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KR20230051189A - 피라졸로아제핀 면역접합체, 및 그의 용도 - Google Patents

피라졸로아제핀 면역접합체, 및 그의 용도 Download PDF

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Publication number
KR20230051189A
KR20230051189A KR1020237004880A KR20237004880A KR20230051189A KR 20230051189 A KR20230051189 A KR 20230051189A KR 1020237004880 A KR1020237004880 A KR 1020237004880A KR 20237004880 A KR20237004880 A KR 20237004880A KR 20230051189 A KR20230051189 A KR 20230051189A
Authority
KR
South Korea
Prior art keywords
alkyldiyl
peg
pep
immunoconjugate
amino
Prior art date
Application number
KR1020237004880A
Other languages
English (en)
Inventor
로마스 쿠디르카
브라이언 사피나
Original Assignee
볼트 바이오테라퓨틱스 인코퍼레이티드
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by 볼트 바이오테라퓨틱스 인코퍼레이티드 filed Critical 볼트 바이오테라퓨틱스 인코퍼레이티드
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Abstract

본 발명은 접합에 의해 하나 이상의 피라졸로아제핀 유도체에 연결된 항체를 포함하는 화학식 I의 면역접합체를 제공한다. 본 발명은 또한 반응성 작용기를 포함하는 피라졸로아제핀 유도체 중간체 조성물을 제공한다. 이러한 중간체 조성물은 링커 또는 연결 모이어티를 통한 면역접합체의 형성에 적합한 기질이다. 본 발명은 추가로 면역접합체로 암을 치료하는 방법을 제공한다.

