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KR20040068986A - 줄기 세포 인자의 생산ㆍ방출의 억제에 의한 소양, 피부거칠어짐, 민감성 피부 개선용 및 미백용 약제 - Google Patents

줄기 세포 인자의 생산ㆍ방출의 억제에 의한 소양, 피부거칠어짐, 민감성 피부 개선용 및 미백용 약제 Download PDF

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KR20040068986A
KR20040068986A KR10-2004-7010101A KR20047010101A KR20040068986A KR 20040068986 A KR20040068986 A KR 20040068986A KR 20047010101 A KR20047010101 A KR 20047010101A KR 20040068986 A KR20040068986 A KR 20040068986A
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KR
South Korea
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extract
skin
scf
powder
release
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Application number
KR10-2004-7010101A
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아시다유타카
아오키히로후미
후지와라루미코
Original Assignee
가부시키가이샤 시세이도
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Publication date
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Abstract

본 발명은 줄기 세포 인자(이하 「SCF」)의 생산 및/또는 방출을 억제함으로써 피부 소양, 피부 거칠어짐이나 민감성 피부를 개선하는 것에 관한 것이다, 또는 미백 효과를 발휘하는 유효 성분의 스크리닝 방법, 및 이러한 유효 성분을 포함하는 소양, 피부 거칠어짐, 민감성 피부 및/또는 미백용 약제를 제공하는 것을 목적으로 한다.

Description

줄기 세포 인자의 생산ㆍ방출의 억제에 의한 소양, 피부 거칠어짐, 민감성 피부 개선용 및 미백용 약제{DRUGS FOR AMELIORATING ITCH, ROUGH SKIN OR HYPERSENSITIVE SKIN OR FOR WHITENING VIA INHIBITION OF THE PRODUCTION AND RELEASE OF STEM CELL FACTOR}
종래부터, 피부 소양, 피부 거칠어짐, 민감성 피부의 개선 효과나 미백 효과를 갖는 것으로서 여러 가지의 치료약, 피부 외용제, 화장료 등이 사용되고 있다. 피부 소양, 피부 거칠어짐, 민감성 피부의 개선 효과를 발휘하는 종래의 약제나 화장료 등에 있어서는 유효 성분으로서 소염제나 아미노산, 다당, 지질 등 외에, 항염증 작용, 또는 높은 보습 작용을 갖는 각종 동식물 추출물이 피부의 가려움, 염증, 각질층의 수분의 소실을 방지하는 능력이 우수하기 때문에 이용되어 왔다. 또한, 미백 효과를 발휘하는 종래의 약제나 화장료 등에 있어서는 유효 성분으로서 L-아스코르빈산, 글루타티온, 홍귤나무산, 시스테인, 히드로퀴논, 태반 추출물 등이 멜라닌의 생성을 억제하여 기미, 주근깨 등을 방지하는 데 우수하기 때문에 이용되어 왔다. 그러나, 어느 것에 있어서도 그 효과는 반드시 충분한 것은 아니어서 보다 우수한 약제의 개발이 요구되고 있다.
SCF(별명: kit ligand[KL] 또는 mast cell growth factor[MCF가 기미 부위 등에 있어서 발현이 항진하고 있는 것, 자외선 조사에 의해 SCF의 발현이 항진하는 것은 알려져 있다(L. H. Kligman et al., Photochem. Photobiol. Vol.63, No.2(1996) pp.123-127). SCF는 각화 세포, 선유아세포, 혈관 내피 세포 등에 있어서 생산되는 단백질이다. SCF의 작용으로서는 미분화 조혈 줄기 세포의 증식, 생식 세포의 분화 촉진, 비만 세포의 증식 촉진, 색소 세포의 증식 촉진 작용 등이 있다(Bio Science 용어 라이브러리 사이토카인·증식 인자 요우도사(1995) 미야조노 코헤이(宮園浩平), 스가무라 가즈오(菅村和夫) 편). SCF에는 막결합형(SCF-2) 및 단백질 분해 효소의 작용에 의해 절단된 막으로부터 유리하는 분비형(SCF-1)이 있는 것이 알려져 있다. SCF-2는 각화 세포 등에 결합한 채로 색소 세포의 SCF 리셉터에 결합하여 색소 세포의 증식을 활성화하고, 또한 SCF-1은 그 절단 부위에 있어서 절단되어 세포막으로부터 유리되어 색소 세포나 비만 세포의 SCF 리셉터에 결합하여 색소 세포의 증식을 활성화하고 또한 비만 세포의 증식 활성화 및 탈과립화를 초래한다(T. Kunisada et al., J. Exp. Med., Vol.187, No.10, (1998) pp.1565-1573). SCF의 이상 생산은 색소 세포의 이상 증식으로 이어지며, 멜라닌 생산을 항진시켜, 기미, 주근깨, 칙칙함 등의 원인이 된다. 또한, 비만 세포의 이상 증식, 이상 탈과립화로도 이어지며, 히스타민, 셀로토닌, LTB4 등의 화학적 매개물질의유리를 항진시키고(J. Grabbe et el., Arch Dermatol Res(1984)287:78-84), 소양, 피부 거칠어짐, 민감성 피부 등의 원인이 된다.
따라서, 이러한 소양, 피부 거칠어짐, 민감성 피부, 기미, 주근깨 등의 직접적인 원인이라고 생각되는 SCF의 생산, 방출을 효과적으로 억제할 수 있으면 종래에 없는 전혀 새롭고, 또한 더욱 유효한 소양, 피부 거칠어짐, 민감성 피부 및/또는 미백용 약제의 제공에 결부된다고 생각된다. 그러나, 종래 기술에 있어서 이러한 SCF 생산, 방출의 억제 활성을 갖는 물질 또는 생약도 그와 같은 물질 또는 생약의 효과적인 스크리닝 방법도 알려져 있지 않다. T. Kunisada et al(전술)은 드랜스제닉 마우스(transgenic mouse)를 이용한 동물 실험에 의해 비만 세포 및 색소 세포에 대한 SCF의 작용을 검토하고 있다. 그러나, 그와 같은 동물 실험의 이용은 시간 및 비용이 많아지기 때문에 다종 다양한 생약, 약제의 스크리닝에는 부적당하므로, 보다 간편하면서 또한 염가로 SCF 생산, 방출의 억제 활성을 갖는 유효 성분 또는 생약을 스크리닝할 수 있는 방법이 요구되고 있었다.
