RU2446814C2 - Микроорганизмы молока млекопитающего, их содержащие композиции и их применение для лечения мастита - Google Patents
Микроорганизмы молока млекопитающего, их содержащие композиции и их применение для лечения мастита Download PDFInfo
- Publication number
- RU2446814C2 RU2446814C2 RU2009149393/15A RU2009149393A RU2446814C2 RU 2446814 C2 RU2446814 C2 RU 2446814C2 RU 2009149393/15 A RU2009149393/15 A RU 2009149393/15A RU 2009149393 A RU2009149393 A RU 2009149393A RU 2446814 C2 RU2446814 C2 RU 2446814C2
- Authority
- RU
- Russia
- Prior art keywords
- strains
- deposited
- probiotic
- registration number
- selection
- Prior art date
Links
- 239000000203 mixture Substances 0.000 title claims abstract description 50
- 235000013336 milk Nutrition 0.000 title claims abstract description 48
- 239000008267 milk Substances 0.000 title claims abstract description 48
- 210000004080 milk Anatomy 0.000 title claims abstract description 48
- 208000004396 mastitis Diseases 0.000 title claims abstract description 40
- 241000124008 Mammalia Species 0.000 title abstract description 6
- 239000006041 probiotic Substances 0.000 claims abstract description 105
- 235000018291 probiotics Nutrition 0.000 claims abstract description 105
- 230000000529 probiotic effect Effects 0.000 claims abstract description 84
- 241000894006 Bacteria Species 0.000 claims abstract description 50
- 241001465754 Metazoa Species 0.000 claims abstract description 32
- 238000000034 method Methods 0.000 claims abstract description 28
- 210000005075 mammary gland Anatomy 0.000 claims abstract description 26
- 239000003814 drug Substances 0.000 claims abstract description 18
- 230000004083 survival effect Effects 0.000 claims abstract description 15
- 241000191967 Staphylococcus aureus Species 0.000 claims abstract description 9
- 239000001963 growth medium Substances 0.000 claims abstract description 9
- 210000002919 epithelial cell Anatomy 0.000 claims abstract description 8
- JVTAAEKCZFNVCJ-UHFFFAOYSA-N lactic acid Chemical compound CC(O)C(O)=O JVTAAEKCZFNVCJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 24
- 241000186604 Lactobacillus reuteri Species 0.000 claims description 14
- 239000006228 supernatant Substances 0.000 claims description 13
- 235000014655 lactic acid Nutrition 0.000 claims description 12
- 239000004310 lactic acid Substances 0.000 claims description 12
- 229940001882 lactobacillus reuteri Drugs 0.000 claims description 12
- 240000006024 Lactobacillus plantarum Species 0.000 claims description 10
- 235000013965 Lactobacillus plantarum Nutrition 0.000 claims description 8
- 229940072205 lactobacillus plantarum Drugs 0.000 claims description 8
- 241000186000 Bifidobacterium Species 0.000 claims description 7
- 241000186012 Bifidobacterium breve Species 0.000 claims description 7
- 241000894007 species Species 0.000 claims description 6
- 241000194032 Enterococcus faecalis Species 0.000 claims description 4
- 241000194029 Enterococcus hirae Species 0.000 claims description 4
- 241000186840 Lactobacillus fermentum Species 0.000 claims description 4
- 241000186869 Lactobacillus salivarius Species 0.000 claims description 4
- 241001494479 Pecora Species 0.000 claims description 4
- 229940032049 enterococcus faecalis Drugs 0.000 claims description 4
- 229940012969 lactobacillus fermentum Drugs 0.000 claims description 4
- 241000282326 Felis catus Species 0.000 claims description 3
- 238000011200 topical administration Methods 0.000 claims description 3
- 238000011282 treatment Methods 0.000 abstract description 29
- 230000000694 effects Effects 0.000 abstract description 17
- 230000002265 prevention Effects 0.000 abstract description 11
- 239000003242 anti bacterial agent Substances 0.000 abstract description 8
- 229940088710 antibiotic agent Drugs 0.000 abstract description 8
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 abstract description 7
- 229940079593 drug Drugs 0.000 abstract description 5
- 235000015140 cultured milk Nutrition 0.000 abstract description 3
- 238000002955 isolation Methods 0.000 abstract description 2
- 231100000957 no side effect Toxicity 0.000 abstract 1
- 239000000126 substance Substances 0.000 abstract 1
- 210000004027 cell Anatomy 0.000 description 27
- 230000001580 bacterial effect Effects 0.000 description 22
- 208000015181 infectious disease Diseases 0.000 description 22
- 238000004519 manufacturing process Methods 0.000 description 22
- 239000012228 culture supernatant Substances 0.000 description 17
- 229920001817 Agar Polymers 0.000 description 14
- 239000008272 agar Substances 0.000 description 14
- 230000001225 therapeutic effect Effects 0.000 description 14
- 241000699670 Mus sp. Species 0.000 description 13
- 230000000968 intestinal effect Effects 0.000 description 12
- 239000008194 pharmaceutical composition Substances 0.000 description 11
- 230000001079 digestive effect Effects 0.000 description 10
- 208000037265 diseases, disorders, signs and symptoms Diseases 0.000 description 10
- 244000005700 microbiome Species 0.000 description 10
- 210000004400 mucous membrane Anatomy 0.000 description 10
- 102000004127 Cytokines Human genes 0.000 description 9
- 108090000695 Cytokines Proteins 0.000 description 9
- 238000004458 analytical method Methods 0.000 description 9
- 230000003115 biocidal effect Effects 0.000 description 9
- 230000005764 inhibitory process Effects 0.000 description 9
- 241000607142 Salmonella Species 0.000 description 8
- 238000012546 transfer Methods 0.000 description 8
- 241000186660 Lactobacillus Species 0.000 description 7
- 235000013305 food Nutrition 0.000 description 7
- 210000004251 human milk Anatomy 0.000 description 7
- 235000020256 human milk Nutrition 0.000 description 7
- 238000002347 injection Methods 0.000 description 7
- 239000007924 injection Substances 0.000 description 7
- 239000002609 medium Substances 0.000 description 7
- 239000006144 Dulbecco’s modified Eagle's medium Substances 0.000 description 6
- OKKJLVBELUTLKV-UHFFFAOYSA-N Methanol Chemical compound OC OKKJLVBELUTLKV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 6
- 230000009286 beneficial effect Effects 0.000 description 6
- 239000012876 carrier material Substances 0.000 description 6
- 208000035475 disorder Diseases 0.000 description 6
- 244000052769 pathogen Species 0.000 description 6
- 230000001717 pathogenic effect Effects 0.000 description 6
- 239000000047 product Substances 0.000 description 6
- 238000012216 screening Methods 0.000 description 6
- 241000282412 Homo Species 0.000 description 5
- 239000002253 acid Substances 0.000 description 5
- 239000003833 bile salt Substances 0.000 description 5
- 229940093761 bile salts Drugs 0.000 description 5
- 230000007423 decrease Effects 0.000 description 5
- 230000028993 immune response Effects 0.000 description 5
- 230000002458 infectious effect Effects 0.000 description 5
- 230000002757 inflammatory effect Effects 0.000 description 5
- 210000002540 macrophage Anatomy 0.000 description 5
- 235000016709 nutrition Nutrition 0.000 description 5
- 210000000952 spleen Anatomy 0.000 description 5
- 230000035882 stress Effects 0.000 description 5
- 239000000725 suspension Substances 0.000 description 5
- 238000002560 therapeutic procedure Methods 0.000 description 5
- 210000001519 tissue Anatomy 0.000 description 5
- 108020004465 16S ribosomal RNA Proteins 0.000 description 4
- 206010012735 Diarrhoea Diseases 0.000 description 4
- 241000233866 Fungi Species 0.000 description 4
- 241000699666 Mus <mouse, genus> Species 0.000 description 4
- 206010028980 Neoplasm Diseases 0.000 description 4
- 240000004808 Saccharomyces cerevisiae Species 0.000 description 4
- 241000293869 Salmonella enterica subsp. enterica serovar Typhimurium Species 0.000 description 4
- 241000700605 Viruses Species 0.000 description 4
- 238000010171 animal model Methods 0.000 description 4
- 238000003556 assay Methods 0.000 description 4
- 244000052616 bacterial pathogen Species 0.000 description 4
- 201000011510 cancer Diseases 0.000 description 4
- 201000010099 disease Diseases 0.000 description 4
- 230000002550 fecal effect Effects 0.000 description 4
- 230000008595 infiltration Effects 0.000 description 4
- 238000001764 infiltration Methods 0.000 description 4
- 230000004054 inflammatory process Effects 0.000 description 4
- 230000009545 invasion Effects 0.000 description 4
- 210000004698 lymphocyte Anatomy 0.000 description 4
- 239000002207 metabolite Substances 0.000 description 4
- 244000005706 microflora Species 0.000 description 4
- 239000000825 pharmaceutical preparation Substances 0.000 description 4
- 230000008569 process Effects 0.000 description 4
- 230000001681 protective effect Effects 0.000 description 4
- 239000000523 sample Substances 0.000 description 4
- 230000005945 translocation Effects 0.000 description 4
- 208000023275 Autoimmune disease Diseases 0.000 description 3
- 241000283690 Bos taurus Species 0.000 description 3
- 241001461464 Cymbocarpa refracta Species 0.000 description 3
- 238000002965 ELISA Methods 0.000 description 3
- 206010061218 Inflammation Diseases 0.000 description 3
- 241000700159 Rattus Species 0.000 description 3
- 241000191940 Staphylococcus Species 0.000 description 3
- 241000282887 Suidae Species 0.000 description 3
- 239000008186 active pharmaceutical agent Substances 0.000 description 3
- 230000003321 amplification Effects 0.000 description 3
- 230000000844 anti-bacterial effect Effects 0.000 description 3
- 238000012512 characterization method Methods 0.000 description 3
- 238000006243 chemical reaction Methods 0.000 description 3
- 238000010586 diagram Methods 0.000 description 3
- 238000009792 diffusion process Methods 0.000 description 3
- 235000021186 dishes Nutrition 0.000 description 3
- 230000012010 growth Effects 0.000 description 3
- 230000003053 immunization Effects 0.000 description 3
- 238000002649 immunization Methods 0.000 description 3
- 238000011534 incubation Methods 0.000 description 3
- 208000027866 inflammatory disease Diseases 0.000 description 3
- 230000006651 lactation Effects 0.000 description 3
- 230000007246 mechanism Effects 0.000 description 3
- 230000000813 microbial effect Effects 0.000 description 3
- 238000003199 nucleic acid amplification method Methods 0.000 description 3
- 230000035764 nutrition Effects 0.000 description 3
- 244000045947 parasite Species 0.000 description 3
- 230000007170 pathology Effects 0.000 description 3
- 229940127557 pharmaceutical product Drugs 0.000 description 3
- 108090000765 processed proteins & peptides Proteins 0.000 description 3
- 238000011321 prophylaxis Methods 0.000 description 3
- 238000012360 testing method Methods 0.000 description 3
- 230000000699 topical effect Effects 0.000 description 3
- 229960005486 vaccine Drugs 0.000 description 3
- 201000001320 Atherosclerosis Diseases 0.000 description 2
- 241000283707 Capra Species 0.000 description 2
- OKTJSMMVPCPJKN-UHFFFAOYSA-N Carbon Chemical compound [C] OKTJSMMVPCPJKN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 108010078777 Colistin Proteins 0.000 description 2
- 206010009900 Colitis ulcerative Diseases 0.000 description 2
- 206010010774 Constipation Diseases 0.000 description 2
- 208000004262 Food Hypersensitivity Diseases 0.000 description 2
- 206010016946 Food allergy Diseases 0.000 description 2
- WSFSSNUMVMOOMR-UHFFFAOYSA-N Formaldehyde Chemical compound O=C WSFSSNUMVMOOMR-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 208000018522 Gastrointestinal disease Diseases 0.000 description 2
- 108060003951 Immunoglobulin Proteins 0.000 description 2
- 208000022559 Inflammatory bowel disease Diseases 0.000 description 2
- 206010027476 Metastases Diseases 0.000 description 2
- 241000736262 Microbiota Species 0.000 description 2
- 201000004681 Psoriasis Diseases 0.000 description 2
- 241000700157 Rattus norvegicus Species 0.000 description 2
- 206010039438 Salmonella Infections Diseases 0.000 description 2
- 102100040247 Tumor necrosis factor Human genes 0.000 description 2
- 201000006704 Ulcerative Colitis Diseases 0.000 description 2
- 206010000269 abscess Diseases 0.000 description 2
- 230000001154 acute effect Effects 0.000 description 2
- 239000000654 additive Substances 0.000 description 2
- 238000012459 agar diffusion assay Methods 0.000 description 2
- 230000000172 allergic effect Effects 0.000 description 2
- 230000000845 anti-microbial effect Effects 0.000 description 2
- 206010003246 arthritis Diseases 0.000 description 2
- 208000006673 asthma Diseases 0.000 description 2
- 208000010668 atopic eczema Diseases 0.000 description 2
- 230000004888 barrier function Effects 0.000 description 2
- 230000033228 biological regulation Effects 0.000 description 2
- 230000015572 biosynthetic process Effects 0.000 description 2
- 210000001185 bone marrow Anatomy 0.000 description 2
- 235000008429 bread Nutrition 0.000 description 2
- 210000000481 breast Anatomy 0.000 description 2
- 235000013339 cereals Nutrition 0.000 description 2
- 235000013351 cheese Nutrition 0.000 description 2
- 230000001684 chronic effect Effects 0.000 description 2
- 229960003346 colistin Drugs 0.000 description 2
- 235000009508 confectionery Nutrition 0.000 description 2
- 238000012258 culturing Methods 0.000 description 2
- 230000006378 damage Effects 0.000 description 2
- 230000001627 detrimental effect Effects 0.000 description 2
- 210000002249 digestive system Anatomy 0.000 description 2
- 238000010790 dilution Methods 0.000 description 2
- 239000012895 dilution Substances 0.000 description 2
- 210000000981 epithelium Anatomy 0.000 description 2
- 238000002474 experimental method Methods 0.000 description 2
