JPH10104233A

JPH10104233A - ヒトアンチトロンビンｉｉｉの定量方法及び測定キット

Info

Publication number: JPH10104233A
Application number: JP25892396A
Authority: JP
Inventors: Hiroshi Kuroda; 広志黒田; Yoshie Matsumoto; 美枝松本
Original assignee: Sekisui Chemical Co Ltd
Current assignee: Sekisui Chemical Co Ltd
Priority date: 1996-09-30
Filing date: 1996-09-30
Publication date: 1998-04-24

Abstract

(57)【要約】（修正有）【課題】非特異的反応による凝集がなく、また、希釈
を必要としないにも関わらず広範囲において正確な測定
が可能な、高感度で迅速なヒトアンチトロンビンＩＩＩ
の定量方法、測定キットを提供する。【解決手段】試料と、抗ヒトアンチトロンビンＩＩＩ
抗体を感作した不溶性担体とを溶液中で混合して抗原抗
体反応による凝集反応を生じさせ、凝集反応に基づく吸
光度変化量を測定して検量線と照合することよりなるヒ
トアンチトロンビンＩＩＩの定量方法であって、不溶性
担体は、ラテックス粒子であり、溶液中の不溶性担体の
濃度は、０．０１〜１重量％であり、溶液中に、平均分
子量３０００〜１００万のポリエチレングリコール、及
び、平均分子量３０００〜１００万のポリビニルピロリ
ドンのうち少なくとも１種０．１〜５重量％が含有さ
れ、凝集反応は、恒温において、５秒〜１５分間行う。

Description

【発明の詳細な説明】

【０００１】

【発明の属する技術分野】本発明は、試料中のヒトアン
チトロンビンＩＩＩの高感度で迅速な定量方法、及び、
このヒトアンチトロンビンＩＩＩの定量方法を実施する
ための測定キットに関する。

【０００２】

【従来の技術】血液中に存在するヒトアンチトロンビン
ＩＩＩは、分子量約５５０００、アミノ酸残基数４３２
であり、糖鎖を１３．４％含む糖タンパクである。この
ヒトアンチトロンビンＩＩＩは、血液凝固の制御に関与
するプロテアーゼインヒビターであり、フィブリノーゲ
ンに作用して血液凝固を促進する酵素であるトロンビン
と結合することにより、血栓や血液凝固の主体であるフ
ィブリンの生成を抑制する。

【０００３】このため、ヒトアンチトロンビンＩＩＩ
は、血液中に血栓等が存在する場合には、消費され減少
する。従って、ヒトアンチトロンビンＩＩＩを定量する
ことは、血栓症や全身的に血栓が多発する疾患である播
種性血管内凝固症候群（ＤＩＣ）の診断等に有用であ
る。

【０００４】ヒトアンチトロンビンＩＩＩは、臨床的に
はその抗原量を測定すること及び酵素としての活性値を
測定することが有用である。抗原量を測定する方法とし
ては各種免疫的測定方法があり、酵素としての活性値を
測定する方法としては、「検査と技術」（２２（５）、
（１９９４））の２４５頁に記載されているように、こ
の酵素の合成基質を用いてその消費量を測定する方法が
ある。

【０００５】これらのうち、免疫的測定方法としては、
近年、反応系の微量化、感度の向上、反応時間の短縮等
を目的として、ラテックス凝集による免疫的測定方法が
開発されている。このようなラテックス凝集による免疫
的測定方法において用いられるラテックス凝集免疫試薬
としては様々なものが上市されている。

【０００６】しかしながら、従来のラテックス凝集免疫
試薬は、非特異的反応による凝集がよく見られ、ＥＩＡ
法等に比べると、特に低濃度域では正確に測定できない
等の問題があった。

