JPH1121247A - 皮膚賦活剤及びアレルギー抑制剤 - Google Patents

Abstract

(57)【要約】 【解決手段】 褐藻類のマツモ属、モズク属、カジメ
属、レッソニア属、マクロシスティス属、ヒバマタ属、
アスコフィラム属及びダービリア属に属する海藻の１種
又は２種以上より抽出されるフコイダンを有効成分とし
て含有する皮膚賦活剤並びにアレルギー抑制剤。 【効果】 本発明の皮膚賦活剤は、生体ヒアルロン酸合
成作用、ヒアルロニダーゼ阻害作用に優れ、またアレル
ギー抑制剤は優れたヒスタミン遊離抑制作用を有する。

Description

【発明の詳細な説明】

【０００１】

【発明の属する技術分野】本発明は、極めて安全性の高
い、特定の海藻種より得られる多糖類フコイダンを有効
成分とする皮膚賦活剤及びアレルギー抑制剤に関する。

【０００２】

【従来の技術及び発明が解決しようとする課題】海藻に
は他の植物と異なる多糖類としてカラギナン、アルギン
酸、フコイダン、ラミナリンなどが含まれている。その
なかでも、カラギナンやアルギン酸は粘性の高い物質と
して食品、化粧品、医薬品などの分野で贈粘剤などとし
て広く用いられている。しかし、フコイダンは、まだ一
般的に使用されているとは言い難い。

【０００３】従来、化粧品分野においては、コンブ、ア
ラメ、ワカメ、メカブなどから得られたフコイダンの粘
性や保湿性に着目し、皮膚に使用した時のスベスベ感、
しっとり感の賦与、余分な皮脂の除去など使用感の改善
を目的とした応用化が検討されている（特開平１−３１
７０７号、特公平７−１４８５０号、特開平１−３０５
０１１号公報）。しかし、これらはいずれもフコイダン
のもつ物理的な特性に着目したものである。最近では、
リン脂質からアラキドン酸遊離を促進させる酵素ホスホ
リパーゼＡ₂を阻害する抗炎症作用（特開平８−９２１
０３号公報）、血液凝固作用、コレステロール沈着防止
作用、抗腫瘍作用（海藻の化学，１９９３，朝倉書
店）、抗ガン作用（第１８回 糖質シンポジウム講演要
旨集，１９９６）などフコイダンの生理作用に関する知
見も出始めてはいるが、皮膚やアレルギーに対する生理
学的、生化学的な作用はほとんど解明されていない。

【０００４】本発明は、生体ヒアルロン酸合成作用とヒ
アルロニダーゼ阻害作用を有する優れた皮膚賦活剤なら
びにヒスタミン遊離抑制作用を有する優れたアレルギー
抑制剤を提供することを目的とする。

【０００５】

【課題を解決するための手段及び発明の実施の形態】本
発明者らは、上記課題を解決すべく、種々の天然物、特
に植物抽出物を対象としてラット表皮細胞のヒアルロン
酸合成促進作用（特開平６−９４２２号、特開平８−１
９８７４１号公報、特願平７−９０６５号、特願平７−
３４１７０５号）、ヒアルロニダーゼ活性阻害作用（特
願平８−１５８１１０号）及び肥満細胞のヒスタミン遊
離抑制作用を指標に鋭意スクリーニングを行った結果、
特定の海藻類、即ち褐藻類のマツモ属、モズク属、カジ
メ属、レッソニア属、マクロシスティス属、ヒバマタ
属、アスコフィラム属、ダービリア属に属する海藻の抽
出物にこれらの特に強い作用を見出した。

【０００６】さらにこれら作用が認められた抽出物中の
有効成分を検討した結果、いずれの海藻からもその活性
成分の一つとしてフコイダンを見出し、本発明を完成す
るに至った。

【０００７】フコイダンは、褐藻類から抽出される硫酸
多糖の一種であり、基本的には、Ｌ−フコース−４−硫
酸の１，２−結合を主体とするが、１，３−，１，４−
結合なども存在するほか、構成糖としてグルクロン酸な
どのウロン酸やガラクトース、キシロース、ラムノー
ス、マンノースなどの中性糖を含む場合も多く、その組
成は、海藻種によって異なっている。そのため、糖鎖構
造が異なると、生理活性も異なってくることが推測され
たが、従来、保湿性を高めるなどして皮膚に良いとされ
ている海藻、特に褐藻類のコンブやホンダワラなどから
抽出したフコイダンはこれらの効果が弱く、本発明の効
果は上記特定の海藻類より得られたフコイダンに特異的
なものであった。なお、他の海藻多糖類であるカラギナ
ンやアルギン酸にはこの様な作用は認められなかった。