- 238000000855 fermentation Methods 0.000 description 2
- 230000004151 fermentation Effects 0.000 description 2
- 210000003754 fetus Anatomy 0.000 description 2
- 235000013312 flour Nutrition 0.000 description 2
- 235000011389 fruit/vegetable juice Nutrition 0.000 description 2
- 210000004907 gland Anatomy 0.000 description 2
- 244000005709 gut microbiome Species 0.000 description 2
- 235000015243 ice cream Nutrition 0.000 description 2
- 238000007654 immersion Methods 0.000 description 2
- 102000018358 immunoglobulin Human genes 0.000 description 2
- 229940072221 immunoglobulins Drugs 0.000 description 2
- 238000000338 in vitro Methods 0.000 description 2
- 230000002401 inhibitory effect Effects 0.000 description 2
- 210000000936 intestine Anatomy 0.000 description 2
- 208000002551 irritable bowel syndrome Diseases 0.000 description 2
- 229940039696 lactobacillus Drugs 0.000 description 2
- 239000007788 liquid Substances 0.000 description 2
- 230000002503 metabolic effect Effects 0.000 description 2
- 230000009401 metastasis Effects 0.000 description 2
- 239000006872 mrs medium Substances 0.000 description 2
- 201000006417 multiple sclerosis Diseases 0.000 description 2
- JORAUNFTUVJTNG-BSTBCYLQSA-N n-[(2s)-4-amino-1-[[(2s,3r)-1-[[(2s)-4-amino-1-oxo-1-[[(3s,6s,9s,12s,15r,18s,21s)-6,9,18-tris(2-aminoethyl)-3-[(1r)-1-hydroxyethyl]-12,15-bis(2-methylpropyl)-2,5,8,11,14,17,20-heptaoxo-1,4,7,10,13,16,19-heptazacyclotricos-21-yl]amino]butan-2-yl]amino]-3-h Chemical compound CC(C)CCCCC(=O)N[C@@H](CCN)C(=O)N[C@H]([C@@H](C)O)CN[C@@H](CCN)C(=O)N[C@H]1CCNC(=O)[C@H]([C@@H](C)O)NC(=O)[C@H](CCN)NC(=O)[C@H](CCN)NC(=O)[C@H](CC(C)C)NC(=O)[C@@H](CC(C)C)NC(=O)[C@H](CCN)NC1=O.CCC(C)CCCCC(=O)N[C@@H](CCN)C(=O)N[C@H]([C@@H](C)O)CN[C@@H](CCN)C(=O)N[C@H]1CCNC(=O)[C@H]([C@@H](C)O)NC(=O)[C@H](CCN)NC(=O)[C@H](CCN)NC(=O)[C@H](CC(C)C)NC(=O)[C@@H](CC(C)C)NC(=O)[C@H](CCN)NC1=O JORAUNFTUVJTNG-BSTBCYLQSA-N 0.000 description 2
- 230000003287 optical effect Effects 0.000 description 2
- XDJYMJULXQKGMM-UHFFFAOYSA-N polymyxin E1 Natural products CCC(C)CCCCC(=O)NC(CCN)C(=O)NC(C(C)O)C(=O)NC(CCN)C(=O)NC1CCNC(=O)C(C(C)O)NC(=O)C(CCN)NC(=O)C(CCN)NC(=O)C(CC(C)C)NC(=O)C(CC(C)C)NC(=O)C(CCN)NC1=O XDJYMJULXQKGMM-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- KNIWPHSUTGNZST-UHFFFAOYSA-N polymyxin E2 Natural products CC(C)CCCCC(=O)NC(CCN)C(=O)NC(C(C)O)C(=O)NC(CCN)C(=O)NC1CCNC(=O)C(C(C)O)NC(=O)C(CCN)NC(=O)C(CCN)NC(=O)C(CC(C)C)NC(=O)C(CC(C)C)NC(=O)C(CCN)NC1=O KNIWPHSUTGNZST-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 238000011533 pre-incubation Methods 0.000 description 2
- 102000004196 processed proteins & peptides Human genes 0.000 description 2
- 230000000770 proinflammatory effect Effects 0.000 description 2
- 230000000069 prophylactic effect Effects 0.000 description 2
- 230000001105 regulatory effect Effects 0.000 description 2
- 206010039447 salmonellosis Diseases 0.000 description 2
- 201000000306 sarcoidosis Diseases 0.000 description 2
- 230000035945 sensitivity Effects 0.000 description 2
- 239000000243 solution Substances 0.000 description 2
- 210000001082 somatic cell Anatomy 0.000 description 2
- 210000002784 stomach Anatomy 0.000 description 2
- UCSJYZPVAKXKNQ-HZYVHMACSA-N streptomycin Chemical compound CN[C@H]1[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](CO)O[C@H]1O[C@@H]1[C@](C=O)(O)[C@H](C)O[C@H]1O[C@@H]1[C@@H](NC(N)=N)[C@H](O)[C@@H](NC(N)=N)[C@H](O)[C@H]1O UCSJYZPVAKXKNQ-HZYVHMACSA-N 0.000 description 2
- 231100000331 toxic Toxicity 0.000 description 2
- 230000002588 toxic effect Effects 0.000 description 2
- 230000004614 tumor growth Effects 0.000 description 2
- 230000035899 viability Effects 0.000 description 2
- HSINOMROUCMIEA-FGVHQWLLSA-N (2s,4r)-4-[(3r,5s,6r,7r,8s,9s,10s,13r,14s,17r)-6-ethyl-3,7-dihydroxy-10,13-dimethyl-2,3,4,5,6,7,8,9,11,12,14,15,16,17-tetradecahydro-1h-cyclopenta[a]phenanthren-17-yl]-2-methylpentanoic acid Chemical class C([C@@]12C)C[C@@H](O)C[C@H]1[C@@H](CC)[C@@H](O)[C@@H]1[C@@H]2CC[C@]2(C)[C@@H]([C@H](C)C[C@H](C)C(O)=O)CC[C@H]21 HSINOMROUCMIEA-FGVHQWLLSA-N 0.000 description 1
- MZOFCQQQCNRIBI-VMXHOPILSA-N (3s)-4-[[(2s)-1-[[(2s)-1-[[(1s)-1-carboxy-2-hydroxyethyl]amino]-4-methyl-1-oxopentan-2-yl]amino]-5-(diaminomethylideneamino)-1-oxopentan-2-yl]amino]-3-[[2-[[(2s)-2,6-diaminohexanoyl]amino]acetyl]amino]-4-oxobutanoic acid Chemical compound OC[C@@H](C(O)=O)NC(=O)[C@H](CC(C)C)NC(=O)[C@H](CCCN=C(N)N)NC(=O)[C@H](CC(O)=O)NC(=O)CNC(=O)[C@@H](N)CCCCN MZOFCQQQCNRIBI-VMXHOPILSA-N 0.000 description 1
- AKXKFZDCRYJKTF-UHFFFAOYSA-N 3-Hydroxypropionaldehyde Chemical compound OCCC=O AKXKFZDCRYJKTF-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 108010062877 Bacteriocins Proteins 0.000 description 1
- 241001019510 Bifidobacterium breve CECT 7263 Species 0.000 description 1
- 101000746317 Bos taurus Granulocyte-macrophage colony-stimulating factor Proteins 0.000 description 1
- 206010006262 Breast inflammation Diseases 0.000 description 1
- 108010053835 Catalase Proteins 0.000 description 1
- 102000016938 Catalase Human genes 0.000 description 1
- 208000037487 Endotoxemia Diseases 0.000 description 1
- 102000004190 Enzymes Human genes 0.000 description 1
- 108090000790 Enzymes Proteins 0.000 description 1
- LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N Ethanol Chemical compound CCO LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 241000192125 Firmicutes Species 0.000 description 1
- 206010017964 Gastrointestinal infection Diseases 0.000 description 1
- 241000282414 Homo sapiens Species 0.000 description 1
- 108090000174 Interleukin-10 Proteins 0.000 description 1
- 108090000978 Interleukin-4 Proteins 0.000 description 1
- 241000194035 Lactococcus lactis Species 0.000 description 1
- 201000010538 Lactose Intolerance Diseases 0.000 description 1
- 102000015728 Mucins Human genes 0.000 description 1
- 108010063954 Mucins Proteins 0.000 description 1
- 101001033265 Mus musculus Interleukin-10 Proteins 0.000 description 1
- 101000648740 Mus musculus Tumor necrosis factor Proteins 0.000 description 1
- 108010053775 Nisin Proteins 0.000 description 1
- NVNLLIYOARQCIX-MSHCCFNRSA-N Nisin Chemical compound N1C(=O)[C@@H](CC(C)C)NC(=O)C(=C)NC(=O)[C@@H]([C@H](C)CC)NC(=O)[C@@H](NC(=O)C(=C/C)/NC(=O)[C@H](N)[C@H](C)CC)CSC[C@@H]1C(=O)N[C@@H]1C(=O)N2CCC[C@@H]2C(=O)NCC(=O)N[C@@H](C(=O)N[C@H](CCCCN)C(=O)N[C@@H]2C(NCC(=O)N[C@H](C)C(=O)N[C@H](CC(C)C)C(=O)N[C@H](CCSC)C(=O)NCC(=O)N[C@H](CS[C@@H]2C)C(=O)N[C@H](CC(N)=O)C(=O)N[C@H](CCSC)C(=O)N[C@H](CCCCN)C(=O)N[C@@H]2C(N[C@H](C)C(=O)N[C@@H]3C(=O)N[C@@H](C(N[C@H](CC=4NC=NC=4)C(=O)N[C@H](CS[C@@H]3C)C(=O)N[C@H](CO)C(=O)N[C@H]([C@H](C)CC)C(=O)N[C@H](CC=3NC=NC=3)C(=O)N[C@H](C(C)C)C(=O)NC(=C)C(=O)N[C@H](CCCCN)C(O)=O)=O)CS[C@@H]2C)=O)=O)CS[C@@H]1C NVNLLIYOARQCIX-MSHCCFNRSA-N 0.000 description 1
- 241000283973 Oryctolagus cuniculus Species 0.000 description 1
- 102000004316 Oxidoreductases Human genes 0.000 description 1
- 108090000854 Oxidoreductases Proteins 0.000 description 1
- 229930040373 Paraformaldehyde Natural products 0.000 description 1
- 108010080032 Pediocins Proteins 0.000 description 1
- 229930182555 Penicillin Natural products 0.000 description 1
- JGSARLDLIJGVTE-MBNYWOFBSA-N Penicillin G Chemical compound N([C@H]1[C@H]2SC([C@@H](N2C1=O)C(O)=O)(C)C)C(=O)CC1=CC=CC=C1 JGSARLDLIJGVTE-MBNYWOFBSA-N 0.000 description 1
- 239000001888 Peptone Substances 0.000 description 1
- 108010080698 Peptones Proteins 0.000 description 1
- 241000009328 Perro Species 0.000 description 1
- 241000295644 Staphylococcaceae Species 0.000 description 1
- 206010041925 Staphylococcal infections Diseases 0.000 description 1
- 235000014897 Streptococcus lactis Nutrition 0.000 description 1
- 241000282898 Sus scrofa Species 0.000 description 1
- 208000026062 Tissue disease Diseases 0.000 description 1
- 108060008682 Tumor Necrosis Factor Proteins 0.000 description 1
- 206010000059 abdominal discomfort Diseases 0.000 description 1
- 239000004480 active ingredient Substances 0.000 description 1
- 230000032683 aging Effects 0.000 description 1
- 150000001299 aldehydes Chemical class 0.000 description 1
- 210000004883 areola Anatomy 0.000 description 1
- 230000000721 bacterilogical effect Effects 0.000 description 1
- 230000000975 bioactive effect Effects 0.000 description 1
- 238000001574 biopsy Methods 0.000 description 1
- 230000037396 body weight Effects 0.000 description 1
- 244000309464 bull Species 0.000 description 1
- 235000012970 cakes Nutrition 0.000 description 1
- 230000000711 cancerogenic effect Effects 0.000 description 1
- 239000002775 capsule Substances 0.000 description 1
- 231100000315 carcinogenic Toxicity 0.000 description 1
- 239000013553 cell monolayer Substances 0.000 description 1
- 238000005119 centrifugation Methods 0.000 description 1
- 230000008859 change Effects 0.000 description 1
- 239000003795 chemical substances by application Substances 0.000 description 1
- 235000015218 chewing gum Nutrition 0.000 description 1
- 230000035606 childbirth Effects 0.000 description 1
- 208000037976 chronic inflammation Diseases 0.000 description 1
- 208000037893 chronic inflammatory disorder Diseases 0.000 description 1
- 230000007012 clinical effect Effects 0.000 description 1
- 210000001072 colon Anatomy 0.000 description 1
- 230000001332 colony forming effect Effects 0.000 description 1
- 150000001875 compounds Chemical class 0.000 description 1
- 230000016396 cytokine production Effects 0.000 description 1
- 235000013365 dairy product Nutrition 0.000 description 1
- 238000001514 detection method Methods 0.000 description 1
- 238000011161 development Methods 0.000 description 1
- 230000018109 developmental process Effects 0.000 description 1
- 230000000741 diarrhetic effect Effects 0.000 description 1
- 230000029087 digestion Effects 0.000 description 1
- 208000010643 digestive system disease Diseases 0.000 description 1
- 208000019836 digestive system infectious disease Diseases 0.000 description 1
- 238000009826 distribution Methods 0.000 description 1
- 239000002552 dosage form Substances 0.000 description 1
- 231100000673 dose–response relationship Toxicity 0.000 description 1
- 238000005516 engineering process Methods 0.000 description 1
- 239000003797 essential amino acid Substances 0.000 description 1
- 235000020776 essential amino acid Nutrition 0.000 description 1
- 230000029142 excretion Effects 0.000 description 1
- 210000003608 fece Anatomy 0.000 description 1
- 238000001914 filtration Methods 0.000 description 1
- 238000005188 flotation Methods 0.000 description 1
- 230000037406 food intake Effects 0.000 description 1
- 238000009472 formulation Methods 0.000 description 1
- 208000018685 gastrointestinal system disease Diseases 0.000 description 1
- 210000001035 gastrointestinal tract Anatomy 0.000 description 1
- 230000002068 genetic effect Effects 0.000 description 1
- 230000009036 growth inhibition Effects 0.000 description 1
- 230000036541 health Effects 0.000 description 1
- 238000010562 histological examination Methods 0.000 description 1
- 230000008348 humoral response Effects 0.000 description 1
- 230000002519 immonomodulatory effect Effects 0.000 description 1
- 230000036039 immunity Effects 0.000 description 1
- 229940027941 immunoglobulin g Drugs 0.000 description 1
- 239000002955 immunomodulating agent Substances 0.000 description 1
- 229940121354 immunomodulator Drugs 0.000 description 1
- 229960001438 immunostimulant agent Drugs 0.000 description 1
- 239000003022 immunostimulating agent Substances 0.000 description 1
- 230000003308 immunostimulating effect Effects 0.000 description 1
- 230000001771 impaired effect Effects 0.000 description 1
- 108010006741 lactobacterin Proteins 0.000 description 1
- 231100000518 lethal Toxicity 0.000 description 1
- 230000001665 lethal effect Effects 0.000 description 1
- 244000144972 livestock Species 0.000 description 1
- 238000011068 loading method Methods 0.000 description 1
- 230000014759 maintenance of location Effects 0.000 description 1
- 230000003211 malignant effect Effects 0.000 description 1
- 239000000463 material Substances 0.000 description 1
- 235000013372 meat Nutrition 0.000 description 1
- 235000013622 meat product Nutrition 0.000 description 1
- 230000001404 mediated effect Effects 0.000 description 1
- 230000002906 microbiologic effect Effects 0.000 description 1
- 238000000386 microscopy Methods 0.000 description 1
- 230000004048 modification Effects 0.000 description 1
- 238000012986 modification Methods 0.000 description 1
- 229940051875 mucins Drugs 0.000 description 1
- 210000001989 nasopharynx Anatomy 0.000 description 1
- 239000004309 nisin Substances 0.000 description 1
- 235000010297 nisin Nutrition 0.000 description 1
- 150000004005 nitrosamines Chemical class 0.000 description 1
- 231100000956 nontoxicity Toxicity 0.000 description 1
- 238000010899 nucleation Methods 0.000 description 1
- 239000007764 o/w emulsion Substances 0.000 description 1
- 239000012188 paraffin wax Substances 0.000 description 1
- 229920002866 paraformaldehyde Polymers 0.000 description 1
- 235000014594 pastries Nutrition 0.000 description 1
- 229940049954 penicillin Drugs 0.000 description 1
- 235000019319 peptone Nutrition 0.000 description 1
- 238000007747 plating Methods 0.000 description 1
- 230000010287 polarization Effects 0.000 description 1
- 229920001184 polypeptide Polymers 0.000 description 1
- 230000003334 potential effect Effects 0.000 description 1
- 230000003389 potentiating effect Effects 0.000 description 1
- 230000035755 proliferation Effects 0.000 description 1
- 102000004169 proteins and genes Human genes 0.000 description 1
- 108090000623 proteins and genes Proteins 0.000 description 1
