ES2865150T3 - Métodos y composiciones para inducir inmunidad protectora contra la infección por el virus de la inmunodeficiencia humana - Google Patents

Abstract

Una combinación de vacunas para su uso en un método para inducir una respuesta inmune contra un virus de inmunodeficiencia humana (VIH) en un sujeto, comprendiendo dicha combinación: (i) una primera composición que comprende una cantidad inmunogénicamente eficaz de uno o más vectores de adenovirus 26 (rAd26) que codifican polipéptidos antigénicos del VIH que tienen las secuencias de aminoácidos de SEQ ID NO: 1, SEQ ID NO: 3 y SEQ ID NO: 4 y un portador farmacéuticamente aceptable; (ii) una segunda composición que comprende una cantidad inmunogénicamente eficaz de una glicoproteína de la envoltura del VIH aislada que comprende la secuencia de aminoácidos de SEQ ID NO: 5 o SEQ ID NO: 6, un adyuvante y un vehículo farmacéuticamente aceptable; y (iii) una cantidad inmunogénicamente eficaz de uno o más vectores rAd26 adicionales que codifican polipéptidos antigénicos del VIH que tienen las secuencias de aminoácidos de SEQ ID NO: 1, SEQ ID NO: 3 y SEQ ID NO: 4. 4, en donde la primera composición se administra para la inmunización de cebado y la segunda composición se administra para potenciar la inmunización, y la cantidad inmunogénicamente eficaz de los vectores rAd26 adicionales está presente en la segunda composición o en una tercera composición que se administra junto con la segunda composición para potenciar la inmunización.

Description

DESCRIPCIÓN

Métodos y composiciones para inducir inmunidad protectora contra la infección por el virus de la inmunodeficiencia humana

CAMPO DE LA INVENCIÓN

[0001] Esta invención se refiere a composiciones, vacunas y métodos para inducir inmunidad protectora contra infección por el virus de la inmunodeficiencia humana (VIH). En particular, la invención se refiere a combinaciones de vacunas heterólogas de uno o más vectores de expresión viral y un polipéptido antigénico aislado para inducir inmunidad protectora contra infecciones por uno o más clados del VIH.

ANTECEDENTES DE LA INVENCIÓN

[0002] El Virus de Inmunodeficiencia Humana (VIH) afecta a millones de personas en todo el mundo, y la prevención de VIH sigue siendo una prioridad muy alta, incluso en una era de tratamiento antirretroviral generalizada. En los Estados Unidos, el Centro para el Control de Enfermedades (CDC) estima que de todos los residentes estadounidenses con VIH, aproximadamente una quinta parte desconoce su estado, y esta pequeña proporción es responsable de transmitir la mitad de las nuevas infecciones cada año [2]. A nivel mundial, la brecha en el diagnóstico y tratamiento oportunos es mucho mayor. A finales de 2010, se estimaba que 34 millones de personas vivían con el VIH en todo el mundo, un 17% más que en 2001. Aunque la mayoría de las nuevas infecciones por el VIH continúan ocurriendo en África subsahariana, los CDC estimaron que la incidencia anual de la infección por el VIH por 2008-2011 en los Estados Unidos se ha mantenido estable en alrededor de 15-16/100.000, con más de 40.000 nuevas infecciones cada año. Por lo tanto, es una prioridad de salud mundial urgente encontrar una vacuna contra el VIH segura y potente que prevenga la infección por el VIH o mitigue su impacto inicial antes del diagnóstico, incluida la destrucción de la reserva intestinal de CD4 [3] y el alto riesgo de transmisión [4].

[0003] Se prevé una vacuna totalmente eficaz sería capaz de provocar tanto respuestas celulares potentes como anticuerpos ampliamente neutralizantes capaces de neutralizar variantes del VIH-1 de diferentes clados.

[0004] Por otra parte, un estudio clínico reciente indica que los anticuerpos no neutralizantes Env-específicos pueden tener alguna capacidad protectora que está vinculada a la función del anticuerpo de subtipo específico [9]. Los anticuerpos ampliamente neutralizantes se dirigen contra regiones altamente conservadas en la envoltura viral. Hasta hace poco, la mayoría de las vacunas anti-VIH utilizaban proteínas antigénicas del VIH purificadas, como gp160, gp41 o gp120 presentadas en forma soluble. La mayoría de los inmunógenos basados en proteínas de envoltura (Env) son moléculas de envoltura monoméricas que provocan anticuerpos de unión, pero no anticuerpos neutralizantes potentes. Esto se debe en parte al hecho de que los anticuerpos neutralizantes reconocen epítopos terciarios y cuaternarios en la estructura trimérica nativa de las proteínas de la envoltura viral. Además, la mayoría de los inmunógenos monoméricos basados en Env no inducen una respuesta mediada por células. Se informó que los trímeros estabilizados de Env del VIH-1 inducían antisueros ampliamente neutralizantes contra el VIH-1 in vivo. Véase, por ejemplo, US 2012/0045472.

[0005] Las vacunas vivas atenuadas han demostrado ser altamente eficaces en los seres humanos y en primates no humanos (PNH) contra ciertas enfermedades virales, tales como una vacuna basada en el virus de inmunodeficiencia en simios vivos atenuados (SIV) en la prevención de la infección por VIS. Desafortunadamente, debido a los riesgos de seguridad asociados con el VIH vivo atenuado, tal estrategia no es aplicable para la vacuna humana contra el VIH.

[0006] Con el fin de provocar tanto respuestas celulares potentes como anticuerpos ampliamente neutralizantes, los vectores recombinantes han sido utilizados para expresar genes para proteínas antigénicas del VIH in vivo como una alternativa a las vacunas virales vivas atenuadas. Se ha explorado el uso de vectores virales recombinantes incompetentes para la replicación para vacunas y otros tipos de terapia génica. En particular, los vectores adenovirales recombinantes incompetentes para la replicación, particularmente los adenovirus de serotipos 2 y 5 (Ad2 y Ad5) se han estudiado extensamente para aplicaciones de administración de genes, incluida la vacunación. Aunque se ha demostrado que estas vacunas basadas en el vector Ad5 que no permiten la replicación provocan respuestas inmunitarias protectoras en una variedad de modelos animales, la utilidad de las vacunas basadas en el vector Ad5 recombinante para el VIH y otros patógenos puede estar limitada por la alta seroprevalencia de neutralización específica de anticuerpos Ad5 (NAb) en poblaciones humanas [17]. Por ejemplo, en un estudio de seroepidemiología de 4.381 sujetos en todo el mundo, se observó que los títulos de Ad5 NAb eran casi universales y altos en África subsahariana, y la mayoría de los individuos presentaban títulos de Ad5 Nab >200 [14].

[0007] Varias pruebas de eficacia de vacunas de VIH-1 se han realizado usando vacunas basadas en vector de Ad5 recombinante. Estos estudios incluyen los ensayos de eficacia de la vacuna contra el VIH-1 HVTN 502/STEP (Merck Ad5), HVTN 503/Phambili (Merck Ad5) y HVTN 505 (NIH VRC ADN/Ad5). Sin embargo, estos tres estudios de eficacia de la vacuna contra el VIH-1, que utilizaron vacunas Ad5 y ADN/Ad5 no replicantes, no mostraron eficacia contra la infección por VIH-1. Además, se observó una tendencia hacia un aumento de la infección por VIH-1 en sujetos vacunados con la vacuna Merck Ad5 del estudio STEP en comparación con placebo. La experiencia hasta la fecha con vectores incompetentes para la replicación, como el adenovirus subtipo 5 para la vacuna contra el VIH, ha sido decepcionante, y no se ha demostrado beneficio en varios ensayos de eficacia [5-8].

[0008] Las preocupaciones sobre la seguridad de los vectores de Ad5, en particular del estudio STEP [8, 10], han llevado a la exploración de vectores de Ad biológicamente sustancialmente diferentes de los serotipos alternativos como vectores de vacunas virales [11-13]. Un ejemplo de un serotipo de adenovirus alternativo al Ad5 es el serotipo 26 de adenovirus (Ad26). El Ad26 es un virus relativamente poco común en los seres humanos y no se sabe que se replique en ninguna otra especie. Varias encuestas para adenovirus en diferentes poblaciones han demostrado que se aísla solo en raras ocasiones, e incluso cuando está aislado, rara vez se asocia con síntomas. La inmunización experimental, igualmente, mostró poca evidencia de infección grave. Véanse, por ejemplo, las referencias [14] y [27] - [43]. Por lo tanto, no hay evidencia de estudios observacionales de que el Ad26 cause síntomas clínicos en adultos sanos, y los datos experimentales de un estudio de desafío con Ad26 también sugirieron que la infección entérica por Ad26 no produce síntomas [44]. Los vectores de adenovirus con replicación defectuosa, rAd26, se pueden cultivar hasta títulos altos en líneas celulares que complementan Ad5 E1 adecuadas para fabricar estos vectores a gran escala y en grado clínico [11 ], y se ha demostrado que este vector induce respuestas inmunes humorales y mediadas por células en las estrategias de vacunación de refuerzo de cebado [11,21]. Otra alternativa es rAd35, un vector de adenovirus de replicación defectuosa derivado del serotipo de adenovirus 35. Los vectores rAd35 crecen hasta títulos altos en líneas celulares adecuadas para la producción de vacunas de grado clínico [61], y se han formulado para inyección y polvo de inhalación estable [62].

[0009] Estos vectores de adenovirus alternativos muestran la transducción eficaz de células dendríticas humanas [63, 22], y por lo tanto tienen la capacidad para mediar la entrega y presentación de antígenos de alto nivel.

[0010] En términos de al menos el uso de receptor, tropismo in vivo, las interacciones con las células dendríticas, perfiles inmunes innatos, fenotipos inmunitarios adaptativos, y eficacia protectora contra el VIS en monos rhesus, Ad26 ha demostrado ser biológicamente muy diferente de Ad5 [11, 12, 15, 19-22]. Además, se ha demostrado la seguridad e inmunogenicidad del vector Ad26 no replicante en humanos (ClinicalTrials.Gov NCT01215149). Además, muchas de las ventajosas diferencias biológicas entre Ad5 y Ad26, tales como menor seroprevalancia y títulos de anticuerpos neutralizantes bajos en humanos, también están presentes entre Ad5 y Ad35.

[0011] El virus vaccinia Ankara modificado (MVA), una cepa deficiente en la replicación del virus de la vaccinia, también se ha utilizado como un vector viral para la expresión recombinante de las proteínas antigénicas del VIH. Véanse, por ejemplo, los documentos US20110159036, US 8197825, etc. El MVA está relacionado con el virus Vaccinia, un miembro del género Orthopoxvirus en la familia de Poxviridae. Se sabe que los poxvirus son buenos inductores de las respuestas de las células T CD8 debido a su expresión intracitoplasmática. Sin embargo, generalmente se cree que son deficientes para generar células T restringidas CD4 MHC de clase II. Véase, por ejemplo, [64].

[0012] Un posible inconveniente de los vectores virales de replicación incompetente es que la expresión del gen diana a ser entregado al huesped desde el vector viral puede disminuir después de la administración del vector. Al ser incapaz de replicarse o propagarse en el huésped, el vector viral no puede producir ninguna copia nueva que pueda usarse posteriormente para aumentar la expresión génica, por lo que se requiere una nueva administración del vector viral. Si se vuelve a administrar el mismo serotipo de adenovirus al huésped, el huésped puede generar anticuerpos neutralizantes para ese serotipo de adenovirus particular, lo que da como resultado una respuesta antiadenovirus específica de serotipo. Tal respuesta anti-adenovirus específica de serotipo puede prevenir la readministración efectiva del vector viral, haciéndolo menos efectivo como vacuna o vehículo de administración de genes.

[0013] Por consiguiente, existe una necesidad en la técnica de vacunas mejoradas que puedan usarse para inducir una inmunidad protectora contra la infección por VIH. Preferiblemente, tal vacuna sería fácil de administrar, de acción prolongada y tendría efectos adversos mínimos. Además, sería preferiblemente eficaz contra una amplia diversidad de tipos circulantes de transmisión del VIH, incluidos los más frecuentes en múltiples regiones del mundo. El documento WO2014107744 describe trímeros de envoltura de VIH estabilizados, por ejemplo, para su uso en el tratamiento o prevención de la infección por VIH, pero no describe la combinación de características de la invención según se reivindica.

BREVE RESUMEN DE LA INVENCIÓN

[0014] La invención se basa en parte en el descubrimiento de que las combinaciones de una proteína antigénica del VIH aislada con vectores de expresión, tales como vectores virales de replicación incompetente, que codifican antígenos del VIH, inducen el aumento de protección de inmunidad contra uno o más clados de VIH. Por consiguiente, un aspecto general de la invención se refiere a una combinación de vacunas para su uso en un método para inducir una respuesta inmunitaria contra un virus de inmunodeficiencia humana (VIH) en un sujeto que necesita un método del mismo, comprendiendo dicha combinación:

(i) una primera composición que comprende una cantidad inmunogénicamente eficaz de uno o más vectores de adenovirus 26 rAd26 que codifican polipéptidos antigénicos del VIH que tienen la secuencia de aminoácidos de SEQ ID NO: 1, SEQ iD NO: 3 y SeQ ID NO: 4 y un portador farmacéuticamente aceptable;

(ii) una segunda composición que comprende una cantidad inmunogénicamente eficaz de una glicoproteína de la envoltura del VIH aislada que comprende la secuencia de aminoácidos de SEQ ID NO: 5 o SEQ ID NO: 6, un adyuvante y un vehículo farmacéuticamente aceptable; y

(iii) una cantidad inmunogénicamente eficaz de uno o más vectores rAd26 adicionales que codifican polipéptidos antigénicos del VIH que tienen la secuencia de aminoácidos de SEQ ID NO: 1, SEQ ID NO: 3 y SeQ ID NO: 4,

en donde la primera composición se administra para la inmunización de cebado y la segunda composición se administra para potenciar la inmunización, y la cantidad inmunogénicamente eficaz de los vectores rAd26 adicionales está presente en la segunda composición o en una tercera composición que se administra junto con la segunda composición para potenciar la inmunización.

[0015] La invención también proporciona una combinación de la vacuna para su uso en la inducción de una respuesta inmune contra un virus de la inmunodeficiencia humana (VIH) en un sujeto, la combinación de vacuna que comprende:

(i) una primera composición que comprende un cantidad inmunogénicamente eficaz de uno o más vectores de adenovirus 26 (rAd26) que codifican polipéptidos antigénicos del VIH que tienen las secuencias de aminoácidos de SEQ ID NO: 1, SEQ ID NO: 3 y SEQ ID NO: 4, y un portador farmacéuticamente aceptable;

(ii) una segunda composición que comprende una cantidad inmunogénicamente eficaz de una glicoproteína de la envoltura del VIH aislada de SEQ ID NO: 5, un vehículo farmacéuticamente aceptable y un adyuvante, en donde el adyuvante es fosfato de aluminio o un adyuvante basado en saponina; y

(iii) una tercera composición que comprende una cantidad inmunogénicamente eficaz de uno o más vectores rAd26 adicionales que codifican polipéptidos antigénicos del VIH que tienen las secuencias de aminoácidos de SEQ ID NO: 1, SEQ ID NO: 3 y SEQ ID NO: 4,

en donde la primera composición se administra para estimular la inmunización, y la segunda composición se administra junto con la tercera composición para estimular la inmunización.

[0016] La invención también proporciona una primera composición que comprende una cantidad inmunogénicamente eficaz de uno o más vectores de adenovirus 26 (Rad26) que codifican polipéptidos antigénicos de VIH que tienen las secuencias de aminoácidos de SEQ ID NO: 1, SEQ ID NO: 3 y SEQ ID NO: 4 y un portador farmacéuticamente aceptable, para usar con una segunda composición que comprende una cantidad inmunogénicamente eficaz de una glicoproteína de la envoltura del VIH aislada que comprende la secuencia de aminoácidos de SEQ ID NO: 5 o SEQ ID NO: 6, un adyuvante y un fármaco farmacéuticamente aceptable portador y una cantidad inmunogénicamente eficaz de uno o más vectores rAd26 adicionales que codifican polipéptidos antigénicos del VIH que tienen las secuencias de aminoácidos de SEQ ID NO: 1, SEQ ID NO: 3 y SEQ ID NO: 4,

en un método para inducir una respuesta inmune contra un virus de inmunodeficiencia humana (VIH) en un sujeto, comprendiendo dicho método administrar dicha primera composición para estimular la inmunización, administrar dicha segunda composición para potenciar la inmunización, y administrar la cantidad inmunogénicamente eficaz de los vectores rAd26 adicionales, en donde dicha cantidad inmunogénicamente eficaz de los vectores rAd26 adicionales está presente en la segunda composición o en una tercera composición que se administra junto con la segunda composición para potenciar la inmunización.

[0017] La invención también proporciona una segunda composición que comprende una cantidad inmunogénicamente eficaz de una glicoproteína de envoltura de VIH aislado sobre la que comprende la secuencia de aminoácidos de SEQ ID NO: 5 o SEQ ID NO: 6, un adyuvante, y un vehículo farmacéuticamente aceptable para su uso con una primera composición que comprende una cantidad inmunogénicamente eficaz de uno o más vectores de adenovirus 26 (rAd26) que codifican polipéptidos antigénicos del VIH que tienen las secuencias de aminoácidos de SEQ ID NO: 1, SEQ ID NO: 3 y SEQ ID NO: 4 y un portador farmacéuticamente aceptable, y una cantidad inmunogénicamente eficaz de uno o más vectores rAd26 adicionales que codifican polipéptidos antigénicos del VIH que tienen las secuencias de aminoácidos de SEQ ID NO: 1, SEQ ID NO: 3 y SEQ ID NO: 4,

en un método para inducir una respuesta inmune contra un virus de inmunodeficiencia humana (VIH) en un sujeto, comprendiendo dicho método administrar dicha primera composición para sensibilizar la inmunización, administrar dicha segunda composición para reforzar la inmunización, y administrar la cantidad inmunogénicamente eficaz de los vectores rAd26 adicionales, en donde dicha cantidad inmunogénicamente eficaz de los vectores rAd26 adicionales está presente en la segunda composición o en una tercera composición que se administra junto con la segunda composición para potenciar la inmunización.

[0018] Las realizaciones de la invención se describen a continuación en algunos de los casos. Un aspecto general de la divulgación se refiere a una combinación de vacunas para inducir una respuesta inmune contra un virus de inmunodeficiencia humana (VIH) en un sujeto que lo necesita, que comprende:

(i) una primera composición que comprende una cantidad inmunogénicamente eficaz de uno o más vectores de expresión codificando uno o más polipéptidos antigénicos del VIH y un vehículo farmacéuticamente aceptable; (ii) una segunda composición que comprende una cantidad inmunogénicamente eficaz de un polipéptido antigénico aislado y un vehículo farmacéuticamente aceptable; y

(iii) una cantidad inmunogénicamente eficaz de uno o más vectores de expresión adicionales que codifican uno o más polipéptidos antigénicos adicionales,

en donde una de las composiciones primera y segunda es para cebar la inmunización y la otra composición es para reforzar la inmunización, y la cantidad inmunogénicamente eficaz de los vectores de expresión adicionales está presente en la segunda composición o en una tercera composición para administrar junto con la segunda composición para cebar o reforzar la inmunización.

[0019] En un ejemplo de la divulgación, el polipéptido antigénico aislado de la combinación de vacuna comprende un VIH sobre glicoproteína, y preferiblemente un trímero estabilizado de gp140 del VIH. En casos particulares de la divulgación, el polipéptido antigénico aislado comprende la secuencia de aminoácido de SEQ ID NO: 5 o SEQ ID NO: 6.

