公司)，AGS細胞之培養基為F-12培養基(購自Gibco公司)，Hela細胞之培養基為最低基礎培養基(Minimum essential medium，MEM，購自Gibco公司)，以上培養基皆須添加10體積%之胎小牛血清(fetal bovine serum，FBS)。

實驗C、乳酸桿菌附著性分析

將實驗B中製備之細胞株分別以1毫升之0.05體積%胰蛋白酶(trypsin)處理5分鐘後，將其分裝於一96孔培養盤中，每個孔中加入1×10⁴ 個細胞，每天置換200微升之新鮮培養基。接著，添加20微升之實驗A中製備之乳酸桿菌菌液於細胞中，並培養1小時，使乳酸桿菌附著於細胞上。進行附著1小時後，移除培養基，使用磷酸鹽緩衝溶液清洗五次，以去除未附著之乳酸菌，再添加100微升之10體積%福馬林，以固定細胞及乳酸桿菌。30分鐘後，再以磷酸鹽緩衝溶液清洗細胞3次，最後以100微升結晶紫(crystal violet)進行染色達5分鐘，並以少量75體積%酒精快速沖洗，以去除細胞上的染色劑。

利用相位差顯微鏡觀察各種乳酸桿菌對腸胃道或泌尿道上皮細胞的吸附性，並隨機在不同的顯微鏡視野(randomized microscopic areas)下，觀察並計算50個細胞的乳酸桿菌吸附情形，以及計算每個細胞之平均吸附乳酸桿菌數量。結果係如表1所示。

由表1結果可知，相較於其他已知乳酸桿菌(包括國際知名且市面上常用之Lactobacillus rhamnosus GG)，胚芽乳酸桿菌菌株CMU995具有更優異之腸胃道及泌尿道細胞之附著性，故可對腸胃道及泌尿道提供更持久的保護。

[實施例2]抑制病原菌生長試驗

實驗D、細菌培養皿試驗

利用洞擴散法(well-diffusion method)進行乳酸桿菌之抑菌能力評估。將無菌之Brucella洋菜培養基(Difco，底特律，密西根州，美國)倒入一細菌培養皿中，使其凝固，再將經隔夜培養之指標性腸胃道致病菌幽門螺旋桿菌Helicobacter pylori (寄存編號：BCRC 17021)及臨床分離之Helicobacter pylori CMU83均勻塗佈於洋菜培養基上，待菌液稍微乾燥後，在培養基上打出直徑為7毫米之孔洞，並於孔洞中添加70微升之於實驗A中，以MRS培養液培養24小時之胚芽乳酸桿菌菌株CMU995的菌液。此外，亦以相同方法對其他腸胃道致病菌進行分析，包括空腸彎曲桿菌(Compylobacter jejuni CMU20)、大腸桿菌、金黃色葡萄球菌(Staphylococcus aureus )、沙門氏菌(Salmonella spp.)、志賀氏桿菌(Shigella flexneri )、產氣莢膜梭菌(Clostridium perfringens) 及白色念珠球菌(Candida albicans )。重複分析每個樣品三次，再將培養基置於一細菌培養箱中，並於16至18小時後測量抑菌圈直徑。於此，以Lactobacillus rhamnosus GG之發酵液作為正對照組，以pH6.3之MRS培養液作為負控制組(negative control)。結果係如表2所示。

表2結果顯示，相較於Lactobacillus rhamnosus GG，本發明之胚芽乳酸桿菌菌株CMU995具有更優異之抑制致病菌生長之功效，故其可用於預防及治療由病原菌所引起之疾病，例如用於保護腸胃道免受病原菌之感染。

[實施例3]抑制病原菌感染及附著試驗

將1毫升之密度為5×10⁴ 個細胞/毫升的Caco-2細胞、AGS細胞及Hela細胞分別培養於一24孔細胞培養盤中，並置於一37℃、含有5體積%二氧化碳/95體積%空氣之細胞培養箱中培養2天，再進行以下二種模式之試驗。

