SK10342003A3

SK10342003A3 - Suspenzia obsahujúca fibrinogén, trombín a alkohol, spôsob prípravy tejto suspenzie, spôsob pokrytia nosiča touto suspenziou, spôsob vysušenia pokrytia nosiča a pokrytá kolagénová hubka

Info

Publication number: SK10342003A3
Application number: SK1034-2003A
Authority: SK
Inventors: Alfred Schaufler
Original assignee: Nycomed Pharma As
Priority date: 2001-01-25
Filing date: 2002-01-25
Publication date: 2004-02-03
Also published as: BG108123A; ME00587A; EA200300821A1; EP1368419A2; DE60207389D1; CN1487843A; HRP20030648B1; HK1058371A1; NO332462B1; NZ527165A; TWI237573B; SK288120B6; DE60203364D1; BG66439B1; SK10352003A3; EE05685B1; KR20030086254A; CZ20032198A3; EA006540B1; CZ304357B6

Description

Oblasť techniky

Predložený vynález sa týka suspenzie obsahujúcej fibrinogén, trombín a alkohol a prípadne alkohol. Vynález sa ďalej týka spôsobu prípravy takejto suspenzie a spôsobu pokrytia tohto nosiča touto suspenziou. Nosičom môže byť kolagénový nosič, ako je kolagénová hubka. Vynález sa ďalej týka spôsobu vysušenia pokrytého nosiča, konkrétne kolagénového nosiča pokrytého suspenziou podľa tohto vynálezu, atak získania pokrytého kolagénového nosiča obsahujúceho aktívne látky pevne viazané na nosič.

Pokrytý kolagénový nosič možno použiť ako k použitiu pripravený absorbovateľný prostriedok pre lepenie tkaniva, utesnenie tkaniva a k zastaveniu krvácania, ktorý v podstate zahŕňa nosič pokrytý pevne naviazanými zložkami fibrínového lepidla: fibrinogén a trombín. Túto naviazanú kombináciu možno aplikovať priamo, napríklad na povrch poranenia. Pri kontakte s krvou, telesnými tekutinami alebo fyziologickým roztokom napodobňuje mechanizmus tohto systému koncovú fázu koagulačnej kaskády, v ktorej trombín katalyzuje premenu fibrinogénu na fibrín a aktiváciu faktora XIII za získania faktora XlIIa. Akonáhle vznikne faktor Xlíla, tak pomocou kovalentného zosieťovania stabilizuje fibrínovú zrazeninu.

Povrch poranenia a nosič sa navzájom zlepia prostredníctvom polymerizácie, ako u dvojzložkového lepidla. V priebehu tohto procesu , ktorý trvá asi 3 až 5 minút, sa pokrytý kolagénový nosič tohto vynálezu výhodne pritláča na plochu poranenia. Zložky prostriedku tohto vynálezu sa enzymaticky odbúravajú v priebehu 4 až 6 mesiacov po jeho aplikácii.

Doterajší stav techniky

Existujú komerčné fibrínové lepidlá, ktoré napodobňujú posledný krok koagulačnej kaskády a ktoré zahŕňajú vysoko koncentrovaný flbrinogénový roztok určený k zmiešaniu s trombínovým roztokom, a to ešte pred aplikáciou na operačné poranenie. Tieto zmesi obsahujú inhibítor fibrinolýzy, napríklad aprotinín alebo kyselinu ε-aminokaprónovú, aby sa predišlo predčasnému rozpusteniu fibrínovej zrazeniny fibrinolytickým enzýmom plazmínom. Tieto dvojzložkové fibrínové lepidlá sú cenné pri rôznych operačných postupoch, ale ak je krvácanie silné, môžu sa ešte predtým, než dôjde k zastaveniu krvácania, odplaviť. Dvojzložkové fibrínové lepidlá naviac vyžadujú uskutočniť niektoré prípravné kroky, ktoré zahŕňajú rozohriatie alebo rozpustenie. Preto sú pre prácu trochu nepraktické, ťažkopádne a nepohodlné a pre úspešné použitie týchto fibrínových lepidiel je nutná skúsenosť.

V priebehu poslednej dekády sa použitie mnohých fibrínových lepidiel stalo v chirurgii pri mnohých indikáciách metódami voľby. Vo väčšine pokusov s fibrínovými lepidlami sa však naviac použila kolagénová pletenina, aby sa zlepšili hemostatické a adhezívne vlastnosti, čo indikuje ich nevýhody a ich obmedzenia použitia chirurgmi.

Kolagén sa ako hemostatické činidlo používa už od konca šesťdesiatych rokov minulého storočia. Kolagén je u všetkých stavovcov nejbežnejší štruktúrny proteín. Monomérny proteín s asi 300 kDa (tropokolagén) sa v určitých miestach kovalentne zosieťuje. Hotový proteín je preto nerozpustný a vytvára charakteristické vlákienka s veľkou pevnosťou v ťahu. Popísali sa mnohé podtriedy kolagénu, pričom najbežnejším je kolagén typu 1, hlavný kolagénový typ v koži, šľachách, kostiach a rohovke. Kolagén je vláknitý proteín zahŕňajúci trojzávitnicu s dĺžkou asi 290 nm. Päť týchto trojzávitníc (tropokolagénových molekúl) je usporiadaných do mikrovlákienka s priemerom asi 3,6 nm. Tieto mikrovlákienka majú polárne a nepoláme segmenty, ktoré sú ľahko dostupné pre špecifické interfibriláme a intrafibrilárne interakcie. Mikrovlákienka sú ybalené do tetragonálnej mriežky a tvoria subfibrily s priemerom asi 30 nm. Tieto subfibrily sú potom usporiadané do kolagénového vlákienka, teda základnej jednotky spojivového tkaniva, ktorá má priemer niekoľko stoviek nanometrov a ktorá je preto viditeľná vo svetle mikroskopu ako tenká čiarka.

Kolagén možno použiť ako materiál pre utesnenie poranenia, prípadne s pokrytím obsahujúcim fibrínové lepidlo. Fibrínové lepidlá, t.j. kombinácie fibrinogénu, trombínu a aprotinínu, sa úspešne terapeuticky používajú už mnoho rokov na lepenie tkanív a nervov a pre utesnenie povrchov, ktoré krvácajú. Jednou z výhod fibrínového lepidla je, že v prípade väčšieho krvácania sa lepidlo obyčajne odplaví ešte predtým, než dôjde k dostatočnej polymerizácii fibrínu. Pre prekonanie tohto problému začali chirurgovia manuálne aplikovať kvapalné fibrínové lepidlá na absorbujúce nosiče, ako je kolagénová pletenina.

Napriek pomernému úspechu týchto kombinovaných aplikácií sa tento spôsob pre niektoré nevýhody nepoužil v širokom meradle. Príprave je totiž relatívne ťažkopádna', spôsob uskutočnenia vyžaduje skúsenosť a zručný personál a prípravok nie je v stavoch núdze pohotovo k dispozícii a čas pre prípravu je v rozsahu 10 až 15 minút. Tieto faktory stimulovali vývoj zlepšeného výrobku, čo viedlo k vývoji pevného kombinovaného prostriedku kolagénového nosiča pokrytého poťahom pevného fibrinogénu, pevného trombínu a pevného aprotinínu, ako je to popísané v patente EP 0 059 265.

Funkcia kolagénového nosiča popísaná v EP 0 059 265 spočíva predovšetkým v úlohe nosiča, ktorý adsorbuje a ktorý dodáva mechanickú stabilitu koagulačnému prípravku, ktorým je pokrytý.

Tak sa vyvinul výrobok, ktorý kombinuje hemostatické vlastnosti fibrínového lepidla s prínosom kolagénu ako nosiča a tento výrobok sa vyrába pod obchodným názvom TachoComb®. TachoComb® je pre použitie pripravená a ľahko aplikovateľná pevná kombinácia kolagénovej náplasti pokrytej nasledujúcimi aktívnymi zložkami fibrínového lepidla - ľudským fibrinogénom, hovädzím trombínom a hovädzím aprotinínom.

TachoComb® predáva od začiatku 90-tych rokov 20. storočia firma Nycomed Pharma a použil sa v klinických pokusoch v Európe u viac než 2500 pacientov. Výrobok sa naviac použil u viac než 700 pacientov v japonskom klinickom programe pri mnohých rôznych indikáciách, ako resekciách pečene a pľúc, operáciách žlčovodu, operáciách sleziny, obličiek a slinivky brušnej, ORL operáciách, gynekologických operáciách a cievnych operáciách. O produkte TachoComb® sa zistilo, že je účinný a bezpečný.

V priebehu uskutočnených klinických pokusov neboli hlásené žiadne klinické komplikácie spojené s aplikáciou výrobku TachoComb®.

Vo WO 97/37 694 (immuno France S.A.) sa v porovnávacom príklade 4 popisuje, že keď sa použil kolagénový výrobok alebo výrobok TachoComb®, tak v prípade, keď sa použil TachoComb®, nedošlo k zastaveniu smrteľného krvácania, a to v protiklade k zastaveniu krvácanie v priebehu 5 minút, keď sa pripravil kolagénový výrobok podľa WO 97/37 694, ktorý neobsahoval trombín.

Vo WO 96/40 033 sú zdôraznené nevýhody hovädzieho trombínu použitého vo výrobku TachoComb®, ktoré spočívajú v tom, že použitie hovädzích alebo iných druhov trombínu môže spôsobiť škodlivú vírusovú kontamináciu a možný je aj prenos hovädzích ochorení ako je bovinná spongiformná encelofalopatia,

US patent č. 6 177 126 BI popisuje zariadenie a spôsob výroby materiálu pre utesnenie a liečbu poranení. Zariadenie obsahuje nádobu, ktorá má na spodnej časti dva perforované taniere, ktoré sú voči sebe navzájom pohyblivé tak, že umožňujú odkvapkávanie suspenzie obsiahnutej v nádobe na nosič, ktorý sa pohybuje pozdĺž nádoby pod jej spodnou časťou.

Podstata vynálezu

Predmet tohto vynálezu sa týka vylepšenej suspenzie, ktorá je vhodná napríklad pre použitie ako pokrytie kolagénového nosiča s cieľom získať k použitiu pripraveného absorbovateľného prostriedku pre zlepenie tkaniva, utesnenie tkaniva a zastavenie krvácania. Ďalší predmet tohto vynálezu sa týka vylepšeného spôsobu pokrytia nosiča ako je kolagénová hubka, a to suspenziou, ktorá obsahuje fibrinogén a trombín. Ďalší predmet predloženého vynálezu sa týka spôsobu sušenia mokrého poťahu suspenzie aplikovanej na nosič s cieľom zaistenia dostatočného zakotvenia pokrytia na nosiči. Ešte ďalší predmet tohto vynálezu sa týka pokrytej kolagénovej hubky s pokrytím fibrinogénom a trombínov, ktoré účinne napodobňujú konečnú fázu koagulačnej kaskády, keď sa pokrytá kolagénová hubka dostane do kontaktu s krvou, telesnými tekutinami alebo fyziologickým roztokom. Ďalší predmet tohto vynálezu sa týka pokrytej kolagénovej hubky s vyššie uvedeným pokrytím, ktoré má dostatočné zakotvenie poťahu ku kolagénovej hubke, t.j. uspokojivo malú abraziu pokrytia v prípade vystavenia mechanickému pôsobeniu.

Prvý predmet tohto vynálezu sa týka suspenzie obsahujúcej fibrinogén, trombín a alkohol, keď sa táto suspenzia získa spôsobom obsahujúcim získanie fibrinogénovej zmesi fibrinogénu a alkoholu, získanie trombínovej zmesi trombínu a alkoholu, zmiešanie fibrinogénovej zmesi a trombínovej zmesi tak, že sa získa uvedená suspenzia obsahujúce častice fibrinogénu a trombínu so stredným priemerom častíc podľa Folka a Warda 25 až 100 pm, ako 35 až 80 pm, ako 40 až 78 pm, ako 40 až 75 pm, ako 45 až 60 pm, ako 47 až 55 pm, alebo ako 60 až 100 pm, ako 60 až 80 pm, ako 65 až 75 pm, s výhodou v rozsahu ± 5 pm, ako v rozsahu ± 4 pm, ako v rozsahu ± 3,5 pm, ako v rozsahu ± 2 pm, ako v rozsahu ± 1,5 pm, ako v rozsahu ± 1 pm, ako v rozsahu ± 0,8 pm, ako v rozsahu ± 0,6 pm, ako v rozsahu ± 0,5 pm. Zistilo sa, že ak sa touto suspenziou pokryje nosič ako je kolagénová hubka, tak je táto suspenzia účinná pre získanie prostriedku pripraveného k použitiu pre lepenie tkania, utesnenie tkaniva a zastavenie krvácania. Suspenzia môže prípadne obsahovať aprotinín pridaný k fibrinogénovej zmesi ako koncentrovaný vodný roztok. Ako farbiaci značkovač je možné pridať riboflavín, takže suspenziu je možné ľahko identifikovať, keď sa ňou pokryl nosič a zaschla.

