JP4888636B2

JP4888636B2 - 歯磨組成物

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Publication number: JP4888636B2
Application number: JP2005367480A
Authority: JP
Inventors: 則幸物井; 博崇太田; 博田草川
Original assignee: Lion Corp
Current assignee: Lion Corp
Priority date: 2005-12-21
Filing date: 2005-12-21
Publication date: 2012-02-29
Anticipated expiration: 2025-12-21
Also published as: JP2007169199A

Description

本発明は、良好な泡質を有し、かつ口腔疾患の原因である口腔バイオフィルムの抑制効果に優れた歯磨組成物に関する。

近年、デンタルプラークはバイオフィルムとして捉えられ（非特許文献１）、バイオフィルム中の細菌は、浮遊性細菌と比較すると細菌のタンパク質発現パターン（非特許文献２，３）や薬剤耐性（非特許文献４，５）が大きく異なり、浮遊性細菌に対して効果のあった薬剤がバイオフィルム構成細菌に対して有効ではないことが明らかになってきた。

これまでに殺菌手段として、フェノール性殺菌剤（特許文献１）などが開発されてきたが、バイオフィルム中の細菌は強力な薬剤耐性メカニズムを有するため、これだけではバイオフィルム抑制効果は不充分であり、口腔疾患のリスクをゼロにすることは困難であった。また、これらの殺菌力を増強するため、殺菌剤の滞留性向上技術（特許文献２）などが提案されているが、バイオフィルムの薬剤浸透性の低さなどにより、著効は期待できなかった。この現状から、バイオフィルム中の細菌に対しても有効なバイオフィルム抑制作用を示す組成物の開発が強く望まれていた。

一方、歯磨において泡は、良好な使用感の付与、すすぎの容易性向上、歯磨組成物の分散性向上、表面張力低下作用による汚れの除去、有効成分のエンハンサー機能などを有するため（非特許文献６）、歯磨組成物に重要な機能である。その中で、良好な泡質（きめの細かい泡）を歯磨組成物に付与することは、使用感を向上させるために特に重要である。

近年、歯磨組成物を含むバイオフィルム抑制組成物として、疎水性アミノ酸及びアンモニウム塩の配合（特許文献３）、歯垢構成微生物の細菌間情報伝達機構の制御物質の配合（特許文献４）、ラクトン及び／又はフラン誘導体の配合（特許文献５）、グリセロールリン酸及びフェノール性殺菌剤の配合（特許文献６）、非イオン性抗菌剤及びジカルボン酸化合物の配合（特許文献７）、オフロキサシンやクロサンテルとフェノール性殺菌剤の配合（特許文献８）などが提案されてきたが、これらの技術は歯磨組成物に重要な泡質とバイオフィルム抑制活性の両方を満たすことが困難なのが現状である。このような現状から、上記技術に代わる、良好な泡質と口腔バイオフィルム抑制作用を併せ持つ歯磨組成物の開発が強く望まれている。

なお、Ｎ，Ｎ−ビス（２−オクチルアミノエチル）グリシンと酸化エチレンの平均付加モル数が８０〜１００のポリオキシエチレン硬化ヒマシ油の組み合わせによりバイオフィルム抑制作用が相乗的に高まることや泡質が良好になることは、これまでに報告されていない。

Ｃｏｓｔｅｒｔｏｎ，Ｊ．Ｗ．，Ｓｔｅｗａｒｔ，Ｐ．Ｓ．ａｎｄＧｒｅｅｎｂｅｒｇ，Ｅ．Ｐ．：Ｂａｃｔｅｒｉａｌｂｉｏｆｉｌｍｓ：ａｃｏｍｍｏｎｃａｕｓｅｏｆｐｅｒｓｉｓｔｅｎｔｉｎｆｅｃｔｉｏｎｓ．Ｓｃｉｅｎｃｅ２８４：１３１８−１３２２，１９９９．Ｃｏｓｔｅｒｔｏｎ，Ｊ．Ｗ．，Ｌｅｗａｎｄｏｗｓｋｉ，Ｚ．，Ｃａｌｄｗｅｌｌ，Ｄ．Ｅ．，Ｋｏｒｂｅｒ，Ｄ．Ｒ．ａｎｄＬａｐｐｉｎ−Ｓｃｏｔｔ，Ｈ．Ｍ．：Ｍｉｃｒｏｂｉａｌｂｉｏｆｉｌｍｓ．Ａｎｎｕ．Ｒｅｖ．Ｍｉｃｒｏｂｉｏｌ．４９：７１１−７４５，１９９５．Ｈｕｄｓｏｎ，Ｍ．Ｃ．，Ｃｕｒｔｉｓｓ，Ｒ．ＩＩＩ：ＲｅｇｕｌａｔｉｏｎｏｆｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎｏｆＳｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓｍｕｔａｎｓｇｅｎｅｓｉｍｐｏｒｔａｎｔｔｏｖｉｒｕｌｅｎｃｅ．Ｉｎｆｅｃｔ．Ｉｍｍｕｎ．５８：４６４−４７０，１９９０．Ｓｔｅｗａｒｔ，Ｐ．Ｓ．：Ｍｅｃｈａｎｉｓｍｓｏｆａｎｔｉｂｉｏｔｉｃｒｅｓｉｓｔａｎｃｅｉｎｂａｃｔｅｒｉａｌｂｉｏｆｉｌｍｓ．Ｉｎｔ．Ｊ．Ｍｅｄ．Ｍｉｃｒｏｂｉｏｌ．２９２：１０７−１１３，２００２．ＰｈｉｌｉｐＭａｒｓｈａｎｄＭｉｃｈａｅｌＶ．Ｍａｒｔｉｎ著「ＯｒａｌＭｉｃｒｏｂｉｏｌｏｇｙ」、Ｗｒｉｇｈｔ出版、２０００年、ｐ．５８−８１（Ｄｅｎｔａｌｐｌａｑｕｅ）田嶋和夫、今井洋子、堀内照夫：泡状フッ素製剤の口腔製品への応用−フッ素イオンとヒドロキシアパタイト表面の交換能に対する「泡」のエンハンサー効果−、歯界展望Ｖｏｌ．９７（５）：１１２５−１１３５、２００１．特開平０２−１１５１１号公報特開平０４−１３９１１９号公報特開２００２−３７０９５３号公報特開２００３−１２８５８０号公報特開２００４−１５５６８１号公報特開２００５−０４７８５５号公報特開２００５−０１５３６９号公報特開２００５−１８７３７７号公報

