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ES2586821T3 - Proceso para la preparación de éster de N-[(2'R)-2'-desoxi-2'-fluoro-2'-metil-p-fenil-5'-uridilil]-L-alanina 1-metiletilo - Google Patents

Proceso para la preparación de éster de N-[(2'R)-2'-desoxi-2'-fluoro-2'-metil-p-fenil-5'-uridilil]-L-alanina 1-metiletilo Download PDF

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ES2586821T3
ES2586821T3 ES10721225.0T ES10721225T ES2586821T3 ES 2586821 T3 ES2586821 T3 ES 2586821T3 ES 10721225 T ES10721225 T ES 10721225T ES 2586821 T3 ES2586821 T3 ES 2586821T3
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Bruce S. Ross
Michael Joseph Sofia
Ganapati Reddy Pamulapati
Suguna Rachakonda
Hai-Ren Zhang
Byoung-Kwon Chun
Peiyuan Wang
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Gilead Pharmasset LLC
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Abstract

Un proceso para preparar un compuesto representado por la formula 4, o un diastereomero a base de fosforo del mismo:**Fórmula** en la que P* representa un atomo de fosforo quiral, y en la que dicho diastereomero a base de fosforo se representa por las formulas RP-4 o SP-4:**Fórmula** que comprenden: a) hacer reaccionar un alanato de isopropilo, A, un di-X'-fenilfosfato, B, 2'-desoxi-2'-fluoro-2'-C-metiluridina, 3, y una base para obtener una primera mezcla que comprende 4, o el diastereomero a base de fosforo del mismo;**Fórmula** en donde X es una base conjugada de un acido, n es 0 o 1, y X' es un halogeno b) hacer reaccionar la primera mezcla con un compuesto protector para obtener una segunda mezcla que comprende 4, o el diastereomero a base de fosforo del mismo, en donde el compuesto protector se selecciona de entre un compuesto protector t-butildimetilsililo y un compuesto protector dimetoxitrifenilmetilo; y c) someter opcionalmente la segunda mezcla a cristalizacion, cromatografia o extraccion con el fin de obtener 4, o el diastereomero a base de fosforo del mismo.

Description

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DESCRIPCION
Proceso para la preparacion de ester de N-[(2'R)-2'-desoxi-2'-fluoro-2'-metil-p-fenil-5'-uridilil]-L-alanina 1-metiletilo Campo de la invencion
En el presente documento se divulgan fosforamidatos de nucleosido y su uso como agentes para el tratamiento de enfermedades virales. Estos compuestos son inhibidores de la replicacion viral de ARN dependiente de ARN y son utiles como inhibidores de la polimerasa NS5B del VHC, como inhibidores de la replicacion del VHC y para el tratamiento de la infeccion por hepatitis C en mamiferos.
Antecedentes
La infeccion por virus de la hepatitis C (VHC) es un problema de salud importante que desarrolla enfermedad hepatica cronica, tal como cirrosis y carcinoma hepatocelular, en un numero considerable de individuos infectados, se estima que afecta al 2-15 % de la poblacion mundial. Se calcula que hay 4,5 millones de personas infectadas solo en Estados Unidos, segun el Centro de Control de Enfermedades de EE. UU. De acuerdo con la Organization Mundial de la Salud, en todo el mundo hay mas de 200 millones de personas infectadas, infectandose cada ano al menos 3 a 4 millones de personas. Una vez infectadas, aproximadamente el 20 % de las personas eliminan el virus, pero el resto puede alojar el VHC durante toda su vida. El diez a veinte por ciento de los individuos infectados cronicamente desarrollara con el tiempo cirrosis que destruye el higado o cancer. La enfermedad viral se transmite por via parenteral a traves de la sangre y productos sanguineos contaminados, agujas contaminadas, o por via sexual, y puede pasar de una madre infectada o madre portadora a su hijo. Los tratamientos actuales para la infeccion por VHC, que se restringen a inmunoterapia con interferon-a recombinante solo o en combination con el analogo nucleosido, ribavirina, presentan un beneficio clinico limitado. Ademas, no existe vacuna alguna establecida para el VHC. En consecuencia, existe una necesidad urgente de agentes terapeuticos mejorados que combatan eficazmente la infeccion cronica por VHC.
