JP7516254B2

JP7516254B2 - Ｉｌ－１５／ｉｌ－１５ｒａヘテロ二量体ｆｃ融合タンパク質およびその使用

Info

Publication number: JP7516254B2
Application number: JP2020557238A
Authority: JP
Inventors: バーネット，マシュー; デスジャルレイス，ジョン; ラシッド，ルマナ; ヴァルマ，ラジャット; ボンゾン，クリスティーン
Original assignee: ゼンコアインコーポレイテッド
Priority date: 2018-04-18
Filing date: 2019-04-18
Publication date: 2024-07-16
Anticipated expiration: 2039-04-18
Also published as: US20190365861A1; MA52289A; MX2020010912A; JP2021522175A; CN112105645A; US20220040264A1; EP3781596A1; WO2019204592A9; TW202011984A; JP2024153643A; CA3097625A1; WO2019204592A8; SG11202010159RA; TWI851572B; AU2019255744A8; US20250057919A1; KR20210003170A; AU2019255744A1; IL278090B1; US12239688B2

Description

関連出願の相互参照
この出願は、２０１８年４月１８日に出願された米国仮出願第６２／６５９，５６３号、２０１８年６月１２日に出願された米国仮出願第６２／６８４，１４３号、２０１８年８月２９日に出願された米国仮出願第６２／７２４，３９６号、および２０１８年１１月７日に出願された米国仮出願第６２／７５６，８００号の優先権を主張し、それらの開示は、それらの全体において参照により組み込まれる。

癌免疫療法における２つの非常に有望なアプローチには、サイトカインベースの治療と、ＰＤ－１などの免疫チェックポイントタンパク質の遮断とが含まれる。

ＩＬ－２およびＩＬ－１５などのサイトカインは、Ｂ細胞、Ｔ細胞、およびＮＫ細胞の増殖および分化を補助することにおいて機能する。両方のサイトカインは、２つの共有の受容体、共通ガンマ鎖（γｃ、ＣＤ１３２）、およびＩＬ－２受容体ベータ鎖（ＩＬ－２Ｒβ、ＣＤ１２２）、ならびに各サイトカインに固有のアルファ鎖受容体：ＩＬ－２受容体アルファ（ＩＬ－２Ｒα、ＣＤ２５）またはＩＬ－１５受容体アルファ（ＩＬ－１５Ｒα、ＣＤ２１５）からなる三量体複合体への結合を通してそれらの細胞シグナル伝達機能を発揮する。両方のサイトカインは、腫瘍学において潜在的に価値のある治療薬と考えられており、ＩＬ－２は、転移性腎細胞癌および悪性黒色腫の患者に使用することが承認されている。現在、いくつかの臨床試験が進行中であるが、組換えＩＬ－１５の承認された使用はない。しかしながら、有望な薬物として、両方のサイトカインは、数分単位で測定される半減期で、非常に速いクリアランスに悩まされている。ＩＬ－２免疫療法は、速いクリアランスを克服するために高用量で投与された場合に、全身毒性と関連している。このような全身毒性は、最近の臨床試験でＩＬ－１５免疫療法でも報告されている（Ｇｕｏｅｔａｌ．，ＪＩｍｍｕｎｏｌ，２０１５，１９５（５）：２３５３－６４）。

ＰＤ－１などの免疫チェックポイントタンパク質は、Ｔ細胞活性化に続いて上方制御され、ＰＤ－Ｌ１などの免疫チェックポイントリガンドと結合すると、活性化Ｔ細胞を疲弊させることによって自己免疫を排除する。しかしながら、免疫チェックポイントタンパク質は、腫瘍浸潤リンパ球（ＴＩＬ）でも上方制御され、免疫チェックポイントリガンドが腫瘍細胞で過剰発現し、腫瘍細胞による免疫逃避の原因となる。Ｏｐｄｉｖｏ（登録商標）（ニボルマブ）およびＫｅｙｔｒｕｄａ（登録商標）（ペムブロリズマブ）などの薬物による免疫チェックポイント相互作用の遮断によるＴＩＬの抑制解除は、癌の治療に非常に効果的であることが証明されている。ニボルマブおよびペムブロリズマブなどのチェックポイント遮断療法の有望さにもかかわらず、多くの患者は、依然としてチェックポイント遮断単独では十分な応答を達成することに失敗している。

したがって、高用量を必要とせず、かつ全身毒性を回避するために腫瘍を標的とするサイトカインによる治療戦略のための腫瘍治療における満たされていない必要性が残っている。さらに、患者の応答率を増加させ得るチェックポイント遮断と合った追加の治療法を特定する必要性がある。本発明は、増強された薬物動態および薬力学を有し、チェックポイント遮断抗体と相乗的に組み合わされる低減された効力のＩＬ－１５／Ｒα－Ｆｃ融合タンパク質を提供することによって、これらの必要性および警告に対処する。

本発明は、チェックポイント遮断抗体と組み合わせて新規ＩＬ－１５／ＩＬ－１５Ｒαヘテロ二量体Ｆｃ融合タンパク質を投与することを対象とする。いくつかの実施形態では、チェックポイント遮断抗体は、抗ＰＤ－１抗体、抗ＰＤ－Ｌ１抗体、抗ＴＩＭ３抗体、抗ＴＩＧＩＴ抗体、抗ＬＡＧ３抗体、および抗ＣＴＬＡ－４抗体からなる群から選択される。

いくつかの態様では、癌の治療を必要とする患者において癌を治療する方法が本明細書に提供され、
治療有効量のＩＬ－１５／ＩＬ－１５Ｒαヘテロ二量体Ｆｃ融合タンパク質であって、
ａ）Ｎ末端からＣ末端にかけて、
ｉ）ＩＬ－１５受容体アルファ（ＩＬ－１５Ｒα）スシドメイン、
ｉｉ）第１のドメインリンカー、および
ｉｉｉ）ＣＨ２－ＣＨ３を含む第１のバリアントＦｃドメインを含む、第１のモノマーと、
ｂ）Ｎ末端からＣ末端にかけて、
ｉ）配列番号２のアミノ酸配列、ならびにＮ４Ｄ／Ｎ６５Ｄ、Ｄ３０Ｎ／Ｎ６５Ｄ、およびＤ３０Ｎ／Ｅ６４Ｑ／Ｎ６５Ｄからなる群から選択されるアミノ酸置換のうちのいずれか１つを含むバリアントＩＬ－１５ドメイン、
ｉｉ）第２のドメインリンカー、ならびに
ｉｉｉ）ＣＨ２－ＣＨ３を含む第２のバリアントＦｃドメインを含む、第２のモノマーと、を含み、
第１および第２のバリアントＦｃドメインが、ＥＵ付番に従って、Ｓ２６７Ｋ／Ｌ３６８Ｄ／Ｋ３７０Ｓ：Ｓ２６７Ｋ／Ｓ３６４Ｋ／Ｅ３５７Ｑ、Ｓ３６４Ｋ／Ｅ３５７Ｑ：Ｌ３６８Ｄ／Ｋ３７０Ｓ、Ｌ３６８Ｄ／Ｋ３７０Ｓ：Ｓ３６４Ｋ、Ｌ３６８Ｅ／Ｋ３７０Ｓ：Ｓ３６４Ｋ、Ｔ４１１Ｅ／Ｋ３６０Ｅ／Ｑ３６２Ｅ：Ｄ４０１Ｋ、Ｌ３６８Ｄ／Ｋ３７０Ｓ：Ｓ３６４Ｋ／Ｅ３５７Ｌ、およびＫ３７０Ｓ：Ｓ３６４Ｋ／Ｅ３５７Ｑからなる群から選択されるアミノ酸置換のセットを有する、治療有効量のＩＬ－１５／ＩＬ－１５Ｒαヘテロ二量体Ｆｃ融合タンパク質と、
治療有効量の、抗ＰＤ－１抗体、抗ＰＤ－Ｌ１抗体、抗ＴＩＭ３抗体、抗ＴＩＧＩＴ抗体、抗ＬＡＧ３抗体、および抗ＣＴＬＡ－４抗体からなる群から選択されるチェックポイント遮断抗体と、を投与することを含む。

いくつかの実施形態では、バリアントＩＬ－１５ドメインは、配列番号２のアミノ酸配列およびアミノ酸置換Ｄ３０Ｎ／Ｅ６４Ｑ／Ｎ６５Ｄを含む。いくつかの実施形態では、バリアントＩＬ－１５ドメインは、配列番号２のアミノ酸配列およびアミノ酸置換Ｄ３０Ｎ／Ｎ６５Ｄを含む。いくつかの実施形態では、バリアントＩＬ－１５ドメインは、配列番号２のアミノ酸配列およびアミノ酸置換Ｎ４Ｄ／Ｎ６５Ｄを含む。

いくつかの実施形態では、ＩＬ－１５Ｒαスシドメインは、配列番号４のアミノ酸配列を含む。

いくつかの実施形態では、第１および第２のバリアントＦｃドメインは、Ｓ３６４Ｋ／Ｅ３５７Ｑ：Ｌ３６８Ｄ／Ｋ３７０Ｓ置換を有する。いくつかの実施形態では、第１のバリアントＦｃドメインは、Ｓ３６４Ｋ／Ｅ３５７Ｑ置換および第２のバリアントＦｃドメインＬ３６８Ｄ／Ｋ３７０Ｓ置換を有する。

いくつかの実施形態では、第１および第２の変異Ｆｃドメインはそれぞれ、Ｍ４２８Ｌ／Ｎ４３４Ｓ置換を含む。

いくつかの実施形態では、第１および第２の変異Ｆｃドメインはそれぞれ、Ｅ２３３Ｐ／Ｌ２３４Ｖ／Ｌ２３５Ａ／Ｇ２３６ｄｅｌ／Ｓ２６７Ｋ置換を含む。

いくつかの実施形態では、ＩＬ－１５／ＩＬ－１５Ｒαヘテロ二量体Ｆｃ融合タンパク質およびチェックポイント遮断抗体は、同時にまたは逐次的に投与される。

いくつかの実施形態では、抗ＰＤ－１抗体は、ニボルマブ、ペムブロリズマブ、またはピジリズマブである。

いくつかの実施形態では、ＩＬ－１５／ＩＬ－１５Ｒαヘテロ二量体Ｆｃ融合タンパク質は、ＸＥＮＰ２４３０６またはＸＥＮＰ２４０４５のアミノ酸配列を含む。

いくつかの実施形態では、ＩＬ－１５／ＩＬ－１５Ｒαヘテロ二量体Ｆｃ融合タンパク質は、ＸＥＮＰ２４３０６（配列番号ＸＸ）のアミノ酸配列を含み、抗ＰＤ－１抗体は、ニボルマブである。いくつかの実施形態では、ＩＬ－１５／ＩＬ－１５Ｒαヘテロ二量体Ｆｃ融合タンパク質は、ＸＥＮＰ２４３０６（配列番号ＸＸ）のアミノ酸配列を含み、抗ＰＤ－１抗体は、ペムブロリズマブである。いくつかの実施形態では、ＩＬ－１５／ＩＬ－１５Ｒαヘテロ二量体Ｆｃ融合タンパク質は、ＸＥＮＰ２４３０６（配列番号ＸＸ）のアミノ酸配列を含み、抗ＰＤ－１抗体は、ピジリズマブである。

いくつかの実施形態では、ＩＬ－１５／ＩＬ－１５Ｒαヘテロ二量体Ｆｃ融合タンパク質は、ＸＥＮＰ２４０４５（配列番号ＸＸ）のアミノ酸配列を含み、抗ＰＤ－１抗体は、ニボルマブである。いくつかの実施形態では、ＩＬ－１５／ＩＬ－１５Ｒαヘテロ二量体Ｆｃ融合タンパク質は、ＸＥＮＰ２４０４５（配列番号ＸＸ）のアミノ酸配列を含み、抗ＰＤ－１抗体は、ペムブロリズマブである。いくつかの実施形態では、ＩＬ－１５／ＩＬ－１５Ｒαヘテロ二量体Ｆｃ融合タンパク質は、ＸＥＮＰ２４０４５（配列番号ＸＸ）のアミノ酸配列を含み、抗ＰＤ－１抗体は、ピジリズマブである。

いくつかの実施形態では、癌は、転移性癌である。いくつかの実施形態では、癌は、乳癌、肺癌、結腸癌、卵巣癌、黒色腫癌、膀胱癌、腎臓癌（ｒｅｎａｌｃａｎｃｅｒ）、腎臓癌（ｋｉｄｎｅｙｃａｎｃｅｒ）、肝臓癌、頭頸部癌、結腸直腸癌、黒色腫、膵臓癌、胃癌、食道癌、中皮腫、前立腺癌、白血病、リンパ腫、および骨髄腫からなる群から選択される。

いくつかの実施形態では、本明細書に概説される癌を治療する方法は、患者において最小レベルの血管漏出をもたらす。

いくつかの実施態様では、血管漏出のレベルは、投与後の患者における血清アルブミンの２０％以下の低減の範囲である。

いくつかの態様では、患者において癌を治療する方法が本明細書に提供され、方法は、ＩＬ－１５／ＩＬ－１５Ｒαヘテロ二量体Ｆｃ融合タンパク質およびチェックポイント遮断抗体を含む併用療法を患者に投与することを含み、ＩＬ－１５／ＩＬ－１５Ｒαヘテロ二量体Ｆｃ融合は、
ａ）Ｎ末端からＣ末端にかけて、
ｉ）ＩＬ－１５受容体アルファ（ＩＬ－１５Ｒα）スシドメイン、
ｉｉ）第１のドメインリンカー、および
ｉｉｉ）ＣＨ２－ＣＨ３を含む第１のバリアントＦｃドメインを含む、第１のモノマーと、
ｂ）Ｎ末端からＣ末端にかけて、
ｉ）配列番号２のアミノ酸配列、ならびにＮ４Ｄ／Ｎ６５Ｄ、Ｄ３０Ｎ／Ｎ６５Ｄ、およびＤ３０Ｎ／Ｅ６４Ｑ／Ｎ６５Ｄからなる群から選択されるアミノ酸置換のうちのいずれか１つを含むバリアントＩＬ－１５ドメイン、
ｉｉ）第２のドメインリンカー、ならびに
ｉｉｉ）ＣＨ２－ＣＨ３を含む第２のバリアントＦｃドメインを含む、第２のモノマーと、を含み、
第１および第２のバリアントＦｃドメインは、ＥＵ付番に従って、Ｓ２６７Ｋ／Ｌ３６８Ｄ／Ｋ３７０Ｓ：Ｓ２６７Ｋ／Ｓ３６４Ｋ／Ｅ３５７Ｑ、Ｓ３６４Ｋ／Ｅ３５７Ｑ：Ｌ３６８Ｄ／Ｋ３７０Ｓ、Ｌ３６８Ｄ／Ｋ３７０Ｓ：Ｓ３６４Ｋ、Ｌ３６８Ｅ／Ｋ３７０Ｓ：Ｓ３６４Ｋ、Ｔ４１１Ｅ／Ｋ３６０Ｅ／Ｑ３６２Ｅ：Ｄ４０１Ｋ、Ｌ３６８Ｄ／Ｋ３７０Ｓ：Ｓ３６４Ｋ／Ｅ３５７Ｌ、およびＫ３７０Ｓ：Ｓ３６４Ｋ／Ｅ３５７Ｑからなる群から選択されるアミノ酸置換のセットを有し、チェックポイント遮断抗体は、抗ＰＤ－１抗体、抗ＰＤ－Ｌ１抗体、抗ＴＩＭ３抗体、抗ＴＩＧＩＴ抗体、抗ＬＡＧ３抗体、および抗ＣＴＬＡ－４抗体からなる群から選択される。

いくつかの実施形態では、ＩＬ－１５／ＩＬ－１５Ｒαヘテロ二量体Ｆｃ融合タンパク質は、ＸＥＮＰ２４３０６（配列番号ＸＸ）またはＸＥＮＰ２４０４５（配列番号ＸＸ）のアミノ酸配列を含む。

いくつかの実施形態では、本明細書に記載される癌を治療する方法は、患者において最小レベルの血管漏出をもたらす。

いくつかの態様では、患者においてＴ細胞拡大を誘導する方法が本明細書に提供され、
治療有効量のＩＬ－１５／ＩＬ－１５Ｒαヘテロ二量体Ｆｃ融合タンパク質であって、
ａ）Ｎ末端からＣ末端にかけて、
ｉ）ＩＬ－１５受容体アルファ（ＩＬ－１５Ｒα）スシドメイン、
ｉｉ）第１のドメインリンカー、および
ｉｉｉ）ＣＨ２－ＣＨ３を含む第１のバリアントＦｃドメインを含む、第１のモノマーと、
ｂ）Ｎ末端からＣ末端にかけて、
ｉ）配列番号２のアミノ酸配列、ならびにＮ４Ｄ／Ｎ６５Ｄ、Ｄ３０Ｎ／Ｎ６５Ｄ、およびＤ３０Ｎ／Ｅ６４Ｑ／Ｎ６５Ｄからなる群から選択されるアミノ酸置換のうちのいずれか１つを含むバリアントＩＬ－１５ドメイン、
ｉｉ）第２のドメインリンカー、ならびに
ｉｉｉ）ＣＨ２－ＣＨ３を含む第２のバリアントＦｃドメインを含む、第２のモノマーと、を含み、第１および第２のバリアントＦｃドメインが、ＥＵ付番に従って、Ｓ２６７Ｋ／Ｌ３６８Ｄ／Ｋ３７０Ｓ：Ｓ２６７Ｋ／Ｓ３６４Ｋ／Ｅ３５を含む、７Ｑ、Ｓ３６４Ｋ／Ｅ３５７Ｑ：Ｌ３６８Ｄ／Ｋ３７０Ｓ、Ｌ３６８Ｄ／Ｋ３７０Ｓ：Ｓ３６４Ｋ、Ｌ３６８Ｅ／Ｋ３７０Ｓ：Ｓ３６４Ｋ、Ｔ４１１Ｅ／Ｋ３６０Ｅ／Ｑ３６２Ｅ：Ｄ４０１Ｋ、Ｌ３６８Ｄ／Ｋ３７０Ｓ：Ｓ３６４Ｋ／Ｅ３５７Ｌ、およびＫ３７０Ｓ：Ｓ３６４Ｋ／Ｅ３５７Ｑからなる群から選択されるアミノ酸置換のセットを有する、治療有効量のＩＬ－１５／ＩＬ－１５Ｒαヘテロ二量体Ｆｃ融合タンパク質と、
治療有効量の、抗ＰＤ－１抗体、抗ＰＤ－Ｌ１抗体、抗ＴＩＭ３抗体、抗ＴＩＧＩＴ抗体、抗ＬＡＧ３抗体、および抗ＣＴＬＡ－４抗体からなる群から選択されるチェックポイント遮断抗体と、を投与することを含む。

いくつかの実施形態では、抗ＰＤ－１抗体は、ニボルマブ、ペムブロリズマブ、またはピジリズマブである。いくつかの実施形態では、ＩＬ－１５／ＩＬ－１５Ｒαヘテロ二量体Ｆｃ融合タンパク質は、ＸＥＮＰ２４３０６（配列番号ＸＸ）またはＸＥＮＰ２４０４５（配列番号ＸＸ）のアミノ酸配列を含む。

いくつかの実施形態では、患者は、癌を有する。いくつかの実施形態では、癌は、転移性癌である。いくつかの実施形態では、癌は、乳癌、肺癌、結腸癌、卵巣癌、黒色腫癌、膀胱癌、腎臓癌（ｒｅｎａｌｃａｎｃｅｒ）、腎臓癌（ｋｉｄｎｅｙｃａｎｃｅｒ）、肝臓癌、頭頸部癌、結腸直腸癌、黒色腫、膵臓癌、胃癌、食道癌、中皮腫、前立腺癌、白血病、リンパ腫、および骨髄腫からなる群から選択される。

いくつかの実施形態では、Ｔ細胞拡大は、Ｔ細胞の少なくとも２倍の増加である。いくつかの実施形態では、Ｔ細胞拡大は、Ｔ細胞の２倍～１５倍の増加の範囲である。

いくつかの実施形態では、方法は、低アルブミン血症を誘導する可能性を増加させない。

いくつかの実施形態では、Ｔ細胞は、腫瘍浸潤リンパ球を含む。

いくつかの実施形態では、本発明は、ＩＬ－１５／ＩＬ－１５Ｒαヘテロ二量体Ｆｃ融合タンパク質と、抗ＰＤ－１抗体、抗ＰＤ－Ｌ１抗体、抗ＴＩＭ３抗体、抗ＴＩＧＩＴ抗体、抗ＬＡＧ３抗体、および抗ＣＴＬＡ－４抗体から選択されるチェックポイント遮断抗体とを含む併用療法を提供する。いくつかの実施形態では、ＩＬ－１５／ＩＬ－１５Ｒαヘテロ二量体Ｆｃ融合タンパク質は、
ａ）Ｎ末端からＣ末端にかけて、
ｉ）ＩＬ－１５受容体アルファ（ＩＬ－１５Ｒα）スシドメイン、
ｉｉ）第１のドメインリンカー、および
ｉｉｉ）ＣＨ２－ＣＨ３を含む第１のバリアントＦｃドメインを含む、第１のモノマーと、
ｂ）Ｎ末端からＣ末端にかけて、
ｉ）配列番号２のアミノ酸配列、ならびにＮ４Ｄ／Ｎ６５Ｄ、Ｄ３０Ｎ／Ｎ６５Ｄ、およびＤ３０Ｎ／Ｅ６４Ｑ／Ｎ６５Ｄからなる群から選択されるアミノ酸置換のうちのいずれか１つを含むバリアントＩＬ－１５ドメイン、
ｉｉ）第２のドメインリンカー、ならびに
ｉｉｉ）ＣＨ２－ＣＨ３を含む第２のバリアントＦｃドメインを含む、第２のモノマーと、を含み、
第１および第２のバリアントＦｃドメインは、ＥＵ付番に従って、Ｓ２６７Ｋ／Ｌ３６８Ｄ／Ｋ３７０Ｓ：Ｓ２６７Ｋ／Ｓ３６４Ｋ／Ｅ３５７Ｑ、Ｓ３６４Ｋ／Ｅ３５７Ｑ：Ｌ３６８Ｄ／Ｋ３７０Ｓ、Ｌ３６８Ｄ／Ｋ３７０Ｓ：Ｓ３６４Ｋ、Ｌ３６８Ｅ／Ｋ３７０Ｓ：Ｓ３６４Ｋ、Ｔ４１１Ｅ／Ｋ３６０Ｅ／Ｑ３６２Ｅ：Ｄ４０１Ｋ、Ｌ３６８Ｄ／Ｋ３７０Ｓ：Ｓ３６４Ｋ／Ｅ３５７Ｌ、およびＫ３７０Ｓ：Ｓ３６４Ｋ／Ｅ３５７Ｑからなる群から選択されるアミノ酸置換のセットを有する。

いくつかの実施形態では、第１および第２のバリアントＦｃドメインはそれぞれ、Ｍ４２８Ｌ／Ｎ４３４Ｓ置換を含む。

いくつかの実施形態では、第１および第２のバリアントＦｃドメインはそれぞれ、Ｅ２３３Ｐ／Ｌ２３４Ｖ／Ｌ２３５Ａ／Ｇ２３６ｄｅｌ／Ｓ２６７Ｋ置換を含む。

いくつかの実施形態では、ＩＬ－１５／ＩＬ－１５Ｒαヘテロ二量体Ｆｃ融合タンパク質は、ＸＥＮＰ２４３０６（配列番号ＸＸ）のアミノ酸配列を含み、抗ＰＤ－１抗体は、ニボルマブである。

いくつかの実施形態では、ＩＬ－１５／ＩＬ－１５Ｒαヘテロ二量体Ｆｃ融合タンパク質は、ＸＥＮＰ２４３０６（配列番号ＸＸ）のアミノ酸配列を含み、抗ＰＤ－１抗体は、ペムブロリズマブである。

いくつかの実施形態では、ＩＬ－１５／ＩＬ－１５Ｒαヘテロ二量体Ｆｃ融合タンパク質は、ＸＥＮＰ２４３０６（配列番号ＸＸ）のアミノ酸配列を含み、抗ＰＤ－１抗体は、ピジリズマブである。

いくつかの実施形態では、ＩＬ－１５／ＩＬ－１５Ｒαヘテロ二量体Ｆｃ融合タンパク質は、ＸＥＮＰ２４０４５（配列番号ＸＸ）のアミノ酸配列を含み、抗ＰＤ－１抗体は、ニボルマブである。

いくつかの実施形態では、ＩＬ－１５／ＩＬ－１５Ｒαヘテロ二量体Ｆｃ融合タンパク質は、ＸＥＮＰ２４０４５（配列番号ＸＸ）のアミノ酸配列を含み、抗ＰＤ－１抗体は、ペムブロリズマブである。

いくつかの実施形態では、ＩＬ－１５／ＩＬ－１５Ｒαヘテロ二量体Ｆｃ融合タンパク質は、ＸＥＮＰ２４０４５（配列番号ＸＸ）のアミノ酸配列を含み、抗ＰＤ－１抗体は、ピジリズマブである。

ＩＬ－１５とその受容体であるＩＬ－１５ＲΑ（ＣＤ２１５）、ＩＬ－１５ＲΒ（ＣＤ１２２）、および共通ガンマ鎖（ＣＤ１３２）との複合体の構造を示す。ＩＬ－１５およびその受容体の配列を示す。Ｆｃヘテロ二量体バリアントセット（スキューおよびｐＩバリアントを含む）の有用な対を示す。図３Ｄおよび図３Ｅにおいて、対応する「単量体２」のバリアントが存在しないバリアントがあり、これらはどちらの単量体でも単独で用いることのできるｐＩバリアントである。等配電子バリアント抗体定常領域およびそれらのそれぞれの置換の一覧を示す。ｐＩ＿（）はより低いｐＩバリアントを示し、ｐＩ＿（＋）はより高いｐＩバリアントを示す。これらは、任意にかつ独立して、本発明の他のヘテロ二量体化バリアント（およびまた本明細書に概説されているように他のバリアントの種類）と組み合わせることができる。ＦｃγＲ結合を切断する有用な切断バリアントを示す（時に「ノックアウト」または「ＫＯ」バリアントと呼ばれる）。一般に、切断バリアントは両方の単量体に見られるが、いくつかの場合においては、それらは一方の単量体のみにあってもよい。本発明の「非サイトカイン」構成要素の特に有用な実施形態を示す。いくつかの例示的な可変長リンカーを示す。いくつかの実施形態では、これらのリンカーは、ＩＬ－１５および／またはＩＬ－１５Ｒα（スシ）のＣ末端をＦｃ領域のＮ末端に連結する用途を見出す。いくつかの実施形態では、これらのリンカーは、ＩＬ－１５をＩＬ－１５Ｒα（スシ）に融合する用途を見出す。サイトカイン配列（例えば、Ｉｌ－１５および／またはＩＬ－１５Ｒα（スシ））を含まない、ヒトＩｇＧ１に基づくいくつかの有用なＩＬ－１５／Ｒα－Ｆｃフォーマット骨格の配列を示す。骨格１はヒトＩｇＧ１（３５６Ｅ／３５８Ｍアロタイプ）に基づき、両方の鎖にＣ２２０Ｓ、Ｓ３６４Ｋ／Ｅ３５７Ｑ：Ｌ３６８Ｄ／Ｋ３７０Ｓのスキューバリアント、Ｌ３６８Ｄ／Ｋ３７０Ｓのスキューバリアントを有する鎖にＱ２９５Ｅ／Ｎ３８４Ｄ／Ｑ４１８Ｅ／Ｎ４２１ＤのｐＩバリアント、そして両方の鎖にＥ２３３Ｐ／Ｌ２３４Ｖ／Ｌ２３５Ａ／Ｇ２３６ｄｅｌ／Ｓ２６７Ｋの切断バリアントを含む。骨格２はヒトＩｇＧ１（３５６Ｅ／３５８Ｍアロタイプ）に基づき、両方の鎖にＣ２２０Ｓ、Ｓ３６４Ｋ：Ｌ３６８Ｄ／Ｋ３７０Ｓのスキューバリアント、Ｌ３６８Ｄ／Ｋ３７０Ｓのスキューバリアントを有する鎖にＱ２９５Ｅ／Ｎ３８４Ｄ／Ｑ４１８Ｅ／Ｎ４２１ＤのｐＩバリアント、そして両方の鎖にＥ２３３Ｐ／Ｌ２３４Ｖ／Ｌ２３５Ａ／Ｇ２３６ｄｅｌ／Ｓ２６７Ｋの切断バリアントを含む。骨格３はヒトＩｇＧ１（３５６Ｅ／３５８Ｍアロタイプ）に基づき、両方の鎖にＣ２２０Ｓ、Ｓ３６４Ｋ：Ｌ３６８Ｅ／Ｋ３７０Ｓのスキューバリアント、Ｌ３６８Ｅ／Ｋ３７０Ｓのスキューバリアントを有する鎖にＱ２９５Ｅ／Ｎ３８４Ｄ／Ｑ４１８Ｅ／Ｎ４２１ＤのｐＩバリアント、そして両方の鎖にＥ２３３Ｐ／Ｌ２３４Ｖ／Ｌ２３５Ａ／Ｇ２３６ｄｅｌ／Ｓ２６７Ｋの切断バリアントを含む。骨格４はヒトＩｇＧ１（３５６Ｅ／３５８Ｍアロタイプ）に基づき、両方の鎖にＣ２２０Ｓ、Ｄ４０１Ｋ：Ｋ３６０Ｅ／Ｑ３６２Ｅ／Ｔ４１１Ｅのスキューバリアント、Ｋ３６０Ｅ／Ｑ３６２Ｅ／Ｔ４１１Ｅのスキューバリアントを有する鎖にＱ２９５Ｅ／Ｎ３８４Ｄ／Ｑ４１８Ｅ／Ｎ４２１ＤのｐＩバリアント、そして両方の鎖にＥ２３３Ｐ／Ｌ２３４Ｖ／Ｌ２３５Ａ／Ｇ２３６ｄｅｌ／Ｓ２６７Ｋの切断バリアントを含む。骨格５はヒトＩｇＧ１（３５６Ｄ／３５８Ｌアロタイプ）に基づき、両方の鎖にＣ２２０Ｓ、Ｓ３６４Ｋ／Ｅ３５７Ｑ：Ｌ３６８Ｄ／Ｋ３７０Ｓのスキューバリアント、Ｌ３６８Ｄ／Ｋ３７０Ｓのスキューバリアントを有する鎖にＱ２９５Ｅ／Ｎ３８４Ｄ／Ｑ４１８Ｅ／Ｎ４２１ＤのｐＩバリアント、そして両方の鎖にＥ２３３Ｐ／Ｌ２３４Ｖ／Ｌ２３５Ａ／Ｇ２３６ｄｅｌ／Ｓ２６７Ｋの切断バリアントを含む。骨格６はヒトＩｇＧ１（３５６Ｅ／３５８Ｍアロタイプ）に基づき、両方の鎖にＣ２２０Ｓ、Ｓ３６４Ｋ／Ｅ３５７Ｑ：Ｌ３６８Ｄ／Ｋ３７０Ｓのスキューバリアント、Ｌ３６８Ｄ／Ｋ３７０Ｓのスキューバリアントを有する鎖にＱ２９５Ｅ／Ｎ３８４Ｄ／Ｑ４１８Ｅ／Ｎ４２１ＤのｐＩバリアント、そして両方の鎖に、Ｅ２３３Ｐ／Ｌ２３４Ｖ／Ｌ２３５Ａ／Ｇ２３６ｄｅｌ／Ｓ２６７Ｋの切断バリアント、ならびに両方の鎖にＮ２９７Ａバリアントを含む。骨格７は、変異がＮ２９７Ｓであることを除いて６と同一である。骨格６および７の代替フォーマットは、両方の鎖において切断バリアントＥ２３３Ｐ／Ｌ２３４Ｖ／Ｌ２３５Ａ／Ｇ２３６ｄｅｌ／Ｓ２６７Ｋを除外することができる。骨格８はヒトＩｇＧ４に基づき、Ｓ３６４Ｋ／Ｅ３５７Ｑ：Ｌ３６８Ｄ／Ｋ３７０Ｓのスキューバリアント、Ｌ３６８Ｄ／Ｋ３７０Ｓのスキューバリアントを有する鎖にＱ２９５Ｅ／Ｎ３８４Ｄ／Ｑ４１８Ｅ／Ｎ４２１ＤのｐＩバリアント、そして両方の鎖にＳ２２８Ｐ（ＥＵ付番によるもので、これはＫａｂａｔではＳ２４１Ｐである）バリアントを含み、これは当該技術分野で既知であるように、Ｆａｂアーム交換を切断する。骨格９はヒトＩｇＧ２に基づき、Ｓ３６４Ｋ／Ｅ３５７Ｑ：Ｌ３６８Ｄ／Ｋ３７０Ｓのスキューバリアント、Ｌ３６８Ｄ／Ｋ３７０Ｓのスキューバリアントを有する鎖にＱ２９５Ｅ／Ｎ３８４Ｄ／Ｑ４１８Ｅ／Ｎ４２１ＤのｐＩバリアントを含む。骨格１０はヒトＩｇＧ２に基づき、Ｓ３６４Ｋ／Ｅ３５７Ｑ：Ｌ３６８Ｄ／Ｋ３７０Ｓのスキューバリアント、Ｌ３６８Ｄ／Ｋ３７０Ｓスキューバリアントを有する鎖にＱ２９５Ｅ／Ｎ３８４Ｄ／Ｑ４１８Ｅ／Ｎ４２１ＤのｐＩバリアント、ならびに両方の鎖にＳ２６７Ｋのバリアントを含む。骨格１１は、Ｍ４２８Ｌ／Ｎ４３４ＳのＸｔｅｎｄ変異を含むことを除いて、骨格１と同一である。骨格１２はヒトＩｇＧ１（３５６Ｅ／３５８Ｍアロタイプ）に基づき、両方の同一の鎖にＣ２２０Ｓ、両方の同一の鎖にＥ２３３Ｐ／Ｌ２３４Ｖ／Ｌ２３５Ａ／Ｇ２３６ｄｅｌ／Ｓ２６７Ｋの切断バリアントを含む。骨格１３はヒトＩｇＧ１（３５６Ｅ／３５８Ｍアロタイプ）に基づき、両方の鎖にＣ２２０Ｓ、Ｓ３６４Ｋ／Ｅ３５７Ｑ：Ｌ３６８Ｄ／Ｋ３７０Ｓのスキューバリアント、Ｓ３６４Ｋ／Ｅ３５７Ｑのスキューバリアントを有する鎖にＰ２１７Ｒ／Ｐ２２９Ｒ／Ｎ２７６ＫのｐＩバリアント、そして両方の鎖にＥ２３３Ｐ／Ｌ２３４Ｖ／Ｌ２３５Ａ／Ｇ２３６ｄｅｌ／Ｓ２６７Ｋの切断バリアントを含む。当業者には理解され、以下に概説されるように、これらの配列は、図９Ａ～９Ｇおよび３９に概略的に示されるように、ＩＬ－１５／Ｒα－ヘテロＦｃ、ｎｃＩＬ－１５／Ｒα、ｓｃＩＬ－１５／Ｒα、およびｄｓＩＬ－１５／Ｒαを含むがこれらに限定されない、本明細書に概説される任意のＩＬ－１５およびＩＬ－１５Ｒα（スシ）対と共に用いられ得る。さらに、任意のＩＬ－１５および／またはＩＬ－１５Ｒα（スシ）バリアントを、任意の組み合わせでこれらの図８Ａ～８Ｅの骨格に組み込むことができる。これらの骨格の各々内に含まれるのは、列挙された配列に対して（本明細書で定義されるように）９０、９５、９８、および９９％同一であり、および／または（当業者には理解されるように、親ヒトＩｇＧ１（または骨格に基づいてＩｇＧ２もしくはＩｇＧ４）と比較していくつかのアミノ酸修飾を既に含む図の「親」と比較して）１、２、３、４、５、６、７、８、９、または１０の追加のアミノ酸置換を含む配列である。すなわち、列挙された骨格は、この図の骨格内に含まれるスキュー、ｐＩ、および切断バリアントに加えて、追加のアミノ酸修飾（一般にアミノ酸置換）を含み得る。本発明のＩＬ－１５／Ｒα－Ｆｃ融合タンパク質のいくつかのフォーマットを示す。ＩＬ－１５Ｒαヘテロ二量体Ｆｃ融合体または「ＩＬ－１５／Ｒα－ヘテロＦｃ」（図９Ａ）は、ヘテロ二量体Ｅｃの一方の側に組換え融合されたＩＬ－１５およびヘテロ二量体Ｆｃの他方の側に組換え融合されたＩＬ－１５Ｒα（スシ）を含む。ＩＬ－１５およびＩＬ－１５Ｒα（スシ）は、Ｆｃ領域のＣ末端とＮ末端との間に可変長Ｇｌｙ－Ｓｅｒリンカーを有し得る。一本鎖ＩＬ－１５／Ｒα－Ｆｃ融合体または「ｓｃＩＬ－１５／Ｒα－Ｆｃ」（図９Ｂ）は、可変長リンカーによってＩＬ－１５に融合されたＩＬ－１５Ｒα（スシ）を含み（「一本鎖」ＩＬ－１５／ＩＬ－１５Ｒα（スシ）複合体または「ｓｃＩＬ－１５／Ｒα」と呼ばれる）、これは次いでヘテロ二量体Ｆｃ領域のＮ末端に融合され、分子の反対側は「Ｆｃのみ」または「空のＦｃ」である。非共有結合のＩＬ－１５／Ｒα－Ｆｃまたは「ｎｃＩＬ－１５／Ｒα－Ｆｃ」（図９Ｃ）はヘテロ二量体Ｆｃ領域に融合されたＩＬ－１５Ｒα（スシ）を含み、一方、ＩＬ－１５は別々にトランスフェクトされて非共有結合のＩＬ－１５／Ｒα複合体が形成され、分子の反対側は「Ｆｃのみ」または「空のＦｃ」である。二価非共有結合のＩＬ－１５／Ｒα－Ｆｃ融合体または「二価ｎｃＩＬ－１５／Ｒα－Ｆｃ」（図９Ｄ）はホモ二量体Ｆｃ領域のＮ末端に融合されたＩＬ－１５Ｒα（スシ）を含み、一方、ＩＬ－１５は別々にトランスフェクトされて非共有結合のＩＬ－１５／Ｒα複合体が形成される。二価一本鎖ＩＬ－１５／Ｒα－Ｆｃ融合体または「二価ｓｃＩＬ－１５／Ｒα－Ｆｃ」（図９Ｅ）は、可変長リンカーによってＩＬ－１５Ｒα（スシ）に融合されたＩＬ－１５を含み（「一本鎖」ＩＬ－１５／ＩＬ－１５Ｒα（スシ）複合体または「ｓｃＩＬ－１５／Ｒα」と呼ばれる）、これは次いでホモ二量体Ｆｃ領域のＮ末端に融合される。Ｆｃ非共有結合のＩＬ－１５／Ｒα融合体または「Ｆｃ－ｎｃＩＬ－１５／Ｒα」（図９Ｆ）はヘテロ二量体Ｆｃ領域のＣ末端に融合されたＩＬ－１５Ｒα（スシ）を含み、一方、ＩＬ－１５は別々にトランスフェクトされて非共有結合のＩＬ－１５／Ｒα複合体が形成され、分子の反対側は「Ｆｃのみ」または「空のＦｃ」である。Ｆｃ－一本鎖ＩＬ－１５／Ｒα融合体または「Ｆｃ－ｓｃＩＬ－１５／Ｒα」（図９Ｇ）は、可変長リンカーによってＩＬ－１５Ｒα（スシ）に融合されたＩＬ－１５を含み（「一本鎖」ＩＬ－１５／ＩＬ－１５Ｒα（スシ）複合体または「ｓｃＩＬ－１５／Ｒα」と呼ばれる）、これは次いでヘテロ二量体Ｆｃ領域のＣ末端に融合され、分子の反対側は「Ｆｃのみ」または「空のＦｃ」である。「ＩＬ－１５／Ｒα－ヘテロＦｃ」フォーマットの例示的なＩＬ－１５／Ｒα－Ｆｃ融合タンパク質である、ＸＥＮＰ２０８１８およびＸＥＮＰ２１４７５の配列を示し、ＸＥＮＰ２０８１９、ＸＥＮＰ２１４７１、ＸＥＮＰ２１４７２、ＸＥＮＰ２１４７３、ＸＥＮＰ２１４７４、ＸＥＮＰ２１４７６、ＸＥＮＰ２１４７７の追加の配列は、それぞれＷＯ２０１８／０７１９１９の図１０４Ａ～１０４Ｄにおいて、それぞれ配列番号４１８～４２３、４２４～４２９、４３０～４３５、４３６～４４１、４４２～４４７、４５４～４５９、および４６０～４６５として列挙されている。ＩＬ－１５およびＩＬ－１５Ｒα（スシ）には下線が付され、リンカーには二重下線が付され（当業者には理解されるように、リンカーは、その一部が図７に示される他のリンカーで置き換えられ得る）、スラッシュ（／）は、ＩＬ－１５、ＩＬ－１５Ｒα、リンカー、およびＦｃ領域の間の境界（複数可）を示す。「ｓｃＩＬ－１５／Ｒα－Ｆｃ」フォーマットの例示的なＩＬ－１５／Ｒα－Ｆｃ融合タンパク質である、ＸＥＮＰ２１４７８の配列を示し、ＸＥＮＰ２１９９３、ＸＥＮＰ２１９９４、ＸＥＮＰ２１９９５、ＸＥＮＰ２３１７４、ＸＥＮＰ２３１７５、ＸＥＮＰ２４４７７、およびＸＥＮＰ２４４８０の追加の配列は、それぞれ図１０４Ｇ、１０４Ｈ、１０４ＡＧ、１０４ＡＵ、および１０４ＡＶのＷＯ２０１８／０７１９１９において、それぞれ配列番号５１４～５１８、５１９～５２３、５２４～５２８、８４９～８５３、１０６３～１０６７、および１０７８～１０８２として列挙されている。ＩＬ－１５およびＩＬ－１５Ｒα（スシ）には下線が付され、リンカーには二重下線が付され（当業者には理解されるように、リンカーは、その一部が図７に示される他のリンカーで置き換えられ得る）、スラッシュ（／）は、ＩＬ－１５、ＩＬ－１５Ｒα、リンカー、およびＦｃ領域の間の境界（複数可）を示す。「ｎｃＩＬ－１５／Ｒα－Ｆｃ」フォーマットの例示的なＩＬ－１５／Ｒα－Ｆｃ融合タンパク質である、ＸＥＮＰ２１４７９、ＸＥＮＰ２２３６６、およびＸＥＮＰ２４３４８の配列を示す。ＩＬ－１５およびＩＬ－１５Ｒα（ｓｕｓｈｉ）には下線が付され、リンカーには二重下線が付され（当業者には理解されるように、リンカーは、その一部が図７に示される他のリンカーで置き換えられ得る）、スラッシュ（／）は、ＩＬ－１５、ＩＬ－１５Ｒα、リンカー、およびＦｃ領域の間の境界を示す。「二価ｎｃＩＬ－１５／Ｒα－Ｆｃ」フォーマットの例示的なＩＬ－１５／Ｒα－Ｆｃ融合タンパク質である、ＸＥＮＰ２１９７８の配列を示し、ＸＥＮＰ２１９７９の追加の配列は、図１０４ＥのＷＯ２０１８／０７１９１９において、配列番号４８０～４８３として列挙されている。ＩＬ－１５およびＩＬ－１５Ｒα（スシ）には下線が付され、リンカーには二重下線が付され（当業者には理解されるように、リンカーは、その一部が図７に示される他のリンカーで置き換えられ得る）、スラッシュ（／）は、ＩＬ－１５、ＩＬ－１５Ｒα、リンカー、およびＦｃ領域の間の境界（複数可）を示す。「二価ＳＣＩＬ－１５／Ｒα－Ｆｃ」フォーマットの例示的なＩＬ－１５／Ｒα－Ｆｃ融合タンパク質の配列を示す。ＩＬ－１５およびＩＬ－１５Ｒα（スシ）には下線が付され、リンカーには二重下線が付され（当業者には理解されるように、リンカーは、その一部が図７に示される他のリンカーで置き換えられ得る）、スラッシュ（／）は、ＩＬ－１５、ＩＬ－１５Ｒα、リンカー、およびＦｃ領域の間の境界（複数可）を示す。「Ｆｃ－ｎｃＩＬ－１５／Ｒα」フォーマットの例示的なＩＬ－１５／Ｒα－Ｆｃ融合タンパク質である、ＸＥＮＰ２２６３７の配列を示し、ＸＥＮＰ２２６３８の追加の配列は、図１０４ＴのＷＯ２０１８／０７１９１９において、配列番号６６８として列挙されている。ＩＬ－１５およびＩＬ－１５Ｒα（スシ）には下線が付され、リンカーには二重下線が付され（当業者には理解されるように、リンカーは、その一部が図７に示される他のリンカーで置き換えられ得る）、スラッシュ（／）は、ＩＬ－１５、ＩＬ－１５Ｒα、リンカー、およびＦｃ領域の間の境界（複数可）を示す。「ＦＣ－ＳＣＩＬ－１５／Ｒα」フォーマットの例示的なＩＬ－１５／Ｒα－Ｆｃ融合タンパク質の配列を示す。ＩＬ－１５およびＩＬ－１５Ｒα（スシ）には下線が付され、リンカーには二重下線が付され（当業者には理解されるように、リンカーは、その一部が図７に示される他のリンカーで置き換えられ得る）、スラッシュ（／）は、ＩＬ－１５、ＩＬ－１５Ｒα、リンカー、およびＦｃ領域の間の境界（複数可）を示す。ＸＥＮＰ２０８１８の例示的なＩＬ－１５／Ｒα－Ｆｃ融合タンパク質フォーマットのデータを提供する。図１７Ａは、ＸＥＮＰ２０８１８のＩＬ－１５／Ｒα－Ｆｃ融合タンパク質フォーマットを示す。図１７Ｂは、ＳＥＣによって決定されたＸＥＮＰ２０８１８の純度および均質性を示す。図１７Ｃは、ＣＥＦによって決定されたＸＥＮＰ２０８１８の純度および均質性を示す。図１７Ｄは、Ｏｃｔｅｔによって決定されたＩＬ－２Ｒβに対するＸＥＮＰ２０８１８の親和性を示す。図１７Ｅは、ＤＳＦによって決定されたＸＥＮＰ２０８１８の安定性を示す。ＸＥＮＰ２１４７８の例示的なＩＬ－１５／Ｒα－Ｆｃ融合タンパク質フォーマットのデータを提供する。図１８Ａは、ＸＥＮＰ２１４７８のＩＬ－１５／Ｒα－Ｆｃ融合タンパク質フォーマットを示す。図１８Ｂは、ＳＥＣによって決定されたＸＥＮＰ２１４７８の純度および均質性を示す。図１８Ｃは、ＣＥＦによって決定されたＸＥＮＰ２１４７８の純度および均質性を示す。図１８Ｄは、Ｏｃｔｅｔによって決定されたＩＬ－２Ｒβに対するＸＥＮＰ２１４７８の親和性を示す。図１８Ｅは、ＤＳＦによって決定されたＸＥＮＰ２１４７８の安定性を示す。ＸＥＮＰ２１４７９の例示的なＩＬ－１５／Ｒα－Ｆｃ融合タンパク質フォーマットのデータを提供する。図１９Ａは、ＸＥＮＰ２１４７９のＩＬ－１５／Ｒα－Ｆｃ融合タンパク質フォーマットを示す。図１９Ｂは、ＳＥＣによって決定されたＸＥＮＰ２１４７９の純度および均質性を示す。図１９Ｃは、ＣＥＦによって決定されたＸＥＮＰ２１４７９の純度および均質性を示す。図１９Ｄは、Ｏｃｔｅｔによって決定されたＩＬ－２Ｒβに対するＸＥＮＰ２１４７９の親和性を示す。図１９Ｅは、ＤＳＦによって決定されたＸＥＮＰ２１４７９の安定性を示す。ＦＡＣＳにより測定された場合、Ｋｉ６７発現に基づく、異なるリンカー長を有するＩＬ－１５／Ｒα－ヘテロＦｃフォーマットの例示的なＩＬ－１５／Ｒα－Ｆｃ融合タンパク質による、ＮＫ（ＣＤ５６^＋／ＣＤ１６^＋）細胞（図２０Ａ）、ＣＤ４^＋Ｔ細胞（図２０Ｂ）、およびＣＤ８^＋Ｔ細胞（図２０Ｃ）の増殖の誘導を示す。ＦＡＣＳにより測定された場合、Ｋｉ６７発現に基づく、ｓｃＩＬ－１５／Ｒα－Ｆｃフォーマット（ＸＥＮＰ２１４７８）およびｎｃＩＬ－１５／Ｒα－Ｆｃフォーマット（ＸＥＮＰ２１４７９）の例示的なＩＬ－１５／Ｒα－Ｆｃ融合タンパク質による、ＮＫ（ＣＤ５６^＋／ＣＤ１６^＋）細胞（図２１Ａ）、ＣＤ４^＋Ｔ細胞（図２１Ｂ）、およびＣＤ８^＋Ｔ細胞（図２１Ｃ）の増殖の誘導を示す。ＳＥＢ刺激ＰＢＭＣアッセイにおける例示的なＩＬ－１５／Ｒα－Ｆｃ融合タンパク質、アイソタイプ対照、およびＰＢＳ対照に対する二価抗ＰＤ－１抗体によるＩＬ－２分泌の増強を示す。ＸＥＮＰ２０８１８および組換えＩＬ－１５による処置後のＰＢＭＣ移植ＮＳＧマウスの生存曲線を示す。

ヒトＰＢＭＣの生着、および示された濃度のＸＥＮＰ２０８１８による処置後７日目のＮＳＧマウスの血清におけるＩＦＮγの濃度を示す。示された濃度でのＸＥＮＰ２０８１８による処置後７日のヒトＰＢＭＣ移植ＮＳＧマウスの全血におけるＣＤ４^＋Ｔ細胞（図２５Ａ）、ＣＤ８^＋Ｔ細胞（図２５Ｂ）、およびＣＤ４５^＋細胞（図２５Ｃ）の数を示す。操作されたジスルフィド結合対の位置を示すＩＬ－１５／Ｒαヘテロ二量体の構造モデルを示す。

システイン残基を操作するための足場として機能するようにＣ末端に追加の残基で操作された例示的なＩＬ－１５Ｒα（スシ）バリアントの配列を示す。システインによって操作されたＩＬ－１５Ｒα（スシ）バリアントと共有ジスルフィド結合を形成するためにシステインで操作された例示的なＩＬ－１５バリアントの配列を示す。システインによって操作されたＩＬ－１５バリアントと共有ジスルフィド結合を形成するためにシステインで操作された例示的なＩＬ－１５Ｒα（スシ）バリアントの配列を示す。ＩＬ－１５およびＩＬ－１５Ｒα（スシ）の間に操作されたジスルフィド結合を有するかまたは有さないＩＬ－１５／Ｒαヘテロ二量体を示す。非共有結合のＩＬ－１５／Ｒαヘテロ二量体または「ｎｃＩＬ－１５／Ｒαヘテロ二量体」（図３０Ａ）は、別々にトランスフェクトされ、非共有結合するＩＬ－１５Ｒα（ｓｕｓｈｉ）およびＩＬ－１５を含む。ジスルフィド結合しているＩＬ－１５／Ｒαヘテロ二量体または「ｄｓＩＬ－１５／Ｒαヘテロ二量体」（図３０Ｂ）は、別々にトランスフェクトされ、操作されたシステインの結果として共有結合するＩＬ－１５Ｒα（ｓｕｓｈｉ）およびＩＬ－１５を含む。一本鎖ＩＬ－１５／Ｒαヘテロ二量体または「ｓｃＩＬ－１５／Ｒαヘテロ二量体」（図３０Ｃ）は、可変長Ｇｌｙ－ＳｅｒリンカーによってＩＬ－１５に融合しているＩＬ－１５Ｒα（スシ）を含む。例示的なｎｃＩＬ－１５／Ｒαヘテロ二量体であるＸＥＮＰ２１９９６の配列を示す。これらの配列は、ＩＬ－１５Ｒα（スシ）のＣ末端におけるポリヒスチジン（Ｈｉｓ×６またはＨＨＨＨＨＨ（配列番号ＸＸ））Ｃ末端タグを使用して生成されたことに注目することが重要である。例示的なｄｓＩＬ－１５／Ｒαヘテロ二量体である、ＸＥＮＰ２２００４、ＸＥＮＰ２２００５、ＸＥＮＰ２２００６、ＸＥＮＰ２２００８、およびＸＥＮＰ２２４９４の配列を示し、ＸＥＮＰ２２００７、ＸＥＮＰ２２００９、ＸＥＮＰ２２０１０、ＸＥＮＰ２２０１１、ＸＥＮＰ２２０１２、およびＸＥＮＰ２２４９３の追加の配列は、それぞれＷＯ２０１８／０７１９１９の図１０４Ｊ、１０４Ｋ、および１０４Ｉにおいて、それぞれ配列番号５４３～５４４、５４５～５４６、５４７～５４８、５５１～５５２、５５３～５５４、および６４７～６４８として示されている。これらの配列は、ＩＬ－１５Ｒα（ｓｕｓｈｉ）のＣ末端におけるポリヒスチジン（Ｈｉｓ×６またはＨＨＨＨＨＨ）Ｃ末端タグを使用して生成されたことに注目することが重要である。例示的なｓｃＩＬ－１５／Ｒαヘテロ二量体であるＸＥＮＰ２２０４９の配列を示す。これらの配列は、ＩＬ－１５のＣ末端におけるポリヒスチジン（Ｈｉｓ×６またはＨＨＨＨＨＨ）Ｃ末端タグを使用して生成されたことに注目することが重要である。ＩＬ－１５およびＩＬ－１５Ｒα（スシ）には下線が付され、リンカーには二重下線が付され（当業者には理解されるように、リンカーは、その一部が図７に示される他のリンカーで置き換えられ得る）、スラッシュ（／）は、ＩＬ－１５、ＩＬ－１５Ｒα、およびリンカーの間の境界（複数可）を示す。ＣＥＦによって決定される、操作されたジスルフィド結合を有するかまたは有さない例示的なＩＬ－１５／Ｒαヘテロ二量体の純度および均質性を示す。ＣＥＦによって決定される、操作されたジスルフィド結合を有するかまたは有さない例示的なＩＬ－１５／Ｒαヘテロ二量体の純度および均質性を示す。ＤＳＦからの融解曲線によって示される、操作されたジスルフィド結合を有するかまたは有さない例示的なＩＬ－１５／Ｒαヘテロ二量体の安定性および融解温度を示す。ＤＳＦからの融解曲線によって示される、操作されたジスルフィド結合を有するかまたは有さない例示的なＩＬ－１５／Ｒαヘテロ二量体の安定性および融解温度を示す。発現収率、分子量、ＭＯＥソフトウェアにより算出されるときのＩＬ－１５およびＩＬ－１５Ｒα（スシ）の間の親和性の予測された変化、融解温度、ならびに操作されたジスルフィド結合を有するかまたは有さないＩＬ－１５／Ｒαヘテロ二量体についてのＩＬ－２Ｒβに対する親和性を示す。変異を関連単量体の後の括弧内に示す。操作されたジスルフィド結合を有する本発明のＩＬ－１５／Ｒα－Ｆｃ融合タンパク質の追加のフォーマットを示す。ジスルフィド結合したＩＬ－１５ヘテロ二量体Ｆｃ融合体または「ｄｓＩＬ－１５／Ｒα－ヘテロＦｃ」）（図３９Ａ）は、「ＩＬ－１５／Ｒα－ヘテロＦｃ」と同じであるが、ＩＬ－１５Ｒα（スシ）およびＩＬ－１５は、操作されたシステインの結果としてさらに共有結合的に連結されている。ジスルフィド結合したＩＬ－１５／ＲαＦｃ融合体または「ｄｓＩＬ－１５／Ｒα－Ｆｃ」（図３９Ｂ）は、「ｎｃＩＬ－１５／Ｒα－Ｆｃ」と同じであるが、ＩＬ－１５Ｒα（スシ）およびＩＬ－１５は、操作されたシステインの結果としてさらに共有結合的に連結されている。二価ジスルフィド結合したＩＬ－１５／Ｒα－Ｆｃまたは「二価ｄｓＩＬ－１５／Ｒα－Ｆｃ」（図３９Ｃ）は、「二価ｎｃＩＬ－１５／Ｒα－Ｆｃ」と同じであるが、操作されたシステインの結果としてＩＬ－１５Ｒα（スシ）およびＩＬ－１５は、さらに共有結合的に連結されている。Ｆｃ－ジスルフィド結合したＩＬ－１５／Ｒα融合体または「Ｆｃ－ｄｓＩＬ－１５／Ｒα」（図３９Ｄ）は、「Ｆｃ－ｎｃＩＬ－１５／Ｒα」と同じであるが、操作されたシステインの結果としてＩＬ－１５Ｒα（スシ）およびＩＬ－１５は、さらに共有結合的に連結されている。「ｄｓＩＬ－１５／Ｒα－ヘテロＦｃ」フォーマットの例示的なＩＬ－１５／Ｒα－Ｆｃ融合タンパク質である、ＸＥＮＰ２２０１３、ＸＥＮＰ２２０１４、ＸＥＮＰ２２０１５、およびＸＥＮＰ２２０１７の配列を示す。ＩＬ－１５およびＩＬ－１５Ｒα（スシ）には下線が付され、リンカーには二重下線が付され（当業者には理解されるように、リンカーは、その一部が図７に示される他のリンカーで置き換えられ得る）、スラッシュ（／）は、ＩＬ－１５、ＩＬ－１５Ｒα、リンカー、およびＦｃ領域の間の境界（複数可）を示す。「ｄｓＩＬ－１５／Ｒα－Ｆｃ」フォーマットの例示的なＩＬ－１５／Ｒα－Ｆｃ融合タンパク質である、ＸＥＮＰ２２３５７、ＸＥＮＰ２２３５８、ＸＥＮＰ２２３５９、ＸＥＮＰ２２６８４、およびＸＥＮＰ２２３６１の配列を示す。ＸＥＮＰ２２３６０、２２３６２、２２３６３、２２３６４、２２３６５、２２３６６の追加の配列は、その全体において参照により本明細書に組み込まれる、それぞれＷＯ２０１８／０７１９１９の図１０４Ｏ、１０４Ｐ、１０４Ｑ、および１０４Ｒに、それぞれ配列番号６１２～６１６、６２２～６２６、６２７～６３１、６３２～６３６、６３７～６４１、および６４２～６４６として示されている。ＩＬ－１５およびＩＬ－１５Ｒα（スシ）には下線が付され、リンカーには二重下線が付され（当業者には理解されるように、リンカーは、その一部が図７に示される他のリンカーで置き換えられ得る）、スラッシュ（／）は、ＩＬ－１５、ＩＬ－１５Ｒα、リンカー、およびＦｃ領域の間の境界（複数可）を示す。「二価ｄｓＩＬ－１５／Ｒα－Ｆｃ」フォーマットの例示的なＩＬ－１５／Ｒα－Ｆｃ融合タンパク質である、ＸＥＮＰ２２６３４、ＸＥＮＰ２２６３５、およびＸＥＮＰ２２６３６の配列を示す。ＸＥＮＰ２２６８７の追加の配列は、その全体において参照により本明細書に組み込まれる、ＷＯ２０１８／０７１９１９の図１０４Ｖに、配列番号６８５～６８８として示されている。ＩＬ－１５およびＩＬ－１５Ｒα（スシ）には下線が付され、リンカーには二重下線が付され（当業者には理解されるように、リンカーは、その一部が図７に示される他のリンカーで置き換えられ得る）、スラッシュ（／）は、ＩＬ－１５、ＩＬ－１５Ｒα、リンカー、およびＦｃ領域の間の境界（複数可）を示す。「Ｆｃ－ｄｓＩＬ－１５／Ｒα」フォーマットの例示的なＩＬ－１５／Ｒα－Ｆｃ融合タンパク質である、ＸＥＮＰ２２６３９およびＸＥＮＰ２２６４０の配列を示す。ＩＬ－１５およびＩＬ－１５Ｒα（スシ）には下線が付され、リンカーには二重下線が付され（当業者には理解されるように、リンカーは、その一部が図７に示される他のリンカーで置き換えられ得る）、スラッシュ（／）は、ＩＬ－１５、ＩＬ－１５Ｒα、リンカー、およびＦｃ領域の間の境界（複数可）を示す。ＣＥＦによって決定される、操作されたジスルフィド結合を有するかまたは有さない例示的なＩＬ－１５／Ｒα－Ｆｃ融合タンパク質の純度および均質性を示す。ＦＡＣＳにより測定された場合、Ｋｉ６７発現に基づく、操作されたジスルフィド結合を有するかまたは有さない例示的なＩＬ－１５／Ｒα－Ｆｃ融合タンパク質による、ＮＫ（ＣＤ５６＋／ＣＤ１６＋）細胞（図４５Ａ）、ＣＤ８^＋Ｔ細胞（図４５Ｂ）、およびＣＤ４^＋Ｔ細胞（図４５Ｃ）増殖の誘導を示す。ＩＬ－１５と、ＩＬ－１５Ｒα、ＩＬ－２Ｒβ、および共通γ鎖との複合体の構造を示す。低減された効力のために操作された置換の位置が示される。低減された効力のために操作された例示的なＩＬ－１５バリアントの配列を示す。列挙された配列と（本明細書で定義されるように）９０％、９５％、９８％、および９９％同一である、および／または１、２、３、４、５、６、７、８、９、または１０個の追加のアミノ酸置換を含む配列がこれらのバリアントＩＬ－１５配列の各々内に含まれる。非限定的な例において、列挙された配列は、実施例２に記載されるように共有ジスルフィド結合の形成に寄与するものなどの追加のアミノ酸修飾を含み得る。より低い効力のために操作された「ＩＬ－１５／Ｒα－Ｒ／Ｒ」フォーマットの例示的なＩＬ－１５／Ｒα－Ｆｃ融合タンパク質である、ＸＥＮＰ２２８１６、ＸＥＮＰ２２８１９、ＸＥＮＰ２２８２０、ＸＥＮＰ２２８２１、ＸＥＮＰ２２８２２、ＸＥＮＰ２２８２９、ＸＥＮＰ２２８３４、ＸＥＮＰ２３５５４、ＸＥＮＰ２３５５７、ＸＥＮＰ２３５６１、ＸＥＮＰ２４０１８、ＸＥＮＰ２４０１９、ＸＥＮＰ２４０４５、ＸＥＮＰ２４０５１、およびＸＥＮＰ２４０５２の配列を示す。ＸＥＮＰ２２８１５、２２８１７、２２８１８、２２８２３、２２８２４、２２８２５、２２８２６、２２８２７、２２８２８、２２８３０、２２８３１、２２８３２、２２３３３、２３５５５、２３５５９、２３５６０、２４０１７、２４０２０、２４０４３、および２４０４８の追加の配列は、ＷＯ２０１８／０７１９１９の図１０４Ｚ、１０４ＡＡ、１０４ＡＣ、１０４ＡＤ、１０４ＡＥ、１０４ＡＦ、１０４ＡＪ、１０４ＡＫ、１０４ＡＭ、１０４ＡＮ、および１０４ＡＯに、それぞれ配列番号７２９～７３４、７４１～７４６、７４７～７５２、７７７～７８２、７８３～７８８、７８９～７９４、７９５～８００、８０１～８０６、８０７～８１２、８１９～８２４、８２５～８３０、８３１～８３６、８３７～８４２、８８７～８９２、８９９～９０４、９０５～９１０、９３７～９４２、９５５～９６０、９６１～９６６、および９７９～９８４に示されている。ＩＬ－１５およびＩＬ－１５Ｒα（スシ）には下線が付され、リンカーには二重下線が付され（当業者には理解されるように、リンカーは、その一部が図７に示される他のリンカーで置き換えられ得る）、スラッシュ（／）は、ＩＬ－１５、ＩＬ－１５Ｒα、リンカー、およびＦｃ領域の間の境界（複数可）を示す。より低い効力のために操作された「ＳＣＩＬ－１５／Ｒα－Ｆｃ」フォーマットの例示的なＩＬ－１５／Ｒα－Ｆｃ融合タンパク質である、ＸＥＮＰ２４０１５、ＸＥＮＰ２４０５０、ＸＥＮＰ２４４７５、ＸＥＮＰ２４４７６、ＸＥＮＰ２４４７８、ＸＥＮＰ２４４７９、およびＸＥＮＰ２４４８１の配列を示す。ＸＥＮＰ２４０１３、２４０１４、２４０１６の追加の配列は、ＷＯ２０１８／０７１９１９の図１０４ＡＫおよび１０４ＡＬに、配列番号９１４～９２１、９２２～９２６、および９３２～９３６として示されている。ＩＬ－１５およびＩＬ－１５Ｒα（スシ）には下線が付され、リンカーには二重下線が付され（当業者には理解されるように、リンカーは、その一部が図７に示される他のリンカーで置き換えられ得る）、スラッシュ（／）は、ＩＬ－１５、ＩＬ－１５Ｒα、リンカー、およびＦｃ領域の間の境界（複数可）を示す。より低い効力のために操作された「ｎｃＩＬ－１５／Ｒα－Ｆｃ」フォーマットの例示的なＩＬ－１５／Ｒα－Ｆｃ融合タンパク質である、ＸＥＮＰ２４３４９、ＸＥＮＰ２４８９０、およびＸＥＮＰ２５１３８の配列を示す。ＩＬ－１５およびＩＬ－１５Ｒα（スシ）には下線が付され、リンカーには二重下線が付され（当業者には理解されるように、リンカーは、その一部が図７に示される他のリンカーで置き換えられ得る）、スラッシュ（／）は、ＩＬ－１５、ＩＬ－１５Ｒα、リンカー、およびＦｃ領域の間の境界（複数可）を示す。より低い効力のために操作された例示的なｎｃＩＬ－１５／Ｒαヘテロ二量体である、ＸＥＮＰ２２８０１およびＸＥＮＰ２２８０２の配列を示す。ＸＥＮＰ２２７９１、２２７９２、２２７９３、２２７９４、２２７９５、２２７９６、２２８０３、２２８０４、２２８０５、２２８０６、２２８０７、２２８０８、２２８０９、２２８１０、２２８１１、２２８１２、２２８１３、２２８１４の追加の配列は、ＷＯ２０１８／０７１９１９の図１０４Ｖ、１０４Ｗ、１０４Ｘ、１０４Ｙ、および１０４Ｚに、それぞれ配列番号６８９～６９０、６９１～６９２、６９３～６９４、６９５～６９６、６９７～６９８、６９９～７００、７０５～７０６、７０７～７０８、７０９～７１０、７１１～７１２、７１３～７１４、７１５～７１６、７１７～７１８、７１９～７２０、７２１～７２２、７２３～７２４、７２５～７２６、および７２７～７２８として示されている。これらの配列は、ＩＬ－１５Ｒα（スシ）のＣ末端におけるポリヒスチジン（Ｈｉｓ×６またはＨＨＨＨＨＨ）Ｃ末端タグを使用して生成されたことに注目することが重要である。低い効力のために操作された「二価ｎｃＩＬ－１５／Ｒα－Ｆｃ」フォーマットの例示的なＩＬ－１５／Ｒα－Ｆｃ融合タンパク質である、ＸＥＮＰ２４３４２の配列を示す。ＩＬ－１５およびＩＬ－１５Ｒα（スシ）には下線が付され、リンカーには二重下線が付され（当業者には理解されるように、リンカーは、その一部が図７に示される他のリンカーで置き換えられ得る）、スラッシュ（／）は、ＩＬ－１５、ＩＬ－１５Ｒα、リンカー、およびＦｃ領域の間の境界（複数可）を示す。より低い効力のために操作された「ｄｓＩＬ－１５／Ｒα－Ｆｃ」フォーマットの例示的なＩＬ－１５／Ｒα－Ｆｃ融合タンパク質である、ＸＥＮＰ２３４７２およびＸＥＮＰ２３４７３の配列を示す。ＩＬ－１５およびＩＬ－１５Ｒα（スシ）には下線が付され、リンカーには二重下線が付され（当業者には理解されるように、リンカーは、その一部が図７に示される他のリンカーで置き換えられ得る）、スラッシュ（／）は、ＩＬ－１５、ＩＬ－１５Ｒα、リンカー、およびＦｃ領域の間の境界（複数可）を示す。ＦＡＣＳによって測定された場合、Ｋｉ６７発現に基づく、バリアントＩＬ－１５／Ｒα－Ｆｃ融合タンパク質によるＮＫ細胞（図５４Ａ）、ＣＤ８^＋（ＣＤ４５ＲＡ－）Ｔ細胞（図５４Ｂ）、およびＣＤ４^＋（ＣＤ４５ＲＡ－）Ｔ細胞（図５４Ｃ）増殖の誘導を示す。バリアントＩＬ－１５／Ｒα－Ｆｃ融合タンパク質によるＮＫおよびＣＤ８^＋Ｔ細胞増殖の誘導のＥＣ５０、およびＸＥＮＰ２０８１８に対するＥＣ５０の倍数低減を示す。図５９Ａ～５９Ｄに示されている実験におけるリンパ球および亜集団のゲーティングを示す。図５６Ａは、ゲーティングされたリンパ球集団を示す。図５６Ｂは、ＣＤ３陰性およびＣＤ３陽性亜集団を示す。図５６Ｃは、ＣＤ３陰性細胞のＣＤ１６陰性およびＣＤ１６陽性の亜集団を示す。図５９Ａ～５９Ｄに示されている実験におけるＣＤ３^＋リンパ球亜集団のゲーティングを示す。図５７Ａは、ＣＤ３^＋Ｔ細胞のＣＤ４^＋、ＣＤ８^＋、およびγδＴ細胞の亜集団を示す。図５７Ｂは、ＣＤ４^＋Ｔ細胞のＣＤ４５ＲＡ（－）およびＣＤ４５ＲＡ（＋）の亜集団を示す。図５７Ｃは、ＣＤ８^＋Ｔ細胞のＣＤ４５ＲＡ（－）およびＣＤ４５ＲＡ（＋）の亜集団を示す。ＸＥＮＰ２２８２１とのヒトＰＢＭＣのインキュベーション前（図５８Ａ）および後（図５８Ｂ）のＣＤ６９およびＣＤ２５の発現を示す。示されたバリアントＩＬ－１５／Ｒα－Ｆｃ融合タンパク質と共に４日間インキュベートしたヒトＰＢＭＣにおける細胞増殖を示す。図５９Ａ～Ｃは、増殖しているＮＫ細胞（ＣＤ３－ＣＤ１６＋）（図５９Ａ）、ＣＤ８＋Ｔ細胞（ＣＤ３＋ＣＤ８＋ＣＤ４５ＲＡ－）（図５９Ｂ）、およびＣＤ４＋Ｔ細胞（ＣＤ３＋ＣＤ４＋ＣＤ４５ＲＡ－）（図５９Ｃ）の割合を示す。図５９Ｄは、対照（ＸＥＮＰ２０８１８）に対する様々なＩＬ－１５／ＩＬ－１５Ｒα Ｆｃ二量体のＥＣ５０の倍数変化を示す。示されたバリアントＩＬ－１５／Ｒα－Ｆｃ融合タンパク質と共に３日間インキュベートしたヒトＰＢＭＣにおける細胞増殖を示す。図６０Ａ～Ｃは、増殖中のＣＤ８^＋（ＣＤ４５ＲＡ－）Ｔ細胞（図６０Ａ）、ＣＤ４^＋（ＣＤ４５ＲＡ－）Ｔ細胞（図６０Ｂ）、γδＴ細胞（図６０Ｃ）、およびＮＫ細胞（図６０Ｄ）の割合を示す。追加のＩＬ－１５／Ｒαバリアントによる処置後のＣＤ８＋Ｔ細胞（図６１Ａ）、ＣＤ４＋Ｔ細胞（図６１Ｂ）、およびＮＫ細胞（図６１Ｃ）上のＫｉ６７発現の割合を示す。ＩＬ－１５／Ｒαバリアントによる処置後の（図６２Ａ）ＣＤ８＋（ＣＤ４５ＲＡ－）Ｔ細胞、（図６２Ｂ）ＣＤ４＋（ＣＤ４５ＲＡ－）Ｔ細胞、（図６２Ｃ）γδＴ細胞、（図６２Ｄ）ＮＫ（ＣＤ１６＋ＣＤ８α－）細胞、および（図６２Ｅ）ＮＫ（ＣＤ５６＋ＣＤ８α－）細胞上のＫｉ６７発現の割合を示す。ＩＬ－１５／Ｒαバリアントによる処理後のＣＤ８^＋（ＣＤ４５ＲＡ－）Ｔ細胞（図６３Ａ）、ＣＤ４^＋（ＣＤ４５ＲＡ－）Ｔ細胞（図６３Ｂ）、γδＴ細胞（図６３Ｃ）、ＮＫ（ＣＤ１６＋ＣＤ８α－）細胞（図６３Ｄ）、およびＮＫ（ＣＤ５６＋ＣＤ８α－）細胞（図６３Ｅ）上のＫｉ６７発現の割合を示す。異なるリンカー長を有する減少された効力のために操作された追加のＩＬ－１５／Ｒαバリアントによる処理後の（図６４Ａ）ＣＤ８＋Ｔ細胞、（図６４Ｂ）ＣＤ４＋Ｔ細胞、（図６４Ｃ）γδＴ細胞、および（図５６４Ｄ）ＮＫ（ＣＤ１６＋）細胞上のＫｉ６７発現の割合を示す。追加のＩＬ－１５／Ｒαバリアントによる処置後の（図６５Ａ）ＣＤ８^＋Ｔ細胞、（図６５Ｂ）ＣＤ４^＋Ｔ細胞、（図６５Ｃ）γδＴ細胞、および（図６５Ｄ）ＮＫ（ＣＤ１６＋）細胞上のＫｉ６７発現の割合を示す。図６７Ａ～６７Ｃに示されている実験におけるリンパ球およびその亜集団のゲーティングを示す。図６６Ａは、リンパ球集団のゲーティングを示す。図６６Ｂは、ＣＤ４＋およびＣＤ８＋のＴ細胞を示す。図６６Ｃは、ＣＤ４＋Ｔ細胞の、ＣＤ４５ＲＡおよびＣＤ２７を発現する亜集団を示す。図６６Ｄは、ＣＤ８＋Ｔ細胞のＣＤ４５ＲＡおよびＣＤ２７発現亜集団を示す。示された濃度で、示されたＩＬ－１５／ＩＬ－１５Ｒα－Ｆｃ融合タンパク質と共にＰＢＭＣを４日間インキュベートした後の、ＣＤ８^＋Ｔ細胞（ＣＤ４５ＲＡ－ＣＤ２７－）（図６７Ａ）およびＣＤ４^＋Ｔ細胞（ＣＤ４５ＲＡ－ＣＤ２７－）（図６７Ｂ）のＳＴＡＴ５リン酸化を示す。図６７Ｃは、対照（ＸＥＮＰ２０８１８）に対する様々なＩＬ１５／ＩＬ１５ＲαＦｃ二量体のＥＣ５０の倍数変化を示す。示された試験物質と共にインキュベーションした後のマウス脾臓細胞におけるＣＤ８^＋ＣＤ４５ＲＡ^－Ｔ細胞（図６８Ａ）およびＣＤ４^＋ＣＤ４５ＲＡ^－Ｔ細胞（図６８Ｂ）のＳＴＡＴ５リン酸化を示す。０．１ｍｇ／ｋｇの単回投与でのＣ５７ＢＬ／６マウスにおける様々なＩＬ－１５／ＲαＦｃ融合タンパク質または対照のＩＶ－ＴＶ投与時のＰＫを示す。半減期対ＮＫ細胞効力の相関を示す。ＩＬ－１５／Ｒα－Ｆｃ親和性バリアントの半減期対マウスＳＴＡＴ５シグナル伝達の相関を示す。Ｃ５７ＢＬ／６アルビノマウスの投与後８日の試験物質の血清濃度を示す。示された試験物質の投与後のＣ５７ＢＬ／６アルビノマウスの脾臓におけるＣＤ８^＋Ｔ細胞数を示す。ＣＤ４５^＋細胞レベルが疾患を予測する指標であることを示す。４日目（図７５Ａ）および８日目（図７５Ｂ）のＣＤ４５^＋細胞数によって示されるように、バリアントＩＬ－１５／Ｒα－Ｆｃ融合タンパク質による生着の増強を示す。示されたバリアントＩＬ－１５／Ｒα－Ｆｃ融合タンパク質または対照による、ヒトＰＢＭＣを移植したＮＳＧマウスの処置後の４日目（図７６Ａ）、７日目（図７６Ｂ）、および１１日目（図７６Ｃ）のＩＦＮγレベルを示す。示されたバリアントＩＬ－１５／Ｒα－Ｆｃ融合タンパク質または対照による、ヒトＰＢＭＣを移植したＮＳＧマウスの処置後の４日目（図７７Ａ）、７日目（図７７Ｂ）、および１１日目（図７７Ｃ）のＣＤ４５^＋リンパ球細胞数を示す。示されたＩＬ－１５／Ｒα－Ｆｃ融合タンパク質または対照による、ヒトＰＢＭＣを移植したＮＳＧマウスの処置後の４日目（図７８Ａ）、７日目（図７８Ｂ）、および１１日目（図７８Ｃ）のＮＫ細胞（ＣＤ１６＋ＣＤ５６＋ＣＤ４５ＲＡ＋）数を示す。示されたＩＬ－１５／Ｒα－Ｆｃ融合タンパク質または対照による、ヒトＰＢＭＣを移植したＮＳＧマウスの処置後の７日目（図７９Ａ）および１１日目（図７９Ｂ）のＣＤ８^＋Ｔ細胞（ＣＤ８＋ＣＤ４５ＲＡ＋）数を示す。示されたＩＬ－１５／Ｒα－Ｆｃ融合タンパク質または対照による、ヒトＰＢＭＣを移植したＮＳＧマウスの処置後の７日目（図８０Ａ）および１１日目（図８０Ｂ）のＣＤ４＋Ｔ細胞（ＣＤ４＋ＣＤ４５ＲＡ＋）数を示す。追加のバリアントＩＬ－１５／Ｒα－Ｆｃ融合タンパク質による処理後のｈｕＰＢＭＣ移植マウスの血清における４、７、および１１日目のＩＦＮγレベルを示す。追加のバリアントＩＬ－１５／Ｒα－Ｆｃ融合タンパク質による処置後のｈｕＰＢＭＣ移植マウスの全血における４日目（図８２Ａ）、７日目（図８２Ｂ）、および１１日目（図８２Ｃ）のＣＤ８＋Ｔ細胞数を示す。追加のバリアントＩＬ－１５／Ｒα－Ｆｃ融合タンパク質による処理後のｈｕＰＢＭＣ移植マウスの全血における４日目（図８３Ａ）、７日目（図８３Ｂ）、および１１日目（図８３Ｃ）のＣＤ４＋Ｔ細胞数を示す。追加のバリアントＩＬ－１５／Ｒα－Ｆｃ融合タンパク質による処理後のｈｕＰＢＭＣ移植マウスの全血における４日目（図８４Ａ）、７日目（図８４Ｂ）、および１１日目（図８４Ｃ）のＣＤ４５＋細胞数を示す。追加のＩＬ－１５／Ｒαバリアントによる処理後の４日目（図８５Ａ）、７日目（図８５Ｂ）、および１１日目（図８５Ｃ）のｈｕＰＢＭＣ移植マウスの初期体重の割合としての体重を示す。各点は単一のＮＳＧマウスを表す。体重が初期体重の７０％を下回ったマウスを安楽死させた。死亡したマウスは７０％として表される。示された試験物質と共にインキュベーションした後のＫｉ６７を発現するカニクイザルＣＤ８^＋Ｔ細胞（図８６Ａ）およびカニクイザルＮＫ細胞（図８６Ｂ）の割合を示す。ＸＥＮＰ２２８１９をカニクイザルに投与した後のリンパ球数を示す。図８４Ａ～Ｅは、それぞれ、ＣＤ５６＋ＮＫ細胞（図８７Ａ）、ＣＤ１６＋ＮＫ細胞（図８７Ｂ）、γδＴ細胞（ＣＤ４５ＲＡ＋ＣＤ３＋ＣＤ４－ＣＤ８－）（図８７Ｃ）、ＣＤ８＋Ｔ細胞（図８７Ｄ）、およびＣＤ４＋Ｔ細胞（図８７Ｅ）の絶対数の倍数変化を示す。ＸＥＮＰ２２８１９をカニクイザルに投与した後の、ＣＤ５６＋ＮＫ細胞（図８８Ａ）、ＣＤ１６＋ＮＫ細胞（図８８Ｂ）、ＣＤ８＋Ｔ細胞（ＣＤ４５ＲＡ＋）（図８８Ｃ）、ＣＤ８＋Ｔ細胞（ＣＤ４５ＲＡ－）（図８８Ｄ）、およびＣＤ４＋Ｔ細胞（ＣＤ４５ＲＡ－）（図８８Ｅ）の増殖を示す。ＸＥＮＰ２２８１９をカニクイザルに投与した後のリンパ球数を示す。図８９Ａ～Ｅは、ＣＤ５６＋ＮＫ細胞（図８９Ａ）、ＣＤ１６＋ＮＫ細胞（図８９Ｂ）、γδＴ細胞（ＣＤ４５ＲＡ＋ＣＤ３＋ＣＤ４－ＣＤ８－）（図８９Ｃ）、ＣＤ８＋Ｔ細胞（図８９Ｄ）、およびＣＤ４＋Ｔ細胞（図８９Ｅ）の絶対数の倍数変化を示す。ＸＥＮＰ２２８１９をカニクイザルに投与した後の、ＣＤ５６＋ＮＫ細胞（図９０Ａ）、ＣＤ１６＋ＮＫ細胞（図９０Ｂ）、ＣＤ８＋Ｔ細胞（ＣＤ４５ＲＡ＋）（図９０Ｃ）、ＣＤ８＋Ｔ細胞（ＣＤ４５ＲＡ－）（図９０Ｄ）、およびＣＤ４＋Ｔ細胞（ＣＤ４５ＲＡ－）（図９０Ｅ）の増殖を示す。ＸＥＮＰ２２８２１をカニクイザルに投与した後のリンパ球数を示す。図９１Ａ～９１Ｅは、ＣＤ５６＋ＮＫ細胞（図９１Ａ）、ＣＤ１６＋ＮＫ細胞（図９１Ｂ）、γδＴ細胞（ＣＤ４５ＲＡ＋ＣＤ３＋ＣＤ４－ＣＤ８－）（図９１Ｃ）、ＣＤ８＋Ｔ細胞（図９１Ｄ）、およびＣＤ４＋Ｔ細胞（図９１Ｅ）の絶対数の倍数変化を示す。ＸＥＮＰ２２８２１をカニクイザルに投与した後の、ＣＤ５６＋ＮＫ細胞（図９２Ａ）、ＣＤ１６＋ＮＫ細胞（図９２Ｂ）、ＣＤ８＋Ｔ細胞（ＣＤ４５ＲＡ＋）（図９２Ｃ）、ＣＤ８＋Ｔ細胞（ＣＤ４５ＲＡ－）（図９２Ｄ）、およびＣＤ４＋Ｔ細胞（ＣＤ４５ＲＡ－）（図９２Ｅ）の増殖を示す。ＸＥＮＰ２２８２２をカニクイザルに投与した後のリンパ球数を示す。図９３Ａ～Ｅは、それぞれ、ＣＤ５６＋ＮＫ細胞（図９３Ａ）、ＣＤ１６＋ＮＫ細胞（図９３Ｂ）、γδＴ細胞（ＣＤ４５ＲＡ＋ＣＤ３＋ＣＤ４－ＣＤ８－）（図９３Ｃ）、ＣＤ８＋Ｔ細胞（図９３Ｄ）、およびＣＤ４＋Ｔ細胞（図９３Ｅ）の絶対数の倍数変化を示す。ＸＥＮＰ２２８２２をカニクイザルに投与した後の、ＣＤ５６＋ＮＫ細胞（図９４Ａ）、ＣＤ１６＋ＮＫ細胞（図９４Ｂ）、ＣＤ８＋Ｔ細胞（ＣＤ４５ＲＡ＋）（図９４Ｃ）、ＣＤ８＋Ｔ細胞（ＣＤ４５ＲＡ－）（図９４Ｄ）、およびＣＤ４＋Ｔ細胞（ＣＤ４５ＲＡ－）（図９４Ｅ）の増殖を示す。ＸＥＮＰ２２８３４をカニクイザルに投与した後のリンパ球数を示す。図９５Ａ～Ｅは、それぞれ、ＣＤ５６＋ＮＫ細胞（図９５Ａ）、ＣＤ１６＋ＮＫ細胞（図９５Ｂ）、γδＴ細胞（ＣＤ４５ＲＡ＋ＣＤ３＋ＣＤ４－ＣＤ８－）（図９５Ｃ）、ＣＤ８＋Ｔ細胞（図９５Ｄ）、およびＣＤ４＋Ｔ細胞（図９５Ｅ）の絶対数の倍数変化を示す。ＸＥＮＰ２２８３４をカニクイザルに投与した後の、ＣＤ５６＋ＮＫ細胞（図９６Ａ）、ＣＤ１６＋ＮＫ細胞（図９６Ｂ）、ＣＤ８＋Ｔ細胞（ＣＤ４５ＲＡ＋）（図９６Ｃ）、ＣＤ８＋Ｔ細胞（ＣＤ４５ＲＡ－）（図９６Ｄ）、およびＣＤ４＋Ｔ細胞（ＣＤ４５ＲＡ－）（図９６Ｅ）の増殖を示す。ＸＥＮＰ２３３４３をカニクイザルに投与した後のリンパ球数を示す。図９７Ａ～Ｅは、それぞれ、ＣＤ５６＋ＮＫ細胞（図９７Ａ）、ＣＤ１６＋ＮＫ細胞（図９７Ｂ）、γδＴ細胞（ＣＤ４５ＲＡ＋ＣＤ３＋ＣＤ４－ＣＤ８－）（図９７Ｃ）、ＣＤ８＋Ｔ細胞（図９７Ｄ）、およびＣＤ４＋Ｔ細胞（図９７Ｅ）の絶対数の倍数変化を示す。ＸＥＮＰ２３３４３をカニクイザルに投与した後の、ＣＤ５６＋ＮＫ細胞（図９８Ａ）、ＣＤ１６＋ＮＫ細胞（図９８Ｂ）、ＣＤ８＋Ｔ細胞（ＣＤ４５ＲＡ＋）（図９８Ｃ）、ＣＤ８＋Ｔ細胞（ＣＤ４５ＲＡ－）（図９８Ｄ）、およびＣＤ４＋Ｔ細胞（ＣＤ４５ＲＡ－）（図９８Ｅ）の増殖を示す。Ｍ４２８Ｌ／Ｎ４３４Ｓ置換を有する「ＩＬ－１５／Ｒα－ヘテロＦｃ」フォーマットの例示的なＩＬ－１５／Ｒα－Ｆｃ融合タンパク質である、ＸＥＮＰ２３３４３、ＸＥＮＰ２３５０４、ＸＥＮＰ２４１１３、ＸＥＮＰ２４３０１、ＸＥＮＰ２４３０６、およびＸＥＮＰ２４３４１の配列を示す。ＩＬ－１５およびＩＬ－１５Ｒα（スシ）には下線が付され、リンカーには二重下線が付され（当業者には理解されるように、リンカーは、その一部が図７に示される他のリンカーで置き換えられ得る）、スラッシュ（／）は、ＩＬ－１５、ＩＬ－１５Ｒα、リンカー、およびＦｃ領域の間の境界（複数可）を示す。Ｍ４２８Ｌ／Ｎ４３４Ｓ置換を有する「ｓｃＩＬ－１５／Ｒα－Ｆｃ」フォーマットの例示的なＩＬ－１５／Ｒα－Ｆｃ融合タンパク質である、ＸＥＮＰ２５９３８（ＸＥＮＰ２４２９４とも呼ばれる）の配列を示す。Ｍ４２８Ｌ／Ｎ４３４Ｓ置換を有する「ｎｃＩＬ－１５／Ｒα－Ｆｃ」フォーマットの例示的なＩＬ－１５／Ｒα－Ｆｃ融合タンパク質である、ＸＥＮＰ２４３８３の配列を示す。ＩＬ－１５およびＩＬ－１５Ｒα（スシ）には下線が付され、リンカーには二重下線が付され（当業者には理解されるように、リンカーは、その一部が図７に示される他のリンカーで置き換えられ得る）、スラッシュ（／）は、ＩＬ－１５、ＩＬ－１５Ｒα、リンカー、およびＦｃ領域の間の境界（複数可）を示す。Ｍ４２８Ｌ／Ｎ４３４Ｓ置換を有する「二価ｎｃＩＬ－１５／Ｒα－Ｆｃ」フォーマットの例示的なＩＬ－１５／Ｒα－Ｆｃ融合タンパク質である、ＸＥＮＰ２４３４６およびＸＥＮＰ２４３５１の配列を示す。ＩＬ－１５およびＩＬ－１５Ｒα（スシ）には下線が付され、リンカーには二重下線が付され（当業者には理解されるように、リンカーは、その一部が図７に示される他のリンカーで置き換えられ得る）、スラッシュ（／）は、ＩＬ－１５、ＩＬ－１５Ｒα、リンカー、およびＦｃ領域の間の境界（複数可）を示す。Ｍ４２８Ｌ／Ｎ４３４ＳＦｃ変異を有するＩＬ－１５／Ｒαバリアントによる処置後のヒトＣＤ８^＋Ｔ細胞（図１０３Ａ）、ヒトＣＤ４^＋Ｔ細胞（図１０３Ｂ）、およびヒトＮＫ細胞（図１０３Ｃ）上のＫｉ６７発現の割合を示す。ＸｍＡｂ２４３０６（ＸＥＮＰ２４３０６とも呼ばれる）による処置後のヒトＣＤ８^＋Ｔ細胞（図１０４Ａ）、ヒトＣＤ４^＋Ｔ細胞（図１０４Ｂ）、ヒトＮＫ細胞（図１０４Ｃ）、およびヒトγδＴ細胞（図１０４Ｄ）上のＫｉ６７発現の割合を示す。Ｍ４２８Ｌ／Ｎ４３４Ｓ変異を有するＷＴＩＬ－１５／Ｒα Ｆｃおよび効力が低減したＩＬ－１５／Ｒαバリアントによる処置後の、カニクイザルＣＤ８^＋Ｔ細胞（図１０５Ａ）、カニクイザルＣＤ４^＋Ｔ細胞（図１０５Ｂ）、およびカニクイザルＮＫ細胞（図１０５Ｃ）上のＫｉ６７発現の割合を示す。ＸＥＮＰ２０８１８またはＸｍＡｂ２４３０６による処理後のカニクイザルＣＤ８α^＋ＣＤ４５ＲＡ^－Ｔ細胞上のＫｉ６７発現の割合を示す。追加のバリアントＩＬ－１５／Ｒα－Ｆｃ融合タンパク質による処置後の、ｈｕＰＢＭＣ移植マウスの全血における４日目（図１０７Ａ）および７日目（図１０７Ｂ）、ならびに脾臓における８日目（図１０７Ｃ）のＣＤ４＋Ｔ細胞数を示す。追加のバリアントＩＬ－１５／Ｒα－Ｆｃ融合タンパク質による処置後の、ｈｕＰＢＭＣ移植マウスの全血における（図１０８Ｃ）４日目および（図１０８Ｂ）７日目、ならびに脾臓における（図１０８Ｃ）８日目のＣＤ８^＋Ｔ細胞数を示す。追加のバリアントＩＬ－１５／Ｒα－Ｆｃ融合タンパク質による処置後の、ｈｕＰＢＭＣ移植マウスの全血における４日目（図１０９Ａ）および７日目（図１０９Ｂ）、ならびに脾臓における８日目（図１０９Ｃ）のＣＤ８＋Ｔ細胞数を示す。追加のＩＬ－１５／Ｒαバリアントによる処置後の－２日目（図１１０Ａ）、１日目（図１１０Ｂ）、５日目（図１１０Ｃ）、８日目（図１１０Ｄ）、および１１日目（図１１０Ｅ）の、ｈｕＰＢＭＣ移植マウスの初期体重の割合としての体重を示す。各点は単一のＮＳＧマウスを表す。図１１０Ｆは、ＩＬ－１５／Ｒαバリアントによる処置後のｈｕＰＢＭＣ移植マウスにおける体重の時間経過を示す。示された試験物質と共にインキュベーションした後のＫｉ６７を発現するＣＤ８＋ＣＤ４５ＲＡ－Ｔ細胞（図１１１Ａ）、ＣＤ４＋ＣＤ４５ＲＡ－Ｔ細胞（図１１１Ｂ）、γδ Ｔ細胞（図１１１Ｃ）、およびＣＤ１６＋ＮＫ細胞（図１１１Ｄ）の割合を示す。ＩＬ－１５／Ｒαバリアントによる処置後のカニクイザルにおけるＣＤ８＋Ｔ細胞（図１１２Ａ）、ＣＤ４＋Ｔ細胞（図１１２Ｂ）、ＮＫ細胞（図１１２Ｃ）、およびγδＴ細胞（図１１２Ｄ）を示す。カニクイザルにおける示された試験物質の経時的な血清中濃度および半減期を示す。ＡＦ６４７標識化試験物質（ＸｔｅｎｄありおよびドメインリンカーなしのＷＴＩＬ－１５／Ｒα－ＦｃおよびＩＬ－１５／Ｒα－Ｆｃ親和性バリアント）の、新鮮かつ活性化されたＰＢＭＣ中のＣＤ８＋ＣＤ４５ＲＡ－Ｔ細胞（図１１４Ａ）、ＣＤ８＋ＣＤ４５ＲＡ＋Ｔ細胞（図１１４Ｂ）、ＣＤ４＋ＣＤ４５ＲＡ－Ｔ細胞（図１１４Ｃ）、ＣＤ４＋ＣＤ４５ＲＡ＋Ｔ細胞（図１１４Ｄ）、ＣＤ１６＋ＮＫ細胞（図１１４Ｅ）、およびγδＴ細胞（図１１４Ｆ）への結合を示す。ＡＦ６４７標識化試験物質（Ｘｔｅｎｄおよびドメインリンカーを含むＷＴＩＬ－１５／Ｒα－ＦｃおよびＩＬ－１５／Ｒα－Ｆｃ親和性バリアント）の、新鮮かつ活性化されたＰＢＭＣ中の（図１１５Ａ）ＣＤ８^＋ＣＤ４５ＲＡ^－Ｔ細胞、（図１１５Ｂ）ＣＤ８^＋ＣＤ４５ＲＡ^＋Ｔ細胞、（図１１５Ｃ）ＣＤ４^＋ＣＤ４５ＲＡ^－Ｔ細胞、（図１１５Ｄ）ＣＤ４^＋ＣＤ４５ＲＡ^＋Ｔ細胞、（図１１５Ｅ）ＣＤ１６^＋ＮＫ細胞、および（図１１５Ｆ）γδＴ細胞への結合を示す。ＡＦ６４７標識化試験物質（ＦｃＲｎバリアントなどのＸｔｅｎｄバリアントを含むＷＴＩＬ－１５／Ｒα－ＦｃおよびＩＬ－１５／Ｒα－Ｆｃ融合タンパク質）の、新鮮かつ活性化されたＰＢＭＣ中の（図１１６Ａ）ＣＤ８^＋ＣＤ４５ＲＡ^－Ｔ細胞、（図１１６Ｂ）ＣＤ８^＋ＣＤ４５ＲＡ^＋Ｔ細胞、（図１１６Ｃ）ＣＤ４^＋ＣＤ４５ＲＡ^－Ｔ細胞、（図１１６Ｄ）ＣＤ４^＋ＣＤ４５ＲＡ^＋Ｔ細胞、（図１１６Ｅ）ＣＤ１６^＋ＮＫ細胞、および（図１１６Ｆ）γδＴ細胞への結合を示す。ＡＦ６４７標識下試験物質（ＸＥＮＰ２４３４１およびＸＥＮＰ２４１１３を含む）の、活性化されたＰＢＭＣ中のＣＤ８^＋ＣＤ４５ＲＡ^－Ｔ細胞への結合を示す。（図１１８Ａ）グループ１（親ＭＣＦ－７腫瘍細胞および示された試験物質と共にインキュベートした精製されたＴ細胞）および（図１１８Ｂ）グループ２（ｐｐ６５を発現するＭＣＦ－７腫瘍細胞および示された試験物質と共にインキュベートした精製されたＴ細胞）におけるＣＤ８^＋Ｔ細胞上のＣＤ２５発現を示す。（図１１９Ａ）グループ１（親ＭＣＦ－７腫瘍細胞および示された試験物質と共にインキュベートした精製されたＴ細胞）および（図１１９Ｂ）グループ２（ｐｐ６５を発現するＭＣＦ－７腫瘍細胞および示された試験物質と共にインキュベートした精製されたＴ細胞）におけるＣＤ４^＋Ｔ細胞上のＣＤ２５発現を示す。（図１２０Ａ）グループ１（親ＭＣＦ－７腫瘍細胞および示された試験物質と共にインキュベートした精製されたＴ細胞）および（図１２０Ｂ）グループ２（ｐｐ６５を発現するＭＣＦ－７腫瘍細胞および示された試験物質と共にインキュベートした精製されたＴ細胞）におけるＣＤ８^＋Ｔ細胞上のＣＤ６９発現を示す。（図１２１Ａ）グループ１（親ＭＣＦ－７腫瘍細胞および示された試験物質と共にインキュベートした精製されたＴ細胞）および（図１２１Ｂ）グループ２（ｐｐ６５を発現するＭＣＦ－７腫瘍細胞および示された試験物質と共にインキュベートした精製されたＴ細胞）におけるＣＤ４^＋Ｔ細胞上のＣＤ６９発現を示す。（図１２２Ａ）グループ１（親ＭＣＦ－７腫瘍細胞および示された試験物質と共にインキュベートした精製されたＴ細胞）および（図１２２Ｂ）グループ２（ｐｐ６５を発現するＭＣＦ－７腫瘍細胞および示された試験物質と共にインキュベートした精製されたＴ細胞）におけるＣＤ８^＋Ｔ細胞における細胞内ＩＦＮγ発現を示す。（図１２３Ａ）グループ１（親ＭＣＦ－７腫瘍細胞および示された試験物質と共にインキュベートした精製されたＴ細胞）および（図１２３Ｂ）グループ２（ｐｐ６５を発現するＭＣＦ－７腫瘍細胞および示された試験物質と共にインキュベートした精製されたＴ細胞）におけるＣＤ４^＋Ｔ細胞における細胞内ＩＦＮγ発現を示す。グループ１（親ＭＣＦ－７腫瘍細胞および示された試験物質と共にインキュベートした精製されたＴ細胞）におけるＣＤ８^＋Ｔ細胞の（図１２４Ａ）Ｋｉ－６７^＋／ＩＦＮγ^－、（図１２４Ｂ）Ｋｉ－６７^＋／ＩＦＮγ^＋、および（図１２４Ｃ）Ｋｉ－６７^－／ＩＦＮγ^＋画分の割合を示す。グループ１（親ＭＣＦ－７腫瘍細胞および示された試験物質と共にインキュベートした精製されたＴ細胞）におけるＣＤ４^＋Ｔ細胞の（図１２５Ａ）Ｋｉ－６７^＋／ＩＦＮγ^－、（図１２５Ｂ）Ｋｉ－６７^＋／ＩＦＮγ^＋、および（図１２５Ｃ）Ｋｉ－６７^－／ＩＦＮγ^＋画分の割合を示す。グループ１（ｐｐ６５を発現するＭＣＦ－７腫瘍細胞および示された試験物質と共にインキュベートした精製されたＴ細胞）におけるＣＤ８^＋Ｔ細胞の（図１２６Ａ）Ｋｉ－６７^＋／ＩＦＮγ^－、（図１２６Ｂ）Ｋｉ－６７^＋／ＩＦＮγ^＋、および（図１２６Ｃ）Ｋｉ－６７^－／ＩＦＮγ^＋画分の割合を示す。グループ１（ｐｐ６５を発現するＭＣＦ－７腫瘍細胞および示された試験物質と共にインキュベートした精製されたＴ細胞）におけるＣＤ４^＋Ｔ細胞の（図１２７Ａ）Ｋｉ－６７^＋／ＩＦＮγ^－、（図１２７Ｂ）Ｋｉ－６７^＋／ＩＦＮγ^＋、および（図１２７Ｃ）Ｋｉ－６７^－／ＩＦＮγ^＋画分の割合を示す。（図１２８Ａ）グループ１（親ＭＣＦ－７腫瘍細胞および示された試験物質と共にインキュベートした精製されたＴ細胞）および（図１２８Ｂ）グループ２（ｐｐ６５を発現するＭＣＦ－７腫瘍細胞および示された試験物質と共にインキュベートした精製されたＴ細胞）におけるＣＤ８^＋Ｔ細胞上のＣＤ１０７ａ発現を示す。（図１２９Ａ）グループ１（親ＭＣＦ－７腫瘍細胞および示された試験物質と共にインキュベートした精製されたＴ細胞）および（図１２９Ｂ）グループ２（ｐｐ６５を発現するＭＣＦ－７腫瘍細胞および示された試験物質と共にインキュベートした精製されたＴ細胞）におけるＣＤ４^＋Ｔ細胞上のＣＤ１０７ａ発現を示す。精製されたＴ細胞および示された試験物質と共にインキュベーションした後の残りの標的細胞［図１３０Ａ：親ＭＣＦ－７腫瘍細胞、図１３０Ｂ：ｐｐ６５を発現するＭＣＦ－７腫瘍細胞］を示す。精製されたＴ細胞および示された試験物質と共にインキュベーションした後の死細胞［図１３１Ａ：親ＭＣＦ－７腫瘍細胞、図１３１Ｂ：ｐｐ６５を発現するＭＣＦ－７腫瘍細胞］の数を示す。精製されたＴ細胞を、抗ＨＬＡ－Ａ抗体ありまたはなしで親ＭＣＦ－７腫瘍細胞またはｐｐ６５を発現するＭＣＦ－７腫瘍細胞と共にインキュベートした後の、ＣＤ８^＋Ｔ細胞のＫｉ－６７^＋／ＩＦＮγ^＋画分の割合を示す。精製されたＴ細胞を、抗ＨＬＡ－Ａ抗体ありまたはなしで親ＭＣＦ－７腫瘍細胞またはｐｐ６５を発現するＭＣＦ－７腫瘍細胞と共にインキュベートした後の、標的細胞（すなわち、親ＭＣＦ－７腫瘍細胞またはｐｐ６５を発現するＭＣＦ－７腫瘍細胞）の数を示す。精製されたＴ細胞を、ｐｐ６５を発現するＭＣＦ－７腫瘍細胞および示された試験物質と共にインキュベーションした後の、（図１３４Ａ）ＣＤ８^＋Ｔ細胞および（図１３４Ｂ）ＣＤ４^＋Ｔ細胞上のＣＤ２５発現を示す。精製されたＴ細胞を、ｐｐ６５を発現するＭＣＦ－７腫瘍細胞および示された試験物質と共にインキュベーションした後の、（図１３５Ａ）ＣＤ８^＋Ｔ細胞および（図１３５Ｂ）ＣＤ４^＋Ｔ細胞上のＣＤ６９発現を示す。精製されたＴ細胞を、ｐｐ６５を発現するＭＣＦ－７腫瘍細胞および示された試験物質と共にインキュベーションした後の、（図１３６Ａ）ＣＤ８^＋Ｔ細胞および（図１３６Ｂ）ＣＤ４^＋Ｔ細胞上のＫｉ６７発現を示す。精製されたＴ細胞を、ｐｐ６５を発現するＭＣＦ－７腫瘍細胞および示された試験物質と共にインキュベーションした後の、（図１３７Ａ）ＣＤ８^＋Ｔ細胞および（図１３７Ｂ）ＣＤ４^＋Ｔ細胞のＫｉ－６７^＋／ＩＦＮγ^＋画分の割合を示す。精製されたＴ細胞を、ｐｐ６５を発現するＭＣＦ－７腫瘍細胞および示された試験物質と共にインキュベーションした後の、（図１３８Ａ）ＣＤ８^＋Ｔ細胞および（図１３８Ｂ）ＣＤ４^＋Ｔ細胞のＣＤ６９^＋／ＩＦＮγ^＋画分の割合を示す。精製されたＴ細胞を、ｐｐ６５を発現するＭＣＦ－７腫瘍細胞および示された試験物質と共にインキュベーションした後の、（図１３９Ａ）ＣＤ８^＋Ｔ細胞および（図１３９Ｂ）ＣＤ４^＋Ｔ細胞のＣＤ６９＋／Ｋｉ６７＋画分の割合を示す。精製されたＴ細胞および示された試験物質と共にインキュベーションした後の、残りの標的細胞（ｐｐ６５を発現するＭＣＦ－７腫瘍細胞）を示す。精製されたＴ細胞および示された試験物質と共にインキュベーションした後の、死細胞（ｐｐ６５を発現するＭＣＦ－７腫瘍細胞）の数を示す。ＸｍＡｂ２４３０６の非Ｘｔｅｎｄ類似体である、ＸＥＮＰ２４０４５による処置後の、ｐｐ６５を発現するＭＣＦ－７腫瘍細胞およびｐｐ６５反応性ヒトＰＢＭＣを移植したマウスにおける、平均腫瘍体積（図１４２Ａ）および腫瘍体積の変化（図１４２Ｂ）を示す。ＸｍＡｂ２４３０６の非Ｘｔｅｎｄ類似体である、ＸＥＮＰ２４０４５による処置後の、ｐｐ６５を発現するＭＣＦ－７腫瘍細胞およびｐｐ６５反応性ヒトＰＢＭＣを移植したマウスの全血における、ＣＤ４５^＋細胞（図１４３Ａ）、ＣＤ４^＋細胞（図１４３Ｂ）、ＣＤ８^＋細胞（図１４３Ｃ）、およびＮＫ細胞（図１４３Ｄ）数を示す。カニクイザルにおける様々な濃度での様々な試験物質の経時的な血清中濃度および半減期を示す。カニクイザルにおける１倍および３倍用量でのＸＥＮＰ２２８２１の経時的なＣｍａｘ正規化血清濃度を示す。示された試験物質を投与した後のカニクイザルにおけるＣＤ８^＋Ｔ細胞（図１４６Ａ）、ＣＤ４^＋Ｔ細胞（図１４６Ｂ）、ＣＤ１６^＋ＮＫ細胞（図１４６Ｃ）、ＣＤ５６^＋ＮＫ細胞（図１４６Ｄ）、およびγδＴ細胞（図１４６Ｅ）数の平均倍数変化を示す。３倍用量または０．６倍用量のいずれかのＸＥＮＰ２４３０６の投与後の、経時的なカニクイザル全血におけるＣＤ８^＋Ｔ細胞（図１４７Ａ）およびγδＴ細胞（図１４７Ｂ）の倍数変化を示す。０．３倍用量のＸＥＮＰ２２８２１および０．６倍用量のＸＥＮＰ２４３０６の投与後の、Ｋｉ６７を発現するカニクイザルリンパ節におけるＣＤ８α^＋ＣＤ４５ＲＡ^＋Ｔ細胞の割合を示す。０．３倍用量のＸＥＮＰ２２８２１および０．６倍用量のＸＥＮＰ２４３０６の投与後の、Ｋｉ６７を発現するカニクイザル全血におけるＣＤ８α^＋ＣＤ４５ＲＡ^＋Ｔ細胞の割合（左軸）および細胞数の倍数変化（右軸）を示す。０．３倍用量のＸＥＮＰ２２８２１の投与後の、Ｋｉ６７を発現するカニクイザルＰＢＭＣ中の様々なリンパ球集団の割合を示す。０．６倍用量のＸｍＡｂ２４３０６の投与後の、Ｋｉ６７を発現するカニクイザルＰＢＭＣ中の様々なリンパ球集団の割合を示す。０．６倍用量のＸｍＡｂ２４３０６の投与後の、経時的なＫｉ６７を発現するカニクイザル全血におけるＣＤ８α＋ＣＤ４５ＲＡ＋Ｔ細胞の割合、およびＸｍＡｂ２４３０６の血清濃度のオーバーレイを示す。０．６倍用量のＸｍＡｂ２４３０６の投与後の、経時的なカニクイザル全血におけるＣＤ８^＋Ｔ細胞、ＣＤ４^＋Ｔ細胞、ＣＤ５６^＋ＣＤ８α^＋ＮＫ細胞、およびγδＴ細胞の数の倍数変化を示す。０．６倍用量のＸｍＡｂ２４３０６の投与後の、経時的なカニクイザル全血におけるＣＤ８^＋Ｔ細胞およびＴｒｅｇの数の倍数変化を示す。ＸＥＮＰ２０８１８またはＸｍＡｂ２４３０６のいずれかの投与後の、カニクイザルの全血における経時的なＣＤ８^＋Ｔ細胞（図１５５Ａ）、ＣＤ４^＋Ｔ細胞（図１５５Ｂ）、およびＣＤ１６^＋ＮＫ細胞（図１５５Ｃ）数のオーバーレイを示す。未処理と比較した、それらのＥＣ_５０濃度で、ＸＥＮＰ２０８１８またはＸｍＡｂ２４３０６のいずれかで２４時間処理した後の、（図１５６Ａ）ＰＢＭＣ全体、（図１５６Ｂ）精製されたＮＫ細胞、および（図１５６Ｃ）精製されたＣＤ８^＋Ｔ細胞における免疫関連遺伝子発現の倍数変化を示す。未処理と比較した、それらのＥＣ_５０濃度で、ＸＥＮＰ２０８１８またはＸｍＡｂ２４３０６のいずれかで４８時間処理した後の、（図１５７Ａ）ＰＢＭＣ全体、（図１５７Ｂ）精製されたＮＫ細胞、および（図１５７Ｃ）精製されたＣＤ８^＋Ｔ細胞における遺伝子発現の倍数変化を示す。未処理と比較した、それらのＥＣ５０濃度で、（図１５８Ａ）ＸｍＡｂ２４３０６またはＩＬ－１５および（図１５８Ｂ）ＸｍＡｂ２４３０６またはＩＬ－２で４８時間処置した後のＰＢＭＣ全体における遺伝子発現の倍数変化を示す。ＸｍＡｂ２４３０６および様々な濃度のラパマイシン拡大Ｔｒｅｇの存在下での（図１５９Ａ）ＣＤ８＋および（図１５９Ｂ）ＣＤ４＋レスポンダーＴ細胞の増殖を示す。切断バリアント（Ｅ２３３Ｐ／Ｌ２３４Ｖ／Ｌ２３５Ａ／Ｇ２３６ｄｅｌ／Ｓ２６７Ｋ、「ＩｇＧ１＿ＰＶＡ＿／Ｓ２６７ｋ」）を有する二価抗ＰＤ－１ｍＡｂであるＸＥＮＰ２６８４２の配列を示す。ＣＤＲには下線が付されている。本明細書中に記載され、そして本明細書中のＣＤＲを含むあらゆる配列に当てはまるように、ＣＤＲ位置の正確な同定は表１に示されるように用いられる付番によってわずかに異なり得、したがって、下線が付されたＣＤＲのみならず、他の付番システムを用いたＶＨおよびＶＬドメイン内に含まれるＣＤＲもまた本明細書に含まれる。さらに、各ＣＤＲは配列表にその独自の配列番号または配列識別子を有し、各ＶＨおよびＶＬドメインは配列表にその独自の配列番号または配列識別子を有する。示された試験物質の最初の投与後の、（図１６１Ａ）６日目および（図１６１Ｂ）１０日目のマウスの全血におけるＣＤ８^＋Ｔ細胞を示す。示された試験物質の最初の投与後の、（図１６２Ａ）６日目および（図１６２Ｂ）１０日目のマウスの全血におけるＣＤ４^＋Ｔ細胞を示す。示された試験物質の最初の投与後の、（図１６３Ａ）６日目および（図１６３Ｂ）１０日目のマウスの全血におけるＣＤ４５^＋Ｔ細胞を示す。示された試験物質の最初の投与後の、（図１６４Ａ）６日目および（図１６４Ｂ）１０日目のマウスの全血におけるＮＫ細胞を示す。示された試験物質の最初の投与後７日目のＮＳＧマウスの血清におけるＩＦＮγを示す。示された試験物質の最初の投与後７日目（図１６６Ａ）、１１日目（図１６６Ｂ）、１４日目（図１６６Ｃ）、および１８日目（図１６６Ｄ）のマウスの体重を示す。ＸＥＮＰ２０８１８と共にインキュベーションした後の、Ｋｉ６７を発現する示されたリンパ球集団の割合を示す。ＸＥＮＰ２０８１８、ＸＥＮＰ２２８２１、ＸＥＮＰ２４０５０、およびＸＥＮＰ２４３０６と共にインキュベーションした後のＣＤ８^＋ＣＤ４５ＲＡ^＋Ｔ細胞上のＳＴＡＴ５リン酸化を示す。ＸＥＮＰ２０８１８、ＸＥＮＰ２２８１９、ＸＥＮＰ２２８２１、およびＸＥＮＰ２２８３４と共にインキュベーションした後のＣＤ８^＋ＣＤ４５ＲＡ^＋Ｔ細胞上のＳＴＡＴ５リン酸化を示す。それらのぞれぞれのＥＣ５０でＸＥＮＰ２０８１８またはＸＥＮＰ２４３０６と共にインキュベーションした後の、経時的なＫｉ６７を発現するＣＤ８^＋ＣＤ４５ＲＡ^－Ｔ細胞の割合を示す。それらのぞれぞれのＥＣ５０でＸＥＮＰ２０８１８またはＸＥＮＰ２４３０６と共にインキュベーションした後の、経時的なＣＤ８^＋ＣＤ４５ＲＡ^－Ｔ細胞上のＢＣＬ２発現を示す。それらのぞれぞれのＥＣ５０でＸＥＮＰ２０８１８またはＸＥＮＰ２４３０６と共にインキュベーションした後の、経時的なＣＤ８^＋ＣＤ４５ＲＡ^－Ｔ細胞上のＣＤ２５発現を示す。ＸＥＮＰ２４０４５またはＸＥＮＰ２０８１８と共にインキュベーションした後の、新鮮なヒトＰＢＭＣ対刺激されたヒトＰＢＭＣにおけるＣＤ８^＋Ｔ細胞のＳＴＡＴ５リン酸化を示す。示された用量のＸＥＮＰ２４３０６および示された用量のプレート結合抗ＣＤ３（ＯＫＴ３）と共にヒトＰＢＭＣをインキュベーションした後の、ＣＤ８^＋ＣＤ４５ＲＡ^－増殖パーセント（ＣＦＳＥ希釈により決定される）を示す。示された濃度で示された試験物質を最初に投与した後の、１０日目のｈｕＰＢＭＣ移植ＮＳＧマウスの血清ＩＦＮγ濃度を示す。示された濃度で示された試験物質を最初に投与した後の、１７日目のｈｕＰＢＭＣ移植ＮＳＧマウスの血液中のＣＤ４５^＋細胞数を示す。示された濃度で示された試験物質を最初に投与した後の、２５日目のｈｕＰＢＭＣ移植ＮＳＧマウスの体重（初期体重の割合として）を示す。示された濃度で示された試験物質を最初に投与した後の、７日目のｈｕＰＢＭＣ移植ＮＳＧマウスの血清ＩＦＮγ濃度を示す。示された濃度で示された試験物質を最初に投与した後の、１０日目のｈｕＰＢＭＣ移植ＮＳＧマウスの血液中のＡ）ＣＤ４５^＋細胞、Ｂ）ＣＤ３^＋Ｔ細胞、Ｃ）ＣＤ４^＋Ｔ細胞、Ｄ）ＣＤ８^＋Ｔ細胞数を示す。示された濃度で示された試験物質を最初に投与した後の、１１日目のｈｕＰＢＭＣ移植ＮＳＧマウスの体重（初期体重の割合として）を示す。示された濃度での示された試験物質の最初の投与後の、ｈｕＰＢＭＣ移植ＮＳＧマウスの体重（初期体重の割合として）の時間経過を示す。ＸＥＮＰ１６４３２および／またはＸＥＮＰ２４０４５を投与したｐｐ６５－ＭＣＦ７およびｈｕＰＢＭＣ移植ＮＳＧマウスにおける２１日目のＣＤ４５^＋細胞数を示す。ＸＥＮＰ１６４３２および／またはＸＥＮＰ２４０４５を投与したｐｐ６５－ＭＣＦ７およびｈｕＰＢＭＣ移植ＮＳＧマウスにおける３１日目の腫瘍体積を示す。ＸＥＮＰ１６４３２および／またはＸＥＮＰ２４０４５を投与したｐｐ６５－ＭＣＦ７およびｈｕＰＢＭＣ（１．５ｘ１０^６）移植ＮＳＧマウスにおける経時的な（ｈｕＰＢＭＣ移植後の）腫瘍体積を示す。ＸＥＮＰ１６４３２および／またはＸＥＮＰ２４０４５を投与したｐｐ６５－ＭＣＦ７およびｈｕＰＢＭＣ（５ｘ１０^６）移植ＮＳＧマウスにおける経時的な（ｈｕＰＢＭＣ移植後の）腫瘍体積を示す。野生型ＩＬ－１５を含むｓｃＩＬ－１５／Ｒα－Ｆｃ融合体であるＸＥＮＰ２１９９３の配列を示す。ＩＬ－１５およびＩＬ－１５Ｒα（スシ）には下線が付され、リンカーには二重下線が付され（当業者には理解されるように、リンカーは、その一部が図に示される他のリンカーで置き換えられ得る）、スラッシュ（／）は、ＩＬ－１５、ＩＬ－１５Ｒα、リンカー、および定常／Ｆｃ領域の間の境界（複数可）を示す。野生型ＩＬ－１５およびＸｔｅｎｄＦｃ（Ｍ４２８Ｌ／Ｎ４３４Ｓ）バリアントを含むＩＬ－１５／Ｒα－ヘテロＦｃ融合体であるＸＥＮＰ２２８５３の配列を示す。ＩＬ－１５およびＩＬ－１５Ｒα（スシ）には下線が付され、リンカーには二重下線が付され（当業者には理解されるように、リンカーは、その一部が図に示される他のリンカーで置き換えられ得る）、スラッシュ（／）は、ＩＬ－１５、ＩＬ－１５Ｒα、リンカー、および定常／Ｆｃ領域の間の境界（複数可）を示す。ＩＬ－１５（Ｎ４Ｄ／Ｎ６５Ｄ）バリアントおよびＸｔｅｎｄＦｃ（Ｍ４２８Ｌ／Ｎ４３４Ｓ）置換を含むｓｃＩＬ－１５／Ｒα－Ｆｃ融合体であるＸＥＮＰ２４２９４の配列を示す。ＩＬ－１５およびＩＬ－１５Ｒα（スシ）には下線が付され、リンカーには二重下線が付され（当業者には理解されるように、リンカーは、その一部が図に示される他のリンカーで置き換えられ得る）、スラッシュ（／）は、ＩＬ－１５、ＩＬ－１５Ｒα、リンカー、および定常／Ｆｃ領域の間の境界（複数可）を示す。示された相対濃度での最初の投与後のカニクイザルにおける、経時的な示された試験物質の血清濃度を示す。経時的なＸＥＮＰ２２８５３および対応するＷＴ非ＸｔｅｎｄＸＥＮＰ２０８１８の相対血清濃度を示す。効力を低減するように操作され、かつＤ３０Ｎ置換を含む例示的なＩＬ－１５バリアントの配列を示す。列挙された配列と（本明細書で定義されるように）９０％、９５％、９８％、および９９％同一である、および／または１、２、３、４、５、６、７、８、９、または１０個の追加のアミノ酸置換を含む配列がこれらのバリアントＩＬ－１５配列の各々内に含まれる。非限定的な例において、列挙された配列は、実施例２に記載されるように共有ジスルフィド結合の形成に寄与するものなどの追加のアミノ酸修飾を含み得る。Ｄ３０Ｎ置換を含むＩＬ－１５バリアントを有する例示的なｓｃＩＬ－１５／Ｒα－Ｆｃ融合体を示す。ＩＬ－１５およびＩＬ－１５Ｒα（スシ）には下線が付され、リンカーには二重下線が付され（当業者には理解されるように、リンカーは、その一部が図に示される他のリンカーで置き換えられ得る）、スラッシュ（／）は、ＩＬ－１５、ＩＬ－１５Ｒα、リンカー、および定常／Ｆｃ領域の間の境界（複数可）を示す。示された試験物質と共にインキュベーションした後の、Ａ）ＣＤ４＋ＣＤ４５ＲＡ－、Ｂ）ＣＤ４＋ＣＤ４５ＲＡ＋、Ｃ）ＣＤ８＋ＣＤ４５ＲＡ－、Ｄ）ＣＤ８＋ＣＤ４５ＲＡ＋、Ｅ）ＣＤ１６＋ＮＫ細胞、Ｆ）ＣＤ５６＋ＮＫ細胞、およびＧ）γδ細胞の発現Ｋｉ６７の割合を示す。実施例１８で議論されるように、機械的ＰＫ／ＲＯ／ＴＭＤＤモデルが相対的なＰＤ効果を示すことを示す。驚くべきことに、予測されたＲＯ－ＡＵＣ値は、実験的に決定されたＰＤ－ＡＵＣ（薬力学的ＡＵＣ）と非常によく相関し、ＲＯ－ＡＵＣが最適化の標的値であることを示し、最適なＫｄ値の予測を可能にする。受容体媒介内在化が、様々なＩＬ－１５のＰＫ／ＰＤ関係に影響する重要な要因であるという仮説を説明する概略図を示す。ｋ_増殖は増殖率を示す。ｋ_死ＣＴＬは細胞死の割合を示す。Ｋ_ｄは解離定数を示す。ｋ_除去は除去率を示す。ｋ_注入は、中心血液への注入速度を示す。ｋ_合成は、ＩＬ－１５受容体の合成速度を示す。ｋ_分解は、ＩＬ－１５受容体の分解速度を示す。図１９５に示されるモデルに基づくシミュレーションに入力された、複数のカニクイザル研究からのＰＫデータのオーバーレイを示す。図１に示されるモデルに基づいて推定されたＫＤ値が、実験的に測定された結合のＥＣ５０値と直線的に相関することを示す。図１９５に示されるモデルに基づいて、シミュレーションされたＰＫプロファイル、受容体占有率（ＲＯ）曲線、および薬力学的プロファイルを示す。モデルは、低減された効力が曝露を延長すること、および最適なＫＤが最大の薬力学（すなわち、Ｔ細胞拡大）のために存在することを示す。Ａ）実験的に決定されたＰＤ－ＡＵＣ（薬力学的ＡＵＣ）による予測ＲＯ－ＡＵＣ値、Ｂ）実験的に決定されたＰＤ－Ｍａｘ（ピークＣＤ８＋Ｔ細胞数）による予測ＲＯ－ＡＵＣ値、Ｃ）実験的に決定されたＡＬＢ－ｍｉｎ（最低血清アルブミン濃度）による予測ＲＯ－ＡＵＣ値、Ｄ）実験的に決定されたＰＤ－ＡＵＣによる予測ＲＯ－Ｍａｘ（最大受容体占有）値、Ｅ）実験的に決定されたＰＤ－Ｍａｘによる予測ＲＯ－Ｍａｘ、およびＦ）実験的に決定されたＡＬＢ－Ｍｉｎによる予測ＲＯ－Ｍａｘの間の相関を示す。注目すべきことに、予測ＲＯ－ＡＵＣ値は実験的に決定されたＰＤ－ＡＵＣおよびＰＤ－ｍａｘと非常によく相関するが、一方で、予測ＲＯ－Ｍａｘ値は実験的に決定されたＡＬＢ－Ｍｉｎと非常によく相関する。ＩＬ－１５／Ｒα－ヘテロＦｃ融合のＸｔｅｎｄバージョンまたは非Ｘｔｅｎｄバージョンのいずれかに対して実行された様々なＫ_Ｄ値に対するシミュレーションスキャン（図１９５に示されるモデルに基づく）を示し、予測された最適なＫ_Ｄは約２００ｎＭであり、ＸｍＡｂ２４３０６の推定Ｋ_Ｄ値と同様であることを明らかにする。ＸＥＮＰ１６４３２および／またはＸＥＮＰ２４０４５を投与したｐｐ６５－ＭＣＦ７およびｈｕＰＢＭＣ移植ＮＳＧマウスにおけるＡ）ヒトＣＤ８＋Ｔ細胞数およびＢ）ヒトＣＤ８＋Ｔ細胞上のＣＤ２５発現を示す。＊＊＊は、対応のないｔ検定によって決定されるｐ≦０．００１を示し、＊＊は、ｐ≦０．０１を示す。ＸＥＮＰ２４０４５および抗ＰＤ－１ｍＡｂの組み合わせによる処置は、後日、ＣＤ８＋Ｔ細胞の拡大を著しく増強し、ＣＤ８＋Ｔ細胞の早期の活性化を誘導したことが見出された。０．３倍用量のＸＥＮＰ２０８１８、０．３倍用量のＸｍＡｂ２４３０６、および０．６倍用量のＸｍＡｂ４３０６を投与した後のカニクイザルにおけるＡ）ＣＤ８＋Ｔ細胞、Ｂ）ＣＤ１６＋ＮＫ細胞、およびＣ）リンパ球の拡大を示す。データは、効力が低減したＸｍＡｂ２４３０６によって付与された薬力学の向上を示す。０．３倍用量のＸＥＮＰ２０８１８、０．３倍用量のＸｍＡｂ２４３０６、および０．６倍用量のＸｍＡｂ２４３０６を投与した後のカニクイザルにおける（血管漏出の指標としての）血清アルブミンの変化パーセントを示す。データは、効力が低減したＸｍＡｂ２４３０６によって付与された（アルブミンドロップの低減によって示される）忍容性の向上を示す。示された濃度で示された試験物質を最初に投与した後の、７日目のｈｕＰＢＭＣ移植ＮＳＧマウスの血液中のＡ）ＣＤ４５＋細胞、Ｂ）ＣＤ３＋Ｔ細胞、Ｃ）ＣＤ４＋Ｔ細胞、Ｄ）ＣＤ８＋Ｔ細胞、Ｅ）ＣＤ１６＋ＣＤ５６＋ＮＫ細胞数、およびＦ）ＣＤ４対ＣＤ８比を示す。示された濃度で示された試験物質を最初に投与した後の、１４日目のｈｕＰＢＭＣ移植ＮＳＧマウスの血液中のＡ）ＣＤ４５＋細胞、Ｂ）ＣＤ３＋Ｔ細胞、Ｃ）ＣＤ４＋Ｔ細胞、Ｄ）ＣＤ８＋Ｔ細胞、Ｅ）ＣＤ１６＋ＣＤ５６＋ＮＫ細胞数、およびＦ）ＣＤ４対ＣＤ８比を示す。データは、１４日目までに、０．３ｍｇ／ｋｇまたは０．１ｍｇ／ｋｇのＸＥＮＰ２４３０６および３ｍｇ／ｋｇのＸＥＮＰ１６４３２の組み合わせによる処置が、３ｍｇ／ｋｇのＸＥＮＰ１６４３２単独による処置を超えて、ＣＤ３＋Ｔ細胞の拡大を著しく増強したことを示す（対応のないｔ検定を使用して対数変換されたデータ上で統計を行った）。示された濃度で示された試験物質を最初に投与した後の、２１日目のｈｕＰＢＭＣ移植ＮＳＧマウスの血液中のＡ）ＣＤ４５＋細胞、Ｂ）ＣＤ３＋Ｔ細胞、Ｃ）ＣＤ４＋Ｔ細胞、Ｄ）ＣＤ８＋Ｔ細胞、Ｅ）ＣＤ１６＋ＣＤ５６＋ＮＫ細胞数、およびＦ）ＣＤ４対ＣＤ８比を示す。示された濃度で示された試験物質を最初に投与した後の、Ａ）３日目、Ｂ）６日目、Ｃ）１０日目、Ｄ）１３日目、Ｅ）１７日目、Ｆ）２０日目、Ｇ）２５日目、Ｈ）２８日目、およびＩ）２９日目のｈｕＰＢＭＣ移植ＮＳＧマウスの体重の変化（ＧＶＨＤの指標として）を示す。データは、１０日目までに、０．３ｍｇ／ｋｇ、０．１ｍｇ／ｋｇ、または０．０１ｍｇ／ｋｇのＸＥＮＰ２４３０６および３ｍｇ／ｋｇのＸＥＮＰ１６４３２の組み合わせによる処置が、３ｍｇ／ｋｇのＸＥＮＰ１６４３２単独による処置を超えて、ＧＶＨＤを著しく増強したことを示す（対応のないｔ検定を使用して統計を行った）。示された濃度での示される試験物質の投与後の、経時的なｈｕＰＢＭＣ移植ＮＳＧマウスの体重の変化（ＧＶＨＤの指標として）を示す。示された濃度で示された試験物質を最初に投与した後の、Ａ）７日目、Ｂ）１４日目、およびＣ）２１日目のｈｕＰＢＭＣ移植ＮＳＧマウスの血清ＩＦＮγ濃度を示す。示された濃度で示された試験物質を最初に投与した後の、１４日目のｐｐ６５－ＭＣＦ－７およびｈｕＰＢＭＣ移植ＮＳＧマウスの血液中のＡ）ＣＤ４５＋細胞、Ｂ）ＣＤ３＋Ｔ細胞、Ｃ）ＣＤ４＋Ｔ細胞、Ｄ）ＣＤ８＋Ｔ細胞、Ｅ）ＣＤ１６＋ＣＤ５６＋ＮＫ細胞数、およびＦ）ＣＤ４対ＣＤ８比を示す。＊はＰ＜０．０５、対応のないｔ検定、ＰＢＳ処置グループと比較して示されたグループを指し、†は、ｐ＜０．０４、対応のないｔ検定、ＸＥＮＰ１６４３２処置グループと比較して示されたグループを示す。データは統計分析の前に対数変換された。データは、１４日目までに、ＸＥＮＰ２４３０６のみまたはＸＥＮＰ１６４３２と組み合わせたＸＥＮＰ２４３０６で処置したグループの各々が、ＰＢＳ処置を超えてリンパ球の拡大を著しく増強したことを示す。特に、１４日目までに、ＸＥＮＰ２４３０６の濃度に関係なく、ＸＥＮＰ２４３０６およびＸＥＮＰ１６４３２の組み合わせ、ならびに高濃度のＸＥＮＰ２４３０６のみで処置した各グループは、ＸＥＮＰ１６４３２処置を超えてリンパ球の拡大を著しく増強した。示された濃度で示された試験物質を最初に投与した後の、２１日目のｐｐ６５－ＭＣＦ－７およびｈｕＰＢＭＣ移植ＮＳＧマウスの血液中のＡ）ＣＤ４５＋細胞、Ｂ）ＣＤ３＋Ｔ細胞、Ｃ）ＣＤ４＋Ｔ細胞、Ｄ）ＣＤ８＋Ｔ細胞、Ｅ）ＣＤ１６＋ＣＤ５６＋ＮＫ細胞数、およびＦ）ＣＤ４対ＣＤ８比を示す。＊はＰ＜０．０５、対応のないｔ検定、ＰＢＳ処置グループと比較して示されたグループを指し、†は、ｐ＜０．０４、対応のないｔ検定、ＸＥＮＰ１６４３２処置グループと比較して示されたグループを示す。データは統計分析の前に対数変換された。示された濃度で示された試験物質を最初に投与した後の、Ａ）４日目、Ｂ）６日目、Ｃ）８日目、Ｄ）１１日目、Ｅ）１３日目、Ｆ）１５日目、Ｇ）１９日目、Ｈ）２２日目、およびＩ）２５日目のｐｐ６５－ＭＣＦ－７およびｈｕＰＢＭＣ移植ＮＳＧマウスにおける腫瘍体積の変化（ベースライン補正）を示す。データは、１１日目までに、１．０ｍｇ／ｋｇ、０．３ｍｇ／ｋｇ、または０．１ｍｇ／ｋｇのＸＥＮＰ２４３０６および３ｍｇ／ｋｇのＸＥＮＰ１６４３２の組み合わせによる処置が、ＸＥＮＰ１６４３２単独による処置と比較して、腫瘍体積を著しく減少させたことを示す（ベースライン補正された腫瘍測定で対応のないｔ検定を使用して統計を行った）。示された濃度での示される試験物質の投与後の、経時的なｐｐ６５－ＭＣＦ－７およびｈｕＰＢＭＣ移植ＮＳＧマウスのＡ）腫瘍体積の変化およびＢ）体重の変化（ＧＶＨＤの指標として）を示す。データは、グループＣ、Ｆ、およびＧで全てのマウスが死亡したが、これはＧＶＨＤに対応していたことを示す（体重の変化で示される）。示された濃度で示された試験物質を最初に投与した後の、Ａ）７日目、Ｂ）１４日目、およびＣ）２１日目のｐｐ６５－ＭＣＦ－７およびｈｕＰＢＭＣ移植ＮＳＧマウスの血清ＩＦＮγ濃度を示す。＊はＰ＜０．０５、対応のないｔ検定、ＰＢＳ処置グループと比較して示されたグループを指し、†は、ｐ＜０．０４、対応のないｔ検定、ＸＥＮＰ１６４３２処置グループと比較して示されたグループを示す。データは統計分析の前に対数変換された。データは、７日目までに、１．０ｍｇ／ｋｇ、０．３ｍｇ／ｋｇ、または０．１ｍｇ／ｋｇのＸＥＮＰ２４３０６および３ｍｇ／ｋｇのＸＥＮＰ１６４３２の組み合わせによる処置が、ＸＥＮＰ１６４３２単独による処置と比較して、ＩＦＮγ分泌を著しく増強したことを示す。

