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CN1231659A - N[n－n－(4－哌啶－4－基)丁酰基)－n－乙基甘氨酰基]化合物的不吸湿的稳定结晶形式 - Google Patents

N[n－n－(4－哌啶－4－基)丁酰基)－n－乙基甘氨酰基]化合物的不吸湿的稳定结晶形式 Download PDF

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CN1231659A
CN1231659A CN97198210A CN97198210A CN1231659A CN 1231659 A CN1231659 A CN 1231659A CN 97198210 A CN97198210 A CN 97198210A CN 97198210 A CN97198210 A CN 97198210A CN 1231659 A CN1231659 A CN 1231659A
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Abstract

本发明涉及不吸湿稳定结晶形式的抗血栓形成化合物N－[N－[N－(4－(哌啶－4－基)丁酰基)－N－乙基甘氨酰基]－(L)－天冬氨酰基]－(L)－β－环己基—丙氨酰胺、制备所述稳定晶形的方法、其药物组合物、以及其中间体。本发明还涉及制备式(Ⅱ)化合物的方法,其中:A,B,Z,E1,E2,G,R,m,n,和p的定义如说明书所述。

Description

N-[N-N-(4-(哌啶-4-基)丁酰基)-N-乙基甘氨酰基] 化合物的不吸湿的稳定结晶形式
发明背景
1.  发明领域
本发明涉及式I的N-[N-[N-(4-(哌啶-4-基)丁酰基)-N-乙基甘氨酰基]-(L)-天冬氨酰]-(L)-β-环己基丙氨酰胺的不吸湿的稳定结晶形式。该化合物具有抗血栓形成活性，
Figure A9719821000091
包括在哺乳动物中抑制血小板聚集和血栓的形成，可用于预防和治疗与心肌梗塞、中风、外周动脉疾病和弥散性血管内凝血等疾病有关的血栓形成。
此外，本发明还涉及N-[N-[N-(4-(哌啶-4-基)丁酰基)-N-乙基甘氨酰基]-(L)-天冬氨酰]-(L)-β-环己基丙氨酰胺结晶形式的制备方法，其药物组合物及其中间体。
此外，本发明还涉及用于制备四氮杂环烷基链烷酰基肽或假肽化合物的中间体。
止血，血液凝集的生物化学过程，是一种极为复杂的现象，正常的全血和身体组织通过该过程自发地使受损的血管停止流血。有效的止血需要血管、血小板和血浆因子的联合活性以及控制机制以防止过度凝固。其中任意一种成分的缺陷、不足或过量均会导致出血或血栓形成的后果。
血小板在细胞外基质上的粘附、扩散和凝集是血栓形成的重要事件。这些事件受一族粘着糖蛋白，即纤维蛋白原、纤连蛋白和冯·维勒布兰德(von willebrand)因子的调节。纤维蛋白原是血小板凝集的辅助因子，而纤连蛋白支持血小板的粘附和扩散反应，冯·维勒布兰德因子对于血小板在内皮下基质上粘附和扩散是非常重要的。纤维蛋白原、纤连蛋白和冯·维勒布兰德因子的结合位点位于被称为糖蛋白IIb/IIIa的血小板膜蛋白配合物上。
粘着糖蛋白如纤维蛋白原不与正常的静息血小板结合。但是，当血小板被激动剂如凝血酶和二磷酸腺苷激活时，血小板的形状发生改变，可能会使GP IIb/IIIa结合位点适于纤维蛋白原接近。本发明的化合物可以封闭纤维蛋白原受体，从而具有上述的抗血栓形成活性。
2.  已报道的进展
已发现，Arg-Gly-Asp(RGD)的存在是纤维蛋白原、纤连蛋白和冯·维勒布兰德因子与细胞表面受体相互作用所必需的(RuoslahtiE.，Pierschbacher，细胞(Cell)1986，44，517-18)。另外两种氨基酸序列似乎也参与了纤维蛋白原的血小板粘附功能，即Gly-Pro-Arg序列和十二肽His-His-Leu-Gly-Gly-ALa-Lys-Gln-Ala-Gly-Asp-Val序列。含有RGD或十二肽的小合成肽表现出可与血小板GPIIb/IIIa受体结合并竞争性地抑制纤维蛋白原、纤连蛋白和冯·维勒布兰德因子的结合以及抑制被激活血小板的凝集(Plow等，美国国家科学院院报(Proc.Natl.Acad.Sci.USA)1985，82，8057-61；Ruggeri等，美国国家科学院院报1986，5708-12；Ginsberg等，生物化学杂志(J.Biol.Chem.)1985，260，3931-36；和Gartner等，生物化学杂志，1987，260，11，891-94)。
Tjoeng等在美国专利5037808和4879313中报道了含有胍基链烷酰基-和胍基链烯酰基-天冬氨酰部分的吲哚基化合物是血小板凝集的抑制剂。
1991年2月12日授权的美国专利4992463(Tjoeng等)公开了一系列具有血小板凝集抑制活性的芳基和芳烷基胍基烷基肽类似物，并具体公开了一系列单-和二甲氧基苯基肽类似物和二苯基烷基肽类似物。
1989年8月15日授权的美国专利(Adams等)公开了一系列具有血小板凝集抑制活性的含有末端芳烷基取代基的胍基烷基肽衍生物，并具体公开了一系列含有末端酰胺功能基的O-甲基酪氨酸、联苯基和萘基衍生物。
Haverstick，D.M.等，在“血液”(Blood)66(4)，946-952(1985)中公开了多种合成肽，包括arg-gly-asp-ser和gly-arg-gly-asp-ser，可以抑制凝血酶诱导的血小板凝集。
Plow.E.F.等，在“美国国家科学院院报”79，3711-3715(1982)中公开了四肽甘氨酰-L-脯氨酰-L-精氨酰-L-脯氨酸可以抑制纤维蛋白原与人血小板结合。
1986年12月15日递交的法国专利申请86/17507公开了含有-arg-gly-asp-序列的四肽、五肽和六肽可用作抗血栓形成剂。
1987年7月28日授权的美国专利4683291(Zimmerman等)公开了一系列含有-arg-gly-asp-序列的由6-40个氨基酸组成的肽是血小板结合抑制剂。
1989年6月7日公开的欧洲专利申请0319506公开了一系列含有-arg-gly-asp-序列的四肽、五肽和六肽是血小板凝集的抑制剂。
美国专利5023233报道了含有Gly-Asp部分的环状肽类似物是纤维蛋白原受体的拮抗剂。
在分别于1991年3月28日、1990年6月7日和1990年1月4日递交的未决美国专利申请07/677006、07/534385和07/460777，以及美国专利4952562和于1990年9月25日递交的国际申请PCT/US90/05448中报道了含有氨基一、胍基-、咪唑基和/或脒基链烷酰基和链烯酰基部分的肽和假肽是抗血栓形成剂，以上这些专利申请均转让给了本发明的同一受让人。
在1990年2月5日递交的未决美国专利申请07/475043和1991年4月11日递交的国际申请PCT/US91/02471(1992年10月29日公开，国际申请号为WO 92/13117)中报道了含有氨基-和胍基-烷基-和链烯基-苯甲酰基、苯基链烷酰基和苯基链烯酰基部分的肽和假肽是抗血栓形成剂，以上这些专利申请均转让给了本发明的同一受让人。
在1989年12月1日递交的美国专利5053392中报道了链烷酰基和取代的链烷酰基氮杂环烷基甲酰基天冬氨酸衍生物是血小板凝集抑制剂，该专利转让给了本发明的同一受让人并且与本发明具有相同的发明人。
在1990年4月5日递交的美国专利5064814中报道了N-取代的氮杂环烷基羰基环状氨基酰基天冬氨酸衍生物是抗血栓形成剂，该专利的发明人和受让人与本申请相同。与本申请的受让人相同的、于1989年10月10日递交的美国专利5051405中报道了氮杂环烷基甲酰基甘氨酰天冬氨酸衍生物是抗血栓形成剂。
1992年4月8日公开的欧洲专利申请0479481公开了用作纤维蛋白原受体拮抗剂的氮杂环烷基链烷酰基甘氨酰天冬氨酰氨基酸类化合物。
1992年4月1日公开的欧洲专利申请0478362公开了用作纤维蛋白原受体拮抗剂的氮杂环烷基链烷酰基肽基β-丙氨酸类化合物。
PCT专利申请公开号WO 95/10295公开了式II的氮杂环烷基链烷酰基肽和假肽，特别是N-[N-[N-(4-(哌啶-4-基)丁酰基)-N-乙基甘氨酰基]-(L)-天冬氨酰]-(L)-β-环己基丙氨酰胺，其可以在哺乳动物中抑制血小板凝集和血栓形成，可用于预防和治疗血栓形成。根据PCT专利申请公开号WO 95/10295所制得的N-[N-[N-(4-(哌啶-4-基)丁酰基)-N-乙基甘氨酰基]-(L)-天冬氨酰]-(L)-β-环己基丙氨酰胺是无定形的、吸湿的，并且由于吸湿其物理性质也不稳定。PCT专利申请公开号WO 95/10295并未公开N-[N-[N-(4-(哌啶-4-基)丁酰基)-N-乙基甘氨酰基]-(L)-天冬氨酰]-(L)-β-环己基丙氨酰胺的不吸湿的、稳定的结晶形式。
PCT专利申请公开号WO 95/10295还公开了氮杂环烷基链烷酰基肽和假肽是通过常规的固相或液相肽合成方法，用原料和/或易于从化学品供应商如Aldrich或Sigma处获得的中间体制得的(H.Paulsen，G.Merz，V.Weichart，“O-糖肽序列的固相合成”，Angew.Chem.Int.Ed.Engl.27(1988)；H.Mergler，R.Tanner，J.Gosteli和P.Grogg，“通过固相和液相方法联合进行肽合成I：一种新的用于固相合成完全保护的片段的对酸非常不稳定的锚基”，四面体通讯(Tetrahedron Letters)29，4005(1988)；Merrifield，R.B.，“25年后的固相肽合成：高血糖素拮抗剂的设计与合成”，Markromol.Chem.Macromol.Symp.19，31(1988))。此外，PCT专利申请公开号WO 95/10295还公开了N-[N-[N-(4-(哌啶-4-基)丁酰基)-N-乙基甘氨酰基]-(L)-天冬氨酰]-(L)-β-环己基丙氨酰胺的无定形和吸湿的形式是通过顺序合成从C-末端氨基酸制得的，参见反应路线I。反应路线I
Figure A9719821000131
Figure A9719821000141
Figure A9719821000142
Figure A9719821000143
PCT专利申请公开号WO 95/10295并未公开从中心的二(假肽或肽)形成四-氮杂环烷基链烷酰基肽和假肽，或者，具体地讲，N-[N-[N-(4-(哌啶-4-基)丁酰基)-N-乙基甘氨酰基]-(L)-天冬氨酰]-(L)-β-环己基丙氨酰胺，由此使中心的二(假肽或肽)的N-和C-末端均与假氨基酸和/或氨基酸偶联形成四-氮杂环烷基链烷酰基肽和假肽。
发明概述
本发明涉及式I的N-[N-[N-(4-(哌啶-4-基)丁酰基)-N-乙基甘氨酰基]-(L)-天冬氨酰]-(L)-β-环己基丙氨酰胺的不吸温的、稳定的结晶形式。该化合物具有抗血栓形成活性，包括在哺乳动物中抑制血小板聚集和血栓的形成，从而可用于预防和治疗与心肌梗塞、中风、外周动脉疾病和弥散性血管内凝血等疾病有关的血栓形成。本发明还涉及N-[N-[N-(4-(哌啶-4-基)丁酰基)-N-乙基甘氨酰基]-(L)-天冬氨酰]-(L)-β-环己基丙氨酰胺的非吸湿的、稳定的结晶形式的药物组合物及其中间体。
本发明还涉及制备式II的四-氮杂环烷基链烷酰基肽或假肽化合物的方法，其中：
A是H；
B是烷基、环烷基、环烷基烷基、烷基环烷基、烷基环烷基烷基、芳基、芳烷基、烷芳基或烷基芳烷基；Z是
Figure A9719821000152
E1是H；
E2是天然α-氨基酸的-碳侧链、H、烷基、环烷基、环烷基烷基、烷基环烷基、烷基环烷基烷基、芳基、取代的芳基、芳烷基、取代的芳烷基、杂环基、取代的杂环基、杂环基烷基、取代的杂环基烷基，或E1和E2与连接E1和E2的氮和碳原子合在一起形成一个4-、5-、6-或7-元氮杂环烷烃环；
G是OR1或NR1R2；
R1和R2彼此独立地是H、烷基、环烷基、环烷基烷基、烷基环烷基、烷基环烷基烷基、芳基、芳烷基、烷芳基或烷基芳烷基；
R是H、烷基、芳基或芳烷基；
m是1-5；
n是0-6；
p是1-4；特别是N-[N-[N-(4-(哌啶-4-基)丁酰基)-N-乙基甘氨酰基]-(L)-天冬氨酰]-(L)-β-环己基丙氨酰胺的非吸湿的、稳定的结晶形式。
附图概述
图1表示实施例13，方法A中制得的N-[N-[N-(4-(哌啶-4-基)丁酰基)-N-乙基甘氨酰基]-(L)-天冬氨酰]-(L)-β-环己基丙氨酰胺的非吸湿性结晶形式的样品的X-射线粉末衍射图。
图2表示实施例13，方法B(a)中制得的N-[N-[N-(4-(哌啶-4-基)丁酰基)-N-乙基甘氨酰基]-(L)-天冬氨酰]-(L)-β-环己基丙氨酰胺的非吸湿性结晶形式的样品的X-射线粉末衍射图。
图3表示实施例13，方法B(b)中制得的N-[N-[N-(4-(哌啶-4-基)丁酰基)-N-乙基甘氨酰基]-(L)-天冬氨酰]-(L)-β-环己基丙氨酰胺的非吸温性结晶形式的样品的X-射线粉末衍射图。
图4表示按照实施例14制得的N-[N-[N-(4-(哌啶-4-基)丁酰基)-N-乙基甘氨酰基]-(L)-天冬氨酰]-(L)-β-环已基丙氨酰胺的吸湿性结晶形式样品的X-射线粉末衍射图。
图5表示按照实施例14制得的N-[N-[N-(4-(哌啶-4-基)丁酰基)-N-乙基甘氨酰基]-(L)-天冬氨酰]-(L)-β-环己基丙氨酰胺的非吸湿性结晶形式样品的X-射线粉末衍射图。
图6表示按照实验15的描述进行的三次不同实验的输出功率作为时间函数的等温微量量热图。该实验监测N-[N-[N-(4-(哌啶-4-基)丁酰基)-N-乙基甘氨酰基}-(L)-天冬氨酰]-(L)-β-环己基丙氨酰胺的不同结晶形式与各种溶剂蒸气接触时的热活性。图6中的(A)线表明，当根据实施例5或11制得的吸湿性N-[N-[N-(4-(哌啶-4-基)丁酰基)-N-乙基甘氨酰基]-(L)-天冬氨酰]-(L)-β-环己基丙氨酰胺于40℃下暴露在80％RH(饱和氯化钾溶液)中30小时以上时，发生了强烈的放热事件，在该暴露过程中，化合物的吸湿形式转变成了化合物的非吸湿形式。图6中的(B)线表明，当根据实施例5或11制得的吸湿性N-[N-[N-(4-(哌啶-4-基)丁酰基)-N-乙基甘氨酰基]-(L)-天冬氨酰]-(L)-β-环己基丙氨酰胺于40℃下暴露在甲醇蒸气(可溶解化合物的除水之外的溶剂)中时，未发生放热转化事件，因此，甲醇不会引起吸湿形式的晶体向非吸湿形式的转变。图6中的(C)线表明，当根据实施例13制得的非吸湿形式的N-[N-[N-(4-(哌啶-4-基)丁酰基)-N-乙基甘氨酰基]-(L)-天冬氨酰]-(L)-β-环己基丙氨酰胺暴露于40℃/80％RH时，未发生了放热转变事件，因此，该化合物的非吸湿形式在这些条件下不会经历形式转变，也就是说，是一种稳定的形式。
图7表示按照实验15的描述进行的三次不同实验的输出功率作为时间函数的等温微量量热图。该实验监测当于40℃、50℃和60℃暴露在80％RH下时，N-[N-[N-(4-(哌啶-4-基)丁酰基)-N-乙基甘氨酰基]-(L)-天冬氨酰]-(L)-β-环己基丙氨酰胺的吸湿性结晶形式向其非吸湿性形式转变的热活性。该图表明，在40℃时，转变在约24小时发生，在50℃时，在6.5小时发生，在60℃时，在3小时发生。
图8表示按照实验15的描述进行的四次不同实验的输出功率作为时间函数的等温微量量热图。该实验监测当于60℃暴露在65％、75％、80％和100％RH下时，N-[N-[N-(4-(哌啶-4-基)丁酰基)-N-乙基甘氨酰基]-(L)-天冬氨酰]-(L)-β-环己基丙氨酰胺的吸湿性结晶形式向其非吸湿性形式转变的热活性。图8的显著特点是，较高的相对湿度引起较快的转变。另一个显著特点是，在100％RH下于60℃向化合物的非吸湿形式转变时，不会发生吸湿形式在室温下出现的液化现象。基于这些结果，预期在60℃下向非吸湿形式的转变速度远高于吸湿形式的液化速度。