【０００８】すなわち、本発明の皮膚賦活剤ならびにア
レルギー抑制剤は、褐藻類のマツモ属、モズク属、カジ
メ属、レッソニア属、マクロシスティス属、ヒバマタ
属、アスコフィラム属及びダービリア属に属する海藻よ
り抽出されるフコイダンを有効成分として含有すること
を特徴とする。

【０００９】本発明のフコイダンが、優れた皮膚賦活作
用を発揮する機構については、老化などで低下した表皮
細胞のヒアルロン酸合成能を向上させるとともに皮膚細
胞中のヒアルロン酸の分解を抑制することにより、皮膚
中のヒアルロン酸のレベルを維持し、皮膚の保湿性、柔
軟性、弾力性の低下を抑え、顕著な皮膚老化防止効果を
示すものと推測される。

【００１０】一方、ヒスタミンは様々なアレルギー症状
を引き起こす生体内メディエーターとして知られてお
り、主に、肥満細胞や好塩基球から脱顆粒によって遊離
する。近年、ヒアルロニダーゼが、肥満細胞からのヒス
タミン遊離に関与していることを示唆する研究（炎症，
Ｖｏｌ．４，ｐｐ４３７，１９８４；Ｃｈｅｍ．Ｐｈａ
ｒｍ．Ｂｕｌｌ．，Ｖｏｌ．３３，ｐｐ６４２，１９８
５；Ｃｈｅｍ．Ｐｈａｒｍ．Ｂｕｌｌ．，Ｖｏｌ．３
３，ｐｐ５０７９，１９８５）が発表されると、ヒアル
ロニダーゼ阻害作用を指標にして抗アレルギー効果を有
する天然物のスクリーニングが盛んに行われてきた。そ
こで、これらの作用を確認したところ、本発明のフコイ
ダンには強いヒアルロニダーゼ阻害作用ならびにヒスタ
ミン遊離抑制作用が認められたことから、本発明のフコ
イダンはアレルギー抑制剤としても極めて有効なもので
ある。

【００１１】以下に、本発明の内容を詳細に説明する。
本発明に用いられるフコイダンを抽出する海藻として
は、例えば、褐藻類のマツモ属ではマツモ（Ａｎａｌｉ
ｐｕｓ ｊａｐｏｎｉｃｕｓ）、モズク属ではモズク
（Ｎｅｍａｃｙｓｔｉｓ ｄｅｃｉｐｉｅｎｓ）、カジ
メ属ではカジメ（Ｅｃｋｌｏｎｉａ ｃａｖａ）、エク
ロニア マキシマ（Ｅｃｋｌｏｎｉａ ｍａｘｉｍ
ａ）、レッソニア属ではレッソニア ニグレッセンス
（Ｌｅｓｓｏｎｉａｎｉｇｒｅｓｃｅｎｓ）、マクロシ
スティス属ではジャイアントケルプ（Ｍａｃｒｏｃｙｓ
ｔｉｓ ｐｙｒｉｆｅｒａ）、ヒバマタ属ではヒバマタ
（Ｆｕｃｕｓ ｅｖａｎｅｓｃｅｎｓ）、フカス ベシ
キュロサス（Ｆｕｃｕｓ ｖｅｓｉｃｕｌｏｓｕｓ）、
アスコフィラム属ではアスコフィラム ノードスム（Ａ
ｓｃｏｐｈｙｌｌｕｍ ｎｏｄｏｓｕｍ）、ダービリア
属ではダービリア アンタークティカ（Ｄｕｒｖｉｌｌ
ｅａ ａｎｔａｒｃｔｉｃａ）などを挙げることができ
る。

