ES2894228T3

ES2894228T3 - Inhibidores de la transcriptasa inversa de nucleósidos sustituidos en 4'

Info

Publication number: ES2894228T3
Application number: ES15715934T
Authority: ES
Inventors: Vinay Girijavallabhan; David Olsen; Zhibo Zhang; Jianmin Fu; Bing-Yu Tang
Original assignee: Merck Sharp and Dohme LLC
Current assignee: Merck Sharp and Dohme LLC
Priority date: 2014-03-28
Filing date: 2015-03-26
Publication date: 2022-02-14
Anticipated expiration: 2035-03-26
Also published as: PT3122752T; HUE056913T2; EP3122752B1; AU2017225090B2; CR20160451A; US9777035B2; PH12016501897B1; JP6182680B2; DK3122752T3; SG11201608031PA; ZA201606413B; MA39809A; SI3122752T1; MX2016012659A; US20150274767A1; RS62418B1; AR130699A2; WO2015148746A1; CY1124829T1; US20180002366A1

Abstract

Un compuesto de Fórmula éstructural II **(Ver fórmula)** o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo, en donde: X es O; Y es -C=CH; R1 es -H, **(Ver fórmula)** o una modificación profármaco del mono, di o trifosfato; R2 es -H; R3 es -H; R4 es -NH2; R5 es -H, -Cl, -F o -NH2, y; R9 es -H, -F, -Cl, -I, -Br o -CH3.

Description

DESCRIPCIÓN

Inhibidores de la transcriptasa inversa de nucleósidos sustituidos en 4'

Antecedentes de la invención

El retrovirus denominado virus de la inmunodeficiencia humana (VIH), particularmente las cepas conocidas como VIH tipo 1 (VIH-1) y tipo 2 (VIH-2), se han vinculado desde el punto de vista etiológico a la enfermedad inmunosupresora conocida como síndrome de inmunodeficiencia adquirida (SIDA). Los individuos seropositivos para el VIH son inicialmente asintomáticos, pero normalmente desarrollan el complejo relacionado con el SIDA (CRS), seguido del SIDA. Los individuos afectados presentan inmunosupresión grave, lo que los hace altamente susceptibles a infecciones oportunistas debilitantes y, en última instancia, mortales. La replicación del VIH por parte de la célula huésped requiere la integración del genoma vírico en el ADN de la célula huésped. Dado que el VIH es un retrovirus, el ciclo de replicación del VIH requiere la transcripción del genoma de ARN vírico en ADN a través de una enzima conocida como transcriptasa inversa (RT).

La transcriptasa inversa tiene tres funciones enzimáticas conocidas: La enzima actúa como una ADN polimerasa ARN dependiente, como una ribonucleasa y como una ADN polimerasa ADN dependiente. En su papel como una ADN polimerasa ARN dependiente, la RT transcribe una copia de ADN monocatenario del a Rn vírico. Como una ribonucleasa, la RT destruye el ARN vírico original y libera el ADN que se acaba de producir a partir del ARN original. Y como una ADN polimerasa ADN dependiente, la RT produce una segunda, cadena de ADN complementaria, utilizando la primera cadena de ADN como molde. Las dos hebras forman ADN de doble hebra, que se integra en el genoma de la célula huésped mediante la enzima integrasa.

Se sabe que los compuestos que inhiben las funciones enzimáticas de la RT del VIH inhibirán la replicación del VIH en las células infectadas. Estos compuestos son útiles en la profilaxis o el tratamiento de la infección por VIH en los seres humanos. Entre los compuestos aprobados para su uso en el tratamiento de la infección por VIH y el SIDA se encuentran los inhibidores de la RT de nucleósidos (NRTI) tales como 3'-azido-3'-desoxitimidina (AZT), 2',3'-didesoxiinosina (ddI), 2',3'- didesoxicitidina (ddC), d4T, 3TC, abacavir, emtricitabina y tenofovir disoproxil fumarato, así como inhibidores de RT no nucleósidos (nNRTI) como nevirapina, delavirdina y efavirenz.

Aunque cada uno de los fármacos anteriores es eficaz en el tratamiento de la infección por VIH y el SIDA, sigue existiendo la necesidad de desarrollar fármacos antivíricos para el VIH que incluyan inhibidores de la RT adicionales. Un problema particular es el desarrollo de cepas mutantes del VIH que sean resistentes a los inhibidores conocidos. El uso de antirretrovirales para tratar el SIDA a menudo conduce a virus que son menos sensibles a los inhibidores. Normalmente, esta resistencia es el resultado de mutaciones que se producen en el segmento de la transcriptasa inversa del gen pol. El uso continuado de compuestos antivíricos para prevenir la infección por VIH inevitablemente dará como resultado la aparición de nuevas cepas resistentes del VIH. En consecuencia, existe una necesidad continua de nuevos inhibidores de la RT que sean eficaces frente a las cepas mutantes del VIH.

Sumario de la invención

La presente invención está dirigida a derivados de nucleósidos sustituidos en 4' y estos derivados para su uso en la inhibición de la transcriptasa inversa del VIH, la profilaxis de la infección por VIH, el tratamiento de la infección por VIH y la profilaxis, el tratamiento y el retraso del inicio o la progresión del S iDa y/o el CRS.

Descripción detallada de la invención

La presente invención se refiere a compuestos que tienen Fórmula estructural II o una sal farmacéuticamente aceptable de los mismos:

en donde:

X es O;

Y es -CeCH;

R1 es -H,

o una modificación profármaco del mono, di o trifosfato;

R2 es -H;

R3 es -H;

R4 es -NH2;

R5 es -H, -Cl, -F o -NH2;

R8 es -H; y

R9 es -H, -F, -Cl, -I, -Br o -CH3.

En otras realizaciones de esta invención son compuestos de Fórmula II o una sal farmacéuticamente aceptable de los mismos, en donde

(a) R1 es -H; o

(b) R1 is

o

(c) R1 es

En otras realizaciones de esta invención son compuestos de Fórmula II o una sal farmacéuticamente aceptable de los mismos, en donde:

o (b) R1 es

o una modificación profármaco del mono, di o trifosfato;

o (c) R1 es

o una modificación profármaco del trifosfato;

o (d) R1 es una modificación profármaco de

Todas las Fórmulas estructurales, realizaciones y clases de las mismas descritas en el presente documento incluyen las sales farmacéuticamente aceptables de los compuestos definidos en el mismo. La referencia a los compuestos de Fórmula II en el presente documento abarca los compuestos de todas las realizaciones y clases de los mismos. La referencia a los compuestos de esta invención como aquellos de una fórmula o realización específica, por ejemplo, Fórmula II o realizaciones de la misma, o cualquier otra fórmula estructural genérica o compuesto específico descrito o reivindicado en el presente documento, pretende incluir el compuesto o compuestos específicos que estén dentro del alcance de la Fórmula o la realización, incluidas las sales de los mismos, particularmente sales farmacéuticamente aceptables, solvatos (incluidos los hidratos) de dichos compuestos, y las formas de sales solvatadas de los mismos, cuando dichas formas sean posibles, a menos que se especifique lo contrario.

La presente invención incluye cada uno de los Ejemplos descritos en el presente documento y sales farmacéuticamente aceptables de los mismos. La invención también incluye composiciones farmacéuticas que comprenden una cantidad eficaz de un compuesto de la invención, o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo, y un transportador farmacéuticamente aceptable.

Cuando cualquier variable (por ejemplo, R7, RX, o RY) aparece más de una vez en cualquier constituyente o en la Fórmula II o en cualquier otra fórmula que representa y describe compuestos de la presente invención, su definición en cada caso es independiente de su definición en cualquier otro caso. Además, solo se permiten las combinaciones de sustituyentes y/o variables en caso de que dichas combinaciones den como resultado compuestos estables.

A menos que se indique expresamente lo contrario, la sustitución con un sustituyente nombrado se permite en cualquier átomo en un anillo (por ejemplo, cicloalquilo, arilo o heteroarilo), con la condición de que dicha sustitución esté permitida químicamente y dé como resultado un compuesto estable.

Como se reconocería por un experto en la materia, determinados compuestos de la presente invención pueden existir en forma de tautómeros. Todas las formas tautoméricas de estos compuestos, tanto asiladas individualmente como en mezclas, están dentro del alcance de la presente invención. Por ejemplo, en casos donde un sustituyente- OH esté permitido en un anillo heteroaromático y sea posible tautomerismo ceto-enol, se entiende que el sustituyente puede estar presente, de hecho, en su totalidad o en parte, en la forma oxo (=O).

Un compuesto “estable” es un compuesto que puede prepararse y aislarse y cuya estructura y propiedades permanecen o puede hacerse que permanezcan esencialmente sin cambios durante un periodo de tiempo suficiente para permitir el uso del compuesto para los propósitos descritos en el presente documento (por ejemplo, administración terapéutica o profiláctica a un sujeto). Los compuestos de la presente invención se limitan a compuestos estables incluidos por la Fórmula II y sus realizaciones.

Los compuestos de Fórmula II pueden tener uno o más centros quirales (asimétricos). La presente invención abarca todas las formas estereoisoméricas de los compuestos de Fórmula II. Los centros de asimetría que están presentes en los compuestos de Fórmula II pueden todos independientemente entre sí tener configuración (R) o (S). Cuando los enlaces a un carbono quiral se representan como líneas rectas en las fórmulas estructurales de la invención, o cuando el nombre de un compuesto se recita sin una designación quiral (R) o (S) para un carbono quiral, se entiende que tanto las configuraciones (R) y (S) de cada carbono quiral, y por lo tanto cada enantiómero o diastereómero y mezclas de los mismos, están abarcados dentro de la Fórmula o por el nombre. La producción de estereoisómeros específicos o mezclas de los mismos puede identificarse en los Ejemplos donde se obtuvieron dichos estereoisómeros o mezclas, pero esto de ninguna manera limita la inclusión de todos los estereoisómeros y mezclas de los mismos dentro del ámbito de la presente invención.

La invención incluye todos los posibles enantiómeros y diastereómeros y mezclas de dos o más estereoisómeros, por ejemplo mezclas de enantiómeros y/o diastereómeros, en todas las proporciones. Por lo tanto, los enantiómeros son un objeto de la invención en forma enantioméricamente pura, tanto antípodas levógiras como dextrógiras, en forma de racematos y en forma de mezclas de los dos enantiómeros en todas las proporciones. En el caso de una isomería cis/trans, la invención incluye tanto la forma cis como la forma trans así como mezclas de estas formas en todas las proporciones. La preparación de estereoisómeros individuales se puede llevar a cabo, si se desea, por separación de una mezcla por métodos habituales, por ejemplo, mediante cromatografía o cristalización, mediante el uso de materiales de partida estereoquímicamente uniformes para la síntesis o mediante síntesis estereoselectiva. Opcionalmente, puede realizarse una derivatización antes de una separación de estereoisómeros. La separación de una mezcla de estereoisómeros puede llevarse a cabo en una etapa intermedia durante la síntesis de un compuesto de Fórmula II o puede realizarse en un producto racémico final. La estereoquímica absoluta puede determinarse por cristalografía por rayos X, de productos cristalinos o intermedios cristalinos que se derivatizan, si es necesario, con un reactivo que contiene un centro estereogénico de configuración conocida. Como alternativa, la estereoquímica absoluta puede determinarse por análisis de espectroscopía de dicroísmo circular vibracional (VCD). La presente invención incluye todos estos isómeros, así como sales, solvatos (incluyendo hidratos) y sales solvatadas de dichos racematos, enantiómeros, diastereómeros y tautómeros y mezclas de los mismos.

Los átomos en un compuesto de Fórmula II mostrar sus abundancias isotópicas naturales o uno o más de los átomos pueden estar artificialmente enriquecidos en un isótopo particular que tiene el mismo número atómico, pero una masa atómica o número másico diferente de la masa atómica o número másico que se encuentra predominantemente en la naturaleza. La presente invención pretende incluir todas las variaciones isotópicas adecuadas de los compuestos de la Fórmula II génerica. Por ejemplo, diferentes formas isotópicas de hidrógeno (H) incluyen protio (1H) y deuterio (2H). El protio es el isótopo de hidrógeno predominante que se encuentra en la naturaleza. El enriquecimiento en deuterio puede proporcionar ciertas ventajas terapéuticas, tales como aumentar la semivida in vivo o reducir los requisitos de dosificación, o puede proporcionar un compuesto útil como patrón para la caracterización de muestras biológicas. Los compuestos de Fórmula II genérica enriquecidos isotópicamente se pueden preparar sin una experimentación excesiva mediante técnicas convencionales bien conocidas de los expertos en la materia o mediante procesos análogos a los descritos en los Esquemas y Ejemplos del presente documento usando reactivos y compuestos intermedios adecuados isotópicamente enriquecidos.

Los compuestos pueden administrarse en forma de sales farmacéuticamente aceptables. El término "sal farmacéuticamente aceptable" se refiere a una sal que no es indeseable desde el punto de vista biológico o de otro modo (por ejemplo, no es tóxica ni perjudicial para el receptor de la misma).

Cuando los compuestos de Fórmula II contienen uno o más grupos ácidos o básicos, la invención también incluye las correspondientes sales farmacéuticamente aceptables. Por lo tanto, los compuestos de Fórmula II que contienen grupos ácidos (por ejemplo, -COOH o un grupo fenólico) se pueden usar de acuerdo con la invención como, por ejemplo pero sin limitación, sales de metales alcalinos, sales de metal alcalinotérreo o sales de amonio. Los ejemplos de tales sales incluyen, pero sin limitación, sodium salts, sales de potasio, sales de calcio, sales de magnesio o sales con amoniaco o aminas orgánicas, tales como, por ejemplo, etilamina, etanolamina, trietanolamina o aminoácidos. Compuestos de Fórmula II que contienen uno o más grupos básicos, es decir, grupos que pueden estar protonados, se pueden usar de acuerdo con la invención en forma de sus sales de adición de ácidos con ácidos orgánicos o inorgánicos como, por ejemplo pero sin limitación, sales con cloruro de hidrógeno, bromuro de hidrógeno, ácido fosfórico, ácido sulfúrico, ácido nítrico, ácido bencenosulfónico, ácido metanosulfónico, ácido p-toluenosulfónico, ácidos naftalenodisulfónicos, ácido oxálico, ácido acético, ácido trifluoroacético, ácido tartárico, ácido láctico, ácido salicílico, ácido benzoico, ácido fórmico, ácido propiónico, ácido piválico, ácido dietilacético, ácido malónico, ácido succínico, ácido pimélico, ácido fumárico, ácido maleico, ácido málico, ácido sulfamínico, ácido fenilpropiónico, ácido glucónico, ácido ascórbico, ácido isonicotínico, ácido cítrico, ácido adípico, etc. Si los compuestos de Fórmula II contienen simultáneamente grupos ácidos y básicos en la molécula, la invención también incluye, además de las formas de sal mencionadas, sales internas o betaínas (zwitteriones). Pueden obtenerse sales a partir de los compuestos de Fórmula II métodos habituales que son conocidos por el experto en la materia, por ejemplo, mediante combinación con un ácido o base orgánica o inorgánica en un disolvente o dispersante, o mediante intercambio aniónico o catiónico de otras sales. La presente invención también incluye todas las sales de los compuestos de Fórmula II que, debido a su baja compatibilidad fisiológica, no son directamente adecuadas para su uso en productos farmacéuticos, pero que pueden usarse, por ejemplo, como intermedios para reacciones químicas o para la preparación de sales farmacéuticamente aceptables.

Otra realización de la presente invención es un compuesto de Fórmula II en donde el compuesto o su sal está en una forma sustancialmente pura. Como se usa en el presente documento, "sustancialmente puro" significa adecuadamente que al menos aproximadamente el 60 % en peso, normalmente al menos aproximadamente el 70 % en peso, preferentemente al menos aproximadamente el 80 % en peso, más preferentemente al menos aproximadamente el 90 % en peso (por ejemplo, de aproximadamente el 90 % en peso a aproximadamente el 99 % en peso), incluso más preferentemente al menos aproximadamente el 95 % en peso (por ejemplo, de aproximadamente el 95 % en peso a aproximadamente el 99% en peso, o de aproximadamente el 98% en peso al 100% en peso), y mucho más preferentemente al menos aproximadamente el 99 % en peso (por ejemplo, el 100 % en peso) de un producto que contiene un compuesto de Fórmula II o su sal (por ejemplo, el producto aislado de una mezcla de reacción que proporciona el compuesto o sal) consiste en el compuesto o sal. El nivel de pureza de los compuestos y sales puede determinarse utilizando un método convencional de análisis, tal como cromatografía de capa fina, electroforesis en gel, cromatografía líquida de alto rendimiento y/o espectrometría de masas. Si se emplea más de un método de análisis y los métodos proporcionan diferencias experimentalmente significativas en el nivel de pureza determinado, entonces rige el método que proporcione el nivel más alto de pureza. Un compuesto o sal con una pureza del 100 % es uno que está exento de impurezas detectables según se determina por un método de análisis convencional. Con respecto a un compuesto de la invención que tiene uno o más centros asimétricos y que puede aparecer como mezclas de estereoisómeros, un compuesto sustancialmente puro ser tanto una mezcla sustancialmente pura de los estereoisómeros como un enantiómero o diastereómero individual sustancialmente puro.

Además, los compuestos de la presente invención pueden existir en forma amorfa y/o una o más formas cristalinas, y como tal, todas las formas amorfas y cristalinas y mezclas de las mismas de los compuestos de Fórmula II se pretende que estén incluidas dentro del alcance de la presente invención. De manera adicional, algunos de los compuestos de la presente invención pueden formar solvatos con agua (es decir, un hidrato) o disolventes orgánicos habituales. Dichos solvatos e hidratos, particularmente los solvatos e hidratos farmacéuticamente aceptables, de los presentes compuestos están igualmente incluidos dentro del alcance de esta invención, junto con las formas anhidras y no solvatadas.

Se entiende que un compuesto de Fórmula II (o cualquier realización del mismo y sus sales farmacéuticamente aceptables) en donde, por ejemplo, R1 es -H, o una modificación profármaco del mono, di o trifosfato, puede convertirse intracelularmente//n vivo mediante uno o más mecanismos (por ejemplo, reacciones químicas catalizadas por enzimas) en el nucleósido 5' trifosfato (es decir, en donde R1 es -P(O)(OH)-O-P(O)(OH)-O-P(O)(OH)2). Sin desear quedar ligado a teoría particular alguna, generalmente se entiende que el nucleósido 5 'trifosfato es responsable de inhibir la enzima RT del VIH y de la actividad antiviral resultante después de la administración del compuesto de Fórmula II a un sujeto.

Por consiguiente, en el presente documento se describen profármacos de los compuestos de la invención. Se proporciona un análisis de los profármacos en T. Higuchi y V. Stella, Pro-drugs as Novel Delivery Systems (1987) 14 de la serie del Simposio A.C.S. y en B/orevers/ble Carr/ers in Drug Des/gn, (1987) Edward B. Roche, ed., American Pharmaceutical Association and Pergamon Press. El término "profármaco" en el presente documento significa un compuesto (por ejemplo, un precursor de un fármaco), que puede estar en forma de una sal farmacéuticamente aceptable, que se transforma intracelularmente//n vivo para proporcionar un derivado de nucleósido sustituido en 4' que es un inhibidor de la transcriptasa inversa del VIH. Un nucleósido 5'trifosfato es un ejemplo de un derivado de nucleósido sustituido en 4'. La transformación in v/vo puede ocurrir por varios mecanismos, por ejemplo, una reacción química catalizada por enzimas, una reacción química metabólica y/o una reacción química espontánea (por ejemplo, solvolisis), tales como, por ejemplo, a través de hidrólisis en la sangre. Los profármacos de los compuestos de fórmula (II) se convierten, debido a la conversión intracelular//n vivo, en un derivado de nucleósido sustituido en 4' de un compuesto de fórmula II que es un inhibidor de la transcriptasa inversa del VIH. Por ejemplo, los derivados de nucleósidos sustituidos en 4' de fórmula II incluyen, pero sin limitación, compuestos de Fórmula II en donde:

a) R1 es -P(O)(OH)-O-P(O)(OH)-O-P(O)(OH)2;

b) . R1 es -P(O)(OH)-O-P(O)(OH)-O-P(O)(OH)2 y R2 es -H; y/o

c) R1 es -P(O)(OH)-O-P(O)(OH)-O-P(O)(OH)2, R2 es -H, R4 es -NH2 y R5 es -H o -NH2.

Los profármacos de compuestos de Fórmula II pueden exhibir una mayor solubilidad, absorción y/o lipofilicidad en comparación con los compuestos por si mismos, resultando por tanto una biodisponibilidad y eficacia aumentadas. Cuando el compuesto contiene, por ejemplo, un grupo hidroxi, el profármaco puede ser un derivado del grupo hidroxi, tal como un éster (-OC(O)R), un éster de carbonato (-OC(O)OR), un éster fosfato (-O-P(=O)(OH)2), un éter (-OR) o un profármaco monofosfato, tal como un fosforamidato (puede convertirse in vivo al nucleósido monofosfato correspondiente).

Por ejemplo, si un compuesto de Fórmula II contiene un grupo funcional alcohol, un profármaco puede formarse mediante el reemplazo de uno o más de los átomos de hidrógeno de los grupos alcohol por un grupo tal como, por ejemplo, alcanoiloximetilo (C1-C6), 1-(alcanoiloxi (C1-C6))etilo, 1-metil-1-(alcanoiloxi (C1-C6))etilo, alcoxicarboniloximetilo (C1-C6), N-alcoxicarbonilaminometilo (C1-C6), succinoílo, alcanoílo (C1-C6), a-amino-alquilo (C1-C4), a-amino-alquileno (C1-C4)-arilo, arilacilo y a-aminoacilo, o a-aminoacil-a-aminoacilo, en donde cada grupo aaminoacilo se selecciona independientemente entre los L-aminoácidos de origen natural o glicosilo (el radical resultante de la retirada de un grupo hidroxilo de la forma de hemiacetal de un carbohidrato).

La expresión "modificación profármaco del mono, di o trifosfato" como se usa en el presente documento incluye, pero sin limitación, profármacos derivados del alcohol 5', tales como -P(O)(-O-alquilo C1-C6)2; -P(O)(-NH-(grupo aaminoacilo))(-O-arilo), conocidos como profármacos tipo "McGuigan"; -P(O)(-O-(alquilen C1-C6)-S-acil)(-NH-arilalquilo); profármacos S-acil-2-tioetilo (SATE); un éster de fosfato cíclico que forma un puente entre dos grupos hidroxilo de ribosa, tales como:

en donde el éster de fosfato cíclico forma un puente entre el grupo 3'-OH y los grupos 5'-OH; y los descritos en la Patente US n.° 7.879.815; Puvlicaciones internacionales n.° WO2005/003047, WO2008/082602, WO2010/0081628, WO2010/075517 y WO2010/075549; Mehellou, Chem. Med. Chem., 5:1841-1842 (2005); Bobeck et al., Antiviral Therapy 15:935-950 (2010); Furman et al., Future Medicinal Chemistry, 1:1429-1452 (2009); y Erion, Microsomes and Drug Oxidations, Proceedings of the International Symposium, 17a, Saratoga Springs, NY, Estados Unidos, 6-10 de julio, 2008, 7-12 (2008).

Si un derivado sustituido en 4' incorpora un grupo funcional amina, puede formarse un profármaco mediante el reemplazo de un átomo de hidrógeno en el grupo amina por un grupo tal como, por ejemplo, R-carbonil-, RO-carbonil-, NRR'-carbonil- en donde R y R' son cada uno independientemente alquilo (C1-C10), cicloalquilo (C3-C7), bencilo, un a-aminoacilo natural, -C(OH)C(O)OY¹en donde Y¹es H, alquilo (C1-C6) o bencilo, -C(OY²)Y³en donde Y²es alquilo (C1-C4) e Y³es alquilo (C1-C6); carboxi alquilo (C1-C6); amino-alquilo (C1-C4) o mono-N- o di-N,N-alquilaminoalquilo (C1-C6); -C(Y⁴)Y⁵en donde Y⁴es H o metilo e Y⁵es mono-N- o di-N,N-alquilamino morfolino (C1-C6); piperidin-1-ilo o pirrolidin-1-ilo, y similares.

Los ésteres farmacéuticamente aceptables de los presentes compuestos incluyen los siguientes grupos: (1) ésteres de ácido carboxílico que se obtienen mediante esterificación del grupo hidroxi de un compuesto hidroxilo, en los que el resto no carbonilo de la porción ácido carboxílico de la agrupación éster se selecciona entre alquilo de cadena lineal o ramificada (por ejemplo, metilo, etilo, n-propilo, isopropilo, t-butilo, sec-butilo o n-butilo), alcoxialquilo (por ejemplo, metoximetilo), arilo (por ejemplo, bencilo), ariloxialquilo (por ejemplo, fenoximetilo), arilo (por ejemplo, fenilo opcionalmente sustituido con, por ejemplo, halógeno, alquilo C1-4, -O-(alquilo C1-4) o amino); (2) ésteres de sulfonato, tales como alquil- o aralquilsulfonilo (por ejemplo, metanosulfonilo); (3) ésteres de aminoácidos (por ejemplo, L-valilo o L-isoleucilo); (4) ésteres de fosfonato y (5) ésteres de mono, di o trifosfato. Los ésteres de fosfato pueden esterificarse adicionalmente mediante, por ejemplo, un alcohol C1-20 o un derivado reactivo del mismo, o mediante un 2,3-di-acil (C6--24) glicerol.

Si un derivado de desoxirribosa sustituido en 4' contiene un grupo funcional ácido carboxílico, un profármaco puede comprender un éster formado mediante el reemplazo del átomo de hidrógeno del grupo ácido por un grupo tal como, por ejemplo, alquilo (Cr Ca), alcanoiloximetilo (C2-C12), 1 -(alcanoiloxi)etilo que tiene de 4 a 9 átomos de carbono, 1-metil-1-(alcanoiloxi)-etilo que tiene de 5 a 10 átomos de carbono, alcoxicarboniloximetilo que tiene de 3 a 6 átomos de carbono, 1-(alcoxicarboniloxi)etilo que tiene de 4 a 7 átomos de carbono, 1-metil-1-(alcoxicarboniloxi)etilo que tiene de 5 a 8 átomos de carbono, N-(alcoxicarbonil)aminometilo que tiene de 3 a 9 átomos de carbono, 1-(N-(alcoxicarbonil)amino)etilo que tiene de 4 a 10 átomos de carbono, 3-ftalidilo, 4-crotonolactonilo, gamma-butirolacton-4-ilo, di-N,N-alquilamino (C1-C2)-alquilo (C2-C3) (tal como p-dimetilaminoetilo), carbamoil-alquilo (C1-C2), N,N-di alquilcarbamoil (C1-C2)-alquilo (C1-C2) y piperidino-, pirrolidino- o morfolino-alquilo (C2-C3), y similares.

Otros ejemplos incluyen los siguientes: cuando el compuesto de Fórmula II contiene un grupo de ácido carboxílico, el profármaco puede ser un éster o una amida, y cuando el compuesto de Fórmula II contiene un grupo amino primario u otro nitrógeno adecuado que puede derivatizarse, el profármaco puede ser una amida, carbamato, urea, imina o una base de Mannich. Se describen procedimientos convencionales para la selección y preparación de derivados de profármaco adecuados, por ejemplo, en Design of Prodrugs, editado por H. Bundgaard, Elsevier, 1985; J. J. Hale et al., J. Med. Chem. 2000, vol. 43, pág. 1234-1241; C. S. Larsen y J. Ostergaard, "Design and application of prodrugs" en: Textbook of Drug Design and Discovery, 3a edición, editado por C. S. Larsen, 2002, pág. 410-458; y Beaumont et al., Current DrugMetabolism 2003, vol. 4, pág. 461-458.

Por consiguiente, los compuestos dentro de las fórmulas estructurales genéricas, realizaciones y compuestos específicos descritos y reivindicados en el presente documento incluyen sales, todos los estereoisómeros y tautómeros posibles, formas físicas (por ejemplo, formas amorfas y cristalinas), formas de solvato e hidrato de los mismos, y cualquier combinación de estas formas, así como las sales de los mismos, cuando dichas formas sean posibles a menos que se especifique otra cosa.

La invención también abarca un compuesto de la invención o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo para su uso en el tratamiento o la profilaxis de la infección por VIH, la inhibición de la transcriptasa inversa del VIH, o el tratamiento, la profilaxis o retraso del inicio del SIDA.

La invención también incluye un compuesto de la invención, o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo, para su uso en la preparación de un medicamento para el tratamiento o la profilaxis de la infección por VIH, para la inhibición de la transcriptasa inversa del VIH, o para el tratamiento, la profilaxis o el retraso en el inicio del SIDA en un sujeto que lo necesite.

La invención también incluye una composición farmacéutica que comprende una cantidad eficaz de un compuesto de la invención, o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo, y un transportador farmacéuticamente aceptable y que además comprende una cantidad eficaz de un agente anti-VIH adicional seleccionado del grupo que consiste en de agentes antivíricos del VIH, inmunomoduladores y agentes antiinfecciosos. Dentro de esta realización, el agente anti-VIH es un antivírico seleccionado del grupo que consiste en inhibidores de la proteasa del VIH, inhibidores de la transcriptasa inversa del VIH, inhibidores de la integrasa del VIH, inhibidores de la fusión del VIH, inhibidores de la entrada del VIH, e inhibidores de maduración del VIH.

Cualquier descripción anterior o que sigue que se refiera a un compuesto de Fórmula II también se aplica a cada realización del mismo.

Otras realizaciones de la presente invención incluyen lo siguiente:

(a) Una composición farmacéutica que comprende una cantidad eficaz de un compuesto de Fórmula II como se ha definido anteriormente, o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo, y un transportador farmacéuticamente aceptable.

(b) Una composición farmacéutica que comprende el producto preparado combinando (por ejemplo, mezclando) una cantidad eficaz de un compuesto de Fórmula II como se ha definido anteriormente, o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo, y un transportador farmacéuticamente aceptable.

(c) La composición farmacéutica de (a) o (b), que comprende además una cantidad eficaz de uno o más agentes contra el VIH seleccionados entre el grupo que consiste en agentes antivirales frente al VIH, inmunomoduladores y agentes antiinfecciosos.

(d) La composición farmacéutica de (c), en donde el agente anti-VIH se selecciona de uno o más de un antivírico seleccionado del grupo que consiste en inhibidores de la proteasa del VIH, inhibidores nucleosídicos de la transcriptasa inversa del VIH, inhibidores no nucleosídicos de la transcriptasa inversa del VIH, inhibidores de la integrasa del VIH, inhibidores de la fusión del VIH, inhibidores de la entrada del VIH e inhibidores de maduración del VIH.

(e) Una combinación que es (i) un compuesto de Fórmula II como se ha definido anteriormente, o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo, y (ii) un agente anti-VIH seleccionado del grupo que consiste en agentes antivirales del VIH, inmunomoduladores y agentes antiinfecciosos; en la que el compuesto y el agente anti-VIH se emplean cada uno en una cantidad que hace que la combinación sea eficaz para su uso en la inhibición de la transcriptasa inversa del VIH, el tratamiento o la profilaxis de la infección por VIH, o el tratamiento, la profilaxis o el retraso en el inicio o la progresión del SIDA.

(f) La combinación de (e), en la que el agente anti-VIH es un antivírico seleccionado del grupo que consiste en inhibidores de la proteasa del VIH, inhibidores nucleosídicos de la transcriptasa inversa del VIH, inhibidores no nucleosídicos de la transcriptasa inversa del VIH, inhibidores de la integrasa del VIH, inhibidores de la fusión del VIH, inhibidores de la entrada del VIH e inhibidores de maduración del VIH.

(g) Un compuesto de Fórmula II o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo para su uso en la inhibición de la transcriptasa inversa del VIH.

(h) Un compuesto de Fórmula II o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo para su uso en la profilaxis o el tratamiento de la infección por VIH (por ejemplo, VIH-1).

(i) El compuesto para su uso de (h), en el que el compuesto de Fórmula II se administra en combinación con una cantidad eficaz de al menos otro antivírico del VIH seleccionado del grupo que consiste en inhibidores de proteasa del VIH, inhibidores de la integrasa del VIH, inhibidores no nucleosídicos de la transcriptasa inversa del VIH, inhibidores nucleosídicos de la transcriptasa inversa del VIH, inhibidores de la fusión del VIH, inhibidores de la entrada del VIH e inhibidores de maduración del VIH.

(j) Un compuesto de Fórmula II o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo para su uso en la profilaxis, el tratamiento o el retraso en el inicio o la progresión del SIDA.

(k) El compuesto para su uso de (j), en el que el compuesto se administra en combinación con una cantidad eficaz de al menos otro antivírico del VIH seleccionado del grupo que consiste en inhibidores de proteasa del VIH, inhibidores de la integrasa del VIH, inhibidores no nucleosídicos de la transcriptasa inversa del VIH, inhibidores nucleosídicos de la transcriptasa inversa del VIH, inhibidores de la fusión del VIH, inhibidores de la entrada del VIH e inhibidores de maduración del VIH.

(l) La composición farmacéutica de (a), (b), (c) o (d) o la combinación de (e) o (f) para su uso en la inhibición de la transcriptasa inversa del VIH.

(m) La composición farmacéutica de (a), (b), (c) o (d) o la combinación de (e) o (f) para su uso en la profilaxis o el tratamiento de la infección por VIH (por ejemplo, VIH-1).

(n) La composición farmacéutica de (a), (b), (c) o (d) o la combinación de (e) o (f) para uso en la profilaxis, el tratamiento o el retraso en el inicio o la progresión del SIDA.

La presente invención también incluye un compuesto de Fórmula II o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo, (i) para su uso en, (ii) para su uso como medicamento para, o (iii) para su uso en la preparación de un medicamento para: (a) terapia (por ejemplo, del cuerpo humano), (b) medicina, (c) inhibición de la transcriptasa inversa del VIH, (d) el tratamiento o la profilaxis de la infección por VIH, o (e) el tratamiento, la profilaxis o el retraso en el inicio o la progresión del SIDA. En estos usos, los compuestos de la presente invención se pueden emplear opcionalmente en combinación con uno o más agentes anti-VIH diferentes seleccionados de agentes antivíricos del VIH, agentes antiinfecciosos e inmunomoduladores.

Realizaciones adicionales de la invención incluyen las composiciones farmacéuticas, combinaciones y usos expuestos en (a)-(n) anteriormente y los usos (i)(a)-(e) a (iii)(a)-(e) expuestos en el párrafo anterior, en donde el compuesto de la presente invención empleado en el mismo es un compuesto de una de las realizaciones, aspectos, clases, subclases o características que se han descrito anteriormente. En todas estas realizaciones, etc., el compuesto puede usarse opcionalmente en forma de o una sal farmacéuticamente aceptable.

Realizaciones adicionales de la presente invención incluyen cada una de las composiciones farmacéuticas, combinaciones, métodos y usos expuestos en los párrafos anteriores, en donde el compuesto de la presente invención o su sal empleada en los mismos está substancialmente puro. Con respecto a una composición farmacéutica que comprende un compuesto de Fórmula II o sal y un transportador farmacéuticamente aceptable y opcionalmente uno o más excipientes, se entiende que la expresión "sustancialmente puro" se refiere a un compuesto de Fórmula II o su sal per se.

Otras realizaciones adicionales de la presente invención incluyen las composiciones farmacéuticas, combinaciones y usos expuestos en (a)-(n) anteriormente y los usos (i)(a)-(e) a (iii)(a)-(e) expuestos anteriormente, en los que el VIH de interés es VIH-1. Por lo tanto, por ejemplo, en la composición farmacéutica (d), el compuesto de Fórmula II se emplea en una cantidad eficaz contra el VIH-1 y el agente anti-VIH es un antivírico del VIH-1 seleccionado del grupo que consiste en inhibidores de la proteasa del VIH-1, inhibidores de la transcriptasa inversa del VIH-1, inhibidores de la integrasa del VIH-1, inhibidores de la fusión del VIH-1 e inhibidores de la entrada del VIH-1. Los compuestos de Fórmula II también pueden ser agentes útiles contra el VIH-2.

El término "administración" y variantes del mismo (por ejemplo, "administrar" un compuesto) en referencia a un compuesto de Fórmula II significa proporcionar el compuesto al individuo que necesita tratamiento o profilaxis, e incluye tanto la autoadministración como la administración al paciente por otra persona. Cuando se proporciona un compuesto en combinación con uno o más agentes activos diferentes (por ejemplo, agentes antivirales útiles para el tratamiento o la profilaxis de la infección por VIH o SIDA), se entiende que cada "administración" y sus variantes incluyen la provisión del compuesto y otros agentes al mismo tiempo o en momentos diferentes. Cuando los agentes de una combinación se administran al mismo tiempo, pueden administrarse juntos en una composición única o pueden administrarse por separado.

Como se usa en el presente documento, el término "composición" pretende incluir un producto que comprende los ingredientes especificados, así como cualquier producto que sea el resultado de la combinación de los ingredientes especificados. Los ingredientes adecuados para la inclusión en una composición farmacéutica son ingredientes farmacéuticamente aceptables, lo que significa que los ingredientes deben ser compatibles entre sí y no nocivos para el receptor de la misma. Por "farmacéuticamente aceptable" se entiende que los ingredientes de la composición farmacéutica deben ser compatibles entre sí y no perjudiciales para el receptor de los mismos.

El término "sujeto", tal como se usa en el presente documento, se refiere a un animal, preferentemente un mamífero, lo más preferentemente un ser humano, que ha sido el objeto de tratamiento, observación o experimentación.

El término "cantidad eficaz", como se usa en el presente documento, significa una cantidad suficiente para inhibir la transcriptasa inversa del VIH, inhibir la replicación del VIH, ejercer un efecto profiláctico, y/o ejercer un efecto terapéutico después de la administración. Una realización de "cantidad eficaz" es una "cantidad terapéuticamente eficaz" que es una cantidad de un compuesto que es eficaz para inhibir la transcriptasa inversa del VIH, inhibir la replicación del VIH (cualquiera de los anteriores que también pueden denominarse en el presente documento "cantidad eficaz de inhibición"), tratar la infección por VIH, tratar el SIDA, retrasar el inicio del SIDA, y/o ralentizar la progresión del SIDA en un paciente. Otra realización de "cantidad eficaz" es una "cantidad profilácticamente eficaz" que es una cantidad del compuesto que es eficaz para la profilaxis de la infección por VIH o la profilaxis del SIDA en un paciente. Se entiende que una cantidad eficaz puede ser simultáneamente tanto una cantidad terapéuticamente eficaz, por ejemplo, para el tratamiento de la infección por VIH, como una cantidad profilácticamente eficaz, por ejemplo, para la prevención o reducción del riesgo de desarrollar SIDA. Cuando el compuesto de Fórmula II se administra como una sal, la referencia a una cantidad del compuesto es la forma libre (es decir, la forma sin sal) del compuesto.

En el uso de la presente invención (es decir, inhibición de la transcriptasa inversa del VIH, el tratamiento o la profilaxis de la infección por VIH, la inhibición de la replicación del VIH, el tratamiento o la profilaxis del SIDA, el retraso del inicio del SIDA, o el retraso o ralentización de la progresión del SIDA), los compuestos de la presente invención, opcionalmente en forma de una sal, pueden administrarse por medios que producen el contacto del agente activo con el sitio de acción del agente. Pueden administrarse por medios convencionales disponibles para su uso junto con productos farmacéuticos, como agentes terapéuticos individuales o en una combinación de agentes terapéuticos. Pueden administrarse solos, pero, normalmente, se administran con un transportador farmacéutico seleccionado basándose en la vía de administración escogida y en la práctica farmacéutica convencional. Los compuestos de la invención pueden, por ejemplo, administrarse por vía oral, parenteral (incluyendo inyección subcutánea, intravenosa, intramuscular, inyección intraesternal o técnicas de infusión), mediante pulverizador para inhalación, o por vía rectal, en forma de una dosificación unitaria de una composición farmacéutica que contiene una cantidad eficaz del compuesto y transportadores farmacéuticamente aceptables no tóxicos convencionales, adyuvantes y vehículos, cualquiera de los métodos de administración puede proporcionarse como una dosis única, una vez al día, o con menos frecuencia, como una vez a la semana o una vez al mes en, por ejemplo, pero sin limitación, los rangos de dosificación y las cantidades que se describen a continuación. Las preparaciones líquidas adecuadas para la administración oral (por ejemplo, suspensiones, jarabes, elixires y similares) se pueden preparar de acuerdo con técnicas conocidas en la técnica y pueden emplear cualquiera de los medios habituales, tales como agua, glicoles, aceites, alcoholes y similares. Las preparaciones sólidas adecuadas para la administración oral (por ejemplo, polvos, píldoras, cápsulas y comprimidos) pueden prepararse de acuerdo con técnicas conocidas en la materia y pueden emplear excipientes sólidos tales como almidones, azúcares, caolín, lubricantes, aglutinantes, agentes disgregantes y similares. Las composiciones parenterales pueden prepararse de acuerdo con técnicas conocidas en la técnica y emplean normalmente agua estéril como vehículo y, opcionalmente, otros ingredientes, tales como auxiliares de la solubilidad. Las soluciones inyectables se pueden preparar de acuerdo con métodos conocidos en la materia, en donde el transportador comprende una solución salina, una solución de glucosa o una solución que contiene una mezcla de solución salina y glucosa. Una descripción adicional de los métodos adecuados para su uso en la preparación de composiciones farmacéuticas para su uso en la presente invención y de ingredientes adecuados para su uso en dichas composiciones, se proporciona en Remington's Pharmaceutical Sciences, 18a edición, editado por A. R. Gennaro, Mack Publishing Co., 1990 y en Remington - The Science and Practice of Pharmacy, 22a edición, publicado por Pharmaceutical Press and Philadelphia College of Pharmacy at University of the Sciences, 2012, ISBN 978 085711 062-6 y ediciones anteriores.

Se pueden utilizar formulaciones de compuestos descritos por la Fórmula II que dan como resultado la sobresaturación del fármaco y/o la rápida disolución para facilitar la absorción oral del fármaco. Los enfoques de formulación para causar sobresaturación del fármaco y/o disolución rápida incluyen, pero no se limitan a, sistemas de nanopartículas, sistemas amorfos, soluciones sólidas, dispersiones sólidas y sistemas lipídicos. Tales estrategias de formulación y las técnicas para prepararlas son bien conocidas en la técnica. Por ejemplo, pueden prepararse dispersiones sólidas utilizando excipientes y procedimientos como los descritos en las revisiones (por ejemplo, A.T.M. Serajuddin, J Pharm Sci, 88:10, págs. 1058-1066 (1999)). También se han descrito sistemas nanoparticulados basados en rozamiento y síntesis directa en revisiones tales como Wu et al. (F. Kesisoglou, S. Panmai, Y. Wu, Advanced Drug Delivery Reviews, 59:7 págs. 631-644 (2007)).

Los compuestos de Fórmula II y sus sales farmacéuticamente aceptables, son inhibidores de la transcriptasa inversa del VIH. Los compuestos son útiles para inhibir la transcriptasa inversa del VIH y para inhibir la replicación del VIH in vitro e in vivo. Más particularmente, los compuestos de Fórmula II inhiben la función polimerasa de la transcriptasa inversa del VIH-1. El ensayo de compuestos de los Ejemplos de la invención en el ensayo que se expone en el Ensayo de polimerasa RT a continuación, ilustra la capacidad de los compuestos de la invención para inhibir la actividad de la ADN polimerasa dependiente de ARN de la transcriptasa inversa del VIH-1. Los compuestos de Fórmula II también pueden ser agentes útiles contra el VIH-2.

Los compuestos de Fórmula II se pueden administrar en un intervalo de dosificación de 0,001 a 1000 mg/kg de peso corporal de mamífero (por ejemplo, ser humano) por día, o en otros intervalos de tiempo según sea apropiado, en una sola dosis o en dosis divididas. Un ejemplo de un intervalo de dosificación es de 0,01 a 500 mg/kg de peso corporal por día, o en otros intervalos de tiempo según corresponda, administrados por vía oral o por otras vías de administración en una sola dosis o en dosis divididas. Otro ejemplo de un intervalo de dosificación es de 0,1 a 100 mg/kg de peso corporal por día, o en otros intervalos de tiempo según corresponda, administrados por vía oral o por otras vías de administración en una sola dosis o en dosis divididas. Para la administración oral (por ejemplo, comprimidos o cápsulas) u otras vías de administración, las composiciones pueden proporcionarse conteniendo de 1,0 a 500 miligramos del principio activo, en particular 1, 5, 10, 15, 20, 25, 50, 75, 100, 150, 200, 250, 300, 400 y 500 miligramos del principio activo para el ajuste sintomático de la dosificación al paciente que ha de tratarse. El nivel de dosis y la frecuencia de la dosificación específicos para cualquier paciente particular puede variarse y dependerá de diversos factores, incluyendo la actividad del compuesto específico empleado, la estabilidad metabólica y la duración de la acción de ese compuesto, la edad, el peso corporal, el estado de salud general, el sexo, la dieta, el modo y el momento de administración, la tasa de excreción, la combinación de fármacos, la gravedad de la afección particular y el hospedador que se somete a la terapia. En algunos casos, dependiendo de la potencia del compuesto o de la respuesta individual, puede ser necesario desviarse hacia arriba o hacia abajo de la dosis administrada. Los compuestos de la invención pueden administrarse en una dosis única, una vez al día, o con menos frecuencia, como una vez a la semana o una vez al mes en, por ejemplo, pero sin limitación, los rangos de dosificación y las cantidades indicadas anteriormente. Además, el compuesto puede formularse para liberación inmediata o modificada, tal como liberación prolongada o controlada.

