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JP6637439B2 - 抗ｏｘ４０抗体及び使用方法 - Google Patents

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Description

関連出願の相互参照
本出願は、それぞれその全体が参照によって本明細書に組み込まれる２０１４年３月３１日出願の米国仮特許出願第６１／９７３，１９３号；２０１４年５月６日出願の同第６１／９８９，４４８号；２０１４年１０月３１日出願の同第６２／０７３，８７３号；及び２０１４年１１月１４日出願の同第６２／０８０，１７１号の優先権を主張する。
配列表
ＡＳＣＩＩテキストファイルでの下記の送信内容は、その全体が参照によって本明細書に組み込まれる：配列表のコンピュータ読み込み可能な形式（ＣＲＦ）（ファイル名：１４６３９２０２９１４０ＳＥＱＬＩＳＴ．ｔｘｔ、記録日：２０１５年３月２６日、サイズ：１４３ＫＢ）。
技術分野
本発明は、抗ＯＸ４０抗体及びその使用方法に関する。
背景
ＯＸ４０（ＣＤ３４、ＴＮＦＲＳＦ４、及びＡＣＴ３５としても公知）は、腫瘍壊死因子受容体スーパーファミリーのメンバーである。ＯＸ４０は、ナイーブＴ細胞上では構成的に発現されないが、Ｔ細胞受容体（ＴＣＲ）の結合後に誘発される。ＯＸ４０のリガンドであるＯＸ４０Ｌは、抗原提示細胞上で主に発現される。ＯＸ４０は、活性化ＣＤ４＋Ｔ細胞、活性化ＣＤ８＋Ｔ細胞、メモリーＴ細胞、及び調節性Ｔ細胞によって高度に発現される。ＯＸ４０シグナル伝達は、ＣＤ４及びＣＤ８Ｔ細胞に同時刺激シグナルを示し、細胞増殖、生存、エフェクター機能、及び遊走の増強につながり得る。ＯＸ４０シグナル伝達はまた、メモリーＴ細胞の発生及び機能を増強する。
調節性Ｔ細胞（Ｔｒｅｇ）細胞は、黒色腫、ＮＳＣＬＣ、腎臓、卵巣、結腸、膵臓、肝細胞、及び乳がんを含む多数のがん適応症に由来する腫瘍及び腫瘍排出リンパ節において高度に富化される。これらの適応症のサブセットにおいて、腫瘍内Ｔｒｅｇ細胞密度の上昇は、患者の予後不良に関連しており、これは、これらの細胞が、抗腫瘍免疫を抑制する重要な役割を果たしていることを示唆している。ＯＸ４０陽性腫瘍浸潤性リンパ球が記載されている。
治療薬として開発するために最適な臨床的属性を有する作用物質が引き続き必要とされていることは明らかである。本明細書に記載の本発明は、この必要性を満たし、他の利益も提供するものである。
特許出願及び公報を含む、本明細書において引用する参照文献はすべて、それらの全体が参照によって本明細書に組み込まれる。
一態様では、ヒトＯＸ４０に結合する単離抗体を提供する。
別の態様では、枯渇性抗体（ｄｅｐｌｅｔｉｎｇ ａｎｔｉｂｏｄｙ）である、抗ヒトＯＸ４０アゴニスト抗体を提供する。別の態様では、ｉｎ ｖｉｔｒｏでヒトＯＸ４０を発現する細胞を枯渇させ、かつ約１ｎＭ以下の親和性でヒトＯＸ４０と結合する、抗ヒトＯＸ４０アゴニスト抗体を提供する。一部の実施形態では、抗体は、ＣＤ４＋エフェクターＴ細胞を枯渇させる。一部の実施形態では、抗体は、調節性Ｔ細胞（Ｔｒｅｇ）を枯渇させる。一部の実施形態では、枯渇は、ＡＤＣＣ及び／または食作用による。一部の実施形態では、枯渇は、ＡＤＣＣによる。
別の態様では、約０．４５ｎＭ以下の親和性でヒトＯＸ４０と結合する抗ヒトＯＸ４０アゴニスト抗体を提供する。一部の実施形態では、抗体は、約０．４ｎＭ以下の親和性でヒトＯＸ４０と結合する。一部の実施形態では、抗体結合親和性は、ラジオイムノアッセイを使用して決定される。一部の実施形態では、抗体は、ヒトＯＸ４０及びカニクイザルＯＸ４０と結合する。一部の実施形態では、ヒト及びカニクイザルＯＸ４０への結合は、ＦＡＣＳアッセイを使用して決定される。一部の実施形態では、ヒトＯＸ４０への結合は、０．２ｕｇ／ｍｌ以下のＥＣ５０を有する。一部の実施形態では、ヒトＯＸ４０への結合は、０．３ｕｇ／ｍｌ以下のＥＣ５０を有する。一部の実施形態では、カニクイザルＯＸ４０への結合は、１．５ｕｇ／ｍｌ以下のＥＣ５０を有する。一部の実施形態では、カニクイザルＯＸ４０への結合は、１．４ｕｇ／ｍｌ以下のＥＣ５０を有する。
別の態様では、本発明は、抗ヒトＯＸ４０アゴニスト抗体での処置前の増殖及び／またはサイトカイン産生と比較した場合に、ＣＤ４＋エフェクターＴ細胞の増殖を増大させ（増大させ得る）、かつ／またはＣＤ４＋エフェクターＴ細胞によるサイトカイン産生を増大させる抗ヒトＯＸ４０アゴニスト抗体を提供する。一部の実施形態では、サイトカインは、ガンマインターフェロンである。
別の態様では、本発明は、メモリーＴ細胞の増殖を増大させ（増大させ得る）、かつ／またはメモリー細胞によるサイトカイン産生を増大させる抗ヒトＯＸ４０アゴニスト抗体を提供する。一部の実施形態では、サイトカインは、ガンマインターフェロンである。
別の態様では、本発明は、Ｔｒｅｇ機能を阻害する（阻害し得る）抗ヒトＯＸ４０アゴニストを提供する。一部の実施形態では、抗体は、エフェクターＴ細胞機能のＴｒｅｇ抑制を阻害する。一部の実施形態では、エフェクターＴ細胞機能は、エフェクターＴ細胞増殖及び／またはサイトカイン産生である。一部の実施形態では、エフェクターＴ細胞は、ＣＤ４＋エフェクターＴ細胞である。
別の態様では、本発明は、ＯＸ４０を発現するターゲット細胞におけるＯＸ４０シグナル伝達を増大させる（増大させ得る）抗ヒトＯＸ４０アゴニスト抗体を提供する。一部の実施形態では、ＯＸ４０シグナル伝達は、ＮＦｋＢ下流シグナル伝達（例えば、ＯＸ４０発現細胞、例えば、ＣＤ４＋エフェクターＴ細胞、ＣＤ８＋エフェクターＴ細胞、ＣＤ４＋メモリーＴ細胞における）をモニターすることによって検出される。
別の態様では、２週間にわたる４０℃での処理の後に安定している抗ヒトＯＸ４０アゴニスト抗体を提供する。
別の態様では、ヒトエフェクター細胞への結合を排除する変異を含む変異型ＩｇＧ１ Ｆｃポリペプチドを含み、天然配列ＩｇＧ１ Ｆｃ部分を含む抗ヒトＯＸ４０アゴニスト抗体と比較して、減弱した活性を有する、抗ヒトＯＸ４０アゴニスト抗体を提供する。一部の実施形態では、抗体は、ＦｃＲへの結合を排除する変異（例えば、ＤＡＮＡまたはＮ２９７Ｇ変異）を含む変異型Ｆｃ部分を含む。一部の実施形態では、活性は、ＣＤ４＋エフェクターＴ細胞増殖及び／若しくはサイトカイン産生の増大、ＣＤ４＋メモリーＴ細胞増殖及び／若しくはサイトカイン産生の増大、ならびに／またはＡＤＣＣ及び／若しくは食作用による細胞の枯渇のうちの１つまたは複数である。
別の態様では、抗ヒトＯＸ４０アゴニスト抗体機能のために抗体架橋結合が必要とされる、抗ヒトＯＸ４０アゴニスト抗体を提供する。一部の実施形態では、抗ヒトＯＸ４０アゴニスト抗体機能は、ＣＤ４＋エフェクターＴ細胞増殖及び／若しくはサイトカイン産生の増大、ＣＤ４＋メモリーＴ細胞増殖及び／またはサイトカイン産生の増大、ならびに／またはＡＤＣＣ及び／または食作用による細胞の枯渇のうちの１つまたは複数である。
別の態様では、（ａ）（ｉ）配列番号２、８、または９のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ１、（ｉｉ）配列番号３、１０、１１、１２、１３、または１４のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ２、及び（ｉｉｉ）配列番号４、１５、または１９から選択されるアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ３を含むＶＨドメイン；ならびに（ｉｖ）配列番号５のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ１、（ｖ）配列番号６のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ２、及び（ｖｉ）配列番号７、２２、２３、２４、２５、２６、２７、または２８のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ３を含む、抗ヒトＯＸ４０アゴニスト抗体を提供する。
別の態様では、（ａ）配列番号２のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ１；（ｂ）配列番号３のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ２；（ｃ）配列番号４のアミノ酸配列ＨＶＲ−Ｈ３；（ｄ）配列番号５のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ１；（ｅ）配列番号６のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ２；及び（ｆ）配列番号７から選択されるアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ３を含む、抗ヒトＯＸ４０アゴニスト抗体を提供する。
別の態様では、（ａ）配列番号２のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ１；（ｂ）配列番号３のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ２；（ｃ）配列番号４のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ３；（ｄ）配列番号５のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ１；（ｅ）配列番号６のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ２；及び（ｆ）配列番号２６から選択されるアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ３を含む、抗ヒトＯＸ４０アゴニスト抗体を提供する。
別の態様では、（ａ）配列番号２のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ１；（ｂ）配列番号３のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ２；（ｃ）配列番号４のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ３；（ｄ）配列番号５のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ１；（ｅ）配列番号６のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ２；及び（ｆ）配列番号２７から選択されるアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ３を含む、抗ヒトＯＸ４０アゴニスト抗体を提供する。
別の態様では、配列番号５６、５８、６０、６２、６４、６６、６８、７０、７２、７４、７６、７８、８０、８２、８４、８６、８８、９０、９２、９４、９６、９８、１００、１０８、１１４、１１６、１８３、または１８４のアミノ酸配列に対して少なくとも９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、または１００％配列同一性を有する重鎖可変ドメイン（ＶＨ）配列を含む、抗ヒトＯＸ４０アゴニスト抗体を提供する。
別の態様では、配列番号５７、５９、６１、６３、６５、６７、６９、７１、７３、７５、７７、７９、８１、８３、８５、８７、８９、９１、９３、９５、９７、９９、１０１、１０９、１１５、または１１７のアミノ酸配列に対して少なくとも９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、または１００％配列同一性を有する軽鎖可変ドメイン（ＶＬ）を含む、抗ヒトＯＸ４０アゴニスト抗体を提供する。
別の態様では、配列番号５６のアミノ酸配列に対して少なくとも９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、または１００％配列同一性を有する重鎖可変ドメイン（ＶＨ）配列を含む、抗ヒトＯＸ４０アゴニスト抗体を提供する。一部の実施形態では、少なくとも９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、または９９％同一性を有するＶＨ配列は、参照配列に対して置換（例えば、保存的置換）、挿入、または欠失を含むが、その配列を含む抗ヒトＯＸ４０アゴニスト抗体は、ヒトＯＸ４０に結合する能力を保持する。一部の実施形態では、合計１〜１０個のアミノ酸が、配列番号５６において置換、挿入、及び／または欠失されている。一部の実施形態では、ＶＨは、（ａ）配列番号２のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ１、（ｂ）配列番号３のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ２、及び（ｃ）配列番号４のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ３から選択される１、２、または３つのＨＶＲを含む。
別の態様では、配列番号５７のアミノ酸配列に対して少なくとも９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、または１００％配列同一性を有する軽鎖可変ドメイン（ＶＬ）を含む、抗ヒトＯＸ４０アゴニスト抗体を提供する。一部の実施形態では、少なくとも９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、または９９％同一性を有するＶＬ配列は、参照配列に対して置換（例えば、保存的置換）、挿入、または欠失を含むが、その配列を含む抗ヒトＯＸ４０アゴニスト抗体はヒトＯＸ４０に結合する能力を保持する。一部の実施形態では、合計１〜１０個のアミノ酸が、配列番号５７において置換、挿入、及び／または欠失されている。一部の実施形態では、ＶＬは、（ａ）配列番号５のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ１；（ｂ）配列番号６のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ２；及び（ｃ）配列番号７のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ３から選択される１、２、または３つのＨＶＲを含む。
別の態様では、配列番号５６のＶＨ配列を含む、抗ヒトＯＸ４０アゴニスト抗体を提供する。
別の態様では、配列番号５７のＶＬ配列を含む、抗ヒトＯＸ４０アゴニスト抗体を提供する。
別の態様では、配列番号５６のＶＨ配列及び配列番号５７のＶＬ配列を含む、抗ヒトＯＸ４０アゴニスト抗体を提供する。
別の態様では、配列番号９４のＶＨ配列を含む、抗ヒトＯＸ４０アゴニスト抗体を提供する。
別の態様では、配列番号９５のＶＬ配列を含む、抗ヒトＯＸ４０アゴニスト抗体を提供する。
別の態様では、配列番号９４のＶＨ配列及び配列番号９５のＶＬ配列を含む、抗ヒトＯＸ４０アゴニスト抗体を提供する。
別の態様では、配列番号９６のＶＨ配列を含む、抗ヒトＯＸ４０アゴニスト抗体を提供する。
別の態様では、配列番号９７のＶＬ配列を含む、抗ヒトＯＸ４０アゴニスト抗体を提供する。
別の態様では、配列番号９６のＶＨ配列及び配列番号９７のＶＬ配列を含む、抗ヒトＯＸ４０アゴニスト抗体を提供する。
別の態様では、配列番号１８０のＶＨ配列を含む、抗ヒトＯＸ４０アゴニスト抗体を提供する。
別の態様では、配列番号１７９のＶＬ配列を含む、抗ヒトＯＸ４０アゴニスト抗体を提供する。
別の態様では、配列番号１８０のＶＨ配列及び配列番号１７９のＶＬ配列を含む、抗ヒトＯＸ４０アゴニスト抗体を提供する。
別の態様では、配列番号１８２のＶＨ配列を含む、抗ヒトＯＸ４０アゴニスト抗体を提供する。
別の態様では、配列番号１８１のＶＬ配列を含む、抗ヒトＯＸ４０アゴニスト抗体を提供する。
別の態様では、配列番号１８２のＶＨ配列及び配列番号１８１のＶＬ配列を含む、抗ヒトＯＸ４０アゴニスト抗体を提供する。
本発明の抗体のいずれかの一部の実施形態では、抗体は、全長ヒトＩｇＧ１抗体である。
本発明の抗体のいずれかの一部の実施形態では、抗体は、ヒト抗体である。本発明の抗体のいずれかの一部の実施形態では、抗体は、ヒト化抗体である。本発明の抗体のいずれかの一部の実施形態では、抗体は、キメラ抗体である。
本発明の抗体のいずれかの一部の実施形態では、抗体は、裸の（ｎａｋｅｄ）抗体である。
別の態様では、本明細書において提供する抗ヒトＯＸ４０抗体（例えば、アゴニスト抗体）のいずれかをコードする、単離核酸を提供する。
別の態様では、本明細書において提供する抗ヒトＯＸ４０抗体（例えば、アゴニスト抗体）のいずれかをコードする核酸を含む、宿主細胞を提供する。
別の態様では、抗体を生産する方法であって、抗体が産生されるように宿主細胞を培養することを含む方法を提供する。一部の実施形態では、方法は、宿主細胞から抗体を回収することをさらに含む。
別の態様では、本明細書において提供する抗ヒトＯＸ４０抗体（例えば、アゴニスト抗体）のいずれかと、細胞傷害性薬物とを含むイムノコンジュゲートを提供する。
別の態様では、本明細書において提供する抗ヒトＯＸ４０抗体（例えば、アゴニスト抗体）のいずれかと、薬学的に許容される担体とを含む医薬製剤を提供する。一部の実施形態では、医薬製剤は、（ａ）約１０ｍｇ／ｍＬ〜約１００ｍｇ／ｍＬの濃度の本明細書に記載の抗ヒトＯＸ４０アゴニスト抗体のいずれかと、（ｂ）濃度が約０．０２％〜約０．０６％であるポリソルベートと；（ｃ）約ｐＨ５．０〜約ｐＨ６．０のヒスチジン緩衝剤と；（ｄ）濃度が約１２０ｍＭ〜約３２０ｍＭである糖とを含む。一部の実施形態では、ヒスチジン緩衝剤は、ｐＨ５．０〜６．０である。一部の実施形態では、糖は、スクロースである。一部の実施形態では、医薬製剤は、（ａ）本明細書に記載の抗ヒトＯＸ４０アゴニスト抗体のいずれかと、（ｂ）濃度が約０．０２％であるポリソルベート２０と；（ｃ）ｐＨ６．０の酢酸ヒスチジン緩衝剤と；（ｄ）濃度が約３２０ｍＭであるスクロースとを含む。一部の実施形態では、医薬製剤は、（ａ）本明細書に記載の抗ヒトＯＸ４０アゴニスト抗体のいずれかと、（ｂ）濃度が約０．０２％であるポリソルベート２０と；（ｃ）ｐＨ５．５の酢酸ヒスチジン緩衝剤と；（ｄ）濃度が約２４０ｍＭであるスクロースとを含む。一部の実施形態では、医薬製剤は、（ａ）本明細書に記載の抗ヒトＯＸ４０アゴニスト抗体のいずれかと、（ｂ）濃度が約０．０４％であるポリソルベート２０と；（ｃ）ｐＨ６．０の酢酸ヒスチジン緩衝剤と；（ｄ）濃度が約１２０ｍＭであるスクロースとを含む。一部の実施形態では、医薬製剤は、（ａ）本明細書に記載の抗ヒトＯＸ４０アゴニスト抗体のいずれかと、（ｂ）濃度が約０．０４％であるポリソルベート４０と；（ｃ）ｐＨ５．０の酢酸ヒスチジン緩衝剤と；（ｄ）濃度が約２４０ｍＭであるスクロースとを含む。一部の実施形態では、医薬製剤は、（ａ）本明細書に記載の抗ヒトＯＸ４０アゴニスト抗体のいずれかと、（ｂ）濃度が約０．０４％であるポリソルベート４０と；（ｃ）ｐＨ６．０の酢酸ヒスチジン緩衝剤と；（ｄ）濃度が約１２０ｍＭであるスクロースとを含む。一部の実施形態では、製剤の抗体は、（ａ）（ｉ）配列番号２、８、または９のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ１、（ｉｉ）配列番号３、１０、１１、１２、１３、または１４のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ２、及び（ｉｉｉ）配列番号４、１５、または１９から選択されるアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ３を含むＶＨドメイン；ならびに（ｉｖ）配列番号５のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ１、（ｖ）配列番号６のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ２、及び（ｖｉ）配列番号７、２２、２３、２４、２５、２６、２７、または２８のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ３を含む。一部の実施形態では、製剤の抗体は、（ａ）配列番号２のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ１；（ｂ）配列番号３のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ２；（ｃ）配列番号４のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ３；（ｄ）配列番号５のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ１；（ｅ）配列番号６のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ２；及び（ｆ）配列番号７から選択されるアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ３を含む。一部の実施形態では、製剤の抗体は、（ａ）配列番号２のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ１；（ｂ）配列番号３のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ２；（ｃ）配列番号４のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ３；（ｄ）配列番号５のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ１；（ｅ）配列番号６のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ２；及び（ｆ）配列番号２６から選択されるアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ３を含む。一部の実施形態では、製剤の抗体は、（ａ）配列番号２のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ１；（ｂ）配列番号３のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ２；（ｃ）配列番号４のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ３；（ｄ）配列番号５のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ１；（ｅ）配列番号６のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ２；及び（ｆ）配列番号２７から選択されるアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ３を含む。一部の実施形態では、製剤の抗体は、配列番号５６、５８、６０、６２、６４、６６、６８、７０、７２、７４、７６、７８、８０、８２、８４、８６、８８、９０、９２、９４、９６、９８、１００、１０８、１１４、１１６、１８３、または１８４のアミノ酸配列に対して少なくとも９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、または１００％配列同一性を有する重鎖可変ドメイン（ＶＨ）配列を含む。一部の実施形態では、製剤の抗体は、配列番号５７、５９、６１、６３、６５、６７、６９、７１、７３、７５、７７、７９、８１、８３、８５、８７、８９、９１、９３、９５、９７、９９、１０１、１０９、１１５、または１１７のアミノ酸配列に対して少なくとも９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、または１００％配列同一性を有する軽鎖可変ドメイン（ＶＬ）を含む。一部の実施形態では、製剤の抗体は、配列番号５６のアミノ酸配列に対して少なくとも９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、または１００％配列同一性を有する重鎖可変ドメイン（ＶＨ）配列を含む。一部の実施形態では、少なくとも９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、または９９％同一性を有するＶＨ配列は、参照配列に対して置換（例えば、保存的置換）、挿入、または欠失を含むが、その配列を含む抗ヒトＯＸ４０アゴニスト抗体はヒトＯＸ４０に結合する能力を保持する。一部の実施形態では、合計１〜１０個のアミノ酸が、配列番号５６において置換、挿入、及び／または欠失されている。一部の実施形態では、ＶＨは、（ａ）配列番号２のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ１、（ｂ）配列番号３のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ２、及び（ｃ）配列番号４のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ３から選択される１、２、または３つのＨＶＲを含む。一部の実施形態では、製剤の抗体は、配列番号５７のアミノ酸配列に対して少なくとも９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、または１００％配列同一性を有する軽鎖可変ドメイン（ＶＬ）を含む。一部の実施形態では、少なくとも９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、または９９％同一性を有するＶＬ配列は、参照配列に対して置換（例えば、保存的置換）、挿入、または欠失を含むが、その配列を含む抗ヒトＯＸ４０アゴニスト抗体はヒトＯＸ４０に結合する能力を保持する。一部の実施形態では、合計１〜１０個のアミノ酸が、配列番号５７において置換、挿入、及び／または欠失されている。一部の実施形態では、ＶＬは、（ａ）配列番号５のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ１；（ｂ）配列番号６のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ２；及び（ｃ）配列番号７のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ３から選択される１、２、または３つのＨＶＲを含む。一部の実施形態では、製剤の抗体は、配列番号５６のＶＨ配列を含む。一部の実施形態では、製剤の抗体は、配列番号５７のＶＬ配列を含む。一部の実施形態では、製剤の抗体は、配列番号５６のＶＨ配列及び配列番号５７のＶＬ配列を含む。一部の実施形態では、製剤の抗体は、配列番号９４のＶＨ配列を含む。一部の実施形態では、製剤の抗体は、配列番号９５のＶＬ配列を含む。一部の実施形態では、製剤の抗体は、配列番号９４のＶＨ配列及び配列番号９５のＶＬ配列を含む。一部の実施形態では、製剤の抗体は、配列番号９６のＶＨ配列を含む。一部の実施形態では、製剤の抗体は、配列番号９７のＶＬ配列を含む。一部の実施形態では、製剤の抗体は、配列番号９６のＶＨ配列及び配列番号９７のＶＬ配列を含む。一部の実施形態では、製剤の抗体は、配列番号１８０のＶＨ配列を含む。一部の実施形態では、製剤の抗体は、配列番号１７９のＶＬ配列を含む。一部の実施形態では、製剤の抗体は、配列番号１８０のＶＨ配列及び配列番号１７９のＶＬ配列を含む。一部の実施形態では、製剤の抗体は、配列番号１８２のＶＨ配列を含む。一部の実施形態では、製剤の抗体は、配列番号１８１のＶＬ配列を含む。一部の実施形態では、製剤の抗体は、配列番号１８２のＶＨ配列及び配列番号１８１のＶＬ配列を含む。
別の態様では、本明細書において提供する抗ヒトＯＸ０アゴニスト抗体は、医薬品として使用するためのものである。
別の態様では、本明細書において提供する抗ヒトＯＸ０アゴニスト抗体は、がんの処置において使用するためのものである。
別の態様では、本明細書において提供する抗ヒトＯＸ０アゴニスト抗体は、Ｔｒｅｇ機能の阻害（例えば、Ｔｒｅｇの抑制機能の阻害）、ＯＸ４０発現細胞（例えば、高レベルのＯＸ４０を発現する細胞）の殺滅、エフェクターＴ細胞機能の増大及び／若しくはメモリーＴ細胞機能の増大、腫瘍免疫の低下、Ｔ細胞機能の増強、ならびに／またはＯＸ−４０発現細胞の枯渇のうちの１つまたは複数において使用するためのものである。
別の態様では、がんを処置するための医薬品の製造における、本明細書において提供する抗ヒトＯＸ０アゴニスト抗体の使用を提供する。
別の態様では、Ｔｒｅｇ機能の阻害（例えば、Ｔｒｅｇの抑制機能の阻害）、ＯＸ４０発現細胞（例えば、高レベルのＯＸ４０を発現する細胞）の殺滅、エフェクターＴ細胞機能の増大及び／若しくはメモリーＴ細胞機能の増大、腫瘍免疫の低下、Ｔ細胞機能の増強、ならびに／またはＯＸ−４０発現細胞の枯渇のうちの１つまたは複数のための医薬品の製造における、本明細書において提供する抗ヒトＯＸ０アゴニスト抗体の使用を提供する
別の態様では、がんを有する個体を処置する方法であって、その個体に、有効量の本明細書において提供する抗ヒトＯＸ４０アゴニスト抗体のいずれかを投与することを含む方法を提供する。一部の実施形態では、方法は、追加の治療薬を投与することをさらに含む。一部の実施形態では、追加の治療薬は、化学療法薬を含む。一部の実施形態では、追加の治療薬は、ＰＤ−１軸結合アンタゴニストを含む。
別の態様では、本明細書において開示する抗ヒトＯＸ４０抗体のいずれかを使用する、診断または検出方法を提供する。
別の態様では、本明細書において開示する抗ヒトＯＸ４０抗体のいずれかを含む、キットまたは製品を提供する。一部の実施形態では、キットまたは製品は、本明細書に記載の抗ヒトＯＸ４０アゴニスト抗体と、任意選択的な薬学的に許容される担体とを含む医薬品を含む。一部の実施形態では、キットまたは製品は、がんを処置するための医薬品を投与するための指示書をさらに含む。
本明細書に記載の様々な実施形態の特徴の１つ、一部、または全部を合わせて、本発明の他の実施形態を形成することができることは理解されるべきである。本発明のこれらの態様及び他の態様が、当業者には明らかになるであろう。本発明のこれらの実施形態及び他の実施形態を、下記の詳細な説明においてさらに記載する。
ヒト化ＯＸ４０抗体変異体をＦＡＣＳによって分析して、Ｈｕｔ７８細胞の表面上に発現されたｈｕＯＸ４０への抗体結合を評価した。 ヒト化ＯＸ４０抗体変異体をＦＡＣＳによって分析して、Ｈｕｔ７８細胞の表面上に発現されたｈｕＯＸ４０への抗体結合を評価した。 ＯＸ４０アゴニスト抗体１Ａ７．ｇｒ．１は、高い親和性でヒト及びカニクイザルＴ細胞に結合した。 （図３Ａ）Ｍａｂ １Ａ７．ｇｒ．１は、架橋結合の不在下でＴ細胞増殖に対して効果を有さなかった。ｍａｂ １Ａ７．ｇｒ．１の濃度の上昇は、抗ＣＤ３架橋結合に応じて、ＣＤ４＋メモリーＴ細胞増殖を同時刺激した。ｍａｂ１Ａ７．ｇｒ．１の同時刺激効果について算出されたＥＣ５０は、９．９６ｎｇ／ｍＬ（ｎ＝２）であった。（図３Ｂ）ｍａｂ １Ａ７．ｇｒ．１の濃度の上昇は、抗ＣＤ３架橋結合に応じて、インターフェロンガンマのＣＤ４＋メモリーＴ細胞産生を同時刺激した。 （図３Ａ）Ｍａｂ １Ａ７．ｇｒ．１は、架橋結合の不在下でＴ細胞増殖に対して効果を有さなかった。ｍａｂ １Ａ７．ｇｒ．１の濃度の上昇は、抗ＣＤ３架橋結合に応じて、ＣＤ４＋メモリーＴ細胞増殖を同時刺激した。ｍａｂ１Ａ７．ｇｒ．１の同時刺激効果について算出されたＥＣ５０は、９．９６ｎｇ／ｍＬ（ｎ＝２）であった。（図３Ｂ）ｍａｂ １Ａ７．ｇｒ．１の濃度の上昇は、抗ＣＤ３架橋結合に応じて、インターフェロンガンマのＣＤ４＋メモリーＴ細胞産生を同時刺激した。 プレート結合した抗ＣＤ３の存在下で、プレート結合したｍａｂ １Ａ７は、エフェクターＴ細胞増殖を同時刺激した。対照的に、ｍａｂ １Ａ７が可溶性形態で、プレート結合した抗ＣＤ３の存在下で提供された場合には、プレート結合した抗ＣＤ３の存在下でプレート結合したアイソタイプ対照抗体で観察されたレベルと同様のレベルまで、同時刺激活性は抑止された。 Ｎ２９７Ｇ変異を含むＭＡｂ １Ａ７ ｇｒ．１は、Ｔｅｆｆ細胞増殖を同時刺激することはできなかった。対照的に、野生型（非変異）ｍａｂ １Ａ７ ｇｒ．１は、抗ＣＤ３誘発性Ｔｅｆｆ細胞増殖を同時刺激した。 ＯＸ４０アゴニスト抗体での処置は、ナイーブＣＤ４＋Ｔ細胞のＴｒｅｇ細胞媒介抑制を阻害した。単独で培養した場合、ナイーブＣＤ４＋Ｔ細胞（Ｔｎ）は、Ｔｒｅｇ細胞及びアイソタイプ対照抗体の添加によって阻害された。天然ＣＤ４＋Ｔ細胞増殖のＴｒｅｇ細胞媒介阻害は、抗ＯＸ４０抗体、ｍａｂ １Ａ７．ｇｒ１を含有する培養物では抑止された。データは、３つの独立した実験の平均を表した。 ｍａｂ １Ａ７．ｇｒ．１での処置は、Ｔｒｅｇ細胞の抑制機能を損傷した。 （図７Ａ）ｍａｂ １Ａ７．ｇｒ．１での処置は、ＯＸ４０発現Ｔ細胞のＡＤＣＣを誘発した。（図７Ｂ）ｍａｂ １Ａ７．ｇｒ１（ＩｇＧ４）によって誘発されるＡＤＣＣのレベルと比較して、ｍａｂ Ａ７．ｇｒ１（ＩｇＧ１）での処置は、ＯＸ４０発現ＣＤ４＋Ｔ細胞のより大きなＡＤＣＣを誘発した。 （図７Ａ）ｍａｂ １Ａ７．ｇｒ．１での処置は、ＯＸ４０発現Ｔ細胞のＡＤＣＣを誘発した。（図７Ｂ）ｍａｂ １Ａ７．ｇｒ１（ＩｇＧ４）によって誘発されるＡＤＣＣのレベルと比較して、ｍａｂ Ａ７．ｇｒ１（ＩｇＧ１）での処置は、ＯＸ４０発現ＣＤ４＋Ｔ細胞のより大きなＡＤＣＣを誘発した。 ＢＴ４７４−ヒトＯＸ４０トランスジェニッククローンは、種々のレベルのヒトＯＸ４０を発現した。図８Ａ、低ＯＸ４０発現ＢＴ４７４細胞。図８Ｂ、高ＯＸ４０発現ＢＴ４７４細胞。 ＢＴ４７４−ヒトＯＸ４０トランスジェニッククローンは、種々のレベルのヒトＯＸ４０を発現した。図８Ａ、低ＯＸ４０発現ＢＴ４７４細胞。図８Ｂ、高ＯＸ４０発現ＢＴ４７４細胞。 ＯＸ４０アゴニスト抗体での処置は、ヒトＯＸ４０を発現する細胞系の抗体依存性細胞媒介食作用を誘発し、抗体依存性細胞媒介食作用のレベルは、ターゲット細胞におけるＯＸ４０発現のレベルに対して感受性があった。 ＯＸ４０アゴニスト抗体１Ａ７．ｇｒ１での処置は、ＯＸ４０発現細胞においてＡＤＣＣを誘発した。 図１１Ａ〜Ｉ：抗ＯＸ４０抗体の可変領域のアミノ酸配列。重鎖ＨＶＲ−Ｈ１、−Ｈ２、及び−Ｈ３、ならびに軽鎖ＨＶＲ−Ｌ１、−Ｌ２、及び−Ｌ３配列がマークされている。アミノ酸位置は、本明細書に記載のとおりのＫａｂａｔナンバリングシステムに従ってナンバリングされている。 図１１Ａ〜Ｉ：抗ＯＸ４０抗体の可変領域のアミノ酸配列。重鎖ＨＶＲ−Ｈ１、−Ｈ２、及び−Ｈ３、ならびに軽鎖ＨＶＲ−Ｌ１、−Ｌ２、及び−Ｌ３配列がマークされている。アミノ酸位置は、本明細書に記載のとおりのＫａｂａｔナンバリングシステムに従ってナンバリングされている。 図１１Ａ〜Ｉ：抗ＯＸ４０抗体の可変領域のアミノ酸配列。重鎖ＨＶＲ−Ｈ１、−Ｈ２、及び−Ｈ３、ならびに軽鎖ＨＶＲ−Ｌ１、−Ｌ２、及び−Ｌ３配列がマークされている。アミノ酸位置は、本明細書に記載のとおりのＫａｂａｔナンバリングシステムに従ってナンバリングされている。 図１１Ａ〜Ｉ：抗ＯＸ４０抗体の可変領域のアミノ酸配列。重鎖ＨＶＲ−Ｈ１、−Ｈ２、及び−Ｈ３、ならびに軽鎖ＨＶＲ−Ｌ１、−Ｌ２、及び−Ｌ３配列がマークされている。アミノ酸位置は、本明細書に記載のとおりのＫａｂａｔナンバリングシステムに従ってナンバリングされている。 図１１Ａ〜Ｉ：抗ＯＸ４０抗体の可変領域のアミノ酸配列。重鎖ＨＶＲ−Ｈ１、−Ｈ２、及び−Ｈ３、ならびに軽鎖ＨＶＲ−Ｌ１、−Ｌ２、及び−Ｌ３配列がマークされている。アミノ酸位置は、本明細書に記載のとおりのＫａｂａｔナンバリングシステムに従ってナンバリングされている。 図１１Ａ〜Ｉ：抗ＯＸ４０抗体の可変領域のアミノ酸配列。重鎖ＨＶＲ−Ｈ１、−Ｈ２、及び−Ｈ３、ならびに軽鎖ＨＶＲ−Ｌ１、−Ｌ２、及び−Ｌ３配列がマークされている。アミノ酸位置は、本明細書に記載のとおりのＫａｂａｔナンバリングシステムに従ってナンバリングされている。 図１１Ａ〜Ｉ：抗ＯＸ４０抗体の可変領域のアミノ酸配列。重鎖ＨＶＲ−Ｈ１、−Ｈ２、及び−Ｈ３、ならびに軽鎖ＨＶＲ−Ｌ１、−Ｌ２、及び−Ｌ３配列がマークされている。アミノ酸位置は、本明細書に記載のとおりのＫａｂａｔナンバリングシステムに従ってナンバリングされている。 図１１Ａ〜Ｉ：抗ＯＸ４０抗体の可変領域のアミノ酸配列。重鎖ＨＶＲ−Ｈ１、−Ｈ２、及び−Ｈ３、ならびに軽鎖ＨＶＲ−Ｌ１、−Ｌ２、及び−Ｌ３配列がマークされている。アミノ酸位置は、本明細書に記載のとおりのＫａｂａｔナンバリングシステムに従ってナンバリングされている。 図１１Ａ〜Ｉ：抗ＯＸ４０抗体の可変領域のアミノ酸配列。重鎖ＨＶＲ−Ｈ１、−Ｈ２、及び−Ｈ３、ならびに軽鎖ＨＶＲ−Ｌ１、−Ｌ２、及び−Ｌ３配列がマークされている。アミノ酸位置は、本明細書に記載のとおりのＫａｂａｔナンバリングシステムに従ってナンバリングされている。 抗ヒトＯＸ４０ ｍａｂ １Ａ７ｇｒ１は、用量依存的にＨｕｔ７８−ｈＯＸ４０細胞に結合したが、その際、最大結合の７０％が、抗体約２００ｎｇ／ｍＬで観察された（点付きの四角によって示されている）。 ＯＸ４０Ｌ−フラッグは、Ｈｕｔ７８−ｈＯＸ４０細胞への用量依存性結合を実証した。 ＯＸ４０Ｌ−フラッグの濃度が上昇するにつれて、Ｈｕｔ７８−ｈＯＸ４０細胞への抗ヒトＯＸ４０ ｍａｂ １Ａ７．ｇｒ．１の結合は低下した。 対照ＤＲ５−フラッグの存在は、ｍａｂ １Ａ７．ｇｒ．１結合に対して影響を有さなかった。 ＳＣＩＤマウスに１ｍｇ／ｋｇまたは１０ｍｇ／ｋｇで投与された１Ａ７．ｇｒ１の薬物動態（ＰＫ）。 図１４Ａ及び１４Ｂ：カニクイザルへの１Ａ７．ｇｒ１の投与は、Ｃ反応性タンパク質（ＣＲＰ）の軽微または一過性の上昇をもたらした。（図１４Ａ）０ｍｇ／ｋｇまたは０．０１ｍｇ／ｋｇ用量を投与されたサルにおいて経時的に観察されたＣＲＰレベル。（図１４Ｂ）０．３ｍｇ／ｋｇまたは１０ｍｇ／ｋｇ用量で投与されたサルにおいて経時的に観察されたＣＲＰレベル。 図１４Ａ及び１４Ｂ：カニクイザルへの１Ａ７．ｇｒ１の投与は、Ｃ反応性タンパク質（ＣＲＰ）の軽微または一過性の上昇をもたらした。（図１４Ａ）０ｍｇ／ｋｇまたは０．０１ｍｇ／ｋｇ用量を投与されたサルにおいて経時的に観察されたＣＲＰレベル。（図１４Ｂ）０．３ｍｇ／ｋｇまたは１０ｍｇ／ｋｇ用量で投与されたサルにおいて経時的に観察されたＣＲＰレベル。 図１５Ａ及び１５Ｂ：カニクイザルへの１Ａ７．ｇｒ１の投与は、サイトカインの混合サブセットの軽微または一過性の上昇をもたらした。（図１５Ａ）経時的な炎症誘発性サイトカインＩＬ６及びＭＣＰ１のレベル。（図１５Ｂ）経時的な抗炎症性サイトカインＩＬ１０及びＩＬ１ｒａのレベル。図１５Ａ及び１５Ｂでは、サイトカインレベルの一過性の上昇を実証した１０ｍｇ／ｋｇ用量群の個々のサルが矢印で標識されている。 図１５Ａ及び１５Ｂ：カニクイザルへの１Ａ７．ｇｒ１の投与は、サイトカインの混合サブセットの軽微または一過性の上昇をもたらした。（図１５Ａ）経時的な炎症誘発性サイトカインＩＬ６及びＭＣＰ１のレベル。（図１５Ｂ）経時的な抗炎症性サイトカインＩＬ１０及びＩＬ１ｒａのレベル。図１５Ａ及び１５Ｂでは、サイトカインレベルの一過性の上昇を実証した１０ｍｇ／ｋｇ用量群の個々のサルが矢印で標識されている。 図１６Ａ及び１６Ｂ：１Ａ７．ｇｒ１へのカニクイザルの曝露が、血清ＰＫ及び末梢受容体占有率によって確認された。（図１６Ａ）０．０１、０．３、または１０ｍｇ／ｋｇの１Ａ７．ｇｒ１を投与されたサルの血清ＰＫ。（図１６Ｂ）０．０１、０．３、または１０ｍｇ／ｋｇの１Ａ７．ｇｒ１を投与されたサルにおける経時的な末梢ＣＤ４＋Ｔ細胞でのＯＸ４０受容体占有率。 図１６Ａ及び１６Ｂ：１Ａ７．ｇｒ１へのカニクイザルの曝露が、血清ＰＫ及び末梢受容体占有率によって確認された。（図１６Ａ）０．０１、０．３、または１０ｍｇ／ｋｇの１Ａ７．ｇｒ１を投与されたサルの血清ＰＫ。（図１６Ｂ）０．０１、０．３、または１０ｍｇ／ｋｇの１Ａ７．ｇｒ１を投与されたサルにおける経時的な末梢ＣＤ４＋Ｔ細胞でのＯＸ４０受容体占有率。 カニクイザルにおいて０．５、５、または３０ｍｇ／ｋｇで投与された１Ａ７．ｇｒ１の薬物動態（ＰＫ）。 ０、０．５、５、または３０ｍｇ／ｋｇの１Ａ７．ｇｒ１を投与されたサルにおける経時的なＯＸ４０受容体占有率。矢印は、試料を得た日を示している。 ０、０．５、５、または３０ｍｇ／ｋｇの１Ａ７．ｇｒ１を投与されたサルにおける経時的なＭＣＰ−１レベル。 ０、０．５、５、または３０ｍｇ／ｋｇの１Ａ７．ｇｒ１を投与されたサルにおいて、末梢Ｔ細胞の有意な活性化または増殖は観察されなかった。
Ｉ．定義
免疫機能不全の内容における「機能不全」という用語は、抗原刺激に対して免疫応答性が低減した状態を指す。
また、「機能不全の」という用語には、本明細書において使用する場合、抗原認識に対する無反応性または非応答性、具体的には、抗原認識を下流のＴ細胞エフェクター機能、例えば、増殖、サイトカイン産生（例えば、ガンマインターフェロン）、及び／またはターゲット細胞殺滅に翻訳する能力の損傷が含まれる。
「Ｔ細胞機能の増強」は、エフェクターまたはメモリーＴ細胞が生物学的機能の再生、持続、または増幅を有することを誘導するか、惹起するか、または刺激することを意味する。Ｔ細胞機能の増強の例には、介入前の同様のレベルと比較して、ＣＤ８＋エフェクターＴ細胞からのγ−インターフェロンの分泌の増大、ＣＤ４＋メモリー及び／またはエフェクターＴ細胞からのγ−インターフェロンの分泌の増大、ＣＤ４＋エフェクター及び／またはメモリーＴ細胞の増殖の増大、ＣＤ８＋エフェクターＴ細胞の増殖の増大、抗原応答性（例えば、クリアランス）の増大が含まれる。一実施形態では、増強のレベルは、少なくとも５０％、あるいは６０％、７０％、８０％、９０％、１００％、１２０％、１５０％、２００％である。この増強を測定する手法は、当業者に公知である。
「腫瘍免疫」は、腫瘍が免疫認識及びクリアランスを回避するプロセスを指す。したがって、治療概念として、そのような回避が減弱され、かつ腫瘍が免疫系によって認識及び攻撃される場合に、腫瘍免疫は「処置される」。腫瘍認識の例には、腫瘍結合、腫瘍縮小、及び腫瘍クリアランスが含まれる。
「免疫原性」は、特定の物質が免疫応答を誘発する能力を指す。腫瘍は、免疫原性であり、腫瘍免疫原性の増強は、免疫応答による腫瘍細胞のクリアランスを援助する。
「アクセプターヒトフレームワーク」は、本明細書における目的のために、下記に定義するとおりの、ヒト免疫グロブリンフレームワークまたはヒトコンセンサスフレームワークに由来する、軽鎖可変ドメイン（ＶＬ）フレームワークまたは重鎖可変ドメイン（ＶＨ）フレームワークのアミノ酸配列を含むフレームワークである。ヒト免疫グロブリンフレームワークまたはヒトコンセンサスフレームワーク「に由来する」アクセプターヒトフレームワークは、その同じアミノ酸配列を含んでもよいし、またはアミノ酸配列の変化を含んでもよい。一部の実施形態では、アミノ酸変化の数は、１０以下、９以下、８以下、７以下、６以下、５以下、４以下、３以下、または２以下である。一部の実施形態では、ＶＬアクセプターヒトフレームワークは、配列において、ＶＬヒト免疫グロブリンフレームワーク配列またはヒトコンセンサスフレームワーク配列と同一である。
「親和性」は、分子（例えば、抗体）の単一結合部位とその結合パートナー（例えば、抗原）との間の総計の非共有結合性相互作用の強度を指す。別段に示さない限り、本明細書において使用する場合、「結合親和性」は、結合対のメンバー（例えば、抗体及び抗原）間の１：１の相互作用を反映する固有の結合親和性を指す。分子Ｘの、そのパートナーＹに対する親和性は一般に、解離定数（Ｋｄ）によって表すことができる。親和性は、本明細書に記載の方法を含む、当技術分野で公知の一般的な方法によって測定することができる。結合親和性を測定するための具体的な実例及び例示的な実施形態は、以下に記載する。
「アゴニスト抗体」は、本明細書において使用する場合、それが結合する抗原の生物学的活性を活性化させる抗体である。
「抗血管新生薬」は、血管の発生をある程度遮断または妨害する化合物を指す。抗血管新生薬は、例えば、血管新生の促進に関係する成長因子または成長因子受容体に結合する小分子または抗体であり得る。一実施形態では、抗血管新生薬は、血管内皮成長因子（ＶＥＧＦ）に結合する抗体、例えば、ベバシズマブ（アバスチン）である。
「抗体依存性細胞媒介細胞傷害性」または「ＡＤＣＣ」は、ある特定の細胞傷害性細胞（例えば、ＮＫ細胞、好中球、及びマクロファージ）上に存在するＦｃ受容体（ＦｃＲ）に結合した分泌免疫グロブリンが、これらの細胞傷害性エフェクター細胞が抗原担持ターゲット細胞に特異的に結合し、続いて、そのターゲット細胞を細胞毒素で殺滅することを可能にする細胞傷害性の形態を指す。ＡＤＣＣを媒介する一次細胞であるＮＫ細胞は、ＦｃγＲＩＩＩのみを発現するが、単球は、ＦｃγＲＩ、ＦｃγＲＩＩ、及びＦｃγＲＩＩＩを発現する。造血細胞上でのＦｃＲ発現は、Ｒａｖｅｔｃｈ ａｎｄ Ｋｉｎｅｔ，Ａｎｎｕ．Ｒｅｖ．Ｉｍｍｕｎｏｌ ９：４５７−９２（１９９１）の４６４頁の表３においてまとめられている。対象分子のＡＤＣＣ活性を評価するために、米国特許第５，５００，３６２号または同第５，８２１，３３７号または米国特許第６，７３７，０５６号（Ｐｒｅｓｔａ）に記載のものなどのｉｎ ｖｉｔｒｏ ＡＤＣＣアッセイを行うことができる。そのようなアッセイに有用なエフェクター細胞には、ＰＢＭＣ及びＮＫ細胞が含まれる。あるいは、または加えて、対象分子のＡＤＣＣ活性は、ｉｎ ｖｉｖｏで、例えば、Ｃｌｙｎｅｓ ｅｔ ａｌ．ＰＮＡＳ（ＵＳＡ）９５：６５２−６５６（１９９８）において開示されているものなどの動物モデルにおいて評価することができる。ＡＤＣＣ活性を評価するための例示的なアッセイを本明細書において、実施例において提供する。
「抗ＯＸ４０抗体」及び「ＯＸ４０に結合する抗体」という用語は、その抗体が、ＯＸ４０をターゲティングする際に診断薬及び／または治療薬として有用であるような十分な親和性でＯＸ４０と結合し得る抗体を指す。一実施形態では、抗ＯＸ４０抗体が無関連の非ＯＸ４０タンパク質に結合する程度は、例えば、ラジオイムノアッセイ（ＲＩＡ）によって測定した場合、ＯＸ４０へのその抗体の結合の約１０％未満である。ある種の実施形態では、ＯＸ４０に結合する抗体は、≦１μＭ、≦１００ｎＭ、≦１０ｎＭ、≦１ｎＭ、≦０．１ｎＭ、≦０．０１ｎＭ、または≦０．００１ｎＭ（例えば１０−８Ｍ以下、例えば、１０−８Ｍ〜１０−１３Ｍ、例えば、１０−９Ｍ〜１０−１３Ｍ）の解離定数（Ｋｄ）を有する。ある種の実施形態では、抗ＯＸ４０抗体は、異なる種由来のＯＸ４０の間でも保存されているＯＸ４０のエピトープに結合する。
本明細書において使用する場合、「〜と結合する」、「〜に特異的に結合する」、または「〜に特異的である」という用語は、生物学的分子を含む異種分子集団の存在下で、ターゲットの存在を決定づける、ターゲットと抗体との間の結合などの測定可能及び再現可能な相互作用を指す。例えば、ターゲット（エピトープであり得る）に結合する、または特異的に結合する抗体は、他のターゲットに結合するよりも、このターゲットにより高い親和性、結合活性で、より容易に、かつ／またはより長い継続時間で結合する抗体である。一実施形態では、無関連のターゲットへの抗体の結合程度は、例えば、ラジオイムノアッセイ（ＲＩＡ）によって測定した場合、ターゲットへの抗体の結合の約１０％未満である。ある種の実施形態では、ターゲットに特異的に結合する抗体は、≦１μＭ、≦１００ｎＭ、≦１０ｎＭ、≦１ｎＭ、または≦０．１ｎＭの解離定数（Ｋｄ）を有する。ある種の実施形態では、抗体は、異なる種由来のタンパク質の間でも保存されているタンパク質上のエピトープに特異的に結合する。別の実施形態では、特異的結合には、排他的結合が含まれ得るが、それを必要としない。
「抗体」という用語は、本明細書において最も広義に使用され、それらが所望の抗原結合活性を示す限り、限定されないが、モノクローナル抗体、ポリクローナル抗体、多重特異性抗体（例えば、二重特異性抗体）、及び抗体断片を含む様々な抗体構造を包含する。
「抗体断片」は、インタクトな抗体の一部分を含み、インタクトな抗体が結合する抗原に結合する、インタクトな抗体以外の分子を指す。抗体断片の例には、限定されないが、Ｆｖ、Ｆａｂ、Ｆａｂ’、Ｆａｂ’−ＳＨ、Ｆ（ａｂ’）２；二重特異性抗体；線状抗体；１本鎖抗体分子（例えば、ｓｃＦｖ）；及び抗体断片から形成される多重特異性抗体が含まれる。
参照抗体と「同じエピトープに結合する抗体」は、競合アッセイにおいて、参照抗体のその抗原への結合を５０％以上遮断する抗体を指し、参照抗体は、競合アッセイにおいて、抗体のその抗原への結合を５０％以上遮断する。例示的な競合アッセイを本明細書において提供する。
「結合ドメイン」という用語は、別の分子に結合するポリペプチドの領域を指す。ＦｃＲの場合、結合ドメインは、Ｆｃ領域の結合を担うそのポリペプチド鎖（例えば、そのアルファ鎖）の一部を含み得る。有用な結合ドメインの１つは、ＦｃＲアルファ鎖の細胞外ドメインである。
「変更された」ＦｃＲ、ＡＤＣＣ、または食作用活性を有する変異型ＩｇＧ Ｆｃを含むポリペプチドは、親ポリペプチドまたは天然配列Ｆｃ領域を含むポリペプチドと比較して、増強または減弱されたＦｃＲ結合活性（例えば、ＦｃγＲ）及び／またはＡＤＣＣ活性及び／または食作用活性を有するものである。
「ＯＸ４０」という用語は、本明細書において使用する場合、別段に示さない限り哺乳動物、例えば、霊長類（例えば、ヒト）及びげっ歯類（例えば、マウス及びラット）を含む任意の脊椎動物源からの任意の天然ＯＸ４０を指す。この用語は、「全長」未プロセシングＯＸ４０、さらには、細胞におけるプロセシングから得られるＯＸ４０の任意の形態を包含する。この用語はまた、ＯＸ４０の天然に存在する変異体、例えば、スプライシング変異体または対立遺伝子変異体を包含する。例示的なヒトＯＸ４０のアミノ酸配列は、配列番号１において示されている。
「ＯＸ４０活性化」は、ＯＸ４０受容体の活性化を指す。一般に、ＯＸ４０活性化は、シグナル伝達をもたらす。
「がん」及び「がん性」という用語は、未制御の細胞増殖によって典型的に特徴付けられる、哺乳動物における生理学的状態を指すか、またはそれらを説明する。がんの例には、限定されないが、がん腫、リンパ腫、芽細胞腫、肉腫、及び白血病、またはリンパ悪性病変が含まれる。そのようながんのより特定の例には、限定されないが、扁平上皮細胞がん（例えば、上皮性扁平上皮細胞がん）、肺がん（小細胞肺がん、非小細胞肺がん、肺の腺がん、及び肺の扁平上皮がんを含む）、腹膜のがん、肝細胞がん、胃がん（消化器がん及び胃腸間質性がんを含む）、膵臓がん、神経膠芽細胞腫、子宮頸がん、卵巣がん、肝臓がん、膀胱がん、尿路のがん、肝細胞がん、乳がん、結腸がん、直腸がん、結腸直腸がん、子宮内膜または子宮がん、唾液腺がん、腎臓がん、前立腺がん、外陰がん、甲状腺がん、肝がん、肛門がん、陰茎がん、黒色腫、表在拡大型黒色腫、悪性黒子型黒色腫、末端性黒子型黒色腫、結節型黒色腫、多発性骨髄腫及びＢ細胞リンパ腫；慢性リンパ球性白血病（ＣＬＬ）；急性リンパ芽球性白血病（ＡＬＬ）；ヘアリーセル白血病；慢性骨髄芽球性白血病；及び移植後リンパ増殖性障害（ＰＴＬＤ）、さらには、母斑症に関連した異常な血管増殖、浮腫（脳腫瘍に関連するものなど）、メーグス症候群、脳、さらには、頭頚部がん、及び関連転移が含まれる。ある種の実施形態では、本発明の抗体による処置に適しているがんには、乳がん、結腸直腸がん、直腸がん、非小細胞肺がん、神経膠芽細胞腫、非ホジキンリンパ腫（ＮＨＬ）、腎臓細胞がん、前立腺がん、肝臓がん、膵臓がん、軟部組織肉腫、カポジ肉腫、カルチノイド腫瘍、頭頚部がん、卵巣がん、中皮腫、及び多発性骨髄腫が含まれる。一部の実施形態では、がんは、非小細胞肺がん、神経膠芽細胞腫、神経芽細胞腫、黒色腫、乳房がん腫（例えば、三種陰性乳がん）、胃がん、結腸直腸がん（ＣＲＣ）、及び肝細胞がん腫から選択される。また、一部の実施形態では、がんは、非小細胞肺がん、結腸直腸がん、神経膠芽細胞腫、及び乳房がん（例えば、三種陰性乳がん）から選択される（これらのがんの転移形態を含む）。
「細胞増殖性障害」及び「増殖性障害」という用語は、ある程度の異常な細胞増殖を随伴する障害を指す。一実施形態では、細胞増殖性障害は、がんである。
「キメラ」抗体という用語は、重鎖及び／または軽鎖の一部分が特定の源または種に由来する一方で、重鎖及び／または軽鎖の残りの部分が異なる源または種に由来する抗体を指す。
抗体の「クラス」は、その重鎖が保有する定常ドメインまたは定常領域の型を指す。５つの主要な抗体クラスＩｇＡ、ＩｇＤ、ＩｇＥ、ＩｇＧ、及びＩｇＭが存在し、これらのうちの数種は、サブクラス（アイソタイプ）、例えば、ＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３、ＩｇＧ４、ＩｇＡ１、及びＩｇＡ２にさらに分割され得る。免疫グロブリンの異なるクラスに対応する重鎖定常ドメインはそれぞれ、α、δ、ε、γ、及びμと呼ばれる。
「補体依存性細胞傷害性」または「ＣＤＣ」は、補体の存在下でのターゲット細胞の溶解を指す。古典的補体経路の活性化は、補体系の第１の構成要素（Ｃ１ｑ）と抗体（適切なサブクラスの）との結合によって開始され、その抗体はそれらのコグネイト抗原に結合する。補体活性化を評価するために、例えば、Ｇａｚｚａｎｏ−Ｓａｎｔｏｒｏ ｅｔ ａｌ．，Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．Ｍｅｔｈｏｄｓ ２０２：１６３（１９９６）において記載されているとおりのＣＤＣアッセイを行ってもよい。変更Ｆｃ領域アミノ酸配列を含むポリペプチド変異体（変異型Ｆｃ領域を含むポリペプチド）及びＣ１ｑ結合能の増大または低減は、例えば米国特許第６，１９４，５５１Ｂ１号及びＷＯ１９９９／５１６４２において記載されている。例えば、Ｉｄｕｓｏｇｉｅ ｅｔ ａｌ．Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１６４：４１７８−４１８４（２０００）も参照されたい。
「細胞増殖抑制薬」という用語は、ｉｎ ｖｉｔｒｏまたはｉｎ ｖｉｖｏのいずれかで細胞の増殖を停止させる化合物または組成物を指す。したがって、細胞増殖抑制薬は、Ｓ期にある細胞のパーセンテージを著しく低減するものであり得る。細胞増殖抑制性薬のさらなる例には、Ｇ０／Ｇ１停止またはＭ期停止を誘発することによって細胞周期の進行を遮断する薬剤が含まれる。ヒト化抗Ｈｅｒ２抗体トラスツズマブ（ＨＥＲＣＥＰＴＩＮ（登録商標））は、Ｇ０／Ｇ１停止を誘発する細胞増殖抑制薬の一例である。古典的Ｍ期遮断薬には、ビンカ類（ビンクリスチン及びビンブラスチン）、タキサン、ならびにトポイソメラーゼＩＩ阻害薬、例えば、ドキソルビシン、エピルビシン、ダウノルビシン、エトポシド、及びブレオマイシンが含まれる。Ｇ１を停止するある種の薬剤、例えば、ＤＮＡアルキル化薬、例えば、タモキシフェン、プレドニゾン、ダカルバジン、メクロレタミン、シスプラチン、メトトレキサート、５−フルオロウラシル、及びａｒａ−Ｃはまた、Ｓ期停止にまで波及する。さらなる情報は、Ｍｅｎｄｅｌｓｏｈｎ ａｎｄ Ｉｓｒａｅｌ，ｅｄｓ．，Ｔｈｅ Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｂａｓｉｓ ｏｆ Ｃａｎｃｅｒ，Ｃｈａｐｔｅｒ １、標題「Ｃｅｌｌ ｃｙｃｌｅ ｒｅｇｕｌａｔｉｏｎ，ｏｎｃｏｇｅｎｅｓ，ａｎｄ ａｎｔｉｎｅｏｐｌａｓｔｉｃ ｄｒｕｇｓ」（Ｍｕｒａｋａｍｉら著）（Ｗ．Ｂ．Ｓａｕｎｄｅｒｓ，Ｐｈｉｌａｄｅｌｐｈｉａ，１９９５）、例えば、ｐ．１３において見出され得る。タキサン（パクリタキセル及びドセタキセル）は両方とも、樹木のイチイに由来する抗がん薬である。ヨーロッパイチイに由来するドセタキセル（ＴＡＸＯＴＥＲＥ（登録商標）、Ｒｈｏｎｅ−Ｐｏｕｌｅｎｃ Ｒｏｒｅｒ）は、パクリタキセル（ＴＡＸＯＬ（登録商標）、Ｂｒｉｓｔｏｌ−Ｍｙｅｒｓ Ｓｑｕｉｂｂ）の半合成類似体である。パクリタキセル及びドセタキセルは、チューブリン二量体からの微小管の構築を促進し、細胞における有糸分裂の阻害をもたらす脱重合の防止によって微小管を安定化させる。
「細胞傷害性薬剤」という用語は、本明細書において使用する場合、細胞機能を阻害する、若しくは阻止する、かつ／または細胞死若しくは破壊を惹起する物質を指す。細胞傷害性薬物には、限定されないが、放射性同位体（例えば、Ａｔ２１１、Ｉ１３１、Ｉ１２５、Ｙ９０、Ｒｅ１８６、Ｒｅ１８８、Ｓｍ１５３、Ｂｉ２１２、Ｐ３２、Ｐｂ２１２、及びＬｕの放射性同位体）；化学療法薬または薬物（例えば、メトトレキサート、アドリアマイシン、ビンカアルカロイド（ビンクリスチン、ビンブラスチン、エトポシド）、ドキソルビシン、メルファラン、マイトマイシンＣ、クロラムブシル、ダウノルビシン、または他のインターカレート薬）；増殖阻害薬；酵素及びその断片、例えば、核酸分解酵素；抗生物質；毒素、例えば、細菌、真菌、植物、または動物由来の小分子毒素または酵素活性毒素（断片及び／またはそれらの変異体を含む）；ならびに下記で開示する様々な抗腫瘍または抗がん薬が含まれる。
「枯渇性抗ＯＸ４０抗体」は、ＯＸ４０発現細胞を殺滅または枯渇させる抗ＯＸ４０抗体である。ＯＸ４０発現細胞の枯渇は、抗体依存性細胞媒介細胞傷害性及び／または食作用などの様々な機構によって達成され得る。ＯＸ４０発現細胞の枯渇をｉｎ ｖｉｔｒｏでアッセイしてもよく、ｉｎ ｖｉｔｒｏでのＡＤＣＣ及び食作用アッセイのための例示的な方法を本明細書において提供する。一部の実施形態では、ＯＸ４０発現細胞は、ヒトＣＤ４＋エフェクターＴ細胞である。一部の実施形態では、ＯＸ４０発現細胞は、ヒトＯＸ４０を発現するトランスジェニックＢＴ４７４細胞である。
「エフェクター機能」は、抗体アイソタイプによって様々である、抗体のＦｃ領域に起因し得る生物学的活性を指す。抗体エフェクター機能の例には、Ｃ１ｑ結合及び補体依存性細胞傷害性（ＣＤＣ）；Ｆｃ受容体結合；抗体依存性細胞媒介細胞傷害性（ＡＤＣＣ）；食作用；細胞表面受容体（例えば、Ｂ細胞受容体）の下方制御；ならびにＢ細胞活性化が含まれる。
薬剤、例えば、医薬製剤の「有効量」は、所望の治療または予防結果を達成するために必要な投薬量及び期間で有効な量を指す。