El virion del VHC es un virus de ARN de cadena positiva con envoltura con una unica secuencia genomica oligorribonucleotidica de aproximadamente 9.600 bases que codifica una poliproteina de aproximadamente 3.010 aminoacidos. Los productos proteicos del gen del HCV consisten en las proteinas estructurales C, E1, y E2, y las proteinas no estructurales NS2, NS3, NS4A, NS4B, NS5A y NS5B. Se cree que las proteinas no estructurales (NE), proporcionan la maquinaria catalitica para la replicacion viral. La proteasa NS3 libera NS5B, la ARN polimerasa dependiente de ARN para la cadena de poliproteina. Se requiere la polimerasa NS5B del VHC para la sintesis de un ARN bicatenario a partir de un ARN viral monocatenario que sirve como plantilla en el ciclo de replicacion del VHC. Por lo tanto, se considera que la polimerasa NS5B es un componente esencial en el complejo de replicacion del VHC (K. Ishi, et al, Heptology, 1999, 29: 1227-1235; V. Lohmann, et al, Virology, 1998.249: 108-118). La inhibition de la polimerasa NS5B del VHC previene la formacion del ARN bicatenario del VHC y por lo tanto constituye un enfoque atractivo para el desarrollo de terapias antivirales especificas para el VHC.
El VHC pertenece a una familia de virus mucho mayor que comparte numerosas caracteristicas comunes.
Virus Flaviviridae
La familia de virus Flaviviridae comprende al menos tres generos distintos: pestivirus, que causan enfermedad en el ganado y cerdos; flavivirus, que son la causa principal de enfermedades, tales como fiebre del dengue y fiebre amarilla; y hepacivirus, cuyo unico miembro es el VHC. El genero flavivirus incluye mas de 68 miembros separados en grupos basandose en la similitud serologica (Calisher et al., J. Gen. Virol, 1993, 70, 37-43). Los sintomas clinicos varian e incluyen fiebre, encefalitis y fiebre hemorragica (Fields Virology, Editores: Fields, B. N., Knipe, D. M., y Howley, P. M., Lippincott-Raven Publishers, Filadelfia, PA, 1996, capitulo 31, 931-959). Los flavivirus de preocupacion mundial que se asocian con enfermedades humanas incluyen los virus de la fiebre hemorragica del dengue (FHD), virus de la fiebre amarilla, sindrome de choque y virus de la encefalitis japonesa (Halstead, S. B., Rev. Infect Dis, 1984, 6, 251-264; Halstead, S. B., Science, 239: 476-481, 1988; Monath, T. P., New Eng. J. Med, 1988, 319, 64 1-643).
El genero pestivirus incluye el virus de la diarrea viral bovina (VDVB), el virus de la peste porcina clasica (VPPC, tambien denominado virus del colera porcino) y el virus de la enfermedad de la frontera (VEF) ovina (Moennig, V. et al. Adv. Vir. Res. 1992, 41, 53-98). Las infecciones por pestivirus del ganado domestico (vacas, cerdos y ovejas) causan considerables perdidas economicas en todo el mundo. VDVB causa la enfermedad de las mucosas en el ganado y tiene gran importancia economica en la industria ganadera (Meyers, G. y Thiel, H. J., Advances in Virus Research, 1996, 47, 53-118; Moennig V., et al, Adv. Vir. Res. 1992, 41, 53-98). Los pestivirus humanos no se han caracterizado tan exhaustivamente como los pestivirus animales. No obstante, los estudios serologicos indican una exposicion considerable a pestivirus en seres humanos.
Los pestivirus y hepacivirus son grupos de virus relacionados estrechamente con la familia Flaviviridae. Otros virus estrechamente relacionados con esta familia incluyen el virus GB A, agentes similares al virus GB A, virus GB B y
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virus GB C (tambien denominado virus de la hepatitis G, VHG). El grupo de los hepacivirus (virus de la hepatitis C; VHC) consiste en diversos virus estrechamente relacionados pero genotipicamente distinguibles que infectan seres humanos. Existen al menos 6 genotipos del VHC y mas de 50 subtipos. Debido a las similitudes entre pestivirus y hepacivirus, combinado con la escasa capacidad de los hepacivirus para crecer de manera eficiente en un cultivo celular, se utiliza a menudo el virus de la diarrea viral bovina (VDVB) como sustituto para estudiar el virus VHC.