Vzhľadom na fyzikálne vlastnosti suspenzie, najmä na sedimentačné správanie sa pomerne veľkých častíc v alkohole, nie je možné definovať štandardné meradlo viskozity kvapaliny pre uvedenú suspenziu. Preto sa použil alternatívny spôsob získania hodnoty viskozity. Podľa tohto spôsobu môže mať suspenzia takú viskozitu, že ak na objem 90 až 120ml suspenzie pôsobí len gravitácia, prejde otvorom na dne nádoby, ktorá má cylindrickú časť s vnútorným priemerom 40 až 50 mm a vnútornou výškou 55 až 65 mm a kónickú spodnú časť s výškou 17 až 23 mm, kde otvor na dne je na nižšom konci kónickej časti kruhového otvoru s priemerom 2 až 3 mm, za 25 až 75 sekúnd.

V prípade nádoby vyrobenej z ocele má táto nádoba a jej otvor nasledujúce rozmery: vnútorný priemer cylindrickej časti je 46 mm, vnútorná výška cylindrickej časti je 60nnn, vnútorná výška kónického dna je 20,5 mm, vnútorný priemer otvoru v dne je 2,6 mm, dĺžka spojovacej časti pripojenej k otvoru v dne je 9 mm alebo v prípade plastovej nádoby má táto nádoba nasledujúce rozmery: vnútorný priemer cylindrickej časti je 50 mm, vnútorná výška cylindrickej časti je 41 mm, vnútorná výška kónického dna je 24 mm, vnútorný priemer otvoru v dne je 2,5 mm, dĺžka spojovacej časti pripojenej k otvoru v dne je menšia než 5 mm, pričom vyššie uvedený čas úniku suspenzie môže byť 25 až 60 s, ako 25 až 50 s, ako 30 až 50 s. ako 32 až 44 s, ako 34 až 38 s.

Nižšie popísané parametre a vlastnosti suspenzie v spojení so spôsobom druhého predmetu vynálezu tiež platia pre suspenziu prvého predmetu vynálezu.

Druhý predmet vynálezu sa týka spôsobu prípravy suspenzie s fibrinogénom a trombínom, ktorý zahŕňa:

prípravu fibrinogénovej zmesi fibrinogénu a alkoholu, prípravu trombínovej zmesi trombínu a alkoholu, zmiešanie fibrinogénovej zmesi a trombínovej zmesi tak, že sa získa uvedená suspenzia obsahujúca častice fibrinogénu a trombínu so stredným priemerom častíc podľa Folka a Warda 25 až 100 μιη. Parametre a vlastnosti popísané vyššie v spojení so suspenziou podľa prvého predmetu vynálezu tiež platia pre spôsob druhého predmetu vynálezu.

V kroku získavania ftbrinogénovej zmesi možno fibrinogén vopred upraviť vhodným spôsobom na mikrometrovú veľkosť, napr. preosiatím, aby sa získali častice so stredným priemerom podľa Folka a Warda 25 až 100 pm. Fibrinogén s mikrometrovou veľkosťou častíc možno napríklad vmiešať do alkoholu, aby sa získala uvedená fibrinogénová zmes. V kroku získania zmesi možno fibrinogén tiež priamo homogenizovať v alkohole, s výhodou pri teplote 0 až 12 °C, ako pri 2 až 8 °C. V priebehu homogenizácie sa môže teplota znížiť. Krok zmiešania fibrinogénovej zmesi a trombínovej zmesi možno uskutočniť pri miešaní suspenzie, kedy miešanie možno uskutočniť pri teplote 0 až 12 °C, ako pri 2 až 8 °C.

Trombín môže byť ľudský, hovädzí alebo rekombinantný a fibrinogén môže byť ľudský alebo rekombinantný. Alkohol môže byť organický alkohol ako je metanol, etanol, propanol, izopropanol, ako je bezvodý organický alkohol, bezvodý etanol, bezvodý propanol alebo bezvodý izopropanol. Ľudský fibrinogén sa môže dodať v pevnej lyofilizovanej forme.

Tretí spôsob vynálezu sa týka spôsobu pokrytia nosiča suspenziou obsahujúcou fibrinogén a trombín, kde suspenzia vznikne spôsobom zahŕňajúcim kroky: prípravu fibrinogénovej zmesi fibrinogénu a alkoholu, prípravu trombínovej zmesi trombínu a alkoholu, zmiešanie fibrinogénovej zmesi a trombínovej zmesi tak, že sa získa uvedená suspenzia obsahujúca častice fibrinogénu a trombínu so stredným priemerom častíc podľa Folka a Warda 25 až 100 pm, spôsob pokrytia obsahuje:

prípravu suspenzie fibrinogénu, trombínu a alkoholu v mieste blízko nosiča, aplikáciu uvedenej suspenzie na povrch nosiča určený k potiahnutiu.

Nosičom môže byť kolagénový nosič, ako je kolagénová hubka. Kolagénová hubka spĺňa najmenej jedno a s výhodou množstvo nasledujúcich kritérií, ako je hodnota pH 5,0 až 6,0, obsah kyseliny mliečnej maximálne 5 %, obsah amoniaku maximálne 0,5 %, obsah rozpustného proteínu vypočítaného ako obsah albumínu maximálne 0,5 %, obsah síranového popola maximálne 1,0 %, obsah ťažkých kovov maximálne 20 ppm, mikrobiologická čistota s maximálne I0³ CFU/g, obsah kolagénu 75 až 100 %, hustota 1 až 10 mg/cm3, modul pružnosti v rozsahu 5 až 100 N/cm.

Kolagénovú hubku možno pripraviť spôsobom zahŕňajúcim kroky prípravy kolagénového gélu, vmiešanie vzduchu do kolagénového gélu tak, aby sa získala kolagénová pena, vysušenie kolagénovej peny tak, aby sa získal suchý blok nosiča obsahujúceho vo vnútri dutiny, oddelenie častí hubky z bloku kolagénovej hubky s priemerom dutiny väčším než 0,75 mm a menším než 4 mm alebo so stredným diagonálnym rozmerom dutín 3 mm.

V tomto kontexte sa termínom priemer dutiny rozumie najdlhšia priama vzdialenosť od steny ku stene dutiny, t.j. najdlhšia diagonálna priama vzdialenosť v dutine. Dutiny môžu mať polygonálny tvar, ako je oktogonálny tvar. Zistilo sa, že priemer dutiny väčší než 0,75 mm a menší než 4 mm alebo stredný priemer dutiny maximálne 3 mm, poskytuje kolagénovú hubku zvlášť výhodnú pre pokrytie suspenzie obsahujúcej fibrinogén a trombín. Ďalej sa zistilo, že pokrytá kolagénová hubka pripravená vyššie uvedeným spôsobom je vzduchotesná a kvapalinotesná vtom zmysle, že keď sa pokrytá kolagénová hubka použije na poranenie, nedovolí vzduchu alebo kvapaline presiaknuť kolagénovou hubkou.

Krok aplikácie suspenzie na nosič je možné uskutočniť pri teplote okolia 0 až 12 °C, ako pri 1 až 10 °C, ako pri 2 až 8 °C. Krok aplikácie suspenzie na nosič je možné ďalej uskutočniť v atmosfére prostredia s relatívnou vlhkosťou 75 až 99 %, ako je 85 až 95 %. Na nosič sa s výhodou aplikuje 0,08 až 0,12 ml suspenzie na jeden cm² pokrývaného povrchu. Pre zaistenie rovnomernej účinnosti finálneho pokrytého nosiča po celom jeho povrchu sa suspenzia s výhodou rovnomerne distribuuje na danú šírku pokrývaného povrchu tak, že hmotnosť fibrinogénu na jednotku plochy pokrývaného povrchu tak, že hmotnosť fibrinogénu na jednotku plochy pokrývaného povrchu sa líši o maximálne 25 %, ako o maximálne 15 %, ako o maximálne 10 %.

K naneseniu suspenzie na nosič je možné použiť aplikátor, ktorý má najmenej jednu trysku, kde suspenzia sa pretláča cez trysku, pričom nosič a tryská sa navzájom voči sebe relatívne pohybujú. Aplikátor môže obsahovať alebo môže byť umiestnený v blízkosti dopravného pásu, ktorý mieša jednotky pripojené k pumpe alebo systému púmp alebo iného zásobného zariadenia a trysky alebo systému trysiek, ktorý sa pohybuje naprieč, napríklad v pravých uhloch k dopravnému pásu. V závislosti od konkrétnych charakteristík prostredia môže mať tryská alebo systém trysiek rôzne tvary a veľkosti. Trysku alebo systém trysiek je možné pripojiť k zásobnému zariadeniu pomocou trubíc. Zásobné zariadenie môže privádzať nanášané médium z miešacej jednotky k systému trysiek. V priebehu procesu nanášania sa systém trysiek môže pohybovať naprieč nosičom. Vo svojej pohotovostnej polohe môže zostávať na jednej strane dopravného pása. Nanášací proces môže byť iniciovaný svetelným čidlom, ktoré indikuje prítomnosť nosiča na dopravnom páse a podobne sa môže aj zastaviť signálom tohto čidla. Takýto aplikátor má relatívne malý mŕtvy objem a ľahko sa s ním pracuje, ľahko sa čistí. Naviac je tu aj možnosť v ktoromkoľvek okamihu prerušiť nanášací proces, je použiteľný v relatívne širokom rozsahu viskozít a jeho výsledkom je homogénne pokrytie.

Alternatívne alebo doplnkovo je možné pre aplikáciu suspenzie na nosič použiť aplikátor, ktorý obsahuje nádobu s množstvom oddelených vývodov, kde sa suspenzia tlačí vývodmi z nádoby na nosič. Tento druhý typ aplikátora vo forme obsahujúcej pohyblivé taniere na svojom dne je popísaný v US patente č. 6 177 126 BI a ktorý je tu vo svojej úplnosti zahrnutý v odkazoch. Pre svoju rovnomernú distribúciu, ktorou sa vyznačujú zariadenia patentu US č. 6 177 126 BI, je jedno z týchto zariadení použité k zvýhodnenému uskutočneniu tohto vynálezu. Nosič a aplikátor sa s výhodou voči sebe relatívne pohybujú v smere pohybu, zatiaľčo sa na nosič nanáša suspenzia, kde rýchlosť pohybu môže byť 0,025 až 0,05 m/s, ako 0,03 až 0,04 m/s. Prietoková rýchlosť suspenzie nanášanej aplikátorom na nosič je 400 až 600 ml/min, ako 470 až 550 ml/min, ako 495 až 505 ml/min.

Štvrtý predmet vynálezu sa týka spôsobu vysušenia suspenzie fibrinogénu, trombínu a alkoholu nanesenej ako mokrý poťah na pokrývaný povrch nosiča, pričom tento spôsob obsahuje vystavenie pokrývaného nosiča tlaku pod 100 kPa (1000 mbar) tak, že sa získa vysušený pokrytý povrch nosiča, aby sa vysušený poťah naviazal na pokrývaný povrch. V sušiacom procesu je možné udržiavať znížený tlak, nízku teplotu 2 až 10 °C a vysokú raletínu vlhkosť 80 až 95 %, čím je možné zachovať štruktúrne a fyzikálne vlastnosti nosiča, konkrétne nosiča vo forme kolagénu ako je kolagénová hubka, rovnako ako fibrinogénu a trombínu.

Suspenziu je možné pripraviť z fibrinogénovej zmesi fibrinogénu a alkoholu, z trombínovej zmesi trombínu a alkoholu, zmiešaním fibrinogénovej zmesi a trombínovej zmesi tak, že sa získa uvedená suspenzia a nosičom môže byť kolagénová hubka, ktorá sa získa spôsobom obsahujúcim prípravu kolagénového gélu, vmiešanie vzduchu do kolagénového gélu tak, že sa získa kolagénová pena, vysušenie kolagénovej peny tak, že sa získa suchý blok kolagénovej hubky obsahujúcej vo vnútri dutiny, oddelenia častí hubky z bloku kolagénovej hubky s priemerom dutiny väčším než 0,75 mm a menším než 4 mm alebo so stredným diagonálnym rozmerom dutiny 3 mm a pokrytie kolagénovej hubky možno uskutočniť suspenziou fibrinogénu, trombínu a alkoholu na mieste blízkom koíagénovej hubke, nanesením suspenzie na pokrývaný povrch kolagénovej hubky.

Spôsob prípravy kolagénovej hubky a prípravy suspenzie sú vyššie diskutované v súvislosti so spôsobmi druhého a tretieho predmetu tohto vynálezu.

