KR102058133B1 - 혼합제제 내 항생제 용해도를 향상시킬 수 있는 면역 증강용 조성물 및 이의 용도 - Google Patents

Abstract

본 발명은 혼합제제 내 항생제 용해도를 향상시킬 수 있는 면역 증강용 조성물 및 이의 용도에 관한 것이다. 더욱 상세하게 본 발명의 조성물을 항생제와 혼합 시 혼합제제 내에서 항생제의 용해도를 향상시킬 수 있는 동시에 비타민 B₁₂의 안정성을 향상시킬 수 있는 면역 증강용 조성물, 이를 포함하는 약학적 조성물, 본 발명의 조성물을 항생제와 혼합 시 혼합제제내의 용해도 향상 방법 및 면역 증강 방법에 관한 것이다.

Description

혼합제제 내 항생제 용해도를 향상시킬 수 있는 면역 증강용 조성물 및 이의 용도{Composition for enhancing immune activity capable of improving of solubility of antibiotics in mixed formulation and use thereof}

본 발명은 혼합제제 내 항생제 용해도를 향상시킬 수 있는 면역 증강용 조성물 및 이의 용도에 관한 것이다. 더욱 상세하게 본 발명의 조성물을 항생제와 혼합 시 혼합제제 내에서 항생제의 용해도를 향상시킬 수 있는 동시에 비타민 B₁₂의 안정성을 향상시킬 수 있는 면역 증강용 조성물, 이를 포함하는 약학적 조성물, 본 발명의 조성물을 항생제와 혼합 시 혼합제제 내의 용해도 향상 방법 및 면역 증강 방법에 관한 것이다.

식량 산업으로서 그 가치가 높아지고 있는 축산업 및 양식업은 수년간 급격히 증가하였다. 가축 및 양식 어류의 양식 산업에서는 현재 동물에게 발병하는 각종 질병의 예방 및 이를 치료하기 위해 많은 종류의 항생제가 사용되고 있다.

그러나, 항생제를 수성현탁제로 사용하는 경우 수용액내 불안정성으로 인해 보존기간이 짧다는 문제점이 발생하였고, 이를 해결하기 위해, 현재는 분말 형태로 보관하고, 사용시점에 물에 섞어 투여하는 방법을 이용하고 있다. 그러나, 항생제의 물 또는 이외의 용매에 대한 난용성으로 인해 현장에서 분말로 사용하는데 어려움이 있다.

한편, 현장에서는 항생제를 단독으로 투여하지 않고, 축산 및 양식 어류의 면역증진, 활력증가와 성장률에 도움을 주는 대사 촉진제와 혼합한 혼합 제제(칵테일 제제)를 선호하고 있으나, 대부분의 대사촉진제는 항생제와 혼합 시 용해도가 현저히 떨어져 사용에 불편함을 가지고 있다. 이와 같이, 항생제와 대사 촉진제가 잘 용해되지 않고, 주사되면, 투과도가 감소하여, 체내 흡수율이 저하되고, 궤양, 염증 등의 부작용이 발생할 수 있다.

본 발명의 배경기술로는 JP43010862호 및 DE25222187호에는 다른 염 및 물질을 첨가하여 비타민 B₁₂를 안정화시킨 방법이 기재되어 있다.

본 발명의 목적은 포스폰산 및 이의 유도체, 에탄올, 비타민 B₁₂를 포함하는 제제에 항생제를 혼합 시 항생제의 용해도를 향상시킬 수 있는 면역 증강용 조성물을 제공하는 것이다.

본 발명의 다른 목적은 상기 조성물을 이용하여, 비타민 B₁₂의 안정성을 개선시킬 수 있는 면역 증강용 조성물을 제공하는 것이다.

본 발명의 또 다른 목적은 혼합제제(칵테일 제제)내 항생제의 용해도를 개선하는 용해도 향상 방법을 제공하는 것이다.

본 발명의 또 다른 목적은 상기 면역 증강용 조성물을 투여하여, 동물에서 면역력을 효율적으로 증강시킬 수 있는 면역 증강 방법을 제공하는 것이다.

본 발명의 다른 목적 및 이점은 하기의 발명의 상세한 설명, 청구범위, 및 도면에 의해 보다 명확하게 된다.

일 측면에 의하면, 포스폰산 및 이의 유도체, 에탄올, 비타민 B_12, 산, 염기성염, 및 안정화제를 포함하는, 면역 증강용 조성물이 제공된다.

일 실시예에 의하면, 상기 포스폰산 유도체는 부타포스판일 수 있다.

일 실시예에 의하면, 상기 에탄올은 조성물 전체 중량에 대해 10 - 15 중량부일 수 있다.

일 실시예에 의하면, 상기 산은 폴리카르복실산일 수 있다.

일 실시예에 의하면, 상기 폴리카르복실산은 글로코노락톤일 수 있다.

일 실시예에 의하면, 상기 염기성염은 탄산나트륨일 수 있다.

일 실시예에 의하면, 상기 안정화제는 우레아 및 아황산수소나트륨 중 1 종 이상을 포함할 수 있다.

일 실시예에 의하면, 상기 면역 증강용 조성물의 pH는 4 내지 8일 수 있다.

일 실시예에 의하면, 상기 면역 증강용 조성물은 항생제를 더 포함할 수 있다.

다른 측면에 의하면, 본원의 면역 증강용 조성물을 포함하는 약학적 조성물이 제공된다.