本発明は、上記要望に応えるためになされたもので、良好な泡質を有しながら高いバイオフィルム抑制作用を示す歯磨組成物を提供することを目的とする。

本発明者は、上記目的を達成するため鋭意研究を重ねた結果、両性界面活性剤であるアルキルポリアミノエチルグリシンやポリオクチルポリアミノエチルグリシンを高速液体クロマトグラフィー法、オープンカラム法、薄層クロマトグラフィー法、液液抽出法などにより精製することで得られるＮ，Ｎ−ビス（２−オクチルアミノエチル）グリシン又はその塩が、高い口腔バイオフィルム抑制効果を発揮すること、しかも、このＮ，Ｎ−ビス（２−オクチルアミノエチル）グリシン又はその塩と、酸化エチレンの平均付加モル数が８０〜１００のポリオキシエチレン硬化ヒマシ油とを組み合わせて配合することにより、これら両成分が相乗的に作用して、顕著な口腔バイオフィルム抑制効果が発揮され、かつ極めて良好な泡質を付与することができること、よって、歯周病等の各種口腔疾患の予防及び抑制に有効な歯磨組成物が得られることを知見し、本発明をなすに至った。

なお、アルキルポリアミノエチルグリシンは、両性界面活性剤として、浮遊性細菌に対する強い殺菌力と、洗浄力の両作用を持ち、タンパク質共存下でもこの殺菌力の低下が少ないことは知られているが、このアルキルポリアミノエチルグリシンやポリオクチルポリアミノエチルグリシンを精製することにより得られるＮ，Ｎ−ビス（２−オクチルアミノエチル）グリシン又はその塩に、高い口腔バイオフィルム抑制効果があること、更に特定のポリオキシエチレン硬化ヒマシを併用することでその口腔バイオフィルム抑制効果が相乗的に向上し、かつ良好な泡質となることは、本発明者が初めて見出したものである。

従って、本発明は、（Ａ）Ｎ，Ｎ−ビス（２−オクチルアミノエチル）グリシン又はその塩を０．０４〜０．３質量％と、（Ｂ）酸化エチレンの平均付加モル数が８０〜１００のポリオキシエチレン硬化ヒマシ油を０．１〜２質量％とを、（Ａ）／（Ｂ）の質量比として１／５〜１／５０で含有してなることを特徴とする歯磨組成物、更に、デキストラナーゼを含有することを特徴とする上記歯磨組成物を提供する。

本発明の歯磨組成物は、顕著な口腔バイオフィルム抑制効果を有し、かつ極めて良好な泡質を有し、各種口腔疾患の予防及び抑制に有効である。

以下、本発明につき更に詳細に説明すると、本発明の歯磨組成物は、Ｎ，Ｎ−ビス（２−オクチルアミノエチル）グリシンと、酸化エチレンの平均付加モル数が８０〜１００のポリオキシエチレン硬化ヒマシ油と、更に好ましくはデキストラナーゼを含有することを特徴とする。

本発明組成物に配合するＮ，Ｎ−ビス（２−オクチルアミノエチル）グリシンは、下記式（１）で示されるものであり、これは塩酸やナトリウムなどの塩として存在したものでもよい。

上記式（１）のＮ，Ｎ−ビス（２−オクチルアミノエチル）グリシンは、一般的にはＮ，Ｎ−ビス（２−オクチルアミノエチル）グリシンの純品としては市販されていないが、市販のアルキルポリアミノエチルグリシン、例えば和光純薬工業社製製品（試薬等）、三洋化成工業社製製品（商品名：レボン５０、レボンＵ等）、竹本油脂社製製品（商品名：サラボン液、サラボン５０液、サラボンＬ液等）等や、市販のポリオクチルポリアミノエチルグリシン、例えば東邦化学工業社製製品（商品名：オバノール５１６等）等を精製することで、Ｎ，Ｎ−ビス（２−オクチルアミノエチル）グリシンを得ることができる。これらの中で、Ｎ，Ｎ−ビス（２−オクチルアミノエチル）グリシンの含有率の高さや単離の容易さ等から、市販のアルキルポリアミノエチルグリシン、特に和光純薬工業社製製品や三洋化成工業社製製品を用いてＮ，Ｎ−ビス（２−オクチルアミノエチル）グリシンを得ることが好ましい。