놀랍게도, 본 발명자는 인간 표피 각화 세포에 건조 등의 자극을 부여함으로써 SCF의 생산 또는 유리를 촉진시킬 수 있는 것을 발견하여, 그 결과 SCF의 생산 및/또는 방출을 효과적으로 억제할 수 있는 유효 성분을 효율적으로 스크리닝하는 것에 성공했다.
본 발명은 줄기 세포 인자(이하 「SCF」)의 생산 및/또는 방출을 억제함으로써 피부 소양, 피부 거칠어짐 또는 민감성 피부를 개선하거나 또는 미백 효과를 발휘하는 유효 성분의 스크리닝 방법, 및 이러한 유효 성분을 포함하는 소양, 피부 거칠어짐, 민감성 피부 및/또는 미백용 약제에 관한 것이다.
도 1은 건조 자극을 부여한 세포에 대한 각종 생약 추출물에 의한 SCF의 억제를 나타내는 그래프이다.
도 2는 건조 자극을 부여한 세포에 대한 각종 생약 추출물에 의한 SCF의 억제를 나타내는 그래프이다.
도 3은 자외선 자극에 의한 세포의 SCF 발현의 항진을 나타내는 그래프이다.
도 4는 약제 자극에 의한 세포의 SCF 발현의 항진을 나타내는 그래프이다.
도 5는 자외선 자극을 부여한 세포에 대한 각종 생약 추출물에 의한 SCF의 억제를 나타내는 그래프이다.
발명의 개시
즉, 본 발명은 제1 형태에 있어서, SCF의 생산 및/또는 방출을 억제함으로써소양, 피부 거칠어짐 또는 민감성 피부의 개선 효과 또는 미백 효과를 발휘하는 유효 성분을 스크리닝하는 방법으로서, SCF를 발현시키는 세포를 테스트 성분과 접촉시키고 해당 세포가 생산 및/또는 방출하는 SCF의 양을 측정하여 SCF의 생산 및/또는 방출량을 감소시키는 테스트 성분을 상기 유효 성분으로서 선정하는 방법으로서, 상기 SCF 발현 세포에 자극을 부여하여 SCF의 생산 및/또는 방출을 촉진시키는 것을 특징으로 하는 방법을 제공한다.
하나의 관점에서, 상기 자극은 건조 자극, 자외선 조사 자극 또는 약제 자극, 바람직하게는 건조 자극이다.
별도의 관점에서, 상기 스크리닝 방법은 상기 SCF 발현 세포를 상기 테스트 성분과 접촉시키고, 이어서 상기 세포에 자극을 부여한 다음 해당 세포가 생산 및/또는 방출하는 SCF의 양을 측정하여 상기 유효 성분을 선정하는 방법이다.
제2 형태에 있어서, 본 발명은 장미 추출물 장미수, 차잎 추출물, 홉 추출물, 산사나무 추출물, 팥 분말, 자작나무 추출물, 계피 추출물, 정향나무 추출물, 아르니카 추출물, 모란 추출물, 린덴, 클로렐라 추출물, 로만카모마일 추출물, 홍차 추출물, 유칼리나무 추출물, 창출 추출물 분말, 백출 추출물 분말, 우롱차 추출물 분말, 오노니스 추출물, 아선약 추출물, 포도잎 추출물, 방풍나물 추출물, 뽕나무 추출물, 파리에타리아 추출물, 안식향 추출물, 스테비아 추출물, 노송나무, 창포 뿌리 추출물, 대두 추출물, 조구등, 비누풀 추출물, 양아욱 추출물, 고추나물 추출물 및 쑥 추출물로 이루어지는 군으로부터 선택되는 하나 또는 복수를 포함하여 이루어지는 SCF 생산 및/또는 억제 피부 외용제를 제공한다.
제3 형태에 있어서, 본 발명은 SCF의 생산 및/또는 방출을 억제하는 성분을 소양 개선 유효 성분으로서 함유하는 소양용 피부 외용제를 제공한다.
하나의 관점에서, 상기 소양 개선 유효 성분은 홉 추출물, 산사나무 추출물, 팥 분말, 정향나무 추출물, 로만카모마일 추출물, 홍차 추출물, 유칼리나무 추출물, 창출 추출물 분말, 백출 추출물 분말, 우롱차 추출물 분말, 오노니스 추출물, 방풍나물 추출물, 파리에타리아 추출물, 안식향 추출물, 스테비아 추출물, 창포 뿌리 추출물, 조구등, 비누풀 추출물, 양아욱 추출물 및 고추나물 추출물로 이루어지는 군으로부터 선택되는 하나 또는 복수이다.
제4 형태에 있어서, 본 발명은 SCF의 생산 및/또는 방출을 억제하는 성분을 피부 거칠어짐 방지 유효 성분으로서 함유하는 피부 거칠어짐 방지용 피부 외용제를 제공한다.
하나의 관점에서, 상기 피부 거칠어짐 방지 유효 성분은 산사나무 추출물, 창출 추출물 분말, 백출 추출물 분말, 오노니스 추출물, 뽕나무 추출물, 파리에타리아 추출물, 안식향 추출물, 스테비아 추출물, 노송나무, 창포 뿌리 추출물, 조구등, 비누풀 추출물 및 양아욱 추출물로 이루어지는 군으로부터 선택되는 하나 또는 복수이다.
제5의 형태에 있어서, 본 발명은 SCF의 생산 및/또는 방출을 억제하는 성분을 민감성 피부 개선 유효 성분으로서 함유하는 민감성 피부용 피부 외용제를 제공한다.