[0020] En un ejemplo de la divulgación, el uno o más vectores de expresión y el uno o más vectores de expresión adicionales de la combinación de vacuna son los vectores de adenovirus, tales como los vectores rAd26, rAd35, rAd48, rAd5HVR48 o los vectores MVA. En un caso particular de la divulgación, el uno o más vectores de expresión adicionales están presentes en la tercera composición de la combinación de vacunas.

[0021] En casos particulares de la divulgación, el uno o más polipéptidos antigénicos codificados por el uno o más vectores de expresión y/o el uno o vectores de expresión más adicionales comprenden uno o más antígenos de mosaico VIH, más preferiblemente, uno o más antígenos Gag-Pol-Env de mosaico VIH, y más preferiblemente comprenden las secuencias de aminoácidos seleccionadas del grupo que consiste en SEQ ID NO: 1-4. En otros casos particulares de la divulgación, el uno o más vectores de expresión son vectores rAd26 que codifican uno o más polipéptidos antigénicos del VIH que comprenden las secuencias de aminoácidos seleccionadas del grupo que consta de SEQ ID NO: 1-4, y el uno o más vectores de expresión adicionales son vectores MVA que codifican uno o más polipéptidos antigénicos del VIH que comprenden las secuencias de aminoácidos seleccionadas del grupo que consiste en las SEQ ID NO: 1-4.

[0022] En un ejemplo preferido de la divulgación, una combinación de vacuna comprende una primera composición que comprende una cantidad inmunogénicamente eficaz de vectores Rad26 que codifican tres polipéptidos antigénicos de VIH que tienen el secuencias de aminoácido de SEQ ID NO: 1, SEQ ID NO: 3, y SEQ ID NO: 4, respectivamente, y un portador farmacéuticamente aceptable; una segunda composición que comprende una cantidad inmunogénicamente eficaz de un polipéptido antigénico aislado que comprende un trímero estabilizado de gp140 de VIH que tiene la secuencia de aminoácidos de SEQ ID NO: 5 y un vehículo farmacéuticamente aceptable; y una tercera composición que comprende una cantidad inmunogénicamente eficaz de vectores MVA que codifican cuatro polipéptidos antigénicos del VIH que tienen las secuencias de aminoácidos de SEQ ID NO: 1, SEQ ID NO: 2, SEQ ID NO: 3 y s Eq ID NO: 4.

[0023] Otro aspecto general de la divulgación se refiere a una combinación de vacunas de acuerdo con una instancia de la divulgación para su uso en la generación de una respuesta inmune protectora contra una infección por el virus de la inmunodeficiencia humana (VIH), en donde la primera composición se usa para cebar la respuesta inmune, y la segunda composición y la cantidad inmunogénicamente eficaz de uno o más vectores de expresión adicionales se utilizan para potenciar la respuesta inmunitaria.

[0024] Otro aspecto general de la descripción se refiere a un kit que comprende una combinación de vacuna de acuerdo a un ejemplo de la descripción.

[0025] Un método para inducir una respuesta inmune contra un virus de la inmunodeficiencia humana (VIH) en un sujeto en necesidad del mismo, comprendiendo el método:

(i) administrar al sujeto una primera composición que comprende una cantidad inmunogénicamente eficaz de uno o más vectores de expresión codificando uno o más polipéptidos antigénicos del VIH y un vehículo farmacéuticamente aceptable;

(ii) administrar al sujeto una segunda composición que comprende una cantidad inmunogénicamente eficaz de un polipéptido antigénico aislado y un vehículo farmacéuticamente aceptable; y

(iii) administrar al sujeto una cantidad inmunogénicamente eficaz de uno o más vectores de expresión adicionales que codifican uno o más polipéptidos antigénicos del VIH adicionales,

en donde los pasos (i) y (ii) se llevan a cabo en cualquier orden, con uno de los pasos para cebar inmunización y la otra para potenciar la inmunización, y la cantidad inmunogénicamente eficaz del uno o más vectores de expresión adicionales está presente en la segunda composición o en una tercera composición administrada junto con la segunda composición para la sensibilización o la inmunización de refuerzo.

[0026] En un ejemplo de la divulgación, la primera composición es para la inmunización de cebado, y la segunda composición y la cantidad inmunogénicamente eficaz de uno o más vectores de expresión adicionales son para impulsar la inmunización.

[0027] En otro ejemplo de la divulgación, los uno o más vectores de expresión está presente en una tercera composición.

[0028] Un método para inducir una respuesta inmune contra un virus de la inmunodeficiencia humana (VIH) en un sujeto en necesidad del mismo, comprendiendo el método:

(i) administrar al sujeto una vacuna de cebador que comprende una cantidad inmunogénicamente eficaz de uno o más vectores de expresión codificando uno o más polipéptidos antigénicos del VIH y un vehículo farmacéuticamente aceptable; y

(ii) administrar al sujeto una vacuna de refuerzo que comprende una cantidad inmunogénicamente eficaz de un polipéptido antigénico aislado, una cantidad inmunogénicamente eficaz de uno o más vectores de expresión adicionales que codifican uno o más polipéptidos antigénicos del VIH adicionales y un portador farmacéuticamente aceptable;

en donde el polipéptido antigénico aislado y el uno o más vectores de expresión adicionales están presentes en la misma composición o composiciones separadas; y en donde la vacuna de refuerzo se administra después de que se administra la vacuna cebadora también se describe.

[0029] En un ejemplo preferido de la descripción, uno o ambos de la vacuna de cebador y la vacuna de refuerzo están readministradas una vez o múltiples veces para inducir adicionalmente la respuesta inmune, en donde la vacuna de cebador se readministra después de su administración inicial pero antes de administrarse primero la vacuna de refuerzo.

[0030] En un ejemplo preferido de la divulgación, la proteína antigénica aislada es un VIH sobre glicoproteína, más preferiblemente, un VIH estabilizado sobre glicoproteína, tal como una proteína trimérica VIH gp140 estabilizada o una proteína trimérica de mosaico gp140 estabilizada, y aún más preferiblemente, comprende la secuencia de aminoácido de SEQ ID NO: 5 o SEQ ID NO: 6.

[0031] En otro ejemplo preferido de la divulgación, el uno o más vectores de expresión y/o el uno o más vectores de expresión adicionales codifican uno o más antígenos mosaico de VIH, más preferiblemente, uno o más antígenos mosaico de VIH GagPol-Env, y aún más preferiblemente codifican uno o más antígenos Gag-Pol-Env de VIH mosaico que comprenden las secuencias de aminoácidos seleccionadas del grupo que consiste de las SEQ ID NO: 1-4.

[0032] En otro caso más preferido de la descripción, el uno o más vectores de expresión o vectores de expresión adicionales son vectores de adenovirus, tales como Rad26, rAd35, rAd48, vectores rAd5HVR48, o vectores MVA. Más preferiblemente, el uno o más vectores usados para estimular la inmunización se derivan de un tipo diferente de virus que los usados para estimular la inmunización. Por ejemplo, cuando se usan vectores de adenovirus, tales como vectores rAd26 o rAd35, para la inmunización de cebado, los vectores MVA se usan junto con la proteína antigénica del VIH aislada para la inmunización de refuerzo.

[0033] En un caso de la divulgación, el uno o más vectores de expresión son vectores Rad26 y el uno o más vectores de expresión adicionales son vectores MVA. En otro caso, el uno o más vectores de expresión son vectores MVA y el uno o más vectores de expresión adicionales son vectores rAd26. En otro caso más, el uno o más vectores de expresión son vectores rAd26 y el uno o más vectores de expresión adicionales también son vectores rAd26.

[0034] En un caso particular de la divulgación, la composición utilizada para la inmunización de cebado comprende vectores Rad26 que codifican una o más proteínas antigénicas que comprenden las secuencias de aminoácidos de SEQ ID NOs: 1,3 y 4, respectivamente; y la una o más composiciones utilizadas para la inmunización de refuerzo comprenden una proteína aislada que comprende la secuencia de aminoácidos de SEQ ID NO: 5 o SEQ ID NO: 6, y vectores MVA que codifican una o más proteínas antigénicas que tienen las secuencias de aminoácidos de SEQ ID NOs: 1-4, respectivamente. Lo más preferiblemente, los vectores MVA están presentes en una tercera composición.

BREVE DESCRIPCIÓN DE LOS DIBUJOS

[0035] El resumen anterior, así como la siguiente descripción detallada de la invención, se entenderá mejor cuando se lea conjuntamente con los dibujos adjuntos. Debe entenderse que la invención no se limita a las realizaciones precisas mostradas en los dibujos.

[0036] En los dibujos:

Las FIGS. 1A y 1B muestran los resultados de un ensayo de inmunoabsorción ligado a enzimas (ELISA) de proteína de envoltura (Env) de gp140 del clado C y de la proteína de envoltura de mosaico (Env) en muestras de suero tomadas de monos Rhesus (Macaca mulatta) (NHP) vacunados con diferentes combinaciones de vacunas en las semanas 28 y 56 después de la administración inicial de la vacuna cebadora; Se muestran los títulos de ELISA de CE⁹⁰ transformados con log10, y los símbolos representan los títulos de los animales individuales ensayados; las líneas horizontales indican los títulos medios geométricos del grupo y las líneas punteadas representan los límites inferiores de detección; FIG. 1A: títulos ELISA de Env gp140 de clado C y Env mosaico en la semana 28; FIG. 1B: títulos ELISA de Env de gp140 de clado C y Env de mosaico en la semana 56; FIG. 2 muestra los resultados de un ensayo de fagocitosis celular dependiente de anticuerpos (ADCP) sobre anticuerpos de inmunoglobulina G (IgG) purificados a partir de muestras de suero obtenidas en la semana 28 de los NHP vacunados usando Env de clado C biotinilado y Env mosaico de antígenos; se muestran las respuestas de puntuación fagocítica de animales individuales; los símbolos representan los valores de puntuación de los animales individuales probados y las columnas grises indican los títulos medios geométricos del grupo;

FIG. 3 muestra los resultados de un ensayo de anticuerpo neutralizante (nAb) en muestras de suero obtenidas en la semana 56 de los NHP vacunados en células TZM-b1 contra pseudovirus Env VIH-1 de nivel 1; los pseudovirus Env VIH-1 de nivel 1 probados incluyeron MW965.26 (clado C), SF162.LS (clado B), MN-3 (clado A), DJ263.8 (clado A) y BaL.26 (clado B); los símbolos representan títulos de DI⁵⁰ (dosis infecciosa mediana) transformados en log 10 de animales individuales con títulos medios geométricos de grupo indicados como líneas horizontales; y

FIG. 4 muestra los resultados de un ensayo de inmunoensayo ligado a enzima de IFN-y (ELISPOT) en muestras obtenidas en la semana 54 de los NHPs vacunados utilizando reservas de péptidos de epítopo de células T globales potenciales (PTE); los resultados se muestran como unidades formadoras de manchas medias (SFU) por 106 células mononucleares de sangre periférica (PBMC); los símbolos representan los valores para animales individuales; las líneas horizontales indican los valores medios geométricos del grupo y la línea de puntos representa el umbral inferior de detección.

DESCRIPCIÓN DETALLADA DE LA INVENCIÓN

[0037] Varias publicaciones, artículos y patentes se citan o se describen en el fondo y en toda la memoria. La discusión de documentos, actos, materiales, dispositivos, artículos o similares que se hayan incluido en la presente especificación tiene el propósito de proporcionar un contexto para la invención. Tal discusión no es una admisión de que cualquiera o todos estos asuntos formen parte del estado de la técnica con respecto a cualquier invención divulgada o reivindicada.

[0038] A menos que se defina lo contrario, todos los términos técnicos y científicos usados en este documento tienen el mismo significado que comúnmente entiende un experto normal en la técnica a la que pertenece esta invención. De lo contrario, ciertos términos usados en este documento tienen los significados que se establecen en la especificación.

[0039] Hay que señalar que, como se usa aquí y en las reivindicaciones adjuntas, las formas singulares “un”, “una”, “el” y “ella” incluyen referencia plural a menos que el contexto claramente dicte otra cosa.

[0040] A menos que se indique lo contrario, el término "al menos" que precede a una serie de elementos debe entenderse para referirse a todos los elementos de la serie.

[0041] A lo largo de esta memoria descriptiva y las reivindicaciones que siguen, a menos que el contexto requiera otra cosa, la palabra "comprender", y variaciones tales como "comprende" y "que comprende", se entenderá que implican la inclusión de un indicado número entero o etapa o grupo de números enteros o pasos pero no la exclusión de ningún otro número entero o paso o grupo de números enteros o paso. Cuando se usa en el presente documento, el término "que comprende" puede sustituirse por el término "que contiene" o "que incluye" o, a veces, cuando se usa en el presente documento, con el término "que tiene".

[0042] Cuando se usa en el presente documento "que consiste en" excluye cualquier elemento, etapa, o ingrediente no especificado en el elemento de la reclamación. Cuando se usa en el presente documento, "que consiste esencialmente en" no excluye materiales o pasos que no afecten materialmente a las características básicas y novedosas de la reivindicación. Cualquiera de los términos antes mencionados de "que comprende", "que contiene", "que incluye" y "que tiene", siempre que se use en el presente documento en el contexto de un aspecto o instancia de la invención o divulgación, puede reemplazarse con el término "que consiste en" o "que consiste esencialmente en" para variar los alcances de la divulgación.

[0043] Tal como se utiliza aquí, el término conjuntivo "y/o" entre múltiples elementos mencionados se entiende como que abarca ambas opciones individuales y combinadas. Por ejemplo, cuando dos elementos están unidos por "y/o", una primera opción se refiere a la aplicabilidad del primer elemento sin el segundo. Una segunda opción se refiere a la aplicabilidad del segundo elemento sin el primero. Una tercera opción se refiere a la aplicabilidad del primer y segundo elementos juntos. Se entiende que cualquiera de estas opciones entra dentro del significado y, por lo tanto, satisface el requisito del término "y/o" como se usa en este documento. También se entiende que la aplicabilidad concurrente de más de una de las opciones entra dentro del significado y, por lo tanto, satisface el requisito del término "y/o".

[0044] Como se usa en el presente documento, "sujeto" se refiere a cualquier animal, preferiblemente un mamífero, más preferiblemente un ser humano, a quien va a ser o ha sido tratado por un método de acuerdo con una instancia de la divulgación. El término "mamífero", como se usa en este documento, abarca cualquier mamífero. Los ejemplos de mamíferos incluyen, pero no se limitan a vacas, caballos, ovejas, cerdos, gatos, perros, ratones, ratas, conejos, cobayas, primates no humanos (NHP) como monos o simios, humanos, etc. más preferiblemente un ser humano.

[0045] Como se usa en este documento, el término "inmunidad protectora" o "respuesta inmune protectora" significa que el sujeto vacunado es capaz de controlar una infección con el agente patógeno contra el que se realiza la vacunación. Normalmente, el sujeto que ha desarrollado una "respuesta inmunitaria protectora" desarrolla sólo síntomas clínicos leves a moderados o ningún síntoma en absoluto. Normalmente, un sujeto que tiene una "respuesta inmune protectora" o "inmunidad protectora" contra un determinado agente no morirá como resultado de la infección con dicho agente.

[0046] Una "proteína de adenovirus cápside" se refiere a una proteína de la cápside de un adenovirus (por ejemplo, Ad26, Ad35, rAd48, vectores rAd5HVR48) que está implicado en la determinación del serotipo y/o tropismo de un adenovirus particular. Las proteínas de la cápside adenoviral incluyen típicamente las proteínas de fibra, pentona y/o hexona. Como se usa en este documento, una "proteína de la cápside" para un adenovirus particular, tal como una "proteína de la cápside Ad26" o una "proteína de la cápside Ad35" puede ser, por ejemplo, una proteína de la cápside quimérica que incluye al menos una parte de una proteína cápside Ad26 o Ad35. En ciertos casos, la proteína de la cápside es una proteína de la cápside completa de Ad26 o de Ad35. En ciertos casos, el hexón, el pentón y la fibra son de Ad26 o de Ad35.

[0047] Tal como se utiliza aquí, el término "co-administración" o "administrado junto con" se refiere a la administración simultánea de dos componentes, tal como un vector de expresión viral y un polipéptido antigénico aislado. La "administración simultánea" puede ser la administración de los dos componentes al menos dentro del mismo día. Cuando dos componentes se "administran junto con", se pueden administrar en composiciones separadas secuencialmente dentro de un período de tiempo corto, como 24, 20, 16, 12, 8 o 4 horas, o dentro de 1 hora, o se pueden administrar en una sola composición al mismo tiempo.

[0048] Los términos "adyuvante" y "estimulante inmune" se usan indistintamente en el presente documento, y se definen como una o más sustancias que provocan la estimulación del sistema inmune. En este contexto, se usa un adyuvante para potenciar una respuesta inmune a los vectores de expresión y polipéptidos antigénicos de la divulgación, tales como vectores de adenovirus, vectores MVA y/o polipéptidos antigénicos antigénicos del VIH de la divulgación.

[0049] Tal como se utiliza aquí, el término "infección" se refiere a la invasión de un huésped por un agente de la enfermedad que causa. Un agente causante de una enfermedad se considera "infeccioso" cuando es capaz de invadir un hospedador y replicarse o propagarse dentro del huésped. Los ejemplos de agentes infecciosos incluyen virus, por ejemplo, virus de inmunodeficiencia humana (VIH) y ciertas especies de adenovirus, priones, bacterias, hongos, protozoos y similares.

[0050] El virus de la inmunodeficiencia humana (VIH) es un miembro del género Lentivirinae, que es parte de la familia de Retroviridae. Dos especies de VIH infectan a los humanos: VIH-1 y VIH-2. El VIH-1 es la cepa más común del virus del VIH y se sabe que es más patógeno que el VIH-2. Como se usa en este documento, los términos "virus de inmunodeficiencia humana" y "VIH" se refieren, pero no se limitan a VIH-1 y VIH-2. En ciertos casos ejemplares, las proteínas de la envoltura descritas en este documento se refieren a las presentes en cualquiera de los cinco serogrupos de lentivirus que se reconocen: primates (p. ej., VIH-1, VIH-2, virus de inmunodeficiencia simia (SIV)); oveja y cabra (por ejemplo, virus visna, virus de encefalitis de artritis caprina); caballo (virus de la anemia infecciosa equina); gato (por ejemplo, virus de inmunodeficiencia felina (VIF)); y ganado (por ejemplo, virus de inmunodeficiencia bovina (VIB)) (Ver descripciones del Comité Internacional de Taxonomía de Virus).

[0051] El VIH se clasifica en múltiples clados con un alto grado de divergencia genética. Como se usa en este documento, el término "clado de VIH" o "subtipo de VIH" se refiere a virus de inmunodeficiencia humana relacionados clasificados según su grado de similitud genética. Actualmente hay tres grupos de aislados de VIH-1: M, N y O. El grupo M (cepas principales) consta de al menos diez clados, de la A a la J. El grupo O (cepas externas) puede constar de un número similar de clados. El grupo N es un nuevo aislado de VIH-1 que no se ha clasificado ni en el grupo M ni en el grupo O. En ciertos casos ejemplares, un anticuerpo ampliamente neutralizante descrito en este documento reconocerá y generará una respuesta inmune contra dos, tres, cuatro, cinco, seis, siete, ocho, nueve, diez o más clados y/o dos o más grupos de VIH.