일 실시예에 의하면, 상기 약학적 조성물은 경구투여제 또는 주사용제일 수 있다.

일 실시예에 의하면, 상기 약학적 조성물은 포유류, 조류, 또는 어류에 투여될 수 있다.

또 다른 측면에 의하면, 본원의 면역 증강 조성물과 항생제를 혼합하여 항생제의 용해도를 향상시키는 단계를 포함하는 항생제의 용해도 향상 방법이 제공된다.

또 다른 측면에 의하면, 본원의 면역 증강용 조성물을 투여하는 단계를 포함하는, 면역 증강 방법이 제공된다.

일 실시예에 의하면, 항생제 및 대사촉진제를 포함하는 혼합 제제(칵테일 제제)내의 항생제 용해도 개선 및 항생제 안정성을 향상 시킬 수 있다.

일 실시예에 의하면, 혼합제제내의 항생제의 용해도를 개선하여, 체내 흡수율을 증가시키고, 안정성 개선 및 궤양, 염증 등의 부작용을 줄일 수 있다.

일 실시예에 의하면, B₁₂의 안정성을 향상시킨 면역 증강용 조성물 및 이를 포함하는 약학적 조성물을 제공할 수 있다.

일 실시예에 의하면, 투여 동물에서, 스트레스 감소, 활력증진, 증체개선, 성장 부진 개선, 면역력 및 항병력 증진, 급성 질병 및 급성 대사 장애 치료의 보조치료 효과를 가진 면역 증강용 조성물을 제공할 수 있다. 특히 상기 면역 증강용 조성물은 가금류에 투여 시, 증체 개선과 폐사율을 감소시킬 수 있고, 어류에 투여 시, 성장 촉진 효과를 가진 면역 증강 방법을 제공할 수 있다.

도 1은 본 발명의 비교예 1 및 실시예 8에 의한 조성물에서 항생제의 함유량에 따라 용해된 정도를 시각적으로 나타낸 사진이다.
도 2는 본 발명의 비교예 1, 3, 4, 및 실시예 8, 16, 20, 23 내지 26에 의한 조성물에서 시간에 따른 비타민 B₁₂의 안정성을 나타낸 그래프이다.

본원에서 달리 정의하지 않는 한, 본 발명과 관련하여 사용된 과학 용어 및 기술 용어들은 통상의 기술자에 의해 일반적으로 이해되는 의미를 가질 것이다. 뿐만 아니라, 문맥상 특별히 지정하지 않는 한, 단수 형태의 용어는 그것의 복수 형태도 포함하는 것이며, 복수 형태의 용어는 그것의 단수 형태도 포함할 것이다. 일반적으로, 세포 및 조직 배양, 분자 생물학, 면역학, 미생물학, 유전학 및 단백질과 핵산 화학, 그리고 혼성화와 관련되어 사용본원에서 달리 정의하지 않는 한, 본 발명과 관련하여 사용된 과학 용어 및 기술 용어들은 통상의 기술자에 의해 일반적으로 이해되는 의미를 가질 것이다. 뿐만 아니라, 문맥상 특별히 지정하지 않는 한, 단수 형태의 용어는 그것의 복수 형태도 포함하는 것이며, 복수 형태의 용어는 그것의 단수 형태도 포함할 것이다. 일반적으로, 세포 및 조직 배양, 분자 생물학, 면역학, 미생물학, 유전학 및 단백질과 핵산 화학, 그리고 혼성화와 관련되어 사용되는 명명법과 이와 관련된 기술들은 통상의 기술자에게 널리 공지되어 있는 것이며, 또한 본 발명이 속하는 기술분야에서 일반적으로 사용되고 있는 것이다.

본 명세서에서 사용하는 용어 "치료"는 질환 또는 질병의 발전의 억제, 질환 또는 질병의 경감 및 질환 또는 질환의 제거를 의미할 수 있다.

본 명세서에서 사용되는 용어 "투여"는 임의의 적절한 방법으로 개체에게 본 발명의 약학적 조성물을 제공하는 것을 의미할 수 있다.

A. 면역 증강용 조성물

포스폰산 및 이의 유도체

본 발명에 사용되는 포스폰산(phosphonic acid)은 수용성의 무색결정으로, H₂PHO₃로 나타내며, 사면체형의 [PHO₃]^2-를 함유하는 이염기산이다. 포스폰산 및 포스폰산 유도체는 ATP의 주 재료인 인산을 공급함으로서 동물의 대사를 활성화하고 면역시스템을 조절하여 질병에 대한 저항력을 증진시키는 약리활성 물질이다.

본 발명에 사용되는 포스폰산 또는 포스폰산 유도체로는 이에 한정하는 것은 아니나, 푸리닐 포스폰산 유도체, 하이드록시에틸리덴디포스폰산, 니트로로트리스(메틸렌포스폰산), 포스포노부탄트리카르복실릭애시드, 에틸렌디아민테트라(메틸렌포스폰산) 및 부타포스판에서 선택될 수 있고, 이 중 부타포스판이 가장 적합할 수 있다. 상기 부타포스판의 화학명은 (1-부틸아미노-1-메틸에틸)포스폰산으로, 동물에서 대사 자극제 및 강장제로 가장 적합한 유기 화합물이며, 하기 화학식 1로 나타낼 수 있다.