하나의 관점에서, 상기 민감성 피부 개선 유효 성분은 장미 추출물 장미수,차잎 추출물, 홉 추출물, 산사나무 추출물, 팥 분말, 자작나무 추출물, 계피 추출물, 정향나무 추출물, 클로렐라 추출물, 홍차 추출물, 유칼리나무 추출물, 창출 추출물 분말, 백출 추출물 분말, 우롱차 추출물 분말, 오노니스 추출물, 아선약 추출물, 포도잎 추출물, 방풍나물 추출물, 뽕나무 추출물, 파리에타리아 추출물, 안식향 추출물, 스테비아 추출물, 노송나무, 창포 뿌리 추출물, 대두 추출물, 조구등, 비누풀 추출물, 양아욱 추출물, 고추나물 추출물 및 쑥 추출물로 이루어지는 군으로부터 선택되는 하나 또는 복수이다.
제6의 형태에 있어서, 본 발명은 SCF의 생산 및/또는 방출을 억제하는 성분을 미백 유효 성분으로서 함유하는 미백용 피부 외용제를 제공한다.
하나의 관점에서, 상기 미백 유효 성분은 장미 추출물 장미수, 오노니스 추출물, 아선약 추출물, 파리에타리아 추출물, 안식향 추출물, 비누풀 추출물, 클로렐라 추출물 및 유칼리나무 추출물로 이루어지는 군으로부터 선택되는 하나 또는 복수이다.
제7의 형태에 있어서, 본 발명은 SCF의 생산 및/또는 방출을 억제함으로써 소양, 피부 거칠어짐 또는 민감성 피부의 개선 효과 또는 미백 효과를 발휘하는 유효 성분을 인간 또는 포유 동물의 표피에 도포하는 것을 포함하여 이루어지는, 소양, 피부 거칠어짐 또는 민감성 피부의 개선 또는 미백 방법을 제공한다.
제8의 형태에 있어서, 본 발명은 자외선 자극에 의해 각화 세포내 또는 세포막 상에 발현되는 SCF를 억제하는 성분을 함유하는 약제를 제공한다.
하나의 관점에서 상기 성분은 장미 추출물 장미수, 차잎 추출물, 홉 추출물,산사나무 추출물, 팥 분말, 자작나무 추출물, 계피 추출물, 정향나무 추출물, 아르니카 추출물, 모란 추출물, 린덴, 클로렐라 추출물, 로만카모마일 추출물, 홍차 추출물, 유칼리나무 추출물, 창출 추출물 분말, 백출 추출물 분말, 우롱차 추출물 분말, 오노니스 추출물, 아선약 추출물, 포도잎 추출물, 방풍나물 추출물, 뽕나무 추출물, 파리에타리아 추출물, 안식향 추출물, 스테비아 추출물, 노송나무, 창포 뿌리 추출물, 대두 추출물, 조구등, 비누풀 추출물, 양아욱 추출물, 고추나물 추출물 및 쑥 추출물로 이루어지는 군으로부터 선택되는 하나 또는 복수이다.
별도의 관점에서, 상기 성분은 팥 분말, 아르니카 추출물, 오노니스 추출물 또는 안식향 추출물이다.
전술한 각 형태의 추출물은 이하와 같은 수법에 의해 얻은 것을 시험에 제공했다.
(1) 쑥, 계피, 팥 분말, 창포 뿌리, 스테비아는 물을 용매로 하여 실온으로부터 50℃까지 가온하여 수시간 추출한 후 통상법에 의해 각 추출물을 얻었다.
(2) 비누풀, 산사나무, 정향나무, 양아욱, 린덴, 모란, 유칼리나무, 안식향, 노송나무, 우롱차, 뽕나무, 대두, 아선약은 함수에탄올(30% 에탄올)을 용매로 하여 실온에서 일주간 침지ㆍ추출한 후 통상법에 의해 각 추출물을 얻었다.
(3) 홍차는 물 또는 함수에탄올(30% 에탄올)을 용매로 하여 가온(60℃)하여 5시간 추출한 후 통상법에 의해 추출물을 얻었다.
(4) 자작나무, 차잎, 고추나물, 오노니스, 아르니카, 파리에타리아, 클로렐라, 장미 추출물 장미수, 포도잎, 홉, 로만카모마일은 80% 또는 90% 에탄올수를 용매로 하여 60℃에서 3시간 또는 90℃에서 2시간 가온ㆍ추출한 후 통상법에 의해 얻은 것을 제공했다.
본 발명을 이하에 상세히 설명한다.
본원 발명은 SCF의 생산 및/또는 방출을 억제함으로써 소양, 피부 거칠어짐 또는 민감성 피부의 개선 효과 또는 미백 효과를 발휘하는 유효 성분을 스크리닝하는 방법을 제공한다. 이 스크리닝 방법은 SCF를 발현시키는 세포를 테스트 성분과 접촉시키고 상기 세포가 생산 및/또는 방출하는 SCF의 양을 측정하여 SCF의 생산 및/또는 방출량을 감소시키는 테스트 성분을 상기 유효 성분으로서 선정하는 것을 포함하여 이루어지는데, 상기 SCF 발현 세포에 자극을 부여하여 SCF의 생산 및/또는 방출을 촉진시키는 것을 특징으로 한다.
본 발명자는 인간 각화 세포와 같은 피부 세포에 건조 등의 자극을 부여하면 세포의 SCF의 생산 및/또는 방출이 촉진되는 것을 발견했다. 따라서, 세포에 이러한 자극을 부여함으로써 소양, 피부 거칠어짐, 민감성 피부나 기미, 주근깨 등의 발증으로 이어지는 SCF의 이상 발현을 세포에 대하여 유도시킬 수 있다. 이것을 이용하여 본 발명자는 SCF의 생산 및/또는 방출을 억제하는 테스트 성분을 세포에 작용시킬 때, SCF의 생산 및/또는 방출을 촉진시키는 자극을 부여해 둠으로써 SCF의 발현을 항진시켜 SCF의 생산 및/또는 방출을 효과적으로 억제할 수 있는 유효 성분을 효율적으로 스크리닝하는 것에 성공했다. 이러한 자극으로서는 건조 자극 외, 자외선 조사 자극, 열자극(가열 및 냉각), 약제 자극(예컨대, 폴스콜린, 테오필린), 침투압 자극, 산화 자극 등의 스트레스를 들 수 있다.
본 발명에 따른 스크리닝 방법에 있어서의 세포의 자극은 세포에 테스트 성분을 작용시키기 전, 동시, 또는 후에 실시할 수 있다. 바람직하게는 세포에 테스트 성분을 작용시킨 후에 세포에 자극을 부여한다.