图9表示按照实验16的描述进行的N-[N-[N-(4-(哌啶-4-基)丁酰基)-N-乙基甘氨酰基]-(L)-天冬氨酰]-(L)-β-环己基丙氨酰胺的吸湿(■)和非吸湿(●)形式在25℃下％重量增加对％RH作图的比较。图9表明，当RH增加时，吸湿形式比非吸湿形式吸收更多的水分，在相对湿度大于60％时更为明显。此外，图9还表明化合物的吸湿形式不会解吸至其最初的重量％，而化合物的吸湿形式会解吸至其最初的重量％。
发明详述
若无相反说明，在本申请整个说明书中所用的如下术语应理解为具有如下含义：
文中所用的缩写包括：BOC(叔丁氧羰基)、CBZ(苄氧羰基)、Gly(甘氨酸)、Asp(天冬氨酸)、0bzl(苄氧基)、TFA(三氟乙酸)、Cha(β-环己基丙氨酸)、EtOAc(乙酸乙酯)、DMF(二甲基甲酰胺)、DCC(二环己基碳二亚胺)、HOBT(羟基苯并三唑)、，TBTU((2-1H-苯并三唑-1-基)-1，1，3，3-四甲基脲四氟硼酸盐)、DI(去离子水)、PNP(对硝基苯酚)、PFP(五氟苯酚)、DCU(二环己基脲)、NMM(N-甲基吗啉)、MTBE(甲基叔丁基醚)、RH(相对湿度)、THF(四氢呋喃)、PipBu(4-哌啶丁酸)，PipBuen(4-(哌啶-4-叉)-丁酸)是下式化合物：
Figure A9719821000181
“患者”包括人和其它哺乳动物。
“可药用盐”是指式I母体化合物的盐形式，当该盐在治疗剂量下使用时对患者相对无害，从而式I母体化合物有益的药物特性不会被盐形式抗衡离子的副作用而受到影响。可药用盐也包括式I化合物的两性离子或内盐。
“烷基”指饱和的脂族烃基，该烃基可以是直链或支链的并且在链中含有约1-20个碳原子。支链是指有低级烷基如甲基、乙基或丙基连接在直链烷基链上。优选的直链或支链烷基是含有1-约10个碳原子的“低级烷基”。首选的低级烷基含有1-约6个碳原子。
“环烷基”指含有一个或多个环并且含有约3-约10个碳原子的饱和碳环基团。优选的环烷基包括环丙基、环丁基、环戊基、环己基、环庚基和十氢萘。
“环烷基烷基”指被环烷基取代的烷基。优选的环烷基烷基包括环戊基甲基、环己基甲基、环己基乙基、十氢萘-1-基甲基和十氢萘-2-基甲基。
“烷基环烷基”指被烷基取代的环烷基。烷基环烷基的例子包括1-、2-、3-或4-甲基或乙基环己基。
“烷基环烷基烷基”指被烷基环烷基取代的烷基。烷基环烷基烷基的例子包括1-、2-、3-或4-甲基或乙基环己基甲基或1-、2-、3-或4-甲基或乙基环己基乙基。
“氮杂环烷烃”指含有氮原子的饱和脂族环。优选的氮杂环烷烃包括吡咯烷和哌啶。
“天然-氨基酸”指甘氨酸、丙氨酸、缬氨酸、亮氨酸、异亮氨酸、丝氨酸、苏氨酸、苯丙氨酸、酪氨酸、色氨酸、半胱氨酸、甲硫氨酸、脯氨酸、羟基脯氨酸、天冬氨酸、天冬酰胺、谷氨酰胺、谷氨酸、组胺酸、精氨酸、鸟氨酸和赖氨酸。
“天然α-氨基酸的α-碳侧链”指取代天然-氨基酸的-碳的部分。天然-氨基酸的α-碳侧链的例子包括缬氨酸、丙氨酸和天冬氨酸的异丙基、甲基和羧甲基。
术语“氨基保护基”指本领域已知的易于脱除的基团，该基团用于防止氨基在合成过程中发生不利的反应并且可以被选择性地脱除。氨基保护基的用途是本领域已知的，用于防止氨基在合成过程中发生不利的反应，许多所述的保护基是已知的，参见，例如T.H.Greene和P.G.M.Wuts，有机合成中的保护基，第2版，John Wiley& Sons，New York(1991)，该文献引入本文作为参考。优选的氨基保护基是酰基，包括甲酰基、乙酰基、氯乙酰基、三氯乙酰基、邻-硝基苯乙酰基、邻-硝基苯氧乙酰基、三氟乙酰基、乙酰乙酰基、4-氯丁酰基、异丁酰基、邻-硝基肉桂酰基、吡啶甲酰基、酰基异硫氰酸酯、氨基己酰基、苯甲酰基等；和酰氧基，包括甲氧羰基、9-芴基甲氧羰基、2，2，2-三氟乙氧羰基、2-三甲基甲硅烷基乙氧羰基、乙烯氧羰基、烯丙氧羰基、叔丁氧羰基(BOC)、1，1-二甲基丙炔氧羰基、苄氧羰基(CBZ)、对硝基苄氧羰基、2，4-二氯苄氧羰基等。
术语“对酸不稳定的氨基保护基”指很容易通过用酸处理除去而对其它试剂相对稳定的以上所定义的氨基保护基。优选的对酸不稳定的氨基保护基是叔丁氧羰基(BOC)。
术语“对氢化不稳定的氨基保护基”指很容易通过氢化除去而对其它试剂相对稳定的以上所定义的氨基保护基。优选的对氢化不稳定的氨基保护基是苄氧羰基(CBZ)。
术语“酸保护基”指本领域已知的易于脱除的基团，该基团用于防止羧酸(-COOH)基团在合成过程中发生不利的反应并且可以被选择性地脱除。羧酸保护基的用途是本领域熟知的，并且许多所述的保护基是已知的，参见，例如T.H.Greene和P.G.M.Wuts，有机合成中的保护基，第2版，John Wiley & Sons，New York(1991)，该文献引入本文作为参考。羧酸保护基的例子包括酯，例如甲氧甲基、甲硫基甲基、四氢吡喃基、苄氧基甲基、取代和未取代的苯甲酰甲基、2，2，2-三氯乙基、叔丁基、肉桂基、取代和未取代的苄基、三甲基甲硅烷基等，以及酰胺和酰肼，包括N，N-二甲基、7-硝基吲哚基、酰肼、N-苯基酰肼等。
术语“对氢化不稳定的酸保护基”指很容易通过氢化除去而对其它试剂相对稳定的以上所定义的酸保护基。优选的对氢化不稳定的氨基保护基是苄基。
“芳基”指苯基或萘基。
“取代的芳基”指被一个或多个芳基取代基取代的苯基或萘基，所述取代基可以相同或不同，其中的“芳基取代基”包括烷基、链烯基、链炔基、芳基、芳烷基、羟基、烷氧基、芳氧基、芳烷氧基、羟烷基、酰基、甲酰基、羧基、链烯酰基、芳酰基、卤素、硝基、三卤代甲基、氰基、烷氧羰基、芳氧羰基、芳烷氧羰基、酰基氨基、芳酰基氨基、氨基甲酰基、烷基氨基甲酰基、二烷基氨基甲酰基、芳基氨基甲酰基、芳烷基氨基甲酰基、烷基磺酰基、烷基亚磺酰基、芳基磺酰基、芳基亚磺酰基、芳烷基磺酰基、芳烷基亚磺酰基或-NRaRb，其中Ra和Rb彼此独立地是氢、烷基、芳基或芳烷基。
“芳烷基”指被芳基取代的烷基。优选的芳烷基包括苄基、萘-1-基甲基、萘-2-基甲基和苯乙基。
“取代的芳烷基”指在芳基部分被一个或多个芳基取代基取代的芳烷基。
“杂环”指约4-至约15-元的单环或多环系统，其中，环中的一个或多个原子是除碳以外的其它元素，例如氮、氧或硫。优选的杂环包括吡啶基、嘧啶基和吡咯烷基。
“取代的杂环”指被一个或多个芳基取代基取代的杂环基团。
“杂环基烷基”和“取代的杂环基烷基”分别指被杂环基团和取代的杂环基团取代的烷基。
“吸湿性”指吸着作用，是指足以影响物质的物理或化学性质的水的获得量或状态(Eds.J.Swarbrick和J.C.Boylan，制药技术百科全书(Encyclopedia of Pharmaceutical Technology)，Vol.10，33页)。优选的实施方案
根据本发明制备的优选的化合物是式II所述的化合物，其中E2是氢、烷基、羟甲基、1-羟基乙基、巯基甲基、2-甲硫基乙基、羧甲基、2-羧基乙基、4-氨基丁基、3-胍基丙基、环烷基、环烷基烷基、烷基环烷基、烷基环烷基烷基、芳基、取代的芳基、芳烷基、取代的芳烷基、杂环基、取代的杂环基、杂环基烷基、取代的杂环基烷基，或者，E1和E2与连接E1和E2的氮和碳原子合在一起形成一个4-、5-、6-或7-元氮杂环烷烃环，条件是杂环基烷基不是吲哚-3-基甲基。
根据本发明制备的更优选的化合物是式II所述的化合物，其中E2是氢、烷基、羟甲基、1-羟基乙基、巯基甲基、2-甲硫基乙基、羧甲基、2-羧基乙基、4-氨基丁基、3-胍基丙基、环烷基、环烷基烷基、烷基环烷基、烷基环烷基烷基、芳基、取代的芳基、芳烷基、取代的芳烷基，或者，E1和E2与连接E1和E2的氮和碳原子合在一起形成一个4-、5-、6-或7-元氮杂环烷烃环。
根据本发明制备的更优选的化合物是式II所述的化合物，其中E2是氢、烷基、羟甲基、1-羟基乙基、巯基甲基、2-甲硫基乙基、羧甲基、2-羧基乙基、4-氨基丁基、3-胍基丙基、环烷基、环烷基烷基、烷基环烷基、烷基环烷基烷基，或者，E1和E2与连接E1和E2的氮和碳原子合在一起形成一个4-、5-、6-或7-元氮杂环烷烃环。
根据本发明制备的更为优选的化合物是式II所述的化合物，其中B是烷基、环烷基、环烷基烷基、烷基环烷基或烷基环烷基烷基。
根据本发明制备的一个具体的实施方案是式IIa所描述的化合物：其中：
B是烷基、环烷基、环烷基烷基、烷基环烷基、烷基环烷基烷基、芳基、芳烷基、烷芳基或烷基芳烷基；
J是H、烷基、环烷基、环烷基烷基、烷基环烷基、烷基环烷基烷基、芳基、取代的芳基、芳烷基或取代的芳烷基；
L是OR1或NR1R2；
R1和R2彼此独立地是H、烷基、环烷基、环烷基烷基、烷基环烷基、烷基环烷基烷基、芳基、芳烷基、烷芳基或烷基芳烷基；
m是1-5；
n是2-6；
p是1或2。
根据本发明制备的更优选的具体实施方案是式IIa所描述的化合物，其中
B是烷基、环烷基、环烷基烷基、烷基环烷基或烷基环烷基烷基；
J是H、烷基、环烷基、环烷基烷基、烷基环烷基或烷基环烷基烷基；
m是3；
n是3或4。
根据本发明制备的进一步优选的具体实施方案是式IIa所描述的化合物，其中
B是烷基；
J是烷基、环烷基或、环烷基烷基；
R1和R2彼此独立地是H、烷基、环烷基、环烷基烷基、烷基环烷基或烷基环烷基烷基；
m是3；
n是3或4；
p是1。
根据本发明制备的另一个进一步优选的具体实施方案是式IIa所描述的化合物，该化合物是N-[N-[N-(4-(哌啶-4-基)丁酰基)-N-乙基甘氨酰基]-(L)-天冬氨酰]-(L)-β-环己基丙氨酰胺，
本发明的另一个实施方案是形成N-[N-[N-(4-(哌啶-4-基)丁酰基)-N-乙基甘氨酰基]-(L)-天冬氨酰]-(L)-β-环己基丙氨酰胺的稳定的、不吸湿的结晶形式。根据本发明，化合物的这种形式可以制成化合物的稳定制剂。N-[N-[N-(4-(哌啶-4-基)丁酰基)-N-乙基甘氨酰基]-(L)-天冬氨酰]-(L)-β-环己基丙氨酰胺的稳定的、不吸湿的结晶形式还具有高的熔点，并且没有吸水的倾向。在高于运输、剂型生产或长期运输或储存过程中所遇到的正常湿度和温度下，该稳定的形式还对湿度和温度表现出独特的、意想不到的良好稳定性。这些特性也有利于剂型的生产。向稳定形式的转变还不会引起物质或其纯度的损失，也不会对其颗粒性质产生不利影响。
应当理解，本发明包括文中所定义的优选化合物、优选实施方案和具体实施方案的所有组合。
本发明的化合物可以以游离碱或酸的形式、其两性离子盐的形式或其可药用盐的形式使用。所有这些形式均包括在本发明的范围内。
如果本发明的化合物被碱性基团取代，则可以形成酸加成盐，所述酸加成盐是更便于使用的形式；在实践中，盐形式的应用相当于游离碱形式的应用。可用于制备酸加成盐的酸优选包括那些当与游离碱混合时可形成可药用盐的酸，可药用盐是指，在盐的药物剂量下，其阴离子对患者无毒的盐，从而游离碱所具有的对血小板凝集和血栓形成的有利的抑制效果不会被阴离子的副反应所影响。尽管优选所述碱性化合物的可药用盐，但所有酸加成盐均可用作游离碱形式的来源，即使某个具体的盐本身仅适用于作为中间体产物，例如，当成盐仅仅是为了纯化和鉴定的目的时，或将其用作通过离子交换的方法制备可药用盐的中间体。本发明范围内的可药用盐是从如下酸衍生的盐：无机酸如盐酸、硫酸、磷酸和氨基磺酸；以及有机酸如乙酸、柠檬酸、乳酸、酒石酸、丙二酸、甲磺酸、乙磺酸、苯磺酸、对甲苯磺酸、环己基氨基磺酸、奎尼酸等。相应的酸加成盐包括：氢卤酸盐，例如盐酸盐和氢溴酸盐、硫酸盐、磷酸盐、硝酸盐、氨基磺酸盐、乙酸盐、柠檬酸盐、乳酸盐、酒石酸盐、丙二酸盐、草酸盐、水杨酸盐、丙酸盐、琥珀酸盐、富马酸盐、马来酸盐、亚甲基-双-β-羟基萘酸盐、龙胆酸盐、甲磺酸盐、羟乙基磺酸盐和二对甲苯甲酰酒石酸甲磺酸盐、乙磺酸盐、苯磺酸盐、对甲苯磺酸盐、环己基氨基磺酸盐和奎尼酸盐等。
根据本发明的另一个特点，本发明化合物的酸加成盐采用已知的方法，通过将游离碱与适宜的酸反应制得。例如，本发明化合物的酸加成盐的制备可以通过将游离碱溶于含有适宜酸的水溶液或水-醇溶液或其它适宜的溶剂中并通过蒸发溶液分离盐来进行，或通过将游离碱和酸在有机溶剂中反应来进行，在该情况下，盐可以直接分离出来或可以通过浓缩溶液得到。
本发明化合物的酸加成盐可以通过已知的方法从盐再生。例如，本发明的母体化合物可以通过用碱例如碳酸氢钠水溶液或氨水溶液处理从其酸加成盐再生。
如果本发明的化合物被酸性基团取代，则可以形成碱加成盐，所述碱加成盐是更便于使用的形式；在实践中，盐形式的应用相当于游离酸形式的应用。可用于制备碱加成盐的碱优选包括那些当与游离酸混合时可形成可药用盐的碱，可药用盐是指，在盐的药物剂量下，其阳离子对动物体无毒的盐，从而游离酸所具有的对血小板凝集和血栓形成的有利的抑制效果不会被阳离子的副反应所影响。可药用盐包括，例如碱金属盐和碱土金属盐，本发明范围内的可药用盐是从如下碱衍生的盐：氢化钠、氢氧化钠、氢氧化钾、氢氧化钙、氢氧化铝、氢氧化锂、氢氧化镁、氢氧化锌、氨、乙二胺、N-甲基-葡糖胺、赖氨酸、精氨酸、鸟氨酸、胆碱、N，N，-二苄基乙二胺、氯普鲁卡因、二乙醇胺、普鲁卡因、N-苄基苯乙胺、二乙胺、哌嗪、三(羟甲基)-氨基甲烷、四甲基氢氧化铵等。
本发明化合物的金属盐可以通过将选定金属的氢化物、氢氧化物、碳酸盐或类似的活泼化合物在含水或有机溶剂中与化合物的游离酸形式接触制得。所用的含水溶剂可以是水或是水与有机溶剂的混合物，优选醇如甲醇或乙醇、酮如丙酮、脂肪族醚如四氢呋喃或酯如乙酸乙酯。所述反应通常在室温下进行，如需要，也可以在加热下进行。
本发明化合物的铵盐可以通过将胺在含水或有机溶剂中与化合物的游离酸形式接触制得。适宜的含水溶剂包括水和水与醇如甲醇或乙醇、醚如四氢呋喃、腈如乙腈、或酮如丙酮的混合物。氨基酸盐可按照类似的方法制得。
本发明化合物的碱加成盐可以通过已知的方法从盐再生。例如，本发明的母体化合物可以通过用酸例如盐酸处理从其碱加成盐再生。
本发明化合物的盐除了本身可用作活性化合物外，还可用于纯化化合物的目的，例如，通过利用盐和母体化合物、副产物和/或原料之间溶解度的不同，通过本领域技术人员熟知的方法进行纯化。
本发明的化合物可以含有不对称中心。这些不对称中心可以彼此独立地是R或S构型。对本领域技术人员显而易见的是，某些式I化合物可以具有几何异构体。几何异构体包括带有烯基部分的本发明化合物的顺式和反式形式。本发明包括单独的几何异构体和立体异构体以及它们的混合物。
所述异构体可以通过已知的方法，例如色谱法和重结晶技术从它们的混合物中分离出来，或可以从它们中问体的适宜异构体通过本文所述的方法分别制得。
美国专利申请08/138820和08/476750描述了无定形式II化合物、特别是无定形式I化合物的制备方法，以上专利申请在此引入本文作为参考。
反应路线II中所示的合成方法描述了用于制备式II化合物、特别是本发明的结晶状式I化合物的本发明的新方法，其中B、E1、E2、G、R、m、n和p如上所定义，P1是对氢化不稳定的酸保护基如苄基，P2是对酸不稳定的氨基保护基如叔丁氧羰基(BOC)，P3是对氢化不稳定的氨基保护基如苄氧羰基(CBZ)。反应路线II
在制备式II化合物或其中间体的过程中，可能还需要防止天然或假氨基酸上存在的化学活泼取代基之间的交叉反应。这些取代基可以用常规的保护基进行保护，所述保护基随后可以根据需要通过已知方法脱除或保留以生成所需的产物或中间体(参见，例如Greene，“有机合成中的保护基”，Wiley，New York，1981)。还需要进行选择性地保护或脱保护以转化或除去己存在的保护基，或以便进行随后的反应以生成最终的所需产物。
以式II化合物的制备对反应路线II的方法进行举例说明，但应当理解，式I化合物是用适宜的原料制得的。在根据反应路线II制备式I化合物时，B是乙基，E是H，F是环已基甲基，G是NH2，R是H，m是3，n是3，p是1，P1是苄基，P2是BOC，P3是CBZ。
根据本发明，制备式I化合物的另一种方法与反应路线II中的方法相似，所不同的是用式III化合物(其中的P3如上所定义)
Figure A9719821000281
代替式IV化合物，
Figure A9719821000282
其中R是H，m是3，n是3，p是1，P3是CBZ，以生成式V的中间体，
Figure A9719821000283
其中B是乙基，E1是H，E2是环己基甲基，G是NH2，p是1，P1是苄基，P3是CBZ 。
