[go: up one dir, main page]
More Web Proxy on the site http://driver.im/

KR20000068229A - 안정한 비-흡습성의 결정성 형태의 ｎ-[ｎ-ｎ-(４-(피페리딘-４-일)부타노일)-ｎ-에틸글리실] 화합물 - Google Patents

안정한 비-흡습성의 결정성 형태의 ｎ-[ｎ-ｎ-(４-(피페리딘-４-일)부타노일)-ｎ-에틸글리실] 화합물 Download PDF

Info

Publication number
KR20000068229A
KR20000068229A KR1019997001362A KR19997001362A KR20000068229A KR 20000068229 A KR20000068229 A KR 20000068229A KR 1019997001362 A KR1019997001362 A KR 1019997001362A KR 19997001362 A KR19997001362 A KR 19997001362A KR 20000068229 A KR20000068229 A KR 20000068229A
Authority
KR
South Korea
Prior art keywords
alkyl
compound
cycloalkyl
cycloalkylalkyl
acid
Prior art date
Application number
KR1019997001362A
Other languages
English (en)
Inventor
츠르잔조피아제이.
멘셀제임스제이.
톨레도-벨라스퀴즈데이비드
윈디쉬빈센트
우드워드릭지.
살라자리차드에이.
베무리나라시마엠.
가데토안토니제이.
파워스매튜알.
커비아크그레고리지.
리우로버트씨.
바나쎄베노이트제이.
쉐어빈제임스피.
로드리구에즈월터
슬레데스키아담더블유.
Original Assignee
오흘러 로스 제이.
아벤티스 파마슈티칼즈 프로덕츠 인코포레이티드
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by 오흘러 로스 제이., 아벤티스 파마슈티칼즈 프로덕츠 인코포레이티드 filed Critical 오흘러 로스 제이.
Publication of KR20000068229A publication Critical patent/KR20000068229A/ko

Links

Classifications

    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07D—HETEROCYCLIC COMPOUNDS
    • C07D211/00—Heterocyclic compounds containing hydrogenated pyridine rings, not condensed with other rings
    • C07D211/04—Heterocyclic compounds containing hydrogenated pyridine rings, not condensed with other rings with only hydrogen or carbon atoms directly attached to the ring nitrogen atom
    • C07D211/06—Heterocyclic compounds containing hydrogenated pyridine rings, not condensed with other rings with only hydrogen or carbon atoms directly attached to the ring nitrogen atom having no double bonds between ring members or between ring members and non-ring members
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K5/00—Peptides containing up to four amino acids in a fully defined sequence; Derivatives thereof
    • C07K5/02—Peptides containing up to four amino acids in a fully defined sequence; Derivatives thereof containing at least one abnormal peptide link
    • C07K5/021—Peptides containing up to four amino acids in a fully defined sequence; Derivatives thereof containing at least one abnormal peptide link containing the structure -NH-(X)n-C(=0)-, n being 5 or 6; for n > 6, classification in C07K5/06 - C07K5/10, according to the moiety having normal peptide bonds
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P7/00—Drugs for disorders of the blood or the extracellular fluid
    • A61P7/02—Antithrombotic agents; Anticoagulants; Platelet aggregation inhibitors
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P9/00—Drugs for disorders of the cardiovascular system
    • A61P9/10—Drugs for disorders of the cardiovascular system for treating ischaemic or atherosclerotic diseases, e.g. antianginal drugs, coronary vasodilators, drugs for myocardial infarction, retinopathy, cerebrovascula insufficiency, renal arteriosclerosis
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07D—HETEROCYCLIC COMPOUNDS
    • C07D211/00—Heterocyclic compounds containing hydrogenated pyridine rings, not condensed with other rings
    • C07D211/04—Heterocyclic compounds containing hydrogenated pyridine rings, not condensed with other rings with only hydrogen or carbon atoms directly attached to the ring nitrogen atom
    • C07D211/06—Heterocyclic compounds containing hydrogenated pyridine rings, not condensed with other rings with only hydrogen or carbon atoms directly attached to the ring nitrogen atom having no double bonds between ring members or between ring members and non-ring members
    • C07D211/08—Heterocyclic compounds containing hydrogenated pyridine rings, not condensed with other rings with only hydrogen or carbon atoms directly attached to the ring nitrogen atom having no double bonds between ring members or between ring members and non-ring members with hydrocarbon or substituted hydrocarbon radicals directly attached to ring carbon atoms
    • C07D211/18—Heterocyclic compounds containing hydrogenated pyridine rings, not condensed with other rings with only hydrogen or carbon atoms directly attached to the ring nitrogen atom having no double bonds between ring members or between ring members and non-ring members with hydrocarbon or substituted hydrocarbon radicals directly attached to ring carbon atoms with substituted hydrocarbon radicals attached to ring carbon atoms
    • C07D211/34—Heterocyclic compounds containing hydrogenated pyridine rings, not condensed with other rings with only hydrogen or carbon atoms directly attached to the ring nitrogen atom having no double bonds between ring members or between ring members and non-ring members with hydrocarbon or substituted hydrocarbon radicals directly attached to ring carbon atoms with substituted hydrocarbon radicals attached to ring carbon atoms with hydrocarbon radicals, substituted by carbon atoms having three bonds to hetero atoms with at the most one bond to halogen, e.g. ester or nitrile radicals
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K5/00—Peptides containing up to four amino acids in a fully defined sequence; Derivatives thereof
    • C07K5/04—Peptides containing up to four amino acids in a fully defined sequence; Derivatives thereof containing only normal peptide links
    • C07K5/08—Tripeptides
    • C07K5/0802—Tripeptides with the first amino acid being neutral
    • C07K5/0804—Tripeptides with the first amino acid being neutral and aliphatic
    • C07K5/0806—Tripeptides with the first amino acid being neutral and aliphatic the side chain containing 0 or 1 carbon atoms, i.e. Gly, Ala
    • Y—GENERAL TAGGING OF NEW TECHNOLOGICAL DEVELOPMENTS; GENERAL TAGGING OF CROSS-SECTIONAL TECHNOLOGIES SPANNING OVER SEVERAL SECTIONS OF THE IPC; TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
    • Y02—TECHNOLOGIES OR APPLICATIONS FOR MITIGATION OR ADAPTATION AGAINST CLIMATE CHANGE
    • Y02P—CLIMATE CHANGE MITIGATION TECHNOLOGIES IN THE PRODUCTION OR PROCESSING OF GOODS
    • Y02P20/00—Technologies relating to chemical industry
    • Y02P20/50—Improvements relating to the production of bulk chemicals
    • Y02P20/55—Design of synthesis routes, e.g. reducing the use of auxiliary or protecting groups

Landscapes

  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Organic Chemistry (AREA)
  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • Medicinal Chemistry (AREA)
  • Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
  • Molecular Biology (AREA)
  • Genetics & Genomics (AREA)
  • Biophysics (AREA)
  • Biochemistry (AREA)
  • Engineering & Computer Science (AREA)
  • Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
  • Veterinary Medicine (AREA)
  • Crystallography & Structural Chemistry (AREA)
  • Animal Behavior & Ethology (AREA)
  • Pharmacology & Pharmacy (AREA)
  • Public Health (AREA)
  • Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
  • Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
  • General Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Cardiology (AREA)
  • Heart & Thoracic Surgery (AREA)
  • Urology & Nephrology (AREA)
  • Diabetes (AREA)
  • Hematology (AREA)
  • Vascular Medicine (AREA)
  • Medicines That Contain Protein Lipid Enzymes And Other Medicines (AREA)
  • Peptides Or Proteins (AREA)
  • Pharmaceuticals Containing Other Organic And Inorganic Compounds (AREA)
  • Hydrogenated Pyridines (AREA)

Abstract

본 발명은 비-흡습성의 안정한 결정성 형태의 항혈전성 화합물 N-[N-[N-(4-(피페리딘-4-일)부타노일)-N-에틸글리실]-(L)-아스파르틸]-(L)-β-사이클로헥실-알라닌 아미드, 이러한 안정한 결정성 형태를 제조하는 방법, 이의 약제학적 조성물 및 이의 중간체에 관한 것이고 또한, 본 발명은 화학식 Ⅱ의 화합물의 제조 방법에 관한 것이다;
화학식 Ⅱ
상기식에서,
A, B, Z, E1, E2, G, R, m, n 및 p는 본원에서 정의된 바와 같다.