Como se ha indicado anteriormente, la presente invención también se refiere al uso de un compuesto de Fórmula II con uno o más agentes contra el VIH. Un "agente contra el VIH" es cualquier agente que sea directa o indirectamente eficaz para la inhibición del VIH, el tratamiento o la profilaxis de la infección por VIH y/o el tratamiento, la profilaxis o el retraso en el inicio o la progresión del SIDA. Se entiende que un agente contra el VIH es eficaz para tratar, prevenir o retrasar el inicio o la progresión de la infección por VIH o el SIDA y/o enfermedades o afecciones que surgen de los mismos o que se asocian a los mismos. Por ejemplo, los compuestos de la presente invención pueden administrarse eficazmente, ya sea en períodos previos a la exposición y/o posteriores a la exposición, en combinación con cantidades eficaces de uno o más agentes contra el VIH seleccionados entre agentes antivíricos frente al VIH, inmunomoduladores, agentes anti-infecciosos o vacunas útiles para tratar la infección por VIH o el SIDA. Los antivíricos frente al VIH adecuados para su uso en combinación con los compuestos de la presente invención incluyen, por ejemplo, los enumerados en la Tabla 1 de la siguiente manera:

continuación

Se entiende que el alcance de las combinaciones de los compuestos de la presente invención con agentes contra el VIH no se limita a los antivíricos frente al VIH enumerados en la Tabla A, sino que incluye, en principio, cualquier combinación con cualquier composición farmacéutica útil para el tratamiento o la profilaxis del SIDA. Los agentes antivíricos frente al VIH y otros agentes se emplearán normalmente en estas combinaciones en sus intervalos y regímenes de dosificación convencionales según se notifica en la técnica, que incluye, por ejemplo, las dosificaciones descritas en Physicians' Desk Reference, Thomson PDR, Thomson PDR, 57a edición (2003), la 58a edición (2004), o la 59a edición (2005) y la Physicians' Desk Reference actual (68a ed.). (2014), Montvale, NJ: PDR Network. Los intervalos de dosificación para un compuesto de la invención en estas combinaciones pueden ser los mismos que los expuestos anteriormente.

Los compuestos de la presente invención también son útiles en la preparación y ejecución de ensayos de exploración para compuestos antivirales. Por ejemplo, los compuestos de la presente invención son útiles para aislar mutantes de enzimas, que son excelentes herramientas de cribado para compuestos antivíricos más potentes. Además, los compuestos de la presente invención son útiles para establecer y determinar el sitio de unión de otros antivíricos a la transcriptasa inversa del VIH, por ejemplo, mediante inhibición competitiva.

Las abreviaturas y acrónimos empleados en el presente documento incluyen los siguientes:

Los compuestos de la invención pueden prepararse por métodos bien conocidos en la técnica de química orgánica. Véase, por ejemplo, J. March, 'Advanced Organic Chemistry' 6a edición, John Wiley and Sons. Durante las secuencias de síntesis puede ser necesario y/o deseable proteger grupos sensibles o reactivos en cualquiera de las moléculas involucradas. Esto se consigue por medio de grupos protectores convencionales, tales como los descritas en T.W.

Greene y P.G.M. Wutts 'Protective Groups in Organic Synthesis' 4a edición, John Wiley and Sons. Los grupos protectores se retiran opcionalmente en una etapa posterior conveniente usando métodos bien conocidos en la técnica.

Los compuestos de la presente invención pueden prepararse fácilmente de acuerdo con los siguientes esquemas de reacción y ejemplos, o modificaciones de los mismos, usando materiales de partida fácilmente disponibles, reactivos y procedimientos de síntesis convencionales. En estas reacciones, también es posible usar variantes que sean conocidas por los expertos en la técnica, pero no se mencionan con mayor detalle. Además, otros procedimientos para preparar compuestos de la presente invención pueden ser fácilmente evidentes para el experto en la técnica a la luz de los siguientes esquemas de reacción y ejemplos. A menos que se indique otra cosa, todas las variables son como se ha definido anteriormente.

Esquema 1

Lactol 1-1 can be converted to 1-2 usando metanolic HCl. Los grupos hidroxi del intermedio 1-2 pueden luego protegerse seguido de la conversión del 1'-OMe en 1'-Cl usando gas HCl para proporcionar 1-4. El intermedio 1-4 se puede hacer reaccionar con diferentes heterociclos sustituidos (1-5) en presencia de una base adecuada para proporcionar el intermedio 1-6. El 6-cloro del intermedio 1-6 se puede convertir a R4 usando una química adecuada seguida de la desprotección de los grupos hidroxilo para proporcionar el intermedio 1-7. El intermedio 1-7 puede protegerse diferencialmente para proporcionar 1-8. La oxidación de 1-8 proporciona el aldehído 1-9 que después puede sufrir una reacción aldólica con formaldehído seguida de reducción para proporcionar 1-10. La oxidación selectiva del grupo hidroxi de la cara alfa seguida de la conversión del aldehído en el alquino proporciona 1-11. La desprotección final del alcohol 3' proporciona los objetivos 1-13.

Esquema 2:

La lactona 2-1 se puede tratar con el anión de diferentes heterociclos para proporcionar intermedios de tipo 2-2. El intermedio 2-2 se puede convertir en 2-3 mediante tratamiento con ácido en presencia de silanos. La desprotección de 2-3 seguida de la protección diferencial de los hidroxilos 3' y 5' proporciona 2-5. La desoxigenación de 2-5 proporciona 2-6 que luego se puede desproteger seguido de protección diferencial para proporcionar 2-8. La oxidación del alcohol terminal a 2-9 seguida de la reacción aldólica con formaldehído y la reducción proporciona el 2-10. La oxidación selectiva del alcohol de cara alfa proporciona el aldehído 2-11 que después se puede convertir en el acetileno 2-12. La desprotección global proporciona 2-13.

Los intermedios del tipo 3-1 (sintetizados usando los métodos del esquema 1) se convierten en oximas del tipo 3-2. La deshidratación de la oxima conduce a los compuestos 3-3 que pueden sufrir una desprotección final para proporcionar los 3-4 diana.

Esquema 4:

Los intermedios del tipo 4-1 (sintetizados usando los métodos del esquema 2) se convierten en oximas del tipo 4-2. La deshidratación de la oxima conduce a los compuestos 4-3 que pueden sufrir una desprotección final para proporcionar los 4-4 diana.

Los intermedios de tipo 5-1 (sintetizados usando métodos de esquemas anteriores) pueden convertirse en trifosfatos 5-2 usando métodos conocidos en la bibliografía.

Los intermedios de tipo 6-1 (sintetizados usando métodos de esquemas anteriores) pueden convertirse en trifosfatos 6-2 usando métodos conocidos en la bibliografía.

Procedimientos químicos generales: Todos los reactivos se adquirieron de fuentes comerciales comunes o se sintetizaron de acuerdo con procedimientos bibliográficos que parten de reactivos comerciales. Los reactivos comerciales se usaron sin purificación adicional. A menos que se indique otra cosa, el porcentaje es porcentaje en peso dado el componente y el peso total de la composición, la temperatura es en °C o es temperatura ambiente y la presión es, o está próxima a la atmosférica. Se obtuvieron espectros de RMN 1H en un Varian VRMN System 400 (400 MHz) y se indican como ppm campo abajo a partir de Me4Si con número de protones, multiplicidades y constantes de acoplamiento en Hercios indicadas entre paréntesis. Cuando se presentan los datos de CL/EM, se realizó el análisis usando un espectrómetro de masas Agilent 6110A MSD o un Applied Biosystems API-100. Se da el ion precursor. Se realizó HPLC preparativa en un sistema preparativo Waters HPLC equipado con una columna Waters Xselect.C18, normalmente usando elución en gradiente con agua/acetonitrilo que contenía un 0,075 % de ácido trifluoroacético. Se realizó cromatografía en columna ultrarrápida usando sílice de fase normal preempaquetado de Biotage, Inc. o sílice a granel de Fisher Scientific. A menos que se indique otra cosa, se realizó cromatografía en columna usando una elusión en gradiente de éter de petróleo/acetato de etilo, desde éter de petróleo al 100 % hasta acetato de etilo al 100%. La expresión "temperatura ambiente" en los ejemplos se refiere a la temperatura ambiente que está normalmente en el intervalo de aproximadamente 20 °C a aproximadamente 26 °C.

INTERMEDIO A

4-metilbenzoato de (2R,3S,5R)-5-cloro-2-(((4-metMbenzoM)oxi)metM)tetrahidrofuran-3-Mo (Intermedio A)

Etapa 1: Síntesis de (2R,3S)-2-(hidroximetil)-5-metoxitetrahidrofuran-3-ol

A una solución agitada de (4S,5R)-5-(hidroximetil)tetrahidrofuran-2,4-diol (7,0 g, 52,2 mmol) en metanol anhidro (105 ml) en una atmósfera de argón, se le añadió cloruro de acetilo (0,614 g, 7,83 mmol) gota a gota con agitación a 0 °C durante 5 minutos y la mezcla resultante se agitó a 0 °C durante 3 horas. Después, se añadió bicarbonato sódico sólido para neutralizar la mezcla de reacción. La fase orgánica se recogió por filtración y después se concentró a presión reducida para dar un residuo en forma de un jarabe. El residuo se purificó por cromatografía sobre gel de sílice (malla 100-200) con diclorometano/metanol (20/1) para dar el compuesto del título. 1H RMN (300 MHz, CDCh, ppm): 8 4,98-5,04 (m, 1H), 4,21-4,23 (m, 0,4H), 4,07-4,09 (m, 0,6H), 3,83-3,89 (m, 1H), 3,50-3,66 (m, 2H), 3,27-3,32 (m, 3H), 2,23-2,29 (m, 0,6H), 2,08-2,12 (m, 0,4H), 1,98-2,03 (m, 0,4H), 1,77-1,83 (m, 0,6H).

Etapa 2: Síntesis de 4-metilbenzoato de (2R,3S)-5-metoxi-2-(((4-metilbenzoil)oxi)metil)tetrahidrofuran-3-ilo

A una solución agitada de (2R,3S)-2-(hidroximetil)-5-metoxitetrahidrofuran-3-ol (6,5 g, 43,9 mmol) en piridina seca (45 ml) en una atmósfera de argón, se le añadió cloruro de 4-metilbenzoílo (20,35 g, 132 mmol) gota a gota a 0 °C durante un periodo de 15 minutos. La mezcla resultante se calentó gradualmente a 30 °C y después se agitó durante 16 horas. La solución resultante se concentró a presión reducida. El residuo resultante se diluyó con acetato de etilo (400 ml) y después se lavó con cloruro de hidrógeno acuoso (1 mol/l, 2 x 100 ml), bicarbonato sódico acuoso saturado (2 x 100 ml) y salmuera (100 ml), respectivamente. La fase orgánica se recogió, se secó sobre sulfato sódico anhidro, se filtró y se concentró a presión reducida. El residuo se purificó por cromatografía sobre gel de sílice (malla 100-200) con éter de petróleo/acetato de etilo (20:1) para dar el compuesto del título. 1H RMN: (300 MHz, CDCh, ppm): 87,90-7,99 (m, 4H), 7,20-7,26 (m, 4H), 5,58-5,61 (m, 0,47H), 5,39-5,42 (m, 0,55H), 5,18-5,24 (m, 1H), 4,46-4,65 (m, 3H), 3,43 (s, 1,61H), 3,36 (s, 1,33H), 2,52-2,60 (m, 1H), 2,17-2,43 (m, 7H).

Etapa 3: 4-metilbenzoato de (2R,3S,5R)-5-doro-2-(((4-metNbenzoM)oxi)metN)tetrahidrofuran-3-Mo (Intermedio A)

En una solución agitada de 4-metilbenzoato de (2R,3S)-5-metoxi-2-(((4-metilbenzoil)oxi)metil)tetrahidrofuran-3-ilo (4,0 g, 10,41 mmol) en éter dietílico anhidro (20 ml) en un matraz de fondo redondo de tres bocas y de 100 ml se introdujo HCl (g). El producto precipitó gradualmente durante un periodo de 40 min a 0 °C. El sólido se filtró y se lavó con éter dietílico seco (3 x 20 ml) y se secó a alto vacío durante 2 horas para dar el Intermedio A en forma de un sólido. 1H RMN: (300 MHz, CDCla, ppm): 87,96 (d, J = 9,0 Hz, 2H), 7,90 (d, J = 8,1 Hz, 2H), 7,19-7,27 (m, 4H), 6,47 (d, J = 5,1 Hz, 1H), 5,54-5,58 (m, 1H), 4,85 (dd, J = 3,3 Hz, J = 7,2 Hz, 1H), 4,68 (dd, J = 3,3 Hz, J = 12,0 Hz, 1H), 4,59 (dd, J = 4,2 Hz, J = 12,0 Hz, 1H), 2,83-2,92 (m, 1H), 2,74 (d, J = 15,0 Hz, 1H), 2,42 (d, J = 3,6 Hz, 6H).

EJEMPLO 1: Síntesis de (2R,3S,5R)-5-(4-ammo-7H-pirrolo[2,3-d]pirimidm-7-M)-2-etiml-2-(hidroximetil)tetrahidrofuran-3-ol (1)

Etapa 1: Síntesis de 4-metilbenzoato de (2R,3S,5R)-5-(4-doro-7H-pirrolo[2,3-d]pirimidm-7-M)-2-(((4-metilbenzoil)oxi)metil)tetrahidrofuran-3-ilo

A una suspensión de hidruro sódico (dispersión al 60 % en aceite mineral, 0,272 g, 6,79 mmol) en acetonitrilo anhidro (50 ml) en una atmósfera de argón en un matraz de fondo redondo de tres bocas y de 250 ml, se le añadió 4-cloro-7H-pirrolo[2,3-d]pirimidina (0,948 g, 6,17 mmol) y la mezcla se agitó a temperatura ambiente durante 30 minutos. Se añadió 4-metilbenzoato de (2R,3S,5R)-5-cloro-2-(((4-metilbenzoil)oxi)metil)tetrahidrofuran-3-ilo (2,4 g, 6,17 mmol) se añadió en porciones con agitación. La mezcla de reacción se calentó a 50 °C y se agitó durante 2 horas. El progreso de la reacción se controló por TLC y LCMS. La evaporación de la mezcla de reacción dio un residuo oleoso, que se purificó por cromatografía sobre gel de sílice con acetato de etilo/éter de petróleo (1 :6, v/v) para dar el compuesto del título. 1H RMN: (300 MHz, CDCla, ppm): 88,64 (s, 1H), 7,98 (d, J = 8,1 Hz, 2H), 7,92 (d, J = 8,1 Hz, 2H), 7,43 (d, J = 3,6 Hz, 1H), 7,20-7,30 (m, 4H), 6,82 (dd, J = 5,7 Hz, J = 8,1 Hz, 1H), 6,60 (d, J = 3,9 Hz, 1H), 4,60-4,76 (m, 3H), 2,86 2,96 (m, 1H), 2,74-2,82 (m, 1H), 2,43 (d, J = 5,4 Hz, 6H). LC-MS: (ES, m/z): 506,43 [M+H]+.

Etapa 2: Síntesis de (2R,3S,5R)-5-(4-ammo-7H-pirrolo[2,3-d]pirimidm-7-M)-2-(hidroximetN)tetrahidrofuran-3-ol

Se añadió 4-metilbenzoato de (2R,3S,5R)-5-(4-cloro-7H-pirrolo[2,3-d]pirimidin-7-il)-2-(((4-metilbenzoil)oxi)metil)tetrahidrofuran-3-ilo (2,18 g, 4,31 mmol) a una bomba de acero de 80 ml y se enfrió a -40 °C. A esto se le añadió amoniaco isopropanólico (saturado a -40 °C, 60 ml). Después de que la mezcla se agitara a 90 °C durante 15 horas, se enfrió a temperatura ambiente y se concentró al vacío. El residuo se purificó por cromatografía en columna sobre gel de sílice con diclorometano/metanol (4/1) para dar el compuesto del título. 1H RMN: (400 MHz, de-DMSO, ppm): 88,04 (s, 1H), 7,34 (d, J = 3,6 Hz, 1H), 7,04 (a, 2H), 6,58 (d, J = 3,6 Hz, 1H), 6,48 (dd, J = 6,0 Hz, J = 8,0 Hz, 1H), 5,24 (d, J = 3,6 Hz, 1H), 5,16 (t, J = 4,2 Hz, 1H), 4,34 (d, J = 2,0 Hz, 1H), 3,82 (dd, J = 4,0 Hz, J = 6,4 Hz, 1H), 3,48-3,58 (m, 2H), 2,48-2,54 (m, 1H), 2,13-2,17 (m, 1H).

Etapa 3: Síntesis de 7-((2R,4S,5R)-4-((ferc-butMdimetMsiMl)oxi)-5-(((íercbutMdimetNsilN)oxi)metN)tetrahidrofuran-2-N)-7H-pirrolo[2,3-d]pirimidm-4-amma.

Se añadieron (2R,3S,5R)-5-(4-amino-7H-pirrolo[2,3-d]pirimidin-7-il)-2-(hidroximetil)tetrahidrofuran-3-ol (950 mg, 3,796 mmol) e imidazol (775,4 mg, 11,388 mmol) a un matraz de fondo redondo de 25 ml en una atmósfera de argón. En el matraz se inyectó DMF anhidra (8 ml), seguido de la adición de cloruro de t-butildimetilsililo (1716,4 mg, 11,388 mmol). Después de que la mezcla se agitara a 25 °C durante 3 horas, se diluyó con acetato de etilo (40 ml) y se lavó con agua (20 ml x 2), NaHCO3 acuoso (saturado, 20 ml x 2) y salmuera (20 ml x 2), respectivamente. La capa orgánica se recogió y se secó sobre Na2SO4 anhidro, se filtró y se concentró a presión reducida para dar un producto en bruto. Después, el producto en bruto se purificó por cromatografía sobre gel de sílice con acetato de etilo/éter de petróleo (acetato de etilo del 35 % al 42 % en éter de petróleo) para dar el compuesto del título. 1H RMN: (300 MHz, CDCl3, ppm): 88,32 (s, 1H), 7,32 (d, J = 3,9 Hz, 1H), 6,69 (t, J = 6,6 Hz, 1H), 6,39 (d, J = 3,6 Hz, 1H), 5,29 (a, 2H), 4,56-4,61 (m, 1H), 3,96 (dd, J = 3,5 Hz, J = 7,0 Hz, 1H), 3,74-3,84 (m, 2H), 2,42-2,51 (m, 1H), 2,30-2,38 (m, 1H), 0,92 (d, J = 4,2 Hz, 18H), 0,08-0,1 (m, 12H). LC-MS: (ES, m/z): 497,71 [M+H]+.

Etapa 4: Síntesis de ((2R,3S,5R)-5-(4-ammo-7H-pirrolo[2,3-d]pirimidm-7-M)-3-((íercbutildimetilsilil)oxi)tetrahidrofuran-2-il)metanol

A una solución agitada de 7-((2R,4S,5R)-4-((ferc-butildimetilsilil)oxi)-5-(((ferc-butildimetilsilil)oxi)metil)tetrahidrofuran-2-il)-7H-pirrolo[2,3-d]pirimidin-4-amina (1,2 g, 2,506 mmol) en THF (24 ml) se le añadió una solución enfriada previamente de ácido trifluoroacético/agua (1/2, v/v, 9 ml) gota a gota a 0 °C durante un periodo de 10 minutos. La mezcla resultante se agitó a 0 °C durante 4 horas y después se co-evaporó tres veces con tolueno por debajo de 25 °C para dar un jarabe. El producto en bruto se purificó por cromatografía en columna sobre gel de sílice con acetato de etilo/diclorometano (1/1) para dar el compuesto del título. 1H RMN: (300 MHz, cfe-DMSO, ppm): 88,03 (s, 1H), 7,34 (d, J = 3,9 Hz, 1H), 7,03 (s a, 2H), 6,58 (d, J = 3,6 Hz, 1H), 6,46 (dd, J = 5,7 Hz, 1H), 5,19 (t, J = 5,7 Hz, 1H), 4,51-4,53 (m, 1H), 3,79-3,83 (m, 1H), 3,47-3,57 (m, 2H), 2,55-2,64 (m, 1H), 2,10-2,17 (m, 1H), 0,9 (s, 9H), 0,11 (s, 6H).

Etapa 5: Síntesis de (2S,3S,5R)-5-(4-ammo-7H-pirrolo[2,3-d]pmmidm-7-il)-3-((fercbutildim etilsilil)oxi)tetrahidrofuran-2-carbaldehído

A una solución agitada de ((2R,3S,5R)-5-(4-amino-7H-pirrolo[2,3-d]pirimidin-7-il)-3-((tercbutildimetilsilil)oxi)tetrahidrofuran-2-il)metanol (100 mg, 0,274 mmol) en acetonitrilo anhidro (10 ml) en una atmósfera de argón en un matraz de fondo redondo de 25 ml, se le añadió ácido 2-yodoxibenzoico (230 mg, 0,823 mmol). La mezcla resultante se calentó a reflujo durante 0,5 horas y después se enfrió a temperatura ambiente. Los sólidos se retiraron por filtración y el filtrado se concentró a presión reducida para dar el compuesto del título, que se usó directamente en la siguiente etapa de reacción sin purificación adicional. LC-MS: (ES, m/z): 363,20 [M+H]+, 381,20 [M+H+H2O]+.

Etapa 6: Síntesis de ((3S,5R)-5-(4-ammo-7H-pirrolo[2,3-d]pirimidm-7-il)-3-((íercbutildimetilsilil)oxi)tetrahidrofuran-2,2-diil)dimetanol

A una solución agitada de (2S,3S,5R)-5-(4-amino-7H-pirrolo[2,3-d]pirimidin-7-il)-3-((fercbutildimetilsilil)oxi)tetrahidrofuran-2-carbaldehído (100 mg, 0,276 mmol, en bruto) en 1,4-dioxano (1 ml) se le añadió una solución de formaldehído (0,3 ml, 4,00 mmol) seguido de la adición de una solución de hidróxido sódico (0,3 ml, 0,600 mmol, 2 M) gota a gota en 1 minuto. La mezcla resultante se agitó a 25 °C durante 3 horas. Una vez completada la reacción, la mezcla de reacción se neutralizó mediante la adición de ácido acético, se diluyó con acetato de etilo y se lavó sucesivamente con agua, NaHCO3 acuoso saturado y salmuera, se secó sobre Na2SO4 y se evaporó a presión reducida. El residuo se re-disolvió en etanol anhidro (2 ml) y se añadió borohidruro sódico (20,87 mg, 0,552 mmol) en porciones a 0 °C. Después de agitar durante 1 hora a 25 °C, la mezcla de reacción se neutralizó mediante la adición de ácido acético, se diluyó con cloroformo (20 ml) y se lavó con agua y salmuera. La capa orgánica se secó sobre Na2SO4 y se evaporó a presión reducida. El residuo se purificó por TLC preparativa con diclorometano/metanol (20/1) para dar el compuesto del título. 1H RMN: (300 MHz, cfe-DMSO, ppm): 88,03 (s, 1H), 7,37 (d, J = 3,6 Hz, 1H), 7,02 (s a, 2H), 6,57 (d, J = 3,6 Hz, 1H), 6,50 (dd, J = 5,7 Hz, J = 8,1 Hz, 1H), 5,12 (dd, J = 5,1 Hz, J = 6,3 Hz, 1H), 4,59-4,60 (m, 1H), 4,38 (dd, J = 5,1 Hz, J = 6,3 Hz, 1H), 3,46-3,61 (m, 4H), 2,70-2,75 (m, 1H), 2,13-2,20 (m, 1H), 0,90 (s, 9H), 0,09 (s, 6H). LC-MS: (ES, m/z): 395,20 [M+H]+.

Etapa 7: Síntesis de (2R,3S,5R)-5-(4-ammo-7H-pirroto[2,3-c/]pirimidm-7-M)-3-((ferc-butMdimetMsiMl)oxi)-2-(hidroximetil)tetrahidrofuran-2-carbaldehído

A una solución agitada de ((3S,5R)-5-(4-amino-7H-pirrolo[2,3-d]pirimidin-7-il)-3-((fercbutildimetilsilil)oxi)tetrahidrofuran-2,2-diil)dimetanol (100 mg, 0,253 mmol) en acetonitrilo anhidro (20 ml) en una atmósfera de argón, se le añadió ácido 2-yodoxibenzoico (284 mg, 1,014 mmol). La mezcla resultante se agitó a 30 °C durante 36 horas. El análisis por LCMS indicó que aún quedaba una pequeña parte del diol-nucleósido de partida, y el compuesto diana era el producto principal. La mezcla se filtró y se lavó con diclorometano. El filtrado se recogió y se concentró a presión reducida para dar el compuesto del título, que se usó directamente en la siguiente etapa de reacción sin purificación adicional. LC-MS: (ES, m/z): 393,28 [M+H]+.

Etapa 8: Síntesis de ((2R,3S,5R)-5-(4-ammo-7H-pirrolo[2,3-d]pirimidm-7-M)-3-((ferc-butMdimetMsiMl)oxi)-2-etiniltetrahidrofuran-2-il)metanol

A una solución agitada de (2R,3S,5R)-5-(4-amino-7H-pirrolo[2,3-d]pirimidin-7-il)-3-((ferc-butildimetilsilil)oxi)-2-(hidroximetil)tetrahidrofuran-2-carbaldehído (100 mg, 0,248 mmol, en bruto) en metanol anhidro (10 ml) en una atmósfera de argón, se le añadió carbonato potásico (68,04 mg, 0,492 mmol). La mezcla se enfrió a 0 °C, después se añadió (1-diazo-2-oxopropil)fosfonato de dimetilo (94,56 mg, 0,492 mmol) gota a gota en 2 minutos. Después de que la mezcla resultante se agitara a 25 °C durante una noche, se concentró a presión reducida. El residuo se purificó por TLC preparativa (metanol/diclorometano = 1/15) para dar el compuesto del título. 1H RMN: (300 MHz, CDCh, ppm): 8 8,24 (s, 1H), 7,04 (d, J = 3,6 Hz, 1H), 6,35 (d, J = 3,6 Hz, 1H), 6,31 (dd, J = 5,7 Hz, J = 9,3 Hz, 1H), 5,48 (a, 2H), 4,73 (d, J = 4,2 Hz, 1H), 4,03 (d, J = 12,6 Hz, 1H), 3,80 (d, J = 12,3 Hz, 1H), 3,13-3,23 (m, 1H), 2,58 (s, 1H), 2,22-2,28 (m, 1H), 0,95 (s, 9H), 0,15 (d, J = 7,2 Hz, 6H).

Etapa 9 : Síntesis de (2R,3S,5R)-5-(4-ammo-7H-pirrolo[2,3-d]pirimidm-7-M)-2-etmN-2-(hidroximetil)tetrahidrofuran-3-ol

A una solución agitada de ((2R,3S,5R)-5-(4-am¡no-7H-p¡rrolo[2,3-d]p¡r¡m¡d¡n-7-¡l)-3-((terc-but¡ld¡met¡ls¡l¡l)ox¡)-2-etiniltetrahidrofuran-2-il)metanol (60 mg, 0,154 mmol) en THF anh¡dro (2 ml) en una atmósfera de argón, se le añad¡ó una soluc¡ón 1 M de fluoruro de tetrabut¡lamon¡o y THF (0,309 ml, 0,309 mmol) gota a gota en 1 m¡nuto a temperatura amb¡ente. La soluc¡ón resultante se ag¡tó a esta temperatura durante 2 horas. El progresó de la reacc¡ón se controló por TLC. Después de que se consum¡era todo el nucleós¡do de part¡da, la mezcla se concentró a pres¡ón reduc¡da. El res¡duo se pur¡f¡có por TLC preparat¡va (metanol/d¡clorometano = 1/9) para dar compuesto del título en bruto que se pur¡f¡có ad¡c¡onalmente por Hp Lc preparat¡va con las s¡gu¡entes cond¡c¡ones: (1#-Pre-HPLC-011(Waters)): Columna, Columna X-select CSH, 19 x 150 mm, 5 um; fase móv¡l, agua con amon¡o b¡carbonato 10 mmol y aceton¡tr¡lo (de aceton¡tr¡lo al 5 % hasta el 20 % en 7,5 m¡n, hasta el 95 % en 2 m¡n); Detector, UV 254 y 220 nm para dar el compuesto 1 en forma de un sólido. 1H RMN: (300 MHz, de-DMSO, ppm): 68,05 (s, 1H), 7,31 (d, J = 3,6 Hz, 1H), 7,03 (s a, 2H), 6,58 (d, J = 3,6 Hz, 1H), 6,50 (t, J = 6,3 Hz, 1H), 5,40-5,49 (m, 2H), 4,49 (dd, J = 6,0 Hz, J = 11,4 Hz, 1H), 3,51-3,66 (m, 2H), 3,46 (s, 1H), 2,55-2,59 (m, 1H), 2,28-2,39 (m, 1H). LC-MS: (ES, m/z): 275,20 [M+H]+.

EJEMPLO 2: Síntesis de (2R,3S,5R)-5-(4-ammo-5-fluoro-7H-pirrolo[2,3-d]pirimidm-7-M)-2-etmN-2-(hidroximetil)tetrahidrofuran-3-ol (2)

Etapa 1: Síntesis de 4-cloro-5-fluoro-7H-pirrolo[2,3-d]pirim idma

Se pus¡eron 4-cloro-7H-p¡rrolo[2,3-d]p¡r¡m¡d¡na (5 g, 32,6 mmol) y SELECTFLUOR® (b¡s(tetrafluoroborato) de 1-cloromet¡l-4-fluoro-1,4-d¡azon¡ab¡c¡clo[2.2.2]octano) (17,30 g, 48,8 mmol) en un matraz de fondo redondo de 500 ml en una atmósfera de argón. A lo anter¡or se le añad¡eron aceton¡tr¡lo seco (150 ml) y ác¡do acét¡co seco (50 ml). La mezcla se calentó a 70 °C y se ag¡tó durante 16 horas. Después de enfr¡ar a temperatura amb¡ente, los d¡solventes se el¡m¡naron a pres¡ón reduc¡da y el res¡duo se co-evaporó con tolueno. El producto en bruto se d¡solv¡ó en una mezcla de d¡clorometano/acetato de etilo (1:1) y se f¡ltró a través de una capa de gel de síl¡ce. Las fases orgán¡cas comb¡nadas se evaporaron a pres¡ón reduc¡da. Después, el producto en bruto se pur¡f¡có por cromatografía sobre gel de síl¡ce con d¡clorometano/acetato de etilo (5:1) para dar el compuesto del título. 1H Rm N: (400 MHz, de-DMSO, ppm): 612,48 (s a, 1H), 8,62 (s, 1H), 7,71 (t, J = 2,6 Hz, 1H). F RMN: (376 MHz, de-DMSO, ppm): 6-170,76 (s, 1F). LC-MS: (ES, m/z): 172,00 [M+H]+.

Etapa 2: Síntesis de 4-metilbenzoato de (2R,3S,5R)-5-(4-cloro-5-fluoro-7H-pirrolo[2,3-d]pirimidm-7-il)-2-(((4-metilbenzoil)oxi)metil)tetrahidrofuran-3-ilo

A una suspensión de dispersión al 60% de hidruro sódico en aceite mineral (0,177 g, 4,41 mmol) en acetonitrilo anhidro (40 ml) en una atmósfera de argón, se le añadió 4-cloro-5-fluoro-7H-pirrolo[2,3-d]pirimidina (0,688 g, 4,01 mmol) en porciones y la mezcla se agitó a temperatura ambiente durante 30 minutos. Después, se añadió el Intermedio A (1,56 g, 4,01 mmol) en porciones. Después de que la mezcla de reacción se calentara a 50 °C y se agitara durante 2 horas, el material volátil se eliminó a presión reducida, y después su residuo se purificó por cromatografía sobre gel de sílice con acetato de etilo/éter de petróleo (1/1) para dar el compuesto del título. 1H RMN: (300 MHz, CDCfe, ppm): 8 8,62-8,68 (m, 1H), 7,91-7,99 (m, 4H), 7,26-7,29 (m, 4H), 7,16-7,18 (m, 2H), 6,84-6,88 (m, 1H), 5,74-5,76 (m, 1H), 4,60-4,74 (m, 3H), 2,74-2,79 (m, 2H), 2,43-2,46 (m, 6H). LC-MS: (ES, m/z): 524,30 [M+H]+.

Etapa 3: Síntesis de (2R,3S,5R)-5-(4-ammo-5-fluoro-7H-pirrolo[2,3-d]pirimidm-7-il)-2-(hidroximetil)tetrahidrofuran-3-ol

A una bomba de acero de 80 ml, se le añadió 4-metilbenzoato de (2R,3S,5R)-5-(4-cloro-5-fluoro-7H-pirrolo[2,3-d]pirimidin-7-il)-2-(((4-metilbenzoil)oxi)metil)tetrahidrofuran-3-ilo (2,0 g, 3,82 mmol). El medio se enfrió a -40 °C. A esto se le añadió /-PrOH saturado en amoniaco (60 ml). Después de que la mezcla se calentara a 80 °C y se agitara durante 18 horas, la mezcla resultante se concentró a presión reducida. El residuo se purificó por cromatografía sobre gel de sílice con diclorometano/metanol (5/1) para dar el compuesto del título. 1H ^rMⁿ: (400 MHz, cfe-DMSO, ppm): 88,06 (s, 1H), 7,33 (d, J = 2,0 Hz, 1H), 6,99 (s a, 2H), 6,54 (t, J = 6,0 Hz, 1H), 5,24 (d, J = 4,4 Hz, 1H), 4,99 (t, J = 5,6 Hz, 1H), 4,30-4,33 (m, 1H), 3,78-3,81 (m, 1H), 3,47-3,56 (m, 2H), 2,37-2,44 (m, 1H), 2,12-2,17 (m, 1H). F RMN: (376 MHz, cfe-DMSO, ppm): 8 -167,49 (s, 1F).

Etapa 4: Síntesis de 7-((2R,4S,5R)-4-((ferc-butildimetilsilil)oxi)-5-(((íercbutildimetilsilil)oxi)metil)tetrahidrofuran-2-il)-5-fluoro-7H-pirrolo[2,3-d]pirim idm-4-amma

Se añadieron (2R,3S,5R)-5-(4-amino-5-fluoro-7H-pirrolo[2,3-d]pirimidin-7-il)-2-(hidroximetil)tetrahidrofuran-3-ol (538 mg, 2,006 mmol) e imidazol (819 mg, 12,03 mmol) a un matraz de fondo redondo de 25 ml en una atmósfera de argón. A esto se le añadió DMF seca (5 ml), seguido de la adición de ferc-butilclorodimetilsilano (1209 mg, 8,02 mmol) en porciones. La mezcla resultante se agitó a 25 °C durante 3 horas. El progreso de la reacción se controló por TLC y LCMS. Una vez completada la reacción, la mezcla se diluyó con acetato de etilo (40 ml) y se lavó con agua (20 ml x 2), NaHCO3 acuoso saturado (20 ml x 2) y salmuera (20 ml x 2), respectivamente. La capa orgánica se recogió, se secó sobre Na2SO4 anhidro y se concentró a presión reducida. Después, el producto en bruto se purificó por cromatografía sobre gel de sílice con acetato de etilo/éter de petróleo (acetato de etilo del 28 % al 41 % en éter de petróleo) para dar el compuesto del título. 1H RMN: (300 MHz, cfe-DMSO, ppm): 88,07 (s, 1H), 7,27 (s, 1H), 6,99 (s a, 2H), 6,54 (t, J = 6,0 Hz, 1H), 4,49 (s, 1H), 3,60-3,78 (m, 3H), 2,51-2,53 (m, 1H), 2,16-2,20 (m, 1H), 0,88 (d, J = 4,2 Hz, 18H), 0,11 (s, 6H), 0,04 (s, 6H). LC-MS: (ES, m/z): 497,71 [M+H]+.

Etapa 5: Síntesis de ((2R,3S,5R)-5-(4-amino-5-fluoro-7H-pirrolo[2,3-d]pirimidin-7-il)-3-((íercbutildimetilsilil)oxi)tetrahidrofuran-2-il)metanol

A una solución agitada de 7-((2R,4S,5R)-4-((ferc-butildimetilsilil)oxi)-5-(((ferc-butildimetilsilil)oxi)metil)tetrahidrofuran-2-il)-5-fluoro-7H-pirrolo[2,3-d]pirimidin-4-amina (900 mg, 1,812 mmol) en THF (12 ml) se le añadió ácido trifluoroacético acuoso (ácido trifluoroacético/agua = 1/1, v/v, 6 ml) gota a gota con agitación a 0 °C en 10 minutos. La mezcla resultante se agitó a 0 °C. El progreso de la reacción se controló por TLC. Después de que se completara la reacción, la mezcla resultante se co-evaporó con tolueno (50 ml x 3) al vacío mientras se mantenía la temperatura por debajo de 25 °C para eliminar los volátiles. El residuo se purificó por cromatografía sobre gel de sílice con acetato de etilo/éter de petróleo (acetato de etilo del 52 % al 58 % en éter de petróleo) para dar el compuesto del título. 1H RMN: (300 MHz, cfe-DMSO, ppm): 88,07 (s, 1H), 7,34 (s, 1H), 6,99 (s a, 2H), 6,53 (t, J = 6,9 Hz, 1H), 5,04 (t, J = 5,6 Hz, 1H), 4,47-4,51 (m, 1H), 3,76-3,79 (m, 1H), 3,44-3,57 (m, 2H), 2,45-2,51 (m, 1H), 2,11-2,16 (m, 1H), 0,90 (s, 9H), 0,11 (s, 6H). LC-MS: (ES, m/z): 383,26 [M+H]+.

Etapa 6: Síntesis de (2S,3S,5R)-5-(4-amino-5-fluoro-7H-pirrolo[2,3-d]pirimidin-7-il)-3-((íercbutildim etilsilil)oxi)tetrahidrofuran-2-carbaldehído

A una solución agitada de ((2R,3S,5R)-5-(4-amino-5-fluoro-7H-pirrolo[2,3-d]pirimidin-7-il)-3-((fercbutildimetilsilil)oxi)tetrahidrofuran-2-il)metanol (360 mg, 0,941 mmol) en acetonitrilo anhidro (12 ml) en una atmósfera de argón, se le añadió ácido 2-yodoxibenzoico (791 mg, 2,82 mmol). La mezcla resultante se calentó a reflujo durante 35 minutos. La reacción se enfrió a temperatura ambiente y los sólidos se retiraron por filtración. El filtrado se recogió y después se concentró al vacío para dar el compuesto del título, que se usó directamente en la siguiente etapa de reacción sin purificación adicional.

Etapa 7: Síntesis de ((3S,5R)-5-(4-amino-5-fluoro-7H-pirrolo[2,3-d]pirimidin-7-il)-3-((íercbutildimetilsilil)oxi)tetrahidrofuran-2,2-diil)dimetanol

A una solución agitada de (2S,3S,5R)-5-(4-amino-5-fluoro-7H-pirrolo[2,3-d]pirimidin-7-il)-3-((tercbutildimetilsilil)oxi)tetrahidrofuran-2-carbaldehído (400 mg, 1,051 mmol, en bruto) en 1,4-dioxano (4 ml) se le añadió una solución de formaldehído (1,2 ml, 16,01 mmol), seguido de la adición de una solución de hidróxido sódico (1,2 ml, 2 M, 2,400 mmol) gota a gota durante 5 minutos. La mezcla resultante se agitó a 25 °C durante 3 horas y después la mezcla de reacción se neutralizó mediante la adición de ácido acético. La mezcla resultante se diluyó con acetato de etilo y se lavó sucesivamente con agua, NaHCO3 acuoso saturado y salmuera. La fase orgánica se secó sobre Na2SO4 y se evaporó a presión reducida. El residuo se disolvió en etanol (10 ml) y se añadió borohidruro sódico (80 mg, 2,103 mmol) en porciones a 0 °C. Después de agitar durante 1 hora a 25 °C, la mezcla de reacción se neutralizó mediante la adición de ácido acético y después se diluyó con cloroformo y se lavó sucesivamente con agua y salmuera. La capa orgánica se secó sobre Na2SO4 y se evaporó a presión reducida. El residuo se purificó por cromatografía sobre gel de sílice con diclorometano/metanol (30/1) para dar el compuesto del título. 1H ^rMⁿ. (300 MHz, de-DMSO, ppm): 88,06 (s, 1H), 7,36 (s, 1H), 6,99 (s a, 2H), 6,57 (t, J = 3,6 Hz, 1H), 4,99 (t, J = 4,8 Hz, 1H), 4,55-4,59 (m, 1H), 4,39 (t, J = 5,1 Hz, 1H), 3,45-3,55 (m, 4H), 2,57-2,65 (m, 1H), 2,17-2,20 (m, 1H), 0,90 (s, 9H), 0,09 (s, 6H).

Etapa 8: Síntesis de (2R,3S,5R)-5-(4-ammo-5-fluoro-7H-pirrolo[2,3-d]pirimidm-7-M)-3-((íerc-butMdimetNsilN)oxi)-2-(hidroximetil)tetrahidrofuran-2-carbaldehído

A una solución agitada de ((3S,5R)-5-(4-amino-5-fluoro-7H-pirrolo[2,3-d]pirimidin-7-il)-3-((tercbutildimetilsilil)oxi)tetrahidrofuran-2,2-diil)dimetanol (120 mg, 0,291 mmol) en acetonitrilo anhidro (8 ml) en una atmósfera de argón, se le añadió ácido 2-yodoxibenzoico (326 mg, 1,164 mmol). La mezcla resultante se agitó a 30 °C durante 24 horas y después se filtró y se lavó con diclorometano. El filtrado se recogió y se concentró a presión reducida para dar el compuesto del título, que se usó directamente en la siguiente etapa de reacción sin purificación adicional. LC-MS: (ES, m/z): 411,43 [M+H]+.

Etapa 9: Síntesis de ((2R,3S,5R)-5-(4-ammo-5-fluoro-7H-pirrolo[2,3-d]pirimidm-7-M)-3-((íercbutildimetilsilil)oxi)-2-etiniltetrahidrofuran-2-il)metanol

A una solución agitada de (2R,3S,5R)-5-(4-amino-5-fluoro-7H-pirrolo[2,3-d]pirimidin-7-il)-3-((terc-butildimetilsilil)oxi)-2-(hidroximetil)tetrahidrofuran-2-carbaldehído (110 mg, 0,268 mmol, en bruto) en metanol anhidro (8 ml) en una atmósfera de argón, se le añadió carbonato potásico (111 mg, 0,804 mmol). La mezcla se enfrió a 0 °C, y después se añadió (1-diazo-2-oxopropil)fosfonato de dimetilo (154 mg, 0,804 mmol) gota a gota durante 1 minuto. Después de que la mezcla se agitara a 25 °C durante una noche, la mezcla resultante se concentró al vacío y después se purificó por TLC preparativa (metanol/diclorometano = 1/15) para dar el compuesto del título. 1H RMN: (300 MHz, de-DMSO, ppm): 88,07 (s, 1H), 7,34 (s, 1H), 7,03 (a, 2H), 6,56 (t, J = 6,3 Hz, 1H), 5,43 (t, J = 6,0 Hz, 1H), 4,61 (t, J = 5,4 Hz, 1H), 3,58-3,67 (m, 1H), 3,49-3,53 (m, 1H), 3,47 (s, 1H), 2,52-2,61 (m, 1H), 2,23-2,31 (m, 1H), 0,91 (s, 9H), 0,11 (d, J = 2,4 Hz, 6H). LC-MS: (ES, m/z): 407,30 [M+H]+.

Etapa 10: Síntesis de (2R,3S,5R)-5-(4-ammo-5-fluoro-7H-pirrolo[2,3-d]pirimidm-7-M)-2-etmN-2-(hidroximetil)tetrahidrofuran-3-ol

A una solución agitada de ((2R,3S,5R)-5-(4-amino-5-fluoro-7H-pirrolo[2,3-d]pirimidin-7-il)-3-((terc-butildimetilsilil)oxi)-2-etiniltetrahidrofuran-2-il)metanol (40 mg, 0,098 mmol) en THF anhidro (2 ml) en una atmósfera de argón, se le añadió una solución de TBAF/THF (0,118 ml, 0,118 mmol) gota a gota con agitación durante 1 minuto a temperatura ambiente y la solución resultante se agitó a esta temperatura durante 2 horas. Una vez completada la reacción, la mezcla resultante se concentró al vacío y el residuo se purificó por TLC preparativa (metanol/diclorometano = 1/10) para dar el producto en bruto (28 mg). El producto en bruto se purificó adicionalmente por HPLC preparativa con las siguientes condiciones: (1#-Pre-HPLC-011(Waters)): Columna, Columna X-select CSH, 19 x 150 mm, 5 um; fase móvil, agua con amonio bicarbonato 10 mmol y acetonitrilo (de acetonitrilo al 5 % hasta el 35 % en 7,5 min, hasta el 95 % en 2 min); Detector, UV 254 y 220 nm. Las fracciones que contenían el producto se recogieron y se liofilizaron para dar el compuesto 2 en forma de un sólido. 1H RMN: (400 MHz, de-DMSO, ppm): 88,07 (s, 1H), 7,30 (d, J = 1,6 Hz, 1H), 7,02 (a, 2H), 6,55 (t, J = 5,8 Hz, 1H), 6,05 (a, 1H), 5,31-5,45 (m, 1H), 4,46 (t, J = 6,6 Hz, 1H), 3,58 (dd, J = 11,8 Hz, J = 29,4 Hz, 2H), 3,47 (s, 1H), 2,44-2,51 (m, 1H), 2,29-2,36 (m, 1H). F RMN: (376 MHz, de-DMSO, ppm): 8 -167,23 (s, IF). LC-MS: (ES, m/z): 293,10 [M+H]+, 315,10 [M+Na]+.