- 230000002040 relaxant effect Effects 0.000 description 1
- 230000002629 repopulating effect Effects 0.000 description 1
- 210000005000 reproductive tract Anatomy 0.000 description 1
- 210000002345 respiratory system Anatomy 0.000 description 1
- 230000004044 response Effects 0.000 description 1
- 229920006395 saturated elastomer Polymers 0.000 description 1
- 230000028327 secretion Effects 0.000 description 1
- 238000010187 selection method Methods 0.000 description 1
- 238000012163 sequencing technique Methods 0.000 description 1
- 238000001228 spectrum Methods 0.000 description 1
- 238000010561 standard procedure Methods 0.000 description 1
- 239000007858 starting material Substances 0.000 description 1
- 229960005322 streptomycin Drugs 0.000 description 1
- 239000000758 substrate Substances 0.000 description 1
- 230000001629 suppression Effects 0.000 description 1
- 238000001356 surgical procedure Methods 0.000 description 1
- 230000031068 symbiosis, encompassing mutualism through parasitism Effects 0.000 description 1
- 239000003826 tablet Substances 0.000 description 1
- ZRKFYGHZFMAOKI-QMGMOQQFSA-N tgfbeta Chemical compound C([C@H](NC(=O)[C@H](C(C)C)NC(=O)CNC(=O)[C@H](CCC(O)=O)NC(=O)[C@H](CCCNC(N)=N)NC(=O)[C@H](CC(N)=O)NC(=O)[C@H](CC(C)C)NC(=O)[C@H]([C@@H](C)O)NC(=O)[C@H](CCC(O)=O)NC(=O)[C@H]([C@@H](C)O)NC(=O)[C@H](CC(C)C)NC(=O)CNC(=O)[C@H](C)NC(=O)[C@H](CO)NC(=O)[C@H](CCC(N)=O)NC(=O)[C@@H](NC(=O)[C@H](C)NC(=O)[C@H](C)NC(=O)[C@@H](NC(=O)[C@H](CC(C)C)NC(=O)[C@@H](N)CCSC)C(C)C)[C@@H](C)CC)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)O)C(=O)N[C@@H](C(C)C)C(=O)N[C@@H](CC=1C=CC=CC=1)C(=O)N[C@@H](C)C(=O)N1[C@@H](CCC1)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)O)C(=O)N[C@@H](CC(N)=O)C(=O)N[C@@H](CCC(O)=O)C(=O)N[C@@H](C)C(=O)N[C@@H](CC=1C=CC=CC=1)C(=O)N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(=O)N[C@@H](C)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N1[C@@H](CCC1)C(=O)N1[C@@H](CCC1)C(=O)N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(=O)N[C@@H](CCC(O)=O)C(=O)N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(=O)N[C@@H](CO)C(=O)N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(O)=O)C1=CC=C(O)C=C1 ZRKFYGHZFMAOKI-QMGMOQQFSA-N 0.000 description 1
- 231100001274 therapeutic index Toxicity 0.000 description 1
- 231100000419 toxicity Toxicity 0.000 description 1
- 230000001988 toxicity Effects 0.000 description 1
- 239000003053 toxin Substances 0.000 description 1
- 231100000765 toxin Toxicity 0.000 description 1
- 108700012359 toxins Proteins 0.000 description 1
- 230000036642 wellbeing Effects 0.000 description 1
- 235000013618 yogurt Nutrition 0.000 description 1
Images
Classifications
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N1/00—Microorganisms, e.g. protozoa; Compositions thereof; Processes of propagating, maintaining or preserving microorganisms or compositions thereof; Processes of preparing or isolating a composition containing a microorganism; Culture media therefor
- C12N1/20—Bacteria; Culture media therefor
- C12N1/205—Bacterial isolates
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A23—FOODS OR FOODSTUFFS; TREATMENT THEREOF, NOT COVERED BY OTHER CLASSES
- A23C—DAIRY PRODUCTS, e.g. MILK, BUTTER OR CHEESE; MILK OR CHEESE SUBSTITUTES; MAKING THEREOF
- A23C9/00—Milk preparations; Milk powder or milk powder preparations
- A23C9/12—Fermented milk preparations; Treatment using microorganisms or enzymes
- A23C9/123—Fermented milk preparations; Treatment using microorganisms or enzymes using only microorganisms of the genus lactobacteriaceae; Yoghurt
- A23C9/1234—Fermented milk preparations; Treatment using microorganisms or enzymes using only microorganisms of the genus lactobacteriaceae; Yoghurt characterised by using a Lactobacillus sp. other than Lactobacillus Bulgaricus, including Bificlobacterium sp.
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A23—FOODS OR FOODSTUFFS; TREATMENT THEREOF, NOT COVERED BY OTHER CLASSES
- A23C—DAIRY PRODUCTS, e.g. MILK, BUTTER OR CHEESE; MILK OR CHEESE SUBSTITUTES; MAKING THEREOF
- A23C19/00—Cheese; Cheese preparations; Making thereof
- A23C19/02—Making cheese curd
- A23C19/032—Making cheese curd characterised by the use of specific microorganisms, or enzymes of microbial origin
- A23C19/0323—Making cheese curd characterised by the use of specific microorganisms, or enzymes of microbial origin using only lactic acid bacteria, e.g. Pediococcus and Leuconostoc species; Bifidobacteria; Microbial starters in general
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A23—FOODS OR FOODSTUFFS; TREATMENT THEREOF, NOT COVERED BY OTHER CLASSES
- A23L—FOODS, FOODSTUFFS, OR NON-ALCOHOLIC BEVERAGES, NOT COVERED BY SUBCLASSES A21D OR A23B-A23J; THEIR PREPARATION OR TREATMENT, e.g. COOKING, MODIFICATION OF NUTRITIVE QUALITIES, PHYSICAL TREATMENT; PRESERVATION OF FOODS OR FOODSTUFFS, IN GENERAL
- A23L33/00—Modifying nutritive qualities of foods; Dietetic products; Preparation or treatment thereof
- A23L33/10—Modifying nutritive qualities of foods; Dietetic products; Preparation or treatment thereof using additives
- A23L33/135—Bacteria or derivatives thereof, e.g. probiotics
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K35/00—Medicinal preparations containing materials or reaction products thereof with undetermined constitution
- A61K35/66—Microorganisms or materials therefrom
- A61K35/74—Bacteria
- A61K35/741—Probiotics
- A61K35/744—Lactic acid bacteria, e.g. enterococci, pediococci, lactococci, streptococci or leuconostocs
- A61K35/745—Bifidobacteria
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K35/00—Medicinal preparations containing materials or reaction products thereof with undetermined constitution
- A61K35/66—Microorganisms or materials therefrom
- A61K35/74—Bacteria
- A61K35/741—Probiotics
- A61K35/744—Lactic acid bacteria, e.g. enterococci, pediococci, lactococci, streptococci or leuconostocs
- A61K35/747—Lactobacilli, e.g. L. acidophilus or L. brevis
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P1/00—Drugs for disorders of the alimentary tract or the digestive system
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P1/00—Drugs for disorders of the alimentary tract or the digestive system
- A61P1/04—Drugs for disorders of the alimentary tract or the digestive system for ulcers, gastritis or reflux esophagitis, e.g. antacids, inhibitors of acid secretion, mucosal protectants
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P1/00—Drugs for disorders of the alimentary tract or the digestive system
- A61P1/10—Laxatives
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P11/00—Drugs for disorders of the respiratory system
- A61P11/06—Antiasthmatics
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P15/00—Drugs for genital or sexual disorders; Contraceptives
- A61P15/14—Drugs for genital or sexual disorders; Contraceptives for lactation disorders, e.g. galactorrhoea
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P17/00—Drugs for dermatological disorders
- A61P17/06—Antipsoriatics
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P19/00—Drugs for skeletal disorders
- A61P19/02—Drugs for skeletal disorders for joint disorders, e.g. arthritis, arthrosis
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P25/00—Drugs for disorders of the nervous system
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P29/00—Non-central analgesic, antipyretic or antiinflammatory agents, e.g. antirheumatic agents; Non-steroidal antiinflammatory drugs [NSAID]
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P3/00—Drugs for disorders of the metabolism
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P31/00—Antiinfectives, i.e. antibiotics, antiseptics, chemotherapeutics
- A61P31/04—Antibacterial agents
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P35/00—Antineoplastic agents
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P35/00—Antineoplastic agents
- A61P35/04—Antineoplastic agents specific for metastasis
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P37/00—Drugs for immunological or allergic disorders
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P37/00—Drugs for immunological or allergic disorders
- A61P37/02—Immunomodulators
- A61P37/04—Immunostimulants
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P37/00—Drugs for immunological or allergic disorders
- A61P37/02—Immunomodulators
- A61P37/06—Immunosuppressants, e.g. drugs for graft rejection
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P37/00—Drugs for immunological or allergic disorders
- A61P37/08—Antiallergic agents
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P9/00—Drugs for disorders of the cardiovascular system
- A61P9/10—Drugs for disorders of the cardiovascular system for treating ischaemic or atherosclerotic diseases, e.g. antianginal drugs, coronary vasodilators, drugs for myocardial infarction, retinopathy, cerebrovascula insufficiency, renal arteriosclerosis
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N1/00—Microorganisms, e.g. protozoa; Compositions thereof; Processes of propagating, maintaining or preserving microorganisms or compositions thereof; Processes of preparing or isolating a composition containing a microorganism; Culture media therefor
- C12N1/20—Bacteria; Culture media therefor
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12Q—MEASURING OR TESTING PROCESSES INVOLVING ENZYMES, NUCLEIC ACIDS OR MICROORGANISMS; COMPOSITIONS OR TEST PAPERS THEREFOR; PROCESSES OF PREPARING SUCH COMPOSITIONS; CONDITION-RESPONSIVE CONTROL IN MICROBIOLOGICAL OR ENZYMOLOGICAL PROCESSES
- C12Q1/00—Measuring or testing processes involving enzymes, nucleic acids or microorganisms; Compositions therefor; Processes of preparing such compositions
- C12Q1/02—Measuring or testing processes involving enzymes, nucleic acids or microorganisms; Compositions therefor; Processes of preparing such compositions involving viable microorganisms
- C12Q1/18—Testing for antimicrobial activity of a material
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A23—FOODS OR FOODSTUFFS; TREATMENT THEREOF, NOT COVERED BY OTHER CLASSES
- A23V—INDEXING SCHEME RELATING TO FOODS, FOODSTUFFS OR NON-ALCOHOLIC BEVERAGES AND LACTIC OR PROPIONIC ACID BACTERIA USED IN FOODSTUFFS OR FOOD PREPARATION
- A23V2002/00—Food compositions, function of food ingredients or processes for food or foodstuffs
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12R—INDEXING SCHEME ASSOCIATED WITH SUBCLASSES C12C - C12Q, RELATING TO MICROORGANISMS
- C12R2001/00—Microorganisms ; Processes using microorganisms
- C12R2001/01—Bacteria or Actinomycetales ; using bacteria or Actinomycetales
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12R—INDEXING SCHEME ASSOCIATED WITH SUBCLASSES C12C - C12Q, RELATING TO MICROORGANISMS
- C12R2001/00—Microorganisms ; Processes using microorganisms
- C12R2001/01—Bacteria or Actinomycetales ; using bacteria or Actinomycetales
- C12R2001/225—Lactobacillus
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12R—INDEXING SCHEME ASSOCIATED WITH SUBCLASSES C12C - C12Q, RELATING TO MICROORGANISMS
- C12R2001/00—Microorganisms ; Processes using microorganisms
- C12R2001/01—Bacteria or Actinomycetales ; using bacteria or Actinomycetales
- C12R2001/225—Lactobacillus
- C12R2001/25—Lactobacillus plantarum
Landscapes
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- Organic Chemistry (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Medicinal Chemistry (AREA)
- Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
- Veterinary Medicine (AREA)
- Pharmacology & Pharmacy (AREA)
- Animal Behavior & Ethology (AREA)
- Public Health (AREA)
- General Chemical & Material Sciences (AREA)
- Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
- Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
- Microbiology (AREA)
- Zoology (AREA)
- Wood Science & Technology (AREA)
- Immunology (AREA)
- Biotechnology (AREA)
- Mycology (AREA)
- Genetics & Genomics (AREA)
- Polymers & Plastics (AREA)
- Food Science & Technology (AREA)
- Molecular Biology (AREA)
- General Engineering & Computer Science (AREA)
- Biochemistry (AREA)
- Biomedical Technology (AREA)
- Epidemiology (AREA)
- Tropical Medicine & Parasitology (AREA)
- Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
- Virology (AREA)
- Pulmonology (AREA)
- Biophysics (AREA)
- Analytical Chemistry (AREA)
- Physics & Mathematics (AREA)
- Toxicology (AREA)
- Nutrition Science (AREA)
- Oncology (AREA)
- Rheumatology (AREA)
Abstract
Изобретение относится к области медицины и ветеринарии. Способ селекции пробиотиков включает стадии: (i) выделения штаммов молочнокислых бактерий или бифидобактерий, присутствующих в свежем молоке млекопитающего с помощью селекции в молочнокислой культуральной среде, (ii) селекции тех штаммов стадии (i), которые способны к переносу в молочную железу после перорального приема, и/или колонизируют молочную железу после их местного применения, (iii) селекции тех штаммов стадии (ii), которые способны снижать степень выживаемости и/или степень адгезии Staphylococcus aureus на эпителиальных клетках, и (iv) селекции тех штаммов стадии (iii), которые способны защищать животных от мастита; применение отобранных пробиотических штаммов в качестве лекарственного средства. Композиция включает один или несколько пробиотических штаммов в замороженной, лиофилизованной или сухой форме. Изобретение обеспечивает повышение эффективности предотвращения или лечения мастита у людей и животных, без побочных эффектов, которые возникают при использовании для тех же целей антибиотиков. 4 н. и 5 з.п. ф-лы, 3 табл., 7 пр., 8 ил.