Description

안정한 비-흡습성의 결정성 형태의 Ｎ-[Ｎ-Ｎ-(４-(피페리딘-４-일)부타노일)-Ｎ-에틸글리실] 화합물{Stable non-hygroscopic crystalline form of N-[N-N-(4-(piperidin-4-yl)butanoyl)-N-ethylglycyl] compounds}
피브리노겐, 피브로넥틴 및 폰 빌레브란트 인자가 세포 표면 수용체와 상호작용하기 위해서는 Arg-Gly-Asp(RGD)의 존재가 필요한 것으로 관찰되었다[참조: Ruoslahti E., Pierschbacher, Cell 1986, 44, 517-18]. 2가지의 기타 아미노산 서열, 즉 Gly-Pro-Arg 서열 및 도데카펩티드 His-His-Leu-Gly-Gly-Ala-Lys-Gln-Ala-Gly-Asp-Val 서열이 또한 피브리노겐의 혈소판 부착 기능에 관여하는 것으로 여겨진다. RGD 또는 도데카펩티드를 함유하는 작은 합성 펩티드가 혈소판 GPⅡb/Ⅲa 수용체에 결합되어 피브리노겐, 피브로넥틴 및 폰 빌레브란트 인자의 결합을 경쟁적으로 억제시킬 뿐만 아니라 활성화된 혈소판의 응집을 억제시키는 것으로 밝혀졌다[참조: Plow et al., Proc. Natl. Acad. Sci. USA 1985, 82, 8057-61; Ruggeri et al., Proc. Natl. Acad. Sci. USA 1986, 5708-12; Ginbsberg et al., J. Biol. Chem. 1985, 260, 3931-36; and Gartner et al., J. Biol. Chem. 1987, 260, 11, 891-94].
구아니디노알카노일- 및 구아니디노알케노일-아스파르틸 잔기를 함유하는 인돌릴 화합물이 혈소판 응집 억제제인 것으로 밝혀졌다[참조: Tjoeng 등의 미국 특허 제5,037,808호 및 제4,879,313호].
1991년 2월 12일자로 허여된 미국 특허 제4,992,463호(Tjoeng 등)에는 일련의 아릴 및 아르알킬 구아니디노알킬 펩티드 모사 화합물이 혈소판 응집 억제 활성을 나타내는 것에 대해 총칭적으로 기재되어 있고 일련의 모노- 및 디메톡시 페닐 펩티드 모사 화합물 및 비페닐알킬 펩티드 모사 화합물에 관해서는 구체적으로 기재되어 있다.
1989년 8월 15일자로 허여된 미국 특허 제4,857,508호(Adams 등)에는 말단 아르알킬 치환체를 함유하는 일련의 구아니디노알킬 펩티드 유도체가 혈소판 응집 억제 활성을 나타내는 것에 관해 총칭적으로 기재되어 있고 말단 아미드 작용기를 함유하는 일련의 O-메틸 티로신, 비페닐 및 나프틸 유도체에 관해서는 구체적으로 기재되어 있다.
문헌[참조: Haverstick, D.M. et al., Blood 66(4), 946-952(1985)]에는 arg-gly-asp-ser 및 gly-arg-gly-asp-ser을 포함하는 수많은 합성 펩티드가 트롬빈 유도된 혈소판 응집을 억제시킬 수 있는 것으로 기재되어 있다.
문헌[참조: Plow, E.F. et al., Proc. Natl. Sci. USA 79, 3711-3715(1982)]에는 테트라펩티드 글리실-L-프롤릴-L-아르기닐-L-프롤린이 사람 혈소판에 대한 피브리노겐 결합을 억제시키는 것으로 기재되어 있다.
1986년 12월 15일자로 출원된 프랑스 특허원 제86/17507호에는 arg-gly-asp--서열을 함유하는 테트라-, 펜타- 및 헥사펩티드 유도체가 항혈전성 제제로서 유용한 것으로 기재되어 있다.
1987년 7월 28일자로 허여된 미국 특허 제4,683,291호(Zimmerman 등)에는 서열 -arg-gly-asp-를 함유하는, 6개 내지 40개의 아미노산으로 구성된 일련의 펩티드가 기재되어 있다.
1989년 6월 7일자로 공고된 유럽 공고공보 제0 319 506호에는 -arg-gly-asp-서열을 함유하는 일련의 테트라-, 펜타- 및 헥사펩티드 유도체가 혈소판 응집 억제제인 것으로 기재되어 있다.
잔기 Gly-Asp를 함유하는 사이클릭 펩티드 동족체가 미국 특허 제5,023,233호에서 피브리노겐 수용체 길항제인 것으로 보고되었다.
아미노-, 이미디잘로일 및/또는 아미디노알카노일 및 알케노일 잔기를 함유하는 펩티드 및 슈도펩티드가 항혈전성 제제인 것으로 보고되었다[참조: 각각 1991년 3월 28일, 1990년 6월 7일 및 1990년 1월 4일자로 출원된 현재 계류중인 미국 특허원 제07/677,006호, 제07/534,385호 및 제07/460,777호, 및 1990년 9월 25일자로 출원된 미국 특허원 제4,952,562호 및 국제 특허출원 PCT/US 90/05448; 이들 특허 출원 모두는 본 발명과 동일한 양수인에게 양도되었다].
아미노- 및 구아니디노-알킬- 및 알케닐-벤조일, 페닐알카노일 및 페닐알케노일 잔기를 함유하는 펩티드 및 슈도펩티드가 항혈전성 제제인 것으로 보고되었다[참조: 1990년 2월 5일자로 출원된, 현재 계류중인 미국 특허원 제07/475,043호, 및 1992년 10월 29일자로 공개된 국제 공개공보 WO 92/13117로서 공개된 국제 특허출원 PCT/US 91/02471; 이들 특허 출원 모두는 본 발명과 동일한 양수인에게 양도되었다].
알카노일 및 치환된 알카노일 아자사이클로알킬포밀 아스파르트산 유도체가 혈소판 응집 억제제인 것으로 보고되었다[참조: 동일한 양수인에게 양도되었고 본 발명과 동일한 발명자에 의해 연구된, 1989년 12월 1일자로 허여된 미국 특허 제5,053,392호].
N-치환된 아자사이클로알킬카보닐 사이클릭 아미노아실아스파르트산 유도체가 항혈전성 제제인 것으로 보고되었다[참조: 본 발명과 동일한 발명자에 의해 연구되어 본 발명과 동일한 양수인에게 양도된, 1990년 4월 5일자로 허여된 미국 특허 제5,064,814호]. 아자사이클로알킬포밀글리실 아스파르트산 유도체가 항혈전성 제제인 것으로 보고되었다[참조: 본 발명과 동일한 양수인에게 양도된 미국 특허 제5,051,405호(1989. 10. 10.)].
유럽 특허 제0 479 481호(1992. 4. 8.)에는 피브리노겐 수용체 길항제로서의 아자사이클로알킬알카노일 글리실 아스파르틸 아미노산이 기재되어 있다.
유럽 특허 제0 478 362호(1992. 4. 1.)에는 피브리노겐 수용체 길항제로서의 아자사이클로알킬알카노일 펩티딜 β-알라닌이 기재되어 있다.
PCT 공개특허공보 제WO 95/10295호에는 포유동물에서 혈소판 응집과 혈전 형성을 억제시키고 혈전증을 예방 및 치료하는데 유용한 다음 화학식 Ⅱ의 아자사이클로알킬알카노일 펩티드 및 슈도펩티드, 및 특히, N-[N-[N-(4-(피페리딘-4-일)부타노일)-N-에틸글리실]-(L)-아스파르틸]-(L)-β-사이클로헥실알라닌 아미드에 관한 것이다:
PCT 공개특허공보 제WO 95/10295호에 따라서 제조된 N-[N-[N-(4-(피페리딘-4-일)부타노일)-N-에틸글리실]-(L)-아스파르틸]-(L)-β-사이클로헥실알라닌 아미드는 비결정성의 흡습성이고 수분을 흡수하기 때문에 물리적으로 불안정하다. PCT 공개특허공보 제WO 95/10295호에는 어떠한 비-흡습성의 안정한 결정성 형태의 N-[N-[N-(4-(피페리딘-4-일)부타노일)-N-에틸글리실]-(L)-아스파르틸]-(L)-β-사이클로헥실알라닌 아미드도 언급되어 있지 않다.
PCT 공개특허공보 제WO 95/10295호에는 또한, 출발 물질 및/또는 화학물질 공급 회사(예: Aldrich 또는 Sigma)로부터 용이하게 입수 가능한 중간체를 사용하여 표준 고체상 또는 용액상 펩티드 합성 방법에 의해 상기 아자사이클로알킬알카노일 펩티드 및 슈도펩티드를 통상적으로 제조하는 것에 관해 기재되어 있다[참조: H.Paulsen, G.Merz, V. Weichart, "Solid-Phase Synthesis of O-Glycopeptide Sequences", Angew, Chem. Int. Ed. Engl. 27(1988); H.Mergler, R.Tanner, J.Gosteli and P.Grogg, "Peptide Synthesis by a Combination of Solid-Phase and Solution Methods I: A New Very Acid-Labile Anchor Group for the Solid-Phase Synthesis of Fully Protected Fragments. Tetrahedron letters 29, 4005(1988); Merrifield, R.B., "Solid Phase Peptide Synthesis after 25 Years: The Design and Synthesis of Antagonists of Glucagon", Makromol. Chem. Macromol. Symp. 19, 31(1988)]. 더욱이, PCT 공개특허공보 제WO 95/10295호에는 비결정성의 흡습성 형태의 N-[N-[N-(4-(피페리딘-4-일)부타노일)-N-에틸글리실]-(L)-아스파르틸]-(L)-β-사이클로헥실알라닌 아미드가 다음 반응식 Ⅰ에 제시된 바와 같이 C-말단 아미노산으로부터의 연속적인 합성에 의해 제조된다고 기재되어 있다:
PCT 공개특허공보 제WO 95/10295호에는 중앙의 디(슈도펩티드 또는 펩티드)의 N 및 C 말단 모두를 슈도아미노산 및/또는 아미노산과 커플링시켜 테트라아자사이클로알킬알카노일 펩티드 및 슈도펩티드를 형성시킴으로써 중앙의 디(슈도펩티드 또는 펩티드)로부터 테트라아자사이클로알킬알카노일 펩티드 및 슈도펩티드, 또는 특히, N-[N-[N-(4-(피페리딘-4-일)부타노일)-N-에틸글리실]-(L)-아스파르틸]-(L)-β-사이클로헥실알라닌 아미드를 제조하는 것에 관해서는 전혀 언급되어 있지 않다.
〈발명의 요약〉
본 발명은 안정한 비-흡습성의 결정성 형태의 다음 화학식 Ⅰ의 N-[N-[N-(4-(피페리딘-4-일)부타노일)-N-에틸글리실]-(L)-아스파르틸]-(L)-β-사이클로헥실-알라닌 아미드에 관한 것이다:
화학식 Ⅰ
당해 화합물은 포유동물에서 혈소판 응집과 혈전 형성을 억제시키는 것을 포함하는 항혈전성 활성을 지니고 있으므로 심근 경색증, 발작, 말초 동맥 질환 및 전이성의 혈관내 응고와 같은 혈전증 연관된 질환 상태를 예방 및 치료하는데 유용하다. 또한, 본 발명은 비-흡습성의 안정한 결정성 형태의 N-[N-[N-(4-(피페리딘-4-일)부타노일)-N-에틸글리실]-(L)-아스파르틸]-(L)-β-사이클로헥실-알라닌 아미드를 포함하는 약제학적 조성물 및 이의 중간체에 관한 것이다.
본 발명은 다음 화학식 Ⅱ의 테트라-아자사이클로알킬알카노일 펩티드 또는 슈도펩티드, 및 특히, 비-흡습성의 안정한 결정성 형태의 N-[N-[N-(4-(피페리딘-4-일)부타노일)-N-에틸글리실]-(L)-아스파르틸]-(L)-β-사이클로헥실알라닌 아미드의 제조 방법에 관한 것이다:
화학식 Ⅱ
상기식에서,
A는 H이고,
B는 알킬, 사이클로알킬, 사이클로알킬알킬, 알킬사이클로알킬, 알킬사이클로알킬알킬, 아릴, 아르알킬, 알킬아릴 또는 알킬아르알킬이며,
Z는이고,
E1은 H이며,
E2는 천연 α-아미노산의 α-탄소 측쇄, H, 알킬, 사이클로알킬, 사이클로알킬알킬, 알킬사이클로알킬, 알킬사이클로알킬알킬, 아릴, 치환된 아릴, 아르알킬, 치환된 아르알킬, 헤테로사이클릴, 치환된 헤테로사이클릴, 헤테로사이클릴알킬, 치환된 헤테로사이클릴알킬이거나 E1과 E2는 E1및 E2가 연결된 질소 및 탄소 원자와 함께, 4-, 5-, 6- 또는 7-원 아자사이클로알칸 환을 형성하고,
G는 OR1또는 NR1R2이며,
R1및 R2는 독립적으로 H, 알킬, 사이클로알킬, 사이클로알킬알킬, 알킬사이클로알킬, 알킬사이클로알킬알킬, 아릴, 아르알킬, 알킬아릴 또는 알킬아르알킬이고,
R은 H, 알킬, 아릴 또는 아르알킬이며,
m은 1 내지 5이고,
n은 0 내지 6이며,
p는 1 내지 4이다.
본 발명은 안정한 비-흡습성의 결정성 형태의 다음 화학식 Ⅰ의 N-[N-[N-(4-(피페리딘-4-일)부타노일)-N-에틸글리실]-(L)-아스파르틸]-(L)-β-사이클로헥실-알라닌 아미드에 관한 것이다:
당해 화합물은 포유동물에서 혈소판 응집과 혈전 형성을 억제시키는 것을 포함하는 항혈전성 활성을 지니고 있으므로 심근 경색증, 발작, 말초 동맥 질환 및 전이성의 혈관내 응고와 같은 혈전증 연관된 질환 상태를 예방 및 치료하는데 유용하다.
또한, 본 발명은 결정성 형태의 N-[N-[N-(4-(피페리딘-4-일)부타노일)-N-에틸글리실]-(L)-아스파르틸]-(L)-β-사이클로헥실-알라닌 아미드를 제조하는 방법, 이를 포함하는 약제학적 조성물 및 이의 중간체에 관한 것이다.
혈액 응고의 생화학적 특징인 지혈은 극도로 복잡한 현상이기 때문에 정상적인 전혈 및 체 조직이 자발적으로, 상처입은 혈관으로부터의 출혈 확산을 억제시킨다. 효과적으로 지혈하기 위해서는 혈관, 혈소판 및 혈장 인자들의 활성이 종합적으로 요구될 뿐만 아니라 과도한 응괴를 방지하기 위한 제어 기전이 요구된다. 이들 요소들 중의 어떠한 것도 결손 내지는 결여되거나 과도한 경우에는 출혈이 지속되거나 혈전증이 발생된다.
세포외 매트릭스 상에 혈소판이 유착, 확산 및 응집되는 것이 혈전 형성에 있어서 주요 사건이다. 이들 사건은 유착성 당단백질, 즉 피브리노겐, 피브로넥틴 및 폰 빌레브란트 인자(von Willebrand factor) 계열에 의해 매개된다. 피브리노겐은 혈소판 응집에 대한 보조 인자인 반면, 피브로넥틴은 혈소판 부착과 확산 반응을 지원해주며 폰 빌레브란트 인자는 혈소판을 내피 하의 매트릭스에 부착시켜 확산시키는데 있어서 중요하다. 피브리노겐, 피브로넥틴 및 폰 빌레브란트 인자에 대한 결합 부위는 당단백질 Ⅱb/Ⅲa로서 공지된 혈소판 막 단백질 복합체 상에 위치한다.
피브리노겐과 같은 유착성 당단백질은 정상적인 휴지기의 혈소판과는 결합되지 않는다. 그러나, 혈소판을 트롬빈 또는 아데노신 디포스페이트와 같은 효능제로 활성화시키는 경우에는, GPⅡb/Ⅲa 결합 부위가 피브리노겐에 근접할 수 있도록 혈소판의 외형이 변하게 된다. 본 발명의 범위 내에 속하는 화합물은 피브리노겐 수용체를 차단함으로써 앞서 언급된 항혈전 활성을 지니게 된다.
도 1은 실시예 13, 방법 A에서 제조된 비-흡습성의 결정성 형태의 N-[N-[N-(4-(피페리딘-4-일)부타노일)-N-에틸글리실]-(L)-아스파르틸]-(L)-β-사이클로헥실알라닌 아미드 샘플의 X레이 분말 회절 그래프를 도시한 것이다.
도 2는 실시예 13, 방법 B(a)에서 제조된 비-흡습성의 결정성 형태의 N-[N-[N-(4-(피페리딘-4-일)부타노일)-N-에틸글리실]-(L)-아스파르틸]-(L)-β-사이클로헥실알라닌 아미드 샘플의 X레이 분말 회절 그래프를 도시한 것이다.
도 3은 실시예 13, 방법 B(b)에서 제조된 비-흡습성의 결정성 형태의 N-[N-[N-(4-(피페리딘-4-일)부타노일)-N-에틸글리실]-(L)-아스파르틸]-(L)-β-사이클로헥실알라닌 아미드 샘플의 X레이 분말 회절 그래프를 도시한 것이다.
도 4는 실시예 14에서 언급된 바와 같이 제조된 흡습성의 결정성 형태의 N-[N-[N-(4-(피페리딘-4-일)부타노일)-N-에틸글리실]-(L)-아스파르틸]-(L)-β-사이클로헥실알라닌 아미드 샘플의 X레이 분말 회절 그래프를 도시한 것이다.
도 5는 실시예 14에서 언급된 바와 같이 제조된 비-흡습성의 결정성 형태의 N-[N-[N-(4-(피페리딘-4-일)부타노일)-N-에틸글리실]-(L)-아스파르틸]-(L)-β-사이클로헥실알라닌 아미드 샘플의 X레이 분말 회절 그래프를 도시한 것이다.
도 6은 실시예 15에 기재된 바와 같이 수행된 3가지 상이한 실험에 대한 시간의 함수로서 동력 출력의 등온성 마이크로열계량 그래프를 나타낸다. 상기 실험은 각종 용매 증기에 노출되었을 경우의 상이한 결정성 형태의 N-[N-[N-(4-(피페리딘-4-일)부타노일)-N-에틸글리실]-(L)-아스파르틸]-(L)-β-사이클로헥실알라닌 아미드의 열 활성을 모니터한다. 도 6에서의 기록 (A)는 실시예 5 또는 11에 따라서 제조된 흡습성의 N-[N-[N-(4-(피페리딘-4-일)부타노일)-N-에틸글리실]-(L)-아스파르틸]-(L)-β-사이클로헥실알라닌 아미드를 40℃하 80% RH(포화 KCl 용액)에 30시간에 걸쳐 노출시킨 경우에는(이러한 노출 동안에 흡습성 형태의 상기 화합물이 비-흡습성 형태의 화합물로 전환된다) 강한 발열 반응이 일어난다는 것을 보여준다. 도 6에서의 기록 (B)는 실시예 5 또는 11에 따라서 제조된 흡습성의 N-[N-[N-(4-(피페리딘-4-일)부타노일)-N-에틸글리실]-(L)-아스파르틸]-(L)-β-사이클로헥실알라닌 아미드를 40℃하의 메탄올 증기(상기 화합물이 용해되는 물 이외의 용매)에 노출시킨 경우에는 어떠한 발열적 전환 반응도 일어나지 않았기 때문에 메탄올이 비-흡습성 형태로의 전환을 위해 상기 형태의 결정 내에서의 이동성을 전혀 지원해주지 않는 다는 것을 보여준다. 도 6에서의 기록 (C)는 실시예 13에 따라서 제조된 비-흡습성의 N-[N-[N-(4-(피페리딘-4-일)부타노일)-N-에틸글리실]-(L)-아스파르틸]-(L)-β-사이클로헥실알라닌 아미드를 40℃하 80% RH에 노출시킨 경우에는 발열적 전환 반응이 전혀 일어나지 않았기 때문에 비-흡습성 형태의 상기 화합물이 이들 조건에서 형태 전환을 진행하지 않는다는 것을, 즉 상기 화합물이 안정한 형태라는 것을 보여준다.
도 7은 실시예 15에 기재된 바와 같이 수행된 3가지 상이한 실험에 대한 시간의 함수로서 동력 출력의 등온성 마이크로열계량 그래프를 나타낸다. 상기 실험은 40℃, 50℃ 및 60℃하 80% RH에 노출되었을 경우에 상기 흡습성의 결정성 형태의 N-[N-[N-(4-(피페리딘-4-일)부타노일)-N-에틸글리실]-(L)-아스파르틸]-(L)-β-사이클로헥실알라닌 아미드가 이의 비-흡습성 형태로 전환되는 것에 관한 열 활성을 모니터한다. 상기 도는 전환이 40℃에서는 대략 24시간, 50℃에서는 대략 6.5시간 및 60℃에서는 대략 3시간에 일어난다는 것을 나타낸다.
도 8은 실시예 15에 기재된 바와 같이 수행된 4가지 상이한 실험에 대한 시간의 함수로서 동력 출력의 등온성 마이크로열계량 그래프를 나타낸다. 상기 실험은 60℃하 65% RH, 75%RH, 80% RH 및 100% RH에 노출되었을 경우에 상기 흡습성의 결정성 형태의 N-[N-[N-(4-(피페리딘-4-일)부타노일)-N-에틸글리실]-(L)-아스파르틸]-(L)-β-사이클로헥실알라닌 아미드가 이의 비-흡습성 형태로 전환되는 것에 관한 열 활성을 모니터하는 것이다. 도 8의 특징은 보다 높은 상대 습도가 보다 신속한 전환을 가져온다는 것이다. 또 다른 특징은 비-흡습성 형태의 상기 화합물로의 전환이 실온에서 흡습성 형태의 화합물에게서 일어나는 액화의 발생 없이 60℃하 100% RH에서 일어난다는 것이다. 이들 결과를 근거로 해보면, 비-흡습성 형태로의 전환 속도가 60℃에서 흡습성 형태의 액화 속도보다 훨씬 더 빠른 것으로 예상된다.
도 9는 실험 16에 기재된 바와 같이 수행된, 25℃하에서의 흡습성(■) 및 비-흡습성(●) 형태의 N-[N-[N-(4-(피페리딘-4-일)부타노일)-N-에틸글리실]-(L)-아스파르틸]-(L)-β-사이클로헥실알라닌 아미드에 대한 중량 증가% 대 %RH 플롯을 비교한 것이다. 도 9는 RH가 증가함에 따라 흡습성 형태가 비-흡습성 형태 보다 더 많은 물을 거두어들이며 60%를 초과하는 상대 습도에서는 이러한 현상이 더 두드러진다. 더욱이, 도 9는 흡습성 형태의 상기 화합물이 이의 본래의 중량%로 탈수되지 않는 반면, 비-흡습성 형태의 상기 화합물은 이의 본래의 중량%로 탈수된다는 것을 나타낸다.
상기 및 본 발명의 명세서 전반에 걸쳐 사용되는 바와 같이, 달리 언급되지 않는다면 다음 용어는 다음의 의미를 지니는 것으로 인지해야 한다:
본원에서 사용된 약어는 다음과 같다:
BOC(t-부틸옥시카보닐), CBZ(벤질옥시카보닐), Gly(글리신), Asp(아스파르트산), Obzl(벤질옥시), TFA(트리플루오로아세트산), Cha(β-사이클로헥실-알라닌), EtOAc(에틸 아세테이트), DMF(디메틸 포름아미드), DCC(디사이클로헥실카보디이미드), HOBT(하이드록시벤조트리아졸), TBTU(2-1H-벤조트리아졸-1-일)-1,1,3,3-테트라메틸우로늄 테트라플루오로보레이트), DI(탈이온수), PNP(p-니트로페놀), PFP(펜타플루오로페놀), DCU(디사이클로헥실 우레아), NMM(N-메틸모르폴린), MTBE(메틸 t-부틸 에테르), RH(상대 습도), THF(테트라하이드로푸란), PipBu(4-피페리딘부티르산), 및 PipBuen((4-피페리딘)부틸리데닐카복실산)은 다음 화학식의 화합물이다:
"환자"는 사람과 기타 포유동물 모두를 포함한다.
"약제학적으로 허용되는 염"은 화학식 Ⅰ의 모 화합물의 유익한 약제학적 성질이 염 형태의 역이온에 기인하는 부작용에 의해 손상되지 않도록 치료 용도로 사용될 경우에 환자에게 비교적 무해한 화학식 Ⅰ의 모 화합물의 염 형태를 의미한다. 약제학적으로 허용되는 염에는 또한 화학식 Ⅰ의 화합물의 쯔비터 이온 또는 내부 염이 포함된다.
"알킬"은 탄소수 약 1 내지 약 20의 직쇄 또는 측쇄일 수 있는 포화 지방족 탄화수소 그룹을 의미한다. 측쇄는 메틸, 에틸 또는 프로필 등의 저급 알킬 그룹이 선형 알킬쇄에 부착된 것을 의미한다. 바람직한 직쇄 또는 측쇄 알킬 그룹은 알킬 그룹의 탄소수가 1 내지 약 10인 "저급 알킬" 그룹이다. 가장 바람직한 저급 알킬 그룹의 탄소수는 1 내지 약 6이다.
"사이클로알킬"은 하나 이상의 환을 갖는 탄소수 약 3 내지 약 10의 포화 카보사이클릭 그룹을 의미한다. 바람직한 사이클로알킬 그룹으로는 사이클로프로필, 사이클로부틸, 사이클로펜틸, 사이클로헥실 및 데카하이드로나프틸이 있다.
"사이클로알킬알킬"은 사이클로알킬 그룹에 의해 치환된 알킬 그룹을 의미한다. 바람직한 사이클로알킬알킬 그룹으로는 사이클로펜틸메틸, 사이클로헥실메틸, 사이클로헥실에틸, 데카하이드로나프트-1-일메틸 및 데카하이드로나프트-2-일메틸이 있다.
"알킬사이클로알킬"은 알킬 그룹에 의해 치환된 사이클로알킬 그룹을 의미한다. 알킬사이클로알킬 그룹의 예로는 1-, 2-, 3- 또는 4-메틸 또는 에틸 사이클로헥실이 있다.
"알킬사이클로알킬알킬"은 알킬사이클로알킬 그룹에 의해 치환된 알킬 그룹을 의미한다. 알킬사이클로알킬 그룹의 예로는 1-, 2-, 3- 또는 4-메틸 또는 에틸 사이클로헥실메틸 또는 1-, 2-, 3- 또는 4-메틸 또는 에틸 사이클로헥실에틸이 있다.
"아자사이클로알칸"은 질소 원자를 함유하는 포화 지방족 환을 의미한다. 바람직한 아자사이클로알칸으로는 피롤리딘 및 피페리딘이 있다.
"천연의 α-아미노산"은 글리신, 알라닌, 발린, 루이신, 이소루이신, 세린, 트레오닌, 페닐알라닌, 티로신, 트립토판, 시스테인, 메티오닌, 프롤린, 하이드록시프롤린, 아스파르트산, 아스파라긴, 글루타민, 글루탐산, 히스티딘, 아르기닌, 오르니틴 및 리신을 의미한다.
"천연의 α-아미노산의 α-탄소 측쇄"는 천연의 α-아미노산의 α-탄소에 치환되는 잔기를 의미한다. 천연의 α-아미노산의 α-탄소 측쇄의 예로는 각각 발린, 알라닌 및 아스파르트산에 대한 이소프로필, 메틸 및 카복시메틸이 있다.
