IT201900011550A1 - Estratto di erbe comprendente verbascoside e aucubina, procedimento di preparazione e uso - Google Patents

Description

DESCRIZIONE dell ́invenzione avente per titolo: “Estratto di erbe comprendente verbascoside e aucubina, procedimento di preparazione e uso”

La presente invenzione riguarda un estratto di erbe comprendente o, alternativamente, consistente di un estratto di almeno una pianta del genere Aloysia, preferibilmente Lippia citriodora (Palau) Kunth (verbena odorosa) e/o Verbena Officinalis L. (verbena comune), e un estratto di almeno una pianta del genere Plantago, preferibilmente Plantago lanceolata L. (piantaggine) e/o Plantago major L. (cinquenervia), comprendente, detto estratto di erbe, verbascoside e aucubina. Inoltre, la presente invenzione riguarda una composizione comprendente detto estratto di erbe e il suo uso come anti-infiammatorio, analgesico e/o antispasmodico. Infine, la presente invenzione riguarda un procedimento per la preparazione di detto estratto di erbe.

Per il trattamento di stati infiammatori e di dolore, sono disponibili in commercio principalmente i tradizionali antinfiammatori steroidei (i.e. cortisone e derivati), che presentano gravi effetti collaterali, e gli anti-infiammatori non steroidei (acronimo, FANS). I FANS bloccano in maniera più o meno reversibile il sito di legame dell’enzima cicloossigenasi (COX). La cicloossigenasi è un enzima coinvolto nel processo infiammatorio e porta alla produzione, a partire dall'acido arachidonico, di numerosi mediatori infiammatori (i.e. prostaglandine (PG), prostacicline (PC), trombossani (TX) e leucotrieni (LT)). La cicloossigenasi esiste in due isoforme: la COX-1, costitutivo dell'organismo, non coinvolto nel processo infiammatorio ma coinvolto nella produzione della protezione gastrica, e la COX-2, enzima inducibile, presente durante il processo infiammatorio e responsabile della sintesi dei mediatori infiammatori nella sede flogistica. I primi FANS sintetizzati, ancora oggi utilizzati, non hanno azione selettiva nei confronti delle due isoforme della COX, inibendole entrambe. Ciò spiega l'effetto antinfiammatorio dato dall'inibizione della COX-2 (l'enzima coinvolto nel processo flogistico) e rende conto degli effetti collaterali a livello gastrico, in quanto la soppressione dell'attività della COX-1 porta alla riduzione della sintesi di prostaglandine (PG) e, conseguentemente, dell'effetto protettivo delle prostaglandine (i.e. PGE2) sulla mucosa gastrica (le PGE inibiscono la produzione di HCl nello stomaco, favoriscono la produzione di muco e la secrezione di bicarbonato, che contrasta l'acidità gastrica). In particolare, in caso di utilizzo di FANS per periodi prolungati o cronico si può avere danno gastrico, lesioni ulceroidi delle mucose, effetti collaterali cardiovascolari e nefrotossicità indotta da NSADD.

Al fine di ridurre gli effetti collaterali dei FANS, la ricerca farmacologica ha sviluppato inibitori selettivi della COX-2 rispetto a COX-1 (i.e celecoxib, etoricoxib, valdecoxib, firocoxib). A causa dell'elevata similitudine strutturale tra le due isoforme di ciclossigenasi, COX-1 e COX-2, la selettività d'azione di questi farmaci nei confronti della COX-2 non è completa ma solo parziale, portando a una riduzione degli effetti collaterali a livello gastrico rispetto ai FANS non selettivi, ma non alla loro completa soppressione.

Il problema tecnico che la presente invenzione affronta e risolve è quello di fornire una composizione naturale con effetti antiinfiammatori, analgesici e antispasmodici, priva di effetti collaterali.

A seguito di una intensa e prolungata attività di ricerca, la Richiedente ha scoperto che composizioni comprendenti verbascoside e aucubina di origine naturale ottenute per estrazione di almeno una pianta del genere Aloysia, preferibilmente Lippia citriodora (verbena odorosa) e/o Verbena Officinalis (verbena comune), e almeno una pianta del genere Plantago, preferibilmente Plantago lanceolata (piantaggine) e/o Plantago major (cinquenervia), sono efficaci come antiinfiammatori, analgesici e antispastici. In particolare, dette composizioni o estratti di erbe (in breve, composizioni dell’invenzione e estratti di erbe dell’invenzione) agiscono come inibitori della cicloossigenasi-2 (COX-2), enzima coinvolto negli stati infiammatori, in modo selettivo rispetto alla cicloossigenasi-1 (COX-1).

Inoltre, le composizioni e gli estratti di erbe dell’invenzione non sono citotossici e sono privi di effetti collaterali, rendendo possibile la loro somministrazione ad un’ampia gamma di soggetti, tra cui anche soggetti pediatrici, anziani e donne in gravidanza.

Infine, gli estratti di erbe dell’invenzione sono di facile preparazione (i.e. procedimento di estrazione) ed economicamente vantaggiosi.

Questi scopi ed altri ancora, che risulteranno chiari dalla descrizione dettagliata che segue, sono raggiunti dagli estratti di erbe e dalle composizioni della presente invenzione grazie alle caratteristiche tecniche rivendicate nelle unite rivendicazioni.

FIGURE

Figura 1: cromatogramma HPLC a lunghezza d’onda di λ=330 nm per il verbascoside nell’estratto di erbe dell’invenzione.

Figura 2: cromatogramma HPLC a lunghezza d’onda di λ=205 nm per l’aucubina nell’estratto di erbe dell’invenzione.

Figura 3: analisi dell'espressione COX-2 mediante RT-PCR.

Figura 4: immunodosaggio PGE2.

DESCRIZIONE DETTAGLIATA DELL’INVENZIONE

Forma oggetto della presente invenzione un estratto di erbe (in breve, estratto di erbe dell’invenzione) comprendente o, alternativamente, consistente di un estratto di almeno una pianta del genere Aloysia, preferibilmente Lippia citriodora e/o Verbena Officinalis, e un estratto di almeno una pianta del genere Plantago, preferibilmente Plantago lanceolata e/o Plantago major, in cui detto estratto di erbe comprende in % in peso verbascoside compreso nell’intervallo da 1% a 50% e aucubina compreso nell’intervallo da 0,1% a 30%, in cui dette % sono rispetto al peso totale dell’estratto di erbe.

In una forma di realizzazione preferita, detto estratto di erbe dell’invenzione comprendente o, alternativamente, consistente di un estratto di Lippia citriodora e/o Verbena Officinalis e un estratto di Plantago lanceolata e/o Plantago major, in cui detto estratto di erbe comprende in % in peso verbascoside compreso nell’intervallo da 1% a 50% e aucubina compreso nell’intervallo da 0,1% a 30%, in cui dette % sono rispetto al peso totale dell’estratto di erbe.

