JP7088502B2

JP7088502B2 - 抗体医薬の効果増強用組成物

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Publication number: JP7088502B2
Application number: JP2021545597A
Authority: JP
Inventors: 康梨井; 真之藤野; ▲祐▼生子守屋
Original assignee: National Center for Child Health and Development; Aureo Co Ltd
Current assignee: National Center for Child Health and Development; Aureo Co Ltd
Priority date: 2019-09-11
Filing date: 2020-09-10
Publication date: 2022-06-21
Anticipated expiration: 2040-09-10
Also published as: US20220265698A1; EP4029509A1; WO2021049587A1; JPWO2021049587A1; CN114340669A; EP4029509A4

Description

本発明は、抗体医薬の効果増強用組成物に関するものである。

新たながん治療法として、免疫チェックポイントをターゲットにした分子標的薬が注目さている。免疫チェックポイントとは、活性化した免疫細胞が正常な組織や細胞までをも攻撃してしまうことがないように、そのような暴走を防ぐためのブレーキ機構であって、がん細胞は、逆にこの機構を利用して、免疫細胞の攻撃から免れている。これはがん細胞が持つ自身を生き延びさせるための機能の一つであり、これまで解明できなかった部分でもある。この研究の進展により、近年、免疫チェックポイント分子であるＰＤ－１やＣＴＬＡ４の機能を阻害する抗体医薬等で、臨床的にも有効な抗がん効果が得られることが明らかとされ、免疫チェックポイント阻害剤の研究、開発がより一層盛んに行われている（非特許文献１～３参照）。

一方、本出願人は、β－グルカンを豊富に産生する、通称黒酵母とも呼ばれるアウレオバシジウムプルランス（Aureobasidium pullulans）の培養物を利用して、皮膚用保湿剤（特許文献１）、便秘改善剤（特許文献２）、免疫賦活剤（特許文献３）、免疫アジュバント（特許文献４）、抗がん剤の副作用を低減するために用いられる生体治癒促進剤（特許文献５）、熱火傷の治癒促進のために用いられる生体治癒促進剤（特許文献６）、ウシの乳房炎の予防・治療用組成物（特許文献７）、マクロファージにおけるサイトカイン産生促進組成物（特許文献８）、インフルエンザウイルス感染症の治療剤（特許文献９）、TRAIL発現亢進剤（特許文献１０）、貧血予防・改善用組成物（特許文献１１）、脂肪蓄積抑制剤（特許文献１２）などを開示している。

Ishida, Y., Agata, Y., Shibahara, K. and Honjo, T.「Induced expression of PD-1, a novel member of the immunoglobulin gene superfamily, upon programmed cell death.」EMBO J. 11 3887-3895 (1992) Freeman, G. J., Long, A. J., Iwai, Y., Bourque, K., Chernova, T., Nishimura, H., Fitsz, L. J., Malenkovich, N., Okazaki, T., Byrne, M. C., Horton, H. F., Fouser, L., Carter, L., Ling, V., Bowman, M. R., Carreno, B. M., Collins, M., Wood, C. R. and Honjo, T.「Engagement of the PD-1 immunoinhibitory receptor by a novel B7 family member leads to negative regulation of lymphocyte activation.」J. Exp. Med. 192 1027-1034 (2000) Spencer C. Wei, Colm R. Duffy, and James P. Allison「Fundamental Mechanisms of Immune Checkpoint Blockade Therapy」CANCER RESEARCH, doi: 10.1158/2159-8290.CD-18-0367, August 16, 2018

特許第４００００７８号公報特許第４０５４６９７号公報特許第４３６９２５８号公報特許第５２４２８５５号公報特許第５３３１４８２号公報特許第５７１５６５９号公報特許第５５５４２２１号公報特許第５５５９１７３号公報特許第５５６０４７２号公報特許第５９３７０２９号公報特許第６２９３１８７号公報特許第６３８０９６８号公報

本発明の目的は、アウレオバシジウムプルランス（Aureobasidium pullulans）を利用して、免疫チェックポイント阻害剤等の抗体医薬の効果を増強することができる組成物を提供することにある。

上記目的を達成するため本発明者らが鋭意研究したところ、アウレオバシジウムプルランス（Aureobasidium pullulans）の培養物に含まれるβ－グルカンには、免疫チェックポイント阻害剤等の抗体医薬と併用することで、その効果を増強する作用効果があることを見出し、本発明を完成するに至った。すなわち、本発明は以下のとおりである。