Description

피라졸로아제핀 면역접합체, 및 그의 용도
관련 출원에 대한 상호 참조
본 정규 출원은 2020년 8월 13일에 출원된 미국 가출원 제63/065,219호에 대한 우선권의 이익을 주장하며, 이 출원은 전체 내용이 참조로 포함된다.
서열 목록
본 출원은 ASCII 서식으로 전자적으로 제출된 서열 목록을 포함하며, 이는 본 명세서에 전체적으로 참고로 포함된다. 2021년 8월 5일에 생성된 해당 ASCII 사본의 이름은 17019_009WO1_SL.txt이며 크기는 63,469바이트이다.
발명의 분야
본 발명은 일반적으로 하나 이상의 피라졸로아제핀 분자에 접합된 항체를 포함하는 면역접합체에 관한 것이다.
접근하기 어려운 종양에 도달하고/하거나 암 환자 및 기타 대상체를 위한 치료 옵션을 확장하기 위해서는 항체 및 면역 보조제의 전달을 위한 새로운 조성물 및 방법이 필요하다. 본 발명은 이러한 조성물 및 방법을 제공한다.
발명의 요약
본 발명은 일반적으로 하나 이상의 피라졸로아제핀 유도체에 접합에 의해 연결된 항체를 포함하는 면역접합체에 관한 것이다. 본 발명은 또한 반응성 작용기를 포함하는 피라졸로아제핀 유도체 중간체 조성물에 관한 것이다. 이러한 중간체 조성물은 항체가 하기 화학식을 갖는 피라졸로아제핀(PAZ) 모이어티에 링커 L에 의해 공유 결합될 수 있는 면역접합체의 형성에 적합한 기질이다.
Figure pct00001
여기서 R1, R2, R3 및 R4 중 하나는 L에 부착된다. X1, X2 및 X3 및 R1, R2, R3 및 R4 치환기는 본원에서 정의된다.
본 발명은 또한 질병, 특히 암의 치료에 있어서 이러한 면역접합체의 용도에 관한 것이다.
본 발명의 한 측면은 하나 이상의 피라졸로아제핀 모이어티에 공유적으로 부착된 링커에 공유적으로 부착된 항체를 포함하는 면역접합체이다.
본 발명의 또 다른 양태는 하기 화학식 IIa 및 IIb로부터 선택되는 5-아미노피라졸로아제핀-링커 화합물이다:
Figure pct00002
여기서 R1, R2, R3, 및 R4 중 하나는 L에 부착된다.
본 발명의 또 다른 측면은 하나 이상의 피라졸로아제핀 모이어티에 접합에 의해 연결된 항체를 포함하는 면역접합체의 치료적 유효량을 투여하는 단계를 포함하는 암을 치료하는 방법이다.
본 발명의 또 다른 측면은 암 치료를 위한, 하나 이상의 피라졸로아제핀 모이어티에 접합에 의해 연결된 항체를 포함하는 면역접합체의 용도이다.
본 발명의 또 다른 측면은 하나 이상의 피라졸로아제핀 모이어티를 항체와 접합시켜 면역접합체를 제조하는 방법이다.
도 1은 비교기 보조제 화합물 C-1 및 C-2에 대한 피라졸로아제핀 화합물 PAZ-2, PAZ-4 및 PAZ-11의 24시간에서의 HEK 인간 TLR7 활성의 그래프를 보여준다.
도 2는 비교기 보조제 화합물 C-1 및 C-2에 대한 피라졸로아제핀 화합물 PAZ-2, PAZ-4 및 PAZ-11의 24시간에서의 HEK 인간 TLR8 활성의 그래프를 보여준다.
이제 본 발명의 특정 구현예를 상세히 참조할 것이며, 그 예는 첨부된 구조 및 화학식에 예시되어 있다. 본 발명은 열거된 구현예와 관련하여 설명될 것이지만, 그것들은 본 발명을 그러한 구현예로 제한하도록 의도된 것이 아님이 이해될 것이다. 반대로, 본 발명은 청구범위에 의해 정의된 본 발명의 범위 내에 포함될 수 있는 모든 대안, 수정 및 등가물을 포함하도록 의도된다.
당업자는 본 발명의 실시에 사용될 수 있는 본 명세서에 기재된 것과 유사하거나 등가인 많은 방법 및 재료를 인식할 것이다. 본 발명은 기술된 방법 및 재료에 제한되는 것은 아니다.
정의
용어 "면역접합체"는 링커를 통해 보조제 모이어티에 공유 결합된 항체 작제물을 지칭한다. 용어 "보조제"는 보조제에 노출된 대상체에서 면역 반응을 유발할 수 있는 물질을 지칭한다. "보조제 모이어티"라는 어구는 본원에 기재된 바와 같이, 예를 들어, 링커를 통해 항체 작제물에 공유 결합된 보조제를 지칭한다. 보조제 모이어티는 항체 작제물에 결합되어 있는 동안, 또는 대상체에게 면역접합체를 투여한 후 항체 작제물로부터 절단 (예를 들어, 효소적 절단)된 후에 면역 반응을 유발할 수 있다. 면역접합체는 표적 항원이 결합되어 있는 동안 활성 보조제 부분의 표적 전달을 가능하게 한다.
"보조제"는 보조제에 노출된 대상체에서 면역 반응을 유발할 수 있는 물질을 지칭한다. "보조제 모이어티"라는 어구는 본원에 기재된 바와 같이, 예를 들어, 링커를 통해 항체 작제물에 공유 결합된 보조제를 지칭한다. 보조제 모이어티는 항체 작제물에 결합되어 있는 동안, 또는 대상체에게 면역접합체를 투여한 후 항체 작제물로부터 절단 (예를 들어, 효소적 절단)된 후에 면역 반응을 유발할 수 있다.
"톨-유사 수용체" 및 "TLR"이라는 용어는 병원체 관련 분자 패턴을 인식하고 선천 면역의 핵심 신호 요소로 작용하는 고도로 보존된 포유동물 단백질 패밀리의 임의의 구성원을 지칭한다. TLR 폴리펩타이드는 류신이 풍부한 반복을 갖는 세포외 도메인, 막횡단 도메인, 및 TLR 신호전달에 관여하는 세포내 도메인을 포함하는 특징적인 구조를 공유한다.
용어 "톨-유사 수용체 7" 및 "TLR7"은 공개적으로 이용가능한 TLR7 서열, 예를 들어, 인간 TLR7 폴리펩타이드의 경우 GenBank 수탁 번호 AAZ99026, 또는 뮤린 TLR7 폴리펩타이드의 경우 GenBank 수탁 번호 AAK62676에 대해 적어도 약 70%, 약 80%, 약 90%, 약 95%, 약 96%, 약 97%, 약 98%, 약 99%, 또는 그 이상의 서열 동일성을 공유하는 핵산 또는 폴리펩타이드를 지칭한다.
용어 "톨-유사 수용체 8" 및 "TLR8"은 공개적으로 이용가능한 TLR7 서열, 예를 들어, 인간 TLR8 폴리펩타이드의 경우 GenBank 등록 번호 AAZ95441, 또는 뮤린 TLR8 폴리펩타이드의 경우 GenBank 등록 번호 AAK62677에 대해 적어도 약 70%, 약 80%, 약 90%, 약 95%, 약 96%, 약 97%, 약 98%, 약 99%, 또는 그 이상의 서열 동일성을 공유하는 핵산 또는 폴리펩타이드를 지칭한다.
"TLR 작용제"는 TLR 신호전달을 유도하기 위해 TLR (예를 들어, TLR7 및/또는 TLR8)에 직접 또는 간접적으로 결합하는 물질이다. TLR 신호 전달에서 감지 가능한 차이는 작용제가 TLR을 자극하거나 활성화한다는 것을 나타낼 수 있다. 신호 차이는 예를 들어, 표적 유전자의 발현, 신호 전달 성분의 인산화, 핵 인자-κB (NF-κB)와 같은 하류 요소의 세포내 국소화, 특정 구성요소 (예컨대, IL-1 수용체 관련 키나제 (IRAK))와 다른 단백질 또는 세포내 구조의 회합, 또는 키나제 (예컨대, 미토겐 활성화 단백질 키나제 (MAPK))와 같은 구성요소의 생화학적 활성에서의 변화로 나타날 수 있다.
"항체"는 면역글로불린 유전자 또는 이의 단편으로부터의 항원 결합 영역 (상보성 결정 영역 (CDR) 포함)을 포함하는 폴리펩타이드를 지칭한다. 용어 "항체"는 구체적으로, 원하는 생물학적 활성을 나타내는 단일클론 항체 (전장 단일클론 항체 포함), 다중클론 항체, 다중특이적 항체 (예컨대, 이중특이적 항체), 및 항체 단편을 포함한다. 예시적인 면역글로불린 (항체) 구조 단위는 사량체를 포함한다. 각각의 사량체는 이황화 결합에 의해 연결된 하나의 "경쇄" (약 25 kDa)와 하나의 "중쇄" (약 50 내지 70 kDa)를 갖는 두 개의 동일한 폴리펩타이드 사슬쌍으로 구성된다. 각 사슬은 면역글로불린 도메인이라고 하는 구조적 도메인으로 구성된다. 이들 도메인은 크기 및 기능에 따라 다양한 범주, 예를 들어, 경쇄 및 중쇄 상의 가변 도메인 또는 영역 (각각 VL 및 VH) 및 경쇄 및 중쇄 상의 불변 도메인 또는 영역 (각각 CL 및 CH)으로 분류된다. 각 사슬의 N 말단은 주로 항원 인식, 즉 항원 결합 도메인을 담당하는 파라토프(paratope)라고 하는 약 100 내지 110개 이상의 아미노산의 가변 영역을 정의한다. 경쇄는 카파 또는 람다로 분류된다. 중쇄는 감마, 뮤, 알파, 델타, 또는 엡실론으로 분류되며, 이는 차례로 면역글로불린 클래스인 IgG, IgM, IgA, IgD 및 IgE를 각각 정의한다. IgG 항체는 4개의 펩타이드 사슬로 구성된 약 150 kDa의 큰 분자이다. IgG 항체는 약 50 kDa의 동일한 클래스 γ 중쇄 2개와 약 25 kDa의 동일한 경쇄 2개를 함유하므로 사량체 4차 구조이다. 2개의 중쇄는 서로 연결되어 있고, 또한 각각 이황화 결합에 의해 경쇄에 연결되어 있다. 생성된 사량체는 2개의 동일한 반쪽을 가지며 함께 Y형 모양을 형성한다. 포크의 각 끝은 동일한 항원 결합 도메인을 함유한다. 인간에는 4개의 IgG 서브클래스 (IgG1, IgG2, IgG3 및 IgG4)가 있으며, 혈청 내 존재도 순으로 명명된다 (즉, IgG1이 가장 풍부함). 전형적으로, 항체의 항원 결합 도메인은 암 세포에 대한 결합의 특이성 및 친화도에서 가장 중요할 것이다.
특정 항원을 표적으로 하는 항체는 특정 항원을 표적으로 하는 적어도 하나의 항원 결합 영역을 갖는 이중특이적 또는 다중특이적 항체를 포함한다. 일부 구현예에서, 표적화된 단클론성 항체는 종양 세포를 표적으로 하는 적어도 하나의 항원 결합 영역을 갖는 이중특이적 항체이다. 이러한 항원은 하기를 포함하지만 이에 제한되지 않는다: 메소텔린, 전립선 특이적 멤브레인 항원 (PSMA), HER2, TROP2, CEA, EGFR, 5T4, Nectin4, CD19, CD20, CD22, CD30, CD70, B7H3, B7H4 (또한 08E로 알려져 있음), 단백질 티로신 키나제 7 (PTK7), 글리피칸-3, RG1, 푸코실-GMl, CTLA-4, 및 CD44 (WO 2017/196598).
"항체 작제물"은 (i) 항원 결합 도메인 및 (ii) Fc 도메인을 포함하는 항체 또는 융합 단백질을 지칭한다.
일부 구현예에서, 결합제는 단독으로 또는 함께 항원-결합 작제물을 구성하는 다른 성분과 함께 항체의 적어도 항원-결합 영역을 포함하는 작제물인 항원-결합 항체 "단편"이다. 예를 들어, (i) VL, VH, CL 및 CH1 도메인으로 구성된 1가 단편인 Fab 단편, (ii) 힌지 영역에서 이황화 가교에 의해 연결된 2개의 Fab 단편을 포함하는 2가 단편인 F(ab')2 단편, (iii) 항체의 단일 암의 VL 및 VH 도메인으로 구성된 Fv 단편, (iv) 온화한 환원 조건을 사용하여 F(ab')2 단편의 이황화 가교를 파괴함으로써 생성되는 Fab' 단편, (v) 이황화 안정화된 Fv 단편 (dsFv), 및 (vi) 2개의 도메인이 단일 폴리펩타이드 사슬로 합성될 수 있도록 하는 합성 링커에 의해 연결된 Fv 단편의 2개 도메인 (즉, VL 및 VH)으로 구성된 1가 분자인 단일 사슬 Fv (scFv)를 포함하여 많은 상이한 유형의 항체 "단편"이 당업계에 공지되어 있다.
항체 또는 항체 단편은 더 큰 작제물, 예를 들어, 항체 단편의 추가 영역에 대한 접합체 또는 융합 작제물의 일부일 수 있다. 예를 들어, 일부 구현예에서, 항체 단편은 본원에 기재된 바와 같이 Fc 영역에 융합될 수 있다. 다른 구현예에서, 항체 단편 (예를 들어, Fab 또는 scFv)은 예를 들어, 막횡단 도메인 (선택적으로 개재 링커 또는 "줄기" (예를 들어, 힌지 영역)와 함께) 및 선택적 세포간 신호전달 도메인에 융합함으로써 키메라 항원 수용체 또는 키메라 T-세포 수용체의 일부가 될 수 있다. 예를 들어, 항체 단편은 PD-L1에 결합하는 T-세포 수용체 유사 작제물을 제공하기 위해 t-세포 수용체의 감마 및/또는 델타 사슬에 융합될 수 있다. 또 다른 구현예에서, 항체 단편은 CD1 또는 CD3 결합 도메인 및 링커를 포함하는 이중특이적 T-세포 인게이저 (BiTE)의 일부이다.
"에피토프"는 항원 결합 도메인이 결합하는 (즉, 항원 결합 도메인의 파라토프에서) 항원의 임의의 항원 결정자 또는 에피토프 결정자를 의미한다. 항원 결정자는 일반적으로 아미노산 또는 당 측쇄와 같은 분자의 화학적 활성 표면 그룹들로 구성되며 일반적으로 특정 3차원 구조적 특성과 특정 전하 특성을 가지고 있다.
용어 "Fc 수용체" 또는 "FcR"은 항체의 Fc 영역에 결합하는 수용체를 지칭한다. Fc 수용체에는 (1) IgG에 결합하는 FcγR, (2) IgA에 결합하는 FcαR, (3) IgE에 결합하는 FcεR의 3가지 주요 부류가 있다. FcγR 패밀리에는 FcγI (CD64), FcγRIIA (CD32A), FcγRIIB (CD32B), FcγRIIIA (CD16A) 및 FcγRIIIB (CD16B)와 같은 여러 구성원이 포함된다. Fcγ 수용체는 IgG에 대한 친화도가 다르며 또한 IgG 서브클래스 (예를 들어, IgG1, IgG2, IgG3 및 IgG4)에 대한 친화도도 다르다.
본원에서 언급된 바와 같은 핵산 또는 아미노산 서열 "동일성"은 관심 핵산 또는 아미노산 서열을 참조 핵산 또는 아미노산 서열과 비교함으로써 결정될 수 있다. 동일성 퍼센트는 최적으로 정렬된 관심 서열과 참조 서열 사이에 똑같은 (즉, 동일한) 뉴클레오티드 또는 아미노산 잔기의 수를 가장 긴 서열의 길이 (즉, 관심 서열 또는 참조 서열 중 더 긴 것의 길이)로 나눈 것이다. 사용 가능한 소프트웨어 프로그램을 사용하여 서열 정렬 및 동일성 퍼센트 계산을 수행할 수 있다. 이러한 프로그램의 예로는 CLUSTAL-W, T-Coffee 및 ALIGN (핵산 및 아미노산 서열의 정렬용), BLAST 프로그램 (예를 들어, BLAST 2.1, BL2SEQ, BLASTp, BLASTn 등) 및 FASTA 프로그램 (예를 들어, FASTA3x, FASTM 및 SSEARCH) (서열 정렬 및 서열 유사성 검색용)이 있다. 서열 정렬 알고리즘은 또한 예를 들어, Altschul 등, J. Molecular Biol., 215(3): 403-410 (1990), Beigert 등, Proc. Natl. Acad. Sci. USA, 106(10): 3770-3775 (2009), Durbin 등, eds., Biological Sequence Analysis: Probalistic Models of Proteins and Nucleic Acids, Cambridge University Press, Cambridge, UK (2009), Soding, Bioinformatics, 21(7): 951-960 (2005), Altschul 등, Nucleic Acids Res., 25(17): 3389-3402 (1997), 및 Gusfield, Algorithms on Strings, Trees and Sequences, Cambridge University Press, Cambridge UK (1997))에 기재되어 있다. 서열의 동일성 퍼센트(%)는 또한 예를 들어, 100 x [(동일한 위치)/min(TGA, TGB)]로 계산할 수 있고, 여기서 TGA 및 TGB는 TGA와 TGB를 최소화하는 정렬에서 펩타이드 서열 A와 B에서 잔기 수와 내부 갭 위치의 합이다. 예를 들어, Russell 등, J. Mol Biol., 244: 332-350 (1994) 참조.
결합제는 항원 결합 부위를 함께 형성하는 Ig 중쇄 및 경쇄 가변 영역 폴리펩타이드를 포함한다. 중쇄 및 경쇄 가변 영역 각각은 프레임워크 영역에 의해 연결된 3개의 상보성 결정 영역 (CDR1, CDR2 및 CDR3)을 포함하는 폴리펩타이드이다. 결합제는 Ig 중쇄 및 경쇄를 포함하는 당업계에 공지된 다양한 유형의 결합제 중 임의의 것일 수 있다. 예를 들어, 결합제는 항체, 항원-결합 항체 "단편", 또는 T-세포 수용체일 수 있다.
"바이오시밀러"는 예를 들어, 아테졸리주맙 (TECENTRIQTM, Genentech, Inc.), 더발루맙 (IMFINZITM, AstraZeneca), 및 아벨루맙 (BAVENCIOTM, EMD Serono, Pfizer)과 같이 이전에 승인된 PD-L1-표적화 항체 작제물; 트라스투주맙 (HERCEPTINTM, Genentech, Inc.) 및 퍼투주맙 (PERJETATM, Genentech, Inc.)과 같이 이전에 승인된 HER2-표적화 항체 작제물; 또는 라베투주맙 (CEA-CIDETM, MN-14, hMN14, Immunomedics) CAS 등록 번호 219649-07-7)과 같은 CEA 표적화 항체에 유사한 활성 성질을 갖는 승인된 항체 작제물을 지칭한다.
"바이오베터(Biobetter)"는 아테졸리주맙, 더발루맙, 아벨루맙, 트라스투주맙, 퍼투주맙, 및 라베투주맙과 같이 이전에 승인된 항체 작제물의 개선체인, 승인된 항체 작제물을 지칭한다. 바이오베터는 이전에 승인된 항체 작제물에 대해 하나 이상의 변형 (예를 들어, 변경된 글리칸 프로필 또는 고유한 에피토프)을 가질 수 있다.
"아미노산"은 펩타이드, 폴리펩타이드 또는 단백질에 포함될 수 있는 임의의 단량체 단위를 의미한다. 아미노산에는 천연 발생 α-아미노산 및 이들의 입체 이성질체, 뿐만 아니라 비천연 (비천연 발생) 아미노산 및 이들의 입체 이성질체가 포함된다. 주어진 아미노산의 "입체 이성질체"는 동일한 분자식 및 분자내 결합을 갖지만 결합 및 원자의 3차원 배열이 상이한 이성질체 (예를 들어, L-아미노산 및 상응하는 D-아미노산)를 지칭한다. 아미노산은 글리코실화 (예를 들어, N-연결 글리칸, O-연결 글리칸, 포스포글리칸, C-연결 글리칸, 또는 글리피케이션) 또는 탈글리코실화될 수 있다. 아미노산은 일반적으로 알려진 세 글자 기호 또는 IUPAC-IUB 생화학 명명 위원회에서 권장하는 한 글자 기호로 본 명세서에서 언급될 수 있다.
천연 발생 아미노산은 유전 코드에 의해 암호화된 아미노산과 나중에 변형되는 아미노산, 예를 들어, 하이드록시프롤린, γ-카르복시글루타메이트 및 O-포스포세린이다. 천연 발생 α-아미노산은 알라닌 (Ala), 시스테인 (Cys), 아스파르트산 (Asp), 글루탐산 (Glu), 페닐알라닌 (Phe), 글리신 (Gly), 히스티딘 (His), 이소류신 (Ile), 아르기닌 (Arg), 라이신 (Lys), 류신 (Leu), 메티오닌 (Met), 아스파라긴 (Asn), 프롤린 (Pro), 글루타민 (Gln), 세린 (Ser), 트레오닌 (Thr), 발린 (Val), 트립토판 (Trp), 티로신 (Tyr), 및 이들의 조합을 포함하지만 이에 제한되지 않는다. 천연 발생 α-아미노산의 입체 이성질체는 D-알라닌 (D-Ala), D-시스테인 (D-Cys), D-아스파라긴산 (D-Asp), D-글루탐산 (D-Glu), D-페닐알라닌 (D-Phe), D-히스티딘 (D-His), D-이소류신 (D-Ile), D-아르기닌 (D-Arg), D-라이신 (D-Lys), D-류신 (D-Leu), D-메티오닌 (D-Met), D-아스파라긴 (D-Asn), D-프롤린 (D-Pro), D-글루타민 (D-Gln), D-세린 (D-Ser), D-트레오닌 (D-Thr), D-발린 (D-Val), D-트립토판 (D-Trp), D-티로신 (D-Tyr), 및 이들의 조합을 포함하나 이에 제한되지 않는다.
천연 발생 아미노산에는 시트룰린 (Cit)과 같은 번역 후 변형에 의해 단백질에서 형성된 것들이 포함된다.
비천연 (비-천연 발생) 아미노산은 천연 발생 아미노산과 유사한 방식으로 기능하는 L- 또는 D-배치 중 하나의 아미노산 유사체, 아미노산 모방체, 합성 아미노산, N-치환된 글리신, 및 N-메틸 아미노산을 포함하나 이에 제한되지는 않는다. 예를 들어, "아미노산 유사체"는 천연 발생 아미노산 (즉, 수소에 결합된 탄소, 카르복실기, 아미노기)과 동일한 기본 화학 구조를 갖지만 변형된 측쇄기 또는 변형된 펩타이드 골격을 갖는 비천연 아미노산, 예를 들어, 호모세린, 노르류신, 메티오닌 설폭사이드 및 메티오닌 메틸 설포늄일 수 있다. "아미노산 모방체"는 아미노산의 일반적인 화학 구조와 다른 구조를 갖지만 천연 발생 아미노산과 유사한 방식으로 기능하는 화합물을 지칭한다.
"링커"는 화합물 또는 물질에서 2개 이상의 모이어티를 공유 결합하는 작용기를 지칭한다. 예를 들어, 연결 모이어티는 면역접합체에서 항체 작제물에 보조제 모이어티를 공유 결합하는 역할을 할 수 있다.
"연결 모이어티"는 화합물 또는 물질에서 2개 이상의 모이어티를 공유 결합하는 작용기를 지칭한다. 예를 들어, 연결 모이어티는 면역접합체에서 항체에 보조제 모이어티를 공유 결합하는 역할을 할 수 있다. 연결 모이어티를 단백질 및 기타 물질에 연결하는 데 유용한 결합은 아미드, 아민, 에스테르, 카르바메이트, 우레아, 티오에테르, 티오카르바메이트, 티오카르보네이트, 및 티오우레아를 포함하지만 이에 제한되지는 않는다.
"2가"는 2개의 작용기를 연결하기 위한 2개의 부착점을 함유하는 화학적 모이어티를 지칭하고; 다가 연결 모이어티는 추가 작용기를 연결하기 위한 추가 부착점을 가질 수 있다. 2가 라디칼은 접미사 "디일"로 표시될 수 있다. 예를 들어, 2가 연결 모이어티는 2가 폴리(에틸렌 글리콜), 2가 사이클로알킬, 2가 헤테로사이클로알킬, 2가 아릴 및 2가 헤테로아릴기와 같은 2가 폴리머 모이어티를 포함한다. "2가 사이클로알킬, 헤테로사이클로알킬, 아릴, 또는 헤테로아릴 기"는 분자 또는 물질에서 2개의 모이어티를 공유 연결하기 위한 2개의 부착점을 갖는 사이클로알킬, 헤테로사이클로알킬, 아릴, 또는 헤테로아릴 기를 지칭한다. 사이클로알킬, 헤테로사이클로알킬, 아릴, 또는 헤테로아릴 기는 치환되거나 비치환될 수 있다. 사이클로알킬, 헤테로사이클로알킬, 아릴, 또는 헤테로아릴 기는 할로, 하이드록시, 아미노, 알킬아미노, 아미도, 아실, 니트로, 시아노 및 알콕시로부터 선택된 하나 이상의 기로 치환될 수 있다.
물결선 ("
Figure pct00003
")은 특정 화학 모이어티의 부착점을 나타낸다. 특정 화학 모이어티에 2개의 물결선 ("
Figure pct00004
")이 존재하는 경우, 화학 모이어티는 양방향으로, 즉 왼쪽에서 오른쪽으로 또는 오른쪽에서 왼쪽으로 읽을 때 사용될 수 있음을 이해해야 한다. 일부 구현예에서, 2개의 물결선 ("
Figure pct00005
")이 존재하는 특정 모이어티는 왼쪽에서 오른쪽으로 읽을 때 사용되는 것으로 간주된다.
"알킬"은 표시된 탄소 원자 수를 갖는 직쇄(선형) 또는 분지형 포화 지방족 라디칼을 지칭한다. 알킬은 예를 들어 1에서 12까지의 임의의 수의 탄소를 포함할 수 있습니다. 알킬 기의 예는 메틸 (Me, -CH3), 에틸 (Et, -CH2CH3), 1-프로필 (n-Pr, n-프로필, -CH2CH2CH3), 2-프로필 (i-Pr, i-프로필, -CH(CH3)2), 1-부틸 (n-Bu, n-부틸, -CH2CH2CH2CH3), 2-메틸-1-프로필 (i-Bu, i-부틸, -CH2CH(CH3)2), 2-부틸 (s-Bu, s-부틸, -CH(CH3)CH2CH3), 2-메틸-2-프로필 (t-Bu, t-부틸, -C(CH3)3), 1-펜틸 (n-펜틸, -CH2CH2CH2CH2CH3), 2-펜틸 (-CH(CH3)CH2CH2CH3), 3-펜틸 (-CH(CH2CH3)2), 2-메틸-2-부틸 (-C(CH3)2CH2CH3), 3-메틸-2-부틸 (-CH(CH3)CH(CH3)2), 3-메틸-1-부틸 (-CH2CH2CH(CH3)2), 2-메틸-1-부틸 (-CH2CH(CH3)CH2CH3), 1-헥실 (-CH2CH2CH2CH2CH2CH3), 2-헥실 (-CH(CH3)CH2CH2CH2CH3), 3-헥실 (-CH(CH2CH3)(CH2CH2CH3)), 2-메틸-2-펜틸 (-C(CH3)2CH2CH2CH3), 3-메틸-2-펜틸 (-CH(CH3)CH(CH3)CH2CH3), 4-메틸-2-펜틸 (-CH(CH3)CH2CH(CH3)2), 3-메틸-3-펜틸 (-C(CH3)(CH2CH3)2), 2-메틸-3-펜틸 (-CH(CH2CH3)CH(CH3)2), 2,3-디메틸-2-부틸 (-C(CH3)2CH(CH3)2), 3,3-디메틸-2-부틸 (-CH(CH3)C(CH3)3, 1-헵틸, 1-옥틸, 등을 포함하지만 이에 제한되지 않는다. 알킬 기는 치환 또는 비치환될 수 있다. "치환된 알킬" 기는 할로, 하이드록시, 아미노, 옥소(=O), 알킬아미노, 아미도, 아실, 니트로, 시아노, 및 알콕시로부터 선택된 하나 이상의 기로 치환될 수 있다.
용어 "알킬디일"은 2가 알킬 라디칼을 지칭한다. 알킬디일 기의 예는 메틸렌 (-CH2-), 에틸렌 (-CH2CH2-), 프로필렌 (-CH2CH2CH2-), 등을 포함하지만 이에 제한되지 않는다. 알킬디일 기는 또한 "알킬렌" 기로 지칭될 수 있다.
"알케닐"은 표시된 탄소 원자 수 및 적어도 하나의 탄소-탄소 이중 결합, sp2를 갖는 직쇄(선형) 또는 분지형, 불포화 지방족 라디칼을 지칭한다. 알케닐은 2개 내지 약 12개 이상의 탄소 원자를 포함할 수 있다. 알케닐 기는 "시스" 및 "트랜스" 배향, 또는 대안적으로 "E" 및 "Z" 배향을 갖는 라디칼이다. 그 예는 에틸레닐 또는 비닐 (-CH=CH2), 알릴 (-CH2CH=CH2), 부테닐, 펜테닐, 및 그의 이성질체를 포함하지만 이에 제한되지 않는다. 알케닐 기는 치환되거나 비치환될 수 있다. "치환된 알케닐" 기는 할로, 하이드록시, 아미노, 옥소 (=O), 알킬아미노, 아미도, 아실, 니트로, 시아노, 및 알콕시로부터 선택된 하나 이상의 기로 치환될 수 있다.
용어들 "알케닐렌" 또는 "알케닐디일"은 선형 또는 분지쇄 2가 탄화수소 라디칼을 지칭한다. 그 예는 에틸레닐렌 또는 비닐렌 (-CH=CH-), 알릴 (-CH2CH=CH-), 등을 포함하지만 이에 제한되지 않는다.
"알키닐"은 표시된 탄소 원자 수 및 적어도 하나의 탄소-탄소 삼중 결합 sp를 갖는 직쇄(선형) 또는 분지형, 불포화 지방족 라디칼을 지칭한다. 알키닐은 2개 내지 약 12개 이상의 탄소 원자를 포함할 수 있다. 예를 들어, C2-C6 알키닐은 에티닐 (-C≡CH), 프로피닐 (프로파르길, -CH2C≡CH), 부티닐, 펜티닐, 헥시닐, 및 그의 이성질체를 포함하지만 이에 제한되지 않는다. 알키닐 기는 치환되거나 비치환될 수 있다. "치환된 알키닐" 기는 할로, 하이드록시, 아미노, 옥소 (=O), 알킬아미노, 아미도, 아실, 니트로, 시아노, 및 알콕시로부터 선택된 하나 이상의 기로 치환될 수 있다.
용어 "알키닐렌" 또는 "알키닐디일"은 2가 알키닐 라디칼을 지칭한다.
용어들 "카보사이클", "카보사이클릴", "카보사이클릭 고리" 및 "사이클로알킬"은 3 내지 12개의 고리 원자, 또는 표시된 원자의 수를 함유하는 포화 또는 부분 불포화, 모노사이클릭, 융합된 바이사이클릭, 또는 가교된 폴리사이클릭 고리 어셈블리를 지칭한다. 포화 모노사이클릭 카르보사이클릭 고리는 예를 들어, 사이클로프로필, 사이클로부틸, 사이클로펜틸, 사이클로헥실, 및 사이클로옥틸을 포함한다. 포화 바이사이클릭 및 폴리사이클릭 카르보사이클릭 고리는 예를 들어, 노르보르난, [2.2.2]바이사이클로옥탄, 데카하이드로나프탈렌 및 아다만탄을 포함한다. 카르보사이클릭기는 또한 고리에 하나 이상의 이중 또는 삼중 결합을 갖고 부분적으로 불포화될 수 있다. 부분적으로 불포화된 대표적인 카르보사이클릭기는 사이클로부텐, 사이클로펜텐, 사이클로헥센, 사이클로헥사디엔 (1,3- 및 1,4-이성질체), 사이클로헵텐, 사이클로헵타디엔, 사이클로옥텐, 사이클로옥타디엔 (1,3-, 1,4- 및 1,5-이성질체), 노르보르넨 및 노르보르나디엔을 포함하지만 이들로 제한되는 것은 아니다.
용어 "사이클로알킬디일"은 2가 사이클로알킬 라디칼을 지칭한다.
"아릴"은 고리 시스템의 단일 탄소 원자로부터 하나의 수소 원자를 제거하여 유도된 6 내지 20개의 탄소 원자 (C6-C20)의 1가 방향족 탄화수소 라디칼을 지칭한다. 아릴기는 모노사이클릭이거나, 융합되어 바이사이클릭 또는 트리사이클릭 기를 형성하거나 결합에 의해 연결되어 바이아릴 기를 형성할 수 있다. 대표적인 아릴기는 페닐, 나프틸 및 바이페닐을 포함한다. 다른 아릴기는 메틸렌 연결 기를 갖는 벤질을 포함한다. 일부 아릴기는 페닐, 나프틸 또는 바이페닐과 같이 6 내지 12개의 고리 구성원을 갖는다. 다른 아릴기는 페닐 또는 나프틸과 같이 6 내지 10개의 고리 구성원을 갖는다.
용어들 "아릴렌" 또는 "아릴디일"은 방향족 고리 시스템의 2개의 탄소 원자로부터 2개의 수소 원자를 제거함으로써 유도된 6 내지 20개의 탄소 원자 (C6-C20)의 2가 방향족 탄화수소 라디칼을 의미한다. 일부 아릴디일 기는 예시적인 구조에서 "Ar"로 표시된다. 아릴디일은 포화된, 부분적으로 불포화된 고리, 또는 방향족 카보사이클릭 고리에 융합된 방향족 고리를 포함하는 바이사이클릭 라디칼을 포함한다. 전형적인 아릴디일 기는 벤젠 (페닐디일), 치환된 벤젠, 나프탈렌, 안트라센, 바이페닐렌, 인데닐렌, 인다닐렌, 1,2-디하이드로나프탈렌, 1,2,3,4-테트라하이드로나프틸, 등으로부터 유로된 라이칼을 포함하지만 이에 제한되지 않는다. 아릴디일 기는 또한 "아릴렌"으로 지칭되고, 본원에 기재된 하나 이상의 치환기로 선택적으로 치환된다.
용어들 "헤테로사이클," "헤테로사이클릴" 및 "헤테로사이클릭 고리"는 본원에서 상호교환적으로 사용되며 적어도 하나의 고리 원자가 질소, 산소, 인 및 황으로부터 선택된 헤테로원자이고 나머지 고리 원자는 C인 3 내지 약 20개의 고리 원자의 포화된 또는 부분적으로 불포화된 (즉, 고리 내에 하나 이상의 이중 및/또는 삼중 결합을 가짐) 카보사이클릭 라디칼을 지칭하고, 하나 이상의 고리 원자는 선택적으로 아래에 기재된 하나 이상의 치환기로 독립적으로 치환된다. 헤테로사이클은 3 내지 7개의 고리 구성원 (2 내지 6개의 탄소 원자 및 N, O, P, 및 S로부터 선택된 1 내지 4개의 헤테로원자)를 갖는 모노사이클 또는 7 내지 10개의 고리 구성원 (4 내지 9개의 탄소 원자 및 N, O, P, 및 S로부터 선택된 1 내지 6개의 헤테로원자)을 갖는 바이사이클, 예를 들어: 바이사이클로 [4,5], [5,5], [5,6], 또는 [6,6] 시스템일 수 있다. 헤테로사이클은 문헌 [Paquette, Leo A.; "Principles of Modern Heterocyclic Chemistry" (W.A. Benjamin, New York, 1968), particularly Chapters 1, 3, 4, 6, 7, 및 9; "The Chemistry of Heterocyclic Compounds, A series of Monographs" (John Wiley & Sons, New York, 1950, 현재까지), 특히 Volumes 13, 14, 16, 19, 및 28; 및 J. Am. Chem. Soc. (1960) 82:5566]에 기재되어 있다. "헤테로사이클릴"은 또한 헤테로사이클 라디칼이 포화된, 부분적으로 불포화된 고리, 또는 방향족 카보사이클릭 또는 헤테로사이클릭 고리와 융합된 라디칼을 포함한다. 헤테로사이클릭 고리의 예는 모폴린-4-일, 피페리딘-1-일, 피페라지닐, 피페라진-4-일-2-온, 피페라진-4-일-3-온, 피롤리딘-1-일, 티오모폴린-4-일, S-디옥소티오모폴린-4-일, 아조칸-1-일, 아제티딘-1-일, 옥타하이드로피리도[1,2-a]피라진-2-일, [1,4]디아제판-1-일, 피롤리디닐, 테트라하이드로푸라닐, 디하이드로푸라닐, 테트라하이드로티에닐, 테트라하이드로피라닐, 디하이드로피라닐, 테트라하이드로티오피라닐, 피페리디노, 모폴리노, 티오모폴리노, 티옥사닐, 피페라지닐, 호모피페라지닐, 아제티디닐, 옥세타닐, 티에타닐, 호모피페리디닐, 옥세파닐, 티에파닐, 옥사제피닐, 디아제피닐, 티아제피닐, 2-피롤리닐, 3-피롤리닐, 인돌리닐, 2H-피라닐, 4H-피라닐, 디옥사닐, 1,3-디옥소라닐, 피라졸리닐, 디티아닐, 디티올라닐, 디하이드로피라닐, 디하이드로티에닐, 디하이드로푸라닐, 피라졸리디닐이미다졸리닐, 이미다졸리디닐, 3-아자바이사이클로[3.1.0]헥사닐, 3-아자바이사이클로[4.1.0]헵타닐, 아자바이사이클로[2.2.2]헥사닐, 3H-인돌릴 퀴놀리지닐 및 N-피리딜 우레아를 포함하지만 이에 제한되지 않는다. 스피로 헤테로사이클릴 모이어티는 또한 이 정의의 범위 내에 포함된다. 스피로 헤테로사이클릴 모이어티의 예는 아자스피로[2.5]옥타닐 및 아자스피로[2.4]헵타닐을 포함한다. 2개 고리 원자가 옥소 (=O) 모이어티로 치환된 헤테로사이클릭 기의 예는 피리미디노닐 및 1,1-디옥소-티오모폴리닐이다. 본원의 헤테로사이클 기는 선택적으로 본원에 기재된 하나 이상의 치환기로 독립적으로 치환된다.
용어 "헤테로사이클릴디일"은 적어도 하나의 고리 원자는 질소, 산소, 인 및 황으로부터 선택된 헤테로원자이고, 나머지 고리 원자 C인 3 내지 약 20개의 고리 원자의 2가, 포화된 또는 부분적으로 불포화된 (즉, 고리 내에 하나 이상의 이중 및/또는 삼중 결합을 가짐) 카보사이클릭 라디칼을 지칭하고, 하나 이상의 고리 원자는 선택적으로 기재된 하나 이상의 치환기로 독립적으로 치환된다. 5-원 및 6-원 헤테로사이클릴디일의 예는 모폴리닐디일, 피페리디닐디일, 피페라지닐디일, 피롤리디닐디일, 디옥사닐디일, 티오모폴리닐디일, 및 S-디옥소티오모폴리닐디일을 포함한다.
용어 "헤테로아릴"은 5-, 6-, 또는 7-원 고리의 1가 방향족 라디칼을 지칭하고, 질소, 산소, 및 황으로부터 독립적으로 선택된 하나 이상의 헤테로원자를 함유하는 5 내지 20개의 원자의 융합 고리계 (이의 적어도 하나는 방향족임)를 포함한다. 헤테로아릴 기의 예는 피리디닐 (예를 들어, 2-하이드록시피리디닐 포함), 이미다졸릴, 이미다조피리디닐, 피리미디닐 (예를 들어, 4-하이드록시피리미디닐 포함), 피라졸릴, 트리아졸릴, 피라지닐, 테트라졸릴, 퓨릴, 티에닐, 이속사졸릴, 티아졸릴, 옥사디아졸릴, 옥사졸릴, 이소티아졸릴, 피롤릴, 퀴놀리닐, 이소퀴놀리닐, 테트라하이드로이소퀴놀리닐, 인돌릴, 벤즈이미다졸릴, 벤조푸라닐, 신놀리닐, 인다졸릴, 인돌리지닐, 프탈라지닐, 피리다지닐, 트리아지닐, 이소인돌릴, 프테리디닐, 퓨리닐, 옥사디아졸릴, 티아디아졸릴, 티아디아졸릴, 푸라자닐, 벤조푸라자닐, 벤조티오페닐, 벤조티아졸릴, 벤즈옥사졸릴, 퀴나졸리닐, 퀴녹살리닐, 나프티리디닐, 및 푸로피리디닐이다. 헤테로아릴 기는 선택적으로 본원에 기재된 하나 이상의 치환기로 독립적으로 치환된다.
용어 "헤테로아릴디일"은 5-, 6-, 또는 7-원 고리의 2가 방향족 라디칼을 지칭하고, 질소, 산소, 및 황으로부터 독립적으로 선택된 하나 이상의 헤테로원자를 함유하는 5 내지 20 원자의 융합 고리계 (이의 적어도 하나는 방향족임)를 포함한다. 5-원 및 6-원 헤테로아릴디일의 예는 피리딜디일, 이미다졸릴디일, 피리미디닐디일, 피라졸릴디일, 트리아졸릴디일, 피라지닐디일, 테트라졸릴디일, 퓨릴디일, 티에닐디일, 이속사졸릴디일디일, 티아졸릴디일, 옥사디아졸릴디일, 옥사졸릴디일, 이소티아졸릴디일, 및 피롤릴디일을 포함한다.
헤테로사이클 또는 헤테로아릴 기는 가능한 경우 결합된 탄소(탄소-연결) 또는 질소(질소-연결)일 수 있다. 비제한적인 예로서, 탄소 결합된 헤테로사이클 또는 헤테로아릴은 피리딘의 위치 2, 3, 4, 5, 또는 6, 피리다진의 위치 3, 4, 5, 또는 6, 피리미딘의 위치 2, 4, 5, 또는 6, 피라진의 위치 2, 3, 5, 또는 6, 푸란, 테트라하이드로푸란, 티오푸란, 티오펜, 피롤 또는 테트라하이드로피롤의 위치 2, 3, 4, 또는 5, 옥사졸, 이미다졸 또는 티아졸의 위치 2, 4, 또는 5, 이속사졸, 피라졸, 또는 이소티아졸의 위치 3, 4, 또는 5, 아지리딘의 위치 2 또는 3, 아제티딘의 위치 2, 3, 또는 4, 퀴놀린의 위치 2, 3, 4, 5, 6, 7, 또는 8 또는 이소퀴놀린의 위치 1, 3, 4, 5, 6, 7, 또는 8에서 결합된다.
비제한적인 예로서, 질소 결합된 헤테로사이클 또는 헤테로아릴은 아지리딘, 아제티딘, 피롤, 파이롤리딘, 2-파리롤린, 3-파리롤린, 이미다졸, 이미다졸리딘, 2-이미다졸린, 3-이미다졸린, 피라졸, 피라졸린, 2-피라졸린, 3-피라졸린, 피페리딘, 피페라진, 인돌, 인돌린, 1H-인다졸의 위치 1, 이소인돌, 또는 이소인돌린의 위치 2, 모폴린의 위치 4, 및 카바졸, 또는 β-카볼린의 위치 9에서 결합된다.
그 자체로 또는 다른 치환기의 일부로서 용어 "할로" 및 "할로겐"은 불소, 염소, 브롬 또는 요오드 원자를 의미한다.
그 자체로 또는 다른 치환기의 일부로서 용어 "카보닐"은 C(=O) 또는 -C(=O)-, 즉 산소에 이중 결합되고 카보닐을 가지고 있는 모이어티에서 다른 두 기에 결합된 탄소 원자를 나타낸다.
본원에 사용된 "4차 암모늄 염"이라는 문구는 알킬 치환기 (예를 들어, 메틸, 에틸, 프로필, 또는 부틸과 같은 C1-C4 알킬)로 4차화된 3차 아민을 지칭한다.
"치료하다", "치료" 및 "치료하는"이라는 용어는 저감; 경감; 증상을 감소시키거나 증상, 부상, 병리 또는 병태를 환자가 더 견딜 수 있게 만드는 것; 증상 진행 속도 감소; 증상 또는 병태의 빈도 또는 기간 감소; 또는 일부 상황에서는 증상의 발병의 예방과 같은 임의의 객관적 또는 주관적 매개변수를 포함하여, 부상, 병리, 병태 (예를 들어, 암), 또는 증상 (예를 들어, 인지 장애)의 치료 또는 개선의 임의의 성공 표시를 지칭한다. 증상의 치료 또는 개선은 예를 들어, 신체 검사의 결과를 포함하는 임의의 객관적 또는 주관적 매개변수를 기반으로 할 수 있다.
용어 "암", "신생물" 및 "종양"은 세포 증식에 대한 제어의 유의미한 상실을 특징으로 하는 비정상적인 성장 표현형을 나타내도록 자율적이고 조절되지 않은 성장을 나타내는 세포를 지칭하기 위해 본원에서 사용된다. 본 발명의 맥락에서 검출, 분석 및/또는 치료를 위한 관심 세포는 암 세포 (예를 들어, 암에 걸린 개체의 암 세포), 악성 암 세포, 전-전이성 암 세포, 전이성 암 세포, 및 비-전이성 암 세포를 포함한다. 거의 모든 조직의 암이 알려져 있다. "암 부담"이라는 어구는 대상체에서 암 세포의 양 또는 암 부피를 지칭한다. 이에 따라 암 부담을 감소시키는 것은 대상체에서 암 세포의 수 또는 암 세포 부피를 감소시키는 것을 지칭한다. 본원에 사용된 용어 "암 세포"는 암 세포 (예를 들어, 개체가 치료될 수 있는, 예를 들어, 암에 걸린 개체로부터 단리될 수 있는 임의의 암)이거나 암 세포로부터 유래된 임의의 세포, 예를 들어, 암 세포의 클론을 지칭한다. 예를 들어, 암 세포는 확립된 암 세포주로부터 유래할 수 있고, 암에 걸린 개체로부터 단리된 1차 세포일 수 있고, 암에 걸린 개체로부터 단리된 1차 세포로부터의 자손 세포 등일 수 있다. 일부 구현예에서, 이 용어는 또한 암 세포의 일부, 예를 들어, 세포내 부분, 세포막 부분, 또는 암 세포의 세포 용해물을 지칭할 수 있다. 암종, 육종, 교모세포종, 흑색종, 림프종 및 골수종과 같은 고형 종양, 및 백혈병과 같은 순환성 암을 비롯한 많은 유형의 암이 당업자에게 공지되어 있다.
본원에 사용된 용어 "암"은 고형 종양 암 (예를 들어, 피부, 폐, 전립선, 유방, 위, 방광, 결장, 난소, 췌장, 신장, 간, 교모세포종, 수모세포종, 평활근육종, 두경부 편평 세포 암종, 흑색종 및 신경내분비) 및 액체 암 (예를 들어, 혈액암); 암종; 연조직 종양; 육종; 기형종; 흑색종; 백혈병; 림프종; 및 최소 잔류 질환을 포함하는 뇌암 및 원발성 및 전이성 종양을 포함하나 이에 제한되지 않는 임의의 형태의 암을 포함한다.
"PD-L1 발현"은 세포 표면에 PD-L1 수용체가 있는 세포를 지칭한다. 본원에 사용된 "PD-L1 과발현"은 상응하는 비-암 세포와 비교하여 더 많은 PD-L1 수용체를 갖는 세포를 지칭한다.
"HER2"는 단백질 인간 표피 성장 인자 수용체 2를 지칭한다.
"HER2 발현"은 세포 표면에 HER2 수용체가 있는 세포를 지칭한다. 예를 들어, 세포는 세포 표면에 약 20,000 내지 약 50,000개의 HER2 수용체를 가질 수 있다. 본원에 사용된 "HER2 과발현"은 약 50,000개 초과의 HER2 수용체를 갖는 세포를 지칭한다. 예를 들어, 세포는 상응하는 비-암 세포와 비교할 때 HER2 수용체의 수가 2, 5, 10, 100, 1,000, 10,000, 100,000 또는 1,000,000배 (예를 들어, 약 1 또는 2백만개의 HER2 수용체)이다. HER2는 유방암의 약 25% 내지 약 30%에서 과발현되는 것으로 추정된다.
암의 "병리"에는 환자의 복지를 손상시키는 모든 현상이 포함된다. 여기에는 비정상적이거나 통제할 수 없는 세포 성장, 전이, 인접 세포의 정상적인 기능 방해, 비정상적인 수준의 사이토카인 또는 기타 분비 산물의 방출, 염증 또는 면역 반응의 억제 또는 악화, 신생물, 전암, 악성 종양 및 림프절과 같은 주변 또는 원거리 조직이나 기관의 침습이 포함되나 이들로 제한되는 것은 아니다.
본 명세서에 사용되는 "암 재발" 및 "종양 재발"이라는 문구 및 이들의 문법적 변형은 암 진단 후 신생물 또는 암성 세포의 추가 성장을 지칭한다. 특히, 암 조직에 추가적인 암 세포 증식이 일어나면 재발이 일어날 수 있다. 유사하게 "종양 퍼짐(tumor spread)"은 종양의 세포가 국소 또는 원거리 조직 및 기관으로 퍼질 때 발생하므로 종양 퍼짐은 종양 전이를 포함한다. "종양 침습"은 종양 성장이 국부적으로 퍼져 정상 기관 기능의 압박, 파괴 또는 방지에 의해 관련 조직의 기능을 손상시킬 때 발생한다.
본 명세서에서 용어 "전이"는 원래의 암성 종양의 장기와 직접적으로 연결되지 않은 장기 또는 신체 부위에서의 암성 종양의 성장을 지칭한다. 전이는 원래 암성 종양의 기관에 직접 연결되지 않은 기관 또는 신체 부위에 검출할 수 없는 양의 암 세포가 존재하는 것인 미세전이를 포함하는 것으로 이해될 것이다. 전이는 또한 암 세포가 원래 종양 부위에서 이탈하고 암 세포가 신체의 다른 부분으로 이동 및/또는 침습하는 것과 같은 과정의 여러 단계로 정의될 수 있다.
"유효량" 및 "치료 유효량"이라는 어구는 투여되어 치료 효과를 생성하는 면역접합체와 같은 물질의 용량 또는 양을 지칭한다. 정확한 용량은 치료의 목적에 따라 다르며 공지된 기술을 사용하여 당업자가 확인할 수 있다 (예를 들어, Lieberman, Pharmaceutical Dosage Forms (vols. 1-3, 1992); Lloyd, The Art, Science and Technology of Pharmaceutical Compounding (1999); Pickar, Dosage Calculations (1999); Goodman & Gilman's The Pharmacological Basis of Therapeutics, 11th Edition (McGraw-Hill, 2006); 및 Remington: The Science and Practice of Pharmacy, 22nd Edition, (Pharmaceutical Press, London, 2012) 참조). 암의 경우, 면역접합체의 치료 유효량은 암 세포의 수를 감소시킬 수 있고; 종양 크기를 줄일 수 있고; 말초 기관으로의 암 세포 침윤을 억제 (즉, 어느 정도 느리게, 바람직하게는 중지)할 수 있고; 종양 전이를 억제 (즉, 어느 정도 느리게, 바람직하게는 중지)할 수 있고; 종양 성장을 어느 정도 억제할 수 있고/있거나; 암과 관련된 하나 이상의 증상을 어느 정도 완화시킬 수 있다. 면역접합체가 기존 암 세포의 성장을 방지하고/하거나 죽일 수 있는 한, 이는 세포증식억제 및/또는 세포독성일 수 있다. 암 치료의 경우 효능은 예를 들어, 질환 진행까지의 시간 (TTP)을 평가하고/하거나 반응률 (RR)을 결정하여 측정할 수 있다.
"수혜자", "개체", "대상체", "숙주" 및 "환자"는 상호교환적으로 사용되며 진단, 치료, 또는 요법이 바람직한 임의의 포유동물 대상체 (예를 들어, 인간)를 나타낸다. 치료 목적의 "포유동물"이라 함은 인간, 가축 및 농장동물, 개, 말, 고양이, 소, 양, 염소, 돼지, 낙타 등의 동물원, 스포츠 또는 애완 동물 등을 비롯한, 포유동물로 분류되는 임의의 동물을 지칭한다. 특정 구현예에서, 포유동물은 인간이다.
본 발명의 맥락에서 "상승적 보조제" 또는 "상승적 조합"이라는 어구는 수용체 작용제, 사이토카인 및 보조제 폴리펩타이드와 같은 2개의 면역 조절제의 조합을 포함하며, 이는 단독 투여되는 것에 비해 조합으로 면역에 대한 상승적 효과를 이끌어낸다. 특히, 본원에 개시된 면역접합체는 청구된 보조제 및 항체 작제물의 상승적 조합을 포함한다. 투여 시 이러한 상승적 조합은, 예를 들어, 항체 작제물 또는 보조제가 다른 모이어티의 부재 하에 투여되는 경우에 비해 면역에 대한 더 큰 효과를 유도한다. 또한, 항체 작제물 또는 보조제가 단독으로 투여될 때와 비교하여 감소된 양의 면역접합체가 투여될 수 있다 (면역접합체의 일부로서 투여된 항체 작제물의 총 수 또는 보조제의 총 수로 측정됨).
본원에 사용된 용어 "투여하는"은 비경구, 정맥내, 복강내, 근육내, 종양내, 병변내, 비강내, 또는 피하 투여, 경구 투여, 좌약으로서의 투여, 국소 접촉, 경막내 투여, 또는 서방성 장치, 예를 들어, 미니 삼투압 펌프의 대상에의 착상을 지칭한다.
수치를 수식하기 위해 본 명세서에서 사용된 용어 "약" 및 "대략"은 수치를 둘러싸는 가까운 범위를 나타낸다. 따라서, "X"가 값이면, "약 X" 또는 "대략 X"는 0.9X 내지 1.1X, 예를 들어, 0.95X 내지 1.05X 또는 0.99X 내지 1.01X의 값을 나타낸다. "약 X" 또는 "대략 X"에 대한 언급은 구체적으로 적어도 X, 0.95X, 0.96X, 0.97X, 0.98X, 0.99X, 1.01X, 1.02X, 1.03X, 1.04X, 및 1.05X 값을 나타낸다. 따라서 "약 X" 및 "대략 X"는 예를 들어, "0.98X"의 청구 제한에 대한 서면 설명 지원을 교시하고 제공하기 위한 것이다.
항체 표적
일부 구현예에서, 면역접합체의 항체는 5T4, ABL, ABCF1, ACVR1, ACVR1B, ACVR2, ACVR2B, ACVRL1, ADORA2A, 아그레칸, AGR2, AICDA, AIF1, AIGI, AKAP1, AKAP2, AMH, AMHR2, ANGPT1, ANGPT2, ANGPTL3, ANGPTL4, ANPEP, APC, APOC1, AR, 아로마타제, ATX, AX1, AZGP1 (아연-a-당단백질), B7.1, B7.2, B7-H1, BAD, BAFF, BAG1, BAI1, BCR, BCL2, BCL6, BDNF, BLNK, BLR1 (MDR15), BIyS, BMP1, BMP2, BMP3B (GDFIO), BMP4, BMP6, BMP8, BMPRTA, BMPR1B, BMPR2, BPAG1 (플렉틴), BRCA1, C19orflO (IL27w), C3, C4A, C5, C5R1, CANT1, CAPRIN-1, CASP1, CASP4, CAV1, CCBP2 (D6/JAB61), CCLI (1-309), CCLI1 (에오탁신), CCL13 (MCP-4), CCL15 (MIP-Id), CCL16 (HCC-4), CCL17 (TARC), CCL18 (PARC), CCL19 (MIP-3b), CCL2 (MCP-1), MCAF, CCL20 (MIP-3a), CCL21 (MEP-2), SLC, 엑소두스-2, CCL22(MDC/STC-1), CCL23 (MPIF-I), CCL24 (MPIF-2/에오탁신-2), CCL25 (TECK), CCL26 (에오탁신-3), CCL27 (CTACK/ILC), CCL28, CCL3 (MIP-Ia), CCL4 (MIPIb), CCL5 (RANTES), CCL7 (MCP-3), CCL8 (mcp-2), CCNA1, CCNA2, CCND1, CCNE1, CCNE2, CCR1 (CKR1/HM145), CCR2 (mcp-IRB/RA), CCR3 (CKR3/CMKBR3), CCR4, CCR5 (CMKBR5/ChemR13), CCR6 (CMKBR6/CKR-L3/STRL22/DRY6), CCR7 (CKR7/EBI1), CCR8 (CMKBR8/TERI/CKR-L1), CCR9 (GPR-9-6), CCRL1 (VSHK1), CCRL2 (L-CCR), CD164, CD19, CDIC, CD2, CD20, CD21, CD200, CD-22, CD24, CD27, CD28, CD3, CD33, CD35, CD37, CD38, CD3E, CD3G, CD3Z, CD4, CD38, CD40, CD40L, CD44, CD45RB, CD47, CD52, CD69, CD72, CD74, CD79A, CD79B, CD8, CD80, CD81, CD83, CD86, CD137, CD152, CD274, CDH1 (에카드헤린), CDH1O, CDH12, CDH13, CDH18, CDH19, CDH2O, CDH5, CDH7, CDH8, CDH9, CDK2, CDK3, CDK4, CDK5, CDK6, CDK7, CDK9, CDKN1A (p21Wap1/Cip1), CDKN1B (p27Kip1), CDKN1C, CDKN2A (p16INK4a), CDKN2B, CDKN2C, CDKN3, CEBPB, CERI, CHGA, CHGB, 키티나제, CHST1O, CKLFSF2, CKLFSF3, CKLFSF4, CKLFSF5, CKLFSF6, CKLFSF7, CKLFSF8, CLDN3, CLDN7 (클라우딘-7), CLDN18.2 (클라우딘 18.2), CLN3, CLU (클러스테린), CMKLR1, CMKOR1 (RDC1), CNR1, COL18A1, COLIA1, COL4A3, COL6A1, CR2, Cripto, CRP, CSF1 (M-CSF), CSF2 (GM-CSF), CSF3 (GCSF), CTL8, CTNNB1 (b-카테닌), CTSB (카텝신 B), CX3CL1 (SCYD1), CX3CR1 (V28), CXCL1 (GRO1), CXCL1O (IP-IO), CXCLI1 (1-TAC/IP-9), CXCL12 (SDF1), CXCL13, CXCL14, CXCL16, CXCL2 (GRO2), CXCL3 (GRO3), CXCL5 (ENA-78/LIX), CXCL6 (GCP-2), CXCL9 (MIG), CXCR3 (GPR9/CKR-L2), CXCR4, CXCR6 (TYMSTR/STRL33/Bonzo), CYB5, CYC1, CYSLTR1, DAB2IP, DES, DKFZp451J0118, DNCL1, DPP4, E2F1, Engel, Edge, Fennel, EFNA3, EFNB2, EGF, EGFR, ELAC2, ENG, Enola, ENO2, ENO3, EPHA1, EPHA2, EPHA3, EPHA4, EPHA5, EPHA6, EPHA7, EPHA8, EPHA9, EPRA10, EPHB1, EPHB2, EPHB3, EPHB4, EPHB5, EPHB6, EPHRIN-A1, EPHRIN-A2, EPHRINA3, EPHRIN-A4, EPHRIN-A5, EPHRIN-A6, EPHRIN-B1, EPHRIN-B2, EPHRIN-B3, EPHB4, EPG, ERBB2 (Her-2), EREG, ERK8, 에스트로겐 수용체, Earl, ESR2, F3 (TF), FADD, 파메실트랜스퍼라제, FasL, FASNf, FCER1A, FCER2, FCGR3A, FGF, FGF1 (aFGF), FGF10, FGF11, FGF12, FGF12B, FGF13, FGF14, FGF16, FGF17, FGF18, FGF19, FGF2 (bFGF). FGF20, FGF21, FGF22, FGF23, FGF3 (int-2), FGF4 (HST), FGF5, FGF6 (HST-2), FGF7 (KGF), FGF8, FGF9, FGFR3, FIGF (VEGFD), FILI (엡실론), FBL1 (ZETA), FLJ12584, FLJ25530, FLRT1 (피브로넥틴), FLT1, FLT-3, FOS, FOSL1 (FRA-1), FY (DARC), GABRP (GABAa), GAGEB1, GAGEC1, GALNAC4S-6ST, GATA3, GD2, GDF5, GFI1, GGT1, GM-CSF, GNAS1, GNRH1, GPR2 (CCR10), GPR31, GPR44, GPR81 (FKSG80), GRCC1O (C1O), GRP, GSN (겔솔린), GSTP1, HAVCR2, HDAC, HDAC4, HDAC5, HDAC7A, HDAC9, Hedgehog, HGF, HIF1A, HIP1, 히스타민 및 히스타민 수용체, HLA-A, HLA-DRA, HLA-E, HM74, HMOXI, HSP90, HUMCYT2A, ICEBERG, ICOSL, ID2, IFN-a, IFNA1, IFNA2, IFNA4, IFNA5, EFNA6, BFNA7, IFNB1, IFN감마, IFNW1, IGBP1, IGF1, IGFIR, IGF2, IGFBP2, IGFBP3, IGFBP6, DL-1, ILIO, ILIORA, ILIORB, IL-1, IL1R1 (CD121a), IL1R2 (CD121b), IL-IRA, IL-2, IL2RA (CD25), IL2RB (CD122), IL2RG (CD132), IL-4, IL-4R (CD123), IL-5, IL5RA (CD125), IL3RB (CD131), IL-6, IL6RA, (CD126), IR6RB (CD130), IL-7, IL7RA (CD127), IL-8, CXCR1 (IL8RA), CXCR2, (IL8RB/CD128), IL-9, IL9R (CD129), IL-10, IL10RA (CD210), IL10RB (CDW210B), IL-11, IL11RA, IL-12, IL-12A, IL-12B, IL-12RB1, IL-12RB2, IL-13, IL13RA1, IL13RA2, IL14, IL15, IL15RA, IL16, IL17, IL17A, IL17B, IL17C, IL17R, IL18, IL18BP, IL18R1, IL18RAP, IL19, ILIA, ILIB, ILIF10, ILIF5, IL1F6, ILIF7, IL1F8, DL1F9, ILIHYI, ILIR1, ILIR2, ILIRAP, ILIRAPLI, ILIRAPL2, ILIRL1, IL1RL2, ILIRN, IL2, IL20, IL20RA, IL21R, IL22, IL22R, IL22RA2, IL23, DL24, IL25, IL26, IL27, IL28A, IL28B, IL29, IL2RA, IL2RB, IL2RG, IL3, IL30, IL3RA, IL4, IL4, IL6ST (당단백질 130), ILK, INHA, INHBA, INSL3, INSL4, IRAK1, IRAK2, ITGA1, ITGA2, ITGA3, ITGA6 (.알파.6 인테그린), ITGAV, ITGB3, ITGB4 (.베타.4 인테그린), JAG1, JAK1, JAK3, JTB, JUN, K6HF, KAI1, KDR, KITLG, KLF5 (GC Box BP), KLF6, KLK10, KLK12, KLK13, KLK14, KLK15, KLK3, KLK4, KLK5, KLK6, KLK9, KRT1, KRT19 (케라틴 19), KRT2A, KRTHB6 (모발 특이적 유형 II 케라틴), LAMA5, LEP (렙틴), Lingo-p75, Lingo-Troy, LPS, LTA (TNF-b)), LTB, LTB4R (GPR16), LTB4R2, LTBR, MACMARCKS, MAG 또는 OMgp, MAP2K7 (c-Jun), MCP-1, MDK, MIB1, 미드카인, MIF, MISRII, MJP-2, MK, MKI67 (Ki-67), MMP2, MMP9, MS4A1, MSMB, MT3 (메탈로티오넥틴-UI), mTOR, MTSS1, MUC1 (뮤신), MYC, MYD88, NCK2, 뉴로칸, 넥틴-4, NFKBI, NFKB2, NGFB (NGF), NGFR, NgR-Lingo, NgRNogo66, (Nogo), NgR-p75, NgR-Troy, NMEI (NM23A), NOTCH, NOTCH1, NOX5, NPPB, NROB1, NROB2, NRID1, NR1D2, NR1H2, NR1H3, NR1H4, NR112, NR113, NR2C1, NR2C2, NR2E1, NR2E3, NR2F1, NR2F2, NR2F6, NR3C1, NR3C2, NR4A1, NR4A2, NR4A3, NR5A1, NR5A2, NR6A1, NRP1, NRP2, NT5E, NTN4, ODZI, OPRDI, P2RX7, PAP, PART1, PATE, PAWR, PCA3, PCDGF, PCNA, PDGFA, PDGFB, PDGFRA, PDGFRB, PECAMI, peg-아스파라기나제, PF4 (CXCL4), PGF, PGR, 포스파칸, PIAS2, PI3 키나제, PIK3CG, PLAU (uPA), PLG, PLXDCI, PKC, PKC-베타, PPBP (CXCL7), PPID, PR1, PRKCQ, PRKD1, PRL, PROC, PROK2, PSAP, PSCA, PTAFR, PTEN, PTGS2 (COX-2), PIN, RAC2 (P21Rac2), RANK, RANK 리간드, RARB, RGS1, RGS13, RGS3, RNFI1O (ZNF144), Ron, ROBO2, RXR, S100A2, SCGB 1D2 (리포필린 B), SCGB2A1 (맘마글로빈 2), SCGB2A2 (맘마글로빈 1), SCYE1 (내피 단핵구 활성화 사이토카인), SDF2, SERPENA1, SERPINA3, SERPINB5 (마스핀), SERPINEI (PAI-I), SERPINFI, SHIP-1, SHIP-2, SHB1, SHB2, SHBG, SfcAZ, SLC2A2, SLC33A1, SLC43A1, SLIT2, SPP1, SPRR1B (Spr1), ST6GAL1, STAB1, 상태, STEAP, STEAP2, TB4R2, TBX21, TCP1O, TDGF1, TEK, TGFA, TGFB1, TGFB1I1, TGFB2, TGFB3, TGFBI, TGEBR1, TGFBR2, TGFBR3, THIL, THBS1 (트롬보스폰딘-1), THBS2, THBS4, THPO, TIE (Tie-1), TIMP3, 조직 인자, TLR1, TLR2, TLR3, TLR4, TLR5, TLR6, TLR7, TLR8, TLR9, TLR10, TLR11, TNF, TNF-a, TNFAIP2 (B94), TNFAIP3, TNFRSF11A, TNFRSF1A, TNFRSF1B, TNFRSF21, TNFRSF5, TNFRSF6 (Fas), TNFRSF7, TNFRSF8, TNFRSF9, TNFSF1O (TRAIL), TNFSF11 (TRANCE), TNFSF12 (APO3L), TNFSF13 (April), TNFSF13B, TNSF14 (HVEM-L), TNFRSF14 (HVEM), TNFSF15 (VEGI), TNFSF18, TNFSF4 (OX40 리간드), TNFSF5 (CD40 리간드). TNFSF6 (FasL), TNFSF7 (CD27 리간드), TNFSF8 (CD30 리간드), TNFSF9 (4-1BB 리간드), TOLLIP, 톨(Toll) 유사 수용체, TOP2A (토포이소머라제 1ia), TP53, TPM1, TPM2, TRADD, TRAF1, TRAF2, TRAF3, TRAF4, TRAF5, TRAF6, TRKA, TREM1, TREM2, TROP2, TRPC6, TSLP, TWEAK, 티로시나제, uPAR, VEGF, VEGFB, VEGFC, 베르시칸, VHL C5, VLA-4, Wnt-1, XCL1 (타임포탁틴), XCL2 (SCM-Ib), XCRI (GPR5/CCXCR1), YYI, ZFPM2, CLEC4C (BDCA-2, DLEC, CD303, CLECSF7), CLEC4D (MCL, CLECSF8), CLEC4E (Mincle), CLEC6A (덱틴-2). CLEC5A (MDL-1, CLECSF5), CLEC1B (CLEC-2), CLEC9A (DNGR-1), CLEC7A (덱틴-1), PDGFRa, SLAMF7, GP6 (GPVI), LILRA1 (CD85I), LILRA2 (CD85H, ILT1), LILRA4 (CD85G, ILT7), LILRA5 (CD85F, ILT11), LILRA6 (CD85b, ILT8), NCR1 (CD335, LY94, NKp46), NCR3 (CD335, LY94, NKp46), NCR3 (CD337, NKp30), OSCAR, TARM1, CD300C, CD300E, CD300LB (CD300B), CD300LD (CD300D), KIR2DL4 (CD158D), KIR2DS, KLRC2 (CD159C, NKG2C), KLRK1 (CD314, NKG2D), NCR2 (CD336, NKp44), PILRB, SIGLEC1 (CD169, SN), SIGLEC14, SIGLEC15 (CD33L3), SIGLEC16, SIRPB1 (CD172B), TREM1 (CD354), TREM2, 및 KLRF1 (NKp80)로부터 선택된 하나 이상의 표적에 결합할 수 있다 (예를 들어, 선택된 표적에 특이적으로 결합한다).