In una forma di realizzazione maggiormente preferita, detto estratto di erbe dell’invenzione comprendente o, alternativamente, consistente di un estratto di Lippia citriodora e un estratto di Plantago lanceolata, in cui detto estratto di erbe comprende in % in peso verbascoside compreso nell’intervallo da 1% a 50% e aucubina compreso nell’intervallo da 0,1% a 30%, in cui dette % sono rispetto al peso totale dell’estratto di erbe.

In una forma di realizzazione preferita, detto estratto di erbe dell’invenzione comprende in % in peso verbascoside compreso nell’intervallo da 2% a 25%, preferibilmente da 3% a 10%, più preferibilmente del 5 0,5%; e aucubina compreso nell’intervallo da 0,5% a 15% preferibilmente da 1% a 5%, più preferibilmente del 2 0,2%, in cui dette % sono rispetto al peso totale dell’estratto di erbe.

I contenuti di verbascoside e aucubina nell’estratto di erbe dell’invenzione in % in peso rispetto al peso totale dell’estratto possono essere determinati secondo tecniche note al tecnico del ramo; preferibilmente possono essere determinate mediante tecniche qualiquantitative di cromatografia liquida ad alta pressione o ad alta prestazione (HPLC) con rivelamento mediante DAD (diode-array detector) ad una lunghezza d’onda di λ=330 nm per il verbascoside e di λ=205 nm per l’aucubina (Figura 1 e Figura 2).

Nel contesto della presente invenzione, con il termine “Lippia citriodora” viene inteso la Lippia citriodora (Palau) Kunth o Aloysia citriodora Palau, comunemente chiamata “verbena odorosa” o “lemon verben”. La Lippia citriodora è una pianta arbustiva perenne del genere Aloysia della famiglia Verbenaceae dell'ordine Lamiales, da non confondere con la "verbena comune" o Verbena officinalis. Sinonimi di Lippia citriodora sono, inoltre, Aloysia triphylla, Verbena citriodora e Verbena triphyilla. La fitocomposizione di Lippia citriodora è principalmente rappresentata da terpenoidi, ma sono presenti anche vari polifenoli tra cui il verbascoside.

Nel contesto della presente invenzione, con il termine “Verbena officinalis” viene inteso la Verbena officinalis L. (L. quale Carl Nilsson Linnaeus), pianta arbustiva perenne del genere Aloysia della famiglia Verbenaceae dell'ordine Lamiales, comunemente chiamata “verbena” o "verbena comune".

Il verbascoside (nome IUPAC [6-[2-(3,4-diidrossifenil)etossi]-5-idrossi-2-(idrossimetil)-4-(3,4,5-triidrossi-6-metilossan-2-il)ossiossan-3-il] (E)-3-(3,4-diidrossifenil)prop-2-enoato), CAS nr 61276-17-3) è un fenilpropanoide ampiamente distribuito nel regno vegetale, caratterizzato da un residuo di acido caffeico ed uno di idrossitirosolo legati ad un glucopiranoside ai lati opposti della catena zuccherina attraverso, rispettivamente, un legame estere e glicosidico. Può essere trovato in specie dell'ordine delle Lamiales, oppure può anche essere prodotto in colture di cellule vegetali. Il verbascoside (conosciuto anche come acteoside) è un metabolita secondario prodotto dalla pianta (i.e. Lippia citriodora o Verbena officinalis) come agente di difesa da parassiti ed insetti ed è noto per il suo elevato potere antiossidante.

Nel contesto della presente invenzione, con il termine “Plantago lanceolata” viene inteso Plantago lanceolata L. (1753) (L. quale Carl Nilsson Linnaeus), comunemente chiamata “piantaggine lanciuola” o “piantaggine”. La Plantago lanceolata è una pianta erbacea officinale perenne del genere Plantago della famiglia delle Plantaginaceae dell'ordine delle Lamiales.

Nel contesto della presente invenzione, con il termine “Plantago major” viene inteso Plantago major L. (1753) (L. quale Carl Nilsson Linnaeus), una pianta erbacea officinale perenne del genere Plantago della famiglia delle Plantaginaceae dell'ordine delle Lamiales. La Plantago major è conosciuta con numerosi nomi comuni: ansoglossa, centonervi, cinquenervi, coda di topo, erba bruna, erba di cento nervi, erba dei sette nervi, lanciola, lingua di cane, lingua di pecora, lingua d'oca, mestolaccio, orecchio d'asino, orecchio di lepre, orecchiella, pentinervi, petacciola pelosa e tirafilo.

L’aucubina (nome IUPAC (2S,3R,4S,5S,6R)-2-[[(1S,4aR,5S,7aS)-5-idrossi-7-(idrossimetil)-1,4a,5,7atetraidrociclopenta[c]piran-1-il]ossi]-6-(idrossimetil)ossane-3,4,5-triol, CAS nr 479-98-1) è un iridoide glicoside trovato nelle foglie di varie piante.

Gli iridoidi appartengono alla più grande classe dei terpenoidi.

L’estratto di erbe dell’invenzione può essere un estratto di foglie, radici, fiori, steli o stimmi di detta almeno una pianta del genere Aloysia, preferibilmente Lippia citriodora e/o Verbena officinalis e un estratto di foglie, radici, fiori, steli o stimmi di detta almeno una pianta del genere Plantago, preferibilmente Plantago lanceolata e/o Plantago major; preferibilmente è un estratto di foglie di Lippia citriodora e/o Verbena officinalis e di foglie di Plantago lanceolata e/o Plantago major; più preferibilmente è un estratto di foglie di Lippia citriodora e di foglie di Plantago lanceolata.

Preferibilmente, detto estratto di erbe dell’invenzione, comprendente verbascoside e aucubina nelle % in peso dell’invenzione, è un estratto secco avente un residuo secco in % in peso compreso nell’intervallo da 90% a 100% rispetto al peso totale dell’estratto di erbe, preferibilmente da 95% a 100%, più preferibilmente da 98% a 100%. Vantaggiosamente, l’estratto di erbe dell’invenzione è un estratto secco di foglie di Lippia citriodora e/o Verbena officinalis, preferibilmente Lippia citriodora, e di foglie di Plantago lanceolata e/o Plantago major, preferibilmente Plantago lanceolata, comprendente verbascoside e aucubina nelle % in peso dell’invenzione, preferibilmente verbascoside titolata al 5 0,5% e aucubina titolata al 2 0,2%.

In una forma di realizzazione particolarmente preferita, detto estratto di erbe dell’invenzione è un estratto secco in forma granulare (o estratto secco granulare). I granuli (o microgranuli) di detto estratto secco in forma granulare sono granuli di dimensioni pressoché uniformi e aventi una dimensione di particella media compresa nell’intervallo da 20 a 150 mesh, misurata attraverso setacciatori meccanici o manuali.