［１］β－グルカンを有効成分として含有し、抗体医薬とともに投与されるものであることを特徴とする抗体医薬の効果増強用組成物。
［２］前記抗体医薬は、免疫チェックポイント阻害を介してがんの増殖を抑制する作用効果を有するものである、上記［１］記載の抗体医薬の効果増強用組成物。
［３］前記抗体医薬は、ＰＤ－Ｌ１に対するモノクローナル抗体を含むものである、上記［１］記載の抗体医薬の効果増強用組成物。
［４］前記抗体医薬は、メラノーマの増殖を抑制する作用効果を有するものである、上記［１］記載の抗体医薬の効果増強用組成物。

本発明によれば、β－グルカンを有効成分とするので、抗体医薬とともに投与することで、その抗体医薬の効果を増強することができる。よって、免疫チェックポイント阻害剤等の強化剤等として好適に用いられる。

試験例１における各被検物質の投与スケジュールの概要を示す図表である。試験例１において腫瘍細胞移植から所定日数経過後の腫瘍体積を調べた結果を示す図表である。試験例２において、脾臓リンパ球について、抗マウスＣＤ４抗体又は抗マウスＣＤ８抗体、及び抗マウスＫｉ－６７（リンパ球活性化マーカー）抗体で多重染色を行い、ＦＡＣＳ解析を行った結果を示す図表である。試験例２において、腫瘍浸潤リンパ球（ＴＩＬ）について、抗マウスＣＤ４抗体又は抗マウスＣＤ８抗体、及び抗マウスＫｉ－６７（リンパ球活性化マーカー）抗体で多重染色を行い、ＦＡＣＳ解析を行った結果を示す図表である。試験例２において、脾臓リンパ球について、抗マウスＣＤ４抗体又は抗マウスＣＤ８抗体、及び抗マウスＩＮＦ－γ抗体で多重染色を行い、ＦＡＣＳ解析を行った結果を示す図表である。試験例２において、腫瘍浸潤リンパ球（ＴＩＬ）について、抗マウスＣＤ４抗体又は抗マウスＣＤ８抗体、及び抗マウスＩＮＦ－γ抗体で多重染色を行い、ＦＡＣＳ解析を行った結果を示す図表である。試験例３における各被検物質の投与スケジュールの概要を示す図表である。試験例３において腫瘍細胞移植から所定日数経過後の腫瘍体積を調べた結果を示す図表である。

本発明においては、β－グルカンを、抗体医薬の効果増強用組成物の有効成分として用いる。

β－グルカンは、β－グルコースがグリコシド結合により重合した多糖である。例えば、大麦やオーツ麦などの穀類、ビール酵母、パン酵母等の酵母類、黒酵母等の不完全菌類、シイタケ、マイタケ、カワラタケ、スエヒロタケ、ハナビラタケ、マンネンタケ等の担子菌類、昆布、ワカメ等の海藻類などに含まれるので、それら天然物から適当な溶媒を用いて抽出すること等により得ることができる。抽出方法としては常法に従はばよく、特に制限はない。例えば、必要に応じて乾燥・粉砕した原料に水、含水アルコール等の抽出溶媒を加えて、加熱及び／又は加圧下に抽出する方法などが挙げられる。加熱条件としては、典型的に１０５～１３５℃、加圧条件としては、典型的に１．８～２．１気圧などが挙げられる。また、抽出効率の向上のためには、酸処理やアルカリ処理、あるいは、多糖類を低分子化させる酵素による酵素処理を施しながら抽出しても構わない。抽出後には、溶媒を溜去して濃縮したり、噴霧乾燥等の乾燥手段で、乾燥粉末化したりしてもよい。なお近年では、各種β－グルカン素材が流通しているので、そのような市販品を利用してもよい。