[화학식 1]

상기 부타포스판의 함량은 이에 한정하는 것은 아니나, 본 발명의 효과를 나타내기 위해서는 전체 중량에 대하여, 0.1 내지 40 중량부로 포함될 수 있고, 1 내지 25 중량부가 적합할 수 있고, 5 내지 15 중량부가 더 적합할 수 있다. 부타포스판의 함량이 0.1 중량부 미만이면, 투여 동물에서, 질병에 대한 저항력 증진효과를 나타내기 어렵고, 부타포스판의 함량이 40 중량부를 초과하면 과량의 대사 촉진제 함량에 따른 부작용이 생길 수 있다.

에탄올

본 발명에 사용되는 에탄올은 방부제 기능과 물이 포함되는 경우, 공용매의 기능도 동시에 수행할 수 있다. 또한, 에탄올은 다른 알코올(예를 들면, 부탄올)과 대비하여, 항생제 및 대사 촉진제가 포함된 혼합 제제 내에서의 항생제의 용해도 개선 및 비타민 B₁₂ 및 항생제의 안정성에 탁월한 효과를 나타낼 수 있다.

상기 효과를 나타내는 에탄올의 양은 이에 한정하는 것은 아니나, 전체 중량에 대하여 3 내지 30 중량부로 포함될 수 있고, 5 내지 20 중량부가 적합할 수 있고, 10 내지 15 중량부가 더 적합할 수 있다. 상기 에탄올의 양이 3 중량부 미만이면, 비타민 B₁₂ 및 항생제의 안정성과 항생제 및 대사 촉진제가 포함된 혼합 제제 내에서의 항생제의 용해도 개선 효과를 나타내기 어려울 수 있고, 30 중량부를 초과하면, 함량 증가에 따른 효과의 차이가 미미하거나 용해도 개선 효과가 감소할 수 있다.

비타민 B ₁₂

본 발명에 따른 조성물에 포함되는 비타민 B₁₂는 수용성 비타민으로, 화학명은 알파-(5,6-디메틸벤즈이미다졸릴)시아노코바미드, 좁은 의미로 시아노코발라민을 의미하는 경우가 많으나 비타민 B₁₂ 일반명으로 포괄되는 다른 화합물도 존재한다. 비타민 B₁₂는 수용성 비타민으로 인간 또는 동물 체내에서 조효소로 작용하거나, 상응하는 조효소 형태로 전환될 수 있는 모든 화합물을 의미한다. 비타민 B₁₂는 에너지 대사 및 신진대사를 촉진시켜 기력을 회복시키고 대사물질의 축적을 저감할 뿐 아니라 부타포스판의 독성도 저감시킬 수 있다. 비타민 B₁₂는 상기 기재된 포스폰산 유도체 중 부타포스판과 함께 현재 국내외에서 동물용 또는 수산용 의약품으로 사용된다.

일반적으로, 비타민은 불안정하고, 온도, 빛, 자외선 또는 저장 시에 빠른 분해가 관찰된다. 이는 비타민 B₁₂에도 적용된다. 비타민 B₁₂의 안정화를 높이기 위해 비타민 B₁₂를 분리 또는 보호하는 방법을 사용하고 있으며, 과립 및 정제를 통한 안정화(EP416773호), 캅셀 충전(FR1472901호), 또는 동결건조(JP63313736호)를 이용하고 있다.

상기 비타민 B₁₂의 함량은 이에 한정하는 것은 아니나, 본 발명의 효과를 나타내기 위해서는 전체 중량에 대하여, 0.0001 내지 0.05 중량부로 포함될 수 있고, 0.001 내지 0.01 중량부가 더 적합할 수 있다. 비타민 B₁₂의 함량이 0.0001 중량부 미만이면, 투여 동물에서, 기력 회복, 대사물질 축적의 저감 및 부타포스판의 독성의 저감 효과를 나타내기 어렵고, 0.05 중량부 초과하면 함량 증가에 따른 효과의 차이가 미미할 수 있다.

산

일 실시예에 의하면, 상기 면역 증강용 조성물은 산을 더 포함할 수 있다.

상기 산의 종류로는 무기산(염산, 인산, 황산 등), 유기산으로 카르복실산, 술폰산, 메탄술폰산, 인산, 아세트산, 개미산, 프로피온산, 시트르산, 숙신산, 젖산, 타르타르산, 말산, 말레산, 벤조산, 4-하이드록시벤조산, 살리실산. 아스코르브산, 아스파르트산 또는 폴리카르복실산(글루코노락톤, 글루콘산, 글루쿠론산, 갈락투론산)이 적합할 수 있고, 타르타르산, 글루콘산 또는 글루코노락톤이 더 적합할 수 있으며, 글루코노락톤이 가장 비타민 B₁₂ 안정성 개선에 적합할 수 있다.

상기 산 또는 염기의 양은 목적하는 pH에 따라 좌우되고, 약제학적으로 허용되는 산 또는 염기를 첨가함으로써, 조정될 수 있다. 액상제제의 pH는 이에 한정하는 것은 아니나, 2 내지 10이 적합할 수 있고, 3 내지 9가 더 적합할 수 있고, 4 내지 8이 가장 적합할 수 있다.

상기 염기 또는 산의 함량은 전체 중량에 대하여, 보통 0.0001 내지 20 중량부가 적합할 수 있고, 0.001 내지 15 중량부가 더 적합할 수 있고, 0.01 내지 10 중량부가 가장 적합할 수 있다.