V priebehu sušenia sa môže pokrytý nosič vystaviť uvedenému tlaku pri teplote 0 až 12 °C, ako pri 1 až 10 °C, ako pri 2 až 8 °C a/alebo relatívnej vlhkosti atmosféry okolia 75 až 99 %, ako 85 až 95 %. Cez pokrytý nosič môže v priebehu sušenia prechádzať prúd vzduchu tak, že odvádza paru smerom od pokrytého nosiča.

Aby bolo vysušenie úplné, pokrytý nosič sa s výhodou udržiava pri uvedených podmienkach po dobu najmenej 1 hodiny, ako sú najmenej 2 hodiny, ako sú najmenej 4 hodiny.

Plocha vysušeného pokrytého povrchu je vzhľadom na zmršťovanie menší než veľkosť plochy vlhkého pokrývaného povrchu. V spôsobe podľa tohto vynálezu je plocha vysušeného pokrytého povrchu najmenej 75 % z veľkosti plochy vlhkého pokrývaného povrchu, ako je najmenej 80 %.

Pre udržanie stability aktívnych zložiek počas skladovania pokrytého nosiča majú s výhodou nosič a vysušený pokrývaný povrch spolu obsah vody nepresahujúci 12 % hmôt., ako nepresahujúci 8 % hmotn.

Akékoľvek parametre a vlastnosti suspenzie a kolagénovej hubky, ktoré zahŕňajú spôsoby výroby diskutované v súvislosti s ďalšími predmetmi tohto vynálezu sa vzťahujú na spôsob štvrtého predmetu tohto vynálezu.

Piaty predmet tohoto vynálezu sa týka pokrytej kolagénovej hubky s poťahom fibrinogénu a trombínu, kde sa pokrytá kolagénová hubka získa spôsobom, ktorý zahŕňa získanie kolagénovej hubky, ktorý obsahuje prípravu kolagénového gélu, vmiešanie vzduchu do kolagénového gélu tak, že sa získa kolagénová pena, vysušenie kolagénovej peny tak, že sa získa suchý blok kolagénovej hubky obsahujúcej vo vnútri dutiny, oddelenia časti hubky z bloku kolagénovej hubky s priemerom dutiny väčším než 0,75 mm a menším než 4 mm alebo so stredným diagonálnym rozmerom 3 mm, nanesenie suspenzie fibrinogénu, trombínu a alkoholu na pokrývaný povrch kolagénovej hubky a vystavenie pokrytého nosiča tlaku pod 100 kPa (1000 mbar) tak, že sa získa vysušený potiahnutý povrch na nosiči tak, že sa vysušený poťah na pokrývanom povrchu zakotví, pokrytá kolagénová hubka má najmenej jednu z nasledujúcich vlastností, ktorými je rovnomerná distribúcia suspenzie po danej šírke pokrývaného povrchu tak, že hmotnosť fibrinogénu na jednotku plochy pokrytého povrchu sa líši o maximálne 25 %, abrazia poťahu je menšia než 2,0 mg/cm², keď sa vzorka pokrytého materiálu 2 minúty trepe na trepačke Vibrofix s frekvenciou 800 až 1200 otáčok za minútu.

Rovnomerná distribúcia suspenzie po pokrývanom povrchu zlepšuje účinnosť pokrytého povrchu, keď sa tento prostriedok použije k napríklad lepenie tkaniva, utesnenie tkaniva alebo k zastaveniu krvácania. Nízka abrazia poťahu zaisťuje, že pokrytá kolagénová hubka sa môže transportovať, uchopiť rukami chirurga alebo chirurgickým nástrojom a inak manipulovať bez straty vysušenej suspenzie, to jest poťahu. Fibrinogénový prípravok môže tvoriť asi 60 až 90 % celkovej hmotnosti pokrytej kolagénovej hubky. Prípravok obyčajne obsahuje 50 až 60 % hmotn. nasledujúcich látok: solí, aminokyselín a albumínu. Samotný fibrinogén obyčajne tvorí 40 až 50 % prípravku.

Suspenzia má obyčajne obsah vody 20 až 80 mg/ml, ako 24 až 32 mg/ml. Obsah trombínu v suspenzii môže byť 20 až 40 lU/ml, ako 24 až 33 lU/ml. V priemere môže byť obsah trombínu po pokrytí 2 až 4 IU/cm² pokrytého povrchu, ako 2,3 až 3,3 IU/cm². Žiaduci môže byť, aby obsah trombínu 5 IU/cm² na ktoromkoľvek mieste pokrytého povrchu alebo aby nepresiahol

3,8 Rl/cm² na ktoromkoľvek mieste pokrytého povrchu.

Mikrobiologická čistota pokrytého nosiča je s výhodou do maximálne 4 CFU/cm², ako do maximálne 2,25 CFU/cm².

Ďalší nezávislý predmet vynálezu sa týka použitia vyššie uvedenej pokrytej kolagénovej hubky pre lepenie tkaniva, utesnenie tkaniva a zastavenie krvácania.

Stručný popis obrázkov

Obrázky 1 až 7 popisujú pokryté nosiče a nástroje k ich aplikácii, ako sa diskutuje v príklade Vili.

Obrázok 8 je vývojovým diagramom popisujúcim reťazec čiastkových procesov od výroby suspenzie po balenie pokrytej kolagénovej hubky, obrázok 9 je ilustráciou zariadení použitých pri meraní viskozity suspenzie, obrázky 10 a 11 obsahujú vývojový diagram popisujúci spôsob získania kolagénovej hubky.

Podrobný opis obrázkov

Nižšie sú popísané zvýhodnené uskutočnenia spôsobov a výrobkov predloženého vynálezu, porovnaj tiež obr. 8.

Suspenziu obsahujúcu fibrinogén, trombín a alkohol možno vyrobiť spôsobom výroby suspenzie podľa tohto vynálezu, a to nasledujúcim spôsobom:

Fibrinogén sa homogenizuje v 100 % etanole pri teplote 2 až 8 °C, pričom vzniká zmes fibrinogénu a alkoholu, zmes tvorí asi 80 % objemu z finálneho objemu suspenzie. Potom sa pridá riboflavín. Zmes sa následne mieša v uzavretej nádobe, a to až do jej ďalšieho spracovania.

Vo vode pre injekcie sa rozpustí ľudský alebo hovädzí trombín. Roztok sa pridá k 35násobnému množstvu 100 % etanolu pri teplote 0 až 8 °C. Takto získaná trombínová suspenzia sa homogenizuje pri teplote 0 až 8 °C po dobu 80 až 100 sekúnd.

Predtým, než sa zmieša ftbrinogénová a trombínová zmes, tak sa k fibrinogénovej zmesi pridá roztok aprotinínu a voda. Potom sa k fibrinogénovej zmesi pridá trombínová zmes. Výsledný objem suspenzie sa získa pridaním 100 % etanolu pri teplote 2 až 8 °C.

Spôsoby obsahujúce vyššie uvedené kroky sú ďalej odkazované ako spôsoby skupiny í.

Alternatívny spôsob výroby suspenzie podľa tohto vynálezu, ktorá obsahuje fibrinogén, trombín a alkohol, zahŕňa nasledujúce kroky:

Fibrinogénová zmes sa pripraví pridaním predpripraveného fibrinogénu sa stredným priemerom veľkosti častíc 25 až 80 pm podľa Folka a Warda a riboflavínu za stáleho miešania k 94 až 97 % etanolu pri teplote 2 až 8 °C. Výsledná zmes riboflavínu a etanolu tvorí asi 70 až 80 % finálneho objemu suspenzie. Fibrinogénová zmes sa ďalej mieša v uzatvorenej nádobe až do ďalšieho spracovania.

Trombínová zmes sa získa pridaním trombínu k 94 až 97 % etanolu pri teplote -30 °C. Takto získaná trombínová zmes sa 80 až 100 sekúnd homogenizuje. Alternatívne sa trombínová zmes pripraví rozpustením trombínu vo vode pre injekcie a následne sa takto získaný trombínový roztok pomaly pridá k 17 až 35-násobnému množstvu 100 % etanolu pri teplote -30 °C. Suspenzia sa 80 až 100 sekúnd homogenizuje. Ako homogenizačné zariadenie možno použiť vybavenie UltraTurrax od firmy IKA. Trombínová zmes sa pridá k zmesi obsahujúcej fibrinogén a riboflavín. Pridá sa 94 až 97 % etanol pri teplote 2 až 8 °C.

Spôsoby obsahujúce vyššie uvedené kroky sa ďalej odkazujú ako spôsoby skupiny II.

Spôsobmi vyššie uvedenej skupiny I a skupiny II sa získa suspenzia podľa tohto vynálezu, ktorá má s výhodou nasledujúce vlastnosti:

Obsah etanolu je 94 až 97 %, doba výtoku meraná prístrojom znázorneným vľavo na obrázku 9 je 31,5 až 48 s, sedimentačné správanie sa: objem pevných častíc v percentách celkového objemu: 5 minút od začiatku testuje väčší než 85 %, hodín od začiatku testu je 50 až 80 %, stredný priemer veľkosti častice podľa Folka a Warda je 35 až 80 pm.

V jednom uskutočnení sušenia podľa tohto vynálezu sa pásiky kolagénovej hubky inkubujú pri teplote 2 až 8 % pri relatívnej vlhkosti 80 až 91 % po dobu 2 až 30 hodín, a to pred pokrytím nosiča vo forme kolagénovej hubky. Aplikátor pre nanesenie suspenzie na kolagénovú hubku je popísaný vyššie. Po pokrytí sa pásiky kolagénovej hubky inkubujú pri teplote 2 až 8 °C a relatívnej vlhkosti 80 až 90 % po dobu 8 až 60 minút. Pásiky pokrytej kolagénovej hubky sa vysušia za zníženého tlaku v sušiacej komore pri teplote vzduchu 2 až 8 °C, relatívnej vlhkosti 80 až 90 %. Cez kolagénové pásiky prechádza pomocou odsávajúceho ventilu prúd vzduchu s prietokovou rýchlosťou vzduchu 1,2 až 40 m³ za hodinu. Použije sa tlak 3 až 6 kPa (30 až 60 mbar), to jest absolútny tlak asi 97 kPa (970 mbar) v závislosti od atmosférického tlaku a pokryté kolagénovú pásiky sa sušia po dobu 2 až 54 hodín.

Odhad viskozity suspenzie sa získa použitím jedného zo zariadení znázornených na obr. 9 a toto je popísané vyššie. Zariadenie znázornené v ľavej časti obr. 9 je vyrobené z ocele a jeho nádoba a otvor v dne majú nasledujúce rozmery:

vnútorný priemer cylindrickej časti je 46 mm, vnútorná výška cylindrickej časti je 60 mm, vnútorná výška kónického dna je 20,5 mm, vnútorný priemer otvoru v dne je 2,6 mm, dĺžka spojovacej časti pripojenej k otvoru na dne je 9 mm.

zariadenie znázornené v pravej časti obr. 9 je z plastového materiálu a nádoba a otvor v dne majú nasledujúce rozmery:

vnútorný priemer cylindrickej časti je 50 mm, vnútorná výška cylindrickej časti je 41 mm, vnútorná výška kónického dna je 24 mm, vnútorný priemer otvoru v dne je 2,5 mm, dĺžka spojovacej časti pripojenej k otvoru v dne je menšia než 5 mm.

Fibrinogénové základné materiály

Zložka	% z celkového obsahu
Prípravok A	Prípravok B	Prípravok C
Ľudský fibrinogén	36 až 52	42 až 47	36 až 52
Ľudský albumín	16 až 24	20 až 24	16 až 24
Celkový proteín	52 až 76	62 až 71	52 až 76
Chlorid sodný	8 až 14	0	8 až 14
Citrát tri sodný	2 až 4	1 až 3	2 až 4
Arginín (hydrochlorid)	15 až 26	15 až21	15 až 26
Glycín	0	6 až 9	1 až 2
Histidín	0	3 až 5	0
Sacharóza	0	0	1 až 2
Zvyšková vlhkosť	<2	2 až 4	<1,5

Trombínové základné materiály

Prípravok	Aktivita (IU/mg látky)	Zvyšková vlhkosť	v Ďalšie látky, aditíva
Ľudský trombín A	360 až 540	<3%	Ľudský albumín, chlorid sodný, citrát sodný
Hovädzí trombín A	>400	<3%	Hovädzí albumín, chlorid sodný, citrát sodný
Ľudský trombín B	7 až 10	<3%	Ľudský albumín, chlorid sodný, citrát sodný
Ľudský trombín C	35 až 60	<3%	Ľudský albumín, chlorid sodný, octan sodný, glycín

Nižšie uvedené príklady I až VI popisujú rôzne postupy prípravy pokrytej kolagénovej hubky s pokrytím fibrinogénom a trombínom podľa tohto vynálezu, ktorých výsledkom sú nižšie popísané uskutočnenia, v suspenziách tohto vynálezu. Ďalej sú použité spôsoby pokrytia podľa tohto vynálezu s spôsoby sušenia podľa tohto vynálezu.