[0052] Se descubrió en la revelación que combinaciones heterólogas de sensibilización-refuerzo, en particular, el cebado con un vector de expresión, tal como Rad26, que codifica una o más proteínas antigénicas de VIH, seguido de refuerzo con un aislado de proteína antigénica del VIH, tales como una glicoproteína de la envoltura del VIH, y preferiblemente el refuerzo adicional con rAd26 o MVA que codifica una o más proteínas antigénicas del VIH, son sorprendentemente eficaces para generar respuestas inmunitarias protectoras contra uno o más subtipos del VIH.

Proteínas antigénicas del VIH

[0053] Tal como se usa aquí, el término "polipéptido antigénico de un VIH", "polipéptido antigénico VIH", "proteína antigénica del VIH", "polipéptido inmunogénico VIH", o "inmunógeno del VIH" se refiere a un polipéptido capaz de inducir una respuesta inmune, por ejemplo, una respuesta humoral y/o mediada por células, contra el VIH en un sujeto que lo necesite. El polipéptido antigénico puede ser una proteína del VIH, un fragmento o epítopo del mismo, o una combinación de múltiples proteínas del VIH o porciones de las mismas, que pueden inducir una respuesta inmune o producir una inmunidad, por ejemplo, inmunidad protectora, contra el VIH en un sujeto en necesidad del mismo.

[0054] Preferiblemente, un polipéptido antigénico es capaz de elevar en un huésped una respuesta inmune protectora, por ejemplo, la inducción de una respuesta inmune contra una enfermedad viral o una infección, y/o producir una inmunidad en (es decir, vacunados) un sujeto contra una enfermedad o infección viral, que protege al sujeto contra la enfermedad o infección viral. Por ejemplo, el polipéptido antigénico puede comprender una proteína o fragmentos de la misma del virus de inmunodeficiencia simia (VIS) o un VIH, como la proteína gp160 de la envoltura del VIH o VIS, las proteínas de la cápside/matriz del VIH o VIS, y los productos génicos gag, p o ly envdel VIH o VIS.

[0055] De acuerdo a los casos de la descripción, el polipéptido antigénico puede ser un antígeno de VIH-1 o VIH-2-o fragmentos de los mismos. Los ejemplos de antígenos del VIH incluyen, pero no se limitan a productos génicos gag, pol y env, que codifican proteínas estructurales y enzimas esenciales. Los productos de los genes gag, pol y env se sintetizan como poliproteínas, que se procesan posteriormente en otros múltiples productos proteicos. El producto proteico primario del gen gag es la poliproteína gag de la proteína estructural viral, que se procesa posteriormente en productos proteicos MA, CA, SP1, NC, SP2 y P6. El gen pol codifica enzimas virales (Pol, polimerasa) y el producto proteico primario se procesa posteriormente en productos proteicos RT, RNasa H, IN y PR. El gen env codifica proteínas estructurales, específicamente glicoproteínas de la envoltura del virión. El producto proteico primario del gen env es gp160, que se procesa posteriormente en gp120 y gp41. Otros ejemplos de antígenos del VIH incluyen las proteínas reguladoras de genes Tat y Rev; proteínas accesorias Nef, Vpr, Vif y Vpu; proteínas de la cápside, proteínas de la nucleocápside y proteína viral p24. Una secuencia de ácido nucleico heteróloga de acuerdo con la divulgación puede codificar cualquier antígeno del VIH, y preferiblemente codifica un producto génico gag, envy/o pol, o una parte del mismo.

[0056] De acuerdo con un ejemplo preferido, el polipéptido antigénico comprende un antígeno Gag del VIH, Env, o Pol, o cualquier parte o combinación de los mismos, más preferiblemente un antígeno VIH-1 Gag, Env, o Pol o cualquier parte o combinación de los mismos.

[0057] De acuerdo con otro ejemplo preferido, el polipéptido antigénico o un péptido codificado por un vector de acuerdo con la divulgación es un antígeno de VIH mosaico. Como se usa en el presente documento, "antígeno mosaico" se refiere a una proteína recombinante ensamblada a partir de fragmentos de secuencias naturales. El "antígeno mosaico" se puede generar y optimizar computacionalmente usando un algoritmo genético. Los antígenos mosaico se asemejan a los antígenos naturales, pero están optimizados para maximizar la cobertura de los posibles epítopos de células T que se encuentran en las secuencias naturales, lo que mejora la amplitud y cobertura de la respuesta inmune.

[0058] Un antígeno VIH mosaico según la invención es preferiblemente un antígeno Gag-Pol-Env mosaico, y más preferiblemente un antígeno VIH-1 Gag-Pol-Env mosaico. Como se usa en el presente documento, "un antígeno Gag-Pol-Env de VIH mosaico" se refiere específicamente a un antígeno mosaico que comprende múltiples epítopos derivados de una o más de las secuencias de poliproteínas Gag, Pol y Env del VIH. Las secuencias de epítopos de los antígenos Gag-Pol-Env de VIH mosaico de acuerdo con la divulgación se asemejan a las secuencias de los antígenos de VIH naturales, pero están optimizadas para presentar una gama más amplia posible de epítopos de células T para mejorar la cobertura de los epítopos que se encuentran en las secuencias de VIH circulantes.

[0059] Por ejemplo, para proporcionar una cobertura máxima de los posibles epítopes de células T, antígenos Gag, Pol y Env de mosaico están diseñados para proporcionar una cobertura óptima de uno o más clados de VIH. Se seleccionan secuencias recombinantes in silico de la base de datos de secuencias de fragmentos de 9 aminoácidos contiguos (9-meros) que se asemejan a proteínas reales y que maximizan el número de coincidencias de secuencia de 9 meros entre candidatos a vacuna y la base de datos global. Los antígenos mosaico Gag, Pol y Env tienen una estructura de dominio similar a los antígenos naturales y consisten enteramente en secuencias naturales sin uniones artificiales. Los antígenos Pol pueden contener mutantes para eliminar la actividad catalítica. Los antígenos mosaico monoméricos Env gp140 pueden contener mutaciones puntuales para eliminar la actividad de escisión y fusión.

[0060] En un caso, un antígeno de Gag-Pol-Env de VIH mosaico según la invención es un antígeno de VIH Gag mosaico con epítopos derivados de las secuencias de productos génicos gag; un antígeno Pol mosaico del VIH con epítopos derivados de las secuencias de productos del gen pol; o un antígeno Env del VIH mosaico con epítopos derivados de las secuencias de productos del gen env.

[0061] En otro ejemplo, un antígeno del Gag-Pol-Env de VIH mosaico según la invención comprende una combinación de epítopos derivados de secuencias de productos génicos gag, pol, y/o env. Los ejemplos incluyen antígenos de Env-Pol en mosaico con epítopos derivados de las secuencias de productos génicos env y pol; antígenos de Env-Gag mosaico con epítopos derivados de las secuencias de productos génicos env y gag; antígenos de Gag-Pol mosaico con epítopos derivados de las secuencias de productos génicos gag y pol; y antígenos de Gag-Env mosaico con epítopos derivados de las secuencias de los productos génicos gag y env.

[0062] En otro ejemplo, un antígeno del Gag-Pol-Env de VIH mosaico según la invención comprende una combinación de epítopos derivados de secuencias de productos génicos gag, pol, y env de uno o más clados.

[0063] Los ejemplos de antígenos Gag-Pol-Env de VIH mosaico incluyen los descritos en, por ejemplo, el documento US20120076812, Barouch et al., Nat Med 2010, 16: 319-323 [54]; Barouch y col., Cell 155: 1 - 9, 2013 [65].

[0064] Preferiblemente, los antígenos de Gag-Pol-Env de VIH mosaico incluyen, pero no se limitan a los antígenos que comprende las secuencias de aminoácidos seleccionadas del grupo que consiste en SEQ ID NOs: 1-4.

[0065] En vista de la presente descripción, un antígeno de VIH mosaico puede producirse usando métodos conocidos en la técnica. Véase, por ejemplo, US20120076812, Fischer et al, Nat Med, 2007. 13 (1): p. 100-6 [53]; Barouch y col., Nat Med 2010, 16: 319 - 323 [54].

Glicoproteína de envoltura

[0066] Como se usa en el presente documento, cada uno de los términos "glicoproteína de envoltura", "glicoproteína env," y "Env" se refiere a, pero no se limita a la glicoproteína que se expresa en la superficie de la envolvente de viriones de VIH y la superficie de la membrana plasmática de las células infectadas por el VIH, o un fragmento de la misma que puede inducir una respuesta inmune o producir una inmunidad contra el VIH en un sujeto que lo necesite.

[0067] El gen env codifica gp160, que se escinde proteolíticamente en gp120 y gp41. Más específicamente, gp160 se trimeriza a (gp160)3 y luego sufre escisión en los dos fragmentos gp120 y gp41 asociados no covalentemente. Posteriormente, la entrada viral está mediada por un trímero de heterodímeros de gp120/gp41. Gp120 es el fragmento de unión al receptor y se une al receptor CD4 en una célula diana que tiene tal receptor, como, por ejemplo, una célula T colaboradora. Gp41, que se une de manera no covalente a gp120, es el fragmento de fusión y proporciona el segundo paso por el cual el VIH ingresa a la célula. La gp41 está originalmente enterrada dentro de la envoltura viral, pero cuando la gp120 se une a un receptor CD4, la gp120 cambia su conformación y hace que la gp41 quede expuesta, donde puede ayudar en la fusión con la célula huésped. Gp140 es el ectodominio no escindido de gp160 trimérico, es decir, (gp160)3, que se ha utilizado como sustituto del estado nativo del pico viral escindido.

[0068] De acuerdo con un ejemplo de la divulgación, las glicoproteínas Env (p. ej., gp160, gp140, gp120, o gp41), preferiblemente proteína gp140 trimérica estabilizada, se pueden administrar para el cebado o impulsar las vacunas para mejorar la inmunidad inducida por vectores de expresión por sí sola.

[0069] Como se usa en este documento, cada uno de los términos "proteína gp140 trimérica estabilizada" y "trímero estabilizado de gp140" se refiere a un trímero de polipéptidos gp140 que incluye una secuencia de polipéptido que aumenta la estabilidad de la estructura trimérica. Los polipéptidos de gp140 pueden tener o pueden modificarse para incluir un dominio de trimerización que estabiliza los trímeros de gp140. Los ejemplos de dominios de trimerización incluyen, pero no se limitan al dominio de trimerización del "pliegue" de T4-fibritina; el dominio de trimerización de la bobina en espiral derivado de GCN4 [66]; y la subunidad catalítica de E. coli aspartato transcarbamoilasa como etiqueta trímera [67].

[0070] En un caso particular de la divulgación, una proteína gp140 trimérica estabilizada comprende la secuencia de aminoácidos de SeQ ID NO: 5.

[0071] De acuerdo con un ejemplo de la divulgación, una proteína gp140 trimérica estabilizada se puede administrar como una inmunización impulsada o como componente de una inmunización de refuerzo junto con vectores de expresión viral. Preferiblemente, la proteína gp140 trimérica estabilizada es una proteína gp140 de clado C o clado A, y más preferiblemente una proteína gp140 de clado C. Una proteína gp140 trimérica del clado C es capaz de inducir potentes respuestas de anticuerpos neutralizantes contra un conjunto de variantes del VIH-1 de diferentes clados y con diferentes sensibilidades de neutralización en cobayas [68, 60].

[0072] De acuerdo con otro ejemplo de la descripción, la "glicoproteína de envoltura" es una proteína de la envoltura de mosaico que comprende múltiples epítopos derivados de una o más de las secuencias de poliproteína Env de uno o más clados de VIH. Por ejemplo, como se usa en el presente documento, una "proteína gp140" puede ser una "proteína gp140 en mosaico" que contiene múltiples epítopos derivados de una o más secuencias de la proteína gp140 de uno o más clados del VIH.

[0073] En un caso particular de la divulgación, una proteína gp140 mosaico es un trímero estabilizado de gp140 mosaico que comprende la secuencia de aminoácidos de SEQ ID NO: 6.

[0074] Un aislado de proteína gp140 puede ser coadministrado con un vector de expresión de adenovirus o un vector de expresión de MVA. Según un caso preferido, una proteína gp140 y Ad26 o MVA se administran por separado, como dos formulaciones distintas, o juntas en una única formulación. La administración simultánea o la co-entrega pueden tener lugar al mismo tiempo, dentro de una hora o dentro del mismo día. Además, se puede administrar una proteína gp140 en una formulación con adyuvante. Los adyuvantes adecuados pueden ser, por ejemplo, fosfato de aluminio o un adyuvante a base de saponina.

[0075] Los polipéptidos antigénicos pueden producirse y aislarse usando cualquier método conocido en la técnica en vista de la presente divulgación. Por ejemplo, un polipéptido antigénico puede expresarse a partir de una célula huésped, preferiblemente una célula huésped recombinante optimizada para la producción del polipéptido antigénico. Según una instancia de la divulgación, se usa un gen recombinante para expresar una proteína gp140 que contiene mutaciones para eliminar la actividad de escisión y fusión, preferiblemente una proteína gp140 optimizada con mayor amplitud, intensidad, profundidad o longevidad de la respuesta inmune antiviral (p. ej., respuestas inmunes celulares o humorales) generadas tras la inmunización (p. ej., cuando se incorpora a una composición de la divulgación, p. ej., vacuna de la divulgación) de un sujeto (p. ej., un ser humano). La proteína gp140 optimizada también puede incluir mutación(es) del sitio de escisión, un sitio del factor Xa y/o un dominio de trimerización de pliegue. Una secuencia líder/señal puede unirse operativamente al N-terminal de una proteína gp140 optimizada para la máxima expresión de la proteína. La secuencia líder/señal normalmente se escinde del polipéptido naciente durante el transporte al lumen del retículo endoplásmico. Puede usarse cualquier secuencia líder/señal adecuada para una célula huésped de interés. Una secuencia líder/señal ejemplar comprende la secuencia de aminoácidos de SEQ ID NO: 7.

[0076] En un ejemplo preferido de la divulgación, el polipéptido antigénico aislado es un gp140 estabilizado trimérico como los descritos en Nkolola et al 2010, J. Virology 84 (7): 3.270-3279 [68]; Kovacs et al, PNAS 2012, 109 (30): 12111-6 [60], WO 2010/042942 y WO 2014/107744.

Adenovirus

[0077] Un adenovirus de acuerdo con la divulgación pertenece a la familia de Adenoviridae, y preferiblemente es uno que pertenece al género Mastadenovirus. Puede ser un adenovirus humano, pero también un adenovirus que infecta a otras especies, incluidos, entre otros, un adenovirus bovino (por ejemplo, adenovirus bovino 3, BAdV3), un adenovirus canino (por ejemplo, CAdV2), un adenovirus porcino (por ejemplo, PAdV3 o 5), o un adenovirus de simio (que incluye un adenovirus de mono y un adenovirus de simio, como un adenovirus de chimpancé o un adenovirus de gorila). Preferiblemente, el adenovirus es un adenovirus humano (HAdV o AdHu), o un adenovirus de simio tal como un adenovirus de chimpancé o gorila (ChAd, AdCh o SAdV). En la descripción, se hace referencia a un adenovirus humano si se hace referencia a él como Ad sin indicación de la especie, por ejemplo, la breve notación "Ad5" significa lo mismo que HAdV5, que es el adenovirus humano de serotipo 5. También como se usa en este documento, la notación "rAd" significa adenovirus recombinante, por ejemplo, "rad26" se refiere a adenovirus humano recombinante 26.

[0078] Estudios más avanzados se han realizado utilizando los adenovirus humanos, y los adenovirus humanos se prefieren de acuerdo con ciertos aspectos de la divulgación. En ciertos casos preferidos, un adenovirus recombinante según la divulgación se basa en un adenovirus humano. En casos preferidos, el adenovirus recombinante se basa en un serotipo de adenovirus humano 5, 11, 26, 34, 35, 48, 49, 50, 52, etc. Según un caso particularmente preferido de la divulgación, un adenovirus es un adenovirus humano de uno de los serotipos 26 o 35. Una ventaja de estos serotipos es una baja seroprevalencia y/o títulos de anticuerpos neutralizantes preexistentes bajos en la población humana. La preparación de vectores rAd26 se describe, por ejemplo, en WO 2007/104792 y en Abbink et al., (2007) Virol 81 (9): 4654­ 63 [11]. Se encuentran secuencias genómicas ejemplares de Ad26 en GenBank Accession EF 153474 y en SEQ ID NO: 1 de WO 2007/104792. La preparación de vectores rAd35 se describe, por ejemplo, en la Patente de Estados Unidos N° 7.270.811, en el documento WO 00/70071 y en Vogels et al., (2003) J Virol 77 (15): 8263-71 [12]. Se encuentran secuencias genómicas ejemplares de Ad35 en GenBank Accession AC_000019 y en la Fig. 6 del documento WO 00/70071.

[0079] Los adenovirus de simio generalmente también tienen una baja seroprevalencia y/o títulos de anticuerpos neutralizantes preexistentes bajos en la población humana, y se ha informado de una cantidad significativa de trabajo usando vectores de adenovirus de chimpancé (por ejemplo, US6083716; WO 2005/071093; WO 2010/086189; WO 2010085984; Farina et al, 2001, J Virol 75: 11603-13 [13]; Cohen et al, 2002, J Gen Virol 83: 151 -55 [69]; Kobinger et al, 2006, Virology 346: 394-401 [70]; Tatsis et al., 2007, Molecular Therapy 15: 608-17 [71]; ver también revisión de Bangari y Mittal, 2006, Vaccine 24: 849-62 [72]; y revisión de Lasaro y Ertl, 2009, Mol Ther 17: 1333 - 39 [73]). Por tanto, en otros casos preferidos, el adenovirus recombinante según la divulgación se basa en un adenovirus de simio, por ejemplo, un adenovirus de chimpancé. En ciertos casos, el adenovirus recombinante se basa en el adenovirus de simio tipo 1, 7, 8, 21,22, 23, 24, 25, 26, 27.1,28.1,29, 30, 31.1,32, 33, 34, 35.1,36, 37,2, 39, 40,1,41,1,42,1,43, 44, 45, 46, 48, 49, 50 o SA7P.

[0080] Preferiblemente, el vector de adenovirus es un vector recombinante deficiente en la replicación viral, tales como Rad26, rAd35, rAd48, rAd5HVR48, etc.

[0081] En un ejemplo preferido de acuerdo con la divulgación, los vectores adenovirales comprenden proteínas de la cápside a partir de dos serotipos raros: Ad26 y Ad35. En el caso típico, el vector es un virus rAd26 o rAd35.

[0082] Por lo tanto, los vectores que se pueden utilizar en una instancia de la divulgación comprenden una proteína de la cápside Ad26 o Ad35 (p. ej., una proteína de fibra, pentón o hexon). Un experto en la técnica reconocerá que no es necesario que se use una proteína de la cápside Ad26 o Ad35 completa en los vectores de la divulgación. Por tanto, las proteínas de la cápside quiméricas que incluyen al menos una parte de una proteína de la cápside Ad26 o Ad35 pueden usarse en los vectores de la divulgación. Los vectores según los casos de la divulgación también pueden comprender proteínas de la cápside en donde las proteínas de fibra, pentón y hexon derivan cada una de un serotipo diferente, siempre que al menos una proteína de la cápside se derive de Ad26 o Ad35. En casos preferidos, las proteínas de fibra, pentón y hexon se derivan cada una de Ad26 o cada una de Ad35.

