JPH02257886A

JPH02257886A - Ｗｓ６０４９―ｂ物質、その製造法およびそれを有効成分として含有する抗癌剤

Info

Publication number: JPH02257886A
Application number: JP1243238A
Authority: JP
Inventors: Sumio Kiyoto; 清遠　純夫; Motoaki Nishikawa; 西川　元章; Morita Iwami; 盛太石見; Gen Terano; 寺野　絃; Masanobu Kosaka; 向阪　正信; Hiroshi Imanaka; 宏今中
Original assignee: Fujisawa Pharmaceutical Co Ltd
Current assignee: Fujisawa Pharmaceutical Co Ltd
Priority date: 1982-05-24
Filing date: 1989-09-18
Publication date: 1990-10-18
Also published as: DK232483A; ATE24933T1; EP0095154A1; ES522637A0; JPS58212787A; EP0095154B1; AU1488683A; DK232483D0; ES8501440A1; SU1308200A3; AU565322B2; JPH0216756B2; JPH0415236B2; US4578271A; KR840004783A; KR900004066B1; CA1209935A; DE3369158D1

Abstract

(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。

Description

【発明の詳細な説明】この発明は生物活性を有する新規化合物（以下、ＷＳ６
０４９−　Ｂ物質と称す）に関する。さらに詳しくは、
この発明は、種々の病原微生物に対し抗菌活性を示し、
また抗腫瘍活性を示す新規な６６０４９−　Ｂ物質、そ
の生産方法並びにそれを含有する医薬組成物に関する。

従って、この発明の目的の１つは、種々の病原微生物や
腫瘍に対し活性を示し、ヒトや動物における感染疾患や
種々の癌の治療に有眉な新しいｗｓ６０４９−　Ｂ物質
を提供することである。

この発明の別の目的は、発酵による５１５６０４９−　
Ｂ物質の生産方法を提供することである。

この発明のもう１つの目的は、活性成分とじてＷＳ６０
４９−　Ｂ物質を含有する医薬組成物を提供することで
ある。

この発明のＷＳ６０４９−　Ｂ物質はアクチノマデユラ
・プルベラセウス（Ａｃｔｉｎｏｍａｄｕｒａ　ｐｕｌ
ｖｅｒａｃａｕｓ　）ｓｐ、　ｎｏｖ、　Ｎｏ、６０４
９等のアクチノマデユラ（Ａｃｔｉｎｏｍａｄｕｒａ　
）属に属するＷＳ６０４９−　Ｂ物質生産菌株を栄養培
地中で発酵させることにより生産することができる。

シ５６０４９−　Ｂ物質生産に用いる微生物およびその
微生物の生産に関する詳細は以下に記述する。

ＷＳ６０４９−　Ｂ物質を生産する微生物について：Ｗ
Ｓ６０４９−　Ｂ物質の生産に使用することができる微
生物はアクチノマデユラ属に属する菌株であり、その−
例としては、和歌山県和歌山市で採集された土壌標本か
ら新たに単離されたアクチノマデユラ・プルベラセウス
ｓｐ、　ｎｏｖ、Ｎｏ、６０４９が挙げられる。

この新たに単離したアクチノマデユラ・プルベラセウス
ｓｐ、　ｎｏｖ、　Ｎｏ、６０４９はブダペスト条約下
にジ・アメリカン・タイプ・カルチャー・フレクシ８ン
（Ｔｈｅ　Ａｍｅｒｉｃａｎ　Ｉｙｐａ　Ｃｕ１ｔｕｒ
ａ　Ｃｏ１１ｅｃｔｉｏｎ＞に寄託され、そのフレクシ
８ンに加えられている。その寄託番号はＡ工ＣＣ３９１
００である（寄託日＝１９８２年４月１２日）、なお、
蕗６０４９−　Ｂ物質の生産にあたり、この発明はここ
に記載の特定微生物の使用に限定きれるものではなく、
この菌株は単に例示のために示されているにすぎないこ
とを明示しておく。

さらに、この発明はＷＳ６０４９−　Ｂ物質を生産する
能力を有するあらゆる変異株の使用をも包含しており、
そのような変異株としては微生物の自然突然変異により
生ずる自然変異株並びにＸ線もしくは紫外線照射あるい
はナイトロジェンマスタード油処理等の通常の方法や遺
伝子工学的方法により前記微生物から生産し得る人工突
然変異株がある。

アクチノマデユラ・プルベラセウスｓｐ、　ｎｏｖ。

Ｎｏ、　６０４９は以下の形態学的性質、培養特性およ
び生理学的特徴を有する。

（１）形態学的特徴形態学的特徴の観察にはシェーリングおよびゴツトリー
ブの方法を使用した（　Ｓｈｉｒｌｉｎｇ、　Ｅ、Ｂ。

およびり、　Ｇｏｔｔｌｉｅｂ　：　Ｍｅｔｈｏｄｓ　
ｆｏｒ　ｃｈａｒａｃ−ｔｅｒｉｚａｔｉｏｎ　ｏｆ　
Ｓｔｒｅｐｔｏｍｙｃｅｓ　５ｐｅｃｉｅｓ、　Ｉｎｔ
、　Ｊ。

５ｙｓｔ、　Ｂａｃｔｅｒｉｏｌ、　、　１６　：　３
１３−３４０．１９６６）　。

形態学的観察は光学および電子顕微鏡を用い、酵母エキ
ス・麦芽エキス寒天、無機塩・澱粉寒天およびオートミ
ール寒天上３０℃で２１日間生育許せた培養株にて行な
った。成熟胞子が５〜２０個の胞子の鎖として出現し、
主にかぎ形、時折緩やかならせん形を示した。その胞子
は卵形、０．８〜１．０×１．２〜１．４μ大でいぼ状
表面を呈した。