本発明に用いるβ－グルカンは、β-１，３グリコシド結合、β-１，４グリコシド結合、β-１，６グリコシド結合などにより重合されていることが好ましく、β-１，３グリコシド結合のホモ重合を主鎖として含むか、もしくはβ-１，３グリコシド結合及びβ-１，６グリコシド結合のヘテロ重合を主鎖として含むものであることがより好ましく、β-１，３グリコシド結合のホモ重合を主鎖として含み、且つβ-１，６グリコシド結合を側鎖として含むものであることが更により好ましい。β－グルカンは、硫酸基、リン酸基等の官能基を有していてもよい。分子量としては、平均分子量５０００～１００万の範囲であることが好ましく、平均分子量２０万～５０万の範囲であることがより好ましい。β－グルカンの分子量は、ゲル濾過法などで測定することができる。

本発明に用いるβ－グルカンは、後述する実施例で示されるように、アウレオバシジウムプルランス（Aureobasidium pullulans）の培養物由来のβ－グルカン含有培養組成物やシイタケ由来のβ－グルカン含有培養組成物などであることができる。

以下には、アウレオバシジウム属（Aureobasidium sp.）に属する微生物に由来するβ－グルカンについて、更に詳述する。そのβ－グルカン含有培養組成物としては、アウレオバシジウムプルランス（Aureobasidium pullulans）に属する微生物（以下、「アウレオバシジウム微生物」という場合がある。）を培養した培養物そのもの、遠心分離等により菌体を分離除去した培養物、その培養物の濃縮液、その培養物の希釈液、あるいはその培養物から水分を除いた固形物等だけでなく、これらを脱塩等してβ－グルカン等の特定の成分の含有量を高めたものも含まれる。

本発明において用いられる上記アウレオバシジウム微生物としては、アウレオバシジウムプルランス（Aureobasidium pullulans）に属し、β－グルカン生産能を有する微生物であればよいが、例えば、アウレオバシジウムプルランスＭ―１（Aureobasidium pullulans M-1、受託番号：ＦＥＲＭＢＰ－０８６１５、受託日：２００４年２月１０日、２００３年２月１４日に寄託されたＦＥＲＭＰ－１９２１３号より移管）（独立行政法人製品評価技術基盤機構特許生物寄託センター郵便番号２９２－０８１８日本国千葉県木更津市かずさ鎌足２－５－８１２０号室）や、アウレオバシジウムプルランスＭ―２（Aureobasidium pullulans M-2、受託番号ＦＥＲＭＢＰ－１００１４、受託日：２００４年４月２２日）（独立行政法人製品評価技術基盤機構特許生物寄託センター郵便番号２９２－０８１８日本国千葉県木更津市かずさ鎌足２－５－８１２０号室）が好適に用いられる。なお、これらの菌株が産生するβ－グルカンは、NMR測定（１３ＣＮＭＲ：Ｖａｒｉａｎ社ＵＮＩＴＹＩＮＯＶＡ５００型、１ＨＮＭＲ：Ｖａｒｉａｎ社ＵＮＩＴＹＩＮＯＶＡ６００型）による構造解析で、グルコースがβ－１，３結合した主鎖からβ－１，６結合でグルコースが分岐した構造を有するβ－１，３－１，６－グルカンであることが明らかとなっている。

上記アウレオバシジウム微生物の培養は、公知の方法（特開昭５７－１４９３０１号公報等参照）に準じて行うことができる。すなわち、炭素源（ショ糖）０．５～５．０質量％、窒素源（例えば米糠）０．１～５．０質量％、その他微量物質（例えば、ビタミン類、無機質）を加えた培地（ｐＨ５．２～６．０）に菌を接種し、温度２０～３０℃で２～１４日間通気培養、好ましくは通気撹拌培養すればよい。β－グルカンが生成されるにしたがって培養物の粘度が上昇し、粘性の高いジェル状になる。このようにして得られる培養物には、通常、０．６～１０質量％の固形分が含まれており、該固形分中にはβ－グルカンが５～８０質量％含まれている。

上記の培養によって得られるβ－グルカンを含む培養物は、加熱又は加圧加熱殺菌して用いることが好ましい。また、遠心分離等により菌体を分離除去した後殺菌して用いてもよい。また、必要に応じて濃縮したもの、あるいは乾燥したものを用いることもできる。更に、β?グルカンに富む成分を抽出したものや、それを脱塩、精製したものを用いることもできる。なお、アウレオバシジウムプルランス（Aureobasidium pullulans）に属する微生物の培養物は、増粘安定剤等の食品添加物として使用されているものであり安全性が高い。