La organizacion genetica de pestivirus y hepacivirus es muy similar. Estos virus de ARN de cadena positiva poseen un unico marco de lectura abierto (MLA) grande codificante de todas las proteinas virales necesarias para la replicacion del virus. Estas proteinas se expresan como una poliprotema procesada co- y post-traduccionalmente mediante las proteinasas tanto celulares como codificadas por el virus para producir las proteinas virales maduras. Las proteinas virales responsables de la replicacion del ARN del genoma viral se encuentran aproximadamente en el carboxi-terminal. Dos tercios del MLA se denominan proteinas no estructurales (NE). La organizacion genetica y el procesamiento de la poliprotema de la porcion de proteinas no estructurales del mLa para pestivirus y hepacivirus son muy similares. Tanto para los pestivirus como los hepacivirus, las proteinas no estructurales (NE) maduras, en orden secuencial del extremo amino-terminal de la region codificante de la proteina no estructural al carboxi-terminal del MLA, consisten en p7, NS2, NS3, NS4A, NS4B, NS5A y NS5B.
Las proteinas NE de pestivirus y hepacivirus comparten dominios de secuencia que son caracteristicos de funciones especificas de las proteinas. Por ejemplo, las proteinas NS3 de los virus de ambos grupos poseen motivos de secuencias aminoacidas caracteristicos de serina proteinasas y de helicasas (Gorbalenya et al., Nature, 1988, 333, 22; Bazan y Fletterick Virology, 1989, 171, 637-639; Gorbalenya et al., Nucleic Acid Res., 1989, 17, 3889-3897). Del mismo modo, las proteinas NS5B de pestivirus y hepacivirus poseen los motivos caracteristicos de ARN polimerasas dirigidas por ARN (Koonin, E.V. y Dolja, V. V., Cric. Rev. Biochem. Molec. Biol. 1993, 28, 375-430).
Los papeles y funciones reales de las proteinas NE de pestivirus y hepacivirus en el ciclo de vida de los virus son directamente analogos. En ambos casos, la serina proteinasa NS3 es responsable de todo el procesamiento proteolitico de los precursores de la poliprotema corriente abajo de su posicion en el MLA (Wiskerchen y Collett, Virology, 1991, 184, 341-350; Bartenschlager et al., J. Virol. 1993, 67, 3835-3844; Eckart et al. Biochem. Biophys. Res. Comm. 1993, 192, 399-406; Grakoui et al., J. Virol. 1993, 67, 2832-2843; Grakoui et al. Proc. Natl. Acad. Sci. EE. UU. 1993, 90, 10583-10587; Hijikata et al., J. Virol. 1993, 67, 4665-4675; Tome et al., J. Virol., 1993, 67, 40174026). La proteina NS4A, en ambos casos, actua como un cofactor con la serina proteasa NS3 (Bartenschlager et al., J. Virol. 1994, 68, 5045-5055; Failla et al., J. Virol. 1994, 68, 3753-3760; Xu et al., J. Virol., 1997, 71:53 12-5322). La proteina NS3 de ambos virus tambien funciona como una helicasa (Kim et al., Biochem. Biophys. Res. Comm., 1995, 215, 160-166; Jin y Peterson, Arch. Biochem. Biophys., 1995, 323, 47-53; Warrener y Collett, J. Virol. 1995, 69,1720-1726). Por ultimo, las proteinas NS5B de pestivirus y hepacivirus presentan la actividad prevista de ARN polimerasas dirigidas por ARN (Behrens et al., EmBo, 1996, 15, 12-22; Lechmann et al., J. Virol., 1997, 71, 84168428; Yuan et al., Biochem. Biophys. Res. Comm. 1997, 232, 231-235; Hagedorn, PCT WO 97/12033; Zhong et al, J. Virol., 1998, 72, 9365-9369).