염기성염

일 실시예에 의하면, 상기 면역 증강용 조성물은 염기성염을 더 포함할 수 있다.

상기 염기성염의 종류로는 이에 한정하는 것은 아니나, 알칼리 금속 또는 알칼리 토금속 수산화물, 인산염(인산나트륨, 인산수소나트륨), 탄산염(탄산나트륨, 탄산수소나트륨), 아미노산(리신, 아르기닌, 히스티딘, 오르니틴, 시트룰린, 하이드록시리신), 메글루민, 에탄올아민, 트리에탄올아민 또는 트리스(하이드록시메틸)아미노메탄이 적합할 수 있고, 수산화나트륨, 수산화칼륨, 아르기닌 또는 탄산나트륨이 더 적합할 수 있으며, 탄산나트륨이 가장 적합할 수 있다.

안정화제

상기 면역 증강용 조성물은 안정화제로서, 우레아 및 아황산수소나트륨 중 1종 이상을 더 포함할 수 있다. 상기 안정화제는 이에 한정하는 것은 아니나, 입자, 결정 형성의 방지를 목적으로 덱스트린, 사이클로덱스트린, 폴리비닐피롤리돈, 폴리소르베이트, 폴록사머, 벤질알코올, 항산화제(모노티오글리세롤, 메타중아황산나트륨, 아황산수소나트륨, 피로아황산나트륨, 설파이드, 유기설파이드, 페놀, 유기산, 아스코르빈산, 토코페롤 등), 및 킬레이트제(에틸렌디아민테트라아세트산) 중 1종 이상이 선택될 수 있으며, 우레아 및 아황산수소나트륨 중 1종 이상을 포함하는 것이 가장 적합할 수 있다. 또한, 상기 안정화제는 제형에 따라, 단독 또는 한 가지 이상의 부형제를 더 포함할 수 있다.

본 발명에 사용 가능한 부형제로는 이에 한정하는 것은 아니나, 식물성 오일(면실유, 대두유 등), 동물 오일 및 합성 오일, 쇄 길이 C₁₂-C₁₈의 중쇄트리글리세리드, 카프릴릭/카프릭 트리글리세라이드, 또는 프로필렌 글리콜 또는 디카프릴레이트/디카프레이트 등이 포함될 수 있다.

상기 안정화제는 이에 한정하는 것은 아니나, 전체 중량에 대하여, 0.0001 내지 20 중량부가 적합할 수 있고, 0.001 내지 15 중량부가 더 적합할 수 있고, 0.01 내지 10 중량부가 가장 적합할 수 있다.

공용매

상기 면역 증강용 조성물은 물 또는 수혼화성 물질을 용매로 더 포함할 수 있다. 일 예로, 이에 한정하는 것은 아니나, 프로필렌 글리콜, 폴리에틸렌 글리콜, 글리세롤, 알콜, N-메틸피롤리돈, 2-피롤리돈, 글리코푸롤, 글리세롤포르말 또는 1,2-이소프로필리덴-글리세롤일 수 있다. 상기 용매는 단독 또는 혼합하여 사용 될 수 있고, 용매로서, 수혼화성 물질 외에도 에멀젼 형태의 오일을 포함될 수 있다.

상기 공용매의 함량은 이에 한정하는 것은 아니나, 전체 중량에 대하여, 90 중량부 이하가 적합할 수 있고, 88 중량부 이하가 더 적합할 수 있으며, 86 중량부이하가 가장 적합할 수 있다.

상기 공용매에 물을 포함하는 경우, 추가 용매를 더 포함할 수 있다. 상기 공용매의 예로는 이에 한정하는 것은 아니나, 약학적으로 허용되는 것은 알콜(에탄올, 부탄올, 벤질 알콜), 디메틸설폭사이드, 디메틸포름아미드, 디메틸아세트아미드, 또는 디메틸 아세탈 등이 포함될 수 있고, 이 중 에탄올이 더 적합할 수 있다.

방부제

상기 면역 증강용 조성물에 포함되는 방부제로서, 이에 한정되는 것은 아니나, 파라하이드록시벤조산 에스테르(메틸 및 프로필 에스테르), 카복실산(소르브산, 프로피온산, 벤조산), 지방족 알콜(벤질 알콜, 에탄올, 부탄올, 페놀, 크레졸, 클로로부탄올), 암모늄 화합물(벤잘코늄 클로라이드, 또는 벤제토늄 클로라이드)일 수 있다. 상기 방부제는 전체 중량에 대하여 0.001 내지 4 중량부가 적합하고, 0.01 내지 3중량부가 더 적합하고, 0.05 내지 2 중량부가 가장 적합할 수 있다.

등장화제

상기 면역 증강용 조성물에 포함되는 등장화제로서, 이에 한정하는 것은 아니나, 염화나트륨 또는 글루코스를 단독 또는 조합으로 사용할 수 있다. 상기 등장화제의 함량은 이에 한정하는 것은 아니나, 전체 중량부에 대하여, 0.001 내지 4 중량부가 적합 할 수 있고, 0.01 내지 3 중량부가 더 적합할 수 있고, 0.05 내지 2 중량부가 가장 적합할 수 있다.