EJEMPLO 3: Síntesis de (2R,3S,5R)-5-(4-ammo-5-metN-7H-pirrolo[2,3-d]pirimidm-7-N)-2-etiml-2-(hidroximetil)tetrahidrofuran-3-ol (3)

Etapa 1: 5-bromo-4-cloro-7H-p¡rrolo[2,3-d]p¡r¡m¡dma

Se suspendió 4-doro-7H-pirrolo[2,3-d]pirimidina (1 g, 6,51 mmol) en DCM seco (20 ml) seguido de la adición de NBS (N-bromosuccinimida) (1,275 g, 7,16 mmol) a temperatura ambiente en una atmósfera de argón. La mezcla se calentó a reflujo y se agitó durante 16 horas. Después de que se consumiera toda la desaza-pirimidina de partida, la mezcla se enfrió a temperatura ambiente y se mantuvo durante 30 min. El precipitado se recogió por filtración, se lavó con DCM (2 x 20 ml) y se secó al vacío para dar el compuesto del título. LC-MS: (ES, m/z): 233,90 [M+H]+. 1H RMN: (300 MHz, de-DMSO, ppm): 612,98 (s a, 1H), 8,64 (s, 1H), 7,96 (s, 1H).

Etapa 2: Síntesis de 4-cloro-5-met¡l-7H-p¡rrolo[2,3-d]p¡r¡m¡dma

Se disolvió 5-bromo-4-cloro-7H-pirrolo[2,3-d]pirimidina (232 mg, 0,998 mmol) en THF seco (10 ml) y se enfrió a -78 °C en una atmósfera de argón. A esto se le añadió una solución de n-butil litio y hexanos (2,5 M, 0,88 ml, 2,196 mmol) gota a gota con agitación en 5 minutos. La mezcla se agitó durante aproximadamente 40 minutos seguido de la adición de yodometano (212 mg, 1,497 mmol). Después, la solución se calentó lentamente a temperatura ambiente en 2 horas. Se añadió agua (2 ml) para interrumpir la reacción. El material volátil se eliminó al vacío por debajo de 40 °C para producir una suspensión. La suspensión se re-disolvió en EtOAc (50 ml) y se lavó con agua (2 x 15 ml) y salmuera (20 ml). La capa orgánica se recogió, se secó sobre Na2SO4 anhidro, se filtró y el filtrado se concentró al vacío para producir un polvo que se recristalizó en MeOH para proporcionar el compuesto del título. LC-MS: (ES, m/z): 168,00 [M+H]+. 1H RMN: (300 MHz, de-DMSO, ppm): 612,22 (s a, 1H), 8,51 (s, 1H), 7,43 (s, 1H), 2,41 (d, J = 0,90 Hz, 1H).

Etapa 3: Síntes¡s de 4-met¡lbenzoato de (2R,3S,5R)-5-(4-cloro-5-met¡l-7H-p¡rrolo[2,3-d]p¡r¡m¡dm-7-¡l)-2-(((4-met¡lbenzo¡l)ox¡)met¡l)tetrah¡drofuran-3-¡lo

A una suspensión agitada de hidruro sódico (dispersión al 60 % en aceite, 0,453 g, 11,32 mmol) en ACN anhidro (50 ml) se le añadió 4-cloro-5-metil-7H-pirrolo[2,3-d]pirimidina (1,724 g, 10,29 mmol) en porciones en una atmósfera de argón y la mezcla se agitó a 25 °C durante 30 minutos. A la solución transparente resultante se le añadió el Intermed¡o A (4,0 g, 10,29 mmol) en porciones a 25 °C. La mezcla resultante se calentó a 50 °C y se agitó durante 3 horas. El progresó de la reacción se controló por TLC. La mezcla se concentró al vacío para dar un sólido, que se purificó por cromatografía sobre gel de sílice en columna usando acetato de etilo/éter de petróleo (1 :6, v/v) para dar el compuesto del título. LC-MS: (ES, m/z): 520,25 [M+H]+. 1H RMN: (300 MHz, CDCla, ppm): 68,55 (s, 1H), 7,90-7,99 (m, 4H), 7,20 7,30 (m, 4H), 7,11 (s, 1H), 6,81 (dd, J = 6,0 Hz, J = 8,4 Hz, 1H), 5,76 (dd, J = 1,5 Hz, J = 3,6 Hz, 1H), 4,73-4,79 (m, 1H), 4,54-4,64 (m, 2H), 2,79-2,88 (m, 1H), 2,68-2,75 (m, 1H), 2,43 (d, J = 3,0 Hz, 6H), 2,33 (d, J = 0,9 Hz, 3H).

Etapa 4: Síntesis de (2R,3S,5R)-5-(4-ammo-5-metil-7H-pirrolo[2,3-d]pirimidm-7-il)-2-(hidroximetil)tetrahidrofuran-3-ol

En una bomba de acero de 150 ml se puso 4-metilbenzoato de (2R,3S,5R)-5-(4-cloro-5-metil-7H-pirrolo[2,3-d]pirimidin-7-il)-2-(((4-metilbenzoil)oxi)metil)tetrahidrofuran-3-ilo (4,5 g, 7,79 mmol). El medio se enfrió a -40 °C. A esto se le añadió amoniaco 2-propanólico (/-PrOH/NH3 líquido = 1/1, v/v, 120 ml). La bomba se cerró herméticamente y la mezcla se calentó a 90 °C y se agitó durante 40 horas. Después de que se completara la reacción, la mezcla se enfrió a 0 °C y se concentró al vacío. El residuo se purificó por cromatografía en columna sobre gel de sílice usando DCM/MeOH (4/1) para dar el compuesto del título. LC-MS: (ES, m/z): 265,10 [M+H]+. 1H RMN: (300 MHz, de-DMSO, ppm): 68,00 (s, 1H), 7,08 (s, 1H), 6,58 (s a, 2H), 6,45 (dd, J = 6,0 Hz, J = 8,1 Hz, 1H), 5,21 (d, J = 3,3 Hz, 1H), 5,05 (t, J = 5,1 Hz, 1H), 4,32-4,36 (m, 1H), 3,78 (d, J = 2,1 Hz, 1H), 3,44-3,57 (m, 2H), 2,39-2,51 (m, 1H), 2,33 (s, 3H), 2,06-2,13 (m, 3H).

Etapa 5: Síntesis de 7-((2R,4S,5R)-4-((ferc-butildimetilsilil)oxi)-5-(((tercbutildimetilsilil)oxi)metil)tetrahidrofuran-2-il)-5-metil-7H-pirrolo[2,3-d]pirim idm-4-amma

A una solución agitada de (2R,3S,5R)-5-(4-amino-5-metil-7H-pirrolo[2,3-d]pirimidin-7-il)-2-(hidroximetil)tetrahidrofuran-3-ol (1,7 g, 6,43 mmol) y 1H-imidazol (1,752 g, 25,7 mmol) en d Mf seca (10 ml) se le añadió ferc-butilclorodimetilsilano (2,91 g, 19,30 mmol) con agitación a 25 °C en una atmósfera de argón. La mezcla resultante se agitó a 25 °C durante 3 horas y después se diluyó con acetato de etilo (100 ml) y se lavó con agua (2 x 30 ml) NaHCO3 acuoso (saturado, 2 x 30 ml) y salmuera (30 ml), respectivamente. La capa orgánica se recogió y se secó sobre Na2SO4 anhidro, se filtró y se concentró al vacío para dar un producto en bruto. Después, el producto en bruto se purificó por cromatografía en columna sobre gel de sílice usando acetato de etilo/éter de petróleo (AE del 28 % al 41 % en EP) para dar el compuesto del título. LC-MS: (ES, m/z): 493,30 [M+H]+. 1H RMN: (300 MHz, CDCh, ppm): 68,24 (s, 1H), 7,02 (s, 1H), 6,67 (dd, J = 6,3 Hz, J = 7,2 Hz, 1H), 5,37 (a, 2H), 4,54-4,57 (m, 1H), 3,94 (dd, J = 3,3 Hz, J = 6,3 Hz, 1H), 3,72-3,82 (m, 2H), 2,37-2,46 (m, 4H), 2,25-2,32 (m, 1H), 0,91 (2s, 18H), 0,10 (s, 12H).

Etapa 6: Síntesis de ((2R,3S,5R)-5-(4-ammo-5-metil-7H-pirrolo[2,3-d]pirimidm-7-il)-3-(íercbutildimetilsilil)tetrahidrofuran-2-il)metanol

A una solución agitada de 7-((2R,4S,5R)-4-(terc-butildimetilsilil)-5-((tercbutildimetilsilil)metil)tetrahidrofuran-2-il)-5-metil-7H-pirrolo[2,3-d]pirimidin-4-amina (2,5 g, 5,07 mmol) en THF (30 ml) se le añadió una solución enfriada previamente de ácido trifluoroacético/agua (1/1, v/v, 15 ml) gota a gota con agitación a 0 °C en 10 minutos. La mezcla resultante se agitó a 0 °C durante 3 horas. El progresó de la reacción se controló por TLC. La solución resultante se co-evaporó con tolueno (3 x 100 ml) mientras se mantenía la temperatura interna por debajo de 25 °C. Después, el producto en bruto resultante se purificó por cromatografía en columna sobre gel de sílice usando acetato de etilo/éter de petróleo (AE del 50 % al 58 % en EP) para dar el compuesto del título. LC-MS: (ES, m/z): 493,30 [M+H]+. 1H RMN: (300 MHz, CD3OD, ppm): 68,18 (s, 1H), 7,41 (s, 1H), 6,59 (dd, J = 6,0 Hz, J = 7,8 Hz, 1H), 4,56-4,60 (m, 1H), 3,93 (dd, J = 3,9 Hz, J = 6,6 Hz, 1H), 3,65-3,70 (m, 2H), 2,45-2,54 (m, 1H), 2,42 (d, J = 0,9 Hz, 3H), 2,23-2,31 (m, 1H), 0,91 (s, 9H), 0,11 (s, 6H).

Etapa 7: Síntesis de (2R,3S,5R)-5-(4-ammo-5-metil-7H-pirrolo[2,3-d]pirimidm-7-il)-3-(íercbutildim etilsilil)tetrahidrofuran-2-carbaldehído

A una suspensión agitada de ((2R,3S,5R)-5-(4-amino-5-metil-7H-pirrolo[2,3-d]pirimidin-7-il)-3-(tercbutildimetilsilil)tetrahidrofuran-2-il)metanol (600 mg, 1,585 mmol) en ACN anhidro (12 ml) se le añadió IBX (888 mg, 3,17 mmol) en una atmósfera de argón. La mezcla se calentó a reflujo y se agitó durante 55 minutos. El progresó de la reacción se controló por LCMS. La mezcla se enfrió a temperatura ambiente y los sólidos se retiraron por filtración. El filtrado se recogió y después se concentró al vacío para dar el compuesto del título, que se usó directamente en la siguiente etapa de reacción sin purificación adicional. LC-MS: (ES, m/z): 377,15 [M+H]+, 409,15 [M+H+MeOH]+.

Etapa 8: Síntesis de ((3S,5R)-5-(4-amino-5-metil-7H-pirrolo[2,3-d]pirimidin-7-il)-3-(íercbutildimetilsilil)tetrahidrofuran-2,2-diil)dimetanol

A una solución agitada de (2R,3S,5R)-5-(4-amino-5-metil-7H-pirrolo[2,3-d]pirimidin-7-il)-3-(tercbutildimetilsilil)tetrahidrofuran-2-carbaldehído (420 mg, en bruto) en 1,4-dioxano (12 ml) y agua (3 ml) en un matraz de fondo redondo de 50 ml, se le añadió formaldehído acuoso (al 37 % p/p, 6 ml) seguido de la adición de una solución de hidróxido sódico (2 N, 6 ml, 0,12 mmol) gota a gota en 2 minutos. La mezcla resultante se agitó a 25 °C durante 3 horas. Después de que se consumiera todo el nucleósido-aldehído de partida, la mezcla de reacción se neutralizó mediante la adición de AcOH (aproximadamente 0,8 ml). La mezcla resultante se diluyó con AcOEt (50 ml) y se lavó sucesivamente con agua (30 ml), NaHCO3 acuoso saturado (20 ml) y salmuera (20 ml). La capa orgánica se secó sobre Na2SO4 anhidro, se filtró y se concentró al vacío. El residuo se re-disolvió en EtOH anhidro (8 ml) y se añadió borohidruro sódico (84,4 mg, 2,23 mmol) en porciones a 0 °C. Después de agitar durante 1 hora a 25 °C, la mezcla de reacción se neutralizó mediante la adición de AcOH. La mezcla se concentró al vacío, y se repartió entre CHCh (50 ml) y agua (30 ml). La capa acuosa se extrajo de nuevo con CHCh (2 x 20 ml). La capa orgánica combinada se lavó sucesivamente con agua y salmuera, se secó sobre Na2SO4 anhidro, se filtró y se concentró al vacío. El residuo se purificó por cromatografía en columna sobre gel de sílice usando diclorometano/metanol (MeOH al 5,5 % en DCM) para dar el compuesto del título. LC-MS: (ES, m/z): 409,35 [M+H]+, 431,35 [M+Na]+. 1H RMN: (300 MHz, de-DMSO, ppm): 68,00 (s, 1H), 7,11 (s, 1H), 6,56 (a, 2H), 6,48 (dd, J = 6,0 Hz, J = 8,4 Hz, 1H), 6,45-6,47 (m, 1H), 5,02 (t, J = 5,5 Hz, 1H), 4,58 (t, J = 2,7 Hz, 1H), 4,35 (dd, J = 4,5 Hz, J = 6,3 Hz, 1H), 3,42-3,60 (m, 4H), 2,58-2,63 (m, 1H), 2,34 (s, 3H), 2,09-2,16 (m, 1H), 0,90 (s, 9H), 0,09 (s, 6H).

Etapa 9: Síntesis de (2R,3S,5R)-5-(4-ammo-5-metN-7H-pirrolo[2,3-d]pmmidm-7-M)-3-((íerc-butMdimetNsMN)oxi)-2-(hidroximetil)tetrahidrofuran-2-carbaldehído

Se suspendió ((3S,5R)-5-(4-amino-5-metil-7H-pirrolo[2,3-d]pirimidin-7-il)-3-((terc-butildimetilsilil)oxi)tetrahidrofuran-2,2-diil)dimetanol (140 mg, 0,343 mmol) en ACN seco (15 ml) en una atmósfera de argón seguido de la adición de ácido 2-yodilbenzoico (240 mg, 0,857 mmol). La mezcla se agitó a 30 °C durante 20 horas. El sólido se retiró por filtración y se lavó con CHCh (2 x 20 ml). El filtrado combinado se concentró al vacío para proporcionar el compuesto del título, que se usó directamente en la siguiente etapa de reacción sin purificación adicional. LC-MS: (ES, m/z): 407,25 [M+H]+.

Etapa 10: Síntesis de ((2R,3S,5R)-5-(4-ammo-5-metil-7H-pirrolo[2,3-d]pmmidm-7-M)-3-((íercbutildimetilsilil)oxi)-2-etiniltetrahidrofuran-2-il)metanol

A una solución agitada de (2R,3S,5R)-5-(4-amino-5-metil-7H-pirrolo[2,3-d]pirimidin-7-il)-3-((terc-butildimetilsilil)oxi)-2-(hidroximetil)tetrahidrofuran-2-carbaldehído (120 mg, ~0,236 mmol, en bruto) en MeOH seco (15 ml) se le añadió K2CO3 (82 mg, 0,590 mmol) a 0 °C en una atmósfera de argón, seguido de la adición de una solución de (1-diazo-2-oxopropil)fosfonato de dimetilo (91 mg, 0,472 mmol) en MeOH (2 ml) gota a gota con agitación a 0 °C en 2 minutos. La mezcla resultante se calentó gradualmente a 25 °C y se agitó durante 16 horas. La mezcla se concentró al vacío. El residuo se purificó por cromatografía en columna ultrarrápida sobre gel de sílice usando acetato de etilo/éter de petróleo (AE al 30 %-50 % en EP) para proporcionar el compuesto del título. LC-MS: (ES, m/z): 403,25 [M+H]+. 1H RMN: (300 MHz, de-DMSO, ppm): 68,01 (s, 1H), 7,07 (s, 1H), 6,60 (a, 2H), 6,49 (dd, J = 6,0 Hz, J = 7,2 Hz, 1H), 5,48 (t, J = 5,7 Hz, 1H), 4,62 (t, J = 5,7 Hz, 1H), 3,57-3,68 (m, 1H), 3,48-3,52 (m, 1H), 3,45 (s, 1H), 2,49-2,62 (m, 1H), 2,33 (s, 3H), 2,21-2,31 (m, 1H), 0,91 (s, 9H), 0,12 (d, J = 6,0 Hz, 6H).

Etapa 11: Síntesis de (2R,3S,5R)-5-(4-ammo-5-metil-7H-pirrolo[2,3-d]pirimidm-7-N)-2-etmN-2-(hidroximetil)tetrahidrofuran-3-ol (3)

A una solución agitada de ((2R,3S,5R)-5-(4-amino-5-metil-7H-pirrolo[2,3-d]pirimidin-7-il)-3-((terc-butildimetilsilil)oxi)-2-etiniltetrahidrofuran-2-il)metanol (27 mg, 0,067 mmol) en THF seco (1 ml) se le añadió una solución de fluoruro de tetra-butilamonio y THF (1,0 M, 0,067 ml, 0,067 mmol) gota a gota con agitación a 0 °C. La mezcla resultante se agitó a 25 °C durante 30 minutos. El progresó de la reacción se controló por TLC. La solución resultante se concentró al vacío. El producto en bruto se purificó por HPLC preparativa con las siguientes condiciones (1#-Pre-HPLC-011(Waters)): Columna, Columna XBridge™ C18, 19 x 150 mm, 5 um; fase móvil, agua con amonio bicarbonato 10 mmol y acetonitrilo (de acetonitrilo al 30 % hasta el 70 % en 10 min, hasta el 95 % en 2 min, hasta el 5 % en 1,5 min); Caudal: 20 ml/min; Detector, UV 254 y 220 nm. Las fracciones que contenían el producto se recogieron y se liofilizaron para dar el compuesto del título. LC-MS: (ES, m/z): 289,05 [M+H]+. 1H RMN: (300 MHz, de-DMSO, ppm): 68,00 (s, 1H), 7,06 (s, 1H), 6,58 (a, 2H), 6,48 (t, J = 6,60 Hz, 1H), 5,45 (d, J = 5,1 Hz, 1H), 5,38 (t, J = 6,0 Hz, 1H), 4,46 (c, J = 5,4 Hz, 1H), 3,50-3,64 (m, 2H), 3,44 (s, 1H), 2,44-2,54 (m, 1H), 2,33 (s, 3H), 2,24-2,32 (m, 1H).

EJEMPLO 4: Síntesis de (2R,3S,5R)-5-(4-ammo-2-cloro-7H-pirrolo[2,3-d]pirimidm-7-M)-2-etiml-2-(hidroximetil)tetrahidrofuran-3-ol (4)

Etapa 1: Síntesis de 4-metilbenzoato de (2R,3S,5R)-5-(2,4-dicloro-7H-pirrolo[2,3-d]pirimidm-7-il)-2-(((4-metilbenzoil)oxi)metil)tetrahidrofuran-3-ilo

A una suspensión agitada de hidruro sódico (dispersión al 60 % en aceite mineral, 0,509 g, 12,73 mmol) en acetonitrilo anhidro (125 ml) se le añadió 2,4-dicloro-7H-pirrolo[2,3-d]pirimidina (2,176 g, 11,57 mmol) en porciones en una atmósfera de argón y la mezcla se agitó a temperatura ambiente durante 30 minutos. A la solución transparente anterior se le añadió el Intermedio A (4,5 g, 11,57 mmol) por lotes con agitación. La mezcla de reacción se dejó en agitación a temperatura ambiente durante 2 horas. El progresó de la reacción se controló por TLC. La evaporación de la mezcla de reacción dio un residuo oleoso, que se purificó por cromatografía sobre gel de sílice en columna usando acetato de etilo/éter de petróleo (1/6, v/v) para dar el compuesto del título. LC-MS: (ES, m/z): 540,20 [M+H]+.¹H RMN: (400 MHz, CDCla, ppm): 88,01 (d, J = 8,0 Hz, 2H), 7,93 (d, J = 8,0 Hz, 2H), 7,43 (d, J = 3,6 Hz, 1H), 7,22-7,37 (m, 4H), 6,80 (dd, J = 6,0 Hz, J = 8,0 Hz, 1H), 6,61 (d, J = 4,0 Hz, 1H), 5,76 (t, J = 2,8 Hz, 1H), 4,76 (dd, J = 3,6 Hz, J = 12,0 Hz, 1H), 4,63-4,69 (m, 2H), 2,76-2,86 (m, 2H), 2,47-2,45 (2s, 6H).

Etapa 2: Síntesis de (2R,3S,5R)-5-(4-ammo-2-cloro-7H-pirrolo[2,3-d]pirimidm-7-il)-2-(hidroximetil)tetrahidrofuran-3-ol

A una bomba de acero de 250 ml se le añadió 4-metilbenzoato de (2R,3S,5R)-5-(2,4-dicloro-7H-pirrolo[2,3-d]pirimidin-7-il)-2-(((4-metilbenzoil)oxi)metil)tetrahidrofuran-3-ilo (5 g, 9,25 mmol). El medio se enfrió a -40 °C. A esto se le añadió amoniaco isopropanólico (isopropanol/amoniaco líquido = 1/3, v/v, 150 ml). El medio se cerró herméticamente, se calentó a 90 °C y se agitó durante 16 horas. La mezcla resultante se enfrió a temperatura ambiente y se concentró al vacío. El residuo se re-disolvió en MeOH (100 ml), seguido de la adición de una solución de metóxido sódico y MeOH (1,0 M, 16,89 ml, 16,89 mmol) gota a gota a 0 °C. La mezcla resultante se calentó a 25 °C y se agitó durante 2 horas. Después de que se completara la reacción, la mezcla se neutralizó mediante la adición de ácido acético (0,01 ml) y se concentró al vacío. El residuo se suspendió en DCM/MeOH (v/v, 100/1, 150 ml). Después de agitar durante 20 minutos, se precipitó un sólido. El sólido se recogió por filtración, se lavó con DCM y se secó al vacío para dar el compuesto del título. LC-MS: (ES, m/z): 285,20 [M+H]+.¹H RMN (400 MHz, CD3OD, ppm): 87,31 (d, J = 2,8 Hz, 1H), 6,58 (d, J = 2,8 Hz, 1H), 6,45 (t, J = 6,8 Hz, 1H), 4,52-4,53 (m, 1H), 3,98-4,01 (m, 1H), 3,81 (dd, J = 2,4 Hz, J = 12,0 Hz, 1H), 3,73 (dd, J = 3,2 Hz, J = 12,0 Hz, 1H), 2,63-2,70 (m, 1H), 2,29-2,34 (m, 1H).

Etapa 3: Síntesis de 7-((2R,4S,5R)-4-((ferc-butMdimetMsilil)oxi)-5-(((fercbutMdimetMsiMl)oxi)metil)tetrahidrofuran-2-il)-2-cloro-7H-pirrolo[2,3-d]pirimidm-4-amma

A una solución agitada de (2R,3S,5R)-5-(4-amino-2-cloro-7H-pirrolo[2,3-d]pirimidin-7-il)-2-(hidroximetil)tetrahidrofuran-3-ol (3,2 g, 6,74 mmol) e imidazol (1,836 g, 27,0 mmol) en DMF seca (10 ml) en una atmósfera de argón se le añadió TBS-Cl (3,05 g, 20,23 mmol) a temperatura ambiente. La mezcla resultante se agitó durante una noche. La mezcla de reacción se diluyó con acetato de etilo (100 ml) y se lavó sucesivamente con agua (2 x 20 ml), NaHCO3 acuoso (saturado, 2 x 20 ml) y salmuera (2 x 20 ml). La capa orgánica se secó sobre Na2SO4 anhidro, se filtró y se concentró al vacío. El residuo se purificó por cromatografía en columna sobre gel de sílice usando acetato de etilo/éter de petróleo (AE del 35 % al 42 % en EP) para dar el compuesto del título. LC-MS: (ES, m/z): 513,20 [M+H]+. 1H RMN: (400 MHz, CDCI3, ppm): 57,32 (s, 1H), 6,61 (t, J = 6,8 Hz, 1H), 6,38 (s, 1H), 5,44 (a, 2H), 4,59-4,61 (m, 1H), 3,91-3,99 (m, 1H), 3,77-3,88 (m, 2H), 2,44-2,51 (m, 1H), 2,34-2,37 (m, 1H), 0,93-0,95 (m, 18H), 0,11-0,12 (m, 12H). 1H RMN: (400 MHz, CD3OD, ppm): 57,31 (d, J = 2,8 Hz, 1H), 6,58 (d, J = 2,8 Hz, 1H), 6,45 (t, J = 6,8 Hz, 1H), 4,52-4,53 (m, 1H), 3,98-4,01 (m, 1H), 3,81 (dd, J = 2,4 Hz, J = 12,0 Hz, 1H), 3,73 (dd, J = 3,2 Hz, J = 12,0 Hz, 1H), 2,63-2,70 (m, 1H), 2,29-2,34 (m, 1H).

Etapa 4: Síntesis de ((2R,3S,5R)-5-(4-ammo-2-doro-7H-pirrolo[2,3-d]pirimidm-7-N)-3-((íercbutildimetilsilil)oxi)tetrahidrofuran-2-il)metanol

A una solución agitada de 7-((2R,4S,5R)-4-((ferc-but¡ld¡met¡ls¡l¡l)ox¡)-5-(((ferc-but¡ld¡met¡ls¡l¡l)ox¡)met¡l)tetrah¡drofuran-2-¡l)-2-cloro-7H-p¡rrolo[2,3-d]p¡r¡m¡d¡n-4-am¡na (2,3 g, 4,48 mmol) en THF (40 ml) se le añad¡ó una soluc¡ón enfr¡ada prev¡amente de ác¡do tr¡fluoroacét¡co/agua (v/v, 1/1, 20 ml) gota a gota con ag¡tac¡ón a 0 °C en 10 m¡nutos. La mezcla resultante se ag¡tó durante 2 horas a 0 °C. El progreso de la reacc¡ón se controló por TLC. La soluc¡ón resultante se co-evaporó con tolueno (3 x 60 ml) m¡entras se mantenía la temperatura ¡nterna por debajo de 25 °C para dar un jarabe de color rosa. El res¡duo se pur¡f¡có por cromatografía en columna sobre gel de síl¡ce usando acetato de et¡lo/d¡clorometano (1/1) para dar el compuesto del título. LC-MS: (ES, m/z): 399,20 [M+H]+. 1H RMN: (400 MHz, de-DMSO, ppm): 57,53 (a, 2H), 7,35 (d, J = 3,2 Hz, 1H), 6,60 (d, J = 3,2 Hz, 1H), 6,35 (t, J = 6,8 Hz, 1H), 4,95 (t, J = 5,4 Hz, 1H), 4,51-4,54 (m, 1H), 3,73-3,79 (m, 1H), 3,46-3,55 (m, 2H), 2,54-2,59 (m, 1H), 2,16-2,20 (m, 1H), 0,90 (s, 9H), 0,11 (s, 6H). 1H RMN: (400 MHz, de-DMSO, ppm): 57,53 (a, 2H), 7,35 (d, J = 3,2 Hz, 1H), 6,60 (d, J = 3,2 Hz, 1H), 6,35 (t, J = 6,8 Hz, 1H), 4,95 (t, J = 5,4 Hz, 1H), 4,51-4,54 (m, 1H), 3,73-3,79 (m, 1H), 3,46-3,55 (m, 2H), 2,54-2,59 (m, 1H), 2,16-2,20 (m, 1H), 0,90 (s, 9H), 0,11 (s, 6H).

Etapa 5: Síntesis de (2S,3S,5R)-5-(4-ammo-2-doro-7H-pirrolo[2,3-d]pirimidm-7-N)-3-((íercbutildim etilsilil)oxi)tetrahidrofuran-2-carbaldehído

A una soluc¡ón ag¡tada de ((2R,3S,5R)-5-(4-am¡no-2-cloro-7H-p¡rrolo[2,3-d]p¡r¡m¡d¡n-7-¡l)-3-((fercbut¡ld¡met¡ls¡l¡l)ox¡)tetrah¡drofuran-2-¡l)metanol (600 mg, 1,504 mmol) en DMSO anh¡dro (3 ml) y aceton¡tr¡lo (15 ml) en una atmósfera de argón se le añad¡ó IBX (632 mg, 2,256 mmol). La mezcla se ag¡tó a temperatura amb¡ente durante 2,5 horas. La mezcla de reacc¡ón se d¡luyó con acetato de et¡lo (20 ml), se lavó con salmuera (2 x 10 ml), se secó sobre sulfato sód¡co anh¡dro y se f¡ltró. El f¡ltrado se concentró al vacío para proporc¡onar el compuesto del título, que se usó d¡rectamente en la s¡gu¡ente etapa s¡n pur¡f¡cac¡ón ad¡c¡onal. LC-MS: (ES, m/z): 415,40 [M+H2O]+.

Etapa 6: Síntesis de ((3S,5R)-5-(4-ammo-2-doro-7H-pirrolo[2,3-d]pirimidm-7-N)-3-((íercbutildimetilsilil)oxi)tetrahidrofuran-2,2-diil)dimetanol

A una soluc¡ón ag¡tada de (2S,3S,5R)-5-(4-am¡no-2-cloro-7H-p¡rrolo[2,3-d]p¡r¡m¡d¡n-7-¡l)-3-((fercbut¡ld¡met¡ls¡l¡l)ox¡)tetrah¡drofuran-2-carbaldehído (700 mg, en bruto) en 1,4-d¡oxano (28 ml) y agua (7 ml) se le añad¡ó una soluc¡ón de formaldehído (7 ml, 93 mmol), segu¡do de la ad¡c¡ón de una soluc¡ón acuosa de h¡dróx¡do sód¡co (7 ml, 2 N, 14,00 mmol) gota a gota en 5 m¡nutos. La mezcla resultante se ag¡tó a 25 °C durante 3 horas. Después de que se consum¡era todo el nucleós¡do-aldehído de part¡da, la mezcla de reacc¡ón se neutral¡zó med¡ante la ad¡c¡ón de ác¡do acét¡co (0,5 ml). La mezcla se d¡luyó con acetato de et¡lo (100 ml) y se lavó suces¡vamente con agua (2 x 20 ml), NaHCO3 acuoso saturado (20 ml) y salmuera (20 ml). La capa orgán¡ca se secó sobre Na2SO4, se f¡ltró y se concentró al vacío. El res¡duo se re-d¡solv¡ó en EtOH anh¡dro (4 ml) y se añad¡ó boroh¡druro sód¡co (133 mg, 3,53 mmol) en una atmósfera de argón en porc¡ones a 0 °C. Después de ag¡tar durante 1 hora a 25 °C, la mezcla se neutral¡zó med¡ante la ad¡c¡ón de ác¡do acét¡co (1,0 ml). La mezcla se concentró al vacío. El res¡duo se d¡luyó con CHCh (100 ml) y se lavó suces¡vamente con agua (2 x 20 ml) y salmuera (1 x 20 ml). La capa orgán¡ca se secó sobre Na2SO4, se f¡ltró y se concentró al vacío. El res¡duo se pur¡f¡có por cromatografía en columna sobre gel de síl¡ce usando DCM/MeOH (30/1) para dar el compuesto del título. LC-MS: (ES, m/z): 429,30 [M+H]+. 1H RMN: (300 MHz, de-DMSO, ppm): 5 7,51 (a, 2H), 7,38 (d, J = 3,9 Hz, 1H), 6,60 (d, J = 3,6 Hz, 1H), 6,40 (t, J = 6,9 Hz, 1H), 4,88 (t, J = 5,5 Hz, 1H), 4,62 (dd, J = 3,3 Hz, J = 5,5 Hz, 1H), 4,39 (t, J = 5,7 Hz, 1H), 3,43-3,63 (m, 4H), 2,61-2,70 (m, 1H), 2,21-2,29 (m, 1H), 0,90 (s, 9H), 0,10 (s, 6H).

Etapa 7: Síntesis de (2R,3S,5R)-5-(4-ammo-2-cloro-7H-pirrolo[2,3-d]pirimidm-7-M)-3-((ferc-butMdimetilsMN)oxi)-2-(hidroximetil)tetrahidrofuran-2-carbaldehído

A una soluc¡ón ag¡tada de ((3S,5R)-5-(4-am¡no-2-cloro-7H-p¡rrolo[2,3-d]p¡r¡m¡d¡n-7-¡l)-3-((fercbut¡ld¡met¡ls¡l¡l)ox¡)tetrah¡drofuran-2,2-d¡¡l)d¡metanol (150 mg, 0,350 mmol) en aceton¡tr¡lo seco (15 ml) se le añad¡ó IBX (294 mg, 1,049 mmol) en una atmósfera de argón. La mezcla resultante se ag¡tó a 30 °C durante 2 horas. La mezcla se f¡ltró y se lavó con CHCh (3 x 15 ml). El f¡ltrado se recog¡ó y después se concentró al vacío para dar el compuesto del título, que se usó d¡rectamente en la s¡gu¡ente etapa s¡n pur¡f¡cac¡ón ad¡c¡onal. LC-MS: (ES, m/z): 427,30 [M+H]+.

Etapa 8: Síntesis de ((2R,3S,5R)-5-(4-ammo-2-cloro-7H-pirrolo[2,3-d]pirimidm-7-M)-3-((ferc-butMdimetilsMN)oxi)-2-etiniltetrahidrofuran-2-il)metanol

Se d¡solv¡ó (2R,3S,5R)-5-(4-am¡no-2-cloro-7H-p¡rrolo[2,3-d]p¡r¡m¡d¡n-7-¡l)-3-((ferc-but¡ld¡met¡ls¡l¡l)ox¡)-2-(h¡drox¡met¡l)tetrah¡drofuran-2-carbaldehído (200 mg, 0,468 mmol) en MeOH anh¡dro (9 ml) segu¡do de la ad¡c¡ón de carbonato potásico (162 mg, 1,171 mmol) a 0 °C en una atmósfera de argón. A la suspensión se le añadió una solución de (1-diazo-2-oxopropil)fosfonato de dimetilo (180 mg, 0,937 mmol) en MeOH (1 ml) gota a gota con agitación en 1 minuto. La mezcla resultante se calentó a 30 °C y se agitó durante 16 horas. La mezcla de reacción se concentró al vacío. El residuo se repartió entre acetato de etilo (30 ml) y agua (10 ml). La capa orgánica se recogió, se lavó con salmuera (2 x 10 ml), se secó sobre Na2SO4 anhidro, se filtró y se concentró al vacío. Después, el residuo se purificó por TLC preparativa (MeOH/DCM = 1/15) para proporcionar el compuesto del título. LC-MS: (ES, m/z): 423,60 [M+H]+.

1H RMN: (400 MHz, de-DMSO, ppm): 67,55 (a, 2H), 7,34 (d, J = 3,6 Hz, 1H), 6,61 (d, J = 3,6 Hz, 1H), 6,38 (t, J = 6,4 Hz, 1H), 5,32 (t, J = 6,0 Hz, 1H), 4,67 (t, J = 6,0 Hz, 1H), 3,58-3,61 (m, 1H), 3,48-3,52 (m, 1H), 3,47 (s, 1H), 2,60-2,63 (m, 1H), 2,31-2,35 (m, 1H), 0,91 (s, 9H), 0,11 (d, J = 3,6 Hz, 6H).

Etapa 9 : Síntesis de (2R,3S,5R)-5-(4-ammo-2-doro-7H-pirrolo[2,3-d]pirimidm-7-M)-2-etmN-2-(hidroximetil)tetrahidrofuran-3-ol

A una solución agitada de ((2R,3S,5R)-5-(4-amino-2-cloro-7H-pirrolo[2,3-d]pirimidin-7-il)-3-((terc-butildimetilsilil)oxi)-2-etiniltetrahidrofuran-2-il)metanol (60 mg, 0,142 mmol) en THF (1 ml) se le añadió una solución de TBAF y THF (1 M, 0,28 ml, 0,284 mmol) gota a gota con agitación a temperatura ambiente. La solución resultante se agitó a temperatura ambiente durante 2 horas. La mezcla se concentró al vacío. Después, el residuo se purificó por HPLC prep. con las siguientes condiciones (1#-Pre-UPLC-011(Waters)): Columna, Columna SunFire Prep C18 o Bd , 5 um, 19 x 150 mm; fase móvil, agua (con bicarbonato de amonio 10 mmol) y acetonitrilo (acetonitrilo al 8 % hasta el 40 % en 6 min, hasta el 95 % en 1,5 min, hasta el 5 % en 1 min); Detector, uv 254 y 220 nm. Las fracciones que contenían el producto se recogieron y se liofilizaron para dar el compuesto 4 en forma de un sólido. LC-MS: (ES, m/z): 309,00 [M+H]+. 1H RMN: (400 MHz, de-DMSO, ppm): 67,54 (a, 2H), 7,33 (d, J = 4,0 Hz, 1H), 6,60 (d, J = 3,6 Hz, 1H), 6,41 (t, J = 6,4 Hz, 1H), 5,52-5,53 (m, 1H), 5,26 (t, J = 6,0 Hz, 1H), 4,47-4,48 (m, 1H), 3,61 (dd, J = 5,2 Hz, J = 11,6 Hz, 1H), 3,53 (dd, J = 6,2 Hz, J = 11,8 Hz, 1H), 3,48 (s, 1H), 2,41-2,50 (m, 1H), 2,32-2,38 (m, 1H)

EJEMPLO 5: Síntesis de (2R,3S,5R)-5-(4-ammo-5-bromo-7H-pirrolo[2,3-d]pmmidm-7-M)-2-etmil-2-(hidroximetil)tetrahidrofuran-3-ol (5)

Etapa 1: Síntesis de 4-metilbenzoato de (2R,3S,5S)-5-(5-bromo-4-cloro-7H-pirrolo[2,3-d]pirimidin-7-il)-2-(((4-metilbenzoil)oxi)metil)tetrahidrofuran-3-ilo

Se añadió hidruro sódico (0,479 g, 11,98 mmol) a una solución agitada de 5-bromo-4-cloro-7H-pirrolo[2,3-d]pirimidina (2,32 g, 9,98 mmol, síntesis descrita en el Ejemplo 3, Etapa 1) en acetonitrilo (30 ml). La mezcla resultante se agitó durante 30 minutos a 0 °C y después se añadió 4-metilbenzoato de (2R,3S,5R)-5-cloro-2-(((4-metilbenzoil)oxi)metil)tetrahidrofuran-3-ilo (4,27 g, 10,98 mmol). Después de que la mezcla resultante se agitara a temperatura ambiente durante 1 hora, se diluyó con 200 ml de acetato de etilo, se lavó con bicarbonato sódico acuoso saturado (60 ml) y cloruro sódico acuoso saturado (60 ml), se secó sobre sulfato sódico anhidro y se concentró al vacío. El residuo se purificó por cromatografía en columna sobre gel de sílice con éter de petróleo\acetato de etilo (1:2) para dar el compuesto del título: 1H RMN (300 MHz, DMSO) 58,65 (s, 1H), 8,22 (s, 1H), 7,96 (d, J = 8,4 Hz, 2H), 7,84 (d, J = 8,1 Hz, 2H), 7,24-7,39 (m, 4H), 6,76-6,79 (m, 1H), 5,74-5,76 (m, 1H), 4,51-4,68 (m, 3H), 3,05-3,15 (m, 1H), 2,74-2,79 (m, 1H), 2,37 (d, J = 1,8 Hz, 6H).

Etapa 2: Síntesis de (2R,3S,5R)-5-(4-ammo-5-bromo-7H-pirrolo[2,3-d]pirimidm-7-il)-2-(hidroximetil)tetrahidrofuran-3-ol

Se añadió 4-metilbenzoato de (2R,3S,5R)-5-(5-bromo-4-cloro-7H-pirrolo[2,3-d]pirimidin-7-il)-2-(((4-metilbenzoil)oxi)metil)tetrahidrofuran-3-ilo (4,50 g, 7,69 mmol) a /'-PrOH saturado con NH3 (15 ml) a -60 °C. La mezcla resultante se agitó a 80 °C durante 12 horas y después se enfrió a temperatura ambiente y se evaporó al vacío para dar 4-metilbenzoato de (2R,3S,5R)-5-(4-amino-5-bromo-7H-pirrolo[2,3-d]pirimidin-7-il)-2-(((4-metilbenzoil)oxi)metil)tetrahidrofuran-3-ilo (4,2 g, 7,43 mmol) en forma de un sólido. Este compuesto en bruto se disolvió en 30 ml de MeOH y después se añadió metanolato sódico (14,86 ml, 14,86 mmol). Después de que la solución resultante se agitara a temperatura ambiente durante 2 horas, se inactivó con ácido acético (0,1 ml) y se concentró al vacío. El producto en bruto se purificó por cromatografía en columna sobre gel de sílice con éter de petróleo/acetato de etilo (1:2) para dar el compuesto del título: 1H RMN (300 MHz, DMSO) 58,12 (s, 1H), 7,78 (s, 1H), 6,78 (s, 2H), 6,48-6,51 (m, 1H), 5,25 (s, 1H), 5,01 (s, 1H), 4,32 (s, 1H), 3,81 (s, 1H), 3,17 (s, 1H), 2,35-2,50 (m, 1H), 2,12-2,19 (m, 1H).

Etapa 3: Síntesis de 5-bromo-7-((2R,4S,5R)-4-((ferc-butildimetilsilil)oxi)-5-(((tercbutildimetilsilil)oxi)metil)tetrahidrofuran-2-il)-7H-pirrolo[2,3-d]pirim idm-4-amma

Se añadió terc-butilclorodimetilsilano (1,786 g, 11,85 mmol) a una solución agitada de (2R,3S,5R)-5-(4-amino-5-bromo-7H-pirrolo[2,3-d]pirimidin-7-il)-2-(hidroximetil)tetrahidrofuran-3-ol (1,3 g, 3,95 mmol), y 1H-imidazol (1,076 g, 15,80 mmol) en DMF (8 ml). La mezcla resultante se agitó a temperatura ambiente durante 4 horas y después se diluyó con 400 ml de acetato de etilo, se lavó con bicarbonato sódico acuoso saturado (80 ml) y cloruro sódico acuoso saturado (80 ml), se secó sobre sulfato sódico anhidro y se concentró al vacío. El residuo se purificó por cromatografía en columna sobre gel de sílice con acetato de etilo/éter de petróleo (1:4) para dar el compuesto del título: 1H RMN (300 MHz, DMSO) 58,10 (s, 1H), 7,55 (s, 1H), 6,79 (s, 2H), 6,48-6,53 (m, 1H), 4,50 (s, 1H), 3,62-3,76 (m, 3H), 2,43 2,50 (m, 1H), 2,17-2,16 (m, 1H), 0,88 (d, J = 2,7 Hz, 18H), 0,10 (s, 6H), 0,05 (s, 6H).

Etapa 4: Síntesis de ((2R,3S,5R)-5-(4-ammo-5-bromo-7H-pirrolo[2,3-d]pirimidm-7-M)-3-((íercbutildim etilsilil)oxi)tetrahidrofuran-2-ilo)

Se disolvió 5-bromo-7-((2R,4S,5R)-4-((tercbutildimetilsilil)oxi)-5-(((tercbutildimetilsilil)oxi)metil)tetrahidrofuran-2-il)-7H-pirrolo[2,3-d]pirimidin-4-amina (1,55 g, 2,78 mmol) en THF (4 ml) y después se trató con una solución enfriada previamente de ácido trifluoroacético/agua (v/v = 1/1, 4 ml) gota a gota con agitación a 0 °C en 10 minutos. Después de que la mezcla resultante se agitara a 0 °C durante 2 horas, se coevaporó con tolueno por debajo de 25 °C para dar un jarabe de color rosa. El residuo se aplicó sobre una columna de gel de sílice, eluyendo con acetato de etilo/diclorometano (1/1) para dar el compuesto del título: 1H RMN (300 MHz, DMSO) 58,19 (s, 1H), 7,74 (s, 1H), 7,28 (s, 2H), 6,50 (c, J = 6,0 Hz, 2H), 4,51 (c, J = 2,7 Hz, 1H), 3,81 (s, 1H), 3,47-3,57 (m, 2H), 2,49-2,58 (m, 1H), 2,17-2,22 (m, 1H), 0,85 (s, 9H), 0,09 (s, 6H).