[0083] Un experto habitual en la técnica reconocerá que los elementos derivados de múltiples serotipos pueden ser combinados en un único vector de adenovirus recombinante. Por tanto, se puede producir un adenovirus quimérico que combina propiedades deseables de diferentes serotipos. Por lo tanto, en algunos casos, un adenovirus quimérico de la divulgación podría combinar la ausencia de inmunidad preexistente de los serotipos Ad26 y Ad35 con características tales como estabilidad de temperatura, ensamblaje, anclaje, rendimiento de producción, infección redirigida o mejorada, estabilidad del ADN en la célula diana y similares.

[0084] En ciertos casos, el vector de adenovirus recombinante útil en la divulgación se deriva principalmente o enteramente de Ad35 o Ad26 desde (es decir, el vector es rAd35 o rAd26). En algunos casos, el adenovirus tiene una replicación deficiente, por ejemplo, porque contiene una deleción en la región E1 del genoma. Para los adenovirus de la divulgación, derivados de Ad26 o Ad35, es típico intercambiar la secuencia codificante de E4-orf6 del adenovirus con la E4-orf6 de un adenovirus del subgrupo C humano tal como Ad5. Esto permite la propagación de tales adenovirus en líneas celulares complementarias bien conocidas que expresan los genes E1 de Ad5, tales como, por ejemplo, células 293, células PER.C6 y similares (ver, p. ej. Havenga y col., 2006, J Gen Virol 87: 2135 - 43 [61]; Wo 03/104467). Sin embargo, tales adenovirus no serán capaces de replicarse en células no complementarias que no expresan los genes E1 de Ad5.

[0085] En ciertos casos, el adenovirus es un adenovirus humano de serotipo 35, con una deleción en la región E1 en donde el ácido nucleico que codifica el uno o más polipéptidos antigénicos de VIH ha sido clonado, y con una región E4-orf6 de Ad5. En ciertos casos, el adenovirus es un adenovirus humano de serotipo 26, con una deleción en la región E1 en donde se ha clonado el ácido nucleico que codifica uno o más polipéptidos antigénicos del VIH, y con una región E4 orf6 de Ad5. Para el adenovirus Ad35, es típico retener el extremo 3’ del marco de lectura abierto E1B 55K en el adenovirus, por ejemplo, los 166 pb directamente aguas arriba del marco de lectura abierto pIX o un fragmento que lo comprende, como un fragmento de 243 pb directamente aguas arriba del codón de inicio pIX, marcado en el extremo 5' por un sitio de restricción Bsu 36I, ya que esto aumenta la estabilidad del adenovirus porque el promotor del gen pIX reside parcialmente en esta área (ver, por ejemplo, [61], supra; WO 2004/001032).

[0086] La preparación de vectores adenovirales recombinantes es bien conocida en la técnica. La preparación de vectores rAd26 se describe, por ejemplo, en WO 2007/104792 y en Abbink et al., (2007) Virol 81 (9): 4654-63 [11]. Se encuentran secuencias genómicas ejemplares de Ad26 en GenBank Accession EF 153474 y en SEQ ID NO: 1 de WO 2007/104792. La preparación de vectores rAd35 se describe, por ejemplo, en la Patente de Estados Unidos N° 7.270.811 y en Vogels et al., (2003) J Virol 77 (15): 8263-71 [12]. Una secuencia de genoma ejemplar de Ad35 se encuentra en GenBank Accession a C_000019.

[0087] En un ejemplo de la descripción, los vectores útiles para la invención incluyen los descritos en WO2012/082918.

[0088] Típicamente, un vector útil en la divulgación se produce utilizando un ácido nucleico que comprende toda la recombinante genoma adenoviral (p. ej., un plásmido, cósmido o vector de baculovirus). Por tanto, la divulgación también proporciona moléculas de ácido nucleico aisladas que codifican los vectores adenovirales de la divulgación. Las moléculas de ácido nucleico de la divulgación pueden estar en forma de ARN o en forma de ADN obtenido por clonación o producido sintéticamente. El ADN puede ser monocatenario o bicatenario.

[0089] Los vectores de adenovirus útiles en la divulgación son típicamente deficientes en replicación. En estos casos, la replicación del virus se vuelve deficiente por eliminación o inactivación de regiones críticas para la replicación del virus, como la región E1. Las regiones pueden eliminarse o inactivarse sustancialmente, por ejemplo, insertando un gen de interés, tal como un gen que codifica un polipéptido antigénico (normalmente unido a un promotor) dentro de la región. En algunos casos, los vectores de la divulgación pueden contener deleciones en otras regiones, tales como las regiones E2, E3 o E4, o inserciones de genes heterólogos unidos a un promotor dentro de una o más de estas regiones. Para los adenovirus mutados en E2 y/o E4, generalmente se usan líneas celulares que complementan E2 y/o E4 para generar adenovirus recombinantes. Las mutaciones en la región E3 del adenovirus no necesitan complementarse con la línea celular, ya que no se requiere E3 para la replicación.

[0090] Una línea celular de empaquetamiento se usa típicamente para producir suficientes cantidades de vectores de adenovirus para uso en la divulgación. Una célula de empaquetamiento es una célula que comprende aquellos genes que se han eliminado o inactivado en un vector de replicación deficiente, lo que permite que el virus se replique en la célula. Las líneas celulares de empaquetamiento adecuadas incluyen, por ejemplo, PER.C6, 911,293 y E1 A549.

[0091] Como se señaló anteriormente, una amplia variedad de polipéptidos antigénicos de VIH puede expresarse en los vectores. Si es necesario, el gen heterólogo que codifica los polipéptidos antigénicos del VIH puede optimizarse por codones para asegurar la expresión adecuada en el huésped tratado (por ejemplo, humano). La optimización de codones es una tecnología ampliamente aplicada en la técnica. Normalmente, el gen heterólogo se clona en la región E1 y/o E3 del genoma adenoviral.

[0092] El gen VIH heterólogo puede estar bajo el control de (es decir, unido operativamente a) un promotor derivado de adenovirus (p. ej., el Promotor Tardío Mayor), o puede estar bajo el control de un promotor heterólogo. Ejemplos de promotores heterólogos adecuados incluyen el promotor del citomegalovirus (CMV) y el promotor del virus del sarcoma de Rous (RSV). Preferiblemente, el promotor está ubicado cadena arriba del gen heterólogo de interés dentro de un casete de expresión.

[0093] Como se señaló anteriormente, los vectores de adenovirus útiles para la divulgación pueden codificar una amplia variedad de polipéptidos antigénicos de VIH conocidos por los expertos en la técnica, incluyendo, pero no limitado a los polipéptidos antigénicos discutidos en este documento.

[0094] En un ejemplo preferido de la descripción, los vectores de adenovirus son el vector Rad26, tal como el descrito en Abbink, J Virol, 2007. 81 (9): p. 4654-63 [11].

Vectores MVA

[0095] Los vectores MVA útiles para la divulgación utilizan virus atenuados derivados del virus vaccinia Ankara modificado, que se caracteriza por la pérdida de sus capacidades para replicar reproductivamente en líneas celulares humanas. Los vectores MVA pueden expresar cualquiera de los polipéptidos antigénicos del VIH conocidos por los expertos en la técnica, incluidos, entre otros, los polipéptidos antigénicos analizados en el presente documento.

[0096] MVA ha sido generada por más de 570 pases en serie sobre fibroblastos de embrión de pollo de la cepa dérmica de vaccinia Ankara [virus Ankara de virus vaccinia corioalantoides, CVA; para revisión, véase Mayr et al. (1975), Infection 3, 6-14 [74]] que se mantuvo en el Vaccination Institute, Ankara, Turquía durante muchos años y se utilizó como base para la vacunación de seres humanos. Sin embargo, debido a las a menudo graves complicaciones posteriores a la vacunación asociadas con los virus vaccinia, hubo varios intentos de generar una vacuna contra la viruela más atenuada y segura.

[0097] Durante el período de 1960-1974, Prof. Anton Mayr tuvo éxito en la atenuación de CVA por más de 570 continuos pasajes en células CEF [74]. Se demostró en una variedad de modelos animales que el MVA resultante era avirulento [75]. Como parte del desarrollo temprano de MVA como una vacuna pre-viruela, hubo ensayos clínicos que utilizaron MVA-517 en combinación con Lister Elstree [77, 78] en sujetos con riesgo de reacciones adversas por vaccinia. En 1976, el MVA derivado de la reserva de semillas de MVA-571 (correspondiente al Paso 571) se registró en Alemania como vacuna cebadora en un programa de vacunación parenteral contra la viruela en dos pasos. Posteriormente, se usó MVA-572 en aproximadamente 120.000 individuos caucásicos, la mayoría niños entre 1 y 3 años de edad, sin efectos secundarios severos reportados, a pesar de que muchos de los sujetos estaban entre la población con alto riesgo de complicaciones asociadas con vaccinia [76]. El MVA-572 se depositó en la Colección Europea de Cultivos de Células Animales como ECACC V94012707.

[0098] Como resultado del pasaje utilizado para atenuar MVA, hay un número de diferentes cepas o aislados, dependiendo del número de pasajes realizados en células CEF. Por ejemplo, MVA-572 se usó en pequeñas dosis como vacuna previa en Alemania durante el programa de erradicación de la viruela, y MVA-575 se usó ampliamente como vacuna veterinaria. Tanto el MVA como el MVA-BN carecen de aproximadamente el 15% (31 kb de seis regiones) del genoma en comparación con el virus CVA ancestral. Las deleciones afectan a varios genes de virulencia y rango de hospedadores, así como al gen de los cuerpos de inclusión de tipo A. MVA-575 se depositó el 7 de diciembre de 2000 en la Colección Europea de Cultivos de Células Animales (ECACC) con el número de acceso V00120707. El virus CVA atenuado MVA (virus vaccinia modificado Ankara) se obtuvo mediante la propagación en serie (más de 570 pases) del CVA en fibroblastos de embriones de pollo primarios.

[0099] A pesar de que Mayr et al. demostraron durante la década de 1970 que el MVA es altamente atenuado y avirulento en humanos y mamíferos, ciertos investigadores han informado que el MVA no está completamente atenuado en líneas celulares de mamíferos y humanos ya que la replicación residual podría ocurrir en estas células [79, 80; Patente de Estados Unidos N° 5.185.146; 81]. Se asume que los resultados reportados en estas publicaciones se han obtenido con varias cepas conocidas de MVA, ya que los virus utilizados difieren esencialmente en sus propiedades, particularmente en su comportamiento de crecimiento en varias líneas celulares. Tal replicación residual es indeseable por varias razones, incluidas las preocupaciones de seguridad en relación con el uso en humanos.

[0100] Cepas de MVA que tienen perfiles de seguridad mejorados para el desarrollo de productos más seguros, tales como vacunas o productos farmacéuticos, se han desarrollado, por ejemplo, Bavarian Nordic. El MVA fue posteriormente aprobado por Bavarian Nordic y se denomina MVA-BNA. Una muestra representativa de MVA-BN se depositó el 30 de agosto de 2000 en la Colección Europea de Cultivos Celulares (ECACC) con el número de acceso V00083008. MVA-BN se describe adicionalmente en los documentos WO 02/42480 (Us 2003/0206926) y WO 03/048184 (US 2006/0159699).

[0101] "Derivados" o "variantes" de MVA se refieren a virus que exhiben esencialmente las mismas características de replicación como MVA como se describe en el presente documento, pero que presentan diferencias en una o más partes de sus genomas. Por ejemplo, MVA-BN, así como un derivado o variante de MVA-BN, no logra replicar reproductivamente in vivo en humanos y ratones, incluso en ratones severamente inmunosuprimidos. Más específicamente, MVA-BN o un derivado o variante de MVA-BN tiene preferiblemente también la capacidad de replicación reproductiva en fibroblastos de embriones de pollo (CEF), pero no tiene capacidad de replicación reproductiva en la línea celular de queratinocitos humanos HaCat [82], el línea celular de osteosarcoma humano óseo 143B (número de depósito ECACC 91112502), la línea celular de riñón embrionario humano 293 (número de depósito ECACC 85120602) y la línea celular de adenocarcinoma de cuello uterino humano HeLa (número de depósito ATCC CCL-2). Además, un derivado o variante de MVA-BN tiene una relación de amplificación de virus al menos dos veces menor, más preferiblemente tres veces menor que MVA-575 en células Hela y líneas celulares HaCaT. Las pruebas y ensayos para estas propiedades de las variantes de MVA se describen en los documentos WO 02/42480 (US 2003/0206926) y WO 03/048184 (US 2006/0159699).

[0102] El término "no es capaz de replicación reproductiva" o "sin capacidad de replicación reproductiva" es, por ejemplo, descrito en el documento WO 02/42480, que también enseña cómo obtener MVA tiene las propiedades deseadas como se ha mencionado más arriba. El término se aplica a un virus que tiene una proporción de amplificación de virus a los 4 días después de la infección de menos de 1 usando los ensayos descritos en el documento WO 02/42480 o en la patente de EE.UU. n26.761.893.

[0103] El término "no se replica reproductivamente" se refiere a un virus que tiene una relación de amplificación del virus a los 4 días después de la infección de menos de 1. Los ensayos descritos en el documento WO 02/42480 o en la Patente de Estados Unidos N° 6.761.893 son aplicables para la determinación de la tasa de amplificación del virus.

[0104] La amplificación o replicación de un virus normalmente se expresa como la proporción de virus producido a partir de una célula infectada (salida) a la cantidad originalmente utilizada para infectar la célula en primer lugar (entrada), y se denomina " relación de amplificación”. Una relación de amplificación de "1" define un estado de amplificación en donde la cantidad de virus producida a partir de las células infectadas es la misma que la cantidad utilizada inicialmente para infectar las células, lo que significa que las células infectadas son permisivas para la infección y reproducción del virus. Por el contrario, una relación de amplificación de menos de 1, es decir, una disminución en la producción en comparación con el nivel de entrada, indica una falta de replicación reproductiva y, por lo tanto, atenuación del virus.

[0105] Las ventajas de la vacuna a base de MVA incluyen su perfil de seguridad, así como la disponibilidad de la vacuna a gran escala de producción. Además, además de su eficacia, la viabilidad de la fabricación a escala industrial puede ser beneficiosa. Además, las vacunas basadas en MVA pueden administrar múltiples antígenos heterólogos y permitir la inducción simultánea de inmunidad humoral y celular.

[0106] Los vectores MVA útiles para la divulgación se pueden preparar usando métodos conocidos en la técnica, tales como los descritos en el documento WO/2002/042480, WO/2002/24224, US20110159036, US 8.197.825, etc.

[0107] En otro aspecto, las cepas virales de MVA de replicación deficiente también pueden ser adecuadas para su uso en la descripción, tales como las cepas MVA-572 y MVA-575, o cualquier otra cepa de MVA atenuada de forma similar. También puede ser adecuado un MVA mutante, tal como el virus vaccinia corioalantoide Ankara eliminado (dCVA). Un dCVA comprende los sitios de deleción del I, del II, del III, del IV, del V y del VI del genoma del MVA. Los sitios son particularmente útiles para la inserción de múltiples secuencias heterólogas. El dCVA puede replicarse reproductivamente (con una proporción de amplificación superior a 10) en una línea celular humana (como las líneas celulares humanas 293, 143B y MRC-5), lo que luego permite la optimización mediante mutaciones adicionales útiles para una estrategia de vacunación basada en virus (ver WO 2011/092029).

[0108] En un ejemplo preferido de la divulgación, el (los) vector(es) de MVA comprenden un ácido nucleico que codifica una o más proteínas antigénicas del VIH, como el antígeno de VIH mosaico. En otros casos preferidos, los vectores MVA codifican uno o más polipéptidos antigénicos del VIH que comprenden las secuencias de aminoácidos seleccionadas del grupo que consta de SEQ ID NO: 1-4, y más preferiblemente codifican cuatro polipéptidos antigénicos del VIH que tienen las secuencias de aminoácidos de s EQ ID. NO: 1, SEQ ID NO: 2, SEQ ID NO: 3 y SEQ ID NO: 4.

[0109] Las secuencias de ácido nucleico que codifican la proteína antigénica del VIH pueden ser insertadas en una o más regiones intergénicas (IGR) del MVA. En ciertos casos, el IGR se selecciona entre IGR07/08, IGR 44/45, IGR 64/65, IGR 88/89, IGR 136/137 e IGR 148/149. En ciertos casos, menos de 5, 4, 3 o 2 IGR del MVA recombinante comprenden secuencias de nucleótidos heterólogas que codifican determinantes antigénicos de un VIH, tales como un antígeno mosaico y/o un polipéptido antigénico del VIH adicional. Las secuencias de nucleótidos heterólogas se pueden insertar, adicional o alternativamente, en uno o más de los sitios de deleción de origen natural, en particular en los principales sitios de deleción I, II, III, IV, V o VI del genoma de MVA. En ciertos casos, menos de 5, 4, 3 o 2 de los sitios de deleción de origen natural del MVA recombinante comprenden secuencias de nucleótidos heterólogas que codifican determinantes antigénicos de una glicoproteína de la envoltura del VIH y/o una proteína del VIH adicional.

[0110] El número de sitios de inserción de MVA que comprenden secuencias de nucleótidos heterólogas que codifican los determinantes antigénicos de una proteína del VIH puede ser 1,2, 3, 4, 5, 6, 7, o más. En ciertos casos, las secuencias de nucleótidos heterólogas se insertan en 4, 3, 2 o menos sitios de inserción. Preferiblemente, se utilizan dos sitios de inserción. En ciertos casos, se utilizan tres sitios de inserción. Preferiblemente, el MVA recombinante comprende al menos 2, 3, 4, 5, 6 o 7 genes insertados en 2 o 3 sitios de inserción.

[0111] Los virus MVA recombinantes proporcionados en este documento pueden ser generados por métodos de rutina conocidos en la técnica. Los métodos para obtener poxvirus recombinantes o para insertar secuencias codificantes exógenas en un genoma poxviral son bien conocidos por los expertos en la técnica. Por ejemplo, los métodos para técnicas estándar de biología molecular como la clonación de ADN, aislamiento de ADN y ARN, análisis de transferencia Western, RT-PCR y técnicas de amplificación por PCR se describen en Molecular Cloning, A Laboratory Manual (2a ed.) [83], y Las técnicas para el manejo y manipulación de virus se describen en el Manual de métodos de virología [BWJ Mahy et al. (eds.), Academic Press (1996)]. De manera similar, las técnicas y el conocimiento para el manejo, manipulación e ingeniería genética de MVA se describen en Molecular Virology: A Practical Approach [AJ Davison & RM Elliott (Eds.), The Practical Approach Series, IRL Press en Oxford University Press, Oxford, Reino Unido (1993) (véase, por ejemplo, Capítulo 9: Expresión de genes por vectores del virus de Vaccinia)] y Current Protocols in Molecular Biology [John Wiley & Son, Inc. (1998) (véase, por ejemplo, Capítulo 16, Sección IV: Expression of proteins in mammalian cells using vaccinia viral vector)].

[0112] Para la generación de los diversos MVA recombinantes descritos en este documento, los diferentes métodos pueden ser aplicables. La secuencia de ADN que se va a insertar en el virus se puede colocar en una construcción de plásmido de E. coli en donde se ha insertado a Dn homólogo a una sección de ADN del MVA. Por separado, la secuencia de ADN que se va a insertar se puede ligar a un promotor. El enlace de gen promotor se puede colocar en la construcción de plásmido de modo que el enlace de gen promotor esté flanqueado en ambos extremos por ADN homólogo a una secuencia de ADN que flanquea una región de ADN de MVA que contiene un locus no esencial. La construcción de plásmido resultante puede amplificarse mediante propagación dentro de bacterias E. coli y aislarse. El plásmido aislado que contiene la secuencia del gen de ADN que se va a insertar se puede transfectar en un cultivo celular, por ejemplo, de fibroblastos de embrión de pollo (CEF), al mismo tiempo que el cultivo se infecta con MVA. La recombinación entre el ADN de MVA homólogo en el plásmido y el genoma viral, respectivamente, puede generar un MVA modificado por la presencia de secuencias de ADN ajenas.