용어 "아민 보호 그룹"은 합성 과정 동안에 바람직하지 못한 반응으로부터 아미노 그룹을 보호시키고 선택적으로 제거 가능한 것으로 공지된 용이하게 제거 가능한 그룹을 의미한다. 아민 보호 그룹의 용도는 합성 과정 동안의 바람직하지 못한 반응으로부터 그룹을 보호하는 것으로 당해 분야에 널리 공지되어 있으며 이러한 많은 보호 그룹이, 예를 들면, 문헌[참조: T.H.Greene and P.G.M. Wuts, Protective Groups in Organic Synthesis, 2nd edition, John Wiley ＆ Sons, New York(1991); 본원에 참조문헌으로 삽입됨]에 공지되어 있다. 바람직한 아민 보호 그룹은 포밀, 아세틸, 클로로아세틸, 트리클로로아세틸, o-니트로페닐아세틸, o-니트로페녹시아세틸, 트리플루오로아세틸, 아세토아세틸, 4-클로로부티릴, 이소부티릴, o-니트로신나모일, 피콜리노일, 아실이소티오시아네이트, 아미노카프로일, 벤조일 등을 포함한 아실; 및 메톡시카보닐, 9-플루오레닐메톡시카보닐, 2,2,2-트리플루오로에톡시카보닐, 2-트리메틸실릴에톡시카보닐, 비닐옥시카보닐, 알릴옥시카보닐, t-부틸옥시카보닐(BOC), 1,1-디메틸프로피닐옥시카보닐, 벤질옥시카보닐(CBZ), p-니트로벤질옥시카보닐, 2,4-디클로로벤질옥시카보닐 등을 포함한 아실옥시이다.
용어 "산 불안정한 아민 보호 그룹"은 산 이외의 다른 시약에 대해서는 비교적 안정하지만 산으로의 처리에 의해서는 용이하게 제거되는, 상기 정의된 바와 같은 아민 보호 그룹을 의미한다. 바람직한 산 불안정한 아민 보호 그룹은 3급-부톡시카보닐(BOC)이다.
용어 "수소화 불안정한 아민 보호 그룹"은 다른 시약에 대해서는 비교적 안정하지만 수소화에 의해서는 용이하게 제거되는, 상기 정의된 바와 같은 아민 보호 그룹을 의미한다. 바람직한 수소화 불안정한 아민 보호 그룹은 벤질옥시카보닐(CBZ)이다.
용어 "산 보호 그룹"은 합성 과정 동안에 바람직하지 못한 반응으로부터 카복실산(-CO2H) 그룹을 보호시키고 선택적으로 제거 가능한 것으로 당해 분야에 공지된 용이하게 제거 가능한 그룹을 의미한다. 카복실산 보호 그룹의 용도는 당해 분야에 널리 공지되어 있으며 이러한 많은 보호 그룹이, 예를 들면, 문헌[참조: T.H.Greene and P.G.M. Wuts, Protective Groups in Organic Synthesis, 2nd edition, John Wiley ＆ Sons, New York(1991); 본원에 참조문헌으로 삽입됨]에 공지되어 있다. 바람직한 카복실산 보호 그룹의 예로는 메톡시메틸, 메틸티오메틸, 테트라하이드로피라닐, 벤질옥시메틸, 치환된 및 치환되지 않은 펜아실, 2,2,2-트리클로로에틸, 3급-부틸, 신나밀, 치환된 및 치환되지 않은 벤질, 트리메틸실릴 등의 에스테르; 및 N,N-디메틸, 7-니트로인돌릴, 하이드라자이드, N-페닐하이드라자이드 등을 포함한 아미드 및 하이드라자이드가 있다.
용어 "수소화 불안정한 산 보호 그룹"은 다른 시약에 대해서는 비교적 안정하지만 수소화에 의해서는 용이하게 제거되는, 상기 정의된 바와 같은 산 보호 그룹을 의미한다. 바람직한 수소화 불안정한 산 보호 그룹은 벤질이다.
"아릴"은 페닐 또는 나프틸 그룹을 의미한다.
"치환된 아릴"은 하나 이상의 아릴 그룹 치환체에 의해 치환된 페닐 또는 나프틸 그룹을 의미하고, 여기서 "아릴 그룹 치환체"에는 알킬, 알케닐, 알키닐, 아릴, 아르알킬, 하이드록시, 알콕시, 아릴옥시, 아르알콕시, 하이드록시알킬, 아실, 포밀, 카복시, 알케노일, 아로일, 할로, 니트로, 트리할로메틸, 시아노, 알콕시카보닐, 아릴옥시카보닐, 아르알콕시카보닐, 아실아미노, 아로일아미노, 카바모일, 알킬카바모일, 디알킬카바모일, 아릴카바모일, 아르알킬카보모일, 알킬설포닐, 알킬설피닐, 아릴설포닐, 아릴설피닐, 아르알킬설포닐, 아르알킬설피닐 또는 -NRaRb(여기서, Ra및 Rb은 독립적으로 수소, 알킬, 아릴 또는 아릴알킬이다)이 포함된다.
"아르알킬"은 아릴 라디칼에 의해 치환된 알킬 그룹을 의미한다. 바람직한 아르알킬 그룹으로는 벤질, 나프틸-1-일메틸 나프트-2-일메틸 및 펜에틸이 있다.
"치환된 아르알킬"은 아릴 분획 상에서 하나 이상의 아릴 그룹 치환체에 의해 치환된 아르알킬 그룹을 의미한다.
"헤테로사이클릴"은 환 중의 하나 이상의 원자가 탄소 이외의 원자, 예를 들면, 질소, 산소 또는 황인 약 4원 내지 약 15원 모노사이클릭 또는 멀티사이클릭 환 시스템을 의미한다. 바람직한 헤테로사이클릴 그룹으로는 피리딜, 피리미딜 및 피롤리딜이 있다.
"치환된 헤테로사이클릴"은 하나 이상의 아릴 그룹 치환체에 의해 치환된 헤테로사이클릴 그룹을 의미한다.
"헤테로사이클릴알킬" 및 "치환된 헤테로사이클릴알킬"은 헤테로사이클릴 및 치환된 헤테로사이클릴 그룹에 의해 각각 치환되는 알킬 그룹을 의미한다.
"흡습성"은 특정 물질의 물리적 또는 화학적 성질에 영향을 미치기에 충분한 양 또는 상태의 물을 획득해주는 흡수력을 의미한다[참조: Eds. J. Swarbrick and J. C. Boylan, Encycolpedia of Pharmaceutical Technology, Vol. 10, p.3].
바람직한 양태
본 발명에 따라서 제조된 바람직한 화합물은 화학식 Ⅱ의 화합물[여기서, E2는 H, 알킬, 하이드록시메틸, 1-하이드록시에틸, 머캅토메틸, 2-메틸티오에틸, 카복시메틸, 2-카복시에틸, 4-아미노부틸, 3-구아니디노프로필, 사이클로알킬, 사이클로알킬알킬, 알킬사이클로알킬, 알킬사이클로알킬알킬, 아릴, 치환된 아릴, 아르알킬, 치환된 아르알킬, 헤테로사이클릴, 치환된 헤테로사이클릴, 헤테로사이클릴알킬, 치환된 헤테로사이클릴알킬이거나, 또는 E1과 E2가 이들에 연결된 질소 및 탄소 원자와 함께, 4-, 5-, 6- 또는 7-원 아자사이클로알칸 환을 형성하는데, 단 헤테로사이클릴알킬은 인돌-3-일메틸 이외의 것이다]로 기술된다.
본 발명에 따라서 제조된 보다 바람직한 화합물은 화학식 Ⅱ의 화합물[여기서, E2는 H, 알킬, 하이드록시메틸, 1-하이드록시에틸, 머캅토메틸, 2-메틸티오에틸, 카복시메틸, 2-카복시에틸, 4-아미노부틸, 3-구아니디노프로필, 사이클로알킬, 사이클로알킬알킬, 알킬사이클로알킬, 알킬사이클로알킬알킬, 아릴, 치환된 아릴, 아르알킬, 치환된 아르알킬이거나, 또는 E1과 E2가 이들에 연결된 질소 및 탄소 원자와 함께, 4-, 5-, 6- 또는 7-원 아자사이클로알칸 환을 형성한다]로 기술된다.
본 발명에 따라서 제조된 보다 바람직한 화합물은 화학식 Ⅱ의 화합물[여기서, E2는 H, 알킬, 하이드록시메틸, 1-하이드록시에틸, 머캅토메틸, 2-메틸티오에틸, 카복시메틸, 2-카복시에틸, 4-아미노부틸, 3-구아니디노프로필, 사이클로알킬, 사이클로알킬알킬, 알킬사이클로알킬, 알킬사이클로알킬알킬이거나, 또는 E1과 E2가 이들에 연결된 질소 및 탄소 원자와 함께, 4-, 5-, 6- 또는 7-원 아자사이클로알칸 환을 형성한다]로 기술된다.
본 발명에 따라서 제조된 추가로 바람직한 화합물은 화학식 Ⅱ의 화합물[여기서, B는 알킬, 사이클로알킬, 사이클로알킬알킬, 알킬사이클로알킬 또는 알킬사이클로알킬알킬이다]로 기술된다.
본 발명에 따라서 제조된 특정한 양태는 다음 화학식 Ⅱa로 기술된다:
상기식에서,
B는 알킬, 사이클로알킬, 사이클로알킬알킬, 알킬사이클로알킬, 알킬사이클로알킬알킬, 아릴, 아르알킬, 알킬아릴 또는 알킬아르알킬이고,
J는 H, 알킬, 사이클로알킬, 사이클로알킬알킬, 알킬사이클로알킬, 알킬사이클로알킬알킬, 아릴, 치환된 아릴, 아르알킬 또는 치환된 아르알킬이며,
L은 OR1또는 NR1R2이고,
R1및 R2는 독립적으로 H, 알킬, 사이클로알킬, 사이클로알킬알킬, 알킬사이클로알킬, 알킬사이클로알킬알킬, 아릴, 아르알킬, 알킬아릴 또는 알킬아르알킬이며,
m은 1 내지 5이고,
n은 2 내지 6이며,
p는 1 또는 2이다.
본 발명에 따라서 제조된 더욱 바람직한 특정한 양태는
B가 알킬, 사이클로알킬, 사이클로알킬알킬, 알킬사이클로알킬 또는 알킬사이클로알킬알킬이고,
J가 H, 알킬, 사이클로알킬, 사이클로알킬알킬, 알킬사이클로알킬 또는 알킬사이클로알킬알킬이며,
m이 3이고,
n이 3 또는 4인 화학식 Ⅱa의 화합물로 기술된다.
본 발명에 따라서 제조된 추가로 바람직한 특정한 양태는
B가 알킬이고,
J가 알킬, 사이클로알킬 또는 사이클로알킬알킬이며,
R1및 R2가 독립적으로 H, 알킬, 사이클로알킬, 사이클로알킬알킬, 알킬사이클로알킬 또는 알킬사이클로알킬알킬이고,
m이 3이며,
n이 3 또는 4이고,
p가 1인 화학식 Ⅱa인 화합물로 기술된다.
또한, 본 발명에 따라서 제조된 추가로 바람직한 특정한 양태는 N-[N-[N-(4-(피페리딘-4-일)부타노일)-N-에틸글리실]-(L)-아스파르틸]-(L)-β-사이클로헥실알라닌 아미드인 화학식 Ⅱa로 기술된다.
본 발명에 따르는 또 다른 양태는 안정한 비-흡습성의 결정성 형태의 N-[N-[N-(4-(피페리딘-4-일)부타노일)-N-에틸글리실]-(L)-아스파르틸]-(L)-β-사이클로헥실알라닌 아미드의 형성이다. 본 발명에 따르면, 이러한 형태의 상기 화합물은 상기 화합물의 안정한 제제로서 개발될 수 있다. 또한, 이와 같이 안정한 비-흡습성의 결정성 형태의 N-[N-[N-(4-(피페리딘-4-일)부타노일)-N-에틸글리실]-(L)-아스파르틸]-(L)-β-사이클로헥실알라닌 아미드는 융점이 높고 물을 전혀 흡수하지 않는다. 이러한 안정한 형태는 선적, 투여형 제조 또는 장기간의 해상 운송 또는 저장시 통상적으로 직면하게 되는 과도한 습도 및 온도에 대하여 독특하고도 예상치 못한 안정성을 나타낸다. 이들 성질은 또한 투여형 제조를 촉진시켜 준다. 안정한 형태로의 전환으로 인해 어떠한 재료상의 손실이나 순도 저하가 발생되지 않으며 이의 입자 특성에도 불리한 영향을 미치지 않는다.
본 발명은 본원에 규정된 바와 같은 바람직한 화합물, 바람직한 양태 및 특정한 양태의 모든 조합을 포괄하는 것으로 인지해야 한다.
본 발명의 화합물은 유리 염기 또는 산, 이의 쯔비터이온성 염, 또는 이의 약제학적으로 허용되는 염의 형태에서 유용하다. 모든 형태가 본 발명의 범주 내에 속한다.
본 발명의 화합물을 염기성 잔기로 치환하는 경우에는, 산 부가 염이 형성되고 이것이 사용하기에 보다 편리한 간단한 형태이며; 실제적으로, 염 형태의 용도는 본질적으로 유리 염기 형태의 용도와 매한가지다. 산 부가염을 제조하는데 사용될 수 있는 산에는 바람직하게는, 유리 염기와 결합될 때 약제학적으로 허용되는 염, 즉 이의 음이온이 약제학적 투여량의 염에서 환자에게 무독성이어서 유리 염기가 본래 지니고 있는 특성인 혈소판 응집 및 혈전 형성에 대한 유익한 억제 효과가 상기 음이온으로 인한 부작용에 의해 손상되지 않게 하는 염을 생성시키는 산이 포함된다. 이러한 염기성 화합물의 약제학적으로 허용되는 염이 바람직하긴 하지만, 염이 단지 정제 및 동정 목적을 위해서만 형성되거나 또는 염이 이온 교환 방법에 의해 약제학적으로 허용되는 염을 제조하는데 중간체로서 사용된 경우에, 특정한 염 자체가 중간 생성물로서만 요구되는 경우일지라도 모든 산 부가염이 유리 염기 형태의 공급원으로서 유용하다. 본 발명의 범주 내에 속하는 약제학적으로 허용되는 염은 다음 산으로부터 유도된 것이다: 염산, 황산, 인산 및 설팜산 등의 무기산; 및 아세트산, 시트르산, 락트산, 타르타르산, 말론산, 메탄설폰산, 에탄설폰산, 벤젠설폰산, p-톨루엔설폰산, 사이클로헥실설팜산, 퀸산 등의 유기산. 상응하는 산 부가염은 각각 다음을 포함한다: 하이드로할라이드, 예를 들면, 하이드로클로라이드 및 하이드로브로마이드, 설페이트, 포스페이트, 니트레이트, 설파메이트, 아세테이트, 시트레이트, 락테이트, 타르타레이트, 말로네이트, 옥살레이트, 살리실레이트, 프로피오네이트, 석시네이트, 푸마레이트, 말레에이트, 메틸렌-비스-β-하이드록시나프토에이트, 겐티세이트, 메실레이트, 이세티오네이트 및 디-p-톨루오일타르트레이트, 메탄설포네이트, 에탄설포네이트, 벤젠설포네이트, p-톨루엔설포네이트, 사이클로헥실설파메이트 및 퀴네이트.
본 발명의 추가의 특징에 따르면, 본 발명에 따르는 화합물의 산 부가염은 공지된 방법을 적용하거나 이를 적절하게 변형시킴으로써 유리 염기를 적당한 산과 반응시켜 제조한다. 예를 들면, 본 발명에 따르는 화합물의 산 부가염은 유리 염기를 적당한 산을 함유하는 수성 또는 수성-알콜 용액에 용해시키거나 기타 적합한 용매에 용해시킨 다음, 이 용액을 증발시킴으로써 상기 염을 분리시키는 방법, 또는 유리 염기와 산을 유기 용매에서 반응시키는 방법(이러한 경우에는, 염을 직접적으로 분리시키거나 용액을 농축시킴으로써 수득할 수 있다)에 의해 제조한다.
본 발명에 따르는 화합물의 산 부가염은 공지된 방법을 적용하거나 이를 적절하게 변형시킴으로써 염으로부터 재생시킬 수 있다. 예를 들면, 본 발명의 화합물을 알칼리, 예를 들면, 중탄산나트륨 수용액 또는 암모니아 수용액으로 처리함으로써 이의 산 부가염으로부터 재생시킬 수 있다.
본 발명의 화합물을 산성 잔기로 치환하는 경우에는, 염기 부가염이 형성될 수 있고 이것이 사용하기에 보다 편리한 간단한 형태이며; 실제적으로, 염 형태의 용도는 본질적으로 유리 산 형태의 용도와 매한가지다. 염기 부가염을 제조하는데 사용될 수 있는 염기에는 바람직하게는, 유리 산과 결합될 때 약제학적으로 허용되는 염, 즉 이의 양이온이 약제학적 투여량의 염에서 동물 유기체에게 무독성이어서 유리 산이 본래 지니고 있는 특성인 혈소판 응집 및 혈전 형성에 대한 유익한 억제 효과가 상기 양이온으로 인한 부작용에 의해 손상되지 않게 하는 염을 생성시키는 염기가 포함된다. 본 발명의 범주 내에 속하는, 알칼리 금속염 및 알칼리 토금속염을 포함한 약제학적으로 허용되는 염은 다음 염기로부터 유도된 것이다: 수소화나트륨, 수산화나트륨, 수산화칼륨, 수산화칼슘, 수산화알루미늄, 수산화리튬, 수산화마그네슘, 수산화아연, 암모니아, 에틸렌디아민, N-메틸-글루카민, 리신, 아르기닌, 오르니틴, 콜린, N,N-디벤질에틸렌-디아민, 클로로프로카인, 디에탄올아민, 프로카인, N-벤질펜에틸아민, 디에틸아민, 피페라진, 트리스(하이드록시메틸)-아미노메탄, 테트라메틸암모늄 하이드록사이드 등.
본 발명에 따르는 화합물의 금속 염은 수성 또는 유기 용매 중의 선택된 금속의 하이드라이드, 하이드록사이드, 카보네이트 또는 유사한 반응성 화합물을 유리 산 형태의 당해 화합물과 접촉시킴으로써 수득할 수 있다. 이용된 수성 용매는 물일 수 있거나 물과 유기 용매, 바람직하게는 메탄올 또는 에탄올 등의 알콜, 아세톤 등의 케톤, 테트라하이드로푸란 등의 지방족 에테르, 또는 에틸 아세테이트 등의 에스테르와의 혼합물일 수 있다. 이러한 반응은 통상적으로 주위 온도에서 수행되지만, 경우에 따라 가열하면서 수행할 수도 있다.
본 발명에 따르는 화합물의 아민 염은 수성 또는 유기 용매 중의 아민을 유리 산 형태의 당해 화합물과 접촉시킴으로써 수득할 수 있다. 적합한 수성 용매에는 물, 및 물과 메탄올 또는 에탄올 등의 알콜, 테트라하이드로푸란 등의 에테르, 아세토니트릴 등의 니트릴, 또는 아세톤 등의 케톤의 혼합물이 포함된다. 아미노산 염을 유사하게 제조할 수 있다.
본 발명에 따르는 화합물의 염기 부가염은 공지된 방법을 적용하거나 이를 적절하게 변형시킴으로써 염으로부터 재생시킬 수 있다. 예를 들면, 본 발명에 따르는 화합물을 산, 예를 들면, 염산으로 처리함으로써 이의 염기 부가염으로부터 재생시킬 수 있다.
본 발명에 따르는 화합물의 염은 그 자체로서 활성 화합물로서 유용할 뿐만 아니라, 당해 분야의 숙련인에게 널리 공지된 기술에 의해 상기 염과 모 화합물, 부산물 및/또는 출발 물질과의 용해도 차이를 이용함으로써 당해 화합물을 정제시키는데 유용하다.
본 발명에 따르는 화합물은 비대칭 중앙을 함유할 수 있다. 이들 비대칭 중안은 독립적으로 R 또는 S 배위일 수 있다. 당해 분야의 숙련인은 화학식 Ⅰ의 특정 화합물이 기하학적 이성체를 나타낸다는 것은 명백히 인지할 것이다. 기하 이성체에는 알케닐 잔기를 갖는 본 발명에 따르는 화합물의 시스 및 트랜스 형태가 포함된다. 본 발명은 개개의 기하 이성체 및 입체 이성체, 및 이들의 혼합물을 포함한다.
이러한 이성체를, 공지된 방법, 예를 들면, 크로마토그래피 기술 및 재결정화 기술을 적용하거나 이를 적절하게 변형시킴으로써 이들의 혼합물로부터 분할할 수 있거나, 이들 이성체를, 예를 들면, 본원에 기재된 방법을 적용하거나 이를 적절하게 변형시킴으로써 이들의 중간체의 적당한 이성체로부터 별도로 제조한다.
본원에 참조문헌으로 삽입된 미국 특허 제08/138,820호 및 제08/476,750호에는 화학식 Ⅱ의 비결정성 화합물, 및 특히 화학식 Ⅰ의 비결정성 화합물을 제조하는 방법이 기재되어 있다.
본 발명에 따르는 화학식 Ⅱ의 화합물, 및 특히 화학식 Ⅰ의 결정성 화합물을 제조하기 위한 본 발명에 따르는 신규의 방법이 다음 반응식 Ⅱ에 제시된 합성법으로 기술된다:
상기식에서,
B, E1, E2, G, R, m, n 및 p는 앞서 정의된 바와 같고,
P1은 벤질과 같은 수소화 불안정한 산 보호 그룹이며,
P2는 t-부톡시카보닐(BOC)와 같은 산 불안정한 아민 보호 그룹이고,
P3은 벤질옥시카보닐(CBZ)과 같은 수소화 불안정한 아민 보호 그룹이다.
화학식 Ⅱ의 화합물 또는 이에 대한 중간체를 제조하는 동안, 천연 아미노산 또는 슈도 아미노산 상에 존재하는 화학적으로 활성인 치환체들 간의 교차 반응을 방지하는 것이 바람직하거나 필요할 수도 있다. 이러한 치환체는 목적하는 생성물 또는 중간체를 제공하도록 공지된 방법에 의해, 필요에 따라 연속적으로 제거되거나 유지될 수 있는 표준 차단 그룹에 의해 보호시킬 수 있다[참조: Green, "Protective Groups in Organic Synthesis", Wiley, New York, 1981]. 존재하는 치환체를 전환 또는 제거하거나, 또는 연속적인 반응으로 목적하는 최종 생성물을 제공하도록 선택적으로 보호 및 탈보호시키는 것이 필요하거나 바람직할 수 있다.
반응식 Ⅱ의 공정이 화학식 Ⅱ의 화합물의 제조 방법을 예시하고 있긴 하지만, 적당한 출발 물질을 사용하여 화학식 Ⅰ의 화합물을 제조한다는 것을 인지해야 한다. 반응식 Ⅱ에 따라서 화학식 Ⅰ의 화합물을 제조하는데 있어서, B는 에틸이고 E1는 H이며 E2는 사이클로헥실메틸이고 G는 NH2이며, R은 H이고, m은 3이고, n은 3이며, p는 1이고, P1은 벤질이며, P2는 BOC이고, P3은 CBZ이다.
화학식 Ⅰ의 화합물을 제조하기 위한 본 발명에 따르는 또 다른 방법은 화학식 Ⅲ의 화합물을 화학식 Ⅳ의 화합물 대신 사용하여 화학식 Ⅴ의 중간체를 수득하는 것을 제외하고는 반응식 Ⅱ에서와 동일하다:
상기식에서,
R은 H이고,
m은 3이며,
n은 3이고,
p는 1이며,
P3은 앞서 정의된 바와 같은 CBZ이며
B는 에틸이고,
E1은 H이고,
E2는 사이클로헥실메틸이며,
G는 NH2이고,
P1은 벤질이다.
반응식 Ⅱ는 본 발명에 따르는 화학식 Ⅵ의 중앙의 디펩티드 중간체를 형성하는 것으로부터 출발하여 본 발명에 따르는 화합물을 제조하는 5단계 방법을 나타내고 있다:
상기식에서,
B, p, P2및 P1은 앞서 정의된 바와 같다.
화학식 Ⅰ의 화합물을 제조하는 경우에는, 본 발명에 따르는 중앙의 디펩티드 중간체는 BOC-N(Et)Gly-(L)-Asp(OBzl)-OH이다. 이러한 중앙의 디펩티드 중간체는 유리 카복실산 잔기를 보호하지 않고 제조한다.
반응식 Ⅱ의 단계 2에서는, 디클로로메탄, 또는 에틸 아세테이트(조용매로서의 DMF의 존재하 또는 부재하에서)와 유기 염기(예: NMM)의 혼합물 중에서 커플링시켜 중앙의 디펩티드를 형성할 수 있으며, 이러한 커플링은 약 실온 내지 약 40℃에서 수행할 수 있다. 커플링시키기 위해 다음 화학식의 아미노산 또는 슈도 아미노산을 활성화시키는 것은 디사이클로헥실카보디이미드의 작용을 통하여 p-니트로페놀, 펜타플루오로-페놀 및 N-하이드록시-석신이미드와의 분리되지 않은 활성 에스테르를 사용하여 수행할 수 있다:
커플링 시간은 커플링되는 아미노산 또는 슈도 아미노산, 활성화제, 용매 및 온도에 따라서 약 1 내지 약 20시간 범위 내이다. 단계 1의 중앙 디펩티드 생성물은 분리되지 않는다. 단계 1의 반응 혼합물을 전형적으로 물 또는 묽은 수성 산(예: 수성 HCl)로 세척한 다음 건조시키지 않고 단계 2에 직접적으로 사용한다. 페놀계 활성 에스테르가 사용된 경우에는, 중앙 디펩티드 생성물을 상기 반응 혼합물로부터 알칼리성 물로 추출한 다음 산성화된 수성 용액으로부터 유기 용매로 재추출하며; 이러한 용액을 단계 2에서와 같이 직접적으로 반응시킨다.
화학식 Ⅵ의 디펩티드 중간체를 사용하여 본 발명에 따르는 화학식 Ⅶ의 트리펩티드 중간체를 제조한다:
상기식에서,
B, E, F, G, p 및 P1은 앞서 정의된 바와 같고,
P2'는 P2또는 TFA·H-이다.
P2'가 TFA·H-인 경우, 부호 "·"는 TFA가 해리되어 F3CCO2 -와 H+를(여기서, H+는 화학식 Ⅶ의 화합물 중의 말단 아민에 양자를 가한다) 형성하는 것을 나타내는데, 즉 화학식 Ⅶa의 TFA 염이 생성되는 것을 나타낸다:
화학식 Ⅰ의 화합물을 제조하는데 있어서는, 본 발명에 따르는 트리펩티드 중간체가 P2'-N(Et)Gly-(L)-Asp(OBzl)-(L)-Cha-NH2이다.
단계 2에서는, 디클로로메탄, 또는 에틸 아세테이트와 DMF 또는 THF의 혼합물 중에서 대략 실온이나 실온 이하의 온도하에 아미노산 또는 슈도 아미노산을 중앙 디펩티드에 커플링시킬 수 있다. 커플링시키기 위해 다음 화학식의 중앙 디펩티드를 활성화시키는 것은 디사이클로헥실카보디이미드의 작용을 통하여 펜타플루오로-페놀 또는 N-하이드록시-석신이미드와의 분리되지 않은 활성 에스테르를 사용하여 수행할 수 있다:
활성화는 이소프로필 클로로포르메이트를 사용하여 수행할 수도 있다. 반응 시간은 커플링되는 아미노산 또는 슈도 아미노산, 활성화제, 용매 및 온도에 따라서 약 1 내지 약 20시간 범위 내이다. 이러한 트리펩티드 생성물은 분리되지 않는다. 트리펩티드 중간체가 분리되지 않는 경우에는, 상기 반응 혼합물을 수성 N-메틸 모르폴린 등의 수성 유기 염기 및 수성 HCl 등의 수성 산으로 세척하고 수성 세척 후에 건조시키지 않고 단계 3의 방법을 통하여 "본래대로" 반응시킨다.
반응식 Ⅱ의 단계 3에서는, 디클로로메탄 중의 트리플루오로아세트산의 용액을 사용하거나 아세트산 중의 HBr과 에틸 아세테이트의 혼합물을 사용하여, 단계 2의 트리펩티드 생성물로부터 BOC 등의 보호 그룹을 제거할 수 있다. 이러한 반응은 약 실온에서 수행할 수 있으며 약 1시간(HBr 방법) 및 2시간(TFA 방법)이 소요된다. 이러한 트리펩티드의 산 염 생성물은 상기 혼합물로부터 직접적으로 결정성 고체로서 여과시키거나(HBr 방법), 증류시켜 부분적으로 용매를 제거하고 비극성 용매를 포트 잔기에 가한 후에 결정성 고체로서 여과시켜 분리한다.
