JP2000157204A - シイタケ菌糸体抽出物の分画物及びその用途 - Google Patents

Abstract

(57)【要約】 【課題】シイタケ菌糸体抽出物をさらに分離して新しい
医薬用途及び／又は保健用途をもつ画分を提供する。 【解決手段】シイタケ菌糸体抽出物エタノール不溶画
分、並びに該シイタケ菌糸体抽出物エタノール不溶画分
を含む肝障害防御剤。

Description

【発明の詳細な説明】

【０００１】

【発明の属する技術分野】本発明はシイタケ菌糸体抽出
物から得られる新規画分及びこれを含む肝障害防御剤に
関する。

【０００２】

【従来の技術】シイタケ（Lentinus edodes）は日本、
中国の代表的な食用キノコであり、日本では約３００年
前から人工栽培が行われてきた。日常食用にしているキ
ノコは子実体と呼ばれ、菌類が子孫を残すために胞子を
生じる生殖体であり、栄養体である菌糸細胞は地中や原
木中で長い時間をかけて菌糸体を形成する。

【０００３】シイタケは古くからさまざまな病気や症状
に効果があると言われてきたが、その薬理作用が解明さ
れてきたのは比較的最近である。シイタケ菌糸体抽出物
については、ラット、マウスでの発癌実験において、動
物の大腸、肝臓などの腫瘍形成及び移植腫瘍細胞の増殖
を抑制し、動物の生存率を上昇させた（N. Sugano eta
l., Cancer Letter, 17:109, 1982;鈴木康将ら、日本大
腸肛門病会誌、43:178, 1990など）、マイトジェン活性
を示した（T. Tabata et al., Immunopharmacology, 2
4:57, 1992; Y. Hibino et al., Immunopharmacology,
28:77, 1994など）、抗体産生を増強し、抗体を介する
ＡＤＣＣ（antibody-dependent cell-mediated cytotox
icity）による免疫学的肝細胞障害に抑制効果を示した
（溝口靖紘ら、肝胆膵、15:127, 1987）などの種々な報
告がなされている。この他にもシイタケ菌糸体抽出物に
は発根促進、農作物の成長促進などの植物ホルモン作用
（M.Mitsuhashi-Kato et al., Plant Cell Physiol. 2
6:221, 1985）や抗植物ウイルス作用（小室康雄：農林
水産省植物ウイルス研報告, 1977）があることが報告さ
れている。

【０００４】

【発明が解決すべき課題】本発明の目的は、シイタケ菌
糸体抽出物から新規な画分を得て、その薬理作用をさら
に詳しく解明し、シイタケ菌糸体抽出物分画物の新しい
医薬用途及び／または保健の途を探索することである。

【０００５】

【課題を解決するための手段】本発明者らは上記課題を
解決するため、鋭意研究した結果、シイタケ菌糸体抽出
物をエタノールを含有する溶液で処理することにより得
られる不溶分画物（以下においてエタノール不溶画分と
いうことがある）が肝障害に対して顕著な防御効果を示
すことを発見して本発明を完成した。

【０００６】すなわち、本発明は、シイタケ菌糸体抽出
物のエタノール不溶画分を提供する。

【０００７】本発明はさらに、シイタケ菌糸体抽出物の
エタノール不溶画分を含む肝障害防御剤を提供する。

【０００８】本発明の肝障害防御剤は、シイタケ菌糸体
抽出物のエタノール不溶画分及び任意成分として薬剤的
に許容できる担体を含む、肝障害の治療用及び／又は予
防用組成物の形であってよい。

【０００９】また、本発明の肝障害防御剤は、食品の形
であってもよく、飲料の形であってよい。さらに本発明
の肝障害防御剤は、これらの形態に何ら限定されるもの
ではない。

【００１０】

【発明の実施の形態】本発明において、シイタケ菌糸体
抽出物とは、シイタケ菌を固体培地上で培養して得られ
る菌糸体、好ましくは菌糸体を含む固体培地を水及び酵
素の存在下に粉砕、分解して得られる抽出物を言う。