「Ｆｃ受容体」または「ＦｃＲ」は、抗体のＦｃ領域に結合する受容体を説明する。一部の実施形態では、ＦｃＲは、天然ヒトＦｃＲである。一部の実施形態では、ＦｃＲは、ＩｇＧ抗体（ガンマ受容体）と結合するものであり、それらの受容体の対立遺伝子変異型及びオルタナティブスプライシング型を含む、ＦｃγＲＩ、ＦｃγＲＩＩ、及びＦｃγＲＩＩＩサブクラスの受容体が含まれる。ＦｃγＲＩＩ受容体には、その細胞質ドメインにおいて主に異なる同様のアミノ酸配列を有するＦｃγＲＩＩＡ（「活性化受容体」）及びＦｃγＲＩＩＢ（「阻害性受容体」）が含まれる。活性化受容体ＦｃγＲＩＩＡは、その細胞質ドメインに免疫受容体チロシン活性化モチーフ（ＩＴＡＭ）を含む。阻害性受容体ＦｃγＲＩＩＢは、その細胞質ドメインに免疫受容体チロシンベース阻害モチーフ（ＩＴＩＭ）を含む（例えば、Ｄａｅｒｏｎ，Ａｎｎｕ．Ｒｅｖ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１５：２０３−２３４（１９９７）を参照されたい）。ＦｃＲは、例えば、Ｒａｖｅｔｃｈ ａｎｄ Ｋｉｎｅｔ，Ａｎｎｕ．Ｒｅｖ．Ｉｍｍｕｎｏｌ ９：４５７−９２（１９９１）；Ｃａｐｅｌ ｅｔ ａｌ．，Ｉｍｍｕｎｏｍｅｔｈｏｄｓ ４：２５−３４（１９９４）；及びｄｅ Ｈａａｓ ｅｔ ａｌ．，Ｊ．Ｌａｂ．Ｃｌｉｎ．Ｍｅｄ．１２６：３３０−４１（１９９５）において概説されている。今後特定されるものを含む他のＦｃＲも、本明細書における「ＦｃＲ」という用語に包含される。「Ｆｃ受容体」または「ＦｃＲ」という用語にはまた、新生児型受容体、ＦｃＲｎも含まれ、これは、胎児への母体のＩｇＧの移動（Ｇｕｙｅｒ ｅｔ ａｌ．，Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１１７：５８７（１９７６）及びＫｉｍ ｅｔ ａｌ．，Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．２４：２４９（１９９４））及び免疫グロブリンのホメオスタシスの調節を担っている。ＦｃＲｎへの結合を測定する方法は公知である（例えば、Ｇｈｅｔｉｅ ａｎｄ Ｗａｒｄ．，Ｉｍｍｕｎｏｌ．Ｔｏｄａｙ １８（１２）：５９２−５９８（１９９７）；Ｇｈｅｔｉｅ ｅｔ ａｌ．，Ｎａｔｕｒｅ Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ，１５（７）：６３７−６４０（１９９７）；Ｈｉｎｔｏｎ ｅｔ ａｌ．，Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．２７９（８）：６２１３−６２１６（２００４）；ＷＯ２００４／９２２１９（Ｈｉｎｔｏｎ ｅｔ ａｌ．）を参照されたい）。ｉｎ ｖｉｖｏでのヒトＦｃＲｎへの結合及びヒトＦｃＲｎ高親和性結合ポリペプチドの血清半減期は、例えば、ヒトＦｃＲｎを発現する遺伝子導入マウスまたはトランスフェクトされたヒト細胞系において、または変異型Ｆｃ領域を含むポリペプチドを投与される霊長類においてアッセイすることができる。ＷＯ２０００／４２０７２（Ｐｒｅｓｔａ）には、ＦｃＲへの結合が改善または減弱されている抗体変異体が記載されている。例えば、Ｓｈｉｅｌｄｓ ｅｔ ａｌ．Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．９（２）：６５９１−６６０４（２００１）も参照されたい。
本明細書における「Ｆｃ領域」という用語は、定常領域の少なくとも一部分を含有する、免疫グロブリン重鎖のＣ末端領域を定義するように使用される。この用語は、天然配列Ｆｃ領域及び変異型Ｆｃ領域を含む。一実施形態では、ヒトＩｇＧ重鎖Ｆｃ領域は、Ｃｙｓ２２６から、またはＰｒｏ２３０から、重鎖のカルボキシル末端までに及ぶ。しかしながら、Ｆｃ領域のＣ末端リシン（Ｌｙｓ４４７）は、存在してもしなくてもよい。本明細書において別段に指定しない限り、Ｆｃ領域または定常領域におけるアミノ酸残基のナンバリングは、Ｋａｂａｔ ｅｔ ａｌ．，Ｓｅｑｕｅｎｃｅｓ ｏｆ Ｐｒｏｔｅｉｎｓ ｏｆ Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｉｃａｌ Ｉｎｔｅｒｅｓｔ，５ｔｈ Ｅｄ．Ｐｕｂｌｉｃ Ｈｅａｌｔｈ Ｓｅｒｖｉｃｅ，Ｎａｔｉｏｎａｌ Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅｓ ｏｆ Ｈｅａｌｔｈ，Ｂｅｔｈｅｓｄａ，ＭＤ，１９９１において記載されているとおり、ＥＵインデックスとも呼ばれる、ＥＵナンバリングシステムに従う。
「機能性Ｆｃ領域」は、天然配列Ｆｃ領域の「エフェクター機能」を保有する。例示的な「エフェクター機能」には、Ｃ１ｑ結合；ＣＤＣ；Ｆｃ受容体結合；ＡＤＣＣ；食作用；細胞表面受容体（例えば、Ｂ細胞受容体；ＢＣＲ）の下方調節などが含まれる。そのようなエフェクター機能は一般に、Ｆｃ領域が結合ドメイン（例えば、抗体可変ドメイン）と組み合わさることを必要とし、例えば、本明細書における定義において開示するとおりの様々なアッセイを使用して評価することができる。
「ヒトエフェクター細胞」は、１種または複数種のＦｃＲを発現し、かつエフェクター機能を実行する白血球を指す。ある種の実施形態では、それらの細胞は、少なくともＦｃγＲＩＩＩを発現し、ＡＤＣＣエフェクター機能（複数可）を実行する。ＡＤＣＣを媒介するヒト白血球の例には、末梢血単核細胞（ＰＢＭＣ）、ナチュラルキラー（ＮＫ）細胞、単球、細胞傷害性Ｔ細胞、及び好中球が含まれる。エフェクター細胞は、天然源、例えば、血液から単離され得る。
「フレームワーク」または「ＦＲ」は、超可変領域（ＨＶＲ）残基以外の可変ドメイン残基を指す。可変ドメインのＦＲは、一般に、４つのＦＲドメインＦＲ１、ＦＲ２、ＦＲ３、及びＦＲ４からなる。したがって、ＨＶＲ及びＦＲ配列は、一般に、ＶＨ（またはＶＬ）において次の配列で現れる：ＦＲ１−Ｈ１（Ｌ１）−ＦＲ２−Ｈ２（Ｌ２）−ＦＲ３−Ｈ３（Ｌ３）−ＦＲ４。
「全長抗体」、「インタクトな抗体」、及び「全抗体」という用語は、本明細書において、天然抗体構造と実質的に同様の構造を有するか、または本明細書において定義するとおりのＦｃ領域を含有する重鎖を有する抗体を指すように互換的に使用される。
「宿主細胞」、「宿主細胞系」、及び「宿主細胞培養物」という用語は、互換的に使用され、外因性核酸が導入されている細胞を指し、そのような細胞の子孫を含む。宿主細胞には、初代形質転換細胞及び継代の数に関わらずそれに由来する子孫を含む、「形質転換体」及び「形質転換細胞」が含まれる。子孫は、核酸含量において親細胞と完全に同一でないことがあり、むしろ変異を含むことがある。元々形質転換された細胞においてスクリーニングまたは選択されたものと同じ機能または生物学的活性を有する変異体子孫が、本明細書に含まれる。
「ヒト抗体」は、ヒト若しくはヒト細胞によって産生された、またはヒト抗体レパートリーを利用する非ヒト源に由来する抗体のアミノ酸配列、あるいは他のヒト抗体コード配列に対応する、アミノ酸配列を保有するものである。ヒト抗体のこの定義は、非ヒト抗原結合性残基を含むヒト化抗体を具体的には除外する。
「ヒトコンセンサスフレームワーク」は、ヒト免疫グロブリンＶＬまたはＶＨフレームワーク配列の選択において最も一般的に生じるアミノ酸残基を代表する、フレームワークである。一般に、ヒト免疫グロブリンＶＬまたはＶＨ配列の選択は、可変ドメイン配列のサブグループからである。一般に、配列のサブグループは、Ｋａｂａｔ ｅｔ ａｌ．，Ｓｅｑｕｅｎｃｅｓ ｏｆ Ｐｒｏｔｅｉｎｓ ｏｆ Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｉｃａｌ Ｉｎｔｅｒｅｓｔ，Ｆｉｆｔｈ Ｅｄｉｔｉｏｎ，ＮＩＨ Ｐｕｂｌｉｃａｔｉｏｎ ９１−３２４２，Ｂｅｔｈｅｓｄａ ＭＤ（１９９１），ｖｏｌｓ．１−３にあるようなサブグループである。一実施形態では、ＶＬについて、サブグループは、上記のＫａｂａｔ ｅｔ ａｌ．においてのようなサブグループカッパＩである。一実施形態では、ＶＨについて、サブグループは、上記のＫａｂａｔ ｅｔ ａｌ．においてのようなサブグループＩＩＩである。
「ヒト化」抗体は、非ヒトＨＶＲからのアミノ酸残基及びヒトＦＲからのアミノ酸残基を含むキメラ抗体を指す。ある種の実施形態では、ヒト化抗体は、少なくとも１つ、典型的には２つの可変ドメインの実質的にすべてを含むこととなり、そのＨＶＲ（例えば、ＣＤＲ）のすべてまたは実質的にすべてが、非ヒト抗体のものに対応し、そのＦＲのすべてまたは実質的にすべてが、ヒト抗体のものに対応する。ヒト化抗体は任意選択的に、ヒト抗体に由来する抗体定常領域の少なくとも一部分を含んでもよい。抗体、例えば非ヒト抗体の「ヒト化型」は、ヒト化を受けた抗体を指す。
「超可変領域」または「ＨＶＲ」という用語は、本明細書において使用する場合、配列が高度に変化する（「相補性決定領域」または「ＣＤＲ」）、かつ／または構造的に規定されたループ（「超可変ループ」）を形成する、かつ／または抗原接触残基（「抗原コンタクト」）を含有する抗体可変ドメインの領域の各々を指す。一般に、抗体は、６つのＨＶＲを含み、そのうち３つがＶＨ（Ｈ１、Ｈ２、Ｈ３）にあり、３つがＶＬ（Ｌ１、Ｌ２、Ｌ３）にある。例示的なＨＶＲには、本明細書において、
（ａ）アミノ酸残基２６〜３２（Ｌ１）、５０〜５２（Ｌ２）、９１〜９６（Ｌ３）、２６〜３２（Ｈ１）、５３〜５５（Ｈ２）、及び９６〜１０１（Ｈ３）において生じる超可変ループ（Ｃｈｏｔｈｉａ ａｎｄ Ｌｅｓｋ，Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．１９６：９０１〜９１７（１９８７））；
（ｂ）アミノ酸残基２４〜３４（Ｌ１）、５０〜５６（Ｌ２）、８９〜９７（Ｌ３）、３１〜３５ｂ（Ｈ１）、５０〜６５（Ｈ２）、及び９５〜１０２（Ｈ３）において生じるＣＤＲ（Ｋａｂａｔ ｅｔ ａｌ．，Ｓｅｑｕｅｎｃｅｓ ｏｆ Ｐｒｏｔｅｉｎｓ ｏｆ Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｉｃａｌ Ｉｎｔｅｒｅｓｔ，５ｔｈ Ｅｄ．Ｐｕｂｌｉｃ Ｈｅａｌｔｈ Ｓｅｒｖｉｃｅ，Ｎａｔｉｏｎａｌ Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅｓ ｏｆ Ｈｅａｌｔｈ，Ｂｅｔｈｅｓｄａ，ＭＤ（１９９１））；
（ｃ）アミノ酸残基２７ｃ〜３６（Ｌ１）、４６〜５５（Ｌ２）、８９〜９６（Ｌ３）、３０〜３５ｂ（Ｈ１）、４７〜５８（Ｈ２）、及び９３〜１０１（Ｈ３）において生じる抗原コンタクト（ＭａｃＣａｌｌｕｍ ｅｔ ａｌ．Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．２６２：７３２−７４５（１９９６））；及び
（ｄ）ＨＶＲアミノ酸残基４６〜５６（Ｌ２）、４７〜５６（Ｌ２）、４８〜５６（Ｌ２）、４９〜５６（Ｌ２）、２６〜３５（Ｈ１）、２６〜３５ｂ（Ｈ１）、４９〜６５（Ｈ２）、９３〜１０２（Ｈ３）、及び９４〜１０２（Ｈ３）を含む、（ａ）、（ｂ）、及び／または（ｃ）の組合せ
が含まれる。
別段に示さない限り、可変ドメインにおけるＨＶＲ残基及び他の残基（例えば、ＦＲ残基）は、本明細書において上記のＫａｂａｔ ｅｔ ａｌ．に従ってナンバリングされる。
一実施形態では、ＨＶＲ残基は、図１１Ａ〜Ｉまたは本明細書の他の箇所において特定されるものを含む。
「イムノコンジュゲート」は、限定されないが、細胞傷害性薬物を含む１個または複数個の異種分子にコンジュゲートされた抗体である。
「個体」または「対象」は、哺乳動物である。哺乳動物には、限定されないが、家畜（例えば、ウシ、ヒツジ、ネコ、イヌ、及びウマ）、霊長類（例えば、ヒト、及びサルなどの非ヒト霊長類）、ウサギ、及びげっ歯類（例えば、マウス及びラット）が含まれる。ある種の実施形態では、個体または対象は、ヒトである。
「細胞成長または増殖の促進」は、細胞の成長または増殖の少なくとも１０％、２０％、３０％、４０％、５０％、６０％、７０％、８０％、９０％、９５％、または１００％増加を意味する。
「単離」抗体は、その天然環境の構成要素から分離されている抗体である。一部の実施形態では、抗体は、例えば、電気泳動法（例えば、ＳＤＳ−ＰＡＧＥ、等電点電気泳動（ＩＥＦ）、キャピラリー電気泳動）またはクロマトグラフ法（例えば、イオン交換または逆相ＨＰＬＣ）によって決定した場合に、純度９５％超または９９％超まで精製される。抗体の純度を評価するための方法の概説については、例えば、Ｆｌａｔｍａｎ ｅｔ ａｌ．，Ｊ．Ｃｈｒｏｍａｔｏｇｒ．Ｂ ８４８：７９−８７（２００７）を参照されたい。
「単離」核酸は、その天然環境の構成要素から分離されている核酸分子を指す。単離核酸には、核酸分子を通常含有する細胞内に含有される核酸分子が含まれるが、その核酸分子は、染色体外に、またはその天然の染色体位置とは異なる染色体位置に存在する。
「抗ＯＸ４０抗体をコードする単離核酸」は、抗体重鎖及び軽鎖（またはそれらの断片）をコードする１種または複数種の核酸分子を指し、それには単一のベクターまたは別個のベクターにおけるそのような核酸分子（複数可）が含まれ、そのような核酸分子（複数可）は、宿主細胞内の１つまたは複数の場所に存在する。
「モノクローナル抗体」という用語は、本明細書において使用する場合、実質的に同種の抗体の集団から得られる抗体を指し、すなわち、その集団に含まれる個々の抗体は、同一であり、かつ／または同じエピトープと結合するが、例えば、天然に存在する変異を含有するか、またはモノクローナル抗体製剤の産生中に発生する可能性のある変異型抗体は除外され、そのような変異型は一般に少量で存在する。異なる決定基（エピトープ）に対する異なる抗体を典型的に含むポリクローナル抗体製剤とは対照的に、モノクローナル抗体製剤の各モノクローナル抗体は、抗原上の単一の決定基に対する。したがって、「モノクローナル」という修飾語は、実質的に同種の抗体の集団から得られるという抗体の特徴を示しており、任意の特定の方法による抗体の産生を必要とするものとして解釈されることはない。例えば、本発明に従って使用されるモノクローナル抗体は、限定されないがハイブリドーマ法、組換えＤＮＡ法、ファージディスプレイ法、及びヒト免疫グロブリン遺伝子座のすべてまたは一部を含有するトランスジェニック動物を利用する方法を含む多様な技術によって作製されてもよく、モノクローナル抗体を作製するためのそのような方法及び他の例示的な方法を、本明細書において記載する。
「裸の抗体」は、異種部分（例えば、細胞傷害性部分）または放射標識にコンジュゲートされていない抗体を指す。裸の抗体は、医薬製剤中に存在してもよい。
「天然抗体」は、様々な構造を有する天然に存在する免疫グロブリン分子を指す。例えば、天然ＩｇＧ抗体は、ジスルフィド結合されている２つの同一の軽鎖及び２つの同一の重鎖から構成される、約１５０，０００ダルトンのヘテロ四量体糖タンパク質である。Ｎ末端からＣ末端まで、各重鎖は、可変重ドメイン（ｖａｒｉａｂｌｅ ｈｅａｖｙ ｄｏｍａｉｎ）または重鎖可変ドメインとも呼ばれる可変領域（ＶＨ）、続いて３つの定常ドメイン（ＣＨ１、ＣＨ２、及びＣＨ３）を有する。同様に、Ｎ末端からＣ末端まで、各軽鎖は、可変軽ドメイン（ｖａｒｉａｂｌｅ ｌｉｇｈｔ ｄｏｍａｉｎ）または軽鎖可変ドメインとも呼ばれる可変領域（ＶＬ）、続いて定常軽（ＣＬ）ドメインを有する。抗体の軽鎖には、その定常ドメインのアミノ酸配列に基づいて、カッパ（κ）及びラムダ（λ）と呼ばれる２つの型うちの１つが割り当てられ得る。「天然配列Ｆｃ領域」は、天然に存在するＦｃ領域のアミノ酸配列と同一のアミノ酸配列を含む。天然配列ヒトＦｃ領域には、天然配列ヒトＩｇＧ１ Ｆｃ領域（非Ａ及びＡアロタイプ）；天然配列ヒトＩｇＧ２ Ｆｃ領域；天然配列ヒトＩｇＧ３ Ｆｃ領域；及び天然配列ヒトＩｇＧ４ Ｆｃ領域、さらには、天然に存在するその変異体が含まれる。
「添付文書」という用語は、そのような治療薬の適応症、使用法、投薬量、投与、併用療法、禁忌症についての情報、及び／またはその使用に関する警告を含有する、治療薬の市販パッケージに通例含まれる指示書を指すように使用される。
参照ポリペプチド配列に関する「アミノ酸配列同一性パーセント（％）」は、配列をアライメントし、配列同一性最大パーセントを得るために必要な場合にはギャップを導入した後に、配列同一性の部分としていかなる保存的置換も考慮せずに、参照ポリペプチド配列におけるアミノ酸残基と同一である、候補配列におけるアミノ酸残基のパーセンテージとして定義される。アミノ酸配列同一性パーセントを決定する目的のためのアライメントは、当技術分野における技能の範囲内である様々な方式で、例えばＢＬＡＳＴ、ＢＬＡＳＴ−２、ＡＬＩＧＮ、またはＭｅｇａｌｉｇｎ（ＤＮＡＳＴＡＲ）ソフトウェアなどの公的に利用可能なコンピュータソフトウェアを使用して達成することができる。当業者は、比較する配列の全長にわたって最大のアライメントを得るために必要とされる任意のアルゴリズムを含む、配列を整列させるために適切なパラメータを決定することができる。しかしながら、本明細書における目的では、アミノ酸配列同一性％値は、配列比較コンピュータプログラムＡＬＩＧＮ−２を使用して生成される。ＡＬＩＧＮ−２配列比較コンピュータプログラムは、Ｇｅｎｅｎｔｅｃｈ，Ｉｎｃ．によって記述され、そのソースコードは、ユーザ文書と共に米国著作権庁（Ｕ．Ｓ．Ｃｏｐｙｒｉｇｈｔ Ｏｆｆｉｃｅ），Ｗａｓｈｉｎｇｔｏｎ Ｄ．Ｃ．，２０５５９に提出されており、米国著作権番号ＴＸＵ５１００８７の下に登録されている。ＡＬＩＧＮ−２プログラムは、Ｇｅｎｅｎｔｅｃｈ，Ｉｎｃ．，Ｓｏｕｔｈ Ｓａｎ Ｆｒａｎｃｉｓｃｏ，Ｃａｌｉｆｏｒｎｉａから公的に利用可能であるか、またはソースコードからコンパイルされてもよい。ＡＬＩＧＮ−２プログラムは、デジタルＵＮＩＸ Ｖ４．０Ｄを含むＵＮＩＸオペレーティングシステムで使用するためにコンパイルすべきである。すべての配列比較パラメータは、ＡＬＩＧＮ−２プログラムによって設定され、変更されない。
アミノ酸配列比較のためにＡＬＩＧＮ−２を用いる場合、所与のアミノ酸配列Ｂに対する、それとの、またはそれと対比した、所与のアミノ酸配列Ａのアミノ酸配列同一性％（あるいは、所与のアミノ酸配列Ｂに対する、それとの、またはそれと対比したある特定のアミノ酸配列同一性％を有する、またはそれを含む、所与のアミノ酸配列Ａと表現され得る）は、下記のとおりに算出される：
１００×分数Ｘ／Ｙ
（式中、Ｘは、配列アライメントプログラムＡＬＩＧＮ−２によって、そのプログラムのＡ及びＢのアライメントにおいて完全な一致としてスコア化されたアミノ酸残基の数であり、Ｙは、Ｂ中のアミノ酸残基の総数である）。アミノ酸配列Ａの長さがアミノ酸配列Ｂの長さと等しくない場合、Ｂに対するＡのアミノ酸配列同一性％は、Ａに対するＢのアミノ酸配列同一性％と等しくはならないことは分かるであろう。別段に特に述べない限り、本明細書において使用するすべてのアミノ酸配列同一性％値は、直前の段落において記載したとおり、ＡＬＩＧＮ−２コンピュータプログラムを使用して得られる。
「医薬製剤」という用語は、調製物の中に含有される活性成分の生物学的活性が有効になるような形態であり、製剤が投与されるであろう対象に対して許容できないほど毒性である追加の構成要素を何ら含有しない調製物を指す。
「薬学的に許容される担体」は、対象に対して無毒性である、活性成分以外の医薬製剤中の成分を指す。薬学的に許容される担体には、限定されないが、緩衝剤、賦形剤、安定剤、または防腐剤が含まれる。
本明細書において使用する場合、「処置」（及び「処置する」または「処置すること」などのその文法上の変形形態）は、処置を受けている個体の自然過程を変更することを目的とした臨床介入を指し、予防のために、または臨床病理過程の間に行うことができる。処置の望ましい効果には、限定されないが、疾患の発生または再発の予防、症状の緩和、疾患の任意の直接的または間接的な病理学的結果の減弱、転移の予防、疾患進行速度の低減、病態の寛解または緩和、及び緩解または予後の改善が含まれる。一部の実施形態では、本発明の抗体を、疾患の発症を遅延させるために、または疾患の進行を減速させるために使用する。
「腫瘍」という用語は、悪性または良性に関わらず、すべての新生細胞成長及び増殖、ならびにすべての前がん性及びがん性細胞及び組織を指す。「がん」、「がん性」、「細胞増殖性障害」、「増殖性障害」、及び「腫瘍」という用語は、本明細書において言及する場合、相互に排他的ではない。
「可変領域」または「可変ドメイン」という用語は、抗体の抗原への結合に関係する抗体重鎖または軽鎖のドメインを指す。天然抗体の重鎖及び軽鎖の可変ドメイン（それぞれ、ＶＨ及びＶＬ）は一般に、同様の構造を有し、各ドメインは、４つの保存されたフレームワーク領域（ＦＲ）及び３つの超可変領域（ＨＶＲ）を含む（例えば、Ｋｉｎｄｔ ｅｔ ａｌ．Ｋｕｂｙ Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ，６ｔｈ ｅｄ．，Ｗ．Ｈ．Ｆｒｅｅｍａｎ ａｎｄ Ｃｏ．，ｐａｇｅ ９１（２００７）を参照されたい）。抗原結合特異性を付与するためには、単一のＶＨまたはＶＬドメインで十分であり得る。さらに、抗原と結合する抗体からのＶＨまたはＶＬドメインを使用し、それぞれ、相補的ＶＬまたはＶＨドメインのライブラリをスクリーニングして、特定の抗原と結合する抗体を単離してもよい。例えば、Ｐｏｒｔｏｌａｎｏ ｅｔ ａｌ．，Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１５０：８８０−８８７（１９９３）；Ｃｌａｒｋｓｏｎ ｅｔ ａｌ．，Ｎａｔｕｒｅ ３５２：６２４−６２８（１９９１）を参照されたい。
「変異型Ｆｃ領域」は、少なくとも１つのアミノ酸修飾、好ましくは１つまたは複数のアミノ酸置換によって、天然配列Ｆｃ領域のアミノ酸配列とは異なるアミノ酸配列を含む。好ましくは、変異型Ｆｃ領域は、天然配列Ｆｃ領域または親ポリペプチドのＦｃ領域と比較して少なくとも１つのアミノ酸置換、例えば、天然配列Ｆｃ領域または親ポリペプチドのＦｃ領域に約１〜約１０のアミノ酸置換、好ましくは、約１〜約５のアミノ酸置換を有する。本明細書における変異型Ｆｃ領域は好ましくは、天然配列Ｆｃ領域と、かつ／または親ポリペプチドのＦｃ領域と少なくとも約８０％の相同性、最も好ましくはそれらと少なくとも約９０％の相同性、より好ましくはそれらと少なくとも約９５％の相同性を保有する。
「ベクター」という用語は、本明細書において使用する場合、連結している別の核酸を増殖させ得る核酸分子を指す。この用語には、自己複製核酸構造としてのベクター、さらには、導入された宿主細胞のゲノムに組み込まれたベクターが含まれる。ある種のベクターは、作動的に連結された核酸の発現を指示することが可能である。そのようなベクターは、本明細書において「発現ベクター」と称される。
「ＶＨサブグループＩＩＩコンセンサスフレームワーク」は、Ｋａｂａｔらの可変重サブグループＩＩＩ中のアミノ酸配列から得られるコンセンサス配列を含む。一実施形態では、ＶＨサブグループＩＩＩコンセンサスフレームワークアミノ酸配列は、次の配列：ＥＶＱＬＶＥＳＧＧＧＬＶＱＰＧＧＳＬＲＬＳＣＡＡＳ（配列番号１８５）−Ｈ１−ＷＶＲＱＡＰＧＫＧＬＥＷＶ（配列番号１８６）−Ｈ２−ＲＦＴＩＳＲＤＮＳＫＮＴＬＹＬＱＭＮＳＬＲＡＥＤＴＡＶＹＹＣ（配列番号１８７）−Ｈ３−ＷＧＱＧＴＬＶＴＶＳＳ（配列番号１８８）の各々の少なくとも一部またはすべてを含む。
「ＶＬサブグループＩコンセンサスフレームワーク」は、Ｋａｂａｔらの可変軽カッパサブグループＩ中のアミノ酸配列から得られるコンセンサス配列を含む。一実施形態では、ＶＨサブグループＩコンセンサスフレームワークアミノ酸配列は、次の配列：
ＤＩＱＭＴＱＳＰＳＳＬＳＡＳＶＧＤＲＶＴＩＴＣ（配列番号１８９）−Ｌ１−ＷＹＱＱＫＰＧＫＡＰＫＬＬＩＹ（配列番号１９０）−Ｌ２−ＧＶＰＳＲＦＳＧＳＧＳＧＴＤＦＴＬＴＩＳＳＬＱＰＥＤＦＡＴＹＹＣ（配列番号１９１）−Ｌ３−ＦＧＱＧＴＫＶＥＩＫ（配列番号１９２）の各々の少なくとも一部またはすべてを含む。
「細胞傷害性薬物」という用語は、本明細書において使用する場合、細胞機能を阻害若しくは阻止する、かつ／または細胞死若しくは破壊の原因となる物質を指す。細胞傷害性薬物には、限定されないが、放射性同位体（例えば、Ａｔ２１１、Ｉ１３１、Ｉ１２５、Ｙ９０、Ｒｅ１８６、Ｒｅ１８８、Ｓｍ１５３、Ｂｉ２１２、Ｐ３２、Ｐｂ２１２、及びＬｕの放射性同位体）；化学療法薬；成長阻害薬；酵素及びその断片、例えば、核酸分解酵素；ならびに毒素、例えば、細菌、真菌、植物、または動物由来の小分子毒素または酵素活性毒素（それらの断片及び／または変異形を含む）が含まれる。例示的な細胞傷害性薬物は、抗微小管薬、白金配位錯体、アルキル化薬、抗生物質薬、トポイソメラーゼＩＩ阻害薬、代謝拮抗薬、トポイソメラーゼＩ阻害薬、ホルモン及びホルモン類似体、シグナル伝達経路阻害薬、非受容体型チロシンキナーゼ血管新生阻害薬、免疫治療薬、アポトーシス促進薬、ＬＤＨ−Ａの阻害薬；脂肪酸生合成の阻害薬；細胞周期シグナル伝達阻害薬；ＨＤＡＣ阻害薬、プロテアソーム阻害薬；ならびにがん代謝の阻害薬から選択され得る。
一実施形態では、細胞傷害性薬物は、抗微小管薬、白金配位錯体、アルキル化薬、抗生物質薬、トポイソメラーゼＩＩ阻害薬、代謝拮抗薬、トポイソメラーゼＩ阻害薬、ホルモン及びホルモン類似体、シグナル伝達経路阻害薬、非受容体型チロシンキナーゼ血管新生阻害薬、免疫治療薬、アポトーシス促進薬、ＬＤＨ−Ａの阻害薬；脂肪酸生合成の阻害薬；細胞周期シグナル伝達阻害薬；ＨＤＡＣ阻害薬、プロテアソーム阻害薬；ならびにがん代謝の阻害薬から選択される。一実施形態では、細胞傷害性薬物は、タキサンである。一実施形態では、タキサンは、パクリタキセルまたはドセタキセルである。一実施形態では、細胞傷害性薬物は、白金製剤である。一実施形態では、細胞傷害性薬物は、ＥＧＦＲのアンタゴニストである。一実施形態では、ＥＧＦＲのアンタゴニストは、Ｎ−（３−エチニルフェニル）−６，７−ビス（２−メトキシエトキシ）キナゾリン−４−アミン（例えば、エルロチニブ）である。一実施形態では、細胞傷害性薬物は、ＲＡＦ阻害薬である。一実施形態では、ＲＡＦ阻害薬は、ＢＲＡＦ及び／またはＣＲＡＦ阻害薬である。一実施形態では、ＲＡＦ阻害薬は、ベムラフェニブである。一実施形態では、細胞傷害性薬物は、ＰＩ３Ｋ阻害薬である。
「化学療法薬」には、がんの処置において有用な化学化合物が含まれる。化学療法薬の例には、エルロチニブ（ＴＡＲＣＥＶＡ（登録商標）、Ｇｅｎｅｎｔｅｃｈ／ＯＳＩ Ｐｈａｒｍ．）、ボルテゾミブ（ＶＥＬＣＡＤＥ（登録商標）、Ｍｉｌｌｅｎｎｉｕｍ Ｐｈａｒｍ．）、ジスルフィラム、没食子酸エピガロカテキン、サリノスポラミドＡ、カルフィルゾミブ、１７−ＡＡＧ（ゲルダナマイシン）、ラディシコール、乳酸デヒドロキナーゼＡ（ＬＤＨ−Ａ）、フルベストラント（ＦＡＳＬＯＤＥＸ（登録商標）、ＡｓｔｒａＺｅｎｅｃａ）、スニチブ（ＳＵＴＥＮＴ（登録商標）、Ｐｆｉｚｅｒ／Ｓｕｇｅｎ）、レトロゾール（ＦＥＭＡＲＡ（登録商標）、Ｎｏｖａｒｔｉｓ）、メシル酸イマチニブ（ＧＬＥＥＶＥＣ（登録商標）、Ｎｏｖａｒｔｉｓ）、フィナスナート（ＶＡＴＡＬＡＮＩＢ（登録商標）、Ｎｏｖａｒｔｉｓ）、オキサリプラチン（ＥＬＯＸＡＴＩＮ（登録商標）、Ｓａｎｏｆｉ）、５−ＦＵ（５−フルオロウラシル）、ロイコボリン、ラパマイシン（シロリムス、ＲＡＰＡＭＵＮＥ（登録商標）、Ｗｙｅｔｈ）、ラパチニブ（ＴＹＫＥＲＢ（登録商標）、ＧＳＫ５７２０１６、Ｇｌａｘｏ Ｓｍｉｔｈ Ｋｌｉｎｅ）、Ｌｏｎａｆａｍｉｂ（ＳＣＨ ６６３３６）、ソラフェニブ（ＮＥＸＡＶＡＲ（登録商標）、Ｂａｙｅｒ Ｌａｂｓ）、ゲフィチニブ（ＩＲＥＳＳＡ（登録商標）、ＡｓｔｒａＺｅｎｅｃａ）、ＡＧ１４７８、アルキル化薬、例えば、チオテパ及びＣＹＴＯＸＡＮ（登録商標）シクロホスファミド；スルホン酸アルキル、例えば、ブスルファン、イムプロスルファン、及びピポスルファン；アジリジン、例えば、ベンゾドパ、カルボコン、メツレドパ、及びウレドパ；エチレンイミン及びメチルアメルアミン（ｍｅｔｈｙｌａｍｅｌａｍｉｎｅ）（アルトレタミン、トリエチレンメラミン、トリエチレンホスホルアミド、トリエチレンチオホスホルアミド、及びトリメチロメラミンを含む）；アセトゲニン（特に、ブラタシン及びブラタシノン（ｂｕｌｌａｔａｃｉｎｏｎｅ））；カンプトテシン（トポテカン及びイリノテカンを含む）；ブリオスタチン；カリスタチン（ｃａｌｌｙｓｔａｔｉｎ）；ＣＣ−１０６５（そのアドレゼシン、カルゼルシン、及びビセレシン合成類似体を含む）；クリプトフィシン（特にクリプトフィシン１及びクリプトフィシン８）；副腎皮質ステロイド（プレドニゾン及びプレドニゾロンを含む）；酢酸シプロテロン；５α−レダクターゼ（フィナステリド及びデュタステリドを含む）；ボリノスタット、ロミデプシン、パノビノスタット、バルプロ酸、モセチノスタットドラスタチン；アルデスロイキン、タルクデュオカルマイシン（合成類似体のＫＷ−２１８９及びＣＢ１−ＴＭ１を含む）；エリュテロビン；パンクラチスタチン；サルコジクチン（ｓａｒｃｏｄｉｃｔｙｉｎ）；スポンジスタチン；ナイトロジェンマスタード、例えば、クロラムブシル、クロマファジン、クロロホスファミド、エストラムスチン、イホスファミド、メクロレタミン、塩酸メクロレタミンオキシド、メルファラン、ノベムビシン、フェネステリン、プレドニムスチン、トロホスファミド、ウラシルマスタード；ニトロソウレア、例えば、カルムスチン、クロロゾトシン、フォテムスチン、ロムスチン、ニムスチン、及びラニムスチン；抗生物質、例えば、エンジイン抗生物質（例えば、カリケアマイシン、特に、カリケアマイシンγ１Ｉ及びカリケアマイシンω１Ｉ（Ａｎｇｅｗ Ｃｈｅｍ．Ｉｎｔｌ．Ｅｄ．Ｅｎｇｌ．１９９４ ３３：１８３−１８６）；ジネマイシン（ジネマイシンＡを含む）；ビスホスホナート、例えば、クロドロネート；エスペラミシン；さらには、ネオカルジノスタチンクロモフォア及び関連色素タンパク質エンジイン抗生物質クロモフォア）、アクラシノマイシン、アクチノマイシン、オースラマイシン（ａｕｔｈｒａｍｙｃｉｎ）、アザセリン、ブレオマイシン、カクチノマイシン、カラビシン（ｃａｒａｂｉｃｉｎ）、カミノマイシン（ｃａｍｉｎｏｍｙｃｉｎ）、カルジノフィリン、クロモマイシニス（ｃｈｒｏｍｏｍｙｃｉｎｉｓ）、ダクチノマイシン、ダウノルビシン、デトルビシン、６−ジアゾ−５−オキソ−Ｌ−ノルロイシン、ＡＤＲＩＡＭＹＣＩＮ（登録商標）（ドキソルビシン）、モルホリノ−ドキソルビシン、シアノモルホリノ−ドキソルビシン、２−ピロリノ−ドキソルビシン、及びデオキシドキソルビシン）、エピルビシン、エソルビシン、イダルビシン、マルセロマイシン、マイトマイシン、例えば、マイトマイシンＣ、ミコフェノール酸、ノガラマイシン、オリボマイシン、ペプロマイシン、ポルフィロマイシン、ピューロマイシン、ケラマイシン（ｑｕｅｌａｍｙｃｉｎ）、ロドルビシン、ストレプトニグリン、ストレプトゾシン、ツベルシジン、ウベニメクス、ジノスタチン、ゾルビシン；代謝拮抗薬、例えば、メトトレキサート及び５−フルオロウラシル（５−ＦＵ）；葉酸類似体、例えば、デノプテリン、メトトレキサート、プテロプテリン、トリメトレキサート；プリン類似体、例えば、フルダラビン、６−メルカプトプリン、チアミプリン、チオグアニン；ピリミジン類似体、例えば、アンシタビン、アザシチジン、６−アザウリジン、カルモフール、シタラビン、ジデオキシウリジン、ドキシフルリジン、エノシタビン、フロクスウリジン；アンドロゲン、例えば、カルステロン、プロピオン酸ドロモスタノロン、エピチオスタノール、メピチオスタン、テストラクトン；抗副腎、例えば、アミノグルテチミド、ミトタン、トリロスタン；葉酸補充薬、例えば、葉酸；アセグラトン；アルドホスファミドグリコシド；アミノレブリン酸；エニルウラシル；アムサクリン；ベストラブシル（ｂｅｓｔｒａｂｕｃｉｌ）；ビサントレン；エダトラキサート（ｅｄａｔｒａｘａｔｅ）；デフォファミン（ｄｅｆｏｆａｍｉｎｅ）；デメコルチン；ジアジクオン；エルフォミチン（ｅｌｆｏｍｉｔｈｉｎｅ）；酢酸エリプチニウム；エポチロン；エトグルシド；硝酸ガリウム；ヒドロキシ尿素；レンチナン；ロニダイニン（ｌｏｎｉｄａｉｎｉｎｅ）；マイタンシノイド、例えば、メイタンシン及びアンサミトシン；ミトグアゾン；ミトキサントロン；モピダムノール（ｍｏｐｉｄａｍｎｏｌ）；ニトラエリン（ｎｉｔｒａｅｒｉｎｅ）；ペントスタチン；フェナメト（ｐｈｅｎａｍｅｔ）；ピラルビシン；ロソキサントロン；ポドフィリン酸；２−エチルヒドラジド；プロカルバジン；ＰＳＫ（登録商標）多糖類複合体（ＪＨＳ Ｎａｔｕｒａｌ Ｐｒｏｄｕｃｔｓ，Ｅｕｇｅｎｅ，Ｏｒｅｇ．）；ラゾキサン；リゾキシン；シゾフラン；スピロゲルマニウム；テヌアゾン酸；トリアジコン；２，２’，２”−トリクロロトリエチルアミン；トリコテセン（特に、Ｔ−２トキシン、ベラクリンＡ（ｖｅｒｒａｃｕｒｉｎ Ａ）、ロリジンＡ（ｒｏｒｉｄｉｎ Ａ）、及びアングイジン）；ウレタン；ビンデシン；ダカルバジン；マンノムスチン；ミトブロニトール；ミトラクトール；ピポブロマン；ガシトシン（ｇａｃｙｔｏｓｉｎｅ）；アラビノシド（「Ａｒａ−Ｃ」）；シクロホスファミド；チオテパ；タキソイド、例えば、ＴＡＸＯＬ（パクリタキセル；Ｂｒｉｓｔｏｌ−Ｍｙｅｒｓ Ｓｑｕｉｂｂ Ｏｎｃｏｌｏｇｙ，Ｐｒｉｎｃｅｔｏｎ，Ｎ．Ｊ．）、ＡＢＲＡＸＡＮＥ（登録商標）（クレモホール不含有）、アルブミン操作されたパクリタキセルのナノ粒子製剤（Ａｍｅｒｉｃａｎ Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ Ｐａｒｔｎｅｒｓ，Ｓｃｈａｕｍｂｅｒｇ，Ｉｌｌ．）、及びＴＡＸＯＴＥＲＥ（登録商標）（ドセタキセル、ドキセタキセル；Ｓａｎｏｆｉ−Ａｖｅｎｔｉｓ）；クロラムブシル；ＧＥＭＺＡＲ（登録商標）（ゲムシタビン）；６−チオグアニン；メルカプトプリン；メトトレキサート；白金類似体、例えば、シスプラチン及びカルボプラチン；ビンブラスチン；エトポシド（ＶＰ−１６）；イホスファミド；ミトキサントロン；ビンクリスチン；ＮＡＶＥＬＢＩＮＥ（登録商標）（ビノレルビン）；ノバントロン（ｎｏｖａｎｔｒｏｎｅ）；テニポシド；エダトレキサート；ダウノマイシン；アミノプテリン；カペシタビン（ＸＥＬＯＤＡ（登録商標））；イバンドロネート；ＣＰＴ−１１；トポイソメラーゼ阻害薬ＲＦＳ２０００；ジフルオロメチルオルニチン（ＤＭＦＯ）；レチノイド、例えば、レチノイン酸；ならびに上記のいずれかの薬学的に許容される塩、酸、及び誘導体が含まれる。
化学療法薬にはまた、（ｉ）腫瘍に対するホルモン作用を調節または阻害するように作用する抗ホルモン薬、例えば、抗エストロゲン及び選択的エストロゲン受容体モジュレーター（ＳＥＲＭ）（例えば、タモキシフェン（ＮＯＬＶＡＤＥＸ（登録商標）；クエン酸タモキシフェンを含む）、ラロキシフェン、ドロロキシフェン、ヨードキシフェン、４−ヒドロキシタモキシフェン、トリオキシフェン、ケオキシフェン、ＬＹ１１７０１８、オナプリストン、及びＦＡＲＥＳＴＯＮ（登録商標）（クエン酸トレミフィン（ｔｏｒｅｍｉｆｉｎｅ ｃｉｔｒａｔｅ））を含む）；（ｉｉ）副腎におけるエストロゲン産生を調節する酵素アロマターゼを阻害するアロマターゼ阻害薬、例えば、４（５）−イミダゾール、アミノグルテチミド、ＭＥＧＡＳＥ（登録商標）（酢酸メゲストロール）、ＡＲＯＭＡＳＩＮ（登録商標）（エキセメスタン；Ｐｆｉｚｅｒ）、ホルメスタニー（ｆｏｒｍｅｓｔａｎｉｅ）、ファドロゾール、ＲＩＶＩＳＯＲ（登録商標）（ボロゾール）、ＦＥＭＡＲＡ（登録商標）（レトロゾール；Ｎｏｖａｒｔｉｓ）、及びＡＲＩＭＩＤＥＸ（登録商標）（アナストロゾール；ＡｓｔｒａＺｅｎｅｃａ）など；（ｉｉｉ）抗アンドロゲン、例えば、フルタミド、ニルタミド、ビカルタミド、ロイプロリド、及びゴセレリン；ブセレリン、トリプテレリン、酢酸メドロキシプロゲステロン、ジエチルスチルベストロール、プレマリン、フルオキシメステロン、全トランス型レチノイン酸、フェンレチニド、さらには、トロキサシタビン（１，３−ジオキソランヌクレオシドシトシン類似体）；（ｉｖ）プロテインキナーゼ阻害薬；（ｖ）脂質キナーゼ阻害薬；（ｖｉ）アンチセンスオリゴヌクレオチド、特に、異常な細胞増殖に関係するシグナル伝達経路における遺伝子の発現を阻害するもの、例えば、ＰＫＣ−アルファ、Ｒａｌｆ及びＨ−Ｒａｓなど；（ｖｉｉ）リボザイム、例えば、ＶＥＧＦ発現阻害薬（例えば、ＡＮＧＩＯＺＹＭＥ（登録商標））及びＨＥＲ２発現阻害薬；（ｖｉｉｉ）ワクチン、例えば、遺伝子治療ワクチン、例えば、ＡＬＬＯＶＥＣＴＩＮ（登録商標）、ＬＥＵＶＥＣＴＩＮ（登録商標）、及びＶＡＸＩＤ（登録商標）；ＰＲＯＬＥＵＫＩＮ（登録商標）、ｒＩＬ−２；トポイソメラーゼ１阻害薬、例えば、ＬＵＲＴＯＴＥＣＡＮ（登録商標）；ＡＢＡＲＥＬＩＸ（登録商標）ｒｍＲＨ；ならびに（ｉｘ）上記のいずれかの薬学的に許容される塩、酸、及び誘導体が含まれる。
化学療法薬にはまた、アレムツズマブ（Ｃａｍｐａｔｈ）、ベバシズマブ（ＡＶＡＳＴＩＮ（登録商標）、Ｇｅｎｅｎｔｅｃｈ）；セツキシマブ（ＥＲＢＩＴＵＸ（登録商標）、Ｉｍｃｌｏｎｅ）；パニツムマブ（ＶＥＣＴＩＢＩＸ（登録商標）、Ａｍｇｅｎ）、リツキシマブ（ＲＩＴＵＸＡＮ（登録商標）、Ｇｅｎｅｎｔｅｃｈ／Ｂｉｏｇｅｎ Ｉｄｅｃ）、ペルツズマブ（ＯＭＮＩＴＡＲＧ（登録商標）、２Ｃ４、Ｇｅｎｅｎｔｅｃｈ）、トラスツズマブ（ＨＥＲＣＥＰＴＩＮ（登録商標）、Ｇｅｎｅｎｔｅｃｈ）、トシツモマブ（Ｂｅｘｘａｒ、Ｃｏｒｉｘｉａ）、及び抗体薬物コンジュゲート、ゲムツズマブオゾガマイシン（ＭＹＬＯＴＡＲＧ（登録商標）、Ｗｙｅｔｈ）などの抗体が含まれる。本発明の化合物と組み合わせて薬剤として治療上の可能性を有する追加のヒト化モノクローナル抗体には、アポリズマブ、アセリズマブ、アトリズマブ、バピネオズマブ、ビバツズマブメルタンシン、カンツズマブメルタンシン、セデリズマブ、セルトリズマブペゴル、シドフシツズマブ、シドツズマブ、ダクリズマブ、エクリズマブ、エファリズマブ、エプラツズマブ、エルリズマブ、フェルビズマブ、フォントリズマブ、ゲムツズマブオゾガマイシン、イノツズマブオゾガマイシン、イピリムマブ、ラベツズマブ、リンツズマブ、マツズマブ、メポリズマブ、モタビズマブ、モトビズマブ、ナタリズマブ、ニモツズマブ、ノロビズマブ、ヌマビズマブ、オクレリズマブ、オマリズマブ、パリビズマブ、パスコリズマブ、ペクフシツズマブ、ペクツズマブ、ペキセリズマブ、ラリビズマブ、ラニビズマブ、レスリビズマブ、レスリズマブ、レシビズマブ、ロベリズマブ、ルプリズマブ、シブロツズマブ、シプリズマブ、ソンツズマブ、タカツズマブテトラキセタン、タドシズマブ、タリズマブ、テフィバズマブ、トシリズマブ、トラリズマブ、ツコツズマブセルモロイキン、ツクシツズマブ、ウマビズマブ、ウルトキサズマブ、ウステキヌマブ、ビシリズマブ、及びインターロイキン−１２ ｐ４０タンパク質を認識するように遺伝的に修飾された組換え排他的ヒト配列、全長ＩｇＧ１ λ抗体である抗インターロイキン−１２（ＡＢＴ−８７４／Ｊ６９５、Ｗｙｅｔｈ Ｒｅｓｅａｒｃｈ ａｎｄ Ａｂｂｏｔｔ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓ）が含まれる。
化学療法薬にはまた、ＥＧＦＲに直接結合するか、または他の方法で相互作用して、そのシグナル伝達活性を防止または低減する化合物を指す「ＥＧＦＲ阻害薬」が含まれ、これはあるいは、「ＥＧＦＲアンタゴニスト」と称される。そのような薬剤の例には、ＥＧＦＲに結合する抗体及び小分子が含まれる。ＥＧＦＲに結合する抗体の例には、ＭＡｂ ５７９（ＡＴＣＣ ＣＲＬ ＨＢ ８５０６）、ＭＡｂ ４５５（ＡＴＣＣ ＣＲＬ ＨＢ８５０７）、ＭＡｂ ２２５（ＡＴＣＣ ＣＲＬ ８５０８）、ＭＡｂ ５２８（ＡＴＣＣ ＣＲＬ ８５０９）（米国特許第４，９４３、５３３号（Ｍｅｎｄｅｌｓｏｈｎら）を参照されたい）及びその変異体、例えば、キメラ化２２５（Ｃ２２５またはセツキシマブ；ＥＲＢＵＴＩＸ（登録商標））及び再形状化ヒト２２５（Ｈ２２５）（ＷＯ９６／４０２１０（Ｉｍｃｌｏｎｅ Ｓｙｓｔｅｍｓ Ｉｎｃ．）を参照されたい）；ＩＭＣ−１１Ｆ８、完全ヒト、ＥＧＦＲ標的抗体（Ｉｍｃｌｏｎｅ）；ＩＩ型変異ＥＧＦＲと結合する抗体（米国特許第５，２１２，２９０）；米国特許第５，８９１，９９６号に記載されているとおりのＥＧＦＲと結合するヒト化及びキメラ抗体；ならびにＥＧＦＲと結合するヒト抗体、例えば、ＡＢＸ−ＥＧＦまたはパニツムマブ（ＷＯ９８／５０４３３（Ａｂｇｅｎｉｘ／Ａｍｇｅｎ）を参照されたい）；ＥＭＤ ５５９００（Ｓｔｒａｇｌｉｏｔｔｏ ｅｔ ａｌ．Ｅｕｒ．Ｊ．Ｃａｎｃｅｒ ３２Ａ：６３６−６４０（１９９６））；ＥＧＦＲ結合についてＥＧＦ及びＴＧＦ−アルファの両方と競合する、ＥＧＦＲに対するヒト化ＥＧＦＲ抗体であるＥＭＤ７２００（マツズマブ）（ＥＭＤ／Ｍｅｒｃｋ）；ヒトＥＧＦＲ抗体、ＨｕＭａｘ−ＥＧＦＲ（ＧｅｎＭａｂ）；Ｅ１．１、Ｅ２．４、Ｅ２．５、Ｅ６．２、Ｅ６．４、Ｅ２．１１、Ｅ６．３、及びＥ７．６．３として公知であり、米国特許第６，２３５，８８３号において記載されている全長ヒト抗体；ＭＤＸ−４４７（Ｍｅｄａｒｅｘ Ｉｎｃ）；ならびにｍＡｂ ８０６またはヒト化ｍＡｂ ８０６（Ｊｏｈｎｓ ｅｔ ａｌ．，Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．２７９（２９）：３０３７５−３０３８４（２００４））が含まれる。抗ＥＧＦＲ抗体を、細胞傷害性薬物とコンジュゲートさせて、イムノコンジュゲートを生成してもよい（例えば、欧州特許第６５９，４３９Ａ２号、Ｍｅｒｃｋ Ｐａｔｅｎｔ ＧｍｂＨを参照されたい）。ＥＧＦＲアンタゴニストには、米国特許第５，６１６，５８２号、同第５，４５７，１０５号、同第５，４７５，００１号、同第５，６５４，３０７号、同第５，６７９，６８３号、同第６，０８４，０９５号、同第６，２６５，４１０号、同第６，４５５，５３４号、同第６，５２１，６２０号、同第６，５９６，７２６号、同第６，７１３，４８４号、同第５，７７０，５９９号、同第６，１４０，３３２号、同第５，８６６，５７２号、同第６，３９９，６０２号、同第６，３４４，４５９号、同第６，６０２，８６３号、同第６，３９１，８７４号、同第６，３４４，４５５号、同第５，７６０，０４１号、同第６，００２，００８号、及び同第５，７４７，４９８号、さらには、次のＰＣＴ公報：ＷＯ９８／１４４５１、ＷＯ９８／５００３８、ＷＯ９９／０９０１６、及びＷＯ９９／２４０３７において記載されている化合物などの小分子が含まれる。特定の小分子ＥＧＦＲアンタゴニストには、ＯＳＩ−７７４（ＣＰ−３５８７７４、エルロチニブ、ＴＡＲＣＥＶＡ（登録商標）Ｇｅｎｅｎｔｅｃｈ／ＯＳＩ Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌｓ）；ＰＤ１８３８０５（ＣＩ １０３３、２−プロペンアミド、Ｎ−［４−［（３−クロロ−４−フルオロフェニル）アミノ］−７−［３−（４−モルホリニル）プロポキシ］−６−キナゾリニル］−ジヒドロクロリド、Ｐｆｉｚｅｒ Ｉｎｃ．）；ＺＤ１８３９、ゲフィチニブ（ＩＲＥＳＳＡ（登録商標））４−（３’−クロロ−４’−フルオロアニリノ）−７−メトキシ−６−（３−モルホリノプロポキシ）キナゾリン、ＡｓｔｒａＺｅｎｅｃａ）；ＺＭ１０５１８０（（６−アミノ−４−（３−メチルフェニル−アミノ）−キナゾリン、Ｚｅｎｅｃａ）；ＢＩＢＸ−１３８２（Ｎ８−（３−クロロ−４−フルオロ−フェニル）−Ｎ２−（１−メチル−ピペリジン−４−イル）−ピリミド［５，４−ｄ］ピリミジン−２，８−ジアミン、Ｂｏｅｈｒｉｎｇｅｒ Ｉｎｇｅｌｈｅｉｍ）；ＰＫＩ−１６６（（Ｒ）−４−［４−［（１−フェニルエチル）アミノ］−１Ｈ−ピロロ［２，３−ｄ］ピリミジン−６−イル］−フェノール）；（Ｒ）−６−（４−ヒドロキシフェニル）−４−［（１−フェニルエチル）アミノ］−７Ｈ−ピロロ［２，３−ｄ］ピリミジン）；ＣＬ−３８７７８５（Ｎ−［４−［（３−ブロモフェニル）アミノ］−６−キナゾリニル］−２−ブチンアミド）；ＥＫＢ−５６９（Ｎ−［４−［（３−クロロ−４−フルオロフェニル）アミノ］−３−シアノ−７−エトキシ−６−キノリニル］−４−（ジメチルアミノ）−２−ブテンアミド）（Ｗｙｅｔｈ）；ＡＧ１４７８（Ｐｆｉｚｅｒ）；ＡＧ１５７１（ＳＵ５２７１；Ｐｆｉｚｅｒ）；二重ＥＧＦＲ／ＨＥＲ２チロシンキナーゼ阻害薬、例えば、ラパチニブ（ＴＹＫＥＲＢ（登録商標）、ＧＳＫ５７２０１６またはＮ−［３−クロロ−４−［（３−フルオロフェニル）メトキシ］フェニル］−６［５［［［２メチルスルホニル）エチル］アミノ］メチル］−２−フラニル］−４−キナゾリンアミン）が含まれる。
化学療法薬にはまた、「チロシンキナーゼ阻害薬」が含まれ、これには、先行するパラグラフにおいて記述したＥＧＦＲ標的薬物；小分子ＨＥＲ２チロシンキナーゼ阻害薬、例えば、Ｔａｋｅｄａから入手可能なＴＡＫ１６５；ＣＰ−７２４，７１４、ＥｒｂＢ２受容体チロシンキナーゼの経口選択的阻害薬（Ｐｆｉｚｅｒ及びＯＳＩ）；二重ＨＥＲ阻害薬、例えば、ＥＧＦＲと優先的に結合するが、ＨＥＲ２及びＥＧＦＲ過剰発現細胞の両方を阻害するＥＫＢ−５６９（Ｗｙｅｔｈから入手可能）；ラパチニブ（ＧＳＫ５７２０１６；Ｇｌａｘｏ−ＳｍｉｔｈＫｌｉｎｅから入手可能）、経口ＨＥＲ２及びＥＧＦＲチロシンキナーゼ阻害薬；ＰＫＩ−１６６（Ｎｏｖａｒｔｉｓから入手可能）；ｐａｎ−ＨＥＲ阻害薬、例えば、カネルチニブ（ＣＩ−１０３３；Ｐｈａｒｍａｃｉａ）；Ｒａｆ−１阻害薬、例えば、Ｒａｆ−１シグナル伝達を阻害する、ＩＳＩＳ Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｓから入手可能なアンチセンス薬ＩＳＩＳ−５１３２；非ＨＥＲ標的ＴＫ阻害薬、例えば、メシル酸イマチニブ（ＧＬＥＥＶＥＣ（登録商標）、Ｇｌａｘｏ ＳｍｉｔｈＫｌｉｎｅから入手可能）；多重標的チロシンキナーゼ阻害薬、例えば、スニチニブ（ＳＵＴＥＮＴ（登録商標）、Ｐｆｉｚｅｒから入手可能）；ＶＥＧＦ受容体チロシンキナーゼ阻害薬、例えば、バタラニブ（ＰＴＫ７８７／ＺＫ２２２５８４、Ｎｏｖａｒｔｉｓ／Ｓｃｈｅｒｉｎｇ ＡＧから入手可能）；ＭＡＰＫ細胞外調節キナーゼＩ阻害薬ＣＩ−１０４０（Ｐｈａｒｍａｃｉａから入手可能）；キナゾリン、例えば、ＰＤ１５３０３５、４−（３−クロロアニリノ）キナゾリン；ピリドピリミジン；ピリミドピリミジン；ピロロピリミジン、例えば、ＣＧＰ５９３２６、ＣＧＰ６０２６１、及びＣＧＰ６２７０６；ピラゾロピリミジン、４−（フェニルアミノ）−７Ｈ−ピロロ［２，３−ｄ］ピリミジン；クルクミン（ジフェルロイルメタン、４，５−ビス（４−フルオロアニリノ）フタルイミド）；ニトロチオフェン部分を含有するチルホスチン；ＰＤ−０１８３８０５（Ｗａｒｎｅｒ−Ｌａｍｂｅｒ）；アンチセンス分子（例えば、ＨＥＲコード核酸に結合するもの）；キノキサリン（米国特許第５，８０４，３９６号）；トリホスチン（ｔｒｙｐｈｏｓｔｉｎ）（米国特許第５，８０４，３９６）；ＺＤ６４７４（Ａｓｔｒａ Ｚｅｎｅｃａ）；ＰＴＫ−７８７（Ｎｏｖａｒｔｉｓ／Ｓｃｈｅｒｉｎｇ ＡＧ）；ｐａｎ−ＨＥＲ阻害薬、例えば、ＣＩ−１０３３（Ｐｆｉｚｅｒ）；Ａｆｆｉｎｉｔａｃ（ＩＳＩＳ ３５２１；Ｉｓｉｓ／Ｌｉｌｌｙ）；メシル酸イマチニブ（ＧＬＥＥＶＥＣ（登録商標））；ＰＫＩ １６６（Ｎｏｖａｒｔｉｓ）；ＧＷ２０１６（Ｇｌａｘｏ ＳｍｉｔｈＫｌｉｎｅ）；ＣＩ−１０３３（Ｐｆｉｚｅｒ）；ＥＫＢ−５６９（Ｗｙｅｔｈ）；セマキシニブ（Ｐｆｉｚｅｒ）；ＺＤ６４７４（ＡｓｔｒａＺｅｎｅｃａ）；ＰＴＫ−７８７（Ｎｏｖａｒｔｉｓ／Ｓｃｈｅｒｉｎｇ ＡＧ）；ＩＮＣ−１Ｃ１１（Ｉｍｃｌｏｎｅ）、ラパマイシン（シロリムス、ＲＡＰＡＭＵＮＥ（登録商標））；または次の特許公報：米国特許第５，８０４，３９６号；ＷＯ１９９９／０９０１６（Ａｍｅｒｉｃａｎ Ｃｙａｎａｍｉｄ）；ＷＯ１９９８／４３９６０（Ａｍｅｒｉｃａｎ Ｃｙａｎａｍｉｄ）；ＷＯ１９９７／３８９８３（Ｗａｒｎｅｒ Ｌａｍｂｅｒｔ）；ＷＯ１９９９／０６３７８（Ｗａｒｎｅｒ Ｌａｍｂｅｒｔ）；ＷＯ１９９９／０６３９６（Ｗａｒｎｅｒ Ｌａｍｂｅｒｔ）；ＷＯ１９９６／３０３４７（Ｐｆｉｚｅｒ、Ｉｎｃ）；ＷＯ１９９６／３３９７８（Ｚｅｎｅｃａ）；ＷＯ１９９６／３３９７（Ｚｅｎｅｃａ）、及びＷＯ１９９６／３３９８０（Ｚｅｎｅｃａ）のいずれかにおいて記載されているものが含まれる。
化学療法薬にはまた、デキサメタゾン、インターフェロン、コルヒチン、メトプリン、シクロスポリン、アンホテリシン、メトロニダゾール、アレムツズマブ、アリトレチノイン、アロプリノール、アミホスチン、三酸化ヒ素、アスパラギナーゼ、生ＢＣＧ、ベバクジマブ、ベキサロテン、クラドリビン、クロファラビン、ダルベポエチンアルファ、デニロイキン、デクスラゾキサン、エポエチンアルファ、エロチニブ、フィルグラスチム、酢酸ヒストレリン、イブリツモマブ、インターフェロンアルファ−２ａ、インターフェロンアルファ−２ｂ、レナリドマイド、レバミゾール、メスナ、メトキサレン、ナンドロロン、ネララビン、ノフェツモマブ、オプレルベキン、パリフェルミン、パミドロネート、ペガデマーゼ、ペガスパルガーゼ、ペグフィルグラスチム、ペメトレキセドジナトリウム、プリカマイシン、ポルフィマーナトリウム、キナクリン、ラスブリカーゼ、サルグラモスチム、テモゾロミド、ＶＭ−２６、６−ＴＧ、トレミフェン、トレチノイン、ＡＴＲＡ、バルルビシン、ゾレドロネート、及びゾレドロン酸、及びそれらの薬学的に許容される塩が含まれる。
化学療法薬にはまた、ヒドロコルチゾン、酢酸ヒドロコルチゾン、酢酸コルチゾン、ピバル酸チキソコルトール、トリアムシノロンアセトニド、トリアムシノロンアルコール、モメタゾン、アムシノニド、ブデソニド、デソニド、フルオシノニド、フルオシノロンアセトニド、ベタメタゾン、リン酸ベタメタゾンナトリウム、デキサメタゾン、リン酸デキサメタゾンナトリウム、フルオコルトロン、１７−酪酸ヒドロコルチゾン、１７−吉草酸ヒドロコルチゾン、ジプロピオン酸アクロメタゾン、吉草酸ベタメタゾン、ジプロピオン酸ベタメタゾン、プレドニカルベート、１７−酪酸クロベタゾン、１７−プロピオン酸クロベタゾール、カプロン酸フルオコルトロン、ピバル酸フルオコルトロン、及び酢酸フルプレドニデン；免疫選択的抗炎症性ペプチド（ＩｍＳＡＩｄ）、例えば、フェニルアラニン−グルタミン−グリシン（ＦＥＧ）及びそのＤ−異性体型（ｆｅＧ）（ＩＭＵＬＡＮ ＢｉｏＴｈｅｒａｐｅｕｔｉｃｓ，ＬＬＣ）；抗リウマチ薬、例えば、アザチオプリン、シクロスポリン（シクロスポリンＡ）、Ｄ−ペニシラミン、金塩、ヒドロキシクロロキン、レフルノミドミノシクリン、スルファサラジン、腫瘍壊死因子アルファ（ＴＮＦα）遮断薬、例えば、エタネルセプト（Ｅｎｂｒｅｌ）、インフリキシマブ（Ｒｅｍｉｃａｄｅ）、アダリムマブ（Ｈｕｍｉｒａ）、セルトリズマブペゴル（Ｃｉｍｚｉａ）、ゴリムマブ（Ｓｉｍｐｏｎｉ）、インターロイキン１（ＩＬ−１）遮断薬、例えば、アナキンラ（Ｋｉｎｅｒｅｔ）、Ｔ細胞同時刺激遮断薬、例えば、アバタセプト（Ｏｒｅｎｃｉａ）、インターロイキン６（ＩＬ−６）遮断薬、例えば、トシリズマブ（ＡＣＴＥＭＥＲＡ（登録商標））；インターロイキン１３（ＩＬ−１３）遮断薬、例えば、レブリキズマブ；インターフェロンアルファ（ＩＦＮ）遮断薬、例えば、ロンタリズマブ；ベータ７インテグリン遮断薬、例えば、ｒｈｕＭＡｂベータ７；ＩｇＥ経路遮断薬、例えば、抗Ｍ１プライム；分泌ホモ三量体ＬＴａ３及び膜結合ヘテロ三量体ＬＴａ１／β２遮断薬、例えば、抗リンホトキシンアルファ（ＬＴａ）；放射性同位体（例えば、Ａｔ２１１、Ｉ１３１、Ｉ１２５、Ｙ９０、Ｒｅ１８６、Ｒｅ１８８、Ｓｍ１５３、Ｂｉ２１２、Ｐ３２、Ｐｂ２１２、及びＬｕの放射性同位体）；その他の治験薬、例えば、チオプラチン、ＰＳ−３４１、フェニル酪酸塩、ＥＴ−１８−ＯＣＨ３、またはファルネシルトランスフェラーゼ阻害薬（Ｌ−７３９７４９、Ｌ−７４４８３２）；ポリフェノール、例えば、クエルセチン、レスベラトロール、ピセアタンノール、没食子酸エピガロカテキン、テアフラビン、フラバノール、プロシアニジン、ベツリン酸及びその誘導体；自食作用阻害薬、例えば、クロロキン；デルタ−９−テトラヒドロカンナビノール（ドロナビノール、ＭＡＲＩＮＯＬ（登録商標））；ベータ−ラパコン；ラパコール；コルヒチン；ベツリン酸；アセチルカンプトテシン、スコポレクチン、及び９−アミノカンプトテシン）；ポドフィロトキシン；テガフール（ＵＦＴＯＲＡＬ（登録商標））；ベキサロテン（ＴＡＲＧＲＥＴＩＮ（登録商標））；ビスホスホナート、例えば、クロドロネート（例えば、ＢＯＮＥＦＯＳ（登録商標）またはＯＳＴＡＣ（登録商標））、エチドロネート（ＤＩＤＲＯＣＡＬ（登録商標））、ＮＥ−５８０９５、ゾレドロン酸／ゾレドロナート（ＺＯＭＥＴＡ（登録商標））、アレンドロネート（ＦＯＳＡＭＡＸ（登録商標））、パミドロネート（ＡＲＥＤＩＡ（登録商標））、チルドロネート（ＳＫＥＬＩＤ（登録商標））、またはリセドロネート（ＡＣＴＯＮＥＬ（登録商標））；及び上皮成長因子受容体（ＥＧＦ−Ｒ）；ワクチン、例えば、ＴＨＥＲＡＴＯＰＥ（登録商標）ワクチン；ペリホシン、ＣＯＸ−２阻害薬（例えば、セレコキシブまたはエトリコキシブ）、プロテオソーム阻害薬（例えば、ＰＳ３４１）；ＣＣＩ−７７９；チピファルニブ（Ｒ１１５７７）；オラフェニブ、ＡＢＴ５１０；Ｂｃｌ−２阻害薬、例えば、オブリメルセンナトリウム（ＧＥＮＡＳＥＮＳＥ（登録商標））；ピクサントロン；ファルネシルトランスフェラーゼ阻害薬、例えば、ロナファルニブ（ＳＣＨ ６６３６、ＳＡＲＡＳＡＲＴＭ）；ならびに上記のいずれかの薬学的に許容される塩、酸、または誘導体；さらには、上記の２種以上の組合せ、例えば、ＣＨＯＰ（シクロホスファミド、ドキソルビシン、ビンクリスチン、及びプレドニゾロンの併用療法の略語）；及びＦＯＬＦＯＸ（オキサリプラチン（ＥＬＯＸＡＴＩＮＴＭ）と５−ＦＵ及びロイコボリンとを組み合わせた処置レジメンの略語）が含まれる。
化学療法薬にはまた、鎮痛、下熱、及び抗炎症効果を有する非ステロイド系抗炎症薬が含まれる。ＮＳＡＩＤには、酵素のシクロオキシゲナーゼの非選択的阻害薬が含まれる。ＮＳＡＩＤの具体的な例には、アスピリン、プロピオン酸誘導体、例えば、イブプロフェン、フェノプロフェン、ケトプロフェン、フルルビプロフェン、オキサプロジン、及びナプロキセン、酢酸誘導体、例えば、インドメタシン、スリンダク、エトドラク、ジクロフェナク、エノール酸誘導体、例えば、ピロキシカム、メロキシカム、テノキシカム、ドロキシカム、ロルノキシカム、及びイソキシカム、フェナム酸誘導体、例えば、メフェナム酸、メクロフェナム酸、フルフェナム酸、トルフェナム酸、ならびにＣＯＸ−２阻害薬、例えば、セレコキシブ、エトリコキシブ、ルミラコキシブ、パレコキシブ、ロフェコキシブ、ロフェコキシブ、及びバルデコキシブが含まれる。ＮＳＡＩＤは、関節リウマチ、変形性関節症、炎症性関節症、強直性脊椎炎、乾癬性関節炎、ライター症候群、急性通風、月経困難症、転移性骨疼痛、頭痛及び片頭痛、手術後疼痛、炎症及び組織損傷による軽症から中程度の疼痛、発熱、腸閉塞、ならびに腎仙痛などの状態の対症的軽減に適応とされ得る。
「サイトカイン」という用語は、別の細胞に対して細胞間メディエーターとして作用する、１種の細胞集団によって放出されるタンパク質のための総称である。そのようなサイトカインの例は、リンホカイン、モノカイン；インターロイキン（ＩＬ）、例えば、ＩＬ−１、ＩＬ−１ａ、ＩＬ−２、ＩＬ−３、ＩＬ−４、ＩＬ−５、ＩＬ−６、ＩＬ−７、ＩＬ−８、ＩＬ−９、ＩＬ−１１、ＩＬ−１２、ＩＬ−１５；腫瘍壊死因子、例えば、ＴＮＦ−αまたはＴＮＦ−β；ならびにＬＩＦ及びｋｉｔリガンド（ＫＬ）及びガンマインターフェロンを含む他のポリペプチド因子である。本明細書において使用する場合、サイトカインという用語には、天然源または組換え細胞培養に由来するタンパク質、及び合成で生成された小分子実体を含む天然配列サイトカインの生物学的に活性な同等物、ならびにそれらの薬学的に許容される誘導体及び塩が含まれる。
「ＰＤ−１軸結合アンタゴニスト」という用語は、ＰＤ−１シグナル伝達軸上のシグナル伝達から生じるＴ細胞機能不全を除去して、結果が、Ｔ細胞機能（例えば、増殖、サイトカイン産生、ターゲット細胞殺滅）の回復または増強であるように、ＰＤ−１軸結合パートナーとその結合パートナーの１種または複数種との相互作用を阻害する分子である。本明細書において使用する場合、ＰＤ−１軸結合アンタゴニストには、ＰＤ−１結合アンタゴニスト、ＰＤ−Ｌ１結合アンタゴニスト、及びＰＤ−Ｌ２結合アンタゴニストが含まれる。
「ＰＤ−１結合アンタゴニスト」という用語は、ＰＤ−１と、その結合パートナーの１種または複数種、例えばＰＤ−Ｌ１、ＰＤ−Ｌ２との相互作用から生じるシグナル伝達を低減、遮断、阻害、抑止、また干渉する分子である。一部の実施形態では、ＰＤ−１結合アンタゴニストは、ＰＤ−１のその結合パートナーへの結合を阻害する分子である。特定の態様では、ＰＤ−１結合アンタゴニストは、ＰＤ−Ｌ１及び／またはＰＤ−Ｌ２へのＰＤ−１の結合を阻害する。例えば、ＰＤ−１結合アンタゴニストには、ＰＤ−１とＰＤ−Ｌ１及び／またはＰＤ−Ｌ２との相互作用から生じるシグナル伝達を低減、遮断、阻害、抑止、または干渉する抗ＰＤ−１抗体、その抗原結合断片、イムノアドヘシン、融合タンパク質、オリゴペプチド、及び他の分子が含まれる。一実施形態では、ＰＤ−１結合アンタゴニストは、機能不全Ｔ細胞の機能不全性が低くなる（例えば、抗原認識に対するエフェクター反応を増強させる）ように、ＰＤ−１を介したシグナル伝達を媒介したＴリンパ球上で発現される細胞表面タンパク質によって、またはそれを介して媒介される負の同時刺激シグナルを低減させる。一部の実施形態では、ＰＤ−１結合アンタゴニストは、抗ＰＤ−１抗体である。特定の態様では、ＰＤ−１結合アンタゴニストは、本明細書に記載のＭＤＸ−１１０６である。別の特定の態様では、ＰＤ−１結合アンタゴニストは、本明細書に記載のＭｅｒｃｋ３７４５である。別の特定の態様では、ＰＤ−１結合アンタゴニストは、本明細書に記載のＣＴ−０１１である。
「ＰＤ−Ｌ１結合アンタゴニスト」という用語は、ＰＤ−Ｌ１と、１種または複数種のその結合パートナー、例えばＰＤ−１、Ｂ７−１のいずれかとの相互作用から生じるシグナル伝達を低減、遮断、阻害、抑止、または干渉する分子である。一部の実施形態では、ＰＤ−Ｌ１結合アンタゴニストは、ＰＤ−Ｌ１のその結合パートナーへの結合を阻害する分子である。特定の態様では、ＰＤ−Ｌ１結合アンタゴニストは、ＰＤ−１及び／またはＢ７−１へのＰＤ−Ｌ１の結合を阻害する。一部の実施形態では、ＰＤ−Ｌ１結合アンタゴニストには、抗ＰＤ−Ｌ１抗体、その抗原結合断片、イムノアドヘシン、融合タンパク質、オリゴペプチド、及びＰＤ−Ｌ１と１種または複数種のその結合パートナー、例えばＰＤ−１、Ｂ７−１との相互作用から生じるシグナル伝達を低減、遮断、阻害、抑止、または干渉する他の分子が含まれる。一実施形態では、ＰＤ−Ｌ１結合アンタゴニストは、機能不全Ｔ細胞の機能不全性が低くなるように（例えば、抗原認識に対するエフェクター反応を増強させる）、ＰＤ−Ｌ１を介したシグナル伝達を媒介したＴリンパ球上で発現される細胞表面タンパク質によって、またはそれを介して媒介される負の同時刺激シグナルを低減させる。一部の実施形態では、ＰＤ−Ｌ１結合アンタゴニストは、抗ＰＤ−Ｌ１抗体である。特定の態様では、抗ＰＤ−Ｌ１抗体は、本明細書に記載のＹＷ２４３．５５．Ｓ７０である。別の特定の態様では、抗ＰＤ−Ｌ１抗体は、本明細書に記載のＭＤＸ−１１０５である。さらに別の特定の態様では、抗ＰＤ−Ｌ１抗体は、本明細書に記載のＭＰＤＬ３２８０Ａである。
