KR101879625B1

KR101879625B1 - 만수국아재비 추출물을 함유하는 아토피 피부염 개선용 화장료 조성물

Info

Publication number: KR101879625B1
Application number: KR1020180014895A
Authority: KR
Inventors: 오좌섭; 최춘환; 홍성수; 안은경; 이재연
Original assignee: 재단법인 경기도경제과학진흥원
Priority date: 2018-02-07
Filing date: 2018-02-07
Publication date: 2018-08-16
Also published as: KR20180018625A

Abstract

본 발명은 아토피 피부염 개선용 화장료 조성물에 관한 것으로, 만수국아재비 추출물을 유효성분으로 함유하는 것을 특징으로 한다.
본 발명에 의한 아토피 피부염 개선용 화장료 조성물은 만수국아재비 추출물을 유효성분으로 함유함으로써, 항알러지, 항산화, 항염증 효과를 나타내어 아토피 피부염을 개선하는 효과를 나타낸다.

Description

만수국아재비 추출물을 함유하는 아토피 피부염 개선용 화장료 조성물{Cosmetic Composition for Improving Atopic Dermatitis Comprising Extract of Tagetes Minuta}

본 발명은 만수국아재비 추출물을 함유하는 아토피 피부염 개선용 화장료 조성물에 관한 것이다.

아토피는 유아기에 주로 발생하여 태열이라고도 하며, 주로 각질층 내의 세라마이드(ceramides)의 함량이 감소됨에 따라 발생한다.

아토피 피부염은 그 원인이 아직까지 명확히 규명되어 있지 않지만, 면역 체계의 교란에 의하여 발생하는 것으로 추정되고 있다.

일반적으로, 아토피 피부염은 각질층의 수분 유지 기능이 떨어짐에 따라 건조하며, 피부 장벽 기능이 저하됨에 따라 피부 알러지 등이 용이하게 발생하여 소양감이 심하고, 반복적으로 재발되며, 각종 자극에 의해 쉽게 피부염이 유발된다.

많은 경우에 1 내지 2주 간격으로 반복적으로 악화되며 적절한 관리를 하지 않으면 삼출을 동반한 홍반성 발진의 아급성 병변, 가죽과 같이 두꺼워진 태선화의 만성 병변으로 진행된다.

아토피 피부의 발생 원인은 크게 두 가지로 구분되는데, 하나는 유전적 원인에 의한 것으로서, 피부 보호막인 세포간 결합물질인 감마-리놀레인산(γ-linoleic acid; GLA)이 선천적으로 부족하여 피부 보호막이 약하고 피부 표면의 수분이 쉽게 소실됨으로써 발생하게 된다. 다른 원인은 환경적 원인으로서 건조한 생활환경, 활성 산소, 세균, 바이러스, 곰팡이 등에 의하여 발생한다[피부과학, 대한피부과학회 간행위원회, 여문각, 1992].

아토피 피부염에 의해 비만세포는 세포 내 과립에서 히스타민과 같은 알레르기 반응 유도 물질이 방출되어 탈과립 상태를 나타낸다[Gao ZG, et al., Biochem Pharmacol. 2009. Nov 5]. 또한, 아토피 피부염은 알러지성 비염, 천식 등을 동반한다는 점에서 알러지성 질환일 가능성이 높은 것으로 보고되고 있다[de Meer G, et al., Pediatr Allergy Immunol. 2009. Nov 13].

아토피 피부염 개선을 위한 다양한 천연물을 주성분으로 하는 조성물이 개시되고 있는데, 대한민국 등록특허공보 10-1418916호에서는 톳 추출물 또는 그로부터 크로마토그래피로 분리한 활성분획을 유효성분으로 함유하는 아토피 피부염 개선용 조성물이 개시되어 있고, 대한민국 등록특허공보 10-1382115호에서는 인삼열매 추출물을 유효성분으로 하여 아토피 피부염 또는 건조증을 개선하는 식품 조성물이 개시되어 있으며, 대한민국 등록특허공보 10-1083347호에서는 이끼 추출물을 유효성분으로 함유하는 아토피 피부염 개선 또는 치료용 약학적 조성물이 개시되어 있다.