【００１２】特に、ヒアルロン酸合成促進効果の観点か
ら皮膚賦活剤として用いられるフコイダンを抽出する海
藻としては、好ましくは、Ｄｕｒｖｉｌｌｅａ ａｎｔ
ａｒｃｔｉｃａ、Ｅｃｋｌｏｎｉａ ｍａｘｉｍａ、Ｆ
ｕｃｕｓ ｖｅｓｉｃｕｌｏｓｕｓ、ヒバマタがよい。
また、ヒアルロニダーゼ阻害効果並びにヒスタミン遊離
抑制効果の観点からアレルギー抑制剤として用いられる
フコイダンを抽出する海藻としては、好ましくは、Ｅｃ
ｋｌｏｎｉａ ｍａｘｉｍａ、カジメ、Ｆｕｃｕｓ ｖ
ｅｓｉｃｕｌｏｓｕｓ、Ｄｕｒｖｉｌｌｅａ ａｎｔａ
ｒｃｔｉｃａ、Ｌｅｓｓｏｎｉａ ｎｉｇｒｅｓｃｅｎ
ｓがよい。

【００１３】上記海藻のフコイダンは、粗抽出液として
用いても、また、粗抽出液から分離精製したものを用い
てもよい。

【００１４】海藻より本発明物質フコイダンを得る方法
に、特に制限はなく、通常の抽出法が採用される。粗抽
出液は、海藻の全藻を細断したものを、水、酸あるいは
親水性有機溶媒を単独あるいは組み合わせて得られる溶
媒を用いて抽出することにより得ることができる。この
場合、有機溶媒としてはメタノール、エタノール、ブタ
ノール等のアルコール類、酢酸エチル等のエステル類、
アセトン等のケトン類、ホルムアルデヒド、ジメチルス
ルホキシドなどを挙げることができる。

【００１５】粗抽出物の抽出条件としては、抽出温度は
特に制限はないが、好ましくは５〜１００℃の範囲で、
１〜２４時間、撹拌しながら行うのが好ましい。

【００１６】粗抽出物からフコイダンを分離精製する方
法としては、例えば、塩化セチルピリジニウムなどの４
級アンモニウム塩を添加し、フコイダンを沈殿させ、ア
ルコール溶液で洗浄する方法やＤＥＡＥセルロースなど
の陰イオン交換樹脂などを用いたクロマトグラフィーを
用いる方法がある。

【００１７】海藻より抽出したフコイダン溶液は、その
まま用いても、あるいは稀釈液としたり、濃縮エキスと
してもよく、また凍結乾燥などにより乾燥粉末物とした
り、ペースト状に調製してもよい。

【００１８】本発明の海藻抽出エキスを配合した皮膚賦
活剤及びアレルギー抑制剤は皮膚外用剤の形態で使用し
得るが、この場合、皮膚外用剤には、上記必須成分の他
に、通常皮膚外用剤に用いられる原料、例えば、界面活
性剤、油分、アルコール類、保湿剤、増粘剤、防腐剤、
酸化防止剤、キレート剤、ｐＨ調整剤、香料、色素、紫
外線吸収・散乱剤、ビタミン類、アミノ酸類、水等を配
合することができる。

【００１９】具体的には、界面活性剤としては、ノニオ
ン界面活性剤として親油型グリセリンモノステアレー
ト、自己乳化型グリセリンモノステアレート、ポリグリ
セリンモノステアレート、ソルビタンモノオレート、ポ
リエチレングリコールモノステアレートなどのエステル
型、ポリオキシエチレンソルビタンモノオレートなどの
エステル型、ポリオキシエチレン硬化ヒマシ油などのエ
ーテルエステル型、ポリオキシエチレンセチルエーテ
ル、ポリオキシエチレン化ステロール、ポリオキシエチ
レン化ラノリン、ポリオキシエチレン化蜜ロウなどのエ
ーテル型などを例示することができる。

【００２０】アニオン界面活性剤としてはカルボン酸塩
型、スルホン酸塩型、硫酸エステル塩型、リン酸エステ
ル塩型などがある。カルボン酸型としてはステアリン酸
ナトリウム、パルミチン酸カリウム、パルミチン酸トリ
エタノールアミンなどの高級脂肪酸塩、Ｎ−ラウロイル
−Ｎ−メチルグリシンナトリウム、Ｎ−ミリスチル−Ｎ
−メチル−β−アラニンカリウム、Ｎ−パルミチルグル
タミン酸トリエタノールアミンなどのＮ−アシルアミノ
酸塩、ラウリルエーテルカルボン酸カリウムなどのアル
キルエーテルカルボン酸塩などを例示することができ
る。スルホン酸塩型としてはセチルスルホン酸ナトリウ
ム、硫酸エステル塩型としてはラウリルエーテル硫酸ナ
トリウム、リン酸エステル塩型としてはラウリルリン酸
ナトリウム、ポリオキシエチレンラウリルリン酸ナトリ
ウムなどを例示することができる。