자세하게는 해당 스크리닝 방법은 예컨대 하기와 같이 하여 실시할 수 있다.
(1) SCF 생산 세포를 적당한 배양액을 이용하여 배양한다(예컨대, 약 25∼37℃, 바람직하게는 약 37℃에서 수시간∼수일, 바람직하게는 약 72시간).
(2) 테스트 성분을 적당한 세포 배양액에 의해 소정의 농도(예컨대, 0.0001%-0.01%)로 희석한다.
(3) (1)의 세포 배양액을 상기 희석 테스트 성분과 교환하고, 항온처리한다(예컨대, 약 25∼37℃, 바람직하게는 약 37℃에서 수시간∼수일, 바람직하게는 약24시간). 이 때, 임의적으로 대조군으로서 상기 테스트 성분을 포함하지 않는 매체를 마찬가지로 작용시킨 세포도 준비해 둔다.
(4) 다음으로, 상기 테스트 성분의 작용된 세포에 자극을 부여한다. 자극이 건조 자극인 경우, 상기 세포 배양액의 상청액을 제거하고, 건조 조건하에서 항온처리한다. 이 때, 임의적으로 대조군으로서 상기 자극을 부여하지 않는 세포도 준비해 둔다.
(5) 상기 자극을 부여한 세포에 배지를 첨가하고 항온처리한다(예컨대, 약 25∼37℃, 바람직하게는 약 37℃에서 약 30분∼4시간, 바람직하게는 약 2시간).
(6) 상기 세포의 상청액을 회수하여 SCF의 양을 측정하고, SCF의 생산 및/또는 방출을 억제하는 성분을 선정한다.
SCF의 생산ㆍ방출량의 억제는 매체만을 첨가한 경우를 100%로 하여 테스트 성분을 가했을 때 SCF 생산량이 25% 정도 저하했을 때를 억제로 본다. 다만, 현저한 세포 독성(예컨대, 75% 정도까지의 호흡 활성의 저하 등)이 일어나지 않는 농도 범위에서 테스트 성분을 첨가하는 것으로 한다.
사용하는 SCF 생산 세포로서는 예컨대 인간 또는 그 외의 포유 동물, 예컨대 랫, 마우스, 토끼 등에서 유래하는 각화 세포, 선유아세포, 혈관 내피 세포 등일 수 있다. 바람직하게는 인간 각화 세포를 사용한다.
전술한 바와 같이, 자극에는 건조 자극, 자외선 조사 자극, 열자극(가열 및 냉각), 약제 자극(예컨대, 폴스콜린, 테오필린), 침투압 자극, 산화 자극 등의 스트레스를 들 수 있다. 건조 자극의 경우, 예컨대 세포를 CO2항온처리기 내에서 CO2약 1∼5%, 습도 약 0∼100%, 온도 25∼37℃의 분위기하에서 배지를 제거하여 적당한 시간, 예컨대 약 15분∼6시간, 바람직하게는 약 1시간 방치함으로써 세포에 건조 자극을 부여할 수 있다. 자외선 조사 자극의 경우, 예컨대 세포에 약290∼320 nm, 10∼60 mJ/cm2로 자외선 조사함으로써 세포에 자극을 부여할 수 있다. 열자극의 경우, 예컨대 세포를 CO2항온처리기 내에서 CO2약 1∼5%, 습도 약 0∼100%, 온도 4∼25℃ 또는 37∼42℃에서 적당한 시간, 예컨대 약 5분∼6시간, 바람직하게는 약 1시간 방치함으로써 세포에 자극을 부여할 수 있다.
본 발명의 스크리닝 방법은 바람직하게는 시험관내에서 행해지나 생체내에서 실시할 수도 있다.
SCF의 측정
본 발명에 있어서 SCF 발현 세포가 생산 및/또는 방출하는 SCF의 측정은 바람직하게는 세포가 그 배양액 중에 방출하는 SCF 또는 파쇄한 세포나 세포의 막획분에 포함되는 SCF를 정성 또는 정량 측정함으로써 실시한다. 측정하는 SCF는 세포막으로부터 유리하여 세포 배양액에 방출되는 분비형(SCF-1)이거나, 또는 세포의 막획분에 포함되는 막결합형(SCF-2)일 수 있다. SCF의 측정은 당업계 주지의 방법, 예컨대, 면역 측정 방법, 예컨대 효소 라벨을 이용하는 ELISA법, 방사성 라벨을 이용하는 RIA법, 항체와 항원과의 반응으로 생기는 혼탁의 흡광도의 변화로부터 항원량을 정량하는 면역 비탁법, 항원과 항체 감작 라텍스 비드 또는 항체 감작 적혈구와의 반응에 의해서 생기는 응집 반응의 정도로부터 항원량을 측정하는 라텍스 응집법이나 적혈구 응집법 등 여러 가지 방법을 들 수 있다. 면역 측정 방식에는 경합법이나 샌드위치법을 들 수 있다. 그 외에 전기 영동법, 등전점 전기 영동법, 크로마토그래피법, 예컨대 겔 여과 크로마토그래피법, 이온 교환 크로마토그래피법, 역상 크로마토그래피법, 고속 액체 크로마토그래피법, 웨스턴 블롯(Western Blot)법 등에 의해 실시할 수 있다. 본 발명에 있어서 바람직하게는 SCF의 측정은 ELISA에 의해 실시한다.
상기 면역 측정 방법에서 사용하는 SFC에 특이적인 항체는 모노클로날 항체 또는 폴리클로날 항체일 수 있다. 모노클로날 항체가 특히 바람직하다. 모노클로날 항체나 폴리클로날 항체의 작성은 당업자에게 주지이다.