Etapa 5: Síntesis de 4-metilbenzoato de (2R,3S)-2-(((ferc-butildifemlsilil)oxi)metil)-5-metoxi-2-feniltetrahidrofuran-3-ilo

Se añadió ácido 2-yodoxibenzoico (839 mg, 3,00 mmol) a una solución de ((2R,3S,5R)-5-(4-amino-5-bromo-7H-pirrolo[2,3-d]pirimidin-7-il)-3-((terc-butildimetilsilil)oxi)tetrahidrofuran-2-il)metanol (443 mg, 0,999 mmol) en acetonitrilo (45 ml). La solución resultante se agitó a 80 °C durante 2 horas, después se enfrió a 0 °C, se filtró y se concentró a presión reducida. Esto dio como resultado el compuesto del título, que se usó directamente en la siguiente etapa sin purificación adicional: MS (ES, m/z): 441,08 [M+h ]+.

Etapa 6: Síntesis de ((2S,4R)-4-(4-amino-5-bromo-7H-pirrolo[2,3-d]pirimidin-7-il)-2-((íercbutildimetilsilil)oxi)ciclopentano-1,1-diil)dimetanol

Se añadió hidróxido sódico (4,03 ml, 8,07 mmol) a una solución agitada de (2S,3S,5R)-5-(4-amino-5-bromo-7H-pirrolo[2,3-d]pirimidin-7-il)-3-((terc-butildimetilsilil)oxi)tetrahidrofuran-2-carbaldehído (445 mg, 1,008 mmol) y formaldehído (1009 mg, 10,08 mmol) en dioxano (6 ml). La mezcla resultante se agitó a temperatura ambiente durante 3 horas y después se diluyó con 150 ml de acetato de etilo, se lavó con bicarbonato sódico acuoso saturado (30 ml) y cloruro sódico acuoso saturado (30 ml), se secó sobre sulfato sódico anhidro y se concentró al vacío para dar un sólido. Se añadió borohidruro sódico (109 mg, 2,88 mmol) a la solución del sólido anterior en etanol (15 ml) a 0 °C. La solución resultante se agitó a temperatura ambiente durante 2 horas, después se inactivó con ácido acético (0,1 ml) y se concentró a presión reducida. El producto en bruto se aplicó sobre una cromatografía en columna sobre gel de sílice con éter de petróleo/acetato de etilo (1:2) para dar el compuesto del título. MS (ES, m/z): 473,43 [M+H]+.

Etapa 7: Síntesis de (2R,3S,5R)-5-(4-amino-5-bromo-7H-pirrolo[2,3-d]pirimidin-7-il)-3-((íercbutildimetilsilil)oxi)-2-(hidroximetil)tetrahidrofuran-2-carbaldehído

Se añadió ácido 2-yodoxibenzoico (302 mg, 1,077 mmol) a una solución de((3S,5R)-5-(4-amino-5-bromo-7H-pirrolo[2,3-d]pirimidin-7-il)-3-((terc-butildimetilsilil)oxi)tetrahidrofuran-2,2-diil)dimetanol (170 mg, 0,359 mmol) en acetonitrilo (40 ml). Después de que la solución resultante se agitara a 0 °C durante 12 horas, se enfrió a 0 °C y después se concentró a presión reducida para dar el compuesto del título, que se usó directamente en la siguiente etapa sin purificación adicional. MS (ES, m/z): 471,43 [M+H]+.

Etapa 8: Síntesis de ((2R,3S,5R)-5-(4-ammo-5-bromo-7H-pirrolo[2,3-d]pirimidm-7-M)-3-((fercbutildimetilsilil)oxi)-2-etiniltetrahidrofuran-2-il)metanol

Se añadió (1-diazo-2-oxopropil)fosfonato de dimetilo (139 mg, 0,721 mmol) a una solución de(2R,3S,5R)-5-(4-amino-5-bromo-7H-pirrolo[2,3-d]pirimidin-7-il)-3-((tercbutildimetilsilil)oxi)-2-(hidroximetil)tetrahidrofuran-2-carbaldehído (170 mg, 0,361 mmol) y carbonato potásico (125 mg, 0,902 mmol) en metanol (8 ml) a 0 °C. La solución resultante se agitó a temperatura ambiente durante 12 horas, después se filtró y se concentró a presión reducida. El compuesto en bruto se purificó por TLC prep. con éter de petróleo/acetato de etilo (1:2) para dar el compuesto del título. ¹H RMN (300 MHz, CD3OD, ppm) 58,00 (s, 1H), 7,39 (s, 1H), 6,44-6,47 (m, 1H), 4,62-4,66 (m, 1H), 3,61-3,71 (m, 2H), 2,90 (s, 1H), 2,25-2,55 (m, 2H), 0,88 (s, 9H), 0,57 (d, J = 3 Hz, 6H).

Etapa 9: Síntesis de (2R,3S,5R)-5-(4-ammo-5-bromo-7H-pirrolo[2,3-d]pmmidm-7-M)-2-etiml-2-(hidroximetil)tetrahidrofuran-3-ol

Se disolvieron ((2R,3S,5R)-5-(4-amino-5-bromo-7H-pirrolo[2,3-d]pirimidin-7-il)-3-((tercbutildimetilsilil)oxi)-2-etiniltetrahidrofuran-2-il)metanol (40 mg, 0,086 mmol) y TBAF (0,086 ml, 0,086 mmol) en THF (1 ml). La solución resultante se agitó durante 2 horas a 30 °C, después se evaporó y se purificó en las siguientes condiciones: Columna: X Bridge C18, 19 x 150 mm, 5 um; Fase móvil A: Agua/TFA al 0,05%, Fase móvil B: ACN; Caudal: 20 ml/min; Gradiente: de 30 % de B a 70 % de B en 10 min; 254 nm. Esto dio como resultado el compuesto 5 en forma de un sólido: ¹H RMN (300 MHz, DMSO, ppm) 58,11 (s, 1H), 7,59 (s, 1H), 6,52 (t, J = 6,6 Hz, 1H), 4,48 (t, J = 6,6 Hz, 1H), 3,53-3,64 (m, 2H), 3,44 (s, 1H), 2,33-2,52 (m, 2H); MS (ES, m/z): 353,17 [M+H]+.

EJEMPLO 6: Síntesis de (2R,3S,5R)-5-(4-ammo-5-cloro-7H-pirrolo[2,3-d]pirimidm-7-M)-2-etmN-2-(hidroximetil)tetrahidrofuran-3-ol (6)

A una mezcla de 4-cloro-7H-pirrolo[2,3-d]pirimidina (2,5 g, 16,28 mmol) en DCM seco (100 ml) se le añadió NCS (N-clorosuccinimida) (4,35 g, 32,6 mmol) a 25 °C. La mezcla resultante se agitó durante 16 horas a 40 °C en una atmósfera de argón. Cuando la 4-cloro-7H-pirrolo[2,3-d]pirimidina se consumió, la mezcla se filtró directamente sin refrigeración. El sólido se recogió, se lavó con DCM (20 ml) y se secó al vacío para dar 4,5-dicloro-7H-pirrolo[2,3-d]pirimidina en forma de un sólido. LC-MS: (ES, m/z): 188,01 [M+H]+. ¹H RMN: (300 MHz, d⁶-DMSO, ppm): 5 12,90 (a, 1H), 8,65 (s, 1H), 7,93 (d, J = 2,7 Hz, 1H).

Etapa 2: Síntesis de 4-metilbenzoato de (2R,3S,5R)-5-(4,5-dicloro-7H-pirrolo[2,3-d]pirimidm-7-il)-2-(((4-metilbenzoil)oxi)metil)tetrahidrofuran-3-ilo

A una suspensión de NaH (dispersión al 60 % en aceite mineral, 0,538 g, 13,46 mmol) en ACN anhidro (100 ml) en una atmósfera de argón en un matraz de fondo redondo de tres bocas y de 250 ml, se le añadió 4,5-dicloro-7H-pirrolo[2,3-d]pirimidina (2,3 g, 12,23 mmol) en porciones y la mezcla se agitó a temperatura ambiente durante 30 minutos. La mezcla turbia se volvió transparente y después se añadió 4-metilbenzoato de (2R,3S)-5-cloro-2-(((4-metilbenzoil)oxi)metil)tetrahidrofuran-3-ilo (intermedio A, 4,76 g, 12,23 mmol) en porciones con agitación en 5 minutos. La mezcla resultante se calentó a 50 °C y se agitó durante 2 horas. El progresó de la reacción se controló por TLC. El material volátil se eliminó al vacío. El producto en bruto se purificó por cromatografía en columna sobre gel de sílice usando acetato de etilo al 10 %-40 % en éter de petróleo para proporcionar el compuesto del título. LC-MS: (ES, m/z): 540,39 [M+H]+.¹H RMN: (300 MHz, CDCla, ppm): 88,64 (s, 1H), 7,91-7,99 (m, 4H), 7,39 (s, 1H), 7,25 7,30 (m, 4H), 6,80 (t, J = 6,9 Hz, 1H), 5,75 (dd, J = 3,6 Hz, J = 6,0 Hz, 1H), 4,60-4,78 (m, 3H), 2,76-2,80 (m, 2H), 2,44 (d, J = 4,8 Hz, 6H).

Etapa 3: Síntesis de (2R,3S,5R)-5-(4-ammo-5-cloro-7H-pirrolo[2,3-d]pirimidm-7-il)-2-(hidroximetil)tetrahidrofuran-3-ol

En una bomba de acero de 150 ml, se puso 4-metilbenzoato de (2R,3S,5R)-5-(4,5-dicloro-7H-pirrolo[2,3-d]pirimidin-7-il)-2-(((4-metilbenzoil)oxi)metil)tetrahidrofuran-3-ilo (3,6 g, 6,66 mmol). El medio se enfrió a -40 °C. A esto se le añadió amoniaco isopropanólico (isopropanol/amoniaco líquido = 1/3, v/v, 120 ml). El medio se cerró herméticamente, se calentó a 90 °C y se agitó durante 16 horas. El análisis por TLC indicó que el nucleósido de partida se había consumido y el producto diana se observó como producto principal. La mezcla resultante se concentró al vacío. El producto en bruto se purificó por cromatografía en columna sobre gel de sílice usando metanol al 2 % -10 % en diclorometano para proporcionar el compuesto del título. LC-MS: (ES, m/z): 284,70 [M+H]+. ¹H RMN (300 MHz, de-DMSO, ppm): 88,09 (s, 1H), 7,58 (s, 1H), 6,87 (a, 2H), 6,51 (dd, J = 6,3 Hz, J = 7,8 Hz, 1H), 5,25 (d, J = 4,2 Hz, 1H), 5,03 (t, J = 5,6 Hz, 1H), 4,30-4,34 (m, 1H), 3,81 (dd, J = 4,3 Hz, J = 6,8 Hz, 1H), 3,46-3,60 (m, 2H), 2,40-2,48 (m, 1H), 2,13-2,20 (m, 1H).

Etapa 4. Síntesis de 7-((2R,4S,5R)-4-((ferc-butildimetilsilil)oxi)-5-(((tercbutildimetilsilil)oxi)metil)tetrahidrofuran-2-il)-5-cloro-7H-pirrolo[2,3-d]pirim idm-4-amma

A una solución agitada de (2R,3S,5R)-5-(4-amino-5-cloro-7H-pirrolo[2,3-d]pirimidin-7-il)-2-(hidroximetil)tetrahidrofuran-3-ol (1,7 g, 5,97 mmol) en DMF (10 ml) se le añadieron 1H-imidazol (1,423 g, 20,90 mmol) y TBDMS-Cl (2,70 g, 17,91 mmol) sucesivamente a 0 °C en una atmósfera de argón. La mezcla resultante se calentó a 25 °C y se agitó durante 2 horas. La solución resultante se diluyó con acetato de etilo (100 ml) y se lavó con agua (100 ml). La capa acuosa se extrajo de nuevo con acetato de etilo (2 x 100 ml). Las capas orgánicas se combinaron, se lavaron sucesivamente con NaHCO3 ac. saturado (2 x 100 ml) y salmuera (2 x 100 ml), se secaron sobre Na2SO4 anhidro, se filtraron y se concentraron al vacío. El residuo se purificó por cromatografía en columna sobre gel de sílice usando acetato de etilo al 2 %-10 % en éter de petróleo para proporcionar el compuesto del título. LC-MS: (ES, m/z): 513,22 [M+H]+.¹H RMN: (300 MHz, d⁶-DMSO, ppm): 58,10 (s, 1H), 7,50 (s, 1H), 6,85 (a, 2H), 6,51 (t, J = 6,8 Hz, 1H), 4,48-4,52 (m, 1H), 3,62-3,80 (m, 3H), 2,55-2,60 (m, 1H), 2,17-2,24 (m, 1H), 0,89 (s, 18H), 0,08 (d, J = 13,6 Hz, 12H).

Etapa 5. Síntesis de ((2R,3S,5R)-5-(4-amino-5-cloro-7H-pirrolo[2,3-d]pirimidin-7-il)-3-((íercbutildimetilsilil)oxi)tetrahidrofuran-2-il)metanol

A una solución agitada de 7-((2R,4S,5R)-4-((ferc-butildimetilsilil)oxi)-5-(((tercbutildimetilsilil)oxi)metil)tetrahidrofuran-2-il)-5-cloro-7H-pirrolo[2,3-d]pirimidin-4-amina (2,42 g, 4,72 mmol) en THF (48 ml) se le añadió una solución enfriada previamente de ácido trifluoroacético/agua (1/1, v/v, 24 ml) gota a gota con agitación a 0 °C en 10 minutos. La mezcla resultante se agitó a 0 °C durante 4 horas. El progresó de la reacción se controló por TLC. La solución resultante se co-evaporó con tolueno (3 x 100 ml) mientras se mantenía la temperatura interna por debajo de 25 °C. El material en bruto resultante se purificó por cromatografía en columna sobre gel de sílice usando metanol al 2 %-10 % en diclorometano para proporcionar el compuesto del título. LC-MS: (ES, m/z): 398,96 [M+H]+. ¹H RMN: (300 MHz, d⁶-DMSO, ppm): 88,28 (s, 1H), 7,86 (a, 2H), 7,78 (s, 1H), 6,52 (t, J = 6,8 Hz, 1H), 4,53 (t, J = 2,6 Hz, 1H), 3,83 (dd, J = 4,5 Hz, J = 6,9 Hz, 1H), 3,48-3,60 (m, 2H), 2,50-2,58 (m, 1H), 2,18-2,25 (m, 1H), 0,90 (s, 9H), 0,11 (s, 6H).

Etapa 6. Síntesis de (2S,3S,5R)-5-(4-amino-5-cloro-7H-pirrolo[2,3-d]pirimidin-7-il)-3-((íerc butildim etilsilil)oxi)tetrahidrofuran-2-carbaldehído

A una solución agitada de ((2R,3S,5R)-5-(4-amino-5-cloro-7H-pirrolo[2,3-d]pirimidin-7-il)-3-((fercbutildimetilsilil)oxi)tetrahidrofuran-2-il)metanol (300 mg, 0,752 mmol) en ACN anhidro (30 ml) se le añadió ácido 2-yodoxibenzoico (632 mg, 2,256 mmol) en una atmósfera de argón. La mezcla se calentó a 85 °C y se agitó durante 20 minutos. El sólido se retiró por filtración. El filtrado se concentró al vacío para proporcionar el compuesto del título, que se usó directamente en la siguiente etapa de reacción sin purificación adicional. LC-MS: (ES, m/z): 396,94 [M+H]+.

Etapa 7. Síntesis de ((3S,5R)-5-(4-ammo-5-doro-7H-pirrolo[2,3-d]pirimidm-7-N)-3-((íercbutildimetilsilil)oxi)tetrahidrofuran-2,2-diil)dimetanol

A una solución agitada de (2S,3S,5R)-5-(4-am¡no-5-cloro-7H-p¡rrolo[2,3-d]p¡r¡m¡d¡n-7-¡l)-3-((tercbutildimetilsilil)oxi)tetrahidrofuran-2-carbaldehído (434 mg, 0,820 mmol) en 1,4-d¡oxano (25 ml) en un matraz de fondo redondo de 100 ml, se le añad¡ó una soluc¡ón de formaldehído (5 ml), segu¡do de la ad¡c¡ón de una soluc¡ón de h¡dróx¡do sód¡co (2 N, 5 ml, 10,00 mmol) gota a gota a 0 °C en 5 m¡nutos. La mezcla resultante se calentó a 25 °C y se ag¡tó durante 3 horas. Después de que se consum¡era todo el nucleós¡do-aldehído de part¡da, la mezcla de reacc¡ón se neutral¡zó med¡ante la ad¡c¡ón de AcOH. La mezcla se d¡luyó con acetato de et¡lo (60 ml) y se lavó sucesivamente con agua (2 x 20 ml), NaHCO3 acuoso saturado (2 x 20 ml) y salmuera (2 x 20 ml). La capa orgán¡ca se secó sobre Na2SO4 y se evaporó a pres¡ón reduc¡da. El res¡duo se re-d¡solv¡ó en EtOH anh¡dro (30 ml) y se añad¡ó tetrah¡droborato sód¡co (62,0 mg, 1,640 mmol) en porc¡ones a 0 °C en una atmósfera de argón. Después de ag¡tar durante 16 hora a 25 °C, la mezcla de reacc¡ón se neutral¡zó med¡ante la ad¡c¡ón de AcOH. La mezcla se concentró al vacío. El res¡duo se suspend¡ó en CHCh (40 ml) y se lavó sucesivamente con agua (2 x 15 ml) y salmuera (2 x 15 ml). La capa orgán¡ca se secó sobre Na2SO4, se f¡ltró y se concentró al vacío. El res¡duo se pur¡f¡có por cromatografía en columna sobre gel de síl¡ce con d¡clorometano/metanol (30/1) para dar el compuesto del título. LC-MS: (ES, m/z): 428,99 [M+H]+. 1H RMN: (300 MHz, de-DMSO, ppm): 68,10 (s, 1H), 7,60 (s, 1H), 6,86 (a, 2H), 6,54 (t, J = 6,9 Hz, 1H), 5,01 (t, J = 5,3 Hz, 1H), 4,59 (dd, J = 3,0 Hz, J = 5,4 Hz, 1H), 4,40 (t, J = 5,6 Hz, 1H), 3,42-3,61 (m, 4H), 2,60-2,69 (m, 1H), 2,18-2,25 (m, 1H), 0,89 (s, 9H), 0,09 (s, 6H).

Etapa 8. Síntesis de (2R,3S,5R)-5-(4-ammo-5-cloro-7H-pirrolo[2,3-d]pmmidm-7-M)-3-((íerc-butMdimetNsMN)oxi)-2-(hidroximetil)tetrahidrofuran-2-carbaldehído

Se d¡solv¡ó ((3S,5R)-5-(4-am¡no-5-cloro-7H-p¡rrolo[2,3-d]p¡r¡m¡d¡n-7-¡l)-3-((tercbut¡ld¡met¡ls¡l¡l)ox¡)tetrah¡drofuran-2,2-d¡¡l)d¡metanol (166 mg, 0,387 mmol) en ACN anh¡dro (20 ml) en una atmósfera de argón y después se le añad¡ó IBX (325 mg, 1,161 mmol). La mezcla resultante se calentó a 30 °C y se ag¡tó durante 20 horas. El sól¡do se ret¡ró por f¡ltrac¡ón. El f¡ltrado se concentró al vacío para proporc¡onar el compuesto del título, que se usó d¡rectamente en la s¡gu¡ente etapa de reacc¡ón s¡n pur¡f¡cac¡ón ad¡c¡onal. LC-MS: (ES, m/z): 426,97 [M+H]+.

Etapa 9: Síntesis de ((2R,3S,5R)-5-(4-ammo-5-cloro-7H-pirrolo[2,3-d]pirimidm-7-M)-3-((ferc-butMdimetNsMN)oxi)-2-etiniltetrahidrofuran-2-il)metanol

A una soluc¡ón ag¡tada de (2R,3S,5R)-5-(4-am¡no-5-cloro-7H-p¡rrolo[2,3-d]p¡r¡m¡d¡n-7-¡l)-3-((terc-but¡ld¡met¡ls¡l¡l)ox¡)-2-(h¡drox¡met¡l)tetrah¡drofuran-2-carbaldehído (160 mg, 0,375 mmol) en MeOH seco (8 ml) se le añad¡ó K2CO3 (129 mg, 0,937 mmol) segu¡do de la ad¡c¡ón de (1-d¡azo-2-oxoprop¡l)fosfonato de d¡met¡lo (144 mg, 0,749 mmol) a 0 °C gota a gota con ag¡tac¡ón en una atmósfera de argón. La mezcla resultante se calentó gradualmente a 25 °C y se ag¡tó durante 16 horas. La mezcla resultante se concentró al vacío. El res¡duo se pur¡f¡có por cromatografía en columna sobre gel de síl¡ce usando acetato de et¡lo al 30 %-50 % en éter de petróleo para proporc¡onar el compuesto del título. LC-MS: (ES, m/z): 422,98 [M+H]+. 1H RMN (300 MHz, d6-DMSO, ppm): 68,10 (s, 1H), 7,58 (s, 1H), 6,90 (a, 2H), 6,52 (t, J = 6,6 Hz, 1H), 5,42-5,46 (m, 1H), 4,64 (t, J = 5,7 Hz, 1H), 3,59-3,67 (m, 1H), 3,50-3,54 (m, 1H), 3,48 (s, 1H), 2,59 2,64 (m, 1H), 2,27-2,31 (m, 1H), 0,91 (s, 9H), 0,12 (s, 6H).

Etapa 10: Síntesis de (2R,3S,5R)-5-(4-ammo-5-cloro-7H-pirrolo[2,3-d]pirimidm-7-M)-2-etiml-2-(hidroximetil)tetrahidrofuran-3-ol (6)

A una soluc¡ón ag¡tada de ((2R,3S,5R)-5-(4-am¡no-5-cloro-7H-p¡rrolo[2,3-d]p¡r¡m¡d¡n-7-¡l)-3-((terc-but¡ld¡met¡ls¡l¡l)ox¡)-2-et¡n¡ltetrah¡drofuran-2-¡l)metanol (64 mg, 0,151 mmol) en THF (3 ml) se le añad¡ó una soluc¡ón de TBAF (1,0 M, 151 |jl, 0,151 mmol) gota a gota con ag¡tac¡ón en una atmósfera de argón. La soluc¡ón resultante se ag¡tó durante 1 hora a 25 °C. La mezcla resultante se concentró al vacío. El res¡duo se apl¡có sobre una columna de gel de síl¡ce y eluyendo con DCM/MeOH (20/1 a 5/1) para dar un producto en bruto. El producto en bruto se pur¡f¡có ad¡c¡onalmente por HPLC prep. con las s¡gu¡entes cond¡c¡ones (1#-Pre-UPLC-01 1 (Waters)): Columna, Columna SunF¡re Prep C18 OBD (Opt¡mum Bed Dens¡ty), 5 um, 19 x 150 mm; fase móv¡l, agua (con b¡carbonato de amon¡o 10 mmol) y aceton¡tr¡lo (aceton¡tr¡lo al 10 % hasta el 45 % en 5 m¡n, hasta el 95 % en 1,5 m¡n, hasta el 5 % en 1 m¡n); Detector, uv 254 y 220 nm. Las fracc¡ones que contenían el producto se recog¡eron y se l¡of¡l¡zaron para dar el compuesto 6 en forma de un sól¡do. LC-MS: (ES, m/z): 308,72 [M+H]+. 1H RMN: (400 MHz, de-DMSO, ppm): 68,10 (s, 1H), 7,54 (s, 1H), 6,88 (a, 2H), 6,52 (t, J = 6,4 Hz, 1H), 5,39-5,52 (m, 2H), 4,48 (t, J = 6,6 Hz, 1H), 3,59 (dd, J = 12,0 Hz, J = 28,8 Hz, 2H), 3,48 (s, 1H), 2,47-2,54 (m, 1H), 2,31-2,37 (m, 1H).

INTERMEDIO B

Síntesis de ((2R,3S,5R)-5-(4-ammo-5-yodo-7H-pirrolo[2,3-d]pirimidm-7-M)-3-((tercbutMdimetMsiMl)oxi)-2-etiniltetrahidrofuran-2-il)metanol (Intermedio B)

Etapa 1: Síntesis de 4-cloro-5-yodo-7H-pirrolo[2,3-d]pirimidma

A una mezcla de 4-doro-7H-pirrolo[2,3-d]p¡nmid¡na (5 g, 32,6 mmol) en DMF (60 ml) en una atmósfera de argón se le añadió NIS (N-yodosuccinimida) (7,33 g, 32,6 mmol) a 0 °C. La mezcla resultante se agitó durante 15 horas a 25 °C en una atmósfera de argón en la oscuridad. La mezcla de reacción se vertió en agua fría y la mezcla se filtró, el sólido se lavó con agua fría (3 x 50 ml) y se secó a 25 °C para dar 4-cloro-5-yodo-7H-p¡rrolo[2,3-d]p¡^m¡d¡na en forma de un sólido. LC-MS: (ES, m/z): 279,9 [M+H]⁺¹.¹H RMN: (400 MHz, CD3SOCD3, ppm): 12,96 (s a, 1H), 8,62 (s, 1H), 7,95 (d, J = 1,8 Hz, 1H)

Etapa 2: Síntesis de 4-metilbenzoato de (2R,3S,5R)-5-(4-cloro-5-yodo-7H-pirrolo[2,3-d]pirimidm-7-il)-2-(((4-metilbenzoil)oxi)metil)tetrahidrofuran-3-ilo

A una mezcla de hidruro sódico (0,845 g, 21,13 mmol) y 4-cloro-5-yodo-7H-p¡rrolo[2,3-d]p¡^m¡d¡na (5,37 g, 19,21 mmol) en acetonitrilo (150 ml) en una atmósfera de argón se le añadió 4-metilbenzoato de (2R,3S,5R)-5-cloro-2-(((4-metilbenzoi^oxOmetil^etrahidrofuran^-ilo (7,47 g, 19,21 mmol) a 20 °C. La mezcla resultante se agitó durante 2 horas a 50 °C en una atmósfera de argón y después el disolvente se evaporó a presión reducida. El residuo se purificó por cromatografía en columna sobre gel de sílice 100-200, eluyendo con AE/p E (1/5) para dar el compuesto del título. LC-MS: (ES, m/z): 613,9 [M+H]⁺¹. : (400 MHz, CDCl3, ppm): 8,63 (s, 1H), 8,00 (d, J = 8,4 Hz, 2H), 7,95 (d, J = 8,4 Hz, 2H), 7,60 (s, 1H), 7,32-7,25 (m, 4H), 6,82 (t, J = 7,2 Hz, 1H), 5,77 (dd, J = 6,4 Hz, 4 Hz, 1H), 4,80-4,76 (m, 1H), 4,71-4,62 (m, 2H), 2,46 (s, 6H), 1,66-1,31 (m, 2H)

Etapa 3: Síntesis de (2R,3S,5R)-5-(4-ammo-5-yodo-7H-pirrolo[2,3-d]pirimidm-7-il)-2-(hidroximetil)tetrahidrofuran-3-ol

Se añadió 4-metilbenzoato de ^ R ^ S ^ R ^ -^ -c lo ro ^ -y o d o ^ H -p ir ro lo ^ ^ -d J p in m id in ^ - il)^ ^ -metilbenzoi^oxOmetil^etrahidrofuran^-ilo (12 g, 18,99 mmol) se añadió a una mezcla agitada y enfriada a -50 °C de amoniaco (120 ml, 240 mmol) en 2-propanol (30 ml) y la mezcla se agitó a 90 °C durante 48 horas. El disolvente se evaporó a presión reducida. El residuo se purificó por cromatografía en columna sobre gel de sílice 100-200, eluyendo con DCM/MeOH (10/1) para dar el compuesto del título. LC-MS: (ES, m/z): 377,0 [M+H]+. ¹H RMN: (300 MHz, CD3SOCD3, ppm): 8,10 (s, 1H), 7,81 (s, 1H), 6,79 (s a, 2H), 6,79-6,51 (dd, J = 8,1 Hz, 3 Hz, 1H), 5,27 (d, J = 3,9 Hz, 1H), 5,05 (t, J = 5,4 Hz, 1H), 4,33 (s a, 1H), 3,81 (s a, 1H), 3,60-3,46 (m, 2H), 2,51-2,44 (m, 1H), 2,19-2,10 (m, 1H)

Etapa 4: Síntesis de 7-((2R,4S,5R)-4-((ferc-butildimetMsiNl)oxi)-5-(((tercbutildimetilsilM)oxi)metM)tetrahidrofuran-2-il)-5-yodo-7H-pirrolo[2,3-d]pirimidm-4-amma

A una mezcla de (2R,3S,5R)-5-(4-am¡no-5-yodo-7H-p¡rrolo[2,3-d]p¡r¡m¡d¡n-7-¡l)-2-(h¡drox¡met¡l)tetrah¡drofuran-3-ol (6 g, 15,95 mmol) e ¡m¡dazol (4,34 g, 63,8 mmol) en DMF (30 ml) en una atmósfera de argón se le añad¡ó TBS-Cl (44,7 ml, 44,7 mmol) a 0 °C. La mezcla resultante se ag¡tó durante 2 horas a 23 °C en una atmósfera de argón. El progresó de la reacc¡ón se controló por LCMS. La mezcla de reacc¡ón se ¡nact¡vó con agua (150 ml) y se extrajo con acetato de et¡lo (3 x 200 ml). La capa orgán¡ca comb¡nada se lavó con salmuera (5 x 200 ml), se secó sobre sulfato sód¡co anh¡dro y se f¡ltró. El f¡ltrado se concentró a pres¡ón reduc¡da, el res¡duo se pur¡f¡có por una columna de gel de síl¡ce, eluyendo con AE/PE (3:7) para proporc¡onar el compuesto del título. LC-MS: (ES, m/z): 605,3 [M+H]⁺¹. ¹H RMN: (400 MHz, CD3SOCD3, ppm): 8,10 (s, 1H), 7,58 (s, 1H), 6,67 (s a, 2H), 6,49 (t, J = 6,8 Hz, 1H), 4,50 (t, J = 2,4 Hz, 1H), 3,88-3,81 (m, 1H), 3,74 (dd, J = 10,8 Hz, 5,6 Hz, 1H), 3,65 (dd, J = 10,8 Hz, 4 Hz, 1H), 2,50-2,49 (m, 1H), 2,25-2,14 (m, 1H), 0,89 (s, 18H), 0,10-0,07 (m, 12H).

Etapa 5: Síntesis de ((2R,3S,5R)-5-(4-ammo-5-yodo-7H-pirrolo[2,3-d]pirimidm-7-il)-3-((íercbutildimetilsilil)oxi)tetrahidrofuran-2-il)metanol

A una mezcla de -7-((2R,4S,5R)-4-((ferc-but¡ld¡met¡ls¡l¡l)ox¡)-5-(((ferc but¡ld¡met¡ls¡l¡l)ox¡)met¡l)tetrah¡drofuran-2-¡l)-5-yodo-7H-p¡rrolo[2,3-d]p¡r¡m¡d¡n-4-am¡na (6,6 g, 10,92 mmol) en THF (66 ml) se le añad¡ó una soluc¡ón de TFA (16 ml, 208 mmol) en agua (16 ml) a 0 °C. La mezcla resultante se ag¡tó durante 4 horas a 0 °C. El progreso de la reacc¡ón se controló por LCMS. El d¡solvente se evaporó a pres¡ón reduc¡da. El res¡duo se d¡solv¡ó en DCM/MeOH (10/1, 150 ml) y el valor de pH de la soluc¡ón se ajustó a 7 con h¡drogenocarbonato sód¡co (5,0 g), se f¡ltró y el d¡solvente se evaporó a pres¡ón reduc¡da. El res¡duo se pur¡f¡có por cromatografía en columna sobre gel de síl¡ce 100-200, eluyendo con AE al 40 - 50 % en EP para dar el compuesto del título. LC-MS: (ES, m/z): 491,1 [M+H]⁺¹. ¹H RMN: (400 MHz, CD3SOCD3, ppm): 8,14 (s, 1H), 7,71 (s, 1H), 6,88 (s a, 2H), 6,47 (dd, J = 8,4 Hz, 6 Hz, 1H), 4,51 (t, J = 2,4 Hz, 1H), 3,80-3,79 (m, 1H), 3,54-3,50 (m, 2H), 2,57-2,53 (m, 1H), 2,18-2,13 (m, 1H), 0,89 (s, 9H), 0,10 (s, 6H).

Etapa 6: Síntesis de (2S,3S,5R)-3-[(ferc-butildimetilsilil)oxi]-5-{4-[(dimetil-Si{4}-sulfamlideno)ammo]-5-yodo-7H-pirrolo[2,3-d]pirim idm-7-il}oxolane-2-carbaldehído

A una mezcla de ((2R,3S,5R)-5-(4-am¡no-5-yodo-7H-p¡rrolo[2,3-d]p¡r¡m¡d¡n-7-¡l)-3-((ferc but¡ld¡met¡ls¡l¡l)ox¡)tetrah¡drofuran-2-¡l)metanol (4,682 g, 9,55 mmol) y DCC (N,N-d¡c¡clohex¡lcarbod¡¡m¡da) (6,1 g, 29,6 mmol) en DMSO (40 ml) en una atmósfera de argón se le añad¡eron p¡r¡d¡na (0,850 ml, 10,51 mmol) y TFA (0,515 ml, 6,68 mmol) a 0 °C. La mezcla resultante se ag¡tó durante 14 horas a 20 °C en una atmósfera de argón. El progresó de la reacc¡ón se controló por LCMS. La mezcla de reacc¡ón se ¡nact¡vó con agua (150 ml) y se extrajo con acetato de et¡lo (3 x 100 ml). Las capas orgán¡cas comb¡nadas se lavaron con salmuera (120 ml), se secaron sobre sulfato sód¡co anh¡dro y se f¡ltraron. El f¡ltrado se concentró a pres¡ón reduc¡da para proporc¡onar el producto del título en bruto en forma de un sól¡do. LC-MS: (ES, m/z): 567,0 [M+H2O+H]+

Etapa 7: Síntesis de mezcla de [(3S,5R)-3-[(ferc-butMdimetMsiNl)oxi]-5-{4-[(dimetN-Si {4}-sulfanilideno)amino]-5-yodo-7H-pirrolo[2,3-d]pirim idm-7-il}-2-(hidroximetil)oxolan-2-il]metanol

A una mezcla de (2S,3S,5R)-3-[(ferc-but¡ld¡met¡ls¡l¡l)ox¡]-5-{4-[(d¡met¡l-S¡{4}-sulfan¡l¡deno)am¡no]-5-yodo-7H-p¡rrolo[2,3-d]p¡r¡m¡d¡n-7-¡l}oxolane-2-carbaldehído (80 mg, 0,146 mmol) y formaldehído (0,5 ml, 0,146 mmol) en 1,4-d¡oxano (4 ml) se le añad¡ó h¡dróx¡do sód¡co 2 M (0,5 ml, 1,000 mmol) a 0 °C. La mezcla resultante se ag¡tó durante 4 horas a 20 °C. El progreso de la reacc¡ón se controló por LCMS. La mezcla de reacc¡ón se ¡nact¡vó con ác¡do acét¡co (0,2 ml) y se extrajo con acetato de et¡lo (3 x 40 ml). Las capas orgán¡cas comb¡nadas se lavaron con NaHCO3 sat. (30 ml) y después con salmuera (40 ml), se secaron sobre sulfato sód¡co anh¡dro y se f¡ltraron. El f¡ltrado se concentró a pres¡ón reduc¡da, el res¡duo se d¡solv¡ó en etanol (4 ml). A esta mezcla se le añad¡ó tetrah¡droborato sód¡co (20 mg, 0,529 mmol) en una atmósfera de argón. Esta mezcla se ag¡tó durante 36 horas a 20 °C. El progreso de la reacc¡ón se controló por LCMS. La mezcla de reacc¡ón se ¡nact¡vó con ác¡do acét¡co (0,05 ml) y se extrajo con CHCh (3 x 40 ml). Las capas orgán¡cas comb¡nadas se lavaron con NaHCO3 sat. (30 ml) y después con salmuera (40 ml), se secaron sobre sulfato sód¡co anh¡dro y se f¡ltraron. El f¡ltrado se concentró a pres¡ón reduc¡da, se pur¡f¡có por TLC, eluyendo con DCM/MeOH (12:1) para proporc¡onar el compuesto del título. LC-MS: (ES, m/z): 581,1 [M H]⁺¹. ¹H RMN (300 MHz, CD3SOCD3, ppm): 8,09 (s, 0,6H), 7,97 (s, 0,4H), 7,69 (s, 0,6H), 7,46 (s, 0,4H), 6,66 (s a, 0,8H), 6,53-6,42 (m, 1H), 5,10 (t, J = 5,4 Hz, 0,4H), 5,02 (t, J = 5,4 Hz, 0,6H), 4,58 (s a, 1H), 4,42-4,37 (m, 1H), 3,58-3,49 (m, 4H), 2,78 (d, J = 2,7 Hz, 3H), 2,68-2,61 (m, 1H), 2,23-2,16 (m, 1H), 0,90 (s, 9H), 0,10 (s, 6H).

Etapa 8: Síntesis de ((3S,5R)-5-(4-ammo-5-yodo-7H-pirrolo[2,3-d]pirimidm-7-il)-3-((íercbutildimetilsilil)oxi)tetrahidrofuran-2,2-diil)dimetanol

A una soluc¡ón de [(3S,5R)-3-[(ferc-but¡ld¡met¡ls¡l¡l)ox¡]-5-{4-[(d¡met¡l-S¡{4}-sulfan¡l¡deno)am¡no]-5-yodo-7H-p¡rrolo[2,3-d]p¡r¡m¡d¡n-7-¡l}-2-(h¡drox¡met¡l)oxolan-2-¡l]metanol (230 mg, 0,396 mmol) en DCM (2 ml) se le añad¡ó TFA (2 ml, 26,0 mmol) a 0 °C. La mezcla resultante se ag¡tó durante 3 horas a 20 °C en una atmósfera de argón. El progresó de la reacc¡ón se controló por LCMS. La mezcla de reacc¡ón se concentró a pres¡ón reduc¡da, el res¡duo se pur¡f¡có por una columna de gel de síl¡ce, eluyendo con DCM/MeOH (95:5) para proporc¡onar el compuesto del título. LC-MS: (ES, m/z): 521,2 [M H]⁺¹.¹H RMN: (400 MHz, CD3 SOCD3, ppm): 8,12 (s, 1H), 7,71 (s, 1H), 7,10 (s a, 2H), 6,43 (t, J = 6,8 Hz, 1H), 4,50 (dd, J = 6 Hz, 3,2 Hz, 1H), 3,50-3,37 (m, 4H), 2,59-2,52 (m, 1H), 2,17-2,11 (m, 1H), 0,80 (s, 9H), 0,00 (s, 6H).

Etapa 9: Síntesis de (2R,3S,5R)-5-(4-ammo-5-yodo-7H-pirrolo[2,3-d]pirimidm-7-M)-3-((ferc-butMdimetNsilN)oxi)-2-(hidroximetil)tetrahidrofuran-2-carbaldehído

A una solución de ((3S,5R)-5-(4-am¡no-5-yodo-7H-p¡rrolo[2,3-d]p¡r¡m¡d¡n-7-¡l)-3-((tercbutildimetMsilil)oxi)tetrahidrofuran-2,2-diil)dimetanol (960 mg, 1,845 mmol) en acetonitrilo (25 ml) en una atmósfera de argón se le añadió IBX (1550 mg, 5,53 mmol) a 18 °C. La mezcla resultante se agitó durante 18 horas a 18 °C en una atmósfera de argón. El progresó de la reacción se controló por LCMS. La mezcla de reacción se filtró. El filtrado se concentró a presión reducida, para proporcionar el producto en bruto en forma de un sólido. Este producto en bruto se usó directamente para la siguiente etapa sin purificación adicional. LC-MS: (ES, m/z): 519,1 [M H]+

Etapa 10: Síntesis de ((2R,3S,5R)-5-(4-ammo-5-yodo-7H-pirrolo[2,3-d]pirimidin-7-M)-3-((fercbutildimetilsilil)oxi)-2-etiniltetrahidrofuran-2-il)metanol (Intermedio B)

A una mezcla de (2R,3S,5R)-5-(4-am¡no-5-yodo-7H-p¡rrolo[2,3-d]p¡r¡m¡d¡n-7-¡l)-3-((terc butildimetilsilil)oxi)-2-(hidroximet¡l)tetrah¡drofuran-2-carbaldehído (190 mg, 0,366 mmol) y K2CO3 (127 mg, 0,916 mmol) en MeOH (10 ml) en una atmósfera de argón se le añadió (1-diazo-2-oxopropil)fosfonato de dimetilo (141 mg, 0,733 mmol) a 0 °C. La mezcla resultante se agitó durante 16 horas a 18 °C en una atmósfera de argón. El color de la mezcla se volvió de amarillo a azul. El progreso de la reacción se controló por LCMS/TLC. La mezcla de reacción se concentró a presión reducida, el residuo se purificó por una columna de gel de sílice, eluyendo con DCM/MeOH (97:3) para proporcionar el compuesto del título. LC-MS: (ES, m/z): 515,1 [M H]+1. . (400 MHz, CDCla, ppm): 8,22 (s, 1H), 7,12 (s, 1H), 6,25 (dd, J = 8,8 Hz, 5,6 Hz, 1H), 5,84 (s a, 2H), 4,71 (dd, J = 5,6 Hz, 2 Hz, 1H), 4,01 (d, J = 12,4 Hz, 1H), 3,80 (d, J = 16 Hz, 1H), 3,17-3,10 (m, 1H), 2,59 (s, 1H), 2,27-2,21 (m, 1H), 0,91 (s, 9H), 0,11 (s, 6H)

EJEMPLO 7: Síntesis de (2R,3S,5R)-5-(4-ammo-5-yodo-7H-pirrolo[2,3-d]pirimidm-7-M)-2-etiml-2-(hidroximetil)tetrahidrofuran-3-ol (7)

A una solución de ((2R,3S,5R)-5-(4-am¡no-5-yodo-7H-p¡rrolo[2,3-d]p¡r¡m¡d¡n-7-¡l)-3-((tercbut¡ld¡met¡ls¡l¡l)ox¡)-2-etiniltetrah¡drofuran-2-¡l)metanol (Intermedio B, 20 mg, 0,039 mmol) en tetrahidrofurano (3 ml) en una atmósfera de argón se le añadió TBAF (0,05 ml, 0,050 mmol) a 18 °C. La mezcla resultante se agitó durante 0,5 horas a 18 °C en una atmósfera de argón. El progreso de la reacción se controló por TLC. La mezcla de reacción se concentró a presión reducida, el residuo se purificó por una columna de gel de sílice, eluyendo con CH2Ch/MeOH (7:1), para dar el producto en bruto que se purificó por HPLC prep. con las siguientes condiciones: Instrumento, Agua-1 (26); Columna: Xbridge RP18, 5 um, 19 x 150 mm; fase móvil: agua (bicarbonato de amonio al 0,05 % dióxido de carbono) y acetonitrilo (acetonitrilo del 10 % hasta 40 % en 8 min, mantenido al 100 % durante 2 min, hasta el 10 % en 2 min); Detector, UV 220 y 254 nm. Las fracciones recogidas se combinaron y se concentraron a presión reducida para dar el compuesto 7 en forma de un sólido. LC-MS: (ES, m/z): 401,0 [M+H]+. ¹H RMN: (400 MHz, CD3OD): 88,10 (s, 1H), 7,63 (s, 1H), 6,68 (s, 2H), 6,49 (t, J = 6,4 Hz, 1H), 5,52 (d, J = 5,2 Hz, 1H), 4,48 (c, J = 6,0 Hz, 1H), 3,64-3,60 (m, 1H), 3,57-3,52 (m, 1H), 3,48 (s, 1H), 2,53-2,47 (m, 1H), 2,35-2,29 (m, 1H).

EJEMPLO 8: Síntesis de (2R,3S,5R)-5-(2,4-diammo-7H-pirrolo[2,3-d]pirimidm-7-M)-2-etiml-2-(hidroximetil)tetrahidrofuran-3-ol (8)

Etapa 1: 4-metilbenzoato de Síntesis de (2R,3S,5R)-5-(2-ammo-4-cloro-7H-pirrolo[2,3-d]pirimidm-7-il)-2-(((4-metilbenzoil)oxi)metil)tetrahidrofuran-3-ilo

Una mezcla de 4-doro-7H-pirrolo[2,3-d]pirimidin-2-amina (2,0 g, 11,86 mmol) y NaH (0,524 g, 13,09 mmol) en acetonitrilo (60 ml) en una atmósfera de argón se agitó durante 0,5 horas a temperatura ambiente en una atmósfera de argón. Después, a la mezcla se le añadió el Intermedio A (4,628 g, 11,90 mmol) y se agitó durante 10 minutos a temperatura ambiente y después a 50 °C durante 2 horas. El proceso se controló por LCMS. La mezcla de reacción se concentró a presión reducida, el residuo se purificó por una columna de gel de sílice, eluyendo con CH2Ch/MeOH (92:8) para proporcionar el compuesto del título. LC-MS: (ES, m/z): 521,1[M+H]+. ¹H RMN: (300 MHz, DMSO-de): 5 7,93 (dd, J = 8,1 Hz, 4H), 7,68-7,21 (m, 5H), 6,78 (s, 2H), 6,57 (c, J = 5,85 Hz, 1H), 6,39 (d, J = 3,9 Hz, 1H), 5,69 (d, J = 5,7 Hz, 1H), 4,63-4,43 (m, 3H), 3,04-2,94 (m, 1H), 2,66 (dd, J = 4,95 Hz, 1H), 2,41 (d, J = 7,8 Hz, 6H), 1,99 (s, 1H).