【００２１】カチオン界面活性剤としては塩化ステアリ
ルジメチルベンジルアンモニウム、塩化ステアリルトリ
メチルアンモニウムなどを例示することができる。

【００２２】両性界面活性剤としては塩化アルキルアミ
ノエチルグリシン液、レシチン等の両性界面活性剤等を
例示することができる。

【００２３】油分としては、ヒマシ油、オリーブ油、カ
カオ油、椿油、ヤシ油、木ロウ、ホホバ油、グレープシ
ード油、アボガド油等の植物油脂類、ミンク油、卵黄油
等の動物油脂類、蜜ロウ、鯨ロウ、ラノリン、カルナウ
バロウ、キャンデリラロウ等のロウ類、流動パラフィ
ン、スクワラン、マイクロクリスタリンワックス、セレ
シンワックス、パラフィンワックス、ワセリン等の炭化
水素類、ラウリン酸、ミリスチン酸、ステアリン酸、オ
レイン酸、イソステアリン酸、ベヘニン酸等の天然及び
合成脂肪酸類、セタノール、ステアリルアルコール、ヘ
キシルデカノール、オクチルドデカノール、ラウリルア
ルコール等の天然及び合成高級アルコール類、ミリスチ
ン酸イソプロピル、パルミチン酸イソプロピル、アジピ
ン酸イソプロピル、ミリスチン酸オクチルドデシル、オ
レイン酸オクチルドデシル、コレステロールオレート等
のエステル類等を例示することができる。

【００２４】保湿剤としては、グリセリン、プロピレン
グリコール、１，３−ブチレングリコール、ソルビトー
ル、ポリグリセリン、ポリエチレングリコール、ジプロ
ピレングリコール等の多価アルコール類、トリメチルグ
リシン等のアミノ酸誘導体、乳酸ナトリウム、ピロリド
ンカルボン酸ナトリウム、アミノ酸等のＮＭＦ成分、ヒ
アルロン酸、コラーゲン、ムコ多糖類、コンドロイチン
硫酸等の水溶性高分子物質等を例示することができる。

【００２５】増粘剤としては、カラギーナン、アルギン
酸ナトリウム、キサンタンガム、ケイ酸アルミニウム、
マルメロ種子抽出物、トラガントガム、デンプン等の天
然高分子物質、メチルセルロース、ヒドロキシエチルセ
ルロース、カルボキシルメチルセルロース、可溶性デン
プン、カチオン化セルロース等の半合成高分子物質等を
例示することができる。

【００２６】防腐剤としては、安息香酸塩、サリチル酸
塩、ソルビン酸塩、デヒドロ酢酸塩、パラオキシ安息香
酸エステル、２，４，４’−トリクロロ−２’−ヒドロ
キシジフェニルエーテル、３，４，４’−トリクロロカ
ルバニリド、塩化ベンザルコニウム、ヒノキチオール、
レゾルシン、エタノール等を例示することができる。

【００２７】酸化防止剤としては、ジブチルヒドロキシ
トルエン、ブチルヒドロキシアニソール、没食子酸プロ
ピル、アスコルビン酸等を、キレート剤としては、エデ
ト酸二ナトリウム、エチレンジアミン四酢酸塩、ピロリ
ン酸塩、ヘキサメタリン酸塩、クエン酸、酒石酸、グル
コン酸等を、ｐＨ調整剤としては、水酸化ナトリウム、
トリエタノールアミン、クエン酸、クエン酸ナトリウ
ム、ホウ酸、ホウ砂、リン酸水素カリウム等をそれぞれ
例示することができる。

【００２８】紫外線吸収・散乱剤としては、２−ヒドロ
キシ−４−メトキシベンゾフェノン、オクチルジメチル
パラアミノベンゾエート、エチルヘキシルパラメトキシ
サイナメート、酸化チタン、カオリン、タルク等を例示
することができる。

【００２９】ビタミン類としては、ビタミンＡ、ビタミ
ンＢ群、ビタミンＣ、ビタミンＤ、ビタミンＥ、ビタミ
ンＦ、ビタミンＫ、ビタミンＰ、ビタミンＵ、カルニチ
ン、フェルラ酸、γ−オリザノール、α−リポ酸、オロ
ット酸及びそれらの誘導体を例示することができる。