實驗E、預防保護模式

取100微升之於實驗A中經培養24小時之胚芽乳酸桿菌菌株CMU995的發酵液，加入至已培養2天的Caco-2細胞、AGS細胞或Hela細胞中，混合均勻後，將細胞放入細胞培養箱中培養0..5小時。接著，以無菌生理食鹽水清洗細胞，以移除未附著之乳酸桿菌，再添加1毫升含有1×10⁷ 菌落形成單位/毫升(CFU/ml)之幽門螺旋桿菌(Helicobacter pylori CMU83)、腸內附著性大腸桿菌(enteroadherent aggregative E. coli ，EAggEC)或沙門氏菌(Salmonella enteritidis )至細胞中，混合均勻後，將細胞放入細胞培養箱中培養1小時，使致病菌感染細胞。然後，移除培養基，以無菌生理食鹽水清洗細胞，以去除未感染細胞之致病菌，再加入1毫升的0.1體積% Triton-X-100(Sigma，Louis，密蘇里州，美國)，使細胞破裂而釋放出感染之致病菌。最後，吸取細胞破碎液並置於9毫升之磷酸鹽緩衝溶液中，經適當稀釋後，以傾注平板計數法計算菌數。於此，以不加乳酸桿菌者為控制組，將計算結果帶入下列公式，計算胚芽乳酸桿菌菌株CMU995之感染抑制率。結果如表3所示。

感染抑制率=(控制組之致病菌數-添加乳酸桿菌組之致病菌數)/控制組之致病菌數×100%

實驗F、治療排除模式

培養Caco-2細胞、AGS細胞或Hela細胞2天後，分別添加1毫升之含有1×10⁷ 菌落形成單位/毫升之幽門螺旋桿菌(Helicobacter pylori CMU83)、腸內附著性大腸桿菌(enteroadherent aggregative E. coli ，EAggEC)或沙門氏菌(Salmonella enteritidis )至細胞中，培養0.5小時使致病菌感染細胞。接著，以無菌生理食鹽水清洗細胞，以去除未侵入細胞之致病菌，再加入100微升之於實驗A中經培養24小時之胚芽乳酸桿菌菌株CMU995的發酵液，培養1小時，使乳酸桿菌進行排除致病菌之作用。最後，再以無菌生理食鹽水清洗細胞，以移除未附著之乳酸桿菌與經排除之致病菌，再加入1毫升0.1體積%Triton-X-100，使細胞破裂而釋放出感染之致病菌。細胞破碎液經適當稀釋後，以傾注平板計數法計算菌數。於此，以不加乳酸桿菌者為控制組，將計算結果帶入上述公式，計算乳酸桿菌之感染抑制率。結果如表4所示。

“ND”表示未進行該細胞之測試。

由表3及表4結果可知，胚芽乳酸桿菌菌株CMU995具有優異之抑制致病菌感染之效果，尤其治療排除模式之試驗結果，更顯示胚芽乳酸桿菌菌株CMU995可有效地降低致病菌對腸胃道及泌尿道細胞之附著作用，進而將其排出細胞外，達成抑制感染的功效。此外，胚芽乳酸桿菌菌株CMU995對於大腸桿菌或沙門氏菌亦有相當優異的抑制效果。

[實施例4]動物試驗

實驗G、試驗動物分組

本實驗使用6週大之雄性C57BL/6小鼠(購自樂斯科公司，台灣)，體重為20至26公克，飼養於一獨立IVC小鼠飼育系統，室溫維持於22℃，並定時12小時光照與黑暗。餵食小鼠經過滅菌的飼料及逆滲透水，供小鼠自由取食，飼養2週使小鼠適應環境後才開始進行實驗。隨機將小鼠分為4組，每組皆8隻。於進行幽門螺旋桿菌感染前，各組小鼠於每日固定時間經口投餵食200微升不同濃度之新鮮製備的胚芽乳酸桿菌菌株CMU995的菌液，連續7日，每日餵食一次。各組實驗情形如下：

A組：生理食鹽水(saline)組/負控制組(negative control)。餵食小鼠經無菌過濾之生理食鹽水。

B組：1×10¹⁰ 菌落形成單位/毫升之胚芽乳酸桿菌菌株CMU995組。以MRS培養液培養胚芽乳酸桿菌菌株CMU995達24小時後，離心菌液，再以生理食鹽水回溶，並調整細菌濃度至1×10¹⁰ 菌落形成單位/毫升，並將其餵食小鼠。

C組：1×10⁹ 菌落形成單位/毫升之胚芽乳酸桿菌菌株CMU995組。以MRS培養液培養胚芽乳酸桿菌菌株CMU995達24小時後，離心菌液，再以生理食鹽水回溶，並調整濃度至1×10⁹ 菌落形成單位/毫升，並將其餵食小鼠。