「ＰＤ−Ｌ２結合アンタゴニスト」という用語は、ＰＤ−Ｌ２と、１種または複数種のその結合パートナー、例えばＰＤ−１との相互作用から生じるシグナル伝達を低減、遮断、阻害、抑止、または干渉する分子である。一部の実施形態では、ＰＤ−Ｌ２結合アンタゴニストは、ＰＤ−Ｌ２のその結合パートナーへの結合を阻害する分子である。特定の態様では、ＰＤ−Ｌ２結合アンタゴニストは、ＰＤ−１へのＰＤ−Ｌ２の結合を阻害する。一部の実施形態では、ＰＤ−Ｌ２アンタゴニストには、抗ＰＤ−Ｌ２抗体、その抗原結合断片、イムノアドヘシン、融合タンパク質、オリゴペプチド、及びＰＤ−Ｌ２と１種または複数種のその結合パートナー、例えばＰＤ−１との相互作用に起因するシグナル伝達を低減、遮断、阻害、抑止、または干渉する他の分子が含まれる。一実施形態では、ＰＤ−Ｌ２結合アンタゴニストは、機能不全Ｔ細胞の機能不全性が低くなるように（例えば、抗原認識に対するエフェクター反応を増強させる）、ＰＤ−Ｌ２を介したシグナル伝達を媒介したＴリンパ球上で発現される細胞表面タンパク質によって、またはそれを介して媒介される負の同時刺激シグナルを低減させる。一部の実施形態では、ＰＤ−Ｌ２結合アンタゴニストは、イムノアドヘシンである。
「食作用」という用語は、細胞による細胞または微粒子状物質の内部移行を意味する。一部の実施形態では、食細胞または貪食細胞は、マクロファージまたは好中球である。一部の実施形態では、細胞は、ヒトＯＸ４０を発現する細胞である。食作用をアッセイするための方法は、当技術分野で公知であり、別の細胞内に内部移行される細胞の存在を検出するための顕微鏡の使用を含む。他の実施形態では、食作用は、ＦＡＣＳを使用して、例えば、別の細胞内に、検出可能に標識された細胞（例えば、第１の細胞とは異なる標識で検出可能に標識されていてもよい）が存在することを検出することによって検出される。
抗体に関して「実質的な活性を保有しない」または「実質的に活性がない」という語句は、本明細書において使用する場合、その抗体が、バックグラウンドレベルを超える（一部の実施形態では、統計的に有意であるバックグラウンドレベルを超える）活性を示さないことを意味する。抗体に関して「活性がほとんどない」という語句は、本明細書において使用する場合、その抗体が、生物学的に有意な量の機能を示さないことを意味する。その機能は、例えば、本明細書に記載のものを含む、当技術分野で公知の任意のアッセイまたは技術に従って測定または検出することができる。一部の実施形態では、抗体機能は、エフェクターＴ細胞増殖及び／またはサイトカイン分泌の刺激である。
「バイオマーカー」または「マーカー」という用語は、本明細書において使用する場合、一般に、遺伝子、ｍＲＮＡ、タンパク質、炭水化物構造、または糖脂質を含む分子を指し、組織または細胞または分泌物におけるそれらの発現は、公知の方法（または本明細書において開示する方法）によって検出され得、かつ予期されるか、または処置レジームに対する細胞、組織、または患者の応答性を予期する（または予期を補助する）ために使用することができる。
「患者試料」とは、がん患者から得られた細胞または体液の収集物を意味する。組織または細胞試料の源は、新鮮、凍結、及び／または保存器官若しくは組織試料若しくは生検若しくは吸引液からなどの固体組織；血液または任意の血液成分；体液、例えば、脳脊髄液、羊水、腹膜液、または間質液；対象の妊娠または発育における任意の時からの細胞であってもよい。組織試料は、防腐剤、抗凝固剤、緩衝剤、固定剤、栄養素、抗生物質などの、本来は組織と自然には混合していない化合物を含んでよい。本明細書における腫瘍試料の例には、限定されないが、腫瘍生検、微細針吸引液、細気管支洗浄液、胸膜液、痰、尿、外科試料、循環腫瘍細胞、血清、血漿、循環血漿タンパク質、腹水、腫瘍に由来するか、若しくは腫瘍様特性を示す一次細胞培養物若しくは細胞系、さらには、保存腫瘍試料、例えば、ホルマリン固定、パラフィン包埋腫瘍試料、または凍結腫瘍試料が含まれる。
「〜の発現に基づき」という語句は、本明細書において使用する場合、発現レベルまたは発現の有無（例えば、本明細書における１種または複数種のバイオマーカーの有無または保有率（例えば、提示する細胞のパーセンテージ）（例えば、ＦｃＲ発現細胞の有無若しくは量若しくは保有率、または例えば、ヒトエフェクター細胞の有無若しくは量若しくは保有率）についての情報を、処置の決定、添付文書に示す情報、またはマーケティング／販売促進指針を告知するために使用することを意味する。
「ヒトエフェクター細胞を有する」がんまたは生体試料は、診断検査において、試料中に存在するヒトエフェクター細胞（例えば、浸潤性ヒトエフェクター細胞）を有する試料である。
「ＦｃＲ発現細胞を有する」がんまたは生体試料は、診断検査において、試料中に存在するＦｃＲ発現（例えば、浸潤性ＦｃＲ発現細胞）を有する試料である。一部の実施形態では、ＦｃＲは、ＦｃγＲである。一部の実施形態では、ＦｃＲは、活性化ＦｃγＲである。
「処置を推奨する」という語句は、本明細書において使用する場合、治療で適切に処置されるか、または適切に処置されない患者を特定するために、患者の試料中のｃ−ｍｅｔのレベルまたは存在に関して生成させた情報またはデータを使用することを指す。一部の実施形態では、治療は、ｃ−ｍｅｔ抗体（例えば、オナルツズマブ）を含んでよい。一部の実施形態では、治療は、ＶＥＧＦアンタゴニスト（例えば、ベバシズマブ）を含んでよい。一部の実施形態では、治療は、抗ヒトＯＸ４０アゴニスト抗体を含んでよい。情報またはデータは、文書、口頭、または電子の任意の形態であってもよい。一部の実施形態では、生成させた情報またはデータの使用には、連絡、提示、報告、記憶、送付、転送、供給、送信、送達、分配、またはそれらの組合せが含まれる。一部の実施形態では、連絡、提示、報告、記憶、送付、転送、供給、送信、送達、分配、またはそれらの組合せを、計算機デバイス、解析ユニット、またはそれらの組合せによって行う。一部のさらなる実施形態では、連絡、提示、報告、記憶、送付、転送、供給、送信、分配、またはそれらの組合せを個体が行う（例えば、実験室または医学の専門家）。一部の実施形態では、情報またはデータには、ＦｃＲ発現細胞の量または保有率と参照レベルとの比較が含まれる。一部の実施形態では、情報またはデータには、ヒトエフェクター細胞の量または保有率と参照レベルとの比較が含まれる。一部の実施形態では、情報またはデータには、ヒトエフェクター細胞またはＦｃＲ発現細胞が試料中に存在する、または存在しないことの表示が含まれる。一部の実施形態では、情報またはデータには、ＦｃＲ発現細胞及び／またはヒトエフェクター細胞が細胞の特定のパーセンテージ（例えば、高い保有率）で存在することの表示が含まれる。一部の実施形態では、情報またはデータには、患者が抗ヒトＯＸ４０アゴニスト抗体を含む治療で適切に処置されるか、または適切に処置されないことの表示が含まれる。
ＩＩ． 組成物及び方法
一態様では、本発明は、一部では、様々なＯＸ４０結合薬の特定に基づく。ある種の実施形態では、ヒトＯＸ４０に結合する抗体（例えば、アゴニスト抗体）を提供する。本発明の抗体は、例えば、ＯＸ４０発現及び／または活性に関連するがん及び他の障害の診断または処置に有用である。
Ａ． 例示的な抗ＯＸ４０抗体
一態様では、本発明は、ヒトＯＸ４０に結合する単離抗体を提供する。
一部の実施形態では、抗ヒトＯＸ４０アゴニスト抗体は、約０．４５ｎＭ以下の親和性でヒトＯＸ４０と結合する。一部の実施形態では、抗ヒトＯＸ４０抗体は、約０．４ｎＭ以下の親和性でヒトＯＸ４０と結合する。一部の実施形態では、抗ヒトＯＸ４０抗体は、約０．５ｎＭ以下の親和性でヒトＯＸ４０と結合する。一部の実施形態では、結合親和性を、ラジオイムノアッセイを使用して決定する。
一部の実施形態では、抗ヒトＯＸ４０アゴニスト抗体は、ヒトＯＸ４０及びカニクイザルＯＸ４０と結合する。一部の実施形態では、結合を、ＦＡＣＳアッセイを使用して決定する。一部の実施形態では、ヒトＯＸ４０への結合は、約０．２ｕｇ／ｍｌのＥＣ５０を有する。一部の実施形態では、ヒトＯＸ４０への結合は、約０．３ｕｇ／ｍｌ以下のＥＣ５０を有する。一部の実施形態では、カニクイザルＯＸ４０への結合は、約１．５ｕｇ／ｍｌのＥＣ５０を有する。一部の実施形態では、カニクイザルＯＸ４０への結合は、約１．４ｕｇ／ｍｌのＥＣ５０を有する。
一部の実施形態では、抗ヒトＯＸ４０アゴニスト抗体は、ラットＯＸ４０またはマウスＯＸ４０に結合しない。
一部の実施形態では、抗ヒトＯＸ４０アゴニスト抗体は、枯渇性抗ヒトＯＸ４０抗体である（例えば、ヒトＯＸ４０を発現する細胞を枯渇させる）。一部の実施形態では、ヒトＯＸ４０発現細胞は、ＣＤ４＋エフェクターＴ細胞である。一部の実施形態では、ヒトＯＸ４０発現細胞は、Ｔｒｅｇ細胞である。一部の実施形態では、枯渇は、ＡＤＣＣ及び／または食作用による。一部の実施形態では、抗体は、ヒトエフェクター細胞によって発現されるＦｃγＲと結合し、かつヒトエフェクター細胞機能を活性化させることによって、ＡＤＣＣを媒介する。一部の実施形態では、抗体は、ヒトエフェクター細胞によって発現されるＦｃγＲと結合し、かつヒトエフェクター細胞機能を活性化させることによって、食作用を媒介する。例示的なヒトエフェクター細胞には、例えば、マクロファージ、ナチュラルキラー（ＮＫ）細胞、単球、好中球が含まれる。一部の実施形態では、ヒトエフェクター細胞は、マクロファージである。一部の実施形態では、ヒトエフェクター細胞は、ＮＫ細胞である。一部の実施形態では、枯渇は、アポトーシスによらない。
一部の実施形態では、抗ヒトＯＸ４０アゴニスト抗体は、機能性Ｆｃ領域を有する。一部の実施形態では、機能性Ｆｃ領域のエフェクター機能は、ＡＤＣＣである。一部の実施形態では、機能性Ｆｃ領域のエフェクター機能は、食作用である。一部の実施形態では、機能性Ｆｃ領域のエフェクター機能は、ＡＤＣＣ及び食作用である。一部の実施形態では、Ｆｃ領域は、ヒトＩｇＧ１である。一部の実施形態では、Ｆｃ領域は、ヒトＩｇＧ４である。
一部の実施形態では、抗ヒトＯＸ４０アゴニスト抗体は、ＯＸ４０発現細胞（例えば、Ｔｒｅｇ）においてアポトーシスを誘発しない。一部の実施形態では、３０ｕｇ／ｍｌの抗体濃度を使用して、例えば、アネキシンＶ及びヨウ化プロプロジウム（ｐｒｏｐｒｏｄｉｕｍ ｉｏｄｉｄｅ）染色されたＴｒｅｇを使用してアポトーシスが生じているかどうかを決定することによって、アポトーシスをアッセイする。
一部の実施形態では、抗ヒトＯＸ４０アゴニスト抗体は、例えば、ＣＤ４＋エフェクターＴ細胞増殖の増大及び／またはＣＤ４＋エフェクターＴ細胞によるガンマインターフェロン産生の増大（例えば、抗ヒトＯＸ４０アゴニスト抗体での処置前の増殖及び／またはサイトカイン産生と比較した場合）によって、ＣＤ４＋エフェクターＴ細胞機能を増強する。一部の実施形態では、サイトカインは、ガンマインターフェロンである。一部の実施形態では、抗ヒトＯＸ４０アゴニスト抗体は、例えば、抗ヒトＯＸ４０アゴニスト抗体での処置前の腫瘍内（浸潤）ＣＤ４＋Ｔ細胞の数と比較した場合に、腫瘍内（浸潤）ＣＤ４＋エフェクターＴ細胞の数（例えば、ＣＤ４＋エフェクターＴ細胞の総数、または例えば、ＣＤ４５＋細胞におけるＣＤ４＋細胞のパーセンテージ）を増大させる。一部の実施形態では、抗ヒトＯＸ４０アゴニスト抗体は、例えば、抗ヒトＯＸ４０アゴニスト抗体での処置前の、ガンマインターフェロンを発現する腫瘍内（浸潤）ＣＤ４＋Ｔ細胞の数と比較した場合に、ガンマインターフェロンを発現する腫瘍内（浸潤）ＣＤ４＋エフェクターＴ細胞（例えば、全ガンマインターフェロン発現ＣＤ４＋細胞、または例えば、全ＣＤ４＋細胞中のガンマインターフェロン発現ＣＤ４＋細胞のパーセンテージ）の数を増大させる。
一部の実施形態では、抗ヒトＯＸ４０アゴニスト抗体は、例えば、抗ヒトＯＸ４０アゴニスト抗体での処置前の腫瘍内（浸潤）ＣＤ８＋Ｔエフェクター細胞の数と比較した場合に、腫瘍内（浸潤）ＣＤ８＋エフェクターＴ細胞の数（例えば、ＣＤ８＋エフェクターＴ細胞の総数、または例えば、ＣＤ４５＋細胞におけるＣＤ８＋のパーセンテージ）を増大させる。一部の実施形態では、抗ヒトＯＸ４０アゴニスト抗体は、例えば、抗ヒトＯＸ４０アゴニスト抗体での処置前の、ガンマインターフェロンを発現する腫瘍内（浸潤）ＣＤ８＋Ｔ細胞の数と比較した場合に、ガンマインターフェロンを発現する腫瘍内（浸潤）ＣＤ８＋エフェクターＴ細胞の数（例えば、全ＣＤ８＋細胞において、ガンマインターフェロンを発現するＣＤ８＋細胞のパーセンテージ）を増大させる。
一部の実施形態では、抗ヒトＯＸ４０アゴニスト抗体は、例えば、メモリーＴ細胞増殖の増大及び／またはメモリー細胞によるサイトカイン産生の増大によって、メモリーＴ細胞機能を増強する。一部の実施形態では、サイトカインは、ガンマインターフェロンである。
一部の実施形態では、抗ヒトＯＸ４０アゴニスト抗体は、例えば、エフェクターＴ細胞機能（例えば、エフェクターＴ細胞増殖及び／またはエフェクターＴ細胞サイトカイン分泌）のＴｒｅｇ抑制を低下させることによって、Ｔｒｅｇ機能を阻害する。一部の実施形態では、エフェクターＴ細胞は、ＣＤ４＋エフェクターＴ細胞である。一部の実施形態では、抗ヒトＯＸ４０アゴニスト抗体は、腫瘍内（浸潤）Ｔｒｅｇの数（例えば、Ｔｒｅｇの総数または例えば、ＣＤ４＋細胞におけるＦｏｘ３ｐ＋細胞のパーセンテージ）を低減させる。
一部の実施形態では、抗ヒトＯＸ４０アゴニスト抗体を、（例えば、野生型ＩｇＧ１におけるエフェクター機能と比較して）エフェクター機能を増大させるように操作する。一部の実施形態では、抗体は、Ｆｃγ受容体への結合を増大させている。一部の実施形態では、抗体は、Ｆｃ領域に（直接また間接に）付着するフコースを欠いている。例えば、そのような抗体におけるフコースの量は、１％〜８０％、１％〜６５％、５％〜６５％、または２０％〜４０％であってもよい。一部の実施形態では、Ｆｃ領域は、二分されたオリゴ糖を含み、例えば、抗体のＦｃ領域に付着した二分岐オリゴ糖が、ＧｌｃＮＡｃによって二分されている。一部の実施形態では、抗体は、ＡＤＣＣを向上させる１つまたは複数のアミノ酸置換、例えば、Ｆｃ領域の２９８、３３３、及び／または３３４位（残基のＥＵナンバリング）での置換を有するＦｃ領域を含む。
一部の実施形態では、抗ヒトＯＸ４０アゴニスト抗体は、ＯＸ４０を発現するターゲット細胞におけるＯＸ４０シグナル伝達を増大させる。一部の実施形態では、ＯＸ４０シグナル伝達を、ＮＦｋＢ下流シグナル伝達をモニターすることによって検出する。
一部の実施形態では、抗ヒトＯＸ４０アゴニスト抗体は、２週間にわたる４０℃での処理後に安定している。
一部の実施形態では、抗ヒトＯＸ４０アゴニスト抗体は、ヒトエフェクター細胞と結合する、例えば、ヒトエフェクター細胞によって発現されるＦｃγＲ（例えば、活性化ＦｃγＲ）と結合する。一部の実施形態では、ヒトエフェクター細胞は、ＡＤＣＣエフェクター機能を行う（行い得る）。一部の実施形態では、ヒトエフェクター細胞は、食作用エフェクター機能を行う（行い得る）。
一部の実施形態では、ヒトエフェクター細胞への結合を排除する変異（例えば、ＤＡＮＡ変異）を含む変異型ＩｇＧ１ Ｆｃポリペプチドを含む抗ヒトＯＸ４０アゴニスト抗体は、天然配列ＩｇＧ１ Ｆｃ部分を含む抗ヒトＯＸ４０アゴニスト抗体と比較して、減弱した活性（例えば、ＣＤ４＋エフェクターＴ細胞機能、例えば、増殖）を有する。一部の実施形態では、ヒトエフェクター細胞への結合を排除する変異（例えば、ＤＡＮＡ変異）を含む変異型ＩｇＧ１ Ｆｃポリペプチドを含む抗ヒトＯＸ４０アゴニスト抗体は、実質的な活性（例えば、ＣＤ４＋エフェクターＴ細胞機能、例えば、増殖）を保有しない。
一部の実施形態では、抗ヒトＯＸ４０アゴニスト抗体機能のために抗体架橋結合が必要とされる。一部の実施形態では、機能は、ＣＤ４＋エフェクターＴ細胞増殖の刺激である。一部の実施形態では、抗体架橋結合を、固体表面（例えば、細胞培養プレート）上に付着した抗ヒトＯＸ４０アゴニスト抗体を提供することによって決定する。一部の実施形態では、抗体のＩｇＧ１ Ｆｃ部分に変異（例えば、ＤＡＮＡ変異）を導入し、その変異型抗体の機能を試験することによって、抗体架橋結合を決定する。
一部の実施形態では、抗ヒトＯＸ４０アゴニスト抗体は、ヒトＯＸ４０への結合について、ＯＸ４０Ｌと競合する。一部の実施形態では、ＯＸ４０Ｌの添加は、ｉｎ ｖｉｔｒｏアッセイにおいて、抗ヒトＯＸ４０抗体機能を増強しない。
別の実施形態では、抗ヒトＯＸ４０アゴニスト抗体は、次の特性のいずれか１つ、いずれかの組合せ、またはすべてを含む：（１）約０．４５ｎＭ以下の親和性でヒトＯＸ４０と結合し、一部の実施形態では、約０．４ｎＭ以下の親和性でヒトＯＸ４０と結合し、一部の実施形態では、約０．５ｎＭ以下の親和性でヒトＯＸ４０と結合する（一部の実施形態では、この結合親和性は、ラジオイムノアッセイを使用して決定される）；（２）ヒトＯＸ４０及びカニクイザルＯＸ４０と結合する（一部の実施形態では、結合は、ＦＡＣＳアッセイを使用して決定される）、（３）約０．２ｕｇ／ｍｌのＥＣ５０でヒトＯＸ４０と結合し、一部の実施形態では、約０．３ｕｇ／ｍｌ以下のＥＣ５０でヒトＯＸ４０と結合し、一部の実施形態では、約１．５ｕｇ／ｍｌのＥＣ５０でカニクイザルＯＸ４０と結合し、一部の実施形態では、約１．４ｕｇ／ｍｌのＥＣ５０でカニクイザルＯＸ４０と結合する、（４）ラットＯＸ４０またはマウスＯＸ４０と実質的に結合しない、（６）枯渇性抗ヒトＯＸ４０抗体であり（例えば、ヒトＯＸ４０を発現する細胞を枯渇させる）、一部の実施形態では、細胞は、ＣＤ４＋エフェクターＴ細胞及び／またはＴｒｅｇ細胞である、（７）例えば、ＣＤ４＋エフェクターＴ細胞増殖の増大及び／またはＣＤ４＋エフェクターＴ細胞によるガンマインターフェロン産生の増大によって、ＣＤ４＋エフェクターＴ細胞機能を増強する（例えば、抗ヒトＯＸ４０アゴニスト抗体での処置前の増殖及び／またはサイトカイン産生と比較した場合）、（８）例えば、メモリーＴ細胞増殖の増大及び／またはメモリー細胞によるサイトカイン産生の増大によって、メモリーＴ細胞機能を増強する、（９）例えば、エフェクターＴ細胞機能（例えば、エフェクターＴ細胞増殖及び／またはエフェクターＴ細胞サイトカイン分泌）のＴｒｅｇ抑制を低下させることによって、Ｔｒｅｇ機能を阻害する。一部の実施形態では、エフェクターＴ細胞は、ＣＤ４＋エフェクターＴ細胞である、（１０）ＯＸ４０を発現するターゲット細胞におけるＯＸ４０シグナル伝達を増大させる（一部の実施形態では、ＯＸ４０シグナル伝達を、ＮＦｋＢ下流シグナル伝達をモニターすることによって検出する）、（１１）２週間にわたる４０℃での処置後に安定している、（１２）ヒトエフェクター細胞と結合する、例えば、ヒトエフェクター細胞によって発現されるＦｃγＲと結合する、（１３）ヒトエフェクター細胞への結合を排除する変異（例えば、Ｎ２９７Ｇ）を含む変異型ＩｇＧ１ Ｆｃポリペプチドを含む抗ヒトＯＸ４０アゴニスト抗体は、天然配列ＩｇＧ１ Ｆｃ部分を含む抗ヒトＯＸ４０アゴニスト抗体と比較して、減弱した活性（例えば、ＣＤ４＋エフェクターＴ細胞機能、例えば、増殖）を有し、一部の実施形態では、ヒトエフェクター細胞への結合を排除する変異（例えば、Ｎ２９７Ｇ）を含む変異型ＩｇＧ１ Ｆｃポリペプチドを含む抗ヒトＯＸ４０アゴニスト抗体は、実質的な活性（例えば、ＣＤ４＋エフェクターＴ細胞機能、例えば、増殖）を保有しない、（１４）抗ヒトＯＸ４０アゴニスト抗体機能のために抗体架橋結合（例えば、Ｆｃ受容体結合による）が必要とされる。
一態様では、本発明は、（ａ）配列番号２のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ１；（ｂ）配列番号３のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ２；（ｃ）配列番号４のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ３；（ｄ）配列番号５のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ１；（ｅ）配列番号６のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ２；及び（ｆ）配列番号７のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ３から選択される少なくとも１つ、２つ、３つ、４つ、５つ、または６つのＨＶＲを含む抗ヒトＯＸ４０アゴニスト抗体を提供する。
一態様では、本発明は、（ａ）配列番号２のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ１；（ｂ）配列番号３のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ２；及び（ｃ）配列番号４のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ３から選択される少なくとも１つ、少なくとも２つ、または３つすべてのＶＨ ＨＶＲ配列を含む抗ヒトＯＸ４０アゴニスト抗体を提供する。一実施形態では、抗体は、配列番号４のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ３を含む。別の実施形態では、抗体は、配列番号４のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ３、及び配列番号７のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ３を含む。さらなる実施形態では、抗体は、配列番号４のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ３、配列番号７のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ３、及び配列番号３のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ２を含む。さらなる実施形態では、抗体は、（ａ）配列番号２のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ１；（ｂ）配列番号３のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ２；及び（ｃ）配列番号４のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ３を含む。
別の態様では、本発明は、（ａ）配列番号５のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ１；（ｂ）配列番号６のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ２；及び（ｃ）配列番号７のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ３から選択される少なくとも１つ、少なくとも２つ、または３つすべてのＶＬ ＨＶＲ配列を含む抗ヒトＯＸ４０アゴニスト抗体を提供する。一実施形態では、抗体は、（ａ）配列番号５のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ１；（ｂ）配列番号６のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ２；及び（ｃ）配列番号７のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ３を含む。
別の態様では、本発明の抗ヒトＯＸ４０アゴニスト抗体は、（ａ）（ｉ）配列番号２のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ１、（ｉｉ）配列番号３のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ２、及び（ｉｉｉ）配列番号４から選択されるアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ３から選択される少なくとも１つ、少なくとも２つ、または３つすべてのＶＨ ＨＶＲ配列を含むＶＨドメイン；ならびに（ｂ）（ｉ）配列番号５のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ１、（ｉｉ）配列番号６のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ２、及び（ｃ）配列番号７のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ３から選択される少なくとも１つ、少なくとも２つ、または３つすべてのＶＬ ＨＶＲ配列を含むＶＬドメインを含む。
別の態様では、本発明は、（ａ）配列番号２のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ１；（ｂ）配列番号３のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ２；（ｃ）配列番号４のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ３；（ｄ）配列番号５のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ１；（ｅ）配列番号６のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ２；及び（ｆ）配列番号７から選択されるアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ３を含む抗ヒトＯＸ４０アゴニスト抗体を提供する。
一態様では、本発明は、（ａ）配列番号２のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ１；（ｂ）配列番号３のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ２；（ｃ）配列番号４のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ３；（ｄ）配列番号５のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ１；（ｅ）配列番号６のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ２；及び（ｆ）配列番号２６のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ３から選択される少なくとも１つ、２つ、３つ、４つ、５つ、または６つのＨＶＲを含む抗ヒトＯＸ４０アゴニスト抗体を提供する。
別の実施形態では、抗体は、配列番号４のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ３、及び配列番号２６のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ３を含む。さらなる実施形態では、抗体は、配列番号４のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ３、配列番号２６のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ３、及び配列番号３のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ２を含む。
別の態様では、本発明の抗体は、（ａ）（ｉ）配列番号２のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ１、（ｉｉ）配列番号３のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ２、及び（ｉｉｉ）配列番号４から選択されるアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ３から選択される少なくとも１つ、少なくとも２つ、または３つすべてのＶＨ ＨＶＲ配列を含むＶＨドメイン；ならびに（ｂ）（ｉ）配列番号５のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ１、（ｉｉ）配列番号６のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ２、及び（ｃ）配列番号２６のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ３から選択される少なくとも１つ、少なくとも２つ、または３つすべてのＶＬ ＨＶＲ配列を含むＶＬドメインを含む。
別の態様では、本発明は、（ａ）配列番号２のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ１；（ｂ）配列番号３のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ２；（ｃ）配列番号４のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ３；（ｄ）配列番号５のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ１；（ｅ）配列番号６のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ２；及び（ｆ）配列番号２６から選択されるアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ３を含む抗体を提供する。
一態様では、本発明は、（ａ）配列番号２のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ１；（ｂ）配列番号３のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ２；（ｃ）配列番号４のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ３；（ｄ）配列番号５のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ１；（ｅ）配列番号６のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ２；及び（ｆ）配列番号２７のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ３から選択される少なくとも１つ、２つ、３つ、４つ、５つ、または６つのＨＶＲを含む抗ヒトＯＸ４０アゴニスト抗体を提供する。
別の実施形態では、抗体は、配列番号４のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ３、及び配列番号２７のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ３を含む。さらなる実施形態では、抗体は、配列番号４のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ３、配列番号２７のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ３、及び配列番号３のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ２を含む。
別の態様では、本発明の抗体は、（ａ）（ｉ）配列番号２のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ１、（ｉｉ）配列番号３のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ２、及び（ｉｉｉ）配列番号４から選択されるアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ３から選択される少なくとも１つ、少なくとも２つ、または３つすべてのＶＨ ＨＶＲ配列を含むＶＨドメイン；ならびに（ｂ）（ｉ）配列番号５のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ１、（ｉｉ）配列番号６のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ２、及び（ｃ）配列番号２７のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ３から選択される少なくとも１つ、少なくとも２つ、または３つすべてのＶＬ ＨＶＲ配列を含むＶＬドメインを含む。
別の態様では、本発明は、（ａ）配列番号２のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ１；（ｂ）配列番号３のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ２；（ｃ）配列番号４のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ３；（ｄ）配列番号５のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ１；（ｅ）配列番号６のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ２；及び（ｆ）配列番号２７から選択されるアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ３を含む抗体を提供する。
一態様では、本発明は、（ａ）配列番号２、８、または９のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ１；（ｂ）配列番号３、１０、１１、１２、１３、または１４のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ２；（ｃ）配列番号４、１５、または１９のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ３；（ｄ）配列番号５のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ１；（ｅ）配列番号６のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ２；及び（ｆ）配列番号７、２２、２３、２４、２５、２６、２７、または２８のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ３から選択される少なくとも１つ、２つ、３つ、４つ、５つ、または６つのＨＶＲを含む抗ヒトＯＸ４０アゴニスト抗体を提供する。
一態様では、本発明は、（ａ）配列番号２、８、または９のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ１；（ｂ）配列番号３、１０、１１、１２、１３、または１４のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ２；及び（ｃ）配列番号４、１５、または１９のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ３から選択される少なくとも１つ、少なくとも２つ、または３つすべてのＶＨ ＨＶＲ配列を含む抗体を提供する。一実施形態では、抗体は、配列番号４、１５、または１９のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ３を含む。別の実施形態では、抗体は、配列番号４、１５、または１９のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ３及び配列番号７、２２、２３、２４、２５、２６、２７、または２８のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ３を含む。さらなる実施形態では、抗体は、配列番号４、１５、または１９のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ３、配列番号７、２２、２３、２４、２５、２６、２７、または２８のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ３、及び配列番号３、１０、１１、１２、１３、または１４のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ２を含む。さらなる実施形態では、抗体は、（ａ）配列番号２、８、または９のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ１；（ｂ）配列番号３、１０、１１、１２、１３、または１４のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ２；及び（ｃ）配列番号４、１５、または１９のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ３を含む。
別の態様では、本発明は、（ａ）配列番号５のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ１；（ｂ）配列番号６のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ２；及び（ｃ）配列番号７、２２、２３、２４、２５、２６、２７、または２８のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ３から選択される少なくとも１つ、少なくとも２つ、または３つすべてのＶＬ ＨＶＲ配列を含む抗体を提供する。一実施形態では、抗体は、（ａ）配列番号５のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ１；（ｂ）配列番号６のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ２；及び（ｃ）配列番号７、２２、２３、２４、２５、２６、２７、または２８のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ３を含む。
別の態様では、本発明の抗体は、（ａ）（ｉ）配列番号２、８、または９のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ１、（ｉｉ）配列番号３、１０、１１、１２、１３、または１４のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ２、及び（ｉｉｉ）配列番号４、１５、または１９から選択されるアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ３から選択される少なくとも１つ、少なくとも２つ、または３つすべてのＶＨ ＨＶＲ配列を含むＶＨドメイン；ならびに（ｂ）（ｉ）配列番号５のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ１、（ｉｉ）配列番号６のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ２、及び（ｃ）配列番号７、２２、２３、２４、２５、２６、２７、または２８のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ３から選択される少なくとも１つ、少なくとも２つ、または３つすべてのＶＬ ＨＶＲ配列を含むＶＬドメインを含む。
別の態様では、本発明は、（ａ）配列番号２、８、または９のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ１；（ｂ）配列番号３、１０、１１、１２、１３、または１４のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ２；（ｃ）配列番号４、１５、または１９のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ３；（ｄ）配列番号５のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ１；（ｅ）配列番号６のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ２；及び（ｆ）配列番号７、２２、２３、２４、２５、２６、２７、または２８から選択されるアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ３を含む抗体を提供する。
一態様では、本発明は、（ａ）配列番号１７２のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ１；（ｂ）配列番号１７３のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ２；（ｃ）配列番号１７４のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ３；（ｄ）配列番号５のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ１；（ｅ）配列番号６のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ２；及び（ｆ）配列番号１７５のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ３から選択される少なくとも１つ、２つ、３つ、４つ、５つ、または６つのＨＶＲを含む抗ヒトＯＸ４０アゴニスト抗体を提供する。一部の実施形態では、ＨＶＲ−Ｈ２は、ＤＭＹＰＤＡＡＡＡＳＹＮＱＫＦＲＥ（配列番号１９３）ではない。一部の実施形態では、ＨＶＲ−Ｈ３は、ＡＰＲＷＡＡＡＡ（配列番号１９４）ではない。一部の実施形態では、ＨＶＲ−Ｌ３は、ＱＡＡＡＡＡＡＡＴ（配列番号１９５）ではない。
一態様では、本発明は、（ａ）配列番号１７２のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ１；（ｂ）配列番号１７３のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ２；及び（ｃ）配列番号１７４のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ３から選択される少なくとも１つ、少なくとも２つ、または３つすべてのＶＨ ＨＶＲ配列を含む抗体を提供する。一実施形態では、抗体は、配列番号１７４のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ３を含む。別の実施形態では、抗体は、配列番号１７４のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ３、及び配列番号１７５のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ３を含む。さらなる実施形態では、抗体は、配列番号１７４のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ３、配列番号１７５のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ３、及び配列番号１７３のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ２を含む。さらなる実施形態では、抗体は、（ａ）配列番号１７２のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ１；（ｂ）配列番号１７３のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ２；及び（ｃ）配列番号１７４のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ３を含む。一部の実施形態では、ＨＶＲ−Ｈ２は、ＤＭＹＰＤＡＡＡＡＳＹＮＱＫＦＲＥ（配列番号１９３）ではない。一部の実施形態では、ＨＶＲ−Ｈ３は、ＡＰＲＷＡＡＡＡ（配列番号１９４）ではない。一部の実施形態では、ＨＶＲ−Ｌ３は、ＱＡＡＡＡＡＡＡＴ（配列番号１９５）ではない。
別の態様では、本発明は、（ａ）配列番号５のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ１；（ｂ）配列番号６のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ２；及び（ｃ）配列番号１７５のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ３を含む抗体を提供する。一部の実施形態では、ＨＶＲ−Ｌ３は、ＱＡＡＡＡＡＡＡＴ（配列番号１９５）ではない。
別の態様では、本発明の抗体は、（ａ）（ｉ）配列番号１７２のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ１、（ｉｉ）配列番号１７３のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ２、及び（ｉｉｉ）配列番号１７４から選択されるミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ３から選択される少なくとも１つ、少なくとも２つ、または３つすべてのＶＨ ＨＶＲ配列を含むＶＨドメイン；ならびに（ｂ）（ｉ）配列番号５のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ１、（ｉｉ）配列番号６のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ２、及び（ｃ）配列番号１７５のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ３から選択される少なくとも１つ、少なくとも２つ、または３つすべてのＶＬ ＨＶＲ配列を含むＶＬドメインを含む。
別の態様では、本発明は、（ａ）配列番号１７２のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ１；（ｂ）配列番号１７３のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ２；（ｃ）配列番号１７４のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ３；（ｄ）配列番号５のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ１；（ｅ）配列番号６のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ２、及び（ｆ）配列番号１７５から選択されるアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ３を含む抗体を提供する。一部の実施形態では、ＨＶＲ−Ｈ２は、ＤＭＹＰＤＡＡＡＡＳＹＮＱＫＦＲＥ（配列番号１９３）ではない。一部の実施形態では、ＨＶＲ−Ｈ３は、ＡＰＲＷＡＡＡＡ（配列番号１９４）ではない。一部の実施形態では、ＨＶＲ−Ｌ３は、ＱＡＡＡＡＡＡＡＴ（配列番号１９５）ではない。
上記置換の考えられ得るすべての組合せが、配列番号１７２、１７３、１７４、及び１７５のコンセンサス配列に包含される。
一態様では、本発明は、（ａ）配列番号２９のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ１；（ｂ）配列番号３０のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ２；（ｃ）配列番号３３のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ３；（ｄ）配列番号３７のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ１；（ｅ）配列番号３９のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ２；及び（ｆ）配列番号４２のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ３から選択される少なくとも１つ、２つ、３つ、４つ、５つ、または６つのＨＶＲを含む抗ヒトＯＸ４０アゴニスト抗体を提供する。
一態様では、本発明は、（ａ）配列番号２９のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ１；（ｂ）配列番号３０のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ２；及び（ｃ）配列番号３３のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ３から選択される少なくとも１つ、少なくとも２つ、または３つすべてのＶＨ ＨＶＲ配列を含む抗体を提供する。一実施形態では、抗体は、配列番号３３のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ３を含む。別の実施形態では、抗体は、配列番号３３のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ３、及び配列番号４２のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ３を含む。さらなる実施形態では、抗体は、配列番号３３のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ３、配列番号４２のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ３、及び配列番号３０のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ２を含む。さらなる実施形態では、抗体は、（ａ）配列番号２９のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ１；（ｂ）配列番号３０のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ２；及び（ｃ）配列番号３３のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ３を含む。
別の態様では、本発明は、（ａ）配列番号３７のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ１；（ｂ）配列番号３９のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ２；及び（ｃ）配列番号４２のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ３から選択される少なくとも１つ、少なくとも２つ、または３つすべてのＶＬ ＨＶＲ配列を含む抗体を提供する。一実施形態では、抗体は、（ａ）配列番号３７のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ１；（ｂ）配列番号３９のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ２；及び（ｃ）配列番号４２のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ３を含む。
別の態様では、本発明の抗体は、（ａ）（ｉ）配列番号２９のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ１、（ｉｉ）配列番号３０のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ２、及び（ｉｉｉ）配列番号３３から選択されるアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ３から選択される少なくとも１つ、少なくとも２つ、または３つすべてのＶＨ ＨＶＲ配列を含むＶＨドメイン；ならびに（ｂ）（ｉ）配列番号３７のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ１、（ｉｉ）配列番号３９のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ２、及び（ｃ）配列番号４２のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ３から選択される少なくとも１つ、少なくとも２つ、または３つすべてのＶＬ ＨＶＲ配列を含むＶＬドメインを含む。
別の態様では、本発明は、（ａ）配列番号２９のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ１；（ｂ）配列番号３０のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ２；（ｃ）配列番号３３のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ３；（ｄ）配列番号３７のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ１；（ｅ）配列番号３９のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ２；及び（ｆ）配列番号４２から選択されるアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ３を含む抗体を提供する。
一態様では、本発明は、（ａ）配列番号２９のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ１；（ｂ）配列番号３０のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ２；（ｃ）配列番号３３のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ３；（ｄ）配列番号３７のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ１；（ｅ）配列番号４０のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ２；及び（ｆ）配列番号４２のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ３から選択される少なくとも１つ、２つ、３つ、４つ、５つ、または６つのＨＶＲを含む抗ヒトＯＸ４０アゴニスト抗体を提供する。
別の態様では、本発明は、（ａ）配列番号３７のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ１；（ｂ）配列番号４０のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ２；及び（ｃ）配列番号４２のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ３から選択される少なくとも１つ、少なくとも２つ、または３つすべてのＶＬ ＨＶＲ配列を含む抗体を提供する。一実施形態では、抗体は、（ａ）配列番号３７のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ１；（ｂ）配列番号４０のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ２；及び（ｃ）配列番号４２のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ３を含む。
別の態様では、本発明の抗体は、（ａ）（ｉ）配列番号２９のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ１、（ｉｉ）配列番号３０のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ２、及び（ｉｉｉ）配列番号３３から選択されるアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ３から選択される少なくとも１つ、少なくとも２つ、または３つすべてのＶＨ ＨＶＲ配列を含むＶＨドメイン；ならびに（ｂ）（ｉ）配列番号３７のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ１、（ｉｉ）配列番号４０のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ２、及び（ｃ）配列番号４２のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ３から選択される少なくとも１つ、少なくとも２つ、または３つすべてのＶＬ ＨＶＲ配列を含むＶＬドメインを含む。
別の態様では、本発明は、（ａ）配列番号２９のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ１；（ｂ）配列番号３０のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ２；（ｃ）配列番号３３のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ３；（ｄ）配列番号３７のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ１；（ｅ）配列番号４０のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ２；及び（ｆ）配列番号４２から選択されるアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ３を含む抗体を提供する。