【０００７】また、一般に、免疫的測定方法は抗原抗体
反応を利用するため、その至適な測定範囲は狭く、従来
のラテックス凝集免疫試薬の測定範囲は、０．１〜２ｍ
ｇ／ｄｌ程度であった。しかしながら、ヒトアンチトロ
ンビンＩＩＩの正常値は年齢、性差によって大きく異な
り、広範囲な正常値分布を有する。このため、従来のラ
テックス凝集免疫試薬を用いて検査を行うに際しては、
「医学と薬学」（２９（２）、（１９９３））の４１１
〜４１７頁に記載されているように、煩雑な希釈操作が
必要とされ、不便であった。

【０００８】４〜８２ｍｇ／ｄｌの範囲で測定が可能な
ラテックス凝集免疫試薬も開発されているが、このもの
も、広い測定範囲を達成するために検体を希釈している
ため、操作が煩雑であり、誤操作や、測定精度を下げる
原因となっていた。

【０００９】

【発明が解決しようとする課題】本発明の目的は、上記
に鑑み、非特異的反応による凝集がなく、また、希釈を
必要としないにも関わらず広範囲において正確な測定が
可能な、高感度で迅速なヒトアンチトロンビンＩＩＩの
定量方法、及び、このヒトアンチトロンビンＩＩＩの定
量法を実施するための測定キットを提供することを目的
とする。

【００１０】

【課題を解決するための手段】本発明は、試料中のヒト
アンチトロンビンＩＩＩを定量するにあたり、上記試料
と、抗ヒトアンチトロンビンＩＩＩ抗体を感作した不溶
性担体とを溶液中で混合して抗原抗体反応による凝集反
応を生じさせ、上記凝集反応に基づく吸光度変化量を測
定して検量線と照合することよりなるヒトアンチトロン
ビンＩＩＩの定量方法であって、上記不溶性担体は、ラ
テックス粒子であり、上記溶液中の上記不溶性担体の濃
度は、０．０１〜１重量％であり、上記溶液中に、平均
分子量３０００〜１００万のポリエチレングリコール、
及び、平均分子量３０００〜１００万のポリビニルピロ
リドンのうち少なくとも１種０．１〜５重量％が含有さ
れ、上記凝集反応は、恒温において、５秒〜１５分間行
うものであり、上記吸光度変化量は、凝集反応に伴う吸
光度の増加量であるヒトアンチトロンビンＩＩＩの定量
方法である。以下に本発明を詳述する。

【００１１】本発明においては、試料中のヒトアンチト
ロンビンＩＩＩを定量するにあたり、まず、試料と、抗
ヒトアンチトロンビンＩＩＩ抗体を感作した不溶性担体
とを溶液中で混合して抗原抗体反応による凝集反応を生
じさせる。

【００１２】上記試料としては特に限定されず、例え
ば、血清、血漿等が挙げられる。また、本発明のヒトア
ンチトロンビンＩＩＩの定量方法は、これら以外の各種
の生体試料、非生体試料に適用することも可能である。

【００１３】本発明においては、上記不溶性担体とし
て、粒径が比較的一定であり、また、工業的に一定の品
質、性能のものを大量生産することができるラテックス
粒子が用いられる。上記ラテックス粒子としては特に限
定されず、例えば、スチレン、塩化ビニル、アクリロニ
トリル、酢酸ビニル、アクリル酸エステル、メタクリル
酸エステル等のビニル系モノマーの単一重合体や共重合
体；スチレン−ブタジエン共重合体、メチルメタクリレ
ート−ブタジエン共重合体等のブタジエン系共重合体等
の微粒子等が挙げられる。これらのうち、抗体の吸着性
に優れており、かつ、生物学的活性を長期間安定に保持
できる等の理由から、ポリスチレン系のラテックス粒子
が好適に用いられる。

【００１４】上記ラテックス粒子の粒径は、０．０２〜
０．５μｍが好ましい。小さすぎると、凍結乾燥を行っ
たときに分散が困難となり、大きすぎると、自己凝集が
進み、分散性が低下する。より好ましくは、０．０５〜
０．２μｍである。