（２）培養特徴培養特徴はシェーリングおよびゴツトリープ（上述）お
よびワックスマン（Ｗａｋｓｍａｎ、　Ｓ、　Ａ。

Ｔｈｅ　Ａｃｔｉｎｏｍｙｃｅｔａｓ、　Ｖｏｌ、２．
　Ｃ１ａｓｓｉｆｉｃａｔｉｏｎ。

１ｄｅｎｔｉｆｉｃａｔｉｏｎ　ａｎｄ　ｄａｓｃｒｉ
ｐｔｉｏｎ　ｏｆ　ｇｅｎｅｒａ　ａｎｄｓｐｅｃｉｅ
ｓ＋　Ｔｈｅ　Ｓｆｉｌｌｉａｍｓ　ａｎｄ　Ｗｉｌｋ
ｉｎｓ　Ｃｏ、。

Ｂａｌｔｉｍｏｒｅ、　１９６１　）の方法に記載の培
地１０種を用い観察した。培養は３０℃で２１日間行な
った。この研究で使用した色名は新色名帖（日本色彩株
式会社）に基づいた６表１に明らかなように、菌株を酵
母エキス・麦芽エキス寒天、オートミール寒天および無
機塩・澱粉寒天上で生育させた場合、コロニーは青色系
に属していた。

可溶性色素は産生しなかった。

細胞壁組成はベラカーら［Ｂｅａｋｅｒ、　Ｂ、、　Ｍ
、　Ｐ。

Ｌａｃｈａｖａｌｉｅｒ、　Ｒ，Ｅ、　Ｇｏｒｄｏｎお
よび）１．　Ａ。

Ｌｅｃｈｅｖａｌｉａｒ　：　Ｒａｐｉｄ　ｄｉｆｆｅ
ｒｅｎｔｉａｔｉｏｎ　ｂａｔｖｅｅｎＮｏｃａｒｄｉ
ａ　ａｎｄ　Ｓｔｒｅｐｔｏｍｙｃｅｓ　ｂｙ　ｐａｐ
ｅｒｃｈｒｏｍａｔｏｇｒａｐｈｙ　ｏｆ　ｗｈｏｌｅ
−ｃａｌｌ　ｈｙｄｒｏｌｙｓａｔｅｓ。

Ａｐｐｌ、　Ｍｉｃｒｏｂｉｏｌ、、　１２，４２１−
４２３．１９６４コおよび山口（Ｙａｍａｇｕｃｈｉ　
Ｔ、　：　Ｃｏｍｐａｒｉｓｏｎ　ｏｆ　ｔｈｅ　ｃｅ
ｌｌ−ｗａｌｌ　ｃｏｍｐｏｓｉｔｉｏｎ　ｏｆ　ｍｏ
ｒｐｈｏｌｏｇｉｃａｌｌｙ　ｄｉｓｔｉｎｃｔａｃｔ
ｉｎｏｍｙｃｅｔａｓ、　Ｊ、　Ｂａｃｔｅｒｉｏｌ、
　８９．４４４−４５３゜１９６５　）の方法により分
析した。このＮｏ、　６０４９株の細胞壁はメソ−ジア
ミノピメリン酸を含有していた。全細胞氷解物にはグル
コース、マンノースお、よびマデュロース（３−〇−メ
チルーＤ−ガラクトース）の存在が認められた。

（３）生物学的並びに生理学的特徴生育に必要な温度域並びに至適温度を温度勾配培養器（
東洋科学産業部）を用い酵母エキス・麦芽エキス寒天培
地上で検討した。生育に要するｐＨ域および至適ｐＨは
、液体培養法により、酵母エキス・麦芽エキスブロス中
３０℃にて７日間振盪することにより検討した。ゼラチ
ン液化は３０℃で１４日間、ゼラチン培地で調べた。ａ
ｌ粉の加水分解は無機塩・澱粉寒天平板上にて３０℃で
１４日間培養した後、澱粉−ヨウ素反応により観察した
。ミルクのペプトン化は脱脂乳培地中３０℃で１４日間
観察した。

メラニン色素産生はチロシン寒天、ペプトン・酵母エキ
ス・鉄寒天およびトリプトン・酵母エキスブロスにて観
察した０表２に明らかなように、生育に適する温度域は
２０℃から４１℃であり、至適温度は３０℃から３５℃
であった。＊粉加水分解、ミルクペプトン化、Ｈ２Ｓ産
生、ウレアーゼ活性、硝酸塩還元およびメラニン産生は
陰性であったが、ゼラチン液化およびミルク凝固は陽性
であった。

炭素源の利用性はブリトノ１ムおよびコ゛・／トリーブ
（Ｐｒｉｄｈａｍ、　Ｔ、　Ｇ、　ａｎｄ　Ｄ、　Ｇｏ
ｔｔｌｉｅｂ　：　Ｔｈｅｕｔｉｌｉｚａｔｉｏｎ　ｏ
ｆ　ｃａｒｂｏｎ　ｃｏｍｐｏｕｎｄｓ　ｂｙ　ｓｏｍ
ｅＡｃｔｉｎｏｍｙｃｅｔａｌｅｓ　ａｓ　ａｎ　ａｉ
ｄ　ｆｏｒ　ｓｐａｃｉｅｓｄａｔｅｒｍｉｎａｔｉｏ
ｎ、　Ｊ、　Ｂａｃｔｅｒｉｏｌ、　５６：　１０７−
１１４゜１９６５）の方法に基づき検討した。結果は３
０℃で１４日培養後検討しも０表３に示すように、利用
し得る炭素源は少なく、わずかにＤ−キシロース、Ｄ−
グルコースおよびＤ−トレ／へロースのみが利用されて
いた。前述の細胞壁組成および細胞糖質組成は、Ｎｏ、
６０４９株がアクチノマデユラ属の一菌株であることを
示している。