本発明による組成物は、抗体医薬の効果を増強するため、その抗体医薬とともに投与するように用いられる。すなわち、抗がん効果等を目的として抗体医薬の効果を発現させるときに、その効果を高めるために用いることができる。

ここで、「抗体医薬とともに投与」とは、上記β－グルカンあるいはβ－グルカン含有培養組成物と抗体医薬の両成分が、適用対象の組織や細胞等の生体構成に、その有効性を示す範囲で時期を経ずに接触させることができればよく、必ずしも両成分が単一の製剤に含まれている状態で投与される必要はない。すなわち、その有効性を示す範囲で、両成分をそれぞれ別製剤として連続投与したり、所定時間あけて投与したりしても、本発明の効果を享受することができる。

本発明による組成物が適用される抗体医薬としては、特に制限されるものではない。例えば、免疫チェックポイント阻害を介してがんの増殖を抑制する作用効果を有する抗体を含むものであり得る。抗体医薬が適用され得る疾病やがんの種類についても、特に制限されるものではなく、がんであれば、例えば、肺がん、リンパ腫、メラノーマ、白血病、腎細胞がん、腎盂・尿管がん、咽頭がん、骨肉種、胃がん、悪性中皮腫、卵巣がん、子宮頸がん、膵がん、MSI-High結腸・直腸がん、食道がん、肝細胞がん、胆道がん等が例示される。抗体としては、例えば、抗ＰＤ－Ｌ１抗体、抗ＰＤ－１抗体、抗ＬＡＧ３抗体、抗ＣＴＬＡ４抗体、抗ＴＩＭ３抗体、抗ＴＩＧＩＴ抗体、抗ＶＩＳＴＡ抗体等が知られているが、これらに限らない。抗体は、ポリクローナル抗体でもよく、モノクローナル抗体でもよく、抗体を含む抗血清の形態であってもよい。また、ヒトの蛋白質に対する抗体であってもよく、マウス、ラット、ウサギ、ヤギ、ウシ、サル等の動物の蛋白質に対する抗体であってもよい。更に、ヒト型の抗体であってもよく、マウス等の動物型の抗体であってもよい。あるいは、マウス、ラット、ウサギ、ヤギ、ウシ、サルなどの動物に抗血清を産生させる等して調製されたものであってもよい。

本発明による組成物の投与経路に特に制限はなく、公知の製剤形態を適宜選択して、経口投与、腹腔内投与、筋肉内投与、経鼻投与、経肺投与、経膣投与、経静脈投与、経直腸投与などに適応することが可能である。

本発明による組成物の投与量は、抗体医薬の種類、被投与者又は被投与動物の健康状態、症状、年齢や、投与方法・投与回数・投与時期などによって、適宜決定することができる。一般的な投与量を例示すれば、例えば、経口的に摂取する場合には、上記β－グルカンあるいはβ－グルカン含有培養組成物の固形分換算にして０．０２５～４０００ｍｇ/ｋｇ（体重）の量で投与する。また、腹腔内投与の場合には、上記β－グルカンあるいはβ－グルカン含有培養組成物の固形分換算にして０．０５～５ｍｇ/ｋｇ（体重）の量で投与する。

本発明による組成物は、典型的に、例えば医薬品、医薬部外品、機能性食品、栄養補助食品、サプリメント、健康食品、動物用医薬品、動物用医薬部外品、動物用機能性食品、動物用栄養補助食品、動物用サプリメント、動物用健康食品など各種の製品形態で使用されることが可能である。あるいはそれら製品と組み合わせて使用されることが可能である。また各種の飲食品と組み合わせて使用してもよい。

以下実施例を挙げて本発明を具体的に説明するが、これらの実施例は本発明の範囲を限定するものではない。

［製造例１］
アウレオバシジウムプルランスＭ－２（Aureobasidium pullulans M-2、独立行政法人製品評価技術基盤機構特許生物寄託センター受託番号：ＦＥＲＭＢＰ－１００１４）を液体培地に植菌し、２４．５℃で４日間振とう培養することで、培養液中にβ－グルカンを産生させた。β－グルカン濃度はフェノール硫酸法および酵素法によっておよそ６ｍｇ／ｍＬと見積られた。