上記式（１）のＮ，Ｎ−ビス（２−オクチルアミノエチル）グリシンを得るための精製方法としては、例えば高速液体クロマトグラフィー法、オープンカラム法、薄層クロマトグラフィー法、液液抽出法などを採用できるが、特に高速液体クロマトグラフィー法が好適であり、また、その精製条件に特に制限はなく、常法により行うことができる。
これらの中で、Ｎ，Ｎ−ビス（２−オクチルアミノエチル）グリシンを得るための出発物質及び精製方法の組み合わせとしては、本発明の効果に悪影響を与える不純物を効率的に除外して高純度のＮ，Ｎ−ビス（２−オクチルアミノエチル）グリシンを得ることができることから、市販のアルキルポリアミノエチルグリシンから高速液体クロマトグラフィー法でＮ，Ｎ−ビス（２−オクチルアミノエチル）グリシンを得ることが好ましい。

本発明では、上記精製により得られるＮ，Ｎ−ビス（２−オクチルアミノエチル）グリシンを配合することができるが、この純品の代わりに、Ｎ，Ｎ−ビス（２−オクチルアミノエチル）グリシンを含有する、下記一般式（２）で示されるアルキルポリアミノエチルグリシン又はその塩をそのまま配合してもよい。

（上記式中、Ｒ₁はＲ［ＮＨＣ₂Ｈ₄］_nで示される基、Ｒ₂はＲＮＨＣ₂Ｈ₄又は水素原子であり、Ｒは炭素数６〜１０のアルキル基、例えばＣ₆Ｈ₁₃，Ｃ₇Ｈ₁₅，Ｃ₈Ｈ₁₇，Ｃ₉Ｈ₁₉，Ｃ₁₀Ｈ₂₁であり、ｎは１又は２である。）

このようなＮ，Ｎ−ビス（２−オクチルアミノエチル）グリシンを含有する、上記一般式（２）のアルキルポリアミノエチルグリシン又はその塩としては、上記した市販品のアルキルポリアミノエチルグリシン又はその塩を使用することができる。

本発明において、Ｎ，Ｎ−ビス（２−オクチルアミノエチル）グリシンの配合量は、Ｎ，Ｎ−ビス（２−オクチルアミノエチル）グリシンとして組成物全体の０．０４〜０．３％（質量％、以下同様。）である。配合量が０．０２％未満の場合は充分なバイオフィルム抑制効果が得られず、１％を超えると泡質や嗜好性などの点で製剤化において問題となる。

なお、Ｎ，Ｎ−ビス（２−オクチルアミノエチル）グリシンとして、上記した一般式（２）のアルキルポリアミノエチルグリシン又はその塩を配合する場合は、泡質への影響や供給性などの点から、Ｎ，Ｎ−ビス（２−オクチルアミノエチル）グリシンの含有量が１０％以上１００％未満、より好適には５０％以上１００％未満であるアルキルポリアミノエチルグリシン又はその塩を用いることが好ましく、このようなアルキルポリアミノエチルグリシン又はその塩を、組成物中のＮ，Ｎ−ビス（２−オクチルアミノエチル）グリシンの含有量が上記範囲となるように配合することが好ましい。

本発明におけるポリオキシエチレン硬化ヒマシ油は、酸化エチレンの平均付加モル数が８０〜１００であることが必須であり、バイオフィルム抑制活性や泡質の面から１００であることがより好ましい。ポリオキシエチレン硬化ヒマシ油の酸化エチレンの平均付加モル数が８０未満の場合は、泡質やバイオフィルム抑制活性などが悪くなる場合があり、１００を超えるものは一般には市販されていない。

上記ポリオキシエチレン硬化ヒマシ油の配合量は、組成物全体の０．１〜２％、更に好ましくは０．５〜２％である。配合量が０．１％未満の場合は満足な泡質などが得られず、５％を超えるとバイオフィルム抑制活性、泡質、嗜好性に悪影響を与える。

本発明においては、Ｎ，Ｎ−ビス（２−オクチルアミノエチル）グリシンと酸化エチレンの平均付加モル数が８０〜１００のポリオキシエチレン硬化ヒマシ油との配合割合が、バイオフィルム抑制効果や泡質などの面から質量比で１：５〜１：５０である。質量比が上記範囲外であると、充分なバイオフィルム抑制効果や満足できる泡質が得られない。

本発明においては、更に、デキストラナーゼを配合することが好ましく、デキストラナーゼの配合により、バイオフィルム抑制活性をより顕著に高めることができる。

前記デキストラナーゼとしては、ケトミウム属、ペニシリウム属、アスペルギルス属、スピカリア属、ラクトバチルス属、セルビブリオ属等に属する公知のデキストラナーゼ生成菌により公知の方法により得られるデキストラナーゼはもちろん、他の微生物により生産されるデキストラナーゼも使用することができる。

デキストラナーゼは、組成物１ｇあたり５〜１００単位（ここで、１単位とはデキストランを基質として反応を行った場合、１分当たりグルコース１μｍｏｌに相当する遊離還元糖を生じる酵素量をいう）で、その配合量は、例えば１００００単位／ｇのデキストラナーゼを用いた場合、組成中０．０５〜１％となることが好ましく、より好ましくは０．０５〜０．５％、更に好ましくは０．１〜０．３％である。配合量が０．０５％未満であると満足なバイオフィルム抑制効果が得られない場合があり、１％を超えると泡質に悪影響を与える場合やバイオフィルム抑制効果の増強が認められなくなり経済的に不利になる場合がある。