【００３０】アミノ酸類としては、グリシン、アラニ
ン、バリン、ロイシン、イソロイシン、セリン、トレオ
ニン、フェニルアラニン、チロシン、トリプトファン、
シスチン、システイン、メチオニン、プロリン、ヒドロ
キシプロリン、アスパラギン酸、アスパラギン、グルタ
ミン酸、グルタミン、アルギニン、ヒスチジン、リジン
及びそれらの誘導体等を例示することができる。

【００３１】本発明の皮膚賦活剤、アレルギー抑制剤の
剤型としては、錠剤、カプセル剤、散剤、内服液、細粒
剤等の内服剤やトローチ、アメ、ガムなどの食品とする
ことができ、また、リニメント剤、スプレー剤、ローシ
ョン剤、ゼリー剤、軟膏等の外皮用になすことができ
る。

【００３２】これらの製剤には、必須成分であるフコイ
ダンを任意の濃度で配合できるが、通常、０．０１〜３
０％（重量％、以下同様）、好ましくは０．１〜１０％
配合させるのがよい。

【００３３】なお、本発明のフコイダンの投与量は、成
人１日当り０．０２〜１０００ｍｇとすることができ
る。

【００３４】以下に本発明の製剤の処方例を示す。 （１）皮膚用クリーム 本発明のフコイダン０．１〜１０％、油分２０〜７０
％、界面活性剤２〜７％、保湿剤１〜１０％、精製水バ
ランス、防腐剤微量、香料微量を含有する組成物。 （２）乳液 本発明のフコイダン０．１〜１０％、油分１０〜４０
％、アルコール類０〜１５％、界面活性剤１〜５％、保
湿剤１〜１０％、増粘剤０〜２％、精製水バランス、防
腐剤微量、香料微量を含有する組成物。 （３）化粧水、美容液 本発明のフコイダン０．１〜１０％、アルコール類５〜
２０％、界面活性剤０〜２％、保湿剤２〜８％、増粘剤
０〜２％、酸化防止剤０〜０．５％、キレート剤０〜
０．１％、ｐＨ調整剤０〜０．２％、精製水バランス、
防腐剤微量、色素０〜微量、香料微量を含有する組成
物。 （４）パック剤 本発明のフコイダン０．１〜１０％、アルコール類２〜
１０％、保湿剤２〜１０％、無機粉体０〜２０％、造膜
剤１０〜２０％、精製水バランス、防腐剤微量、香料微
量を含有する組成物。 （５）アメ 本発明のフコイダン０．１〜１０％、砂糖１０〜７０
％、水飴２０〜５０％、有機酸０〜２０％、パラチノー
ス０〜７０％、アスパルテーム０〜７０％、キシリトー
ル０〜７０％、精製水バランス、香料微量を含有する組
成物。 （６）トローチ 本発明のフコイダン０．１〜１０％、ブドウ糖０〜７０
％、パラチノース０〜８５％、アスパルテーム０〜８５
％、キシリトール０〜８５％、アラビアゴム３〜２０
％、タルク０〜１５％、ステアリン酸マグネシウム０〜
５％、精製水バランス、香料微量を含有する組成物。

【００３５】

【実施例】次に、試験例、実施例等により本発明を具体
的に説明するが、本発明は以下の実施例に限定されるも
のではない。

【００３６】〔製造例〕フコイダンの抽出、精製 海藻からのフコイダンの抽出、精製は、Ｍｉｚｕｉらの
方法（ＫｉｔａｓｔｏＡｒｃｈ．Ｅｘｐ．Ｍｅｄ．，Ｖ
ｏｌ．５８，ｐｐ５９，１９８５）に準じて行った。エ
クロニア マキシマ（Ｅｃｋｌｏｎｉａ ｍａｘｉｍ
ａ）について行った例を以下に示す。

【００３７】Ｅｃｋｌｏｎｉａ ｍａｘｉｍａ乾燥藻体
１８０ｇをミキサーを用いて粉砕し、２０倍量の蒸留水
を加えた後、撹拌しながら室温にて３時間抽出した。抽
出液を濾過後、凍結乾燥して水抽出物３０．７ｇを得
た。