反应路线II说明了一种制备本发明化合物的五步方法，首先是形成本发明式VI的中心二肽中间体，其中B、p、P2和P1如上所定义。在制备式I化合物的情况下，本发明的中心二肽中间体是BOC-N(Et)-Gly-(L)-Asp-(OBzl)-OH。制得的中心二肽中间体未对游离的羧基部分进行保护。
在反应路线II的第2步中，偶联形成中心二肽的反应可以在二氯甲烷或乙酸乙酯(含或不含DMF作为助溶剂)和有机碱如NMM的混合物中进行，反应温度为室温至约40℃。用于偶联的下式氨基酸或假氨基酸的活化可以采用
Figure A9719821000291
不用分离的活泼酯的形式用对硝基苯酚、五氟苯酚和N-羟基-琥珀酰亚胺通过二环己基碳二亚胺的作用来完成。根据所要偶联的氨基酸或假氨基酸、活化剂、溶剂和温度，偶联反应的时间为约1-20小时。步骤1的中心二肽产物无需分离。步骤1的反应混合物通常用水或稀的含水酸(例如盐酸)洗涤，然后不经干燥直接用于步骤2。当使用基于苯酚的活泼酯时，将中心二肽产物从反应混合物中萃取到碱性水溶液中，然后再从酸化的水溶液中萃取到有机溶剂中，然后将该溶液直接进行步骤2的反应。
式VI的二肽中间体用于制备本发明式VII的三肽中间体，其中B、E1、E2、G、p和P1如上所定义，P2’是P2或TFA·H-。当P2’是TFA·H-时，“·”符号表示TFA解离形成F3CCO2 -和H+，其中H+质子化式VII化合物末端的胺，即形成式VIIa的TFA盐。
Figure A9719821000301
在制备式I化合物时，本发明的三肽中间体是p2'-N(Et)Gly-(L)-Asp(OBzl)-(L)-Cha-NH2。
在步骤2中，氨基酸或假氨基酸与中心二肽的偶联反应可以在二氯甲烷或乙酸乙酯和DMF或THF的混合物中进行，反应温度为室温是低于室温。用于偶联的下式中心二肽的活化
Figure A9719821000302
可以用五氟苯酚或N-羟基-琥珀酰亚胺通过二环己基碳二亚胺的作用形成不用分离的活泼酯来完成。活化反应还可以用氯甲酸异丙酯来进行。反应时间随所要偶联的氨基酸或假氨基酸、活化剂、溶剂和温度而改变，为约1-20小时。三肽产物可以不用分离。当不分离三肽中间体时，将反应混合物用有机碱的水溶液如N-甲基吗啉水溶液和含水的酸如盐酸洗涤，在用水洗涤后不经干燥直接通过步骤3的方法进行反应。
在反应路线II的步骤3中，可以用三氟乙酸的二氯甲烷溶液，或用HBr在乙酸和乙酸乙酯中的混合物从步骤2的三肽产物上脱除保护基如BOG。反应可以在室温下进行，反应分别需要约1小时(HBr法)和约2小时(TFA法)。通过过滤以结晶状固体的形式从反应混合物中分离出三肽的酸加成盐产物，该过程可以直接进行(HBr法)，也可以在蒸除部分溶剂并向残余物中加入非极性溶剂后进行。
本发明的另一个方法可描述为从BOC-N(Et)Gly-OH迅速、简便地制备TFA·H-N(Et)Gly-(L)-Asp(OBzl)-(L)-Cha-NH2的单一连环方法，该方法是包括反应路线II的前两步和用TFA处理的“一勺烩”反应。结果出人意料地得到TFA·H-N(Et)Gly-(L)-Asp(OBzl)-(L)-Cha-NH2，因其从连环反应溶液中直接结晶出来。该连环方法避免了反应路线II中相应的三步不连续的反应，建立了一种简单、省时、经济的合成方法，该方法可用于工业生产。
反应路线II表明了以相反的顺序构建多肽，从N-保护的氨基酸开始，然后依次在羧基末端添加，该顺序与常规的顺序相反，在常规的顺序中，多肽是通过在保护的C-末端氨基酸的氨末端依次酰胺化构建的。本发明的反向合成方法仅需对第一个氨基酸的氮进行保护，从此以后可以使用在胺或酸末端均未保护的氨基酸(侧链功能基除外)。反向合成方法还可以以流水线生产式II化合物、特别是式I化合物，因为可以使用流动型生产技术而不是液相肽化学通常需要的批量型技术。这种新方法无需购买在胺末端保护的氨基酸，从而降低了生产成本。无需特殊的设备、试剂或分析方法。
本发明的另一个方法是通过新型的固态转变方法从通过反应路线II和指出的替代反应步骤中所述方法制得的N-[N-[N-(4-(哌啶-4-基)丁酰基)-N-乙基甘氨酰基]-(L)-天冬氨酰]-(L)-β-环己基丙氨酰胺的吸湿性结晶可重复地形成N-[N-[N-(4-(哌啶-4-基)丁酰基)-N-乙基甘氨酰基]-(L)-天冬氨酰]-(L)-β-环己基丙氨酰胺的稳定的、不吸湿的结晶。
N-[N-[N-(4-(哌啶-4-基)丁酰基)-N-乙基甘氨酰基]-(L)-天冬氨酰]-(L)-β-环己基丙氨酰胺的吸湿性结晶形式的物理性质不稳定，在接触湿度和温度的条件下转变成高度稳定的N-[N-[N-(4-(哌啶-4-基)丁酰基)-N-乙基甘氨酰基]-(L)-天冬氨酰]-(L)-β-环己基丙氨酰胺的不吸湿的结晶形式。
根据本发明，用于从N-[N-[N-(4-(哌啶-4-基)丁酰基)-N-乙基甘氨酰基]-(L)-天冬氨酰]-(L)-β-环己基丙氨酰胺的吸湿性结晶形式向高度稳定的N-[N-[N-(4-(哌啶-4-基)丁酰基)-N-乙基甘氨酰基]-(L)-天冬氨酰]-(L)-B-环己基丙氨酰胺的不吸湿性结晶形式转变的一般条件在静态和动态条件下完成。
本发明的静态方法是指静态转变，因为该方法包括将置于不能移动的容器如小瓶或托盘内的N-[N-[N-(4-(哌啶-4-基)丁酰基)-N-乙基甘氨酰基]-(L)-天冬氨酰]-(L)-β-环己基丙氨酰胺的吸温性结晶形式在控制的环境室内暴露于特定的温度和湿度条件。该“静态”转变在约20℃-80℃、更优选约40℃-80℃的温度下和约40％-100％RH、优选约65％-80％RH的相对湿度下进行。
本发明的动态方法是指动态转变，因为该方法包括将N-[N-[N-(4-(哌啶-4-基)丁酰基)-N-乙基甘氨酰基]-(L)-天冬氨酰]-(L)-β-环己基丙氨酰胺的吸湿性结晶形式暴露于与静态模型相同的湿度和温度条件下，并同时进行搅拌，包括将N-[N-[N-(4-(哌啶-4-基)丁酰基)-N-乙基甘氨酰基]-(L)-天冬氨酰]-(L)-β-环己基丙氨酰胺的吸湿性结晶形式在旋转蒸发仪中翻滚或在圆柱形容器中(在湿度烘箱中)用搅拌叶片搅拌。
以下实施例是用来说明本发明的，并不对其范围构成限定。
若无相反说明，所报道的质谱分析数据是在VG 70SE上进行的低分辨快原子轰击质谱，“计算”值为(M＋H)+。核磁共振(NMR)波谱数据用Brucker ACF 300在D2O中得到。快速色谱在硅胶上进行。高效液相色谱(HPLC)在粒度为8-15μ的C-18反相柱上进行。
若无相反说明，所报道的x-射线粉末衍射图是用带有Cu辐射源的Siemens D5000衍射仪(1.8kW，45kV，40mA)扫描粉末样品得到的。在测定前，将样品研磨以消除粒度对峰强度的影响。将约60mg样品上样到1.5×1cm样品器内并以3-40°2θ的范围进行扫描，步长为0.04°，每一步长共照射1秒。实施例1 BOC-N(Et)Gly-(L)-Asp(0Bzl)-OH的制备
(反应路线II的步骤1)
向1升的三颈圆底烧瓶中加入51g(0.25mol)BOC-N(Et)Gly-OH、35g(0.25mol)PNP、400mL乙酸乙酯和100mLDMF。将该混合物搅拌形成溶液并冷却至4-6℃。在10分钟内滴加51.5g(0.25mol)DCC的125mL乙酸乙酯溶液，同时将温度保持在约5℃-约8℃。将所有DCC加完后，移走冷却浴，将混合物升温至室温(20-22℃)并搅拌1.5小时。在此期间内有DCU固体沉淀生成。通过分析型HPLC(BOC-N(Et)Gly-OH的消失)确定PNP酯的形成是否完全。将反应混合物过滤并将DCU残余物用2-50mL乙酸乙酯洗涤，将洗涤液加入到滤液中。弃除DCU。
向搅拌的滤液中加入67g(0.3mol)H2N-(L)-Asp-(OBzl)-OH在150mml(138g，1.36mol)NMM中的浆液。将混合物加热至38-40℃并在该温度下保持41小时，此刻的分析型HLPC表明BOC-N(Et)Gly-OPNP已完全消耗掉。将反应混合物冷却至25℃并滤除未反应的H2N-(L)-Asp-(OBzl)-OH。将溶液冷却并过滤，再次得到1.2g(回收21.7g，11.2g是加入的20％过量，10.5g(0.047mol)是未反应的物质)。
将滤液在2升Squibb漏斗中用500mL去离子水萃取，然后用2×250mL萃取。将合并的水溶液用3×300mL 1∶1 MTBE/EtOAc萃取以除去残余的PNP(HPLC分析表明仅有痕量残余)，然后冷却至5℃并滴加150mL浓盐酸进行酸化，从pH8.9至pH1.79。将酸化的水溶液用2×200mL乙酸乙酯萃取。对水溶液的HPLC分析表明不含残余的所需产物。将乙酸乙酯萃取液合并，用硫酸镁干燥，过滤并通过旋转蒸发仪在35℃浓缩。将得到的淡橙色油于35℃抽真空，以尽可能地除去残余的溶剂，得到85.68g油状的BOC-N(Et)Gly-(L)-Asp(0Bzl)-OH(21.3mol，85.5％收率，未对残余的溶剂进行校正)。鉴定：NMR(250MHz)：7.3ppm(s)，5.1ppm(s)，3.3ppm(dq)，3.0ppm(dq)，1.4ppm(s)，1.1ppm(t)MS：M=408；M+1观测值=409HPLC：90.79A％(3.87A％对硝基苯酚，未对e进行校正)元素分析：C20H28N2O7：H，N；C实测值57.54，C计算值58.81实施例2 BOC-N(Et)Gly-(L)-Asp(OBzl)-(L)-Cha-NH2的制备
(反应路线II的步骤2)方法A：氯甲酸异丙酯法
将1当量BOC-N(Et)Gly-(L)-Asp(OBzl)-OH溶于乙酸乙酯(6-8体积；1∶6.5重量：体积)并将温度保持在-15℃至0℃。加入NMM(1当量)并将温度保持在约-15℃至约0℃。在约-15℃至0℃的温度下向保护的二肽溶液中加入氯甲酸异丙酯(1-1.1当量)。将反应液在约-15℃至约0℃的温度下保持2-5分钟。向维持在约-15℃至约0℃的二肽溶液中加入H2N-(L)-Cha-NH2(1当量)的THF溶液(10体积，1∶10重量：体积)。用在1 5分钟、1小时和2小时得到的进程控制(HPLC)样品监测反应，以评估反应是否完成。(当所观察的二肽在HPLC分析中的面积小于10％时，表明反应完成)。
BOC-三肽产物直接从反应溶液中沉淀出来，从反应混合物中滤出沉淀，用乙酸乙酯洗涤(2次，1体积，重量∶体积)，然后真空干燥。一般产率＞60％，纯度＞90A％；通常观察到＜1A％的天冬氨酸差向非对映异构体。
用乙酸乙酯形成浆液，由此可得到最终收率约为60％的BOC-N(Et)Gly-(L)-Asp(OBzl)-(L)-Cha-NH2并将纯度提高到＞95A％，同时将非对映异构体降低至＜0.5％。
作为氯甲酸异丙酯的一个具体例子，当进行实施例A的一般方法并使用4.55g(8.1mmol)BOC-N(Et)Gly-(L)-Asp(OBzl)-OH时，则制得的BOC-N(Et)Gly-(L)-Asp(OBzl)-(L)-Cha-NH2的量为3.26g(纯度97.9A％，0.3A非对映异构体)，70％理论收率。方法B：五氟苯酚-DCC复合物法
将五氟苯酚(PFP，2.9当量)和DCC(1当量)于室温下溶于乙酸乙酯(5体积；1∶5重量∶体积)并冷却至-15℃至0℃。将1当量BOC-N(Et)Gly-(L)-Asp(OBzl)-OH溶于乙酸乙酯(6体积，1∶6重量∶体积)并与事先溶于DMF(10体积，1∶10重量∶体积)的1当量H2N-(L)-Cha-NH2混合。将二肽/H2N-(L)-Cha-NH2溶液滴加到PFP和DCC的溶液中，保持温度在-15℃至0℃。将反应液在15-22℃保持5-16小时，用在1、2、3、4和16小时得到的进程控制(HPLC)样品评估反应是否完成。(当所观察的二肽的量在HPLC分析中面积小于2％时，表明反应完成)。
将反应混合物过滤并将滤饼(DCU)用乙酸乙酯(2×0.5体积；重量∶体积)洗涤。将滤液用水(10体积；1∶10重量∶体积)处理并除去水层。将乙酸乙酯层用水(1次，5体积；1∶5重量∶体积)洗涤。将乙酸乙酯层冷却至析出产物沉淀，滤出沉淀并用乙酸乙酯(2×0.4体积；1∶0.4重量∶体积)洗涤。分离的摩尔收率＞60％，一般纯度＞90A％；含1-4A％的天冬氨酸差向非对映异构体。
用乙酸乙酯形成浆液，由此可得到最终收率约为60％的BOC-N(Et)Gly-(L)-Asp(0Bzl)-(L)-Cha-NH2并将纯度提高到＞99A％，同时将非对映异构体降低至＜0.5％。
作为五氟苯酚-DCC复合物法的一个具体例子，当进行实施例B的一般方法并使用10g(24.5mmol)BOC-N(Et)Gly-(L)-Asp(OBzl)-OH时，则制得的BOC-N(Et)Gly-(L)-Asp(OBzl)-(L)-Cha-NH2的量为8.15g(纯度99A％，0.49A非对映异构体)，59％理论收率。方法C：羟基苯并三唑(HOBT)/2-(1H-苯并三唑-1-基)-1，1，3，3-四甲基脲四氟硼酸盐(TBTU)法
将1当量BOC-N(Et)Gly-(L)-Asp(OBzl)-OH溶于DMF(9-10体积，1∶10重量∶重量)并保持在室温。向该溶液中加入H2N-(L)-Cha-NH2(1当量)和羟基苯并三唑(HOBT，1当量)。将得到的溶液冷却至约0℃-10℃，然加入NMM(1-1.1当量)。将偶联剂TBTU(1-1.1当量)溶于DMF(4-5体积，1∶5重量∶重量)并于0℃至约10℃下加入到保护的二肽溶液中。将该溶液于约10℃-25℃搅拌约3小时，直至HPLC分析表明反应完成(原料的面积小于2％)。将反应混合物加入到搅拌中的5％氯化钠水溶液(约为反应液体积的4倍)和乙酸乙酯(约为反应液体积的2倍)的混合物中。分液，将水相用另外的乙酸乙酯(约为反应液体积的1.5倍)萃取。合并有机相，依次用0.5N柠檬酸水溶液(约为有机相体积的0.6-0.7倍)、10％碳酸氢钠水溶液(两次，每次均约为有机相体积的0.6-0.7倍)和25％氯化钠水溶液(约为有机相体积的0.3-0.4倍)洗涤。将得到的有机相在约30-50℃下减压浓缩至约1/4至1/2体积，然后向该温热的溶液中加入同体积的庚烷。将混合物搅拌并冷却至约0℃至约20℃以析出所需三肽的沉淀。滤出固体，用乙酸乙酯和庚烷的混合物洗涤，干燥。一般收率＞60％，一般纯度＞95.7A％；天冬氨酸差向非对映异构体的含量＜2A％。
作为HOBT/TBTU法的一个具体例子，当按照该一般方法进行时，使用10g(24.5mmol)BOC-N(Et)Gly-(L)-Asp(OBzl)-OH，制得9.3gBOC-N(Et)Gly-(L)-Asp(OBzl)-(L)-Cha-NH2(纯度96.1A％，1.77A％Asp的非对映异构体)，67.7％理论收率。质谱：M计算值560.7；M+1观测值561mp 182.17(DSC)1H NMR(δ vs TMS，D6 DMSO)：0.89 m(1H)；0.94，m(1H)；1.0，dt(2H)；1.15，m(2H)；1.06-1.3,m(4H)；1.36，d(9H)；1.4-1.74，m(6H)；2.65，m(1H)；2.85，m(1H)；3.18.m(2H)；3.75，d(2H)；4.2，s(1H)；4.66，d(1H)；5.08，s(2H)；7.02，s(1H)；7.18，d(1H)；7.36，s(5H)；7.88，dd(1H)；8.24，dd(1H)。实施例3 TFA-N(Et)Gly-(L)-Asp(OBzl)-(L)-Cha-NH2的制备
(反应路线II的步骤3)