본 발명에 따르는 추가의 공정은 BOC-N(Et)Gly-OH로부터 TFA·H-N(Et)Gly-(L)-Asp(OBzl)-(L)-Cha-NH2를 신속하고도 간단하게 제조하기 위한 단일의 연계된 공정으로서 기술되며, 이러한 공정은 반응식 Ⅱ의 첫 번째 2가지 커플링 단계와 TFA로의 처리 단계를 포괄하는 원-포트 반응이다. TFA·HN(Et)Gly-(L)-Asp(OBzl)-(L)-Cha-NH2는 이것이 연계된 반응 용액으로부터 직접적으로 결정화되기 때문에 독자적으로 수득된다. 이와 같이 연계된 공정은 반응식 Ⅱ에서의 상응하는 3가지 별도의 반응을 생략시켜 주고 상기 언급된 문제점들을 해결해 주어 제작 환경에 유용한 단순하고도 시간 및 비용 면에서 효율적인 합성법을 확립시켜 준다.
반응식 Ⅱ는 통상적인 순서와는 반대로, N-보호된 아미노산으로 시작한 다음 카복실 말단에 가하는 역순으로 폴리펩티드를 작제하는 것을 나타내는데, 여기서는 보호된 C-말단 아미노산의 아민 말단에서 연속적인 아미드화에 의해 폴리펩티드를 작제한다. 이러한 본 발명에 따르는 역순의 합성법에서는 단지 첫 번째 아미노산의 질소 보호만을 요구하기 때문에, 아민 또는 산 말단(측쇄 작용성 그룹은 제외됨)에서 보호되지 않은 연속되는 아미노산의 전방 지점부터 사용하는 것이 가능하다. 이러한 역순 합성법은 또한, 용액상 펩티드 화학에 통상적으로 요구된 배치식 공정과는 반대로 연속식으로 제조하는 기술을 사용할 수 있기 때문에, 화학식 Ⅱ의 화합물 및 특히 화학식 Ⅰ의 화합물을 능률적으로 제조한다. 이러한 신규의 접근 방법은 아민 말단이 보호된 아미노산을 구입할 필요가 없기 때문에 생산 단가를 절감시킨다. 어떠한 특수 장비, 시약 또는 분석 방법이 요구되지 않는다.
본 발명에 따르는 또 다른 방법은 반응식 Ⅱ에 기재된 바와 같은 방법 및 언급된 또 다른 반응 단계들에 의해 제조된 흡습성의 결정성 N-[N-[N-(4-(피페리딘-4-일)부타노일)-N-에틸글리실]-(L)-아스파르틸]-(L)-β-사이클로헥실알라닌 아미드로부터 신규의 고체 상태 전환 공정에 의해, 안정한 비-흡습성의 결정성 N-[N-[N-(4-(피페리딘-4-일)부타노일)-N-에틸글리실]-(L)-아스파르틸]-(L)-β-사이클로헥실알라닌 아미드를 재생가능한 수준으로 형성시키는 것이다.
흡습성의 결정성 형태의 N-[N-[N-(4-(피페리딘-4-일)부타노일)-N-에틸글리실]-(L)-아스파르틸]-(L)-β-사이클로헥실알라닌 아미드는 물리적으로 불안정하고 습도 및 온도 조건에 노출될 때 고도로 안정한 비-흡습성의 결정성 형태의 N-[N-[N-(4-(피페리딘-4-일)부타노일)-N-에틸글리실]-(L)-아스파르틸]-(L)-β-사이클로헥실알라닌 아미드로 전환된다.
흡습성의 결정성 형태의 N-[N-[N-(4-(피페리딘-4-일)부타노일)-N-에틸글리실]-(L)-아스파르틸]-(L)-β-사이클로헥실알라닌 아미드로부터 고도로 안정한 비-흡습성의 결정성 형태의 N-[N-[N-(4-(피페리딘-4-일)부타노일)-N-에틸글리실]-(L)-아스파르틸]-(L)-β-사이클로헥실알라닌 아미드로 전환시키기 위한 본 발명에 따르는 일반적인 조건은 정적 및 동적 조건하에서 이루어졌다.
본 발명에 따르는 정적 과정은 정적 전환 과정으로서 기술되는데, 이는 상기 과정이 바이알이나 트레이와 같은 움직이지 않는 용기에 놓여진 흡습성의 결정성 형태의 N-[N-[N-(4-(피페리딘-4-일)부타노일)-N-에틸글리실]-(L)-아스파르틸]-(L)-β-사이클로헥실알라닌 아미드를 환경이 통제된 방에서 특정한 온도 및 습도 조건에 노출시키는 것을 포함하기 때문이다. "정적" 전환 과정은 약 20 내지 약 80℃, 더욱 바람직하게는 약 40 내지 약 80℃ 및 약 40% 내지 약 100%RH, 바람직하게는 약 65 내지 약 80%RH의 온도 및 상대 습도에서 수행한다.
본 발명에 따르는 동적 과정은 동적 전환 과정으로 기술되는데, 이는 상기 과정이 흡습성의 결정성 형태의 N-[N-[N-(4-(피페리딘-4-일)부타노일)-N-에틸글리실]-(L)-아스파르틸]-(L)-β-사이클로헥실알라닌 아미드를 정적 모델에서와 같은 습도 및 온도하의 인큐베이션 하에 노출시키긴 하지만, 흡습성의 결정성 형태의 N-[N-[N-(4-(피페리딘-4-일)부타노일)-N-에틸글리실]-(L)-아스파르틸]-(L)-β-사이클로헥실알라닌 아미드를 회전 증발용 플라스크 또는 진탕용 프로펠라가 장착된 실린더형 용기(습도 조절된 오븐 중의)에서 텀블링시키는 것을 포함한 진탕 수단 하에 노출시키는 것을 포함하기 때문이다.
다음 실시예는 본 발명을 예시하기 위한 것이고 이로써 본 발명의 범위가 제한되지는 않는다.
달리 언급되지 않는 한, 보고된 질량 스펙트럼 분석 데이터는 VG 70SE 상에서 수행된 저 분해 고속 원자 충격 값이며, 여기서 "계산된"값이 (M+H)+이다. 핵 자기 공명(NMR) 스펙트럼 데이터는 D2O 중에서 Brucker ACF 300 상에서 수득된 것이다. 섬광 크로마토그래피는 실리카 겔 상에서 수행한다. 고성능 액체 크로마토그래피(HPLC)는 입자 크기가 8 내지 15μ 범위인 C-18 역상 컬럼 상에서 수행한다.
달리 언급되지 않는 한, 보고된 X레이 분말 회절 그래프는 스캔 분말 샘플에 대한 Cu 방사선 공급원(1.8kW, 45kV 및 40mA)을 사용하여 시멘스 D5000 회절계를 사용하여 수득한다. 이러한 샘플을 측정에 앞서 분쇄시켜 피크 세기에 대한 입자 크기 효과를 제거한다. 샘플 약 60mg을 1.5 x 1cm 샘플 홀더에 부하하고 0.04。의 단계 크기 및 단계 당 1초의 총 노출을 이용하여 3 내지 40。 2 델타(2θ)로 스캐닝한다.
실시예 1
BOC-N(Et)Gly-(L)-Asp(OBzl)-OH의 제조(반응식 Ⅱ의 단계 1)
1L들이 3목 환저 플라스크에 BOC-N(Et)Gly-OH 51g(0.25mole), PNP 35g(0.25mole), EtOAc 400ml 및 DMF 100ml를 가한다. 이 혼합물을 교반시켜 용액을 형성하고 이를 4 내지 6℃로 냉각시킨다. 온도를 약 5℃ 내지 약 8℃로 유지시키면서 EtOAc 125ml 중의 DCC 51.5g(0.25mole)의 용액을 10분 동안 적가한다. 모든 DCC를 가한 후, 냉각 욕을 제거하고 혼합물이 실온(20 내지 22℃)으로 가온됨에 따라 이를 1.5시간 동안 교반시킨다. 이러한 기간 동안에 고체가 침전되고 DCU가 형성된다. PNP 에스테르 형성이 완료되었는지는 분석용 HPLC에 의해 결정한다(BOC-N(Et)Gly-OH가 사라짐). 반응 혼합물을 여과시키고 DCU 잔사를 EtOAc 2-50ml 분획으로 세척하고 세척액을 여액에 가한다. DCU를 따라 낸다.
이와 같이 교반되고 여과된 용액에 NMM 150ml(138g, 1.36mole) 중의 슬러리로서 H2N-(L)-Asp(OBzl)-OH 67g(0.3mole)을 가한다. 이 혼합물을 38 내지 40℃로 가열하고 이 온도에서 41시간 동안 유지키고, 이때 분석용 HPLC는 BOC-N(Et)Gly-OPNP 소모가 완료되었음을 지시해준다. 이 반응 혼합물을 25℃로 냉각시키고 반응되지 않은 H2N-(L)-Asp(OBzl)-OH을 여과 제거한다. 이 용액을 냉각시키고 재여과시켜 1.2g을 더 수득한다(21.7g 회수됨; 11.2g은 20% 과량 첨가되었음을 나타내고 10.5g(0.047mole)은 반응되지 않은 물질을 나타낸다).
여과된 용액을 2L용 스큅(Squibb) 깔대기에서 탈이온수 500ml 한 분획으로 추출한 다음 2-250ml 분획으로 추출한다. 합한 수용액을 1:1 MTBE/EtOAc 3-300ml 분획으로 추출하여 잔류성 PNP(HPLC 분석은 단지 미량만이 잔존하는 것으로 나타났다)을 제거한 다음, 5℃로 냉각시키고 진한 HCl 150ml를 적가함으로써 pH를 8.9에서 1.79로 산성화시킨다. 이와 같이 산성화된 수용액을 EtOAc 2-200ml 분획으로 추출한다. 이 수용액의 HPLC 분석은 어떠한 목적 생성물도 잔류하지 않은 것으로 나타났다. EtOAc 추출물을 합하고 MgSO4로 건조시키며, 여과한 다음 35℃에서 회전 증발시켜 농축시킨다. 이로써 생성된 연한 오렌지색 오일을 35℃에서 펌핑하여 잔류성 용매을 최대한도로 제거하여 오일로서 BOC-N(Et)Gly-(L)-Asp(OBzl)-OH 85.69G을 수득한다(21.3mmole, 85.5% 수율, 잔류성 용매에 대해서는 교정되지 않음).
특징 확인:
NMR(250MHz): 7.3ppm(δ), 5.1ppm(δ), 3.3ppm(dq), 3.0(dq), 1.4ppm(s), 1.1(t)
MS: M=408; M+1관찰= 409
HPLC: 90.79A%(3.87A% p-니트로페놀, e에 대해 교정되지 않음)
원소 분석: C20H28N2O7: H,N; Cfd57.54, Ccal58.81
실시예 2
BOC-N(Et)Gly-(L)-Asp(OBzl)-(L)-Cha-NH2의 제조(반응식 Ⅱ의 단계 2)
방법 A: 이소프로필 클로로포르메이트 방법
1당량의 BOC-N(Et)Gly-(L)-Asp(OBzl)-OH을 EtOAc(6 내지 8용적; 1:6.5 wt:vol)에 용해시키고 -15 내지 0℃의 온도로 유지시킨다. 온도를 약 -15℃ 내지 약 0℃로 유시시키면서 NMM(1 당량)을 가한다. 이소프로필 클로로포르메이트(1 내지 1.1 당량)을 -15 내지 0℃에서 보호된 디펩티드 용액에 가한다. 반응물을 2 내지 5분 동안 -15 내지 0℃로 유지시킨다. THF(10 용적; 1:10 Wt:vol) 중의 H2N-(L)-Cha-NH2(1당량)의 용액을 -15 내지 0℃로 유지시키면서 상기 냉각된 디펩티드 용액에 가한다. 15분, 1시간 및 2시간에 수득된 동일 공정내의 대조군(HPLC) 샘플을 이용하여 반응을 모니터하여 반응이 완료되었는지를 평가한다(관찰된 디펩티드의 양이 HPLC 분석에 의해 10면적% 미만이면 반응은 완료된 것이다).
BOC-트리펩티드 생성물이 반응 용액으로부터 직접적으로 침전되고 이를 반응 혼합물로부터 여과시키고, EtOAc으로 세척하며(2X, 1 용적; Wt:vol), 진공하에 건조시킨다. 전형적인 수율은 〉60%이고, 순도는 90〉A%이며; 아스파르트산-에피머성 부분입체이성체의 〈1A%가 전형적으로 관찰되었다.
EtOAc 슬러리는 BOC-N(Et)Gly-(L)-Asp(OBzl)-(L)-Cha-NH2를 60%의 최종 수율로 제공해주며 부분입체이성체를 〈0.5%로 감소시키면서 순도를 〉95%로 개선시켜 준다.
이소프로필 클로로포르메이트 방법의 구체적인 예로서, 방법 A의 일반적인 과정이 수행되고 BOC-N(Et)Gly-(L)-Asp(OBzl)-OH 4.55g(8.1mmole)이 사용되는 경우에는, 제조된 BOC-N(Et)Gly-(L)-Asp(OBzl)-(L)-Cha-NH2의 양이 3.26g(97.9A% 순도, 0.3A% 부분입체이성체; 70% 이론상 수율)이다.
방법 B: 펜타플루오로-페놀-DCC 복합체 방법
펜타플루오로 페놀(PFP, 2.9당량) 및 DCC(1당량)을 실온에서 EtOAc(5 용적; 1:5 Wt:vol)에 용해시키고 -15 내지 0℃로 냉각시킨다. BOC-N(Et)Gly-(L)-Asp(OBzl)-OH 1당량을 EtOAc(6용적; 1:6 Wt:vol)에 용해시키고, 미리 DMF(10용적; 1:10 Wt:vol)에 용해시킨 H2N-(L)-Cha-NH21당량과 혼합한다. -15 내지 0℃로 유지시키면서 디펩티드/H2N-(L)-Cha-NH2용액을 PFP와 DCC의 용액에 적가한다. 반응물을 15 내지 22℃에서 5 내지 16시간 동안 유지시키고 1시간, 2시간, 3시간, 4시간 및 16시간에 수득된 동일 공정내의 대조군(HPLC) 샘플을 이용하여 반응을 모니터하여 반응이 완료되었는지를 평가한다(관찰된 디펩티드의 양이 HPLC 분석에 의해 2면적% 미만이면 반응은 완료된 것이다).
반응 혼합물을 여과시키고 필터 케이크(DCU)를 EtOAc(2 X 0.5 용적; Wt:vol)로 세척한다. 여액을 물(10 용적; 1:10 Wt:vol)로 세척하고 수층을 제거한다. EtOAc 층을 물(1 X 5 용적; 1:5 Wt:vol)으로 세척한다. EtOAc 층을 냉각시켜 생성물을 침전시키고, 이를 여과시킨 다음 EtOAc((2 X 0.4 용적; 1:0.4 Wt:vol)으로 세척한다. 분리된 몰 수율은 〉60%이고 전형적인 순도는 〉90A%이다(1 내지 4A%의 아스파르트산-에피머성 부분입체이성체).
EtOAc 재-슬러리는 BOC-N(Et)Gly-(L)-Asp(OBzl)-(L)-Cha-NH2를 60%의 최종 수율로 제공해주며 부분입체이성체를 〈0.5%로 감소시키면서 순도를 〉99A%로 개선시켜 준다.
펜타플루오로-페놀 DCC 복합체 방법의 구체적인 예로서, 방법 B의 일반적인 과정이 수행되고 BOC-N(Et)Gly-(L)-Asp(OBzl)-OH 10g(24.5mmole)이 사용되는 경우에는, 제조된 BOC-N(Et)Gly-(L)-Asp(OBzl)-(L)-Cha-NH2의 양은 8.15g(99A% 순도, 0.49A% 부분입체이성체; 70% 이론상 수율)이다.
방법 C: 하이드록시벤조트리아졸(HOBT)/2-(1H-벤조트리아졸-1-일)-1,1,3,3-테트라메틸우로늄 테트라플루오로보레이트(TBTU) 방법
1당량의 BOC-N(Et)Gly-(L)-Asp(OBzl)-OH를 DMF(9 내지 10용적; 1:10 Wt:vol)에 용해시키고 주위 온도에서 유지시킨다. 이 용액에 H2N-(L)-Cha-NH2(1당량) 및 하이드록시벤조트리아졸(HOBT, 1당량)을 가한다. 생성된 용액을 약 0 내지 10℃로 냉각시키고 NMM(1 내지 1.1당량)을 가한다. 커플링제인 TBTU(1 내지 1.1당량)을 DMF(4 내지 5용적; 1:5 Wt:vol)에 용해시키고 0 내지 약 10℃에서 보호된 디펩티드 용액에 가한다. HPLC 분석이 반응의 완료를 지시할 때까지(출발 물질 2면적% 미만) 상기 용액을 약 10 내지 약 25℃에서 약 3시간 동안 교반시킨다. 이 반응 혼합물을 5% 수성 염화나트륨(약 4용적 대 반응 용적)과 EtOAc(약 2 용적 대 반응 용적)의 교반된 혼합물에 가한다. 상을 분리하고 수성 상을 부가 분획의 EtOAc(약 1.5용적 대 반응 용적)로 추출한다. 유기 상을 합하고 0.5N 수성 시트르산(약 0.6 내지 0.7 용적 대 유기 상 용적), 10% 수성 중탄산나트륨(약 0.6 내지 0.7 용적 대 유기 상 용적, 2회) 및 25% 수성 염화나트륨(약 0.3 내지 0.4 용적 대 유기 상 용적)으로 연속적으로 세척한다. 생성된 유기 상을 약 30 내지 50℃에서 감압하에 약 1/4 내지 1/2 용적으로 농축시키고, 이러한 가온된 용액에 등 용적의 헵탄을 가한다. 혼합물을 교반시키고 약 0 내지 약 20℃로 냉각시켜 목적하는 트리펩티드를 침전시킨다. 이 고체를 여과시키고, EtOAc와 헵탄의 혼합물로 세척한 다음 건조시킨다. 전형적인 수율은 〉60%이고, 전형적인 순도는 〉95.7A%이며, 아스파르트산-에피머성 부분입체이성체의 수준은 2A%이다.
HOBT/TBTU 방법의 구체적인 예로서, 방법 C의 일반적인 과정이 수행되고 BOC-N(Et)Gly-(L)-Asp(OBzl)-OH 10g(24.5mmole)이 사용되는 경우에는, 제조된 BOC-N(Et)Gly-(L)-Asp(OBzl)-(L)-Cha-NH2의 양은 9.3g(96,1A% 순도, Asp에서 1.77A% 부분입체이성체; 67.7% 이론상 수율)이다.
질량 스펙트럼: M계산560.7; M+1관찰561
mp 182.17(DSC)
1H NMR(δ 대 TMS, D6 DMSO): 0.89m(1H); 0.94,m(1H); 1.0,dt(2H); 1.15,m(2H); 1.06-1.3,m(4H); 1.36,d(9H); 1.4-1.74,m(6H); 2.65,m(1H); 2.85,m(1H); 3.18,m(2H); 3.75,d(2H); 4.2,s(1H); 4.66,d(1H); 5.08,s(2H); 7.02,s(1H); 7.18,d(1H); 7.36,s(5H); 7.88,dd(1H); 8.24,dd(1H).
실시예 3
TFA-N(Et)Gly-(L)-Asp(OBzl)-(L)-Cha-NH2의 제조(반응식 Ⅱ의 단계 3)
BOC-N(Et)Gly-(L)-Asp(OBzl)-(L)-Cha-NH2을 디클로로메탄(약 1:12 wt/wt)에 용해시키고, 이 용액에 TFA를 주위 온도에서 가한다. 이어서, HPLC가 반응 완료(3 내지 5시간)를 지시할 때까지 이를 교반시킨다. 상기 용액을 40 내지 45℃에서 약 1/2 용적으로 농축시킨다. 온도를 〉40℃로 유지시키면서, 이러한 가온된 용액에 MTBE을 가한다(BOC-N(Et)Gly-(L)-Asp(OBzl)-(L)-Cha-NH2에 대비해서 약 1:19 wt/wt). 이 혼합물을 약 5℃로 서서히 냉각시키고 1시간 동안 교반시켜 결정화를 완료시킨다. 생성된 고체를 여과시키고, 냉각된 MTBE로 세척한다. 이 고체를 감압하에 건조시키고 TFA-N(Et)Gly-(L)-Asp(OBzl)-(L)-Cha-NH2의 함량(HPLC wt/wt 검정)에 대해 분석한다. 수득량은 거의 정량적이며 순도는 〉95A%이다.
질량 스펙트럼: M계산460(유리 염기); M+1관찰461
원소 분석: C26H37N4O7F3; H,N,F,C 54.35, fd., 53.82
1H NMR(δ 대 TMS, D6DMSO): 0.9,m(2H); 1.15,t(6H); 1.5,m(1H); 1.5-1.8,m(6H); 2.65,dd(1H); 2.9m(3H); 3.7,s(2H); 3.9,m(2H); 4.2,m(1H); 4.75,m(1H); 5.1,s(2H); 7.0,s(1H); 7.15,s(1H); 7.2,s(5H); 8.13,d(1H); 8.7-8.8,m(3H).
13C NMR(특징적 시그날, δ 대 TMS, D6 DMSO); 10.76, 25.49, 25.68, 25.96, 31.66, 33.07, 33.36, 36.25, 38.59, 41.88, 47.02, 49.40, 50.47, 65.71, 127.81-128.34, 135.82, 165.10, 169.34, 173.79.
탈보호의 구체적인 예가 표 A에 제시되어 있다.
실험 실시예 반응 규모량(BOC-N(Et)Gly-(L)-Asp(OBzl)-(L)-Cha-NH2) 수율 및 A % 순도(TFA·N(Et)Gly-(L)-Asp(OBzl)-(L)-Cha-NH2)
실시예 1 7.5g(13.3mmol) 7.4g(12.9mmol) 97% 수율;98.8A% 순도
실시예 2 6.53g(11/6mmol) 6.4g(11.1mmol) 96% 수율;98.47A% 순도
실시예 4
CBZ-PipBu-N(Et)Gly-(L)-Asp(OBzl)-(L)-Cha-NH2의 제조(반응식 Ⅱ의 단계 4)
EtOAc, DMF 및 물(TFA·N(Et)Gly-(L)-Asp(OBzl)-(L)-Cha-NH2에 대해 총 100:8:4 v/v, -11:1 v/wt) 중의 등몰량의 TFA·N(Et)Gly-(L)-Asp(OBzl)-(L)-Cha-NH2, CBZ-PipBu 및 TBTU의 현탁액을 제조한다. 이 현탁액을 0 내지 10℃로 냉각시키고 약 3 내지 4당량의 NMM을 가한다. 이 혼합물을 실온으로 가온시키고 HPLC가 반응 완료를 지시할 때까지 교반시킨다(1 내지 3시간; 이 기간 동안 용액이 생성된다). 물을 가하고(가해진 본래 양의 물의 2 내지 3배) 상을 분리시킨다. 수성 상을 회수하고 유기 상을 2분획 이상의 물로 세척한다. 이들 합한 수성 세척액을 EtOAc로 역추출하고 합한 유기 상을 25% 수성 염화나트륨으로 세척한다. 유기 상을 감압하에 약 1/2 용적으로 농축시키고, MTBE(용액 용적에 대해 약 1/2 v/v)을 가한다. 이 혼합물을 결정화시키고(수 시간) 용액을 여과시켜 수집하고, 냉각된 EtOAc와 MTBE의 혼합물로 세정한다. 고체를 감압하에 건조시킨다. CBZ-PipBu-N(Et)Gly-(L)-Asp(OBzl)-(L)-Cha-NH2의 함량을 HPLC wt/wt 검정에 의해 분석한다. 수율은 〉80%이고 순도는 〉95A%이다.
상기 제조 방법의 구체적인 예로서, 단계 4의 일반적인 과정이 수행되는 경우에는, TFA·N(Et)Gly-(L)-Asp(OBzl)-(L)-Cha-NH27.25g이 CBZ-PipBu-N(Et)Gly-(L)-Asp(OBzl)-(L)-Cha-NH27.9g(〉99A% 순도, Asp에서 0.08A% 부분입체이성체; 84% 이론상 수율)을 제공한다.
원소 분석: C41H57N5O8; H,N,C 65.84, fd., 65.38
질량 스펙트럼: M계산747; M+1관찰748
mp 101.6(DSC)
1H NMR(δ 대 TMS, CDCl3): 0.88m(1H); 0.98,m(1H); 1.13,m(2H); 1.23,m(6H); 1.4,m(1H); 1.62-1.76,m(8H); 1.86,qd(1H); 2.35,t(1H); 2.74,dd(2H); 3.25,dd(1H); 3.47,q(2H); 3.7,d(1H); 3.84,d(1H); 4.15,ds(2H); 4.5,qd(1H); 4.68,dt(1H); 5.07,d(1H); 5.14,bd(2H); 5.16,d(1H); 7.28-7.39,m(10H); 7.57,dd(1H).
13C NMR(δ 대 TMS, CDCl3): [특징적 피크] 66.93(모두 벤질 탄소), 127.78-128.64(모두 페닐 환), 155.249, 170.00, 170.24; 171.69, 174.27, 175.21(모두 카보닐 탄소).
실시예 5
흡습성의 결정성 형태의 N-[N-[N-(4-(피페리딘-4-일)부타노일)-N-에틸글리실]-(L)-아스파르틸]-(L)-β-사이클로헥실알라닌 아미드의 제조(반응식 Ⅱ의 단계 5)
20: 1 알콜/물(CBZ-PipBu-N(Et)Gly-(L)-Asp(OBzl)-(L)-Cha-NH2에 대해 10:1 v/wt) 중의 CBZ-PipBu-N(Et)Gly-(L)-Asp(OBzl)-(L)-Cha-NH2, 암모늄 포르메이트 및 10% Pd/C의 혼합물을 제조한다. 이 혼합물을 40 내지 50℃로 가열하고 HPLC가 반응 완료를 지시할 때까지 교반시킨다(1 내지 2시간). 혼합물을 실온으로 냉각시키고 여과시켜 촉매를 제거한다. 이로써 생성된 용액을 40 내지 50℃로 가열하고, 이 용액을 35 내지 40℃로 냉각시키면서 아세톤을 가한다(여과된 용액에 대해 대략 등 용적). N-[N-[N-(4-(피페리딘-4-일)부타노일)-N-에틸글리실]-(L)-아스파르틸]-(L)-β-사이클로헥실알라닌 아미드의 시드(seed)를 상기 혼합물에 가하면, 실온으로 냉각하는 동안(수 시간) 이로부터 흡습성 형태의 N-[N-[N-(4-(피페리딘-4-일)부타노일)-N-에틸글리실]-(L)-아스파르틸]-(L)-β-사이클로헥실알라닌 아미드가 결정화된다. 아세톤으로 세정하면서 질소 블랭킷 하에서 여과시켜 고체를 수집한다. 고체를 감압하에 건조시키고 흡습성의 결정성 형태의 N-[N-[N-(4-(피페리딘-4-일)부타노일)-N-에틸글리실]-(L)-아스파르틸]-(L)-β-사이클로헥실알라닌 아미드의 함량을 분석한다(HPLC wt/wt 검정). 수율은 대체로 〉85%이고 순도는 〉95A%이다.