Ｉ．定義
本発明をより完全に理解できるようにするため、いくつかの定義を以下に示す。そのような定義は、文法的同等物を包含することを意図する。

本明細書において「切断」とは、結合および／または活性の低下または除去を意味する。したがって、例えば、「ＦｃγＲ結合を切断する」とは、Ｆｃ領域アミノ酸バリアントが、その特定のバリアントを含まないＦｃ領域と比較して５０％未満の開始結合を有することを意味し、７０～８０～９０～９５～９８％未満の結合喪失が好ましく、一般に、結合はＢｉａｃｏｒｅアッセイにおいて検出可能な結合のレベル未満である。ＦｃγＲ結合の切断において特に有用なものは、図５に示されるバリアントである。しかしながら、他の記載がない限り、本発明のＦｃモノマーはＦｃＲｎへの結合を保持する。

本明細書で使用される「ＡＤＣＣ」または「抗体依存性細胞媒介性細胞傷害」とは、ＦｃγＲを発現する非特異的細胞傷害性細胞が標的細胞上の結合抗体を認識し、続いて標的細胞の溶解を引き起こす細胞媒介反応を意味する。ＡＤＣＣは、ＦｃγＲＩＩＩａへの結合と相関し、ＦｃγＲＩＩＩａへの結合の増加はＡＤＣＣ活性の増加をもたらす。本明細書で論じるように、本発明の多くの実施形態はＡＤＣＣ活性を完全に切断する。

本明細書で用いられる「ＡＤＣＰ」または抗体依存性細胞媒介食作用とは、ＦｃγＲを発現する非特異的細胞傷害性細胞が標的細胞上の連結抗体を認識し、続いて標的細胞の食作用を引き起こす細胞媒介反応を意味する。

本明細書における「修飾」とは、ポリペプチド配列におけるアミノ酸の置換、挿入、および／もしくは欠失、またはタンパク質に化学的に連結された部分への改変を意味する。例えば、修飾は、タンパク質に結合した改変された炭水化物またはＰＥＧ構造であってもよい。本明細書における「アミノ酸修飾」は、ポリペプチド配列中のアミノ酸の置換、挿入、および／または欠失を意味する。明確にするために、別段の記載がない限り、アミノ酸修飾は常に、ＤＮＡによってコードされるアミノ酸、例えば、ＤＮＡおよびＲＮＡ中にコドンを有する２０個のアミノ酸に対するものである。

本明細書における「アミノ酸置換」または「置換」は、親ポリペプチド配列中の特定の位置のアミノ酸を異なるアミノ酸で置換することを意味する。特に、いくつかの実施形態では、置換は、特定の位置で天然に存在しない（生物内で天然に存在しないか、またはいずれの生物中にも存在しないかのいずれか）アミノ酸に対するものである。例えば、置換Ｅ２７２Ｙまたは２７２Ｙは、２７２位のグルタミン酸がチロシンで置換されているバリアントポリペプチド、この場合はＦｃバリアントを指す。明確にするために、核酸コード配列を変化させるが、出発アミノ酸を変化させない（例えば、宿主生物発現レベルを上昇させるためにＣＧＧ（アルギニンをコードする）をＣＧＡ（アルギニンをなおコードする）に交換する）ように操作されたタンパク質は、「アミノ酸置換」ではない。すなわち、同じタンパク質をコードする新たな遺伝子の創出にもかかわらず、タンパク質は、それが開始する特定の位置に同じアミノ酸を有する場合、それはアミノ酸置換ではない。置換には、天然に存在するアミノ酸および場合によっては合成アミノ酸が含まれ得る。例としては、米国特許第６，５８６，２０７号、ＷＯ９８／４８０３２、ＷＯ０３／０７３２３８、ＵＳ２００４－０２１４９８８Ａ１、ＷＯ０５／３５７２７Ａ２、ＷＯ０５／７４５２４Ａ２、Ｊ．Ｗ．Ｃｈｉｎｅｔａｌ．，（２００２），ＪｏｕｒｎａｌｏｆｔｈｅＡｍｅｒｉｃａｎＣｈｅｍｉｃａｌＳｏｃｉｅｔｙ１２４：９０２６－９０２７、Ｊ．Ｗ．Ｃｈｉｎ，＆Ｐ．Ｇ．Ｓｃｈｕｌｔｚ，（２００２），ＣｈｅｍＢｉｏＣｈｅｍ１１：１１３５－１１３７、Ｊ．Ｗ．Ｃｈｉｎ，ｅｔａｌ．，（２００２），ＰＩＣＡＳＵｎｉｔｅｄＳｔａｔｅｓｏｆＡｍｅｒｉｃａ９９：１１０２０－１１０２４、およびＬ．Ｗａｎｇ，＆Ｐ．Ｇ．Ｓｃｈｕｌｔｚ，（２００２），Ｃｈｅｍ．１－１０が挙げられ、全て全体が参照により組み込まれる。

本明細書で使用される「アミノ酸挿入」または「挿入」は、親ポリペプチド配列中の特定の位置にアミノ酸残基またはアミノ酸配列を付加することを意味する。例えば、－２３３Ｅは、２３３位の後、かつ２３４位の前のグルタミン酸の挿入を示す。さらに、－２３３ＡＤＥまたはＡ２３３ＡＤＥは、２３３位の後、かつ２３４位の前のＡｌａＡｓｐＧｌｕの挿入を示す。

本明細書で使用される「アミノ酸欠失」または「欠失」は、親ポリペプチド配列中の特定の位置でアミノ酸残基またはアミノ酸配列を除去することを意味する。例えば、Ｅ２３３、Ｅ２３３＃、Ｅ２３３（）、またはＥ２３３ｄｅｌは、２３３位のグルタミン酸の欠失を示す。さらに、ＥＤＡ２３３－またはＥＤＡ２３３＃は、２３３位で始まる配列ＧｌｕＡｓｐＡｌａの欠失を示す。

本明細書で使用される「バリアントタンパク質」、「タンパク質バリアント」、または「バリアント」とは、少なくとも１つのアミノ酸修飾に基づいて親タンパク質のそれとは異なるタンパク質を意味する。タンパク質バリアントは、タンパク質自体、タンパク質を含む組成物、それをコードするアミノ配列、またはそれをコードするＤＮＡもしくは核酸配列を指し得る。好ましくは、タンパク質バリアントは、親タンパク質と比較して少なくとも１つのアミノ酸修飾、例えば、親と比較して約１～約７０個のアミノ酸修飾、および好ましくは約１～約５個のアミノ酸修飾を有する。修飾は、付加、欠失、または置換であり得る。以下に記載するように、いくつかの実施形態では、親ポリペプチド、例えばＦｃ親ポリペプチドは、ＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３、またはＩｇＧ４由来のＦｃ領域等のヒト野生型配列であるが、変異を有するヒト配列もまた、「親ポリペプチド」としての役割を果たすことができ、例えば、ＩｇＧ１／２ハイブリッドを含めることができる。本明細書のタンパク質バリアントの配列は、好ましくは、親タンパク質配列と少なくとも約８０％の同一性、最も好ましくは少なくとも約９０％の同一性、より好ましくは少なくとも約９５－９８－９９％の同一性を有する。

したがって、本明細書で使用される「抗体バリアント」または「バリアント抗体」とは、少なくとも１つのアミノ酸修飾に基づいて親抗体とは異なる抗体を意味し、本明細書で使用される「ＩｇＧバリアント」または「バリアントＩｇＧ」とは、少なくとも１つのアミノ酸修飾に基づいて親ＩｇＧ（ここでも、多くの場合はヒトＩｇＧ配列に由来）とは異なる抗体を意味し、本明細書で使用される「免疫グロブリンバリアント」または「バリアント免疫グロブリン」とは、少なくとも１つのアミノ酸修飾に基づいて親免疫グロブリン配列のそれとは異なる免疫グロブリン配列を意味する。本明細書で使用される「Ｆｃバリアント」または「バリアントＦｃ」とは、Ｆｃドメインにアミノ酸修飾を含むタンパク質を意味する。修飾は、付加、欠失、または置換であり得る。本発明のＦｃバリアントは、それらを構成するアミノ酸修飾に従って定義される。したがって、例えば、Ｎ４３４Ｓまたは４３４Ｓは、親Ｆｃポリペプチドに対して４３４位にセリン残基の置換を有するＦｃバリアントであり、付番はＥＵインデックスに従う。同様に、Ｍ４２８Ｌ／Ｎ４３４Ｓは、親Ｆｃポリペプチドに対して置換Ｍ４２８ＬおよびＮ４３４Ｓを有するＦｃ変異を定義する。ＷＴアミノ酸の同一性は特定されていなくてもよく、その場合、前述のバリアントは４２８Ｌ／４３４Ｓと称される。置換が提供される順序は任意であり、すなわち、例えば、４２８Ｌ／４３４Ｓは４３４Ｓ／４２８Ｌと同一のＦｃバリアントなどであることが留意される。抗体またはその誘導体および断片に関連する本発明において論じられる全ての位置について、特に明記されない限り、アミノ酸位置の付番はＥＵインデックスに従う。ＥＵインデックス、またはＫａｂａｔもしくはＥＵ付番スキームと同様のＥＵインデックスは、ＥＵ抗体の付番を指す（Ｅｄｅｌｍａｎｅｔａｌ．，１９６９，ＰｒｏｃＮａｔｌＡｃａｄＳｃｉＵＳＡ６３：７８－８５、参照によりその全体が本明細書に組み込まれる）。修飾は、付加、欠失、または置換であり得る。置換には、天然に存在するアミノ酸および場合によっては合成アミノ酸が含まれ得る。

本明細書で使用される場合、「タンパク質」は、タンパク質、ポリペプチド、オリゴペプチド、およびペプチドを含む、少なくとも２つの共有結合したアミノ酸を意味する。ペプチジル基は、天然に存在するアミノ酸およびペプチド結合、または合成ペプチド模倣構造、すなわち、ペプトイド（全体が参照により組み込まれるＳｉｍｏｎｅｔａｌ．，ＰＮＡＳＵＳＡ８９（２０）：９３６７（１９９２）を参照）等の「類似体」を含んでよい。アミノ酸は、当業者には理解されるであろうとおり、天然に存在するものでも合成物（例えば、ＤＮＡによってコードされるアミノ酸ではないもの）のいずれかであり得る。例えば、ホモフェニルアラニン、シトルリン、オルニチン、およびノレオロイシンは、本発明の目的では合成アミノ酸と考えられ、Ｄ－およびＬ－（ＲまたはＳ）立体配置のアミノ酸の両方を利用することができる。本発明のバリアントは、例えば、これらに限定されないが、全て全体が参照により組み込まれる、Ｃｒｏｐｐ＆Ｓｈｕｌｔｚ，２００４，ＴｒｅｎｄｓＧｅｎｅｔ．２０（１２）：６２５－３０、Ａｎｄｅｒｓｏｎｅｔａｌ．，２００４，ＰｒｏｃＮａｔｌＡｃａｄＳｃｉＵＳＡ１０１（２）：７５６６－７１、Ｚｈａｎｇｅｔａｌ．，２００３，３０３（５６５６）：３７１－３、およびＣｈｉｎｅｔａｌ．，２００３，Ｓｃｉｅｎｃｅ３０１（５６３５）：９６４－７によって説明される方法を含む、Ｓｃｈｕｌｔｚおよび共同研究者らによって開発された技術を使用して組み込まれた合成アミノ酸の使用を含む修飾を含み得る。さらに、ポリペプチドには、１つ以上の側鎖または末端の合成誘導体化、グリコシル化、ＰＥＧ化、円順列、環化、他の分子へのリンカー、タンパク質またはタンパク質ドメインへの融合、およびペプチドタグまたは標識の付加が含まれ得る。生物学的に機能する分子が２つ以上のタンパク質を含む場合、各タンパク質は「モノマー」または「サブユニット」または「ドメイン」と呼ばれてもよく、生物学的に機能する分子は「複合体」と呼ばれてもよい。

「残基」とは、本明細書で使用されるとき、タンパク質における位置およびその関連するアミノ酸素性を意味する。例えば、アスパラギン２９７（Ａｓｎ２９７またはＮ２９７とも称される）は、ヒト抗体ＩｇＧ１中の２９７位の残基である。

本明細書で使用される「ＩｇＧサブクラス修飾」または「アイソタイプ修飾」とは、１つのＩｇＧアイソタイプの１つのアミノ酸を、異なる、整合したＩｇＧアイソタイプの対応するアミノ酸に変換するアミノ酸修飾を意味する。例えば、ＥＵ位置２９６においてＩｇＧ１はチロシンを含み、ＩｇＧ２はフェニルアラニンを含むので、ＩｇＧ２におけるＦ２９６Ｙ置換は、ＩｇＧサブクラス修飾であると考えられる。

本明細書で使用される「天然に存在しない修飾」とは、アイソタイプ性ではないアミノ酸修飾を意味する。例えば、ＩｇＧのうちのいずれも４３４位にセリンを含まないので、ＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３、またはＩｇＧ４（またはそれらのハイブリッド）における置換４３４Ｓは、天然に生じない修飾であると見なされる。

本明細書で使用される「アミノ酸」および「アミノ酸同一性」は、ＤＮＡおよびＲＮＡによってコードされている２０種の天然に存在するアミノ酸のうちの１つを意味する。

本明細書で使用される「エフェクター機能」とは、抗体Ｆｃ領域とＦｃ受容体またはリガンドとの相互作用から生じる生化学的事象を意味する。エフェクター機能には、ＡＤＣＣ、ＡＤＣＰ、およびＣＤＣが含まれるが、これらに限定されない。

本明細書で使用される「ＩｇＧＦｃリガンド」または「Ｆｃリガンド」とは、ＩｇＧ抗体のＦｃ領域に結合してＦｃ／Ｆｃリガンド複合体を形成する任意の生物由来の分子、好ましくはポリペプチドを意味する。Ｆｃリガンドには、ＦｃγＲＩ、ＦｃγＲＩＩ、ＦｃγＲＩＩＩ、ＦｃＲｎ、Ｃ１ｑ、Ｃ３、マンナン結合レクチン、マンノース受容体、ｓｔａｐｈｙｌｏｃｏｃｃａｌプロテインＡ、ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃａｌプロテインＧ、およびウイルスＦｃγＲが含まれるが、これらに限定されない。Ｆｃリガンドにはまた、ＦｃγＲと相同なＦｃ受容体のファミリーである、Ｆｃ受容体相同体（ＦｃＲＨ）が含まれる（参照により全体が組み込まれる、Ｄａｖｉｓｅｔａｌ．，２００２，ＩｍｍｕｎｏｌｏｇｉｃａｌＲｅｖｉｅｗｓ１９０：１２３－１３６）。Ｆｃリガンドは、Ｆｃに結合する未発見の分子を含み得る。特定のＩｇＧＦｃリガンドは、ＦｃＲｎおよびＦｃガンマ受容体である。

本明細書で使用される「Ｆｃガンマ受容体」、「ＦｃγＲ」、または「ＦｃガンマＲ」とは、ＩｇＧ抗体Ｆｃ領域に結合し、かつＦｃγＲ遺伝子によってコードされるタンパク質ファミリーの任意のメンバーを意味する。ヒトにおいて、このファミリーには、アイソフォームであるＦｃγＲＩａ、ＦｃγＲＩｂ、およびＦｃγＲＩｃを含むＦｃγＲＩ（ＣＤ６４）；アイソフォームであるＦｃγＲＩＩａ（アロタイプであるＨ１３１およびＲ１３１を含む）、ＦｃγＲＩＩｂ（ＦｃγＲＩＩｂ－１およびＦｃγＲＩＩｂ－２を含む）、ならびにＦｃγＲＩＩｃを含むＦｃγＲＩＩ（ＣＤ３２）；ならびにアイソフォームであるＦｃγＲＩＩＩａ（アロタイプであるＶ１５８およびＦ１５８を含む）、ならびにＦｃγＲＩＩＩｂ（アロタイプであるＦｃγＲＩＩｂ－ＮＡ１およびＦｃγＲＩＩｂ－ＮＡ２を含む）を含むＦｃγＲＩＩＩ（ＣＤ１６）（参照により全体が組み込まれる、Ｊｅｆｆｅｒｉｓｅｔａｌ．，２００２，ＩｍｍｕｎｏｌＬｅｔｔ８２：５７－６５）、ならびに任意の発見されていないヒトＦｃγＲまたはＦｃγＲアイソフォームもしくはアロタイプが含まれるが、これらに限定されない。ＦｃγＲは、ヒト、マウス、ラット、ウサギ、およびサルを含むが、これらに限定されない任意の生物由来であり得る。マウスＦｃγＲには、ＦｃγＲＩ（ＣＤ６４）、ＦｃγＲＩＩ（ＣＤ３２）、ＦｃγＲＩＩＩ（ＣＤ１６）、およびＦｃγＲＩＩＩ－２（ＣＤ１６－２）、ならびに任意の未発見のマウスＦｃγＲまたはＦｃγＲアイソフォームもしくはアロタイプが含まれるが、これらに限定されない。

本明細書で使用される「ＦｃＲｎ」または「新生児Ｆｃ受容体」とは、ＩｇＧ抗体のＦｃ領域に結合し、少なくとも部分的にＦｃＲｎ遺伝子によってコードされるタンパク質を意味する。ＦｃＲｎは、ヒト、マウス、ラット、ウサギ、およびサルを含むが、これらに限定されない任意の生物由来であり得る。当技術分野で既知のとおり、機能性ＦｃＲｎタンパク質は、しばしば重鎖および軽鎖と呼ばれる２つのポリペプチドを含む。軽鎖はβ－２－ミクログロブリン（β２－ミクログロブリン）であり、重鎖はＦｃＲｎ遺伝子によってコードされる。本明細書において別段の記載がない限り、ＦｃＲｎまたはＦｃＲｎタンパク質は、ＦｃＲｎ重鎖とβ２－ミクログロブリンとの複合体を指す。様々なＦｃバリアントを使用して、ＦｃＲｎへの結合を増加させ、場合によっては、血清半減期を増加させることができる。概して、別段の記載がない限り、本発明のＦｃモノマーは、ＦｃＲｎへの結合を保持する（および下記のように、ＦｃＲｎへの結合を増加させるためのアミノ酸バリアントを含み得る）。

本明細書で使用される「親ポリペプチド」とは、バリアントを生成するようにその後修飾される出発ポリペプチドを意味する。親ポリペプチドは、天然に存在するポリペプチド、または天然に存在するポリペプチドのバリアントもしくは改変されたバージョンであってもよい。親ポリペプチドとは、ポリペプチド自体、親ポリペプチドを含む組成物、またはそれをコードするアミノ酸配列を指し得る。したがって、本明細書で使用される「親免疫グロブリン」とは、バリアントを生成するように修飾される非修飾免疫グロブリンポリペプチドを意味し、本明細書で使用される「親抗体」とは、バリアント抗体を生成するように修飾される非修飾抗体を意味する。「親抗体」には、以下に概説するように、既知の市販の組み換えで産生した抗体が含まれることに注意すべきである。

本明細書で使用される場合、「Ｆｃ」または「Ｆｃ領域」または「Ｆｃドメイン」とは、いくつかの場合では、第１の定常領域免疫グロブリンドメイン（例えば、ＣＨ１）またはその一部の全部または一部を除く、いくつかの場合では、ヒンジの全部または一部をさらに除く、抗体の定常領域を含むポリペプチドを意味する。このため、Ｆｃは、ＩｇＡ、ＩｇＤ、およびＩｇＧの最後の２つの定常領域免疫グロブリンドメイン（例えば、ＣＨ２およびＣＨ３）、ＩｇＥおよびＩｇＭの最後の３つの定常領域免疫グロブリンドメイン、および任意選択的にこれらのドメインに対する可動性ヒンジＮ末端のすべてまたは一部を指し得る。ＩｇＡおよびＩｇＭの場合、ＦｃはＪ鎖を含んでもよい。ＩｇＧの場合、Ｆｃドメインは免疫グロブリンドメインＣＨ２およびＣＨ３（Ｃγ２およびＣγ３）と、ＣＨ１（Ｃγ１）とＣＨ２（Ｃγ２）の間の下部ヒンジ領域を含む。Ｆｃ領域の境界は異なり得るが、ヒトＩｇＧ重鎖Ｆｃ領域は、通常、そのカルボキシ末端に残基Ｅ２１６、Ｃ２２６、またはＡ２３１を含むものと定義され、ここでの付番はＫａｂａｔと同様のＥＵインデックスに従う。いくつかの実施形態では、以下でより詳細に説明されるように、例えば、１つ以上のＦｃγＲまたはＦｃＲｎへの結合を変化させるために、Ｆｃ領域に対してアミノ酸修飾が行われる。

当業者には理解されるように、重定常領域ドメインの正確な付番および配置は、異なる付番システムで異なり得る。ＥＵおよびＫａｂａｔによる重定常領域の付番の有用な比較は以下のとおり、参照によりその全体が組み込まれる、Ｅｄｅｌｍａｎｅｔａｌ．，１９６９，ＰｒｏｃＮａｔｌＡｃａｄＳｃｉＵＳＡ６３：７８－８５、およびＫａｂａｔｅｔａｌ．，１９９１，ＳｅｑｕｅｎｃｅｓｏｆＰｒｏｔｅｉｎｓｏｆＩｍｍｕｎｏｌｏｇｉｃａｌＩｎｔｅｒｅｓｔ，５ｔｈＥｄ．，ＵｎｉｔｅｄＳｔａｔｅｓＰｕｂｌｉｃＨｅａｌｔｈＳｅｒｖｉｃｅ，ＮａｔｉｏｎａｌＩｎｓｔｉｔｕｔｅｓｏｆＨｅａｌｔｈ，Ｂｅｔｈｅｓｄａを参照されたい。

本明細書で使用される「融合タンパク質」とは、少なくとも２つのタンパク質の共有結合を意味する。本明細書に記載されるように、融合タンパク質は人工配列、例えば、ドメインリンカーを含み得る。本明細書における「Ｆｃ融合タンパク質」または「イムノアドヘシン」とは、概して、本明細書に記載されるように、ＩＬ－１５および／またはＩＬ－１５Ｒなど、１つ以上の異なるタンパク質に連結された（任意に、本明細書に記載されるようにドメインリンカーを介して）Ｆｃ領域を含むタンパク質を意味する。いくつかの例では、２つのＦｃ融合タンパク質がホモダイマーＦｃ融合タンパク質またはヘテロダイマーＦｃ融合タンパク質を形成することができ、後者が好ましい。いくつの場合では、ヘテロ二量体Ｆｃ融合タンパク質の一方の単量体は、Ｆｃドメインのみ（例えば、空のＦｃドメイン）を含み、他方の単量体は、バリアントＦｃドメインおよび受容体、リガンド、または他の結合パートナーなどのタンパク質ドメインを含むＦｃ融合体である。

本明細書で使用される「位置」は、タンパク質の配列中の場所を意味する。位置は、順番に付番されるか、または確立されたフォーマット、例えば、抗体付番のためのＥＵインデックスによって付番されてもよい。

本明細書における本発明のヘテロ二量体タンパク質のモノマーの文脈における「鎖性（ｓｔｒａｎｄｅｄｎｅｓｓ）」は、「整合」する二本鎖ＤＮＡと同様に、「整合」してヘテロ二量体を形成する能力を保持、生成、および／または増強するようにヘテロ二量体化バリアントを各モノマーに組み込むことを意味する。例えば、いくつかのｐＩバリアントが単量体Ａへと操作される（例えば、ｐＩをより高くする）場合、同様に利用され得る「電荷対」である立体バリアントはｐＩバリアントに干渉せず、例えば、ｐＩを高くした電荷バリアントが同一の「鎖」または「単量体」に置かれ、両方の機能を保持する。同様に、以下により詳細に概説されるように、対のセットになる「スキュー」バリアントについて、当業者は、対の１つのセットを組み入れる鎖または単量体がどちらに入るかを決定する際にｐＩを考慮し、同様にスキューのｐＩを使用してｐＩ分離を最大化するようにする。

本明細書における「野生型またはＷＴ」とは、対立遺伝子変異を含む、天然に見出されるアミノ酸配列またはヌクレオチド配列を意味する。ＷＴタンパク質は、意図的に修飾されていないアミノ酸配列またはヌクレオチド配列を有する。

本発明のヘテロ二量体タンパク質は一般に、単離されているか、または組換え体である。本明細書に開示される様々なポリペプチドを説明するために使用される場合、「単離された」とは、それが発現された細胞または細胞培養物から特定および分離および／または回収されたポリペプチドを意味する。通常、単離されたポリペプチドは、少なくとも１つの精製ステップによって調製されるであろう。「単離されたタンパク質」とは、宿主細胞タンパク質などの細胞培養由来の他のタンパク質を実質的に含まないタンパク質を指す。「組換え体」は、外来性宿主細胞において組換え核酸技術を用いてタンパク質が生成されることを意味する。

タンパク質配列に関する「アミノ酸配列同一性パーセント（％）」は、最大の配列同一性パーセントを達成するために配列を整合し、必要ならギャップを導入した後の、特定の（親）配列中のアミノ酸残基と同一である候補配列中のアミノ酸残基のパーセンテージとして定義され、そして配列同一性の一部としていかなる保存的置換も考慮しない。アミノ酸配列同一性パーセントを決定するためのアラインメントは、例えば、ＢＬＡＳＴ、ＢＬＡＳＴ－２、ＡＬＩＧＮ、またはＭｅｇａｌｉｇｎ（ＤＮＡＳＴＡＲ）ソフトウェアなどの公的に利用可能なコンピューターソフトウェアを使用して、当技術分野の範囲内である様々な方法で達成できる。当業者は、比較される配列の全長にわたって最大の整合を達成するために必要とされる任意のアルゴリズムを含む、整合を測定するための適切なパラメータを決定することができる。１つの特定のプログラムは、参照により本明細書に組み込まれる米国特許出願公開第２０１６０２４４５２５号の段落番号［０２７９］～［０２８０］に概説されているＡＬＩＧＮ－２プログラムである。

本発明のアミノ酸配列（「本発明の配列」）と親アミノ酸配列との間の同一性の程度は、「本発明の配列」の長さまたは親配列の長さのうちの短い方で割った、２つの配列の整合における正確な一致の数として計算される。結果は同一性パーセントで表される。

ある実施形態では、２つ以上のアミノ酸配列は少なくとも５０％、６０％、７０％、８０％、または９０％同一である。ある実施形態では、２つ以上のアミノ酸配列は少なくとも９５％、９７％、９８％、９９％、さらには１００％まで同一である。

本明細書における「抗原結合ドメイン」または「ＡＢＤ」とは、抗原決定基にその結合特異性を付与する抗原結合分子の一部を意味する。

本明細書で使用される場合、「抗原結合分子」という用語は、その最も広い意味で、抗原決定基に特異的に結合する任意の分子を指す。抗原結合分子は、タンパク質、炭水化物、脂質、または他の化学化合物であってもよい。抗原結合分子の例としては、免疫グロブリンおよびその誘導体またはフラグメント、例えばＦａｂおよびｓｃＦｖがある。抗原結合分子の追加の例は、受容体とリガンドである。

特定の抗原またはエピトープとの「特異的結合」もしくは「～に特異的に結合する」または特定の抗原またはエピトープ「～に対して特異的である」とは、非特異的相互作用とは測定可能な程度に異なる結合を意味する。特異的結合は、例えば、一般に結合活性を有さない同様の構造の分子である対照分子の結合と比較した分子の結合を決定することによって、測定することができる。例えば、特異的結合は、標的と同様である対照分子との競合によって決定することができる。

特異的結合の強度または親和性は、相互作用の解離定数（Ｋ_Ｄ）として表すことができ、Ｋ_Ｄが小さいほどより大きな親和性を表し、Ｋ_Ｄが大きいほどより低い親和性を表す。結合特性は、生体層干渉法および表面プラズモン共鳴に基づく方法などの当技術分野で周知の方法によって決定することができる。そのような方法の１つは、抗原結合部位／抗原または受容体／リガンド複合体の会合速度と解離速度を測定することを伴い、速度は、複合パートナーの濃度、相互作用の親和性、および両方向の速度に等しく影響を与える幾何学的パラメータに依存する。したがって、会合速度（ｋａ）および解離速度（ｋｄ）の両方を決定することができ、ｋｄ／ｋａの比は、解離定数Ｋ_Ｄに等しい（例えば、Ｎａｔｕｒｅ３６１：１８６－１８７（１９９３）およびＤａｖｉｅｓｅｔａｌ．（１９９０）ＡｎｎｕａｌＲｅｖＢｉｏｃｈｅｍ５９：４３９－４７３を参照されたい）。

特定の抗原またはエピトープに対する特異的結合は、例えば、抗原またはエピトープに対して少なくとも約１０－４Ｍ、少なくとも約１０－５Ｍ、少なくとも約１０－６Ｍ、少なくとも約１０－７Ｍ、少なくとも約１０－８Ｍ、少なくとも約１０－８Ｍ、代替的に少なくとも約１０－１０Ｍ、少なくとも約１０－１１Ｍ、少なくとも約１０－１２Ｍ、またはそれ以上のＫ_Ｄを有する抗体結合分子によって示され得る。典型的には、抗原に特異的に結合する抗体結合分子は、抗原またはエピトープと比べて、対照分子に対して２０倍、５０倍、１００倍、５００倍、１０００倍、５，０００倍、１０，０００倍、またはそれを超えて大きいＫ_Ｄを有することになる。

また、特定の分子またはエピトープへの特異的結合は、例えば、抗原またはエピトープに対するＫａまたは会合速度が、対照と比べたそのエピトープに対して少なくとも２０倍、５０倍、１００倍、５００倍、１０００倍、５，０００倍、１０，０００倍、またはそれを超えて大きい抗原結合分子によって示され得る。

「エピトープ」とは、本明細書では、特異的抗原結合ドメイン、例えばパラトープとして既知の抗体分子の可変領域と相互作用する決定基を意味する。エピトープは、アミノ酸または糖側鎖などの分子の群分けであり、通常、特異的構造特性、ならびに特異的電荷特性を有する。単一分子は、２つ以上のエピトープを有してもよい。エピトープは、結合に直接関与するアミノ酸残基（エピトープの免疫優性構成要素とも称される）および結合に直接関与しない他のアミノ酸残基、例えば、特異的抗原結合ペプチドによって効果的に遮断されるアミノ酸残基、換言すると、特異的抗原結合ペプチドのフットプリント内にあるアミノ酸残基を含み得る。エピトープは、立体配座または直線状のいずれであってもよい。立体配座エピトープは、直線状のポリペプチド鎖の異なるセグメントからのアミノ酸の空間的な並置によって作り出される。直線状エピトープは、ポリペプチド鎖内の隣接アミノ酸残基によって作り出されるものである。立体配座エピトープおよび非立体配座エピトープは、変性溶媒の存在下で前者への結合は失われるが、後者への結合は失われないという点で区別され得る。エピトープは、典型的には、固有の空間立体構造内に、少なくとも３個、より一般的には、少なくとも５個、または８～１０個のアミノ酸を含む。同一のエピトープを認識する抗原結合分子は、ある抗原結合分子の別の抗原結合分子の標的抗原への結合を遮断する能力、例えば、「ビニング」を示す単純な免疫アッセイにおいて検証され得る。以下に概説するように、本発明は、列挙された本明細書の抗原結合分子および抗原結合ドメインを含むだけでなく、列挙された抗原結合分子または抗原結合ドメインによって結合されるエピトープとの結合について競合するものも含む。

「融合」または「共有結合」とは、本明細書で概説される構成要素（例えば、ＩＬ－１５およびＦｃドメイン）が、直接またはドメインリンカーを介してのいずれかでペプチド結合により連結されることを意味する。

本明細書で使用される場合、「一本鎖」という用語は、ペプチド結合によって直線的に連結されたアミノ酸モノマーを含む分子を指す。

本発明をさらに説明する前に、本発明は記載された特定の実施形態に限定されず、よって当然のことながら変化し得ることが理解されるべきである。本発明の範囲が添付の特許請求の範囲によってのみ限定されるため、本明細書で使用する用語は、特定の実施形態のみを説明するためのものであり、限定することを目的とするものではないことも理解されるべきである。

ＩＩ．抗体
以下で考察するように、「抗体」という用語は全般的に使用される。本発明で使用される抗体は、本明細書に記載されているようにいくつかのフォーマットをとることができ、本明細書に記載され図に示される従来の抗体、および抗体誘導体、断片および模倣物を含む。

従来の抗体構造単位は、典型的には四量体を含む。各四量体は、典型的には、２本の同一のポリペプチド鎖対からなり、各対は、１本の「軽」鎖（典型的には、約２５ｋＤａの分子量）と、１本の「重」鎖（典型的には、約５０～７０ｋＤａの分子量）とを有する。ヒト軽鎖は、カッパ軽鎖およびラムダ軽鎖として分類される。本発明は、一般にＩｇＧクラスに基づく二重特異性抗体を対象とし、これは、ＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３、およびＩｇＧ４を含むがこれらに限定されない、いくつかのサブクラスを有する。一般に、ＩｇＧ１、ＩｇＧ２、およびＩｇＧ４が、ＩｇＧ３よりも頻繁に使用される。ＩｇＧ１は、３５６（ＤまたはＥ）および３５８（ＬまたはＭ）で多型を有する異なるアロタイプを有することに留意すべきである。本明細書に示される配列は３５６Ｅ／３５８Ｍアロタイプを使用するが、他のアロタイプも本明細書に含まれる。すなわち、本明細書に含まれるＩｇＧ１Ｆｃドメインを含む任意の配列は、３５６Ｅ／３５８Ｍアロタイプの代わりに３５６Ｄ／３５８Ｌを有することができる。

さらに、本明細書中の配列の多くは、位置２２０の少なくとも１つのシステインをセリンで置換したものであり、これは一般に、本明細書に記載の配列の大部分について「ｓｃＦｖ単量体」側にあるが、ジスルフィド形成を減少させるために「Ｆａｂ単量体」側、またはその両方にすることもできる。本明細書中の配列内に具体的に含まれるのは、これらのシステインの一方または両方が置換されたもの（Ｃ２２０Ｓ）である。

したがって、本明細書で使用されるとき、「アイソタイプ」は、それらの定常領域の化学的および抗原的特徴によって定義される免疫グロブリンの任意のサブクラスを意味する。治療用抗体は、アイソタイプおよび／またはサブクラスのハイブリッドも含み得ることを理解されたい。例えば、参照により組み込まれる米国公開第２００９／０１６３６９９号に示されるように、本発明は、ヒトＩｇＧ１／Ｇ２ハイブリッドの使用である。

超可変領域は、一般に、軽鎖可変領域においておよそ、アミノ酸残基２４～３４（ＬＣＤＲ１、「Ｌ」は軽鎖を表す）、５０～５６（ＬＣＤＲ２）、および８９～９７（ＬＣＤＲ３）、ならびに重鎖可変領域においてはおよそ約３１～３５Ｂ（ＨＣＤＲ１、「Ｈ」は重鎖を表す）、５０～６５（ＨＣＤＲ２）、および９５～１０２（ＨＣＤＲ３）からのアミノ酸残基（Ｋａｂａｔｅｔａｌ．，ＳＥＱＵＥＮＣＥＳＯＦＰＲＯＴＥＩＮＳＯＦＩＭＭＵＮＯＬＯＧＩＣＡＬＩＮＴＥＲＥＳＴ，５ｔｈＥｄ．ＰｕｂｌｉｃＨｅａｌｔｈＳｅｒｖｉｃｅ，ＮａｔｉｏｎａｌＩｎｓｔｉｔｕｔｅｓｏｆＨｅａｌｔｈ，Ｂｅｔｈｅｓｄａ，Ｍｄ．（１９９１））ならびに／または超可変ループを形成する残基（例えば、軽鎖可変領域における残基２６～３２（ＬＣＤＲ１）、５０～５２（ＬＣＤＲ２）、および９１～９６（ＬＣＤＲ３）、ならびに重鎖可変領域における２６～３２（ＨＣＤＲ１）、５３～５５（ＨＣＤＲ２）、および９６－１０１（ＨＣＤＲ３）を包含する（ＣｈｏｔｈｉａａｎｄＬｅｓｋ（１９８７）Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．１９６：９０１－９１７）。本発明の特定のＣＤＲを以下に記載する。

当業者には理解されるように、ＣＤＲの正確な付番および配置は、異なる付番系間で異なり得る。しかしながら、可変重鎖および／または可変軽鎖配列の開示は、関連する（固有の）ＣＤＲの開示を含むことが理解されるべきである。したがって、各可変重領域の開示は、ｖｈＣＤＲ（例えば、ｖｈＣＤＲ１、ｖｈＣＤＲ２、およびｖｈＣＤＲ３）の開示であり、各可変軽領域の開示は、ｖｌＣＤＲ（例えば、ｖｌＣＤＲ１、ｖｌＣＤＲ２、およびｖｌＣＤＲ３）の開示である。ＣＤＲ付番の有用な比較は以下のとおりであり、Ｌａｆｒａｎｃｅｔａｌ．，Ｄｅｖ．Ｃｏｍｐ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．２７（１）：５５－７７（２００３）を参照されたい。

本明細書全体を通して、Ｋａｂａｔ付番系は一般に、可変ドメイン内の残基（およそ、軽鎖可変領域の残基１～１０７および重鎖可変領域の残基１～１１３）を参照するときに使用され、ＥＵ付番系は、Ｆｃ領域に対するものである（例えば、Ｋａｂａｔｅｔａｌ．、上述（１９９１））。

重鎖のＩｇドメインの別の種類は、ヒンジ領域である。本明細書において「ヒンジ」または「ヒンジ領域」または「抗体ヒンジ領域」または「ヒンジドメイン」とは、抗体の第１のおよび第２の定常ドメイン間のアミノ酸を含む可動性ポリペプチドを意味する。構造的に、ＩｇＧＣＨ１ドメインはＥＵ位置２１５で終わり、ＩｇＧＣＨ２ドメインは残基ＥＵ位置２３１で始まる。したがって、ＩｇＧについては、抗体ヒンジは、本明細書では、位置２１６（ＩｇＧ１中のＥ２１６）～２３０（ＩｇＧ１中のＰ２３０）を含むように定義され、付番はＫａｂａｔにあるようなＥＵインデックスによる。場合によっては、「ヒンジフラグメント」が使われ、それは、ヒンジドメインのＮ末端またはＣ末端のいずれかまたは両方でより少ないアミノ酸を含有する。本明細書に記載のとおり、ｐＩバリアントはヒンジ領域にも同様に作製することができる。

軽鎖は、一般に、可変軽鎖ドメイン（軽鎖ＣＤＲを含み、可変重鎖ドメインとともにＦｖ領域を形成する）、および定常軽領域（しばしばＣＬまたはＣκと称される）の２つのドメインを含む。

以下に概説される追加の置換のための目的とする別の領域は、Ｆｃ領域である。

本発明は、多数の異なるＣＤＲセットを提供する。この場合において、「完全ＣＤＲセット」は、３つの可変軽鎖および３つの可変重鎖ＣＤＲ、例えばｖｌＣＤＲ１、ｖｌＣＤＲ２、ｖｌＣＤＲ３、ｖｈＣＤＲ１、ｖｈＣＤＲ２、およびｖｈＣＤＲ３を含む。これらは、それぞれより大きな可変軽または可変重鎖ドメインの一部であり得る。さらに、本明細書により完全に概説されているように、可変重および可変軽鎖ドメインは、重鎖および軽鎖が使用されるとき（例えば、Ｆａｂが使用されるとき）には別個のポリペプチド鎖上に、またはｓｃＦｖ配列の場合には単一ポリペプチド鎖上にあり得る。

ＣＤＲは、抗原結合の形成、またはより具体的には、抗体のエピトープ結合部位の形成に寄与する。「エピトープ」とは、パラトープとして知られている抗体分子の可変領域内の特異的抗原結合部位と相互作用する決定基を指す。エピトープは、アミノ酸または糖側鎖などの分子の群分けであり、通常、特異的構造特性、ならびに特異的電荷特性を有する。単一抗原が、２つ以上のエピトープを有してもよい。

エピトープは、結合に直接関与するアミノ酸残基（エピトープの免疫優性構成要素とも称される）および結合に直接関与しない他のアミノ酸残基、例えば、特異的抗原結合ペプチドによって効果的に遮断されるアミノ酸残基、換言すると、特異的抗原結合ペプチドのフットプリント内にあるアミノ酸残基を含み得る。

エピトープは、立体配座または直線状のいずれであってもよい。立体配座エピトープは、直線状のポリペプチド鎖の異なるセグメントからのアミノ酸の空間的な並置によって作り出される。直線状エピトープは、ポリペプチド鎖内の隣接アミノ酸残基によって作り出されるものである。立体配座エピトープおよび非立体配座エピトープは、変性溶媒の存在下で前者への結合は失われるが、後者への結合は失われないという点で区別され得る。

エピトープは、典型的には、固有の空間立体構造内に、少なくとも３個、より一般的には、少なくとも５個、または８～１０個のアミノ酸を含む。同一のエピトープを認識する抗体は、ある抗体の別の抗体の標的抗原への結合を遮断する能力、例えば、「ビニング」を示す単純な免疫アッセイにおいて検証され得る。以下に概説するように、本発明は、列挙された抗原結合ドメインおよび本明細書の抗体を含むだけでなく、列挙された抗原結合ドメインによって結合されるエピトープとの結合について競合するものも含む。

したがって、本発明は異なる抗体ドメインを提供する。本明細書中に記載され、当技術分野において既知のとおり、本発明のヘテロ二量体抗体は、重鎖および軽鎖内に異なるドメインを含み、これもまた重複し得る。これらのドメインは、Ｆｃドメイン、ＣＨ１ドメイン、ＣＨ２ドメイン、ＣＨ３ドメイン、ヒンジドメイン、重鎖定常ドメイン（ＣＨ１－ヒンジ－ＦｃドメインまたはＣＨ１－ヒンジ－ＣＨ２－ＣＨ３）、可変重鎖ドメイン、可変軽鎖ドメイン、軽鎖定常ドメイン、Ｆａｂドメイン、およびｓｃＦｖドメインを含むが、これらに限定されない。

したがって、「Ｆｃドメイン」は、－ＣＨ２－ＣＨ３ドメイン、任意選択的にヒンジドメイン（－Ｈ－ＣＨ２－ＣＨ３）を含む。本明細書の実施形態では、ｓｃＦｖがＦｃドメインに結合しているとき、Ｆｃドメインのヒンジの全部または一部に結合しているのはｓｃＦｖ構築物のＣ末端であり、例えば、それは一般にヒンジの始まりである配列ＥＰＫＳに結合している。重鎖は、可変重ドメインおよび定常ドメインを含み、これは、ＣＨ１－任意選択のＣＨ２－ＣＨ３を含むヒンジ－Ｆｃドメインを含む。軽鎖は、可変軽鎖および軽鎖定常ドメインを含む。ｓｃＦｖは、可変重鎖、ｓｃＦｖリンカー、および可変軽鎖ドメインを含む。本明細書に概説した構築物および配列のほとんどにおいて、可変重鎖のＣ末端はｓｃＦｖリンカーのＮ末端に結合し、そのＣ末端は可変軽鎖のＮ末端に結合している（Ｎ－ｖｈ－リンカー－ｖｌ－Ｃ）が、これはスイッチすることができる（Ｎ－ｖｌ－リンカー－ｖｈ－Ｃ）。

本発明のいくつかの実施形態は、少なくとも１つのｓｃＦｖドメインを含み、それは天然に生じないが、ｓｃＦｖリンカーによってともに連結した可変重鎖ドメインと可変軽鎖ドメインとを一般に含む。本明細書に概説されるように、ｓｃＦｖドメインは、一般に、ｖｈ－ｓｃＦｖリンカー－ｖｌとしてＮ末端からＣ末端に向かう向きとされているが、これは、ｓｃＦｖドメイン（または、Ｆａｂ由来のｖｈおよびｖｌ配列を使用して構築されたドメイン）のいずれに関しても、フォーマットに応じて一方または両方の端部に任意選択のリンカーを用いて、ｖｌ－ｓｃＦｖリンカー－ｖｈへと逆転させることができる。

本明細書に示されるように、好適なリンカー（ドメインリンカーまたはｓｃＦｖリンカーのいずれかとして使用）にはいくつかあり、列挙されたドメインに共有結合（組み換え技術により生成される従来型ペプチド結合を含む）するために使用することができる。いくつかの実施形態では、リンカーペプチドは、主に、以下のアミノ酸残基Ｇｌｙ、Ｓｅｒ、Ａｌａ、またはＴｈｒを含み得る。リンカーペプチドは、それらが所望の活性を保持するように互いに対して正しい立体配座をとるような方法で２つの分子を結合させるのに十分な長さを有するべきである。一実施形態では、リンカーは、約１～５０アミノ酸長、好ましくは約１～３０アミノ酸長である。一実施形態において、１～２０アミノ酸長のリンカーが使用され得、いくつかの実施形態において、約５～約１０アミノ酸が使用されている。有用なリンカーには、例えば、ｎが少なくとも１つの整数（一般に３～４）である（ＧＳ）ｎ、（ＧＳＧＧＳ）ｎ、（ＧＧＧＧＳ）ｎ、および（ＧＧＧＳ）ｎ、グリシン－アラニンポリマー、アラニン－セリンポリマー、ならびに他の可動性リンカーを含むグリシンセリンポリマーが含まれる。代替的に、ポリエチレングリコール（ＰＥＧ）、ポリプロピレングリコール、ポリオキシアルキレン、またはポリエチレングリコールとポリプロピレングリコールとのコポリマーを含むがこれらに限定されない様々な非タンパク質性ポリマーが、リンカーとして有用であり得る。

他のリンカー配列は、任意の長さのＣＬ／ＣＨ１ドメインの任意の配列を含むが、ＣＬ／ＣＨ１ドメインの全ての残基を含まない場合があり、例えば、ＣＬ／ＣＨ１ドメインの最初の５～１２アミノ酸残基である。リンカーは、免疫グロブリン軽鎖、例えば、ＣκまたはＣλに由来し得る。リンカーは、例えば、Ｃγ１、Ｃγ２、Ｃγ３、Ｃγ４、Ｃα１、Ｃα２、Ｃδ、Ｃε、およびＣμを含む任意のアイソタイプの免疫グロブリン重鎖に由来し得る。リンカー配列はまた、Ｉｇ様タンパク質（例えば、ＴＣＲ、ＦｃＲ、ＫＩＲ）、ヒンジ領域由来配列、および他のタンパク質由来の他の天然配列などの他のタンパク質に由来してもよい。

いくつかの実施形態では、リンカーは、本明細書に概説される任意の２つのドメインをともに連結するために使用される「ドメインリンカー」である。例えば、ＦａｂのＣＨ１ドメインのＣ末端をｓｃＦｖのＮ末端に結合するドメインリンカーがあり、別の任意のドメインリンカーはｓｃＦｖのＣ末端をＣＨ２ドメインに結合している（ただし、多くの実施形態では、このドメインリンカーとしてヒンジが使用される）。任意の好適なリンカーを使用することができるが、多くの実施形態は、例えば、ｎが少なくとも１（一般に３～４～５）の整数である、（ＧＳ）ｎ、（ＧＳＧＧＳ）ｎ、（ＧＧＧＧＳ）ｎ、および（ＧＧＧＳ）ｎを含むドメインリンカーとしてグリシン－セリンポリマー、ならびに各ドメインがその生物学的機能を保持できるように十分な長さおよび柔軟性を有する２つのドメインの組み換え結合を可能にする任意のペプチド配列を利用する。場合によっては、以下に概説する「鎖性（ｓｔｒａｎｄｅｄｎｅｓｓ）」に注意を払って、ｓｃＦｖリンカーのいくつかの実施形態において使用されるように、荷電ドメインリンカーを使用することができる。

いくつかの実施形態では、リンカーは、本明細書で考察されるｖｈおよびｖｌドメインを共有結合するために使用されるｓｃＦｖリンカーである。多くの場合、ｓｃＦｖリンカーは、荷電ｓｃＦｖリンカーである。

したがって、本発明はさらに、第１の単量体と第２の単量体との間のｐＩの分離を促進するための荷電ｓｃＦｖリンカーを提供する。すなわち、正または負のいずれかの荷電ｓｃＦｖリンカー（または異なる単量体に対してｓｃＦｖを使用する足場の場合は両方）を組み込むことによって、Ｆｃドメインをさらに変化させずに、荷電リンカーを含む単量体はｐＩを変えることを可能にする。これらの荷電リンカーは、標準的なリンカーを含む任意のｓｃＦｖ中に置換することができる。また、当業者には理解されるように、ｐＩの所望の変化に従って、荷電ｓｃＦｖリンカーが正しい「鎖」または単量体上に使用される。例えば、本明細書で論じられるように、トリプルＦフォーマットヘテロ二量体抗体を作製するために、所望の抗原結合ドメインのそれぞれについてのＦｖ領域の元のｐＩが計算され、そしてｓｃＦｖを作製するために１つが選択され、ｐＩに応じて、正または負のリンカーのいずれかが選択される。

荷電ドメインリンカーも同様に、本発明の単量体のｐＩ分離を増加させるために使用することができ、したがって、本明細書に含まれるものは、リンカーが利用される、本明細書の任意の実施形態で使用することができる。

具体的には、抗体のいくつかのフォーマットは、通常「ヘテロ二量体抗体」と称され、タンパク質が、ヘテロ二量体Ｆｃドメインと、ＦａｂとしてであれｓｃＦｖとしてであれ、少なくとも２つのＦｖ領域とに自己集合した少なくとも２つの関連Ｆｃ配列を有することを意味する。

ＩＩＩ．キメラおよびヒト化抗体
ある特定の実施形態では、本発明のチェックポイント遮断抗体は、特定の生殖細胞系列重鎖免疫グロブリン遺伝子由来の重鎖可変領域および／または特定の生殖細胞系列軽鎖免疫グロブリン遺伝子由来の軽鎖可変領域を含む。例えば、そのような抗体は、特定の生殖細胞系列配列「の産物」であるまたはそれ「に由来する」重鎖または軽鎖可変領域を含むヒト抗体を含み得るかまたはそれからなり得る。ヒト生殖細胞系列免疫グロブリン配列「の産物」であるまたはそれ「に由来する」ヒト抗体は、ヒト抗体のアミノ酸配列をヒト生殖細胞系列免疫グロブリンのアミノ酸配列と比較することと、ヒト抗体の配列に最も近い配列である（即ち、最も高い同一性％）ヒト生殖細胞系列免疫グロブリンを選択することとによって（本明細書に概説される方法を使用する）、そのようなものとして同定され得る。特定のヒト生殖細胞系列免疫グロブリン配列「の産物」であるまたはそれ「に由来する」ヒト抗体は、例えば、天然に生じる体細胞突然変異または部位特異的突然変異の意図的導入に起因して、生殖細胞系列配列と比較してアミノ酸の相違を含み得る。しかしながら、ヒト化抗体は、典型的には、ヒト生殖細胞系列免疫グロブリン遺伝子によってコードされるアミノ酸配列とアミノ酸配列において少なくとも９０％同一であり、他の種の生殖細胞系列免疫グロブリンアミノ酸配列（例えば、マウス生殖細胞系列配列）と比較したときに、抗体をヒト配列に由来するものとして特定するアミノ酸残基を含む。ある特定の場合にでは、ヒト化抗体は、生殖細胞系列免疫グロブリン遺伝子によってコードされるアミノ酸配列と、アミノ酸配列において少なくとも９５％、９６％、９７％、９８％、もしくは９９％、またはさらに少なくとも９６％、９７％、９８％、または９９％同一であり得る。典型的には、特定のヒト生殖細胞系配列に由来するヒト化抗体は、ヒト生殖細胞系免疫グロブリン遺伝子によってコードされるアミノ酸配列と１０～２０個以下のアミノ酸差しか示さない（本明細書中の任意のスキューバリアント、ｐＩバリアント、および切断バリアントの導入前、すなわち、本発明のバリアントの導入前は、バリアントの数は一般に少ない）。ある特定の場合には、ヒト化抗体は、生殖細胞系列免疫グロブリン遺伝子によってコードされるアミノ酸配列とは５個以下、またはさらには４、３、２、もしくは１個以下のアミノ酸差しか示さない場合がある（同様に、本明細書における任意のスキューバリアント、ｐＩバリアント、および切断バリアントの導入前、すなわち、本発明のバリアントの導入前は、バリアントの数は一般に少ない）。

一実施形態では、親抗体は、当技術分野で既知のとおり、親和性成熟されたものである。構造に基づく方法が、例えば、ＵＳＳＮ１１／００４，５９０に記載されているように、ヒト化および親和性成熟のために用いられ得る。これらに限定されないが、全て全体が参照により組み込まれる、Ｗｕｅｔａｌ．，１９９９，Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．２９４：１５１－１６２、Ｂａｃａｅｔａｌ．，１９９７，Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．２７２（１６）：１０６７８－１０６８４、Ｒｏｓｏｋｅｔａｌ．，１９９６，Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．２７１（３７）：２２６１１－２２６１８、Ｒａｄｅｒｅｔａｌ．，１９９８，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ９５：８９１０－８９１５、Ｋｒａｕｓｓｅｔａｌ．，２００３，ＰｒｏｔｅｉｎＥｎｇｉｎｅｅｒｉｎｇ１６（１０）：７５３－７５９に記載される方法を含む、選択に基づく方法が抗体可変領域のヒト化および／または親和性成熟のために用いられ得る。他のヒト化方法は、ＣＤＲの一部のみを移植することを含んでもよく、これには、これらに限定されないが、全て全体が参照により組み込まれる、ＵＳＳＮ０９／８１０，５１０、Ｔａｎｅｔａｌ．，２００２，Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１６９：１１１９－１１２５、ＤｅＰａｓｃａｌｉｓｅｔａｌ．，２００２，Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１６９：３０７６－３０８４に記載される方法が含まれる。

ＩＶ．ヘテロ二量体Ｆｃ融合タンパク質
本発明は、異なる方向でＩＬ－１５およびＩＬ－１５受容体アルファ（ＩＬ－１５Ｒα）タンパク質ドメインを含むヘテロ二量体Ｆｃ融合タンパク質に関する。Ｆｃドメインは、ＩｇＧＦｃドメイン、例えば、ＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３またはＩｇＧ４Ｆｃドメインから誘導することができ、ＩｇＧ１Ｆｃドメインが本発明において特に使用される。

各鎖のカルボキシ末端部分は、エフェクター機能に主に関与する定常領域を定義する。Ｋａｂａｔらは、重鎖および軽鎖の可変領域の多数の一次配列を収集した。配列の保存の程度に基づき、Ｋａｂａｔらは、個々の一次配列をＣＤＲおよびフレームワークに分類し、そのリストを作成した（参照により全体が組み込まれる、ＳＥＱＵＥＮＣＥＳＯＦＩＭＭＵＮＯＬＯＧＩＣＡＬＩＮＴＥＲＥＳＴ，５ｔｈｅｄｉｔｉｏｎ，ＮＩＨｐｕｂｌｉｃａｔｉｏｎ，Ｎｏ．９１－３２４２，Ｅ．Ａ．Ｋａｂａｔｅｔａｌ．を参照されたい）。本明細書全体を通して、Ｋａｂａｔ付番系は概して、可変ドメイン内の残基（およそ、軽鎖可変領域の残基１～１０７および重鎖可変領域の残基１～１１３）を参照するときに使用され、ＥＵ付番系は、Ｆｃ領域に対するものである（例えば、Ｋａｂａｔｅｔａｌ．，上述（１９９１）を参照）。

免疫グロブリンのＩｇＧサブクラスには、重鎖においていくつかの免疫グロブリンドメインがある。本明細書の「免疫グロブリン（Ｉｇ）ドメイン」とは、明確に異なる三次構造を有する免疫グロブリンの領域を意味する。定常重（ＣＨ）ドメインおよびヒンジドメインを含む重鎖ドメインが本発明における関心対象である。ＩｇＧ抗体の関連において、ＩｇＧアイソタイプは、それぞれ３つのＣＨ領域を有する。したがって、ＩｇＧの文脈における「ＣＨ」ドメインは以下のとおりである。「ＣＨ１」は、ＫａｂａｔにあるようなＥＵインデックスに従って１１８～２１５位を指す。「ヒンジ」は、ＫａｂａｔにあるようなＥＵインデックスに従って２１６～２３０位を指す。「ＣＨ２」は、ＫａｂａｔにあるようなＥＵインデックスに従って２３１～３４０位を指し、「ＣＨ３」は、ＫａｂａｔにあるようなＥＵインデックスに従って３４１～４４７位を指す。表１に示されるように、重鎖ドメインの正確な付番および配置は、異なる付番システムで異なり得る。本明細書に示され、以下に記載されるように、ｐＩバリアントは、以下に考察されるヒンジ領域と同様に１つまたは複数のＣＨ領域にあり得る。

重鎖のＩｇドメインの別の種類は、ヒンジ領域である。本明細書において「ヒンジ」または「ヒンジ領域」または「抗体ヒンジ領域」または「免疫グロブリンヒンジ領域」とは、抗体の第１のおよび第２の定常ドメイン間のアミノ酸を含む可動性ポリペプチドを意味する。構造的に、ＩｇＧＣＨ１ドメインはＥＵ位置２１５で終わり、ＩｇＧＣＨ２ドメインは残基ＥＵ位置２３７で始まる。したがって、ＩｇＧについては、抗体ヒンジは、位置２１６（ＩｇＧ１中のＥ２１６）から２３０（ＩｇＧ１中のＰ２３０）を含むように本明細書で定義され、付番は、Ｋａｂａｔと同様にＥＵインデックスによるものである。いくつかの実施形態では、例えばＦｃ領域に関連して、ヒンジが含まれ、一般に位置２１６～２３０を指す。本明細書に記載のとおり、ｐＩバリアントはヒンジ領域にも同様に作製することができる。

したがって、本発明は異なる抗体ドメインを提供する。本明細書中に記載され、そして当該技術分野において既知であるように、本発明のヘテロ二量体タンパク質は異なるドメインを含み、これもまた重複し得る。これらのドメインは、Ｆｃドメイン、ＣＨ１ドメイン、ＣＨ２ドメイン、ＣＨ３ドメイン、ヒンジドメイン、重定常ドメイン（ＣＨ１－ヒンジ－ＦｃドメインまたはＣＨ１－ヒンジ－ＣＨ２－ＣＨ３）を含むが、これらに限定されない。

したがって、「Ｆｃドメイン」は、－ＣＨ２－ＣＨ３ドメイン、および場合によりヒンジドメインを含む。いくつかの実施形態では、Ｆｃドメインはまた、ＣＨ１ドメインの一部も含む。いくつかの実施形態では、タンパク質フラグメント、例えば、ＩＬ－１５またはＩＬ－１５ＲαがＦｃドメインに結合している場合、それは、Ｆｃドメインのヒンジの全部または一部に結合しているのＩＬ－１５またはＩＬ－１５Ｒα構築物のＣ末端であり、例えば、それは、一般にヒンジの始まりである配列ＥＰＫＳに結合している。本明細書における他の実施形態では、タンパク質フラグメント、例えば、ＩＬ－１５またはＩＬ－１５ＲαがＦｃドメインに結合している場合、それは、ＣＨ３ドメインのＣ末端に結合しているタンパク質断片のＮ末端である。

本明細書に概説したＦｃドメインタンパク質のコンストラクトおよび配列のいくつかにおいて、ＩＬ－１５またはＩＬ－１５ＲαのＣ末端はドメインリンカーのＮ末端に結合し、そのＣ末端は定常ＦｃドメインのＮ末端に結合している（Ｎ－ＩＬ－１５またはＩＬ－１５Ｒαタンパク質断片－リンカー－Ｆｃドメイン－Ｃ）が、これは切り替えることができる（Ｎ－Ｆｃドメイン－リンカー－ＩＬ－１５またはＩＬ－１５Ｒαタンパク質ドメイン－Ｃ）。本明細書に概説される他の構築物および配列において、第１のタンパク質断片のＣ末端は、場合によりドメインリンカーを介して、第２のタンパク質断片のＮ末端に結合し、第２のタンパク質断片のＣ末端は、場合によりドメインリンカーを介して定常ＦｃドメインのＮ末端に結合する。本明細書に概説されるさらに他の構築物および配列において、第１のタンパク質断片または第２のタンパク質断片に結合していない定常Ｆｃドメインが提供される。ヘテロ二量体Ｆｃ融合タンパク質は、本明細書に記載の２つ以上の例示的な単量体Ｆｃドメインタンパク質を含み得る。さらに別の構築物では、第１のタンパク質断片のＮ末端は、任意にドメインリンカーを介して、第２のタンパク質断片のＮ末端に結合し、第２のタンパク質断片のＣ末端は、任意にドメインリンカーを介して定常ＦｃドメインのＮ末端に結合する。

いくつかの実施形態では、リンカーは、本明細書に概説される任意の２つのドメインを共に連結するために使用される「ドメインリンカー」であり、そのいくつかは図８７に示されている。任意の適切なリンカーを用いることができるが、多くの実施形態は、例えば、ｎが少なくとも１（および一般に０～１～２～３～４～５）である、（ＧＳ）ｎ、（ＧＳＧＧＳ）ｎ、（ＧＧＧＧＳ）ｎ、および（ＧＧＧＳ）ｎを含むグリシン－セリンポリマー、ならびに各ドメインがその生物学的機能を保持できるように十分な長さおよび柔軟性を有する２つのドメインの組換え結合を可能にする任意のペプチド配列を利用する。場合によっては、以下に概説する「鎖性（ｓｔｒａｎｄｅｄｎｅｓｓ）」に注意を払って、リンカーは荷電ドメインリンカーである。

したがって、いくつかの実施形態では、本発明は、自己集合してヘテロ二量体Ｆｃドメイン融合ポリペプチドを形成する、２つの異なる重鎖バリアントＦｃ配列の使用に依存するヘテロ二量体Ｆｃ融合タンパク質を提供する。

一実施形態では、ヘテロダイマーＦｃ融合タンパク質は、それがｐＩ操作などのヘテロダイマーを生成するように操作することができる少なくとも２つの定常ドメインを含む。使用され得る他のＦｃドメインは、ｐＩ操作された本発明のＣＨ１、ＣＨ２、ＣＨ３、およびヒンジドメインのうちの１つ以上を含む断片を含む。特に、図９Ａ～９Ｇおよび図３９Ａ～３９Ｄに示すフォーマットは、ヘテロ二量体Ｆｃ融合タンパク質であり、これは、このタンパク質が、ヘテロ二量体Ｆｃドメインに自己集合した２つの結合したＦｃ配列および少なくとも１つのタンパク質断片（例えば、１、２またはそれ以上のタンパク質断片）を有することを意味する。いくつかの場合において、第１のタンパク質断片は第１のＦｃ配列に連結し、そして第２のタンパク質断片は第２のＦｃ配列に連結する。他の場合では、第１のタンパク質断片は第１のＦｃ配列に連結しており、第１のタンパク質断片はＦｃ配列に連結していない第２のタンパク質断片に非共有結合的に付着している。場合によっては、ヘテロダイマーＦｃ融合タンパク質は、第１のＦｃ配列に連結している第２のタンパク質フラグメントに連結した第１のタンパク質フラグメント、および第１のまたは第２のタンパク質フラグメントのいずれにも連結していない第２のＦｃ配列を含む。

本発明は、１つ以上の結合パートナー、リガンド、または受容体への結合を可能にするヘテロダイマーＦｃ融合タンパク質を提供するための新規構築物に関する。ヘテロダイマーＦｃ構築物は、抗体の重鎖の２つのＦｃドメイン、例えば、「ダイマー」に組み立てられる２つの「モノマー」の自己組織化の性質に基づく。ヘテロダイマーＦｃ融合体は、以下でさらに詳しく説明するとおり、各モノマーのアミノ酸配列を変えることによって作製される。したがって、本発明は概して、結合パートナー（複数可）またはリガンド（複数可）または受容体（複数可）をいくつかの方法で共結合することができるヘテロダイマーＦｃ融合タンパク質の生成に関し、ヘテロダイマー形成を促進するために、かつ／またはホモダイマーよりもヘテロダイマーの精製を容易にするために、各鎖で異なる定常領域中のアミノ酸バリアントに依存している。

本発明のヘテロ二量体を生成するために使用することができるいくつかのメカニズムが存在する。さらに、当業者には理解されるように、これらのメカニズムを組み合わせて高いヘテロ二量体化を確実にすることができる。したがって、ヘテロ二量体の産生をもたらすアミノ酸バリアントは、「ヘテロ二量体化バリアント」と称される。後述するように、ヘテロ二量体化バリアントは、ヘテロ二量体からのホモ二量体の精製を可能にする立体バリアント（例えば、後述の「ノブアンドホール」または「スキュー」バリアントおよび「電荷対」変異）ならびに「ｐＩバリアント」を含み得る。その全体が参照により本明細書に組み込まれ、具体的には以下で「ヘテロ二量体化バリアント」の議論について本明細書に援用されるように、ヘテロ二量体化の有用な機構には、「ノブアンドホール」（「ＫＩＨ」、時に「スキュー」バリアントとして本明細書に記載される（ＷＯ２０１４／１４５８０６中の議論を参照されたい）、ＷＯ２０１４／１４５８０６に記載されているような「静電ステアリング」または「電荷対」、ＷＯ２０１４／１４５８０６に記載されているようなｐＩバリアント、ならびにＷＯ２０１４／１４５８０６および以下に概説されているような一般的な追加のＦｃバリアントが含まれる。

本発明において、ヘテロ二量体タンパク質および抗体の精製を容易することができるいくつかの基本的な機構が存在し、その１つは、各単量体、続いて各二量体種が異なるｐＩを有することによって、Ａ－Ａ、Ａ－Ｂ、およびＢ－Ｂ二量体タンパク質の等電点精製が可能になるように、ｐＩバリアントの使用に依存する。代替的に、いくつかのフォーマットはまた、サイズに基づいて分離することも可能にする。以下にさらに概説するように、ホモダイマーよりもヘテロダイマーの形成を「スキューさせる」ことも可能である。したがって、立体的ヘテロ二量体化バリアントおよびｐＩバリアントまたは電荷対バリアントの組み合わせは、本発明において特に使用される。

一般に、本発明において特に使用される実施形態は、２つのモノマー間および各ダイマー種間のｐＩ差を増加させる、ｐＩバリアントと組み合わせた、ホモダイマー形成に対するヘテロダイマー形成を促進するスキューバリアントを含むバリアントのセットに依存する。

さらに、以下により完全に概説されるように、ヘテロダイマーＦｃ融合タンパク質のフォーマットに応じて、ｐＩバリアントはモノマーの定常ドメインおよび／またはＦｃドメイン内に含まれるか、またはドメインリンカーが使用されるかのいずれかであり得る。すなわち、本発明は、一方または両方のモノマー上にあるｐＩバリアント、および／または荷電ドメインリンカーも提供する。さらに、代替の機能性のためのさらなるアミノ酸操作もまた、Ｆｃ、ＦｃＲｎ、およびＫＯバリアントなどのｐＩ変化を付与し得る。

ヘテロ二量体タンパク質の精製を可能にするための分離機構としてｐＩを利用する本発明においては、アミノ酸変異を一方または両方の単量体のポリペプチドに導入することができ、すなわち、単量体の一方（本明細書では簡単のために「単量体Ａ」と呼ぶ）のｐＩを単量体Ｂと異なるように操作でき、または、単量体ＡおよびＢの両方を、単量体ＡのｐＩを増加させ、単量体ＢのｐＩを減少させるように改変できる。論じられるように、いずれかまたは両方の単量体のｐＩ変化は、荷電残基を除去または付加することによって（例えば、中性アミノ酸を正または負に荷電したアミノ酸残基で置換する、例えば、グルタミンからグルタミン酸）、正または負から反対の電荷への荷電残基の変更によって（例えばアスパラギン酸からリジンへ）、または荷電残基の中性残基への変更によって（例えば、電荷の消失、リジンからセリン）、実施することができる。いくつかのこれらのバリアントを図に示す。

したがって、本発明のこの実施形態は、ヘテロ二量体をホモ二量体から分離することができるように、少なくとも１つの単量体に十分なｐＩの変化を生じさせることを提供する。当業者には理解されるように、そして以下にさらに議論されるように、これは、「野生型」重鎖定常領域およびそのｐＩ（ｗｔＡ：＋ＢまたはｗｔＡ：Ｂ－）を増加または減少させるように操作されたバリアント領域を使用することによって、または一方の領域を増加させて他方の領域を減少させることによって（Ａ＋：Ｂ－またはＡ－：Ｂ＋）行うことができる。

したがって、一般に、本発明のいくつかの実施形態の構成要素は、二量体タンパク質の単量体の両方ではないにしても、少なくとも１つの等電点（ｐＩ）を、アミノ酸置換（「ｐＩバリアント」または「ｐＩ置換」）を単量体の一方または両方に組み込むことによって変化させることを目的とする定常領域におけるアミノ酸バリアントである。２つのホモ二量体からのヘテロ二量体の分離は、２つの単量体のｐＩが０．１ｐＨ単位とわずかに異なる場合に達成することができ、０．２、０．３、０．４、および０．５以上異なるものが全て本発明における使用を見出す。

当業者には理解されるように、良好な分離を得るために各単量体または両方の単量体（複数可）に含まれるべきｐＩバリアントの数は、構成要素の出発ｐＩに部分的に依存するであろう。すなわち、どの単量体を操作するか、またはどの「方向」（例えば、より陽性またはより陰性）かを決定するために、Ｆｃドメインの配列、およびいくつかの場合では、Ｆｃドメインに連結するタンパク質ドメイン（複数可）が計算され、そこから決定がなされる。当該技術分野において既知であるように、異なるＦｃドメインおよび／またはタンパク質ドメインは、本発明において利用される異なる出発ｐＩを有するであろう。概して、本明細書に概説されるように、ｐＩは、少なくとも約０．１ｌｏｇの各単量体の総ｐＩの差異を生じるように操作され、本明細書に概説されるように０．２～０．５が好ましい。

さらに、当業者には理解され、本明細書に概説されるように、いくつかの実施形態では、ヘテロ二量体はサイズに基づいてホモ二量体から分離することができる。図に示されるように、例えば、フォーマットのいくつかは、サイズに基づいてヘテロ二量体およびホモ二量体の分離を可能にする。

Ｆｃドメイン（複数可）の定常領域（複数可）を使用することによって、ｐＩバリアントを使用してヘテロ二量体化を達成する場合、ヘテロ二量体Ｆｃ融合タンパク質を設計および精製するためのよりモジュール方式のアプローチが提供される。したがって、いくつかの実施形態では、ヘテロ二量体化バリアント（スキューおよび精製ヘテロ二量体化バリアントを含む）を操作しなければならない。さらに、いくつかの実施形態では、ｐＩバリアントから生じる免疫原性の可能性は、顕著な免疫原性を導入することなくｐＩが変化するように、異なるＩｇＧアイソタイプからのｐＩバリアントを移入することによって著しく低減される。したがって、解決されるべき追加の問題は、高いヒト配列含有量を有する低ｐＩの定常ドメインの解明、例えば、任意の特定の位置における非ヒト残基の最小化または回避である。

このｐＩ操作で起こり得る副次的な利益はまた、血清半減期の延長およびＦｃＲｎ結合の増加である。すなわち、ＵＳＳＮ１３／１９４，９０４（その全体において参照により本明細書に組み込まれる）に記載されているように、抗体定常ドメイン（抗体およびＦｃ融合体に見られるものを含む）のｐＩを低下させるとインビボでより長い血清保持をもたらし得る。血清半減期の増加のためのこれらのｐＩバリアントはまた、精製のためのｐＩ変化を促進する。

さらに、ヘテロ二量体化バリアントのｐＩバリアントは、ホモ二量体が存在するときを排除、最小化、および区別する能力が顕著であるため、Ｆｃ融合タンパク質の分析および品質管理プロセスにさらなる利益を与える。同様に、ヘテロ二量体Ｆｃ融合タンパク質生成の再現性を確実に試験する能力が重要である。

Ａ．ヘテロ二量体化バリアント
本発明は、ヘテロ二量体形成および／またはホモ二量体からの精製を可能にするためにヘテロ二量体化バリアントを利用する、様々なフォーマットのヘテロ二量体Ｆｃ融合タンパク質を含む、ヘテロ二量体タンパク質を提供する。ヘテロ二量体融合構築物は、２つのＦｃドメイン、例えば、「二量体」に組み立てられる２つの「単量体」の自己集合の性質に基づく。

ヘテロ二量体化スキューバリアントのセットのいくつかの好適な対が存在する。これらのバリアントは、「セット」の「対」になる。すなわち、一方のセットの対が第１の単量体に組み込まれ、他のセットの対が第２の単量体に組み込まれる。注目すべきは、これらのセットは、一方の単量体上の残基と他方の単量体上の残基との間で一対一の対応関係を有する「ノブインホール」バリアントとして必ずしも振舞わないことであり、すなわち、これらのセットの対は、ヘテロ二量体形成を促進し、ホモ二量体形成を妨げる２つの単量体間の界面を形成し、生物学的条件下で自発的に形成するヘテロ二量体の割合を予想される５０％（２５％ホモ二量体Ａ／Ａ：５０％ヘテロ二量体Ａ／Ｂ：２５％ホモ二量体Ｂ／Ｂ）ではなく９０％以上にする。

Ｂ．立体バリアント
いくつかの実施形態では、ヘテロ二量体の形成は、立体バリアントの付加によって促進され得る。すなわち、各重鎖中のアミノ酸を変えることによって、異なる重鎖が会合して同じＦｃアミノ酸配列を有するホモ二量体を形成するよりもヘテロ二量体構造を形成する可能性が高い。好適な立体バリアントは、ＵＳＳＮ１５／１４１，３５０の図２９に含まれており、それらの全ては、その全体において参照により本明細書に組み込まれ、同様に図８４に含まれる。

１つの機構は、それらの全てがそれらの全体において参照により本明細書に組み込まれる、ＵＳＳＮ６１／５９６，８４６、Ｒｉｄｇｗａｙｅｔａｌ．，ＰｒｏｔｅｉｎＥｎｇｉｎｅｅｒｉｎｇ９（７）：６１７（１９９６）、Ａｔｗｅｌｌｅｔａｌ．，Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．１９９７２７０：２６、米国特許第８，２１６，８０５号に記載されるように、当該技術分野において一般的に「ノブアンドホール」と呼ばれ、ヘテロ二量体形成を有利にし、ホモ二量体形成を不利にする立体効果を作り出すアミノ酸操作を指す。これらの図は、「ノブアンドホール」に依存するいくつかの「単量体Ａ－単量体Ｂ」対を特定する。さらに、Ｍｅｒｃｈａｎｔｅｔａｌ．，ＮａｔｕｒｅＢｉｏｔｅｃｈ．１６：６７７（１９９８）に記載されているように、これらの「ノブアンドホール」変異は、ヘテロ二量体化に対するスキュー形成のためのジスルフィド結合と組み合わせることができる。

ヘテロ二量体の生成に使用されるさらなる機構は、参照によりその全てが本明細書に組み込まれる、Ｇｕｎａｓｅｋａｒａｎｅｔａｌ．，Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．２８５（２５）：１９６３７（２０１０）に記載されているように、時に「静電ステアリング」と呼ばれる。これは、本明細書において、時に「電荷対」と称される。この実施形態では、静電学を使用して、ヘテロ二量体化に向けて形成をスキューさせる。当業者には理解されるように、これらはまた、ｐＩ、したがって精製に影響する場合があり、したがっていくつかの場合ではｐＩバリアントと見なすこともできる。しかしながら、これらはヘテロ二量体化を強制するために生成され、精製手段として使用されなかったため、それらは「立体バリアント」として分類される。これらには、これらに限定されないが、Ｄ２２１Ｒ／Ｐ２２８Ｒ／Ｋ４０９Ｒと対になったＤ２２１Ｅ／Ｐ２２８Ｅ／Ｌ３６８Ｅ（例えば、これらは「単量体の対応するセット」である）、およびＣ２２０Ｒ／Ｅ２２４Ｒ／Ｐ２２８Ｒ／Ｋ４０９Ｒと対になったＣ２２０Ｅ／Ｐ２２８Ｅ／３６８Ｅが含まれる。

さらなるモノマーＡおよびモノマーＢのバリアントは、本明細書に概説されるｐＩバリアントまたは参照によりそのすべてが本明細書に明示的に組み込まれるＵＳ２０１２／０１４９８７６の図３７に示される他の立体バリアントなどの他のバリアントと、任意選択的に独立して任意の量で組み合わせることができる。

いくつかの実施形態では、本明細書に概説される立体バリアントは、任意のｐＩバリアント（またはＦｃバリアント、ＦｃＲｎバリアント等の他のバリアント）を一方または両方の単量体に任意選択的にかつ独立して組み込むことができ、本発明のタンパク質に独立してかつ任意選択的に含むかまたは除外することができる。

好適なスキューバリアントの一覧を図３Ａ～３Ｅに示す。多くの実施形態において特に有用であるのは、これらに限定されないが、Ｓ３６４Ｋ／Ｅ３５７Ｑ：Ｌ３６８Ｄ／Ｋ３７０Ｓ、Ｌ３６８Ｄ／Ｋ３７０Ｓ：Ｓ３６４Ｋ、Ｌ３６８Ｅ／Ｋ３７０Ｓ：Ｓ３６４Ｋ、Ｔ４１１Ｅ／Ｋ３６０Ｅ／Ｑ３６２Ｅ：Ｄ４０１Ｋ、Ｌ３６８Ｄ／Ｋ３７０Ｓ：Ｓ３６４Ｋ／Ｅ３５７Ｌ、Ｋ３７０Ｓ：Ｓ３６４Ｋ／Ｅ３５７Ｑ、およびＴ３６６Ｓ／Ｌ３６８Ａ／Ｙ４０７Ｖ：Ｔ３６６Ｗ（任意に架橋ジスルフィド、Ｔ３６６Ｓ／Ｌ３６８Ａ／Ｙ４０７Ｖ／Ｙ３４９Ｃ：Ｔ３６６Ｗ／Ｓ３５４Ｃを含む）を含むセットの対である。命名法に関して、対「Ｓ３６４Ｋ／Ｅ３５７Ｑ：Ｌ３６８Ｄ／Ｋ３７０Ｓ」は、一方の単量体が二重バリアントセットＳ３６４Ｋ／Ｅ３５７Ｑを有し、他方が二重バリアントセットＬ３６８Ｄ／Ｋ３７０Ｓを有することを意味し、上述のように、これらの対の「鎖性（ｓｔｒａｎｄｅｄｎｅｓｓ）」は出発ｐＩに依存する。

Ｃ．ヘテロ二量体のｐＩ（等電点）バリアント
一般に、当業者には理解されるように、ｐＩバリアントには２つの一般的なカテゴリー：タンパク質のｐＩを増加させるもの（塩基性変化）とタンパク質のｐＩを減少させるもの（酸性変化）がある。本明細書に記載されるように、これらのバリアントのすべての組み合わせを使用することができる。一方のモノマーは野生型、または野生型と顕著に異なるｐＩを示さないバリアントであってもよく、他方がより塩基性またはより酸性のいずれかであり得る。あるいは、各モノマーは、１つはより塩基性に、１つはより酸性へと変化し得る。

ｐＩバリアントの好ましい組み合わせはＵＳＳＮ１５／１４１，３５０の図３０に示されており、そのすべてはその全体が参照により本明細書に組み込まれる。本明細書に概説し、図に示すように、これらの変化はＩｇＧ１と比較して示されているが、すべてのアイソタイプをこのように変更することができ、アイソタイプハイブリッドも同様である。重鎖定常ドメインがＩｇＧ２～４に由来する場合、Ｒ１３３ＥおよびＲ１３３Ｑもまた使用され得る。ｐＩバリアントを図４に示す。

一実施形態では、Ｆｃモノマーの１つがＣＨ１ドメインを含む場合、ｐＩバリアントの好ましい組み合わせは、２０８Ｄ／２９５Ｅ／３８４Ｄ／４１８Ｅ／４２１Ｄバリアント（ヒトＩｇＧ１と比較するときＮ２０８Ｄ／Ｑ２９５Ｅ／Ｎ３８４Ｄ／Ｑ４１８Ｅ／Ｎ４２１Ｄ）を含む１つのモノマーを有する。いくつかの例では、第２のモノマーは、（ＧＫＰＧＳ）_４を含む、正荷電ドメインリンカーを含む。場合によっては、第１のモノマーは２０８位を含むＣＨ１ドメインを含む。したがって、ＣＨ１ドメインを含まない構築物（例えば、ドメインの１つにＣＨ１ドメインを利用しないヘテロダイマーＦｃ融合タンパク質の場合）において、好ましい負のｐＩバリアントＦｃセットは、２９５Ｅ／３８４Ｄ／４１８Ｅ／４２１Ｄバリアント（ヒトＩｇＧ１と比較するときＱ２９５Ｅ／Ｎ３８４Ｄ／Ｑ４１８Ｅ／Ｎ４２１Ｄ）を含む。