将BOC-N(Et)Gly-(L)-Asp(OBzl)-(L)-Cha-NH2溶于二氯甲烷(约1∶12w/w)，然后于室温下向该溶液中加入TFA。将其搅拌至HPLC表明反应完成(3-5小时)。将溶液于40-45℃浓缩至约1/2体积。向该温热的溶液中加入MTBE(相对于BOC-N(Et)Gly-(L)-Asp(OBzl)-(L)-Cha-NH2约1∶10w/w)，同时保持温度＞40℃。将该混合物缓慢冷却至约5℃并搅拌1小时以确保完全结晶。将生成的固体过滤，用冷的MTBE洗涤。将固体减压干燥并分析TFA·N(Et)Gly-(L)-Asp(OBzl)-(L)-Cha-NH2的含量(HPLC w/w分析)。收率通常接近定量，纯度＞95A％。质谱：M计算值：460(游离碱)；M+1观测值：461元素分析：C26H37N4O7F3 H，N，F，C 54.35，实测值53.821H NMR(δ vs TMS，D6DMSO)：0.9，m(2H)；1.15，1(6H)；1.5，m(1H)；1.5-1.8，m(6H)；2.65 dd(1H)；2.9 m(3H)；3.7，s，(2H)；3.9，m(2H)；4.2，m(1H)；4.75，m(1H)；5.1，s(2H)；7.0，s(1H)；7.15，s(1H)；7.2，s(5H)；8.13，d(1H)；8.7-8.8，m(3H)。13C NMR(显著信号，δvs TMS，D6 DMSO)：10.76，25.49，25.68，25.96，31.66，33.07，33.36，36.25，38.59，41.88，47.02，49.40，50.47，65.71，127.81-128.34，135.82，165.10，169.34，173.79
脱保护的具体例子如表A所示。
表A
实验室实例 反应规模(BOC-N(Et)Gly-(L)-Asp(OBzl)-(L)-Cha-NH2) 收率和A％纯度(TFA·N(Et)Gly-(L)-Asp(OBzl)-(L)-Cha-NH2)
实例1 7.5g(13.3mmol) 7.4g(12.9mmol)97％收率；98.8A％纯度
实例2 6.53g(11.6mmol) 6.4g(11.1mmol)96％收率；98.47A％纯度
实施例4 CBZ-PipBu-N(Et)Gly-(L)-Asp(OBzl)-(L)-Cha-NH2的制备(反应路线II的步骤4)
制备约等摩尔量的TFA·N(Et)Gly-(L)-Asp(OBzl)-(L)-Cha-NH2、CBZ-PipBu和TBTU在乙酸乙酯、DMF和水(100∶8∶4v/v；相对于TFA·N(Et)Gly-(L)-Asp(OBzl)-(L)-Cha-NH2约11∶1总体积/重量)中的悬浮液。将该悬浮液冷却至0-10℃并加入约3-4当量的NMM。将该混合物升温至室温并搅拌至HPLC表明反应完成(1-3小时，在此期间内形成溶液)。加入水(最初加入水量的2-3倍)并分液。保留水相，将有机相用水洗涤两次。将合并的含水洗涤液用乙酸乙酯萃取，将合并的有机相用25％氯化钠水溶液洗涤。将有机相减压浓缩至约1/2体积，加入MTBE(相对于溶液体积，约1/2v/v)。使混合物结晶(数小时)，过滤收集固体，用冷的乙酸乙酯和MTBE的混合物冲洗。将固体减压干燥。通过HPLC w/w分析确定CBZ-PipBu-N(Et)Gly-(L)-Asp(OBzl)-(L)-Cha-NH2的含量。收率通常＞80％，纯度＞95A％。
作为上述制备方法的具体实例，当按照该一般方法进行时，使用7.25g(24.5mmol)TFA·N(Et)Gly-(L)-Asp(OBzl)-(L)-Cha-NH2，制得7.9g CBZ-PipBu-N(Et)Gly-(L)-Asp(OBzl)-(L)-Cha-NH2(纯度＞99A％，0.08A％ Asp的非对映异构体)，84％理论收率。元素分析：C41H57N5O8：H，N，C，65.84，实测值，65.38质谱：M计算值747；M＋1观测值748mp 101.6(DSC)1H NMR(δvs TMS，CDCl3)：0.88m(1H)；0.98，m(1H)；1.13(2H)；1.23，m(6H)；1.4，m(1H)；1.62-1.76，m(8H)；1.86，qd(1H)；2.35，t(1H)；2.74，dd(2H)；3.25，dd(1H)；3.47，q(2H)；3.7，d(1H)；3.84，d(1H)；4.15，ds(2H)；4.5，qd(1H)；4.68，dt(1H)；5.07，d(1H)；5.14 bd(2H)；5.16，d(1H)；7.28-7.39，m(10H)；7.57，dd(1H)13C NMR(相对于TMS的δ，CDCl3)：[显著峰]66.93(两个苄基碳)，127.78-128.64(两个苯环)，155.249，170.00，170.24，171.69，174.27，175.21(所有的羰基碳)。实施例5 N-[N-[N-(4-(哌啶-4-基)丁酰基)-N-乙基甘氨酰基]-(L)-天冬氨酰]-(L)-β-环己基丙氨酰胺的吸湿性结晶形式的制备(反应路线II的步骤5)
制备CBZ-PipBu-N(Et)Gly-(L)-Asp(OBzl)-(L)-Cha-NH2、甲酸铵和10％Pd/C在20∶1醇/水(相对于CBZ-PipBu-N(Et)Gly-(L)-Asp(OBzl)-(L)-Cha-NH2，10∶1体积/重量)中的混合物。将该混合物加热至40-50℃，然后搅拌至HPLC表明反应完成(1-2小时)。将该混合物冷却至室温并滤除催化剂。将得到的溶液加热至40-50℃并加入丙酮(约于滤液等体积)，使溶液冷却至35-40℃。向混合物加入N-[N-[N-(4-(哌啶-4-基)丁酰基)-N-乙基甘氨酰基]-(L)-天冬氨酰]-(L)-β-环己基丙氨酰胺的晶种，在冷却至室温时结晶出N-[N-[N-(4-(哌啶-4-基)丁酰基)-N-乙基甘氨酰基]-(L)-天冬氨酰]-(L)-β-环己基丙氨酰胺的吸湿性结晶形式(数小时)。在氮气氛下过滤收集固体，用丙酮冲洗。将固体减压干燥并分析N-[N-[N-(4-(哌啶-4-基)丁酰基)-N-乙基甘氨酰基]-(L)-天冬氨酰]-(L)-β-环己基丙氨酰胺的吸湿性结晶的含量(HPLC w/w分析)。收率通常＞85％，纯度＞95A％。
作为上述制备方法的具体实例，当按照步骤5的一般方法进行时，使用5g CBZ-PipBu-N(Et)Gly-(L)-Asp(OBzl)-(L)-Cha-NH2制得了3.1g白色固体状的N-[N-[N-(4-(哌啶-4-基)丁酰基)-N-乙基甘氨酰基]-(L)-天冬氨酰]-(L)-β-环己基丙氨酰胺的吸湿性结晶形式(纯度99.6A％)，化学计量收率的89.4％。
根据上述实施例1-5，使用适宜的原料制得了如下化合物：
N-[N-[N-(4-(哌啶-4-基)丁酰基)-N-乙基甘氨酰基]天冬氨酰]缬氨酸，
N-[N-[N-(4-(哌啶-4-基)丁酰基)-N-乙基甘氨酰基]天冬氨酰]-D-缬氨酸，
N-[N-[N-(3-(哌啶-4-基)丙酰基)-N-乙基甘氨酰基]天冬氨酰]缬氨酸，
N-[N-[N-(5-(哌啶-4-基)戊酰基)-N-乙基甘氨酰基]天冬氨酰]缬氨酸，
N-[N-[N-(4-(哌啶-4-基)丁酰基)-N-乙基甘氨酰基]天冬氨酰]-L-α-环己基甘氨酸，
N-[N-[N-(4-(哌啶-4-基)丁酰基)-N-乙基甘氨酰基]天冬氨酰]正亮氨酸，
N-[N-[N-(4-(哌啶-4-基)丁酰基)-N-乙基甘氨酰基]天冬氨酰]-L-α-(2，2-二甲基)丙-3-基甘氨酸，
N-[N-[N-(4-(哌啶-4-基)丁酰基)-N-乙基甘氨酰基]天冬氨酰]-L-β-十氢萘-1-基丙氨酸，
N-[N-[N-(4-(哌啶-4-基)丁酰基)-N-乙基甘氨酰基]天冬氨酰]-L-α-(2-环己基乙基)甘氨酸，
N-[N-[N-(4-(哌啶-4-基)丁酰基)-N-乙基甘氨酰基]天冬氨酰]苯丙氨酸，
N-[N-[N-(4-(哌啶-4-基)丁酰基)-N-乙基甘氨酰基]天冬氨酰]-L-β-萘-1-基丙氨酸，
N-[N-[N-(4-(哌啶-4-基)丁酰基)-N-乙基甘氨酰基]天冬氨酰]-L-β-萘-2-基丙氨酸，
N-[N-[N-(4-(哌啶-4-基)丁酰基)-N-乙基甘氨酰基]天冬氨酰]-L-β-环己基丙氨酸，乙酯
N-[N-[N-(4-(哌啶-4-基)丁酰基)-N-乙基甘氨酰基]天冬氨酰]-L-β-顺-十氢萘-2-基丙氨酸，
N-[N-[N-(4-(哌啶-4-基)丁酰基)-N-乙基甘氨酰基]天冬氨酰]-α-氨基环己烷甲酸，
N-[N-[N-(4-(哌啶-4-基)丁酰基)-N-乙基甘氨酰基]天冬氨酰]-β-环己基-D-丙氨酸，
N-[N-[N-(4-(哌啶-4-基)丁酰基)-N-乙基甘氨酰基]天冬氨酰]-β-十氢萘-1-基丙氨酸，
N-[N-[N-(4-(哌啶-4-基)丁酰基)-N-乙基甘氨酰基]天冬氨酰]-β-环己基丙氨酸-N-乙基酰胺，
N-[N-[N-(4-(哌啶-4-基)丁酰基)-N-乙基甘氨酰基]天冬氨酰]-β-环辛基丙氨酸，
N-[N-[N-(4-(哌啶-4-基)丁酰基)-N-乙基甘氨酰基]天冬氨酰]-β-环己基甲基丙氨酰胺，
N-[N-[N-(4-(哌啶-4-基)丁酰基)-N-乙基甘氨酰基]天冬氨酰]-β-金刚烷-1-基丙氨酸，
N-[N-[N-(4-(哌啶-4-基)丁酰基)-N-乙基甘氨酰基]天冬氨酰]-β-(1，2，3，4)-四氢萘-5-基丙氨酸，
N-[N-[N-(4-(哌啶-4-基)丁酰基)-N-乙基甘氨酰基]天冬氨酰]-β-(4-环己基)环己基丙氨酸，
N-[N-[N-(4-(哌啶-4-基)丁酰基)-N-乙基甘氨酰基]天冬氨酰]-β-环庚基丙氨酸，
N-[N-[N-(4-(哌啶-4-基)丁酰基)-N-乙基甘氨酰基]天冬氨酰]-β-环辛基丙氨酰胺，
N-[N-[N-(4-(哌啶-4-基)丁酰基)-N-乙基甘氨酰基]天冬氨酰]--环己基丙基甘氨酸，
N-[N-[N-(4-(哌啶-4-基)丁酰基)-N-乙基甘氨酰基]天冬氨酰]-β-环辛基甲基丙氨酸，
N-[N-[N-(4-(哌啶-4-基)丁酰基)-N-乙基甘氨酰基]天冬氨酰]-β-环戊基丙氨酸，和
N-[N-[N-(4-(哌啶-4-基)丁酰基)-N-乙基甘氨酰基]天冬氨酰]-β-环己基甲基丙氨酸乙酯。实施例6 4-N-CBZ-哌啶酮的制备
将40Kg N-苄氧羰氧基琥珀酰亚胺和26Kg(175mol)4-哌啶酮·HCl·H2O在38.8Kg水和88Kg THF中的混合物在15℃±5℃下搅拌直至溶解(约15分钟)。向搅拌的混合物中加入NMM(22.8Kg)(放热)，同时将温度保持在20℃或20℃以下。将其在20℃±5℃下搅拌2.5小时，此刻的HPLC表明反应完成。将混合物用115.2Kg MTBE和38.8Kg水稀释并在20℃±5℃下搅拌5分钟。停止搅拌，分层，分出水层(下层)并弃除。将有机层用2×129.6Kg水洗涤(搅拌5分钟，分液，分离并弃除水相[下层])。将有机层用5.2Kg氯化钠的46.8Kg水溶液洗涤(搅拌5分钟，分液，分离并弃除水相[下层])。将有机层用11.5Kg硫酸镁处理，搅拌1小时，然后将混合物过滤。将反应器用8Kg MTBE冲洗(过滤，与主滤液合并；总滤液水的含量：0.52％)。于30℃下减压蒸馏将混合物的体积减少-半。向真空中充入氮气并将残余物冷却至20℃(残余物中水的含量：0.43％)。将残余物用57.6Kg MTBE稀释，然后通过30℃下减压蒸馏再次将混合物的体积减少一半。向真空中充入氮气并将残余物冷却至20℃(残余物中水的含量：0.25％)。如此重复5次。将最终的残余物用28.8KgMTBE稀释并搅拌5分钟，然后分析水含量和4-N-CBZ-哌啶酮的含量(水：0.05％，4-N-CBZ-哌啶酮w/w分析：22.66重量％，35.36kg，155mol，88.6％化学计量收率)。实施例7 PipBu的制备
在氮气流下及搅拌下，制备53.5Kg 3-羧基丙基三苯基溴化鏻在230.1Kg 1，2-二甲氧基乙烷中的溶液。于35分钟内加入叔丁醇钾/THF(20重量％，141.8Kg溶液)，同时将温度保持在24-28℃。将混合物于该温度下搅拌0.5小时，此刻的HPLC表明反应完成。将搅拌下的混合物冷却至10℃±2℃，然后于40分钟内向该混合物中加入96.45Kg(滴定度：1.15摩尔当量)4-CBZ-哌啶酮的MTBE溶液，将反应液的温度保持在12℃±2℃。将混合物在该温度下搅拌10分钟，然后加热至20℃±2℃并将该温度下搅拌2小时。向搅拌的混合物中加入22.5Kg浓盐酸在245.6Kg水中的溶液，同时将温度保持在20℃±2℃；最终的pH为0.5。将混合物在搅拌下用214.0Kg甲基叔丁基醚萃取。停止搅拌，分液，弃除水层(下层)。将有机相用133.75Kg水洗涤(搅拌5分钟，分液，分离并弃除水[下]层)，然后用10.7Kg50％氢氧化钠的126.8Kg水溶液洗涤(搅拌10分钟，分液，分离并弃除有机[上]层)。将水层用2×123.05Kg乙酸乙酯萃取(搅拌5分钟，分液，分离并弃除有机[上]层)。向搅拌的水溶液加入13.1Kg浓盐酸至pH 2.5-3.5(最终：2.82)。然后将混合物用123.05Kg乙酸乙酯萃取(搅拌5分钟，分液，分离并弃除水[下]层)。将乙酸乙酯溶液用133.75Kg水洗涤(搅拌5分钟，分液，分离并弃除水[下]层)，然后分析(w/w)CBZ-PipBuen的含量(总重量：194.86kg，17.05％CBZ-PipBuen[33.22kg，108mol]，87.9％化学计量收率)。
将PipBuen的乙酸乙酯溶液与6.6Kg 5％Pd/C(50％水，重量％)-起在搅拌下加入到不锈钢压力箱内，然后将该混合物加热至55℃±2℃。加入溶于66.4Kg水的甲酸钾(38.2Kg)，同时将反应混合物的温度保持在55℃±2℃(约30分钟)。将该混合物在55℃±2℃搅拌2小时，此刻反应结束(HPLC)。向反应器中加入6.6Kg硅藻土和33.2Kg水，将混合物搅拌，然后过滤。将反应器用33.2Kg水冲洗(过滤，加入到主滤液中)。将滤液置于新的容器中，冷却至20-25℃，分液，弃除有机层。将水层用52.1Kg浓盐酸酸化至pH 2-3(最终2.82)，然后用4×129.5Kg二氯甲烷萃取(搅拌5分钟，分液，弃除有机[下]层)。搅拌下加入17.85Kg 50％氢氧化钠水溶液将水相调至pH 6.1。将混合物过滤得到224Kg含有17.6Kg(103mol)4-(3’-羧基丙基)哌啶的溶液。实施例8 CBZ-PipBu的制备
将4-(3’-羧基丙基)哌啶在氢氧化钠水溶液中的224Kg溶液与55.3Kg THF混合，然后将该混合物于搅拌下冷却至8℃±2℃。加入NMM(20.9Kg)，同时保持温度＜10℃。加料结束后，将温度调至8℃±2℃，然后在1小时内加入溶于49.8Kg THF的25.7Kg 1-(苄氧羰基)琥珀酰亚胺，同时将温度保持在＜15℃。10-15℃下3小时后反应结束(分析HPLC)。加入浓盐酸(29.9Kg)将pH调至2.5-3.5(最终3.3)，然后加入61.4Kg MTBE并将该混合物搅拌5分钟。停止搅拌，分液，分出水(下)层(弃除)。将MTBE层用3×83.1Kg水洗涤(分别搅拌10分钟、5分钟和5分钟)；每次均分出水层并弃除。在不搅拌的条件下，加入8.3Kg 50％氢氧化钠在95.7Kg水中的溶液，加料结束后，将混合物搅拌约5分钟。停止搅拌，分液，分出有机(上)层并弃除。将水层倒回反应器中，用2×38.4Kg甲基叔丁基醚萃取(搅拌5分钟，分液，弃除有机[上]层)。用18.5Kg甲基叔丁基醚重复该操作。将水层倒回反应器中，用9.9Kg浓盐酸酸化至pH2.5-3.5(最终3.37)。将混合物用76.4Kg甲基叔丁基醚萃取(搅拌5分钟，分液，弃除下[水]层)。将有机层用1.1Kg碳酸氢钠在12.4Kg水中的溶液洗涤(搅拌5分钟，分液，弃除水[下]层)，然后用41.5Kg水洗涤(搅拌5分钟，分液，弃除水[下]层)。将反应器置于减压条件下并于55℃蒸除挥发性溶剂直至不再有馏出液流出。加入甲苯(32.4Kg)，将混合物常压下蒸馏直至不再有馏出液流出，此刻的浴温升至90-95℃。然后将混合物冷却至30-35℃，向反应器中加入庚烷(56.85Kg)(两相)，将混合物加热至90-95℃(一相)，然后再次冷却至38-42℃。加入CBZ-PipBu晶种，产物在1小时内从混合物中析出结晶。过滤收集固体，依次用19.35Kg 1∶2甲苯/庚烷和33.4Kg庚烷洗涤。将滤饼于40℃下真空干燥(干燥分析中有0.13％的损失)得到22.4Kg(72.96mol，以4-哌啶酮计，42％化学计量收率)CBZ-PipBu。实施例9 CBZ-PipBuen的制备