한편, 만수국아재비(Tagetes minuta)는 쓰레기풀이라 불리는 국화과의 한해살이 식물로서 야생에 널리 분포하는 식물이다.

우리나라에서는 만수국아재비를 주로 관상용으로 이용할 목적으로 일부 재배하고 있으나, 외국에서는 오래 전부터 관상용 이외에도 향료, 색소 및 약용 자원으로 이용하고 있다. 근래에는 남미 지역이나 인도, 남부 유럽 지역에서 상업적으로 재배되고 있다.

만수국아재비의 약용 자원으로서의 이용을 살펴보면, 용매 추출물이나 정유를 전통적인 민간처방으로서 사용하고 있는데, 예를 들어, 인도, 유럽, 남미, 및 미국의 남부 지역에서는 민간 처방으로 만수국아재비의 침출액(infusion)을 간 장해, 장내 질환, 설사, 복통, 두통, 폐렴, 기침, 곰팡이성 피부질환의 치료를 목적으로 이용되고 있을 뿐만 아니라 항경련, 항염증, 항균, 항미생물 효과도 있음이 밝혀져 있다[Radzen et al., Parfmer und Kosmetik, 67, 52-55(1986); Zygadlo et al., Lag. J. Essent. Oil Res., 6, 617-621(1994); Singh et al., Indian Perfumer, 39, 102-106(1995); Bicchi et al., Flavour Fragr. J., 12, 47-52(1997)].

이러한 만수국아재비를 활용한 예를 살펴보면, 대한민국 등록특허공보 10-0979059호에서 천연 염색을 위한 염료의 원료로 사용되고 있을 뿐이다. 즉, 만수국아재비를 원료로 하여 아토피 피부염 개선을 위한 조성물로 사용한 예는 아직 보고되지 않고 있다.

본 발명자들은 천연물인 만수국아재비의 추출물을 유효성분으로 사용할 때 아토피 피부염 개선을 위해 효능이 있음을 확인하고 이를 함유하는 조성물을 연구하여 본 발명을 완성하게 되었다.

대한민국 등록특허공보 10-1418916호 대한민국 등록특허공보 10-1382115호 대한민국 등록특허공보 10-1083347호 대한민국 등록특허공보 10-0979059호

본 발명은 만수국아재비 추출물을 유효성분으로 함유함으로써 아토피 피부염 개선의 효과를 얻는 것을 그 목적으로 한다.

상기와 같은 목적을 달성하기 위한 본 발명의 아토피 피부염 개선용 화장료 조성물은 만수국아재비 추출물을 유효성분으로 함유하는 것을 특징으로 한다.

이때, 상기 만수국아재비 추출물은 만수국아재비를 C1~C4 알코올 또는 물과 C1~C4 알코올의 혼합물 중에 첨가하여 추출하여 얻어진 추출물일 수 있으며, 바람직하게는 메탄올에 첨가하여 추출하여 얻어진 추출물일 수 있다.

본 발명의 아토피 피부염 개선용 화장료 조성물은 상기 만수국아재비 추출물을 화장료 조성물 전체 중량에 대하여 0.001 내지 97 중량%, 바람직하게는 0.01 내지 20 중량%의 범위로 함유하는 것을 특징으로 한다.

상기와 같이 제시된 본 발명에 의한 아토피 피부염 개선용 화장료 조성물은 만수국아재비 추출물을 유효성분으로 함유함으로써, 항알러지, 항산화, 항염증 효과를 나타내어 아토피 피부염을 개선하는 효과를 나타낸다.