D組：1×10⁸ 菌落形成單位/毫升之胚芽乳酸桿菌菌株CMU995組。以MRS培養液培養胚芽乳酸桿菌菌株CMU995達24小時後，離心菌液，再以生理食鹽水回溶，並調整濃度至1×10⁸ 菌落形成單位/毫升，並將其餵食小鼠。

實驗H、幽門螺旋桿菌感染試驗

餵食小鼠乳酸桿菌菌株CMU995之菌液達7日後，於隔日經口餵食2×10⁷ 菌落形成單位的幽門螺旋桿菌(Helicobacter pylori CMU83)菌液，連續餵食3日使小鼠感染，再於次日使小鼠禁食1日後，以二氧化碳及頸椎分離術犧牲小鼠。摘取小鼠的胃及十二指腸段(約0.5公克)，將其放入含有9.5毫升無菌磷酸鹽緩衝溶液的離心管中，以均質機攪拌3分鐘後，取出1毫升組織破碎液，再以無菌磷酸鹽緩衝溶液做10倍連續稀釋，在不同稀釋倍數下，取出100微升稀釋液，以平板塗抹計數法將稀釋液塗抹於Brucella洋菜培養基，並添加2.5體積%胎小牛血清及用於篩選幽門螺旋桿菌之選擇性輔助劑Selective Supplements SR147E(Oxoid，Hampshire，英格蘭)，此培養基係經測試可用於篩選本實驗中所使用之幽門螺旋桿菌Helicobacter pylori CMU83。於37℃、微好氧條件下進行培養48小時後，計算菌落數。每個實驗分析皆進行三次重複，以SPSS 10.0套裝軟體統計分析實驗結果，先經單向變方分析(one way ANOVA，analysis of variance)測定各組間之顯著性差異，判斷標準為p<0.05。分析結果如表5所示。

表5結果顯示，餵食小鼠1×10⁹ 菌落形成單位/毫升或1×10¹⁰ 菌落形成單位/毫升之濃度的胚芽乳酸桿菌菌株CMU995後，可明顯抑制幽門螺旋桿菌於小鼠腸胃道之感染，因此可達到保護腸胃道免於病原菌感染之效果。

[實施例5]

實驗I、菌株鑑定

[乳酸桿菌鑑定套組分析]

將本發明之胚芽乳酸桿菌菌株CMU995以MRS培養基活化培養16小時後，使用鑑定乳酸桿菌專用之API 50 CHL鑑定套組(Biomerieux，Marcy I’Etoile，法國)進行分析，以確認此菌株之種類。

[基因序列分析]

使用乳酸菌之特異性引子進行胚芽乳酸桿菌菌株CMU995之16S-23S rRNA片段的聚合酵素鏈鎖反應(polymerase chain reaction，PCR)，並將反應產物進行序列分析。所得之聚合酵素鏈鎖反應產物進行序列分析後，部分序列之結果係如SEQ ID NO: 1所示。

SEQ ID NO: 1 ACATTGCAACAGCGCGTGCCGTATTTTAATTATCGGCTAGCCACAGAGAT CTATCCGTTAAACAAACAATTTACTGAGAAATACGGGAATAAGTATGGGA AATATCCCTAGCGAACCCTAAATAATGGCCCCCCTGTCTTGAACAGATAG ACTGGCCAAACTCCTACGGGAGAAAACGTTGGGAAATTTTGCTCAATGG GCCCAACCCTGAGGCGCCCCTGCCACATATATGAGGAAAGCCTTCGGGTT ATAAAATTTTTTTTCAGCGAGGAGTGAAGTGAGGATAAGAACCTTCTACA

本分析所使用之引子序列為LU-5及Lac-2，序列如下所示：

LU-5: 5’-CTAGCGGGTGCGACTTTGTT-3’　SEQ ID NO:2

Lac-2: 5’-CCTCTTCGCTCGCCGCTACT-3’　SEQ ID NO:3

[脈衝電場膠體電泳分析]

利用脈衝電場膠體電泳法(pulsed field gel electrophoresis，PFGE)分析胚芽乳酸桿菌菌株CMU995的基因組DNA(genomic DNA)，使用之限制酵素(restriction enzyme)為SgsI(Promega Corporation，Madison，美國)，藉此獲得胚芽乳酸桿菌菌株CMU995之基因指紋圖譜，結果係如第1圖所示。第1圖之基因指紋圖譜僅係提供作為基因指紋辨識胚芽乳酸桿菌菌株CMU995之參考，而非用於限制該菌株之基因鑑定。