B. 약학적 조성물

상기 기재된 면역 증강용 조성물을 포함하는 약학적 조성물이 제공될 수 있다. 상기 약학적 조성물은 액상제제로 제형화될 수 있고, 혼합제제(칵테일 제제) 내 항생제가 포함되는 약학적 조성물의 투여는 주사제로서, 복강 또는 근육주사로 투여되거나, 직접 경구 또는 음용수에 혼합하여, 투여될 수 있으며, 본 발명에 기재된 항생제를 단독 또는 혼합하여 사용할 수 있다.

경구투여를 위한 액상 제제로는 현탁제, 내용액제, 유제, 시럽제 등이 해당되는데 흔히 사용되는 단순 희석제인 물 이외에 여러 가지 부형제, 예를 들면 습윤제, 감미제, 방향제, 보존제 등이 포함될 수 있다.

또한, 본 발명의 조성물은 실제 임상 투여 시에 비경구의 여러 가지 제형으로 투여될 수 있으며, 제제화 할 경우에는 보통 사용하는 충진제, 증량제, 결합제, 습윤제, 계면활성제 등의 희석제 또는 부형제를 사용하여 조제될 수 있다.

비 경구 투여를 위한 제제에는 멸균된 수용액, 비수성용제, 현탁제, 유제, 주사제가 포함될 수 있고, 본 발명의 조성물은 투여 경로에 따라 적합한 담체와 함께 제형화될 수 있다.

본 발명에 따른 약학적 조성물은 하나 이상의 완충제(예를 들어, 식염수 또는 PBS), 카보하이트레이트(예를 들어, 글루코스, 만노즈, 슈크로즈 또는 덱스트란), 항산화제, 정균제, 킬레이트화제(예를 들어, EDTA 또는 글루타치온), 아쥬반트(예를 들어, 알루미늄 하이드록사이드), 현탁제, 농후제 및/또는 보존제를 추가로 포함할 수 있다.

또한, 본 발명의 조성물은 포유동물에 투여된 후 활성 성분의 신속하게 제공될 수 있도록 당업계에 공지된 방법을 사용하여 제형화될 수 있다.

본 발명은 약학적 조성물은 연구자, 수의사, 의사 또는 기타 임상에 의해 생각되는 조직계, 동물 또는 인간에서 생물학적 또는 의학적 반응을 유도하는 유효 성분 또는 약학적 조성물의 양, 즉 치료되는 질환 또는 장애의 증상의 완화를 유도하는 양인 치료상 유효량으로 투여할 수 있다. 투여될 최적의 투여량은 당업자에 의해 쉽게 결정될 수 있으며, 질환의 종류, 질환의 중증도, 조성물에 함유된 유효성분의 함량, 제형의 종류, 체중, 건강 상태, 투여시간, 투여 경로 및 조성물의 분비율, 치료기간, 동시 사용되는 약물을 비롯한 다양한 인자에 따라 조절될 수 있다. 본 발명의 약학적 조성물은 개체에 다양한 경로로 투여될 수 있다. 예를 들어 정맥내, 복강내, 근육내, 동맥내, 구강, 심장내, 골수내, 경막내, 경피, 장관, 피하 또는 국소 투여할 수 있으나 이에 제한되지 않는다.

본 발명의 약학적 조성물은 1 내지 10,000mg/kg/일일 수 있고, 1 내지 2000mg/kg/일이 적합할 수 있으며, 하루에 한 번 내지 1회 이상 여러 차례에 나누어 투여할 수도 있다.

본 발명의 약학적 조성물은 이에 한정하는 것은 아니나, 포유류, 조류 또는 어류에 투여될 수 있다. 특히, 상기 약학적 조성물은 조류 및 어류에 적합할 수 있고, 어류에 가장 적합할 수 있다.

또한, 본 발명의 약학적 조성물은 면역력 및 항병력 증진, 급성 질병 및 급성 대사 장애 치료의 보조치료 효과 및 성장 부진 개선을 위하여, 병용하여 사용할 수 있다.

C. 항생제

본 발명의 조성물과 혼합되는 항생제는 일반적으로 용해도가 좋지 않아, 액제, 주사제의 제형이 많다. 그러나, 가금류 또는 어류용 항생제 조성물은 공급의 편의성을 위해 분말제품으로 공급된다. 이러한 항생제를 수성현탁제로 사용하는 경우 수용액내 불안정성으로 인해 보존기간이 짧다. 이에, 보통은 분말 형태로 보관하다가 사용시점에 물에 섞어 투여한다. 물에 투여 시 상기 분말 항생제는 용해성이 높아야 하며, 용해된 현탁액에서 일정 기간 동안 안정성을 유지해야 하는 것을 필수 조건으로 한다.

본 발명에 사용되는 항생제로는 이에 한정하는 것은 아니나, 페니실린계, 세파로스포린계 또는 아미노글리코시드계 등이 적합하며, 일예로, 아목시실린, 암피실린, 페니실린, 스트렙토마이신, 디하이드로스트렙토마이신, 세프티오퍼 및 티아물린에서 1종 이상 선택될 수 있고, 아목시실린, 암피실린 및 세프티오퍼가 더 적합할 수 있다.

아목시실린(amoxicillin), 암피실린(ampicillin), 페니실린(penicillin)은 광범위한 세균감염 치료에 유효한 대표적인 베타-락탐계 항생물질이며, 특히, 아목시실린 및 이의 염은 그람양성균은 물론 그람음성균까지 광범위한 스펙트럼을 보이는 세균감염증치료에 유용한 페니실린계 항생제이다.