Etapa 2: Síntesis de (2R,3S,5R)-5-(2,4-diammo-7H-pirrolo[2,3-d]pirimidm-7-il)-2-(hidroximetil)tetrahidrofuran-3-ol

Una mezcla de 4-metilbenzoato de (2R,3S,5R)-5-(2-amino-4-cloro-7H-pirrolo[2,3-d]pirimidin-7-il)-2-(((4-metilbenzoil)oxi)metil)tetrahidrofuran-3-ilo (1,0 g, 0,960 mmol) y amoniaco (50 ml, 0,960 mmol) en 2-propanol (5 ml) se agitó durante 20 horas a 100 °C. El progreso de la reacción se controló por TLC. La mezcla de reacción se dejó enfriar a temperatura ambiente y se concentró a presión reducida, el residuo se purificó por una columna de gel de sílice, eluyendo con CH2Ch/MeOH (82:18) para proporcionar el compuesto del título. LC-MS: (ES, m/z): 266,0 [M+H]+.

¹H RMN: (300 MHz, DMSO-de): 56,93 (d, J = 3,6 Hz, 1H), 6,76 (s, 2H), 6,40 (d, J = 3,6 Hz, 1H), 6,32 (c, J = 5,85 Hz, 1H), 5,70 (s, 2H), 5,20 (d, J = 3,6 Hz, 1H), 4,29 (d, J = 2,4 Hz, 1H), 3,78-3,74 (m, 1H), 3,55-3,41 (m, 2H), 3,16 (s, 1H), 2,49-2,34 (m, 1H), 2,08-2,01 (m, 1H).

Etapa 3: Síntesis de 7-((2R,4S,5R)-4-((ferc-butMdimetilsiMl)oxi)-5-(((tercbutildimetilsilM)oxi)metM)tetrahidrofuran-2-il)-7H-pirrolo[2,3-d]pirimidm-2,4-diamma

A una mezcla de (2R,3S,5R)-5-(2,4-diamino-7H-pirrolo[2,3-d]pirimidin-7-il)-2-(hidroximetil)tetrahidrofuran-3-ol (1,39 g, 5,24 mmol) y TBDMS-Cl (2,369 g, 15,72 mmol) en DMF (6 ml) en una atmósfera de argón se le añadió imidazol (1,784 g, 26,2 mmol). La mezcla resultante se agitó durante 16 horas a 20 °C en una atmósfera de argón. El progreso de la reacción se controló por LCMS/TLC. La mezcla de reacción se concentró a presión reducida, el residuo se purificó por una columna de gel de sílice, eluyendo con CH2Ch/MeOH (92:8) para proporcionar el compuesto del título en forma de un sólido. LC-MS: (ES, m/z): 494,4 [M+H]+, ¹H RMN: (300 MHz, CDCla): 67,58 (s, 2H), 7,04 (d, J = 3,9 Hz, 1H), 6,54 (d, J = 3,9 Hz, 1H), 6,52 (s, 2H), 6,32 (dd, J = 6,0 Hz, 1H), 4,45 (t, J = 2,4 Hz, 1H), 3,78 (d, J = 2,1 Hz, 1H), 3,68 (t, J = 5,5 Hz, 2H), 3,17 (d, J = 3,0 Hz, 1H), 2,49-2,42 (m, 1H), 2,17-2,10 (m, 1H), 0,89 (s, 18H), 0,10-0,09 (m, 12H).

Etapa 4: Síntesis de N,N'-(7-((2R,4S,5R)-4-((ferc-but¡ld¡met¡ls¡l¡l)ox¡)-5-(((tercbut¡ld¡met¡ls¡l¡l)ox¡)met¡l)tetrah¡drofuran-2-¡l)-7H-p¡rrolo[2,3-d]p¡r¡m¡dm-2,4-d¡¡l)d¡benzam¡da

A una mezcla de 7-((2R,4S,5R)-4-((ferc-butildimetilsilil)oxi)-5-(((tercbutildimetilsilil)oxi)metil)tetrahidrofuran-2-il)-7H-pirrolo[2,3-d]pirimidin-2,4-diamina (l38 mg, 0,279 mmol) y Dm A p (5 mg, 0,041 mmol) en piridina (5 ml) en una atmósfera de argón se le añadió cloruro de benzoílo (158 mg, 1,124 mmol). La mezcla resultante se agitó durante 4 horas a 0 °C en una atmósfera de argón. El progreso de la reacción se controló por LCMS/TLC. La mezcla de reacción se inactivó con agua (50 ml) y se extrajo con acetato de etilo (3 x 30 ml). Las capas orgánicas combinadas se lavaron con salmuera (40 ml), se secaron sobre sulfato sódico anhidro y se filtraron. El filtrado se concentró a presión reducida, el residuo se purificó por una columna de gel de sílice, eluyendo con EP/AE (2:1) para proporcionar el compuesto del título. LC-MS: (ES, m/z): 702,3 [M+H]+, 1H RMN: (300 MHz, CDCh): 511,11 (s, 1H), 10,80 (s, 1H), 8,09 (d, J = 7,2 Hz, 2H), 7,73 (d, J = 7,2 Hz, 2H), 7,66-7,43 (m, 8H), 6,62-6,54 (m, 2H), 4,56 (s, 1H), 3,84-3,64 (m, 4H), 2,81-2,72 (m, 1H), 2,26-2,22 (m, 1H), 0,90-0,83 (m, 18H), 0,11-0,01 (m, 12H).

Etapa 5: Síntes¡s de N,N'-(7-((2R,4S,5R)-4-((ferc-but¡ld¡met¡ls¡l¡l)ox¡)-5-(h¡drox¡met¡l)tetrah¡drofuran-2-¡l)-7H-p¡rrolo[2,3-d]p¡r¡m¡d¡n-2,4-d¡¡l)d¡benzam¡da

A una mezcla de N,N'-(7-((2R,4S,5R)-4-((ferc-butildimetilsilil)oxi)-5-(((tercbutildimetilsilil)oxi)metil)tetrahidrofuran-2-il)-7H-pirrolo[2,3-d]pirimidin-2,4-diil)dibenzamida (110 mg, 0,157 mmol) en THF (4 ml) se le añadió una solución de TFA (0,5 ml, 6,49 mmol) en agua (0,5 ml) a 0 °C. La mezcla resultante se agitó durante 4 horas a 0 °C. El progreso de la reacción se controló por LCMS. La mezcla de reacción se concentró a presión reducida, el residuo se purificó por una columna de gel de sílice, eluyendo con CH2Ch/MeOH (95:5) para proporcionar el compuesto del título. LC-MS: (ES, m/z): 588,6 [M+H]+, 1H RMN: (300 MHz, CDCla): 8 11,11 (s, 1H), 10,81 (s, 1H), 8,09 (d, J = 7,2 Hz, 2H), 7,97 (d, J = 7,2 Hz, 2H), 7,65-7,46 (m, 8H), 6,62-6,56 (m, 2H), 4,96 (t, J = 5,4 Hz, 1H), 4,58 (t, J = 2,7 Hz, 1H), 3,82-3,77 (m, 2H), 3,56-3,51 (m, 2H), 2,72-2,67 (m, 1H), 2,27-2,21 (m, 1H), 0,88 (s, 9H), 0,09 (s, 6H).

Etapa 6: Síntes¡s de N,N'-(7-((2R,4S,5S)-4-((íerc-but¡ld¡met¡ls¡l¡l)ox¡)-5-form¡ltetrah¡drofuran-2-¡l)-7H-p¡rrolo[2,3-d]p¡r¡m¡d¡n-2,4-d¡¡l)d¡benzam¡da

A una mezcla de N,N'-(7-((2R,4S,5R)-4-((ferc-butildimetilsilil)oxi)-5-(hidroximetil)tetrahidrofuran-2-il)-7H-pirrolo[2,3-d]pirimidin-2,4-diil)dibenzamida (35 mg, 0,060 mmol) en acetonitrilo (5 ml) en una atmósfera de argón se le añadió IBX (42 mg, 0,150 mmol). La mezcla resultante se agitó durante 50 minutos a 50 °C en una atmósfera de argón. El progreso de la reacción se controló por LCMS. La mezcla de reacción se dejó enfriar a temperatura ambiente y se filtró. El filtrado se concentró a presión reducida, el producto en bruto se usó directamente para la siguiente etapa sin purificación adicional. LC-MS: (ES, m/z): 618,3 [M C^OH]+

Etapa 7: Síntes¡s de N,N'-(7-((2R,4S)-4-((íerc-but¡ld¡met¡ls¡l¡l)ox¡)-5,5-b¡s(h¡drox¡met¡l)tetrah¡drofuran-2-¡l)-7H-p¡rrolo[2,3-d]p¡r¡m¡d¡n-2,4-d¡¡l)d¡benzam¡da

A una solución de N,N'-(7-((2R,4S,5S)-4-((ferc-butildimetilsilil)oxi)-5-formiltetrahidrofuran-2-il)-7H-pirrolo[2,3-d]pirimidin-2,4-diil)dibenzamida (35 mg, 0,060 mmol) en 1,4-dioxano (5 ml) se le añadió formaldehído (1 ml, 0,060 mmol), NaOH (1 ml, 2,000 mmol) y la mezcla se agitó durante 4 horas a 20 °C, se enfrió a 0 °C, se inactivó con AcOH a pH 6, se añadió agua (40 ml) y se extrajo con acetato de etilo (3 x 40 ml). Las capas orgánicas combinadas se lavaron con salmuera (30 ml), se secaron sobre sulfato sódico anhidro y se filtraron. El filtrado se concentró a presión reducida, el residuo se disolvió en etanol (5,00 ml) y se añadió NaBH4 (5,65 mg, 0,149 mmol) en una atmósfera de argón. La mezcla resultante se agitó durante 16 horas a 20 °C. El progreso de la reacción se controló por LCMS. La mezcla de reacción se dejó enfriar a temperatura ambiente, se inactivó con AcOH a pH 6, se añadió agua (40 ml) y se extrajo con acetato de etilo (3 x 40 ml). Las capas orgánicas se concentraron y se purificaron con una columna de gel de sílice, eluyendo con CH2Ch/MeOH (20:1) para proporcionar el producto del título en forma de un sólido. LC-MS: (ES, m/z): 618,2 [M+H]+, 1H RMN: (400 MHz, CDCh): 5 11,11 (s, 1H), 10,80 (s, 1H), 8,09 (d, J = 7,2 Hz, 2H), 7,73 (d, J = 7,2 Hz, 2H), 7,66-7,43 (m, 8H), 6,62-6,54 (m, 2H), 4,56 (s, 1H), 3,84-3,64 (m, 4H), 2,81-2,72 (m, 1H), 2,26-2,22 (m, 1H), 0,90-0,83 (m, 18H), 0,11-0,01 (m, 12H).

Etapa 8: Síntes¡s de N,N'-(7-((2R,4S,5R)-4-((íerc-but¡ld¡met¡ls¡l¡l)ox¡)-5-form¡l-5-(h¡drox¡met¡l)tetrah¡drofuran-2-¡l)-7H-p¡rroto[2,3-d]p¡r¡m¡dm-2,4-d¡¡l)d¡benzam¡da

A una solución de N,N'-(7-((2R,4S)-4-((ferc-butildimetilsilil)oxi)-5,5-bis(hidroximetil)tetrahidrofuran-2-il)-7H-pirrolo[2,3-d]pirimidin-2,4-diil)dibenzamida (30 mg, 0,049 mmol) en acetonitrilo (10 ml) en una atmósfera de argón se le añadió IBX (40 mg, 0,143 mmol) a 20 °C. La mezcla resultante se agitó durante 3 horas a 25 °C en una atmósfera de argón. El progresó de la reacción se controló por LCMS. La mezcla de reacción se dejó enfriar a temperatura ambiente y se filtró. El filtrado se concentró a presión reducida para proporcionar el producto en bruto en forma de un sólido que se usó directamente para la siguiente etapa sin purificación adicional. LC-MS: (ES, m/z): 616,2 [M+H]+

Etapa 9: Síntes¡s de N,N'-(7-((2R,4S,5R)-4-((ferc-but¡ld¡met¡ls¡l¡l)ox¡)-5-et¡ml-5-(h¡drox¡met¡l)tetrah¡drofuran-2-¡l)-7H-p¡rrolo[2,3-d]p¡r¡m¡dm-2,4-d¡¡l)d¡benzam¡da

A una mezcla de N,N'-(7-((2R,4S,5R)-4-((terc-butildimetilsilil)oxi)-5-formil-5-(hidroximetil)tetrahidrofuran-2-il)-7H-pirrolo[2,3-d]pirimidin-2,4-diil)dibenzamida (70 mg, 0,114 mmol) y K2CO3 (39,3 mg, 0,284 mmol) en MeOH (5 ml) en una atmósfera de argón se le añadió una solución de (2-diazo-3-oxobutanoil)fosfonato de dimetilo (50,0 mg, 0,227 mmol) en MeOH (0,25 ml) a 0 °C. La mezcla resultante se agitó durante 16 horas a 25 °C en una atmósfera de argón. El progresó de la reacción se controló por LCMS. La mezcla de reacción se concentró a presión reducida, el residuo se purificó por TLC, eluyendo con CH2Ch/MeOH (20:1) para proporcionar el compuesto del título. LC-MS: (ES, m/z): 612,4 [M+H]+

Etapa 10: Síntesis de (2R,3S,5R)-5-(2,4-diammo-7H-pirrolo[2,3-d]pirimidm-7-M)-2-etmN-2-(hidroximetil)tetrahidrofuran-3-ol (8)

A una solución de N,N'-(7-((2R,4S,5R)-4-((terc-butildimetilsilil)oxi)-5-etinil-5-(hidroximetil)tetrahidrofuran-2-il)-7H-pirrolo[2,3-d]pirimidin-2,4-diil)dibenzamida (40 mg, 0,065 mmol) en MeOH (4 ml) en una atmósfera de argón se le añadió una solución de NaOCH3 en MeOH (0,065 ml, 0,065 M) a 20 °C. La mezcla resultante se agitó durante 48 horas a 40 °C en una atmósfera de argón. El progresó de la reacción se controló por LCMS. La mezcla de reacción se dejó enfriar a temperatura ambiente y se concentró a presión reducida, el residuo se purificó por TLC, eluyendo con CH2Ch/MeOH (20:1) para proporcionar el intermedio en bruto (27 mg) en forma de un sólido que se diluyó en THF (3 ml) en una atmósfera de argón. Se añadió una solución de TBAF (1 M, 0,040 ml, 0,04 mmol) a 20 °C. La mezcla resultante se agitó durante 0,5 horas a 20 °C en una atmósfera de argón. El progreso de la reacción se controló por LCMS/TLC. La mezcla de reacción se concentró a presión reducida, el residuo se purificó por TLC, eluyendo con CH2Ch/MeOH (5:1) para proporcionar el producto en bruto (15 mg) que después se purificó por HPLC prep. con las siguientes condiciones: Instrumento, Waters-2767-Prep; Columna: Xbridge RP18, 5 um, 19 x 150 mm; fase móvil: agua (bicarbonato de amonio al 0,05 % (dióxido de carbono) y acetonitrilo (acetonitrilo del 5 % hasta el 40 % en 8 min); Detector, UV 220 y 254 nm. Las fracciones recogidas se combinaron y se concentraron a presión reducida para dar el compuesto 8 en forma de un sólido. LC-MS: (ES, m/z): 618,2 [M+H]+, ¹H RMN (400 MHz, CDCh): 86,85 (d, J = 3,6 Hz, 1H), 6,55 (s, 2H), 6,36 (d, J = 4,0 Hz, 2H), 5,56 (s, 2H), 5,48-5,43 (m, 2H), 4,42 (c, J = 5,6 Hz, 1H), 3,61-3,49 (m, 2H), 3,44 (s, 1H), 2,47-2,40 (m, 1H), 2,26-2,21 (m, 1H).

EJEMPLO 9: Síntesis de (2R,3S,5R)-5-(4-ammo-2-fluoro-7H-pirrolo[2,3-d]pirimidm-7-M)-2-etmN-2-(hidroximetil)tetrahidrofuran-3-ol (9)

Etapa 1: Síntesis de 4-az¡do-7H-p¡rrolo[2,3-d]p¡r¡m¡dm-2-amma

A una solución agitada de 4-doro-7H-pirrolo[2,3-d]pirimidin-2-amina (3,5 g, 20,76 mmol) en DMSO anhidro (35 ml) en una atmósfera de argón, se le añadió una solución de azida sódica (2,025 g, 31,1 mmol) en agua (3,50 ml). La mezcla se calentó a 100 °C y se agitó durante una noche. El progreso de la reacción se controló por TLC y LCMS. La mezcla resultante se enfrió a temperatura ambiente. Se añadieron 250 g de hielo picado y la mezcla se agitó a 0 °C durante 30 minutos. Se formó un precipitado. El precipitado se recogió por filtración, se lavó con agua fría y se secó sobre P2O5 al vacío durante una noche para dar 4-azido-7H-pirrolo[2,3-d]pirimidin-2-amina en forma de un sólido, que se usó directamente en la siguiente etapa de reacción sin purificación adicional. ¹H RMN: (400 MHz, d⁶-DMSO, ppm): 5 11,91 (s a, 1H), 7,96 (s a, 2H), 7,13 (t, J = 3,0 Hz, 1H), 6,72 (dd, J = 2,0 Hz, J = 3,2 Hz, 1H). LC-MS: (ES, m/z): 176,00 [M H]+.

Etapa 2: Síntesis de 4-az¡do-2-fluoro-7H-p¡rrolo[2,3-d]p¡r¡m¡dma

Se amasó fluoruro de hidrógeno-piridina (HF al 70 % en Py al 30 %) (12 ml, 133 mmol) en una botella de teflón en una atmósfera de argón. A esto se le añadió 4-azido-7H-pirrolo[2,3-d]pirimidin-2-amina (3,1 g, 17,70 mmol). La mezcla se agitó a temperatura ambiente hasta que se convirtió en una solución transparente, después se enfrió a -60 °C, seguido de la adición de nitrito de ferc-butilo (2,5 ml, 21,02 mmol) gota a gota en 10 minutos. La mezcla resultante se agitó entre -60 °C y -40 °C durante 2 horas. El progreso de la reacción se controló por TLC y LCMS. La mezcla se vertió en NaHCO3 acuoso frío (150 ml, saturado). El producto en bruto se extrajo con acetato de etilo (100 ml x 3), se lavó con salmuera (100 ml x 2), se secó sobre Na2SO4 anhidro, se filtró y el filtrado se concentró al vacío para dar un residuo. Después, el residuo se purificó por cromatografía en columna sobre gel de sílice usando acetato de etilo/éter de petróleo (1/4) para dar 4-azido-2-fluoro-7H-pirrolo[2,3-d] en forma de un sólido. ¹H RMN: (300 MHz, d⁶-DMSO, ppm): 5 12,43 (s a, 1H), 7,48 (d, J = 3,9 Hz, 1H), 6,50 (d, J = 3,6 Hz, 1H). F RMN: (282 MHz, d⁶-DMSO, ppm): 5 -54,57 (s, IF). LC-MS: (ES, m/z): 179,20 [M H]+.

Etapa 3: Síntes¡s de 4-met¡lbenzoato de (2R,3S,5R)-5-(4-az¡do-2-fluoro-7H-p¡rrolo[2,3-d]p¡r¡m¡dm-7-¡l)-2-(((4-met¡lbenzo¡l)ox¡)met¡l)tetrah¡drofuran-3-¡lo

A una suspensión agitada de una dispersión al 60 % de hidruro sódico en aceite mineral (0,272 g, 6,79 mmol) en DMF anhidra (20 ml) en una atmósfera de argón en un matraz de fondo redondo de dos bocas y de 50 ml, se le añadió 4-azido-2-fluoro-7H-pirrolo[2,3-d]pirimidina (1,1 g, 6,18 mmol) en porciones a 0 °C y la mezcla se agitó a esta temperatura durante 5 minutos. Se añadió el Intermedio A (2,4 g, 6,17 mmol) con agitación. La mezcla de reacción se calentó a 25 °C y se agitó durante 2 horas. El progreso de la reacción se controló por TLC y LCMS. La mezcla se diluyó con acetato de etilo (100 ml) y se lavó con agua (70 ml). La capa acuosa se extrajo de nuevo con acetato de etilo (60 ml x 2). La capa orgánica combinada se lavó con salmuera (100 ml x 3), se secó sobre Na2SO4 anhidro, se filtró y se concentró al vacío. El producto en bruto se purificó por cromatografía en columna sobre gel de sílice usando acetato de etilo/éter de petróleo (1/10) para dar el compuesto del título. 1H RMN: (400 MHz, CDCh, ppm): 58,00 (d, J = 8,4 Hz, 2H), 7,95 (d, J = 8,0 Hz, 2H), 7,32-7,23 (m, 4H), 6,74 (dd, J = 6,4 Hz, J = 8,0 Hz, 1H), 6,49 (d, J = 4,0 Hz, 1H), 5,75-5,74 (m, 1H), 4,75-4,54 (m, 3H), 2,85-2,74 (m, 2H), 2,47-2,43 (m, 6H). F RMN: (376 MHz, CDCh, ppm): 5 -52,26 (s, IF, isómero P), -52,48 (s, IF, isómero a). LC-MS: (ES, m/z): 531,42 [M H]+.

Etapa 4: Síntesis de 4-metilbenzoato de (2R,3S,5R)-5-(4-ammo-2-fluoro-7H-pirrolo[2,3-d]pirimidm-7-il)-2-(((4-metilbenzoil)oxi)metil)tetrahidrofuran-3-ilo

A una solución agitada de 4-metilbenzoato de (2R,3S,5R)-5-(4-azido-2-fluoro-7H-pirrolo[2,3-d]pirimidin-7-il)-2-(((4-metilbenzoil)oxi)metil)tetrahidrofuran-3-ilo (2,0 g, 3,77 mmol) en una mezcla de MeOH (10 ml) y DCM (15 ml) en una atmósfera de argón, se le añadió propano-1,3-ditiol (0,816 g, 7,54 mmol), seguido de la adición de trietilamina (0,763 g, 7,54 mmol) gota a gota con agitación en 10 minutos a 25 °C. La mezcla se agitó a 25 °C durante 30 minutos. El progresó de la reacción se controló por TLC. La mezcla resultante se concentró al vacío. Después, el residuo se purificó por cromatografía en columna sobre gel de sílice usando acetato de etilo/éter de petróleo (AE al 42 % en EP) para dar el compuesto del título en forma de un polvo. 1H RMN: (400 MHz, CDCl3, ppm): 58,00 (d, J = 8,0 Hz, 2H), 7,97 (d, J = 8,0 Hz, 2H), 7,33-7,26 (m, 4H), 7,12 (d, J = 4,0 Hz, 1H), 6,72 (dd, J = 6,2 Hz, J = 8,2 Hz, 1H), 6,38 (d, J = 3.6 Hz, 1H), 5,75-5,72 (m, 1H), 5,36 (s a, 2H), 4,73-4,57 (m, 3H), 2,79-2,74 (m, 2H), 2,47 (s, 3H), 2,44 (s, 3H). F RMN: (376 MHz, CDCla, ppm): 5 -52,97 (s, IF, isómero P), -53,10 (s, IF, isómero a). LC-MS: (ES, m/z): 505,63 [M H]+.

Etapa 5: Síntesis de (2R,3S,5R)-5-(4-ammo-2-fluoro-7H-pirrolo[2,3-d]pirimidm-7-il)-2-(hidroximetil)tetrahidrofuran-3-ol

A una solución agitada de 4-metilbenzoato de (2R,3S,5R)-5-(4-amino-2-fluoro-7H-pirrolo[2,3-d]pirimidin-7-il)-2-(((4-metilbenzoil)oxi)metil)tetrahidrofuran-3-ilo (1,75 g, 3,47 mmol) en MeOH anhidro (10 ml) en una atmósfera de argón, se le inyectó una solución de metóxido sódico y MeOH (1,0 M, 3,47 ml, 3,47 mmol) con agitación a 0 °C en 5 minutos. La mezcla resultante se dejó en agitación de 0 °C a 10 °C durante 4 horas. El progreso de la reacción se controló por TLC y LCMS. La mezcla resultante se neutralizó mediante la adición de AcOH, y después se concentró a presión reducida. Después, el residuo se purificó por cromatografía en columna sobre gel de sílice usando diclorometano/metanol (MeOH al 6 % en DCM) para dar el compuesto del título. 1H RMN: (400 MHz, d6-DMSO, ppm): 5 7,55 (s a, 2H), 7,31 (d, J = 3,6 Hz, 1H), 6,61 (d, J = 3,6 Hz, 1H), 6,34 (dd, J = 6,4 Hz, J = 8,0 Hz, 1H), 5,26 (d, J = 3.6 Hz, 1H), 4,92 (t, J = 5,0 Hz, 1H), 4,32 (d, J = 2,4 Hz, 1H), 3,82-3,79 (m, 1H), 3,58-3,46 (m, 2H), 2,48-2,41 (m, 1H), 2,19-2,13 (m, 1H). F RMN: (376 MHz, de-DMSO, ppm): 5 -53,77 (s, IF, isómero P), -53,98 (s, IF, isómero a). LC-MS: (ES, m/z): 269,20 [M H]+.

Etapa 6: Síntesis de 7-((2R,4S,5R)-4-((ferc-butildimetMsiNl)oxi)-5-(((tercbutildimetilsilil)oxi)metil)tetrahidrofuran-2-il)-2-fluoro-7H-pirrolo[2,3-d]pirim idin-4-amina

Se amasaron (2R,3S,5R)-5-(4-amino-2-fluoro-7H-pirrolo[2,3-d]pirimidin-7-il)-2-(hidroximetil)tetrahidrofuran-3-ol (850 mg, 3,17 mmol) e imidazol (863 mg, 12,68 mmol) en un matraz de fondo redondo de 50 ml en una atmósfera de argón. En el matraz se inyectó DMF anhidra (10 ml), seguido de la adición de TBS-Cl (1433 mg, 9,51 mmol) en porciones. La mezcla se agitó a 25 °C durante 2 horas. Después de que la reacción se completara, la mezcla se diluyó con acetato de etilo (60 ml) y se lavó con agua (30 ml x 2), NaHCO3 acuoso (saturado, 30 ml x 2) y salmuera (30 ml x 2), respectivamente. La capa orgánica se recogió y se secó sobre Na2SO4 anhidro, se filtró y se concentró a presión reducida para dar un producto en bruto. Después, el residuo se purificó por cromatografía en columna sobre gel de sílice usando acetato de etilo/éter de petróleo (AE al 20 % en EP) para dar el compuesto del título. 1H RMN: (300 MHz, de-DMSO, ppm): 57,55 (s a, 2H), 7,26 (d, J = 3,6 Hz, 1H), 6,60 (d, J = 3,3 Hz, 1H), 6,31 (t, J = 6,6 Hz, 1H), 4,55-4,50 (m, 1H), 3,80-3,61 (m, 4H), 2,64-2,55 (m, 1H), 2,23-2,17 (m, 1H), 0,90-0,87 (m, 18H), 0,11-0,06 (m, 12H). F RMN: (282 MHz, de-DMSO, ppm): 5 -53,64 (s, IF, isómero P), -53,78 (s, IF, isómero a). LC-MS: (ES, m/z): 497,58 [M H]+.

Etapa 7: ((2R,3S,5R)-5-(4-ammo-2-fluoro-7H-pirrolo[2,3-d]pirimidm-7-il)-3-((tercbutildimetilsilil)oxi)tetrahidrofuran-2-il)metanol

A una solución agitada de 7-((2R,4S,5R)-4-((terc-butildimetilsilil)oxi)-5-(((tercbutildimetilsilil)oxi)metil)tetrahidrofuran-2-il)-2-fluoro-7H-pirrolo[2,3-d]pirimidin-4-amina (1,4 g, 2,82 mmol) en T^hF (24 ml) se le añadió TFA acuoso (TFA/H2O = 1/1, v/v, 12 ml) gota a gota con agitación a 0 °C en 10 minutos. La mezcla resultante se dejó en agitación a 0 °C. El progreso de la reacción se controló por TLC. Después de agitar durante 5 horas, el nucleósido protegido con di-TBS de partida se consumió completamente, y después la mezcla de reacción se co-evaporó con tolueno (50 ml x 3). El residuo se re-disolvió en una mezcla de MeOH/DCM (MeOH al 15 % en DCM, 50 ml). Se añadió NaHCO3 sólido (2 g) a 0 °C, seguido de la adición de agua (1 ml). La mezcla resultante se agitó durante 30 minutos. Después de que el valor de pH se ajustara a 7, los sólidos se retiraron por filtración, el filtrado se recogió y se concentró a presión reducida. El residuo se purificó por cromatografía en columna sobre gel de sílice usando acetato de etilo/éter de petróleo (AE al 40 % en EP) para dar el compuesto del título. ¹H RMN: (400 MHz, da-DMSO, ppm): 87,57 (s a, 2H), 7,32 (d, J = 3,6 Hz, 1H), 6,61 (d, J = 3,6 Hz, 1H), 6,32 (dd, J = 6,0 Hz, J = 8,0 Hz, 1H), 4,99-4,96 (m, 1H), 4,52 (t, J = 2,8 Hz, 1H), 3,79 (c, J = 2,4 Hz, 1H), 3,54-3,49 (m, 2H), 2,57-2,53 (m, 1H), 2,19-2,13 (m, 1H), 0,91-0,88 (m, 9H), 0,13-0,11 (m, 6H). F RMN: (376 MHz, de-DMSO, ppm): 8 -53,71 (s, IF, isómero P), -53,89 (s, IF, isómero a). LC-MS: (ES, m/z): 383,36 [M H]+.

Etapa 8: Síntesis de (2S,3S,5R)-5-(4-ammo-2-fluoro-7H-pirrolo[2,3-d]pirimidm-7-M)-3-((íercbutildim etilsilil)oxi)tetrahidrofuran-2-carbaldehído

Se inyectó TFA (0,051 ml, 0,659 mmol) en una solución agitada de ((2R,3S,5R)-5-(4-amino-2-fluoro-7H-pirrolo[2,3-d]pirimidin-7-il)-3-((terc-butildimetilsilil)oxi)tetrahidrofuran-2-il)metanol (360 mg, 0,941 mmol), d Cc (N,N-diciclohexilcarbodiimida) (602 mg, 2,92 mmol) y piridina (0,084 ml, 1,035 mmol) en DMSO anhidro (2 ml) en una atmósfera de argón a temperatura ambiente en 2 min y la mezcla se agitó durante una noche. El progreso de la reacción se controló por TLC y LCMS. La mezcla se filtró para eliminar diciclohexilurea y el filtrado se repartió con acetato de etilo (30 ml) y H2O (30 ml). La capa orgánica se recogió y se lavó con salmuera (20 ml x 2), se secó sobre Na2SO4 anhidro, se filtró y el filtrado se evaporó a presión reducida para dar el compuesto del título, que se usó directamente en la siguiente etapa de reacción sin purificación adicional. LC-MS: (ES, m/z): 381,20 [M H]+, 413,20 [M MeOH H]+.

Etapa 9: Síntesis de ((3S,5R)-5-(4-ammo-2-fluoro-7H-pirrolo[2,3-d]pirimidm-7-M)-3-((íercbutildimetilsilil)oxi)tetrahidrofuran-2,2-diil)dimetanol

A una solución agitada de (2S,3S,5R)-5-(4-amino-2-fluoro-7H-pirrolo[2,3-d]pirimidin-7-il)-3-((tercbutildimetilsilil)oxi)tetrahidrofuran-2-carbaldehído (400 mg, 1,051 mmol) en 1,4-dioxano (8 ml) en un matraz de fondo redondo de 50 ml, se le añadió una solución de formaldehído (1,2 ml, 16,01 mmol), seguido de la adición de una solución de hidróxido sódico (1,2 ml, 2,400 mmol) gota a gota en 2 minutos. La mezcla resultante se agitó a 25 °C durante 7 horas. Después de que se consumiera todo el nucleósido de partida, la mezcla de reacción se neutralizó mediante la adición de AcOH. La mezcla resultante se diluyó con AcOEt (100 ml) y se lavó sucesivamente con agua (2 x 40 ml), NaHCO3 ac. saturado (2 x 40 ml) y salmuera (50 ml). La capa orgánica se secó sobre Na2SO4 y se evaporó a presión reducida. El residuo se re-disolvió en EtOH (3 ml) y se añadió borohidruro sódico (199 mg, 5,26 mmol) en porciones a 0 °C. Después de agitar durante 5 horas a 25 °C, la mezcla de reacción se neutralizó mediante la adición de AcOH. La mezcla se concentró a presión reducida, el residuo se repartió entre CHCh (100 ml) y agua (50 ml). La capa orgánica se lavó sucesivamente con agua y salmuera, se secó sobre Na2SO4 y se evaporó a presión reducida. El residuo se purificó por cromatografía en columna sobre gel de sílice usando diclorometano/metanol (30/1) para dar el compuesto del título. ¹H RMN (400 MHz, de-DMSO, ppm): 87,55 (s a, 2H), 7,34 (d, J = 3,6 Hz, 1H), 6,60 (d, J = 3,6 Hz, 1H), 6,35 (t, J = 7,0 Hz, 1H), 4,90 (t, J = 3,6 Hz, 1H), 4,60 (c, J = 2,8 Hz, 1H), 4,41 (t, J = 3,6 Hz, 1H), 3,60-3,43 (m, 4H), 2,69-2,62 (m, 1H), 2,23-2,17 (m, 1H), 0,92 (s, 9H), 0,09 (s, 6H). F RMN: (376 MHz, d⁶-DMSO, ppm): 8-53,80 (s, IF, isómero P). LC-MS: (ES, m/z): 413,32 [M H]+, 435,34 [M Na]+.

Etapa 10: Síntesis de (2R,3S,5R)-5-(4-ammo-2-fluoro-7H-pirrolo[2,3-d]pirimidm-7-M)-3-((íercbutildimetilsilil)oxi)-2-(hidroximetil)tetrahidrofuran-2-carbaldehído

A una solución agitada de ((3S,5R)-5-(4-amino-2-fluoro-7H-pirrolo[2,3-d]pirimidin-7-il)-3-((tercbutildimetilsilil)oxi)tetrahidrofuran-2,2-diil)dimetanol (180 mg, 0,436 mmol) en acetonitrilo anhidro (15 ml) y DMSO seco (1,5 ml) en un matraz de fondo redondo de 50 ml en una atmósfera de argón, se le añadió IBX (367 mg, 1,309 mmol). La mezcla resultante se agitó a 20 °C durante 8 horas. La mezcla de reacción se filtró, se lavó con diclorometano. El filtrado se recogió y se concentraron a presión reducida. El residuo se re-disolvió en acetato de etilo (40 ml), se lavó sucesivamente con agua (3 x 15 ml) y salmuera (2 x 20 ml), se secó sobre Na2SO4 anhidro, se filtró y el filtrado se concentró a presión reducida para dar el compuesto del título, que se usó directamente en la siguiente etapa de reacción sin purificación adicional. ¹H RMN: (400 Mh z , CDCh, ppm): 89,65 (s, 1H), 7,60 (d, J = 3,6 Hz, 1H), 6,43 (dd, J = 5,6 Hz, J = 9,6 Hz, 1H), 6,39 (d, J = 3,6 Hz, 1H), 5,56-5,43 (m, 3H), 4,96 (d, J = 4,8 Hz, 1H), 4,08 (d, J = 11,2 Hz, 1H), 3,81 (d, J = 12,8 Hz, 1H), 3,27-3,19 (m, 1H), 2,25 (dd, J = 5,4 Hz, J = 13,0 Hz, 1H), 0,91 (s, 9H), 0,11 (d, J = 5,2 Hz, 6H). F RMN: (376 MHz, CDCl3, ppm): 8-53,14 (s, IF). LC-MS: (ES, m/z): 411,21 [M H]+.

Etapa 11: Síntesis de ((2R,3S,5R)-5-(4-ammo-2-fluoro-7H-pirrolo[2,3-d]pirimidm-7-M)-3-((íercbutildimetilsilil)oxi)-2-etiniltetrahidrofuran-2-il)metanol

A una solución agitada de (2R,3S,5R)-5-(4-amino-2-fluoro-7H-pirrolo[2,3-d]pirimidin-7-il)-3-((terc-butildimetilsilil)oxi)-2-(hidroximetil)tetrahidrofuran-2-carbaldehído (190 mg, 0,463 mmol) en MeOH anhidro (8 ml) en una atmósfera de argón, se le añadió carbonato potásico (160 mg, 1,157 mmol). La mezcla se enfrió a 0 °C, después se añadió (1-diazo-2-oxopropil)fosfonato de dimetilo (178 mg, 0,926 mmol) gota a gota en 1 minuto. La mezcla resultante se calentó a 25 °C y se agitó durante una noche. La mezcla de reacción se concentró a presión reducida y después se purificó por cromatografía en columna sobre gel de sílice usando metanol/diclorometano (MeOH al 4,8 % en DCM) para dar el compuesto del título. ¹H RMN: (400 MHz, CDCl3, ppm): 86,99 (d, J = 3,6 Hz, 1H), 6,35 (d, J = 3,6 Hz, 1H), 6,28 (dd, J = 6,0 Hz, J = 8,8 Hz, 1H), 5,45-5,33 (m, 3H), 4,76 (c, J = 2,8 Hz, 1H), 4,03 (dd, J = 2,0 Hz, J = 12,4 Hz, 1H), 8,16-3,79 (m, 1H), 3,12-3,06 (m, 1H), 2,70 (s, 1H), 2,33-2,27 (m, 1H), 0,94 (s, 9H), 0,16 (d, J = 8,0 Hz, 6H). F RMN: (376 MHz, CDCl3, ppm): 6 -53,26 (s, IF). LC-MS: (ES, m/z): 407,30 [M H]+

Etapa 12: Síntesis de (2R,3S,5R)-5-(4-ammo-2-fluoro-7H-pirrolo[2,3-d]pirimidm-7-il)-2-etiml-2-(hidroximetil)tetrahidrofuran-3-ol (9)

A una solución agitada de ((2R,3S,5R)-5-(4-amino-2-fluoro-7H-pirrolo[2,3-d]pirimidin-7-il)-3-((terc-butildimetilsilil)oxi)-2-etiniltetrahidrofuran-2-il)metanol (15 mg, 0,037 mmol) en THF anhidro (1 ml) en una atmósfera de argón se le añadió una solución de TBAF y THF (0,037 ml, 0,037 mmol) gota a gota con agitación en 1 minuto a temperatura ambiente. El medio se agitó a temperatura ambiente durante 2 horas. El progresó de la reacción se controló por TLC. Después de que se consumiera todo el nucleósido de partida, la mezcla se concentró al vacío, y después el residuo se purificó por TLC preparativa (MeOH/DCM = 1/15) para dar un producto en bruto (10 mg). El producto en bruto se purificó adicionalmente por HPLC preparativa con las siguientes condiciones: (1#-Pre-HPLC-011(Waters)): Columna, Columna X-bridge C18, 19 x 150 mm, 5 um; fase móvil, agua con amonio bicarbonato 10 mmol y acetonitrilo (de acetonitrilo al 5 % hasta el 30 % en 5 min, hasta el 95 % en 2 min); Detector, uv 254 y 220 nm. Las fracciones que contenían el producto se recogieron y se liofilizaron para dar el compuesto 9 en forma de un sólido. ¹H RMN: (400 MHz, d⁶-DMSO, ppm): 67,57 (s a, 2H), 7,28 (d, J = 3,6 Hz, 1H), 6,61 (d, J = 3,6 Hz, 1H), 6,35 (t, J = 6,4 Hz, 1H), 5,51 (d, J = 5,6 Hz, 1H), 5,27 (t, J = 6,0 Hz, 1H), 4,48 (dd, J = 6,4 Hz, J = 12,0 Hz, 1H), 3,61 (dd, J = 5,6 Hz, J = 11,6 Hz, 1H), 3,53 (dd, J = 6,4 Hz, J = 12,0 Hz, 1H), 3,48 (s, 1H), 2,50-2,46 (m, 1H), 2,37-2,31 (m, 1H). F RMN: (376 MHz, cfe-DMSO, ppm): 6 -53,67 (s, IF). LC-MS: (ES, m/z): 293,15 [M H]+, 315,15 [M Na]+.

EJEMPLO DE REFERENCIA 10: Síntesis de (2R,3S,5R)-5-(4-ammo-7H-pirrolo[2,3-d]pirimidin-7-il)-3-hidroxi-2-(hidroxim etil)tetrahidrofuran-2-carbonitrilo (10)

Etapa 1: Síntesis de 5-(4-ammo-7H-pirrolo[2,3-d]pirimidm-7-il)-3-((tercbutildimetilsilil)oxi)-2-(hidroximetil)tetrahidrofuran-2-carbaldehído oxima

A una solución agitada de (2R,3S,5R)-5-(4-amino-7H-pirrolo[2,3-d]pirimidin-7-il)-3-((tercbutildimetilsilil)oxi)-2-(hidroximetil)tetrahidrofuran-2-carbaldehído (Ejemplo 1, Intermedio C, 50 mg, 0,127 mmol, 1,0 equiv.) en piridina seca (2,5 ml) se le añadió clorhidrato de hidroxilamina (26,6 mg, 0,382 mmol, 3,0 equiv.) en una atmósfera de argón. La mezcla resultante se agitó a 30 °C durante 2 horas. El progresó de la reacción se controló por LCMS. La mezcla de reacción se concentró al vacío, y después el residuo se disolvió en acetato de etilo (50 ml), se lavó sucesivamente con agua (2 x 30 ml) y salmuera (35 ml), se secó sobre sulfato sódico anhidro, se filtró y el filtrado se concentró al vacío. El residuo se purificó por TLC preparativa (DCM/MeOH = 10/1) para proporcionar el compuesto del título. LC-MS: (ES, m/z): 408,20 [M+H]+.

Etapa 2: Síntesis de (2R,3S,5R)-5-(4-ammo-7H-pirroto[2,3-d]pirimidm-7-il)-3-((ferc-butildimetilsilil)oxi)-2-(hidroxim etil)tetrahidrofuran-2-carbonitrilo

A una mezcla agitada de 5-(4-amino-7H-pirrolo[2,3-d]pirimidin-7-il)-3-((tercbutildimetilsilil)oxi)-2-(hidroximetil)tetrahidrofuran-2-carbaldehído oxima (40 mg, 0,098 mmol) y trietilamina (105 mg, 1,038 mmol) en DCM seco (5 ml) se le añadió anhídrido 2,2,2-trifluoroacético (110 mg, 0,524 mmol) gota a gota con agitación a 20 °C en una atmósfera de argón. La mezcla resultante se agitó a 20 °C durante 20 horas. El progresó de la reacción se controló por LCMS. La mezcla de reacción se diluyó con DCM (30 ml), se lavó sucesivamente con NaHCO3 acuoso saturado (25 ml) y salmuera (25 ml), se secó sobre Na2SO4 anhidro, se filtró y el filtrado se concentró al vacío. El residuo se purificó por TLC preparativa (DCM/MeOH = 10/1) para proporcionar el compuesto del título. LC-MS: (ES, m/z): 390,11 [M+H]+. 1H RMN: (300 MHz, CD3OD, ppm): 68,10 (s, 1H), 7,30 (d, J = 3,6 Hz, 1H), 6,68 (t, J = 6,9 Hz, 1H), 6,64 (d, J = 3,6 Hz, 1H), 4,90 (t, J = 6,3 Hz, 1H), 3,85 (dd, J = 12,0 Hz, J = 21,6 Hz, 2H), 2,85-2,94 (m, 1H), 2,42-2,49 (m, 1H), 1,02 (s, 9H), 0,26 (d, J = 9,0 Hz, 6H).