본 발명자는 본 발명에 따른 스크리닝 방법에 따라서 이하의 생약이 SCF 생산 세포 유래의 SCF의 양을 감소시킬 수 있는 것을 발견했다:
장미 추출물 장미수, 차잎 추출물, 홉 추출물, 산사나무 추출물, 팥 분말, 자작나무 추출물, 계피 추출물, 정향나무 추출물, 아르니카 추출물, 모란 추출물, 린덴, 클로렐라 추출물, 로만카모마일 추출물, 홍차 추출물, 유칼리나무 추출물, 창출 추출물 분말, 백출 추출물 분말, 우롱차 추출물 분말, 오노니스 추출물, 아선약 추출물, 포도잎 추출물, 방풍나물 추출물, 뽕나무 추출물, 파리에타리아 추출물, 안식향 추출물, 스테비아 추출물, 노송나무, 창포 뿌리 추출물, 대두 추출물, 조구등, 비누풀 추출물, 양아욱 추출물, 고추나물 추출물, 쑥 추출물. 이러한 생약의 상세한 내용에 관해서는 일본 범용 화장품 원료집 제4판(약사일보)을 참조하기 바란다.
상기 생약 추출물은 통상법에 의해 원료 식물로부터 추출된 것으로, 추출법에는 제한되지 않고, 예컨대, 정향나무 추출물이면 일본 약국방 정향나무를 건조하여, 잘게 자른 것 10 kg에 50 v/v%의 에탄올(화장품 원료 기준, 무수에탄올 및 동정제수로 조제)을 가하여 24시간 침지하고, 압착 분리하여 추출물을 얻는 것에 의해 획득할 수 있다.
본 발명에 있어서의 소양, 피부 거칠어짐, 민감성 피부는 세포에 의해 방출된 SCF가 비만 세포의 SCF 리셉터에 결합함으로써 유도된 것을 말한다. 소양이란 넓은 의미에 있어서의 피부, 두피의 가려움을 의미하는데, 예컨대 건조, 아토피성 피부염, 노인성 건피증에 의한 소양 등을 들 수 있다. 피부 거칠어짐이란 넓은 의미에 있어서의 피부가 열화한 상태를 의미하고, 소양에 의한 소파나 아토피성 피부염의 악화 열화의 결과 야기되는 피부 거칠어짐, 건조에 의한 피부 거칠어짐 등을 들 수 있다. 민감성 피부란 피자극성이 항진한 상태의 피부를 의미하고, 외계로부터의 비특이적인 물리화학적 자극, 예컨대 소파, 온열, 발한, 일광, 의복, 부착물 등, 또한 정신적 스트레스 자극에 대하여 과민하게 반응하는 피부의 상태를 가리킨다.
본 발명에 있어서의 미백 효과란, 햇볕에 탐, 건조 그 외의 원인에 의해 세포에 의해 방출된 SCF가 색소 세포의 SCF 리셉터에 결합함으로써 유도되는 멜라닌의 과잉 생산에 의해 야기되는 기미, 주근깨, 칙칙함 등을 개선하는 것을 의미한다.
본 발명의 소양, 피부 거칠어짐, 민감성 피부 및 미백용 약제는 통상 상기SCF 생산ㆍ방출 억제 유효 성분을 물이나 에탄올 등의 수성 용매에 함유시켜 이용된다. 본 발명의 SCF 생산·방출 억제 성분의 배합량은 특별히 제한되지 않으나, 고형분 환산으로 0.00001∼0.01 중량%, 특히 0.0001∼0.005 중량% 정도의 범위가 바람직하다. 또한, 본 발명에 따른 약제를 입욕제로서 조제하는 경우, 사용시에 통상 100∼1000배 정도로 희석되기 때문에 배합은 이것을 고려하여 고농도로 처방되는 것이 바람직하다. 상기 수성 용매로서는 저급 알콜이 바람직하며, 저급 알콜의 함유량은 본 발명의 약제중에 20∼80 중량%, 더욱 바람직하게는 40∼60 중량%이다.
또한, 본 발명의 소양, 피부 거칠어짐, 민감성 피부 및 미백용 약제에는 상기 필수 성분 이외에, 통상 화장품이나 의약품 등의 피부 외용제에 이용되는 성분, 예컨대, 그 외의 미백제, 보습제, 산화 방지제, 유성 성분, 자외선 흡수제, 계면활성제, 증점제, 알콜류, 분말 성분, 색제, 수성 성분, 물, 각종 피부 영양제 등을 필요에 따라서 적절하게 배합할 수 있다.
그 외, 약제의 용도에 맞춰 에데트산이나트륨, 에데트산삼나트륨, 시트르산나트륨, 폴리인산나트륨, 메타인산나트륨, 글루콘산 등의 금속봉쇄제, 카페인, 탄닌, 베라파밀, 트라넥삼산 및 그 유도체, 감초 추출물, 글라브리딘, 모과나무의 과실의 열수추출물, 각종 생약, 초산토코페롤, 글리틸리틴산 및 그 유도체 또는 그 염 등의 약제, 비타민 C, 아스코르빈산인산마그네슘, 아스코르빈산글루코시드, 알부틴, 홍귤나무산 등의 다른 미백제, 글루코오스, 프룩토스, 만노스, 자당, 트레할로스 등의 당류, 레티노인산, 레티놀, 초산레티놀, 팔미틴산레티놀 등의 비타민 A류 등도 적절하게 배합할 수 있다.
본 발명의 소양, 피부 거칠어짐, 민감성 피부 및 미백용 약제는 그 용도에 맞춰 예컨대 화장료, 의약품, 의약부외품 등의 외용제, 예컨대 화장수, 크림, 유액, 로션, 팩, 목욕용제, 연고, 헤어 로션, 헤어 토닉, 헤어 리퀴드, 샴푸, 린스, 양모ㆍ육모제 등 종래 피부 외용제에 이용하는 것이면 어느 것이라도 좋고, 제형은 특별히 문제삼지 않는다.
실시예
다음에 실시예에 의해서 본 발명을 더욱 상세히 설명한다.
실험예 1
건조 자극에 의해 각화 세포막으로부터 방출되는 SCF의 측정과 억제 약제의 스크리닝
시판의 인간 표피 각화 세포(신생아; Cryo NHEK-Neo, 산코순약)를 시판의 무혈청 배지(Defined Keratinocyte-SFM, GIBC0사)를 이용하여 배양했다. 12구멍 미세 평판에 1 ×105cells/mL로 세포를 뿌려, 콘플루엔트가 될 때까지 약 37℃에서 약 72시간 배양했다.