Vantaggiosamente, detto estratto secco in forma granulare, in aggiunta all’estratto di detta almeno una pianta del genere Aloysia, preferibilmente Lippia citriodora e/o Verbena officinalis, e all’estratto di detta almeno una pianta del genere Plantago, preferibilmente Plantago lanceolata e/o Plantago major, comprende inoltre un supporto scelto nel gruppo comprendente o, alternativamente, consistente di maltodestrina, gomma arabica, inulina, fibre vegetali, polialcoli, fruttoligosaccaridi, lecitine, destrosio, isomalto e zuccheri di vario genere; preferibilmente detto supporto è maltodestrina.

Detto estratto secco in forma granulare, preferibilmente comprendente detto supporto, ha il vantaggio di essere altamente solubile e, inoltre, altamente scorrevole permettendo una migliore performance dei macchinari industriali per sua la lavorazione, ad esempio per la preparazione di composizione, quali ad esempio capsule, compresse, polveri per bustine e composizioni liquide, comprendenti l’estratto di erbe dell’invenzione.

Inoltre, l’estratto secco in forma granulare dell’invenzione, preferibilmente comprendente detto supporto, ha il vantaggio di essere formulabile in forma orosolubile e idrosolubile, vale a dire in forme di somministrazione facilmente fruibili.

In una ulteriore forma di realizzazione, l’estratto secco in forma granulare dell’invenzione può essere ricoperto o incapsulato o rivestito con una matrice di rivestimento, in cui detta matrice di rivestimento sia tale da impartire all’estratto secco in forma granulare sia una gastro-protezione sia un rilascio modulato nell’intestino dei principi attivi in esso contenuti (i.e. verbascoside e aucubina). Detta matrice di rivestimento (agente di coating) può comprendere o, alternativamente consistere di acidi grassi liberi o relativi esteri, cere, lacche o loro miscele. Con matrice di rivestimento di gastroprotezione, viene inteso che i granuli di estratto secco sono rivestiti con un involucro che le protegge dall’ambiente acido dello stomaco in modo che arrivino inalterate nell’intestino dove rilasciano il principio attivo consentendone l’assorbimento.

Forma oggetto della presente invenzione una composizione comprendente o, alternativamente, consistente dell’estratto di erbe dell’invenzione secondo una qualsiasi delle forme di realizzazione descritte nella presente invenzione e, opzionalmente, almeno un additivo e/o eccipiente di grado alimentare o farmaceutico.

Nel caso in cui non siano presenti detti additivo e/o eccipienti, la composizione dell’invenzione coincide con l’estratto di erbe dell’invenzione.

Nel contesto della presente invenzione, detto almeno un additivo e/o eccipiente di grado farmaceutico o alimentare, opzionalmente presente nella composizione dell’invenzione, è una sostanza priva di attività terapeutica adatta per uso farmaceutico o alimentare. Detti additivo e/o eccipiente accettabili per uso farmaceutico o alimentare comprendono tutte le sostanze ausiliarie note all’esperto del ramo come, ad esempio, diluenti, solventi (tra cui acqua, glicerina, alcol etilico), solubilizzanti, addensanti, edulcoranti, antiagglomeranti, agenti di carica, aromatizzanti, coloranti, lubrificanti, tensioattivi, antimicrobici, antiossidanti, conservanti, tamponi per stabilizzare il pH e loro miscele; esempi specifici sono: tamponi fosfato, stearato di magnesio, biossido di silicone, carbossimetilcellulosa sodica reticolata, cellulosa microcristallina, idrossipropilmetilcellulosa, aromi naturali o artificiali.

In una forma di realizzazione la composizione dell’invenzione, comprendente l’estratto di erbe e, opzionalmente, almeno un additivo e/o eccipiente di grado alimentare o farmaceutico, come definiti nella presente descrizione, può comprendere inoltre un ulteriore componente (o componente attivo) scelto dal gruppo comprendente o, alternativamente, consistente di: vitamine del gruppo B, C, D, E, sali organici e/o inorganici di magnesio, di selenio, di zinco e loro miscele.

Forma oggetto della presente invenzione una composizione farmaceutica, composizione nutraceutica, prodotto integratore alimentare o un prodotto alimentare o un alimento a fine medico speciale (Novel food), una composizione per dispositivo medico o una composizione cosmetica comprendente o, alternativamente, consistente della composizione dell’invenzione secondo le forme di realizzazione descritte nella presente descrizione.

Il termine “dispositivo medico” nel contesto della presente invenzione è usato nel significato secondo il Decreto Legislativo italiano 24 febbraio 1997, n. 46, oppure secondo il nuovo Regolamento Dispositivi Medici (UE) 2017/745 (MDR).

La composizione della presente invenzione può essere in una forma liquida, quale soluzione, sistema liquido bifasico, sospensione, dispersione o sciroppo, in forma semisolida, quale gel, crema o schiuma, oppure in forma solida, quale polvere, granuli o microgranuli, scaglie, aggregati, compressa, compressa masticabile, capsula, losanga, pasticche, barretta e forme equivalenti.

La composizione dell’invenzione può essere formulata per somministrazione orale (uso orale o somministrazione gastroenterica), sublinguale (o buccale), transmucosale o topica.

In una forma di realizzazione preferita, la composizione dell’invenzione è per uso orale, preferibilmente in forma solida; ancora più preferibilmente in una forma di granuli, microgranuli, scaglie, polvere, polvere o granuli o microgranuli orosolubile o solubili, compressa, capsula o soft-gel.

Forma oggetto della presente invenzione la composizione dell’invenzione secondo quanto sopra descritto, in cui detta composizione è per uso come medicamento.

Detta composizione secondo l’invenzione è per uso come anti-infiammatorio, analgesico e/o antispasmodico in un soggetto avente necessità.

In particolare, la composizione dell’invenzione è per uso nel trattamento sintomatico di patologie infiammatorie muscolo-scheletriche, reumatologiche, articolari e in post-chirurgia, preferibilmente per uso in metodi di trattamento di osteoartrite, artrite reumatoide e spondilite anchilosante.

In particolare, la composizione dell’invenzione per uso come analgesico, quale sostanza che attenua o elimina la sensazione del dolore senza ridurre lo stato di coscienza, è una composizione per uso nel trattamento di mal di denti, dismenorrea, dolori post-operatori, dolori cervicali, dolori artritici, dolori o crampi addominali, dolori muscolo-scheletrici, dolori post-parto, dolori da trauma sportivo o contusione e dolori generici.

L'estratto di erbe dell’invenzione titolato in verbascoside e aucubina esercita significativi effetti anti-infiammatori e analgesici agendo come un inibitore specifico della COX-2; inoltre, non è citotossico ed è privo di effetti collaterali rilevanti. Detta attività dell’estratto di erbe dell’invenzione è imputabile ad un effetto sinergico o di potenziamento reciproco svolto da verbascoside e aucubina contro la iper-espressione di COX-2 in stati infiammatori o di condizioni di dolore.