상기 제조 방법의 구체적인 예로서, 단계 5의 일반적인 과정이 수행되는 경우에는, CBZ-PipBu-N(Et)Gly-(L)-Asp(OBzl)-(L)-Cha-NH25g이 흡습성의 결정성 형태의 N-[N-[N-(4-(피페리딘-4-일)부타노일)-N-에틸글리실]-(L)-아스파르틸]-(L)-β-사이클로헥실알라닌 아미드 3.1g(〉99.6A% 순도, 화학양론적 수율 89.4%)을 백색 고체로서 제공한다.
적절한 출발 물질을 사용하는 것을 제외하고는 상기 실시예 1 내지 5에 따라서 제조된 기타 화합물로는 다음과 같은 것들이 있다:
N-[N-[N-(4-(피페리딘-4-일)부타노일)-N-에틸글리실]아스파르틸] 발린,
N-[N-[N-(4-(피페리딘-4-일)부타노일)-N-에틸글리실]아스파르틸]-D-발린,
N-[N-[N-(3-(피페리딘-4-일)프로파노일)-N-에틸글리실]아스파르틸] 발린,
N-[N-[N-(5-(피페리딘-4-일)펜타노일)-N-에틸글리실]아스파르틸] 발린,
N-[N-[N-(4-(피페리딘-4-일)부타노일)-N-에틸글리실]아스파르틸]-L-α-사이클로헥실 글리신,
N-[N-[N-(4-(피페리딘-4-일)부타노일)-N-에틸글리실]아스파르틸] 노르루이신,
N-[N-[N-(4-(피페리딘-4-일)부타노일)-N-에틸글리실]아스파르틸]-L-α-(2,2-디메틸)프로프-3-일 글리신,
N-[N-[N-(4-(피페리딘-4-일)부타노일)-N-에틸글리실]아스파르틸]-L-β-데카하이드로나프트-1-일 알라닌,
N-[N-[N-(4-(피페리딘-4-일)부타노일)-N-에틸글리실]아스파르틸]-L-α-(2-사이클로헥실에틸)글리신,
N-[N-[N-(4-(피페리딘-4-일)부타노일)-N-에틸글리실]아스파르틸] 페닐알라닌,
N-[N-[N-(4-(피페리딘-4-일)부타노일)-N-에틸글리실]아스파르틸]-L-β-나프트-1-일 알라닌,
N-[N-[N-(4-(피페리딘-4-일)부타노일)-N-에틸글리실]아스파르틸]-L-β-나프트-2-일 알라닌,
N-[N-[N-(4-(피페리딘-4-일)부타노일)-N-에틸글리실]아스파르틸]-L-β-사이클로헥실 알라닌, 에틸 에스테르,
N-[N-[N-(4-(피페리딘-4-일)부타노일)-N-에틸글리실]아스파르틸]-L-β-데카하이드로나프트-2-일 알라닌,
N-[N-[N-(4-(피페리딘-4-일)부타노일)-N-에틸글리실]아스파르틸]-α-아미노사이클로헥산카복실산,
N-[N-[N-(4-(피페리딘-4-일)부타노일)-N-에틸글리실]아스파르틸]-β-사이클로헥실-D-알라닌,
N-[N-[N-(4-(피페리딘-4-일)부타노일)-N-에틸글리실]아스파르틸]-β-데카하이드로나프트-1-알라닌,
N-[N-[N-(4-(피페리딘-4-일)부타노일)-N-에틸글리실]아스파르틸]-β-사이클로헥실알라닌 에틸 아미드,
N-[N-[N-(4-(피페리딘-4-일)부타노일)-N-에틸글리실]아스파르틸]-β-사이클로옥틸알라닌,
N-[N-[N-(4-(피페리딘-4-일)부타노일)-N-에틸글리실]아스파르틸]-β-사이클로헥실메틸알라닌,
N-[N-[N-(4-(피페리딘-4-일)부타노일)-N-에틸글리실]아스파르틸]-β-아다만트-1-일 알라닌,
N-[N-[N-(4-(피페리딘-4-일)부타노일)-N-에틸글리실]아스파르틸]-β-(1,2,3,4)-테트라하이드로나프트-5-일 알라닌,
N-[N-[N-(4-(피페리딘-4-일)부타노일)-N-에틸글리실]아스파르틸]-β-(4-사이클로헥실)사이클로헥실알라닌,
N-[N-[N-(4-(피페리딘-4-일)부타노일)-N-에틸글리실]아스파르틸]-β-사이클로헵틸알라닌,
N-[N-[N-(4-(피페리딘-4-일)부타노일)-N-에틸글리실]아스파르틸]-β-사이클로옥틸알라닌 아미드,
N-[N-[N-(4-(피페리딘-4-일)부타노일)-N-에틸글리실]아스파르틸]-α-사이클로헥실프로필글리신,
N-[N-[N-(4-(피페리딘-4-일)부타노일)-N-에틸글리실]아스파르틸]-β-사이클로옥틸메틸알라닌,
N-[N-[N-(4-(피페리딘-4-일)부타노일)-N-에틸글리실]아스파르틸]-β-사이클로펜틸알라닌, 및
N-[N-[N-(4-(피페리딘-4-일)부타노일)-N-에틸글리실]아스파르틸]-β-사이클로헥실메틸알라닌 에틸 에스테르.
실시예 6
N-CBZ-피페리돈의 제조
물 38.8kg 및 THF 88kg 중의 N-벤질옥시카보닐옥시 석신이미드 40kg과 4-피페리돈·HCl·H2O 26kg(175mol)의 혼합물을 용해될 때까지(약 15분) 15℃±5℃에서 교반시킨다. 온도를 20℃ 이하로 유지시키면서 상기와 같이 교반된 혼합물에 NMM(22.8kg)을 가한다(발열 반응). 상기 배치를 20℃±5℃에서 2.5시간 동안 교반시키는데, 이때 HPLC는 반응 완료를 지시해준다. 이 혼합물을 MTBE 115.2kg과 물 38.8kg으로 희석시키고 20℃±5℃에서 5분 동안 교반시킨다. 교반을 중지하고, 층을 분리시키고, 수성(하부) 층을 제거하여 따라 낸다. 유기 층을 물 129.6kg으로 2회 세척한다(5분 동안 교반시키고, 상을 분리하며 수성(하부) 상을 제거/따라 낸다). 유기 상을 물 46.8kg 중의 NaCl 5.2kg으로 세척한다(5분 동안 교반시키고, 상을 분리하며 수성(하부) 층을 제거/따라낸다). 유기 층을 MgSO411.5kg으로 처리하고, 1시간 동안 교반시킨 다음 혼합물을 여과시킨다. 반응기를 MTBE 8kg으로 세정한다(여과시키고, 주 여액과 혼합한다: 총 여액 수 함량: 0.52%). 상기 혼합물 용적을 30℃하 감압하에서 증류를 통해 절반으로 감소시킨다. 진공 상태에 질소가 유입시키고 잔사를 20℃로 냉가시킨다(포트 잔사 수 함량: 0.43%). 이 잔사를 MTBE 57.6kg으로 희석시킨 다음, 혼합물 용적을 30℃하 진공 하에서 증류를 통하여 절반으로 다시 감소시킨다. 진공에 질소를 유입시킥 혼합물을 20℃로 냉각시킨다(포트 잔사 수 함량: 0.25%). 이를 5회 더 반복한다. 최종 포트 잔사를 MTBE 28.8kg으로 희석시킨 다음 5분 동안 혼합하고, 이어서 수 함량과 4-N-CBZ-피페리돈의 함량을 분석한다(물: 0.05%; 4-N-CBZ-피페리돈에 대한 wt/wt 검정: 22.66wt%, 35.36kg, 155mole, 88.6% 화학양론적 수율).
실시예 7
PipBu의 제조
N2퍼징 및 교반 하에서 1,2-디메톡시-에탄 230.1kg 중의 3-카복시프로필 트리페닐포스포늄 브로마이드 53.5kg의 용액을 제조한다. 온도를 24 내지 28℃로 유지시키면서 칼륨-3급-부톡사이드/THF(20wt%, 141.8kg의 용액)을 35분에 걸쳐 가한다. 이 혼합물을 상기 온도에서 0.5시간 동안 교반시키는데, 이때 HPLC가 반응 완료를 지시해준다. 교반된 혼합물을 10℃±2℃로 냉각시킨 다음, 이 혼합물에 MTBE 중의 4-CBZ-피페리돈 96.45kg(역가: 1.15몰 당량)을 가하여 배치 온도를 12℃±2℃로 유지시킨다. 이 혼합물을 상기 온도에서 10분 동안 교반시킨 다음, 20℃±2℃로 가열하고 이 온도에서 2시간 동안 교반시킨다. 이와 같이 교반된 혼합물에, 혼합물이 20℃±2℃로 유지되도록 물 245.6kg 중의 진한 수성 HCl 22.5kg의 용액을 가하면, 최종 pH는 0.5이다. 혼합물을 교반시키면서 메틸-3급-부틸 에테르 214.0kg으로 추출한다. 교반을 중지하고, 층을 분리시키고, 수성(하부) 층을 제거하여 따라 낸다. 유기 층을 물 133.75kg으로 세척한 다음(5분 동안 교반시키고, 상을 분리하며 수성(하부) 상을 제거/따라 낸다), 물 126.8kg 중의 50% NaOH 10.7kg으로 세척한다(10분 동안 교반시키고, 상을 분리하며 유기(상부) 층을 제거/따라낸다). 수성 층을 EtOAc 123.05kg으로 2회 추출한다(5분 동안 교반시키고, 상을 분리하며 유기(상부) 층을 제거/따라낸다). 이와 같이 교반된 수성 층에 진한 수성 HCl 13.1kg을 가하여 pH가 2.5 내지 3.5가 되게한 다음(최종: 2.82), 혼합물을 EtOAc 123.05kg으로 추출한다(5분 동안 교반시키고, 상을 분리하며 수성(하부) 층을 제거/따라낸다). EtOAc 용액을 물 133.75kg으로 세척한 다음(5분 동안 교반시키고, 상을 분리하며 수성(하부) 층을 제거/따라낸다), CBZ-PipBuen의 함량을 분석한다(총 중량: 194.86kg, 17.05% CBZ-PipBuen[33.22kg, 108mole], 87.9% 화학양론적 수율).
PipBuen의 EtOAc 용액을 5% Pd/C 66kg(물 50중량%)과 함께, 교반시키면서 스텐레스 스틸 가압 탱크에 채운 다음, 이 혼합물을 55℃±2℃로 가열한다. 물 66.4kg에 용해된 칼륨 포르메이트(38.2kg)을 가하여 반응 혼합물 온도를 55℃±2℃로 유지시킨다(대략 30분). 이 혼합물을 55℃±2℃에서 2시간 동안 교반시키는데, 이때 반응이 완료되었다(HPLC). 이 반응기에 셀라이트 6.6kg과 물 3.2kg을 가하고 이 혼합물을 교반시킨 다음 여과시킨다. 반응기를 물 33.2kg으로 세정한다(여과시키고, 주 여액에 가한다). 여액을 새로운 용기에 놓아두고, 20 내지 25℃로 냉각시키며, 층을 분리한 다음, 유기 층을 제거 및 따라 낸다. 수성 층을 진한 수성 HCl 52.1kg으로 산성화하여 pH가 2 내지 3(최종: 2.82)가 되게한 다음, 메틸렌 클로라이드 129.5kg으로 4회 추출한다(5분 동안 교반시키고, 상을 분리하며 유기(하부) 층을 제거/따라낸다). 수성 상을 교반시키면서 50% 수성 NaOH 17.85kg을 가함으로써 pH를 6.1로 조정한다. 혼합물을 여과시켜 4-(3'-카복시프로필)피페리딘 17.6kg(103mole)을 함유하는 용액 224kg을 수득한다.
실시예 8
CBZ-PipBu의 제조
수성 NaOH 중의 4-(3'-카복시프로필)피페리딘의 224kg 용액을 THF 55.3kg과 혼합하고 이 혼합물을 교반시키면서 8℃±2℃로 냉각시킨다. 온도를 〈10℃로 유지시키면서 NMM(20.9kg)을 가한다. 첨가를 완료한 후, 온도를 8℃±2℃로 조정한 다음, 온도를 〈15℃로 유지시키면서 THF 49.8kg 중에 용해된 1-(벤질옥소카보닐)석신이미드 25.7kg을 1시간에 걸쳐 가한다. 10 내지 15℃에서 3시간 후에 반응이 완료된다(분석용 HPLC). 진한 수성 HCl(29.9kg)을 가하여 pH를 2.5 내지 3.5(최종 3.3)로 조정한 다음, MTBE 61.4kg을 가하고 혼합물을 5분 동안 교반시킨다. 교반을 중지하고, 층을 분리시킨 다음 수성(하부) 층을 분리시킨다(폐기함). MTBE 층을 물 83.1kg 3분획으로 세척한다(10분, 5분 및 5분 교반 주기); 각 경우에 수성 상을 분리시키고 제거한다(폐기함). 물 95.7kg 중의 50% 수성 NaOH 8.4kg의 용액을 교반하지 않고 가한 다음, 반응이 완료되면, 이 혼합물을 약 5분 동안 교반시킨다. 교반을 중지하고, 상을 분리시키며, 유기(상부) 층을 분리하여 따라낸다. 수성 층을 반응기에 넣고 메틸-3급-부틸 에테르 38.4kg으로 2회 추출한다(5분 동안 교반시키고, 상을 분리하며 유기(상부) 층을 제거/따라낸다). 이러한 작동을 메틸-3급-부틸 에테르 18.5kg을 사용하여 반복한다. 반응기에 다시 넣은 수성 층을 진한 수성 HCl 9.9kg으로 산성화하여 pH 2.5 내지 3.5(최종: 3.37)이 되게한다. 이 혼합물을 메틸-3급-부틸 에테르 76.4kg으로 추출한다(5분 동안 교반시키고, 상을 분리하며 수성(하부) 층을 제거/따라낸다). 유기 층을 물 12.4kg 중의 NaHCO31.1kg의 용액으로 세척한 다음(5분 동안 교반함), 물 41.5kg으로 세척한다(5분 동안 교반시키고, 상을 분리하며 수성(하부) 층을 제거/따라낸다). 이 반응기를 감압하에 놓아두고 휘발성 용매를 증류액 유동이 멈출때 까지 55℃에서 제거한다. 톨루엔(32.4kg)을 가하고, 배치 온도를 90 내지 95℃로 상승시키면서 혼합물을 증류액 유동이 중지될 때까지 주위압하에서 증류시킨다. 이어서, 상기 혼합물을 30 내지 35℃로 냉각시키고, 헵탄(56.85kg)을 상기 반응기(2 상)에 채우며, 혼합물을 90 내지 95℃로 가열한 다음(단일 상), 38 내지 42℃로 재냉각시킨다. CBZ-PipBu의 시드 결정을 가하면, 상기 혼합물로부터 1시간에 걸쳐 생성물이 결정화된다. 고체를 여과시켜 수집하고 1:2 톨루엔/헵탄 19.35kg으로 세척한 다음 헵탄 33.4kg으로 세척한다. 필터 케이크를 40℃하 진공하에서 건조시켜(건조 분석시 0.13% 손실됨) CBZ-PipBu 22.4kg(72.96mole, 4-피페리돈으로부터 42% 화학양론적 수율)을 수득한다.
실시예 9
CBZ-PipBuen의 제조
14℃에서 1,2-디에톡시에탄 407ml 중의 3-카복시프로필 트리페닐포스포늄 브로마이드 82g의 현탁액에 테트라하이드로푸란 중의 20중량% 칼륨 3급-부톡사이드 220g을, 반응 혼합물 온도를 24 내지 28℃로 유지시키면서 25분에 걸쳐 가한다. 이 혼합물을 1시간 동안 교반시키고, 10℃로 냉각시킨 다음, 3급 부틸 메틸 에테르 246ml 중의 4-N-CBZ-피페리돈 52.5g의 용액을 냉각시키면서 30분에 걸쳐 가한다. 첨가를 완료한 후, 이 혼합물을 12℃에서 10분 동안 교반시킨 다음 20℃ 가온시키고, 30분 더 교반시킨다. 반응 혼합물을 1N 수성 HCl 410ml로 10분 동안 처리하고 3급 부틸 메틸 에테르 328ml로 희석시킨 다음, 상을 분리시킨다. 유기 상을 물 205ml로 세척한 다음, 1N 수성 NaOH 210ml로 세척한다. 생성물을 함유하는 NaOH 층을 별도로 수집하고, 에틸 아세테이트 189g 3분획으로 세척하고, 진한 HCl을 사용하여 산성화하여 pH 3.48이 되게한 다음, 에틸 아세테이트 189ml로 추출한다. 에틸 아세테이트 층을 분리하고, 물 211ml로 세척한 다음, MgSO410g으로 30분 동안 건조시키고, 여과시킨 다음 진공하에 농축시킨다. 오일상 잔사(50.7g)를 톨루엔/헵탄으로부터 결정화하여 CBZ-PipBuen 총 29.46g(50.9% 수율; 약 95A% 순도)을 수득한다.
질량 스펙트럼: M계산303; M+1관찰304
1H NMR(δ 대 TMS, CDCl3): 2.2,t(2H); 2.25,t(2H); 2.35,m(4H); 3.45,m(4H); 5.15,s(2H); 5.2,m(1H); 7.33,2(5H).
13C NMR(δ 대 TMS, CDCl3): 22.43, 28.2, 34.26, 35.66, 44.88, 45.74, 67.20, 122.02, 127.83, 127.95, 128.45, 128.69, 128.90, 136.17, 136.72, 155.34, 178.39.
실시예 10
CBZ-PipBuen-N(Et)Gly-(L)-Asp(OBzl)-(L)-Cha-NH2의 제조(반응식 Ⅱ의 또 다른 단계 4)
CBZ-PipBuen(70g, 0.23mole) 및 DMF(230ml)을 1L들이 재킷된 플라스크에 가하고 0℃로 냉각시키면서 교반시킨 다음 TBTU(74.9g, 0.23mole)을 한번에 가한다. 온도를 0℃로 유지시키고 DIPEA(61.9g, 0.61mole) 첨가를 개시한다. 45분 후, TFA-N(Et)Gly-(L)-Asp(OBzl)-(L)-Cha-NH2(138.7g, 0.24mole)를 DMF(230ml) 중의 용액으로서 가한다. DIPEA(45ml)을 가함으로써 pH를 7 내지 8로 조정하고 혼합물을 주위 온도에 도달하게 한다. 2시간 후, 반응이 완료된다(HPLC 분석). 혼합물을 물(2.4L)로 급냉시키고 EtOAc(1L)로 추출한다. 수성 상을 EtOAc(0.3L)로 역추출한다. 유기 층을 합하고, 수성 시트르산(5%w/w, 2 X 1L)로 세척하고, 수성 NaHCO3(5%w/w, 2 X 1L)로 세척한 다음 물(2L)로 세척한다. EtOAc 층을 2L용 플라스크에 옮기고 교반시키면서 헵탄(500ml)을 가하여 결정화를 수행한다. 고체를 부크너 깔대기 상에서 흡입시켜 수집하고, EtOAc/헵탄(2:1 v/v, 1L)으로 세척한 다음, 일정한 중량이 되도록 건조시켜 CBZ-PipBuen-N(Et)Gly-(L)-Asp(OBzl)-(L)-Cha-NH2(143.2g, 0.19mole, 83% 수율)을 수득한다.
원소 분석: C41H35N5O7C: 계산치 66.02; 실측치 65.53, H,N
질량 스펙트럼: M계산745.91; M+1관찰746
1H NMR(δ 대 TMS, CDCl3): 0.86,qd(1H); 0.98,qd(1H); 1.16,t(2H); 1.24,dt(6H); 1.37,m(1H); 1.64-1.78,m(4H); 1.86,qd(1H); 2.2,bd(4H); 2.35,m(1H); 2.4,m(2H); 2.74,dd(1H); 3.07,m(4H); 3.52,d(1H); 3.85,d(1H); 4.12,q(1H); 4.49,qd(1H); 4.68,dt(1H); 5.07,d(1H); 5.14,s(1H); 5.16,d(1H); 5.22,t(2H); 6.45,s(1H); 7.28,d(1H); 7.26,s(5H); 7.35,s(5H); 7.56,d(1H).
13C NMR(δ 대 TMS, CDCl3): 14.15, 22.68, 24.95, 25.61, 26.03, 26.45, 28.20, 31.71, 32.89, 33.80, 33.89. 34.00, 35.63, 38.37, 44.79, 45.13, 45.65, 50.23, 51.34, 60.40, 66.87, 67.06, 76.50, 77.13, 77.77, 122.46, 126.88, 127.80-128.60, 135.15, 155.19, 170.11, 170.20, 171.61, 173.76, 175.35.
실시예 11
흡습성의 결정성 형태의 N-[N-[N-(4-(피페리딘-4-일)부타노일)-N-에틸글리실]-(L)-아스파르틸]-(L)-β-사이클로헥실알라닌 아미드의 제조(반응식 Ⅱ의 또 다른 단계)
CBZ-PipBuen-N(Et)Gly-(L)-Asp(OBzl)-(L)-Cha-NH2의(140g, 0.19mole), 암모늄 포르메이트(61g, 0.96mole) 및 10% Pd/C(50중량%, 데구사 유형, 28g)을 5L용 재킷된 플라스크에 가하고, EtOH(200프로프, 1260ml), iPrOH(70ml) 및 물(DI, 70g)을 가한다. 이 혼합물을 40 내지 50℃로 가열하고 HPLC가 반응 완료를 지시할 때까지(5시간) 교반시킨다. 혼합물을 실온으로 냉각시키고 여과시켜 촉매를 제거한다. 이로써 생성된 용액을 40 내지 50℃로 가열하고, 용액을 35 내지 40℃로 냉각시키면서 아세톤(여과된 용액에 대해 대략 등 용적)을 가한다. N-[N-[N-(4-(피페리딘-4-일)부타노일)-N-에틸글리실]-(L)-아스파르틸]-(L)-β-사이클로헥실알라닌 아미드의 시드를 상기 혼합물에 가하면, 실온으로 냉각하는 동안(수 시간) 이로부터 흡습성 형태의 N-[N-[N-(4-(피페리딘-4-일)부타노일)-N-에틸글리실]-(L)-아스파르틸]-(L)-β-사이클로헥실알라닌 아미드가 결정화된다. 질소 블랭킷 하에서 부크너 깔대기 상에 흡입시켜 고체를 수집하고, 케이크를 아세톤으로 세척하고 일정한 중량이 되도록 공기 건조시켜 N-[N-[N-(4-(피페리딘-4-일)부타노일)-N-에틸글리실]-(L)-아스파르틸]-(L)-β-사이클로헥실알라닌 아미드를 수득한다(84.3g, 0.16mole, 84.8% 수율, 〉95A%).
실시예 12
연계된 TFA-N(Et)Gly-(L)-Asp(OBzl)-(L)-Cha-NH2의 제조(반응식 Ⅱ의 또 다른 단계 1 내지 3)
온도 프로브가 장착된 500ml들이 플라스크에 BOC-N(Et)-Gly(20.3g, 0.1mole), N-하이드록시석신이미드(11.5g, 0.1mole) 및 디클로로메탄(200ml)을 채운다. 이 혼합물을 중간 속도로 교반시키고 이로써 생성된 용액에 DCC(20.6g, 0.1mole)을 고체로서 한 분획으로 가한다. 이 용액을 1시간 동안 교반시키는데, 이 기간 동안에 작은 발열이 감지되었고(온도가 20℃에서 28℃로 상승된다) DCU가 침전된다. 생성된 현탁액을 왓트만 #1 여과지가 장착된 부크너 깔대기를 사용하여 진공 여과시킨다. 이 케이크를 디클로로메탄(2 x 25ml)로 세척한다. 이 여액을 본래의 500ml 플라스크에 도로 보낸 다음, (L)Asp(OBzl)(22.3g, 0.1mole), NMM(33.8ml, 0.3mole) 및 DMF(80g, 1.01mole)을 연속적으로 가한다. 실온에서 2시간 동안 교반시킨 후에, BOC-N(Et)Gly-(L)-Asp(OBzl) 형성이 완료된다(HPLC 모니터). 이러한 반응 혼합물을 빙수(100ml)을 함유하는 추출용 깔대기에 따라 붓는다. 혼합물을 pH 1이 될때까지 HCl(36%, 25ml)로 산성화한다. 층을 분리하고 디클로로메탄 층을 빙수(100ml)로 세척한 다음 상을 분리시킨다(수성 상 pH 3 내지 4). 디클로로메탄 층을 본래의 500ml들이 플라스크에 도로 보내고 이에 NH2-(L)-Cha-NH2(17g, 0.1mole), N-하이드록시석신이미드(11.5g, 0.1mole) 및 DCC(20.6g, 0.1mole)을 고체로서 한 분획으로 연속적으로 채운다. 실온에서 2시간 동안 교반시킨 후에, BOC-N(Et)Gly-(L)-Asp(OBzl)-(L)-Cha-NH2의 형성이 완료되고(HPLC 모니터) DCU를 왓트만 #1 여과지가 장착된 부크너 깔대기를 사용하여 진공 여과시킨다. 이 케이크를 디클로로메탄(2 x 25ml)로 세척한다. 이 여액을 N-메틸 모르폴린(15ml, pH 8-9)을 함유하는 탈이온수(200ml)로 세척한다. 상을 분리하고 디클로로메탄 층을 물(DI, 2 x 150ml)로 다시 세척한다. 디클로로메탄 상을 1N HCl(pH 1) 150ml로 세척한다. 상을 분리하고 디클로로메탄 층을 탈이온수(200ml, pH 3)로 세척한다. BOC-N(Et)Gly-(L)-Asp(OBzl)-(L)-Cha-NH2의 디클로로메탄 용액을 청정한 500ml들이 플라스크에 도로 보낸 다음, TFA(100ml)을 채운다. 실온에서 2시간 동안 교반시킨 후에, TFA·N(Et)Gly-(L)-Asp(OBzl)-(L)-Cha-NH2의 형성이 완료되었다(HPLC 모니터). 이러한 반응 혼합물을 진공하에 증류시켜 디클로로메탄과 대부분을 TFA을 제거한 다음 MTBE(500ml) 및 시드를 가하여 생성물을 결정화시킨다. 혼합물을 왓트만 #1 여과지가 장착된 부크너 깔대기를 사용하여 진공 여과시킨다. 이러한 케이크를 MTBE(2 x 25ml)로 세척하고 공기 건조시켜 TFA·N(Et)Gly-(L)-Asp(OBzl)-(L)-Cha-NH2(46.8g, 81.5% 수율)을 백색 고체로서 수득한다(〉97A% 순도, 〈0.2A% D-Asp 부분입체이성체).
실시예 13
안정한 비-흡습성의 결정성 형태의 N-[N-[N-(4-(피페리딘-4-일)부타노일)-N-에틸글리실]-(L)-아스파르틸]-(L)-β-사이클로헥실알라닌 아미드의 제조
방법 A: 정적 전환