Description
ОБЛАСТЬ ТЕХНИКИ
Изобретение относится к новому способу предотвращения или лечения мастита как у людей, так и у животных посредством применения выделенных из молока млекопитающего микроорганизмов, полученных от здоровых хозяев соответствующего вида; настоящее изобретение относится к тем новым пробиотическим микроорганизмам, полученным из молока, которые способны снижать риск инфекционного мастита, и к способу скрининга, используемому для их получения; настоящее изобретение относится к применению этих пробиотических бактерий для профилактики или лечения мастита и других заболеваний; и, в конечном счете, к композициям, включающим эти соединения.
УРОВЕНЬ ТЕХНИКИ
Мастит представляет собой воспаление и инфекцию молочной железы, которое особенно часто встречается у женщин и других самок млекопитающих во время лактации. Мастит в основном бывает вызван стафилококковой и/или стрептококковой селекцией и разрастанием в протоках молочных желез и в ареоле молочных желез. Среди людей маститу подвержено до 30% лактирующих женщин, который часто приводит к раннему и нежелательному отлучению от груди, поскольку представляет собой действительно болезненное состояние.
Кроме того, мастит не является патологией, специфичной только для человека, маститу также подвержены все виды млекопитающих. В этом смысле, инфекционный мастит у видов и пород животных, разводимых для производства молока, таких как коровы, овцы или козы, представляется важной проблемой с экономической точки зрения, так как молоко, полученное во время инфекционного процесса, должно быть выброшено из-за высокого количества бактериальных и соматических клеток. Кроме того, мастит может представлять собой важную проблему у таких видов домашних животных (свиньи, кролики...) и у таких пород животных (например, быки для производства мяса), которые не предназначены для производства молока, так как уменьшенное количество молока низкого бактериологического качества может значительно увеличивать процент заболеваемости и смертности среди потомства.
В этих случаях, терапия на основе антибиотиков выступает как единственный возможный метод лечения. Однако для имеющегося в настоящее время широкого спектра антибиотиков грамположительной направленности характерна низкая эффективность для стафилококковых и стрептококковых штаммов, вызывающих мастит, и поэтому, фактически, в некоторых обстоятельствах такие способы лечения могут быть пагубными, поскольку они обычно элиминируют симбиотическую флору, характерную для молока млекопитающего, которая может оказывать некоторые защитные эффекты. Кроме того, антибиотикотерапия может в результате приводить к появлению остатков антибиотика в молоке, что также является пагубным, если это происходит в период лактации. Альтернативно, для лечения субклинического мастита, вызванного S. aureus, также используется рекомбинантный бычий GM-CSF (Takahashi,H. et al. 2004, Cad.J.Vet.Res. 68:182-187), но его использование не демонстрирует эффективности при лечении поздней стадии инфекции S. aureus.
Альтернативным способом лечения мастита является использование пробиотиков. Например, Sytnik,S.I. et al. (Vrach Delo., 1990, 3:98-100) осуществили попытку использования бифидобактерий для предотвращения мастита, но при этом не наблюдали какого-либо ингибирования времени удержания микрофлоры груди. Greene,W.A. et al. (J.Dairy Sci., 1991, 74:2976- 2981) описали использование коммерческого препарата лактобактерий при повышенном количестве соматических клеток (SSC) для лечения путем введения прямой интрамаммарной инъекции, но сделали заключение, что продукт лактобактерий, используемый в анализе, не является эффективным в качестве интрамаммарного лечения субклинического мастита на основе SCC. В патенте US4591499 описан способ лечения мастита с использованием интрамаммарной инъекции эмульсии типа «масло в воде», содержащей непатогенный штамм лактобактерий или смесь штаммов. Однако по-видимому, штаммы, описанные в этом документе, действуют посредством неспецифического уменьшения pH в молочной железе и нуждаются во введении путем прямой интрамаммарной инъекции. В патенте RU2134583 описано применение местной композиции, содержащей лактобактерин (микробная масса лактобактерий, которая была в живом виде лиофилизована/высушена в культуральной среде) или бифидумбактерин (лиофилизованный биопрепарат, иммобилизованный на специальном активированном угле), для лечения массированного распространения микробов грудного молока. Однако этот препарат подходит исключительно для местного введения и представляет собой часть многостадийного лечения, которое включает расслабляющий массаж и применение суспензии организмов, выделенных из нормальной микрофлоры кишечника, дополнительно содержащей защитную пленкообразующую среду. В международной патентной заявке WO05/34970 описан способ лечения мастита путем интрамаммарной инъекции штамма Lactococcus lactis. Таким образом, все данные об уровне техники, описанные выше, относятся к применению пробиотических штаммов путем или интрамаммарной инъекции, или путем местного применения. Таким образом, в области техники сохраняется необходимость разработки дополнительных способов, обеспечивающих предотвращение или лечение мастита и других патологий молочной железы у женщин и у самок других млекопитающих, способов, более легких в применении и с использованием менее инвазивных средств.
СУЩНОСТЬ ИЗОБРЕТЕНИЯ
Настоящее изобретение основано на неожиданном и удивительном открытии того, что молоко млекопитающего содержит пробиотические штаммы, которые способны переноситься в молочную железу после их перорального приема, и проявляют местный терапевтический эффект против патогенов, которые вызывают мастит, таким образом, помогая уменьшать случаи мастита.
Кроме того, эти штаммы имеют ряд дополнительных неожиданных предпочтительных свойств, которые делают их пригодными для лечения других заболеваний. Настоящее изобретение является предпочтительным по отношению к способам, известным в области техники, принимая во внимание ценные свойства, которые может обеспечить лактация, и благодаря экономической заинтересованности фермеров в молочной продуктивности.
В первом аспекте, в изобретении предлагается способ селекции пробиотиков, включающий стадии:
(i) выделения штаммов молочнокислых бактерий или бифидобактерий, присутствующих в свежем молоке, из вида млекопитающего с помощью селекции в молочнокислой культуральной среде,
(ii) селекции тех штаммов стадии (i), которые способны к переносу в молочную железу после перорального приема, и/или колонизируют молочную железу после их местного применения,
(iii) селекции тех штаммов стадии (ii), которые способны снижать степень выживаемости и/или степень адгезии Staphylococcus aureus на эпителиальных клетках, и
(iv) селекции тех штаммов стадии (iii), которые способны защищать животных от мастита.
В другом аспекте, в изобретении предлагаются пробиотические штаммы, получаемые способом по изобретению. В другом аспекте, в изобретении предлагается супернатант культуры штамма или смеси штаммов по изобретению.
В следующем аспекте, в изобретении предлагается композиция, фармацевтический продукт, кормовой или пищевой продукт, включающие, по меньшей мере, один пробиотический штамм по изобретению, или супернатант культуры одного или более штаммов по изобретению.
В другом аспекте в изобретении предлагается применение пробиотических штаммов по изобретению, или культурального супернатанта для производства лекарственного средства, предназначенного для лечения и/или профилактики хронической или острой инфекции или инвазии, или нежелательной микробной колонизации, где инфекция, инвазия или колонизация вызваны паразитами, бактериями, дрожжами, грибками или вирусами, причем лекарственное средство воздействует на любую поверхность тела или слизистую оболочку нуждающегося в этом субъекта или животного.
В следующем аспекте в изобретении предлагается применение пробиотического штамма или смеси пробиотических штаммов по изобретению или культурального супернатанта для производства лекарственного средства, предназначенного для лечения и/или профилактики реакций гиперчувствительности к пище и метаболической непереносимости; констипации и других желудочно-кишечных расстройств; воспалительных или аутоиммунных нарушений, выбранных из группы, состоящей из IBD, неспецифического язвенного колита, артрита, атеросклероза, рассеянного склероза, псориаза или саркоидоза; и опухолевого роста, метастаза и рака у нуждающегося в этом субъекта или животного.
В следующем аспекте в изобретении предлагается применение пробиотического штамма или смеси пробиотических штаммов или культурального супернатанта по изобретению для производства лекарственного средства, предназначенного для лечения и/или профилактики аллергических нарушений или астмы у нуждающегося в этом субъекта или животного.
В следующем аспекте в изобретении предлагается применение пробиотического штамма или смеси пробиотических штаммов или культурального супернатанта по изобретению для производства лекарственного средства, предназначенного для лечения и/или профилактики временно подавленного иммунного статуса индивидуумов или животных, подвергшихся физиологической нагрузке или нагрузке, полученной в результате терапии.
КРАТКОЕ ОПИСАНИЕ ФИГУР
На Фигуре 1 представлены последовательности 16S рРНК пробиотических штаммов бактерий, включенных в настоящее изобретение, и их профиль ПЦР со случайной амплификацией полиморфной ДНК.
На Фигуре 2 представлена диаграмма, демонстрирующая способность переноса в молочную железу мышей штаммов по настоящему изобретению и колонизацию пищеварительного канала мышей штаммами по настоящему изобретению. Количество лактобактерий (серые столбцы), бифидобактерий (черные столбцы) и энтерококков (белые столбцы) в образцах сцеженного молока и в образцах фекалий лактирующих мышей, получающих ежедневно в течение 14 дней 108 КОЕ генетически стабильных штаммов, анализировали с помощью посева бактериальных колоний. Образцы сцеженного молока и образцы фекалий собирали в дни 0, 5 и 10, соответствующие дням получения пробиотиков. Количество ПЦР-позитивных колоний в молоке выражено в %.
На Фигуре 3 представлена диаграмма, демонстрирующая ингибирование выживаемости и адгезии стафилоккоков, получаемое после совместного культивирования стафилоккоков со штаммами, включенными в настоящее изобретение. A. Ингибирующий эффект пробиотиков, включенных в настоящее изобретение, оказываемый на выживаемость Staphylococcus aureus, оценивали in vitro с помощью анализа диффузии в агар из лунки на ТСА-чашках. Диаметр островка ингибирования (в миллиметрах), вызванного бактериальными супернатантами, определяет противомикробный эффект. B. Адгезию патогенного штамма Staphylococcus aureus на клетках Caco-2 оценивали в присутствии пробиотических штаммов по изобретению. Десять случайных областей просчитывали, и результаты выражали как среднее значение % прикрепленных к клеткам грамотрицательных бактерий по сравнению с количеством патогенных бактерий, прикрепленных к клеткам в отсутствие пробиотиков.
На Фигуре 4 представлена диаграмма, демонстрирующая эффект защиты от мастита. Мастит индуцировали у лактирующих мышей через 10 дней после родового акта путем инъекции 106 КОЕ S. aureus в четвертую пару молочных желез. Нагрузку стафилококка в сцеженном молоке (A) и балльную оценку воспаления молочной железы (B) проводили через 5 и 10 дней после инфекции.
На Фигуре 5 представлена диаграмма, демонстрирующая адгезию пробиотических штаммов на клетках кишечника. Адгезию пробиотических штаммов по настоящему изобретению оценивали с использованием клеточных линий кишечника Caco-2 (серые столбцы) или HT-29 (черные столбцы). Двадцать случайных областей просчитывали, и результаты выражали как среднее значение количества бактерий, прикрепленных к клеткам, на единицу области ± Станд.откл.
На Фигуре 6 представлена диаграмма, демонстрирующая выживаемость пробиотических штаммов в условиях, близких к условиям пищеварения. Сопротивляемость пробиотических штаммов по настоящему изобретению к кислотному содержанию (серые столбцы) и к высокому содержанию солей желчных кислот (черные столбцы) оценивали in vitro путем культивирования бактерий в среде MRS, pH 3 или в растворе 0,15% солей желчных кислот в течение 90 минут. Результаты представлены в качестве среднего значения ± Станд.откл. трех независимых экспериментов.
На Фигуре 7 демонстрируется эффект, оказываемый пробиотическими штаммами на модель перорально индуцированной инфекции сальмонеллой. A. Диаграмма, демонстрирующая эффект лечения пробиотиками, оказываемый на ингибирование транслокации сальмонеллы в селезенку. Количество колоний сальмонеллы измеряли в селезенках мышей, подвергнутых лечению с помощью пробиотиков, вакцинированных (серые столбцы) или не вакцинированных (черные столбцы) с помощью 108 КОЕ инактивированных бактерий сальмонеллы, через 24 часа после перорального введения 1010 КОЕ бактерий сальмонеллы. B. Кривые выживаемости животных после инфекции сальмонеллой.
На Фигуре 8 представлена диаграмма, демонстрирующая эффект, оказываемый пробиотическими штаммами на экспрессию цитокинов и иммуноглобулина G. Анализировали продуцирование TNF-альфа (A) и IL-10 (B) в макрофагах, выделенных из костного мозга, стимулированных с помощью LPS и указанного пробиотического штамма в течение 12 часов, в то время как экспрессию IgG (C) анализировали в лимфоцитах, полученных из селезенки мышей Balb/c (возрастом 6-8 недель) и стимулированных с помощью LPS и указанного пробиотического штамма в течение 6 дней. Продуцирование обоих цитокинов и IgG детектировали с помощью анализа ELISA.
ПОДРОБНОЕ ОПИСАНИЕ ИЗОБРЕТЕНИЯ
В изобретении предлагается новый способ профилактики и терапевтического лечения инфекционного мастита одновременно у женщин и у самок других нуждающихся в этом млекопитающих. Способ основан на применении конкретных пробиотических штаммов, селектированных для такого конкретного применения. В первом аспекте в изобретении предлагается способ селекции пробиотиков, включающий стадии:
(i) выделения штаммов молочнокислых бактерий или бифидобактерий, присутствующих в свежем молоке, из вида млекопитающего с помощью селекции в молочнокислой культуральной среде,
(ii) селекции тех штаммов стадии (i), которые способны к переносу в молочную железу после перорального приема, и/или колонизируют молочную железу после их местного применения,
(iii) селекции тех штаммов стадии (ii), которые способны снижать степень выживаемости и/или степень адгезии Staphylococcus aureus на эпителиальных клетках, и
(iv) селекции тех штаммов стадии (iii), которые способны защищать животных от мастита.
В стадии (i) любое молоко, полученное из организма млекопитающего, может использоваться в качестве стартового материала для способа по изобретению. В предпочтительном варианте осуществления изобретения используется молоко человека, коровы, свиньи, овцы, кошки или собаки. Кроме того, любая молочнокислая культуральная среда, известная из области техники, может использоваться для селекции штаммов. Предпочтительно, молочнокислую культуральную среду выбирают из среды MRS, из среды APT, из среды RCM, из среды LM 17, из среды GM 17 и среды Elliker. Наиболее предпочтительно, молочнокислая культуральная среда представляет собой среду MRS.