Etapa 3: Síntesis de (2R,3S,5R)-5-(4-ammo-7H-pirrolo[2,3-dlpirimidm-7-il)-3-hidroxi-2-(hidroxim etil)tetrahidrofuran-2-carbonitrilo (10)

A una solución agitada de (2R,3S,5R)-5-(4-amino-7H-pirrolo[2,3-d]pirimidin-7-il)-3-((tercbutildimetilsilil)oxi)-2-(hidroximetil)tetrahidrofuran-2-carbonitrilo (35 mg, 0,090 mmol) en THF seco (5 ml) se le añadió una solución de TBAF y THF (1,0 M, 0,108 ml, 0,108 mmol) gota a gota con agitación en una atmósfera de argón a 15 °C. La mezcla resultante se agitó a 15 °C durante 0,5 horas. El progreso de la reacción se controló por LCMS y TLC. La mezcla de reacción se concentró al vacío. El residuo se purificó por TLC preparativa (DCM/MeOH = 10/1) para dar un jarabe. El producto en bruto se purificó adicionalmente por HPLC prep. con las siguientes condiciones: (1#-Pre-UPLC-011(Waters)): Columna, Columna inversa SunFire C18, 19 x 150 mm, 5 um; fase móvil, agua con amonio bicarbonato 10 mmol y acetonitrilo (de acetonitrilo al 5 % hasta el 20 % en 7,5 min, hasta el 95 % en 2 min, hasta el 5 % en 1 min); Detector, uv 254 y 220 nm. Las fracciones que contenían el producto se recogieron y se liofilizaron para dar el compuesto del título 10 en forma de un sólido. LC-MS: (ES, m/z): 276,10 [M+H]+. 1H RMN: (400 MHz, d6-DMSO, ppm): 58,07 (s, 1H), 7,34 (d, J = 3,6 Hz, 1H), 7,33 (a, 2H), 7,08 (s, 1H), 6,64 (t, J = 7,0 Hz, 1H), 6,61 (d, J = 3,6 Hz, 1H), 6,27 (d, J = 4,8 Hz, 1H), 5,82 (t, J = 6,0 Hz, 1H), 4,61 (dd, J = 4,8 Hz, J = 10,0 Hz, 1H), 3,75 (dd, J = 5,6 Hz, J = 12,0 Hz, 1H), 3,62 (dd, J = 6,0 Hz, J = 11,6 Hz, 1H), 2,74-2,81 (m, 1H), 2,33-2,38 (m, 1H).

EJEMPLO DE REFERENCIA 11: Síntesis de (2R,3S,5R)-5-(4-ammopirrolo[2,1-f][1,2,4triazm-7-N)-2-ethnl-2-hdroxmetil)tetrahdrofuran-3-ol (11)

Etapa 1: Síntesis de 4-(metiltio)pirrolo[2,1-f][1,2,4]triazina

La síntesis de 4-cloropirrolo[2,1-f][1,2,4]triazina se describe en el documento WO2011/150356A1,2011. En un matraz de fondo redondo de 500 ml, se puso una solución de 4-cloropirrolo[2,1 -f][1,2,4]triazina (17 g, 110,70 mmol) y (metilsulfanil)sodio (15 g, 214,01 mmol) en tetrahidrofurano (300 ml). La solución resultante se agitó durante 1 durante una noche a temperatura ambiente. Los sólidos se retiraron por filtración. La mezcla resultante se concentró al vacío. El residuo se aplicó a una columna de gel de sílice con acetato de etilo/éter de petróleo (1:10). Esto dio como resultado el compuesto del título. LC-MS (ES, m/z): 166 [M+H]+

Etapa 2: (3R,4R,5R)-3,4-bis(benciloxi)-5-((benciloxi)metil)-2-(4-(metiltio)pirrolo[2,1-f][1,2,4]triazin-7-il)tetrahidrofuran-2-ol

A una solución de 4-(metiltio)pirrolo[2,1-f][1,2,4]triazina (1,650 g, 9,99 mmol) en THF (30 ml) se le añadió diisopropilamida de litio (7,5 ml, 15,00 mmol) a -78 °C en una atmósfera de argón y la mezcla resultante se agitó durante 30 minutos a -78 °C. Después de eso, se añadió (3R,4R,5R)-3,4-bis(benciloxi)-5-((benciloxi)metil)dihidrofuran-2(3H)-ona (4,18 g, 9,99 mmol) en THF (10 ml) a -78 °C en una atmósfera de argón y se agitó durante 120 minutos de -78 a -50 °C. La reacción se interrumpió mediante la adición de cloruro de amonio (ac., 10 ml) y después se extrajo con acetato de etilo (300 ml). La capa orgánica se lavó con salmuera (3 x 50 ml), se secó sobre sulfato sódico y se concentró al vacío. El residuo se aplicó sobre una columna de gel de sílice, eluyendo con acetato de etilo/éter de petróleo (1:5) para dar el compuesto del título. LC-MS: 584,2 [M+H]+

Etapa 3: Síntesis de 7-((2S,3S,4R,5R)-3,4-bis(benciloxi)-5-((benciloxi)metil)tetrahidrofuran-2-il)-4-(metiltio)pirrolo[2,1-f][1,2,4]triazina

A una solución de 3R,4R,5R)-3,4-bis(benciloxi)-5-((benciloxi)metil)-2-(4-(metiltio)pirrolo[2,1-f][1,2,4]triazin-7-il)tetrahidrofuran-2-ol (3,00 g, 5,14 mmol) en DCM (30 ml) se le añadieron trietilsilano (2,390 g, 20,56 mmol) y trifluoroborano (0,697 g, 10,28 mmol) a 0 °C en una atmósfera de argón. La solución resultante se agitó durante 30 minutos a 0 °C, después se inactivó mediante la adición de bicarbonato sódico (ac., 20 ml) y se extrajo con DCM (200 ml). La capa orgánica se lavó con 3 x 50 ml de salmuera, se secó sobre sulfato sódico y se concentró al vacío. El residuo se aplicó sobre una columna de gel de sílice, eluyendo con acetato de etilo/éter de petróleo (1:10) para dar el compuesto del título. LC-MS: 568,4 [M+H]+.¹H RMN: (300 MHz, CDCl3, ppm): 88,21 (s, 1H), 7,23-7,36 (m, 15H), 6,81 (d, J = 4,5 Hz, 1H), 6,70 (d, J = 4,5 Hz, 1H), 5,69 (d, J = 4,2 Hz, 1H), 4,37-4,62 (m, 7H), 4,22-4,26 (m, 1H), 4,10-4,13 (m, 1H), 3,66-3,67 (m, 1H), 3,62-3,63 (m, 1H), 2,75 (s, 3H).

Etapa 4: Síntesis de 7-((2S,3S,4R,5R)-3,4-bis(bencMoxi)-5-((benciloxi)metil)tetrahidrofuran-2-il)pirrolo[2,1-f][1,2,4]triazin-4-amina

Una solución de 7-((2S,3S,4R,5R)-3,4-bis(benciloxi)-5-((benciloxi)metil)tetrahidrofuran-2-il)-4-(metiltio)pirrolo[2,1-f][1,2,4]triazina (4,6 g, 8,10 mmol) en 2-propanol (5 ml) se lavó abundantemente con amoniaco (1350 mg, 79 mmol) a -40 0 °C durante 60 minutos en un tubo cerrado herméticamente. Después de que la mezcla resultante se agitara durante 16 horas a 80 °C, se evaporó para dar el compuesto del título. LC-MS: 537,3 [M+H]+. ¹H RMN: (300 MHz, DMSO, ppm): 87,80 (s, 1H), 7,69 (s, 2H), 7,24-7,36 (m, 15H), 6,88 (d, J = 4,5 Hz, 1H), 6,80 (d, J = 4,2 Hz, 1H), 5,44 (d, J = 5,4 Hz, 1H), 4,49-4,62 (m, 6H), 4,31 (t, J = 5,1 Hz, 1H), 4,15-4,18 (m, 1H), 4,09-4,12 (m, 1H), 3,29-3,67 (m, 2H).

Etapa 5: Síntesis de (2S,3R,4S,5R)-2-(4-aminopirrolo[2,1-f][1,2,4]triazin-7-il)-5-(hidroximetil)tetrahidrofuran-3,4-diol

A una solución de 7-((2S,3S,4R,5R)-3,4-bis(benciloxi)-5-((benciloxi)metil)tetrahidrofuran-2-il)pirrolo[2,1-f][1,2,4]triazin-4-amina (100 mg, 0,186 mmol) en ácido acético (2 ml) se le añadió Pd(OH)2 (al 10 % en mol)/C (100 mg, 0,130 mmol) en una atmósfera de hidrógeno a 25 °C durante 4 horas. La mezcla se filtró a través de una capa de celite y el filtrado se evaporó. El residuo se aplicó sobre una columna de gel de sílice, eluyendo con MeOH/DCM (1:8) para dar el compuesto del título. LC-MS: 267,2 [M+H]+. ¹H RMN: (300 MHz, DMSO, ppm): 87,79 (s, 1H), 7,77 (s, 2H), 6,84 (d, J = 4,2 Hz, 1H), 6,68 (d, J = 4,2 Hz, 1H), 5,10 (d, J = 6,6 Hz, 1H), 4,95 (d, J = 6,6 Hz, 1H), 4,84 (d, J = 4,8 Hz, 1H), 4,76 (t, J = 5,4 Hz, 1H), 4,20-4,25 (m, 1H), 3,94 (d, J = 4,8 Hz, 1H), 3,78 (d, J = 4,2 Hz, 1H), 3,41-3,64 (m, 2H).

Etapa 6: Síntesis de (6aR,8S,9S,9aS)-8-(4-aminopirrolo[2,1-f][1,2,4]triazin-7-il)-2,2,4,4-tetraisopropiltetrahidro-6H-furo[3,2-f][1,3,5,2,4]trioxadisNocm-9-ol

Se disolvieron (2S,3R,4S,5R)-2-(4-aminopirrolo[2,1-f][1,2,4]triazin-7-il)-5-(hidroximetil)tetrahidrofuran-3,4-diol (790 mg, 2,97 mmol) y 1H-imidazol (606 mg, 8,90 mmol) en DMF (20 ml) en una atmósfera de argón. Se añadió 1,3-dicloro-1,1,3,3-tetraisopropildisiloxano (936 mg, 2,97 mmol) gota a gota a 0 °C. Después de que la mezcla resultante se agitara durante 5 horas a 25 °C en una atmósfera de argón, se añadió agua (10 ml) y la mezcla resultante se diluyó con acetato de etilo (400 ml). La fase orgánica se lavó con (3 x 60 ml) de agua y 60 ml de salmuera, se secó sobre Na2SO4 y se concentró al vacío. El residuo se aplicó sobre gel de sílice, eluyendo con MeOH/DCM (1:20) para dar el compuesto del título. LC-MS: 509,3 [M+H]+. ¹H RMN: (400 MHz, DMSO, ppm): 8 7,81 (s, 1H), 7,70 (s, 2H), 6,82 (d, J = 4,8 Hz, 1H), 6,61 (d, J = 4,4 Hz, 1H), 5,20 (d, J = 4,8 Hz, 1H), 5,16 (d, J = 1,6 Hz, 1H), 4,31-4,35 (m, 1H), 4,12-4,15 (m, 1H), 4,00-4,03 (m, 1H), 3,88-3,91 (m, 1H), 0,96-1,05 (m, 28H)

Etapa 7: Síntesis de carbonotioato de O-((6aR,8S,9S,9aR)-8-(4-aminopirrolo[2,1-f][1,2,4]triazin-7-il)-2,2,4,4-tetraisopropiltetrahidro-6H-furo[3,2-f][1,3,5,2,4]trioxadisilocm-9-il) O-fenilo

Se disolvieron (6aR,8S,9S,9aS)-8-(4-aminopirrolo[2,1-f][1,2,4]triazin-7-il)-2,2,4,4-tetraisopropiltetrahidro-6H-furo[3,2-f][1,3,5,2,4]trioxadisilocin-9-ol (210 mg, 0,413 mmol) y N,N-dimetilpiridin-4-amina (202 mg, 1,651 mmol) en DCM (10 ml) en una atmósfera de argón. Se añadió carbonocloridotioato de O-fenilo (143 mg, 0,826 mmol) gota a gota a 0 °C. Después de que la reacción se agitara a 25 °C en una atmósfera de argón durante 2 horas, la mezcla resultante se diluyó con DCM (100 ml) y después se lavó con 3 x 30 ml de agua y 30 ml de salmuera. La capa orgánica se secó sobre Na2SO4 y se concentró al vacío. El residuo se aplicó sobre una columna de gel de sílice eluyendo con acetato de etilo/éter de petróleo (3:1) para dar el compuesto del título. LC-MS: 645,2 [M+H]+, ¹H RMN: (400 MHz, DMSO, ppm): 87,83 (s, 2H), 7,79 (s, 1H), 7,48 (t, J = 8,0 Hz, 2H), 7,33 (t, J = 7,2 Hz, 1H), 7,14 (d, J = 7,6 Hz, 2H), 6,80 (d, J = 4,4 Hz, 1H), 6,71 (d, J = 4,4 Hz, 1H), 6,16 (dd, J = 2,4 Hz, J = 5,6 Hz, 1H), 5,46 (d, J = 2,0 Hz, 1H), 4,90 (dd, J = 5,6 Hz, J = 8,8 Hz, 1H), 3,95-4,06 (m, 2H), 3,85-3,87 (m, 1H), 0,96-1,06 (m, 28H).

Etapa 8: Síntesis de 7-((6aR,8R,9aS)-2,2,4,4-tetra¡soprop¡ltetrah¡dro-6H-furo[3,2-f][1,3,5,2,4]tr¡oxad¡s¡locm-8-il)pirrolo[2,1-f][1,2,4]triazin-4-amina

Carbonotioato de O-((6aR,8S,9S,9aR)-8-(4-aminopirrolo[2,1-f][1,2,4]triazin-7-il)-2,2,4,4-tetraisopropiltetrahidro-6H-furo[3,2-f][1,3,5,2,4]trioxadisilocin-9-il) O-fenilo (1,45 g, 2,248 mmol), A iBn (0,738 g, 4,50 mmol) y tributilestanano (3,93 g, 13,49 mmol) se disolvieron en tolueno (20 ml) en una atmósfera de argón. Después de que la reacción se agitara a 80 °C en una atmósfera de argón durante 3 horas, la solución resultante se concentró al vacío. El residuo se aplicó sobre una columna de gel de sílice eluyendo con acetato de etilo/éter de petróleo (2,5:1) para dar el compuesto del título. LC-MS: 493,4 [M+H]+, 1H RMN: (400 MHz, DMSO, ppm): 87,81 (s, 1H), 7,79 (s, 2H), 6,81 (d, J = 4,4 Hz, 1H), 6,60 (d, J = 4,4 Hz, 1H), 5,46 (t, 1H), 4,58-4,62 (m, 1H), 3,90-4,00 (m, 1H), 3,75-3,80 (m, 2H), 2,20-2,30 (m, 1H), 2,30 2,40 (m, 1H), 0,98-1,06 (m, 28H).

Etapa 9: Síntes¡s de (2R,3S,5R)-5-(4-am¡nop¡rrolo[2,1-f][1,2,4]tr¡az¡n-7-¡l)-2-(h¡drox¡met¡l)tetrah¡drofuran-3-ol

Se disolvió 7-((6aR,8R,9aS)-2,2,4,4-tetraisopropiltetrahidro-6H-furo[3,2-f][1,3,5,2,4]trioxadisilocin-8-il)pirrolo[2,1-f][1,2,4]triazin-4-amina (1,0 g, 2,029 mmol) en THF (10 ml) en una atmósfera de argón. Se añadió TBa F (0,531 g, 2,029 mmol) a la solución de reacción gota a gota a 20 °C. Después de que la solución resultante se agitara a 20 °C en una atmósfera de argón durante 2 horas, se concentró al vacío. El residuo se aplicó sobre una columna de gel de sílice eluyendo con DCM/MeOH (20:1) para dar el compuesto del título. LC-MS: 251,2 [M+H]+, 1H RMN: (400 MHz, DMSO, ppm): 87,83 (s, 1H), 7,81 (s, 2H), 6,84 (d, J = 4,8 Hz, 1H), 6,82 (d, J = 4,4 Hz, 1H), 5,47-5,51 (m, 1H), 5,06 (d, J = 4,0 Hz, 1H), 4,73 (t, J = 6,0 Hz, 1H), 4,22 (m, 1H), 3,74-3,78 (m, 1H), 3,32-3,45 (m, 2H), 2,16-2,20 (m, 1H), 2,09 2,14 (m, 1H).

Etapa 10: Síntes¡s de 7-((2R,4S,5R)-4-((ferc-but¡ld¡met¡ls¡l¡l)ox¡)-5-(((tercbut¡ld¡met¡ls¡l¡l)ox¡)met¡l)tetrah¡drofuran-2-¡l)p¡rrolo[2,1-f][1,2,4]tr¡az¡n-4-am¡na

(2R,3S,5R)-5-(4-Aminopirrolo[2,1-f][1,2,4]triazin-7-il)-2-(hidroximetil)tetrahidrofuran-3-ol (300 mg, 1,199 mmol), 1H-imidazol (490 mg, 7,19 mmol) y terc-butilclorodimetilsilano (723 mg, 4,80 mmol) se disolvieron en DMF (4,0 ml) en una atmósfera de argón. Después de que la mezcla de reacción se agitara a 20 °C en una atmósfera de argón durante 5 horas, la mezcla resultante se diluyó con acetato de etilo (100 ml) y se lavó con (3 x 30 ml) de agua y 30 ml de salmuera. La capa orgánica se secó con Na2SO4 y se concentró al vacío. El residuo se aplicó sobre una columna de gel de sílice eluyendo con acetato de etilo/éter de petróleo (2:1) para dar el compuesto del título. LC-MS: 479,3 [M+H]+, 1H RMN: (300 MHz, DMSO, ppm): 87,82 (s, 1H), 7,75 (s, 2H), 6,82 (d, J = 4,5 Hz, 1H), 6,61 (d, J = 4,5 Hz, 1H), 5,48 5,53 (m, 1H), 4,42 (m, 1H), 3,78 (m, 1H), 3,48-3,62 (m, 2H), 2,22-2,27 (m, 1H), 2,04-2,10 (m, 1H), 0,78-0,89 (m, 18H), 0,00-0,10 (m, 12H)

Etapa 11: Síntes¡s de ((2R,3S,5R)-5-(4-am¡nop¡rrolo[2,1-f][1,2,4]tr¡az¡n-7-¡l)-3-((fercbut¡ld¡met¡ls¡l¡l)ox¡)tetrah¡drofuran-2-¡l)metanol

Se disolvió 7-((2R,4S,5R)-4-((terc-butildimetilsilil)oxi)-5-(((tercbutildimetilsilil)oxi)metil)tetrahidrofuran-2-il)pirrolo[2,1-f][1,2,4]triazin-4-amina (500 mg, 1,044 mmol) en ^tH^f(8,0 ml), H2O (2,0 ml) y TFA (2,0 ml) y se agitó a 0 °C durante 4 horas. La mezcla de reacción se ajustó a pH 7 con bicarbonato sódico y después se extrajo con acetato de etilo (30 ml x 3), se lavó con (3 x 20 ml) de agua y 20 ml de salmuera. La capa orgánica se secó sobre Na2SO4 y se concentró al vacío. El residuo se aplicó sobre una columna de gel de sílice eluyendo con acetato de etilo/éter de petróleo (2:1) para dar el compuesto del título. LC-MS: 365,3 [M+H]+, 1H RMN: (400 MHz, DMSO, ppm): 87,82 (s, 1H), 7,68 (s, 2H), 6,82 (d, J = 4,4 Hz, 1H), 6,65 (d, J = 4,4 Hz, 1H), 5,46-5,50 (m, 1H), 4,80 (t, J = 5,6 Hz, 1H), 4,42 (d, J = 4,2 Hz, 1H), 3,74-3,78 (m, 1H), 3,32-3,44 (m, 2H), 2,24-2,28 (m, 1H), 2,02-2,06 (m, 1H), 0,85-0,90 (m, 9H), 0,00-0,10 (m, 6H).

Etapa 12: Síntes¡s de (2S,3S,5R)-5-(4-am¡nop¡rrolo[2,1-f][1,2,4]tr¡az¡n-7-¡l)-3-((fercbut¡ld¡met¡ls¡l¡l)ox¡)tetrah¡drofuran-2-carbaldehído

((2R,3S,5R)-5-(4-Aminopirrolo[2,1-f][1,2,4]triazin-7-il)-3-((tercbutildimetilsilil)oxi)tetrahidrofuran-2-il)metanol (270 mg, 0,741 mmol) e IBX (270 mg, 0,963 mmol) se disolvieron en acetonitrilo (20,0 ml) en una atmósfera de argón. Después de que la mezcla de reacción se agitara a 80 °C en una atmósfera de argón durante 1 hora, el sólido se retiró por filtración y el filtrado se concentró al vacío para dar el compuesto del título que se usó directamente para la siguiente etapa. LC-MS: 363,2 [M+H]+, 1H RMN: (400 MHz, DMSO, ppm): 89,59 (s, 1H), 7,84 (s, 1H), 7,73 (s, 2H), 6,86 (d, J = 4,4 Hz, 1H), 6,64 (d, J = 4,4 Hz, 1H), 5,67-5,71 (m, 1H), 4,71 (d, J = 4,4 Hz, 1H), 4,25 (s, 1H), 2,25-2,32 (m, 1H), 2,12 2,17 (m, 2H), 0,84-0,91 (m, 9H), 0,00-0,13 (m, 6H).

Etapa 13: Síntes¡s de ((3S,SR)-5-(4-ammop¡rrolo[2,1-f][1,2,4]tr¡azm-7-¡l)-3-((fercbut¡ld¡met¡ls¡l¡l)ox¡)tetrah¡drofuran-2,2-d¡¡l)d¡metanol

Se disolvió (2S,3S,5R)-5-(4-aminopirrolo[2,1-f][1,2,4]triazin-7-il)-3-((tercbutildimetMsilil)oxi)tetrahidrofuran-2-carbaldehído (200 mg, 0,552 mmol) en 1,4-dioxano (10 ml) a 20 °C. Después, se añadieron formaldehído (2,0 ml, 0,552 mmol) e hidróxido sódico (2,0 ml, 4,00 mmol). Después de que la mezcla resultante se agitara a 20 °C durante 4 horas, se ajustó a pH 7 con ácido acético. La mezcla se diluyó con acetato de etilo (150 ml) y después se lavó con 3 x 30 ml de agua y 30 ml de salmuera. La capa orgánica se secó sobre Na2SO4 y se concentró al vacío. El residuo se disolvió en etanol (10 ml) a 0 °C y después se añadió NaBH4 (41,7 mg, 1,103 mmol) a 0 °C. Después de que la mezcla resultante se agitara a 20 °C durante 16 horas, se ajustó a pH = 7 con ácido acético y la mezcla se extrajo con acetato de etilo (150 ml) y después se lavó con (3 x 30 ml) de agua y 30 ml de salmuera. La capa orgánica se secó sobre Na2SO4 y se concentró al vacío. El residuo se aplicó a una columna de gel de sílice eluyendo con DCM/MeOH (10:1) para dar el compuesto del título. LC-MS: 395,2 [M+H]+, ¹H RMN: (400 MHz, DMSO, ppm): 87,82 (s, 1H), 7,70 (s, 2H), 6,82 (d, J = 4,4 Hz, 1H), 6,66 (d, J = 4,4 Hz, 1H), 5,50-5,60 (m, 1H), 4,68 (t, 1H), 4,52 (d, J = 4,4 Hz, 1H), 4,22 (t, 1H), 3,53-3,60 (m, 2H), 2,35-2,45 (m, 1H), 2,00-2,10 (m, 1H), 0,90 (s, 9H), 0,08-0,09 (m, 6H).

Etapa 14: Síntesis de (2R,3S,5R)-5-(4-ammopirrolo[2,1-f][1,2,4]triazm-7-M)-3-((ferc-butMdimetMsilil)oxi)-2-(hidroximetil)tetrahidrofuran-2-carbaldehído

((3S,5R)-5-(4-Aminopirrolo[2,1 -f][1,2,4]triazin-7-il)-3-((tercbutildimetilsilil)oxi)tetrahidrofuran-2,2-diil)dimetanol (90 mg, 0,228 mmol) e IBX (256 mg, 0,912 mmol) se disolvieron en acetonitrilo (15,0 ml) en una atmósfera de argón. Después de que la mezcla de reacción se agitara a 30 °C en una atmósfera de argón durante 48 horas, el sólido se retiró por filtración. El filtrado se concentró al vacío para dar el compuesto del título, que se usó directamente para la siguiente etapa.

Etapa 15: Síntesis de ((2R,3S,5R)-5-(4-aminopirrolo[2,1-f][1,2,4|triazm-7-M)-3-((ferc-butMdimetMsiMl)oxi)-2-etiniltetrahidrofuran-2-il)metanol

(2R,3S,5R)-5-(4-Aminopirrolo[2,1-f][1,2,4]triazin-7-N)-3-((ferc-butNdimetNsilN)oxi)-2-(hidroximetN)tetrahidrofuran-2-carbaldehído (80 mg, 0,204 mmol) y K2CO3 (85 mg, 0,611 mmol) se disolvieron en metanol (10 ml) en una atmósfera de argón. A la mezcla de reacción se le añadió (1-diazo-2-oxopropil)fosfonato de dimetilo (78 mg, 0,408 mmol) gota a gota a 0 °C. Después de que la mezcla de reacción se agitara a 25 °C en una atmósfera de argón durante 16 horas, se filtró y se concentró al vacío. El residuo se aplicó a una columna de gel de sílice eluyendo con DCM/MeOH (10:1) para dar el compuesto del título. LC-MS: 389,3 [m H]+

Etapa 16: Síntesis de (2R,3S,5R)-5-(4-aminopirrolo[2,1-f][1,2,4]triazin-7-il)-2-etinil-2-(hidroximetil)tetrahidrofuran-3-ol (11)

((2R,3S,5R)-5-(4-Aminopirrolo[2,1-f][1,2,4]triazin-7-il)-3-((ferc-butildimetilsilil)oxi)-2-etiniltetrahidrofuran-2-il)metanol (50 mg, 0,129 mmol) y TBAF (33,6 mg, 0,129 mmol) se disolvieron en THF (5,0 ml) en una atmósfera de argón. Después de que la solución resultante se agitara a 25 °C en una atmósfera de argón durante 2 horas, la mezcla de reacción se concentró al vacío. El residuo se purificó por HPLC prep. con las siguientes condiciones (1#-Pre-HPLC-011(Waters)): Columna, Columna Xbridge Prep C18, 19 x 150 mm; fase móvil, agua (10 mmol/l de NH4HCO3) y acetonitrilo (acetonitrilo del 5,0 % hasta el 25,0 % en 8 min, hasta el 95,0 % en 1,5 min, bajando hasta el 5,0 % en 1,5 min); Detector, UV254 y 220 nm) para dar el compuesto del título 11 en forma de un sólido. LC-MS: 275,1 [M+H]+, ¹H RMN: (400 MHz, DMSO, ppm): 87,82 (s, 1H), 7,69 (s, 2H), 6,82 (d, J = 4,4 Hz, 1H), 6,69 (d, J = 4,0 Hz, 1H), 5,60 (t, J = 7,6 Hz, 1H), 5,28 (d, J = 4,2 Hz, 1H), 5,06 (d, J = 6,8 Hz, J = 6,0 Hz, 1H), 4,30-4,34 (m, 1H), 3,45-3,56 (m, 2H), 3,38 (s, 1H), 2,30-2,37 (m, 1H), 2,17-2,13 (m, 1H).

EJEMPLO DE REFERENCIA 12: Síntesis de (2R,3S,5R)-5-(4-ammopirrolo[2,1-f][1,2,4]triazm-7-il)-3-hidroxi-2-(hidroxim etil)tetrahidrofuran-2-carbonitrilo (12)

Etapa 1: Síntesis de 5-(4-ammopirrolo[2,1-f][1,2,4]triazm-7-il)-3-((tercbutildimetilsilil)oxi)-2-(hidroximetil)tetrahidrofuran-2-carbaldehído oxima

A una mezcla del Intermedio D (véase el Ejemplo 11) (70 mg, 0,178 mmol) en piridina (5 ml) en una atmósfera de argón se le añadió clorhidrato de hidroxilamina (37,17 mg, 0,543 mmol) a 25 °C. Después de que la mezcla resultante se agitara durante 2 horas a 25 °C, la mezcla de reacción se concentró a presión reducida. El residuo se diluyó con acetato de etilo (100 ml), se lavó con agua (3 x 20 ml) y salmuera (20 ml), se secó sobre sulfato sódico anhidro y se concentró a presión reducida para proporcionar el compuesto del título que se usó sin purificación. LC-MS: 408,2 [M+H]+

Etapa 2: Síntesis de (2R,3S,5R)-5-(4-ammopirrolo[2,1-f][1,2,4]triazm-7-il)-3-((ferc-butildimetilsilil)oxi)-2-(hidroxim etil)tetrahidrofuran-2-carbonitrilo

A una mezcla de 5-(4-aminopirrolo[2,1-f][1,2,4]triazin-7-il)-3-((íerc-butildimetilsilil)oxi)-2-(hidroximetil)tetrahidrofuran-2-carbaldehído oxima (70 mg, 0,172 mmol) en DCM (15 ml) en una atmósfera de argón se le añadieron Et3N (69,5 mg, 0,687 mmol) y anhídrido 2,2,2-trifluoroacético (72,2 mg, 0,344 mmol) a 25 °C. La mezcla resultante se agitó durante 16 horas a 25 °C y después la mezcla de reacción se diluyó con DCM (100 ml), se lavó con bicarbonato sódico acuoso sat. (3 x 20 ml) y salmuera (20 ml), se secó sobre sulfato sódico anhidro y se concentró a presión reducida. El residuo se purificó por una columna de gel de sílice, eluyendo con DCM/MeOH (15:1) para proporcionar el compuesto del título. LC-MS: 309,2 [M+H]+.

Etapa 3: Síntesis de (2R,3S,5R)-5-(4-aminopirrolo[2,1-f][1,2,4|triazin-7-il)-3-hidroxi-2-(hidroxim etil)tetrahidrofuran-2-carbonitrilo (12)

A una mezcla de (2R,3S,5R)-5-(4-aminopirrolo[2,1 -f][1,2,4]triazin-7-il)-3-((tercbutildimetilsilil)oxi)-2-(hidroximetil)tetrahidrofuran-2-carbonitrilo (50 mg, 0,128 mmol) en THF(10 ml) en una atmósfera de argón se le añadió TBAF (33,6 mg, 0,128 mmol) a 25 °C. La mezcla resultante se agitó durante 2 horas a 25 °C y después se concentró a presión reducida. El producto en bruto se purificó por HPLC prep. con las siguientes condiciones: Instrumento, (1#-Pre-HPLC-011(Waters)); Columna: Xbridge C18, 5 um, 19 x 150 mm; fase móvil: agua (NH4CO3 al 0,05 %) y ACN (ACN del 5,0 % hasta el 40 % en 10 min, mantenido al 95 % durante 2 minutos, bajando hasta el 5 % en 2 minutos); Detector, UV 220 y 254 nm. Las fracciones recogidas se combinaron y se concentraron a presión reducida para dar el compuesto del título 12 en forma de un sólido. LC-MS: 276,0 [M+H]+, ¹H RMN (400 MHz, DMSO, ppm): 87,86 (s, 1H), 7 ,74-7,84 (s, 2H), 6,88 (d, J = 4,4 Hz, 1H), 6,84 (d, J = 4,4 Hz, 1H), 6,10 (d, J = 4,4 Hz, 1H), 5,72-5,79 (m, 1H), 5,62 5,63 (m, 1H), 4,44-4,61 (s, 1H), 3,53-3,62 (m, 2H), 2,42-2,49 (m, 1H), 2,19-2,24 (m, 1H).

EJEMPLO 13: ((2R,3S,5R)-5-(4-ammo-7H-pirrolo[2,3-d]pirimidm-7-il)-2-etiml-3-hidroxitetrahidrofuran-2-il)metil trifosfato de amonio (13)

Etapa 1: 2-((4,4,6,6-tetraoxido-1,3,5,2,4,6-trioxatrifosfinan-2-il)oxi)benzoato (Intermedio E)

En una caja de guantes en una atmósfera de argón, se añadió tributilamina seca (0,4 ml, 1,679 mmol) al matraz que contenía pirofosfato de tributilamonio (112 mg, 0,205 mmol) disuelto en 0,4 ml de dimetilformamida (DMF) para dar una solución transparente. Después, la solución transparente se inyectó en el matraz que contenía 2-cloro-4H-benzo[d][1,3,2]dioxafosfinin-4-ona seca (27,6 mg, 0,136 mmol) en dimetilformamida (0,4 ml) con agitación vigorosa. La mezcla resultante se agitó a 30 °C durante 30 minutos para dar una solución del Intermedio E que se usó directamente en la siguiente reacción sin tratamiento adicional.

Etapa 2: Síntesis de ((2R,3S,5R)-5-(4-amino-7H-pirrolo[2,3-d]pirimidin-7-il)-2-etinil-3-hidroxitetrahidrofuran-2-il)metil trifosfato de amonio (13)

Se puso (2R,3S,5R)-5-(4-amino-7H-pirrolo[2,3-d]pirimidin-7-il)-2-etinil-2-(hidroximetil)tetrahidrofuran-3-ol (Compuesto 1, 8 mg, 0,029 mmol) en un matraz de fondo redondo (10 ml) y después se secó sobre P2O5 a alto vacío durante una noche. A este matraz se le añadieron tamices moleculares activados de 4 A (100 mg). El medio se cargó con argón y después una solución del Intermedio E (2,0 equiv., recién preparado) en DMF seca (0,15 ml) se transfirió al matraz anterior mediante una jeringa y la mezcla se agitó a 25 °C durante 3 horas. El progreso de la reacción se controló por TLC (acetonitrilo: cloruro de amonio 0,1 M = 7:3). Después de que se consumiera la mayor parte del nucleósido de partida, la mezcla se enfrió a 0 °C, y después se inyectó una solución de yodo [al 3 % en 0,1 ml de piridina/agua (9:1)] en la mezcla de reacción. A medida que se consumía el yodo, se continuó la adición gota a gota de la solución de yodo hasta que se mantuvo un color pardo permanente del yodo. Después de 15 minutos, se añadió tampón de bicarbonato de trietilamonio (1,0 M, 2 ml) con agitación a 10 °C durante otros 15 minutos. El material volátil se eliminó al vacío (la temperatura interna no superó los 25 °C). El residuo se re-disolvió en agua (2 ml) y se extrajo con cloroformo (2 x 2 ml). Después, la capa acuosa recogida que contenía el producto en bruto se purificó por HPLC preparativa con las siguientes condiciones (1#-Pre-HPLC-011(Waters)): Columna, Columna XBridge™ Prep OBD (Optimum Bed Density) T3, 19 x 150 mm, 5 um; fase móvil, agua con amonio bicarbonato 50 mmol y acetonitrilo (de acetonitrilo al 2 % hasta el 5,2 % en 5 min, hasta el 95 % en 2 min, hasta el 5 % en 1,5 min); Detector, UV 254 y 220 nm. Las fracciones que contenían el producto se recogieron y se liofilizaron para dar el compuesto del título 13 en forma de un sólido. LC-MS: (ES, m/z): 512,90 [M-H-4NH³]'. ¹H RMN: (400 MHz, D2O, ppm): 88,06 (s, 1H), 7,38 (d, J = 3,6 Hz, 1H), 6,63 (t, J = 7,6 Hz, 1H), 6,58 (d, J = 3,6 Hz, 1H), 4,06-4,14 (m, 2H), 2,67-2,72 (m, 1H), 2,54-2,59 (m, 1H). P RMN: (161 MHz, D2O, ppm): 8 -5,86 (s, 1P), -11,49--11,39 (d, J = 15,13 Hz, 1P), -19,29 (s, 1P).

Los siguientes compuestos 14-21 se sintetizaron usando el método descrito en el Ejemplo 13:

EJEMPLO 14: ((2R,3S,5R)-5-(4-amino-5-fluoro-7H-pirrolo[2,3-d]pirimidin-7-il)-2-etinil-3-hidroxitetrahidrofuran-2-il)metil trifosfato de amonio (14). LC-MS: (ES, m/z): 530,85 [M-H-4NH³]-. ¹H RMN: (400 MHz, D2O, ppm): 88,00 (s, 1H), 7,14 (s, 1H), 6,62 (dd, J = 4,8 Hz, J = 6,0 Hz, 1H), 4,13 (dd, J = 5,6 Hz, J = 11,2 Hz, 1H), 4,06 (dd, J = 5,0 Hz, J = 11,4 Hz, 1H), 2,48-2,64 (m, 2H). P RMN: (161 MHz, D2O, ppm): 8 -5,97--5,89 (d, J = 13,85 Hz, IP), -11,52--11,43 (d, J = 14,81 Hz, IP), -19,31 (s, IP).

EJEMPLO 15: (2R,3S,5R)-5-(4-amino-5-metil-7H-pirrolo[2,3-d]pirimidin-7-il)-2-etinil-3-hidroxitetrahidrofuran-2-il)metil trifosfato de amonio (15). LC-MS: (ES, m/z): 527,00 [M - H - 4NH³]-. ¹H RMN: (400 MHz, D2O, ppm): 87,96 (s, 1H), 7,07 (s, 1H), 6,55 (t, J = 6,6 Hz, 1H), 4,11 (dd, J = 6,2 Hz, J = 11,4 Hz, 1H), 4,05 (dd, J = 5,8 Hz, J = 12,0 Hz, 1H), 2,59-2,66 (m, 1H), 2,48-2,53 (m, 1H), 2,78 (s, 3H). P RMN: (161 MHz, D2O, ppm): 8 -5,90 (s, IP), -11,48--11,39 (d, J = 14,49 Hz, IP), -19,32 (s, 1P).

EJEMPLO 16: ((2R,3S,5R)-5-(4-amino-2-cloro-7H-pirrolo[2,3-d]pirimidin-7-il)-2-etinil-3-hidroxitetrahidrofuran-2-il)metil trifosfato de bis-trietilamonio (16). LC-MS: (ES, m/z): 546,95 [M-H-2TEA]-.¹H RMN: (400 MHz, D2O, ppm): 8 7,31 (d, J = 4,0 Hz, 1H), 6,53 (d, J = 4,0 Hz, 1H), 6,50 (t, J = 6,4 Hz, 1H), 4,15 (dd, J = 5,8 Hz, J = 10,6 Hz, 1H), 4,08 (dd, J = 4,8 Hz, J = 11,2 Hz, 1H), 2,62-2,67 (m, 1H), 2,53-2,58 (m, 1H). P RMN: (161 MHz, D2O, ppm): 8 -5,86--5,77 (d, J = 14,81 Hz, IP), -11,45— 11,35 (d, J= 15,13 Hz, 1P), -19,24 (s, IP).

EJEMPLO 17: ((2R,3S,5R)-5-(4-amino-5-cloro-7H-pirrolo[2,3-d]pirimidin-7-il)-2-etinil-3-hidroxitetrahidrofuran-2-il)metil trifosfato de amonio (17). LC-MS: (ES, m/z): 546,70 [M-H-4NH³]-. ¹H RMN: (400 MHz, D2O, ppm): 87,97 (s, 1H), 7,34 (s, 1H), 6,54 (t, J = 6,0 Hz, 1H), 4,01-4,13 (m, 2H), 2,52-2,62 (m, 2H). P RMN: (161 MHz, D2O, ppm): 8 -5,81 (s, 1P), -11,42 (s, 1P), -19,25 (s, 1P).

EJEMPLO DE REFERENCIA 18: ((2R,3S,5R)-5-(4-amino-7H-pirrolo[2,3-d]pirimidin-7-il)-2-ciano-3-hidroxitetrahidrofuran-2-il)metil trifosfato de bis-trietilam onio (18). LC-m S: (ES, m/z): 514,35 [M - H - 2TEA]- ¹H RMN: (400 MHz, D2O, ppm): 88,04 (s, 1H), 7,29 (d, J = 3,2 Hz, 1H), 6,70 (t, J = 6,8 Hz, 1H), 6,55 (d, J = 3,2 Hz, 1H), 4,87 (t, J = 6,0 Hz, 1H), 4,21-4,16 (m, 2H), 2,99 (c, J = 7,2 Hz, 15H), 2,80-2,76 (m, 1H), 2,58-2,54 (m, 1H), 1,12 (t, J = 7,2 Hz, 26H). P RMN: (161 MHz, D2O, ppm): 8-5,85 (s, 1P), -11,84 (d, J = 15,30 Hz, 1P), -19,38 (s, 1P).

EJEMPLO DE REFERENCIA 19: ((2R,3S,5R)-5-(4-aminopirrolo[2,1-f][1,2,4]triazin-7-il)-2-etinil-3-hidroxitetrahidrofuran-2-il)metil trifosfato de amonio (19). LC-MS: (ES, m/z): 512,90 [M-H-4NH³]'. ¹H RMN: (400 MHz, D2O, ppm): 87,73 (s, 1H), 6,77 (dd, J = 4,4 Hz, J = 7,4 Hz, 2H), 5,73 (t, J = 7,4 Hz, 1H), 4,52-4,56 (m, 1H), 3,98 4,03 (m, 2H), 2,56-2,63 (m, 1H), 2,34-2,40 (m, 1H). P RMN: (161 MHz, D2O, ppm): 8-5,79 (s, IP), -11,24 (s, IP), -19,21 (s, IP).

EJEMPLO DE REFERENCIA 20: ((2R,3S,5R)-5-(4-aminopirazolo[1,5-a][1,3,5]triazin-8-il)-2-etinil-3-hidroxitetrahidrofuran-2-il)metil trifosfato de amonio (20). LC-MS: (ES, m/z): 513,95 [M - H - 4 NH³]'.¹H RMN: (400 MHz, D2O, ppm): 88,22 (s, 1H), 7,99 (s, 1H), 5,53 (t, J = 7,6 Hz, 1H), 4,60-4,57 (m, 1H), 4,12-4,03 (m, 2H), 2,56-2,49 (m, 1H), 2,35-2,29 (m, 1H). P RMN: (161 MHz, D2O, ppm): 8 -5,82 (s, IP), -11,32-11,23 (d, J = 13,69 Hz, 1P), -19,24 (s, 1P).

EJEMPLO DE REFERENCIA 21: ((2R,3S,5R)-5-(4-aminoimidazo[2,1-f][1,2,4]triazm-7-M)-2-etmN-3-hidroxitetrahidrofuran-2-il)metil trifosfato de amonio (21). LC-MS: (ES, m/z): 513,95 [M - H - 4NH3]-.1H RMN: (400 MHz, D2O, ppm): 88,23 (s, 1H), 7,98 (s, 1H), 5,66 (t, J = 7,6 Hz, 1H), 4,61-4,58 (m, 1H), 4,05 (s a, 2H), 2,68-2,61 (m, 1H), 2,46-2,42 (m, 1H). P RMN: (161 MHz, D2O, ppm): 8 -5,81 (s, IP), -11,33-11,24 (d, J = 13,85 Hz, IP), -19,19 (s, IP).

Los nombres de las formas libres de sal de los compuestos 13-21 son, respectivamente:

EJEMPLO DE REFERENCIA 22: Síntesis de (2R,3S,5R)-5-(4-aminoimidazo[2,1-f][1,2,4]triazm-7-M)-2-etmN-2-(hidroximetil)tetrahidrofuran-3-ol (22)

Etapa 1: Síntesis de óxido de (am inooxi)difenilfosfina

A una solución agitada de clorhidrato de hidroxilamina (70 g, 1007 mmol) en una mezcla de 1,4-dioxano (100 ml) y agua (100 ml) se le añadió una solución de NaOH (38,3 g, 957 mmol) en agua (400 ml) gota a gota con agitación a 0 °C en 30 minutos. La solución resultante se agitó a 0 °C durante 20 minutos. En lo anterior se inyectó una solución de cloruro de difenilfosfinic (77 ml, 403 mmol) en 1,4-dioxano (100 ml) rápidamente a 0 °C. La mezcla resultante se agitó vigorosamente a temperatura ambiente durante 10 minutos. Se formó un precipitado y se recogió por filtración. El sólido se re-suspendió en NaOH ac. (0,25 N, 1000 ml) y se agitó a 4 °C durante 1,5 horas. La mezcla se filtró y la torta de filtro se lavó sucesivamente con agua (3 x 1000 ml) y éter (2 x 500 ml). El sólido se secó al vacío durante una noche para dar óxido de (aminooxi)difenilfosfina. LC-MS: (ES, m/z): 233,9 [M H]+. 1H RMN: (400 MHz, CÍ6-DMSO, ppm): 5 7,82-7,69 (m, 4H), 7,58-7,40 (m, 6H) P RMN: (121 MHz, d6-DMSO, ppm): 521,53 (s, IP).

Etapa 2: Síntesis de 1-amino-1H imidazol-2-carboxilato de etilo

A una solución agitada de 1H-imidazol-2-carboxilato de etilo (6 g, 30,9 mmol) en DMF (250 ml) en una atmósfera de argón se le añadió una solución de LiHMDS y THF (93 ml, 93 mmol, 1 M) gota a gota a -10 °C durante 60 minutos. La mezcla resultante se agitó a -10 °C durante 30 min más y después se añadió óxido de (aminooxi)difenilfosfina (21,63 g, 93 mmol) en porciones durante 30 minutos mientras se mantenía la temperatura entre 0 °C y 10 °C. La mezcla resultante se calentó a temperatura ambiente y se agitó vigorosamente durante 16 horas. La reacción se interrumpió con agua enfriada con hielo (600 ml) y se extrajo con EtOAc (2 x 800 ml). Las capas orgánicas combinadas se secaron sobre Na2SO4 anhidro, se filtraron y el filtrado se concentró a presión reducida para dar 1 -amino-1 H-imidazol-2-carboxilato de etilo que se usó directamente para la siguiente etapa de reacción sin purificación adicional. LC-MS: (ES, m/z): 156,1 [M H]+. 1H RMN: (400 MHz, da-DMSO, ppm): 67,37 (d, J = 0,8 Hz, 1H), 6,96 (d, J = 0,8 Hz, 1H), 6,57 (s a, 2H), 4,33-4,27 (m, 2H), 1,31 (t, J = 7,2 Hz, 3H).