Príklady uskutočnenia w nálezu

Príklad 1

V tomto príklade obsahuje suspenzia, ľudsky fibrinogénový prípravok B a ľudský trombínový prípravok B.

Spôsobom skupiny 11 sa použitím nasledujúcich množstiev a parametrov získal výsledný ubjeín suspenzie 3 500 ml:

i ibrinogénová zmes: 2 800 ml etanolu (94 % pri teplote 2 až 8 °C), 492,5 g ľudského ťibrinogénového prípravku B s časticami s veľkosťou mikrometrov, 493,5 mg riboflavínu. Fibrinogénova zmes sa udržiavala za stáleho miešania 20 hodín pri teplote 2 až 8 °C.

Trombínová zmes: 100 ml etanolu (100 % pri teplote -30 ^:Cj. 12,27 g ľudského trombínového prípravku B. Trombínová zmes sa udržiavala 18 hodín pri teplote -30 °C.

Suspenzia: 157 ml trombínovej zmesi sa pridalo k fibrinogénovej zmesi. K doplneniu na výsledný objem suspenzie 3 500 ml sa pridal 94 % etanol pri teplote 2 až 8 °C.

Vlastnosti suspenzie:

1. Koncentrácia etanolu: 94,3 %,

2. Doba výtoku meraná v oceľovom zariadení znázornenom v ľavej časti obr. 9: 36,5 s,

3. Sedimentačné správanie sa:

Ά) sedimentačný objem po 5 minútach od začiatku: 98 % testovaného objemu, b) sedimentačný objem po 24 hodinách od začiatku: 64 % testovaného objemu,

4. Veľkosť častice (stredný priemer podľa Folka a Warda): 56.4 - 1,3 pm.

Nosiče vo forme kolagénových pásikov sa pokryli suspenziou. Za nasledujúcich podmienok sa v chladiacej komore najprv preinkubovalo 48 pásikov kolagénovej hubky: Teplota

5.2 °C, absolútna vlhkosť 4,8 g vody na kg vzduchu, inkubačná doba 18,5 hodiny.

Pre pokrytie pásikov kolagénovej hubky suspenziou sa použil aplikátor popísaný v US patente č. 6 177 126 B1.

Pokryté pásiky kolagénovej hubky sa vysušili nasledujúcim spôsobom:

Pokryté pásiky sa inkubovali 15 minút pre teplote 5,2 'C a absolútnej vlhkosti 4,8 g vody na kg vzduchu.

Potom sa za zníženého tlaku pokrxté pásiky vysušili v sušiacej komore za nasledujúcich podmienok sušenia:

Vzduchové podmienky: teplota 5.2 °C. absolútna vlhkosť 4.8 g vody na kg vzduchu, prietok vzduchu odsávacím ventilom 23 nr' za hodinu, tlak 5.9 kPa 159 mbar). doba sušenia 4 hodiny.

keď sa vzorky s rozmermi 1 cm x 5 cm trepali po dobu 2 minút v testovacej skúmavke na trepačke Vibrohx pri frekvencii S00 až I 200 otáčok za minútu, došlo k abrazii získaného pokrytia pásikov kolagénovej hubky o asi 0.2 mg/cm.

Príklad II

V tomto príklade obsahuje suspenzia ľudský fibrinogčnový prípravok C a ľudský trombínový prípravok C.

Spôsobom skupiny 11 sa použitím nasledujúcich množstiev a parametrov získal výsledný objem suspenzie 3 500 ml:

Fibrínogénová zmes: 2 252 ml etanolu (94 % pri teplote 2 až 8 ^:C), 370,7 g ľudského fibrinogénového prípravku C s časticami s veľkosťou mikrometrov. 493,5 mg riboflavínu. Fibrínogénová zmes sa udržiavala za stáleho miešania 20 hodín pri teplote 2 až 8 °C.

Trombínová zmes: 188 ml etanolu (100 % pri teplote -30 ’C). 12 vialiek ľudského trombínového prípravku C/12 ml vody pre injekcie. Trombínová zmes sa udržiavala 18 hodín pri teplote -30 °C.

Suspenzia: 164,5 ml trombínovej zmesi sa pridalo k fibrinosénovej zmesi. K doplneniu na výsledný objem suspenzie 3 500 ml sa pridal 94 % etanol pri teplote 2 až 8 ’C.

Vlastnosti suspenzie:

1. Koncentrácia etanolu: 94,1 %.

2. Doba výtoku meraná v oceľovom zariadení znázornenom v ľavej časti obr. 9: 32,8 s,

3. Sedimentačné správanie sa:

a) sedimentačný objem po 5 minútach od začiatku: 94 % testovaného objemu,

b) sedimentačný objem po 24 hodinách od začiatku: 71 % testovaného objemu,

4. Veľkosť častice (stredný priemer podľa Folka a Warda): 49.2 - 0,93 um.

Nosiče vo forme kolagénových pásikov sa pokryli suspenziou. Za nasledujúcich podmienok sa v chladiacej komore najprv preinkubov alo 48 pásikov kolagénovej hubky: Teplota

4,8 °C', relatívna vlhkosť 90.3 %, inkubačná doba 22.25 hodinv.

Pre pokrytie pásikov kolagénovej hubky suspenziou sa použil aplikátor popísaný v US patente č. 6 177 126 BI.

Pokryté pásiky kolagénovej hubky sa vy sušili nasledujúcim spôsobom:

Pokryté pásiky sa inkubovali 13 minút pre teplote 4.9 ~C a absolútnej vlhkosti 4.8 g vody na kg vzduchu.

Potom sa za zníženého tlaku pokryté pásiky vysušili v sušiacej komore za nasledujúcich podmienok sušenia:

Vzduchové podmienky: teplota 5.2 C. absolútna vlhkosť 4.9 g vody na kg vzduchu, prietok v zduchu odsávacím ventilom 25 nv za hodinu, tlak 6 kPa (60 mbar), doba sušenia 4 hodiny.

Keď sa vzorky s rozmermi 1 cm x 5 cm trepali po dobu 2 minút v testovacej skúmavke na trepačke Vibrofix pri frekvencii 800 až 1 200 otáčok za minútu, došlo k abrazii získaného pokrytia pásikov kolagénovej hubky o asi 0.2 mg/cm'.

Príklad III

V tomto príklade obsahuje suspenzia ľudský fibrinogénový prípravok B a ľudský trombínový prípravok B a aprotinín.

Spôsobom skupiny II sa použitím nasledujúcich množstiev a parametrov získal výsledný objem suspenzie 1 000 ml:

Fibrinogénová zmes: 820 ml etanolu (100 % pri teplote 2 až 8 °C), 39,4 ml vody pre injekciu a

10.6 ml aprotinínu, 90.67 g ľudského fibrinogénového prípravku B s časticami s veľkosťou mikrometrov, 141 mg riboflavínu. Fibrinogénová zmes sa udržiavala za stáleho miešania 20 hodín pri teplote 2 až 8 ^CC.

Trombínová zmes: 50 ml etanolu (100 % pri teplote -30 °C), 3,75 g ľudského trombínového prípravku B. Trombínová zmes sa udržiavala 16 hodín pri teplote -30 °C.

Suspenzia: K fibrinogénovej zmesi sa pridal celý objem trombínovej zmesi. K doplneniu na výsledný objem suspenzie 1 000 ml sa pridal 100 % etanol pri teplote 2 až 8 °C.

Charakteristiky suspenzie:

1. Koncentrácia etanolu: 95 %.

2. Doba výtoku meraná v plastovom zariadení znázornenom v pravej časti obr. 9: 35 s,

3. Sedimentačné správanie sa:

a) sedimentačný objem po 5 minútach od začiatku: 89 ⁰o testovaného objemu.

b) sedimentačný objem po 24 hodinách od začiatku: 76 ⁰o testovaného objemu,

4. Veľkosť častice (stredný priemer podľa Folka a Warda): 74.4 - 3.5 um.

Nosiče vo forme kolagénových pásikov sa pokryli suspenziou. Za nasledujúcich podmienok sa v chladiacej komore najprv preinkubovalo 16 pásikov kolagénovej hubky: Teplota 5.0 °C. relatívna vlhkosť 85 %. inkubačná doba ! 7 hodín.

Pokrvté pásiky kolagénovej hubky sa vysušili nasledujúcim spôsobom:

Pokryté pásiky sa inkubovali 35 minút pre teplote 5 ^cCa relatívnej vlhkosti 85 %.

Potom sa za zníženého tlaku pokryté pásikv vysušili v sušiacej komore za nasledujúcich podmienok sušenia:

Vzduchové podmienky: teplota 5 ^:C. relatívna vlhkosť 85 %, prietok vzduchu odsávacím ventilom 1.2 tn^J za hodinu, tlak 3,5 kPa (35 mbar). doba sušenia 4 hodiny.

Keď sa vzorky s rozmermi 1 cm x 5 cm trepali po dobu 2 minút v testovacej skúmavke na trepačke Vibrofix pri frekvencii 800 až 1 200 otáčok za minútu, došlo k abrazii získaného pokrytia pásikov kolagénovej hubky o asi 0,2 mg/cm².

Príklad IV

V tomto príklade obsahuje suspenzia ľudský fibrinogénový prípravok C a ľudský irombínový prípravok C.

Spôsobom skupiny II sa použitím nasledujúcich množstiev a parametrov získal výsledný objem suspenzie 780 ml:

Fibrinogénová zmes: 700 ml etanolu (94 % pri teplote 2 až 8 °C), 84,42 g ľudského fibrinogénového prípravku C s časticami s veľkosťou mikrometrov, 110 mg riboflavínu. Fibrinogénová zmes sa udržiavala za stáleho miešania 20 hodín pri teplote 2 až 8 °C.

Trombínová zmes: 35 ml etanolu (100 % pri teplote -30 ^:C). 0,54 g ľudského trombínového prípravku B

C. Trombínová zmes sa udržiavala 16 hodín pri teplote -30 ^CC.

Suspenzia: K fibrinogénovej zmesi sa pridalo 23,0 ml trombínovej zmesi. K doplneniu na výsledný objem suspenzie 780 ml sa pridal 100 % etanol pri teplote 2 až 8 ^:C.

Vlastnosti suspenzie:

1. Koncentrácia etanolu: 94 %.

2. Doba výtoku meraná v plastovom zariadení znázornenom v pravej časti obr. 9: 33.5 s.

3. Sedimentačné správanie sa:

a) sedimentačný objem po 5 minútach od začiatku: 92 % testovaného objemu,

b) sedimentačný objem po 24 hodinách od začiatku: 72 % testovaného objemu,

4. Veľkosť častice (stredný priemer podľa Folka a Warda): 60.5 = 0.5 pm.

Nosiče vo forme kolagénových pásikov sa pokryli suspenziou. Za nasledujúcich podmienok sa v chladiacej komore najprv preinkubovalo 8 Dásikov kolagénovej hubky: Teplota 6.0 ^CC. relatívna vlhkosť 85 %. inkubačná doba 18.5 hodiny.

Pokryté pásiky kolagénovej hubky sa vysušili nasledujúcim spôsobom:

Pokiylé pásiky sa inkubovali 45 minút pre teplote 5³Ca relatívnej vlhkosti 85 %.

Vzduchové podmienky: teplota 5 ^CC, relatívna vlhkosť 85 %, prietok vzduchu odsávacím ventilom 1,2 m³ za hodinu, tlak 3,5 kPa (35 mbar), doba sušenia 4 hodiny.

Keď sa vzorky s rozmermi 1 cm x 5 cm trepali po dobu 2 minút v testovacej skúmavke na trepačke Vibrofix pri frekvencii 800 až 1 200 otáčok za minútu, došlo k abrazii získaného pokrytia pásikov kolagénovej hubky o asi 0,2 mg cín'.

Príklad V

V tomto príklade obsahuje suspenzia ľudský fibrinogénový prípravok A a ľudský trombínový prípravok A.

Spôsobom skupiny I sa použitím nasledujúcich množstiev a parametrov získal výsledný objem suspenzie 3 120 ml:

Fibrinogénová zmes: 2 540 ml etanolu (100 % pri teplote 2 až 8 ^CC), 311,6 g ľudského fibrinogénového prípravku A, 440 mg riboflavínu. Fibrinogénová zmes sa udržiavala za stáleho miešania 18 hodín pri teplote 2 až 8 ’C.

Trombínová zmes: 210 ml etanolu (100 % pri teplote -30 ’C). 229 g ľudského trombínového prípravku A.

Suspenzia: 87.3 ml vod\ pre injekcie sa pridalo k fibrinogénovej zmesi. K fibrinogénovej zmesi sa pridala trombínová zmes. K doplneniu na výsledný objem suspenzie sa pridal 100 % etanol pri teplote 2 až 8 ’C.