一態様では、本発明は、（ａ）配列番号２９のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ１；（ｂ）配列番号３０、３１、または３２のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ２；（ｃ）配列番号３３のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ３；（ｄ）配列番号３７のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ１；（ｅ）配列番号３９、４０、または４１のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ２；及び（ｆ）配列番号４２、４３、または４４のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ３から選択される少なくとも１つ、２つ、３つ、４つ、５つ、または６つのＨＶＲを含む抗ヒトＯＸ４０アゴニスト抗体を提供する。
一態様では、本発明は、（ａ）配列番号２９のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ１；（ｂ）配列番号３０、３１、または３２のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ２；及び（ｃ）配列番号３３のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ３から選択される少なくとも１つ、少なくとも２つ、または３つすべてのＶＨ ＨＶＲ配列を含む抗体を提供する。別の実施形態では、抗体は、配列番号３３のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ３、及び配列番号４２、４３、または４４のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ３を含む。さらなる実施形態では、抗体は、配列番号３３のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ３、配列番号４２、４３、または４４のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ３、及び配列番号３９、４０、または４１のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ２を含む。さらなる実施形態では、抗体は、（ａ）配列番号２９のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ１；（ｂ）配列番号３０、３１、または３２のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ２；及び（ｃ）配列番号３３のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ３を含む。
別の態様では、本発明は、（ａ）配列番号３７のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ１；（ｂ）配列番号３９、４０、または４１のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ２；及び（ｃ）配列番号４２、４３、または４４のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ３から選択される少なくとも１つ、少なくとも２つ、または３つすべてのＶＬ ＨＶＲ配列を含む抗体を提供する。一実施形態では、抗体は、（ａ）配列番号３７のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ１；（ｂ）配列番号３９、４０、または４１のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ２；及び（ｃ）配列番号４２、４３、または４４のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ３を含む。
別の態様では、本発明の抗体は、（ａ）（ｉ）配列番号２９のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ１、（ｉｉ）配列番号３０、３１、または３２のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ２、及び（ｉｉｉ）配列番号３３から選択されるアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ３から選択される少なくとも１つ、少なくとも２つ、または３つすべてのＶＨ ＨＶＲ配列を含むＶＨドメイン；ならびに（ｂ）（ｉ）配列番号３７のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ１、（ｉｉ）配列番号３９、４０、または４１のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ２、及び（ｃ）配列番号４２、４３、または４４のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ３から選択される少なくとも１つ、少なくとも２つ、または３つすべてのＶＬ ＨＶＲ配列を含むＶＬドメインを含む。
別の態様では、本発明は、（ａ）配列番号２９のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ１；（ｂ）配列番号３０、３１、または３２のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ２；（ｃ）配列番号３３のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ３；（ｄ）配列番号３７のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ１；（ｅ）配列番号３９、４０、または４１のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ２；及び（ｆ）配列番号４２、４３、または４４から選択されるアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ３を含む抗体を提供する。
一態様では、本発明は、（ａ）配列番号２９のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ１；（ｂ）配列番号１７５のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ２；（ｃ）配列番号３３のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ３；（ｄ）配列番号３７のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ１；（ｅ）配列番号１７７のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ２；及び（ｆ）配列番号１７８のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ３から選択される少なくとも１つ、２つ、３つ、４つ、５つ、または６つのＨＶＲを含む抗ヒトＯＸ４０アゴニスト抗体を提供する。
一態様では、本発明は、（ａ）配列番号２９のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ１；（ｂ）配列番号１７５のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ２；及び（ｃ）配列番号３３のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ３から選択される少なくとも１つ、少なくとも２つ、または３つすべてのＶＨ ＨＶＲ配列を含む抗体を提供する。別の実施形態では、抗体は、配列番号３３のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ３、及び配列番号１７７のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ３を含む。さらなる実施形態では、抗体は、配列番号３３のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ３、配列番号１７８のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ３、及び配列番号１７６のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ２を含む。さらなる実施形態では、抗体は、（ａ）配列番号２９のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ１；（ｂ）配列番号１７６のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ２；及び（ｃ）配列番号３３のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ３を含む。
別の態様では、本発明は、（ａ）配列番号３７のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ１；（ｂ）配列番号１７７のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ２；及び（ｃ）配列番号１７７のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ３から選択される少なくとも１つ、少なくとも２つ、または３つすべてのＶＬ ＨＶＲ配列を含む抗体を提供する。一実施形態では、抗体は、（ａ）配列番号３７のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ１；（ｂ）配列番号１７７のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ２；及び（ｃ）配列番号１７８のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ３を含む。
別の態様では、本発明の抗体は、（ａ）（ｉ）配列番号２９のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ１、（ｉｉ）配列番号１７６のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ２、及び（ｉｉｉ）配列番号３３から選択されるアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ３から選択される少なくとも１つ、少なくとも２つ、または３つすべてのＶＨ ＨＶＲ配列を含むＶＨドメイン；ならびに（ｂ）（ｉ）配列番号３７のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ１、（ｉｉ）配列番号１７７のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ２、及び（ｃ）配列番号１７８のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ３から選択される少なくとも１つ、少なくとも２つ、または３つすべてのＶＬ ＨＶＲ配列を含むＶＬドメインを含む。
別の態様では、本発明は、（ａ）配列番号２９のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ１；（ｂ）配列番号１７６のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ２；（ｃ）配列番号３３のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ３；（ｄ）配列番号３７のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ１；（ｅ）配列番号１７７のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ２；及び（ｆ）配列番号１７８から選択されるアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ３を含む抗体を提供する。
上記の実施形態のいずれかでは、抗ＯＸ４０アゴニスト抗体をヒト化する。一実施形態では、抗ＯＸ４０抗体は、上記の実施形態のいずれかにおいてのとおりか、または図１１Ａ〜Ｉ中の実施形態のいずれかでのＨＶＲを含み、さらに、アクセプターヒトフレームワーク、例えば、ヒト免疫グロブリンフレームワークまたはヒトコンセンサスフレームワークを含む。別の実施形態では、抗ＯＸ４０抗体は、上記の実施形態のいずれかにおいてのとおりのＨＶＲを含み、さらに、図１１Ａ〜Ｉにおいて示されているＦＲ配列を含むＶＨ及び／またはＶＬを含む。
別の態様では、抗ヒトＯＸ４０アゴニスト抗体は、配列番号５６、５８、６０、６２、６４、６６、６８、７０、７２、７４、７６、７８、８０、８２、８４、８６、８８、９０、９２、９４、９６、９８、１００、１０８、１１４、１１６、１８３、または１８４のアミノ酸配列に対して少なくとも９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、または１００％配列同一性を有する重鎖可変ドメイン（ＶＨ）配列を含む。ある種の実施形態では、少なくとも９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、または９９％同一性を有するＶＨ配列は、参照配列に対して置換（例えば、保存的置換）、挿入、または欠失を含むが、その配列を含む抗ヒトＯＸ４０アゴニスト抗体は、ＯＸ４０に結合する能力を保持する。ある種の実施形態では、配列番号５６、５８、６０、６２、６４、６６、６８、７０、７２、７４、７６、７８、８０、８２、８４、８６、８８、９０、９２、９４、９６、９８、１００、１０８、１１４、１１６、１８３、または１８４において、合計１〜１０個のアミノ酸が置換、挿入、及び／または欠失されている。ある種の実施形態では、置換、挿入、または欠失は、ＨＶＲの外側の領域において（すなわち、ＦＲにおいて）生じる。任意選択的に、抗ヒトＯＸ４０アゴニスト抗体は、配列番号５６、５８、６０、６２、６４、６６、６８、７０、７２、７４、７６、７８、８０、８２、８４、８６、８８、９０、９２、９４、９６、９８、１００、１０８、１１４、１１６、１８３、または１８４におけるＶＨ配列（その配列の翻訳後修飾を含む）を含む。特定の実施形態では、ＶＨは、（ａ）配列番号２のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ１、（ｂ）配列番号３のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ２、及び（ｃ）配列番号４のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ３から選択される１つ、２つ、または３つのＨＶＲを含む。
別の態様では、配列番号５７、５９、６１、６３、６５、６７、６９、７１、７３、７５、７７、７９、８１、８３、８５、８７、８９、９１、９３、９５、９７、９９、１０１、１０９、１１５、または１１７のアミノ酸配列に対して少なくとも９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、または１００％配列同一性を有する軽鎖可変ドメイン（ＶＬ）を含む抗ヒトＯＸ４０アゴニスト抗体を提供する。ある種の実施形態では、少なくとも９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、または９９％同一性を有するＶＬ配列は、参照配列に対して置換（例えば、保存的置換）、挿入、または欠失を含むが、その配列を含む抗ヒトＯＸ４０アゴニスト抗体は、ＯＸ４０に結合する能力を保持する。ある種の実施形態では、配列番号５７、５９、６１、６３、６５、６７、６９、７１、７３、７５、７７、７９、８１、８３、８５、８７、８９、９１、９３、９５、９７、９９、１０１、１０９、１１５、または１１７において、合計１〜１０個のアミノ酸が置換、挿入、及び／または欠失されている。ある種の実施形態では、置換、挿入、または欠失は、ＨＶＲの外側の領域において（すなわち、ＦＲにおいて）生じる。任意選択的に、抗ヒトＯＸ４０アゴニスト抗体は、配列番号５７、５９、６１、６３、６５、６７、６９、７１、７３、７５、７７、７９、８１、８３、８５、８７、８９、９１、９３、９５、９７、９９、１０１、１０９、１１５、または１１７におけるＶＬ配列（その配列の翻訳後修飾を含む）を含む。特定の実施形態では、ＶＬは、（ａ）配列番号５のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ１；（ｂ）配列番号６のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ２、及び（ｃ）配列番号７のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ３から選択される１つ、２つ、または３つのＨＶＲを含む。
別の態様では、抗ヒトＯＸ４０アゴニスト抗体は、配列番号５６のアミノ酸配列に対して少なくとも９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、または１００％配列同一性を有する重鎖可変ドメイン（ＶＨ）配列を含む。ある種の実施形態では、少なくとも９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、または９９％同一性を有するＶＨ配列は、参照配列に対して置換（例えば、保存的置換）、挿入、または欠失を含むが、その配列を含む抗ヒトＯＸ４０アゴニスト抗体は、ＯＸ４０に結合する能力を保持する。ある種の実施形態では、配列番号５６において、合計１〜１０個のアミノ酸が置換、挿入、及び／または欠失されている。ある種の実施形態では、置換、挿入、または欠失は、ＨＶＲの外側の領域において（すなわち、ＦＲにおいて）生じる。任意選択的に、抗ヒトＯＸ４０アゴニスト抗体は、配列番号５６におけるＶＨ配列（その配列の翻訳後修飾を含む）を含む。特定の実施形態では、ＶＨは、（ａ）配列番号２のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ１、（ｂ）配列番号３のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ２、及び（ｃ）配列番号４のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ３から選択される１つ、２つ、または３つのＨＶＲを含む。
別の態様では、配列番号５７のアミノ酸配列に対して少なくとも９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、または１００％配列同一性を有する軽鎖可変ドメイン（ＶＬ）を含む抗ヒトＯＸ４０アゴニスト抗体を提供する。ある種の実施形態では、少なくとも９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、または９９％同一性を有するＶＬ配列は、参照配列に対して置換（例えば、保存的置換）、挿入、または欠失を含むが、その配列を含む抗ヒトＯＸ４０アゴニスト抗体は、ＯＸ４０に結合する能力を保持する。ある種の実施形態では、配列番号５７において、合計１〜１０個のアミノ酸が置換、挿入、及び／または欠失されている。ある種の実施形態では、置換、挿入、または欠失は、ＨＶＲの外側の領域において（すなわち、ＦＲにおいて）生じる。任意選択的に、抗ヒトＯＸ４０アゴニスト抗体は、配列番号５７におけるＶＬ配列（その配列の翻訳後修飾を含む）を含む。特定の実施形態では、ＶＬは、（ａ）配列番号５のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ１；（ｂ）配列番号６のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ２、及び（ｃ）配列番号７のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ３から選択される１つ、２つ、または３つのＨＶＲを含む。
別の態様では、抗ヒトＯＸ４０アゴニスト抗体は、配列番号１８０のアミノ酸配列に対して少なくとも９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、または１００％配列同一性を有する重鎖可変ドメイン（ＶＨ）配列を含む。ある種の実施形態では、少なくとも９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、または９９％同一性を有するＶＨ配列は、参照配列に対して置換（例えば、保存的置換）、挿入、または欠失を含むが、その配列を含む抗ヒトＯＸ４０アゴニスト抗体は、ＯＸ４０に結合する能力を保持する。ある種の実施形態では、配列番号１８０において、合計１〜１０個のアミノ酸が置換、挿入、及び／または欠失されている。ある種の実施形態では、置換、挿入、または欠失は、ＨＶＲの外側の領域において（すなわち、ＦＲにおいて）生じる。任意選択的に、抗ヒトＯＸ４０アゴニスト抗体は、配列番号１８０におけるＶＨ配列（その配列の翻訳後修飾を含む）を含む。特定の実施形態では、ＶＨは、（ａ）配列番号２のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ１、（ｂ）配列番号３のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ２、及び（ｃ）配列番号４のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ３から選択される１つ、２つ、または３つのＨＶＲを含む。
別の態様では、配列番号１７９のアミノ酸配列に対して少なくとも９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、または１００％配列同一性を有する軽鎖可変ドメイン（ＶＬ）を含む抗ヒトＯＸ４０アゴニスト抗体を提供する。ある種の実施形態では、少なくとも９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、または９９％同一性を有するＶＬ配列は、参照配列に対して置換（例えば、保存的置換）、挿入、または欠失を含むが、その配列を含む抗ヒトＯＸ４０アゴニスト抗体は、ＯＸ４０に結合する能力を保持する。ある種の実施形態では、配列番号１７９において、合計１〜１０個のアミノ酸が置換、挿入、及び／または欠失されている。ある種の実施形態では、置換、挿入、または欠失は、ＨＶＲの外側の領域において（すなわち、ＦＲにおいて）生じる。任意選択的に、抗ヒトＯＸ４０アゴニスト抗体は、配列番号１７９におけるＶＬ配列（その配列の翻訳後修飾を含む）を含む。特定の実施形態では、ＶＬは、（ａ）配列番号５のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ１；（ｂ）配列番号６のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ２、及び（ｃ）配列番号７のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ３から選択される１つ、２つ、または３つのＨＶＲを含む。
別の態様では、抗ヒトＯＸ４０アゴニスト抗体は、配列番号９４のアミノ酸配列に対して少なくとも９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、または１００％配列同一性を有する重鎖可変ドメイン（ＶＨ）配列を含む。ある種の実施形態では、少なくとも９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、または９９％同一性を有するＶＨ配列は、参照配列に対して置換（例えば、保存的置換）、挿入、または欠失を含むが、その配列を含む抗ヒトＯＸ４０アゴニスト抗体は、ＯＸ４０に結合する能力を保持する。ある種の実施形態では、配列番号９４において、合計１〜１０個のアミノ酸が置換、挿入、及び／または欠失されている。ある種の実施形態では、置換、挿入、または欠失は、ＨＶＲの外側の領域において（すなわち、ＦＲにおいて）生じる。任意選択的に、抗ヒトＯＸ４０アゴニスト抗体は、配列番号９４におけるＶＨ配列（その配列の翻訳後修飾を含む）を含む。特定の実施形態では、ＶＨは、（ａ）配列番号２のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ１、（ｂ）配列番号３のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ２、及び（ｃ）配列番号４のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ３から選択される１つ、２つ、または３つのＨＶＲを含む。
別の態様では、配列番号９５のアミノ酸配列に対して少なくとも９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、または１００％配列同一性を有する軽鎖可変ドメイン（ＶＬ）を含む抗ヒトＯＸ４０アゴニスト抗体を提供する。ある種の実施形態では、少なくとも９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、または９９％同一性を有するＶＬ配列は、参照配列に対して置換（例えば、保存的置換）、挿入、または欠失を含むが、その配列を含む抗ヒトＯＸ４０アゴニスト抗体は、ＯＸ４０に結合する能力を保持する。ある種の実施形態では、配列番号９５において、合計１〜１０個のアミノ酸が置換、挿入、及び／または欠失されている。ある種の実施形態では、置換、挿入、または欠失は、ＨＶＲの外側の領域において（すなわち、ＦＲにおいて）生じる。任意選択的に、抗ヒトＯＸ４０アゴニスト抗体は、配列番号９５におけるＶＬ配列（その配列の翻訳後修飾を含む）を含む。特定の実施形態では、ＶＬは、（ａ）配列番号５のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ１；（ｂ）配列番号６のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ２、及び（ｃ）配列番号２６のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ３から選択される１つ、２つ、または３つのＨＶＲを含む。
別の態様では、抗ヒトＯＸ４０アゴニスト抗体は、配列番号９６のアミノ酸配列に対して少なくとも９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、または１００％配列同一性を有する重鎖可変ドメイン（ＶＨ）配列を含む。ある種の実施形態では、少なくとも９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、または９９％同一性を有するＶＨ配列は、参照配列に対して置換（例えば、保存的置換）、挿入、または欠失を含むが、その配列を含む抗ヒトＯＸ４０アゴニスト抗体は、ＯＸ４０に結合する能力を保持する。ある種の実施形態では、配列番号９６において、合計１〜１０個のアミノ酸が置換、挿入、及び／または欠失されている。ある種の実施形態では、置換、挿入、または欠失は、ＨＶＲの外側の領域において（すなわち、ＦＲにおいて）生じる。任意選択的に、抗ヒトＯＸ４０アゴニスト抗体は、配列番号９６におけるＶＨ配列（その配列の翻訳後修飾を含む）を含む。特定の実施形態では、ＶＨは、（ａ）配列番号２のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ１、（ｂ）配列番号３のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ２、及び（ｃ）配列番号４のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ３から選択される１つ、２つ、または３つのＨＶＲを含む。
別の態様では、配列番号９７のアミノ酸配列に対して少なくとも９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、または１００％配列同一性を有する軽鎖可変ドメイン（ＶＬ）を含む抗ヒトＯＸ４０アゴニスト抗体を提供する。ある種の実施形態では、少なくとも９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、または９９％同一性を有するＶＬ配列は、参照配列に対して置換（例えば、保存的置換）、挿入、または欠失を含むが、その配列を含む抗ヒトＯＸ４０アゴニスト抗体は、ＯＸ４０に結合する能力を保持する。ある種の実施形態では、配列番号９７において、合計１〜１０個のアミノ酸が置換、挿入、及び／または欠失されている。ある種の実施形態では、置換、挿入、または欠失は、ＨＶＲの外側の領域において（すなわち、ＦＲにおいて）生じる。任意選択的に、抗ヒトＯＸ４０アゴニスト抗体は、配列番号９７におけるＶＬ配列（その配列の翻訳後修飾を含む）を含む。特定の実施形態では、ＶＬは、（ａ）配列番号５のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ１；（ｂ）配列番号６のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ２、及び（ｃ）配列番号２７のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ３から選択される１つ、２つ、または３つのＨＶＲを含む。
別の態様では、抗ヒトＯＸ４０アゴニスト抗体は、配列番号１１８、１２０、１２２、１２４、１２６、１２８、１３０、１３２、１３４、１３６、１３８、１４０、１４２、１４４、１４６、１４８のアミノ酸配列に対して少なくとも９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、または１００％配列同一性を有する重鎖可変ドメイン（ＶＨ）配列を含む。ある種の実施形態では、少なくとも９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、または９９％同一性を有するＶＨ配列は、参照配列に対して置換（例えば、保存的置換）、挿入、または欠失を含むが、その配列を含む抗ヒトＯＸ４０アゴニスト抗体は、ＯＸ４０に結合する能力を保持する。ある種の実施形態では、配列番号１１８、１２０、１２２、１２４、１２６、１２８、１３０、１３２、１３４、１３６、１３８、１４０、１４２、１４４、１４６、１４８において、合計１〜１０個のアミノ酸が置換、挿入、及び／または欠失されている。ある種の実施形態では、置換、挿入、または欠失は、ＨＶＲの外側の領域において（すなわち、ＦＲにおいて）生じる。任意選択的に、抗ヒトＯＸ４０アゴニスト抗体は、配列番号１１８、１２０、１２２、１２４、１２６、１２８、１３０、１３２、１３４、１３６、１３８、１４０、１４２、１４４、１４６、１４８におけるＶＨ配列（その配列の翻訳後修飾を含む）を含む。特定の実施形態では、ＶＨは、（ａ）配列番号２９のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ１、（ｂ）配列番号３０のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ２、及び（ｃ）配列番号３３のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ３から選択される１つ、２つ、または３つのＨＶＲを含む。
別の態様では、配列番号１１９、１２１、１２３、１２５、１２７、１２９、１３１、１３３、１３５、１３７、１３９、１４１、１４３、１４５、１４７、１４９のアミノ酸配列に対して少なくとも９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、または１００％配列同一性を有する軽鎖可変ドメイン（ＶＬ）を含む抗ヒトＯＸ４０アゴニスト抗体を提供する。ある種の実施形態では、少なくとも９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、または９９％同一性を有するＶＬ配列は、参照配列に対して置換（例えば、保存的置換）、挿入、または欠失を含むが、その配列を含む抗ヒトＯＸ４０アゴニスト抗体は、ＯＸ４０に結合する能力を保持する。ある種の実施形態では、配列番号１１９、１２１、１２３、１２５、１２７、１２９、１３１、１３３、１３５、１３７、１３９、１４１、１４３、１４５、１４７、１４９において、合計１〜１０個のアミノ酸が置換、挿入、及び／または欠失されている。ある種の実施形態では、置換、挿入、または欠失は、ＨＶＲの外側の領域において（すなわち、ＦＲにおいて）生じる。任意選択的に、抗ヒトＯＸ４０アゴニスト抗体は、配列番号１１９、１２１、１２３、１２５、１２７、１２９、１３１、１３３、１３５、１３７、１３９、１４１、１４３、１４５、１４７、１４９におけるＶＬ配列（その配列の翻訳後修飾を含む）を含む。特定の実施形態では、ＶＬは、（ａ）配列番号３７のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ１；（ｂ）配列番号３９のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ２；及び（ｃ）配列番号４２のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ３から選択される１つ、２つ、または３つのＨＶＲを含む。
一実施形態では、抗体は、それぞれ配列番号５６及び配列番号５７におけるＶＨ及びＶＬ配列（それらの配列の翻訳後修飾を含む）を含む。一実施形態では、抗体は、それぞれ配列番号５８及び配列番号５９におけるＶＨ及びＶＬ配列（それらの配列の翻訳後修飾を含む）を含む。一実施形態では、抗体は、それぞれ配列番号６０及び配列番号６１におけるＶＨ及びＶＬ配列（それらの配列の翻訳後修飾を含む）を含む。一実施形態では、抗体は、それぞれ配列番号６２及び配列番号６３におけるＶＨ及びＶＬ配列（それらの配列の翻訳後修飾を含む）を含む。一実施形態では、抗体は、それぞれ配列番号６４及び配列番号６５におけるＶＨ及びＶＬ配列（それらの配列の翻訳後修飾を含む）を含む。一実施形態では、抗体は、それぞれ配列番号６６及び配列番号６７におけるＶＨ及びＶＬ配列（それらの配列の翻訳後修飾を含む）を含む。一実施形態では、抗体は、それぞれ配列番号６８及び配列番号６９におけるＶＨ及びＶＬ配列（それらの配列の翻訳後修飾を含む）を含む。一実施形態では、抗体は、それぞれ配列番号７０及び配列番号７１におけるＶＨ及びＶＬ配列（それらの配列の翻訳後修飾を含む）を含む。一実施形態では、抗体は、それぞれ配列番号７２及び配列番号７３におけるＶＨ及びＶＬ配列（それらの配列の翻訳後修飾を含む）を含む。一実施形態では、抗体は、それぞれ配列番号７４及び配列番号７５におけるＶＨ及びＶＬ配列（それらの配列の翻訳後修飾を含む）を含む。一実施形態では、抗体は、それぞれ配列番号７６及び配列番号７７におけるＶＨ及びＶＬ配列（それらの配列の翻訳後修飾を含む）を含む。一実施形態では、抗体は、それぞれ配列番号７８及び配列番号７９におけるＶＨ及びＶＬ配列（それらの配列の翻訳後修飾を含む）を含む。一実施形態では、抗体は、それぞれ配列番号８０及び配列番号８１におけるＶＨ及びＶＬ配列（それらの配列の翻訳後修飾を含む）を含む。一実施形態では、抗体は、それぞれ配列番号８２及び配列番号８３におけるＶＨ及びＶＬ配列（それらの配列の翻訳後修飾を含む）を含む。一実施形態では、抗体は、それぞれ配列番号８４及び配列番号８５におけるＶＨ及びＶＬ配列（それらの配列の翻訳後修飾を含む）を含む。一実施形態では、抗体は、それぞれ配列番号８６及び配列番号８７におけるＶＨ及びＶＬ配列（それらの配列の翻訳後修飾を含む）を含む。一実施形態では、抗体は、それぞれ配列番号８８及び配列番号８９におけるＶＨ及びＶＬ配列（それらの配列の翻訳後修飾を含む）を含む。一実施形態では、抗体は、それぞれ配列番号９０及び配列番号９１におけるＶＨ及びＶＬ配列（それらの配列の翻訳後修飾を含む）を含む。一実施形態では、抗体は、それぞれ配列番号９２及び配列番号９３におけるＶＨ及びＶＬ配列（それらの配列の翻訳後修飾を含む）を含む。一実施形態では、抗体は、それぞれ配列番号９４及び配列番号９５におけるＶＨ及びＶＬ配列（それらの配列の翻訳後修飾を含む）を含む。一実施形態では、抗体は、それぞれ配列番号９６及び配列番号９７におけるＶＨ及びＶＬ配列（それらの配列の翻訳後修飾を含む）を含む。一実施形態では、抗体は、それぞれ配列番号９８及び配列番号９９におけるＶＨ及びＶＬ配列（それらの配列の翻訳後修飾を含む）を含む。一実施形態では、抗体は、それぞれ配列番号１００及び配列番号１０１におけるＶＨ及びＶＬ配列（それらの配列の翻訳後修飾を含む）を含む。一実施形態では、抗体は、それぞれ配列番号１０８及び配列番号１０９におけるＶＨ及びＶＬ配列（それらの配列の翻訳後修飾を含む）を含む。一実施形態では、抗体は、それぞれ配列番号１１４及び配列番号１１５におけるＶＨ及びＶＬ配列（それらの配列の翻訳後修飾を含む）を含む。一実施形態では、抗体は、それぞれ配列番号１１６及び配列番号１１７におけるＶＨ及びＶＬ配列（それらの配列の翻訳後修飾を含む）を含む。一実施形態では、抗体は、それぞれ配列番号１８３及び配列番号６５におけるＶＨ及びＶＬ配列（それらの配列の翻訳後修飾を含む）を含む。一実施形態では、抗体は、それぞれ配列番号１８４及び配列番号６９におけるＶＨ及びＶＬ配列（それらの配列の翻訳後修飾を含む）を含む。
一実施形態では、抗体は、それぞれ配列番号１１８及び配列番号１１９におけるＶＨ及びＶＬ配列（それらの配列の翻訳後修飾を含む）を含む。一実施形態では、抗体は、それぞれ配列番号１２０及び配列番号１２１におけるＶＨ及びＶＬ配列（それらの配列の翻訳後修飾を含む）を含む。一実施形態では、抗体は、それぞれ配列番号１２２及び配列番号１２３におけるＶＨ及びＶＬ配列（それらの配列の翻訳後修飾を含む）を含む。一実施形態では、抗体は、それぞれ配列番号１２４及び配列番号１２５におけるＶＨ及びＶＬ配列（それらの配列の翻訳後修飾を含む）を含む。一実施形態では、抗体は、それぞれ配列番号１２６及び配列番号１２７におけるＶＨ及びＶＬ配列（それらの配列の翻訳後修飾を含む）を含む。一実施形態では、抗体は、それぞれ配列番号１２８及び配列番号１２９におけるＶＨ及びＶＬ配列（それらの配列の翻訳後修飾を含む）を含む。一実施形態では、抗体は、それぞれ配列番号１３０及び配列番号１３１におけるＶＨ及びＶＬ配列（それらの配列の翻訳後修飾を含む）を含む。一実施形態では、抗体は、それぞれ配列番号１３２及び配列番号１３３におけるＶＨ及びＶＬ配列（それらの配列の翻訳後修飾を含む）を含む。一実施形態では、抗体は、それぞれ配列番号１３４及び配列番号１３５におけるＶＨ及びＶＬ配列（それらの配列の翻訳後修飾を含む）を含む。一実施形態では、抗体は、それぞれ配列番号１３６及び配列番号１３７におけるＶＨ及びＶＬ配列（それらの配列の翻訳後修飾を含む）を含む。一実施形態では、抗体は、それぞれ配列番号１３８及び配列番号１３９におけるＶＨ及びＶＬ配列（それらの配列の翻訳後修飾を含む）を含む。一実施形態では、抗体は、それぞれ配列番号１４０及び配列番号１４１におけるＶＨ及びＶＬ配列（それらの配列の翻訳後修飾を含む）を含む。一実施形態では、抗体は、それぞれ配列番号１４２及び配列番号１４３におけるＶＨ及びＶＬ配列（それらの配列の翻訳後修飾を含む）を含む。一実施形態では、抗体は、それぞれ配列番号１４４及び配列番号１４５におけるＶＨ及びＶＬ配列（それらの配列の翻訳後修飾を含む）を含む。一実施形態では、抗体は、それぞれ配列番号１４６及び配列番号１４７におけるＶＨ及びＶＬ配列（それらの配列の翻訳後修飾を含む）を含む。
別の態様では、上記で示した実施形態のいずれかにおいてのとおりのＶＨ、及び上記で示した実施形態のいずれかにおいてのとおりのＶＬを含む抗ヒトＯＸ４０アゴニスト抗体を提供する。
さらなる態様では、本発明は、本明細書において提供する抗ヒトＯＸ４０抗体と同じエピトープに結合する抗体を提供する。一部の実施形態では、その抗体は、抗ヒトＯＸ４０アゴニスト抗体である。
本発明のさらなる態様では、上記実施形態のいずれかによる抗ＯＸ４０抗体は、キメラ、ヒト化、またはヒト抗体を含むモノクローナル抗体である。一実施形態では、抗ＯＸ４０抗体は、抗体断片、例えば、Ｆｖ、Ｆａｂ、Ｆａｂ’、ｓｃＦｖ、ｄｉａｂｏｄｙ、またはＦ（ａｂ’）２断片である。別の実施形態では、抗体は、全長抗体、例えば、インタクトなＩｇＧ１抗体、または本明細書において定義するとおりの他の抗体クラス若しくはアイソタイプである。一部の実施形態では、抗体は、インタクトな全長ＩｇＧ４抗体である。
さらなる態様では、上記実施形態のいずれかによる抗ＯＸ４０抗体は、下記のセクション１〜７において記載するとおりの特徴のいずれかを単独で、または組合せで含み得る。
１． 抗体親和性
ある種の実施形態では、本明細書において提供する抗体は、≦１μＭ、≦１００ｎＭ、≦１０ｎＭ、≦１ｎＭ、≦０．１ｎＭ、≦０．０１ｎＭ、または≦０．００１ｎＭ（例えば、１０−８Ｍ以下、例えば、１０−８Ｍ〜１０−１３Ｍ、例えば、１０−９Ｍ〜１０−１３Ｍ）の解離定数（Ｋｄ）を有する。
一実施形態では、Ｋｄを、放射標識抗原結合アッセイ（ＲＩＡ）によって測定する。一実施形態では、ＲＩＡを、対象抗体のＦａｂバージョン及びその抗原と共に行う。例えば、抗原についてのＦａｂの溶液結合親和性は、未標識抗原の一連の滴定の存在下で、Ｆａｂを最小濃度の（１２５Ｉ）標識抗原と平衡化させ、次いで、抗Ｆａｂ抗体コーティングプレートと結合した抗原を捕捉することによって測定する（例えば、Ｃｈｅｎ ｅｔ ａｌ．，Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．２９３：８６５−８８１（１９９９）を参照されたい）。アッセイのための条件を確立するために、ＭＩＣＲＯＴＩＴＥＲ（登録商標）マルチウェルプレート（Ｔｈｅｒｍｏ Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ）を、５０ｍＭの炭酸ナトリウム（ｐＨ９．６）中の５μｇ／ｍＬ捕捉抗Ｆａｂ抗体（Ｃａｐｐｅｌ Ｌａｂｓ）で終夜コーティングし、続いて、ＰＢＳ中の２％（ｗ／ｖ）ウシ血清アルブミンで、室温（およそ２３℃）で２〜５時間にわたってブロッキングする。非吸着性のプレート（Ｎｕｎｃ ＃２６９６２０）中で、１００ｐＭまたは２６ｐＭ［１２５Ｉ］抗原を、対象Ｆａｂの系列希釈液と混合する（例えば、Ｐｒｅｓｔａ ｅｔ ａｌ．，Ｃａｎｃｅｒ Ｒｅｓ．５７：４５９３−４５９９（１９９７）における、抗ＶＥＧＦ抗体Ｆａｂ−１２の評価と一致）。次いで、対象Ｆａｂを終夜インキュベートするが、インキュベーションは、平衡に到達することを保証するために、より長い期間（例えば、約６５時間）にわたって継続してもよい。その後、室温での（例えば、１時間にわたる）インキュベーションのために、混合物を捕捉プレートに移す。次いで、溶液を除去し、プレートをＰＢＳ中の０．１％ポリソルベート２０（ＴＷＥＥＮ−２０（登録商標））で８回洗浄する。プレートが乾燥したとき、１５０μＬ／ウェルのシンチラント（ｓｃｉｎｔｉｌｌａｎｔ）（ＭＩＣＲＯＳＣＩＮＴ−２０（商標）；Ｐａｃｋａｒｄ）を添加し、プレートをＴＯＰＣＯＵＮＴ（商標）ガンマ計数器（Ｐａｃｋａｒｄ）で１０分間にわたってカウントする。最大結合の２０％以下をもたらす各Ｆａｂの濃度を、競合結合アッセイにおいて使用するために選択する。
別の実施形態では、Ｋｄを、ＢＩＡＣＯＲＥ（登録商標）表面プラスモン共鳴アッセイを使用して測定する。例えば、ＢＩＡＣＯＲＥ（登録商標）−２０００またはａ ＢＩＡＣＯＲＥ（登録商標）−３０００（ＢＩＡｃｏｒｅ，Ｉｎｃ．，Ｐｉｓｃａｔａｗａｙ，ＮＪ）を使用するアッセイを２５℃で、約１０応答単位（ＲＵ）で固定化された抗原ＣＭ５チップを用いて行う。一実施形態では、カルボキシメチル化デキストランバイオセンサチップ（ＣＭ５、ＢＩＡＣＯＲＥ，Ｉｎｃ．）を、供給業者の指示に従ってＮ−エチル−Ｎ’−（３−ジメチルアミノプロピル）−カルボジイミド塩酸塩（ＥＤＣ）及びＮ−ヒドロキシコハク酸イミド（ＮＨＳ）で活性化する。抗原を１０ｍＭ酢酸ナトリウム（ｐＨ４．８）で５μｇ／ｍＬ（約０．２μＭ）まで希釈し、その後、５μＬ／分の流速で注入して、カップリングされたタンパク質のおよそ１０応答単位（ＲＵ）を達成する。抗原の注入後に、１Ｍエタノールアミンを注入して、未反応の基をブロッキングする。反応速度の測定のために、Ｆａｂの２倍系列希釈液（０．７８ｎＭ〜５００ｎＭ）を、０．０５％ポリソルベート２０（ＴＷＥＥＮ−２０（商標））界面活性剤を含むＰＢＳ（ＰＢＳＴ）中、２５℃で、およそ２５μＬ／分の流速で注入する。単純な１対１Ｌａｎｇｍｕｉｒ結合モデル（ＢＩＡＣＯＲＥ（登録商標）Ｅｖａｌｕａｔｉｏｎ Ｓｏｆｔｗａｒｅ、第３．２版）を使用して、会合センサーグラム及び解離センサーグラムを同時に適合することによって、会合速度（ｋｏｎ）及び解離速度（ｋｏｆｆ）を算出する。平衡解離定数（Ｋｄ）は、比率ｋｏｆｆ／ｋｏｎとして算出する。例えば、Ｃｈｅｎ ｅｔ ａｌ．，Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．２９３：８６５−８８１（１９９９）を参照されたい。オン速度が、上記の表面プラスモン共鳴アッセイによって、１０６Ｍ−１ ｓ−１を超える場合、撹拌されたキュベットを備えたストップトフロー装着分光光度計（Ａｖｉｖ Ｉｎｓｔｒｕｍｅｎｔｓ）または８０００−シリーズＳＬＭ−ＡＭＩＮＣＯ（商標）分光光度計（ＴｈｅｒｍｏＳｐｅｃｔｒｏｎｉｃ）などの分光計において測定される、漸増濃度の抗原の存在下で、２５℃で、ＰＢＳ（ｐＨ７．２）中の２０ｎＭ抗抗原抗体（Ｆａｂ型）の蛍光発光強度（励起＝２９５ｎｍ、発光＝３４０ｎｍ、１６ｎｍ帯域通過）の増大または減少を測定する蛍光消光技術を使用することによって、オン速度を決定することができる。
２． 抗体断片
ある種の実施形態では、本明細書において提供する抗体は、抗体断片である。抗体断片には、限定されないが、Ｆａｂ、Ｆａｂ’、Ｆａｂ’−ＳＨ、Ｆ（ａｂ’）２、Ｆｖ、及びｓｃＦｖ断片、ならびに下記の他の断片が含まれる。ある種の抗体断片の概説については、Ｈｕｄｓｏｎ ｅｔ ａｌ．Ｎａｔ．Ｍｅｄ．９：１２９−１３４（２００３）を参照されたい。ｓｃＦｖ断片の概説については、例えば、Ｐｌｕｃｋｔｈｕｎ，ｉｎ Ｔｈｅ Ｐｈａｒｍａｃｏｌｏｇｙ ｏｆ Ｍｏｎｏｃｌｏｎａｌ Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ，ｖｏｌ．１１３，Ｒｏｓｅｎｂｕｒｇ ａｎｄ Ｍｏｏｒｅ ｅｄｓ．，（Ｓｐｒｉｎｇｅｒ−Ｖｅｒｌａｇ，Ｎｅｗ Ｙｏｒｋ），ｐｐ．２６９−３１５（１９９４）を参照されたい；また、ＷＯ９３／１６１８５；及び米国特許第５，５７１，８９４号及び同第５，５８７，４５８号を参照されたい。サルベージ受容体結合エピトープ残基を含み、増大したｉｎ ｖｉｖｏ半減期を有するＦａｂ及びＦ（ａｂ’）２断片の考察については、米国特許第５，８６９，０４６号を参照されたい。
二重特異性抗体は、二価性または二重特異性であり得る２つの抗原結合部位を有する抗体断片である。例えば、欧州特許第４０４，０９７号、ＷＯ１９９３／０１１６１；Ｈｕｄｓｏｎ ｅｔ ａｌ．，Ｎａｔ．Ｍｅｄ．９：１２９−１３４（２００３）；及びＨｏｌｌｉｎｇｅｒ ｅｔ ａｌ．，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ９０：６４４４−６４４８（１９９３）を参照されたい。三重特異性抗体及び四重特異性抗体はまた、Ｈｕｄｓｏｎ ｅｔ ａｌ．，Ｎａｔ．Ｍｅｄ．９：１２９−１３４（２００３）において記載されている。
単一ドメイン抗体は、抗体の重鎖可変ドメインのすべて若しくは一部分、または軽鎖可変ドメインのすべて若しくは一部分を含む抗体断片である。ある種の実施形態では、単一ドメイン抗体は、ヒト単一ドメイン抗体である（Ｄｏｍａｎｔｉｓ，Ｉｎｃ．，Ｗａｌｔｈａｍ，ＭＡ、例えば、米国特許第６，２４８，５１６ Ｂ１号を参照されたい）。
抗体断片は、限定されないが、本明細書に記載のとおりのインタクトな抗体のタンパク質分解消化、さらには、組換え宿主細胞（例えば、Ｅ．ｃｏｌｉまたはファージ）による産生を含む、様々な技術によって作製することができる。
３． キメラ及びヒト化抗体
ある種の実施形態では、本明細書において提供する抗体は、キメラ抗体である。ある種のキメラ抗体は、例えば、米国特許第４，８１６，５６７号；及びＭｏｒｒｉｓｏｎ ｅｔ ａｌ．，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ、８１：６８５１−６８５５（１９８４））において記載されている。一例では、キメラ抗体は、非ヒト可変領域（例えば、マウス、ラット、ハムスター、ウサギ、またはサルなどの非ヒト霊長類に由来する可変領域）及びヒト定常領域を含む。さらなる例では、キメラ抗体は、クラスまたはサブクラスが親抗体のそれから変更されている「クラススイッチされた」抗体である。キメラ抗体には、それらの抗原結合断片が含まれる。
ある種の実施形態では、キメラ抗体は、ヒト化抗体である。典型的に、親の非ヒト抗体の特異性及び親和性を保持しながら、ヒトに対する免疫原性を低減するために、非ヒト抗体はヒト化される。一般に、ヒト化抗体は、ＨＶＲ、例えば、ＣＤＲ（またはそれらの部分）が非ヒト抗体に由来し、ＦＲ（またはそれらの部分）がヒト抗体配列に由来する１つまたは複数の可変ドメインを含む。ヒト化抗体はまた、任意選択的に、ヒト定常領域の少なくとも一部分を含む。一部の実施形態では、例えば、抗体特異性または親和性を復元する、または改善するために、ヒト化抗体におけるいくつかのＦＲ残基は非ヒト抗体（例えば、ＨＶＲ残基が由来する抗体）由来の対応する残基で置換される。
ヒト化抗体及びそれらを作製する方法は、例えば、Ａｌｍａｇｒｏ ａｎｄ Ｆｒａｎｓｓｏｎ、Ｆｒｏｎｔ．Ｂｉｏｓｃｉ．１３：１６１９−１６３３（２００８）において概説されており、さらに、例えば、Ｒｉｅｃｈｍａｎｎ ｅｔ ａｌ．，Ｎａｔｕｒｅ ３３２：３２３−３２９（１９８８）；Ｑｕｅｅｎ ｅｔ ａｌ．，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔ’ｌ Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ ８６：１００２９−１００３３（１９８９）；米国特許第５，８２１，３３７号、同第７，５２７，７９１号、同第６，９８２，３２１号、及び同第７，０８７，４０９号；Ｋａｓｈｍｉｒｉ ｅｔ ａｌ．，Ｍｅｔｈｏｄｓ ３６：２５−３４（２００５）（特異性決定領域（ＳＤＲ）グラフティングを記載）；Ｐａｄｌａｎ、Ｍｏｌ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．２８：４８９−４９８（１９９１）（「リサーフェシング（ｒｅｓｕｒｆａｃｉｎｇ）」を記載）；Ｄａｌｌ’Ａｃｑｕａ ｅｔ ａｌ．，Ｍｅｔｈｏｄｓ ３６：４３−６０（２００５）（「ＦＲシャフリング」を記載）；ならびにＯｓｂｏｕｒｎ ｅｔ ａｌ．，Ｍｅｔｈｏｄｓ ３６：６１−６８（２００５）及びＫｌｉｍｋａ ｅｔ ａｌ．，Ｂｒ．Ｊ．Ｃａｎｃｅｒ，８３：２５２−２６０（２０００）（ＦＲシャフリングへの「誘導選択（ｇｕｉｄｅｄ ｓｅｌｅｃｔｉｏｎ）」アプローチを記載）において記載されている。
ヒト化に使用してもよいヒトフレームワーク領域には、限定されないが：「最良適合（ｂｅｓｔ−ｆｉｔ）」法を使用して選択されるフレームワーク領域（例えば、Ｓｉｍｓ ｅｔ ａｌ．Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１５１：２２９６（１９９３）を参照されたい）；軽鎖または重鎖可変領域の特定のサブグループのヒト抗体のコンセンサス配列に由来するフレームワーク領域（例えば、Ｃａｒｔｅｒ ｅｔ ａｌ．Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ，８９：４２８５（１９９２）；及びＰｒｅｓｔａ ｅｔ ａｌ．Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．，１５１：２６２３（１９９３）を参照されたい）；ヒト成熟（体細胞変異した）フレームワーク領域またはヒト生殖細胞系フレームワーク領域（例えば、Ａｌｍａｇｒｏ ａｎｄ Ｆｒａｎｓｓｏｎ，Ｆｒｏｎｔ．Ｂｉｏｓｃｉ．１３：１６１９−１６３３（２００８）を参照されたい）；ならびにＦＲライブラリのスクリーニングに由来するフレームワーク領域（例えば、Ｂａｃａ ｅｔ ａｌ．，Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．２７２：１０６７８−１０６８４（１９９７）及びＲｏｓｏｋ ｅｔ ａｌ．，Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．２７１：２２６１１−２２６１８（１９９６）を参照されたい）が含まれる。
４． ヒト抗体
ある種の実施形態では、本明細書において提供する抗体は、ヒト抗体である。ヒト抗体は、当技術分野で公知の様々な技術を使用して生産することができる。ヒト抗体は、一般に、ｖａｎ Ｄｉｊｋ ａｎｄ ｖａｎ ｄｅ Ｗｉｎｋｅｌ，Ｃｕｒｒ．Ｏｐｉｎ．Ｐｈａｒｍａｃｏｌ．５：３６８−７４（２００１）、及びＬｏｎｂｅｒｇ，Ｃｕｒｒ．Ｏｐｉｎ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．２０：４５０−４５９（２００８）において記載されている。
免疫原を、抗原攻撃に応答してインタクトなヒト抗体またはヒト可変領域を含むインタクトな抗体を産生するように修飾されたトランスジェニック動物に投与することによって、ヒト抗体を調製してもよい。そのような動物は典型的には、内因性免疫グロブリン遺伝子座を置き換える、または染色体外に存在するか、若しくは動物の染色体中に無作為に組み込まれる、ヒト免疫グロブリン遺伝子座のすべてまたは一部分を含有する。そのような遺伝子導入マウスでは、内因性免疫グロブリン遺伝子座は一般に、不活性化されている。トランスジェニック動物からヒト抗体を得るための方法の概説については、Ｌｏｎｂｅｒｇ，Ｎａｔ．Ｂｉｏｔｅｃｈ．２３：１１１７−１１２５（２００５）を参照されたい。また、例えば、米国特許第６，０７５，１８１号及び同第６，１５０，５８４号（ＸＥＮＯＭＯＵＳＥ（商標）技術を記載）；米国特許第５，７７０，４２９号（ＨＵＭＡＢ（登録商標）技術を記載）；米国特許第７，０４１，８７０号（Ｋ−Ｍ ＭＯＵＳＥ（登録商標）技術を記載）；ならびに米国特許出願公開第ＵＳ ２００７／００６１９００号（ＶＥＬＯＣＩＭＯＵＳＥ（登録商標）技術を記載）を参照されたい。そのような動物によって生成されるインタクトな抗体由来のヒト可変領域は、例えば、異なるヒト定常領域と組み合わせることによって、さらに修飾されてもよい。
ヒト抗体はまた、ハイブリドーマベースの方法によって作製することもできる。ヒトモノクローナル抗体の産生のためのヒト骨髄腫細胞系及びマウス−ヒトヘテロ骨髄腫細胞系が記載されている。（例えば、Ｋｏｚｂｏｒ Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．，１３３：３００１（１９８４）；Ｂｒｏｄｅｕｒ ｅｔ ａｌ．，Ｍｏｎｏｃｌｏｎａｌ Ａｎｔｉｂｏｄｙ Ｐｒｏｄｕｃｔｉｏｎ Ｔｅｃｈｎｉｑｕｅｓ ａｎｄ Ａｐｐｌｉｃａｔｉｏｎｓ，ｐｐ．５１−６３（Ｍａｒｃｅｌ Ｄｅｋｋｅｒ，Ｉｎｃ．，Ｎｅｗ Ｙｏｒｋ，１９８７）；及びＢｏｅｒｎｅｒ ｅｔ ａｌ．，Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．，１４７：８６（１９９１）を参照されたい）。ヒトＢ細胞ハイブリドーマ技術を介して生成されるヒト抗体はまた、Ｌｉ ｅｔ ａｌ．，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ，１０３：３５５７−３５６２（２００６）において記載されている。追加の方法には、例えば、米国特許第７，１８９，８２６号（ハイブリドーマ細胞系由来のモノクローナルヒトＩｇＭ抗体の産生を記載）、及びＮｉ，Ｘｉａｎｄａｉ Ｍｉａｎｙｉｘｕｅ，２６（４）：２６５−２６８（２００６）（ヒト−ヒトハイブリドーマを記載）において記載されているものが含まれる。ヒトハイブリドーマ技術（Ｔｒｉｏｍａ ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ）はまた、Ｖｏｌｌｍｅｒｓ ａｎｄ Ｂｒａｎｄｌｅｉｎ，Ｈｉｓｔｏｌｏｇｙ ａｎｄ Ｈｉｓｔｏｐａｔｈｏｌｏｇｙ，２０（３）：９２７−９３７（２００５）、ならびにＶｏｌｌｍｅｒｓ ａｎｄ Ｂｒａｎｄｌｅｉｎ，Ｍｅｔｈｏｄｓ ａｎｄ Ｆｉｎｄｉｎｇｓ ｉｎ Ｅｘｐｅｒｉｍｅｎｔａｌ ａｎｄ Ｃｌｉｎｉｃａｌ Ｐｈａｒｍａｃｏｌｏｇｙ，２７（３）：１８５−９１（２００５）においても記載されている。
ヒト抗体はまた、ヒト由来ファージディスプレイライブラリから選択されるＦｖクローン可変ドメイン配列を単離することによって、生成してもよい。次いで、そのような可変ドメイン配列を、所望のヒト定常ドメインと組み合わせてもよい。抗体ライブラリからヒト抗体を選択するための技術は下記に記載する。
５． ライブラリ由来抗体