いくつかの実施形態では、変異は、位置２１６、２１７、２１８、２１９、２２０、２２１、２２２、２２３、２２４、２２５、２２６、２２７、２２８、２２９、および２３０を含む、Ｆｃドメインのヒンジドメインで生じる。したがって、ｐＩ変異、特に置換は、本発明で使用されている１、２、３、４または５個の変異によって位置２１６～２３０のうちの１つ以上で行うことができる。同様に、すべての可能な組み合わせが、単独で、または他のドメイン中の他のｐＩバリアントとともに企図されている。

ヒンジドメインのｐＩを低下させるのに使用される具体的な置換としては、２２１位の欠失、２２２位の非天然バリンまたはトレオニン、２２３位の欠失、２２４位の非天然グルタミン酸、２２５位の欠失、２３５位の欠失、および２３６位の欠失または非天然アラニンが含まれるがこれらに限定されない。場合によっては、ヒンジドメインにおいてはｐＩ置換のみが行われ、他の例では、これらの置換（複数可）は他のドメイン内の他のｐＩバリアントに任意の組み合わせで加えられる。

いくつかの実施形態では、位置２３３、２３４、２３５、２３６、２７４、２９６、３００、３０９、３２０、３２２、３２６、３２７、３３４、および３３９を含むＣＨ２領域内に変異を生じさせることができる。同様に、これら１４個の位置のすべての可能な組み合わせを作ることができ、例えば、ｐＩ抗体は、１、２、３、４、５、６、７、８、９または１０個のＣＨ２のｐＩ置換を有していてもよい。

ＣＨ２ドメインのｐＩを低下させるのに使用される具体的な置換としては、２７４位の非天然グルタミンまたはグルタミン酸、２９６位の非天然フェニルアラニン、３００位の非天然フェニルアラニン、３０９位の非天然バリン、３２０位の非天然グルタミン酸、３２２位の非天然グルタミン酸、３２６位の非天然グルタミン酸、３２７位の非天然グリシン、３３４位の天然グルタミン酸、３３９位の非天然トレオニン、およびＣＨ２内および他のドメインとのすべての可能な組み合わせが含まれるがこれらに限定されない。

この実施形態では、変異は位置３５５、３５９、３６２、３８４、３８９、３９２、３９７、４１８、４１９、４４４および４４７から独立して任意選択的に選択され得る。ＣＨ３ドメインのｐＩを低下させるのに使用される具体的な置換としては、３５５位の非天然グルタミンまたはグルタミン酸、３８４位の非天然セリン、３９２位の非天然アスパラギンまたはグルタミン酸、３９７位の非天然メチオニン、４１９位の非天然グルタミン酸、３５９位の非天然グルタミン酸、３６２位の非天然グルタミン酸、３８９位の非天然グルタミン酸、４１８位の非天然グルタミン酸、４４４位の非天然グルタミン酸、および４４７位の欠失または非天然アスパラギン酸が含まれるがこれらに限定されない。

Ｄ．アイソタイプバリアント
さらに、本発明の多くの実施形態は、あるＩｇＧアイソタイプから別のＩｇＧアイソタイプへの特定の位置でのｐＩアミノ酸の「移入」に依存し、したがって、バリアントに望ましくない免疫原性が導入される可能性を低減または排除する。これらのいくつかは、参照により本明細書に組み込まれている、米国特許出願公開第２０１４／０３７００１３号の図２１に示されている。すなわち、ＩｇＧ１は、高いエフェクター機能を含む様々な理由から治療用抗体の一般的なアイソタイプである。しかしながら、ＩｇＧ１の重定常領域は、ＩｇＧ２のそれよりも高いｐＩを有する（８．１０対７．３１）。特定の位置でＩｇＧ２残基をＩｇＧ１骨格に導入することによって、得られる単量体のｐＩは低下（または上昇）し、さらにより長い血清半減期を示す。例えば、ＩｇＧ１は１３７位にグリシン（ｐＩ５．９７）を有し、ＩｇＧ２はグルタミン酸（ｐＩ３．２２）を有し、グルタミン酸を移入すると、得られるタンパク質のｐＩに影響を与える。以下に記載されるように、バリアントＦｃ融合タンパク質のｐＩに顕著な影響を与えるためには、一般にいくつかのアミノ酸置換が必要とされる。しかしながら、ＩｇＧ２分子中の変化でさえも血清半減期の増加を可能にすることが以下に論じられるように留意されるべきである。

他の実施形態では、非アイソタイプのアミノ酸変化を行って、（例えば、高ｐＩのアミノ酸から低ｐＩのアミノ酸へと変化させることによって）得られるタンパク質の全体的な荷電状態を低下させるか、または以下でさらに詳細に説明する安定性等のための構造の調整を可能にする。

さらに、重定常ドメインと軽定常ドメインの両方をｐＩ操作することによって、ヘテロ二量体の各単量体における顕著な変化を見ることができる。本明細書で考察されるように、２つの単量体のｐＩが少なくとも０．５だけ異なることが、イオン交換クロマトグラフィーもしくは等電点電気泳動、または等電点に高感度な他の方法による分離を可能する。

Ｅ．ｐＩの計算
各モノマーのｐＩは、バリアント重鎖定常ドメインのｐＩおよび全モノマーのｐＩに依存し、バリアント重鎖定常ドメインおよび融合パートナーを含み得る。したがって、いくつかの実施形態において、ｐＩの変化は、米国特許出願公開第２０１４／０３７００１３号の図１９のチャートを用いて、バリアント重鎖定常ドメインに基づいて計算される。本明細書で論じるように、どのモノマーを操作するかは概して、各モノマーの固有のｐＩによって決定される。

Ｆ．インビボ結合により良好なＦｃＲｎも付与するｐＩバリアント
ｐＩバリアントが単量体のｐＩを減少させる場合、それらはインビボでの血清保持を改善するというさらなる利点を有することができる。

まだ検討中ではあるが、エンドソーム内のｐＨ６でＦｃＲｎに結合するとＦｃが隔離されるため、Ｆｃ領域はインビボでより長い半減期を有すると考えられている（参照により全体的に組み込まれる、ＧｈｅｔｉｅａｎｄＷａｒｄ，１９９７ＩｍｍｕｎｏｌＴｏｄａｙ．１８（１２）：５９２－５９８）。次いでエンドソーム区画はＦｃを細胞表面にリサイクルする。区画が細胞外空間に開くと、約７．４のより高いｐＨが、血中へのＦｃの放出を誘導する。マウスにおいて、Ｄａｌｌ’Ａｃｑｕａらは、ｐＨ６およびｐＨ７．４でのＦｃＲｎ結合が増加したＦｃ変異は実際に低下した血清濃度および野生型Ｆｃと同一の半減期を有することを示した（参照により全体的に組み込まれる、Ｄａｌｌ’Ａｃｑｕａｅｔａｌ．２００２，Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１６９：５１７１－５１８０）。ｐＨ７．４でのＦｃＲｎに対するＦｃの親和性の増加は、血中へのＦｃの放出を妨げると考えられる。したがって、インビボでのＦｃの半減期を増加させるＦｃ変異は、理想的には、より高いｐＨでのＦｃの放出をなお可能にしながら、より低いｐＨでのＦｃＲｎ結合を増加させる。アミノ酸ヒスチジンは、６．０～７．４のｐＨ範囲でその荷電状態を変化させる。それ故、Ｆｃ／ＦｃＲｎ複合体中の重要な位置にＨｉｓ残基を見出すことは驚くべきことではない。

Ｇ．追加機能のための追加のＦｃバリアント
ｐＩアミノ酸変異に加えて、これらに限定されないが、１つ以上のＦｃγＲへの結合を改変すること、ＦｃＲｎへの結合の改変などを含む、様々な理由で実施され得るいくつかの有用なＦｃアミノ酸修飾が存在する。

したがって、本発明のタンパク質は、ｐＩバリアントおよび立体バリアントを含む、本明細書に概説したヘテロ二量体化バリアントを含むアミノ酸修飾を含むことができる。バリアントの各セットは独立して任意選択的に特定のヘテロ二量体タンパク質に含み得るかまたはそれから除外し得る。

Ｈ．ＦｃγＲバリアント
したがって、ＦｃγＲ受容体のうちの１つ以上への結合を改変するために実施され得るいくつかの有用なＦｃ置換が存在する。結合の増加ならびに結合の減少をもたらす置換が有用であり得る。例えば、ＦｃγＲＩＩＩａへの結合の増加は、一般に、ＡＤＣＣ（抗体依存性細胞媒介性細胞傷害性、すなわち、ＦｃγＲを発現する非特異的細胞傷害性細胞が標的細胞上の結合抗体を認識し、その後、標的細胞の溶解を引き起こす細胞媒介性反応）の増加をもたらすことが知られている。同様に、いくつかの状況下では、ＦｃγＲＩＩｂ（抑制性受容体）への結合の減少も有益であり得る。本発明で使用されるアミノ酸置換には、ＵＳＳＮ１１／１２４，６２０（特に図４１）、ＵＳＳＮ１１／１７４，２８７、ＵＳＳＮ１１／３９６，４９５、ＵＳＳＮ１１／５３８，４０６に列挙されるものが含まれ、それらのすべてはその全体が、具体的にはそこで開示されるバリアントが参照により、明示的に本明細書に組み込まれる。使用される特定のバリアントには、２３６Ａ、２３９Ｄ、２３９Ｅ、３３２Ｅ、３３２Ｄ、２３９Ｄ／３３２Ｅ、２６７Ｄ、２６７Ｅ、３２８Ｆ、２６７Ｅ／３２８Ｆ、２３６Ａ／３３２Ｅ、２３９Ｄ／３３２Ｅ／３３０Ｙ、２３９Ｄ、３３２Ｅ／３３０Ｌ、２４３Ａ、２４３Ｌ、２６４Ａ、２６４Ｖ、および２９９Ｔが含まれるがこれらに限定されない。

さらに、ＦｃγＲＩＩｃに対する親和性を増加させるアミノ酸置換もまた、本明細書に概説されるＦｃドメインバリアントに含まれ得る。例えば、ＵＳＳＮ１１／１２４，６２０およびＵＳＳＮ１４／５７８，３０５に記載される置換は有用である。

さらに、その全体が参照により本明細書に組み込まれるＵＳＳＮ１２／３４１，７６９に具体的に開示される、４３４Ｓ、４３４Ａ、４２８Ｌ、３０８Ｆ、２５９Ｉ、４２８Ｌ／４３４Ｓ、２５９Ｉ／３０８Ｆ、４３６Ｉ／４２８Ｌ、４３６ＩまたはＶ／４３４Ｓ、４３６Ｖ／４２８Ｌ、および２５９Ｉ／３０８Ｆ／４２８Ｌを含むがこれらに限定されない、ＦｃＲｎへの結合の増加および血清半減期の増加に使用される追加のＦｃ置換が存在する。

Ｉ．切断バリアント
同様に、機能性バリアントの別のカテゴリーは「ＦｃγＲ切断バリアント」または「Ｆｃノックアウト（ＦｃＫＯまたはＫＯ）」バリアントである。これらの実施形態では、いくつかの治療用途のために、さらなる作用機序を回避するために、１つ以上またはすべてのＦｃγ受容体（例えば、ＦｃγＲ１、ＦｃγＲＩＩａ、ＦｃγＲＩＩｂ、ＦｃγＲＩＩＩａなど）へのＦｃドメインの正常な結合を低減または除去することが望ましい。すなわち、例えば、多くの実施形態では、特に、免疫調節タンパク質の使用において、Ｆｃドメインのうちの１つが、１つ以上のＦｃγ受容体切断バリアントを含むように、ＦＣγＲＩＩＩａ結合を切断してＡＤＣＣ活性を排除または著しく低減することが望ましい。これらの切断バリアントは、それらのすべてが参照によりその全体が本明細書に組み込まれるＵＳＳＮ１５／１４１，３５０の図３１に示されており、ＥＵインデックスに従って、Ｇ２３６Ｒ／Ｌ３２８Ｒ、Ｅ２３３Ｐ／Ｌ２３４Ｖ／Ｌ２３５Ａ／Ｇ２３６ｄｅｌ／Ｓ２３９Ｋ、Ｅ２３３Ｐ／Ｌ２３４Ｖ／Ｌ２３５Ａ／Ｇ２３６ｄｅｌ／Ｓ２６７Ｋ、Ｅ２３３Ｐ／Ｌ２３４Ｖ／Ｌ２３５Ａ／Ｇ２３６ｄｅｌ／Ｓ２３９Ｋ／Ａ３２７Ｇ、Ｅ２３３Ｐ／Ｌ２３４Ｖ／Ｌ２３５Ａ／Ｇ２３６ｄｅｌ／Ｓ２６７Ｋ／Ａ３２７Ｇ、およびＥ２３３Ｐ／Ｌ２３４Ｖ／Ｌ２３５Ａ／Ｇ２３６ｄｅｌからなる群から選択される切断バリアントを用いる好ましい態様で、それぞれが独立して任意選択的に含まれるか除外することができる。本明細書で言及される切断バリアントは、ＦｃγＲ結合を切断するが、一般にはＦｃＲｎ結合を切断しないことに留意されたい。ＦｃγＲ結合を切断する有用な切断バリアント（時に「ノックアウト」または「ＫＯ」バリアントと呼ばれる）を図５に示す。

Ｊ．ヘテロダイマーおよびＦｃバリアントの組み合わせ
当業者には理解されるように、列挙されたヘテロ二量体化バリアント（スキューおよび／またはｐＩバリアントを含む）は全て、それらの「撚り度」または「単量体分配」を保持する限り任意の方法で任意に独立して組み合わせることができる。さらに、これらのバリアントは全て、ヘテロ二量体化フォーマットのいずれにも組み合わせることができる。

ｐＩバリアントの場合、特定の使用を見出す実施形態が図に示されているが、精製を促進するために２つの単量体間のｐＩの差異を変えるという基本的な規則に従って、他の組み合わせを生成することができる。

さらに、ヘテロ二量体化バリアント、スキュー、およびｐＩのいずれも、本明細書で一般的に概説されるように、Ｆｃ切断バリアント、Ｆｃバリアント、ＦｃＲｎバリアントと独立して任意に組み合わせることができる。

さらに、単量体Ｆｃドメインは、Ｃ２２０Ｓ／Ｓ２６７Ｋ／Ｌ３６８Ｄ／Ｋ３７０ＳまたはＣ２２０Ｓ／Ｓ２６７Ｋ／Ｓ３６４Ｋ／Ｅ３５７Ｑを含むアミノ酸置換のセットを含み得る。

さらに、ヘテロ二量体Ｆｃ融合タンパク質は、スキューバリアント（例えば、ＵＳＳＮ１５／１４１，３５０号の図１Ａ～１Ｃに示されるアミノ酸置換のセット、それらの全ては参照によりその全体が本明細書に組み込まれる）を含むことができ、特に有用なスキューバリアントは、Ｓ３６４Ｋ／Ｅ３５７Ｑ：Ｌ３６８Ｄ／Ｋ３７０Ｓ、Ｌ３６８Ｄ／Ｋ３７０Ｓ：Ｓ３６４Ｋ、Ｌ３６８Ｅ／Ｋ３７０Ｓ：Ｓ３６４Ｋ、Ｔ４１１Ｅ／Ｋ３６０Ｅ／Ｑ３６２Ｅ：Ｄ４０１Ｋ、Ｌ３６８Ｄ／Ｋ３７０Ｓ：Ｓ３６４Ｋ／Ｅ３５７Ｌ、Ｋ３７０Ｓ：Ｓ３６４Ｋ／Ｅ３５７Ｑ、Ｔ３６６Ｓ／Ｌ３６８Ａ／Ｙ４０７Ｖ：Ｔ３６６Ｗ、およびＴ３６６Ｓ／Ｌ３６８Ａ／Ｙ４０７Ｖ：Ｔ３６６Ｗ（任意に、架橋ジスルフィド、Ｔ３６６Ｓ／Ｌ３６８Ａ／Ｙ４０７Ｖ／Ｙ３４９Ｃ：Ｔ３６６Ｗ／Ｓ３５４Ｃを含む）からなる群から選択され、任意に切断バリアント、任意に荷電したドメインリンカー、および任意にｐＩバリアントを含むことができる。

いくつかの実施形態では、Ｆｃドメインは、ＥＵ付番に従って、２３６Ｒ、Ｓ２３９Ｄ、Ｓ２３９Ｅ、Ｆ２４３Ｌ、Ｍ２５２Ｙ、Ｖ２５９Ｉ、Ｓ２６７Ｄ、Ｓ２６７Ｅ、Ｓ６７Ｋ、Ｓ２９８Ａ、Ｖ３０８Ｆ、Ｌ３２８Ｆ、Ｌ３２８Ｒ、３３０Ｌ、Ｉ３３２Ｄ、Ｉ３３２Ｅ、Ｍ４２８Ｌ、Ｎ４３４Ａ、Ｎ４３４Ｓ、２３６Ｒ／Ｌ３２８Ｒ、Ｓ２３９Ｄ／Ｉ３３２Ｅ、２３６Ｒ／Ｌ３２８Ｆ、Ｖ２５９Ｉ／Ｖ３０８Ｆ、Ｓ２６７Ｅ／Ｌ３２８Ｆ、Ｍ４２８Ｌ／Ｎ４３Ｓ、Ｙ４３６Ｉ／Ｍ４２８Ｌ、Ｎ４３６Ｖ／Ｍ４２８Ｌ、Ｖ４３６Ｉ／Ｎ４３４Ｓ、Ｙ４３６Ｖ／Ｎ４３４Ｓ、Ｓ２３９Ｄ／Ｉ３３２Ｅ／３３０Ｌ、Ｍ２５２Ｙ／Ｓ５４Ｔ／Ｔ２５６Ｅ、Ｖ２５９Ｉ／Ｖ３０８Ｆ／Ｍ４２８Ｌ、Ｅ２３３Ｐ／Ｌ２３４Ｖ／Ｌ２３５Ａ／Ｇ２３６ｄｅｌ／Ｓ２３９Ｋ、Ｅ２３３Ｐ／Ｌ２３４Ｖ／Ｌ２３５Ａ／Ｇ２３６ｄｅｌ／Ｓ２３９Ｋ／Ａ３２７Ｇ、Ｅ２３３Ｐ／Ｌ２３４Ｖ／Ｌ２３５Ａ／Ｇ２３６ｄｅｌ／Ｓ２６７Ｋ／Ａ３２７Ｇ、Ｅ２３３Ｐ／Ｌ２３４Ｖ／Ｌ２３５Ａ／Ｇ２３６＿、およびＥ２３３Ｐ／Ｌ２３４Ｖ／Ｌ２３５Ａ／Ｇ２３６ｄｅｌ／Ｓ２６７Ｋからなる群から選択される１つ以上のアミノ酸置換を含む。

一実施形態では、本発明における使用を見出すスキューおよびｐＩバリアントの特定の組み合わせは、Ｔ３６６Ｓ／Ｌ３６８Ａ／Ｙ４０７Ｖ：Ｔ３６６Ｗ（任意に、架橋ジスルフィド、Ｔ３６６Ｓ／Ｌ３６８Ａ／Ｙ４０７Ｖ／Ｙ３４９Ｃ：Ｔ３６６Ｗ／Ｓ３５４Ｃを含む）であり、一方の単量体がＱ２９５Ｅ／Ｎ３８４Ｄ／Ｑ４１８Ｅ／Ｎ４８１Ｄを含み、他方が正に荷電されたドメインリンカーを含む。当該技術分野において理解されるように、「ノブインホール」バリアントは、ｐＩを変化させず、したがって、どちらの単量体にも使用することができる。

ある特定の実施形態では、Ｆｃドメインは、Ｍ４２８Ｌ／Ｎ４３４Ｓを含むアミノ酸置換を含む。いくつかの実施形態では、非標的化ＩＬ－１５／Ｒαヘテロ二量体Ｆｃ融合タンパク質の各Ｆｃドメインは、Ｍ４２８Ｌ／Ｎ４３４Ｓを含むアミノ酸置換を含む。

本明細書に記載されるＩＬ－１５およびＩＬ－１５Ｒαタンパク質を含むヘテロ二量体Ｆｃ融合タンパク質のＦｃドメインの有用な実施形態は、図６Ａ～６Ｅに提供されている。

Ｖ．ＩＬ－１５およびＩＬ－１５Ｒαタンパク質ドメイン
本発明は、ＩＬ－１５およびＩＬ－１５Ｒαタンパク質を含むヘテロ二量体Ｆｃ融合タンパク質を提供する。図に示されるように、ＩＬ－１５複合体は、いくつかの形態をとることができる。上述のように、ＩＬ－１５タンパク質それ自体は、ＩＬ－１５Ｒαタンパク質と複合体化するときよりも安定性が低い。当該技術分野において既知であるように、ＩＬ－１５Ｒαタンパク質は、「スシドメイン」を含み、これはＩＬ－１５結合活性を保持する受容体の最も短い領域である。したがって、全ＩＬ－１５Ｒαタンパク質を含むヘテロ二量体融合タンパク質を作製することができるが、本明細書における好ましい実施形態は、スシドメインのみを使用する複合体を含み、その配列を図に示す。

したがって、ＩＬ－１５複合体は一般に、ＩＬ－１５タンパク質およびＩＬ－１５Ｒαのスシドメイン（完全長配列が使用されるという別段の記載がない限り、「ＩＬ－１５Ｒα」、「ＩＬ－１５Ｒα（スシ）」、および「スシ」は全体を通じて交換可能に使用される）を含む。この複合体は３つの異なるフォーマットで使用することができる。図９Ａ、９Ｃ、９Ｄ、および９Ｆに示されるように、ＩＬ－１５タンパク質およびＩＬ－１５Ｒα（スシ）は、共有結合しているのではなく、むしろ通常のリガンド－リガンド相互作用によって自己集合している。本明細書でより十分に説明されるように、Ｆｃドメインに共有結合的に連結されるのはＩＬ－１５ドメインまたはスシドメインのいずれかであり得る（一般に、任意のドメインリンカーを使用する）。代替的に、それらは、概して図９Ｂ、９Ｅ、および９Ｇに示されるように、ドメインリンカーを使用して共有結合することができる。図９Ｂは、スシドメインをＮ末端ドメインとして示すが、これは逆にすることもできる。最後に、ＩＬ－１５ドメインおよびスシドメインの各々は、システインアミノ酸を含むように操作することができ、同様に、ジスルフィド結合を形成して、概して図３９Ａ～３９Ｄに示されるように、Ｆｃドメインに（任意のドメインリンカーを使用して）共有結合しているＩＬ－１５ドメインまたはスシドメインのいずれかと共に複合体を形成する。

いくつかの実施形態では、ヒトＩＬ－１５タンパク質は、ＮＣＢＩ参照配列番号ＮＰ＿０００５７６．１または配列番号１に示されるアミノ酸配列を有する。いくつかの場合では、ヒトＩＬ－１５のコード配列は、ＮＣＢＩ参照配列番号ＮＭ＿０００５８５に示される。本明細書に概説されるＦｃ融合ヘテロ二量体タンパク質の例示的なＩＬ－１５タンパク質は、配列番号２のアミノ酸配列（成熟ＩＬ－１５）または配列番号１のアミノ酸４９～１６２を有し得る。いくつかの実施形態では、ＩＬ－１５タンパク質は、配列番号２と少なくとも９０％、例えば、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、またはそれ以上の配列同一性を有する。いくつかの実施形態では、ＩＬ－１５タンパク質は、配列番号２のアミノ酸配列、ならびにＣ４２Ｓ、Ｌ４５Ｃ、Ｑ４８Ｃ、Ｖ４９Ｃ、Ｌ５２Ｃ、Ｅ５３Ｃ、Ｅ８７Ｃ、およびＥ８９Ｃからなる群から選択される１つ以上のアミノ酸置換を有する。Ｆｃ融合タンパク質のＩＬ－１５タンパク質は、１、２、３、４、５、６、７、８、または９個のアミノ酸置換を有し得る。

アミノ酸置換（複数可）は、ＩＬ－１５：ＩＬ－２βおよびＩＬ－１５：共通ガンマ鎖の界面での等配電子置換であり得る。いくつかの実施形態では、ヒトＩＬ－１５タンパク質は、Ｎ１Ｄ、Ｎ４Ｄ、Ｄ８Ｎ、Ｄ３０Ｎ、Ｄ６１Ｎ、Ｅ６４Ｑ、Ｎ６５Ｄ、Ｑ１０８Ｅ、およびそれらの任意の組み合わせからなる群から選択される１つ以上のアミノ酸置換を有する。いくつかの実施形態では、Ｆｃ融合タンパク質のヒトＩＬ－１５タンパク質は、配列番号２のアミノ酸配列およびアミノ酸置換Ｎ４Ｄ／Ｎ６５Ｄを有する。いくつかの場合では、Ｆｃ融合タンパク質のヒトＩＬ－１５タンパク質は、Ｎ４Ｄ／Ｎ６５Ｄ置換を含む配列番号２と少なくとも９７％または９８％の配列同一性を有する。いくつかの実施形態では、Ｆｃ融合タンパク質のヒトＩＬ－１５タンパク質は、配列番号２のアミノ酸配列およびアミノ酸置換Ｄ３０Ｎ／Ｎ６５Ｄを有する。いくつかの場合では、Ｆｃ融合タンパク質のヒトＩＬ－１５タンパク質は、Ｄ３０Ｎ／Ｎ６５Ｄ置換を含む配列番号２と少なくとも９７％または９８％の配列同一性を有する。いくつかの実施形態では、Ｆｃ融合タンパク質のヒトＩＬ－１５タンパク質は、配列番号２のアミノ酸配列およびアミノ酸置換Ｄ３０Ｎ／Ｅ６４Ｑ／Ｎ６５Ｄを有する。いくつかの場合では、Ｆｃ融合タンパク質のヒトＩＬ－１５タンパク質は、Ｄ３０Ｎ／Ｅ６４Ｑ／Ｎ６５Ｄ置換を含む配列番号２と少なくとも９６％または９７％の配列同一性を有する。

いくつかの実施形態では、Ｆｃ融合タンパク質のヒト成熟ＩＬ－１５タンパク質などのヒトＩＬ－１５タンパク質は、配列番号２のアミノ酸配列と同一である。いくつかの場合では、ヒト成熟ＩＬ－１５タンパク質などのヒトＩＬ－１５タンパク質は、アミノ酸置換を有さない。

いくつかの実施形態では、ヒト成熟ＩＬ－１５バリアントタンパク質は、１つ以上のアミノ酸変異（例えば、置換、挿入、および／または欠失）を有する。いくつかの場合では、変異により、ヒトＩＬ－１５受容体アルファ（ＩＬ－１５Ｒα）タンパク質とジスルフィド結合を形成することができるシステイン残基が導入される。

いくつかの実施形態では、ヒトＩＬ－１５受容体アルファ（ＩＬ－１５Ｒα）タンパク質は、ＮＣＢＩ参照配列番号ＮＰ＿００２１８０．１または配列番号３に示されるアミノ酸配列を有する。いくつかの場合では、ヒトＩＬ－１５Ｒαのコード配列は、ＮＣＢＩ参照配列番号ＮＭ＿００２１８９．３に示示される。本明細書に概説されるＦｃ融合ヘテロ二量体タンパク質の例示的なＩＬ－１５Ｒαタンパク質は、配列番号３のスシドメイン（例えば、配列番号３のアミノ酸３１～９５）、または換言すると配列番号４のアミノ酸配列を含むかまたはそれからなることができる。いくつかの実施形態では、ＩＬ－１５Ｒαタンパク質は、配列番号４のアミノ酸配列、ならびにＤ９６、Ｐ９７、Ａ９８、Ｄ９６／Ｐ９７、Ｄ９６／Ｃ９７、Ｄ９６／Ｐ９７／Ａ９８、Ｄ９６／Ｐ９７／Ｃ９８、およびＤ９６／Ｃ９７／Ａ９８からなる群から選択されるアミノ酸挿入を有し、アミノ酸位置は、完全長ヒトＩＬ－１５Ｒαタンパク質または配列番号３に対するものである。例えば、Ｄ（例えば、Ａｓｐ）、Ｐ（例えば、Ｐｒｏ）、Ａ（例えば、Ａｌａ）、ＤＰ（例えば、Ａｓｐ－Ｐｒｏ）、ＤＣ（例えば、Ａｓｐ－Ｃｙｓ）、ＤＰＡ（例えば、Ａｓｐ－Ｐｒｏ－Ａｌａ）、ＤＰＣ（例えば、Ａｓｐ－Ｐｒｏ－Ｃｙｓ）、またはＤＣＡ（例えば、Ａｓｐ－Ｃｙｓ－Ａｌａ）などのアミノ酸（複数可）は、配列番号４のＩＬ－１５Ｒαタンパク質のＣ末端に付加され得る。いくつかの実施形態では、ＩＬ－１５Ｒαタンパク質は、配列番号４のアミノ酸配列、ならびにＫ３４Ｃ、Ａ３７Ｃ、Ｇ３８Ｃ、Ｓ４０Ｃ、およびＬ４２Ｃからなる群から選択される１つ以上のアミノ酸置換を有し、アミノ酸位置は、配列番号４に対するものである。配列番号４のＩＬ－１５Ｒα（スシ）タンパク質は、１、２、３、４、５、６、７、８、またはそれ以上のアミノ酸変異（例えば、置換、挿入、および／または欠失）を有し得る。

配列番号１は、ＭＲＩＳＫＰＨＬＲＳＩＳＩＱＣＹＬＣＬＬＬＮＳＨＦＬＴＥＡＧＩＨＶＦＩＬＧＣＦＳＡＧＬＰＫＴＥＡＮＷＶＮＶＩＳＤＬＫＫＩＥＤＬＩＱＳＭＨＩＤＡＴＬＹＴＥＳＤＶＨＰＳＣＫＶＴＡＭＫＣＦＬＬＥＬＱＶＩＳＬＥＳＧＤＡＳＩＨＤＴＶＥＮＬＩＩＬＡＮＮＳＬＳＳＮＧＮＶＴＥＳＧＣＫＥＣＥＥＬＥＥＫＮＩＫＥＦＬＱＳＦＶＨＩＶＱＭＦＩＮＴＳである。

配列番号２は、ＮＷＶＮＶＩＳＤＬＫＫＩＥＤＬＩＱＳＭＨＩＤＡＴＬＹＴＥＳＤＶＨＰＳＣＫＶＴＡＭＫＣＦＬＬＥＬＱＶＩＳＬＥＳＧＤＡＳＩＨＤＴＶＥＮＬＩＩＬＡＮＮＳＬＳＳＮＧＮＶＴＥＳＧＣＫＥＣＥＥＬＥＥＫＮＩＫＥＦＬＱＳＦＶＨＩＶＱＭＦＩＮＴＳである。

配列番号３は、ＭＡＰＲＲＡＲＧＣＲＴＬＧＬＰＡＬＬＬＬＬＬＬＲＰＰＡＴＲＧＩＴＣＰＰＰＭＳＶＥＨＡＤＩＷＶＫＳＹＳＬＹＳＲＥＲＹＩＣＮＳＧＦＫＲＫＡＧＴＳＳＬＴＥＣＶＬＮＫＡＴＮＶＡＨＷＴＴＰＳＬＫＣＩＲＤＰＡＬＶＨＱＲＰＡＰＰＳＴＶＴＴＡＧＶＴＰＱＰＥＳＬＳＰＳＧＫＥＰＡＡＳＳＰＳＳＮＮＴＡＡＴＴＡＡＩＶＰＧＳＱＬＭＰＳＫＳＰＳＴＧＴＴＥＩＳＳＨＥＳＳＨＧＴＰＳＱＴＴＡＫＮＷＥＬＴＡＳＡＳＨＱＰＰＧＶＹＰＱＧＨＳＤＴＴＶＡＩＳＴＳＴＶＬＬＣＧＬＳＡＶＳＬＬＡＣＹＬＫＳＲＱＴＰＰＬＡＳＶＥＭＥＡＭＥＡＬＰＶＴＷＧＴＳＳＲＤＥＤＬＥＮＣＳＨＨＬである。

配列番号４は、ＩＴＣＰＰＰＭＳＶＥＨＡＤＩＷＶＫＳＹＳＬＹＳＲＥＲＹＩＣＮＳＧＦＫＲＫＡＧＴＳＳＬＴＥＣＶＬＮＫＡＴＮＶＡＨＷＴＴＰＳＬＫＣＩＲである。

いくつかの実施形態では、本発明は、アミノ酸バリアントＤ３０Ｎを有するヒトＩＬ－１５バリアントを含むタンパク質を提供する。いくつかの実施形態では、タンパク質は、配列番号２のアミノ酸配列およびＤ３０Ｎ置換を含む。いくつかの実施形態では、タンパク質は、配列番号２のアミノ酸配列および少なくともＤ３０Ｎ置換を含む。

いくつかの実施形態では、本発明は、アミノ酸バリアントＮ１Ｄを有するヒトＩＬ－１５バリアントを含むタンパク質を提供する。いくつかの実施形態では、タンパク質は、配列番号２のアミノ酸配列およびＮ１Ｄ置換を含む。いくつかの実施形態では、タンパク質は、配列番号２のアミノ酸配列および少なくともＮ１Ｄ置換を含む。

いくつかの実施形態では、本発明は、アミノ酸バリアントＮ４Ｄを有するヒトＩＬ－１５バリアントを含むタンパク質を提供する。いくつかの実施形態では、タンパク質は、配列番号２のアミノ酸配列およびＮ４Ｄ置換を含む。いくつかの実施形態では、タンパク質は、配列番号２のアミノ酸配列および少なくともＮ４Ｄ置換を含む。

いくつかの実施形態では、本発明は、アミノ酸バリアントＥ６４Ｑを有するヒトＩＬ－１５バリアントを含むタンパク質を提供する。いくつかの実施形態では、タンパク質は、配列番号２のアミノ酸配列およびＥ６４Ｑ置換を含む。いくつかの実施形態では、タンパク質は、配列番号２のアミノ酸配列および少なくともＥ６４Ｑ置換を含む。

いくつかの実施形態では、本発明は、アミノ酸バリアントＮ６５Ｄを有するヒトＩＬ－１５バリアントを含むタンパク質を提供する。いくつかの実施形態では、タンパク質は、配列番号２のアミノ酸配列およびＮ６５Ｄ置換を含む。いくつかの実施形態では、タンパク質は、配列番号２のアミノ酸配列および少なくともＮ６５Ｄ置換を含む。

いくつかの実施形態では、本発明は、アミノ酸置換Ｎ１Ｄ／Ｄ３０Ｎを有するヒトＩＬ－１５バリアントを含むタンパク質を提供する。いくつかの実施形態では、タンパク質は、配列番号２のアミノ酸配列およびＮ１Ｄ／Ｄ３０Ｎ置換を含む。いくつかの実施形態では、タンパク質は、配列番号２のアミノ酸配列および少なくともＮ１Ｄ／Ｄ３０Ｎ置換を含む。

いくつかの実施形態では、本発明は、アミノ酸置換Ｎ４Ｄ／Ｄ３０Ｎを有するヒトＩＬ－１５バリアントを含むタンパク質を提供する。いくつかの実施形態では、タンパク質は、配列番号２のアミノ酸配列およびＮ４Ｄ／Ｄ３０Ｎ置換を含む。いくつかの実施形態では、タンパク質は、配列番号２のアミノ酸配列および少なくともＮ４Ｄ／Ｄ３０Ｎ置換を含む。

いくつかの実施形態では、本発明は、アミノ酸置換Ｄ３０Ｎ／Ｅ６４Ｑを有するヒトＩＬ－１５バリアントを含むタンパク質を提供する。いくつかの実施形態では、タンパク質は、配列番号２のアミノ酸配列およびＤ３０Ｎ／Ｅ６４Ｑ置換を含む。いくつかの実施形態では、タンパク質は、配列番号２のアミノ酸配列および少なくともＤ３０Ｎ／Ｅ６４Ｑ置換を含む。

いくつかの実施形態では、本発明は、アミノ酸置換Ｄ３０Ｎ／Ｎ６５Ｄを有するヒトＩＬ－１５バリアントを含むタンパク質を提供する。いくつかの実施形態では、タンパク質は、配列番号２のアミノ酸配列およびＤ３０Ｎ／Ｎ６５Ｄ置換を含む。いくつかの実施形態では、タンパク質は、配列番号２のアミノ酸配列および少なくともＤ３０Ｎ／Ｎ６５Ｄ置換を含む。

いくつかの実施形態では、本発明は、アミノ酸置換Ｄ３０Ｎ／Ｅ６４Ｑ／Ｎ６５Ｄを有するヒトＩＬ－１５バリアントを含むタンパク質を提供する。いくつかの実施形態では、タンパク質は、配列番号２のアミノ酸配列およびＤ３０Ｎ／Ｅ６４Ｑ／Ｎ６５Ｄ置換を含む。いくつかの実施形態では、タンパク質は、配列番号２のアミノ酸配列および少なくともＤ３０Ｎ／Ｅ６４Ｑ／Ｎ６５Ｄ置換を含む。

ＶＩ．ドメインリンカー
いくつかの実施形態では、ＩＬ－１５タンパク質およびＩＬ－１５Ｒαタンパク質は、リンカーを介して共に結合している。任意に、タンパク質は、リンカーを介して結合していない。他の実施形態では、ＩＬ－１５タンパク質およびＩＬ－１５Ｒαタンパク質は、非共有結合している。

いくつかの実施形態では、ＩＬ－１５タンパク質は、リンカーを介してＦｃドメインに結合している。いくつかの実施形態では、ＩＬ－１５タンパク質は、例えば、リンカーなしで直接Ｆｃドメインに結合している。特定の実施形態では、ＩＬ－１５タンパク質は、ヒンジ領域またはその断片を介してＦｃドメインに結合している。いくつかの実施形態では、ＩＬ－１５Ｒαタンパク質は、リンカーを介してＦｃドメインに結合している。他の実施形態では、ＩＬ－１５Ｒαタンパク質は、例えば、リンカーなしで直接Ｆｃドメインに結合している。特定の実施形態では、ＩＬ－１５Ｒαタンパク質は、ヒンジ領域またはその断片を介してＦｃドメインに結合している。いくつかの場合では、リンカーは、ＩＬ－１５タンパク質またはＩＬ－１５Ｒαタンパク質をＦｃドメインに結合するためには使用されない。

いくつかの実施形態では、リンカーは、本明細書に概説される任意の２つのドメインを共に連結するために使用される「ドメインリンカー」である。任意の好適なリンカーを使用することができるが、多くの実施形態は、例えば、ｎが少なくとも０（および一般に０～１～２～３～４～５）である、（ＧＳ）ｎ、（ＧＳＧＧＳ）ｎ、（ＧＧＧＧＳ）ｎ、および（ＧＧＧＳ）ｎを含むグリシン－セリンポリマー、ならびに各ドメインがその生物学的機能を保持できるように十分な長さおよび柔軟性を有する２つのドメインの組換え結合を可能にする任意のペプチド配列を利用する。ある特定の場合では、有用なリンカーは、（ＧＧＧＧＳ）_０または（ＧＧＧＧＳ）_１または（ＧＧＧＧＳ）_２を含む。有用なドメインリンカーを図７に示す。いくつかの場合では、以下に概説されるように「撚り度」に注意が払われて、荷電ドメインリンカーは、図７および本明細書において論議され示されるように使用され得る。

ＶＩＩ．本発明の有用なフォーマット
図９Ａ～９Ｇおよび図３９Ａ～３９Ｄに示されるように、本発明のＩＬ－１５／Ｒα－Ｆｃ融合タンパク質のいくつかの有用なフォーマットが存在する。一般に、本発明のヘテロ二量体融合タンパク質は、２つの機能的構成要素：ＩＬ－１５／ＩＬ－１５Ｒα（スシ）構成要素およびＦｃ構成要素を有し、本明細書で概説されるようにその両方は異なる形態をとることができ、その両方が任意の構成で他の構成要素と組み合わされ得る。

第１および第２のＦｃドメインは、ＥＵ付番に従って、ａ）Ｓ２６７Ｋ／Ｌ３６８Ｄ／Ｋ３７０Ｓ：Ｓ２６７Ｋ／ＬＳ３６４Ｋ／Ｅ３５７Ｑ、ｂ）Ｓ３６４Ｋ／Ｅ３５７Ｑ：Ｌ３６８Ｄ／Ｋ３７０Ｓ、ｃ）Ｌ３６８Ｄ／Ｋ３７０Ｓ：Ｓ３６４Ｋ、ｄ）Ｌ３６８Ｅ／Ｋ３７０Ｓ：Ｓ３６４Ｋ、ｅ）Ｔ４１１Ｅ／Ｋ３６０Ｅ／Ｑ３６２Ｅ：Ｄ４０１Ｋ、ｆ）Ｌ３６８Ｄ／Ｋ３７０Ｓ：Ｓ３６４Ｋ／Ｅ３５７Ｌ、およびｇ）Ｋ３７０Ｓ：Ｓ３６４Ｋ／Ｅ３５７Ｑからなる群から選択されるアミノ酸置換のセットを有し得る。いくつかの実施形態では、第１のＦｃドメインは、Ｌ３６８Ｄ／Ｋ３７０Ｓ置換を有し、第２のＦｃドメインは、Ｓ３６４Ｋ／Ｅ３５７Ｑ置換を有する。いくつかの実施形態では、第１のＦｃドメインは、Ｓ３６４Ｋ／Ｅ３５７Ｑ置換を有し、第２のＦｃドメインは、Ｌ３６８Ｄ／Ｋ３７０Ｓ置換を有する。

いくつかの実施形態では、第１および／または第２のＦｃドメインは、ＥＵ付番に従って、Ｑ２９５Ｅ／Ｎ３８４Ｄ／Ｑ４１８Ｅ／Ｎ４２１Ｄを含むアミノ酸置換の追加のセットを有する。

任意に、第１および／または第２のＦｃドメインは、ＥＵ付番に従って、Ｇ２３６Ｒ／Ｌ３２８Ｒ、Ｅ２３３Ｐ／Ｌ２３４Ｖ／Ｌ２３５Ａ／Ｇ２３６ｄｅｌ／Ｓ２３９Ｋ、Ｅ２３３Ｐ／Ｌ２３４Ｖ／Ｌ２３５Ａ／Ｇ２３６ｄｅｌ／Ｓ２６７Ｋ、Ｅ２３３Ｐ／Ｌ２３４Ｖ／Ｌ２３５Ａ／Ｇ２３６ｄｅｌ／Ｓ２３９Ｋ／Ａ３２７Ｇ、Ｅ２３３Ｐ／Ｌ２３４Ｖ／Ｌ２３５Ａ／Ｇ２３６ｄｅｌ／Ｓ２６７Ｋ／Ａ３２７Ｇ、およびＥ２３３Ｐ／Ｌ２３４Ｖ／Ｌ２３５Ａ／Ｇ２３６ｄｅｌからなるアミノ酸置換の追加のセットを有する。

任意に、第１および／または第２のＦｃドメインは、半減期延長のために４２８Ｌ／４３４Ｓバリアントを有する。任意に、第１および／または第２のＦｃドメインは、半減期延長のためにＭ４２８Ｌ／Ｎ４３４Ｓバリアントを有する。いくつかの実施形態では、第１のＦｃドメインは、Ｍ４２８Ｌ／Ｎ４３４Ｓ置換を有し、第２のＦｃドメインは、Ｍ４２８Ｌ／Ｎ４３４Ｓ置換を有する

Ａ．ＩＬ－１５／Ｒα－ヘテロＦｃフォーマット
この実施形態では、図９Ｂに示されるように、ヘテロ二量体融合タンパク質は、２つの単量体（２つのＦｃ単量体）を含む。第１の単量体は、（Ｎ末端からＣ末端にかけて）ＩＬ－１５－任意のドメインリンカー－ＣＨ２－ＣＨ３を含み、ドメインリンカーは、ヒンジの全部または一部を時に含む。第２の単量体は、ＩＬ－１５／Ｒα（スシ）ドメイン－任意のドメインリンカー－ＣＨ２－ＣＨ３を含み、ドメインリンカーは、ヒンジの全部または一部を時に含む。

ＩＬ－１５／Ｒα－ヘテロＦｃフォーマットにおいて、好ましい実施形態は、スキューバリアント対Ｓ３６４Ｋ／Ｅ３５７Ｑ：Ｌ３６８Ｄ／Ｋ３７０Ｓを利用する。いくつかの場合では、Ｌ３６８Ｄ／Ｋ３７０Ｓバリアントは第１の単量体にあり、Ｓ３５４Ｋ／Ｅ３５７Ｑバリアントは第２の単量体にある。

ＩＬ－１５／Ｒα－ヘテロＦｃフォーマットにおいて、好ましい実施形態は、ＩＬ－１５のＤ３０Ｎ／Ｎ６５Ｄバリアントを利用する。

ＩＬ－１５／Ｒα－ヘテロＦｃフォーマットにおいて、好ましい実施形態は、ＩＬ－１５のＤ３０Ｎ／Ｎ６５Ｄバリアントおよびスキューバリアント対Ｓ３６４Ｋ／Ｅ３５７Ｑ：Ｌ３６８Ｄ／Ｋ３７０Ｓを利用する。ＩＬ－１５／Ｒα－ヘテロＦｃフォーマットにおいて、好ましい実施形態は、ＩＬ－１５のＤ３０Ｎ／Ｎ６５Ｄバリアント、スキューバリアント対Ｓ３６４Ｋ／Ｅ３５７Ｑ：Ｌ３６８Ｄ／Ｋ３７０Ｓ、各々のＦｃ単量体において４２８Ｌ／４３４Ｓバリアントを利用する。ＩＬ－１５／Ｒα－ヘテロＦｃフォーマットにおいて、好ましい実施形態は、ＩＬ－１５のＤ３０Ｎ／Ｎ６５Ｄバリアント、スキューバリアント対Ｓ３６４Ｋ／Ｅ３５７Ｑ：Ｌ３６８Ｄ／Ｋ３７０Ｓ、各々のＦｃ単量体においてＭ４２８Ｌ／Ｎ４３４Ｓバリアントを利用する。

いくつかの実施形態では、ＩＬ－１５／Ｒα－ヘテロＦｃ融合タンパク質は、ヒト成熟ＩＬ－１５のＤ３０Ｎ／Ｎ６５Ｄバリアント、ＩＬ－１５Ｒα（スシ）ドメイン、および図６Ａに示されるアミノ酸置換を含むＦｃ単量体を含む。いくつかの実施形態では、ＩＬ－１５／Ｒα－ヘテロＦｃ融合タンパク質は、ヒト成熟ＩＬ－１５のＤ３０Ｎ／Ｎ６５Ｄバリアント；ヒトＩＬ－１５Ｒα（スシ）ドメイン；アミノ酸置換Ｃ２２０Ｓ、ヘテロ二量体ｐＩ置換Ｌ３６８Ｄ／Ｋ３７０Ｓ、等配電子ｐＩ置換Ｑ２９５Ｅ／Ｎ３８４Ｄ／Ｑ４１８Ｅ／Ｎ４２１Ｄ、切断置換Ｅ２３３Ｐ／Ｌ２３４Ｖ／Ｌ２３５Ａ／Ｇ２３６ｄｅｌ／Ｓ２６７Ｋを含むＩＬ－１５－Ｆｃ単量体；ならびにアミノ酸置換Ｃ２２０Ｓ、ヘテロ二量体ｐＩ置換Ｓ３６４Ｋ／Ｅ３５７Ｑ、および切断置換Ｅ２３３Ｐ／Ｌ２３４Ｖ／Ｌ２３５Ａ／Ｇ２３６ｄｅｌ／Ｓ２６７Ｋを含むＩＬ－１５Ｒα（スシ）－Ｆｃ単量体を含む。いくつかの実施形態では、ＩＬ－１５／Ｒα－ヘテロＦｃ融合タンパク質は、ヒト成熟ＩＬ－１５のＤ３０Ｎ／Ｎ６５Ｄバリアント；ヒトＩＬ－１５Ｒα（スシ）ドメイン；アミノ酸置換Ｃ２２０Ｓ、ヘテロ二量体ｐＩ置換Ｌ３６８Ｄ／Ｋ３７０Ｓ、等配電子ｐＩ置換Ｑ２９５Ｅ／Ｎ３８４Ｄ／Ｑ４１８Ｅ／Ｎ４２１Ｄ、切断置換Ｅ２３３Ｐ／Ｌ２３４Ｖ／Ｌ２３５Ａ／Ｇ２３６ｄｅｌ／Ｓ２６７Ｋ、およびＦｃＲｎ置換Ｍ４２８Ｌ／Ｎ４３４Ｓを含むＩＬ－１５－Ｆｃ単量体；ならびにアミノ酸置換Ｃ２２０Ｓ、ヘテロ二量体ｐＩ置換Ｓ３６４Ｋ／Ｅ３５７Ｑ、切断置換Ｅ２３３Ｐ／Ｌ２３４Ｖ／Ｌ２３５Ａ／Ｇ２３６ｄｅｌ／Ｓ２６７Ｋ、およびＦｃＲｎ置換Ｍ４２８Ｌ／Ｎ４３４Ｓを含むＩＬ－１５Ｒα（スシ）－Ｆｃ単量体を含む。

ＩＬ－１５／Ｒα－ヘテロＦｃフォーマットにおいて、好ましい実施形態は、ＩＬ－１５Ｄ３０Ｎ／Ｅ６４Ｑ／Ｎ６５Ｄバリアントを利用する。

ＩＬ－１５／Ｒα－ヘテロＦｃフォーマットにおいて、好ましい実施形態は、ＩＬ－１５のＤ３０Ｎ／Ｅ６４Ｑ／Ｎ６５Ｄバリアントおよびスキューバリアント対Ｓ３６４Ｋ／Ｅ３５７Ｑ：Ｌ３６８Ｄ／Ｋ３７０Ｓを利用する。

ＩＬ－１５／Ｒα－ヘテロＦｃフォーマットにおいて、好ましい実施形態は、ＩＬ－１５のＤ３０Ｎ／Ｅ６４Ｑ／Ｎ６５Ｄバリアント、スキューバリアント対Ｓ３６４Ｋ／Ｅ３５７Ｑ：Ｌ３６８Ｄ／Ｋ３７０Ｓ、および各々のＦｃ単量体において４２８Ｌ／４３４Ｓバリアントを利用する。ＩＬ－１５／Ｒα－ヘテロＦｃフォーマットにおいて、好ましい実施形態は、ＩＬ－１５のＤ３０Ｎ／Ｅ６４Ｑ／Ｎ６５Ｄバリアント、スキューバリアント対Ｓ３６４Ｋ／Ｅ３５７Ｑ：Ｌ３６８Ｄ／Ｋ３７０Ｓ、および各々のＦｃ単量体においてＭ４２８Ｌ／Ｎ４３４Ｓバリアントを利用する。いくつかの実施形態では、ＩＬ－１５／Ｒα－ヘテロＦｃ融合タンパク質は、ヒト成熟ＩＬ－１５のＤ３０Ｎ／Ｅ６４Ｑ／Ｎ６５Ｄバリアント、ＩＬ－１５Ｒα（スシ）ドメイン、および図６Ａに示されるアミノ酸置換を含むＦｃ単量体を含む。いくつかの実施形態では、ＩＬ－１５／Ｒα－ヘテロＦｃ融合タンパク質は、ヒト成熟ＩＬ－１５のＤ３０Ｎ／Ｅ６４Ｑ／Ｎ６５Ｄバリアント；ヒトＩＬ－１５Ｒα（スシ）ドメイン；アミノ酸置換Ｃ２２０Ｓ、ヘテロ二量体ｐＩ置換Ｌ３６８Ｄ／Ｋ３７０Ｓ、等配電子ｐＩ置換Ｑ２９５Ｅ／Ｎ３８４Ｄ／Ｑ４１８Ｅ／Ｎ４２１Ｄ、切断置換Ｅ２３３Ｐ／Ｌ２３４Ｖ／Ｌ２３５Ａ／Ｇ２３６ｄｅｌ／Ｓ２６７Ｋを含むＩＬ－１５－Ｆｃ単量体；ならびにアミノ酸置換Ｃ２２０Ｓ、ヘテロ二量体ｐＩ置換Ｓ３６４Ｋ／Ｅ３５７Ｑ、および切断置換Ｅ２３３Ｐ／Ｌ２３４Ｖ／Ｌ２３５Ａ／Ｇ２３６ｄｅｌ／Ｓ２６７Ｋを含むＩＬ－１５Ｒα（スシ）－Ｆｃ単量体を含む。いくつかの実施形態では、ＩＬ－１５／Ｒα－ヘテロＦｃ融合タンパク質は、ヒト成熟ＩＬ－１５のＤ３０Ｎ／Ｅ６４Ｑ／Ｎ６５Ｄバリアント；ヒトＩＬ－１５Ｒα（スシ）ドメイン；アミノ酸置換Ｃ２２０Ｓ、ヘテロ二量体ｐＩ置換Ｌ３６８Ｄ／Ｋ３７０Ｓ、等配電子ｐＩ置換Ｑ２９５Ｅ／Ｎ３８４Ｄ／Ｑ４１８Ｅ／Ｎ４２１Ｄ、切断置換Ｅ２３３Ｐ／Ｌ２３４Ｖ／Ｌ２３５Ａ／Ｇ２３６ｄｅｌ／Ｓ２６７Ｋ、およびＦｃＲｎ置換Ｍ４２８Ｌ／Ｎ４３４Ｓを含むＩＬ－１５－Ｆｃ単量体；ならびにアミノ酸置換Ｃ２２０Ｓ、ヘテロ二量体ｐＩ置換Ｓ３６４Ｋ／Ｅ３５７Ｑ、切断置換Ｅ２３３Ｐ／Ｌ２３４Ｖ／Ｌ２３５Ａ／Ｇ２３６ｄｅｌ／Ｓ２６７Ｋ、およびＦｃＲｎ置換Ｍ４２８Ｌ／Ｎ４３４Ｓを含むＩＬ－１５Ｒα（スシ）－Ｆｃ単量体を含む。

ＩＬ－１５／Ｒα－ヘテロＦｃフォーマットにおいて、好ましい実施形態は、ＩＬ－１５のＮ４Ｄバリアントを利用する。

ＩＬ－１５／Ｒα－ヘテロＦｃフォーマットにおいて、好ましい実施形態は、ＩＬ－１５のＮ４Ｄバリアントおよびスキューバリアント対Ｓ３６４Ｋ／Ｅ３５７Ｑ：Ｌ３６８Ｄ／Ｋ３７０Ｓを利用する。ＩＬ－１５／Ｒα－ヘテロＦｃフォーマットにおいて、好ましい実施形態は、ＩＬ－１５のＮ４Ｄバリアント、スキューバリアント対Ｓ３６４Ｋ／Ｅ３５７Ｑ：Ｌ３６８Ｄ／Ｋ３７０Ｓ、および各々のＦｃ単量体において４２８Ｌ／４３４Ｓバリアントを利用する。ＩＬ－１５／Ｒα－ヘテロＦｃフォーマットにおいて、好ましい実施形態は、ＩＬ－１５のＮ４Ｄバリアント、スキューバリアント対Ｓ３６４Ｋ／Ｅ３５７Ｑ：Ｌ３６８Ｄ／Ｋ３７０Ｓ、および各々のＦｃ単量体においてＭ４２８Ｌ／Ｎ４３４Ｓバリアントを利用する。いくつかの実施形態では、ＩＬ－１５／Ｒα－ヘテロＦｃ融合タンパク質は、ヒト成熟ＩＬ－１５のＮ４Ｄバリアント、ＩＬ－１５Ｒα（スシ）ドメイン、および図６Ａに示されるアミノ酸置換を含むＦｃ単量体を含む。いくつかの実施形態では、ＩＬ－１５／Ｒα－ヘテロＦｃ融合タンパク質は、ヒト成熟ＩＬ－１５のＮ４Ｄバリアント；ヒトＩＬ－１５Ｒα（スシ）ドメイン；アミノ酸置換Ｃ２２０Ｓ、ヘテロ二量体ｐＩ置換Ｌ３６８Ｄ／Ｋ３７０Ｓ、等配電子ｐＩ置換Ｑ２９５Ｅ／Ｎ３８４Ｄ／Ｑ４１８Ｅ／Ｎ４２１Ｄ、切断置換Ｅ２３３Ｐ／Ｌ２３４Ｖ／Ｌ２３５Ａ／Ｇ２３６ｄｅｌ／Ｓ２６７Ｋを含むＩＬ－１５－Ｆｃ単量体；ならびにアミノ酸置換Ｃ２２０Ｓ、ヘテロ二量体ｐＩ置換Ｓ３６４Ｋ／Ｅ３５７Ｑ、および切断置換Ｅ２３３Ｐ／Ｌ２３４Ｖ／Ｌ２３５Ａ／Ｇ２３６ｄｅｌ／Ｓ２６７Ｋを含むＩＬ－１５Ｒα（スシ）－Ｆｃ単量体を含む。いくつかの実施形態では、ＩＬ－１５／Ｒα－ヘテロＦｃ融合タンパク質は、ヒト成熟ＩＬ－１５のＮ４Ｄバリアント；ヒトＩＬ－１５Ｒα（スシ）ドメイン；アミノ酸置換Ｃ２２０Ｓ、ヘテロ二量体ｐＩ置換Ｌ３６８Ｄ／Ｋ３７０Ｓ、等配電子ｐＩ置換Ｑ２９５Ｅ／Ｎ３８４Ｄ／Ｑ４１８Ｅ／Ｎ４２１Ｄ、切断置換Ｅ２３３Ｐ／Ｌ２３４Ｖ／Ｌ２３５Ａ／Ｇ２３６ｄｅｌ／Ｓ２６７Ｋ、およびＦｃＲｎ置換Ｍ４２８Ｌ／Ｎ４３４Ｓを含むＩＬ－１５－Ｆｃ単量体；ならびにアミノ酸置換Ｃ２２０Ｓ、ヘテロ二量体ｐＩ置換Ｓ３６４Ｋ／Ｅ３５７Ｑ、切断置換Ｅ２３３Ｐ／Ｌ２３４Ｖ／Ｌ２３５Ａ／Ｇ２３６ｄｅｌ／Ｓ２６７Ｋ、およびＦｃＲｎ置換Ｍ４２８Ｌ／Ｎ４３４Ｓを含むＩＬ－１５Ｒα（スシ）－Ｆｃ単量体を含む。

ＩＬ－１５／Ｒα－ヘテロＦｃフォーマットにおいて、好ましい実施形態は、ＩＬ－１５のＮ６５Ｄバリアントを利用する。ＩＬ－１５／Ｒα－ヘテロＦｃフォーマットにおいて、好ましい実施形態は、ＩＬ－１５のＮ６５Ｄバリアントおよびスキューバリアント対Ｓ３６４Ｋ／Ｅ３５７Ｑ：Ｌ３６８Ｄ／Ｋ３７０Ｓを利用する。

ＩＬ－１５／Ｒα－ヘテロＦｃフォーマットにおいて、好ましい実施形態は、ＩＬ－１５のＮ６５Ｄバリアント、スキューバリアント対Ｓ３６４Ｋ／Ｅ３５７Ｑ：Ｌ３６８Ｄ／Ｋ３７０Ｓ、および各々のＦｃ単量体において４２８Ｌ／４３４Ｓバリアントを利用する。ＩＬ－１５／Ｒα－ヘテロＦｃフォーマットにおいて、好ましい実施形態は、ＩＬ－１５のＮ６５Ｄバリアント、スキューバリアント対Ｓ３６４Ｋ／Ｅ３５７Ｑ：Ｌ３６８Ｄ／Ｋ３７０Ｓ、および各々のＦｃ単量体においてＭ４２８Ｌ／Ｎ４３４Ｓバリアントを利用する。いくつかの実施形態では、ＩＬ－１５／Ｒα－ヘテロＦｃ融合タンパク質は、ヒト成熟ＩＬ－１５のＮ６５Ｄバリアント、ＩＬ－１５Ｒα（スシ）ドメイン、および図６Ａに示されるアミノ酸置換を含むＦｃ単量体を含む。いくつかの実施形態では、ＩＬ－１５／Ｒα－ヘテロＦｃ融合タンパク質は、ヒト成熟ＩＬ－１５のＮ６５Ｄバリアント；ヒトＩＬ－１５Ｒα（スシ）ドメイン；アミノ酸置換Ｃ２２０Ｓ、ヘテロ二量体ｐＩ置換Ｌ３６８Ｄ／Ｋ３７０Ｓ、等配電子ｐＩ置換Ｑ２９５Ｅ／Ｎ３８４Ｄ／Ｑ４１８Ｅ／Ｎ４２１Ｄ、切断置換Ｅ２３３Ｐ／Ｌ２３４Ｖ／Ｌ２３５Ａ／Ｇ２３６ｄｅｌ／Ｓ２６７Ｋを含むＩＬ－１５－Ｆｃ単量体；ならびにアミノ酸置換Ｃ２２０Ｓ、ヘテロ二量体ｐＩ置換Ｓ３６４Ｋ／Ｅ３５７Ｑ、および切断置換Ｅ２３３Ｐ／Ｌ２３４Ｖ／Ｌ２３５Ａ／Ｇ２３６ｄｅｌ／Ｓ２６７Ｋを含むＩＬ－１５Ｒα（スシ）－Ｆｃ単量体を含む。いくつかの実施形態では、ＩＬ－１５／Ｒα－ヘテロＦｃ融合タンパク質は、ヒト成熟ＩＬ－１５のＮ６５Ｄバリアント；ヒトＩＬ－１５Ｒα（スシ）ドメイン；アミノ酸置換Ｃ２２０Ｓ、ヘテロ二量体ｐＩ置換Ｌ３６８Ｄ／Ｋ３７０Ｓ、等配電子ｐＩ置換Ｑ２９５Ｅ／Ｎ３８４Ｄ／Ｑ４１８Ｅ／Ｎ４２１Ｄ、切断置換Ｅ２３３Ｐ／Ｌ２３４Ｖ／Ｌ２３５Ａ／Ｇ２３６ｄｅｌ／Ｓ２６７Ｋ、およびＦｃＲｎ置換Ｍ４２８Ｌ／Ｎ４３４Ｓを含むＩＬ－１５－Ｆｃ単量体；ならびにアミノ酸置換Ｃ２２０Ｓ、ヘテロ二量体ｐＩ置換Ｓ３６４Ｋ／Ｅ３５７Ｑ、切断置換Ｅ２３３Ｐ／Ｌ２３４Ｖ／Ｌ２３５Ａ／Ｇ２３６ｄｅｌ／Ｓ２６７Ｋ、およびＦｃＲｎ置換Ｍ４２８Ｌ／Ｎ４３４Ｓを含むＩＬ－１５Ｒα（スシ）－Ｆｃ単量体を含む。

ＩＬ－１５／Ｒα－ヘテロＦｃフォーマットにおいて、好ましい実施形態は、ＩＬ－１５のＮ４Ｄ／Ｎ６５Ｄバリアントを利用する。

ＩＬ－１５／Ｒα－ヘテロＦｃフォーマットにおいて、好ましい実施形態は、ＩＬ－１５のＮ４Ｄ／Ｎ６５Ｄバリアントおよびスキューバリアント対Ｓ３６４Ｋ／Ｅ３５７Ｑ：Ｌ３６８Ｄ／Ｋ３７０Ｓを利用する。

ＩＬ－１５／Ｒα－ヘテロＦｃフォーマットにおいて、好ましい実施形態は、ＩＬ－１５のＮ４Ｄ／Ｎ６５Ｄバリアント、スキューバリアント対Ｓ３６４Ｋ／Ｅ３５７Ｑ：Ｌ３６８Ｄ／Ｋ３７０Ｓ、各々のＦｃ単量体において４２８Ｌ／４３４Ｓバリアントを利用する。ＩＬ－１５／Ｒα－ヘテロＦｃフォーマットにおいて、好ましい実施形態は、ＩＬ－１５のＮ４Ｄ／Ｎ６５Ｄバリアント、スキューバリアント対Ｓ３６４Ｋ／Ｅ３５７Ｑ：Ｌ３６８Ｄ／Ｋ３７０Ｓ、各々のＦｃ単量体においてＭ４２８Ｌ／Ｎ４３４Ｓバリアントを利用する。いくつかの実施形態では、ＩＬ－１５／Ｒα－ヘテロＦｃ融合タンパク質は、ヒト成熟ＩＬ－１５のＮ４Ｄ／Ｎ６５Ｄバリアント、ＩＬ－１５Ｒα（スシ）ドメイン、および図６Ａに示されるアミノ酸置換を含むＦｃ単量体を含む。いくつかの実施形態では、ＩＬ－１５／Ｒα－ヘテロＦｃ融合タンパク質は、ヒト成熟ＩＬ－１５のＮ４Ｄ／Ｎ６５Ｄバリアント；ヒトＩＬ－１５Ｒα（スシ）ドメイン；アミノ酸置換Ｃ２２０Ｓ、ヘテロ二量体ｐＩ置換Ｌ３６８Ｄ／Ｋ３７０Ｓ、等配電子ｐＩ置換Ｑ２９５Ｅ／Ｎ３８４Ｄ／Ｑ４１８Ｅ／Ｎ４２１Ｄ、切断置換Ｅ２３３Ｐ／Ｌ２３４Ｖ／Ｌ２３５Ａ／Ｇ２３６ｄｅｌ／Ｓ２６７Ｋを含むＩＬ－１５－Ｆｃ単量体；ならびにアミノ酸置換Ｃ２２０Ｓ、ヘテロ二量体ｐＩ置換Ｓ３６４Ｋ／Ｅ３５７Ｑ、および切断置換Ｅ２３３Ｐ／Ｌ２３４Ｖ／Ｌ２３５Ａ／Ｇ２３６ｄｅｌ／Ｓ２６７Ｋを含むＩＬ－１５Ｒα（スシ）－Ｆｃ単量体を含む。いくつかの実施形態では、ＩＬ－１５／Ｒα－ヘテロＦｃ融合タンパク質は、ヒト成熟ＩＬ－１５のＮ４Ｄ／Ｎ６５Ｄバリアント；ヒトＩＬ－１５Ｒα（スシ）ドメイン；アミノ酸置換Ｃ２２０Ｓ、ヘテロ二量体ｐＩ置換Ｌ３６８Ｄ／Ｋ３７０Ｓ、等配電子ｐＩ置換Ｑ２９５Ｅ／Ｎ３８４Ｄ／Ｑ４１８Ｅ／Ｎ４２１Ｄ、切断置換Ｅ２３３Ｐ／Ｌ２３４Ｖ／Ｌ２３５Ａ／Ｇ２３６ｄｅｌ／Ｓ２６７Ｋ、およびＦｃＲｎ置換Ｍ４２８Ｌ／Ｎ４３４Ｓを含むＩＬ－１５－Ｆｃ単量体；ならびにアミノ酸置換Ｃ２２０Ｓ、ヘテロ二量体ｐＩ置換Ｓ３６４Ｋ／Ｅ３５７Ｑ、切断置換Ｅ２３３Ｐ／Ｌ２３４Ｖ／Ｌ２３５Ａ／Ｇ２３６ｄｅｌ／Ｓ２６７Ｋ、およびＦｃＲｎ置換Ｍ４２８Ｌ／Ｎ４３４Ｓを含むＩＬ－１５Ｒα（スシ）－Ｆｃ単量体を含む。

ＩＬ－１５／Ｒα－ヘテロＦｃフォーマットでは、好ましい実施形態は、ＩＬ－１５のＮ１Ｄ／Ｎ６５Ｄバリアントを利用する。

ＩＬ－１５／Ｒα－ヘテロＦｃフォーマットにおいて、好ましい実施形態は、ＩＬ－１５のＮ１Ｄ／Ｎ６５Ｄバリアントおよびスキューバリアント対Ｓ３６４Ｋ／Ｅ３５７Ｑ：Ｌ３６８Ｄ／Ｋ３７０Ｓを利用する。

ＩＬ－１５／Ｒα－ヘテロＦｃフォーマットにおいて、好ましい実施形態は、ＩＬ－１５のＮ１Ｄ／Ｎ６５Ｄバリアント、スキューバリアント対Ｓ３６４Ｋ／Ｅ３５７Ｑ：Ｌ３６８Ｄ／Ｋ３７０Ｓ、各々のＦｃ単量体において４２８Ｌ／４３４Ｓバリアントを利用する。ＩＬ－１５／Ｒα－ヘテロＦｃフォーマットにおいて、好ましい実施形態は、ＩＬ－１５のＮ１Ｄ／Ｎ６５Ｄバリアント、スキューバリアント対Ｓ３６４Ｋ／Ｅ３５７Ｑ：Ｌ３６８Ｄ／Ｋ３７０Ｓ、各々のＦｃ単量体においてＭ４２８Ｌ／Ｎ４３４Ｓバリアントを利用する。いくつかの実施形態では、ＩＬ－１５／Ｒα－ヘテロＦｃ融合タンパク質は、ヒト成熟ＩＬ－１５のＮ１Ｄ／Ｎ６５Ｄバリアント、ＩＬ－１５Ｒα（スシ）ドメイン、および図６Ａに示されるアミノ酸置換を含むＦｃ単量体を含む。いくつかの実施形態では、ＩＬ－１５／Ｒα－ヘテロＦｃ融合タンパク質は、ヒト成熟ＩＬ－１５のＮ１Ｄ／Ｎ６５Ｄバリアント；ヒトＩＬ－１５Ｒα（スシ）ドメイン；アミノ酸置換Ｃ２２０Ｓ、ヘテロ二量体ｐＩ置換Ｌ３６８Ｄ／Ｋ３７０Ｓ、等配電子ｐＩ置換Ｑ２９５Ｅ／Ｎ３８４Ｄ／Ｑ４１８Ｅ／Ｎ４２１Ｄ、切断置換Ｅ２３３Ｐ／Ｌ２３４Ｖ／Ｌ２３５Ａ／Ｇ２３６ｄｅｌ／Ｓ２６７Ｋを含むＩＬ－１５－Ｆｃ単量体；ならびにアミノ酸置換Ｃ２２０Ｓ、ヘテロ二量体ｐＩ置換Ｓ３６４Ｋ／Ｅ３５７Ｑ、および切断置換Ｅ２３３Ｐ／Ｌ２３４Ｖ／Ｌ２３５Ａ／Ｇ２３６ｄｅｌ／Ｓ２６７Ｋを含むＩＬ－１５Ｒα（スシ）－Ｆｃ単量体を含む。いくつかの実施形態では、ＩＬ－１５／Ｒα－ヘテロＦｃ融合タンパク質は、ヒト成熟ＩＬ－１５のＮ１Ｄ／Ｎ６５Ｄバリアント；ヒトＩＬ－１５Ｒα（スシ）ドメイン；アミノ酸置換Ｃ２２０Ｓ、ヘテロ二量体ｐＩ置換Ｌ３６８Ｄ／Ｋ３７０Ｓ、等配電子ｐＩ置換Ｑ２９５Ｅ／Ｎ３８４Ｄ／Ｑ４１８Ｅ／Ｎ４２１Ｄ、切断置換Ｅ２３３Ｐ／Ｌ２３４Ｖ／Ｌ２３５Ａ／Ｇ２３６ｄｅｌ／Ｓ２６７Ｋ、およびＦｃＲｎ置換Ｍ４２８Ｌ／Ｎ４３４Ｓを含むＩＬ－１５－Ｆｃ単量体；ならびにアミノ酸置換Ｃ２２０Ｓ、ヘテロ二量体ｐＩ置換Ｓ３６４Ｋ／Ｅ３５７Ｑ、切断置換Ｅ２３３Ｐ／Ｌ２３４Ｖ／Ｌ２３５Ａ／Ｇ２３６ｄｅｌ／Ｓ２６７Ｋ、およびＦｃＲｎ置換Ｍ４２８Ｌ／Ｎ４３４Ｓを含むＩＬ－１５Ｒα（スシ）－Ｆｃ単量体を含む。

ＩＬ－１５／Ｒα－ヘテロＦｃフォーマットにおいて、好ましい実施形態は、ＩＬ－１５のＱ１０８Ｅバリアントを利用する。

ＩＬ－１５／Ｒα－ヘテロＦｃフォーマットにおいて、好ましい実施形態は、ＩＬ－１５のＱ１０８Ｅバリアントおよびスキューバリアント対Ｓ３６４Ｋ／Ｅ３５７Ｑ：Ｌ３６８Ｄ／Ｋ３７０Ｓを利用する。

ＩＬ－１５／Ｒα－ヘテロＦｃフォーマットにおいて、好ましい実施形態は、ＩＬ－１５のＱ１０８Ｅバリアントおよびスキューバリアント対Ｓ３６４Ｋ／Ｅ３５７Ｑ：Ｌ３６８Ｄ／Ｋ３７０Ｓ、ならびに両方の単量体において４２８Ｌ／４３４Ｓバリアントを利用する。ＩＬ－１５／Ｒα－ヘテロＦｃフォーマットにおいて、好ましい実施形態は、ＩＬ－１５のＱ１０８Ｅバリアントおよびスキューバリアント対Ｓ３６４Ｋ／Ｅ３５７Ｑ：Ｌ３６８Ｄ／Ｋ３７０Ｓ、ならびに両方の単量体においてＭ４２８Ｌ／Ｎ４３４Ｓバリアントを利用する。

ＩＬ－１５／Ｒα－ヘテロＦｃフォーマットにおいて、好ましい実施形態は、ＩＬ－１５のＱ１０８Ｅバリアント、スキューバリアント対Ｓ３６４Ｋ／Ｅ３５７Ｑ：Ｌ３６８Ｄ／Ｋ３７０Ｓ、および各々のＦｃ単量体において４２８Ｌ／４３４Ｓバリアントを利用する。ＩＬ－１５／Ｒα－ヘテロＦｃフォーマットにおいて、好ましい実施形態は、ＩＬ－１５のＱ１０８Ｅバリアント、スキューバリアント対Ｓ３６４Ｋ／Ｅ３５７Ｑ：Ｌ３６８Ｄ／Ｋ３７０Ｓ、および各々のＦｃ単量体においてＭ４２８Ｌ／Ｎ４３４Ｓバリアントを利用する。いくつかの実施形態では、ＩＬ－１５／Ｒα－ヘテロＦｃ融合タンパク質は、ヒト成熟ＩＬ－１５のＱ１０８Ｅバリアント、ＩＬ－１５Ｒα（スシ）ドメイン、および図６Ａに示されるアミノ酸置換を含むＦｃ単量体を含む。いくつかの実施形態では、ＩＬ－１５／Ｒα－ヘテロＦｃ融合タンパク質は、ヒト成熟ＩＬ－１５のＱ１０８Ｅバリアント；ヒトＩＬ－１５Ｒα（スシ）ドメイン；アミノ酸置換Ｃ２２０Ｓ、ヘテロ二量体ｐＩ置換Ｌ３６８Ｄ／Ｋ３７０Ｓ、等配電子ｐＩ置換Ｑ２９５Ｅ／Ｎ３８４Ｄ／Ｑ４１８Ｅ／Ｎ４２１Ｄ、切断置換Ｅ２３３Ｐ／Ｌ２３４Ｖ／Ｌ２３５Ａ／Ｇ２３６ｄｅｌ／Ｓ２６７Ｋを含むＩＬ－１５－Ｆｃ単量体；ならびにアミノ酸置換Ｃ２２０Ｓ、ヘテロ二量体ｐＩ置換Ｓ３６４Ｋ／Ｅ３５７Ｑ、および切断置換Ｅ２３３Ｐ／Ｌ２３４Ｖ／Ｌ２３５Ａ／Ｇ２３６ｄｅｌ／Ｓ２６７Ｋを含むＩＬ－１５Ｒα（スシ）－Ｆｃ単量体を含む。いくつかの実施形態では、ＩＬ－１５／Ｒα－ヘテロＦｃ融合タンパク質は、ヒト成熟ＩＬ－１５のＱ１０８Ｅバリアント；ヒトＩＬ－１５Ｒα（スシ）ドメイン；アミノ酸置換Ｃ２２０Ｓ、ヘテロ二量体ｐＩ置換Ｌ３６８Ｄ／Ｋ３７０Ｓ、等配電子ｐＩ置換Ｑ２９５Ｅ／Ｎ３８４Ｄ／Ｑ４１８Ｅ／Ｎ４２１Ｄ、切断置換Ｅ２３３Ｐ／Ｌ２３４Ｖ／Ｌ２３５Ａ／Ｇ２３６ｄｅｌ／Ｓ２６７Ｋ、およびＦｃＲｎ置換Ｍ４２８Ｌ／Ｎ４３４Ｓを含むＩＬ－１５－Ｆｃ単量体；ならびにアミノ酸置換Ｃ２２０Ｓ、ヘテロ二量体ｐＩ置換Ｓ３６４Ｋ／Ｅ３５７Ｑ、切断置換Ｅ２３３Ｐ／Ｌ２３４Ｖ／Ｌ２３５Ａ／Ｇ２３６ｄｅｌ／Ｓ２６７Ｋ、およびＦｃＲｎ置換Ｍ４２８Ｌ／Ｎ４３４Ｓを含むＩＬ－１５Ｒα（スシ）－Ｆｃ単量体を含む。

ＩＬ－１５／Ｒα－ヘテロＦｃフォーマットにおいて、好ましい実施形態は、ＩＬ－１５の野生型バリアントを利用する。

ＩＬ－１５／Ｒα－ヘテロＦｃフォーマットにおいて、好ましい実施形態は、ＩＬ－１５の野生型バリアントおよびスキューバリアント対Ｓ３６４Ｋ／Ｅ３５７Ｑ：Ｌ３６８Ｄ／Ｋ３７０Ｓを利用する。

ＩＬ－１５／Ｒα－ヘテロＦｃフォーマットにおいて、好ましい実施形態は、ＩＬ－１５の野生型バリアント、スキューバリアント対Ｓ３６４Ｋ／Ｅ３５７Ｑ：Ｌ３６８Ｄ／Ｋ３７０Ｓ、および各々のＦｃ単量体において４２８Ｌ／４３４Ｓバリアントを利用する。ＩＬ－１５／Ｒα－ヘテロＦｃフォーマットにおいて、好ましい実施形態は、ＩＬ－１５の野生型バリアント、スキューバリアント対Ｓ３６４Ｋ／Ｅ３５７Ｑ：Ｌ３６８Ｄ／Ｋ３７０Ｓ、および各々のＦｃ単量体においてＭ４２８Ｌ／Ｎ４３４Ｓバリアントを利用する。いくつかの実施形態では、ＩＬ－１５／Ｒα－ヘテロＦｃ融合タンパク質は、ヒト成熟ＩＬ－１５の野生型バリアント、ＩＬ－１５Ｒα（スシ）ドメイン、および図６Ａに示されるアミノ酸置換を含むＦｃ単量体を含む。いくつかの実施形態では、ＩＬ－１５／Ｒα－ヘテロＦｃ融合タンパク質は、ヒト成熟ＩＬ－１５の野生型バリアント；ヒトＩＬ－１５Ｒα（スシ）ドメイン；アミノ酸置換Ｃ２２０Ｓ、ヘテロ二量体ｐＩ置換Ｌ３６８Ｄ／Ｋ３７０Ｓ、等配電子ｐＩ置換Ｑ２９５Ｅ／Ｎ３８４Ｄ／Ｑ４１８Ｅ／Ｎ４２１Ｄ、切断置換Ｅ２３３Ｐ／Ｌ２３４Ｖ／Ｌ２３５Ａ／Ｇ２３６ｄｅｌ／Ｓ２６７Ｋを含むＩＬ－１５－Ｆｃ単量体；ならびにアミノ酸置換Ｃ２２０Ｓ、ヘテロ二量体ｐＩ置換Ｓ３６４Ｋ／Ｅ３５７Ｑ、および切断置換Ｅ２３３Ｐ／Ｌ２３４Ｖ／Ｌ２３５Ａ／Ｇ２３６ｄｅｌ／Ｓ２６７Ｋを含むＩＬ－１５Ｒα（スシ）－Ｆｃ単量体を含む。いくつかの実施形態では、ＩＬ－１５／Ｒα－ヘテロＦｃ融合タンパク質は、ヒト成熟ＩＬ－１５の野生型バリアント；ヒトＩＬ－１５Ｒα（スシ）ドメイン；アミノ酸置換Ｃ２２０Ｓ、ヘテロ二量体ｐＩ置換Ｌ３６８Ｄ／Ｋ３７０Ｓ、等配電子ｐＩ置換Ｑ２９５Ｅ／Ｎ３８４Ｄ／Ｑ４１８Ｅ／Ｎ４２１Ｄ、切断置換Ｅ２３３Ｐ／Ｌ２３４Ｖ／Ｌ２３５Ａ／Ｇ２３６ｄｅｌ／Ｓ２６７Ｋ、およびＦｃＲｎ置換Ｍ４２８Ｌ／Ｎ４３４Ｓを含むＩＬ－１５－Ｆｃ単量体；ならびにアミノ酸置換Ｃ２２０Ｓ、ヘテロ二量体ｐＩ置換Ｓ３６４Ｋ／Ｅ３５７Ｑ、切断置換Ｅ２３３Ｐ／Ｌ２３４Ｖ／Ｌ２３５Ａ／Ｇ２３６ｄｅｌ／Ｓ２６７Ｋ、およびＦｃＲｎ置換Ｍ４２８Ｌ／Ｎ４３４Ｓを含むＩＬ－１５Ｒα（スシ）－Ｆｃ単量体を含む。

ＩＬ－１５／Ｒα－ヘテロＦｃフォーマットにおいて、好ましい実施形態は、ＷＯ２０１８／０７１９１９の図４８Ａ（鎖１（１７６９３）および鎖２（１５９０８）を含むＸＥＮＰ２２８２２）、図９４Ａ（鎖１および鎖２を含むＸＥＮＰ２３５０４）、図１０４ＡＯ（鎖１および鎖２を含むＸＥＮＰ２４０４５）、図１０４ＡＱ（鎖１および鎖２を含むＸＥＮＰ２４３０６）、図４８Ａ（鎖１および鎖２を含むＸＥＮＰ２２８２１）、図９４Ａ（鎖１および鎖２を含むＸＥＮＰ２３３４３）、図１０４ＡＪ（鎖１および鎖２を含むＸＥＮＰ２３５５７）図１０４ＡＰ（鎖１および鎖２を含むＸＥＮＰ２４１１３）、図１０４ＡＰ（鎖１および鎖２を含むＸＥＮＰ２４０５１）、図１０４ＡＲ（鎖１および鎖２を含むＸＥＮＰ２４３４１）、図１０４ＡＰ（鎖１および鎖２を含むＸＥＮＰ２４０５２）、ならびに図１０４ＡＰ（鎖１および鎖２を含むＸＥＮＰ２４３０１）に示され、それらの全てはその全体において参照により本明細書に組み込まれる。

ＩＬ－１５／Ｒα－ヘテロＦｃフォーマットにおいて、好ましい実施形態は、図１０（鎖１（１５９０２）および鎖２（１５９０８）を含むＸＥＮＰ２２８２２）および（鎖１（１６４７９）および鎖２（１６４８１）を含むＸＥＮＰ２１４７５）に示される。

Ｂ．ｓｃＩＬ－１５－Ｒα－Ｆｃ
この実施形態では、図９Ｂに示されるように、ヘテロ二量体融合タンパク質は、２つの単量体を含む。第１の単量体は、（Ｎ末端からＣ末端に向けて）ＩＬ－１５／Ｒα（ｓｕｓｈｉ）－ドメインリンカー－ＩＬ－１５－任意選択のドメインリンカー－ＣＨ２－ＣＨ３を含み、ドメインリンカーは、ヒンジの全部または一部をしばしば含む。第２の単量体は、ヒンジ－ＣＨ２－ＣＨ３の全部または一部を含む、「空の」Ｆｃを含む。これは「ｓｃＩＬ－１５／Ｒα－Ｆｃ」と呼ばれ、「ｓｃ」は「一本鎖」（例えば、ＩＬ－１５／Ｒαスシ複合体の）を表す。

ｓｃＩＬ－１５／Ｒα－Ｆｃフォーマットにおいて、好ましい実施形態は、ＩＬ－１５Ｎ６５Ｄバリアントを利用する。

ｓｃＩＬ－１５／Ｒα－Ｆｃフォーマットにおいて、好ましい実施形態は、ＩＬ－１５のＤ３０Ｎ／Ｅ６４Ｑ／Ｎ６５Ｄバリアントおよびスキューバリアント対Ｓ３６４Ｋ／Ｅ３５７Ｑ：Ｌ３６８Ｄ／Ｋ３７０Ｓを利用する。

ｓｃＩＬ－１５／Ｒα－Ｆｃフォーマットにおいて、好ましい実施形態は、ＩＬ－１５のＤ３０Ｎ／Ｅ６４Ｑ／Ｎ６５Ｄバリアント、スキューバリアント対Ｓ３６４Ｋ／Ｅ３５７Ｑ：Ｌ３６８Ｄ／Ｋ３７０Ｓ、および各々のＦｃ単量体において４２８Ｌ／４３４Ｓバリアントを利用する。ｓｃＩＬ－１５／Ｒα－Ｆｃフォーマットにおいて、好ましい実施形態は、ＩＬ－１５のＤ３０Ｎ／Ｅ６４Ｑ／Ｎ６５Ｄバリアント、スキューバリアント対Ｓ３６４Ｋ／Ｅ３５７Ｑ：Ｌ３６８Ｄ／Ｋ３７０Ｓ、および各々のＦｃ単量体においてＭ４２８Ｌ／Ｎ４３４Ｓバリアントを利用する。

いくつかの実施形態では、ｓｃＩＬ－１５／Ｒα－Ｆｃ融合タンパク質は、ヒト成熟ＩＬ－１５のＤ３０Ｎ／Ｎ６５ＤバリアントおよびＩＬ－１５Ｒα（スシ）ドメインを含む一本鎖、ならびに図６Ｂに示されるアミノ酸置換を含むＦｃモノマーを含む。いくつかの実施形態では、ｓｃＩＬ－１５／Ｒα－Ｆｃ融合タンパク質は、ヒト成熟ＩＬ－１５のＤ３０Ｎ／Ｎ６５ＤバリアントおよびＩＬ－１５Ｒα（スシ）ドメインを含む一本鎖；アミノ酸置換Ｃ２２０Ｓ、ヘテロ二量体ｐＩ置換Ｌ３６８Ｄ／Ｋ３７０Ｓ、等配電子ｐＩ置換Ｑ２９５Ｅ／Ｎ３８４Ｄ／Ｑ４１８Ｅ／Ｎ４２１Ｄ、および切断置換Ｅ２３３Ｐ／Ｌ２３４Ｖ／Ｌ２３５Ａ／Ｇ２３６ｄｅｌ／Ｓ２６７Ｋを含むｓｃＩＬ－１５／Ｒα－Ｆｃ単量体；ならびにアミノ酸置換Ｃ２２０Ｓ、ヘテロ二量体ｐＩ置換Ｓ３６４Ｋ／Ｅ３５７Ｑ、および切断置換Ｅ２３３Ｐ／Ｌ２３４Ｖ／Ｌ２３５Ａ／Ｇ２３６ｄｅｌ／Ｓ２６７Ｋを含む空のＦｃ単量体を含む。いくつかの実施形態では、ｓｃＩＬ－１５／Ｒα－Ｆｃ融合タンパク質は、ヒト成熟ＩＬ－１５のＤ３０Ｎ／Ｎ６５ＤバリアントおよびＩＬ－１５Ｒα（スシ）ドメインを含む一本鎖；アミノ酸置換Ｃ２２０Ｓ、ヘテロ二量体ｐＩ置換Ｌ３６８Ｄ／Ｋ３７０Ｓ、等配電子ｐＩ置換Ｑ２９５Ｅ／Ｎ３８４Ｄ／Ｑ４１８Ｅ／Ｎ４２１Ｄ、切断置換Ｅ２３３Ｐ／Ｌ２３４Ｖ／Ｌ２３５Ａ／Ｇ２３６ｄｅｌ／Ｓ２６７Ｋ、およびＦｃＲｎ置換Ｍ４２８Ｌ／Ｎ４３４Ｓを含むｓｃＩＬ－１５／Ｒα－Ｆｃ単量体；ならびにアミノ酸置換Ｃ２２０Ｓ、ヘテロ二量体ｐＩ置換Ｓ３６４Ｋ／Ｅ３５７Ｑ、切断置換Ｅ２３３Ｐ／Ｌ２３４Ｖ／Ｌ２３５Ａ／Ｇ２３６ｄｅｌ／Ｓ２６７Ｋ、およびＦｃＲｎ置換Ｍ４２８Ｌ／Ｎ４３４Ｓを含む空のＦｃ単量体を含む。

ｓｃＩＬ－１５／Ｒα－Ｆｃフォーマットにおいて、好ましい実施形態は、ＩＬ－１５Ｄ３０Ｎ／Ｅ６４Ｑ／Ｎ６５Ｄバリアントを利用する。

いくつかの実施形態では、ｓｃＩＬ－１５／Ｒα－Ｆｃ融合タンパク質は、ヒト成熟ＩＬ－１５のＤ３０Ｎ／Ｅ６４Ｑ／Ｎ６５ＤバリアントおよびＩＬ－１５Ｒα（スシ）ドメインを含む一本鎖、ならびに図６Ｂに示されるアミノ酸置換を含むＦｃモノマーを含む。いくつかの実施形態では、ｓｃＩＬ－１５／Ｒα－Ｆｃ融合タンパク質は、ヒト成熟ＩＬ－１５のＤ３０Ｎ／Ｅ６４Ｑ／Ｎ６５ＤバリアントおよびＩＬ－１５Ｒα（スシ）ドメインを含む一本鎖；アミノ酸置換Ｃ２２０Ｓ、ヘテロ二量体ｐＩ置換Ｌ３６８Ｄ／Ｋ３７０Ｓ、等配電子ｐＩ置換Ｑ２９５Ｅ／Ｎ３８４Ｄ／Ｑ４１８Ｅ／Ｎ４２１Ｄ、および切断置換Ｅ２３３Ｐ／Ｌ２３４Ｖ／Ｌ２３５Ａ／Ｇ２３６ｄｅｌ／Ｓ２６７Ｋを含むｓｃＩＬ－１５／Ｒα－Ｆｃ単量体；ならびにアミノ酸置換Ｃ２２０Ｓ、ヘテロ二量体ｐＩ置換Ｓ３６４Ｋ／Ｅ３５７Ｑ、および切断置換Ｅ２３３Ｐ／Ｌ２３４Ｖ／Ｌ２３５Ａ／Ｇ２３６ｄｅｌ／Ｓ２６７Ｋを含む空のＦｃ単量体を含む。いくつかの実施形態では、ｓｃＩＬ－１５／Ｒα－Ｆｃ融合タンパク質は、ヒト成熟ＩＬ－１５のＤ３０Ｎ／Ｅ６４Ｑ／Ｎ６５ＤバリアントおよびＩＬ－１５Ｒα（スシ）ドメインを含む一本鎖；アミノ酸置換Ｃ２２０Ｓ、ヘテロ二量体ｐＩ置換Ｌ３６８Ｄ／Ｋ３７０Ｓ、等配電子ｐＩ置換Ｑ２９５Ｅ／Ｎ３８４Ｄ／Ｑ４１８Ｅ／Ｎ４２１Ｄ、切断置換Ｅ２３３Ｐ／Ｌ２３４Ｖ／Ｌ２３５Ａ／Ｇ２３６ｄｅｌ／Ｓ２６７Ｋ、およびＦｃＲｎ置換Ｍ４２８Ｌ／Ｎ４３４Ｓを含むｓｃＩＬ－１５／Ｒα－Ｆｃ単量体；ならびにアミノ酸置換Ｃ２２０Ｓ、ヘテロ二量体ｐＩ置換Ｓ３６４Ｋ／Ｅ３５７Ｑ、切断置換Ｅ２３３Ｐ／Ｌ２３４Ｖ／Ｌ２３５Ａ／Ｇ２３６ｄｅｌ／Ｓ２６７Ｋ、およびＦｃＲｎ置換Ｍ４２８Ｌ／Ｎ４３４Ｓを含む空のＦｃ単量体を含む。

ｓｃＩＬ－１５／Ｒα－Ｆｃフォーマットにおいて、好ましい実施形態は、ＩＬ－１５のＮ６５Ｄバリアントおよびスキューバリアント対Ｓ３６４Ｋ／Ｅ３５７Ｑ：Ｌ３６８Ｄ／Ｋ３７０Ｓを利用する。

ｓｃＩＬ－１５／Ｒα－Ｆｃフォーマットにおいて、好ましい実施形態は、ＩＬ－１５のＮ６５Ｄバリアント、スキューバリアント対Ｓ３６４Ｋ／Ｅ３５７Ｑ：Ｌ３６８Ｄ／Ｋ３７０Ｓ、および各々のＦｃ単量体において４２８Ｌ／４３４Ｓバリアントを利用する。ｓｃＩＬ－１５／Ｒα－Ｆｃフォーマットにおいて、好ましい実施形態は、ＩＬ－１５のＮ６５Ｄバリアント、スキューバリアント対Ｓ３６４Ｋ／Ｅ３５７Ｑ：Ｌ３６８Ｄ／Ｋ３７０Ｓ、および各々のＦｃ単量体においてＭ４２８Ｌ／Ｎ４３４Ｓバリアントを利用する。

いくつかの実施形態では、ｓｃＩＬ－１５／Ｒα－Ｆｃ融合タンパク質は、ヒト成熟ＩＬ－１５のＮ６５ＤバリアントおよびＩＬ－１５Ｒα（スシ）ドメインを含む一本鎖、ならびに図６Ｂに示されるアミノ酸置換を含むＦｃモノマーを含む。いくつかの実施形態では、ｓｃＩＬ－１５／Ｒα－Ｆｃ融合タンパク質は、ヒト成熟ＩＬ－１５のＮ６５ＤバリアントおよびＩＬ－１５Ｒα（スシ）ドメインを含む一本鎖；アミノ酸置換Ｃ２２０Ｓ、ヘテロ二量体ｐＩ置換Ｌ３６８Ｄ／Ｋ３７０Ｓ、等配電子ｐＩ置換Ｑ２９５Ｅ／Ｎ３８４Ｄ／Ｑ４１８Ｅ／Ｎ４２１Ｄ、および切断置換Ｅ２３３Ｐ／Ｌ２３４Ｖ／Ｌ２３５Ａ／Ｇ２３６ｄｅｌ／Ｓ２６７Ｋを含むｓｃＩＬ－１５／Ｒα－Ｆｃ単量体；ならびにアミノ酸置換Ｃ２２０Ｓ、ヘテロ二量体ｐＩ置換Ｓ３６４Ｋ／Ｅ３５７Ｑ、および切断置換Ｅ２３３Ｐ／Ｌ２３４Ｖ／Ｌ２３５Ａ／Ｇ２３６ｄｅｌ／Ｓ２６７Ｋを含む空のＦｃ単量体を含む。いくつかの実施形態では、ｓｃＩＬ－１５／Ｒα－Ｆｃ融合タンパク質は、ヒト成熟ＩＬ－１５のＮ６５ＤバリアントおよびＩＬ－１５Ｒα（スシ）ドメインを含む一本鎖；アミノ酸置換Ｃ２２０Ｓ、ヘテロ二量体ｐＩ置換Ｌ３６８Ｄ／Ｋ３７０Ｓ、等配電子ｐＩ置換Ｑ２９５Ｅ／Ｎ３８４Ｄ／Ｑ４１８Ｅ／Ｎ４２１Ｄ、切断置換Ｅ２３３Ｐ／Ｌ２３４Ｖ／Ｌ２３５Ａ／Ｇ２３６ｄｅｌ／Ｓ２６７Ｋ、およびＦｃＲｎ置換Ｍ４２８Ｌ／Ｎ４３４Ｓを含むｓｃＩＬ－１５／Ｒα－Ｆｃ単量体；ならびにアミノ酸置換Ｃ２２０Ｓ、ヘテロ二量体ｐＩ置換Ｓ３６４Ｋ／Ｅ３５７Ｑ、切断置換Ｅ２３３Ｐ／Ｌ２３４Ｖ／Ｌ２３５Ａ／Ｇ２３６ｄｅｌ／Ｓ２６７Ｋ、およびＦｃＲｎ置換Ｍ４２８Ｌ／Ｎ４３４Ｓを含む空のＦｃ単量体を含む。

ｓｃＩＬ－１５／Ｒα－Ｆｃフォーマットにおいて、好ましい実施形態は、ＩＬ－１５Ｎ４Ｄ／Ｎ６５Ｄバリアントを利用する。

ｓｃＩＬ－１５／Ｒα－Ｆｃフォーマットにおいて、好ましい実施形態は、ＩＬ－１５のＮ４Ｄ／Ｎ６５Ｄバリアントおよびスキューバリアント対Ｓ３６４Ｋ／Ｅ３５７Ｑ：Ｌ３６８Ｄ／Ｋ３７０Ｓを利用する。

ｓｃＩＬ－１５／Ｒα－Ｆｃフォーマットにおいて、好ましい実施形態は、ＩＬ－１５のＮ４Ｄ／Ｎ６５Ｄバリアント、スキューバリアント対Ｓ３６４Ｋ／Ｅ３５７Ｑ：Ｌ３６８Ｄ／Ｋ３７０Ｓ、および各々のＦｃ単量体において４２８Ｌ／４３４Ｓバリアントを利用する。ｓｃＩＬ－１５／Ｒα－Ｆｃフォーマットにおいて、好ましい実施形態は、ＩＬ－１５のＮ４Ｄ／Ｎ６５Ｄバリアント、スキューバリアント対Ｓ３６４Ｋ／Ｅ３５７Ｑ：Ｌ３６８Ｄ／Ｋ３７０Ｓ、および各々のＦｃ単量体においてＭ４２８Ｌ／Ｎ４３４Ｓバリアントを利用する。

いくつかの実施形態では、ｓｃＩＬ－１５／Ｒα－Ｆｃ融合タンパク質は、ヒト成熟ＩＬ－１５のＮ４Ｄ／Ｎ６５ＤバリアントおよびＩＬ－１５Ｒα（スシ）ドメインを含む一本鎖、ならびに図６Ｂに示されるアミノ酸置換を含むＦｃモノマーを含む。いくつかの実施形態では、ｓｃＩＬ－１５／Ｒα－Ｆｃ融合タンパク質は、ヒト成熟ＩＬ－１５のＮ４Ｄ／Ｎ６５ＤバリアントおよびＩＬ－１５Ｒα（スシ）ドメインを含む一本鎖；アミノ酸置換Ｃ２２０Ｓ、ヘテロ二量体ｐＩ置換Ｌ３６８Ｄ／Ｋ３７０Ｓ、等配電子ｐＩ置換Ｑ２９５Ｅ／Ｎ３８４Ｄ／Ｑ４１８Ｅ／Ｎ４２１Ｄ、および切断置換Ｅ２３３Ｐ／Ｌ２３４Ｖ／Ｌ２３５Ａ／Ｇ２３６ｄｅｌ／Ｓ２６７Ｋを含むｓｃＩＬ－１５／Ｒα－Ｆｃ単量体；ならびにアミノ酸置換Ｃ２２０Ｓ、ヘテロ二量体ｐＩ置換Ｓ３６４Ｋ／Ｅ３５７Ｑ、および切断置換Ｅ２３３Ｐ／Ｌ２３４Ｖ／Ｌ２３５Ａ／Ｇ２３６ｄｅｌ／Ｓ２６７Ｋを含む空のＦｃ単量体を含む。いくつかの実施形態では、ｓｃＩＬ－１５／Ｒα－Ｆｃ融合タンパク質は、ヒト成熟ＩＬ－１５のＮ４Ｄ／Ｎ６５ＤバリアントおよびＩＬ－１５Ｒα（スシ）ドメインを含む一本鎖；アミノ酸置換Ｃ２２０Ｓ、ヘテロ二量体ｐＩ置換Ｌ３６８Ｄ／Ｋ３７０Ｓ、等配電子ｐＩ置換Ｑ２９５Ｅ／Ｎ３８４Ｄ／Ｑ４１８Ｅ／Ｎ４２１Ｄ、切断置換Ｅ２３３Ｐ／Ｌ２３４Ｖ／Ｌ２３５Ａ／Ｇ２３６ｄｅｌ／Ｓ２６７Ｋ、およびＦｃＲｎ置換Ｍ４２８Ｌ／Ｎ４３４Ｓを含むｓｃＩＬ－１５／Ｒα－Ｆｃ単量体；ならびにアミノ酸置換Ｃ２２０Ｓ、ヘテロ二量体ｐＩ置換Ｓ３６４Ｋ／Ｅ３５７Ｑ、切断置換Ｅ２３３Ｐ／Ｌ２３４Ｖ／Ｌ２３５Ａ／Ｇ２３６ｄｅｌ／Ｓ２６７Ｋ、およびＦｃＲｎ置換Ｍ４２８Ｌ／Ｎ４３４Ｓを含む空のＦｃ単量体を含む。

ｓｃＩＬ－１５／Ｒα－Ｆｃフォーマットにおいて、好ましい実施形態は、ＩＬ－１５Ｎ１Ｄ／Ｎ６５Ｄバリアントを利用する。

ｓｃＩＬ－１５／Ｒα－Ｆｃフォーマットにおいて、好ましい実施形態は、ＩＬ－１５のＮ１Ｄ／Ｎ６５Ｄバリアントおよびスキューバリアント対Ｓ３６４Ｋ／Ｅ３５７Ｑ：Ｌ３６８Ｄ／Ｋ３７０Ｓを利用する。

ｓｃＩＬ－１５／Ｒα－Ｆｃフォーマットにおいて、好ましい実施形態は、ＩＬ－１５のＮ１Ｄ／Ｎ６５Ｄバリアント、スキューバリアント対Ｓ３６４Ｋ／Ｅ３５７Ｑ：Ｌ３６８Ｄ／Ｋ３７０Ｓ、および各々のＦｃ単量体において４２８Ｌ／４３４Ｓバリアントを利用する。ｓｃＩＬ－１５／Ｒα－Ｆｃフォーマットにおいて、好ましい実施形態は、ＩＬ－１５のＮ１Ｄ／Ｎ６５Ｄバリアント、スキューバリアント対Ｓ３６４Ｋ／Ｅ３５７Ｑ：Ｌ３６８Ｄ／Ｋ３７０Ｓ、および各々のＦｃ単量体においてＭ４２８Ｌ／Ｎ４３４Ｓバリアントを利用する。

いくつかの実施形態では、ｓｃＩＬ－１５／Ｒα－Ｆｃ融合タンパク質は、ヒト成熟ＩＬ－１５のＮ１Ｄ／Ｎ６５ＤバリアントおよびＩＬ－１５Ｒα（スシ）ドメインを含む一本鎖、ならびに図６Ｂに示されるアミノ酸置換を含むＦｃモノマーを含む。いくつかの実施形態では、ｓｃＩＬ－１５／Ｒα－Ｆｃ融合タンパク質は、ヒト成熟ＩＬ－１５のＮ１Ｄ／Ｎ６５ＤバリアントおよびＩＬ－１５Ｒα（スシ）ドメインを含む一本鎖；アミノ酸置換Ｃ２２０Ｓ、ヘテロ二量体ｐＩ置換Ｌ３６８Ｄ／Ｋ３７０Ｓ、等配電子ｐＩ置換Ｑ２９５Ｅ／Ｎ３８４Ｄ／Ｑ４１８Ｅ／Ｎ４２１Ｄ、および切断置換Ｅ２３３Ｐ／Ｌ２３４Ｖ／Ｌ２３５Ａ／Ｇ２３６ｄｅｌ／Ｓ２６７Ｋを含むｓｃＩＬ－１５／Ｒα－Ｆｃ単量体；ならびにアミノ酸置換Ｃ２２０Ｓ、ヘテロ二量体ｐＩ置換Ｓ３６４Ｋ／Ｅ３５７Ｑ、および切断置換Ｅ２３３Ｐ／Ｌ２３４Ｖ／Ｌ２３５Ａ／Ｇ２３６ｄｅｌ／Ｓ２６７Ｋを含む空のＦｃ単量体を含む。いくつかの実施形態では、ｓｃＩＬ－１５／Ｒα－Ｆｃ融合タンパク質は、ヒト成熟ＩＬ－１５のＮ１Ｄ／Ｎ６５ＤバリアントおよびＩＬ－１５Ｒα（スシ）ドメインを含む一本鎖；アミノ酸置換Ｃ２２０Ｓ、ヘテロ二量体ｐＩ置換Ｌ３６８Ｄ／Ｋ３７０Ｓ、等配電子ｐＩ置換Ｑ２９５Ｅ／Ｎ３８４Ｄ／Ｑ４１８Ｅ／Ｎ４２１Ｄ、切断置換Ｅ２３３Ｐ／Ｌ２３４Ｖ／Ｌ２３５Ａ／Ｇ２３６ｄｅｌ／Ｓ２６７Ｋ、およびＦｃＲｎ置換Ｍ４２８Ｌ／Ｎ４３４Ｓを含むｓｃＩＬ－１５／Ｒα－Ｆｃ単量体；ならびにアミノ酸置換Ｃ２２０Ｓ、ヘテロ二量体ｐＩ置換Ｓ３６４Ｋ／Ｅ３５７Ｑ、切断置換Ｅ２３３Ｐ／Ｌ２３４Ｖ／Ｌ２３５Ａ／Ｇ２３６ｄｅｌ／Ｓ２６７Ｋ、およびＦｃＲｎ置換Ｍ４２８Ｌ／Ｎ４３４Ｓを含む空のＦｃ単量体を含む。

ｓｃＩＬ－１５／Ｒα－Ｆｃフォーマットにおいて、好ましい実施形態には、鎖１（１６４７８）および鎖２（８９２４）を含むＸＥＮＰ２１４７８が含まれ、図１１に示される。このフォーマットの他の実施形態には、ＸＥＮＰ２１９９３、ＸＥＮＰ２１９９４、ＸＥＮＰ２１９９５、ＸＥＮＰ２３１７４、ＸＥＮＰ２３１７５、ＸＥＮＰ２４４７７、およびＸＥＮＰ２４４８０が含まれ、ＷＯ２０１８／０７１９１９の図１０４Ｇ、１０４Ｈ、１０４ＡＧ、１０４ＡＵ、および１０４ＡＶに示され、アミノ酸配列はそれぞれ、配列番号５１４～５１８、５１９～５２３、５２４～５２８、８４９～８５３、１０６３～１０６７、および１０７８～１０８２に見出される。

Ｃ．ｎｃＩＬ－１５／Ｒα－Ｆｃ
この実施形態では、図９Ｃに示されるように、ヘテロ二量体融合タンパク質は、３つの単量体を含む。第１の単量体は、（Ｎ末端からＣ末端にかけて）ＩＬ－１５／Ｒα（スシ）－ドメインリンカー－ＣＨ２－ＣＨ３を含み、ドメインリンカーは、ヒンジの全部または一部を時に含む。第２の単量体は、ヒンジ－ＣＨ２－ＣＨ３の全部または一部を含む、「空の」Ｆｃを含む。第３の単量体はＩＬ－１５である。これは「ｎｃＩＬ－１５／Ｒα－Ｆｃ」と呼ばれ、「ｎｃ」は「非共有結合」を表す。

ｎｃＩＬ－１５／Ｒα－Ｆｃフォーマットにおいて、好ましい実施形態は、スキューバリアント対Ｓ３６４Ｋ／Ｅ３５７Ｑ：Ｌ３６８Ｄ／Ｋ３７０Ｓを利用する。

ｎｃＩＬ－１５／Ｒα－Ｆｃフォーマットにおいて、好ましい実施形態は、ＩＬ－１５Ｄ３０Ｎ／Ｅ６４Ｑ／Ｎ６５Ｄバリアントを利用する。

ｎｃＩＬ－１５／Ｒα－Ｆｃフォーマットにおいて、好ましい実施形態は、ＩＬ－１５のＤ３０Ｎ／Ｅ６４Ｑ／Ｎ６５Ｄバリアントおよびスキューバリアント対Ｓ３６４Ｋ／Ｅ３５７Ｑ：Ｌ３６８Ｄ／Ｋ３７０Ｓを利用する。