Vlastnosti suspenzie:

1. Koncentrácia etanolu: 97 %.

2. Doba výtoku meraná v oceľovom zariadení znázornenom v ľavej časti obr. 9: 40,8 s,

3. Sedimentačné správanie sa:

a) sedimentačný objem po 5 minútach od začiatku: 95.6 % testovaného objemu,

b) sedimentačný objem po 24 hodinách od začiatku: 63.5 % testovaného objemu,

4. Veľkosť častice (stredný priemer podľa Folka a Warda): 51,8 = 0,8 pm.

Nosiče vo forme kolagénoxých pásikov sa pokryli suspenziou. Za nasledujúcich podmienok sa v chladiacej komore najprv preinkubovalo 48 pásikov kolagénovej hubky: Teplota

6.5 ^CC, relatívna vlhkosť 90 %, inkubačná doba 22.5 hodiny.

Pokryté pásiky kolagénovej hubky sa vysušili nasledujúcim spôsobom:

Poknté pásiky sa inkubovali 10 minút pre teplote 6.5 ’C a relatívnej vlhkosti 90 %.

Potom sa za zníženého tlaku pokrsté pásiky vysušili v sušiacej komore za nasledujúcich podmienok sušenia:

Vzduchové podmienky: teplota 6,5 °C, relatívna vlhkosť 90- %, prietok vzduchu odsávacím ventilom 21 m³ za hodinu, tlak 5,8 kPa (58 mbar). doba sušenia 4 hodiny.

Keď sa vzorky s rozmermi 1 cm x 5 cm trepali po dobu 2 minút v testovacej skúmavke na trepačke Vibrofix pri frekvencii 800 až 1 200 otáčok za minútu, došlo k abrazii získaného pokrytia pásikov kolagénovej hubky o asi 0.2 mg/cm²

V tomto príklade obsahuje suspenzia ľudský fibrinogénový prípravok A a hovädzí

Príklad VI trombínový prípravok a aprotinín.

Spôsobom skupiny I sa použitím nasledujúcich množstiev a parametrov získal výsledný objem suspenzie 16 720 ml:

Fibrinogénová zmes: 13 600 ml etanolu (100 % pri teplote 2 až 8 ⁼C). 1750,5 g ľudského fibrinogénového prípravku A, 2 361 mg riboťlavínu. Fibrinogénová zmes sa udržiavala za stáleho miešania 18 hodín pri teplote 2 až 8 °C.

Irombínová zmes: 420 ml etanolu (100 % pri teplote -30 ^SC), 1 229 g hovädzieho trombinového prípravku.

Suspenzia: 162,3 ml aprotinínového roztoku sa pridalo k fibrinogénovej zmesi. 304,7 ml vody pre injekcie sa pridalo k fibrinogénovej zmesi. K fibrinogénovej zmesi sa pridala trombínová zmes. K doplneniu na výsledný objem suspenzie sa pridal 100 % etanol pri teplote 2 až 8 °C. Vlastnosti suspenzie:

1. Koncentrácia etanolu: 97 %

Doba výtoku meraná v oceľovom zariadení znázornenom v ľavej časti obr. 9: 36,8 s 3. Ve^rkosť častice (stredný priemer podľa Folka a Warda): 58,6 = 0.6 pm.

Nosiče vo forme kolagénových pásikov sa pokryli suspenziou. Za nasledujúcich podmienok sa v chladiacej komore najprv preinkubovalo 288 pásikov kolagénovej hubky: Teplota 6,5 'C, relatívna vlhkosť 89 %, inkubačná doba 25 hodín.

Pokrvté pásiky kolagénovej hubky sa vysušili nasledujúcim spôsobom:

Pokrvté pásiky sa inkubovali 10 minút pri teplote 6.5 ^:C a relatív nej vlhkosti 89 %.

Vzduchové podmienky: teplota 6,5 °C, relatívna vlhkosť 89 %, prietok vzduchu odsávacím ventilom 22,5 m³ za hodinu, tlak 5,9 kPa (59 mbar), doba sušenia 4 hodiny.

Keď sa vzorky s rozmermi 1 cm x 5 cm trepali po dobu 2 minút v testovacej skúmavke na trepačke Vibrofix pri frekvencii 800 až 1 200 otáčok za minútu, došlo k abrazii získaného pokrstia pásikov kolagénovej hubky o asi 0,2 mg/cm'.

Príklad VII

V tomto príklade sa testoval stabilita krycej suspenzie obsahujúcej ľudský fibrinogčn, hovädzí trombín a aprotinín na pokrytej kolagénvej hubke, a to počas trvania pokrývacieho procesu 7 hodín za podmienok okolia výrobných miestností, napr. 2 až 8 'C.

Každá aktívna zložka sa skúmala v rôznych vzorkovacích časoch.

Výsledky sú znázornené v nižšie uvedenej tabuľke I.

Tabuľka I

	Eudský fibrinogén	Hovädzí fibrinogén	Aprotinín (Ph.Eur.U./ml)
(mgml)	HU/ml)
Na začiatku pokrývania	50.0	21,8	0,59
Po 4.5 hodinách	49.7	23,3	0,59
Po 7 hodinách (koniec procesu pokrývania)	49.1	20,4	0,56

Výsledky ukazujú uspokojivú stabilitu všetkých troch zložiek.

Príklad VIII

Odkazy sú na obrázky 1 až 7, ktoré predstavujú:

Obrázok 1

1.1. Opraskin: nepokrtytý/pokrytý

1.2. Pokrytý Opraskin®: ponorenie do endoskopického zariadenia

1.3. Pokrytý Opraskin : rozvinutý po ponorení do endoskopického zariadenia Obrázok 2

2.1. Willospon forte: nepokrtytý/pokrytý

2.2. Pokrytý Willospon® forte: ponorenie do endoskopického zariadenia

2.3. Pokrytý Willospon® forte: rozvinutý po ponorení do endoskopického zariadenia

Obrázok 3 t?

3.1. Willospon® Spezial: nepokrtytý/pokr\ty

3.2. Pokrytý Willospon® Spezial: ponorenie do endoskopického zariadenia

3.3. Pokrytý Willospon® Spezial: rozvinutý po ponorení do endoskopického zariadenia Obrázok 4

4.1. Ethisorb® Patch: nepokrtytý pokrytý

4.2. Pokrytý Ethisorb’ Patch: ponorenie do endoskopického zariadenia

4.3. Pokrytý Ethisorb’ Patch: rozvinutý po ponorení do endoskopického zariadenia

Obrázok 5

5.1. Tabotamb® NU Knit: nepokrtytý/pokrytý

5.2. Pokrytý Tabotamb® NU Knit: ponorenie do endoskopického zariadenia .

5.3. Pokrytý Tabotamb® NU Knit: rozvinutý po ponorení do endoskopického zariadenia Obrázok 6

6.1. Hubka Nycomed: nepokrtytá/pokrytá (laboratórna vzorka)

6.2. Pokrytá hubka Nycomed (laboratórna vzorka): ponorenie do endoskopického zariadenia

6.3. Pokrytá kolagénová hubka Nycomed (laboratórna vzorka): rozvinutý po ponorení do endoskopického zariadenia

6.3. Pokrytá kolagénová hubka Nycomed (výrobná vzorka = TachoComb®): rozvinutý po ponorení do endoskopického zariadenia

Obrázok 7 endoskopický nástroj: Endodock® endoskopický nástroj: Endodock® endoskopický nástroj: Endodock®

Porovnanie pokrytej hubky Nycomed (TachoComb S) s inými nosičovými výrobkami pokrytými identicky ako TachoComb S Priľnutie vrstvy

Postup

1. Pokrytie rôznych nosičov

Obchodné meno	Materiál	Vyrobené/Dodávané
Opraskin¹	Kolagénová hubka	Lohman. Postfach 2343. D-56513 Neuw ied
Willospon forte	Kolagénová hubka (teľacia)	Will-Pharma. Postbus 30, NL 1160 AA Zwanenburg
Willospon^ Spezial	Želatínová hubka	Will-Pharma. Postbus 30, NL 1160 AA Zwanenburg
Ethisorb' Patch	Polyglactin910/Polydioxanon	Johnson/Johnson (výrobca) Ethicon, Robert/Koch/Str. 1 D-22851 Norderstedt
Ίabotamp NU Knit	Oxidovaná regenerovaná celulóza	Johnson/Johnson (výrobca) Ethicon, Robert/Koch/Str. 1 D-22851 Norderstedt
Collagen sponge Nycomed	Konská kolagénová hubka	Nycomed Austria Sankt/Peter Str. 25 A-4021 Linz

Poktývacou suspenziou Tachocomb S sa potiahla plocha s rozmermi 2 cm x 4,5 cm. Množstvo suspenzie pre pokrytie zodpovedalo popisu pre TachoComb (5,5 mg fibrinogénu/cm²). Vzorky sa vysušili.

2. Z každého pokrytého nosiča sa pripravila vzorka s rozmermi 1 cm x 4 cm.

3. Priľnutie vrstvy sa testovalo nasledujúcim spôsobom.

Popis spôsobu

Prístrojové vybavenie

Analytické váhy (presnosť váženia ± 0,5 mg)

Trepačka Vibrofix kombinovaná s upevňovacím zariadením

Pravítko s milimetrovým delením

Stopky, skalpel, skúmavky s vnútorným priemerom 2 cm s uzáverom

Postup

Postup a výpočet pre určenie abrazie sú uvedene vyššie.

Vvsledkv

Nosič	Látka	Abrazia (mg/cm)
Opraskin®	lyofilizovaný kolagén	2.1
Willospon® forte (3 mm)	lyofilizovaný kolagén 1,2
Willospon® Spezial (1 mm)	želatína	2.1
Ethisorb*’ Patch (ZVP609)	polyglaktín/dioxanón	14,3
Tabotamp® N U Knit	oxidovaná celulóza	9,2
Collagen sponge Nycomed	kolagén. penový	0.15

Komentár

Žiadny nosič okrem kolagénovej hubky Nycomed nie je po pokrytí pružný. Vzorka sa musí vyrezať veľmi opatrne. Ak sa vystrihne pomocou nožníc, dôjde k odlúpnutiu veľkého množstva poťahového materiálu, pretože vrstva je sama o sebe neohybná. Medi poťahovým materiálom a nosičom Ethisorb® Patch nedošlo takmer k žiadnemu spojeniu. Ak sa trochu potrepalo, celé pokrytie sa odlúpilo ako koberec. Rozdiel medzi kolagénovou bubkou Nycomed a ostatnými nosičovými materiálmi je úplne jasný.

Pružnosť zvlhčeného pokrytého nosiča

Postup

1. Pokrytie rôznych nosičov

Krycou suspenziou Tacho Comb S sa pokryla plocha s rozmermi 2 cm x 4,5 sm každého nosiča. Množstvo pokrývacej suspenzie zodpovedalo popisu pre TachoComb (5.5 mg fibrinogénu/cm ). Vzorky sa vysušili.

2. Z každého pokrytého nosiča sa pripravila vzorka s plochou 5 až 7 cm². Určila sa presná východisková plocha vysušenej vzorky.

3. Vzorka sa zvlhčila a položila na elastickú latexovú fóliu upevnenú k špeciálnemu zariadeniu, ako je podrobne popísané pod nadpisom Postup. Potom sa na latexovú fóliu vyvinul tlak, pri ktorom sa roztiahla. Po dvoch roztiahnutiach a uvoľneniach sa fólia roztiahla tretíkrát. Plocha nosiča sa odmerala v bode najvyššieho roztiahnutia.

Popis spôsobu

Prístrojové vybavenie/Chemikálie

Pei istaltická pumpa (IKA PA/SF)

Nádobka na vyrovnanie tlaku (3 výstupy)

Tlakomer VDO (0 až 25 kPa (0 až 250 mbar))

Sklená nálievka (priemer otvoru 1:30 mm. 2:15 mm)

Silikónové trubičky a sponky, latexové rukavice (Semper med), skalpel, pravítko s milimetrovým delením, nožnice Fyziologický mziok

Postup

K trom výstupom tlakovej vyrovnávacej nádoby sa pomocou silikónovýcli trubičiek vzduchotesne pripojilo nasledujúce vybavenie:

a) pcrisíaltická pumpa

b) tlakomer

c) sklená nálievka/otvor 2

Z latexovej rukavice sa vyrezal dvojitý pásik s rozmermi 8 cm x 8 cm. Tento pásik sa vzduchotesne upevnil k sklenej nálevke otvor 1.

Skalpelom sa vyrezala plocha asi 5 až 7 cm² pokrytej plochy pokrytého nosiča. Odmerala sa plocha vzorky (východisková plocha). Pokrytie vzorky sa zvlhčilo fyziologickým roztokom a vzorka sa položila na latexovú fóliu. Potom sa na latexovú fóliu vzorka ručne asi 1 minútu pritláčala.