本発明の抗体は、所望の活性（複数可）を有する抗体についてコンビナトリアルライブラリをスクリーニングすることによって単離してもよい。例えば、ファージディスプレイライブラリを生成し、そのようなライブラリを、所望の結合特性を保有する抗体についてスクリーニングするための様々な方法が当技術分野で公知である。そのような方法は、例えば、Ｈｏｏｇｅｎｂｏｏｍ ｅｔ ａｌ． ｉｎ Ｍｅｔｈｏｄｓ ｉｎ Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｂｉｏｌｏｇｙ １７８：１−３７（Ｏ’Ｂｒｉｅｎ ｅｔ ａｌ．，ｅｄ．，Ｈｕｍａｎ Ｐｒｅｓｓ，Ｔｏｔｏｗａ，ＮＪ，２００１）において概説され、さらに、例えば、ＭｃＣａｆｆｅｒｔｙ ｅｔ ａｌ．，Ｎａｔｕｒｅ ３４８：５５２−５５４；Ｃｌａｃｋｓｏｎ ｅｔ ａｌ．，Ｎａｔｕｒｅ ３５２：６２４−６２８（１９９１）；Ｍａｒｋｓ ｅｔ ａｌ．，Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．２２２：５８１−５９７（１９９２）；Ｍａｒｋｓ ａｎｄ Ｂｒａｄｂｕｒｙ，ｉｎ Ｍｅｔｈｏｄｓ ｉｎ Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｂｉｏｌｏｇｙ ２４８：１６１−１７５（Ｌｏ，ｅｄ．，Ｈｕｍａｎ Ｐｒｅｓｓ，Ｔｏｔｏｗａ，ＮＪ，２００３）；Ｓｉｄｈｕ ｅｔ ａｌ．，Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．３３８（２）：２９９−３１０（２００４）；Ｌｅｅ ｅｔ ａｌ．，Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．３４０（５）：１０７３−１０９３（２００４）；Ｆｅｌｌｏｕｓｅ，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ １０１（３４）：１２４６７−１２４７２（２００４）；及びＬｅｅ ｅｔ ａｌ．，Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．Ｍｅｔｈｏｄｓ ２８４（１−２）：１１９−１３２（２００４）において記載されている。
ある種のファージディスプレイ方法では、ＶＨ及びＶＬ遺伝子のレパートリーは、ポリメラーゼ連鎖反応（ＰＣＲ）によって別個にクローニングされ、ファージライブラリ中で無作為に組み換えられ、次いで、それらは、Ｗｉｎｔｅｒ ｅｔ ａｌ．，Ａｎｎ．Ｒｅｖ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．，１２：４３３−４５５（１９９４）において記載されているように、抗原結合ファージについてスクリーニングされ得る。ファージは典型的に、１本鎖Ｆｖ（ｓｃＦｖ）断片として、またはＦａｂ断片としてのいずれかで、抗体断片を提示する。免疫源からのライブラリは、ハイブリドーマを構築する必要なしに、免疫原に対する高親和性抗体を提供する。あるいは、Ｇｒｉｆｆｉｔｈｓ ｅｔ ａｌ．，ＥＭＢＯ Ｊ，１２：７２５−７３４（１９９３）によって記載されているとおり、ナイーブレパートリーをクローニングして（例えば、ヒトから）、いかなる免疫化も伴わずに、広範な非自己抗原及び他にも自己抗原に対する抗体の単一の源を提供することができる。最後に、ナイーブライブラリはまた、Ｈｏｏｇｅｎｂｏｏｍ ａｎｄ Ｗｉｎｔｅｒ，Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．，２２７：３８１−３８８（１９９２）によって記載されているとおり、幹細胞からの再配列されていないＶ遺伝子セグメントをクローニングし、無作為配列を含有するＰＣＲプライマーを使用して高度可変ＣＤＲ３領域をコードし、ｉｎ ｖｉｔｒｏで再配列を達成することによって、合成的に作製することができる。ヒト抗体ファージライブラリを記載している特許公報には、例えば：米国特許第５，７５０，３７３号、及び米国特許出願公開第２００５／００７９５７４号、同第２００５／０１１９４５５号、同第２００５／０２６６０００号、同第２００７／０１１７１２６号、同第２００７／０１６０５９８号、同第２００７／０２３７７６４号、同第２００７／０２９２９３６号、及び同第２００９／０００２３６０号が含まれる。
ヒト抗体ライブラリから単離された抗体または抗体断片は、本明細書においてヒト抗体またはヒト抗体断片と見なされる。
６． 多重特異性抗体
ある種の実施形態では、本明細書において提供する抗体は、多重特異性抗体、例えば、二重特異性抗体である。多重特異性抗体は、少なくとも２つの異なる部位について結合特異性を有するモノクローナル抗体である。ある種の実施形態では、結合特異性の一方は、ＯＸ４０についてのものであり、他方は、任意の他の抗原についてのものである。ある種の実施形態では、二重特異性抗体は、ＯＸ４０の２つの異なるエピトープに結合してもよい。二重特異性抗体を使用して、細胞傷害性薬物を、ＯＸ４０を発現する細胞に限局させてもよい。二重特異性抗体は、全長抗体または抗体断片として調製することができる。
多重特異性抗体を作製するための技術には、限定されないが、異なる特異性を有する２つの免疫グロブリン重鎖−軽鎖対の組換え共発現（Ｍｉｌｓｔｅｉｎ ａｎｄ Ｃｕｅｌｌｏ，Ｎａｔｕｒｅ ３０５：５３７（１９８３））、ＷＯ９３／０８８２９号、及びＴｒａｕｎｅｃｋｅｒ ｅｔ ａｌ．，ＥＭＢＯ Ｊ．１０：３６５５（１９９１）を参照されたい）、及び「ノブ・イン・ホール（ｋｎｏｂ−ｉｎ−ｈｏｌｅ）」操作（例えば、米国特許第５，７３１，１６８号を参照されたい）が含まれる。多重特異性抗体はまた、静電的ステアリング（ｅｌｅｃｔｒｏｓｔａｔｉｃ ｓｔｅｅｒｉｎｇ）効果を操作して抗体Ｆｃ−ヘテロ二量体分子を作製すること（ＷＯ２００９／０８９００４Ａ１）；２つ以上の抗体または断片を架橋すること（例えば、米国特許第４，６７６，９８０号、及びＢｒｅｎｎａｎ ｅｔ ａｌ．，Ｓｃｉｅｎｃｅ，２２９：８１（１９８５）を参照されたい）；ロイシンジッパーを使用して二重特異性抗体を産生すること（例えば、Ｋｏｓｔｅｌｎｙ ｅｔ ａｌ．，Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．，１４８（５）：１５４７−１５５３（１９９２）を参照されたい）；「ダイアボディ」技術を使用して二重特異性抗体断片を作製すること（例えば、Ｈｏｌｌｉｎｇｅｒ ｅｔ ａｌ．，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ，９０：６４４４−６４４８（１９９３）を参照されたい）；及び１本鎖Ｆｖ（ｓＦｖ）二量体を使用すること（例えば、Ｇｒｕｂｅｒ ｅｔ ａｌ．，Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．，１５２：５３６８（１９９４）を参照されたい）；及び例えば、Ｔｕｔｔ ｅｔ ａｌ．Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１４７：６０（１９９１）において記載されているとおりの三重特異性抗体を調製することによって作製されてもよい。
「オクトパス（Ｏｃｔｏｐｕｓ）抗体」を含む、３つ以上の機能的抗原結合部位を有する操作された抗体もまた、本明細書に含まれる（例えば、ＵＳ ２００６／００２５５７６Ａ１を参照されたい）。
本明細書における抗体または断片にはまた、ＯＸ４０、さらには別の異なる抗原に結合する抗原結合部位を含む「二重作用（Ｄｕａｌ Ａｃｔｉｎｇ）ＦＡｂ」または「ＤＡＦ」が含まれる（例えば、ＵＳ ２００８／００６９８２０を参照されたい）。
７． 抗体変異体
ある種の実施形態では、本明細書において提供する抗体のアミノ酸配列変異体を企図する。例えば、抗体の結合親和性及び／または他の生物学的特性を改善することが望ましいことがある。抗体のアミノ酸配列変異体は、適切な修飾を、抗体をコードするヌクレオチド配列中に導入することによって、またはペプチド合成によって調製してもよい。そのような修飾には、例えば、抗体のアミノ酸配列からの残基の欠失、及び／または抗体のアミノ酸配列への残基の挿入、及び／または抗体のアミノ酸配列内での残基の置換が含まれる。欠失、挿入、及び置換の任意の組合せを作製して、最終構築物に到達することができるが、ただし、その最終構築物が、所望の特性、例えば、抗原結合性を保有することを条件とする。
ａ） 置換、挿入、及び欠失変異体
ある種の実施形態では、１つまたは複数のアミノ酸置換を有する抗体変異体を提供する。置換型変異誘発についての対象部位には、ＨＶＲ及びＦＲが含まれる。保存的置換を表Ａにおいて、「好ましい置換」の見出しの下に示す。より実質的な変化を表Ａにおいて、「例示的な置換」の見出しの下に提供し、またアミノ酸側鎖クラスを参照して下記にさらに記載する。アミノ酸置換を対象抗体に導入し、産物を、所望の活性、例えば、保持／改善された抗原結合、減少した免疫原性、または改善されたＡＤＣＣ若しくはＣＤＣについて、スクリーニングしてもよい。
Figure 0006637439
アミノ酸は、下記の一般的な側鎖特性によって分類されてもよい：
（１）疎水性：ノルロイシン、Ｍｅｔ、Ａｌａ、Ｖａｌ、Ｌｅｕ、Ｉｌｅ；
（２）中性親水性：Ｃｙｓ、Ｓｅｒ、Ｔｈｒ、Ａｓｎ、Ｇｌｎ；
（３）酸性：Ａｓｐ、Ｇｌｕ；
（４）塩基性：Ｈｉｓ、Ｌｙｓ、Ａｒｇ；
（５）鎖配向に影響を及ぼす残基：Ｇｌｙ、Ｐｒｏ；
（６）芳香族：Ｔｒｐ、Ｔｙｒ、Ｐｈｅ。
非保存的置換は、これらのクラスのうちの１つのメンバーを別のクラスと交換することを伴うであろう。
置換変異体の１つの種類は、親抗体（例えば、ヒト化またはヒト抗体）の１個または複数個の超可変領域残基を置換することを伴う。一般に、さらなる研究のために選択される得られた変異体（複数可）は、親抗体と比較して、ある種の生物学的特性における修飾（例えば、改善）（例えば、増加した親和性、低減された免疫原性）を有することとなり、かつ／または親抗体の、実質的に保持されたある種の生物学的特性を有することとなる。例示的な置換変異体は、例えば、本明細書に記載のものなどのファージディスプレイベースの親和性成熟技術を使用して、好都合に生成され得る、親和性成熟抗体である。簡単には、１個または複数個のＨＶＲ残基が変異させられ、変異型抗体がファージ上で提示され、特定の生物学的活性（例えば、結合親和性）についてスクリーニングされる。
変化（例えば、置換）をＨＶＲにおいて行って、例えば、抗体親和性を改善してもよい。そのような変化を、ＨＶＲ「ホットスポット」、すなわち、体細胞成熟プロセス中に高頻度で変異を受けるコドンによってコードされる残基（例えば、Ｃｈｏｗｄｈｕｒｙ，Ｍｅｔｈｏｄｓ Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．２０７：１７９−１９６（２００８）を参照されたい）、及び／または抗原と接触する残基において行ってもよく、得られた変異型ＶＨまたはＶＬを結合親和性について試験する。二次ライブラリを構築し、そこから再選択することによる親和性成熟は、例えば、Ｈｏｏｇｅｎｂｏｏｍ ｅｔ ａｌ． ｉｎ Ｍｅｔｈｏｄｓ ｉｎ Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｂｉｏｌｏｇｙ １７８：１−３７（Ｏ’Ｂｒｉｅｎ ｅｔ ａｌ．，ｅｄ．，Ｈｕｍａｎ Ｐｒｅｓｓ，Ｔｏｔｏｗａ，ＮＪ，（２００１））において記載されている。親和性成熟の一部の実施形態では、様々な方法（例えば、エラープローンＰＣＲ、鎖シャフリング、またはオリゴヌクレオチド指向性変異誘発）のいずれかによって、多様性を、成熟のために選択された可変遺伝子中に導入する。次いで、二次ライブラリを作出する。次いで、ライブラリを、所望の親和性を有する任意の抗体変異体を特定するためにスクリーニングする。多様性を導入するための別の方法は、数個のＨＶＲ残基（例えば、１回に４〜６個の残基）が無作為化される、ＨＶＲ指向性アプローチを伴う。例えば、アラニンスキャニング変異誘発またはモデリングを使用して、抗原結合に関与するＨＶＲ残基を具体的に特定してもよい。特にＣＤＲ−Ｈ３及びＣＤＲ−Ｌ３が、多くの場合にターゲティングされる。
ある種の実施形態では、置換、挿入、または欠失は、そのような変化が、抗原と結合する抗体の能力を実質的に低減しない限り、１つまたは複数のＨＶＲ内で生じてもよい。例えば、結合親和性を実質的に低減しない保存的変化（例えば、本明細書において提供する保存的置換）が、ＨＶＲにおいて行われてもよい。そのような変化は、例えば、ＨＶＲ中の抗原接触残基の外側にあってもよい。上記に提供した変異型ＶＨ及びＶＬ配列のある種の実施形態では、各ＨＶＲは、変化させられないか、または１つ、２つ、若しくは３つを超えないアミノ酸置換を含有するかのいずれかである。
変異誘発のためにターゲティングされ得る抗体の残基または領域を特定するための有用な方法は、Ｃｕｎｎｉｎｇｈａｍ ａｎｄ Ｗｅｌｌｓ（１９８９）Ｓｃｉｅｎｃｅ，２４４：１０８１−１０８５によって記載されているとおりの「アラニンスキャニング変異誘発」と呼ばれる。この方法では、ターゲット残基（例えば、ａｒｇ、ａｓｐ、ｈｉｓ、ｌｙｓ、及びｇｌｕなどの荷電残基）のうちのある残基または基が特定され、中性または負の荷電をもつアミノ酸（例えば、アラニンまたはポリアラニン）によって置き換えられて、抗体の抗原との相互作用が影響を受けるかどうかを決定する。さらなる置換が、最初の置換に対する機能的感受性を実証するアミノ酸の場所に導入されてもよい。あるいは、または追加的に、抗体と抗原との間の接触点を特定する抗原−抗体複合体の結晶構造。そのような接触残基及び隣接する残基を、置換候補としてターゲティングするか、または排除してもよい。変異体をスクリーニングして、それらが所望の特性を含有するかどうかを決定してもよい。
アミノ酸配列挿入には、１個の残基から１００個以上の残基を含有するポリペプチドの範囲の長さであるアミノ末端及び／またはカルボキシル末端融合、さらには、単一または多数のアミノ酸残基の配列内挿入が含まれる。末端挿入の例には、Ｎ末端メチオニル残基を有する抗体が含まれる。抗体分子の他の挿入変異体には、抗体の血清半減期を増大させる酵素（例えば、ＡＤＥＰＴのための）またはポリペプチドに対する、抗体のＮ末端またはＣ末端への融合が含まれる。
ｂ） グリコシル化変異体
ある種の実施形態では、本明細書において提供する抗体を、抗体がグリコシル化される程度を上昇または低下させるように変化させる。抗体へのグリコシル化部位の付加または欠失は、１つまたは複数のグリコシル化部位が作成または除去されるように、アミノ酸配列を変化させることによって、好都合に遂行してもよい。
抗体がＦｃ領域を含む場合、そこに付着した炭水化物は変化していてもよい。哺乳動物細胞によって産生される天然抗体は典型的には、一般にＮ結合によって、Ｆｃ領域のＣＨ２ドメインのＡｓｎ２９７に付着される、分岐した二分岐オリゴ糖を含む。例えば、Ｗｒｉｇｈｔ ｅｔ ａｌ．ＴＩＢＴＥＣＨ １５：２６−３２（１９９７）を参照されたい。オリゴ糖には、様々な炭水化物、例えば、マンノース、Ｎ−アセチルグルコサミン（ＧｌｃＮＡｃ）、ガラクトース、及びシアル酸、さらには、二分岐オリゴ糖構造の「ステム」においてＧｌｃＮＡｃに付着したフコースが含まれてもよい。一部の実施形態では、本発明の抗体におけるオリゴ糖の修飾は、ある種の改善された特性を有する抗体変異体を作り出すために行われてもよい。
一実施形態では、Ｆｃ領域に（直接的にまたは間接的に）付着するフコースを欠いた炭水化物構造を有する抗体変異体を提供する。例えば、そのような抗体におけるフコースの量は、１％〜８０％、１％〜６５％、５％〜６５％、または２０％〜４０％であってもよい。フコースの量は、例えば、ＷＯ２００８／０７７５４６において記載されているように、ＭＡＬＤＩ−ＴＯＦ質量分析法によって測定した場合に、Ａｓｎ ２９７に付着したすべての糖鎖構造（例えば、複合体、ハイブリッド、及び高マンノース構造）の合計と比較して、Ａｓｎ２９７における糖鎖内のフコースの平均量を算出することによって決定される。Ａｓｎ２９７は、Ｆｃ領域における約２９７位（Ｆｃ領域残基のＥｕナンバリング）に位置するアスパラギン残基を指すが；Ａｓｎ２９７はまた、抗体における小規模な配列変異によって、２９７位から約±３アミノ酸上流または下流、すなわち、２９４位〜３００位の間にも位置し得る。そのようなフコシル化変異体は、改善されたＡＤＣＣ機能を有し得る。例えば、米国特許出願公開第２００３／０１５７１０８号（Ｐｒｅｓｔａ，Ｌ．）；米国特許出願公開第２００４／００９３６２１号（Ｋｙｏｗａ Ｈａｋｋｏ Ｋｏｇｙｏ Ｃｏ．，Ｌｔｄ）を参照されたい。「脱フコシル化」または「フコース欠損」抗体変異体に関連する刊行物の例には、ＵＳ ２００３／０１５７１０８；ＷＯ２０００／６１７３９；ＷＯ２００１／２９２４６；ＵＳ ２００３／０１１５６１４；ＵＳ ２００２／０１６４３２８；ＵＳ ２００４／００９３６２１；ＵＳ ２００４／０１３２１４０；ＵＳ ２００４／０１１０７０４；ＵＳ ２００４／０１１０２８２；ＵＳ ２００４／０１０９８６５；ＷＯ２００３／０８５１１９；ＷＯ２００３／０８４５７０；ＷＯ２００５／０３５５８６；ＷＯ２００５／０３５７７８；ＷＯ２００５／０５３７４２；ＷＯ２００２／０３１１４０；Ｏｋａｚａｋｉ ｅｔ ａｌ．Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．３３６：１２３９−１２４９（２００４）；Ｙａｍａｎｅ−Ｏｈｎｕｋｉ ｅｔ ａｌ．Ｂｉｏｔｅｃｈ．Ｂｉｏｅｎｇ．８７：６１４（２００４）が含まれる。脱フコシル化抗体を産生することが可能な細胞系の例には、タンパク質フコシル化が欠損したＬｅｃ１３ ＣＨＯ細胞（Ｒｉｐｋａ ｅｔ ａｌ．Ａｒｃｈ．Ｂｉｏｃｈｅｍ．Ｂｉｏｐｈｙｓ．２４９：５３３−５４５（１９８６）、米国特許出願公開第２００３／０１５７１０８ Ａ１号（Ｐｒｅｓｔａ，Ｌ）、及びＷＯ２００４／０５６３１２ Ａ１（Ａｄａｍｓら）（特に実施例１１で））、及びα−１，６−フコシルトランスフェラーゼ遺伝子、ＦＵＴ８、ノックアウトＣＨＯ細胞などのノックアウト細胞系（例えば、Ｙａｍａｎｅ−Ｏｈｎｕｋｉ ｅｔ ａｌ．Ｂｉｏｔｅｃｈ．Ｂｉｏｅｎｇ．８７：６１４（２００４）；Ｋａｎｄａ，Ｙ．ｅｔ ａｌ．，Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌ．Ｂｉｏｅｎｇ．，９４（４）：６８０−６８８（２００６）、及びＷＯ２００３／０８５１０７を参照されたい）が含まれる。
二分されたオリゴ糖を有する、例えば、抗体のＦｃ領域に付着した二分岐オリゴ糖類がＧｌｃＮＡｃによって二分されている抗体変異体をさらに提供する。そのような抗体変異体は、低減されたフコシル化及び／または改善されたＡＤＣＣ機能を有し得る。そのような抗体変異体の例は、例えば、ＷＯ２００３／０１１８７８（Ｊｅａｎ−Ｍａｉｒｅｔら）、米国特許第６，６０２，６８４号（Ｕｍａｎａら）、及びＵＳ ２００５／０１２３５４６（Ｕｍａｎａら）において記載されている。Ｆｃ領域に付着したオリゴ糖において少なくとも１個のガラクトース残基を有する抗体変異体も提供する。そのような抗体変異体は、改善されたＣＤＣ機能を有し得る。そのような抗体変異体は、例えば、ＷＯ１９９７／３００８７（Ｐａｔｅｌら）、ＷＯ１９９８／５８９６４（Ｒａｊｕ，Ｓ．）、及びＷＯ１９９９／２２７６４号（Ｒａｊｕ，Ｓ．）において記載されている。
ｃ） Ｆｃ領域変異体
ある種の実施形態では、１つまたは複数のアミノ酸修飾を、本明細書において提供する抗体のＦｃ領域に導入し、それによってＦｃ領域変異体を生成してもよい。Ｆｃ領域変異体は、１つまたは複数のアミノ酸位置にアミノ酸修飾（例えば、置換）を含む、ヒトＦｃ領域配列（例えば、ヒトＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３、またはＩｇＧ４ Ｆｃ領域）を含んでもよい。
ある種の実施形態では、本発明は、いくつかのエフェクター機能を保有するが、すべてのエフェクター機能は保有せず、それにより、ｉｎ ｖｉｖｏでの抗体の半減期が重要であるが、なおもある特定のエフェクター機能（補体及びＡＤＣＣなど）が不必要または有害である用途に望ましい候補となる、抗体変異体を企図する。ｉｎ ｖｉｔｒｏ及び／またはｉｎ ｖｉｖｏ細胞傷害性アッセイを実行して、ＣＤＣ及び／またはＡＤＣＣ活性の低減／枯渇を確認することができる。例えば、Ｆｃ受容体（ＦｃＲ）結合アッセイを実行して、抗体がＦｃγＲ結合を欠いている（したがって、おそらくＡＤＣＣ活性を欠いている）が、ＦｃＲｎ結合能力を保持していることを保証することができる。ＡＤＣＣを媒介するための一次細胞であるＮＫ細胞は、Ｆｃ（ＲＩＩＩのみを発現するが、一方で単球は、Ｆｃ（ＲＩ、Ｆｃ（ＲＩＩ、及びＦｃ（ＲＩＩＩを発現する。造血細胞上でのＦｃＲ発現は、Ｒａｖｅｔｃｈ ａｎｄ Ｋｉｎｅｔ，Ａｎｎｕ．Ｒｅｖ．Ｉｍｍｕｎｏｌ ９：４５７−９２（１９９１）の４６４頁の表３において要約されている。対象分子のＡＤＣＣ活性を評価するためのｉｎ ｖｉｔｒｏアッセイの非限定的な例は、米国特許第５，５００，３６２号（例えば、Ｈｅｌｌｓｔｒｏｍ，Ｉ．ｅｔ ａｌ．Ｐｒｏｃ．Ｎａｔ’ｌ Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ ８３：７０５９−７０６３（１９８６）を参照されたい）及びＨｅｌｌｓｔｒｏｍ，Ｉ ｅｔ ａｌ．，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔ’ｌ Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ ８２：１４９９−１５０２（１９８５）、５，８２１，３３７（Ｂｒｕｇｇｅｍａｎｎ，Ｍ． ｅｔ ａｌ．，Ｊ．Ｅｘｐ．Ｍｅｄ．１６６：１３５１−１３６１（１９８７）を参照されたい）において記載されている。あるいは、非放射性アッセイ法を用いてもよい（例えば、フローサイトメトリーのためのＡＣＴＩ（商標）非放射性細胞傷害性アッセイ（ＣｅｌｌＴｅｃｈｎｏｌｏｇｙ，Ｉｎｃ．Ｍｏｕｎｔａｉｎ Ｖｉｅｗ，ＣＡ、及びＣｙｔｏＴｏｘ ９６（登録商標）非放射性細胞傷害性アッセイ（Ｐｒｏｍｅｇａ，Ｍａｄｉｓｏｎ，ＷＩ）を参照されたい。そのようなアッセイに有用なエフェクター細胞には、末梢血単核細胞（ＰＢＭＣ）及びナチュラルキラー（ＮＫ）細胞が含まれる。あるいは、または追加的に、対象分子のＡＤＣＣ活性を、ｉｎ ｖｉｖｏで、例えば、Ｃｌｙｎｅｓ ｅｔ ａｌ．Ｐｒｏｃ．Ｎａｔ’ｌ Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ ９５：６５２−６５６（１９９８）に開示されているものなどの動物モデルにおいて評価してもよい。Ｃ１ｑ結合アッセイも実施して、抗体がＣ１ｑと結合不可能であり、したがってＣＤＣ活性を欠いていることを確認してもよい。例えば、ＷＯ２００６／０２９８７９及びＷＯ２００５／１００４０２におけるＣ１ｑ及びＣ３ｃ結合ＥＬＩＳＡを参照されたい。補体活性化を評価するために、ＣＤＣアッセイを行ってもよい（例えば、Ｇａｚｚａｎｏ−Ｓａｎｔｏｒｏ ｅｔ ａｌ．，Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．Ｍｅｔｈｏｄｓ ２０２：１６３（１９９６）；Ｃｒａｇｇ，Ｍ．Ｓ．ｅｔ ａｌ．，Ｂｌｏｏｄ １０１：１０４５−１０５２（２００３）；及びＣｒａｇｇ，Ｍ．Ｓ．ａｎｄ Ｍ．Ｊ．Ｇｌｅｎｎｉｅ，Ｂｌｏｏｄ １０３：２７３８−２７４３（２００４）を参照されたい）。ＦｃＲｎ結合及びｉｎ ｖｉｖｏクリアランス／半減期の決定もまた、当技術分野で公知の方法を使用して行うことができる（例えば、Ｐｅｔｋｏｖａ，Ｓ．Ｂ．ｅｔ ａｌ．，Ｉｎｔ’ｌ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１８（１２）：１７５９−１７６９（２００６）を参照されたい）。
低減されたエフェクター機能を有する抗体には、Ｆｃ領域残基２３８、２６５、２６９、２７０、２９７、３２７、及び３２９のうちの１個または複数個の置換を有するものが含まれる（米国特許第６，７３７，０５６号）。そのようなＦｃ変異体には、残基２６５及び２９７のアラニンへの置換を有する「ＤＡＮＡ」Ｆｃ変異体と呼ばれるものを含む（米国特許第７，３３２，５８１号）、アミノ酸２６５、２６９、２７０、２９７、及び３２７位の２つ以上において置換を有するＦｃ変異体が含まれる。
ＦｃＲへの改善または減弱された結合を有するある種の抗体変異体が記載されている。（例えば、米国特許第６，７３７，０５６号、ＷＯ２００４／０５６３１２号、及びＳｈｉｅｌｄｓ ｅｔ ａｌ．，Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．９（２）：６５９１−６６０４（２００１）を参照されたい）。
ある種の実施形態では、抗体変異体は、ＡＤＣＣを改善する１つまたは複数のアミノ酸置換、例えば、Ｆｃ領域の２９８、３３３、及び／または３３４位（残基のＥＵナンバリング）における置換を有するＦｃ領域を含む。
一部の実施形態では、例えば、米国特許第６，１９４，５５１号、ＷＯ９９／５１６４２、及びＩｄｕｓｏｇｉｅ ｅｔ ａｌ．Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１６４：４１７８−４１８４（２０００）において記載されているとおり、変化した（すなわち、改善または減少のいずれか）Ｃ１ｑ結合及び／または補体依存性細胞傷害性（ＣＤＣ）をもたらす変化をＦｃ領域において行う。
増大した半減期、及び母体ＩｇＧの胎児への移入を担う新生児型Ｆｃ受容体（ＦｃＲｎ）への改善された結合を有する抗体（Ｇｕｙｅｒ ｅｔ ａｌ．，Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１１７：５８７（１９７６）及びＫｉｍ ｅｔ ａｌ．，Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．２４：２４９（１９９４））が、ＵＳ ２００５／００１４９３４Ａ１（Ｈｉｎｔｏｎら）において記載されている。それらの抗体は、ＦｃＲｎへのＦｃ領域の結合を改善する１つまたは複数の置換を内部に有するＦｃ領域を含む。そのようなＦｃ変異体には、Ｆｃ領域残基２３８、２５６、２６５、２７２、２８６、３０３、３０５、３０７、３１１、３１２、３１７、３４０、３５６、３６０、３６２、３７６、３７８、３８０、３８２、４１３、４２４、または４３４のうちの１つ以上における置換、例えば、Ｆｃ領域残基４３４の置換（米国特許第７，３７１，８２６号）を有するものが含まれる。
また、Ｆｃ領域変異体の他の例に関して、Ｄｕｎｃａｎ ＆ Ｗｉｎｔｅｒ，Ｎａｔｕｒｅ ３２２：７３８−４０（１９８８）、米国特許第５，６４８，２６０号、米国特許第５，６２４，８２１号、及びＷＯ９４／２９３５１号も参照されたい。
ｄ） システイン操作された抗体変異体
ある種の実施形態では、抗体の１個または複数個の残基がシステイン残基で置換されている、システイン操作された抗体、例えば、「チオＭａｂ」を作成することが望ましいことがある。特定の実施形態では、置換残基は、抗体のアクセス可能な部位において生じる。それらの残基をシステインで置換することによって、反応性のチオール基はそれによって、抗体のアクセス可能な部位に位置付けられ、それを使用して、抗体を、薬物部分またはリンカー−薬物部分などの他の部分にコンジュゲートさせて、本明細書においてさらに記載するとおりのイムノコンジュゲートを作成してもよい。ある種の実施形態では、次の残基のうちの任意の１個または複数個をシステインで置換してもよい：軽鎖のＶ２０５（Ｋａｂａｔナンバリング）、重鎖のＡ１１８（ＥＵナンバリング）、及び重鎖Ｆｃ領域のＳ４００（ＥＵナンバリング）。システイン操作された抗体を、例えば、米国特許第７，５２１，５４１号において記載されているとおりに生成してもよい。
ｅ） 抗体誘導体
ある種の実施形態では、本明細書において提供する抗体を、当技術分野で公知であり、容易に入手可能な追加の非タンパク質性部分を含有するようにさらに修飾してもよい。抗体の誘導体化に適した部分には、限定されないが、水溶性ポリマーが含まれる。水溶性ポリマーの非限定的な例には、限定されないが、ポリエチレングリコール（ＰＥＧ）、エチレングリコール／プロピレングリコールのコポリマー、カルボキシメチルセルロース、デキストラン、ポリビニルアルコール、ポリビニルピロリドン、ポリ−１，３−ジオキソラン、ポリ−１，３，６−トリオキサン、エチレン／無水マレイン酸コポリマー、ポリアミノ酸（ホモポリマーまたはランダムコポリマーのいずれか）、及びデキストランまたはポリ（ｎ−ビニルピロリドン）ポリエチレングリコール、プロプロピレン（ｐｒｏｐｒｏｐｙｌｅｎｅ）グリコールホモポリマー、プロリプロピレン（ｐｒｏｌｙｐｒｏｐｙｌｅｎｅ）オキシド／エチレンオキシドコポリマー、ポリオキシエチル化ポリオール（例えば、グリセロール）、ポリビニルアルコール、ならびにそれらの混合物が含まれる。ポリエチレングリコールプロピオンアルデヒドは、水中でのその安定性によって、製造において利点を有し得る。ポリマーは、任意の分子量のものであってもよく、分岐していても非分岐であってもよい。抗体に付着したポリマーの数は、様々であってもよく、１つを超えるポリマーが付着される場合、それらは、同じ分子または異なる分子であり得る。一般に、誘導体化に使用されるポリマーの数及び／または種類は、限定されないが、改善される抗体の特定の特性または機能、抗体誘導体が規定の条件下で療法において使用されるかどうかなどを含む考察に基づいて、決定することができる。
別の実施形態では、放射線への曝露によって選択的に加熱され得る抗体及び非タンパク質性部分のコンジュゲートを提供する。一実施形態では、非タンパク質性部分は、カーボンナノチューブ（Ｋａｍ ｅｔ ａｌ．，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ １０２：１１６００−１１６０５（２００５））である。放射線は、任意の波長のものであってもよく、限定されないが、一般の細胞は傷つけないが、非タンパク質性部分を、抗体−非タンパク質性部分に近位の細胞が殺滅させられる温度まで加熱する波長が含まれる。
Ｂ． 組換え法及び組成物
抗体を、例えば、米国特許第４，８１６，５６７号において記載されているとおり、組換え法及び組成物を使用して生産してもよい。一実施形態では、本明細書に記載の抗ＯＸ４０抗体をコードする単離核酸を提供する。そのような核酸は、抗体のＶＬを含むアミノ酸配列及び／またはＶＨを含むアミノ酸配列（例えば、抗体の軽鎖及び／または重鎖）をコードし得る。さらなる実施形態では、そのような核酸を含む１種または複数種のベクター（例えば、発現ベクター）を提供する。さらなる実施形態では、そのような核酸を含む宿主細胞を提供する。そのような一実施形態では、宿主細胞は、（１）抗体のＶＬを含むアミノ酸配列及び抗体のＶＨを含むアミノ酸配列をコードする核酸を含むベクター、または（２）抗体のＶＬを含むアミノ酸配列をコードする核酸を含む第１のベクター、及び抗体のＶＨを含むアミノ酸配列をコードする核酸を含む第２のベクターを含む（例えば、それらで形質転換されている）。一実施形態では、宿主細胞は、真核性、例えば、チャイニーズハムスター卵巣（ＣＨＯ）細胞またはリンパ系細胞（例えば、Ｙ０、ＮＳ０、Ｓｐ２０細胞）である。一実施形態では、抗ＯＸ４０抗体を作製する方法であって、上記で提供したとおりの抗体をコードする核酸を含む宿主細胞を、抗体の発現に適した条件下で培養することと、任意選択的に、抗体を宿主細胞（または宿主細胞培養培地）から回収することとを含む方法を提供する。
抗ＯＸ４０抗体の組換え産生のために、例えば、上記のとおり、抗体をコードする核酸が単離され、宿主細胞におけるさらなるクローニング及び／または発現のために、１種または複数種のベクター中に挿入される。そのような核酸は、従来の手順を使用して（例えば、抗体の重鎖及び軽鎖をコードする遺伝子に特異的に結合可能である、オリゴヌクレオチドプローブを使用することによって）、容易に単離され、配列決定され得る。
抗体コードベクターのクローニングまたは発現に適した宿主細胞には、本明細書に記載の原核細胞または真核細胞が含まれる。例えば、特にグリコシル化及びＦｃエフェクター機能が必要とされない場合には、抗体を細菌において産生させてもよい。細菌における抗体断片及びポリペプチドの発現については、例えば、米国特許第５，６４８，２３７号、同第５，７８９，１９９号、及び同第５，８４０，５２３号を参照されたい。（また、Ｅ．ｃｏｌｉにおける抗体断片の発現を記載する、Ｃｈａｒｌｔｏｎ，Ｍｅｔｈｏｄｓ ｉｎ Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｂｉｏｌｏｇｙ，Ｖｏｌ．２４８（Ｂ．Ｋ．Ｃ．Ｌｏ，ｅｄ．，Ｈｕｍａｎａ Ｐｒｅｓｓ，Ｔｏｔｏｗａ，ＮＪ，２００３），ｐｐ．２４５−２５４も参照されたい）。発現後に、抗体を、可溶性画分において細菌細胞ペーストから単離してもよく、またさらに精製することができる。
原核生物に加えて、糸状菌または酵母などの真核微生物が、抗体コードベクターに適したクローニングまたは発現宿主であり、それには、グリコシル化経路が「ヒト化」されており、部分的または完全ヒトグリコシル化パターンを有する抗体の産生をもたらす真菌及び酵母株が含まれる。Ｇｅｒｎｇｒｏｓｓ，Ｎａｔ．Ｂｉｏｔｅｃｈ．２２：１４０９−１４１４（２００４）、及びＬｉ ｅｔ ａｌ．，Ｎａｔ．Ｂｉｏｔｅｃｈ．２４：２１０−２１５（２００６）を参照されたい。
グリコシル化抗体の発現に適した宿主細胞はまた、多細胞生物（無脊椎動物及び脊椎動物）に由来する。無脊椎動物細胞の例には、植物及び昆虫細胞が含まれる。昆虫細胞と併せて、特にＳｐｏｄｏｐｔｅｒａ ｆｒｕｇｉｐｅｒｄａ細胞のトランスフェクションのために使用され得る多数のバキュロウイルス株が特定されている。
植物細胞培養物もまた、宿主として利用することができる。例えば、米国特許第５，９５９，１７７号、同第６，０４０，４９８号、同第６，４２０，５４８号、同第７，１２５，９７８号、及び同第６，４１７，４２９号（トランスジェニック植物において抗体を産生するためのＰＬＡＮＴＩＢＯＤＩＥＳ（商標）技術を記載）を参照されたい。
脊椎動物細胞も、宿主として使用してよい。例えば、懸濁液中で成長するように適合された哺乳動物細胞系が、有用であり得る。有用な哺乳動物宿主細胞系の他の例は、ＳＶ４０によって形質転換されたサル腎臓ＣＶ１株（ＣＯＳ−７）；ヒト胎児由来腎臓系（例えば、Ｇｒａｈａｍ ｅｔ ａｌ．，Ｊ．Ｇｅｎ Ｖｉｒｏｌ．３６：５９（１９７７）において記載されたとおりの２９３または２９３細胞）；ベビーハムスター腎臓細胞（ＢＨＫ）；マウスセルトリ細胞（例えば、Ｍａｔｈｅｒ，Ｂｉｏｌ．Ｒｅｐｒｏｄ．２３：２４３−２５１（１９８０）において記載されたとおりのＴＭ４細胞）；サル腎臓細胞（ＣＶ１）；アフリカミドリザル腎臓細胞（ＶＥＲＯ−７６）；ヒト子宮頸がん細胞（ＨＥＬＡ）；イヌ腎臓細胞（ＭＤＣＫ；バッファローラット肝臓細胞（ＢＲＬ３Ａ）；ヒト肺細胞（Ｗ１３８）；ヒト肝がん細胞（Ｈｅｐ Ｇ２）；マウス乳腺腫瘍（ＭＭＴ０６０５６２）；例えば、Ｍａｔｈｅｒ ｅｔ ａｌ．，Ａｎｎａｌｓ Ｎ．Ｙ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．３８３：４４−６８（１９８２）において記載されたとおりのＴＲＩ細胞；ＭＲＣ５細胞；及びＦＳ４細胞である。他の有用な哺乳動物宿主細胞系には、ＤＨＦＲ− ＣＨＯ細胞（Ｕｒｌａｕｂ ｅｔ ａｌ．，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ ７７：４２１６（１９８０）を含む、チャイニーズハムスター卵巣（ＣＨＯ）細胞；ならびにＹ０、ＮＳ０、及びＳｐ２／０などの骨髄腫細胞系が含まれる。抗体産生に適したある種の哺乳動物宿主細胞系の概説については、例えば、Ｙａｚａｋｉ ａｎｄ Ｗｕ，Ｍｅｔｈｏｄｓ ｉｎ Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｂｉｏｌｏｇｙ，Ｖｏｌ．２４８（Ｂ．Ｋ．Ｃ．Ｌｏ，ｅｄ．，Ｈｕｍａｎａ Ｐｒｅｓｓ，Ｔｏｔｏｗａ，ＮＪ），ｐｐ．２５５−２６８（２００３）を参照されたい。
Ｃ． アッセイ
本明細書において提供する抗ＯＸ４０抗体は、それらの物理／化学特性及び／または生物学的活性について、当技術分野で公知の様々なアッセイによって、特定され、スクリーニングされ、または特徴付けられてもよい。
１． 結合アッセイ及び他のアッセイ
一態様では、本発明の抗体を、その抗原結合活性について、例えば、ＥＬＩＳＡ、ウェスタンブロットなどの公知の方法によって試験する。ＯＸ４０結合を、当技術分野で公知の方法を使用して決定してもよく、例示的な方法を本明細書において開示する。一実施形態では、結合を、ラジオイムノアッセイを使用して測定する。例示的なラジオイムノアッセイを実施例において例示する。ＯＸ４０抗体をヨウ化し、固定濃度のヨウ化抗体及び漸減濃度の系列希釈された未標識ＯＺ Ｘ４０抗体を含有する競合反応混合物を調製する。ＯＸ４０を発現する細胞（例えば、ヒトＯＸ４０で安定的にトランスフェクトされたＢＴ４７４細胞）を、反応混合物に添加する。インキュベーションの後に、細胞を洗浄して、遊離ヨウ化ＯＸ４０抗体を、細胞に結合したＯＸ４０抗体から分離する。結合したヨウ化ＯＸ４０抗体のレベルを、例えば、細胞に関連した放射能をカウントすることによって決定し、結合親和性を、標準的な方法を使用して決定する。別の実施形態では、表面発現ＯＸ４０（例えば、Ｔ細胞サブセット上）に結合するＯＸ４０抗体の能力を、フローサイトメトリーを使用して評価する。末梢白血球を得（例えば、ヒト、カニクイザル、ラット、またはマウスから）、細胞を血清でブロッキングする。標識されたＯＸ４０抗体を系列希釈法で添加し、Ｔ細胞も、Ｔ細胞サブセットを特定するために染色する（当技術分野で公知の方法を使用）。試料のインキュベーション及び洗浄の後に、細胞を、フローサイトメーターを使用して分類し、データを、当技術分野で周知の方法を使用して分析する。別の実施形態では、ＯＸ４０結合を、表面プラスモン共鳴を使用して分析してもよい。例示的な表面プラスモン共鳴方法は、実施例において例示する。
別の態様では、競合アッセイを使用して、ＯＸ４０への結合について本明細書において開示する抗ＯＸ４０抗体のいずれかと競合する抗体を特定してもよい。ある種の実施形態では、そのような競合抗体は、本明細書において開示する抗ＯＸ４０抗体のいずれかによって結合される同じエピトープ（例えば、直線状または立体配座エピトープ）に結合する。抗体が結合するエピトープをマッピングするための詳細な例示的な方法は、Ｍｏｒｒｉｓ（１９９６）“Ｅｐｉｔｏｐｅ Ｍａｐｐｉｎｇ Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ，”ｉｎ Ｍｅｔｈｏｄｓ ｉｎ Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｂｉｏｌｏｇｙ ｖｏｌ．６６（Ｈｕｍａｎａ Ｐｒｅｓｓ，Ｔｏｔｏｗａ，ＮＪ）において提供されている。競合アッセイは、実施例において例示する。
例示的な競合アッセイにおいて、固定化されたＯＸ４０を、ＯＸ４０に結合する第１の標識抗体（例えば、ｍａｂ １Ａ７．ｇｒ．１、ｍａｂ ３Ｃ８．ｇｒ５）、及びＯＸ４０への結合につい第１の抗体と競合するその能力について試験されている第２の未標識抗体を含む溶液中でインキュベートする。第２の抗体は、ハイブリドーマ上清中に存在してもよい。対照として、固定化されたＯＸ４０を、第１の標識抗体は含むが、第２の未標識抗体は含まない溶液中でインキュベートする。ＯＸ４０への第１の抗体の結合を許容する条件下でのインキュベーション後に、過剰の非結合抗体を除去し、固定化されたＯＸ４０に関連する標識の量を測定する。固定化されたＯＸ４０に関連する標識の量が、対照試料と比較して試験試料中で実質的に低減される場合、それは、第２の抗体がＯＸ４０への結合について第１の抗体と競合していることを示す。Ｈａｒｌｏｗ ａｎｄ Ｌａｎｅ（１９８８） Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ：Ａ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ Ｍａｎｕａｌ ｃｈ．１４（Ｃｏｌｄ Ｓｐｒｉｎｇ Ｈａｒｂｏｒ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ，Ｃｏｌｄ Ｓｐｒｉｎｇ Ｈａｒｂｏｒ，ＮＹ）を参照されたい。
２． 活性アッセイ
一態様では、生物学的活性を有する抗ＯＸ４０抗体をそこから特定するためのアッセイを提供する。生物学的活性には、例えば、ＯＸ４０への結合（例えば、ヒト及び／またはカニクイザルＯＸ４０への結合）、ＯＸ４０媒介性シグナル伝達の増大（例えば、ＮＦｋＢ−媒介性転写の増大）、ヒトＯＸ４０を発現する細胞（例えば、Ｔ細胞）の枯渇、ＡＤＣＣ及び／または食作用による、ヒトＯＸ４０を発現する細胞の枯渇、例えばエフェクターＴ細胞増殖の増大及び／またはエフェクターＴ細胞によるサイトカイン産生（例えば、ガンマインターフェロン）の増大によるＴエフェクター細胞機能（例えば、ＣＤ４＋エフェクターＴ細胞）の増強、例えばメモリーＴ細胞増殖の増大及び／またはメモリーＴ細胞によるサイトカイン産生（例えば、ガンマインターフェロン）の増大によるメモリーＴ細胞機能（例えば、ＣＤ４＋メモリーＴ細胞）の増強、調節性Ｔ細胞機能の阻害（例えば、エフェクターＴ細胞機能（例えば、ＣＤ４＋エフェクターＴ細胞機能）のＴｒｅｇ抑制の低下による）、ヒトエフェクター細胞への結合が含まれ得る。ｉｎ ｖｉｖｏ及び／またはｉｎ ｖｉｔｒｏでそのような生物学的活性を有する抗体も提供する。
ある種の実施形態では、本発明の抗体をそのような生物学的活性について試験する。
当技術分野で公知の方法を使用して、Ｔ細胞同時刺激をアッセイすることができ、例示的な方法を本明細書において開示する。例えば、Ｔ細胞（例えば、メモリーまたはエフェクターＴ細胞）は、末梢白血球から得てもよい（例えば、Ｆｉｃｏｌｌ勾配遠心分離を使用してヒト全血から単離）。メモリーＴ細胞（例えば、ＣＤ４＋メモリーＴ細胞）またはエフェクターＴ細胞（例えば、ＣＤ４＋Ｔｅｆｆ細胞）は、当技術分野で公知の方法を使用して、ＰＢＭＣから単離してもよい。例えば、Ｍｉｌｔｅｎｙｉ ＣＤ４＋メモリーＴ細胞単離キットまたはＭｉｌｔｅｎｙｉナイーブＣＤ４＋Ｔ細胞単離キットを使用してもよい。単離Ｔ細胞を、抗原提示細胞（例えば、ＣＤ３２及びＣＤ８０を発現する照射Ｌ細胞）の存在下で培養し、ＯＸ４０アゴニスト抗体の存在または不在下で抗ＣＤ３抗体の添加によって活性化させる。Ｔ細胞増殖のアゴニストＯＸ４０抗体の効果を、当技術分野で周知の方法を使用して測定してもよい。例えば、ＣｅｌｌＴｉｔｅｒ Ｇｌｏキット（Ｐｒｏｍｅｇａ）を使用してもよく、結果を、Ｍｕｌｔｉｌａｂｅｌ Ｒｅａｄｅｒ（Ｐｅｒｋｉｎ Ｅｌｍｅｒ）で読み取る。Ｔ細胞機能に対するアゴニストＯＸ４０抗体の効果はまた、Ｔ細胞によって産生されるサイトカインの分析によって決定してもよい。一実施形態では、ＣＤ４＋Ｔ細胞によるインターフェロンガンマの産生を、例えば、細胞培養上清中のインターフェロンガンマの測定によって決定する。インターフェロンガンマを測定するための方法は、当技術分野で周知である。
Ｔｒｅｇ細胞機能を、当技術分野で公知の方法を使用してアッセイしてもよく、例示的な方法を本明細書において開示する。一例では、エフェクターＴ細胞増殖を抑制するＴｒｅｇの能力をアッセイする。Ｔ細胞を、当技術分野で公知の方法を使用してヒト全血から単離する（例えば、メモリーＴ細胞またはナイーブＴ細胞を単離）。精製されたＣＤ４＋ナイーブＴ細胞を標識し（例えば、ＣＦＳＥで）、精製されたＴｒｅｇ細胞を、異なる試薬で標識する。照射抗原提示細胞（例えば、ＣＤ３２及びＣＤ８０を発現するＬ細胞）を、標識された精製ナイーブＣＤ４＋Ｔ細胞及び精製Ｔｒｅｇと共に同時培養する。同時培養物を、抗ＣＤ３抗体を使用して活性化させ、アゴニストＯＸ４０抗体の存在または不在下で試験される。適切な時間（例えば、６日間の同時培養）の後に、ＦＡＣＳ分析を使用して、ＣＤ４＋ナイーブＴ細胞増殖のレベルを、色素希釈によって、標識染色の低減（例えば、ＣＦＳＥ標識染色の低減）において追跡する。
ＯＸ４０シグナル伝達は、当技術分野で周知の方法を使用してアッセイしてもよく、例示的な方法を本明細書において開示する。一実施形態では、ヒトＯＸ４０と、レポーター遺伝子に融合したＮＦｋＢプロモーターを含むレポーター遺伝子（例えば、ベータルシフェラーゼ）とを発現するトランスジェニック細胞を生成する。細胞へのＯＸ４０アゴニスト抗体の添加は、ＮＦｋＢ転写の増大をもたらし、これを、レポーター遺伝子についてのアッセイを使用して検出する。
例えば、単球由来マクロファージ、またはＵ９３７細胞（成熟マクロファージの形態及び特徴を有するヒト組織球性リンパ腫細胞系）を使用することによって、食作用をアッセイしてもよい。ＯＸ４０発現細胞を、抗ＯＸ４０アゴニスト抗体の存在または不在下で、単球由来マクロファージまたはＵ９３７細胞に添加する。適切な期間にわたってそれらの細胞を培養した後に、１）マクロファージまたはＵ９３７細胞及び２）ＯＸ４０発現細胞のマーカーで二重染色する細胞のパーセンテージを検査し、これを、ＯＸ４０発現細胞（例えば、ＧＦＰ）のマーカーを示す細胞の合計数で割ることによって、食作用のパーセンテージを決定する。分析を、フローサイトメトリーによって行ってもよい。別の実施形態では、分析を、蛍光顕微鏡分析によって行ってもよい。
ＡＤＣＣを、例えば、当技術分野で周知の方法を使用してアッセイしてもよい。例示的な方法は、定義のセクションにおいて記載し、例示的なアッセイは、実施例において開示する。一部の実施形態では、ＯＸ４０のレベルを、ＡＤＣＣアッセイを試験するために使用されるＯＸ４０発現細胞において特徴付ける。その細胞を、検出可能に標識された抗ＯＸ４０抗体（例えば、ＰＥ標識済み）で染色してもよく、次いで、蛍光のレベルを、フローサイトメトリーを使用して決定し、結果を、蛍光強度の中央値（ＭＦＩ）として表す。別の実施形態では、ＡＤＣＣを、ＣｅｌｌＴｉｔｅｒ Ｇｌｏアッセイキットによって分析してもよく、細胞生存性／細胞傷害性は、化学ルミネセンス（ｃｈｅｍｉｏｌｕｍｉｎｅｓｃｅｎｃｅ）によって決定してもよい。
ＦｃγＲＩＡ、ＦｃγＲＩＩＡ、ＦｃγＲＩＩＢ、及びＦｃγＲＩＩＩＡの２種のアロタイプ（Ｆ１５８及びＶ１５８）への様々な抗体の結合親和性を、個々の組換えＦｃγ受容体を使用するＥＬＩＳＡベースのリガンド結合アッセイにおいて測定してもよい。精製ヒトＦｃγ受容体は、Ｃ末端においてＧｌｙ／６ｘＨｉｓ／グルタチオンＳ−トランスフェラーゼ（ＧＳＴ）ポリペプチドタグに連結している受容体γ鎖の細胞外ドメインを含有する融合タンパク質として発現される。それらのヒトＦｃγ受容体に対する抗体の結合親和性は、次のとおりアッセイする。低親和性受容体、すなわち、ＦｃγＲＩＩＡ（ＣＤ３２Ａ）、ＦｃγＲＩＩＢ（ＣＤ３２Ｂ）、ならびにＦｃγＲＩＩＩＡ（ＣＤ１６）の２種のアロタイプ、Ｆ−１５８及びＶ−１５８では、抗体を、１：３の抗体：架橋結合Ｆ（ａｂ’）２のおおよそのモル比で、ヤギ抗ヒトカッパ鎖のＦ（ａｂ’）２断片（ＩＣＮ Ｂｉｏｍｅｄｉｃａｌ；Ｉｒｖｉｎｅ、ＣＡ）と架橋結合することによって多量体として試験してもよい。プレートを、抗ＧＳＴ抗体（Ｇｅｎｅｎｔｅｃｈ）でコーティングし、ウシ血清アルブミン（ＢＳＡ）でブロッキングする。ＥＬｘ４０５（商標）プレートウォッシャー（Ｂｉｏｔｅｋ Ｉｎｓｔｒｕｍｅｎｔｓ；Ｗｉｎｏｏｓｋｉ，ＶＴ）を用いて、０．０５％Ｔｗｅｅｎ−２０を含有するリン酸緩衝生理食塩水（ＰＢＳ）で洗浄した後に、Ｆｃγ受容体を、そのプレートに２５ｎｇ／ウェルで添加し、室温で１時間にわたってインキュベートする。プレートを洗浄した後に、試験抗体の系列希釈液を多量体複合体として添加し、プレートを、室温で２時間にわたってインキュベートした。未結合抗体を除去するためのプレート洗浄の後に、Ｆｃγ受容体に結合した抗体を、ヤギ抗ヒトＦ（ａｂ’）２のホースラディッシュペルオキシダーゼ（ＨＲＰ）コンジュゲートしたＦ（ａｂ’）２断片（Ｊａｃｋｓｏｎ ＩｍｍｕｎｏＲｅｓｅａｒｃｈ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓ；Ｗｅｓｔ Ｇｒｏｖｅ，ＰＡ）で検出し、続いて、基質であるテトラメチルベンジジン（ＴＭＢ）（Ｋｉｒｋｅｇａａｒｄ ＆ Ｐｅｒｒｙ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓ；Ｇａｉｔｈｅｒｓｂｕｒｇ，ＭＤ）を添加する。プレートを、試験されるＦｃγ受容体に応じて、発色するように室温で５〜２０分間にわたってインキュベートする。反応を、１Ｍ Ｈ３ＰＯ４で停止し、４５０ｎｍでの吸光度を、マイクロプレートリーダー（ＳｐｅｃｔｒａＭａｘ（登録商標）１９０、Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｄｅｖｉｃｅｓ；Ｓｕｎｎｙｖａｌｅ、ＣＡ）で測定した。抗体の濃度に対して抗体希釈液の二重反復試験からの平均吸光値をプロットすることによって、用量反応結合曲線を生成する。ＳｏｆｔＭａｘ Ｐｒｏ（Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｄｅｖｉｃｅｓ）を使用して、結合曲線を４パラメータ式と適合させた後に、Ｆｃγ受容体への結合からの最大応答の５０％（ＥＣ５０）が検出される抗体の有効濃度の値を決定した。
細胞死を惹起する抗体を選択するために、例えば、ヨウ化プロピジウム（ＰＩ）、トリパンブルー、または７ＡＡＤの取込みによって示される膜完全性の低下を、対照と比較して評価してもよい。ＰＩ取込みアッセイは、補体及び免疫エフェクター細胞の不在下で行うことができる。ＯＸ４０発現細胞を、培地のみと、または例えば、約１０μｇ／ｍｌの適切なモノクローナル抗体を含有する培地とインキュベートする。細胞を、一定期間（例えば、１または３日間）にわたってインキュベートする。各処置の後に、細胞を洗浄し、分取する。一部の実施形態では、細胞を、細胞凝集物除去用の３５ｍｍストレーナーキャップ付き１２×７５管（管１本当たり１ｍｌ、処置群あたり３管）に分取する。次いで、管に、ＰＩ（１０μｇ／ｍｌ）を入れる。ＦＡＣＳＣＡＮ（商標）フローサイトメーター及びＦＡＣＳＣＯＮＶＥＲＴ（商標）ＣｅｌｌＱｕｅｓｔソフトウェア（Ｂｅｃｔｏｎ Ｄｉｃｋｉｎｓｏｎ）を使用して、試料を分析してもよい。
上記ｉｎ ｖｉｔｒｏアッセイのいずれかにおいて使用するための細胞には、ＯＸ４０を天然に発現するか、またはＯＸ４０を発現するように操作されている細胞または細胞系が含まれる。そのような細胞には、ＯＸ４０を天然に発現する活性化Ｔ細胞、Ｔｒｅｇ細胞、及び活性化メモリーＴ細胞が含まれる。そのような細胞にはまた、ＯＸ４０を発現する細胞系、及び通常はＯＸ４０を発現しないが、ＯＸ４０をコードする核酸でトランスフェクトされている細胞系が含まれる。上記ｉｎ ｖｉｔｒｏアッセイのいずれかにおいて使用するための、本明細書において提供する例示的な細胞系には、ヒトＯＸ４０を発現するトランスジェニックＢＴ４７４細胞（ヒト乳がん細胞系）が含まれる。
上記アッセイのいずれも、抗ＯＸ４０抗体の代わりに、またはそれに加えて、本発明のイムノコンジュゲートを使用して実施してもよいことが理解される。
上記アッセイのいずれも、抗ＯＸ４０抗体及び追加の治療薬を使用して実施してもよいことが理解される。
Ｄ． イムノコンジュゲート
本発明はまた、１種または複数種の細胞傷害性薬剤、例えば、化学療法薬若しくは薬物、成長阻害薬、毒素（例えば、タンパク質毒素、細菌、真菌、植物、若しくは動物由来の酵素活性毒素、またはその断片）、または放射性同位体にコンジュゲートされた本明細書の抗ＯＸ４０抗体を含むイムノコンジュゲートを提供する。
一実施形態では、イムノコンジュゲートは、抗体が、限定されないが、マイタンシノイド（米国特許第５，２０８，０２０号、同第５，４１６，０６４号、及び欧州特許第０ ４２５ ２３５Ｂ１号を参照されたい）；オーリスタチン、例えば、モノメチルオーリスタチン薬物部分ＤＥ及びＤＦ（ＭＭＡＥ及びＭＭＡＦ）（米国特許第５，６３５，４８３号及び同第５，７８０，５８８号、及び同第７，４９８，２９８号を参照されたい）；ドラスタチン；カリケアマイシンまたはその誘導体（米国特許第５，７１２，３７４号、同第５，７１４，５８６号、同第５，７３９，１１６号、同第５，７６７，２８５号、同第５，７７０，７０１号、同第５，７７０，７１０号、同第５，７７３，００１号、及び同第５，８７７，２９６号；Ｈｉｎｍａｎ ｅｔ ａｌ．，Ｃａｎｃｅｒ Ｒｅｓ．５３：３３３６−３３４２（１９９３）；及びＬｏｄｅ ｅｔ ａｌ．，Ｃａｎｃｅｒ Ｒｅｓ．５８：２９２５−２９２８（１９９８）を参照されたい）；アンスラサイクリン、例えば、ダウノマイシンまたはドキソルビシン（Ｋｒａｔｚ ｅｔ ａｌ．，Ｃｕｒｒｅｎｔ Ｍｅｄ．Ｃｈｅｍ．１３：４７７−５２３（２００６）；Ｊｅｆｆｒｅｙ ｅｔ ａｌ．，Ｂｉｏｏｒｇａｎｉｃ ＆ Ｍｅｄ．Ｃｈｅｍ．Ｌｅｔｔｅｒｓ １６：３５８−３６２（２００６）；Ｔｏｒｇｏｖ ｅｔ ａｌ．，Ｂｉｏｃｏｎｊ．Ｃｈｅｍ．１６：７１７−７２１（２００５）；Ｎａｇｙ ｅｔ ａｌ．，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ ９７：８２９−８３４（２０００）；Ｄｕｂｏｗｃｈｉｋ ｅｔ ａｌ．，Ｂｉｏｏｒｇ．＆ Ｍｅｄ．Ｃｈｅｍ．Ｌｅｔｔｅｒｓ １２：１５２９−１５３２（２００２）；Ｋｉｎｇ ｅｔ ａｌ．，Ｊ．Ｍｅｄ．Ｃｈｅｍ．４５：４３３６−４３４３（２００２）；及び米国特許第６，６３０，５７９号を参照されたい）；メトトレキサート；ビンデシン；タキサン、例えば、ドセタキセル、パクリタキセル、ラロタキセル、テセタキセル（ｔｅｓｅｔａｘｅｌ）、及びオルタタキセル；トリコテセン；及びＣＣ１０６５を含む１種または複数種の薬物にコンジュゲートされている抗体−薬物コンジュゲート（ＡＤＣ）である。
別の実施形態では、イムノコンジュゲートは、限定されないが、ジフテリアＡ鎖、ジフテリア毒素の非結合活性断片、外毒素Ａ鎖（Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ ａｅｒｕｇｉｎｏｓａから）、リシンＡ鎖、アブリンＡ鎖、モデシンＡ鎖、アルファ−サルシン、シナアブラギリ（Ａｌｅｕｒｉｔｅｓ ｆｏｒｄｉｉ）タンパク質、ジアンチンタンパク質、ヨウシュヤマゴボウ（Ｐｈｙｔｏｌａｃａ ａｍｅｒｉｃａｎａ）タンパク質（ＰＡＰＩ、ＰＡＰＩＩ、及びＰＡＰ−Ｓ）、ツルレイシ（ｍｏｍｏｒｄｉｃａ ｃｈａｒａｎｔｉａ）阻害薬、クルシン、クロチン、サボンソウ（ｓａｐａｏｎａｒｉａ ｏｆｆｉｃｉｎａｌｉｓ）阻害薬、ゲロニン、ミトゲリン（ｍｉｔｏｇｅｌｌｉｎ）、レストリクトシン（ｒｅｓｔｒｉｃｔｏｃｉｎ）、フェノマイシン（ｐｈｅｎｏｍｙｃｉｎ）、エノマイシン（ｅｎｏｍｙｃｉｎ）、及びトリコテセンを含む酵素活性毒素またはその断片にコンジュゲートされている本明細書に記載のとおりの抗体を含む。
別の実施形態では、イムノコンジュゲートは、放射性原子にコンジュゲートされて、放射性コンジュゲートを形成している本明細書に記載のとおりの抗体を含む。様々な放射性同位体が、放射性コンジュゲートの生成に利用可能である。例には、Ａｔ２１１、Ｉ１３１、Ｉ１２５、Ｙ９０、Ｒｅ１８６、Ｒｅ１８８、Ｓｍ１５３、Ｂｉ２１２、Ｐ３２、Ｐｂ２１２、及びＬｕの放射性同位体が含まれる。放射性コンジュゲートが検出のために使用される場合、これは、シンチグラフィ研究のための放射性原子、例えば、ｔｃ９９ｍ若しくはＩ１２３、または核磁気共鳴（ＮＭＲ）画像（磁気共鳴画像法、ｍｒｉとしても公知）のためのスピン標識、例えば、再びヨウ素−１２３、ヨウ素−１３１、インジウム−１１１、フッ素−１９、炭素−１３、窒素−１５、酸素−１７、ガドリニウム、マンガン、若しくは鉄を含んでもよい。
抗体及び細胞傷害性薬物のコンジュゲートは、様々な二官能タンパク質カップリング剤、例えば、Ｎ−スクシンイミジル−３−（２−ピリジルジチオ）プロピオナート（ＳＰＤＰ）、スクシンイミジル−４−（Ｎ−マレイミドメチル）シクロヘキサン−１−カルボキシラート（ＳＭＣＣ）、イミノチオラン（ＩＴ）、イミドエステルの二官能性誘導体（ジメチルアジピミダートＨＣｌなど）、活性エステル（スベリン酸ジスクシンイミジルなど）、アルデヒド（グルタルアルデヒドなど）、ビス−アジド化合物（ビス（ｐ−アジドベンゾイル）ヘキサンジアミンなど）、ビス−ジアゾニウム誘導体（ビス−（ｐ−ジアゾニウムベンゾイル）−エチレンジアミンなど）、ジイソシアナート（トルエン２，６−ジイソシアナートなど）、及びビス活性フッ素化合物（１，５−ジフルオロ−２，４−ジニトロベンゼンなど）を使用して作製してもよい。例えば、リシン免疫毒素は、Ｖｉｔｅｔｔａ ｅｔ ａｌ．，Ｓｃｉｅｎｃｅ ２３８：１０９８（１９８７）において記載されているとおりに調製することができる。炭素−１４標識された１−イソチオシアナトベンジル−３−メチルジエチレントリアミンペンタ酢酸（ＭＸ−ＤＴＰＡ）は、抗体に放射ヌクレオチドをコンジュゲートするための例示的なキレート化剤である。ＷＯ９４／１１０２６を参照されたい。リンカーは、細胞において細胞傷害性薬物の放出を容易にする「切断可能なリンカー」であってもよい。例えば、酸不安定性リンカー、ペプチダーゼ感受性リンカー、感光性リンカー、ジメチルリンカー、またはジスルフィド含有リンカー（Ｃｈａｒｉ ｅｔ ａｌ．，Ｃａｎｃｅｒ Ｒｅｓ．５２：１２７−１３１（１９９２）、米国特許第５，２０８，０２０号）を使用してもよい。
本明細書におけるイムノコンジュゲートまたはＡＤＣは、限定されないが、市販の（例えば、Ｐｉｅｒｃｅ Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ，Ｉｎｃ．製、Ｒｏｃｋｆｏｒｄ、ＩＬ．、Ｕ．Ｓ．Ａ）ＢＭＰＳ、ＥＭＣＳ、ＧＭＢＳ、ＨＢＶＳ、ＬＣ−ＳＭＣＣ、ＭＢＳ、ＭＰＢＨ、ＳＢＡＰ、ＳＩＡ、ＳＩＡＢ、ＳＭＣＣ、ＳＭＰＢ、ＳＭＰＨ、スルホ−ＥＭＣＳ、スルホ−ＧＭＢＳ、スルホ−ＫＭＵＳ、スルホ−ＭＢＳ、スルホ−ＳＩＡＢ、スルホ−ＳＭＣＣ、及びスルホ−ＳＭＰＢ、ならびにＳＶＳＢ（スクシンイミジル−（４−ビニルスルホン）ベンゾアート）を含むがこれらだけに限定されないクロスリンカー試薬を用いて調製されるそのようなコンジュゲートを明確に企図している。
Ｅ． 診断及び検出のための方法及び組成物