ｎｃＩＬ－１５／Ｒα－Ｆｃフォーマットにおいて、好ましい実施形態は、ＩＬ－１５のＤ３０Ｎ／Ｅ６４Ｑ／Ｎ６５Ｄバリアント、スキューバリアント対Ｓ３６４Ｋ／Ｅ３５７Ｑ：Ｌ３６８Ｄ／Ｋ３７０Ｓ、および各々のＦｃ単量体において４２８Ｌ／４３４Ｓバリアントを利用する。ｎｃＩＬ－１５／Ｒα－Ｆｃフォーマットにおいて、好ましい実施形態は、ＩＬ－１５のＤ３０Ｎ／Ｅ６４Ｑ／Ｎ６５Ｄバリアント、スキューバリアント対Ｓ３６４Ｋ／Ｅ３５７Ｑ：Ｌ３６８Ｄ／Ｋ３７０Ｓ、および各々のＦｃ単量体においてＭ４２８Ｌ／Ｎ４３４Ｓバリアントを利用する。

いくつかの実施形態では、ｎｃＩＬ－１５／Ｒα－Ｆｃ融合タンパク質は、ヒト成熟ＩＬ－１５のＤ３０Ｎ／Ｅ６４Ｑ／Ｎ６５Ｄバリアント、ＩＬ－１５Ｒα（スシ）ドメイン、および図６Ｃに示されるアミノ酸置換を含むＦｃ単量体を含む。いくつかの実施形態では、ｎｃＩＬ－１５／Ｒα－Ｆｃ融合タンパク質は、ヒト成熟ＩＬ－１５Ｄ３０Ｎ／Ｅ６４Ｑ／Ｎ６５Ｄバリアント、ＩＬ－１５Ｒα（スシ）ドメイン；アミノ酸置換Ｃ２２０Ｓ、ヘテロ二量体ｐＩ置換Ｌ３６８Ｄ／Ｋ３７０Ｓ、等配電子ｐＩ置換Ｑ２９５Ｅ／Ｎ３８４Ｄ／Ｑ４１８Ｅ／Ｎ４２１Ｄ、および切断置換Ｅ２３３Ｐ／Ｌ２３４Ｖ／Ｌ２３５Ａ／Ｇ２３６ｄｅｌ／Ｓ２６７Ｋを含む空のＦｃ単量体；ならびにアミノ酸置換Ｃ２２０Ｓ、ヘテロ二量体ｐＩ置換Ｓ３６４Ｋ／Ｅ３５７Ｑ、および切断置換Ｅ２３３Ｐ／Ｌ２３４Ｖ／Ｌ２３５Ａ／Ｇ２３６ｄｅｌ／Ｓ２６７Ｋを含むＩＬ－１５Ｒα（スシ）－Ｆｃ単量体を含む。いくつかの実施形態では、ｎｃＩＬ－１５／Ｒα－Ｆｃ融合タンパク質は、ヒト成熟ＩＬ－１５のＤ３０Ｎ／Ｅ６４Ｑ／Ｎ６５Ｄバリアントを含む一本鎖；ＩＬ－１５Ｒα（スシ）ドメイン；アミノ酸置換Ｃ２２０Ｓ、ヘテロ二量体ｐＩ置換Ｌ３６８Ｄ／Ｋ３７０Ｓ、等配電子ｐＩ置換Ｑ２９５Ｅ／Ｎ３８４Ｄ／Ｑ４１８Ｅ／Ｎ４２１Ｄ、切断置換Ｅ２３３Ｐ／Ｌ２３４Ｖ／Ｌ２３５Ａ／Ｇ２３６ｄｅｌ／Ｓ２６７Ｋ、およびＦｃＲｎ置換Ｍ４２８Ｌ／Ｎ４３４Ｓを含む空のＦｃ；ならびにアミノ酸置換Ｃ２２０Ｓ、ヘテロ二量体ｐＩ置換Ｓ３６４Ｋ／Ｅ３５７Ｑ、切断置換Ｅ２３３Ｐ／Ｌ２３４Ｖ／Ｌ２３５Ａ／Ｇ２３６ｄｅｌ／Ｓ２６７Ｋ、およびＦｃＲｎ置換Ｍ４２８Ｌ／Ｎ４３４Ｓを含むＩＬ－１５Ｒα（スシ）－Ｆｃ単量体を含む。

ｎｃＩＬ－１５／Ｒα－Ｆｃフォーマットにおいて、好ましい実施形態は、ＩＬ－１５Ｎ４Ｄバリアントを利用する。

ｎｃＩＬ－１５／Ｒα－Ｆｃフォーマットにおいて、好ましい実施形態は、ＩＬ－１５Ｎ４Ｄバリアント、およびスキューバリアント対Ｓ３６４Ｋ／Ｅ３５７Ｑ：Ｌ３６８Ｄ／Ｋ３７０Ｓを利用する。ｎｃＩＬ－１５／Ｒα－Ｆｃフォーマットにおいて、好ましい実施形態は、ＩＬ－１５Ｎ４Ｄバリアント、スキューバリアント対Ｓ３６４Ｋ／Ｅ３５７Ｑ：Ｌ３６８Ｄ／Ｋ３７０Ｓ、および各々のＦｃ単量体において４２８Ｌ／４３４Ｓバリアントを利用する。ｎｃＩＬ－１５／Ｒα－Ｆｃフォーマットにおいて、好ましい実施形態は、ＩＬ－１５のＮ４Ｄバリアント、スキューバリアント対Ｓ３６４Ｋ／Ｅ３５７Ｑ：Ｌ３６８Ｄ／Ｋ３７０Ｓ、および各々のＦｃ単量体においてＭ４２８Ｌ／Ｎ４３４Ｓバリアントを利用する。

いくつかの実施形態では、ｎｃＩＬ－１５／Ｒα－Ｆｃ融合タンパク質は、ヒト成熟ＩＬ－１５のＮ４Ｄバリアント、ＩＬ－１５Ｒα（スシ）ドメイン、および図６Ｃに示されるアミノ酸置換を含むＦｃ単量体を含む。いくつかの実施形態では、ｎｃＩＬ－１５／Ｒα－Ｆｃ融合タンパク質は、ヒト成熟ＩＬ－１５Ｎ４Ｄバリアント、ＩＬ－１５Ｒα（スシ）ドメイン；アミノ酸置換Ｃ２２０Ｓ、ヘテロ二量体ｐＩ置換Ｌ３６８Ｄ／Ｋ３７０Ｓ、等配電子ｐＩ置換Ｑ２９５Ｅ／Ｎ３８４Ｄ／Ｑ４１８Ｅ／Ｎ４２１Ｄ、および切断置換Ｅ２３３Ｐ／Ｌ２３４Ｖ／Ｌ２３５Ａ／Ｇ２３６ｄｅｌ／Ｓ２６７Ｋを含む空のＦｃ単量体；ならびにアミノ酸置換Ｃ２２０Ｓ、ヘテロ二量体ｐＩ置換Ｓ３６４Ｋ／Ｅ３５７Ｑ、および切断置換Ｅ２３３Ｐ／Ｌ２３４Ｖ／Ｌ２３５Ａ／Ｇ２３６ｄｅｌ／Ｓ２６７Ｋを含むＩＬ－１５Ｒα（スシ）－Ｆｃ単量体を含む。いくつかの実施形態では、ｎｃＩＬ－１５／Ｒα－Ｆｃ融合タンパク質は、ヒト成熟ＩＬ－１５のＮ４Ｄバリアントを含む一本鎖；ＩＬ－１５Ｒα（スシ）ドメイン；アミノ酸置換Ｃ２２０Ｓ、ヘテロ二量体ｐＩ置換Ｌ３６８Ｄ／Ｋ３７０Ｓ、等配電子ｐＩ置換Ｑ２９５Ｅ／Ｎ３８４Ｄ／Ｑ４１８Ｅ／Ｎ４２１Ｄ、切断置換Ｅ２３３Ｐ／Ｌ２３４Ｖ／Ｌ２３５Ａ／Ｇ２３６ｄｅｌ／Ｓ２６７Ｋ、およびＦｃＲｎ置換Ｍ４２８Ｌ／Ｎ４３４Ｓを含む空のＦｃ；ならびにアミノ酸置換Ｃ２２０Ｓ、ヘテロ二量体ｐＩ置換Ｓ３６４Ｋ／Ｅ３５７Ｑ、切断置換Ｅ２３３Ｐ／Ｌ２３４Ｖ／Ｌ２３５Ａ／Ｇ２３６ｄｅｌ／Ｓ２６７Ｋ、およびＦｃＲｎ置換Ｍ４２８Ｌ／Ｎ４３４Ｓを含むＩＬ－１５Ｒα（スシ）－Ｆｃ単量体を含む。

ｎｃＩＬ－１５／Ｒα－Ｆｃフォーマットにおいて、好ましい実施形態は、ＩＬ－１５Ｎ６５Ｄバリアントを利用する。

ｎｃＩＬ－１５／Ｒα－Ｆｃフォーマットにおいて、好ましい実施形態は、ＩＬ－１５のＮ６５Ｄバリアントおよびスキューバリアント対Ｓ３６４Ｋ／Ｅ３５７Ｑ：Ｌ３６８Ｄ／Ｋ３７０Ｓを利用する。ｎｃＩＬ－１５／Ｒα－Ｆｃフォーマットにおいて、好ましい実施形態は、ＩＬ－１５のＮ６５Ｄバリアント、スキューバリアント対Ｓ３６４Ｋ／Ｅ３５７Ｑ：Ｌ３６８Ｄ／Ｋ３７０Ｓ、および各々のＦｃ単量体において４２８Ｌ／４３４Ｓバリアントを利用する。ｎｃＩＬ－１５／Ｒα－Ｆｃフォーマットにおいて、好ましい実施形態は、ＩＬ－１５のＮ６５Ｄバリアント、スキューバリアント対Ｓ３６４Ｋ／Ｅ３５７Ｑ：Ｌ３６８Ｄ／Ｋ３７０Ｓ、および各々のＦｃ単量体においてＭ４２８Ｌ／Ｎ４３４Ｓバリアントを利用する。

いくつかの実施形態では、ｎｃＩＬ－１５／Ｒα－Ｆｃ融合タンパク質は、ヒト成熟ＩＬ－１５のＮ６５Ｄバリアント、ＩＬ－１５Ｒα（スシ）ドメイン、および図６Ｃに示されるアミノ酸置換を含むＦｃ単量体を含む。いくつかの実施形態では、ｎｃＩＬ－１５／Ｒα－Ｆｃ融合タンパク質は、ヒト成熟ＩＬ－１５Ｎ６５Ｄバリアント、ＩＬ－１５Ｒα（スシ）ドメイン；アミノ酸置換Ｃ２２０Ｓ、ヘテロ二量体ｐＩ置換Ｌ３６８Ｄ／Ｋ３７０Ｓ、等配電子ｐＩ置換Ｑ２９５Ｅ／Ｎ３８４Ｄ／Ｑ４１８Ｅ／Ｎ４２１Ｄ、および切断置換Ｅ２３３Ｐ／Ｌ２３４Ｖ／Ｌ２３５Ａ／Ｇ２３６ｄｅｌ／Ｓ２６７Ｋを含む空のＦｃ単量体；ならびにアミノ酸置換Ｃ２２０Ｓ、ヘテロ二量体ｐＩ置換Ｓ３６４Ｋ／Ｅ３５７Ｑ、および切断置換Ｅ２３３Ｐ／Ｌ２３４Ｖ／Ｌ２３５Ａ／Ｇ２３６ｄｅｌ／Ｓ２６７Ｋを含むＩＬ－１５Ｒα（スシ）－Ｆｃ単量体を含む。いくつかの実施形態では、ｎｃＩＬ－１５／Ｒα－Ｆｃ融合タンパク質は、ヒト成熟ＩＬ－１５のＮ６５Ｄバリアントを含む一本鎖；ＩＬ－１５Ｒα（スシ）ドメイン；アミノ酸置換Ｃ２２０Ｓ、ヘテロ二量体ｐＩ置換Ｌ３６８Ｄ／Ｋ３７０Ｓ、等配電子ｐＩ置換Ｑ２９５Ｅ／Ｎ３８４Ｄ／Ｑ４１８Ｅ／Ｎ４２１Ｄ、切断置換Ｅ２３３Ｐ／Ｌ２３４Ｖ／Ｌ２３５Ａ／Ｇ２３６ｄｅｌ／Ｓ２６７Ｋ、およびＦｃＲｎ置換Ｍ４２８Ｌ／Ｎ４３４Ｓを含む空のＦｃ；ならびにアミノ酸置換Ｃ２２０Ｓ、ヘテロ二量体ｐＩ置換Ｓ３６４Ｋ／Ｅ３５７Ｑ、切断置換Ｅ２３３Ｐ／Ｌ２３４Ｖ／Ｌ２３５Ａ／Ｇ２３６ｄｅｌ／Ｓ２６７Ｋ、およびＦｃＲｎ置換Ｍ４２８Ｌ／Ｎ４３４Ｓを含むＩＬ－１５Ｒα（スシ）－Ｆｃ単量体を含む。

ｎｃＩＬ－１５／Ｒα－Ｆｃフォーマットにおいて、好ましい実施形態は、ＩＬ－１５Ｎ４Ｄ／Ｎ６５Ｄバリアントを利用する。

ｎｃＩＬ－１５／Ｒα－Ｆｃフォーマットにおいて、好ましい実施形態は、ＩＬ－１５のＮ４Ｄ／Ｎ６５Ｄバリアントおよびスキューバリアント対Ｓ３６４Ｋ／Ｅ３５７Ｑ：Ｌ３６８Ｄ／Ｋ３７０Ｓを利用する。ｎｃＩＬ－１５／Ｒα－Ｆｃフォーマットにおいて、好ましい実施形態は、ＩＬ－１５のＮ４Ｄ／Ｎ６５Ｄバリアント、スキューバリアント対Ｓ３６４Ｋ／Ｅ３５７Ｑ：Ｌ３６８Ｄ／Ｋ３７０Ｓ、および各々のＦｃ単量体において４２８Ｌ／４３４Ｓバリアントを利用する。ｎｃＩＬ－１５／Ｒα－Ｆｃフォーマットにおいて、好ましい実施形態は、ＩＬ－１５のＮ４Ｄ／Ｎ６５Ｄバリアント、スキューバリアント対Ｓ３６４Ｋ／Ｅ３５７Ｑ：Ｌ３６８Ｄ／Ｋ３７０Ｓ、および各々のＦｃ単量体においてＭ４２８Ｌ／Ｎ４３４Ｓバリアントを利用する。

いくつかの実施形態では、ｎｃＩＬ－１５／Ｒα－Ｆｃ融合タンパク質は、ヒト成熟ＩＬ－１５のＮ４Ｄ／Ｎ６５Ｄバリアント、ＩＬ－１５Ｒα（スシ）ドメイン、および図６Ｃに示されるアミノ酸置換を含むＦｃ単量体を含む。いくつかの実施形態では、ｎｃＩＬ－１５／Ｒα－Ｆｃ融合タンパク質は、ヒト成熟ＩＬ－１５Ｎ４Ｄ／Ｎ６５Ｄバリアント、ＩＬ－１５Ｒα（スシ）ドメイン；アミノ酸置換Ｃ２２０Ｓ、ヘテロ二量体ｐＩ置換Ｌ３６８Ｄ／Ｋ３７０Ｓ、等配電子ｐＩ置換Ｑ２９５Ｅ／Ｎ３８４Ｄ／Ｑ４１８Ｅ／Ｎ４２１Ｄ、および切断置換Ｅ２３３Ｐ／Ｌ２３４Ｖ／Ｌ２３５Ａ／Ｇ２３６ｄｅｌ／Ｓ２６７Ｋを含む空のＦｃ単量体；ならびにアミノ酸置換Ｃ２２０Ｓ、ヘテロ二量体ｐＩ置換Ｓ３６４Ｋ／Ｅ３５７Ｑ、および切断置換Ｅ２３３Ｐ／Ｌ２３４Ｖ／Ｌ２３５Ａ／Ｇ２３６ｄｅｌ／Ｓ２６７Ｋを含むＩＬ－１５Ｒα（スシ）－Ｆｃ単量体を含む。いくつかの実施形態では、ｎｃＩＬ－１５／Ｒα－Ｆｃ融合タンパク質は、ヒト成熟ＩＬ－１５のＮ４Ｄ／Ｎ６５Ｄバリアントを含む一本鎖；ＩＬ－１５Ｒα（スシ）ドメイン；アミノ酸置換Ｃ２２０Ｓ、ヘテロ二量体ｐＩ置換Ｌ３６８Ｄ／Ｋ３７０Ｓ、等配電子ｐＩ置換Ｑ２９５Ｅ／Ｎ３８４Ｄ／Ｑ４１８Ｅ／Ｎ４２１Ｄ、切断置換Ｅ２３３Ｐ／Ｌ２３４Ｖ／Ｌ２３５Ａ／Ｇ２３６ｄｅｌ／Ｓ２６７Ｋ、およびＦｃＲｎ置換Ｍ４２８Ｌ／Ｎ４３４Ｓを含む空のＦｃ；ならびにＩＬ－１５Ｒα（スシ）－Ｆｃ単量体切断アミノ酸置換Ｃ２２０Ｓ、ヘテロ二量体ｐＩ置換Ｓ３６４Ｋ／Ｅ３５７Ｑ、切断置換Ｅ２３３Ｐ／Ｌ２３４Ｖ／Ｌ２３５Ａ／Ｇ２３６ｄｅｌ／Ｓ２６７Ｋ、およびＦｃＲｎ置換Ｍ４２８Ｌ／Ｎ４３４Ｓを含む。

ｎｃＩＬ－１５／Ｒα－Ｆｃフォーマットにおいて、好ましい実施形態は、ＩＬ－１５Ｎ１Ｄ／Ｎ６５Ｄバリアントを利用する。

ｎｃＩＬ－１５／Ｒα－Ｆｃフォーマットにおいて、好ましい実施形態は、ＩＬ－１５のＮ１Ｄ／Ｎ６５Ｄバリアントおよびスキューバリアント対Ｓ３６４Ｋ／Ｅ３５７Ｑ：Ｌ３６８Ｄ／Ｋ３７０Ｓを利用する。ｎｃＩＬ－１５／Ｒα－ヘテロＦｃフォーマットにおいて、好ましい実施形態は、ＩＬ－１５のＮ１Ｄ／Ｎ６５Ｄバリアント、スキューバリアント対Ｓ３６４Ｋ／Ｅ３５７Ｑ：Ｌ３６８Ｄ／Ｋ３７０Ｓ、および各々のＦｃ単量体において４２８Ｌ／４３４Ｓバリアントを利用する。ｎｃＩＬ－１５／Ｒα－ヘテロＦｃフォーマットにおいて、好ましい実施形態は、ＩＬ－１５のＮ１Ｄ／Ｎ６５Ｄバリアント、スキューバリアント対Ｓ３６４Ｋ／Ｅ３５７Ｑ：Ｌ３６８Ｄ／Ｋ３７０Ｓ、および各々のＦｃ単量体においてＭ４２８Ｌ／Ｎ４３４Ｓバリアントを利用する。

いくつかの実施形態では、ｎｃＩＬ－１５／Ｒα－Ｆｃ融合タンパク質は、ヒト成熟ＩＬ－１５のＮ１Ｄ／Ｎ６５Ｄバリアント、ＩＬ－１５Ｒα（スシ）ドメイン、および図６Ｃに示されるアミノ酸置換を含むＦｃ単量体を含む。いくつかの実施形態では、ｎｃＩＬ－１５／Ｒα－Ｆｃ融合タンパク質は、ヒト成熟ＩＬ－１５Ｎ１Ｄ／Ｎ６５Ｄバリアント、ＩＬ－１５Ｒα（スシ）ドメイン；アミノ酸置換Ｃ２２０Ｓ、ヘテロ二量体ｐＩ置換Ｌ３６８Ｄ／Ｋ３７０Ｓ、等配電子ｐＩ置換Ｑ２９５Ｅ／Ｎ３８４Ｄ／Ｑ４１８Ｅ／Ｎ４２１Ｄ、および切断置換Ｅ２３３Ｐ／Ｌ２３４Ｖ／Ｌ２３５Ａ／Ｇ２３６ｄｅｌ／Ｓ２６７Ｋを含む空のＦｃ単量体；ならびにアミノ酸置換Ｃ２２０Ｓ、ヘテロ二量体ｐＩ置換Ｓ３６４Ｋ／Ｅ３５７Ｑ、および切断置換Ｅ２３３Ｐ／Ｌ２３４Ｖ／Ｌ２３５Ａ／Ｇ２３６ｄｅｌ／Ｓ２６７Ｋを含むＩＬ－１５Ｒα（スシ）－Ｆｃ単量体を含む。いくつかの実施形態では、ｎｃＩＬ－１５／Ｒα－Ｆｃ融合タンパク質は、ヒト成熟ＩＬ－１５のＮ１Ｄ／Ｎ６５Ｄバリアントを含む一本鎖；ＩＬ－１５Ｒα（スシ）ドメイン；アミノ酸置換Ｃ２２０Ｓ、ヘテロ二量体ｐＩ置換Ｌ３６８Ｄ／Ｋ３７０Ｓ、等配電子ｐＩ置換Ｑ２９５Ｅ／Ｎ３８４Ｄ／Ｑ４１８Ｅ／Ｎ４２１Ｄ、切断置換Ｅ２３３Ｐ／Ｌ２３４Ｖ／Ｌ２３５Ａ／Ｇ２３６ｄｅｌ／Ｓ２６７Ｋ、およびＦｃＲｎ置換Ｍ４２８Ｌ／Ｎ４３４Ｓを含む空のＦｃ；ならびにアミノ酸置換Ｃ２２０Ｓ、ヘテロ二量体ｐＩ置換Ｓ３６４Ｋ／Ｅ３５７Ｑ、切断置換Ｅ２３３Ｐ／Ｌ２３４Ｖ／Ｌ２３５Ａ／Ｇ２３６ｄｅｌ／Ｓ２６７Ｋ、およびＦｃＲｎ置換Ｍ４２８Ｌ／Ｎ４３４Ｓを含むＩＬ－１５Ｒα（スシ）－Ｆｃ単量体を含む。

ｎｃＩＬ－１５／Ｒα－Ｆｃフォーマットにおいて、好ましい実施形態は、ＩＬ－１５バリアントＱ１０８Ｅを利用する。

ｎＩＬ－１５／Ｒα－Ｆｃフォーマットにおいて、好ましい実施形態は、ＩＬ－１５バリアントＱ１０８Ｅおよびスキューバリアント対Ｓ３６４Ｋ／Ｅ３５７Ｑ：Ｌ３６８Ｄ／Ｋ３７０Ｓを利用する。

ｎｃＩＬ－１５／Ｒα－Ｆｃフォーマットにおいて、好ましい実施形態は、ＩＬ－１５のバリアントＱ１０８Ｅおよびスキューバリアント対Ｓ３６４Ｋ／Ｅ３５７Ｑ：Ｌ３６８Ｄ／Ｋ３７０Ｓ、ならびに両方の単量体において４２８Ｌ／４３４Ｓバリアントを利用する。ｓｃＩＬ－１５／Ｒα－Ｆｃフォーマットにおいて、好ましい実施形態は、ＩＬ－１５のバリアントＱ１０８Ｅおよびスキューバリアント対Ｓ３６４Ｋ／Ｅ３５７Ｑ：Ｌ３６８Ｄ／Ｋ３７０Ｓ、ならびに両方の単量体においてＭ４２８Ｌ／Ｎ４３４Ｓバリアントを利用する。

いくつかの実施形態では、ｎｃＩＬ－１５／Ｒα－Ｆｃ融合タンパク質は、ヒト成熟ＩＬ－１５のＱ１０８Ｅバリアント、ＩＬ－１５Ｒα（スシ）ドメイン、および図６Ｃに示されるアミノ酸置換を含むＦｃ単量体を含む。いくつかの実施形態では、ｎｃＩＬ－１５／Ｒα－Ｆｃ融合タンパク質は、ヒト成熟ＩＬ－１５Ｑ１０８Ｅバリアント、ＩＬ－１５Ｒα（スシ）ドメイン；アミノ酸置換Ｃ２２０Ｓ、ヘテロ二量体ｐＩ置換Ｌ３６８Ｄ／Ｋ３７０Ｓ、等配電子ｐＩ置換Ｑ２９５Ｅ／Ｎ３８４Ｄ／Ｑ４１８Ｅ／Ｎ４２１Ｄ、および切断置換Ｅ２３３Ｐ／Ｌ２３４Ｖ／Ｌ２３５Ａ／Ｇ２３６ｄｅｌ／Ｓ２６７Ｋを含む空のＦｃ単量体；ならびにアミノ酸置換Ｃ２２０Ｓ、ヘテロ二量体ｐＩ置換Ｓ３６４Ｋ／Ｅ３５７Ｑ、および切断置換Ｅ２３３Ｐ／Ｌ２３４Ｖ／Ｌ２３５Ａ／Ｇ２３６ｄｅｌ／Ｓ２６７Ｋを含むＩＬ－１５Ｒα（スシ）－Ｆｃ単量体を含む。いくつかの実施形態では、ｎｃＩＬ－１５／Ｒα－Ｆｃ融合タンパク質は、ヒト成熟ＩＬ－１５のＱ１０８Ｅバリアントを含む一本鎖；ＩＬ－１５Ｒα（スシ）ドメイン；アミノ酸置換Ｃ２２０Ｓ、ヘテロ二量体ｐＩ置換Ｌ３６８Ｄ／Ｋ３７０Ｓ、等配電子ｐＩ置換Ｑ２９５Ｅ／Ｎ３８４Ｄ／Ｑ４１８Ｅ／Ｎ４２１Ｄ、切断置換Ｅ２３３Ｐ／Ｌ２３４Ｖ／Ｌ２３５Ａ／Ｇ２３６ｄｅｌ／Ｓ２６７Ｋ、およびＦｃＲｎ置換Ｍ４２８Ｌ／Ｎ４３４Ｓを含む空のＦｃ；ならびにアミノ酸置換Ｃ２２０Ｓ、ヘテロ二量体ｐＩ置換Ｓ３６４Ｋ／Ｅ３５７Ｑ、切断置換Ｅ２３３Ｐ／Ｌ２３４Ｖ／Ｌ２３５Ａ／Ｇ２３６ｄｅｌ／Ｓ２６７Ｋ、およびＦｃＲｎ置換Ｍ４２８Ｌ／Ｎ４３４Ｓを含むＩＬ－１５Ｒα（スシ）－Ｆｃ単量体を含む。

ｎｃＩＬ－１５／Ｒα－Ｆｃフォーマットにおいて、好ましい実施形態は、ＩＬ－１５野生型バリアントを利用する。

ｎｃＩＬ－１５／Ｒα－Ｆｃフォーマットにおいて、好ましい実施形態は、ＩＬ－１５の野生型バリアントおよびスキューバリアント対Ｓ３６４Ｋ／Ｅ３５７Ｑ：Ｌ３６８Ｄ／Ｋ３７０Ｓを利用する。ｎｃＩＬ－１５／Ｒα－ヘテロＦｃフォーマットにおいて、好ましい実施形態は、ＩＬ－１５の野生型バリアント、スキューバリアント対Ｓ３６４Ｋ／Ｅ３５７Ｑ：Ｌ３６８Ｄ／Ｋ３７０Ｓ、および各々のＦｃ単量体において４２８Ｌ／４３４Ｓバリアントを利用する。ｎｃＩＬ－１５／Ｒα－ヘテロＦｃフォーマットにおいて、好ましい実施形態は、ＩＬ－１５の野生型バリアント、スキューバリアント対Ｓ３６４Ｋ／Ｅ３５７Ｑ：Ｌ３６８Ｄ／Ｋ３７０Ｓ、および各々のＦｃ単量体においてＭ４２８Ｌ／Ｎ４３４Ｓバリアントを利用する。

いくつかの実施形態では、ｎｃＩＬ－１５／Ｒα－Ｆｃ融合タンパク質は、ヒト成熟ＩＬ－１５の野生型バリアント、ＩＬ－１５Ｒα（スシ）ドメイン、および図６Ｃに示されるアミノ酸置換を含むＦｃ単量体を含む。いくつかの実施形態では、ｎｃＩＬ－１５／Ｒα－Ｆｃ融合タンパク質は、ヒト成熟ＩＬ－１５野生型バリアント、ＩＬ－１５Ｒα（スシ）ドメイン；アミノ酸置換Ｃ２２０Ｓ、ヘテロ二量体ｐＩ置換Ｌ３６８Ｄ／Ｋ３７０Ｓ、等配電子ｐＩ置換Ｑ２９５Ｅ／Ｎ３８４Ｄ／Ｑ４１８Ｅ／Ｎ４２１Ｄ、および切断置換Ｅ２３３Ｐ／Ｌ２３４Ｖ／Ｌ２３５Ａ／Ｇ２３６ｄｅｌ／Ｓ２６７Ｋを含む空のＦｃ単量体；ならびにアミノ酸置換Ｃ２２０Ｓ、ヘテロ二量体ｐＩ置換Ｓ３６４Ｋ／Ｅ３５７Ｑ、および切断置換Ｅ２３３Ｐ／Ｌ２３４Ｖ／Ｌ２３５Ａ／Ｇ２３６ｄｅｌ／Ｓ２６７Ｋを含むＩＬ－１５Ｒα（スシ）－Ｆｃ単量体を含む。いくつかの実施形態では、ｎｃＩＬ－１５／Ｒα－Ｆｃ融合タンパク質は、ヒト成熟ＩＬ－１５の野生型バリアントを含む一本鎖；ＩＬ－１５Ｒα（スシ）ドメイン；アミノ酸置換Ｃ２２０Ｓ、ヘテロ二量体ｐＩ置換Ｌ３６８Ｄ／Ｋ３７０Ｓ、等配電子ｐＩ置換Ｑ２９５Ｅ／Ｎ３８４Ｄ／Ｑ４１８Ｅ／Ｎ４２１Ｄ、切断置換Ｅ２３３Ｐ／Ｌ２３４Ｖ／Ｌ２３５Ａ／Ｇ２３６ｄｅｌ／Ｓ２６７Ｋ、およびＦｃＲｎ置換Ｍ４２８Ｌ／Ｎ４３４Ｓを含む空のＦｃ；ならびにアミノ酸置換Ｃ２２０Ｓ、ヘテロ二量体ｐＩ置換Ｓ３６４Ｋ／Ｅ３５７Ｑ、切断置換Ｅ２３３Ｐ／Ｌ２３４Ｖ／Ｌ２３５Ａ／Ｇ２３６ｄｅｌ／Ｓ２６７Ｋ、およびＦｃＲｎ置換Ｍ４２８Ｌ／Ｎ４３４Ｓを含むＩＬ－１５Ｒα（スシ）－Ｆｃ単量体を含む。

ｎｃＩＬ－１５／Ｒα－ヘテロＦｃフォーマットにおいて、好ましい実施形態は、その全てがその全体において参照により本明細書に組み込まれる、ＷＯ２０１８／０７１９１９の図１０４ＡＳ（鎖１および鎖２を含むＸＥＮＰ２４３４９）および図１０４ＡＴ（鎖１および鎖２を含むＸＥＮＰ２４３８３）に示される。

ｎｃＩＬ－１５／Ｒα－Ｆｃフォーマットにおいて、好ましい実施形態は、鎖１（１６４８４）および鎖２（８７９３）および鎖３（１６４８１）を含むＸＥＮＰ２１４７９、鎖１（１６４７８）および鎖２（８９２４）および鎖３（）を含むＸＥＮＰ２２３６６、ならびに鎖１（１６４８４）および鎖２（８７９３）および鎖３（１５９０８）を含むＸＥＮＰ２２３６６、ならびにＸＥＮＰ２４３４８など、図１２Ａおよび図１２Ｂに示される。

Ｄ．二価ｎｃＩＬ－１５／Ｒα－Ｆｃ
この実施形態では、図９Ｄに示されるように、ヘテロ二量体融合タンパク質は、４つの単量体を含む。第１および第２の単量体は、（Ｎ末端からＣ末端にかけて）ＩＬ－１５／Ｒα（スシ）－ドメインリンカー－ＣＨ２－ＣＨ３を含み、ドメインリンカーは、ヒンジの全部または一部を時に含む。第３および第４の単量体はＩＬ－１５を含む。これは「二価ｎｃＩＬ－１５／Ｒα－Ｆｃ」と呼ばれ、「ｎｃ」は「非共有結合」を表す。

二価ｎｃＩＬ－１５／Ｒα－Ｆｃフォーマットにおいて、好ましい実施形態は、スキューバリアント対Ｓ３６４Ｋ／Ｅ３５７Ｑ：Ｌ３６８Ｄ／Ｋ３７０Ｓを利用する。

二価ｎｃＩＬ－１５／Ｒα－Ｆｃフォーマットにおいて、好ましい実施形態は、ＩＬ－１５Ｄ３０Ｎ／Ｎ６５Ｄバリアントを利用する。

二価ｎｃＩＬ－１５／Ｒα－Ｆｃフォーマットにおいて、好ましい実施形態は、ＩＬ－１５のＤ３０Ｎ／Ｅ６４Ｑ／Ｎ６５Ｄバリアントおよびスキューバリアント対Ｓ３６４Ｋ／Ｅ３５７Ｑ：Ｌ３６８Ｄ／Ｋ３７０Ｓを利用する。二価ｎｃＩＬ－１５／Ｒα－Ｆｃフォーマットにおいて、好ましい実施形態は、ＩＬ－１５のＤ３０Ｎ／Ｎ６５Ｄバリアント、スキューバリアント対Ｓ３６４Ｋ／Ｅ３５７Ｑ：Ｌ３６８Ｄ／Ｋ３７０Ｓ、各々のＦｃ単量体において４２８Ｌ／４３４Ｓバリアントを利用する。二価ｎｃＩＬ－１５／Ｒα－Ｆｃフォーマットにおいて、好ましい実施形態は、ＩＬ－１５のＤ３０Ｎ／Ｎ６５Ｄバリアント、スキューバリアント対Ｓ３６４Ｋ／Ｅ３５７Ｑ：Ｌ３６８Ｄ／Ｋ３７０Ｓ、各々のＦｃ単量体においてＭ４２８Ｌ／Ｎ４３４Ｓバリアントを利用する。

いくつかの実施形態では、二価ｎｃＩＬ－１５／Ｒα－Ｆｃ融合タンパク質は、ヒト成熟ＩＬ－１５Ｄ３０Ｎ／Ｎ６５Ｄバリアント、ＩＬ－１５Ｒα（スシ）ドメイン、および図６Ｃに示されるアミノ酸置換を含む２つのＦｃ単量体を含む。いくつかの実施形態では、二価ｎｃＩＬ－１５／Ｒα－Ｆｃ融合タンパク質は、２つのヒト成熟ＩＬ－１５Ｄ３０Ｎ／Ｎ６５Ｄバリアント；ヒトＩＬ－１５Ｒα（スシ）ドメインを含む第１のＩＬ－１５Ｒα（スシ）－Ｆｃ単量体、ならびにアミノ酸置換Ｃ２２０Ｓおよび切断置換Ｅ２３３Ｐ／Ｌ２３４Ｖ／Ｌ２３５Ａ／Ｇ２３６ｄｅｌ／Ｓ２６７Ｋを含むＦｃ単量体；ならびにヒトＩＬ－１５Ｒα（スシ）ドメインを含む第２のＩＬ－１５Ｒα（スシ）－Ｆｃ単量体、ならびにアミノ酸置換Ｃ２２０Ｓおよび切断置換Ｅ２３３Ｐ／Ｌ２３４Ｖ／Ｌ２３５Ａ／Ｇ２３６ｄｅｌ／Ｓ２６７Ｋを含むＦｃ単量体を含む。いくつかの実施形態では、二価ｎｃＩＬ－１５／Ｒα－Ｆｃ融合タンパク質は、２つのヒト成熟ＩＬ－１５Ｄ３０Ｎ／Ｎ６５Ｄバリアント；ヒトＩＬ－１５Ｒα（スシ）ドメインを含む第１のＩＬ－１５Ｒα（スシ）－Ｆｃ単量体、ならびにアミノ酸置換Ｃ２２０Ｓ、切断置換Ｅ２３３Ｐ／Ｌ２３４Ｖ／Ｌ２３５Ａ／Ｇ２３６ｄｅｌ／Ｓ２６７Ｋ、およびＦｃＲｎ置換Ｍ４２８Ｌ／Ｎ４３４Ｓを含むＦｃ単量体；ならびにヒトＩＬ－１５Ｒα（スシ）ドメインを含む第２のＩＬ－１５Ｒα（スシ）－Ｆｃ単量体、ならびにアミノ酸置換Ｃ２２０Ｓおよび切断置換Ｅ２３３Ｐ／Ｌ２３４Ｖ／Ｌ２３５Ａ／Ｇ２３６ｄｅｌ／Ｓ２６７Ｋ、およびＦｃＲｎ置換Ｍ４２８Ｌ／Ｎ４３４Ｓを含むＦｃ単量体を含む。

二価ｎｃＩＬ－１５／Ｒα－Ｆｃフォーマットにおいて、好ましい実施形態は、ＩＬ－１５Ｄ３０Ｎ／Ｅ６４Ｑ／Ｎ６５Ｄバリアントを利用する。

二価ｎｃＩＬ－１５／Ｒα－Ｆｃフォーマットにおいて、好ましい実施形態は、ＩＬ－１５のＤ３０Ｎ／Ｅ６４Ｑ／Ｎ６５Ｄバリアントおよびスキューバリアント対Ｓ３６４Ｋ／Ｅ３５７Ｑ：Ｌ３６８Ｄ／Ｋ３７０Ｓを利用する。二価ｎｃＩＬ－１５／Ｒα－Ｆｃフォーマットにおいて、好ましい実施形態は、ＩＬ－１５のＤ３０Ｎ／Ｅ６４Ｑ／Ｎ６５Ｄバリアント、スキューバリアント対Ｓ３６４Ｋ／Ｅ３５７Ｑ：Ｌ３６８Ｄ／Ｋ３７０Ｓ、および各々のＦｃ単量体において４２８Ｌ／４３４Ｓバリアントを利用する。二価ｎｃＩＬ－１５／Ｒα－Ｆｃフォーマットにおいて、好ましい実施形態は、ＩＬ－１５のＤ３０Ｎ／Ｅ６４Ｑ／Ｎ６５Ｄバリアント、スキューバリアント対Ｓ３６４Ｋ／Ｅ３５７Ｑ：Ｌ３６８Ｄ／Ｋ３７０Ｓ、および各々のＦｃ単量体においてＭ４２８Ｌ／Ｎ４３４Ｓバリアントを利用する。

二価ｎｃＩＬ－１５／Ｒα－Ｆｃフォーマットにおいて、好ましい実施形態は、ＩＬ－１５Ｎ６５Ｄバリアントを利用する。

二価ｎｃＩＬ－１５／Ｒα－Ｆｃフォーマットにおいて、好ましい実施形態は、ＩＬ－１５のＮ６５Ｄバリアントおよびスキューバリアント対Ｓ３６４Ｋ／Ｅ３５７Ｑ：Ｌ３６８Ｄ／Ｋ３７０Ｓを利用する。二価ｎｃＩＬ－１５／Ｒα－Ｆｃフォーマットにおいて、好ましい実施形態は、ＩＬ－１５のＮ６５Ｄバリアント、スキューバリアント対Ｓ３６４Ｋ／Ｅ３５７Ｑ：Ｌ３６８Ｄ／Ｋ３７０Ｓ、および各々のＦｃ単量体において４２８Ｌ／４３４Ｓバリアントを利用する。二価ｎｃＩＬ－１５／Ｒα－Ｆｃフォーマットにおいて、好ましい実施形態は、ＩＬ－１５のＮ６５Ｄバリアント、スキューバリアント対Ｓ３６４Ｋ／Ｅ３５７Ｑ：Ｌ３６８Ｄ／Ｋ３７０Ｓ、および各々のＦｃ単量体においてＭ４２８Ｌ／Ｎ４３４Ｓバリアントを利用する。

いくつかの実施形態では、二価ｎｃＩＬ－１５／Ｒα－Ｆｃ融合タンパク質は、ヒト成熟ＩＬ－１５Ｎ６５Ｄバリアント、ＩＬ－１５Ｒα（スシ）ドメイン、および図６Ｃに示されるアミノ酸置換を含む２つのＦｃ単量体を含む。いくつかの実施形態では、二価ｎｃＩＬ－１５／Ｒα－Ｆｃ融合タンパク質は、２つのヒト成熟ＩＬ－１５Ｎ６５Ｄバリアントと；ヒトＩＬ－１５Ｒα（スシ）ドメインを含む第１のＩＬ－１５Ｒα（スシ）－Ｆｃ単量体、ならびにアミノ酸置換Ｃ２２０Ｓおよび切断置換Ｅ２３３Ｐ／Ｌ２３４Ｖ／Ｌ２３５Ａ／Ｇ２３６ｄｅｌ／Ｓ２６７Ｋを含むＦｃ単量体と；ヒトＩＬ－１５Ｒα（スシ）ドメインを含む第２のＩＬ－１５Ｒα（スシ）－Ｆｃ単量体、ならびにアミノ酸置換Ｃ２２０Ｓおよび切断置換Ｅ２３３Ｐ／Ｌ２３４Ｖ／Ｌ２３５Ａ／Ｇ２３６ｄｅｌ／Ｓ２６７Ｋを含むＦｃ単量体とを含む。いくつかの実施形態では、二価ｎｃＩＬ－１５／Ｒα－Ｆｃ融合タンパク質は、２つのヒト成熟ＩＬ－１５Ｎ６５Ｄバリアントと；ヒトＩＬ－１５Ｒα（スシ）ドメインを含む第１のＩＬ－１５Ｒα（スシ）－Ｆｃ単量体、ならびにアミノ酸置換Ｃ２２０Ｓ、切断置換Ｅ２３３Ｐ／Ｌ２３４Ｖ／Ｌ２３５Ａ／Ｇ２３６ｄｅｌ／Ｓ２６７Ｋ、およびＦｃＲｎ置換Ｍ４２８Ｌ／Ｎ４３４Ｓを含むＦｃ単量体と；ヒトＩＬ－１５Ｒα（スシ）ドメインを含む第２のＩＬ－１５Ｒα（スシ）－Ｆｃ単量体、ならびにアミノ酸置換Ｃ２２０Ｓおよび切断置換Ｅ２３３Ｐ／Ｌ２３４Ｖ／Ｌ２３５Ａ／Ｇ２３６ｄｅｌ／Ｓ２６７Ｋ、およびＦｃＲｎ置換Ｍ４２８Ｌ／Ｎ４３４Ｓを含むＦｃ単量体とを含む。

二価ｎｃＩＬ－１５／Ｒα－Ｆｃフォーマットにおいて、好ましい実施形態は、ＩＬ－１５Ｎ４Ｄ／Ｎ６５Ｄバリアントを利用する。

二価ｎｃＩＬ－１５／Ｒα－Ｆｃフォーマットにおいて、好ましい実施形態は、ＩＬ－１５のＮ４Ｄ／Ｎ６５Ｄバリアントおよびスキューバリアント対Ｓ３６４Ｋ／Ｅ３５７Ｑ：Ｌ３６８Ｄ／Ｋ３７０Ｓを利用する。二価ｎｃＩＬ－１５／Ｒα－Ｆｃフォーマットにおいて、好ましい実施形態は、ＩＬ－１５のＮ４Ｄ／Ｎ６５Ｄバリアント、スキューバリアント対Ｓ３６４Ｋ／Ｅ３５７Ｑ：Ｌ３６８Ｄ／Ｋ３７０Ｓ、および各々のＦｃ単量体において４２８Ｌ／４３４Ｓバリアントを利用する。二価ｎｃＩＬ－１５／Ｒα－Ｆｃフォーマットにおいて、好ましい実施形態は、ＩＬ－１５のＮ４Ｄ／Ｎ６５Ｄバリアント、スキューバリアント対Ｓ３６４Ｋ／Ｅ３５７Ｑ：Ｌ３６８Ｄ／Ｋ３７０Ｓ、および各々のＦｃ単量体においてＭ４２８Ｌ／Ｎ４３４Ｓバリアントを利用する。

二価ｎｃＩＬ－１５／Ｒα－Ｆｃフォーマットにおいて、好ましい実施形態は、ＩＬ－１５Ｎ１Ｄ／Ｎ６５Ｄバリアントを利用する。

二価ｎｃＩＬ－１５／Ｒα－Ｆｃフォーマットにおいて、好ましい実施形態は、ＩＬ－１５のＮ１Ｄ／Ｎ６５Ｄバリアントおよびスキューバリアント対Ｓ３６４Ｋ／Ｅ３５７Ｑ：Ｌ３６８Ｄ／Ｋ３７０Ｓを利用する。二価ｎｃＩＬ－１５／Ｒα－Ｆｃフォーマットにおいて、好ましい実施形態は、ＩＬ－１５のＮ１Ｄ／Ｎ６５Ｄバリアント、スキューバリアント対Ｓ３６４Ｋ／Ｅ３５７Ｑ：Ｌ３６８Ｄ／Ｋ３７０Ｓ、および各々のＦｃ単量体において４２８Ｌ／４３４Ｓバリアントを利用する。二価ｎｃＩＬ－１５／Ｒα－Ｆｃフォーマットにおいて、好ましい実施形態は、ＩＬ－１５のＮ１Ｄ／Ｎ６５Ｄバリアント、スキューバリアント対Ｓ３６４Ｋ／Ｅ３５７Ｑ：Ｌ３６８Ｄ／Ｋ３７０Ｓ、および各々のＦｃ単量体においてＭ４２８Ｌ／Ｎ４３４Ｓバリアントを利用する。

いくつかの実施形態では、二価ｎｃＩＬ－１５／Ｒα－Ｆｃ融合タンパク質は、ヒト成熟ＩＬ－１５Ｎ１Ｄ／Ｎ６５Ｄバリアント、ＩＬ－１５Ｒα（スシ）ドメイン、および図６Ｃに示されるアミノ酸置換を含む２つのＦｃ単量体を含む。いくつかの実施形態では、二価ｎｃＩＬ－１５／Ｒα－Ｆｃ融合タンパク質は、２つのヒト成熟ＩＬ－１５Ｎ１Ｄ／Ｎ６５Ｄバリアントと；ヒトＩＬ－１５Ｒα（スシ）ドメインを含む第１のＩＬ－１５Ｒα（スシ）－Ｆｃ単量体、ならびにアミノ酸置換Ｃ２２０Ｓおよび切断置換Ｅ２３３Ｐ／Ｌ２３４Ｖ／Ｌ２３５Ａ／Ｇ２３６ｄｅｌ／Ｓ２６７Ｋを含むＦｃ単量体と；ヒトＩＬ－１５Ｒα（スシ）ドメインを含む第２のＩＬ－１５Ｒα（スシ）－Ｆｃ単量体、ならびにアミノ酸置換Ｃ２２０Ｓおよび切断置換Ｅ２３３Ｐ／Ｌ２３４Ｖ／Ｌ２３５Ａ／Ｇ２３６ｄｅｌ／Ｓ２６７Ｋを含むＦｃ単量体とを含む。いくつかの実施形態では、二価ｎｃＩＬ－１５／Ｒα－Ｆｃ融合タンパク質は、２つのヒト成熟ＩＬ－１５Ｎ１Ｄ／Ｎ６５Ｄバリアントと；ヒトＩＬ－１５Ｒα（スシ）ドメインを含む第１のＩＬ－１５Ｒα（スシ）－Ｆｃ単量体、ならびにアミノ酸置換Ｃ２２０Ｓ、切断置換Ｅ２３３Ｐ／Ｌ２３４Ｖ／Ｌ２３５Ａ／Ｇ２３６ｄｅｌ／Ｓ２６７Ｋ、およびＦｃＲｎ置換Ｍ４２８Ｌ／Ｎ４３４Ｓを含むＦｃ単量体と；ヒトＩＬ－１５Ｒα（スシ）ドメインを含む第２のＩＬ－１５Ｒα（スシ）－Ｆｃ単量体、ならびにアミノ酸置換Ｃ２２０Ｓおよび切断置換Ｅ２３３Ｐ／Ｌ２３４Ｖ／Ｌ２３５Ａ／Ｇ２３６ｄｅｌ／Ｓ２６７Ｋ、およびＦｃＲｎ置換Ｍ４２８Ｌ／Ｎ４３４Ｓを含むＦｃ単量体とを含む。

二価ｎｃＩＬ－１５／Ｒα－Ｆｃフォーマットにおいて、好ましい実施形態は、ＩＬ－１５Ｑ１０８Ｅバリアントを利用する。

二価ｎｃＩＬ－１５／Ｒα－Ｆｃフォーマットにおいて、好ましい実施形態は、ＩＬ－１５のＱ１０８Ｅバリアントおよびスキューバリアント対Ｓ３６４Ｋ／Ｅ３５７Ｑ：Ｌ３６８Ｄ／Ｋ３７０Ｓを利用する。二価ｎｃＩＬ－１５／Ｒα－Ｆｃフォーマットにおいて、好ましい実施形態は、ＩＬ－１５のＱ１０８Ｅバリアントおよびスキューバリアント対Ｓ３６４Ｋ／Ｅ３５７Ｑ：Ｌ３６８Ｄ／Ｋ３７０Ｓ、ならびに両方の単量体において４２８Ｌ／４３４Ｓバリアントを利用する。二価ｎｃＩＬ－１５／Ｒα－Ｆｃフォーマットにおいて、好ましい実施形態は、ＩＬ－１５のＱ１０８Ｅバリアント、スキューバリアント対Ｓ３６４Ｋ／Ｅ３５７Ｑ：Ｌ３６８Ｄ／Ｋ３７０Ｓ、および各々のＦｃ単量体においてＭ４２８Ｌ／Ｎ４３４Ｓバリアントを利用する。

いくつかの実施形態では、二価ｎｃＩＬ－１５／Ｒα－Ｆｃ融合タンパク質は、ヒト成熟ＩＬ－１５Ｑ１０８Ｅバリアント、ＩＬ－１５Ｒα（スシ）ドメイン、および図６Ｃに示されるアミノ酸置換を含む２つのＦｃ単量体を含む。いくつかの実施形態では、二価ｎｃＩＬ－１５／Ｒα－Ｆｃ融合タンパク質は、２つのヒト成熟ＩＬ－１５Ｑ１０８Ｅバリアントと；ヒトＩＬ－１５Ｒα（スシ）ドメインを含む第１のＩＬ－１５Ｒα（スシ）－Ｆｃ単量体、ならびにアミノ酸置換Ｃ２２０Ｓおよび切断置換Ｅ２３３Ｐ／Ｌ２３４Ｖ／Ｌ２３５Ａ／Ｇ２３６ｄｅｌ／Ｓ２６７Ｋを含むＦｃ単量体と；ヒトＩＬ－１５Ｒα（スシ）ドメインを含む第２のＩＬ－１５Ｒα（スシ）－Ｆｃ単量体、ならびにアミノ酸置換Ｃ２２０Ｓおよび切断置換Ｅ２３３Ｐ／Ｌ２３４Ｖ／Ｌ２３５Ａ／Ｇ２３６ｄｅｌ／Ｓ２６７Ｋを含むＦｃ単量体とを含む。いくつかの実施形態では、二価ｎｃＩＬ／Ｒα－Ｆｃ融合タンパク質は、２つのヒト成熟ＩＬ－Ｑ１０８Ｅバリアントと；ヒトＩＬ－１５Ｒα（スシ）ドメインを含む第１のＩＬ－１５Ｒα（スシ）－Ｆｃ単量体、ならびにアミノ酸置換Ｃ２２０Ｓ、切断置換Ｅ２３３Ｐ／Ｌ２３４Ｖ／Ｌ２３５Ａ／Ｇ２３６ｄｅｌ／Ｓ２６７Ｋ、およびＦｃＲｎ置換Ｍ４２８Ｌ／Ｎ４３４Ｓを含むＦｃ単量体と；ヒトＩＬ－１５Ｒα（スシ）ドメインを含む第２のＩＬ－１５Ｒα（スシ）－Ｆｃ単量体、ならびにアミノ酸置換Ｃ２２０Ｓおよび切断置換Ｅ２３３Ｐ／Ｌ２３４Ｖ／Ｌ２３５Ａ／Ｇ２３６ｄｅｌ／Ｓ２６７Ｋ、およびＦｃＲｎ置換Ｍ４２８Ｌ／Ｎ４３４Ｓを含むＦｃ単量体とを含む。

二価ｎｃＩＬ－１５／Ｒα－Ｆｃフォーマットにおいて、好ましい実施形態は、ＩＬ－１５野生型バリアントを利用する。

二価ｎｃＩＬ－１５／Ｒα－Ｆｃフォーマットにおいて、好ましい実施形態は、ＩＬ－１５の野生型バリアントおよびスキューバリアント対Ｓ３６４Ｋ／Ｅ３５７Ｑ：Ｌ３６８Ｄ／Ｋ３７０Ｓを利用する。

二価ｎｃＩＬ－１５／Ｒα－Ｆｃフォーマットにおいて、好ましい実施形態は、ＩＬ－１５の野生型バリアント、スキューバリアント対Ｓ３６４Ｋ／Ｅ３５７Ｑ：Ｌ３６８Ｄ／Ｋ３７０Ｓ、および各々のＦｃ単量体において４２８Ｌ／４３４Ｓバリアントを利用する。二価ｎｃＩＬ－１５／Ｒα－Ｆｃフォーマットにおいて、好ましい実施形態は、ＩＬ－１５の野生型バリアント、スキューバリアント対Ｓ３６４Ｋ／Ｅ３５７Ｑ：Ｌ３６８Ｄ／Ｋ３７０Ｓ、および各々のＦｃ単量体においてＭ４２８Ｌ／Ｎ４３４Ｓバリアントを利用する。

いくつかの実施形態では、二価ｎｃＩＬ－１５／Ｒα－Ｆｃ融合タンパク質は、ヒト成熟ＩＬ－１５野生型バリアント、ＩＬ－１５Ｒα（スシ）ドメイン、および図６Ｃに示されるアミノ酸置換を含む２つのＦｃ単量体を含む。いくつかの実施形態では、二価ｎｃＩＬ－１５／Ｒα－Ｆｃ融合タンパク質は、２つのヒト成熟ＩＬ－１５野生型バリアントと；ヒトＩＬ－１５Ｒα（スシ）ドメインを含む第１のＩＬ－１５Ｒα（スシ）－Ｆｃ単量体、ならびにアミノ酸置換Ｃ２２０Ｓおよび切断置換Ｅ２３３Ｐ／Ｌ２３４Ｖ／Ｌ２３５Ａ／Ｇ２３６ｄｅｌ／Ｓ２６７Ｋを含むＦｃ単量体と；ヒトＩＬ－１５Ｒα（スシ）ドメインを含む第２のＩＬ－１５Ｒα（スシ）－Ｆｃ単量体、ならびにアミノ酸置換Ｃ２２０Ｓおよび切断置換Ｅ２３３Ｐ／Ｌ２３４Ｖ／Ｌ２３５Ａ／Ｇ２３６ｄｅｌ／Ｓ２６７Ｋを含むＦｃ単量体とを含む。いくつかの実施形態では、二価ｎｃＩＬ／Ｒα－Ｆｃ融合タンパク質は、２つのヒト成熟ＩＬ－野生型バリアントと；ヒトＩＬ－１５Ｒα（スシ）ドメインを含む第１のＩＬ－１５Ｒα（スシ）－Ｆｃ単量体、ならびにアミノ酸置換Ｃ２２０Ｓ、切断置換Ｅ２３３Ｐ／Ｌ２３４Ｖ／Ｌ２３５Ａ／Ｇ２３６ｄｅｌ／Ｓ２６７Ｋ、およびＦｃＲｎ置換Ｍ４２８Ｌ／Ｎ４３４Ｓを含むＦｃ単量体と；ヒトＩＬ－１５Ｒα（切断）ドメインを含む第２のＩＬ－１５Ｒα（スシ）－Ｆｃ単量体、ならびにアミノ酸置換Ｃ２２０Ｓおよび切断置換Ｅ２３３Ｐ／Ｌ２３４Ｖ／Ｌ２３５Ａ／Ｇ２３６ｄｅｌ／Ｓ２６７Ｋ、およびＦｃＲｎ置換Ｍ４２８Ｌ／Ｎ４３４Ｓを含むＦｃ単量体とを含む。

二価ｎｃＩＬ－１５／Ｒα－Ｆｃフォーマットにおいて、好ましい実施形態は、その全てがその全体において参照により本明細書に組み込まれる、ＷＯ２０１８／０７１９１９の図１０４Ｅ（鎖１および鎖２を含むＸＥＮＰ２１９７９）および配列表に配列番号４８０～４８３として示される。

二価ｎｃＩＬ－１５／Ｒα－Ｆｃフォーマットにおいて、好ましい実施形態は、実施形態は、鎖１（１７０２３）および鎖２（１６４８４）を含むＸＥＮＰ２１９７８などの、図１３に示される。

Ｅ．二価ｓｃＩＬ－１５／Ｒα－Ｆｃ
この実施形態では、図９Ｂに示されるように、ヘテロ二量体融合タンパク質は、２つの単量体を含む。第１および第２の単量体は、（Ｎ末端からＣ末端にかけて）ＩＬ－１５／Ｒα（スシ）－ドメインリンカー－ＩＬ－１５－任意のドメインリンカー－ＣＨ２－ＣＨ３を含み、ドメインリンカーは、ヒンジの全部または一部を時に含む。これは「二価ｓｃＩＬ－１５／Ｒα－Ｆｃ」と呼ばれ、「ｓｃ」は「一本鎖」（例えば、ＩＬ－１５／Ｒαスシ複合体の）を表す。

二価ｓｃＩＬ－１５／Ｒα－Ｆｃフォーマットにおいて、好ましい実施形態は、スキューバリアント対Ｓ３６４Ｋ／Ｅ３５７Ｑ：Ｌ３６８Ｄ／Ｋ３７０Ｓを利用する。

二価ｓｃＩＬ－１５／Ｒα－Ｆｃフォーマットにおいて、好ましい実施形態は、ＩＬ－１５Ｎ６５Ｄバリアントを利用する。

二価ｓｃＩＬ－１５／Ｒα－Ｆｃフォーマットにおいて、好ましい実施形態は、ＩＬ－１５Ｄ３０Ｎ／Ｅ６４Ｑ／Ｎ６５Ｄバリアントおよびスキューバリアント対Ｓ３６４Ｋ／Ｅ３５７Ｑ：Ｌ３６８Ｄ／Ｋ３７０Ｓを利用する。二価ｓｃＩＬ－１５／Ｒα－Ｆｃフォーマットにおいて、好ましい実施形態は、ＩＬ－１５Ｄ３０Ｎ／Ｎ６５Ｄバリアントおよびスキューバリアント対Ｓ３６４Ｋ／Ｅ３５７Ｑ：Ｌ３６８Ｄ／Ｋ３７０Ｓ、ならびに両方の単量体において４２８Ｌ／４３４Ｓバリアントを利用する。

いくつかの実施形態では、二価ｎｃＩＬ－１５／Ｒα－Ｆｃ融合タンパク質は、２つのヒト成熟ＩＬ－１５Ｄ３０Ｎ／Ｎ６５Ｄバリアント、２つのＩＬ－１５Ｒα（スシ）ドメイン、および図６Ｄに示されるアミノ酸置換を含む２つのＦｃ単量体を含む。いくつかの実施形態では、二価ｓｃＩＬ－１５／Ｒα－Ｆｃ融合タンパク質は、アミノ酸置換Ｃ２２０Ｓおよび切断置換Ｅ２３３Ｐ／Ｌ２３４Ｖ／Ｌ２３５Ａ／Ｇ２３６ｄｅｌ／Ｓ２６７Ｋを含むＦｃモノマーに連結されたヒトＩＬ－１５Ｒα（スシ）ドメインに連結されたヒト成熟ＩＬ－１５Ｄ３０Ｎ／Ｎ６５Ｄバリアントを含む第１のＩＬ－１５／Ｒα（スシ）－Ｆｃ単量体と；アミノ酸置換Ｃ２２０Ｓおよび切断置換Ｅ２３３Ｐ／Ｌ２３４Ｖ／Ｌ２３５Ａ／Ｇ２３６ｄｅｌ／Ｓ２６７Ｋを含むＦｃ単量体に連結されたヒトＩＬ－１５Ｒα（スシ）ドメインに連結されたヒト成熟ＩＬ－１５Ｄ３０Ｎ／Ｎ６５Ｄバリアントを含む第２のＩＬ－１５／Ｒα（スシ）－Ｆｃ単量体とを含む。いくつかの実施形態では、二価ｓｃＩＬ－１５／Ｒα－Ｆｃ融合タンパク質は、アミノ酸置換Ｃ２２０Ｓ、切断置換Ｅ２３３Ｐ／Ｌ２３４Ｖ／Ｌ２３５Ａ／Ｇ２３６ｄｅｌ／Ｓ２６７Ｋ、およびＦｃＲｎ置換Ｍ４２８Ｌ／Ｎ４３４Ｓを含むＦｃモノマーに連結されたヒトＩＬ－１５Ｒα（スシ）ドメインに連結されたヒト成熟ＩＬ－１５Ｄ３０Ｎ／Ｎ６５Ｄバリアントを含む第１のＩＬ－１５／Ｒα（スシ）－Ｆｃ単量体と；アミノ酸置換Ｃ２２０Ｓ、切断置換Ｅ２３３Ｐ／Ｌ２３４Ｖ／Ｌ２３５Ａ／Ｇ２３６ｄｅｌ／Ｓ２６７Ｋ、およびＦｃＲｎ置換Ｍ４２８Ｌ／Ｎ４３４Ｓを含むＦｃ単量体に連結されたヒトＩＬ－１５Ｒα（スシ）ドメインに連結されたヒト成熟ＩＬ－１５Ｄ３０Ｎ／Ｎ６５Ｄバリアントを含む第２のＩＬ－１５／Ｒα（スシ）－Ｆｃ単量体とを含む。
二価ｓｃＩＬ－１５／Ｒα－Ｆｃフォーマットにおいて、好ましい実施形態は、ＩＬ－１５Ｄ３０Ｎ／Ｅ６４Ｑ／Ｎ６５Ｄバリアントを利用する。

二価ｓｃＩＬ－１５／Ｒα－Ｆｃフォーマットにおいて、好ましい実施形態は、ＩＬ－１５Ｄ３０Ｎ／Ｅ６４Ｑ／Ｎ６５Ｄバリアントおよびスキューバリアント対Ｓ３６４Ｋ／Ｅ３５７Ｑ：Ｌ３６８Ｄ／Ｋ３７０Ｓを利用する。

二価ｓｃＩＬ－１５／Ｒα－Ｆｃフォーマットにおいて、好ましい実施形態は、ＩＬ－１５Ｄ３０Ｎ／Ｅ６４Ｑ／Ｎ６５Ｄバリアント、スキューバリアント対Ｓ３６４Ｋ／Ｅ３５７Ｑ：Ｌ３６８Ｄ／Ｋ３７０Ｓ、および各々のＦｃ単量体において４２８Ｌ／４３４Ｓバリアントを利用する。二価ｓｃＩＬ－１５／Ｒα－Ｆｃフォーマットにおいて、好ましい実施形態は、ＩＬ－１５Ｄ３０Ｎ／Ｅ６４Ｑ／Ｎ６５Ｄバリアント、スキューバリアント対Ｓ３６４Ｋ／Ｅ３５７Ｑ：Ｌ３６８Ｄ／Ｋ３７０Ｓ、および各々のＦｃ単量体においてＭ４２８Ｌ／Ｎ４３４Ｓバリアントを利用する。

いくつかの実施形態では、二価ｎｃＩＬ－１５／Ｒα－Ｆｃ融合タンパク質は、２つのヒト成熟ＩＬ－１５Ｄ３０Ｎ／Ｅ６４Ｑ／Ｎ６５Ｄバリアント、２つのＩＬ－１５Ｒα（スシ）ドメイン、および図６Ｄに示されるアミノ酸置換を含む２つのＦｃ単量体を含む。いくつかの実施形態では、二価ｓｃＩＬ－１５／Ｒα－Ｆｃ融合タンパク質は、アミノ酸置換Ｃ２２０Ｓおよび切断置換Ｅ２３３Ｐ／Ｌ２３４Ｖ／Ｌ２３５Ａ／Ｇ２３６ｄｅｌ／Ｓ２６７Ｋを含むＦｃモノマーに連結されたヒトＩＬ－１５Ｒα（スシ）ドメインに連結されたヒト成熟ＩＬ－１５Ｄ３０Ｎ／Ｅ６４Ｑ／Ｎ６５Ｄバリアントを含む第１のＩＬ－１５／Ｒα（スシ）－Ｆｃ単量体と；アミノ酸置換Ｃ２２０Ｓおよび切断置換Ｅ２３３Ｐ／Ｌ２３４Ｖ／Ｌ２３５Ａ／Ｇ２３６ｄｅｌ／Ｓ２６７Ｋを含むＦｃ単量体に連結されたヒトＩＬ－１５Ｒα（スシ）ドメインに連結されたヒト成熟ＩＬ－１５Ｄ３０Ｎ／Ｅ６４Ｑ／Ｎ６５Ｄバリアントを含む第２のＩＬ－１５／Ｒα（スシ）－Ｆｃ単量体とを含む。いくつかの実施形態では、二価ｓｃＩＬ－１５／Ｒα－Ｆｃ融合タンパク質は、アミノ酸置換Ｃ２２０Ｓ、切断置換Ｅ２３３Ｐ／Ｌ２３４Ｖ／Ｌ２３５Ａ／Ｇ２３６ｄｅｌ／Ｓ２６７Ｋ、およびＦｃＲｎ置換Ｍ４２８Ｌ／Ｎ４３４Ｓを含むＦｃモノマーに連結されたヒトＩＬ－１５Ｒα（スシ）ドメインに連結されたヒト成熟ＩＬ－１５Ｄ３０Ｎ／Ｅ６４Ｑ／Ｎ６５Ｄバリアントを含む第１のＩＬ－１５／Ｒα（スシ）－Ｆｃ単量体と；アミノ酸置換Ｃ２２０Ｓ、切断置換Ｅ２３３Ｐ／Ｌ２３４Ｖ／Ｌ２３５Ａ／Ｇ２３６ｄｅｌ／Ｓ２６７Ｋ、およびＦｃＲｎ置換Ｍ４２８Ｌ／Ｎ４３４Ｓを含むＦｃ単量体に連結されたヒトＩＬ－１５Ｒα（スシ）ドメインに連結されたヒト成熟ＩＬ－１５Ｄ３０Ｎ／Ｅ６４Ｑ／Ｎ６５Ｄバリアントを含む第２のＩＬ－１５／Ｒα（スシ）－Ｆｃ単量体とを含む。

二価ｓｃＩＬ－１５／Ｒα－Ｆｃフォーマットにおいて、好ましい実施形態は、ＩＬ－１５Ｎ６５Ｄバリアントおよびスキューバリアント対Ｓ３６４Ｋ／Ｅ３５７Ｑ：Ｌ３６８Ｄ／Ｋ３７０Ｓを利用する。二価ｓｃＩＬ－１５／Ｒα－Ｆｃフォーマットにおいて、好ましい実施形態は、ＩＬ－１５Ｎ６５Ｄバリアント、スキューバリアント対Ｓ３６４Ｋ／Ｅ３５７Ｑ：Ｌ３６８Ｄ／Ｋ３７０Ｓ、および各Ｆｃ単量体において４２８Ｌ／４３４Ｓバリアントを利用する。二価ｓｃＩＬ－１５／Ｒα－Ｆｃフォーマットにおいて、好ましい実施形態は、ＩＬ－１５Ｎ６５Ｄバリアント、スキューバリアント対Ｓ３６４Ｋ／Ｅ３５７Ｑ：Ｌ３６８Ｄ／Ｋ３７０Ｓ、および各Ｆｃ単量体においてＭ４２８Ｌ／Ｎ４３４Ｓバリアントを利用する。

いくつかの実施形態では、二価ｎｃＩＬ－１５／Ｒα－Ｆｃ融合タンパク質は、２つのヒト成熟ＩＬ－１５Ｎ６５Ｄバリアント、２つのＩＬ－１５Ｒα（スシ）ドメイン、および図６Ｄに示されるアミノ酸置換を含む２つのＦｃ単量体を含む。いくつかの実施形態では、二価ｓｃＩＬ－１５／Ｒα－Ｆｃ融合タンパク質は、アミノ酸置換Ｃ２２０Ｓおよび切断置換Ｅ２３３Ｐ／Ｌ２３４Ｖ／Ｌ２３５Ａ／Ｇ２３６ｄｅｌ／Ｓ２６７Ｋを含むＦｃモノマーに連結されたヒトＩＬ－１５Ｒα（スシ）ドメインに連結されたヒト成熟ＩＬ－１５Ｎ６５Ｄバリアントを含む第１のＩＬ－１５／Ｒα（スシ）－Ｆｃ単量体と；アミノ酸置換Ｃ２２０Ｓおよび切断置換Ｅ２３３Ｐ／Ｌ２３４Ｖ／Ｌ２３５Ａ／Ｇ２３６ｄｅｌ／Ｓ２６７Ｋを含むＦｃ単量体に連結されたヒトＩＬ－１５Ｒα（スシ）ドメインに連結されたヒト成熟ＩＬ－１５Ｎ６５Ｄバリアントを含む第２のＩＬ－１５／Ｒα（スシ）－Ｆｃ単量体とを含む。いくつかの実施形態では、二価ｓｃＩＬ－１５／Ｒα－Ｆｃ融合タンパク質は、アミノ酸置換Ｃ２２０Ｓ、切断置換Ｅ２３３Ｐ／Ｌ２３４Ｖ／Ｌ２３５Ａ／Ｇ２３６ｄｅｌ／Ｓ２６７Ｋ、およびＦｃＲｎ置換Ｍ４２８Ｌ／Ｎ４３４Ｓを含むＦｃモノマーに連結されたヒトＩＬ－１５Ｒα（スシ）ドメインに連結されたヒト成熟ＩＬ－１５Ｎ６５Ｄバリアントを含む第１のＩＬ－１５／Ｒα（スシ）－Ｆｃ単量体と；アミノ酸置換Ｃ２２０Ｓ、切断置換Ｅ２３３Ｐ／Ｌ２３４Ｖ／Ｌ２３５Ａ／Ｇ２３６ｄｅｌ／Ｓ２６７Ｋ、およびＦｃＲｎ置換Ｍ４２８Ｌ／Ｎ４３４Ｓを含むＦｃ単量体に連結されたヒトＩＬ－１５Ｒα（スシ）ドメインに連結されたヒト成熟ＩＬ－１５Ｎ６５Ｄバリアントを含む第２のＩＬ－１５／Ｒα（スシ）－Ｆｃ単量体とを含む。

二価ｓｃＩＬ－１５／Ｒα－Ｆｃフォーマットにおいて、好ましい実施形態は、ＩＬ－１５Ｎ４Ｄ／Ｎ６５Ｄバリアントを利用する。

二価ｓｃＩＬ－１５／Ｒα－Ｆｃフォーマットにおいて、好ましい実施形態は、ＩＬ－１５Ｎ４Ｄ／Ｎ６５Ｄバリアントおよびスキューバリアント対Ｓ３６４Ｋ／Ｅ３５７Ｑ：Ｌ３６８Ｄ／Ｋ３７０Ｓを利用する。二価ｓｃＩＬ－１５／Ｒα－Ｆｃフォーマットにおいて、好ましい実施形態は、ＩＬ－１５Ｎ４Ｄ／Ｎ６５Ｄバリアント、スキューバリアント対Ｓ３６４Ｋ／Ｅ３５７Ｑ：Ｌ３６８Ｄ／Ｋ３７０Ｓ、および各々のＦｃ単量体において４２８Ｌ／４３４Ｓバリアントを利用する。二価ｓｃＩＬ－１５／Ｒα－Ｆｃフォーマットにおいて、好ましい実施形態は、ＩＬ－１５Ｎ４Ｄ／Ｎ６５Ｄバリアント、スキューバリアント対Ｓ３６４Ｋ／Ｅ３５７Ｑ：Ｌ３６８Ｄ／Ｋ３７０Ｓ、および各々のＦｃ単量体においてＭ４２８Ｌ／Ｎ４３４Ｓバリアントを利用する。

いくつかの実施形態では、二価ｎｃＩＬ－１５／Ｒα－Ｆｃ融合タンパク質は、２つのヒト成熟ＩＬ－１５Ｎ４Ｄ／Ｎ６５Ｄバリアント、２つのＩＬ－１５Ｒα（スシ）ドメイン、および図６Ｄに示されるアミノ酸置換を含む２つのＦｃ単量体を含む。いくつかの実施形態では、二価ｓｃＩＬ－１５／Ｒα－Ｆｃ融合タンパク質は、アミノ酸置換Ｃ２２０Ｓおよび切断置換Ｅ２３３Ｐ／Ｌ２３４Ｖ／Ｌ２３５Ａ／Ｇ２３６ｄｅｌ／Ｓ２６７Ｋを含むＦｃモノマーに連結されたヒトＩＬ－１５Ｒα（スシ）ドメインに連結されたヒト成熟ＩＬ－１５Ｎ４Ｄ／Ｎ６５Ｄバリアントを含む第１のＩＬ－１５／Ｒα（スシ）－Ｆｃ単量体と；アミノ酸置換Ｃ２２０Ｓおよび切断置換Ｅ２３３Ｐ／Ｌ２３４Ｖ／Ｌ２３５Ａ／Ｇ２３６ｄｅｌ／Ｓ２６７Ｋを含むＦｃ単量体に連結されたヒトＩＬ－１５Ｒα（スシ）ドメインに連結されたヒト成熟ＩＬ－１５Ｎ４Ｄ／Ｎ６５Ｄバリアントを含む第２のＩＬ－１５／Ｒα（スシ）－Ｆｃ単量体とを含む。いくつかの実施形態では、二価ｓｃＩＬ－１５／Ｒα－Ｆｃ融合タンパク質は、アミノ酸置換Ｃ２２０Ｓ、切断置換Ｅ２３３Ｐ／Ｌ２３４Ｖ／Ｌ２３５Ａ／Ｇ２３６ｄｅｌ／Ｓ２６７Ｋ、およびＦｃＲｎ置換Ｍ４２８Ｌ／Ｎ４３４Ｓを含むＦｃモノマーに連結されたヒトＩＬ－１５Ｒα（スシ）ドメインに連結されたヒト成熟ＩＬ－１５Ｎ４Ｄ／Ｎ６５Ｄバリアントを含む第１のＩＬ－１５／Ｒα（スシ）－Ｆｃ単量体と；アミノ酸置換Ｃ２２０Ｓ、切断置換Ｅ２３３Ｐ／Ｌ２３４Ｖ／Ｌ２３５Ａ／Ｇ２３６ｄｅｌ／Ｓ２６７Ｋ、およびＦｃＲｎ置換Ｍ４２８Ｌ／Ｎ４３４Ｓを含むＦｃ単量体に連結されたヒトＩＬ－１５Ｒα（スシ）ドメインに連結されたヒト成熟ＩＬ－１５Ｎ４Ｄ／Ｎ６５Ｄバリアントを含む第２のＩＬ－１５／Ｒα（スシ）－Ｆｃ単量体とを含む。

二価ｓｃＩＬ－１５／Ｒα－Ｆｃフォーマットにおいて、好ましい実施形態は、ＩＬ－１５Ｎ１Ｄ／Ｎ６５Ｄバリアントを利用する。

二価ｓｃＩＬ－１５／Ｒα－Ｆｃフォーマットにおいて、好ましい実施形態は、ＩＬ－１５Ｎ１Ｄ／Ｎ６５Ｄバリアントおよびスキューバリアント対Ｓ３６４Ｋ／Ｅ３５７Ｑ：Ｌ３６８Ｄ／Ｋ３７０Ｓを利用する。二価ｓｃＩＬ－１５／Ｒα－Ｆｃフォーマットにおいて、好ましい実施形態は、ＩＬ－１５Ｎ１Ｄ／Ｎ６５Ｄバリアント、スキューバリアント対Ｓ３６４Ｋ／Ｅ３５７Ｑ：Ｌ３６８Ｄ／Ｋ３７０Ｓ、および各々のＦｃ単量体において４２８Ｌ／４３４Ｓバリアントを利用する。二価ｓｃＩＬ－１５／Ｒα－Ｆｃフォーマットにおいて、好ましい実施形態は、ＩＬ－１５Ｎ１Ｄ／Ｎ６５Ｄバリアント、スキューバリアント対Ｓ３６４Ｋ／Ｅ３５７Ｑ：Ｌ３６８Ｄ／Ｋ３７０Ｓ、および各々のＦｃ単量体においてＭ４２８Ｌ／Ｎ４３４Ｓバリアントを利用する。

いくつかの実施形態では、二価ｎｃＩＬ－１５／Ｒα－Ｆｃ融合タンパク質は、２つのヒト成熟ＩＬ－１５Ｎ１Ｄ／Ｎ６５Ｄバリアント、２つのＩＬ－１５Ｒα（スシ）ドメイン、および図６Ｄに示されるアミノ酸置換を含む２つのＦｃ単量体を含む。いくつかの実施形態では、二価ｓｃＩＬ－１５／Ｒα－Ｆｃ融合タンパク質は、アミノ酸置換Ｃ２２０Ｓおよび切断置換Ｅ２３３Ｐ／Ｌ２３４Ｖ／Ｌ２３５Ａ／Ｇ２３６ｄｅｌ／Ｓ２６７Ｋを含むＦｃモノマーに連結されたヒトＩＬ－１５Ｒα（スシ）ドメインに連結されたヒト成熟ＩＬ－１５Ｎ１Ｄ／Ｎ６５Ｄバリアントを含む第１のＩＬ－１５／Ｒα（スシ）－Ｆｃ単量体と；アミノ酸置換Ｃ２２０Ｓおよび切断置換Ｅ２３３Ｐ／Ｌ２３４Ｖ／Ｌ２３５Ａ／Ｇ２３６ｄｅｌ／Ｓ２６７Ｋを含むＦｃ単量体に連結されたヒトＩＬ－１５Ｒα（スシ）ドメインに連結されたヒト成熟ＩＬ－１５Ｎ１Ｄ／Ｎ６５Ｄバリアントを含む第２のＩＬ－１５／Ｒα（スシ）－Ｆｃ単量体とを含む。いくつかの実施形態では、二価ｓｃＩＬ－１５／Ｒα－Ｆｃ融合タンパク質は、アミノ酸置換Ｃ２２０Ｓ、切断置換Ｅ２３３Ｐ／Ｌ２３４Ｖ／Ｌ２３５Ａ／Ｇ２３６ｄｅｌ／Ｓ２６７Ｋ、およびＦｃＲｎ置換Ｍ４２８Ｌ／Ｎ４３４Ｓを含むＦｃモノマーに連結されたヒトＩＬ－１５Ｒα（スシ）ドメインに連結されたヒト成熟ＩＬ－１５Ｎ１Ｄ／Ｎ６５Ｄバリアントを含む第１のＩＬ－１５／Ｒα（スシ）－Ｆｃ単量体と；アミノ酸置換Ｃ２２０Ｓ、切断置換Ｅ２３３Ｐ／Ｌ２３４Ｖ／Ｌ２３５Ａ／Ｇ２３６ｄｅｌ／Ｓ２６７Ｋ、およびＦｃＲｎ置換Ｍ４２８Ｌ／Ｎ４３４Ｓを含むＦｃ単量体に連結されたヒトＩＬ－１５Ｒα（スシ）ドメインに連結されたヒト成熟ＩＬ－１５Ｎ１Ｄ／Ｎ６５Ｄバリアントを含む第２のＩＬ－１５／Ｒα（スシ）－Ｆｃ単量体とを含む。

二価ｓｃＩＬ－１５／Ｒα－Ｆｃフォーマットにおいて、好ましい実施形態は、ＩＬ－１５Ｑ１０８Ｅバリアントおよびスキューバリアント対Ｓ３６４Ｋ／Ｅ３５７Ｑ：Ｌ３６８Ｄ／Ｋ３７０Ｓを利用する。二価ｓｃＩＬ－１５／Ｒα－Ｆｃフォーマットにおいて、好ましい実施形態は、ＩＬ－１５Ｑ１０８Ｅバリアントおよびスキューバリアント対Ｓ３６４Ｋ／Ｅ３５７Ｑ：Ｌ３６８Ｄ／Ｋ３７０Ｓ、ならびに両方の単量体において４２８Ｌ／４３４Ｓバリアントを利用する。

いくつかの実施形態では、二価ｎｃＩＬ－１５／Ｒα－Ｆｃ融合タンパク質は、２つのヒト成熟ＩＬ－１５Ｑ１０８Ｅバリアント、２つのＩＬ－１５Ｒα（スシ）ドメイン、および図６Ｄに示されるアミノ酸置換を含む２つのＦｃ単量体を含む。いくつかの実施形態では、二価ｓｃＩＬ－１５／Ｒα－Ｆｃ融合タンパク質は、アミノ酸置換Ｃ２２０Ｓおよび切断置換Ｅ２３３Ｐ／Ｌ２３４Ｖ／Ｌ２３５Ａ／Ｇ２３６ｄｅｌ／Ｓ２６７Ｋを含むＦｃモノマーに連結されたヒトＩＬ－１５Ｒα（スシ）ドメインに連結されたヒト成熟ＩＬ－１５Ｑ１０８Ｅバリアントを含む第１のＩＬ－１５／Ｒα（スシ）－Ｆｃ単量体と；アミノ酸置換Ｃ２２０Ｓおよび切断置換Ｅ２３３Ｐ／Ｌ２３４Ｖ／Ｌ２３５Ａ／Ｇ２３６ｄｅｌ／Ｓ２６７Ｋを含むＦｃ単量体に連結されたヒトＩＬ－１５Ｒα（スシ）ドメインに連結されたヒト成熟ＩＬ－１５Ｑ１０８Ｅバリアントを含む第２のＩＬ－１５／Ｒα（スシ）－Ｆｃ単量体とを含む。いくつかの実施形態では、二価ｓｃＩＬ－１５／Ｒα－Ｆｃ融合タンパク質は、アミノ酸置換Ｃ２２０Ｓ、切断置換Ｅ２３３Ｐ／Ｌ２３４Ｖ／Ｌ２３５Ａ／Ｇ２３６ｄｅｌ／Ｓ２６７Ｋ、およびＦｃＲｎ置換Ｍ４２８Ｌ／Ｎ４３４Ｓを含むＦｃモノマーに連結されたヒトＩＬ－１５Ｒα（スシ）ドメインに連結されたヒト成熟ＩＬ－１５Ｑ１０８Ｅバリアントを含む第１のＩＬ－１５／Ｒα（スシ）－Ｆｃ単量体と；アミノ酸置換Ｃ２２０Ｓ、切断置換Ｅ２３３Ｐ／Ｌ２３４Ｖ／Ｌ２３５Ａ／Ｇ２３６ｄｅｌ／Ｓ２６７Ｋ、およびＦｃＲｎ置換Ｍ４２８Ｌ／Ｎ４３４Ｓを含むＦｃ単量体に連結されたヒトＩＬ－１５Ｒα（スシ）ドメインに連結されたヒト成熟ＩＬ－１５Ｑ１０８Ｅバリアントを含む第２のＩＬ－１５／Ｒα（スシ）－Ｆｃ単量体とを含む。

二価ｓｃＩＬ－１５／Ｒα－Ｆｃフォーマットにおいて、好ましい実施形態は、ＩＬ－１５野生型バリアントを利用する。

二価ｓｃＩＬ－１５／Ｒα－Ｆｃフォーマットにおいて、好ましい実施形態は、ＩＬ－１５野生型バリアントおよびスキューバリアント対Ｓ３６４Ｋ／Ｅ３５７Ｑ：Ｌ３６８Ｄ／Ｋ３７０Ｓを利用する。二価ｓｃＩＬ－１５／Ｒα－Ｆｃフォーマットにおいて、好ましい実施形態は、ＩＬ－１５野生型バリアント、スキューバリアント対Ｓ３６４Ｋ／Ｅ３５７Ｑ：Ｌ３６８Ｄ／Ｋ３７０Ｓ、および各々のＦｃ単量体において４２８Ｌ／４３４Ｓバリアントを利用する。二価ｓｃＩＬ－１５／Ｒα－Ｆｃフォーマットにおいて、好ましい実施形態は、ＩＬ－１５野生型バリアント、スキューバリアント対Ｓ３６４Ｋ／Ｅ３５７Ｑ：Ｌ３６８Ｄ／Ｋ３７０Ｓ、および各々のＦｃ単量体においてＭ４２８Ｌ／Ｎ４３４Ｓバリアントを利用する。

いくつかの実施形態では、二価ｎｃＩＬ－１５／Ｒα－Ｆｃ融合タンパク質は、２つのヒト成熟ＩＬ－１５野生型バリアント、２つのＩＬ－１５Ｒα（スシ）ドメイン、および図６Ｄに示されるアミノ酸置換を含む２つのＦｃ単量体を含む。いくつかの実施形態では、二価ｓｃＩＬ－１５／Ｒα－Ｆｃ融合タンパク質は、アミノ酸置換Ｃ２２０Ｓおよび切断置換Ｅ２３３Ｐ／Ｌ２３４Ｖ／Ｌ２３５Ａ／Ｇ２３６ｄｅｌ／Ｓ２６７Ｋを含むＦｃモノマーに連結されたヒトＩＬ－１５Ｒα（スシ）ドメインに連結されたヒト成熟ＩＬ－１５Ｎ１Ｄ／Ｎ６５Ｄバリアントを含む第１のＩＬ－１５／Ｒα（スシ）－Ｆｃ単量体と；アミノ酸置換Ｃ２２０Ｓおよび切断置換Ｅ２３３Ｐ／Ｌ２３４Ｖ／Ｌ２３５Ａ／Ｇ２３６ｄｅｌ／Ｓ２６７Ｋを含むＦｃ単量体に連結されたヒトＩＬ－１５Ｒα（スシ）ドメインに連結されたヒト成熟ＩＬ－１５Ｎ１Ｄ／Ｎ６５Ｄバリアントを含む第２のＩＬ－１５／Ｒα（スシ）－Ｆｃ単量体とを含む。いくつかの実施形態では、二価ｓｃＩＬ－１５／Ｒα－Ｆｃ融合タンパク質は、アミノ酸置換Ｃ２２０Ｓ、切断置換Ｅ２３３Ｐ／Ｌ２３４Ｖ／Ｌ２３５Ａ／Ｇ２３６ｄｅｌ／Ｓ２６７Ｋ、およびＦｃＲｎ置換Ｍ４２８Ｌ／Ｎ４３４Ｓを含むＦｃモノマーに連結されたヒトＩＬ－１５Ｒα（スシ）ドメインに連結されたヒト成熟ＩＬ－１５Ｎ１Ｄ／Ｎ６５Ｄバリアントを含む第１のＩＬ－１５／Ｒα（スシ）－Ｆｃ単量体と；アミノ酸置換Ｃ２２０Ｓ、切断置換Ｅ２３３Ｐ／Ｌ２３４Ｖ／Ｌ２３５Ａ／Ｇ２３６ｄｅｌ／Ｓ２６７Ｋ、およびＦｃＲｎ置換Ｍ４２８Ｌ／Ｎ４３４Ｓを含むＦｃ単量体に連結されたヒトＩＬ－１５Ｒα（スシ）ドメインに連結されたヒト成熟ＩＬ－１５Ｎ１Ｄ／Ｎ６５Ｄバリアントを含む第２のＩＬ－１５／Ｒα（スシ）－Ｆｃ単量体とを含む。

二価ｓｃＩＬ－１５／Ｒα－Ｆｃフォーマットにおいて、好ましい実施形態は、図１４に示される。

Ｆ．Ｆｃ－ｎｃＩＬ－１５／Ｒα
この実施形態では、図９Ｆに示されるように、ヘテロ二量体融合タンパク質は、３つの単量体を含む。第１のモノマーは、（Ｎ末端からＣ末端にかけて）ＣＨ２－ＣＨ３－ドメインリンカー－ＩＬ－１５／Ｒα（スシ）を含み、Ｆｃは、ヒンジの一部の全てを含む。第２の単量体は、ヒンジ－ＣＨ２－ＣＨ３の全部または一部を含む、「空の」Ｆｃを含む。第３の単量体はＩＬ－１５である。これは「ｎｃＩＬ－１５／Ｒα－Ｆｃ」と呼ばれ、「ｎｃ」は「非共有結合」を表す。

ｎｃＩＬ－１５／Ｒα－Ｆｃ（またはＦｃ－ｎｃＩＬ－１５／Ｒα）フォーマットにおいて、好ましい実施形態は、スキューバリアント対Ｓ３６４Ｋ／Ｅ３５７Ｑ：Ｌ３６８Ｄ／Ｋ３７０Ｓを利用する。

ｎｃＩＬ－１５／Ｒα－Ｆｃフォーマットにおいて、好ましい実施形態は、ＩＬ－１５Ｄ３０Ｎ／Ｎ６５Ｄバリアントを利用する。

ｎｃＩＬ－１５／Ｒα－Ｆｃフォーマットにおいて、好ましい実施形態は、ＩＬ－１５Ｄ３０Ｎ／Ｅ６４Ｑ／Ｎ６５Ｄバリアントおよびスキューバリアント対Ｓ３６４Ｋ／Ｅ３５７Ｑ：Ｌ３６８Ｄ／Ｋ３７０Ｓを利用する。Ｆｃ－ｎｃＩＬ－１５／Ｒαフォーマットにおいて、好ましい実施形態は、ＩＬ－１５Ｄ３０Ｎ／Ｎ６５Ｄバリアントおよびスキューバリアント対Ｓ３６４Ｋ／Ｅ３５７Ｑ：Ｌ３６８Ｄ／Ｋ３７０Ｓ、ならびに両方の単量体において４２８Ｌ／４３４Ｓバリアントを利用する。Ｆｃ－ｎｃＩＬ－１５／Ｒαフォーマットにおいて、好ましい実施形態は、ＩＬ－１５Ｄ３０Ｎ／Ｎ６５Ｄバリアントおよびスキューバリアント対Ｓ３６４Ｋ／Ｅ３５７Ｑ：Ｌ３６８Ｄ／Ｋ３７０Ｓ、ならびに両方の単量体においてＭ４２８Ｌ／Ｎ４３４Ｓバリアントを利用する。

いくつかの実施形態では、ｎｃＩＬ－１５／Ｒα－Ｆｃ融合タンパク質は、ヒト成熟ＩＬ－１５Ｄ３０Ｎ／Ｎ６５Ｄバリアント、ＩＬ－１５Ｒα（スシ）ドメイン、および図６Ｅに示されるアミノ酸置換を含む２つのＦｃ単量体を含む。いくつかの実施形態では、ｎｃＩＬ－１５／Ｒα－Ｆｃ融合タンパク質は、ヒトＩＬ－１５Ｄ３０Ｎ／Ｎ６５Ｄバリアント、アミノ酸置換Ｃ２２０Ｓ、ヘテロ二量体ｐＩバリアントＬ３６８Ｄ／Ｋ３７０Ｓ、および切断置換Ｅ２３３Ｐ／Ｌ２３４Ｖ／Ｌ２３５Ａ／Ｇ２３６ｄｅｌ／Ｓ２６７Ｋを含むＦｃ単量体のＣ末端に連結されたヒトＩＬ－１５Ｒα（スシ）ドメインを含むＦｃ－ＩＬ－１５／Ｒα（スシ）単量体、ならびにアミノ酸置換Ｃ２２０Ｓ、ヘテロ二量体ｐＩバリアントＳ３６４Ｋ／Ｅ３５７Ｑ、等配電子ｐＩ置換Ｐ２１７Ｒ／Ｐ２２８Ｒ／Ｎ２７６Ｋ、および切断置換Ｅ２３３Ｐ／Ｌ２３４Ｖ／Ｌ２３５Ａ／Ｇ２３６ｄｅｌ／Ｓ２６７Ｋを含む空のＦｃモノマーを含む。いくつかの実施形態では、ｎｃＩＬ－１５／Ｒα－Ｆｃ融合タンパク質は、ヒトＩＬ－１５Ｄ３０Ｎ／Ｎ６５Ｄバリアント、アミノ酸置換Ｃ２２０Ｓ、ヘテロ二量体ｐＩバリアントＬ３６８Ｄ／Ｋ３７０Ｓ、切断置換Ｅ２３３Ｐ／Ｌ２３４Ｖ／Ｌ２３５Ａ／Ｇ２３６ｄｅｌ／Ｓ２６７Ｋ、およびＦｃＲｎ置換Ｍ４２８Ｌ／Ｎ３４３Ｓを含むＦｃ単量体のＣ末端に連結されたヒトＩＬ－１５Ｒα（スシ）ドメインを含むＦｃ－ＩＬ－１５／Ｒα（スシ）単量体、ならびにアミノ酸置換Ｃ２２０Ｓ、ヘテロ二量体ｐＩバリアントＳ３６４Ｋ／Ｅ３５７Ｑ、等配電子ｐＩ置換Ｐ２１７Ｒ／Ｐ２２８Ｒ／Ｎ２７６Ｋ、切断置換Ｅ２３３Ｐ／Ｌ２３４Ｖ／Ｌ２３５Ａ／Ｇ２３６ｄｅｌ／Ｓ２６７Ｋ、およびＦｃＲｎ置換Ｍ４２８Ｌ／Ｎ３４３Ｓを含む空のＦｃモノマーを含む。

ｎｃＩＬ－１５／Ｒα－Ｆｃフォーマットにおいて、好ましい実施形態は、ＩＬ－１５のＤ３０Ｎ／Ｅ６４Ｑ／Ｎ６５Ｄバリアントを利用する。

Ｆｃ－ｎｃＩＬ－１５／Ｒαフォーマットにおいて、好ましい実施形態は、ＩＬ－１５Ｄ３０Ｎ／Ｅ６４Ｑ／Ｎ６５Ｄバリアントおよびスキューバリアント対Ｓ３６４Ｋ／Ｅ３５７Ｑ：Ｌ３６８Ｄ／Ｋ３７０Ｓを利用する。Ｆｃ－ｎｃＩＬ－１５／Ｒαフォーマットにおいて、好ましい実施形態は、ＩＬ－１５Ｄ３０Ｎ／Ｅ６４Ｑ／Ｎ６５Ｄバリアント、スキューバリアント対Ｓ３６４Ｋ／Ｅ３５７Ｑ：Ｌ３６８Ｄ／Ｋ３７０Ｓ、および各々のＦｃ単量体において４２８Ｌ／４３４Ｓバリアントを利用する。Ｆｃ－ｎｃＩＬ－１５／Ｒαフォーマットにおいて、好ましい実施形態は、ＩＬ－１５Ｄ３０Ｎ／Ｅ６４Ｑ／Ｎ６５Ｄバリアント、スキューバリアント対Ｓ３６４Ｋ／Ｅ３５７Ｑ：Ｌ３６８Ｄ／Ｋ３７０Ｓ、および各々のＦｃ単量体においてＭ４２８Ｌ／Ｎ４３４Ｓバリアントを利用する。

いくつかの実施形態では、ｎｃＩＬ－１５／Ｒα－Ｆｃ融合タンパク質は、ヒト成熟ＩＬ－１５Ｄ３０Ｎ／Ｅ６４Ｑ／Ｎ６５Ｄバリアント、ＩＬ－１５Ｒα（スシ）ドメイン、および図６Ｅに示されるアミノ酸置換を含む２つのＦｃ単量体を含む。いくつかの実施形態では、ｎｃＩＬ－１５／Ｒα－Ｆｃ融合タンパク質は、ヒトＩＬ－１５Ｄ３０Ｎ／Ｅ６４Ｑ／Ｎ６５Ｄバリアント、アミノ酸置換Ｃ２２０Ｓ、ヘテロ二量体ｐＩバリアントＬ３６８Ｄ／Ｋ３７０Ｓ、および切断置換Ｅ２３３Ｐ／Ｌ２３４Ｖ／Ｌ２３５Ａ／Ｇ２３６ｄｅｌ／Ｓ２６７Ｋを含むＦｃ単量体のＣ末端に連結されたヒトＩＬ－１５Ｒα（スシ）ドメインを含むＦｃ－ＩＬ－１５／Ｒα（スシ）単量体、ならびにアミノ酸置換Ｃ２２０Ｓ、ヘテロ二量体ｐＩバリアントＳ３６４Ｋ／Ｅ３５７Ｑ、等配電子ｐＩ置換Ｐ２１７Ｒ／Ｐ２２８Ｒ／Ｎ２７６Ｋ、および切断置換Ｅ２３３Ｐ／Ｌ２３４Ｖ／Ｌ２３５Ａ／Ｇ２３６ｄｅｌ／Ｓ２６７Ｋを含む空のＦｃモノマーを含む。いくつかの実施形態では、ｎｃＩＬ－１５／Ｒα－Ｆｃ融合タンパク質は、ヒトＩＬ－１５Ｄ３０Ｎ／Ｅ６４Ｑ／Ｎ６５Ｄバリアント、アミノ酸置換Ｃ２２０Ｓ、ヘテロ二量体ｐＩバリアントＬ３６８Ｄ／Ｋ３７０Ｓ、切断置換Ｅ２３３Ｐ／Ｌ２３４Ｖ／Ｌ２３５Ａ／Ｇ２３６ｄｅｌ／Ｓ２６７Ｋ、およびＦｃＲｎ置換Ｍ４２８Ｌ／Ｎ３４３Ｓを含むＦｃ単量体のＣ末端に連結されたヒトＩＬ－１５Ｒα（スシ）ドメインを含むＦｃ－ＩＬ－１５／Ｒα（スシ）単量体、ならびにアミノ酸置換Ｃ２２０Ｓ、ヘテロ二量体ｐＩバリアントＳ３６４Ｋ／Ｅ３５７Ｑ、等配電子ｐＩ置換Ｐ２１７Ｒ／Ｐ２２８Ｒ／Ｎ２７６Ｋ、切断置換Ｅ２３３Ｐ／Ｌ２３４Ｖ／Ｌ２３５Ａ／Ｇ２３６ｄｅｌ／Ｓ２６７Ｋ、およびＦｃＲｎ置換Ｍ４２８Ｌ／Ｎ３４３Ｓを含む空のＦｃモノマーを含む。

Ｆｃ－ｎｃＩＬ－１５／Ｒαフォーマットにおいて、好ましい実施形態は、ＩＬ－１５Ｎ４Ｄバリアントを利用する。

Ｆｃ－ｎｃＩＬ－１５／Ｒαフォーマットにおいて、好ましい実施形態は、ＩＬ－１５Ｎ４Ｄバリアントおよびスキューバリアント対Ｓ３６４Ｋ／Ｅ３５７Ｑ：Ｌ３６８Ｄ／Ｋ３７０Ｓを利用する。Ｆｃ－ｎｃＩＬ－１５／Ｒαフォーマットにおいて、好ましい実施形態は、ＩＬ－１５Ｎ４Ｄバリアント、スキューバリアント対Ｓ３６４Ｋ／Ｅ３５７Ｑ：Ｌ３６８Ｄ／Ｋ３７０Ｓ、および各々のＦｃ単量体において４２８Ｌ／４３４Ｓバリアントを利用する。Ｆｃ－ｎｃＩＬ－１５／Ｒαフォーマットにおいて、好ましい実施形態は、ＩＬ－１５Ｎ４Ｄバリアント、スキューバリアント対Ｓ３６４Ｋ／Ｅ３５７Ｑ：Ｌ３６８Ｄ／Ｋ３７０Ｓ、および各々のＦｃ単量体においてＭ４２８Ｌ／Ｎ４３４Ｓバリアントを利用する。

いくつかの実施形態では、ｎｃＩＬ－１５／Ｒα－Ｆｃ融合タンパク質は、ヒト成熟ＩＬ－１５Ｎ４Ｄバリアント、ＩＬ－１５Ｒα（スシ）ドメイン、および図６Ｅに示されるアミノ酸置換を含む２つのＦｃ単量体を含む。いくつかの実施形態では、ｎｃＩＬ－１５／Ｒα－Ｆｃ融合タンパク質は、ヒトＩＬ－１５Ｎ４Ｄバリアント、アミノ酸置換Ｃ２２０Ｓ、ヘテロ二量体ｐＩバリアントＬ３６８Ｄ／Ｋ３７０Ｓ、および切断置換Ｅ２３３Ｐ／Ｌ２３４Ｖ／Ｌ２３５Ａ／Ｇ２３６ｄｅｌ／Ｓ２６７Ｋを含むＦｃ単量体のＣ末端に連結されたヒトＩＬ－１５Ｒα（スシ）ドメインを含むＦｃ－ＩＬ－１５／Ｒα（スシ）単量体、ならびにアミノ酸置換Ｃ２２０Ｓ、ヘテロ二量体ｐＩバリアントＳ３６４Ｋ／Ｅ３５７Ｑ、等配電子ｐＩ置換Ｐ２１７Ｒ／Ｐ２２８Ｒ／Ｎ２７６Ｋ、および切断置換Ｅ２３３Ｐ／Ｌ２３４Ｖ／Ｌ２３５Ａ／Ｇ２３６ｄｅｌ／Ｓ２６７Ｋを含む空のＦｃモノマーを含む。いくつかの実施形態では、ｎｃＩＬ－１５／Ｒα－Ｆｃ融合タンパク質は、ヒトＩＬ－１５Ｎ４Ｄバリアント、アミノ酸置換Ｃ２２０Ｓ、ヘテロ二量体ｐＩバリアントＬ３６８Ｄ／Ｋ３７０Ｓ、切断置換Ｅ２３３Ｐ／Ｌ２３４Ｖ／Ｌ２３５Ａ／Ｇ２３６ｄｅｌ／Ｓ２６７Ｋ、およびＦｃＲｎ置換Ｍ４２８Ｌ／Ｎ３４３Ｓを含むＦｃ単量体のＣ末端に連結されたヒトＩＬ－１５Ｒα（スシ）ドメインを含むＦｃ－ＩＬ－１５／Ｒα（スシ）単量体、ならびにアミノ酸置換Ｃ２２０Ｓ、ヘテロ二量体ｐＩバリアントＳ３６４Ｋ／Ｅ３５７Ｑ、等配電子ｐＩ置換Ｐ２１７Ｒ／Ｐ２２８Ｒ／Ｎ２７６Ｋ、切断置換Ｅ２３３Ｐ／Ｌ２３４Ｖ／Ｌ２３５Ａ／Ｇ２３６ｄｅｌ／Ｓ２６７Ｋ、およびＦｃＲｎ置換Ｍ４２８Ｌ／Ｎ３４３Ｓを含む空のＦｃモノマーを含む。

Ｆｃ－ｎｃＩＬ－１５／Ｒαフォーマットにおいて、好ましい実施形態は、ＩＬ－１５Ｎ６５Ｄバリアントを利用する。

Ｆｃ－ｎｃＩＬ－１５／Ｒαフォーマットにおいて、好ましい実施形態は、ＩＬ－１５Ｎ６５Ｄバリアントおよびスキューバリアント対Ｓ３６４Ｋ／Ｅ３５７Ｑ：Ｌ３６８Ｄ／Ｋ３７０Ｓを利用する。Ｆｃ－ｎｃＩＬ－１５／Ｒαフォーマットにおいて、好ましい実施形態は、ＩＬ－１５Ｎ６５Ｄバリアント、スキューバリアント対Ｓ３６４Ｋ／Ｅ３５７Ｑ：Ｌ３６８Ｄ／Ｋ３７０Ｓ、および各々のＦｃ単量体において４２８Ｌ／４３４Ｓバリアントを利用する。ｎｃＩＬ－１５／Ｒα－Ｆｃフォーマットにおいて、好ましい実施形態は、ＩＬ－１５のＮ６５Ｄバリアント、スキューバリアント対Ｓ３６４Ｋ／Ｅ３５７Ｑ：Ｌ３６８Ｄ／Ｋ３７０Ｓ、および各々のＦｃ単量体においてＭ４２８Ｌ／Ｎ４３４Ｓバリアントを利用する。

いくつかの実施形態では、ｎｃＩＬ－１５／Ｒα－Ｆｃ融合タンパク質は、ヒト成熟ＩＬ－１５Ｎ６５Ｄバリアント、ＩＬ－１５Ｒα（スシ）ドメイン、および図６Ｅに示されるアミノ酸置換を含む２つのＦｃ単量体を含む。いくつかの実施形態では、ｎｃＩＬ－１５／Ｒα－Ｆｃ融合タンパク質は、ヒトＩＬ－１５Ｎ６５Ｄバリアント、アミノ酸置換Ｃ２２０Ｓ、ヘテロ二量体ｐＩバリアントＬ３６８Ｄ／Ｋ３７０Ｓ、および切断置換Ｅ２３３Ｐ／Ｌ２３４Ｖ／Ｌ２３５Ａ／Ｇ２３６ｄｅｌ／Ｓ２６７Ｋを含むＦｃ単量体のＣ末端に連結されたヒトＩＬ－１５Ｒα（スシ）ドメインを含むＦｃ－ＩＬ－１５／Ｒα（スシ）単量体、ならびにアミノ酸置換Ｃ２２０Ｓ、ヘテロ二量体ｐＩバリアントＳ３６４Ｋ／Ｅ３５７Ｑ、等配電子ｐＩ置換Ｐ２１７Ｒ／Ｐ２２８Ｒ／Ｎ２７６Ｋ、および切断置換Ｅ２３３Ｐ／Ｌ２３４Ｖ／Ｌ２３５Ａ／Ｇ２３６ｄｅｌ／Ｓ２６７Ｋを含む空のＦｃモノマーを含む。いくつかの実施形態では、ｎｃＩＬ－１５／Ｒα－Ｆｃ融合タンパク質は、ヒトＩＬ－１５Ｎ６５Ｄバリアント、アミノ酸置換Ｃ２２０Ｓ、ヘテロ二量体ｐＩバリアントＬ３６８Ｄ／Ｋ３７０Ｓ、切断置換Ｅ２３３Ｐ／Ｌ２３４Ｖ／Ｌ２３５Ａ／Ｇ２３６ｄｅｌ／Ｓ２６７Ｋ、およびＦｃＲｎ置換Ｍ４２８Ｌ／Ｎ３４３Ｓを含むＦｃ単量体のＣ末端に連結されたヒトＩＬ－１５Ｒα（スシ）ドメインを含むＦｃ－ＩＬ－１５／Ｒα（スシ）単量体、ならびにアミノ酸置換Ｃ２２０Ｓ、ヘテロ二量体ｐＩバリアントＳ３６４Ｋ／Ｅ３５７Ｑ、等配電子ｐＩ置換Ｐ２１７Ｒ／Ｐ２２８Ｒ／Ｎ２７６Ｋ、切断置換Ｅ２３３Ｐ／Ｌ２３４Ｖ／Ｌ２３５Ａ／Ｇ２３６ｄｅｌ／Ｓ２６７Ｋ、およびＦｃＲｎ置換Ｍ４２８Ｌ／Ｎ３４３Ｓを含む空のＦｃモノマーを含む。