【００１１】シイタケ菌糸体抽出物は好ましくは以下の
方法により得られたものを使用するが、これに限定され
ない。すなわち、バガス（サトウキビのしぼりかす）と
脱脂米糠を基材とする固体培地上にシイタケ菌を接種
し、次いで菌糸体を増殖して得られる菌糸体を含む固体
培地を１２メッシュ通過分が３０重量％以下となるよう
解束し、この解束された固体培地に水およびセルラー
ゼ、プロテアーゼまたはグルコシダーゼから選ばれる酵
素の１種またはそれ以上を、前記固体培地を３０〜５５
℃の温度に保ちながら添加するとともに、前記固体培地
を前記酵素の存在下に粉砕、すりつぶしてバカス繊維の
少なくとも７０重量％以上が１２メッシュ通過分である
ようにし、次いで９５℃までの温度に加熱することによ
り酵素を失活させるとともに滅菌し、得られた懸濁状液
をろ過することによってシイタケ菌糸体抽出物を得る。
シイタケ菌糸体抽出物はそのまま本発明の防御剤に用い
てもよいが、これを濃縮、凍結乾燥して粉末として保存
し、使用時に種々の形態で使用するのが便宜的である。
凍結乾燥して得られる粉末は褐色粉末で、吸湿性があ
り、特異な味と臭いをもつ。このようにして得られるシ
イタケ菌糸体抽出物はフェノール-硫酸法による糖質分
析により糖質を１５−５０％、好ましくは２０−４０％
（ｗ／ｗ）、Lowry法によるタンパク質分析によりタン
パク質を１０−４０％、好ましくは１３−３０％（ｗ／
ｗ）、没食子酸を標準とするFolin-Denis法によりポリ
フェノールを１−５％、好ましくは２．５−３．５％
（ｗ／ｗ）含んでいた。シイタケ菌糸体抽出物にはその
ほかに脂質約０．１％、繊維約０．４％、灰分約２０％
を含む。

【００１２】また、シイタケ菌糸体抽出物の構成糖組成
（％）は以下の通りであった：キシロース：１５．２；
アラビノース：８．２；マンノース：８．４；グルコー
ス：３９．４；ガラクトース：５．４；アミノ糖：１
２．０；ウロン酸：１１．３。

【００１３】本発明によるシイタケ菌糸体抽出物のエタ
ノール不溶画分は、このようにして得られたシイタケ菌
糸体抽出物、好ましくはシイタケ菌糸体抽出物粉末を適
当な濃度の水溶液として、夾雑物を除去するために固形
粒子のろ過剤（好ましくはセライト５４５）を用いてろ
過し、エタノール（好ましくは４容）を加えて、不溶性
画分と可溶性画分に分けることによって得られる。エタ
ノール不溶画分は粗多糖類を含む画分であり、主成分と
して糖質を５４．３％、タンパク質を１４．６％含む。

【００１４】本発明のシイタケ菌糸体抽出物のエタノー
ル不溶画分はシイタケ菌糸体抽出物から２０％の収率で
得られた。シイタケ菌糸体抽出物エタノール不溶画分の
構成糖組成（％）は以下の通りであった：キシロース：
１５．０；アラビノース：９．３；マンノース：１２．
９；グルコース：２８．７；ガラクトース：１０．７；
アミノ糖：１２．５；ウロン酸：１０．９。シイタケ菌
糸体抽出物エタノール不溶画分の肝障害に対する防御効
果を以下の方法により試験したところ、ラット肝細胞を
用いるin vitro試験において、顕著な防御効果が観察さ
れた。本発明の防御剤は、治療剤及び／または予防剤及
び／または保健用剤である。

【００１５】本発明の防御剤は、セフロキサジン、セフ
ロキシムナトリウム、ラタモキセフナトリウムなどのセ
フェム系、硫酸アミカシンなどのアミノ配糖体系、アク
ラルビシンなどの抗腫瘍系、リファンピシンなどの抗酸
菌抗生物質系、テトラサイクリン系、マクロライド系、
ペニシリン系などの抗生物質、中枢神経用薬である、ア
スピリンなどの解熱鎮痛消炎系、クロキサゾラムなどの
精神神経系、バルプロ酸ナトリウムなどの抗てんかん剤
系、ハロタンなどの全身麻酔剤系、フェノバルビタール
などの催眠鎮静系、総合感冒薬系などの薬剤の投与によ
って引き起こされる肝障害、またこれらの他に、ピンド
ロールなどの不整脈用系、トラビジルなどの血管拡張剤
系、塩酸ニカルジピンなどの循環器官用系、塩酸ラベタ
ロールなどの降圧剤系、クロフィブラートなどの動脈硬
化用系で知られる循環器用薬、さらにテガフールなどの
代謝拮抗剤系やエストラサイトなどのホルモン剤やスル
ファメトキサゾールなどのサルファ剤、イソニアジドな
どの抗結核剤、ノルフロキサシンなどの合成抗菌剤など
の薬剤の投与により引き起こされる肝障害、さらには、
生活環境中に存在するビスフェノール、フタル酸エステ
ル、塩素化合物、アルキルフェノール、アルコール類な
どの環境有害物質によって引き起こされる肝障害に有用
であるのみならず、免疫学的肝障害、ウィルス性肝障
害、脂肪肝、肝癌、アルコール性肝障害、肝硬変などに
有効である。従って、シイタケ菌糸体抽出物のエタノー
ル不溶画分及び任意成分として薬剤的に許容できる担体
を含む、肝障害の治療用及び／又は予防用組成物として
使用することができる。