ある種の実施形態では、本明細書において提供する抗ＯＸ４０抗体はいずれも、生体試料中のＯＸ４０の存在を検出するために有用である。「検出すること」という用語は、本明細書において使用する場合、定量または定性検出を包含する。ある種の実施形態では、生体試料は、細胞または組織、例えば、腫瘍（例えば、ＮＳＣＬＣまたは乳房腫瘍）の試料を含む。
一実施形態では、診断または検出方法において使用するための抗ＯＸ４０抗体を提供する。さらなる態様では、生体試料中のＯＸ４０の存在を検出する方法を提供する。ある種の実施形態では、方法は、生体試料を、本明細書に記載の抗ＯＸ４０抗体と、ＯＸ４０への抗ＯＸ４０抗体の結合を許容する条件下で接触させることと、抗ＯＸ４０抗体とＯＸ４０との間で複合体が形成されるかどうかを検出することとを含む。そのような方法は、ｉｎ ｖｉｔｒｏまたはｉｎ ｖｉｖｏ方法であってもよい。一実施形態では、例えば、ＯＸ４０が患者選択のためのバイオマーカーである場合、抗ＯＸ４０抗体を使用して、抗ＯＸ４０抗体での治療にふさわしい対象を選択する。
一部の実施形態では、診断または検出方法において使用するための抗ＯＸ４０抗体は、（ａ）配列番号２のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ１；（ｂ）配列番号３のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ２；（ｃ）配列番号４のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ３；（ｄ）配列番号５のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ１；（ｅ）配列番号６のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ２、及び（ｆ）配列番号７のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ３から選択される少なくとも１つ、２つ、３つ、４つ、５つ、または６つのＨＶＲを含む抗ヒトＯＸ４０抗体である。一部の実施形態では、抗ＯＸ４０抗体は、（ａ）（ｉ）配列番号２のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ１、（ｉｉ）配列番号３のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ２、及び（ｉｉｉ）配列番号４から選択されるアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ３から選択される少なくとも１つ、少なくとも２つ、または３つすべてのＶＨ ＨＶＲ配列を含むＶＨドメイン；ならびに（ｂ）（ｉ）配列番号５のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ１、（ｉｉ）配列番号６のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ２、及び（ｃ）配列番号７のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ３から選択される少なくとも１つ、少なくとも２つ、または３つすべてのＶＬ ＨＶＲ配列を含むＶＬドメインを含む。一部の実施形態では、ＯＸ４０抗体は、（ａ）配列番号２のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ１；（ｂ）配列番号３のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ２；（ｃ）配列番号４のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ３；（ｄ）配列番号５のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ１；（ｅ）配列番号６のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ２、及び（ｆ）配列番号７から選択されるアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ３を含む。一部の実施形態では、抗体は、配列番号１８０のアミノ酸配列に対して少なくとも９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、または１００％配列同一性を有する重鎖可変ドメイン（ＶＨ）配列を含む。ある種の実施形態では、少なくとも９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、または９９％同一性を有するＶＨ配列は、参照配列に対して置換（例えば、保存的置換）、挿入、または欠失を含むが、その配列を含む抗ヒトＯＸ４０アゴニスト抗体は、ＯＸ４０に結合する能力を保持する。ある種の実施形態では、配列番号１８０において、合計１〜１０個のアミノ酸が置換、挿入、及び／または欠失されている。ある種の実施形態では、置換、挿入、または欠失は、ＨＶＲの外側の領域において（すなわち、ＦＲにおいて）生じる。任意選択的に、抗ヒトＯＸ４０アゴニスト抗体は、配列番号１８０におけるＶＨ配列（その配列の翻訳後修飾を含む）を含む。特定の実施形態では、ＶＨは、（ａ）配列番号２のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ１、（ｂ）配列番号３のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ２、及び（ｃ）配列番号４のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ３から選択される１つ、２つ、または３つのＨＶＲを含む。一部の実施形態では、抗体は、配列番号１７９のアミノ酸配列に対して少なくとも９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、または１００％配列同一性を有する軽鎖可変ドメイン（ＶＬ）を含む。ある種の実施形態では、少なくとも９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、または９９％同一性を有するＶＬ配列は、参照配列に対して置換（例えば、保存的置換）、挿入、または欠失を含むが、その配列を含む抗ヒトＯＸ４０アゴニスト抗体は、ＯＸ４０に結合する能力を保持する。ある種の実施形態では、配列番号１７９において、合計１〜１０個のアミノ酸が置換、挿入、及び／または欠失されている。ある種の実施形態では、置換、挿入、または欠失は、ＨＶＲの外側の領域において（すなわち、ＦＲにおいて）生じる。任意選択的に、抗ヒトＯＸ４０アゴニスト抗体は、配列番号１７９におけるＶＬ配列（その配列の翻訳後修飾を含む）を含む。特定の実施形態では、ＶＬは、（ａ）配列番号５のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ１；（ｂ）配列番号６のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ２、及び（ｃ）配列番号７のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ３から選択される１つ、２つ、または３つのＨＶＲを含む。
一部の実施形態では、診断または検出の方法において使用される抗ＯＸ４０抗体は、（ａ）配列番号２９のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ１；（ｂ）配列番号３０のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ２；（ｃ）配列番号３１のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ３；（ｄ）配列番号３７のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ１；（ｅ）配列番号３９のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ２；及び（ｆ）配列番号４２のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ３から選択される少なくとも１つ、２つ、３つ、４つ、５つ、または６つのＨＶＲを含む抗ヒトＯＸ４０抗体である。一部の実施形態では、抗ＯＸ４０抗体は、（ａ）（ｉ）配列番号２９のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ１、（ｉｉ）配列番号３０のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ２、及び（ｉｉｉ）配列番号３１から選択されるアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ３から選択される少なくとも１つ、少なくとも２つ、または３つすべてのＶＨ ＨＶＲ配列を含むＶＨドメイン；ならびに（ｂ）（ｉ）配列番号３７のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ１、（ｉｉ）配列番号３９のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ２、及び（ｃ）配列番号４２のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ３から選択される少なくとも１つ、少なくとも２つ、または３つすべてのＶＬ ＨＶＲ配列を含むＶＬドメインを含む。一部の実施形態では、抗ＯＸ４０抗体は、（ａ）配列番号２９のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ１；（ｂ）配列番号３０のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ２；（ｃ）配列番号３１のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ３；（ｄ）配列番号３７のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ１；（ｅ）配列番号３９のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ２；及び（ｆ）配列番号４２から選択されるアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ３を含む。一部の実施形態では、抗ＯＸ４０抗体は、配列番号１８２のアミノ酸配列に対して少なくとも９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、または１００％配列同一性を有する重鎖可変ドメイン（ＶＨ）配列を含む。ある種の実施形態では、少なくとも９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、または９９％同一性を有するＶＨ配列は、参照配列に対して置換（例えば、保存的置換）、挿入、または欠失を含むが、その配列を含む抗ヒトＯＸ４０アゴニスト抗体は、ＯＸ４０に結合する能力を保持する。ある種の実施形態では、配列番号１８２において、合計１〜１０個のアミノ酸が置換、挿入、及び／または欠失されている。ある種の実施形態では、置換、挿入、または欠失は、ＨＶＲの外側の領域において（すなわち、ＦＲにおいて）生じる。任意選択的に、抗ヒトＯＸ４０アゴニスト抗体は、配列番号１８２におけるＶＨ配列（その配列の翻訳後修飾を含む）を含む。特定の実施形態では、ＶＨは、（ａ）配列番号２９のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ１、（ｂ）配列番号３０のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ２、及び（ｃ）配列番号３１のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ３から選択される１つ、２つ、または３つのＨＶＲを含む。一部の実施形態では、抗ＯＸ４０抗体は、配列番号１８１のアミノ酸配列に対して少なくとも９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、または１００％配列同一性を有する軽鎖可変ドメイン（ＶＬ）を含む。ある種の実施形態では、少なくとも９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、または９９％同一性を有するＶＬ配列は、参照配列に対して置換（例えば、保存的置換）、挿入、または欠失を含むが、その配列を含む抗ヒトＯＸ４０アゴニスト抗体は、ＯＸ４０に結合する能力を保持する。ある種の実施形態では、配列番号１８１において、合計１〜１０個のアミノ酸が置換、挿入、及び／または欠失されている。ある種の実施形態では、置換、挿入、または欠失は、ＨＶＲの外側の領域において（すなわち、ＦＲにおいて）生じる。任意選択的に、抗ヒトＯＸ４０アゴニスト抗体は、配列番号１８１におけるＶＬ配列（その配列の翻訳後修飾を含む）を含む。特定の実施形態では、ＶＬは、（ａ）配列番号３７のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ１；（ｂ）配列番号３９のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ２；及び（ｃ）配列番号４２のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ３から選択される１つ、２つ、または３つのＨＶＲを含む。
一部の実施形態では、抗ＯＸ４０抗体は、配列番号１８０のＶＨ配列を含む。一部の実施形態では、抗ＯＸ４０抗体は、配列番号１７９のＶＬ配列を含む。一部の実施形態では、抗ＯＸ４０抗体は、配列番号１８０のＶＨ配列及び配列番号１７９のＶＬ配列を含む。一部の実施形態では、抗ＯＸ４０抗体は、配列番号１８２のＶＨ配列を含む。一部の実施形態では、抗ＯＸ４０抗体は、配列番号１８１のＶＬ配列を含む。一部の実施形態では、抗ＯＸ４０抗体は、配列番号１８２のＶＨ配列及び配列番号１８１のＶＬ配列を含む。
本発明の抗体を使用して診断されてもよい例示的な障害には、がんが含まれる。
ある種の実施形態では、標識された抗ＯＸ４０抗体を提供する。標識には、限定されないが、直接検出される標識または部分（蛍光標識、発色団標識、高電子密度標識、化学発光標識、及び放射性標識など）、さらには、例えば、酵素反応または分子相互作用を介して、間接的に検出される酵素またはリガンドなどの部分が含まれる。例示的な標識には、限定されないが、放射性同位体３２Ｐ、１４Ｃ、１２５Ｉ、３Ｈ、及び１３１Ｉ、フルオロフォア、例えば、希土類キレートまたはフルオレセイン及びその誘導体、ローダミン及びその誘導体、ダンシル、ウンベリフェロン、ルセリフェラーゼ（ｌｕｃｅｒｉｆｅｒａｓｅｓ）、例えば、ホタルルシフェラーゼ及び細菌ルシフェラーゼ（米国特許第４，７３７，４５６号）、ルシフェリン、２，３−ジヒドロフタラジンジオン、ホースラディッシュペルオキシダーゼ（ＨＲＰ）、アルカリホスファターゼ、β−ガラクトシダーゼ、グルコアミラーゼ、リゾチーム、糖オキシダーゼ、例えば、グルコースオキシダーゼ、ガラクトースオキシダーゼ、及びグルコース−６−リン酸デヒドロゲナーゼ、過酸化水素を用いて色素前駆体を酸化させる酵素、例えばＨＲＰ、ラクトペルオキシダーゼ、またはマイクロペルオキシダーゼとカップリングされた複素環式オキシダーゼ、例えば、ウリカーゼ及びキサンチンオキシダーゼ、ビオチン／アビジン、スピン標識、バクテリオファージ標識、安定した遊離ラジカルが含まれる。
一態様では、本発明は、例えば、抗ヒトＯＸ４０アゴニスト抗体での処置におそらく応答するがん患者を特定するための診断方法を提供する。
一部の実施形態では、抗ヒトＯＸ４０アゴニスト抗体での処置におそらく応答する患者を特定するための方法であって、（ｉ）患者からのがんの試料におけるＦｃＲ発現細胞の有無または量（例えば、所与の試料サイズ当たりの数）を決定することと、（ｉｉ）試料がＦｃＲ発現細胞（例えば、多数のＦｃＲ発現細胞）を含むならば、おそらく応答すると患者を特定することとを含む方法を提供する。ＦｃＲを発現する細胞を検出するための方法は、当技術分野で周知であり、例えば、ＩＨＣによる方法を含む。一部の実施形態では、ＦｃＲは、ＦｃγＲである。一部の実施形態では、ＦｃＲは、活性化ＦｃγＲである。一部の実施形態では、がんは、本明細書に記載の任意のがんである。一部の実施形態では、がんは、非小細胞肺がん（ＮＳＣＬＣ）、神経膠芽細胞腫、神経芽細胞腫、黒色腫、乳がん（例えば、三種陰性乳がん）、胃がん、結腸直腸がん（ＣＲＣ）、または肝細胞がんである。一部の実施形態では、方法は、ｉｎ ｖｉｔｒｏの方法である。一部の実施形態では、方法はさらに、（ｉｉｉ）抗ヒトＯＸ４０アゴニスト抗体（例えば、本明細書に記載の抗ヒトＯＸ４０アゴニスト抗体のいずれか）での処置を推奨することを含む。一部の実施形態では、方法はさらに、（ｉｖ）抗ヒトＯＸ４０アゴニスト抗体で患者を処置することを含む。
一部の実施形態では、抗ヒトＯＸ４０アゴニスト抗体での処置におそらく応答する患者を特定するための方法であって、（ｉ）患者からのがんの試料におけるヒトエフェクター細胞（例えば、浸潤エフェクター細胞）の有無または量（例えば、所与の試料サイズ当たりの数）を決定することと、（ｉｉ）試料がエフェクター細胞（例えば、多数のエフェクター細胞）を含むならば、おそらく応答すると患者を特定することとを含む方法を提供する。浸潤ヒトエフェクター細胞を検出するための方法は、当技術分野で周知であり、例えば、ＩＨＣによる方法を含む。一部の実施形態では、ヒトエフェクター細胞は、ＮＫ細胞、マクロファージ、単球の１種または複数種である。一部の実施形態では、エフェクター細胞は、活性化ＦｃγＲを発現する。一部の実施形態では、方法は、ｉｎ ｖｉｔｒｏの方法である。一部の実施形態では、がんは、本明細書に記載の任意のがんである。一部の実施形態では、がんは、非小細胞肺がん（ＮＳＣＬＣ）、神経膠芽細胞腫、神経芽細胞腫、黒色腫、乳がん（例えば、三種陰性乳がん）、胃がん、結腸直腸がん（ＣＲＣ）、または肝細胞がんである。一部の実施形態では、方法はさらに、（ｉｉｉ）抗ヒトＯＸ４０アゴニスト抗体（例えば、本明細書に記載の抗ヒトＯＸ４０アゴニスト抗体のいずれか）での処置を推奨することを含む。一部の実施形態では、方法はさらに、（ｉｖ）抗ヒトＯＸ４０アゴニスト抗体で患者を処置することを含む。
がんの診断を提供する方法であって、（ｉ）患者からの試料においてＦｃＲ発現細胞（例えば、ＦｃＲのレベルまたは有無または分布率（例えば、例えばＩＨＣによる、ＦｃＲ発現細胞のパーセンテージ））を測定することと；（ｉｉ）試料がＦｃＲバイオマーカー発現を示す場合に、患者を、ＦｃＲバイオマーカー（例えば、高いＦｃＲバイオマーカー）を含むがんを有すると診断することとを含む方法を提供する。一部の実施形態では、方法はさらに、（ｉｉｉ）（ａ）抗ヒトＯＸ４０アゴニスト抗体を含む治療を選択すること、または（ｂ）抗ヒトＯＸ４０アゴニスト抗体を含む治療を患者に推奨することとを含む。一部の実施形態では、方法は、ｉｎ ｖｉｔｒｏの方法である。
がんの診断を提供する方法であって、（ｉ）患者からの試料においてヒトエフェクター細胞（例えば、ヒトエフェクター細胞のレベルまたは有無または分布率（例えば、ヒトエフェクター細胞のパーセンテージ））を測定することと；（ｉｉ）試料がヒトエフェクター細胞バイオマーカーを示す場合に、患者を、ヒトエフェクター細胞（例えば、高いヒトエフェクター細胞）を含むがんを有すると診断することとを含む方法を提供する。一部の実施形態では、方法はさらに、（ｉｉｉ）（ａ）抗ヒトＯＸ４０アゴニスト抗体を含む治療を選択すること、または（ｂ）抗ヒトＯＸ４０アゴニスト抗体を含む治療を患者に推奨することを含む。一部の実施形態では、方法は、ｉｎ ｖｉｔｒｏの方法である。
がん患者に処置を推奨する方法であって、（ｉ）患者からの試料においてＦｃＲ発現細胞（例えば、ＦｃＲのレベルまたは有無または分布率（例えば、ＦｃＲを発現する細胞のパーセンテージ））を測定することと；（ｉｉ）試料がＦｃＲ発現細胞を有する場合に（一部の実施形態では、高いＦｃＲ発現細胞）、抗ヒトＯＸ４０アゴニスト抗体での処置を推奨することとを含む方法を提供する。一部の実施形態では、方法は、（ｉｉｉ）患者のために、抗ヒトＯＸ４０アゴニスト抗体を含む治療を選択することをさらに含む。一部の実施形態では、方法は、ｉｎ ｖｉｔｒｏの方法である。
がん患者に処置を推奨する方法であって、（ｉ）患者からの試料においてヒトエフェクター細胞（例えば、ヒトエフェクター細胞のレベルまたは有無または分布率（例えば、ヒトエフェクター細胞のパーセンテージ））を測定することと；（ｉｉ）試料がヒトエフェクター細胞を有する場合に（一部の実施形態では、高いヒトエフェクター細胞）、抗ヒトＯＸ４０アゴニスト抗体での処置を推奨することとを含む方法を提供する。一部の実施形態では、方法は、（ｉｉｉ）患者のために、抗ヒトＯＸ４０アゴニスト抗体を含む治療を選択することをさらに含む。一部の実施形態では、方法は、ｉｎ ｖｉｔｒｏの方法である。
本明細書において提供する本発明のいずれかの一部の実施形態では、試料を、抗ヒトＯＸ４０アゴニスト抗体での処置前に得る。一部の実施形態では、試料を、がん医薬品での処置前に得る。一部の実施形態では、試料を、がんが転移した後に得る。一部の実施形態では、試料を、ホルマリン固定し、パラフィン包埋する（ＦＦＰＥ）。一部の実施形態では、試料は、生検（例えば、コア生検）、外科標本（例えば、外科的切除からの標本）、または微細針吸引液の試料である。
Ｆ． 医薬製剤
本明細書に記載のとおりの抗ＯＸ４０抗体の医薬製剤は、所望の程度の純度を有するそのような抗体を、１種または複数種の任意選択的な薬学的に許容される担体（Ｒｅｍｉｎｇｔｏｎ’ｓ Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ Ｓｃｉｅｎｃｅｓ １６ｔｈ ｅｄｉｔｉｏｎ，Ｏｓｏｌ，Ａ．Ｅｄ．（１９８０））と混合することによって、凍結乾燥製剤または水溶液の形態で調製される。薬学的に許容される担体は一般に、用いられる投薬量及び濃度で、受容者に対して非毒性であり、それらには、限定されないが：リン酸塩、クエン酸塩、及び他の有機酸などの緩衝剤；アスコルビン酸及びメチオニンを含む抗酸化剤；防腐剤（塩化オクタデシルジメチルベンジルアンモニウムなど；塩化ヘキサメトニウム；塩化ベンザルコニウム；塩化ベンゼトニウム；フェノール、ブチル、もしくはベンジルアルコール；メチルもしくはプロピルパラベンなどのアルキルパラベン；カテコール；レソルシノール；シクロヘキサノール；３−ペンタノール；及びｍ−クレゾールなど）；低分子量（約１０残基未満）ポリペプチド；血清アルブミン、ゼラチン、もしくは免役グロブリンなどのタンパク質；ポリビニルピロリドンなどの親水性ポリマー；グリシン、グルタミン、アスパラギン、ヒスチジン、アルギニン、もしくはリシンなどのアミノ酸；単糖、二糖、及びグルコース、マンノース、もしくはデキストリンを含む他の炭水化物；ＥＤＴＡなどのキレート化剤；スクロース、マンニトール、トレハロース、もしくはソルビトールなどの糖類；ナトリウムなどの塩形成対イオン；金属複合体（例えば、Ｚｎ−タンパク質複合体）；ならびに／またはポリエチレングリコール（ＰＥＧ）などの非イオン性界面活性剤が含まれる。本明細書における例示的な薬学的に許容される担体には、可溶性の中性活性ヒアルロニダーゼ糖タンパク質（ｓＨＡＳＥＧＰ）などの介在性（ｉｎｓｔｅｒｓｔｉｔｉａｌ）薬物分散剤、例えば、ｒＨｕＰＨ２０（ＨＹＬＥＮＥＸ（登録商標）、Ｂａｘｔｅｒ Ｉｎｔｅｒｎａｔｉｏｎａｌ，Ｉｎｃ．）などのヒト可溶性ＰＨ−２０ヒアルロニダーゼ糖タンパク質がさらに含まれる。ｒＨｕＰＨ２０を含む、ある種の例示的なｓＨＡＳＥＧＰ及び使用方法は、米国特許出願公開第２００５／０２６０１８６号及び同第２００６／０１０４９６８号において記載されている。一態様では、ｓＨＡＳＥＧＰは、コンドロイチナーゼなどの１種または複数種の追加のグリコサミノグリカナーゼと組み合わされる。
一部の実施形態では、「ヒスチジン緩衝剤」は、ヒスチジンイオンを含む緩衝剤である。ヒスチジン緩衝剤の例には、塩化ヒスチジン、酢酸ヒスチジン、リン酸ヒスチジン、硫酸ヒスチジンが含まれる。本明細書の実施例において特定した好ましいヒスチジン緩衝剤は、酢酸ヒスチジンであることが判明した。好ましい実施形態では、酢酸ヒスチジン緩衝剤を、Ｌ−ヒスチジン（遊離塩基、固体）を酢酸（液体）で滴定することによって調製する。一部の実施形態では、ヒスチジン緩衝剤または酢酸ヒスチジン緩衝剤は、ｐＨ５．０〜６．０、一部の実施形態では、ｐＨ５．３〜５．８である。
一部の実施形態では、本明細書における「糖」は、単糖、二糖、三糖、多糖、糖アルコール、還元糖、非還元糖などを含む、一般組成（ＣＨ２Ｏ）ｎ及びその誘導体を含む。本明細書における糖の例には、グルコース、スクロース、トレハロース、ラクトース、フルクトース、マルトース、デキストラン、グリセリン、デキストラン、エリトリトール、グリセロール、アラビトール、シリトール（ｓｙｌｉｔｏｌ）、ソルビトール、マンニトール、メリビオース（ｍｅｌｌｉｂｉｏｓｅ）、メレチトース、ラフィノース、マンノトリオース、スタキオース、マルトース、ラクツロース、マルツロース（ｍａｌｔｕｌｏｓｅ）、グルシトール、マルチトール、ラクチトール、イソ−マルツロースなどが含まれる。一部の実施形態では、糖は、非還元二糖、例えば、トレハロースまたはスクロースである。
本明細書における一部の実施形態では、「界面活性剤」は、表面活性剤、好ましくは非イオン性界面活性剤を指す。本明細書における界面活性剤の例には、ポリソルベート（例えば、ポリソルベート２０及びポリソルベート８０）；ポロキサマー（例えば、ポロキサマー１８８）；Ｔｒｉｔｏｎ；ドデシル硫酸ナトリウム（ＳＤＳ）；ラウリル硫酸ナトリウム（ｓｏｄｉｕｍ ｌａｕｒｅｌ ｓｕｌｆａｔｅ）；オクチルグリコシドナトリウム；ラウリル−、ミリスチル−、リノレイル−、またはステアリル−スルホベタイン；ラウリル−、ミリスチル−、リノレイル−、またはステアリル−サルコシン；リノレイル−、ミリスチル−、またはセチル−ベタイン；ラウロアミドプロピル−、コカミドプロピル−、リノレアミドプロピル−、ミリスタミドプロピル−、パルミドプロピル−、またはイソステアラミドプロピル−ベタイン（例えば、ラウロアミドプロピル）；ミリスタミドプロピル−、パルミドプロピル−、またはイソステアラミドプロピル−ジメチルアミン；ナトリウムメチルココイル−、またはジナトリウムメチルオレイル−タウラート；及びＭＯＮＡＱＵＡＴ（商標）シリーズ（Ｍｏｎａ Ｉｎｄｕｓｔｒｉｅｓ，Ｉｎｃ．、Ｐａｔｅｒｓｏｎ、Ｎｅｗ Ｊｅｒｓｅｙ）；ポリエチルグリコール、ポリプロピルグリコール、及びエチレンとプロピレングリコールのコポリマー（例えば、Ｐｌｕｒｏｎｉｃｓ、ＰＦ６８など）などが含まれる。一部の実施形態では、界面活性剤は、ポリソルベート２０である。一部の実施形態では、界面活性剤は、ポリソルベート８０である。
例示的な凍結乾燥抗体製剤は、米国特許第６，２６７，９５８号において記載されている。水性抗体製剤には、米国特許第６，１７１，５８６号及びＷＯ２００６／０４４９０８において記載されているものが含まれ、後者の製剤は、酢酸ヒスチジン緩衝剤を含む。
本明細書における製剤はまた、治療されている特定の適応症に必要ならば１種を超える活性成分、好ましくは相互に悪影響を及ぼさない相補的活性を有する活性成分を含有してもよい。例えば、追加の医薬品（その例は本明細書において提供する）をさらに提供することが望ましいことがある。そのような活性成分は、意図されている目的に有効な量で組み合わされて適切に存在する。
活性成分を、例えば、コアセルベーション技術によって、または界面重合によって調製されるマイクロカプセル、例えば、それぞれ、コロイド状薬物送達系（例えば、リポソーム、アルブミンマイクロスフェア、マイクロエマルション、ナノ粒子、及びナノカプセル）中またはマクロエマルション中のヒドロキシメチルセルロースまたはゼラチン−マイクロカプセル及びポリ−（メチルメタクリレート（ｍｅｔｈｙｌｍｅｔｈａｃｙｌａｔｅ））マイクロカプセル中に封入してもよい。そのような技術は、Ｒｅｍｉｎｇｔｏｎ’ｓ Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ Ｓｃｉｅｎｃｅｓ １６ｔｈ ｅｄｉｔｉｏｎ，Ｏｓｏｌ，Ａ．Ｅｄ．（１９８０）において開示されている。
持続放出製剤を調製してもよい。持続放出製剤の適切な例には、抗体を含有する固体疎水性ポリマーの半透性マトリクスが含まれ、そのマトリクスは、造形品、例えば、フィルム、またはマイクロカプセルの形態である。
ｉｎ ｖｉｖｏ投与で使用されるべき製剤は一般に滅菌されている。滅菌状態は、例えば、滅菌濾過膜を通した濾過によって、容易に達成され得る。
一部の実施形態では、（ａ）本明細書に記載の抗ヒトＯＸ４０アゴニスト抗体のいずれか；（ｂ）ｐＨ５．０〜６．０のヒスチジン緩衝剤を含む医薬製剤を本明細書において提供する。
一部の実施形態では、（ａ）本明細書に記載の抗ヒトＯＸ４０アゴニスト抗体のいずれか；（ｂ）ｐＨ５．０〜６．０のヒスチジン緩衝剤；（ｃ）糖；及び（ｄ）界面活性剤を含む医薬製剤を本明細書において提供する。
製剤のいずれかの一部の実施形態では、抗ヒトＯＸ４０アゴニスト抗体は、約１０ｍｇ／ｍＬ〜約１００ｍｇ／ｍＬ（例えば、約１５ｍｇ／ｍＬ、１８ｍｇ／ｍＬ、２０ｍｇ／ｍＬ、６０ｍｇ／ｍＬ、及び７５ｍｇ／ｍＬ）の濃度で存在する。一部の実施形態では、抗ヒトＯＸ４０アゴニスト抗体は、約２０ｍｇ／ｍＬの濃度で存在する。一部の実施形態では、抗ヒトＯＸ４０アゴニスト抗体は、約５０ｍｇ／ｍＬの濃度で存在する。一部の実施形態では、抗ヒトＯＸ４０アゴニスト抗体は、約６０ｍｇ／ｍＬの濃度で存在する。一部の実施形態では、抗ヒトＯＸ４０アゴニスト抗体は、約７０ｍｇ／ｍＬの濃度で存在する。
製剤のいずれかの一部の実施形態では、糖は、約７５ｍＭ〜約３６０ｍＭ（例えば、約１００ｍＭ、約１２０ｍＭ、約２４０ｍＭ、約３２０ｍＭ〜約３６０ｍＭ）の濃度で存在する。一部の実施形態では、糖は、約１２０ｍＭの濃度で存在する。一部の実施形態では、糖は、約２４０ｍＭの濃度で存在する。一部の実施形態では、糖は、約３２０ｍＭの濃度で存在する。一部の実施形態では、糖は、二糖である。一部の実施形態では、二糖はトレハロースである。一部の実施形態では、二糖はスクロースである。
製剤のいずれかの一部の実施形態では、ヒスチジン緩衝剤は、約１ｍＭ〜約５０ｍＭの濃度である（例えば、約１ｍＭ〜約２５ｍＭ）。一部の実施形態では、ヒスチジン緩衝剤は、約１０ｍＭの濃度である。一部の実施形態では、ヒスチジン緩衝剤は、約２０ｍＭの濃度である。一部の実施形態では、ヒスチジン緩衝剤は、約３０ｍＭの濃度である。一部の実施形態では、ヒスチジン緩衝剤は、酢酸ヒスチジンである。
製剤のいずれかの一部の実施形態では、界面活性剤は、ポリソルベート（例えば、ポリソルベート２０またはポリソルベート４０）、ポロキサマー（例えば、ポロキサマー１８８）；Ｔｒｉｔｏｎ；ドデシル硫酸ナトリウム（ＳＤＳ）；ラウリル硫酸ナトリウム；またはオクチルグリコシドナトリウムである。
製剤のいずれかの一部の実施形態では、界面活性剤は、ポリソルベートである。一部の実施形態では、ポリソルベートは、約０．００５％〜約０．１％の濃度で存在する。一部の実施形態では、ポリソルベートは、約０．００５％の濃度で存在する。一部の実施形態では、ポリソルベートは、約０．０２％の濃度で存在する。一部の実施形態では、ポリソルベートは、約０．０４％の濃度で存在する。一部の実施形態では、ポリソルベートは、約０．０６％の濃度で存在する。一部の実施形態では、ポリソルベートは、ポリソルベート２０である。一部の実施形態では、ポリソルベートは、ポリソルベート８０である。
製剤のいずれかの一部の実施形態では、製剤を、希釈剤（例えば、０．９％ＮａＣｌ）で希釈する。一部の実施形態では、抗ヒトＯＸ４０アゴニスト抗体は、約１ｍｇ／ｍＬの濃度で存在する。
特に、（ａ）本明細書に記載の抗ヒトＯＸ４０アゴニスト抗体のいずれか、（ｂ）濃度が約０．００５％〜約０．１％であるポリソルベート；及び（ｃ）ヒスチジン緩衝剤（例えば、ｐＨ５．０〜６．０のヒスチジン緩衝剤）を含む医薬製剤を、本明細書において提供する。
一部の実施形態では、医薬製剤は、（ａ）本明細書に記載の抗ヒトＯＸ４０アゴニスト抗体のいずれか（例えば、約１０ｍｇ／ｍＬ〜約１００ｍｇ／ｍＬの濃度）、（ｂ）濃度が約０．０２％〜約０．０６％であるポリソルベート；（ｃ）ヒスチジン緩衝剤（例えば、ｐＨ５．０〜６．０のヒスチジン緩衝剤）；及び濃度が約１２０ｍＭ〜約３２０ｍＭである糖を含む。一部の実施形態では、糖は、スクロースである。
一部の実施形態では、医薬製剤は、（ａ）約１０ｍｇ／ｍＬ〜約１００ｍｇ／ｍＬの濃度の本明細書に記載の抗ヒトＯＸ４０アゴニスト抗体のいずれか、（ｂ）濃度が約０．０２％〜約０．０６％であり、ポリソルベート２０またはポリソルベート４０であるポリソルベート；（ｃ）ｐＨ５．０〜６．０の酢酸ヒスチジン緩衝剤；及び約１２０ｍＭ〜約３２０ｍＭの濃度の糖（例えば、スクロース）を含む。
一部の実施形態では、医薬製剤は、（ａ）本明細書に記載の抗ヒトＯＸ４０アゴニスト抗体のいずれか、（ｂ）濃度が約０．０２％〜約０．０６％であるポリソルベート２０；（ｃ）酢酸ヒスチジン緩衝剤（例えば、ｐＨ５．０〜６．０の酢酸ヒスチジン緩衝剤）；及び（ｄ）濃度が約１２０ｍＭ〜約３２０ｍＭであるスクロースを含む。
一部の実施形態では、医薬製剤は、（ａ）本明細書に記載の抗ヒトＯＸ４０アゴニスト抗体のいずれか、（ｂ）濃度が約０．０２％〜約０．０６％であるポリソルベート４０；（ｃ）酢酸ヒスチジン緩衝剤（例えば、ｐＨ５．０〜６．０の酢酸ヒスチジン緩衝剤）；及び濃度が約１２０ｍＭ〜約３２０ｍＭであるスクロースを含む。
一部の実施形態では、医薬製剤は、（ａ）本明細書に記載の抗ヒトＯＸ４０アゴニスト抗体のいずれか、（ｂ）濃度が約０．０２％であるポリソルベート２０；（ｃ）ｐＨ６．０の酢酸ヒスチジン緩衝剤；及び（ｄ）濃度が約３２０ｍＭであるスクロースを含む。
一部の実施形態では、医薬製剤は、（ａ）本明細書に記載の抗ヒトＯＸ４０アゴニスト抗体のいずれか、（ｂ）濃度が約０．０２％であるポリソルベート２０；（ｃ）ｐＨ５．５の酢酸ヒスチジン緩衝剤；及び（ｄ）濃度が約２４０ｍＭであるスクロースを含む。
一部の実施形態では、医薬製剤は、（ａ）本明細書に記載の抗ヒトＯＸ４０アゴニスト抗体のいずれか、（ｂ）濃度が約０．０４％であるポリソルベート２０；（ｃ）ｐＨ６．０の酢酸ヒスチジン緩衝剤；及び（ｄ）濃度が約１２０ｍＭであるスクロースを含む。
一部の実施形態では、医薬製剤は、（ａ）本明細書に記載の抗ヒトＯＸ４０アゴニスト抗体のいずれか、（ｂ）濃度が約０．０４％であるポリソルベート４０；（ｃ）ｐＨ５．０の酢酸ヒスチジン緩衝剤；及び（ｄ）濃度が約２４０ｍＭであるスクロースを含む。
一部の実施形態では、医薬製剤は、（ａ）本明細書に記載の抗ヒトＯＸ４０アゴニスト抗体のいずれか、（ｂ）濃度が約０．０４％であるポリソルベート４０；（ｃ）ｐＨ６．０の酢酸ヒスチジン緩衝剤；及び（ｄ）濃度が約１２０ｍＭであるスクロースを含む。
一部の実施形態では、医薬製剤は、液体医薬製剤である。一部の実施形態では、医薬製剤は、安定な医薬製剤である。一部の実施形態では、医薬製剤は、安定な液体医薬製剤である。
本明細書に記載の医薬製剤のいずれかの一部の実施形態では、医薬製剤の抗ヒトＯＸ４０アゴニスト抗体は、約１０ｍｇ／ｍＬ〜約１００ｍｇ／ｍＬの濃度で存在する。一部の実施形態では、ヒトＯＸ４０アゴニスト抗体の濃度は、おおよそ１０ｍｇ／ｍＬ〜５０ｍｇ／ｍＬ、１０ｍｇ／ｍＬ〜７５ｍｇ／ｍＬ、２５ｍｇ／ｍＬ〜７５ｍｇ／ｍＬ、５０ｍｇ／ｍＬ〜１００ｍｇ／ｍＬ、５０ｍｇ／ｍＬ〜７５ｍｇ／ｍＬ、及び／または７５ｍｇ／ｍＬ〜１００ｍｇ／ｍＬのいずれかである。一部の実施形態では、ヒトＯＸ４０アゴニスト抗体の濃度は、おおよそ２０ｍｇ／ｍＬ、３０ｍｇ／ｍＬ、４０ｍｇ／ｍＬ、５０ｍｇ／ｍＬ、６０ｍｇ／ｍＬ、７０ｍｇ／ｍＬ、または１００ｍｇ／ｍＬのいずれかを超える。
医薬製剤は、好ましくはポリソルベートを含む。ポリソルベートは一般に、凝集物の形成（振盪または輸送の際に生じるものなど）を低減する量で含まれる。ポリソルベートの例には、限定されないが、ポリソルベート２０（ポリオキシエチレン（２０）ソルビタンモノラウレート）、ポリソルベート４０（ポリオキシエチレン（２０）ソルビタンモノパルミテート）、ポリソルベート６０（ポリオキシエチレン（２０）ソルビタンモノステアレート）、及び／またはポリソルベート８０（ポリオキシエチレン（２０）ソルビタンモノオレエート）が含まれる。一部の実施形態では、ポリソルベートは、ポリソルベート２０（ポリオキシエチレン（２０）ソルビタンモノラウレート）である。本明細書に記載の医薬製剤のいずれかの一部の実施形態では、ポリソルベート濃度は、凝集を最小化し、かつ／または長期貯蔵で、かつ／または投与中に（例えば、静脈内用バッグにおいて希釈した後に）安定性を維持するのに十分である。一部の実施形態では、ポリソルベート濃度は、約０．００５％ｗ／ｖ、約０．０２％ｗ／ｖ、約０．０４％ｗ／ｖ、及び約０．１％ｗ／ｖ未満である。一部の実施形態では、ポリソルベート濃度は、０．０１％ｗ／ｖ超及び約０．１％ｗ／ｖ未満である。一部の実施形態では、ポリソルベート濃度は、おおよそ０．００５％ｗ／ｖ、約０．０２％ｗ／ｖ、０．０３％ｗ／ｖ、０．０４％ｗ／ｖ、または０．０５％ｗ／ｖのいずれかである。一部の実施形態では、ポリソルベートは、約０．０４％ｗ／ｖの濃度で存在する。一部の実施形態では、ポリソルベートは、約０．０２％ｗ／ｖの濃度で存在する。
医薬製剤は好ましくは、糖を含む。糖には、単糖、二糖、三糖、多糖、糖アルコール、還元糖、非還元糖などが含まれる。糖のさらなる例には、限定されないが、グルコース、スクロース、トレハロース、ラクトース、フルクトース、マルトース、デキストラン、グリセリン、デキストラン、エリトリトール、グリセロール、アラビトール、シリトール、ソルビトール、マンニトール、メリビオース、メレチトース、ラフィノース、マンノトリオース、スタキオース、マルトース、ラクツロース、マルツロース、グルシトール、マルチトール、ラクチトール、イソ−マルツロースなどが含まれる。一部の実施形態では、糖は、二糖である。一部の実施形態では、糖は、非還元二糖である。一部の実施形態では、糖は、トレハロースである。
糖は一般に、凝集物の形成を低減する量で含まれる。本明細書に記載の医薬製剤のいずれかの一部の実施形態では、糖は、おおよそ５０ｍＭ〜２５０ｍＭ、７５ｍＭ〜２００ｍＭ、７５ｍＭ〜１５０ｍＭ、１００ｍＭ〜１５０ｍＭ、または１１０ｍＭ〜１３０ｍＭ、または１００ｍＭ〜３２０ｍＭ、または２４０ｍＭ〜３２０ｍＭ、または２４０ｍＭ〜４００ｍＭのいずれかの濃度で存在する。一部の実施形態では、糖は、おおよそ５０ｍＭ、７５ｍＭ、１００ｍＭ、１１０ｍＭ、または１１５ｍＭのいずれかを超える濃度で存在する。一部の実施形態では、糖は、おおよそ１００ｍＭ、１１０ｍＭ、１２０ｍＭ、１３０ｍＭ、または１４０ｍＭのいずれかの濃度で存在する。一部の実施形態では、糖は、約１２０ｍＭの濃度で存在する。製剤のいずれかの一部の実施形態では、糖は、約７５ｍＭ〜約３６０ｍＭ（例えば、約１００ｍＭ、約１２０ｍＭ、約２４０ｍＭ、約３２０ｍＭ〜約３６０ｍＭ）の濃度で存在する。一部の実施形態では、糖は、約２４０ｍＭの濃度で存在する。一部の実施形態では、糖は、約３２０ｍＭの濃度で存在する。
医薬製剤は好ましくは、ヒスチジン緩衝剤を含む。ヒスチジン緩衝剤の例には、限定されないが、塩化ヒスチジン、コハク酸ヒスチジン、酢酸ヒスチジン、リン酸ヒスチジン、硫酸ヒスチジンが含まれる。一部の実施形態では、ヒスチジン緩衝剤は、酢酸ヒスチジンである。本明細書に記載の医薬製剤のいずれかの一部の実施形態では、ヒスチジン緩衝剤濃度は、おおよそ１ｍＭ〜５０ｍＭ、１ｍＭ〜３５ｍＭ、１ｍＭ〜２５ｍＭ、１ｍＭ〜２０ｍＭ、７．５ｍＭ〜１２．５ｍＭ、または５ｍＭ〜１５ｍＭ、２０ｍＭ〜３０ｍＭ、２５ｍＭ〜３５ｍＭのいずれかである。一部の実施形態では、ヒスチジン緩衝剤濃度は、おおよそ５ｍＭ、７．５ｍＭ、１０ｍＭ、１２．５ｍＭ、１５ｍＭ、２０ｍＭ、２５ｍＭ、３０ｍＭ、３５ｍＭ、または４０ｍＭのいずれかである。一部の実施形態では、ヒスチジン緩衝剤濃度は、約１０ｍＭである。一部の実施形態では、ヒスチジン緩衝剤濃度は、約２０ｍＭである。一部の実施形態では、ヒスチジン緩衝剤濃度は、約３０ｍＭである。一部の実施形態では、ヒスチジン緩衝剤濃度は、約４０ｍＭである。本明細書に記載の医薬製剤のいずれかの一部の実施形態では、ヒスチジン緩衝剤は、ｐＨ５．０〜６．０のｐＨ、例えば、おおよそｐＨ５．０、ｐＨ５．１、ｐＨ５．２、ｐＨ５．３、ｐＨ５．４、ｐＨ５．５、ｐＨ５．６、ｐＨ５．７、ｐＨ５．８、ｐＨ５．９、またはｐＨ６．０のいずれかである。一部の実施形態では、ｐＨは、ｐＨ４．９〜ｐＨ６．３である。
本明細書に記載の医薬製剤はまた、治療されている特定の適応症に必要ならば１種を超える活性化合物、好ましくは相互に悪影響を及ぼさない相補的活性を有する活性化合物を含有してもよい。そのような分子は、意図されている目的に有効な量で組み合わされて適切に存在する。
さらに、本明細書に記載の医薬製剤を含むバイアル、及びバイアルに充填する方法を本明細書において提供する。一部の実施形態では、シリンジによって穴開けされ得るストッパーを備えたバイアルの内部にあり、好ましくは水性形態の医薬製剤を提供する。バイアルを望ましくは、約２〜８℃で、さらには、それを必要とする対象に投与するまで最高３０℃で２４時間にわたって貯蔵する。バイアルは、例えば、１５ｃｃバイアル（例えば、２００ｍｇ用量で）であってよい。
投与用の医薬製剤は好ましくは、液体製剤（非凍結乾燥）であり、以前凍結乾燥に掛けられたことがない。医薬製剤を凍結乾燥させてもよいが、好ましくは、凍結乾燥させない。医薬製剤のいずれかの一部の実施形態では、医薬製剤は、凍結乾燥医薬製剤である。一部の実施形態では、医薬製剤は、液体製剤である。一部の実施形態では、医薬製剤は、塩化ナトリウムなどの塩の高張化（ｔｏｎｉｃｉｆｙｉｎｇ）量を含有しない。医薬製剤のいずれかの一部の実施形態では、医薬製剤を希釈する。
Ｇ． 治療方法及び組成物
本明細書において提供する抗ヒトＯＸ４０抗体のいずれも、治療方法において使用され得る。
一態様では、医薬品として使用するための抗ヒトＯＸ４０アゴニスト抗体を提供する。さらなる態様では、がんの処置において使用するための抗ヒトＯＸ４０アゴニスト抗体を提供する。ある種の実施形態では、処置法において使用するための抗ヒトＯＸ４０アゴニスト抗体を提供する。ある種の実施形態では、本発明は、個体に有効量の抗ヒトアゴニストＯＸ４０抗体を投与することを含む、がんを有する個体を処置する方法において使用するための抗ヒトＯＸ４０アゴニスト抗体を提供する。そのような一実施形態では、方法は、個体に有効量の少なくとも１種の追加の治療薬、例えば、下記に記載するとおりの治療薬を投与することをさらに含む。
一態様では、個体に有効量の抗ヒトアゴニストＯＸ４０抗体を投与することを含む、がんを有する個体における免疫機能の増強（例えば、細胞媒介免疫応答を上方調節することによって）において使用するための抗ヒトＯＸ４０アゴニスト抗体を提供する。一態様では、個体に有効量の抗ヒトアゴニストＯＸ４０抗体を投与することを含む、がんを有する個体におけるＴ細胞機能の増強において使用するための抗ヒトＯＸ４０アゴニスト抗体を提供する。一態様では、個体に有効量の抗ヒトアゴニストＯＸ４０抗体を投与することを含む、ヒトＯＸ４０発現細胞（例えば、ＯＸ４０発現Ｔ細胞、例えば、ＯＸ４０発現Ｔｒｅｇ）の枯渇において使用するための抗ヒトＯＸ４０アゴニスト抗体を提供する。一部の実施形態では、枯渇は、ＡＤＣＣによる。一部の実施形態では、枯渇は、食作用による。腫瘍免疫を有する個体を処置するための抗ヒトＯＸ４０アゴニスト抗体を提供する。
さらなる態様では、（例えば、細菌またはウイルスまたは他の病原体への）感染の処置において使用するための抗ヒトＯＸ４０アゴニスト抗体を提供する。ある種の実施形態では、本発明は、個体に有効量の抗ヒトアゴニストＯＸ４０抗体を投与することを含む、感染を有する個体を処置する方法において使用するための抗ヒトＯＸ４０アゴニスト抗体を提供する。一部の実施形態では、感染は、ウイルス及び／または細菌への感染である。一部の実施形態では、感染は、病原体への感染である。
さらなる態様では、本発明は、医薬品の製造または調製における抗ＯＸ４０抗体の使用を提供する。一実施形態では、医薬品は、がんの処置のための医薬品である。さらなる実施形態では、医薬品は、がんを有する個体に有効量の医薬品を投与することを含む、がんを処置する方法において使用するための医薬品である。そのような一実施形態では、方法は、個体に、有効量の、例えば、下記のとおりの少なくとも１種の追加の治療薬を投与することをさらに含む。
一態様では、医薬品は、個体に有効量の医薬品を投与することを含む、がんを有する個体における免疫機能の増強（例えば、細胞媒介免疫応答を上方調節することによって）において使用するための医薬品である。一態様では、医薬品は、個体に有効量の医薬品を投与することを含む、がんを有する個体におけるＴ細胞機能の増強において使用するための医薬品である。一部の実施形態では、Ｔ細胞機能不全障害は、がんである。一態様では、医薬品は、個体に有効量の医薬品を投与することを含む、ヒトＯＸ４０発現細胞（例えば、高ＯＸ４０を発現する細胞、例えば、ＯＸ４０発現Ｔ細胞）の枯渇において使用するための医薬品である。一部の実施形態では、枯渇は、ＡＤＣＣによる。一部の実施形態では、枯渇は、食作用による。一態様では、医薬品は、腫瘍免疫を有する個体を処置するための医薬品である。
さらなる態様では、医薬品は、（例えば、細菌またはウイルスまたは他の病原体への）感染の処置において使用するための医薬品である。ある種の実施形態では、医薬品は、個体に有効量の医薬品を投与することを含む、感染を有する個体を処置する方法において使用するための医薬品である。一部の実施形態では、感染は、ウイルス及び／または細菌への感染である。一部の実施形態では、感染は、病原体への感染である。
さらなる態様では、本発明は、がんを処置するための方法を提供する。一実施形態では、方法は、そのようながんを有する個体に、有効量の抗ＯＸ４０抗体を投与することを含む。そのような一実施形態では、方法は、個体に、有効量の、下記に記載するとおりの少なくとも１種の追加の治療薬を投与することをさらに含む。上記実施形態のいずれかによる「個体」は、ヒトであってもよい。
一態様では、個体に有効量の抗ヒトアゴニストＯＸ４０抗体を投与することを含む、がんを有する個体において免疫機能を増強（例えば、細胞媒介免疫応答を上方調節することによって）するための方法を提供する。一態様では、個体に有効量の抗ヒトアゴニストＯＸ４０抗体を投与することを含む、がんを有する個体においてＴ細胞機能を増強するための方法を提供する。一態様では、個体に有効量の抗ヒトアゴニストＯＸ４０抗体を投与することを含む、ヒトＯＸ４０発現細胞（例えば、高レベルのＯＸ４０を発現するＴ細胞、例えば、ＯＸ４０発現Ｔ細胞）を枯渇させるための方法を提供する。一部の実施形態では、枯渇は、ＡＤＣＣによる。一部の実施形態では、枯渇は、食作用による。腫瘍免疫を有する個体を処置するための抗ヒトＯＸ４０アゴニスト抗体を提供する。
一部の実施形態では、がんの例にはさらに、限定されないが、Ｂ細胞リンパ腫（低度／濾胞性非ホジキンリンパ腫（ＮＨＬ）；小リンパ球性（ＳＬ）ＮＨＬ；中度／濾胞性ＮＨＬ；中度びまん性ＮＨＬ；高度免疫芽球性ＮＨＬ；高度リンパ芽球性ＮＨＬ；高度小非分割細胞型（ｓｍａｌｌ ｎｏｎ−ｃｌｅａｖｅｄ ｃｅｌｌ）ＮＨＬ；巨大腫瘤病変（ｂｕｌｋｙ ｄｉｓｅａｓｅ）ＮＨＬ；マントル細胞リンパ腫；ＡＩＤＳ関連リンパ腫；及びワルデンシュトレーム型マクログロブリン血症を含む）；慢性リンパ球性白血病（ＣＬＬ）；急性リンパ芽球性白血病（ＡＬＬ）；ヘアリーセル白血病；慢性骨髄芽球性白血病；及び移植後リンパ性増殖性障害（ＰＴＬＤ）、さらには、母斑症、浮腫（例えば、脳腫瘍と関連するもの）、Ｂ細胞増殖性障害、及びメーグス症候群と関連する異常な血管増殖が含まれる。より具体的な例には、限定されないが、再発または難治性ＮＨＬ、最前線低度ＮＨＬ、ＩＩＩ／ＩＶ期ＮＨＬ、化学療法抵抗性ＮＨＬ、前駆Ｂリンパ芽球白血病及び／またはリンパ腫、小リンパ球性リンパ腫、Ｂ細胞慢性リンパ球性白血病及び／または前リンパ球性白血病及び／または小リンパ球性リンパ腫、Ｂ細胞前リンパ球性リンパ腫、免疫細胞腫、及び／またはリンパ形質細胞性リンパ腫、リンパ形質細胞性リンパ腫、辺縁帯Ｂ細胞リンパ腫、脾臓辺縁帯リンパ腫、節外辺縁帯−ＭＡＬＴリンパ腫、節性辺縁帯リンパ腫、ヘアリーセル白血病、プラズマ細胞腫及び／またはプラズマ細胞骨髄腫、低度／濾胞性リンパ腫、中等度／濾胞性ＮＨＬ、マントル細胞リンパ腫、濾胞中心リンパ腫（濾胞性）、中等度びまん性ＮＨＬ、びまん性大Ｂ細胞リンパ腫、侵攻性ＮＨＬ（侵攻性最前線ＮＨＬ及び侵攻性再発性ＮＨＬを含む）、自系幹細胞移植後に再発するかまたはそれに対して難治性のＮＨＬ、原発性縦隔大Ｂ細胞リンパ腫、原発性体液性リンパ腫、高度免疫芽細胞ＮＨＬ、高度リンパ芽球ＮＨＬ、高度小非開裂細胞ＮＨＬ、巨大腫瘤病変ＮＨＬ、バーキットリンパ腫、前駆（末梢性）大顆粒リンパ球性白血病、菌状息肉腫及び／またはセザリー症候群、皮膚リンパ腫、未分化大細胞リンパ腫、血管中心性リンパ腫が含まれる。
一部の実施形態では、がんの例にはさらに、限定されないが、Ｂ細胞増殖性障害が含まれ、これにはさらに、限定されないが、リンパ腫（例えば、Ｂ細胞非ホジキンリンパ腫（ＮＨＬ））及びリンパ球性白血病が含まれる。そのようなリンパ腫及びリンパ球性白血病には、例えば、ａ）濾胞性リンパ腫、ｂ）小非開裂細胞細胞リンパ腫／バーキットリンパ腫（地方病性バーキットリンパ腫、散発性バーキットリンパ腫、及び非バーキットリンパ腫を含む）、ｃ）辺縁帯リンパ腫（節外周辺帯Ｂ細胞リンパ腫（粘液関連リンパ性組織リンパ腫、ＭＡＬＴを含む）、節辺縁帯Ｂ細胞リンパ腫、及び脾臓辺縁帯リンパ腫）、ｄ）マントル細胞リンパ腫（ＭＣＬ）、ｅ）大細胞リンパ腫（Ｂ細胞びまん性大細胞リンパ腫（ＤＬＣＬ）、びまん性混合細胞リンパ腫、免疫芽球性リンパ腫、原発性縦隔Ｂ細胞リンパ腫、血管中心性リンパ腫−肺Ｂ細胞リンパ腫を含む）、ｆ）ヘアリーセル白血病、ｇ）リンパ球性リンパ腫、ワルデンストレームマクログロブリン血症、ｈ）急性リンパ球性白血病（ＡＬＬ）、慢性リンパ球性白血病（ＣＬＬ）／小リンパ球性リンパ腫（ＳＬＬ）、Ｂ細胞前リンパ球性白血病、ｉ）血漿細胞新生物、血漿細胞骨髄腫、多発性骨髄腫、プラズマ細胞腫、及び／またはｊ）ホジキン病が含まれる。
方法のいずれかの一部の実施形態では、がんは、Ｂ細胞増殖性障害である。一部の実施形態では、Ｂ細胞増殖性障害は、リンパ腫、非ホジキンリンパ腫（ＮＨＬ）、侵攻性ＮＨＬ、再発侵攻性ＮＨＬ、再発不活性ＮＨＬ、難治性ＮＨＬ、難治性不活性ＮＨＬ、慢性リンパ球性白血病（ＣＬＬ）、小リンパ球性リンパ腫、白血病、ヘアリーセル白血病（ＨＣＬ）、急性リンパ球性白血病（ＡＬＬ）、またはマントル細胞リンパ腫である。一部の実施形態では、Ｂ細胞増殖性障害は、ＮＨＬ、例えば、不活性ＮＨＬ及び／または侵攻性ＮＨＬである。一部の実施形態では、Ｂ細胞増殖性障害は、不活性濾胞性リンパ腫またはびまん性大Ｂ細胞リンパ腫である。
さらなる一態様では、本発明は、例えば、上記治療方法のいずれかにおいて使用するための、本明細書において提供する抗ＯＸ４０抗体のいずれかを含む医薬製剤を提供する。一実施形態では、医薬製剤は、本明細書において提供する抗ＯＸ４０抗体のいずれか及び薬学的に許容される担体を含む。別の実施形態では、医薬製剤は、本明細書において提供する抗ＯＸ４０抗体のいずれか、及び例えば、下記に記載するとおりの少なくとも１種の追加の治療薬を含む。
本発明の方法のいずれかの一部の実施形態では、抗ヒトＯＸ４０アゴニスト抗体は、Ｔｒｅｇ機能の阻害（例えば、Ｔｒｅｇの抑制機能の阻害）、ＯＸ４０発現細胞（例えば、高レベルのＯＸ４０を発現する細胞）の殺滅、エフェクターＴ細胞機能の増大、及び／またはメモリーＴ細胞機能の増大によって、腫瘍免疫を阻害する。本発明の方法のいずれかの一部の実施形態では、抗ヒトＯＸ４０アゴニスト抗体は、Ｔｒｅｇ機能の阻害（例えば、Ｔｒｅｇの抑制機能の阻害）、ＯＸ４０発現細胞（例えば、高レベルのＯＸ４０を発現する細胞）の殺滅、エフェクターＴ細胞機能の増大、及び／またはメモリーＴ細胞機能の増大によって、がんを処置する。本発明の方法のいずれかの一部の実施形態では、抗ヒトＯＸ４０アゴニスト抗体は、Ｔｒｅｇ機能の阻害（例えば、Ｔｒｅｇの抑制機能の阻害）、ＯＸ４０発現細胞（例えば、高レベルのＯＸ４０を発現する細胞）の殺滅、エフェクターＴ細胞機能の増大、及び／またはメモリーＴ細胞機能の増大によって、免疫機能を増強する。本発明の方法のいずれかの一部の実施形態では、抗ヒトＯＸ４０アゴニスト抗体は、Ｔｒｅｇ機能の阻害（例えば、Ｔｒｅｇの抑制機能の阻害）、ＯＸ４０発現細胞（例えば、高レベルのＯＸ４０を発現する細胞）の殺滅、エフェクターＴ細胞機能の増大、及び／またはメモリーＴ細胞機能の増大によって、Ｔ細胞機能を増強する。
方法のいずれかの一部の実施形態では、抗ヒトＯＸ４０アゴニスト抗体は、枯渇性抗ヒトアゴニスト抗体である。一部の実施形態では、抗ヒトＯＸ４０アゴニスト抗体での処置は、細胞枯渇（例えば、ＯＸ４０発現細胞の枯渇、例えば、高レベルのＯＸ４０を発現する細胞の枯渇）をもたらす。一部の実施形態では、枯渇は、ＡＤＣＣによる。一部の実施形態では、枯渇は、食作用による。
方法のいずれかの一部の実施形態では、抗ヒトＯＸ４０アゴニスト抗体は、ＯＸ４０アゴニスト抗体の投与前のＴｒｅｇ機能と比較して、例えば、エフェクター及び／またはメモリーＴ細胞機能（一部の実施形態では、エフェクターＴ細胞及び／またはメモリーＴ細胞増殖及び／またはサイトカイン分泌）のＴｒｅｇ抑制を阻害することによって、Ｔｒｅｇ機能を阻害する。方法のいずれかの一部の実施形態では、抗ヒトＯＸ４０アゴニスト抗体は、ＯＸ４０アゴニスト抗体の投与前のエフェクターＴ細胞増殖と比較して、エフェクターＴ細胞増殖を増大させる。方法のいずれかの一部の実施形態では、抗ヒトＯＸ４０アゴニスト抗体は、ＯＸ４０アゴニスト抗体の投与前のメモリーＴ細胞増殖と比較して、メモリーＴ細胞増殖を増大させる。方法のいずれかの一部の実施形態では、抗ヒトＯＸ４０アゴニスト抗体は、ＯＸ４０アゴニスト抗体の投与前のエフェクターＴ細胞サイトカイン産生と比較して、エフェクターＴ細胞サイトカイン産生（例えば、ガンマインターフェロン産生）を増大させる。方法のいずれかの一部の実施形態では、抗ヒトＯＸ４０アゴニスト抗体は、ＯＸ４０アゴニスト抗体の投与前のメモリーＴ細胞サイトカイン産生と比較して、メモリーＴ細胞サイトカイン産生（例えば、ガンマインターフェロン産生）を増大させる。方法のいずれかの一部の実施形態では、抗ヒトＯＸ４０アゴニスト抗体は、ＯＸ４０アゴニスト抗体の投与前のＣＤ４＋エフェクターＴ細胞増殖及び／またはＣＤ８＋エフェクターＴ細胞増殖と比較して、ＣＤ４＋エフェクターＴ細胞増殖及び／またはＣＤ８＋エフェクターＴ細胞増殖を増大させる。方法のいずれかの一部の実施形態では、抗ヒトＯＸ４０アゴニスト抗体は、ＯＸ４０アゴニスト抗体の投与前のメモリーＴ細胞増殖と比較して、メモリーＴ細胞増殖（例えば、ＣＤ４＋メモリーＴ細胞増殖）を増大させる。一部の実施形態では、個体におけるＣＤ４＋エフェクターＴ細胞が、抗ヒトＯＸ４０アゴニスト抗体の投与前の増殖、サイトカイン分泌、及び／または細胞溶解性活性と比較して、増強した増殖、サイトカイン分泌、及び／または細胞溶解性活性を有する。
本発明の方法のいずれかの一部の実施形態では、ＣＤ４＋エフェクターＴ細胞の数が、抗ヒトＯＸ４０アゴニスト抗体の投与前と比較して上昇する。一部の実施形態では、ＣＤ４＋エフェクターＴ細胞サイトカイン分泌が、抗ヒトＯＸ４０アゴニスト抗体の投与前と比較して上昇する。方法のいずれかの一部の実施形態では、個体におけるＣＤ８＋エフェクターＴ細胞は、抗ヒトＯＸ４０アゴニスト抗体の投与前と比較して、増強した増殖、サイトカイン分泌、及び／または細胞溶解性活性を有する。一部の実施形態では、ＣＤ８＋エフェクターＴ細胞の数が、抗ヒトＯＸ４０アゴニスト抗体の投与前と比較して上昇する。一部の実施形態では、ＣＤ８＋エフェクターＴ細胞サイトカイン分泌が、抗ヒトＯＸ４０アゴニスト抗体の投与前と比較して上昇する。
本発明の方法のいずれかの一部の実施形態では、抗ヒトＯＸ４０アゴニスト抗体は、ヒトエフェクター細胞と結合し、例えば、ヒトエフェクター細胞によって発現されるＦｃγＲと結合する。一部の実施形態では、ヒトエフェクター細胞は、ＡＤＣＣエフェクター機能を実行する。一部の実施形態では、ヒトエフェクター細胞は、食作用エフェクター機能を実行する。
本発明の方法のいずれかの一部の実施形態では、ヒトエフェクター細胞への結合を排除する変異（例えば、ＤＡＮＡまたはＮ２９７Ｇ変異）を含む変異型ＩｇＧ１ Ｆｃポリペプチドを含む抗ヒトＯＸ４０アゴニスト抗体は、天然配列ＩｇＧ１ Ｆｃ部分を含む抗ヒトＯＸ４０アゴニスト抗体と比較して、減弱した活性（例えば、ＣＤ４＋エフェクターＴ細胞機能、例えば、増殖）を有する。一部の実施形態では、ヒトエフェクター細胞への結合を排除する変異（例えば、ＤＡＮＡまたはＮ２９７Ｇ変異）を含む変異型ＩｇＧ１ Ｆｃポリペプチドを含む抗ヒトＯＸ４０アゴニスト抗体は、実質的な活性（例えば、ＣＤ４＋エフェクターＴ細胞機能、例えば、増殖）を保有しない。
本発明の方法のいずれかの一部の実施形態では、抗ヒトＯＸ４０アゴニスト抗体機能に、抗体架橋結合が必要とされる。一部の実施形態では、機能は、ＣＤ４＋エフェクターＴ細胞増殖の刺激である。一部の実施形態では、抗体架橋結合は、固体表面（例えば、細胞培養プレート）上に付着させた抗ヒトＯＸ４０アゴニスト抗体を提供することによって決定される。一部の実施形態では、抗体架橋結合は、抗体のＩｇＧ１ Ｆｃ部分に変異（例えば、ＤＡＮＡまたはＮ２９７Ｓ変異）を導入し、変異抗体の機能を試験することによって決定される。
方法のいずれかの一部の実施形態では、個体におけるメモリーＴ細胞は、抗ヒトＯＸ４０アゴニスト抗体の投与前と比較して、増強した増殖及び／またはサイトカイン分泌を有する。一部の実施形態では、メモリーＴ細胞の数が、抗ヒトＯＸ４０アゴニスト抗体の投与前と比較して上昇する。一部の実施形態では、メモリーＴ細胞サイトカイン分泌（レベル）が、抗ヒトＯＸ４０アゴニスト抗体の投与前と比較して上昇する。方法のいずれかの一部の実施形態では、個体におけるＴｒｅｇは、抗ヒトＯＸ４０アゴニスト抗体の投与前と比較して、低下した、エフェクターＴ細胞機能（例えば、増殖及び／またはサイトカイン分泌）の阻害を有する。一部の実施形態では、エフェクターＴ細胞の数が、抗ヒトＯＸ４０アゴニスト抗体の投与前と比較して上昇する。一部の実施形態では、エフェクターＴ細胞サイトカイン分泌（レベル）が、抗ヒトＯＸ４０アゴニスト抗体の投与前と比較して上昇する。