この菌株を、既に明らかにされているアクチノマデユラ
の既知種の菌株特徴と比較した（Ｎｏｎｏｍｕｒａ＋　
Ｈ，およびＹ、　０ｈａｒａ　：　Ｄｉｓｔｒｉｂｕｔ
ｉｏｎｏｆ　ｇｃｔｉｎｏｍｙｃｅｔｅｓ　ｉｎ　５ｏ
ｉｌ　；　　６　、　　Ｓｏｍｅ　ｎｅｗｓｐｅｃｉｅ
ｓ　ｏｆ　ｔｈｅ　ｇｅｎｕｓ　Ａｃｔｉｎｏｍａｄｕ
ｒａ　；Ｌｅｃｈａｖａｌｉｅｒ　ｅｔ　ａｌ、、　Ｊ
、　Ｆｅｒｍｅｎｔ、　Ｍｅｃｈｎｏｌ、。

４９　：　９０４−９１２．１９７１　：　Ｇｏｏｄｆ
ａｌｌｏｗ、　Ｍ、、　Ｇ。

Ａｌｄｅｒｓｏｎ　ａｎｄ　Ｊ、Ｌａｃａｙ　　：　　
Ｎｕｍｅｒｉｃａｌ　ｔａｘｏｎｏｍｙｏｆ　Ａｃｔｉ
ｎｏｍａｄｕｒａ　ａｎｄ　ｒｅｌａｔｅｄ　ａｃｔｉ
ｎｏｍｙｃｅｔｅｓ。

Ｊ、　　Ｇｅｎ、　　Ｍｉｃｒｏｂｉｏｌ、、　　１１
２　　：　　９５−１１１．　１９７９　　；τｏｍｉ
ｔａ、に、、Ｙ、Ｈｏ５ｈｉｎｏ、１．５ａｓａｈｉｒ
ａ　ａｎｄ　Ｈ。

Ｋａｗａｇｕｃｈｉ　　：　　ＢＢＭ−９２８，ａ　ｎ
ｅｗ　ａｎｔｉｔｕｍｏｒａｎｔｉｂｉｏｔｉｃ　ｃｏ
ｍｐｌｅｘ　２．Ｔａｘｏｎｏｍｉｃ　５ｔｕｄｉｅｓ
　ｏｎｔｈｅ　ｐｒｏｄｕｃｉｎｇ　ｏｒｇａｎｉｓｍ
、　　Ｊ、　　Ａｎｔｉｂｉｏｔｉｃｓ、　　３３　：
１０９８−１１０２．１９８０）。

Ｎｏ、　６０４９株はアクチノマデユラ・ベルフッスポ
ラ（Ａｃｔｉｎｏｍａｄｕｒａ　ｖｅｒｒｕｃｏｓｏｓ
ｐｏｒａ　）と類似しているものと思われる。しかし、
Ｎｏ、６０４９株は次の点でこの種と区別できることが
判明した０表４に示すように、Ｄ−フラクトース、Ｌ−
アラビノース、マンニトール、シュクロースおよびグリ
セリンの利用性が異なっている。差異は硝酸塩還元およ
びミルク・ペプトン化ででも観察される。　Ｎｏ。

６０４９株の気中菌糸の色は、無機塩−澱粉寒天培地上
では白色系に属し、一方Ａ、ベルフッスポラのそれは灰
色系に属した。　Ｎｏ、６０４９株とＡ、ベルコツスポ
ラの培養特性を直接比較した結果は表５に示した。

上記比較の結果、Ｎｏ、６０４９株はアクチノマデユラ
属の新種であると思われる。酵母エキス・麦芽エキス寒
天、オートミール寒天および無機塩・澱粉寒天培地上の
粉末状となることにより、Ｎｏ。

６０４９株にアクチノマデユラ・プルベラセウスｓｐ。

ｎｏｖ、の名称を提案した。

表Ｉ　　Ｎｏ、６０４９株の培養特徴オートトル寒天　　　　　緑白色　無　色　なし無機塩
・澱粉寒天グルコース・アスパラギン寒天シュクロース・硝酸塩寒天栄養寒天バレイシ蘇・ダキストロース寒天チロシン寒天白　色　明赤色　なしな　し　　桃　色　なしな　　しな　　しな　　し灰白色淡桃色明赤色淡桃色淡桃色なしなしなしなし表２　　Ｎｏ、６０４９株の生理学的特徴生育温度範囲
　　　２０℃−４１℃ 至　　適　　温　　度　　　　　　　３０℃−３５℃生
育ｐＨ範囲　　　６−１Ｏ至　　　適　　　ｐＨ７−８硝酸塩還元　　陰　性澱粉の加水分解　　　　陽　性ミルク凝固　　　弱陽性ミルクペプトン化　　　　　陰　　性ゼラチンの液化　　　　陽　性メラニン産生　　　陰　性Ｈ２Ｓ　　産　　　生　　　　　　　陰　　　性ウ　し
　ア　−　ゼ　　　　　　　陰　　　性表３Ｎｏ、　６０４９株の炭素源の資化 −」Ｌコｈａ− 源な　　　　しグリセリンＤ−キシロースクエン酸ナトリウムラクトースＤ−フラクトースラムノースマルトースコハク酸ナトリウムイヌリンイノシトールラフィノースＤ−ガラクトースＬ−アラビノースＤ−グルコースマンニトールＤ−マンノースシュクロースセルロースＤ−）レハロースサリシリンキチン酢酸ナトリウム＋：利用する　士：多少利用するｍ：利用しない ± ＋＋生理学的特徴における相違点表５Ｎｏ、　６０４９株とアクチノマデユラ・ベルコンスボ
ラとの培養特徴の比較Ｄ−フラクトースし−アラビノースマンニトールシュクロースグリセリン硝酸塩還元＋＋ ± 陰性＋＋＋ ± ＋＋陽性＋＋：かなり資化する＋：責化する ±：多少資化する：費化しない１ニペブトン・酵母エキス・鉄寒天２：栄養寒天３：バレイショ・デキストロース寒天４：シュクロース・硝酸塩寒天５：チロシン寒天６：酵母エキス・麦芽エキス寒天７：オートミール寒天８：無機塩・澱粉寒天９ニゲルコース・アスパラギン寒天讐５６０４９−　Ｂ物質の産生この発明のＷＳ６０４９−　Ｂ物質は、アクチノマデユ
ラ属に属するＷＳ６Ｑ４９−　Ｂ物質生産菌株（例えば
、アクチノマデユラ・プルベラセウスｓｐ、　（ＩＯＶ
。