14℃下，向82g 3-羧基丙基三苯基溴化鏻的407mL 1，2-二乙氧基乙烷悬浮液中于25分钟内加入220g 20％(重量)叔丁醇钾的四氢呋喃溶液，同时保持反应混合物的温度在24-28℃。将混合物搅拌1小时，冷却至10℃，然后在冷却下于30分钟内加入52.5g 4-N-CBZ-哌啶酮的246mL甲基叔丁基醚溶液。加料结束后，将混合物于12℃搅拌10分钟，然后升温至20℃并搅拌30分钟。将反应混合物用410mLlN盐酸处理10分钟，用328mL甲基叔丁基醚稀释，然后分液。将有机相用205mL水洗涤，然后用210mL1N氢氧化钠水溶液洗涤。分出含有产物的氢氧化钠层，用3×189g乙酸乙酯洗涤，用浓盐酸酸化至pH 3.48，然后用189mL乙酸乙酯萃取。分出乙酸乙酯层，用211mL水洗涤，然后用10g硫酸镁干燥30分钟，过滤，真空浓缩。将油状残余物(50.7g)用甲苯/庚烷结晶得到29.46g CBZ-PipBuen(50.9％收率，约95A％纯)。质谱：M计算值：303，M＋1观测值：3041H NMR：(δvs TMS，CDCl3)2.2，t(2H)；2.25，t(2H)；2.35，m(4H)；3.45，m(4H)，5.15，s(2H)；5.2，m(1H)；7.33，2(5H)。13C NMR(δvs TMS，CDCl3)22.43，28.2，34.26，35.66，44.88，45.74，67.20，122.02，127.83，127.95，128.45，128.69，128.90，136.17，136.72，155.34，178.39实施例10 CBZ-PipBuen-N(Et)Gly-(L)-Asp(OBzl)-(L)-Cha-NH2的制备(反应路线II的另一种步骤4)
将CBZ-PipBuen(70g，0.23mol)和DMF(230mL)加入到1升带夹套的烧瓶中，搅拌下冷却至0℃，然后立即加入TBTU(74.9g，0.23mmol)。将温度保持在0℃，开始加入DIPEA(61.9g，0.61mol)。45分钟后，加入TFA·N(Et)Gly-(L)-Asp(OBzl)-(L)-Cha-NH2(138.7g，0.24mol)的DMF(230mL)溶液。加入DIPEA(45mL)将pH调至7-8并将混合物升温至室温。2小时后，反应结束(HPLC分析)。在水(2.5升)中终止反应并用乙酸乙酯(1升)萃取。将水相用乙酸乙酯(0.3升)萃取。合并有机层，依次用柠檬酸水溶液(5％w/w，2×1升)、碳酸氢钠水溶液(5％w/w，2×1升)和水(2升)洗涤。将乙酸乙酯层转移至2升烧瓶中，于搅拌下加入庚烷(500mL)以引发结晶。在Buchner漏斗上抽滤收集固体，用乙酸乙酯/庚烷(2∶1 v/v，1升)洗涤并干燥至恒重得到CBZ-PipBuen-N(Et)Gly-(L)-Asp(OBzl)-(L)-Cha-NH2(143.2g，0.19mol，83％收率)。元素分析：C41H55N5O7 C：计算值66.02实测值65.53，H，N。质谱：M计算值745.91；M＋1观测值7461H NMR(δvs TMS，CDCl3)：0.86qd(1H)；0.98，qd(1H)；1.16，t(2H)，1.24，dt(6H)；1.37，m(1H)；1.64-1.78，m(4H)；1.86，qd(1H)；2.2bd(4H)；2.35，m(1H)；2.4，m(2H)；2.74，dd(1H)；3.07，m(4H)；3.52，d，(1H)；3.85，d(1H)；4.12，q(1H)；4.49，qd(1H)；4.68，dt(1H)；5.07，d(1H)；5.14，s(1H)；5.16，d(1H)；5.22，t(2H)；6.45，s(1H)；7.28，d(1H)；7.26，s(5H)；7.35，s(5H)；7.56，d(1H)13C NMR(δvs TMS，CDCl3)：14.15，22.68，24.95，25.61，26.03，26.45，28.20，31.71，32.89，33.80，33.89，34.00，35.63，38.37，44.79，45.13，45.65，50.23，51.34，60.40，66.87，67.06，76.50，77.13，77.77，122.46，126.88，127.80-128.60，135.15，155.19，170.11，170.20，171.61，173.76，175.35.实施例11 N-[N-[N-(4-(哌啶-4-基)丁酰基)-N-乙基甘氨酰基]-(L)-天冬氨酰]-(L)-β-环己基丙氨酰胺的吸湿性结晶形式的制备(反应路线II的另一种步骤5)
将CBZ-PipBuen-N(Et)Gly-(L)-Asp(OBzl)-(L)-Cha-NH2(140g，0.19mol)、甲酸铵(61g，0.96mol)和10％Pd/C(含50％水，degussa型，28g)加入到5升带夹套的烧瓶中。加入乙醇(200标准强度，1260mL)、异丙醇(70mL)和水(去离子水，70g)。将混合物加热至40-50℃，搅拌至HPLC表明反应结束(5小时)。将混合物冷却至升温，滤除催化剂。将得到的溶液加热至40-50℃并加入丙酮(约与滤液等体积)，将溶液冷却至35-40℃。向混合物中加入N-[N-[N-(4-(哌啶-4-基)丁酰基)-N-乙基甘氨酰基]-(L)-天冬氨酰]-(L)-β-环己基丙氨酰胺的晶种，在冷却至室温的同时(数小时)，从其中析出N-[N-[N-(4-(哌啶-4-基)丁酰基)-N-乙基甘氨酰基]-(L)-天冬氨酰]-(L)-β-环己基丙氨酰胺的吸湿形式的结晶。在氮气氛下，用Buchner漏斗抽滤收集固体，将滤饼用丙酮洗涤并晾干至恒重得到N-[N-[N-(4-(哌啶-4-基)丁酰基)-N-乙基甘氨酰基]-(L)-天冬氨酰]-(L)-β-环己基丙氨酰胺(84.3g，0.16mol，84.8％收率，＞95A％)。实施例12 TFA-N(Et)Gly-(L)-Asp(OBzl)-(L)-Cha-NH2的连锁制备(反应路线II的另一种步骤1-3)
向装有温度计的500mL烧瓶中加入BOC-N(Et)Gly(20.3g，0.1mol)、N-羟基琥珀酰亚胺(11.5g，0.1mol)和二氯甲烷(200mL)。将混合物以适当的速度搅拌并向形成的溶液中一次性加入DCC(20.6g，0.1mol)固体。将该溶液搅拌1小时，在此期间内观察到轻微的放热(温度从20℃升至28℃)和DCU沉淀。将形成的悬浮液用装有1号Whatman滤纸的Buchner漏斗真空过滤。将滤饼用二氯甲烷(2×25mL)洗涤。将滤液倒回最初的500mL烧瓶内，然后依次加入(L)Asp(OBzl)(22.3g，0.1mol)、NMM(33.8ml，0.3mol)和DMF(80g，1.01mol)。室温搅拌2小时后，形成BOC-N(Et)Gly-(L)-Asp(OBzl)的反应结束(HPLC监测)。将反应混合物倒入含有冰水(100mL)的萃取漏斗中。将混合物用盐酸(36％，25mL)酸化至pH 1.分层，将二氯甲烷层用冰水(100mL)洗涤并分液(水相pH 3-4)。将二氯甲烷层倒回最初的500mL烧瓶内，然后依次以固体形式一次性加入NH2-(L)-Cha-NH2(17g，0.1mol)、N-羟基琥珀酰亚胺(11.5g，0.1mol)和DCC(20.6g，0.1mol)。室温搅拌2小时后，形成BOC-N(Et)Gly-(L)-Asp(OBzl)-(L)-Cha-NH2的反应结束(HPLC监测)，用装有1号Whatman滤纸的Buchner漏斗真空滤除DCU。将滤饼用二氯甲烷(2×25mL)洗涤。将滤液转移到萃取漏斗中并用含有N-甲基吗啉(15mL，pH 8-9)的去离子水(200mL)洗涤。分液并将二氯甲烷层再次用水(去离子水，2×150mL)洗涤。将二氯甲烷层用150mLlN盐酸洗涤(pH 1)洗涤。分液并将二氯甲烷层用去离子水洗涤(200mL，pH3)。将BOC-N(Et)Gly-(L)-Asp(OBzl)-(L)-Cha-NH2的二氯甲烷溶液倒回干净的500mL烧瓶中，然后加入TFA(100mL)。室温搅拌2小时后，形成TFA·HN(Et)Gly-(L)-Asp(0Bzl)-(L)-Cha-NH2的反应结束(HPLC监测)。将反应混合物真空蒸馏除去二氯甲烷和大部分TFA，然后加入MTBE(500mL)和晶种以引发产物结晶。将混合物用装有1号Whatman滤纸的Buchner漏斗真空过滤。将滤饼用MTBE(2×25mL)洗涤并晾干得到白色固体状TFA·HN(Et)Gly-(L)-Asp(0Bzl)-(L)-Cha-NH2(46.8g，81.5％收率)(＞97A％纯，＜0.2A％D-Asp非对映异构体)。实施例13 N-[N-[N-(4-(哌啶-4-基)丁酰基)-N-乙基甘氨酰基]-(L)-天冬氨酰]-(L)-β-环己基丙氨酰胺的稳定的不吸湿结晶形式的制备方法A：静态转变
将N-[N-[N-(4-(哌啶-4-基)丁酰基)-N-乙基甘氨酰基]-(L)-天冬氨酰]-(L)-β-环己基丙氨酰胺的吸湿性结晶形式(7.45Kg)用锤式磨研磨。将得到的7.35Kg固体置于不锈钢干燥器托盘内(90×28cm)并将该托盘用穿孔的铝箔覆盖。然后将托盘密封在湿度烘箱内(LUNAIRE Humidity Cabinet CEO 941W-3型)；除了取样用于分析外，将烘箱在整个形式转变过程中保持密封。将烘箱调至40％RH和60℃并在该水平保持1小时。然后将湿度烘箱调至80％RH/60℃并在该水平保持12小时。在80％RH/60℃下18小时后，取样并通过X-射线粉末衍射分析进行检测，以分析向N-[N-[N-(4-(哌啶-4-基)丁酰基)-N-乙基甘氨酰基]-(L)-天冬氨酰]-(L)-β-环己基丙氨酰胺的不吸湿结晶形式的转变。将湿度烘箱再次密封并调至40％RH/60℃，保持2小时。将烘箱调至周围环境条件，然后从烘箱中取出托盘得到N-[N-[N-(4-(哌啶-4-基)丁酰基)-N-乙基甘氨酰基]-(L)-天冬氨酰]-(L)-β-环己基丙氨酰胺的不吸湿结晶形式(7.2Kg，96.6％收率)。通过X-射线粉末衍射图(图1)证实转变。还将X-射线粉末衍射以用单位埃(A)表示的晶体平面内距离(d)、每秒计数(Cps)和相对峰强度(％)按衍射角(2θ)增加的顺序制成表(表1)。表1-N-   2θ             ---d--- ---Cps---  ---％---1     5.065    17.4314   86.00     5.822     6.323    13.9672   248.00    16.783     7.518    11.7489   221.00    14.954     8.163    10.8222   496.00    33.565     8.780    10.0633   155.00    10.496     10.383   8.5125    218.00    14.757     11.351   7.7886    112.00    7.588     12.596   7.0218    999.00    67.599     13.858   6.3852    316.00    21.3810    15.191   5.8274    1338.00   90.5311    16.476   5.3759    481.00    32.5412    16.745   5.2901    556.00    37.6213    17.980   4.9294    679.00    45.9514    18.572   4.7735    1079.00   73.0015    18.799   4.7165    1230.00   83.2216    19.147   4.6315    1229.00   83.1517    19.619   4.5211    1380.00   93.3718    20.200   4.3924    1246.00   84.3019    20.466   4.3360    1478.00   100.0020    20.870   4.2528    1088.00   73.6121    21.625   4.1061    584.00    39.5122    22.088   4.0210    891.00    60.2823    22.840   3.8903    613.00    41.4724    23.947   3.7129    597.00    40.3925    24.569   3.6203    680.00    46.0126    25.608   3.4757    506.00    34.2427    27.015   3.2978    1100.00   74.4228    27.837   3.2022    420.00    28.4229    27.967   3.1877    400.00    27.0630    29.255   3.0502    536.00    36.2731    29.689   3.0066    603.00    40.8032    30.665   2.9130    518.00    35.0533    31.318   2.8538    451.00    30.5134    31.894   2.8036    533.00    36.0635    33.370   2.6829    518.00    35.0536    33.562   2.6679    552.00    37.3537    33.919   2.6407    581.00    39.3138    34.840   2.5730    561.00    37.9639    35.789   2.5069    559.00    37.8240    35.940   2.4967    560.00    37.8941    36.780   2.4416    740.00    50.0742    37.042   2.4249    736.00    49.8043    37.959   2.3684    683.00    46.2144    39.017   2.3066    643.00    43.50方法B：动态转变a.形式转变