일부 구현예에서, 항체는 FcR.감마 커플링 수용체에 결합한다. 일부 구현예에서, FcR.감마 커플링 수용체는 GP6 (GPVI), LILRA1 (CD85I), LILRA2 (CD85H, ILT1), LILRA4 (CD85G, ILT7), LILRA5 (CD85F, ILT11), LILRA6 (CD85b, ILT8), NCR1 (CD335, LY94, NKp46), NCR3 (CD335, LY94, NKp46), NCR3 (CD337, NKp30), OSCAR, 및 TARM1로 이루어진 군으로부터 선택된다.
일부 구현예에서, 항체는 DAP12 커플링 수용체에 결합한다. 일부 구현예에서, DAP12 커플링 수용체는 CD300C, CD300E, CD300LB (CD300B), CD300LD (CD300D), KIR2DL4 (CD158D), KIR2DS, KLRC2 (CD159C, NKG2C), KLRK1 (CD314, NKG2D), NCR2 (CD336, NKp44). PILRB, SIGLEC1 (CD169, SN), SIGLEC14, SIGLEC15 (CD33L3), SIGLEC16, SIRPB1 (CD172B), TREM1 (CD354), 및 TREM2로 이루어진 군으로부터 선택된다.
일부 구현예에서, 항체는 hemITAM 보유 수용체에 결합한다. 일부 구현예에서, hemITAM 보유 수용체는 KLRF1 (NKp80)이다.
일부 구현예에서, 항체는 CLEC4C (BDCA-2, DLEC, CD303, CLECSF7), CLEC4D (MCL, CLECSF8), CLEC4E (Mincle), CLEC6A (덱틴-2), CLEC5A (MDL-1, CLECSF5), CLEC1B (CLEC-2), CLEC9A (DNGR-1), 및 CLEC7A (덱틴-1)로부터 선택된 하나 이상의 표적에 결합할 수 있다. 일부 구현예에서, 항체는 CLEC6A (덱틴-2) 또는 CLEC5A 에 결합할 수 있다. 일부 구현예에서, 항체는 CLEC6A (덱틴-2)에 결합할 수 있다.
일부 구현예에서, 항체는 하기로부터 선택된 하나 이상의 표적에 결합할 수 있다(예를 들어, 하기로부터 선택된 표적에 특이적으로 결합한다): ATP5I (Q06185), 귀리 (P29758), AIFM1 (Q9Z0X1), AOFA (Q64133), MTDC (P18155), CMC1 (Q8BH59), PREP (Q8K411), YMEL1 (O88967), LPPRC (Q6PB66), LONM (Q8CGK3), ACON (Q99KI0), ODO1 (Q60597), IDHP (P54071), ALDH2 (P47738), ATPB (P56480), AATM (P05202), TMM93 (Q9CQW0), ERGI3 (Q9CQE7), RTN4 (Q99P72), CL041 (Q8BQR4), ERLN2 (Q8BFZ9), TERA (Q01853), DAD1 (P61804), CALX (P35564), CALU (O35887), VAPA (Q9WV55), MOGS (Q80UM7), GANAB (Q8BHN3), ERO1A (Q8R180), UGGG1 (Q6P5E4), P4HA1 (Q60715), HYEP (Q9D379), CALR (P14211), AT2A2 (O55143), PDIA4 (P08003), PDIA1 (P09103), PDIA3 (P27773), PDIA6 (Q922R8), CLH (Q68FD5), PPIB (P24369), TCPG (P80318), MOT4 (P57787), NICA (P57716), BASI (P18572), VAPA (Q9WV55), ENV2 (P11370), VAT1 (Q62465), 4F2 (P10852), ENOA (P17182), ILK (O55222), GPNMB (Q99P91), ENV1 (P10404), ERO1A (Q8R180), CLH, (Q68FD5), DSG1A (Q61495), AT1A1 (Q8VDN2), HYOU1 (Q9JKR6), TRAP1 (Q9CQN1), GRP75 (P38647), ENPL (P08113), CH60 (P63038), 및 CH10 (Q64433). 이전의 목록에서, 기탁 번호는 괄호로 나타낸다.
일부 구현예에서, 항체는 CDH1, CD19, CD20, CD29, CD30, CD38, CD40, CD47, EpCAM, MUC1, MUC16, EGFR, Her2, SLAMF7, 및 gp75로부터 선택된 항원에 결합한다. 일부 구현예에서, 항원는 CD19, CD20, CD47, EpCAM, MUC1, MUC16, EGFR, 및 Her2로부터 선택된다. 일부 구현예에서, 항체는 Tn 항원 및 톰슨 프라이덴리히(Thomsen-Friedenreich) 항원으로부터 선택된 항원에 결합한다.
일부 구현예에서, 항체 또는 Fc 융합 단백질는 하기로부터 선택된다: 아바고보맙, 아바타셉트 (또한 ORENCIA®로 알려져 있음), 압식시맙 (또한 REOPRO®로 알려져 있음), c7E3 Fab), 아달리무맙 (또한 HUMIRA®로 알려져 있음), 아데카투무맙, 알렘투주맙 (또한 CAMPATH®로 알려져 있음), MabCampath 또는 Campath-1H), 알투모맙, 아펠리무맙, 아나투모맙 마페나톡스, 아네투무맙, 안루키주맙, 아폴리주맙, 아르시투모맙, 아셀리주맙, 아틀리주맙, 아토롤리무맙, 바피뉴주맙, 바실릭시마맙 (또한 SIMULECT®로 알려져 있음), 바비툭시맙, 벡투무맙 (또한 LYMPHOSCAN®로 알려져 있음), 벨리무맙 (또한 LYMPHO-STAT-B®로 알려져 있음), 베르틸리무맙, 베실레소맙, 베바시주맙 (또한 AVASTIN®로 알려져 있음), 비시로맙 브랄로바르비탈, 비바투주맙 메르탄신, 캄파트, 카나키누맙 (또한 ACZ885), 칸투주맙 메르탄신, 카프로맙 (또한 PROSTASCINT®로 알려져 있음), 카투막소맙 (또한 REMOVAB®로 알려져 있음), 세델리주맙 (또한 CIMZIA®로 알려져 있음), 세르톨리주맙 페골, 세툭시맙 (또한 ERBITUX®로 알려져 있음), 클레놀릭시맙, 다세투주맙, 다클릭시맙, 다클리주맙 (또한 ZENAPAX®로 알려져 있음), 데노수맙 (또한 AMG 162로 알려져 있음), 데투모맙, 도를리모맙 아리톡스, 도를릭시주맙, 둔투무맙, 두리물루맙, 두르물루맙, 에크로멕시맙, 에쿨리주맙 (또한 SOLIRIS®로 알려져 있음), 에도바코맙, 에드레콜로맙 (또한 Mab17-1A, PANOREX®로 알려져 있음), 에팔리주맙 (또한 RAPTIVA®로 알려져 있음), 에펀구맙 (또한 MYCOGRAB®로 알려져 있음), 엘실리모맙, 엔리모맙 페골, 에피투모맙 시툭세탄, 에팔리주맙, 에피투모맙, 에프라투주맙, 에를리주맙, 에르투막소맙 (또한 REXOMUN®로 알려져 있음), 에타네르셉트 (또한 ENBREL®로 알려져 있음), 에타라시주맙 (또한 에타라투주맙, VITAXIN®, ABEGRIN®로 알려져 있음), 엑스비비루맙, 파놀레소맙 (또한 NEUTROSPEC®로 알려져 있음), 파랄리모맙, 펠비주맙, 폰톨리주맙 (또한 HUZAF®로 알려져 있음), 갈릭시맙, 간테네루맙, 가빌리모맙 (또한 ABXCBL®로 알려져 있음), 젬투주맙 오조가미신 (또한 MYLOTARG®로 알려져 있음), 골리무맙 (또한 CNTO 148로 알려져 있음), 고밀릭시맙, 이발리주맙 (또한 TNX-355로 알려져 있음), 이브리투모맙 티욱세탄 (또한 ZEVALIN®로 알려져 있음), 이고보맙, 임시로맙, 인플릭시맙 (또한 REMICADE®로 알려져 있음), 이놀리모맙, 이노투주맙 오조가미신, 이필리무맙 (또한 MDX-010, MDX-101로 알려져 있음), 이라투무맙, 켈릭시맙, 라베투주맙, 레말레소맙, 레브릴리주맙, 레르델리무맙, 렉사투무맙 (또한 HGS-ETR2, ETR2-ST01로 알려져 있음), 렉시투무맙, 리비비루맙, 린투주맙, 루카투무맙, 루밀릭시맙, 마파투무맙 (또한 HGSETR1, TRM-1로 알려져 있음), 마슬리모맙, 마투주맙 (또한 EMD72000로 알려져 있음), 메폴리주맙 (또한 BOSATRIA®로 알려져 있음), 메텔리무맙, 밀라투주맙, 민레투모맙, 미투모맙, 모롤리무맙, 무타비주맙 (또한 NUMAX®로 알려져 있음), 무로모납 (또한 OKT3로 알려져 있음), 나콜로맙 타페나톡스, 납투모맙 에스타페나톡스, 나탈리주맙 (또한 TYSABRI®, ANTEGREN®로 알려져 있음), 네바쿠맙, 네렐리모맙, 니모투주맙 (또한 THERACIM hR3®, THERA-CIM-hR3®, THERALOC®로 알려져 있음), 노페투모맙 메르펜탄 (또한 VERLUMA®로 알려져 있음), 오크렐리주맙, 오둘리모맙, 오파투무맙, 오말리주맙 (또한 XOLAIR®로 알려져 있음), 오레고보맙 (또한 OVAREX®로 알려져 있음), 오텔릭시주맙, 파기박시맙, 팔리바주맙 (또한 SYNAGIS®로 알려져 있음), 파니투무맙 (또한 ABX-EGF, VECTIBIX®로 알려져 있음), 파스콜리주맙, 펨투무맙 (또한 THERAGYN®로 알려져 있음), 페르투주맙 (또한 2C4, OMNITARG®로 알려져 있음), 펙셀리주맙, 핀투모맙, 프릴릭시맙, 프리투무맙, 라니비주맙 (또한 LUCENTIS®로 알려져 있음), 락시바쿠맙, 레가비루맙, 레슬리주맙, 리툭시맙 (또한 RITUXAN®, MabTHERA®로 알려져 있음), 로벨리주맙, 루플리주맙, 사투모맙, 세비루맙, 시브로투주맙, 시플리주맙 (또한 MEDI-507로 알려져 있음), 손투주맙, 스타물루맙 (또한 MYO-029로 알려져 있음), 술레소맙 (또한 LEUKOSCAN®로 알려져 있음), 타카투주맙 테트락세탄, 타도시주맙, 탈리주맙, 타플리투모맙 팝톡스, 테피바주맙 (또한 AUREXIS®로 알려져 있음), 텔리모맙 아리톡스, 테넬릭시맙, 테플리주맙, 티실리무맙, 토실리주맙 (또한 ACTEMRA®로 알려져 있음), 토랄리주맙, 토시투모맙, 트라스투주맙 (또한 HERCEPTIN®로 알려져 있음), 트레멜리무맙 (또한 CP-675,206으로 알려져 있음), 투코투주맙 셀모류킨, 투비루맙, 우르톡사주맙, 우스테키누맙 (또한 CNTO 1275로 알려져 있음), 바팔릭시맙, 벨투주맙, 베팔리모맙, 비실리주맙 (또한 NUVION®로 알려져 있음), 볼록식시맙 (또한 M200으로 알려져 있음), 보투무맙 (또한 HUMASPECT®로 알려져 있음), 잘루투무맙, 자놀리무맙 (또한 HuMAX-CD4로 알려져 있음), 지랄리무맙, 졸리모맙 아리톡스, 다라투무맙, 엘로투주맙, 오비누투주맙, 올라라투맙, 브렌툭시맙 베도틴, 아피베르셉트, 아바타셉트, 벨라타셉트, 아피베르셉트, 에타네르셉트, 로미플로스팀, SBT-040 (US 2017/0158772에 나열된 서열). 일부 구현예에서, 항체는 리툭시맙이다.
항체
본 발명의 면역접합체는 항체를 포함한다. 본 발명의 구현예의 범위에는 본원에 기재된 항체 작제물 또는 항원 결합 도메인의 기능적 변이체가 포함된다. 본원에 사용된 용어 "기능적 변이체"는 모 항체 작제물 또는 항원 결합 도메인과 실질적으로 또는 상당한 서열 동일성 또는 유사성을 갖는 항원 결합 도메인을 갖는 항체 작제물을 지칭하며, 이 기능적 변이체는 항체 작제물 또는 그것의 변이체인 항원 결합 도메인의 생물학적 활성을 보유한다. 기능적 변이체는 모 항체 작제물 또는 항원 결합 도메인과 유사한 정도, 동일한 정도, 또는 더 높은 정도로 예를 들어, 비제한적으로 PD-L1, HER2, CEA 또는 TROP2로 발현하는 표적 세포를 인식하는 능력을 보유하는 본원에 기재된 항체 작제물 또는 항원 결합 도메인 (모 항체 작제물 또는 항원 결합 도메인)의 변이체를 포함한다.
항체 작제물 또는 항원 결합 도메인과 관련하여, 기능적 변이체는 항체 작제물 또는 항원 결합 도메인과 아미노산 서열이 예를 들어, 적어도 약 30%, 약 50%, 약 75%, 약 80%, 약 85%, 약 90%, 약 91%, 약 92%, 약 93%, 약 94%, 약 95%, 약 96%, 약 97%, 약 98%, 약 99% 또는 그 이상 동일하다.
기능적 변이체는 예를 들어, 적어도 하나의 보존적 아미노산 치환을 갖는 모 항체 작제물 또는 항원 결합 도메인의 아미노산 서열을 포함할 수 있다. 대안적으로, 또는 추가적으로, 기능적 변이체는 적어도 하나의 비보존적 아미노산 치환을 갖는 모 항체 작제물 또는 항원 결합 도메인의 아미노산 서열을 포함할 수 있다. 이 경우, 비보존적 아미노산 치환이 기능적 변이체의 생물학적 활성을 방해하거나 저해하지 않는 것이 바람직하다. 비보존적 아미노산 치환은 기능적 변이체의 생물학적 활성을 향상시켜, 기능적 변이체의 생물학적 활성이 모 항체 작제물 또는 항원 결합 도메인과 비교하여 증가될 수 있다.
본 발명의 면역접합체를 포함하는 항체는 Fc 조작된 변이체를 포함한다. 일부 구현예에서, 하나 이상의 Fc 수용체에 대한 조절된 결합을 초래하는 Fc 영역 내의 돌연변이는 하기 돌연변이: SD (S239D), SDIE (S239D/I332E), SE (S267E), SELF (S267E/L328F), SDIE (S239D/I332E), SDIEAL (S239D/I332E/A330L), GA (G236A), ALIE (A330L/I332E), GASDALIE (G236A/S239D/A330L/I332E), V9 (G237D/P238D/P271G/A330R), 및 V11 (G237D/P238D/H268D/P271G/A330R) 중 하나 이상, 및/또는 다음 아미노산: E345R, E233, G237, P238, H268, P271, L328 및 A330에서 하나 이상의 돌연변이를 포함할 수 있다. Fc 수용체 결합을 조절하기 위한 추가의 Fc 영역 변형은 예를 들어, US 2016/0145350; US 7416726; 및 US 5624821에 기재되어 있으며, 이들은 그 전체가 본원에 참고로 포함된다.
본 발명의 면역접합체를 포함하는 항체는 아푸코실화와 같은 글리칸 변이체를 포함한다. 일부 구현예에서, 결합제의 Fc 영역은 천연의 비변형된 Fc 영역과 비교하여 Fc 영역의 변경된 글리코실화 패턴을 갖도록 변형된다.
본 발명의 항체 작제물 또는 항원 결합 도메인의 아미노산 치환은 바람직하게는 보존적 아미노산 치환이다. 보존적 아미노산 치환은 당업계에 공지되어 있으며, 특정 물리적 및/또는 화학적 특성을 갖는 하나의 아미노산이 동일하거나 유사한 화학적 또는 물리적 특성을 갖는 다른 아미노산으로 교환되는 아미노산 치환을 포함한다. 예를 들어, 보존적 아미노산 치환은 산성/음으로 하전된 다른 극성 아미노산 (예를 들어, Asp 또는 Glu)으로 치환된 산성/음으로 하전된 극성 아미노산, 비극성 측쇄가 있는 다른 아미노산으로 치환된 비극성 측쇄가 있는 아미노산 (예를 들어, Ala, Gly, Val, Ile, Leu, Met, Phe, Pro, Trp, Cys, Val 등), 염기성/양으로 하전된 다른 극성 아미노산으로 치환된 염기성/양으로 하전된 극성 아미노산 (예를 들어, Lys, His, Arg 등), 극성 측쇄가 있는 다른 비하전 아미노산으로 치환된 극성 측쇄가 있는 비하전 아미노산 (예를 들어, Asn, Gln, Ser, Thr, Tyr 등), 베타 분지된 측쇄가 있는 다른 아미노산으로 치환된 베타 분지된 측쇄가 있는 아미노산 (예를 들어, Ile, Thr, Val), 방향족 측쇄가 있는 다른 아미노산으로 치환된 방향족 측쇄가 있는 아미노산 (예를 들어, His, Phe, Trp 및 Tyr) 등일 수 있다.
항체 작제물 또는 항원 결합 도메인은 다른 성분, 예를 들어, 다른 아미노산이 항체 작제물 또는 항원 결합 도메인 기능적 변이체의 생물학적 활성을 실질적으로 변화시키지 않도록 본원에 기재된 특정 아미노산 서열 또는 서열들로 본질적으로 이루어질 수 있다.
일부 구현예에서, 면역접합체 내의 항체는 변형된 Fc 영역을 함유하고, 여기서 변형은 하나 이상의 Fc 수용체에 대한 Fc 영역의 결합을 조절한다.
일부 구현예에서, 면역접합체 내의 항체(예를 들어, 적어도 2개의 보조제 모이어티에 접합된 항체)는 Fc 영역 내의 돌연변이가 결여된 고유 항체와 비교하여 하나 이상의 Fc 수용체 (예를 들어, FcγRI (CD64), FcγRIIA (CD32A), FcγRIIB (CD32B), FcγRIIIA (CD16a), 및/또는 FcγRIIIB (CD16b))에 대한 조절된 결합 (예를 들어, 증가된 결합 또는 감소된 결합)을 초래하는 Fc 영역에서 하나 이상의 변형 (예를 들어, 아미노산 삽입, 결실, 및/또는 치환)을 함유한다. 일부 구현예에서, 면역접합체 내의 항체는 FcγRIIB에 대한 항체의 Fc 영역의 결합을 감소시키는 Fc 영역 내의 하나 이상의 변형 (예를 들어, 아미노산 삽입, 결실 및/또는 치환)을 함유한다. 일부 구현예에서, 면역접합체 내의 항체는 Fc 영역 내의 돌연변이가 결여된 고유 항체와 비교하여 FcγRI (CD64), FcγRIIA (CD32A), 및/또는 FcRγIIIA (CD16a)에 대한 동일한 결합을 유지하거나 증가된 결합을 가지면서 FcγRIIB에 대한 항체의 결합을 감소시키는 항체의 Fc 영역에서 하나 이상의 변형 (예를 들어, 아미노산 삽입, 결실, 및/또는 치환)을 함유한다. 일부 구현예에서, 면역접합체 내의 항체는 FcγRIIB에 대한 항체의 Fc 영역의 결합을 증가시키는 Fc 영역 내의 하나 이상의 변형을 함유한다.
일부 구현예에서, 조절된 결합은 항체의 천연 Fc 영역에 비해 항체의 Fc 영역에서의 돌연변이에 의해 제공된다. 돌연변이는 CH2 도메인, CH3 도메인, 또는 이들의 조합에 있을 수 있다. "천연 Fc 영역"은 "야생형 Fc 영역"과 동의어이며 자연에서 발견되는 Fc 영역의 아미노산 서열과 동일하거나 천연 항체 (예를 들어, 세툭시맙)에서 발견되는 Fc 영역의 아미노산 서열과 동일한 아미노산 서열을 포함한다. 천연 서열 인간 Fc 영역은 천연 서열 인간 IgG1 Fc 영역, 천연 서열 인간 IgG2 Fc 영역, 천연 서열 인간 IgG3 Fc 영역, 및 천연 서열 인간 IgG4 Fc 영역, 뿐만 아니라 그의 자연 발생 변이체를 포함한다. 천연 서열 Fc는 Fc의 다양한 동종이형을 포함한다 (Jefferis 등, (2009) mAbs, 1(4):332-338).
일부 구현예에서, 면역접합체의 항체의 Fc 영역은 천연의 비변형된 Fc 영역과 비교하여 Fc 영역의 변경된 글리코실화 패턴을 갖도록 변형된다. 인간 면역글로불린은 각 중쇄의 Cγ2 도메인에 있는 Asn297 잔기에서 글리코실화된다. 이 N-연결된 올리고당은 핵심 헵타사카라이드, N-아세틸글루코사민4만노스3 (GlcNAc4Man3)으로 구성된다. 엔도글리코시다제 또는 PNGase F를 사용한 헵타사카라이드의 제거는 항체 Fc 영역의 형태적 변화를 유도하는 것으로 알려져 있으며, 이는 활성화 FcγR에 대한 항체 결합 친화도를 현저히 감소시키고 효과기 기능을 감소시킬 수 있다. 핵심 헵타사카라이드는 종종 갈락토스, 이등분 GlcNAc, 푸코스 또는 시알산으로 장식되어 있으며, 이는 활성화 및 억제 FcγR에 대한 Fc 결합에 차등적으로 영향을 미친다. 또한, α2,6-시알화는 생체내 항염증 활성을 향상시키는 반면, 어푸코실화(afucosylation)는 FcγRIIIa 결합을 개선하고 항체 의존성 세포독성 및 항체 의존성 포식작용을 10배 증가시킨다는 것이 입증되었다. 따라서 특정 글리코실화 패턴을 사용하여 염증 효과기 기능을 제어할 수 있다.
일부 구현예에서, 글리코실화 패턴을 변경하기 위한 변형은 돌연변이이다. 예를 들어, Asn297에서의 치환. 일부 구현예에서, Asn297은 글루타민(N297Q)으로 돌연변이된다. FcγR-조절 신호전달을 조절하는 항체로 면역 반응을 제어하는 방법은 예를 들어 미국 특허 7,416,726 및 미국 특허 출원 공개 2007/0014795 및 2008/0286819에 기재되어 있으며, 이들은 그 전체가 참고로 본 명세서에 포함된다.
일부 구현예에서, 면역접합체의 항체는 비-자연 발생 글리코실화 패턴을 갖는 조작된 Fab 영역을 함유하도록 변형된다. 예를 들어, 하이브리도마는 증가된 FcRγIIIa 결합 및 효과기 기능을 가능하게 하는 특이적 돌연변이를 갖는 비푸코실화된 mAb, 탈시알릴화된 mAb 또는 탈글리코실화된 Fc를 분비하도록 유전적으로 조작될 수 있다. 일부 구현예에서, 면역접합체의 항체는 비푸코실화되도록 조작된다.
일부 구현예에서, 면역접합체 내의 항체의 전체 Fc 영역은 상이한 Fc 영역으로 교환되어, 항체의 Fab 영역이 비천연 Fc 영역에 접합된다. 예를 들어, 일반적으로 IgG1 Fc 영역을 포함하는 세툭시맙의 Fab 영역은 IgG2, IgG3, IgG4 또는 IgA에 접합될 수 있거나, 일반적으로 IgG4 Fc 영역을 포함하는 니볼루맙의 Fab 영역은 IgG1, IgG2, IgG3, IgA1 또는 IgG2에 접합될 수 있다. 일부 구현예에서, 비-천연 Fc 도메인을 갖는 Fc 변형된 항체는 또한 기재된 Fc 도메인의 안정성을 조절하는 하나 이상의 아미노산 변형, 예컨대 IgG4 Fc 내의 S228P 돌연변이를 포함한다. 일부 구현예에서, 비-천연 Fc 도메인을 갖는 Fc 변형된 항체는 또한 FcR에 대한 Fc 결합을 조절하는 본원에 기재된 하나 이상의 아미노산 변형을 포함한다.
일부 구현예에서, FcR에 대한 Fc 영역의 결합을 조절하는 변형은 천연 비-변형된 항체와 비교할 때 그의 항원에 대한 항체의 Fab 영역의 결합을 변경하지 않는다. 다른 구현예에서, FcR에 대한 Fc 영역의 결합을 조절하는 변형은 또한 천연 비-변형된 항체와 비교할 때 그의 항원에 대한 항체의 Fab 영역의 결합을 증가시킨다.
예시적인 구현예에서, 본 발명의 면역접합체는 PD-L1을 특이적으로 인식하고 결합하는 항원 결합 도메인을 포함하는 항체 작제물을 포함한다.
프로그램된 사멸-리간드 1 (PD-L1, 분화 클러스터 274, CD274, B7-상동체 1 또는 B7-H1)은 B7 단백질 슈퍼패밀리에 속하며 프로그램된 세포 사멸 단백질 1 (PD-1, PDCD1, 분화 클러스터 279 또는 CD279)의 리간드이다. PD-L1은 또한 B7.1 (CD80)과 상호작용할 수 있으며 이러한 상호작용은 T 세포 프라이밍을 억제하는 것으로 여겨진다. PD-L1/PD-1 축은 적응 면역 반응을 억제하는 데 큰 역할을 한다. 보다 구체적으로, PD-L1과 그의 수용체 PD-1의 결합은 T-세포의 활성화 및 증식을 억제하는 신호를 전달하는 것으로 여겨진다. PD-L1에 결합하고 리간드가 PD-1 수용체에 결합하는 것을 방지하는 제제는 이러한 면역억제를 방지하고, 따라서 암 또는 감염의 치료와 같이, 원하는 경우 면역 반응을 향상시킬 수 있다. PD-L1/PD-1 경로는 또한 자가면역을 예방하는 데 기여하므로 PD-L1에 대한 효능제 또는 면역 억제 페이로드를 전달하는 제제는 자가면역 장애의 치료에 도움이 될 수 있다.
아테졸리주맙 (TECENTRIQTM), 더발루맙 (IMFINZITM), 및 아벨루맙 (BAVENCIOTM)을 포함하여 PD-L1을 표적으로 하는 여러 항체가 암 치료를 위해 개발되었다. 그럼에도 불구하고, PD-L1에 높은 친화도로 결합하고 PD-L1/PD-1 신호전달을 효과적으로 방지하는 제제 및 PD-L1 발현 세포에 치료적 페이로드를 전달할 수 있는 제제를 비롯한 새로운 PD-L1-결합 제제에 대한 필요성이 계속 존재한다. 또한 자가면역 장애 및 감염을 치료하기 위한 새로운 PD-L1 결합제가 필요하다.
하나 이상의 피라졸로아제핀 모이어티에 공유 부착된 링커에 공유 부착된 항-PD-L1 항체를 포함하는 면역접합체를 세포, 또는 세포를 포함하는 포유동물에 투여하는 단계를 포함하는, PD-L1을 발현하는 세포에 피라졸로아제핀 유도체 페이로드를 전달하는 방법이 제공된다.
또한, 포유동물에서 면역 반응을 향상 또는 감소 또는 억제하는 방법, 및 PD-L1 억제에 반응성인 포유동물의 질환, 장애 또는 병태를 치료하는 방법이 제공되며, 이 방법은 그의 PD-L1 면역접합체를 포유동물에 투여하는 단계를 포함한다.
본 발명은 면역글로불린 중쇄 가변 영역 폴리펩티드 및 면역글로불린 경쇄 가변 영역 폴리펩티드를 포함하는 PD-L1 항체를 제공한다. PD-L1 항체는 PD-L1에 특이적으로 결합한다. 항체의 결합 특이성은 예를 들어 PD-L1 발현 세포를 표적화하여 이러한 세포에 치료 페이로드를 전달할 수 있게 한다. 일부 구현예에서, PD-L1 항체는 인간 PD-L1에 결합한다. 그러나 임의의 PD-L1 단편, 동족체 또는 파라로그에 결합하는 항체도 포함된다.
일부 구현예에서, PD-L1 항체는 PD-L1이 그의 수용체인 PD-1에 결합하는 것을 실질적으로 억제하거나 방해하지 않으면서 PD-L1에 결합한다. 그러나, 다른 구현예에서, PD-L1 항체는, 항체가 PD-L1/PD-1 신호전달을 억제하는 데(예를 들어, 치료 목적으로) 사용될 수 있도록 PD-L1과 그의 수용체인 PD-1의 결합을 완전히 또는 부분적으로 차단(억제 또는 방지)할 수 있다. 항체 또는 항원 결합 항체 단편은 PD-L1에 대해 단일특이적일 수 있거나, 이중특이적 또는 다중특이적일 수 있다. 예를 들어, 2가 또는 다가 항체 또는 항체 단편에서, 결합 도메인은 동일한 항원의 상이한 에피토프를 표적화하거나 상이한 항원을 표적화하는 상이한 것일 수 있다. 다가 결합 작제물을 작제하는 방법은 당업계에 공지되어 있다. 이중특이적 및 다중특이적 항체는 당업계에 공지되어 있다. 또한, 디아바디, 트리아바디 또는 테트라바디가 제공될 수 있는데, 폴리펩티드 사슬의 이량체, 삼량체 또는 사량체는 각각 동일한 폴리펩티드 사슬 상의 VH와 VL 사이의 쌍형성을 허용하기에는 너무 짧은 펩티드 링커에 의해 VL에 연결된 VH를 포함하고, 이로써 상이한 VH -VL 폴리펩타이드 사슬 상의 상보적 도메인 사이의 쌍형성을 유도하여 2개, 3개 또는 4개의 기능적 항원 결합 부위를 갖는 다량체 분자를 생성한다. 또한, 2개의 상이한 가변 도메인을 갖는 작은 scFv 단편인 bis-scFv 단편을 생성하여 2개의 상이한 에피토프에 결합할 수 있는 이중특이적 bis-scFv 단편을 생성할 수 있다. Fab 이량체(Fab2) 및 Fab 삼량체(Fab3)는 유전공학 방법을 사용하여 Fab 단편을 기반으로 하는 다중특이적 구조를 생성할 수 있다.
PD-L1 항체는 인간 항체, 비-인간 항체, 인간화 항체 또는 키메라 항체, 또는 상응하는 항체 단편일 수 있거나 그로부터 수득될 수 있다. "키메라" 항체는 전형적으로 인간 불변 영역 및 비-인간 가변 영역을 포함하는 항체 또는 그의 단편이다. "인간화" 항체는 전형적으로 인간 항체 스캐폴드를 포함하지만 적어도 하나의 CDR(예를 들어, 1, 2, 3, 4, 5 또는 모든 6개의 CDR)에 비-인간 기원 아미노산 또는 서열을 포함하는 단클론성 항체이다.
PD-L1 항체는 WO 2021/150701에 기술되고 본 명세서에 참조로 포함되는 바와 같이 내재화될 수 있거나, PD-L1 항체는 WO 2021/150702에 기재되고 본 명세서에 참조로 포함되는 바와 같이 비-내재화될 수 있다.
예시적인 구현예에서, 본 발명의 면역접합체는 HER2를 특이적으로 인식하고 결합하는 항원 결합 도메인을 포함하는 항체 작제물을 포함한다.
특정 구현예에서, 본 발명의 면역접합체는 항-HER2 항체를 포함한다. 본 발명의 한 구현예에서, 본 발명의 면역접합체의 항-HER2 항체는 인간화 항-HER2 항체, 예를 들어, 본원에 참조로 구체적으로 포함되는 US 5821337의 표 3에 기술된 바와 같은 huMAb4D5-1, huMAb4D5-2, huMAb4D5-3, huMAb4D5-4, huMAb4D5-5, huMAb4D5-6, huMAb4D5-7 및 huMAb4D5-8을 포함한다. 이러한 항체는 HER2에 결합하는 뮤린 항체 (4D5)의 상보성 결정 영역이 있는 인간 프레임워크 영역을 함유한다. 인간화 항체 huMAb4D5-8은 상표명 HERCEPTINTM (Genentech, Inc.)으로 상업적으로 입수가능한 트라스투주맙이라고도 지칭된다.
트라스투주맙 (CAS 180288-69-1, HERCEPTIN®, huMAb4D5-8, rhuMAb HER2, Genentech)은 HER2의 세포외 도메인에 대한 세포 기반 검정 (Kd = 5 nM)에서 높은 친화도를 갖고 선택적으로 결합하는 뮤린 항-HER2 항체 (4D5)의 인간화 버전인 재조합 DNA 유래, IgG1 카파, 단일클론 항체이다 (US 5677171; US 5821337; US 6054297; US 6165464; US 6339142; US 6407213; US 6639055; US 6719971; US 6800738; US 7074404; Coussens 등 (1985) Science 230:1132-9; Slamon 등 (1989) Science 244:707-12; Slamon 등 (2001) New Engl. J. Med. 344:783-792).
본 발명의 한 구현예에서, 항체 작제물 또는 항원 결합 도메인은 트라스투주맙의 CDR 영역을 포함한다. 본 발명의 한 구현예에서, 항-HER2 항체는 트라스투주맙의 프레임워크 영역을 추가로 포함한다. 본 발명의 한 구현예에서, 항-HER2 항체는 트라스투주맙의 가변 영역 중 하나 또는 둘 모두를 추가로 포함한다.
본 발명의 또 다른 구현예에서, 본 발명의 면역접합체의 항-HER2 항체는 US 7862817에 기재된 바와 같은 인간화 항-HER2 항체, 예를 들어, 인간화 2C4를 포함한다. 예시적인 인간화 2C4 항체는 퍼투주맙 (CAS 등록 번호 380610-27-5), PERJETATM (Genentech, Inc.)이다. 퍼투주맙은 HER 이량체화 억제제 (HDI)이며 다른 HER 수용체 (예컨대, EGFR/HER1, HER2, HER3 및 HER4)와 활성 이종이량체 또는 동종이량체를 형성하는 HER2의 능력을 억제하는 기능을 한다. 예를 들어, Harari and Yarden, Oncogene 19:6102-14 (2000); Yarden and Sliwkowski. Nat Rev Mol Cell Biol 2:127-37 (2001); Sliwkowski Nat Struct Biol 10:158-9 (2003); Cho 등 Nature 421:756-60 (2003); 및 Malik 등 Pro Am Soc Cancer Res 44:176-7 (2003) 참조. PERJETATM는 유방암 치료제로 승인되었다.
본 발명의 한 구현예에서, 항체 작제물 또는 항원 결합 도메인은 퍼투주맙의 CDR 영역을 포함한다. 본 발명의 한 구현예에서, 항-HER2 항체는 퍼투주맙의 프레임워크 영역을 추가로 포함한다. 본 발명의 한 구현예에서, 항-HER2 항체는 퍼투주맙의 가변 영역 중 하나 또는 둘 모두를 추가로 포함한다.
예시적인 구현예에서, 본 발명의 면역접합체는 카프린-1을 특이적으로 인식하고 결합하는 항원 결합 도메인을 포함하는 항체 작제물을 포함한다 (Ellis JA, Luzio JP (1995) J Biol Chem. 270(35):20717-23; Wang B, 등 (2005) J Immunol. 175 (7):4274-82; Solomon S, 등 (2007) Mol Cell Biol. 27(6):2324-42). 카프린-1은 GPIAP1, GPIP137, GRIP137, M11S1, RNG105, p137GPI 및 세포 주기 관련 단백질 1로도 알려져 있다.
세포질 활성화/증식 관련 단백질-1 (카프린-1)은 세포 주기 조절 관련 유전자의 조절에 참여하는 RNA 결합 단백질이다. 카프린-1은 c-Myc 및 cyclin D2 mRNA에 선택적으로 결합하여 G1 단계를 통해 S 단계로의 세포 진행을 가속화하고 세포 생존력을 향상시키며 세포 성장을 촉진하여, 종양 형성에 중요한 역할을 할 수 있음을 나타낸다 (Wang B, 등 (2005) J Immunol. 175:4274-4282). 카프린-1은 단독으로 또는 RasGAP SH3 도메인 결합 단백질 1 및 취약 X 정신 지체 단백질과 같은 다른 RNA 결합 단백질과 함께 작용한다. 종양 형성 과정에서 카프린-1은 주로 세포 증식을 활성화하고 면역 관문 단백질의 발현을 상향 조절함으로써 기능한다. 스트레스 과립의 형성을 통해 카프린-1은 종양 세포가 불리한 조건에 적응하는 과정에도 관여하여 방사선 및 화학 요법 내성에 기여한다. 다양한 임상 악성 종양에서의 역할을 감안할 때, 카프린-1은 바이오마커로서, 및 신규 치료제 개발의 표적으로서 사용될 가능성이 있다 (Yang, Z-S, 등 (2019) Oncology Letters 18:15-21).
치료 및 검출을 위해 카프린-1을 표적으로 하는 항체가 기술되어 있다 (WO 2011/096519; WO 2013/125654; WO 2013/125636; WO 2013/125640; WO 2013/125630; WO 2013/018889; WO 2013/018891); WO 2013/018883, WO 2013/018892, WO 2014/014082, WO 2014/014086, WO 2015/020212, WO 2018/079740).
예시적인 구현예에서, 본 발명의 면역접합체는 CEA를 특이적으로 인식하고 결합하는 항원 결합 도메인을 포함하는 항체 작제물을 포함한다. CD66e (분화 클러스터 66e)로도 알려져 있는 암종배아 항원 관련 세포 부착 분자 5 (CEACAM5)는 암종배아 항원 (CEA) 유전자 계열의 구성원이다.
암 배아 항원 (CEA, CD66e, CEACAM5)의 증가된 발현은 종양의 다양한 생물학적 측면, 특히 종양 세포 부착, 전이, 세포 면역 메커니즘 차단 및 항아폽토시스 기능을 갖는 것과 관련이 있다. CEA는 또한 많은 암종에 대한 혈액 표지자로 사용된다. MN-14 및 hMN14로도 알려진 라베투주맙 (CEA-CIDETM, Immunomedics, CAS 등록 번호 219649-07-7)은 인간화 IgG1 단일클론 항체이며 결장직장암 치료를 위해 연구되었다 (Blumenthal, R. 등 (2005) Cancer Immunology Immunotherapy 54(4):315-327). 캄프토테신 유사체에 접합된 라베투주맙 (labetuzumab govitecan, IMMU-130)은 암 배아 항원 관련 세포 부착 분자 5 (CEACAM5)을 표적으로 하고 재발성 또는 불응성 전이성 결장직장암 환자에서 연구 중이다 (Sharkey, R. 등, (2018), Molecular Cancer Therapeutics 17(1):196-203; Cardillo, T. 등 (2018) Molecular Cancer Therapeutics 17(1):150-160).
본 발명의 한 구현예에서, CEA 표적화 항체 작제물 또는 항원 결합 도메인은 US 6676924에 개시된 hMN-14/라베투주맙 서열번호 1의 가변 경쇄(VL 카파)를 포함하며, 이는 이러한 목적을 위해 본 명세서에 참조로 포함된다.
DIQLTQSPSSLSASVGDRVTITCKASQDVGTSVAWYQQKPGKAPKLLIYWTSTRHTGVPSRFSGSGSGTDFTFTISSLQPEDIATYYCQQYSLYRSFGQGTKVEIK 서열번호 1
본 발명의 구현예에서, CEA 표적화 항체 작제물 또는 항원 결합 도메인은 hMN-14/라베투주맙 서열번호 2-8(US 6676924)의 경쇄 CDR(상보성 결정 영역) 또는 경쇄 프레임워크(LFR) 서열을 포함한다.
Figure pct00006
본 발명의 한 구현예에서, CEA 표적화 항체 작제물 또는 항원 결합 도메인은 US 6676924에 개시된 hMN-14/라베투주맙 서열번호 9의 가변 중쇄(VH)를 포함하며, 이는 이러한 목적을 위해 본 명세서에 참조로 포함된다.
EVQLVESGGGVVQPGRSLRLSCSSSGFDFTTYWMSWVRQAPGKGLEWVAEIHPDSSTINYAPSLKDRFTISRDNSKNTLFLQMDSLRPEDTGVYFCASLYFGFPWFAYWGQGTPVTVSS 서열번호 9
본 발명의 구현예에서, CEA 표적화 항체 작제물 또는 항원 결합 도메인은 hMN-14/라베투주맙 서열번호 10-16(US 6676924)의 중쇄 CDR(상보성 결정 영역) 또는 중쇄 프레임워크(HFR) 서열을 포함한다.
Figure pct00007
본 발명의 한 구현예에서, CEA 표적화 항체 작제물 또는 항원 결합 도메인은 US 8642742에 개시된 바와 같이 hPR1A3 서열번호 17의 가변 경쇄(VL kappa)를 포함하며, 이는 이러한 목적을 위해 본 명세서에 참조로 포함된다.
DIQMTQSPSSLSASVGDRVTITCKASAAVGTYVAWYQQKPGKAPKLLIYSASYRKRGVPSRFSGSGSGTDFTLTISSLQPEDFATYYCHQYYTYPLFTFGQGTKLEIK 서열번호 17
본 발명의 구현예에서, CEA 표적화 항체 작제물 또는 항원 결합 도메인은 hPR1A3 서열번호 18-24(US 8642742)의 경쇄 CDR(상보성 결정 영역) 또는 경쇄 프레임워크(LFR) 서열을 포함한다.
Figure pct00008
본 발명의 구현예에서, CEA 표적화 항체 작제물 또는 항원 결합 도메인은 hPR1A3 서열번호 25-31 (US 8642742)의 중쇄 CDR(상보성 결정 영역) 또는 중쇄 프레임워크(LFR) 서열을 포함한다.
Figure pct00009
본 발명의 한 구현예에서, CEA 표적화 항체 작제물 또는 항원 결합 도메인은 US 7232888에 개시된 hMFE-23 서열번호 32의 가변 경쇄(VL 카파)를 포함하며, 이는 이러한 목적을 위해 본 명세서에 참조로 포함된다.
ENVLTQSPSSMSASVGDRVNIACSASSSVSYMHWFQQKPGKSPKLWIYSTSNLASGVPSRFSGSGSGTDYSLTISSMQPEDAATYYCQQRSSYPLTFGGGTKLEIK 서열번호 32
본 발명의 구현예에서, CEA 표적화 항체 작제물 또는 항원 결합 도메인은 hMFE-23 서열번호 33-40(US 7232888)의 경쇄 CDR(상보성 결정 영역) 또는 경쇄 프레임워크(LFR) 서열을 포함한다. 구현예는 LFR1, 서열번호:33 및 서열번호:34의 2개의 변이체를 포함한다.
Figure pct00010
본 발명의 구현예에서, CEA 표적화 항체 작제물 또는 항원 결합 도메인은 hMFE-23 서열번호 41(US 7232888)의 가변 중쇄(VH)를 포함한다.
QVKLEQSGAEVVKPGASVKLSCKASGFNIKDSYMHWLRQGPGQRLEWIGWIDPENGDTEYAPKFQGKATFTTDTSANTAYLGLSSLRPEDTAVYYCNEGTPTGPYYFDYWGQGTLVTVSS 서열번호 41
본 발명의 구현예에서, CEA 표적화 항체 작제물 또는 항원 결합 도메인은 hMFE-23 서열번호 42-49(US 7232888)의 중쇄 CDR(상보성 결정 영역) 또는 중쇄 프레임워크(LFR) 서열을 포함한다. 구현예는 HFR1, 서열번호:42 및 서열번호:43의 2개의 변이체를 포함한다.
Figure pct00011
본 발명의 구현예에서, CEA 표적화 항체 작제물 또는 항원 결합 도메인은 SM3E 서열번호 50 (US 7232888)의 가변 경쇄 (VL 카파)를 포함한다.
ENVLTQSPSSMSVSVGDRVTIACSASSSVPYMHWLQQKPGKSPKLLIYLTSNLASGVPSRFSGSGSGTDYSLTISSVQPEDAATYYCQQRSSYPLTFGGGTKLEIK 서열번호 50
본 발명의 구현예에서, CEA 표적화 항체 작제물 또는 항원 결합 도메인은 SM3E 서열번호 51-56 및 38-39(US 7232888)의 경쇄 CDR(상보성 결정 영역) 또는 경쇄 프레임워크(LFR) 서열을 포함한다. 구현예는 LFR1, 서열번호:51 및 서열번호:52의 2개의 변이체를 포함한다.
Figure pct00012
본 발명의 구현예에서, CEA 표적화 항체 작제물 또는 항원 결합 도메인은 NP-4/아르시투모맙 서열번호 57의 가변 경쇄를 포함한다.
QTVLSQSPAILSASPGEKVTMTCRASSSVTYIHWYQQKPGSSPKSWIYATSNLASGVPARFSGSGSGTSYSLTISRVEAEDAATYYCQHWSSKPPTFGGGTKLEIK 서열번호 57
본 발명의 구현예에서, CEA 표적화 항체 작제물 또는 항원 결합 도메인은 NP-4/아르시투모맙 서열번호 58-64의 경쇄 CDR(상보성 결정 영역) 또는 경쇄 프레임워크(LFR) 서열을 포함한다.
Figure pct00013
본 발명의 구현예에서, CEA 표적화 항체 작제물 또는 항원 결합 도메인은 NP-4/아르시투모맙 서열번호 65의 가변 중쇄 (VH)를 포함한다.
EVKLVESGGGLVQPGGSLRLSCATSGFTFTDYYMNWVRQPPGKALEWLGFIGNKANGYTTEYSASVKGGRFTISRDKSQSILYLQMNTLRAEDSATYYCTRDRGLRFYFDYWGQGTTLTVSS 서열번호 65.
본 발명의 구현예에서, CEA 표적화 항체 작제물 또는 항원 결합 도메인은 NP-4 서열번호 66-72의 중쇄 CDR (상보성 결정 영역) 또는 중쇄 프레임워크 (HFR) 서열을 포함한다.
Figure pct00014
본 발명의 구현예에서, CEA 표적화 항체 작제물 또는 항원 결합 도메인은 US 7776330에 개시된 바와 같이 M5A/hT84.66 서열번호 73의 가변 경쇄(VL kappa)를 포함하며, 이는 이러한 목적을 위해 본 명세서에 참조로 포함된다.
DIQLTQSPSSLSASVGDRVTITCRAGESVDIFGVGFLHWYQQKPGKAPKLLIYRASNLESGVPSRFSGSGSRTDFTLTISSLQPEDFATYYCQQTNEDPYTFGQGTKVEIK 서열번호 73
본 발명의 구현예에서, CEA 표적화 항체 작제물 또는 항원 결합 도메인은 M5A/hT84.66 서열번호 74-80 (US 7776330)의 경쇄 CDR(상보성 결정 영역) 또는 경쇄 프레임워크(LFR) 서열을 포함한다.
Figure pct00015
본 발명의 구현예에서, CEA 표적화 항체 작제물 또는 항원 결합 도메인은 M5A/hT84.66 서열번호 81 (US 7776330)의 가변 중쇄(VH)를 포함한다.
EVQLVESGGGLVQPGGSLRLSCAASGFNIKDTYMHWVRQAPGKGLEWVARIDPANGNSKYADSVKGGRFTISADTSKNTAYLQMNSLRAEDTAVYYCAPFGYYVSDYAMAYWGQGTLVTVSS 서열번호 81
본 발명의 구현예에서, CEA 표적화 항체 작제물 또는 항원 결합 도메인은 M5A/hT84.66 서열번호 82-88 (US 7776330)의 중쇄 CDR(상보성 결정 영역) 또는 중쇄 프레임워크(HFR) 서열을 포함한다.
Figure pct00016
본 발명의 구현예에서, CEA 표적화 항체 작제물 또는 항원 결합 도메인은 US 9617345에 개시된 바와 같이 hAb2-3 서열번호 89의 가변 경쇄(VL kappa)를 포함하며, 이는 이러한 목적을 위해 본 명세서에 참조로 포함된다.
DIQMTQSPASLSASVGDRVTITCRASENIFSYLAWYQQKPGKSPKLLVYNTRTLAEGVPSRFSGSGSGTDFSLTISSLQPEDFATYYCQHHYGTPFTFGSGTKLEIK 서열번호 89
본 발명의 구현예에서, CEA 표적화 항체 작제물 또는 항원 결합 도메인은 hAb2-3 서열번호 90-96 (US 9617345)의 경쇄 CDR(상보성 결정 영역) 또는 경쇄 프레임워크(LFR) 서열을 포함한다.
Figure pct00017
본 발명의 구현예에서, CEA 표적화 항체 작제물 또는 항원 결합 도메인은 서열번호 97 (US 9617345)의 가변 중쇄 (VH)를 포함한다.
EVQLQESGPGLVKPGGSLSLSCAASGFVFSSYDMSWVRQTPERGLEWVAYISSGGGITYAPSTVKGRFTVSRDNAKNTLYLQMNSLTSEDTAVYYCAAHYFGSSGPFAYWGQGTLVTVSS 서열번호 97
본 발명의 구현예에서, CEA 표적화 항체 작제물 또는 항원 결합 도메인은 hAb2-3 서열번호 98-104의 중쇄 CDR (상보성 결정 영역) 또는 중쇄 프레임워크 (HFR) 서열을 포함한다.
Figure pct00018
본 발명의 구현예에서, CEA 표적화 항체 작제물 또는 항원 결합 도메인은 US 9982063에 개시된 바와 같이 A240VL-B9VH/AMG-211 서열번호 105의 가변 경쇄(VL kappa)를 포함하며, 이는 이러한 목적을 위해 본 명세서에 참조로 포함된다.
QAVLTQPASLSASPGASASLTCTLRRGINVGAYSIYWYQQKPGSPPQYLLRYKSDSDKQQGSGVSSRFSASKDASANAGILLISGLQSEDEADYYCMIWHSGASAVFGGGTKLTVL 서열번호 105
본 발명의 구현예에서, CEA 표적화 항체 작제물 또는 항원 결합 도메인은 A240VL-B9VH/AMG-211 서열번호 106-112 (US 9982063)의 경쇄 CDR(상보성 결정 영역) 또는 경쇄 프레임워크(LFR) 서열을 포함한다.
Figure pct00019
본 발명의 구현예에서, CEA 표적화 항체 작제물 또는 항원 결합 도메인은 B9VH 서열번호 113 (US 9982063)의 가변 중쇄 (VH)를 포함한다.
EVQLVESGGGLVQPGRSLRLSCAASGFTVSSYWMHWVRQAPGKGLEWVGFIRNKANGGTTEYAASVKGRFTISRDDSKNTLYLQMNSLRAEDTAVYYCARDRGLRFYFDYWGQGTTVTVSS 서열번호 113
본 발명의 구현예에서, CEA 표적화 항체 작제물 또는 항원 결합 도메인은 서열번호 114-121 (US 9982063)의 중쇄 CDR (상보성 결정 영역) 또는 중쇄 프레임워크 (HFR) 서열을 포함한다. 구현예는 CDR-H2의 2개의 변이체, 서열번호:117 및 서열번호:118을 포함한다.
Figure pct00020
본 발명의 구현예에서, CEA 표적화 항체 작제물 또는 항원 결합 도메인은 E12VH 서열번호 122 (US 9982063)의 가변 중쇄 (VH)를 포함한다.
EVQLVESGGGLVQPGRSLRLSCAASGFTVSSYWMHWVRQAPGKGLEWVGFILNKANGGTTEYAASVKGRFTISRDDSKNTLYLQMNSLRAEDTAVYYCARDRGLRFYFDYWGQGTTVTVSS 서열번호 122
본 발명의 구현예에서, CEA 표적화 항체 작제물 또는 항원 결합 도메인은 서열번호 123-129 (US 9982063)의 중쇄 CDR (상보성 결정 영역) 또는 중쇄 프레임워크 (HFR) 서열을 포함한다.
Figure pct00021
본 발명의 구현예에서, CEA 표적화 항체 작제물 또는 항원 결합 도메인은 PR1A3 VH 서열번호 130 (US 8642742)의 가변 중쇄 (VH)를 포함한다.
QVQLVQSGAEVKKPGASVKVSCKASGYTFTEFGMNWVRQAPGQGLEWMGWINTKTGEATYVEEFKGRVTFTTDTSTSTAYMELRSLRSDDTAVYYCARWDFAYYVEAMDYWGQGTTVTVSS 서열번호 130
예시적인 구현예에서, 본 발명의 면역접합체는 TROP2를 특이적으로 인식하고 결합하는 항원 결합 도메인을 포함하는 항체 작제물을 포함한다. 종양 연관 칼슘 신호 변환체 2(TROP-2)는 TACSTD2 유전자에 의해 인코딩되는 막관통 당단백질이다 (Linnenbach AJ, 등 (1993) Mol Cell Biol. 13(3): 1507-15; Calabrese G, 등 (2001) Cytogenet Cell Genet. 92(1-2): 164-5). TROP2는 많은 암에서 차등적으로 발현되고 자가 재생, 증식, 침습 및 생존을 위해 세포에 신호를 보내는 세포내 칼슘 신호 변환체이다. TROP2는 줄기 세포 마커로 간주되며 많은 정상 조직에서 발현되지만 대조적으로 많은 암에서 과발현된다 (Ohmachi T, 등., (2006) Clin. Cancer Res., 12(10), 3057-3063; Muhlmann G, 등., (2009) J. Clin. Pathol., 62(2), 152-158; Fong D, 등., (2008) Br. J. Cancer, 99(8), 1290-1295; Fong D, 등., (2008) Mod. Pathol., 21(2), 186-191; Ning S, 등., (2013) Neurol. Sci., 34(10), 1745-1750). TROP2의 과발현은 예후적으로 중요하다. TROP2와 상호 작용하는 여러 리간드가 제안되었다. TROP2는 다양한 경로를 통해 세포에 신호를 보내고 여러 전사 인자의 복잡한 네트워크에 의해 전사적으로 조절된다.
인간 TROP2(TACSTD2: 종양 연관 칼슘 신호 변환체 2, GA733-1, EGP-1, M1S1; 이하, hTROP2로 지칭함)는 323개의 아미노산 잔기로 구성된 단일 통과 막관통 유형 1 세포막 단백질이다. 인간 영양막세포와 암 세포에 공통적인 면역 저항에 관여하는 세포막 단백질의 존재가 이전에 제안되었지만 (Faulk W P, 등., Proc. Natl. Acad. Sci. 75(4):1947-1951 (1978)), 인간 융모막암종 세포주에서 세포막 단백질에 대한 단클론성 항체에 의해 인식되는 항원 분자가 확인되었고 인간 영양막세포에서 발현되는 분자 중 하나로 TROP2로 지정되었다 (Lipinski M, 등., Proc. Natl. Acad. Sci. 78(8), 5147-5150 (1981)). 이 분자는 또한 위암 세포주로 면역화하여 얻은 마우스 단클론성 항체 GA733에 의해 인식되는 종양 항원 GA733-1(Linnenbach A J, 등., Proc. Natl. Acad. Sci. 86(1), 27-31 (1989)) 또는 비-소세포 폐암 세포로 면역화하여 얻은 마우스 단클론성 항체 RS7-3G11에 의해 인식되는 상피 당단백질(EGP-1; Basu A, 등., Int. J. Cancer, 62 (4), 472-479 (1995))로 지정되었다. 그러나 1995년에 TROP2 유전자가 클로닝되었고, 이들 분자는 모두 동일한 분자임이 확인되었다 (Fornaro M, 등., Int. J. Cancer, 62(5), 610-618 (1995)). hTROP2의 DNA 서열 및 아미노산 서열은 공개 데이터베이스에서 입수할 수 있으며 예를 들어 기탁 번호 NM_002353 및 NP_002344 (NCBI)로 지정될 수 있다.
암과의 연관성을 시사하는 정보에 따라, 현재까지 다수의 항-hTROP2 항체가 확립되어 항종양 효과가 연구되고 있다. 이들 항체 중에서, 예를 들어 누드 마우스 이종이식편 모델에서 자체적으로 항종양 활성을 나타내는 비접합 항체(WO 2008/144891; WO 2011/145744; WO 2011/155579; WO 2013/077458) 뿐만 아니라 세포독성 약물과 함께 ADC로서 항종양 활성을 나타내는 항체(WO 2003/074566; WO 2011/068845; WO 2013/068946; US 7999083)가 개시된다. 그러나 이들의 활동 강도나 커버리지는 아직 미흡하며 hTROP2의 치료 표적으로서의 의료 필요는 충족되지 못하고 있다.
암 세포에서 TROP2 발현은 약물 내성과 관련이 있다. 몇 가지 전략은 항체, 항체 융합 단백질, 화학적 억제제, 나노입자 등을 포함하는 암 세포의 TROP2를 표적으로 한다. 이러한 다양한 요법적 치료를 사용한 시험관 내 연구 및 전임상 연구는 마우스에서 시험관 내 및 생체 내 모두에서 종양 세포 성장을 상당히 억제하는 결과를 초래하였다. 임상 연구는 TROP2를 예후 바이오마커 및 내성을 역전시키는 치료 표적으로서 잠재적으로 적용할 수 있는 가능성을 조사하였다.
사시투주맙 고비테칸 (TRODELVY®, Immunomedics, IMMU-132), 토포이소머라제 억제제 약물에 연결된 TROP2 지향 항체를 포함하는 항체-약물 접합체는 이전에 적어도 두 가지 치료를 받은 성인 환자의 전이성 삼중 음성 유방암(mTNBC) 치료에 대해 표시된다. 사시투주맙 고비테칸의 TROP2 항체는 이리노테칸의 활성 대사산물인 SN-38에 접합된다(US 2016/0297890; WO 2015/098099).
본 발명의 한 구현예에서, TROP2 표적화 항체 작제물 또는 항원 결합 도메인은 hRS7(인간화 RS7)의 경쇄 CDR(상보성 결정 영역) 서열, 서열번호 131-133(US 7238785, 이는 본 명세서에 참조로 포함됨)을 포함한다.
Figure pct00022
본 발명의 한 구현예에서, TROP2 표적화 항체 작제물 또는 항원 결합 도메인은 hRS7(인간화 RS7)의 중쇄 CDR(상보성 결정 영역) 서열, 서열번호 134-136 (US 7238785; US 9797907; US 9382329; WO 2020/142659, 이들 각각은 본 명세서에 참조로 포함됨)을 포함한다.
Figure pct00023
본 발명의 한 구현예에서, TROP2 표적화 항체 작제물 또는 항원 결합 도메인은 AR47A6.4.2의 경쇄 CDR(상보성 결정 영역) 서열, 서열번호 131-133(US 7420040, 이는 본 명세서에 참조로 포함됨)을 포함한다.
Figure pct00024
본 발명의 한 구현예에서, TROP2 표적화 항체 작제물 또는 항원 결합 도메인은 AR47A6.4.2의 중쇄 CDR(상보성 결정 영역) 서열, 서열번호 134, 137, 138 (US 7420040, 이는 본 명세서에 참조로 포함됨)을 포함한다.
Figure pct00025
본 발명의 한 구현예에서, TROP2 표적화 항체 작제물 또는 항원 결합 도메인은 인간화 KM4097의 경쇄 CDR(상보성 결정 영역) 서열, 서열번호 139-141 (US 2012/0237518, 이는 본 명세서에 참조로 포함됨)을 포함한다.
Figure pct00026
본 발명의 한 구현예에서, TROP2 표적화 항체 작제물 또는 항원 결합 도메인은 인간화 KM4097의 중쇄 CDR(상보성 결정 영역) 서열, 서열번호 142-144 (US 2012/0237518, 이는 본 명세서에 참조로 포함됨)을 포함한다.
Figure pct00027
본 발명의 한 구현예에서, TROP2 표적화 항체 작제물 또는 항원 결합 도메인은 hTINA1-H1L1의 경쇄 CDR(상보성 결정 영역) 서열, 서열번호 132, 133, 145 (US 10,227,417, 이는 본 명세서에 참조로 포함됨)을 포함한다.
Figure pct00028
Figure pct00029
본 발명의 한 구현예에서, TROP2 표적화 항체 작제물 또는 항원 결합 도메인은 hTINA1-H1L1의 중쇄 CDR(상보성 결정 영역) 서열, 서열번호 146-148 (US 10,227,417, 이는 본 명세서에 참조로 포함됨)을 포함한다.
Figure pct00030
본 발명의 한 구현예에서, TROP2 표적화 항체 작제물 또는 항원 결합 도메인은 hTINA1-H1L1의 경쇄 CDR(상보성 결정 영역) 서열, 서열번호 149-151 (US 8871908, 이는 본 명세서에 참조로 포함됨)을 포함한다.
Figure pct00031
본 발명의 한 구현예에서, TROP2 표적화 항체 작제물 또는 항원 결합 도메인은 hTINA1-H1L1의 중쇄 CDR(상보성 결정 영역) 서열, 서열번호 152-157 (US 8871908, 이는 본 명세서에 참조로 포함됨)을 포함한다.
Figure pct00032
본 발명의 한 구현예에서, TROP2 표적화 항체 작제물 또는 항원 결합 도메인은 hTINA1-H1L1의 경쇄 CDR(상보성 결정 영역) 서열, 서열번호 150, 151, 158 (US 8871908, 이는 본 명세서에 참조로 포함됨)을 포함한다.
Figure pct00033
본 발명의 한 구현예에서, TROP2 표적화 항체 작제물 또는 항원 결합 도메인은 hTINA1-H1L1의 중쇄 CDR(상보성 결정 영역) 서열, 서열번호 152-154, 157, 159, 160 (US 8871908, 이는 본 명세서에 참조로 포함됨)을 포함한다.
Figure pct00034
일부 구현예에서, 항체 작제물은 Fc 도메인을 추가로 포함한다. 특정 구현예에서, 항체 작제물은 항체이다. 특정 구현예에서, 항체 작제물은 융합 단백질이다. 항원 결합 도메인은 단일쇄 가변 영역 단편 (scFv)일 수 있다. 합성 펩타이드를 통해 항체 경쇄의 V 도메인에 연결된 항체 중쇄의 가변 (V) 도메인을 포함하는 절단된 Fab 단편인 단일쇄 가변 영역 단편 (scFv)은 일상적인 재조합 DNA 기술 기법을 사용하여 생성할 수 있다. 유사하게, 이황화물-안정화된 가변 영역 단편 (dsFv)은 재조합 DNA 기술에 의해 제조될 수 있다. 항체 작제물 또는 항원 결합 도메인은 항체, 예컨대 항-PD-L1 항체, 항-Her2 항체, 항-CEA 항체 또는 항-TROP2 항체의 항원 결합 도메인의 하나 이상의 가변 영역(예를 들어, 2개의 가변 영역)을 포함할 수 있고, 각각의 가변 영역은 CDR1, CDR2, 및 CDR3을 포함한다.
일부 구현예에서, 면역접합체 내의 항체는 변형된 Fc 영역을 함유하고, 여기서 변형은 하나 이상의 Fc 수용체에 대한 Fc 영역의 결합을 조절한다.
일부 구현예에서, Fc 영역은 TGFβ1에 결합할 수 있는 형질전환 성장 인자 베타 1 (TGFβ1) 수용체, 또는 그의 단편을 포함함으로써 변형된다. 예를 들어, 수용체는 TGFβ 수용체 II (TGFβRII)일 수 있다. 일부 구현예에서, TGFβ 수용체는 인간 TGFβ 수용체이다. 일부 구현예에서, IgG는 TGFβRII 세포외 도메인 (ECD)에 대한 C-말단 융합을 갖는다. "Fc 링커"는 IgG를 TGFβRII 세포외 도메인에 부착하는 데 사용될 수 있다. Fc 링커는 표적에 대한 결합 특이성을 유지하면서 분자의 적절한 3차원 폴딩을 허용하는 짧고 유연한 펩타이드일 수 있다. 일부 구현예에서, TGFβ 수용체의 N-말단은 (Fc 링커가 있거나 없는) 항체 작제물의 Fc에 융합된다. 일부 구현예에서, 항체 작제물 중쇄의 C-말단은 (Fc 링커가 있거나 없는) TGFβ 수용체에 융합된다. 일부 구현예에서, 항체 작제물 중쇄의 C-말단 라이신 잔기는 알라닌으로 돌연변이된다.
일부 구현예에서, 면역접합체 내의 항체는 글리코실화된다.
일부 구현예에서, 면역접합체 내의 항체는 조작된 시스테인이 접합에 이용가능하지만, 면역글로불린 접힘 및 조립을 교란시키거나 항원 결합 및 효과기 기능을 변경하지 않는 부위에서 시스테인 치환을 통해 항체에 대한 보조제, 표지 또는 약물 모이어티의 부위-특이적 접합을 제공하는 시스테인-조작된 항체이다 (Junutula, 등, 2008b Nature Biotech., 26(8):925-932; Dornan 등 (2009) Blood 114(13):2721-2729; US 7521541; US 7723485; US 2012/0121615; WO 2009/052249). "시스테인 조작된 항체" 또는 "시스테인 조작된 항체 변이체"는 항체의 하나 이상의 잔기가 시스테인 잔기로 치환된 항체이다. 시스테인-조작된 항체는 균일한 화학량론 (예를 들어, 단일 조작된 시스테인 부위를 갖는 항체에서 항체당 최대 2개의 피라졸로아제핀 모이어티)을 갖는 피라졸로아제핀-링커 화합물로서 피라졸로아제핀 보조제 모이어티에 접합될 수 있다.
일부 구현예에서, 표 3의 면역접합체를 제조하기 위해 사용된 시스테인-조작된 항체는 경쇄의 149-라이신 부위 (LC K149C)에 도입된 시스테인 잔기를 갖는다. 다른 구현예에서, 시스테인-조작된 항체는 중쇄의 118-알라닌 부위 (EU 넘버링) (HC A118C)에 도입된 시스테인 잔기를 갖는다. 이 부위는 대안적으로 순차적 넘버링으로는 121 또는 Kabat 넘버링으로는 114로 번호가 매겨진다. 다른 구현예에서, 시스테인-조작된 항체는 Kabat 넘버링에 따라 G64C 또는 R142C에서 경쇄에, 또는 Kabat 넘버링에 따라 D101C, V184C 또는 T205C에서 중쇄에 도입된 시스테인 잔기를 갖는다.