In aggiunta, la composizione dell’invenzione è per uso come antiossidante, antimicrobico e anti-piretico per diminuire la temperatura corporea in caso di febbre.

In una forma di realizzazione alternativa, la composizione dell’invenzione è per uso come coadiuvante ad un trattamento, preventivo e/o curativo, antiinfiammatorio, analgesico, antispasmodico, antiossidante, antimicrobico e/o anti-piretico, in particolare per le patologie, sintomi e/o disturbi descritti nella presente invenzione.

La composizione dell’invenzione è da intendersi indifferentemente per uso umano o veterinario, cioè come composizione da applicare a soggetti umani o animali con le modalità note all’esperto del ramo.

La presente invenzione si riferisce, inoltre, ad un metodo di trattamento, preventivo e/o sintomatico, di patologie infiammatorie muscolo-scheletriche, reumatologiche, articolari e in post-chirurgia (e.g. osteoartrite, artrite reumatoide e spondilite anchilosante) e sintomi e/o disturbi ad esse associate; ad un metodo di trattamento, preventivo e/o sintomatico, analgesico e/o antispasmodico per ridurre o eliminare sintomi e/o disturbi associati o derivanti al dolore (e.g. mal di denti, dismenorrea, dolori post-operatori, dolori cervicali, dolori artritici, dolori o crampi addominali, dolori muscolo-scheletrici, dolori postparto, dolori da trauma sportivo o contusione e dolori generici), quale un metodo di trattamento; ad un metodo di trattamento antiossidante, antimicrobico e/o antipiretico, in cui detti metodi di trattamento comprendono la somministrazione della composizione dell’invenzione come sopra definita ad un soggetto avente necessità.

La presente invenzione si riferisce, inoltre, all’uso non-terapeutico della composizione dell’invenzione secondo le varie forme di realizzazione riportate nella presente descrizione, in cui detto uso è per un trattamento non-terapeutico di malesseri o sensazioni di disagio collegate alla sfera del dolore e degli spasmi dell’intestino e dell’addome.

Infine, forma oggetto dell’invenzione un procedimento per la preparazione dell’estratto di erbe dell’invenzione (in breve, procedimento dell’invenzione), secondo una qualsiasi delle forme di realizzazione riportate nella presente descrizione, comprendente le fasi di:

(I) predisposte (a) almeno una pianta del genere Aloysia comprendente verbascoside, preferibilmente Lippia citriodora e/o Verbena Officinalis, e/o (b) almeno una pianta del genere Plantago comprendente aucubina, preferibilmente Plantago lanceolata e/o Plantago major, in un impianto di estrazione; seguito da

(II) miscelare (a) e/o (b) con un solvente idroalcolico (c), preferibilmente etanolo/acqua, in cui il rapporto in peso [(a) e/o (b)]:(c) è compreso nell’intervallo da 1:1 a 1:25, preferibilmente da 1:3 a 1:20, più preferibilmente da 1:6 a 1:15; seguito da

(III) riscaldare sotto agitazione ad una temperatura compresa nell’intervallo da 30°C a 90°C, preferibilmente da 40°C a 80°C, più preferibilmente da 50°C a 70°C, per un tempo compreso nell’intervallo da 20 a 240 minuti, preferibilmente da 30 a 180 minuti, più preferibilmente da 40 a 120 minuti, ad ottenere un estratto grezzo (d) comprendente una fase solida e una fase liquida; seguito da

(IV) separare la fase liquida di detto estratto grezzo (d) dalla fase solida di detto estratto grezzo (d) ad ottenere una fase liquida isolata (e);

(V) concentrare la fase liquida isolata (e).

Il procedimento dell’invenzione, comprendente le fasi da (I) a (V), può essere eseguito estraendo (a), preferibilmente Lippia citriodora, e (b), preferibilmente Plantago lanceolata, contemporaneamente in un unico impianto di estrazione. Alternativamente, l’estrazione di (a), preferibilmente Lippia citriodora, e l’estrazione di (b), preferibilmente Plantago lanceolata, possono essere eseguite in modo separato su due diversi impianti di estrazione.

In una forma di realizzazione preferita, (a), preferibilmente Lippia citriodora, e (b), preferibilmente Plantago lanceolata, sono estratte contemporaneamente in un unico impianto di estrazione.

In detto procedimento dell’invenzione, l’estrazione (i.e. fase (II) e fase (III)) è effettuata in tempi brevi permettendo di estrarre gli attivi (i.e. verbascoside e/o aucubina) dalla materia prima estratta lasciando inalterati e bilanciati i costituenti del fitocomplesso originariamente contenuti nelle piante (a) e (b) come definite nel contesto della presente invenzione, preferibilmente (a) Lippia citriodora e (b) Plantago lanceolata.

In una forma di realizzazione del procedimento dell’invenzione, comprendente le fasi da (I) a (V) descritte e opzionalmente, le fasi da (VI) a (VIII), - la fase (V) di concentrare la fase liquida isolata (e) è eseguita mediante rimozione parziale del solvente (c), ad esempio per evaporazione, fino ad ottenere un estratto molle (f) avente un residuo secco compreso nell’intervallo da 20% a 80% in peso sul peso totale dell’estratto molle (f), preferibilmente da 30% a 70%, più preferibilmente da 40% a 60%; e

- la fase (V) di concentrare è seguita dalla fase (VI) di essiccare detto estratto molle (f) a dare un estratto secco (g), in cui detto estratto secco (g) ha un residuo secco in % in peso compreso nell’intervallo da 90% a 100% rispetto al peso totale dell’estratto secco (g), preferibilmente da 95% a 100%, più preferibilmente da 98% a 100%.

Detta fase (VI) di essiccare comprende la rimozione, parziale o quasi totale, del solvente (c) utilizzato durante l’estrazione, ad esempio mediante l’evaporazione del solvente con tecniche convenzionali al tecnico del ramo.

L’estratto secco (g) ottenuto dal procedimento dell’invenzione (fasi da (I) a (VI)) è l’estratto di erbe dell’invenzione comprendente o, alternativamente, consistente di un estratto di almeno una pianta del genere Aloysia, preferibilmente Lippia citriodora e/o Verbena Officinalis, e un estratto di almeno una pianta del genere Plantago, preferibilmente Plantago lanceolata e/o Plantago major, comprende in % in peso verbascoside compreso nell’intervallo da 1% a 50% e aucubina compreso nell’intervallo da 0,1% a 30%, in cui dette % sono rispetto al peso totale dell’estratto di erbe, nelle varie forme di realizzazione descritte nella presente descrizione.

In una forma di realizzazione, la fase (VI) di essiccare è seguita dalla fase (VII) di granulare detto estratto secco (g), a dare un estratto secco in forma granulare (h) come definito nel contesto della presente invenzione.