【００３８】水抽出物２０ｇを蒸留水２Ｌに溶解し（１
％溶液）、蒸留水に対し透析を行い、透析内液を凍結乾
燥して、透析物２．９ｇを得た。

【００３９】透析物１ｇを蒸留水１００ｍＬに溶解し
（１％溶液）、３％塩化セチルピリジニウム（以下、Ｃ
ＰＣ）水溶液３０ｍＬを添加した。３７℃にて一晩放置
後、遠心分離して沈殿（酸性多糖−ＣＰＣ複合体）を集
めた。

【００４０】この沈殿に４Ｍ ＮａＣｌ３５０ｍＬを加
え、３７℃にて一晩撹拌し、酸性多糖とＣＰＣを解離さ
せた。その後、３倍量のエタノールを加えて多糖を沈殿
させ、遠心分離により沈殿を回収した。以上の操作を計
３回繰り返した後、さらにエタノール４００ｍＬを用い
て沈殿を洗浄することによりＣＰＣを完全に除去した。

【００４１】得られた沈殿を蒸留水２Ｌに再溶解、濾過
した後、さらに蒸留水を加えて全量６Ｌとし、ホローフ
ァイバーを用いて脱塩を行った。脱塩後の溶液を凍結乾
燥した。

【００４２】凍結乾燥物を蒸留水１５０ｍＬに再溶解
し、２％ＣａＣｌ₂水溶液２００ｍＬを添加した。充分
に撹拌した後、遠心分離により、アルギン酸を沈殿とし
て除去した。得られた上清を蒸留水に対して透析した
後、凍結乾燥して、フコイダン画分０．５ｇを得た。

【００４３】〔試験例１〕（ヒアルロン酸合成促進試
験） 試験例１：ラットケラチノサイトに対するヒアルロン酸
合成促進試験 新生児（３日令）ラットの皮膚からトリプシン処理によ
りケラチノサイトを分離し、増殖用培地で培養した後、
分化用培地で２日間培養した。

【００４４】この細胞に上記製造例で得た各々のフコイ
ダンや他の海藻多糖類を５００μｇ／ｍＬの濃度で７２
時間作用させ、培地中に放出されてきたヒアルロン酸の
濃度を、ヒアルロン酸バインディングプロテインアッセ
イ法により測定した。コントロールを１．００とした時
の培地中のヒアルロン酸量を算出した結果を表１に示
す。なお、下記表１中のヒアルロン酸量（ヒアルロン酸
合成促進能）は下記式により求めた。 ヒアルロン酸合成促進能（倍率）＝Ａ／Ｂ Ａ：各被験物質を添加したときの培地中のヒアルロン酸
濃度（ｎｇ／ｍＬ） Ｂ：無添加のときの培地中のヒアルロン酸濃度（ｎｇ／
ｍＬ）

【００４５】

【表１】

【００４６】表１に示した結果のように、本発明のフコ
イダン、すなわち、マツモ、モズク、カジメ、Ｅｃｋｌ
ｏｎｉａ ｍａｘｉｍａ、Ｌｅｓｓｏｎｉａ ｎｉｇｒ
ｅｓｃｅｎｓ、ジャイアントケルプ、ヒバマタ、Ｆｕｃ
ｕｓ ｖｅｓｉｃｕｌｏｓｕｓ、Ａｓｃｏｐｈｙｌｌｕ
ｍ ｎｏｄｏｓｕｍ、Ｄｕｒｖｉｌｌｅａ ａｎｔａｒ
ｃｔｉｃａの各海藻から抽出されたフコイダンはヒアル
ロン酸合成を促進することが判明した。なかでも特に作
用の強かったものはＥｃｋｌｏｎｉａ ｍａｘｉｍａ、
ヒバマタ、Ｆｕｃｕｓ ｖｅｓｉｃｕｌｏｓｕｓ、Ｄｕ
ｒｖｉｌｌｅａａｎｔａｒｃｔｉｃａ由来のフコイダン
であった。

【００４７】これに対し、同じ褐藻類であっても、本発
明の範囲外となる海藻類、すなわちコンブ属のマコン
ブ、ホンダワラ属のホンダワラから得られたフコイダン
ならびに海藻に特徴的な他の多糖類カラギーナンやアル
ギン酸ナトリウムにはヒアルロン酸合成促進効果は認め
られなかった。