Etapa 3: Síntesis de im¡dazo[2,1-f][1,2,4]triazm-4(3H)-ona

A una mezcla agitada de 1-amino-1H-imidazol-2-carboxilato de etilo (6 g, 30,9 mmol) en EtOH (60 ml) en una atmósfera de argón se le añadió acetato de formamidina (17,71 g, 170 mmol). La mezcla resultante se calentó a reflujo y se agitó durante una noche. La mezcla de reacción se enfrió a temperatura ambiente y se filtró. La torta de filtro se lavó sucesivamente con agua (3 x 10 ml) y EtOAc (2 x 10 ml). El sólido recogido se secó a alto vacío durante una noche para dar imidazo[2,1-f][1,2,4]triazin-4(3H)-ona. LC-MS: (ES, m/z): 136,9 [M H]+. 1H RMN: (400 MHz, d6-DMSO, ppm): 6 12,31 (s a, 1H), 8,09 (s, 1H), 7,98 (d, J = 0,8 Hz, 1H), 7,50 (d, J = 0,8 Hz, 1H).

Etapa 4: Síntesis de 4-doroimidazo[2,1-f][1,2,4]tríazma

Se amasó imidazo[2,1-f][1,2,4]triazin-4(3H)-ona (2,4 g, 17,63 mmol) en un matraz de fondo redondo de 100 ml en una atmósfera de argón seguido de la inyección de POCh (20 ml) a temperatura ambiente. La mezcla se calentó a reflujo y se agitó durante 16 h. El material volátil se eliminó a presión reducida. El residuo se repartió entre EtOAc (100 ml) y agua (30 ml). La capa orgánica se lavó sucesivamente con NaHCO3 ac. frío (saturado, 3 x 20 ml) y salmuera (20 ml), se secó sobre Na2SO4 anhidro, se filtró y el filtrado se concentró a presión reducida. El residuo se purificó por cromatografía en columna sobre gel de sílice usando éter de pet./EtOAc (5/1) para proporcionar 4-cloroimidazo[2,1-f][1,2,4]triazina. LC-MS: (ES, m/z): 155,0 [M H]+. 1H RMN: (400 MHz, de-DMSO, ppm): 68,81 (s, 1H), 8,65 (d, J = 1,2 Hz, 1H), 8,08 (d, J = 0,8 Hz, 1H).

Etapa 5. Síntesis de 4-(metMtio)imidazo[2,1-f][1,2,4]tríazma

A una solución agitada de 4-cloroimidazo[2,1-f][1,2,4]triazina (20 g, 129 mmol) en THF (500 ml) en una atmósfera de argón se le añadió NaSMe (13,60 g, 194 mmol) a temperatura ambiente. La mezcla resultante se agitó a temperatura ambiente durante 72 horas. La mezcla de reacción se inactivó con NH4O acuoso (saturado, 200 ml) y se extrajo con EtOAc (2 x 500 ml). Las capas orgánicas combinadas se lavaron con salmuera (2 x 200 ml), se secaron sobre Na2SO4 anhidro, se filtraron y el filtrado se concentró a presión reducida. El residuo se purificó por cromatografía en columna sobre gel de sílice usando éter de pet./EtOAc (1/1) para proporcionar 4-(metiltio)imidazo[2,1-f][1,2,4]triazina. LC-MS: (ES, m/z): 167,2 [M H]+. 1H RMN: (400 MHz, CDCh, ppm): 68,47 (s, 1H), 7,90 (d, J = 0,8 Hz, 1H), 7,76 (d, J = 0,4 Hz, 1H), 2,73 (s, 3H).

Etapa 6: Síntesis de (3R,4R,5R)-3,4-bis(bencMoxi)-5-((bencMoxi)metM)-2-(4-(metMtio)imidazo[2,1-f][1,2,4]triazm-7-il)tetrahidrofuran-2-ol

En una solución agitada de 4-(metiltio)imidazo[2,1-f][1,2,4]triazina (1 g, 6,02 mmol) en THF (25 ml) en una atmósfera de argón se inyectó una solución de LDA y THF (4,5 ml, 9,0 mmol, 2 M) a -78 °C en 5 minutos. La mezcla resultante se mantuvo a -78 °C durante 30 minutos y después se inyectó una solución de (3R,4R,5R)-3,4-bis(benciloxi)-5-((benciloxi)metil)dihidrofuran-2(3H)-ona (disponible en el mercado, 3,27 g, 7,82 mmol) en THF (15 ml) y la mezcla resultante se agitó entre -78 °C y -50 °C durante 2 horas. La reacción se interrumpió con NH4Cl acuoso (saturado, 20 ml) y se extrajo con EtOAc (2 x 50 ml). Las capas orgánicas combinadas se lavaron con salmuera (2 x 20 ml), se secaron sobre Na2SO4 anhidro, se filtraron y el filtrado se concentró a presión reducida. El residuo se purificó por cromatografía en columna sobre gel de sílice usando éter de pet./EtOAc (5/1) para dar (3R,4R,5R)-3,4-bis(benciloxi)-5-((benciloxi)metil)-2-(4-(metiltio)imidazo[2,1-f][1,2,4]triazin-7-il)tetrahidrofuran-2-ol. LC-Ms : (ES, m/z): 585,1 [M H]+.

Etapa 7: Síntesis de 7-((2S,3S,4R,5R)-3,4-bis(bencNoxi)-5-((bencNoxi)metN)tetrahidrofuran-2-M)-4-(met¡lt¡o)¡m¡dazo[2,1-f][1,2,4]tr¡az¡na

En una solución agitada de (3R,4R,5R)-3,4-bis(benciloxi)-5-((benciloxi)metil)-2-(4-(metiltio)imidazo[2,1-f][1,2,4]triazin-7-il)tetrahidrofuran-2-ol (1,7 g, 2,91 mmol) en DCM (30 ml) en una atmósfera de argón se inyectaron trifluoruro de boro-eterato de dietilo (825,3 mg, 5,82 mmol) y trietilsilano (1,35 g, 11,63 mmol) a 0 °C sucesivamente. La mezcla resultante se agitó a 0 °C durante 16 horas más. La reacción se interrumpió con NaHCO3 acuoso (saturado, 20 ml) y se extrajo con DCM (2 x 30 ml). Las capas orgánicas combinadas se lavaron con salmuera (30 ml), se secaron sobre Na2SO4 anhidro, se filtraron y el filtrado se concentró a presión reducida. El residuo se purificó por cromatografía en columna sobre gel de sílice usando éter de pet./EtOAc (10/1) para dar 7-((2S,3S,4R,5R)-3,4-bis(benciloxi)-5-((benciloxi)metil)tetrahidrofuran-2-il)-4-(metiltio)imidazo[2,1-f][1,2,4]triazina. LC-m S: (ES, m/z): 570,0 [M H]+. 1H RMN: (300 MHz, CDCla, ppm): 68,38 (s, 1H), 7,66 (s, 1H), 7,37-7,26 (m, 15H), 5,56 (d, J = 5,4 Hz, 1H), 4,70-4,49 (m, 6H), 4,39 (c, J = 4,2 Hz, 1H), 4,34 (t, J = 5,4 Hz, 1H), 4,15 (t, J = 5,1 Hz, 1H), 3,70 (dd, J = 3,6 Hz, J = 10,5 Hz, 1H), 3,60 (dd, J = 3,9 Hz, J = 10,8 Hz, 1H), 2,70 (s, 3H).

Etapa 8: Síntesis de 7-((2S,3S,4R,5R)-3,4-bis(bencMoxi)-5-((benciloxi)metil)tetrahidrofuran-2-il)imidazo[2,1-f][1,2,4]triazin-4-amina

En una bomba de acero de 80 ml, se amasó 7-((2S,3S,4R,5R)-3,4-bis(benciloxi)-5-((benciloxi)metil)tetrahidrofuran-2-il)-4-(metiltio)imidazo[2,1-f][1,2,4]triazina (1,4 g, 2,462 mmol). El medio se enfrió a -60 °C. A esto se le añadió amoniaco isopropanólico (isopropanol/amoniaco líquido = 2/3, mezclado a -60 °C, 50 ml). La mezcla resultante se calentó a 90 °C y se agitó durante 16 horas. La mezcla de reacción se enfrió a temperatura ambiente y después se concentró a presión reducida. El residuo se purificó por cromatografía en columna sobre gel de sílice usando éter de pet./EtOAc (1/1) para dar 7-((2S,3S,4R,5R)-3,4-bis(benciloxi)-5-((benciloxi)metil)tetrahidrofuran-2-il)imidazo[2,1-f][1,2,4]triazin-4-amina. LC-MS: (ES, m/z): 538,3 [M H]+. ¹H RMN: (400 MHz, d⁶-DMSO, ppm): 68,24 (s a, 1H), 8,15 (s a, 1H), 8,05 (s, 1H), 7,49 (s, 1H), 7,36-7,28 (m, 15H), 5,35 (d, J = 5,2 Hz, 1H), 4,63 (s, 2H), 4,56 (d, J = 4,8 Hz, 2H), 4,52 (d, J = 2,0 Hz, 2H), 4,45 (t, J = 5,2 Hz, 1H), 4,22-4,16 (m, 2H), 3,65 (dd, J = 3,2 Hz, J = 10,8 Hz, 1H), 3,58 (dd, J = 4,4 Hz, J = 10,8 Hz, 1H).

Etapa 9: Síntesis de (2S,3R,4S,5R)-2-(4-aminoimidazo[2,1-f][1,2,4]triazin-7-il)-5-(hidroximetil)tetrahidrofuran-3.4- diol

A una solución agitada de 7-((2S,3S,4R,5R)-3,4-bis(benciloxi)-5-((benciloxi)metil)tetrahidrofuran-2-il)imidazo[2,1-f][1,2,4]triazin-4-amina (1,2 g, 2,232 mmol) en AcOH (10 ml) se le añadió Pd(OH)2 al 20 %/C (1,2 g). El medio se cargó con hidrógeno (2 atm) y se agitó a 25 °C durante 24 horas. El sólido se retiró por filtración y se lavó con AcOH (2 x 15 ml). El filtrado combinado se concentró a presión reducida. El residuo se purificó por cromatografía en columna sobre gel de sílice usando DCM/MeOH (8/1) para proporcionar (2S,3R,4S,5R)-2-(4-aminoimidazo[2,1-f][1,2,4]triazin-7-il)-5-(hidroximetil)tetrahidrofuran-3,4-diol. LC-MS: (ES, m/z): 290,0 [M Na]+. ¹H RMN: (400 MHz, de-DMSO, ppm): 68,22 (s a, 1H), 8,15 (s a, 1H), 8,07 (s, 1H), 7,64 (s, 1H), 5,13-5,09 (m, 2H), 5,03 (d, J = 6,4 Hz, 1H), 4,78 (s a, 1H), 4,32 (t, J = 6,0 Hz, 1H), 3,99 (t, J = 4,8 Hz, 1H), 3,81 (c, J = 4,4 Hz, 1H), 3,56 (dd, J = 3,2 Hz, J = 11,2 Hz, 1H), 3,46 (dd, J = 3,6 Hz, J = 11,2 Hz, 1H).

Etapa 10: Síntesis de (6aR,8S,9S,9aS)-8-(4-aminoimidazo[2,1-f][1,2,4]triazm-7-M)-2,2,4,4-tetraisopropiltetrahidro-6H-furo[3,2-f][1,3,5,2,4]trioxadisilocm-9-ol

En una solución agitada de (2S,3R,4S,5R)-2-(4-aminoimidazo[2,1-f][1,2,4]triazin-7-il)-5-(hidroximetil)tetrahidrofuran-3.4- diol (3,2 g, 11,97 mmol) y 1H-imidazol (3,26 g, 47,9 mmol) en DMF (65 ml) en una atmósfera de argón se inyectó 1,3-dicloro-1,1,3,3-tetraisopropildisiloxano (3,97 g, 12,57 mmol) a 0 °C. La mezcla resultante se calentó a 30 °C y se agitó durante 5 horas. La reacción se interrumpió con agua (70 ml) y se extrajo con EtOAc (3 x 100 ml). La capa orgánica combinada se lavó con salmuera (3 x 100 ml), se secó sobre Na2SO4 anhidro, se filtró y el filtrado se concentró a presión reducida. El residuo se purificó por cromatografía en columna sobre gel de sílice usando éter de pet./EtOAc (3/1) para dar (6aR,8S,9S,9aS)-8-(4-aminoimidazo [2,1-f][1,2,4]triazin-7-il)-2,2,4,4-tetraisopropiltetrahidro-6H-furo[3,2-f][1,3,5,2,4]trioxadisilocin-9-ol. LC-MS: (ES, m/z): 510,4 [M H]+.¹H RMN (400 MHz, CDCla, ppm): 68,12 (s, 1H), 7,62 (s, 1H), 7,03 (s a, 1H), 6,39 (s a, 1H), 5,31 (d, J = 3,2 Hz, 1H), 4,68 (dd, J = 6,0 Hz, J = 7,0 Hz, 1H), 4,47 (c, J = 2,8 Hz, 1H), 4,10-4,05 (m, 3H), 3,20 (s a, 1H), 1,15-1,05 (m, 28H).

Etapa 11: Síntesis de carbonotioato de O-((6aR,8S,9S,9aR)-8-(4-aminoimidazo[2,1-f][1,2,4]triazin-7-il)-2,2,4,4-tetraisopropiltetrahidro-6H-furo[3,2-f][1,3,5,2,4]trioxadisilocm-9-il) O-fenilo

En una solución agitada de (6aR,8S,9S,9aS)-8-(4-aminoimidazo[2,1-f][1,2,4]triazin-7-il)-2,2,4,4-tetraisopropiltetrahidro-6H-furo[3,2-f][1,3,5,2,4]trioxadisilocin-9-ol (4,0 g, 7,85 mmol) y DMAp (3,83 g, 31,4 mmol) en DCM (160 ml) en una atmósfera de argón se inyectó carbonocloridotioato de O-fenilo (2,71 g, 15,69 mmol) a 0 °C. La mezcla resultante se agitó a 0 °C durante 3 horas más. La mezcla de reacción se concentró a presión reducida. El residuo se purificó por cromatografía en columna sobre gel de sílice usando éter de pet./EtOAc (1/3) para dar carbonotioato de O-((6aR,8S,9S,9aR)-8-(4-aminoimidazo[2,1-f][1,2,4]triazin-7-il)-2,2,4,4-tetraisopropiltetrahidro-6H-furo[3,2-f][1,3,5,2,4]trioxadisilocin-9-il) O-fenilo. LC-MS: (ES, m/z): 646,3 [M H]+.¹H RMN: (400 MHz, d⁶-DMSO, ppm): 6 8,37 (s a, 1H), 8,28 (s a, 1H), 8,02 (s, 1H), 7,67 (s, 1H), 7,49 (t, J = 8,0 Hz, 2H), 7,34 (t, J = 7,4 Hz, 1H), 7,15 (d, J = 8,4 Hz, 2H), 6,22 (dd, J = 2,0 Hz, J = 5,2 Hz, 1H), 5,49 (d, J = 2,0 Hz, 1H), 4,95 (dd, J = 5,2 Hz, J = 8,8 Hz, 1H), 4,07 3,96 (m, 2H), 3,91-3,88 (m, 1H), 1,07-1,04 (m, 28H).

Etapa 12: Síntesis de 7-((6aR,8R,9aS)-2,2,4,4-tetraisopropiltetrahidro-6H-furo[3,2-f][1,3,5,2,4]trioxadisilocm-8-il)imidazo[2,1-f][1,2,4]triazin-4-amina

En una solución agitada de carbonotioato de O-((6aR,8S,9S,9aR)-8-(4-aminoimidazo [2,1 -f][1,2,4]triazin-7-il)-2,2,4,4-tetraisopropiltetrahidro-6H-furo[3,2-f][1,3,5,2,4]trioxadisilocin-9-il) O-fenilo (350 mg, 0,542 mmol) y AIBN (133 mg, 0,813 mmol) en tolueno desgasificado (10 ml) en una atmósfera de argón se inyectó hidruro de tri-n-butilestaño (314 mg, 1,084 mmol) a temperatura ambiente. La mezcla se calentó a 80 °C y se agitó durante 3 horas. La mezcla de reacción se concentró a presión reducida. El residuo se purificó por cromatografía en columna sobre gel de sílice usando éter de pet./EtOAc (1/3) para dar 7-((6aR,8R,9aS)-2,2,4,4-tetraisopropiltetrahidro-6H-furo[3,2-f][1,3,5,2,4]trioxadisilocin-8-il)imidazo[2,1-f][1,2,4]triazin-4-amina. LC-MS: (ES, m/z): 494,5 [M H]+. ¹H RMN: (400 MHz, cfe-DMSO, ppm): 88,23 (s a, 1H), 8,16 (s a, 1H), 8,05 (s, 1H), 7,56 (s, 1H), 5,42 (t, J = 7,0 Hz, 1H), 4,63 (dd, J = 5,8 Hz, J = 13,0 Hz, 1H), 3,95 (dd, J = 3,2 Hz, J = 11,6 Hz, 1H), 3,83 (dd, J = 6,8 Hz, J = 12,0 Hz, 1H), 3,78-3,75 (m, 1H), 2,55-2,51 (m, 1H), 2,37-2,32 (m, 1H), 1,07-1,01 (m, 28H).

Etapa 13: Síntesis de (2R,3S,5R)-5-(4-aminoimidazo[2,1-f][1,2,4]triazin-7-il)-2-(hidroximetil)tetrahidrofuran-3-ol

En una solución agitada de 7-((6aR,8R,9aS)-2,2,4,4-tetraisopropiltetrahidro -6H-furo[3,2-f][1,3,5,2,4]trioxadisilocin-8-il)imidazo[2,1-f][1,2,4]triazin-4-amina (2,7 g, 5,47 mmol) en t Hf (60 ml) se inyectó fluoruro de hidrógeno-piridina (5,42 g, 54,7 mmol) a 0 °C. La mezcla se calentó a temperatura ambiente y se agitó durante 20 horas. La mezcla de reacción se enfrió a 0 °C, se neutralizó con NaHCO3 sólido y después se diluyó con MeOH (50 ml). El sólido se retiró por filtración y el filtrado se concentró a presión reducida. El residuo se trató con DCM/MeOH (20 ml, 100/1, v/v) y se agitó durante 30 minutos. El precipitado de color blanco se recogió y se secó al vacío durante una noche para dar (2R,3S,5R)-5-(4-aminoimidazo[2,1-f][1,2,4]triazin-7-il)-2-(hidroximetil)tetrahidrofuran-3-ol. 1H RMN: (400 Mh z , cfe-DMSO, ppm): 88,20 (s a, 1H), 8,13 (s a, 1H), 8,06 (s, 1H), 7,60 (s, 1H), 5,42 (dd, J = 5,8 Hz, J = 10,2 Hz, 1H), 5,12 (d, J = 4,0 Hz, 1H), 4,74 (t, J = 5,6 Hz, 1H), 4,28-4,25 (m, 1H), 3,81-3,78 (m, 1H), 3,42 (t, J = 5,4 Hz, 2H), 2,33-2,26 (m, 1H), 2,13-2,09 (m, 1H).

Etapa 14: Síntesis de 7-((2R,4S,5R)-4-((íerc-butMdimetMsiMl)oxi)-5-(((tercbutildimetilsilil)oxi)metil)tetrahidrofuran-2-il)imidazo[2,1-f][1,2,4]triazin-4-amina

Se amasaron (2R,3S,5R)-5-(4-aminoimidazo[2,1-f][1,2,4]triazin-7-il)-2-(hidroximetil)tetrahidrofuran-3-ol (200 mg, 0,796 mmol) y 1H-imidazol (217 mg, 3,18 mmol) en un matraz de 10 ml en una atmósfera de argón. En la mezcla se inyectó DMF anhidra (2,5 ml), seguido de la adición de ferc-butilclorodimetilsilano (360 mg, 2,388 mmol) a 0 °C. La mezcla se agitó a 25 °C durante 3 h. La mezcla resultante se diluyó con EtOAc (50 ml), se lavó con NaHCO3 acuoso (saturado, 2 x 15 ml) y salmuera (20 ml), respectivamente. La capa orgánica se recogió y se secó sobre Na2SO4 anhidro, se filtró y se concentró a presión reducida. El residuo se purificó por cromatografía en columna sobre gel de sílice usando éter de pet./EtOAc (EtOAc al 35 %-52 % en éter de pet.) para dar 7-((2R,4S,5R)-4-((terc-butildimetilsilil)oxi)-5-(((tercbutildimetilsilil) oxi)metil)tetrahidrofuran-2-il)imidazo[2,1-f][1,2,4]triazin-4-amina. LC-Ms : (ES, m/z): 480,1 [M H]+. 1H RMN: (300 MHz, d6-DMSO, ppm): 88,20 (s a, 1H), 8,13 (s a, 1H), 8,06 (s, 1H), 7,57 (s, 1H), 5,43 (dd, J = 5,6 Hz, J = 10,0 Hz, 1H), 4,46-4,44 (m, 1H), 3,81 (t, J = 4,5 Hz, 1H), 3,63-3,51 (m, 2H), 2,45-2,36 (m, 1H), 2,16-2,10 (m, 1H), 0,89 (s, 9H), 0,86 (s, 9H), 0,10 (s, 6H), 0,02 (d, J = 3,6 Hz, 6H).

Etapa 15: Síntesis de ((2R,3S,5R)-5-(4-aminoimidazo[2,1-f][1,2,4]triazin-7-il)-3-((fercbutildimetilsilil)oxi)tetrahidrofuran-2-il)metanol

Se amasó 7-((2R,4S,5R)-4-((terc-butildimetilsilil)oxi)-5-(((tercbutildimetilsilil)oxi)metil)tetrahidrofuran-2-il)imidazo[2,1-f][1,2,4]triazin-4-amina (350 mg, 0,730 mmol) en un matraz de fondo redondo de 25 ml, seguido de la inyección de THF (4 ml). El medio se enfrió a 0 °C. A esto se le añadió una solución enfriada previamente de ácido trifluoroacético/agua (1/1, v/v, 2 ml) gota a gota con agitación a 0 °C en 10 min. La mezcla resultante se agitó a 0 °C durante 2 horas. El progreso de la reacción se controló por TLC y LCMS. La solución resultante se co-evaporó con tolueno (3 x 20 ml) y el residuo se re-suspendió en NaHCO3 ac. (saturado, 4 ml) y después se evaporó a sequedad. El residuo se purificó por cromatografía en columna sobre gel de sílice con EtOAc/DCM (1/1) para dar ((2R,3S,5R)-5-(4-aminoimidazo[2,1-f][1,2,4]triazin-7-il)-3-((ferc-butildimetilsilil)oxi)tetrahidrofuran-2-il)metanol. LC-MS: (ES, m/z): 366,2 [M H]+. 1H RMN: (300 MHz, cfe-DMSO, ppm): 88,09 (s a, 1H), 8,03 (s a, 1H), 7,96 (s, 1H), 7,51 (s, 1H), 5,31 (c, J = 5,4 Hz, 1H), 4,70 (t, J = 5,7 Hz, 1H), 4,34 (d, J = 5,1 Hz, 1H), 3,69 (t, J = 4,5 Hz, 1H), 3,33-3,28 (m, 2H), 2,34 2,24 (m, 1H), 2,01-1,96 (m, 1H), 0,79 (s, 9H), 0,01 (s, 6H).

Etapa 16: Síntesis de (2S,3S,5R)-5-(4-aminoimidazo[2,1-f][1,2,4]triazin-7-il)-3-((íercbutMdimetMsiMl)oxi)tetrahidrofuran-2-carbaldehído

A una solución agitada de ((2R,3S,SR)-5-(4-aminoimidazo[2,1-f][1,2,4]triazin-7-il)-3-((fercbutildimetilsilil)oxi)tetrahidrofuran-2-il)metanol (280 mg, 0,766 mmol) en acetonitrilo anhidro (20 ml) en una atmósfera de argón se le añadió IBX (644 mg, 2,298 mmol) a temperatura ambiente. La mezcla se calentó a 80 °C y se agitó durante 25 minutos. El análisis por LCMS indicó que el nucleósido de partida se había consumido completamente. La mezcla resultante se enfrió a temperatura ambiente. Los sólidos se retiraron por filtración y el filtrado se concentró a presión reducida para dar (2S,3S,5R)-5-(4-aminoimidazo[2,1-f][1,2,4]triazin-7-il)-3-((fercbutildimetilsilil)oxi)tetrahidrofuran-2-carbaldehído, que se usó directamente para la siguiente etapa de reacción sin purificación adicional. LC-MS: (ES, m/z): 363,7 [M H]+.

Etapa 17: Síntesis de ((3S,5R)-5-(4-aminoimidazo[2,1-f][1,2,4]triazin-7-il)-3-((fercbutildimetilsilil)oxi)tetrahidrofuran-2,2-diil)dimetanol

En una solución agitada de (2S,3S,5R)-5-(4-aminoimidazo[2,1-f][1,2,4]triazin-7-il)-3-((fercbutildimetilsilil)oxi)tetrahidrofuran-2-carbaldehído (300 mg, en bruto) en 1,4-dioxano (4 ml) en un matraz de fondo redondo de 25 ml, se inyectó formaldehído ac. al 37 % (1,0 ml), seguido de NaOH ac. (1,0 ml, 2,0 mmol, 2 N) a 0 °C. La mezcla resultante se calentó a temperatura ambiente y se agitó durante 16 horas. Después de que se consumiera todo el nucleósido de partida, la mezcla de reacción se neutralizó con AcOH (~0,2 ml). La mezcla se diluyó con EtOAc (100 ml) y se lavó sucesivamente con agua (2 x 25 ml), NaHCO3 acuoso (saturado, 25 ml) y salmuera (20 ml). La capa orgánica se secó sobre Na2SO4 anhidro, se filtró y el filtrado se concentró a presión reducida para dar un producto en bruto. El producto en bruto se re-disolvió en EtOH (5 ml) en una atmósfera de argón y se añadió borohidruro sódico (153 mg, 4,04 mmol) en porciones a 0 °C. Después de agitar a temperatura ambiente durante 16 horas, la mezcla de reacción se neutralizó con AcOH (~0,2 ml) y se evaporó a sequedad. El residuo se repartió entre CHCh (50 ml) y agua (25 ml). La capa acuosa se extrajo de nuevo con CHCh (2 x 25 ml). La capa orgánica combinada se lavó con salmuera (40 ml), se secó sobre Na2SO4 anhidro, se filtró y el filtrado se concentró a presión reducida. El residuo se purificó por cromatografía en columna sobre gel de sílice usando DCM/MeOH (30/1) para dar ((3S,5R)-5-(4-aminoimidazo[2,1-f][1,2,4]triazin-7-il)-3-((ferc-butildimetilsilil)oxi)tetrahidrofuran-2,2-diil)dimetanol. LC-m S: (ES, m/z): 395,8 [M H]+. 1H RMN: (400 MHz, de-DMSO, ppm): 68,18 (s a, 1H), 8,12 (s a, 1H), 8,07 (s, 1H), 7,62 (s, 1H), 5,47 (c, J = 5,2 Hz, 1H), 4,68 (t, J = 5,6 Hz, 1H), 4,53 (d, J = 3,6 Hz, 1H), 4,27 (t, J = 5,6 Hz, 1H), 3,60-3,55 (m, 1H), 3,53-3,51 (m, 2H), 3,34 3,31 (m, 1H), 2,56-2,53 (m, 1H), 2,11-2,07 (m, 1H), 0,90 (s, 9H), 0,09 (d, J = 2,8 Hz, 6H).

Etapa 18: Síntesis de (2R,3S,5R)-5-(4-ammoimidazo[2,1-f][1,2,4]triazm-7-M)-3-((ferc-butMdimetMsiMl)oxi)-2-(hidroximetil)tetrahidrofuran-2-carbaldehído

A una mezcla agitada de ((3S,SR)-5-(4-aminoimidazo[2,1-f][1,2,4]triazin-7-il)-3-((fercbutildimetilsilil)oxi)tetrahidrofuran-2 ,2-diil)dimetanol (180 mg, 0,455 mmol) en acetonitrilo (20 ml) y DMSO (2 ml) en una atmósfera de argón se le añadió IBX (382 mg, 1,365 mmol) a temperatura ambiente. La mezcla resultante se calentó a 30 °C y se agitó durante 2 horas. El sólido se retiró por filtración, se lavó con CHCh (2 x 20 ml) y el filtrado combinado se concentró a presión reducida. El residuo se re-disolvió en EtOAc (30 ml), se lavó sucesivamente con NaHCO3 acuoso (saturado, 2 x 15 ml) y salmuera (20 ml), se secó sobre Na2SO4 anhidro, se filtró y el filtrado se concentró a presión reducida para dar (2R,3S,5R)-5-(4-aminoimidazo[2,1-f][1,2,4]triazin-7-il)-3-((ferc-butildimetilsilil)oxi)-2-(hidroximetil)tetrahidrofuran-2-carbaldehído, que se usó directamente para la siguiente etapa de reacción sin purificación adicional. LC-MS: (ES, m/z): 393,8 [M H]+.

Etapa 19: Síntesis de ((2R,3S,5R)-5-(4-ammo-7aH-pirrolo[3,2-d]pirimidm-7-M)-3-((fercbutMdimetilsilil)oxi)-2-etiniltetrahidrofuran-2-il)metanol

En una mezcla agitada de (2R,3S,5R)-5-(4-aminoimidazo[2,1-f][1,2,4]triazin-7-il)-3-((fercbutildimetilsilil)oxi)-2-(hidroximetil)tetrahidrofuran-2-carbaldehído (250 mg, 0,286 mmol, en bruto) y K2CO3 (120 mg, 0,86 mmol) en MeOH (10 ml) en una atmósfera de argón se inyectó una solución de (1-diazo-2-oxopropil)fosfonato de dimetilo (110 mg, 0,58 mmol) en MeOH (1 ml) a 0 °C. La mezcla resultante se calentó a 30 °C y se agitó durante 16 horas. La mezcla de reacción se concentró a presión reducida. El residuo se purificó por cromatografía en columna sobre gel de sílice usando DCM/MeOH (30/1) para dar ((2R,3S,5R)-5-(4-amino-7aH-pirrolo[3,2-d]pirimidin-7-il)-3-((fercbutildimetilsilil)oxi)-2-etiniltetrahidrofuran-2-il)metanol. LC-MS: (ES, m/z): 390,2 [M H]+. 1H RMN: (400 MHz, de-DMSO, ppm): 68,23 (s a, 1H), 8,15 (s a, 1H), 8,08 (s, 1H), 7,67 (s, 1H), 5,54 (t, J = 7,8 Hz, 1H), 5,16 (t, J = 6,2 Hz, 1H), 4,53 (dd, J = 4,6 Hz, J = 6,2 Hz, 1H), 3,55 (dd, J = 5,2 Hz, J = 11,6 Hz, 1H), 3,45 (dd, J = 7,0 Hz, J = 11,8 Hz, 1H), 3,42 (s, 1H), 2,56-2,53 (m, 1H), 2,23-2,17 (m, 1H), 0,91 (s, 9H), 0,10 (d, J = 3,2 Hz, 6H).

Etapa 20. Síntesis de (2R,3S,5R)-5-(4-ammoimidazo[2,1-f][1,2,4]triazm-7-M)-2-etiml-2-(hidroximetil)tetrahidrofuran-3-ol (22)

En una solución agitada de ((2R,3S,5R)-5-(4-aminoimidazo[2,1-f][1,2,4]triazin-7-il)-3-((fercbutildimetilsilil)oxi)-2-etiniltetrahidrofuran-2-il)metanol (150 mg, 0,385 mmol) en THF anhidro (5 ml) en una atmósfera de argón se inyectó una solución de TBAF y THF (0,385 ml, 0,385 mmol, 1 M) a 0 °C. La mezcla se calentó a temperatura ambiente y se agitó durante 16 horas. El progreso de la reacción se controló por TLC y LCMS. La mezcla resultante se concentró a presión reducida. El residuo se purificó por cromatografía en columna sobre gel de sílice usando DCM/MeOH (24/1) para dar el compuesto del título 22. LC-MS: (ES, m/z): 309,00 [M H]+. 1H RMN: (400 MHz, d6-DMSO, ppm): 68,21 (s a, 1H), 8,14 (s a, 1H), 8,07 (s, 1H), 7,64 (s, 1H), 5,53 (t, J = 7,6 Hz, 1H), 5,34 (d, J = 5,2 Hz, 1H), 5,07 (t, J = 6,4 Hz, 1H), 4,35 (c, J = 6,0 Hz, 1H), 3,56 (dd, J = 5,6 Hz, J = 12,0 Hz, 1H), 3,48 (dd, J = 7,0 Hz, J = 11,8 Hz, 1H), 3,41 (s, 1H), 2,46-2,41 (m, 1H), 2,28-2,21 (m, 1H).

EJEMPLO DE REFERENCIA 23: Síntesis de (2R,3S,5R)-5-(4-ammopirazolo[1,5-a][1,3,5]triazm-8-il)-2-etiml-2-(hidroximetil)tetrahidrofuran-3-ol (23)

Etapa 1: Síntesis de (3R,4R,5R)-3,4-bis(bencNoxi)-5-((bencNoxi)metN)tetrahidrofuran-2-ol: En una suspensión agitada de NaH al 60 % dispersado en aceite mineral (1,878 g, 46,9 mmol) en DME anhidro (éter dimetílico) (150 ml) en una atmósfera de argón se inyectó (cianometil)fosfonato de dietilo (11,88 g, 67,1 mmol) a 0 °C durante 10 minutos. La mezcla se calentó a 25 °C y se mantuvo durante 0,5 h y después se añadió una solución de (3R,4R,5R)-3,4-bis(benciloxi)-5-((benciloxi)metil)tetrahidrofuran-2-ol (14,1 g, 33,5 mmol) en DME seco (100 ml) gota a gota con agitación a 0 °C durante 30 minutos. La mezcla resultante se calentó de nuevo a 25 °C y se mantuvo durante 2 horas. La mezcla resultante se diluyó con H2O (300 ml) y se extrajo con Et2O (3 x 500 ml). Las capas orgánicas combinadas se lavaron con salmuera (500 ml), se secaron sobre Na2SO4 anhidro, se filtraron y el filtrado se concentró a presión reducida. El residuo se purificó por cromatografía en columna ultrarrápida sobre gel de sílice usando EtOAc/éter de pet. (EtOAc al 5 %-20 % en éter de pet.) para proporcionar 2-((3S,4R,5R)-3,4-bis(benciloxi)-5-((benciloxi)metil)tetrahidrofuran-2-il)acetonitrilo. LC-M^s: (ES, m/z): 444,21 [M H]+. 1H ^rMⁿ: (300 MHz, C^dCI3, ppm): 5 7,33-7,31 (m, 15H), 4,63-4,43 (m, 6H), 4,25-4,13 (m, 2H), 3,95 (dd, J = 3,0 Hz, J = 4,8 Hz, 1H), 3,77 (dd, J = 5,4 Hz, J = 6,9 Hz, 1H), 3,53-3,45 (m, 2H), 2,78-2,75 (m, 0,4 H), 2,66 (dd, J = 4,8 Hz, J = 16,8 Hz, 0,8 H), 2,50 (dd, J = 4,8 Hz, J = 16,8 Hz, 0,8 H).

Etapa 2: Síntesis de 2-((3S,4R,5R)-3,4-bis(benciloxi)-5-((benciloxi)metil)tetrahidrofuran-2-il)-3-(dim etilam ino)acrilonitrilo

En una solución agitada de 2-((3S,4R,5R)-3,4-bis(benciloxi)-5-((benciloxi) metil)tetrahidrofuran-2-il)acetonitrilo (12,6 g, 28,4 mmol) en DCM (90 ml) en una atmósfera de argón se inyectaron DMF seca (2,54 ml, 32,8 mmol) seguido de 1-ferc-butoxi-N,N,N',N'-tetrametilmetanodiamina (19,80 g, 114 mmol) a 0 °C durante 5 minutos. La mezcla resultante se calentó a 25 °C y se agitó durante 16 horas. La mezcla resultante se concentró a presión reducida. El residuo se purificó por cromatografía en columna ultrarrápida sobre gel de sílice usando EtOAc/éter de pet. (EtOAc al 15 %-35 % en éter de pet.) para proporcionar 2-((3S,4R,5R)-3,4-bis(benciloxi)-5-((benciloxi)metil)tetrahidrofuran-2-il)-3-(dimetilamino)acrilonitrilo. LC-MS: (ES, m/z): 499,25 [M H]+. 1H RMN: (300 MHz, CDCla, ppm): 57,33-7,30 (m, 15H), 6,47 (s, 1H), 4,65-4,53 (m, 6H), 4,32 (d, J = 7,2 Hz, 1H), 4,19-4,15 (m, 1H), 4,00-3,90 (m, 2H), 3,59-3,46 (m, 2H), 3,04 (s, 6H).

Etapa 3. Síntesis de 2-((3S,4R,5R)-3,4-bis(benciloxi)-5-((benciloxi)metil)tetrahidrofuran-2-il)-3 hidrazinilacrilonitrilo

A una solución agitada de 2-((3S,4R,5R)-3,4-bis(benciloxi)-5-((benciloxi) metil)tetrahidrofuran-2-il)-3-(dimetilamino)acrilonitrilo (12,9 g, 25,9 mmol) en MeOH (90 ml) se le añadieron hidrazina hidrato (21,15 g, 647 mmol), H2O (3,0 ml, 167 mmol) y clorhidrato de hidrazina (2,66 g, 38,8 mmol) sucesivamente a temperatura ambiente. La mezcla resultante se calentó a 65 °C y se agitó durante 16 horas. La mezcla final se concentró a presión reducida. El residuo se diluyó con H2O (500 ml) y se extrajo con EtOAc (3 x 500 ml). Las capas orgánicas combinadas se lavaron con salmuera (500 ml), se secaron sobre Na2SO4 anhidro, se filtraron y el filtrado se concentró a presión reducida para proporcionar 2-((3S,4R,5R)-3,4-bis(benciloxi)-5-((benciloxi)metil)tetrahidrofuran-2-il)-3-hidrazinilacrilonitrilo, que se usó directamente para la siguiente etapa de reacción sin purificación adicional. LC-MS: (ES, m/z): 486,23 [M H]+.

Etapa 4: Síntesis de 4-[(2S,3S,4R,5R)-3,4-bis(benciloxi)-5-[(benciloxi)metil]oxolan-2-il]-1H-pirazol-5-amina

Se puso 2-((3S,4R,5R)-3,4-bis(benciloxi)-5-((benciloxi)metil)tetrahidrofuran-2-il)-3-hidrazinilacrilonitrilo (18 g, 37,1 mmol) en un matraz de fondo redondo de 1000 ml seguido de la inyección de ACN (200 ml). La mezcla se calentó a reflujo durante 48 horas. La mezcla resultante se concentró a presión reducida. El residuo se purificó por cromatografía en columna ultrarrápida sobre gel de sílice usando MeOH/DCM (MeOH del 2 % al 10 % en DCM) para proporcionar 4-[(2S,3S,4R,5R)-3,4-bis(benciloxi)-5-[(benciloxi)metil]oxolan-2-il]-1H-pirazol-5-amina. LC-MS: (ES, m/z): 486,23 [M H]+.¹H RMN: (400 MHz, CDCh, ppm): 87,40-7,24 (m, 16H), 4,97 (d, J = 6,8 Hz, 1H), 4,68 (d, J = 12,0 Hz, 1H), 4,62 4,44 (m, 5H), 4,24-4,22 (m, 1H), 4,10-4,04 (m, 2H), 3,71 (dd, J = 3,0 Hz, J = 10,2 Hz, 1H), 3,63-3,50 (m, 1H).

Etapa 5. Síntesis de 8-((2S,3S,4R,5R)-3,4-bis(benciloxi)-5-((benciloxi)metil)tetrahidrofuran-2-il)pirazolo[1,5-a][1,3,5]triazin-4-amina

A una mezcla agitada de cianamida (50 g, 1189 mmol) se le añadió trimetoximetano (505 g, 4757 mmol) y la mezcla se calentó a 105 °C y se agitó durante 5 minutos. En lo anterior se inyectó ácido fórmico (4,38 g, 95 mmol) a 105 °C durante 5 minutos. Después de que la solución resultante se agitara a 105 °C durante 5 horas, la mezcla de reacción se enfrió a temperatura ambiente. Los sólidos se retiraron por filtración y el filtrado se concentró a presión reducida. El producto se recogió por destilación (0,1 mm de Hg, de 60 °C a 70 °C) para dar N-cianoformimidato de (E)-metilo (50 g, 0,595 mol).

A una solución agitada de N-cianoformimidato de (E)-metilo (21,82 g, 259 mmol) en tolueno (150 ml) en una atmósfera de argón se le añadió una solución de 4-((3S,4R,5R)-3,4-bis(benciloxi)-5-((benciloxi)metil)tetrahidrofuran-2-il)-1H-pirazol-5-amina (21 g, 43,2 mmol) en tolueno (30 ml) a temperatura ambiente. La mezcla resultante se calentó a 90 °C y se agitó durante 20 horas. La solución resultante se concentró a presión reducida. El residuo se purificó por cromatografía en columna ultrarrápida sobre gel de sílice usando EtOAc/éter de pet. (EtOAc del 30 % al 50 % en éter de pet.) para proporcionar 8-((2S,3S,4R,5R)-3,4-bis(benciloxi)-5-((benciloxi)metil) tetrahidrofuran-2-il)pirazolo[1,5-a][1,3,5]triazin-4-amina. LC-MS: (ES, m/z): 538,24 [M H]+.¹H RMN: (300 MHz, CDCla, ppm): 88,05 (s, 1H), 7,99 (s, 1H), 7,31-7,23 (m, 15H), 6,67 (s a, 2H), 5,33 (d, J = 5,4 Hz, 1H), 4,67-4,50 (m, 6H), 4,35-4,29 (m, 2H), 4,15-4,11 (m, 1H), 3,72 (dd, J = 3,9 Hz, J = 10,5 Hz, 1H), 3,62 (dd, J = 4,2 Hz, J = 10,8 Hz, 1H).

Etapa 6: Síntesis de (2S,3R,4S,5R)-2-(4-ammopirazolo[1,5-a][1,3,5]triazm-8-il)-5-(hidroximetil)tetrahidrofuran-3.4- diol

A una mezcla agitada de 8-((2S,3S,4R,5R)-3,4-bis(benciloxi)-5-((benciloxi)metil)tetrahidrofuran-2-il)pirazolo[1,5-a][1,3,5]triazin-4-amina (10 g, 18,60 mmol) en AcOH (250 ml) se le añadió hidróxido de paladio al 20 % sobre carbono. La mezcla se cargó con hidrógeno (1,5-2 atm) y se agitó a 25 °C durante 14 horas. Los sólidos se retiraron por filtración. El filtrado se concentró a presión reducida. El residuo se trituró con DCM (150 ml) para formar un precipitado de color blanco. El precipitado se recogió por filtración, se lavó con DCM y se secó al vacío durante una noche para dar (2S,3R,4S,5R)-2-(4-aminopirazolo[1,5-a][1,3,5]triazin-8-il)-5-(hidroximetil)tetrahidrofuran-3,4-diol. LC-MS: (ES, m/z): 268,10 [M H]+. ¹H RMN (300 MHz, de-DMSO, ppm): 88,76 (s a, 1H), 8,41 (s a, 1H), 8,19 (s, 1H), 8,06 (s, 1H), 4,96 4,91 (m, 2H), 4,86-4,81 (m, 2H), 4,20 (c, J = 6,0 Hz, 1H), 3,98 (c, J = 4,5 Hz, 1H), 3,78 (c, J = 3,9 Hz, 1H), 3,61-3,55 (m, 1H), 3,49-3,43 (m, 1H).

Etapa 7: Síntesis de (6aR,8S,9S,9aS)-8-(4-ammopirazolo[1,5-a][1,3,5]triazm-8-il)-2,2,4,4-tetraisopropiltetrahidro-6H-furo[3,2-f][1,3,5,2,4]trioxadisilocm-9-ol

En una solución agitada de (2S,3R,4S,5R)-2-(4-aminopirazolo[1,5-a][1,3,5]triazin-8-il)-5-(hidroximetil)tetrahidrofuran-3.4- diol (2,2 g, 8,23 mmol) y 1H-imidazol (1,681 g, 24,70 mmol) en d Mf seca (100 ml) en una atmósfera de argón se inyectó 1,3-dicloro-1,1,3,3-tetraisopropildisiloxano (2,86 g, 9,06 mmol) a 0 °C durante 4 minutos. La mezcla resultante se calentó a 25 °C y se agitó durante 3 horas. El residuo se diluyó con H2O (50 ml) y se extrajo con EtOAc (3 x 50 ml). Las capas orgánicas combinadas se lavaron con salmuera (2 x 50 ml), se secaron sobre Na2SO4 anhidro, se filtraron y el filtrado se concentró a presión reducida. El residuo se purificó por cromatografía en columna ultrarrápida sobre gel de sílice usando EtOAc/éter de pet. (EtOAc al 30 %-50 % en éter de pet.) para proporcionar (6aR,8S,9S,9aS)-8-(4-aminopirazolo[1,5-a][1,3,5]triazin-8-il)-2,2,4,4-tetraisopropiltetrahidro-6H-furo[3,2-f][1,3,5,2,4]trioxadisilocin-9-ol. LC-MS: (ES, m/z): 510,25 [M H]+.¹H RMN: (300 MHz, de-DMSO, ppm): 88,72 (s a, 1H), 8,42 (s a, 1H), 8,08 (s, 1H), 8.02 (s, 1H), 5,08 (d, J = 4,8 Hz, 1H), 4,91 (d, J = 1,8 Hz, 1H), 4,41 (dd, J = 5,4 Hz, J = 8,1 Hz, 1H), 4,30-4,28 (m, 1H), 3,99-3,86 (m, 3H), 1,04-1,00 (m, 28H).