В стадии (ii) штаммы, выделенные в стадии (i), селектируют на основе их способности к переносу в молочную железу после перорального приема, и/или способны колонизировать молочную железу после местного применения. Для детектирования способности к переносу в молочную железу может быть использован анализ, такой, как описанный в патентной заявке WO2004003235 для детектирования переноса микроорганизма в молоко после перорального приема.
В стадии (iii) может использоваться любой анализ, известный из области техники, для измерения степени выживаемости стафилококка и для измерения степени адгезии S. aureus на эпителиальных клетках. В предпочтительном варианте осуществления изобретения, эффект, оказываемый пробиотиками на степень адгезии, измеряют с использованием конфлюентной культуры клеточной линии кишечника, к которой добавляют клетки S. aureus и пробиотики по изобретению, и с помощью любого подходящего метода измеряют количество прикрепленных клеток S. aureus. Обычно клеточная линия кишечника представляет собой Caco-2, и количество прикрепленных клеток измеряют с помощью прямого обследования клеточных монослоев с использованием световой микроскопии. Кроме того, альтернативно, стадия селекции (iii) также может включать измерение жизнеспособности S. aureus в присутствии пробиотических штаммов. Может использоваться любой анализ, подходящий для измерения ингибирования роста бактериальных штаммов. Обычно, оценку жизнеспособности S. aureus проводят с помощью анализа диффузии в агар из лунки.
В стадии (iv) может использоваться любой анализ для измерения эффекта защиты от мастита. Предпочтительно, анализ включает использование экспериментальной модели мастита на животном, где, по меньшей мере, один патоген, о котором известно, что он является причинным фактором мастита, инъецируют в молочную железу. Более предпочтительно, экспериментальной моделью на животном является мышь, и патогеном, который необходимо ввести, чтобы вызвать мастит, является S.aureus.
В другом аспекте, в изобретении предлагается пробиотический штамм, который можно получить с помощью способа по изобретению. Предпочтительно, пробиотический штамм выбирают из группы, состоящей из штамма Bifidobacterium breve, депонированного в коллекции CECT под регистрационным номером № 7263, Bifidobacterium breve, депонированного в коллекции CECT под регистрационным номером № 7264, Lactobacillus reuteri, депонированного в коллекции CECT под регистрационным номером № 7260, Lactobacillus plantarum, депонированного в коллекции CECT под регистрационным номером № 7262, Lactobacillus fermentum, депонированного в коллекции CECT под регистрационным номером № 7265, Lactobacillus reuteri, депонированного в коллекции CECT под регистрационным номером № 7266, Lactobacillus salivarius, депонированного в коллекции CECT под регистрационным номером № 7409, Enterococcus hirae, депонированного в коллекции CECT под регистрационным номером № 7410, Enterococcus faecalis, депонированного в коллекции CECT под регистрационным номером № 7411, Lactobacillus plantarum, депонированного в коллекции CECT под регистрационным номером № 7412, Lactobacillus reuteri, депонированного в коллекции CECT под регистрационным номером № 7413.
В следующем аспекте в изобретении предлагается супернатант культуры одного или более штаммов по изобретению. Супернатант может быть получен из культуры с помощью любых средств, доступных специалисту в данной области, включающих центрифугирование, фильтрацию, флотацию и тому подобное.
В следующем аспекте в изобретении предлагается применять пробиотический штамм или смесь пробиотических штаммов по изобретению или супернатант культуры одного или более штаммов по изобретению в качестве лекарственного средства. В другом аспекте, в изобретении предлагается композиция, которая включает, по меньшей мере, один из бактериальных штаммов по изобретению. Предпочтительно, композиция включает, по меньшей мере, 2, по меньшей мере, 3, по меньшей мере, 4, по меньшей мере, 5 или, по меньшей мере, 6 штаммов по изобретению, и где каждый из штаммов представлен в композиции в пропорции, составляющей от 0,1% до 99,9%, предпочтительно, от 1% до 99%, более предпочтительно, от 10% до 90%. В другом варианте осуществления изобретения, композиция включает любой из бактериальных штаммов по изобретению вместе с другим штаммом или смесью штаммов, и где каждый из штаммов представлен в композиции в пропорции, составляющей от 0,1% до 99,9%, предпочтительно, от 1% до 99%, более предпочтительно, от 10% до 90%. В другом аспекте, в изобретении предлагается композиция, которая включает супернатант культуры одного или более штаммов по изобретению. Предпочтительно, супернатант представлен в композиции в пропорции, составляющей от 0,1% до 99,9%, предпочтительно, от 1% до 99%, более предпочтительно, от 10% до 90%.
В другом аспекте, в изобретении предлагается фармацевтическая композиция, включающая терапевтически эффективное количество, по меньшей мере, одного штамма, или предлагается фармацевтическая композиция, включающая терапевтически эффективное количество супернатанта культуры одного или более штаммов по изобретению. Фармацевтический препарат может принимать форму таблеток, капсул, жидких бактериальных суспензий, сухих пероральных добавок, водонасыщенных пероральных добавок, пробирок с сухой смесью, пробирок с жидкой смесью. Предпочтительно, пробиотик-содержащая или супернатант-содержащая композиция и фармацевтический продукт направлены к поверхности слизистой оболочки рта, желудка и/или кишечника; однако они также могут быть направлены к слизистой оболочке носоглотки, дыхательных путей, репродуктивного тракта или к слизистой оболочке желез, и/или к молочной железе и они могут вводиться женщинам или животным с помощью перорального пути введения, назального, окулярного, ректального, местного и/или вагинального.
В другом аспекте, в изобретении предлагается кормовой или пищевой продукт, включающий, по меньшей мере, один пробиотический штамм по изобретению, или супернатант культуры одного или более штаммов по изобретению. Не ограничивающие примеры продуктов питания, которые могут использоваться по настоящему изобретению, представляют собой молоко, йогурт, сыр, творог, ферментированное молоко, ферментированные продукты на основе молока, ферментированные продукты на основе круп, ферментированные мясные продукты, другие мучные продукты на основе молока или на основе круп, смеси лечебного питания, мороженое, соки, хлеб, пирожные или конфеты, смеси корма животных, полусинтетические или синтетические питательные смеси, детские смеси, смеси лечебного питания, мороженое, соки, мука, хлеб, пирожные, конфеты или жевательные резинки.
Требуемое дозированное количество пробиотических штаммов в композиции, пищевой или фармацевтической композиции, описанных ранее, будет варьироваться согласно природе нарушения или согласно предполагаемому применению композиции, которая используется или профилактически, или терапевтически, и согласно типу вовлеченного в использование композиции организма.
В настоящем изобретении может использоваться любая подходящая дозировка пробиотиков или их комбинаций при условии, что токсические эффекты не превышают терапевтических эффектов. Терапевтическая эффективность и токсичность могут определяться с помощью стандартных фармацевтических процедур с использованием экспериментальных животных, таких процедур, как расчет статистических данных ED (дозы, терапевтически эффективной у 50% популяции) или LD (дозы, летальной для 50% популяции). Соотношение дозы токсического эффекта к дозе терапевтического эффекта представляет собой терапевтический индекс, который может быть выражен в виде соотношения LD/ED. Тем не менее, активность новых микроорганизмов у индивидуума является естественно дозо-зависимой. То есть, чем больше новых микроорганизмов вводится посредством принятия внутрь или введения вышеуказанного пищевого материала или фармацевтической композиции, тем выше защитная и/или терапевтическая активность микроорганизмов. Так как микроорганизмы по настоящему изобретению не причиняют вреда людям и животным и достоверно выделяются из грудного молока здорового человека, то эти микроорганизмы могут вводиться в большом количестве, так что, по существу, большая пропорция слизистой оболочки индивидуума будет колонизирована новыми микроорганизмами. Предпочтительными являются композиции, которые демонстрируют большие значения терапевтических индексов. Данные, полученные из исследований на модели животных, используются для определения интервала дозировок для применения у человека или животного. Дозировка, содержащаяся в таких композициях, предпочтительно находится в интервале циркулирующих концентраций, который включает ED, с небольшой токсичностью или в отсутствие токсичности. Дозировка варьируется в этом интервале в зависимости от применяемой дозированной формы, чувствительности пациента и пути введения. Точная дозировка будет определяться лечащим врачом в свете факторов, связанных с требующимся лечением субъекта. Например, для приготовления пищевой композиции по настоящему изобретению, по меньшей мере, один пробиотический штамм по настоящему изобретению вводится с подходящим носителем в количестве от 105 КОЕ/г примерно до 1012 КОЕ/ на 1 г материала носителя, предпочтительно, примерно от 106 КОЕ/г примерно до 1011 КОЕ/ на 1 г материала носителя, более предпочтительно, примерно от 106 КОЕ/г примерно до 1010 КОЕ/ на 1 г материала носителя.
В случае фармацевтической композиции, дозировка пробиотического штамма должна составлять примерно от 105 КОЕ/г примерно до 1014 КОЕ/ на 1 г материала носителя, предпочтительно, примерно от 106 КОЕ/г примерно до 1013 КОЕ/ на 1 г материала носителя, более предпочтительно, примерно от 107 КОЕ/г примерно до 1012 КОЕ/ на 1 г материала носителя. В целях настоящего изобретения аббревиатура КОЕ будет обозначать "колониеобразующая единица", которая определяется как количество бактериальных клеток, обнаруженных с помощью микробиологических подсчетов на чашках с агаром.
Дозировка и введение регулируются для обеспечения подходящего уровня активного компонента или для поддержания целевого эффекта. Факторы, которые могут приниматься во внимание, включают тяжесть стадии заболевания, общее состояние здоровья субъекта, возраст, вес и пол субъекта, время и частоту введения, комбинацию(и) лекарственных средств, чувствительность реакции и ответ на терапию. Композиции продолжительного действия могут вводиться каждые 3-4 дня, каждую неделю или каждые две недели в зависимости от периода полужизни и скорости выведения конкретной композиции.
В предпочтительном варианте осуществления изобретения, изобретение также относится к композициям штаммов по настоящему изобретению в лиофилизованной, сублимированной или в сухой форме, которые могут быть получены с помощью любого стандартного метода, известного из уровня техники.
В другом аспекте, в изобретении предлагается композиция, фармацевтический продукт, кормовой или пищевой продукт, где пробиотический штамм или смесь штаммов представлены в частично или полностью инактивированной форме.
Множество людей обладает нарушенной кишечной микрофлорой, то есть нарушен баланс между полезными и вредными кишечными бактериями. Ряд факторов, среди которых стресс, присутствие солей желчных кислот и специфическое питание, влияет на бактериальную микрофлору. В этих случаях процесс ферментации может быть нарушен, и количество полезных бактерий уменьшается, вследствие чего слизистая оболочка толстой кишки иссушается и прекращает функционировать в то же самое время, как потенциальные злокачественные бактерии быстро возрастают в количестве. Пробиотические штаммы по изобретению способны предотвращать адгезию S. aureus на эпителиальных клетках, а также способны уменьшать степень выживаемости клеток S. aureus и многих других патогенов. Таким образом, пробиотические штаммы по изобретению конкретно применяются для лечения указанных заболеваний, так как они эффективно содействуют уничтожению патогенов, в то время одновременно они содействуют репопуляции поверхности слизистой оболочки физиологической микрофлорой.
По этой причине, один аспект настоящего изобретения представляет собой применение пробиотиков по изобретению и супернатантов культуры одного или более штаммов по изобретению для приготовления фармацевтической композиции, предназначенной для профилактического или терапевтического лечения хронической или острой инфекции, или инвазии, или нежелательной микробной колонизации поверхности слизистой оболочки, или любого другого локального участка у человека, где инфекция, инвазия или колонизация вызваны паразитами, бактериями, дрожжами, грибками или вирусами, оказывающими влияние на любую поверхность тела или слизистой оболочки, причем указанное терапевтическое лечение включает введение эффективного количества пробиотика или пробиотик-содержащей композиции нуждающемуся в этом субъекту. В предпочтительном варианте осуществления изобретения инфекция или колонизация любой поверхности тела или слизистой оболочки субъекта или животного вызвана паразитами, бактериями, дрожжами, грибками или вирусами.
Пробиотики по изобретению были селектированы на основе их способности колонизировать молочную железу после перорального приема и на основе их способности предотвращать адгезию S. aureus на эпителиальных клетках, а также на основе их способности снижать выживаемость S. aureus. Таким образом, штаммы являются подходящими для лечения мастита. Соответственно, в следующем аспекте, в изобретении предлагается применение пробиотических штаммов по изобретению и супернатантов культур одного или более штаммов по изобретению для приготовления фармацевтической композиции, предназначенной для лечения или профилактики инфекционного мастита у человека и животного. Этот способ заключается в применении пробиотических штаммов, селектированных из соответствующего свежего молока, и в способности этих штаммов к переносу в молочную железу и в проявлении там своих полезных свойств, таких как ингибирование стафилококковой инфекции.
Кроме того, также было продемонстрировано, что пробиотические штаммы по изобретению обладают некоторыми из свойств, характерных для потенциального пробиотического штамма, а именно безвредность и хорошая сопротивляемость процессу пищеварения, а также способность колонизации пищеварительного канала. Таким образом, штаммы способны достигать кишечного тракта после перорального приема и проявляют там свои терапевтические свойства. Соответственно, в предпочтительном варианте осуществления изобретения, в изобретении предлагается применение пробиотических штаммов по изобретению и супернатанта культуры одного или более штаммов по изобретению для приготовления фармацевтической композиции, предназначенной для лечения неонатальной диареи.
Известно, что пробиотические штаммы уменьшают продуцирование активированными макрофагами про-воспалительных цитокинов во время хронических воспалительных нарушений. Соответственно, в другом аспекте, в изобретении предлагается применение бактериальных штаммов, композиций по изобретению и супернатантов культуры одного или более штаммов по изобретению в приготовлении фармацевтической композиции для производства лекарственного средства, предназначенного для лечения воспалительных или аутоиммунных нарушений. Не ограничивающие примеры таких воспалительных и аутоиммунных заболеваний включают IBD, неспецифический язвенный колит, артрит, атеросклероз, рассеянный склероз, псориаз или саркоидоз.
Пробиотические штаммы по изобретению способны к репопуляции иммунного барьера пищеварительного канала, и, таким образом, они также конкретно подходят для улучшения иммунного барьера пищеварительного канала нуждающегося в этом субъекта или животного. Соответственно, в другом аспекте в изобретении предлагается применение одного или более пробиотических штаммов по изобретению и супернатантов культуры одного или более штаммов по изобретению для приготовления фармацевтической композиции для приготовления лекарственного средства, предназначенного для лечения и/или профилактики реакций гиперчувствительности к пище и метаболической непереносимости, такой как лактозная непереносимость; констипации и других желудочно-кишечных расстройств.