도 1은 본 발명의 만수국아재비 추출물의 농도에 따른 β-헥소사미니다제 분비량 억제에 대한 분석 결과를 나타낸 그래프이다.
도 2는 본 발명의 만수국아재비 추출물의 농도에 따른 ABTS 라디칼 소거능의 분석 결과를 나타낸 그래프이다.
도 3은 본 발명의 만수국아재비 추출물의 농도에 따른 DPPH 라디칼 소거능의 분석 결과를 나타낸 그래프이다.
도 4는 본 발명의 만수국아재비 추출물의 농도에 따른 NO 생성 억제능의 분석 결과를 나타낸 그래프이다.
도 5는 본 발명의 만수국아재비 추출물의 농도에 따라 양성 대조군에 대한 상대 함량을 나타낸 그래프이다.

본 명세서에서, "아토피 피부염"은 그 발생의 직·간접적인 원인을 불문하고 당업계에서 아토피 피부염으로 분류되는 모든 질환을 포함하는 것으로 정의된다.

통상 아토피 피부염은 그 발병 시기 또는 그 발명 대상에 따라 유아형 아토피 피부염, 소아형 아토피 피부염, 성인형 아토피 피부염 그리고 임산부 아토피 피부염으로 분류되는데, 본 명세서에서 아토피 피부염은 이러한 모든 유형의 아토피 피부염을 포함하는 것으로서 이해되어야 한다.

본 발명의 하기 실험예에서 확인할 수 있듯이 무작위로 선출된 아토피 피부염 증상을 갖는 100명(총 4 그룹)의 피검자들을 대상으로 임상실험을 실시한 결과, 약 85 내지 95% 전후의 피검자에 대해서 효과가 있는 것으로 나타났다.

이러한 결과는 무작위로 선출된 피검자들을 대상으로 하여 얻어진 결과라는 점에서, 본 발명의 아토피 피부염 개선제 조성물은 아토피 피부염의 발생 원인을 불문하고 모든 유형의 아토피 피부염에 그 효과가 있는 것으로 볼 수 있다.

본 발명에서 사용되는 용어 "개선"은 본 발명의 조성물의 투여로 아토피 피부염의 증상이 호전 또는 이롭게 변경되는 모든 행위를 의미한다.

이하, 본 발명을 상세히 설명한다.

본 발명은 만수국아재비 추출물을 유효성분으로 함유하는 것을 특징으로 한다.

상기 만수국아재비 추출물은 건조된 만수국아재비에 C1~C4 알코올 또는 물과 C1~C4 알코올의 혼합물 중에 첨가하여 추출하여 얻어진 추출물일 수 있다. 상기 C1~C4 알코올은 메탄올, 에탄올, 프로판올, 이소프로판올, 부탄올 중 어느 하나 또는 그 이상의 혼합물일 수 있다. 상기 알코올은 물과 혼합한 혼합용매로서 사용할 수도 있다.

본 발명에서 바람직한 일 실시예에서는 상기 추출에 메탄올을 사용한다.

구체적으로 설명하면, 상기 만수국아재비 추출물은 작두를 사용하여 2~3cm로 절단하여 사용한다. 만수국아재비의 절단물을 30~50℃의 온도에서 2~4일간 건조시킨 후, 400~600g의 건중량에 75~85 중량% 메탄올을 넣고 초음파 기기를 이용하여 추출하고 여과하여 제조한다.

본 발명의 만수국아재비 추출물은 피부 주름 개선용 화장료 조성물의 유효성분으로 사용되며, 이때 상기 만수국아재비 추출물은 조성물 중량에 대하여 0.001 내지 97 중량%의 범위로 함유될 수 있으며, 바람직하게는 0.01 내지 20 중량%의 범위로 함유될 수 있으나, 이에 제한되지는 않는다.

화장료 조성물의 경우, 상기 만수국아재비 추출물을 유효성분으로 하여, 그 용도에 따라, 예를 들면, 용액, 겔, 고체 또는 반죽 무수 생성물, 수상에 유상을 분산시켜 얻은 에멀젼, 현탁액, 마이크로에멀젼, 마이크로캡슐, 미세과립구 또는 이온형(리포좀), 비이온형의 소낭 분산제의 형태, 크림, 스킨, 로션, 파우더, 연고, 스프레이 또는 콘실 스틱의 형태로 제공될 수 있다. 또한, 포말(foam)의 형태 또는 압축된 추진제를 더 함유한 에어로졸 조성물의 형태로도 제조될 수 있다.