[0113] De acuerdo con un ejemplo preferente, una célula de un cultivo celular adecuado tal como, por ejemplo, células CEF, puede estar infectada con un virus de la viruela. Posteriormente, la célula infectada puede transfectarse con un primer vector plásmido que comprende un gen o genes extraños o heterólogos, preferiblemente bajo el control transcripcional de un elemento de control de la expresión de poxvirus. Como se explicó anteriormente, el vector plasmídico también comprende secuencias capaces de dirigir la inserción de la secuencia exógena en una parte seleccionada del genoma poxviral. Opcionalmente, el vector plasmídico también contiene un casete que comprende un marcador y/o gen de selección unido operativamente a un promotor poxviral. Los genes marcadores o de selección adecuados son, por ejemplo, los genes que codifican la proteína verde fluorescente, p-galactosidasa, neomicina-fosforribosiltransferasa u otros marcadores. El uso de casetes de selección o marcadores simplifica la identificación y el aislamiento del poxvirus recombinante generado. Sin embargo, también se puede identificar un poxvirus recombinante mediante tecnología de PCR. Posteriormente, se puede infectar una célula adicional con el poxvirus recombinante obtenido como se describió anteriormente y transfectar con un segundo vector que comprende un segundo gen o genes extraños o heterólogos. En caso de que este gen se introduzca en un sitio de inserción diferente del genoma poxviral, el segundo vector también difiere en las secuencias homólogas al poxvirus que dirigen la integración del segundo gen o genes extraños en el genoma del poxvirus. Una vez que se ha producido la recombinación homóloga, se puede aislar el virus recombinante que comprende dos o más genes extraños o heterólogos. Para introducir genes extraños adicionales en el virus recombinante, los pasos de infección y transfección pueden repetirse usando el virus recombinante aislado en pasos previos para la infección y usando un vector adicional que comprenda un gen o genes extraños adicionales para la transfección.

[0114] Alternativamente, los pasos de la infección y transfección como se describe anteriormente son intercambiables, es decir, una adecuada célula puede en primer lugar transfectar por el vector plásmido que comprende el gen extraño y, a continuación, se infectaron con el virus de la viruela. Como alternativa adicional, también es posible introducir cada gen extraño en diferentes virus, coinfectar una célula con todos los virus recombinantes obtenidos y cribar un recombinante que incluya todos los genes extraños. Una tercera alternativa es la ligación del genoma del ADN y las secuencias extrañas in vitro y la reconstitución del genoma del ADN del virus vaccinia recombinado usando un virus auxiliar. Una cuarta alternativa es la recombinación homóloga en E. coli u otra especie bacteriana entre un genoma del virus vaccinia clonado como un cromosoma artificial bacteriano (BAC) y una secuencia extraña lineal flanqueada por secuencias de ADN homólogas a las secuencias que flanquean el sitio de integración deseado en el genoma de virus vaccinia.

[0115] El gen heterólogo VIH, por ejemplo, el ácido nucleico que codifica uno o más polipéptidos antigénicos de VIH, puede estar bajo el control de (es decir, operativamente unido a) uno o más promotores de poxvirus. En ciertos casos, el promotor del poxvirus es un promotor Pr7.5, un promotor híbrido temprano/tardío, o un promotor PrS, un promotor PrS5E, un promotor temprano o tardío sintético o natural, o un promotor ATI del virus de la viruela vacuna.

[0116] En un ejemplo preferido de la descripción, los vectores MVA expresan antígenos polivalentes mosaico Env/Gag/Pol, tales como los descritos en Barouch et al, Nat Med 2010, 16: 319-323 [54]; Barouch y col., Cell 155: 1 - 9, 2013 [65]. Según los casos de la divulgación, los vectores MVA pueden expresar cualquiera de los polipéptidos antigénicos descritos en el presente documento, incluidos, entre otros, antígenos mosaico del VIH, tales como antígenos Gag-Pol-Env de VIH mosaico.

Composiciones inmunogénicas

[0117] Como se usa en el presente documento, "una cantidad inmunogénicamente eficaz" o "cantidad inmunológicamente eficaz" significa una cantidad de una composición suficiente para inducir un efecto inmunológico o una respuesta inmunitaria deseados en un sujeto que lo necesite. En un caso, una cantidad inmunogénicamente eficaz significa una cantidad suficiente para inducir una respuesta inmunitaria en un sujeto que la necesite. En otro caso, una cantidad inmunogénicamente eficaz significa una cantidad suficiente para producir inmunidad en un sujeto que la necesite, por ejemplo, proporcionar un efecto protector contra una enfermedad tal como una infección viral. Una cantidad inmunogénicamente eficaz puede variar dependiendo de una variedad de factores, tales como la condición física del sujeto, edad, peso, salud, etc.; la aplicación particular, ya sea induciendo una respuesta inmune o proporcionando inmunidad protectora; el vector recombinante específico administrado; el inmunógeno codificado por el vector recombinante administrado; el polipéptido antigénico específico administrado; y la enfermedad particular, por ejemplo, infección viral, para la que se desea inmunidad. Una cantidad inmunogénicamente eficaz puede ser determinada fácilmente por un experto en la técnica a la vista de la presente divulgación.

[0118] Como orientación general, una cantidad inmunogénicamente eficaz cuando se utiliza con referencia a un vector viral recombinante puede variar de aproximadamente 108 partículas virales a aproximadamente 1012 partículas virales, por EJEMPLO 108, 109, 1010, 1011, o 1012 partículas virales. Se puede administrar una cantidad inmunogénicamente eficaz en una sola composición, o en múltiples composiciones, tales como 1,2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9 o 10 composiciones (por ejemplo, tabletas, cápsulas o inyectables), en donde la administración de múltiples cápsulas o inyecciones proporciona colectivamente a un sujeto la cantidad inmunogénicamente eficaz. En general, cuando se usa con referencia a un polipéptido, tal como un polipéptido antigénico aislado, una cantidad inmunogénicamente eficaz puede variar entre, por ejemplo, aproximadamente 0,3 a aproximadamente 3000 microgramos (mg), por ejemplo, 1-1000 mg, por ejemplo, 10­ 500 mg, por ejemplo, aproximadamente 50, 100, 150, 200, 250, 300, 350, 400, 450 o 500 mg. También es posible administrar una cantidad inmunogénicamente eficaz a un sujeto, y posteriormente administrar otra dosis de una cantidad inmunogénicamente eficaz al mismo sujeto, en un régimen denominado de cebado-refuerzo. Este concepto general de un régimen de refuerzo primario es bien conocido por los expertos en el campo de las vacunas. Opcionalmente, se pueden añadir al régimen otras administraciones de refuerzo, según sea necesario.

[0119] Las composiciones inmunogénicas son composiciones que comprenden una cantidad inmunogénicamente eficaz de adenovirus o vectores MVA purificados o parcialmente purificados para su uso en la divulgación. Dichas composiciones se pueden formular como una vacuna (también denominada "composición inmunogénica") de acuerdo con métodos bien conocidos en la técnica. Tales composiciones pueden incluir adyuvantes para mejorar las respuestas inmunes. Las proporciones óptimas de cada componente en la formulación se pueden determinar mediante técnicas bien conocidas por los expertos en la técnica en vista de la presente descripción.

[0120] La preparación y uso de composiciones inmunogénicas son bien conocidos por los expertos normales en la técnica. Las composiciones farmacéuticas líquidas generalmente incluyen un vehículo líquido tal como agua, petróleo, aceites animales o vegetales, aceite mineral o aceite sintético. También se pueden incluir solución salina fisiológica, dextrosa u otra solución de sacárido o glicoles tales como etilenglicol, propilenglicol o polietilenglicol.

[0121] Las composiciones de la descripción pueden comprender otros antígenos VIH-1 o las inmunizaciones de cebado o impulso pueden comprender otros antígenos. Los otros antígenos usados en combinación con los vectores de adenovirus de la divulgación no son críticos para la divulgación y pueden ser, por ejemplo, antígenos de VIH-1 y ácidos nucleicos que los expresan.

[0122] Las composiciones inmunogénicas útiles en la descripción pueden comprender adyuvantes. Los adyuvantes adecuados para la coadministración de acuerdo con la divulgación deben ser potencialmente seguros, bien tolerados y efectivos en personas, incluidas QS-21, Detox-PC, MPL-SE, MoGM-CSF, TiterMax-G, CRL-1005, GERBU, TERamida, PSC97B, Adjumer, PG-026, GSK-I, GcMAF, B-aletina, MPC-026, Adjuvax, CpG ODN, Betafectin, sales de aluminio (por ejemplo, AdjuPhos), Adjuplex y MF59.

[0123] Otros adyuvantes que se pueden administrar incluyen lectinas, factores de crecimiento, citoquinas y linfoquinas tales como interferón alfa, interferón gamma, factor de crecimiento derivado de plaquetas (PDGF), factor estimulante de colonias de granulocitos (G-CSF), factor estimulante de colonias de granulocitos macrófagos (gMCSF), factor de necrosis tumoral (TNF), factor de crecimiento epidérmico (EGF), IL-I, IL-2, IL-4, IL-6, IL-8, IL-IO e IL-12 o ácidos nucleicos codificantes por lo tanto.

[0124] Las composiciones de la divulgación pueden comprender un excipiente farmacéuticamente aceptable, portador, tampón, estabilizador u otros materiales bien conocidos por los expertos en la técnica. Dichos materiales no deben ser tóxicos y no deben interferir con la eficacia del ingrediente activo. La naturaleza precisa del vehículo u otro material puede depender de la vía de administración, por ejemplo, intramuscular, subcutánea, oral, intravenosa, cutánea, intramucosa (por ejemplo, intestinal), intranasal o intraperitoneal.

[0125] La capacidad de inducir o estimular una respuesta inmune anti-VIH después de la administración en un organismo animal o humano se puede evaluar, ya sea in vitro o in vivo usando una diversidad de ensayos que son estándar en la técnica. Para obtener una descripción general de las técnicas disponibles para evaluar el inicio y la activación de una respuesta inmune, véase, por ejemplo, Coligan et al. (1992 y 1994, Current Protocols in Immunology; ed. J Wiley & Sons Inc, Instituto Nacional de Salud). La medición de inmunidad celular se puede realizar midiendo los perfiles de citocinas secretados por las células efectoras activadas, incluidas las derivadas de las células T CD4+ y CD8+ (p. ej., cuantificación de células productoras de IL-10 o IFN gamma mediante ELISPOT), mediante la determinación del estado de activación de células efectoras inmunes (por ejemplo, ensayos de proliferación de células T mediante una captación clásica de [3H] timidina), mediante el análisis de linfocitos T específicos de antígeno en un sujeto sensibilizado (por ejemplo, lisis específica de péptidos en un ensayo de citotoxicidad, etc.).

[0126] La capacidad de estimular una respuesta celular y/o una respuesta humoral puede ser determinada por la unión de anticuerpos y/o competición en la unión (véase, por ejemplo Harlow, 1989, Antibodies, Cold Spring Harbor Press). Por ejemplo, los títulos de anticuerpos producidos en respuesta a la administración de una composición que proporciona un inmunógeno pueden medirse mediante un ensayo inmunoabsorbente ligado a enzimas (ELISA). Las respuestas inmunes también se pueden medir mediante un ensayo de anticuerpos neutralizantes, donde la neutralización de un virus se define como la pérdida de infectividad a través de la reacción/inhibición/neutralización del virus con un anticuerpo específico. La respuesta inmune se puede medir además mediante el ensayo de fagocitosis celular dependiente de anticuerpos (ADCP).

[0127] De acuerdo con los casos de la descripción, tras la administración a un sujeto, un vector de expresión, tal como un vector de adenovirus recombinante o vector MVA recombinante, expresa un polipéptido inmunogénico. Cualquiera de los polipéptidos antigénicos descritos en el presente documento puede codificarse mediante un vector de expresión y administrarse a un sujeto en un método de la divulgación. El polipéptido inmunogénico expresado se presenta al sistema inmunológico del sujeto, induciendo así la respuesta requerida para producir inmunidad o inducir una respuesta inmunitaria para tratar o prevenir una enfermedad o infección. Por ejemplo, la respuesta puede ser la producción de anticuerpos específicos del polipéptido inmunogénico.

[0128] Preferiblemente, tras la administración a un sujeto, un vector de expresión expresa un antígeno de Gag-Pol-Env de VIH mosaico. La presentación de un antígeno Gag-Pol-Env de VIH mosaico de acuerdo con la divulgación al sistema inmunológico de un sujeto puede inducir la producción de anticuerpos específicos para los productos génicos gag, p o ly/o env del VIH, dependiendo de la composición de la secuencia del antígeno mosaico del VIH expresado.

Combinación de vacuna

[0129] Un aspecto general de la descripción se refiere a una combinación de vacuna para inducir una respuesta inmune contra un virus de la inmunodeficiencia humana (VIH) en un sujeto en necesidad del mismo, que comprende:

(i) una primera composición que comprende una cantidad inmunogénicamente eficaz de uno o más vectores de expresión que codifican uno o más polipéptidos antigénicos del VIH y un vehículo farmacéuticamente aceptable;

(ii) una segunda composición que comprende una cantidad inmunogénicamente eficaz de un polipéptido antigénico aislado y un vehículo farmacéuticamente aceptable; y

(iii) una cantidad inmunogénicamente eficaz de uno o más vectores de expresión adicionales que codifican uno o más polipéptidos antigénicos adicionales,

en donde una de la primera y la segunda composición es para cebar la inmunización y la otra composición es para reforzar la inmunización, y la cantidad inmunogénicamente eficaz de los vectores de expresión adicionales está presente en la segunda composición o en una tercera composición para administrar junto con la segunda composición para cebar o reforzar la inmunización.

[0130] En un ejemplo preferido, el polipéptido antigénico aislado comprende un VIH sobre glicoproteína. Los ejemplos de la glicoproteína de la envoltura incluyen cualquiera de las glicoproteínas de la envoltura del VIH descritas anteriormente, incluidas, entre otras, gp160, gp140, gp120 o gp41 de cualquier clado del VIH. Preferiblemente, el polipéptido antigénico aislado comprende un trímero estabilizado de una proteína de la envoltura del VIH, tal como un trímero estabilizado de gp140 de VIH, particularmente un trímero estabilizado de clado C de gp140 de VIH, tal como el que comprende la secuencia de aminoácidos de SEQ ID NO: 5. En otro caso de la divulgación, la glicoproteína de la envoltura del VIH es una glicoproteína de la envoltura del VIH mosaico, tal como una proteína gp140 del VIH mosaico, tal como la que comprende la secuencia de aminoácidos de SEQ ID NO: 6.

[0131] En otro ejemplo preferido, el vector de expresión o el vector de expresión adicional es un vector de adenovirus o un vector de MVA. Preferiblemente, se utilizan vectores de diferente origen para cebar y potenciar la inmunización. Por ejemplo, cuando se usa un vector de adenovirus para la inmunización de cebado, se usa un vector MVA para la inmunización de refuerzo. Asimismo, cuando se usa un vector MVA para la inmunización de cebado, se usa un vector de adenovirus para la inmunización de refuerzo. En un caso preferido de la divulgación, se usan uno o más vectores de adenovirus, más preferiblemente vectores rAd26, para la inmunización de cebado, y se usan uno o más vectores MVA, junto con el polipéptido antigénico del VIH aislado, tal como una proteína de la envoltura del VIH para potenciar la inmunización.

[0132] En otros casos de la descripción, uno o más vectores de adenovirus, preferiblemente vectores de Rad26, se utilizan para la inmunización de cebado, y uno o más vectores de adenovirus, preferiblemente vectores de Rad26, junto con un polipéptido antigénico de VIH aislado, tal como una proteína de la envoltura de VIH, preferiblemente una proteína gp140 trimérica estabilizada, se usa para la inmunización de refuerzo. Los vectores de adenovirus usados para estimular la inmunización pueden codificar las mismas proteínas antigénicas que las codificadas por los vectores de adenovirus usados para la inmunización de cebado.

[0133] En otro caso más de la divulgación, un polipéptido antigénico de VIH aislado y uno o más vectores de adenovirus, preferiblemente vectores de Rad26, se usan para cebar la inmunización, y se aisló un polipéptido antigénico de VIH y uno o más vectores de adenovirus, preferiblemente vectores de Rad26, se utilizan para potenciar la inmunización.

[0134] De acuerdo a los casos de la descripción, cualquiera de los polipéptidos antigénicos de VIH analizados anteriormente puede ser codificado por el (los) vector(es) de expresión y el vector de expresión adicional. En un caso preferido, el polipéptido antigénico es un antígeno mosaico del VIH, más preferiblemente, un antígeno Gag-Pol-Env de VIH mosaico. Ejemplos de antígenos de Gag-Pol-Env de VIH mosaico incluyen, pero no se limitan a antígenos mosaico que comprende las secuencias de aminoácidos de SEQ ID NOs: 1 a 4.

[0135] En un caso de la divulgación, la primera composición comprende vectores Rad26 de codificación de uno o más polipéptidos antigénicos del VIH mosaico, tales como los antígenos Gag-Pol-Env del VIH mosaico; la segunda composición comprende una proteína de la envoltura del VIH aislada, tal como un trímero estabilizado de gp140 del VIH o una proteína de la envoltura del VIH mosaico; y los vectores de expresión adicionales son vectores MVA que codifican uno o más polipéptidos antigénicos del VIH mosaico, tales como los antígenos Gag-Pol-Env del VIH mosaico.

[0136] En un ejemplo preferido de la descripción, la primera composición comprende vectores Rad26 que codifican una o más proteínas que tienen las secuencias de aminoácidos de SEQ ID NOs: 1 a 4; la segunda composición comprende un polipéptido antigénico aislado que tiene la secuencia de aminoácidos de SEQ ID NO: 5 o SEQ ID NO: 6; y los vectores de expresión adicionales son vectores MVA que codifican una o más proteínas que tienen las secuencias de aminoácidos de las SEQ ID NO: 1-4.

[0137] En un ejemplo particularmente preferido de la divulgación, la primera composición comprende vectores Rad26 que codifican tres proteínas del VIH de mosaico que tienen las secuencias de aminoácidos de SEQ ID NO: 1, SEQ ID NO: 3 y SEQ ID NO: 4, respectivamente; la segunda composición comprende un trímero estabilizado aislado de gp140 de VIH que tiene la secuencia de aminoácidos de SEQ ID NO: 5; y los vectores MVA están presentes en una tercera composición, y codifican cuatro proteínas antigénicas del VIH mosaico que tienen las secuencias de aminoácidos de las SEQ ID NO: 1 a 4.

[0138] Según los casos de la divulgación, la primera composición puede comprender un vector de expresión o más de un vector de expresión. En un caso, la primera composición comprende un vector de expresión, tal como un vector de adenovirus, y más preferiblemente un vector rAd26. En otro caso, la primera composición comprende más de un vector de expresión, como uno, dos, tres o cuatro, etc. vectores de expresión, que son preferiblemente vectores de adenovirus, como los vectores rAd26. El uno o más vectores de expresión pueden expresar los mismos o diferentes polipéptidos antigénicos del VIH. Cada uno de los vectores de expresión puede expresar una secuencia polipeptídica antigénica del VIH o más de una secuencia polipeptídica antigénica del VIH. Como ejemplo ilustrativo y no limitante, la primera composición puede comprender tres vectores rAd26, cada uno de los cuales expresa un polipéptido antigénico del VIH diferente, preferiblemente seleccionado del grupo que consta de SEQ ID NO: 1-4, y más preferiblemente SEQ ID NO: 1, 3, y 4.