将N-[N-[N-(4-(哌啶-4-基)丁酰基)-N-乙基甘氨酰基]-(L)-天冬氨酰]-(L)-β-环己基丙氨酰胺的吸湿性结晶形式(50g)置于位于环状支架上的带有机械搅拌器的400mL量筒内(高度6cm)。将该装置置于温度控制烘箱(LUNAIRE Humidity Cabinet CEO 941W-3型)内。将搅拌设置在275rpm，将温度和RH在30分钟内分别调至60℃和40％。将化合物在该条件下保持1小时，然后将条件在45分钟内改变至80％RH/60℃。将化合物在该条件下保持16小时，然后将烘箱重新设置为40％RH/60℃并保持3.25小时。然后将化合物恢复至周围环境条件(床高4cm)，从量筒内取出得到N-[N-[N-(4-(哌啶-4-基)丁酰基)-N-乙基甘氨酰基]-(L)-天冬氨酰]-(L)-β-环己基丙氨酰胺的不吸湿结晶形式(收率＞95％)。通过X-射线粉末衍射分析(图2)证实转变。还将X-射线粉末衍射以用单位埃(A)表示的晶体平面内距离(d)、每秒计数(Cps)和相对峰强度(％)按衍射角(2θ)增加的顺序制成表(表2)。表2-N-  2θ              ---d---  ---Cps--- ---％---1    5.186     17.0268   196.00    8.432    6.371     13.8615   722.00    31.073    7.570     11.6689   516.00    22.204    8.232     10.7323   1094.00   47.075    8.817     10.0206   257.00    11.066    10.428    8.4761    365.00    15.717    11.377    7.7714    129.00    5.558    11.600    7.6223    117.00    5.559    12.667    6.9828    1805.00   77.6710   13.913    6.3599    551.00    23.7111   14.398    6.1468    178.00    7.6612   15.226    5.844     2285.00   98.3213   16.538    5.3557    861.00    37.0514   16.773    5.2814    929.00    39.9715   18.019    4.9190    1132.00   48.7116   18.672    4.7483    1871.00   80.5117   18.815    4.7125    2052.00   88.3018   19.204    4.6178    2071.00   89.1119    19.654    4.5132    2226.00    95.7820    20.237    4.3845    1939.00    83.4321    20.523    4.3240    2324.00    100.0022    20.934    4.2400    1656.00    71.2623    21.691    4.0938    923.00     39.7224    22.143    4.0112    1411.00    60.7125    22.910    3.8786    994.00     42.7726    24.007    3.7037    964.00     41.4827    24.642    3.6097    991.00     42.6428    25.642    3.6097    991.00     42.6429    27.070    3.2913    1687.00    72.593(    27.855    3.2002    688.00     29.6031    29.497    3.0258    843.00     36.2732    29.497    3.0013    878.00     37.7833    30.751    2.9051    809.00     34.8134    31.916    2.8017    821.00     35.3335    33.982    2.6360    882.00     37.9536    35.200    2.5475    865.00     37.2237    36.001    2.4926    841.00     36.1938    36.927    2.4322    1106.00    47.5939    38.389    2.3429    968.00     41.65b.形式转变
将N-[N-[N-(4-(哌啶-4-基)丁酰基)-N-乙基甘氨酰基]-(L)-天冬氨酰]-(L)-β-环己基丙氨酰胺的吸湿性结晶形式(370g)加入到2L旋转蒸发仪烧瓶内。将该烧瓶置于旋转蒸发仪(Heidolph UV2002)上并降至预先加热(58℃)的水浴(Heidolph MR 2002)中。用真空泵(Divatrion DV1)将该装置置于60毫巴的真空下，然后以控制的方式通入在另一个加热的含水烧瓶内产生的潮湿空气打破真空。通过湿度控制装置(Vausalo Humiditique and TemperatureTraumettor)控制温空气的通入，以便在装置内得到79％的RH(130-180毫巴的内压)。然后将旋转蒸发仪以145-160转/分钟旋转5小时，同时将加热浴保持在约60℃并将容器内的RH保持在71-79％。然后用氮气打破真空，将容器及其内容物冷却至室温，取出产物得到N-[N-[N-(4-(哌啶-4-基)丁酰基)-N-乙基甘氨酰基]-(L)-天冬氨酰]-(L)-β-环己基丙氨酰胺的不吸湿结晶形式。将第2批317g N-[N-[N-(4-(哌啶-4-基)丁酰基)-N-乙基甘氨酰基]-(L)-天冬氨酰]-(L)-β-环已基丙氨酰胺的吸湿性结晶形式按照同样方式进行处理得到N-[N-[N-(4-(哌啶-4-基)丁酰基)-N-乙基甘氨酰基]-(L)-天冬氨酰]-(L)-β-环己基丙氨酰胺的不吸湿结晶形式。通过X-射线粉末衍射分析(图3)证实转变。两次共得到667g N-[N-[N-(4-(哌啶-4-基)丁酰基)-N-乙基甘氨酰基]-(L)-天冬氨酰]-(L)-β-环己基丙氨酰胺的不吸湿结晶形式(97％总收率)。通过X-射线粉末衍射分析(图3)证实转变。还将X-射线粉末衍射以用单位埃(A)表示的晶体平面内距离(d)、每秒计数(Cps)和相对峰强度(％)按衍射角(2θ)增加的顺序制成表(表3)。表3-N-   2θ             ---d---  ---Cps--- ---％---1     5.124    17.2309   180.00    10.172     6.328    13.9565   408.00    23.053     7.574    11.6623   305.00    17.234     8.191    10.7851   556.00    31.415     8.797    10.0432   166.00    9.386     10.398   8.5004    244.00    13.797     12.628   7.0040    1198.00   67.688     13.871   6.3791    353.00    19.949     15.218   5.8172    1543.00   87.1810    15.723   5.6317    187.00    10.5611    16.538   5.3558    589.00    33.2812    16.751   5.2882    621.00    35.0813    18.024   4.9175    869.00    49.1014    18.640   4.7563    1156.00   65.3115    18.809   4.7141    1241.00   70.1116    19.191   4.6210    1521.00   85.9317    19.659   4.5120    1413.00   79.8318    20.865   4.4064    1303.00   73.6219    21.495   4.3299    1770.00   100.0020    20.865   4.2539    1120.00   63.2821    21.616   4.1077    683.00    38.5922    22.113   4.0166    919.00    51.9223    22.950   3.8719    697.00    39.3824    24.117   3.6871    659.00    37.2325    24.618   3.6132    716.00    40.4526    25.644   3.4709    662.00    37.4027    26.297   3.3862    486.00    27.4628    27.052   3.2934    1270.00   71.7529    27.960   3.1885    518.00    29.2730    29.640   3.0115    705.100   39.3831    30.744   2.9058    695.00    39.2732    33.465   2.6755    697.00    39.3833    33.840   2.6467    764.00    43.1634    35.812   2.5053    736.00    41.5835    36.811   2.4396    858.00    48.4736    37.076   2.4228    919.00    51.9237    38.185   2.3549    870       49.1538    39.622   2.2728    882.00    49.83实施例14 N-[N-[N-(4-(哌啶-4-基)丁酰基)-N-乙基甘氨酰基]-(L)-天冬氨酰]-(L)-β-环己基丙氨酰胺的吸湿性结晶形式及其转变的不吸湿结晶形式的样品的X-射线粉末衍射图
取实施例5或11制得的N-[N-[N-(4-(哌啶-4-基)丁酰基)-N-乙基甘氨酰基]-(L)-天冬氨酰]-(L)-β-环己基丙氨酰胺的吸湿性结晶样品，及其按照实施例13的方法转变的相应不吸湿的结晶形式的样品。吸湿性结晶形式和不吸湿结晶形式的X-射线粉末衍射图分别如图4和5所示。还将吸湿性结晶形式和不吸湿结晶形式的X-射线粉末衍射以对用单位埃(A)表示的晶体平面内距离(d)、每秒计数(Cps)和相对峰强度(％)按衍射角(2θ)增加的顺序制成表(分别参见表4和表5)。表4-N-   2θ              ---d---  ---Cps--- ---％---1     5.073     17.4037   1487.00   86.502     6.451     13.6905   447.00    26.003     7.837     11.2712   411.00    23.914     8.491     10.4049   602.00    35.025     9.699     9.1119    93.00     5.416     10.488    8.4278    421.00    24.497     11.570    7.6423    92.00     5.358     12.550    7.0474    411.00    23.919     13.576    6.5168    760.00    44.2110    15.327    5.7763    606.00    35.2511    15.790    5.6080    456.00    26.5312    16.179    5.4739    346.00    20.1313    16.770    5.2824    938.00    54.5714    17.085    5.1856    685.00    39.8515    17.750    4.9927    924.00    53.7516    18.151    4.8835    741.00    43.1117    18.504    4.7909    593.00    34.5018    19.323    4.5897    930.00    54.1019    19.714    4.4996    792.00    46.0720    20.545    4.3194    1719.00   100.0021    21.388    4.1510    897.00    52.1822    22.381    3.9691    373.00    21.7023    22.870    3.8852    258.00    15.0124    23.640    3.7604    563.00    32.7525    23.841    3.7292    680.00    39.5626    24.048    3.6976    623.00    36.2427    24.746    3.5949    338.00    19.6628    25.200    3.5311    366.00    21.2929    25.792    3.4513    590.00    34.3230    26.266    3.3901    731.00    42.5231    26.959    3.3045    555.00    32.2932    27.426    3.2494    769.00    44.7433    27.967    3.1876    528.00    30.7234    29.020    3.0744    771.00    44.8535    29.922    2.9837    491.00    28.5636    30.970    2.8851    384.00    22.3437    31.552    2.8332    510.00    29.6738    33.338    2.6854    627.00    36.4739    34.838    2.5731    520.00    30.2540    35.873    2.5012    653.00    37.9941    36.107    2.4855    639.00    37.1742    37.162    2.4174    683.00    39.7343    38.509    2.3359    775.00    45.0844    39.701    2.2684    784.00    45.61表5-N-   2θ             ---d---   ---Cps--- ---％---1     5.152     17.1371   123.00    7.342     6.386     13.8287   483.00    28.843     7.580     11.6540   389.00    23.224     8.225     10.7410   752.00    44.905     8.801     10.0390   180.00    10.756     10.408    8.4928    276.00    16.487     12.660    6.9863    1399.00   83.528     13.914    6.3594    391.00    23.349     15.251    5.8047    1675.00   100.0010    16.541    5.3548    608.00    36.3011    16.771    5.2818    652.00    38.9312    18.047    4.9112    775.00    46.2713    18.676    4.7472    1078.00   64.3614    18.902    4.6910    1099.00   65.6115    19.182    4.6231    1151.00   68.7216    19.697    4.5035    1164.00   69.4917    20.240    4.3838    1049.00   62.6318    20.568    4.3147    1403.00   83.7619    29.933    4.2403    1024.00   61.1 320    21.684    4.0951    569.00    33.9721    22.122    4.0150    746.00    44.5422    22.970    3.8685    564.00    33.6723    24.080    3.6927    546.00    32.6024    24.218    3.6720    556.00    33.1925    24.694    3.6023    618.00    36.9026    25.680    3.4662    510.00    30.4527    26.400    3.3732    403.00    24.0628    27.105    3.2871    1093.00   65.2529    27.929    3.1920    450.00    26.8730    29.360    3.0395    555.00    33.1331    29.724    3.0031    595.00    35.5232    30.340    2.9435    429.00    25.6133    30.693    2.9105    552.00    32.9634    31.353    2.8507    476.00    28.4235    31.822    2.8098    531.00    31.7036    32.006    2.7940    545.00    32.5437    32.885    2.7213    485.00    28.9638    33.508    2.6722    547.00    32.6639    34.040    2.6316    606.00    36.1 840    34.839    2.5730    5 80.00   34.6341    35.998    2.4928    596.00    35.5842    36.680    2.4480    629.00    37.5543    36.948    2.4309    727.00    43.4044    37.197    2.4152    703.00    41.9745    39.602    2.2739    697.00    41.61实施例15 N-[N-[N-(4-(哌啶-4-基)丁酰基)-N-乙基甘氨酰基]-(L)-天冬氨酰]-(L)-β-环己基丙氨酰胺的吸湿性和不吸湿的结晶形式的等温微量量热实验