本発明の歯磨組成物は、固体、固形物、液体、液状、ゲル体、ペースト状にすることができ、練歯磨、液体歯磨、液状歯磨、潤製歯磨などの各種剤型に調製できるが、特に液体歯磨、液状歯磨として好適に調製することができる。その製造法も剤型に応じた常法を採用することができるが、その目的、組成物の剤型等に応じて、上述した成分に加えて更に適宜な任意成分、例えば研磨剤、界面活性剤、粘結剤、粘稠剤、香料、有効成分などを配合することができる。

例えば、研磨剤としては、第２リン酸カルシウム・２水和物及び無水物、第１リン酸カルシウム、第３リン酸カルシウム、炭酸カルシウム、ピロリン酸カルシウム、水酸化アルミニウム、アルミナ、無水ケイ酸、ケイ酸アルミニウム、不溶性メタリン酸ナトリウム、第３リン酸マグネシウム、炭酸マグネシウム、硫酸カルシウム、ポリメタクリル酸メチル、ベントナイト、ケイ酸ジルコニウム、合成樹脂等の１種又は２種以上を配合し得る（配合量通常５〜９０％、練歯磨の場合には１０〜６０％）。

また、界面活性剤として陰イオン界面活性剤、上記ポリオキシエチレン硬化ヒマシ油以外の非イオン界面活性剤及び両性イオン界面活性剤の１種又は２種以上を配合し得る。陰イオン界面活性剤としては、Ｎ−ラウロイルザルコシン酸ナトリウム、Ｎ−ミリストイルザルコシン酸ナトリウムなどのＮ−アシルザルコシン酸ナトリウム、水素添加ココナッツ脂肪酸モノグリセリドモノ硫酸ナトリウム、ラウリルスルホ酢酸ナトリウム、Ｎ−パルミトイルグルタミン酸ナトリウムなどのＮ−アシルグルタミン酸塩、Ｎ−メチル−Ｎ−アシルタウリンナトリウム、Ｎ−メチル−Ｎ−アシルアラニンナトリウム、α−オレフィンスルホン酸ナトリウム等が用いられる。また、非イオン界面活性剤としては、ショ糖脂肪酸エステル、マルトース脂肪酸エステル、ラクトース脂肪酸エステルなどの糖脂肪酸エステル、マルチトール脂肪酸エステル、ラクチトール脂肪酸エステルなどの糖アルコール脂肪酸エステル、ポリオキシエチレンソルビタンモノラウレート、ポリオキシエチレンソルビタンモノステアレートなどのポリオキシエチレンソルビタン脂肪酸エステル、ラウリン酸モノ又はジエタノールアミド、ミリスチン酸モノ又はジエタノールアミドなどの脂肪酸ジエタノールアミド、ソルビタン脂肪酸エステル、脂肪酸モノグリセライド、ポリオキシエチレン高級アルコールエーテル、ポリオキシエチレンポリオキシプロピレン共重合体、ポリオキシエチレンポリオキシプロピレン脂肪酸エステル等が用いられる。両性イオン界面活性剤としては、Ｎ−アルキル−Ｎ−カルボキシメチルアンモニウムベタイン、２−アルキル−１−ヒドロキシエチルイミダゾリンベタインナトリウムなどが用いられる（配合量通常０．１〜２０．０％）。

粘結剤としては、カラギーナン、カルボキシメチルセルロースナトリウム、メチルセルロース、ヒドロキシエチルセルロース、カルボキシメチルヒドロキシエチルセルロースナトリウムなどのセルロース誘導体、アルギン酸塩、アルギン酸プロピレングリコールエステル、キサンタンガム、トラガカントガム、カラヤガム、アラビヤガムなどのガム類、ポリビニルアルコール、ポリアクリル酸ナトリウム、カルボキシビニルポリマー、ポリビニルピロリドンなどの合成粘結剤、シリカゲル、アルミニウムシリカゲル、ビーガム、ラポナイトなどの無機粘結剤等の１種又は２種以上が配合し得る（配合量通常０．３〜１０％）。

粘稠剤としては、グリセリン、エチレングリコール、ジエチレングリコール、ヘキシレングリコール、ブチレングリコール、ペンタンジオール、プロピレングリコール、ソルビット、ポリエチレングリコール２００〜２００００、ポリプロピレングリコール３００〜４０００などを１種又は２種以上を配合し得る（配合量通常１〜７０％）。

香料としては、ペパーミント油、スペアミント油、アニス油、ユーカリ油、カシア油、クローブ油、タイム油、セージ油、レモン油、オレンジ油、ハッカ油、カルダモン油、コリアンダー油、マンダリン油、ライム油、ラベンダー油、ローズマリー油、ローレル油、カモミル油、キャラウェイ油、マジョラム油、レモングラス油、オリガナム油、パインニードル油、ネロリ油、ローズ油、ジャスミン油、イリスコンクリート、アブソリュートペパーミント、アブソリュートローズ、オレンジフラワー等の天然香料及び、これら天然香料の加工処理（前溜部カット、後溜部カット、分留、液液抽出、エッセンス化、粉末香料化等）した香料、及び、メントール、カルボン、アネトール、シネオール、サリチル酸メチル、シンナミックアルデヒド、オイゲノール、３−ｌ−メントキシプロパン−１，２−ジオール、チモール、リナロール、リナリールアセテート、リモネン、メントン、メンチルアセテート、Ｎ−置換−パラメンタン−３−カルボキサミド、ピネン、オクチルアルデヒド、シトラール、プレゴン、カルビールアセテート、アニスアルデヒド、エチルアセテート、エチルブチレート、アリルシクロヘキサンプロピオネート、メチルアンスラニレート、エチルメチルフェニルグリシデート、バニリン、ウンデカラクトン、ヘキサナール、イソアミルアルコール、ヘキセノール、ジメチルサルファイド、シクロテン、フルフラール、トリメチルピラジン、エチルラクテート、エチルチオアセテート等の単品香料、更に、ストロベリーフレーバー、アップルフレーバー、バナナフレーバー、パイナップルフレーバー、グレープフレーバー、マンゴーフレーバー、バターフレーバー、ミルクフレーバー、フルーツミックスフレーバー、トロピカルフルーツフレーバー等の調合香料等、口腔用組成物に用いられる公知の香料素材を使用することができ、実施例の香料に限定されない。含有量も特に限定されないが、上記の香料素材は、製剤組成中に０．０００００１〜１％使用するのが好ましい。また、上記香料素材を併用した賦香用香料としては、製剤組成中に０．１〜２．０％使用するのが好ましい。