Etapa 8:. Síntesis de 8-((6aR,8R,9aS)-2,2,4,4-tetra¡sopropMtetrah¡dro-6H-furo[3,2-f][1,3,5,2,4]trioxad¡s¡locm-8-il)pirazolo[1,5-a][1,3,5]triazin-4-amina

A una solución agitada de (6aR,8S,9S,9aS)-8-(4-am¡nop¡razolo[1,5-a][1,3,5]tr¡az¡n-8-¡l)-2,2,4,4-tetra¡soprop¡ltetrah¡dro-6H-furo[3,2-f][1,3,5,2,4]tr¡oxad¡s¡loc¡n-9-ol (3,90 g, 7,65 mmol) en DCE seco (120 ml) en una atmósfera de argón se le añad¡ó 1,1'-t¡ocarbon¡ld¡¡m¡dazol (1,704 g, 9,56 mmol) a temperatura amb¡ente. La mezcla resultante se calentó a 85 °C y se ag¡tó durante 1,5 horas. El anál¡s¡s por TLC ¡nd¡có que el nucleós¡do de part¡da se había consum¡do completamente. La soluc¡ón resultante se concentró a pres¡ón reduc¡da para dar el ¡ntermed¡o de ¡m¡dazol¡lo en bruto que se re-d¡solv¡ó ¡nmed¡atamente en tolueno desgas¡f¡cado (120 ml) en una atmósfera de argón. A lo anter¡or se le añad¡ó AIBN (1,88 g, 11,48 mmol) segu¡do de la ¡nyecc¡ón de tr¡but¡lestanano (4,45 g, 15,30 mmol) a 25 °C durante 2 m¡nutos. La mezcla resultante se calentó a 80 °C y se ag¡tó durante 3 horas. La soluc¡ón resultante se concentró a pres¡ón reduc¡da. El res¡duo en bruto se pur¡f¡có por cromatografía en columna ultrarráp¡da sobre gel de síl¡ce usando EtOAc/éter de pet. (EtOAc al 30 %-50 % en éter de pet.) para proporc¡onar 8-((6aR,8R,9aS)-2,2,4,4-tetra¡soprop¡ltetrah¡dro-6H-furo[3,2-f][1,3,5,2,4]tr¡oxad¡s¡loc¡n-8-¡l)p¡razolo[1,5-a][1,3,5]tr¡az¡n-4-am¡na. LC-MS: (ES, m/z): 494,25 [M H]+.¹H RMN: (300 MHz, CDCh, ppm): 88,18 (s, 1H), 8,06 (s, 1H), 6,61 (s a, 2H), 5,40 (t, J = 7,5 Hz, 1H), 4,70-4,65 (m, 1H), 4,10 (dd, J = 3,0 Hz, J = 10,8 Hz, 1H), 3,95-3,81 (m, 2H), 2,52-2,38 (m, 2H), 1,08-1,05 (m, 28H).

Etapa 9: Síntesis de (2R,3S,5R)-5-(4-aminop¡razolo[1,5-a][1,3,5]tr¡az¡n-8-¡l)-2-(h¡drox¡met¡l)tetrah¡drofuran-3-ol

En una soluc¡ón ag¡tada de 8-((6aR,8R,9aS)-2,2,4,4-tetra¡soprop¡l tetrah¡dro-6H-furo[3,2-f][1,3,5,2,4]tr¡oxad¡s¡loc¡n-8-¡l)p¡razolo[1,5-a][1,3,5]tr¡az¡n-4-am¡na (1,5 g, 3,04 mmol) en THF anh¡dro (35 ml) en una atmósfera de argón se ¡nyectó una soluc¡ón de HF-P¡r¡d¡na (1,5 ml, 11,65 mmol) a 0 °C durante 5 m¡nutos. La mezcla se calentó a 25 °C y se ag¡tó durante 4 horas. La mezcla resultante se neutral¡zó med¡ante la ad¡c¡ón de NaHCO3 sól¡do y después se d¡luyó con MeOH (30 ml). El sól¡do no d¡suelto se ret¡ró por f¡ltrac¡ón. El f¡ltrado se concentró a pres¡ón reduc¡da y después se tr¡turó con EtOAc (20 ml). Se formó un prec¡p¡tado de color blanco y se recog¡ó por f¡ltrac¡ón y después se secó al vacío durante una noche para proporc¡onar (2R,3S,5R)-5-(4-am¡nop¡razolo[1,5-a][1,3,5]tr¡az¡n-8-¡l)-2-(h¡drox¡met¡l)tetrah¡drofuran-3-ol. LC-MS: (ES, m/z): 252,10 [M H]+. ¹H RMN: (300 MHz, de-DMSO, ppm): 88,71 (s a, 1H), 8,39 (s a, 1H), 8,19 (s, 1H), 8,05 (s, 1H), 5,25 (c, J = 5,4 Hz, 1H), 5,03 (d, J = 3,9 Hz, 1H), 4,87 (t, J = 6,0 Hz, 1H), 4,26-4,24 (m, 1H), 3,76-3,74 (m, 1H), 3,52-3,40 (m, 2H), 2,32-2,22 (m, 1H), 2,04-1,98 (m, 1H)

Etapa 10: Síntes¡s de 8-((2R,4S,5R)-4-((ferc-but¡ld¡met¡ls¡l¡l)ox¡)-5-(((íercbut¡ld¡met¡ls¡l¡l)ox¡)met¡l)tetrah¡drofuran-2-¡l)p¡razolo[1,5-a][1,3,5]tr¡az¡n-4-am¡na

A una soluc¡ón ag¡tada de (2R,3S,5R)-5-(4-am¡nop¡razolo[1,5-a][1,3,5]tr¡az¡n-8-¡l)-2-(h¡drox¡met¡l)tetrah¡drofuran-3-ol (540 mg, 2,149 mmol) y 1H-¡m¡dazol (512 mg, 7,52 mmol) en d Mf (10 ml) en una atmósfera de argón se le añad¡ó TBS-Cl (972 mg, 6,45 mmol) a 0 °C durante 1 m¡nuto. La mezcla resultante se calentó a 25 °C y se ag¡tó durante 2 horas. La soluc¡ón resultante se d¡luyó con H2O (50 ml) y se extrajo con EtOAc (3 x 50 ml). Las capas orgán¡cas comb¡nadas se lavaron con salmuera (2 x 50 ml), se secaron sobre Na2SO4 anh¡dro, se f¡ltraron y el f¡ltrado se concentró a pres¡ón reduc¡da. El res¡duo se pur¡f¡có por cromatografía en columna ultrarráp¡da sobre gel de síl¡ce usando EtOAc/éter de pet. (EtOAc al 20% en éter de pet.) para proporc¡onar 8-((2R,4S,5R)-4-((tercbut¡ld¡met¡ls¡l¡l)ox¡)-5-(((tercbut¡ld¡met¡ls¡l¡l)ox¡)met¡l)tetrah¡drofuran-2-¡l)p¡razolo[1,5-a][1,3,5]tr¡az¡n-4-am¡na. LC-MS: (ES, m/z): 480,27 [M H]+. ¹H RMN: (400 MHz, CDCla, ppm): 88,18 (s, 1H), 8,10 (s, 1H), 6,80 (s a, 2H), 5,49 (c, J = 5.2 Hz, 1H), 4,51 (d, J = 5,2 Hz, 1H), 3,98 (t, J = 4,0 Hz, 1H), 3,74 (dd, J = 3,8 Hz, J = 10,6 Hz, 1H), 3,63 (dd, J = 6,4 Hz, J = 10,8 Hz, 1H), 2,39-2,32 (m, 1H), 2,22-2,17 (m, 1H), 0,93-0,92 (m, 18H), 0,11-0,05 (m, 12H).

Etapa 11: Síntes¡s de ((2R,3S,5R)-5-(4-am¡nop¡razolo[1,5-a][1,3,5]tr¡az¡n-8-¡l)-3-((íercbut¡ld¡met¡ls¡l¡l)ox¡)tetrah¡drofuran-2-¡l)metanol

En una soluc¡ón ag¡tada de 8-((2R,4S,5R)-4-((terc-but¡ld¡met¡ls¡l¡l)ox¡)-5-(((terc-but¡ld¡met¡ls¡l¡l)ox¡)met¡l)tetrah¡drofuran-2-¡l)p¡razolo[1,5-a][1,3,5]tr¡az¡n-4-am¡na (800 mg, 1,667 mmol) en THF (16 ml) se ¡nyectó una soluc¡ón enfr¡ada prev¡amente de TFA/H2O (8 ml, v/v, 1/1) a 0 °C durante 5 m¡nutos. La mezcla resultante se ag¡tó a 0 °C durante 1,5 horas. El progresó de la reacc¡ón se controló por TLC. La soluc¡ón resultante se co-evaporó con tolueno (3 x 50 ml) por debajo de 25 °C y el res¡duo se re-d¡solv¡ó en MeOH/DCM (20 ml, v/v, 1/2) y la mezcla se neutral¡zó con NaHCO3 sól¡do. El sól¡do se ret¡ró por f¡ltrac¡ón y el f¡ltrado se concentró a pres¡ón reduc¡da. El producto en bruto se pur¡f¡có por cromatografía en columna ultrarráp¡da sobre gel de síl¡ce usando MeOH/DCM (MeOH del 2 % al 10 % en DCM) para proporc¡onar ((2R,3S,5R)-5-(4-am¡nop¡razolo[1,5-a][1,3,5]tr¡az¡n-8-¡l)-3-((terc-but¡ld¡met¡ls¡l¡l)ox¡)tetrah¡drofuran-2-¡l)metanol. LC-MS: (ES, m/z): 366,19 [M H]+. ¹H RMN: (300 MHz, de-DMSO, ppm): 88,70 (s a, 1H), 8,38 (s a, 1H), 8,19 (s, 1H), 8,05 (s, 1H), 5,24 (c, J = 5,4 Hz, 1H), 4,92 (t, J = 6,0 Hz, 1H), 4,42 (d, J = 4,8 Hz, 1H), 3,75 (dd, J = 3,6 Hz, J = 4,8 Hz, 1H), 3,46-3,43 (m, 2H), 2,39-2,30 (m, 1H), 2,00-1,94 (m, 1H), 0,90 (s, 9H), 0,11 (s, 6H).

Etapa 12: Síntes¡s de (2S,3S,5R)-5-(4-am¡nop¡razolo[1,5-a][1,3,5]tr¡az¡n-8-¡l)-3-((íercbut¡ld¡met¡ls¡l¡l)ox¡)tetrah¡drofuran-2-carbaldehído

A una suspensión agitada de ((2R,3S,5R)-5-(4-ammopirazolo[1,5-a][1,3,5]triazin-8-¡l)-3-((fercbutildimetilsilil)oxi)tetrahidrofuran-2-il)metanol (350 mg, 0,958 mmol) en ACN anhidro (40 ml) en una atmósfera de argón se le añadió IBX (804 mg, 2,87 mmol) a 25 °C. La mezcla resultante se calentó a 80 °C y se agitó durante 1 hora. El sólido se retiró por filtración. El filtrado se concentró a presión reducida para proporcionar (2S,3S,5R)-5-(4-am¡nop¡razolo[1,5-a][1,3,5]tr¡az¡n-8-¡l)-3-((terc-but¡ld¡met¡ls¡l¡l)ox¡)tetrah¡drofuran-2-carbaldehído, que se usó directamente para la siguiente etapa de reacción sin purificación adicional. LC-MS: (ES, m/z): 364,17 [M H]+.

Etapa 13: Síntesis de ((3S,5R)-5-(4-ammopirazolo[1,5-a][1,3,5]triazm-8-il)-3-((íercbutildimetilsilil)oxi)tetrahidrofuran-2,2-diil)dimetanol

En una solución agitada de (2S,3S,5R)-5-(4-am¡nop¡razolo[1,5-a][1,3,5]tr¡az¡n-8-¡l)-3-((tercbutildimetilsili^oxOtetrahidrofuran^-carbaldehído (349 mg, 0,960 mmol) en 1,4-dioxano (25 ml) en un matraz de fondo redondo de 100 ml, se inyectó una solución acuosa al 37 % de formaldehído (5 ml), seguido de la inyección de una solución acuosa de NaOH (5 ml, 2 N) a temperatura ambiente durante 5 minutos. La mezcla resultante se agitó a temperatura ambiente durante 5 horas. Después de que se consumiera todo el nucleósido de partida, la mezcla de reacción se neutralizó con AcOH (~0,5 ml). La mezcla se diluyó con EtOAc (50 ml) y se lavó sucesivamente con H2O (2 x 20 ml), NaHCO3 ac. (saturado, 2 x 20 ml) y salmuera (20 ml). La capa orgánica se secó sobre Na2SO4, se filtró y el filtrado se concentró a presión reducida. El residuo se re-disolvió en EtOH anhidro (40 ml) y se añadió tetrahidroborato sódico (72,6 mg, 1,920 mmol) en porciones a 0 °C en una atmósfera de argón. Después de agitar a 25 °C durante 16 horas, la mezcla de reacción se neutralizó con AcOH (~ 0,2 ml) y se concentró a presión reducida. El residuo se repartió entre CHCh (30 ml) y H2O (15 ml). La capa acuosa se extrajo de nuevo con CHCh (2 x 15 ml). La capa orgánica combinada se lavó con salmuera (20 ml), se secó sobre Na2SO4, se filtró y el filtrado se concentró a presión reducida. El residuo se purificó por cromatografía en columna ultrarrápida sobre gel de sílice usando MeOH/DCM (MeOH al 3,5% en DCM) para dar ((3S,5R)-5-(4-am¡nop¡razolo[1,5-a][1,3,5]tr¡az¡n-8-¡l)-3-((tercbutNdimetilsiliOoxOtetrahidrofuran^ -dMOdimetanol. LC-MS: (ES, m/z): 396,20 [M H]+.1H RMN: (300 MHz, de-DMSO, ppm): 68,70 (s a, 1H), 8,38 (s a, 1H), 8,20 (s, 1H), 8,05 (s, 1H), 5,30 (dd, J = 5,1 Hz, J = 11,1 Hz, 1H), 4,84 (t, J = 6,0 Hz, 1H), 4,50 (d, J = 4,2 Hz, 1H), 4,22 (dd, J = 5,1 Hz, J = 6,3 Hz, 1H), 3,62-3,48 (m, 3H), 3,41-3,31 (m, 1H), 2,57-2,50 (m, 1H), 1,95 (dd, J = 5,1 Hz, J = 12,6 Hz, 1H), 0,90 (s, 9H), 0,11 (s, 6H).

Etapa 14: Síntesis de (2R,3S,5R)-5-(4-ammopirazolo[1,5-a][1,3,5]triazm-8-il)-3-((ferc-butildimetilsilil)oxi)-2-(hidroximetil)tetrahidrofuran-2-carbaldehído

A una suspensión agitada de ((3S,5R)-5-(4-am¡nop¡razolo[1,5-a][1,3,5]tr¡az¡n-8-¡l)-3-((tercbutildimetilsiN^oxOtetrahidrofuran^^-dM^dimetanol (190 mg, 0,480 mmol) en ACN/Dm SO (8 ml, v/v, 10/1) en una atmósfera de argón se le añadió IBX (404 mg, 1,441 mmol) a 25 °C. La mezcla resultante se agitó a 30 °C durante 7 horas. El sólido se retiró por filtración. El filtrado se concentró a presión reducida para dar (2R,3S,5R)-5-(4-am¡nop¡razolo[1,5-a][1,3,5]tr¡az¡n-8-¡l)-3-((terc-but¡ld¡met¡ls¡l¡l)ox¡)-2-(h¡drox¡met¡l)tetrah¡drofuran-2-carbaldehído que se usó directamente para la siguiente etapa de reacción sin purificación adicional. LC-MS: (ES, m/z): 394,18 [M H]+.

Etapa 15: Síntesis de ((2R,3S,5R)-5-(4-ammopirazolo[1,5-a][1,3,5]triazm-8-il)-3-((ferc-butildimetilsilil)oxi)-2-etiniltetrahidrofuran-2-il)metanol

A una solución agitada de (2R,3S,5R)-5-(4-am¡nop¡razolo[1,5-a][1,3,5]tr¡az¡n-8-¡l)-3-((terc-but¡ld¡met¡ls¡l¡l)ox¡)-2-(hidroximetil^etrahidrofuran^-carbaldehído (189 mg, 0,480 mmol) en MeOH seco (6 ml) en una atmósfera de argón se le añadió K2CO3 (199 mg, 1,441 mmol) seguido de la inyección de una solución de (1-diazo-2-oxopropil)fosfonato de dimetilo (185 mg, 0,961 mmol) en MeOH (1,5 ml) a 0 °C durante 3 minutos. La mezcla de reacción se calentó lentamente a 25 °C y después se agitó a 25 °C durante 16 horas. La mezcla resultante se concentró a presión reducida. El residuo se purificó por cromatografía en columna ultrarrápida sobre gel de sílice usando MeOH/DCM (MeOH del 2 % al 10% en DCM) para proporcionar ((2R,3S,5R)-5-(4-am¡nop¡razolo[1,5-a][1,3,5]tr¡az¡n-8-¡l)-3-((tercbutildimetilsNiOoxO ^ -etinNtetrahidrofuran^ -iOmetanol. LC-MS: (ES, m/z): 390,19 [M H]+.1H RMN: (300 MHz, CDCh , ppm): 68,17 (s, 1H), 7,98 (s, 1H), 6,43 (s a, 2H), 5,54 (dd, J = 5,7 Hz, J = 10,5 Hz, 1H), 4,61 (d, J = 4,2 Hz, 1H), 3,97 (d, J = 12,3 Hz, 1H), 3,76 (d, J = 12,0 Hz, 1H), 2,70-2,61 (m, 1H), 2,54 (s, 1H), 2,20-2,14 (m, 1H), 0,95 (s, 9H), 0,12 (d, J = 6,0 Hz, 6H).

Etapa 16: (2R,3S,5R)-5-(4-aminopirazolo[1,5-a][1,3,5]triazin-8-il)-2-etinil-2-(hidroximetil)tetrahidrofuran-3-ol (23)

En una solución agitada de ((2R,3S,5R)-5-(4-am¡nop¡razolo[1,5-a][1,3,5]tr¡az¡n-8-¡l)-3-((terc-but¡ld¡met¡ls¡l¡l)ox¡)-2-etiniltetrahidrofuran^-i^metanol (120 mg, 0,308 mmol) en THF (5 ml) en una atmósfera de argón se inyectó una solución de TBAF y THF (0,462 ml, 0,462 mmol, 1,0 M) a 0 °C durante 2 minutos. La mezcla se agitó a 20 °C durante 26 horas. La mezcla resultante se concentró a presión reducida. El residuo se purificó por cromatografía en columna ultrarrápida sobre gel de sílice usando MeOH/DCM (MeOH del 5 % al 10 % en DCM) para dar un producto en bruto. El producto en bruto (90 mg) se purificó adicionalmente por HPLC prep. con las siguientes condiciones (1#-Pre-HPLC-011(Waters)): Columna, X-bridge C18 19 x 150 mm; fase móvil, agua con NH4HCO3 (10 mmol/l) y ACN (ACN del 4 % hasta el 9 % en 6 min, mantenido al 95 % durante 2 minutos, bajando hasta el 5 % en 2 minutos); Detector, UV 254 y 220 nm. Las fracciones que contenían el producto se recogieron y se liofilizaron durante una noche para dar (2R,3S,5R)-5-(4-aminopirazolo[1,5-a][1,3,5]triazin-8-il)-2-etinil-2-(hidroximetil)tetrahidrofuran-3-ol. LC-MS: (ES, m/z): 276,10 [M H]+. 1H RMN: (400 MHz, c/e-DMSO, ppm): 58,71 (s a, 1H), 8,43 (s a, 1H), 8,20 (s, 1H), 8,05 (s, 1H), 5,36 (t, J = 7,6 Hz, 1H), 5,26-5,22 (m, 2H), 4,34 (dd, J = 4,8 Hz, J = 11,2 Hz, 1H), 3,58 (dd, J = 5,2 Hz, J = 11,6 Hz, 1H), 3,49 (dd, J = 7,6 Hz, J = 11,6 Hz, 1H), 3,37 (s, 1H), 2,44-2,37 (m, 1H), 2,16-2,12 (m, 1H).

Ensayo de polimerasa RT

Las proteínas RT de tipo salvaje de longitud completa y 2 mutantes se expresaron en células de Escherichia coli BL21(DE3) y se purificaron. Brevemente, el sustrato de ácido nucleico heterodimérico usado en las reacciones de la polimerasa Rt del VIH-1 se generó hibridando el cebador de ADN biotinilado con un molde de ARN de 500 nucleótidos. La enzima RT del VIH-1 (concentración final de 50 pM) se combinó con un compuesto inhibidor o DMSO (DMSO al 10 % en la mezcla de reacción final) en tampón de ensayo (Tris-HCl 62,5 mM, pH de 7,8, ditiotreitol 1,25 mM, MgCl2 7,5 mM, KCl 100 mM, CHAPS al 0,03%, EGTA 0,125 mM). Esta mezcla se preincubó durante 30 minutos a temperatura ambiente en placas de microtítulo. La reacción de polimerización se inició mediante la adición de molde/sustrato de cebador (concentración final: 16,6 nM) y dNTP (concentración final: dCTP 2 ^M, dGTP, dATP y RudUTP 66,6 nM). Después de 90 min de incubación a 37 °C, las reacciones se inactivaron mediante la adición de EdTA (25 mM). La mezcla resultante se incubó durante 5 minutos más a temperatura ambiente y luego se transfirió la solución (50 ^l) a una placa de avidina bloqueada de Meso Scale Discovery (MSD). Las mezclas se incubaron a temperatura ambiente durante 60 minutos antes de la cuantificación del producto de reacción mediante un instrumento de generación de imágenes ECL 6000. Los datos resultantes se muestran en la Tabla 2.

TABLA 2

continuación

Ensayo Viking/CTG

Ensayo Viking:

Evaluación de la potencia antivírica en un ensayo de infección por VIH-1 de múltiples rondas. La replicación de VIH-1 se supervisó usando el clon D3 de MT4-gag-GFP (designado en lo sucesivo en el presente documento como MT4-GFP), que son células MT-4 modificadas para albergar un gen indicador de GFP, la expresión del cual depende de las proteínas expresadas por el VIH-1 tat y rev. La infección productiva de una célula MT4-GFP con el VIH-1 da como resultado la expresión de GFP aproximadamente 24 h tras la infección.

Las células MT4-GFP se mantuvieron a 37 °C/5 % de CO2/90 % de humedad relativa en RPMI 1640 complementado con 10 % de suero fetal bovino, 100 U/ ml de penicilina/estreptomicina y 400 ^g/ ml de G418 para mantener el gen indicador. Para las infecciones, las células MT4-GFP se colocaron en el mismo medio carente de G418 y se infectaron durante una noche con el virus H9IIIB con una multiplicidad aproximada de la infección de 0,01 en las mismas condiciones de incubación. A continuación, las células se lavaron y se resuspendieron en RPMI 1640 que contenía suero humano normal al 10 % o al 50 % a 1,6 x 105 células/ml (condiciones de NHS al 10 % o 50 %) o en suero humano normal al 100 % a 2 x 105 células/ml (condiciones de NHS al 100 %). Se prepararon placas con compuesto mediante la dispensación de compuestos disueltos en DMSO en pocillos de placas recubiertas con poli D lisina de 384 pocillos (0,2 |jl/pocillo) usando un dispensador acústico ECHO. Cada compuesto se sometió a ensayo en una dilución en serie por 3 de 10 puntos (concentraciones finales típicas: 8,4 i^M - 0,43 nM). Los controles no incluían inhibidor alguno (solo DMSO) y una combinación de tres agentes antivíricos (efavirenz, indinavir y un inhibidor de la transferencia de la cadena de integrasa a concentraciones finales de 4 ^M cada uno). Las células se añadieron (50 pl/pocillo) a las placas con com puesto y las células infectadas se m antuvieron a 37 °C/5 % de C O 2/90 % de hum edad relativa.

Las células infectadas se cuantificaron en dos puntos de tiempo, ~48 h y ~ 72 h después de la infección, contando el número de células verdes en cada pocillo utilizando un escáner Acumen eX3. El aumento en el número de células verdes durante un período de ~24 h da la tasa de reproducción, Ro, que es normalmente 5-15 y se ha demostrado experimentalmente que está en fase logarítmica (datos no mostrados). La inhibición de R0 se calcula para cada pocillo, y las CI50 se determinan por el ajuste de curvas de 4 parámetros no lineales.

Ensayo CTG:

Evaluación de la citotoxicidad en el ensayo de viabilidad celular luminiscente CellTiter-Glo (CTG).

Se sembraron células MT4-GFP en RPMI 1640 suplementado con suero bovino fetal al 10%, 100 U/ml de penicilina/estreptomicina durante la noche a 37 °C/ 5 % de CO2/90 % de humedad relativa. A continuación, las células se lavaron y se resuspendieron en RPMI 1640 que contenía suero humano normal al 10 % a una densidad de 0,8 x 105 células/ml. Se prepararon placas de compuesto dispensando compuestos disueltos en DMSO en pocillos de placas negras sólidas de 384 pocillos (Corning 3571) usando un dispensador acústico ECHO (0,2 pl/pocillo). Cada compuesto se sometió a ensayo en una dilución en serie por 3 de 10 puntos (concentraciones finales: 8,4 pM - 0,43 nM). Los controles incluyeron DMSO. Las células se añadieron (50 pl/pocillo) a las placas con compuesto y se mantuvieron a 37 °C/5 % de CO2/90 % de humedad relativa. Se añadió reactivo CTG (Promega, G7573) a las placas de células después de 48 h de incubación de acuerdo con la descripción del fabricante. Las señales de luminiscencia se registraron en un lector de placas En Vision (PerkinElmer). Las DL50 se determinaron mediante ajuste de curvas de 4 parámetros no lineales. Los datos resultantes se muestran en la Tabla 3 con el inhibidor de la transcriptasa inversa de nucleósidos del VIH comercializado AZT (azidotimidina, zidovudina) incluido como control.

TABLA 3

(continuación)

(continuación)

Persistencia antivírica

La replicación de VIH-1 se supervisó usando el clon D3 de MT4-gag-GFP (designado en lo sucesivo en el presente documento como MT4-GFP), que son células MT-4 modificadas para albergar un gen indicador de GFP, la expresión del cual depende de las proteínas expresadas por el VIH-1 tat y rev. La infección productiva de una célula MT4-GFP con el VIH-1 da como resultado la expresión de GFP aproximadamente 24 h tras la infección. Las células MT4-GFP se mantuvieron a 37 °C/5 % de CO2/90 % de humedad relativa en RPMI 1640 complementado con 10 % de suero fetal bovino, 100 U/ ml de penicilina/estreptomicina y 400 pg/ ml de G418 para mantener el gen indicador. Para el ensayo de persistencia de punto de tiempo de 72 horas (placa de 72 h) y el ensayo de control de punto de tiempo de 24 horas (placa de 24 h), las células MT4-GFP se lavaron y se resuspendieron en RPMI 1640 que contenía suero humano normal al 10 % a 1,6 x 105 o 2,4 x 105 células/ml (BHS al 10 %). Las placas de compuestos se prepararon distribuyendo compuestos disueltos en DMSO en pocillos de placas de cultivo celular de 384 pocillos (0,205 pl/pocillo) usando un dispensador acústico ECHO. Cada compuesto se sometió a ensayo en una dilución en serie por 3 de 10 puntos (concentraciones finales típicas: 4,2 pM - 0,21 nM). Los controles no incluían inhibidor alguno (solo DMSO) y una combinación de tres agentes antivíricos (efavirenz, indinavir y un inhibidor de la transferencia de la cadena de integrasa a concentraciones finales de 4 pM cada uno). Las células se agregaron (50 pl/pocillo) a las placas del compuesto y se incubaron a 37 °C/5 % de CO2/90 % de humedad relativa durante 24 horas. Las células se lavaron con 5 x 40 ul de RPMI 1640 suplementado con NHS al 10 % y 100 U/ml de penicilina/estreptomicina. La placa de 72 h se devolvió a la incubadora a 37 °C para una incubación adicional de 48 horas. Se transfirieron 40 ul de las células de cada pocillo de la placa de 24 horas o de la placa de 72 horas (después de 48 horas de incubación posterior al lavado) a una placa revestida con poli-D-lisina. A continuación, las células se infectaron con el virus H9IIIB con una multiplicidad aproximada de infección de 0,1 en las mismas condiciones de incubación.

Las células infectadas se cuantificaron aproximadamente 24 h después de la infección, contando el número de células verdes en cada pocillo utilizando un escáner Acumen eX3. Las CI50 para los compuestos de la Tabla 4 se determinaron mediante ajuste de curvas de 4 parámetros no lineales.

El ensayo de persistencia antivírica está destinado a evaluar la persistencia de la actividad antivírica tras la eliminación del nucleósido. Los datos de la Tabla 4 demuestran la persistencia antivírica de los compuestos de la presente invención en comparación con el nucleósido AZT comercializado. La publicación AIDS Research and Therapy, 2009, 6:5, destaca el valor de la persistencia antivírica.

TABLA 4

continuación

Vida media de la adenosina desaminasa (ADA)

Los datos de la Tabla 5 se generaron haciendo reaccionar un compuesto de sustrato con ADA tipo 1 humana en presencia de tampón Tris-HCl (pH 7,5) a 40 °C y monitorizando mediante LCMS el consumo de material de partida. El tiempo necesario para la conversión del 50 % al producto de inosina correspondiente se indica como T1/2 en la Tabla 5. Se sabe que la desaminación por la adenosina desaminasa disminuye el potencial terapéutico de los inhibidores de nucleósidos similares a la adenosina, especialmente In vivo (véanse las referencias a continuación). Se ha demostrado que los compuestos que se muestran en la Tabla 5 tienen diversos grados de estabilidad frente a la adenosina desaminasa en comparación con la EDA ((2R,3S,5R)-5-(6-amino-9H-purin-9-il)-2-etinil-2-(hidroximetil)tetrahidrofuran-3-ol) y desoxiadenosina natural. Es posible que los compuestos más resistentes a la ADA tengan mejores propiedades farmacocinéticas.

Referencias: Journal of Medicinal Chemistry 1996, 39, 19, 3847; Chemical Pharmaceutical Bulletin. 1994, 42, 8, 1688 1690; Antimicrobial Agents and Chemotherapy (2013), 57(12), 6254-6264; Collection of Czechoslovak Chemical Communications (2006), 71(6), 769-787 Microbiologica (1995), 18(4), 359-70; J Antivir Antiretrovir S10.doi:10.4172/jaa.S10-002.

Conversión del Compuesto 2 en el Producto de Inosina 2A

7-((2R,4S,5R)-5-etinil-4-hidroxi-5-(hidroximetil)tetrahidrofuran-2-il)-5-fluoro-3R-pirrolo[2,3-d]pirimidin-4(7H)-ona (2A)

Se inyectó tampón Tris-HCl (pH 7,5, 5 ml) en un matraz de fondo redondo de 25 ml. La mezcla se calentó a reflujo durante 30 minutos. Después, la mezcla se enfrió a 30 °C y se añadió (2R,3S,5R)-5-(4-amino-5-fluoro-7H-pirrolo[2,3-d]pirimidin-7-il)-2-etinil-2-(hidroximetil)tetrahidrofuran-3-ol (Compuesto de ejemplo2, 7 mg, 0,024 mmol), seguido de la adición de adenosina desaminasa (3 mg, ~ 33 unidades). La mezcla resultante se agitó a 40 °C y se agitó durante 4 días. La mezcla de reacción se concentró al vacío y el residuo se purificó por HPLC preparativa con las siguientes condiciones: Columna: X-Bridge C18, 19*150 mm, 5 um; fase móvil, agua con amonio bicarbonato 10 mmol y acetonitrilo (de acetonitrilo al 6 % hasta el 30 % en 5 min, mantenido al 95 % durante 2 min, hasta el 40 % en 2 min); Detector, uv 254 y 220 nm. Las fracciones que contenían el producto se recogieron y se liofilizaron para dar el compuesto del título 2A en forma de un sólido. ¹H RMN: (400 MHz, CÍ⁶-DMSO, ppm): 5 11,58 (s a, 1H), 7,86 (s, 1H), 7,22 (d, J = 1,6 Hz, 1H), 6,44 (t, J = 5,8 Hz, 1H), 5,47 (d, J = 4,8 Hz, 1H), 5,26-5,22 (m, 1H), 4,39-4,35 (m, 1H), 3,55 3,45 (m, 2H), 3,42 (s, 1H), 2,41-2,24 (m, 2H). ¹⁹F RMN: (376 MHz, da-DMSO, ppm): 5 - 165,50 (s, IF). LC-MS: (ES, m/z): 294,15 [M H]+.

Los procedimientos generales descritos anteriormente para la conversión del compuesto 2 en 2A se aplicaron a cada uno de los compuestos sustrato de la Tabla 5, lo que dio como resultado la producción de los productos de inosina mostrados para Desoxi-adenosina y EDA, así como los productos de inosina 1A, 2A, 11A, 22A y 23A. Usando los procedimientos descritos, la conversión de los compuestos 4, 8 y 9 en 4A, 8A y 9A, respectivamente, no se detectó (ND = sustrato insensible a adenosina desaminasa).

Compuesto 1A: 7-((2R,4S,5R)-5-etinil-4-hidroxi-5-(hidroximetil)tetrahidrofuran-2-il)-3H-pirrolo[2,3-d]pirimidin-4(7H)-ona: ¹H RMN: (400 MHz, CD3OD, ppm): 58,31 (s, 1H), 7,37 (d, J = 3,6 Hz, 1H), 6,68 (d, J = 3,6 Hz, 1H), 6,62 (t, J = 6,4 Hz, 1H), 4,69 (t, J = 7,0 Hz, 1H), 3,80 (dd, J = 12,0 Hz, J = 30,0 Hz, 2H), 3,09 (s, 1H), 2,67-2,54 (m, 2H). LC MS: (ES, m/z): 276,00 [M H]+.

Compuesto 11A: 7-((2R,4S,5R)-5-etinil-4-hidroxi-5-(hidroximetil)tetrahidrofuran-2-il)pirrolo[2,1-f][1,2,4]triazin-4(3H)-ona: ¹H RMN: (400 MHz, da-DMSO, ppm): 5 10,25 (s a, 1H), 7,86 (s, 1H), 6,83 (d, J = 4,5 Hz, 1H), 6,63 (d, J = 4,2 Hz, 1H), 5,53 (t, J = 7,5 Hz, 1H), 5,31-5,25 (m, 1H), 5,09-5,05 (m, 1H), 4,31-4,27 (m, 1H), 3,55-3,45 (m, 2H), 3,33 (s, 1H), 2,35-2,18 (m, 2H). LC-MS: (ES, m/z): 298,00 [M Na]+.

Compuesto 22A: 7-((2R,4S,5R)-5-etinil-4-hidroxi-5-(hidroximetil)tetrahidrofuran-2-il)imidazo[2,1-f][1,2,4]triazin-4(3H)-ona : ¹H RMN: (400 MHz, da-DMSO, ppm): 58,12 (s, 1H), 7,56 (s, 1H), 5,45 (t, J = 7,4 Hz, 1H), 5,35 (d, J = 4,0 Hz, 1H), 5,06 (s a, 1H), 4,33 (s a, 1H), 3,56-3,46 (m, 2H), 3,32 (s, 1H), 2,42-2,33 (m, 1H), 2,28-2,22 (m, 1H). LC-MS: (ES, m/z): 277,10 [M H]+.

Compuesto 23A: 8-((2R,4S,5R)-5-etinil-4-hidroxi-5-(hidroximetil)tetrahidrofuran-2-il)pirazolo[1,5 a][1,3,5]triazin-4(3H)-ona: 1H RMN: (400 MHz, de-DMSO, ppm): 58,08 (s, 1H), 7,98 (s, 1H), 5,30 (t, J = 7,4 Hz, 1H), 5,25 (d, J = 5,2 Hz, 1H), 5,24-5,11 (m, 1H), 4,32 (c, J = 5,2 Hz, 1H), 3,53 (dd, Ji = 11,6 Hz, J2 = 32,0 Hz, 2H), 3,36 (s, 1H), 2,36-2,29 (m, 1H), 2,16-2,10 (m, 1H). LC-MS: (ES, m/z): 274,80 [M - H]-.

TABLA 5

continuación

Mientras que la memoria descriptiva anterior enseña los principios de la presente invención, con ejemplos provistos con propósito de ilustración, la práctica de la invención abarca todas las variaciones habituales, adaptaciones y/o modificaciones que entren dentro del alcance de las siguientes reivindicaciones. La enumeración o ilustración de un compuesto específico en las reivindicaciones (es decir, una especie) sin una designación de estereoconfiguración específica, o con una designación de este tipo para menos de la totalidad de los centros quirales, pretende incluir el racemato, mezclas racémicas, cada enantiómero individual, una mezcla diastereoisomérica y cada diastereómero individual del compuesto en donde tales formas sean posibles debido a la presencia de uno o más centros asimétricos.

Claims

REIVINDICACIONES

1. Un compuesto de Fórmula éstructural II

o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo, en donde:

X es O;

Y es -C=CH;

R1 es -H,

o una modificación profármaco del mono, di o trifosfato;

R2 es -H;

R3 es -H;

R4 es -NH2;

R5 es -H, -Cl, -F o -NH2, y;

R9 es -H, -F, -Cl, -I, -Br o -CH3.

2. El compuesto de la reivindicación 1, o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo, en donde: R1 es -H.

3. El compuesto de la reivindicación 1 o de la reivindicación 2 que es:

o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo.

4. El compuesto de cualquier reivindicación anterior o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo, seleccionado entre el grupo que consiste en:

y sales farmacéuticamente aceptables de los mismos.

5. El compuesto de cualquier reivindicación anterior que es:

6. El compuesto de cualquier reivindicación anterior que es una sal farmacéuticamente aceptable de:

7. El compuesto de una cualquiera de las reivindicaciones 1 a 4 que es:

8. El compuesto de una cualquiera de las reivindicaciones 1 a 4 que es una sal farmacéuticamente aceptable de:

9. El compuesto de una cualquiera de las reivindicaciones 1 a 4 que es:

10. El compuesto de una cualquiera de las reivindicaciones 1 a 4 que es una sal farmacéuticamente aceptable de:

11. El compuesto de una cualquiera de las reivindicaciones 1 a 4 que es:

12. El compuesto de una cualquiera de las reivindicaciones 1 a 4 que es una sal farmacéuticamente aceptable de:

13. El compuesto de una cualquiera de las reivindicaciones 1 a 4 seleccionado entre el grupo que consiste en: tetrahidrógeno trifosfato de ((2R,3S,5R)-5-(4-amino-7H-pirrolo[2,3-d]pirimidin-7-il)-2-etinil-3-hidroxitetrahidrofuran-2-il)metilo;

tetrahidrógeno trifosfato de ((2R,3S,5R)-5-(4-amino-5-fluoro-7H-pirrolo[2,3-d]pirimidin-7-il)-2-etinil-3-hidroxitetrahidrofuran-2-il)metilo, y;

tetrahidrógeno trifosfato de ((2R,3S,5R)-5-(4-amino-2-cloro-7H-pirrolo[2,3-d]pirimidin-7-il)-2-etinil-3-hidroxitetrahidrofuran-2-il)metilo.

14. El compuesto de una cualquiera de las reivindicaciones 1 a 4 que es:

tetrahidrógeno trifosfato de ((2R,3S,5R)-5-(4-amino-7H-pirrolo[2,3-d]pirimidin-7-il)-2-etinil-3-hidroxitetrahidrofuran-2-il)metilo.

15. El compuesto de una cualquiera de las reivindicaciones 1 a 4 que es:

tetrahidrógeno trifosfato de ((2R,3S,5R)-5-(4-am¡no-5-fluoro-7H-p¡rrolo[2,3-d]p¡r¡m¡d¡n-7-¡l)-2-et¡n¡l-3-hidroxitetrahidrofuran-2-il)metilo.

16. El compuesto de una cualqu¡era de las re¡v¡nd¡cac¡ones 1 a 4 que es:

tetrah¡drógeno trifosfato de ((2R,3S,5R)-5-(4-am¡no-2-cloro-7H-p¡rrolo[2,3-d]p¡r¡m¡d¡n-7-¡l)-2-et¡n¡l-3-h¡drox¡tetrah¡drofuran-2-¡l)met¡lo.

17. Una compos¡c¡ón farmacéut¡ca que comprende un compuesto o una sal farmacéut¡camente aceptable del m¡smo, de una cualqu¡era de las re¡v¡nd¡cac¡ones 1 a 16 y un vehículo farmacéut¡camente aceptable.

18. Un compuesto, o una sal farmacéut¡camente aceptable del mismo, de una cualqu¡era de las re¡v¡nd¡cac¡ones 1 a 16 para uso en terap¡a.

19. Un compuesto, o una sal farmacéut¡camente aceptable del m¡smo, de una cualqu¡era de las re¡v¡nd¡cac¡ones 1 a 16 para su uso en la ¡nh¡b¡c¡ón de la transcr¡ptasa ¡nversa del VIH, el tratam¡ento o la prof¡lax¡s de la ¡nfecc¡ón por VIH o el tratam¡ento, la prof¡lax¡s o el retraso del ¡n¡c¡o del SIDA.

20. La compos¡c¡ón farmacéut¡ca de la re¡v¡nd¡cac¡ón 17, que comprende además uno o más agentes contra el VIH selecc¡onados entre el grupo que cons¡ste en agentes ant¡v¡rales frente al VIH, ¡nmunomoduladores y agentes ant¡¡nfecc¡osos.

21. La compos¡c¡ón farmacéut¡ca de la re¡v¡nd¡cac¡ón 20, en donde el agente ant¡-VIH se selecc¡ona de uno o más de un ant¡vír¡co selecc¡onado del grupo que cons¡ste en ¡nh¡b¡dores de la proteasa del VIH, ¡nh¡b¡dores nucleosíd¡cos de la transcr¡ptasa ¡nversa del VIH, ¡nh¡b¡dores no nucleosíd¡cos de la transcr¡ptasa ¡nversa del VIH, ¡nh¡b¡dores de la ¡ntegrasa del VIH, ¡nh¡b¡dores de la fus¡ón del VIH, ¡nh¡b¡dores de la entrada del VIH e ¡nh¡b¡dores de madurac¡ón del VIH.

22. Una comb¡nac¡ón que comprende un compuesto o una sal farmacéut¡camente aceptable del m¡smo, de una cualqu¡era de las re¡v¡nd¡cac¡ones 1 a 16 y uno o más agentes contra el VIH selecc¡onados entre agentes ant¡v¡rales del VIH, agentes ant¡¡nfecc¡osos e ¡nmunomoduladores para su uso en la ¡nh¡b¡c¡ón de la transcr¡ptasa ¡nversa del VIH, el tratam¡ento o la prof¡lax¡s de la ¡nfecc¡ón por VIH o el tratam¡ento, la prof¡lax¡s o el retraso en el ¡n¡c¡o o la progres¡ón del SIDA.

23. La comb¡nac¡ón para el uso de la re¡v¡nd¡cac¡ón 22, en la que el agente ant¡-VIH es un ant¡vír¡co selecc¡onado del grupo que cons¡ste en ¡nh¡b¡dores de la proteasa del VIH, ¡nh¡b¡dores nucleosíd¡cos de la transcr¡ptasa ¡nversa del VIH, ¡nh¡b¡dores no nucleosíd¡cos de la transcr¡ptasa ¡nversa del VIH, ¡nh¡b¡dores de la ¡ntegrasa del VIH, ¡nh¡b¡dores de la fus¡ón del VIH, ¡nh¡b¡dores de la entrada del VIH e ¡nh¡b¡dores de madurac¡ón del VIH.

24. La compos¡c¡ón farmacéut¡ca de la re¡v¡nd¡cac¡ón 20 o una comb¡nac¡ón para su uso de la re¡v¡nd¡cac¡ón 22, en donde el agente contra el VIH se selecc¡ona entre los s¡gu¡entes.

continuación

Los siguientes medicamentos enumerados en la tabla están en forma de sal: sulfato de abacavir, mesilato de delavirdina, sulfato de indinavir, sulfato de atazanavir, mesilato de nelfinavir y mesilato de saquinavir.

25. La composición farmacéutica de la reivindicación 20 o una combinación para su uso de la reivindicación 22, en donde el agente contra el VIH es doravirina.

26. La composición farmacéutica de la reivindicación 20 o una combinación para su uso de la reivindicación 22, en donde el agente contra el VIH es tenofovir disoproxil fumarato.

27. La composición farmacéutica de la reivindicación 20 o una combinación para su uso de la reivindicación 22, en donde el agente contra el VIH es tenofovir alafenamida fumarato.