스트렙토마이신(streptomycin)은 트렙토미세스 그리세우스(Streptomyces griseus)의 대사물에서 발견된 항생물질로, 페니실린이나 술파제에는 작용하기 어려운 많은 그람 음성균을 비롯하여, 광범위한 병원 미생물에 작용한다. 식물의 세균성 병해 방제에 효과가 있음이 밝혀진 후로 농약에도 사용하며, 과수, 채소의 궤양병, 세균성 구멍병, 무름병, 역병 등의 방제용으로도 사용되고 있다. 항생물질로서 사람에 대한 독성 및 어류에 미치는 독성도 낮다.

디하이드로스트렙토마이신(dihydrostreptomycin)은 결핵 기타 세균 감염증 치료에 사용되며, 제8뇌신경(청신경)에 대한 장해 작용은 스트렙토마이신보다 강하나, 평형장해 작용은 매우 미미하여, 임상적으로 스트렙토마이신보다 널리 사용된다.

세프티오퍼(Ceftiofur)는 세파로스포린(Cephalosporin)계열의 항생제로서, 소 호흡기 질병의 치료 목적으로 1988년 미국 식품의약품 안전국에서 정식으로 허가 되어 사용하고 있다. 이후, 세프티오퍼 하이드로클로라이드 성분, 목화씨 오일에 세프티오퍼 크리스탈린을 결합한 새로운 세프티오퍼제제 등이 허가되었다. 현재에는 소, 양, 염소 등의 육류에 사용된다.

티아물린(tiamulin)은 돼지의 적리 및 마이코플라즈마성 관절염과 폐렴의 치료에 이용되는 항생제로서, 현재에는 돼지의 세균성 설사병에 대해서도 이용되는 것으로 알려져 있다.

상기 기재된 항생제를 수성현탁제로 사용하는 경우 수용액내 불안정성으로 인해 보존기간이 짧고, 분말 형태로 보관하다가 사용시점에 물에 섞어 투여하는 경우, 용해도가 낮아 사용에 불편할 수 있다.

반면, 본 발명의 조성물을 이용하면, 항생제의 용해도가 개선되어, 소량의 항생제로도 충분한 효과를 나타낼 수 있고, 이에 따라 항생제 용해도에 따른 부작용 문제도 예방할 수 있다.

본 발명에 따른 면역 증강용 조성물을 이용하여 포함될 수 있는 항생제 용해도는 이에 한정하는 것은 아니나, 30mg/ml - 100mg/ml일 수 있고, 40mg/ml - 100mg/ml가 더 적합할 수 있고, 50mg/ml - 100mg/ml가 가장 적합할 수 있다. 상기 함량 범위 내에서, 투여된 동물의 급성 독성을 나타내지 않고, 대사 촉진 및 면역 증강 효과를 나타낼 수 있다.

D. 면역 증강 방법

본 발명에 따른 면역 증강용 조성물을 투여하는 단계를 포함하면, 투여 동물에 활력 증진, 항병력 증진, 급성 질병 및 급성 대사 장애 치료, 성장 촉진, 증체개선, 성장 부진 개선, 폐사율 감소 및 스트레스를 감소시킬 수 있는 면역 증강 방법이 제공된다.

이하, 본 발명의 이해를 돕기 위하여 바람직한 실시예를 제시한다. 그러나 하기의 실시예는 본 발명을 보다 쉽게 이해하기 위하여 제공되는 것일 뿐 본 발명이 하기의 실시예에 의해 한정되는 것은 아니다.

실시예

면역 증강용 조성물의 제조

포스폰산 및 이의 유도체, 에탄올, 우레아, 산, 염기성염 및 비타민 B₁₂를 주사용수에 용해시켜, 하기 표 1의 조성대로 최종 100ml의 조성물을 제조하였다. 상기 제조된 조성물의 pH는 4.5 내지 6으로 상기 기재된 염기성염 또는 산을 첨가하여 용액의 pH를 조정하였으며 용액 제조 후 여과를 통해 질소 가스를 도입하였다.

상기 제조된 샘플들에 항생제를 혼합한 후 용해도 확인실험 및 비타민 B₁₂의 장기안정성 실험을 진행하였다. 투여 동물에서의 면역증강 효과 및 수온 변화에 따른 스트레스의 강도를 측정하는 실험을 진행하였다. 상기 구성의 투입량은 중량%(w/v)로 나타내었으며, 조성은 표 1에 나타내었다.