피라졸로아제핀 보조제 화합물
본 발명의 면역접합체는 피라졸로아제핀 보조제 모이어티를 포함한다. 본원에 기재된 보조제 모이어티는 면역 반응을 유발하는 화합물 (즉, 면역자극제)이다. 일반적으로, 본원에 기재된 보조제 모이어티는 TLR 작용제이다. TLR은 척추동물에서 선천적 면역 반응의 시작을 담당하는 I형 막횡단 단백질이다. TLR은 박테리아, 바이러스 및 곰팡이의 다양한 병원체 관련 분자 패턴을 인식하고 침입 병원체에 대한 1차 방어선 역할을 한다. TLR은 세포 발현과 이들이 시작하는 신호 전달 경로의 차이로 인해 중복되지만 뚜렷히 구별되는 생물학적 반응을 이끌어낸다. 일단 결합되면 (예를 들어, 자연 자극 또는 합성 TLR 작용제에 의해), TLR은 어댑터 단백질 골수성 분화 1차 반응 유전자 88 (MyD88) 및 IL-1 수용체 관련 키나제 (IRAK)의 동원을 통해 핵 인자 κB (NF-κB)의 활성화로 이어지는 신호 전달 캐스케이드를 시작한다. IRAK의 인산화는 TNF-수용체 관련 인자 6 (TRAF6)의 동원으로 이어져 NF-κB 억제제 I-κB의 인산화를 초래한다. 그 결과, NF-κB는 세포 핵으로 들어가 프로모터가 사이토카인과 같은 NF-κB 결합 부위를 포함하는 유전자의 전사를 시작한다. TLR 신호 전달에 대한 추가 조절 모드에는 TNF 수용체 관련 인자 6 (TRAF6)의 어댑터 유도 인터페론 β (TRIF) 의존성 유도를 함유하는 TIR 도메인과 TRIF 및 TRAF3를 통한 MyD88 독립 경로의 활성화가 포함되어 인터페론 반응 인자 3 (IRF3)의 인산화를 유도한다. 유사하게, MyD88 의존성 경로는 또한 IRF5 및 IRF7을 포함한 여러 IRF 계열 구성원을 활성화하는 반면 TRIF 의존성 경로는 NF-κB 경로도 활성화한다.
전형적으로, 본원에 기재된 보조제 모이어티는 TLR7 및/또는 TLR8 작용제이다. TLR7 및 TLR8은 모두 단핵구 및 수지상 세포에서 발현된다. 인간에서 TLR7은 형질세포양 수지상 세포 (pDC) 및 B 세포에서도 발현된다. TLR8은 골수 기원의 세포, 즉 단핵구, 과립구 및 골수 수지상 세포에서 주로 발현된다. TLR7 및 TLR8은 바이러스 침입에 대응하는 수단으로서, 세포 내 "외부" 단일 가닥 RNA의 존재를 감지할 수 있다. TLR8 발현 세포를 TLR8 작용제로 처리하면 높은 수준의 IL-12, IFN-γ, IL-1, TNF-α, IL-6 및 기타 염증성 사이토카인이 생성될 수 있다. 유사하게, TLR7 작용제로 pDC와 같은 TLR7 발현 세포를 자극하면 높은 수준의 IFN-α 및 기타 염증성 사이토카인이 생성될 수 있다. TLR7/TLR8 결합 및 결과적인 사이토카인 생성은 수지상 세포 및 기타 항원 제시 세포를 활성화하여 다양한 선천성 및 후천성 면역 반응 메커니즘을 구동하여 종양 파괴를 유발할 수 있다.
본 발명의 예시적인 피라졸로아제핀 화합물(PAZ)을 표 1에 나타낸다. 각 화합물은 질량 분광법으로 특성화되었으며 표시된 질량을 갖는 것으로 나타난다. 본 발명의 피라졸로아제핀 화합물은 위치이성질체 A 및 B를 포함하며, IUPAC 위치는 다음과 같이 넘버링된다:
Figure pct00035
인간 TLR7 또는 인간 TLR8을 발현하는 HEK293 NFKB 리포터 세포에 대한 활성을 실시예 202에 따라 측정하였다. 표 1의 피라졸로아제핀 화합물은 암 및 다른 장애를 치료하기 유용한 치료석 활성을 예측할 수 있는, TLR8 작용제 선택성의 놀랍고도 예상치 못한 특성을 입증한다.
도 1은 비교기 보조제 화합물 C-1 및 C-2에 대한 피라졸로아제핀 화합물 PAZ-2, PAZ-4 및 PAZ-11의 24시간에서의 HEK 인간 TLR7 활성의 그래프를 보여준다. PAZ-2 및 PAZ-11은 알려진 TLR7 보조제 C-1에 대해 비교 가능한 TLR7 활성을 갖지만 모두 매우 상이한 구조 및 생물물리학적 특징을 갖는다.
도 2는 비교기 보조제 화합물 C-1 및 C-2에 대한 피라졸로아제핀 화합물 화합물 PAZ-1 및 PAZ-2의 24시간에서의 HEK 인간 TLR8 활성의 그래프를 보여준다. PAZ-11은 알려진 TLR8 보조제 C-2에 대해 더 나은 TLR8 효능을 가지고 있다. 또한 C-2에 대해 개선된 친수성을 가지고 있다. 증가된 TLR8 효능과 커플링된 개선된 물리화학적 특성은 훨씬 더 효율적인 보조제를 산출한다.
Figure pct00036
Figure pct00037
Figure pct00038
Figure pct00039
Figure pct00040
비교기 화합물
Figure pct00041
피라졸로아제핀-링커 화합물
본 발명의 면역접합체는 항체와 피라졸로아제핀-링커 화합물의 접합에 의해 제조된다. 피라졸로아제핀-링커 화합물은 링커 단위에 공유적으로 부착된 피라졸로아제핀(PAZ) 모이어티를 포함한다. 링커 단위는 면역접합체의 안정성, 투과성, 용해도 및 기타 약동학, 안전성 및 효능 특성에 영향을 미치는 작용기 및 하위단위를 포함한다. 링커 단위는 항체의 반응성 작용기와 반응하는, 즉 접합하는 반응성 작용기를 포함한다. 예를 들어, 항체의 라이신 측쇄 아미노와 같은 친핵성 기는 PAZ-링커 화합물의 친전자성 반응성 작용기와 반응하여 면역접합체를 형성한다. 또한, 예를 들어, 항체의 시스테인 티올은 PAZ-링커 화합물의 말레이미드 또는 브로모아세트아미드 기와 반응하여 면역접합체를 형성한다.
본 발명의 면역접합체 설계에 대한 고려사항은 다음을 포함한다: (1) 생체 내 순환 동안 PAZ 모이어티의 조기 방출을 방지하고 (2) PAZ 모이어티의 생물학적 활성 형태가 원하는 작용 부위에서 적절한 속도로 방출되도록 보장한다. 기능적 특성과 함께 면역접합체의 복잡한 구조는 항체, 접합 부위, 링커 구조 및 피라졸로아제핀 화합물을 포함한 분자의 모든 구성 요소를 신중하게 설계하고 선택해야 한다. 링커는 보조제 방출의 메커니즘과 속도를 결정한다.
일반적으로 링커 단위(L)은 절단 가능하거나 절단 불가능할 수 있다. 절단 가능한 링커 단위는 항체로부터 PAZ 효능제를 분리하는 펩티드 링커 단위를 인식하고 절단하는 카텝신과 같은 특정 프로테아제에 대한 기질인 펩티드 서열을 포함할 수 있다(Caculitan NG, 등 (2017) Cancer Res. 77(24) :7027-7037).
절단 가능한 링커 단위는 산 민감성 디설파이드 기와 같은 불안정한 작용기를 포함할 수 있다(Kellogg, BA 등 (2011) Bioconjugate Chem. 22, 717-727; Ricart, A. D. 등 (2011) Clin. Cancer Res. 17, 6417-6427; Pillow, T., 등 (2017) Chem. Sci. 8, 366-370; Zhang D, 등 (2016) ACS Med Chem Lett. 7(11):988-993).
일부 구현예에서, 링커는 생리학적 조건 하에서 절단 불가능하다. 본원에서 사용되는 용어 "생리학적 조건"은 20-40℃의 온도, 대기압(즉, 1기압), pH 약 6 내지 약 8, 및 하나 이상의 생리학적 효소, 프로테아제, 산 및 염기를 지칭한다. 면역접합체에서 항체와 PAZ 모이어티 사이의 절단 불가능한 링커의 한 가지 이점은 조기 페이로드 방출 및 상응하는 독성을 최소화하는 것이다.
한 구현예에서, 본 발명은 카텝신, 종양 연관 엘라스타제 효소 또는 프로테아제 유사 또는 엘라스타아제 유사 활성을 가진 효소와 같은 프로테아제에 의해 선택적으로 절단될 수 있는 특정 아미노산 잔기의 선형 서열에 기반한 펩티드 라디칼을 포함하는, 세포 결합제와 면역자극성 PAZ 모이어티 사이에 펩티드 연결 단위인 PEP를 포함한다. 펩티드 라디칼은 약 2 내지 약 12개의 아미노산일 수 있다. 펩티드 링커 내 결합의 효소적 절단은 활성 형태의 면역자극성 PAZ 모이어티를 방출한다. 이는 본 발명에 따른 접합체의 조직 특이성을 증가시키고 따라서 다른 조직 유형에서 본 발명에 따른 접합체의 독성을 추가로 감소시킨다.
예시적 구현예에서, PEP는 하기로 이루어진 군으로부터 선택된 아미노산의 아미노산 잔기 (AA)로 구성된다:
Figure pct00042
Figure pct00043
및
Figure pct00044
예시적 구현예에서, PEP는 Ala-Pro-Val, Asn-Pro-Val, Ala-Ala-Val, Ala-Ala-Pro-Ala, Ala-Ala-Pro-Val, 및 Ala-Ala-Pro-Nva로 이루어진 군으로부터 선택된다
예시적인 구현예에서, PEP는 하기 화학식을 갖는다:
Figure pct00045
예시적인 구현예에서, PEP는 하기 화학식을 갖는다:
Figure pct00046
예시적인 구현예에서, PEP는 하기 화학식으로부터 선택된다:
Figure pct00047
및
Figure pct00048
링커는 생물학적 배지, 예를 들어 배양 배지 또는 혈청에서 면역접합체의 충분한 안정성을 제공하고, 동시에 면역자극 PAZ 모이어티, 즉 "페이로드"의 방출과 함께 그의 특이적 효소적 또는 가수분해성 절단성의 결과로서 종양 조직 내에서 원하는 세포내 작용을 제공한다.
프로테아제, 카텝신 또는 엘라스타제의 효소 활성은 생리학적 조건 하에서 면역접합체의 공유 결합의 절단을 촉매할 수 있다. 효소적 활성은 종양 조직과 연관된 세포의 발현 생성물이다. 표적 펩티드의 절단 부위에 대한 효소적 활성은 면역접합체를 표적화 펩티드 및 연결 기가 없는 활성 면역자극 약물로 전환시킨다. 절단 부위는 효소에 의해 특이적으로 인식될 수 있다. 카텝신 또는 엘라스타제는 특정 펩티드의 C-말단 아미노산 잔기와 면역접합체의 면역자극 모이어티 사이의 특정 펩티드 결합의 절단을 촉매할 수 있다.
한 구현예에서, 본 발명은 글루쿠로니다제(Jeffrey SC, 등 (2006) Bioconjug. Chem. 17(3):831-40), 또는 설퍼타아제 (Bargh JD, 등 (2020) Chem Sci. 11(9):2375-2380) 절단에 대한 기질을 포함하는 세포 결합제와 면역자극 모이어티 사이의 연결 단위, 즉 L 또는 링커를 포함한다. 특히, L은 Gluc 단위를 포함하고 하기로부터 선택된 화학식을 포함한다:
Figure pct00049
및
Figure pct00050
본 발명의 면역접합체의 특이적 절단은 면역계의 종양 침윤 세포 및 백혈구 분비 효소의 존재를 이용하여 종양 부위에서 항암 약물의 활성화를 촉진한다.
PAZ-링커 화합물에 적합한 친전자성 반응성 작용기는 N-하이드록시석신이미딜 (NHS) 에스테르 및 N-하이드록시설포석신이미딜 (설포-NHS) 에스테르 (아민 반응성); 카르보디이미드 (아민 및 카르복실 반응성); 하이드록시메틸 포스핀 (아민 반응성); 말레이미드 (티올 반응성); N-요오도아세트아미드와 같은 할로겐화 아세트아미드 (티올 반응성); 아릴 아지드 (1차 아민 반응성); 플루오르화 아릴 아지드 (탄소-수소 (C-H) 삽입을 통한 반응성); 펜타플루오로페닐 (PFP) 에스테르 (아민 반응성); 테트라플루오로페닐 (TFP) 에스테르 (아민 반응성); 이미도에스테르 (아민 반응성); 이소시아네이트 (하이드록실 반응성); 비닐 설폰 (티올, 아민 및 하이드록실 반응성); 피리딜 이황화물 (티올 반응성); 및 벤조페논 유도체 (C-H 결합 삽입을 통한 반응성)를 포함하나 이들로 제한되는 것은 아니다. 추가 시약은 Hermanson, Bioconjugate Techniques 2nd Edition, Academic Press, 2008에 기술된 것들을 포함하지만 이에 제한되는 것은 아니다.
본 발명은 면역접합체의 설계, 제조 및 사용에 대한 한계 및 어려움에 대한 해결책을 제공한다. 일부 링커는 혈류에서 불안정하여 표적 세포에서 내재화되기 전에 허용할 수 없는 양의 보조제/약물을 방출할 수 있다 (Khot, A. 등 (2015) Bioanalysis 7(13):1633-1648). 다른 링커는 혈류에서 안정성을 제공할 수 있지만 세포내 방출 효과에서는 부정적인 영향을 받을 수 있다. 원하는 세포내 방출을 제공하는 링커는 일반적으로 혈류에서 불량한 안정성을 갖는다. 달리 말하면, 혈류 안정성과 세포내 방출은 일반적으로 반비례한다. 또한, 표준 접합 과정에서 항체에 부하된 보조제/약물 모이어티의 양, 즉 약물 부하, 접합 반응에서 형성되는 응집체의 양, 및 얻을 수 있는 최종 정제된 접합체의 수율은 상호 관련된다. 예를 들어, 응집체 형성은 일반적으로 항체에 접합된 보조제/약물 모이어티 및 이의 유도체의 당량 수와 양의 상관관계가 있다. 높은 약물 부하 하에서, 형성된 응집체는 치료 용도를 위해 제거되어야 한다. 결과적으로, 약물 부하 매개 응집체 형성은 면역접합체 수율을 감소시키고 공정 규모 확대를 어렵게 만들 수 있다.
예시적인 구현예는 화학식 IIa 및 IIb의 5-아미노피라졸로아제핀-링커 화합물을 포함한다:
Figure pct00051
식 중 X1, X2, 및 X3은 결합, C(=O), C(=O)N(R5), O, N(R5), S, S(O)2, 및 S(O)2N(R5)로 이루어진 군으로부터 독립적으로 선택되고;
R1, R2, R3, 및 R4는 H, C1-C12 알킬, C2-C6 알케닐, C2-C6 알키닐, C3-C12 카보사이클릴, C6-C20 아릴, C2-C9 헤테로사이클릴, 및 C1-C20 헤테로아릴로 이루어진 군으로부터 독립적으로 선택되고, 여기서 알킬, 알케닐, 알키닐, 카보사이클릴, 아릴, 헤테로사이클릴, 및 헤테로아릴은 하기로부터 선택된 하나 이상의 군으로부터 독립적으로 및 선택적으로 치환되고
-(C1-C12 알킬디일)-N(R5)-*;
-(C1-C12 알킬디일)-N(R5)2;
-(C1-C12 알킬디일)-OR5;
-(C3-C12 카보사이클릴);
-(C3-C12 카보사이클릴)-*;
-(C3-C12 카보사이클릴)-(C1-C12 알킬디일)-NR5-*;
-(C3-C12 카보사이클릴)-(C1-C12 알킬디일)-N(R5)2;
-(C3-C12 카보사이클릴)-NR5-C(=NR5)NR5-*;
-(C6-C20 아릴);
-(C6-C20 아릴디일)-*;
-(C6-C20 아릴디일)-N(R5)-*;
-(C6-C20 아릴디일)-(C1-C12 알킬디일)-N(R5)-*;
-(C6-C20 아릴디일)-(C1-C12 알킬디일)-(C2-C20 헤테로사이클릴디일)-*;
-(C6-C20 아릴디일)-(C1-C12 알킬디일)-N(R5)2;
-(C6-C20 아릴디일)-(C1-C12 알킬디일)-NR5-C(=NR5a)N(R5)-*;
-(C2-C20 헤테로사이클릴);
-(C2-C20 헤테로사이클릴)-*;
-(C2-C9 헤테로사이클릴)-(C1-C12 알킬디일)-NR5-*;
-(C2-C9 헤테로사이클릴)-(C1-C12 알킬디일)-N(R5)2;
-(C2-C9 헤테로사이클릴)-C(=O)-(C1-C12 알킬디일)-N(R5)-*;
-(C2-C9 헤테로사이클릴)-NR5-C(=NR5a)NR5-*;
-(C2-C9 헤테로사이클릴)-NR5-(C6-C20 아릴디일)-(C1-C12 알킬디일)-N(R5)-*;
-(C2-C9 헤테로사이클릴)-(C6-C20 아릴디일)-*;
-(C1-C20 헤테로아릴);
-(C1-C20 헤테로아릴디일)-*;
-(C1-C20 헤테로아릴디일)-(C1-C12 알킬디일)-N(R5)-*;
-(C1-C20 헤테로아릴디일)-(C1-C12 알킬디일)-N(R5)2;
-(C1-C20 헤테로아릴디일)-NR5-C(=NR5a)N(R5)-*;
-(C1-C20 헤테로아릴디일)-N(R5)C(=O)-(C1-C12 알킬디일)-N(R5)-*;
-C(=O)-*;
-C(=O)-(C1-C12 알킬디일)-N(R5)-*;
-C(=O)-(C2-C20 헤테로사이클릴디일)-*;
-C(=O)N(R5)2;
-C(=O)N(R5)-*;
-C(=O)N(R5)-(C1-C12 알킬디일)-*;
-C(=O)N(R5)-(C1-C12 알킬디일)-C(=O)N(R5)-*;
-C(=O)N(R5)-(C1-C12 알킬디일)-N(R5)C(=O)R5;
-C(=O)N(R5)-(C1-C12 알킬디일)-N(R5)C(=O)N(R5)2;
-C(=O)NR5-(C1-C12 알킬디일)-N(R5)CO2R5;
-C(=O)NR5-(C1-C12 알킬디일)-N(R5)C(=NR5a)N(R5)2;
-C(=O)NR5-(C1-C12 알킬디일)-NR5C(=NR5a)R5;
-C(=O)NR5-(C1-C8 알킬디일)-NR5(C2-C5 헤테로아릴);
-C(=O)NR5-(C1-C20 헤테로아릴디일)-N(R5)-*;
-C(=O)NR5-(C1-C20 헤테로아릴디일)-*;
-C(=O)NR5-(C1-C20 헤테로아릴디일)-(C1-C12 알킬디일)-N(R5)2;
-C(=O)NR5-(C1-C20 헤테로아릴디일)-(C2-C20 헤테로사이클릴디일)-C(=O)NR5-(C1-C12 알킬디일)-NR5-*;
-N(R5)2;
-N(R5)-*;
-N(R5)C(=O)R5;
-N(R5)C(=O)-*;
-N(R5)C(=O)N(R5)2;
-N(R5)C(=O)N(R5)-*;
-N(R5)CO2R5;
-N(R5)CO2(R5)-*;
-NR5C(=NR5a)N(R5)2;
-NR5C(=NR5a)N(R5)-*;
-NR5C(=NR5a)R5;
-N(R5)C(=O)-(C1-C12 알킬디일)-N(R5)-*;
-N(R5)-(C2-C5 헤테로아릴);
-N(R5)-S(=O)2-(C1-C12 알킬);
-O-(C1-C12 알킬);
-O-(C1-C12 알킬디일)-N(R5)2;
-O-(C1-C12 알킬디일)-N(R5)-*;
-OC(=O)N(R5)2;
-OC(=O)N(R5)-*;
-S(=O)2-(C2-C20 헤테로사이클릴디일)-*;
-S(=O)2-(C2-C20 헤테로사이클릴디일)-(C1-C12 알킬디일)-N(R5)2;
-S(=O)2-(C2-C20 헤테로사이클릴디일)-(C1-C12 알킬디일)-NR5-*; 및
-S(=O)2-(C2-C20 헤테로사이클릴디일)-(C1-C12 알킬디일)-OH;
또는 R2 및 R3은 함께 5- 또는 6-원 헤테로사이클릴 고리를 형성하고;
R5는 H, C6-C20 아릴, C3-C12 카보사이클릴, C2-C20 헤테로사이클릴, C6-C20 아릴디일, C1-C12 알킬, 및 C1-C12 알킬디일로 이루어진 군으로부터 선택되거나, 또는 2개의 R5 기는 함께 5- 또는 6-원 헤테로사이클릴 고리를 형성하고;
R5a는 C6-C20 아릴 및 C1-C20 헤테로아릴로 이루어진 군으로부터 선택되고;
여기서 별표 *는 L의 부착 부위를 나타내고, 그리고 R1, R2, R3 및 R4 중 하나는 L에 부착되고;
L은 하기로 이루어진 군으로부터 선택된 링커이고:
Q-C(=O)-PEG-;
Q-C(=O)-PEG-C(=O)N(R6)(C1-C12 알킬디일)C(=O)-Gluc-;
Q-C(=O)-PEG-O-;
Q-C(=O)-PEG-O-C(=O)-;
Q-C(=O)-PEG-C(=O)-;
Q-C(=O)-PEG-C(=O)-PEP-;
Q-C(=O)-PEG-N(R6)-;
Q-C(=O)-PEG-N(R6)-C(=O)-;
Q-C(=O)-PEG-N(R6)-PEG-C(=O)-PEP-;
Q-C(=O)-PEG-N+(R6)2-PEG-C(=O)-PEP-;
Q-C(=O)-PEG-C(=O)-PEP-N(R6)-(C1-C12 알킬디일)-;
Q-C(=O)-PEG-C(=O)-PEP-N(R6)-(C1-C12 알킬디일)N(R6)C(=O)-(C2-C5 모노헤테로사이클릴디일)-;
Q-C(=O)-PEG-SS-(C1-C12 알킬디일)-OC(=O)-;
Q-C(=O)-PEG-SS-(C1-C12 알킬디일)-C(=O)-;
Q-C(=O)-(C1-C12 알킬디일)-C(=O)-PEP-;
Q-C(=O)-(C1-C12 알킬디일)-C(=O)-PEP-N(R6)-(C1-C12 알킬디일)-;
Q-C(=O)-(C1-C12 알킬디일)-C(=O)-PEP-N(R6)-(C1-C12 알킬디일)-N(R5)-C(=O);
Q-C(=O)-(C1-C12 알킬디일)-C(=O)-PEP-N(R6)-(C1-C12 알킬디일)-N(R6)C(=O)-(C2-C5 모노헤테로사이클릴디일)-;
Q-(CH2)m-C(=O)N(R6)-PEG-;
Q-(CH2)m-C(=O)N(R6)-PEGC(=O)N(R6)(C1-C12 알킬디일)C(=O)-Gluc-;
Q-(CH2)m-C(=O)N(R6)-PEG-O-;
Q-(CH2)m-C(=O)N(R6)-PEG-O-C(=O)-;
Q-(CH2)m-C(=O)N(R6)-PEG-C(=O)-;
Q-(CH2)m-C(=O)N(R6)-PEG-N(R5)-;
Q-(CH2)m-C(=O)N(R6)-PEG-N(R5)-C(=O)-;
Q-(CH2)m-C(=O)N(R6)-PEG-C(=O)-PEP-;
Q-(CH2)m-C(=O)N(R6)-PEG-SS-(C1-C12 알킬디일)-OC(=O)-;
Q-(CH2)m-C(=O)-PEP-N(R6)-(C1-C12 알킬디일)-;
Q-(CH2)m-C(=O)-PEP-N(R6)-(C1-C12 알킬디일)N(R6)C(=O)-; 및
Q-(CH2)m-C(=O)-PEP-N(R6)-(C1-C12 알킬디일)N(R6)C(=O)-(C2-C5 모노헤테로사이클릴디일)-;
R6는 독립적으로 H 또는 C1-C6 알킬이고;
PEG는 화학식: -(CH2CH2O)n-(CH2)m-을 가지며; m은 1 내지 5의 정수이고, n은 2 내지 50의 정수이고;
Gluc는 화학식
Figure pct00052
을 가지며:
PEP는 화학식
Figure pct00053
을 가지며:
여기서 AA는 천연 또는 비천연 아미노산 측쇄, 또는 AA 중 하나 이상으로부터 독립적으로 선택되고, 인접한 질소 원자는 5-원 고리 프롤린 아미노산을 형성하고, 물결선은 부착점을 나타내고;
Cyc는 C6-C20 아릴디일 및 C1-C20 헤테로아릴디일로부터 선택되고, 이는 F, Cl, NO2, -OH, -OCH3, 및 하기 구조
Figure pct00054
를 갖는 글루쿠론산으로부터 선택된 하나 이상의 군으로부터 선택적으로 치환되고:
R7는 -CH(R8)O-, -CH2-, -CH2N(R8)-, 및 -CH(R8)O-C(=O)-로 이루어진 군으로부터 선택되고, 여기서 R8는 H, C1-C6 알킬, C(=O)-C1-C6 알킬, 및 -C(=O)N(R9)2로부터 선택되고, 여기서 R9는 H, C1-C12 알킬, 및 -(CH2CH2O)n-(CH2)m-OH로 이루어진 군으로부터 독립적으로 선택되고, 여기서 m은 1 내지 5의 정수이고, n은 2 내지 50의 정수이고, 또는 2개의 R9 기는 함께 5- 또는 6-원 헤테로사이클릴 고리를 형성하고;
y는 2 내지 12의 정수이고;
z는 0 또는 1이고; 그리고
Q는 N-하이드록시석신이미딜, N-하이드록시설포석신이미딜, 말레이미드, 및 페녹시로 이루어진 군으로부터 선택되고, 이는 F, Cl, NO2, 및 SO3 -로부터 독립적으로 선택된 하나 이상의 기로 치환되고;
알킬, 알킬디일, 알케닐, 알케닐디일, 알키닐, 알키닐디일, 아릴, 아릴디일 카보사이클릴, 카보사이클릴디일, 헤테로사이클릴, 헤테로사이클릴디일, 헤테로아릴, 및 헤테로아릴디일은 F, Cl, Br, I, -CN, -CH3, -CH2CH3, -CH=CH2, -C≡CH, -C≡CCH3, -CH2CH2CH3, -CH(CH3)2, -CH2CH(CH3)2, -CH2OH, -CH2OCH3, -CH2CH2OH, -C(CH3)2OH, -CH(OH)CH(CH3)2, -C(CH3)2CH2OH, -CH2CH2SO2CH3, -CH2OP(O)(OH)2, -CH2F, -CHF2, -CF3, -CH2CF3, -CH2CHF2, -CH(CH3)CN, -C(CH3)2CN, -CH2CN, -CH2NH2, -CH2NHSO2CH3, -CH2NHCH3, -CH2N(CH3)2, -CO2H, -COCH3, -CO2CH3, -CO2C(CH3)3, -COCH(OH)CH3, -CONH2, -CONHCH3, -CON(CH3)2, -C(CH3)2CONH2, -NH2, -NHCH3, -N(CH3)2, -NHCOCH3, -N(CH3)COCH3, -NHS(O)2CH3, -N(CH3)C(CH3)2CONH2, -N(CH3)CH2CH2S(O)2CH3, -NHC(=NH)H, -NHC(=NH)CH3, -NHC(=NH)NH2, -NHC(=O)NH2, -NO2, =O, -OH, -OCH3, -OCH2CH3, -OCH2CH2OCH3, -OCH2CH2OH, -OCH2CH2N(CH3)2, -O(CH2CH2O)n-(CH2)mCO2H, -O(CH2CH2O)nH, -OP(O)(OH)2, -S(O)2N(CH3)2, -SCH3, -S(O)2CH3, 및 -S(O)3H로부터 독립적으로 선택된 하나 이상의 기로 선택적으로 치환된다.
화학식 II의 피라졸로아제핀-링커 화합물의 예시적인 구현예는 X1은 결합이고, 그리고 R1은 H인 것을 포함한다.
화학식 II의 피라졸로아제핀-링커 화합물의 예시적인 구현예는 X2는 결합이고, 그리고 R2는 C1-C8 알킬인 것을 포함한다.
화학식 II의 피라졸로아제핀-링커 화합물의 예시적인 구현예는 X2 및 X3 각각은 결합이고, 그리고 R2 및 R3은 C1-C8 알킬, -O-(C1-C12 알킬), -(C1-C12 알킬디일)-OR5, -(C1-C8 알킬디일)-N(R5)CO2R5, -(C1-C12 알킬)-OC(O)N(R5)2, -O-(C1-C12 알킬)-N(R5)CO2R5, 및 -O-(C1-C12 알킬)-OC(O)N(R5)2로부터 독립적으로 선택되는 것을 포함한다.
화학식 II의 피라졸로아제핀-링커 화합물의 예시적인 구현예는 R2는 C1-C8 알킬이고, R3은 -(C1-C8 알킬디일)-N(R5)CO2R4인 것을 포함한다.
화학식 II의 피라졸로아제핀-링커 화합물의 예시적인 구현예는 R2는 -CH2CH2CH3이고 R3은 -CH2CH2CH2NHCO2(t-Bu), -OCH2CH2NHCO2(사이클로부틸), 및 -CH2CH2CH2NHCO2(사이클로부틸)로부터 선택되는 것을 포함한다.
화학식 II의 피라졸로아제핀-링커 화합물의 예시적인 구현예는 R2 및 R3 각각은 독립적으로 -CH2CH2CH3, -OCH2CH3, -OCH2CF3, -CH2CH2CF3, -OCH2CH2OH, 및 -CH2CH2CH2OH로부터 선택되는 것을 포함한다.
화학식 II의 피라졸로아제핀-링커 화합물의 예시적인 구현예는 R2 및 R3 각각은 -CH2CH2CH3인 것을 포함한다.
화학식 II의 피라졸로아제핀-링커 화합물의 예시적인 구현예는 R2는 -CH2CH2CH3이고, R3는 -OCH2CH3인 것을 포함한다.
화학식 II의 피라졸로아제핀-링커 화합물의 예시적인 구현예는 X3-R3은 하기로 이루어진 군으로부터 선택되는 것을 포함한다:
Figure pct00055
Figure pct00056
및
Figure pct00057
화학식 II의 피라졸로아제핀-링커 화합물의 예시적인 구현예는 R2 또는 R3이 L에 부착되는 것을 포함한다.
화학식 II의 피라졸로아제핀-링커 화합물의 예시적인 구현예는 X3-R3-L이 하기로 이루어진 군으로부터 선택되는 것을 포함한다:
Figure pct00058
여기서 물결선은 N에 대한 부착점을 나타낸다.
화학식 II의 피라졸로아제핀-링커 화합물의 예시적인 구현예는 R4가 C1-C12 알킬인 것을 포함한다.
화학식 II의 피라졸로아제핀-링커 화합물의 예시적인 구현예는 R4는 -(C1-C12 알킬디일)-N(R5)-*이고; 여기서 별표 *는 L의 부착 부위를 나타내는 것을 포함한다.
화학식 II의 피라졸로아제핀-링커 화합물의 예시적인 구현예는 L은 -C(=O)-PEG- 또는 -C(=O)-PEG-C(=O)-인 것을 포함한다.
화학식 II의 피라졸로아제핀-링커 화합물의 예시적인 구현예는 PEG에 대해, m은 1 또는 2이고, 그리고 n은 2 내지 10의 정수인 것을 포함한다.
화학식 II의 피라졸로아제핀-링커 화합물의 예시적인 구현예는 PEG에 대해, n은 10인 것을 포함한다.
화학식 II의 피라졸로아제핀-링커 화합물의 예시적인 구현예는 L은 PEP를 포함하고, PEP는 디펩티드이고 하기 화학식을 갖는 것을 포함한다:
Figure pct00059
화학식 II의 피라졸로아제핀-링커 화합물의 예시적인 구현예는 L은 PEP를 포함하고, PEP는 트리펩티드이고 하기 화학식을 갖는 것을 포함한다:
Figure pct00060
화학식 II의 피라졸로아제핀-링커 화합물의 예시적인 구현예는 L은 PEP를 포함하고, PEP는 테트라펩티드이고 하기 화학식을 갖는 것을 포함한다:
Figure pct00061
화학식 II의 피라졸로아제핀-링커 화합물의 예시적인 구현예는 L은 PEP를 포함하고, PEP는 테트라펩티드인 것을 포함하고, 여기서:
AA1은 Abu, Ala, 및 Val로 이루어진 군으로부터 선택되고;
AA2는 Nle(O-Bzl), Oic 및 Pro로 이루어진 군으로부터 선택되고;
AA3은 Ala 및 Met(O)2로 이루어진 군으로부터 선택되고; 그리고
AA4는 Oic, Arg(NO2), Bpa, 및 Nle(O-Bzl)로 이루어진 군으로부터 선택된다.
화학식 II의 피라졸로아제핀-링커 화합물의 예시적인 구현예는 PEP는 하기 화학식을 갖는 것을 포함한다:
Figure pct00062
식 중 AA1 및 AA2는 자연 발생 아미노산의 측쇄로부터 독립적으로 선택된다.
화학식 II의 피라졸로아제핀-링커 화합물의 예시적인 구현예는 AA1 및 AA2는 H, -CH3, -CH(CH3)2, -CH2(C6H5), -CH2CH2CH2CH2NH2, -CH2CH2CH2NHC(NH)NH2, -CHCH(CH3)CH3, -CH2SO3H, 및 -CH2CH2CH2NHC(O)NH2로부터 독립적으로 선택되거나; 또는 AA1 및 AA2는 5-원 고리 프롤린 아미노산을 형성하는 것을 포함한다.
화학식 II의 피라졸로아제핀-링커 화합물의 예시적인 구현예는 AA1은 -CH(CH3)2이고, AA2는 -CH2CH2CH2NHC(O)NH2인 것을 포함한다.
화학식 II의 피라졸로아제핀-링커 화합물의 예시적인 구현예는 AA1 및 AA2는 GlcNAc 아스파르트산, -CH2SO3H, 및 -CH2OPO3H로부터 독립적으로 선택되는 것을 포함한다.
화학식 II의 피라졸로아제핀-링커 화합물의 예시적인 구현예는 L은 하기 구조로부터 선택되는 것을 포함한다:
Figure pct00063
여기서 물결선은 R1, R2, R3 및 R4 중 하나에 대한 부착을 나타낸다.
화학식 II의 피라졸로아제핀-링커 화합물의 예시적인 구현예는 하기 화학식 IIa-IId로부터 선택된다:
Figure pct00064
Figure pct00065
화학식 II의 피라졸로아제핀-링커 화합물의 예시적인 구현예는 화학식 IIe-IIl로부터 선택된다:
Figure pct00066
Figure pct00067
Figure pct00068
및
Figure pct00069
화학식 II의 피라졸로아제핀-링커 화합물의 예시적인 구현예는 Q는 하기로부터 선택되는 것을 포함한다:
Figure pct00070
Figure pct00071
및
Figure pct00072
화학식 II의 피라졸로아제핀-링커 화합물의 예시적인 구현예는 Q는 하나 이상의 F로 치환된 페녹시인 것을 포함한다.
화학식 II의 피라졸로아제핀-링커 화합물의 예시적인 구현예는 Q는 2,3,5,6-테트라플루오로페녹시인 것을 포함한다.
화학식 II의 피라졸로아제핀-링커 화합물의 예시적인 구현예는 Q는 말레이미드인 것을 포함한다.
화학식 II의 피라졸로아제핀-링커 화합물의 예시적인 구현예는 Q는 말레이미드인 것을 포함한다.
본 발명은 화학식 II 구현예의 특징의 모든 합리적인 조합 및 순열을 포함한다.
피라졸로아제핀-링커 화합물의 예시적 구현예는 표 2a 및 2b로부터 선택된다. 각 화합물은 질량 분광법으로 특성화되었으며 표시된 질량을 갖는 것으로 나타난다. 표 2a 및 2b의 피라졸로아제핀-링커 화합물은 암 및 다른 장애를 치료하기 위한 유용한 치료 활성을 예측할 수 있는 TLR8 효능제 선택성의 놀랍고 예상치 못한 특성을 입증한다.
Figure pct00073
Figure pct00074
Figure pct00075
Figure pct00076
Figure pct00077
Figure pct00078
Figure pct00079
Figure pct00080
Figure pct00081
Figure pct00082
Figure pct00083
Figure pct00084
면역접합체
면역접합체의 예시적인 구현예는 링커에 의해 하나 이상의 5-아미노피라졸로아제핀(PAZ) 모이어티에 공유 부착되고 하기 화학식 I 또는 그의 약제학적으로 허용 가능한 염 을 갖는 항체를 포함한다:
Figure pct00085
식 중:
Ab는 항체이고;
p는 1 내지 8의 정수이고;
PAZ는 화학식 IIa 및 IIb로부터 선택된 5-아미노피라졸로아제핀 모이어티이고:
Figure pct00086
X1, X2, 및 X3은 결합, C(=O), C(=O)N(R5), O, N(R5), S, S(O)2, 및 S(O)2N(R5)로 이루어진 군으로부터 독립적으로 선택되고;
R1, R2, R3, 및 R4는 H, C1-C12 알킬, C2-C6 알케닐, C2-C6 알키닐, C3-C12 카보사이클릴, C6-C20 아릴, C2-C9 헤테로사이클릴, 및 C1-C20 헤테로아릴로 이루어진 군으로부터 독립적으로 선택되고, 여기서 알킬, 알케닐, 알키닐, 카보사이클릴, 아릴, 헤테로사이클릴, 및 헤테로아릴은 하기로부터 선택된 하나 이상의 군으로부터 독립적으로 및 선택적으로 치환되고
-(C1-C12 알킬디일)-N(R5)-*;
-(C1-C12 알킬디일)-N(R5)2;
-(C1-C12 알킬디일)-OR5;
-(C3-C12 카보사이클릴);
-(C3-C12 카보사이클릴)-*;
-(C3-C12 카보사이클릴)-(C1-C12 알킬디일)-NR5-*;
-(C3-C12 카보사이클릴)-(C1-C12 알킬디일)-N(R5)2;
-(C3-C12 카보사이클릴)-NR5-C(=NR5)NR5-*;
-(C6-C20 아릴);
-(C6-C20 아릴디일)-*;
-(C6-C20 아릴디일)-N(R5)-*;
-(C6-C20 아릴디일)-(C1-C12 알킬디일)-N(R5)-*;
-(C6-C20 아릴디일)-(C1-C12 알킬디일)-(C2-C20 헤테로사이클릴디일)-*;
-(C6-C20 아릴디일)-(C1-C12 알킬디일)-N(R5)2;
-(C6-C20 아릴디일)-(C1-C12 알킬디일)-NR5-C(=NR5a)N(R5)-*;
-(C2-C20 헤테로사이클릴);
-(C2-C20 헤테로사이클릴)-*;
-(C2-C9 헤테로사이클릴)-(C1-C12 알킬디일)-NR5-*;
-(C2-C9 헤테로사이클릴)-(C1-C12 알킬디일)-N(R5)2;
-(C2-C9 헤테로사이클릴)-C(=O)-(C1-C12 알킬디일)-N(R5)-*;
-(C2-C9 헤테로사이클릴)-NR5-C(=NR5a)NR5-*;
-(C2-C9 헤테로사이클릴)-NR5-(C6-C20 아릴디일)-(C1-C12 알킬디일)-N(R5)-*;
-(C2-C9 헤테로사이클릴)-(C6-C20 아릴디일)-*;
-(C1-C20 헤테로아릴);
-(C1-C20 헤테로아릴디일)-*;
-(C1-C20 헤테로아릴디일)-(C1-C12 알킬디일)-N(R5)-*;
-(C1-C20 헤테로아릴디일)-(C1-C12 알킬디일)-N(R5)2;
-(C1-C20 헤테로아릴디일)-NR5-C(=NR5a)N(R5)-*;
-(C1-C20 헤테로아릴디일)-N(R5)C(=O)-(C1-C12 알킬디일)-N(R5)-*
-C(=O)-*;
-C(=O)-(C1-C12 알킬디일)-N(R5)-*;
-C(=O)-(C2-C20 헤테로사이클릴디일)-*;
-C(=O)N(R5)2;
-C(=O)N(R5)-*;
-C(=O)N(R5)-(C1-C12 알킬디일)-*;
-C(=O)N(R5)-(C1-C12 알킬디일)-C(=O)N(R5)-*;
-C(=O)N(R5)-(C1-C12 알킬디일)-N(R5)C(=O)R5;
-C(=O)N(R5)-(C1-C12 알킬디일)-N(R5)C(=O)N(R5)2;
-C(=O)NR5-(C1-C12 알킬디일)-N(R5)CO2R5;
-C(=O)NR5-(C1-C12 알킬디일)-N(R5)C(=NR5a)N(R5)2;
-C(=O)NR5-(C1-C12 알킬디일)-NR5C(=NR5a)R5;
-C(=O)NR5-(C1-C8 알킬디일)-NR5(C2-C5 헤테로아릴);
-C(=O)NR5-(C1-C20 헤테로아릴디일)-N(R5)-*;
-C(=O)NR5-(C1-C20 헤테로아릴디일)-*;
-C(=O)NR5-(C1-C20 헤테로아릴디일)-(C1-C12 알킬디일)-N(R5)2;
-C(=O)NR5-(C1-C20 헤테로아릴디일)-(C2-C20 헤테로사이클릴디일)-C(=O)NR5-(C1-C12 알킬디일)-NR5-*;
-N(R5)2;
-N(R5)-*;
-N(R5)C(=O)R5;
-N(R5)C(=O)-*;
-N(R5)C(=O)N(R5)2;
-N(R5)C(=O)N(R5)-*;
-N(R5)CO2R5;
-N(R5)CO2(R5)-*;
-NR5C(=NR5a)N(R5)2;
-NR5C(=NR5a)N(R5)-*;
-NR5C(=NR5a)R5;
-N(R5)C(=O)-(C1-C12 알킬디일)-N(R5)-*;
-N(R5)-(C2-C5 헤테로아릴);
-N(R5)-S(=O)2-(C1-C12 알킬);
-O-(C1-C12 알킬);
-O-(C1-C12 알킬디일)-N(R5)2;
-O-(C1-C12 알킬디일)-N(R5)-*;
-OC(=O)N(R5)2;
-OC(=O)N(R5)-*;
-S(=O)2-(C2-C20 헤테로사이클릴디일)-*;
-S(=O)2-(C2-C20 헤테로사이클릴디일)-(C1-C12 알킬디일)-N(R5)2;
-S(=O)2-(C2-C20 헤테로사이클릴디일)-(C1-C12 알킬디일)-NR5-*; 및
-S(=O)2-(C2-C20 헤테로사이클릴디일)-(C1-C12 알킬디일)-OH;
또는 R2 및 R3은 함께 5- 또는 6-원 헤테로사이클릴 고리를 형성하고;
R5는 H, C6-C20 아릴, C3-C12 카보사이클릴, C2-C20 헤테로사이클릴, C6-C20 아릴디일, C1-C12 알킬, 및 C1-C12 알킬디일로 이루어진 군으로부터 선택되거나, 또는 2개의 R5 기는 함께 5- 또는 6-원 헤테로사이클릴 고리를 형성하고;
R5a는 C6-C20 아릴 및 C1-C20 헤테로아릴로 이루어진 군으로부터 선택되고;
여기서 별표 *는 L의 부착 부위를 나타내고, 그리고 R1, R2, R3 및 R4 중 하나는 L에 부착되고;
L은 하기로 이루어진 군으로부터 선택된 링커이고:
-C(=O)-PEG-;
-C(=O)-PEGC(=O)N(R6)(C1-C12 알킬디일)C(=O)-Gluc-;
-C(=O)-PEG-O-;
-C(=O)-PEG-O-C(=O)-;
-C(=O)-PEG-C(=O)-;
-C(=O)-PEG-C(=O)-PEP-;
-C(=O)-PEG-N(R6)-;
-C(=O)-PEG-N(R6)-C(=O)-;
-C(=O)-PEG-N(R6)-PEG-C(=O)-PEP-;
-C(=O)-PEG-N+(R6)2-PEG-C(=O)-PEP-;
-C(=O)-PEG-C(=O)-PEP-N(R6)-(C1-C12 알킬디일)-;
-C(=O)-PEG-C(=O)-PEP-N(R6)-(C1-C12 알킬디일)N(R6)C(=O)-(C2-C5 모노헤테로사이클릴디일)-;
-C(=O)-PEG-SS-(C1-C12 알킬디일)-OC(=O)-;
-C(=O)-PEG-SS-(C1-C12 알킬디일)-C(=O)-;
-C(=O)-(C1-C12 알킬디일)-C(=O)-PEP-;
-C(=O)-(C1-C12 알킬디일)-C(=O)-PEP-N(R6)-(C1-C12 알킬디일)-;
-C(=O)-(C1-C12 알킬디일)-C(=O)-PEP-N(R6)-(C1-C12 알킬디일)-N(R5)-C(=O);
-C(=O)-(C1-C12 알킬디일)-C(=O)-PEP-N(R6)-(C1-C12 알킬디일)-N(R6)C(=O)-(C2-C5 모노헤테로사이클릴디일)-;
-석신이미딜-(CH2)m-C(=O)N(R6)-PEG-;
-석신이미딜-(CH2)m-C(=O)N(R6)-PEG-C(=O)N(R6)(C1-C12 알킬디일)C(=O)-Gluc-;
-석신이미딜-(CH2)m-C(=O)N(R6)-PEG-O-;
-석신이미딜-(CH2)m-C(=O)N(R6)-PEG-O-C(=O)-;
-석신이미딜-(CH2)m-C(=O)N(R6)-PEG-C(=O)-;
-석신이미딜-(CH2)m-C(=O)N(R6)-PEG-N(R5)-;
-석신이미딜-(CH2)m-C(=O)N(R6)-PEG-N(R5)-C(=O)-;
-석신이미딜-(CH2)m-C(=O)N(R6)-PEG-C(=O)-PEP-;
-석신이미딜-(CH2)m-C(=O)N(R6)-PEG-SS-(C1-C12 알킬디일)-OC(=O)-;
-석신이미딜-(CH2)m-C(=O)-PEP-N(R6)-(C1-C12 알킬디일)-;
-석신이미딜-(CH2)m-C(=O)-PEP-N(R6)-(C1-C12 알킬디일)N(R6)C(=O)-; 및
-석신이미딜-(CH2)m-C(=O)-PEP-N(R6)-(C1-C12 알킬디일)N(R6)C(=O)-(C2-C5 모노헤테로사이클릴디일)-;
R6는 독립적으로 H 또는 C1-C6 알킬이고;
PEG는 하기 화학식을 가지며: -(CH2CH2O)n-(CH2)m-을 가지며; m은 1 내지 5의 정수이고, n은 2 내지 50의 정수이고;
Gluc는 화학식
Figure pct00087
을 가지며:
PEP는 화학식
Figure pct00088
을 가지며:
여기서 AA는 천연 또는 비천연 아미노산 측쇄, 또는 AA 중 하나 이상으로부터 독립적으로 선택되고, 인접한 질소 원자는 5-원 고리 프롤린 아미노산을 형성하고, 물결선은 부착점을 나타내고;
Cyc는 C6-C20 아릴디일 및 C1-C20 헤테로아릴디일로부터 선택되고, 이는 F, Cl, NO2, -OH, -OCH3, 및 구조
Figure pct00089
를 갖는 글루쿠론산으로부터 선택된 하나 이상의 군으로부터 선택적으로 치환되고:
R7는 -CH(R8)O-, -CH2-, -CH2N(R8)-, 및 -CH(R8)O-C(=O)-로 이루어진 군으로부터 선택되고, 여기서 R8는 H, C1-C6 알킬, C(=O)-C1-C6 알킬, 및 -C(=O)N(R9)2로부터 선택되고, 여기서 R9는 H, C1-C12 알킬, 및 -(CH2CH2O)n-(CH2)m-OH로 이루어진 군으로부터 독립적으로 선택되고, 여기서 m은 1 내지 5의 정수이고, n은 2 내지 50의 정수이고, 또는 2개의 R9 기는 함께 5- 또는 6-원 헤테로사이클릴 고리를 형성하고;
y는 2 내지 12의 정수이고;
z는 0 또는 1이고; 그리고
알킬, 알킬디일, 알케닐, 알케닐디일, 알키닐, 알키닐디일, 아릴, 아릴디일, 카보사이클릴, 카보사이클릴디일, 헤테로사이클릴, 헤테로사이클릴디일, 헤테로아릴, 및 헤테로아릴디일은 F, Cl, Br, I, -CN, -CH3, -CH2CH3, -CH=CH2, -C≡CH, -C≡CCH3, -CH2CH2CH3, -CH(CH3)2, -CH2CH(CH3)2, -CH2OH, -CH2OCH3, -CH2CH2OH, -C(CH3)2OH, -CH(OH)CH(CH3)2, -C(CH3)2CH2OH, -CH2CH2SO2CH3, -CH2OP(O)(OH)2, -CH2F, -CHF2, -CF3, -CH2CF3, -CH2CHF2, -CH(CH3)CN, -C(CH3)2CN, -CH2CN, -CH2NH2, -CH2NHSO2CH3, -CH2NHCH3, -CH2N(CH3)2, -CO2H, -COCH3, -CO2CH3, -CO2C(CH3)3, -COCH(OH)CH3, -CONH2, -CONHCH3, -CON(CH3)2, -C(CH3)2CONH2, -NH2, -NHCH3, -N(CH3)2, -NHCOCH3, -N(CH3)COCH3, -NHS(O)2CH3, -N(CH3)C(CH3)2CONH2, -N(CH3)CH2CH2S(O)2CH3, -NHC(=NH)H, -NHC(=NH)CH3, -NHC(=NH)NH2, -NHC(=O)NH2, -NO2, =O, -OH, -OCH3, -OCH2CH3, -OCH2CH2OCH3, -OCH2CH2OH, -OCH2CH2N(CH3)2, -O(CH2CH2O)n-(CH2)mCO2H, -O(CH2CH2O)nH, -OP(O)(OH)2, -S(O)2N(CH3)2, -SCH3, -S(O)2CH3, 및 -S(O)3H로부터 독립적으로 선택된 하나 이상의 기로 독립적으로 및 선택적으로 치환된다.
화학식 I의 면역접합체의 예시적인 구현예는 항체는 PD-L1에 결합하는 항원 결합 도메인을 갖는 항체 작제물인 것을 포함한다.
화학식 I의 면역접합체의 예시적인 구현예는 항체는 아테졸리주맙, 더발루맙, 및 아벨루맙, 또는 그의 바이오시밀러 또는 바이오베터로 이루어진 군으로부터 선택되는 것을 포함한다.
화학식 I의 면역접합체의 예시적인 구현예는 항체는 HER2에 결합하는 항원 결합 도메인을 갖는 항체 작제물인 것을 포함한다.
화학식 I의 면역접합체의 예시적인 구현예는 항체는 트라스투주맙 및 페르투주맙, 또는 그의 바이오시밀러 또는 바이오베터로 이루어진 군으로부터 선택되는 것을 포함한다.
화학식 I의 면역접합체의 예시적인 구현예는 항체는 CEA에 결합하는 항원 결합 도메인을 갖는 항체 작제물인 것을 포함한다.
화학식 I의 면역접합체의 예시적인 구현예는 항체는 라베투주맙, 또는 그의 바이오시밀러 또는 바이오베터인 것을 포함한다.
화학식 I의 면역접합체의 예시적인 구현예는 항체는 카프린-1에 결합하는 항원 결합 도메인을 갖는 항체 작제물인 것을 포함한다.
화학식 I의 면역접합체의 예시적인 구현예는 항체는 TROP2에 결합하는 항원 결합 도메인을 갖는 항체 작제물인 것을 포함한다.
화학식 I의 면역접합체의 예시적인 구현예는 항체는 사시투주맙, 또는 그의 바이오시밀러 또는 바이오베터인 것을 포함한다.
화학식 I의 면역접합체의 예시적인 구현예는 X1은 결합이고, 그리고 R1은 H인 것을 포함한다.
화학식 I의 면역접합체의 예시적인 구현예는 X2는 결합이고, 그리고 R2는 C1-C8 알킬인 것을 포함한다.
화학식 I의 면역접합체의 예시적인 구현예는 X2 및 X3 각각은 결합이고, 그리고 R2 및 R3은 C1-C8 알킬, -O-(C1-C12 알킬), -(C1-C12 알킬디일)-OR5, -(C1-C8 알킬디일)-N(R5)CO2R5, -(C1-C12 알킬)-OC(O)N(R5)2, -O-(C1-C12 알킬)-N(R5)CO2R5, 및 -O-(C1-C12 알킬)-OC(O)N(R5)2로부터 독립적으로 선택되는 것을 포함한다.
화학식 I의 면역접합체의 예시적인 구현예는 R2는 C1-C8 알킬이고, R3은 -(C1-C8 알킬디일)-N(R5)CO2R4인 것을 포함한다.
화학식 I의 면역접합체의 예시적인 구현예는 R2는 -CH2CH2CH3이고 R3은 -CH2CH2CH2NHCO2(t-Bu), -OCH2CH2NHCO2(사이클로부틸), 및 -CH2CH2CH2NHCO2(사이클로부틸)로부터 선택되는 것을 포함한다.
화학식 I의 면역접합체의 예시적인 구현예는 R2 및 R3 각각은 독립적으로 -CH2CH2CH3, -OCH2CH3, -OCH2CF3, -CH2CH2CF3, -OCH2CH2OH, 및 -CH2CH2CH2OH로부터 선택되는 것을 포함한다.
화학식 I의 면역접합체의 예시적인 구현예는 R2 및 R3 각각은 -CH2CH2CH3인 것을 포함한다.
화학식 I의 면역접합체의 예시적인 구현예는 R2는 -CH2CH2CH3이고 R3은 -OCH2CH3인 것을 포함한다.
화학식 I의 면역접합체의 예시적인 구현예는 X3-R3은 하기로 이루어진 군으로부터 선택되는 것을 포함한다:
Figure pct00090
Figure pct00091
Figure pct00092
및
Figure pct00093
화학식 I의 면역접합체의 예시적인 구현예는 R2 또는 R3은 L에 부착되는 것을 포함한다.
화학식 I의 면역접합체의 예시적인 구현예는 X3-R3-L은 하기로 이루어진 군으로부터 선택되는 것을 포함한다:
Figure pct00094
Figure pct00095
여기서 물결선은 N에 대한 부착점을 나타낸다.
화학식 I의 면역접합체의 예시적인 구현예는 R4는 C1-C12 알킬인 것을 포함한다.
화학식 I의 면역접합체의 예시적인 구현예는 R4는 -(C1-C12 알킬디일)-N(R5)-*이고; 여기서 별표 *는 L의 부착 부위를 나타내는 것을 포함한다.
화학식 I의 면역접합체의 예시적인 구현예는 L은 -C(=O)-PEG- 또는 -C(=O)-PEG-C(=O)-인 것을 포함한다.
화학식 I의 면역접합체의 예시적인 구현예는 L은 항체의 시스테인 티올에 부착되는 것을 포함한다.
화학식 I의 면역접합체의 예시적인 구현예는 PEG에 대해, m은 1 또는 2이고, 그리고 n은 2 내지 10의 정수인 것을 포함한다.
화학식 I의 면역접합체의 예시적인 구현예는 PEG에 대해, n은 10인 것을 포함한다.
화학식 I의 면역접합체의 예시적인 구현예는 L은 PEP를 포함하고, PEP는 디펩티드이고 하기 화학식을 갖는 것을 포함한다:
Figure pct00096
화학식 I의 면역접합체의 예시적인 구현예는 L은 PEP를 포함하고, PEP는 트리펩티드이고 하기 화학식을 갖는 것을 포함한다:
Figure pct00097
화학식 I의 면역접합체의 예시적인 구현예는 L은 PEP를 포함하고, PEP는 테트라펩티드이고 하기 화학식을 갖는 것을 포함한다:
Figure pct00098
화학식 I의 면역접합체의 예시적인 구현예는 PEP는 하기 화학식을 갖는 것을 포함한다:
Figure pct00099
식 중 AA1 및 AA2는 자연 발생 아미노산의 측쇄로부터 독립적으로 선택된다.
화학식 I의 면역접합체의 예시적인 구현예는 AA1 및 AA2는 H, -CH3, -CH(CH3)2, -CH2(C6H5), -CH2CH2CH2CH2NH2, -CH2CH2CH2NHC(NH)NH2, -CHCH(CH3)CH3, -CH2SO3H, 및 -CH2CH2CH2NHC(O)NH2로부터 독립적으로 선택되거나; 또는 AA1 및 AA2는 5-원 고리 프롤린 아미노산을 형성하는 것을 포함한다.
화학식 I의 면역접합체의 예시적인 구현예는 AA1은 -CH(CH3)2이고, AA2는 -CH2CH2CH2NHC(O)NH2인 것을 포함한다.
화학식 I의 면역접합체의 예시적인 구현예는 AA1 및 AA2는 GlcNAc 아스파르트산, -CH2SO3H, 및 -CH2OPO3H로부터 독립적으로 선택되는 것을 포함한다.
화학식 I의 면역접합체의 예시적인 구현예는 A가 하기인 것을 포함한다
A1은 Abu, Ala, 및 Val로 이루어진 군으로부터 선택되고;
AA2는 Nle(O-Bzl), Oic 및 Pro로 이루어진 군으로부터 선택되고;
AA3은 Ala 및 Met(O)2로 이루어진 군으로부터 선택되고; 그리고
AA4는 Oic, Arg(NO2), Bpa, 및 Nle(O-Bzl)로 이루어진 군으로부터 선택된다.
화학식 I의 면역접합체의 예시적인 구현예는 L은 하기 구조로부터 선택되는 것을 포함한다:
Figure pct00100
여기서 물결선은 R5에 대한 부착을 나타낸다.
화학식 I의 면역접합체의 예시적인 구현예는 하기 화학식 Ia-Id로부터 선택된다:
Figure pct00101
Figure pct00102
화학식 I의 면역접합체의 예시적인 구현예는 하기 화학식 Ie-Il로부터 선택된다:
Figure pct00103
Figure pct00104
Figure pct00105
및
Figure pct00106
본 발명은 화학식 I 구현예의 모든 합리적인 조합 및 특징의 순열을 포함한다.
특정 구현예에서, 본 발명의 면역접합체 화합물은 면역자극 활성을 갖는 것들을 포함한다. 본 발명의 항체-약물 접합체는 종양 조직에 피라졸로아제핀 약물의 유효 용량을 선택적으로 전달함으로써, 비접합 피라졸로아제핀에 비해 치료 지수 ("치료 창(therapeutic window)")를 증가시키면서 더 큰 선택성 (즉, 더 낮은 유효 용량)을 달성할 수 있다.
약물 부하는 화학식 I의 면역접합체에서 항체당 PAZ 모이어티의 수인 p로 표시된다. 약물 (PAZ) 부하는 항체당 1 내지 약 8개의 약물 모이어티 (D) 범위일 수 있다. 화학식 I의 면역접합체는 1 내지 약 8의 범위의 약물 모이어티와 접합된 항체의 혼합물 또는 집합을 포함한다. 일부 구현예에서, 항체에 접합될 수 있는 약물 모이어티의 수는 라이신 및 시스테인과 같이 반응성 또는 이용 가능한 아미노산 측쇄 잔기의 수로 제한된다. 일부 구현예에서, 유리 시스테인 잔기가 본원에 기재된 방법에 의해 항체 아미노산 서열 내로 도입된다. 그러한 측면에서, p는 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 또는 8일 수 있고, 이들의 범위, 예컨대 1 내지 8 또는 2 내지 5일 수 있다. 임의의 이러한 측면에서, p 및 n은 동일하다 (즉, p = n = 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7 또는 8, 또는 그 사이의 일부 범위). 화학식 I의 예시적인 면역접합체는 1, 2, 3, 또는 4개의 조작된 시스테인 아미노산을 갖는 항체를 포함하지만 이에 제한되지는 않는다 (Lyon, R. 등 (2012) Methods in Enzym. 502:123-138). 일부 구현예에서, 하나 이상의 유리 시스테인 잔기가 항체에 이미 존재하여 조작을 사용하지 않고 사슬내 이황화 결합을 형성하고, 이 경우 기존의 유리 시스테인 잔기를 사용하여 항체를 약물에 접합시킬 수 있다. 일부 구현예에서, 항체는 하나 이상의 유리 시스테인 잔기를 생성하기 위해 항체의 접합 전에 환원 조건에 노출된다.
일부 면역접합체의 경우, p는 항체의 부착 부위 수에 의해 제한될 수 있다. 예를 들어, 부착이 시스테인 티올인 경우, 본원에 기재된 특정 예시적인 구현예에서, 항체는 약물이 부착될 수 있는, 단 하나 또는 제한된 수의 시스테인 티올 기를 가질 수 있거나, 단 하나 또는 제한된 수의 충분히 반응성인 티올기를 가질 수 있다. 다른 구현예에서, 항체에서 하나 이상의 라이신 아미노기가 이용가능하고 화학식 II의 PAZ-링커 화합물과의 접합에 반응성일 수 있다. 특정 구현예에서, 더 높은 약물 부하, 예를 들어, p > 5는 특정 항체-약물 접합체의 응집, 불용성, 독성 또는 세포 투과성의 손실을 유발할 수 있다. 특정 구현예에서, 면역접합체에 대한 평균 약물 부하 범위는 1 내지 약 8; 약 2 내지 약 6; 또는 약 3 내지 약 5이다. 특정 구현예에서, 항체는 라이신 또는 시스테인과 같은 반응성 친핵성 기를 나타내기 위해 변성 조건에 적용된다.
면역접합체의 부하 (약물/항체 비율)은 예를 들어, (i) 항체에 대한 PAZ-링커 중간체 화합물의 몰 과량을 제한하고, (ii) 접합 반응 시간 또는 온도를 제한하고, (iii) 최적화된 항체 반응성을 위한 환원성 변성 조건을 부분적으로 또는 제한함으로써 다양한 방식으로 제어될 수 있다.
항체의 하나 이상의 친핵성 기가 약물과 반응하는 경우, 생성된 생성물은 항체에 부착된 하나 이상의 약물 모이어티의 분포를 갖는 면역접합체 화합물의 혼합물임을 이해해야 한다. 항체당 약물의 평균 수는 항체에 특이적이고 약물에 대해 특이적인 이중 ELISA 항체 검정에 의해 혼합물로부터 계산될 수 있다. 개별 면역접합체 분자는 혼합물에서 질량 분광법으로 확인하고 HPLC, 예를 들어, 소수성 상호작용 크로마토그래피로 분리할 수 있다 (예를 들어, McDonagh 등 (2006) Prot. Engr. Design & Selection 19(7):299-307; Hamblett 등 (2004) Clin. Cancer Res. 10:7063-7070; Hamblett, K.J., 등 "Effect of drug loading on the pharmacology, pharmacokinetics, and toxicity of an anti-CD30 antibody-drug conjugate," Abstract No. 624, American Association for Cancer Research, 2004 Annual Meeting, March 27-31, 2004, Proceedings of the AACR, Volume 45, March 2004; Alley, S.C., 등 "Controlling the location of drug attachment in antibody-drug conjugates," Abstract No. 627, American Association for Cancer Research, 2004 Annual Meeting, March 27-31, 2004, Proceedings of the AACR, Volume 45, March 2004 참조). 특정 구현예에서, 단일 부하 값을 갖는 균질한 면역접합체는 전기영동 또는 크로마토그래피에 의해 접합 혼합물로부터 단리될 수 있다.
화학식 I의 면역접합체의 예시적인 구현예는 표 3a 및 3b 면역접합체로부터 선택된다. 표 3a 및 3b의 면역접합체는 다수 입증 활성을 나타내는 실시예 203에 기재된 방법을 이용하여 테스트되었다.
Figure pct00107
Figure pct00108
Figure pct00109
항-HER2 항체 트라스투주맙과 링커-보조제 화합물의 접합에 의해 비교기 면역접합체 A를 제조하였다:
Figure pct00110
면역접합체의 조성물
본 발명은 본원에 기재된 바와 같은 복수의 면역접합체 및 임의로 그를 위한 담체, 예를 들어, 제약상 또는 약리학상 허용되는 담체를 포함하는 조성물, 예를 들어, 제약상 또는 약리학상 허용되는 조성물 또는 제제를 제공한다. 면역접합체는 조성물에서 동일하거나 상이할 수 있다. 즉, 조성물은 항체 작제물의 동일한 위치에 연결된 동일한 수의 PAZ 보조제를 갖는 면역접합체 및/또는 항체 작제물의 상이한 위치에 연결된 동일한 수의 보조제를 가지거나, 항체 작제물 상의 동일한 위치에 연결된 상이한 수의 보조제를 가지거나, 항체 작제물의 상이한 위치에 연결된 상이한 수의 보조제를 갖는 면역접합체를 포함할 수 있다.
예시적인 구현예에서, 면역접합 화합물을 포함하는 조성물은 면역접합 화합물의 혼합물을 포함하고, 여기서 면역접합 화합물의 혼합물에서 항체당 평균 약물 (PAZ) 부하는 약 2 내지 약 5이다.
본 발명의 면역접합체의 조성물은 항체 작제물에 대한 평균 보조제의 비(DAR)가 약 0.4 내지 약 10일 수 있다. 당업자는 항체 작제물에 접합된 피라졸로아제핀 보조제의 수가 본 발명의 여러 면역접합체를 포함하는 조성물에서 면역접합체마다 다를 수 있으며, 따라서 항체 작제물 (예를 들어, 항체)에 대한 보조제 비는 평균으로서 측정될 수 있고, 이는 항체에 대한 약물 비 (DAR)로 지칭될 수 있다. 항체 작제물 (예를 들어, 항체)에 대한 보조제 비는 임의의 적합한 수단에 의해 평가될 수 있으며, 이들 중 다수는 당업계에 공지되어 있다.
접합 반응으로부터 면역접합체의 제조에서 항체당 보조제 모이어티의 평균 수 (DAR)는 질량 분석, ELISA 검정, 및 HPLC와 같은 통상적인 수단에 의해 특성화될 수 있다. p와 관련하여 조성물에서 면역접합체의 정량적 분포 또한 결정될 수 있다. 일부 경우에, p가 다른 약물 부하를 갖는 면역접합체로부터 특정 값인 균질 면역접합체의 분리, 정제 및 특성화는 역상 HPLC 또는 전기영동과 같은 수단에 의해 달성될 수 있다.
일부 구현예에서, 조성물은 하나 이상의 약제학상 또는 약리학상 허용되는 부형제를 추가로 포함한다. 예를 들어, 본 발명의 면역접합체는 IV 투여 또는 장기의 체강 또는 내강으로의 투여와 같은 비경구 투여용으로 제형화될 수 있다. 대안적으로, 면역접합체는 종양내 주사될 수 있다. 주사용 조성물은 일반적으로 약제학상 허용되는 담체에 용해된 면역접합체의 용액을 포함할 것이다. 사용할 수 있는 허용되는 비히클 및 용매 중에는 물 및 염화나트륨과 같은 하나 이상의 염의 등장성 용액, 예를 들어, 링거 용액이 있다. 또한, 멸균 고정 오일은 통상적으로 용매 또는 현탁 매질로서 사용될 수 있다. 이러한 목적으로 합성 모노글리세라이드 또는 디글리세라이드를 비롯한 임의의 부드러운 고정 오일을 사용할 수 있다. 또한, 올레산과 같은 지방산도 마찬가지로 주사제의 제조에 사용될 수 있다. 이들 조성물은 바람직하게는 멸균되고 일반적으로 바람직하지 않은 물질이 없다. 이들 조성물은 통상적이고 잘 알려진 멸균 기술에 의해 멸균될 수 있다. 조성물은 pH 조절제 및 완충제, 독성 조절제, 예를 들어, 아세트산나트륨, 염화나트륨, 염화칼륨, 염화칼슘, 젖산나트륨 등과 같은 생리학적 조건을 근사화하는 데 필요한 약제학상 허용되는 보조 물질을 함유할 수 있다
조성물은 임의의 적합한 농도의 면역접합체를 함유할 수 있다. 조성물 중 면역접합체의 농도는 광범위하게 변할 수 있고, 선택된 특정 투여 방식 및 환자의 필요에 따라 주로 유체 부피, 점도, 체중 등에 기초하여 선택될 것이다. 특정 구현예에서, 주사용 용액 제제 중 면역접합체의 농도는 약 0.1% (w/w) 내지 약 10% (w/w) 범위일 것이다.
면역접합체를 이용한 암 치료 방법