En la actualidad, existen opciones de tratamiento limitadas para los individuos infectados por el virus de la hepatitis C. La opcion terapeutica aprobada actual es el uso de la inmunoterapia con interferon-a recombinante solo o en combinacion con el analogo de nucleosido, ribavirina. Esta terapia se limita en su eficacia clinica y solo el 50 % de los pacientes tratados responden a la terapia. Por lo tanto, son sumamente necesarias terapias mas eficaces e innovadoras para hacer frente a la necesidad medica insatisfecha planteada por la infeccion por VHC.
Se ha identificado actualmente diversas dianas moleculares potenciales para el desarrollo de farmacos antivirales de accion directa como agentes terapeuticos anti-VHC, incluyendo, entre otros, autoproteasa NS2-NS3, proteasa N3, helicasa N3, y polimerasa NS5B. La ARN polimerasa dependiente de ARN es absolutamente esencial para la replicacion del genoma de ARN monocatenario en sentido positivo, y esta enzima ha suscitado gran interes entre los quimicos medicinales.
Se han revisado inhibidores de NS5B del VHC como terapias potenciales para la infeccion por VHC: Tan, S.-L., et al., Nature Rev. Drug Discov., 2002, 1, 867-881; Walker, M. P. et al., Exp. Opin. Investigational Drugs, 2003, 12, 1269-1280; Ni, Z-J, et al., Current Opinion in Drug Discovery and Development, 2004, 7, 446-459; Beaulieu, P. L., et al., Current Opinion in Investigational Drugs, 2004, 5, 838-850; Wu, J., et al., Current Drug Targets-Infectious Disorders, 2003, 3, 207-219.; Griffith, R. C., et al, Annual Reports in Medicinal Chemistry, 2004, 39, 223-237; Carrol, S., et al., Infectious Disorders-Drug Targets, 2006, 6, 17-29. El potencial de emergencia de cepas resistentes del VHC y la necesidad de identificar los agentes con una amplia cobertura de genotipo apoyan la necesidad de continuar los esfuerzos para identificar nucleosidos mas eficaces e innovadores como inhibidores de NS5B del VHC.
Los inhibidores de nucleosido de la polimerasa NS5B pueden actuar como un sustrato no natural que da como resultado la terminacion de cadena o como un inhibidor competitivo que compite con la union del nucleotido a la polimerasa. Para funcionar como una terminacion de cadena, la celulas debe captar el analogo de nucleosido y convertirlo in vivo a un trifosfato para competir por el sitio de union del nucleotido en la polimerasa. Esta conversion al trifosfato se media habitualmente por quinasas celulares que imparten requisitos estructurales adicionales a un inhibidor potencial de la polimerasa de nucleosido. Desafortunadamente, esto limita la evaluacion directa de los
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nucleosidos como inhibidores de la replication del VHC en ensayos basados en celulas capaces de la fosforilacion in situ.
En algunos casos, la actividad biologica de un nucleosido se ve obstaculizada por sus caractensticas de pobre sustrato para una o mas de las quinasas necesarias para convertirlo a la forma trifosfato activo. La formation del monofosfato por el nucleosido quinasa se aprecia generalmente como la etapa limitante de la velocidad de los tres acontecimientos de fosforilacion. Para evitar la necesidad de la etapa de fosforilacion inicial en el metabolismo de un nucleosido en el analogo de trifosfato activo, se ha descrito la preparation de profarmacos de fosfato estables. Se han mostrado que los profarmacos de fosforamidato de nucleosido son precursores del trifosfato de nucleosido activo e inhiben la replicacion viral cuando se administran a celulas enteras infectadas virales (McGuigan, C., et al., J. Med. Chem., 1996, 39, 1748-1753; Valette, G., et al., J. Med. Chem., 1996, 39, 1981-1990; Balzarini, J., et al., Pro. National Acad Sci EE. UU., 1996, 93, 7295-7299; Siddiqui, A. Q., et al., J. Med. Chem., 1999, 42, 4122-4128; Eisenberg, E. J., et al., Nucleosides, Nucleotides and Nucleic Acids, 2001, 20, 1091-1098; Lee, W. A., et al., Antimicrobial Agents and Chemotherapy, 2005, 49, 1898); documentos US 2006/0241064; y WO 2007/095269.