Ｎｏ、　６０４９）を好気的条件下に利用し得る炭素源
および窒素を含有する栄養培地中で生育させる（例えば
、振盪培養、深部培養等）ことにより生産させる。

栄養培地中の好ましい炭素源は、キシロース、グルコー
ス、シュクロース、澱粉等の糖質である。

好ましい窒素源は酵母エキス、ペプトン、グルテンミー
ル、綿実粕、大豆粉、コーンステイープリカー、乾燥酵
母、麦芽等、並びにアンモニウム塩（例えば、硝酸アン
モニウム、リン酸アンモニウム等）、尿素、アミノ＃等
の無４Ｍ！ｆｉびに有４１！窒素化合物である。

前記の炭素源および窒素源は種々組合せて用いることが
でき、また純度の高いものである必要はなく、微量の成
長因子やかなりの量の鉱質栄養素を含有する低純度のも
のもまた使用することができる。

必要な場合には、培地に次酸カルシウム、リン酸ナトリ
ウムまたカリウム、塩化ナトリウムまたはカリウム、マ
グネシウム塩、銅塩等の鉱酸塩を加えてもよい。

必要であれば、特に培養培地の発泡が激しい場合には、
液体パラフィン、脂肪油、植物油、鉱油またはシリコー
ン等の消泡剤を加えてもよい。

他の抗生物質の大量生産に使用される好ましい方法の場
合と同様に、深部好気培養条件がＷＳ６０４９−Ｂ物質
の大量生産にも好ましい。

少量生産の場合には、フラスコまたはビン中での振盪培
養または表面培養が使用される。更に、大きなタンク中
で行なわれる場合、ＷＳ６０４９−　Ｂ物質の生産過程
における生育遅滞を避けるため、生産タンク中に接種す
るにはＷＳ６０４９−　Ｂ物質生産菌株の前培養物を使
用するのが好ましい、従って、まず、比較的少量の培地
に微生物の胞子または菌糸を接種し、この培地を培養す
ることにより前培養物を生産し、続いてその前培養物を
無菌的に大きなタンクに移すことが望ましい、前培養物
を生産する培地としては、賢５６０４９−　Ｂ物質生産
に使用される培地とほぼ同じ培地か、あるいは全く別の
培地を用いる。

培養混合物の攪拌および通気は種々の方法で行ない得る
。攪拌はプロペラまたは類似の機械的装置、発酵器の回
転または振盪、種々のポンプ装置、または無菌空気を培
地に吹込むことによって行なってよい０通気は無菌空気
を発酵混合物に吹込むことにより行なってよい。

発酵は、通常的２０℃から４０℃の間、好ましくは２５
−３０℃の温度で、約５０−１００時間、行なわれる。

発酵が終了すると、培養ブロスはＷＳ６０４９−　Ｂ物
質を回収するため、抗生物質の回収および精製に通常使
用されている種々の方法（例えば、適当な溶媒またはそ
のような溶媒の混合物を用いての溶媒抽出法、クロマト
グラフィ、または適当な溶媒またはそのような溶媒の混
合物からの再結晶法）に供する。

ここで、発酵ブロスかもの％ＪＳ６０４９−　Ｂ物質の
回収および精製に当っては、この発明に関わるアクチノ
マデユラ属に属するＷＳ６０４９−　Ｂ物質生産菌株（
例えば、アクテノマデユラ・プルベラセウスｓｐ。

ｎｏｖ、　Ｎｏ、６０４９）は通常、ＷＳ６０４９−　
Ｂ物質と同時に極めて類似した化学構造を有すると思わ
れるｗＳ６０４９−　Ａ物質を生産することが多いので
、両者を分離精製する必要がある。

すなわち、一般に、ＷＳ６０４９−　Ａ物質および賢５
６０４９−　Ｂ物質は主に培養菌糸体中に得られる。

従って、培養ブロスから濾過または遠心分離により菌糸
体ケーキを得、続いてＷＳ６０４９−　Ａ物質およびＷ
１８Ｏ４９−Ｂ物質は前記菌糸体ケーキから、アセトン
、酢酸エチル等の適当な溶媒またはそれらの混合物を用
いて抽出することにより回収される。

抽出物は通常の方法により処理しＷＳ６０４９−　Ａ物
質およびＷＳ６０４９−　Ｂ物質を得る０例えば、抽出
物は蒸発または蒸留により濃縮して少量にし、る６０４
９−　Ａ物質およびＷＳ６０４９−　Ｂ物質を含有する
残渣を得、この残渣を通常の精製方法（例えばクロマト
グラフィあるいは適当な溶媒またはそれらの混合物から
の再結晶）により精製する。