Ｆｃ－ｎｃＩＬ－１５／Ｒαフォーマットにおいて、好ましい実施形態は、ＩＬ－１５Ｎ４Ｄ／Ｎ６５Ｄバリアントを利用する。

Ｆｃ－ｎｃＩＬ－１５／Ｒαフォーマットにおいて、好ましい実施形態は、ＩＬ－１５Ｎ４Ｄ／Ｎ６５Ｄバリアントおよびスキューバリアント対Ｓ３６４Ｋ／Ｅ３５７Ｑ：Ｌ３６８Ｄ／Ｋ３７０Ｓを利用する。Ｆｃ－ｎｃＩＬ－１５／Ｒαフォーマットにおいて、好ましい実施形態は、ＩＬ－１５Ｎ４Ｄ／Ｎ６５Ｄバリアント、スキューバリアント対Ｓ３６４Ｋ／Ｅ３５７Ｑ：Ｌ３６８Ｄ／Ｋ３７０Ｓ、および各々のＦｃ単量体において４２８Ｌ／４３４Ｓバリアントを利用する。Ｆｃ－ｎｃＩＬ－１５／Ｒαフォーマットにおいて、好ましい実施形態は、ＩＬ－１５Ｎ４Ｄ／Ｎ６５Ｄバリアント、スキューバリアント対Ｓ３６４Ｋ／Ｅ３５７Ｑ：Ｌ３６８Ｄ／Ｋ３７０Ｓ、および各々のＦｃ単量体においてＭ４２８Ｌ／Ｎ４３４Ｓバリアントを利用する。

いくつかの実施形態では、ｎｃＩＬ－１５／Ｒα－Ｆｃ融合タンパク質は、ヒト成熟ＩＬ－１５Ｎ４Ｄ／Ｎ６５Ｄバリアント、ＩＬ－１５Ｒα（スシ）ドメイン、および図６Ｅに示されるアミノ酸置換を含む２つのＦｃ単量体を含む。いくつかの実施形態では、ｎｃＩＬ－１５／Ｒα－Ｆｃ融合タンパク質は、ヒトＩＬ－１５Ｎ４Ｄ／Ｎ６５Ｄバリアント、アミノ酸置換Ｃ２２０Ｓ、ヘテロ二量体ｐＩバリアントＬ３６８Ｄ／Ｋ３７０Ｓ、および切断置換Ｅ２３３Ｐ／Ｌ２３４Ｖ／Ｌ２３５Ａ／Ｇ２３６ｄｅｌ／Ｓ２６７Ｋを含むＦｃ単量体のＣ末端に連結されたヒトＩＬ－１５Ｒα（スシ）ドメインを含むＦｃ－ＩＬ－１５／Ｒα（スシ）単量体、ならびにアミノ酸置換Ｃ２２０Ｓ、ヘテロ二量体ｐＩバリアントＳ３６４Ｋ／Ｅ３５７Ｑ、等配電子ｐＩ置換Ｐ２１７Ｒ／Ｐ２２８Ｒ／Ｎ２７６Ｋ、および切断置換Ｅ２３３Ｐ／Ｌ２３４Ｖ／Ｌ２３５Ａ／Ｇ２３６ｄｅｌ／Ｓ２６７Ｋを含む空のＦｃモノマーを含む。いくつかの実施形態では、ｎｃＩＬ－１５／Ｒα－Ｆｃ融合タンパク質は、ヒトＩＬ－１５Ｎ４Ｄ／Ｎ６５Ｄバリアント、アミノ酸置換Ｃ２２０Ｓ、ヘテロ二量体ｐＩバリアントＬ３６８Ｄ／Ｋ３７０Ｓ、切断置換Ｅ２３３Ｐ／Ｌ２３４Ｖ／Ｌ２３５Ａ／Ｇ２３６ｄｅｌ／Ｓ２６７Ｋ、およびＦｃＲｎ置換Ｍ４２８Ｌ／Ｎ３４３Ｓを含むＦｃ単量体のＣ末端に連結されたヒトＩＬ－１５Ｒα（スシ）ドメインを含むＦｃ－ＩＬ－１５／Ｒα（スシ）単量体、ならびにアミノ酸置換Ｃ２２０Ｓ、ヘテロ二量体ｐＩバリアントＳ３６４Ｋ／Ｅ３５７Ｑ、等配電子ｐＩ置換Ｐ２１７Ｒ／Ｐ２２８Ｒ／Ｎ２７６Ｋ、切断置換Ｅ２３３Ｐ／Ｌ２３４Ｖ／Ｌ２３５Ａ／Ｇ２３６ｄｅｌ／Ｓ２６７Ｋ、およびＦｃＲｎ置換Ｍ４２８Ｌ／Ｎ３４３Ｓを含む空のＦｃモノマーを含む。

Ｆｃ－ｎｃＩＬ－１５／Ｒαフォーマットにおいて、好ましい実施形態は、ＩＬ－１５Ｎ１Ｄ／Ｎ６５Ｄバリアントを利用する。

Ｆｃ－ｎｃＩＬ－１５／Ｒαフォーマットにおいて、好ましい実施形態は、ＩＬ－１５Ｎ１Ｄ／Ｎ６５Ｄバリアントおよびスキューバリアント対Ｓ３６４Ｋ／Ｅ３５７Ｑ：Ｌ３６８Ｄ／Ｋ３７０Ｓを利用する。

Ｆｃ－ｎｃＩＬ－１５／Ｒαフォーマットにおいて、好ましい実施形態は、ＩＬ－１５Ｎ１Ｄ／Ｎ６５Ｄバリアント、スキューバリアント対Ｓ３６４Ｋ／Ｅ３５７Ｑ：Ｌ３６８Ｄ／Ｋ３７０Ｓ、および各々のＦｃ単量体において４２８Ｌ／４３４Ｓバリアントを利用する。Ｆｃ－ｎｃＩＬ－１５／Ｒαフォーマットにおいて、好ましい実施形態は、ＩＬ－１５Ｎ１Ｄ／Ｎ６５Ｄバリアント、スキューバリアント対Ｓ３６４Ｋ／Ｅ３５７Ｑ：Ｌ３６８Ｄ／Ｋ３７０Ｓ、および各々のＦｃ単量体においてＭ４２８Ｌ／Ｎ４３４Ｓバリアントを利用する。

いくつかの実施形態では、ｎｃＩＬ－１５／Ｒα－Ｆｃ融合タンパク質は、ヒト成熟ＩＬ－１５Ｎ１Ｄ／Ｎ６５Ｄバリアント、ＩＬ－１５Ｒα（スシ）ドメイン、および図６Ｅに示されるアミノ酸置換を含む２つのＦｃ単量体を含む。いくつかの実施形態では、ｎｃＩＬ－１５／Ｒα－Ｆｃ融合タンパク質は、ヒトＩＬ－１５Ｎ１Ｄ／Ｎ６５Ｄバリアント、アミノ酸置換Ｃ２２０Ｓ、ヘテロ二量体ｐＩバリアントＬ３６８Ｄ／Ｋ３７０Ｓ、および切断置換Ｅ２３３Ｐ／Ｌ２３４Ｖ／Ｌ２３５Ａ／Ｇ２３６ｄｅｌ／Ｓ２６７Ｋを含むＦｃ単量体のＣ末端に連結されたヒトＩＬ－１５Ｒα（スシ）ドメインを含むＦｃ－ＩＬ－１５／Ｒα（スシ）単量体、ならびにアミノ酸置換Ｃ２２０Ｓ、ヘテロ二量体ｐＩバリアントＳ３６４Ｋ／Ｅ３５７Ｑ、等配電子ｐＩ置換Ｐ２１７Ｒ／Ｐ２２８Ｒ／Ｎ２７６Ｋ、および切断置換Ｅ２３３Ｐ／Ｌ２３４Ｖ／Ｌ２３５Ａ／Ｇ２３６ｄｅｌ／Ｓ２６７Ｋを含む空のＦｃモノマーを含む。いくつかの実施形態では、ｎｃＩＬ－１５／Ｒα－Ｆｃ融合タンパク質は、ヒトＩＬ－１５Ｎ１Ｄ／Ｎ６５Ｄバリアント、アミノ酸置換Ｃ２２０Ｓ、ヘテロ二量体ｐＩバリアントＬ３６８Ｄ／Ｋ３７０Ｓ、切断置換Ｅ２３３Ｐ／Ｌ２３４Ｖ／Ｌ２３５Ａ／Ｇ２３６ｄｅｌ／Ｓ２６７Ｋ、およびＦｃＲｎ置換Ｍ４２８Ｌ／Ｎ３４３Ｓを含むＦｃ単量体のＣ末端に連結されたヒトＩＬ－１５Ｒα（スシ）ドメインを含むＦｃ－ＩＬ－１５／Ｒα（スシ）単量体、ならびにアミノ酸置換Ｃ２２０Ｓ、ヘテロ二量体ｐＩバリアントＳ３６４Ｋ／Ｅ３５７Ｑ、等配電子ｐＩ置換Ｐ２１７Ｒ／Ｐ２２８Ｒ／Ｎ２７６Ｋ、切断置換Ｅ２３３Ｐ／Ｌ２３４Ｖ／Ｌ２３５Ａ／Ｇ２３６ｄｅｌ／Ｓ２６７Ｋ、およびＦｃＲｎ置換Ｍ４２８Ｌ／Ｎ３４３Ｓを含む空のＦｃモノマーを含む。

Ｆｃ－ｎｃＩＬ－１５／Ｒαフォーマットにおいて、好ましい実施形態は、ＩＬ－１５Ｑ１０８Ｅバリアントを利用する。

Ｆｃ－ｎｃＩＬ－１５／Ｒαフォーマットにおいて、好ましい実施形態は、ＩＬ－１５Ｑ１０８Ｅバリアントおよびスキューバリアント対Ｓ３６４Ｋ／Ｅ３５７Ｑ：Ｌ３６８Ｄ／Ｋ３７０Ｓを利用する。Ｆｃ－ｎｃＩＬ－１５／Ｒαフォーマットにおいて、好ましい実施形態は、ＩＬ－１５Ｑ１０８Ｅバリアントおよびスキューバリアント対Ｓ３６４Ｋ／Ｅ３５７Ｑ：Ｌ３６８Ｄ／Ｋ３７０Ｓ、ならびに両方の単量体において４２８Ｌ／４３４Ｓバリアントを利用する。Ｆｃ－ｎｃＩＬ－１５／Ｒαフォーマットにおいて、好ましい実施形態は、ＩＬ－１５Ｑ１０８Ｅバリアントおよびスキューバリアント対Ｓ３６４Ｋ／Ｅ３５７Ｑ：Ｌ３６８Ｄ／Ｋ３７０Ｓ、ならびに両方の単量体においてＭ４２８Ｌ／Ｎ４３４Ｓバリアントを利用する。

いくつかの実施形態では、ｎｃＩＬ－１５／Ｒα－Ｆｃ融合タンパク質は、ヒト成熟ＩＬ－１５Ｑ１０８Ｅバリアント、ＩＬ－１５Ｒα（スシ）ドメイン、および図６Ｅに示されるアミノ酸置換を含む２つのＦｃ単量体を含む。いくつかの実施形態では、ｎｃＩＬ－１５／Ｒα－Ｆｃ融合タンパク質は、ヒトＩＬ－１５Ｑ１０８Ｅバリアント、アミノ酸置換Ｃ２２０Ｓ、ヘテロ二量体ｐＩバリアントＬ３６８Ｄ／Ｋ３７０Ｓ、および切断置換Ｅ２３３Ｐ／Ｌ２３４Ｖ／Ｌ２３５Ａ／Ｇ２３６ｄｅｌ／Ｓ２６７Ｋを含むＦｃ単量体のＣ末端に連結されたヒトＩＬ－１５Ｒα（スシ）ドメインを含むＦｃ－ＩＬ－１５／Ｒα（スシ）単量体、ならびにアミノ酸置換Ｃ２２０Ｓ、ヘテロ二量体ｐＩバリアントＳ３６４Ｋ／Ｅ３５７Ｑ、等配電子ｐＩ置換Ｐ２１７Ｒ／Ｐ２２８Ｒ／Ｎ２７６Ｋ、および切断置換Ｅ２３３Ｐ／Ｌ２３４Ｖ／Ｌ２３５Ａ／Ｇ２３６ｄｅｌ／Ｓ２６７Ｋを含む空のＦｃモノマーを含む。いくつかの実施形態では、ｎｃＩＬ－１５／Ｒα－Ｆｃ融合タンパク質は、ヒトＩＬ－１５Ｑ１０８Ｅバリアント、アミノ酸置換Ｃ２２０Ｓ、ヘテロ二量体ｐＩバリアントＬ３６８Ｄ／Ｋ３７０Ｓ、切断置換Ｅ２３３Ｐ／Ｌ２３４Ｖ／Ｌ２３５Ａ／Ｇ２３６ｄｅｌ／Ｓ２６７Ｋ、およびＦｃＲｎ置換Ｍ４２８Ｌ／Ｎ３４３Ｓを含むＦｃ単量体のＣ末端に連結されたヒトＩＬ－１５Ｒα（スシ）ドメインを含むＦｃ－ＩＬ－１５／Ｒα（スシ）単量体、ならびにアミノ酸置換Ｃ２２０Ｓ、ヘテロ二量体ｐＩバリアントＳ３６４Ｋ／Ｅ３５７Ｑ、等配電子ｐＩ置換Ｐ２１７Ｒ／Ｐ２２８Ｒ／Ｎ２７６Ｋ、切断置換Ｅ２３３Ｐ／Ｌ２３４Ｖ／Ｌ２３５Ａ／Ｇ２３６ｄｅｌ／Ｓ２６７Ｋ、およびＦｃＲｎ置換Ｍ４２８Ｌ／Ｎ３４３Ｓを含む空のＦｃモノマーを含む。

Ｆｃ－ｎｃＩＬ－１５／Ｒαフォーマットにおいて、好ましい実施形態は、ＩＬ－１５野生型バリアントを利用する。

Ｆｃ－ｎｃＩＬ－１５／Ｒαフォーマットにおいて、好ましい実施形態は、ＩＬ－１５野生型バリアントおよびスキューバリアント対Ｓ３６４Ｋ／Ｅ３５７Ｑ：Ｌ３６８Ｄ／Ｋ３７０Ｓを利用する。Ｆｃ－ｎｃＩＬ－１５／Ｒαフォーマットにおいて、好ましい実施形態は、ＩＬ－１５野生型バリアント、スキューバリアント対Ｓ３６４Ｋ／Ｅ３５７Ｑ：Ｌ３６８Ｄ／Ｋ３７０Ｓ、および各々のＦｃ単量体において４２８Ｌ／４３４Ｓバリアントを利用する。Ｆｃ－ｎｃＩＬ－１５／Ｒαフォーマットにおいて、好ましい実施形態は、ＩＬ－１５野生型バリアント、スキューバリアント対Ｓ３６４Ｋ／Ｅ３５７Ｑ：Ｌ３６８Ｄ／Ｋ３７０Ｓ、および各々のＦｃ単量体においてＭ４２８Ｌ／Ｎ４３４Ｓバリアントを利用する。

いくつかの実施形態では、ｎｃＩＬ－１５／Ｒα－Ｆｃ融合タンパク質は、ヒト成熟ＩＬ－１５野生型バリアント、ＩＬ－１５Ｒα（スシ）ドメイン、および図６Ｅに示されるアミノ酸置換を含む２つのＦｃ単量体を含む。いくつかの実施形態では、ｎｃＩＬ－１５／Ｒα－Ｆｃ融合タンパク質は、ヒトＩＬ－１５野生型バリアント、アミノ酸置換Ｃ２２０Ｓ、ヘテロ二量体ｐＩバリアントＬ３６８Ｄ／Ｋ３７０Ｓ、および切断置換Ｅ２３３Ｐ／Ｌ２３４Ｖ／Ｌ２３５Ａ／Ｇ２３６ｄｅｌ／Ｓ２６７Ｋを含むＦｃ単量体のＣ末端に連結されたヒトＩＬ－１５Ｒα（スシ）ドメインを含むＦｃ－ＩＬ－１５／Ｒα（スシ）単量体、ならびにアミノ酸置換Ｃ２２０Ｓ、ヘテロ二量体ｐＩバリアントＳ３６４Ｋ／Ｅ３５７Ｑ、等配電子ｐＩ置換Ｐ２１７Ｒ／Ｐ２２８Ｒ／Ｎ２７６Ｋ、および切断置換Ｅ２３３Ｐ／Ｌ２３４Ｖ／Ｌ２３５Ａ／Ｇ２３６ｄｅｌ／Ｓ２６７Ｋを含む空のＦｃモノマーを含む。いくつかの実施形態では、ｎｃＩＬ－１５／Ｒα－Ｆｃ融合タンパク質は、ヒトＩＬ－１５野生型バリアント、アミノ酸置換Ｃ２２０Ｓ、ヘテロ二量体ｐＩバリアントＬ３６８Ｄ／Ｋ３７０Ｓ、切断置換Ｅ２３３Ｐ／Ｌ２３４Ｖ／Ｌ２３５Ａ／Ｇ２３６ｄｅｌ／Ｓ２６７Ｋ、およびＦｃＲｎ置換Ｍ４２８Ｌ／Ｎ３４３Ｓを含むＦｃ単量体のＣ末端に連結されたヒトＩＬ－１５Ｒα（スシ）ドメインを含むＦｃ－ＩＬ－１５／Ｒα（スシ）単量体、ならびにアミノ酸置換Ｃ２２０Ｓ、ヘテロ二量体ｐＩバリアントＳ３６４Ｋ／Ｅ３５７Ｑ、等配電子ｐＩ置換Ｐ２１７Ｒ／Ｐ２２８Ｒ／Ｎ２７６Ｋ、切断置換Ｅ２３３Ｐ／Ｌ２３４Ｖ／Ｌ２３５Ａ／Ｇ２３６ｄｅｌ／Ｓ２６７Ｋ、およびＦｃＲｎ置換Ｍ４２８Ｌ／Ｎ３４３Ｓを含む空のＦｃモノマーを含む。

Ｆｃ－ｎｃＩＬ－１５／Ｒαフォーマットにおいて、ＸＥＮＰ２２６３８を含む好ましい実施形態は、その全てがその全体において参照により本明細書に組み込まれる、ＷＯ２０１８／０７１９１９の図１０４Ｔおよび配列表に配列番号６６８～６７２として示される。

Ｆｃ－ｎｃＩＬ－１５／Ｒαフォーマットにおいて、好ましい実施形態は、鎖１（１７６０３）および鎖２（８９２７）および鎖３（１６４８４）としてＸＥＮＰ２２６３７を含み、図１５に示される。

Ｇ．Ｆｃ－ｓｃＩＬ－１５／Ｒα
この実施形態では、図９Ｇに示されるように、ヘテロ二量体融合タンパク質は、２つの単量体を含む。第１のモノマーは、（Ｎ末端からＣ末端にかけて）ＣＨ２－ＣＨ３－任意のドメインリンカー－ＩＬ－１５／Ｒα（スシ）－ドメインリンカー－ＩＬ－１５を含み、Ｆｃは、ヒンジの一部の全てを含む。第２の単量体は、ヒンジ－ＣＨ２－ＣＨ３の全部または一部を含む、「空の」Ｆｃを含む。これは「Ｆｃ－ｓｃＩＬ－１５／Ｒα」または「ｓｃＩＬ－１５／Ｒα－Ｆｃ」と呼ばれ、「ｓｃ」は「一本鎖」（例えば、ＩＬ－１５／スシ複合体の）を表す。

いくつかの実施形態では、Ｆｃ－ｓｃＩＬ－１５／Ｒα融合タンパク質は、ヒト成熟ＩＬ－１５バリアント、ＩＬ－１５Ｒα（スシ）ドメイン、および図６Ｅに示されるアミノ酸置換を含む２つのＦｃ単量体を含む。いくつかの実施形態では、Ｆｃ－ｓｃＩＬ－１５／Ｒα融合タンパク質は、Ｆｃドメインがヒト成熟ＩＬ－１５バリアントに連結されたヒトＩＬ－１５Ｒα（スシ）ドメインに連結されるように、アミノ酸置換Ｃ２２０Ｓ、ヘテロ二量体ｐＩバリアントＬ３６８Ｄ／Ｋ３７０Ｓ、および切断置換Ｅ２３３Ｐ／Ｌ２３４Ｖ／Ｌ２３５Ａ／Ｇ２３６ｄｅｌ／Ｓ２６７Ｋを含むＦｃ単量体を含むＦｃ－ＩＬ－１５／Ｒα（スシ）単量体；ならびにアミノ酸置換Ｃ２２０Ｓ、ヘテロ二量体ｐＩバリアントＳ３６４Ｋ／Ｅ３５７Ｑ、等配電子ｐＩ置換Ｐ２１７Ｒ／Ｐ２２８Ｒ／Ｎ２７６Ｋ、および切断置換Ｅ２３３Ｐ／Ｌ２３４Ｖ／Ｌ２３５Ａ／Ｇ２３６ｄｅｌ／Ｓ２６７Ｋを含む空のＦｃ単量体を含む。いくつかの実施形態では、Ｆｃ－ｓｃＩＬ－１５／Ｒα融合タンパク質は、Ｆｃドメインがヒト成熟ＩＬ－１５バリアントに連結されたヒトＩＬ－１５Ｒα（スシ）ドメインに連結されるように、アミノ酸置換Ｃ２２０Ｓ、ヘテロ二量体ｐＩバリアントＬ３６８Ｄ／Ｋ３７０Ｓ、切断置換Ｅ２３３Ｐ／Ｌ２３４Ｖ／Ｌ２３５Ａ／Ｇ２３６ｄｅｌ／Ｓ２６７Ｋ、およびＦｃＲｎ置換Ｍ４２８Ｌ／Ｎ３４３Ｓを含むＦｃ単量体を含むＦｃ－ＩＬ－１５／Ｒα（スシ）単量体；ならびにアミノ酸置換Ｃ２２０Ｓ、ヘテロ二量体ｐＩバリアントＳ３６４Ｋ／Ｅ３５７Ｑ、等配電子ｐＩ置換Ｐ２１７Ｒ／Ｐ２２８Ｒ／Ｎ２７６Ｋ、切断置換Ｅ２３３Ｐ／Ｌ２３４Ｖ／Ｌ２３５Ａ／Ｇ２３６ｄｅｌ／Ｓ２６７Ｋ、およびＦｃＲｎ置換Ｍ４２８Ｌ／Ｎ３４３Ｓを含む空のＦｃ単量体を含む。

Ｆｃ－ｓｃＩＬ－１５／Ｒαフォーマットにおいて、好ましい実施形態は、スキューバリアント対Ｓ３６４Ｋ／Ｅ３５７Ｑ：Ｌ３６８Ｄ／Ｋ３７０Ｓを利用する。

Ｆｃ－ｓｃＩＬ－１５／Ｒαフォーマットにおいて、好ましい実施形態は、ＩＬ－１５のＤ３０Ｎ／Ｎ６５Ｄバリアントを利用する。

Ｆｃ－ｓｃＩＬ－１５／Ｒαフォーマットにおいて、好ましい実施形態は、ＩＬ－１５Ｄ３０Ｎ／Ｅ６４Ｑ／Ｎ６５Ｄバリアントおよびスキューバリアント対Ｓ３６４Ｋ／Ｅ３５７Ｑ：Ｌ３６８Ｄ／Ｋ３７０Ｓを利用する。Ｆｃ－ｓｃＩＬ－１５／Ｒαフォーマットにおいて、好ましい実施形態は、ＩＬ－１５Ｄ３０Ｎ／Ｎ６５Ｄバリアントおよびスキューバリアント対Ｓ３６４Ｋ／Ｅ３５７Ｑ：Ｌ３６８Ｄ／Ｋ３７０Ｓ、ならびに両方の単量体において４２８Ｌ／４３４Ｓバリアントを利用する。Ｆｃ－ｓｃＩＬ－１５／Ｒαフォーマットにおいて、好ましい実施形態は、ＩＬ－１５Ｄ３０Ｎ／Ｎ６５Ｄバリアントおよびスキューバリアント対Ｓ３６４Ｋ／Ｅ３５７Ｑ：Ｌ３６８Ｄ／Ｋ３７０Ｓ、ならびに両方の単量体においてＭ４２８Ｌ／Ｎ４３４Ｓバリアントを利用する。

いくつかの実施形態では、Ｆｃ－ｓｃＩＬ－１５／Ｒα融合タンパク質は、ヒト成熟ＩＬ－１５Ｄ３０Ｎ／Ｎ６５Ｄバリアント、ＩＬ－１５Ｒα（スシ）ドメイン、および図６Ｅに示されるアミノ酸置換を含む２つのＦｃ単量体を含む。いくつかの実施形態では、Ｆｃ－ｓｃＩＬ－１５／Ｒα融合タンパク質は、Ｆｃドメインがヒト成熟ＩＬ－１５Ｄ３０Ｎ／Ｎ６５Ｄバリアントに連結されたヒトＩＬ－１５Ｒα（スシ）ドメインに連結されるように、アミノ酸置換Ｃ２２０Ｓ、ヘテロ二量体ｐＩバリアントＬ３６８Ｄ／Ｋ３７０Ｓ、および切断置換Ｅ２３３Ｐ／Ｌ２３４Ｖ／Ｌ２３５Ａ／Ｇ２３６ｄｅｌ／Ｓ２６７Ｋを含むＦｃ単量体を含むＦｃ－ＩＬ－１５／Ｒα（スシ）単量体；ならびにアミノ酸置換Ｃ２２０Ｓ、ヘテロ二量体ｐＩバリアントＳ３６４Ｋ／Ｅ３５７Ｑ、等配電子ｐＩ置換Ｐ２１７Ｒ／Ｐ２２８Ｒ／Ｎ２７６Ｋ、および切断置換Ｅ２３３Ｐ／Ｌ２３４Ｖ／Ｌ２３５Ａ／Ｇ２３６ｄｅｌ／Ｓ２６７Ｋを含む空のＦｃ単量体を含む。いくつかの実施形態では、Ｆｃ－ｓｃＩＬ－１５／Ｒα融合タンパク質は、Ｆｃドメインがヒト成熟ＩＬ－１５Ｄ３０Ｎ／Ｎ６５Ｄバリアントに連結されたヒトＩＬ－１５Ｒα（スシ）ドメインに連結されるように、アミノ酸置換Ｃ２２０Ｓ、ヘテロ二量体ｐＩバリアントＬ３６８Ｄ／Ｋ３７０Ｓ、切断置換Ｅ２３３Ｐ／Ｌ２３４Ｖ／Ｌ２３５Ａ／Ｇ２３６ｄｅｌ／Ｓ２６７Ｋ、およびＦｃＲｎ置換Ｍ４２８Ｌ／Ｎ３４３Ｓを含むＦｃ単量体を含むＦｃ－ＩＬ－１５／Ｒα（スシ）単量体；ならびにアミノ酸置換Ｃ２２０Ｓ、ヘテロ二量体ｐＩバリアントＳ３６４Ｋ／Ｅ３５７Ｑ、等配電子ｐＩ置換Ｐ２１７Ｒ／Ｐ２２８Ｒ／Ｎ２７６Ｋ、切断置換Ｅ２３３Ｐ／Ｌ２３４Ｖ／Ｌ２３５Ａ／Ｇ２３６ｄｅｌ／Ｓ２６７Ｋ、およびＦｃＲｎ置換Ｍ４２８Ｌ／Ｎ３４３Ｓを含む空のＦｃ単量体を含む。

Ｆｃ－ｓｃＩＬ－１５／Ｒαフォーマットにおいて、好ましい実施形態は、ＩＬ－１５Ｄ３０Ｎ／Ｅ６４Ｑ／Ｎ６５Ｄバリアントを利用する。

Ｆｃ－ｓｃＩＬ－１５／Ｒαフォーマットにおいて、好ましい実施形態は、ＩＬ－１５Ｄ３０Ｎ／Ｅ６４Ｑ／Ｎ６５Ｄバリアントおよびスキューバリアント対Ｓ３６４Ｋ／Ｅ３５７Ｑ：Ｌ３６８Ｄ／Ｋ３７０Ｓを利用する。Ｆｃ－ｓｃＩＬ－１５／Ｒαフォーマットにおいて、好ましい実施形態は、ＩＬ－１５Ｄ３０Ｎ／Ｅ６４Ｑ／Ｎ６５Ｄバリアント、スキューバリアント対Ｓ３６４Ｋ／Ｅ３５７Ｑ：Ｌ３６８Ｄ／Ｋ３７０Ｓ、および各々のＦｃ単量体において４２８Ｌ／４３４Ｓバリアントを利用する。Ｆｃ－ｓｃＩＬ－１５／Ｒαフォーマットにおいて、好ましい実施形態は、ＩＬ－１５Ｄ３０Ｎ／Ｅ６４Ｑ／Ｎ６５Ｄバリアント、スキューバリアント対Ｓ３６４Ｋ／Ｅ３５７Ｑ：Ｌ３６８Ｄ／Ｋ３７０Ｓ、および各々のＦｃ単量体においてＭ４２８Ｌ／Ｎ４３４Ｓバリアントを利用する。

いくつかの実施形態では、Ｆｃ－ｓｃＩＬ－１５／Ｒα融合タンパク質は、ヒト成熟ＩＬ－１５Ｄ３０Ｎ／Ｅ６４Ｑ／Ｎ６５Ｄバリアント、ＩＬ－１５Ｒα（スシ）ドメイン、および図６Ｅに示されるアミノ酸置換を含む２つのＦｃ単量体を含む。いくつかの実施形態では、Ｆｃ－ｓｃＩＬ－１５／Ｒα融合タンパク質は、Ｆｃドメインがヒト成熟ＩＬ－１５Ｄ３０Ｎ／Ｅ６４Ｑ／Ｎ６５Ｄバリアントに連結されたヒトＩＬ－１５Ｒα（スシ）ドメインに連結されるように、アミノ酸置換Ｃ２２０Ｓ、ヘテロ二量体ｐＩバリアントＬ３６８Ｄ／Ｋ３７０Ｓ、および切断置換Ｅ２３３Ｐ／Ｌ２３４Ｖ／Ｌ２３５Ａ／Ｇ２３６ｄｅｌ／Ｓ２６７Ｋを含むＦｃ単量体を含むＦｃ－ＩＬ－１５／Ｒα（スシ）単量体；ならびにアミノ酸置換Ｃ２２０Ｓ、ヘテロ二量体ｐＩバリアントＳ３６４Ｋ／Ｅ３５７Ｑ、等配電子ｐＩ置換Ｐ２１７Ｒ／Ｐ２２８Ｒ／Ｎ２７６Ｋ、および切断置換Ｅ２３３Ｐ／Ｌ２３４Ｖ／Ｌ２３５Ａ／Ｇ２３６ｄｅｌ／Ｓ２６７Ｋを含む空のＦｃ単量体を含む。いくつかの実施形態では、Ｆｃ－ｓｃＩＬ－１５／Ｒα融合タンパク質は、Ｆｃドメインがヒト成熟ＩＬ－１５Ｄ３０Ｎ／Ｅ６４Ｑ／Ｎ６５Ｄバリアントに連結されたヒトＩＬ－１５Ｒα（スシ）ドメインに連結されるように、アミノ酸置換Ｃ２２０Ｓ、ヘテロ二量体ｐＩバリアントＬ３６８Ｄ／Ｋ３７０Ｓ、切断置換Ｅ２３３Ｐ／Ｌ２３４Ｖ／Ｌ２３５Ａ／Ｇ２３６ｄｅｌ／Ｓ２６７Ｋ、およびＦｃＲｎ置換Ｍ４２８Ｌ／Ｎ３４３Ｓを含むＦｃ単量体を含むＦｃ－ＩＬ－１５／Ｒα（スシ）単量体；ならびにアミノ酸置換Ｃ２２０Ｓ、ヘテロ二量体ｐＩバリアントＳ３６４Ｋ／Ｅ３５７Ｑ、等配電子ｐＩ置換Ｐ２１７Ｒ／Ｐ２２８Ｒ／Ｎ２７６Ｋ、切断置換Ｅ２３３Ｐ／Ｌ２３４Ｖ／Ｌ２３５Ａ／Ｇ２３６ｄｅｌ／Ｓ２６７Ｋ、およびＦｃＲｎ置換Ｍ４２８Ｌ／Ｎ３４３Ｓを含む空のＦｃ単量体を含む。

Ｆｃ－ｓｃＩＬ－１５／Ｒαフォーマットにおいて、好ましい実施形態は、ＩＬ－１５Ｎ６５Ｄバリアントを利用する。

Ｆｃ－ｓｃＩＬ－１５／Ｒαフォーマットにおいて、好ましい実施形態は、ＩＬ－１５のＮ６５Ｄバリアントおよびスキューバリアント対Ｓ３６４Ｋ／Ｅ３５７Ｑ：Ｌ３６８Ｄ／Ｋ３７０Ｓを利用する。Ｆｃ－ｓｃＩＬ－１５／Ｒαフォーマットにおいて、好ましい実施形態は、ＩＬ－１５のＮ６５Ｄバリアント、スキューバリアント対Ｓ３６４Ｋ／Ｅ３５７Ｑ：Ｌ３６８Ｄ／Ｋ３７０Ｓ、および各々のＦｃ単量体において４２８Ｌ／４３４Ｓバリアントを利用する。Ｆｃ－ｓｃＩＬ－１５／Ｒαフォーマットにおいて、好ましい実施形態は、ＩＬ－１５のＮ６５Ｄバリアント、スキューバリアント対Ｓ３６４Ｋ／Ｅ３５７Ｑ：Ｌ３６８Ｄ／Ｋ３７０Ｓ、および各々のＦｃ単量体においてＭ４２８Ｌ／Ｎ４３４Ｓバリアントを利用する。

いくつかの実施形態では、Ｆｃ－ｓｃＩＬ－１５／Ｒα融合タンパク質は、ヒト成熟ＩＬ－１５Ｎ６５Ｄバリアント、ＩＬ－１５Ｒα（スシ）ドメイン、および図６Ｅに示されるアミノ酸置換を含む２つのＦｃ単量体を含む。いくつかの実施形態では、Ｆｃ－ｓｃＩＬ－１５／Ｒα融合タンパク質は、Ｆｃドメインがヒト成熟ＩＬ－１５Ｎ６５Ｄバリアントに連結されたヒトＩＬ－１５Ｒα（スシ）ドメインに連結されるように、アミノ酸置換Ｃ２２０Ｓ、ヘテロ二量体ｐＩバリアントＬ３６８Ｄ／Ｋ３７０Ｓ、および切断置換Ｅ２３３Ｐ／Ｌ２３４Ｖ／Ｌ２３５Ａ／Ｇ２３６ｄｅｌ／Ｓ２６７Ｋを含むＦｃ単量体を含むＦｃ－ＩＬ－１５／Ｒα（スシ）単量体；ならびにアミノ酸置換Ｃ２２０Ｓ、ヘテロ二量体ｐＩバリアントＳ３６４Ｋ／Ｅ３５７Ｑ、等配電子ｐＩ置換Ｐ２１７Ｒ／Ｐ２２８Ｒ／Ｎ２７６Ｋ、および切断置換Ｅ２３３Ｐ／Ｌ２３４Ｖ／Ｌ２３５Ａ／Ｇ２３６ｄｅｌ／Ｓ２６７Ｋを含む空のＦｃ単量体を含む。いくつかの実施形態では、Ｆｃ－ｓｃＩＬ－１５／Ｒα融合タンパク質は、Ｆｃドメインがヒト成熟ＩＬ－１５Ｎ６５Ｄバリアントに連結されたヒトＩＬ－１５Ｒα（スシ）ドメインに連結されるように、アミノ酸置換Ｃ２２０Ｓ、ヘテロ二量体ｐＩバリアントＬ３６８Ｄ／Ｋ３７０Ｓ、切断置換Ｅ２３３Ｐ／Ｌ２３４Ｖ／Ｌ２３５Ａ／Ｇ２３６ｄｅｌ／Ｓ２６７Ｋ、およびＦｃＲｎ置換Ｍ４２８Ｌ／Ｎ３４３Ｓを含むＦｃ単量体を含むＦｃ－ＩＬ－１５／Ｒα（スシ）単量体；ならびにアミノ酸置換Ｃ２２０Ｓ、ヘテロ二量体ｐＩバリアントＳ３６４Ｋ／Ｅ３５７Ｑ、等配電子ｐＩ置換Ｐ２１７Ｒ／Ｐ２２８Ｒ／Ｎ２７６Ｋ、切断置換Ｅ２３３Ｐ／Ｌ２３４Ｖ／Ｌ２３５Ａ／Ｇ２３６ｄｅｌ／Ｓ２６７Ｋ、およびＦｃＲｎ置換Ｍ４２８Ｌ／Ｎ３４３Ｓを含む空のＦｃ単量体を含む。

Ｆｃ－ｓｃＩＬ－１５／Ｒαフォーマットにおいて、好ましい実施形態は、ＩＬ－１５Ｎ４Ｄ／Ｎ６５Ｄバリアントを利用する。

Ｆｃ－ｓｃＩＬ－１５／Ｒαフォーマットにおいて、好ましい実施形態は、ＩＬ－１５Ｎ４Ｄ／Ｎ６５Ｄバリアントおよびスキューバリアント対Ｓ３６４Ｋ／Ｅ３５７Ｑ：Ｌ３６８Ｄ／Ｋ３７０Ｓを利用する。Ｆｃ－ｓｃＩＬ－１５／Ｒαフォーマットにおいて、好ましい実施形態は、ＩＬ－１５Ｎ４Ｄ／Ｎ６５Ｄバリアント、スキューバリアント対Ｓ３６４Ｋ／Ｅ３５７Ｑ：Ｌ３６８Ｄ／Ｋ３７０Ｓ、および各々のＦｃ単量体において４２８Ｌ／４３４Ｓバリアントを利用する。ｎｃＩＬ－１５／Ｒα－Ｆｃフォーマットにおいて、好ましい実施形態は、ＩＬ－１５Ｎ４Ｄ／Ｎ６５Ｄバリアント、スキューバリアント対Ｓ３６４Ｋ／Ｅ３５７Ｑ：Ｌ３６８Ｄ／Ｋ３７０Ｓ、および各々のＦｃ単量体においてＭ４２８Ｌ／Ｎ４３４Ｓバリアントを利用する。

いくつかの実施形態では、Ｆｃ－ｓｃＩＬ－１５／Ｒα融合タンパク質は、ヒト成熟ＩＬ－１５Ｎ４Ｄ／Ｎ６５Ｄバリアント、ＩＬ－１５Ｒα（スシ）ドメイン、および図６Ｅに示されるアミノ酸置換を含む２つのＦｃ単量体を含む。いくつかの実施形態では、Ｆｃ－ｓｃＩＬ－１５／Ｒα融合タンパク質は、Ｆｃドメインがヒト成熟ＩＬ－１５Ｎ４Ｄ／Ｎ６５Ｄバリアントに連結されたヒトＩＬ－１５Ｒα（スシ）ドメインに連結されるように、アミノ酸置換Ｃ２２０Ｓ、ヘテロ二量体ｐＩバリアントＬ３６８Ｄ／Ｋ３７０Ｓ、および切断置換Ｅ２３３Ｐ／Ｌ２３４Ｖ／Ｌ２３５Ａ／Ｇ２３６ｄｅｌ／Ｓ２６７Ｋを含むＦｃ単量体を含むＦｃ－ＩＬ－１５／Ｒα（スシ）単量体；ならびにアミノ酸置換Ｃ２２０Ｓ、ヘテロ二量体ｐＩバリアントＳ３６４Ｋ／Ｅ３５７Ｑ、等配電子ｐＩ置換Ｐ２１７Ｒ／Ｐ２２８Ｒ／Ｎ２７６Ｋ、および切断置換Ｅ２３３Ｐ／Ｌ２３４Ｖ／Ｌ２３５Ａ／Ｇ２３６ｄｅｌ／Ｓ２６７Ｋを含む空のＦｃ単量体を含む。いくつかの実施形態では、Ｆｃ－ｓｃＩＬ－１５／Ｒα融合タンパク質は、Ｆｃドメインがヒト成熟ＩＬ－１５Ｎ４Ｄ／Ｎ６５Ｄバリアントに連結されたヒトＩＬ－１５Ｒα（スシ）ドメインに連結されるように、アミノ酸置換Ｃ２２０Ｓ、ヘテロ二量体ｐＩバリアントＬ３６８Ｄ／Ｋ３７０Ｓ、切断置換Ｅ２３３Ｐ／Ｌ２３４Ｖ／Ｌ２３５Ａ／Ｇ２３６ｄｅｌ／Ｓ２６７Ｋ、およびＦｃＲｎ置換Ｍ４２８Ｌ／Ｎ３４３Ｓを含むＦｃ単量体を含むＦｃ－ＩＬ－１５／Ｒα（スシ）単量体；ならびにアミノ酸置換Ｃ２２０Ｓ、ヘテロ二量体ｐＩバリアントＳ３６４Ｋ／Ｅ３５７Ｑ、等配電子ｐＩ置換Ｐ２１７Ｒ／Ｐ２２８Ｒ／Ｎ２７６Ｋ、切断置換Ｅ２３３Ｐ／Ｌ２３４Ｖ／Ｌ２３５Ａ／Ｇ２３６ｄｅｌ／Ｓ２６７Ｋ、およびＦｃＲｎ置換Ｍ４２８Ｌ／Ｎ３４３Ｓを含む空のＦｃ単量体を含む。

Ｆｃ－ｓｃＩＬ－１５／Ｒαフォーマットにおいて、好ましい実施形態は、ＩＬ－１５Ｎ１Ｄ／Ｎ６５Ｄバリアントを利用する。

Ｆｃ－ｓｃＩＬ－１５／Ｒαフォーマットにおいて、好ましい実施形態は、ＩＬ－１５Ｎ１Ｄ／Ｎ６５Ｄバリアントおよびスキューバリアント対Ｓ３６４Ｋ／Ｅ３５７Ｑ：Ｌ３６８Ｄ／Ｋ３７０Ｓを利用する。Ｆｃ－ｓｃＩＬ－１５／Ｒαフォーマットにおいて、好ましい実施形態は、ＩＬ－１５Ｎ１Ｄ／Ｎ６５Ｄバリアント、スキューバリアント対Ｓ３６４Ｋ／Ｅ３５７Ｑ：Ｌ３６８Ｄ／Ｋ３７０Ｓ、および各々のＦｃ単量体において４２８Ｌ／４３４Ｓバリアントを利用する。Ｆｃ－ｓｃＩＬ－１５／Ｒαフォーマットにおいて、好ましい実施形態は、ＩＬ－１５Ｎ１Ｄ／Ｎ６５Ｄバリアント、スキューバリアント対Ｓ３６４Ｋ／Ｅ３５７Ｑ：Ｌ３６８Ｄ／Ｋ３７０Ｓ、および各々のＦｃ単量体においてＭ４２８Ｌ／Ｎ４３４Ｓバリアントを利用する。

いくつかの実施形態では、Ｆｃ－ｓｃＩＬ－１５／Ｒα融合タンパク質は、ヒト成熟ＩＬ－１５Ｎ１Ｄ／Ｎ６５Ｄバリアント、ＩＬ－１５Ｒα（スシ）ドメイン、および図６Ｅに示されるアミノ酸置換を含む２つのＦｃ単量体を含む。いくつかの実施形態では、Ｆｃ－ｓｃＩＬ－１５／Ｒα融合タンパク質は、Ｆｃドメインがヒト成熟ＩＬ－１５Ｎ１Ｄ／Ｎ６５Ｄバリアントに連結されたヒトＩＬ－１５Ｒα（スシ）ドメインに連結されるように、アミノ酸置換Ｃ２２０Ｓ、ヘテロ二量体ｐＩバリアントＬ３６８Ｄ／Ｋ３７０Ｓ、および切断置換Ｅ２３３Ｐ／Ｌ２３４Ｖ／Ｌ２３５Ａ／Ｇ２３６ｄｅｌ／Ｓ２６７Ｋを含むＦｃ単量体を含むＦｃ－ＩＬ－１５／Ｒα（スシ）単量体；ならびにアミノ酸置換Ｃ２２０Ｓ、ヘテロ二量体ｐＩバリアントＳ３６４Ｋ／Ｅ３５７Ｑ、等配電子ｐＩ置換Ｐ２１７Ｒ／Ｐ２２８Ｒ／Ｎ２７６Ｋ、および切断置換Ｅ２３３Ｐ／Ｌ２３４Ｖ／Ｌ２３５Ａ／Ｇ２３６ｄｅｌ／Ｓ２６７Ｋを含む空のＦｃ単量体を含む。いくつかの実施形態では、Ｆｃ－ｓｃＩＬ－１５／Ｒα融合タンパク質は、Ｆｃドメインがヒト成熟ＩＬ－１５Ｎ１Ｄ／Ｎ６５Ｄバリアントに連結されたヒトＩＬ－１５Ｒα（スシ）ドメインに連結されるように、アミノ酸置換Ｃ２２０Ｓ、ヘテロ二量体ｐＩバリアントＬ３６８Ｄ／Ｋ３７０Ｓ、切断置換Ｅ２３３Ｐ／Ｌ２３４Ｖ／Ｌ２３５Ａ／Ｇ２３６ｄｅｌ／Ｓ２６７Ｋ、およびＦｃＲｎ置換Ｍ４２８Ｌ／Ｎ３４３Ｓを含むＦｃ単量体を含むＦｃ－ＩＬ－１５／Ｒα（スシ）単量体；ならびにアミノ酸置換Ｃ２２０Ｓ、ヘテロ二量体ｐＩバリアントＳ３６４Ｋ／Ｅ３５７Ｑ、等配電子ｐＩ置換Ｐ２１７Ｒ／Ｐ２２８Ｒ／Ｎ２７６Ｋ、切断置換Ｅ２３３Ｐ／Ｌ２３４Ｖ／Ｌ２３５Ａ／Ｇ２３６ｄｅｌ／Ｓ２６７Ｋ、およびＦｃＲｎ置換Ｍ４２８Ｌ／Ｎ３４３Ｓを含む空のＦｃ単量体を含む。

Ｆｃ－ｓｃＩＬ－１５／Ｒαフォーマットにおいて、好ましい実施形態は、ＩＬ－１５バリアントＱ１０８Ｅを利用する。

Ｆｃ－ｓｃＩＬ－１５／Ｒαフォーマットにおいて、好ましい実施形態は、ＩＬ－１５バリアントＱ１０８Ｅおよびスキューバリアント対Ｓ３６４Ｋ／Ｅ３５７Ｑ：Ｌ３６８Ｄ／Ｋ３７０Ｓを利用する。Ｆｃ－ｓｃＩＬ－１５／Ｒαフォーマットにおいて、好ましい実施形態は、ＩＬ－１５バリアントＱ１０８Ｅおよびスキューバリアント対Ｓ３６４Ｋ／Ｅ３５７Ｑ：Ｌ３６８Ｄ／Ｋ３７０Ｓ、ならびに両方の単量体において４２８Ｌ／４３４Ｓバリアントを利用する。Ｆｃ－ｓｃＩＬ－１５／Ｒαフォーマットにおいて、好ましい実施形態は、ＩＬ－１５バリアントＱ１０８Ｅおよびスキューバリアント対Ｓ３６４Ｋ／Ｅ３５７Ｑ：Ｌ３６８Ｄ／Ｋ３７０Ｓ、ならびに両方の単量体においてＭ４２８Ｌ／Ｎ４３４Ｓバリアントを利用する。

いくつかの実施形態では、Ｆｃ－ｓｃＩＬ－１５／Ｒα融合タンパク質は、ヒト成熟ＩＬ－１５Ｑ１０８Ｅバリアント、ＩＬ－１５Ｒα（スシ）ドメイン、および図６Ｅに示されるアミノ酸置換を含む２つのＦｃ単量体を含む。いくつかの実施形態では、Ｆｃ－ｓｃＩＬ－１５／Ｒα融合タンパク質は、Ｆｃドメインがヒト成熟ＩＬ－１５Ｑ１０８Ｅバリアントに連結されたヒトＩＬ－１５Ｒα（スシ）ドメインに連結されるように、アミノ酸置換Ｃ２２０Ｓ、ヘテロ二量体ｐＩバリアントＬ３６８Ｄ／Ｋ３７０Ｓ、および切断置換Ｅ２３３Ｐ／Ｌ２３４Ｖ／Ｌ２３５Ａ／Ｇ２３６ｄｅｌ／Ｓ２６７Ｋを含むＦｃ単量体を含むＦｃ－ＩＬ－１５／Ｒα（スシ）単量体；ならびにアミノ酸置換Ｃ２２０Ｓ、ヘテロ二量体ｐＩバリアントＳ３６４Ｋ／Ｅ３５７Ｑ、等配電子ｐＩ置換Ｐ２１７Ｒ／Ｐ２２８Ｒ／Ｎ２７６Ｋ、および切断置換Ｅ２３３Ｐ／Ｌ２３４Ｖ／Ｌ２３５Ａ／Ｇ２３６ｄｅｌ／Ｓ２６７Ｋを含む空のＦｃ単量体を含む。いくつかの実施形態では、Ｆｃ－ｓｃＩＬ－１５／Ｒα融合タンパク質は、Ｆｃドメインがヒト成熟ＩＬ－１５Ｑ１０８Ｅバリアントに連結されたヒトＩＬ－１５Ｒα（スシ）ドメインに連結されるように、アミノ酸置換Ｃ２２０Ｓ、ヘテロ二量体ｐＩバリアントＬ３６８Ｄ／Ｋ３７０Ｓ、切断置換Ｅ２３３Ｐ／Ｌ２３４Ｖ／Ｌ２３５Ａ／Ｇ２３６ｄｅｌ／Ｓ２６７Ｋ、およびＦｃＲｎ置換Ｍ４２８Ｌ／Ｎ３４３Ｓを含むＦｃ単量体を含むＦｃ－ＩＬ－１５／Ｒα（スシ）単量体；ならびにアミノ酸置換Ｃ２２０Ｓ、ヘテロ二量体ｐＩバリアントＳ３６４Ｋ／Ｅ３５７Ｑ、等配電子ｐＩ置換Ｐ２１７Ｒ／Ｐ２２８Ｒ／Ｎ２７６Ｋ、切断置換Ｅ２３３Ｐ／Ｌ２３４Ｖ／Ｌ２３５Ａ／Ｇ２３６ｄｅｌ／Ｓ２６７Ｋ、およびＦｃＲｎ置換Ｍ４２８Ｌ／Ｎ３４３Ｓを含む空のＦｃ単量体を含む。

Ｆｃ－ｓｃＩＬ－１５／Ｒαフォーマットにおいて、好ましい実施形態は、ＩＬ－１５野生型バリアントを利用する。

Ｆｃ－ｓｃＩＬ－１５／Ｒαフォーマットにおいて、好ましい実施形態は、ＩＬ－１５野生型バリアントおよびスキューバリアント対Ｓ３６４Ｋ／Ｅ３５７Ｑ：Ｌ３６８Ｄ／Ｋ３７０Ｓを利用する。Ｆｃ－ｓｃＩＬ－１５／Ｒαフォーマットにおいて、好ましい実施形態は、ＩＬ－１５野生型バリアントおよびスキューバリアント対Ｓ３６４Ｋ／Ｅ３５７Ｑ：Ｌ３６８Ｄ／Ｋ３７０Ｓ、ならびに両方の単量体において４２８Ｌ／４３４Ｓバリアントを利用する。Ｆｃ－ｓｃＩＬ－１５／Ｒαフォーマットにおいて、好ましい実施形態は、ＩＬ－１５野生型バリアントおよびスキューバリアント対Ｓ３６４Ｋ／Ｅ３５７Ｑ：Ｌ３６８Ｄ／Ｋ３７０Ｓ、ならびに両方の単量体においてＭ４２８Ｌ／Ｎ４３４Ｓバリアントを利用する。

いくつかの実施形態では、Ｆｃ－ｓｃＩＬ－１５／Ｒα融合タンパク質は、ヒト成熟ＩＬ－１５野生型バリアント、ＩＬ－１５Ｒα（スシ）ドメイン、および図６Ｅに示されるアミノ酸置換を含む２つのＦｃ単量体を含む。いくつかの実施形態では、Ｆｃ－ｓｃＩＬ－１５／Ｒα融合タンパク質は、Ｆｃドメインがヒト成熟ＩＬ－１５野生型バリアントに連結されたヒトＩＬ－１５Ｒα（スシ）ドメインに連結されるように、アミノ酸置換Ｃ２２０Ｓ、ヘテロ二量体ｐＩバリアントＬ３６８Ｄ／Ｋ３７０Ｓ、および切断置換Ｅ２３３Ｐ／Ｌ２３４Ｖ／Ｌ２３５Ａ／Ｇ２３６ｄｅｌ／Ｓ２６７Ｋを含むＦｃ単量体を含むＦｃ－ＩＬ－１５／Ｒα（スシ）単量体；ならびにアミノ酸置換Ｃ２２０Ｓ、ヘテロ二量体ｐＩバリアントＳ３６４Ｋ／Ｅ３５７Ｑ、等配電子ｐＩ置換Ｐ２１７Ｒ／Ｐ２２８Ｒ／Ｎ２７６Ｋ、および切断置換Ｅ２３３Ｐ／Ｌ２３４Ｖ／Ｌ２３５Ａ／Ｇ２３６ｄｅｌ／Ｓ２６７Ｋを含む空のＦｃ単量体を含む。いくつかの実施形態では、Ｆｃ－ｓｃＩＬ－１５／Ｒα融合タンパク質は、Ｆｃドメインがヒト成熟ＩＬ－１５野生型バリアントに連結されたヒトＩＬ－１５Ｒα（スシ）ドメインに連結されるように、アミノ酸置換Ｃ２２０Ｓ、ヘテロ二量体ｐＩバリアントＬ３６８Ｄ／Ｋ３７０Ｓ、切断置換Ｅ２３３Ｐ／Ｌ２３４Ｖ／Ｌ２３５Ａ／Ｇ２３６ｄｅｌ／Ｓ２６７Ｋ、およびＦｃＲｎ置換Ｍ４２８Ｌ／Ｎ３４３Ｓを含むＦｃ単量体を含むＦｃ－ＩＬ－１５／Ｒα（スシ）単量体；ならびにアミノ酸置換Ｃ２２０Ｓ、ヘテロ二量体ｐＩバリアントＳ３６４Ｋ／Ｅ３５７Ｑ、等配電子ｐＩ置換Ｐ２１７Ｒ／Ｐ２２８Ｒ／Ｎ２７６Ｋ、切断置換Ｅ２３３Ｐ／Ｌ２３４Ｖ／Ｌ２３５Ａ／Ｇ２３６ｄｅｌ／Ｓ２６７Ｋ、およびＦｃＲｎ置換Ｍ４２８Ｌ／Ｎ３４３Ｓを含む空のＦｃ単量体を含む。

ｓｃＩＬ－１５／Ｒα－Ｆｃフォーマットにおいて、好ましい実施形態は、図１６に示される。

ＶＩＩＩ．本発明の特定の実施形態
異なるフォーマットの非標的化ＩＬ－１５／ＩＬ－１５Ｒα－Ｆｃ融合タンパク質およびチェックポイント遮断抗体を含む組成物が本明細書に提供される。非標的化ＩＬ－１５／ＩＬ－１５Ｒα－Ｆｃ融合タンパク質およびチェックポイント遮断抗体を、対象、例えば、ヒト対象に投与することを含む方法も提供される。

いくつかの実施形態では、本明細書に記載される組成物のチェックポイント遮断抗体は、抗ＰＤ－１抗体からなる群から選択される。いくつかの実施形態では、抗ＰＤ－１抗体は、ニボルマブ、ニボルマブ、ペムブロリズマブ、またはピジリズマブからなる群から選択される。

いくつかの実施形態では、本明細書に記載される組成物の非標的化ＩＬ－１５／ＩＬ－１５Ｒα－Ｆｃ融合タンパク質は、ＩＬ－１５／ＩＬ－１５Ｒα－ヘテロＦｃフォーマット、ｓｃＩＬ－１５／Ｒα－Ｆｃフォーマット、ｎｃＩＬ－１５／Ｒα－Ｆｃフォーマット、二価ｎｃＩＬ－１５／Ｒα－Ｆｃフォーマット、二価ｓｃＩＬ－１５／Ｒα－Ｆｃフォーマット、Ｆｃ－ｎｃＩＬ－１５／Ｒαフォーマット、またはＦｃ－ｓｃＩＬ－１５／Ｒαフォーマットなどの、本明細書に記載されるフォーマットで編成される。いくつかの実施形態では、非標的化ＩＬ－１５／ＩＬ－１５Ｒα－Ｆｃ融合タンパク質は、ＩＬ－１５／ＩＬ－１５Ｒα－ヘテロＦｃフォーマットを有する。

いくつかの実施形態では、組成物の非標的化ＩＬ－１５／ＩＬ－１５Ｒα－Ｆｃ融合タンパク質は、ＩＬ－１５／ＩＬ－１５Ｒα－ヘテロＦｃフォーマットを有し、ヒト成熟ＩＬ－１５のＤ３０Ｎ／Ｅ６４Ｑ／Ｎ６５Ｄバリアント；ヒトＩＬ－１５Ｒα（スシ）ドメイン；アミノ酸置換Ｃ２２０Ｓ、ヘテロ二量体ｐＩ置換Ｌ３６８Ｄ／Ｋ３７０Ｓ、等配電子ｐＩ置換Ｑ２９５Ｅ／Ｎ３８４Ｄ／Ｑ４１８Ｅ／Ｎ４２１Ｄ、切断置換Ｅ２３３Ｐ／Ｌ２３４Ｖ／Ｌ２３５Ａ／Ｇ２３６ｄｅｌ／Ｓ２６７Ｋを含むＩＬ－１５－Ｆｃ単量体；ならびにアミノ酸置換Ｃ２２０Ｓ、ヘテロ二量体ｐＩ置換Ｓ３６４Ｋ／Ｅ３５７Ｑ、および切断置換Ｅ２３３Ｐ／Ｌ２３４Ｖ／Ｌ２３５Ａ／Ｇ２３６ｄｅｌ／Ｓ２６７Ｋを含むＩＬ－１５Ｒα（スシ）－Ｆｃ単量体を含む。いくつかの実施形態では、ＩＬ－１５／Ｒα－ヘテロＦｃ融合タンパク質は、ヒト成熟ＩＬ－１５のＮ６５Ｄバリアント；ヒトＩＬ－１５Ｒα（スシ）ドメイン；アミノ酸置換Ｃ２２０Ｓ、ヘテロ二量体ｐＩ置換Ｌ３６８Ｄ／Ｋ３７０Ｓ、等配電子ｐＩ置換Ｑ２９５Ｅ／Ｎ３８４Ｄ／Ｑ４１８Ｅ／Ｎ４２１Ｄ、切断置換Ｅ２３３Ｐ／Ｌ２３４Ｖ／Ｌ２３５Ａ／Ｇ２３６ｄｅｌ／Ｓ２６７Ｋ、およびＦｃＲｎ置換Ｍ４２８Ｌ／Ｎ４３４Ｓを含むＩＬ－１５－Ｆｃ単量体；ならびにアミノ酸置換Ｃ２２０Ｓ、ヘテロ二量体ｐＩ置換Ｓ３６４Ｋ／Ｅ３５７Ｑ、切断置換Ｅ２３３Ｐ／Ｌ２３４Ｖ／Ｌ２３５Ａ／Ｇ２３６ｄｅｌ／Ｓ２６７Ｋ、およびＦｃＲｎ置換Ｍ４２８Ｌ／Ｎ４３４Ｓを含むＩＬ－１５Ｒα（スシ）－Ｆｃ単量体を含む。

いくつかの実施形態では、本明細書に記載される組成物または方法は、抗ＰＤ－１抗体と、（ａ）（Ｎ末端からＣ末端にかけて）アミノ酸置換Ｃ２２０Ｓ、ヘテロ二量体ｐＩ０置換Ｌ３６８Ｄ／Ｋ３７０Ｓ、等配電子ｐＩ置換Ｑ２９５Ｅ／Ｎ３８４Ｄ／Ｑ４１８Ｅ／Ｎ４２１Ｄ、および切断置換Ｅ２３３Ｐ／Ｌ２３４Ｖ／Ｌ２３５Ａ／Ｇ２３６ｄｅｌ／Ｓ２６７Ｋを含むＩＬ－１５－Ｆｃ単量体に連結されたヒト成熟ＩＬ－１５Ｄ３０Ｎ／Ｅ６４Ｑ／Ｎ６５Ｄバリアントを含む第１の単量体、ならびに（ｂ）（Ｎ末端からＣ末端にかけて）アミノ酸置換Ｃ２２０Ｓ、ヘテロ二量体ｐＩ置換Ｓ３６４Ｋ／Ｅ３５７Ｑ、および切断置換Ｅ２３３Ｐ／Ｌ２３４Ｖ／Ｌ２３５Ａ／Ｇ２３６ｄｅｌ／Ｓ２６７Ｋを含むＩＬ－１５Ｒα（スシ）－Ｆｃ単量体に連結されたヒトＩＬ－１５Ｒα（スシ）ドメインを含む第２の単量体を含む非標的化ＩＬ－１５／ＩＬ－１５Ｒα－Ｆｃ融合タンパク質とを含む。いくつかの実施形態では、組成物は、抗ＰＤ－１抗体と、（ａ）（Ｎ末端からＣ末端にかけて）アミノ酸置換Ｃ２２０Ｓ、ヘテロ二量体ｐＩ置換Ｌ３６８Ｄ／Ｋ３７０Ｓ、等配電子ｐＩ置換Ｑ２９５Ｅ／Ｎ３８４Ｄ／Ｑ４１８Ｅ／Ｎ４２１Ｄ、切断置換Ｅ２３３Ｐ／Ｌ２３４Ｖ／Ｌ２３５Ａ／Ｇ２３６ｄｅｌ／Ｓ２６７Ｋ、およびＦｃＲｎ置換Ｍ４２８Ｌ／Ｎ４３４Ｓを含むＩＬ－１５－Ｆｃ単量体に連結されたヒト成熟ＩＬ－１５Ｄ３０Ｎ／Ｅ６４Ｑ／Ｎ６５Ｄバリアントを含む第１の単量体、ならびに（ｂ）（Ｎ末端からＣ末端にかけて）アミノ酸置換Ｃ２２０Ｓ、ヘテロ二量体ｐＩ置換Ｓ３６４Ｋ／Ｅ３５７Ｑ、切断置換Ｅ２３３Ｐ／Ｌ２３４Ｖ／Ｌ２３５Ａ／Ｇ２３６ｄｅｌ／Ｓ２６７Ｋ、およびＦｃＲｎ置換Ｍ４２８Ｌ／Ｎ４３４Ｓを含むＩＬ－１５Ｒα（スシ）－Ｆｃ単量体に連結されたヒトＩＬ－１５Ｒα（スシ）ドメインを含む第２の単量体を含む非標的化ＩＬ－１５／ＩＬ－１５Ｒα－Ｆｃ融合タンパク質とを含む。

いくつかの実施形態では、本明細書に記載される組成物または方法は、ニボルマブと、（ａ）（Ｎ末端からＣ末端にかけて）アミノ酸置換Ｃ２２０Ｓ、ヘテロ二量体ｐＩ置換Ｌ３６８Ｄ／Ｋ３７０Ｓ、等配電子ｐＩ置換Ｑ２９５Ｅ／Ｎ３８４Ｄ／Ｑ４１８Ｅ／Ｎ４２１Ｄ、および切断置換Ｅ２３３Ｐ／Ｌ２３４Ｖ／Ｌ２３５Ａ／Ｇ２３６ｄｅｌ／Ｓ２６７Ｋを含むＩＬ－１５－Ｆｃ単量体に連結されたヒト成熟ＩＬ－１５Ｄ３０Ｎ／Ｅ６４Ｑ／Ｎ６５Ｄバリアントを含む第１の単量体、ならびに（ｂ）（Ｎ末端からＣ末端にかけて）アミノ酸置換Ｃ２２０Ｓ、ヘテロ二量体ｐＩ置換Ｓ３６４Ｋ／Ｅ３５７Ｑ、および切断置換Ｅ２３３Ｐ／Ｌ２３４Ｖ／Ｌ２３５Ａ／Ｇ２３６ｄｅｌ／Ｓ２６７Ｋを含むＩＬ－１５Ｒα（スシ）－Ｆｃ単量体に連結されたヒトＩＬ－１５Ｒα（スシ）ドメインを含む第２の単量体を含む非標的化ＩＬ－１５／ＩＬ－１５Ｒα－Ｆｃ融合タンパク質とを含む。いくつかの実施形態では、本明細書に記載される組成物または方法は、ニボルマブと、（ａ）（Ｎ末端からＣ末端にかけて）アミノ酸置換Ｃ２２０Ｓ、ヘテロ二量体ｐＩ置換Ｌ３６８Ｄ／Ｋ３７０Ｓ、等配電子ｐＩ置換Ｑ２９５Ｅ／Ｎ３８４Ｄ／Ｑ４１８Ｅ／Ｎ４２１Ｄ、切断置換Ｅ２３３Ｐ／Ｌ２３４Ｖ／Ｌ２３５Ａ／Ｇ２３６ｄｅｌ／Ｓ２６７Ｋ、およびＦｃＲｎ置換Ｍ４２８Ｌ／Ｎ４３４Ｓを含むＩＬ－１５－Ｆｃ単量体に連結されたヒト成熟ＩＬ－１５Ｄ３０Ｎ／Ｅ６４Ｑ／Ｎ６５Ｄバリアントを含む第１の単量体、ならびに（ｂ）（Ｎ末端からＣ末端にかけて）アミノ酸置換Ｃ２２０Ｓ、ヘテロ二量体ｐＩ置換Ｓ３６４Ｋ／Ｅ３５７Ｑ、切断置換Ｅ２３３Ｐ／Ｌ２３４Ｖ／Ｌ２３５Ａ／Ｇ２３６ｄｅｌ／Ｓ２６７Ｋ、およびＦｃＲｎ置換Ｍ４２８Ｌ／Ｎ４３４Ｓを含むＩＬ－１５Ｒα（スシ）－Ｆｃ単量体に連結されたヒトＩＬ－１５Ｒα（スシ）ドメインを含む第２の単量体を含む非標的化ＩＬ－１５／ＩＬ－１５Ｒα－Ｆｃ融合タンパク質とを含む。

いくつかの実施形態では、本明細書に記載される組成物または方法は、ペムブロリズマブと、（ａ）（Ｎ末端からＣ末端にかけて）アミノ酸置換Ｃ２２０Ｓ、ヘテロ二量体ｐＩ置換Ｌ３６８Ｄ／Ｋ３７０Ｓ、等配電子ｐＩ置換Ｑ２９５Ｅ／Ｎ３８４Ｄ／Ｑ４１８Ｅ／Ｎ４２１Ｄ、および切断置換Ｅ２３３Ｐ／Ｌ２３４Ｖ／Ｌ２３５Ａ／Ｇ２３６ｄｅｌ／Ｓ２６７Ｋを含むＩＬ－１５－Ｆｃ単量体に連結されたヒト成熟ＩＬ－１５Ｄ３０Ｎ／Ｅ６４Ｑ／Ｎ６５Ｄバリアントを含む第１の単量体、ならびに（ｂ）（Ｎ末端からＣ末端にかけて）アミノ酸置換Ｃ２２０Ｓ、ヘテロ二量体ｐＩ置換Ｓ３６４Ｋ／Ｅ３５７Ｑ、および切断置換Ｅ２３３Ｐ／Ｌ２３４Ｖ／Ｌ２３５Ａ／Ｇ２３６ｄｅｌ／Ｓ２６７Ｋを含むＩＬ－１５Ｒα（スシ）－Ｆｃ単量体に連結されたヒトＩＬ－１５Ｒα（スシ）ドメインを含む第２の単量体を含む非標的化ＩＬ－１５／ＩＬ－１５Ｒα－Ｆｃ融合タンパク質とを含む。いくつかの実施形態では、組成物は、ペムブロリズマブと、（ａ）（Ｎ末端からＣ末端にかけて）アミノ酸置換Ｃ２２０Ｓ、ヘテロ二量体ｐＩ置換Ｌ３６８Ｄ／Ｋ３７０Ｓ、等配電子ｐＩ置換Ｑ２９５Ｅ／Ｎ３８４Ｄ／Ｑ４１８Ｅ／Ｎ４２１Ｄ、切断置換Ｅ２３３Ｐ／Ｌ２３４Ｖ／Ｌ２３５Ａ／Ｇ２３６ｄｅｌ／Ｓ２６７Ｋ、およびＦｃＲｎ置換Ｍ４２８Ｌ／Ｎ４３４Ｓを含むＩＬ－１５－Ｆｃ単量体に連結されたヒト成熟ＩＬ－１５Ｄ３０Ｎ／Ｅ６４Ｑ／Ｎ６５Ｄバリアントを含む第１の単量体、ならびに（ｂ）（Ｎ末端からＣ末端にかけて）アミノ酸置換Ｃ２２０Ｓ、ヘテロ二量体ｐＩ置換Ｓ３６４Ｋ／Ｅ３５７Ｑ、切断置換Ｅ２３３Ｐ／Ｌ２３４Ｖ／Ｌ２３５Ａ／Ｇ２３６ｄｅｌ／Ｓ２６７Ｋ、およびＦｃＲｎ置換Ｍ４２８Ｌ／Ｎ４３４Ｓを含むＩＬ－１５Ｒα（スシ）－Ｆｃ単量体に連結されたヒトＩＬ－１５Ｒα（スシ）ドメインを含む第２の単量体を含む非標的化ＩＬ－１５／ＩＬ－１５Ｒα－Ｆｃ融合タンパク質とを含む。

いくつかの実施形態では、本明細書に記載される組成物または方法は、ピジリズマブと、（ａ）（Ｎ末端からＣ末端にかけて）アミノ酸置換Ｃ２２０Ｓ、ヘテロ二量体ｐＩ置換Ｌ３６８Ｄ／Ｋ３７０Ｓ、等配電子ｐＩ置換Ｑ２９５Ｅ／Ｎ３８４Ｄ／Ｑ４１８Ｅ／Ｎ４２１Ｄ、および切断置換Ｅ２３３Ｐ／Ｌ２３４Ｖ／Ｌ２３５Ａ／Ｇ２３６ｄｅｌ／Ｓ２６７Ｋを含むＩＬ－１５－Ｆｃ単量体に連結されたヒト成熟ＩＬ－１５Ｄ３０Ｎ／Ｅ６４Ｑ／Ｎ６５Ｄバリアントを含む第１の単量体、ならびに（ｂ）（Ｎ末端からＣ末端にかけて）アミノ酸置換Ｃ２２０Ｓ、ヘテロ二量体ｐＩ置換Ｓ３６４Ｋ／Ｅ３５７Ｑ、および切断置換Ｅ２３３Ｐ／Ｌ２３４Ｖ／Ｌ２３５Ａ／Ｇ２３６ｄｅｌ／Ｓ２６７Ｋを含むＩＬ－１５Ｒα（スシ）－Ｆｃ単量体に連結されたヒトＩＬ－１５Ｒα（スシ）ドメインを含む第２の単量体を含む非標的化ＩＬ－１５／ＩＬ－１５Ｒα－Ｆｃ融合タンパク質とを含む。いくつかの実施形態では、本明細書に記載される組成物または方法は、ピジリズマブと、（ａ）（Ｎ末端からＣ末端にかけて）アミノ酸置換Ｃ２２０Ｓ、ヘテロ二量体ｐＩ置換Ｌ３６８Ｄ／Ｋ３７０Ｓ、等配電子ｐＩ置換Ｑ２９５Ｅ／Ｎ３８４Ｄ／Ｑ４１８Ｅ／Ｎ４２１Ｄ、切断置換Ｅ２３３Ｐ／Ｌ２３４Ｖ／Ｌ２３５Ａ／Ｇ２３６ｄｅｌ／Ｓ２６７Ｋ、およびＦｃＲｎ置換Ｍ４２８Ｌ／Ｎ４３４Ｓを含むＩＬ－１５－Ｆｃ単量体に連結されたヒト成熟ＩＬ－１５Ｄ３０Ｎ／Ｅ６４Ｑ／Ｎ６５Ｄバリアントを含む第１の単量体、ならびに（ｂ）（Ｎ末端からＣ末端にかけて）アミノ酸置換Ｃ２２０Ｓ、ヘテロ二量体ｐＩ置換Ｓ３６４Ｋ／Ｅ３５７Ｑ、切断置換Ｅ２３３Ｐ／Ｌ２３４Ｖ／Ｌ２３５Ａ／Ｇ２３６ｄｅｌ／Ｓ２６７Ｋ、およびＦｃＲｎ置換Ｍ４２８Ｌ／Ｎ４３４Ｓを含むＩＬ－１５Ｒα（スシ）－Ｆｃ単量体に連結されたヒトＩＬ－１５Ｒα（スシ）ドメインを含む第２の単量体を含む非標的化ＩＬ－１５／ＩＬ－１５Ｒα－Ｆｃ融合タンパク質とを含む。

いくつかの実施形態では、本明細書に記載される組成物または方法は、抗ＰＤ－１抗体と、（ａ）（Ｎ末端からＣ末端にかけて）アミノ酸置換Ｃ２２０Ｓ、ヘテロ二量体ｐＩ０置換Ｌ３６８Ｄ／Ｋ３７０Ｓ、等配電子ｐＩ置換Ｑ２９５Ｅ／Ｎ３８４Ｄ／Ｑ４１８Ｅ／Ｎ４２１Ｄ、および切断置換Ｅ２３３Ｐ／Ｌ２３４Ｖ／Ｌ２３５Ａ／Ｇ２３６ｄｅｌ／Ｓ２６７Ｋを含むＩＬ－１５－Ｆｃ単量体に連結されたヒト成熟ＩＬ－１５Ｎ４Ｄ／Ｎ６５Ｄバリアントを含む第１の単量体、ならびに（ｂ）（Ｎ末端からＣ末端にかけて）アミノ酸置換Ｃ２２０Ｓ、ヘテロ二量体ｐＩ置換Ｓ３６４Ｋ／Ｅ３５７Ｑ、および切断置換Ｅ２３３Ｐ／Ｌ２３４Ｖ／Ｌ２３５Ａ／Ｇ２３６ｄｅｌ／Ｓ２６７Ｋを含むＩＬ－１５Ｒα（スシ）－Ｆｃ単量体に連結されたヒトＩＬ－１５Ｒα（スシ）ドメインを含む第２の単量体を含む非標的化ＩＬ－１５／ＩＬ－１５Ｒα－Ｆｃ融合タンパク質とを含む。いくつかの実施形態では、組成物は、抗ＰＤ－１抗体と、（ａ）（Ｎ末端からＣ末端にかけて）アミノ酸置換Ｃ２２０Ｓ、ヘテロ二量体ｐＩ置換Ｌ３６８Ｄ／Ｋ３７０Ｓ、等配電子ｐＩ置換Ｑ２９５Ｅ／Ｎ３８４Ｄ／Ｑ４１８Ｅ／Ｎ４２１Ｄ、切断置換Ｅ２３３Ｐ／Ｌ２３４Ｖ／Ｌ２３５Ａ／Ｇ２３６ｄｅｌ／Ｓ２６７Ｋ、およびＦｃＲｎ置換Ｍ４２８Ｌ／Ｎ４３４Ｓを含むＩＬ－１５－Ｆｃ単量体に連結されたヒト成熟ＩＬ－１５Ｎ４Ｄ／Ｎ６５Ｄバリアントを含む第１の単量体、ならびに（ｂ）（Ｎ末端からＣ末端にかけて）アミノ酸置換Ｃ２２０Ｓ、ヘテロ二量体ｐＩ置換Ｓ３６４Ｋ／Ｅ３５７Ｑ、切断置換Ｅ２３３Ｐ／Ｌ２３４Ｖ／Ｌ２３５Ａ／Ｇ２３６ｄｅｌ／Ｓ２６７Ｋ、およびＦｃＲｎ置換Ｍ４２８Ｌ／Ｎ４３４Ｓを含むＩＬ－１５Ｒα（スシ）－Ｆｃ単量体に連結されたヒトＩＬ－１５Ｒα（スシ）ドメインを含む第２の単量体を含む非標的化ＩＬ－１５／ＩＬ－１５Ｒα－Ｆｃ融合タンパク質とを含む。

いくつかの実施形態では、本明細書に記載される組成物または方法は、ニボルマブと、（ａ）（Ｎ末端からＣ末端にかけて）アミノ酸置換Ｃ２２０Ｓ、ヘテロ二量体ｐＩ置換Ｌ３６８Ｄ／Ｋ３７０Ｓ、等配電子ｐＩ置換Ｑ２９５Ｅ／Ｎ３８４Ｄ／Ｑ４１８Ｅ／Ｎ４２１Ｄ、および切断置換Ｅ２３３Ｐ／Ｌ２３４Ｖ／Ｌ２３５Ａ／Ｇ２３６ｄｅｌ／Ｓ２６７Ｋを含むＩＬ－１５－Ｆｃ単量体に連結されたヒト成熟ＩＬ－１５Ｎ４Ｄ／Ｎ６５Ｄバリアントを含む第１の単量体、ならびに（ｂ）（Ｎ末端からＣ末端にかけて）アミノ酸置換Ｃ２２０Ｓ、ヘテロ二量体ｐＩ置換Ｓ３６４Ｋ／Ｅ３５７Ｑ、および切断置換Ｅ２３３Ｐ／Ｌ２３４Ｖ／Ｌ２３５Ａ／Ｇ２３６ｄｅｌ／Ｓ２６７Ｋを含むＩＬ－１５Ｒα（スシ）－Ｆｃ単量体に連結されたヒトＩＬ－１５Ｒα（スシ）ドメインを含む第２の単量体を含む非標的化ＩＬ－１５／ＩＬ－１５Ｒα－Ｆｃ融合タンパク質とを含む。いくつかの実施形態では、本明細書に記載される組成物または方法は、ニボルマブと、（ａ）（Ｎ末端からＣ末端にかけて）アミノ酸置換Ｃ２２０Ｓ、ヘテロ二量体ｐＩ置換Ｌ３６８Ｄ／Ｋ３７０Ｓ、等配電子ｐＩ置換Ｑ２９５Ｅ／Ｎ３８４Ｄ／Ｑ４１８Ｅ／Ｎ４２１Ｄ、切断置換Ｅ２３３Ｐ／Ｌ２３４Ｖ／Ｌ２３５Ａ／Ｇ２３６ｄｅｌ／Ｓ２６７Ｋ、およびＦｃＲｎ置換Ｍ４２８Ｌ／Ｎ４３４Ｓを含むＩＬ－１５－Ｆｃ単量体に連結されたヒト成熟ＩＬ－１５Ｎ４Ｄ／Ｎ６５Ｄバリアントを含む第１の単量体、ならびに（ｂ）（Ｎ末端からＣ末端にかけて）アミノ酸置換Ｃ２２０Ｓ、ヘテロ二量体ｐＩ置換Ｓ３６４Ｋ／Ｅ３５７Ｑ、切断置換Ｅ２３３Ｐ／Ｌ２３４Ｖ／Ｌ２３５Ａ／Ｇ２３６ｄｅｌ／Ｓ２６７Ｋ、およびＦｃＲｎ置換Ｍ４２８Ｌ／Ｎ４３４Ｓを含むＩＬ－１５Ｒα（スシ）－Ｆｃ単量体に連結されたヒトＩＬ－１５Ｒα（スシ）ドメインを含む第２の単量体を含む非標的化ＩＬ－１５／ＩＬ－１５Ｒα－Ｆｃ融合タンパク質とを含む。

いくつかの実施形態では、本明細書に記載される組成物または方法は、ペムブロリズマブと、（ａ）（Ｎ末端からＣ末端にかけて）アミノ酸置換Ｃ２２０Ｓ、ヘテロ二量体ｐＩ置換Ｌ３６８Ｄ／Ｋ３７０Ｓ、等配電子ｐＩ置換Ｑ２９５Ｅ／Ｎ３８４Ｄ／Ｑ４１８Ｅ／Ｎ４２１Ｄ、および切断置換Ｅ２３３Ｐ／Ｌ２３４Ｖ／Ｌ２３５Ａ／Ｇ２３６ｄｅｌ／Ｓ２６７Ｋを含むＩＬ－１５－Ｆｃ単量体に連結されたヒト成熟ＩＬ－１５Ｎ４Ｄ／Ｎ６５Ｄバリアントを含む第１の単量体、ならびに（ｂ）（Ｎ末端からＣ末端にかけて）アミノ酸置換Ｃ２２０Ｓ、ヘテロ二量体ｐＩ置換Ｓ３６４Ｋ／Ｅ３５７Ｑ、および切断置換Ｅ２３３Ｐ／Ｌ２３４Ｖ／Ｌ２３５Ａ／Ｇ２３６ｄｅｌ／Ｓ２６７Ｋを含むＩＬ－１５Ｒα（スシ）－Ｆｃ単量体に連結されたヒトＩＬ－１５Ｒα（スシ）ドメインを含む第２の単量体を含む非標的化ＩＬ－１５／ＩＬ－１５Ｒα－Ｆｃ融合タンパク質とを含む。いくつかの実施形態では、本明細書に記載される組成物または方法は、ペムブロリズマブと、（ａ）（Ｎ末端からＣ末端にかけて）アミノ酸置換Ｃ２２０Ｓ、ヘテロ二量体ｐＩ置換Ｌ３６８Ｄ／Ｋ３７０Ｓ、等配電子ｐＩ置換Ｑ２９５Ｅ／Ｎ３８４Ｄ／Ｑ４１８Ｅ／Ｎ４２１Ｄ、切断置換Ｅ２３３Ｐ／Ｌ２３４Ｖ／Ｌ２３５Ａ／Ｇ２３６ｄｅｌ／Ｓ２６７Ｋ、およびＦｃＲｎ置換Ｍ４２８Ｌ／Ｎ４３４Ｓを含むＩＬ－１５－Ｆｃ単量体に連結されたヒト成熟ＩＬ－１５Ｎ４Ｄ／Ｎ６５Ｄバリアントを含む第１の単量体、ならびに（ｂ）（Ｎ末端からＣ末端にかけて）アミノ酸置換Ｃ２２０Ｓ、ヘテロ二量体ｐＩ置換Ｓ３６４Ｋ／Ｅ３５７Ｑ、切断置換Ｅ２３３Ｐ／Ｌ２３４Ｖ／Ｌ２３５Ａ／Ｇ２３６ｄｅｌ／Ｓ２６７Ｋ、およびＦｃＲｎ置換Ｍ４２８Ｌ／Ｎ４３４Ｓを含むＩＬ－１５Ｒα（スシ）－Ｆｃ単量体に連結されたヒトＩＬ－１５Ｒα（スシ）ドメインを含む第２の単量体を含む非標的化ＩＬ－１５／ＩＬ－１５Ｒα－Ｆｃ融合タンパク質とを含む。

いくつかの実施形態では、本明細書に記載される組成物または方法は、ピジリズマブと、（ａ）（Ｎ末端からＣ末端にかけて）アミノ酸置換Ｃ２２０Ｓ、ヘテロ二量体ｐＩ置換Ｌ３６８Ｄ／Ｋ３７０Ｓ、等配電子ｐＩ置換Ｑ２９５Ｅ／Ｎ３８４Ｄ／Ｑ４１８Ｅ／Ｎ４２１Ｄ、および切断置換Ｅ２３３Ｐ／Ｌ２３４Ｖ／Ｌ２３５Ａ／Ｇ２３６ｄｅｌ／Ｓ２６７Ｋを含むＩＬ－１５－Ｆｃ単量体に連結されたヒト成熟ＩＬ－１５Ｎ４Ｄ／Ｎ６５Ｄバリアントを含む第１の単量体、ならびに（ｂ）（Ｎ末端からＣ末端にかけて）アミノ酸置換Ｃ２２０Ｓ、ヘテロ二量体ｐＩ置換Ｓ３６４Ｋ／Ｅ３５７Ｑ、および切断置換Ｅ２３３Ｐ／Ｌ２３４Ｖ／Ｌ２３５Ａ／Ｇ２３６ｄｅｌ／Ｓ２６７Ｋを含むＩＬ－１５Ｒα（スシ）－Ｆｃ単量体に連結されたヒトＩＬ－１５Ｒα（スシ）ドメインを含む第２の単量体を含む非標的化ＩＬ－１５／ＩＬ－１５Ｒα－Ｆｃ融合タンパク質とを含む。いくつかの実施形態では、本明細書に記載される組成物または方法は、ピジリズマブと、（ａ）（Ｎ末端からＣ末端にかけて）アミノ酸置換Ｃ２２０Ｓ、ヘテロ二量体ｐＩ置換Ｌ３６８Ｄ／Ｋ３７０Ｓ、等配電子ｐＩ置換Ｑ２９５Ｅ／Ｎ３８４Ｄ／Ｑ４１８Ｅ／Ｎ４２１Ｄ、切断置換Ｅ２３３Ｐ／Ｌ２３４Ｖ／Ｌ２３５Ａ／Ｇ２３６ｄｅｌ／Ｓ２６７Ｋ、およびＦｃＲｎ置換Ｍ４２８Ｌ／Ｎ４３４Ｓを含むＩＬ－１５－Ｆｃ単量体に連結されたヒト成熟ＩＬ－１５Ｎ４Ｄ／Ｎ６５Ｄバリアントを含む第１の単量体、ならびに（ｂ）（Ｎ末端からＣ末端にかけて）アミノ酸置換Ｃ２２０Ｓ、ヘテロ二量体ｐＩ置換Ｓ３６４Ｋ／Ｅ３５７Ｑ、切断置換Ｅ２３３Ｐ／Ｌ２３４Ｖ／Ｌ２３５Ａ／Ｇ２３６ｄｅｌ／Ｓ２６７Ｋ、およびＦｃＲｎ置換Ｍ４２８Ｌ／Ｎ４３４Ｓを含むＩＬ－１５Ｒα（スシ）－Ｆｃ単量体に連結されたヒトＩＬ－１５Ｒα（スシ）ドメインを含む第２の単量体を含む非標的化ＩＬ－１５／ＩＬ－１５Ｒα－Ｆｃ融合タンパク質とを含む。

いくつかの実施形態では、本明細書に記載される組成物または方法は、抗ＰＤ－１抗体と、（ａ）（Ｎ末端からＣ末端にかけて）アミノ酸置換Ｃ２２０Ｓ、ヘテロ二量体ｐＩ０置換Ｌ３６８Ｄ／Ｋ３７０Ｓ、等配電子ｐＩ置換Ｑ２９５Ｅ／Ｎ３８４Ｄ／Ｑ４１８Ｅ／Ｎ４２１Ｄ、および切断置換Ｅ２３３Ｐ／Ｌ２３４Ｖ／Ｌ２３５Ａ／Ｇ２３６ｄｅｌ／Ｓ２６７Ｋを含むＩＬ－１５－Ｆｃ単量体に連結されたヒト成熟ＩＬ－１５Ｄ３０Ｎ／Ｎ６５Ｄバリアントを含む第１の単量体、ならびに（ｂ）（Ｎ末端からＣ末端にかけて）アミノ酸置換Ｃ２２０Ｓ、ヘテロ二量体ｐＩ置換Ｓ３６４Ｋ／Ｅ３５７Ｑ、および切断置換Ｅ２３３Ｐ／Ｌ２３４Ｖ／Ｌ２３５Ａ／Ｇ２３６ｄｅｌ／Ｓ２６７Ｋを含むＩＬ－１５Ｒα（スシ）－Ｆｃ単量体に連結されたヒトＩＬ－１５Ｒα（スシ）ドメインを含む第２の単量体を含む非標的化ＩＬ－１５／ＩＬ－１５Ｒα－Ｆｃ融合タンパク質とを含む。いくつかの実施形態では、本明細書に記載される組成物または方法は、抗ＰＤ－１抗体と、（ａ）（Ｎ末端からＣ末端にかけて）アミノ酸置換Ｃ２２０Ｓ、ヘテロ二量体ｐＩ置換Ｌ３６８Ｄ／Ｋ３７０Ｓ、等配電子ｐＩ置換Ｑ２９５Ｅ／Ｎ３８４Ｄ／Ｑ４１８Ｅ／Ｎ４２１Ｄ、切断置換Ｅ２３３Ｐ／Ｌ２３４Ｖ／Ｌ２３５Ａ／Ｇ２３６ｄｅｌ／Ｓ２６７Ｋ、およびＦｃＲｎ置換Ｍ４２８Ｌ／Ｎ４３４Ｓを含むＩＬ－１５－Ｆｃ単量体に連結されたヒト成熟ＩＬ－１５Ｄ３０Ｎ／Ｎ６５Ｄバリアントを含む第１の単量体、ならびに（ｂ）（Ｎ末端からＣ末端にかけて）アミノ酸置換Ｃ２２０Ｓ、ヘテロ二量体ｐＩ置換Ｓ３６４Ｋ／Ｅ３５７Ｑ、切断置換Ｅ２３３Ｐ／Ｌ２３４Ｖ／Ｌ２３５Ａ／Ｇ２３６ｄｅｌ／Ｓ２６７Ｋ、およびＦｃＲｎ置換Ｍ４２８Ｌ／Ｎ４３４Ｓを含むＩＬ－１５Ｒα（スシ）－Ｆｃ単量体に連結されたヒトＩＬ－１５Ｒα（スシ）ドメインを含む第２の単量体を含む非標的化ＩＬ－１５／ＩＬ－１５Ｒα－Ｆｃ融合タンパク質とを含む。

いくつかの実施形態では、本明細書に記載される組成物または方法は、ニボルマブと、（ａ）（Ｎ末端からＣ末端にかけて）アミノ酸置換Ｃ２２０Ｓ、ヘテロ二量体ｐＩ置換Ｌ３６８Ｄ／Ｋ３７０Ｓ、等配電子ｐＩ置換Ｑ２９５Ｅ／Ｎ３８４Ｄ／Ｑ４１８Ｅ／Ｎ４２１Ｄ、および切断置換Ｅ２３３Ｐ／Ｌ２３４Ｖ／Ｌ２３５Ａ／Ｇ２３６ｄｅｌ／Ｓ２６７Ｋを含むＩＬ－１５－Ｆｃ単量体に連結されたヒト成熟ＩＬ－１５Ｄ３０Ｎ／Ｎ６５Ｄバリアントを含む第１の単量体、ならびに（ｂ）（Ｎ末端からＣ末端にかけて）アミノ酸置換Ｃ２２０Ｓ、ヘテロ二量体ｐＩ置換Ｓ３６４Ｋ／Ｅ３５７Ｑ、および切断置換Ｅ２３３Ｐ／Ｌ２３４Ｖ／Ｌ２３５Ａ／Ｇ２３６ｄｅｌ／Ｓ２６７Ｋを含むＩＬ－１５Ｒα（スシ）－Ｆｃ単量体に連結されたヒトＩＬ－１５Ｒα（スシ）ドメインを含む第２の単量体を含む非標的化ＩＬ－１５／ＩＬ－１５Ｒα－Ｆｃ融合タンパク質とを含む。いくつかの実施形態では、本明細書に記載される組成物または方法は、ニボルマブと、（ａ）（Ｎ末端からＣ末端にかけて）アミノ酸置換Ｃ２２０Ｓ、ヘテロ二量体ｐＩ置換Ｌ３６８Ｄ／Ｋ３７０Ｓ、等配電子ｐＩ置換Ｑ２９５Ｅ／Ｎ３８４Ｄ／Ｑ４１８Ｅ／Ｎ４２１Ｄ、切断置換Ｅ２３３Ｐ／Ｌ２３４Ｖ／Ｌ２３５Ａ／Ｇ２３６ｄｅｌ／Ｓ２６７Ｋ、およびＦｃＲｎ置換Ｍ４２８Ｌ／Ｎ４３４Ｓを含むＩＬ－１５－Ｆｃ単量体に連結されたヒト成熟ＩＬ－１５Ｄ３０Ｎ／Ｎ６５Ｄバリアントを含む第１の単量体、ならびに（ｂ）（Ｎ末端からＣ末端にかけて）アミノ酸置換Ｃ２２０Ｓ、ヘテロ二量体ｐＩ置換Ｓ３６４Ｋ／Ｅ３５７Ｑ、切断置換Ｅ２３３Ｐ／Ｌ２３４Ｖ／Ｌ２３５Ａ／Ｇ２３６ｄｅｌ／Ｓ２６７Ｋ、およびＦｃＲｎ置換Ｍ４２８Ｌ／Ｎ４３４Ｓを含むＩＬ－１５Ｒα（スシ）－Ｆｃ単量体に連結されたヒトＩＬ－１５Ｒα（スシ）ドメインを含む第２の単量体を含む非標的化ＩＬ－１５／ＩＬ－１５Ｒα－Ｆｃ融合タンパク質とを含む。

いくつかの実施形態では、本明細書に記載される組成物または方法は、ペムブロリズマブと、（ａ）（Ｎ末端からＣ末端にかけて）アミノ酸置換Ｃ２２０Ｓ、ヘテロ二量体ｐＩ置換Ｌ３６８Ｄ／Ｋ３７０Ｓ、等配電子ｐＩ置換Ｑ２９５Ｅ／Ｎ３８４Ｄ／Ｑ４１８Ｅ／Ｎ４２１Ｄ、および切断置換Ｅ２３３Ｐ／Ｌ２３４Ｖ／Ｌ２３５Ａ／Ｇ２３６ｄｅｌ／Ｓ２６７Ｋを含むＩＬ－１５－Ｆｃ単量体に連結されたヒト成熟ＩＬ－１５Ｄ３０Ｎ／Ｎ６５Ｄバリアントを含む第１の単量体、ならびに（ｂ）（Ｎ末端からＣ末端にかけて）アミノ酸置換Ｃ２２０Ｓ、ヘテロ二量体ｐＩ置換Ｓ３６４Ｋ／Ｅ３５７Ｑ、および切断置換Ｅ２３３Ｐ／Ｌ２３４Ｖ／Ｌ２３５Ａ／Ｇ２３６ｄｅｌ／Ｓ２６７Ｋを含むＩＬ－１５Ｒα（スシ）－Ｆｃ単量体に連結されたヒトＩＬ－１５Ｒα（スシ）ドメインを含む第２の単量体を含む非標的化ＩＬ－１５／ＩＬ－１５Ｒα－Ｆｃ融合タンパク質とを含む。いくつかの実施形態では、本明細書に記載される組成物または方法は、ペムブロリズマブと、（ａ）（Ｎ末端からＣ末端にかけて）アミノ酸置換Ｃ２２０Ｓ、ヘテロ二量体ｐＩ置換Ｌ３６８Ｄ／Ｋ３７０Ｓ、等配電子ｐＩ置換Ｑ２９５Ｅ／Ｎ３８４Ｄ／Ｑ４１８Ｅ／Ｎ４２１Ｄ、切断置換Ｅ２３３Ｐ／Ｌ２３４Ｖ／Ｌ２３５Ａ／Ｇ２３６ｄｅｌ／Ｓ２６７Ｋ、およびＦｃＲｎ置換Ｍ４２８Ｌ／Ｎ４３４Ｓを含むＩＬ－１５－Ｆｃ単量体に連結されたヒト成熟ＩＬ－１５Ｄ３０Ｎ／Ｎ６５Ｄバリアントを含む第１の単量体、ならびに（ｂ）（Ｎ末端からＣ末端にかけて）アミノ酸置換Ｃ２２０Ｓ、ヘテロ二量体ｐＩ置換Ｓ３６４Ｋ／Ｅ３５７Ｑ、切断置換Ｅ２３３Ｐ／Ｌ２３４Ｖ／Ｌ２３５Ａ／Ｇ２３６ｄｅｌ／Ｓ２６７Ｋ、およびＦｃＲｎ置換Ｍ４２８Ｌ／Ｎ４３４Ｓを含むＩＬ－１５Ｒα（スシ）－Ｆｃ単量体に連結されたヒトＩＬ－１５Ｒα（スシ）ドメインを含む第２の単量体を含む非標的化ＩＬ－１５／ＩＬ－１５Ｒα－Ｆｃ融合タンパク質とを含む。

いくつかの実施形態では、本明細書に記載される組成物または方法は、ピジリズマブと、（ａ）（Ｎ末端からＣ末端にかけて）アミノ酸置換Ｃ２２０Ｓ、ヘテロ二量体ｐＩ置換Ｌ３６８Ｄ／Ｋ３７０Ｓ、等配電子ｐＩ置換Ｑ２９５Ｅ／Ｎ３８４Ｄ／Ｑ４１８Ｅ／Ｎ４２１Ｄ、および切断置換Ｅ２３３Ｐ／Ｌ２３４Ｖ／Ｌ２３５Ａ／Ｇ２３６ｄｅｌ／Ｓ２６７Ｋを含むＩＬ－１５－Ｆｃ単量体に連結されたヒト成熟ＩＬ－１５Ｄ３０Ｎ／Ｎ６５Ｄバリアントを含む第１の単量体、ならびに（ｂ）（Ｎ末端からＣ末端にかけて）アミノ酸置換Ｃ２２０Ｓ、ヘテロ二量体ｐＩ置換Ｓ３６４Ｋ／Ｅ３５７Ｑ、および切断置換Ｅ２３３Ｐ／Ｌ２３４Ｖ／Ｌ２３５Ａ／Ｇ２３６ｄｅｌ／Ｓ２６７Ｋを含むＩＬ－１５Ｒα（スシ）－Ｆｃ単量体に連結されたヒトＩＬ－１５Ｒα（スシ）ドメインを含む第２の単量体を含む非標的化ＩＬ－１５／ＩＬ－１５Ｒα－Ｆｃ融合タンパク質とを含む。いくつかの実施形態では、本明細書に記載される組成物または方法は、ピジリズマブと、（ａ）（Ｎ末端からＣ末端にかけて）アミノ酸置換Ｃ２２０Ｓ、ヘテロ二量体ｐＩ置換Ｌ３６８Ｄ／Ｋ３７０Ｓ、等配電子ｐＩ置換Ｑ２９５Ｅ／Ｎ３８４Ｄ／Ｑ４１８Ｅ／Ｎ４２１Ｄ、切断置換Ｅ２３３Ｐ／Ｌ２３４Ｖ／Ｌ２３５Ａ／Ｇ２３６ｄｅｌ／Ｓ２６７Ｋ、およびＦｃＲｎ置換Ｍ４２８Ｌ／Ｎ４３４Ｓを含むＩＬ－１５－Ｆｃ単量体に連結されたヒト成熟ＩＬ－１５Ｄ３０Ｎ／Ｎ６５Ｄバリアントを含む第１の単量体、ならびに（ｂ）（Ｎ末端からＣ末端にかけて）アミノ酸置換Ｃ２２０Ｓ、ヘテロ二量体ｐＩ置換Ｓ３６４Ｋ／Ｅ３５７Ｑ、切断置換Ｅ２３３Ｐ／Ｌ２３４Ｖ／Ｌ２３５Ａ／Ｇ２３６ｄｅｌ／Ｓ２６７Ｋ、およびＦｃＲｎ置換Ｍ４２８Ｌ／Ｎ４３４Ｓを含むＩＬ－１５Ｒα（スシ）－Ｆｃ単量体に連結されたヒトＩＬ－１５Ｒα（スシ）ドメインを含む第２の単量体を含む非標的化ＩＬ－１５／ＩＬ－１５Ｒα－Ｆｃ融合タンパク質とを含む。

いくつかの実施形態では、組成物は、ニボルマブ、ペムブロリズマブ、およびペジリズマブからなる群から選択される抗ＰＤ－１抗体、ならびにＸＥＮＰ２４３０６を含む（当業者から理解されるように、それらの配列識別子を含む）。いくつかの実施形態では、組成物は、ニボルマブおよびＸＥＮＰ２４３０６を含む。いくつかの実施形態では、組成物は、ペムブロリズマブおよびＸＥＮＰ２４３０６を含む。いくつかの実施形態では、組成物は、ペジリズマブおよびＸＥＮＰ２４３０６を含む。いくつかの実施形態では、組成物は、ニボルマブ、ペムブロリズマブ、およびペジリズマブからなる群から選択される抗ＰＤ－１抗体、ならびにＸＥＮＰ２４０４５を含む（当業者から理解されるように、それらの配列識別子を含む）。いくつかの実施形態では、組成物は、ニボルマブおよびＸＥＮＰ２４０４５を含む。いくつかの実施形態では、組成物は、ペムブロリズマブおよびＸＥＮＰ２４０４５を含む。いくつかの実施形態では、組成物は、ペジリズマブおよびＸＥＮＰ２４０４５を含む。

いくつかの実施形態では、併用療法または治療は、ニボルマブ、ペムブロリズマブ、およびペジリズマブからなる群から選択される抗ＰＤ－１抗体、ならびにＸＥＮＰ２４３０６を含む（当業者から理解されるように、それらの配列識別子を含む）。いくつかの実施形態では、併用療法または治療は、ニボルマブおよびＸＥＮＰ２４３０６を含む。いくつかの実施形態では、併用療法または治療は、ペムブロリズマブおよびＸＥＮＰ２４３０６を含む。いくつかの実施形態では、併用療法または治療は、ペジリズマブおよびＸＥＮＰ２４３０６を含む。いくつかの実施形態では、併用療法または治療は、ニボルマブ、ペムブロリズマブ、およびペジリズマブからなる群から選択される抗ＰＤ－１抗体、ならびにＸＥＮＰ２４０４５を含む（当業者から理解されるように、それらの配列識別子を含む）。いくつかの実施形態では、併用療法または治療は、ニボルマブおよびＸＥＮＰ２４０４５を含む。いくつかの実施形態では、併用療法または治療は、ペムブロリズマブおよびＸＥＮＰ２４０４５を含む。いくつかの実施形態では、併用療法または治療は、ペジリズマブおよびＸＥＮＰ２４０４５を含む。いくつかの場合では、併用療法は、癌の治療、Ｔ細胞の拡大の誘導に有用であり、かつ／または対象において最小の血管漏出をもたらす。いくつかの実施形態では、併用療法は、対象に投与され、対象においてＴ細胞拡大を誘導する。いくつかの場合において、拡大されたＴ細胞集団、例えば、ＴＩＬ集団は、対象が抗ＰＤ－１抗体または非標的化ＩＬ－１５／ＩＬ－１５Ｒα－Ｆｃ融合タンパク質のみのいずれかを投与される場合よりも多い。いくつかの実施形態では、併用療法は対象に投与され、抗ＰＤ－１抗体または非標的化ＩＬ－１５／ＩＬ－１５Ｒα－Ｆｃ融合タンパク質のみのいずれかの投与と比較して最小レベルの血管漏出をもたらす。

いくつかの実施形態では、癌を治療する方法は、ニボルマブ、ペムブロリズマブ、およびペジリズマブからなる群から選択される抗ＰＤ－１抗体、ならびにＸＥＮＰ２４３０６を含む（当業者から理解されるように、それらの配列識別子を含む）。いくつかの実施形態では、癌を治療する方法は、ニボルマブおよびＸＥＮＰ２４３０６を含む。いくつかの実施形態では、組成物は、ペムブロリズマブおよびＸＥＮＰ２４３０６を含む。いくつかの実施形態では、癌を治療する方法は、ペジリズマブおよびＸＥＮＰ２４３０６を含む。いくつかの実施形態では、癌を治療する方法は、ニボルマブ、ペムブロリズマブ、およびペジリズマブからなる群から選択される抗ＰＤ－１抗体、ならびにＸＥＮＰ２４０４５を含む（当業者から理解されるように、それらの配列識別子を含む）。いくつかの実施形態では、癌を治療する方法は、ニボルマブおよびＸＥＮＰ２４０４５を含む。いくつかの実施形態では、癌を治療する方法は、ペムブロリズマブおよびＸＥＮＰ２４０４５を含む。いくつかの実施形態では、癌を治療する方法は、ペジリズマブおよびＸＥＮＰ２４０４５を含む。

いくつかの実施形態では、対象においてＴ細胞を拡大する方法は、ニボルマブ、ペムブロリズマブ、およびペジリズマブからなる群から選択される抗ＰＤ－１抗体、ならびにＸＥＮＰ２４３０６を含む（当業者から理解されるように、それらの配列識別子を含む）。いくつかの実施形態では、対象においてＴ細胞を拡大する方法は、ニボルマブおよびＸＥＮＰ２４３０６を含む。いくつかの実施形態では、対象においてＴ細胞を拡大する方法は、ペムブロリズマブおよびＸＥＮＰ２４３０６を含む。いくつかの実施形態では、対象においてＴ細胞を拡大する方法は、ペジリズマブおよびＸＥＮＰ２４３０６を含む。いくつかの実施形態では、対象においてＴ細胞を拡大する方法は、ニボルマブ、ペムブロリズマブ、およびペジリズマブからなる群から選択される抗ＰＤ－１抗体、ならびにＸＥＮＰ２４０４５を含む（当業者から理解されるように、それらの配列識別子を含む）。いくつかの実施形態では、対象においてＴ細胞を拡大する方法は、ニボルマブおよびＸＥＮＰ２４０４５を含む。いくつかの実施形態では、対象においてＴ細胞を拡大する方法は、ペムブロリズマブおよびＸＥＮＰ２４０４５を含む。いくつかの実施形態では、対象においてＴ細胞を拡大する方法は、ペジリズマブおよびＸＥＮＰ２４０４５を含む。

抗ＰＤ－１抗体および例示的なＩＬ－１５／Ｒα－Ｆｃ融合バリアントによる治療の投与は、対象において活性化Ｔ細胞を含むＴ細胞の増殖を誘導する。実施例２２に示されるように、抗ＰＤ－１抗体（例えば、ＸＥＮＰ１６４３２）およびＩＬ－１５／Ｒα－Ｆｃ融合バリアント（例えば、ＸＥＮＰ２４３０６）の組み合わせは、抗ＰＤ－１のみと比較してインビボでリンパ球の拡張された拡大を呈することができる。いくつかの実施形態では、抗ＰＤ－１抗体および例示的なＩＬ－１５／Ｒα－Ｆｃ融合バリアントの投与は、ＩＦＮγ生成を誘導する。いくつかの場合では、抗ＰＤ－１抗体およびＩＬ－１５／Ｒα－Ｆｃ融合タンパク質を投与することにより、ＩＦＮγ生成のレベルが増加する。抗ＰＤ－１抗体またはＩＬ－１５／Ｒα－Ｆｃ融合タンパク質のみと比較して、抗ＰＤ－１抗体およびＩＬ－１５／Ｒα－Ｆｃ融合タンパク質を含む治療を投与すると、ＩＦＮγのレベルがより高くなる。

いくつかの実施形態では、抗ＰＤ－１抗体および例示的なＩＬ－１５／Ｒα－Ｆｃ融合バリアントの投与は、腫瘍サイズを減少させる。いくつかの場合では、抗ＰＤ－１抗体またはＩＬ－１５／Ｒα－Ｆｃ融合タンパク質のみと比較して、抗ＰＤ－１抗体およびＩＬ－１５／Ｒα－Ｆｃ融合タンパク質を含む治療を投与すると、腫瘍サイズはより低くなる。

いくつかの実施形態では、組成物または方法は、抗ＰＤ－１抗体および本発明のヘテロ二量体融合タンパク質のうちのいずれかを含む。当業者によって理解され、以下でより完全に議論されるように、概して図９Ａ～９Ｇおよび図３９Ａ～３９Ｄに示されるように、本発明のヘテロ二量体融合タンパク質は、多種多様な構成をとることができる。例示的な融合タンパク質のアミノ酸配列は、配列識別子から明らかであるように、図１２Ａ、１２Ｂ、１３、１４、１５、１５、１６、４０Ａ、４０Ｂ、４１Ａ、４１Ｂ、４２、４３、４８Ａ～４８Ｈ、４９Ａ～４９Ｄ、５０Ａ～５０Ｂ、５１、５２、５３、９９Ａ～９９Ｃ、１００、１０１、および１０２に提供される。