＜試験例１＞
常法に従い、腫瘍細胞株の移植による担がんマウスを作成し、被験物質の投与によってその腫瘍の成長に影響があるかどうかを調べた。

具体的には、担がんマウスを作成は、Ｃ５７ＢＬ/６マウス（日本エスエルシー株式会社）に対し、マウスメラノーマ細胞株Ｂ１６Ｆ１０（理研バイオバンク）の３×１０^５個を、マウス脇腹に接種し、１６日間腫瘍を成長させることにより行った。

試験動物を、無処置群、抗ＰＤ－Ｌ１抗体の単独投与群、β－グルカンの単独投与群、及び抗ＰＤ－Ｌ１抗体とβ－グルカンの併用投与群、の４群に分け、Ｎ数は、無処置群で２６匹、ＰＤ－Ｌ１抗体の単独投与群で１８匹、β－グルカンの単独投与群で６匹、抗ＰＤ－Ｌ１抗体とβ－グルカンの併用群で９匹とした。以下では、便宜上、無処置群を「対照群」といい、抗ＰＤ－Ｌ１抗体の単独投与群を「試験群１」といい、β－グルカンの単独投与群を「試験群２」といい、抗ＰＤ－Ｌ１抗体とβ－グルカンの併用投与群を「試験群３」という場合がある。

被験物質の投与形態としては、抗ＰＤ－Ｌ１抗体の単独投与群（「試験群１」）では、腫瘍細胞移植から８日目及び１２日目の時点で、抗マウスＰＤ－Ｌ１抗体（Clone: MIH5）を２００μｇ／匹の投与量で腹腔内に投与した。β－グルカン単独投与群（「試験群２」）では、腫瘍細胞移植から８日目、１１日目、及び１４日目の時点で、上記製造例１で調製したβ－グルカン含有培養組成物をそのβ－グルカン量に換算して３０ｍｇ／ｋｇの投与量で腹腔内に投与した。抗ＰＤ－Ｌ１抗体とβ－グルカンの併用投与群（「試験群３」）については、抗マウスＰＤ－Ｌ１抗体と上記製造例１で調製したβ－グルカン含有培養組成物を、それぞれの単独投与群と同様の時点で、それぞれの単独投与群と同様の投与量でマウス腹腔内に投与した。図１には、各被検物質の投与スケジュールの概要を示す。

メラノーマ細胞株の接種後から６日目、８日目、１２日目、１４日目、１６日目に、腫瘍の長径及び短径を測定し、下記式による腫瘍体積（ｍｍ^３）を記録した。

腫瘍細胞移植から所定日数経過後の腫瘍体積の結果を、表１及び図２に示す。また、腫瘍細胞移植から１６日目の腫瘍体積を比較したときの各群間での有意性の有無をBrown-Forsythe Testにて統計解析にて調べた結果を、表２に示す。

その結果、抗ＰＤ－Ｌ１抗体とβ－グルカンの併用投与群（「試験群３」）では、無処置群（「対照群」）に比べて、顕著に腫瘍体積が減少していた。その減少効果は、抗ＰＤ－Ｌ１抗体の単独投与群（「試験群１」）やβ－グルカン単独投与群（「試験群２」）に比べても、統計的に有意に認められた（１６日目の比較参照）。

＜試験例２＞
腫瘍細胞移植後１６日目の担がんマウスを解剖し、それぞれの試験群の担がんマウスから脾臓リンパ球及び腫瘍浸潤リンパ球（ＴＩＬ）を分離・精製した。リンパ球は、採取した組織を滅菌蒸留水にて溶血した後、リンパ球分離キット（商品名「lympholyte-M」、（Cedarlane Laboratories社）にて調製した。

各リンパ球について、抗マウスＣＤ４抗体（BioLegend Japan株式会社）、抗マウスＣＤ８抗体（BioLegend Japan株式会社）、抗マウスＫｉ－６７（リンパ球活性化マーカー）抗体（サーモフィッシャーサイエンティフィック株式会社）、及び抗マウスＩＮＦ－γ抗体（日本ベクトン・ディッキンソン株式会社）を用いて、染色を行い、ＦＡＣＳ解析を行った。細胞表面抗原の染色の後、細胞内抗原の染色を行った。細胞内抗原の染色はFixation BufferおよびPermeabilization Wash Buffer（BioLegend Japan株式会社）を用いた。