본 발명은 암을 치료하는 방법을 제공한다. 방법은 치료 유효량의 본원에 기재된 면역접합체 (예를 들어, 본원에 기재된 바와 같은 조성물로서)를 이를 필요로 하는 대상체, 예를 들어, 암을 앓고 있고 암에 대한 치료가 필요한 대상체에게 투여하는 단계를 포함한다. 상기 방법은 표 3a 및 3b로부터 선택된 면역접합체 (IC)의 치료 유효량을 투여하는 단계를 포함한다.
본 발명의 면역접합체는 예를 들어, 종양 항원의 과발현을 특징으로 하는 다양한 과증식성 질환 또는 장애를 치료하는데 사용될 수 있는 것으로 고려된다. 예시적인 과증식성 장애는 양성 또는 악성 고형 종양 및 백혈병 및 림프성 악성종양과 같은 혈액학적 장애를 포함한다.
또 다른 측면에서, 약제로서 사용하기 위한 면역접합체가 제공된다. 특정 구현예에서, 본 발명은 개체에게 유효량의 면역접합체를 투여하는 단계를 포함하는, 개체를 치료하는 방법에 사용하기 위한 면역접합체를 제공한다. 하나의 이러한 구현예에서, 방법은 예를 들어, 본원에 기재된 바와 같은 유효량의 적어도 하나의 추가 치료제를 개체에게 투여하는 단계를 추가로 포함한다.
추가 측면에서, 본 발명은 의약의 제조(manufacture) 또는 제조(preparation)에서의 면역접합체의 용도를 제공한다. 한 구현예에서, 의약은 암 치료를 위한 것이며, 이 방법은 암에 걸린 개체에게 유효량의 의약을 투여하는 단계를 포함한다. 하나의 이러한 구현예에서, 방법은 예를 들어 본원에 기재된 바와 같은 유효량의 적어도 하나의 추가 치료제를 개체에게 투여하는 단계를 추가로 포함한다.
암종은 상피 조직에서 발생하는 악성 종양이다. 상피 세포는 신체의 외부 표면을 덮고 내부 공동을 감싸며 선 조직의 라이닝을 형성한다. 암종의 예에는 선암 (유방, 췌장, 폐, 전립선, 위, 위식도 접합부, 및 결장의 암과 같은 선 (분비) 세포에서 시작하는 암) 부신피질 암종; 간세포 암; 신세포 암종; 난소 암종; 제자리(in situ) 암종; 도관 암종; 유방 암종; 기저 세포 암종; 편평 세포 암종; 이행 세포 암종; 결장 암종; 비인두 암종; 다안 낭포성 신세포 암종; 귀리 세포 암종; 대세포 폐 암종; 소세포 폐 암종; 비-소세포 폐 암종 등을 포함하나 이들로 제한되는 것은 아니다. 암종은 전립선, 췌장, 결장, 뇌 (보통 이차 전이로), 폐, 유방, 및 피부에서 발견될 수 있다. 일부 구현예에서, 비-소세포 폐 암종을 치료하는 방법은 PD-L1에 결합할 수 있는 항체 작제물 (예를 들어, 아테졸리주맙, 더발루맙, 아벨루맙, 그의 바이오시밀러, 또는 그의 바이오베터)을 함유하는 면역접합체를 투여하는 단계를 포함한다. 일부 구현예에서, 유방암을 치료하는 방법은 PD-L1에 결합할 수 있는 항체 작제물 (예를 들어, 아테졸리주맙, 더발루맙, 아벨루맙, 그의 바이오시밀러, 또는 그의 바이오베터)을 함유하는 면역접합체를 투여하는 단계를 포함한다. 일부 구현예에서, 삼중-음성 유방암을 치료하는 방법은 PD-L1에 결합할 수 있는 항체 작제물 (예를 들어, 아테졸리주맙, 더발루맙, 아벨루맙, 그의 바이오시밀러, 또는 그의 바이오베터)을 함유하는 면역접합체를 투여하는 단계를 포함한다.
연조직 종양은 결합 조직에서 유래하는 매우 다양한 희귀 종양군이다. 연조직 종양의 예에는 폐포 연부 육종; 혈관종 섬유성 조직구종; 연골근산화 섬유종; 골격 연골육종; 골격외 점액성 연골육종; 투명 세포 육종; 이형성 작은 원형 세포 종양; 피부섬유육종 돌기; 자궁내막 기질 종양; 유윙 육종; 섬유종증 (데스모이드(Desmoid)); 섬유육종, 유아; 위장관 기질 종양; 뼈 거대 세포 종양; 건활막 거대 세포 종양; 염증성 근섬유모세포 종양; 자궁 평활근종; 평활근육종; 지방모세포종; 전형적인 지방종; 방추 세포 또는 다형성 지방종; 비정형 지방종; 연골 지방종; 잘 분화된 지방육종; 점액질/원형 세포 지방육종; 다형성 지방육종; 점액질 악성 섬유성 조직구종; 고급 악성 섬유성 조직구종; 점액섬유육종; 악성 말초 신경초 종양; 중피종; 신경 모세포종; 골연골종; 골육종; 원시 신경외배엽 종양; 폐포 횡문근육종; 배아 횡문근육종; 양성 또는 악성 신경초종; 활액 육종; 에반의 종양(Evan's tumor); 결절성 근막염; 데스모이드형 섬유종증; 고립성 섬유성 종양; 피부섬유육종 원충 (DFSP); 혈관육종; 상피성 혈관내피종; 건활막 거대 세포 종양 (TGCT); 색소성 융모 결절성 활막염 (PVNS); 섬유성 이형성증; 점액섬유육종; 섬유육종; 활액 육종; 악성 말초 신경초 종양; 신경섬유종; 연조직의 다형성 선종; 및 섬유아세포, 근섬유아세포, 조직구, 혈관 세포/내피 세포, 및 신경초 세포로부터 유래된 신생물을 포함하나 이들로 제한되지 않는다.
육종은 뼈에서, 또는 연골, 지방, 근육, 혈관, 섬유 조직 또는 기타 결합 또는 지지 조직을 포함한 신체의 연조직과 같은 중간엽 기원의 세포에서 발생하는 드문 유형의 암이다. 다양한 유형의 육종은 암이 형성되는 위치에 따라 다르다. 예를 들어, 골육종은 뼈에, 지방육종은 지방에, 횡문근육종은 근육에 발생한다. 육종의 예에는 피부 종양; 육종 보트리오이데스; 연골육종; 유윙 육종; 악성 혈관내피종; 악성 신경초종; 골육종; 및 연조직 육종 (예: 폐포 연부 육종; 혈관육종; 낭포 육종 엽상체 피부섬유육종 원충 (DFSP); 데스모이드 종양; 결합조직형성 소원형세포종양; 상피 세포 육종; 골격외 연골육종; 골격외 골육종; 섬유육종; 위장관 기질 종양 (GIST); 혈관주위세포종; 혈관육종(hemangiosarcoma) (더 일반적으로 "혈관육종(angiosarcoma)"이라고 함), 카포시 육종, 평활근육종, 지방육종, 림프관육종, 악성 말초신경초종양 (MPNST), 신경섬유육종, 활액육종, 및 미분화 다형성 육종)을 포함하나 이들로 제한되지 않는다.
기형종은 예를 들어, 모발, 근육 및 뼈를 포함한 여러 다른 유형의 조직을 포함할 수 있는 생식 세포 종양의 한 유형이다 (예를 들어, 내배엽, 중배엽 및 외배엽의 세 가지 생식층의 일부 및/또는 모두에서 유래된 조직을 포함할 수 있음). 기형종은 여성의 난소, 남성의 고환, 어린이의 꼬리뼈에서 가장 흔하게 발생한다.
흑색종은 멜라닌 세포 (멜라닌 색소를 만드는 세포)에서 시작되는 암의 한 형태이다. 흑색종은 점 (피부 흑색종)에서 시작될 수 있지만 눈이나 장과 같은 다른 색소 조직에서도 시작할 수 있다.
메르켈 세포 암종은 일반적으로 얼굴, 머리 또는 목에 살색 또는 청적색 결절로 나타나는 드문 유형의 피부암이다. 메르켈 세포 암종은 피부의 신경 내분비 암종이라고도 한다. 일부 구현예에서, 메르켈 세포 암종을 치료하는 방법은 PD-L1에 결합할 수 있는 항체 작제물 (예를 들어, 아테졸리주맙, 더발루맙, 아벨루맙, 그의 바이오시밀러, 또는 그의 바이오베터)을 함유하는 면역접합체를 투여하는 단계를 포함한다. 일부 구현예에서, 메르켈 세포 암종은 투여가 일어날 때 전이되었다.
백혈병은 골수와 같은 혈액 형성 조직에서 시작하여 많은 수의 비정상 혈액 세포가 생성되어 혈류로 들어가는 암이다. 예를 들어, 백혈병은 정상적으로 혈류에서 성숙하는 골수 유래 세포에서 발생할 수 있다. 백혈병은 질환이 얼마나 빨리 발병하고 진행되는지 (예를 들어, 급성 대 만성) 및 영향을 받는 백혈구 유형 (예를 들어, 골수성 대 림프성)에 따라 명명된다. 골수성 백혈병은 골수성(myelogenous) 또는 골수모세포성(myeloblastic) 백혈병이라고도 한다. 림프성 백혈병은 림프모구성 또는 림프구성 백혈병이라고도 한다. 림프절 백혈병 세포가 림프절에 모여서 부어오를 수 있다. 백혈병의 예에는 급성 골수성 백혈병 (AML), 급성 림프구성 백혈병 (ALL), 만성 골수성 백혈병 (CML) 및 만성 림프구성 백혈병 (CLL)이 포함되지만 이들로 제한되는 것은 아니다.
림프종은 면역 체계의 세포에서 시작되는 암이다. 예를 들어, 림프종은 림프계에서 정상적으로 성숙하는 골수 유래 세포에서 발생할 수 있다. 림프종에는 두 가지 기본 범주가 있다. 림프종의 한 범주는 리드-스턴버그(Reed-Sternberg) 세포라고 하는 세포 유형의 존재로 표시되는 호지킨 림프종 (HL)이다. 현재 6개의 인정된 HL 유형이 있다. 호지킨 림프종의 예로는 결절성 경화증 고전적 호지킨 림프종 (CHL), 혼합 세포성 CHL, 림프구 고갈 CHL, 림프구 풍부 CHL, 및 결절성 림프구 우세 HL이 있다.
림프종의 다른 범주는 비호지킨 림프종 (NHL)으로, 면역계 세포의 크고 다양한 암 군을 포함한다. 비호지킨 림프종은 추가로 무통성 (느린 성장) 과정이 있는 암과 공격적 (빠르게 성장하는) 과정이 있는 암으로 나눌 수 있다. 현재 61개의 인정된 NHL 유형이 있다. 비호지킨 림프종의 예에는 AIDS 관련 림프종, 역형성 대세포 림프종, 혈관면역모세포 림프종, 아세포 NK 세포 림프종, 버킷 림프종, 버킷 유사 림프종 (소형 비절단 세포 림프종), 만성 림프구성 백혈병/소림프구성 림프종, 피부 T-세포 림프종, 미만성 거대 B-세포 림프종, 장병증형 T-세포 림프종, 여포성 림프종, 간비장 감마 델타 T-세포 림프종, T-세포 백혈병, 림프모구 림프종, 맨틀 세포 림프종, 변연부 림프종, 비강 T-세포 림프종, 소아 림프종, 말초 T-세포 림프종, 원발성 중추신경계 림프종, 형질전환 림프종, 치료 관련 T-세포 림프종, 및 발덴스트롬 마크로글로불린혈증을 포함하나 이들로 제한되는 것은 아니다.
뇌암에는 뇌 조직의 모든 암이 포함된다. 뇌암의 예는 신경교종 (예를 들어, 교모세포종, 성상세포종, 희소돌기아교종, 뇌실막종 등), 수막종, 뇌하수체 선종, 및 전정 신경초종, 원시 신경외배엽 종양 (수모세포종)을 포함하지만 이들로 제한되는 것은 아니다.
본 발명의 면역접합체는 단독으로 또는 요법에서 다른 제제와 조합하여 사용될 수 있다. 예를 들어, 면역접합체는 화학요법제와 같은 적어도 하나의 추가 치료제와 공동 투여될 수 있다. 이러한 병용 요법은 병용 투여 (2개 이상의 치료제가 동일하거나 별도의 제형에 포함되는 경우) 및 개별 투여를 포함하며, 이 경우 면역접합체의 투여는 추가 치료제 및/또는 보조제의 투여 전, 동시 및/또는 후에 일어날 수 있다. 면역접합체는 또한 방사선 요법과 함께 사용할 수 있다.
본 발명의 면역접합체 (및 임의의 추가 치료제)는 비경구, 폐내 및 비강내를 포함하는 임의의 적합한 수단에 의해 투여될 수 있고, 국소 치료가 필요한 경우 병변내 투여가 가능하다. 비경구 주입에는 근육내, 정맥내, 동맥내, 복강내 또는 피하 투여가 포함된다. 투여는 임의의 적절한 경로, 예를 들어, 부분적으로는 투여가 단기인지 만성인지에 따라 정맥내 또는 피하 주사와 같은 주사에 의해 이루어질 수 있다. 다양한 시점에 걸친 단일 또는 다중 투여, 볼루스 투여 및 펄스 주입을 포함하나 이에 제한되지 않는 다양한 투여 스케줄이 본원에서 고려된다.
아테졸리주맙, 더발루맙, 아벨루맙, 이들의 바이오시밀러, 및 이들의 바이오베터는 암, 특히 유방암, 특히 삼중 음성 (에스트로겐 수용체, 프로게스테론 수용체, 및 과잉 HER2 단백질에 대한 테스트 음성) 유방암, 방광암, 및 메르켈 세포 암종의 치료에 유용한 것으로 알려져 있다. 본원에 기술된 면역접합체는 아테졸리주맙, 더발루맙, 아벨루맙, 이들의 바이오시밀러 및 이들의 바이오베터와 동일한 유형의 암, 특히 유방암, 특히 삼중 음성 (에스트로겐 수용체, 프로게스테론 수용체 및 과잉 HER2 단백질에 대해 음성 테스트) 유방암, 방광암 및 메르켈 세포 암종을 치료하는 데 사용할 수 있다.
면역접합체는 아테졸리주맙, 더발루맙, 아벨루맙, 이들의 바이오시밀러, 및 이들의 바이오베터에 사용되는 투여 요법과 같은 임의의 적합한 투여 요법을 사용하여 임의의 치료 유효량으로 이를 필요로 하는 대상체에게 투여된다. 예를 들어, 방법은 대상체에게 약 100 ng/kg 내지 약 50 mg/kg의 용량을 제공하도록 면역접합체를 투여하는 단계를 포함할 수 있다. 면역접합체 용량은 약 5 mg/kg 내지 약 50 mg/kg, 약 10 μg/kg 내지 약 5 mg/kg, 또는 약 100 μg/kg 내지 약 1 mg/kg의 범위일 수 있다. 면역접합체 용량은 약 100, 200, 300, 400, 또는 500 μg/kg일 수 있다. 면역접합체 용량은 약 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 또는 10 mg/kg일 수 있다. 면역접합체 용량은 또한 특정 접합체 뿐만 아니라 치료되는 암의 유형 및 중증도에 따라 이러한 범위를 벗어날 수 있다. 투여 빈도는 주 1회 투여 내지 다중 투여, 또는 더 빈번한 범위일 수 있다. 일부 구현예에서, 면역접합체는 1개월에 약 1회 내지 1주에 약 5회 투여된다. 일부 구현예에서, 면역접합체는 주 1회 투여된다.
또 다른 측면에서, 본 발명은 암을 예방하는 방법을 제공한다. 상기 방법은 치료 유효량의 면역접합체 (예를 들어, 상기 기재된 바와 같은 조성물로서)를 대상체에게 투여하는 단계를 포함한다. 특정 구현예에서, 대상체는 예방될 특정 암에 취약하다. 예를 들어, 방법은 대상체에게 약 100 ng/kg 내지 약 50 mg/kg의 용량을 제공하도록 면역접합체를 투여하는 단계를 포함할 수 있다. 면역접합체 용량은 약 5 mg/kg 내지 약 50 mg/kg, 약 10 μg/kg 내지 약 5 mg/kg, 또는 약 100 μg/kg 내지 약 1 mg/kg의 범위일 수 있다. 면역접합체 용량은 약 100, 200, 300, 400, 또는 500 μg/kg일 수 있다. 면역접합체 용량은 약 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 또는 10 mg/kg일 수 있다. 면역접합체 용량은 또한 특정 접합체 뿐만 아니라 치료되는 암의 유형 및 중증도에 따라 이러한 범위를 벗어날 수 있다. 투여 빈도는 주 1회 투여 내지 다중 투여, 또는 더 빈번한 범위일 수 있다. 일부 구현예에서, 면역접합체는 1개월에 약 1회 내지 1주에 약 5회 투여된다. 일부 구현예에서, 면역접합체는 주 1회 투여된다.
본 발명의 일부 구현예는 상기 기재된 바와 같은 암을 치료하는 방법을 제공하고, 여기서 암은 유방암이다. 유방암은 유방의 다양한 부위에서 발생할 수 있으며, 다양한 상이한 유형의 유방암이 특성화되었다. 예를 들어, 본 발명의 면역접합체는 제자리 도관 암종; 침윤성 도관 암종 (예를 들어, 관상 암종, 수질 암종, 점액성 암종, 유두 암종, 또는 유방의 낭상 암종); 제자리 소엽 암종; 침윤성 소엽 암종; 염증성 유방암; 및 삼중 음성 (에스트로겐 수용체, 프로게스테론 수용체 및 과량의 HER2 단백질에 대한 테스트 음성) 유방암과 같은 다른 형태의 유방암을 치료하기 위해 사용될 수 있다. 일부 구현예에서, 유방암을 치료하는 방법은 HER2 (예를 들어, 트라스투주맙, 퍼투주맙, 이들의 바이오시밀러 또는 바이오베터) 및 PD-L1 (예를 들어, 아테졸리주맙, 더발루맙, 아벨루맙, 이들의 바이오시밀러 또는 바이오베터)를 결합할 수 있는 항제 작제물을 함유하는 면역접합체를 투여하는 단계를 포함한다. 일부 구현예에서, 결장암 폐암, 신장암, 췌장암, 위암, 및 식도암을 치료하는 방법은 CEA, 또는 CEA를 과발현하는 종양에 결합할 수 있는 항체 작제물 (예를 들어, 라베투주맙, 이의 바이오시밀러, 또는 바이오베터)을 함유하는 면역접합체를 투여하는 단계를 포함한다.
일부 구현예에서, 암은 TLR7 및/또는 TLR8에 의해 유도된 전염증 반응에 민감하다.
일부 구현예에서, 치료 유효량의 면역접합체는 PD-L1, HER2, CEA 또는 TROP2를 발현하는 암을 치료할 필요가 있는 환자에게 투여된다.
일부 구현예에서, 치료 유효량의 면역접합체는 자궁경부암, 자궁내막 암, 난소암, 전립선암, 췌장암, 식도암, 방광암, 요로 암, 요상피 암종, 폐암, 비-소세포 폐암, 머켈(Merkel) 세포 암종, 결장암, 결장직장암, 위암, 또는 유방암의 치료를 필요로 하는 환자에게 투여된다. 머켈 세포 암종 암은 전이성 머켈 세포 암종일 수 있다. 유방암은 삼중 음성 유방암일 수 있다. 식도암은 위식도 접합부 선암종일 수 있다.
실시예
피라졸로아제핀 화합물 (PAZ) 및 중간체의 제조
실시예 1 5-아미노-1-메틸-N,N-디프로필-1,6-디하이드로피라졸로[4,3-b]아제핀-7-카복사미드, PAZ-1의 합성
Figure pct00111
메틸 4-(tert-부톡시카보닐아미노)-2-메틸-피라졸 -3-카복실레이트, 1b의 제조
DCM (25 mL) 중 메틸 4-아미노-2-메틸-피라졸-3-카복실레이트, 1a (1 g, 6.45 mmol, 1 eq)의 혼합물에 TEA (1.96 g, 19.3 mmol, 2.69 mL, 3 eq), DMAP (78.7 mg, 644 umol (마이크로몰), 0.1 eq) 및 (Boc)2O (2.81 g, 12.9 mmol, 2.96 mL, 2 eq)을 첨가한 다음, 15℃에서 10시간 동안 교반하였다. 혼합물을 농축시키고 칼럼 크로마토그래피 (SiO2, 석유 에테르/에틸 아세테이트=1:0 내지 1:1)로 정제하여 1b (1 g, 3.92 mmol, 60.78% 수율)를 황색 오일로서 얻었다.
tert-부틸 N-[5-(하이드록시메틸)-1-메틸-피라졸-4-일]카바메이트, 1c의 제조
DCM (5 mL) 중 1b (800 mg, 3.13 mmol, 1 eq)의 혼합물에 DIBAL-H (1 M, 12.5 mL, 4 eq)을 0℃에서 첨가하고 15℃에서 10시간 동안 교반하였다. 반응 혼합물을 물 (0.5 mL)로 켄칭한 다음, Na2SO4 상에서 건조시키고, 셀라이트를 통해 여과하고, 여액을 농축시켜 1c (400 mg, 1.76 mmol, 56.2% 수율)를 황색 오일로서 얻었다. LC/MS [M+H] 228.1 (계산됨); LC/MS [M+H] 228.0 (관찰됨).
tert-부틸 N-(5-포르밀-1-메틸-피라졸-4-일)카바메이트, 1d의 제조
DCM (10 mL) 중 1c (300 mg, 1.32 mmol, 1 eq) 및 MnO2 (1.15 g, 13.2 mmol, 10 eq)의 혼합물을 45℃에서 23시간 동안 교반하였다. 혼합물을 셀라이트를 통해 여과하고, 여액을 농축시켜 1d (297 mg, 1.32 mmol, 99.9% 수율)를 황색 오일로서 얻었다. 1H NMR (400MHz, CDCl3) δ 10.01 (s, 1H), 8.28 (s, 1H), 8.04 (s, 1H), 4.11 (s, 3H), 1.53 (s, 9H)
(E)-에틸 3-(4-((tert-부톡시카보닐)아미노)-1-메틸-1H-피라졸-5-일) -2-(시아노메틸)아크릴레이트, 1e의 제조
톨루엔 (10 mL) 중 1d (270 mg, 1.20 mmol, 1 eq) 및 에틸 3-시아노-2-(트리페닐-포스파닐리덴)프로파노에이트 (650 mg, 1.68 mmol, 1.4 eq)의 혼합물을 80℃에서 10시간 동안 교반하였다. 혼합물을 농축시키고 미정제 물질을 칼럼 크로마토그래피 (SiO2, 석유 에테르/에틸 아세테이트= 1:0- 1:2)로 정제하여 1e (300 mg, 897.21 umol, 74.9 % 수율)를 황색 오일로서 얻었다. LC/MS [M+H] 335.2 (계산됨); LC/MS [M+H] 335.2 (관찰됨).
에틸 5-아미노-1-메틸-6H-피라졸로[4,3-b]아제핀-7-카복실레이트, 1f의 제조
HCl/EtOAc (4 M, 5 mL) 중 1e (280 mg, 837 umol, 1 eq)의 혼합물을 15℃에서 10분 동안 교반하였다. 혼합물을 농축시켜 1f (120 mg, 512 umol, 61.17% 수율)를 황색 고체로서 얻었다.
5-아미노-1- 메틸-6H -피라졸로[4,3-b] 아제핀-7-카복실산, 1g의 제조
EtOH (5 mL) 및 H2O (1 mL) 중 1f (120 mg, 512 umol, 1 eq)의 혼합물에 LiOH.H2O (43 mg, 1.02 mmol, 2 eq)을 첨가하고 25℃에서 10시간 동안 교반하였다. 혼합물을 prep-HPLC(HCl 조건: 칼럼: Waters Xbridge BEH C18 100*30mm*10um;이동상: [물(0.04%HCl)-ACN];B%:1%-20%,9min)로 정제하여 1g (90 mg, 436 umol, 85.2 % 수율)를 황색 고체로서 얻었다. LC/MS [M+H] 207.1 (계산됨); LC/MS [M+H] 207.1 (관찰됨).
5-아미노-1- 메틸-6H -피라졸로[4,3-b] 아제핀-7-카복실산, PAZ-1의 제조
DMF (1 mL) 중 5-아미노-1-메틸-6H-피라졸로[4,3-b]아제핀-7-카복실산 (60 mg, 291 umol, 1 eq)의 혼합물에 1-[비스(디메틸아미노)메틸렌]-1H-1,2,3-트리아졸로[4,5-b]피리디늄 3-옥사이드 헥사플루오로포스페이트, 헥사플루오로포스페이트 아자벤조트리아졸 테트라메틸 우로늄, HATU (133 mg, 349 umol, 1.2 eq) 및 DIEA (188 mg, 1.45 mmol, 253 uL, 5 eq)을 첨가하였다. 그 다음 N-프로필프로판-1-아민 (147 mg, 1.45 mmol, 201 uL, 5 eq)을 혼합물에 첨가하고 15℃에서 10시간 동안 교반하였다. 혼합물을 농축시킨 다음, prep-HPLC(TFA 조건: 칼럼: Phenomenex Synergi C18 150*25*10um;이동상: [물(0.1%TFA)-ACN];B%: 15%-40%,10min)로 정제하여 5-아미노-1-메틸-N,N-디프로필-6H-피라졸로[4,3-b]아제핀-7-카복사미드 (14 mg, 48.4 umol, 16.6% 수율)를 백색 고체로서 얻었다. 1H NMR (400MHz, MeOD-d4) δ 7.61 (s, 1H), 7.11 (s, 1H), 3.51-3.35 (m, 4H), 3.34 (s, 2H), 1.73-1.64 (m, 4H), 1.02-0.85 (m, 6H). LC/MS [M+H] 290.2 (계산됨); LC/MS [M+H] 290.2 (관찰됨).
실시예 2 5-아미노-1-(5-아미노펜틸)-N,N-디프로필-6H-피라졸로[4,3-b]아제핀-7-카복사미드, PAZ-2의 합성
Figure pct00112
tert-부틸 N-[5-[5-아미노-7-(디프로필카바모일)-6H-피라졸로[4,3-b]아제핀-1-일]펜틸]카바메이트, PAZ-4을 실시예 4의 절차로 제조하였다. EtOAc (1 mL) 중 PAZ-4 (30 mg, 65.1 umol, 1.0 eq)의 용액에 HCl/EtOAc (4 M, 5 mL)을 첨가한 다음, 0.5시간 동안 20℃에서 교반하였다. 혼합물을 진공에서 농축하여 5-아미노-1-(5-아미노펜틸)-N,N-디프로필-6H-피라졸로[4,3-b]아제핀-7-카복사미드 (14.2 mg, 35.2 umol, 54.09% 수율, 98.48% 순도, HCl)를 백색 고체로서 얻었다. 1H NMR (MeOD, 400 MHz) δ 7.66 (s, 1H), 7.14 (s, 1H), 4.27 (t, J = 7.2 Hz, 2H), 3.46-3.42 (m, 4H), 3.38 (s, 2H), 2.90 (t, J = 8.0 Hz, 2H), 1.89-1.86 (m, 2H), 1.72-1.66 (m, 6H), 1.40-1.38 (m, 2H), 0.96-0.89 (m, 6H). LC/MS [M+H] 361.3 (계산됨); LC/MS [M+H] 361.2 (관찰됨).
실시예 4 tert-부틸 N-[5-[5-아미노-7-(디프로필카바모일)-6H-피라졸로[4,3-b]아제핀-1-일]펜틸]카바메이트, PAZ-4의 합성
Figure pct00113
메틸 2-[5-(tert-부톡시카보닐아미노)펜틸]-4-니트로-피라졸-3- 카복실레이트, 4b의 제조
DMF (50 mL) 중 메틸 4-니트로-1H-피라졸-5-카복실레이트, 4a (5 g, 29.2 mmol, 1.0 eq)의 용액에 K2CO3 (20.2 g, 146 mmol, 5.0 eq) 및 5-(tert-부톡시카보닐아미노)펜틸 4-메틸벤젠설포네이트 (10.5 g, 29.2 mmol, 1.0 eq)를 25℃에서 N2 하에 첨가하였다. 혼합물을 3시간 동안 60℃에서 교반하였다. 그 다음 H2O (200 mL)의 첨가로 켄칭하고 에틸 아세테이트 (200 mL x 3)로 추출하였다. 조합된 유기상을 염수 (100 mL)로 세척하고, 무수 Na2SO4로 건조시키고, 여과하고 진공에서 농축하였다. 잔류물을 실리카겔 크로마토그래피 (칼럼 높이: 250 mm, 직경: 100 mm, 100-200 메쉬 실리카겔, 석유 에테르/에틸 아세테이트 = 50/1, 0/1)로 정제하여 4b (4.1 g, 미정제 물질)을 황색 오일로서 얻었고 위치이성질체, 메틸 1-[5-(tert-부톡시카보닐아미노)펜틸]-4-니트로-피라졸-3-카복실레이트 (6.1 g, 미정제 물질)를 황색 오일로서 얻었다. 1H NMR (CDCl3, 400 MHz) δ 8.03 (s, 1H), 4.26 (t, J = 7.2 Hz, 2H), 4.03 (s, 3H), 3.11 (q, J = 6.8 Hz, 2H), 1.94-1.86 (m, 2H), 1.53-1.44 (m, 2H), 1.44 (s, 9H), 1.34-1.33 (m, 2H).
tert-부틸 N-[5-[5-(하이드록시메틸)-4-니트로-피라졸-1-일]펜틸]카바메이트, 4c의 제조
DCM (36 mL) 중 4b (3.6 g, 10.1 mmol, 1.0 eq)의 용액에 0℃에서 DIBAL-H (1 M, 40.4 mL, 4.0 eq)에 첨가한 다음, 0.5시간 동안 0℃에서 교반하였다. 혼합물을 H2O 2 mL로 켄칭하고 10분 동안 교반한 다음, Na2SO4로 건조시키고, 에틸 아세테이트 (50 mL x 4)로 세척하고, 여과하고 압력 하에 농축하였다. 잔류물을 실리카겔 크로마토그래피 (칼럼 높이: 250 mm, 직경: 100 mm, 100-200 메쉬 실리카겔, 석유 에테르/에틸 아세테이트 = 100/1 내지 0/1)로 정제하여 4c (2.4 g, 7.31 mmol, 72.35% 수율)를 황색 오일로서 얻었다. 1H NMR (CDCl3, 400 MHz) δ 8.09 (s, 1H), 4.98 (d, J = 7.2 Hz, 2H), 4.59 (s, 1H), 4.24 (t, J = 7.2 Hz, 2H), 3.32 (t, J = 6.8 Hz, 1H), 3.12 (q, J = 6.8 Hz, 2H), 1.96-1.92 (m, 2H), 1.53-1.49 (m, 2H), 1.44 (s, 9H), 1.38-1.34 (m, 2H).
tert-부틸 N-[5-(5-포르밀-4-니트로-피라졸-1-일)펜틸]카바메이트, 4d의 제조
DCM (24 mL) 중 4c (2.4 g, 7.31 mmol, 1.0 eq)의 용액에 MnO2 (6.35 g, 73.1 mmol, 10.0 eq)을 첨가한 다음, 12시간 동안 50℃에서 교반하였다. 혼합물을 여과하고 압력 하에 농축하였다. 잔류물을 실리카겔 크로마토그래피 (칼럼 높이: 250 mm, 직경: 100 mm, 100-200 메쉬 실리카겔, 석유 에테르/에틸 아세테이트 = 100/1 내지 0/1)로 정제하여 2d (0.93 g, 2.85 mmol, 38.99% 수율)를 황색 오일로서 얻었다. 1H NMR (CDCl3, 400 MHz) δ 10.51 (s, 1H), 8.13 (s, 1H), 4.56 (t, J = 7.6 Hz, 2H), 3.13-3.10 (m, 2H), 1.91-1.84 (m, 2H), 1.53-1.51 (m, 2H), 1.45 (s, 9H), 1.43-1.36 (m, 2H).
(E)-에틸 3-(1-(5-((tert-부톡시카보닐)아미노)펜틸)-4-니트로-1H- 피라졸-5-일)-2-(시아노메틸)아크릴레이트, 4e의 제조
톨루엔 (10 mL) 중 에틸 3-시아노-2-(트리페닐-λ5-포스파닐리덴)프로파노에이트 (1.21 g, 3.13 mmol, 1.10 eq)의 용액에 2d (0.93 g, 2.85 mmol, 1.0 eq)을 첨가한 다음, 3시간 동안 70℃에서 N2 하에 교반하였다. 그 이후로는, 농축시켜 톨루엔 (10 mL)을 제거하였다. 잔류물을 실리카겔 크로마토그래피 (칼럼 높이: 250 mm, 직경: 100 mm, 100-200 메쉬 실리카겔, 석유 에테르/에틸 아세테이트 = 100/1 내지 0/1 대 에틸 아세테이트/MeOH = 100/1 내지 10/1)로 정제하여 4e (1.2 g, 2.76 mmol, 96.70% 수율)를 황색 오일로서 얻었다. 1H NMR (CDCl3, 400 MHz) δ 8.22 (s, 1H), 7.63 (s, 1H), 4.58 (s, 1H), 4.45-4.40 (m, 2H), 4.10-4.07 (m, 2H), 3.41 (s, 2H), 3.11 (q, J = 6.4 Hz, 2H), 1.93-1.89 (m, 2H), 1.54-1.50 (m, 2H), 1.45-1.42 (m, 12H), 1.34-1.32 (m, 2H)
에틸 5-아미노-1-[5-(tert-부톡시카보닐아미노)펜틸]-6H-피라졸로[4,3- b]아제핀-7-카복실레이트, 4f의 제조
AcOH (6 mL) 중 4e (600 mg, 1.38 mmol, 1.0 eq)의 용액에 Fe (385 mg, 6.89 mmol, 5.0 eq)을 첨가한 다음, 3시간 동안 70℃에서 교반하였다. 혼합물을 여과하고 농축시켜 AcOH를 제거한 다음, H2O 5 mL을 첨가하고, 에틸 아세테이트 (10 mL x 5)로 추출하였다. 조합된 유기상을 염수 (5 mL)로 세척하고, 무수 Na2SO4로 건조시키고, 여과하고 진공에서 농축하였다. 잔류물을 실리카겔 크로마토그래피 (칼럼 높이: 250 mm, 직경: 100 mm, 100-200 메쉬 실리카겔, 석유 에테르/에틸 아세테이트 = 50/1 내지 0/1 대 에틸 아세테이트/MeOH = 50/1 내지 1/1)로 정제하여 4f (150 mg, 369.92 umol, 26.85% 수율)를 황색 오일로서 얻었다. 1H NMR (CDCl3, 400 MHz) δ 7.69 (s, 1H), 7.58 (s, 1H), 4.36-4.31 (m, 2H), 4.20-4.16 (m, 2H), 3.13 (s, 2H), 3.10-3.09 (m, 2H), 1.89-1.84 (m, 2H), 1.52-1.49 (m, 2H), 1.44 (s, 9H), 1.39 (t, J = 7.2 Hz, 3H), 1.32-1.31 (m, 2H).
5-아미노-1-[5-(tert-부톡시카보닐아미노)펜틸]-6H-피라졸로[4,3- b]아제핀-7-카복실산, 4g의 제조
EtOH (0.5 mL) 중 4f (130 mg, 321 umol, 1.0 eq)의 용액에 H2O (0.5 mL) 중 LiOH.H2O (53.8 mg, 1.28 mmol, 4.0 eq)의 용액을 첨가한 다음, 3시간 동안 20℃에서 교반하였다. 혼합물의 pH를 HCl(4M)로 ~7로 조정한 다음, DCM/i-PrOH (3/1, 10 mL x 3)로 추출하였다. 조합된 유기상을 무수 Na2SO4로 건조시키고, 여과하고 진공에서 농축하여 4g (121 mg, 320.58 umol, 99.99% 수율)를 황색 오일로서 얻었다. 1H NMR (MeOD, 400 MHz) δ 7.66 (s, 1H), 7.56 (s, 1H), 4.23 (t, J = 7.2 Hz, 2H), 3.41 (s, 2H), 2.99 (t, J = 6.8 Hz, 2H), 1.86-1.82 (m, 2H), 1.48-1.45 (m, 2H), 1.41 (s, 9H), 1.29-1.26 (m, 2H)
tert-부틸 N-[5-[5-아미노-7-(디프로필카바모일)-6H-피라졸로[4,3-b]아제핀-1-일]펜틸]카바메이트, PAZ-4의 제조
DMF (0.5 mL) 중 4g (100 mg, 265 umol, 1.0 eq)의 용액에 HATU (106 mg, 278 umol, 1.05 eq), DIEA (103 mg, 795 umol, 3.0 eq) 및 N-프로필프로판-1-아민 (40.2 mg, 397 umol, 1.50 eq)을 첨가하였다. 혼합물을 0.5시간 동안 20℃에서 교반하였다. 그 다음 여과하고 prep-HPLC (칼럼: Phenomenex Synergi C18 150*25*10 um; 이동상: [물 (0.1% TFA)-ACN]; B%: 20%-45%, 9 min)로 정제하여 PAZ-4 (105 mg, 218.98 umol, 82.65% 수율, 96.06% 순도)를 백색 고체로서 얻었다. 1H NMR (MeOD, 400 MHz) δ 7.63 (s, 1H), 7.14 (s, 1H), 4.25 (t, J = 7.2 Hz, 2H), 3.46-3.45 (m, 4H), 3.37 (s, 2H), 2.98 (t, J = 6.4 Hz, 2H), 1.84-1.83 (m, 2H), 1.73-1.67 (m, 4H), 1.45-1.44 (m, 2H), 1.42 (s, 9H), 1.31-1.27 (m, 2H), 0.96-0.89 (m, 6H). LC/MS [M+H] 461.3 (계산됨); LC/MS [M+H] 461.3 (관찰됨).
실시예 6 5-아미노-2-메틸-N,N-디프로필-6H- 피라졸로[4,3-b]아제핀-7-카복사미드, PAZ-6의 합성
Figure pct00114
(1-메틸-4-니트로-피라졸-3-일)메탄올, 6b의 제조
DCM (40 mL) 중 메틸 1-메틸-4-니트로-피라졸-3-카복실레이트, 6a (4.00 g, 21.6 mmol, 1.0 eq)의 용액에 DIBAL-H (1 M, 64.8 mL, 3.0 eq)을 0℃에서 N2 하에 적가한 다음, 0℃에서 1시간 동안 교반하였다. 반응 혼합물을 물 (1.2 mL)로 켄칭하고 여과한 다음, 여액을 진공에서 농축하였다. 잔류물을 실리카겔 크로마토그래피 (칼럼 높이: 250 mm, 직경: 100 mm, 100-200 메쉬 실리카겔, 석유 에테르/에틸 아세테이트=10/1, 1/2)로 정제하여 6b (2.20 g, 14.0 mmol, 64.8% 수율)를 백색 고체로서 얻었다. 1H NMR (400 MHz, CDCl3) δ 8.07 (s, 1H), 4.84 (d, J = 5.6 Hz, 2H), 3.87 (s, 3H), 2.77 (t, J = 5.6Hz, 1H).
1-메틸-4-니트로-피라졸-3-카브알데하이드, 6c의 제조
DCM (20 mL) 중 6b (2.20 g, 14.0 mmol, 1.0 eq)의 용액에 MnO2 (6.09 g, 70.0 mmol, 5.0 eq)을 20℃에서 N2 하에 한번에 첨가한 다음, 40℃에서 10시간 동안 교반하였다. 반응 혼합물을 여과하고 여액을 진공에서 농축하였다. 잔류물을 실리카겔 크로마토그래피 (칼럼 높이: 250 mm, 직경: 100 mm, 100-200 메쉬 실리카겔, 석유 에테르/에틸 아세테이트=10/1, 1/4)로 정제하여 6c (1.00 g, 6.45 mmol, 46.0% 수율)를 황색 고체로서 얻었다. 1H NMR (400 MHz, CDCl3) δ 10.38 (s, 1H), 8.15 (s, 1H), 4.01 (s, 3H).
(E)-에틸 2-(시아노메틸)-3-(1-메틸-4-니트로-1H-피라졸-3-일)아크릴레이트, 6d의 제조
톨루엔 (10 mL) 중 6c (1.00 g, 6.45 mmol, 1.0 eq) 및 에틸 3-시아노-2-(트리페닐-λ5-포스파닐리덴)프로파노에이트 (3.25 g, 8.38 mmol, 1.3 eq)의 혼합물에 20℃에서 N2 하에 한번에 첨가하고 75℃에서 10시간 동안 교반하였다. 반응 혼합물을 진공에서 농축하였다. 잔류물을 실리카겔 크로마토그래피 (칼럼 높이: 250 mm, 직경: 100 mm, 100-200 메쉬 실리카겔, 석유 에테르/에틸 아세테이트=10/1, 1/1)로 정제하여 6d (1.10 g, 4.16 mmol, 64.5% 수율)를 황색 고체로서 얻었다. 1H NMR (400 MHz, CDCl3) δ 8.27 (s, 1H), 8.17 (s, 1H), 4.30 (q, J = 7.2 Hz, 2H), 3.98 (s, 3H), 3.95 (s, 2H), 1.33 (t, J = 7.2 Hz, 3H).
에틸 5-아미노-2-메틸-6H-피라졸로[4,3-b]아제핀-7-카복실레이트, 6e의 제조
AcOH (18 mL) 중 6d (900 mg, 3.41 mmol, 1.0 eq)의 용액에 Fe (951 mg, 17.0 mmol, 5.0 eq)을 20℃에서 N2 하에 한번에 첨가한 다음, 60℃에서 10시간 동안 교반하였다. 반응 혼합물을 진공에서 농축하였다. 잔류물을 실리카겔 크로마토그래피 (칼럼 높이: 250 mm, 직경: 100 mm, 100-200 메쉬 실리카겔, 석유 에테르/에틸 아세테이트=10/1, 0/1 및 그 다음 에틸 아세테이트/메탄올=1/0, 6/1)로 정제하여 6e (270 mg, 1.15 mmol, 33.8% 수율)를 황색 고체로서 얻었다.
5-아미노-2-메틸-6H-피라졸로[4,3-b]아제핀-7-카복실산, 6f의 제조
EtOH (10 mL) 및 H2O (2 mL) 중 PAZ-6e (120 mg, 512 umol, 1.0 eq)의 용액에 LiOHㆍH2O (107 mg, 2.56 mmol, 5.0 eq)을 20℃에서 N2 하에 한번에 첨가한 다음, 20℃에서 10시간 동안 교반하였다. 반응 혼합물에 물 (5 mL)을 첨가하고 HCl (4 M)로 pH를 ~7로 조정한 다음, 혼합물을 진공에서 농축하고, 여과하고 필터 케이크을 건조시켜 6f (70.0 mg, 339 umol, 66.2 % 수율)를 담황색 고체로서 얻었다. 1H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ 7.56 (s, 1H), 7.19 (br s, 1H), 3.86 (s, 3H), 3.07 (s, 2H).
5-아미노-2-메틸-N, N-디프로필-6H-피라졸로[4,3-b]아제핀-7-카복스-아미드, PAZ-6의 제조
DMF (1 mL) 중 6f (60.0 mg, 291 umol, 1.0 eq)의 용액에 HATU (99.5 mg, 261 umol, 0.9 eq) 및 DIEA (112 mg, 873 umol, 152 uL, 3.0 eq)을 20℃에서 N2 하에 첨가하였다. 10분 후, N-프로필프로판-1-아민 (58.9 mg, 582 umol, 80.2 uL, 2.0 eq)을 첨가하고 추가 0.5시간 동안 20℃에서 교반하였다. 반응 혼합물을 여과하고 여액을 prep-HPLC (칼럼: Phenomenex Luna C18 150*30mm*5um;이동상: [물(0.1%TFA)-ACN];B%: 5%-40%,12min)로 정제하여 PAZ-6 (25.6 mg, 86.7 umol, 29.8% 수율, 98.0% 순도)를 황색 고체로서 얻었다. 1H NMR (400 MHz, MeOD-d4) δ 7.86 (s, 1H), 6.96 (s, 1H), 3.99 (s, 3H), 3.50-3.42 (m, 4H), 3.41 (s, 2H), 1.75-1.64 (m, 4H), 0.98-0.92 (m, 6H). LC/MS [M+H] 290.2 (계산됨); LC/MS [M+H] 290.2 (관찰됨).
실시예 7 5-아미노-1-(5-아미노펜틸)-N-[3-(3,3-디메틸부타노일아미노)프로필]-N-프로필-6H-피라졸로[4,3-b]아제핀-7-카복사미드, PAZ-7의 합성
Figure pct00115
EtOAc (2 mL) 중 PAZ-8 (80 mg, 139 umol, 1.0 eq)의 용액에 HCl/EtOAc (4 M, 1.05 mL, 30.0 eq)을 첨가한 다음, 혼합물을 0.5시간 동안 20℃에서 교반하였다. 혼합물을 압력 하에 농축하고 (75 mg, 146 umol, 98 % 수율 PAZ-7, 2HCl)를 황색 고체로서 얻었다. 1H NMR (MeOD, 400 MHz) δ 7.67 (s, 1H), 7.18 (s, 1H), 4.28 (t, J = 7.2 Hz, 2H), 3.52 (t, J = 6.8 Hz, 2H), 3.45-3.41 (m, 4H), 3.32 (d, J = 2.4 Hz, 2H), 2.91 (t, J = 7.6 Hz, 2H), 2.07-2.04 (m, 2H), 1.90-1.85 (m, 4H), 1.69-1.66 (m, 4H), 1.40-1.36 (m, 2H), 1.02 (s, 9H), 0.97-0.87 (m, 3H). LC/MS [M+H] 474.3 (계산됨); LC/MS [M+H] 474.3 (관찰됨).
실시예 8 tert-부틸 N-[5-[5-아미노-7-[3-(3,3-디메틸부타노일아미노)프로필-프로필-카바모일]-6H-피라졸로[4,3-b]아제핀-1-일]펜틸]카바메이트, PAZ-8의 합성
Figure pct00116
DMF (3 mL) 중 8a (250 mg, 662 umol, 1.0 eq)의 용액에 HATU (252 mg, 662 umol, 1.0 eq), DIEA (257 mg, 1.99 mmol, 346 uL, 3.0 eq) 및 3,3-디메틸-N-[3-(프로필아미노)프로필]부탄아미드 (149 mg, 695 umol, 1.05 eq)을 20℃에서 첨가하고 0.5시간 동안 교반하였다. 혼합물을 여과하고 prep-HPLC (칼럼: Phenomenex Synergi C18 150*25*10 um; 이동상: [물(0.1%TFA)-ACN]; B%: 15%-45%, 10 min)로 정제하여 PAZ-8 (120 mg, 195 umol, 29.44% 수율, 93.23% 순도)를 백색 고체로서 얻었다. 1H NMR (MeOD, 400 MHz) δ 7.64 (s, 1H), 7.17 (s, 1H), 4.25 (t, J = 7.2 Hz, 2H), 3.52 (t, J = 7.2 Hz, 2H), 3.46-3.40 (m, 4H), 3.22 (d, J = 1.6 Hz, 2H), 3.00-2.97 (m, 2H), 2.06 (s, 2H), 1.88-1.83 (m, 4H), 1.70-1.68 (m, 2H), 1.47-1.45 (m, 2H), 1.42-1.41 (m, 11H), 1.28-1.27 (m, 2H), 1.02 (s, 9H), 0.93 (s, 3H). LC/MS [M+H] 574.4 (계산됨); LC/MS [M+H] 574.4 (관찰됨).
실시예 9 5-아미노-2-(5-아미노펜틸)-N-[3-(3,3-디메틸부타노일 아미노)프로필]-N-프로필-6H-피라졸로[4,3-b]아제핀-7-카복사미드, PAZ-9의 합성
Figure pct00117
EtOAc (2 mL) 중 실시예 10 (80.0 mg, 139 umol, 1 eq)로부터 PAZ-10, tert-부틸 N-[5-[5-아미노-7-[3-(3,3-디메틸부타노일아미노)프로필-프로필-카바모일]-6H-피라졸로[4,3-b]아제핀-2-일]펜틸]카바메이트의 용액에 HCl/EtOAc (4 M, 2 mL, 57.0 eq)을 첨가하고 20℃에서 1시간 동안 교반하였다. 혼합물을 농축시켜 PAZ-9 (70 mg, 128 umol, 91.85% 수율, 2HCl)를 담황색 고체로서 얻었다. 1H NMR (MeOD-d4, 400 MHz) δ 7.93 (s, 1H), 6.97 (s, 1H), 4.25 (t, J = 6.8 Hz, 2H), 3.52 (br t, J = 7.2 Hz, 2H), 3.47-3.39 (m, 4H), 3.27-3.16 (m, 2H), 2.92 (br t, J = 7.2 Hz, 2H), 2.08-2.01 (m, 2H), 1.99-1.91 (m, 2H), 1.90-1.80 (m, 2H), 1.75-1.63 (m, 4H), 1.44-1.40 (m, 2H), 1.01 (br s, 9H), 0.94-0.90 (m, 3H). LC/MS [M+H] 474.4 (계산됨); LC/MS [M+H] 474.3 (관찰됨).
실시예 10 tert-부틸 N-[5-[5-아미노-7-[3-(3,3-디메틸부타노일아미노)프로필-프로필-카바모일]-6H-피라졸로[4,3-b]아제핀-2-일]펜틸]카바메이트, PAZ-10의 합성
Figure pct00118
DMF (5 mL) 중 5-아미노-2-[5-(tert-부톡시카보닐아미노)펜틸]-6H-피라졸로 [4,3-b]아제핀-7-카복실산, 10a (250 mg, 662 umol, 1 eq)의 용액에 HATU (252 mg, 662 umol, 1 eq), DIEA (257 mg, 2.00 mmol, 346 uL, 3 eq) 및 3,3-디메틸-N-[3-(프로필아미노)프로필]부탄아미드 (664 mg, 2.70 mmol, 4 eq, HCl)를 첨가한 다음, 20℃에서 1시간 동안 교반하였다. 혼합물을 물 (30 mL)로 희석하고 EtOAc (30 mL x 3)로 추출하였다. 유기층을 염수 (20 mL)로 세척하고, Na2SO4 상에서 건조시키고, 여과하고 농축하였다. 잔류물을 prep-HPLC (칼럼: Phenomenex Synergi C18 150*25*10um;이동상: [물(0.1%TFA)-ACN];B%: 15%-45%,8min)로 정제하여 PAZ-10 (90 mg, 131 umol, 19.76% 수율, TFA)를 담황색 고체로서 얻었다. 1H NMR (MeOD-d4, 400 MHz) δ 7.88 (s, 1H), 6.98 (s, 1H), 4.22 (t, J = 7.2 Hz, 2H), 3.52 (br t, J = 7.2 Hz, 2H), 3.48-3.38 (m, 4H), 3.26-3.15 (m, 2H), 3.02 (t, J = 6.8 Hz, 2H), 2.10-1.99 (m, 2H), 1.96-1.79 (m, 4H), 1.72-1.62 (m, 2H), 1.54-1.47 (m, 2H), 1.42 (s, 9H), 1.37-1.28 (m, 2H), 1.01 (s, 9H), 0.95-0.86 (m, 3H). LC/MS [M+H] 574.4 (계산됨); LC/MS [M+H] 574.4 (관찰됨).
실시예 11 tert-부틸 N-[5-[5-아미노-7-[에톡시(프로필)카바모일]-6H-피라졸로[4,3-b]아제핀-1-일]펜틸]카바메이트, PAZ-11의 합성
Figure pct00119
DCM (5 mL) 및 디메틸아세트아미드 DMA (5 mL) 중 5-아미노-1-[5-(tert-부톡시카보닐아미노)펜틸]-6H-피라졸로 [4,3-b]아제핀-7-카복실산, 4g (220 mg, 582 umol, 1 eq) 및 N-에톡시프로판-1-아민 (122 mg, 874 umol, 1.5 eq, HCl)의 용액에 1-에틸-3-(3-디메틸아미노프로필)카보디이미드 하이드로클로라이드, EDCI (447 mg, 2.33 mmol, 4 eq)을 첨가한 다음, 20℃에서 1시간 동안 교반하였다. 반응 혼합물을 여과하고 감압 하에서 농축하였다. 잔류물을 prep-HPLC (TFA 조건: 칼럼: Phenomenex Gemini-NX 150*30mm*5um;이동상: [물(0.1%TFA)-ACN];B%: 25%-55%,9min)로 정제하여 PAZ-11 (135 mg, 234.13 umol, 40.17% 수율, TFA)를 백색 고체로서 얻었다. 1H NMR (MeOD-d4, 400MHz) δ 7.64 (s, 1H), 7.48 (s, 1H), 4.25 (t, J = 6.8 Hz, 2H), 3.96 (q, J = 7.2 Hz, 2H), 3.74 (t, J = 7.2 Hz, 2H), 3.43 (s, 2H), 2.99 (t, J = 6.8 Hz, 2H), 1.90-1.71 (m, 4H), 1.51-1.37 (m, 11H), 1.33-1.23 (m, 2H), 1.19 (t, J = 7.2 Hz, 3H), 1.00 (t, J = 7.2 Hz, 3H). LC/MS [M+H] 463.3 (계산됨); LC/MS [M+H] 463.3 (관찰됨).
실시예 12 5-아미노-1-(5-아미노펜틸)-N-에톡시-N-프로필-6H-피라졸로[4,3-b]아제핀-7-카복사미드, PAZ-12의 합성
Figure pct00120
EtOAc (1 mL) 중 PAZ-11 (123 mg, 265.90 umol, 1 eq)의 용액에 HCl/EtOAc (4 M, 10 mL, 150 eq)을 첨가하고 20℃에서 0.5시간 동안 교반하였다. 반응 혼합물을 감압 하에서 농축하여 PAZ-12 (100.5 mg, 230.83 umol, 86.81% 수율, 2HCl)를 담황색 고체로서 얻었다. 1H NMR (MeOD-d4, 400MHz) δ 7.66 (s, 1H), 7.46 (s, 1H), 4.28 (t, J = 7.2 Hz, 2H), 3.95 (q, J = 7.2 Hz, 2H), 3.74 (t, J = 7.2 Hz, 2H), 3.43 (s, 2H), 2.91 (t, J = 7.6 Hz, 2H), 1.95-1.84 (m, 2H), 1.83-1.73 (m, 2H), 1.70-1.64 (m, 2H), 1.45-1.34 (m, 2H), 1.18 (t, J = 7.2 Hz, 3H), 1.00 (t, J = 7.2 Hz, 3H). LC/MS [M+H] 363.2 (계산됨); LC/MS [M+H] 363.1 (관찰됨).
실시예 13 tert-부틸 N-[[4-[[5-아미노-7-(디프로필카바모일)-6H-피라졸로[4,3-b]아제핀-1-일] 메틸]페닐]메틸]카바메이트, PAZ-13의 합성
Figure pct00121
Figure pct00122
메틸 2-[[4-[(tert-부톡시카보닐아미노)메틸]페닐]메틸]-4-니트로-피라졸-3-카복실레이트, 13b의 제조
DMF (5 mL) 중 메틸 4-니트로-1H-피라졸-5-카복실레이트, 13a (200 mg, 1.17 mmol, 1.0 eq) 및 tert-부틸 N-[[4-(브로모메틸)페닐]메틸]카바메이트 (350 mg, 1.17 mmol, 1.0 eq)의 혼합물에 K2CO3 (323 mg, 2.34 mmol, 2.0 eq)을 20℃에서 N2 하에 한번에 첨가한 다음, 20℃에서 2시간 동안 교반하였다. 물 (20 mL)을 첨가하고 수성상을 에틸 아세테이트 (10 mL x 3)로 추출하고, 조합된 유기상을 염수 (20 mL)로 세척하고, 무수 Na2SO4로 건조시키고, 여과하고 진공에서 농축하였다. 잔류물을 실리카겔 크로마토그래피 (칼럼 높이: 250 mm, 직경: 100 mm, 100-200 메쉬 실리카겔, 석유 에테르/에틸 아세테이트 = 1/0, 2/1)로 정제하여 13b (100 mg, 256 umol, 21.9 % 수율)를 백색 고체로서 얻었다. 1H NMR (400 MHz, MeOD-d4) δ 8.18 (s, 1H), 7.32-7.21 (m, 4H), 5.50 (s, 2H), 4.23 (s, 2H), 3.92 (s, 3H), 1.46 (s, 9H).
tert-부틸 N-[[4-[[5-(하이드록시메틸)-4-니트로-피라졸-1-일]메틸]페닐] 메틸]카바메이트, 13c의 제조
DCM (20 mL) 중 13b (1.50 g, 3.84 mmol, 1.0 eq)의 용액에 DIBAL-H (1 M, 15.3 mL, 4.0 eq)을 N2 하에 0℃에서 적가하고, 혼합물을 0℃에서 2시간 동안 교반하였다. 반응 혼합물을 빙수 (3 mL)로 켄칭한 다음, 혼합물을 여과하고 여액을 농축하였다. 잔류물을 실리카겔 크로마토그래피 (칼럼 높이: 250 mm, 직경: 100 mm, 100-200 메쉬 실리카겔, 석유 에테르/에틸 아세테이트=1/0, 1/1)로 정제하여 13c (600 mg, 1.66 mmol, 43.1% 수율)를 황색 오일로서 얻었다. 1H NMR (400 MHz, CDCl3-d) δ 8.05 (s, 1H), 7.23-7.20 (m, 2H), 7.14-7.11 (m, 2H), 5.36 (s, 2H), 4.85 (d, J = 6.8 Hz, 2H), 4.22 (d, J = 6.0 Hz, 2H), 1.38 (s, 9H).
tert-부틸 N-[[4-[(5-포르밀-4-니트로-피라졸-1-일) 메틸] 페닐] 메틸] 카바메이트, 13d의 제조
DCM (10 mL) 중 13c (600 mg, 1.66 mmol, 1.0 eq)의 용액에 MnO2 (1.44 g, 16.5 mmol, 10 eq)을 20℃에서 N2 하에 한번에 첨가한 다음, 혼합물을 45℃에서 48시간 동안 교반하였다. 반응 혼합물을 여과하고 여액을 진공에서 농축하였다. 잔류물을 실리카겔 크로마토그래피 (칼럼 높이: 250 mm, 직경: 100 mm, 100-200 메쉬 실리카겔, 석유 에테르/에틸 아세테이트=1/0, 2/1)로 정제하여 13d (500 mg, 1.39 mmol, 83.8% 수율)를 황색 고체로서 얻었다. 1H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ 10.33 (s, 1H), 8.53 (s, 1H), 7.25 (s, 4H), 5.72 (s, 2H), 4.14 (d, J = 6.0 Hz, 2H), 1.43 (s, 9H).
에틸 (E)-3-[2-[[4-[(tert-부톡시카보닐아미노)메틸]페닐]메틸] -4-니트로-피라졸-3-일]-2-(시아노메틸)프로프-2-에노에이트, 13e의 제조
톨루엔 (10 mL) 중 PAZ-13d (380 mg, 1.05 mmol, 1.0 eq) 및 에틸 3-시아노-2-(트리페닐-λ5-포스파닐리덴) 프로파노에이트 (449 mg, 1.16 mmol, 1.1 eq)의 혼합물을 75℃에서 3시간 동안 교반하였다. 반응 혼합물을 진공에서 농축한 다음, 잔류물을 실리카겔 크로마토그래피 (칼럼 높이: 250 mm, 직경: 100 mm, 100-200 메쉬 실리카겔, 석유 에테르/에틸 아세테이트=10/1, 2/1)로 정제하여 13e (370 mg, 788 umol, 74.7% 수율)를 갈색 고체로서 얻었다.
에틸 5-아미노-1-[[4-[(tert-부톡시카보닐아미노)메틸]페닐] 메틸]-6H-피라졸로[4,3-b]아제핀-7-카복실레이트, 13f의 제조
AcOH (7 mL) 중 13e (370 mg, 788 umol, 1.0 eq)의 용액에 Fe (220 mg, 3.94 mmol, 5.0 eq)을 20℃에서 N2 하에 한번에 첨가한 다음, 65℃에서 10시간 동안 교반하였다. 반응 혼합물을 에틸 아세테이트로 희석한 다음, 여과하였다. 여액을 진공에서 농축하였다. 잔류물을 prep-HPLC (칼럼: Phenomenex luna C18 100*40mm*5 um;이동상: [물(0.1%TFA)-ACN];B%: 15%-40%,8min)로 정제하여 13f (180 mg, 409 umol, 51.9% 수율)를 황색 고체로서 얻었다. 1H NMR (400 MHz, MeOD) δ 7.73 (s, 1H), 7.48 (s, 1H), 7.24 (d, J = 8.0 Hz, 2H), 7.11 (d, J = 8.0 Hz, 2H), 5.44 (s, 2H), 4.28 (q, J = 7.2 Hz, 2H), 4.21 (s, 2H), 3.05 (s, 2H), 1.45 (s, 9H), 1.34 (t, J = 7.2 Hz, 3H).
5-아미노-1-[[4-[(tert-부톡시카보닐아미노) 메틸] 페닐] 메틸]-6H -피라졸로[4,3-b]아제핀-7-카복실산, 13g의 제조
EtOH (4 mL) 및 H2O (4 mL) 중 PAZ-13f (160 mg, 364 umol, 1.0 eq)의 용액에 LiOHㆍH2O (61.1 mg, 1.46 mmol, 4.0 eq)을 20℃에서 N2 하에 한번에 첨가하고 20℃에서 3시간 동안 교반하였다. 반응 혼합물을 pH=7까지 HCl (4 M)로 켄칭한 다음, 농축시켜 EtOH를 진공에서 제거하였다. 침전을 여과하여 13g (120 mg, 291 umol, 80.1% 수율)를 회색 고체로서 얻었다. 1H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ 7.66 (s, 1H), 7.39 (s, 1H), 7.18 (d, J = 8.0 Hz, 2H), 7.04 (d, J = 8.0 Hz, 2H), 5.39 (s, 2H), 4.09 (d, J = 6.0 Hz, 2H), 2.90 (s, 2H), 1.39 (s, 9H).
PAZ-13의 제조
DMF (2 mL) 중 13g (150 mg, 364 umol, 1.0 eq)의 용액에 HATU (138 mg, 364 umol, 1.0 eq) 및 Et3N (110 mg, 1.09 mmol, 152 uL, 3.0 eq)을 20℃에서 N2 하에 한번에 첨가하였다. 10분 후, N-프로필프로판-1-아민 (110 mg, 1.09 mmol, 150 uL, 3.0 eq)을 첨가하고 20℃에서 1시간 동안 교반하였다. 반응 혼합물을 여과하고 여액을 prep-HPLC (칼럼: Phenomenex Synergi C18 150*25*10um; 이동상: [물 (0.1%TFA)-ACN]; B%: 10%-40%, 10min)로 정제하여 PAZ-13 (110 mg, 221 umol, 60.8% 수율, 99.7% 순도)를 백색 고체로서 얻었다. 1H NMR (400 MHz, MeOD) δ 7.71 (s, 1H), 7.26 (d, J = 8.0 Hz, 2H), 7.11 (d, J = 8.0 Hz, 2H), 7.02 (s, 1H), 5.51 (s, 2H), 4.20 (s, 2H), 3.38-3.34 (m, 4H), 3.30 (s, 2H), 1.55-1.50 (m, 4H), 1.45 (s, 9H), 1.04-0.66 (m, 6H). LC/MS [M+H] 495.3 (계산됨); LC/MS [M+H] 495.2 (관찰됨).
실시예 14 5-아미노-1-[[4-(아미노메틸)페닐]메틸]-N,N-디프로필-6H- 피라졸로[4,3-b]아제핀 -7-카복사미드, PAZ-14의 합성
Figure pct00123
EtOAc (2 mL) 중 tert-부틸 N-[[4-[[5-아미노-7-(디프로필카바모일)-6H-피라졸로[4,3-b]아제핀-1-일]메틸]페닐]메틸]카바메이트, PAZ-13 (100 mg, 202 umol, 1.0 eq)의 용액에 HCl/EtOAc (4 M, 2.53 mL, 50 eq)을 20℃에서 N2 하에 한번에 첨가한 다음, 혼합물을 20℃에서 1시간 동안 교반하였다. 반응 혼합물을 진공에서 농축하여 PAZ-14 (87.0 mg, 196 umol, 97.1% 수율, 97.2% 순도, HCl)를 갈색 오일로서 얻었다. 1H NMR (400 MHz, MeOD) δ 7.74 (s, 1H), 7.46 (d, J = 8.0 Hz, 2H), 7.25 (d, J = 8.0 Hz, 2H), 7.06 (s, 1H), 5.56 (s, 2H), 4.11 (s, 2H), 3.35 (s, 2H), 3.33-3.31 (m, 4H), 1.72-1.54 (m, 4H), 1.01-0.71 (m, 6H). LC/MS [M+H] 395.2 (계산됨); LC/MS [M+H] 395.1 (관찰됨).
실시예 15 사이클로부틸 (3-(5-아미노-1-(5-아미노펜틸)-N-프로필-1,6-디하이드로피라졸로[4,3-b]아제핀-7-카복사미도)프로필)카바메이트, PAZ-15의 합성
Figure pct00124
EtOAc (3 mL) 중 PAZ-16 (200 mg, 349 umol, 1 eq)의 용액에 HCl/EtOAc (4 M, 10 mL)를 첨가한 다음, 25℃에서 1시간 동안 교반하였다. 혼합물을 감압 하에서 농축하여 PAZ-15 (170 mg, 333 umol, 95.61% 수율, HCl)를 황색 고체로서 얻었다. 1H NMR (MeOD-d4, 400MHz) δ 7.67 (s, 1H), 7.17 (br s, 1H), 4.85-4.80 (m, 1H), 4.28 (t, J = 7.2 Hz, 2H), 3.51 (br t, J = 7.2 Hz, 2H), 3.47-3.36 (m, 4H), 3.19-3.02 (m, 2H), 2.91 (br t, J = 7.6 Hz, 2H), 2.32-2.20 (m, 2H), 2.04-1.92 (m, 2H), 1.90-1.82 (m, 4H), 1.77-1.57 (m, 6H), 1.45-1.31 (m, 2H), 0.98-0.84 (m, 3H). LC/MS [M+H] 474.3 (계산됨); LC/MS [M+H] 474.1 (관찰됨).
실시예 16 tert-부틸 (5-(5-아미노-7-((3-((사이클로부톡시카보닐)아미노)프로필)(프로필)카바모일)피라졸로[4,3-b]아제핀-1(6H)-일)펜틸)카바메이트, PAZ-16의 합성
Figure pct00125
DMF (0.5 mL) 중 5-아미노-1-[5-(tert-부톡시카보닐아미노)펜틸]-6H-피라졸로 [4,3-b]아제핀-7-카복실산, 4g (250 mg, 662 umol, 1 eq)의 용액에 HATU (277 mg, 729 umol, 1.1 eq) 및 DIEA (428 mg, 3.3 mmol, 577 uL, 5 eq), 그 다음 사이클로부틸 N-[3-(프로필아미노)프로필]카바메이트 (166 mg, 662 umol, 1 eq, HCl)을 첨가하고 25℃에서 0.5시간 동안 교반하였다. 혼합물을 여과하고 prep-HPLC (TFA 조건; 칼럼: Phenomenex Gemini-NX C18 75*30mm*3um;이동상: [물(0.1%TFA)-ACN];B%: 30%-50%,8min)로 정제하여 PAZ-16 (200 mg, 348.6 umol, 52.63% 수율)를 황색 고체로서 얻었다. 1H NMR (MeOD-d4, 400MHz) δ 7.42 (s, 1H), 6.95 (s, 1H), 4.84-4.77 (m, 1H), 4.17 (t, J = 7.2 Hz, 2H), 3.48 (br t, J = 7.2 Hz, 2H), 3.42-3.37 (m, 2H), 3.30 (br s, 2H), 3.12-3.02 (m, 2H), 2.98 (t, J = 6.8 Hz, 2H), 2.27 (br s, 2H), 2.07-1.93 (m, 2H), 1.83-1.75 (m, 4H), 1.71-1.55 (m, 4H), 1.47-1.39 (m, 11H), 1.29-1.22 (m, 2H), 0.97-0.86 (m, 3H). LC/MS [M+H] 574.4 (계산됨); LC/MS [M+H] 574.4 (관찰됨).