In una forma di realizzazione preferita, la fase (VI) di essiccare è concomitante alla fase (VII) di granulare in quanto detta fase (VI) di essiccare è condotta mediante un granulatore a letto fluido, secondo procedure standard note al tecnico del ramo, in cui è utilizzato un supporto e detto supporto è miscelato a detto estratto molle (f), a dare un estratto secco granulato (h) come definito nel contesto della presente invenzione.

Vantaggiosamente, detto supporto è scelto nel gruppo comprendente o, alternativamente, consistente di maltodestrina, gomma arabica, inulina, fibre vegetali, polialcoli, fruttoligosaccaridi, lecitine, destrosio, isomalto e zuccheri di vario genere, preferibilmente maltodestrina.

Le fasi di essiccare e granulare con metodo di granulazione mediante un granulatore a letto fluido porta all’ottenimento di un estratto di erbe secco in forma di granuli secondo la presente invenzione di dimensioni pressoché uniformi, in cui detti granuli hanno le seguenti caratteristiche:

- altissima scorrevolezza che consente un’ottima lavorabilità, ad esempio l’ottenimento di capsule e compresse di peso e durezza uniformi, con una minima perdita e maggior produttività nella fase di produzione di solidi orali;

- velocità di dissoluzione che risulta molto più elevata rispetto ai convenzionali estratti secchi in polvere; questo si riflette in una più alta biodisponibilità in vivo ed una migliore farmacocinetica degli attivi dell’estratto (i.e. verbascoside e aucubina);

- assenza di formazione di polvere all’atto dell’apertura della confezione in busta (e.g. composizioni orosolubili o solubili);

- possibilità di rivestimento dell’estratto granulare con opportuno agente per l’ottenimento di granuli a rilascio controllato o resistenti a pH specifico (e.g. gastroprotetti).

Vantaggiosamente, nel procedimento dell’invenzione, le fasi da (I) a (V) o (VI) o (VII), sono seguite dalla fase (VIII) di determinare il contenuto di verbascoside e aucubina nell’estratto (f), (g) o (h) mediante tecniche quali-quantitative di cromatografia liquida ad alta pressione o ad alta prestazione (HPLC) ad una lunghezza d’onda di λ=330 nm per il verbascoside e di λ=205 nm per l’aucubina.

In una forma di realizzazione preferita, nel procedimento dell’invenzione comprendente le fasi da (I) a (V) o (VI) o (VII) o (VIII), in detta fase (I) di predisporre sono predisposte le foglie di (a), preferibilmente Lippia citriodora, comprendenti verbascoside e/o le foglie di (b), preferibilmente Plantago lanceolata, comprendenti aucubina; preferibilmente le foglie essiccate di (a), preferibilmente Lippia citriodora, e/o foglie essiccate di (b), preferibilmente Plantago lanceolata; più preferibilmente in cui dette foglie essiccate sono in un taglio scelto tra polvere, taglio tisana o taglio filtro.

In una forma di realizzazione preferita, nel procedimento dell’invenzione comprendente le fasi da (I) a (V) o (VI) o (VII) o (VIII), in detta fase (II) il solvente idroalcolico (c) è una miscela etanolo/acqua avente un grado alcolico compreso nell’intervallo da 10° a 80° alcolici, preferibilmente da 20°-70° alcolici.

Vantaggiosamente, nel procedimento dell’invenzione comprendente le fasi da (I) a (V) o (VI) o (VII) o (VIII), la fase (IV) di separare è effettuata mediante una tecnica scelta tra le tecniche di chiarificazione, decantazione, centrifugazione e/o filtrazione del substrato da purificare, preferibilmente centrifugazione.

Vantaggiosamente, nel procedimento dell’invenzione comprendente le fasi da (I) a (V) o (VI) o (VII) o (VIII), la fase (V) di concentrare, quale fase di rimozione o evaporazione di parte del solvente utilizzato durante l’estrazione, è condotta secondo una tecnica di concentrazione sottovuoto scelta tra sottovuoto con evaporatore a bolla, sottovuoto con film cadente e sottovuoto con strato sottile, preferibilmente con strato sottile.

La concentrazione dell’estratto sottovuoto consente di ridurre notevolmente i tempi di produzione e di recuperare il solvente.

In una forma di realizzazione maggiormente preferita, il procedimento dell’invenzione comprende o, alternativamente, consiste delle fasi di:

- (I) predisporre le foglie di (a) Lippia citriodora comprendente verbascoside e le foglie di (b) Plantago lanceolata comprendente aucubina; preferibilmente foglie essiccate; seguito da

- (II) miscelare (a) e (b) con il solvente (c) etanolo/acqua avente un grado alcolico compreso nell’intervallo da 10° a 80° alcolici, in cui (a) e (b) sono in rapporto in peso compreso nell’intervallo da 1:6 a 1:15; seguito da

- (III) riscaldare sotto agitazione ad una temperatura compresa nell’intervallo da 50°C a 70°C, per un tempo compreso nell’intervallo da 40 a 120 minuti, ad ottenere un estratto grezzo (d) comprendente una fase solida e una fase liquida; seguito da

- (IV) separare la fase liquida di detto estratto grezzo (d) dalla fase solida di detto estratto grezzo (d), preferibilmente con la tecnica di centrifugazione, ad ottenere una fase liquida isolata (e); seguito da

- (V) concentrare la fase liquida isolata (e) mediante evaporazione parziale del solvente (c) fino ad ottenere un estratto molle (f) avente un residuo secco compreso nell’intervallo da 40% a 60% in peso sul peso totale dell’estratto molle (f); seguito da

- (VI) essiccare detto estratto molle (f) a dare un estratto secco (g), in cui detto estratto secco (g) ha un residuo secco in % in peso compreso nell’intervallo da 90% a 100%, preferibilmente da 98% - 100%, rispetto al peso totale dell’estratto secco (g); in cui detta fase (VI) di essiccare è condotta mediante un granulatore a letto fluido in cui è utilizzato un supporto e detto supporto è miscelato a detto estratto molle (f); e in cui detto supporto è scelto nel gruppo comprendente o, alternativamente, consistente di maltodestrina, gomma arabica, inulina, fibre vegetali, polialcoli, fruttoligosaccaridi, lecitine, destrosio, isomalto e zuccheri di vario genere, preferibilmente maltodestrina.

Per chiarezza, per raggiungere lo scopo della presente invenzione, i componenti (o componenti attivi) dell’estratto di erbe della presente invenzione, quali l’estratto di (a) e l’estratto di (b) titolati in verbascoside e aucubina secondo le % in peso descritte nella presente invenzione, possono essere anche somministrati separatamente (preferibilmente in un intervallo di tempo da 30 minuti a 1 ora) ed in qualunque ordine ma, preferibilmente, l’estratto di (a) e l’estratto di (b) sono somministrati ad un soggetto contemporaneamente, ancora più preferibilmente in una unica composizione per ottenere un effetto più rapido e per facilità di somministrazione.