いくつかの実施形態では、組成物または方法は、抗ＰＤ－１抗体ならびに任意の例示的な「ＩＬ－１５／ＲαヘテロＦｃ」および「ｄｓＩＬ－１５／ＲαヘテロＦｃ」タンパク質を含む。本明細書に概説される実施形態の多くは、一般に、第１のドメインリンカーを用いて第１の第１のＦｃドメインのＮ末端に共有結合したＩＬ－１５タンパク質ドメインを含む第１の単量体（第１の融合タンパク質）、および第２のドメインリンカーを用いて第２のＦｃドメインのＮ末端に共有結合したＩＬ－１５Ｒαタンパク質ドメインを含む第２の単量体（第２の融合タンパク質）を含むフォーマットに依存する。このフォーマット（「ＩＬ－１５／ＲαヘテロＦｃ」および「ｄｓＩＬ－１５／ＲαヘテロＦｃ」）の例示的な実施形態には、これらに限定されないが、ＸＥＮＰ２０８１８、ＸＥＮＰ２０８１９、ＸＥＮＰ２１４７１、ＸＥＮＰ２１４７２、ＸＥＮＰ２１４７３、ＸＥＮＰ２１４７４、ＸＥＮＰ２１４７５、ＸＥＮＰ２１４７６、ＸＥＮＰ２１４７７、ＸＥＮＰ２２０１３、ＸＥＮＰ２２８１５、ＸＥＮＰ２２８１６、ＸＥＮＰ２２８１７、ＸＥＮＰ２２８１８、ＸＥＮＰ２２８１９、ＸＥＮＰ２２８２０、ＸＥＮＰ２２８２１、ＸＥＮＰ２２８２２、ＸＥＮＰ２２８２３、ＸＥＮＰ２２８２４、ＸＥＮＰ２２８２５、ＸＥＮＰ２２８２６、ＸＥＮＰ２２８２７、ＸＥＮＰ２２８２８、ＸＥＮＰ２２８２９、ＸＥＮＰ２２８３０、ＸＥＮＰ２２８３１、ＸＥＮＰ２２８３２、ＸＥＮＰ２２８３３、ＸＥＮＰ２２８３４、ＸＥＮＰ２２８１５、ＸＥＮＰ２２８１６、ＸＥＮＰ２２８１７、ＸＥＮＰ２２８１８、ＸＥＮＰ２２８１９、ＸＥＮＰ２２８２０、ＸＥＮＰ２２８２１、ＸＥＮＰ２３３４３、ＸＥＮＰ２３５５４、ＸＥＮＰ２３５５５、ＸＥＮＰ２３５５７、ＸＥＮＰ２３５５９、ＸＥＮＰ２３５６１、ＸＥＮＰ２４０１８、ＸＥＮＰ２４０１９、ＸＥＮＰ２４０２０、ＸＥＮＰ２４０５１、ＸＥＮＰ２４０５２、ＸＥＮＰ２３５０４、ＸＥＮＰ２４３０６、ＸＥＮＰ２４３０６、ＸＥＮＰ２３３４３、ＸＥＮＯ２４１１３、ＸＥＮＰ２４３４１、およびＸＥＮＰ２４３０１（対応する配列識別子を含む）が含まれる。

いくつかの実施形態では、組成物または方法は、抗ＰＤ－１抗体と、ＸＥＮＰ２２３５７、ＸＥＮＰ２２３５８、ＸＥＮＰ２２３５９、ＸＥＮＰ２２３６０、ＸＥＮＰ２２３６２、ＸＥＮＰ２２３６３、ＸＥＮＰ２２３６４、ＸＥＮＰ２２３６５、ＸＥＮＰ２２３６６、ＸＥＮＰ２２６８４、ＸＥＮＰ２２３６１、ＸＥＮＰ２２８１６、ＸＥＮＰ２２８１９、ＸＥＮＰ２２８２０、ＸＥＮＰ２２８２１、ＸＥＮＰ２２８２２、ＸＥＮＰ２２８２９、ＸＥＮＰ２２８３４、ＸＥＮＰ２３５５４、ＸＥＮＰ２３５５７、ＸＥＮＰ２３５６１、ＸＥＮＰ２４０１８、ＸＥＮＰ２４０１９、ＸＥＮＰ２４０４５、ＸＥＮＰ２４０５１、ＸＥＮＰ２４０５２、ＸＥＮＰ２３３４３、ＸＥＮＰ２３５０４、ＸＥＮＰ２４１１３、ＸＥＮＰ２４３０１、ＸＥＮＰ２４３０６、ＸＥＮＰ２４３４１、ＸＥＮＰ２３４７２、ＸＥＮＰ２３４７３、ＸＥＮＰ２２８１５、ＸＥＮＰ２２８１７、ＸＥＮＰ２２８１８、ＸＥＮＰ２２８２３、ＸＥＮＰ２２８２４、ＸＥＮＰ２２８２５、ＸＥＮＰ２２８２６、ＸＥＮＰ２２８２７、ＸＥＮＰ２２８２８、ＸＥＮＰ２２８３０、ＸＥＮＰ２２８３１、ＸＥＮＰ２２８３２、ＸＥＮＰ２２８３３、ＸＥＮＰ２３５５５、ＸＥＮＰ２３５５９、ＸＥＮＰ２３５６０、ＸＥＮＰ２４０１７、ＸＥＮＰ２４０２０、ＸＥＮＰ２４０４３、またはＸＥＮＰ２４０４８（対応する配列識別子を含む）の「ＩＬ－１５／ＲαヘテロＦｃ」および「ｄｓＩＬ－１５／ＲαヘテロＦｃ」フォーマットを有するＩＬ－１５／Ｒαヘテロ二量体Ｆｃ融合タンパク質とを含む。そのようなフォーマットの例示的なアミノ酸配列は、配列識別子から明らかであるように、図４１Ａ、４１Ｂ、４８Ａ、４８Ｂ、４８Ｃ、４８Ｄ、４８Ｅ、４８Ｆ、４８Ｇ、４８Ｈ、５３、９０Ａ、９９Ｂ、および９９Ｃに示されている。

いくつかの実施形態では、組成物または方法は、抗ＰＤ－１抗体と、第２のドメインリンカーを介して第１のＦｃドメインＮ末端に共有結合した第１のドメインリンカーを介して第２のタンパク質ドメインのＮ末端に共有結合した第１のタンパク質ドメイン、および第２のＦｃドメイン（例えば、空のＦｃドメイン）を含む融合タンパク質を含むｓｃＩＬ－１５／Ｒα－Ｆｃヘテロ二量体融合タンパク質とを含む。いくつかの場合では、第１のタンパク質ドメインは、ＩＬ－１５Ｒαタンパク質ドメインであり、第２のタンパク質ドメインは、ＩＬ－１５タンパク質ドメインである。このフォーマット（「ｓｃＩＬ－１５／Ｒα－Ｆｃ」）の例示的な実施形態は、これに限定されないが、ＸＥＮＰ２１４７８（対応する配列識別子を含む）を含む。

いくつかの実施形態では、組成物または方法は、抗ＰＤ－１抗体と、ＸＥＮＰ２４０１３、ＸＥＮＰ２４０１４、ＸＥＮＰ２４０１６、ＸＥＮＰ２４０１５、ＸＥＮＰ２４０５０、ＸＥＮＰ２４４７５、ＸＥＮＰ２４４７６、ＸＥＮＰ２４４７８、ＸＥＮＰ２４４７９、ＸＥＮＰ２４４８１、およびＸＥＮＰ２５９３８（対応する配列識別子を含む）を有するＩＬ－１５／Ｒαヘテロ二量体Ｆｃ融合タンパク質とを含む。そのようなフォーマットの例示的なアミノ酸配列は、配列識別子から明らかであるように、図４９Ａ、４９Ｂ、４９Ｃ、４９Ｄ、および１００に示されている。

いくつかの実施形態では、組成物または方法は、抗ＰＤ－１抗体と、ドメインリンカーを介して第１のＦｃドメインのＮ末端に共有結合した第１のタンパク質、第２のＦｃドメイン（例えば、空のＦｃドメイン）、および第１のタンパク質ドメインに非共有結合した第２のタンパク質ドメインを含むｎｃＩＬ－１５／Ｒα－ＦｃまたはｄｓＩＬ－１５／Ｒα－Ｆｃヘテロ二量体融合タンパク質とを含む。いくつかの場合では、第１のタンパク質ドメインは、ＩＬ－１５タンパク質ドメインであり、第２のタンパク質ドメインは、ＩＬ－１５Ｒαタンパク質ドメインである。このフォーマット（「ｎｃＩＬ－１５／Ｒα－Ｆｃ」または「ｄｓＩＬ－１５／Ｒα－Ｆｃ」）の例示的な実施形態には、これらに限定されないが、ＸＥＮＰ２１４７９、ＸＥＮＰ２２３５７、ＸＥＮＰ２２３５４、ＸＥＮＰ２２３５５、ＸＥＮＰ２２３５６、ＸＥＮＰ２２３５７、ＸＥＮＰ２２３５８、ＸＥＮＰ２２３５９、ＸＥＮＰ２２３６０、ＸＥＮＰ２２３６１、ＸＥＮＰ２２３６２、ＸＥＮＰ２２３６３、ＸＥＮＰ２２３６４、ＸＥＮＰ２２３６５、ＸＥＮＰ２２３６６、ＸＥＮＰ２２６３７、ＸＥＮＰ２４３４８、ＸＥＮＰ２４３４９、およびＸＥＮＰ２４３８３（対応する配列識別因子を含む）が含まれる。

いくつかの実施形態では、「ｎｃＩＬ－１５／Ｒα－Ｆｃ」フォーマットを有するＩＬ－１５／Ｒαヘテロ二量体Ｆｃ融合タンパク質は、ＸＥＮＰ２１４７９、ＸＥＮＰ２２３６６、ＸＥＮＰ２４３４８、ＸＥＮＰ２４３８３、ＸＥＮＰ２４３４９、ＸＥＮＰ２４８９０、およびＸＥＮＰ２５１３８（対応する配列識別子を含む）である。そのようなフォーマットの例示的なアミノ酸配列は、配列識別子から明らかであるように、図１２Ａ、１２Ｂ、５０Ａ、５０Ｂ、および１０１に示されている。

いくつかの実施形態では、組成物または方法は、抗ＰＤ－１抗体と、第１のドメインリンカーを介して当該第１のＦｃドメインのＮ末端に共有結合した第１のタンパク質ドメインを含む第１の融合タンパク質、第２のドメインリンカーを介して当該第２のＦｃドメインのＮ末端に共有結合した第２のタンパク質ドメインを含む第２の融合タンパク質、当該第１の融合タンパク質の当該第１のタンパク質ドメインに非共有結合した第３のタンパク質ドメインを、および当該第２の融合タンパク質の当該第２のタンパク質ドメインに非共有結合した第４のタンパク質ドメイン含む二価ｎｃＩＬ－１５／Ｒα－Ｆｃまたは二価ｄｓＩＬ－１５／Ｒα－Ｆｃ融合タンパク質とを含む。いくつかの場合では、第１および第２のタンパク質ドメインは、ＩＬ－１５Ｒαタンパク質ドメインであり、第３および第４のタンパク質ドメインは、ＩＬ－１５タンパク質ドメインである。このフォーマット（「二価ｎｃＩＬ－１５／Ｒα－Ｆｃ」または「二価ｄｓＩＬ－１５／Ｒα－Ｆｃ」）の例示的な実施形態には、これらに限定されないが、ＸＥＮＰ２１９７８、ＸＥＮＰ２２６３４、ＸＥＮＰ２４３４２、およびＸＥＮＰ２４３４６（対応する配列識別子を含む）が含まれる。

いくつかの実施形態では、「二価ｎｃＩＬ－１５／Ｒα－Ｆｃ」フォーマットを有するＩＬ－１５／Ｒαヘテロ二量体Ｆｃ融合タンパク質は、ＸＥＮＰ２１９７８、ＸＥＮＰ２４３４２、ＸＥＮＰ２４３４６、およびＸＥＮＰ２４３５１（対応する配列識別子を含む）である。そのようなフォーマットの例示的なアミノ酸配列は、配列識別子から明らかであるように、図１３、５２、および１０２に示されている。

別の有用なフォーマット（「二価ｓｃＩＬ－１５／Ｒα－Ｆｃ」）は、配列識別子から明らかであるように、本明細書中で図１４に概説されている。

いくつかの実施形態では、組成物または方法は、抗ＰＤ－１抗体と、ドメインリンカーを用いて第１のタンパク質ドメインのＮ末端に共有結合した第１のＦｃドメイン、第２のＦｃドメイン（例えば、空のＦｃドメイン）、および当該第１のタンパク質ドメインに非共有結合した第２のタンパク質ドメインを含む第１の融合タンパク質を含むＦｃ－ｎｃＩＬ－１５／Ｒα融合タンパク質またはＦｃ－ｄｓＩＬ－１５／Ｒα融合タンパク質とを含む。このフォーマット（「Ｆｃ－ｎｃＩＬ－１５／Ｒα」または「Ｆｃ－ｄｓＩＬ－１５／Ｒα」）の例示的な実施形態には、配列識別子から明らかであるように、これらに限定されないが、ＸＥＮＰ２２６３７およびＸＥＮＰ２２６３９、ならびに図１６に示されるものが含まれる。いくつかの実施形態では、第１のタンパク質および第２のタンパク質は、リンカーを介して結合している（図９Ｇ）。

いくつかの実施形態では、「Ｆｃ－ｎｃＩＬ－１５／Ｒα」フォーマットを有するＩＬ－１５／Ｒαヘテロ二量体Ｆｃ融合タンパク質は、ＸＥＮＰ２２６３７およびＸＥＮＰ２２６３８である。そのようなフォーマットの例示的なアミノ酸配列は、配列識別子から明らかであるように、図１５に示されている。

いくつかの実施形態では、「Ｆｃ－ｓｃＩＬ－１５／Ｒα」フォーマットを有するＩＬ－１５／Ｒαヘテロ二量体Ｆｃ融合タンパク質は、配列識別子から明らかであるように、図１６に示されている。

いくつかの実施形態では、「Ｆｃ－ｄｓＩＬ－１５／Ｒα」を有するＩＬ－１５／Ｒαヘテロ二量体Ｆｃ融合タンパク質は、ＸＥＮＰ２２６３９およびＸＥＮＰ２２６４０である。そのようなフォーマットの例示的なアミノ酸配列は、配列識別子から明らかであるように、図４２に示されている。

本明細書に概説されるヘテロ二量体Ｆｃ融合タンパク質のうちのいずれについても、第１のドメインリンカーおよび第２のドメインリンカーは同じであっても異なっていてもよい。さらに、ヘテロ二量体タンパク質の第１のＦｃドメインおよび第２のＦｃドメインは、異なるアミノ酸配列を有し得る。

本発明のＦｃドメインは、ＩｇＧＦｃドメイン、例えば、ＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３、またはＩｇＧ４Ｆｃドメインを含み、ＩｇＧ１、ＩｇＧ２、およびＩｇＧ４Ｆｃドメインは、いくつかの実施形態において特定の用途を見出す。いくつかの実施形態では、第１および第２のＦｃドメインは、ＥＵ付番に従って、Ｌ３６８Ｄ／Ｋ３７０ＳおよびＳ３６４Ｋ、Ｌ３６８Ｄ／Ｋ３７０ＳおよびＳ３６４Ｋ／Ｅ３５７Ｌ、Ｌ３６８Ｄ／Ｋ３７０ＳおよびＳ３６４Ｋ／Ｅ３５７Ｑ、Ｔ４１１Ｅ／Ｋ３６０Ｅ／Ｑ３６２ＥおよびＤ４０１Ｋ、Ｌ３６８Ｅ／Ｋ３７０ＳおよびＳ３６４Ｋ、Ｋ３７０ＳおよびＳ３６４Ｋ／Ｅ３５７Ｑ、Ｋ３７０ＳおよびＳ３６４Ｋ／Ｅ３５７Ｑ、Ｓ２６７Ｋ／Ｌ３６８Ｄ／Ｋ３７０ＳおよびＳ２６７Ｋ／Ｓ３６４Ｋ／Ｅ３５７Ｑからなる群から選択されるアミノ酸置換のセットを含む。いくつかの例では、本明細書に概説されるヘテロ二量体Ｆｃ融合体のフォーマットのうちのいずれかの第１および／または第２のＦｃドメインは、ＥＵ付番に従って、Ｑ２９５Ｅ／Ｎ３８４Ｄ／Ｑ４１８Ｅ／Ｎ４２１Ｄを含むさらなるアミノ酸置換のセットを有し得る。いくつかの実施形態では、第１のおよび／または第２のＦｃドメインは、ＥＵ付番に従って、Ｇ２３６Ｒ／Ｌ３２８Ｒ、Ｅ２３３Ｐ／Ｌ２３４Ｖ／Ｌ２３５Ａ／Ｇ２３６ｄｅｌ／Ｓ２３９Ｋ、Ｅ２３３Ｐ／Ｌ２３４Ｖ／Ｌ２３５Ａ／Ｇ２３６ｄｅｌ／Ｓ２６７Ｋ、Ｅ２３３Ｐ／Ｌ２３４Ｖ／Ｌ２３５Ａ／Ｇ２３６ｄｅｌ／Ｓ２３９Ｋ／Ａ３２７Ｇ、Ｅ２３３Ｐ／Ｌ２３４Ｖ／Ｌ２３５Ａ／Ｇ２３６ｄｅｌ／Ｓ２６７Ｋ／Ａ３２７Ｇ、およびＥ２３３Ｐ／Ｌ２３４Ｖ／Ｌ２３５Ａ／Ｇ２３６ｄｅｌからなるアミノ酸置換の追加のセットを有する。

追加のヘテロ二量体化バリアントは、独立してかつ任意に含まれ得、図に概説されるバリアントから選択され得る。これらの組成物は、切断バリアント、ｐＩバリアント、荷電バリアント、アイソタイプバリアントなどをさらに含み得る。

ＩＬ－１５／Ｒα界面で操作されたジスルフィド結合を有する抗ＰＤ－１抗体およびＩＬ－１５／Ｒα－Ｆｃヘテロ二量体融合タンパク質を含む組成物が本明細書に提供される（例えば、実施例２を参照されたい）。そのようなＩＬ－１５／Ｒα－Ｆｃ融合タンパク質は、ＮＫ細胞、ＣＤ８^＋Ｔ細胞、およびＣＤ４^＋Ｔ細胞を含む免疫細胞の増殖を誘導または促進することができる。

効力の減少のために操作された抗ＰＤ－１抗体およびＩＬ－１５／Ｒα－Ｆｃ融合タンパク質を含む組成物も本明細書に提供される（「ＩＬ－１５／Ｒα－Ｆｃ親和性バリアント」とも呼ばれる；例えば、実施例３を参照されたい）。いくつかの場合では、ＩＬ－１５／Ｒα－Ｆｃ融合タンパク質バリアントは、薬物動態の改善、効力の減少、および半減期の延長（例えば、増加）を示す。

いくつかの実施形態では、効力の減少のために操作された抗ＰＤ－１抗体およびＩＬ－１５／Ｒα－Ｆｃ融合バリアントを含む組成物はまた、各Ｆｃ単量体がアミノ酸置換Ｍ４２８Ｌ／Ｎ４３４Ｓを含むように、Ｘｔｅｎｄ（ＦｃＲｎ）Ｆｃ置換で操作される。そのようなＩＬ－１５／Ｒα－ＸｔｅｎｄＦｃバリアントの例示的な実施形態を、図９９Ａ～９９Ｃ、１００、１０１、および１０２に示す（表６もまた参照されたい）。ＩＬ－１５／Ｒα－ＸｔｅｎｄＦｃバリアントの投与は、対象における活性化Ｔ細胞を含むＴ細胞の増殖を誘導する。実施例４Ｄに示されるように、ドメインリンカー（例えば、ＸＥＮＰ２４１１３）を有するＩＬ－１５／Ｒα－Ｆｃ親和性バリアントは、リンカーなし（ヒンジのみ；例えば、ＸＥＮＰ２４３４１）の対応するＩＬ－１５／Ｒα－Ｆｃ親和性バリアントと比較してインビボでリンパ球の拡張された拡大を呈することができる。ＩＬ－１５／Ｒα－Ｆｃ親和性バリアントは、延長されたＴ細胞薬理学を提供することができる。

本発明のＩＬ－１５／Ｒα－Ｆｃ融合タンパク質は、Ｔ細胞およびＮＫ細胞に優先的に結合することができ、いくつかの場合では、対象の癌環境において活性化Ｔ細胞を選択的に標的とすることができる。特に、ドメインリンカーなし（ヒンジのみ；例えば、ＸＥＮＰ２４３４１）のＩＬ－１５／Ｒα－Ｆｃ融合バリアント（例えば、ＩＬ－１５／Ｒα－Ｆｃ親和性バリアント）は、ドメインリンカー（例えば、ＸＥＮＰ２４１１３）を有する対応するＩＬ－１５／Ｒα－Ｆｃ親和性バリアントよりも様々なリンパ球集団へのより少ない結合を示した（図１１７を参照されたい）。

本明細書に記載されるＩＬ－１５／Ｒα－Ｆｃ融合タンパク質は、活性化Ｔ細胞の抗腫瘍効果を増強することができる（実施例５Ｂおよび５Ｃを参照されたい）。一実施形態では、本明細書に記載されるＩＬ－１５／Ｒα－Ｆｃ融合タンパク質は、ＣＤ８^＋Ｔ細胞（例えば、活性化ＣＤ８^＋Ｔ細胞）およびＣＤ４^＋Ｔ細胞（例えば、活性化ＣＤ４^＋Ｔ細胞）の増殖を誘導することができる。いくつかの場合では、ＩＬ－１５／Ｒα－Ｆｃ融合タンパク質は、ＣＤ４^＋Ｔ細胞よりもＣＤ８^＋Ｔ細胞の増殖を誘導することができる。ある特定の実施形態では、本明細書に記載されるＩＬ－１５／Ｒα－Ｆｃ融合タンパク質は、ＣＤ８^＋Ｔ細胞（例えば、ＣＤ６９^＋／ＩＦＮγ^＋画分および／またはＣＤ８^＋Ｔ細胞のＣＤ６９^＋／Ｋｉ－６７^＋画分）およびＣＤ４^＋Ｔ細胞（例えば、ＣＤ６９^＋／ＩＦＮγ^＋画分および／またはＣＤ４^＋Ｔ細胞のＣＤ６９^＋／Ｋｉ－６７^＋画分）の増殖を誘導することができる。本発明のＩＬ－１５／Ｒα－Ｆｃ融合タンパク質は、腫瘍細胞の死滅を促進することができ、腫瘍浸潤リンパ球を含む活性化リンパ球を選択的に拡大することができる。特に、ＩＬ－１５／Ｒα－Ｆｃ融合タンパク質は、ＣＤ８^＋およびＣＤ４^＋Ｔ細胞の増殖を優先的に誘導することができる。

いくつかの実施形態では、本明細書に記載されるＩＬ－１５／Ｒα－Ｆｃ融合タンパク質は、そのようなタンパク質を投与される対象において抗腫瘍効果を増強することができる。以下に記載される実施例に示されるように（実施例５Ｄを参照されたい）、ＩＬ－１５／Ｒα－Ｆｃ融合タンパク質による治療は、そのようなＩＬ－１５／Ｒα－Ｆｃ融合タンパク質なしの治療と比較して、腫瘍を有する対象における腫瘍成長を著しく低減した。

いくつかの実施形態では、本明細書に記載されるＸｔｅｎｄ－Ｆｃ置換ありおよびなしのＩＬ－１５／Ｒα－Ｆｃ融合タンパク質の効力の低減は、そのようなタンパク質を投与される対象における薬力学および薬物動態の両方を増強し得る。以下に記載される実施例（実施例６を参照されたい）に示されるように、ＸｍＡｂ２４３０６およびＸＥＮＰ２３３４３などの本発明のＸｔｅｎｄ（ＦｃＲｎ）置換（例えば、各Ｆｃ単量体におけるＭ４２８Ｌ／Ｎ４３４Ｓバリアント）を有するＩＬ－１５／Ｒα－Ｆｃ融合タンパク質は、Ｘｔｅｎｄ置換なしの対応するＩＬ－１５／Ｒα－Ｆｃ融合タンパク質と比較して、対象においてより長い血清半減期を呈した。いくつかの場合では、Ｘｔｅｎｄ置換は、半減期の増加によって示されるように、著しく曝露を改善した。

ＸＥＮＰ２２８２１などの効力が低減したＩＬ－１５／Ｒα－Ｆｃバリアントは、ＸＥＮＰ２０８１８などの本明細書に記載される野生型ＩＬ－１５／Ｒα－Ｆｃ融合タンパク質よりも長い期間リンパ球数を拡大することができることが以下に示される（実施例７を参照されたい）。特に、ＸＥＮＰ２２８２１のＸｔｅｎｄ類似体であるＸＥＮＰ２３３４３は、ＸＥＮＰ２２８２１を超えたリンパ球拡大の期間をさらに増強した。

以下に記載される実施例（実施例８を参照されたい）に示されるように、これに限定されないが、ＸｍＡｂ２４３０６（ＸＥＮＰ２４３０６とも呼ばれる）などのＩＬ－１５／Ｒα－Ｆｃ融合タンパク質は、抗ＣＤ３誘導エフェクターＴ細胞増殖のＴｒｅｇ抑制を克服することができる。

本明細書に記載されるように（実施例９を参照されたい）、これに限定されないが、ＸＥＮＰ２４０４５などのＩＬ－１５／Ｒα－Ｆｃ融合タンパク質は、白血球の拡大を促進し、ある範囲の用量レベルにわたって異種ＧＶＨＤを悪化させることができる。特に、ＸＥＮＰ２４０４５とＸＥＮＰ１３４３２などの抗ＰＤ－１抗体との併用療法は、特に低用量で相乗作用（相乗効果など）を示した。

いくつかの実施形態では、本発明のＩＬ－１５／Ｒα－Ｆｃ融合タンパク質は、ＸＥＮＰ２３５５７である（図４８Ｅを参照されたい）。ＸＥＮＰ２３５５７は、鎖１（ヒト＿ＩＬ１５＿Ｎ４Ｄ／Ｎ６５Ｄ＿（ＧＧＧＧＳ）１＿Ｆｃ（２１６）＿ＩｇＧ１＿ｐＩ（－）＿等配電子＿Ａ＿Ｃ２２０Ｓ／ＰＶＡ＿／Ｓ２６７Ｋ／Ｌ３６８Ｄ／Ｋ３７０Ｓ（１８７８６））および鎖２（ヒト＿ＩＬ１５Ｒａ（スシ）＿（ＧＧＧＧＳ）２２０＿Ｆ）ＰＶＡ＿／Ｓ２６７Ｋ／Ｓ３６４Ｋ／Ｅ３５７Ｑ（１５９０８））を含む。

いくつかの実施形態では、本発明のＩＬ－１５／Ｒα－Ｆｃ融合タンパク質は、ＸＥＮＰ２４０４５である（図４８Ｅを参照されたい）。ＸＥＮＰ２４０４５は、鎖１（ヒト＿ＩＬ１５＿Ｄ３０Ｎ／Ｅ６４Ｑ／Ｎ６５Ｄ＿（ＧＧＧＧＳ）１＿Ｆｃ（２１６）＿ＩｇＧ１＿ｐＩ（－）＿等配電子＿Ａ＿Ｃ２２０Ｓ／ＰＶＡ＿／Ｓ２６７Ｋ／Ｌ３６８Ｄ／Ｋ３７０Ｓ）および鎖２（ヒト＿ＩＬ１５Ｒα（スシ）＿（ＧＧＧＧＳ）１＿Ｆｃ（２１６）＿ＩｇＧ１＿Ｃ２２０Ｓ／ＰＶＡ＿／Ｓ２６７Ｋ／Ｓ３６４Ｋ／Ｅ３５７Ｑ）を含む。

いくつかの実施形態では、本発明のＩＬ－１５／Ｒα－Ｆｃ融合タンパク質は、ＸＥＮＰ２４１１３である（図９９Ｂを参照されたい）。ＸＥＮＰ２４１１３は、鎖１（ヒト＿ＩＬ１５＿Ｎ４Ｄ／Ｎ６５Ｄ＿（ＧＧＧＧＳ）１＿Ｆｃ（２１６）＿ＩｇＧ１＿ｐＩ（－）＿等配電子＿Ａ＿Ｃ２２０Ｓ／ＰＶＡ＿／Ｓ２６７Ｋ／Ｌ３６８Ｄ／Ｋ３７０Ｓ／Ｍ４２８Ｌ／Ｎ４３４Ｓ）および鎖２（ヒト＿ＩＬ１５Ｒα（スシ）＿（ＧＧＧＧＳ）１＿Ｆｃ（２１６）＿ＩｇＧ１＿Ｃ２２０Ｓ／ＰＶＡ＿／Ｓ２６７Ｋ／Ｓ３６４Ｋ／Ｅ３５７Ｑ／Ｍ４２８Ｌ／Ｎ４３４Ｓ）を含む。

いくつかの実施形態では、本発明のＩＬ－１５／Ｒα－Ｆｃ融合タンパク質は、ＸＥＮＰ２４３０６である（図９９Ｃを参照されたい）。ＸＥＮＰ２４３０６は、鎖１（ヒト＿ＩＬ１５＿Ｄ３０Ｎ／Ｅ６４Ｑ／Ｎ６５Ｄ＿（ＧＧＧＧＳ）１＿Ｆｃ（２１６）＿ＩｇＧ１＿ｐＩ（－）＿等配電子＿Ａ＿Ｃ２２０Ｓ／ＰＶＡ＿／Ｓ２６７Ｋ／Ｌ３６８Ｄ／Ｋ３７０Ｓ／Ｍ４２８Ｌ／Ｎ４３４Ｓ）および鎖２（ヒト＿ＩＬ１５Ｒα（スシ）＿（ＧＧＧＧＳ）１＿Ｆｃ（２１６）＿ＩｇＧ１＿Ｃ２２０Ｓ／ＰＶＡ＿／Ｓ２６７Ｋ／Ｓ３６４Ｋ／Ｅ３５７Ｑ／Ｍ４２８Ｌ／Ｎ４３４Ｓ）を含む。

したがって、一態様では、本発明は、ａ）第１のタンパク質ドメインが第１のドメインリンカーを用いて第１のＦｃドメインのＮ末端に共有結合されている、第１のタンパク質ドメインおよび第１のＦｃドメインを含む第１の融合タンパク質、ｂ）第２のタンパク質ドメインが、第２のドメインリンカーを用いてＦｃドメインのＮ末端に共有結合されている、第２のタンパク質ドメインおよび第２のＦｃドメインを含む第２の融合タンパク質を含むヘテロ二量体タンパク質を提供し、第１および第２のＦｃドメインは、ＥＵ付番に従って、Ｓ２６７Ｋ／Ｌ３６８Ｄ／Ｋ３７０Ｓ：Ｓ２６７Ｋ／ＬＳ３６４Ｋ／Ｅ３５７Ｑ、Ｓ３６４Ｋ／Ｅ３５７Ｑ：Ｌ３６８Ｄ／Ｋ３７０Ｓ、Ｌ３６８Ｄ／Ｋ３７０Ｓ：Ｓ３６４Ｋ、Ｌ３６８Ｅ／Ｋ３７０Ｓ：Ｓ３６４Ｋ、Ｔ４１１Ｅ／Ｋ３６０Ｅ／Ｑ３６２Ｅ：Ｄ４０１Ｋ、Ｌ３６８Ｄ／Ｋ３７０Ｓ：Ｓ３６４Ｋ／Ｅ３５７Ｌ、およびＫ３７０Ｓ：Ｓ３６４Ｋ／Ｅ３５７Ｑからなる群から選択されるアミノ酸置換のセットを有し、第１のタンパク質ドメインは、ＩＬ－１５タンパク質を含み、第２のタンパク質ドメインは、ＩＬ－１５Ｒαタンパク質を含む。いくつかの実施形態では、第１のタンパク質ドメインは、第１のドメインリンカーを用いずに第１のＦｃドメインのＮ末端に直接共有結合し、および／または、第２のタンパク質ドメインは、第２のドメインリンカーを用いずに第２のＦｃドメインのＮ末端に直接共有結合する。いくつかの実施形態では、本発明はまた、抗ＰＤ－１抗体などのチェックポイント遮断抗体を提供する。

いくつかの例では、ヘテロ二量体タンパク質は、ＸＥＮＰ２０８１８、ＸＥＮＰ２０８１９、ＸＥＮＰ２１４７１、ＸＥＮＰ２１４７２、ＸＥＮＰ２１４７３、ＸＥＮＰ２１４７４、ＸＥＮＰ２１４７５、ＸＥＮＰ２１４７６、ＸＥＮＰ２１４７７、ＸＥＮＰ２２０１３、ＸＥＮＰ２２８１５、ＸＥＮＰ２２８１６、ＸＥＮＰ２２８１７、ＸＥＮＰ２２８１８、ＸＥＮＰ２２８１９、ＸＥＮＰ２２８２０、ＸＥＮＰ２２８２１、ＸＥＮＰ２２８２２、ＸＥＮＰ２２８２３、ＸＥＮＰ２２８２４、ＸＥＮＰ２２８２５、ＸＥＮＰ２２８２６、ＸＥＮＰ２２８２７、ＸＥＮＰ２２８２８、ＸＥＮＰ２２８２９、ＸＥＮＰ２２８３０、ＸＥＮＰ２２８３１、ＸＥＮＰ２２８３２、ＸＥＮＰ２２８３３、ＸＥＮＰ２２８３４、ＸＥＮＰ２３３４３、ＸＥＮＰ２３５５４、ＸＥＮＰ２３５５５、ＸＥＮＰ２３５５７、ＸＥＮＰ２３５５９、ＸＥＮＰ２４０１９、およびＸＥＮＰ２４０２０（対応する配列識別子を含む）からなる群から選択される。

さらなる態様では、本発明は、ａ）第１のタンパク質ドメインが第１のドメインリンカーを用いて第２のタンパク質のＮ末端に共有結合されており、第２のタンパク質ドメインが第２のドメインリンカーを用いて第１のＦｃドメインのＮ末端に共有結合されている、第１のタンパク質ドメイン、第２のタンパク質ドメイン、および第１のＦｃドメインを含む融合タンパク質、ｂ）第２のＦｃドメインを含むヘテロ二量体タンパク質を提供し、第１および第２のＦｃドメインは、ＥＵ付番に従って、Ｓ２６７Ｋ／Ｌ３６８Ｄ／Ｋ３７０Ｓ：Ｓ２６７Ｋ／ＬＳ３６４Ｋ／Ｅ３５７Ｑ、Ｓ３６４Ｋ／Ｅ３５７Ｑ：Ｌ３６８Ｄ／Ｋ３７０Ｓ、Ｌ３６８Ｄ／Ｋ３７０Ｓ：Ｓ３６４Ｋ、Ｌ３６８Ｅ／Ｋ３７０Ｓ：Ｓ３６４Ｋ、Ｔ４１１Ｅ／Ｋ３６０Ｅ／Ｑ３６２Ｅ：Ｄ４０１Ｋ、Ｌ３６８Ｄ／Ｋ３７０Ｓ：Ｓ３６４Ｋ／Ｅ３５７Ｌ、およびＫ３７０Ｓ：Ｓ３６４Ｋ／Ｅ３５７Ｑからなる群から選択されるアミノ酸置換のセットを有し、第１のタンパク質ドメインは、ＩＬ－１５Ｒαタンパク質を含み、第２のタンパク質ドメインは、ＩＬ－１５タンパク質を含む。いくつかの場合では、抗ＰＤ－１抗体などのチェックポイント遮断抗体も提供される。

いくつかの実施形態では、ヘテロ二量体タンパク質は、ＸＥＮＰ２１４７８であり得る。

別の態様では、本発明は、ａ）第１のタンパク質ドメインがドメインリンカーを用いて第１のＦｃドメインのＮ末端に共有結合されている、第１のタンパク質ドメインおよび第１のＦｃドメインを含む融合タンパク質、ｂ）第２のＦｃドメイン、ならびにｃ）第１のタンパク質ドメインに非共有結合した第２のタンパク質ドメインを含むヘテロ二量体タンパク質を提供し、第１および第２のＦｃドメインは、ＥＵ付番に従って、Ｓ２６７Ｋ／Ｌ３６８Ｄ／Ｋ３７０Ｓ：Ｓ２６７Ｋ／ＬＳ３６４Ｋ／Ｅ３５７Ｑ、Ｓ３６４Ｋ／Ｅ３５７Ｑ：Ｌ３６８Ｄ／Ｋ３７０Ｓ、Ｌ３６８Ｄ／Ｋ３７０Ｓ：Ｓ３６４Ｋ、Ｌ３６８Ｅ／Ｋ３７０Ｓ：Ｓ３６４Ｋ、Ｔ４１１Ｅ／Ｋ３６０Ｅ／Ｑ３６２Ｅ：Ｄ４０１Ｋ、Ｌ３６８Ｄ／Ｋ３７０Ｓ：Ｓ３６４Ｋ／Ｅ３５７Ｌ、およびＫ３７０Ｓ：Ｓ３６４Ｋ／Ｅ３５７Ｑからなる群から選択されるアミノ酸置換のセットを有し、第１のタンパク質ドメインは、ＩＬ－１５Ｒαを含み、第２のタンパク質ドメインは、ＩＬ－１５タンパク質を含む。いくつかの場合では、抗ＰＤ－１抗体などのチェックポイント遮断抗体も提供される。

いくつかの実施形態では、ヘテロ二量体タンパク質は、ＸＥＮＰ２１４７９、ＸＥＮＰ２２３５７、ＸＥＮＰ２２３５４、ＸＥＮＰ２２３５５、ＸＥＮＰ２２３５６、ＸＥＮＰ２２３５７、ＸＥＮＰ２２３５８、ＸＥＮＰ２２３５９、ＸＥＮＰ２２３６０、ＸＥＮＰ２２３６１、ＸＥＮＰ２２３６２、ＸＥＮＰ２２３６３、ＸＥＮＰ２２３６４、ＸＥＮＰ２２３６５、ＸＥＮＰ２２３６６、およびＸＥＮＰ２２６３７（対応する配列識別子を含む）からなる群から選択され得る。

さらなる態様では、本発明は、ａ）第１のタンパク質ドメインがドメインリンカーを用いて当該第１のＦｃドメインのＮ末端に共有結合されている、第１のタンパク質ドメインおよび第１のＦｃドメインを含む第１の融合タンパク質、ｂ）第２のタンパク質ドメインがドメインリンカーを用いて第２のＦｃドメインのＣ末端に共有結合されている、第２のタンパク質ドメインを含む第２の重鎖および第２のＦｃドメインを含む第１の第２の重鎖を含む第２の融合タンパク質、ｃ）第１の融合タンパク質の第１タンパク質ドメインに非共有結合した第３のタンパク質ドメイン、ならびにｄ）第２の融合タンパク質の第２のタンパク質ドメインに非共有結合した第４のタンパク質を含むヘテロ二量体タンパク質を提供し、第１および第２のＦｃドメインは、ＥＵ付番に従って、Ｓ２６７Ｋ／Ｌ３６８Ｄ／Ｋ３７０Ｓ：Ｓ２６７Ｋ／ＬＳ３６４Ｋ／Ｅ３５７Ｑ、Ｓ３６４Ｋ／Ｅ３５７Ｑ：Ｌ３６８Ｄ／Ｋ３７０Ｓ、Ｌ３６８Ｄ／Ｋ３７０Ｓ：Ｓ３６４Ｋ、Ｌ３６８Ｅ／Ｋ３７０Ｓ：Ｓ３６４Ｋ、Ｔ４１１Ｅ／Ｋ３６０Ｅ／Ｑ３６２Ｅ：Ｄ４０１Ｋ、Ｌ３６８Ｄ／Ｋ３７０Ｓ：Ｓ３６４Ｋ／Ｅ３５７Ｌ、およびＫ３７０Ｓ：Ｓ３６４Ｋ／Ｅ３５７Ｑからなる群から選択されるアミノ酸置換のセットを有し、第１のタンパク質ドメインおよび第２のタンパク質ドメインは、ＩＬ－１５Ｒαタンパク質を含み、第３のタンパク質ドメインおよび第４のタンパク質ドメインは、ＩＬ－１５タンパク質を含む。いくつかの実施形態では、ヘテロ二量体タンパク質は、ＸＥＮＰ２１９７８またはＸＥＮＰ２２６３４であり得る。いくつかの場合では、抗ＰＤ－１抗体などのチェックポイント遮断抗体も提供される。

さらなる態様では、本発明は、ａ）第１のＦｃドメインがドメインリンカーを用いて第１のタンパク質ドメインのＮ末端に共有結合されている、第１のＦｃドメインおよび第１のタンパク質ドメインを含む第１の融合タンパク質、ｂ）第２のＦｃドメイン、ならびにｃ）第１の融合タンパク質の第１のタンパク質ドメインに非共有結合した第２のタンパク質ドメインを含むヘテロ二量体タンパク質を提供し、第１および第２のＦｃドメインは、ＥＵ付番に従って、Ｓ２６７Ｋ／Ｌ３６８Ｄ／Ｋ３７０Ｓ：Ｓ２６７Ｋ／ＬＳ３６４Ｋ／Ｅ３５７Ｑ、Ｓ３６４Ｋ／Ｅ３５７Ｑ：Ｌ３６８Ｄ／Ｋ３７０Ｓ、Ｌ３６８Ｄ／Ｋ３７０Ｓ：Ｓ３６４Ｋ、Ｌ３６８Ｅ／Ｋ３７０Ｓ：Ｓ３６４Ｋ、Ｔ４１１Ｅ／Ｋ３６０Ｅ／Ｑ３６２Ｅ：Ｄ４０１Ｋ、Ｌ３６８Ｄ／Ｋ３７０Ｓ：Ｓ３６４Ｋ／Ｅ３５７Ｌ、およびＫ３７０Ｓ：Ｓ３６４Ｋ／Ｅ３５７Ｑからなる群から選択されるアミノ酸置換のセットを有し、第１のタンパク質ドメインは、ＩＬ－１５Ｒαタンパク質を含み、第２のタンパク質ドメインは、ＩＬ－１５タンパク質を含む。いくつかの場合では、抗ＰＤ－１抗体などのチェックポイント遮断抗体も提供される。

本発明の実施形態のうちのいずれかにおいて、第１および／または第２のＦｃドメインは、ＥＵ付番に従って、Ｑ２９５Ｅ／Ｎ３８４Ｄ／Ｑ４１８Ｅ／Ｎ４２１Ｄを含むアミノ酸置換の追加のセットを有し得る。いくつかの場合では、第１および／または第２のＦｃドメインは、ＥＵ付番に従って、Ｇ２３６Ｒ／Ｌ３２８Ｒ、Ｅ２３３Ｐ／Ｌ２３４Ｖ／Ｌ２３５Ａ／Ｇ２３６ｄｅｌ／Ｓ２３９Ｋ、Ｅ２３３Ｐ／Ｌ２３４Ｖ／Ｌ２３５Ａ／Ｇ２３６ｄｅｌ／Ｓ２６７Ｋ、Ｅ２３３Ｐ／Ｌ２３４Ｖ／Ｌ２３５Ａ／Ｇ２３６ｄｅｌ／Ｓ２３９Ｋ／Ａ３２７Ｇ、Ｅ２３３Ｐ／Ｌ２３４Ｖ／Ｌ２３５Ａ／Ｇ２３６ｄｅｌ／Ｓ２６７Ｋ／Ａ３２７Ｇ、およびＥ２３３Ｐ／Ｌ２３４Ｖ／Ｌ２３５Ａ／Ｇ２３６ｄｅｌからなるアミノ酸置換の追加のセットを有する。

本発明の実施形態のうちのいずれかにおいて、ＩＬ－１５タンパク質は、完全長ヒトＩＬ－１５および短縮型ヒトＩＬ－１５からなる群から選択されるポリペプチド配列を有し、ＩＬ－１５Ｒαタンパク質は、完全長ヒトＩＬ－１５ＲαおよびヒトＩＬ－１５Ｒαのスシドメインからなる群から選択されるポリペプチド配列を有する。いくつかの場合では、ＩＬ－１５タンパク質およびＩＬ１－５Ｒαタンパク質は、それぞれ、Ｅ８７Ｃ：Ｄ９６／Ｐ９７／Ｃ９８、Ｅ８７Ｃ：Ｄ９６／Ｃ９７／Ａ９８、Ｖ４９Ｃ：Ｓ４０Ｃ、Ｌ５２Ｃ：Ｓ４０Ｃ、Ｅ８９Ｃ：Ｋ３４Ｃ、Ｑ４８Ｃ：Ｇ３８Ｃ、Ｅ５３Ｃ：Ｌ４２Ｃ、Ｃ４２Ｓ：Ａ３７Ｃ、およびＬ４５Ｃ：Ａ３７Ｃからなる群から選択されるアミノ酸置換または付加のセットを有する。

さらなる態様では、本発明は、チェックポイント遮断抗体と、ＸＥＮＰ２０８１８、ＸＥＮＰ２０８１９、ＸＥＮＰ２１４７１、ＸＥＮＰ２１４７２、ＸＥＮＰ２１４７３、ＸＥＮＰ２１４７４、ＸＥＮＰ２１４７５、ＸＥＮＰ２１４７６、ＸＥＮＰ２１４７７、ＸＥＮＰ２１４７８、ＸＥＮＰ２１４７９、ＸＥＮＰ２１９７８、ＸＥＮＰ２２０１３、ＸＥＮＰ２２０１５、ＸＥＮＰ２２０１７、ＸＥＮＰ２２３５４、ＸＥＮＰ２２３５５、ＸＥＮＰ２２３５６、ＸＥＮＰ２２３５７、ＸＥＮＰ２２３５８、ＸＥＮＰ２２３５９、ＸＥＮＰ２２３６０、ＸＥＮＰ２２３６１、ＸＥＮＰ２２３６２、ＸＥＮＰ２２３６３、ＸＥＮＰ２２３６４、ＸＥＮＰ２２３６５、ＸＥＮＰ２２３６６、ＸＥＮＰ２２６３７、およびＸＥＮＰ２２６３９（対応する配列識別子を含む）からなる群から選択されるヘテロ二量体タンパク質とを提供する。いくつかの態様では、本発明は、ＸＥＮＰ２０８１８、ＸＥＮＰ２０８１９、ＸＥＮＰ２１４７１、ＸＥＮＰ２１４７２、ＸＥＮＰ２１４７３、ＸＥＮＰ２１４７４、ＸＥＮＰ２１４７５、ＸＥＮＰ２１４７６、ＸＥＮＰ２１４７７、ＸＥＮＰ２２０１３、ＸＥＮＰ２２８１５、ＸＥＮＰ２２８１６、ＸＥＮＰ２２８１７、ＸＥＮＰ２２８１８、ＸＥＮＰ２２８１９、ＸＥＮＰ２２８２０、ＸＥＮＰ２２８２１、ＸＥＮＰ２２８２２、ＸＥＮＰ２２８２３、ＸＥＮＰ２２８２４、ＸＥＮＰ２２８２５、ＸＥＮＰ２２８２６、ＸＥＮＰ２２８２７、ＸＥＮＰ２２８２８、ＸＥＮＰ２２８２９、ＸＥＮＰ２２８３０、ＸＥＮＰ２２８３１、ＸＥＮＰ２２８３２、ＸＥＮＰ２２８３３、ＸＥＮＰ２２８３４、ＸＥＮＰ２３３４３、ＸＥＮＰ２３５５４、ＸＥＮＰ２３５５５、ＸＥＮＰ２３５５７、ＸＥＮＰ２３５５９、ＸＥＮＰ２４０１９、およびＸＥＮＰ２４０２０（対応する配列識別子を含む）からなる群から選択されるヘテロ二量体タンパク質を提供する。これらのタンパク質を作製する方法およびそれらを用いて患者を治療する方法に加えて、核酸、発現ベクター、および宿主細胞も全て同様に提供される。

いくつかの態様では、癌の治療を必要とする患者において癌を治療し、当該患者において血管漏出のレベルを最小化する方法が本明細書に提供される。そのような方法は、治療有効量のチェックポイント遮断抗体、例えば、抗ＰＤ－１抗体および治療有効量の本明細書に記載されるＩＬ－１５／ＩＬ－１５Ｒαヘテロ二量体Ｆｃ融合タンパク質または本明細書に記載される薬学的組成物を患者に投与することを含む。

いくつかの実施形態では、方法はまた、治療有効量のチェックポイント遮断抗体を投与することを含む。いくつかの実施形態では、チェックポイント遮断抗体は、抗ＰＤ－１抗体、抗ＰＤ－Ｌ１抗体、抗ＴＩＭ３抗体、抗ＴＩＧＩＴ抗体、抗ＬＡＧ３抗体、および抗ＣＴＬＡ－４抗体から選択される。いくつかの実施形態では、抗ＰＤ－１抗体は、ニボルマブ、ペムブロリズマブ、またはピジリズマブである。いくつかの実施形態では、抗ＰＤ－Ｌ１抗体は、アテゾリズマブ、アベルマブ、またはダルバルマブである。

いくつかの実施形態では、血管漏出のレベルは、ＩＬ－１５／ＩＬ－１５Ｒαヘテロ二量体Ｆｃ融合タンパク質および抗ＰＤ－１抗体の投与後、患者における血清アルブミンの２０％以下の低減、例えば、２０％低減、１９％低減、１８％低減、１７％低減、１６％低減、２０％低減、２０％低減、２０％低減、２０％低減、２０％低減、１５％低減、１４％低減、１３％低減、１２％低減、１１％低減、１０％低減、またはそれ以下の低減の範囲である。いくつかの場合では、血清アルブミンのそのような低減は、投与後１日目～１５日目に生じる。いくつかの実施形態では、低減は、ＩＬ－１５／ＩＬ－１５Ｒαヘテロ二量体Ｆｃ融合タンパク質および抗ＰＤ－１抗体の投与後、１日目、２日目、３日目、４日目、５日目、６日目、７日目、８日目、９日目、１０日目、１１日目、１２日目、１３日目、１４日目、１５日目、またはそれ以降に生じる（または検出可能である）。

いくつかの実施形態では、患者は、ＩＬ－１５Ｒαヘテロ二量体Ｆｃ融合タンパク質および抗ＰＤ－１抗体の投与後、リンパ球の２倍～１５倍の増加、例えば、２倍、３倍、４倍、５倍、６倍、７倍、８倍、９倍、１０倍、１１倍、１２倍、１３倍、１４倍、または１５倍の増加を呈する。いくつかの場合では、リンパ球のそのような増加は、投与後１日目～１５日目に生じる。いくつかの実施形態では、リンパ球の増加は、投与後１日目、２日目、３日目、４日目、５日目、６日目、７日目、８日目、９日目、１０日目、１１日目、１２日目、１３日目、１４日目、１５日目、またはそれ以降に生じる（または検出可能である）。

いくつかの実施形態では、患者は、ＩＬ－１５／ＩＬ－１５Ｒαヘテロ二量体Ｆｃ融合タンパク質および抗ＰＤ－１抗体の投与後、末梢ＣＤ８＋Ｔ細胞の２倍～１３倍の増加、例えば、２倍、３倍、４倍、５倍、６倍、７倍、８倍、９倍、１０倍、１１倍、１２倍、または１３倍の増加を呈する。いくつかの場合では、末梢ＣＤ８＋Ｔ細胞のそのような増加は、投与後１日目～１５日目に生じる。いくつかの実施形態では、末梢ＣＤ８＋Ｔ細胞の増加は、投与後１日目、２日目、３日目、４日目、５日目、６日目、７日目、８日目、９日目、１０日目、１１日目、１２日目、１３日目、１４日目、１５日目、またはそれ以降に生じる（または検出可能である）。

いくつかの態様では、低アルブミン血症を誘導する可能性を増加させることなく、Ｔ細胞拡大を誘導することを必要とする患者においてＴ細胞拡大を誘導する方法が本明細書に提供され、治療有効量の本明細書に記載されるＩＬ－１５／ＩＬ－１５Ｒαヘテロ二量体Ｆｃ融合タンパク質または本明細書に記載される薬学的組成物を当該患者に投与することを含む。いくつかの実施形態では、方法はまた、治療有効量のチェックポイント遮断抗体を投与することを含む。いくつかの実施形態では、チェックポイント遮断抗体は、抗ＰＤ－１抗体、抗ＰＤ－Ｌ１抗体、抗ＴＩＭ３抗体、抗ＴＩＧＩＴ抗体、抗ＬＡＧ３抗体、および抗ＣＴＬＡ－４抗体から選択される。いくつかの実施形態では、抗ＰＤ－１抗体は、ニボルマブ、ペムブロリズマブ、またはピジリズマブである。

いくつかの実施形態では、Ｔ細胞拡大は、Ｔ細胞の少なくとも２倍、例えば、２倍、３倍、４倍、５倍、６倍、７倍、８倍、９倍、１０倍、１１倍、１２倍、１３倍、１４倍、１５倍、１６倍、１７倍、１８倍、１９倍、２０倍、２１倍、またはそれ以上の増加である。いくつかの実施形態では、Ｔ細胞拡大は、Ｔ細胞の２倍～１５倍の増加、例えば、２倍、３倍、４倍、５倍、６倍、７倍、８倍、９倍、１０倍、１１倍、１２倍、１３倍、１４倍、または１５倍の増加の範囲である。いくつかの例では、Ｔ細胞のそのような拡大は、ＩＬ－１５／ＩＬ－１５Ｒαヘテロ二量体Ｆｃ融合およびチェックポイント遮断抗体、例えば、抗ＰＤ－１抗体の投与後、１日目～１５日目に生じる。いくつかの実施形態では、Ｔ細胞の拡大は、ＩＬ－１５／ＩＬ－１５Ｒαヘテロ二量体Ｆｃ融合タンパク質およびチェックポイント遮断抗体、例えば、抗ＰＤ－１抗体の投与後、１日目、２日目、３日目、４日目、５日目、６日目、７日目、８日目、９日目、１０日目、１１日目、１２日目、１３日目、１４日目、１５日目、またはそれ以降に生じる（または検出可能である）。

いくつかの実施形態では、抗ＰＤ－１抗体と組み合わせて本明細書に記載されるＩＬ－１５／ＩＬ－１５Ｒαヘテロ二量体Ｆｃ融合タンパク質は、対照ＩＬ－１５またはＩＬ－１５Ｒα含有タンパク質と比較してリンパ球拡大を増強し、またアルブミンドロップの低減をもたらす（図２０３に示されるデータ）。アルブミンドロップの低減は、ＩＬ－１５／ＩＬ－１５Ｒαヘテロ二量体Ｆｃ融合タンパク質および抗ＰＤ－１抗体の優れた治療指数を示す。いくつかの実施形態では、抗ＰＤ－１抗体と組み合わせたＩＬ－１５／ＩＬ－１５Ｒαヘテロ二量体Ｆｃ融合タンパク質は、末梢ＣＤ８^＋Ｔ細胞の少なくとも３倍（２００％）の増加を促進する。いくつかの実施態様では、抗ＰＤ－１抗体と組み合わせたＩＬ－１５／ＩＬ－１５Ｒαヘテロ二量体Ｆｃ融合タンパク質は、１５％の低減を超えないようにアルブミン減少の程度を媒介または促進した。いくつかの例では、抗ＰＤ－１抗体と組み合わせたＩＬ－１５／ＩＬ－１５Ｒαヘテロ二量体Ｆｃ融合タンパク質は、対照ＩＬ－１５またはＩＬ－１５Ｒａ含有タンパク質よりも低いアルブミンレベルの減少を引き起こしたか、または誘導した。いくつかの実施形態では、本明細書に記載される患者は、２０％の減少を上回るアルブミンレベルを維持しながら、末梢ＣＤ８^＋Ｔ細胞の少なくとも１１倍（１０００％）の増加を促進するＩＬ－１５／ＩＬ－１５Ｒαヘテロ二量体Ｆｃ融合タンパク質および抗ＰＤ－１抗体を投与される。

本発明は、チェックポイント遮断抗体およびＩＬ－１５Ｒαタンパク質と複合したＩＬ－１５タンパク質を投与することによって、患者におけるＴ細胞拡大を誘導する方法を提供し、改善には、抗ＰＤ－１抗体およびＩＬ－１５Ｒαタンパク質と複合したＩＬ－１５バリアントタンパク質を患者に投与することが含まれ、ＩＬ－１５バリアントタンパク質は、患者が低アルブミン血症の低減された可能性を有するように低減された親和性を有する。

本明細書に記載される方法のいくつかの実施形態では、バリアントＩＬ－１５は、Ｎ１Ｄ、Ｎ４Ｄ、Ｄ８Ｎ、Ｄ３０Ｎ、Ｄ６１Ｎ、Ｅ６４Ｑ、Ｎ６５Ｄ、およびＱ１０８Ｅからなる群から選択される１つ以上のアミノ酸置換を有する。いくつかの実施形態では、バリアントＩＬ－１５は、Ｎ１Ｄ置換または少なくともＮ１Ｄ置換を有する。いくつかの実施形態では、バリアントＩＬ－１５は、Ｎ４Ｄ置換または少なくともＮ４Ｄ置換を有する。いくつかの実施形態では、バリアントＩＬ－１５は、Ｎ１Ｄ置換または少なくともＮ１Ｄ置換を有する。いくつかの実施形態では、バリアントＩＬ－１５は、Ｄ３０Ｎ置換または少なくともＤ３０Ｎ置換を有する。いくつかの実施形態では、バリアントＩＬ－１５は、Ｄ６１Ｎ置換または少なくともＤ６１Ｎ置換を有する。いくつかの実施形態では、バリアントＩＬ－１５は、Ｅ６４Ｑ置換または少なくともＥ６４Ｑ置換を有する。いくつかの実施形態では、バリアントＩＬ－１５は、Ｎ６５Ｄ置換または少なくともＮ６５Ｄ置換を有する。いくつかの実施形態では、バリアントＩＬ－１５は、Ｑ１０８Ｅ置換または少なくともＱ１０８Ｅ置換を有する。

本明細書に記載される方法のいくつかの実施形態では、ＩＬ－１５バリアントタンパク質は、Ｎ４Ｄ、Ｎ６５Ｄ、Ｎ４Ｄ／Ｎ６５Ｄ、Ｄ３０Ｎ／Ｎ６５Ｄ、およびＤ３０Ｎ／Ｅ６４Ｑ／Ｎ６５Ｄからなる群から選択されるアミノ酸置換（複数可）を有する。いくつかの実施形態では、バリアントＩＬ－１５は、Ｎ４Ｄ置換を有する。いくつかの実施形態では、バリアントＩＬ－１５は、Ｎ６５Ｄ置換を有する。いくつかの実施形態では、バリアントＩＬ－１５は、Ｎ４Ｄ／Ｎ６５Ｄ置換を有する。いくつかの実施形態では、バリアントＩＬ－１５は、Ｄ３０Ｎ／Ｎ６５Ｄ置換を有する。いくつかの実施形態では、バリアントＩＬ－１５は、Ｄ３０Ｎ／Ｅ６４Ｑ／Ｎ６５Ｄ置換を有する。

本明細書に記載される方法のいくつかの実施形態では、ＩＬ－１５Ｒαタンパク質と複合したＩＬ－１５バリアントタンパク質は、本明細書に記載されるＩＬ－１５／ＩＬ－１５Ｒαヘテロ二量体Ｆｃ融合タンパク質のうちのいずれか１つである。

したがって、一態様では、本発明は、（ａ）第１のタンパク質ドメインが第１のドメインリンカーを用いて第１のＦｃドメインのＮ末端に共有結合されている、第１のタンパク質ドメインおよび第１のＦｃドメインを含む第１の融合タンパク質、（ｂ）第２のタンパク質ドメインが、第２のドメインリンカーを用いてＦｃドメインのＮ末端に共有結合されている、第２のタンパク質ドメインおよび第２のＦｃドメインを含む第２の融合タンパク質を含むＩＬ－１５／ＩＬ－１５Ｒαヘテロ二量体Ｆｃ融合タンパク質を提供し、第１および第２のＦｃドメインは、ＥＵ付番に従って、Ｓ２６７Ｋ／Ｌ３６８Ｄ／Ｋ３７０Ｓ：Ｓ２６７Ｋ／ＬＳ３６４Ｋ／Ｅ３５７Ｑ、Ｓ３６４Ｋ／Ｅ３５７Ｑ：Ｌ３６８Ｄ／Ｋ３７０Ｓ、Ｌ３６８Ｄ／Ｋ３７０Ｓ：Ｓ３６４Ｋ、Ｌ３６８Ｅ／Ｋ３７０Ｓ：Ｓ３６４Ｋ、Ｔ４１１Ｔ／Ｅ３６０Ｅ／Ｑ３６２Ｅ：Ｄ４０１Ｋ、Ｌ３６８Ｄ／Ｋ３７０Ｓ：Ｓ３６４Ｋ／Ｅ３５７Ｌ、およびＫ３７０Ｓ：Ｓ３６４Ｋ／Ｅ３５７Ｑからなる群から選択されるアミノ酸置換のセットを有し、第１のタンパク質ドメインは、ＩＬ－１５タンパク質を含み、第２のタンパク質ドメインは、ＩＬ－１５Ｒαタンパク質を含む。いくつかの実施形態では、第１のタンパク質ドメインは、第１のドメインリンカーを用いずに第１のＦｃドメインのＮ末端に直接共有結合し、かつ／または、第２のタンパク質ドメインは、第２のドメインリンカーを用いずに第２のＦｃドメインのＮ末端に直接共有結合する。

いくつかの実施形態では、第１のおよび／または第２のＦｃドメインは、ＥＵ付番によるＱ２９５Ｅ／Ｎ３８４Ｄ／Ｑ４１８Ｅ／Ｎ４２１Ｄを含むアミノ酸置換の追加のセットを有する。いくつかの実施形態では、第１および／または第２のＦｃドメインは、ＥＵ付番に従って、Ｇ２３６Ｒ／Ｌ３２８Ｒ、Ｅ２３３Ｐ／Ｌ２３４Ｖ／Ｌ２３５Ａ／Ｇ２３６ｄｅｌ／Ｓ２３９Ｋ、Ｅ２３３Ｐ／Ｌ２３４Ｖ／Ｌ２３５Ａ／Ｇ２３６ｄｅｌ／Ｓ２６７Ｋ、Ｅ２３３Ｐ／Ｌ２３４Ｖ／Ｌ２３５Ａ／Ｇ２３６ｄｅｌ／Ｓ２３９Ｋ／Ａ３２７Ｇ、Ｅ２３３Ｐ／Ｌ２３４Ｖ／Ｌ２３５Ａ／Ｇ２３６ｄｅｌ／Ｓ２６７Ｋ／Ａ３２７Ｇ、およびＥ２３３Ｐ／Ｌ２３４Ｖ／Ｌ２３５Ａ／Ｇ２３６ｄｅｌからなるアミノ酸置換の追加のセットを有する。いくつかの実施形態では、第１および／または第２のＦｃドメインは、ＥＵ付番に従って、追加のアミノ酸置換Ｍ４２８Ｌ／Ｎ４３４Ｓを有する。

いくつかの実施形態では、ＩＬ－１５タンパク質は、完全長ヒトＩＬ－１５タンパク質および短縮型ヒトＩＬ－１５タンパク質からなる群から選択されるポリペプチド配列を有し、当該ＩＬ－１５Ｒαタンパク質は、完全長ヒトＩＬ－１５Ｒαタンパク質およびヒトＩＬ－１５Ｒαタンパク質のスシドメインからなる群から選択されるポリペプチド配列を有する。ある特定の実施形態では、ＩＬ－１５タンパク質は、Ｎ１Ｄ、Ｎ４Ｄ、Ｄ８Ｎ、Ｄ３０Ｎ、Ｄ６１Ｎ、Ｅ６４Ｑ、Ｎ６５Ｄ、およびＱ１０８Ｅからなる群から選択される１つ以上のアミノ酸置換を有する。特定の実施形態では、ＩＬ－１５タンパク質は、Ｎ４Ｄ、Ｎ６５Ｄ、Ｎ４Ｄ／Ｎ６５Ｄ、およびＤ３０Ｎ／Ｅ６４Ｑ／Ｎ６５Ｄからなる群から選択されるアミノ酸置換を有する。

いくつかの実施形態では、ＩＬ－１５タンパク質およびＩＬ－１５Ｒαタンパク質は、それぞれ、Ｅ８７Ｃ：Ｄ９６／Ｐ９７／Ｃ９８、Ｅ８７Ｃ：Ｄ９６／Ｃ９７／Ａ９８、Ｖ４９Ｃ：Ｓ４０Ｃ、Ｌ５２Ｃ：Ｓ４０Ｃ、Ｅ８９Ｃ：Ｋ３４Ｃ、Ｑ４８Ｃ：Ｇ３８Ｃ、Ｅ５３Ｃ：Ｌ４２Ｃ、Ｃ４２Ｓ：Ａ３７Ｃ、およびＬ４５Ｃ：Ａ３７Ｃからなる群から選択されるアミノ酸置換または付加のセットを有する。

いくつかの実施形態では、第１のタンパク質ドメインは、第１のドメインリンカーを用いずに第１のＦｃドメインのＮ末端に直接共有結合し、および／または、第２のタンパク質ドメインは、第２のドメインリンカーを用いずに第２のＦｃドメインのＮ末端に直接共有結合する。

いくつかの実施形態では、ＩＬ－１５／ＩＬ－１５Ｒαヘテロ二量体Ｆｃ融合タンパク質は、ＸＥＮＰ２０８１８、ＸＥＮＰ２２０１３、ＸＥＮＰ２２０１４、ＸＥＮＰ２２０１５、ＸＥＮＰ２２０１７、ＸＥＮＰ２３３４３、ＸＥＮＰ２３５０４、ＸＥＮＰ２３５５７、ＸＥＮＰ２４０４５、ＸＥＮＰ２４１１３、ＸＥＮＰ２４３０１、ＸＥＮＰ２４３０６、およびＸＥＮＰ２４３４１からなる群から選択される。

これらのタンパク質を作製する方法およびそれらを用いて患者を治療する方法に加えて、核酸、発現ベクター、および宿主細胞も全て同様に提供される。

一態様では、本発明は、本明細書に記載されるＩＬ－１５／ＩＬ－１５Ｒα Ｆｃ融合ヘテロ二量体タンパク質のうちのいずれか１つ、および薬学的に許容される担体を含む薬学的組成物を提供する。いくつかの実施形態では、本発明は、ＸＥＮＰ２０８１８、ＸＥＮＰ２２０１３、ＸＥＮＰ２２０１４、ＸＥＮＰ２２０１５、ＸＥＮＰ２２０１７、ＸＥＮＰ２３３４３、ＸＥＮＰ２３５０４、ＸＥＮＰ２３５５７、ＸＥＮＰ２４０４５、ＸＥＮＰ２４１１３、ＸＥＮＰ２４３０１、ＸＥＮＰ２４３０６、およびＸＥＮＰ２４３４１からなる群から選択されるＩＬ－１５／ＩＬ－１５Ｒαヘテロ二量体Ｆｃ融合タンパク質、ならびに薬学的に許容される担体を含む薬学的組成物を提供する。

一態様では、本発明は、治療有効量の本明細書に記載されるＩＬ－１５／ＩＬ－１５Ｒαヘテロ二量体Ｆｃ融合タンパク質のうちのいずれか１つ、またはその薬学的組成物を患者に投与することを含む、癌を治療することを必要とする患者において癌を治療する方法を提供する。いくつかの実施形態では、方法はまた、治療有効量のチェックポイント遮断抗体を投与することを含む。ある特定の実施形態では、チェックポイント遮断抗体は、抗ＰＤ－１抗体、抗ＰＤ－Ｌ１抗体、抗ＴＩＭ３抗体、抗ＴＩＧＩＴ抗体、抗ＬＡＧ３抗体、および抗ＣＴＬＡ－４抗体から選択される。いくつかの例では、抗ＰＤ－１抗体は、ニボルマブ、ペムブロリズマブ、またはピジリズマブである。いくつかの例では、抗ＰＤ－Ｌ１抗体は、アテゾリズマブ、アベルマブ、またはダルバルマブである。

追加のＩＬ－１５／ＩＬ－１５Ｒαヘテロ二量体Ｆｃ融合タンパク質は、例えば、２０１６年１０月１４日に出願された米国特許第６２／４０８，６５５号、２０１６年１１月１日に出願された米国特許第６２／４１６，０８７号、２０１７年１月６日に出願された米国特許第６２／４４３，４６５号、２０１７年３月２８日に出願された米国特許第６２／４７７，９２６号、２０１７年１０月１６日に出願された米国特許出願第１５／７８５，４０１号、およびＷＯ２０１８／０７１９１９に詳細に記載され、これらは、その中の図面、説明文、および特許請求の範囲を特に参照して、それら全体において参照により本明細書に明示的に組み込まれる。

一態様では、本発明は、癌の治療を必要とする患者において癌を治療し、患者において血管漏出のレベルを最小化する方法を提供する。いくつかの実施形態では、方法は、治療有効量の本明細書に記載されるＩＬ－１５／ＩＬ－１５Ｒαヘテロ二量体Ｆｃ融合タンパク質または本明細書に記載される薬学的組成物を患者に投与することを含む。

いくつかの実施形態では、患者は、投与後にリンパ球の２倍～１５倍の増加を呈する。

いくつかの実施形態では、患者は、投与後に末梢ＣＤ８＋Ｔ細胞の２倍～１３倍の増加を呈する。

一態様では、本発明は、低アルブミン血症を誘導する可能性を増加させることなく、Ｔ細胞拡大を誘導することを必要とする患者においてＴ細胞拡大を誘導する方法を提供し、治療有効量の本明細書に記載されるＩＬ－１５／ＩＬ－１５Ｒαヘテロ二量体Ｆｃ融合タンパク質または本明細書に記載される薬学的組成物を患者に投与することを含む。

いくつかの実施形態では、方法はまた、治療有効量のチェックポイント遮断抗体を投与することを含む。

いくつかの実施形態では、チェックポイント遮断抗体は、抗ＰＤ－１抗体、抗ＰＤ－Ｌ１抗体、抗ＴＩＭ３抗体、抗ＴＩＧＩＴ抗体、抗ＬＡＧ３抗体、および抗ＣＴＬＡ－４抗体から選択される。いくつかの実施形態では、抗ＰＤ－１抗体は、ニボルマブ、ペムブロリズマブ、またはピジリズマブである。いくつかの実施形態では、抗ＰＤ－Ｌ１抗体は、アテゾリズマブ、アベルマブ、またはダルバルマブである。

いくつかの態様では、本発明は、ＩＬ－１５Ｒαタンパク質と複合したＩＬ－１５タンパク質を投与することによって、患者におけるＴ細胞拡大を誘導する方法を提供し、改善には、ＩＬ－１５Ｒαタンパク質と複合したＩＬ－１５バリアントタンパク質を患者に投与することが含まれ、ＩＬ－１５バリアントタンパク質は、患者が低アルブミン血症の低減された可能性を有するように低減された親和性を有する。

本明細書に記載される方法のいくつかの実施形態では、バリアントＩＬ－１５は、Ｎ１Ｄ、Ｎ４Ｄ、Ｄ８Ｎ、Ｄ３０Ｎ、Ｄ６１Ｎ、Ｅ６４Ｑ、Ｎ６５Ｄ、およびＱ１０８Ｅからなる群から選択される１つ以上のアミノ酸置換を有する。

本明細書に記載される方法のいくつかの実施形態では、ＩＬ－１５バリアントタンパク質は、Ｎ４Ｄ、Ｎ６５Ｄ、Ｎ４Ｄ／Ｎ６５Ｄ、およびＤ３０Ｎ／Ｅ６４Ｑ／Ｎ６５Ｄからなる群から選択されるアミノ酸置換（複数可）を有する。
本明細書に記載される方法のいくつかの実施形態では、ＩＬ－１５Ｒαタンパク質と複合したＩＬ－１５バリアントタンパク質は、本明細書に記載されるＩＬ－１５／ＩＬ－１５Ｒαヘテロ二量体Ｆｃ融合タンパク質のうちのいずれか１つである。

ＩＸ．本発明の核酸
本発明はさらに、本発明のヘテロ二量体Ｆｃ融合タンパク質をコードする核酸組成物（または、単量体Ｆｃドメインタンパク質の場合はそれらをコードする核酸も）を提供する。

当業者には理解されるように、核酸組成物はヘテロ二量体タンパク質のフォーマットに依存するであろう。したがって、例えば、フォーマットが３つのアミノ酸配列を必要とするとき、３つの核酸配列を発現のために１つ以上の発現ベクターに組み込むことができる。同様に、いくつかのフォーマットは２つの核酸のみを必要とし、同様に、それらを１つまたは２つの発現ベクターに入れることができる。

当該技術分野において既知であるように、本発明の構成要素をコードする核酸は、当該技術分野において既知であるように、そして本発明のヘテロ二量体Ｆｃ融合タンパク質を生成するために使用される宿主細胞に応じた発現ベクターに組み込まれ得る。一般に、核酸は任意の数の調節エレメント（プロモーター、複製起点、選択可能マーカー、リボソーム結合部位、インデューサーなど）に作動可能に連結されている。発現ベクターは、染色体外ベクターまたは組み込みベクターであり得る。

次いで、本発明の核酸および／または発現ベクターを、多くの実施形態において用途を見出す、哺乳動物、細菌、酵母、昆虫、および／または真菌細胞を含む当該技術分野において周知の任意の数の異なる種類の宿主細胞に哺乳動物細胞（例えば、ＣＨＯ細胞）で形質転換する。

いくつかの実施形態では、各単量体をコードする核酸は、フォーマットに応じて適用可能なように、それぞれ一般に異なるまたは同じプロモーター制御下で単一の発現ベクター内に含まれる。本発明において特に使用される実施形態では、これら２つまたは３つの核酸の各々は、異なる発現ベクターに含まれる。

本発明のヘテロ二量体Ｆｃ融合タンパク質は、当該技術分野において周知のように、発現ベクター（複数可）を含む宿主細胞を培養することによって作製される。一旦生成されると、イオン交換クロマトグラフィーステップを含む従来の融合タンパク質または抗体精製ステップが実施される。本明細書で議論されるように、２つの単量体のｐＩが少なくとも０．５異なることは、イオン交換クロマトグラフィーもしくは等電点電気泳動、または等電点に感受性の他の方法による分離を可能にし得る。すなわち、各単量体が異なる等電点（ｐＩ）を有し、ヘテロ二量体も異なるｐＩを有するように、各モノマーのｐＩを変化させるｐＩ置換を含むことによって、ヘテロ二量体の等電点精製（例えば、陰イオン交換クロマトグラフィー、陽イオン交換クロマトグラフィー）を促進する。これらの置換はまた、精製後の任意の混入したホモ二量体の決定およびモニタリングにも役立つ（例えば、ＩＥＦゲル、ｃＩＥＦ、および分析用ＩＥＸカラム）。

Ｘ．ＩＬ－１５／ＩＬ－１５Ｒαヘテロ二量体免疫調節Ｆｃ融合タンパク質の生物学的および生化学的機能性
一般に、本発明のヘテロ二量体Ｆｃ融合タンパク質は、癌を有する患者に投与され、有効性は、本明細書に記載されるようないくつかの方法で評価される。このため、癌量、腫瘍のサイズ、転移の存在または程度の評価などの、有効性の標準的なアッセイが実行され得るが、免疫腫瘍学的治療もまた免疫状態評価に基づいて同様に評価され得る。これは、インビトロアッセイおよびインビボアッセイの両方を含むいくつかの方法で行うことができる。例えば、腫瘍量、サイズ、侵襲性、ＬＮ関与、転移などの「古典的な」測定と併せて、免疫状態（例えば、ｉｐｉ治療後のＩＣＯＳ＋ＣＤ４＋Ｔ細胞の存在）の変化の評価を実施することができる。このため、以下のうちのいずれかまたは全てを評価することができる：ＣＤ４^＋Ｔ細胞活性化もしくは増殖、ＣＤ８^＋Ｔ（ＣＴＬ）細胞活性化もしくは増殖、ＣＤ８^＋Ｔ細胞媒介性細胞傷害性活性および／もしくはＣＴＬ媒介性細胞枯渇、ＮＫ細胞活性およびＮＫ媒介性細胞枯渇に対するＰＶＲＩＧの抑制効果、Ｔｒｅｇ細胞分化および増殖ならびにＴｒｅｇ細胞もしくは骨髄由来サプレッサー細胞（ＭＤＳＣ）媒介性免疫抑制もしくは免疫耐性に対するＰＶＲＩＧの増強効果、ならびに／または免疫細胞による炎症性サイトカイン生成、例えば、Ｔ細胞もしくは他の免疫細胞によるＩＬ－２、ＩＦＮ－γ、もしくはＴＮＦ－α生成に対するＰＶＲＩＧの効果。

いくつかの実施形態では、治療の評価は、例えば、ＣＦＳＥ希釈法、免疫エフェクター細胞のＫｉ６７細胞内染色、および^３Ｈ－チミジン取り込み法を使用して、免疫細胞増殖を評価することによって実施される。

いくつかの実施形態では、治療の評価は、ＣＤ２５、ＣＤ６９、ＣＤ１３７、ＩＣＯＳ、ＰＤ１、ＧＩＴＲ、ＯＸ４０、およびＣＤ１０７Ａの表面発現によって測定される細胞脱顆粒のうちの１つ以上を含む、遺伝子発現の増加または活性化関連マーカーの増加したタンパク質レベルを評価することによって実施される。

一般に、遺伝子発現アッセイは、当該技術分野で既知であるように実施される。

一般に、タンパク質発現測定も同様に、当該技術分野で既知であるように実施される。

いくつかの実施形態では、治療の評価は、酵素活性（プロテアーゼ活性を含む）、細胞膜透過性、細胞接着、ＡＴＰ生成、補酵素生成、およびヌクレオチド取り込み活性などの多数の細胞パラメータを推測することを通した標的細胞生存検出によって測定される細胞傷害性活性を評価することによって実施される。これらのアッセイの具体的な例としては、これらに限定されないが、トリパンブルーまたはＰＩ染色、^５１Ｃｒまたは^３５Ｓ放出法、ＬＤＨ活性、ＭＴＴおよび／またはＷＳＴアッセイ、カルセイン－ＡＭアッセイ、発光系アッセイ、ならびに他のものが挙げられる。

いくつかの実施形態では、治療の評価は、サイトカイン生成によって測定されるＴ細胞活性を評価することによって行われ、周知の技法を使用して、ＩＦＮγ、ＴＮＦα、ＧＭ－ＣＳＦ、ＩＬ２、ＩＬ６、ＩＬ４、ＩＬ５、ＩＬ１０、ＩＬ１３を含むがこれらに限定されないサイトカインを使用して、細胞内、培養上清液中のいずれかで測定する。

したがって、治療の評価は、以下のうちの１つ以上を評価するアッセイを使用して実施することができる：（ｉ）免疫応答を増加させること、（ｉｉ）αβおよび／またはγδのＴ細胞の活性化を増加させること、（ｉｉｉ）細胞傷害性Ｔ細胞活性を増加させること、（ｉｖ）ＮＫおよび／またはＮＫＴ細胞活性を増加させること、（ｖ）αβおよび／またはγδのＴ細胞抑制を軽減させること、（ｖｉ）炎症誘発性サイトカイン分泌を増加させること、（ｖｉｉ）ＩＬ－２分泌を増加させること、（ｖｉｉｉ）インターフェロン－γ生成を増加させること、（ｉｘ）Ｔｈ１応答を増加させること、（ｘ）Ｔｈ２応答を減少させること、（ｘｉ）制御性Ｔ細胞（Ｔｒｅｇ）のうちの少なくとも１つの細胞数および／または活性を減少させるかまたは排除すること。

Ａ．有効性および効力を測定するアッセイ
いくつかの実施形態では、Ｔ細胞活性化は、当該技術分野において既知であるように、混合リンパ球反応（ＭＬＲ）アッセイを使用して評価される。活性の増加は免疫刺激活性を示す。活性の適切な増加を以下に概説する。

一実施形態では、シグナル伝達経路アッセイは、例えば、異なる因子のリン酸化もしくは脱リン酸化によって、または他の翻訳後修飾を測定することによって測定される、免疫応答の増加または減少を測定する。ＩＬ－１５は、ＳＴＡＴ５のリン酸化を介してＩＦＮγの発現および分泌を媒介する。したがって、いくつかの実施形態では、シグナル伝達経路アッセイは、ＳＴＡＴ５のリン酸化によって示されるように、免疫応答の増加または減少を測定する。活性の増加は免疫刺激活性を示す。活性の適切な増加を以下に概説する。

一実施形態では、シグナル伝達経路アッセイは、例えば、サイトカイン分泌によって、または増殖によって、または例えば、ＣＤ１３７、ＣＤ１０７ａ、ＰＤ１などのような活性化マーカーの発現の変化によって測定される、αβおよび／またはγδ Ｔ細胞の活性化の増加または減少を測定する。活性の増加は免疫刺激活性を示す。活性の適切な増加を以下に概説する。

一実施形態では、シグナル伝達経路アッセイは、例えば、例えば癌細胞のような標的細胞の直接殺傷によって、またはサイトカイン分泌によって、または増殖によって、または例えば、ＣＤ１３７、ＣＤ１０７ａ、ＰＤ１などのような活性化マーカーの発現の変化によって測定される、細胞傷害性Ｔ細胞活性の増加または減少を測定する。活性の増加は免疫刺激活性を示す。活性の適切な増加を以下に概説する。

一実施形態では、シグナル伝達経路アッセイは、例えば、例えば癌細胞のような標的細胞の直接殺傷によって、またはサイトカイン分泌によって、または例えば、ＣＤ１０７ａなどのような活性化マーカーの発現の変化によって測定される、ＮＫおよび／またはＮＫＴ細胞活性の増加または減少を測定する。活性の増加は免疫刺激活性を示す。活性の適切な増加を以下に概説する。

一実施形態では、シグナル伝達経路アッセイは、例えば、サイトカイン分泌によって、または増殖によって、または例えば、ＣＤ１３７、ＣＤ１０７ａ、ＰＤ１などのような活性化マーカーの発現の変化によって測定される、αβおよび／またはγδ Ｔ細胞抑制の増加または減少を測定する。活性の増加は免疫刺激活性を示す。活性の適切な増加を以下に概説する。

一実施形態では、シグナル伝達経路アッセイは、例えば、ＥＬＩＳＡによって、またはＬｕｍｉｎｅｘによって、またはＭｕｌｔｉｐｌｅｘビーズに基づく方法によって、または細胞内染色およびＦＡＣＳ分析によって、またはＡｌｉｓｐｏｔなどによって測定される、炎症誘発性サイトカイン分泌の増加または減少を測定する。活性の増加は免疫刺激活性を示す。活性の適切な増加を以下に概説する。

一実施形態において、シグナル伝達経路アッセイは、例えば、ＥＬＩＳＡによって、またはＬｕｍｉｎｅｘによって、またはＭｕｌｔｉｐｌｅｘビーズに基づく方法によって、または細胞内染色およびＦＡＣＳ分析によって、またはＡｌｉｓｐｏｔなどによって測定される、ＩＬ－２分泌の増加または減少を測定する。活性の増加は免疫刺激活性を示す。活性の適切な増加を以下に概説する。

一実施形態において、シグナル伝達経路アッセイは、例えば、ＥＬＩＳＡによって、またはＬｕｍｉｎｅｘによって、またはＭｕｌｔｉｐｌｅｘビーズに基づく方法によって、または細胞内染色およびＦＡＣＳ分析によって、またはＡｌｉｓｐｏｔなどによって測定される、インターフェロン－γ生成の増加または減少を測定する。活性の増加は免疫刺激活性を示す。活性の適切な増加を以下に概説する。

一実施形態では、シグナル伝達経路アッセイは、例えば、サイトカイン分泌によって、または活性化マーカーの発現の変化によって測定される、Ｔｈ１応答の増加または減少を測定する。活性の増加は免疫刺激活性を示す。活性の適切な増加を以下に概説する。

一実施形態では、シグナル伝達経路アッセイは、例えば、サイトカイン分泌によって、または活性化マーカーの発現の変化によって測定される、Ｔｈ２応答の増加または減少を測定する。活性の増加は免疫刺激活性を示す。活性の適切な増加を以下に概説する。

一実施形態では、シグナル伝達経路アッセイは、例えば、フローサイトメトリーによって、またはＩＨＣによって測定される、制御性Ｔ細胞（Ｔｒｅｇ）のうちの少なくとも１つの細胞数および／または活性の増加または減少を測定する。応答の減少は免疫刺激活性を示す。適切な減少は、以下に概説される増加の場合と同じである。

一実施形態では、シグナル伝達経路アッセイは、例えば、フローサイトメトリーによって、またはＩＨＣによって測定される、Ｍ２マクロファージ細胞数の増加または減少を測定する。応答の減少は免疫刺激活性を示す。適切な減少は、以下に概説される増加の場合と同じである。

一実施形態では、シグナル伝達経路アッセイは、例えば、サイトカイン分泌によって、または活性化マーカーの発現の変化によって測定される、Ｍ２マクロファージ腫瘍形成促進活性の増加または減少を測定する。応答の減少は免疫刺激活性を示す。適切な減少は、以下に概説される増加の場合と同じである。

一実施形態では、シグナル伝達経路アッセイは、例えば、フローサイトメトリーによって、またはＩＨＣによって測定される、Ｎ２好中球増加の増加または減少を測定する。応答の減少は免疫刺激活性を示す。適切な減少は、以下に概説される増加の場合と同じである。

一実施形態では、シグナル伝達経路アッセイは、例えば、サイトカイン分泌によって、または活性化マーカーの発現の変化によって測定される、Ｎ２好中球腫瘍形成促進活性の増加または減少を測定する。応答の減少は免疫刺激活性を示す。適切な減少は、以下に概説される増加の場合と同じである。

一実施形態では、シグナル伝達経路アッセイは、例えば、サイトカイン分泌によって、または増殖によって、または例えば、ＣＤ１３７、ＣＤ１０７ａ、ＰＤ１などのような活性化マーカーの発現の変化によって測定される、Ｔ細胞活性化の阻害の増加または減少を測定する。活性の増加は免疫刺激活性を示す。活性の適切な増加を以下に概説する。

一実施形態では、シグナル伝達経路アッセイは、例えば、癌細胞のような標的細胞の直接殺傷によって、またはサイトカイン分泌によって、または増殖によって、または例えば、ＣＤ１３７、ＣＤ１０７ａ、ＰＤ１などのような活性化マーカーの発現の変化によって測定される、ＣＴＬ活性化の阻害の増加または減少を測定する。活性の増加は免疫刺激活性を示す。活性の適切な増加を以下に概説する。

一実施形態では、シグナル伝達経路アッセイは、例えば、活性化マーカーの発現の変化によって測定される、αβおよび／またはγδ Ｔ細胞疲労の増加または減少を測定する。応答の減少は免疫刺激活性を示す。適切な減少は、以下に概説される増加の場合と同じである。

一実施形態では、シグナル伝達経路アッセイは、例えば、サイトカイン分泌によって、または増殖によって、または例えば、ＣＤ１３７、ＣＤ１０７ａ、ＰＤ１などのような活性化マーカーの発現の変化によって測定される、αβおよび／またはγδ Ｔ細胞応答の増加または減少を測定する。活性の増加は免疫刺激活性を示す。活性の適切な増加を以下に概説する。

一実施形態では、シグナル伝達経路アッセイは、例えば、サイトカイン分泌によって、または増殖によって、または例えば、ＣＤ４５ＲＡ、ＣＣＲ７などのような活性化マーカーの発現の変化によって測定される、抗原特異的メモリー応答の刺激の増加または減少を測定する。活性の増加は免疫刺激活性を示す。活性の適切な増加を以下に概説する。

一実施形態では、シグナル伝達経路アッセイは、例えば、ＭＴＴ、Ｃｒ放出、カルサインＡＭなどの細胞傷害性アッセイによって、または例えば、ＣＦＳＥ希釈もしくはヨウ化プロピジウム染色などのようなフローサイトメトリーに基づくアッセイによって測定される、癌細胞のアポトーシスまたは溶解の増加または減少を測定する。活性の増加は免疫刺激活性を示す。活性の適切な増加を以下に概説する。

一実施形態では、シグナル伝達経路アッセイは、例えば、例えばＭＴＴ、Ｃｒ放出、カルサインＡＭなどの細胞傷害性アッセイによって、または例えば、ＣＦＳＥ希釈もしくはヨウ化プロピジウム染色などのようなフローサイトメトリーに基づくアッセイによって測定される、癌細胞への細胞傷害性または細胞増殖抑制性の効果の刺激の増加または減少を測定する。活性の増加は免疫刺激活性を示す。活性の適切な増加を以下に概説する。

一実施形態において、シグナル伝達経路アッセイは、例えば、例えばＭＴＴ、Ｃｒ放出、カルサインＡＭなどの細胞傷害性アッセイによって、または例えば、ＣＦＳＥ希釈もしくはヨウ化プロピジウム染色などのようなフローサイトメトリーに基づくアッセイによって測定される、癌細胞の直接殺傷の増加または減少を測定する。活性の増加は免疫刺激活性を示す。活性の適切な増加を以下に概説する。

一実施形態では、シグナル伝達経路アッセイ測定は、例えば、サイトカイン分泌によって、または増殖によって、または活性化マーカーの発現の変化によって測定される、Ｔｈ１７活性の増加または減少を測定する。活性の増加は免疫刺激活性を示す。活性の適切な増加を以下に概説する。

一実施形態において、シグナル伝達経路アッセイは、例えば、例えばＭＴＴ、Ｃｒ放出、カルサインＡＭなどの細胞傷害性アッセイによって、または例えば、ＣＦＳＥ希釈もしくはヨウ化プロピジウム染色などのようなフローサイトメトリーに基づくアッセイによって測定される、補体依存性細胞傷害性および／または抗体依存性細胞媒介性細胞傷害性の誘導の増加または減少を測定する。活性の増加は免疫刺激活性を示す。活性の適切な増加を以下に概説する。

一実施形態では、Ｔ細胞活性化は、例えば、例えば癌細胞のような標的細胞の直接殺傷によって、またはサイトカイン分泌によって、または増殖によって、または例えば、ＣＤ１３７、ＣＤ１０７ａ、ＰＤ１などのような活性化マーカーの発現の変化によって測定される。Ｔ細胞については、増殖、活性化の細胞表面マーカー（例えば、ＣＤ２５、ＣＤ６９、ＣＤ１３７、ＰＤ１）、細胞傷害性（標的細胞を殺傷する能力）、およびサイトカイン生成（例えば、ＩＬ－２、ＩＬ－４、ＩＬ－６、ＩＦＮγ、ＴＮＦ－ａ、ＩＬ－１０、ＩＬ－１７Ａ）の増加が、癌細胞の増強された殺傷と一致する免疫調節の指標となり得る。

一実施形態では、ＮＫ細胞活性化は、例えば、例えば癌細胞のような標的細胞の直接的な殺傷によって、またはサイトカイン分泌によって、または例えば、ＣＤ１０７ａなどのような活性化マーカーの発現の変化によって測定される。ＮＫ細胞については、増殖、細胞傷害性（標的細胞を殺傷し、ＣＤ１０７ａ、グランザイム、およびパーフォリン発現を増加させる能力）、サイトカイン生成（例えば、ＩＦＮγおよびＴＮＦ）、および細胞表面受容体発現（例えば、ＣＤ２５）の増加が、癌細胞の増強された殺傷と一致する免疫調節の指標となり得る。

一実施形態では、γδ Ｔ細胞活性化は、例えば、サイトカイン分泌によって、または増殖によって、または活性化マーカーの発現の変化によって測定される。

一実施形態では、Ｔｈ１細胞活性化は、例えば、サイトカイン分泌によって、または活性化マーカーの発現の変化によって測定される。

活性または応答の適切な増加（または減少、上で概説されるように適切なもの）は、基準試料または対照試料のいずれか、例えば、本発明の抗ＰＶＲＩＧ抗体を含まない試験試料におけるシグナルと比べて、１０％、２０％、３０％、４０％、５０％、６０％、７０％、８０％、９０％、９５％、または９８～９９％パーセントの増加である。同様に、基準試料または対照試料と比較して、少なくとも１倍、２倍、３倍、４倍、または５倍の増加が有効性を示す。

ＸＩ．チェックポイント遮断抗体
いくつかの実施形態では、本明細書に記載されるＩＬ－１５およびＩＬ－１５Ｒαタンパク質を含むヘテロ二量体Ｆｃ融合タンパク質は、これらに限定されないが、ＰＤ－１阻害剤、ＴＩＭ３阻害剤、ＣＴＬＡ４阻害剤、ＰＤ－Ｌ１阻害剤、ＴＩＧＩＴ阻害剤、ＬＡＧ３阻害剤、またはそれらの組み合わせなどのチェックポイント遮断抗体を含む他の治療薬と組み合わされる。

Ａ．抗ＰＤ１抗体
いくつかの実施形態では、本明細書に記載されるＩＬ－１５／Ｒα－Ｆｃ融合タンパク質は、チェックポイント遮断抗体、例えば、抗ＰＤ－１抗体と組み合わせて、癌を有する対象に投与することができる。いくつかの場合では、抗ＰＤ－１抗体には、ＸＥＮＰ１３４３２（エフェクター機能が切断されたニボルマブに基づく二価抗ＰＤ－１ｍＡｂ；ＸＥＮＰ１３４３２のアミノ酸配列が図１６０に示されている）が含まれる。

例示的な非限定的な抗ＰＤ－１抗体分子は、その全体において参照により組み込まれる、２０１５年７月３０日に公開された“ＡｎｔｉｂｏｄｙＭｏｌｅｃｕｌｅｓｔｏＰＤ－１ａｎｄＵｓｅｓＴｈｅｒｅｏｆ”と題するＵＳ２０１５／０２１０７６９に開示されている。

一実施形態では、抗ＰＤ－１抗体分子は、ＢＡＰ０４９－クローン－Ａ、ＢＡＰ０４９－クローン－Ｂ、ＢＡＰ０４９－クローン－Ｃ、ＢＡＰ０４９－クローン－Ｄ、もしくはＢＡＰ０４９－クローン－Ｅのアミノ酸配列、またはＵＳ２０１５／０２１０７６９の表１に記載されているか、または表１のヌクレオチド配列によってコードされているアミノ酸配列、あるいは前述の配列のうちのいずれかと実質的に同一（例えば、少なくとも８０％、８５％、９０％、９２％、９５％、９７％、９８％、９９％以上同一）である配列を含む、少なくとも１つまたは２つの重鎖可変ドメイン（任意に定常領域を含む）、少なくとも１つまたは２つの軽鎖可変ドメイン（任意に定常領域を含む）、またはその両方を含む。ＵＳ２０１５／０２１０７６９の表４に示されるように、抗ＰＤ－１抗体分子は、任意に、重鎖、軽鎖、またはその両方からのリーダー配列、またはそれと実質的に同一である配列を含む。

さらに別の実施形態では、抗ＰＤ－１抗体分子は、本明細書に記載される抗体、例えば、ＢＡＰ０４９－ｈｕｍ０１、ＢＡＰ０４９－ｈｕｍ０２、ＢＡＰ０４９－ｈｕｍ０３、ＢＡＰ０４９－ｈｕｍ０４、ＢＡＰ０４９－ｈｕｍ０５、ＢＡＰ０４９－ｈｕｍ０６、ＢＡＰ０４９－ｈｕｍ０７、ＢＡＰ０４９－ｈｕｍ０８、ＢＡＰ０４９－ｈｕｍ０９、ＢＡＰ０４９－ｈｕｍ１０、ＢＡＰ０４９－ｈｕｍ１１、ＢＡＰ０４９－ｈｕｍ１２、ＢＡＰ０４９－ｈｕｍ１３、ＢＡＰ０４９－ｈｕｍ１４、ＢＡＰ０４９－ｈｕｍ１５、ＢＡＰ０４９－ｈｕｍ１６、ＢＡＰ０４９－クローン－Ａ、ＢＡＰ０４９－クローン－Ｂ、ＢＡＰ０４９－クローン－Ｃ、ＢＡＰ０４９－クローン－Ｄ、もしくはＢＡＰ０４９－クローン－Ｅのいずれかから選択される抗体、または表１に記載されるか、または表１のヌクレオチド配列によってコードされる抗体の重鎖可変領域および／または軽鎖可変領域からの少なくとも１つ、２つ、もしくは３つの相補性決定領域（ＣＤＲ）、または前述の配列のうちのいずれかと実質的に同一（例えば、少なくとも８０％、８５％、９０％、９２％、９５％、９７％、９８％、９９％以上同一）の配列を含む。

さらに別の態様では、抗ＰＤ－１抗体分子は、ＵＳ２０１５／０２１０７６９の表１に示されるか、または表１に示されるヌクレオチド配列によってコードされているアミノ酸配列を含む重鎖可変領域からの少なくとも１つ、２つ、または３つのＣＤＲ（またはまとめて全てのＣＤＲ）を含む。一実施形態では、ＣＤＲ（またはまとめて全てのＣＤＲ）のうちの１つ以上は、表１に示されるか、または表１に示されるヌクレオチド配列によってコードされるアミノ酸配列に対して、１、２、３、４、５、６、またはそれ以上の変化、例えば、アミノ酸置換または欠失を有する。

さらに別の態様では、抗ＰＤ－１抗体分子は、ＵＳ２０１５／０２１０７６９の表１に示されるか、または表１に示されるヌクレオチド配列によってコードされているアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域からの少なくとも１つ、２つ、または３つのＣＤＲ（またはまとめて全てのＣＤＲ）を含む。一実施形態では、ＣＤＲ（またはまとめて全てのＣＤＲ）のうちの１つ以上は、表１に示されるか、または表１に示されるヌクレオチド配列によってコードされるアミノ酸配列に対して、１、２、３、４、５、６、またはそれ以上の変化、例えば、アミノ酸置換または欠失を有する。ある特定の実施形態では、抗ＰＤ－１抗体分子は、軽鎖ＣＤＲにおける置換、例えば、軽鎖のＣＤＲ１、ＣＤＲ２、および／またはＣＤＲ３における１つ以上の置換を含む。一実施形態では、抗ＰＤ－１抗体分子は、軽可変領域の１０２位での軽鎖ＣＤＲ３における置換、例えば、表１による軽可変領域の１０２位でのシステインからチロシンへの、またはシステインからセリン残基への置換を含む（例えば、マウスまたはキメラの非修飾については配列番号１６もしくは２４、または修飾された配列については配列番号３４、４２、４６、５４、５８、６２、６６、７０、７４、もしくは７８）。

別の態様では、抗ＰＤ－１抗体分子は、ＵＳ２０１５／０２１０７６９の表１に示されるか、または表１に示されるヌクレオチド配列によってコードされているアミノ酸配列を含む重鎖および軽鎖可変領域からの少なくとも１つ、２つ、３つ、４つ、５つ、または６つのＣＤＲ（またはまとめて全てのＣＤＲ）を含む。一実施形態では、ＣＤＲ（またはまとめて全てのＣＤＲ）のうちの１つ以上は、表１に示されるか、または表１に示されるヌクレオチド配列によってコードされるアミノ酸配列に対して、１、２、３、４、５、６、またはそれ以上の変化、例えば、アミノ酸置換または欠失を有する。

一実施形態では、抗ＰＤ－１抗体分子は、以下を含む：

（ａ）各々がＵＳ２０１５／０２１０７６９の表１に開示されている、配列番号４のＶＨＣＤＲ１アミノ酸配列、配列番号５のＶＨＣＤＲ２アミノ酸配列、および配列番号３のＶＨＣＤＲ３アミノ酸配列を含む重鎖可変領域（ＶＨ）、ならびに配列番号１３のＶＬＣＤＲ１アミノ酸配列、配列番号１４のＶＬＣＤＲ２アミノ酸配列、および配列番号３３のＶＬＣＤＲ３アミノ酸配列を含む軽鎖可変領域（ＶＬ）；

（ｂ）各々がＵＳ２０１５／０２１０７６９の表１に開示されている、配列番号１から選択されるＶＨＣＤＲ１アミノ酸配列、配列番号２のＶＨＣＤＲ２アミノ酸配列、および配列番号３のＶＨＣＤＲ３アミノ酸配列を含むＶＨ、ならびに配列番号１０のＶＬＣＤＲ１アミノ酸配列、配列番号１１のＶＬＣＤＲ２アミノ酸配列、および配列番号３２のＶＬＣＤＲ３アミノ酸配列を含むＶＬ；

（ｃ）各々がＵＳ２０１５／０２１０７６９の表１に開示されている、配列番号２２４のＶＨＣＤＲ１アミノ酸配列、配列番号５のＶＨＣＤＲ２アミノ酸配列、および配列番号３のＶＨＣＤＲ３アミノ酸配列を含むＶＨ、ならびに配列番号１３のＶＬＣＤＲ１アミノ酸配列、配列番号１４のＶＬＣＤＲ２アミノ酸配列、および配列番号３３のＶＬＣＤＲ３アミノ酸配列を含むＶＬ；または

（ｄ）各々がＵＳ２０１５／０２１０７６９の表１に開示されている、配列番号２２４のＶＨＣＤＲ１アミノ酸配列、配列番号２のＶＨＣＤＲ２アミノ酸配列、および配列番号３のＶＨＣＤＲ３アミノ酸配列を含むＶＨ、ならびに配列番号１０のＶＬＣＤＲ１アミノ酸配列、配列番号１１のＶＬＣＤＲ２アミノ酸配列、および配列番号３２のＶＬＣＤＲ３アミノ酸配列を含むＶＬ。

別の実施形態では、抗ＰＤ－１抗体分子は、各々がＵＳ２０１５／０２１０７６９の表１に開示されている、（ｉ）配列番号１、配列番号４、または配列番号２２４から選択されるＶＨＣＤＲ１アミノ酸配列、配列番号２または配列番号５のＶＨＣＤＲ２アミノ酸配列、および配列番号３のＶＨＣＤＲ３アミノ酸配列を含む重鎖可変領域（ＶＨ）、ならびに（ｉｉ）配列番号１０または配列番号１３のＶＬＣＤＲ１アミノ酸配列、配列番号１１または配列番号１４のＶＬＣＤＲ２アミノ酸配列、および配列番号３２または配列番号３３のＶＬＣＤＲ３アミノ酸配列を含む軽鎖可変領域（ＶＬ）を含む。

他の実施形態では、ＰＤ－１阻害剤は、ニボルマブ、ペムブロリズマブ、またはピジリズマブから選択される抗ＰＤ－１抗体である。

いくつかの実施形態では、抗ＰＤ－１抗体は、ニボルマブである。ニボルマブの代替名には、ＭＤＸ－１１０６、ＭＤＸ－１１０６－０４、ＯＮＯ－４５３８、またはＢＭＳ－９３６５５８が含まれる。いくつかの実施形態では、抗ＰＤ－１抗体は、ニボルマブ（ＣＡＳ登録番号：９４６４１４－９４－４）である。ニボルマブは、ＰＤ１を特異的に遮断する完全ヒトＩｇＧ４モノクローナル抗体である。ニボルマブ（クローン５Ｃ４）およびＰＤ１と特異的に結合する他のヒトモノクローナル抗体は、ＵＳ８，００８，４４９およびＷＯ２００６／１２１１６８に開示されている。一実施形態では、ＰＤ－１の阻害剤はニボルマブであり、本明細書に開示される配列（またはそれと実質的に同一もしくは類似の配列、例えば、指定された配列と少なくとも８５％、９０％、９５％同一またはそれ以上の配列）を有する。いくつかの実施形態では、抗ＰＤ－１抗体は、ペムブロリズマブである。ペムブロリズマブは（ラムブロリズマブ、ＭＫ－３４７５、ＭＫ０３４７５、ＳＣＨ－９００４７５、またはＫＥＹＴＲＵＤＡ（登録商標）とも呼ばれる；Ｍｅｒｃｋ）は、ＰＤ－１と結合するヒト化ＩｇＧ４のモノクローナル抗体である。ペムブロリズマブおよび他のヒト化抗ＰＤ－１抗体は、Ｈａｍｉｄ，Ｏ．ｅｔａｌ．（２０１３）ＮｅｗＥｎｇｌａｎｄＪｏｕｒｎａｌｏｆＭｅｄｉｃｉｎｅ３６９（２）：１３４－４４、ＵＳ８，３５４，５０９、およびＷＯ２００９／１１４３３５に開示されている。

一実施形態では、ＰＤ－１の阻害剤は、例えば、ＵＳ８，３５４，５０９およびＷＯ２００９／１１４３３５に開示されている、ペムブロリズマブであり、本明細書に開示される配列（またはそれと実質的に同一もしくは類似の配列、例えば、指定された配列と少なくとも８５％、９０％、９５％同一またはそれ以上の配列）を有する。

いくつかの実施形態では、抗ＰＤ－１抗体は、ピジリズマブである。ピジリズマブ（ＣＴ－０１１；ＣｕｒｅＴｅｃｈ）は、ＰＤ１と結合するヒト化ＩｇＧ１ｋモノクローナル抗体である。ピジリズマブおよび他のヒト化抗ＰＤ－１モノクローナル抗体は、ＵＳ８，７４７，８４７およびＷＯ２００９／１０１６１１に開示されている。

他の抗ＰＤ１抗体には、とりわけ、ＡＭＰ５１４（Ａｍｐｌｉｍｍｕｎｅ）、例えば、ＵＳ８，６０９，０８９、ＵＳ２０１０／０２８３３０、および／またはＵＳ２０１２／０１１４６４９に開示されている抗ＰＤ１抗体が含まれる。

いくつかの実施形態では、ＰＤ－１阻害剤は、イムノアドヘシン（例えば、定常領域（例えば、免疫グロブリン配列のＦｃ領域）に融合したＰＤ－Ｌ１またはＰＤ－Ｌ２の細胞外またはＰＤ－１結合部分を含むイムノアドヘシン）である。いくつかの実施形態では、ＰＤ－１阻害剤は、ＡＭＰ－２２４（Ｂ７－ＤＣＩｇ；Ａｍｐｌｉｍｍｕｎｅ；例えば、ＷＯ２０１０／０２７８２７およびＷＯ２０１１／０６６３４２に開示されている）であり、ＰＤ－１およびＢ７－Ｈ１間の相互作用を遮断するＰＤ－Ｌ２Ｆｃ融合可溶性受容体である。

いくつかの実施形態では、抗ＰＤ－１抗体は、本発明のＩＬ－１５／ＲαＦｃ融合タンパク質と組み合わせて使用され得る。これらに限定されないが、現在ＦＤＡが承認している２つの抗体である、ペムブロリズマブおよびニボリズマブ、ならびに現在これらに限定されないが、チスレリズマブ、Ｓｙｍ０２１、ＲＥＧＮ２８１０（Ｒｅｎｇｅｎｅｒｏｎにより開発）、ＪＮＪ－６３７２３２８３（ＪａｎｄＪにより開発）、ＳＨＲ－１２１０、ピジリズマブ、ＡＭＰ－２２４、ＭＥＤＩｏ６８０、ＰＤＲ００１、およびＣＴ－００１、ならびにＬｉｕｅｔａｌ．，Ｊ．Ｈｅｍａｔ．＆Ｏｎｃｏｌ．（２０１７）１０：１３６に概説される他のものを含む臨床試験におけるものを含むいくつかの抗ＰＤ－１抗体があり、その中の抗体は参照により明示的に組み込まれる。