【００１５】上記不溶性担体は、抗ヒトアンチトロンビ
ンＩＩＩ抗体が感作されたものである。上記抗ヒトアン
チトロンビンＩＩＩ抗体としては特に限定されず、ポリ
クローナル抗体、モノクローナル抗体のいずれも使用す
ることができる。上記ポリクローナル抗体としては、ヒ
ト、ウサギ、ヤギ等の由来の動物種、グロブリン画分、
アフィニティ精製画分等の純度、Ｆａｂ′、Ｆ（ａｂ）
２等の処理方法等は制限されるものではない。上記不溶
性担体への上記抗ヒトアンチトロンビンＩＩＩ抗体の感
作は、物理的又は化学的に吸着させる方法等により行う
ことができる。

【００１６】本発明においては、上記試料と上記不溶性
担体とを溶液中で混合する。上記溶液としては特に限定
されず、例えば、リン酸緩衝液、グリシン緩衝液、トリ
ス塩酸緩衝液、グッド緩衝液等が挙げられる。

【００１７】本発明においては、上記溶液中の上記不溶
性担体の濃度は、０．０１〜１重量％である。低すぎる
と、凝集塊の形成が不充分であり、必要な感度が得られ
ず、高すぎると、バックグラウンドとしての吸光度が高
すぎ、正確な定量を行うことができないので、上記範囲
に限定される。好ましくは、０．０２〜０．２重量％で
ある。

【００１８】本発明においては、上記溶液中に、ポリエ
チレングリコール及びポリビニルピロリドンのうち少な
くとも１種が含有される。これらのものが上記溶液中に
含有されることにより、感度の向上及び反応の促進を図
ることができる。

【００１９】上記ポリエチレングリコール及び上記ポリ
ビニルピロリドンの平均分子量は、それぞれ、３０００
〜１００万である。小さすぎると、感度の向上又は反応
促進の効果が不充分であり、大きすぎると、上記溶液へ
の溶解度が著しく低くなり、溶解性の点で問題が生じる
ので、上記範囲に限定される。好ましくは、ポリエチレ
ングリコールについては、４０００〜３万、ポリビニル
ピロリドンについては、１万〜１０万である。

【００２０】上記溶液中の上記ポリエチレングリコール
及びポリビニルピロリドンのうち少なくとも１種の濃度
は、０．１〜５重量％である。低すぎると、感度が低
く、低濃度域での正確な測定ができず、高すぎると、非
特異的反応による凝集が生じ、正確な測定ができないの
で、上記範囲に限定される。好ましくは、ポリエチレン
グリコールについては、１〜４重量％、ポリビニルピロ
リドンについては、０．２〜３重量％である。

【００２１】上記ポリエチレングリコール及び上記ポリ
ビニルピロリドンは、それぞれ、適宜な媒体に分散及び
溶解させて使用することが好ましい。この場合におい
て、上記不溶性担体と、上記ポリエチレングリコール及
びポリビニルピロリドンのうち少なくとも１種とを同一
の媒体に分散及び溶解させることにより１液型のラテッ
クス試薬として使用してもよく、また、それぞれ、別個
の媒体に分散及び溶解させることによりラテックス試薬
と溶液状試薬との２液型試薬として使用してもよい。

【００２２】上記媒体としては特に限定されず、例え
ば、リン酸緩衝液、グリシン緩衝液、トリス塩酸緩衝
液、グッド緩衝液等が挙げられる。上記媒体のｐＨは、
５．５〜８．５が好ましい。より好ましくは、６．５〜
８．０である。

【００２３】上記１液型のラテックス試薬中には、更
に、牛血清アルブミン、ショ糖、塩濃度調整のために塩
化ナトリウム等を適宜溶解させてもよい。また、上記ラ
テックス試薬と溶液状試薬との２液型試薬として使用す
る場合にも、それぞれに牛血清アルブミン、ショ糖、塩
濃度調整のために塩化ナトリウム等を適宜溶解させても
よい。

【００２４】本発明においては、上記抗原抗体反応によ
る凝集反応は、恒温において行われる。好ましくは、２
５〜３７℃である。また、上記凝集反応は、５秒〜１５
分間行う。短すぎると、正確な測定ができず、長すぎる
と、非特異的反応による凝集が生じ、正確な測定ができ
ないので、上記範囲に限定される。