Quando i componenti (o componenti attivi) dell’estratto di erbe della presente invenzione, quali l’estratto di Lippia citriodora e l’estratto di Plantago lanceolata titolati in verbascoside e aucubina sono somministrati in una unica composizione, detta unica composizione corrisponde alla composizione della presente invenzione.

Se non diversamente specificato, l’espressione composizione o estratto o altro che comprende un componente in una quantità “compresa in un intervallo da x a y” intende che detta componente può essere presente nella composizione o estratto o altro in tutte le quantità presenti in detto intervallo, anche se non esplicitate, estremi dell’intervallo compresi.

PARTE SPERIMENTALE

Poiché la COX-2 è un enzima inducibile coinvolto nell'infiammazione, è stato studiato l'effetto di una composizione secondo l’invenzione (estratto di erbe di Lippia citriodora e Plantago lanceolata titolato in verbascoside (> 5%) e aucubina (> 2%)) verso le espressioni di COX-2 nei neutrofili umani stimolate da LPS (lipopolisaccaride batterico) usando sia la trascrizione inversa della reazione a catena della polimerasi (Reverse Transcription – Polymerase Chain Reaction, in breve RT-PCR) sia un saggio immunologico PGE2.

METODI E MATERIALI

1. Isolamento dei neutrofili

I neutrofili umani sono stati isolati da campioni di sangue intero prelevati da 10 volontari sani (5 uomini e 5 donne, età media: 34,1 ± 3,7 anni) utilizzando il kit di isolamento dei neutrofili umani EasySep<TM >Direct (STEMCELL Technologies, Vancouver, Canada). Dopo l'isolamento, i neutrofili sono stati risospesi ad una concentrazione di 5 * 106 cellule / ml nella soluzione salina bilanciata di Hank (37 °C) contenente 10 mM di HEPES pH 7,4, 1,6 mM di Ca<2+ >e non Mg<2+>.

2. Materiale

- LPS è stato acquistato da InvivoGen (Tolosa, Francia). - L'estratto vegetale in forma granulare secondo l’invenzione titolato in verbascoside (5%) e aucubina (2%) (VERBAScox®, marchio registrato da LaBioTre srl, Tavamelle Val di Pesa, Italia).

- Celecofoxib (un noto inibitore farmacologico di COX -2) è stato acquistato da Sigma-Aidrich (St. Louis, MO, USA).

3. Vitalità cellulare

La vitalità cellulare è stata determinata utilizzando il kit di analisi MTT (Promega, Madison, WI, USA) in base al protocollo del produttore (MTT: bromuro di 3-(4,5-dimetiltiazol-2-il)-2,5-difeniltetrazolio). Al fine di determinare la citotossicità dell'estratto di erbe dell’invenzione, le cellule sono state incubate con soluzioni acquose dell'estratto di erbe dell’invenzione a tre diverse concentrazioni (1%, 3% e 5%) per 24 ore. Le colture del gruppo di controllo non sono state trattate e la loro vitalità è stata fissata a 100%. A scopo di confronto, le cellule sono state anche trattate per 24 ore con una soluzione di celecoxib all'1%, che è stata preparata come descritto in precedenza [Agrawal S, et al.: Solubility enhancement of poorly water soluble celecoxib for parenteral formulations. Int J Pharm Sei (2012) 3: 2325-2336]. Dopo l'incubazione, 10 μl del reagente di etichettatura MTT sono stati aggiunti a ciascun pozzetto. Dopo 4 ore, è stata aggiunta una aliquota da 100 μl di soluzione di solubilizzazione, seguita da un'incubazione di 12 ore. L'assorbanza è stata successivamente misurata con un lettore di micropiastre (Bio-Tek, Winooski, VT, USA) a una lunghezza d'onda di prova di 595 nm e una lunghezza d'onda di riferimento di 690 nm. La densità ottica (OD) è stata calcolata come differenza tra l'assorbanza al riferimento lunghezza d'onda e quella alla lunghezza d'onda del test. La percentuale di vitalità è stata calcolata utilizzando la seguente formula: (OD del campione trattato / OD di controllo) x 100.

4. Incubazioni con LPS in diverse condizioni sperimentali

Gli esperimenti sono stati condotti su terreno RPMI (RPMI: Rosewell Park Memorial Institute, terreno povero di cationi Ca2+ e Mg2+ comunemente usato per le cellule della linea bianca del sangue) integrato con siero bovino fetale all'1% (37 °C, 5% CO2,95% di umidità) dopo aver seminato neutrofili (5x10<5 >cellule / pozzetto) in una piastra a 96 pozzetti. Le seguenti condizioni sono state utilizzate:

1) cellule non trattate (controllo),

2) cellule esposte a 5 μg/mL di LPS per 24 h,

3) cellule esposte a 5 μg/mL di LPS più estratto di erbe dell’invenzione in soluzione 1% per 24 h,

4) cellule esposte a 5 μg/ml di LPS più estratto di erbe dell’invenzione in soluzione al 3% per 24 ore,

5) cellule esposte a 5 μg/ml di LPS più estratto di erbe dell’invenzione in soluzione al 5% per 24 ore e

6) cellule esposto a 5 μg/ml di LPS più celecoxib in soluzione all'1% per 24 ore.

5. Analisi dell'espressione di mRNA COX-1 e COX-2

Per identificare le espressioni di mRNA di COX-1 e COX-2, è stata eseguita RT-PCR. L'RNA totale è stato isolato dai neutrofili usando RNAzoI<TM>B (TEL-TEST, Friendswood, TX, USA). 2 μL di RNA e 2 μL di esameri casuali (Promega) sono stati aggiunti insieme e la miscela è stata riscaldata a 65°C per 10 minuti. 1 μL di trascrittasi inversa AMV (Promega), 5 μL di dNTP 10 mM (Promega), 1 μL di RNasin (Promega) e 5 μL di 10 x tampone AMV RT (Promega) sono stati quindi aggiunti alla miscela. Il volume finale è stato portato a 50 μL con acqua trattata con dietil pirocarbonato e la miscela di reazione è stata quindi incubata a 42°C per 1 ora. L'amplificazione della PCR è stata eseguita in un volume di reazione di 40 μL contenente 1 μL di cDNA appropriato, 1 μL di ciascun set di primer a una concentrazione di 10 pM, 4 μL di 10 x tampone RT, 1 μl di 2,5 mM dNTP e 2 unità di DNA polimerasi Taq (Promega).

La sequenza dei primer per la COX-1 umana era la seguente: 5'- CGCCAGTGAATCCCTGTTGTT-3' e reverse 5'AAGGTGGCATTGACAAACTCC-3'.