Известно, что пробиотики применяются для противодействия раку благодаря их эффектам, оказываемым на ингибирование в кишечнике канцерогенных токсинов, таких как нитрозамины, а также благодаря эффекту, оказываемому этими пробиотиками на модулирование естественной иммунной реакции. Соответственно, в следующем аспекте в изобретении предлагается применение штаммов, заявленных в настоящем изобретении, и супернатантов культуры одного или более штаммов по изобретению для приготовления фармацевтической композиции, предназначенной для профилактического или терапевтического лечения некоторых типов рака и для ингибирования опухолевого роста, метастаза и рака у нуждающегося в этом субъекта или животного.
Штаммы по изобретению способны модулировать иммунный ответ и баланс между цитокинами Th1 и Th2. Соответственно, в следующем аспекте в изобретении предлагается применение штаммов, композиций и супернатантов по изобретению для производства лекарственного средства, предназначенного для лечения и/или профилактики аллергических нарушений, астмы и нарушений, связанных с развитием устойчивости против принятых внутрь белков.
В следующем аспекте, в изобретении предлагается применение штаммов, композиций и супернатантов по изобретению для производства лекарственного средства, предназначенного для лечения и/или профилактики временного подавления иммунного статуса индивидуумов, возникающего в процессе старения, или временного подавления иммунного статуса здоровых индивидуумов, подвергшихся интенсивной нагрузке или, как правило, сильной физиологической нагрузке или стрессу.
В другом аспекте, в изобретении предлагается терапевтическое применение пробиотического штамма, комбинаций штаммов и супернатантов, где штамм или штаммы вводятся перорально, местно, назально, энтерально, окулярно, урогенитально, ректально или вагинально.
Кроме того, благодаря присутствию селектированных штаммов в грудном молоке, субъекты, нуждающиеся в лечении, могут представлять собой не только тех, кто непосредственно принимает селектированные штаммы, но также могут представлять собой утробный плод или грудных младенцев. Соответственно, еще в одном аспекте в изобретении предлагается применение штаммов, композиций и супернатанта по изобретению для производства лекарственного средства, созданного для введения лактирующей женщине с целью терапевтического или профилактического лечения их утробных плодов и/или грудных младенцев.
Следующие методы и примеры иллюстрируют изобретение.
ПРИМЕРЫ
Пример 1: Выделение пробиотиков из молока млекопитающего
Образцы свежего молока (2 мл за исключением случаев, когда у самок собирают только 0,5 мл) получали от 23 здоровых женщин на 6-14 день после родов; от 8 самок свиньи на 5 день после родов, от 9 самок на 2-10 день после родов и от 4 коров на 2 день после родов. Ни женщины, ни животные не испытывали затруднений во время родов, и им не проводили никакой терапии с введением антибиотиков в последние две недели перед сбором образца молока. Все образцы молока немедленно замораживали при -80°C.
Для того чтобы выделить бактериальные штаммы из этих образцов, последовательные разведения 0,1 мл образцов в пептонном бульоне высевали на чашки со средой MRS, APT, RCM, LM 17, GM 17 и Elliker-агаром, инкубировали при 37°C в аэробных и в анаэробных условиях в течение 24-48 часов. Среди исходно полученных колоний в приблизительном количестве 1200 штук, выбрали 120 (10%; включают характерные колонии с различной морфологией, наблюдаемые на чашках) и субкультивировали на MRS-агаре при 37°C в анаэробных условиях. Среди них дополнительно выбирали 86 изолятов со следующими характеристиками: не образующие спор, негативные по каталазе и оксидазе грамположительные бактерии.
Эти 68 селектированных изолятов дополнительно охарактеризовывали как фенотипически (API CH50, APIZYM и оценка устойчивости к антибиотикам), так и генетически (секвенирование 16S рРНК и профиль ПЦР со случайной амплификацией полиморфной ДНК). Эта характеризация привела в результате к получению 59 различных бактериальных штаммов, которые дополнительно оценивали посредством процесса скрининга, описанного в настоящем изобретении, с целью получения потенциальных пробиотических кандидатов, способных защищать организм от мастита.
После окончания процесса скрининга только 6 штаммов (2 от женщин, 2 от самок и 2 от самок свиней) удовлетворяли всем определенным критериям. Другие молочнокислые бактерии получали от других видов млекопитающего, таких как коза, овца, кошка, крыса и мышь, но они не удовлетворяли в достаточной степени всем критериям скрининга, и по этой причине их не включили в настоящее изобретение.
- Bifidobacterium breve, причем указанные бактерии получены из молока человека.
- Bifidobacterium breve, причем указанные бактерии получены из молока человека.
- Lactobacillus reuteri, причем указанные бактерии получены из молока свиньи.
- Lactobacillus plantarum, причем указанные бактерии получены из молока свиньи.
- Lactobacillus reuteri, причем указанные бактерии получены из молока собаки.
- Lactobacillus fermentum, причем указанные бактерии получены из молока собаки.
- Lactobacillus salivarius, причем указанные бактерии получены из молока свиньи.
- Enterococcus hirae, причем указанные бактерии получены из молока кошки.
- Enterococcus faecalis, причем указанные бактерии получены из молока кошки.
- Lactobacillus plantarum, причем указанные бактерии получены из молока кошки.
- Lactobacillus reuteri, причем указанные бактерии получены из молока собаки.
Пример 2: Физиологическая и генетическая характеризация
Все эти изоляты генетически и физиологически охарактеризовывали. Для идентификации каждого пробиотического штамма, осуществляли анализ ферментации API 50CH (BioMerieux) штаммов при 37°C в анаэробных условиях в течение 24 и 48 часов, следуя инструкциям производителя. Результаты для 24 часов суммировали в Таблице I. Позитивный ферментируемый субстрат представляет собой тот, для которого получено значение выше чем 3.
Благодаря низкой специфичности характеризации API, также осуществляли анализ последовательностей 16S рРНК селектированных бактериальных штаммов. Последовательность 16S РНК селектированных бактерий и их профиль ПЦР со случайной амплификацией полиморфной ДНК продемонстрированы на Фигуре 1. Полученные результаты привели к классификации бактериальных штаммов, как указано выше. Соответственно этой классификации бактериальные штаммы по изобретению депонировали согласно Бедапештскому соглашению в коллекцию CECT - Coleccion Española de Cultivos Tipo-, Валенсия (Испания) 17 апреля 2007 года, и присвоили им следующие регистрационные номера:
- Bifidobacterium breve CECT7263
- Bifidobacterium breve CECT7264
- Lactobacillus reuteri CECT7260
- Lactobacillus plantarum CECT7262
- Lactobacillus reuteri CECT7265
- Lactobacillus fermentum CECT7266
Следующие бактериальные штаммы по изобретению депонировали согласно Будапештскому соглашению в коллекцию CECT - Coleccion Española de Cultivos Tipo-, Валенсия (Испания) 30 мая 2008 года:
Lactobacillus salivarius CECT7409
Enterococcus hirae CECT7410
Enterococcus faecalis CECT7411
Lactobacillus plantarum CECT7412
Lactobacillus reuteri CECT7413
Пример 3: Селективный скрининг штаммов
Пример 3a: Перенос в молочную железу после перорального приема
После получения различных штаммов кандидатов из молока млекопитающего, как указано в первом критерии селекции, следующая стадия в способе селекции, описанном в настоящем изобретении, состоит в том, что бактерии должны быть способны к переносу в молоко после перорального приема или местного применения. Для того чтобы протестировать эту способность, предполагаемые штаммы генетически метили, как описано ранее (WO 2004/003235), и вводили беременным крысам перорально, выступающим в качестве экспериментальной животной модели. В молоке и неонатальных фекальных образцах измеряли вместе лактобактерии, бифидобактерии и энтерококки. Кроме того, специфичный перенос бактерий анализировали с помощью ПЦР-скрининга колоний, полученных из молока лактирующих крыс и из неонатальных фекальных образцов.
Четырем беременным крысам Wistar перорально инокулировали 108 КОЕ генетически меченных штаммов, переносимых в 0,5 мл молока, каждые два дня за две недели до родов. После родов, перенос генетически меченных бактерий в грудное молоко анализировали путем сравнения бактерий, выделенных из образцов неонатальных фекалий в дни 0, 5 и 10 после родов. Все чашки инкубировали в течение 24 часов при 37°C в анаэробных условиях. Для каждого полученного образца измеряли вместе бифидобактерии, лактобактерии и энтерококки. Среди колоний, которые росли на чашках с агаром MRS, случайно выбирали 50 из каждого образца и субкультивировали на чашках Cm-MRS. В конечном счете использовали Cm-устойчивые колонии в качестве матриц для детекции специфических генетически меченных колоний (Фигура 2). Перенос считали позитивным, когда, по меньшей мере, 1% полученных колоний представляли собой PCR-позитивные колонии.
Пример 3b: Ингибирование выживаемости Staphylococcus aureus
Пробиотические штаммы по настоящему изобретению оценивали с использованием анализа диффузии в агар из лунки на предмет их способности продуцировать бактерицидные метаболиты, способные снижать выживаемость Staphylococcus aureus. Готовили чашки с агаром TSA, содержащие 106 КОЕ/мл S. aureus. Лунки диаметром 5 мм вырезали в агаре с использованием стерильного инструмента cork-borer. Затем добавляли в лунки 50 мкл концентрированного в два раза супернатанта каждого раствора, содержащего пробиотический штамм, и давали возможность диффундировать в агар в течение периода пре-инкубации в течение 2 часов при 4°C, с последующей аэробной инкубацией чашек при 37°C в течение 16-18 часов. После периода инкубации, наблюдали и измеряли островки ингибирования (в миллиметрах) для оценки бактерицидного эффекта пробиотических кандидатов (Фигура 3A).
Пример 3c: Ингибирование адгезии Staphylococcus aureus на эпителиальных клетках
Клеточные линии кишечника Caco-2 культивировали до конфлюэнтного состояния в 35 мм пластиковых чашках, содержащих 2 мл среды без антибиотиков. На 10-14 день после достижения состояния конфлюэнтности, 1 мл среды заменяли на 1 мл суспензии, содержащей 108 пробиотических бактерий в среде DMEM. Культуры инкубировали в течение 1 часа при 37°C. После этого, к культурам добавляли 1 мл суспензии, содержащей 108 патогенных бактерий (S. aureus) в среде DMEM, и инкубировали еще 1 час при 37°C. Клетки промывали дважды с помощью PBS и фиксировали ледяным 70% метанолом в течение 30 минут. Чашки сушили на воздухе и окрашивали по Граму. Прикрепленные бактерии визуализировали с использованием оптического микроскопа Axiovert 200 (Zeiss) при 1000x увеличении в масляной иммерсии. Считали количество грамотрицательных бактерий в 10 случайных областях, и результаты выражали как среднее значение % патогенных бактерий, прикрепленных к клеткам, по сравнению с контрольными культурами, не содержащими пробиотические штаммы (Фигура 3B).
Пример 3d: Защиты от мастита
Для оценки эффективности защиты от мастита с помощью пробиотических кандидатов использовали экспериментальную модель на мыши, имеющей эту патологию. Вкратце, 10-ти беременным крысам Wistar на группу ежедневно вводили с помощью перорального зонда 108 КОЕ/день каждого пробиотического штамма, переносимого в 200 мкл молока в течение двух недель после родов. Через одну неделю после родов инфекцию мастита индуцировали у животных с помощью инъекции 106 КОЕ S. aureus в четвертую пару молочных желез. Сцеженное молоко собирали в дни 0, 5 и 10 после инфекции для измерения бактериальной нагрузки (Фигура 4A); и 5 животных каждой группы умерщвляли в дни 5 и 10 после инфекции для получения биопсий молочной железы с тем, чтобы оценить воспалительный процесс с помощью гистологического исследования.
Цельные железы фиксировали в 5% формалине и обезвоживали с помощью спирта и, в конечном счете, помещали в парафин. Тканевые срезы окрашивали с помощью гематоксилин-эозина, исследовали слепым методом (Фигура 4B). Для качественной оценки изменений гистологии молочной железы, значение индекса воспаления (HV) определяли следующим образом:
- Балльная оценка 0: Нет инфильтрации.
- Балльная оценка 1: Умеренная интерстициальная инфильтрация PMN клеток в выделенные области тканевых срезов, не нарушенный тубулярный эпителий.
- Балльная оценка 2: Интерстициальная инфильтрация, перекрывающая большую часть областей, дисперсные области нарушения ткани с потерей структуры ткани и редко встречающиеся картины образования абсцесса.
- Балльная оценка 3: Тяжелая форма инфильтрации, перекрывающая большую часть областей, часто встречающиеся области нарушения ткани с потерей архитектуры ткани и часто встречающиеся картины образования абсцесса.
Пример 4: Пробиотический потенциал штаммов
Селектированные штаммы дополнительно анализировали на предмет выявления различных характеристик, которые могут усиливать их способности действовать в качестве пробиотических штаммов. Полученные результаты описаны в указанных примерах.
Пример 4a: Адгезия на клетки Caco-2 и HT-29
Для анализов адгезии, клеточные линии Caco-2 (ATCC HTB-37) и HT-29 (ATCC HTB-38) применяли в качестве модели клеток кишечника. Обе клеточные линии представляют черты, характерные для клеток кишечника, такие как поляризация, экспрессия ферментов кишечника, продуцирование конкретных структурных полипептидов, таких как муцины.
Клетки растили в пластиковых матрасах (75 см2, Nunc) в среде DMEM в качестве культуральной среды с добавлением 10% инактивированной ФТС, заменимые аминокислоты, 100 Ед/мл пенициллин/стрептомицин, 1 мкг/мл амфотерцина. Культивирование осуществляли при 37°C в атмосфере, включающей 95% воздуха и 5% CO2. Среду меняли 1 раз в два дня и клетки рассевали каждую неделю.
Клеточные линии кишечника Caco-2 и HT-29 рассевали в 35 мм-пластиковых чашках, содержащих 2 мл среды без антибиотиков до состояния конфлюэнтности. На 10-14 день после достижения состояния конфлюэнтности, 1 мл среды заменяли на 1 мл суспензии, содержащей 108 бактерий в среде DMEM (PAA). Культуры инкубировали в течение 1 часа при 37°C. После этого, клетки промывали дважды с помощью PBS и фиксировали ледяным 70% метанолом в течение 30 минут. Чашки сушили на воздухе и окрашивали по Граму. Прикрепленные бактерии визуализировали с использованием оптического микроскопа Axiovert 200 (Zeiss) при 1000x увеличении в масляной иммерсии. Считали количество бактерий в 20 случайных областях, и результаты выражали как среднее значение количества бактерий, прикрепленных к клеткам на область ± станд.откл. (Фигура 5).