用Thermometric Thermal Activity Monitor(TAM)对N-[N-[N-(4-(哌啶-4-基)丁酰基)-N-乙基甘氨酰基]-(L)-天冬氨酰]-(L)-β-环己基丙氨酰胺的吸湿性和不吸湿的结晶形式进行等温微量量热实验。通过将不同的结晶形式在不同温度下暴露于不同的湿度或溶剂蒸气中来研究所述结晶形式的固态转变。使用如下盐溶液来形成不同的湿度：KCl(80％RH)，NaCl(75％RH)和NaBr(65％RH)。称取约100mg各种结晶形式的化合物置于TAM玻璃安瓿内并将含有饱和盐溶液(含有过量的固体)或有机溶剂的微恒湿器置于安瓿内。将安瓿密封，使其与环境温度平衡，然后降至TAM的测量位置。将用洗涤过的海沙代替了待测试样品的相同系统置于参考侧。测定输出功率(μW)随时间的变化(图6-8)。实施例16 N-[N-[N-(4-(哌啶-4-基)丁酰基)-N-乙基甘氨酰基]-(L)-天冬氨酰]-(L)-β-环己基丙氨酰胺的吸湿性和不吸湿的结晶形式的吸湿等温线
在VTI MB300G湿度天平上测定N-[N-[N-(4-(哌啶-4-基)丁酰基)-N-乙基甘氨酰基]-(L)-天冬氨酰]-(L)-β-环己基丙氨酰胺的吸湿性和不吸湿的结晶形式的吸湿等温线。实验可按照两种方式进行，一种是对约15mg的待测结晶形式进行增加和降低％RH的步骤并测定(在每一平衡步骤)重量增加随％RH的变化(图9)，另一种是将待测结晶形式置于恒定的湿度下并测定重量增加随时间的变化。
式II化合物显示出有价值的药理活性，因此可掺入药物组合物中并用于对患有特定疾病的患者进行治疗。
本发明还涉及对患有可通过施用血小板凝集抑制剂通过抑制纤维蛋白原与激活的血小板和血小板凝集和血液凝固中涉及的其它粘着糖蛋白结合而得到缓解或预防之疾病的患者进行治疗的方法。此外，本发明还涉及用于在人和其它哺乳动物中预防或治疗与心肌梗塞、中风、外周动脉疾病和弥散性血管内凝血等疾病有关的血栓形成的方法。
本文所指的治疗应理解为包括预防性治疗以及对已确定的疾病进行治疗。
本发明还包括含有药物可接受量的至少一种式I化合物以及可药用载体或赋形剂的药物组合物。
实践中，用于治疗的本发明化合物或组合物可以通过任何适宜的方式，例如局部、吸入、胃肠外、直肠或口服给药，但优选通过口服给药。
式II化合物可以以允许通过最佳途径进行给药的形式提供，并且本发明还涉及适用于人或兽医的含有至少一种本发明化合物的药物合物。这些组合物可以根据常规方法，用一种或多种可药用辅剂或赋形剂制得。所述辅剂包括，稀释剂、无菌含水介质和各种无毒的有机溶剂。所述组合物可以呈片剂、丸剂、胶囊、颗粒剂、粉剂、水溶液或混悬液、可注射溶液、酏剂、糖浆等形式，并且可以含有一种或多种选自甜味剂、矫味剂、着色剂、稳定剂或防腐剂的试剂以得到可药用的制剂。
对于载体以及载体中活性成分含量的选择通常根据产物的溶解度和化学性质、具体的给药方式和药物实践中需要注意的条件来决定。例如，可将赋形剂如乳糖、柠檬酸钠、碳酸钙、磷酸氢二钙和崩解剂如淀粉、藻酸和某些复合硅胶及润滑剂如硬脂酸镁、十二烷基硫酸钠和滑石用于制备片剂。为了制备胶囊，优选使用乳糖和高分子量的聚乙二醇。当使用含水混悬液时，其可含有乳化剂或有助于悬浮的试剂。还可使用稀释剂如蔗糖、乙醇、聚乙二醇、丙二醇、甘油和氯仿或它们的组合。
为了进行胃肠外给药，可以使用本发明化合物在植物油如蓖麻油、花生油或橄榄油或水-有机溶液如水和丙二醇、可注射有机酯如油酸乙酯以及可药用盐的无菌水溶液中的乳液、混悬液或溶液。还可用本发明产物的盐溶液通过肌肉内或皮下注射进行给药。水溶液，包括盐在纯净蒸馏水中的溶液还可用于静脉内给药，条件是对其pH值进行了适当的调节、进行了正确地缓冲并用足够量的葡萄糖或氯化钠使其等渗，并且通过加热、辐射和/或微孔过滤对其进行了灭菌。
局部给药时，可以使用含有本发明化合物的凝胶(水或醇基质的)、霜剂或软膏。还可将本发明化合物掺入凝胶或贴剂的基质中，从而可以透过皮肤屏障控释化合物。
用于直肠给药的固体组合物包括根据已知方法配制的含有至少一种式II化合物的栓剂。
本发明组合物中活性成分的百分含量可以改变，条件是其应构成适宜剂量的一定份额。显然，可以在大概同一时间施用多个单位剂量形式。所采用的剂量可由医生或有资格的医务工作者确定，并取决于所需的治疗效果、给药途径和治疗的持续时间，以及患者的病情。完成本发明方法的剂量方案是，先是确保最大治疗反应的剂量直至病情得到改善，然后用可以缓解病情的最低有效量。通常，口服剂量可以从约0.1mg/kg至约100mg/kg，优选从约0.1mg/kg至约20mg/kg，首选从约1mg/kg至约20mg/kg，静脉内剂量为约0.1μg/kg至约100μg/kg，优选从约0.1mg/kg至约50mg/kg。对于各具体情况，剂量根据待治疗患者的具体因素如年龄、体重、一般健康情况和可以影响本发明化合物效果的其它特点来确定。
此外，还可将式II化合物按照所需的频率进行给药以得到所需的治疗效果。某些患者可能对较高或较低的剂量迅速反应，可能仅需非常小的维持剂量。对于其他患者，根据具体患者的生理需要，可能需要以1-4次口服剂量/天、优选每天1-2次进行长期治疗。当然，对于其他患者，可能需要医嘱每天不超过一或两次剂量。
当根据文献中的记载进行试验时，式II化合物显示出显著的药理学活性，相信这些试验结果与在人和其它哺乳动物中的药理学活性相关联。以下体外和体内药理学试验结果是式II化合物的特典型结果。
以下药理学试验评估式II化合物对于纤维蛋白原介导的血小板凝集、纤维蛋白原与凝血酶激活的血小板结合的抑制活性，以及对ADP诱导的离体血小板凝集的抑制作用，这些试验的结果与式II化合物的体内抑制特性相关联。
血小板凝集试验是基于“血液”，66(4)，946-952(1985)中的描述。纤维蛋白原结合试验是基于Ruggeri，Z.M.等，美国国家科学院院报，83，5708-5712(1986)和Plow，E.F等，美国国家科学院院报，82，8057-8061(1985)。对ADP-诱导的离体血小板凝集的抑制作用试验是基于Zucker，“通过光电方法测定的血小板凝集”，酶学方法(Methods in Enzymology)，169，117-133(1989)。血小板凝集试验制备固定的活化血小板
用Magueie.G.A等，生物化学杂志，254，5357-5363(1979)和Rggeri，Z.M.等，临床研究杂志(J.Clin.Invest.)72，1-12(1983)所述的凝胶过滤技术，从人血小板浓缩物中分离血小板。将血小板以2×108细胞/mL的浓度悬浮在改性的无钙Tyrode氏缓冲液中，该缓冲液含有127mM氯化钠，2mM氯化镁，0.42mM Na2HPO4，11.9mM NaHCO3，2.9mM KCl，5.5mM葡萄糖，pH为7.35的10mMHEPES，和0.35％人血清白蛋白(HSA)。通过加入终浓度为2单位/mL的人a-凝血酶，然后加入浓度为40μM的凝血酶抑制剂I-2581来激活这些洗涤过的血小板。向激活的血小板中加入低聚甲醛至终浓度为0.50％，然后将其在室温保温30分钟。然后通过以650xg离心15分钟来收集固定的活化血小板。用上述Tyrode氏-0.35％HSA缓冲液将血小板沉淀洗涤4次，然后用相同的缓冲液重悬至2×108细胞/mL的浓度。血小板凝集试验
将固定的活化血小板与所选剂量的待测化合物一起保温，以检测1分钟的血小板凝集抑制作用以及加入终浓度为250μg/ml的人纤维蛋白原而引发的凝集作用。用血小板凝集绘图仪PAP-4记录血小板凝集作用。将凝集作用的抑制程度表示为不存在抑制剂的情况下所观察到的凝集率的百分比。然后计算每种化合物的IC50，即将凝集率降低50％所需的抑制剂的量(参见例如Plow，E.F.等，美国国家科学院院报，82，8057-8061(1985))。纤维蛋白原结合试验
用Walsh，P.N.等，Br.J.Haematol.281-296(1977)所述的，Trapani-Lombardo，V.等改进的白蛋白密度梯度技术(临床研究杂志76，1950-1958(1985))，从血小板中洗去血浆组分。在每个实验中，将改性的Tyrode氏缓冲液(Rggeri，Z.M.等，临床研究杂志，72，1-12(1983))中的血小板混合物用人a-凝血酶在22-25℃刺激10分钟(3.125×1011血小板/升和凝血酶为0.1 NIH单位/mL)。然后将25倍过量(单位/单位)的水蛭素在加入125I-标记的纤维蛋白原和待测化合物前5分钟加入。加入所有这些物质后，混合物中最终的血小板计数为1x1011/L。继续在22-25℃保温30分钟后，通过将50μL混合物在300μL 20％蔗糖溶液中以12000xg离心4分钟使结合的和游离的配体分离。然后将血小板沉积物与混合物的其余部分分离以测定血小板结合的放射性。在含有过量未标记配体的混合物中测定非特异性结合。当通过Scatchard分析法对结合曲线进行分析时，利用计算机程序从结合等温线中以拟合参数的形式得到非特异性结合(Musson.P.J.酶学方法(Methods Enzymol.)92，542-576(1983))。为了测定各化合物抑制50％纤维蛋白原与凝血酶激活的血小板结合所需的浓度(IC50)，对各化合物试验6个或更多的浓度，125I-标记的纤维蛋白原保持在0.176μmol/L(60μg/mL)。将残余的纤维蛋白原结合对样品化合物浓度的对数绘制曲线求得IC50。对ADP-诱导的离体血小板凝集的抑制实验方法
在向体重为10-20kg的杂种狗施用试验化合物5-10分钟之前取对照血液样品。将化合物通过水饲管胃内给药，或通过明胶胶囊口服给药。给药后，以30分钟的间隔取血样(5mL)3小时，然后在6、12和24小时取样。通过静脉穿刺头部静脉获得各血液样品并直接收集在含有3.8％柠檬酸三钠的塑料注射器内，柠檬酸三钠的量为每9份血液1份柠檬酸三钠。离体犬血小板凝集
将血液样品以1000rpm离心10分钟以得到血小板富集的血浆(PRP)。取出PRP后，将样品以2000rpm继续离心10分钟得到血小板较少的血浆(PPP)。用Coulter计数器(Coulter Electronics，Hialeah，FL)对PRP中的血小板计数。如果PRP中血小板的浓度大于300000血小板/μL，则将PRP用PPP稀释将血小板计数调整到300000血小板/μL。然后将PRP的等分液(250μL)置于石英玻璃比色杯(7.25×55mm，Bio/Data Corp.Horsham，PA)中。然后向PRP中加入肾上腺素(最终浓度为lμM)，将其于37℃保温1分钟。然后向PRP中以10μM的最终浓度加入血小板凝集刺激物，ADP。用光透射集合度计(Bio/Data Platelet Aggregation Profiler，PAP-4型，Bio/Data Corp.Horsham，PA)通过分光光度法监测血小板的凝集。为了测定化合物，一式两份记录透光率和最大透光率(最大凝集)的改变率(斜率)。以与从对照PRP得到的数据相比，斜率或最大凝集的减少百分比(平均值±SEM)报道血小板凝集数据，所述对照PRP是从在施用试验化合物前得到的血液样品制得的。
式II化合物在前述试验中表现出显著的活性，被认为可用于预防和治疗与某些疾病有关的血栓形成。由离体犬血小板凝集试验中的抗血栓形成活性可以预测到其在人中的活性(参见，例如Catalfamo，J.L.和Dodds，W.Jean，“从实验室动物中分离血小板”，酶学方法，169，A部分，27(1989))。通过以上方法对式II化合物进行的试验所得到的结果列于下表6中。在该表中还给出了4-4(哌啶基)丁酰基甘氨酰天冬氨酰色氨酸、即欧洲专利申请公开说明书0479481中公开的化合物的对比试验结果。表6
             固定化血小板凝剂量ADP诱导的离体血小板凝集的抑制作用化合物           集的抑制作用(mg/kg)口服给药后离体血小板凝集的％抑制作
             (IC50，μM)   用
                                 1h    3h   6h   12h   24h实施例15         0.097          5    100   100  100  98    50EPA’481的化合物 0.047          5    53＜20本领域技术人员很容易理解，本发明可以很好地实现本发明的目的并达到所述的结果和优点。本文所述的化合物、组合物和方法是优选实施方案的代表，或是用于举例说明，而并非想要对本发明的范围进行限定。

Claims (24)

1.  化合物N-(N-叔丁氧羰基-N-乙基甘氨酰基)-(L)-天冬氨酸β-苄酯。
2.  化合物N-[N-[N-[4-[N-苄氧基羰基哌啶-4-基]丁酰基-N-乙基甘氨酰基]-(L)-天冬氨酰基β-苄基酯]-(L)-β-环己基-丙氨酰胺。
3.  化合物4-(哌啶-4-叉)丁酸。
4.  化合物N-[N-[N-[3-[N-苄氧基羰基-4-哌啶基]亚丙基羰基]-N-乙基甘氨酰基]-(L)-天冬氨酰基β-苄基酯]-(L)-β-环己基-丙氨酰胺。
5.  不吸湿结晶形式的N-[N-[N-(4-(哌啶-4-基)丁酰基)-N-乙基甘氨酰基]-(L)-天冬氨酰基]-(L)-β-环己基-丙氨酰胺化合物或其可药用盐。
6.  一种药物组合物，该组合物包含权利要求1的化合物以及可药用载体。
7.  制备不吸湿结晶形式N-[N-[N-(4-(哌啶-4-基)丁酰基)-N-乙基甘氨酰基]-(L)-天冬氨酰基]-(L)-β-环己基-丙氨酰胺的方法，该方法包括将吸湿性结晶形式N-[N-[N-(4-(哌啶-4-基)丁酰基)-N-乙基甘氨酰基]-(L)-天冬氨酰基]-(L)-β-环己基-丙氨酰胺在大约20℃至大约80℃下暴露在大约40％-100％相对湿度中。
8.  根据权利要求7的方法，其中所述暴露是在大约65％-大约80％相对湿度下进行。