La sequenza di primer per la COX-2 umana era la seguente: 5'- CTGGCGCTCAGCCATACAG-3' e reverse 5'-CGCACTTATACTGGTCAAATCCC-3’.

La sequenza dei primer per la gliceridemia 3-fosfato deidrogenasi (GAPDH; gene housekeeping) era la seguente: 5'-GGAGCGAGATCCCTCCAAAAT-3' e reverse 5'-GGCTGTTGTCATACTTCTCATGG-3'.

Le amplificazioni della PCR sono state eseguite utilizzando un sistema GeneAmp® 9600 PCR (Perkin Elmer, Norwalk, CT, USA) alle seguenti condizioni: iniziale denaturazione a 94°C per 5 min, seguita da 40 cicli, ciascuno consistente di denaturazione a 94°C per 30 s, ricottura a 58°C per 30 s, estensione a 72°C per 30 s, con una fase di estensione finale alla fine della procedura a 72°C per 5 min. Le quantità di prodotti RT-PCR per ciascuna delle specie di mRNA alle sei diverse condizioni sperimentali sopra descritte sono state calcolate densitometricamente utilizzando il software Molecular Analyst™ (Bio-Rad, Hercules, CA, USA). Gli esperimenti sono stati condotti in triplicato e i dati quantitativi di espressione genica sono stati normalizzati ai livelli di espressione di GAPDH.

6. Valutazione delle concentrazioni di PGE2

La valutazione delle concentrazioni di PGE2 in ciascun pozzetto alle sei diverse condizioni sperimentali è stata eseguita utilizzando un kit di immunoanalisi enzimatica competitiva PGE2 disponibile in commercio (GE Healthcare, Milwaukee, WI, USA). Tutti gli esperimenti sono stati eseguiti in triplice copia.

7. Analisi dei dati

I calcoli statistici sono stati eseguiti utilizzando GraphPad 7.0 (GraphPad Inc., San Diego, CA, USA). I risultati sono espressi come medie ± deviazioni standard. I dati sono stati analizzati mediante una ANOVA a distanza seguita da test di Dunn post-hoc. Un valore P a due code <0,05 è stato considerato statisticamente significativo.

RISULTATI

1. Vitalità cellulare

Sulla base dei risultati del test MTT, la viabilità delle cellule incubate per 24 ore con l'estratto di erbe dell’invenzione solubilizzato all'1%, 3% e 5% delle concentrazioni era 91 ± 3%, 87 ± 5% e 81 ± 7 % del valore di controllo (100%) osservato nelle celle non trattate. La vitalità cellulare delle cellule incubate con celecoxib 1% era 90 ± 2%.

Complessivamente, i risultati del test MTT hanno rivelato che l'estratto di erbe dell’invenzione non esercitava alcuna importante citotossicità nei neutrofili umani.

2. Analisi dell'espressione COX-1 e COX-2 mediante RT-PCR

L'analisi RT-PCR dei livelli di mRNA di COX-1 e COX-2 è stata eseguita al fine di fornire una stima dei relativi livelli di espressione di questi geni alle sei diverse condizioni sperimentali sopra delineate. I livelli di mRNA di COX-1 e COX-2 in cellule non trattate sono stati usati come valore di controllo e fissati a 100 unità arbitrarie (a.u.).

Dopo il trattamento con 5 μg/ml di LPS per 24 ore, l'espressione di COX-1 è stata di 108 ± 10 a.u..

I livelli di mRNA di COX-1 dopo esposizione a 5 μg/ml di LPS più estratto di erbe dell’invenzione a concentrazioni dell'1%, 3% e 5% per 24 ore erano 111 ± 8, 96 ± 11 e 91 ± 9 a.u., rispettivamente.

I livelli di espressione delle cellule esposte a 5 μg/ml di LPS più celecoxib all'1% per 24 ore erano 116 ± 4 a.u.. Tutti questi cambiamenti non erano statisticamente significativi, suggerendo che i trattamenti non influenzano l'espressione di COX-1.

Il livello di mRNA di COX-2 dopo il trattamento con 5 μg /ml di LPS per 24 ore è stato significativamente aumentato a 971 ± 49 a.u.

I livelli di mRNA di COX-2 dopo esposizione a 5 μg/ml di LPS più estratto di erbe dell’invenzione a concentrazioni dell'1%, 3% e 5% per 24 ore erano 702 ± 51, 536 ± 63 e 449 ± 46 a.u., rispettivamente (tutti P <0,001 versus trattamento con 5 μg/ml di LPS).

I livelli di espressione delle cellule esposte a 5 μg/ml di LPS più celecoxib all'1% per 24 ore erano 283 ± 37 a.u. (Figura 3; P <0,001 verso estratto di erbe dell’invenzione alla concentrazione del 5%).

3. Immunodosaggio PGE2

I risultati del saggio immunologico PGE2 hanno rivelato che, dopo 24 ore di esposizione a LPS, la quantità di PGE2 è aumentata da 5,12 ± 1,24 pg/pozzetto a 66,21 ± 3,67 pg/pozzetto.

I livelli di PGE2 dopo esposizione a 5 μg/ml di LPS più estratto di erbe dell’invenzione a concentrazioni dell'1%, 3% e 5% per 24 ore erano 46.29 ± 3.10 pg/pozzetto, 39.83 ± 2.97 pg/pozzetto e 32.11 ± 3.89 pg/pozzetto (tutti P <0,001 verso trattamento con 5 μg/ml LPS).

Concentrazioni di PGE2 a 5 μg/ml di LPS più celecoxib all'1% per 24 ore erano 19,21 ± 2,39 pg/pozzetto (Figura 4; P <0,001 verso estratto di erbe dell’invenzione alla concentrazione del 5%).

DISCUSSIONE DEI RISULTATI

Una maggiore espressione di COX-2 porta ad una maggiore produzione di PGE2, che a sua volta è strettamente associata all'insorgenza di infiammazione e dolore. I principali risultati di queste aree di studio sono i seguenti:

l) l'estratto di erbe dell’invenzione titolato in verbascoside e aucubina non è significativamente citotossico come mostrato dal dosaggio MTT;

2) l'estratto non inibisce significativamente la COX-1, mentre è in grado di sopprimere l'iperespressione di COX-2 indotta da LPS a livello di mRNA nei neutrofili umani;

3) in un modello sperimentale infiammatorio in vitro, l'effetto dell'estratto di erbe dell’invenzione con una concentrazione del 5% era paragonabile a quello ottenuto con celecoxib all'1%, sebbene, in termini di riduzione assoluta e relativa dell'espressione di mRNA di COX-2 e produzione di PGE2 nei neutrofili umani, celecoxib ha sovraperformato significativamente l'estratto di erbe dell’invenzione.