なお、本発明においては、Ｎ，Ｎ−ビス（２−オクチルアミノエチル）グリシン又はその塩に加えて、他の有効成分として、クロルヘキシジン、ベンゼトニウムクロライド、ベンザルコニウムクロライド、デカリニウムクロライドなどの陽イオン性殺菌剤、トリクロサン、ヒノキチオール等のフェノール性化合物、リゾチーム、アミラーゼ、プロテアーゼなどの酵素、モノフルオロリン酸ナトリウム、モノフルオロリン酸カリウムなどのアルカリ金属モノフルオロホスフェート、フッ化ナトリウム、フッ化第１錫などのフッ化物、トラネキサム酸、イプシロンアミノカプロン酸、アルミニウムクロルヒドロキシルアラントイン、ジヒドロコレスタノール、グリチルリチン酸類、グリチルレチン酸、ビサボロール、グリセロホスフェート、クロロフィル、塩化ナトリウム、水溶性無機リン酸化合物等を１種又は２種以上配合し得る。上記他の有効成分の配合量は、本発明の効果を妨げない範囲で有効量とすることができる（配合量通常０．０００１〜５％）。

以下、実験例、実施例及び比較例を示して本発明を具体的に説明するが、本発明は下記実施例に制限されるものではない。なお、以下の例において配合量はいずれも質量％である。

［実験例］
表１に示す組成の液体歯磨組成物を下記方法で調製し、下記方法でバイオフィルム抑制活性及び泡質を評価した。結果を表１に示す。

〈比較例及び実施例の液体歯磨組成物の調製法〉
６０℃で加熱溶解させたポリオキシエチレン硬化ヒマシ油及びポリオキシエチレンラウリルエーテル、５０％塩酸アルキルポリアミノエチルグリシン水溶液、Ｎ，Ｎ−ビス（２−オクチルアミノエチル）グリシン及びその他の成分を秤取し、蒸留水５０ｍＬ中で４０℃で加温して混合分散させた後、デキストラナーゼ添加群にはデキストラナーゼを配合した後、全量が１００ｍＬになるように蒸留水でメスアップした。

なお、後述するように、比較例及び実施例には、Ｎ，Ｎ−ビス（２−オクチルアミノエチル）グリシンとして、市販の塩酸アルキルポリアミノエチルグリシン水溶液、あるいは市販の塩酸アルキルポリアミノエチルグリシン水溶液から高速液体クロマトグラフィー法で単離したＮ，Ｎ−ビス（２−オクチルアミノエチル）グリシンを用いた。また、ポリオキシエチレン硬化ヒマシ油などその他の成分は一般的に市販されているものを用いた。

〈バイオフィルム抑制活性測定〉
ライオン株式会社オーラルケア研究所において継代保存（凍結保存）してあったストレプトコッカスミュータンス（Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓｍｕｔａｎｓ）ＡＴＣＣ２５１７５株，アクチノマイセスナイスランディー（Ａｃｔｉｎｏｍｙｃｅｓｎａｅｓｌｕｎｄｉｉ）ＡＴＣＣ５１６５５株，フゾバクテリウムニュークレアタム（Ｆｕｓｏｂａｃｔｅｒｉｕｍｎｕｃｌｅａｔｕｍ）ＡＴＣＣ１０９５３株，ポルフィロモーナスジンジバリス（Ｐｏｒｈｙｒｏｍｏｎａｓｇｉｎｇｉｖａｌｉｓ）ＡＴＣＣ３３２７７株菌液４０μＬをそれぞれ、１２１℃で１５分間オートクレーブした５ｍｇ／Ｌのヘミン（シグマアルドリッチ社製）及び１ｍｇ／ＬのビタミンＫ（和光純薬工業社製）を含むトッドへーウィットブロース（ＢｅｃｔｏｎａｎｄＤｉｃｋｉｎｓｏｎ社製）培養液（ＴＨＢＨＭ^*1）４ｍＬに添加し、３７℃で一晩嫌気培養（８０ｖｏｌ％窒素、１０ｖｏｌ％二酸化炭素、１０ｖｏｌ％水素）した。同様に保存してあったベイヨネラパービューラ（Ｖｅｉｌｌｏｎｅｌｌａｐａｒｖｕｌａ）ＡＴＣＣ１７７４５株菌液８０μＬを、１２１℃で１５分間オートクレーブした１．２６％乳酸ナトリウム（シグマアルドリッチ社製）を含むトッドへーウィットブロース（ＢｅｃｔｏｎａｎｄＤｉｃｋｉｎｓｏｎ社製）培養液（ＴＨＢＬ^*2）４ｍＬに添加し、同様に培養した。培養後、ベイヨネラパービューラを除く４菌種の菌液からそれぞれ３００μＬを採取し、３０ｍＬのＴＨＢＨＭに添加し、更に一晩培養した。ベイヨネラパービューラの菌液から同様に３００μＬを採取し、３０ｍＬのＴＨＢＬに添加し一晩培養した。再培養後、各菌液を遠心分離（１００００ｒｐｍ、１０ｍｉｎ）し、上清を廃棄した。各沈査（細菌）に対して１２１℃で１５分間オートクレーブしたベイサルメディウムムチン培養液（ＢＭＭ^*3）を添加し再懸濁した後、予めＢＭＭ１０００ｍＬを入れた培養槽に、上記各菌数がそれぞれ１×１０⁷個／ｍＬになるように接種し、３７℃、嫌気条件下（９５ｖｏｌ％窒素、５ｖｏｌ％二酸化炭素）で一晩培養した。その後、ＢＭＭを１００ｍＬ／ｈの速度で供給するとともに、同速度で培養液を排出した。上記培養槽から排出された培養液は、液量が３００ｍＬに保たれる別の培養槽に連続的に供給した。この培養槽内の回転盤（約８０ｒｐｍで回転）には、付着担体であるハイドロキシアパタイトディスク（直径７ｍｍ×高さ３．５ｍｍ）を装着し、その表面にバイオフィルムを形成させた。