【００２５】本発明においては、次に、上記凝集反応に
基づく吸光度変化量を測定して検量線と照合することに
より、ヒトアンチトロンビンＩＩＩを定量する。上記吸
光度変化量は、凝集反応に伴う吸光度の増加量である。

【００２６】上記吸光度変化量の測定の際の測定波長
は、通常、５００〜１０００ｎｍ、好ましくは、５００
〜８００ｎｍ、より好ましくは、５５０〜６５０ｎｍの
範囲から適切な波長が選択される。上記吸光度変化量の
測定に用いられる測定装置としては、経時的に上記溶液
の吸光度を測定することできるものであれば特に限定さ
れず、例えば、汎用の生化学自動分析装置等が挙げられ
る。上記測定波長、検体量、試薬量等は、上記測定装置
に合わせて適宜選択することができる。

【００２７】上記検量線と照合する具体的な方法として
は、例えば、ヒトアンチトロンビンＩＩＩ標準血清及び
その希釈系列等のヒトアンチトロンビンＩＩＩ既知量の
試料について、吸光度変化量の測定を行い、その測定値
とヒトアンチトロンビンＩＩＩ量とから検量線を作成し
ておき、ヒトアンチトロンビンＩＩＩ未知量の試料につ
いて同一条件で測定した吸光度変化量の測定値から上記
検量線において対応するヒトアンチトロンビンＩＩＩ量
を求めることにより実施することができる。

【００２８】本発明２は、抗ヒトアンチトロンビンＩＩ
Ｉ抗体を感作したラテックス粒子と、平均分子量３００
０〜１００万のポリエチレングリコール、及び、平均分
子量３０００〜１００万のポリビニルピロリドンのうち
少なくとも１種を含有する検体希釈用液とからなる本発
明１のヒトアンチトロンビンＩＩＩの定量方法を実施す
るための測定キットである。

【００２９】本発明２の測定キットを用いてヒトアンチ
トロンビンＩＩＩを定量する具体的な方法としては、例
えば、吸光度変化量の測定に汎用の生化学自動分析装置
を使用するのであれば、本発明２の測定キットを所定の
位置にセットし、測定すべき試料及びヒトアンチトロン
ビンＩＩＩ既知量の試料をセットし、適宜吸光度測定の
ための条件をセットすることにより実施することができ
る。また、吸光度変化量の測定に吸光度計を使用するの
であれば、本発明２の測定キット、測定すべき試料及び
ヒトアンチトロンビンＩＩＩ既知量の試料を混合、攪拌
し、一定の時間経過後、その吸光度を測定することによ
り実施することができる。好ましくは、汎用の生化学自
動分析装置を用いる方法である。このような生化学自動
分析装置としては特に限定されず、例えば、７１５０型
自動分析装置（日立製作所製）、ＭＩＲＡ（ＣＯＢＡＳ
社製）等が挙げられる。

【００３０】本発明のヒトアンチトロンビンＩＩＩの定
量方法によれば、抗ヒトアンチトロンビンＩＩＩ抗体を
感作した不溶性担体と試料とを溶液中で混合し、抗原抗
体反応を契機としたラテックス凝集反応を生ぜしめ、こ
の溶液の吸光度変化量を測定し、予め作成しておいた検
量線を用いて、濃度未知の試料中のヒトアンチトロンビ
ンＩＩＩ量を正確に測定することができる。また、本発
明のヒトアンチトロンビンＩＩＩの定量方法を実施する
ための測定キットを用いることにより、試料中のヒトア
ンチトロンビンＩＩＩ量を正確に測定することができ
る。