흡습성의 결정성 형태의 N-[N-[N-(4-(피페리딘-4-일)부타노일)-N-에틸글리실]-(L)-아스파르틸]-(L)-β-사이클로헥실알라닌 아미드(7.45kg)를 햄머 밀(hammer mill)에서 분쇄시킨다. 이로써 생성된 고체 7.35kg을 스텐레스 스틸 드라이어 트레이(90 X 28cm)에 놓아두고 이 트레이를 천공된 알루미늄 호일로 덮는다. 이어서, 상기 트레이를 습도 조절된 오븐(LUNAIRE Humidity Cabinet 모델 번호 CEO 941W-3)내로 봉하고; 이 오븐을 분석을 위해 샘플을 꺼내는 것을 제외하고는 형태 전환 공정 내내 밀봉된 채로 있다. 이 오븐을 40% RH 및 60℃로 조정하고 이들 수준에서 1시간 동안 유지시킨다. 이어서, 이러한 습도 조절된 오븐을 80% RH/60℃로 조정하고 이 수준에서 12시간 동안 유지시킨다. 80% RH/60℃에서 18시간 둔 후에 샘플을 꺼내고 X레이 분말 회절 분석으로 체크하여 비-흡습성의 결정성 형태의 N-[N-[N-(4-(피페리딘-4-일)부타노일)-N-에틸글리실]-(L)-아스파르틸]-(L)-β-사이클로헥실알라닌 아미드로의 전환을 평가한다. 이 습도 조절된 오븐을 다시 봉하고 40% RH/60℃로 조정하고 이 수준에서 2시간 동안 유지시킨다. 오븐을 주위 조건으로 재조정한 다음, 트레이를 상기 오븐으로부터 꺼내고 비-흡습성의 결정성 형태의 N-[N-[N-(4-(피페리딘-4-일)부타노일)-N-에틸글리실]-(L)-아스파르틸]-(L)-β-사이클로헥실알라닌 아미드를 수득한다(7.2kg, 96.6% 수율). 이러한 전환에 대한 확인은 X레이 분말 회절 분석에 의해 결정한다(도 1). 이러한 X레이 분말 회절을 결정의 평면간 거리(d)(Å), 초당 계수(Cps) 및 상대적 피크 세기(%)에 상응하는 회절 각(2θ)의 증가 차수의 함수로서 표로 작성하였다(표 1).
방법 B: 동적 조건
a. 형태 전환
흡습성의 결정성 형태의 N-[N-[N-(4-(피페리딘-4-일)부타노일)-N-에틸글리실]-(L)-아스파르틸]-(L)-β-사이클로헥실알라닌 아미드(50g)을 기계적 교반기가 장착된, 링 스탠드 상의 400ml 용의 눈금이 있는 실린더(층 높이 6cm)에 놓아둔다. 이러한 장치를 습도 조절된 오븐(LUNAIRE Humidity Cabinet 모델 번호 CEO 941W-3)에 놓아둔다. 교반을 275rpm으로 설정하고, 온도와 RH를 30분에 걸쳐 60℃ 및 40%로 각각 조정한다. 상기 화합물을 이들 조건에서 1시간 동안 유지시킨 다음, 조건을 45분에 걸쳐 80% RH/60℃로 변화시킨다. 이어서, 상기 화합물을 이러한 조건하에서 16시간 동안 유지시킨 다음 오븐을 40% RH/60℃로 재설정하고 3.25시간 동안 유지시킨다. 이어서, 상기 화합물을 주위 조건(층 높이 4cm)로 보낸 다음, 실린더로부터 꺼내어 비-흡습성의 결정성 형태의 N-[N-[N-(4-(피페리딘-4-일)부타노일)-N-에틸글리실]-(L)-아스파르틸]-(L)-β-사이클로헥실알라닌 아미드를 수득한다(〉95% 수율). 이러한 전환에 대한 확인은 X레이 분말 회절 분석에 의해 결정한다(도 2). 이러한 X레이 분말 회절을 결정의 평면간 거리(d)(Å), 초당 계수(Cps) 및 상대적 피크 세기(%)에 상응하는 회절 각(2θ)의 증가 차수의 함수로서 표로 작성하였다(표 2).
b. 형태 전환
흡습성의 결정성 형태의 N-[N-[N-(4-(피페리딘-4-일)부타노일)-N-에틸글리실]-(L)-아스파르틸]-(L)-β-사이클로헥실알라닌 아미드(370g)를 2L 용의 회전 증발 플라스크에 채운다. 이 플라스크를 회전 증발기(Heidolph UV 2002) 상에 놓아두고 예비가열된(58℃) 욕(Heidolph MR 2002) 아래에 있게한다. 이 장치를 진공 펌프(Divatrion DV1)를 사용하여 60mBar의 진공하에 놓아둔 다음, 진공을 제어 방식으로 해체하여 별도의 가열된 수 함유 플라스크에 발생된 축축한 대기을 수용하게 한다. 이러한 축축한 대기의 수용은 상기 장치 내에서의 RH가 79%에 도달하도록 습도 조절 장치(Vausalo Humiditique and Temperature Traumettor)에 의해 조절한다. 이어서, 가열 욕을 대략 60℃로 유지시키고 용기 내의 RH를 71 내지 79% 로 유지시키면서 회전 증발기 용기를 5시간에 걸쳐 분당 145 내지 160회전수로 회전시킨다. 이어서, 진공을 해체하여 질소를 도입하고, 용기 및 이의 내용물을 주위 온도로 냉각시키고, 생성물을 꺼내어 비-흡습성의 결정성 형태의 N-[N-[N-(4-(피페리딘-4-일)부타노일)-N-에틸글리실]-(L)-아스파르틸]-(L)-β-사이클로헥실알라닌 아미드를 수득한다. 흡습성의 결정성 형태의 N-[N-[N-(4-(피페리딘-4-일)부타노일)-N-에틸글리실]-(L)-아스파르틸]-(L)-β-사이클로헥실알라닌 아미드의 두 번째 317g 분획을 유사하게 처리하여 비-흡습성의 결정성 형태의 N-[N-[N-(4-(피페리딘-4-일)부타노일)-N-에틸글리실]-(L)-아스파르틸]-(L)-β-사이클로헥실알라닌 아미드를 수득한다. 이러한 전환에 대한 확인은 X레이 분말 회절 분석에 의해 결정한다(도 3). 두 분획에 대한 실험 결과, 총 667g의 비-흡습성의 결정성 형태의 N-[N-[N-(4-(피페리딘-4-일)부타노일)-N-에틸글리실]-(L)-아스파르틸]-(L)-β-사이클로헥실알라닌 아미드가 수득되었다(총 수율 97%). 함께 이러한 전환에 대한 확인은 X레이 분말 회절 분석에 의해 결정한다(도 3). 이러한 X레이 분말 회절 결과가 결정의 평면간 거리(d)(Å), 초당 계수(Cps) 및 상대적 피크 세기(%)에 상응하는 회절 각(2θ)의 증가 차수의 함수로서 표로 작성하였다(표 3).
실시예 14
흡습성의 결정성 형태 및 이의 전환된 비-흡습성의 결정성 형태에서 N-[N-[N-(4-(피페리딘-4-일)부타노일)-N-에틸글리실]-(L)-아스파르틸]-(L)-β-사이클로헥실알라닌 아미드 샘플의 X레이 분말 회절 그래프
흡습성의 결정성 형태의 N-[N-[N-(4-(피페리딘-4-일)부타노일)-N-에틸글리실]-(L)-아스파르틸]-(L)-β-사이클로헥실알라닌 아미드 샘플을 실시예 5 또는 11에서와 같이 제조하고, 이를 실시예 13의 방법에 따라서 상응하는 비-흡습성의 결정성 형태로 전환시킨다. 흡습성의 결정성 형태 및 비-흡습성의 결정성 형태의 X레이 분말 회절 그래프가 각각 도 4 및 5에 도시되어 있다. 흡습성의 결정성 형태 및 비-흡습성의 결정성 형태에 대한 X레이 분말 회절 그래프가 또한, 결정의 평면간 거리(d)(Å), 초당 계수(Cps) 및 상대적 피크 세기(%)에 상응하는 회절 각(2θ)의 증가 차수의 함수로서 표 4 및 5로 각각 작성하였다.
실시예 15
흡습성 및 비-흡습성의 결정성 형태의 N-[N-[N-(4-(피페리딘-4-일)부타노일)-N-에틸글리실]-(L)-아스파르틸]-(L)-β-사이클로헥실알라닌 아미드에 대한 등온적 마이크로열계량 실험
흡습성 및 비-흡습성의 결정성 형태의 N-[N-[N-(4-(피페리딘-4-일)부타노일)-N-에틸글리실]-(L)-아스파르틸]-(L)-β-사이클로헥실알라닌 아미드에 대한 등온적 마이크로열계량 실험을 다음 모니터(Thermometric 열활성 모니터; TAM) 상에서 수행한다. 상이한 결정성 형태의 고체 상태 전환은 이들 형태를 상이한 습도 또는 상이한 온도의 용매 증기에 노출시킴으로써 연구한다. 상이한 습도를 획득하기 위해 사용된 포화 염 용액은 KCl(80% RH), NaCl(75% RH) 및 NaBr(65% RH)이다. 대략 100mg의 양의 상기 형태를 TAM 유리 앰풀 내로 칭량하고 포화 염 용액(과량의 고체를 가짐) 또는 유기 용매를 함유하는 마이크로 항습도장치를 상기 앰풀 내부에 놓아둔다. 이 앰풀을 밀봉하고, 실험 온도와 평형을 이루게 한다음 TAM에서의 측정 위치 아래에 위치시킨다. 시험되는 형태 대신에 세정된 바다 모래를 함유하는 동일한 시스템을 참조용 측면 상에 놓아둔다. 출력(pW)을 시간의 함수로서 측정한다(도 6 내지 8).
실시예 16
흡습성 및 비-흡습성의 결정성 형태의 N-[N-[N-(4-(피페리딘-4-일)부타노일)-N-에틸글리실]-(L)-아스파르틸]-(L)-β-사이클로헥실알라닌 아미드의 수분 흡수 등온선
흡습성 및 비-흡습성의 결정성 형태의 N-[N-[N-(4-(피페리딘-4-일)부타노일)-N-에틸글리실]-(L)-아스파르틸]-(L)-β-사이클로헥실알라닌 아미드의 수분 흡수 등온선을 VTI MB300G 수분 발란스 상에서 수득한다. 본 실험은 대상물인 결정성 형태 약 15mg을 상대로 하여 %RH를 증가시키는 단계 및 감소시키는 단계를 수행하여 이로부터의 중량 증가%를 %RH의 함수로서 나타내거나(도 9) 대상물인 결정성 형태를 일정한 습도로 유지시켜 이에 따른 중량 증가분을 시간의 함수로서 나타내었다.
화학식 Ⅱ의 화합물은 유용한 약리학적 활성을 나타내므로, 약제학적 조성물에 혼입되어 특정한 병리학적 질환에 걸린 환자를 치료하는데 사용된다.
본 발명은 또한, 활성화된 혈소판 및 혈소판 응집과 혈액 응괴와 연관된 기타 유착성 당단백질에 대한 피브리노겐 결합을 억제함으로써 혈소판 응집의 억제제를 투여함으로써 완화시키거나 방지할 수 있는 질환에 걸린 환자를 치료하는 방법에 관한 것이다. 더욱이, 본 발명은 사람 및 기타 포유동물에 있어서 심근 경색증, 발작, 말초 동맥 질환 및 전이성의 혈관내 응고와 같은 혈전증 연관된 특정 질환 상태를 예방 또는 치료하는 방법에 관한 것이다.
본원에서 언급된 치료는 예방적 치료 뿐만 아니라 만성적 질환의 치료를 포함하는 것으로 인식해야 한다.
본 발명은 또한 이의 범주내에 약제학적으로 허용되는 양의 하나 이상의 화학식 Ⅰ의 화합물을 약제학적으로 허용되는 담체 또는 부형제와 함께 포함하는 약제학적 조성물을 포함한다.
실제로, 본 발명에 따르는 치료용 화합물 또는 조성물을 적합한 어떠한 수단, 예를 들면, 국부, 흡입, 비경구, 직장 또는 경구적으로 투여할 수 있지만, 경구 투여하는 것이 바람직하다.
화학식 Ⅱ의 화합물은 가장 적합한 경로에 의해 투여될 수 있는 형태로 제시될 수 있으며 본 발명은 또한, 사람 또는 수의학 분야에서 사용하기에 적합한, 본 발명에 따르는 하나 이상의 화합물을 함유하는 약제학적 조성물에 관한 것이다. 이들 조성물은 하나 이상의 약제학적으로 허용되는 보조제 또는 부형제를 사용하여 통상적인 방법에 따라서 제조할 수 있다. 이러한 보조제는 특히, 희석제, 멸균성 수성 매질 및 각종 비독성의 유기 용매를 포함한다. 당해 조성물은 정제, 환제, 캅셀제, 과립제, 산제, 수성 용제 또는 현탁제, 주사용 용제, 엘릭서, 시럽 등의 형태로 존재할 수 있으며 약제학적으로 허용되는 제제를 수득하기 위해서 감미제, 향료, 착색제, 안정화제 또는 방부제로 이루어진 그룹 중에서 선택된 하나 이상의 제제를 포함할 수 있다.
비히클의 선택 및 이러한 비히클 중의 활성 물질의 함량은 일반적으로 생성물의 용해도 및 화학적 성질, 특정한 투여 방식 및 약제학적 실시시 준수해야 하는 규정에 따라서 결정된다. 예를 들면, 락토즈, 나트륨 시트레이트, 탄산칼슘, 인산이칼슘 등의 부형제; 및 마그네슘 스테아레이트, 나트륨 라우릴 설페이트 및 탈크 등의 윤활제와 배합된, 전분, 알긴산 및 특정한 복합체 실리카 겔 등의 붕해제가 정제 제조에 사용될 수 있다. 캅셀제를 제조하기 위해서는, 락토즈 및 고분자량 폴리에틸렌 글리콜을 사용하는 것이 바람직하다. 수성 현탁제가 사용되는 경우에는, 이들이 현탁을 촉진시키는 유화제(들)를 함유할 수 있다. 슈크로즈, 폴리에틸렌 글리콜, 폴리프로필렌 글리콜, 글리세롤 및 클로로포름 또는 이들의 조합물 등의 희석제 뿐만 아니라 기타 물질을 사용할 수도 있다.
비경구 투여의 경우에는, 식물성 오일, 예를 들면, 참깨유, 땅콩유 또는 올리브유, 또는 물 및 프로필렌 글리콜 등의 수성-유기 용액, 에틸 올레에이트 등의 주사용 유기 에스테르 뿐만 아니라 약제학적으로 허용되는 염의 멸균성 수용액 중의 본 발명에 따르는 유제, 현탁제 또는 용제를 사용한다. 본 발명에 따르는 생성물의 염의 용제는 또한 근육내 또는 복강 주사에 의한 투여에 유용하다. 순수한 증류수 중의 염 용액을 포함하는 수성 용제는 정맥내 투여에 사용될 수 있는데, 단 이들의 pH는 이들이 적절하게 완충되고 충분한 양의 글루코즈 또는 염화나트륨과 등장성이 되며 가열, 조사 및/또는 미세여과에 의해서 살균되도록 적합하게 조정된다.
국부 투여를 위해서는, 본 발명의 화합물을 함유하는 겔(물 또는 알콜 기재), 크림 또는 연고를 사용할 수 있다. 본 발명의 화합물은 또한, 화합물을 경피 장벽을 통하여 서방출시켜주는, 패치 형태로 적용하기 위한 겔 또는 매트릭스 기재에 삽입될 수 있다.
직장 투여용 고형 조성물에는 공지된 방법에 따라서 제형화되고 하나 이상의 화학식 Ⅱ의 화합물을 함유하는 좌제가 포함된다.
본 발명에 따르는 조성물 중의 활성 성분의 비율(%)은 다양할 수 있는데, 이로써 적합한 투여량 비율을 구성해야 한다. 명백하게, 여러 개의 단위 투여형를 대략 동시에 투여할 수 있다. 이용되는 용량은 담당의나 전문의에 의해서, 목적하는 치료 효과, 투여 경로 및 치료기간, 및 환자의 상태에 따라서 결정된다. 본 발명의 방법을 수행하는데 있어서의 투여량 섭생은 질환 상태의 개선이 얻어질 때까지 최대의 치료학적 반응을 보장해주고 그 후에는 완화시켜 주는 최대의 효과적인 수준을 보장해주는 것이다. 일반적으로, 경구 투여량은 약 0.1 내지 약 100mg/kg, 바람직하게는 약 0.1 내지 20mg/kg, 가장 바람직하게는 약 1 내지 20mg/kg이고 정맥내 투여량은 약 0.1 내지 약 100㎍/kg, 바람직하게는 약 0.1mg/kg 내지 50mg/kg이다. 각각의 특정한 경우에 있어서, 투여량은 치료할 환자마다의 독특한 요인들, 예를 들면, 연령, 체중, 일반적인 건강 상태 및 본 발명에 따르는 화합물의 효능에 영향을 미칠 수 있는 기타 특징에 따라서 결정된다.
더욱이, 화학식 Ⅱ의 화합물을 목적하는 치료 효과를 획득하기 위하여 필요에 따라 자주 투여할 수 있다. 몇몇 환자들은 보다 많거나 적은 투여량에 신속하게 반응할 수 있으며 훨씬 더 약한 유지 용량이면 충분하다는 것을 발견할 수 있다. 다른 환자의 경우에는, 각 환자 개개인의 생리적인 요구 사항에 따라서, 1일 1 내지 4회, 바람직하게는 1일 1회 내지 2회 경구 투여하면서 장기간 동안 치료하는 것이 바람직할 수 있다. 일반적으로, 활성 물질은 1일 1 내지 4회 경구 투여할 수 있다. 물론, 다른 환자의 경우에, 1일 1회 또는 2회분 이하로 처방하는 것이 필요할 것이다.
화학식 Ⅱ의 화합물은 시험 결과가 사람 및 기타 포유동물에서의 약리학적 활성과 상관이 있는 것으로 여겨지는, 당해 분야의 문헌에 기재된 시험에 따라서 현저한 약리학적 활성을 나타낸다. 다음의 약리학적 시험관내 및 생체내 시험 결과는 화학식 Ⅱ의 화합물의 특징을 확인하는데 있어 전형적인 것이다.
다음 약리학적 시험은 피브리노겐-매개된 혈소판 응집, 트롬빈-자극된 혈소판에 대한 피브리노겐 결합, 및 ADP-유도된 생체외 혈소판 응집의 억제에 대한 화학식 Ⅱ의 화합물의 억제 활성을 평가한 것이며 이들 시험 결과는 화학식 Ⅱ의 화합물의 생체내 억제 특성과 상관이 있다.
혈소판 응집 검정은 문헌[참조: Blood 66(4), 946-952(1985)]에 기재된 것을 근거로 한 것이다. 피브리노겐-결합 검정은 필수적으로 문헌[참조: Ruggeri, Z.M., et al., Proc. Natl. Acad. Sci. USA 83, 5708-5712(1986) and Plow, E.F., et al., Proc. Natl. Acad. Sci. USA 82, 8057-8061(1985)]에 기재된 것이다. ADP-유도된 생체외 혈소판 응집 검정은 문헌[참조: Zncker, "Platelet Aggregation Measured by the Photoelectric Method", Methods in Enzymology 169, 117-133(1989)]에 기재된 것을 근거로 한 것이다.
혈소판 응집 검정
고정된-활성화된 혈소판의 제조
문헌[참조: Marguerie, G.A. et al., J. Biol. Chem. 254, 5357-5363(1979) and Ruggeri, Z.M. et al., J. Clin Invest, 72, 1-12(1983)]에 기재된 바와 같은 겔 여과 기술을 사용하여 사람 혈소판 농축물로부터 혈소판을 분리한다. 이 혈소판을 127mM 염화나트륨, 2mM 염화마그네슘, 0.42mM Na2HPO4, 11.9mM NaHCO3, 2.9mM KCl, 5.5mM 글루코즈, 10mM HEPES(pH 7.35) 및 사람 혈청 알부민(HSA)을 함유하는 변형된 칼슘-무함유 티로드(Tyrode's) 완충액에서 2 x 108세포/ml의 농도로 현탁시킨다. 세척된 이들 혈소판에 사람 α-트롬빈을 2단위/ml의 최종 농도로 첨가한 다음 트롬빈 억제제 I-2581을 40μM의 최종 농도로 첨가함으로써 상기 혈소판을 활성화시킨다. 이와 같이 활성화된 혈소판에 파라포름알데히드를 가하여 최종 농도가 0.50%가 되도록 하고 이를 실온에서 30분 동안 배양한다. 이어서, 고정된-활성화된 혈소판을 650xg으로 15분 동안 원심분리시켜 수집한다.. 이러한 혈소판 펠릿을 상기 티로드-0.35% HSA 완충액으로 4회 세척하고 동일한 완충액에서 2 x 108세포/ml로 재현탁시킨다.
혈소판 응집 검정
상기와 같이 고정된 활성화된 혈소판을 1분 동안 혈소판 응집 억제을 위해 시험될 당해 화합물의 선택된 용량과 함께 배양하고 사람 피브리노겐을 250㎍/ml의 최종 농도로 가함으로써 응집이 개시된다. 혈소판 응집 프로필러 모델 PAP-4를 사용하여 혈소판 응집을 기록한다. 응집의 억제 정도를 억제제의 부재하에서 관찰된 응집율의 %로서 나타낸다. 이어서, IC50, 즉 응집율을 50% 정도 감소시키는데 필요한 억제제의 양을 각 화합물로부터 산정한다[참조: 예를 들면, Plow, E.F. et al., Proc. Natl. Acad. Sci. USA 82, 8057-8061(1985)].
피브리노겐-결합 검정
문헌[참조: Trapani-Lombardo, V. et al., J. Clin. Invest. 76, 1950-1958(1985)]에 의해 변형된 바와 같이, 문헌[참조: Walsh, P.N. et al., Br. J. Haematol. 281-296(1977)]의 알부민 밀도-구배 기술에 의해 혈장 구성물이 없도록 혈소판을 세척한다. 각 실험상 혼합물에서 변형된 티로드 완충액[참조: Ruggeri, Z.M., et al., J. Clin. Invest. 72, 1-12(1983)] 중의 혈소판을 22 내지 25℃에서 10분 동안 알부민 α-트롬빈으로 자극한다(3.125 x 10 혈소판/l 및 0.1NIH 단위/ml의 트롬빈). 이어서,125I-표지된 피브리노겐과 시험될 화합물을 가하기 전에 5분 동안 히루딘을 25배 과량(단위/단위)으로 가한다. 이러한 첨가 후, 혼합물 중의 최종 혈소판 계수는 1 x 1011/L이다. 22 내지 25℃에서 30분 더 배양한 후, 상기 혼합물 50㎕을 20% 슈크로즈 300㎕을 통하여 12,000xg으로 4분 동안 원심분리시킴으로써 결합된 리간드와 유리 리간드를 분리시킨다. 혈소판 펠릿을 나머지 혼합물로부터 분리시켜 혈소판-결합된 방사능을 측정한다. 과량의 표지되지 않은 리간드를 함유하는 혼합물에서 비-특이적 결합을 측정한다. 스카차드(Scatchard) 분석에 의해 결합 곡선을 분석하는 경우, 컴퓨터 프로그램을 통하여 결합 등온선으로부터 고정된 파라미터로서 비-특이적 결합을 유도한다[참조: Munson, P. J., Method Enzymol. 92, 542-576(1983)]. 트롬빈-자극된 혈소판에 대한 피브리노겐 결합을 50% 억제시키는데 필요한 각 화합물의 농도(IC50)를 결정하기 위하여, 각 화합물을 0.176μmol/ml(60㎍/ml)로 설정된125I-표지된 피브리노겐을 사용하여 6 이상의 농도로 시험한다. 동일한 화합물의 농도의 대수에 대한 잔류성 피브리노겐 결합을 플롯팅함으로써 IC50을 유도한다.
ADP-유도된 생체외 혈소판 응집의 억제
실험 프로토콜
체중이 10 내지 20kg인 잡종 개에 시험 화합물을 투여하기 5 내지 10분 전에 대조군 혈액 샘플을 수득한다. 당해 화합물을 물에 타서 위내 투여하거나 젤라틴 캡슐을 통하여 경구 투여한다. 이어서, 혈액 샘플(5ml)을 3시간 동안 30분 간격으로 수득하고 투여한지 6시간, 12시간 및 24시간 후에 수득한다. 각 혈액 샘플을 두부 정맥의 정맥천자에 의해 수득하고 3.8% 삼나트륨 시트레이트 1부 대 혈액 9부을 함유하는 플라스틱 주사기에 직접적으로 수집한다.
생체외 개의 혈소판 응집
혈액 샘플을 1000rpm으로 원심분리시켜 혈소판 풍부한 혈장(PRP)을 수득한다. PRP를 제거한 후, 상기 샘플을 2000rpm으로 10분 더 원심분리시켜 혈소판이 결여된 혈장(PPP)을 수득한다. 컬터 계수기(Coulter Electronics, Hlaleah, FL)를 사용하여 PRP 중의 혈소판 계수를 측정한다. PRP 중의 혈소판 농도가 300,000혈소판/㎕ 초과인 경우에는, PRP를 PPP로 희석시켜 혈소판 계수를 300,000혈소판/㎕로 조정한다. 이어서, 분취량의 PRP(250㎕)을 실리콘 처리된 유리 큐벳트(7.25 x 55mm, Bio/Data Corp., Horsham, PA)에 놓아둔다. 이어서, 에피네프린(최종 농도 1μM)을 PRP에 가하고 이를 37℃에서 1분 동안 배양한다. 이어서, 혈소판 응집 자극인자인 ADP를 10μM의 최종 농도로 PRP에 가한다. 투광 응집 측정기(Bio/Data 혈소판 응집 프로필러, 모델 PAP-4, Bio/Data Corp., Horsham, PA)를 사용하여 혈소판 응집을 분광측정법으로 모니터한다. 화합물을 시험하기 위하여, 투광율 변화(기울기)와 최대 투광성을 중복으로 기록한다. 혈소판 응집 데이터를, 시험 화합물을 투여하기 전에 수득된 혈액 샘플로부터 제조되는 대조군 PRP로부터 수득된 데이터와 비교해서 기울기 또는 최대 응집 감소율(평균±SEM)로서 보고한다.
화학식 Ⅱ의 화합물은 앞서의 시험에서 현저한 활성을 나타내고 혈전증 연관된 특징 질환 상태를 예방 및 치료하는데 유용하다. 생체외 개의 혈소판 응집 검정에서의 항혈전성 활성은 사람에 있어서의 이러한 활성을 예고해준다[참조: Catalfamo, J.L., and Dodds, W.Jean, "Isolation of Platelets from Laboratory Animals", Methods Enzymol, 169, Part A, 27(1989)]. 상기 방법에 의해 화학식 Ⅱ의 화합물을 시험한 결과가 다음 표 6에 제시되어 있다. 또한, 다음 표에는 4-4(피페리딜)부타노일 글리실 아스파르틸 트립토판, 즉 EP 0 479 481에 기재된 화합물에 대한 비교용 시험 결과가 제시되어 있다.
실시예 번호화합물 고정된 혈소판응집 억제율(IC50μM) 용량(mg/kg) ADP-유도 생체외 혈소판 응집억제율 경구 투여후 생체외혈소판 응집 억제율(%)
1h 3h 6h 12h 24h
15 0.097 5 100 100 100 98 50
EPA '481의 화합물 0.047 5 53 〈20
당해 분야의 숙련인은 본 발명의 목적을 수행하고 언급된 최종 목적과 이점 뿐만 아니라 본 발명 본래의 이점을 획득하도록 잘 적응된다는 것을 용이하게 인지할 것이다. 본원에 기재된 화합물, 조성물 및 방법은 바람직한 양태의 대표적인 것으로서 제시된 것이거나 예시적인 것이지, 이로써 본 발명의 범위가 제한되지는 않는다.