Latexová fólia sa pomocou peristaltickej pumpy roztiahla tlakom 7 kPa (70 mbar). To sa opakovalo dvakrát, vždy s následným uvoľnením tlaku na latexovú fóliu. Po treťom roztiahnutí sa odmerala plocha (dĺžka a šírka) pokrvtého nosiča, a to v bode najväčšieho roztiahnutia latexovej fólie.

Výpočet

Faktor pružnosti = plocha nosiča pri treťom roztiahnutí východisková plocha vzorky

Výsledky

Nosič	Látka	Faktor pružnosti
Opraskin'⁸	lyofilizovaný kolagén	1,78
Willospon forte (3 mm)	lyofilizovaný kolagén	1,53
Willospon Spezial (1 mm)	želatína	1,79
Ethisorb® Patch (ZVP609)	polyglaktín/dioxanón	1,0
Tabotamp® NU Knit	oxidovaná celulóza	1,15
Collagen sponge Nycomed	kolagén. penový	1,55

Komentár

Pružnosť zvlhčenej kolagénovej hubky Nycomed (TachoComb S) je jednou z dôležitých vlastností výrobku. Pružnosť je nevyhnutná v chirurgii hrudníka a brušnej dutiny. Po prilepení by mal byť nosič schopný sledovať napríklad rozťahovacie a sťahovacie pohyby plúc alebo čriev. Najmä Ethisorb® nevykazoval pružnosť vôbec žiadnu. Z pokrytia sa uvoľňoval okamžite. Pokrytý Willospon® Spezial a Opraskin® vykazovali v priebehu testu štruktúrne defekty.

Použitie pokrytého nosiča v endoskopickej chirurgii

Postup

1. Pokrytie rôznych nosičov

Krycou suspenziou TachoComb S sa pokryla plocha s rozmermi 2 cm x 4 cm každého nosiča. Množstvo krycej suspenzie zodpovedalo popisu pre TachoComb (5,5 mg fibrinogénu/cirr). Vzorky sa vysušili.

2. Zaobchádzanie so vzorkami pokrytého nosiča pre použitie v endoskopickej chirurgii a strata pokrytia v dôsledku tohto zaobchádzania sa zdokumentovali prostredníctvom digitálneho fotografického vybavenia.

Popis spôsobu

Prístrojové vybavenie

Endodock: Endoskopický nástroj prispôsobený pre použitie prostriedku TachoComb® v endoskopickej chirurgii (viď obrázok 7). Digitálne fotografické vybavenie.

Zoznam študovanvch nosičov

Nosič	Nosičový materiál
Opraskin'	lyofilizovaný kolagén
Willospon forte (3 mm)	lyofilizoxaný kolagén
Willospon® Spezial (1 mm)	želatína
Ethisorb® Patch (ZVP609)	polyglaktín/dioxanón
Tabotamp⁸ NU Knit	oxidovaná celulóza
Collagen sponge Nycomed	kolagén, penový 1

Postup

Zosnímané obrázky všetkých nosičov

1. obrázok: Dokumentácia nepokrytých a pokrytých nosičových vzoriek.

2. obrázok: Pokryté vzorky sa ponoria do endoskopického zariadenia (Endodock). Vzorka sa musí ručne sploštiť, aby ju bolo možné obaliť okolo vodiaceho kolíka”. Potom sa vzorka opatrne ponorí do oceľovej trubičky s priemerom 10 mm.

Dokumentácia vzorky čiastočne ponorenej do trubičky zariadenia Endodock.

3. obrázok: Vzorka sa opatrne vyberie von. Potom sa vzorka rozvinie. Pokrytie, ktoré sa v dôsledku tohto zaobchádzania so vzorkou oddelí, sa zhromaždí vedľa vzorky. Rozvinutá vzorka po ponorení do endoskopického zariadenia a úbytok pokrytia v dôsledku tohto zaobchádzania so vzorkou sa zdokumentujú.

Komentár

Použitie prostriedku TachoComb S (pokrytá konská kolagénová hubka/Nycomed) v endoskopickej chirurgii je najnáročnejšou aplikáciou výrobku. TachoComb S sa ponorí do endoskopického zariadenia. Trubička tohto vybavenia má obyčajne priemer 10 až 13 mm. Pre ponorenie do trubičky sa Tacho Comb S sploští a potom sa obalí okolo vodiaceho “kolíka” a potom sa opatrne ponorí do trubičky. Preto musí byť spojenie poťahu s nosičom a aj vlastné spojenie silné, ale aby zostal výrobok ohybný v suchom stave, aby sa mohol ohýbať a rolovať. Keď sa TachoComb S vnáša do operovaného miesta, opatrne sa vyberie z trubičky. Potom sa musí rozvinúť a umiestniť na povrch poranenia. To často vyžaduje nejaké úpravy. Preto by priľnutie vrstvy k nosiču malo byť dostatočne silné, aby toto zaobchádzanie vydržalo.

Výsledky

Výsledky sú uvedené na pripojených obrázkoch 1 až 6. Odhad odpadnutého krycieho materiálu je nasledujúci:

Opraskin^	30 až 40 %
' Willospon^ forte (3 mm)	60 až 70 %
\Villospon^s Spezial (1 mm)	50%'
Ethisorb^A Patch (ZVP609)	60 až 70 %
Tabotamp“ NU Knit	95 %
Collagen sponge Nycomed	< 5 %

Pretože Ethisorb® je veľmi neohybný nosič, je priľnutie poťahu veľmi zlé. Preto pri tomto výskume stratil pokrytý Ethisorb® takmer celé pokrytie. V porovnaní s pokrytou kolagénovou hubkou od firmy Nycomed mali všetky ostatné študované nosiče pokrývaný povrch hladký. Preto pokrytie leží na nosiči ako “rovný koberec“. To vedie k trochu neohybnej štruktúre suchých pokrytých nosičov. Ohýbanie a rolovanie v ňom často spôsobuje praskliny.

Po ponorení pokrytých nosičov do trubičky endoskopického zariadenia a potom rozvinutí vzorky stratili všetky nosiče okrem kolagénovj hubky firmy Nycomed pomerne veľa pokrytia, takže veľké plochy zostali bez pokrývacieho materiálu.

Štruktúra a zrnitosť kolagénovej hubky firmy Nycomed je základom vysokej ohybnosti výrobku TachoComb S za podmienok vysušenia alebo zvlhčenia.

Kolagénová hubka firmy Nycomed je penová a má vo vnútri mnohouhoľníkové dutiny. Na povrchu sú tieto dutiny prerezané a vznikajú kaverny. Tieto kaverny zväčšujú povrch pokrytia. V priebehu pokrývania sa pokrývacia suspenzia distribuuje rovnomerne na štruktúrovaný povrch. V priebehu sušenia sa roztok obsahujúci ako fibrinogén, tak trombín, zakotví ako pevné látky do týchto kaverien. Preto sa môže TachoComb S narezať na požadujúce veľkosti a je možné ho ponoriť do endoskopického vybavenia s len malou stratou pokrývacieho materiálu alebo úplne bez straty.

V porovnaní so všetkými ostatnými študovanými nosičmi je veľkou výhodou suchého prostriedku TachoComb S jeho vysoká ohybnosť.

Výroba kolagénovej hubky

Kolagénovú hubku, na ktorú sa odkazuje v tomto texte, je možné vyrobiť spôsobom všeobecne znázorneným na obrázkoch 10 a 11 a popísaným nižšie:

Zistilo sa, že úspešné pokrytie kolagénovej hubky prípravkom fibrínového lepidla závisí od štruktúry kolagénovej hubky. Je tak žiadúce získať spôsob výroby kolagénovej hubky s určitou štruktúrou a konkrétnym cieľom je vyrobenie kolagénovej hubky vhodné pre pokrytie prípravkom fibrínového lepidla tak, abv sa získal materiál pre hojenie a uzatváranie poranení. Ďalej je žiadúce získať spôsob výroby kolagénovej hubky, ktorá má vo vzťahu k hubkám z predchádzajúcich prác v odbore zlepšené fyzikálne vlastnosti, a to v zmysle zlepšenej vlhkosti, pružnosti, hustoty a modulu pružnosti. Ďalej je žiadúce získať spôsob prípravy kolagénovej hubky, ktorá je vzduchotesná a kvapalinotesná v tom zmysle, že keď sa kolagénová hubka aplikuje na poranenie, nedovolí vzduchu alebo kvapaline presakovať kolagénovou hubkou.

Spôsob prípravy kolagénovej hubky tak môže obsahovať prípravu kolagénového gélu, vmiešanie vzduchu do kolagénového gélu tak, aby sa získala kolagénová pena, vysušenie kolagénovej peny tak, aby sa získal suchý blok kolagénovej hubky obsahujúci vo vnútri dutiny, oddelenie častí hubky z bloku kolagénovej hubky s priemerom dutiny väčším neý 0,75 mm a menším než 4 mm alebo so stredným priemerom dutiny maximálne 3 mm.

Pod termínom priemer dutiny sa v tomto texte rozumie najväčšia priama vzdialenosť od steny k stene dutiny, to jest najväčšia diagonálna priama vzdialenosť v dutine. Dutiny môžu mať polygonálny tvar, ako je oktogonálny tvar.

Zistilo sa, že priemer dutiny väčší než 0,75 mm a menší než 4 mm alebo stredný priemer dutiny maximálne 3 mm poskytuje kolagénovú hubku zvlášť vhodnú pre pokrytie prípravkom fibrínového lepidla. Kolagénový gél má s výhodou hmotnosť sušiny v rozsahu 2 až 20 mg sušiny na 1 g gélu, ako je 5 až 13 mg, ako je 6 až 11 mg na 1 g gélu. Dynamická viskozita kolagénového gélu je s výhodou 2 až 20 N.cm, ako je 4 až 10 N.cm, ako je 6 až 8 N.cm. Kolagénová hubka má s výhodou taký obsah vody, ktorý nie je väčší než 20 %, ako je 10 až 15 %. ako je 18 %. Modul pružnosti kolagénovej hubky je s výhodou v rozsahu 5 až 100 N/cm, ako je 10 až 50 N/cm a hustota hubky je s výhodou 1 až 10 mg/cm³, ako je 2 až 7 mg/cm³.

Zistilo sa, že kolagénová hubka pripravená spôsobom tohto vynálezu je vzduchotesná v tom zmysle, že keď sa kolagénová hubka aplikuje na poranenie, tak nedovolí vzduchu alebo kvapaline preniknúť kolagénovou hubkou. Kvapaliny sa do hubky absorbujú. Tento efekt sa primárne dosiahne v dôsledku tej skutočnosti, že krok vmiešania vzduchu do kolagénového gélu poskytne kolagénovú hubku, ktorá má trojrozmernú štruktúru s nahromadenými oddelenými dutinami a v podstate úplne uzavretými stenami kolagénového materiálu, a to v protiklade so známymi kolagénovými hubkami, ktoré majú štruktúru vláknitú.

Kolagénový gél môže obsahovať materiál rôznych typov, ako je kolagén typu I, II alebo III z cicavčích, transgénnych alebo rekombinantných zdrojov, ale je možné použiť aj všetky ďalšie typy kolagénu. Kolagén môže obsahovať materiál zo šliach vybratých zo skupiny obsahujúcej konské šľachy, ľudské šľachy a hovädzie šľachy. Kolagénový gél môže ďalej alebo alternatívne obsahovať rekombinantný kolagénový materiál.

Obsah kolagénu v izolovaných častiach hubky je vo vzťahu k sušine hubky s výhodou 50 až 100 %, ako je 75 až 100 %, ako je 80 až 100 %, ako je 85 až 100 %. ako je 90 až 100 %, ako je 92 až 100 %, ako je 92 až 98 %, ako je 93 až 97 %, ako je 94 až 96 %.

Krok prípravy kolagénového gélu s výhodou obsahuje kroky skladovania šliach pri teplote -10 až -30 °C a zlúpnutie šliach, odstránenie cudzieho proteínu zo šliach, zníženie obsahu choroboplodných zárodkov v šľachách, napučanie šliach, homogenizáciu napučaných šliach.

Kroky skladovania, zlúpnutia, odstránenia proteínu, zníženie obsahu choroboplodných zárodkov a napučiavanie majú za cieľ prečistiť surový materiál, zatiaľčo krok homogenizácie má za cieľ získanie kolagénu vo forme gélu.

krok zníženia obsahu choroboplodných zárodkov s výhodou obsahuje pridanie kyseliny, ako je organická kyselina, ako je kyselina mliečna, k šľachám. K šľachám sa naviac s výhodou pridá organické rozpúšťadlo, ako je alkohol, ako je etanol. Krok napučania šliach ďalej s výhodou obsahuje pridanie kyseliny mliečnej ku šľachám. Použitá kyselina mliečna môže byť 0,40 až 0,50 % kyselina mliečna, ako je 0,45 % kyselina mliečna,

Krok napučania šliach môže obsahovať udržiavanie šliach pri teplote 4 až 25 °C, ako pri teplote 10 až 20 °C, po dobu 48 až 200 hodín, ako po dobu 100 až 200 hodín.