[0139] De acuerdo con los casos de la descripción, los uno o más vectores de expresión adicionales pueden ser un vector de expresión, o más de un vector de expresión, tal como dos, tres, cuatro o más vectores de expresión. El uno o más vectores de expresión adicionales pueden expresar polipéptidos antigénicos iguales o diferentes. Cada uno de los vectores de expresión adicionales puede expresar una secuencia polipeptídica antigénica o múltiples secuencias polipeptídicas antigénicas. Como ejemplo ilustrativo y no limitativo, se utilizan dos vectores de expresión adicionales, preferiblemente vectores MVA, con cada vector MVA codificando una secuencia de antígeno de VIH mosaico diferente, como secuencias de antígeno de VIH mosaico Gag-Pol-Env seleccionadas del grupo que consiste en SEQ ID NOs: 1-4. Preferiblemente, en tales casos de la divulgación, un vector MVA codifica polipéptidos antigénicos del VIH que comprenden las SEQ ID NO: 1 y 3, y el otro vector MVA codifica polipéptidos antigénicos del VIH que comprenden las SEQ ID NO: 2 y 4.

La combinación de vacunas según los casos de la divulgación es eficaz para inducir una respuesta inmunitaria contra uno o varios clados del VIH.

Método para inducir inmunidad protectora de la infección contra VIH

[0140] También se describe un método para cebar y potenciar una respuesta inmunitaria a uno o más clados de VIH en un sujeto en necesidad del mismo usando uno o más vectores de expresión en combinación con un polipéptido antigénico aislado.

[0141] De acuerdo con un ejemplo general de la divulgación, un método para inducir una respuesta inmune contra un virus de la inmunodeficiencia humana (VIH) en un sujeto en necesidad de la misma comprende:

(i) administrar al sujeto una primera composición que comprende una cantidad inmunogénicamente eficaz de uno o más vectores de expresión que codifican uno o más polipéptidos antigénicos del VIH y un portador farmacéuticamente aceptable;

(ii) administrar al sujeto una segunda composición que comprende una cantidad inmunogénicamente eficaz de un polipéptido antigénico aislado y un vehículo farmacéuticamente aceptable;

(iii) administrar al sujeto una cantidad inmunogénicamente eficaz de uno o más vectores de expresión adicionales que codifican uno o más polipéptidos antigénicos del VIH adicionales,

en donde los pasos (a) y (b) se llevan a cabo en cualquier orden, con uno de los pasos para cebar la inmunización y el otro para potenciar la inmunización, y la cantidad inmunogénicamente eficaz del uno o más vectores de expresión adicionales está presente en la segunda composición o en una tercera composición administrada junto con la segunda composición para la sensibilización o la inmunización de refuerzo.

[0142] Cualquiera de las combinaciones de vacuna de acuerdo a los casos de la descripción se pueden utilizar en el presente método.

[0143] De acuerdo a los casos de la descripción, "inducir una respuesta inmune" cuando se usa con referencia a los métodos descritos en el presente documento abarca proporcionar inmunidad protectora y/o vacunar a un sujeto contra una infección, tal como una infección por VIH, para fines profilácticos, como además de provocar una respuesta inmunitaria deseada o eficaz en un sujeto que la necesite contra una infección, tal como una infección por VIH, con fines terapéuticos. Preferiblemente, los métodos de la divulgación son para fines profilácticos, como para proporcionar inmunidad protectora.

[0144] Los casos de polipéptidos antigénicos aislados, vectores de expresión, vectores de expresión adicionales, polipéptidos antigénicos codificados por los vectores de expresión, etc. que pueden usarse en los métodos descritos se discuten en detalle anteriormente y en los ejemplos ilustrativos a continuación.

[0145] En un caso de los métodos descritos, uno o más vectores de adenovirus que codifican uno o más polipéptidos antigénicos de VIH se usan para cebar la respuesta inmune. Se pueden usar uno o más polipéptidos antigénicos de VIH aislados junto con uno o más vectores de adenovirus para la inmunización de cebado. La inmunización de cebado se puede administrar múltiples veces, por ejemplo, la administración de cebado inicial en el tiempo 0, seguida de otra administración de cebado aproximadamente 10-14 semanas después de la administración de cebado inicial. Se utilizan uno o más polipéptidos antigénicos de VIH aislados junto con uno o más adenovirus o vectores MVA adicionales que codifican uno o más polipéptidos antigénicos de VIH adicionales para potenciar la respuesta inmune. La inmunización de refuerzo también se puede administrar varias veces, por ejemplo, primero aproximadamente 22-26 semanas después de la administración de sensibilización inicial, seguida de otra administración de refuerzo aproximadamente 46-50 semanas después de la administración de sensibilización inicial. Se monitoriza la respuesta inmune inducida por la inmunización.

[0146] Ejemplos de los métodos descritos también contemplan regímenes de estimulación-refuerzo más cortos, lo que significa que la inmunización de refuerzo final se administra aproximadamente 22-26 semanas después de la administración de sensibilización inicial. La inmunización de sensibilización se puede administrar en la semana 0. La inmunización de refuerzo se puede administrar varias veces, por ejemplo, primero aproximadamente a las 7-9 semanas o 11-13 semanas después de la administración de sensibilización inicial, seguida de otra administración de refuerzo aproximadamente a las 22-26 semanas. semanas después de la administración de cebado inicial. En ciertos casos, uno o más polipéptidos antigénicos de VIH aislados se administran junto con uno o más vectores de adenovirus para la inmunización de cebado.

[0147] Los expertos en la técnica apreciarán fácilmente que el régimen para las administraciones de sensibilización y refuerzo se puede ajustar basándose en las respuestas inmunitarias medidas después de las administraciones. Por ejemplo, las composiciones de refuerzo se administran generalmente semanas o meses después de la administración de la composición de imprimación, por ejemplo, aproximadamente 2-3 semanas o 4 semanas, 8 semanas, 16 semanas, 20 semanas, 24 semanas o 28 semanas, o 30 semanas o 32 semanas o uno o dos años después de la administración de la composición de cebado.

[0148] En un ejemplo preferido de la descripción, los vectores de adenovirus utilizados en los métodos descritos en este documento incluyen un vector de Rad26. En un caso ejemplar, se usa un vector rAd26 para cebar la respuesta inmune, y se usa un vector MVA junto con un polipéptido antigénico aislado para estimular la respuesta inmune, o viceversa.

[0149] En una o más instancias del método descrito, una pluralidad de vectores Rad26 se utilizan para cebar la respuesta inmune, y una pluralidad de proteínas antigénicas aisladas, opcionalmente junto con una pluralidad de vectores de MVA, se utiliza para estimular la respuesta inmunitaria, o viceversa.

[0150] En un ejemplo preferido de acuerdo con el método de la presente memoria, una pluralidad de vectores Rad26 se usan para el cebado de la inmunización, seguido por una inmunización de refuerzo con una pluralidad de vectores MVA y un polipéptido antigénico aislado. Preferiblemente, la inmunización de refuerzo se administra 10 a 36 semanas después del último cebado, más preferiblemente 12 a 24 semanas después del cebado.

[0151] Los antígenos en las respectivas composiciones de cebado e impulso (sin embargo, se usan muchas composiciones de impulso) no necesita ser idénticos, pero deben compartir determinantes antigénicos o ser sustancialmente similares entre sí.

[0152] La administración de las composiciones inmunogénicas que comprenden los vectores de expresión y/o polipéptidos antigénicos es típicamente intramuscular o subcutánea. Sin embargo, también se pueden contemplar otros modos de administración tales como intravenoso, cutáneo, intradérmico o nasal. La administración intramuscular de las composiciones inmunogénicas se puede lograr usando una aguja para inyectar una suspensión de los vectores de expresión, por ejemplo, vectores de adenovirus y/o MVA, y/o polipéptidos antigénicos. Una alternativa es el uso de un dispositivo de inyección sin aguja para administrar la composición (usando, por ejemplo, Biojector™) o un polvo liofilizado que contiene la vacuna.

[0153] Para la inyección intravenosa, cutánea o subcutánea, o inyección en el sitio de la aflicción, el vector será en la forma de una solución acuosa parenteralmente aceptable que está libre de pirógenos y tiene pH, isotonicidad y estabilidad. Asimismo, el polipéptido antigénico aislado estará en forma de una solución parenteralmente aceptable que tenga un pH, isotonicidad y estabilidad adecuados. Los expertos en la técnica son capaces de preparar soluciones adecuadas usando, por ejemplo, vehículos isotónicos tales como inyección de cloruro de sodio, inyección de Ringer, inyección de lactato de Ringer. Se pueden incluir conservantes, estabilizadores, tampones, antioxidantes y/u otros aditivos, según se requiera. También se puede emplear una formulación de liberación lenta.

[0154] Típicamente, la administración de las composiciones de vacuna de acuerdo con los casos de la descripción tendrá un objetivo profiláctico de generar una respuesta inmune contra un antígeno de VIH antes de la infección o el desarrollo de los síntomas. Las enfermedades y trastornos que pueden tratarse o prevenirse de acuerdo con la divulgación incluyen aquellos en donde una respuesta inmune puede desempeñar un papel protector o terapéutico. En otros casos, los vectores de expresión, por ejemplo, vectores de adenovirus y/o MVA, y/o polipéptidos antigénicos pueden administrarse para profilácticos posteriores a la exposición.

[0155] Las composiciones inmunogénicas que contienen los vectores de expresión, por ejemplo, vectores de adenovirus y/o vectores de MVA, y polipéptidos antigénicos se administran a un sujeto, que da lugar a una respuesta inmune anti-VIH en el sujeto. Una cantidad de una composición suficiente para inducir una respuesta inmunitaria detectable se define como una "dosis inmunogénicamente eficaz”. Como se muestra en los ejemplos siguientes, las composiciones inmunogénicas de la divulgación inducen una respuesta inmunitaria humoral así como mediada por células. En un caso típico de la divulgación, la respuesta inmune es una respuesta inmune protectora.

[0156] La cantidad real administrada, y la velocidad y curso del tiempo de administración, dependerá de la naturaleza y gravedad de lo que está siendo tratado. La prescripción del tratamiento, por ejemplo, decisiones sobre la dosis, etc., es responsabilidad de los médicos generales y otros médicos, o en un contexto veterinario, un veterinario, y generalmente tiene en cuenta el trastorno a tratar, la condición del paciente individual, el lugar del parto, el método de administración y otros factores conocidos por los médicos. Ejemplos de las técnicas y protocolos mencionados anteriormente se pueden encontrar en Remington Pharmaceutical Sciences, edición 16a, Osol, A. ed., 1980.

[0157] Después de la producción de vectores de adenovirus y MVA y la formulación opcional de tales partículas en composiciones, los vectores pueden administrarse a un individuo, particularmente a un ser humano o a otro primate. La administración puede ser a seres humanos u otro mamífero, por ejemplo, ratón, rata, hámster, cobaya, conejo, oveja, cabra, cerdo, caballo, vaca, burro, mono, perro o gato. La administración a un mamífero no humano no necesita ser con un propósito terapéutico, pero puede ser para uso en un contexto experimental, por ejemplo, en la investigación de mecanismos de respuestas inmunes a la proteína gp140 o los antígenos expresados por los vectores adenovirus o MVA.

[0158] En un régimen ejemplar, se administra el adenovirus o vector MVA (por ejemplo, por vía intramuscular) en el intervalo de aproximadamente 100 |ul a aproximadamente 10 ml de solución salina que contiene concentraciones de desde alrededor de 104 a 1012 partículas de virus/ml. Normalmente, el vector de adenovirus o MVA se administra en una cantidad de aproximadamente 109 a aproximadamente 1012 partículas virales (vp) a un sujeto humano durante una administración, más típicamente de aproximadamente 1010 a aproximadamente 1012 vp. La vacunación inicial va seguida de un refuerzo como se describe anteriormente. El polipéptido antigénico de VIH aislado se puede administrar, por ejemplo, en el intervalo de aproximadamente 0,001 a 30 mg/kg de peso corporal. El experto en la materia apreciará que ciertos factores pueden influir en la dosis requerida para tratar eficazmente a un sujeto, que incluyen, entre otros, la gravedad de la enfermedad o trastorno, tratamientos previos, la salud general y/o la edad del sujeto y otras enfermedades presentes.

[0159] La composición puede, si se desea, presentarse en un kit, envase o dispensador, que puede contener una o más formas de dosificación de unidad que contienen el ingrediente activo. El kit, por ejemplo, puede comprender una hoja de metal o plástico, como un envase blíster. El kit, paquete o dispensador puede ir acompañado de instrucciones de administración.

[0160] Las composiciones de la divulgación se pueden administrar solas o en combinación con otros tratamientos, ya sea simultánea o secuencialmente dependiendo de la condición a ser tratada, y otros factores que pueden afectar al tratamiento.

[0161] Los siguientes ejemplos de la descripción son para ilustrar adicionalmente la naturaleza de la descripción. El alcance de la invención se determinará mediante las reivindicaciones adjuntas.

EJEMPLOS

EJEMPLO 1. Estudio de regímenes de vacuna contra el VIH en primates no humanos.

[0162] Un estudio animal se realizó para identificar un régimen de vacuna multivalente de VIH-1 para el continuo desarrollo avanzado. El estudio probó un programa de vacunación extendido utilizando dos inmunizaciones de refuerzo (a las 0 semanas y 12 semanas) y una primera inmunización de refuerzo (a las 24 semanas). Se administró una segunda inmunización de refuerzo en la semana 52. En particular, el estudio probó el impacto de usar una combinación de un vector de adenovirus o MVA con una glicoproteína de envoltura en combinaciones de vacunas heterólogas. Las respuestas inmunológicas humorales y celulares se probaron en primates no humanos vacunados (también denominados "NHP").

Vacunación y diseño experimental

[0163] Los monos rhesus (Macaca mulatta) (NHPs) fueron vacunados con cuatro plataformas de vacuna diferentes con 12 animales por grupo (Grupos II-V), además de dos grupos de control (Grupos I y VI), también con 12 animales cada uno. El primer grupo de control (Grupo I) recibió vacunas cebadoras y de refuerzo de los vectores Ad26 que expresan el EnV1 del VIH-1 mosaico (SEQ ID NO: 1), GagPol1 mosaico (SEQ iD NO 3) y GagPol2 mosaico (SEQ iD NO: 4) genes sin ninguna proteína antigénica del VIH aislada. Los vectores Ad26 se denominan "Ad26.meses1 Env, Ad26.meses1 Gag-Pol y Ad26.meses2Gag-Pol, respectivamente, y se denominan colectivamente "Ad26meses”. El segundo grupo de control (Grupo VI) recibió solo placebos de vacunas de cebador y refuerzo ("simulacros").

[0164] Todos los grupos, excepto el grupo VI, recibieron dos vacunas de cebadores con Ad26meses en las semanas 0 y 12, seguida de una primera vacuna de refuerzo a las 24 semanas. una vacuna de refuerzo posterior se administró a las 52 semanas.

[0165] En particular, el Grupo II recibió dos vacunas cebadoras de Ad26meses, seguidas de dos vacunas de refuerzo con 250 pg de proteína trimérica de Env gp140 de clado C (SEQ ID NO: 5) dosificada con el adyuvante de fosfato de aluminio (en lo sucesivo denominado "producto farmacológico gp140" o "gp140 DP"). El grupo III recibió dos vacunas cebadoras de Ad26meses, seguidas de dos vacunas de refuerzo con Ad26meses coadministradas y gp140 DP. El grupo IV recibió dos vacunas cebadoras de Ad26meses, seguidas de dos vacunas de refuerzo con una composición que contenía dos vectores MVA diferentes, con un MV Un vector que expresa un gen EnV1 mosaico (SEQ ID NO: 1) y un gen GagPol1 mosaico (SEQ ID NO: 3), y el otro vector MVA que expresa un gen EnV2 mosaico (SEQ ID NO: 2) y un gen GagPol2 mosaico (SEQ ID NO: 4), estando los genes en ubicaciones separadas en los vectores. Los vectores MVA se denominan "MVA.meses1 Env/Gag-Pol" y "MVA.meses2Env/Gag-Pol", y se denominan colectivamente "MVAmeses". El grupo V recibió dos vacunas cebadoras de Ad26meses, seguidas de dos vacunas de refuerzo con MVAmeses codificado y gp140 DP. Los regímenes de vacunas probados en NHP se resumen en la Tabla 1A a continuación.

Tabla 1A: Regímenes de vacunas probados en NHP.

[0166] Los siguientes experimentos de ensayo de núcleo inicial, incluyendo ensayos de anticuerpos de unión de ELISA, ensayos de fagocitosis celular dependiente de anticuerpos (ADCP), y ensayos de ELISPOT se realizaron en muestras tomadas de los NHPs tratados de acuerdo con los regímenes descritos en la Tabla 1A a las 28 semanas y/o 54/56 semanas después de la administración inicial de la vacuna de cebador. Un experimento de exposición de virus de inmunodeficiencia simia/humana (VIHS) se lleva a cabo en la semana 72.

Ensayo de anticuerpo (Ab) de unión a ELISA

[0167] La respuesta humoral específica de VIH-1 se determinó a 28 y 56 semanas mediante un ensayo de inmunoabsorción ligado a enzimas modificado (ELISA). Los pocillos de una columna de placas de fondo plano de 96 pocillos (Nunc) se recubrieron con 10 pg de proteína de recubrimiento gp140 de clado C (C97ZA.012) (SEQ ID NO: 5), o 10 pg de proteína mosaico 1 (SEQ ID NO: 6) diluido en 10 pl de solución salina tamponada con fosfato (DPBS) 1x Dulbecco (Gibco/Life Technologies) a 100 pl por pocillo, y se incubó durante la noche a 4°C. Una muestra de suero positiva conocida de un estudio anterior se utilizó como control positivo y una muestra de suero de prevacunación se utilizó como control negativo.

[0168] Los pocillos de las placas se lavaron una vez con 200 pl de ELISA Wash (1000 ml de PBS (1x) y 0,5 ml de Tween 20 (Sigma)). Los pocillos se bloquearon con 250 pl de solución de bloqueo (Blocker Casein en PBS (Pierce)) y se incubaron a temperatura ambiente durante 3-4 horas. Después de la incubación, se descartó la solución de bloqueo. Luego, se agregaron 150 pl de solución de bloqueo y 6 pl de la muestra de suero a la primera columna de cada placa y 100 de solución de bloqueo en todos los demás pocilios. Luego se realizaron diluciones en serie de 50 gl en 100 gl de solución de bloqueo a través de la placa, y se descartaron 50 gl de la columna final para que cada pocillo tuviera 100 gl de muestra. Las placas se incubaron a temperatura ambiente durante 1 hora. El contenido de los pocillos se descartó y a continuación se lavaron los pocillos 3 veces con 200 gl de lavado de ELISA.

[0169] A continuación, 100 gl de 1:2000 de anticuerpo secundario con peroxidasa AffiniPure de cabra anti-IgG humana (Jackson ImmunoResearch Labs) en solución de bloqueo se añadieron a cada pocillo. Las placas se incubaron nuevamente a temperatura ambiente durante 1 hora y se lavaron 3 veces con ELISA Wash. Los pocillos se revelaron con 100 gl de solución de micropocillos SeruBlue TMB (KPL Laboratories) y se detuvo el desarrollo después de 0,5 min con 100 gl de solución de parada TMB (KPL Research Products).