上記方法による培養は１４日間行い、後半の７日間は次に示す薬剤処置を行った。
即ち、１日１回、バイオフィルムを培養槽から取り出し、試験組成物（実施例及び比較例）で３分間処理した後、洗浄後、再び培養槽内に戻した。同操作は総計７回実施した。

培養終了時には、試験組成物のバイオフィルム抑制効果を評価するため、バイオフィルムを４ｍＬのＴＨＢＨＭを添加した試験管（直径１３ｍｍ×１００ｍｍ）に移した。直ちに超音波破砕（２００μＡの出力で１０秒間）、段階希釈（１０倍希釈を６段階）を行い、常法で作製した血液寒天平板培地^*4に各菌溶液を塗沫した。同平板培地は、肉眼でコロニーが確認できるまで嫌気培養（８０ｖｏｌ％窒素、１０ｖｏｌ％二酸化炭素、１０ｖｏｌ％水素）した。各平板培地のコロニー数をカウント後、定法により生菌数を算出した。結果は、下式で求めた生細菌減少率で示した。

^*1 ＴＨＢＨＭの組成：１リットル中の質量で表す。
トッドへーウィットブロース（ＢｅｃｔｏｎａｎｄＤｉｃｋｉｎｓｏｎ社製）
３０ｇ／Ｌ
ヘミン（シグマアルドリッチ社製）５ｍｇ／Ｌ
ビタミンＫ（和光純薬工業社製）１ｍｇ／Ｌ
蒸留水残
（全量が１Ｌになるようにメスアップした。）
^*2 ＴＨＢＬの組成：１リットル中の質量で表す。
トッドへーウィットブロース（ＢｅｃｔｏｎａｎｄＤｉｃｋｉｎｓｏｎ社製）
３０ｇ／Ｌ
６０％乳酸ナトリウム水溶液（シグマアルドリッチ社製）２１ｇ／Ｌ
蒸留水残
（全量が１Ｌになるようにメスアップした。）
^*3 ＢＭＭの組成：１リットル中の質量で表す。
プロテオースペプトン（ＢｅｃｔｏｎａｎｄＤｉｃｋｉｎｓｏｎ社製）
２ｇ／Ｌ
トリプトン（ＢｅｃｔｏｎａｎｄＤｉｃｋｉｎｓｏｎ社製）１ｇ／Ｌ
イーストエキストラクト（ＢｅｃｔｏｎａｎｄＤｉｃｋｉｎｓｏｎ社製）
１ｇ／Ｌ
ムチン（シグマアルドリッチ社製）２．５ｇ／Ｌ
ヘミン（シグマアルドリッチ社製）１ｍｇ／Ｌ
ビタミンＫ（和光純薬工業社製）０．２ｍｇ／Ｌ
ＫＣｌ（和光純薬工業社製）０．５ｇ／Ｌ
システイン（和光純薬工業社製）０．１ｇ／Ｌ
蒸留水残
（全量が１Ｌになるようにメスアップした。）
^*4 血液寒天平板培地の組成：１リットル中の質量で表す。
トッドへーウィットブロース（ＢｅｃｔｏｎａｎｄＤｉｃｋｉｎｓｏｎ社製）
３０ｇ／Ｌ
寒天（ＢｅｃｔｏｎａｎｄＤｉｃｋｉｎｓｏｎ社製）１５ｇ／Ｌ
ヘミン（シグマアルドリッチ社製）５ｍｇ／Ｌ
ビタミンＫ（和光純薬工業社製）１ｍｇ／Ｌ
蒸留水残
（全量が１Ｌになるようにメスアップした。）

〈泡質の評価〉
専門パネラー１０名の口腔内に試験組成物（実施例及び比較例）１０ｍＬを滴下し、２０秒間含嗽した後、ブラッシングし、下記の評点基準で泡質を評価した。結果は、比較例１の歯磨組成物を基準とし、下記の評点で示した。