本発明の方法のいずれかの一部の実施形態では、腫瘍内（浸潤）ＣＤ４＋エフェクターＴ細胞の数（例えば、ＣＤ４＋エフェクターＴ細胞の総数、または例えば、ＣＤ４５＋細胞におけるＣＤ４＋細胞のパーセンテージ）が、抗ヒトＯＸ４０アゴニスト抗体の投与前と比較して上昇する。本発明の方法のいずれかの一部の実施形態では、ガンマインターフェロンを発現する腫瘍内（浸潤）ＣＤ４＋エフェクターＴ細胞の数（例えば、ＣＤ４＋細胞を発現する全ガンマインターフェロン、または例えば、全ＣＤ４＋細胞における、ガンマインターフェロン発現ＣＤ４＋細胞のパーセンテージ）が、抗ヒトＯＸ４０アゴニスト抗体の投与前と比較して上昇する。
本発明の方法のいずれかの一部の実施形態では、腫瘍内（浸潤）ＣＤ８＋エフェクターＴ細胞の数（例えば、ＣＤ８＋エフェクターＴ細胞の総数、または例えば、ＣＤ４５＋細胞におけるＣＤ８＋のパーセンテージ）が、抗ヒトＯＸ４０アゴニスト抗体の投与前と比較して上昇する。本発明の方法のいずれかの一部の実施形態では、ガンマインターフェロンを発現する腫瘍内（浸潤）ＣＤ８＋エフェクターＴ細胞の数（例えば、全ＣＤ８＋細胞における、ガンマインターフェロンを発現するＣＤ８＋細胞のパーセンテージ）が、抗ヒトＯＸ４０アゴニスト抗体の投与前と比較して上昇する。
本発明の方法のいずれかの一部の実施形態では、腫瘍内（浸潤）Ｔｒｅｇの数（例えば、Ｔｒｅｇの総数または例えば、ＣＤ４＋細胞におけるＦｏｘ３ｐ＋細胞のパーセンテージ）が、抗ヒトＯＸ４０アゴニスト抗体の投与前と比較して低下する。
本発明の方法のいずれかの一部の実施形態では、抗ヒトＯＸ４０アゴニスト抗体の投与は、腫瘍抗原の投与と組み合わせての投与である。一部の実施形態では、腫瘍抗原は、タンパク質を含む。一部の実施形態では、腫瘍抗原は、核酸を含む。一部の実施形態では、腫瘍抗原は、腫瘍細胞である。
本発明の方法のいずれかの一部の実施形態では、がんは、ヒトエフェクター細胞を提示する（例えば、ヒトエフェクター細胞によって浸潤される）。ヒトエフェクター細胞を検出する方法は、当技術分野で周知であり、例えば、ＩＨＣによる方法を含む。一部の実施形態では、がんは、高レベルのヒトエフェクター細胞を提示する。一部の実施形態では、ヒトエフェクター細胞は、ＮＫ細胞、マクロファージ、単球のうちの１種または複数種である。一部の実施形態では、がんは、本明細書に記載のがんのいずれかである。一部の実施形態では、がんは、非小細胞肺がん（ＮＳＣＬＣ）、神経膠芽細胞腫、神経芽細胞腫、黒色腫、乳がん（例えば、三種陰性乳がん）、胃がん、結腸直腸がん（ＣＲＣ）、または肝細胞がんである。
本発明の方法のいずれかの一部の実施形態では、がんは、ＦｃＲを発現する細胞を提示する（例えば、ＦｃＲを発現する細胞によって浸潤される）。ＦｃＲを検出する方法は、当技術分野で周知であり、例えば、ＩＨＣによる方法を含む。一部の実施形態では、がんは、高レベルのＦｃＲ発現細胞を提示する。一部の実施形態では、ＦｃＲは、ＦｃγＲである。一部の実施形態では、ＦｃＲは、活性化ＦｃγＲである。一部の実施形態では、がんは、非小細胞肺がん（ＮＳＣＬＣ）、神経膠芽細胞腫、神経芽細胞腫、黒色腫、乳がん（例えば、三種陰性乳がん）、胃がん、結腸直腸がん（ＣＲＣ）、または肝細胞がんである。
上記実施形態のいずれかによる「個体」は好ましくは、ヒトである。
本発明の抗体は、治療において単独で、または他の薬剤と組み合わせて使用することができる。例えば、本発明の抗体は、少なくとも１種の追加の治療薬で同時投与することができる。
上述のような併用治療は、組み合わせた投与（２種以上の治療薬が同じか、または別個の製剤中に含まれる）、及び別個の投与を包含し、別個の投与の場合、本発明の抗体の投与は、１種または複数種の追加の治療薬の投与の前、それと同時、及び／またはその後に生じ得る。一実施形態では、抗ＯＸ４０抗体の投与及び追加の治療薬の投与は、相互に約１ヶ月以内、または約１、２、もしくは３週間以内、または約１、２、３、４、５、もしくは６日以内に生じる。本発明の抗体は、放射線療法と組み合わせて使用することもできる。
一部の実施形態では、抗ヒトＯＸ４０アゴニスト抗体は、化学療法または化学療法薬と併せて投与してもよい。一部の実施形態では、抗ヒトＯＸ４０アゴニスト抗体は、放射線治療または放射性治療薬と併せて投与してもよい。一部の実施形態では、抗ヒトＯＸ４０アゴニスト抗体は、ターゲット療法またはターゲット治療薬と併せて投与してもよい。一部の実施形態では、抗ヒトＯＸ４０アゴニスト抗体は、免疫療法または免疫治療薬、例えば、モノクローナル抗体と併せて投与してもよい。
一部の実施形態では、抗ヒトＯＸ４０アゴニスト抗体を、ＰＡＲＰ阻害薬（例えば、Ｏｌａｐａｒａｎｉｂ、Ｒｕｃａｐａｒｉｂ、Ｎｉｒａｐａｒｉｂ、Ｃｅｄｉｒａｎｉｂ、ＢＭＮ６７３、Ｖｅｌｉｐａｒｉｂ）、Ｔｒａｂｅｃｔｅｄｉｎ、ｎａｂ−パクリタキセル（アルブメン結合パクリタキセル、ＡＢＲＡＸＡＮＥ）、Ｔｒｅｂａｎａｎｉｂ、Ｐａｚｏｐａｎｉｂ、Ｃｅｄｉｒａｎｉｂ、Ｐａｌｂｏｃｉｃｌｉｂ、エベロリムス、フルオロピリミジン（例えば、ＦＯＬＦＯＸ、ＦＯＬＦＩＲＩ）、ＩＦＬ、レゴラフェニブ、Ｒｅｏｌｙｓｉｎ、Ａｌｉｍｔａ、Ｚｙｋａｄｉａ、Ｓｕｔｅｎｔ、Ｔｏｒｉｓｅｌ（テムシロリムス）、Ｉｎｌｙｔａ（アキシチニブ、Ｐｆｉｚｅｒ）、Ａｆｉｎｉｔｏｒ（エベロリムス、Ｎｏｖａｒｔｉｓ）、Ｎｅｘａｖａｒ（ソラフェニブ、Ｏｎｙｘ／Ｂａｙｅｒ）、Ｖｏｔｒｉｅｎｔ、Ｐａｚｏｐａｎｉｂ、アキシチニブ、ＩＭＡ−９０１、ＡＧＳ−００３、カボザンチニブ、Ｖｉｎｆｌｕｎｉｎｅ、Ｈｓｐ９０阻害薬（例えば、アパトルシン（ａｐａｔｏｒｓｉｎ））、Ａｄ−ＧＭ−ＣＳＦ（ＣＴ−００７０）、Ｔｅｍａｚｏｌｏｍｉｄｅ、ＩＬ−２、ＩＦＮａ、ビンブラスチン、Ｔｈａｌｏｍｉｄ、ダカルバジン、シクロホスファミド、レナリドマイド、アザシチジン、レナリドマイド、ボルテゾミド（ＶＥＬＣＡＤＥ）、アムルビシン、カルフィルゾミブ、プララトレキサート、及び／またはエンザスタウリンと併せて投与してもよい。
一部の実施形態では、抗ヒトＯＸ４０アゴニスト抗体を、ＰＤ−１軸結合アンタゴニストと併せて投与してもよい。ＰＤ−１軸結合アンタゴニストには、限定されないが、ＰＤ−１結合アンタゴニスト、ＰＤ−Ｌ１結合アンタゴニスト、及びＰＤ−Ｌ２結合アンタゴニストが含まれる。「ＰＤ−１」の別の名称には、ＣＤ２７９及びＳＬＥＢ２が含まれる。「ＰＤ−Ｌ１」の別の名称には、Ｂ７−Ｈ１、Ｂ７−４、ＣＤ２７４、及びＢ７−Ｈが含まれる。「ＰＤ−Ｌ２」の別の名称には、Ｂ７−ＤＣ、Ｂｔｄｃ、及びＣＤ２７３が含まれる。一部の実施形態では、ＰＤ−１、ＰＤ−Ｌｌ、及びＰＤ−Ｌ２は、ヒトＰＤ−１、ＰＤ−Ｌｌ、及びＰＤ−Ｌ２である。一部の実施形態では、ＰＤ−１結合アンタゴニストは、ＰＤ−１のそのリガンド結合パートナーへの結合を阻害する分子である。具体的な態様では、ＰＤ−１リガンド結合パートナーは、ＰＤ−Ｌｌ及び／またはＰＤ−Ｌ２である。別の実施形態では、ＰＤ−Ｌｌ結合アンタゴニストは、ＰＤ−Ｌ１のその結合パートナーへの結合を阻害する分子である。具体的な態様では、ＰＤ−Ｌｌ結合パートナーは、ＰＤ−１及び／またはＢ７−１である。別の実施形態では、ＰＤ−Ｌ２結合アンタゴニストは、ＰＤ−Ｌ２のその結合パートナーへの結合を阻害する分子である。具体的な態様では、ＰＤ−Ｌ２結合パートナーは、ＰＤ−１である。アンタゴニストは、抗体、その抗原結合断片、イムノアドヘシン、融合タンパク質、またはオリゴペプチドであってもよい。一部の実施形態では、ＰＤ−１結合アンタゴニストは、抗ＰＤ−１抗体（例えば、ヒト抗体、ヒト化抗体、またはキメラ抗体）である。一部の実施形態では、抗ＰＤ−１抗体は、ＭＤＸ−１１０６（ニボルマブ、ＯＰＤＩＶＯ）、Ｍｅｒｃｋ３４７５（ＭＫ−３４７５、ペムブロリズマブ、ＫＥＹＴＲＵＤＡ）、及びＣＴ−０１１（ピジリズマブ）からなる群から選択される。一部の実施形態では、ＰＤ−１結合アンタゴニストは、イムノアドヘシン（例えば、ＰＤ−Ｌ１の細胞外またはＰＤ−１結合部分、または定常領域（例えば、免疫グロブリン配列のＦｃ領域）に融合したＰＤ−Ｌ２を含むイムノアドヘシン）である。一部の実施形態では、ＰＤ−１結合アンタゴニストはＡＭＰ−２２４である。一部の実施形態では、ＰＤ−Ｌｌ結合アンタゴニストは抗ＰＤ−Ｌｌ抗体である。一部の実施形態では、抗ＰＤ−Ｌｌ結合アンタゴニストは、ＹＷ２４３．５５．Ｓ７０、ＭＰＤＬ３２８０Ａ、ＭＥＤＩ４７３６、及びＭＤＸ−１１０５からなる群から選択される。ＢＭＳ−９３６５５９としても公知のＭＤＸ−１１０５は、ＷＯ２００７／００５８７４に記載の抗ＰＤ−Ｌｌ抗体である。抗体ＹＷ２４３．５５．Ｓ７０（それぞれ配列番号２０及び２１において示されている重鎖及び軽鎖可変領域配列）は、ＷＯ２０１０／０７７６３４ Ａｌにおいて記載の抗ＰＤ−Ｌｌである。ＭＤＸ−１１０６−０４、ＯＮＯ−４５３８、ＢＭＳ−９３６５５８、またはニボルマブとしても公知のＭＤＸ−１１０６は、ＷＯ２００６／１２１１６８において記載の抗ＰＤ−１抗体である。ＭＫ−３４７５、ＳＣＨ−９００４７５、またはペムブロリズマブとしても公知のＭｅｒｃｋ３４７５は、ＷＯ２００９／１１４３３５に記載の抗ＰＤ−１抗体である。ｈＢＡＴ、ｈＢＡＴ−１、またはピジリズマブとしても公知のＣＴ−０１１は、ＷＯ２００９／１０１６１１に記載の抗ＰＤ−１抗体である。Ｂ７−ＤＣＩｇとしても公知のＡＭＰ−２２４は、ＷＯ２０１０／０２７８２７及びＷＯ２０１１／０６６３４２に記載のＰＤ−Ｌ２−Ｆｃ融合可溶性受容体である。一部の実施形態では、抗ＰＤ−１抗体は、ＭＤＸ−１１０６である。「ＭＤＸ−１１０６」の別の名称には、ＭＤＸ−１１０６−０４、ＯＮＯ−４５３８、ＢＭＳ−９３６５５８、またはニボルマブが含まれる。一部の実施形態では、抗ＰＤ−１抗体は、ニボルマブ（ＣＡＳ登録番号：９４６４１４−９４−４）である。
一部の実施形態では、抗ヒトＯＸ４０アゴニスト抗体を、活性化同時刺激分子に対するアゴニストと併せて投与してもよい。一部の実施形態では、活性化同時刺激分子には、ＣＤ４０、ＣＤ２２６、ＣＤ２８、ＧＩＴＲ、ＣＤ１３７、ＣＤ２７、ＨＶＥＭ、またはＣＤ１２７が含まれ得る。一部の実施形態では、活性化同時刺激分子に対するアゴニストは、ＣＤ４０、ＣＤ２２６、ＣＤ２８、ＯＸ４０、ＧＩＴＲ、ＣＤ１３７、ＣＤ２７、ＨＶＥＭ、またはＣＤ１２７に結合するアゴニスト抗体である。一部の実施形態では、抗ヒトＯＸ４０アゴニスト抗体を、阻害性同時刺激分子に対するアンタゴニストと併せて投与してもよい。一部の実施形態では、阻害性同時刺激分子には、ＣＴＬＡ−４（ＣＤ１５２としても公知）、ＰＤ−１、ＴＩＭ−３、ＢＴＬＡ、ＶＩＳＴＡ、ＬＡＧ−３、Ｂ７−Ｈ３、Ｂ７−Ｈ４、ＩＤＯ、ＴＩＧＩＴ、ＭＩＣＡ／Ｂ、またはアルギナーゼが含まれ得る。一部の実施形態では、阻害性同時刺激分子に対するアンタゴニストは、ＣＴＬＡ−４、ＰＤ−１、ＴＩＭ−３、ＢＴＬＡ、ＶＩＳＴＡ、ＬＡＧ−３（例えば、ＬＡＧ−３−ＩｇＧ融合タンパク質（ＩＭＰ３２１））、Ｂ７−Ｈ３、Ｂ７−Ｈ４、ＩＤＯ、ＴＩＧＩＴ、ＭＩＣＡ／Ｂ、またはアルギナーゼに結合するアンタゴニスト抗体である。
一部の実施形態では、抗ヒトＯＸ４０アゴニスト抗体を、ＣＴＬＡ−４（ＣＤ１５２としても公知）に対するアンタゴニスト、例えば、ブロッキング抗体と併せて投与してもよい。一部の実施形態では、抗ヒトＯＸ４０アゴニスト抗体を、イピリムマブ（ＭＤＸ−０１０、ＭＤＸ−１０１、またはＹｅｒｖｏｙ（登録商標）としても公知）と併せて投与してもよい。一部の実施形態では、抗ヒトＯＸ４０アゴニスト抗体を、トレメリムマブ（チシリムマブまたはＣＰ−６７５，２０６としても公知）と併せて投与してもよい。一部の実施形態では、抗ヒトＯＸ４０アゴニスト抗体を、Ｂ７−Ｈ３（ＣＤ２７６としても公知）に対するアンタゴニスト、例えば、ブロッキング抗体と併せて投与してもよい。一部の実施形態では、抗ヒトＯＸ４０アゴニスト抗体を、ＭＧＡ２７１と併せて投与してもよい。一部の実施形態では、抗ヒトＯＸ４０アゴニスト抗体を、ＴＧＦベータに対するアンタゴニスト、例えば、メテリムマブ（ｍｅｔｅｌｉｍｕｍａｂ）（ＣＡＴ−１９２としても公知）、フレソリムマブ（ＧＣ１００８としても公知）、またはＬＹ２１５７２９９と併せて投与してもよい。
一部の実施形態では、抗ヒトＯＸ４０アゴニスト抗体を、キメラ抗原受容体（ＣＡＲ）を発現するＴ細胞（例えば、細胞傷害性Ｔ細胞またはＣＴＬ）の養子免疫細胞移入を含む処置と併せて投与してもよい。一部の実施形態では、抗ヒトＯＸ４０アゴニスト抗体を、ＵＣＡＲＴ１９と併せて投与してもよい。一部の実施形態では、抗ヒトＯＸ４０アゴニスト抗体を、ＷＴ１２８ｚと併せて投与してもよい。一部の実施形態では、抗ヒトＯＸ４０アゴニスト抗体を、ＫＴＥ−Ｃ１９（Ｋｉｔｅ）と併せて投与してもよい。一部の実施形態では、抗ヒトＯＸ４０アゴニスト抗体を、ＣＴＬ０１９（Ｎｏｖａｒｔｉｓ）と併せて投与してもよい。一部の実施形態では、抗ヒトＯＸ４０アゴニスト抗体を、ドミナントネガティブＴＧＦベータ受容体、例えば、ドミナントネガティブＴＧＦベータＩＩ型受容体を含むＴ細胞の養子免疫細胞移入を含む処置と併せて投与してもよい。一部の実施形態では、抗ヒトＯＸ４０アゴニスト抗体を、ＨＥＲＣＲＥＥＭプロトコル（例えば、ＣｌｉｎｉｃａｌＴｒｉａｌｓ．ｇｏｖ 識別番号 ＮＣＴ００８８９９５４を参照されたい）を含む処置と併せて投与してもよい。
一部の実施形態では、抗ヒトＯＸ４０アゴニスト抗体を、ＣＤ１９に対するアンタゴニストと併せて投与してもよい。一部の実施形態では、抗ヒトＯＸ４０アゴニスト抗体を、ＭＯＲ００２０８と併せて投与してもよい。一部の実施形態では、抗ヒトＯＸ４０アゴニスト抗体を、ＣＤ３８に対するアンタゴニストと併せて投与してもよい。一部の実施形態では、抗ヒトＯＸ４０アゴニスト抗体を、ダラツムマブと併せて投与してもよい。
一部の実施形態では、抗ヒトＯＸ４０アゴニスト抗体を、ＣＤ１３７に対するアゴニスト（ＴＮＦＲＳＦ９、４−１ＢＢ、またはＩＬＡとしても公知）、例えば、活性化抗体と併せて投与してもよい。一部の実施形態では、抗ヒトＯＸ４０アゴニスト抗体を、ウレルマブ（ＢＭＳ−６６３５１３としても公知）と併せて投与してもよい。一部の実施形態では、抗ヒトＯＸ４０アゴニスト抗体を、ＣＤ４０に対するアゴニスト、例えば、活性化抗体と併せて投与してもよい。一部の実施形態では、抗ヒトＯＸ４０アゴニスト抗体を、ＣＰ−８７０８９３と併せて投与してもよい。一部の実施形態では、抗ヒトＯＸ４０アゴニスト抗体を、ＯＸ４０（ＣＤ１３４としても公知）に対するアゴニスト、例えば、活性化抗体と併せて投与してもよい。一部の実施形態では、抗ヒトＯＸ４０アゴニスト抗体を、異なる抗ＯＸ４０抗体（例えば、ＡｇｏｎＯＸ）と併せて投与してもよい。一部の実施形態では、抗ヒトＯＸ４０アゴニスト抗体を、ＣＤ２７に対するアゴニスト、例えば、活性化抗体と併せて投与してもよい。一部の実施形態では、抗ヒトＯＸ４０アゴニスト抗体を、ＣＤＸ−１１２７と併せて投与してもよい。一部の実施形態では、抗ヒトＯＸ４０アゴニスト抗体を、インドールアミン−２，３−ジオキシゲナーゼ（ＩＤＯ）に対するアンタゴニストと併せて投与してもよい。一部の実施形態では、ＩＤＯアンタゴニストは、１−メチル−Ｄ−トリプトファン（１−Ｄ−ＭＴとしても公知）である。
一部の実施形態では、抗ヒトＯＸ４０アゴニスト抗体を、ＣＤ１３７（ＴＮＦＲＳＦ９、４−１ＢＢ、またはＩＬＡとしても公知）に対するアゴニスト、例えば、活性化抗体と併せて投与してもよい。一部の実施形態では、抗ヒトＯＸ４０アゴニスト抗体を、ウレルマブ（ＢＭＳ−６６３５１３としても公知）と併せて投与してもよい。一部の実施形態では、抗ヒトＯＸ４０アゴニスト抗体を、ＣＤ４０に対するアゴニスト、例えば、活性化抗体と併せて投与してもよい。一部の実施形態では、抗ヒトＯＸ４０アゴニスト抗体を、ＣＰ−８７０８９３またはＲＯ７００９７８９と併せて投与してもよい。一部の実施形態では、抗ヒトＯＸ４０アゴニスト抗体を、ＯＸ４０（ＣＤ１３４としても公知）に対するアゴニスト、例えば、活性化抗体と併せて投与してもよい。一部の実施形態では、抗ヒトＯＸ４０アゴニスト抗体を、ＣＤ２７に対するアゴニスト、例えば、活性化抗体と併せて投与してもよい。一部の実施形態では、抗ヒトＯＸ４０アゴニスト抗体を、ＣＤＸ−１１２７（バルリルマブとしても公知）と併せて投与してもよい。一部の実施形態では、抗ヒトＯＸ４０アゴニスト抗体を、インドールアミン−２，３−ジオキシダーゼ（ＩＤＯ）に対するアンタゴニストと併せて投与してもよい。一部の実施形態では、ＩＤＯアンタゴニストは、１−メチル−Ｄ−トリプトファン（１−Ｄ−ＭＴとしても公知）である。一部の実施形態では、ＩＤＯアンタゴニストは、ＷＯ２０１０／００５９５８（その内容は、記録によって本明細書に明確に取り込まれる）において示されているＩＤＯアンタゴニストである。一部の実施形態では、ＩＤＯアンタゴニストは、４−（｛２−［（アミノスルホニル）アミノ］エチル｝アミノ）−Ｎ−（３−ブロモ−４−フルオロフェニル）−Ｎ’−ヒドロキシ−１，２，５−オキサジアゾール−３−カルボキシイミドアミド（例えば、ＷＯ２０１０／００５９５８の実施例２３に記載のとおり）である。一部の実施形態では、ＩＤＯアンタゴニストは、
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である。一部の実施形態では、ＩＤＯアンタゴニストは、ＩＮＣＢ２４３６０である。一部の実施形態では、ＩＤＯアンタゴニストは、Ｉｎｄｏｘｉｍｏｄ（１−メチル−トリプトファンのＤ異性体）である。一部の実施形態では、抗ヒトＯＸ４０アゴニスト抗体を、抗体−薬物コンジュゲートと併せて投与してもよい。一部の実施形態では、抗体−薬物コンジュゲートは、メルタンシンまたはモノメチルオーリスタチンＥ（ＭＭＡＥ）を含む。一部の実施形態では、抗ヒトＯＸ４０アゴニスト抗体を、抗ＮａＰｉ２ｂ抗体−ＭＭＡＥコンジュゲート（ＤＮＩＢ０６００Ａ、ＲＧ７５９９、またはリファスツズマブ・ベトチン（ｌｉｆａｓｔｕｚｕｍａｂ ｖｅｄｏｔｉｎ）としても公知）と併せて投与してもよい。一部の実施形態では、抗ヒトＯＸ４０アゴニスト抗体を、トラスツズマブ・エムタンシン（Ｔ−ＤＭ１、ａｄｏ−トラスツズマブ・エムタンシン、またはＫＡＤＣＹＬＡ（登録商標）（Ｇｅｎｅｎｔｅｃｈ）としても公知）と併せて投与してもよい。一部の実施形態では、抗ヒトＯＸ４０アゴニスト抗体を、抗ＭＵＣ１６抗体−ＭＭＡＥコンジュゲート、ＤＭＵＣ５７５４Ａと併せて投与してもよい。一部の実施形態では、抗ヒトＯＸ４０アゴニスト抗体を、抗ＭＵＣ１６抗体−ＭＭＡＥコンジュゲート、ＤＭＵＣ４０６４Ａと併せて投与してもよい。一部の実施形態では、抗ヒトＯＸ４０アゴニスト抗体を、エンドセリンＢ受容体（ＥＤＮＢＲ）をターゲティングする抗体−薬物コンジュゲート、例えば、ＭＭＡＥとコンジュゲートした、ＥＤＮＢＲに対する抗体と併せて投与してもよい。一部の実施形態では、抗ヒトＯＸ４０アゴニスト抗体を、リンパ球抗原６複合体、ローカスＥ（ｌｏｃｕｓ Ｅ）（Ｌｙ６Ｅ）をターゲティングする抗体−薬物コンジュゲート、例えば、ＭＭＡＥとコンジュゲートした、Ｌｙ６Ｅに対する抗体（ＤＬＹＥ５９５３Ａとしても公知）と併せて投与してもよい。一部の実施形態では、抗ヒトＯＸ４０アゴニスト抗体を、ポラツズマブ・ベドチンと併せて投与してもよい。一部の実施形態では、抗ヒトＯＸ４０アゴニスト抗体を、ＣＤ３０をターゲティングする抗体−薬物コンジュゲートと併せて投与してもよい。一部の実施形態では、抗ヒトＯＸ４０アゴニスト抗体を、ＡＤＣＥＴＲＩＳ（ブレンツキシマブ・ベドチンとしても公知）と併せて投与してもよい。一部の実施形態では、抗ヒトＯＸ４０アゴニスト抗体を、ポラツズマブ・ベドチンと併せて投与してもよい。
一部の実施形態では、抗ヒトＯＸ４０アゴニスト抗体を、血管新生阻害薬と併せて投与してもよい。一部の実施形態では、抗ヒトＯＸ４０アゴニスト抗体を、ＶＥＧＦ、例えば、ＶＥＧＦ−Ａに対する抗体と併せて投与してもよい。一部の実施形態では、抗ヒトＯＸ４０アゴニスト抗体を、ベバシズマブ（ＡＶＡＳＴＩＮ（登録商標）（Ｇｅｎｅｎｔｅｃｈ）としても公知）と併せて投与してもよい。一部の実施形態では、抗ヒトＯＸ４０アゴニスト抗体を、アンギオポイエチン２（Ａｎｇ２としても公知）に対する抗体と併せて投与してもよい。一部の実施形態では、抗ヒトＯＸ４０アゴニスト抗体を、ＭＥＤＩ３６１７と併せて投与してもよい。一部の実施形態では、抗ヒトＯＸ４０アゴニスト抗体を、ＶＥＧＦＲ２に対する抗体と併せて投与してもよい。一部の実施形態では、抗ヒトＯＸ４０アゴニスト抗体を、ラムシルマブと併せて投与してもよい。一部の実施形態では、抗ヒトＯＸ４０アゴニスト抗体を、ＶＥＧＦ受容体融合タンパク質と併せて投与してもよい。一部の実施形態では、抗ヒトＯＸ４０アゴニスト抗体を、アフリベルセプトと併せて投与してもよい。一部の実施形態では、抗ヒトＯＸ４０アゴニスト抗体を、ｚｉｖ−アフリベルセプト（ＶＥＧＦ ＴｒａｐまたはＺａｌｔｒａｐ（登録商標）としても公知）と併せて投与してもよい。一部の実施形態では、抗ヒトＯＸ４０アゴニスト抗体を、ＶＥＧＦ及びＡｎｇ２に対する二重特異性抗体と併せて投与してもよい。一部の実施形態では、抗ヒトＯＸ４０アゴニスト抗体を、ＲＧ７２２１（バヌシズマブ（ｖａｎｕｃｉｚｕｍａｂ）としても公知）と併せて投与してもよい。一部の実施形態では、抗ヒトＯＸ４０アゴニスト抗体を、血管新生阻害薬と併せて、かつＰＤ−１軸結合アンタゴニスト（例えば、抗ＰＤ−１抗体などのＰＤ−１結合アンタゴニスト、抗ＰＤ−Ｌ１抗体などのＰＤ−Ｌ１結合アンタゴニスト、及び抗ＰＤ−Ｌ２抗体などのＰＤ−Ｌ２結合アンタゴニスト）と併せて投与してもよい。一部の実施形態では、抗ヒトＯＸ４０アゴニスト抗体を、ベバシズマブ及びＰＤ−１軸結合アンタゴニスト（例えば、抗ＰＤ−１抗体などのＰＤ−１結合アンタゴニスト、抗ＰＤ−Ｌ１抗体などのＰＤ−Ｌ１結合アンタゴニスト、及び抗ＰＤ−Ｌ２抗体などのＰＤ−Ｌ２結合アンタゴニスト）と併せて投与してもよい。一部の実施形態では、抗ヒトＯＸ４０アゴニスト抗体を、ベバシズマブ及びＭＤＸ−１１０６（ニボルマブ、ＯＰＤＩＶＯ）と併せて投与してもよい。一部の実施形態では、抗ヒトＯＸ４０アゴニスト抗体を、ベバシズマブ及びＭｅｒｃｋ３４７５（ＭＫ−３４７５、ペムブロリズマブ、ＫＥＹＴＲＵＤＡ）と併せて投与してもよい。一部の実施形態では、抗ヒトＯＸ４０アゴニスト抗体を、ベバシズマブ及びＣＴ−０１１（ピジリズマブ）と併せて投与してもよい。一部の実施形態では、抗ヒトＯＸ４０アゴニスト抗体を、ベバシズマブ及びＹＷ２４３．５５．Ｓ７０と併せて投与してもよい。一部の実施形態では、抗ヒトＯＸ４０アゴニスト抗体を、ベバシズマブ及びＭＰＤＬ３２８０Ａと併せて投与してもよい。一部の実施形態では、抗ヒトＯＸ４０アゴニスト抗体を、ベバシズマブ及びＭＥＤＩ４７３６と併せて投与してもよい。一部の実施形態では、抗ヒトＯＸ４０アゴニスト抗体を、ベバシズマブ及びＭＤＸ−１１０５と併せて投与してもよい。
一部の実施形態では、抗ヒトＯＸ４０アゴニスト抗体を、抗新生物薬と併せて投与してもよい。一部の実施形態では、抗ヒトＯＸ４０アゴニスト抗体を、ＣＳＦ−１Ｒ（Ｍ−ＣＳＦＲまたはＣＤ１１５としても公知）をターゲティングする薬剤と併せて投与してもよい。一部の実施形態では、抗ヒトＯＸ４０アゴニスト抗体を、抗ＣＳＦ−１Ｒ抗体（ＩＭＣ−ＣＳ４またはＬＹ３０２２８５５としても公知）と併せて投与してもよい。一部の実施形態では、抗ヒトＯＸ４０アゴニスト抗体を、抗ＣＳＦ−１Ｒ抗体、ＲＧ７１５５（ＲＯ５５０９５５４またはエマクツズマブ（ｅｍａｃｔｕｚｕｍａｂ）としても公知）と併せて投与してもよい。一部の実施形態では、抗ヒトＯＸ４０アゴニスト抗体を、インターフェロン、例えば、インターフェロンアルファまたはインターフェロンガンマと併せて投与してもよい。一部の実施形態では、抗ヒトＯＸ４０アゴニスト抗体を、Ｒｏｆｅｒｏｎ−Ａ（組換えインターフェロンアルファ−２ａとしても公知）と併せて投与してもよい。一部の実施形態では、抗ヒトＯＸ４０アゴニスト抗体を、ＧＭ−ＣＳＦ（組換えヒト顆粒球マクロファージコロニー刺激因子、ｒｈｕ ＧＭ−ＣＳＦ、サルグラモスチム、またはＬｅｕｋｉｎｅ（登録商標）としても公知）と併せて投与してもよい。一部の実施形態では、抗ヒトＯＸ４０アゴニスト抗体を、ＩＬ−２（アルデスロイキンまたはＰｒｏｌｅｕｋｉｎ（登録商標）としても公知）と併せて投与してもよい。一部の実施形態では、抗ヒトＯＸ４０アゴニスト抗体を、ＩＬ−１２と併せて投与してもよい。一部の実施形態では、抗ヒトＯＸ４０アゴニスト抗体を、ＩＬ２７と併せて投与してもよい。一部の実施形態では、抗ヒトＯＸ４０アゴニスト抗体を、ＩＬ−１５と併せて投与してもよい。一部の実施形態では、抗ヒトＯＸ４０アゴニスト抗体を、ＡＬＴ−８０３と併せて投与してもよい。一部の実施形態では、抗ヒトＯＸ４０アゴニスト抗体を、ＣＤ２０をターゲティングする抗体と併せて投与してもよい。一部の実施形態では、ＣＤ２０をターゲティングする抗体は、オビヌツズマブ（ＧＡ１０１またはＧａｚｙｖａ（登録商標）としても公知）またはリツキシマブである。一部の実施形態では、抗ヒトＯＸ４０アゴニスト抗体を、ＧＩＴＲをターゲティングする抗体と併せて投与してもよい。一部の実施形態では、ＧＩＴＲをターゲティングする抗体は、ＴＲＸ５１８である。一部の実施形態では、ＧＩＴＲをターゲティングする抗体は、ＭＫ０４１６６（Ｍｅｒｃｋ）である。
一部の実施形態では、抗ヒトＯＸ４０アゴニスト抗体を、ブルトンチロシンキナーゼ（ＢＴＫ）の阻害薬と併せて投与してもよい。一部の実施形態では、抗ヒトＯＸ４０アゴニスト抗体を、イブルチニブと併せて投与してもよい。一部の実施形態では、抗ヒトＯＸ４０アゴニスト抗体を、イソクエン酸デヒドロゲナーゼ１（ＩＤＨ１）及び／またはイソクエン酸デヒドロゲナーゼ２（ＩＤＨ２）の阻害薬と併せて投与してもよい。一部の実施形態では、抗ヒトＯＸ４０アゴニスト抗体を、ＡＧ−１２０（Ａｇｉｏｓ）と併せて投与してもよい。
一部の実施形態では、抗ヒトＯＸ４０アゴニスト抗体を、オビヌツズマブ及びＰＤ−１軸結合アンタゴニスト（例えば、抗ＰＤ−１抗体などのＰＤ−１結合アンタゴニスト、抗ＰＤ−Ｌ１抗体などのＰＤ−Ｌ１結合アンタゴニスト、及び抗ＰＤ−Ｌ２抗体などのＰＤ−Ｌ２結合アンタゴニスト）と併せて投与してもよい。
一部の実施形態では、抗ヒトＯＸ４０アゴニスト抗体を、がんワクチンと併せて投与してもよい。一部の実施形態では、がんワクチンは、一部の実施形態では、個別化ペプチドワクチンであるペプチドがんワクチンである。一部の実施形態では、ペプチドがんワクチンは、多価ロングペプチド、マルチ−ペプチド、ペプチドカクテル、ハイブリッドペプチド、またはペプチド−パルス樹状細胞ワクチン（例えば、Ｙａｍａｄａ ｅｔ ａｌ．，Ｃａｎｃｅｒ Ｓｃｉ，１０４：１４−２１、２０１３を参照されたい）である。一部の実施形態では、抗ヒトＯＸ４０アゴニスト抗体を、アジュバントと併せて投与してもよい。一部の実施形態では、抗ヒトＯＸ４０アゴニスト抗体を、ＴＬＲアゴニスト、例えば、ポリ−ＩＣＬＣ（Ｈｉｌｔｏｎｏｌ（登録商標）としても公知）、ＬＰＳ、ＭＰＬ、またはＣｐＧ ＯＤＮを含む処置と併せて投与してもよい。一部の実施形態では、抗ヒトＯＸ４０アゴニスト抗体を、腫瘍壊死因子（ＴＮＦ）アルファと併せて投与してもよい。一部の実施形態では、抗ヒトＯＸ４０アゴニスト抗体を、ＩＬ−１と併せて投与してもよい。一部の実施形態では、抗ヒトＯＸ４０アゴニスト抗体を、ＨＭＧＢ１と併せて投与してもよい。一部の実施形態では、抗ヒトＯＸ４０アゴニスト抗体を、ＩＬ−１０アンタゴニストと併せて投与してもよい。一部の実施形態では、抗ヒトＯＸ４０アゴニスト抗体を、ＩＬ−４アンタゴニストと併せて投与してもよい。一部の実施形態では、抗ヒトＯＸ４０アゴニスト抗体を、ＩＬ−１３アンタゴニストと併せて投与してもよい。一部の実施形態では、抗ヒトＯＸ４０アゴニスト抗体を、ＩＬ−１７アンタゴニストと併せて投与してもよい。一部の実施形態では、抗ヒトＯＸ４０アゴニスト抗体を、ＨＶＥＭアンタゴニストと併せて投与してもよい。一部の実施形態では、抗ヒトＯＸ４０アゴニスト抗体を、ＩＣＯＳアゴニストと併せて、例えば、ＩＣＯＳ−Ｌ、またはＩＣＯＳに対するアゴニスト抗体の投与によって投与してもよい。一部の実施形態では、抗ヒトＯＸ４０アゴニスト抗体を、ＣＸ３ＣＬ１をターゲティングする処置と併せて投与してもよい。一部の実施形態では、抗ヒトＯＸ４０アゴニスト抗体を、ＣＸＣＬ９をターゲティングする処置と併せて投与してもよい。一部の実施形態では、抗ヒトＯＸ４０アゴニスト抗体を、ＣＸＣＬ１０をターゲティングする処置と併せて投与してもよい。一部の実施形態では、抗ヒトＯＸ４０アゴニスト抗体を、ＣＣＬ５をターゲティングする処置と併せて投与してもよい。一部の実施形態では、抗ヒトＯＸ４０アゴニスト抗体を、ＬＦＡ−１またはＩＣＡＭ１アゴニストと併せて投与してもよい。一部の実施形態では、抗ヒトＯＸ４０アゴニスト抗体を、Ｓｅｌｅｃｔｉｎアゴニストと併せて投与してもよい。
一部の実施形態では、抗ヒトＯＸ４０アゴニスト抗体を、Ｂ−Ｒａｆの阻害薬と併せて投与してもよい。一部の実施形態では、抗ヒトＯＸ４０アゴニスト抗体を、ベムラフェニブ（Ｚｅｌｂｏｒａｆ（登録商標）としても公知）と併せて投与してもよい。一部の実施形態では、抗ヒトＯＸ４０アゴニスト抗体を、ダブラフェニブ（Ｔａｆｉｎｌａｒ（登録商標）としても公知）と併せて投与してもよい。一部の実施形態では、抗ヒトＯＸ４０アゴニスト抗体を、エンコラフェニブ（ＬＧＸ８１８）と併せて投与してもよい。
一部の実施形態では、抗ヒトＯＸ４０アゴニスト抗体を、ＥＧＦＲ阻害薬と併せて投与してもよい。一部の実施形態では、抗ヒトＯＸ４０アゴニスト抗体を、エルロチニブ（Ｔａｒｃｅｖａ（登録商標）としても公知）と併せて投与してもよい。一部の実施形態では、抗ヒトＯＸ４０アゴニスト抗体を、ＥＧＦＲ−Ｔ７９０Ｍの阻害薬と併せて投与してもよい。一部の実施形態では、抗ヒトＯＸ４０アゴニスト抗体を、ゲフィチニブと併せて投与してもよい。一部の実施形態では、抗ヒトＯＸ４０アゴニスト抗体を、アファチニブと併せて投与してもよい。一部の実施形態では、抗ヒトＯＸ４０アゴニスト抗体を、セツキシマブ（Ｅｒｂｉｔｕｘ（登録商標）としても公知）と併せて投与してもよい。一部の実施形態では、抗ヒトＯＸ４０アゴニスト抗体を、パニツムマブ（Ｖｅｃｔｉｂｉｘ（登録商標）としても公知）と併せて投与してもよい。一部の実施形態では、抗ヒトＯＸ４０アゴニスト抗体を、ロシレチニブと併せて投与してもよい。一部の実施形態では、抗ヒトＯＸ４０アゴニスト抗体を、ＡＺＤ９２９１と併せて投与してもよい。一部の実施形態では、抗ヒトＯＸ４０アゴニスト抗体を、ＭＥＫ、例えば、ＭＥＫ１（ＭＡＰ２Ｋ１としても公知）及び／またはＭＥＫ２（ＭＡＰ２Ｋ２としても公知）の阻害薬と併せて投与してもよい。一部の実施形態では、抗ヒトＯＸ４０アゴニスト抗体を、コビメチニブ（ＧＤＣ−０９７３またはＸＬ−５１８としても公知）と併せて投与してもよい。一部の実施形態では、抗ヒトＯＸ４０アゴニスト抗体を、トラメチニブ（Ｍｅｋｉｎｉｓｔ（登録商標）としても公知）と併せて投与してもよい。一部の実施形態では、抗ヒトＯＸ４０アゴニスト抗体を、ビニメチニブと併せて投与してもよい。
一部の実施形態では、抗ヒトＯＸ４０アゴニスト抗体を、Ｂ−Ｒａｆの阻害薬（例えば、ベムラフェニブまたはダブラフェニブ）及びＭＥＫの阻害薬（例えば、ＭＥＫ１及び／またはＭＥＫ２（例えば、コビメチニブまたはトラメチニブ）と併せて投与してもよい。一部の実施形態では、抗ヒトＯＸ４０アゴニスト抗体を、ＥＲＫの阻害薬（例えば、ＥＲＫ１／２）と併せて投与してもよい。一部の実施形態では、抗ヒトＯＸ４０アゴニスト抗体を、ＧＤＣ−０９９４）と併せて投与してもよい。一部の実施形態では、抗ヒトＯＸ４０アゴニスト抗体を、Ｂ−Ｒａｆの阻害薬、ＭＥＫの阻害薬、及びＥＲＫ１／２の阻害薬と併せて投与してもよい。一部の実施形態では、抗ヒトＯＸ４０アゴニスト抗体を、ＥＧＦＲの阻害薬、ＭＥＫの阻害薬、及びＥＲＫ１／２の阻害薬と併せて投与してもよい。一部の実施形態では、抗ヒトＯＸ４０アゴニスト抗体を、１種または複数種のＭＡＰキナーゼ経路阻害薬と併せて投与してもよい。一部の実施形態では、抗ヒトＯＸ４０アゴニスト抗体を、ＣＫ１２７と併せて投与してもよい。一部の実施形態では、抗ヒトＯＸ４０アゴニスト抗体を、Ｋ−Ｒａｓの阻害薬と併せて投与してもよい。
一部の実施形態では、抗ヒトＯＸ４０アゴニスト抗体を、ｃ−Ｍｅｔの阻害薬と併せて投与してもよい。一部の実施形態では、抗ヒトＯＸ４０アゴニスト抗体を、オナルツズマブ（ＭｅｔＭＡｂとしても公知）と併せて投与してもよい。一部の実施形態では、抗ヒトＯＸ４０アゴニスト抗体を、未分化（ａｎａｐｌａｔｉｃ）リンパ腫キナーゼ（ＡＬＫ）の阻害薬と併せて投与してもよい。一部の実施形態では、抗ヒトＯＸ４０アゴニスト抗体を、ＡＦ８０２（ＣＨ５４２４８０２またはアレクチニブとしても公知）と併せて投与してもよい。一部の実施形態では、抗ヒトＯＸ４０アゴニスト抗体を、クリゾチニブと併せて投与してもよい。一部の実施形態では、抗ヒトＯＸ４０アゴニスト抗体を、セリチニブと併せて投与してもよい。一部の実施形態では、抗ヒトＯＸ４０アゴニスト抗体を、ホスファチジルイノシトール３−キナーゼ（ＰＩ３Ｋ）の阻害薬と併せて投与してもよい。一部の実施形態では、抗ヒトＯＸ４０アゴニスト抗体を、ブパルリシブ（ＢＫＭ−１２０）と併せて投与してもよい。一部の実施形態では、抗ヒトＯＸ４０アゴニスト抗体を、ピクチリシブ（ＧＤＣ−０９４１としても公知）と併せて投与してもよい。一部の実施形態では、抗ヒトＯＸ４０アゴニスト抗体を、ブパルリシブ（ＢＫＭ−１２０としても公知）と併せて投与してもよい。一部の実施形態では、抗ヒトＯＸ４０アゴニスト抗体を、ペリホシン（ＫＲＸ−０４０１としても公知）と併せて投与してもよい。一部の実施形態では、抗ヒトＯＸ４０アゴニスト抗体を、ホスファチジルイノシトール３−キナーゼ（ＰＩ３Ｋ）のデルタ選択的阻害薬と併せて投与してもよい。一部の実施形態では、抗ヒトＯＸ４０アゴニスト抗体を、イデラリシブ（ＧＳ−１１０１またはＣＡＬ−１０１としても公知）と併せて投与してもよい。一部の実施形態では、抗ヒトＯＸ４０アゴニスト抗体を、タセリシブ（ＧＤＣ−００３２としても公知）と併せて投与してもよい。一部の実施形態では、抗ヒトＯＸ４０アゴニスト抗体を、ＢＹＬ−７１９と併せて投与してもよい。一部の実施形態では、抗ヒトＯＸ４０アゴニスト抗体を、Ａｋｔの阻害薬と併せて投与してもよい。一部の実施形態では、抗ヒトＯＸ４０アゴニスト抗体を、ＭＫ２２０６と併せて投与してもよい。一部の実施形態では、抗ヒトＯＸ４０アゴニスト抗体を、ＧＳＫ６９０６９３と併せて投与してもよい。一部の実施形態では、抗ヒトＯＸ４０アゴニスト抗体を、イパタセルチブ（ＧＤＣ−００６８としても公知）と併せて投与してもよい。一部の実施形態では、抗ヒトＯＸ４０アゴニスト抗体を、ｍＴＯＲの阻害薬と併せて投与してもよい。一部の実施形態では、抗ヒトＯＸ４０アゴニスト抗体を、シロリムス（ラパマイシンとしても公知）と併せて投与してもよい。一部の実施形態では、抗ヒトＯＸ４０アゴニスト抗体を、テムシロリムス（ＣＣＩ−７７９またはＴｏｒｉｓｅｌ（登録商標）としても公知）と併せて投与してもよい。一部の実施形態では、抗ヒトＯＸ４０アゴニスト抗体を、エベロリムス（ＲＡＤ００１としても公知）と併せて投与してもよい。一部の実施形態では、抗ヒトＯＸ４０アゴニスト抗体を、リダフォロリムス（ＡＰ−２３５７３、ＭＫ−８６６９、またはデフォロリムスとしても公知）と併せて投与してもよい。一部の実施形態では、抗ヒトＯＸ４０アゴニスト抗体を、ＯＳＩ−０２７と併せて投与してもよい。一部の実施形態では、抗ヒトＯＸ４０アゴニスト抗体を、ＡＺＤ８０５５と併せて投与してもよい。一部の実施形態では、抗ヒトＯＸ４０アゴニスト抗体を、ＩＮＫ１２８と併せて投与してもよい。一部の実施形態では、抗ヒトＯＸ４０アゴニスト抗体を、二重ＰＩ３Ｋ／ｍＴＯＲ阻害薬と併せて投与してもよい。一部の実施形態では、抗ヒトＯＸ４０アゴニスト抗体を、ＸＬ７６５と併せて投与してもよい。一部の実施形態では、抗ヒトＯＸ４０アゴニスト抗体を、ＧＤＣ−０９８０と併せて投与してもよい。一部の実施形態では、抗ヒトＯＸ４０アゴニスト抗体を、ＢＥＺ２３５（ＮＶＰ−ＢＥＺ２３５としても公知）と併せて投与してもよい。一部の実施形態では、抗ヒトＯＸ４０アゴニスト抗体を、ＢＧＴ２２６と併せて投与してもよい。一部の実施形態では、抗ヒトＯＸ４０アゴニスト抗体を、ＧＳＫ２１２６４５８と併せて投与してもよい。一部の実施形態では、抗ヒトＯＸ４０アゴニスト抗体を、ＰＦ−０４６９１５０２と併せて投与してもよい。一部の実施形態では、抗ヒトＯＸ４０アゴニスト抗体を、ＰＦ−０５２１２３８４（ＰＫＩ−５８７としても公知）と併せて投与してもよい。
一部の実施形態では、抗ヒトＯＸ４０アゴニスト抗体を、エストロゲン受容体を選択的に分解する薬剤と併せて投与してもよい。一部の実施形態では、抗ヒトＯＸ４０アゴニスト抗体を、ＧＤＣ−０９２７と併せて投与してもよい。一部の実施形態では、抗ヒトＯＸ４０アゴニスト抗体を、ＨＥＲ３の阻害薬と併せて投与してもよい。一部の実施形態では、抗ヒトＯＸ４０アゴニスト抗体を、デュリゴツズマブと併せて投与してもよい。一部の実施形態では、抗ヒトＯＸ４０アゴニスト抗体を、ＬＳＤ１の阻害薬と併せて投与してもよい。一部の実施形態では、抗ヒトＯＸ４０アゴニスト抗体を、ＭＤＭ２の阻害薬と併せて投与してもよい。一部の実施形態では、抗ヒトＯＸ４０アゴニスト抗体を、ＢＣＬ２の阻害薬と併せて投与してもよい。一部の実施形態では、抗ヒトＯＸ４０アゴニスト抗体を、ベネトクラックスと併せて投与してもよい。一部の実施形態では、抗ヒトＯＸ４０アゴニスト抗体を、ＣＨＫ１の阻害薬と併せて投与してもよい。一部の実施形態では、抗ヒトＯＸ４０アゴニスト抗体を、ＧＤＣ−０５７５と併せて投与してもよい。一部の実施形態では、抗ヒトＯＸ４０アゴニスト抗体を、活性化ヘッジホッグシグナル伝達経路の阻害薬と併せて投与してもよい。一部の実施形態では、抗ヒトＯＸ４０アゴニスト抗体を、ＥＲＩＶＥＤＧＥと併せて投与してもよい。
一部の実施形態では、抗ヒトＯＸ４０アゴニスト抗体を、放射線療法と併せて投与してもよい。一部の実施形態では、抗ヒトＯＸ４０アゴニスト抗体を、ゲムシタビンと併せて投与してもよい。一部の実施形態では、抗ヒトＯＸ４０アゴニスト抗体を、ｎａｂ−パクリタキセル（ＡＢＲＡＸＡＮＥ）と併せて投与してもよい。一部の実施形態では、抗ヒトＯＸ４０アゴニスト抗体を、トラスツズマブと併せて投与してもよい。一部の実施形態では、抗ヒトＯＸ４０アゴニスト抗体を、ＴＶＥＣと併せて投与してもよい。一部の実施形態では、抗ヒトＯＸ４０アゴニスト抗体を、ＩＬ２７と併せて投与してもよい。一部の実施形態では、抗ヒトＯＸ４０アゴニスト抗体を、シクロホスファミドと併せて投与してもよい。一部の実施形態では、抗ヒトＯＸ４０アゴニスト抗体を、Ｔ細胞を腫瘍に動員する薬剤と併せて投与してもよい。一部の実施形態では、抗ヒトＯＸ４０アゴニスト抗体を、リリルマブ（ＩＰＨ２１０２／ＢＭＳ−９８６０１５）と併せて投与してもよい。一部の実施形態では、抗ヒトＯＸ４０アゴニスト抗体を、イデラリシブと併せて投与してもよい。一部の実施形態では、抗ヒトＯＸ４０アゴニスト抗体を、ＣＤ３及びＣＤ２０をターゲティングする抗体と併せて投与してもよい。一部の実施形態では、抗ヒトＯＸ４０アゴニスト抗体を、ＲＥＧＮ１９７９と併せて投与してもよい。一部の実施形態では、抗ヒトＯＸ４０アゴニスト抗体を、ＣＤ３及びＣＤ１９をターゲティングする抗体と併せて投与してもよい。一部の実施形態では、抗ヒトＯＸ４０アゴニスト抗体を、ブリナツモマブと併せて投与してもよい。
一部の実施形態では、抗ヒトＯＸ４０アゴニスト抗体を、腫瘍崩壊性ウイルスと併せて投与してもよい。一部の実施形態では、抗ヒトＯＸ４０アゴニスト抗体を、カルボプラチン及びｎａｂ−パクリタキセルと併せて投与してもよい。一部の実施形態では、抗ヒトＯＸ４０アゴニスト抗体を、カルボプラチン及びパクリタキセルと併せて投与してもよい。一部の実施形態では、抗ヒトＯＸ４０アゴニスト抗体を、シスプラチン及びペメトレキセドと併せて投与してもよい。一部の実施形態では、抗ヒトＯＸ４０アゴニスト抗体を、シスプラチン及びゲムシタビンと併せて投与してもよい。一部の実施形態では、抗ヒトＯＸ４０アゴニスト抗体を、ＦＯＬＦＯＸと併せて投与してもよい。一部の実施形態では、抗ヒトＯＸ４０アゴニスト抗体を、ＦＯＬＦＩＲＩと併せて投与してもよい。
上記のような併用療法は、組み合わせた投与（２種以上の治療薬が同じか、または別個の製剤中に含まれる）、及び別個の投与を包含し、別個の投与の場合、本発明の抗体の投与は、追加の治療薬及び／またはアジュバントの投与の前、それと同時、及び／またはその後に生じ得る。本発明の抗体は、放射線療法と組み合わせて使用することもできる。
本発明の抗体（及び任意の追加の治療薬）は、非経口、肺内、及び鼻腔内、ならびに局所処置で所望の場合には、病変内投与を含む任意の適切な手段によって投与することができる。非経口注入には、筋肉内、静脈内、動脈内、腹腔内、または皮下投与が含まれる。投与は、一部では、投与が短時間または長時間であるかに応じて、任意の適切な経路によって、例えば、注射、例えば、静脈内または皮下注射によってでよい。様々な投与スケジュールには、限定されないが、単回または様々な時点での多回投与、ボーラス投与が含まれ、パルス注入が本明細書において企図される。
本発明の抗体を、良好な医療実務と一致する様式で製剤化し、調薬し、投与することとなる。この文脈において考察される因子には、処置を受ける特定の障害、処置を受ける特定の哺乳動物、個別患者の臨床状態、障害の原因、薬剤の送達部位、投与方法、投与スケジュール、及び医師に公知の他の因子が含まれる。抗体を、必要ではないが、任意選択的に、該当障害を予防または処置するために現在使用されている１種または複数の薬剤と共に製剤化する。そのような他の薬剤の有効量は、製剤中に存在する抗体の量、障害または処置の種類、及び上記で検討した他の因子に左右される。これらは一般に、本明細書の記載と同じ投薬量及び投与経路で、または本明細書に記載の投薬量の約１〜９９％で、または適切であると経験的／臨床的に決定される任意の投薬量で、及び任意の経路によって使用される。
疾患の予防または処置では、本発明の抗体の適切な投薬量（単独で、または１種もしくは複数種の他の追加の治療薬と組み合わせて使用する場合）は、治療を受ける疾患の種類、抗体の種類、疾患の重症度及び経過、その抗体が予防目的または治療目的で投与されるか、先行する治療、患者の臨床履歴及び抗体に対する応答、ならびに医師の裁量に左右されるであろう。抗体を、１回で、または一連の処置で患者に適切に投与する。疾患の種類及び重症度に応じて、例えば、１回または複数回の別個の投与によるか、または連続的な注入によるかに関わらず、抗体約１μｇ／ｋｇ〜４０ｍｇ／ｋｇが、患者に投与する当初の候補投薬量であり得る。典型的な１日投薬量の１例は、上述の因子に応じて、約１μｇ／ｋｇ〜１００ｍｇ／ｋｇ以上の範囲であろう。数日以上にわたる反復投与では、状態に応じて、疾患症状の所望の抑制が生じるまで、一般に処置を持続させることとなる。そのような用量を、間欠的に、例えば、毎週または３週毎に投与してもよい（例えば、患者が、約２〜約２０回、または例えば、約６回用量の抗体を投与されるように）。初回は比較的高い負荷量、続いて、1回または複数回の低い用量を投与することもできる。しかしながら、他の投与計画も有用であり得る。この療法の進行は、従来の技術及びアッセイによって容易にモニターされる。
上記製剤または治療方法のいずれも、抗ＯＸ４０抗体の代わりに、またはそれに加えて、本発明のイムノコンジュゲートを使用して実施することができることが理解されるであろう。
ＩＩＩ． 製品及びキット
本発明の別の態様では、上記の障害の処置、防止、及び／または診断に有用な材料を含有する製品を提供する。製品は、容器、及び容器上か、またはそれに随伴するラベルまたは添付文書を含む。適切な容器には、例えば、ボトル、バイアル、シリンジ、静脈内用溶液バッグなどが含まれる。容器は、様々な材料、例えば、ガラスまたはプラスチックから形成されていてよい。容器は、組成物だけか、または状態の処置、防止、及び／もしくは診断に有効である別の組成物と組み合わせられている組成物を保持し、滅菌アクセスポート（例えば、容器は、皮下注射針で穴開けされ得るストッパーを備えた静脈内用溶液バッグまたはバイアルであってよい）を有してもよい。組成物中の少なくとも１種の活性薬剤は、本発明の抗体である。ラベルまたは添付文書は、組成物が、選択された状態の処置に使用されることを表示する。さらに、製品は、（ａ）本発明の抗体を含む組成物を中に含む第１の容器；及び（ｂ）さらなる細胞傷害性薬または別段の治療薬を含む組成物を中に含む第２の容器を含んでもよい。本発明のこの実施形態における製品は、組成物が、特定の状態を処置するために使用することができることを表示する添付文書をさらに含んでもよい。あるいは、または加えて、製品は、薬学的に許容される緩衝液、例えば、注射用静菌水（ＢＷＦＩ）、リン酸緩衝生理食塩水、リンゲル液、及びデキストロース溶液を含む第２（または第３）の容器をさらに含んでもよい。これは、他の緩衝液、希釈剤、フィルター、針、及びシリンジを含む、商業的及び使用者の見地から望ましい他の材料をさらに含んでもよい。
一部の実施形態では、本明細書に記載の抗ヒトＯＸ４０アゴニスト抗体及び任意選択的な薬学的に許容される担体を含む医薬品を含むキットを、本明細書において提供する。一部の実施形態では、キットは、がんを処置するために医薬品を投与するための指示書をさらに含む。
上記製品のいずれも、抗ＯＸ４０抗体の代わりに、またはそれに加えて、本発明のイムノコンジュゲートを含んでもよいことが理解されるであろう。
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材料及び方法
表面プラスモン共鳴：Ｂｉａｃｏｒｅ ３０００ 装置（ＧＥ Ｈｅａｌｔｈｃａｒｅ）で表面プラスモン共鳴（ＳＰＲ）を使用して、抗ＯＸ４０抗体の結合反応速度を測定した。製造者が提供するプロトコルを使用して、アミンベースのカップリングによって、ＣＭ５センサーチップ上に抗ヒトＦｃ（ＧＥ Ｈｅａｌｔｈｃａｒｅ）を固定化した。抗ＯＸ４０抗体は、３００〜４００共鳴単位（ＲＵ）のレベルで捕捉された。ヒトＯＸ４０（Ｓｉｎｏ Ｂｉｏｌｏｇｉｃａｌ Ｉｎｃ）に対して、抗体結合を測定した。１８．７５〜３００ｎＭまたは６．２５〜２００ｎＭの範囲を有するｈｕＯＸ４０の２倍濃度系列を、実験のために使用した。３０μｌ／分の流速、２５℃の温度で、１０ｍＭ ＨＥＰＥＳ、ｐＨ７．４、１５０ｍＭ ＮａＣｌ、及び０．００５％Ｔｗｅｅｎ ２０の泳動緩衝液を用い、２分の注入時間を使用して、ＯＸ４０の結合についてのセンサーグラムを記録した。注入の後に、抗体からのリガンドの分離を、泳動緩衝液中で６００秒間にわたってモニターした。結合サイクルの合間に、３Ｍ塩化マグネシウム４０μｌの注入で、表面を再生させた。泳動緩衝液のみを含有したブランクを差し引いた後に、１：１ Ｌａｎｇｍｕｉｒ結合モデルを、製造者が供給するソフトウェアで使用して、抗ＯＸ４０抗体へのＯＸ４０の結合について観察されたセンサーグラムを分析して、反応速度及び結合定数を算出した。
クロスブロッキング：上記のとおり、Ｂｉａｃｏｒｅ３０００装置（ＧＥ Ｈｅａｌｔｈｃａｒｅ）で表面プラスモン共鳴（ＳＰＲ）を使用して、クロスブロッキング実験を行った。分析のために、２つのフォーマットを使用した。第１のフォーマットでは、異なるフローセルで抗マウスＦｃ（ＧＥ Ｈｅａｌｔｈｃａｒｅ）を使用して、親抗体１Ａ７、３Ｃ８、及び１Ｄ２に由来するハイブリドーマを捕捉した。次いで、ヒトＯＸ４０（Ｓｉｎｏ Ｂｉｏｌｏｇｉｃａｌ Ｉｎｃ）を、２分間にわたって抗体全体に流して、結合させた。これに、抗ＯＸ４０抗体クローン１Ａ７．ｇｒ．１、３Ｃ８．ｇｒ．５、及び１Ｄ２キメラの２．５分の注入を続けた。共鳴単位（ＲＵ）の上昇は、クロスブロッキングがないことを示し、ＲＵに変化がないことは、競合を示す。第２のフォーマットでは、抗体フォーマットを逆にし、ヒト化変異体を、抗ヒトＦｃ（ＧＥ Ｈｅａｌｔｈｃａｒｅ）を使用して捕捉した。これに、ｈｕＯＸ４０の２分の注入、次いで、マウス抗体を続けた。クローンはそれぞれ、他の２種のクローンの存在下で結合することができ、それ自体の結合と競合しただけであった。
抗体変異体の生成：Ｋｕｎｋｅｌ変異誘発を使用して、ヒト化抗ＯＸ４０アゴニスト抗体クローン１Ａ７、３Ｃ８、及び１Ｄ２の変異体を生成した。変異型抗体を、２９３の細胞において一過性に発現させ、次いで、結合及び機能について試験した。
ＦＡＣＳ分析：ヒトＴ細胞系Ｈｕｔ７８を、ヒトＯＸ４０で安定的にトランスフェクトし、ヒト化抗ＯＸ４０抗体クローンを、Ｈｕｔ７８−ＯＸ４０細胞を使用してＦＡＣＳによって試験して、変異体が細胞表面に発現されたＯＸ４０の結合を保持しているかどうかを評価した。ＦＡＣＳブロッキング緩衝液（１倍ＰＢＳ、０．５％ＢＳＡ、０．０５％アジ化Ｎａ）でのブロッキングの後に、細胞を３０分間にわたって氷上で０．１、１．０、または１０．０μｇ／ｍｌの抗体のいずれかで染色した。染色の後に、細胞を冷ＦＡＣＳ緩衝液（１倍ＰＢＳ、０．５％ＢＳＡ、０．０５％アジ化Ｎａ）で２回洗浄した。次いで、細胞を３０分間にわたって氷上で抗ｈｕＦｃフィコエリトリン（ＰＥ）または抗ｍｕＦｃ ＰＥで染色した。染色された細胞を冷ＦＡＣＳ緩衝液で３回洗浄し、その後、ＦＡＣＳＣａｌｉｂｕｒで読み取り、続いて、Ｆｌｏｗｊｏソフトウェアを使用して分析した。
安定性試験：抗ＯＸ４０アゴニスト抗体を、熱ストレス試験及び化学的ストレス試験を含む安定性分析に掛けた。熱試験では、製剤化抗体の試料を、２週間にわたって４０℃で処理し、次いで、ＬＣ−ＭＳ／ＭＳを使用するトリプシンマッピングを使用して決定されるとおり、例えば、ＣＤＲ残基における異性化または脱アミノ化アミノ酸残基の存在について、分析に掛けた。化学的試験では、製剤化抗体の試料を、酸化条件（例えば、酸化剤としてＡＡＰＨを使用）に掛け、次いで、ＬＣ−ＭＳ／ＭＳを使用するトリプシンマッピングを使用して、ＣＤＲにおける酸化残基（例えば、ＭまたはＷ）の存在について分析した。
トランスフェクトされたＢＴ−４７４細胞上で発現される組換えヒトＯＸ４０タンパク質へのＯＸ４０アゴニスト抗体１Ａ７．ｇｒ．１の平衡結合分析：Ｉｏｄｏｇｅｎ法（Ｆｒａｋｅｒ及びＳｐｅｃｋ １９７８）を使用して、Ｍａｂ １Ａ７．ｇｒ．１をヨウ素化した。ＮＡＰ−５カラムを使用するゲル濾過によって、放射標識ｍａｂ １Ａ７．ｇｒ．１を、遊離１２５Ｉ−Ｎａから精製した；精製抗体は、２４．３μＣｉ／μｇの特異的活性を有した。固定濃度のヨウ化ｍａｂ １Ａ７．ｇｒ．１及び漸減濃度の系列希釈された未標識ｍａｂ １Ａ７．ｇｒ．１を含有する５０μＬ体積の競合反応混合物を９６ウェルプレートに入れた。ヒトＯＸ４０を発現する、安定的にトランスフェクトされたＢＴ−４７４細胞を３７℃、５％ＣＯ２で培養した。Ｃｅｌｌ Ｄｉｓｓｏｃｉａｔｉｏｎ Ｓｏｌｕｔｉｏｎ（Ｓｉｇｍａ−Ａｌｄｒｉｃｈ；Ｓｔ．Ｌｏｕｉｓ、ＭＯ）を使用して、細胞をフラスコから分離し、結合緩衝液（２％ＦＢＳ、５０ｍＭ ＨＥＰＥＳ、ｐＨ７．２、２ｍＭアジ化ナトリウムを含むＤＭＥＭ）で洗浄した。洗浄した細胞を結合緩衝液０．２ｍＬ中におよそ５×１０４細胞の密度で、競合反応混合物５０μＬを含有する９６ウェルプレートに添加した。細胞を含む各競合反応物におけるヨウ化抗体の最終濃度は、およそ１００ｐＭ（０．２５ｍＬ当たりおよそ１６．０×１０４ｃｐｍ）であり、細胞を含む競合反応物における未標識抗体の最終濃度は、５００ｎＭで始まり、１０種の濃度について１/３ステップで漸減するように変動し、結合緩衝液のみを使用する無添加未標識抗体ステップが続いた。細胞を含む競合反応物を室温で２時間にわたってインキュベートした。細胞を含む競合反応物を、未標識抗体の各濃度で３連でアッセイした。２時間のインキュベーションの後に、競合反応物をＭｉｌｌｉｐｏｒｅ Ｍｕｌｔｉｓｃｒｅｅｎ（登録商標）フィルタープレート（Ｍｉｌｌｉｐｏｒｅ；Ｂｉｌｌｅｒｉｃａ、ＭＡ）に移し、結合緩衝液で４回洗浄して、結合したヨウ化抗体から遊離抗体を分離した。フィルターを、Ｗａｌｌａｃ Ｗｉｚａｒｄ １４７０ガンマカウンター（ＰｅｒｋｉｎＥｌｍｅｒ Ｌｉｆｅ ａｎｄ Ａｎａｌｙｔｉｃａｌ Ｓｃｉｅｎｃｅｓ Ｉｎｃ．；Ｗｅｌｌｅｓｌｅｙ、ＭＡ）でカウントした。抗体の結合親和性を決定するためにＭｕｎｓｏｎ及びＲｏｄｂａｒｄの適合アルゴリズム（Ｍｕｎｓｏｎ及びＲｏｄｂａｒｄ １９８０）を使用するＮｅｗＬｉｇａｎｄソフトウェア（Ｇｅｎｅｎｔｅｃｈ）を使用して、結合データを評価した。
フローサイトメトリーを介しての、ヒト、カニクイザル、ラット、及びマウスＴ細胞上の細胞表面に発現したＯＸ４０へのＯＸ４０アゴニスト抗体１Ａ７．ｇｒ．１の結合：赤血球溶解緩衝液（ＢＤ Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅ；Ｓａｎ Ｊｏｓｅ、ＣＡ）を使用して赤血球を溶解することによって、末梢白血球（ＰＢＭＣ）をヒト、モーリシャスカニクイザル、ラット、またはマウス全血から得た。細胞を、４℃で１５分間にわたってＰＢＳ中のそれぞれ１０％ヒト、カニクイザル、ラット、またはマウス血清でブロックし、反応毎に全血１００μＬの当量で９６ウェルプレート内に播種した。
Ａｌｅｘａ Ｆｌｕｏｒ（登録商標）６４７で標識されたＭａｂ １Ａ７．ｇｒ．１（またはＡｌｅｘａ Ｆｌｕｏｒ（登録商標）６４７で標識されたトラスツズマブ抗体対照）を用量設定し、ヒト、ラット、及びマウス試料では９μｇ／ｍＬで開始して３倍系列希釈法で、かつモーリシャスカニクイザル試料では８μｇ／ｍＬで開始して２倍系列希釈法で細胞に結合させた。ＰＢＭＣを３０分間にわたって暗所で４℃で同時染色して、次のとおりにＴ細胞サブセット集団を特定した：ヒト、抗ＣＤ３−ＰＥ−Ｃｙ７、抗ＰｅｒＣＤＰ−Ｃｙ５．５、抗ＣＤ８−ＢＶ５１０（ＢＤ Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ）；カニクイザル、抗ＣＤ３−ＰＥ−Ｃｙ７、抗ＣＤ４−ＰｅｒＣＰ−Ｃｙ５．５、抗ＣＤ８−ＡＰＣ−Ｈ７（ＢＤ Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ）；ラット、抗ＣＤ３−ＰＥ、抗ＣＤ４−ＦＩＴＣ（ＢＤ Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ）；マウス、抗ＣＤ３−ＦＩＴＣ、抗ＣＤ４−ＰＥ（ｅＢｉｏｓｃｉｅｎｃｅ、Ｓａｎ Ｄｉｅｇｏ、ＣＡ）。
次いで、細胞をＦＡＣＳ染色緩衝液（ＢＤ Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅ）で２回洗浄し、ＰＢＳ中の１％パラホルムアルデヒド（ＥＭＳ）で固定し、その後、フローサイトメーターで試料を得た。
すべての試料を、ＢＤ Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ ＦＡＣＳＣａｎｔｏ ＩＩに流した。Ｔ細胞上のトラスツズマブ対照抗体からの背景染色を使用して、分析ゲートを設定し、ｍａｂ １Ａ７．ｇｒ．１ −Ａｌｅｘａ ６４７染色を正規化した。ＢＤ ＦＡＣＳＤｉｖａソフトウェアを使用して、得られたデータを分析した。
抗ＯＸ４０アゴニスト抗体１Ａ７．ｇｒ．１はエフェクターＴ細胞同時刺激を媒介した：Ｔｒｉｍａ Ａｃｃｅｌアフェレーシスデバイスを使用して、末梢白血球（ＰＢＭＣ）をヒト全血から回収し、Ｆｉｃｏｌｌ−Ｈｙｐａｑｕｅ勾配遠心分離（ＧＥ ｈｅａｌｔｈｃａｒｅ）によってさらに富化した。Ｍｉｌｔｅｎｙｉ ＣＤ４＋メモリーＴ細胞単離キット（Ｍｉｌｔｅｎｙｉ）を製造者の指示に従って使用して、ＣＤ４＋メモリーＴ細胞をＰＢＭＣから単離した。ＣＤ３２及びＣＤ８０を発現するＬ細胞を５０００Ｒａｄで照射し、抗原提示細胞として使用した。
照射したＣＤ３２＋ＣＤ８０＋Ｌ細胞（５０００細胞／ウェル）をＣＤ４＋メモリーＴ細胞（５００００細胞／ウェル）と混合し、３７℃、５％ＣＯ２中で、９６ウェルプレート内で培養した。培養培地は、１０％ＦＢＳ、Ｇｌｕｔａ−ＭＡＸ、ピルビン酸ナトリウム、ペニシリン／ストレプトマイシン、非必須アミノ酸、及びベータ−メルカプトエタノールを含むＲＰＭＩ １６４０からなった。
ＣＤ４＋メモリーＴ細胞を、ＣＤ３２＋ＣＤ８０＋Ｌ細胞同時培養物中で、４０ｎｇ／ｍＬの抗ＣＤ３（クローンＳＰ３４）及び（ＢＤ Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ）及び変動量のｍａｂ １Ａ７．ｇｒ．１またはアイソタイプ対照（抗ＨＳＶ糖タンパク質Ｄ、抗ｇＤ）（３２０ｎｇ／ｍＬから０．１６ｎｇ／ｍＬまで系列２倍希釈）を添加することによって活性化させた。培養５日目に、上清中のＩＦＮ−ガンマレベルをＬｕｍｉｎｅｘ（Ｂｉｏ−Ｒａｄ）によって評価し、Ｔ細胞増殖をＣｅｌｌ Ｔｉｔｅｒ−Ｇｌｏルミネセンス（Ｐｒｏｍｅｇａ）によって測定し、培養７日目に、ＥｎＶｉｓｉｏｎ Ｍｕｌｔｉｌａｂｅｌ Ｒｅａｄｅｒ（Ｐｅｒｋｉｎ Ｅｌｍｅｒ）で読み取った。
結果：
ＯＸ４０アゴニスト抗体は、ナノモル未満の親和性でヒトＯＸ４０と結合した。表面プラスモン共鳴分析を使用して、ヒトＯＸ４０への抗ＯＸ４０抗体結合の結合反応速度を測定した。Ｂｉａｃｏｒｅによって測定した場合に、ヒト化抗体１Ａ７の変異体は、ヒトＯＸ４０に対して高い親和性結合を示した。この分析の結果を、表２において示す。
表２：ヒトＯＸ４０へのヒト化抗ＯＸ４０抗体１Ａ７変異体結合の反応速度定数
Figure 0006637439
ヒト化抗体３Ｃ８の変異体は、ｈｕＯＸ４０に対して高い親和性を示した。この分析の結果を表３において示す。
表３：ヒトＯＸ４０へのヒト化抗ＯＸ４０抗体３Ｃ８変異体結合の反応速度定数
Figure 0006637439
抗体１Ｄ２のヒト化変異体は、親ハイブリドーマ抗体と比較すると、ｈｕＯＸ４０への結合の低減を示した。この分析の結果を表４において示す。
表４：ヒトＯＸ４０へのヒト化抗ＯＸ４０抗体１Ｄ２変異体結合の反応速度定数
Figure 0006637439
ＦＡＣＳ分析：ヒト化ＯＸ４０抗体変異体をＦＡＣＳによって分析して、Ｈｕｔ７８細胞の表面上で発現されるｈｕＯＸ４０への抗体結合を評価した。この分析の結果を図１において示す。ヒト化抗ＯＸ４０アゴニスト抗体１Ａ７．ｇｒ．１、１Ａ７．ｇｒ．２、１Ａ７．ｇｒ．３、３Ｃ８．ｇｒ．１、３Ｃ８．ｇｒ．２、及び３Ｃ８．ｇｒ．３は、細胞表面上で発現されるヒトＯＸ４０に良好に結合した。