[0170] Las placas se leyeron en un lector de placas de ELISA a 450 nm y 550 nm (Molecular Devices-Versamax, y software Softmax Pro 4.7.1). Los títulos de ELISA CE⁹⁰ se calcularon usando la siguiente ecuación (I), en donde las variables se derivaron del ajuste de la curva de 4 parámetros generada por SoftMaxPro:

en donde H representa la pendiente y F representa el porcentaje de respuesta.

[0171] Los análisis estadísticos de los datos se realizaron por comparación no paramétrica con el control utilizando el método de Dunn para la junta de la clasificación, y el grupo con el más alto título medio geométrico se definió como control, respectivamente.

[0172] Los resultados de los experimentos de clado C gp140 (C97) y ensayo ELISA mosaico 1 (Mos1) se resumen en la FIG. 1A (semana 28) y la FIG. 1B (semana 56). Los antígenos de clado C gp140 Env y Mosaico 1 Env mostraron una buena correlación sin sesgo (datos no mostrados).

Ensayo de fagocitosis celular dependiente de anticuerpos (ADCP)

[0173] Las respuestas funcionales no neutralizantes de anticuerpos se midieron utilizando anticuerpos de inmunoglobulina G (IgG) purificados a partir de muestras de suero obtenidas en la semana 28 de los NHPs tratados. La IgG se purificó usando columnas Melon Gel (Thermo Scientific) y se cuantificó usando un espectrofotómetro Nanodrop (Thermo Scientific). Los ensayos de ADCP fueron realizados como se describe en Ackerman et al. (2011) (Un ensayo robusto de alto rendimiento para determinar la actividad fagocítica de muestras de anticuerpos clínicos. J. Immunol. Methods 366, 8­ 19).

[0174] Más específicamente, el antígeno biotinilado de clado C (C97) Env (SEQ ID NO: 5) y Mosaico M (MOS 1) Env (SEQ ID NO: 6) se incubaron con 1 gm de perlas neutravidina fluorescente de color amarillo-verde (Invitrogen) durante la noche. Después, las perlas se lavaron y se resuspendieron a una dilución final de 1:100 en solución salina tamponada con fosfato - albúmina de suero bovino (PBSBSA). Los anticuerpos purificados de las muestras de suero y 9 x 105 perlas marcadas con antígeno se mezclaron en una placa de 96 pocillos de fondo redondo y la placa se incubó durante 2 horas. A continuación, se añadieron a cada pocillo células monocíticas humanas derivadas de leucemia mieloide aguda (células THP-1; 2 x 104 células) en un volumen final de 200 gl y se incubó la placa durante la noche.

[0175] Al día siguiente, la mitad del volumen de cultivo se retiró y se reemplazó con 100 gl de paraformaldehído al 4% antes se analizaron las placas en un citómetro de flujo BD LSR II equipado con un lector de placa HTS. Para el análisis, las muestras se seleccionaron en células vivas y se determinó la proporción de células que fagocitan perlas THP-1. Se calculó una puntuación fagocítica de la siguiente manera: (porcentaje de perlas positivas) multiplicado por (intensidad de fluorescencia media de las perlas positivas).

[0176] Los resultados obtenidos en el Ensayo de ADCP en la semana 28 se resumen en la FIG. 2, que muestra las respuestas de puntuación fagocítica de animales individuales. Los análisis estadísticos de los datos se realizaron mediante comparaciones no paramétricas para todos los pares utilizando el método de Dunn para la clasificación conjunta.

[0177] Los antígenos de clado C gp140 Env y mosaico M Env mostraron una buena correlación sin sesgo, que son consistentes con los resultados del ensayo ELISA descrito anteriormente, y el ensayo de anticuerpo neutralizante (nAb) descrito a continuación.

Ensayo de anticuerpos neutralizantes (NAB)

[0178] Las respuestas de anticuerpos neutralizantes (NAB) contra pseudoviruses de nivel 1 de VIH-1 Env se midieron usando ensayos de neutralización de virus en las células basadas en luciferasa TZM.bl. Específicamente, los virus en el panel de nivel 1 incluyeron MW965.26 (ciado C), SF162.LS (ciado B), MN-3 (ciado A), DJ263.8 (ciado A) y BaL.26 (ciado B).

[0179] Brevemente, piacas de fondo piano de 96 pociiios se recubrieron con muestras de suero obtenidas de ios NHPs en ia semana 56, y diiuciones de tres veces de ias muestras de suero en 100 pi de 10% se hicieron de Eagie modificado por Duibecco (DMEM). Luego, se agregaron 200 DICT⁵⁰ de virus (dosis infecciosa de cuitivo de tejidos o ia cantidad de un agente patógeno que producirá un cambio patoiógico en ei 50% de ios cuitivos ceiuiares inocuiados) a cada pociiio en un voiumen de 50 pi. Las piacas se incubaron durante 1 hora a 37°C. Después se añadieron céiuias TZM.bi a 1 x 104 céiuias/pociiio en un voiumen de 100 pi de DMEM ai 10% que contenía DEAE-Dextrano (Sigma) a una concentración finai de 11 pg/mi.

[0180] La CI⁵⁰ se caicuió como ia diiución de suero que resuitó en una reducción dei 50% en unidades reiativas de iuminiscencia como comparación con ei controi de virus no diiuido, después de ia sustracción de unidades de iuminiscencia reiativa de controi de céiuias (céiuias TZM.bi sin ia presencia de virus).

[0181] Los resuitados de ios ensayos de neutraiización TZM-bi de VIH-1 de nivei 1 contra MW965.26 (ciado C), SF162.LS (ciado B), MN-3 (ciado A), DJ263.8 (ciado A), y BaL.26 (ciado B) en muestras obtenidas de ios NHP en ia semana 56 se muestran en ia FlG. 3. Los símboios representan títuios de DI⁵⁰ transformados en iog 10 de ios animaies individuaies ensayados con títuios medios geométricos grupaies indicados como iíneas horizontaies. Los resuitados dei ensayo de nAb concuerdan con ios dei ensayo ELISA.

Ensayo ELISPOT

[0182] Las respuestas inmunes ceiuiares-1-específicas dei VIH fueron evaiuadas por ensayos de IFN-y ELISPOT como se describe anteriormente en Liu et ai, 2009, Nature 457: 87-91. Los ensayos ELISPOT utiiizaron grupos de péptidos de epítopo de céiuias T potenciaies (PTE) dei VIH-1 que cubren epítopos de céiuias T humanas potenciaies giobaies. En estudios anteriores, ios anáiisis de ia ampiitud inmune ceiuiar utiiizaron subgrupos de 10-16 péptidos que cubren cada antígeno seguido de mapeo de epítopos usando péptidos individuaies, esenciaimente como hemos informado previamente en Barouch et ai., 2010, Nat. Med. 16: 319-323 [54]. Las respuestas de iinfocitos T CD8+ y CD4+ específicas de epítopo se determinaron mediante estudios de depieción ceiuiar.

[0183] En resumen, ia inmunogenicidad de ios NHPs tratados se evaiuó en muestras obtenidas en ia semana 54 por ensayos de IFN-y ELISPOT utiiizando reservas de péptidos PTE. Las céiuias mononucieares de sangre periférica (PBMC) se estimuiaron con ios conjuntos de péptidos PTE y, después de ia incubación, ias céiuias se iavaron, marcaron y desarroiiaron para visuaiizar céiuias formadoras de manchas. Los resuitados dei ensayo ELISPOT, expresados como unidades formadas de manchas medias (SFU) por 106 PBMC, se muestran en ia FIG. 4.

Conclusiones del estudio

[0184] Como se muestra por ios resuitados de ios estudios con animaies descritos anteriormente y tai como se resume en ias FIGS. 1-4, ia combinación de vectores rAd y/o vectores MVA con poiipéptido antigénico aisiado en combinaciones de cebado-refuerzo es útii para generar ampiias respuestas inmunes humoraies y ceiuiares específicas de VIH en primates. Específicamente, se demostró ia utiiidad de incorporar una proteína gp140 en una o más inmunizaciones de refuerzo para generar ampiias respuestas inmunitarias humoraies y ceiuiares específicas dei VIH en primates. Además, se demostró que todos ios regímenes de vacunas probados eran inmunogénicos en todos ios animaies inmunizados (Grupo II-V).

[0185] En particuiar, ia administración de uno o más vectores de Rad26 (semana 0 y 12) que expresan uno o más antígenos de VIH-1 seguidos por una inmunización de impuiso a ias semanas 24 y 52 con vectores Rad26 o vectores MVA y una proteína gp140 de ciado C aisiada, dieron como resuitado un refuerzo eficiente de ia respuesta humorai ai VIH-1, como se muestra en ios resuitados de ios ensayos de ELISA y ADCP (véanse ias FIGS. 1A, 1B y 2, específicamente ei Grupo III ("Ad26/Ad26 Env" marcado) y Grupo V ("Ad26/MVA Env" marcado)). Además, ia administración de uno o más vectores rAd26, seguida de una inmunización de refuerzo en ias semanas 24 y 52 con vectores MVA con o sin ia proteína gp140 dei ciado C, pudo aumentar significativamente ias respuestas inmunes ceiuiares medidas por ei ensayo ELISPOT (ver Figura 4, específicamente Grupo IV ("Ad26/MVA" marcado) y Grupo V ("Ad26/MVA Env" marcado)).

EJEMPLO 2. Estudio de regímenes de vacunas contra ei VIH en seres humanos.

[0186] Se reaiiza ei siguiente estudio muiticéntrico, aieatorizado, de grupos paraieios, estudio ciínico dobie ciego controiado con piacebo en hombres y mujeres aduitos sanos no infectados por VIH: Un estudio de fase 1/2a para evaiuar ia seguridad/toierabiiidad e inmunogenicidad de ios regímenes de vacuna de vector mosaico Ad26 homóiogos o regímenes de vacuna de vector heteróiogo de mosaico de Ad26 y mosaico de MVA, con adyuvante de proteína pius de dosis aita, dosis baja o sin ciado C gp140 para ia prevención dei VIH. Este estudio está en curso.

Justificación general

[0187] Se realiza un estudio para evaluar la seguridad/tolerabilidad e inmunogenicidad de siete regímenes de vacunas de refuerzo y cebado. Los sujetos reciben cuatro dosis de la vacuna del estudio: Ad26meses o placebo se administra en las semanas 0 y 12; y Ad26meses o MVA MOS, tanto con o sin el producto de fármaco de glicoproteína 140 (baja o alta dosis), o placebo solamente se da en las semanas 24 y 48.

[0188] Las vacunas del estudio utilizadas son Ad26meses, MVAmeses y gp140 DP como sigue (véase también Ejemplo 1):

(i) Ad26meses se compone de los siguientes tres productos de vacuna suministrados en el mismo vial y administrados en una proporción de 2:1:1: Ad26.meses1 Env, Ad26.meses1 Gag-Pol y Ad26.meses2Gag-Pol que expresan genes de VIH-1 mosaico EnV1 (SEQ ID NO: 1), GagPol1 mosaico (SEQ iD: NO 3) y GagPol2 mosaico (SEQ ID NO: 4), respectivamente;

(ii) MVAmeses se compone de los siguientes dos productos de vacuna suministrados en viales separados y administrados en una proporción 1:1: MVA-Mosaicl (virus MVA que expresa las proteínas Mosaico 1 VIH-1 Gag, Pol y Env que tienen SEQ ID NO: 1 y 3) y MVA Mosaico 2 (virus MVA que expresa las proteínas Mosaico 2 VIH-1 Gag, Pol y Env que tienen las SeQ iD NO: 2 y 4); y

(iii) el producto farmacológico gp140 contiene glicoproteína 140 del clado C del VIH-1 (gp140 trimérica recombinante que tiene la SEQ ID NO: 5), producida por una línea celular PER.C6® transformada construida para producir gp140. En este estudio, el producto farmacológico gp140 se dosifica con fosfato de aluminio como adyuvante, y el producto farmacológico gp140 dosificado se denomina simplemente "gp140 DP".

Objetivos

[0189] Los objetivos primarios del estudio incluyen (1) la evaluación de la seguridad/tolerabilidad de varios regímenes de cebado-impulso que contienen componentes Ad26meses, MVAmeses, y/o gp140 DP; y (2) comparar las respuestas de anticuerpos de unión a Env del VIH entre los diferentes regímenes de vacuna.

[0190] El objetivo secundario del estudio incluye la evaluación de la unión de otro anticuerpo, la función efectora de anticuerpos y caracterización de anticuerpos y respuestas celulares.

[0191] Los objetivos de exploración del estudio incluyen (1) la exploración de las respuestas inmunes a los diferentes regímenes de vacunación en las secreciones de la mucosa en un subconjunto de sujetos; (2) explorar patrones de expresión génica entre los diferentes regímenes de vacunas; y (3) explorar anticuerpos de neutralización contra los vectores Ad26.

Vacunación y diseño experimental

[0192] El estudio comprende un período de vacunación de 48 semanas durante el cual los sujetos se vacunaron al inicio del estudio (semana 0), Semana 12 y Semana 24, con un refuerzo en la semana 48, y un período de seguimiento de 48 semanas a una visita final en la semana 96. Las vacunas se administran como se muestra en la Tabla 1B, y se toman muestras de sangre en visitas clínicas específicas para evaluar las respuestas inmunes.

[0193] Continuará un período de seguimiento a largo plazo (aproximadamente 2 años después de la semana 96) para los sujetos asignados al azar al régimen que se seleccionan posteriormente para estudios futuros, basándose en el análisis de los datos de la semana 28. Si los datos de la semana 28 no son concluyentes, los datos de la semana 52 se tienen en cuenta en la selección del régimen. En el caso de que no se pueda tomar una decisión clara, este período de seguimiento extendido puede incluir sujetos de más de un grupo con el propósito de evaluar la durabilidad de las respuestas inmunes. El final del estudio es la última visita del sujeto.

Tabla 1B: Regímenes de vacunas probados en humanos

(Continuación)

Dosis y administración

[0194] Los sujetos reciben dosis de vacuna del estudio en cuatro puntos de tiempo de acuerdo con la asignación al azar, en el día 1 de la semana 0, en l a semana 12, y en la semana 24, con un refuerzo en la semana 48, administrado por inyección intramuscular en el deltoides. Para las visitas con una sola inyección (es decir, en las semanas 0 y 12), se puede usar cualquiera de los deltoides para la inyección. Cuando se administran dos inyecciones de la vacuna del estudio en una visita (es decir, en las semanas 24 y 48), se usa un deltoides diferente para cada inyección (con excepciones permitidas por indicación médica). Las vacunas del estudio con las dosis administradas son las siguientes:

(i) Ad26meses (Ad26.meses1 Env Ad26.meses1 Gag-Pol Ad26.meses2Gag-Pol):

La dosis total es de 5x1010 partículas virales (vp) por inyección de 0,5 ml

(ii) MVA meses (MVA-Mosaico 1 MVA-Mosaico 2):

La dosis total es de 108 unidades formadoras de placa (ufp) por inyección de 0,5 ml

(iii) gp140 DP:

Dosis baja: gp140 DP con 50 gg de proteína total, mezclada con adyuvante de fosfato de aluminio (0,425 mg aluminio) en la farmacia, por inyección de 0,5 ml

Dosis alta: gp140 DP con 250 gg de proteína total, mezclada con adyuvante de fosfato de aluminio (0,425 mg de aluminio) en la farmacia, por inyección de 0,5 ml

(iv) Placebo:

solución salina al 0,9%, inyección de 0,5 mL

Evaluaciones de inmunogenicidad

[0195] Los ensayos se realizan para evaluar las respuestas inmunitarias humorales incluyendo, pero no limitados a: ensayo de anticuerpos de unión a suero específicos de Env, ensayos de NAB, y ensayo de anticuerpos dependientes de la fagocitosis celular (ADCP), así como mapeo de epítopos (ver Tabla 2).

Tabla 2: Ensayos de respuesta inmune humoral

(Continuación)

[0196] Los ensayos se realizan para evaluar las respuestas inmunes celulares incluyendo, pero no limitados a: ELISPOT, tinción intracelular de citoquinas, y citometría de flujo de múltiples parámetros (véase la Tabla 3).

Tabla 3: Ensayos de respuesta inmune de células

EJEMPLO 3. Otros estudios de los regímenes de vacunas contra el VIH en los seres humanos

[0197] Se llevan a cabo más estudios clínicos en seres humanos para evaluar la seguridad/tolerabilidad y la inmunogenicidad de diferentes calendarios de vacunación con vectores Rad26 que expresan antígenos de mosaico de VIH y proteína trimérica de clado C gp140 aislada en sujetos sanos no infectados por el VIH. En particular, se prueban regímenes más cortos y menos regímenes de dosificación en comparación con el estudio descrito en el Ejemplo 2. La optimización del programa de vacuna puede aumentar el cumplimiento del programa completo y/o ser más simple de usar y más fácil de administrar.

Vacunación y diseño experimental

[0198] Se lleva a cabo un estudio clínico de Fase 1 doble ciego controlado de grupos paralelos, controlado con placebo de centro único, aleatorizado, en hombres y mujeres adultos sanos de 18 a 50 años no infectados por VIH. Un objetivo de 36 sujetos humanos está participando en este estudio. Los sujetos se dividen en tres grupos (Grupos 1 a 3) con 12 sujetos asignados al azar a cada grupo. Los sujetos de cada grupo se asignan al azar en dos subgrupos: Subgrupo A (10 sujetos) y Subgrupo B (2 sujetos). Los sujetos del subgrupo A reciben la vacuna del estudio y los sujetos del subgrupo B reciben placebo. Los sujetos se inscriben en el estudio independientemente de su seropositividad inicial para Ad26.

[0199] El estudio comprende un período máximo de vacunación de 48 semanas, y un período de seguimiento de post­ vacunación hasta la Semana 72. Los sujetos reciben las vacunas de estudio o de placebo de acuerdo con los horarios de la Tabla 4 a continuación. Consulte el Ejemplo 2 para obtener una descripción de las composiciones de vacuna utilizadas en el estudio.

Tabla 4: Programa de administración de las vacunas del estudio en el estudio

[0200] El grupo 1 representa el régimen del "caso base", que permite unir los datos de este estudio al estudio del Ejemplo 2. A los sujetos del Grupo 1 se les administran cuatro vacunas en las Semanas 0, 12, 24 y 48, que es el mismo programa de dosificación que los sujetos del Grupo 1 del estudio del Ejemplo 2 (véase la Tabla 1B en el Ejemplo 2). Los grupos 2 y 3 reciben tres vacunas durante 24 semanas (Grupo 2: Semanas 0, 12 y 24; Grupo 3: Semanas 0, 8 y 24). Se toman muestras de sangre en visitas clínicas específicas para evaluar las respuestas inmunes.

[0201] Más específicamente, el Grupo 2 analiza un régimen más corto, más conveniente mediante la eliminación de la necesidad para el sujeto para regresar a la clínica para un impulso tarde en la semana 48, a diferencia del "caso base".

[0202] El grupo 3 examina la capacidad de los vectores rAd26 para cebar una respuesta cualitativamente similar a la del régimen completo, al tiempo que alcanza niveles de inmunogenicidad que son superiores a los del régimen del "caso base" después de la semana 24 debido a una dosis adicional de gp140 DP en la segunda vacunación.

[0203] Un análisis intermedio (ciego) se lleva a cabo una vez que todos los sujetos completan la visita de la semana 28 o se suspenden antes. El análisis principal (sin cegamiento) se realiza una vez que todos los sujetos completan la visita de la semana 52 o la suspenden antes. El análisis final se realiza una vez todos los sujetos completan su visita final del estudio en la semana 72.