상기 화장료 조성물은 본 발명의 만수국아재비 추출물에 추가로 지방 물질, 유기 용매, 용해제, 농축제 및 겔화제, 연화제, 항산화제, 현탁화제, 안정화제, 발포제(foaming agent), 방향제, 계면활성제, 물, 이온형 또는 비이온형 유화제, 충전제, 금속이온봉쇄제 및 킬레이트화제, 보존제, 비타민, 차단제, 습윤화제, 필수 오일, 염료, 안료, 친수성 또는 친유성 활성제, 지질 소낭 또는 화장품에 통상적으로 사용되는 임의의 다른 성분과 같은 화장품 분야에서 통상적으로 사용되는 보조제를 함유할 수 있다.

이하, 본 발명을 실시예, 실험예에 의하여 상세히 설명한다.

단, 하기 실시예, 실험예는 본 발명을 구체적으로 예시하는 것일 뿐, 본 발명의 내용이 실시예, 실험예에 의해 한정되는 것은 아니다.

<실시예>

*만수국아재비 추출물은 아래와 같이 제조되었다.

사용한 모든 용매들은 분석용 등급으로써, Sigma-Aldrich(미국)나 Merck(미국)에서 구입하였다.

만수국아재비의 전초를 작두를 이용하여 2.54㎝ 정도로 고르게 자른 후, 건조 오븐에서 40℃로 3일간 건조시켰다. 약 500g의 식물 건중량으로 한 전초를 80 중량% 메탄올에서 초음파 기기를 이용하여 추출하였으며, 이들 액체를 멤브레인 필터(0.2 ㎛)에 통과시켜 여과한 후, 진공상태에서 용매를 제거하여 메탄올 추출물을 남겼다. 이러한 과정을 통하여, 만수국아재비의 구성성분 중 섬유소 등은 정제 과정을 통해 걸러지고, 만수국아재비 추출물은 만수국아재비의 미량성분을 주로 포함하는 메탄올 추출물이 되었다.

<실험예 1> 항알러지 유효성 평가

항알러지 유효성은 β-헥소사미니다제 양을 측정하여 평가하였다. 상기 β-헥소사미니다제 분비 양의 억제는 면역세포의 탈과립화 방지 정도를 나타내는 지표로서 분석 결과를 도 1에 도시하였다.

실험은 다음과 같이 수행되었다.

먼저, Rat basophlic leukemia 셀 라인인 RBL-2H3 세포주를 15% FBS, 100 unit/ml의 페니실린과 스트렙토마이신을 포함하는 MEM 배지와 37℃, 5% CO₂ 조건에서 24 well plate에 2ㅧ10⁵cells/well로 분주한 후 24시간 배양하였다. 상등액 제거 후 25 ng/ml anti-DNP IgE가 포함된 MEM 배지를 넣고 4시간 배양 후 PIPES buffer로 두 번 세척하고, 4 mM MgCl₂, 5.6 mM glucose, 0.1% BSA를 포함시킨 PIPES buffer를 넣고 10분 배양하였다.

다음으로, 시료를 25, 50, 100 ㎍/㎖의 농도로 20분 처리 후 50 ng/㎖ DNP-BSA 넣고 20분간 반응하였다. ice에서 10분 방치하여 반응을 종결시킨 후 상등액을 96 well plate에 넣고 1mM P-니트로페닐-아세틸-β-D-글루코사미니드를 넣은 후 37℃에서 1시간 반응시켰다. 다음으로, stop solution (0.1 M NaHCO₃, 0.1 M Na₂CO₃) 을 넣고 반응을 종결시킨 후 405nm 파장대에서 ELISA 리더로 흡광도를 측정하였다. 양성 대조군으로는 ketotifen(100 ㎍/ml)을 사용하였다.

측정에 따른 50% 저해농도(IC₅₀)를 표 1에 나타내었다.