물 또는 에탄올로 추출한 도 1 및 2에 나타내는 각 생약 추출물을 2% w/v가 되도록 70% 에탄올에 용해했다.
배양액중에 최종농도가 0.005% w/v가 되도록 테스트 생약 추출물을 가하고 37℃에서 24시간 항온처리했다. 대조군으로서 에탄올(EtOH)만을 가한 것도 항온처리했다. 최후의 2시간은 세포의 활성을 검토하기 위해서, 즉 테스트 생약 추출물의 세포 장해 작용에 의한 영향을 조사하기 위해서 alamarBlue TM(바이오소스·인터내셔널)을 10%가 되도록 첨가하고 상청의 형광 강도(excitation 560nm, emission 590nm)를 측정했다.
건조 자극으로서 상청을 완전히 제거한 후 CO2항온처리기 내에 1시간 방치했다.
이어서 배지를 첨가하고 그 2시간 후에 상청을 회수했다. 상청중 SCF량을 시판의 ELISA법에 의한 측정 키트(R&D Systems사)로 정량했다.
건조 자극을 가하지 않은 것을 대조로 하여, 테스트 생약 추출물의 SCF량 억제 작용을 평가했다.
동시에 테스트 생약 추출물이 갖는 세포 상해성을 alamarBlue TM의 환원량을 지표로 평가했다.
그 결과를 도 1 및 2에 나타낸다. 도 1 및 2의 (a)는 각 생약 추출물을 첨가한 경우의 alamarBlue TM의 환원량을 나타내고, (b)는 각 생약 추출물을 첨가하고, 건조 자극을 부여한 세포의 배지 중 유리 SCF의 양으로부터, 각 생약 추출물을 첨가하나 건조 자극을 부여하지 않은 세포의 배지 중 유리 SCF를 뺀 값을 나타낸다. 도 1 및 2의 결과로부터 분명한 바와 같이 각종 생약 추출물은 에탄올과 비교하여 배양액 중의 SCF 양을 유의하게 감소시키므로 SCF의 생산 및/또는 방출을 효과적으로 억제할 수 있는 것을 알았다.
실험예 2
각종 자극에 의한 각화 세포막상에서의 SCF의 발현의 항진
10 cm 평판에 150만개의 각화 세포를 파종하고 72시간 배양한 후에, (1) 배지를 PBS(-)로 교환하고, UVB를 20 mJ/cm2로 조사하여 즉시 PBS(-)를 배지로 교환하거나, (2) 폴스콜린을 첨가하거나 또는 (3) 테오필린을 첨가하여, 세포에 자극을 부여했다. 24시간 배양후 세포를 회수하고, 50 mM 인산완충액(pH7.8)+프로테아제 저해제 용액 200 μl에 세포를 확산시킨 다음 초음파 파쇄기에 의해 30초씩 5회 4℃에서 세포를 파쇄했다. 이것을 10,000 g, 20분, 4℃에서 원심 분리하고, 상청을 더욱 100,000 g, 60분 4℃에서 원심 분리했다. 얻어진 팰릿을 25 mM 인산완충액(pH6.8) + 0.1% Triton-X100 용액 100 μl에 녹이고 막획분 단백질 추출액으로 했다. 이 용액의 단백질량을 정법에 의해 측정하고, 또한 SCF량을 측정하여 SCF량/단백질량의 값을 얻었다.
그 결과를 도 3 및 4에 나타낸다. 도면의 결과로부터 분명한 바와 같이 세포에 자외선 자극, 또는 폴스콜린이나 테오필린 등의 약제 자극을 부여하면 세포내 또는 세포막상에서의 SCF의 발현이 항진되는 것이 분명해졌다.
실험예 3
자외선 자극에 의해 각화 세포막 상에 발현되는 SCF의 측정과 억제 약제의 스크리닝
10 cm 평판에 150만개의 각화 세포를 파종하고 72시간 배양한 후 배지를 PBS(-)로 교환, UVB를 20 mJ/cm2로 조사하고 즉시 PBS(-)를 배지로 교환한다. 거기에 스크리닝 대상 생약을 첨가하고 24시간 배양후 세포를 회수하고, 50 nm 인산완충액(pH7.8) + 프로테아제 저해제 용액 200 μl에 세포를 확산시킨 다음 초음파 파쇄기에 의해 30초씩 5회 4℃에서 세포를 파쇄했다. 이것을 10,000 g, 20분, 4℃에서 원심 분리하고, 상청을 100,000 g, 60분 4℃에서 추가로 원심 분리했다. 얻어진 팰릿을 25 mM 인산완충액(pH6.8) + 0.1% Triton-X100 용액 100 μl에 녹여, 막획분 단백질 추출액으로 했다. 이 용액의 단백질량을 정법에 의해 측정하고, 또한 SCF량을 측정하여, SCF량/단백질량의 값을 얻었다. 이 값에 관해서 대상 약제 첨가군 중 용매만을 첨가한 군과 비교해서 25% 이하로 저하시켜 후보 생약을 상기 억제 약제로 한다.
그 결과를 도 5에 나타낸다. 도 5의 결과로부터 분명한 바와 같이 각종 생약 추출물로 처리된 세포는 자외선 조사만으로 처리한 세포와 비교하여 SCF의 발현이 유의하게 억제된 것을 알았다.
이하에 여러 가지 제형의 본 발명에 의한 생약 추출물 함유 약제의 처방예를 열거한다.