Claims (24)

  1. N-(N-3급-부톡시카보닐-N-에틸글리실)-(L)-아스파르트산 β-벤질 에스테르인 화합물.
  2. N-[N-[N-[4-[N-벤질옥시카보닐피페리딘-4-일]부타노일]-N-에틸글리실]-(L)-아스파르틸 β-벤질 에스테르]-(L)-β-사이클로헥실알라닌 아미드인 화합물.
  3. 4-(4-피페리딘)부틸리데닐카복실산인 화합물.
  4. N-[N-[N-[3-[N-벤질옥시카보닐-4-피페리딘]프로필리데닐카보닐]-N-에틸글리실]-(L)-아스파르틸 β-벤질 에스테르]-(L)-β-사이클로헥실알라닌 아미드인 화합물.
  5. 비-흡습성의 결정성 N-[N-[N-(4-(피페리딘-4-일)부타노일)-N-에틸글리실]-(L)-아스파르틸]-(L)-β-사이클로헥실알라닌 아미드인 화합물 또는 약제학적으로 허용되는 이의 염.
  6. 제1항에 따르는 화합물과 약제학적으로 허용되는 담체를 포함하는 약제학적 조성물.
  7. 흡습성의 결정성 N-[N-[N-(4-(피페리딘-4-일)부타노일)-N-에틸글리실]-(L)-아스파르틸]-(L)-β-사이클로헥실알라닌 아미드를 약 40 내지 약 100%의 상대 습도와 약 20 내지 약 80℃의 온도조건에 노출시킴을 포함하여, 비-흡습성의 결정성 N-[N-[N-(4-(피페리딘-4-일)부타노일)-N-에틸글리실]-(L)-아스파르틸]-(L)-β-사이클로헥실알라닌 아미드를 제조하는 방법.
  8. 제7항에 있어서, 노출이 약 65 내지 약 80%의 상대 습도에서 이루어지는 방법.
  9. 제7항에 있어서, 노출이 약 40 내지 약 80℃에서 이루어지는 방법.
  10. 제7항에 있어서, 노출이 정적 조건하에서 수행되는 방법.
  11. 제7항에 있어서, 노출이 동적 조건하에서 수행되는 방법.
  12. 화학식의 화합물과 화학식의 화합물을 커플링시켜 화학식의 제1 중간체 화합물을 형성하는 단계;
    화학식의 화합물을 상기 제1 중간체 화합물에 커플링시켜 화학식의 제2 중간체 화합물을 형성하는 단계; 및
    트리플루오로아세트산을 사용하여 이러한 제2 중간체 화합물로부터 P2보호 그룹을 제거하여 염 화합물을 수득하는 단계를 포함하여, 다음 화학식의 염 화합물을 제조하는 방법.
    상기식에서,
    B는 알킬, 사이클로알킬, 사이클로알킬알킬, 알킬사이클로알킬, 알킬사이클로알킬알킬, 아릴, 아르알킬, 알킬아릴 또는 알킬아르알킬이고,
    E1은 H이며,
    E2는 천연 α-아미노산의 α-탄소 측쇄, H, 알킬, 사이클로알킬, 사이클로알킬알킬, 알킬사이클로알킬, 알킬사이클로알킬알킬, 아릴, 치환된 아릴, 아르알킬, 치환된 아르알킬, 헤테로사이클릴, 치환된 헤테로사이클릴, 헤테로사이클릴알킬, 치환된 헤테로사이클릴알킬이거나 E1과 E2는 이들에 연결된 질소 및 탄소 원자와 함께, 4-, 5-, 6- 또는 7-원 아자사이클로알칸 환을 형성하고,
    G는 OR1또는 NR1R2이며,
    R1및 R2는 독립적으로 H, 알킬, 사이클로알킬, 사이클로알킬알킬, 알킬사이클로알킬, 알킬사이클로알킬알킬, 아릴, 아르알킬, 알킬아릴 또는 알킬아르알킬이고,
    p는 1 내지 4이며,
    P1은 산 보호 그룹이고,
    P2는 산 불안정한 아민 보호 그룹이다.
  13. 제12항에 있어서, P1이 수소화 불안정한 산 보호 그룹인 방법.
  14. 화학식 V의 화합물.
    화학식 V
    상기식에서,
    P3은 아민 보호 그룹이고,
    B는 알킬, 사이클로알킬, 사이클로알킬알킬, 알킬사이클로알킬, 알킬사이클로알킬알킬, 아릴, 아르알킬, 알킬아릴 또는 알킬아르알킬이고,
    P1은 산 보호 그룹이며,
    E1은 H이며,
    E2는 천연 α-아미노산의 α-탄소 측쇄, H, 알킬, 사이클로알킬, 사이클로알킬알킬, 알킬사이클로알킬, 알킬사이클로알킬알킬, 아릴, 치환된 아릴, 아르알킬, 치환된 아르알킬, 헤테로사이클릴, 치환된 헤테로사이클릴, 헤테로사이클릴알킬, 치환된 헤테로사이클릴알킬이거나 E1과 E2는 이들에 연결된 질소 및 탄소 원자와 함께, 4-, 5-, 6- 또는 7-원 아자사이클로알칸 환을 형성하고,
    G는 OR1또는 NR1R2이며,
    R1및 R2는 독립적으로 H, 알킬, 사이클로알킬, 사이클로알킬알킬, 알킬사이클로알킬, 알킬사이클로알킬알킬, 아릴, 아르알킬, 알킬아릴 또는 알킬아르알킬이고,
    p는 1 내지 4이다.
  15. 제14항에 있어서, P1이 수소화 불안정한 산 보호 그룹이고 P3이 수소화 불안정한 아민 보호 그룹인 화합물.
  16. 제15항에 있어서,
    B가 알킬, 사이클로알킬, 사이클로알킬알킬, 알킬사이클로알킬, 알킬사이클로알킬알킬, 아릴, 아르알킬, 알킬아릴 또는 알킬아르알킬이고,
    E1이 H이며,
    E2가 H, 알킬, 사이클로알킬, 사이클로알킬알킬, 알킬사이클로알킬, 알킬사이클로알킬알킬, 아릴, 치환된 아릴, 아르알킬 또는 치환된 아르알킬이고,
    L이 OR1또는 NR1R2이며,
    R1및 R2가 독립적으로 H, 알킬, 사이클로알킬, 사이클로알킬알킬, 알킬사이클로알킬, 알킬사이클로알킬알킬, 아릴, 아르알킬, 알킬아릴 또는 알킬아르알킬이고,
    p가 1 또는 2인 화합물.
  17. 제16항에 있어서,
    B가 알킬, 사이클로알킬, 사이클로알킬알킬, 알킬사이클로알킬 또는 알킬사이클로알킬알킬이고,
    E2가 H, 알킬, 사이클로알킬, 사이클로알킬알킬, 알킬사이클로알킬 또는 알킬사이클로알킬알킬인 화합물.
  18. 제17항에 있어서,
    B가 알킬이고,
    E2가 알킬, 사이클로알킬 또는 사이클로알킬알킬이며,
    R1및 R2가 독립적으로 H, 알킬, 사이클로알킬, 사이클로알킬알킬, 알킬사이클로알킬 또는 알킬사이클로알킬알킬이고,
    p가 1인 화합물.
  19. 제18항에 있어서,
    P3이 벤질옥시카보닐이고,
    B가 에틸이며,
    P1이 벤질이고,
    E2가 사이클로헥실메틸이며,
    G가 NH2인 화합물.
  20. 화학식의 ((4-피페리딘)부틸리데닐카복실산) 화합물을 화학식의 트리펩티드와 커플링시키는 단계를 포함하여, 화학식 V의 화합물 또는 이의 산 부가염을 제조하는 방법.
    화학식 V
    상기식에서,
    P3은 아민 보호 그룹이고,
    B는 알킬, 사이클로알킬, 사이클로알킬알킬, 알킬사이클로알킬, 알킬사이클로알킬알킬, 아릴, 아르알킬, 알킬아릴 또는 알킬아르알킬이며,
    P1은 산 보호 그룹이고,
    E1은 H이며,
    E2는 천연 α-아미노산의 α-탄소 측쇄, H, 알킬, 사이클로알킬, 사이클로알킬알킬, 알킬사이클로알킬, 알킬사이클로알킬알킬, 아릴, 치환된 아릴, 아르알킬, 치환된 아르알킬, 헤테로사이클릴, 치환된 헤테로사이클릴, 헤테로사이클릴알킬, 치환된 헤테로사이클릴알킬이거나 E1과 E2는 이들에 연결된 질소 및 탄소 원자와 함께, 4-, 5-, 6- 또는 7-원 아자사이클로알칸 환을 형성하고,
    G는 OR1또는 NR1R2이며,
    R1및 R2는 독립적으로 H, 알킬, 사이클로알킬, 사이클로알킬알킬, 알킬사이클로알킬, 알킬사이클로알킬알킬, 아릴, 아르알킬, 알킬아릴 또는 알킬아르알킬이고,
    p는 1 내지 4이다.
  21. 제20항에 있어서, P1이 수소화 불안정한 산 보호 그룹이고 P3이 수소화 불안정한 아민 보호 그룹인 방법.
  22. 화학식 III의 화합물.
    화학식 III
    상기식에서,
    P3은 아민 보호 그룹이다.
  23. 제22항에 있어서, P3이 수소화 불안정한 아민 보호 그룹인 화합물.
  24. 제23항에 있어서, P3이 벤질옥시카보닐인 화합물.
KR1019997001362A 1996-08-21 1997-08-21 안정한 비-흡습성의 결정성 형태의 ｎ-[ｎ-ｎ-(４-(피페리딘-４-일)부타노일)-ｎ-에틸글리실] 화합물 KR20000068229A (ko)