図３には、脾臓リンパ球について、抗マウスＣＤ４抗体又は抗マウスＣＤ８抗体、及び抗マウスＫｉ－６７（リンパ球活性化マーカー）抗体で多重染色を行い、ＦＡＣＳ解析を行った結果を示す。

図４には、腫瘍浸潤リンパ球（ＴＩＬ）について、抗マウスＣＤ４抗体又は抗マウスＣＤ８抗体、及び抗マウスＫｉ－６７（リンパ球活性化マーカー）抗体で多重染色を行い、ＦＡＣＳ解析を行った結果を示す。

図５には、脾臓リンパ球について、抗マウスＣＤ４抗体又は抗マウスＣＤ８抗体、及び抗マウスＩＮＦ－γ抗体で多重染色を行い、ＦＡＣＳ解析を行った結果を示す。

図６には、腫瘍浸潤リンパ球（ＴＩＬ）について、抗マウスＣＤ４抗体又は抗マウスＣＤ８抗体、及び抗マウスＩＮＦ－γ抗体で多重染色を行い、ＦＡＣＳ解析を行った結果を示す。

図３の結果にみられるように、脾臓リンパ球のＫｉ－６７発現に関して、ＣＤ４陽性Ｔ細胞及びＣＤ８陽性Ｔ細胞共に、抗ＰＤ－Ｌ１抗体の単独投与群（「試験群１」）又はβ－グルカンの単独投与群（「試験群２」）又は抗ＰＤ－Ｌ１抗体とβ－グルカンの併用投与群（「試験群３」）で、無処置群（「対照群」）に対する目立った差異は認められなかった。

図４の結果にみられるように、腫瘍浸潤リンパ球のＫｉ－６７発現に関して、ＣＤ４陽性Ｔ細胞及びＣＤ８陽性Ｔ細胞共に、無処置群（「対照群」）又は抗ＰＤ－Ｌ１抗体の単独投与群（「試験群１」）又はβ－グルカンの単独投与群（「試験群２」）と比較して、抗ＰＤ－Ｌ１抗体とβ－グルカンの併用投与群（「試験群３」）では、その発現が顕著に高くなる傾向が認められた（図４中、「＊＊」はｐ＜０．０１を表わし、「＊＊＊」はｐ＜０．００１を表わす。）。

図５の結果にみられるように、脾臓リンパ球のＩＮＦ－γ発現に関して、ＣＤ４陽性Ｔ細胞及びＣＤ８陽性Ｔ細胞共に、抗ＰＤ－Ｌ１抗体の単独投与群（「試験群１」）又はβ－グルカンの単独投与群（「試験群２」）又は抗ＰＤ－Ｌ１抗体とβ－グルカンの併用投与群（「試験群３」）で、無処置群（「対照群」）に対する目立った差異は認められなかった。

図６の結果にみられるように、腫瘍浸潤リンパ球のＩＮＦ－γ発現に関して、ＣＤ８陽性Ｔ細胞において、無処置群（「対照群」）又は抗ＰＤ－Ｌ１抗体の単独投与群（「試験群１」）又はβ－グルカンの単独投与群（「試験群２」）と比較して、抗ＰＤ－Ｌ１抗体とβ－グルカンの併用投与群（「試験群３」）では、その発現が顕著に高くなる傾向が認められた。一方、ＣＤ４陽性Ｔ細胞においては、無処置群（「対照群」）と抗ＰＤ－Ｌ１抗体とβ－グルカンの併用投与群（「試験群３」）との間で、それほど差はみられなかった（図６中、「＊＊」はｐ＜０．０１を表わし、「＊＊＊」はｐ＜０．００１を表わす。）。

以上から、抗ＰＤ－Ｌ１抗体やβ－グルカンの投与により、細胞浸潤性Ｔ細胞を活性化しその細胞障害性が高められることが明らかとなった。一方、脾臓リンパ球に、顕著な影響はなかった。また、その活性化効果は、併用することによって、単独投与よりも顕著に高められることが明らかとなった。これらは、担がんマウスの腫瘍体積の低減効果と、よく整合する結果であった。

＜試験例３＞
試験例１と同様にして、腫瘍細胞株の移植による担がんマウスを作成し、被験物質の投与によってその腫瘍の成長に影響があるかどうかを調べた。その際、被験物質として、アウレオバシジウムプルランス由来のβ－グルカンに替えて、シイタケ由来のβ－グルカン（「ミセルグルカン」、株式会社ＲＬ－ＪＰ製）（以下、「ミセルβ－グルカン」という。）を用いた。