【００４８】〔試験例２〕（ヒアルロニダーゼ活性阻害
試験） 上記製造例で得た各々の海藻のフコイダンのヒアルロニ
ダーゼ阻害活性の測定は、以下の方法で行った。

【００４９】酵素（ｔｙｐｅ ＩＶ−Ｓ ｆｒｏｍ Ｂ
ｏｖｉｎｅ ｔｅｓｔｉｓ，ＳＩＧＭＡ社製）溶液の１
００μＬ（１，３８０ｕｎｉｔ／ｍＬ）に上記製造例で
得た各々の海藻のフコイダンや他の海藻多糖類の試料２
００μＬを加えて、３７℃で２０分間放置した。次に、
酵素活性化剤（Ｃｏｍｐｏｕｎｄ ４８／８０，ＳＩＧ
ＭＡ社製）溶液（０．１ｍｇ／ｍＬ）２００μＬを加
え、３７℃で２０分間放置した後、基質であるヒアルロ
ン酸カリウム（ｆｒｏｍ ｒｏｏｓｔｅｒ ｃｏｍｂ，
和光純薬社製）溶液（０．４ｍｇ／ｍＬ）５００μＬを
入れ、３７℃で４０分間放置した。

【００５０】次いで、０．４Ｎ水酸化ナトリウム溶液２
００μＬを加えて反応を停止させた後、Ｍｏｒｇａｎ−
Ｅｌｓｏｎ法の変法（Ｊ．Ｂｉｏ．Ｃｈｅｍ．，２１
７，９５９（１９５５））で生成したＮ−アセチルヘキ
ソサミン量を吸光度ＯＤ_585nmから求めた。

【００５１】また、酵素反応には０．１ｍＭ酢酸緩衝液
（ｐＨ３．５）を用い、ヒアルロニダーゼ阻害活性は次
式より求められる阻害率で算出した。

【００５２】

【数１】

【００５３】上記製造例で得た各々の海藻のフコイダン
について、種々試料濃度での阻害率から５０％阻害濃度
（ＩＣ₅₀）を算出した結果を表２に示す。数値が低い
程、ヒアルロニダーゼ活性阻害が高いことを示す。

【００５４】

【表２】

【００５５】表２に示した結果のように、本発明のフコ
イダン、すなわち、マツモ、モズク、カジメ、Ｅｃｋｌ
ｏｎｉａ ｍａｘｉｍａ、Ｌｅｓｓｏｎｉａ ｎｉｇｒ
ｅｓｃｅｎｓ、ジャイアントケルプ、ヒバマタ、Ｆｕｃ
ｕｓ ｖｅｓｉｃｕｌｏｓｕｓ、Ａｓｃｏｐｈｙｌｌｕ
ｍ ｎｏｄｏｓｕｍ、Ｄｕｒｖｉｌｌｅａ ａｎｔａｒ
ｃｔｉｃａの各海藻から抽出されたフコイダンはヒアル
ロニダーゼ活性を強く阻害することが判明した。なかで
も特に作用の強かったものはカジメ、Ｅｃｋｌｏｎｉａ
ｍａｘｉｍａ、Ｌｅｓｓｏｎｉａ ｎｉｇｒｅｓｃｅ
ｎｓ、Ｆｕｃｕｓ ｖｅｓｉｃｕｌｏｓｕｓ、Ｄｕｒｖ
ｉｌｌｅａ ａｎｔａｒｃｔｉｃａ由来のフコイダンで
あった。

【００５６】これに対し、同じ褐藻類であっても、本発
明の範囲外となる海藻類、すなわちコンブ属のマコン
ブ、ホンダワラ属のホンダワラから得られたフコイダン
ならびに海藻に特徴的な他の多糖類カラギーナンやアル
ギン酸ナトリウムの阻害活性は低かった。

【００５７】〔試験例３〕（ヒスタミン遊離抑制試験） 上記製造例で得た各々の海藻のフコイダンのヒスタミン
遊離抑制作用は、以下の方法で行った。上記製造例で得
た各々の海藻のフコイダンなどの被検物質をＴｙｒｏｄ
ｅ液に溶解し、１ｍｇ／ｍＬに調製した試料液１０μＬ
をラット腹腔細胞浮遊液１０μＬと混合、３７℃、１０
分間インキュベートした後、５μｇ／ｍＬ Ｃｏｍｐｏ
ｕｎｄ４８／８０溶液２０μＬを添加し、３７℃、１０
分間作用させた。反応を停止させるため氷冷し、遠心分
離後、上清液をとり、等量の０．１Ｍ塩酸を加えた。こ
の溶液をオンカラム誘導体化法（Ｊ．Ｃｈｒｏｍａｔｏ
ｇｒ．，Ｖｏｌ．５９５，ｐ１６３，１９９２）により
ＨＰＬＣ分析し、遊離ヒスタミンのピーク面積を測定し
た。表３に示した抑制率は、ヒスタミンのピーク面積よ
り下記の式を用いて算出した。但し、式中のコントロー
ル面積は、被検物質を添加しないＴｙｒｏｄｅ液を用い
て得られた遊離ヒスタミンのピーク面積である。