Asimismo la limitation de la utilidad de los nucleosidos como agentes terapeuticos viables se debe a veces por sus pobres propiedades fisicoquimicas y farmacocineticas. Estas propiedades pobres pueden limitar la absorcion intestinal de un agente y limitar la captation en el tejido o celula diana. Para mejorar sus propiedades se han empleado profarmacos de nucleosidos. Se ha demostrado que la preparacion de fosforamidatos de nucleosido mejora la absorcion sistemica de un nucleosido y, ademas, el resto de fosforamidato de estos "pronucleotidos" se enmascara con grupos lipofilos neutros para obtener un coeficiente de division adecuado para optimizar la captacion y el transporte en la celula mejorando drasticamente la concentration intracelular del analogo de monofosfato de nucleosido en relacion con la administracion de solo el nucleosido original. La hidrolisis mediada por la enzima del resto de ester de fosfato produce un monofosfato de nucleosido en el que la limitacion de velocidad de fosforilacion inicial es innecesaria. Con este fin, la solicitud de la patente de Estados Unidos 12/053.015, que corresponde a los documentos WO 2008/121634 y US 2010/0016251, divulga una serie de profarmacos de fosforamidato de nucleosido, muchos de los cuales muestran actividad en un ensayo de VHC. Varios compuestos divulgados en el documento US 2010/0016251 se ensayaron como potencial candidato clinico para su aprobacion por la AAM.
Sumario de la invencion
La presente invencion proporciona un proceso para preparar un compuesto representado por la formula 4, o un diastereomero a base de fosforo del mismo:
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en la que P* representa un atomo de fosforo quiral,
y en la que dicho diastereomero a base de fosforo se representa por la formula Rp-4 o Sp-4:
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que comprende:
a) hacer reaccionar un alanato de isopropilo, A, un di-X'-fenilfosfato, B, 2'-desoxi-2'-fluoro-2'-C-metiluridina, 3, y una base para obtener una primera mezcla que comprende 4, o el diastereomero a base de fosforo del mismo;
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b) hacer reaccionar la primera mezcla con un compuesto protector para obtener una segunda mezcla que comprende 4, o el diastereomero a base de fosforo del mismo, en la que el compuesto protector se selecciona de entre un compuesto protector t-butildimetilsililo y un compuesto protector dimetoxitrifenilmetilo; y
c) someter opcionalmente la segunda mezcla a cristalizacion, cromatografia o extraccion con el fin de obtener 4, o el diastereomero a base de fosforo del mismo.
Las caracteristicas preferidas del proceso de la presente invencion se exponen en las reivindicaciones dependientes.
Breve descripcion de los dibujos

Figura 1. Difractograma de XRD de alta resolucion de 4.
Figura 2. Difractograma de XRD de alta resolucion de Rp-4.

Figura 3. Difractograma de XRD de alta resolucion de Sp-4 (Forma 1).

Figura 4. Difractograma de XRD de alta resolucion de Sp-4 (Forma 1).
Figura 5. Difractograma de XRD de alta resolucion de Sp-4CH2CI2 (Forma 2).
Figura 6. Difractograma de XRD de alta resolucion de Sp-4-CHCb (Forma 3).

Figura 7. Difractograma de XRD de alta resolucion de Sp-4 (Forma 4).

Figura 8. Difractograma de XRD de alta resolucion de Sp-4 (Forma 5).
Figura 9. Difractograma de XRD de alta resolucion de Sp-4 (amorfo).
Figura 10. Estructura de cristal de rayos X para Sp-4 (Forma 1)
Figura 11. Estructura de cristal de rayos X (Isotropica) para Sp-4CH2Ch (Forma 2)
Figura 12. Estructura de cristal de rayos X (Anisotropica) para Sp-4-CH2Ch (Forma 2)
Figura 13. Estructura de cristal de rayos X para Sp-4-CHCh (Forma 3)
Figura 14. Espectro FT-IR de 4.