Krok homogenizácie napučaných šliach sa s výhodou uskutoční tak, aby sa získala veľkosť častice fragmentov kolagénového gélu, to jest guličiek vlákien, s priemerom 0,8 až 1,2 cm, ako je 1 cm. fyzikálne vlastnosti kolagénového gélu sú naviac s výhodou také, ako je uvedené vyššie. Vhodné vlastnosti sa môžu napríklad dosiahnuť uskutočnením kroku homogenizácie napučaných šliach prostredníctvom ozubeného kotúčového mlynčeka alebo zodpovedajúcim homogenizačným zariadením.

Krok vmiešania vzduchu do kolagénového gélu s výhodou obsahuje kroky vmiešania okolitého vzduchu do gél prostredníctvom mixéra tak. aby vznikla kolagénová pena, vedenie premiešanej kolagénovej peny do frakcionačného kanálika, oddelenie kolagénového gélu a kolagénovej peny vo fŕakcionačnom kanáliku.

Aspoň časť kolagénového gélu oddeleného od kolagénovej peny vo fŕakcionačnom kanáliku sa môže viesť späť do mixéra. V tomto prípade je pomer medzi množstvom kolagénového gélu, ktorý sa vedie späť do mixéra z frakcionačného kanálika a množstvom čerstvého kolagénového gélu vedeného do mixéra, s výhodou 0,1 až 0.5. Krok oddelenia kolagénového gélu a kolagénovej peny s výhodou zahŕňa kroky oddelenia vybranej časti kolagénovej peny obsiahnutej vo fŕakcionačnom kanáliku, vedenie vybranej časti kolagénovej peny von z frakcionačného kanálika k jej vysušeniu.

V zvýhodnenom uskutočnení tohto spôsobu sa udržiava vo fŕakcionačnom kanáliku teplota 15 až 40 °C, ako je 20 až 25 °C.

Po vmiešaní vzduchu do kolagénového gélu sa kolagénová pena môže po dobu 2 až 4 minút homogenizovať.

Pred krokom sušenia kolagénovej peny a po kroku vmiešania vzduchu do kolagénového gélu sa ku kolagénovej pene môže pridať neutralizačné činidlo, pričom kolagénová pena sa s výhodou neutralizuje preto, aby sa hodnota pH obyčajne 2,5 až 3,5, znížila na hodnotu pH kolagénovej peny 6,5 až 8,5. Je možné použiť neutralizačné činidlo obsahujúce roztok amoniaku, pričom kolagénová pena sa s výhodou neutralizuje po dobu 5 až 30 hodín, ako je 10 až 20 hodín, ako je 24 hodín.

Pred krokom sušenia kolagénovej peny sa kolagénová pena s výhodou naplní do sušiaceho kontajnera, a to takým spôsobom, že v priebehu plnenia sa do peny nedostane v podstate žiadny vzduch.

Krok sušenia s výhodou obsahuje sušenie pri teplote 15 až 60 °C, ako pri 20 až 40 C, po dobu 50 až 200 hodín, ako 100 až 150 hodín tak, aby sa získala vysušená kolagénová pena. Sušenie je možné uskutočniť pri mierne zníženom atmosférickom tlaku, ako pri tlaku 70 až 90 kPa (700 až 900 mbar), ako 80 kPa (800 mbar).

Kolagénová hubka vyrobená spôsobom podľa tohto vynálezu s výhodou spĺňa aspoň jedno z nasledujúcich kritérií:

hodnota pH 5,0 až 6,0, obsah kyseliny mliečnej maximálne 5 %, obsah amoniaku maximálne 0,5 %, obsah rozpusteného proteínu vypočítaného ako obsah albumínu maximálne 0,5 %, obsah síranového popola maximálne 1,0 %. obsah ťažkých kovov maximálne 20 ppm, mikrobiologická čistota s maximálne 10³ CFU/g, obsah kolagénu 75 až 100 %, hustota 1 až 10 mg/cm³, ako 2 až 7 mg/cm³, modul pružnosti 5 až 10 N/cm, ako 10 až 50 N/cm.

Krok oddelenia časti kolagénovej hubky môže obsahovať rozdelenie kolagénovej hubky na množstvo častí pomocou rozrezania. Získané časti je možné tvarovať do akejkoľvek požadovanej formy, ako je kónická, cylindrická, zhŕňajúc cylindrickú s prstencovým prierezom, obdĺžniková, polygonálna, kvádrová a ploché pásiky alebo sa môže vhodnou granulačnou metódou previesť na granulát, atď.

Z vyššie uvedeného textu je zrejmé, že kolagénovú hubku je možné pripraviť spôsobom obsahujúcim prípravu kolagénového gélu, vmiešanie vzduchu do kolagénového gélu tak, aby sa získala kolagénová pena, vysušenie kolagénovej peny tak, aby sa získal vysušený blok kolagénovej hubky s dutinami, oddelenie častí hubky z bloku kolagénovej hubky, ktoré majú nasledujúce vlastnosti: modul pružnosti v rozsahu 5 až 10 N/cm, hustotu v rozsahu 1 až 10 mg/cm³, priemer dutiny väčší než 0,75 mm a menší než 4 mm alebo stredný priemer dutiny maximálne 3 mm.

Claims

PATENTOVÉ NÁROKY

ΓΠ

1. Suspenzia fibrinogénu. trombínu a alkoholu vyznačujúca sa tým. že sa získa spôsobom obsahujúcim prípravu fibrinogénovej zmesi fibrinogénu a alkoholu, prípravu trombínovej zmesi trombínu a alkoholu, zmiešanie fibrinogénovej zmesi a trombínovej zmesi tak. že sa získa uxedená suspenzia, ktorá obsahuje fibrinogénové a trombinové častice so stredným priemerom častíc podľa Folka a Warda 25 až 100 pm.
2. Suspenzia podľa nároku 1. vyznačujúca sa tým. že obsahuje častice so stredným priemerom častíc podľa Folka a Warda 35 až 80 pm.

Suspenzia podľa nároku 1 alebo 2, vyznačujúca sa tým, že jej \iskozita je taká, že objem 90 až 120 ml suspenzie, na ktorú pôsobí len gravitácia, vytečie za 25 až 75 sekúnd otvorom v dne nádoby, ktorá ma cylindrickú časť s vnútorným priemerom 40 až 50 rám a výškou 55 až 65 mm a kónickú spodnú časť s výškou 17 až 23 mm, kde otvor v dne je na spodnom konci kónickej časti ako kruhový otvor s priemerom 2 až 3 mm.

4. Suspenzia podľa nároku 3, vyznačujúca sa tým, že jej objem 90 až 120 ml vytečie otvorom v dne za 30 až 50 sekúnd.

5. Suspenzia podľa ktoréhokoľvek z nárokov 1 až 4, vyznačujúca sa tým. že ďalej obsahuje aprotinín.

6. Spôsob prípravy suspenzie s fibrinogénom a trombínom vyznačujúci sa tým. že sa pripraví fibrinogénová zmes fibrinogénu a alkoholu, trombínová zmes trombínu a alkoholu, zmieša sa fibrinogénová zmes a trombínová zmes tak, že sa získa suspenzia tak. že táto suspenzia obsahuje fibrinogénové a trombinové častice so stredným priemerom častice so stredným priemerom podľa Folka a Warda 25 až 100 pm.

7. Spôsob podľa nároku 6, vyznačujúci sa tým, že pri príprave fibrinogénovej zmesi sa fibrinogén vopred upraví na mikrometrovú veľkosť častíc tak, že sa získajú častice so stredným priemerom podľa Folka a Warda 25 až 100 pm.

8. Spôsob podľa nároku 6 alebo 7. vyznačujúci sa tým. že fibrinogén s mikrometrovou veľkosťou častíc sa vmieša do alkoholu tak. že sa získa fibrinogénová zmes.

9. Spôsob podľa ktoréhokoľvek z nárokov 6 až 8. vyznačujúci sa tým. že zmes sa pri príprave homogenizuje.

10. Spôsob podľa nároku 9. vyznačuj úc i sa tým. že zmes sa zhomogenizuje pri teplote 0 až 12 °C.

11. Spôsob podľa nároku 10. vyznačujúci sa tým, že zmes sa zhomogenizuje pri teplote 2 až 8 °C.

12. Spôsob podľa nároku ll,vyznačujúci sa tým, že v priebehu homogenizácie sa zníži teplota

13. Spôsob podľa ktoréhokoľvek z nárokov 6 až 12, vyznačujúci sa tým. že sa použije najmenej jeden z druhov trombínu, ktorými je ľudský trombín, hovädzí trombín alebo rekombinantný trombín.

14. Spôsob podľa ktoréhokoľvek z nárokov 6 až 13, vyznačujúci sa tým, že sa použije najmenej jeden z druhov fibrinogénu, ktorými je ľudský fibrinogén alebo rekombinantný fibrinogén.

15. Spôsob podľa ktoréhokoľvek z nárokov 6 až 14, vyznačujúci sa tým, že sa použije suspenzia, ktorá ďalej obsahuje aprotinín.

16. Spôsob podľa ktoréhokoľvek z nárokov 6 až 15, vyznačujúci sa tým, že sa použije alkohol, ktorým je etanol.

17. Spôsob podľa nároku 16, vyznačujúci sa tým, že sa použije etanol, ktorým je bezvodý etanol.

18. Spôsob podľa ktoréhokoľvek z nárokov 6 až 17, vyznačujúci sa tým, že zmiešanie librinogénovej zmesi a trombínovej zmesi sa uskutoční za miešania suspenzie.

19. Spôsob podľa nároku 18, vyznačuj úci sa tým. že miešanie sa uskutoční pri teplote 0 až 12 °C.

20. Spôsob podľa nároku 19, vyznačujúci sa tým. že miešanie sa uskutoční pri teplote 2 až 8 °C.

21. Spôsob pokrytia nosiča suspenziou obsahujúcou fibrinogén a trombín, kde suspenzia sa získa z fibrinogénovej zmesi fibrinogénu a alkoholu, trombínovej zmesi trombínu a alkoholu, zmiešanie fibrinogénovej zmesi a trombínovej zmesi tak, že sa získa uvedená suspenzia obsahujúca fibrinogénové a trombínoxé častice so stredným priemerom častíc podľa Folka a Warda 25 až 100 μηι, vyznačujúci sa tým. že suspenzia fibrinogénu, trombínu a alkoholu sa pripraví v mieste blízkom nosiču a suspenzia sa nanesie na pokrývaný povrch nosiča.

22. Spôsob podľa nároku 21, vyznačujúci sa tým, že ako nosič sa použije kolagénový nosič.

23. Spôsob podľa nároku 22, vyznačujúci sa tým, že ako kolagénový nosič sa použije kolagénová hubka.

24. Spôsob podľa nároku 23, vyznačujúci sa tým, že sa použije kolagénová hubka, ktorá spĺňa najmenej jedno z nasledujúcich kritérií, ktorými je hodnota pH 5,0 až 6,0, obsah kyseliny mliečnej maximálne 5 %, obsah amoniaku maximálne 0,5 %, obsah rozpustného proteínu vypočítaného ako obsah albumínu maximálne 0,5 %, obsah síranového popola maximálne 1 %„ obsah ťažkých kovov maximálne 20 ppm, mikrobiologická čistota s maximálne 10³ CFU/g, obsah kolagénu 75 až 100 %, hustota 1 až 10 mg/cm³, modul pružnosti 5 až 10 N/cm.

25. Spôsob podľa nároku 23 alebo 24, vyznačujúci sa tým, že ako nosič sa použije kolagénová hubka, ktorá sa pripraví spôsobom obsahujúcim prípravu kolagénového gélu, vmiešanie vzduchu do kolagénového gélu tak. že sa získa kolagénová pena, vysušenie kolagénovej peny tak. že sa získa suchý blok nosiča obsahujúceho vo vnútri dutiny, oddelenie častí hubky z bloku kolagénovej hubky s priemerom dutiny väčším než 0,75 mm a menším než 4 mm alebo dutinami so stredným diagonálnym rozmerom 3 mm.

26. Spôsob podľa ktoréhokoľvek z nárokov 21 až 25. vyznačujúci sa tým. že nanesenie suspenzie na nosič sa uskutoční pri teplote okolia 0 až 12 °C.

27. Spôsob podľa nároku 26. vyznačujúci sa tým, že nanesenie suspenzie na nosič sa uskutoční pri teplote okolia 1 až 10 °C.