	부타포스판	비타민B12	에탄올	산	염기	항생제 혼합 (아목시실린)
실시예1	10	0.005	5	구연산	수산화나트륨	-
실시예2	10	0.005	5	타르타르산	수산화나트륨	-
실시예3	10	0.005	5	프로피온산	수산화나트륨	-
실시예4	10	0.005	5	글로코노락톤	수산화나트륨	-
실시예5	10	0.005	5	구연산	탄산나트륨	-
실시예6	10	0.005	5	타르타르산	탄산나트륨	-
실시예7	10	0.005	5	프로피온산	탄산나트륨	-
실시예8	10	0.005	5	글로코노락톤	탄산나트륨	○
실시예9	10	0.005	10	구연산	수산화나트륨	-
실시예10	10	0.005	10	타르타르산	수산화나트륨	-
실시예11	10	0.005	10	프로피온산	수산화나트륨	-
실시예12	10	0.005	10	글로코노락톤	수산화나트륨	-
실시예13	10	0.005	10	구연산	탄산나트륨	-
실시예14	10	0.005	10	타르타르산	탄산나트륨	-
실시예15	10	0.005	10	프로피온산	탄산나트륨	-
실시예16	10	0.005	10	글로코노락톤	탄산나트륨	○
실시예17	15	0.0075	5	글로코노락톤	수산화나트륨	-
실시예18	15	0.0075	10	글로코노락톤	수산화나트륨	-
실시예19	15	0.0075	5	글로코노락톤	탄산나트륨	-
실시예20	15	0.0075	10	글로코노락톤	탄산나트륨	○
실시예21	10	0.005	5	글로코노락톤	탄산나트륨	Ｘ
실시예23	10	0.005	14	글로코노락톤	탄산나트륨	○
실시예24	10	0.005	14	무	수산화나트륨	○
실시예25	10	0.005	14	무	탄산나트륨	○
실시예26	10	0.005	14	무	인산염	○
비교예1	10	0.005	0	글로코노락톤	탄산나트륨	○
비교예2	0	0	0	무	무	○
비교예3	10	0.005	0	무	수산화나트륨	○
비교예4	10	0.005	(부탄올) 4	무	수산화나트륨	-

실험예

1. 항생제 용해도

본 발명에 따라 면역 증강 조성물을 제조한 후 항생제와 혼합하여, 항생제의 용해도를 확인하였다. 결과는 표 2에 나타내었다. 표 2에는 에탄올을 사용한 결과가 부탄올을 사용하였을 경우와 대비하여, 용해도의 차이가 나타남을 보였고, 산으로서 글루코노락톤을 사용한 경우가 사용하지 않은 경우보다 용해도가 개선되었고, 염기로서, 탄산나트륨을 사용한 경우가, 인산염을 사용한 경우보다 더 높은 용해도를 나타내었다.

또한, 도 1을 참조하면, 에탄올을 사용한 경우, 용해도가 크게 향상된 것을 확인하였다. 아목시실린의 함량은 2g/10ml을 사용하였다.

	조성(%)					성상_ 아목시실린 혼합
	부타포스판	비타민B12	에탄올	산	염기
실시예8	10	0.005	5	글로코노락톤	탄산나트륨	투명용해
실시예16	10	0.005	10	글로코노락톤	탄산나트륨	투명용해
실시예20	15	0.0075	10	글로코노락톤	탄산나트륨	투명용해
비교예1	10	0.005	0	글로코노락톤	탄산나트륨	투명용해
비교예3	10	0.005	0	무	수산화나트륨	용해안됨, 침전
비교예4	10	0.005	(부탄올) 4	무	수산화나트륨	-
실시예24	10	0.005	14	무	수산화나트륨	투명용해
실시예25	10	0.005	14	무	탄산나트륨	투명용해
실시예26	10	0.005	14	무	인산염	용해, 침전
실시예23	10	0.005	14	글로코노락톤	탄산나트륨	투명용해

항생제의 최대 농도는 본 발명에 따른 조성물을 사용한 경우, 최소 50mg/ml 이상을 나타내어, 용해도를 획기적으로 개선한 것으로 나타났다.

2. 비타민 B ₁₂ 의 장기간 안정성

실시예로 만든 샘플을 30±2℃, 65±5% 조건에서 장기안정성 시험을 하였고, 다른 제제에 비해 비타민 B₁₂의 안정성이 향상된 것으로 나타났다. 결과를 표 3에 나타내었다.

도 2를 참조하면, 비교예 1, 3, 및 4와 비교하여, 실시예 8, 16, 20, 23 내지 26의 경우, 24개월이 지난 이후에도 안정성이 유지되는 것으로 나타났으며, 특히 실시예 23의 경우, 24개월이 지난 후에도 효과를 나타낼 수 있는 유의미한 농도로, 비타민B₁₂ 의 안정성이 나타나는 것으로 확인되었다.

3. 투여 동물에서의 면역증강

본 발명에 따른 조성물의 면역증강 효과를 확인하기 위하여, 상기 표 1의 조성대로 제조된 실시예 8, 실시예 21 및 비교예 2의 조성물을 어체중 kg당 본제 0.5ml를 근육 주사하였다(표 4 참조). 별도의 주사가 없는 어류를 대조군으로 이용하였다. 실험에 사용한 어류는 미부혈관을 통해 혈액을 채취하고 헤파린 처리된 튜브 및 미 첨가된 튜브에 담아 면역 활성과 관련된 지표를 측정하여 면역 증강 효과를 확인하였다. 조사된 항목은 리소자임(lysozyme), NBT(Nitroblue tetrazolium), MPO(myeloperoxidase), Tig(totoal immunoglobulin) SOD(superoxide dismutase) 활성을 측정하고 그 결과를 하기 표 5 및 표 6에 나타내었다. 본 실험의 결과는 근육주사 후 1주, 2주차의 면역학적 변화를 관찰하였으며, 각각의 대조군과 비교하여 통계적으로 유의미한 차이를 보이는 값 (*P<0.05)을 별도로 표기하였다.

	부타포스판	비타민B12	에탄올	산	염기	항생제
대조구	-	-	-	-	-	-
비교예2	-	-	-	-	-	아목시실린
실시예21	10	0.005	5	글로코노락톤	탄산나트륨	-
실시예8	10	0.005	5	글로코노락톤	탄산나트륨	아목시실린

표 5 및 표 6을 참조하면, 본 발명의 조성물에서 어류에게 근육주사로 주입할 경우 대조군에 비해 실시예 8 및 실시예 21에서 면역지표 값이 증가한 것을 확인할 수 있다. 이를 통하여, 본 발명의 조성물이 어류에서 우수한 면역력 증강 효과를 보이는 것을 확인하였다.