【００３１】

【実施例】以下に実施例を掲げて本発明を更に詳しく説
明するが、本発明はこれら実施例のみに限定されるもの
ではない。

【００３２】実施例１〜４０、比較例１〜４０１）試薬及び材料実施例１〜４０及び比較例１〜４０で使用した試薬及び
材料は以下の通りである。

【００３３】ラテックス平均粒径０．３０４μｍのポリスチレンラテックス（固
形分１０％（Ｗ／Ｖ）、積水化学工業社製）を用いた。ラテックス希釈用緩衝液５０ｍＭのＮａ₂ＨＰＯ₄と、５０ｍＭのＮａＨ₂ＰＯ
₄とを、ｐＨ７．５０になるように混合したものを用い
た。抗ヒトアンチトロンビンＩＩＩ抗体ヤギの抗血清からイムノグロブリン分画にまで精製した
ヤギ抗ヒトアンチトロンビンＩＩＩ抗体（１ｍｇ／ｍ
ｌ）を用いた。

【００３４】抗体希釈用緩衝液ラテックス希釈用緩衝液を、抗体希釈用緩衝液として用
いた。ブロッキング用緩衝液１００ｍＭのＮａ₂ＨＰＯ₄と、１００ｍＭのＮａＨ₂
ＰＯ₄とを、ｐＨ７．４０になるように混合し、ウシ血
清アルブミン（Ｂｏｖｉｎｅｓｅｒｕｍａｌｂｕｍ
ｉｎ、ＦｒａｃｔｉｏｎＶ、ＲｅａｇｅｎｔＧｒａｄ
ｅ、ＭｉｌｅｓＣｏｒｐ．社製）を１％（Ｗ／Ｖ）にな
るように、また、ＮａＮ₃（試薬特級、ナカライテスク
社製）を０．１％（Ｗ／Ｖ）になるように添加したもの
を用いた。

【００３５】血漿検体血栓既往症を有する患者及び健常人の血漿を用いた。ヒトアンチトロンビンＩＩＩ標準ヒト血清ヒトプール血清から、アフィニティクロマトグラフィに
よりヒトアンチトロンビンＩＩＩを除去した血清に対し
て、精密に秤量したヒトアンチトロンビンＩＩＩ精製抗
原を添加し、４０ｍｇ／ｄｌのヒトアンチトロンビンＩ
ＩＩ標準ヒト血清を調製した。更に、生理食塩水にて約
２０、１０、５、２．５ｍｇ／ｄｌにそれぞれ希釈して
使用した。また、血液項目用標準血清を含まない、生理
食塩水のみのものを０ｍｇ／ｄｌとした。

【００３６】検体希釈用液（Ｒ１液）ブロッキング用緩衝液に、ポリエチレングリコール６０
００（平均分子量７５００、和光純薬工業社製）を３％
（Ｗ／Ｖ）になるように添加したものを用いた。ＳＲＩＤ法市販のアガロース培地を用いて、ヒトアンチトロンビン
ＩＩＩ標準ヒト血清により検量線を製し、検体中のヒト
アンチトロンビンＩＩＩの定量を行った。なお、抗体と
してはヤギポリクローナル抗体（ＤＡＫＯ社製）を用い
た。ヒトアンチトロンビンＩＩＩ測定用ラテックス凝集免疫
試薬市販のラテックス凝集免疫試薬（エルピアエースＡＴＩ
ＩＩ、ダイアヤトロン社製）を用いた。

【００３７】２）方法（１）ラテックス試薬の調製平均粒径０．３０４μｍのポリスチレンラテックス（固
形分１０％（Ｗ／Ｖ））１容に、ラテックス希釈用緩衝
液３容を添加希釈し、２．５％（Ｗ／Ｖ）ラテックス液
とした。抗ヒトアンチトロンビンＩＩＩ抗体は、タンパ
ク濃度が６６．７μｇ／ｍｌになるように抗体希釈用緩
衝液で希釈し、感作抗体液とした。２．５％（Ｗ／Ｖ）
ラテックス液２００μ１を２５℃のインキュベーター中
でマグネチックスターラーで攪拌しながら、抗体感作液
８００μｌを素早く添加し、２５℃にて１時間攪拌し
た。その後、ブロッキング用緩衝液を２．０ｍｌ添加
し、２５℃にて続けて２時間攪拌した。その後、１５
℃、１５０００ｒｐｍにて１５分間遠心分離した。得ら
れた沈殿にブロッキング用緩衝液４．０ｍｌを添加し、
同様に遠心分離することにより、沈殿を洗浄した。洗浄
操作は３回行った。この沈殿にブロッキング用緩衝液を
２．０ｍｌ添加し、よく攪拌した後、超音波破砕機にて
分散処理を行い、固形分０．２５％（Ｗ／Ｖ）のラテッ
クス試薬とした。このようにして調製したラテックス試
薬は４℃にて保存した。