具体的には、担がんマウスを作成は、Ｃ５７ＢＬ/６マウス（日本エスエルシー株式会社）に対し、マウスメラノーマ細胞株Ｂ１６Ｆ１０（理研バイオバンク）の３×１０^５個を、マウス脇腹に接種し、１３日間腫瘍を成長させることにより行った。

試験動物を、無処置群、ミセルβ－グルカン単独投与群、抗ＰＤ－Ｌ１抗体単独投与群、及び抗ＰＤ－Ｌ１抗体とミセルβ－グルカンの併用投与群の４群に分け、Ｎ数は、無処置群で４匹、ミセルβ－グルカン単独投与群で２匹、ＰＤ－Ｌ１抗体単独投与群で３匹、抗ＰＤ－Ｌ１抗体とミセルβ－グルカンの併用群で３匹とした。以下では、便宜上、無処置群を「対照群Ａ」といい、ミセルβ－グルカン単独投与群を「試験群１Ａ」といい、抗ＰＤ－Ｌ１抗体単独投与群を「試験群２Ａ」といい、抗ＰＤ－Ｌ１抗体とミセルβ－グルカンの併用投与群を「試験群３Ａ」という場合がある。

被験物質の投与形態としては、無処置群（「対照群Ａ」）では、腫瘍細胞移植から８日目、１２日目、及び１４日目の時点で、生理食塩水を腹腔内に投与した。ミセルβ－グルカン単独投与群（「試験群１Ａ」）では、腫瘍細胞移植から８日目、１１日目の時点で、ミセルβ－グルカンをそのβ－グルカン量に換算して１００ｍｇ／ｋｇの投与量で腹腔内に投与した。抗ＰＤ－Ｌ１抗体の単独投与群（「試験群２Ａ」）では、腫瘍細胞移植から８日目及び１２日目の時点で、抗マウスＰＤ－Ｌ１抗体（Clone: MIH5）を２００μｇ／匹の投与量で腹腔内に投与した。抗ＰＤ－Ｌ１抗体とミセルβ－グルカンの併用投与群（「試験群３Ａ」）については、抗マウスＰＤ－Ｌ１抗体を、腫瘍細胞移植から８日目及び１２日目の時点で、上記同様の投与形態で投与し、ミセルβ－グルカンを、腫瘍細胞移植から８日目及び１１日目の時点で、そのβ－グルカン量に換算して１００ｍｇ／ｋｇの投与量で腹腔内に投与した。図７には、各被検物質の投与スケジュールの概要を示す。

メラノーマ細胞株の接種後から６日目、８日目、１１日目、１２日目に、腫瘍の長径及び短径を測定し、試験例１同様にして腫瘍体積（ｍｍ^３）を記録した。

腫瘍細胞移植から所定日数経過後の腫瘍体積の結果を、表３及び図８に示す。また、腫瘍細胞移植から１２日目の腫瘍体積を比較したときの各群間での有意性の有無をBrown-Forsythe Testにて統計解析にて調べた結果を、表４に示す。

その結果、抗ＰＤ－Ｌ１抗体とミセルβ－グルカンの併用投与群（「試験群３Ａ」）では、無処置群（「対照群Ａ」）に比べて、顕著に腫瘍体積が減少していた。その減少効果は、抗ＰＤ－Ｌ１抗体の単独投与群（「試験群２Ａ」）に比べても、より高い傾向であった（１２日目の比較参照）。

Claims

アウレオバシジウムプルランスの培養物由来のβ－グルカンを有効成分として含有し、免疫チェックポイント阻害を介してがんの増殖を抑制する作用効果を有する抗体医薬とともに投与されるものであることを特徴とする抗体医薬の効果増強用組成物。
前記抗体医薬は、ＰＤ－Ｌ１に対するモノクローナル抗体を含むものである、請求項１記載の抗体医薬の効果増強用組成物。
前記抗体医薬は、メラノーマの増殖を抑制する作用効果を有するものである、請求項１記載の抗体医薬の効果増強用組成物。
腹腔内投与用である、請求項１記載の抗体医薬の効果増強用組成物。