すなわち、ＷＳ６０４９−　Ａ物質およびＷＳ６０４９
−　Ｂ物質は、例えば、上記残渣をクロロホルム等の適
当な溶媒に溶解し、その溶液を、例えばシリカゲルカム
でクロロホルム、アセトン等の適当な溶媒またはそのよ
うな溶媒の混合物を用いクロマトグラフィにかけること
により分離でき、このようにして分離したＷＳ６０４９
−　Ｂ物質をさらに、通常の方法（例えば高速液体クロ
マトグラフィ）により精製することができる。

ＷＳ６０４９−　Ｂ物質は下記の物理化学的性質を有す
る。

１）形状および色無色の粉末２）呈色反応陽性：ドラーゲンドルフ反応、エールリッヒ反応ｐよび
硫酸セリウム反応陰性：ニンヒドリン反応３）　溶解性可溶：メタノール、アセトン、クロロホルムわずかに可
溶：ジエチルエーテル不溶：へキサン４）　融点　１４５℃（分解）５）比旋光度：［α］ε５＝　−２０１’　（Ｃ＝１．０．　ＣＨＣｌ
３）６）　紫外吸収スペクトル＝２８０ｎｍ（εＩＸ、４５０）ｃｍ＝３２０　ｎｍ　（Ｅ　”　　＝：２５０）ｌＣｗ７）　赤外吸収スペクトル１７２５゜１４６５゜１３１０゜１０７０゜８８０゜１６７５．１６１０゜１４５０．１４０５゜１２５０．１１８０゜１０２０、　９８５゜８５０ｃｍ−１１５９５゜１３７０゜１１５５゜９５５゜１５２０゜１３５０゜１１１５゜９０５゜８）元素分析Ｃ：　５１．５８Ｘ、　Ｈ：　５．７５Ｘ、　Ｎ：　４
．２７Ｘ、　５７９．８０Ｘ９）　薄層クロマトグラフ
ィｍ　　　　−退」Ｉ口Ｉ　　　　　　　Ｒｆ値シリカゲ
ルシート　　　　　クロロホルム：メタノール　　　　
　　　　０．５３（１０：１バｖ／ｖ）クロロホルム：アセトン（１：１）（ｖ／ｖ）０．１８１０）分子量ゲル透過クロマトグラフィ：　１１００〜１２００１１
）Ｃ核磁気共鳴スペクトル（ＣＤＣｌ３）：δ（ｐｐｍ
）　　：　　１３．８．　１６．７．　１７．６．　１
９．８．　２２．７゜２９．１．　３３．９．　３４．
１．　３５．２．　３９．５゜５２．８．　５５．８．
　５６．１．　５６．３．　６１．０゜６１．５．　６
４．６．　６６．７．　６８．４．　６９．０゜６９．
３．　６９．８．　７０．４．　７１．９．　７５．９
゜７６．２．　７６．７．　７７．２．　７７．３．　
７７．６゜８３．２．　８６．６．　８ｇ、３．　９０
．７．　９７．３゜９８．６．　９９．０．　９９．６
．　９９．７．　１０３．９゜１０７．８．　１１２．
７．　１２３．２．　１２４゜９゜１２９．８．　１３
１．０．　１３８．８．　１４４．２゜１４６．３．　
１５４．０．　１５４．６．　１６０．９゜１６６．６
．１９２．４　（添付説明図の図１に示す）１２）Ｈ核磁気共鳴スペクトル（ＣＤＣｌ２）　：８　
（ｐｐｍ）　：１１．７５　（１）１．ｓ）、　８．５
７　（ＩＨ，ｓ）。

７．４８　（ＩＨ，ｓ）、　６．６　（ＩＨ，ｄ、ｄ、
）、　　６．２４　（ＩＨ。

ｄ、Ｊ＝１．３Ｈｚ＞、　　６．１８　（ＩＨ，ｂｒ、
ｓ）、　　５．９３　（ＩＨ。

ｄ、Ｊ：９．２Ｈｚ）、　５．８３　（ＩＨ，ｄ、ｄ、
Ｊ＝９Ｈｚおよび１．３Ｈｚ＞、　　５．７０　（ＩＨ
，ｂｒ、ｄ）、　　５．５　（ＩＨ，ｍ）。

５．４７　（ＩＩ、ｄ、Ｊ：２．３Ｈｚ＞、　　５．４
２　（ＩＨ，ｂｒ、ｓ）。

４、’ｊｓ　（ＬＨ，ｄ、Ｊ＝９Ｈｚ）、　　４．７０
〜４．６　（２Ｈ，ｍ）。

４．５６　（ＬＨ，ｄ、Ｊ＝２．３Ｈｚ）、　　４．２
４　（ＩＨ，ｓ）。

４．１５−３．４　（１２〜１８Ｈ）、　　３．９７　
（３Ｈ，ｓ）、　　３．８８（３Ｈ，ｓ）、　　３．７
９　（３Ｈ，ｓ）、　　３．４２　（３Ｈ，ｓ）、　　
２．５２（３Ｈ，ｓ）、　　２．ｆｒ２．４　（２Ｈ，
ｍ）、　　２．４〜２．２（７〜８Ｈ）、　　２．１２
　（３Ｈ，ｓ）、　　２．２〜２．０　（２Ｈ，ｍ）。

１．５　（２Ｈ，ｍ）、　　１．４　（３Ｈ，ｄ、Ｊ＝
６Ｈｚ＞、　　１．３５（３８，ｄ、Ｊ＝６Ｈｚ）、　
１．３３　（３Ｈ，ｄ、、Ｃ６Ｈｚ＞　（添付説明図の
図２に示す）賢５６０４９−　Ｂ物質の生物学的性質ＷＳ６０４９−
　Ｂ物質の生物学的性質は以下に説明する。