Ejemplo 4. Estudios adicionales de los regímenes de vacunas contra el VIH en los seres humanos

[0204] También se llevan a cabo más estudios clínicos en seres humanos para evaluar la seguridad/tolerabilidad y la inmunogenicidad de diferentes calendarios de vacunación con vectores MVA y proteína trimérica de Clado C gp140 en sujetos sanos no infectados por VIH, en donde se prueban regímenes de dosificación más cortos y regímenes que tienen menos dosis en comparación con el estudio del Ejemplo 2. Los sujetos reciben las vacunas del estudio o placebo de acuerdo con los esquemas de la Tabla 5 debajo. Las composiciones de vacuna utilizadas en el estudio son como se describen en el Ejemplo 2. Los participantes en el estudio se asignaron al azar como se describió anteriormente para el estudio en el Ejemplo 3.

Tabla 5: Calendario de administración de las vacunas del estudio en el estudio

(Continuación)

[0205] El primer grupo (Grupo 1) representa de nuevo el régimen de "caso base", que permite unir los datos de este estudio al estudio del Ejemplo 2. A los sujetos se les administran cuatro vacunas en las Semanas 0, 12, 24 y 48, que es el mismo programa de dosificación que los sujetos del Grupo 4 del estudio en el Ejemplo 2 (ver Tabla 1B en el Ejemplo 2). Los otros grupos (Grupos 2 y 3) reciben regímenes más cortos y se vacunan en las semanas 0, 8 o 12 y 24. El cebado en este estudio es con vectores Ad26 y el refuerzo es con vectores MVA. Las posibles ventajas de estos regímenes incluyen una mayor comodidad con la duración más corta (24 semanas en total) en comparación con el régimen del Grupo 1 (48 semanas en total). Se toman muestras de sangre en visitas clínicas específicas para evaluar las respuestas inmunes.

REFERENCIAS

[0206]

1. Gurwith, M., et al., Safety and immunogenicity of an oral, replicating adenovirus serotype 4 vector vaccine for H5N1 influenza: a randomised, double-blind, placebo-controlled, phase 1 study. Lancet Infect Dis, 2013. 13(3): p. 238-50.

2. Centers for Disease, Control, and Prevention, Vital signs: HIV prevention through care and treatment--United States. MMWR Morb Mortal Wkly Rep, 2011.60(47): p. 1618-23.

3. Centlivre, M., et al., In HIV-1 pathogenesis the die is cast during primary infection. AIDS, 2007. 21 (1): p. 1-11.

4. Wawer, M.J., et al., Rates of HIV-1 transmission per coital act, by stage of HIV-1 infection, in Rakai, Uganda. J Infect Dis, 2005. 191(9): p. 1403-9.

5. Flynn, N.M., et al., Placebo-controlled phase 3 trial of a recombinant glycoprotein 120 vaccine to prevent HIV-1 infection. J Infect Dis, 2005. 191(5): p. 654-65.

6. Pitisuttithum, P., et al., Randomized, double-blind, placebo-controlled efficacy trial of a bivalent recombinant glycoprotein 120 HIV-1 vaccine among injection drug users in Bangkok, Thailand. J Infect Dis, 2006. 194(12): p.

1661-71.

7. Gray, G.E., et al., Safety and efficacy of the HVTN 503/Phambili study of a clade-B-based HIV-1 vaccine in South Africa: a double-blind, randomised, placebo-controlled test-of-concept phase 2b study. Lancet Infect Dis, 2011. 11(7): p. 507-15.

8. Buchbinder, S.P., et al., Efficacy assessment of a cell-mediated immunity HIV-1 vaccine (the Step Study): a double-blind, randomised, placebo-controlled, test-of-concept trial. Lancet, 2008. 372(9653): p. 1881-93.

9. Rerks-Ngarm, S., et al., Vaccination with ALVAC and A iDs VAX to prevent HIV-1 infection in Thailand. N Engl J Med, 2009. 361(23): p. 2209-20.

10. McElrath, M.J., et al., HIV-1 vaccine-induced immunity in the test-of-concept Step Study: a case-cohort analysis. Lancet, 2008. 372(9653): p. 1894-905.

11. Abbink, P., et al., Comparative seroprevalence and immunogenicity of six rare serotype recombinant adenovirus vaccine vectors from subgroups B and D. J Virol, 2007. 81 (9): p. 4654-63.

12. Vogels, R., et al., Replication-deficient human adenovirus type 35 vectors for gene transfer and vaccination: efficient human cell infection and bypass of preexisting adenovirus immunity. J Virol, 2003. 77(15): p. 8263-71.

13. Farina, S.F., et al., Replication-defective vector based on a chimpanzee adenovirus. J Virol, 2001.75(23): p.

11603-13.

14. Barouch, D.H., et al., International seroepidemiology of adenovirus serotypes 5, 26, 35, and 48 in pediatric and adult populations. Vaccine, 2011.29: p. 5203-5209.

15. Mast, T.C., et al., International epidemiology of human pre-existing adenovirus (Ad) type-5, type-6, type-26 and type-36 neutralizing antibodies: correlates of high Ad5 titers and implications for potentia1HIV vaccine trials. Vaccine, 2010. 28(4): p. 950-7.

16. Chen, H., et al., Adenovirus-based vaccines: comparison of vectors from three species of adenoviridae. J Virol, 2010. 84(20): p. 10522-32.

17. Thorner, A.R., et al., Age dependence of adenovirus-specific neutralizing antibody titers in individuals from subSaharan Africa. J Clin Microbiol, 2006. 44(10): p. 3781-3.

18. Sprangers, M.C., et al., Quantifying adenovirus-neutralizing antibodies by luciferase transgene detection: addressing preexisting immunity to vaccine and gene therapy vectors. J Clin Microbiol, 2003. 41(11): p. 5046-52.

19. Waddington, S.N., et al., Adenovirus serotype 5 hexon mediates liver gene transfer. Cell, 2008. 132(3): p.

397-409.

20. Liu, J., et al., Magnitude and phenotype of cellular immune responses elicited by recombinant adenovirus vectors and heterologous prime-boost regimens in rhesus monkeys. J Virol, 2008. 82(10): p. 4844-52.

21. Liu, J., et al., Immune control of an SIV challenge by a T-cell-based vaccine in rhesus monkeys. Nature, 2009.

457(7225): p. 87-91.

22. Lore, K., et al., Myeloid and plasmacytoid dendritic cells are susceptible to recombinant adenovirus vectors and stimulate polyfunctional memory T cell responses. J Immunol, 2007. 179(3): p. 1721-9.

23. unpublished, Barouch.et al.

24. Barouch et al.,. in AIDS Vaccine. 2009. Paris, France.

25. Kuschner, R.A., et al., A phase 3, randomized, double-blind, placebo-controlled study of the safety and efficacy of the live, oral adenovirus type 4 and type 7 vaccine, in U.S. military recruits. Vaccine, 2013. 31 (28): p. 2963-71.

26. Masopust, D. and L.J. Picker, Hidden memories: frontline memory T cells and early pathogen interception. J Immunol, 2012. 188(12): p. 5811-7.

27. Bell, J.A., et al., Illness and microbial experiences of nursery children at junior village. American Journal of Hygiene, 1961.74: p. 267-292.

28. Rhee, E.G. and D.H. Barouch, Adenoviruses, in Principles and Practice of Infectious Diseases, G.L. Mandell, J.E. Bennett, and R. Dolin, Editors. 2010, Elsevier: Filadelfia, PA.

29. Brandt, C.D., et al., Infections in 18,000 infants and children in a controlled study of respiratory tract disease. I. Adenovirus pathogenicity in relation to serologic type and illness syndrome. Am J Epidemiol, 1969. 90(6): p.

484-500.

30. Fox, J.P., et al., The virus watch program: a continuing surveillance of viral infections in metropolitan New York families. VI. Observations of adenovirus infections: virus excretion patterns, antibody response, efficiency of surveillance, patterns of infections, and relation to illness. Am J Epidemiol, 1969. 89(1): p. 25-50.

31. Fox, J.P., C.E. Hall, and M.K. Cooney, The Seattle Virus Watch. VII. Observations of adenovirus infections. Am J Epidemiol, 1977. 105(4): p. 362-86.

32. Noel, J., et al., Identification of adenoviruses in faeces from patients with diarrhoea at the Hospitals for Sick Children, London, 1989-1992. J Med Virol, 1994. 43(1): p. 84-90.

33. Faden, H., et al., Pediatric adenovirus infection: relationship of clinical spectrum, seasonal distribution, and serotype. Clin Pediatr (Fila), 2011.50(6): p. 483-7.

34. Abbas, K.Z., et al., Temporal changes in respiratory adenovirus serotypes circulating in the greater Toronto area, Ontario, during December 2008 to April 2010. Virol J, 2013. 10: p. 15.

35. Diarrhea: Why children are still dying and what can be done, 2009, The United Nations Chidlren’s Fund (UNICEF)/World Health Organization (WHO): New York, NY.

36. Ramani, S. and G. Kang, Viruses causing childhood diarrhoea in the developing world. Curr Opin Infect Dis, 2009. 22(5): p. 477-82.

37. Kotloff, K.L., et al., Burden and aetiology of diarrhoeal disease in infants and young children in developing countries (the Global Enteric Multicenter Study, GEMS): a prospective, case-control study. Lancet, 2013.

382(9888): p. 209-22.

38. Magwalivha, M., et al., High prevalence of species D human adenoviruses in fecal specimens from Urban Kenyan children with diarrhea. J Med Virol, 2010. 82(1): p. 77-84.

39. Liu, L.Y., et al., [Investigation of adenovirus infection in hospitalized children with diarrhea during 2010 in Beijing, China]. Zhonghua Er Ke Za Zhi, 2012. 50(6): p. 450-4.

40. Ouyang, Y., et al., Etiology and epidemiology of viral diarrhea in children under the age of five hospitalized in Tianjin, China. Arch Virol, 2012. 157(5): p. 881-7.

41. Lee, J.I., et al., Detection and molecular characterization of adenoviruses in Korean children hospitalized with acute gastroenteritis. Microbiol Immunol, 2012. 56(8): p. 523-8.

42. Espinola, E.E., et al., Genetic diversity of human adenovirus in hospitalized children with severe acute lower respiratory infections in Paraguay. J Clin Virol, 2012. 53(4): p. 367-9.

43. Mast, T.C., et al., International epidemiology of human pre-existing adenovirus (Ad) type-5, type-6, type-26 and type-36 neutralizing antibodies: correlates of high Ad5 titers and implications for potentia1HIV vaccine trials. Vaccine, 2010. 28: p. 950-957.

44. Kasel, J.A., et al., Conjunctivitis and enteric infection with adenovirus types 26 and 27: responses to primary, secondary and reciprocal cross-challenges. Am J Hyg, 1963. 77: p. 265-82.

45. Hierholzer, J.C., et al., Adenoviruses from patients with AIDS: a plethora of serotypes and a description of five new serotypes of subgenus D (types 43-47). J Infect Dis, 1988. 158(4): p. 804-13.

46. Khoo, S.H., et al., Adenovirus infections in human immunodeficiency virus-positive patients: clinical features and molecular epidemiology. J Infect Dis, 1995. 172(3): p. 629-37.

47. Curlin, M.E., et al., Frequent detection of human adenovirus from the lower gastrointestinal tract in men who have sex with men. PLoS One, 2010. 5(6): p. e11321.

48. Dubberke, E.R., et al., Acute meningoencephalitis caused by adenovirus serotype 26. J Neurovirol, 2006.

12(3): p. 235-40.

49. Koneru, B., et al., Adenoviral infections in pediatric liver transplant recipients. JAMA, 1987. 258(4): p. 489-92.

50. Venard, V., et al., Genotyping of adenoviruses isolated in an outbreak in a bone marrow transplant unit shows that diverse strains are involved. J Hosp Infect, 2000. 44(1): p. 71-4.

51. Al Qurashi, Y.M., M. Guiver, and R.J. Cooper, Sequence typing of adenovirus from samples from hematological stem cell transplant recipients. J Med Virol, 2011.83(11): p. 1951-8.

Claims (15)

REIVINDICACIONES

1. Una combinación de vacunas para su uso en un método para inducir una respuesta inmune contra un virus de inmunodeficiencia humana (VIH) en un sujeto, comprendiendo dicha combinación:

(i) una primera composición que comprende una cantidad inmunogénicamente eficaz de uno o más vectores de adenovirus 26 (rAd26) que codifican polipéptidos antigénicos del VIH que tienen las secuencias de aminoácidos de SEQ ID NO: 1, SEQ ID NO: 3 y SEQ ID NO: 4 y un portador farmacéuticamente aceptable;

(ii) una segunda composición que comprende una cantidad inmunogénicamente eficaz de una glicoproteína de la envoltura del VIH aislada que comprende la secuencia de aminoácidos de SEQ ID NO: 5 o SEQ ID NO: 6, un adyuvante y un vehículo farmacéuticamente aceptable; y

(iii) una cantidad inmunogénicamente eficaz de uno o más vectores rAd26 adicionales que codifican polipéptidos antigénicos del VIH que tienen las secuencias de aminoácidos de SEQ ID NO: 1, SEQ ID NO: 3 y SEQ ID NO: 4,

en donde la primera composición se administra para la inmunización de cebado y la segunda composición se administra para potenciar la inmunización, y la cantidad inmunogénicamente eficaz de los vectores rAd26 adicionales está presente en la segunda composición o en una tercera composición que se administra junto con la segunda composición para potenciar la inmunización.

2. La combinación de vacunas para su uso según la reivindicación 1, en donde la cantidad inmunogénicamente eficaz de uno o más vectores rAd26 adicionales está presente en la tercera composición.

3. La combinación de vacunas para su uso según la reivindicación 1 o 2, en donde el adyuvante es fosfato de aluminio o un adyuvante a base de saponina.

4. La combinación de vacunas para su uso de acuerdo con la reivindicación 3, en donde el adyuvante es fosfato de aluminio.

5. La combinación de vacunas para su uso de acuerdo con una cualquiera de las reivindicaciones 1 a 4, en donde la glicoproteína de la envoltura del VIH aislada comprende la secuencia de aminoácidos de SEQ ID NO: 5.

6. La combinación de vacunas para su uso de acuerdo con una cualquiera de las reivindicaciones 1 a 5. 5, en donde dicha respuesta inmune es una respuesta inmune protectora contra la infección por VIH.

7. Un kit que comprende la combinación de vacunas para su uso de acuerdo con una cualquiera de las reivindicaciones 1 a 5.

8. Una combinación de vacunas para su uso en la inducción de una respuesta inmune contra un virus de inmunodeficiencia humana (VIH) en un sujeto, comprendiendo la combinación de vacunas:

(i) una primera composición que comprende una cantidad inmunogénicamente eficaz de uno o más vectores de adenovirus 26 (rAd26) que codifican polipéptidos antigénicos del VIH que tienen las secuencias de aminoácidos de SEQ ID NO: 1, SEQ ID NO: 3, y SEQ ID NO: 4 y un portador farmacéuticamente aceptable;

(ii) una segunda composición que comprende una cantidad inmunogénicamente eficaz de una glicoproteína de la envoltura del VIH aislada de SEQ ID NO: 5, un vehículo farmacéuticamente aceptable y un adyuvante, en donde el adyuvante es fosfato de aluminio o un adyuvante basado en saponina; y

(iii) una tercera composición que comprende una cantidad inmunogénicamente eficaz de uno o más vectores rAd26 adicionales que codifican polipéptidos antigénicos del VIH que tienen las secuencias de aminoácidos de SEQ ID NO: 1, SEQ ID NO: 3 y SEQ ID NO: 4,

en donde la primera composición se administra para estimular la inmunización, y la segunda composición se administra junto con la tercera composición para estimular la inmunización.

9. La combinación de vacunas para su uso según la reivindicación 8, en donde el adyuvante es fosfato de aluminio.

10. Una primera composición que comprende una cantidad inmunogénicamente eficaz de uno o más vectores de adenovirus 26 (rAd26) que codifican polipéptidos antigénicos del VIH que tienen las secuencias de aminoácidos de SEQ ID NO: 1, SEQ ID NO: 3 y SEQ ID NO: 4 y un portador aceptable, para usar con una segunda composición que comprende una cantidad inmunogénicamente eficaz de una glicoproteína de la envoltura del VIH aislada que comprende la secuencia de aminoácidos de SEQ ID NO: 5 o SEQ ID NO: 6, un adyuvante y un portador farmacéuticamente aceptable, y una cantidad eficaz de uno o más vectores rAd26 adicionales que codifican polipéptidos antigénicos del VIH que tienen las secuencias de aminoácidos de SEQ ID NO: 1, SEQ ID NO: 3 y SEQ ID NO: 4,

en un método para inducir una respuesta inmune contra un virus de inmunodeficiencia humana (VIH) en un sujeto, comprendiendo dicho método administrar dicha primera composición para cebar la inmunización, administrar dicha segunda composición para estimular la inmunización y administrar el inmunógeno cantidad eficaz de los vectores rAd26 adicionales, en donde dicha cantidad inmunogénicamente eficaz de los vectores rAd26 adicionales está presente en la segunda composición o en una tercera composición que se administra junto con la segunda composición para potenciar la inmunización.

11. Una segunda composición que comprende una cantidad inmunogénicamente eficaz de una glicoproteína de la envoltura del VIH aislada que comprende la secuencia de aminoácidos de SEQ ID NO: 5 o SEQ ID NO: 6, un adyuvante y un portador farmacéuticamente aceptable para usar con una primera composición que comprende una cantidad inmunogénicamente eficaz de uno o más vectores de adenovirus 26 (rAd26) que codifican polipéptidos antigénicos del VIH que tienen las secuencias de aminoácidos de SEQ ID NO: 1, SEQ ID NO: 3 y SEQ ID NO: 4 y un portador farmacéuticamente aceptable, y una cantidad inmunogénicamente eficaz de uno o más vectores rAd26 adicionales que codifican polipéptidos antigénicos del VIH que tienen las secuencias de aminoácidos de SEQ ID NO: 1, SEQ ID NO: 3 y SEQ ID NO: 4,

en un método para inducir una respuesta inmune contra un virus de inmunodeficiencia humana (VIH) en un sujeto, comprendiendo dicho método administrar dicha primera composición para cebar la inmunización, administrar dicha segunda composición para estimular la inmunización y administrar la cantidad inmunogénicamente eficaz de los vectores rAd26 adicionales, en donde dicha cantidad inmunogénicamente eficaz de los vectores rAd26 adicionales está presente en la segunda composición o en una tercera composición que se administra junto con la segunda composición para potenciar la inmunización.

12. La primera composición para uso de la reivindicación 10 o la segunda composición para uso de la reivindicación 11, en donde la cantidad inmunogénicamente eficaz de uno o más vectores rAd26 adicionales está presente en la tercera composición.

13. La primera composición para uso de la reivindicación 10 o 12, o la segunda composición para uso de la reivindicación 11 o 12, en donde el adyuvante es fosfato de aluminio o un adyuvante a base de saponina, preferiblemente en donde el adyuvante es fosfato de aluminio.

14. La primera composición para el uso de la reivindicación 10 o 12 o 13 o la segunda composición para el uso de la reivindicación 11 o 12 o 13, en donde la glicoproteína de la envoltura del VIH aislada comprende la secuencia de aminoácidos de SEQ ID NO: 5.

15. La primera composición para uso de cualquiera de las reivindicaciones 10 y 12 a 14, o la segunda composición para uso de cualquiera de las reivindicaciones 11 y 12 a 14, en donde dicha respuesta inmune es una respuesta inmune protectora contra la infección por VIH.