【００３８】（２）ラテックス試薬によるヒトアンチト
ロンビンＩＩＩ量の測定ラテックス試薬によるヒトアンチトロンビンＩＩＩ量の
測定は、生化学用自動分析装置７１５０形（日立製作所
社製）を用いて行った。上記（１）で得られた固形分
０．２５％（Ｗ／Ｖ）のラテックス試薬をそのままＲ２
液（固形分０．２５％（Ｗ／Ｖ））とした。測定条件は
以下の通りである。

【００３９】検体容量３μｌ検体希釈液（Ｒ１液）３００μｌ試薬（Ｒ２液）１００μｌ測定波長５７０ｎｍ測定温度３７℃

【００４０】試薬（Ｒ２液）を添加してから約８０秒後
の吸光度と約３２０秒後の吸光度の差（△ＯＤ５７０）
を測定し、この吸光度の差を１００００倍したものを吸
光度変化量とした。検体の代わりに既知濃度の血液項目
用標準血清で同様の測定を行って、予め検量線を作成し
ておき、上記検体の吸光度変化量を上記検量線に外挿し
て、検体中のヒトアンチトロンビンＩＩＩ量を測定し
た。

【００４１】（３）ＳＲＩＤ法によるヒトアンチトロン
ビンＩＩＩ量の測定上記（２）で測定したすべての検体について、ＳＲＩＤ
法を用いて、検体中のヒトアンチトロンビンＩＩＩ量を
測定した。

【００４２】（４）市販のラテックス凝集免疫試薬によ
るヒトアンチトロンビンＩＩＩ量の測定上記（２）で測定したすべての検体について、市販のラ
テックス凝集免疫試薬（エルピアエースＡＴＩＩＩ、ダ
イアヤトロン社製）を用いて、検体中のヒトアンチトロ
ンビンＩＩＩ量を測定した。測定方法は、キット添付の
操作法に従い、専用機であるエルピア１００を用いて行
った。

【００４３】３）試験と結果（１）実施例１〜４０血栓症既往症を有する患者及び健常人の血清を検体とし
て、上記２）の（２）ラテックス試薬によるヒトアンチ
トロンビンＩＩＩ量の測定に従って、検体中のヒトアン
チトロンビンＩＩＩ量を測定した。また、上記２）の
（３）ＳＲＩＤ法によるヒトアンチトロンビンＩＩＩ量
の測定に従って、検体中のヒトアンチトロンビンＩＩＩ
量を測定した。これらの測定結果を、表１に示した。ま
た、表１に示したラテックス試薬によるヒトアンチトロ
ンビンＩＩＩ量とＳＲＩＤ法によるヒトアンチトロンビ
ンＩＩＩ量との相関を図１に示した。

【００４４】（２）比較例１〜４０上記の血栓症既往症を有する患者及び健常人の血清を検
体として、上記２）の（４）市販のラテックス凝集免疫
試薬によるヒトアンチトロンビンＩＩＩ量の測定に従っ
て、検体中のヒトアンチトロンビンＩＩＩ量を測定し
た。これらの測定結果を、表２に示した。また、表２に
示した市販のラテックス凝集免疫試薬によるヒトアンチ
トロンビンＩＩＩ量と表１に示したＳＲＩＤ法によるヒ
トアンチトロンビンＩＩＩ量との相関を図２に示した。