실시예 1
바디 크림
배합량(중량부)
메틸폴리실록산 3
데카메틸시클로펜타실록산 13
옥타메틸시클로테트라실록산 12
폴리옥시에틸렌·메틸폴리실록산 공중합체 1
에탄올 2
이소프로판올 1
글리세린 3
디프로필렌글리콜 5
폴리에틸렌글리콜6000 5
메타인산나트륨 0.05
DL-α-토코페롤 2-L-아스코르빈산인산디에스테르칼륨 0.1
초산 DL-α-토코페롤 O.1
카페인 0.1
회향풀 추출물 0.1
하마멜리스 추출물 0.1
인삼 추출물 0.1
창출 추출물 분말 0.005
L-멘톨 적량
파라옥시안식향산에스테르 적량
에데트산3나트륨 0.05
디모르폴리노피리다진 0.01
트리메톡시계피산메틸비스(트리메틸실록시)실릴이소펜틸 0.1
황산화철 적량
티탄산코발트 적량
디메틸디스테아릴암모늄헥토라이트 1.5
폴리비닐알콜 0.1
히드록시에틸셀룰로오스 O.1
정제수 나머지
트리메틸실록시규산 2
향료 적량
실시예 2
유액
배합량(중량부)
메틸폴리실록산 2
베헤닐알콜 1
크실리톨 1
바틸알콜 0.5
글리세린 5
1,3-부틸렌글리콜 7
에리트리톨 2
경화유 3
스쿠알랜 6
테트라2-에틸헥산산펜타에리트리톨 2
이소스테아린산폴리옥시에틸렌글리세릴 1
모노스테아린산폴리옥시에틸렌글리세린 1
안식향 추출물 0.001
수산화칼륨 적량
헥사메타인산나트륨 0.05
페녹시에탄올 적량
카르복시비닐 중합체 0.11
정제수 나머지
실시예 3
화장수
배합량(중량부)
글리세린 2
1,3-부틸렌글리콜 4
에리트리톨 1
폴리옥시에틸렌메틸글루코시드 1
폴리옥시에틸렌경화피마자오일 0.5
시트르산 0.02
시트르산나트륨 0.08
페녹시에탄올 0.25
N-야자유지방산아실 L-아르기닌에틸·DL-피롤리돈카르복실산 0.1
조구등 0.0001
정제수 나머지
실시예 4
미백 화장수
배합량(중량부)
에틸알콜 10
디프로필렌글리콜 1
폴리에틸렌글리콜 1000 1
폴리옥시에틸렌메틸글루코시드 1
호호바오일 0.01
트리2-에틸헥산산글리세릴 0.1
폴리옥시에틸렌경화피마자오일 0.2
디이소스테아린산폴리글리세릴 0.15
N-스테아로일-L-글루타민산나트륨 0.1
시트르산 0.04
시트르산나트륨 0.18
수산화칼륨 0.4
글리틸리틴산디칼륨 0.1
염산아르기닌 0.1
L-아스코르빈산2-글루코시드 2
황금 추출물 0.1
범의귀 추출물 0.1
파라벤 0.12
광대수염 추출물 0.1
디부틸히드록시톨루엔 0.01
에데트산3나트륨 0.05
파라메톡시계피산2-에틸헥실 0.01
비누풀 추출물 0.005
정제수 나머지
미네랄수 3
향료 적량
실시예 5
트리트먼트 마스크
배합량(중량부)
에탄올 10
1,3-부틸렌글리콜 6
폴리에틸렌글리콜4000 2
올리브오일 1
마카데미아너트 오일 1
히드록시스테아린산피토스테릴 0.05
젖산 0.05
젖산나트륨액(50%) 0.2
L-아스코르빈산황산에스테르2나트륨 0.1
DL-α-토코페롤2-L-아스크로빈산인산디에스테르칼륨 0.1
비타민E아세테이트 0.1
생선 콜라겐 0.1
콘드로이틴황산토륨 0.1
파라옥시안식향산에스테르 0.1
카르복시메틸셀룰로오스나트륨 0.2
폴리비닐알콜 12.5
트라넥삼산 1
백출 추출물 분말 0.001
정제수 나머지
향료 적량
실시예 6
미백 엣센스
배합량(중량부)
바셀린 2
메틸폴리실록산 2
에틸알콜 5
베헤닐알콜 0.5
바틸알콜 0.2
글리세린 7
1,3-부틸렌글리콜 5
폴리에틸렌글리콜20000 0.5
호호바 오일 3
스쿠알랜 2
히드록시스테아린산콜레스테릴 0.5
테트라2-에틸헥산산펜타에리트리톨 1
폴리옥시에틸렌경화피마자오일 1
수산화칼륨 0.1
피로아황산나트륨 0.01
헥사메타인산나트륨 0.05
글리틸레틴산스테아릴 0.1
판토테닐에틸에테르 0.1
알부틴 7
초산토코페롤 0.1
히알론산나트륨 0.05
유칼리나무 추출물 O.001
파라옥시안식향산에스테르 적량
에데트산3나트륨 0.05
4-t-부틸-4'-메톡시디벤조일메탄 0.1
디파라메톡시계피산모노-2-에틸헥산산글리세릴 0.1
황산화철 적량
크산탄검 0.1
카르복시비닐폴리머 0.2
정제수 나머지
실시예 7
소양용 입욕제
배합량(중량부)
유동파라핀 35
폴리에틸렌글리콜 20
스쿠알랜 5
2-에틸헥산산세틸 5
폴리옥시에틸렌경화피마자오일 5
시트르산 0.1
시트르산나트륨 0.2
글리신 0.5
히알론산나트륨 0.3
페녹시에탄올 0.5
파리에타리아 추출물 1
정제수 나머지
향료 적량
본 발명에 따라서, SCF의 생산·방출을 억제하는 생약을 효율적으로 스크리닝할 수 있다.

Claims (16)

  1. 줄기 세포 인자(이하 「SCF」)의 생산 및/또는 방출을 억제함으로써 소양, 피부 거칠어짐 또는 민감성 피부의 개선 효과 또는 미백 효과를 발휘하는 유효 성분을 스크리닝하는 방법으로서, SCF를 발현하는 세포를 테스트 성분과 접촉시켜 상기 세포가 생산 및/또는 방출하는 SCF의 양을 측정하여 SCF의 생산 및/또는 방출량을 감소시키는 테스트 성분을 상기 유효 성분으로서 선정함에 있어, 상기 SCF 발현 세포에 자극을 가하여 SCF의 생산 및/또는 방출을 촉진시키는 것을 특징으로 하는 방법.
  2. 제1항에 있어서, 상기 자극이 건조 자극, 자외선 조사 자극 또는 약제 자극인 것인 스크리닝 방법.