Пример 4b: Устойчивость к кислоте и к солям желчной кислоты
Для анализа устойчивости пробиотических штаммов по настоящему изобретению к кислотному содержанию и к содержанию солей желчной кислоты, к условиям, с которыми столкнутся эти бактерии в процессе транзита по системе пищеварения, бактерии культивировали в среде MRS-бульона с pH 3 или с содержанием 2% солей желчной кислоты (Sigma) в течение 90 минут. Выживаемость рассчитывали с помощью посева на чашки с MRS-агаром последовательных разведений бактерий и сравнивали с количеством колоний, полученных в контрольных условиях (MRS-бульон, pH 5,8).
Чашки с бактериями культивировали в течение 24 часов при 36°C в предельно анаэробных условиях. Эксперимент повторяли три раза (Фигура 6).
Пример 4c: Устойчивость к антибиотикам
Использование современных антибиотиков приводит к снижению количества симбиотической микрофлоры пищеварительного канала, что иногда приводит к диарее и другим расстройствам пищеварительного канала. Кроме того, это снижение количества бактерий пищеварительного канала может быть следствием инфекции организма-хозяина условно-патогенными бактериями и вирусами. Использование антибиотиков для блокирования инфекции не излечивает этого расстройства, но осложняет его. В других случаях, подобных воспалению кишечника, где пробиотики могут проявить полезную функцию, этот потенциальный эффект иногда ограничивается одновременной терапией с использованием антибиотиков. По всем этим причинам селекция потенциальных пробиотических штаммов, которые способны сопротивляться распространенным антибиотикам, должен быть со всей очевидностью интересным.
Для анализа устойчивости пробиотических штаммов по настоящему изобретению использовали анализ диффузии в агар из лунки. Готовили чашки с агаром Müeller-Hinton, содержащие 106 КОЕ/мл каждого пробиотического штамма. Затем добавляли коммерческие диски антибиотика в лунки и давали возможность диффундировать в агар в течение 10 минут периода пре-инкубации при комнатной температуре с последующей предельно анаэробной инкубацией чашек при 36°C в течение 16-18 часов. Данные об устойчивости пробиотических штаммов к антибиотикам суммированы в Таблице II.
Пример 4d: Продуцирование противомикробных метаболитов
Предположили, что основной механизм, используемый пробиотиками, заключается в контролировании баланса между полезными и вредными бактериями кишечника в системе пищеварительного канала. Когда количество полезных бактерий уменьшается, условно-патогенные бактерии могут разрастаться и нарушать самочувствие организма-хозяина или даже индуцировать инфекцию. Большинство бактериальных организмов приобрели характеристики или механизмы, которые уменьшают возможности роста других микроорганизмов, которые находятся с ними в симбиозе и, таким образом, дают возможность их собственного селективного роста. Уменьшение pH посредством продуцирования кислоты молочнокислыми бактериями является одним из таких механизмов. Кроме того, некоторые молочнокислые бактерии также продуцируют биоактивные пептидные компоненты и другие метаболиты, которые селективно ингибируют рост других бактерий, дрожжей или грибков. Это случай реутерина (альдегид) или бактериоцинов (пептиды, такие как низин или педиоцин PA-I).
Пробиотические штаммы по настоящему изобретению оценивали с помощью анализа диффузии в агар из лунки на предмет их способности продуцировать бектерицидные метаболиты. Готовили чашки с TSA-агаром, содержащие 106 КОЕ/мл различных патогенных бактериальных штаммов, и оценивали так, как указано ранее в Примере 3b для S. aureus. Полученные результаты описаны в Таблице III.
Пример 5: Эффект пробиотических штаммов по настоящему изобретению, оказываемый на транслокацию Salmonella typhimurium у мышей после иммунизации с помощью вакцины в виде инактивированного штамма Salmonella
Транслокация грамотрицательных бактерий по эпителию пищеварительного канала может встречаться в особенности у субъектов после желудочно-кишечной инфекции, заболевания или хирургической операции. В отсутствие лечения это может привести к эндотоксикозу. В этом примере, исследовали эффект, оказываемый получением пробиотических штаммов по настоящему изобретению на транслокацию патогенна пищеварительного канала Salmonella typhimurium.
Самцам мышей Balb/c (возрастом 6-8 недель) ежедневно давали 1×108 КОЕ в 0,2 мл молока или только молоко в течение двух недель. После этого мышей или перорально иммунизировали, или не иммунизировали с помощью вакцины в виде инактивированного штамма Salmonella (108 КОЕ, инактивированных с помощью параформальдегида, в 0,2 мл молока). После иммунизации мышам давали пробиотические препараты в другие дни в течение дополнительных двух недель. Через две недели после пероральной иммунизации, всем мышам перорально вводили живой штамм S. typhimurium (1010 КОЕ в 0,2 мл молока). Затем через 24-48 часов определяли у половины животных уровень колонизации S. typhimurium в селезенке. За оставшимися животными следили в течение двух дополнительных недель с целью оценки выживаемости животных после инфекции бактериями Salmonella.
Полученные результаты демонстрируют, что большинство тестируемых пробиотиков потенцируют полезный эффект вакцинации мышей вакциной в виде инактивированного штамма Salmonella, как показано на Фигуре 7.
Пример 6: Эффект L. plantarum CECT7262 или L. reuteri CECT7260, оказываемый на предотвращение неонатальной диареи у новорожденных поросят
Отлучение от грудного молока поросят в возрасте 3-4 недель коррелирует с высоким показателем смертности у этих животных в основном благодаря увеличению случаев диарейных инфекций. Вероятно, эта высокая смертность связана с подавлением их иммунитета благодаря стрессовой модификации их пищевого и режимного статуса и благодаря важным изменениям в составе их микробиоты пищеварительного канала.
По этой причине фермеры стараются разрешить эту задачу с использованием нескольких способов, таких как использование антибиотиков, иммуностимуляторов или компонентов защиты слизистой оболочки, таких как колистин или ZnO. Однако официальное запрещение EU на использование антибиотиков для продукции животноводства в 2006 усложнило ситуацию. По этой причине использование пробиотиков для модулирования микробиоты пищеварительного канала и для модулирования иммунного ответа проявило себя в качестве потенциальной альтернативы.
Сравнили защитный эффект, оказываемый введением 3×109 КОЕ/день L. reuteri CECT7260 и L. plantarum CECT7262, и введением состава животного корма, содержащего 3000 м.д. ZnO и 40 м.д. колистина, двум группам из 48 и 45 отлученных от грудного молока поросят в течение периода времени, составляющего 34 дня.
В обеих группах никто из животных не страдал от диареи, не умирал во время исследования, и по оценкам вес тела также был сходным при обоих типах лечения, что предполагает, что состав животного корма с добавлением этих пробиотиков является, по меньшей мере, настолько же хорошим, как составы, содержащие подходящие антибиотики и иммуномодуляторы.
Пример 7: Эффект, оказываемый пробиотическими бактериями на продуцирование воспалительных цитокинов и IgG
Кроме уменьшения риска инфекции, многие клинические эффекты, ассоциированные с лечением пробиотиками, проявляются благодаря иммуномодулирующим способностям селектированных пробиотических штаммов. Регуляция иммунного ответа обычно опосредована через изменение баланса между про-воспалительными цитокинами (Th1), такими как TNF-альфа, гуморальными цитокинами (Th2), такими как IL-4 или IL-13, и регуляторными цитокинами (Th3), такими как IL-10 и TGF-бета. Кроме того, разбалансировка иммунного ответа будет также модулировать секрецию иммуноглобулинов во время последующего гуморального ответа. По этой причине тестировали эффект, оказываемый некоторыми из пробиотических штаммов по настоящему изобретению на регуляцию экспрессии некоторых из этих ключевых цитокинов и IgG.
В качестве клеточной модели использовали выделенные из костного мозга макрофаги, стимулированные с помощью 100 нг/мл LPS (Sigma). 105 макрофагов/на лунку культивировали в 24-луночных пластиковых планшетах (Nunc) в присутствии 1 мл DMEM. После прикрепления, макрофаги стимулировали или не стимулировали с помощью 100 нг/мл LPS и с помощью 107 КОЕ/мл указанных пробиотических штаммов в течение 12 часов при 37°C в атмосфере 5% CO2. Супернатанты собирали и анализировали продуцирование цитокинов с использованием анализа ELISA (Biosource) мышиного TNF-альфа или мышиного IL-10. Полученные результаты суммированы на Фигурах 8A и B.
Анализ эффекта, оказываемого пробиотическими штаммами по настоящему изобретению на продуцирование иммуноглобулинов, осуществляли с использованием культур лимфоцитов, полученных из селезенки самцов мышей Balb/c (возрастом 6-8 недель). 2×106 лимфоцитов культивировали в 1 мл DMEM в 24-луночных пластиковых планшетах и стимулировали с помощью инактивированных пробиотических культур (108 КОЕ/мл) в присутствие или в отсутствие 25 мкг/мл LPS в течение 6 дней. Продуцирование лимфоцитами IgG оценивали с использованием анализа ELISA мышиного IgG от Bethyl (Фигура 8C).
Claims (9)
1. Способ селекции пробиотиков, включающий стадии:
(i) выделения штаммов молочно-кислых бактерий или бифидобактерий, присутствующих в свежем молоке, из вида млекопитающего с помощью селекции в молочно-кислой культуральной среде,
(ii) селекции тех штаммов стадии (i), которые способны к переносу в молочную железу после перорального приема и/или колонизируют молочную железу после их местного применения,
(iii) селекции тех штаммов стадии (ii), которые способны снижать степень выживаемости и/или степень адгезии Staphylococcus aureus на эпителиальных клетках, и
(iv) селекции тех штаммов стадии (iii), которые способны защищать животных от мастита.
(i) выделения штаммов молочно-кислых бактерий или бифидобактерий, присутствующих в свежем молоке, из вида млекопитающего с помощью селекции в молочно-кислой культуральной среде,
(ii) селекции тех штаммов стадии (i), которые способны к переносу в молочную железу после перорального приема и/или колонизируют молочную железу после их местного применения,
(iii) селекции тех штаммов стадии (ii), которые способны снижать степень выживаемости и/или степень адгезии Staphylococcus aureus на эпителиальных клетках, и
(iv) селекции тех штаммов стадии (iii), которые способны защищать животных от мастита.
2. Способ по п.1, где молоко, используемое в стадии (i), выбрано из молока человека, свиньи, коровы, кошки, овцы и собаки.
3. Пробиотический штамм, получаемый с помощью способа по п.1 или 2.
4. Пробиотический штамм по п.3, отличающийся тем, что он выбран из группы, состоящей из штамма Bifidobacterium breve, депонированного в коллекции СЕСТ под регистрационным номером №7263, Bifidobacterium breve, депонированного в коллекции СЕСТ под регистрационным номером №7264, Lactobacillus reuteri, депонированного в коллекции СЕСТ под регистрационным номером №7260, Lactobacillus plantarum, депонированного в коллекции СЕСТ под регистрационным номером №7262, Lactobacillus fermentum, депонированного в коллекции СЕСТ под регистрационным номером №7265, и штамма Lactobacillus reuteri, депонированного в коллекции СЕСТ под регистрационным номером №7266, Enterococcus hirae, депонированного в коллекции СЕСТ под регистрационным номером №7410, Lactobacillus plantarum, депонированного в коллекции СЕСТ под регистрационным номером №7412, Enterococcus faecalis, депонированного в коллекции СЕСТ под регистрационным номером №7411, Lactobacillus salivarius, депонированного в коллекции СЕСТ под регистрационным номером №7409, Lactobacillus reuteri, депонированного в коллекции СЕСТ под регистрационным номером №7413.
5. Супернатант культуры штамма или штаммов, определенных в п.3 или 4.
6. Пробиотический штамм по п.3 или 4 или супернатант по п.5 для применения в качестве лекарственного средства.
7. Композиция, включающая, по меньшей мере, пробиотический штамм по п.3 или 4 или супернатант, определенный в п.5.
8. Композиция, определенная в п.7, которая представлена в замороженной, лиофилизованной или сухой форме.
9. Композиция, определенная в п.7 или 8, где пробиотический штамм представлен в частично инактивированной или полностью инактивированной форме.