	IC₅₀(㎍/㎖)
만수국아재비 추출물	92.79
Ketotifen	38.97

세포독성 평가 결과 본 발명의 만수국아재비 추출물에 있어서 양성 대조군에 비해 훨씬 높은 세포 생존률을 나타내어 세포독성이 적은 것을 확인하였다.

또한, 도 1의 결과를 살펴보면, 본 발명의 만수국아재비 추출물의 농도에 따라 탈과립화 억제 효과가 나타나는 것을 확인할 수 있었다. 이러한 결과는 본 발명의 만수국아재비 추출물의 항알러지 효과를 나타내는 것이며, 화장료 조성물로 사용할 때의 아토피 피부염 개선의 효과를 기대할 수 있는 결과이다.

<실험예 2> 항산화 유효성 평가

항산화 유효성은 ABTS 라티칼 소거능과 DPPH 라디칼 소거능을 측정하여 평가하였다.

ABTS 라디칼 소거능은 아래와 같이 평가하였으며, 그 결과는 도 2에 도시하였다.

7 mM ABTS buffer와 2.45 mM potassium persulfate buffer(K₂S₂O₈)를 제조한 후 ABTS: K₂S₂O₈을 2:1의 부피비로 섞은 후 12~16시간 차광하여 반응시켰다. 다음으로, stock buffer를 734nm에서 측정한 O.D. 값이 0.70ㅁ0.02가 나오도록 희석하고 buffer 100㎕ 농도별로 희석한 추출물 시료 100㎕를 첨가하고 실온에서 6분간 반응시켰다. 734nm에서 흡광도를 측정하여 각각의 시료에 대한 IC₅₀ 값을 구해 평가하였다. 양성대조군으로 항산화제인 BHA를 사용하였다.

측정에 따른 50% 저해농도(IC₅₀)를 표 2에 나타내었다.

	IC₅₀(㎍/㎖)
만수국아재비 추출물	28.14
BHA	3.37

또한, 도 2의 결과를 살펴보면, 본 발명의 만수국아재비 추출물의 농도에 따라 ABTS 라디칼 소거능이 증가하는 경향을 확인할 수 있었다.

다음으로, DPPH 라디칼 소거능을 확인하기 위하여, DPPH 용액과 시료를 넣은 반응액을 30분 동안 상온에서 반응시킨 후 ELISA reader를 이용하여 517 nm에서 흡광도를 측정하였으며, 그 결과는 도 3에 도시하였다.

또한, 측정에 따른 50% 저해농도(IC₅₀)를 표 3에 나타내었다.

	IC₅₀(㎍/㎖)
만수국아재비 추출물	222.3
BHA	19.1

또한, 도 3의 결과를 살펴보면, 본 발명의 만수국아재비 추출물의 농도에 따라 DPPH 라디칼 소거능이 증가하는 경향을 확인할 수 있었다.

이러한 ABTS 및 DPPH 라디칼 소거능에 대한 결과는 본 발명의 만수국아재비 추출물의 항알러지 효과를 나타내는 것이며, 화장료 조성물로 사용할 때의 아토피 피부염 개선의 효과를 기대할 수 있는 결과이다.

<실험예 3> 항염증 유효성 평가

항염증 유효성은 Raw264.7 cell의 NO synthesis 유도하고, 이로부터 NO assay를 분석하여 항염증 효능을 평가하였으며, MTT assay를 분석하여 세포 독성을 평가하였다.

항염증 유효성을 평가하기 위한 Raw264.7 cell의 NO synthesis는 아래와 같이 수행되었다.

마우스 대식세포인 raw264.7 cell을 10% FBS DMEM 배지를 넣고 37℃, 5% CO₂의 조건에서 배양하였다. Raw264.7 대식세포를 96 well plate에 4.3ㅧ104 cells/well의 세포 수로 분주하고 24시간 후 내독소로 작용하여 NO synthesis mitogen으로 쓰이는 Lipopolysacharide를 0.5 ㎍/㎖농도로 처리하였다.