根據API 50 CHL鑑定套組之鑑定結果，顯示胚芽乳酸桿菌菌株CMU995屬於Lactobacillus plantarum 。聚合酵素鏈鎖反應之基因片段產物之基因序列比對結果，進一步證實此菌株為新穎之Lactobacillus plantarum 菌株。

胚芽乳酸桿菌菌株CMU995係經寄存於財團法人食品工業發展研究所，寄存編號為BCRC 910472，及寄存於德國國家菌種保藏中心(Deutsche Sammlung von Mikroorganismen und Zellkulturen GmbH，DSMZ)，寄存編號為DSM 23780。

以上實施例顯示，胚芽乳酸桿菌菌株CMU995可拮抗病原菌對腸胃道及泌尿道之附著，以保護胃腸道細胞而降低病原菌感染，亦可直接地抑制病原菌之生長，經由此二種抑菌機制之加乘作用來保護腸胃道及泌尿道。

上述實施例僅係用以例示說明本發明及其功效，而非用於限制本發明。任何熟於此項技藝之人士均可在不違背本發明之技術原理及精神的情況下，對上述實施例進行修改及變化。因此，本發明之權利保護範圍應如後述之申請專利範圍所列者。

<110> 中國醫藥大學

<120> 胚芽乳酸桿菌及其用途

<130> 無

<160> 3

<170> PatentIn version 3.5

<210> 1

<211> 299

<212> DNA

<213> 胚芽乳酸桿菌菌株CMU995

<400> 1

<210> 2

<211> 20

<212> DNA

<213> 人工合成

<220>

<223> 引子

<400> 2

<210> 3

<211> 20

<212> DNA

<213> 人工合成

<220>

<223> 引子

<400> 3

第1圖所示為胚芽乳酸桿菌菌株CMU995之基因指紋圖譜。

Claims

一種經分離之胚芽乳酸桿菌菌株(Lactobacillus plantarum )CMU995，其寄存於財團法人食品工業發展研究所，寄存編號為BCRC 910472，及寄存於德國國家菌種保藏中心(Deutsche Sammlung von Mikroorganismen und Zellkulturen GmbH，DSMZ)，寄存編號為DSM 23780。
如請求項1之胚芽乳酸桿菌菌株CMU995，其具有腸胃道及/或泌尿道附著性。
如請求項1之胚芽乳酸桿菌菌株CMU995，其具有抑制病原菌生長之功效。
如請求項1之胚芽乳酸桿菌菌株CMU995，其具有抑制病原菌對腸胃道及/或泌尿道附著之功效。
如請求項3或4之胚芽乳酸桿菌菌株CMU995，其中該病原菌係選自以下群組：幽門螺旋桿菌(Helicobacter pylori )、空腸彎曲桿菌(Campylobacter jejuni )、沙門氏菌屬(Salmonella spp.)、大腸桿菌屬(Escherichia spp.)、金黃色葡萄球菌屬(Staphylococcus spp.)、志賀氏桿菌(Shigella flexneri )、產氣莢膜梭菌(Clostridium perfringens )、白色念珠球菌(Candida albicans )、及前述之組合。
如請求項5之胚芽乳酸桿菌菌株CMU995，其中該病原菌係幽門螺旋桿菌。
一種組合物，包含如請求項1之胚芽乳酸桿菌菌株CMU995。
如請求項7之組合物，其係用於抑制病原菌、保護腸胃道、保護泌尿道、或前述之組合。
如請求項8之組合物，其中該病原菌係選自以下群組：幽門螺旋桿菌、空腸彎曲桿菌、沙門氏菌屬、大腸桿菌屬、金黃色葡萄球菌屬、志賀氏桿菌、產氣莢膜梭菌、白色念珠球菌、及前述之組合。
如請求項7之組合物，其係呈一選自以下群組之形式：醫藥組合物、飼料、飲料、營養補充品、乳製品、食品、保健食品及噴劑、塞劑等。
一種如請求項1之胚芽乳酸桿菌菌株CMU995於製造抑制病原菌、保護腸胃道、及/或保護泌尿道之藥物的用途。
如請求項11之用途，其中該病原菌係選自以下群組：幽門螺旋桿菌、空腸彎曲桿菌、沙門氏菌屬、大腸桿菌屬、金黃色葡萄球菌屬、志賀氏桿菌、產氣莢膜梭菌、白色念珠球菌、及前述之組合。