Applications Claiming Priority (2)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| EP07380158A EP1997499A1 (en) | 2007-05-31 | 2007-05-31 | Mammalian milk microorganisms, compositions containing them and their use for the treatment of mastitis |
| EP07380158.1 | 2007-05-31 |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| RU2009149393A RU2009149393A (ru) | 2011-07-10 |
| RU2446814C2 true RU2446814C2 (ru) | 2012-04-10 |
Family
ID=38657070
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| RU2009149393/15A RU2446814C2 (ru) | 2007-05-31 | 2008-06-02 | Микроорганизмы молока млекопитающего, их содержащие композиции и их применение для лечения мастита |
Country Status (16)
| Country | Link |
|---|---|
| US (1) | US8557560B2 (ru) |
| EP (2) | EP1997499A1 (ru) |
| JP (1) | JP5710250B2 (ru) |
| AU (1) | AU2008257455B2 (ru) |
| CA (1) | CA2689360C (ru) |
| CO (1) | CO6270334A2 (ru) |
| DK (1) | DK2162143T3 (ru) |
| ES (1) | ES2555159T3 (ru) |
| HU (1) | HUE025851T2 (ru) |
| IL (1) | IL202386A0 (ru) |
| MX (1) | MX2009013044A (ru) |
| NZ (1) | NZ581576A (ru) |
| PL (1) | PL2162143T3 (ru) |
| PT (1) | PT2162143E (ru) |
| RU (1) | RU2446814C2 (ru) |
| WO (1) | WO2008145756A1 (ru) |
Cited By (2)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| RU2684600C1 (ru) * | 2013-12-19 | 2019-04-09 | Н.В. Нютрисиа | Lactobacillus salivarius для лечения мастита |
| RU2741836C2 (ru) * | 2014-10-21 | 2021-01-29 | Акилон Киль Сосьедад Лимитада | Композиции пробиотиков и пребиотиков |
Families Citing this family (53)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| WO2010103132A1 (es) * | 2009-03-10 | 2010-09-16 | Hero España, S.A. | Aislamiento, identificación y caracterización de cepas con actividad probiótica a partir de heces de lactantes alimentados exclusivamente con leche materna |
| GB201112091D0 (en) | 2011-07-14 | 2011-08-31 | Gt Biolog Ltd | Bacterial strains isolated from pigs |
| RU2476591C1 (ru) * | 2011-08-19 | 2013-02-27 | Федеральное государственное образовательное учреждение высшего профессионального образования "Горский государственный аграрный университет" | Штамм enterococcus hirae, используемый для приготовления кисломолочных продуктов |
| RU2477313C1 (ru) * | 2011-08-25 | 2013-03-10 | Федеральное государственное бюджетное образовательное учреждение высшего профессионального образования "Горский государственный аграрный университет" | ШТАММ Enterococcus hirae, ИСПОЛЬЗУЕМЫЙ ПРИ ПРОИЗВОДСТВЕ КИСЛОМОЛОЧНЫХ ПРОДУКТОВ |
| RU2476592C1 (ru) * | 2011-09-02 | 2013-02-27 | Федеральное государственное бюджетное образовательное учреждение высшего профессионального образования "Горский государственный аграрный университет" | Штамм enterococcus hirae, используемый для производства кисломолочных продуктов |
| GB201117313D0 (en) | 2011-10-07 | 2011-11-16 | Gt Biolog Ltd | Bacterium for use in medicine |
| US10588857B2 (en) | 2012-03-29 | 2020-03-17 | Therabiome, Llc | Gastrointestinal site-specific oral vaccination formulations active on the ileum and appendix |
| CA3101218A1 (en) | 2013-03-14 | 2014-09-25 | Therabiome, Llc | Targeted gastrointestinal tract delivery of probiotic organisms and/or therapeutic agents |
| GB201306536D0 (en) | 2013-04-10 | 2013-05-22 | Gt Biolog Ltd | Polypeptide and immune modulation |
| US20160066582A1 (en) | 2013-04-23 | 2016-03-10 | Terragen Holdings Limited | Bacterial strains having antimicrobial activity and biocontrol compositions comprising the same |
| DE102013105666A1 (de) | 2013-06-03 | 2014-12-04 | Hochschule Hannover | Probiotische Stämme, Zusammensetzungen enthaltend probiotische Stämme sowie pharmazeutische Mittel |
| EP2818056A1 (en) | 2013-06-25 | 2014-12-31 | Biosearch S.A. | Probiotic bacteria comprising metals, metal nanoparticles and uses thereof |
| US20150057574A1 (en) | 2013-08-23 | 2015-02-26 | Elwha Llc | Selecting and Delivering Treatment Agents based on a Microbe Profile |
| US9811641B2 (en) | 2013-08-23 | 2017-11-07 | Elwha Llc | Modifying a cosmetic product based on a microbe profile |
| US9805171B2 (en) | 2013-08-23 | 2017-10-31 | Elwha Llc | Modifying a cosmetic product based on a microbe profile |
| US10010704B2 (en) | 2013-08-23 | 2018-07-03 | Elwha Llc | Systems, methods, and devices for delivering treatment to a skin surface |
| US9557331B2 (en) | 2013-08-23 | 2017-01-31 | Elwha Llc | Systems, methods, and devices for assessing microbiota of skin |
| US9390312B2 (en) | 2013-08-23 | 2016-07-12 | Elwha Llc | Systems, methods, and devices for assessing microbiota of skin |
| US9456777B2 (en) | 2013-08-23 | 2016-10-04 | Elwha Llc | Systems, methods, and devices for assessing microbiota of skin |
| US10152529B2 (en) | 2013-08-23 | 2018-12-11 | Elwha Llc | Systems and methods for generating a treatment map |
| PL2862576T3 (pl) | 2013-10-16 | 2017-06-30 | Casen Recordati, S.L. | Drobnoustroje i zawierające je kompozycje do stosowania do leczenia lub profilaktyki zapalenia sutka |
| KR20170091157A (ko) | 2014-12-23 | 2017-08-08 | 4디 파마 리서치 리미티드 | 피린 폴리펩티드 및 면역 조정 |
| SI3065748T1 (en) | 2014-12-23 | 2018-05-31 | 4D Pharma Research Limited | Severe bacteroid tethethioomycron and its use in reducing inflammation |
| EP3244904A1 (en) * | 2015-01-16 | 2017-11-22 | Biogaia AB | Lactic acid bacteria and their use for the treatment of mastitis |
| EP3250217A1 (en) * | 2015-01-30 | 2017-12-06 | Technische Universität München | Composition for use in preventing and/or treating diarrhea in animals |
| EP3277255A1 (en) | 2015-03-31 | 2018-02-07 | GOJO Industries, Inc. | Synergistic compositions and methods for mitigating skin irritation and enhancing skin barrier function |
| MA41010B1 (fr) | 2015-06-15 | 2020-01-31 | 4D Pharma Res Ltd | Compositions comprenant des souches bactériennes |
| KR20180012849A (ko) | 2015-06-15 | 2018-02-06 | 4디 파마 리서치 리미티드 | 박테리아 균주를 함유한 조성물 |
| MA41060B1 (fr) | 2015-06-15 | 2019-11-29 | 4D Pharma Res Ltd | Compositions comprenant des souches bactériennes |
| ES2742514T3 (es) | 2015-06-15 | 2020-02-14 | 4D Pharma Res Ltd | Composiciones que comprenden cepas bacterianas |
| AU2016278067B2 (en) | 2015-06-15 | 2022-09-22 | Cj Bioscience, Inc. | Compositions comprising bacterial strains |
| SK542015A3 (sk) * | 2015-07-30 | 2017-02-02 | Univerzita Pavla Jozefa Šafárika V Košiciach | Kmene mikroorganizmov Lactobacillus Plantarum LS/07 CCM 7766 a spôsob ich využitia |
| GB201520497D0 (en) | 2015-11-20 | 2016-01-06 | 4D Pharma Res Ltd | Compositions comprising bacterial strains |
| PT3209310T (pt) | 2015-11-20 | 2018-04-20 | 4D Pharma Res Ltd | Composições compreendendo estirpes bacterianas |
| GB201520638D0 (en) | 2015-11-23 | 2016-01-06 | 4D Pharma Res Ltd | Compositions comprising bacterial strains |
| GB201520631D0 (en) | 2015-11-23 | 2016-01-06 | 4D Pharma Res Ltd | Compositions comprising bacterial strains |
| WO2017112945A1 (en) * | 2015-12-24 | 2017-06-29 | Dairy A Day Inc. | Compositions and methods of use of novel strains of lactobacillus fermentum |
| CA3016179C (en) | 2016-03-04 | 2019-08-13 | 4D Pharma Plc | Compositions comprising bacterial blautia strains for treating visceral hypersensitivity |
| GB201612191D0 (en) | 2016-07-13 | 2016-08-24 | 4D Pharma Plc | Compositions comprising bacterial strains |
| TWI802545B (zh) | 2016-07-13 | 2023-05-21 | 英商４Ｄ製藥有限公司 | 包含細菌菌株之組合物 |
| GB201621123D0 (en) | 2016-12-12 | 2017-01-25 | 4D Pharma Plc | Compositions comprising bacterial strains |
| US11434468B2 (en) * | 2017-01-13 | 2022-09-06 | Bened Biomedical Co., Ltd. | Lactic acid bacteria and its applications |
| EP3630137B1 (en) | 2017-05-22 | 2023-05-17 | 4D Pharma Research Limited | Compositions comprising bacterial strains |
| MA41708A (fr) | 2017-05-24 | 2020-04-08 | 4D Pharma Res Ltd | Compositions comprenant des souches bactériennes |
| MD3600364T2 (ro) | 2017-06-14 | 2020-12-31 | 4D Pharma Res Ltd | Compoziții care conţin tulpină bacteriană din genul Megasphaera și utilizări ale acestora |
| ES2855701T3 (es) | 2017-06-14 | 2021-09-24 | 4D Pharma Res Ltd | Composiciones que comprenden cepas bacterianas |
| ES2841902T3 (es) | 2017-06-14 | 2021-07-12 | 4D Pharma Res Ltd | Composiciones que comprenden cepas bacterianas |
| CN111971055A (zh) * | 2018-03-23 | 2020-11-20 | 森永乳业株式会社 | 母乳成分增强用组合物 |
| US20220184153A1 (en) * | 2019-03-25 | 2022-06-16 | The State of Israel, Ministry of Agriculture&Rural Development, Agricltural Research Oganization(ARO | Method of treating bovine mastitis |
| US20220288135A1 (en) * | 2019-07-08 | 2022-09-15 | BioPlx, Inc. | Live biotherapeutic compositions and methods |
| EP4065146A1 (en) * | 2019-11-29 | 2022-10-05 | Société des Produits Nestlé S.A. | Compositions and methods with a probiotic and a nutrient and/or mineral for the prevention or treatment of mastitis |
| CL2019003739A1 (es) * | 2019-12-18 | 2020-06-19 | Univ Concepcion | Cepas probióticas de lactobacillus sp. y de pediococcus sp. y su uso en la elaboración de una formulación probiótica para prevención de diarreas causadas por patógenos bacterianos que afectan a perros y gatos. |
| CN117338823A (zh) * | 2023-12-06 | 2024-01-05 | 山东百德生物科技有限公司 | 一种动物酵素发酵液及其制备方法与应用 |
Citations (5)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| WO1997046104A1 (en) * | 1996-06-05 | 1997-12-11 | Biogaia Biologics Ab | Treatment of diarrhea |
| RU2126446C1 (ru) * | 1992-07-06 | 1999-02-20 | Сосьете Де Продюи Нестле С.А. | Штамм молочнокислых бактерий lactobacillus acidophilus и композиция против диареи |
| WO2004003235A2 (en) * | 2002-06-28 | 2004-01-08 | Puleva Biotech, S.A. | Probiotic strains, a process for the selection of them, compositions thereof, and their use |
| WO2005034970A1 (en) * | 2003-10-17 | 2005-04-21 | Teagasc The Agriculture And Food Development Authority | Use of probiotic bacteria in the treatment of infection |
| WO2005117532A2 (en) * | 2004-06-03 | 2005-12-15 | Biogaia Ab | Method for improved breast milk feeding to reduce the risk of allergy |
Family Cites Families (2)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US4591499A (en) | 1984-01-20 | 1986-05-27 | J. B. Lima, Inc. | Method for treatment and prevention of mastitis |
| US7125963B2 (en) * | 2004-03-03 | 2006-10-24 | En N Tech Inc | Treatments for contaminant reduction in lactoferrin preparations and lactoferrin containing compositions |
-
2007
- 2007-05-31 EP EP07380158A patent/EP1997499A1/en not_active Withdrawn
-
2008
- 2008-06-02 CA CA2689360A patent/CA2689360C/en active Active
- 2008-06-02 DK DK08760355.1T patent/DK2162143T3/en active
- 2008-06-02 JP JP2010509847A patent/JP5710250B2/ja active Active
- 2008-06-02 PT PT87603551T patent/PT2162143E/pt unknown
- 2008-06-02 US US12/602,182 patent/US8557560B2/en active Active
- 2008-06-02 ES ES08760355.1T patent/ES2555159T3/es active Active
- 2008-06-02 PL PL08760355T patent/PL2162143T3/pl unknown
- 2008-06-02 WO PCT/EP2008/056768 patent/WO2008145756A1/en active Application Filing
- 2008-06-02 AU AU2008257455A patent/AU2008257455B2/en active Active
- 2008-06-02 MX MX2009013044A patent/MX2009013044A/es active IP Right Grant
- 2008-06-02 RU RU2009149393/15A patent/RU2446814C2/ru active
- 2008-06-02 EP EP08760355.1A patent/EP2162143B1/en active Active
- 2008-06-02 NZ NZ581576A patent/NZ581576A/en unknown
- 2008-06-02 HU HUE08760355A patent/HUE025851T2/en unknown
-
2009
- 2009-11-26 IL IL202386A patent/IL202386A0/en unknown
- 2009-12-30 CO CO09149368A patent/CO6270334A2/es not_active Application Discontinuation
Patent Citations (5)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| RU2126446C1 (ru) * | 1992-07-06 | 1999-02-20 | Сосьете Де Продюи Нестле С.А. | Штамм молочнокислых бактерий lactobacillus acidophilus и композиция против диареи |
| WO1997046104A1 (en) * | 1996-06-05 | 1997-12-11 | Biogaia Biologics Ab | Treatment of diarrhea |
| WO2004003235A2 (en) * | 2002-06-28 | 2004-01-08 | Puleva Biotech, S.A. | Probiotic strains, a process for the selection of them, compositions thereof, and their use |
| WO2005034970A1 (en) * | 2003-10-17 | 2005-04-21 | Teagasc The Agriculture And Food Development Authority | Use of probiotic bacteria in the treatment of infection |
| WO2005117532A2 (en) * | 2004-06-03 | 2005-12-15 | Biogaia Ab | Method for improved breast milk feeding to reduce the risk of allergy |
Cited By (2)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| RU2684600C1 (ru) * | 2013-12-19 | 2019-04-09 | Н.В. Нютрисиа | Lactobacillus salivarius для лечения мастита |
| RU2741836C2 (ru) * | 2014-10-21 | 2021-01-29 | Акилон Киль Сосьедад Лимитада | Композиции пробиотиков и пребиотиков |
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| US8557560B2 (en) | 2013-10-15 |
| PL2162143T3 (pl) | 2016-03-31 |
| IL202386A0 (en) | 2010-06-30 |
| HUE025851T2 (en) | 2016-04-28 |
| JP2010528093A (ja) | 2010-08-19 |
| JP5710250B2 (ja) | 2015-04-30 |
| RU2009149393A (ru) | 2011-07-10 |
| DK2162143T3 (en) | 2015-12-14 |
| CA2689360A1 (en) | 2008-12-04 |
| EP1997499A1 (en) | 2008-12-03 |
| EP2162143A1 (en) | 2010-03-17 |
| PT2162143E (pt) | 2016-01-07 |
| AU2008257455B2 (en) | 2014-05-01 |
| BRPI0811973A2 (pt) | 2014-10-21 |
| CA2689360C (en) | 2017-03-14 |
| US20100266550A1 (en) | 2010-10-21 |
| WO2008145756A1 (en) | 2008-12-04 |
| EP2162143B1 (en) | 2015-09-09 |
| NZ581576A (en) | 2012-01-12 |
| MX2009013044A (es) | 2010-04-12 |
| AU2008257455A1 (en) | 2008-12-04 |
| ES2555159T3 (es) | 2015-12-29 |
| CO6270334A2 (es) | 2011-04-20 |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| RU2446814C2 (ru) | Микроорганизмы молока млекопитающего, их содержащие композиции и их применение для лечения мастита | |
| US11759486B2 (en) | Lactobacillus plantarum and composition comprising same | |
| JP4176715B2 (ja) | プロバイオティクス菌株、その選択方法、その組成物、およびその使用 | |
| EP2494031B1 (en) | Novel lactobacillus plantarum and composition comprising the same | |
| KR101255894B1 (ko) | 락토바실러스 플란타룸 및 그의 용도 | |
| US12128077B2 (en) | Strains, composition and method of use | |
| WO2020063531A1 (zh) | 副干酪乳杆菌et-22及其用途 | |
| CN113528367A (zh) | 一株具有预防腹泻和降解胆固醇功能的凝结芽孢杆菌 | |
| TWI776433B (zh) | 戴白氏乳桿菌乳酸亞種ldl557分離株及其用途 | |
| CN117327606A (zh) | 一种长双歧杆菌菌株及其制备方法和用途 | |
| CN117327605A (zh) | 一种益生菌制剂及其用途 | |
| CN117323298A (zh) | 一种长双歧杆菌冻干制剂、其制备方法和用途 | |
| BRPI0811973B1 (pt) | Processo para a seleção de probióticos, cepa probiótica, sobrenadante, composição, produto farmacêutico, alimento ou produto nutricional e uso de uma cepa probiótica |