다음으로 37℃, 5% CO₂의 조건에서 1시간 30분 인큐베이션한 후 시료를 6.25, 12.5, 25, 50, 100, 500 ㎍/㎖의 농도 또는 25, 50, 100, 200, 400 ㎍/㎖의 농도까지 처리하고, 24시간 인큐베이션하였다.

다음으로 항염증 효능평가를 위하여 아래와 같이 NO assay를 분석하였다.

1M NaNO₂를 표준곡선으로 0, 1.56 μM, 3.12 μM, 6.25 μM, 12.5 μM, 25 μM, 50 μM, 100 μM이 되도록 희석하여 기준값을 잡았다(Reference 1). 다음으로, 1% sulfanilamide와 0.1% N-(1-naphtyl)ethylenediamine dihydrochloride 시약을 1:1의 부피비로 섞고, 혼합시약과 Raw264.7 cell의 NO synthesis 유도 실험의 시료 처리 후 24시간 배양된 배지상등액을 1:1의 부피비로 각각 50 ㎕씩 섞어주고 10분간 상온에 보관한 후 540 nm에서 ELISA 측정하여 대조군 대비 NO생성 억제능을 측정하였다.

다음으로 세포독성평가를 위하여 아래와 같이 MTT assay를 분석하였다.

NO assay 분석 실험에 사용된 상층액을 제외한 나머지 상층액을 제거하고 5 ㎎/㎖ MTT solution이 10% 포함된 serum-free 배지를 100 ㎕씩 넣었다. 37℃, 5% CO₂ 인큐베이터에 넣어 2시간 보관하였다. 다시 배지를 제거하고 DMSO를 100 ㎕/well로 넣었다. 마지막으로 Shaker에서 15 분간 용해시키고, ELISA reader를 이용해 540 nm에서 흡광도를 측정하였다. 양성 대조군은 L-NNMA를 사용하였다.

측정에 따른 50% 저해농도(IC₅₀)를 표 4에 나타내었다.

	IC₅₀(㎍/㎖)
만수국아재비 추출물	222.3
L-NNMA	19.1

또한, 도 4의 결과를 살펴보면, 본 발명의 만수국아재비 추출물의 농도에 따라 NO 생성 억제능이 증가하는 경향을 확인할 수 있었다. 또한, 도 5의 결과를 살펴보면, 본 발명의 만수국아재비 추출물의 농도에 따라 양성 대조군에 대한 상대 함량이 일정한 것으로 나타나 본 발명의 만수국아재비 추출물의 항염증 유효성을 확인할 수 있었다.

*이상과 같이 본 발명의 만수국아재비 추출물은 항알러지, 항산화, 항염증의 효과를 나타내었다. 이러한 결과로부터 본 발명의 만수국아재비 추출물을 화장료 조성물의 유효성분으로 사용할 때 아토피 피부염 개선의 효과를 나타낼 것으로 기대되었다.

상기는 본 발명의 바람직한 실시예를 참고로 설명하였으며, 상기의 실시예에 한정되지 아니하고, 상기의 실시예를 통해 본 발명이 속하는 기술분야에서 통상의 지식을 가진 자가 본 발명의 요지를 벗어나지 않는 범위에서 다양한 변경으로 실시할 수 있는 것이다.

Claims

만수국아재비(Tagetes minuta) 전초 추출물을 유효성분으로 함유하는 항알러지용 조성물로서,
상기 만수국아재비 전초 추출물은 만수국아재비 전초를 메탄올, 에탄올, 물 또는 이들의 혼합용매 중에 첨가하여 추출하여 얻어진 추출물이고,
상기 항알러지용 조성물은 아토피 피부염에 그 개선 용도로 적용될 수 있는 것을 특징으로 하는 조성물.
제1항에 있어서,
상기 만수국아재비 전초 추출물은 물과 메탄올의 혼합용매 추출물인 것을 특징으로 하는 조성물.
제1항에 있어서,
상기 만수국아재비 전초 추출물은 80% 메탄올 추출물인 것을 특징으로 하는 조성물.
제1항 내지 제3항 중 어느 한 항에 있어서,
상기 조성물은 화장료 조성물인 것을 특징으로 하는 조성물.