１）讐５６０４９−　Ｂ物質の抗腫瘍活性：Ｗ１８Ｏ４
９−Ｂ物質の抗腫瘍活性はマウスでの実験的腫瘍系で検
討した。

リンパ球性白血病Ｐ　−３８８をＢＯＦ１マウスの腹腔
内に、ｌＸ１０６細胞／マウスの接種量で移植した。腫
瘍細胞移植２４時間後に、各用量の抗生物質をマウスに
腹腔内投与した。投与は１．２．３および４日目に行な
った。

ＷＳ６０４９−　Ｂ物質は生理食塩溶液（０，９％食塩
液）に懸濁した。対照動物には生理食塩溶液を腹腔内投
与した。注射量は全実験とも０．２賊とした。

治療効果は平均生存時間で測定し、結果は１７６％（薬
物投与評の生存時間／対照群の生存時間ｘｌＯＯ）で表
わした。毒性は、腫瘍接種後０日から４日目の間の体重
減少として測定した。

結果は表６に示す、　ＷＳ６０４９−　Ｂ物質は白血病
Ｐ−３８８に対し優れた活性を示した。計画した。、　
０２５−１２．０４／ＩＱＥの用量ではマウスは有意な
延命を示した。

（以下余白）表７ＷＳ６０４９−　Ｂ物質の抗菌スペクトル２）　　ＷＳ
６０４９−Ｂ物質の抗菌活性ＷＳ６０４９−　Ｂ物質の
抗菌活性を、細菌の場合はブイヨン培地中にて、真菌お
よび酵母の場合はサブロー培地中にて、系列ブロス希釈
法により検討した。最小発育阻止濃度（ｔｌＩｃ）は、
細菌の場合３７℃で一晩培養後、真菌および酵母の場合
２８℃で４８−７２時間培養後、ｓｘ／ｌ１ＩＱで表わ
した。

ＷＳ６０４９−　Ｂ物質の抗菌スペクトルは表７に示す
。

（以下余白）このように、抗生物質ＷＳ６０４９−　Ｂ物質は広い抗
菌活性を示し、これまで発見された最も活性な抗生物質
の範中に入るものと思われる。

３）％ｊＳ６０４９−　Ｂ物質の急性毒性ＷＳ６０４９
−　Ｂ物質のｄｄｙマウスにおける腹腔内投与の急性毒
性は、０．０５ｍｇ／　ｋｇである。

本発明の製剤組成物は、活性成分として、外用、経口ま
たはリド経口使用に適した有機または無機担体あるいは
賦形剤と混合したＷＳ６０４９−　Ｂ物質を含有する製
剤の形（例えば、固体、半固体または液体）で−使用す
ることができる。活性成分は、例えば、錠剤、粒剤、カ
プセル剤、坐剤、溶液、乳剤、懸濁剤およびその他使用
に適した剤形にするための通常無毒で、薬学的に許容し
得る担体と結合させてもよい、使用することができる担
体としては、水、グルツース、ラクトース、アカシアゴ
ム、ゼラチン、マンニトール、澱粉糊、マグネシウム三
ケイ酸塩、タルク、トウモロコシ澱粉、ケラチン、コロ
イド状シリカ、バレイショ澱粉、尿素およびその他が、
固体、半固体または液体での製剤の製造に適するものと
して挙げられ、さらに補助剤、安定化剤、濃稠化剤、着
色剤および香料を使用してもよい、活性が目的化合物は
、製剤組成物中に、疾病の進行または病態に望む抗菌効
果を発揮するのに十分な量で含有されている。

この組成物を人間に使用する場合、静脈内、筋肉内また
は経口投与により使用することが望ましい０本発明の目
的化合物の投与量あるいは治療上有効な量は、治療を受
ける個々の患者の年齢や状態に依存し様々であるが、一
般に、人間または動物の体重−あたり活性成分的０．０
Ｌ−５ｋが１日用量として疾病の治療に投与され、平均
１回用量として約０．１肩、１（，１０Ｐ＠、５０寓、
１００（および２００（が一般に投与きれる。

以下の実施例は本発明の例示の目的で示すものである。

宜１艷１２％澱粉、０．５％グルコース、１％綿実粉、１％乾燥
酵母、０．５％コーンステイープリカーおよび０．２％
炭酸カルシウムを含有する液体培地（１６０ｍｌｌ　）
　（ｐＨ７，０）を３個（７）　５００＋＋１１１容エ
ルレンマイヤーフラスコそれぞれに入れ、１２０℃で３
０分間滅菌した。アクチノマデユラ・プルベラセウスｓ
ｐ、　ｎｏｖ。

Ｎｏ、　６０４９　（ＡＴＣＣ３９１００）の斜面培養
物の一白金耳を各培地に接種し、振幅３インチ、回転２
２０ｒｐｍのロータリー振ｉａｍ上３０℃で４日間培養
した。得られた培養物は、１２０℃で３０分間滅菌した
３０２容ジヤ一型発酵器中に入れた、シュクロース４％
、乾燥酵母０．５％、リン酸水素二カリウム０．１％、
硫酸マグネシウム（７Ｈ２Ｏ）　０．１％、塩化ナトリ
ウム０．１％、硫酸アンモニア０．２％、炭酸カルシウ
ム０２％、硫酸鉄（７Ｈ２Ｏ）０．０００１％、塩化マ
ンガン（４）１２０）　０．０００１％、硫酸亜鉛Ｃ７
Ｈ２Ｏ）　０．０００１％およびヨウ化ナトリウム０．
００００５％を含有する液体培地（２０ｊりに接種し、
通気＜ｚｏｌ１分）並びに攪拌（３００ｒ、　ｐ、　ｍ
　）下に３０℃で４日間培養した。