실시예 L-1 (2,3,5,6-테트라플루오로페닐) 3-[2-[2-[2-[2-[2-[2-[2-[2-[2-[2-[5-[5-아미노-7-(디프로필카바모일)-6H-피라졸로[4,3-b]아제핀-1-일]펜틸-메틸-아미노]에톡시]에톡시]에톡시]에톡시]에톡시]에톡시]에톡시]에톡시]에톡시]에톡시]프로파노에이트, PAZ-L-1의 합성
Figure pct00126
tert-부틸 3-[2-[2-[2-[2-[2-[2-[2-[2-[2-[2-[5-[5-아미노-7- (디프로필카바모일)-6H-피라졸로[4,3-b]아제핀-1-일]펜틸-메틸-아미노]에톡시]에톡시]에톡시]에톡시]에톡시]에톡시]에톡시]에톡시]에톡시]에톡시]프로파노에이트, L-1a의 제조
MeOH (2 mL) 중 5-아미노-1-(5-아미노펜틸)-N,N-디프로필-6H-피라졸로[4,3-b]아제핀-7- 카복사미드, PAZ-2 (57 mg, 143.59 umol, 1.0 eq, HCl)의 용액에 tert-부틸 3-[2-[2-[2-[2-[2-[2-[2-[2-[2-(2-옥소에톡시)에톡시]에톡시]에톡시]에톡시]에톡시]에톡시]에톡시]에톡시]에톡시]프로파노에이트 (218 mg, 373 umol, 2.60 eq) 및 NaBH3CN (27.0 mg, 431 umol, 3.0 eq)을 첨가하고 혼합물을 12시간 동안 20℃에서 교반한 다음, HCHO (23.3 mg, 287 umol, 21.3 uL, 37% 순도, 2.0 eq)을 첨가하고 추가 1시간 동안 20℃에서 교반하였다. 반응을 여과하고 prep-HPLC (칼럼: Phenomenex Synergi C18 150*25*10 um; 이동상: [물(0.1%TFA)-ACN]; B%: 25%-35%, 10 min)로 정제하여 L-1a (100 mg, 106.02 umol, 73.83% 수율)를 황색 오일로서 얻었다. 1H NMR (MeOD, 400 MHz) δ 7.67 (s, 1H), 7.13 (s, 1H), 4.30-4.28 (m, 2H), 3.84-3.83 (m, 2H), 3.71-3.59 (m, 40H), 3.47-3.44 (m, 6H), 3.38 (s, 2H), 2.91 (s, 3H), 2.47 (t, J = 6.0 Hz, 2H), 2.03 (s, 3H), 1.94-1.91 (m, 2H), 1.82-1.63 (m, 6H), 1.45 (s, 9H), 1.39-1.37 (m, 2H), 0.96-0.91 (m, 6H).
3-[2-[2-[2-[2-[2-[2-[2-[2-[2-[2-[5-[5-아미노-7-(디프로필카바모일)- 6H-피라졸로[4,3-b]아제핀-1-일]펜틸-메틸-아미노]에톡시]에톡시]에톡시]에톡시]에톡시]에톡시]에톡시]에톡시]에톡시]에톡시]프로판산, L-1b의 제조
H2O (0.2 mL) 중 L-1a (90 mg, 95.42 umol, 1.0 eq)의 용액에 HCl (12 M, 159 uL, 20.0 eq)을 첨가하고 1시간 동안 80℃에서 교반하였다. 혼합물을 압력 하에 농축하여 L-1b (60 mg, 67.64 umol, 70.88% 수율)를 황색 오일로서 얻었다.
PAZ-L-1의 제조
DMA (0.1 mL) 및 DCM (1 mL) 중 L-1b (55 mg, 62.0 umol, 1.0 eq)의 용액에 2,3,5,6-테트라플루오로페놀 (82.5 mg, 496 umol, 8 eq) 및 EDCI (119 mg, 620 umol, 10.0 eq)을 첨가한 다음, 0.5시간 동안 20℃에서 교반하였다. 혼합물을 25℃에서 농축하고 (칼럼: Phenomenex Synergi C18 150*25*10 um; 이동상: [물(0.1%TFA)-ACN]; B%: 20%-50%, 8 min)로 정제하여 PAZ-L-1 (31.5 mg, 24.94 umol, 40.22% 수율, 2TFA)를 담황색 오일로서 얻었다. 1H NMR (MeOD, 400 MHz) δ 7.67 (s, 1H), 7.47-7.42 (m, 1H), 7.13 (s, 1H), 4.28 (t, J = 7.2 Hz, 2H), 3.87-3.85 (m, 2H), 3.84-3.82 (m, 2H), 3.71-3.57 (m, 38H), 3.53-3.40 (m, 6H), 3.41 (s, 2H), 2.98 (t, J = 6.0 Hz, 2H), 2.91 (s, 3H), 1.90-1.89 (m, 2H), 1.77-1.76 (m, 2H), 1.71-1.66 (m, 4H), 1.38-1.34 (m, 2H), 0.96-0.92 (m, 6H). LC/MS [M+H] 1035.6 (계산됨); LC/MS [M+H] 1035.6 (관찰됨).
실시예 L-4 2,3,5,6-테트라플루오로페닐 39-(5-아미노-7-((3-(3,3-디메틸부탄아미도)프로필)(프로필)카바모일)피라졸로[4,3-b]아제핀-1(6H)-일)-34-메틸-4,7,10,13,16,19,22,25,28,31-데카옥사-34-아자노나트리아콘타노에이트, PAZ-L-4의 합성
Figure pct00127
tert-부틸 3-[2-[2-[2-[2-[2-[2-[2-[2-[2-[2-[5-[5-아미노-7-[3-(3,3- 디메틸부타노일아미노)프로필-프로필-카바모일]-6H-피라졸로[4,3-b]아제핀-1-일]펜틸-메틸-아미노]에톡시]에톡시]에톡시]에톡시]에톡시]에톡시]에톡시]에톡시]에톡시]에톡시]프로파노에이트, L-4a의 제조
MeOH (4 mL) 중 PAZ-7 (90 mg, 165 umol, 1.0 eq, 2 HCl)의 혼합물에 tert-부틸 3-[2-[2-[2-[2-[2-[2-[2-[2-[2-(2-옥소에톡시)에톡시]에톡시] 에톡시]에톡시]에톡시]에톡시]에톡시]에톡시]에톡시]프로파노에이트 (96.3 mg, 165 umol, 1.0 eq) 및 NaBH3CN (20.7 mg, 329.3 umol, 2.0 eq)을 25℃에서 한번에 첨가하였다. 혼합물을 25℃에서 12시간 동안 교반하였다. 그 다음 포름알데하이드, HCHO (66.81 mg, 823 umol, 37% 순도, 5 eq) 및 나트륨 시아노붕소수화물, NaBH3CN (20.7 mg, 329 umol, 2 eq)을 첨가하고 추가 2시간 동안 25℃에서 교반하였다. 반응 혼합물을 농축시키고 prep-HPLC(칼럼: Phenomenex Gemini-NX 150*30mm*5um;이동상: [물 (0.1% TFA)-ACN]; B%: 20%-50%, 9 min)로 정제하여 L-4a (80 mg, 75.73 umol, 45.99% 수율)를 황색 오일로서 얻었다.
3-[2-[2-[2-[2-[2-[2-[2-[2-[2-[2-[5-[5-아미노-7-[3-(3,3-디메틸부타노일 아미노)프로필-프로필-카바모일]-6H-피라졸로[4,3-b]아제핀-1-일]펜틸-메틸-아미노]에톡시]에톡시]에톡시]에톡시]에톡시]에톡시]에톡시]에톡시]에톡시]에톡시]프로판산, L-4b의 제조
H2O (2 mL) 및 CH3CN (0.5 mL) 중 L-4a (75 mg, 71.0 umol, 1.0 eq)의 혼합물에 HCl (12 M, 148 uL, 25 eq)을 25℃에서 한번에 첨가하였다. 혼합물을 80℃에서 1시간 동안 교반한 다음, 농축시켜 L-4b (60 mg, 미정제 물질, HCl)을 수득된를 황색 오일로서 얻었다.
PAZ-L-4의 제조
DCM (2 mL) 및 DMA (0.4 mL) 중 L-4b (55 mg, 54.9 umol, 1.0 eq, HCl)의 혼합물에 2,3,5,6-테트라플루오로페놀 (91.3 mg, 550 umol, 10 eq) 및 EDCI (105 mg, 550 umol, 10 eq)을 25℃에서 한번에 첨가하였다. 혼합물을 25℃에서 1시간 동안 교반한 다음, 농축시키고 prep-HPLC(칼럼: Phenomenex Synergi C18 150*25*10um; 이동상: [물 (0.1% TFA)-ACN]; B%: 20%-50%, 8 min)로 정제하여 PAZ-L-4 (39.4 mg, 34.31 umol, 62.40% 수율)를 황색 오일로서 얻었다. 1H NMR (MeOD, 400 MHz) δ 7.67 (s, 1H), 7.47-7.42 (m, 1H), 7.17 (s, 1H), 4.28 (t, J = 7.2 Hz, 2H), 3.87 (t, J = 6.0 Hz, 2H), 3.84-3.51 (m, 2H), 3.71-3.57 (m, 38H), 3.53-3.41 (m, 8H), 3.17-3.05 (m, 2H), 2.98 (t, J = 5.6 Hz, 2H), 2.91 (s, 3H), 2.10-2.06 (m, 2H), 1.96-1.82 (m, 4H), 1.82-1.73 (m, 2H), 1.73-1.62 (m, 2H), 1.39-1.37 (m, 2H), 1.02 (s, 9H), 0.95-0.88 (m, 3H). LC/MS [M+H] 1148.6 (계산됨); LC/MS [M+H] 1148.7 (관찰됨).
실시예 L-5 2,3,5,6-테트라플루오로페닐 39-(5-아미노-7-((3-(3,3-디메틸부탄아미도)프로필)(프로필)카바모일)피라졸로[4,3-b]아제핀-2(6H)-일)-34-메틸-4,7,10,13,16,19,22,25,28,31-데카옥사-34-아자노나트리아콘타노에이트, PAZ-L-5의 합성
Figure pct00128
tert-부틸 3-[2-[2-[2-[2-[2-[2-[2-[2-[2-[2-[5-[5-아미노-7-[3-(3,3-디메틸 부타노일아미노)프로필-프로필-카바모일]-6H-피라졸로[4,3-b]아제핀-2-일]펜틸-메틸-아미노]에톡시]에톡시]에톡시]에톡시]에톡시]에톡시]에톡시]에톡시]에톡시]에톡시]프로파노에이트, L-5a의 제조
MeOH (1 mL) 중 5-아미노-2-(5-아미노펜틸)-N-[3-(3,3-디메틸부타노일아미노) 프로필]-N-프로필-6H-피라졸로[4,3-b]아제핀-7-카복사미드, PAZ-9 (55.0 mg, 101 umol, 1 eq, 2HCl)의 용액에 tert-부틸 3-[2-[2-[2-[2-[2-[2-[2-[2-[2-(2-옥소에톡시)에톡시] 에톡시]에톡시]에톡시]에톡시]에톡시]에톡시]에톡시]에톡시]프로파노에이트 (88.0 mg, 151 umol, 1.5 eq) 및 NaBH3CN (10.00 mg, 151.00 umol, 1.5 eq)을 첨가한 다음, 23시간 동안 교반하였다. 그 이후로는, HCHO (50.00 mg, 503.00 umol, 46.00 uL, 30% 순도, 5 eq) 및 NaBH3CN (10.00 mg, 151.00 umol, 1.5 eq)을 혼합물에 첨가하고 25℃에서 추가 1시간 동안 교반하였다. 혼합물을 여과하고 농축하였다. 잔류물을 prep-HPLC (칼럼: Phenomenex Synergi C18 150*25*10um;이동상: [물(0.1%TFA)-ACN];B%: 15%-45%,8min)로 정제하여 L-5a (70 mg, 59.81 umol, 59.44% 수율, TFA)를 무색 오일로서 얻었다. LC/MS [M+H] 1056.7 (계산됨); LC/MS [M+H] 1056.6 (관찰됨).
39-(5-아미노-7-((3-(3,3-디메틸부탄아미도)프로필)(프로필)카바모일)피라졸로[4,3-b]아제핀-2(6H)-일)-34-메틸-4,7,10,13,16,19,22,25,28,31-데카옥사-34-아자노나트리아콘나노익산, L-5b의 제조
H2O (1 mL) 중 L-5a (70.0 mg, 60.0 umol, 1 eq, TFA)의 용액에 HCl (12 M, 75.0 uL, 15 eq)을 20℃에서 첨가한 다음, 80℃에서 1시간 동안 교반하였다. 혼합물을 농축시켜 L-5b (50 mg, 48.2 umol, 80.64% 수율, HCl)를 담황색 고체로서 얻었다. LC/MS [M+H] 1000.7 (계산됨); LC/MS [M+H] 1000.6 (관찰됨).
PAZ-L-5의 제조
DCM (2 mL) 및 DMA (0.1 mL) 중 L-5b (45.0 mg, 43.0 umol, 1 eq, HCl)의 용액에 2,3,5,6-테트라플루오로페놀 (58.0 mg, 347 umol, 8 eq) 및 EDCI (83.0 mg, 434 umol, 10 eq)을 첨가하였다. 혼합물을 20℃에서 1시간 동안 교반한 다음, 농축시키고 여과하였다. 잔류물을 prep-HPLC (칼럼: Phenomenex Synergi C18 150*25*10um;이동상: [물(0.1%TFA)-ACN];B%: 20%-50%,8min)로 정제하여 PAZ-L-5 (22 mg, 17.43 umol, 40.15% 수율, TFA)를 담황색 오일로서 얻었다. 1H NMR (MeOD-d4, 400 MHz) δ 7.92 (s, 1H), 7.50-7.42 (m, 1H), 6.98 (s, 1H), 4.26 (t, J = 6.8 Hz, 2H), 3.87 (t, J = 6.0 Hz, 2H), 3.85-3.80 (m, 2H), 3.71-3.60 (m, 38H), 3.52 (br t, J = 7.2 Hz, 2H), 3.49-3.35 (m, 6H), 3.26-3.07 (m, 4H), 2.98 (t, J = 6.0 Hz, 2H), 2.91 (s, 3H), 2.10-1.92 (m, 4H), 1.89-1.75 (m, 4H), 1.69-1.65 (m, 2H), 1.47-1.36 (m, 2H), 1.02 (br s, 9H), 0.96-0.86 (m, 3H). LC/MS [M+H] 1148.6 (계산됨); LC/MS [M+H] 1148.5 (관찰됨).
실시예 L-6 2,3,5,6-테트라플루오로페닐 43-(5-아미노-7-(에톡시(프로필)카바모일)피라졸로[4,3-b]아제핀-1(6H)-일)-37-옥소-4,7,10,13,16,19,22,25,28,31,34-운데카옥사-38-아자트리테트라콘타노에이트, PAZ-L-6의 합성
Figure pct00129
tert-부틸 43-(5-아미노-7-(에톡시(프로필)카바모일)피라졸로[4,3-b]아제핀-1(6H)-일)-37-옥소-4,7,10,13,16,19,22,25,28,31,34-운데카옥사-38-아자트리테트라콘타노에이트, L-6a의 제조
DMF (0.5 mL) 중 2,2-디메틸-4-옥소-3,7,10,13,16,19,22,25,28,31,34,37-도데카옥사테트라콘탄-40-오익산 (54.5 mg, 82.7 umol, 1.2 eq)의 용액에 HATU (28.8 mg, 75.8 umol, 1.1 eq) 및 DIPEA (44.5 mg, 344 umol, 5 eq)을 첨가하였다. 5분 후, 5-아미노-1-(5-아미노펜틸)-N-에톡시-N-프로필-6H-피라졸로[4,3-b]아제핀-7-카복사미드, PAZ-12 (30 mg, 68.90 umol, 1 eq, 2HCl)을 반응 혼합물에 첨가하고 15℃에서 25분 동안 교반하였다. 반응 혼합물을 여과하고 감압 하에서 농축하였다. 잔류물을 prep-HPLC (TFA 조건: 칼럼: Phenomenex Synergi C18 150*25*10um;이동상: [물(0.1%TFA)-ACN];B%: 15%-45%,10min)로 정제하여 L-6a (40 mg, 35.80 umol, 51.96% 수율, TFA)를 밝은 황색 오일로서 얻었다. LC/MS [M+H] 1003.6 (계산됨); LC/MS [M+H] 1003.8 (관찰됨).
43-(5-아미노-7-(에톡시(프로필)카바모일)피라졸로[4,3-b]아제핀-1(6H)-일)-37-옥소-4,7,10,13,16,19,22,25,28,31,34-운데카옥사-38-아자트리테트라콘탄오익산, L-6b의 제조
H2O (3 mL) 중 L-6a (40 mg, 35.8 umol, 1 eq, TFA)의 용액에 HCl (12 M, 20 eq)을 첨가하고 혼합물을 80℃에서 0.5시간 동안 교반하였다. 반응 혼합물을 감압 하에서 농축하여 L-6b (40 mg, 미정제 물질, HCl)를 밝은 황색 오일로서 얻었다. LC/MS [M+H] 947.6 (계산됨); LC/MS [M+H] 947.7 (관찰됨).
PAZ-L-6의 제조
DMA (0.2 mL) 및 DCM (1 mL) 중 L-6b (30 mg, 30.5 umol, 1 eq, HCl) 및 2,3,5,6-테트라플루오로페놀 (50.6 mg, 305 umol, 10 eq)의 용액에 EDCI (58.5 mg, 305 umol, 10 eq)을 첨가하고 15℃에서 1시간 동안 교반하였다. 반응 혼합물을 감압 하에서 농축하였다. 잔류물을 prep-HPLC (TFA 조건: 칼럼: Phenomenex Synergi C18 150*25*10um;이동상: [물(0.1%TFA)-ACN];B%: 25%-50%,8min)로 정제하여 PAZ-L-6 (13 mg, 10.75 umol, 35.25% 수율, TFA)를 밝은 황색 오일로서 얻었다. 1H NMR (MeOD-d4, 400MHz) δ 7.66 (s, 1H), 7.48 (s, 1H), 7.47-7.38 (m, 1H), 4.26 (t, J = 6.8 Hz, 2H), 3.97 (q, J = 6.8 Hz, 2H), 3.88 (t, J = 6.0 Hz, 2H), 3.77-3.67 (m, 4H), 3.66-3.64 (m, 4H), 3.64-3.58 (m, 36H), 3.43 (s, 2H), 3.35 (s, 2H), 3.14 (t, J = 6.8 Hz, 2H), 2.98 (t, J = 6.0 Hz, 2H), 2.40 (t, J = 6.0 Hz, 2H), 1.91-1.70 (m, 4H), 1.52-1.46 (m, 2H), 1.34-1.24 (m, 2H), 1.20 (t, J = 7.2 Hz, 3H), 1.00 (t, J = 7.2 Hz, 3H). LC/MS [M+H] 1095.5 (계산됨); LC/MS [M+H] 1095.4 (관찰됨).
실시예 L-7 2,3,5,6-테트라플루오로페닐 39-(5-아미노-7-(에톡시(프로필)카바모일)피라졸로[4,3-b]아제핀-1(6H)-일)-34-메틸-4,7,10,13,16,19,22,25,28,31-데카옥사-34-아자노나트리아콘타노에이트, PAZ-L-7의 합성
Figure pct00130
tert-부틸 3-[2-[2-[2-[2-[2-[2-[2-[2-[2-[2-[5-[5-아미노-7-[에톡시(프로필) 카바모일]-6H-피라졸로[4,3-b]아제핀-1-일]펜틸-메틸-아미노]에톡시]에톡시]에톡시]에톡시]에톡시]에톡시]에톡시]에톡시]에톡시]에톡시]프로파노에이트, L-7a의 제조
MeOH (10 mL) 중 5-아미노-1-(5-아미노펜틸)-N-에톡시-N-프로필-6H-피라졸로[4,3-b] 아제핀-7-카복사미드, PAZ-12 (30 mg, 68.9 umol, 1 eq, 2HCl)의 용액에 TEA (13.9 mg, 137 umol, 2 eq) 및 tert-부틸 3-[2-[2-[2-[2-[2-[2-[2-[2-[2-(2-옥소에톡시)에톡시]에톡시]에톡시]에톡시]에톡시]에톡시]에톡시]에톡시]에톡시]프로파노에이트 (80.6 mg, 138 umol, 2 eq)을 15℃에서 첨가하였다. 30분 후, NaBH3CN (8.66 mg, 137.81 umol, 2 eq)을 15℃에서 첨가하고 생성된 혼합물을 이 온도에서 12시간 동안 교반하였다. HCHO (41.38 mg, 413.42 umol, 37.97 uL, 30% 순도, 6 eq) 및 NaBH3CN (8.66 mg, 137.81 umol, 2 eq)을 15℃에서 첨가하고 15℃에서 2시간 동안 교반하였다. 반응 혼합물을 감압 하에서 농축하였다. 잔류물을 prep-HPLC (TFA 조건: 칼럼: Phenomenex Synergi C18 150*25*10um;이동상: [물(0.1%TFA)-ACN];B%: 25%-43%,8min)로 정제하여 L-7a (45 mg, 38.36 umol, 55.67% 수율, 2TFA)를 밝은 황색 오일로서 얻었다. LC/MS [M+H] 945.6 (계산됨); LC/MS [M+H] 945.5 (관찰됨).
3-[2-[2-[2-[2-[2-[2-[2-[2-[2-[2-[5-[5-아미노-7-[에톡시(프로필)카바모일] -6H-피라졸로[4,3-b]아제핀-1-일]펜틸-메틸-아미노]에톡시]에톡시]에톡시]에톡시]에톡시]에톡시]에톡시]에톡시]에톡시]에톡시]프로판산, L-7b의 제조
H2O (3 mL) 중 L-7a (45 mg, 38.36 umol, 1 eq, 2TFA)의 용액에 HCl (12 M, 63.9 uL, 20 eq)을 첨가한 다음, 혼합물을 80℃에서 1시간 동안 교반하였다. 반응 혼합물을 감압 하에서 농축하여 L-7b (40 mg, 미정제 물질, 2HCl)를 밝은 황색 오일로서 얻었다. LC/MS [M+H] 889.5 (계산됨); LC/MS [M+H] 889.6 (관찰됨).
PAZ-L-7의 제조
DCM (3 mL) 및 DMA (0.3 mL) 중 L-7b (40 mg, 41.58 umol, 1 eq, 2HCl) 및 2,3,5,6-테트라플루오로페놀 (69.0 mg, 416 umol, 10 eq)의 용액에 EDCI (79.7 mg, 415 umol, 10 eq)을 첨가한 다음, 15℃에서 1시간 동안 교반하였다. 반응 혼합물을 감압 하에서 농축하였다. 잔류물을 prep-HPLC (TFA 조건: 칼럼: Phenomenex Synergi C18 150*25*10um;이동상: [물(0.1%TFA)-ACN];B%: 25%-50%,8min)로 정제하여 PAZ-L-7 (19.5 mg, 15.41 umol, 37.07% 수율, 2TFA)를 밝은 황색 오일로서 얻었다. 1H NMR (MeOD-d4, 400MHz) δ 7.67 (s, 1H), 7.46 (s, 1H), 7.45-7.38 (m, 1H), 4.29 (t, J = 6.8 Hz, 2H), 3.95 (q, J = 7.2 Hz, 2H), 3.88 (t, J = 6.0 Hz, 2H), 3.82 (br d, J = 3.6 Hz, 2H), 3.74 (t, J = 7.2 Hz, 2H), 3.71-3.55 (m, 38H), 3.43 (s, 2H), 3.26-3.03 (m, 2H), 2.98 (t, J = 6.0 Hz, 2H), 2.91 (s, 3H), 1.97-1.87 (m, 2H), 1.78-1.74 (m, 4H), 1.44-1.32 (m, 2H), 1.18 (t, J = 7.2 Hz, 3H), 1.00 (t, J = 7.6 Hz, 3H). LC/MS [M+H] 1037.5 (계산됨); LC/MS [M+H] 1037.4 (관찰됨).
실시예 L-8 2,3,5,6-테트라플루오로페닐 43-(5-아미노-7-((3-((사이클로부톡시카보닐)아미노)프로필)(프로필)카바모일)피라졸로[4,3-b]아제핀-1(6H)-일)-37-옥소-4,7,10,13,16,19,22,25,28,31,34-운데카옥사-38-아자트리테트라콘타노에이트, PAZ-L-8의 합성
Figure pct00131
tert-부틸 43-(5-아미노-7-((3-((사이클로부톡시카보닐)아미노)프로필)(프로필)카바모일)피라졸로[4,3-b]아제핀-1(6H)-일)-37-옥소-4,7,10,13,16,19,22,25,28,31,34-운데카옥사-38-아자트리테트라콘타노에이트, L-8a의 제조
DMF (0.5 mL) 중 2,2-디메틸-4-옥소-3,7,10,13,16,19,22,25,28,31,34,37-도데카옥사테트라콘탄-40-오익산 (77.5 mg, 117 umol, 1 eq)의 용액에 HATU (49.2 mg, 129 umol, 1.1 eq) 및 DIEA (76.0 mg, 588 umol, 102 uL, 5 eq), 그 다음 사이클로부틸 (3-(5-아미노-1-(5-아미노펜틸)-N-프로필-1,6-디하이드로피라졸로[4,3-b]아제핀-7-카복사미도)프로필)카바메이트, PAZ-15 (60 mg, 117.6 umol, 1 eq, HCl)을 첨가하였다. 혼합물을 25℃에서 0.5시간 동안 교반하였다. 잔류물을 여과하고 감압 하에서 농축한 다음, prep-HPLC (TFA 조건; 칼럼: Phenomenex luna C18 100*40mm*5 um;이동상: [물(0.1%TFA)-ACN];B%: 10%-45%,8min)로 정제하여 L-8a (90 mg, 73.3 umol, 62.29% 수율, TFA)를 황색 오일로서 얻었다. 1H NMR (MeOD-d4, 400MHz) δ 7.66 (s, 1H), 7.16 (br s, 1H), 4.90-4.89 (m, 1H), 4.26 (t, J = 7.2 Hz, 2H), 3.72-3.68 (m, 4H), 3.65-3.57 (m, 44H), 3.55-3.43 (m, 4H), 3.39 (br s, 2H), 3.17-3.11 (m, 2H), 2.47 (t, J = 6.4 Hz, 2H), 2.40 (t, J = 6.0 Hz, 2H), 2.29-2.23 (m, 2H), 2.05-1.99 (m, 2H), 1.90-1.80 (m, 4H), 1.77-1.56 (m, 4H), 1.53-1.41 (m, 12H), 1.32-1.25 (m, 2H), 0.98-0.89 (m, 3H)
43-(5-아미노-7-((3-((사이클로부톡시카보닐)아미노)프로필)(프로필)카바모일)피라졸로[4,3-b]아제핀-1(6H)-일)-37-옥소-4,7,10,13,16,19,22,25,28,31,34-운데카옥사-38-아자트리테트라콘탄오익산, L-8b의 제조
물 (2 mL) 중 L-8a (50 mg, 44.9 umol, 1 eq, TFA)의 용액에 HCl (12 M, 74.8 uL, 20 eq)을 첨가한 다음, 혼합물을 80℃에서 0.5시간 동안 교반하였다. 혼합물을 감압 하에서 농축하여 L-8b (40 mg, 37.8 umol, 84.24% 수율)를 무색 오일로서 얻었다.
PAZ-L-8의 제조.
DCM (1 mL) 및 DMA (0.1 mL) 중 L-8b (40 mg, 34.0 umol, 1 eq, TFA)의 용액에 2,3,5,6-테트라플루오로페놀 (45.3 mg, 273 umol, 8 eq) 및 EDCI (65.4 mg, 341 umol, 10 eq)을 첨가하고 25℃에서 0.5시간 동안 교반하였다. 잔류물을 여과하고 감압 하에서 농축한 다음, prep-HPLC (TFA 조건; 칼럼: Phenomenex Synergi C18 150*30mm*4um;이동상: [물(0.1%TFA)-ACN];B%: 25%-50%,8min)로 정제하여 PAZ-L-8 (30 mg, 22.7 umol, 66.65% 수율, TFA)를 황색 고체로서 얻었다. 1H NMR (메탄올-d4, 400MHz) δ 7.65 (s, 1H), 7.49-7.38 (m, 1H), 7.16 (s, 1H), 4.90-4.89 (m, 1H), 4.25 (t, J = 6.8 Hz, 2H), 3.88 (t, J = 6.0 Hz, 2H), 3.72-3.55 (m, 44H), 3.54-3.44 (m, 4H), 3.38 (br s, 2H), 3.18-3.12 (m, 2H), 2.98 (t, J = 6.0 Hz, 2H), 2.40 (t, J = 6.0 Hz, 2H), 2.32-2.24 (m, 2H), 2.04-1.98 (m, 2H), 1.89-1.80 (m, 4H), 1.80-1.56 (m, 4H), 1.55-1.42 (m, 2H), 1.32-1.26 (m, 2H), 0.96-0.89 (m, 3H). LC/MS [M+H] 1206.6 (계산됨); LC/MS [M+H] 1206.6 (관찰됨).
실시예 L-9 2,3,5,6-테트라플루오로페닐 39-(5-아미노-7-((3-((사이클로부톡시카보닐)아미노)프로필)(프로필)카바모일)피라졸로[4,3-b]아제핀-1(6H)-일)-34-메틸-4,7,10,13,16,19,22,25,28,31-데카옥사-34-아자노나트리아콘타노에이트, PAZ-L-9의 합성
Figure pct00132
tert-부틸 39-(5-아미노-7-((3-((사이클로부톡시카보닐)아미노)프로필)(프로필)카바모일)피라졸로[4,3-b]아제핀-1(6H)-일)-34-메틸-4,7,10,13,16,19,22,25,28,31-데카옥사-34-아자노나트리아콘타노에이트, L-9a의 제조
MeOH (2 mL) 중 사이클로부틸 (3-(5-아미노-1-(5-아미노펜틸)-N-프로필-1,6-디하이드로피라졸로[4,3-b]아제핀-7-카복사미도)프로필)카바메이트, PAZ-15 (70 mg, 137 umol, 1 eq, HCl) 및 tert-부틸 1-옥소-3,6,9,12,15,18,21,24,27,30-데카옥사트리트리아콘탄-33-오에이트 (185 mg, 316 umol, 2.3 eq)의 용액에 NaBH3CN (17.3 mg, 274.5 umol, 2 eq) 및 Et3N (13.9 mg, 137 umol, 1 eq)을 첨가하고 25℃에서 16시간 동안 교반하였다. 그 다음 포름알데하이드 (22.3 mg, 274.5 umol, 20.4 uL, 37% 순도, 2 eq) 및 NaBH3CN (17.3 mg, 274.5 umol, 2 eq)을 혼합물에 첨가하고 25℃에서 추가 0.5시간 동안 교반하였다. 잔류물을 여과하고 감압 하에서 농축한 다음, prep-HPLC (TFA 조건; 칼럼: Phenomenex Gemini-NX C18 75*30mm*3um;이동상: [물(0.1%TFA)-ACN];B%: 20%-40%,8min)로 정제하여 L-9a (90 mg, 76.90 umol, 56.03% 수율, TFA)를 황색 오일로서 얻었다.
39-(5-아미노-7-((3-((사이클로부톡시카보닐)아미노)프로필)(프로필)카바모일)피라졸로[4,3-b]아제핀-1(6H)-일)-34-메틸-4,7,10,13,16,19,22,25,28,31-데카옥사-34-아자노나트리아콘나노익산, L-9b의 제조
물 (2 mL) 중 L-9a (90 mg, 76.9 umol, 1 eq, TFA)의 용액에 HCl (12 M, 128 uL, 20 eq)을 첨가하고 혼합물을 80℃에서 0.5시간 동안 교반하였다. 혼합물을 감압 하에서 농축하여 L-9b (70 mg, 67.5 umol, 87.81% 수율, HCl)를 무색 오일로서 얻었다.
PAZ-L-9의 제조
DCM (2 mL) 및 DMA (0.1 mL) 중 L-9b (70 mg, 62.8 umol, 1 eq, TFA)의 용액에 2,3,5,6-테트라플루오로페놀 (83.5 mg, 503 umol, 8 eq) 및 EDCI (120 mg, 628 umol, 10 eq)을 첨가한 다음, 혼합물을 25℃에서 0.5시간 동안 교반하였다. 잔류물을 여과하고 감압 하에서 농축한 다음, prep-HPLC (TFA 조건; 칼럼: Phenomenex Synergi C18 150*30mm*4um;이동상: [물(0.1%TFA)-ACN];B%: 25%-50%,8min)로 정제하여 PAZ-L-9 (40 mg, 31.69 umol, 50.44% 수율, TFA)를 황색 고체로서 얻었다. 1H NMR (MeOD-d4, 400MHz) δ 7.68 (s, 1H), 7.50-7.39 (m, 1H), 7.16 (br s, 1H), 4.80-4.76 (m, 1H), 4.29 (t, J = 6.8 Hz, 2H), 3.88 (t, J = 6.0 Hz, 2H), 3.83 (br s, 2H), 3.69-3.61 (m, 38H), 3.53-3.48 (m, 2H), 3.44 (br d, J = 7.2 Hz, 2H), 3.38 (br s, 2H), 3.29-3.19 (m, 2H), 3.16-3.05 (m, 2H), 2.99 (t, J = 6.0 Hz, 2H), 2.91 (s, 3H), 2.28-2.24 (m, 2H), 2.04-1.98 (m, 2H), 1.96-1.90 (m, 2H), 1.89-1.72 (m, 6H), 1.71-1.62 (m, 2H), 1.42-1.36 (m, 2H), 0.96-0.93 (m, 3H). LC/MS [M+H] 1148.6 (계산됨); LC/MS [M+H] 1148.6 (관찰됨).
실시예 L-27 5-아미노-1-(1-(2,5-디옥소-2,5-디하이드로-1H-파이롤-1-일)-2,36-디옥소-6,9,12,15,18,21,24,27,30,33-데카옥사-3,37-디아자도테트라콘탄-42-일)-N-에톡시-N-프로필-1,6-디하이드로피라졸로[4,3-b]아제핀-7-카복사미드, PAZ-L-27의 합성
Figure pct00133
Figure pct00134
tert-부틸 3-[2-[2-[2-[2-[2-[2-[2-[2-[2-[2-(p-톨릴설포닐옥시) 에톡시]에톡시]에톡시]에톡시]에톡시]에톡시]에톡시]에톡시]에톡시]에톡시]프로파노에이트, L-27b의 제조
DCM (1000 mL) 중 tert-부틸 3-[2-[2-[2-[2-[2-[2-[2-[2-[2-(2-하이드록시에톡시)에톡시] 에톡시]에톡시]에톡시]에톡시]에톡시]에톡시]에톡시]에톡시]프로파노에이트, L-27a (100 g, 170 mmol, 1 eq), TEA (43.1 g, 426 mmol, 59.3 mL, 2.5 eq) 및 DMAP (2.08 g, 17.0 mmol, 0.1 eq)의 용액에 TosCl (48.7 g, 255 mmol, 1.5 eq)을 0℃에서 N2 하에 첨가한 다음, 15℃에서 12시간 동안 교반하였다. 반응 혼합물을 0℃에서 H2O (2000 mL)의 첨가로 켄칭한 다음, DCM (1000 mL x 3)로 추출하였다. 조합된 유기층을 염수 (300 mL)로 세척하고, Na2SO4 상에서 건조시키고, 여과하고 감압 하에서 농축하였다. 잔류물을 칼럼 크로마토그래피 (SiO2, 석유 에테르:에틸 아세테이트 = 1:0 내지 0:1)를 첨가한 다음, (SiO2, EtOAc:MeOH = 1:0 내지 10:1)로 정제하여 L-27b (187.4 g, 미정제 물질)를 밝은 황색 오일로서 얻었다. 1H NMR (CDCl3, 400 MHz) δ 7.81 (d, J = 8.0 Hz, 2H), 7.35 (d, J = 8.0 Hz, 2H), 4.17 (t, J = 4.8 Hz, 2H), 3.74-3.57 (m, 40H), 2.51 (t, J = 6.4 Hz, 2H), 2.46 (s, 3H), 1.45 (s, 9H).
tert-부틸 3-[2-[2-[2-[2-[2-[2-[2-[2-[2-[2-(1,3-디옥소이소인돌린-2-일) 에톡시]에톡시]에톡시]에톡시]에톡시]에톡시]에톡시]에톡시]에톡시]에톡시]프로파노에이트, L-27c의 제조
DMF (1000 mL) 중 L-27b (127 g, 171 mmol, 1 eq)의 용액에 (1,3-디옥소이소인돌린-2-일)칼륨 (41.3 g, 223 mmol, 1.3 eq)을 25℃에서 첨가한 다음, 50℃에서 12시간 동안 교반하였다. 반응 혼합물을 빙수 (3000 mL) 에 부었고, 그 다음 EtOAc (800 mL x 6)로 추출하였다. 조합된 유기층을 염수 (300 mL x 3)로 세척하고, Na2SO4 상에서 건조시키고, 여과하고 감압 하에서 농축하였다. 잔류물을 칼럼 크로마토그래피 (SiO2, 석유 에테르:에틸 아세테이트 = 1:0 내지 0:1)를 첨가한 다음, (SiO2, EtOAc:MeOH = 1:0 내지 10:1)로 정제하여 L-27c (142 g, 미정제 물질)를 황색 오일로서 얻었다. 1H NMR (CDCl3, 400 MHz) δ 7.85 (dd, J = 3.2, 5.6 Hz, 2H), 7.72 (dd, J = 3.2, 5.6 Hz, 2H), 3.96-3.86 (m, 2H), 3.76-3.69 (m, 4H), 3.68-3.55 (m, 36H), 2.51 (t, J = 6.8 Hz, 2H), 1.45 (s, 9H).
tert-부틸 3-[2-[2-[2-[2-[2-[2-[2-[2-[2-(2-아미노에톡시)에톡시] 에톡시]에톡시]에톡시]에톡시]에톡시]에톡시]에톡시]에톡시]프로파노에이트, L-27d의 제조
MeOH (1000 mL) 중 L-27c (100 g, 140 mmol, 1 eq)의 용액에 NH2NH2.H2O (28.54 g, 559 mmol, 27.71 mL, 98% 순도, 4 eq)을 25℃에서 첨가한 다음, 50℃에서 8시간 동안 교반하였다. 반응 혼합물을 25℃로 냉각시키고, 그 다음 여과하고 여액을 감압 하에서 농축하였다. 미정제 생성물을 MTBE (500 mL x 3)로 25℃에서 30분 동안 추가 분쇄한 다음, 여과하고 감압 하에서 농축하여 L-27d (113.7 g, 미정제 물질)를 밝은 황색 오일로서 얻었다. 1H NMR (CDCl3, 400 MHz) δ 3.74-3.58 (m, 38H), 3.51 (t, J = 5.2 Hz, 2H), 2.86 (t, J = 5.2 Hz, 2H), 2.50 (t, J = 6.8 Hz, 2H), 1.45 (s, 9H). LC/MS [M+H] 586.4 (계산됨); LC/MS [M+H] 586.4 (관찰됨)
tert-부틸 3-[2-[2-[2-[2-[2-[2-[2-[2-[2-[2-[[2-(2,5-디옥소파이롤-1-일)아세틸] 아미노]에톡시]에톡시]에톡시]에톡시]에톡시]에톡시]에톡시]에톡시]에톡시]에톡시]프로파노에이트, L-27e의 제조
DCM (100 mL) 중 L-27d (11.3 g, 19.3 mmol, 1 eq), 2-(2,5-디옥소파이롤-1-일)아세트산 (3 g, 19.3 mmol, 1 eq) 및 디이소프로필에틸아민, DIPEA (10.0 g, 77.4 mmol, 13.5 mL, 4 eq)의 용액에 HATU (8.09 g, 21.3 mmol, 1.1 eq)을 0℃에서 첨가한 다음, 0℃에서 30분 동안 교반하였다. 반응 혼합물을 감압 하에서 농축하였다. 잔류물을 prep-HPLC (TFA 조건; 칼럼: Phenomenex luna c18 250mm*100mm*10um;이동상: [물(0.1%TFA)-ACN];B%: 25%-55%, 25min)로 정제하여 L-27e (4.5 g, 6.23 mmol, 32.2% 수율)를 황색 오일로서 얻었다. 1H NMR (CDCl3, 400 MHz) δ 6.88-6.80 (m, 1H), 6.78 (s, 2H), 4.22 (s, 2H), 3.77-3.54 (m, 40H), 3.47 (q, J = 5.2 Hz, 2H), 2.51 (t, J = 6.4 Hz, 2H), 1.46 (s, 9H)
3-[2-[2-[2-[2-[2-[2-[2-[2-[2-[2-[[2-(2,5-디옥소파이롤-1-일)아세틸]아미노]에톡시] 에톡시]에톡시]에톡시]에톡시]에톡시]에톡시]에톡시]에톡시]에톡시]프로판산, L-27f의 제조
CH3CN (25 mL) 및 H2O (25 mL) 중 L-27e (4.5 g, 6.23 mmol, 1 eq)의 용액에 TFA (5.68 g, 49.8 mmol, 3.69 mL, 8 eq)을 첨가한 다음, 80℃에서 1시간 동안 교반하였다. 반응 혼합물을 감압 하에서 농축하여 CH3CN을 제거하였다. 잔류물을 MTBE (10 mL x 3)로 추출하고 버렸다. 수성상을 감압 하에서 농축하여 잔류물을 얻었다. 잔류물을 prep-HPLC (TFA 조건; 칼럼: Phenomenex luna c18 250mm*100mm*10um;이동상: [물(0.1%TFA)-ACN];B%: 0%-25%,24min)로 정제하여 L-27f (1.6 g, 2.40 mmol, 38.6% 수율)를 밝은 황색 오일로서 얻었다. 1H NMR (CDCl3, 400 MHz) δ 6.95 (br s, 1H), 6.78 (s, 2H), 4.22 (s, 2H), 3.78 (t, J = 6.4 Hz, 2H), 3.70-3.63 (m, 36H), 3.60-3.54 (m, 2H), 3.46 (q, J = 5.2 Hz, 2H), 2.61 (t, J = 6.0 Hz, 2H). LC/MS [M+H] 667.3 (계산됨); LC/MS [M+H] 667.2 (관찰됨).
PAZ-L-27의 제조
DMF (0.5 mL) 중 L-27f (79.0 mg, 119 umol (마이크로몰), 1.0 eq)의 혼합물에 HATU (45.1 mg, 119 umol, 1.0 eq), DIEA (61.3 mg, 474 umol, 82.6 uL (마이크로리터), 4.0 eq) 및 5-아미노-1-(5-아미노펜틸)-N-에톡시-N-프로필-6H-피라졸로[4,3-b]아제핀-7-카복사미드, PAZ-12 (70.0 mg, 119 umol, 1.0 eq, 2TFA)을 25℃에서 첨가한 다음, 이 온도에서 0.5시간 동안 교반하였다. 혼합물을 prep-HPLC(칼럼: Phenomenex Luna 80*30mm*3um;이동상: [물(TFA)-ACN];B%: 5%-30%,8min)로 정제하여 PAZ-L-27 (40.4 mg, 39.95 umol, 33.70% 수율)를 담황색 오일로서 얻었다. 1H NMR (MeOD, 400 MHz) δ 7.66 (s, 1H), 7.48 (s, 1H), 6.90 (s, 2H), 4.26 (t, J = 6.8 Hz, 2H), 4.17 (s, 2H), 3.97 (q, J = 7.2 Hz, 2H), 3.74 (t, J = 7.2 Hz, 2H), 3.69 (t, J = 6.0 Hz, 2H), 3.66-3.55 (m, 38H), 3.44 (s, 2H), 3.40-3.35 (m, 2H), 3.14 (t, J = 6.8 Hz, 2H), 2.40 (t, J = 6.0 Hz, 2H), 1.90-1.71 (m, 4H), 1.56-1.45 (m, 2H), 1.34-1.24 (m, 2H), 1.20 (t, J = 7.2 Hz, 3H), 1.00 (t, J = 7.6 Hz, 3H). LC/MS [M+H] 1011.6 (계산됨); LC/MS [M+H] 1011.5 (관찰됨).
실시예 L-28 1-(2,5-디옥소-2,5-디하이드로-1H-파이롤-1-일)-2-옥소-6,9,12,15,18,21,24,27,30,33-데카옥사-3-아자펜타트리아콘탄-35-일 (5-(5-아미노-7-(에톡시(프로필)카바모일)피라졸로[4,3-b]아제핀-1(6H)-일)펜틸)카바메이트, PAZ-L-28의 합성
Figure pct00135
Figure pct00136
2-(2,5-디옥소-2,5-디하이드로-1H-파이롤-1-일)-N-(32-하이드록시-3,6,9,12,15,18,21,24,27,30-데카옥사도트리아콘틸)아세트아미드, L-28b의 제조
DCM (5 mL) 중 2-(2,5-디옥소파이롤-1-일)아세트산 (309 mg, 1.99 mmol, 1 eq) 및 2-[2-[2-[2-[2-[2-[2-[2-[2-[2-(2-아미노에톡시)에톡시]에톡시]에톡시]에톡시]에톡시]에톡시] 에톡시] 에톡시]에톡시]에탄올, L-28a (1 g, 1.99 mmol, 1 eq)의 혼합물에 HATU (796 mg, 2.09 mmol, 1.05 eq) 및 Et3N (302 mg, 2.99 mmol, 416 uL, 1.5 eq)을 0℃에서 N2 하에 첨가한 다음, 0℃에서 1시간 동안 교반하였다. 반응 혼합물을 H2O (20 mL*2)로 세척하고, 유기상을 무수 Na2SO4로 건조시키고, 여과하고 진공에서 농축하여 L-28b를 무색 오일로서 얻었다. 1H NMR (CDCl3, 400 MHz) δ 6.78 (s, 2H), 6.71-6.76 (m, 1H), 4.21 (s, 2H), 3.55-3.79 (m, 42H), 3.60-3.45 (m, 2H).
1-(2,5-디옥소-2,5-디하이드로-1H-파이롤-1-일)-2-옥소-6,9,12,15,18,21,24,27,30,33-데카옥사-3-아자펜타트리아콘탄-35-일 (4-니트로페닐) 카보네이트, L-28c의 제조
DCM (20 mL) 중 L-28b (1 g, 1.57 mmol, 1 eq) 및 (4-니트로페닐) 카보노클로리데이트 (473 mg, 2.35 mmol, 1.5 eq)의 혼합물에 피리딘, Py (247 mg, 3.13 mmol, 252 uL, 2 eq)를 25℃에서 N2 하에 첨가한 다음, 25℃에서 2시간 동안 교반하였다. 혼합물을 H2O (20 mL)로 세척한 다음, 염수 (20 mL)로 세척하고, 유기상을 무수 Na2SO4로 건조시키고, 여과하고 진공에서 농축하였다. 잔류물을 실리카겔 크로마토그래피 (칼럼 높이: 250 mm, 직경: 100 mm, 100-200 메쉬 실리카겔, 석유 에테르/에틸 아세테이트=1/1, 0/1 내지 EtOAc/MeOH=10/1)로 정제하여 L-28c (750 mg, 933.07 umol, 59.59% 수율)를 담황색 오일로서 얻었다. 1H NMR (CDCl3, 400 MHz) δ 8.23-8.33 (m, 2H), 7.37-7.45 (m, 2H), 6.78 (s, 2H), 6.62-6.69 (m, 1H), 4.41-4.48 (m, 2H), 4.21 (s, 2H), 3.79-3.87 (m, 2H), 3.62-3.73 (m, 36H), 3.56-3.61 (m, 2H), 3.43-3.49 (m, 2H).
PAZ-L-28의 제조
DMF (0.5 mL) 중 5-아미노-1-(5-아미노펜틸)-N-에톡시-N-프로필-6H-피라졸로[4,3-b]아제핀-7-카복사미드, PAZ-12 (70 mg, 119 umol, 1.0 eq, 2TFA) 및 L-28c (95.2 mg, 118 umol, 1 eq)의 혼합물에 DIEA (61.3 mg, 474 umol, 82.6 uL, 4.0 eq)을 25℃에서 한번에 첨가한 다음, 25℃에서 0.5시간 동안 교반하였다. 혼합물을 여과하고, 여액을 prep-HPLC(칼럼: Phenomenex Luna 80*30mm*3um;이동상: [물(TFA)-ACN];B%: 5%-30%,8min)로 정제하여 PAZ-L-28 (23.1 mg, 22.4 umol, 18.9% 수율)를 담황색 오일로서 얻었다. 1H NMR (MeOD, 400 MHz) δ 7.66 (s, 1H), 7.49 (s, 1H), 6.90 (s, 2H), 4.26 (t, J=6.8 Hz, 2H), 4.17 (s, 2H), 4.14-4.09 (m, 2H), 3.97 (q, J=7.2 Hz, 2H), 3.74 (t, J=7.2 Hz, 2H), 3.67-3.60 (m, 38H), 3.55 (t, J=5.6 Hz, 2H), 3.44 (s, 2H), 3.40-3.35 (m, 2H), 3.05 (t, J=6.8 Hz, 2H), 1.91-1.72 (m, 4H), 1.55-1.41 (m, 2H), 1.34-1.23 (m, 2H), 1.20 (t, J=7.2 Hz, 3H), 1.00 (t, J=7.6 Hz, 3H). LC/MS [M+H] 1027.6 (계산됨); LC/MS [M+H] 1027.5 (관찰됨).
실시예 201 면역접합체 (IC)의 제조
예시적인 절차에서, 라이신 기반 접합을 준비하기 위해, ZebaTM 스핀 탈염 컬럼(Thermo Fisher Scientific)을 사용하여 pH 8.3에서 100 mM 붕산염, 50 mM 염화나트륨, 1 mM 에틸렌디아민테트라아세트산을 함유하는 접합 완충액으로 용액을 완충액 교환하였다. 완충액 교환된 항체의 농도를 접합 완충액을 사용하여 약 5 내지 25 mg/ml로 조정하고 멸균 여과하였다. 피라졸로아제핀-링커 화학식 II 화합물(PAZ-L)은 디메틸설폭사이드(DMSO) 또는 디메틸아세트아미드(DMA)에 5 내지 20 mM의 농도로 용해된다. 접합을 위해, 항체를 4 내지 20 몰 당량의 PAZ-L과 혼합한다. 어떤 경우에, 최대 20%(v/v)의 추가 DMA 또는 DMSO를 추가하여 접합 완충액에서 PAZ-L의 용해도를 개선하였다. 반응은 20℃ 또는 30℃ 또는 37℃에서 약 30분 내지 4시간 동안 진행되도록 한다. 생성된 접합체는 2개의 연속적인 ZebaTM 스핀 탈염 컬럼을 사용하여 미반응 PAZ-L에서 정제된다. 컬럼은 인산염 완충 식염수(PBS) (pH 7.2)로 사전 평형화된다. 보조제 대 항체 비율(DAR)은 XEVOTM G2-XS TOF 질량 분광계(Waters Corporation)에 연결된 ACQUITYTM UPLC H-클래스(Waters Corporation, Milford, MA)에서 C4 역상 컬럼을 사용하는 액체 크로마토그래피 질량 분광분석으로 추정된다.
예시적인 절차에서, 시스테인 기반 접합을 준비하기 위해, ZebaTM 스핀 탈염 컬럼(Thermo Fisher Scientific)을 사용하여 2 mM EDTA를 갖는 PBS(pH 7.2)을 함유하는 접합 완충액으로 용액을 완충액 교환하였다. 사슬간 이황화물은 30분 내지 2시간 동안 37℃에서 2 내지 4 몰 과잉의 Tris (2-카복시에틸) 포스핀 (TCEP) 또는 디티오트레이톨 (DTT)을 사용하여 환원된다. 과잉의 TCEP 또는 DTT를 접합 완충액으로 미리 평형화된 ZebaTM 스핀 탈염 컬럼을 사용하여 제거하였다. 완충액 교환된 항체의 농도를 접합 완충액을 사용하여 약 5 내지 20 mg/ml로 조정하고 멸균 여과하였다. PAZ-L은 디메틸설폭사이드(DMSO) 또는 디메틸아세트아미드(DMA)에 5 내지 20 mM의 농도로 용해된다. 접합을 위해, 항체를 10 내지 20 몰 당량의 PAZ-L과 혼합한다. 어떤 경우에, 최대 20%(v/v)의 추가 DMA 또는 DMSO를 추가하여 접합 완충액에서 PAZ-L의 용해도를 개선하였다. 반응은 20℃에서 약 30분 내지 4시간 동안 진행되도록 한다. 생성된 접합체는 2개의 연속적인 ZebaTM 스핀 탈염 컬럼을 사용하여 미반응 PAZ-L에서 정제된다. 컬럼은 인산염 완충 식염수(PBS) (pH 7.2)로 사전 평형화된다. 보조제 대 항체 비율(DAR)은 XEVOTM G2-XS TOF 질량 분광계(Waters Corporation)에 연결된 ACQUITYTM UPLC H-클래스(Waters Corporation, Milford, MA)에서 C4 역상 컬럼을 사용하는 액체 크로마토그래피 질량 분광분석으로 추정된다.
접합 후, 미반응 PAZ-L 및/또는 고분자량 응집체를 잠재적으로 제거하기 위해, 접합체는 크기 배제 크로마토그래피, 소수성 상호작용 크로마토그래피, 이온 교환 크로마토그래피, 크로마토포커싱, 한외여과, 원심 한외여과, 접선 흐름 여과, 및 이들의 조합을 사용하여 추가로 정제될 수 있다.
예시적인 절차에서, 항체는 G-25 SEPHADEXTM 탈염 컬럼 (Sigma-Aldrich, St. Louis, MO)를 사용하여 pH 8.3에서 100 mM 붕산, 50 mM 염화나트륨, 1 mM 에틸렌디아민테트라아세트산을 함유하는 접합 완충액으로 완충액 교환된다. 그 다음 완충액을 사용하여 용출액을 각각 약 1-10 mg/ml의 농도로 조정한 다음 멸균 여과한다. 항체를 20-30℃로 예열하고 PAZ-L의 2 내지 20 (예를 들어, 7 내지 10) 몰 당량과 빠르게 혼합한다. 반응을 30℃에서 약 16시간 동안 진행되도록 하고 면역접합체 (IC)는 pH 7.2의 인산염 완충 식염수 (PBS)에서 평형화된 2개의 연속적인 G-25 탈염 컬럼을 실행하여 반응물로부터 분리되어 표 2의 면역접합체 (IC)를 제공한다. 보조제-항체 비율 (DAR)은 XEVOTM G2-XS TOF 질량 분석기 (Waters Corporation)에 연결된 ACQUITYTM UPLC H-class (Waters Corporation, Milford, MA)에서 C4 역상 컬럼을 사용하여 액체 크로마토그래피 질량 분석기 분석에 의해 결정된다.
접합을 위해, 항체는 항체의 안정성 또는 항원 결합 특이성에 부정적인 영향을 미치지 않는 당업계에 공지된 수성 완충 시스템에 용해될 수 있다. 인산염 완충 식염수를 사용할 수 있다. PAZ-L은 본원의 다른 곳에 기재된 바와 같이 적어도 하나의 극성 비양성자성 용매를 포함하는 용매계에 용해된다. 일부 이러한 양태에서, PAZ-L은 pH 8의 Tris 완충액 (예를 들어, 50 mM Tris)에서 약 5 mM, 약 10 mM, 약 20 mM, 약 30 mM, 약 40 mM 또는 약 50 mM, 및 약 5 mM 내지 약 50 mM 또는 약 10 mM 내지 약 30 mM과 같은 범위의 농도로 용해된다. 일부 측면에서, PAZ-L는 DMSO(디메틸설폭사이드), DMA(디메틸아세트아미드) 또는 아세토니트릴, 또는 다른 적합한 쌍극성 비양성자성 용매에 용해된다.
대안적으로 접합 반응에서, 등가 과량의 PAZ-L 중간 용액을 희석하고 항체 용액과 조합할 수 있다. PAZ-L 용액은 적어도 하나의 극성 비양성자성 용매 및 적어도 하나의 극성 양성자성 용매로 적합하게 희석될 수 있으며, 그 예로는 물, 메탄올, 에탄올, n-프로판올 및 아세트산을 포함한다. 항체에 대한 PAZ-L의 몰 당량은 약 1.5:1, 약 3:1, 약 5:1, 약 10:1, 약 15:1, 또는 약 20:1, 및 약 1.5:1 내지 약 20:1 약 1.5:1 내지 약 15:1, 약 1.5:1 내지 약 10:1, 약 3:1 내지 약 15:1, 약 3:1 내지 약 10:1, 약 5:1 내지 약 15:1 또는 약 5:1 내지 약 10:1과 같은 범위일 수 있다. 반응은 LC-MS와 같은 당업계에 공지된 방법에 의해 완료에 대해 적절하게 모니터링될 수 있다. 접합 반응은 전형적으로 약 1시간 내지 약 16시간 범위에서 완료된다. 반응이 완료된 후, 반응 혼합물에 시약을 첨가하여 반응을 켄칭할 수 있다. 항체 티올기가 PAZ-L의 말레이미드와 같은 티올 반응성 기와 반응하는 경우, 미반응 항체 티올 기가 캡핑 시약과 반응할 수 있다. 적절한 캡핑 시약의 예는 에틸말레이미드이다.
접합 후, 면역접합체를 정제하고, 예를 들어, 크기 배제 크로마토그래피, 소수성 상호작용 크로마토그래피, 이온 교환 크로마토그래피, 크로마토포커싱, 한외여과, 원심 한외여과, 접선 흐름 여과, 및 이들의 조합과 같은, 그러나 이들로 제한되지 않는 당업계에 공지된 정제 방법에 의해 접합되지 않은 반응물 및/또는 접합체 응집체로부터 분리할 수 있다. 예를 들어, 정제는 면역접합체를, 예컨대 20 mM 석신산나트륨, pH 5에서 희석하는 것이 선행될 수 있다. 희석된 용액을 양이온 교환 컬럼에 적용한 후, 예를 들어, 적어도 10개의 컬럼 부피의 20 mM 석신산나트륨, pH 5로 세척한다. 접합체는 PBS와 같은 완충액으로 적절히 용출될 수 있다.
실시예 202 HEK 리포터 분석
인간 TLR7 또는 인간 TLR8을 발현하는 HEK293 리포터 세포는 Invivogen에서 구입했으며 세포 증식 및 실험을 위해 판매자 프로토콜을 따랐다. 간략하게, 세포는 10% FBS, 제오신(Zeocin) 및 블라스티시딘(Blasticidin)이 보충된 DMEM 중 5% CO2에서 80-85% 합류까지 성장시켰다. 그 다음 세포를 HEK 검출 배지 및 면역자극 분자를 함유하는 기질과 함께 4x104세포/웰로 96-웰의 평평한 플레이트에 접종하였다. 620-655 nm 파장에서 플레이트 판독기를 사용하여 활성을 측정하였다.
실시예 203 시험관내 면역접합체 활성의 평가
이 실시예는 본 발명의 면역접합체가 예를 들어 수지상 세포에서 골수 활성화를 유도하는데 효과적이며 따라서 암 치료에 유용하다는 것을 보여준다.
인간 종래의 수지상 세포의 단리: 밀도 구배 원심분리에 의해 건강한 혈액 공여자(Stanford Blood Center, Palo Alto, California)로부터 얻은 인간 말초 혈액으로부터 인간 종래의 수지상 세포(cDC)를 음성으로 선택하였다. 간략하게, 먼저 ROSETTESEPTM 인간 CD3 고갈 칵테일(Stem Cell Technologies, Vancouver, Canada)을 사용하여 세포를 풍부화하여 세포 준비로부터 T 세포를 제거한다. 그 다음 cDC는 EASYSEPTM 인간 골수성 DC 풍부화 키트(Stem Cell Technologies)를 사용하여 음성 선택을 통해 추가로 풍부화된다.
cDC 활성화 검정: 8 x 104 APC를 10:1 효과기(cDC) 대 표적(종양 세포) 비율로 ISAC 표적 항원을 발현하는 종양 세포와 공동 배양하였다. 10% FBS 및 지시된 경우 다양한 농도의 표시된 본 발명의 면역접합체(상기 실시예에 따라 제조된 바와 같음)가 보충된 RPMI-1640 배지를 함유하는 96-웰 플레이트(Corning, Corning, NY)에서 세포를 인큐베이션하였다. 약 18시간의 밤새 인큐베이션 후, 무세포 상청액을 수집하고 BioLegend LEGENDPLEX 사이토카인 비드 어레이를 사용하여 사이토카인 분비(TNFα 포함)에 대해 분석하였다.
골수성 세포 유형의 활성화는 상이한 골수성 집단이 활용되는 기재된 검정 외에 다양한 스크린 검정을 사용하여 측정될 수 있다. 이들은 하기를 포함할 수 있다: 건강한 공여자 혈액에서 단리된 단핵구, M-CSF 분화 대식세포, GM-CSF 분화 대식세포, GM-CSF+IL-4 단핵구 유래 수지상 세포, 건강한 공여자 혈액에서 단리된 종래의 수지상 세포(cDC), 및 면역억제 상태로 분극화된 골수 세포(골수 유래 억제 세포 또는 MDSC라고도 함). MDSC 분극화 세포의 예는 M2a Mφ(IL4/IL13), M2c Mφ(IL10/TGFb), GM-CSF/IL6 MDSC 및 종양 교육 단핵구(TEM)와 같은 면역억제 상태로 분화된 단핵구를 포함한다. TEM 분화는 종양 조건화 배지(예를 들어 786.O, MDA-MB-231, HCC1954)를 사용하여 수행될 수 있다. 원발성 종양 연관 골수 세포는 또한 해리된 종양 세포 현탁액에 존재하는 일차 세포를 포함할 수 있다(Discovery Life Sciences).
기재된 골수 세포 집단의 활성화 평가는 ISAC가 항체의 CDR 영역을 통해 결합할 수 있는 관심 항원을 발현하는 세포와의 공동 배양 또는 단일 배양으로 수행될 수 있다. 18 내지 48시간 동안 인큐베이션한 후, 활성화는 유동 세포측정을 사용하는 세포 표면 공동자극 분자의 상향조절에 의해 또는 분비된 염증유발 사이토카인의 측정에 의해 평가될 수 있다. 사이토카인 측정을 위해, 무세포 상청액을 수확하고 유동 세포측정을 사용하여 사이토카인 비드 어레이(예: Biolegend의 LegendPlex)로 분석한다.
본 명세서에 인용된 간행물, 특허 출원, 및 특허를 포함한 모든 참고 문헌은 각 참고 문헌이 개별적으로 그리고 구체적으로 참고로 인용되는 것으로 표시되고 그 전체가 여기에 기재된 것처럼 동일한 정도로 참고로 인용된다.
SEQUENCE LISTING <110> BOLT BIOTHERAPEUTICS, INC. <120> PYRAZOLOAZEPINE IMMUNOCONJUGATES, AND USES THEREOF <130> 17019.009WO1 <140> <141> <150> 63/065,219 <151> 2020-08-13 <160> 160 <170> PatentIn version 3.5 <210> 1 <211> 106 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <221> source <223> /note="Description of Artificial Sequence: Synthetic polypeptide" <400> 1 Asp Ile Gln Leu Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly 1 5 10 15 Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Lys Ala Ser Gln Asp Val Gly Thr Ser 20 25 30 Val Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu Leu Ile 35 40 45 Tyr Trp Thr Ser Thr Arg His Thr Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly 50 55 60 Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Phe Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro 65 70 75 80 Glu Asp Ile Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln Tyr Ser Leu Tyr Arg Ser 85 90 95 Phe Gly Gln Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys 100 105 <210> 2 <211> 23 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <221> source <223> /note="Description of Artificial Sequence: Synthetic peptide" <400> 2 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Claims (89)