クロスブロッキング実験：抗体クローンはそれぞれ、他の２種のクローンの存在下で結合することができ、ヒトＯＸ４０への結合について、それ自体と競合しただけであったが、これは、抗体１Ａ７、３Ｃ８及び１Ｄ２が、ヒトＯＸ４０への結合について相互に競合しないことを示唆した。
変異型ＯＸ４０抗体の生成及び特性決定：抗ＯＸ４０クローン１Ａ７．ｇｒ．１及び３Ｃ８．ｇｒ．５の変異体を、潜在的に不安定な（例えば、熱ストレス条件下で）ＣＤＲ残基モチーフを変異させるｋｕｎｋｅｌ変異誘発によって生成した。抗体１Ａ７．ｇｒ１では、配列ＤＳ（Ｄは、ＣＤＲＨ１にあり；ＤＳは、異性化が増大する可能性がある）及びＮＧＤＳ（ＣＤＲ Ｈ２中；ＮＧは、異性化が増大する可能性がある）を、潜在的に不安定な残基として特定し、表５において示したとおりに変異させた。変異体を上記のとおりＢｉａｃｏｒｅによって試験して、結合反応速度を評価し、同時刺激アッセイにおいて、生物学的活性を決定した。
表５：ｍａｂ １Ａ７．ｇｒ．１の変異体に導入した変異
Figure 0006637439
ＤＡまたはＥＳへの残基ＤＳ（Ｄは、ＣＤＲ Ｈ１にある）の変異は、ｈｕＯＸ４０についての結合親和性を著しく変更することはなかった（表６）。ＮＡＤＳ、ＮＡＤＡ、ＮＧＤＡ、及びＮＧＳＳへのＣＤＲ Ｈ２中の残基ＮＧＤＳの変異も、ヒトＯＸ４０についての結合親和性を著しく変更することはなかった。ＳＧＤＳへのＮＧＤＳ（ＣＤＲ Ｈ２中）の変異は、結合親和性を１／２にした（表６）。変異型抗体を、Ｔ細胞同時刺激アッセイを使用して分析したところ、１Ａ７．ｇｒ１抗体（データは図示せず）と比較すると、Ｔエフェクター細胞の同時刺激レベルは、変異体において著しくは変更されなかった。
表６：ヒトＯＸ４０への抗ＯＸ４０ １Ａ７変異体結合の反応速度定数
Figure 0006637439
抗体３Ｃ８．ｇｒ５では、配列ＤＴ（ＣＤＲＨ２中）及びＤＧ（ＣＤＲ Ｌ２中）（両方とも、潜在的異性化部位）を、抗体３Ｃ８．ｇｒ．５における潜在的に不安定な残基と特定した。表７において示すとおりに、これらの配列をそれぞれ変異させた。
表７：ｍａｂ ３Ｃ８．ｇｒ．５の変異体に導入した変異
Figure 0006637439
ＤＡまたはＤＱのいずれかへの、ＣＤＲ Ｈ２中の残基ＤＴの変異は、ヒトＯＸ４０についての親和性の低下をもたらした（親抗体の親和性と比較して）（表８）。ＥＧ、ＱＧ、またはＳＧのいずれかへの、ＣＤＲ Ｌ２中の残基ＤＧの変異は、結合親和性を著しく変更することはなかった（表８）。
表８：ヒトＯＸ４０への抗ＯＸ４０ ３Ｃ８安定性変異体結合についての反応速度定数
Figure 0006637439
安定性試験：抗体１Ａ７．ｇｒ．１を、上記のとおりの安定性試験に掛けたところ、配列ＤＳ（Ｄは、ＣＤＲＨ１中にある）及びＮＧＤＳ（ＣＤＲ Ｈ２中）は、熱ストレス試験条件下で安定していた。加えて、Ｍ及びＷ残基（ＣＤＲ−Ｈ１、−Ｈ２、及び−Ｈ３中）は、化学ストレス試験中に、許容されないレベルの酸化を示すことはなかった。
抗体３Ｃ８．ｇｒ．５も、安定性試験に掛けた。残基ＤＴは、熱試験条件下で安定していた一方で、残基ＤＧ（ＣＤＲ−Ｌ２）は、熱試験条件下で安定していなかった。
ＯＸ４０抗体アラニンスキャニング変異体の生成及び特性決定：例えば、結合親和性に対する変異の影響を検査するために、１Ａ７．ｇｒ．１及び３Ｃ８．ｇｒ．５のアラニンスキャン変異体を生成した。加えて、抗体活性に対する結合親和性の影響を決定した。軽鎖及び重鎖の第３のＣＤＲ中のアミノ酸残基を変化させるｋｕｎｋｅｌ変異誘発を使用して、変異を生成した。変異型抗体を、２９３細胞において一過性に発現させ、ヒトＯＸ４０への結合についてＢｉａｃｏｒｅ ３０００によって試験した。
この実験の結果を表９において示す。重鎖ＣＤＲ３中で、９６位（１Ａ７．Ａｌａ．１４）、９７位（１Ａ７．Ａｌａ．１１）、９８位（１Ａ７．Ａｌａ．１３）、９９位（１Ａ７．Ａｌａ．１０）、及び１００位（１Ａ７．Ａｌａ．９）におけるアラニン置換は、ｈｕＯＸ４０に対する結合の低減を示した。これらの結果は、９６、９７、９８、９９、及び１００位の残基が、ＯＸ４０への抗体結合について重要であり得ることを示唆している。ｉｎ ｖｉｔｒｏ Ｔ細胞同時刺激アッセイにおけるＡｌａスキャン変異体１Ａ７．Ａｌａ９、１Ａ７．Ａｌａ１０、１Ａ７．Ａｌａ１１、１Ａ７．Ａｌａ１３、及び１Ａ７．Ａｌａ１４の機能的特性決定は、ＯＸ４０抗体親和性の低下が、エフェクターＴ細胞増殖活性を同時刺激する抗体の能力の低減と相関することを示した。
表９：ヒトＯＸ４０への抗ＯＸ４０ １Ａ７．ｇｒ．１アラニンスキャン変異体結合の反応速度定数（置換アラニンに下線が付されている）
[訳者注：下記表で[ ]で囲まれている配列箇所は、ＰＣＴ／ＵＳ２０１５／０２３４３２では、下線が引かれた文字である。]
Figure 0006637439
Figure 0006637439
抗体３Ｃ８．ｇｒ５アラニンスキャン変異体の分析を表１０において示す。軽鎖重鎖ＣＤＲ３中で、９１、９３、９４、及び９５位においてアラニン置換を含む変異型抗体は、ｈｕＯＸ４０への結合の著しい低減を示した。重鎖ＣＤＲ３中の３つの位はすべて（９５、９６、及び９７）、アラニンに変異させた場合、ｈｕＯＸ４０への結合の低減を示した。
表１０：ヒトＯＸ４０への抗ＯＸ４０ ３Ｃ８．ｇｒ．５アラニンスキャン変異体結合の反応速度定数（アラニン置換に下線が付されている）
[訳者注：下記表で[ ]で囲まれている配列箇所は、ＰＣＴ／ＵＳ２０１５／０２３４３２では、下線が引かれた文字である。]
Figure 0006637439
ラジオイムノアッセイ分析を使用して分析すると、Ｍａｂ １Ａ７．ｇｒ．１はヒトＯＸ４０に高い親和性で結合した：平衡結合研究を記載のとおりに行って、トランスフェクトされたＢＴ−４７４細胞上で発現されるヒトＯＸ４０に対するｍａｂ １Ａ７．ｇｒ．１の親和性を決定した。Ｋｄ値を、表１１においてまとめる。測定された結合親和性の平均は、０．４５ｎＭであった（ｎ＝３、個々の値は０．４３、０．４４、０．４９）。
表１１ 組換えヒトＯＸ４０を発現するＢＴ−４７４細胞へのｍａｂ １Ａ７．ｇｒ．１結合の平衡結合分析
Figure 0006637439
Ｍａｂ １Ａ７．ｇｒ．１は、ヒト、カニクイザル、ラット、及びマウスＴ細胞上で発現されるＯＸ４０に高い親和性で結合した：ヒト、カニクイザル、ラット、及びマウスＴ細胞上で発現されるＯＸ４０へのｍａｂ １Ａ７．ｇｒ．１の結合を、フローサイトメトリーをベースとするアッセイにおいて評価した。ヒト及びカニクイザルＴ細胞へのｍａｂ １Ａ７．ｇｒ．１結合の平均ＥＣ５０値を表１２においてまとめ、結合曲線を図２において示す。結果は、ｍａｂ１Ａ７．ｇｒ．１が、ヒト及びカニクイザルＴ細胞に、同様の高い親和性で、ヒト及びカニクイザルＴ細胞についてそれぞれ０．２２０±０．０２６（１．４７ｎＭ）及び０．１４２±０．０００１μｇ／ｍＬ（０．９４６ｎＭ）のＥＣ５０値で結合したことを示す。測定可能なラットまたはマウスＴ細胞へのｍａｂ１Ａ７．ｇｒ．１の結合は、検出されなかった。
表１２：ヒト及びカニクイザルＴ細胞へのＭａｂ １Ａ７．ｇｒ．１結合
Figure 0006637439
ＯＸ４０アゴニスト抗体ｍａｂ１Ａ７．ｇｒ．１での処置は、Ｔ細胞受容体結合後に、用量依存的にＴエフェクター細胞増殖及びインターフェロンガンマ産生を同時刺激した：ＣＤ４＋メモリーＴ細胞を、記載のとおりの固定濃度の抗ＣＤ３及び変動濃度の抗ＯＸ４０または対照抗体で刺激した。抗ＣＤ３架橋結合の不在下では、ｍａｂ １Ａ７．ｇｒ．１は、Ｔ細胞増殖に対して効果を有さなかった（図３Ａ）。漸増濃度のｍａｂ １Ａ７．ｇｒ．１は、抗ＣＤ３架橋結合に応じてＣＤ４＋メモリーＴ細胞増殖を同時刺激した。ｍａｂ１Ａ７．ｇｒ．１の同時刺激効果についての算出ＥＣ５０は、９．９６ｎｇ／ｍＬであった（ｎ＝２、図３Ａ）。漸増濃度のｍａｂ１Ａ７．ｇｒ．１は、抗ＣＤ３架橋結合に応じて、インターフェロンガンマのＣＤ４＋メモリーＴ細胞産生を同時刺激した（図３Ｂ）。これらの結果は、アゴニストＯＸ４０ ｍａｂ１Ａ７．ｇｒ．１が、ＣＤ４＋メモリーＴ細胞増殖及びインターフェロンガンマ産生を同時刺激することを実証した。
材料及び方法ＩＩ
１． 抗体：精製抗ヒトＯＸ４０（ＰＥ）（クローンＡＣＴ３５）、マウスＩｇＧ１（ＰＥ）、抗ヒトＣＤ３（クローンＳＰ３４）、抗ヒトＣＤ４（ＦＩＴＣ）、抗ヒトＣＤ２５（ＰＥ）、抗ヒトＣＤ４５ＲＡ（ＡＰＣ）、抗ヒトＣＤ３−ＡＰＣ、及び精製マウス抗ヒトＣＤ１１ｂ抗体は、ＢＤ ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓから購入した。アレムツズマブ（Ｃａｍｐａｔｈ）は、Ｇｅｎｚｙｍｅから購入した。抗ヒトＣＤ５２（ＡＰＣ）は、Ｓｉｇｍａから購入した。ヤギ抗マウスＩｇＧ Ａｌｅｘａ Ｆｌｕｏｒ ６４７は、Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎから購入した。抗ヒトＣＤ１２７（ｅＦｌｕｏｒ ４５０）及びラット抗マウスＯＸ４０（ＰＥ、クローンＯＸ８６）は、ｅＢｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓから購入した。抗ヒトＯＸ４０抗体ＩＡ７ｇｒ１、リツキシマブ（キメラ抗ＣＤ２０、ＩｇＧ１）及び抗ＨＳＶ糖タンパク質Ｄ（抗ｇＤ抗体、ヒトＩｇＧ１）は、Ｇｅｎｅｎｔｅｃｈで生成した。抗ヒトＩｇＧ（ＰＥ）は、ＢＤ Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓから購入した。ヒトＣＤ４ Ｉｓｏｌａｔｉｏｎ Ｋｉｔ ＩＩは、Ｍｉｌｔｅｎｙｉ Ｂｉｏｔｅｃｈからのものであった。ヒトＮＫ Ｉｓｏｌａｔｉｏｎキットは、Ｓｔｅｍ Ｃｅｌｌ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙから購入した。
２． 細胞及び培地
ａ、 細胞系：ＢＴ４７４（ヒト乳がん細胞系）は、ＡＴＣＣから得；２９３をベースとする両栄養性細胞系は、Ｌｉｆｅ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙから得た。ＢＴ４７４及び両栄養性細胞を培養し、１０％ＦＢＳ／Ｐｅｎ／Ｓｔｒｅｐを補充したＤＭＥＭ培地中、３７℃／５％ＣＯ２インキュベーターで維持した。ＣＤ３２ａ及びＣＤ８０を発現するＬ細胞を培養し、完全ＲＰＭＩ培地（ＲＰＭＩ−１６４０、１０％ＦＢＳ（熱不活化）／Ｐｅｎ／ｓｔｒｅｐ／グルタミン／非必須アミノ酸／５５μＭ βＭＥを補充）中、３７℃／５％ＣＯ２インキュベーターで維持した。Ｕ９３７（ヒト単球性細胞系）を培養し、完全ＲＰＭＩ培地中、３７℃／５％ＣＯ２インキュベーターで維持した。
ｂ、 ヒトＯＸ４０発現ＢＴ４７４クローンの生成：ヒトＯＸ４０−ＭＳＣＶ（ｈＯＸ４０−ＭＳＣＶ）プラスミドを生成するために、ヒトＯＸ４０ ｃＤＮＡを５’ＨＳＶ糖タンパク質Ｄ（ｇＤ）タグとの融合タンパク質として、ＭＳＣＶ ＩＲＥＳ ＧＦＰレトロウイルスベクター（Ｃｌｏｎｔｅｃｈ）にクローニングした。両栄養性Ｐｈｏｅｎｉｘパッケージング細胞を、Ｆｕｇｅｎｅ ＨＤ（Ｒｏｃｈｅ）を介してｈＯＸ４０−ＭＳＣＶプラスミドでトランスフェクトした。続いて、ＢＴ４７４細胞を、トランスフェクトされた両栄養性細胞からのウイルス上清で感染させた。ＯＸ４０発現ＢＴ４７４細胞のプールを、表面ｇＤ＋及びＧＦＰ＋細胞を選別することによって富化した。ＯＸ４０発現クローンを、ＯＸ４０発現クローンの限界希釈分析によって生成した。高レベル及び低レベルのＯＸ４０を発現するクローンを、フローサイトメトリーによって、ｇＤタグの表面発現及びＯＸ４０発現レベルに基づき選択した。ＢＴ４７４クローン上でのヒトＯＸ４０発現レベルを決定するために、ＯＸ４０発現細胞を、抗ヒトＯＸ４０−ＰＥ（クローンＡＣＴ３５、ＢＤ Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ）で染色し、細胞蛍光を、ＦＡＣＳ Ｃａｎｔｏ ＩＩ（ＢＤ Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅ）で測定し、Ｆｌｏｗｊｏソフトウェア（ＴｒｅｅＳｔａｒ）を使用して分析した。
ｃ、 正常なヒト末梢血単核細胞（ＰＢＭＣ）、Ｔ細胞、単球、及びＮＫ細胞の単離：正常なヒト末梢血試料は、登録済みのＧｅｎｅｎｔｅｃｈ従業員によって寄付され、Ｅｍｐｌｏｙｅｅ Ｈｅａｌｔｈ Ｓｅｒｖｉｃｅ部によって提供された。正常なヒト軟膜は、Ｇｅｎｅｎｔｅｃｈ Ｅｍｐｌｏｙｅｅ Ｈｅａｌｔｈ Ｓｅｒｖｉｃｅ部を介してＳａｎ Ｆｒａｎｃｉｓｃｏ Ｂｌｏｏｄ Ｂａｎｋから得た。末梢白血球（ＰＢＭＣ）を、Ｔｒｉｍａ Ａｃｃｅｌアフェレーシスデバイスを使用してヒト全血から回収し、Ｆｉｃｏｌｌ−Ｈｙｐａｑｕｅ勾配遠心分離（ＧＥ Ｈｅａｌｔｈｃａｒｅ）によってさらに富化した。
ＣＤ４＋Ｔ細胞を、Ｍｉｌｔｅｎｙｉ ＣＤ４＋Ｔ細胞単離キットを使用してＰＢＭＣから単離した。ＣＤ４＋ナイーブＴ細胞を、ＣＤ４−ＦＩＴＣ、ＣＤ２５−ＰＥ、及びＣＤ１２７−ｅ４５０（ｅＢｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ）で染色して、ＣＤ４＋ＣＤ２５−ＣＤ１２７＋細胞及びＣＤ４＋ＣＤ２５＋ＣＤ１２７−細胞を選別した。Ｔｒｅｇ細胞を、ＦＡＣＳ Ａｒｉａ（ＢＤ Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ）を用いて同じ提供者から選別した。選別の直後に、選別細胞の純度をフローサイトメトリー分析によって確認した。
Ｆｉｃｏｌｌ−Ｐａｑｕｅ勾配遠心分離によって単離した全血試料のＰＢＭＣを使用して、単球を単離した。単球を、ヒト単球単離キット（Ｍｉｌｔｅｎｙｉ）を使用してＰＢＭＣから単離した。単球由来マクロファージ（ＭＤＭ）の生成のために、単離した単球を、ＧＭ−ＣＳＦ２０ｎｇ／ｍＬの存在下で完全ＲＰＭＩ培地で７〜１４日間にわたって培養した。
ヒトＮＫ細胞富化キット（Ｓｔｅｍ Ｃｅｌｌ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ）を製造者指示に従って使用して、正常なヒトＮＫ細胞を軟膜のＰＢＭＣから単離し、細胞を、ＡＤＣＣアッセイのために直ちに使用した。
３、 細胞標識試薬：精製したＣＤ４＋ナイーブＴ細胞を、ＣｅｌｌＴｒａｃｅ ＣＦＳＥ Ｃｅｌｌ Ｐｒｏｌｉｆｅｒａｔｉｏｎ Ｋｉｔ（Ｌｉｆｅ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ）を使用してＣＦＳＥで標識し、精製したＴｒｅｇ細胞をＰＫＨ２６ Ｒｅｄ Ｆｌｕｏｒｅｓｃｅｎｔ Ｃｅｌｌ Ｌｉｎｋｅｒ Ｋｉｔ（Ｓｉｇｍａ）で標識した。両方のキットを、製造者指示に従って使用した。
４． Ｔｒｅｇ抑制アッセイ：ＣＤ３２及びＣＤ８０を発現するＬ細胞を５０００ｒａｄで照射し、抗原提示細胞として、ＣＤ４＋ＣＤ２５＋ＣＤ１２７−細胞抑制アッセイのために使用した。
照射ＣＤ３２＋ＣＤ８０＋Ｌ細胞（５０００ＲＡＤ、１０，０００細胞／ウェル）を、平底９６ウェル組織培養プレート上に播種し、３７℃／５％ＣＯ２インキュベーター内で終夜維持した。翌日に、選別したＴｒｅｇ細胞の存在下または不在下でのＣＤ４＋ナイーブＴ細胞増殖を、次のＣＤ４＋ＣＤ２５＋ＣＤ１２７−Ｔ細胞抑制アッセイにおいて評価した。
ナイーブＣＤ４＋Ｔ細胞の増殖をモニターするために、１００，０００のＣＦＳＥ（５ｕｍ）標識ナイーブＣＤ４＋Ｔ細胞を、前日に播種したＬ細胞をすでに含有していたアッセイプレートの各ウェルに添加した。Ｔｒｅｇ細胞の抑制機能を試験するために、２００，０００のＰＫＨ２６（２ｕｍ）標識Ｔｒｅｇ細胞を、ＣＦＳＥ標識ＣＤ４＋ナイーブＴ細胞を含有する各ウェルに添加した。抗ＯＸ４０抗体１Ａ７．ｇｒ１の活性を試験するために、１Ａ７．ｇｒ１、またはアイソタイプ対照抗体の抗ＣＤ２０抗体（リツキシマブ）（それぞれ２００ｎｇ／ｍｌ）をナイーブＣＤ４＋Ｔ細胞、Ｔｒｅｇ細胞、及び照射ＣＤ３２＋ＣＤ８０＋Ｌ細胞の同時培養物に添加した。可溶性抗ＣＤ３を、２．５ｎｇ／ｍＬの最終濃度で細胞に添加した。データを得る前に、アッセイプレートを、３７℃／５％ＣＯ２インキュベーターで６日間にわたって維持した。６日目に、ナイーブＣＤ４Ｔ細胞の増殖を、ＣＦＳＥ色素希釈によって追跡し、細胞蛍光を、ＦＡＣＳ Ｃａｎｔｏ ＩＩ（ＢＤ Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅ）で測定し、ＦｌｏｗＪｏソフトウェア（Ｔｒｅｅｓｔａｒ）を使用して分析した。
５． 抗体依存性細胞媒介食作用（ＡＤＣＰ）アッセイ：Ｕ９３７細胞を、食細胞性エフェクター細胞としてＡＤＣＰアッセイにおいて使用した。ＰＫＨ２６（２ｕｍ）で標識した５０，０００のＵ９３７細胞を９６ウェル組織培養プレートに播種した。変動量の抗ＯＸ４０、１Ａ７．ｇｒ１、または抗ＨＥＲ２（トラスツズマブアイソタイプ対照）抗体（１０００〜７．８ｎｇ／ｍｌまでの２倍系列希釈）をＵ９３７細胞に添加した。ＯＸ４０高または低発現ＢＴ４７４クローンのいずれかをターゲット細胞として、ＡＤＣＰアッセイにおいて利用した。５，０００のＯＸ４０＋ＢＴ４７４細胞を、Ｕ９３７細胞に、アッセイプレートにおいて添加した。アッセイプレートを３７℃／５％ＣＯ２インキュベーターで４時間にわたってインキュベートした。次いで、細胞を、細胞蛍光測定のためにＦＡＣＳ Ｃａｎｔｏ ＩＩ（ＢＤ Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅ）で収集し、ＦｌｏｗＪｏソフトウェア（Ｔｒｅｅｓｔａｒ）を使用して分析した。ＧＦＰ＋ＰＫＨ２６＋事象（すなわち、ＢＴ４７４細胞を貪食している、測定されたＵ９３７細胞）を、すべてのＧＦＰ＋事象（全ＢＴ４７４細胞）で割ることによって、食作用のパーセンテージを算出した。
６、 抗体依存性細胞媒介細胞傷害性（ＡＤＣＣ）アッセイ：１Ａ７．ｇｒ１が、ＯＸ４０発現Ｔ細胞のＡＤＣＣを誘発することを実証するために、一次ＮＫ細胞を、活性化一次ＣＤ４＋Ｔ細胞と共に同時培養した。ヒトＣＤ４Ｔ細胞単離キット（Ｍｉｌｔｅｎｙｉ ｋｉｔ）及びヒトＮＫ細胞富化キット（Ｓｔｅｍ Ｃｅｌｌ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ）をそれぞれ使用して、ＣＤ４＋Ｔ細胞及びＮＫ細胞を同じＰＢＭＣドナーから単離した。完全ＲＰＭＩ−１６４０培地中で４８時間にわたって、Ｔ細胞をＰＨＡ（５ｕｇ／ｍｌ）で活性化することによって、単離ＣＤ４＋Ｔ細胞上でのＯＸ４０発現を誘発した。ＡＤＣＣアッセイのために、アレムツズマブ（抗ＣＤ５２ｍＡｂ）を陽性対照として使用し、抗ｇＤを陰性対照として使用した。活性化ＣＤ４＋細胞（１ウェル当たり５，０００）を変動量の１Ａ７．ｇｒ１または対照抗体（１００００〜０．０１ｎｇ／ｍｌの３倍系列希釈）と共に、９６ウェル組織培養アッセイプレート中で３０分間にわたってインキュベートした。続いて、ＮＫ細胞（５０、０００細胞）を各ウェルに添加することによって、ＡＤＣＣアッセイを開始した。次いで、アッセイプレートを３７℃／５％ＣＯ２インキュベーター内で、さらに２０時間にわたってインキュベートした。次いで、同時培養物を、抗ヒトＣＤ４−ＦＩＴＣ及び７ＡＡＤ（ＢＤ Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ）で染色した。ＰＢＳで洗浄した後に、データをフローサイトメトリー（ＢＤ ＦＡＣＳｃａｌｉｂｅｒ）によって得、Ｆｌｏｗｊｏプログラム（ＴｒｅｅＳｔａｒ）によって分析した。全ＣＤ４Ｔ細胞に対するＣＤ４＋７ＡＡＤ＋細胞のパーセンテージによって、ＯＸ４０発現ＣＤ４Ｔ細胞の殺滅（ＡＤＣＣ）頻度を規定した。
１Ａ７ｇｒ１誘発性ＯＸ４０感受性ＡＤＣＣを実証するために、高または低ヒトＯＸ４０発現ＢＴ４７４（ヒト乳がん細胞系）クローンを、黒色壁の９６ウェル組織培養アッセイプレートに播種して（１ウェル当たり５，０００）、３７℃／５％ＣＯ２インキュベーターで２４時間にわたって付着させ、維持した。次いで、抗ＣＤ２０（アイソタイプ対照）または抗ＯＸ４０アゴニスト抗体１Ａ７．ｇｒ１をＢＴ４７４細胞に添加した。ヒトＮＫ細胞富化キット（Ｓｔｅｍ Ｃｅｌｌ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ）を使用して、健康なドナーからの一次ヒトＮＫ細胞を軟膜ＰＢＭＣから単離し、次いで、５０，０００の精製ＮＫ細胞を、抗ＣＤ２０（リツキシマブアイソタイプ対照）または１Ａ７．ｇｒ１の存在下でＢＴ４７４クローンを含有するウェルに添加した。アッセイプレートを２４時間にわたってインキュベートし、その後、ＣｅｌｌＴｉｔｅｒＧｌｏ試薬を添加して、化学発光シグナルを得た。抗ＯＸ４０媒介ＡＤＣＣを受けた細胞のパーセンテージを、抗体で処理された細胞のシグナルを未処理細胞のシグナルで割ることによって算出した。ＮＫ単一培養からのシグナルを差し引いて、ＮＫ細胞からのバックグラウンドシグナルを相殺した。
結果ＩＩ
Ｍａｂ １Ａ７．ｇｒ．１は、ＣＤ４＋ナイーブＴ細胞のＴｒｅｇ抑制を阻害した：本発明者らは、Ｔｒｅｇ細胞へのＯＸ４０アゴニスト抗体の結合によるＯＸ４０架橋結合が、ナイーブＴ細胞増殖を阻害するそれらの能力を阻害するかどうかを試験した。ナイーブＣＤ４＋Ｔ細胞増殖は、１Ａ７．ｇｒ１の不在下で抗ＣＤ３架橋結合によって誘発された。ナイーブＴ細胞培養物へのＴｒｅｇ細胞の添加は、抗ＣＤ３誘発性ナイーブＴ細胞増殖を抑制した。ｍＡｂ １Ａ７．ｇｒ．１での処理は、調節性Ｔ細胞の抑制機能を阻害した（ｎ＝３、図６）。フローサイトメトリー分析によって低ＣＦＳＥ集団をモニターすることによって、ナイーブＴ細胞増殖を測定した。この結果は、ｍＡｂ １Ａ７．ｇｒ．１がＴｒｅｇ細胞の抑制機能を阻害することを実証した。
ＢＴ４７４−ｈＯＸ４０トランスジェニッククローンは、種々のレベルのｈＯＸ４０を発現した：ｈＯＸ４０表面染色及びフローサイトメトリー分析による平均蛍光強度（ＭＦＩ）を使用して、ヒトＯＸ４０の発現レベルをトランスジェニックＢＴ４７４細胞クローンにおいて特徴づけた。ＢＴ４７４−高ヒトＯＸ４０クローンは、ＢＴ４７４−低ヒトＯＸ４０クローンよりも５倍超高いＯＸ４０を発現し、高ＯＸ４０クローンは、５２４３のＭＦＩを示し（図８Ｂ）、低ＯＸ４０クローンは、９９４のＭＦＩを示した（図８Ａ）。アイソタイプ対照抗体のトラスツズマブは、１０のＭＦＩを有した（データは図示せず）。
ＯＸ４０アゴニスト抗体での処置は、ＯＸ４０依存性抗体依存性細胞媒介食作用（ＡＤＣＰ）を誘発した：抗ヒトＯＸ４０ｍａｂ １Ａ７．ｇｒ．１がＡＤＣＰを媒介するかどうかを決定するために、Ｕ９３７骨髄系細胞を、ＯＸ４０発現ターゲット細胞、高または低レベルのＯＸ４０を発現するＢＴ４７４クローンと共に培養した。ＦＡＣＳを使用してアッセイした場合に、ＯＸ４０アゴニスト抗体１Ａ７での処置は、低レベル及び高レベルのｈＯＸ４０を発現するＢＴ４７４−ｈＯＸ４０クローンの食作用を用量依存的に誘発した（図９）。加えて、ＢＴ４７４−低ｈＯＸ４クローンを使用した場合よりも、ＢＴ４７４−高ｈＯＸ４０クローンを使用すると、より高いレベルの食作用が観察され、これは、ＯＸ４０抗体媒介性細胞媒介食作用が、ターゲット細胞上でのＯＸ４０発現レベルに依存することを示唆した（図９）。対照的に、ＢＴ４７４−高ｈＯＸ４０クローンで示されたとおり、アイソタイプ対照抗体のトラスツズマブ（Ｈｅｒｃｅｐｔｉｎとも呼ばれる）は、１０％食作用を媒介しただけであった。これらのデータは、ｍａｂ １Ａ７．ｇｒ．１が、ＯＸ４０発現ターゲット細胞の食作用を誘発すること、及び抗体依存性細胞媒介食作用のレベルがＯＸ４０レベルと相関することを実証した。
アゴニストＯＸ４０抗体１Ａ７．ｇｒ１での処置は、ヒトＯＸ４０を発現するＢＴ４７４クローンにおいてＡＤＣＣを誘発し、ＡＤＣＣのレベルは、低レベルのＯＸ４０を発現する細胞におけるＡＤＣＣのレベルよりも、高レベルのＯＸ４０を発現する細胞において有意に高かった：ＯＸ４０アゴニスト抗体１Ａ７．ｇｒ１での処置は、ＯＸ４０発現細胞においてＡＤＣＣを誘発した（図１０）。ＡＤＣＣを検出するために、ＣｅｌｌＴｉｔｅｒＧｌｏアッセイを行った。ターゲット細胞生存率の低下によって証明されるとおり、０．１ｕｇ／ｍＬの抗ＯＸ４０アゴニスト抗体１Ａ７．ｇｒ１での処置は、低ｈＯＸ４０−ＢＴ４７４細胞の有意なＡＤＣＣを誘発した。０．１ｕｇ／ｍｌのＯＸ４０アゴニスト抗体１Ａ７．ｇｒ１での処置は、高ｈＯＸ４０−ＢＴ４７４細胞のさらにより広範なＡＤＣＣをもたらした。低ｈＯＸ４０−ＢＴ４７４クローン及び高ｈＯＸ４０−ＢＴ４７４クローンの間のＡＤＣＣの差異は、統計的に有意であった（ｐ＝０．００７７）。対照的に、リツキシマブ（対照）での処置は、高及び低ＯＸ４０発現ＢＴ４７４クローンの両方について、生存率を変更しなかった。これらのデータは、アゴニストＯＸ４０抗体１Ａ７．ｇｒ１が、ｉｎ ｖｉｔｒｏでＯＸ４０発現細胞の殺滅を媒介することができることを実証した。加えて、ＡＤＣＣのレベルは、低レベルのＯＸ４０を発現する細胞におけるＡＤＣＣのレベルよりも、高レベルのＯＸ４０を発現する細胞において有意に高かった。ＯＸ４０は、腫瘍内Ｔ細胞において高度に発現され、ヒト腫瘍内Ｔｒｅｇ細胞は、高レベルのヒトＯＸ４０を発現する。
アゴニストＯＸ４０抗体の活性は、架橋結合依存性であり、エフェクターＴ細胞を同時刺激するためにＦｃエフェクター機能を必要とした：ｍａｂ １Ａ７が、エフェクターＴ細胞増殖を同時刺激するために抗体架橋結合に依存しているかどうかを決定するために、ｍａｂ １Ａ７．ｇｒ．１を、プレート結合形態または可溶性形態で培養物に添加した。この実験の結果を、図４Ａにおいて示す。プレート結合した抗ＣＤ３の存在下で、プレート結合したｍａｂ １Ａ７．ｇｒ．１は、ＣＤ４＋エフェクターＴ細胞増殖を同時刺激した。対照的に、１Ａ７が可溶性形態で、プレート結合した抗ＣＤ３の存在下で提供された場合には、プレート結合した抗ＣＤ３の存在下で、プレート結合したアイソタイプ対照抗体で観察されたレベルと同様のレベルまで、同時刺激活性は抑止された。これらの結果は、エフェクターＴ細胞のｍａｂ １Ａ７同時刺激のために、架橋結合（例えば、プレートへのｍａｂ １Ａ７．ｇｒ．１の付着によって提供される）が必要とされ得ることを示唆している。
活性のためにｍａｂ １Ａ７．ｇｒ．１が架橋結合を必要とするかどうかをさらに精査するために、変異型抗体を生成して、細胞上に提示されるＦｃガンマ受容体に結合し得ない抗体を作成した。簡単には、Ｆｃガンマ受容体と結合するために必要とされる、Ｎ−連結グリコシル化のための部位であるＦｃ残基アスパラギン２９７をグリシンに変異させて（Ｎ２９７Ｇ）、Ｆｃ受容体への抗体Ｆｃ結合を妨害した。この実験の結果を図４Ｂにおいて示す。Ｎ２９７Ｇ変異を含むＭＡｂ １Ａ７ ｇｒ．１（ＩｇＧ１）は、Ｔｅｆｆ細胞増殖を同時刺激することができなかった。対照的に、野生型（非変異）ｍａｂ １Ａ７ ｇｒ．１は、抗ＣＤ３誘発性Ｔｅｆｆ細胞増殖を同時刺激した。図４Ａにおいて示した結果と併せて、これらの結果は、ＯＸ４０アゴニストｍａｂ １Ａ７ ｇｒ．１の活性が架橋結合依存性であり、エフェクターＴ細胞を同時刺激するためにＦｃエフェクター機能を必要とすることを実証した。
ｍａｂ １Ａ７ ｇｒ．１ ＩｇＧ１は、ｍａｂ １Ａ７．ｇｒ．１ ＩｇＧ４よりも強力な架橋結合活性を保有した。抗体アイソタイプは、Ｆｃガンマ受容体について示差的結合を有する。最も強力なエフェクターＴ細胞同時刺激活性を可能にするアイソタイプを特定するために、ヒトＩｇＧ１ Ｆｃを有するｍａｂ １Ａ７．ｇｒ．１の活性を、ヒトＩｇＧ４主鎖上のｍａｂ １Ａ７ ｇｒ．１の活性と比較した。この実験の結果を、図５において示す。Ｍａｂ １Ａ７ ｇｒ．１−ＩｇＧ１は、ｍａｂ １Ａ７ ｇｒ．１−ＩｇＧ４よりも強力に、抗ＣＤ３誘発性エフェクターＴ細胞増殖を同時刺激した。この結果は、ヒトＩｇＧ１ Ｆｃを含むｍａｂ１Ａ７ ｇｒ．１が、ヒトＩｇＧ４ Ｆｃを含むｍａｂ １Ａ７．ｇｒ１よりも強力な架橋結合活性を保有したことを示した。
ｍａｂ １Ａ７．ｇｒ．１での処置は、ＯＸ４０発現Ｔ細胞のＡＤＣＣを誘発した。細胞表面抗原を認識する抗体は、抗体依存性細胞傷害活性（ＡＤＣＣ）によって、ターゲット細胞枯渇を媒介する可能性を有する。ｍａｂ１Ａ７．ｇｒ１がＡＤＣＣを誘発するかどうかを決定するために、高レベルのＯＸ４０を発現するターゲット細胞を、末梢血ＣＤ４＋Ｔ細胞をＰＨＡで刺激することによって生成し、ヒトエフェクター細胞の存在下でｍａｂ １Ａ７．ｇｒ．１と接触させた。この実験の結果を、図７Ａにおいて示す。ＮＫ細胞を、刺激されたＣＤ４＋Ｔ細胞と共に培養した場合に（ＮＫ細胞１０：活性化Ｔ細胞１の比）、ｍａｂ １Ａ７．ｇｒ．１での処置は、ＯＸ４０発現Ｔ細胞のＡＤＣＣを誘発した。この結果は、１Ａ７．ｇｒ１が、高レベルのＯＸ４０を発現するＴ細胞でＡＤＣＣを誘発することを実証した。ｍａｂ．１Ａ７．ｇｒ．１によって誘発された枯渇は、陽性対照抗体のアレムツズマブ（抗ＣＤ５２ｍａｂ）での処置によって誘発された枯渇よりも広範ではなかった。対照的に、陰性対照のｍａｂ抗ｇＤ（アイソタイプ対照）での処置は、ＡＤＣＣの誘発をもたらさなかった。
異なるＦｃアイソタイプを有するｍａｂ １Ａ７．ｇｒ．１抗体がｉｎ ｖｉｔｒｏで示差的ＡＤＣＣ活性を実証するかどうかを決定するために、ＩｇＧ１アイソタイプを有するｍａｂ １Ａ７．ｇｒ１の活性を、ＩｇＧ４アイソタイプを有するｍａｂ １Ａ７．ｇｒ１の活性と比較した。この実験の結果を図７Ｂにおいて示す。ｍａｂ Ａ７．ｇｒ１（ＩｇＧ１）での処置は、ｍａｂ １Ａ７．ｇｒ１（ＩｇＧ４）によって誘発されるＡＤＣＣのレベルと比較して、より高いＯＸ４０発現ＣＤ４＋Ｔ細胞のＡＤＣＣを誘発した。
材料及び方法ＩＩＩ
ＯＸ４０Ｌ及び抗ＯＸ４０結合競合アッセイ。抗ヒトＯＸ４０抗体１Ａ７ｇｒ１を、Ａｌｅｘａ Ｆｌｕｏｒ６４７にコンジュゲートさせた。ヒトＯＸ４０Ｌ−フラッグ及びヒトＤＲ５−フラッグタンパク質は、Ｇｅｎｅｎｔｅｃｈで生成した。Ａｌｅｘａ Ｆｌｕｏｒ ５５５にコンジュゲートした抗フラッグ抗体は、Ｃｅｌｌ Ｓｉｇｎａｌｉｎｇ（カタログ番号３７６８）から購入した。トランスジェニックＨｕｔ７８−ｈＯＸ４０細胞（Ｈｕｔ７８−ｈＯＸ４０、ヒトＴ細胞系、ヒトＯＸ４０発現のためにレトロウイルスで形質導入）を培養し、完全ＲＰＭＩ培地（ＲＰＭＩ−１６４０、１０％ＦＢＳ（熱不活化）／Ｐｅｎ／ｓｔｒｅｐ／グルタミン／非必須アミノ酸／５５ｕＭ βＭＥで補充）中、３７℃／５％ＣＯ２インキュベーターで維持した。
初めに、ＯＸ４０へのｍａｂ １Ａ７ｇｒ１結合の滴定を行った。１×１０６のＨｕｔ７８−ｈＯＸ４０細胞を使用し、ｍａｂ１Ａ７ｇｒ１の濃度を、１０ｕｇ／ｍＬから始めて、１／２ずつ滴定した。４℃で３０分間のインキュベーションの後に、細胞を洗浄緩衝液（ＰＢＳ／０．５％ＦＢＳ／２ｍＭ ＥＤＴＡ）中で２回洗浄し、続いて、ＦＡＣＳＣａｎｔｏＩＩフローサイトメーター（ＢＤ）でデータを得た。次いで、データをＦｌｏｗｊｏプログラム（ＴｒｅｅＳｔａｒ）によって分析し、平均蛍光強度（ＭＦＩ）を得た。最大ＭＦＩの約７０％を生成するｍａｂ １Ａ７．ｇｒ．１（２００ｎｇ／ｍＬ）の量を競合アッセイにおいて使用するために選択した。ＯＸ４０Ｌ−フラッグを１０ｕｇ／ｍＬから出発して１／３ずつ滴定したことを除いて、ＯＸ４０Ｌ−フラッグ結合の滴定を同様に実施した。
ＯＸ４０Ｌ及び抗ＯＸ４０ ｍａｂ結合競合アッセイを、次のとおりに行った：ＯＸ４０Ｌ−フラッグまたは対照ＤＲ５−フラッグを、１０ｕｇ／ｍｌ〜１０ｎｇ／ｍＬの濃度で、１×１０６のＨｕｔ７８−ｈＯＸ４０細胞に添加した。４℃で３０分間のインキュベーションの後に、細胞を洗浄緩衝液で２回洗浄し、次いで、１０ｕｇ／ｍＬの抗フラッグ−Ａｌｅｘａ Ｆｌｕｏｒ ５５５及び２００ｎｇ／ｍＬのｍａｂ １Ａ７．ｇｒ．１−ＡｌｅｘａＦｌｕｏｒ６４７を添加して、ＯＸ４０Ｌと抗ｈＯＸ４０ ｍａｂ １Ａ７．ｇｒ．１との間の競合を試験した。４℃で３０分間のインキュベーションの後に、細胞を洗浄緩衝液で２回洗浄し、続いて、ＦＡＣＳＣａｎｔｏＩＩフローサイトメーター（ＢＤ）でデータを得た。次いで、データをＦｌｏｗｊｏプログラム（ＴｒｅｅＳｔａｒ）によって分析して、１Ａ７ｇｒ１結合のＭＦＩを得た。
結果ＩＩＩ
滴定実験は、抗ヒトＯＸ４０ｍａｂ １Ａ７ｇｒ１が用量依存的にＨｕｔ７８−ｈＯＸ４０細胞に結合し、最大結合の７０％が約２００ｎｇ／ｍＬの抗体で観察されることを実証した（図１２Ａ）。この濃度を、競合実験のために選択した。ＯＸ４０Ｌ−フラッグはまた、Ｈｕｔ７８−ｈＯＸ４０細胞への用量依存的結合を実証した（図１２Ｂ）。
競合アッセイにおいて、ＯＸ４０Ｌ−フラッグの濃度が上昇するにつれて、Ｈｕｔ７８−ｈＯＸ４０細胞への抗ヒトＯＸ４０ ｍａｂ １Ａ７．ｇｒ．１の結合は低下した（図１２Ｃ）。対照的に、対照ＤＲ５−フラッグの存在は、ｍａｂ １Ａ７．ｇｒ．１結合に影響を有さず（図１２Ｄ）、これは、Ｈｕｔ７８−ＯＸ４０細胞へのＯＸ４０Ｌ結合が特異的であることを示した。これらのデータは、Ｈｕｔ７８−ＯＸ４０細胞上のｈＯＸ４０への結合について、ＯＸ４０Ｌが、抗ヒトＯＸ４０ ｍａｂ １Ａ７ｇｒ１と競合することを実証した。同様の実験で、３Ｃ８．ｇｒ５も、ＯＸ４０Ｌとの結合について競合することが観察された。
材料及び方法ＩＶ
マウスにおける抗ＯＸ４０の薬物動態（ＰＫ）評価。雌のＢ６．ＣＢ１７−Ｐｒｋｄｃｓｃｉｄ／ＳｚＪマウス（ｎ＝１２動物／群）に、０日目に、１Ａ７．ｇｒ１ ＩｇＧ１（ＭＯＸＲ０９１６）の単回静脈内注射を１ｍｇ／ｋｇまたは１０ｍｇ／ｋｇで与えた。各マウスに、５ｍＬ／ｋｇ（１ｍｇ／ｋｇ用量は、０．２ｍｇ／ｍＬの濃度であり；１０ｍｇ／ｋｇ用量は、２ｍｇ／ｍＬの濃度であった）の用量体積を与えた。投与後５分目；１、３、８、及び２４時間目；ならびに２、４、７、１０、１４、２１、及び２８日目に、心臓穿刺（１動物当たり３時点；１時点当たり３動物）によって、各動物から血液試料（１２５〜１５０μＬ）を収集した。研究のために投与前試料を収集しなかった。試料を、血清分離管を備えた管に収集し、下記のとおり処理した。
遠心分離の前に少なくとも２０分間にわたって、周囲温度で、試料を凝固させた。収集から１時間以内に、２℃〜８℃を維持するように設定された遠心分離器内で５分間にわたって、１分当たり１１，０００回転の相対遠心力で、遠心分離を開始した。血液から分離した血清を、事前にラベル付けされた、キャップを備えた０．５ｍＬ管に移した。分析まで、−８０℃を維持するように設定されたフリーザー内で試料を貯蔵した。
一般的なＥＬＩＳＡで、捕捉試薬としてヒツジ抗ヒトＩｇＧを、かつ検出試薬としてヤギ抗ヒトＩｇＧホースラディッシュペルオキシダーゼ（ＨＲＰ）を使用して、１Ａ７．ｇｒ１ ＩｇＧ１を分析した。このアッセイでの有効検出限界（ＬＯＤ）は、０．０８μｇ／ｍＬであった。
静脈内ボーラスインプットモデル及びスパースサンプリング（Ｍｏｄｅｌ ２０１）、ＷｉｎＮｏｎｌｉｎ Ｐｒｏ、第５．２．１版（Ｐｈａｒｓｉｇｈｔ Ｃｏｒｐｏｒａｔｉｏｎ；Ｍｏｕｎｔａｉｎ Ｖｉｅｗ、ＣＡ）を使用して、各動物からの血清濃度対時間データを分析した。すべてのＰＫ分析は、個々の動物データのナイーブプールに基づいた。特定のＰＫパラメータ：Ｃｍａｘ（最大濃度）、ＡＵＣｌａｓｔ（時点＝０から、直線台形規則（ｌｉｎｅａｒ ｔｒａｐｅｚｏｉｄａｌ ｒｕｌｅ）を使用して最後の測定可能な濃度が算出された時点までの血清濃度対時間曲線下面積）、ＡＵＣｉｎｆ（無限大まで外挿した血清濃度対時間曲線下面積）、Ｃｍａｘ／Ｄ（用量正規化Ｃｍａｘ）、ＡＵＣｉｎｆ／Ｄ（用量正規化ＡＵＣｉｎｆ）、ＣＬ（クリアランス；用量／ＡＵＣｉｎｆ）、Ｖｓｓ（定常状態での分布容積）、及びｔ１／２，λｚ（終末相半減期）を推定するために、次の方法を使用した。
結果ＩＶ
１及び１０ｍｇ／ｋｇの投与後に、ＰＫは、１Ａ７．ｇｒ１ ＩｇＧ１では用量比例することが観察された（図１３）。ＰＫパラメータを下記の表１３にまとめる。
表１３：ＰＫパラメータ
Figure 0006637439
非担腫瘍ＳＣＩＤマウスにおいて、１Ａ７．ｇｒ１では、直線的な用量比例ＰＫが観察された。これらのデータは、試験した用量レベルでの１Ａ７．ｇｒ１ ＩｇＧ１の薬物動態が、マウスにおいて非交差反応性ヒトＩｇＧ１モノクローナル抗体で予測されたとおりであり、かつ典型的なＩｇＧ１モノクローナル抗体の薬物動態と同様であったことを示唆している。
材料及び方法Ｖ
カニクイザルにおけるパイロット４週間毒性研究。ビヒクル（１０ｍＭ酢酸ヒスチジン、６％スクロース、０．０２％Ｔｗｅｅｎ２０、ｐＨ５．８）または１Ａ７．ｇｒ１ ＩｇＧ１を、０．０１、０．３、または１０ｍｇ／ｋｇ／用量で、雄のカニクイザルに静脈内投与した。投与計画は、２週間毎に１回で３回の投与であった（１、１５、及び２９日目に投与）。終末検死を、最後の投与の３日後に行った。安全性エンドポイントには：臨床観察及び毎日の観察、臨床病理、凝固、検尿、肉眼及び顕微鏡による分析、毒物動態（ＴＫ）、及び抗治療抗体（ＡＴＡ）力価が含まれた。薬力学的（ＰＤ）分析には、血清サイトカイン、Ｔ細胞活性化／増殖／枯渇、及びＯＸ４０受容体占有率が含まれた。
血液を静脈穿刺によって採取した。許容される試料採取頻度及び血液体積を超えない場合には、追加の血液試料を得た（例えば、非血清試料の凝固の結果）。他の試料種をＦＡＣＳ及びＰＤ試料と同時に収集している場合には、静脈穿刺の後にまずそれらの試料を収集し、続いて、ＦＡＣＳ及びＰＤ試料を収集した。特別なステンレス鋼製ケージパンからの排流によって、尿を収集した。収集の後に、試料を、処理に適した実験室に移した。血液試料を血清のために処理し、血清を様々な臨床化学パラメータについて分析した。
個々の臨床化学値を、ＯＬＹＭＰＵＳ（登録商標）ａｕ６４０ｅ分析器で分析した。Ｃ反応性タンパク質（ＣＲＰ）を、免疫比濁法によって測定した。
表示の時点で、Ｋ２−ＥＤＴＡ抗凝固薬を含む血液試料をサイトカイン分析のために収集した。遠心分離の後に、血漿を収集し、分析まで−８０℃で貯蔵した。複数のサイトカインの同時定量を可能にするビーズをベースとした多重技術であるＬＵＭＩＮＥＸ（登録商標）ｘＭＡＰ（登録商標）アッセイ技術（Ｌｕｍｉｎｅｘ、Ａｕｓｔｉｎ、ＴＸ）を使用して、サイトカインレベルを決定した。ＭＩＬＬＩＰＬＥＸ（登録商標）ＭＡＰ Ｎｏｎ−Ｈｕｍａｎ Ｐｒｉｍａｔｅ Ｃｙｔｏｋｉｎｅ Ｍａｇｎｅｔｉｃ Ｂｅａｄ Ｐａｎｅｌ Ｋｉｔ（ＥＭＤ Ｍｉｌｌｉｐｏｒｅ、Ｂｉｌｌｅｒｉｃａ、ＭＡ）を製造者プロトコルに従って使用して、試料を分析した。標準は、組換えＧＣＳＦ、ＧＭＣＳＦ、ＩＦＮγ、ＩＬ１ベータ、ＩＬ１ｒａ、ＩＬ２、ＩＬ４、ＩＬ５、ＩＬ６、ＩＬ８、ＩＬ１０、ＩＬ１２／２３ｐ４０、ＩＬ１３、ＩＬ１５、ＩＬ１７Ａ、ＩＬ１８、ＭＣＰ１、ＭＩＰ１アルファ、ＭＩＰ１ベータ、ｓＣＤ４０、ＴＧＦアルファ、ＴＮＦアルファ、及びＶＥＧＦの混合物を含有した。標準曲線範囲は、ＩＬ４で４．６〜３０００ｐｇ／ｍＬ；ＩＬ１０及びＩＬ１８で１１．６〜７５００ｐｇ／ｍＬ；ならびに他のすべてのサイトカインで２．３〜１５００ｐｇ／ｍＬであった。血漿試料を１：３希釈し、続いて、９６ウェルプレートで３回、１：２系列希釈し、各サイトカインに特異的な、抗体コンジュゲートした蛍光ビーズのカクテルを添加した。プレートを室温で３０分間にわたってインキュベートし、続いて、４℃で終夜インキュベートした。翌日、ビオチン化検出抗体の混合物を試料に添加し、プレートを室温で１時間にわたってインキュベートし、続いて、ストレプトアビジン−フィコエリトリンと共に３０分間にわたってインキュベートした。次いで、ＬＵＭＩＮＥＸ（登録商標）ＦＬＥＸＭＡＰ３Ｄ（登録商標）装置を使用して、蛍光シグナルを評価したが、フィコエリトリンシグナルの強度は、存在するサイトカインの量に対応した。各タンパク質での標準曲線の５パラメータ適合から、血清サイトカイン濃度を決定した。
サル血清中の１Ａ７．ｇｒ１ ＩｇＧ１の濃度を、一般的なＥＬＩＳＡを使用して分析した。ヒツジ抗ヒトＩｇＧ（Ｈ＋Ｌ）（サル吸収済）を、捕捉試薬として使用し、ホースラディッシュペルオキシダーゼ（ＨＲＰ）にコンジュゲートしたヤギ抗ヒトＩｇＧ（Ｈ＋Ｌ）（サル吸収済）コンジュゲートを、検出試薬として使用した。
フローサイトメトリーを使用する受容体占有率分析のための研究を通じて、血液試料を収集した。染色表面マーカー（例えば、ＯＸ４０受容体）のフローサイトメトリーアッセイのために、抗体カクテルを各試験日に各染色パネルのために調製した。カクテルの適切なアリコットを、深型９６ウェルプレートの指定のウェルに分配した。各動物で、全血試料１００μＬを、染色カクテルを含有する適切なウェルに移し、混合した。染色した血液を暗所で、周囲温度で最低３０分間にわたってインキュベートした。赤血球を１Ｘ ＢＤ ＦＡＣＳ Ｌｙｓｅ（ＢＤ Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ）１．８ｍＬで室温で少なくとも６分間にわたって溶解させた。試料を遠心分離し、上清を吸引し、廃棄した。細胞ペレットをＨＢＳＳ１．８ｍＬで２回洗浄した。２回目の洗浄の後に、各試料を１％パラホルムアルデヒド３００μＬ中に再懸濁させた。ＢＤ ＦＡＣＳ Ｃａｎｔｏ ＩＩフローサイトメーターで収集するために、各試料（２００μＬ）をＵ底９６ウェルプレートの適切なウェルに移した。ＦＡＣＳ Ｄｉｖａソフトウェア（ＢＤ Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ）を使用して、データ分析を行った。リンパ球を、それらのＦＳＣ／ＳＳＣプロファイルに基づき特定し、Ｔ細胞を、ＣＤ３＋／ＳＳＣｌｏｗとしてゲートした。その後のＣＤ３＋Ｔ細胞の階層型ゲーティングを使用して、Ｔ細胞サブセットのそれぞれを特定し、かつカウントした。投与された試験物の存在下でＯＸ４０に結合しない蛍光標識試験物（抗ＯＸ４０抗体）を使用して、ＣＤ３＋ＣＤ４＋ＣＤ８−Ｔｈリンパ球上のＯＸ４０の占有率を評価した。無関連ヒト化ＩｇＧ１抗体を１Ａ７．ｇｒ１のためのアイソタイプ対照として使用した。アイソタイプゲートを超えて陽性であったＴｈ細胞の画分を、％ＯＸ４０＋細胞として分類した。
研究設計を、下記の表１４においてまとめる。
表１４：パイロット毒性研究設計
Figure 0006637439
優良試験所基準（ＧＬＰ）毒性研究。ビヒクル（２０ｍＭ酢酸ヒスチジン、２４０ｍＭスクロース、０．０２％ポリソルベート２０、ｐＨ５．５）または１Ａ７．ｇｒ１ ＩｇＧ１を、静脈内ボーラスによって０．５、５、または３０ｍｇ／ｋｇ／用量で、雄及び雌のカニクイザル（１群当たり５匹の雄及び５匹の雌）において投与した。投与計画は２週毎に１回、６週間で、合計４回の投与であった（１、１５、２９、及び４３日目に投与）。主な研究動物を、４５日目の終末検死に指定した。回復検死（ｒｅｃｏｖｅｒｙ ｎｅｃｒｏｐｓｙ）に指定した動物を、最後の投与後に６週間にわたって回復させ、８５日目に検死した。安全性エンドポイントには、臨床観察及び毎日の観察、臨床病理、凝固、検尿、肉眼及び顕微鏡による分析、毒物動態（ＴＫ）、抗治療抗体（ＡＴＡ）力価、ＣＶ安全性薬理学、ならびに神経学的評価が含まれた。薬力学的（ＰＤ）分析には、血清サイトカイン、Ｔ細胞活性化／増殖／枯渇、及びＯＸ４０受容体占有率（末梢及び組織）が含まれた。
血液を静脈穿刺によって採取した。採血前に湿った氷上で終夜にわたって、特別なステンレス鋼製ケージパンからの排流から／排流によって、尿を収集した。収集の後に、試料を、処理に適した実験室に移した。臨床化学採血の前に、動物を絶食させた。
一般的なＥＬＩＳＡを使用して、サル血清における１Ａ７．ｇｒ１ ＩｇＧ１の濃度を分析した。
フローサイトメトリーによってＣＤ３＋ＣＤ４＋Ｔ−ヘルパーリンパ球上のＡＦ６４７標識１Ａ７．ｇｒ１の結合を評価することによって、受容体占有率を評価した。簡単には、全血または単細胞懸濁液１００μＬを２．２ｍｌ／ウェルの９６ウェルプレートの適切なウェルに、新たに調製したＰｈａｒｍ Ｌｙｓｅ１．８ｍＬと共に添加した。試料を十分に混合し、室温で２０分間にわたってインキュベートした。溶解の後に、試料を遠心し、上清を廃棄し、試料をＨＢＳＳ１．８ｍＬで１回洗浄した。洗浄の後に、細胞を１０％カニクイザル血清１００μＬ中でブロックし、２〜８℃を維持するように設定された冷蔵庫内、暗所で、最低１５分間にわたってインキュベートした。ブロッキングステップの後に、適切な体積の抗体カクテルをプレート上の適切なウェルに添加し、プレートを混合し、次いで、２〜８℃を維持するように設定された冷蔵庫内、暗所で、最低３０分間にわたってインキュベートした。インキュベーションの後に、プレートをＨＢＳＳ１．８ｍＬで２回洗浄し、試料を１％パラホルムアルデヒド３００μＬ中に再懸濁させ、２〜８℃を維持するように設定された冷蔵庫内、暗所で、１０〜１５分間にわたってインキュベートした。インキュベーションの後に、各試料２００μＬをｖ底９６ウェルプレートに移し、血球計算器上で分析した。フローサイトメトリー装置で、マーカー抗原を有する様々な細胞種の相対存在度でデータを得た。ＦＡＣＳＣａｎｔｏ（商標）ＩＩフローサイトメーター及びＤＩＶＡ（登録商標）６．０ソフトウェアを利用して、試料を分析した。各投与後時点で各動物について生成したデータを、対応する研究前の値と、さらには、一連の対照値と比較した。上昇または低下の程度を評価して、観察されたあらゆる変化の潜在的な生物学的有意性を補助的に決定した。
ＬＵＭＩＮＥＸ（登録商標）をベースとした有効な方法によって、ＭＣＰ−１レベルを測定した。この、ビーズをベースとする多重サンドイッチイムノアッセイは、固体支持体として、分析物特異的捕捉抗体にコンジュゲートしている、スペクトルでコード化されるビーズを使用する固相タンパク質アッセイである。標準及び試料をウェルに添加すると、存在する分析物（サイトカイン）は、カラーコード化ビーズにコンジュゲートしている特異的捕捉抗体と結合した（各カラービーズは、１種のサイトカインに特異的である）。このアッセイにおける検出系は、蛍光タンパク質のＲ−フィコエリトリンにコンジュゲートしたストレプトアビジン、または分析物特異的ビオチン化検出抗体と混合されたストレプトアビジン−フィコエリトリン（ストレプトアビジン−ＲＰＥ）であった。各マイクロプレートウェルの内容物を、Ｌｕｍｉｎｅｘ装置に入れた。ビーズのスペクトル特性及び関連ＲＰＥ蛍光の量をモニターすることによって、数種の分析物の濃度を同時に決定した。試料を遠心して、デブリをペレット化した。９６ウェルマルチスクリーンフィルタープレートのウェルを洗浄緩衝液２００μＬで洗浄した。次いで、標準、品質管理（ＱＣ）試料及び試料をアッセイ緩衝液２５μＬを含有する適切なウェルに移し（２５μＬ）、続いて、適切な抗体ビーズ使用液２５μＬを添加した。プレートを暗所、室温で、激しく振盪するように設定されたプレート振盪機上で、２時間（±５分）にわたってインキュベートし、次いで、洗浄緩衝液２００μＬで２回洗浄し、続いて、検出抗体２５μＬを各ウェルに添加した。プレートを暗所、室温で、激しく振盪するように設定されたプレート振盪機上で、１時間（±２分）にわたってインキュベートした。次いで、使用ストレプトアビジン−ＲＰＥ使用液２５μＬを各ウェルに添加し、プレートを暗所、室温で、激しく振盪するように設定されたプレート振盪機上で、３０分間（±１分）にわたってインキュベートした。プレートを洗浄緩衝液２００μＬで２回洗浄した後に、シース液１５０μＬを各ウェルに添加し、プレートを暗所、室温で、激しく振盪するように設定されたプレート振盪機上で、少なくとも５分間にわたってインキュベートした。プレートをＬｕｍｉｎｅｘシステムで読み取った。３７．５００〜６０００ｐｇ／ｍＬの濃度範囲に及ぶサルＭＣＰ−１の標準をアッセイ希釈液中で調製した。アッセイのＬＬＯＱ及びＵＬＯＱは、７５．００〜６０００ｐｇ／ｍＬであった。サルＭＣＰ−１のＱＣ試料を、２００、１０００、及び３２００ｐｇ／ｍＬの理論濃度でアッセイ希釈液中で調製した。加えて、内因性ＱＣ（ＥＱＣ）を無溶媒で添加したところ、それは曲線の範囲内にあった。
研究設計を表１５においてまとめる。
表１５：ＧＬＰ毒性研究設計
Figure 0006637439
結果Ｖ
パイロット毒性研究
この研究の目的は、２週毎に１回（１、１５、及び２９日目）、合計３回の投与で静脈内注射を介してカニクイザルに投与した場合の抗ＯＸ４０（１Ａ７．ｇｒ１ ＩｇＧ１）の毒性、毒物動態プロファイル、及び薬力学を評価することであった。
１Ａ７．ｇｒ１ ＩｇＧ１の静脈内投与は、カニクイザルにおいて２週毎に１回、４週間で、１０ｍｇ／ｋｇまで忍容性が良好であり、すべての動物が、予定された検死まで生存した。Ｃ反応性タンパク質（ＣＲＰ）の軽微な上昇（図１４Ａ及びＢ）が観察されたが、ＣＲＰの一過性の上昇は、主に高用量群（１０ｍｇ／ｋｇ）の３匹のＡＴＡ＋サルに限定された。同様に、サイトカインの混合サブセットの一過性の上昇（図１５Ａ及びＢ）は、主に高用量群（１０ｍｇ／ｋｇ）の３匹のＡＴＡ＋サルに限定された。残りのＡＴＡ＋またはＡＴＡ−動物では、臨床病理学的変化またはサイトカインの上昇は観察されなかった。抗原攻撃の不在下では、予測されたとおり、ＩＦＮγの上昇は観察されなかった。
血清ＰＫ（図１６Ａ）及び末梢受容体占有率（図１６Ｂ）の測定によって、すべての動物において、曝露が確認された。第１の循環Ｃｍａｘ用量は、３つの群すべてで比例していた。ＰＫは、１０ｍｇ／ｋｇでＡＵＣ０−１４に基づきＩｇＧ１抗体で予測されたとおりであった。高頻度のＡＴＡが観察された：０．０１及び０．３ｍｇ／ｋｇ群では動物４匹のうち３匹；及び１０ｍｇ／ｋｇ群では動物４匹のうち２匹。影響は、血清濃度及び受容体占有率の低下であった。これらの結果は、１Ａ７．ｇｒ１の静脈内投与が、表示の投与スケジュールでカニクイザルにおいて良好に忍容されることを実証した。
ＧＬＰ毒性研究
ＧＬＰ毒性研究の目的は、０、０．５、５、及び３０ｍｇ／ｋｇ／用量で静脈内投与されたカニクイザルにおいて、研究日１、１５、２９、４３日目に、続いて、無投与の４２日目（回復期間）に、１Ａ７．ｇｒ１の毒性を決定することであった。
１Ａ７．ｇｒ１ ＩｇＧ１の静脈内投与は、カニクイザルにおいて２週毎に１回、６週間で、３０ｍｇ／ｋｇまで忍容性が良好であり、すべての動物が、研究日４５及び８５日目での予定された検死時点まで生存した。ＩｇＧ１抗体で予測された用量比例ＰＫが観察された（図１７）。曝露及び受容体占有率は、３０ｍｇ／ｋｇ用量レベルで維持された（図１８）。ＡＴＡは、０．５及び５ｍｇ／ｋｇ用量レベルでは、すべての動物において検出されたが、３０ｍｇ／ｋｇ用量レベルでは検出されず、曝露及び受容体占有率が低下した。中間用量動物において、ＭＣＰ−１の一過性の上昇が観察された（図１９）。末梢Ｔ細胞の有意な活性化または増殖も観察されず（図２０）、観察された絶対末梢Ｔカウントのいずれの有意な低減も観察されなかった。
まとめると、１回目の投与後の臨床病理パラメータにおいて、臨床観察または変化は観察されなかった。おそらくＡＴＡによって、２回目の投与後に始まる急性投与後反応、ならびに急性相タンパク質及びサイトカインの一過性の上昇が観察された（両方の研究と一致）。薬物関連の器官の重量変化、肉眼または顕微鏡による所見は特記されなかった。０．５ｍｇ／ｋｇ及び５ｍｇ／ｋｇ用量群のすべての動物においてＡＴＡが検出され（ただし３０ｍｇ／ｋｇでは検出されず）、曝露及び受容体占有率が低下した。１Ａ７．ｇｒ１は、高親和性（約０．４５ｎＭ）でヒトＯＸ４０と結合することが見出され、ＰＫは、典型的なＩｇＧ１で予測されたとおりであり、用量比例した。これらは、ヒトＣＬ＝２．５ｍＬ／ｄ／ｋｇ及びｔ１／２約３週間に当たる（ｐｒｏｊｅｃｔ）。組織または末梢におけるＴ細胞数または活性化状態について、有意なＰＤ作用は観察されなかった。ＯＸ４０が、活性化Ｔ細胞でのみ一過性に発現され、健康なカニクイザルは、些少な活性化Ｔ細胞しか有さないであろうために、末梢Ｔ細胞の有意な活性化または増殖の欠如、及び絶対末梢Ｔ細胞カウントの有意な変化の欠如は、意外ではなかった。
明瞭な理解を目的として、上述の発明を、実例及び実施例により多少詳細に記載してきたが、説明及び実施例は、本発明の範囲を限定するものとして解釈されるべきではない。本明細書において言及したすべての特許及び科学文献の開示は、それらの全体が参照によって本明細書に明確に組み込まれる。

Claims (41)

  1. （１）（ａ）ＤＳＹＭＳ（配列番号２）のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ１；（ｂ）ＤＭＹＰＤＮＧＤＳＳＹＮＱＫＦＲＥ（配列番号３）のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ２；及び（ｃ）ＡＰＲＷＹＦＳＶ（配列番号４）のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ３を含む重鎖可変ドメイン（ＶＨ）；並びに
    （２）（ｄ）ＲＡＳＱＤＩＳＮＹＬＮ（配列番号５）のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ１；（ｅ）ＹＴＳＲＬＲＳ（配列番号６）のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ２；及び（ｆ）ＱＱＧＨＴＬＰＰＴ（配列番号７）のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ３を含む軽鎖可変ドメイン（ＶＬ）を含む、ヒトＯＸ４０に結合する抗体。
  2. ヒトＯＸ４０に結合する抗体が抗ヒトＯＸ４０アゴニスト抗体である、請求項１に記載の抗体。
  3. ヒトＯＸ４０及びカニクイザルＯＸ４０と結合する、請求項１又は２に記載の抗体。
  4. ２週間にわたる４０℃での処理の後に安定している、請求項１〜３のいずれか１項に記載の抗体。
  5. ＶＨドメインが、配列番号５６のアミノ酸配列に対し、少なくとも９０％の配列同一性を有する、請求項１〜４のいずれか１項に記載の抗体。
  6. ＶＨドメインが、配列番号５６のアミノ酸配列に対し、少なくとも９５％の配列同一性を有する、請求項５に記載の抗体。
  7. ＶＨドメインが、配列番号５６のアミノ酸配列を含む、請求項５に記載の抗体。
  8. ＶＬドメインが、配列番号５７のアミノ酸配列に対し、少なくとも９０％の配列同一性を有する、請求項１〜７のいずれか１項に記載の抗体。
  9. ＶＬドメインが、配列番号５７のアミノ酸配列に対し、少なくとも９５％の配列同一性を有する、請求項８に記載の抗体。
  10. ＶＬドメインが配列番号５７のアミノ酸配列を含む、請求項８に記載の抗体。
  11. ＶＨドメインが配列番号５６のアミノ酸配列を含み、かつＶＬドメインが配列番号５７のアミノ酸配列を含む、請求項１〜４のいずれか１項に記載の抗体。
  12. Ｆａｂ、Ｆａｂ’、Ｆａｂ’−ＳＨ、Ｆ（ａｂ’）２、Ｆｖ、及びｓｃＦｖ断片からなる群から選択される抗体断片である、請求項１〜１１のいずれか１項に記載の抗体。
  13. ヒトＩｇＧ１ Ｆｃ領域をさらに含む、請求項１〜１１のいずれか１項に記載の抗体。
  14. モノクローナル抗体である、請求項１〜１１のいずれか１項に記載の抗体。
  15. ヒト化抗体である、請求項１〜１４のいずれか１項に記載の抗体。
  16. 請求項１〜１５のいずれか１項に記載の抗体をコードする単離核酸。
  17. 請求項１６に記載の核酸を含む宿主細胞。
  18. 請求項１７に記載の宿主細胞を培養して、抗体が産生されるようにすることを含む、抗体を生産する方法。
  19. 宿主細胞から抗体を回収することをさらに含む、請求項１８に記載の方法。
  20. 細胞傷害性薬物又は標識にコンジュゲートされた請求項１〜１５のいずれか１項に記載の抗体を含むイムノコンジュゲート。
  21. 請求項１〜１５のいずれか１項に記載の抗体、及び薬学的に許容される担体を含む組成物。
  22. 緩衝液、界面活性剤、及び糖を含む、請求項２１に記載の組成物。
  23. １０ｍｇ／ｍＬ〜１００ｍｇ／ｍＬの抗体、０．０１％〜０．１％（ｗ／ｖ）の界面活性剤、１００ｍＭ〜３２０ｍＭの糖、１ｍＭ〜５０ｍＭのヒスチジン緩衝液を含み、ｐＨが５．０〜６．０である、請求項２１に記載の組成物。
  24. １０ｍｇ／ｍＬ〜１００ｍｇ／ｍＬの抗体、０．０１％〜０．１％（ｗ／ｖ）の界面活性剤、１００ｍＭ〜１５０ｍＭの糖、１ｍＭ〜２５ｍＭのヒスチジン緩衝液を含み、ｐＨが５．０〜６．０である、請求項２１に記載の組成物。
  25. ５０ｍｇ／ｍＬ〜７５ｍｇ／ｍＬの抗体、０．０１％〜０．１％（ｗ／ｖ）の界面活性剤、１１０ｍＭ〜１３０ｍＭの糖、２０ｍＭ〜３０ｍＭのヒスチジン緩衝液を含み、ｐＨが５．０〜６．０である、請求項２１に記載の組成物。
  26. １０ｍｇ／ｍＬ〜１００ｍｇ／ｍＬの抗体、０．０２％〜０．０６％（ｗ／ｖ）のポリソルベート、１００ｍＭ〜３２０ｍＭのスクロース、１ｍＭ〜５０ｍＭのヒスチジン緩衝液を含み、ｐＨが５．０〜６．０である、請求項２１に記載の組成物。
  27. ６０ｍｇ／ｍＬの抗体、０．０３％（ｗ／ｖ）のポリソルベート、１２０ｍＭのスクロース、２０ｍＭの酢酸ヒスチジン緩衝液を含み、ｐＨが５．５である、請求項２１に記載の組成物。
  28. 有効量の請求項１〜１５のいずれか１項に記載の抗体又は請求項２１に記載の組成物を含む、がんを有する個体を処置するための医薬。
  29. 抗体又は組成物が追加の治療剤と共に投与される、請求項２８に記載の医薬。
  30. 追加の治療剤が化学療法薬を含む、請求項２９に記載の医薬。
  31. 追加の治療剤がＰＤ−１軸結合アンタゴニストを含む、請求項２９に記載の医薬。
  32. ＰＤ−１軸結合アンタゴニストがＰＤ−Ｌ１結合アンタゴニストである、請求項３１に記載の医薬。
  33. ＰＤ−Ｌ１結合アンタゴニストが抗ＰＤ−Ｌ１抗体である、請求項３２に記載の医薬。
  34. ＰＤ−１軸結合アンタゴニストがＰＤ−１結合アンタゴニストである、請求項３１に記載の医薬。
  35. ＰＤ−１結合アンタゴニストが抗ＰＤ−１抗体である、請求項３４に記載の医薬。
  36. 抗ＰＤ−１抗体がニボルマブ又はペムブロリズマブである、請求項３５に記載の医薬。
  37. がんが、乳がん、肺がん、黒色腫、腎臓細胞がん、膀胱がん、結腸直腸がん、及び卵巣がんからなる群から選択される、請求項２８〜３６のいずれか１項に記載の医薬。
  38. がんが三種陰性乳がんである、請求項２８〜３６のいずれか１項に記載の医薬。
  39. がんが非小細胞肺がんである、請求項２８〜３６のいずれか１項に記載の医薬。
  40. がんが尿路のがんである、請求項２８〜３６のいずれか１項に記載の医薬。
  41. がんを処置するための医薬の製造における、請求項１〜１５のいずれか１項に記載の抗体の使用。
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