동물	구분	면역지표 (1주차)
		Lysozyme (unit/ml)	NBT (540nm)	MPO (450nm)	Tig (mg/ml)	SOD (%,inhibition)
어류	대조군	16 ±1	0.879 ±0.013	1.64 ±0.28	21.2 ±2.26	49.09 ±7.46
	비교예2	17 ± 0.3	0.890 ±0.013	1.6 ±0.47	19.3 ±1.28	50.7 ±2.31
	실시예 21	18.3 ±4.04	0.885 ±0.008	1.73 ±0.32*	21.3 ±0.66	53.02 ±0.73*
	실시예 8	21.3 ±3.5*	0.892 ±0.02	1.93 ±0.11*	23.4 ±0.5*	55.1 ±0.82*

동물	구분	면역지표 (2주차)
		Lysozyme (unit/ml)	NBT (540nm)	MPO (450nm)	Tig (mg/ml)	SOD (%,inhibition)
어류	대조군	22.3 ±3.78	0.931 ±0.002	1.81 ±0.11	25.67 ±2.64	51.2 ±3.52
	비교예2	24 ± 0.9	0.893 ±0.32	1.95 ±0.2	26.1 ±2.43	55.6 ±1.98*
	실시예 21	25 ±4.58*	0.951 ±0.007*	2.01 ±0.09*	27.61 ±1.93*	56.1 ±5.32*
	실시예 8	25.3 ±2.5*	0.99 ±0.05*	2.32 ±0.32*	27.7 ±1.7*	57.4 ±2.9*

4. 수온에 따른 스트레스 개선

본 발명에 따른 조성물의 수온 변화에 따른 스트레스 개선 여부를 확인하기 위하여, 상기 표 1의 조성대로 제조한 후 실시예 8, 실시예 21 및 비교예 2의 조성물을 어체중 kg당 본제 0.5ml의 농도로 근육 주사하였다. 별도의 주사가 없는 어류를 대조군으로 이용하였으며, 수온은 시간당 5 - 6℃ 낮추어 스트레스를 준 뒤 1일 및 7일째 코르티솔(cortisol)의 변화를 측정하고 그 결과를 표 7에 나타내었다. 또한, 각각의 대조군과 비교하여 통계적으로 유의미한 차이를 보이는 값 (*P<0.05)을 별도로 표기하였다.

표 7을 참조하면, 본 발명에 따른 조성물을 어류에게 근육주사로 주입할 경우 대조군에 비해 실시예 8 및 실시예 21에서 수온변화에 따른 스트레스가 감소하는 것을 확인할 수 있었다. 이를 통하여, 본 발명의 조성물이 어류의 스트레스 개선에 도움이 되는 것을 확인할 수 있었다.

Cortisol (ng/dL)
	수온 변화
	대조군	비교예2	실시예21	실시예8
1 day	28.8 ±1.98	27.7 ±3.42	22.1 ±2.65*	23.1 ±0.24*
7 days	35.12 ±0.55	31.8 ±2.7	20.4 ±0.51*	20.2 ±0.03*

이상, 본 발명의 일 실시예에 대하여 설명하였으나, 해당 기술 분야에서 통상의 지식을 가진 자라면, 특허청구범위에 기재된 본 발명의 사상으로부터 벗어나지 않는 범위 내에서, 구성 요소의 부가, 변경, 삭제 또는 추가 등에 의해 본 발명을 다양하게 수정 및 변경시킬 수 있을 것이며, 이 또한 본 발명의 권리 범위 내에 포함된다고 할 것이다.

Claims (14)

1. 부타포스폰산;
   에탄올;
   비타민 B₁₂;
   글루코노락톤산;
   탄산나트륨;
   우레아; 및
   항생제를 포함하고,
   상기 항생제는 아목시실린인, 면역 증강용 조성물.
2. 삭제
3. 제1항에 있어서,
   상기 에탄올은 조성물 전체 중량에 대해 10 - 15 중량부인, 면역 증강용 조성물.
4. 삭제
5. 삭제
6. 삭제
7. 삭제
8. 제1항에 있어서,
   상기 면역 증강용 조성물의 pH는 4 내지 8인, 면역 증강용 조성물.
9. 삭제
10. 제1항, 제3항, 및 제8항 중 어느 한 항에 기재된 면역 증강용 조성물을 포함하는, 약학적 조성물.
11. 제10항에 있어서,
    상기 약학적 조성물은 경구투여제 또는 주사용제인, 약학적 조성물.
12. 제10항에 있어서,
    상기 약학적 조성물은 포유류, 조류, 또는 어류에 투여되는, 약학적 조성물.
13. 제1항, 제3항, 및 제8항 중 어느 한 항에 기재된 면역 증강용 조성물과 항생제를 혼합하여 항생제의 용해도를 향상시키는 단계를 포함하는 항생제의 용해도 향상 방법.
14. 제1항, 제3항, 및 제8항 중 어느 한 항에 기재된 면역 증강용 조성물을 사람을 제외한 포유류, 조류 또는 어류에 투여하는 단계를 포함하는, 면역 증강 방법.

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