かくして得た培養プロスは珪藻土（１ｋｇ）を用い濾過
した。得られた菌糸体に酢酸エチル１ＯＮを加え、１０
分間かき混ぜた。この抽出操作を２度行ない、その抽出
物を合わせた。抽出物は１％重次酸ナトリウム１０にお
よび１０％塩化ナトリウム１０！で洗浄した。その後抽
出物は真空濃縮し、１２とした。無水硫酸ナトリウムで
脱水後、この酢酸エチル溶液はきらに真空濃縮し、得ら
れた油状物質はシリカゲル（７０１１１Ｑ　）を用いカ
ラム・クロマトグラフィにかけた。カラムはクロロホル
ム２００ｍ１ｌで洗い、クロロホルム・メタノールｆｉ
液（４０：ｔ）で溶出した。活性物質を含む分画（５０
０１１１Ｑ　）を真空濃縮して粗粉末（１４０ｍｇ）を
得た。

この粉末をクロロホルム２ｒｎＱに溶解し、シリカゲル
（２０＋＋Ｉ＋　）を用いカラムＣζかＣすた。カラム
はクロロホルム・アセトン混液（８：１）で洗イ、δ６
０４９−　Ａ物ｆｆをクロロホルム・アセトン混液（４
：１）で溶離した。　ＷＳ６０４９−　Ｂ物質はクロロ
ホルム・アセトン混液（２：１）を用い溶離した。

ＷＳ６０４９−　Ｂ物質を含む分画を真空濃縮して、δ
６０４９−　Ｂ物質（１５ｍｇ）の粗粉末を得た。この
粗粉末を高速液体クロマトグラフィ（ＨＰＬＣ）にかけ
た、　ＨＰＬＣは、ウォーターズＵ６に型注入器を備え
たウォーターズ６０００　Ａ型ポンプを用いて行なった
。クロマトグラフィは、ウォーターズ４４０型Ｗ検出器
を用い、２５４ｎｍで検査した。マイクロポラシル（Ｍ
　Ｐｏｒａｓｉｌ　）　（メルク・ダーマシュタット）
を充填したスチール製カラム（内径７．９ｍｍ、長さ３
００ｍｍ　）を流速３ＩＩ１１１／分で使用した。移動
相はヘキサン拳クロロホルム・メタノールｆｉ液（２５
：１０：２）を使用した。上記条件下でＨＰＬＣを行な
い、ＷＳ６０４９−　Ｂ物質４含む分画（保持時間：２
６分）を得た。この分画からＷＳ６０４９−　Ｂ物質の
無色の粉末８ｍｇを得た。