いくつかの実施形態では、本明細書に記載されるＩＬ－１５／Ｒα Ｆｃ融合タンパク質は、ＰＤ－１阻害剤（例えば、抗ＰＤ－１抗体）と組み合わせて使用され得る。ある特定の実施形態では、本明細書に記載されるＩＬ－１５／ＲαＦｃ融合タンパク質（例えば、ＸＥＮＰ２４１１３、ＸＥＮＰ２４３０６、ＸＥＮＰ２３５５７、またはＸＥＮＰ２４０４５）は、抗ＰＤ－１抗体と組み合わせて投与される。

Ｂ．抗ＴＩＭ３抗体
例示的な非限定的な抗ＴＩＭ－３抗体分子は、その全体において参照により組み込まれる、２０１５年８月６日に公開された“ＡｎｔｉｂｏｄｙＭｏｌｅｃｕｌｅｓｔｏＰＤ－１ａｎｄＵｓｅｓＴｈｅｒｅｏｆ”と題するＵＳ２０１５／０２１０７６９に開示されている。

一実施形態では、抗ＴＩＭ－３抗体分子は、ＡＢＴＩＭ３、ＡＢＴＩＭ３－ｈｕｍ０１、ＡＢＴＩＭ３－ｈｕｍ０２、ＡＢＴＩＭ３－ｈｕｍ０３、ＡＢＴＩＭ３－ｈｕｍ０４、ＡＢＴＩＭ３－ｈｕｍ０５、ＡＢＴＩＭ３－ｈｕｍ０６、ＡＢＴＩＭ３－ｈｕｍ０７、ＡＢＴＩＭ３－ｈｕｍ０８、ＡＢＴＩＭ３－ｈｕｍ０９、ＡＢＴＩＭ３－ｈｕｍ１０、ＡＢＴＩＭ３－ｈｕｍ１１、ＡＢＴＩＭ３－ｈｕｍ１２、ＡＢＴＩＭ３－ｈｕｍ１３、ＡＢＴＩＭ３－ｈｕｍ１４、ＡＢＴＩＭ３－ｈｕｍ１５、ＡＢＴＩＭ３－ｈｕｍ１６、ＡＢＴＩＭ３－ｈｕｍ１７、ＡＢＴＩＭ３－ｈｕｍ１８、ＡＢＴＩＭ３－ｈｕｍ１９、ＡＢＴＩＭ３－ｈｕｍ２０、ＡＢＴＩＭ３－ｈｕｍ２１、ＡＢＴＩＭ３－ｈｕｍ２２、ＡＢＴＩＭ３－ｈｕｍ２３のアミノ酸配列、またはＵＳ２０１５／０２１８２７４の表１～４に記載されているか、または表１～４のヌクレオチド配列によってコードされているアミノ酸配列、あるいは前述の配列のうちのいずれかと実質的に同一（例えば、少なくとも８０％、８５％、９０％、９２％、９５％、９７％、９８％、９９％以上同一）である配列を含む、少なくとも１つまたは２つの重鎖可変ドメイン（任意に定常領域を含む）、少なくとも１つまたは２つの軽鎖可変ドメイン（任意に定常領域を含む）、またはその両方を含む。ＵＳ２０１５／０２１８２７４に示されるように、抗ＴＩＭ－３抗体分子は、任意に、重鎖、軽鎖、またはその両方からのリーダー配列、またはそれと実質的に同一である配列を含む。

さらに別の実施形態では、抗ＴＩＭ－３抗体分子は、本明細書に記載される抗体、例えば、ＡＢＴＩＭ３、ＡＢＴＩＭ３－ｈｕｍ０１、ＡＢＴＩＭ３－ｈｕｍ０２、ＡＢＴＩＭ３－ｈｕｍ０３、ＡＢＴＩＭ３－ｈｕｍ０４、ＡＢＴＩＭ３－ｈｕｍ０５、ＡＢＴＩＭ３－ｈｕｍ０６、ＡＢＴＩＭ３－ｈｕｍ０７、ＡＢＴＩＭ３－ｈｕｍ０８、ＡＢＴＩＭ３－ｈｕｍ０９、ＡＢＴＩＭ３－ｈｕｍ１０、ＡＢＴＩＭ３－ｈｕｍ１１、ＡＢＴＩＭ３－ｈｕｍ１２、ＡＢＴＩＭ３－ｈｕｍ１３、ＡＢＴＩＭ３－ｈｕｍ１４、ＡＢＴＩＭ３－ｈｕｍ１５、ＡＢＴＩＭ３－ｈｕｍ１６、ＡＢＴＩＭ３－ｈｕｍ１７、ＡＢＴＩＭ３－ｈｕｍ１８、ＡＢＴＩＭ３－ｈｕｍ１９、ＡＢＴＩＭ３－ｈｕｍ２０、ＡＢＴＩＭ３－ｈｕｍ２１、ＡＢＴＩＭ３－ｈｕｍ２２、ＡＢＴＩＭ３－ｈｕｍ２３のいずれかから選択されるか、または２０１５／０２１８２７４の表１～４に記載されているか、または表１～４のヌクレオチド配列によってコードされている抗体の重鎖可変領域および／または軽鎖可変領域からの少なくとも１つ、２つ、または３つの相補性決定領域（ＣＤＲ）、あるいは前述の配列のうちのいずれかと実質的に同一（例えば、少なくとも８０％、８５％、９０％、９２％、９５％、９７％、９８％、９９％以上同一）である配列を含む。

さらに別の態様では、抗ＴＩＭ－３抗体分子は、ＵＳ２０１５／０２１８２７４の表１～４に示されるか、または表１～４に示されるヌクレオチド配列によってコードされているアミノ酸配列を含む重鎖可変領域からの少なくとも１つ、２つ、または３つのＣＤＲ（またはまとめて全てのＣＤＲ）を含む。一実施形態では、ＣＤＲ（またはまとめて全てのＣＤＲ）のうちの１つ以上は、表１～４に示されるか、または表１～４に示されるヌクレオチド配列によってコードされるアミノ酸配列に対して、１、２、３、４、５、６、またはそれ以上の変化、例えば、アミノ酸置換または欠失を有する。

さらに別の態様では、抗ＴＩＭ－３抗体分子は、ＵＳ２０１５／０２１８２７４の表１～４に示されるか、または表１～４に示されるヌクレオチド配列によってコードされているアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域からの少なくとも１つ、２つ、または３つのＣＤＲ（またはまとめて全てのＣＤＲ）を含む。一実施形態では、ＣＤＲ（またはまとめて全てのＣＤＲ）のうちの１つ以上は、表１～４に示されるか、または表１～４に示されるヌクレオチド配列によってコードされるアミノ酸配列に対して、１、２、３、４、５、６、またはそれ以上の変化、例えば、アミノ酸置換または欠失を有する。ある特定の実施形態では、抗ＴＩＭ－３抗体分子は、軽鎖ＣＤＲにおける置換、例えば、軽鎖のＣＤＲ１、ＣＤＲ２、および／またはＣＤＲ３における１つ以上の置換を含む。

別の態様では、抗ＴＩＭ－３抗体分子は、ＵＳ２０１５／０２１８２７４の表１～４に示されるか、または表１～４に示されるヌクレオチド配列によってコードされているアミノ酸配列を含む重鎖および軽鎖可変領域からの少なくとも１つ、２つ、３つ、４つ、５つ、または６つのＣＤＲ（またはまとめて全てのＣＤＲ）を含む。一実施形態では、ＣＤＲ（またはまとめて全てのＣＤＲ）のうちの１つ以上は、表１～４に示されるか、または表１～４に示されるヌクレオチド配列によってコードされるアミノ酸配列に対して、１、２、３、４、５、６、またはそれ以上の変化、例えば、アミノ酸置換または欠失を有する。

一実施形態では、抗ＴＩＭ－３抗体分子は、以下を含む：
（ａ）各々がＵＳ２０１５／０２１８２７４の表１～４に開示されている、配列番号９から選択されるＶＨＣＤＲ１アミノ酸配列、配列番号１０のＶＨＣＤＲ２アミノ酸配列、および配列番号５のＶＨＣＤＲ３アミノ酸配列を含む重鎖可変領域（ＶＨ）、ならびに配列番号１２のＶＬＣＤＲ１アミノ酸配列、配列番号１３のＶＬＣＤＲ２アミノ酸配列、および配列番号１４のＶＬＣＤＲ３アミノ酸配列を含む軽鎖可変領域（ＶＬ）；
（ｂ）各々がＵＳ２０１５／０２１８２７４の表１～４に開示されている、配列番号３から選択されるＶＨＣＤＲ１アミノ酸配列、配列番号４のＶＨＣＤＲ２アミノ酸配列、および配列番号５のＶＨＣＤＲ３アミノ酸配列を含むＶＨ、ならびに配列番号６のＶＬＣＤＲ１アミノ酸配列、配列番号７のＶＬＣＤＲ２アミノ酸配列、および配列番号８のＶＬＣＤＲ３アミノ酸配列を含むＶＬ；
（ｃ）各々がＵＳ２０１５／０２１８２７４の表１～４に開示されている、配列番号９から選択されるＶＨＣＤＲ１アミノ酸配列、配列番号２５のＶＨＣＤＲ２アミノ酸配列、および配列番号５のＶＨＣＤＲ３アミノ酸配列を含むＶＨ、ならびに配列番号１２のＶＬＣＤＲ１アミノ酸配列、配列番号１３のＶＬＣＤＲ２アミノ酸配列、および配列番号１４のＶＬＣＤＲ３アミノ酸配列を含むＶＬ；
（ｄ）各々がＵＳ２０１５／０２１８２７４の表１～４に開示されている、配列番号３から選択されるＶＨＣＤＲ１アミノ酸配列、配列番号２４のＶＨＣＤＲ２アミノ酸配列、および配列番号５のＶＨＣＤＲ３アミノ酸配列を含むＶＨ、ならびに配列番号６のＶＬＣＤＲ１アミノ酸配列、配列番号７のＶＬＣＤＲ２アミノ酸配列、および配列番号８のＶＬＣＤＲ３アミノ酸配列を含むＶＬ；
（ｅ）各々がＵＳ２０１５／０２１８２７４の表１～４に開示されている、配列番号９から選択されるＶＨＣＤＲ１アミノ酸配列、配列番号３１のＶＨＣＤＲ２アミノ酸配列、および配列番号５のＶＨＣＤＲ３アミノ酸配列を含むＶＨ、ならびに配列番号１２のＶＬＣＤＲ１アミノ酸配列、配列番号１３のＶＬＣＤＲ２アミノ酸配列、および配列番号１４のＶＬＣＤＲ３アミノ酸配列を含むＶＬ；または
（ｆ）各々がＵＳ２０１５／０２１８２７４の表１～４に開示されている、配列番号３から選択されるＶＨＣＤＲ１アミノ酸配列、配列番号３０のＶＨＣＤＲ２アミノ酸配列、および配列番号５のＶＨＣＤＲ３アミノ酸配列を含むＶＨ、ならびに配列番号６のＶＬＣＤＲ１アミノ酸配列、配列番号７のＶＬＣＤＲ２アミノ酸配列、および配列番号８のＶＬＣＤＲ３アミノ酸配列を含むＶＬ。

例示的な抗ＴＩＭ－３抗体は、米国特許第８，５５２，１５６号、ＷＯ２０１１／１５５６０７、ＥＰ２５８１１１３、および米国公開第２０１４／０４４７２８号に開示されており、Ｓｙｍ０２３（Ｓｙｍｐｈｏｇｅｎの臨床開発中）、ＴＳＲ－２２（Ｔｅｓａｒｏの臨床開発中）、ＬＹ３３２１３６７（ＥｌｉＬｉｌｌｙの臨床開発中）、ＢＧＴＢ－Ａ４２５（ＢｅｉＧｅｎｅの臨床開発中）、ＭＢＧ４５３（Ｎｏｖａｒｔｉｓの臨床開発中）、およびＩＮＣＡＧＮ０２３９０（Ｉｎｃｙｔｅの臨床開発中）を含む。

いくつかの実施形態では、抗ＴＩＭ－３抗体は、本発明のＩＬ－１５／Ｒα Ｆｃ融合タンパク質と組み合わせて使用され得る。これらに限定されないが、ＭＢＧ４５３およびＴＳＲ－０２２を含む、臨床開発中のいくつかのＴＩＭ－３抗体がある。

いくつかの実施形態では、本明細書に記載されるＩＬ－１５／Ｒα Ｆｃ融合タンパク質は、ＴＩＭ－３阻害剤（例えば、抗ＴＩＭ３抗体）と組み合わせて使用され得る。ある特定の実施形態では、本明細書に記載されるＩＬ－１５／ＲαＦｃ融合タンパク質（例えば、ＸＥＮＰ２４１１３、ＸＥＮＰ２４３０６、ＸＥＮＰ２３５５７、またはＸＥＮＰ２４０４５）は、抗ＴＩＭ３抗体と組み合わせて投与される。

Ｃ．抗ＣＴＬＡ４抗体
例示的な抗ＣＴＬＡ４抗体には、トレメリムマブ（以前はチシリムマブ、ＣＰ－６７５，２０６として知られているＰｆｉｚｅｒから入手可能なＩｇＧ２モノクローナル抗体）、およびイピリムマブ（ＭＤＸ－０１０、ＣＡＳ番号４７７２０２－００－９としても知られているＣＴＬＡ－４抗体）。他の例示的な抗ＣＴＬＡ－４抗体は、例えば、米国特許第５，８１１，０９７号に開示されている。

一実施形態では、抗ＣＴＬＡ４抗体は、例えば、ＵＳ５，８１１，０９７、ＵＳ７，６０５，２３８、ＷＯ００／３２２３１、およびＷＯ９７／２０５７４に開示されている、イピリムマブであり、本明細書に開示される配列（またはそれと実質的に同一もしくは類似の配列、例えば、指定された配列と少なくとも８５％、９０％、９５％同一またはそれ以上の配列）を有する。

一実施形態では、抗ＣＴＬＡ４抗体は、例えば、ＵＳ６，６８２，７３６およびＷＯ００／３７５０４に開示されている、トレメリムマブであり、本明細書に開示される配列（またはそれと実質的に同一もしくは類似の配列、例えば、指定された配列と少なくとも８５％、９０％、９５％同一またはそれ以上の配列）を有する。

いくつかの実施形態では、抗ＣＴＬＡ－４抗体は、本発明のＩＬ－１５／ＲαＦｃ融合タンパク質と組み合わせて使用され得る。したがって、本明細書で概説される併用療法で使用するのに好適な抗ＣＴＬＡ－４抗体には、これらに限定されないが、現在ＦＤＡで承認している抗体イピリムマブの１つ、ならびにＣＰ－６７５，２０６およびＡＧＥＮ－１８８４を含む開発中のさらにいくつかが含まれる。

いくつかの実施形態では、本明細書に記載されるＩＬ－１５／Ｒα Ｆｃ融合タンパク質は、ＣＴＬＡ－４阻害剤（例えば、抗ＣＴＬＡ－４抗体）と組み合わせて使用され得る。ある特定の実施形態では、本明細書に記載されるＩＬ－１５／ＲαＦｃ融合タンパク質（例えば、ＸＥＮＰ２４１１３、ＸＥＮＰ２４３０６、ＸＥＮＰ２３５５７、またはＸＥＮＰ２４０４５）は、抗ＣＴＬＡ－４抗体と組み合わせて投与される。

Ｄ．抗ＰＤ－Ｌ１抗体
例示的な非限定的な抗ＰＤ－Ｌ１抗体分子は、その全体において参照により組み込まれる、２０１６年４月２１日に公開された“ＡｎｔｉｂｏｄｙＭｏｌｅｃｕｌｅｓｔｏＰＤ－Ｌ１ａｎｄＵｓｅｓＴｈｅｒｅｏｆ”と題するＵＳ２０１６／０１０８１２３に開示されている。

一実施形態では、抗ＰＤ－Ｌ１抗体分子は、ＢＡＰ０５８－ｈｕｍ０１、ＢＡＰ０５８－ｈｕｍ０２、ＢＡＰ０５８－ｈｕｍ０３、ＢＡＰ０５８－ｈｕｍ０４、ＢＡＰ０５８－ｈｕｍ０５、ＢＡＰ０５８－ｈｕｍ０６、ＢＡＰ０５８－ｈｕｍ０７、ＢＡＰ０５８－ｈｕｍ０８、ＢＡＰ０５８－ｈｕｍ０９、ＢＡＰ０５８－ｈｕｍ１０、ＢＡＰ０５８－ｈｕｍ１１、ＢＡＰ０５８－ｈｕｍ１２、ＢＡＰ０５８－ｈｕｍ１３、ＢＡＰ０５８－ｈｕｍ１４、ＢＡＰ０５８－ｈｕｍ１５、ＢＡＰ０５８－ｈｕｍ１６、ＢＡＰ０５８－ｈｕｍ１７、ＢＡＰ０５８－クローン－Ｋ、ＢＡＰ０５８－クローン－Ｌ、ＢＡＰ０５８－クローン－Ｍ、ＢＡＰ０５８－クローン－Ｎ、もしくはＢＡＰ０５８－クローン－Ｏのいずれかのアミノ酸配列、またはＵＳ２０１６／０１０８１２３の表１に記載されているか、または表１のヌクレオチド配列によってコードされているアミノ酸配列、あるいは前述の配列のうちのいずれかと実質的に同一（例えば、少なくとも８０％、８５％、９０％、９２％、９５％、９７％、９８％、９９％以上同一）である配列を含む、少なくとも１つまたは２つの重鎖可変ドメイン（任意に定常領域を含む）、少なくとも１つまたは２つの軽鎖可変ドメイン（任意に定常領域を含む）、またはその両方を含む。

さらに別の実施形態では、抗ＰＤ－Ｌ１抗体分子は、本明細書に記載される抗体、例えば、ＢＡＰ０５８－ｈｕｍ０１、ＢＡＰ０５８－ｈｕｍ０２、ＢＡＰ０５８－ｈｕｍ０３、ＢＡＰ０５８－ｈｕｍ０４、ＢＡＰ０５８－ｈｕｍ０５、ＢＡＰ０５８－ｈｕｍ０６、ＢＡＰ０５８－ｈｕｍ０７、ＢＡＰ０５８－ｈｕｍ０８、ＢＡＰ０５８－ｈｕｍ０９、ＢＡＰ０５８－ｈｕｍ１０、ＢＡＰ０５８－ｈｕｍ１１、ＢＡＰ０５８－ｈｕｍ１２、ＢＡＰ０５８－ｈｕｍ１３、ＢＡＰ０５８－ｈｕｍ１４、ＢＡＰ０５８－ｈｕｍ１５、ＢＡＰ０５８－ｈｕｍ１６、ＢＡＰ０５８－ｈｕｍ１７、ＢＡＰ０５８－クローン－Ｋ、ＢＡＰ０５８－クローン－Ｌ、ＢＡＰ０５８－Ｃクローン－Ｍ、ＢＡＰ０５８－クローン－Ｎ、もしくはＢＡＰ０５８－クローン－Ｏのいずれかから選択される抗体、またはＵＳ２０１６／０１０８１２３の表１に記載されるか、または表１のヌクレオチド配列によってコードされる抗体の重鎖可変領域および／または軽鎖可変領域からの少なくとも１つ、２つ、もしくは３つの相補性決定領域（ＣＤＲ）、または前述の配列のうちのいずれかと実質的に同一（例えば、少なくとも８０％、８５％、９０％、９２％、９５％、９７％、９８％、９９％以上同一）の配列を含む。

さらに別の態様では、抗ＰＤ－Ｌ１抗体分子は、ＵＳ２０１６／０１０８１２３の表１に示されるか、または表１に示されるヌクレオチド配列によってコードされているアミノ酸配列を含む重鎖可変領域からの少なくとも１つ、２つ、または３つのＣＤＲ（またはまとめて全てのＣＤＲ）を含む。一実施形態では、ＣＤＲ（またはまとめて全てのＣＤＲ）のうちの１つ以上は、表１に示されるか、または表１に示されるヌクレオチド配列によってコードされるアミノ酸配列に対して、１、２、３、４、５、６、またはそれ以上の変化、例えば、アミノ酸置換または欠失を有する。

さらに別の態様では、抗ＰＤ－Ｌ１抗体分子は、ＵＳ２０１６／０１０８１２３の表１に示されるか、または表１に示されるヌクレオチド配列によってコードされているアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域からの少なくとも１つ、２つ、または３つのＣＤＲ（またはまとめて全てのＣＤＲ）を含む。一実施形態では、ＣＤＲ（またはまとめて全てのＣＤＲ）のうちの１つ以上は、表１に示されるか、または表１に示されるヌクレオチド配列によってコードされるアミノ酸配列に対して、１、２、３、４、５、６、またはそれ以上の変化、例えば、アミノ酸置換または欠失を有する。ある特定の実施形態では、抗ＰＤ－Ｌ１抗体分子は、軽鎖ＣＤＲにおける置換、例えば、軽鎖のＣＤＲ１、ＣＤＲ２、および／またはＣＤＲ３における１つ以上の置換を含む。

別の態様では、抗ＰＤ－Ｌ１抗体分子は、表１に示されるか、またはＵＳ２０１６／０１０８１２３の表１に示されるヌクレオチド配列によってコードされているアミノ酸配列を含む重鎖および軽鎖可変領域からの少なくとも１つ、２つ、３つ、４つ、５つ、または６つのＣＤＲ（またはまとめて全てのＣＤＲ）を含む。一実施形態では、ＣＤＲ（またはまとめて全てのＣＤＲ）のうちの１つ以上は、表１に示されるか、または表１に示されるヌクレオチド配列によってコードされるアミノ酸配列に対して、１、２、３、４、５、６、またはそれ以上の変化、例えば、アミノ酸置換または欠失を有する。

一実施形態では、抗ＰＤ－Ｌ１抗体分子は、以下を含む：
（ｉ）各々がＵＳ２０１６／０１０８１２３の表１に開示されている、配列番号１、配列番号４、または配列番号１９５から選択されるＶＨＣＤＲ１アミノ酸配列、配列番号２のＶＨＣＤＲ２アミノ酸配列、および配列番号３のＶＨＣＤＲ３アミノ酸配列を含む重鎖可変領域（ＶＨ）；ならびに
（ｉｉ）各々がＵＳ２０１６／０１０８１２３の表１に開示されている、配列番号９のＶＬＣＤＲ１アミノ酸配列、配列番号１０のＶＬＣＤＲ２アミノ酸配列、および配列番号１１のＶＬＣＤＲ３アミノ酸配列を含む軽鎖可変領域（ＶＬ）。

別の実施形態では、抗ＰＤ－Ｌ１抗体分子は、以下を含む：
（ｉ）各々がＵＳ２０１６／０１０８１２３の表１に開示されている、配列番号１、配列番号４、または配列番号１９５から選択されるＶＨＣＤＲ１アミノ酸配列、配列番号５のＶＨＣＤＲ２アミノ酸配列、および配列番号３のＶＨＣＤＲ３アミノ酸配列を含む重鎖可変領域（ＶＨ）；ならびに
（ｉｉ）各々がＵＳ２０１６／０１０８１２３の表１に開示されている、配列番号１２のＶＬＣＤＲ１アミノ酸配列、配列番号１３のＶＬＣＤＲ２アミノ酸配列、および配列番号１４のＶＬＣＤＲ３アミノ酸配列を含む軽鎖可変領域（ＶＬ）。

一実施形態では、抗ＰＤ－Ｌ１抗体分子は、配列番号１のＶＨＣＤＲ１アミノ酸配列を含む。別の実施形態では、抗ＰＤ－Ｌ１抗体分子は、配列番号４のＶＨＣＤＲ１アミノ酸配列を含む。さらに別の実施形態では、抗ＰＤ－Ｌ１抗体分子は、各々がＵＳ２０１６／０１０８１２３の表１に開示されている、配列番号１９５のＶＨＣＤＲ１アミノ酸配列を含む。

いくつかの実施形態では、ＰＤ－Ｌ１阻害剤は、抗体分子である。いくつかの実施形態では、抗ＰＤ－Ｌ１阻害剤は、ＹＷ２４３．５５．Ｓ７０、ＭＰＤＬ３２８０Ａ、ＭＥＤＩ－４７３６、ＭＳＢ－００１０７１８Ｃ、ＭＤＸ－１１０５、アテゾリズマブ、ダルバルマブ、アベルマブ、またはＢＭＳ９３６５５９から選択される。

いくつかの実施形態では、抗ＰＤ－Ｌ１抗体は、アテゾリズマブである。アテゾリズマブ（ＭＰＤＬ３２８０ＡおよびＡｔｅｚｏ（登録商標）とも呼ばれる；Ｒｏｃｈｅ）は、ＰＤ－Ｌ１と結合するモノクローナル抗体である。アテゾリズマブおよび他のヒト化抗ＰＤ－Ｌ１抗体は、ＵＳ８，２１７，１４９に開示されており、本明細書に開示される配列（またはそれと実質的に同一もしくは類似の配列、例えば、指定された配列と少なくとも８５％、９０％、９５％同一またはそれ以上の配列）を有する。

いくつかの実施形態では、抗ＰＤ－Ｌ１抗体は、アベルマブである。アベルマブ（Ａ０９－２４６－２とも呼ばれる；ＭｅｒｃｋＳｅｒｏｎｏ）は、ＰＤ－Ｌ１と結合するモノクローナル抗体である。アベルマブおよび他のヒト化抗ＰＤ－Ｌ１抗体は、ＵＳ９，３２４，２９８およびＷＯ２０１３／０７９１７４に開示されており、本明細書に開示される配列（またはそれと実質的に同一もしくは類似の配列、例えば、指定された配列と少なくとも８５％、９０％、９５％同一またはそれ以上の配列）を有する。

いくつかの実施形態では、抗ＰＤ－Ｌ１抗体は、デュルバルマブである。デュルバルマブ（ＭＥＤＩ４７３６とも呼ばれる；ＡｓｔｒａＺｅｎｅｃａ）は、ＰＤ－Ｌ１と結合するモノクローナル抗体である。デュルバルマブおよび他のヒト化抗ＰＤ－Ｌ１抗体は、ＵＳ８，７７９，１０８に開示されており、本明細書に開示される配列（またはそれと実質的に同一もしくは類似の配列、例えば、指定された配列と少なくとも８５％、９０％、９５％同一またはそれ以上の配列）を有する。

いくつかの実施形態では、抗ＰＤ－Ｌ１抗体は、ＢＭＳ－９３６５５９である。ＢＭＳ－９３６５５９（ＭＤＸ－１１０５とも呼ばれる；ＢＭＳ）は、ＰＤ－Ｌ１と結合するモノクローナル抗体である。ＢＭＳ－９３６５５９および他のヒト化抗ＰＤ－Ｌ１抗体は、ＵＳ７，９４３，７４３およびＷＯ２００７／００５８７４に開示されており、本明細書に開示される配列（またはそれと実質的に同一もしくは類似の配列、例えば、指定された配列と少なくとも８５％、９０％、９５％同一またはそれ以上の配列）を有する。

いくつかの実施形態では、抗ＰＤ－Ｌ１抗体は、本発明のＩＬ－１５／ＲαＦｃ融合タンパク質と組み合わせて使用され得る。現在ＦＤＡが承認している３つの抗体である、アテゾリズマブ、アベルマブ、デュルバルマブ、ならびにこれらに限定されないが、ＬＹ３３００００５４およびＣＳ１００１、ならびにＬｉｕｅｔａｌ．，Ｊ．Ｈｅｍａｔ．＆Ｏｎｃｏｌ．（２０１７）１０：１３６に概説される他のものを含む現在臨床試験におけるものを含むいくつかの抗ＰＤ－Ｌ１抗体があり、その中の抗体は参照により明示的に組み込まれる。

いくつかの実施形態では、本明細書に記載されるＩＬ－１５／Ｒαヘテロ二量体融合タンパク質は、ＰＤ－Ｌ１またはＰＤ－Ｌ２阻害剤（例えば、抗ＰＤ－Ｌ１抗体）と組み合わせて使用され得る。

Ｅ．抗ＴＩＧＩＴ抗体
いくつかの実施形態では、抗ＴＩＧＩＴ抗体は、ＯＭＰ－３１３Ｍ３２である。ＯＭＰ－３１３Ｍ３２（ＯｎｃｏＭｅｄＰｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌｓ）は、ＴＩＧＩＴと結合するモノクローナル抗体である。ＯＭＰ－３１３Ｍ３２および他のヒト化抗ＴＩＧＩＴ抗体は、ＵＳ２０１６／０３７６３６５およびＷＯ２０１６／１９１６４３に開示されており、本明細書に開示される配列（またはそれと実質的に同一もしくは類似の配列、例えば、指定された配列と少なくとも８５％、９０％、９５％同一またはそれ以上の配列）を有する。

いくつかの実施形態では、抗ＴＩＧＩＴ抗体は、ＢＭＳ－９８６２０７である。ＢＭＳ－９８６２０７（ＯＮＯ－４６８６とも呼ばれる；Ｂｒｉｓｔｏｌ－ＭｙｅｒｓＳｑｕｉｂｂ）は、ＴＩＧＩＴと結合するモノクローナル抗体である。ＢＭＳ－９８６２０７および他のヒト化抗ＴＩＧＩＴ抗体は、ＵＳ２０１６／０１７６９６３およびＷＯ２０１６／１０６３０２に開示されており、本明細書に開示される配列（またはそれと実質的に同一もしくは類似の配列、例えば、指定された配列と少なくとも８５％、９０％、９５％同一またはそれ以上の配列）を有する。

いくつかの実施形態では、抗ＴＩＧＩＴ抗体は、ＭＴＩＧ７１９２である。ＭＴＩＧ７１９２（Ｇｅｎｅｎｔｅｃｈ）は、ＴＩＧＩＴと結合するモノクローナル抗体である。ＭＴＩＧ７１９２および他のヒト化抗ＴＩＧＩＴ抗体は、ＵＳ２０１７／０８８６１３、ＷＯ２０１７／０５３７４８、およびＷＯ２０１６／０１１２６４に開示されており、本明細書に開示される配列（またはそれと実質的に同一もしくは類似の配列、例えば、指定された配列と少なくとも８５％、９０％、９５％同一またはそれ以上の配列）を有する。

いくつかの実施形態では、抗ＴＩＧＩＴ抗体は、本発明のＩＬ－１５／ＲαＦｃ融合タンパク質と組み合わせて使用され得る。臨床開発中のいくつかのＴＩＧＩＴ抗体、ＢＭＳ－９８６２０７（ＢＭＳによる臨床開発中）、ＯＭＰ－３１３Ｍ３２（ＯｎｃｏＭｅｄによる臨床開発中）、ＭＴＩＧ７１９２Ａ（Ｇｅｎｅｎｔｅｃｈによる臨床開発中）、およびＡＢ１５４（ＡｒｃｕｓＢｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓによる臨床開発中）がある。

いくつかの実施形態では、本明細書に記載されるＩＬ－１５／Ｒα Ｆｃ融合タンパク質は、ＴＩＧＩＴ阻害剤（例えば、抗ＴＩＧＩＴ抗体）と組み合わせて使用され得る。ある特定の実施形態では、本明細書に記載されるＩＬ－１５／ＲαＦｃ融合タンパク質（例えば、ＸＥＮＰ２４１１３、ＸＥＮＰ２４３０６、ＸＥＮＰ２３５５７、またはＸＥＮＰ２４０４５）は、抗ＴＩＧＩＴ抗体と組み合わせて投与される。

いくつかの実施形態では、抗ＴＩＧＩＴ抗体は、これらに限定されないが、ＢＭＳ－９８６２０７（ＢＭＳによる臨床開発中）、ＯＭＰ－３１３Ｍ３２（ＯｎｃｏＭｅｄによる臨床開発中）、ＭＴＩＧ７１９２Ａ（Ｇｅｎｅｎｔｅｃｈによる臨床開発中）、およびＡＢ１５４（ＡｒｃｕｓＢｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓによる臨床開発中）を含む、ＸＥＮＰ２４３０６と組み合わせて使用され得る。

Ｆ．抗ＬＡＧ３抗体
例示的な非限定的な抗ＬＡＧ－３抗体分子は、その全体において参照により組み込まれる、２０１５年９月１７日に公開された“ＡｎｔｉｂｏｄｙＭｏｌｅｃｕｌｅｓｔｏＬＡＧ－３ａｎｄＵｓｅｓＴｈｅｒｅｏｆ”と題するＵＳ２０１５／０２５９４２０に開示されている。

一実施形態では、抗ＬＡＧ－３抗体分子は、ＢＡＰ０５０－ｈｕｍ０１、ＢＡＰ０５０－ｈｕｍ０２、ＢＡＰ０５０－ｈｕｍ０３、ＢＡＰ０５０－ｈｕｍ０４、ＢＡＰ０５０－ｈｕｍ０５、ＢＡＰ０５０－ｈｕｍ０６、ＢＡＰ０５０－ｈｕｍ０７、ＢＡＰ０５０－ｈｕｍ０８、ＢＡＰ０５０－ｈｕｍ０９、ＢＡＰ０５０－ｈｕｍ１０、ＢＡＰ０５０－ｈｕｍ１１、ＢＡＰ０５０－ｈｕｍ１２、ＢＡＰ０５０－ｈｕｍ１３、ＢＡＰ０５０－ｈｕｍ１４、ＢＡＰ０５０－ｈｕｍ１５、ＢＡＰ０５０－ｈｕｍ１６、ＢＡＰ０５０－ｈｕｍ１７、ＢＡＰ０５０－ｈｕｍ１８、ＢＡＰ０５０－ｈｕｍ１９、ＢＡＰ０５０－ｈｕｍ２０、ｈｕＢＡＰ０５０（Ｓｅｒ）（例えば、ＢＡＰ０５０－ｈｕｍ０１－Ｓｅｒ、ＢＡＰ０５０－ｈｕｍ０２－Ｓｅｒ、ＢＡＰ０５０－ｈｕｍ０３－Ｓｅｒ、ＢＡＰ０５０－ｈｕｍ０４－Ｓｅｒ、ＢＡＰ０５０－ｈｕｍ０５－Ｓｅｒ、ＢＡＰ０５０－ｈｕｍ０６－Ｓｅｒ、ＢＡＰ０５０－ｈｕｍ０７－Ｓｅｒ、ＢＡＰ０５０－ｈｕｍ０８－Ｓｅｒ、ＢＡＰ０５０－ｈｕｍ０９－Ｓｅｒ、ＢＡＰ０５０－ｈｕｍ１０－Ｓｅｒ、ＢＡＰ０５０－ｈｕｍ１１－Ｓｅｒ、ＢＡＰ０５０－ｈｕｍ１２－Ｓｅｒ、ＢＡＰ０５０－ｈｕｍ１３－Ｓｅｒ、ＢＡＰ０５０－ｈｕｍ１４－Ｓｅｒ、ＢＡＰ０５０－ｈｕｍ１５－Ｓｅｒ、ＢＡＰ０５０－ｈｕｍ１８－Ｓｅｒ、ＢＡＰ０５０－ｈｕｍ１９－Ｓｅｒ、またはＢＡＰ０５０－ｈｕｍ２０－Ｓｅｒ）、ＢＡＰ０５０－クローン－Ｆ、ＢＡＰ０５０－クローン－Ｇ、ＢＡＰ０５０－クローン－Ｈ、ＢＡＰ０５０－クローン－Ｉ、もしくはＢＡＰ０５０－クローン－Ｊのいずれかのアミノ酸配列、またはＵＳ２０１５／０２５９４２０の表１に記載されているか、または表１のヌクレオチド配列によってコードされているアミノ酸配列、あるいは前述の配列のうちのいずれかと実質的に同一（例えば、少なくとも８０％、８５％、９０％、９２％、９５％、９７％、９８％、９９％以上同一）である配列を含む、少なくとも１つまたは２つの重鎖可変ドメイン（任意に定常領域を含む）、少なくとも１つまたは２つの軽鎖可変ドメイン（任意に定常領域を含む）、またはその両方を含む。

さらに別の実施形態では、抗ＬＡＧ－３抗体分子は、ＢＡＰ０５０－ｈｕｍ０１、ＢＡＰ０５０－ｈｕｍ０２、ＢＡＰ０５０－ｈｕｍ０３、ＢＡＰ０５０－ｈｕｍ０４、ＢＡＰ０５０－ｈｕｍ０５、ＢＡＰ０５０－ｈｕｍ０６、ＢＡＰ０５０－ｈｕｍ０７、ＢＡＰ０５０－ｈｕｍ０８、ＢＡＰ０５０－ｈｕｍ０９、ＢＡＰ０５０－ｈｕｍ１０、ＢＡＰ０５０－ｈｕｍ１１、ＢＡＰ０５０－ｈｕｍ１２、ＢＡＰ０５０－ｈｕｍ１３、ＢＡＰ０５０－ｈｕｍ１４、ＢＡＰ０５０－ｈｕｍ１５、ＢＡＰ０５０－ｈｕｍ１６、ＢＡＰ０５０－ｈｕｍ１７、ＢＡＰ０５０－ｈｕｍ１８、ＢＡＰ０５０－ｈｕｍ１９、ＢＡＰ０５０－ｈｕｍ２０、ｈｕＢＡＰ０５０（Ｓｅｒ）（例えば、ＢＡＰ０５０－ｈｕｍ０１－Ｓｅｒ、ＢＡＰ０５０－ｈｕｍ０２－Ｓｅｒ、ＢＡＰ０５０－ｈｕｍ０３－Ｓｅｒ、ＢＡＰ０５０－ｈｕｍ０４－Ｓｅｒ、ＢＡＰ０５０－ｈｕｍ０５－Ｓｅｒ、ＢＡＰ０５０－ｈｕｍ０６－Ｓｅｒ、ＢＡＰ０５０－ｈｕｍ０７－Ｓｅｒ、ＢＡＰ０５０－ｈｕｍ０８－Ｓｅｒ、ＢＡＰ０５０－ｈｕｍ０９－Ｓｅｒ、ＢＡＰ０５０－ｈｕｍ１０－Ｓｅｒ、ＢＡＰ０５０－ｈｕｍ１１－Ｓｅｒ、ＢＡＰ０５０－ｈｕｍ１２－Ｓｅｒ、ＢＡＰ０５０－ｈｕｍ１３－Ｓｅｒ、ＢＡＰ０５０－ｈｕｍ１４－Ｓｅｒ、ＢＡＰ０５０－ｈｕｍ１５－Ｓｅｒ、ＢＡＰ０５０－ｈｕｍ１８－Ｓｅｒ、ＢＡＰ０５０－ｈｕｍ１９－Ｓｅｒ、またはＢＡＰ０５０－ｈｕｍ２０－Ｓｅｒ）、ＢＡＰ０５０－クローン－Ｆ、ＢＡＰ０５０－クローン－Ｇ、ＢＡＰ０５０－クローン－Ｈ、ＢＡＰ０５０－クローン－Ｉ、もしくはＢＡＰ０５０－クローン－Ｊのいずれかから選択される抗体、またはＵＳ２０１５／０２５９４２０の表１に記載されているか、または表１のヌクレオチド配列によってコードされている抗体の重鎖可変領域および／または軽鎖可変領域からの少なくとも１つ、２つ、もしくは３つの相補性決定領域（ＣＤＲ）、または前述の配列のうちのいずれかと実質的に同一（例えば、少なくとも８０％、８５％、９０％、９２％、９５％、９７％、９８％、９９％以上同一）である配列を含む。

さらに別の態様では、抗ＬＡＧ－３抗体分子は、ＵＳ２０１５／０２５９４２０の表１に示されるか、または表１に示されるヌクレオチド配列によってコードされているアミノ酸配列を含む重鎖可変領域からの少なくとも１つ、２つ、または３つのＣＤＲ（またはまとめて全てのＣＤＲ）を含む。一実施形態では、ＣＤＲ（またはまとめて全てのＣＤＲ）のうちの１つ以上は、表１に示されるか、または表１に示されるヌクレオチド配列によってコードされるアミノ酸配列に対して、１、２、３、４、５、６、またはそれ以上の変化、例えば、アミノ酸置換または欠失を有する。

さらに別の態様では、抗ＬＡＧ－３抗体分子は、ＵＳ２０１５／０２５９４２０の表１に示されるか、または表１に示されるヌクレオチド配列によってコードされているアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域からの少なくとも１つ、２つ、または３つのＣＤＲ（またはまとめて全てのＣＤＲ）を含む。一実施形態では、ＣＤＲ（またはまとめて全てのＣＤＲ）のうちの１つ以上は、表１に示されるか、または表１に示されるヌクレオチド配列によってコードされるアミノ酸配列に対して、１、２、３、４、５、６、またはそれ以上の変化、例えば、アミノ酸置換または欠失を有する。ある特定の実施形態では、抗ＰＤ－Ｌ１抗体分子は、軽鎖ＣＤＲにおける置換、例えば、軽鎖のＣＤＲ１、ＣＤＲ２、および／またはＣＤＲ３における１つ以上の置換を含む。

別の態様では、抗ＬＡＧ－３抗体分子は、表１に示されるか、またはＵＳ２０１５／０２５９４２０の表１に示されるヌクレオチド配列によってコードされているアミノ酸配列を含む重鎖および軽鎖可変領域からの少なくとも１つ、２つ、３つ、４つ、５つ、または６つのＣＤＲ（またはまとめて全てのＣＤＲ）を含む。一実施形態では、ＣＤＲ（またはまとめて全てのＣＤＲ）のうちの１つ以上は、表１に示されるか、または表１に示されるヌクレオチド配列によってコードされるアミノ酸配列に対して、１、２、３、４、５、６、またはそれ以上の変化、例えば、アミノ酸置換または欠失を有する。

一実施形態では、抗ＬＡＧ－３抗体分子は、以下を含む：
（ｉ）各々がＵＳ２０１５／０２５９４２０の表１に開示されている、配列番号１、配列番号４、または配列番号２８６から選択されるＶＨＣＤＲ１アミノ酸配列、配列番号２のＶＨＣＤＲ２アミノ酸配列、および配列番号３のＶＨＣＤＲ３アミノ酸配列を含む重鎖可変領域（ＶＨ）；ならびに
（ｉｉ）各々がＵＳ２０１５／０２５９４２０の表１に開示されている、配列番号１０のＶＬＣＤＲ１アミノ酸配列、配列番号１１のＶＬＣＤＲ２アミノ酸配列、および配列番号１２のＶＬＣＤＲ３アミノ酸配列を含む軽鎖可変領域（ＶＬ）。

別の実施形態では、抗ＬＡＧ－３抗体分子は、以下を含む：
（ｉ）各々がＵＳ２０１５／０２５９４２０の表１に開示されている、配列番号１、配列番号４、または配列番号２８６から選択されるＶＨＣＤＲ１アミノ酸配列、配列番号５のＶＨＣＤＲ２アミノ酸配列、および配列番号３のＶＨＣＤＲ３アミノ酸配列を含む重鎖可変領域（ＶＨ）；ならびに
（ｉｉ）各々がＵＳ２０１５／０２５９４２０の表１に開示されている、配列番号１３のＶＬＣＤＲ１アミノ酸配列、配列番号１４のＶＬＣＤＲ２アミノ酸配列、および配列番号１５のＶＬＣＤＲ３アミノ酸配列を含む軽鎖可変領域（ＶＬ）。

一実施形態では、抗ＬＡＧ－３抗体分子は、配列番号１のＶＨＣＤＲ１アミノ酸配列を含む。別の実施形態では、抗ＬＡＧ－３抗体分子は、配列番号４のＶＨＣＤＲ１アミノ酸配列を含む。さらに別の実施形態では、抗ＬＡＧ－３抗体分子は、各々がＵＳ２０１５／０２５９４２０の表１に開示されている、配列番号２８６のＶＨＣＤＲ１アミノ酸配列を含む。

いくつかの実施形態では、抗ＬＡＧ－３抗体は、ＢＭＳ－９８６０１６である。ＢＭＳ－９８６０１６（ＢＭＳ９８６０１６とも呼ばれる；Ｂｒｉｓｔｏｌ－ＭｙｅｒｓＳｑｕｉｂｂ）は、ＬＡＧ－３と結合するモノクローナル抗体である。ＢＭＳ－９８６０１６および他のヒト化抗ＬＡＧ－３抗体は、ＵＳ２０１１／０１５０８９２、ＷＯ２０１０／０１９５７０、およびＷＯ２０１４／００８２１８に開示されている。

いくつかの実施形態では、抗ＬＡＧ３抗体は、ＬＡＧ５２５である。ＬＡＧ５２５（ＩＭＰ７０１とも呼ばれる；Ｎｏｖａｒｔｉｓ）は、ＬＡＧ３と結合するモノクローナル抗体である。ＬＡＧ５２５および他のヒト化抗ＬＡＧ３抗体は、ＵＳ９，２４４，０５９およびＷＯ２００８／１３２６０１に開示されており、本明細書に開示される配列（またはそれと実質的に同一もしくは類似の配列、例えば、指定された配列と少なくとも８５％、９０％、９５％同一またはそれ以上の配列）を有する。

他の例示的な抗ＬＡＧ３抗体は、例えば、ＵＳ２０１１／１５０８９２およびＵＳ２０１８／０６６０５４に開示されている。

いくつかの実施形態では、抗ＬＡＧ－３抗体は、本発明のＩＬ－１５／ＲαＦｃ融合タンパク質と組み合わせて使用され得る。ＲｅｇｅｎｅｒｏｎによるＲＥＧＮ３７６７、ＴＳＲ－０３３（Ｔｅｓａｒｏ）、ＢＭＳ－９８６０１６（ＢＭＳ）、およびＳｙｍ０２２（Ｓｙｍｐｈｏｇｅｎ）を含む臨床開発中のいくつかの抗ＬＡＧ－３抗体がある。

いくつかの実施形態では、本明細書に記載されるＩＬ－１５／Ｒα Ｆｃ融合タンパク質は、ＬＡＧ３阻害剤（例えば、抗ＬＡＧ３抗体）と組み合わせて使用され得る。ある特定の実施形態では、本明細書に記載されるＩＬ－１５／ＲαＦｃ融合タンパク質（例えば、ＸＥＮＰ２４１１３、ＸＥＮＰ２４３０６、ＸＥＮＰ２３５５７、またはＸＥＮＰ２４０４５）は、抗ＬＡＧ３抗体と組み合わせて投与される。

いくつかの実施形態では、抗ＬＡＧ－３抗体は、これらに限定されないが、ＲｅｇｅｎｅｒｏｎによるＲＥＧＮ３７６７、ＴＳＲ－０３３（Ｔｅｓａｒｏ）、ＢＭＳ－９８６０１６（ＢＭＳ）、およびＳｙｍ０２２（Ｓｙｍｐｈｏｇｅｎ）を含むＸＥＮＰ２４３０６と組み合わせて使用され得る。

ＸＩＩ．併用療法
いくつかの態様では、本明細書に記載されるＩＬ－１５／Ｒα Ｆｃ融合タンパク質は、別の治療薬と組み合わせて投与される。本明細書で使用される場合、「組み合わせて」投与されるとは、対象の障害の苦痛の経過中に２つ（またはそれ以上）の異なる治療が対象に送達されること、例えば、２つ以上の治療が、対象が障害があると診断された後、および障害が治癒または排除される前、または他の理由で治療が中止される前に送達されることを意味する。いくつかの実施形態では、１つの治療の送達は、２つ目の送達が開始する時に依然として行われているため、投与に関して重複がある。これは、本明細書では「同時」または「同時送達」と時に呼ばれる。他の実施形態では、１つの治療の送達は、他の治療の送達が開始する前に終了する。いずれかの場合のいくつかの実施形態では、併用投与のため、治療はより効果的である。例えば、１つ目の治療の不在下で２つ目の治療が投与された場合、または類似の状況が１つ目の治療で見られる場合に見られるよりも、２つ目の治療はより効果的であり、例えば、２つ目の治療を少なくしても同等の効果が見られるか、または２つ目の治療が症状を大幅な程度に低減する。いくつかの実施形態では、送達は、症状、または障害に関連する他のパラメータの低減が、他の不在下で送達される１つの治療で観察されるものよりも大きいようなものである。２つの治療の効果は、部分的に相加的、完全に相加的、または相加的よりも大きい場合がある。送達は、送達された１つ目の治療の効果が、２つ目の治療が送達されたときに依然として検出可能であるようなものであり得る。

本明細書に記載されるＩＬ－１５／Ｒα Ｆｃ融合タンパク質（例えば、ＸＥＮＰ２４１１３、ＸＥＮＰ２４３０６、ＸＥＮＰ２３５５７、またはＸＥＮＰ２４０４５）および少なくとも１つの追加の治療薬は、同時に、同じもしくは別々の組成物で、または逐次的に投与され得る。逐次的投与の場合、本明細書に記載されるＩＬ－１５／Ｒα Ｆｃ融合タンパク質（例えば、ＸＥＮＰ２４１１３、ＸＥＮＰ２４３０６、ＸＥＮＰ２３５５７、またはＸＥＮＰ２４０４５）を最初に投与し、追加の薬剤を２回目に投与するか、または投与順序を逆にすることができる。

本明細書に記載されるＩＬ－１５／Ｒα Ｆｃ融合タンパク質（例えば、ＸＥＮＰ２４１１３、ＸＥＮＰ２４３０６、ＸＥＮＰ２３５５７、またはＸＥＮＰ２４０４５）および／または他の治療薬、手順または様式は、活動性障害の期間中、または寛解期間もしくはより低い活動性疾患の期間中に投与され得る。ＩＬ－１５／Ｒα Ｆｃ融合タンパク質（例えば、ＸＥＮＰ２４１１３、ＸＥＮＰ２４３０６、ＸＥＮＰ２３５５７、またはＸＥＮＰ２４０４５）は、他の治療の前に、治療と同時に、治療後に、または障害の寛解中に投与され得る。

組み合わせて投与する場合、ＩＬ－１５／Ｒα Ｆｃ融合タンパク質（ＸＥＮＰ２４１１３、ＸＥＮＰ２４３０６、ＸＥＮＰ２３５５７、またはＸＥＮＰ２４０４５）および追加の薬剤（例えば、２つ目または３つ目の薬剤）、または全てを、例えば、単剤療法として個別に使用される各薬剤の量または投与量よりも低いかまたは同じである量または用量で投与され得る。いくつかの実施形態では、ＩＬ－１５／Ｒα Ｆｃ融合タンパク質（例えば、ＸＥＮＰ２４１１３、ＸＥＮＰ２４３０６、ＸＥＮＰ２３５５７、またはＸＥＮＰ２４０４５）、追加の薬剤（例えば、２つ目または３つ目の薬剤）、または全ての投与される量または投与量は、例えば、単剤療法として個別に使用される各薬剤の量または投与量より低い（例えば、少なくとも２０％、少なくとも３０％、少なくとも４０％、または少なくとも５０％）。他の実施形態では、ＩＬ－１５／Ｒα Ｆｃ融合タンパク質（例えば、ＸＥＮＰ２４１１３、ＸＥＮＰ２４３０６、ＸＥＮＰ２３５５７、またはＸＥＮＰ２４０４５）、追加の薬剤（例えば、２つ目または３つ目の薬剤）、または全ての量または投与量は、同じ治療効果を達成するために必要な、例えば、単剤療法として個別に使用される各薬剤の量または投与量より低い（例えば、少なくとも２０％、少なくとも３０％、少なくとも４０％、または少なくとも５０％より低い）。

さらなる態様では、本明細書に記載されるＩＬ－１５／Ｒα Ｆｃ融合タンパク質（例えば、ＸＥＮＰ２４１１３、ＸＥＮＰ２４３０６、ＸＥＮＰ２３５５７、またはＸＥＮＰ２４０４５）は、化学療法、放射線、シクロスポリン、アザチオプリン、メトトレキサート、ミコフェノール酸塩、およびＦＫ５０６などの免疫抑制剤、チェックポイント阻害剤に対する抗体、またはＣＡＭＰＡＴＨ、他の抗体療法、シトキサン、フルダラビン、シクロスポリン、ＦＫ５０６、ラパマイシン、ミコフェノール酸、ステロイド、ＦＲ９０１６５、サイトカイン、および放射線などの他の免疫抑制剤、Ｉｚｕｍｏｔｏｅｔａｌ．２００８ＪＮｅｕｒｏｓｕｒｇ１０８：９６３－９７１に記載されているようなペプチドワクチンと組み合わせた治療計画で使用することができる。

ある特定の例では、本発明の化合物は、他の抗癌剤、抗アレルギー剤、抗悪心剤（または制吐剤）、鎮痛剤、細胞保護剤、およびそれらの組み合わせなどの他の治療剤と組み合わされる。

一実施形態では、本明細書に記載されるＩＬ－１５／Ｒα Ｆｃ融合タンパク質（例えば、ＸＥＮＰ２４１１３、ＸＥＮＰ２４３０６、ＸＥＮＰ２３５５７、またはＸＥＮＰ２４０４５）は、化学療法剤と組み合わせて使用することができる。例示的な化学療法剤には、アントラサイクリン（例えば、イダルビシン、ダウノルビシン、ドキソルビシン（例えば、リポソームドキソルビシン））、アントラセンジオン誘導体（例えば、ミトキサントロン）、ビンカアルカロイド（例えば、ビンブラスチン、ビンクリスチン、ビンデシン、ビンノレルビン）、アルキル化剤（例えば、シクロホスファミド、ダカルバジン、メルファラン、イホスファミド、テモゾロミド）、免疫細胞抗体（例えば、アレムツザマブ、ゲムツズマブ、リツキシマブ、オファツムマブ、トシツモマブ、ブレンツキシマブ）、代謝拮抗剤（例えば、葉酸拮抗薬、シタラビン、ピリミジン類似体、プリン類似体、およびアデノシンデアミナーゼ阻害剤（例えば、フルダラビン）を含む）、ｍＴＯＲ阻害剤、ＴＮＦＲグルココルチコイド誘発ＴＮＦＲ関連タンパク質（ＧＩＴＲ）アゴニスト、プロテアソーム阻害剤（例えば、アクラシノマイシンＡ、グリオトキシン、またはボルテゾミブ）、サリドマイドもしくはサリドマイド誘導体（例えば、レナリドマイド）などの免疫調節剤、イブルチニブ（例えば、イムブルビカ）などのキナーゼ阻害剤、コルチコステロイド（例えば、デキサメタゾン、プレドニゾン）、ならびにＣＶＰ（シクロホスファミド、ビンクリスチン、およびプレドニゾンの組み合わせ）、エトポシド（例えば、ＶＰ－１６）ありまたはなしのＣＨＯＰ（シクロホスファミド、ヒドロキシダウノルビシン、Ｏｎｃｏｖｉｎ（登録商標）（ビンクリスチン）、およびプレドニゾンの組み合わせ）、シクロホスファミドおよびペントスタチンの組み合わせ、クロラムブシルおよびプレドニゾンの組み合わせ、フルダラビンおよびシクロホスファミドの組み合わせ、または塩酸メクロレタミン（例えば、Ｍｕｓｔａｒｇｅｎ）、ドキソルビシン（Ａｄｒｉａｍｙｃｉｎ（登録商標））、メトトレキサート、オキサリプラチン、もしくはシタラビン（ａｒａ－Ｃ）などの別の薬剤が含まれる。

併用療法での使用が検討されている一般的な化学療法剤には、アナストロゾール（Ａｒｉｍｉｄｅｘ（登録商標））、ビカルタミド（Ｃａｓｏｄｅｘ（登録商標））、硫酸ブレオマイシン（Ｂｌｅｎｏｘａｎｅ（登録商標））、ブスルファン（Ｍｙｌｅｒａｎ（登録商標））、ブスルファン注射（Ｂｕｓｕｌｆｅｘ（登録商標））、カペシタビン（Ｘｅｌｏｄａ（登録商標））、Ｎ４－ペントキシカルボニル－５－デオキシ－５－フルオロシチジン、カルボプラチン（Ｐａｒａｐｌａｔｉｎ（登録商標））、カルムスチン（ＢｉＣＮＵ（登録商標））、クロラムブシル（Ｌｅｕｋｅｒａｎ（登録商標））、シスプラチン（Ｐｌａｔｉｎｏｌ（登録商標））、クラドリビン（Ｌｅｕｓｔａｔｉｎ（登録商標））、シクロホスファミド（Ｃｙｔｏｘａｎ（登録商標）またはＮｅｏｓａｒ（登録商標））、シタラビン、シトシンアラビノシド（Ｃｙｔｏｓａｒ－Ｕ（登録商標））、シタラビンリポソーム注射（ＤｅｐｏＣｙｔ（登録商標））、ダカルバジン（ＤＴＩＣ－Ｄｏｍｅ（登録商標））、ダクチノマイシン（アクチノマイシンＤ、コスメガン）、塩酸ダウノルビシン（Ｃｅｒｕｂｉｄｉｎｅ（登録商標））、ダウノルビシンクエン酸リポソーム注射（ＤａｕｎｏＸｏｍｅ（登録商標））、デキサメタゾン、ドセタキセル（Ｔａｘｏｔｅｒｅ（登録商標））、塩酸ドキソルビシン（Ａｄｒｉａｍｙｃｉｎ（登録商標）、Ｒｕｂｅｘ（登録商標））、エトポシド（Ｖｅｐｅｓｉｄ（登録商標））、リン酸フルダラビン（Ｆｌｕｄａｒａ（登録商標））、５－フルオロウラシル（Ａｄｒｕｃｉｌ（登録商標）、Ｅｆｕｄｅｘ（登録商標））、フルタミド（Ｅｕｌｅｘｉｎ（登録商標））、テザシチビン、ゲムシタビン（ジフルオロデオキシシチジン）、ヒドロキシ尿素（Ｈｙｄｒｅａ（登録商標））、イダルビシン（Ｉｄａｍｙｃｉｎ（登録商標））、イホスファミド（ＩＦＥＸ（登録商標））、イリノテカン（Ｃａｍｐｔｏｓａｒ（登録商標））、Ｌ－アスパラギナーゼ（ＥＬＳＰＡＲ（登録商標））、ロイコボリンカルシウム、メルファラン（Ａｌｋｅｒａｎ（登録商標））、６－メルカプトプリン（Ｐｕｒｉｎｅｔｈｏｌ（登録商標））、メトトレキサート（Ｆｏｌｅｘ（登録商標））、ミトキサントロン（Ｎｏｖａｎｔｒｏｎｅ（登録商標））、マイロターグ、パクリタキセル（Ｔａｘｏｌ（登録商標））、フェニックス（Ｙｔｔｒｉｕｍ９０／ＭＸ－ＤＴＰＡ）、ペントスタチン、カルムスチンインプラントを含むポリフェプロザン２０（Ｇｌｉａｄｅｌ（登録商標））、クエン酸タモキシフェン（Ｎｏｌｖａｄｅｘ（登録商標））、テニポシド（Ｖｕｍｏｎ（登録商標））、６－チオグアニン、チオテパ、チラパザミン（Ｔｉｒａｚｏｎｅ（登録商標））、注射用塩酸トポテカン（Ｈｙｃａｍｐｔｉｎ（登録商標））、ビンブラスチン（Ｖｅｌｂａｎ（登録商標））、ビンクリスチン（Ｏｎｃｏｖｉｎ（登録商標））、およびビノレルビン（Ｎａｖｅｌｂｉｎｅ（登録商標））が含まれる。

ＸＩＩＩ．治療
一旦作製されると、本発明の組成物は、一般に本発明のヘテロ二量体Ｆｃ融合タンパク質の結合によって、一般にＴ細胞活性化を促進すること（例えば、Ｔ細胞はもはや抑制されない）によって癌を治療することによって、いくつかの腫瘍学用途に使用される。

したがって、本発明のヘテロ二量体組成物は、これに限定されないが、転移性癌を含むこれらの癌の治療において用途を見出す。

Ａ．インビボ投与のためのヘテロ二量体タンパク質組成物
本発明に従って使用される抗体の製剤は、所望の純度の抗体を任意の薬学的に許容される担体、賦形剤、または安定化剤（Ｒｅｍｉｎｇｔｏｎ’ｓＰｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌＳｃｉｅｎｃｅｓ１６ｔｈｅｄｉｔｉｏｎ，Ｏｓｏｌ，Ａ．Ｅｄ．［１９８０］に一般に概説されるような）と混合することによって、保存のために、凍結乾燥製剤または水溶液の形態で調製される。許容される担体、緩衝剤、賦形剤、または安定剤は、使用される投薬量および濃度において、レシピエントに対して非毒性でありリン酸、クエン酸、および他の有機酸などの緩衝液；アスコルビン酸およびメチオニンを含む抗酸化剤；防腐剤（塩化オクタデシルジメチルベンジルアンモニウム；塩化ヘキサメトニウム；塩化ベンザルコニウム、塩化ベンゼトニウム；フェノール、ブチル、またはベンジルアルコール；メチルまたはプロピルパラベンなどのアルキルパラベン；カテコール；レゾルシノール；シクロヘキサノール；３－ペンタノール；およびｍ－クレゾール）；低分子量（約１０残基未満）ポリペプチド；血清アルブミン、ゼラチン、または免疫グロブリンなどのタンパク質；ポリビニルピロリドンなどの親水性ポリマー；グリシン、グルタミン、アスパラギン、ヒスチジン、アルギニン、リジンなどのアミノ酸；単糖類、二糖類、およびグルコース、マンノース、またはデキストリンを含む他の炭水化物；ＥＤＴＡなどのキレート剤；スクロース、マンニトール、トレハロースまたはソルビトールなどの糖類；ナトリウムなどの塩形成対イオン；金属錯体（例えば、Ｚｎ－タンパク質複合体）；および／またはＴＷＥＥＮ（商標）、ＰＬＵＲＯＮＩＣＳ（商標）またはポリエチレングリコール（ＰＥＧ）などの非イオン性界面活性剤を含む。

Ｂ．投与様式
本発明のヘテロ二量体タンパク質および化学療法剤は、ボーラスとしての静脈内投与またはある期間にわたる持続注入などの既知の方法に従って対象に投与される。

Ｃ．治療様式
本発明の方法において、治療は、疾患または状態に関して肯定的な治療応答を提供するために使用される。「肯定的な治療応答」は、疾患もしくは状態の改善、および／または疾患または状態に関連する症状の改善を意図する。例えば、肯定的な治療応答は、疾患における以下の改善のうちの１つ以上を指す：（１）新生細胞の数の低減、（２）新生細胞死の増加、（３）新生細胞の生存の阻害、（５）腫瘍成長の阻害（すなわち、ある程度の減速、好ましくは停止）、（６）患者生存率の増加、および（７）疾患または状態に関連する１つ以上の症状からのいくらかの解放。

任意の所与の疾患または状態における肯定的な治療応答は、その疾患または状態に特有の標準化された応答基準によって決定され得る。腫瘍応答は、磁気共鳴画像（ＭＲＩ）スキャン、Ｘ線撮影、コンピューター断層撮影（ＣＴ）スキャン、骨スキャン撮影、内視鏡検査、ならびに骨髄穿刺（ＢＭＡ）および循環中の腫瘍細胞の計数を含む腫瘍生検サンプリングなどのスクリーニング技法を使用して、腫瘍形態（例えば、全身腫瘍組織量、腫瘍サイズなど）の変化について評価され得る。

これらの肯定的な治療応答に加えて、治療を受けている対象は、疾患に関連する症状の改善の有益な効果を経験し得る。

本発明に従う治療には、使用される医薬品の「治療有効量」が含まれる。「治療有効量」は、所望の治療結果を達成するために、必要な投与量および期間で有効な量を指す。

治療有効量は、個体の疾患状態、年齢、性別、および体重、ならびに個体において所望の応答を誘発する医薬品の能力などの要因によって異なり得る。治療有効量はまた、タンパク質またはタンパク質部分のいずれの毒性または有害な効果よりも治療上有益な効果が勝る量である。

腫瘍療法のための「治療有効量」は、疾患の進行を安定化するその能力によっても測定することができる。癌を阻害する化合物の能力は、ヒト腫瘍における有効性を予測する動物モデル系において評価してもよい。

あるいは、組成物のこの特性は、当業者に知られているインビトロアッセイによって、化合物が細胞成長を阻害するか、またはアポトーシスを誘導する能力を検査することによって評価してもよい。治療有効量の治療用化合物は、腫瘍サイズを減少させるか、さもなければ対象の症状を軽減し得る。当業者であれば、対象のサイズ、対象の症状の重症度、および選択される特定の組成物または投与経路などの要因に基づいて、そのような量を決定することができるであろう。

投与レジメンは、最適な所望の応答（例えば、治療応答）を提供するように調節される。例えば、単回のボーラスを投与してもよく、いくつかの分割用量を経時的に投与してもよく、または治療状況の緊急性によって示されるように用量を比例して低減または増加させてもよい。非経口組成物は、投与の容易性および投与量の均一性のために、単位剤形で処方され得る。本明細書で使用される単位剤形は、治療される対象のための単一投与量として好適な物理的に別個の単位を指し、各単位は、必要とされる薬学的担体に関連して所望の治療効果を生じるように計算された所定量の活性化合物を含む。

本発明の単位剤形形態の仕様は、（ａ）活性化合物の固有の特徴および達成すべき特定の治療効果、ならびに（ｂ）個体における感受性の治療に対してそのような活性化合物を調合する分野に付いて回る制限に影響され、またそれらに直接的に依存する。

本発明で使用されるヘテロ二量体タンパク質の効率的な投与量および投与計画は、治療される疾患または状態に依存し、当業者によって決定され得る。

本発明で使用されるヘテロ二量体タンパク質の治療有効量の例示的な非限定的な範囲は、約０．１～１００ｍｇ／ｋｇである。

全ての引用文献は、本明細書にそれらの全体が参照により明示的に組み込まれる。

本発明の特定の実施形態を例示の目的で上に説明してきたが、添付の特許請求の範囲に記載されるように本発明から逸脱することなく詳細の多数の変形をなし得ることが当業者には理解されよう。

本発明を説明するために実施例を以下に提供する。これらの実施例は、本発明を任意の特定の用途または動作理論に限定することを意味するものではない。本発明で議論される全ての定常領域位置について、付番は、Ｋａｂａｔ（Ｋａｂａｔｅｔａｌ．，１９９１，ＳｅｑｕｅｎｃｅｓｏｆＰｒｏｔｅｉｎｓｏｆＩｍｍｕｎｏｌｏｇｉｃａｌＩｎｔｅｒｅｓｔ，５ｔｈＥｄ．，ＵｎｉｔｅｄＳｔａｔｅｓＰｕｂｌｉｃＨｅａｌｔｈＳｅｒｖｉｃｅ，ＮａｔｉｏｎａｌＩｎｓｔｉｔｕｔｅｓｏｆＨｅａｌｔｈ，Ｂｅｔｈｅｓｄａ、参照により全体が組み込まれる）と同様のＥＵインデックスに従う。抗体の技術分野の当業者は、この規則が免疫グロブリン配列の特定の領域における非連続的な付番からなり、免疫グロブリンファミリーにおける保存された位置への標準的な基準を可能にすることを理解するであろう。したがって、ＥＵインデックスによって定義されるような任意の所与の免疫グロブリンの位置は、必ずしもその連続配列に対応しない。

一般的および具体的な科学技術は、米国特許出願公開第２０１５／０３０７６２９号、第２０１４／０２８８２７５号、およびＷＯ２０１４／１４５８０６に概説されており、それらの全ては、特にその中に概説されている技術に関して、それらの全体において参照により明示的に組み込まれる。

ＸＩＶ．実施例１：ＩＬ－１５／ＩＬ－１５Ｒα（スシ）Ｆｃ融合タンパク質
ＩＬ－１５／ＩＬ－１５Ｒαヘテロ二量体の短い半減期に対処するために、生成の促進および複合体のＦｃＲｎ媒介リサイクルの促進および半減期の延長を目的として、Ｆｃ融合体としてＩＬ－１５／ＩＬ－１５Ｒα（スシ）複合体（以下、ＩＬ－１５／Ｒα－Ｆｃ融合体と呼ばれる）を生成した。

Ａ．１Ａ：ＩＬ－１５／Ｒα－Ｆｃ融合タンパク質の操作
ＩＬ－１５またはＩＬ－１５Ｒαスシドメインをコードするプラスミドを、標準的な遺伝子合成、続いてＦｃ融合パートナー（例えば、図８Ａ～８Ｄに示される定常領域）を含むｐＴＴ５発現ベクターへのサブクローニングによって構築した。例示的なＩＬ－１５／Ｒα－Ｆｃ融合タンパク質フォーマットの漫画の概略図を図９Ａ～９Ｇに示す。

ＩＬ－１５Ｒαヘテロ二量体Ｆｃ融合体または「ＩＬ－１５／Ｒα－ヘテロＦｃ」フォーマットは、ヘテロ二量体Ｆｃの一方の側に組み換え的に融合されたＩＬ－１５、およびヘテロ二量体Ｆｃの他方の側に組み換え的に融合されたＩＬ－１５Ｒαスシドメインを含む（図９Ａ）。ＩＬ－１５およびＩＬ－１５Ｒαは、それらのそれぞれの、Ｆｃ領域のＣ末端とＮ末端との間に可変長リンカー（図７を参照されたい）を有し得る。このフォーマットの例示的なタンパク質は、ＸＥＮＰ２０８１８およびＸＥＮＰ２１４７５を含み、それらの配列を図１０に示す（表２も参照されたい）。ＸＥＮＰ２０８１９、ＸＥＮＰ２１４７１、ＸＥＮＰ２１４７２、ＸＥＮＰ２１４７３、ＸＥＮＰ２１４７４、ＸＥＮＰ２１４７６、ＸＥＮＰ２１４７７を含む、このフォーマットの追加のタンパク質の配列は、参照により本明細書に組み込まれる、それぞれＷＯ２０１８／０７１９１９の図１０４Ａ～１０４Ｄに、それぞれ配列番号４１８～４２３、４２４～４２９、４３０～４３５、４３６～４４１、４４２～４４７、４５４～４５９、および４６０～４６５として示されている。

一本鎖ＩＬ－１５／Ｒα－Ｆｃ融合体または「ｓｃＩＬ－１５／Ｒα－Ｆｃ」フォーマットは、可変長リンカーによってＩＬ－１５に融合しているＩＬ－１５Ｒαスシドメインを含み（「一本鎖」ＩＬ－１５／ＩＬ－１５Ｒα複合体または「ｓｃＩＬ－１５／Ｒα」と呼ばれる）、これは次いでヘテロ二量体Ｆｃ領域のＮ末端に融合され、分子の反対側は「Ｆｃのみ」または「空のＦｃ」ヘテロ二量体Ｆｃである（図９Ｂ）。例示的なリンカーの配列を図７に示す。このフォーマットの例示的なタンパク質はＸＥＮＰ２１４７８であり、その配列は図１１に示されている（表３も参照されたい）。ＸＥＮＰ２１９９３、ＸＥＮＰ２１９９４、ＸＥＮＰ２１９９５、ＸＥＮＰ２３１７４、ＸＥＮＰ２４４７７、およびＸＥＮＰ２４４８０を含むこのフォーマットの追加のタンパク質の配列は、それぞれＷＯ２０１８／０７１９１９の図１０４Ｇ、１０４Ｈ、１０４ＡＧ、１０４ＡＵ、および１０４ＡＶに、それぞれ配列番号５１４～５１８、５１９～５２３、５２４～５２８、８４９～８５３、１０６３～１０６７、および１０７８～１０８２として示されている。

非共有結合のＩＬ－１５／Ｒα－Ｆｃ融合体または「ｎｃＩＬ－１５／Ｒα－Ｆｃ」フォーマットは、ヘテロ二量体Ｆｃ領域に融合しているＩＬ－１５Ｒαスシドメインを含むが、一方で、ＩＬ－１５は、別々にトランスフェクトされて非共有結合のＩＬ－１５／ＩＬ－１５Ｒα複合体が形成され、分子の反対側は「Ｆｃのみ」または「空のＦｃ」ヘテロ二量体Ｆｃである（図９Ｃ）。このフォーマットの例示的なタンパク質には、ＸＥＮＰ２２６３４、ＸＥＮＰ２２６３５、およびＸＥＮＰ２２６３６が含まれ、それらの配列は図１２Ａ～１２Ｂに示されている。

二価非共有結合のＩＬ－１５／Ｒα－Ｆｃ融合体または「二価ｎｃＩＬ－１５／Ｒα－Ｆｃ」フォーマット（図９Ｄ）はホモ二量体Ｆｃ領域のＮ末端に融合されたＩＬ－１５Ｒα（スシ）を含み、一方、ＩＬ－１５は別々にトランスフェクトされて非共有結合のＩＬ－１５／Ｒα複合体が形成される。このフォーマットの例示的なタンパク質はＸＥＮＰ２１９７８であり、その配列は図１３に示されている。ＸＥＮＰ２１９７９を含むこのフォーマットの追加のタンパク質の配列は、参照により本明細書に組み込まれる、ＷＯ２０１８／０７１９１９の図１０４Ｅに、配列番号４８０～４８３として示されている。

二価一本鎖ＩＬ－１５／Ｒα－Ｆｃ融合体または「二価ｓｃＩＬ－１５／Ｒα－Ｆｃ」フォーマット（図９Ｅ）は、可変長リンカーによってＩＬ－１５Ｒα（スシ）に融合されたＩＬ－１５を含み（「一本鎖」ＩＬ－１５／ＩＬ－１５Ｒα（スシ）複合体または「ｓｃＩＬ－１５／Ｒα」と呼ばれる）、これは次いでホモ二量体Ｆｃ領域のＮ末端に融合される。例示的なリンカーの配列を図７に示す。このフォーマットの例示的なタンパク質の配列を図１４に示す。

Ｆｃ非共有結合のＩＬ－１５／Ｒα融合体または「Ｆｃ－ｎｃＩＬ－１５／Ｒα」フォーマット（図９Ｅ）はヘテロ二量体Ｆｃ領域のＣ末端に融合されたＩＬ－１５Ｒα（スシ）を含み、一方、ＩＬ－１５は別々にトランスフェクトされて非共有結合のＩＬ－１５／Ｒα複合体が形成され、分子の反対側は「Ｆｃのみ」または「空のＦｃ」である。このフォーマットの例示的なタンパク質はＸＥＮＰ２２６３７であり、その配列は図１５に示されている。ＸＥＮＰ２２６３８を含むこのフォーマットの追加のタンパク質の配列は、参照により本明細書に組み込まれる、ＷＯ２０１８／０７１９１９の図１０４Ｔに、配列番号６６８～６７２として示されている。

Ｆｃ－一本鎖ＩＬ－１５／Ｒα融合体または「Ｆｃ－ｓｃＩＬ－１５／Ｒα」フォーマット（図９Ｇ）は、可変長リンカーによってＩＬ－１５Ｒα（スシ）に融合されたＩＬ－１５を含み（「ｓｃＩＬ－１５／Ｒα」）、これは次いでヘテロ二量体Ｆｃ領域のＣ末端に融合され、分子の反対側は「Ｆｃのみ」または「空のＦｃ」である。例示的なリンカーの配列を図７に示す。このフォーマットの例示的なタンパク質の配列を図１６に示す。

タンパク質は、ＨＥＫ２９３Ｅ細胞における一過性トランスフェクションによって生成され、プロテインＡクロマトグラフィー（ＧＥＨｅａｌｔｈｃａｒｅ）および陰イオン交換クロマトグラフィー（５０ｍＭＴｒｉｓｐＨ８．５および１ＭＮａＣｌを含む５０ｍＭＴｒｉｓｐＨ８．５の５～４０％勾配を有するＨｉＴｒａｐＱ５ｍＬカラム）を含む二段階精製プロセスによって精製した。

Ｂ．１Ｂ：純度および均質性についてのＩＬ－１５／Ｒα－Ｆｃ融合タンパク質の特徴付け
上に記載されるようないくつかのフォーマットで生成されたＩＬ－１５／Ｒα－Ｆｃ融合タンパク質を、以下に一般的に記載されるように、純度および均質性についてサイズ排除クロマトグラフィー（ＳＥＣ）およびキャピラリー等電点電気泳動（ＣＥＦ）によって特徴付けした。

タンパク質をＳＥＣを用いて分析して、それらのサイズ（すなわち流体力学的容積）を測定し、精製された試料の非変性の挙動を決定した。分析は、Ａｇｉｌｅｎｔ１２００高速液体クロマトグラフィー（ＨＰＬＣ）システムで実施した。４℃で２５分間、移動相として１×ＰＢＳ、ｐＨ７．４を１．０ｍＬ／分で用いて、２８０ｎＭのＵＶ検出波長で、Ｓｕｐｅｒｄｅｘ（商標）２００１０／３００ＧＬカラム（ＧＥＨｅａｌｔｈｃａｒｅＬｉｆｅＳｃｉｅｎｃｅｓ）に試料を注入した。ＡｇｉｌｅｎｔＯｐｅｎＬａｂクロマトグラフィーデータシステム（ＣＤＳ）ＣｈｅｍＳｔａｔｉｏｎＥｄｉｔｉｏｎＡＩＣバージョンＣ．０１．０７を使用して分析を行った。選択したＩＬ－１５／Ｒα－Ｆｃ融合タンパク質のクロマトグラムを図１７Ｂ、１８Ｂ、および１９Ｂに示す。

製造者の使用説明書を使用して実施したＰｒｏｔｅｉｎＥｘｐｒｅｓｓＡｓｓａｙＬａｂＣｈｉｐおよびＰｒｏｔｅｉｎＥｘｐｒｅｓｓＡｓｓａｙＲｅａｇｅｎｔＫｉｔを使用するＬａｂＣｈｉｐＧＸＩＩＴｏｕｃｈＨＴ（ＰｅｒｋｉｎＥｌｍｅｒ、Ｗａｌｔｈａｍ，Ｍａｓｓ）を使用するＣＥＦによってタンパク質を電気泳動的に分析した。試料は、一方を還元下（ジチオトレイトールを用いて）、および他方を非還元条件下で二重に試験した。選択したＩＬ－１５／Ｒα－Ｆｃ融合タンパク質のゲル画像を図１７Ｃ、１８Ｃ、および１９Ｃに示す。

融合タンパク質の各々について、ピークの対称性および他の種の比較的少ない集団は、様々なフォーマットがロバストであったことを示す。

Ｃ．１Ｃ：親和性および安定性についてのＩＬ－１５／Ｒα－Ｆｃ融合タンパク質の分析
ＩＬ－１５／Ｒα－Ｆｃ融合タンパク質の親和性スクリーニングは、Ｏｃｔｅｔ、ＢｉｏＬａｙｅｒＩｎｔｅｒｆｅｒｏｍｅｔｒｙ（ＢＬＩ）に基づく方法を用いて行った。Ｏｃｔｅｔの実験ステップは、一般的に以下を含んでいた：固定化（バイオセンサー上へのリガンドまたは試験物質の捕捉）、会合（対応する試験物質またはリガンドの連続希釈物を含むウェルへのリガンドまたは試験物質をコーティングしたバイオセンサーの浸漬）、試験物質の親和性を決定するための解離（緩衝液を含むウェルにバイオセンサーを戻すこと）。緩衝液のみを含む基準ウェルもまた、データ処理中のバックグラウンド補正のための方法に含まれた。特に、抗ヒトＦｃ（ＡＨＣ）バイオセンサーを使用して試験物質を捕捉し、次いでＫＤ決定のために複数濃度のＩＬ－２Ｒβ（Ｒ＆ＤＳｙｓｔｅｍｓ、Ｍｉｎｎｅａｐｏｌｉｓ，Ｍｉｎｎ．）に浸漬した。親和性の結果および対応するセンサーグラムを図１７Ｄ、１８Ｄ、および１９Ｄに示す。３つの構築物の各々は、ＩＬ－１Ｒβに対して高い親和性結合（３～８ｎＭ）を示した。

ＩＬ－１５／Ｒα－Ｆｃ融合タンパク質の安定性を、示差走査蛍光光度法（ＤＳＦ）を用いて評価した。ＤＳＦ実験は、Ｂｉｏ－ＲａｄＣＦＸＣｏｎｎｅｃｔＲｅａｌ－ＴｉｍｅＰＣＲＤｅｔｅｃｔｉｏｎＳｙｓｔｅｍを用いて行った。タンパク質をＳＹＰＲＯオレンジ蛍光色素と混合し、ＰＢＳで０．２ｍｇ／ｍＬに希釈した。ＳＹＰＲＯオレンジの最終濃度は１０倍であった。２５℃で最初の１０分間のインキュベーション期間の後、タンパク質を１℃／分の加熱速度で２５～９５℃に加熱した溶融温度（Ｔｍ）は機器のソフトウェアを用いて計算した。安定性の結果および対応する融解曲線を図１７Ｅ、１８Ｅ、および１９Ｅに示す。構築物の各々は、Ｔｍが約６８℃で良好な全体的な安定性を示した。

Ｄ．１Ｄ：細胞増殖アッセイにおけるＩＬ－１５／Ｒα－Ｆｃ融合タンパク質の活性
上に記載されるような様々なフォーマットのＩＬ－１５／Ｒα－Ｆｃ融合タンパク質を、細胞増殖アッセイで試験した。ヒトＰＢＭＣを示された濃度で試験物質を用いて処理した。処理の４日後、ＰＢＭＣを抗ＣＤ８－ＦＩＴＣ（ＲＰＡ－Ｔ８）、抗ＣＤ４－ＰｅｒＣＰ／Ｃｙ５．５（ＯＫＴ４）、抗ＣＤ２７－ＰＥ（Ｍ－Ｔ２７１）、抗ＣＤ５６－ＢＶ４２１（５．１Ｈ１１）、抗ＣＤ１６－ＢＶ４２１（３Ｇ８）、および抗ＣＤ４５ＲＡ－ＢＶ６０５（Ｈｉ１００）で染色し、以下の細胞型についてゲーティングした：ＣＤ４＋Ｔ細胞、ＣＤ８＋Ｔ細胞、およびＮＫ細胞（ＣＤ５６＋／ＣＤ１６＋）。Ｋｉ６７は細胞増殖と厳密に関連するタンパク質であり、細胞内Ｋｉ６７についての染色は抗Ｋｉ６７－ＡＰＣ（Ｋｉ－６７）およびＦｏｘｐ３／転写因子染色緩衝液セット（ＴｈｅｒｍｏＦｉｓｈｅｒＳｃｉｅｎｔｉｆｉｃ、Ｗａｌｔｈａｍ，Ｍａｓｓ）を使用して行った。上述の細胞型に対するＫｉ６７の割合は、ＦＡＣＳを使用して測定した（図２０Ａ～２０Ｃおよび図２１Ａ～２１Ｃに示す）。

様々なＩＬ－１５／Ｒα－Ｆｃ融合タンパク質は、ＣＤ８＋Ｔ細胞およびＮＫ細胞の強い増殖を誘導した。特に、増殖活性の差異は、ＩＬ－１５－Ｆｃ側のリンカーの長さに依存していた。特に、ＸＥＮＰ２１４７１、ＸＥＮＰ２１４７４、およびＸＥＮＰ２１４７５を含む、リンカーを有さない（ヒンジのみ）構築物は、より弱い増殖活性を示した。

Ｅ．１Ｅ：ＳＥＢ刺激ＰＢＭＣアッセイにおけるＩＬ－１５／Ｒα－Ｆｃ融合タンパク質の活性
上に記載されるように、ＩＬ－１５／Ｒαヘテロ二量体はＴ細胞を強力に活性化することができる。上述に記載されるような様々なフォーマットのＩＬ－１５／Ｒα－Ｆｃ融合タンパク質を、ＳＥＢ刺激ＰＢＭＣアッセイで試験した。ブドウ球菌エンテロトキシンＢ（ＳＥＢ）は、Ｔ細胞受容体（ＴＣＲ）を介した活性化によって達成されるのと同様にＴ細胞の活性化および増殖を引き起こす超抗原である。ＳＥＢを用いたヒトＰＢＭＣの刺激は、Ｔ細胞活性化および増殖をアッセイするための一般的な方法である。

複数のドナーからのヒトＰＢＭＣを、２０μｇ／ｍＬの様々なＩＬ－１５／Ｒα－Ｆｃ融合タンパク質または対照（ＰＢＳ、アイソタイプ対照、および二価抗ＰＤ－１抗体）と組み合わせて１０ｎｇ／ｍＬのＳＥＢで７２時間刺激した。処理後、上清を回収してＩＬ－２についてアッセイし、そのデータを図２２に示す。データは、ＩＬ－１５／Ｒα－Ｆｃ融合タンパク質が、ＰＢＳおよびアイソタイプ対照よりもＩＬ－２分泌を増強したことを明らかに示す。特に、いくつかのＩＬ－１５／Ｒα－Ｆｃ融合タンパク質は、抗ＰＤ－１抗体と同等またはそれ以上の活性を有する。

Ｆ．１Ｆ：ＩＬ－１５／Ｒα－Ｆｃ融合タンパク質は、ヒトＰＢＭＣを移植ＮＳＧマウスにおける生着および疾患活動性を増強する。
ＩＬ－１５／Ｒα－Ｆｃ融合タンパク質ＸＥＮＰ２０８１８を、雌のＮＳＧ（ＮＯＤ－ＳＣＩＤ－ガンマ）免疫不全マウスにおいて実施された移植片対宿主病（ＧＶＨＤ）モデルにおいて評価した。ＮＳＧマウスにヒトＰＢＭＣを注射したとき、ヒトＰＢＭＣはマウス細胞に対して自己免疫応答を引き起こす。ヒトＰＢＭＣ、続いてＩＬ－１５／Ｒα－Ｆｃ融合タンパク質を注射したＮＳＧマウスの処置は、移植されたＴ細胞の増殖を増強する。

１０００万のヒトＰＢＭＣを、０日目にＩＶ－ＯＳＰを介してＮＳＧマウスに移植し、続いてＸＥＮＰ２０８１８（１日目に１ｍｇ／ｋｇ、次いでその後は毎週）および組換えＩＬ－１５（Ｂｉｏｌｅｇｅｎｄ、１日目に０．１７ｍｇ／ｋｇ、次いでその後は毎週）を投与した。生存曲線を図２３に示す。データは、ＩＬ－１５／Ｒα－Ｆｃ融合タンパク質を投与されたマウスが、組換えＩＬ－１５を投与されたマウス（１４日目まで全て生存）と比較して急速な罹患率および死亡率（１０日目までに全て死亡）を実証したことを示す。これはおそらくＩＬ－１５／Ｒα－Ｆｃ融合タンパク質で予測された、より長い半減期によるものである。

別の実験では、０日目にＩＶ－ＯＳＰを介して１０００万のヒトＰＢＭＣをＮＳＧマウスに移植し、続いて１日目にＸＥＮＰ２０８１８（１ｍｇ／ｋｇ、０．３ｍｇ／ｋｇ、０．１ｍｇ／ｋｇ、または０．０３ｍｇ／ｋｇ、次いでその後毎週）またはＰＢＳを投与した。マウスにＰＢＭＣを移植しなかった対照群を含めて、野生型ＮＳＧマウスに対するＸＥＮＰ２０８１８の効果を調べた。血液を７日目に採取して、ＩＦＮγを測定し、そのデータを図２４に示し、ＣＤ４＋Ｔ細胞、ＣＤ８＋Ｔ細胞、およびＣＤ４５＋細胞の数を測定し、そのデータを図２５Ａ～２５Ｃに示す。データはＸＥＮＰ２０８１８に対する明らかな用量応答を示す。

ＸＶ．実施例２：操作されたジスルフィド結合を有するＩＬ－１５／Ｒα－Ｆｃヘテロ二量体融合タンパク質
ＩＬ－１５／Ｒα－Ｆｃ融合タンパク質の安定性をさらに向上させ、半減期を延長させるために、ＩＬ－１５／Ｒα界面においてジスルフィド結合を操作した。

Ａ．２Ａ：操作されたジスルフィド結合を有するＩＬ－１５／Ｒαヘテロ二量体の操作および特徴付け
ＩＬ－１５／Ｒα複合体の結晶構造を調べることによって、ならびにＭｏｌｅｃｕｌａｒＯｐｅｒａｔｉｎｇＥｎｖｉｒｏｎｍｅｎｔ（ＭＯＥ、ＣｈｅｍｉｃａｌＣｏｍｐｕｔｉｎｇＧｒｏｕｐ、Ｍｏｎｔｒｅａｌ，Ｑｕｅｂｅｃ，Ｃａｎａｄａ）ソフトウェアを用いてモデリングすることによって、図２６に示されるように、ＩＬ－１５／Ｒα界面の残基が共有ジスルフィド結合を形成するためにシステインで置換され得ることを予測した。

ＩＬ－１５またはＩＬ－１５Ｒα（スシ）をコードするプラスミドを、標準的な遺伝子合成、続いてｐＴＴ５発現ベクターへのサブクローニングによって構築した。ＩＬ－１５Ｒα（スシ）鎖は、Ｃ末端ポリヒスチジンタグを含んでいた。上に記載されるように同定された残基を、標準的な変異導入技術によってシステインで置換した。さらに、ＩＬ－１５Ｒαのスシドメインに続く３個までのアミノ酸を、操作するシステインの足場としてＩＬ－１５Ｒα（スシ）のＣ末端に付加した（その例示的な配列を図２７に示す）。システインで操作された例示的なＩＬ－１５およびＩＬ－１５Ｒα（スシ）バリアントの配列を、それぞれ図２８および２９、ならびに配列表に示す。

操作されたジスルフィドを有するかまたは有さないＩＬ－１５／Ｒαヘテロ二量体の漫画の概略図を図３０Ａ～３０Ｃに示す。

例示的なｎｃＩＬ－１５／Ｒαヘテロ二量体ＸＥＮＰ２１９９６の配列を図３１に示す。例示的なｄｓＩＬ－１５／Ｒαヘテロ二量体ＸＥＮＰ２２００４、ＸＥＮＰ２２００５、ＸＥＮＰ２２００６、ＸＥＮＰ２２００８、およびＸＥＮＰ２２４９４の配列を図３２に示す。例示的なｓｃＩＬ－１５／Ｒαヘテロ二量体ＸＥＮＰ２２０４９の配列を図３３に示す。

Ｃ末端に追加の残基を有するが操作されたシステインを有さない「野生型」ＩＬ－１５／Ｒαヘテロ二量体を対照として生成した。ＸＥＮＰ２２００１、ＸＥＮＰ２２００２、およびＸＥＮＰ２２００３を含むこのフォーマットの追加のタンパク質の配列は、参照により本明細書に組み込まれる、それぞれＷＯ２０１８／０７１９１９の図１０４Ｈおよび１０４Ｉに、それぞれ配列番号５３１～５３２、５３３～５３４、および５３５～５３６として示されている。

タンパク質をＨＥＫ２９３Ｅ細胞における一過性トランスフェクションによって生成し、Ｎｉ－ＮＴＡクロマトグラフィーによって精製した。

概して実施例１Ｂに記載されるように、タンパク質が精製された後、それらを純度および均質性についてキャピラリー等電点電気泳動（ＣＥＦ）によって特徴付け、そのゲル画像を図３４～３５に示す。次いで、概して実施例１Ｃに記載されるように、ＤＳＦを用いてタンパク質を安定性についてスクリーニングし、そのデータを図３６～３８に示す。最後に、概して実施例１Ｃに記載されるように、Ｏｃｔｅｔによりタンパク質をＩＬ－２Ｒβに対する結合についてスクリーニングし、そのデータを図３８に示す。

変性非還元ＣＥＦによって示されるように、多くのジスルフィド結合が正しく形成され、ここで、操作されたジスルフィド結合を含まない対照と比較したとき、共有結合複合体のより大きい分子量が観察され得る（図３４～３５）。ジスルフィド結合しているＩＬ－１５／Ｒαヘテロ二量体は、＋１３℃までの高い熱安定性を有した（図３８）。ＩＬ－２Ｒβに対する結合は、操作されたジスルフィド結合を含むことによって影響されなかった（図３８）。好ましいジスルフィド結合対は、ＸＥＮＰ２２００５、ＸＥＮＰ２２００６、ＸＥＮＰ２２００８、およびＸＥＮＰ２２４９４であり、以下に記載されるようにＦｃ融合タンパク質として構築した。

Ｂ．２Ｂ：操作されたジスルフィド結合を有するＩＬ－１５／Ｒα－Ｆｃ融合タンパク質の特徴付け
上に記載される変異を有する、ＩＬ－１５またはＩＬ－１５Ｒαスシドメインをコードするプラスミドを、Ｆｃ融合パートナー（例えば、図８に示される定常領域）を含むｐＴＴ５発現ベクターへとサブクローニングした。操作されたジスルフィド結合を有するＩＬ－１５／Ｒα－Ｆｃ融合タンパク質の漫画の概略図を図３９Ａ～３９Ｄに示す。

ジスルフィド結合したＩＬ－１５ヘテロ二量体Ｆｃ融合体または「ｄｓＩＬ－１５／Ｒα－ヘテロＦｃ」）（図３９Ａ）は、「ＩＬ－１５／Ｒα－ヘテロＦｃ」と同じであるが、ＩＬ－１５Ｒα（スシ）およびＩＬ－１５は、操作されたシステインの結果としてさらに共有結合的に連結されている。このフォーマットの例示的なタンパク質は、ＸＥＮＰ２２０１３、ＸＥＮＰ２２０１４、ＸＥＮＰ２２０１５、およびＸＥＮＰ２２０１７を含み、それらの配列を図４０Ａ～４０Ｂに示す。

ジスルフィド結合したＩＬ－１５／ＲαＦｃ融合体または「ｄｓＩＬ－１５／Ｒα－Ｆｃ」（図３９Ｂ）は、「ｎｃＩＬ－１５／Ｒα－Ｆｃ」と同じであるが、ＩＬ－１５Ｒα（スシ）およびＩＬ－１５は、操作されたシステインの結果としてさらに共有結合的に連結されている。このフォーマットの例示的なタンパク質は、ＸＥＮＰ２２３５７、ＸＥＮＰ２２３５８、ＸＥＮＰ２２３５９、ＸＥＮＰ２２６８４、およびＸＥＮＰ２２３６１を含み、それらの配列を図４１Ａ～４１Ｂに示す。ＸＥＮＰ２２３６０、ＸＥＮＰ２２３６２、ＸＥＮＰ２２３６３、ＸＥＮＰ２２３６４、ＸＥＮＰ２２３６５、ＸＥＮＰ２２３６６を含むこのフォーマットの追加のタンパク質の配列は、参照により本明細書に組み込まれる、それぞれＷＯ２０１８／０７１９１９の図１０４Ｏ、１０４Ｐ、１０４Ｑ、および１０４Ｒに、それぞれ配列番号６１２～６１６、６２２～６２６、６２７～６３１、６３２～６３６、６３７～６４１、および６４２～６４６として示されている。

二価ジスルフィド結合したＩＬ－１５／Ｒα－Ｆｃまたは「二価ｄｓＩＬ－１５／Ｒα－Ｆｃ」（図３９Ｃ）は、「二価ｎｃＩＬ－１５／Ｒα－Ｆｃ」と同じであるが、操作されたシステインの結果としてＩＬ－１５Ｒα（スシ）およびＩＬ－１５は、さらに共有結合的に連結されている。このフォーマットの例示的なタンパク質は、ＸＥＮＰ２２６３４、ＸＥＮＰ２２６３５、およびＸＥＮＰ２２６３６を含み、それらの配列を図４２に示す。ＸＥＮＰ２２６８７を含むこのフォーマットの追加のタンパク質の配列は、参照により本明細書に組み込まれる、ＷＯ２０１８／０７１９１９の図１０４Ｖに、配列番号６８５～６８８としてである。

Ｆｃ－ジスルフィド結合したＩＬ－１５／Ｒα融合体または「Ｆｃ－ｄｓＩＬ－１５／Ｒα」（図３９Ｄ）は、「Ｆｃ－ｎｃＩＬ－１５／Ｒα」と同じであるが、操作されたシステインの結果としてＩＬ－１５Ｒα（スシ）およびＩＬ－１５は、さらに共有結合的に連結されている。を図４３を示すこのフォーマットの例示的なタンパク質は、ＸＥＮＰ２２６３９およびＸＥＮＰ２２６４０を含み、それらの配列を図４３に示す。

Ｃ末端に追加の残基を有するが操作されたシステインを有さない「野生型」ＩＬ－１５／Ｒα－Ｆｃ融合タンパク質を対照として生成した。ＸＥＮＰ２１９８８、ＸＥＮＰ２１９８９、ＸＥＮＰ２１９９０、ＸＥＮＰ２１９９１、ＸＥＮＰ２１９９２、ＸＥＮＰ２２３５４、およびＸＥＮＰ２２３５５を含むこれらの対照ＩＬ－１５／Ｒα－Ｆｃ融合タンパク質の配列は、参照により本明細書に組み込まれる、ＷＯ２０１８／０７１９１９の図１０４Ｆ、１０４Ｇ、１０４Ｌ、および１０４Ｍに、それぞれ配列番号４８４～４８９、４９０～４９５、４９６～５０１、５０２～５０７、５０８～５１３、５８２～５８６、および５８７～５９１として示されている。

概して実施例１Ｂに記載されるように、タンパク質が精製された後、それらを純度および均質性についてキャピラリー等電点電気泳動（ＣＥＦ）によって特徴付けた。上述のように、変性非還元ＣＥＦによって示されるように、多くのジスルフィド結合が正しく形成され、ここで、操作されたジスルフィド結合を含まない対照と比較したとき、共有結合複合体のより大きい分子量が観察され得る（図４４）。

次いで、タンパク質を細胞増殖アッセイで試験した。ＩＬ－１５／Ｒα－Ｆｃ融合タンパク質（操作されたジスルフィド結合を有するかまたは有さない）または対照をＰＢＭＣと共に４日間インキュベートした。インキュベーション後、ＰＢＭＣを抗ＣＤ４－ＰｅｒＣＰ／Ｃｙ５．５（ＲＰＡ－Ｔ４）、抗ＣＤ８－ＦＩＴＣ（ＲＰＡ－Ｔ８）、抗ＣＤ４５ＲＡ－ＢＶ５１０（ＨＩ１００）、抗ＣＤ１６－ＢＶ４２１（３Ｇ８）、抗ＣＤ５６－ＢＶ４２１（ＨＣＤ５６）、抗ＣＤ２７－ＰＥ（Ｏ３２３）、および抗Ｋｉ６７－ＡＰＣ（Ｋｉ－６７）で染色して様々な細胞集団をマークし、概して実施例１Ｄに記載されるようにＦＡＣＳによって分析した。Ｋｉ６７発現によって示されるＮＫ細胞、ＣＤ４＋Ｔ細胞、およびＣＤ８＋Ｔ細胞の増殖を図４５Ａ～４５Ｃに示す。ＩＬ－１５／Ｒα－Ｆｃ融合タンパク質およびＩＬ－１５対照の各々が、ＮＫ細胞、ＣＤ８＋Ｔ細胞、およびＣＤ４＋Ｔ細胞の強い増殖を誘導した。

ＸＶＩ．実施例３：より低い効力ならびにＰＫおよび半減期の増加のために操作されたＩＬ－１５／Ｒα－Ｆｃ融合タンパク質
ＰＫをさらに改善しそして半減期を延長するために、ＩＬ－１５の効力を減少させることが抗原シンクを減少させ、それによって、半減期を増加させるであろうと推論した。

Ａ．３Ａ：バリアントＩＬ－１５／Ｒα－Ｆｃ融合タンパク質の操作および生成
ＩＬ－１５：ＩＬ－２ＲβおよびＩＬ－１５：共通ガンマ鎖の界面の結晶構造を調べることによって、ならびにＭＯＥソフトウェアを用いてモデリングすることによって、効力を低減させるために置換され得るこれらの界面の残基を予測した。図４６は、（免疫原性のリスクを低減するために）等配電子置換を操作した予測された残基の位置を示すＩＬ－１５：受容体複合体の構造モデルを示す。低減された効力のために操作された例示的なＩＬ－１５バリアントの配列を図４７Ａ～４７Ｃに示す。

ＩＬ－１５またはＩＬ－１５Ｒα（スシ）をコードするプラスミドを、標準的な遺伝子合成、続いてＦｃ融合パートナー（例えば、図８Ａ～８Ｄに示される定常領域）を含むｐＴＴ５発現ベクターへのサブクローニングによって構築した。上に記載されるように同定された置換を、標準的な変異導入技術によって組み込んだ。

低減された効力のために操作された「ＩＬ－１５／Ｒα－ヘテロＦｃ」フォーマットの例示的なＩＬ－１５／Ｒα－Ｆｃ融合タンパク質の配列を図４８Ａ～４８Ｈに示し、ＸＥＮＰ２２８１５、ＸＥＮＰ２２８１７、ＸＥＮＰ２２８１８、ＸＥＮＰ２２８２３、ＸＥＮＰ２２８２４、ＸＥＮＰ２２８２５、ＸＥＮＰ２２８２６、ＸＥＮＰ２２８２７、ＸＥＮＰ２２８２８、ＸＥＮＰ２２８３０、ＸＥＮＰ２２８３１、ＸＥＮＰ２２８３２、ＸＥＮＰ２２８３３、ＸＥＮＰ２３５５５、ＸＥＮＰ２３５５９、ＸＥＮＰ２３５６０、ＸＥＮＰ２４０１７、ＸＥＮＰ２４０２０、ＸＥＮＰ２４０４３、およびＸＥＮＰ２４０４８を含む追加の配列は、参照により本明細書に組み込まれる、ＷＯ２０１８／０７１９１９の図１０４Ｚ、１０４ＡＡ、１０４ＡＣ、１０４ＡＤ、１０４ＡＥ、１０４ＡＦ、１０４ＡＪ、１０４ＡＫ、１０４ＡＭ、１０４ＡＮ、および１０４ＡＯに、それぞれ配列番号７２９～７３４、７４１～７４６、７４７～７５２、７７７～７８２、７８３～７８８、７８９～７９４、７９５～８００、８０１～８０６、８０７～８１２、８１９～８２４、８２５～８３０、８３１～８３６、８３７～８４２、８８７～８９２、８９９～９０４、９０５～９１０、９３７～９４２、９５５～９６０、９６１～９６６、および９７９～９８４として示されている。

低減された効力のために操作された「ｓｃＩＬ－１５／Ｒα－Ｆｃ」フォーマットの例示的なＩＬ－１５／Ｒα－Ｆｃ融合タンパク質の配列を図４９Ａ～４９Ｄに示し、ＸＥＮＰ２４０１３、ＸＥＮＰ２４０１４、およびＸＥＮＰ２４０１６を含む追加の配列は、参照により本明細書に組み込まれる、ＷＯ２０１８／０７１９１９の図１０４ＡＫおよび１０４ＡＬに、それぞれ配列番号９１４～９２１、９２２～９２６、および９３２～９３６として示されている。

低下した効力のために操作された「ｎｃＩＬ－１５／Ｒα－Ｆｃ」フォーマットの例示的なＩＬ－１５／Ｒα－Ｆｃ融合タンパク質の配列を図５０Ａ～５０Ｂに示す。低下した効力のために操作された例示的なｎｃＩＬ－１５／Ｒαヘテロ二量体の配列を図５１に示し、ＸＥＮＰ２２７９１、ＸＥＮＰ２２７９２、ＸＥＮＰ２２７９３、ＸＥＮＰ２２７９４、ＸＥＮＰ２２７９５、ＸＥＮＰ２２７９６、ＸＥＮＰ２２８０３、ＸＥＮＰ２２８０４、ＸＥＮＰ２２８０５、ＸＥＮＰ２２８０６、ＸＥＮＰ２２０９ＸＥＮＰ２２０９ＸＥＮＰ２２０９ＸＥＮＰ２２８０７、ＸＥＮＰ２２８１１、ＸＥＮＰ２２８１２、ＸＥＮＰ２２８１３、およびＸＥＮＰ２２８１４を含む追加の配列は、参照により本明細書に組み込まれる、ＷＯ２０１８／０７１９１９の図１０４Ｖ、１０４Ｗ、１０４Ｘ、１０４Ｙ、および１０４Ｚに、それぞれ配列番号６８９～６９０、６９１～６９２、６９３～６９４、６９５～６９６、６９７～６９８、６９９～７００、７０５～７０６、７０７～７０８、７０９～７１０、７１１～７１２、７１３～７１４、７１５～７１６、７１７～７１８、７１９～７２０、７２１～７２２、７２３～７２４、７２５～７２６、および７２７～７２８として示されている。

低下した効力のために操作された「二価のｎｃＩＬ－１５／Ｒα－Ｆｃ」フォーマットの例示的なＩＬ－１５／Ｒα－Ｆｃ融合タンパク質の配列を図５２に示す。低下した効力のために操作された「ｄｓＩＬ－１５／Ｒα－Ｆｃ」フォーマットの例示的なＩＬ－１５／Ｒα－Ｆｃ融合タンパク質の配列を図５３に示す。

Ｂ．３Ｂ：効力の減少のために操作されたバリアントＩＬ－１５／Ｒα－ヘテロＦｃおよびｓｃＩＬ－１５／Ｒα－Ｆｃ融合タンパク質のインビトロ活性
バリアントＩＬ－１５／Ｒα－Ｆｃ融合タンパク質をいくつかの細胞増殖アッセイで試験した。

最初の細胞増殖アッセイでは、ＩＬ－１５／Ｒα－Ｆｃ融合タンパク質（操作された置換ありまたはなし）または対照をＰＢＭＣと共に４日間インキュベートした。インキュベーション後、ＰＢＭＣを抗ＣＤ４－Ｅｖｏｌｖｅ６０５（ＳＫ－３）、抗ＣＤ８－ＰｅｒＣＰ／Ｃｙ５．５（ＲＰＡ－Ｔ８）、抗ＣＤ４５ＲＡ－ＡＰＣ／Ｃｙ７（ＨＩ１００）、抗ＣＤ１６－ｅＦｌｕｏｒ４５０（ＣＢ１６）、抗ＣＤ５６－ｅＦｌｕｏｒ４５０（ＴＵＬＹ５６）、抗ＣＤ３－ＦＩＴＣ（ＯＫＴ３）、および抗Ｋｉ６７－ＡＰＣ（Ｋｉ－６７）で染色して様々な細胞集団をマークし、概して実施例１Ｄに記載されるようにＦＡＣＳによって分析した。Ｋｉ６７発現によって示されるＮＫ細胞、ＣＤ８＋Ｔ細胞、およびＣＤ４＋Ｔ細胞の増殖を図５４Ａ～５４Ｃおよび図５５に示す。ほとんどのＩＬ－１５／Ｒα－Ｆｃ融合タンパク質は各細胞集団の増殖を誘導したが、しかしながら、活性は特定の操作された置換に応じて変化した。