  3. 제1항 또는 제2항에 있어서, 상기 SCF 발현 세포를 상기 테스트 성분과 접촉시키고, 이어서 상기 세포에 자극을 가한 다음, 상기 세포가 생산 및/또는 방출하는 SCF의 양을 측정하여 상기 유효 성분을 선정하는 것인 스크리닝 방법.
  4. 장미 추출물 장미수, 차잎 추출물, 홉 추출물, 산사나무 추출물, 팥 분말, 자작나무 추출물, 계피 추출물, 정향나무 추출물, 아르니카 추출물, 모란 추출물, 린덴, 클로렐라 추출물, 로만카모마일 추출물, 홍차 추출물, 유칼리나무 추출물,창출 추출물 분말, 백출 추출물 분말, 우롱차 추출물 분말, 오노니스 추출물, 아선약 추출물, 포도잎 추출물, 방풍나물 추출물, 뽕나무 추출물, 파리에타리아 추출물, 안식향 추출물, 스테비아 추출물, 노송나무, 창포 뿌리 추출물, 대두 추출물, 조구등, 비누풀 추출물, 양아욱 추출물, 고추나물 추출물 및 쑥 추출물로 이루어지는 군으로부터 선택되는 하나 또는 복수를 포함하여 이루어지고, SCF 생산 및/또는 방출을 억제하는 피부 외용제.
  5. SCF의 생산 및/또는 방출을 억제하는 성분을 소양 개선 유효 성분으로서 함유하는 소양용 피부 외용제.
  6. 제5항에 있어서, 상기 소양 개선 유효 성분은 홉 추출물, 산사나무 추출물, 팥 분말, 정향나무 추출물, 로만카모마일 추출물, 홍차 추출물, 유칼리나무 추출물, 창출 추출물 분말, 백출 추출물 분말, 우롱차 추출물 분말, 오노니스 추출물, 방풍나물 추출물, 파리에타리아 추출물, 안식향 추출물, 스테비아 추출물, 창포 뿌리 추출물, 조구등, 비누풀 추출물, 양아욱 추출물 및 고추나물 추출물로 이루어지는 군으로부터 선택되는 하나 또는 복수를 포함하여 이루어지는 것인 소양용 피부 외용제.
  7. SCF의 생산 및/또는 방출을 억제하는 성분을 피부 거칠어짐 방지 유효 성분으로서 함유하는 피부 거칠어짐 방지용 피부 외용제.
  8. 제7항에 있어서, 상기 피부 거칠어짐 방지 유효 성분은 산사나무 추출물, 창출 추출물 분말, 백출 추출물 분말, 오노니스 추출물, 뽕나무 추출물, 파리에타리아 추출물, 안식향 추출물, 스테비아 추출물, 노송나무, 창포 뿌리 추출물, 조구등, 비누풀 추출물 및 양아욱 추출물로 이루어지는 군으로부터 선택되는 하나 또는 복수를 포함하여 이루어지는 것인 피부 거칠어짐 방지용 피부 외용제.
  9. SCF의 생산 및/또는 방출을 억제하는 성분을 민감성 피부 개선 유효 성분으로서 함유하는 민감성 피부용 피부 외용제.
  10. 제9항에 있어서, 상기 민감성 피부 개선 유효 성분은 장미 추출물 장미수, 차잎 추출물, 홉 추출물, 산사나무 추출물, 팥 분말, 자작나무 추출물, 계피 추출물, 정향나무 추출물, 클로렐라 추출물, 홍차 추출물, 유칼리나무 추출물, 창출 추출물 분말, 백출 추출물 분말, 우롱차 추출물 분말, 오노니스 추출물, 아선약 추출물, 포도잎 추출물, 방풍나물 추출물, 뽕나무 추출물, 파리에타리아 추출물, 안식향 추출물, 스테비아 추출물, 노송나무, 창포 뿌리 추출물, 대두 추출물, 조구등, 비누풀 추출물, 양아욱 추출물, 고추나물 추출물 및 쑥 추출물로 이루어지는 군으로부터 선택되는 하나 또는 복수를 포함하여 이루어지는 민감성 피부용 피부 외용제.
  11. SCF의 생산 및/또는 방출을 억제하는 성분을 미백 유효 성분으로서 함유하는 것인 미백용 피부 외용제.
  12. 제11항에 있어서, 상기 미백 유효 성분은 장미 추출물 장미수, 오노니스 추출물, 아선약 추출물, 파리에타리아 추출물, 안식향 추출물, 비누풀 추출물, 클로렐라 추출물 및 유칼리나무 추출물로 이루어지는 군으로부터 선택되는 하나 또는 복수를 포함하여 이루어지는 것인 미백용 피부 외용제.
  13. SCF의 생산 및/또는 방출을 억제함으로써 소양, 피부 거칠어짐 또는 민감성 피부의 개선 효과 또는 미백 효과를 발휘하는 유효 성분을 인간 또는 포유 동물의 표피에 도포하는 단계를 포함하여 이루어지는, 소양, 피부 거칠어짐 또는 민감성 피부의 개선 또는 미백 방법.
  14. 자외선 자극에 의해 각화 세포내 또는 세포막 상에 발현되는 SCF를 억제하는 성분을 함유하는 약제.
  15. 제14항에 있어서, 상기 성분은 장미 추출물 장미수, 차잎 추출물, 홉 추출물, 산사나무 추출물, 팥 분말, 자작나무 추출물, 계피 추출물, 정향나무 추출물, 아르니카 추출물, 모란 추출물, 린덴, 클로렐라 추출물, 로만카모마일 추출물, 홍차 추출물, 유칼리나무 추출물, 창출 추출물 분말, 백출 추출물 분말, 우롱차 추출물 분말, 오노니스 추출물, 아선약 추출물, 포도잎 추출물, 방풍나물 추출물, 뽕나무 추출물, 파리에타리아 추출물, 안식향 추출물, 스테비아 추출물, 노송나무, 창포 뿌리 추출물, 대두 추출물, 조구등, 비누풀 추출물, 양아욱 추출물, 고추나물 추출물 및 쑥 추출물로 이루어지는 군으로부터 선택되는 하나 또는 복수인 것인 약제.
  16. 제14항에 있어서, 상기 성분은 팥 분말, 아르니카 추출물, 오노니스 추출물 또는 안식향 추출물인 것인 약제.
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