Applications Claiming Priority (2)

Application Number Priority Date Filing Date Title
US2428496P 1996-08-21 1996-08-21
US60/024,284 1996-08-21

Publications (1)

Publication Number Publication Date
KR20000068229A true KR20000068229A (ko) 2000-11-25

Family

ID=21819807

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
KR1019997001362A KR20000068229A (ko) 1996-08-21 1997-08-21 안정한 비-흡습성의 결정성 형태의 ｎ-[ｎ-ｎ-(４-(피페리딘-４-일)부타노일)-ｎ-에틸글리실] 화합물

Country Status (20)

Country Link
US (2) US6153588A (ko)
EP (1) EP0923553B1 (ko)
JP (1) JP4008499B2 (ko)
KR (1) KR20000068229A (ko)
CN (2) CN1231659A (ko)
AP (1) AP9901462A0 (ko)
AT (1) ATE390438T1 (ko)
AU (1) AU733591B2 (ko)
BG (1) BG63538B1 (ko)
BR (1) BR9711340A (ko)
CA (1) CA2263647C (ko)
DE (1) DE69738601T2 (ko)
EA (1) EA001362B1 (ko)
IL (1) IL128561A0 (ko)
NO (1) NO990721L (ko)
OA (1) OA10979A (ko)
PL (1) PL331772A1 (ko)
SK (1) SK21999A3 (ko)
WO (1) WO1998007696A1 (ko)
ZA (1) ZA977510B (ko)

Families Citing this family (19)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
IL128561A0 (en) * 1996-08-21 2000-01-31 Rhone Poulenc Rorer Pharma Stable non-hygroscopic crystalline form of N-(N-N-(4-(piperidin-4-YL)butanoyl)-N-ethylglycyl) compounds
WO1999019294A1 (en) * 1997-05-14 1999-04-22 Aventis Pharmaceuticals Products Inc. Legal/Patents Process for the preparation of azacycloalkylalkanoyl pseudotetrapeptides
JP2001519411A (ja) * 1997-10-10 2001-10-23 アヴェンティス ファーマシューティカルズ プロダクツ インコーポレイテッド アザシクロアルキルアルカノイルプソイドテトラぺプチドの調製方法
WO2000040601A1 (en) * 1998-12-30 2000-07-13 Aventis Pharmaceuticals Products Inc. Process for preparing a stable non-hygroscopic crystalline n-[n-[n- piperdin- 4-yl)butanoyl)- n.ethylglycyl]- (l)-aspartyl] -ss-cyclohexylalanine amide
US20050238834A1 (en) * 2004-04-21 2005-10-27 Eastman Kodak Company High modulus label with compliant carrier sheet
US8021679B2 (en) 2005-08-25 2011-09-20 Medtronic Vascular, Inc Nitric oxide-releasing biodegradable polymers useful as medical devices and coatings therefore
US8241619B2 (en) 2006-05-15 2012-08-14 Medtronic Vascular, Inc. Hindered amine nitric oxide donating polymers for coating medical devices
US7811600B2 (en) * 2007-03-08 2010-10-12 Medtronic Vascular, Inc. Nitric oxide donating medical devices and methods of making same
US8273828B2 (en) * 2007-07-24 2012-09-25 Medtronic Vascular, Inc. Methods for introducing reactive secondary amines pendant to polymers backbones that are useful for diazeniumdiolation
US20090222088A1 (en) * 2008-02-29 2009-09-03 Medtronic Vascular, Inc. Secondary Amine Containing Nitric Oxide Releasing Polymer Composition
US20090232868A1 (en) * 2008-03-17 2009-09-17 Medtronic Vascular, Inc. Nitric Oxide Releasing Polymer Composition
US20090232863A1 (en) * 2008-03-17 2009-09-17 Medtronic Vascular, Inc. Biodegradable Carbon Diazeniumdiolate Based Nitric Oxide Donating Polymers
US8158187B2 (en) * 2008-12-19 2012-04-17 Medtronic Vascular, Inc. Dry diazeniumdiolation methods for producing nitric oxide releasing medical devices
US8709465B2 (en) * 2009-04-13 2014-04-29 Medtronic Vascular, Inc. Diazeniumdiolated phosphorylcholine polymers for nitric oxide release
US9704557B2 (en) * 2013-09-25 2017-07-11 Qualcomm Incorporated Method and apparatus for storing retention time profile information based on retention time and temperature
CA3009065C (en) 2015-12-21 2022-01-25 Texas Tech University System System and method for solution phase gap peptide synthesis
WO2019217116A1 (en) * 2018-05-06 2019-11-14 Gap Peptides Llc Method for solution-phase peptide synthesis
US12024537B2 (en) 2018-05-31 2024-07-02 Sederma Compositions and methods for chemical synthesis
US11827660B2 (en) 2019-02-01 2023-11-28 Sederma Synthesis strategy for gap protecting group

Family Cites Families (15)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US4857508A (en) * 1987-12-03 1989-08-15 Monsanto Company Novel platelet-aggregation inhibitor peptide derivatives
US4992463A (en) * 1988-07-20 1991-02-12 Monsanto Company Thienyl peptide mimetic compounds which are useful in inhibiting platelet aggregation
US5332726A (en) * 1989-09-29 1994-07-26 Rhone-Poulenc Rorer Pharmaceuticals Inc. Antithrombotic peptides and pseudopeptides
US4952562A (en) * 1989-09-29 1990-08-28 Rorer Pharmaceutical Corporation Anti-thrombotic peptides and pseudopeptides
US5064814A (en) * 1990-04-05 1991-11-12 Rhone-Poulenc Rorer Pharmaceuticals Inc. Anti-thrombotic peptide and pseudopeptide derivatives
US5264420A (en) 1990-09-27 1993-11-23 Merck & Co., Inc. Fibrinogen receptor antagonists
NZ239876A (en) * 1990-09-27 1993-12-23 Merck & Co Inc Glycyl-b-alanine derivatives and pharmaceutical compositions thereof.
US5218138A (en) 1992-09-02 1993-06-08 Rhone-Poulenc Rorer Pharmaceuticals Inc. Stereoselective reduction of 3-hydroxyket-1-ones to 1,3-syn-dihydroxylated compounds
US5340798A (en) * 1992-10-14 1994-08-23 Merck & Co., Inc. Fibrinogen receptor antagonists
WO1995001336A1 (fr) * 1993-06-30 1995-01-12 Sumitomo Pharmaceuticals Co., Ltd. Nouveau derive de piperidine
JP3032297B2 (ja) * 1993-10-15 2000-04-10 ローヌ‐プーラン ローラー ファーマシューティカルズ インコーポレイテッド 抗血栓性アザシクロアルキルアルカノイルペプチド及びプソイドペプチド
US5780590A (en) * 1993-10-15 1998-07-14 Rhone-Poulenc Rorer Pharmaceuticals Inc. Antithrombotic azacycloalkylalkanoyl peptides and pseudopeptides
US5707994A (en) * 1993-10-19 1998-01-13 Sumitomo Pharmaceuticals Company, Limited 2,3-diaminopropionic acid derivative
IL128561A0 (en) * 1996-08-21 2000-01-31 Rhone Poulenc Rorer Pharma Stable non-hygroscopic crystalline form of N-(N-N-(4-(piperidin-4-YL)butanoyl)-N-ethylglycyl) compounds
JP2001519411A (ja) * 1997-10-10 2001-10-23 アヴェンティス ファーマシューティカルズ プロダクツ インコーポレイテッド アザシクロアルキルアルカノイルプソイドテトラぺプチドの調製方法

Also Published As

Publication number Publication date
NO990721D0 (no) 1999-02-16
CA2263647A1 (en) 1998-02-26
EA001362B1 (ru) 2001-02-26
IL128561A0 (en) 2000-01-31
EP0923553B1 (en) 2008-03-26
JP4008499B2 (ja) 2007-11-14
DE69738601D1 (de) 2008-05-08
US6153588A (en) 2000-11-28
EP0923553A4 (en) 1999-12-08
BG103225A (en) 2000-01-31
NO990721L (no) 1999-04-20
CA2263647C (en) 2011-02-15
WO1998007696A1 (en) 1998-02-26
EP0923553A1 (en) 1999-06-23
CN1231659A (zh) 1999-10-13
CN1491942A (zh) 2004-04-28
BG63538B1 (bg) 2002-04-30
AP9901462A0 (en) 1999-03-31
AU733591B2 (en) 2001-05-17
ATE390438T1 (de) 2008-04-15
JP2000517305A (ja) 2000-12-26
EA199900217A1 (ru) 1999-08-26
DE69738601T2 (de) 2009-04-30
SK21999A3 (en) 2000-02-14
AU4156397A (en) 1998-03-06
PL331772A1 (en) 1999-08-02
BR9711340A (pt) 1999-08-17
US6753409B1 (en) 2004-06-22
OA10979A (en) 2001-11-01
ZA977510B (en) 1998-05-21

Similar Documents

Publication Publication Date Title
US6753409B1 (en) STABLE NON-HYGROSCOPIC CRYSTALLINE FORM OF N-[N-[N-(4-(PIPERIDIN-4-YL)BUTANOYL)-N-ETHYLGLYCYL]ASPARTYL]-L-β-CYCLOHEXYL ALANINE AMIDE, INTERMEDIATES THEREOF, AND PREPARATION THEREOF AND OF ANTITHROMBOTIC AZACYCLOALKYLALKANOYL PEPTIDES AND PSEUDOPEPTIDES
AP904A (en) Antithrombotic Azacycloalkylalkanoyl peptides and pseudopeptides.
US5866685A (en) Antithrombotic azacycloalkylalkanoyl peptides and pseudopeptides
US6274705B1 (en) Antithrombotic azacycloalkylalkanoyl peptides and pseudopeptides
MXPA99001773A (en) Antithrombotic azacycloalkylalkanoyl peptides and pseudopeptides
MXPA99001772A (en) Stable non-hygroscopic crystalline form of n-[n-n-(4-(piperidin-4-yl)butanoyl)-n-ethylglycyl]compounds
CZ55199A3 (cs) Stabilní, nehygroskopická krystalická forma N- [N-[N(4-piperidin-4-yl)butanoyl]-N-ethylgIycyl]ových derivátů
CZ55099A3 (cs) Antitrombotické azacykloalkylalkanoylové peptidy a pseudopeptidy
NZ299833A (en) Treating or preventing thrombosis using azacycloalkanol peptides and pseudopeptides

Legal Events

Date Code Title Description
A201 Request for examination
E902 Notification of reason for refusal
E601 Decision to refuse application