【００１６】投与経路は経口投与が最も好ましいが、静
脈内投与、皮下投与などであってもよい。経口投与に適
した製剤には、錠剤、カプセル剤、散剤、顆粒剤、溶液
剤、シロップ剤などが含まれるが、これに限定されな
い。

【００１７】薬剤的に許容できる担体には、当業界で公
知の適当な賦形剤、結合剤、崩壊剤、滑沢剤、着香料、
着色剤、溶解補助剤、懸濁剤、コーティング剤などを含
むが、これに限定されない。

【００１８】本発明の防御剤の投与量は患者の年齢、体
重、症状、投与経路などを考慮して医師、薬剤師、栄養
士などにより決定される。本発明の防御剤に含まれるシ
イタケ菌糸体抽出物は食品として使用されてきたもので
あり、極めて安全であるところから、投与量を厳しく限
定する必要はないが、通常エタノール不溶画分として１
日あたり８ｍｇ−１．２ｇ、好ましくは８０ｍｇ−３６
０ｍｇである。さらに、肝障害の原因となる薬剤と併用
して投与しても支障はない。

【００１９】本発明の防御剤は、食品の形で提供するこ
ともできる。好ましい食品としては顆粒、麺類、キャン
ディー、ゼリー、クッキーなどが挙げられる。さらに、
本発明の防御剤は、飲料の形で提供することもできる。
このような食品、飲料にはシイタケ菌糸体抽出物の他
に、ビタミン剤、カルシウムなどの無機成分、キトサン
などの食物繊維、大豆抽出物などの蛋白質、レシチンな
どの脂質、乳糖などの糖類などを追加してもよい。

【００２０】本発明を以下の実施例によりさらに詳しく
説明するが、本発明の範囲はこれに限定されない。本発
明の方法を種々変更、修飾して使用することが当業者に
は可能であり、これらも本発明の範囲に含まれる。

【００２１】

【実施例】実施例１：シイタケ菌糸体抽出物の調製法 バガス９０重量部、米糖１０重量部からなる固体培地に
純水を適度に含ませた後に、シイタケ種菌を接種し、温
度および湿度を調節した培養室内に放置し、菌糸体を増
殖させた。菌糸体が固体培地に蔓延した後、バガス基材
の繊維素を解束し、１２メッシュ通過分が２４重量％以
下となるようにした。この解束された培地1.0kgに、純
水3.5Ｌを加え、４０℃に保ちながら精製セルラーゼ2.0
gを加え培地含有混合物とした。

【００２２】次いで培地含有混合物を変速付ギヤーポン
プにより循環させながら、固体培地にギヤー部分におい
て粉砕およびすりつぶし作用を２００分間程度加えバカ
ス繊維の約８０重量％が１２メッシュ通過分となるよう
にした。培地含有混合物の粉砕およびすりつぶしは、該
混合物の温度を徐々に上昇させながら行った。その後培
地含有混合物をさらに加熱して、９０℃として３０分間
放置した。９０℃への加熱により、酵素を失活せしめ、
かつ殺菌を施した。得られた培地含有混合物を６０メッ
シュろ布を用いてろ過してシイタケ菌糸体抽出物とし、
濃縮した後、凍結乾燥粉末を得た。

【００２３】実施例２：エタノール不溶画分の調製 実施例１で得られたシイタケ菌糸体抽出物乾燥粉末１２
ｇを水２Ｌに溶解し、セライト５４５で処理して夾雑物
を除去した。これにエタノール８Ｌを加えて攪拌、静置
して生じた沈殿を遠心分離し、沈殿物を得た。沈殿画分
は粗多糖類画分であり、シイタケ菌糸体抽出物乾燥粉末
に対し、２０％（凍結乾燥重量）であった。

【００２４】実施例３：組成分析 実施例１で得たシイタケ菌糸体抽出物及び実施例２で得
たシイタケ菌糸体抽出物のエタノール不溶画分につい
て、フェノール-硫酸法による糖質分析、Lowry法による
タンパク質分析、および没食子酸を標準とするFolin-De
nis法によるポリフェノール分析を実施した。得られた
結果を表１に示す。