【図面の簡単な説明】

図１はこの発明で得られるＷＳ６０４９−　Ｂ物質の１
３０核磁気共鳴スペクトルを、図２はその１Ｈ核磁気共
鳴スペクトルをそれぞれ示す。

Claims

【特許請求の範囲】（１）下記の理化学的性質を有するＷＳ６０４９−Ｂ物
質。１）形状および色無色の粉末２）呈色反応陽性：ドラーゲンドルフ反応、エールリッヒ反応および
硫酸セリウム反応陰性：ニンヒドリン反応３）溶解性可溶：メタノール、アセトン、クロロホルムわずかに可
溶：ジエチルエーテル不溶：ヘキサン４）融点１４５℃（分解）５）比旋光度［α］＾２＾５＿Ｄ＝−２０１゜（Ｃ＝１．０、ＣＨＣ
ｌ＿３）６）紫外吸収スペクトル ▲数式、化学式、表等があります▼ ▲数式、化学式、表等があります▼ ▲数式、化学式、表等があります▼ ７）赤外吸収スペクトル ▲数式、化学式、表等があります▼ ８）元素分析Ｃ：５１．５８％、Ｈ：５．７５％、Ｎ：４．２７％、
Ｓ：９．８０％９）薄層クロマトグラフィ ▲数式、化学式、表等があります▼ ▲数式、化学式、表等があります▼ １０）分子量ゲル透過クロマトグラフィ：１１００〜１２００１１）
＾１＾３Ｃ核磁気共鳴スペクトル（ＣＤＣｌ＿３）：δ
（ｐｐｍ）：１３．８、１６．７、１７．６、１９．８
、２２．７、２９．１、３３．９、３４．１、３５．２
、３９．５、５２．８、５５．８、５６．１、５６．３
、６１．０、６１．５、６４．６、６６．７、６８．４
、６９．０、６９．３、６９．８、７０．４、７１．９
、７５．９、７６．２、７６．７、７７．２、７７．３
、７７．６、８３．２、８６．６、８８．３、９０．７
、９７．３、９８．６、９９．０、９９．６、９９．７
、１０３．９、１０７．８、１１２．７、１２３．２、
１２４．９、１２９．８、１３１．０、１３６．８、１
４４．２、１４６．３、１５４．０、１５４．６、１６
０．９、１６６．６、１９２．４１２）＾１Ｈ核磁気共鳴スペクトル（ＣＤＣｌ＿３）：
δ（ｐｐｍ）：１１．７５（１Ｈ，ｓ）、８．５７（１
Ｈ，ｓ）、７．４８（１Ｈ，ｓ）、６．６（１Ｈ，ｄ．
ｄ．）、６．２４（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝１．３Ｈｚ）、６．
１８（１Ｈ，ｂｒ．ｓ）、５．９３（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝９
．２Ｈ）、５．８３（１Ｈ，ｄ．ｄ，Ｊ＝９Ｈｚおよび
１．３Ｈｚ）、５．７０（１Ｈ，ｂｒ．ｄ）、５．５（
１Ｈ，ｍ）、５．４７（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝２．３Ｈｚ）、
５．４２（１Ｈ，ｂｒ．ｓ）、４．９８（１Ｈ，ｄ，Ｊ
＝９Ｈｚ）、４．７０〜４．６（２Ｈ，ｍ）、４．５６
（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝２．３Ｈｚ）、４．２４（１Ｈ，ｓ）
、４．１５〜３．４（１２〜１８Ｈ）、３．９７（３Ｈ
，ｓ）、３．８８（３Ｈ，ｓ）、３．７９（３Ｈ，ｓ）
、３．４２（３Ｈ，ｓ）、２．５２（３Ｈ，ｓ）、２．
６〜２．４（２Ｈ，ｍ）、２．４〜２．２（７〜８Ｈ）
、２．１２（３Ｈ，ｓ）、２．２〜２．０（２Ｈ，ｍ）
、１．５（２Ｈ，ｍ）、１．４（３Ｈ，ｄ，Ｊ＝６Ｈｚ
）、１．３５（３Ｈ，ｄ，Ｊ＝６Ｈｚ）、１．３３（３
Ｈ，ｄ，Ｊ＝６Ｈｚ）（２）アクチノマデュラ属に属す
るＷＳ６０４９−Ｂ物質生産菌を培地に培養し、得られ
る培養物からＷＳ６０４９−Ｂ物質を分離採取すること
を特徴とするＷＳ６０４９−Ｂ物質の製造法。（３）下記の物理化学的性質を有するＷＳ６０４９−Ｂ
物質を有効成分として含有する抗癌剤。１）形状および色無色の粉末２）呈色反応陽性：ドラーゲンドルフ反応、エールリッヒ反応および
硫酸セリウム反応陰性：ニンヒドリン反応３）溶解性可溶：メタノール、アセトン、クロロホルムわずかに可
溶：ジエチルエーテル不溶：ヘキサン４）融点１４５℃（分解）５）比旋光度［α］＾２＾５＿Ｄ＝−２０１゜（Ｃ＝１．０、ＣＨＣ
ｌ＿３）６）紫外吸収スペクトル ▲数式、化学式、表等があります▼ ▲数式、化学式、表等があります▼ ▲数式、化学式、表等があります▼ ７）赤外吸収スペクトル ▲数式、化学式、表等があります▼ ８）元素分析Ｃ：５１．５８％、Ｈ：５．７５％、Ｎ：４．２７％、
Ｓ：９．８０％９）薄層クロマトグラフィ ▲数式、化学式、表等があります▼ １０）分子量ゲル透過クロマトグラフィ：１１００〜１２００１１）
＾１＾３Ｃ核磁気共鳴スペクトル（ＣＤＣｌ＿３）：δ
（ｐｐｍ）：１３．８、１６．７、１７．６、１９．８
、２２．７、２９．１、３３．９、３４．１、３５．２
、３９．５、５２．８、５５．８、５６．１、５６．３
、６１．０、６１．５、６４．６、６６．７、６８．４
、６９．０、６９．３、６９．８、７０．４、７１．９
、７５．９、７６．２、７６．７、７７．２、７７．３
、７７．６、８３．２、８６．６、８８．３、９０．７
、９７．３、９８．６、９９．０、９９．６、９９．７
、１０３．９、１０７．８、１１２．７、１２３．２、
１２４．９、１２９．８、１３１．０、１３６．８、１
４４．２、１４６．３、１５４．０、１５４．６、１６
０．９、１６６．６、１９２．４１２）＾１Ｈ核磁気共鳴スペクトル（ＣＤＣｌ＿３）：
δ（ｐｐｍ）：１１．７５（１Ｈ，ｓ）、８．５７（１
Ｈ，ｓ）、７．４８（１Ｈ，ｓ）、６．６（１Ｈ，ｄ．
ｄ．）、６．２４（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝１．３Ｈｚ）、６．
１８（１Ｈ，ｂｒ．ｓ）、５．９３（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝９
．２Ｈｚ）、５．８３（１Ｈ，ｄ．ｄ，Ｊ＝９Ｈｚおよ
び１．３Ｈｚ）、５．７０（１Ｈ，ｂｒ．ｄ）、５．５
（１Ｈ，ｍ）、５．４７（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝２．３Ｈｚ）
、５．４２（１Ｈ，ｂｒ．ｓ）、４．９８（１Ｈ，ｄ，
Ｊ＝９Ｈあ）、４．７０〜４．６（２Ｈ，ｍ）、４．５
６（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝２．３Ｈｚ）、４．２４（１Ｈ，ｓ
）、４．１５〜３．４（１２〜１８Ｈ）、３．９７（３
Ｈ，ｓ）、３．８８（３Ｈ，ｓ）、３．７９（３Ｈ，ｓ
）、３．４２（３Ｈ，ｓ）、２．５２（３Ｈ，ｓ）、２
．６〜２．４（２Ｈ，ｍ）、２．４〜２．２（７〜８Ｈ
）、２．１２（３Ｈ，ｓ）、２．２〜２．０（２Ｈ，ｍ
）、１．５（２Ｈ，ｍ）、１．４（３Ｈ，ｄ，Ｊ＝６Ｈ
ｚ）、１．３５（３Ｈ，ｄ，Ｊ＝６Ｈｚ）、１．３３（
３Ｈ，ｄ，Ｊ＝６Ｈｚ）（４）アクチノマデュラ・プル
ベラセウスｓｐ．ｎｏｖ．Ｎｏ．６０４９。