9.  根据权利要求7的方法，其中所述暴露是在大约40℃-大约80℃下进行。
10.  根据权利要求7的方法，其中所述暴露是在静态条件下进行。
11.  根据权利要求7的方法，其中所述暴露是在动态条件下进行。
12.  制备下式盐化合物的方法：
Figure A9719821000031
其中
B代表烷基，环烷基，环烷基烷基，烷基环烷基，烷基环烷基烷基，芳基，芳烷基，烷芳基，或烷基芳烷基；
E1代表H；
E2代表天然α-氨基酸的-碳侧链，H，烷基，环烷基，环烷基烷基，烷基环烷基，烷基环烷基烷基，芳基，取代芳基，芳烷基，取代芳烷基，杂环基，取代杂环基，杂环基烷基，取代的杂环基烷基，或者E1和E2与连接E1和E2的氮和碳原子一起形成4-、5-、6-、或7-元氮杂环烷烃环；
G代表OR1或NR1R2；
R1和R2独立地代表H，烷基，环烷基，环烷基烷基，烷基环烷基，烷基环烷基烷基，芳基，芳烷基，烷基芳基或烷基芳烷基；
p代表1-4；和
P1代表酸保护基，该方法包括偶联下述两式化合物：其中P2代表对酸不稳定的氨基保护基，形成下式第一中间体化合物：
Figure A9719821000042
然后将下式化合物：偶联到第一中间体化合物上，形成下式第二中间体化合物：
Figure A9719821000044
接着用三氟乙酸除去第二中间体化合物的P2保护基，得到所要的盐化合物。
13.  权利要求12的方法，其中P1为对氢化不稳定的酸保护基。
14.  下式化合物：
其中：
P3代表氨基保护基；
B代表烷基，环烷基，环烷基烷基，烷基环烷基，烷基环烷基烷基，芳基，芳烷基，烷芳基，或烷基芳烷基；
P1代表酸保护基；
E1代表H；
E2代表天然α-氨基酸的α-碳侧链，H，烷基，环烷基，环烷基烷基，烷基环烷基，烷基环烷基烷基，芳基，取代芳基，芳烷基，取代芳烷基，杂环基，取代杂环基，杂环基烷基，取代的杂环基烷基，或者E1和E2与连接E1和E2的氮和碳原子一起形成4-、5-、6-、或7-元氮杂环烷烃环；
G代表OR1或NR1R2；
R1和R2独立地代表H，烷基，环烷基，环烷基烷基，烷基环烷基，烷基环烷基烷基，芳基，芳烷基，烷基芳基，或烷基芳烷基；和
p代表1-4。
15.  根据权利要求14的化合物，其中P1代表对氢化不稳定的酸保护基，且P3代表对氢化不稳定的氨基保护基。
16.  根据权利要求15的化合物，其中
B代表烷基，环烷基，环烷基烷基，烷基环烷基，烷基环烷基烷基，芳基，芳烷基，烷芳基或烷基芳烷基；
E1代表H；
E2代表H，烷基，环烷基，环烷基烷基，烷基环烷基，烷基环烷基烷基，芳基，取代芳基，芳烷基或取代芳烷基；
L代表OR1或NR1R2；
R1和R2独立地代表H，烷基，环烷基，环烷基烷基，烷基环烷基，烷基环烷基烷基，芳基，芳烷基，烷芳基或烷基芳烷基；和
p代表1或2。
17.  根据权利要求16的化合物，其中
B代表烷基，环烷基，环烷基烷基，烷基环烷基或烷基环烷基烷基；和
E2代表H，烷基，环烷基，环烷基烷基，烷基环烷基或烷基环烷基烷基。
18.  根据权利要求17的化合物，其中
B代表烷基；
E2代表烷基，环烷基或环烷基烷基；
R1和R2独立地代表H，烷基，环烷基，环烷基烷基，烷基环烷基或烷基环烷基烷基；和
p代表1。
19.  根据权利要求18的化合物，其中
P3代表苄氧基羰基；
B代表乙基；
P1代表苄基；
E2代表环己基甲基；和
G代表NH2。
20.  制备下式化合物的方法：
Figure A9719821000061
其中：
P3代表氨基保护基；
B代表烷基，环烷基，环烷基烷基，烷基环烷基，烷基环烷基烷基，芳基，芳烷基，烷芳基，或烷基芳烷基；
P1代表酸保护基；
E1代表H；
E2代表天然α-氨基酸的α-碳侧链，H，烷基，环烷基，环烷基烷基，烷基环烷基，烷基环烷基烷基，芳基，取代芳基，芳烷基，取代芳烷基，杂环基，取代杂环基，杂环基烷基，取代的杂环基烷基，或者E1和E2与连接E1和E2的氮和碳原子一起连接成4-、5-、6-、或7-元氮杂环烷烃环；
G代表OR1或NR1R2；
R1和R2独立地代表H，烷基，环烷基，环烷基烷基，烷基环烷基，烷基环烷基烷基，芳基，芳烷基，烷基芳基，或烷基芳烷基；和
p代表1-4，该方法包括：
使下式((哌啶-4-叉)丁酸)化合物：与下式三肽或其酸加成盐偶联：
Figure A9719821000072
21.  权利要求20的方法，其中P1代表对氢化不稳定的酸保护基，且P3代表对氢化不稳定的氨基保护基。
22.  下式化合物：其中P3代表氨基保护基。
23.  根据权利要求22的化合物，其中P3代表对氢化不稳定的氨基保护基。
24.  根据权利要求23的化合物，其中P3代表苄氧基羰基。
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Families Citing this family (19)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
IL128561A0 (en) * 1996-08-21 2000-01-31 Rhone Poulenc Rorer Pharma Stable non-hygroscopic crystalline form of N-(N-N-(4-(piperidin-4-YL)butanoyl)-N-ethylglycyl) compounds
WO1999019294A1 (en) * 1997-05-14 1999-04-22 Aventis Pharmaceuticals Products Inc. Legal/Patents Process for the preparation of azacycloalkylalkanoyl pseudotetrapeptides
JP2001519411A (ja) * 1997-10-10 2001-10-23 アヴェンティス ファーマシューティカルズ プロダクツ インコーポレイテッド アザシクロアルキルアルカノイルプソイドテトラぺプチドの調製方法
WO2000040601A1 (en) * 1998-12-30 2000-07-13 Aventis Pharmaceuticals Products Inc. Process for preparing a stable non-hygroscopic crystalline n-[n-[n- piperdin- 4-yl)butanoyl)- n.ethylglycyl]- (l)-aspartyl] -ss-cyclohexylalanine amide
US20050238834A1 (en) * 2004-04-21 2005-10-27 Eastman Kodak Company High modulus label with compliant carrier sheet
US8021679B2 (en) 2005-08-25 2011-09-20 Medtronic Vascular, Inc Nitric oxide-releasing biodegradable polymers useful as medical devices and coatings therefore
US8241619B2 (en) 2006-05-15 2012-08-14 Medtronic Vascular, Inc. Hindered amine nitric oxide donating polymers for coating medical devices
US7811600B2 (en) * 2007-03-08 2010-10-12 Medtronic Vascular, Inc. Nitric oxide donating medical devices and methods of making same
US8273828B2 (en) * 2007-07-24 2012-09-25 Medtronic Vascular, Inc. Methods for introducing reactive secondary amines pendant to polymers backbones that are useful for diazeniumdiolation
US20090222088A1 (en) * 2008-02-29 2009-09-03 Medtronic Vascular, Inc. Secondary Amine Containing Nitric Oxide Releasing Polymer Composition
US20090232868A1 (en) * 2008-03-17 2009-09-17 Medtronic Vascular, Inc. Nitric Oxide Releasing Polymer Composition
US20090232863A1 (en) * 2008-03-17 2009-09-17 Medtronic Vascular, Inc. Biodegradable Carbon Diazeniumdiolate Based Nitric Oxide Donating Polymers
US8158187B2 (en) * 2008-12-19 2012-04-17 Medtronic Vascular, Inc. Dry diazeniumdiolation methods for producing nitric oxide releasing medical devices
US8709465B2 (en) * 2009-04-13 2014-04-29 Medtronic Vascular, Inc. Diazeniumdiolated phosphorylcholine polymers for nitric oxide release
US9704557B2 (en) * 2013-09-25 2017-07-11 Qualcomm Incorporated Method and apparatus for storing retention time profile information based on retention time and temperature
CA3009065C (en) 2015-12-21 2022-01-25 Texas Tech University System System and method for solution phase gap peptide synthesis
WO2019217116A1 (en) * 2018-05-06 2019-11-14 Gap Peptides Llc Method for solution-phase peptide synthesis
US12024537B2 (en) 2018-05-31 2024-07-02 Sederma Compositions and methods for chemical synthesis
US11827660B2 (en) 2019-02-01 2023-11-28 Sederma Synthesis strategy for gap protecting group

Family Cites Families (15)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US4857508A (en) * 1987-12-03 1989-08-15 Monsanto Company Novel platelet-aggregation inhibitor peptide derivatives
US4992463A (en) * 1988-07-20 1991-02-12 Monsanto Company Thienyl peptide mimetic compounds which are useful in inhibiting platelet aggregation
US5332726A (en) * 1989-09-29 1994-07-26 Rhone-Poulenc Rorer Pharmaceuticals Inc. Antithrombotic peptides and pseudopeptides
US4952562A (en) * 1989-09-29 1990-08-28 Rorer Pharmaceutical Corporation Anti-thrombotic peptides and pseudopeptides
US5064814A (en) * 1990-04-05 1991-11-12 Rhone-Poulenc Rorer Pharmaceuticals Inc. Anti-thrombotic peptide and pseudopeptide derivatives
US5264420A (en) 1990-09-27 1993-11-23 Merck & Co., Inc. Fibrinogen receptor antagonists
NZ239876A (en) * 1990-09-27 1993-12-23 Merck & Co Inc Glycyl-b-alanine derivatives and pharmaceutical compositions thereof.
US5218138A (en) 1992-09-02 1993-06-08 Rhone-Poulenc Rorer Pharmaceuticals Inc. Stereoselective reduction of 3-hydroxyket-1-ones to 1,3-syn-dihydroxylated compounds
US5340798A (en) * 1992-10-14 1994-08-23 Merck & Co., Inc. Fibrinogen receptor antagonists
WO1995001336A1 (fr) * 1993-06-30 1995-01-12 Sumitomo Pharmaceuticals Co., Ltd. Nouveau derive de piperidine
JP3032297B2 (ja) * 1993-10-15 2000-04-10 ローヌ‐プーラン ローラー ファーマシューティカルズ インコーポレイテッド 抗血栓性アザシクロアルキルアルカノイルペプチド及びプソイドペプチド
US5780590A (en) * 1993-10-15 1998-07-14 Rhone-Poulenc Rorer Pharmaceuticals Inc. Antithrombotic azacycloalkylalkanoyl peptides and pseudopeptides
US5707994A (en) * 1993-10-19 1998-01-13 Sumitomo Pharmaceuticals Company, Limited 2,3-diaminopropionic acid derivative
IL128561A0 (en) * 1996-08-21 2000-01-31 Rhone Poulenc Rorer Pharma Stable non-hygroscopic crystalline form of N-(N-N-(4-(piperidin-4-YL)butanoyl)-N-ethylglycyl) compounds
JP2001519411A (ja) * 1997-10-10 2001-10-23 アヴェンティス ファーマシューティカルズ プロダクツ インコーポレイテッド アザシクロアルキルアルカノイルプソイドテトラぺプチドの調製方法

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WO1998007696A1 (en) 1998-02-26
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