評点基準；
比較例１と比較して、泡のきめが細かい：５点
比較例１と比較して、泡のきめがやや細かい：４点
比較例１と比較して、どちらとも言えない：３点
比較例１と比較して、泡のきめがやや荒い：２点
比較例１と比較して、泡のきめが荒い：１点
評点；
◎：４．５点以上
○：４．０点以上４．５点未満
△：２．５点以上４．０点未満
×：２．５点未満

^a)；５０％塩酸アルキルポリアミノエチルグリシン水溶液（和光純薬工業社製、Ｎ，Ｎ−ビス（２−オクチルアミノエチル）グリシン含有率＝５６．７％）を配合し、表中のＮ，Ｎ−ビス（２−オクチルアミノエチル）グリシン配合量とした。例えば、実施例１の場合、上記の５０％塩酸アルキルポリアミノエチルグリシン水溶液を０．３５％配合し、Ｎ，Ｎ−ビス（２−オクチルアミノエチル）グリシン配合量を０．１％とした。

^b)；下記の精製法で得たＮ，Ｎ−ビス（２−オクチルアミノエチル）グリシンの配合量。
Ｎ，Ｎ−ビス（２−オクチルアミノエチル）グリシンの精製法：
５０％塩酸アルキルポリアミノエチルグリシン水溶液^a)（和光純薬工業社製）を０．２ｇ秤取し、全量が１００ｍＬになるように蒸留水でメスアップした。同水溶液を日立社製高速液体クロマトグラフィー（Ｄ−７０００型）を用いて下記条件で分画し、溶出時間２０．８分付近のメインピークを採取した（溶出時間２０．６〜２１．２分の間）。採取した溶出液は凍結乾燥（東京理科機械社製、ＦＤ−８１）させ、結晶（Ｎ，Ｎ−ビス（２−オクチルアミノエチル）グリシン）を得た。結晶の分子量が３８５．６（日本電子社製質量分析計ＪＭＳによる）であることから、Ｎ，Ｎ−ビス（２−オクチルアミノエチル）グリシンと同定した。

高速液体クロマトグラフィーの条件
検出器：紫外線２１０ｎｍ、流速：１．０ｍＬ／分、
注入量：１００μＬ、
カラム：ジーエルサイエンス社製イナートシルＯＤＳ−３（直径４．６×１５０ｍｍ
）、ガードカラム：ジーエルサイエンス社製イナートシルＯＤＳ−３（直径４．０×
１０ｍｍ）、
カラム温度：４０℃、
移動相：
分析開始時から５分以内まで（溶出時間０分以上５分以内）；
５％アセトニトリル（和光純薬工業社製）を含む０．１％トリフルオロ酢酸（和光
純薬工業社製）水溶液
分析開始から５分を超え３５分以内まで；
経時的に０．１％トリフルオロ酢酸水溶液のアセトニトリル濃度を５％から８０％
に上昇させた（リニアグラジエント、例えば分析開始から２０分後は、４２．５％ア
セトニトリルを含む０．１％トリフルオロ酢酸）
分析開始から３５分を超え４０分以内まで；
８０％アセトニトリルを含む０．１％トリフルオロ酢酸水溶液

^c)；いずれも日本サーファクタント社製、ＰＯＥ数はポリオキシエチレン硬化ヒマシ油の酸化エチレンの平均付加モル数を示す
^d)；三共社製（１００００単位／ｇ）
^e)；ＳＤＳ＝ラウリル硫酸ナトリウム（和光純薬工業社製、酸化エチレンの平均付加モル数が８０〜１００のポリオキシエチレン硬化ヒマシ油の対照として）
^f)；ＰＯＥラウリルエーテル＝酸化エチレンの平均付加モル数が２１のポリオキシエチレンラウリルエーテル（日本サーファクタント社製、酸化エチレンの平均付加モル数が８０〜１００のポリオキシエチレン硬化ヒマシ油の対照として）
^g)；ＣＰＣ＝塩化セチルピリジニウム（和光純薬工業社製、Ｎ，Ｎ−ビス（２−オクチルアミノエチル）グリシンの対照として）

上記の結果より、Ｎ，Ｎ−ビス（２−オクチルアミノエチル）グリシンあるいはポリオキシエチレン硬化ヒマシ油を単独配合した比較例１，２、Ｎ，Ｎ−ビス（２−オクチルアミノエチル）グリシンと酸化エチレンの平均付加モル数が８０〜１００のポリオキシエチレン硬化ヒマシ油以外の界面活性剤を併用した比較例３〜６、酸化エチレンの平均付加モル数が１００のポリオキシエチレン硬化ヒマシ油と従来の殺菌剤との組み合わせた比較例７では、バイオフィルム抑制活性及び泡質の両方を満足できる結果は得られなかったが、Ｎ，Ｎ−ビス（２−オクチルアミノエチル）グリシンと酸化エチレンの平均付加モル数が８０〜１００のポリオキシエチレン硬化ヒマシ油を併用すると（実施例）、相乗的な効果が発現し、いずれの評価においても良好な結果が得られ、本発明の有効性が認められた。また、Ｎ，Ｎ−ビス（２−オクチルアミノエチル）グリシン精製品と塩酸アルキルポリアミノエチルグリシンでは、Ｎ，Ｎ−ビス（２−オクチルアミノエチル）グリシン濃度が同一な場合、同等なバイオフィルム抑制活性及び泡質が得られることを確認した。