  1. 링커에 의해 하나 이상의 5-아미노피라졸로아제핀 모이어티에 공유 부착된 항체를 포함하고 하기 화학식 I 또는 그의 약제학적으로 허용 가능한 염을 갖는 면역접합체:
    Figure pct00137

    식 중:
    Ab는 항체이고;
    p는 1 내지 8의 정수이고;
    PAZ는 화학식 IIa 및 IIb로부터 선택된 5-아미노피라졸로아제핀 모이어티이고:
    Figure pct00138

    X1, X2, 및 X3은 결합, C(=O), C(=O)N(R5), O, N(R5), S, S(O)2, 및 S(O)2N(R5)로 이루어진 군으로부터 독립적으로 선택되고;
    R1, R2, R3, 및 R4는 H, C1-C12 알킬, C2-C6 알케닐, C2-C6 알키닐, C3-C12 카보사이클릴, C6-C20 아릴, C2-C9 헤테로사이클릴, 및 C1-C20 헤테로아릴로 이루어진 군으로부터 독립적으로 선택되고, 여기서 알킬, 알케닐, 알키닐, 카보사이클릴, 아릴, 헤테로사이클릴, 및 헤테로아릴은 하기로부터 선택된 하나 이상의 군으로부터 독립적으로 및 선택적으로 치환되고
    -(C1-C12 알킬디일)-N(R5)-*;
    -(C1-C12 알킬디일)-N(R5)2;
    -(C1-C12 알킬디일)-OR5;
    -(C3-C12 카보사이클릴);
    -(C3-C12 카보사이클릴)-*;
    -(C3-C12 카보사이클릴)-(C1-C12 알킬디일)-NR5-*;
    -(C3-C12 카보사이클릴)-(C1-C12 알킬디일)-N(R5)2;
    -(C3-C12 카보사이클릴)-NR5-C(=NR5)NR5-*;
    -(C6-C20 아릴);
    -(C6-C20 아릴디일)-*;
    -(C6-C20 아릴디일)-N(R5)-*;
    -(C6-C20 아릴디일)-(C1-C12 알킬디일)-N(R5)-*;
    -(C6-C20 아릴디일)-(C1-C12 알킬디일)-(C2-C20 헤테로사이클릴디일)-*;
    -(C6-C20 아릴디일)-(C1-C12 알킬디일)-N(R5)2;
    -(C6-C20 아릴디일)-(C1-C12 알킬디일)-NR5-C(=NR5a)N(R5)-*;
    -(C2-C20 헤테로사이클릴);
    -(C2-C20 헤테로사이클릴)-*;
    -(C2-C9 헤테로사이클릴)-(C1-C12 알킬디일)-NR5-*;
    -(C2-C9 헤테로사이클릴)-(C1-C12 알킬디일)-N(R5)2;
    -(C2-C9 헤테로사이클릴)-C(=O)-(C1-C12 알킬디일)-N(R5)-*;
    -(C2-C9 헤테로사이클릴)-NR5-C(=NR5a)NR5-*;
    -(C2-C9 헤테로사이클릴)-NR5-(C6-C20 아릴디일)-(C1-C12 알킬디일)-N(R5)-*;
    -(C2-C9 헤테로사이클릴)-(C6-C20 아릴디일)-*;
    -(C1-C20 헤테로아릴);
    -(C1-C20 헤테로아릴디일)-*;
    -(C1-C20 헤테로아릴디일)-(C1-C12 알킬디일)-N(R5)-*;
    -(C1-C20 헤테로아릴디일)-(C1-C12 알킬디일)-N(R5)2;
    -(C1-C20 헤테로아릴디일)-NR5-C(=NR5a)N(R5)-*;
    -(C1-C20 헤테로아릴디일)-N(R5)C(=O)-(C1-C12 알킬디일)-N(R5)-*;
    -C(=O)-*;
    -C(=O)-(C1-C12 알킬디일)-N(R5)-*;
    -C(=O)-(C2-C20 헤테로사이클릴디일)-*;
    -C(=O)N(R5)2;
    -C(=O)N(R5)-*;
    -C(=O)N(R5)-(C1-C12 알킬디일)-*;
    -C(=O)N(R5)-(C1-C12 알킬디일)-C(=O)N(R5)-*;
    -C(=O)N(R5)-(C1-C12 알킬디일)-N(R5)C(=O)R5;
    -C(=O)N(R5)-(C1-C12 알킬디일)-N(R5)C(=O)N(R5)2;
    -C(=O)NR5-(C1-C12 알킬디일)-N(R5)CO2R5;
    -C(=O)NR5-(C1-C12 알킬디일)-N(R5)C(=NR5a)N(R5)2;
    -C(=O)NR5-(C1-C12 알킬디일)-NR5C(=NR5a)R5;
    -C(=O)NR5-(C1-C8 알킬디일)-NR5(C2-C5 헤테로아릴);
    -C(=O)NR5-(C1-C20 헤테로아릴디일)-N(R5)-*;
    -C(=O)NR5-(C1-C20 헤테로아릴디일)-*;
    -C(=O)NR5-(C1-C20 헤테로아릴디일)-(C1-C12 알킬디일)-N(R5)2;
    -C(=O)NR5-(C1-C20 헤테로아릴디일)-(C2-C20 헤테로사이클릴디일)-C(=O)NR5-(C1-C12 알킬디일)-NR5-*;
    -N(R5)2;
    -N(R5)-*;
    -N(R5)C(=O)R5;
    -N(R5)C(=O)-*;
    -N(R5)C(=O)N(R5)2;
    -N(R5)C(=O)N(R5)-*;
    -N(R5)CO2R5;
    -N(R5)CO2(R5)-*;
    -NR5C(=NR5a)N(R5)2;
    -NR5C(=NR5a)N(R5)-*;
    -NR5C(=NR5a)R5;
    -N(R5)C(=O)-(C1-C12 알킬디일)-N(R5)-*;
    -N(R5)-(C2-C5 헤테로아릴);
    -N(R5)-S(=O)2-(C1-C12 알킬);
    -O-(C1-C12 알킬);
    -O-(C1-C12 알킬디일)-N(R5)2;
    -O-(C1-C12 알킬디일)-N(R5)-*;
    -OC(=O)N(R5)2;
    -OC(=O)N(R5)-*;
    -S(=O)2-(C2-C20 헤테로사이클릴디일)-*;
    -S(=O)2-(C2-C20 헤테로사이클릴디일)-(C1-C12 알킬디일)-N(R5)2;
    -S(=O)2-(C2-C20 헤테로사이클릴디일)-(C1-C12 알킬디일)-NR5-*; 및
    -S(=O)2-(C2-C20 헤테로사이클릴디일)-(C1-C12 알킬디일)-OH;
    또는 R2 및 R3은 함께 5- 또는 6-원 헤테로사이클릴 고리를 형성하고;
    R5는 H, C6-C20 아릴, C3-C12 카보사이클릴, C2-C20 헤테로사이클릴, C6-C20 아릴디일, C1-C12 알킬, 및 C1-C12 알킬디일로 이루어진 군으로부터 선택되거나, 또는 2개의 R5 기는 함께 5- 또는 6-원 헤테로사이클릴 고리를 형성하고;
    R5a는로 이루어진 군으로부터 선택되고 C6-C20 아릴 및 C1-C20 헤테로아릴;
    여기서 별표 *는 L의 부착 부위를 나타내고, 그리고 R1, R2, R3 및 R4 중 하나는 L에 부착되고;
    L은 하기로 이루어진 군으로부터 선택된 링커이고:
    -C(=O)-PEG-;
    -C(=O)-PEG-C(=O)N(R6)(C1-C12 알킬디일)C(=O)-Gluc-;
    -C(=O)-PEG-O-;
    -C(=O)-PEG-O-C(=O)-;
    -C(=O)-PEG-C(=O)-;
    -C(=O)-PEG-C(=O)-PEP-;
    -C(=O)-PEG-N(R6)-;
    -C(=O)-PEG-N(R6)-C(=O)-;
    -C(=O)-PEG-N(R6)-PEG-C(=O)-PEP-;
    -C(=O)-PEG-N+(R6)2-PEG-C(=O)-PEP-;
    -C(=O)-PEG-C(=O)-PEP-N(R6)-(C1-C12 알킬디일)-;
    -C(=O)-PEG-C(=O)-PEP-N(R6)-(C1-C12 알킬디일)N(R6)C(=O)-(C2-C5 모노헤테로사이클릴디일)-;
    -C(=O)-PEG-SS-(C1-C12 알킬디일)-OC(=O)-;
    -C(=O)-PEG-SS-(C1-C12 알킬디일)-C(=O)-;
    -C(=O)-(C1-C12 알킬디일)-C(=O)-PEP-;
    -C(=O)-(C1-C12 알킬디일)-C(=O)-PEP-N(R6)-(C1-C12 알킬디일)-;
    -C(=O)-(C1-C12 알킬디일)-C(=O)-PEP-N(R6)-(C1-C12 알킬디일)-N(R5)-C(=O);
    -C(=O)-(C1-C12 알킬디일)-C(=O)-PEP-N(R6)-(C1-C12 알킬디일)-N(R6)C(=O)-(C2-C5 모노헤테로사이클릴디일)-;
    -석신이미딜-(CH2)m-C(=O)N(R6)-PEG-;
    -석신이미딜-(CH2)m-C(=O)N(R6)-PEG-C(=O)N(R6)(C1-C12 알킬디일)C(=O)Gluc-;
    -석신이미딜-(CH2)m-C(=O)N(R6)-PEG-O-;
    -석신이미딜-(CH2)m-C(=O)N(R6)-PEG-O-C(=O)-;
    -석신이미딜-(CH2)m-C(=O)N(R6)-PEG-C(=O)-;
    -석신이미딜-(CH2)m-C(=O)N(R6)-PEG-N(R5)-;
    -석신이미딜-(CH2)m-C(=O)N(R6)-PEG-N(R5)-C(=O)-;
    -석신이미딜-(CH2)m-C(=O)N(R6)-PEG-C(=O)-PEP-;
    -석신이미딜-(CH2)m-C(=O)N(R6)-PEG-SS-(C1-C12 알킬디일)-OC(=O)-;
    -석신이미딜-(CH2)m-C(=O)-PEP-N(R6)-(C1-C12 알킬디일)-;
    -석신이미딜-(CH2)m-C(=O)-PEP-N(R6)-(C1-C12 알킬디일)N(R6)C(=O)-; 및
    -석신이미딜-(CH2)m-C(=O)-PEP-N(R6)-(C1-C12 알킬디일)N(R6)C(=O)-(C2-C5 모노헤테로사이클릴디일)-;
    R6는 독립적으로 H 또는 C1-C6 알킬이고;
    PEG는 식: -(CH2CH2O)n-(CH2)m-을 가지며; m은 1 내지 5의 정수이고, n은 2 내지 50의 정수이고;
    Gluc는 화학식
    Figure pct00139
    을 가지며:
    PEP는 화학식
    Figure pct00140
    을 가지며:
    여기서 AA는 천연 또는 비천연 아미노산 측쇄, 또는 AA 중 하나 이상으로부터 독립적으로 선택되고, 인접한 질소 원자는 5-원 고리 프롤린 아미노산을 형성하고, 물결선은 부착점을 나타내고;
    Cyc는 C6-C20 아릴디일 및 C1-C20 헤테로아릴디일로부터 선택되고, 이는 F, Cl, NO2, -OH, -OCH3, 및 구조:
    Figure pct00141
    를 갖는 글루쿠론산으로부터 선택된 하나 이상의 군으로부터 선택적으로 치환되고:
    R7는 -CH(R8)O-, -CH2-, -CH2N(R8)-, 및 -CH(R8)O-C(=O)-로 이루어진 군으로부터 선택되고, 여기서 R8는 H, C1-C6 알킬, C(=O)-C1-C6 알킬, 및 -C(=O)N(R9)2로부터 선택되고, 여기서 R9는 H, C1-C12 알킬, 및 -(CH2CH2O)n-(CH2)m-OH로 이루어진 군으로부터 독립적으로 선택되고, 여기서 m은 1 내지 5의 정수이고, n은 2 내지 50의 정수이고, 또는 2개의 R9 기는 함께 5- 또는 6-원 헤테로사이클릴 고리를 형성하고;
    y는 2 내지 12의 정수이고;
    z는 0 또는 1이고; 그리고
    알킬, 알킬디일, 알케닐, 알케닐디일, 알키닐, 알키닐디일, 아릴, 아릴디일, 카보사이클릴, 카보사이클릴디일, 헤테로사이클릴, 헤테로사이클릴디일, 헤테로아릴, 및 헤테로아릴디일은 F, Cl, Br, I, -CN, -CH3, -CH2CH3, -CH=CH2, -C≡CH, -C≡CCH3, -CH2CH2CH3, -CH(CH3)2, -CH2CH(CH3)2, -CH2OH, -CH2OCH3, -CH2CH2OH, -C(CH3)2OH, -CH(OH)CH(CH3)2, -C(CH3)2CH2OH, -CH2CH2SO2CH3, -CH2OP(O)(OH)2, -CH2F, -CHF2, -CF3, -CH2CF3, -CH2CHF2, -CH(CH3)CN, -C(CH3)2CN, -CH2CN, -CH2NH2, -CH2NHSO2CH3, -CH2NHCH3, -CH2N(CH3)2, -CO2H, -COCH3, -CO2CH3, -CO2C(CH3)3, -COCH(OH)CH3, -CONH2, -CONHCH3, -CON(CH3)2, -C(CH3)2CONH2, -NH2, -NHCH3, -N(CH3)2, -NHCOCH3, -N(CH3)COCH3, -NHS(O)2CH3, -N(CH3)C(CH3)2CONH2, -N(CH3)CH2CH2S(O)2CH3, -NHC(=NH)H, -NHC(=NH)CH3, -NHC(=NH)NH2, -NHC(=O)NH2, -NO2, =O, -OH, -OCH3, -OCH2CH3, -OCH2CH2OCH3, -OCH2CH2OH, -OCH2CH2N(CH3)2, -O(CH2CH2O)n-(CH2)mCO2H, -O(CH2CH2O)nH, -OP(O)(OH)2, -S(O)2N(CH3)2, -SCH3, -S(O)2CH3, 및 -S(O)3H로부터 독립적으로 선택된 하나 이상의 기로 독립적으로 그리고 선택적으로 치환됨.
  2. 제1항에 있어서, 항체는 PD-L1에 결합하는 항원 결합 도메인을 갖는 항체 작제물인, 면역접합체.
  3. 제2항에 있어서, 항체는 아테졸리주맙, 더발루맙, 및 아벨루맙, 또는 그의 바이오시밀러 또는 바이오베터로 이루어진 군으로부터 선택되는, 면역접합체.
  4. 제1항에 있어서, 항체는 HER2에 결합하는 항원 결합 도메인을 갖는 항체 작제물인, 면역접합체.
  5. 제4항에 있어서, 항체는 트라스투주맙 및 페르투주맙, 또는 그의 바이오시밀러 또는 바이오베터로 이루어진 군으로부터 선택되는, 면역접합체.
  6. 제1항에 있어서, 항체는 CEA에 결합하는 항원 결합 도메인을 갖는 항체 작제물인, 면역접합체.
  7. 제6항에 있어서, 항체는 라베투주맙, 또는 그의 바이오시밀러 또는 바이오베터인, 면역접합체.
  8. 제1항에 있어서, 항체는 TROP2에 결합하는 항원 결합 도메인을 갖는 항체 작제물인, 면역접합체.
  9. 제8항에 있어서, 항체는 사시투주맙, 또는 그의 바이오시밀러 또는 바이오베터인, 면역접합체.
  10. 제1항 내지 제9항 중 어느 한 항에 있어서, X1은 결합이고, R1은 H인, 면역접합체.
  11. 제1항 내지 제9항 중 어느 한 항에 있어서, X2는 결합이고, R2는 C1-C8 알킬인, 면역접합체.
  12. 제1항 내지 제9항 중 어느 한 항에 있어서, X2 및 X3 각각은 결합이고, 그리고 R2 및 R3은 C1-C8 알킬, -O-(C1-C12 알킬), -(C1-C12 알킬디일)-OR5, -(C1-C8 알킬디일)-N(R5)CO2R5, -(C1-C12 알킬)-OC(O)N(R5)2, -O-(C1-C12 알킬)-N(R5)CO2R5, 및 -O-(C1-C12 알킬)-OC(O)N(R5)2로부터 독립적으로 선택되는, 면역접합체.
  13. 제12항에 있어서, R2는 C1-C8 알킬이고, R3은 -(C1-C8 알킬디일)-N(R5)CO2R4인, 면역접합체.
  14. 제12항에 있어서, R2는 -CH2CH2CH3이고 R3은 -CH2CH2CH2NHCO2(t-Bu), -OCH2CH2NHCO2(사이클로부틸), 및 -CH2CH2CH2NHCO2(사이클로부틸)로부터 선택되는, 면역접합체.
  15. 제12항에 있어서, R2 및 R3 각각은 독립적으로 -CH2CH2CH3, -OCH2CH3, -OCH2CF3, -CH2CH2CF3, -OCH2CH2OH, 및 -CH2CH2CH2OH로부터 선택되는, 면역접합체.
  16. 제12항에 있어서, R2 및 R3 각각은 -CH2CH2CH3인, 면역접합체.
  17. 제12항에 있어서, R2는 -CH2CH2CH3이고 R3은 -OCH2CH3인, 면역접합체.
  18. 제1항 내지 제9항 중 어느 한 항에 있어서, X3-R3은 하기로 이루어진 군으로부터 선택되는, 면역접합체:
    Figure pct00142