【００５８】

【数２】

【００５９】

【表３】

【００６０】表３に示した結果のように、本発明のフコ
イダン、すなわち、マツモ、モズク、カジメ、Ｅｃｋｌ
ｏｎｉａ ｍａｘｉｍａ、Ｌｅｓｓｏｎｉａ ｎｉｇｒ
ｅｓｃｅｎｓ、ジャイアントケルプ、ヒバマタ、Ｆｕｃ
ｕｓ ｖｅｓｉｃｕｌｏｓｕｓ、Ａｓｃｏｐｈｙｌｌｕ
ｍ ｎｏｄｏｓｕｍ、Ｄｕｒｖｉｌｌｅａ ａｎｔａｒ
ｃｔｉｃａの各海藻から抽出されたフコイダンには強い
ヒスタミン遊離抑制効果が判明した。なかでも特に作用
の強かったものはカジメ、Ｅｃｋｌｏｎｉａｍａｘｉｍ
ａ、Ｌｅｓｓｏｎｉａ ｎｉｇｒｅｓｃｅｎｓ、Ｆｕｃ
ｕｓ ｖｅｓｉｃｕｌｏｓｕｓ、Ｄｕｒｖｉｌｌｅａ
ａｎｔａｒｃｔｉｃａ由来のフコイダンであった。

【００６１】これに対し、同じ褐藻類であっても、本発
明の範囲外となる海藻類、すなわちコンブ属のマコン
ブ、ホンダワラ属のホンダワラから得られたフコイダン
ならびに海藻に特徴的な他の多糖類カラギーナンやアル
ギン酸ナトリウムには強い抑制効果は認められなかっ
た。上記の製造物をヒトに用い、評価したところ、すこ
ぶる良好な効果を得た。

【００６２】以下、実施例を示す。なお、下記例で％は
重量％である。また、各例の成分配合量の合計はいずれ
も１００．０％である。

【００６３】

【表４】

【００６４】

【表５】

【００６５】

【表６】

【００６６】

【表７】

【００６７】

【表８】

【００６８】

【表９】

【００６９】

【表１０】

【００７０】

【表１１】

【００７１】

【表１２】

【００７２】

【表１３】

【００７３】

【表１４】

【００７４】

【表１５】

【００７５】

【表１６】

【００７６】

【表１７】

【００７７】

【表１８】

【００７８】

【表１９】

【００７９】

【表２０】

【００８０】

【表２１】

【００８１】

【表２２】

【００８２】

【表２３】

【００８３】

【表２４】

【００８４】

【表２５】

【００８５】

【発明の効果】本発明の皮膚賦活剤は、生体ヒアルロン
酸合成作用、ヒアルロニダーゼ阻害作用に優れ、またア
レルギー抑制剤は優れたヒスタミン遊離抑制作用を有す
る。

───────────────────────────────────────────────────── フロントページの続き (51)Int.Cl.⁶ 識別記号 ＦＩ Ａ６１Ｋ 31/725 ＡＢＦ Ａ６１Ｋ 31/725 ＡＢＦ Ｃ０８Ｂ 37/00 Ｃ０８Ｂ 37/00 Ｑ

Claims (2)

【特許請求の範囲】
1. 【請求項１】 褐藻類のマツモ属、モズク属、カジメ
   属、レッソニア属、マクロシスティス属、ヒバマタ属、
   アスコフィラム属及びダービリア属に属する海藻の１種
   又は２種以上より抽出されるフコイダンを有効成分とし
   て含有する皮膚賦活剤。
2. 【請求項２】 褐藻類のマツモ属、モズク属、カジメ
   属、レッソニア属、マクロシスティス属、ヒバマタ属、
   アスコフィラム属及びダービリア属に属する海藻の１種
   又は２種以上より抽出されるフコイダンを有効成分とし
   て含有するアレルギー抑制剤。