【００２５】

【表１】

【００２６】実施例４：構成糖組成 加水分解管（３ｍＬ用、Pierce社製）に実施例１で得た
シイタケ菌糸体抽出物及び実施例２で得たシイタケ菌糸
体抽出物エタノール不溶画分をそれぞれ１ｍｇとり、４
Ｍトリフルオロ酢酸を１ｍＬ加えて真空シールし、１０
０℃で３時間、酸加水分解を行った。加水分解液をナス
フラスコに移して粘稠なオイル状になるまで減圧濃縮
（ロータリーエバポレーター）し、純水２ｍＬに溶解し
た後、０．４５μｍフィルターでろ過し、高速液体クロ
マトグラフィーを用いたポストカラムラベル法により構
成単糖の定量を行った。アミノ糖は亜硝酸-indole法、
ウロン酸はカルバゾール法を用いて測定した。得られた
結果を表２に示す。

【００２７】

【表２】

【００２８】実施例５：初代培養肝細胞を用いるin vit
ro試験 １）ラット肝細胞の分離及び初代培養 ラット（Wistar、雄、６−８週齢）の肝細胞を分離し、
３７℃、５％ＣＯ２条件下で一晩培養した。 ２）肝細胞のＣＣｌ４及び被験物質による処理 １）で調製した肝細胞に、ＣＣｌ４（ＤＭＳＯ溶液：肝
障害誘導物質）及び被験物質（シイタケ菌糸体抽出物の
エタノール不溶画分）を種々の濃度で調整した無血清培
地を５００μｌ加え、２４時間インキュベートした。 ３）ＧＯＴ活性測定 培養液をエッペンドルフチューブに移し、１００００ｒ
ｐｍ、５分間、室温にて遠心した。この上清中のＧＯＴ
活性をＧＯＴ測定試薬（リキテックＧＯＴ ＩＦＣＣ：
ベーリンガーマンハイム社製）を用い、測定した。被験
物質を加えていない培養液上清のＧＯＴ活性の平均値を
１００としたときの各培養液上清のＧＯＴ活性の割合を
求め、肝障害強度とした。その結果を図１に示す。図か
ら明らかなように、シイタケ菌糸体抽出物のエタノール
不溶画分は肝障害防御効果が観察された。

【００２９】

【発明の効果】本発明のシイタケ菌糸体抽出物エタノー
ル不溶画分は顕著な肝障害の防御効果を有しており、肝
障害の予防、治療に使用できる。本発明の防御剤は、肝
障害の原因となる薬剤の投与と併用することができ、ま
た副作用がないことから、安全に使用でき、大きな産業
上の利用可能性が期待できる。

【図面の簡単な説明】

【図１】ラット初代培養肝細胞を用いるin vitro試験に
おけるシイタケ菌糸体抽出物のエタノール不溶画分の肝
障害防御試験の結果を示すグラフである。

───────────────────────────────────────────────────── フロントページの続き (51)Int.Cl.⁷ 識別記号 ＦＩ テーマコート゛(参考） Ａ６１Ｋ 35/84 Ａ２３Ｌ 2/00 Ｆ (72)発明者 杉野 玲子 大阪府大阪市淀川区三津屋南３−13−35 小林製薬株式会社内 (72)発明者 白銀 英樹 大阪府大阪市淀川区三津屋南３−13−35 小林製薬株式会社内 (72)発明者 竹内 豊実 大阪府大阪市淀川区三津屋南３−13−35 小林製薬株式会社内 Ｆターム(参考） 4B017 LC03 LE01 LE03 LG19 LP01 LP03 LP06 4B018 LB10 LE03 LE05 MD83 ME14 MF01 MF06 MF12 4C088 AA08 AB73 AC17 BA04 BA05 BA07 BA11 CA19 MA17 MA52 NA14 ZA75

Claims (6)

【特許請求の範囲】
1. 【請求項１】シイタケ菌糸体抽出物をエタノールを含有
   する溶液で処理することにより得られる不溶性画分。
2. 【請求項２】シイタケ菌糸体抽出物をエタノールを含有
   する溶液で処理することにより得られる不溶性画分を含
   む肝障害防御剤。
3. 【請求項３】シイタケ菌糸体抽出物をエタノールを含有
   する溶液で処理することにより得られる不溶性画分及び
   任意成分として薬剤的に許容できる担体を含む、肝障害
   の治療用及び／又は予防用組成物である請求項２記載の
   防御剤。
4. 【請求項４】経口で投与する請求項２又は３記載の防御
   剤。
5. 【請求項５】食品である請求項２記載の防御剤。
6. 【請求項６】飲料である請求項２記載の防御剤。