Questi risultati dimostrano che l’estratto di erbe dell’invenzione è in grado di inibire sia l'espressione di COX-2 che la sintesi di PGE2 in un tipo di cellula (neutrofili umani) che svolge un ruolo chiave nell'infiammazione acuta. In altre parole, questi risultati dimostrano che l'estratto di erbe dell’invenzione titolato in verbascoside e aucubina è sicuro (non citotossico) e può esercitare significativi effetti anti-infiammatori e analgesici agendo come un inibitore specifico della COX-2.

Conseguentemente, i dati sperimentali della presente descrizione dimostrano che verbascoside e aucubina contenuti nell’estratto di erbe dell’invenzione esercitano effetti sinergici o di potenziamento reciproco contro l'espressione di COX-2 in stati infiammatori o di condizioni di dolore.

Claims (10)

1. RIVENDICAZIONI 1. Un estratto di erbe comprendente o, alternativamente, consistente di un estratto di almeno una pianta del genere Aloysia e un estratto di almeno una pianta del genere Plantago, in cui detto estratto di erbe comprende in % in peso verbascoside compreso nell’intervallo da 1% a 50% e aucubina compreso nell’intervallo da 0,1% a 30%, in cui dette % sono rispetto al peso totale dell’estratto di erbe.
2. 2. L’estratto di erbe secondo la rivendicazione 1, in cui detta almeno una pianta del genere Aloysia è scelta dal gruppo comprendente o, alternativamente, consistente di Lippia citriodora (Palau) Kunth, Verbena Officinalis L. e una loro miscela, e in cui detta almeno una pianta del genere Plantago è scelta dal gruppo comprendente o, alternativamente, consistente di Plantago lanceolata L., Plantago major L. e una loro miscela; preferibilmente in cui detta almeno una pianta del genere Aloysia è Lippia citriodora (Palau) Kunth e in cui detta almeno una pianta del genere Plantago è Plantago lanceolata L.; più preferibilmente in cui detto estratto di erbe comprende in % in peso verbascoside compreso nell’intervallo da 2% a 25% e aucubina compreso nell’intervallo da 0,5% a 15%, rispetto al peso totale dell’estratto di erbe.
3. 3. L’estratto di erbe secondo la rivendicazione 1 o 2, in cui detto estratto di erbe è un estratto secco in forma granulare, in cui detto estratto secco ha un residuo secco in % in peso compreso nell’intervallo da 90% a 100%, rispetto al peso totale dell’estratto secco; preferibilmente da 95% a 100%; più preferibilmente da 98% a 100%.
4. 4. Una composizione comprendente l’estratto di erbe secondo una qualsiasi delle rivendicazioni da 1 a 3 e, opzionalmente, almeno un additivo e/o eccipiente di grado alimentare o farmaceutico.
5. 5. La composizione secondo la rivendicazione 4 per uso come anti-infiammatorio, analgesico e/o antispasmodico in un soggetto avente necessità.
6. 6. La composizione secondo la rivendicazione 4 o 5, in cui la composizione è per uso come anti-infiammatorio in metodi di trattamento di patologie infiammatorie muscolo-scheletriche, reumatologiche, articolari e in post-chirurgia e di disturbi e/o sintomi ad essi associati, preferibilmente osteoartrite, artrite reumatoide e spondilite anchilosante; e/o in cui la composizione è per uso come analgesico in metodi di trattamento di mal di denti, dismenorrea, dolori postoperatori, dolori cervicali, dolori artritici, dolori o crampi addominali, dolori muscolo-scheletrici, dolori post-parto, dolori da trauma sportivo o contusione e dolori generici.
7. 7. Un procedimento per la preparazione dell’estratto di erbe secondo una qualsiasi delle rivendicazioni da 1 a 3 comprendente le fasi di: (I) predisporre in un impianto di estrazione (a) almeno una pianta del genere Aloysia comprendente verbascoside, preferibilmente scelta dal gruppo comprendente o, alternativamente, consistente di Lippia citriodora (Palau) Kunth, Verbena Officinalis L. e una loro miscela, e/o (b) almeno una pianta del genere Plantago comprendente aucubina, preferibilmente scelta dal gruppo comprendente o, alternativamente, consistente di Plantago lanceolata L., Plantago major L. e una loro miscela; (II) miscelare (a) e/o (b) con un solvente idroalcolico (c), in cui il rapporto in peso [(a) e/o (b)]:(c) è compreso nell’intervallo da 1:1 a 1:25, preferibilmente da 1:3 a 1:20, più preferibilmente da 1:6 a 1:15; (III) riscaldare sotto agitazione ad una temperatura compresa nell’intervallo da 30°C a 90°C, preferibilmente da 40°C a 80°C, più preferibilmente da 50°C a 70°C, per un tempo compreso nell’intervallo da 20 a 240 minuti, preferibilmente da 30 a 180 minuti, più preferibilmente da 40 a 120 minuti, ad ottenere un estratto grezzo (d) comprendente una fase solida e una fase liquida; (IV) separare la fase liquida di detto estratto grezzo (d) dalla fase solida di detto estratto grezzo (d) ad ottenere una fase liquida isolata (e); (V) concentrare la fase liquida isolata (e).
8. 8. Il procedimento secondo la rivendicazione 7, - in cui la fase (V) di concentrare la fase liquida isolata (e) è eseguita mediante rimozione parziale del solvente (c) fino ad ottenere un estratto molle (f) avente un residuo secco compreso nell’intervallo da 20% a 80% in peso rispetto al peso totale dell’estratto molle, preferibilmente da 30% a 70%, più preferibilmente da 40% a 60%; e - in cui la fase (V) è seguita dalla fase (VI) di essiccare detto estratto molle (f) a dare un estratto secco (g), in cui detto estratto secco (g) ha un residuo secco in % in peso compresa nell’intervallo da 90% a 100% rispetto al peso totale dell’estratto, preferibilmente da 95% a 100%, più preferibilmente da 98% a 100%.
9. 9. Il procedimento secondo la rivendicazione 8, in cui in detta fase (VI) di essiccare è condotta mediante un granulatore a letto fluido usando un supporto in cui detto supporto è miscelato a detto estratto molle (f) a dare un estratto secco in forma granulare (h); preferibilmente in cui detto supporto è scelto nel gruppo comprendente o, alternativamente, consistente di maltodestrina, gomma arabica, inulina, fibre vegetali, polialcoli, fruttoligosaccaridi, lecitine, destrosio, isomalto e zuccheri di vario genere.
10. 10. Il procedimento secondo una qualsiasi delle rivendicazioni da 7 a 9, in cui - in detta fase (I) di predisporre, sono predisposte le foglie di (a) Lippia citriodora comprendente verbascoside e/o foglie di (b) Plantago lanceolata comprendente aucubina; preferibilmente foglie essiccate; e/o - in cui in detta fase (II) di miscelare, il solvente idroalcolico (c) è una miscela etanolo/acqua avente un grado alcolico compreso nell’intervallo da 10° a 80° alcolici; preferibilmente da 20°-70° alcolici.