28. Spôsob podľa nároku 27, vyznačujúci sa tým, že nanesenie suspenzie na nosič sa uskutoční pri teplote okolia 2 až 8 °C.

29. Spôsob podľa ktoréhokoľvek z nárokov 21 až 28, vyznačujúci sa tým. že nanesenie suspenzie sa uskutoční v okolitej atmosfére s relatívnou vllikosťou 75 až 99 %.

30. Spôsob podľa nároku 29, vyznačujúci sa tým, že nanesenie suspenzie sa uskutoční v okolitej atmosfére s relatívnou vlhkosťou 85 až 95 %.

31. Spôsob podľa ktoréhokoľvek z nárokov 21 až 30, v y z n a č uj ú c i sa t ý m, že na nosič sa nanesie objem 0,08 až 0,12 ml suspenzie na cm² pokrývaného povrchu.

32. Spôsob podľa ktoréhokoľvek z nárokov 21 až 31, vyznačuj úci sa tým, že suspenzia sa distribuuje rovnomerne po danej šírke pokrývaného nosiča tak, že hmotnosť fibrinogénu na jednotku plochy pokrývaného povrchu sa líši maximálne o 25 %.
3. Spôsob podľa ktoréhokoľvek z nárokov 21 až 32, vyznačujúci sa tým, že pre nanesenie suspenzie na nosič sa použije aplikátor s najmenej jednou tryskou, kde suspenzia je vytláčaná tryskou, pričom nosič a tryská sa navzájom relatívne pohybujú.

34. Spôsob podľa ktoréhokoľvek z nárokov 21 až 32, vyznačujúci sa tým. že pre nanesenie suspenzie na nosič sa použije aplikátor obsahujúci nádobu s množstvom oddelených otvorom a kde suspenzia sa na nosič vytláča z nádoby cez otvory.

35. Spôsob podľa nároku 34, vyznačujúci sa tým, že nosič a aplikátor sa v priebehu nanášania suspenzie na nosič navzájom relatívne pohybujú v smere pohybu.

36. Spôsob podľa nároku 35, vyznačujúci sa tým, že sa použije rýchlosť pohybu 0,025 až 0.05 m,'s.

37. Spôsob podľa nároku 36, vyznačujúci sa tým. že sa použije rýchlosť pohybu 0,03 až 0,04 nťs.

38. Spôsob podľa ktoréhokoľvek z nárokov 34 až 37, vyznačujúci sa tým, že sa použije prietoková rýchlosť 400 až 600 ml/min suspenzie nanášanej aplikátorom na nosič.

39. Spôsob podľa nároku 38, vyznačujúci sa tým, že sa použije prietoková rýchlosť 470 až 550 ml/min.

40. Spôsob podľa nároku 39, vyznačujúci sa tým, že sa použije prietoková rýchlosť 495 až 505 ml/min.

41. Spôsob vysušenia suspenzie fibrinogénu, trombínu a alkoholu nanesenej ako mokrý poťah na pokrývaný povrch nosiča, a suspenzia obsahuje fibrinogénové a trombínové častice so stredným priemerom častíc podľa Folka a Warda 25 až 100 pm vyznačujúci sa tým, že pokrytý nosič sa vystaví tlaku pod 100 kPa tak, že sa získa vysušený pokrytý povrch nosiča tak, že sa vysušený poťah na pokrytom povrchu zakotví.

42. Spôsob podľa nároku 41, vyznačujúci sa tým, že suspenzia sa získa z fibrinogénovej zmesi fibrinogénu a alkoholu, trombínovej zmesi trombínu a alkoholu, zmiešaním fibrinogénovej zmesi a trombínovej zmesi tak, že sa získa táto suspenzia a nosičom je kolagénová hubka, ktorá sa získa spôsobom obsahujúcim prípravu kolagénového gélu, vmiešanie vzduchu do kolagénového gélu tak, že sa získa kolagénová pena. vysušenie kolagénovej peny tak, že sa získa suchý blok kolagénovej hubky obsahujúcej vo vnútri dutiny, oddelenie častí hubky z bloku kolagénovej hubky s priemerom dutiny väčším než 0,75 mm a menším než 4 mm alebo dutinami so stredným diagonálnym rozmerom 3 mm a kde sa na kolagénovú hubku nanesie poťah suspenzie fibrinogénu, trombínu a alkoholu pripravené na mieste v blízkosti kolagénovej hubky a nanesením suspenzie na pokrývaný povrch kolagénovej hubky.

43. Spôsob podľa nároku 41 alebo 42. vyznačujúci sa tým. že sa pokrytý nosič vystaví tlaku pod 100 kPa pri teplote 0 až 12 °C.

44. Spôsob podľa nároku 43, vyznačujúci sa tým, že sa pokrytý nosič vystaví tlaku pod 100 kPa pri teplote 1 až 10 °C.

45. Spôsob podľa nároku 43, vyznačujúci sa tým, že sa pokrytý nosič vystaví tlaku pod 100 kPa pri teplote 2 až 8 °C.

46. Spôsob podľa ktoréhokoľvek z nárokov 41 až 45, vyznačujúci sa tým. že sa pokrytý nosič vystaví tlaku 100 kPa pri relatívnej vlhkosti okolitej atmosféry 75 až 99 %.

47. Spôsob podľa ktoréhokoľvek z nárokov 41 až 46, vyznačujúci sa tým, že sa pokrytý nosič vystaví tlaku 100 kPa pri relatívnej vlhkosti okolitej atmosféry 85 až 95 %.

48. Spôsob podľa ktoréhokoľvek z nárokov 41 až 47, vyznačujúci sa tým, že v priebehu sušenia sa použije prúdenie vzduchu cez pokrytý nosič.

49. Spôsob podľa ktoréhokoľvek z nárokov 43 až 48, vyznačujúci sa tým, že pokrytý nosič sa udržiava pri uvedenej teplote po dobu najmenej 1 hodiny.

50. Spôsob podľa ktoréhokoľvek z nárokov 43 až 48, vyznačujúci sa tým, že pokrytý nosič sa udržiava pri uvedenej teplote po dobu najmenej 2 hodín.

51. Spôsob podľa ktoréhokoľvek z nárokov 43 až 48, vyznačujúci sa tým, že pokrytý nosič sa udržiava pri uvedenej teplote po dobu najmenej 4 hodín.

52. Spôsob podľa ktoréhokoľvek z nárokov 41 až 51, vyznačujúci sa tým, že plocha vysušeného pokrytého povrchu je najmenej 75 % z veľkosti plochy mokrého pokrytého povrchu.

53. Spôsob podľa ktoréhokoľvek znárokov 41 až 51. vyznačujúci sa tým. že plocha vysušeného pokrytého povrchu je najmenej 80 % z v eľkosti plochy mokrého pokrytého povrchu.

54. Spôsob podľa ktoréhokoľvek znárokov 41 až 53. vyznačujúci sa tým, že nosič a vysušený pokrytý povrch majú obsah vody neprevy šujúci 12 % hmôt.

55. Spôsob podľa ktoréhokoľvek znárokov' 41 až 53, vyznačujúci sa tým, že nosič a vysušený pokrytý povrch majú obsah vody neprevyšujúci 8 % hmôt.

56. Spôsob podľa ktoréhokoľvek z nárokov 41 až 55, vyznačujúci sa tým, že sa použije suspenzia ďalej obsahujúca aprotinín.

57. Pokrytý kolagénová hubka s poťahom fibrinogénu a trombínu, kde pokrytá kolagénová hubka sa získa prípravou kolagénového gélu, vmiešanie vzduchu do kolagénového gélu tak, že sa získa kolagénová pena. vysušením kolagénovej peny tak, že sa získa suchý blok kolagénovej hubky obsahujúcej vo vnútri dutiny, oddelenie častí hubky z bloku kolagénovej hubky s priemerom dutiny väčším než 0,75 mm a menším než 4 mm alebo dutinami so stredným diagonálnym rozmerom 3 mm, nanesením suspenzie fibrinogénu, trombínu a alkoholu na pokrývaný povrch kolagénovej hubky, pričom suspenzia obsahuje fibrinogénové a trombínové častice so stredným priemerom častíc podľa Folka a Warda 25 až 100 pm a vystavením pokrytého nosiča tlaku pod 100 kPa tak, že sa získa vysušený pokrytý povrch nosiča tak, že sa vysušený poťah na pokrytom povrchu zakotví, vyznačujúci sa tým, že pokrytá kolagénová hubka má najmenej jednu z nasledujúcich vlastností, a to rovnomernú distribúciu suspenzie po danej šírke pokrytého povrchu tak, že hmotnosť fibrinogénu na jednotku plochy pokrytého povrchu sa líši o maximálne 25 %, abrazia pokrytia je menšia než 2,0 mg/cm², keď sa vzorka pokrytého materiálu s rozmermi 1 cm x 5 cm 2 minúty trepe v testovanej skúmavke na trepačke Vibrofix pri frekvencii 800 až 1 200 otáčok za minútu.

58. Pokrytá kolagénová hubka podľa nároku 57, vyznačujúca sa tým, že k jej pokrytiu sa použije suspenzia s obsahom vody 20 až 80 mg/ml.

59. Pokrytá kolagénová hubka podľa nároku 57. v y z n a č uj ú c a sa t ý m, že k jej pokrytiu sa použije suspenzia s obsahom vody 24 až 32 mg/ml.

60. Pokrytá kolagénová hubka podľa ktoréhokoľvek z nárokov 57 až 58. vyznačujúca sa tým. že obsah trombínu v suspenzii pre pokrytie je 20 až 40 IU/ml.

61. Pokrytá kolagénová hubka podľa ktoréhokoľvek z nárokov 57 až 59. vyznačujúca sa tým, že obsah trombínu v suspenzii pre pokrytie je 24 až 33 IU/ml.

62. Pokrytá kolagénová hubka podľa ktoréhokoľvek z nárokov 57 až 61, vyznačujúca sa tým, že má v priemere obsah trombínu 2 až 4 IlJ/cm² pokrytého povrchu.

63. Pokrytá kolagénová hubka podľa ktoréhokoľvek z nárokov 57 až 61, vyznačujúca sa tým, že má v priemere obsah trombínu 2,3 až 3.3 IU/cm² pokrytého povrchu.

64. Pokrytá kolagénová hubka podľa ktoréhokoľvek z nárokov 57 až 63, vyznačujúca sa tým, že obsah trombínu na ktoromkoľvek mieste pokrytého povrchu nosiča neprekračuje 5 IU/cm².

65. Pokrytá kolagénová hubka podľa ktoréhokoľvek z nárokov 57 až 62, vyznačujúca sa tým, že obsah trombínu na ktoromkoľvek mieste pokrytého povrchu nosiča neprekračuje

3,8 IU/cm².

66. Pokrytá kolagénová hubka podľa ktoréhokoľvek z nárokov 57 až 65, vyznačujúca sa tým, že má mikroskopickú čistotu s maximálne 4 CFU/cm².

67. Pokrytá kolagénová hubka podľa ktoréhokoľvek z nárokov 57 až 65, vyznačujúca sa tým, že má mikroskopickú čistotu s maximálne 2,25 CFU/cm².

68. Použitie pokrytej kolagénovej hubky pre lepenie tkaniva, utesnenie tkaniva a zastavenie krvácania, kde kolagénová hubka má pokrytie s fibrinogénom a trombinom, kde sa pokrytá kolagénová hubka získa spôsobom obsahujúcim prípravu kolagénového gélu, vmiešanie vzduchu do kolagénového gélu tak, že sa získa kolagénová pena, vysušenie kolagénovej peny tak, že sa získa suchý blok kolagénovej hubky obsahujúcej vo vnútri dutiny, oddelenie častí hubky z bloku kolagénovej hubky s priemerom dutiny väčším než 0.75 mm a menším než 4 mm alebo dutinami so stredným diagonálnym rozmerom 3 mm. nanesenie suspenzie fibrinogénu. trombinu a alkoholu na pokrývaný povrch kolagénovej hubky, pričom suspenzia obsahuje fibrinogénové a trombínové častice so stredným priemerom častíc podľa Folka a Warda 25 až 100 pm a vystavenie pokrytého nosiča tlaku pod 100 kPa tak, že sa získa vysušený pokrytý^- povrch nosiča tak, že sa vysušený^- poťah na pokrytom povrchu zakotví, pričom pokrytá kolagénová hubka má najmenej jednu z nasledujúcich vlastností, a to rovnomernú distribúciu suspenzie po danej šírke pokrytého povrchu tak, že hmotnosť fibrinogénu na jednotku plochy pokrytého povrchu sa líši o maximálne 25 %, abrazia pokrytia je menšia než 2,0 mg/cm². keď sa vzorka pokrytého materiálu s rozmermi 1 cm x 5 cm 2 minúty trepe v testovanej skúmavke na trepačke Vibrofix pri frekvencii 800 až 1 200 otáčok za minútu.