本発明においては、Ｎ，Ｎ−ビス（２−オクチルアミノエチル）グリシンと酸化エチレンの平均付加モル数が８０〜１００のポリオキシエチレン硬化ヒマシ油とを併用することにより、Ｎ，Ｎ−ビス（２−オクチルアミノエチル）グリシン及び／又は酸化エチレンの平均付加モル数が８０〜１００のポリオキシエチレン硬化ヒマシ油のミセルの性状が変化することによりこれらの効果が発現すると考えられる。

更に、Ｎ，Ｎ−ビス（２−オクチルアミノエチル）グリシン及び酸化エチレンの平均付加モル数が８０〜１００のポリオキシエチレン硬化ヒマシ油を配合し、更に、デキストラナーゼを配合すると（実施例１３，１４）、バイオフィルム抑制効果がより高まることがわかった。

［実施例１５］液体歯磨
Ｎ，Ｎ−ビス（２−オクチルアミノエチル）グリシン^* ０．１１％
ポリオキシエチレン（８０）硬化ヒマシ油（日本サーファクタント社製）１．０
グリセリン１５．０
エタノール１５．０
サッカリンナトリウム０．０１
安息香酸ナトリウム０．３
香料Ａ１．０
リン酸２ナトリウム０．０５
硝酸カリウム１．０
イノシン酸ナトリウム１．０
トリクロサン０．１５
精製水残
計１００．０％
^*５０％塩酸アルキルポリアミノエチルグリシン水溶液（和光純薬工業社製、Ｎ，Ｎ−ビス（２−オクチルアミノエチル）グリシン含有率＝５６．７％）を０．４％配合した。

［実施例１６］液体歯磨
Ｎ，Ｎ−ビス（２−オクチルアミノエチル）グリシン^* ０．０４％
ポリオキシエチレン（１００）硬化ヒマシ油（日本サーファクタント社製）１．５
デキストラナーゼ（三共社製、１２０００単位／ｇ）０．２５
グリセリン３５．０
プロピレングリコール５．０
ポリアクリル酸ナトリウム０．５
無水ケイ酸１５．０
サッカリンナトリウム０．３
安息香酸ナトリウム０．３
トリクロサン０．１
β−グリチルレチン酸０．０５
香料Ｂ０．５
硝酸カリウム３．０
トラネキサム酸０．１
トリプトファン０．５
精製水残
計１００．０％
^*５０％塩酸アルキルポリアミノエチルグリシン水溶液（和光純薬工業社製、Ｎ，Ｎ−ビス（２−オクチルアミノエチル）グリシン含有率＝５６．７％）を０．１５％配合した。

［実施例１７］液状歯磨
Ｎ，Ｎ−ビス（２−オクチルアミノエチル）グリシン^* ０．０６％
ポリオキシエチレン（１００）硬化ヒマシ油（日本サーファクタント社製）２．０
無水ケイ酸１８．０
キサンタンガム０．２
ポリアクリル酸ナトリウム０．１
７０％ソルビット液３５．０
グリセリン１７．０
プロピレングリコール５．０
サッカリンナトリウム０．３
香料Ｃ０．８
精製水残
計１００．０％
^*５０％塩酸アルキルポリアミノエチルグリシン水溶液（和光純薬工業社製、Ｎ，Ｎ−ビス（２−オクチルアミノエチル）グリシン含有率＝５６．７％）を０．２％配合した。

［実施例１８］練歯磨
Ｎ，Ｎ−ビス（２−オクチルアミノエチル）グリシン^* ０．２６％
ポリオキシエチレン（８０）硬化ヒマシ油（日本サーファクタント社製）１．５
カルボキシメチルセルロース２．０
ポリアクリル酸ナトリウム０．３
７０％ソルビット液２０．０
プロピレングリコール４．０
ポリエチレングリコール４００００．５
リン酸水素カルシウム・２水塩３５．０
無水ケイ酸５．０
サッカリンナトリウム０．１５
モノフルオロリン酸ナトリウム０．４１
香料Ｄ１．１
精製水残
計１００．０％
^*５０％塩酸アルキルポリアミノエチルグリシン水溶液（和光純薬工業社製、Ｎ，Ｎ−ビス（２−オクチルアミノエチル）グリシン含有率＝５６．７％）を０．９％配合した。

なお、香料Ａ〜Ｄは下記表２の通りである。

＊フルーツミックスフレーバーＦＭ３０００（調合香料）
ストロベリーフレーバー２５
アップルフレーバー１５
メロンフレーバー１７
バナナフレーバー１０
ピーチフレーバー５
オレンジ油２．５
ラズベリーフレーバー２
パイナップルフレーバー１５
グレープフレーバー１
トロピカルフルーツフレーバー１．５
ミルクフレーバー１
グレープフルーツ油０．５
レモン油０．５
ローズ油０．２
エタノール残
合計１００％

以上、実施例１５〜１８に対して、実施例１と同様な評価を行った結果、バイオフィルム抑制効果、泡質のいずれにおいても比較例より極めて良好な結果が得られた。

Claims

（Ａ）Ｎ，Ｎ−ビス（２−オクチルアミノエチル）グリシン又はその塩を０．０４〜０．３質量％と、（Ｂ）酸化エチレンの平均付加モル数が８０〜１００のポリオキシエチレン硬化ヒマシ油を０．１〜２質量％とを、（Ａ）／（Ｂ）の質量比として１／５〜１／５０で含有してなることを特徴とする歯磨組成物。
更に、デキストラナーゼを含有することを特徴とする請求項１記載の歯磨組成物。
液体又は液状歯磨として調製された請求項１又は２記載の歯磨組成物。