Figura 15. Espectro FT-IR de Rp-4.
Figura 16. Espectro FT-IR de Sp-4 Figura 17. Analisis TGA y DSC de 4.
Figura 18. Analisis TGA y DSC de Rp-4.
Figura 19. Analisis TGA y DSC de Sp-4.
Figura 20A. Estructura de cristal de rayos X para 8 (isomero Sp) (molecula n.° 1 de la unidad asimetrica).
Figura 20B. Estructura de cristal de rayos X para 8 (isomero Sp) (molecula n.° 2 de la unidad asimetrica).
Descripcion detallada de la invencion
Definiciones
La expresion "una" entidad, como se usa en este documento, se refiere a una o mas de esa entidad; por ejemplo, un compuesto se refiere a uno o mas compuestos o al menos un compuesto. Como tal, el termino "una" (o "un"), "uno o mas", y "al menos uno" pueden usarse de forma intercambiable en el presente documento.
Las expresiones "opcional" u "opcionalmente", como se usan en el presente documento, significan que un evento o circunstancia que se describe posteriormente puede no ocurrir necesariamente, y que la descripcion incluye casos en los que el evento o circunstancia se produce y casos en los que no. Por ejemplo, "enlace opcional" significa que el enlace puede o no estar presente, y que la descripcion incluye enlaces sencillos, dobles o triples.
El termino "P*" significa que el atomo de fosforo es quiral y que tiene una designacion Cahn-Ingold-Prelog correspondiente de "R" o "S" que tienen sus significados habituales aceptados.
El termino "purificado", como se describe en el presente documento, se refiere a la pureza de un compuesto dado. Por ejemplo, un compuesto esta "purificado" cuando el compuesto dado es un componente principal de la composition, es decir, al menos un 50 % p/p puro. Por lo tanto, "purificado" incluye al menos un 50 % p/p de pureza, al menos un 60 % p/p de pureza, al menos un 70 % de pureza, al menos un 80 % de pureza, al menos un 85 % de pureza, al menos un 90 % de pureza, al menos un 92 % de pureza, al menos un 94 % de pureza, al menos un 96 % de pureza, al menos un 97 % de pureza, al menos un 98 % de pureza, al menos un 99 % de pureza, al menos un
99,5 % de pureza y al menos un 99,9 % de pureza, donde "sustancialmente puro" incluye al menos un 97 % de
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pureza, al menos un 98 % de pureza, al menos un 99 % de pureza, al menos un 99,5 % de pureza, y al menos un 99,9 % de pureza.
El termino "metabolito", como se describe en el presente documento, se refiere a un compuesto producido in vivo despues de la administracion un sujeto que necesita el mismo.
El termino "aproximadamente" (tambien representado por ~) significa que el valor numerico mencionado es parte de un intervalo que varia dentro del error experimental estandar.
La expresion "sustancialmente como se muestra en..." un patron XRPD especificado significa que las posiciones pico mostradas en el patron XRPD son sustancialmente las mismas, dentro la inspeccion visual o recurrir a listas pico seleccionadas (± 0,2 °20). Un experto entiende que las intensidades pueden variar dependiendo de la muestra.
La expresion "sustancialmente anhidro" significa que una sustancia contiene como mucho el 10 % en peso de agua, preferiblemente como mucho el 1 % en peso de agua, mas preferiblemente como mucho el 0,5 % en peso de agua, y mucho mas preferiblemente como mucho el 0,1 % en peso de agua.
Un disolvente o anti-disolvente (como se usa en las reacciones, la cristalizacion, etc. o disolventes reticulares y/o adsorbidos) incluye al menos uno de un alcohol Ci a C8, un eter C2 a C8, una cetona C3 a C7, un ester C3 a C7, un clorocarbono Ci a C2, un nitrilo C2 a C7, un disolvente diverso, un hidrocarburo saturado C5 a C12, y un hidrocarburo aromatico C6 a C12.
El alcohol Ci a C8 se refiere a un alcohol lineal/ramificado y/o dclico/adclico que tiene tal numero de carbonos. El alcohol Ci a C8 incluye, pero sin limitacion, metanol, etanol, n-propanol, isopropanol, isobutanol, hexanol y ciclohexanol.