【００４５】

【表１】

【００４６】

【表２】

【００４７】表１及び表２、並びに、図１及び図２から
明らかなように、本発明のヒトアンチトロンビンＩＩＩ
の定量方法によって測定されたヒトアンチトロンビンＩ
ＩＩ量は、ＳＲＩＤ法によるヒトアンチトロンビンＩＩ
Ｉ量と、低濃度域においても高濃度域においてもよく一
致したが、市販のラテックス凝集免疫試薬によるヒトア
ンチトロンビンＩＩＩ量は、ＳＲＩＤ法によるヒトアン
チトロンビンＩＩＩ量と、低濃度域及び高濃度域におい
て、必ずしも一致しなかった。以上の結果から、本発明
のヒトアンチトロンビンＩＩＩの定量方法は、従来のラ
テックス凝集免疫試薬よりも高感度で、かつ、ＳＲＩＤ
法よりも迅速、簡便な優れた定量法であることが確認さ
れた。

【００４８】

【発明の効果】本発明のヒトアンチトロンビンＩＩＩの
定量方法は、上述の構成からなるので、従来のラテック
ス凝集免疫試薬で見られたような検体中の共存物質によ
る非特異的反応を抑制し、かつ低濃度域でもＳＲＩＤ法
と同様の検出感度を示す。また、このヒトアンチトロン
ビンＩＩＩの定量方法を実施するための測定キットを用
いることにより、迅速かつ簡便にヒト血清中のヒトアン
チトロンビンＩＩＩを正確に定量することが可能とな
り、疾患の発見、病態の把握、治療方法の決定等に有効
に利用することができる。

【図面の簡単な説明】

【図１】実施例１〜４０において使用された検体中の、
ラテックス試薬によるヒトアンチトロンビンＩＩＩ量
と、ＳＲＩＤ法によるヒトアンチトロンビンＩＩＩ量と
の相関を示す図である。縦軸は、ＳＲＩＤ法によるヒト
アンチトロンビンＩＩＩ量を表し、横軸は、ラテックス
試薬によるヒトアンチトロンビンＩＩＩ量を表す。

【図２】比較例１〜４０において使用された検体中の、
市販のラテックス凝集免疫試薬によるヒトアンチトロン
ビンＩＩＩ量とＳＲＩＤ法によるヒトアンチトロンビン
ＩＩＩ量との相関を示す図である。縦軸は、市販のラテ
ックス凝集免疫試薬によるヒトアンチトロンビンＩＩＩ
量を表し、横軸は、ＳＲＩＤ法によるヒトアンチトロン
ビンＩＩＩ量を表す。

Claims

【特許請求の範囲】

【請求項１】試料中のヒトアンチトロンビンＩＩＩを
定量するにあたり、前記試料と、抗ヒトアンチトロンビ
ンＩＩＩ抗体を感作した不溶性担体とを溶液中で混合し
て抗原抗体反応による凝集反応を生じさせ、前記凝集反
応に基づく吸光度変化量を測定して検量線と照合するこ
とよりなるヒトアンチトロンビンＩＩＩの定量方法であ
って、前記不溶性担体は、ラテックス粒子であり、前記
溶液中の前記不溶性担体の濃度は、０．０１〜１重量％
であり、前記溶液中に、平均分子量３０００〜１００万
のポリエチレングリコール、及び、平均分子量３０００
〜１００万のポリビニルピロリドンのうち少なくとも１
種０．１〜５重量％が含有され、前記凝集反応は、恒温
において、５秒〜１５分間行うものであり、前記吸光度
変化量は、凝集反応に伴う吸光度の増加量であることを
特徴とするヒトアンチトロンビンＩＩＩの定量方法。
【請求項２】抗ヒトアンチトロンビンＩＩＩ抗体を感
作したラテックス粒子と、平均分子量３０００〜１００
万のポリエチレングリコール、及び、平均分子量３００
０〜１００万のポリビニルピロリドンのうち少なくとも
１種を含有する検体希釈用液とからなることを特徴とす
る請求項１記載のヒトアンチトロンビンＩＩＩの定量方
法を実施するための測定キット。