    Figure pct00143
    및
    Figure pct00144
  19. 제1항 내지 제9항 중 어느 한 항에 있어서, R2 또는 R3은 L에 부착되는, 면역접합체.
  20. 제19항에 있어서, X3-R3-L은 하기로 이루어진 군으로부터 선택되는, 면역접합체:
    Figure pct00145

    Figure pct00146

    여기서 물결선은 N에 대한 부착점을 나타낸다.
  21. 제1항 내지 제9항 중 어느 한 항에 있어서, R4는 C1-C12 알킬인, 면역접합체.
  22. 제1항 내지 제9항 중 어느 한 항에 있어서, R4는 -(C1-C12 알킬디일)-N(R5)-*이고; 여기서 별표 *는 L의 부착 부위를 나타내는, 면역접합체.
  23. 제1항 내지 제9항 중 어느 한 항에 있어서, L은 -C(=O)-PEG- 또는 -C(=O)-PEG-C(=O)-인, 면역접합체.
  24. 제1항 내지 제9항 중 어느 한 항에 있어서, L은 항체의 시스테인 티올에 부착되는, 면역접합체.
  25. 제1항 내지 제9항 중 어느 한 항에 있어서, PEG에 대해, m은 1 또는 2이고, 그리고 n은 2 내지 10의 정수인, 면역접합체.
  26. 제25항에 있어서, n은 10인, 면역접합체.
  27. 제1항 내지 제9항 중 어느 한 항에 있어서, L은 PEP를 포함하고, PEP는 디펩티드이고 하기 화학식을 갖는, 면역접합체:
    Figure pct00147
  28. 제27항에 있어서, AA1 및 AA2는 H, -CH3, -CH(CH3)2, -CH2(C6H5), -CH2CH2CH2CH2NH2, -CH2CH2CH2NHC(NH)NH2, -CHCH(CH3)CH3, -CH2SO3H, 및 -CH2CH2CH2NHC(O)NH2로부터 독립적으로 선택되거나; 또는 AA1 및 AA2는 5-원 고리 프롤린 아미노산을 형성하는, 면역접합체.
  29. 제27항에 있어서, AA1은 -CH(CH3)2이고, AA2는 -CH2CH2CH2NHC(O)NH2인, 면역접합체.
  30. 제27항에 있어서, AA1 및 AA2는 GlcNAc 아스파르트산, -CH2SO3H, 및 -CH2OPO3H로부터 독립적으로 선택되는, 면역접합체.
  31. 제27항에 있어서, PEP는 하기 화학식을 갖는, 면역접합체:
    Figure pct00148

    식 중 AA1 및 AA2는 자연 발생 아미노산의 측쇄로부터 독립적으로 선택됨.
  32. 제1항 내지 제9항 중 어느 한 항에 있어서, L은 PEP를 포함하고, PEP는 트리펩티드이고 하기 화학식을 갖는, 면역접합체:
    Figure pct00149
  33. 제1항 내지 제9항 중 어느 한 항에 있어서, L은 PEP를 포함하고, PEP는 테트라펩티드이고 하기 화학식을 갖는, 면역접합체:
    Figure pct00150
  34. 제33항에 있어서,
    AA1은 Abu, Ala, 및 Val로 이루어진 군으로부터 선택되고;
    AA2는 Nle(O-Bzl), Oic 및 Pro로 이루어진 군으로부터 선택되고;
    AA3은 Ala 및 Met(O)2로 이루어진 군으로부터 선택되고; 그리고
    AA4는 Oic, Arg(NO2), Bpa, 및 Nle(O-Bzl)로 이루어진 군으로부터 선택되는, 면역접합체.
  35. 제1항 내지 제9항 중 어느 한 항에 있어서, L은 PEP를 포함하고, PEP는 Ala-Pro-Val, Asn-Pro-Val, Ala-Ala-Val, Ala-Ala-Pro-Ala, Ala-Ala-Pro-Val, 및 Ala-Ala-Pro-Nva로 이루어진 군으로부터 선택되는, 면역접합체.
  36. 제1항 내지 제9항 중 어느 한 항에 있어서, L은 PEP를 포함하고, PEP는 하기 구조로부터 선택되는, 면역접합체:
    Figure pct00151

    Figure pct00152
    및
    Figure pct00153
  37. 제1항 내지 제9항 중 어느 한 항에 있어서, L은 하기 구조로부터 선택되는, 면역접합체:
    Figure pct00154

    여기서 물결선은 R5에 대한 부착을 나타낸다.
  38. 제1항 내지 제9항 중 어느 한 항에 있어서, 화학식 Ia-Id로부터 선택되는, 면역접합체:
    Figure pct00155

    Figure pct00156
  39. 제1항 내지 제9항 중 어느 한 항에 있어서, 화학식 Ie-Il로부터 선택되는, 면역접합체:
    Figure pct00157

    Figure pct00158
    및
    Figure pct00159
  40. 화학식 IIa 및 IIb로부터 선택되는 5-아미노피라졸로아제핀-링커 화합물:
    Figure pct00160

    여기서 X1, X2, 및 X3은 결합, C(=O), C(=O)N(R5), O, N(R5), S, S(O)2, 및 S(O)2N(R5)로 이루어진 군으로부터 독립적으로 선택되고;
    R1, R2, R3, 및 R4는 H, C1-C12 알킬, C2-C6 알케닐, C2-C6 알키닐, C3-C12 카보사이클릴, C6-C20 아릴, C2-C9 헤테로사이클릴, 및 C1-C20 헤테로아릴로 이루어진 군으로부터 독립적으로 선택되고, 여기서 알킬, 알케닐, 알키닐, 카보사이클릴, 아릴, 헤테로사이클릴, 및 헤테로아릴은 하기로부터 선택된 하나 이상의 군으로부터 독립적으로 그리고 선택적으로 치환되며:
    -(C1-C12 알킬디일)-N(R5)-*;
    -(C1-C12 알킬디일)-N(R5)2;
    -(C1-C12 알킬디일)-OR5;
    -(C3-C12 카보사이클릴);
    -(C3-C12 카보사이클릴)-*;
    -(C3-C12 카보사이클릴)-(C1-C12 알킬디일)-NR5-*;
    -(C3-C12 카보사이클릴)-(C1-C12 알킬디일)-N(R5)2;
    -(C3-C12 카보사이클릴)-NR5-C(=NR5)NR5-*;
    -(C6-C20 아릴);
    -(C6-C20 아릴디일)-*;
    -(C6-C20 아릴디일)-N(R5)-*;
    -(C6-C20 아릴디일)-(C1-C12 알킬디일)-N(R5)-*;
    -(C6-C20 아릴디일)-(C1-C12 알킬디일)-(C2-C20 헤테로사이클릴디일)-*;
    -(C6-C20 아릴디일)-(C1-C12 알킬디일)-N(R5)2;
    -(C6-C20 아릴디일)-(C1-C12 알킬디일)-NR5-C(=NR5a)N(R5)-*;
    -(C2-C20 헤테로사이클릴);
    -(C2-C20 헤테로사이클릴)-*;
    -(C2-C9 헤테로사이클릴)-(C1-C12 알킬디일)-NR5-*;
    -(C2-C9 헤테로사이클릴)-(C1-C12 알킬디일)-N(R5)2;
    -(C2-C9 헤테로사이클릴)-C(=O)-(C1-C12 알킬디일)-N(R5)-*;
    -(C2-C9 헤테로사이클릴)-NR5-C(=NR5a)NR5-*;
    -(C2-C9 헤테로사이클릴)-NR5-(C6-C20 아릴디일)-(C1-C12 알킬디일)-N(R5)-*;
    -(C2-C9 헤테로사이클릴)-(C6-C20 아릴디일)-*;
    -(C1-C20 헤테로아릴);
    -(C1-C20 헤테로아릴디일)-*;
    -(C1-C20 헤테로아릴디일)-(C1-C12 알킬디일)-N(R5)-*;
    -(C1-C20 헤테로아릴디일)-(C1-C12 알킬디일)-N(R5)2;
    -(C1-C20 헤테로아릴디일)-NR5-C(=NR5a)N(R5)-*;
    -(C1-C20 헤테로아릴디일)-N(R5)C(=O)-(C1-C12 알킬디일)-N(R5)-*;
    -C(=O)-*;
    -C(=O)-(C1-C12 알킬디일)-N(R5)-*;
    -C(=O)-(C2-C20 헤테로사이클릴디일)-*;
    -C(=O)N(R5)2;
    -C(=O)N(R5)-*;
    -C(=O)N(R5)-(C1-C12 알킬디일)-*;
    -C(=O)N(R5)-(C1-C12 알킬디일)-C(=O)N(R5)-*;
    -C(=O)N(R5)-(C1-C12 알킬디일)-N(R5)C(=O)R5;
    -C(=O)N(R5)-(C1-C12 알킬디일)-N(R5)C(=O)N(R5)2;
    -C(=O)NR5-(C1-C12 알킬디일)-N(R5)CO2R5;
    -C(=O)NR5-(C1-C12 알킬디일)-N(R5)C(=NR5a)N(R5)2;
    -C(=O)NR5-(C1-C12 알킬디일)-NR5C(=NR5a)R5;
    -C(=O)NR5-(C1-C8 알킬디일)-NR5(C2-C5 헤테로아릴);
    -C(=O)NR5-(C1-C20 헤테로아릴디일)-N(R5)-*;
    -C(=O)NR5-(C1-C20 헤테로아릴디일)-*;
    -C(=O)NR5-(C1-C20 헤테로아릴디일)-(C1-C12 알킬디일)-N(R5)2;
    -C(=O)NR5-(C1-C20 헤테로아릴디일)-(C2-C20 헤테로사이클릴디일)-C(=O)NR5-(C1-C12 알킬디일)-NR5-*;
    -N(R5)2;
    -N(R5)-*;
    -N(R5)C(=O)R5;
    -N(R5)C(=O)-*;
    -N(R5)C(=O)N(R5)2;
    -N(R5)C(=O)N(R5)-*;
    -N(R5)CO2R5;
    -N(R5)CO2(R5)-*;
    -NR5C(=NR5a)N(R5)2;
    -NR5C(=NR5a)N(R5)-*;
    -NR5C(=NR5a)R5;
    -N(R5)C(=O)-(C1-C12 알킬디일)-N(R5)-*;
    -N(R5)-(C2-C5 헤테로아릴);
    -N(R5)-S(=O)2-(C1-C12 알킬);
    -O-(C1-C12 알킬);
    -O-(C1-C12 알킬디일)-N(R5)2;
    -O-(C1-C12 알킬디일)-N(R5)-*;
    -OC(=O)N(R5)2;
    -OC(=O)N(R5)-*;
    -S(=O)2-(C2-C20 헤테로사이클릴디일)-*;
    -S(=O)2-(C2-C20 헤테로사이클릴디일)-(C1-C12 알킬디일)-N(R5)2;
    -S(=O)2-(C2-C20 헤테로사이클릴디일)-(C1-C12 알킬디일)-NR5-*; 및
    -S(=O)2-(C2-C20 헤테로사이클릴디일)-(C1-C12 알킬디일)-OH;
    또는 R2 및 R3은 함께 5- 또는 6-원 헤테로사이클릴 고리를 형성하고;
    R5는 H, C6-C20 아릴, C3-C12 카보사이클릴, C2-C20 헤테로사이클릴, C6-C20 아릴디일, C1-C12 알킬, 및 C1-C12 알킬디일로 이루어진 군으로부터 선택되거나, 또는 2개의 R5 기는 함께 5- 또는 6-원 헤테로사이클릴 고리를 형성하고;
    R5a는 C6-C20 아릴 및 C1-C20 헤테로아릴로 이루어진 군으로부터 선택되고;
    여기서 별표 *는 L의 부착 부위를 나타내고, 그리고 R1, R2, R3 및 R4 중 하나는 L에 부착되고;
    L은 하기로 이루어진 군으로부터 선택된 링커이고:
    Q-C(=O)-PEG-;
    Q-C(=O)-PEG-C(=O)N(R6)(C1-C12 알킬디일)C(=O)-Gluc-;
    Q-C(=O)-PEG-O-;
    Q-C(=O)-PEG-O-C(=O)-;
    Q-C(=O)-PEG-C(=O)-;
    Q-C(=O)-PEG-C(=O)-PEP-;
    Q-C(=O)-PEG-N(R6)-;
    Q-C(=O)-PEG-N(R6)-C(=O)-;
    Q-C(=O)-PEG-N(R6)-PEG-C(=O)-PEP-;
    Q-C(=O)-PEG-N+(R6)2-PEG-C(=O)-PEP-;
    Q-C(=O)-PEG-C(=O)-PEP-N(R6)-(C1-C12 알킬디일)-;
    Q-C(=O)-PEG-C(=O)-PEP-N(R6)-(C1-C12 알킬디일)N(R6)C(=O)-(C2-C5 모노헤테로사이클릴디일)-;
    Q-C(=O)-PEG-SS-(C1-C12 알킬디일)-OC(=O)-;
    Q-C(=O)-PEG-SS-(C1-C12 알킬디일)-C(=O)-;
    Q-C(=O)-(C1-C12 알킬디일)-C(=O)-PEP-;
    Q-C(=O)-(C1-C12 알킬디일)-C(=O)-PEP-N(R6)-(C1-C12 알킬디일)-;
    Q-C(=O)-(C1-C12 알킬디일)-C(=O)-PEP-N(R6)-(C1-C12 알킬디일)-N(R5)-C(=O);
    Q-C(=O)-(C1-C12 알킬디일)-C(=O)-PEP-N(R6)-(C1-C12 알킬디일)-N(R6)C(=O)-(C2-C5 모노헤테로사이클릴디일)-;
    Q-(CH2)m-C(=O)N(R6)-PEG-;
    Q-(CH2)m-C(=O)N(R6)-PEG-C(=O)N(R6)(C1-C12 알킬디일)C(=O)Gluc-;
    Q-(CH2)m-C(=O)N(R6)-PEG-O-;
    Q-(CH2)m-C(=O)N(R6)-PEG-O-C(=O)-;
    Q-(CH2)m-C(=O)N(R6)-PEG-C(=O)-;
    Q-(CH2)m-C(=O)N(R6)-PEG-N(R5)-;
    Q-(CH2)m-C(=O)N(R6)-PEG-N(R5)-C(=O)-;
    Q-(CH2)m-C(=O)N(R6)-PEG-C(=O)-PEP-;
    Q-(CH2)m-C(=O)N(R6)-PEG-SS-(C1-C12 알킬디일)-OC(=O)-;
    Q-(CH2)m-C(=O)-PEP-N(R6)-(C1-C12 알킬디일)-;
    Q-(CH2)m-C(=O)-PEP-N(R6)-(C1-C12 알킬디일)N(R6)C(=O)-; 및
    Q-(CH2)m-C(=O)-PEP-N(R6)-(C1-C12 알킬디일)N(R6)C(=O)-(C2-C5 모노헤테로사이클릴디일)-;
    R6는 독립적으로 H 또는 C1-C6 알킬이고;
    PEG는 하기 화학식을 가지며: -(CH2CH2O)n-(CH2)m-을 가지며; m은 1 내지 5의 정수이고, n은 2 내지 50의 정수이고;
    Gluc는 화학식
    Figure pct00161
    을 가지며;
    PEP는 화학식
    Figure pct00162
    을 가지며
    여기서 AA는 천연 또는 비천연 아미노산 측쇄, 또는 AA 중 하나 이상으로부터 독립적으로 선택되고, 인접한 질소 원자는 5-원 고리 프롤린 아미노산을 형성하고, 물결선은 부착점을 나타내고;
    Cyc는 C6-C20 아릴디일 및 C1-C20 헤테로아릴디일로부터 선택되고, 이는 F, Cl, NO2, -OH, -OCH3, 및 구조
    Figure pct00163
    를 갖는 글루쿠론산으로부터 선택된 하나 이상의 군으로부터 선택적으로 치환되고;
    R7는 -CH(R8)O-, -CH2-, -CH2N(R8)-, 및 -CH(R8)O-C(=O)-로 이루어진 군으로부터 선택되고, 여기서 R8는 H, C1-C6 알킬, C(=O)-C1-C6 알킬, 및 -C(=O)N(R9)2로부터 선택되고, 여기서 R9는 H, C1-C12 알킬, 및 -(CH2CH2O)n-(CH2)m-OH로 이루어진 군으로부터 독립적으로 선택되고, 여기서 m은 1 내지 5의 정수이고, n은 2 내지 50의 정수이고, 또는 2개의 R9 기는 함께 5- 또는 6-원 헤테로사이클릴 고리를 형성하고;
    y는 2 내지 12의 정수이고;
    z는 0 또는 1이고; 그리고
    Q는 N-하이드록시석신이미딜, N-하이드록시설포석신이미딜, 말레이미드, 및 페녹시로 이루어진 군으로부터 선택되고, 이는 F, Cl, NO2, 및 SO3 -로부터 독립적으로 선택된 하나 이상의 기로 치환되고;
    알킬, 알킬디일, 알케닐, 알케닐디일, 알키닐, 알키닐디일, 아릴, 아릴디일 카보사이클릴, 카보사이클릴디일, 헤테로사이클릴, 헤테로사이클릴디일, 헤테로아릴, 및 헤테로아릴디일은 F, Cl, Br, I, -CN, -CH3, -CH2CH3, -CH=CH2, -C≡CH, -C≡CCH3, -CH2CH2CH3, -CH(CH3)2, -CH2CH(CH3)2, -CH2OH, -CH2OCH3, -CH2CH2OH, -C(CH3)2OH, -CH(OH)CH(CH3)2, -C(CH3)2CH2OH, -CH2CH2SO2CH3, -CH2OP(O)(OH)2, -CH2F, -CHF2, -CF3, -CH2CF3, -CH2CHF2, -CH(CH3)CN, -C(CH3)2CN, -CH2CN, -CH2NH2, -CH2NHSO2CH3, -CH2NHCH3, -CH2N(CH3)2, -CO2H, -COCH3, -CO2CH3, -CO2C(CH3)3, -COCH(OH)CH3, -CONH2, -CONHCH3, -CON(CH3)2, -C(CH3)2CONH2, -NH2, -NHCH3, -N(CH3)2, -NHCOCH3, -N(CH3)COCH3, -NHS(O)2CH3, -N(CH3)C(CH3)2CONH2, -N(CH3)CH2CH2S(O)2CH3, -NHC(=NH)H, -NHC(=NH)CH3, -NHC(=NH)NH2, -NHC(=O)NH2, -NO2, =O, -OH, -OCH3, -OCH2CH3, -OCH2CH2OCH3, -OCH2CH2OH, -OCH2CH2N(CH3)2, -O(CH2CH2O)n-(CH2)mCO2H, -O(CH2CH2O)nH, -OP(O)(OH)2, -S(O)2N(CH3)2, -SCH3, -S(O)2CH3, 및 -S(O)3H로부터 독립적으로 선택된 하나 이상의 기로 선택적으로 치환됨.
  41. 제40항에 있어서, X1은 결합이고, 그리고 R1은 H인, 5-아미노-피라졸로아제핀-링커 화합물.
  42. 제40항에 있어서, X2는 결합이고, 그리고 R2는 C1-C8 알킬인, 5-아미노-피라졸로아제핀-링커 화합물.
  43. 제40항에 있어서, X2 및 X3 각각은 결합이고, 그리고 R2 및 R3은 C1-C8 알킬, -O-(C1-C12 알킬), -(C1-C12 알킬디일)-OR5, -(C1-C8 알킬디일)-N(R5)CO2R5, -(C1-C12 알킬)-OC(O)N(R5)2, -O-(C1-C12 알킬)-N(R5)CO2R5, 및 -O-(C1-C12 알킬)-OC(O)N(R5)2로부터 독립적으로 선택되는, 5-아미노-피라졸로아제핀-링커 화합물.
  44. 제43항에 있어서, R2는 C1-C8 알킬이고, R3은 -(C1-C8 알킬디일)-N(R5)CO2R4인, 5-아미노-피라졸로아제핀-링커 화합물.
  45. 제43항에 있어서, R2는 -CH2CH2CH3이고 R3은 -CH2CH2CH2NHCO2(t-Bu), -OCH2CH2NHCO2(사이클로부틸), 및 -CH2CH2CH2NHCO2(사이클로부틸)로부터 선택되는, 5-아미노-피라졸로아제핀-링커 화합물.
  46. 제43항에 있어서, R2 및 R3 각각은 독립적으로 -CH2CH2CH3, -OCH2CH3, -OCH2CF3, -CH2CH2CF3, -OCH2CH2OH, 및 -CH2CH2CH2OH로부터 선택되는, 5-아미노-피라졸로아제핀-링커 화합물.
  47. 제43항에 있어서, R2 및 R3 각각은 -CH2CH2CH3인, 5-아미노-피라졸로아제핀-링커 화합물.
  48. 제43항에 있어서, R2는 -CH2CH2CH3이고 R3은 -OCH2CH3인, 5-아미노-피라졸로아제핀-링커 화합물.
  49. 제40항에 있어서, X3-R3은 하기로 이루어진 군으로부터 선택되는, 5-아미노-피라졸로아제핀-링커 화합물:
    Figure pct00164

    Figure pct00165
    및
    Figure pct00166
  50. 제40항에 있어서, R2 또는 R3은 L에 부착되는, 5-아미노-피라졸로아제핀-링커 화합물.
  51. 제40항에 있어서, X3-R3-L은 하기로 이루어진 군으로부터 선택되는, 5-아미노-피라졸로아제핀-링커 화합물:
    Figure pct00167

    여기서 물결선은 N에 대한 부착점을 나타낸다.
  52. 제40항에 있어서, R4는 C1-C12 알킬인, 5-아미노-피라졸로아제핀-링커 화합물.
  53. 제40항에 있어서, R4는 -(C1-C12 알킬디일)-N(R5)-*이고; 여기서 별표 *는 L의 부착 부위를 나타내는, 5-아미노-피라졸로아제핀-링커 화합물.
  54. 제40항에 있어서, L은 -C(=O)-PEG- 또는 -C(=O)-PEG-C(=O)-인, 5-아미노-피라졸로아제핀-링커 화합물.
  55. 제40항에 있어서, PEG에 대해, m은 1 또는 2이고, 그리고 n은 2 내지 10의 정수인, 5-아미노-피라졸로아제핀-링커 화합물.
  56. 제55항에 있어서, n은 10인, 5-아미노-피라졸로아제핀-링커 화합물.
  57. 제40항에 있어서, L은 PEP를 포함하고, PEP는 디펩티드이고 하기 화학식을 갖는, 5-아미노-피라졸로아제핀-링커 화합물:
    Figure pct00168
  58. 제57항에 있어서, AA1 및 AA2는 H, -CH3, -CH(CH3)2, -CH2(C6H5), -CH2CH2CH2CH2NH2, -CH2CH2CH2NHC(NH)NH2, -CHCH(CH3)CH3, -CH2SO3H, 및 -CH2CH2CH2NHC(O)NH2로부터 독립적으로 선택되거나; 또는 AA1 및 AA2는 5-원 고리 프롤린 아미노산을 형성하는, 5-아미노-피라졸로아제핀-링커 화합물.
  59. 제58항에 있어서, AA1은 -CH(CH3)2이고, AA2는 -CH2CH2CH2NHC(O)NH2인, 5-아미노-피라졸로아제핀-링커 화합물.
  60. 제57항에 있어서, AA1 및 AA2는 GlcNAc 아스파르트산, -CH2SO3H, 및 -CH2OPO3H로부터 독립적으로 선택되는, 5-아미노-피라졸로아제핀-링커 화합물.
  61. 제57항에 있어서, PEP는 하기 화학식을 갖는, 5-아미노-피라졸로아제핀-링커 화합물:
    Figure pct00169

    식 중 AA1 및 AA2는 자연 발생 아미노산의 측쇄로부터 독립적으로 선택됨.
  62. 제40항에 있어서, L은 PEP를 포함하고, PEP는 트리펩티드이고 하기 화학식을 갖는, 5-아미노-피라졸로아제핀-링커 화합물:
    Figure pct00170
  63. 제40항에 있어서, L은 PEP를 포함하고, PEP는 테트라펩티드이고 하기 화학식을 갖는, 5-아미노-피라졸로아제핀-링커 화합물:
    Figure pct00171
  64. 제63항에 있어서,
    AA1은 Abu, Ala, 및 Val로 이루어진 군으로부터 선택되고;
    AA2는 Nle(O-Bzl), Oic 및 Pro로 이루어진 군으로부터 선택되고;
    AA3은 Ala 및 Met(O)2로 이루어진 군으로부터 선택되고; 그리고
    AA4는 Oic, Arg(NO2), Bpa, 및 Nle(O-Bzl)로 이루어진 군으로부터 선택되는, 5-아미노-피라졸로아제핀-링커 화합물.
  65. 제40항에 있어서, L은 PEP를 포함하고, PEP는 Ala-Pro-Val, Asn-Pro-Val, Ala-Ala-Val, Ala-Ala-Pro-Ala, Ala-Ala-Pro-Val, 및 Ala-Ala-Pro-Nva로 이루어진 군으로부터 선택되는, 5-아미노-피라졸로아제핀-링커 화합물.
  66. 제40항에 있어서, L은 PEP를 포함하고, PEP는 하기 구조로부터 선택되는, 5-아미노-피라졸로아제핀-링커 화합물:
    Figure pct00172

    Figure pct00173
    및
    Figure pct00174
  67. 제40항에 있어서, L은 하기 구조로부터 선택되는, 5-아미노-피라졸로아제핀-링커 화합물:
    Figure pct00175

    여기서 물결선은 R1, R2, R3 및 R4 중 하나에 대한 부착을 나타내는, 5-아미노-피라졸로아제핀-링커 화합물.
  68. 제40항에 있어서, 화학식 IIa-IId로부터 선택되는, 5-아미노-피라졸로아제핀-링커 화합물:
    Figure pct00176

    Figure pct00177
  69. 제40항에 있어서, 화학식 IIe-IIl로부터 선택되는, 5-아미노-피라졸로아제핀-링커 화합물:
    Figure pct00178

    Figure pct00179
    및
    Figure pct00180
  70. 제40항에 있어서, Q는 하기로부터 선택되는, 5-아미노-피라졸로아제핀-링커 화합물:
    Figure pct00181

    Figure pct00182
    및
    Figure pct00183
  71. 제70항에 있어서, Q는 하나 이상의 F로 치환된 페녹시인, 5-아미노-피라졸로아제핀-링커 화합물.
  72. 제71항에 있어서, Q는 2,3,5,6-테트라플루오로페녹시인, 5-아미노-피라졸로아제핀-링커 화합물.
  73. 제70항에 있어서, Q는 말레이미드인, 5-아미노-피라졸로아제핀-링커 화합물.
  74. 제40항에 있어서, 표 2a 및 2b로부터 선택되는, 5-아미노-피라졸로아제핀-링커 화합물.
  75. 항체와 제40항의 5-아미노-피라졸로아제핀-링커 화합물과의 접합에 의해 제조된 면역접합체.
  76. 제1항 내지 제39항 중 어느 한 항에 따른 면역접합체의 치료 유효량 및 하나 이상의 약제학적으로 허용 가능한 희석제, 비히클, 담체 또는 부형제를 포함하는 약제학적 조성물.
  77. 암의 치료 방법으로서, 제1항 내지 제39항 중 어느 한 항에 따른 면역접합체의 치료 유효량을 이를 필요로 하는 환자에게 투여하는 것을 포함하는, 방법.
  78. 제77항에 있어서, 암은 TLR7 및/또는 TLR8 효능작용에 의해 유도된 염증유발 반응에 민감한 것인, 방법.
  79. 제77항에 있어서, 암은 PD-L1 발현 암인, 방법.
  80. 제77항에 있어서, 암은 HER2 발현 암인, 방법.
  81. 제77항에 있어서, 암은 CEA 발현 암인, 방법.
  82. 제77항에 있어서, 암은 TROP2 발현 암인, 방법.
  83. 제77항 내지 제82항 중 어느 한 항에 있어서, 암은 자궁경부암, 자궁내막 암, 난소암, 전립선암, 췌장암, 식도암, 방광암, 요로 암, 요상피 암종, 폐암, 비-소세포 폐암, 머켈 세포 암종, 결장암, 결장직장암, 위암, 및 유방암으로부터 선택되는, 방법.
  84. 제83항에 있어서, 유방암은 삼중 음성 유방암인, 방법.
  85. 제83항에 있어서, 머켈 세포 암종 암은 전이성 머켈 세포 암종인, 방법.
  86. 제83항에 있어서, 위암은 HER2 과발현 위암인, 방법.
  87. 제83항에 있어서, 암은 위식도 접합부 선암종인, 방법.
  88. 암을 치료하기 위한 제1항 내지 제36항 중 어느 한 항에 따른 면역접합체의 용도.
  89. 제1항의 화학식 I의 면역접합체의 제조 방법으로서, 제40항의 화학식 II의 5-아미노-피라졸로아제핀-링커 화합물은 항체와 접합되는, 방법.
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