第２の細胞増殖アッセイでは、ＩＬ－１５／Ｒα－Ｆｃ融合タンパク質（操作された置換ありまたはなし）をＰＢＭＣと共に３日間インキュベートした。インキュベーション後、ＰＢＭＣを抗ＣＤ３－ＦＩＴＣ（ＯＫＴ３）、抗ＣＤ４－Ｅｖｏｌｖｅ６０４（ＳＫ－３）、抗ＣＤ８－ＰｅｒＣＰ／Ｃｙ５．５（ＲＰＡ－Ｔ８）、抗ＣＤ１６－ｅＦｌｕｏｒ４５０（ＣＢ１６）、抗ＣＤ５６－ＣＤ５６－ｅＦｌｕｏｒ４５０（ＴＵＬＹ５６）、抗ＣＤ２７－ＰＥ（Ｏ３２３）、抗ＣＤ４５ＲＡ－ＡＰＣ／Ｃｙ７（Ｈｌ１００）、および抗Ｋｉ６７－ＡＰＣ（２０Ｒａｊ１）抗体で染色して様々な細胞集団をマークした。図５６Ａ～５６Ｃおよび５７Ａ～５７Ｃは、ＦＡＣＳによってＸＥＮＰ２２８２１と共にインキュベーションした後の様々な細胞集団の選択を示す。リンパ球を最初に側方散乱（ＳＳＣ）および前方散乱（ＦＳＣ）に基づいてゲーティングした（図５６Ａ）。次に、リンパ球をＣＤ３発現に基づいてゲーティングした（図５６Ｂ）。ＣＤ３発現について陰性の細胞を、ＣＤ１６発現に基づいてさらにゲーティングして、ＮＫ細胞（ＣＤ１６＋）を同定した（図５６Ｃ）。ＣＤ４＋Ｔ細胞、ＣＤ８＋Ｔ細胞、およびγδＴ細胞（ＣＤ３＋ＣＤ４－ＣＤ８－）を同定するために、ＣＤ３＋Ｔ細胞をＣＤ４およびＣＤ８発現に基づいてさらにゲーティングした（図５７Ａ）。図５７Ｂ～Ｃにそれぞれ示すように、ＣＤ４＋およびＣＤ８＋Ｔ細胞をＣＤ４５ＲＡ発現についてゲートした。最後に、様々な細胞集団の増殖を、Ｋｉ６７発現の割合に基づいて決定し、データを図５９Ａ～５９Ｄに示す。ＮＫおよびＣＤ８＋Ｔ細胞は、ＩＬ－１５／Ｒα－Ｆｃ融合タンパク質に対してＣＤ４＋Ｔ細胞よりも感受性であり、上述のように、増殖活性は特定の操作された置換に応じて変化した。図５９Ｄは、対照ＸＥＮＰ２０８１８に対する様々なＩＬ－１５／Ｒα－Ｆｃ融合タンパク質のＥＣ５０の倍数変化を示す。図５８Ａおよび５８Ｂは、ＰＢＭＣのＸＥＮＰ２２８２１とのインキュベーション前後にＣＤ６９およびＣＤ２５（Ｔ細胞活性化マーカー）の発現についてゲーティングすることによる、ＩＬ－１５／Ｒα－Ｆｃ融合タンパク質による処理後のリンパ球の活性化をさらに示す。

第３の実験において、追加のバリアントＩＬ－１５／Ｒα－Ｆｃ融合タンパク質をヒトＰＢＭＣと共に３７℃で３日間インキュベートした。インキュベーション後、ＰＢＭＣを抗ＣＤ３－ＦＩＴＣ（ＯＫＴ３）、抗ＣＤ４－ＳＢ６００（ＳＫ－３）、抗ＣＤ８－ＰｅｒＣＰ／Ｃｙ５．５（ＲＰＡ－Ｔ８）、抗ＣＤ４５ＲＡ－ＡＰＣ／Ｃｙ７（ＨＩ１００）、抗ＣＤ１６－ｅＦｌｕｏｒ４５０（ＣＢ１６）、抗ＣＤ２５－ＰＥ（Ｍ－Ａ２５１）、および抗Ｋｉ６７－ＡＰＣ（Ｋｉ－６７）で染色して様々な細胞集団をマークし、概して実施例１Ｄに記載されるようにＦＡＣＳによって分析した。Ｋｉ６７発現によって示されるＣＤ８＋（ＣＤ４５ＲＡ－）Ｔ細胞、ＣＤ４＋（ＣＤ４５ＲＡ－）Ｔ細胞、γδＴ細胞、およびＮＫ細胞の増殖を図６０Ａ～６０Ｄに示す。

第４の実験において、ヒトＰＢＭＣを示された濃度で追加のＩＬ－１５／Ｒα－Ｆｃバリアントと共に３日間インキュベートした。インキュベーション後、ＰＢＭＣを抗ＣＤ３－ＦＩＴＣ（ＯＫＴ３）、抗ＣＤ４（ＳＢ６００）、抗ＣＤ８－ＰｅｒＣＰ／Ｃｙ５．５（ＲＰＡ－Ｔ８）、抗ＣＤ１６－ｅＦｌｕｏｒ４５０（ＣＢ１６）、抗ＣＤ２５－ＰＥ（Ｍ－Ａ２５１）、抗ＣＤ４５ＲＡ－ＡＰＣ／Ｃｙ７（Ｈｌ１００）、および抗Ｋｉ６７－ＡＰＣ（Ｋｉ６７）で染色し、概して実施例１Ｄに記載されるようにＦＡＣＳによって分析した。処理後のＣＤ８＋Ｔ細胞、ＣＤ４＋Ｔ細胞、およびＮＫ細胞に対するＫｉ６７の割合を図６１Ａ～６１Ｃに示す。

第５の実験において、バリアントＩＬ－１５／Ｒα－Ｆｃ融合タンパク質をヒトＰＢＭＣと共に３７℃で３日間インキュベートした。インキュベーション後、細胞を抗ＣＤ３－ＰＥ（ＯＫＴ３）、抗ＣＤ４－ＦＩＴＣ（ＲＰＡ－Ｔ４）、抗ＣＤ８α－ＢＶ５１０（ＳＫ１）、抗ＣＤ８β－ＡＰＣ（２ＳＴ８．５Ｈ７）、抗ＣＤ１６－ＢＶ４２１（３Ｇ８）、抗ＣＤ２５－ＰｅｒＣＰ／Ｃｙ５．５（Ｍ－Ａ２５１）、抗ＣＤ４５ＲＡ－ＡＰＣ／Ｃｙ７（ＨＩ１００）、抗ＣＤ５６－ＢＶ６０５（ＮＣＡＭ１６．２）、および抗Ｋｉ６７－ＰＥ／Ｃｙ７（Ｋｉ－６７）で染色し、概して実施例１Ｄに記載されるようにＦＡＣＳによって分析した。ＣＤ８＋Ｔ細胞、ＣＤ４＋Ｔ細胞、γδＴ細胞、およびＮＫ細胞に対するＫｉ６７の割合を図６２Ａ～６２Ｅに示す。

第６の実験において、バリアントＩＬ－１５／Ｒα－Ｆｃ融合タンパク質をヒトＰＢＭＣと共に３７℃で３日間インキュベートした。インキュベーション後、細胞を抗ＣＤ３－ＰＥ（ＯＫＴ３）、抗ＣＤ４－ＦＩＴＣ（ＲＰＡ－Ｔ４）、抗ＣＤ８α－ＢＶ５１０（ＳＫ１）、抗ＣＤ８β－ＡＰＣ（ＳＩＤＩ８ＢＥＥ）、抗ＣＤ１６－ＢＶ４２１（３Ｇ８）、抗ＣＤ２５－ＰｅｒＣＰ／Ｃｙ５．５（Ｍ－Ａ２５１）、抗ＣＤ４５ＲＡ－ＡＰＣ／Ｃｙ７（ＨＩ１００）、抗ＣＤ５６－ＢＶ６０５（ＮＣＡＭ１６．２）、および抗Ｋｉ６７－ＰＥ／Ｃｙ７（Ｋｉ－６７）で染色し、概して実施例１Ｄに記載されるようにＦＡＣＳによって分析した。ＣＤ８＋Ｔ細胞、ＣＤ４＋Ｔ細胞、γδＴ細胞、およびＮＫ細胞に対するＫｉ６７の割合を図６３Ａ～６３Ｅに示す。

Ｃ．３Ｃ：ＩＬ－１５およびＩＬ－１５Ｒαの間に異なるリンカー長を有する、減少された効力のために操作されたバリアントｓｃＩＬ－１５／Ｒα－Ｆｃ融合タンパク質のインビトロ活性
上に記載される置換のうちのいくつかを有し、さらにＩＬ－１５およびＩＬ－１５Ｒαの間に異なる長さのリンカーを有するＩＬ－１５／Ｒα－Ｆｃ融合タンパク質（表４に示される）を、示された濃度でヒトＰＢＭＣと共に３７℃で３日間インキュベートした。インキュベーション後、ＰＢＭＣを抗ＣＤ３－ＰＥ（ＯＫＴ３）、抗ＣＤ４－ＦＩＴＣ（ＲＰＡ－Ｔ４）、抗ＣＤ８－ＡＰＣ（ＲＰＡ－Ｔ８）、抗ＣＤ１６－ＢＶ６０５（３Ｇ８）、抗ＣＤ２５－ＰｅｒＣＰ／Ｃｙ５．５（Ｍ－Ａ２５１）、抗ＣＤ４５ＲＡ－ＡＰＣ／Ｆｉｒｅ７５０（ＨＩ１００）および抗Ｋｉ６７－ＰＥ／Ｃｙ７（Ｋｉ－６７）で染色し、概して実施例１Ｄに記載されるようにＦＡＣＳによって分析した。ＣＤ８＋Ｔ細胞、ＣＤ４＋Ｔ細胞、γδＴ細胞、およびＮＫ（ＣＤ１６＋）細胞に対するＫｉ６７の割合を図６４Ａ～Ｄに示す。データは、ｎｃＩＬ－１５／Ｒα－Ｆｃ融合タンパク質ＸＥＮＰ２１４７９がＣＤ８＋Ｔ細胞、ＣＤ４＋Ｔ細胞、ＮＫ（ＣＤ１６＋）細胞、およびγδＴ細胞の増殖の最も強力な誘導因子であることを示す。ｓｃＩＬ－１５／Ｒα－Ｆｃ融合タンパク質の各々は、増殖を誘導することにおいてＸＥＮＰ２１４７９よりも効力が弱かったが、差異はリンカーの長さ、ならびに特定の操作された置換の両方に依存していた。

Ｄ．３Ｄ：さらなるフォーマットの減少された効力のために操作されたバリアントＩＬ－１５／Ｒα－Ｆｃ融合タンパク質のインビトロ活性
異なるフォーマットのバリアントＩＬ－１５／Ｒα－Ｆｃ融合タンパク質（表５に示される）を、示された濃度でヒトＰＢＭＣと共に３７℃で３日間インキュベートした。インキュベーション後、ＰＢＭＣを抗ＣＤ３－ＰＥ（ＯＫＴ３）、抗ＣＤ４－ＦＩＴＣ（ＲＰＡ－Ｔ４）、抗ＣＤ８－ＡＰＣ（ＲＰＡ－Ｔ８）、抗ＣＤ１６－ＢＶ６０５（３Ｇ８）、抗ＣＤ２５－ＰｅｒＣＰ／Ｃｙ５．５（Ｍ－Ａ２５１）、抗ＣＤ４５ＲＡ－ＡＰＣ／Ｆｉｒｅ７５０（ＨＩ１００）および抗Ｋｉ６７－ＰＥ／Ｃｙ７（Ｋｉ－６７）で染色し、概して実施例１Ｄに記載されるようにＦＡＣＳによって分析した。ＣＤ８＋Ｔ細胞、ＣＤ４＋Ｔ細胞、γδＴ細胞、およびＮＫ（ＣＤ１６＋）細胞に対するＫｉ６７の割合を、それぞれ図６５Ａ～６５Ｄに示す。上述のように、データは、ｎｃＩＬ－１５／Ｒα－Ｆｃ融合タンパク質ＸＥＮＰ２１４７９がＣＤ８＋Ｔ細胞、ＣＤ４＋Ｔ細胞、ＮＫ（ＣＤ１６＋）細胞、およびγδＴ細胞の増殖の最も強力な誘導因子であることを示している。特に、ｎｃＩＬ－１５／Ｒα－Ｆｃフォーマット（ＸＥＮＰ２４３４９）へのＱ１０８Ｅ置換の導入は、野生型（ＸＥＮＰ２１４７９）と比較してその増殖活性を劇的に低減させる。

Ｅ．３Ｅ：バリアントＩＬ－１５／Ｒα－Ｆｃ融合タンパク質によるＳＴＡＴ５リン酸化
ＩＬ－１５およびＩＬ－１５Ｒαのトランス提示は、ＳＴＡＴ５のリン酸化およびそれに続くＮＫ細胞およびＴ細胞（ＣＤ４＋およびＣＤ８＋）の増殖を促進する。したがって、ＣＤ８＋およびＣＤ４＋Ｔ細胞を、示されたＩＬ－１５／Ｒα－Ｆｃ試験試料と共に１５分間インキュベートした後、ＳＴＡＴ５リン酸化について分析した。ＰＢＭＣを、抗ＣＤ４－ＢＶ４２１（ＲＰＡ－Ｔ４）および抗ＣＤ８－Ａ７００（ＳＫ１）で、室温で３０～４５分間染色した。細胞を洗浄し、予め冷却した（－２０℃）９０％メタノールと共に２０～６０分間インキュベートした。メタノールと共にインキュベートした後、細胞を再度洗浄し、抗ＣＤ４５ＲＡ－ＢＶ５１０（ＨＩ１００）、抗ＣＤ２７－ＢＶ６０５（Ｌ１２８）、抗ＣＤ２５－ＰＥ（ＭＡ２５１）、抗ｐＳＴＡＴ５－Ａｌｅｘａ６４７（ｐＹ６８７）、および抗ＦｏｘＰ３－Ａｌｅｘａ４８８（２５９Ｄ）で染色し、様々な細胞集団およびＳＴＡＴ５リン酸化をマークした。図６６Ａ～６６Ｄは、ＸＥＮＰ２２８２１と共にインキュベートした後の様々な細胞集団の選択を示す。リンパ球を最初にＳＳＣおよびＦＳＣに基づいてゲーティングした（図６６Ａ）。次いで、リンパ球をＣＤ４およびＣＤ８発現に基づいてゲーティングして、ＣＤ４＋およびＣＤ８＋Ｔ細胞を同定した（図６６Ｂ）。次いで、ＣＤ４＋およびＣＤ８＋Ｔ細胞をさらにＣＤ４５ＲＡおよびＣＤ２７の発現に基づいてゲーティングして、それぞれ図６６Ｃ～６６Ｄに示されるさらなる亜集団を同定した。最後に、様々な細胞集団におけるＳＴＡＴ５のリン酸化を判定し、データを図６７Ａ～６７Ｃに示す。Ｔ細胞におけるＳＴＡＴ５リン酸化は用量依存的に誘導され、また特定の操作された置換に応じて変動した。図６７Ｃは、対照に対するバリアントＩＬ－１５／Ｒα－Ｆｃ融合タンパク質のＳＴＡＴ５リン酸化についてのＥＣ５０の倍数変化を示す。

別の実験では、Ｂ６マウスからの脾臓細胞を、示された濃度で試験物質と共に１５分間インキュベートした。インキュベーション後、脾臓細胞を抗ＣＤ４４－ＢＶ６０５（ＩＭ７）で染色した。細胞を洗浄し、予め冷却した（－２０℃）９０％メタノールと共に２０～６０分間インキュベートした。メタノールインキュベーション後、細胞を再度洗浄し、抗ＣＤ３－ＢＶ４２１（１４５－２Ｃ１１）、抗ＣＤ４－ＰＥ（ＧＫ１．５）、抗ＣＤ８－ＦＩＴＣ（５３－６．７）、および抗ｐＳＴＡＴ５－Ａｌｅｘａ６４７（ｐＹ６９４）で、室温で３０から４５分間染色して、様々な細胞集団およびＳＴＡＴ５リン酸化をマークした。マウスＣＤ８＋ＣＤ４５ＲＡ－およびＣＤ４＋ＣＤ４５ＲＡ－でのＳＴＡＴ５リン酸化を示すＡｌｅｘａ６４７ＭＦＩを図６８Ａ～６８Ｂに示す。

Ｆ．３Ｆ：低下した効力のために操作されたバリアントＩＬ－１５／Ｒα－Ｆｃ融合タンパク質のＰＫ
低減された効力のために操作されたＩＬ－１５／Ｒα－Ｆｃ融合タンパク質が半減期およびＰＫを改善したかどうかを調べるために、Ｃ５７ＢＬ／６マウスにおけるＰＫ研究においてこれらのバリアントを調べた。０日目に、２コホートのマウス（１コホートあたり試験物質あたり５匹のマウス）にＩＶ－ＴＶによって０．１ｍｇ／ｋｇの示された試験物質を投与した。投与の６０分後に、次いで、コホート１では２、４、および７日目、ならびにコホート２では１、３、および８日目に血清を採取した。ＩＬ－１５／Ｒα－Ｆｃ融合タンパク質の血清レベルを、サンドイッチＥＬＩＳＡにおいて抗ＩＬ－１５および抗ＩＬ－１５Ｒα抗体を用いて決定した。結果を図６９に示す。図７０は、試験物質のヒトＮＫ細胞の効力および半減期の間の相関関係を示す。図７１は、試験物質のマウスＳＴＡＴ５シグナル伝達効力および半減期の間の相関関係を示す。

予想通り、効力が低減したバリアントは実質的により長い半減期を示した。特に、半減期は、野生型対照ＸＥＮＰ２０８１８の０．５日と比較して、約９日まで改善された（ＸＥＮＰ２２８２１およびＸＥＮＰ２２８２２を参照されたい）。

Ｇ．３Ｇ：効力が低減したＩＬ－１５／Ｒα－Ｆｃ融合タンパク質がリンパ球の拡大を促進する
Ｃ５７ＢＬ／６アルビノマウスでのさらなる実験では、示された濃度で示された試験物質を動物に投与した（グループあたり５匹のマウス）。マウスを採血し、８日目に屠殺して、試験物質の血清濃度（図１４６Ａ～１４６Ｄ）および脾臓におけるＣＤ８＋Ｔ細胞数（図７３）を評価した。

データは、ＸＥＮＰ２２８１８およびＸＥＮＰ２２８２９などの効力が低減したバリアントがより大きなリンパ球の拡大を促進することを示す。しかしながら、効力の過度の低減（ＸＥＮＰ２２８２１で見られるような）は、リンパ球の拡大の増強を無効にする。

Ｈ．３Ｈ：バリアントＩＬ－１５／Ｒα－Ｆｃ融合タンパク質は、ヒトＰＢＭＣ移植ＮＳＧマウスにおける生着および疾患活動性を増強する
バリアントＩＬ－１５／Ｒα－Ｆｃ融合タンパク質を、概して実施例１Ｆに記載されているように、雌のＮＳＧ免疫不全マウスにおいて実施されたＧＶＨＤモデルにおいて評価した。

最初の研究では、１０００万個のヒトＰＢＭＣを、０日目にＩＶ－ＯＳＰを介してＮＳＧマウスに移植し、続いて１日目に示された濃度でＩＬ－１５／Ｒα－Ｆｃ融合タンパク質を投与した。ＣＤ４５＋の増殖は体重減少と相関し（図７４に示すように）、そのため、この研究における疾患活動性の指標としてＣＤ４５＋細胞を４日目および８日目に測定した（図７５Ａ～７５Ｂ）。データは、ＩＬ－１５／Ｒα－Ｆｃ融合タンパク質の各々が、対照（ＰＢＳ）と比較して、ヒトＰＢＭＣ移植ＮＳＧマウスにおいてＣＤ４５＋細胞の増殖を増強することを示す。

別の研究では、１０００万個のヒトＰＢＭＣを、０日目にＩＶ－ＯＳＰを介してＮＳＧマウスに移植し、続いて１日目に示された濃度でＩＬ－１５／Ｒα－Ｆｃ融合タンパク質を投与した。ＩＦＮγレベルならびにヒトＮＫ細胞、ＣＤ４５＋リンパ球、ＣＤ８＋Ｔ細胞、およびＣＤ４＋Ｔ細胞の数を、４、７、および１１日目に測定した（図７６Ａ～７６Ｃ、７７Ａ～７７Ｃ、７８Ａ～７８Ｂ、７９Ａ～７９Ｂ、および８０Ａ～８０Ｂ）。データは、バリアントＩＬ－１５／Ｒα－Ｆｃ融合タンパク質がＩＦＮγ分泌およびヒトＮＫ細胞およびＴ細胞の増殖を用量依存的に増強することを示す。特に、観察された活性は各バリアントのインビトロ効力と相関している。

さらに別の研究では、１０００万個のヒトＰＢＭＣを、－８日目にＩＶ－ＯＳＰを介してＮＳＧマウスに移植し、続いて０日目に示された濃度で示された試験物質を投与した。ＩＦＮγレベルならびにヒトＮＫ細胞、ＣＤ４５＋リンパ球、ＣＤ８＋Ｔ細胞、およびＣＤ４＋Ｔ細胞の数を、４、７、および１１日目に測定した。図８１は、４、７、および１１日目のマウス血清中のＩＦＮγレベルを示す。図８２Ａ～８２Ｃはそれぞれ、４、７、および１１日目のＣＤ８＋Ｔ細胞数を示す。図８３Ａ～８３Ｃはそれぞれ、４、７、および１１日目のＣＤ４＋Ｔ細胞数を示す。図８４Ａ～８４Ｃはそれぞれ、４、７、および１１日目のＣＤ４５＋細胞数を示す。マウスの体重もまた、４、７、および１１日目に測定し、図８５Ａ～８５Ｃに初期体重の割合として示した。

Ｉ．３Ｉ：ＩＬ－１５／Ｒα－Ｆｃ融合タンパク質はカニクイザルリンパ球を増殖させる
臨床開発を容易にするために、カニクイザルにおける薬力学、薬物動態、および毒性など、ＩＬ－１５／Ｒα－Ｆｃ融合タンパク質の様々なパラメータを評価することが有用である。したがって、ＩＬ－１５／Ｒα－Ｆｃ融合タンパク質がカニクイザルリンパ球を増殖させることができたかどうかを調査した。カニクイザルＰＢＭＣを示された試験物質と共にインキュベートし、様々なリンパ球集団でのＫｉ６７の発現を評価し、そのデータを図８６に示す。

Ｊ．３Ｊ：ＩＬ－１５／Ｒα－Ｆｃ融合タンパク質はカニクイザルにおいて活性である
カニクイザルに、ＸＥＮＰ２０８１８（ｎ＝３）、ＸＥＮＰ２２８１９（ｎ＝１）、ＸＥＮＰ２２８２１（ｎ＝３）、ＸＥＮＰ２２８２２（ｎ＝３）、ＸＥＮＰ２２８３４（ｎ＝３）、およびＸＥＮＰ２３３４３（ｎ＝３）の単回静脈内（ｉｖ）用量を投与した。リンパ球数（図８７Ａ～８７Ｅ、８９Ａ～８９Ｅ、９１Ａ～９１Ｅ、９３Ａ～９３Ｅ、９５Ａ～９５Ｅ、および９７Ａ～９７Ｅ）および増殖（図８８Ａ～８８Ｅ、９０Ａ～９０Ｅ、９２Ａ～９２Ｅ、９４Ａ～９４Ｅ、９６Ａ～９６Ｅ、および９８Ａ～９８Ｅ）を、経時的に評価した。データは、６日目にピークに達し、その後に回復および正常化するＸＥＮＰ２２８２１による処理後の、Ｄ５６^＋ＮＫ細胞（図９１Ａ）、ＣＤ１６^＋ＮＫ細胞（図９１Ｂ）、γδ Ｔ細胞（図９１Ｃ）、ＣＤ８^＋Ｔ細胞（ＣＤ４５ＲＡ＋）（図９１Ｄ）、ＣＤ８＋Ｔ細胞（ＣＤ４５ＲＡ－）（図９１Ｅ）、およびＣＤ４^＋Ｔ細胞（図９１Ｆ）における著しい変化を示す。最後に、図９２Ａ～９２Ｅは、ＸＥＮＰ２２８２１による処理後の増殖活性を示す、ＣＤ５６^＋ＮＫ細胞（図９２Ａ）、ＣＤ１６^＋ＮＫ細胞（図９２Ｂ）、ＣＤ８^＋Ｔ細胞（ＣＤ４５ＲＡ^＋）（図９２Ｃ）、ＣＤ８＋Ｔ細胞（ＣＤ４５ＲＡ－）（図９２Ｄ）、およびＣＤ４^＋Ｔ細胞（図９２Ｅ）におけるＫｉ６７の著しい発現を示す。ＸＥＮＰ２０８１８、ＸＥＮＰ２２８１９、ＸＥＮＰ２２８２２、およびＸＥＮＰ２３３４３による処理後に同様の増殖活性が観察され、本発明のほとんどのＩＬ－１５／Ｒα－Ｆｃ融合タンパク質がカニクイザルにおいて活性であることを実証している。

ＸＶＩＩ．実施例４：ＸｔｅｎｄＦｃで操作されたＩＬ－１５／Ｒα－Ｆｃ融合タンパク質
上に記載されるように減少された効力のために操作されたＩＬ－１５／Ｒα－Ｆｃバリアントを、ＩＬ－１５および／またはＩＬ－１５Ｒα（スシ）をコードするプラスミドを、Ｍ４２８Ｌ／Ｎ４３４Ｓ置換を有するＦｃ融合パートナーを含むｐＴＴ５発現ベクター（図８Ａ～８Ｄ、骨格１１を参照されたい）へとサブクローニングすることによって、半減期をさらに増加させるためにＸｔｅｎｄＦｃ（以下、「ＩＬ－１５／Ｒα－ＸｔｅｎｄＦｃ」融合タンパク質と呼ばれる）でさらに操作した。例示的なＩＬ－１５／Ｒα－ＸｔｅｎｄＦｃの配列を図９９Ａ～９９Ｃ、１００、１０１、および１０２に示す（表６も参照されたい）。

Ａ．４Ａ：さらなるＩＬ－１５／Ｒα－Ｆｃバリアントのインビトロ活性
１．４Ａ（ａ）：ヒトリンパ球の増殖
ヒトＰＢＭＣを示された濃度でＩＬ－１５／Ｒα－ＸｔｅｎｄＦｃバリアントと共に３日間インキュベートした。インキュベーション後、ＰＢＭＣを抗ＣＤ３－ＦＩＴＣ（ＯＫＴ３）、抗ＣＤ４－ＰＥ（ＲＰＡ－Ｔ４）、抗ＣＤ８－ｅＦｌｕｏｒ４５０（ＳＫ－１）、抗ＣＤ４５ＲＡ－ＰＥ／Ｃｙ７（ＨＩ１００）、抗ＣＤ１６－ＰｅｒＣＰ／Ｃｙ５．５（３Ｇ８）、抗ＣＤ２５－ＡＰＣ／Ｆｉｒｅ７５０（Ｍ－Ａ２５１）、および抗Ｋｉ６７－ＡＰＣ（Ｋｉ－６７）で染色して様々な細胞集団をマークし、概して実施例１Ｄに記載されるようにＦＡＣＳによって分析した。Ｋｉ６７発現によって示されるような処理後のＣＤ８＋Ｔ細胞、ＣＤ４＋Ｔ細胞、およびＮＫ細胞の増殖を図１０３Ａ～１０３Ｃに示す。

別の実験では、ヒトＰＢＭＣを示された濃度で、ＸＥＮＰ２０８１８およびＸＥＮＰ２４３０６で処理した。処理の３日後、最初にＰＢＭＣを抗ＣＤ３－ＰｅｒＣＰ／Ｃｙ５．５（ＯＫＴ３）、抗ＣＤ４－ＢＶ７８６（ＲＰＡ－Ｔ４）、抗ＣＤ８β－ＰＥ／Ｃｙ７（ＳＩＤＩ８ＢＥＥ）、抗ＣＤ１６－ＢＶ４２１（３Ｇ８）、抗ＣＤ５６－ＢＶ６０５、および抗ＣＤ４５ＲＡ－ＡＰＣ／Ｃｙ７（ＨＩ１００）で染色した。細胞を再度洗浄し、ｅＢｉｏｓｃｉｅｎｃｅ（商標）Ｆｏｘｐ３／ＴｒａｎｓｃｒｉｐｔｉｏｎＦａｃｔｏｒＳｔａｉｎｉｎｇＢｕｆｆｅｒＳｅｔ（ＴｈｅｒｍｏＦｉｓｈｅｒＳｃｉｅｎｔｉｆｉｃ、Ｗａｌｔｈａｍ，Ｍａｓｓ．）を使用して、抗ＦｏｘＰ３－ＡＦ４８８（２５９Ｄ）および抗Ｋｉ６７－ＡＰＣで染色した。Ｋｉ６７発現によって示されるような処理後のＣＤ８＋Ｔ細胞、ＣＤ４＋Ｔ細胞、ＮＫ細胞、およびγδ Ｔ細胞の増殖を図１０４Ａ～１０４Ｄに示す。

２．４Ａ（ｂ）：Ｋｉ６７で示されるカニクイザルリンパ球の増殖
Ｘｔｅｎｄバリアントがカニクイザルにおける活性を調べるために選択されたため、カニクイザルＴ細胞を増殖させるそれらの能力を調べた。カニクイザルＰＢＭＣを示された濃度で選択された試験物質と共に３日間インキュベートした。インキュベーション後、ＰＢＭＣを抗ＣＤ３－ＦＩＴＣ（ＳＰ３４）、抗ＣＤ４－ＰＥ／Ｃｙ７（ＯＫＴ４）、抗ＣＤ８－ＡＰＣ（ＲＰＡ－Ｔ８）、抗ＣＤ４５ＲＡ－ＡＰＣ／Ｆｉｒｅ７５０（ＨＩ１００）、抗ＣＤ１６－ＢＶ６０５（３Ｇ８）、抗ＣＤ２５－ＢＶ４２１（Ｍ－Ａ２５１）、および抗Ｋｉ６７－ＰｅｒＣＰ／Ｃｙ５．５（Ｋｉ－６７）で染色して様々な細胞集団をマークし、概して実施例１Ｄに記載されるようにＦＡＣＳによって分析した。Ｋｉ６７発現によって示されるような処理後のＣＤ８＋Ｔ細胞、ＣＤ４＋Ｔ細胞、およびＮＫ細胞の増殖を図１０５Ａ～１０５Ｃに示す。さらに、実施例１Ｄに示されるデータと一致するように、ドメインリンカーなし（ヒンジのみ；すなわち、ＸＥＮＰ２４３４１）のＩＬ－１５／Ｒα－Ｆｃ親和性バリアントは、対応するＩＬ－１５／Ｒα－Ｆｃ親和性バリアントよりもカニクイザルリンパ球の増殖においてより低い効力を示した。別の実験では、３匹の動物のカニクイザルＰＢＭＣを、示された濃度でＸＥＮＰ２０８１８およびＸＭＡｂ２４３０６と共に４日間インキュベートした。インキュベーション後、ＰＢＭＣを抗ＣＤ３－ＦＩＴＣ（ＳＰ３４）、抗ＣＤ４－ＰＥ／Ｃｙ７（ＯＫＴ４）、抗ＣＤ８α－ＰＢ（ＢＷ１３５）、抗ＣＤ８ｂ－ｅＦ６６０（ＳＩＤＩ８ＢＥＥ）、抗ＣＤ４５ＲＡ－ＡＰＣ／Ｈ７（５Ｈ９）、抗ＣＤ１６－ＢＶ６０５（３Ｇ８）、抗ＣＤ５６－ＰｅｒＣＰ／Ｃｙ５．５（Ｂ１５９）、および抗Ｋｉ６７－ＰｅｒＣＰ／Ｃｙ５．５（Ｋｉ－６７）で染色して様々な細胞集団をマークし、概して実施例１Ｄに記載されるようにＦＡＣＳによって分析した。Ｋｉ６７発現によって示されるような処理後のＣＤ８＋ＣＤ８α＋ＣＤ４５ＲＡ－Ｔ細胞の増殖を図１０６に示す。

Ｂ．４Ｂ：ＧＶＨＤモデルにおけるＩＬ－１５／Ｒα－ＸｔｅｎｄＦｃバリアントのインビボ活性
１０００万個のヒトＰＢＭＣを、－７日目にＩＶ－ＯＳＰを介してＮＳＧマウスに移植し、続いて０日目に示された試験物質（０．３ｍｇ／ｋｇ）を投与した。全血を４日目および７日目に採取し、マウスを５～８日目または１１日目にそれらの脾臓のために屠殺して、ＦＡＣＳを使用してＣＤ４＋Ｔ細胞、ＣＤ８＋Ｔ細胞、およびＣＤ４５＋細胞の数を測定した。図１０７Ａ１０７Ｃはそれぞれ、４日目および７日目の全血における、ならびに８日目の脾臓における、ＣＤ４＋Ｔ細胞の数を示す。図１０８Ａ１０８Ｃはそれぞれ、４日目および７日目の全血における、ならびに８日目の脾臓における、ＣＤ８＋Ｔ細胞の数を示す。図１０９Ａ１０９Ｃはそれぞれ、４日目および７日目の全血における、ならびに８日目の脾臓における、ＣＤ４＋Ｔ細胞の数を示す。マウスの体重もまた、図１０２Ａ１０２Ｆに示されるように、－８、－２、１、５、８、および１１日目に測定した。各点は１匹の雌のＮＳＧマウスを表す。

Ｃ．４Ｃ：カニクイザルＰＢＭＣにおけるバリアントＩＬ－１５／Ｒα－ＸｔｅｎｄＦｃ融合タンパク質のインビトロ活性
バリアントＩＬ－１５／Ｒα－ＸｔｅｎｄＦｃ融合タンパク質がカニクイザルを増殖させる能力は、概して実施例３Ｉに記載されるように行った。特に、カニクイザルＰＢＭＣを示された試験物質と共に３日間インキュベートした。インキュベーション後、細胞を、抗ＣＤ３ＦＩＴＣ（ＯＫＴ３）、抗ＣＤ４－ＰＥ（ＲＰＡ－Ｔ４）、抗ＣＤ８－Ｅｆｌｕｏｒ４５０（ＳＫ－１）、抗ＣＤ１５ＰｅｒＣＰ／Ｃｙ５．５（３Ｇ８）、抗ＣＤ３ＣＤ２５－ＡＰＣ／Ｆｉｒｅ７５０（Ｍ－Ａ２５１）、抗ＣＤ４５ＲＡ－ＰＥ／Ｃｙ７（ＨＩ１００）、および抗Ｋｉ６７－ＡＰＣで染色し、フローサイトメトリーによって評価した。Ｋｉ６７を発現する様々なリンパ球集団の割合を示すデータを図１１１Ａ～１１１Ｄに示す。

Ｄ．４Ｄ：カニクイザルにおけるバリアントＩＬ－１５／Ｒα－ＸｔｅｎｄＦｃ融合タンパク質のインビボ活性
サル（ｎ＝３）に示された試験物質の単回静脈内（ｉ．ｖ．）投用量を投与し（１日目）、血液を毎日採取した。血液中のＣＤ８＋Ｔ細胞、ＣＤ４＋Ｔ細胞およびＮＫ細胞の数を、図１１２Ａ～１１２Ｃにそれぞれ示されるように経時的に評価した。各点は３匹のカニクイザルの平均である。データは、バリアントの各々が増殖性免疫細胞において活性であることを示し、これは本発明のＩＬ－１５／Ｒα－Ｆｃ融合タンパク質がヒトの癌の治療薬として有用であり得ることを示している。さらに、実施例１Ｄおよび４Ａに示されるデータと一致して、ドメインリンカー（すなわち、ＸＥＮＰ２４１１３）を有するＩＬ－１５／Ｒα－Ｆｃ親和性バリアントは、リンカーなし（ヒンジのみ、すなわち、ＸＥＮＰ２４３４１）の対応するＩＬ－１５／Ｒα－Ｆｃ親和性バリアントと比較して、カニクイザルリンパ球の拡張された拡大を示した。試験物質の血清濃度も経時的に評価し、図１１３に示されるように半減期を決定した。データは、ＸＥＮＰ２４３０６が最も延長されたＴ細胞薬理学を示すことを示す。ＸＥＮＰ２４１１３はまた、延長されたＴ細胞薬理学を示す。今後の研究では、ＸＥＮＰ２４１１３をより低い用量で評価するであろう。

ＸＶＩＩＩ．実施例５：ＩＬ－１５／Ｒα－Ｆｃ融合タンパク質は、活性化されたＴ細胞の抗腫瘍活性を増強する
Ａ．５Ａ：ＩＬ－１５／Ｒα－Ｆｃ融合タンパク質は活性化Ｔ細胞と優先的に結合する
免疫腫瘍学の文脈において、本発明のＩＬ－１５／Ｒα－Ｆｃ融合タンパク質が癌環境において活性化Ｔ細胞を選択的に標的とすることが重要である。これを調査するために、新鮮な活性化ＰＢＭＣを使用して結合実験を行った。腫瘍環境で活性化リンパ球の代用として使用される活性化ＰＢＭＣを、１００ｎｇ／ｍＬプレート結合抗ＣＤ３（ＯＫＴ３）および１μｇ／ｍｌ抗ＩＬ－２で２日間、新鮮なＰＢＭＣを刺激することによって調製した。新鮮な活性化ＰＢＭＣを、示されたＡＦ６４７標識試験物質と共に氷上で１時間インキュベートした。インキュベーション後、ＰＢＭＣを、抗ＣＤ３－ＰＥ／Ｃｙ７（ＯＫＴ３）、抗ＣＤ４－ＦＩＴＣ（ＲＰＡ－Ｔ４）、抗ＣＤ８－ＰｅｒＣＰ／Ｃｙ５．５（ＳＫ１）、抗ＣＤ１６－ＢＶ４２１（３Ｇ８）、抗ＣＤ４５ＲＡ－ＰＥ－ＨＩ１００で染色し、様々な細胞集団を同定した。ＡＦ６４７ＭＦＩで示される様々な細胞集団への試験物質の結合は、図１１４Ａ～１１４Ｆ（Ｘｔｅｎｄあり、およびドメインリンカーなしのＩＬ－１５／Ｒα－Ｆｃ親和性バリアント）、図１１５Ａ～１１５Ｆ（Ｘｔｅｎｄおよびドメインリンカーを有するＩＬ－１５／Ｒα－Ｆｃ親和性バリアント）、および図１１６Ａ～１１６Ｆ（Ｘｔｅｎｄを含む追加のフォーマットのＩＬ－１５／Ｒα－Ｆｃ融合タンパク質）に示される。データは、本発明のＩＬ－１５／Ｒα－Ｆｃ融合タンパク質が活性化ＰＢＭＣにおいてＴ細胞およびＮＫ細胞と優先的に結合し、免疫腫瘍学におけるそれらの使用の適合性を示唆していることを示す。さらに、実施例１Ｄ、４Ａ、および４Ｄに示されるデータと一致して、ドメインリンカーなし（ヒンジのみ；例えば、ＸＥＮＰ２４３４１）のＩＬ－１５／Ｒα－Ｆｃ親和性バリアントは、図１１７を参照に示されるように、リンカー（例えば、ＸＥＮＰ２４１１３）を有する対応するＩＬ－１５／Ｒα－Ｆｃ親和性バリアントよりも様々なリンパ球集団へのより少ない結合を示した。

Ｂ．５Ｂ：ＸｍＡｂ２４３０６は活性化Ｔ細胞の抗腫瘍効果を増強する
製造業者の指示に従って、ＥａｓｙＳｅｐ（商標）ＨｕｍａｎＴＣｅｌｌＥｎｒｉｃｈｍｅｎｔＫｉｔ（ＳＴＥＭＣＥＬＬＴｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ、Ｖａｎｃｏｕｖｅｒ，Ｃａｎａｄａ）を使用して、Ｔ細胞をヒトＰＢＭＣ（ＣＭＶ＋ＨＬＡ－Ａ０２０１）から精製した。精製されたＴ細胞を、ＣＦＳＥ標識化親ＭＣＦ－７腫瘍細胞（この実施例ではグループ１と指定）またはＣＦＳＥ標識化ｐｐ６５発現ＭＣＦ－７腫瘍細胞（この実施例ではグループ２と指定）を、２０：１のＥ：Ｔ比で、示された試験物質と共に４日間インキュベートした。３日目に、ブレフェルジンＡ（ＢｉｏＬｅｇｅｎｄ、ＳａｎＤｉｅｇｏ，Ｃａｌｉｆ．）および抗ＣＤ１０７ａ－ＰｅｒＣＰ／Ｃｙ５．５（ＬＡＭＰ－１）を細胞に添加した。インキュベーション後、細胞をＺｏｍｂｉｅＡｑｕａ（商標）ＦｉｘａｂｌｅＶｉａｂｉｌｉｔｙＫｉｔ（ＢｉｏＬｅｇｅｎｄ、ＳａｎＤｉｅｇｏ，Ｃａｌｉｆ．）と共に室温で３０分間インキュベートした。細胞を洗浄し、抗ＣＤ４－ＡＰＣ／ｅＦｌｕｏｒ７８０（ＲＰＡ－Ｔ４）、抗ＣＤ８ｂ－ＰＥ／Ｃｙ７（ＳＩＤＩ８ＢＥＥ）、抗ＣＤ２５－ＰＥ（Ｍ－Ａ２５１）、および抗ＣＤ６９－ＢＶ６０５（ＦＮ５０）で、氷上で１時間染色した。細胞を再度洗浄し、ｅＢｉｏｓｃｉｅｎｃｅ（商標）Ｆｏｘｐ３／ＴｒａｎｓｃｒｉｐｔｉｏｎＦａｃｔｏｒＳｔａｉｎｉｎｇＢｕｆｆｅｒＳｅｔ（ＴｈｅｒｍｏＦｉｓｈｅｒＳｃｉｅｎｔｉｆｉｃ、Ｗａｌｔｈａｍ，Ｍａｓｓ．）を使用して、抗ＩＦＮγ－ＢＶ４２１（４Ｓ．Ｂ３）および抗Ｋｉ６７－ＡＰＣで染色した。様々な細胞集団について、フローサイトメトリーにより細胞を分析した。標的細胞をＣＦＳＥ染色に基づいて同定し、死亡標的細胞をＺｏｍｂｉｅ染色に基づいて同定した。エフェクター細胞（ＣＦＳＥ－）を、ＣＤ４およびＣＤ８発現に基づいてゲーティングした。

ＣＤ２５およびＣＤ６９はＴ細胞活性化マーカーである。図１１８Ａおよび１１８Ｂは、それぞれ２つのグループのＣＤ８＋Ｔ細胞上のＣＤ２５発現（ＰＥＭＦＩで示される）を示し、図１１９Ａおよび１１９Ｂはそれぞれ、ＣＤ４＋Ｔ細胞上のＣＤ２５発現を示す。図１２０Ａおよび１２０Ｂは、それぞれ２つのグループのＣＤ８＋Ｔ細胞上のＣＤ６９発現（ＢＶ６０５ＭＦＩで示される）を示し、図１２１Ａ１２１Ｂはそれぞれ、ＣＤ４＋Ｔ細胞上のＣＤ６９発現を示す。

Ｋｉ６７は、タンパク質の増殖に厳密に関連するタンパク質である。図１２２Ａ～１２２Ｂは、それぞれ２つのグループのＣＤ８＋Ｔ細胞上の細胞内ＩＦＮγ発現（ＢＶ４２１ＭＦＩで示される）を示し、図１２３Ａ～１２３Ｂは、それぞれＣＤ４＋Ｔ細胞上の細胞内ＩＦＮγ発現を示す。図１２４Ａ～１２４Ｃは、それぞれグループ１のＣＤ８＋Ｔ細胞のＫｉ－６７＋／ＩＦＮγ－、Ｋｉ－６７＋／ＩＦＮγ＋、およびＫｉ－６７－／ＩＦＮγ＋画分を示す。図１２５Ａ～１２５Ｃは、それぞれグループ１のＣＤ４＋Ｔ細胞のＫｉ－６７＋／ＩＦＮγ－、Ｋｉ－６７＋／ＩＦＮγ＋、およびＫｉ－６７－／ＩＦＮγ＋画分を示す。図１２６Ａ～１２６Ｃは、それぞれグループ１のＣＤ８＋Ｔ細胞のＫｉ－６７＋／ＩＦＮγ－、Ｋｉ－６７＋／ＩＦＮγ＋、およびＫｉ－６７－／ＩＦＮγ＋画分を示す。図１２７Ａ～１２７Ｃは、それぞれグループ１のＣＤ４＋Ｔ細胞のＫｉ－６７＋／ＩＦＮγ－、Ｋｉ－６７＋／ＩＦＮγ＋、およびＫｉ－６７－／ＩＦＮγ＋画分を示す。

ＣＤ１０７ａは、脱顆粒および細胞溶解活性のさらなる指標に関連している。図１２８Ａおよび１２８Ｂは、それぞれ２つのグループのＣＤ８^＋Ｔ細胞上のＣＤ１０７ａ発現（ＰｅｒＣＰ／Ｃｙ５．５ＭＦＩで示される）を示し、図１２９Ａ～１２９Ｂはそれぞれ、ＣＤ４^＋Ｔ細胞上のＣＤ１０７ａ発現を示す。

図１３０Ａ～１３０Ｂは、それぞれ２つのグループの残りの標的細胞（すなわち、親ＭＣＦ－７腫瘍細胞またはｐｐ６５発現ＭＣＦ－７腫瘍細胞）の数を示し、図１３１Ａ～１３１Ｂは、死亡標的細胞の数を示す。

全体として、データは、本発明のＩＬ－１５／Ｒα－Ｆｃ融合タンパク質が腫瘍細胞の殺傷を促進するだけでなく、融合タンパク質が活性化リンパ球を選択的に拡大し、腫瘍浸潤リンパ球に対する選択性の可能性を示していることを示す。特に、ＩＬ－１５／Ｒα－Ｆｃ融合タンパク質は、Ｋｉ６７^＋ＩＦＮγ^＋である各集団の割合で示されるように、ＣＤ８＋およびＣＤ４＋Ｔ細胞の増殖を優先的に誘導する。

活性化Ｔ細胞の優先的増殖を確認する同様の実験で、ヒトＰＢＭＣ（ＣＭＶ＋ＨＬＡ－Ａ０２０１）から精製されたＴ細胞を、抗ＨＬＡ－Ａ抗体（Ｗ６／３２）ありまたはなしで、親またはｐｐ６５発現ＭＣＦ－７腫瘍細胞と共に３０：１のＥ：Ｔ比でインキュベートした（ＴＣＲを介したＴ細胞の活性化を低減／排除するため）。Ｋｉ６７^＋／ＩＦＮγ^＋であるＣＤ８^＋Ｔ細胞の割合を示すデータを図１３２に示す。残りの標的細胞（例えば、親ＭＣＦ－７腫瘍細胞またはｐｐ６５発現ＭＣＦ－７腫瘍細胞）の数を示すデータを図１３３に示す。抗ＨＬＡ－Ａ抗体とのインキュベーションおよびその後のＴ細胞活性化の低減により、ＣＤ８^＋Ｋｉ６７^＋ＩＦＮγ^＋Ｔ細胞の割合が低下し、標的細胞の殺傷力が低下し、活性化リンパ球の選択的拡大がさらに示された。

Ｃ．５Ｃ：ＸＥＮＰ２４１１３は活性化Ｔ細胞の抗腫瘍効果を増強する
製造業者の指示に従って、ＥａｓｙＳｅｐ（商標）ＨｕｍａｎＴＣｅｌｌＥｎｒｉｃｈｍｅｎｔＫｉｔ（ＳＴＥＭＣＥＬＬＴｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ、Ｖａｎｃｏｕｖｅｒ，Ｃａｎａｄａ）を使用して、Ｔ細胞をヒトＰＢＭＣ（ＣＭＶ＋ＨＬＡ－Ａ０２０１）から精製した。精製されたＴ細胞を、２０：１のＥ：Ｔ比でのＣＦＳＥ標識化ｐｐ６５発現ＭＣＦ－７腫瘍細胞および示された試験物質と共に４日間インキュベートした。３日目に、ブレフェルジンＡ（ＢｉｏＬｅｇｅｎｄ、ＳａｎＤｉｅｇｏ，Ｃａｌｉｆ．）および抗ＣＤ１０７ａ－ＰｅｒＣＰ／Ｃｙ５．５（ＬＡＭＰ－１）を細胞に添加した。インキュベーション後、細胞をＺｏｍｂｉｅＡｑｕａ（商標）ＦｉｘａｂｌｅＶｉａｂｉｌｉｔｙＫｉｔ（ＢｉｏＬｅｇｅｎｄ、ＳａｎＤｉｅｇｏ，Ｃａｌｉｆ．）と共に室温で３０分間インキュベートした。細胞を洗浄し、抗ＣＤ４－ＡＰＣ／ｅＦｌｕｏｒ７８０（ＲＰＡ－Ｔ４）、抗ＣＤ８ｂ－ＰＥ／Ｃｙ７（ＳＩＤＩ８ＢＥＥ）、抗ＣＤ２５－ＰＥ（Ｍ－Ａ２５１）、および抗ＣＤ６９－ＢＶ６０５（ＦＮ５０）で、氷上で１時間染色した。細胞を再度洗浄し、ｅＢｉｏｓｃｉｅｎｃｅ（商標）Ｆｏｘｐ３／ＴｒａｎｓｃｒｉｐｔｉｏｎＦａｃｔｏｒＳｔａｉｎｉｎｇＢｕｆｆｅｒＳｅｔ（ＴｈｅｒｍｏＦｉｓｈｅｒＳｃｉｅｎｔｉｆｉｃ、Ｗａｌｔｈａｍ，Ｍａｓｓ．）を使用して、抗ＩＦＮγ－ＢＶ４２１（４Ｓ．Ｂ３）および抗Ｋｉ６７－ＡＰＣで染色した。様々な細胞集団について、フローサイトメトリーにより細胞を分析した。標的細胞をＣＦＳＥ染色に基づいて同定し、死亡標的細胞をＺｏｍｂｉｅ染色に基づいて同定した。エフェクター細胞（ＣＦＳＥ－）を、ＣＤ４およびＣＤ８発現に基づいてゲーティングした。

ＣＤ２５およびＣＤ６９はＴ細胞活性化マーカーである。図１３４Ａおよび１３４Ｂは、それぞれＣＤ８^＋Ｔ細胞およびＣＤ４^＋Ｔ細胞上の（ＰＥＭＦＩで示されるような）ＣＤ２５発現を示す。図１３５Ａおよび１３５Ｂは、それぞれＣＤ８^＋Ｔ細胞およびＣＤ４^＋Ｔ細胞上の（ＢＶ６０５ＭＦＩで示されるような）ＣＤ６９発現を示す。

Ｋｉ６７は、タンパク質の増殖に厳密に関連するタンパク質である。図１３６Ａおよび１３６Ｂは、それぞれＣＤ８^＋Ｔ細胞およびＣＤ４^＋Ｔ細胞における（ＡＰＣＭＦＩで示されるような）Ｋｉ６７発現を示す。図１３７Ａおよび１３７Ｂは、それぞれＣＤ８＋Ｔ細胞およびＣＤ４^＋Ｔ細胞のＫｉ－６７^＋／ＩＦＮγ^＋画分を示す。図１３８Ａおよび１３８Ｂは、それぞれＣＤ８＋Ｔ細胞およびＣＤ４^＋Ｔ細胞のＣＤ６９^＋／ＩＦＮγ^＋画分を示す。図１３９Ａおよび１３９Ｂは、それぞれＣＤ８＋Ｔ細胞およびＣＤ４^＋Ｔ細胞のＣＤ６９^＋／Ｋｉ－６７^＋画分を示す。図１４０は残りの標的細胞（例えば、ｐｐ６５発現ＭＣＦ－７腫瘍細胞）の数を示し、図１４１は死亡標的細胞の数を示す。

実施例５Ｂと一致して、ＩＬ－１５／Ｒα－Ｆｃ融合タンパク質の各々は、Ｋｉ６７発現によって示されるように、ＣＤ４^＋Ｔ細胞よりもＣＤ８^＋Ｔ細胞の増殖を優先的に誘導する。特に、ＣＤ６９^＋ＫＩ６７^＋およびＣＤ６９^＋ＩＦＮγ^＋画分の両方の増加は、ｐｐ６５－ＭＣＦ７標的殺傷と相関していた。したがって、活性化Ｔ細胞の増殖においてＸｍＡｂ２４３０６よりも高い効力を有するＸＥＮＰ２４１１３も、標的殺傷においてより強力である。

Ｄ．５Ｄ：ＩＬ－１５／Ｒα－Ｆｃはマウスにおいて抗腫瘍効果を増強する
実施例４Ｂに示される研究では、ＸｍＡｂ２４３０６を含むいくつかの低効力バリアントは、ＧＶＨＤを増強することに失敗した。Ｘｔｅｎｄ置換（Ｍ４２８Ｌ／Ｎ４３４Ｓ）は、ヒトおよびカニクイザルのＰＫを増強するが、一方で、置換は実際にマウスにおいて曝露を減少させる。したがって、この実施例に示される研究では、ＸｍＡｂ２４３０６の非Ｘｔｅｎｄ類似体であるＸＥＮＰ２４０４５を、マウスにおけるその抗腫瘍効果について評価した。

ＮＯＤＳＣＩＤガンマ（ＮＳＧ）マウス（１グループあたり１０匹）に、－１４日目に、背腹部に３×１０^６個のｐｐ６５発現ＭＣＦ－７細胞を皮内移植した。０日目に、マウスに、Ｔ細胞ｐｐ６５反応性（または対照マウスのＰＢＳ）に対して陽性とスクリーニングされたＨＬＡ適合ＣＭＶ^＋ドナーからの５×１０^６個のヒトＰＢＭＣを腹腔内移植した。マウスを示された試験物質またはＰＢＳ（対照マウス用）で４週間（合計４回用量）毎週処置した。腫瘍体積はキャリパー測定によりモニタリングし、そのデータを図１４２Ａおよび１４２Ｂに示す（初回投与後の日数）。図１４３Ａ～１４３Ｄに示されるように、７、１２、１９、および２６日目に血液を採取し、フローサイトメトリーによって分析して、様々なリンパ球集団を計数した。このモデルでは、ＸＥＮＰ２４０４５はＰＢＭＣのみと比較して腫瘍成長を著しく低減した。

ＸＩＸ．実施例６：Ｘｔｅｎｄ－ＦｃありまたはなしのＩＬ－１５／Ｒα－Ｆｃ融合タンパク質の効力の低減は、カニクイザルにおける薬力学および薬物動態の両方を増強する
実施例３Ｊに示されるように、いくつかの効力が低減したＩＬ－１５／Ｒα－Ｆｃバリアント、ならびにＸＥＮＰ２２８２１のＸｔｅｎｄ類似体であるＸＥＮＰ２３３４３は、カニクイザルにおいて活性であった。

経時的な試験物質の血清濃度および半減期を図１４４に示す。データは、効力がカニクイザルにおける曝露と逆相関し、最も長い半減期を有する不活性ＩＬ－１５／Ｒα－Ｆｃ融合バリアントＸＥＮＰ２２８３４であることを示す。これは、実施例３Ｆに示されるマウスのデータと一致している。特に、ＸＥＮＰ２２８２１の１倍および３倍の用量でのＣｍａｘ正規化血清濃度（図１４５に示される）で示されるように、用量の増加はＰＫへの最小の影響を有する。さらに、Ｘｔｅｎｄ置換は、ＸＥＮＰ２３３４３の半減期によって示されるように、曝露を著しく改善する。

さらに、図８７Ａ～８７Ｅ、９１Ａ～９１Ｅ、および９７Ａ～９７Ｅに示されるように、ＸＥＮＰ２０８１８、ＸＥＮＰ２２８２１、およびＸＥＮＰ２３３４３による処置後のカニクイザルにおけるリンパ球数は、図１４６Ａ～１４６Ｅのそれらの平均倍数変化のオーバーレイとして再プロットされ、薬力学の改善を強調した。データは、効力が低減したＩＬ－１５／Ｒα－ＦｃバリアントＸＥＮＰ２２８２１が、野生型ＩＬ－１５／Ｒα－Ｆｃ融合ＸＥＮＰ２０８１８より長い期間リンパ球数を拡大させることを明確に示す。特に、ＸＥＮＰ２２８２１のＸｔｅｎｄ類似体であるＸＥＮＰ２３３４３は、ＸＥＮＰ２２８２１を超えたリンパ球拡大の期間をさらに増強した。

さらなる研究では、カニクイザルに０．３倍用量のＸＥＮＰ２２８２１（ｎ＝３）または０．６倍用量のＸｍＡｂ２４３０６の単回静脈内（ｉｖ）用量を投与し、様々なパラメータを経時的に評価した。データは、ＸｍＡｂ２４３０６が、良好な忍容性と共により低い０．６倍用量で同様のＰＫ／ＰＤを示す（実施例４Ｄに示される３倍用量と比較して；図１４７Ａおよび１４７Ｂに示される２つの研究のリンパ球拡大のオーバーレイ）。特に、ＸＥＮＰ２２８２１（０．３倍用量）と同様の用量にもかかわらず、ＸｍＡｂ２４３０６（０．６倍用量）は、より強力なＸＥＮＰ２２８２１より優れたＰＫ／ＰＤを示し、１０日目まで末梢Ｋｉ－６７陽性（図１４９～１５１）および１５日目までリンパ節Ｋｉ－６７陽性（研究終了；図１４８）である。さらに、ＸｍＡｂ２４３０６は、Ｔｒｅｇを含むＣＤ４＋Ｔ細胞よりも優先的にＣＤ８＋Ｔ細胞を拡大する（図１５３および１５４を参照されたい）。図１５５Ａ～１５５Ｃは、この研究（ＸｍＡｂ２４３０６の投与後）および実施例３Ｊ（ＸＥＮＰ２０８１８、ＷＴＩＬ－１５／Ｒα－Ｆｃの投与後）に示される研究からのＣＤ８＋Ｔ細胞、ＣＤ４＋Ｔ細胞、ＣＤ１６＋ＮＫ細胞数のオーバーレイを示し、効力の低減によってもたらされる増強された薬力学をさらに説明する。

ＸＸ．実施例７：効力の低減は、ＩＬ－１５／Ｒα－Ｆｃ融合タンパク質の免疫機構に影響を与えない
ＸｍＡｂ２４３０６の効力の低減は、ＷＴＸＥＮＰ２０８１８などのより効力の高いＩＬ－１５／Ｒα－Ｆｃ融合タンパク質で同じレベルのＴ細胞拡大を達成するために、より高い濃度を必要とする。しかしながら、効力の低減および／またはより高い濃度が、ＩＬ－１５／Ｒα－Ｆｃ治療に関連する免疫機構を変化させるであろうという懸念があった。したがって、ＰＢＭＣ、単離されたＣＤ８＋Ｔ細胞、および単離されたＮＫ細胞における免疫関連遺伝子のプロファイルを、それらのそれぞれのＥＣ５０でのＸＥＮＰ２０８１８（ＷＴＩＬ－１５／Ｒα－Ｆｃ融合）およびＸｍＡｂ２４３０６のいずれかとのインキュベーション後に調査した。

製造業者の指示に従って、ＥａｓｙＳｅｐ（商標）ＨｕｍａｎＴＣｅｌｌＥｎｒｉｃｈｍｅｎｔＫｉｔ（ＳＴＥＭＣＥＬＬＴｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ、Ｖａｎｃｏｕｖｅｒ，Ｃａｎａｄａ）を使用して、ＣＤ８＋Ｔ細胞を濃縮した。製造業者の指示に従って、ＥａｓｙＳｅｐ（商標）ＨｕｍａｎＣＤ５６ＰｏｓｉｔｉｖｅＳｅｌｅｃｔｉｏｎＫｉｔＩＩ（ＳＴＥＭＣＥＬＬＴｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ、Ｖａｎｃｏｕｖｅｒ，Ｃａｎａｄａ）を使用して、ＮＫ細胞を濃縮した。２００万個の新鮮なＰＢＭＣ、ＣＤ８＋Ｔ細胞、またはＮＫ細胞を、ＸＥＮＰ２０８１８、ＸｍＡｂ２４３０６、組換えＩＬ－１５、または組換えＩＬ－２と共に２４時間または４８時間インキュベートした。インキュベーション後、ＲＮｅａｓｙＰｌｕｓＭｉｎｉＫｉｔ（Ｑｉａｇｅｎ、Ｈｉｌｄｅｎ，Ｇｅｒｍａｎｙ）を使用してＲＮＡを抽出した。試料あたり１００ｎｇのＲＮＡを、ｎＣｏｕｎｔｅｒ（登録商標）ＰａｎＣａｎｃｅｒＩｍｍｕｎｅＰｒｏｆｉｌｉｎｇＰａｎｅｌ（ＮａｎｏＳｔｒｉｎｇＴｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ、Ｓｅａｔｔｌｅ，Ｗａｓｈ．）でアッセイした。ＸＥＮＰ２０８１８およびＸｍＡｂ２４３０６による処理後の遺伝子発現の倍数変化を、図１５６Ａアラ１５６Ｃおよび図１５７Ａ～１５７Ｃに示されるように、様々な条件でプロットした。データは、各場合で、遺伝子発現プロファイルがＸＥＮＰ２０８１８およびＸｍＡｂ２４３０６の間でよく相関していることを示し、より高い濃度でより低い効力のＩＬ－１５／Ｒα－ヘテロＦｃ融合を投与した後、免疫機構に変化がないことを示唆する。対照的に、ＸｍＡｂ２４３０６対ＩＬ－１５で４８時間処理した後の遺伝子発現の倍数変化の相関を図１５８Ａに示す。より低い相関は、ＩＬ－１５Ｒα受容体を有する細胞にも結合する組換えＩＬ－１５によるものと推定される。さらに対照的に、ＸｍＡｂ２４３０６対ＩＬ－２で４８時間処理した後の遺伝子発現の倍数変化の相関を図１５８Ｂに示す。より低い相関は、異なる受容体（すなわち、ＩＬ－２Ｒα）への組換えＩＬ－２の結合によるものと推定される。

ＸＸＩ．実施例８：ＩＬ－１５／Ｒα－Ｆｃ融合タンパク質およびＴｒｅｇ
エフェクターＴ細胞の増殖に加えて、ＩＬ－１５は、Ｔｒｅｇ上の受容体と結合して、それらの増殖を増強することもできるが、しかしながら、Ｔｒｅｇは、免疫応答を抑制するため、腫瘍治療には好ましくないと考えられている。実施例６に示される研究では、本発明のＩＬ－１５／Ｒα－Ｆｃ融合タンパク質が、ＴｒｅｇよりもＣＤ８＋Ｔ細胞を選択的に拡大したことを見出した。ここでは、エフェクターＴ細胞のＴｒｅｇ抑制に対する本発明のＩＬ－１５／Ｒα－Ｆｃ融合タンパク質の影響も調査した。

ラパマイシンは、インビトロでＣＤ４＋ＣＤ２５＋ＦＯＸＰ３＋Ｔｒｅｇの増殖を促進し、結果として生じる拡大したＴｒｅｇは、ＣＤ４＋およびＣＤ８＋Ｔ細胞の増殖を抑制することが以前に報告されている（例えば、Ｂａｔｔａｇｌｉａｅｔａｌ．（２００６）ＲａｐａｍｙｃｉｎｐｒｏｍｏｔｅｓｅｘｐａｎｓｉｏｎｏｆｆｕｎｃｔｉｏｎａｌＣＤ４＋ＣＤ２５＋ＦＯＸＰ３＋ｒｅｇｕｌａｔｏｒｙＴｃｅｌｌｓｏｆｂｏｔｈｈｅａｌｔｈｙｓｕｂｊｅｃｔｓａｎｄｔｙｐｅ１ｄｉａｂｅｔｉｃｐａｔｉｅｎｔｓ．ＪＩｍｍｕｎｏｌ．１７７（１２）８３３８－８３４７、およびＳｔｒａｕｓｓｅｔａｌ．（２００７）ＳｅｌｅｃｔｉｖｅｓｕｒｖｉｖａｌｏｆｎａｔｕｒａｌｌｙｏｃｃｕｒｒｉｎｇｈｕｍａｎＣＤ４＋ＣＤ２５＋Ｆｏｘｐ３＋ｒｅｇｕｌａｔｏｒｙＴｃｅｌｌｓｃｕｌｔｕｒｅｄｗｉｔｈｒａｐａｍｙｃｉｎ．ＪＩｍｍｕｎｏｌ．１７８（１）３２０－３２９を参照されたい）。したがって、ＣＤ４＋細胞を、ＥａｓｙＳｅｐ（商標）ＨｕｍａｎＣＤ４＋ＴＣｅｌｌＥｎｒｉｃｈｍｅｎｔＫｉｔ（ＳＴＥＭＣＥＬＬＴｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ、Ｖａｎｃｏｕｖｅｒ，Ｃａｎａｄａ）を使用して、ネガティブ選択によりヒトＰＢＭＣから濃縮した。Ｔｒｅｇを、ＲＰＭＩ１６４０＋１０％ウシ胎児血清＋０．１μｇ／ｍｌラパマイシン＋５００Ｕ／ｍｌＩＬ－２で、Ｄｙｎａｂｅａｄｓ（商標）ＨｕｍａｎＴｒｅｇＥｘｐａｎｄｅｒ（ＴｈｅｒｍｏＦｉｓｈｅｒＳｃｉｅｎｔｉｆｉｃ、Ｗａｌｔｈａｍ，Ｍａｓｓ．）を使用して１～４日間拡大させた。Ｔｒｅｇを、０．５μｇ／ｍｌの抗ＣＤ３（ＯＫＴ３、Ｂｉｏｌｅｇｅｎｄ、ＳａｎＤｉｅｇｏ，Ｃａｌｉｆ．）でコーティングしたＴ７５フラスコに移し、ＲＰＭＩ１６４０＋１０％ウシ胎児血清＋０．１μｇ／ｍｌラパマイシン＋１００Ｕ／ｍｌＩＬ－２＋０．５μｇ／ｍｌ抗ＣＤ２８ｍＡｂで培養した。ＰＢＭＣ由来のＣＤ４＋Ｔ細胞の初回の濃縮から少なくとも８日後に実験を行った。

１ｘ１０^５個のＣＦＳＥ標識化ＰＢＭＣ（自己由来）を、プレート結合抗ＣＤ３（１００ｎｇ／ｍｌ；ＯＫＴ３）上に、Ｔａｇ－ｉｔＶｉｏｌｅｔ標識化Ｔｒｅｇの２倍希釈液で、１０μｇ／ｍｌのＸｍＡｂ２４３０６で３日間、３７℃で共培養した。ＣＤ８＋およびＣＤ４＋レスポンダー細胞の増殖を、ＣＦＳＥまたはＴａｇ－ｉｔＶｉｏｌｅｔ希釈によって測定し、ＺｏｍｂｉｅＡｑｕａ（商標）ＦｉｘａｂｌｅＶｉａｂｉｌｉｔｙＫｉｔ（ＢｉｏＬｅｇｅｎｄ、ＳａｎＤｉｅｇｏ，Ｃａｌｉｆ．）で染色して、死細胞を除外し、データを図１５９Ａおよび１５９Ｂに示す。データは、ＸｍＡｂ２４３０６が抗ＣＤ３誘導エフェクターＴ細胞増殖のＴｒｅｇ抑制を克服することを示す。

ＸＸＩＩ．実施例９：チェックポイント遮断抗体と組み合わせたＩＬ－１５／Ｒα－Ｆｃ融合タンパク質
次に、本発明のＩＬ－１５／Ｒα－Ｆｃ融合タンパク質がチェックポイント遮断と合わせるのに好適であるかどうかを調査した。実施例５Ｂと同様に、ＸｍＡｂ２４３０６の非Ｘｔｅｎｄ類似体を使用した。使用したチェックポイント遮断抗体は、ＸＥＮＰ１６４３２（エフェクター機能が切断されたニボルマブに基づく二価抗ＰＤ－１ｍＡｂであり、配列は図１６０に示される）であった。１０００万個のヒトＰＢＭＣを、－１日目にＩＶ－ＯＳＰを介してＮＳＧマウスに移植し、続いて０、７、１４、および２１日目に示された濃度で示された試験物質を投与した。全血を６日目および１０日目に採取し、ＦＡＣＳを使用してＣＤ４＋Ｔ細胞、ＣＤ８＋Ｔ細胞、ＣＤ４５＋細胞、およびＮＫ細胞の数、ならびにＩＦＮγの血清濃度を測定し、体重を週２回測定した。６日目および１０日目の細胞数を図１６１Ａおよび１６１Ｂ、１６２Ａおよび１６２Ｂ、１６３Ａおよび１６３Ｂ、ならびに１６４Ａおよび１６４Ｂに示し、７日目の血清ＩＦＮγ濃度を図１６５に示し、７、１１、１４、および１８日目までの体重の変化を図１６６Ａ～１６６Ｄに示す。各点は１匹の雌のＮＳＧマウスを表す。データは、ＸＥＮＰ２４０４５が白血球の拡大を促進し、全ての用量レベルで異種ＧＶＨＤを悪化させることを示す。特に、ＸＥＮＰ２４０４５は、特により低い０．３ｍｇ／ｋｇのＸＥＮＰ２４０４５用量で、ＰＤ－１遮断（ＸＥＮＰ１６４３２）との強い相乗効果を示す。

ＸＸＩＩＩ．実施例１０：様々なリンパ球集団に対するＷＴＩＬ－１５／Ｒα－Ｆｃ増殖効果
ＷＴＩＬ－１５／Ｒα－Ｆｃ（ＸＥＮＰ２０８１８）とのインキュベーション後の、Ｋｉ６７を発現する様々なリンパ球集団の割合を、本明細書に記載される実施例の他の場所に概して記載されるように調査し、そのデータを図１６７に示す。

ＸＸＩＶ．実施例１１：ＸＥＮＰ２４３０６は、ＣＤ８^＋ＣＤ２５^＋Ｔ細胞上のＳＴＡＴ５リン酸化を刺激することにおける効力の減少を実証する
ＸＥＮＰ２４３０６、ＷＴＩＬ－１５／Ｒα－Ｆｃ（ＸＥＮＰ２０８１８）、および他の効力のバリアントとのインキュベーション後の、ＣＤ８＋ＣＤ４５ＲＡ＋Ｔ細胞上のＳＴＡＴ５リン酸化を、実施例の他の場所に概して記載されるように調査し、そのデータを図１６８および１６９に示す。

ＸＸＶ．実施例１２：効力の低減は、用量を調節したときに同様のシグナル伝達動態を示す
ヒトＰＢＭＣは、ＸＥＮＰ２０８１８またはＸＥＮＰ２４３０６のＥＣ５０用量で刺激され、６日間毎日アッセイした。３日後に細胞を試験物質から洗浄した。Ｋｉ６７を発現するＣＤ８^＋ＣＤ４５ＲＡ^－Ｔ細胞の割合を示すデータ、ならびにＣＤ８^＋ＣＤ４５ＲＡ^－Ｔ細胞上のＢＣＬ－２およびＣＤ２５発現を、図１７０、１７１、および１７２にそれぞれ示す。データは、効力の低減が、用量を調節したときに、ＷＴと比較して同様のシグナル伝達動態を示すことを示す。

ＸＸＶＩ．実施例１３：ＸＥＮＰ２４０４５は、活性化Ｔ細胞上でＳＴＡＴ５リン酸化を優先的に誘導する
ＸＥＮＰ２４０４５（ＸＥＮＰ２４３０６の非Ｘｔｅｎｄアナログ）およびＷＴＩＬ－１５／Ｒα－Ｆｃとのインキュベーション後の、新鮮なヒトＰＢＭＣ対刺激されたヒトＰＢＭＣにおけるＣＤ８^＋Ｔ細胞上のＳＴＡＴ５リン酸化を、本明細書に記載される実施例の他の場所に概して記載されるように調査し、そのデータを図１７３に示す。データは、ＸＥＮＰ２０８１８およびＸＥＮＰ２４０４５の両方が、刺激されたＰＢＭＣにおけるＣＤ８^＋Ｔ細胞上にＳＴＡＴ５リン酸化を優先的に誘導し、活性化Ｔ細胞の優先を示していることを示す。

ＸＸＶＩＩ．実施例１４：ＸＥＮＰ２４３０６は活性化Ｔ細胞を優先的に拡大する
２ｘ１０^５個のＣＦＳＥ標識化ヒトＰＢＭＣを、示された用量のＸＥＮＰ２４３０６と共に、示された用量のプレート結合抗ＣＤ３（ＯＫＴ３）で４日間インキュベートした。Ｔ細胞の増殖をＣＦＳＥ希釈によって測定し、Ｚｏｍｂｉｅ色素を使用して死細胞を除外した。増殖するＣＤ８^＋ＣＤ４５ＲＡ^－Ｔ細胞の割合を示すデータを図１７４に示し、Ｔ細胞の活性化の増加（αＣＤ３のより高い濃度による）が、ＸＥＮＰ２４３０６によるＣＤ８^＋Ｔ細胞のより大きな増殖を可能したことを示す。

ＸＸＶＩＩＩ．実施例１５：ＸＥＮＰ２４０４５およびＸＥＮＰ２３５５７は、ｈｕＰＢＭＣ移植ＮＳＧマウス（ＧＶＨＤモデル）におけるＴ細胞増殖およびＩＦＮγ生成を増強し、チェックポイント遮断と組み合わせる。
ＸＥＮＰ２４０４５（ＸＥＮＰ２４３０６の非Ｘｔｅｎｄ類似体）およびＸＥＮＰ２３５５７（ＸＥＮＰ２４１１３の非Ｘｔｅｎｄ類似体）を、単独で、または抗ＰＤ－１ｍＡｂと組み合わせて、別のＧＶＨＤ研究で調査した。ＮＳＧマウスに、１日目にＩＶ－ＯＳＰを介して５ｘ１０^６個のヒトＰＢＭＣを移植し、０、７、１４、および２１日目に示された濃度の示された試験物質を投与した。図１７５は、１０日目の血清ＩＦＮγ濃度を示し、図１７６は、１７日目のＣＤ４５^＋細胞数を示し、図１７７は、２５日目の体重（初期体重の割合として）を示す。

データは、ＸＥＮＰ２４０４５およびＸＥＮＰ２３５５７がＴ細胞の増殖およびＩＦＮγ生成を増強し、ＧＶＨＤも増強することを示す。特に、データは、Ｔ細胞増殖およびＩＦＮγ生成の両方の明らかな用量応答がさらに増強され、ＸＥＮＰ２３５５７の０．１ｍｇ／ｋｇおよびＸＥＮＰ２３５５７の０．１ｍｇ／ｋｇ対０．０３ｍｇ／ｋｇと比較して０．３ｍｇ／ｋｇ用量で、ＧＥＮＶが体重の変化によって示されるようにさらに悪化したことを示す。さらに、データは、ＩＬ－１５／Ｒα－Ｆｃ融合が、Ｔ細胞増殖およびＩＦＮγセクションの増強およびＧＶＨＤの増強によって示されるように、チェックポイント遮断と十分に合うことを示す。

ＸＸＩＸ．実施例１６：ＸＥＮＰ２４０４５は、ｈｕＰＢＭＣ移植ＮＳＧマウス（ＧＶＨＤモデル）におけるＴ細胞増殖およびＩＦＮγ生成を増強し、チェックポイント遮断と組み合わせる。
ＸＥＮＰ２４０４５（ＸＥＮＰ２４３０６の非Ｘｔｅｎｄ類似体）を単独で、または抗ＰＤ－１ｍＡｂと組み合わせて調査する別のＧＶＨＤ研究では、ＮＳＧマウスに、１日目にＩＶ－ＯＳＰを介して１０ｘ１０６個のヒトＰＢＭＣを移植し、０、７、１４、および２１日目に示された濃度の示された試験物質を投与した。

図１７８は、７日目の血清ＩＦＮγ濃度を示し、図１７９は、１０日目の様々なリンパ球集団の数を示し、図１８０および１８１は、それぞれ１１日目および試験期間中にわたる体重（初期体重の割合として）を示す。実施例１５と一致して、データは、ＸＥＮＰ２４０４５がＴ細胞増殖およびＩＦＮγ生成を増強することを示す。さらに、データはまた、ＸＥＮＰ２４０４５が、Ｔ細胞増殖およびＩＦＮγセクションの増強およびＧＶＨＤの増強によって示されるように、チェックポイント遮断と十分に合うことを示す。

ＸＸＸ．実施例１７：ＩＬ－１５－Ｆｃ融合は、マウス腫瘍モデルにおけるＰＤ－１遮断の抗腫瘍活性を増強する
ＮＳＧマウス（グループあたり１０匹）に、－１４日目に３ｘ１０６個のｐｐ６５形質導入ＭＣＦ－７細胞を皮内接種した。次いで、マウスに１．５ｘ１０６または５ｘ１０６個のｐｐ６５反応性ヒトＰＢＭＣ（または対照にはＰＢＳ）を腹腔内注射し、０日目に試験物質（ＰＢＳ、３．０ｍｇ／ｋｇのＸＥＮＰ１６４３２、または３ｍｇ／ｋｇのＸＥＮＰ１６４３２と組み合わせた０．５ｍｇ／ｋｇのＸＥＮＰ２４０４５）で処置し、７、１４、および２１日目に示された試験物質でさらに処置した。１．５ｘ１０６個のｈｕＰＢＭＣを移植したマウスにおける、ｈｕＰＢＭＣ移植後２１日目のＣＤ４５＋細胞数を図１８２に示す。１．５ｘ１０６個のｈｕＰＢＭＣを移植したマウスにおけるＨｕＰＢＭＣ移植後３１日目、ならびに研究期間中にわたる腫瘍体積を図１８３および１８４に示す。研究期間中にわたる５ｘ１０６個のｈｕＰＢＭＣを移植したマウスにおける腫瘍体積を図１８５に示す。データは、ＩＬ－１５－Ｆｃ融合ＸＥＮＰ２４０４５が、１．５ｘ１０６個のｈｕＰＢＭＣを移植したマウスにおける抗ＰＤ－１遮断の抗腫瘍活性を増強することを示す。特に図１８５に示されるように、５ｘ１０６個のｈｕＰＢＭＣを移植したマウスでは、ＸＥＮＰ２４０４５およびＸＥＮＰ１６４３２を組み合わせても、ＸＥＮＰ１６４３２単独での処置よりも抗腫瘍活性は増強されなかった。これは以下を示唆する：ａ）ＩＬ－１５－Ｆｃ融合とチェックポイント遮断とを組み合わせると、腫瘍浸潤リンパ球（ＴＩＬ）の数が少ない腫瘍の治療に大きな利益を提供し得ること；ならびにｂ）チェックポイント遮断免疫療法単独に対する反応が最適ではない患者において、本発明のＩＬ－１５－Ｆｃ融合体などのサイトカイン免疫療法の追加は、抗腫瘍応答を増強し得ること。

ＸＸＸＩ．実施例１８：カニクイザルにおけるＩＬ－１５－Ｆｃ効力バリアントの薬物動態の調査
ＸｔｅｎｄによるＩＬ－１５－Ｆｃ効力バリアントの薬物動態を調査する別の研究では、カニクイザルに、ＸＥＮＰ２２８５３（Ｘｔｅｎｄを含むＷＴＩＬ－１５／Ｒα－ヘテロＦｃ）、ＸＥＮＰ２４３０６（Ｘｔｅｎｄを含むＩＬ－１５（Ｄ３０Ｎ／Ｅ６４Ｑ／Ｎ６５Ｄ）／Ｒα－ヘテロＦｃ）、ＸＥＮＰ２４１１３（Ｘｔｅｎｄを含むＩＬ－１５（Ｎ４Ｄ／Ｎ６５Ｄ）／Ｒα－ヘテロＦｃ）、およびＸＥＮＰ２４２９４（Ｘｔｅｎｄを含むｓｃＩＬ－１５（Ｎ４Ｄ／Ｎ６５Ｄ）／Ｒα－Ｆｃ）を様々な濃度で投与した。

図１８９は、最初の投与後の経時的な試験物質の血清濃度を示す。図１９０は、ＸＥＮＰ２２８５３および対応するＷＴ非ＸｔｅｎｄＸＥＮＰ２０８１８（カニクイザルの以前の研究からの）の相対的な血清中濃度を経時的に示す。実施例６に示されるデータと一致して、データは、Ｘｔｅｎｄ置換のみ（ＸＥＮＰ２２８５３のように）が、ＩＬ－１５－Ｆｃ融合の薬物動態にいくらかの改善を提供することを示す。特に、Ｘｔｅｎｄ置換（ＸＥＮＰ２４３０６およびＸＥＮＰ２４１１３のように）に加えて効力のバリアントを組み込むと、ＩＬ－１５－Ｆｃ融合の薬物動態が大幅に改善される。予期せぬことに、ＸＥＮＰ２４１１３は、ＸＥＮＰ２４３０６と比較して大幅に劣った薬物動態を示した。同様に、ｓｃＩＬ－１５／Ｒα－Ｆｃ融合ＸＥＮＰ２４２９４（ＸＥＮＰ２４１１３と同じＩＬ－１５（Ｎ４Ｄ／Ｎ６５Ｄ）効力バリアントを有する）もまた、ＸＥＮＰ２４３０６と比較して実質的に劣った薬物動態を示した。ＸＥＮＰ２４１１３（およびＸＥＮＰ２４２９４）の薬物動態の減少は、ＩＬ－１５（Ｄ３０Ｎ／Ｅ６４Ｑ／Ｎ６５Ｄ）バリアントを有するＩＬ－１５－Ｆｃ融合体よりも高いインビトロ効力を示すＩＬ－１５（Ｎ４Ｄ／Ｎ６５Ｄ）バリアントを有するＩＬ－１５－Ｆｃ融合体に基づいて予測されたが（実施例３Ｂおよび図６１に示されるように）、一方で、薬物動態の減少は、効力の増加に対して予想外に不釣り合いであった。

サルの研究では、効力が低減したＩＬ－１５／Ｒα－ヘテロＦｃ融合体で数日の半減期が示され、ＩＬ－１５の＜１時間の半減期よりも著しく長い。さらに、薬力学およびクリアランスの顕著な逆相関が観察され、効力が低減したバリアントは、より持続的な曝露により、より高い多くの忍容用量およびリンパ球増殖の増強を可能にする。これらの観察に基づいて、受容体媒介内在化は、様々なＩＬ－１５のＰＫ／ＰＤ関係に影響する重要な要因であると仮定した（図１９５に概略的に示される）。

これをさらに調査するために、最適な薬物受容体親和性を予測する機構に基づくＰＫ／ＰＤモデルを開発し、効力対標的媒介クリアランスのバランスを取る。一部の結果を図１９４に示す。複数のカニクイザル研究からのＰＫデータ（図１９６）を、これらのシミュレーションに入力し、ＰＫデータのグローバルフィットで複数の追加パラメータを変化（浮動）させた。驚くべきことに、シミュレーションは、結合の実験的に測定されたＥＣ５０値と直線的に相関する推定Ｋ_Ｄ値に収束した（図１９７）。推定されたＫ_Ｄ値を利用して、シミュレートされたＰＫプロファイル、受容体占有率（ＲＯ）曲線、および薬力学的プロファイルを生成し（図１９８に示されるように）、それはＲＯ（ＲＯ－ＡＵＣ）の曲線下の予測面積、ならびに最大受容体占有率（ＲＯ－Ｍａｘ）の決定を可能にした。実験的に決定されたＰＤ－ＡＵＣに対して推測ＲＯ－ＡＵＣ値（薬力学的ＡＵＣ：経時的なＣＤ８^＋Ｔ細胞の倍数増加の曲線下面積）（図１９９Ａ）、実験的に決定されたＰＤ－Ｍａｘに対する推測ＲＯ－ＡＵＣ値（ピークＣＤ８^＋Ｔ細胞の増加（倍数対ベースライン））（図１９９Ｂ）、実験的に決定されたＡＬＢ－ｍｉｎに対する予測ＲＯ－ＡＵＣ値（ベースラインレベルに対するアルブミンの低減％の最低）（図１９９Ｃ）、実験的に決定されたＰＤ－ＡＵＣに対する予測ＲＯ－Ｍａｘ（最大受容体占有率）値（図１９９Ｄ）、実験的に決定されたＰＤ－Ｍａｘに対する予測ＲＯ－Ｍａｘ（図１９９Ｅ）、および実験的に決定されたＡＬＢ－Ｍｉｎに対する予測ＲＯ－Ｍａｘ（図１９９Ｆ）をプロットした。驚くべきことに、予測されたＲＯ－ＡＵＣ値は、図１９９Ａに示される実験的に決定されたＰＤ－ＡＵＣ（薬力学的ＡＵＣ）、ならびに図１９８Ｂに示されるＰＤ－Ｍａｘと非常によく相関し、ＲＯ－ＡＵＣが最小化するための標的値であることを示す。

最後に、ＩＬ－１５／Ｒａ－ヘテロＦｃ融合のＸｔｅｎｄバージョンまたは非Ｘｔｅｎｄバージョンのいずれかに対して実行された様々なＫ_Ｄ値に対するシミュレーションスキャンを行い、予測された最適なＫ_Ｄは約２００ｎＭであり、ＸｍＡｂ２４３０６の推定Ｋ_Ｄ値と同様であることを明らかにする。

ＸＸＸＩＩ．実施例１９：効力が低減したＩＬ－１５／Ｒα－ヘテロＦｃ融合は、抗ＰＤ－１と生成的に組み合わされ、末梢Ｔ細胞を拡大する
実施例１７に記載されるマウス腫瘍モデルでは、ＸＥＮＰ２４０４５および抗ＰＤ－１ｍＡｂの組み合わせによる処置は、抗ＰＤ－１ｍＡｂ単独による処置と比較して、抗腫瘍活性を著しく増強した（対応のないｔ検定に従って、２１、２７、３８、４１、および４３日でｐ≦０．０５、ならびに２４、２９、３１、３４、３６日目にｐ≦０．０１）。さらに末梢Ｔ細胞の拡大を調査した。ヒトＣＤ８^＋Ｔ細胞の増殖を示すデータ（研究の７、１４、２１、および２８日目の数で示される）を図２０１Ａおよび図２０１Ｂに示す。特に１４、２１、および２８日目に、ＣＤ８^＋Ｔ細胞数は、抗ＰＤ－１ｍＡｂ単独での処置と比較して、ＸＥＮＰ２４０４５および抗ＰＤ－１ｍＡｂの組み合わせでの治療によって著しく増強された。さらに、図２０１Ｂに示されるように、ＸＥＮＰ２４０４５および抗ＰＤ－１ｍＡｂの組み合わせでの処置は、抗ＰＤ－１ｍＡｂ単独により処置よりも遥かに早くＣＤ８^＋Ｔ細胞の活性化を増強した（ＣＤ８Ｔ細胞によるＣＤ２５の発現によって示されるように）。

ＸＸＸＩＩＩ．実施例２０：効力が低減したＩＬ－１５／Ｒα－ヘテロＦｃ融合は、薬力学を増強するだけでなく、忍容性も改善する
様々なカニクイザルの研究から収集されたデータに基づいて、ＩＬ－１５／Ｒα－ヘテロＦｃ融合体の低減された効力を操作することにより、リンパ球の最大１０００％増加と共に、ＷＴＩＬ－１５を含むＩＬ－１５／Ｒα－ヘテロＦｃ融合体よりも薬力学を増強することを見出した（データは、０．３倍用量のＸＥＮＰ２０８１８、０．３倍用量のＸｍＡｂ２４３０６、および０．６倍用量のＸｍＡｂ２４３０６を投与することによって、ＣＤ８^＋Ｔ細胞、ＣＤ１６^＋ＮＫ細胞、およびリンパ球の拡大を示す図２０２Ａ～図２０２Ｃにオーバーレイされる）。血管漏出症候群は、ＩＬ－２などのサイトカインによる治療に関連する特徴的な毒性副作用である。血管漏出の１つの兆候は低アルブミン血症、血清アルブミン濃度の低下である。したがって、上に記載されるように投与されたカニクイザルにおけるアルブミンドロップを調査し、ＸｍＡｂ２４３０６が、ＸＥＮＰ２０８１８と比較してリンパ球の拡大を増強するだけでなく、アルブミンドロップの低減（データは図２０３に示される）ももたらすことが著しく見出され、ＸｍＡｂ２４３０６の優れた治療インデックスを示す。例えば、ＸｍＡｂ２４３０６およびＸＥＮＰ２０８１８の両方が、末梢ＣＤ８^＋Ｔ細胞の少なくとも３倍（２００％）の増加を促進したが（同じレベルで投与した場合）、一方で、ＸｍＡｂ２４３０６によって媒介されるアルブミンの減少の程度は１５％を超えなかったのに対し、ＸＥＮＰ２０８１８少なくとも２５％のアルブミンの減少を引き起こした。さらに、２倍高い（０．６倍）用量のＸｍＡｂ２４３０６は、２０％の減少を上回るアルブミンレベルを維持しながら、末梢ＣＤ８^＋Ｔ細胞の少なくとも１１倍（１０００％）の増加を促進した。さらに、実施例１８に記載されるモデリングでは、予測ＲＯ－Ｍａｘ値が実験的に決定されたＡＬＢ－Ｍｉｎと非常によく相関しているように見え（図１９９Ｆを参照されたい）、ＲＯ－ＭａｘがＩＬ－１５および他のサイトカインの忍容性を微調整するのに最適化するための標的値であることを示す。

ＸＸＸＩＶ．実施例２１：ＩＬ－１５：ＣＤ１３２界面での修飾を含む効力がさらに低下したＩＬ－１５バリアントの操作
実施例３Ｂおよび図５５に示されるように、野生型ｓｃＩＬ－１５／Ｒα－Ｆｃ融合ＸＥＮＰ２１４７８は、ＮＫ細胞およびＣＤ８＋Ｔ細胞の増殖を誘導することにおいて、野生型ＩＬ－１５／Ｒα－ヘテロＦｃＸＥＮＰ２０８１８よりも効力が低かった。したがって、ＩＬ－１５／Ｒα－ヘテロＦｃ融合での使用に好適な効力が低減したＩＬ－１５バリアントは弱すぎる場合があり、ｓｃＩＬ－１５／Ｒα－Ｆｃ融合などの他のＩＬ－１５融合フォーマットでの使用には好適でない場合があると推論した。したがって、ＩＬ－１５（Ｎ４Ｄ／Ｎ６５Ｄ）バリアントを有するＩｌ－１５／Ｒα－ヘテロＦｃ融合体が、ＩＬ－１５（Ｄ３０Ｎ／Ｅ６４Ｑ／Ｎ６５Ｄ）バリアントを有するＩＬ－１５／Ｒα－ヘテロＦｃ融合体よりも高いインビトロ効力を示したため、そのような他のフォーマットで使用するＩＬ－１５（Ｎ４Ｄ／Ｎ６５Ｄ）バリアントに興味があった。

しかしながら、上に示されるように、ＩＬ－１５（Ｎ４Ｄ／Ｎ６５Ｄ）バリアントを有するＩＬ－１５－Ｆｃ融合体は、ＩＬ－１５（Ｄ３０Ｎ／Ｅ６４Ｑ／Ｎ６５Ｄ）バリアントを有するＩＬ－１５－Ｆｃ融合体と比較して劣った薬物動態を示した。ＩＬ－１５（Ｎ４Ｄ／Ｎ６５Ｄ）には、ＣＤ１２２への結合を担うＩＬ－１５界面での両方のその置換がある一方で、ＩＬ－１５（Ｄ３０Ｎ／Ｅ６４Ｑ／Ｎ６５Ｄ）にはＩＬ－１５：ＣＤ１２２界面での２つの置換（Ｅ６４ＱおよびＮ６５Ｄ）、およびＣＤ１３２へ結合を担うＩＬ－１５界面での１つの置換（Ｄ３０Ｎ）があることに留意した。したがって、ＩＬ－１５：ＣＤ１３２界面での修飾が、ＸＥＮＰ２４３０６で観察された優れた薬物動態に寄与し得ると推論した。

上記を考慮して、Ｄ３０Ｎ置換を組み込んだＩＬ－１５効力バリアントの追加ライブラリを生成した。例示的なそのようなＩＬ－１５バリアントの配列は図１９１に示され、これらのバリアントを含む例示的なｓｃＩＬ－１５／Ｒα－Ｆｃ融合体（配列は図１９２に示される）を生成し、細胞増殖アッセイで調査した。

ヒトＰＢＭＣを示された濃度で示された試験物質と共に３日間インキュベートした。インキュベーション後、ＰＢＭＣを、抗ＣＤ３－ＰＥ（ＯＫＴ３）、抗ＣＤ４－ＦＩＴＣ（ＲＰＡ－Ｔ４）、抗ＣＤ８－ｅＦ６６０（ＳＩＤＩ８ＢＥＥ）、抗ＣＤ１６－ＢＶ４２１（３Ｇ８）、抗ＣＤ４５ＲＡ－ＡＰＣ／Ｆｉｒｅ７５０（ＨＩ１００）、抗ＣＤ５６－ＢＶ６０５（５．１Ｈ１１）、および抗Ｋｉ６７－ＰＥ／Ｃｙ７（Ｋｉ－６７）で染色し、フローサイトメトリーによって分析した。図１９３Ａ～図１９３Ｇは、増殖を示すＫｉ６７を発現する様々なリンパ球集団の割合を示す。

予想通り、データは、ＩＬ－１５（Ｄ３０Ｎ／Ｅ６４Ｑ／Ｎ６５Ｄ）バリアントを含むｓｃＩＬ－１５／Ｒα－Ｆｃ融合体は、ＩＬ－１５バリアントを含むＩＬ－１５／Ｒα－ヘテロＦｃＩＬ－１５ならびにＩＬ－１５（Ｎ４Ｄ／Ｎ６５Ｄ）バリアントを含むｓｃＩＬ－１５／Ｒα－Ｆｃ融合体の両方と比較して、様々なリンパ球集団の増殖において活性がなかったか、または劇的に低減された活性を有した。しかしながら、Ｄ３０Ｎ置換を含むＩＬ＝１５バリアントを有するｓｃＩＬ－１５／Ｒα－Ｆｃ融合体の多くは、ＷＴｓｃＩＬ－１５／Ｒα－ＦｃＸＥＮＰ２１９９３と同様の活性を示した。特に、ＩＬ－１５：ＣＤ１３２界面の修飾だけでなく、ＩＬ－１５（Ｎ４Ｄ／Ｎ６５Ｄ）バリアントと同様の効力も含む特定のＩＬ－１５（Ｄ３０Ｎ／Ｎ６５Ｄ）バリアントを同定した（ｓｃＩＬ－１５／Ｒα－Ｆｃ融合の文脈において）。

ＸＸＸＶ．実施例２２：追加の研究
Ａ．２２Ａ：ＸＥＮＰ２４３０６は、ヒトＰＢＭＣ移植ＮＳＧマウス（ＧＶＨＤモデル）におけるＴ細胞増殖およびＩＦＮγ生成を増強し、チェックポイント遮断と生成的に組み合わせる
ＧＶＨＤ研究では、様々濃度のＸＥＮＰ２４３０６を、単独または抗ＰＤ－１ｍＡｂＸＥＮＰ１６４３２と組み合わせて調査した。ＮＳＧマウスに、１日目にＩＶ－ＯＳＰを介して１０ｘ１０^６個のヒトＰＢＭＣを移植し、０、７、１４、および２１日目に示された濃度の示された試験物質を投与した。３、７、１４、および２１日目に血液を採血し、リンパ球の増殖（データは図２０４～２０６に示される）およびＩＦＮγ濃度（データは図２０９に示される）を調査し、体重をＧＶＨＤの指標として週２回評価した（データは図２０７～２０８に示される）。

データは、１０日目までに、０．３ｍｇ／ｋｇ、０．１ｍｇ／ｋｇ、または０．０１ｍｇ／ｋｇのＸＥＮＰ２４３０６および３ｍｇ／ｋｇのＸＥＮＰ１６４３２の組み合わせによる処置が、３ｍｇ／ｋｇのＸＥＮＰ１６４３２単独による処置を超えて、ＧＶＨＤを著しく増強したことを示す（対応のないｔ検定を使用して統計を行った）。１４日目までに、０．３ｍｇ／ｋｇまたは０．１ｍｇ／ｋｇのＸＥＮＰ２４３０６および３ｍｇ／ｋｇのＸＥＮＰ１６４３２の組み合わせによる処置が、３ｍｇ／ｋｇのＸＥＮＰ１６４３２単独による処置を超えて、ＣＤ３＋Ｔ細胞の拡大を著しく増強した（対応のないｔ検定を使用して対数変換されたデータ上で統計を行った）。

Ｂ．２２Ｂ：ＸＥＮＰ２４３０６はマウス腫瘍モデルにおけるＰＤ－１遮断の抗腫瘍活性を増強する
マウス腫瘍モデルにおいて、様々濃度のＸＥＮＰ２４３０６を、単独または抗ＰＤ－１ｍＡｂＸＥＮＰ１６４３２と組み合わせて調査した。ＮＳＧマウスに、－１５日目に３ｘ１０^６個のｐｐ６５形質導入ＭＣＦ－７を皮内接種した。次いで、０日目に、マウスに１．５ｘ１０^６個のヒトＰＢＭＣを腹腔内注射し、０、７、１４、および２１日目に示される試験物質でさらに処置した。７、１４、および２１日目に血液を採取して、リンパ球の拡大（データは図２１０～２１１に示される）およびＩＦＮγ濃度（データは図２１４に示される）を調査した。腫瘍体積を、キャリパー測定によって週３回測定し（データは図２１２および２１３Ａに示される）、重量をＧＶＨＤの指標として週２回評価した（データは図２１３Ｂに示される）。

データは、１１日目までに、１．０ｍｇ／ｋｇ、０．３ｍｇ／ｋｇ、または０．１ｍｇ／ｋｇのＸＥＮＰ２４３０６および３ｍｇ／ｋｇのＸＥＮＰ１６４３２の組み合わせによる処置が、ＸＥＮＰ１６４３２単独による処置と比較して、腫瘍体積を著しく減少させたことを示す（ベースライン補正された腫瘍測定で対応のないｔ検定を使用して統計を行った）。７日目までに、１．０ｍｇ／ｋｇ、０．３ｍｇ／ｋｇ、または０．１ｍｇ／ｋｇのＸＥＮＰ２４３０６および３ｍｇ／ｋｇのＸＥＮＰ１６４３２の組み合わせによる処置が、ＸＥＮＰ１６４３２単独による処置と比較して、ＩＦＮγ分泌を著しく増強した。１４日目までに、ＸＥＮＰ２４３０６のみまたはＸＥＮＰ１６４３２と組み合わせたＸＥＮＰ２４３０６で処置したグループの各々が、ＰＢＳ処置を超えてリンパ球の拡大を著しく増強した。特に、１４日目までに、ＸＥＮＰ２４３０６の濃度に関係なく、ＸＥＮＰ２４３０６およびＸＥＮＰ１６４３２の組み合わせ、ならびに高濃度のＸＥＮＰ２４３０６のみで処置した各グループは、ＸＥＮＰ１６４３２処置を超えてリンパ球の拡大を著しく増強した。

上記の実施例は、当業者に本発明の組成物、システム、および方法の実施形態をどのように作製および使用するかについての完全な開示および説明を与えるために提供されており、本発明者らがそれらの発明とみなすものの範囲を限定することは意図されていない。当業者に明らかである本発明を実施するための上に記載される様式の修正は、以下の特許請求の範囲の範囲内にあることが意図される。本明細書中で言及されている全ての特許および刊行物は、本発明が関係する当業者の技術水準を示している。本開示において引用された全ての参考文献は、あたかも各参考文献が参照によりその全体が個別に組み込まれているのと同程度に参照により組み込まれる。

全ての見出しおよびセクションの指定は、明確さおよび参照目的のためだけに使用されているにすぎず、決して限定的であると見なされるべきではない。例えば、当業者は、本明細書に記載される本発明の趣旨および範囲に従って、必要に応じて異なる見出しおよびセクションからの様々な態様を組み合わせることの有用性を認識するであろう。

本明細書に引用された全ての参考文献は、あたかも各個々の刊行物または特許または特許出願が全ての目的のためにその全体が参照により組み込まれるように具体的かつ個別に示されるのと同程度にそれらの全体が全ての目的のために本明細書に参照により組み込まれる。
当業者には明らかなように、本出願の趣旨および範囲から逸脱することなく、本出願の多くの修正および変形をなすことができる。本明細書に記載された特定の実施形態および実施例は例としてのみ提供され、特許請求の範囲が権利を与えられる同等物の全範囲と共に、添付の特許請求の範囲の用語によってのみ限定されるべきである。

Claims

癌の治療を必要とする患者において癌を治療する方法における使用のための医薬組成物であって、
治療有効量のＩＬ－１５／ＩＬ－１５Ｒαヘテロ二量体Ｆｃ融合タンパク質であって、
前記ＩＬ－１５／ＩＬ－１５Ｒαヘテロ二量体Ｆｃ融合タンパク質が、ｉ）配列番号２５３および２５４、またはｉｉ）配列番号２０４および２０５のアミノ酸配列を含み、
前記方法が、治療有効量の、抗ＰＤ－１抗体、抗ＰＤ－Ｌ１抗体、抗ＴＩＭ３抗体、抗ＴＩＧＩＴ抗体、抗ＬＡＧ３抗体、および抗ＣＴＬＡ－４抗体からなる群から選択されるチェックポイント遮断抗体を併用投与することを含む、医薬組成物。
患者においてＴ細胞拡大を誘導する方法における使用のための医薬組成物であって、
治療有効量のＩＬ－１５／ＩＬ－１５Ｒαヘテロ二量体Ｆｃ融合タンパク質であって、
前記ＩＬ－１５／ＩＬ－１５Ｒαヘテロ二量体Ｆｃ融合タンパク質が、ｉ）配列番号２５３および２５４、またはｉｉ）配列番号２０４および２０５のアミノ酸配列を含み、
前記方法が、治療有効量の、抗ＰＤ－１抗体、抗ＰＤ－Ｌ１抗体、抗ＴＩＭ３抗体、抗ＴＩＧＩＴ抗体、抗ＬＡＧ３抗体、および抗ＣＴＬＡ－４抗体からなる群から選択されるチェックポイント遮断抗体を併用投与することを含む、医薬組成物。
前記ＩＬ－１５／ＩＬ－１５Ｒαヘテロ二量体Ｆｃ融合タンパク質および前記チェックポイント遮断抗体が、同時にまたは逐次的に投与される、請求項１または２に記載の医薬組成物。
前記抗ＰＤ－１抗体が、ニボルマブ、ペムブロリズマブ、またはピジリズマブである、請求項１～３のいずれか一項に記載の医薬組成物。
前記ＩＬ－１５／ＩＬ－１５Ｒαヘテロ二量体Ｆｃ融合タンパク質が、配列番号２５３および２５４のアミノ酸配列を含み、前記抗ＰＤ－１抗体が、ニボルマブである、請求項１～４のいずれか一項の医薬組成物。
前記ＩＬ－１５／ＩＬ－１５Ｒαヘテロ二量体Ｆｃ融合タンパク質が、配列番号２５３および２５４のアミノ酸配列を含み、前記抗ＰＤ－１抗体が、ペムブロリズマブある、請求項１～４のいずれか一項に記載の医薬組成物。
前記ＩＬ－１５／ＩＬ－１５Ｒαヘテロ二量体Ｆｃ融合タンパク質が、配列番号２５３および２５４のアミノ酸配列を含み、前記抗ＰＤ－１抗体が、ピジリズマブである、請求項１～４のいずれか一項に記載の医薬組成物。
前記ＩＬ－１５／ＩＬ－１５Ｒαヘテロ二量体Ｆｃ融合タンパク質が、配列番号２０４および２０５のアミノ酸配列を含み、前記抗ＰＤ－１抗体が、ニボルマブである、請求項１～４のいずれか一項に記載の医薬組成物。
前記ＩＬ－１５／ＩＬ－１５Ｒαヘテロ二量体Ｆｃ融合タンパク質が、配列番号２０４および２０５のアミノ酸配列を含み、前記抗ＰＤ－１抗体が、ペムブロリズマブである、請求項１～４のいずれか一項に記載の医薬組成物。
前記ＩＬ－１５／ＩＬ－１５Ｒαヘテロ二量体Ｆｃ融合タンパク質が、配列番号２０４および２０５のアミノ酸配列を含み、前記抗ＰＤ－１抗体が、ピジリズマブである、請求項１～４のいずれか一項に記載の医薬組成物。
前記ＩＬ－１５／ＩＬ－１５Ｒαヘテロ二量体Ｆｃ融合タンパク質が、配列番号２５３および２５４のアミノ酸配列を含み、前記チェックポイント遮断抗体が、アテゾリズマブである、請求項１～３のいずれか一項に記載の医薬組成物。
前記ＩＬ－１５／ＩＬ－１５Ｒαヘテロ二量体Ｆｃ融合タンパク質が、配列番号２０４および２０５のアミノ酸配列を含み、前記チェックポイント遮断抗体が、アテゾリズマブである、請求項１～３のいずれか一項に記載の医薬組成物。
前記癌が、転移性癌である、請求項１または３～１２のいずれか一項に記載の医薬組成物。
前記癌が、乳癌、肺癌、結腸癌、卵巣癌、黒色腫癌、膀胱癌、腎臓癌（ｒｅｎａｌｃａｎｃｅｒ）、腎臓癌（ｋｉｄｎｅｙｃａｎｃｅｒ）、肝臓癌、頭頸部癌、結腸直腸癌、黒色腫、膵臓癌、胃癌、食道癌、中皮腫、前立腺癌、白血病、リンパ腫、および骨髄腫からなる群から選択される、請求項１または３～１２のいずれか一項に記載の医薬組成物。
前記方法が、前記患者における最小レベルの血管漏出をもたらす、請求項１～１４のいずれか一項に記載の医薬組成物。
前記血管漏出のレベルが、投与後の前記患者における血清アルブミンの２０％以下の低減の範囲である、請求項１５に記載の医薬組成物。
前記Ｔ細胞拡大が、Ｔ細胞の少なくとも２倍の増加である、請求項２～１２、１５、または１６に記載の医薬組成物。
前記Ｔ細胞拡大が、Ｔ細胞の２倍～１５倍の増加の範囲である、請求項２～１２、１５、または１６に記載の医薬組成物。
前記方法が、低アルブミン血症を誘導する可能性を増加させない、請求項１～１８のいずれか一項に記載の医薬組成物。
前記Ｔ細胞が、腫瘍浸潤リンパ球を含む、請求項２～１２、１５、１６、１７、１８、または１９のいずれか一項に記載の医薬組成物。
癌の治療を必要とする患者において癌を治療する方法における使用のための医薬組成物であって、
治療有効量のＩＬ－１５／ＩＬ－１５Ｒαヘテロ二量体Ｆｃ融合タンパク質であって、
ａ）配列番号２５３のアミノ酸配列を含む、第１のモノマーと、
ｂ）配列番号２５４のアミノ酸配列を含む、第２のモノマーと、を含む、
ＩＬ－１５／ＩＬ－１５Ｒαヘテロ二量体Ｆｃ融合タンパク質を含み、
前記方法が、治療有効量の、抗ＰＤ－１抗体、抗ＰＤ－Ｌ１抗体、抗ＴＩＭ３抗体、抗ＴＩＧＩＴ抗体、抗ＬＡＧ３抗体、および抗ＣＴＬＡ－４抗体からなる群から選択されるチェックポイント遮断抗体を併用投与することを含む、医薬組成物。
患者においてＴ細胞拡大を誘導する方法における使用のための医薬組成物であって、
治療有効量のＩＬ－１５／ＩＬ－１５Ｒαヘテロ二量体Ｆｃ融合タンパク質であって、
ａ）配列番号２０４のアミノ酸配列を含む、第１のモノマーと、
ｂ）配列番号２０５のアミノ酸配列を含む、第２のモノマーと、を含む、
ＩＬ－１５／ＩＬ－１５Ｒαヘテロ二量体Ｆｃ融合タンパク質を含み、
前記方法が、治療有効量の、抗ＰＤ－１抗体、抗ＰＤ－Ｌ１抗体、抗ＴＩＭ３抗体、抗ＴＩＧＩＴ抗体、抗ＬＡＧ３抗体、および抗ＣＴＬＡ－４抗体からなる群から選択されるチェックポイント遮断抗体を併用投与することを含む、医薬組成物。