El eter C2 a C8 se refiere a un eter lineal/ramificado y/o dclico/adclico que tiene dicho numero de carbonos. El eter C2 a C8 incluye, pero sin limitacion, eter dimetilico, eter dietilico, eter diisopropilico, di-n-butil eter, metil-t-butil eter (MTBE), tetrahidrofurano, y dioxano
La cetona C3 a C7 se refiere a una cetona lineal/ramificada y/o dclica/adclica que tiene dicho numero de carbonos. La cetona C3 a C7 incluye, pero sin limitacion, acetona, metil etil cetona, propanona, butanona, metil isobutil cetona, metil butil cetona y ciclohexanona.
El ester C3 a C7 se refiere a un ester lineal/ramificado y/o dclico/adclico que tiene dicho numero de carbonos. El ester C3 a C7 incluye, pero sin limitacion, acetato de etilo, acetato de propilo, acetato de n-butilo, etc.
El clorocarbono Ci a C2 se refiere a un clorocarbono que tiene dicho numero de carbonos. El clorocarbono Ci a C2 incluye, pero sin limitacion, cloroformo, cloruro de metileno (DCM), tetracloruro de carbono, 1,2-dicloroetano, y tetracloroetano.
Un nitrilo C2 a C7 se refiere a un nitrilo que tiene dicho numero de carbonos. El nitrilo C2 a C7 incluye, pero sin limitacion, acetonitrilo, propionitrilo, etc.
Un disolvente diverso se refiere a un disolvente empleado comunmente en la quimica organica, que incluye, pero sin limitacion, dietilenglicol, diglima (dietilenglicol dimetil eter), 1,2-dimetoxi-etano, dimetilformamida, dimetilsulfoxido, etilenglicol, glicerina, hexametilfosforamida, hexametilfosforo triama, N-metil-2-pirrolidinona, nitrometano, piridina, trietil amina y acido acetico.
El termino hidrocarburo saturado C5 a Ci2 se refiere a un hidrocarburo lineal/ramificado y/o dclico/adclico. El hidrocarburo saturado C5 a Ci2 incluye, pero sin limitacion, n-pentano, eter de petroleo (ligroma), n-hexano, n- heptano, ciclohexano y cicloheptano.
El termino aromatico C6 a Ci2 se refiere a hidrocarburos sustituidos y sin sustituir que tienen un grupo fenilo como su estructura principal. Los hidrocarburos preferidos incluyen benceno, xileno, tolueno, clorobenceno, o-xileno, m- xileno, p-xileno, xilenos, siendo tolueno mas preferido.
El termino "halo" o "halogeno" como se usa en el presente documento, incluye cloro, bromo, yodo y fluor.
El termino "grupo de bloqueo" se refiere a un grupo quimico que muestra las siguientes caracteristicas. El "grupo" se obtiene a partir de un "compuesto protector". Los grupos que son selectivos para hidroxilos primarios sobre hidroxilos secundarios que pueden ponerse en condiciones compatibles con la estabilidad del fosforamidato (pH 2-8) e imparten sobre el producto resultante propiedades fisicas sustancialmente diferentes que permiten una separacion mas facil del producto del grupo nuevo de 3'-fosforamidato-5' del compuesto deseado sin reaccionar. El grupo debe reaccionar selectivamente con un buen rendimiento para dar un sustrato protegido que sea estable para las reacciones proyectadas (vease Protective Groups in Organic Synthesis, 3a ed. T. W. Greene y P. G. M. Wuts, John
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Wiley & Sons, Nueva York, N.Y., 1999). Los ejemplos de grupos incluyen, pero sin limitacion: benzoflo, acetilo, benzoNo fenil-sustituido, tetrahidropiranilo, tritilo, DMT (4,4'-dimetoxitritilo), MMT (4-monometoxitritilo), trimetoxitritilo, grupo pixilo (9-fenilxanten-9-ilo), tiopixilo (9-feniltioxanten-9-ilo) o 9-(p-metoxifenil)xantina-9-ilo (MOX), etc.; C(O)- alquilo, C(O)Ph, C(O)arilo, CH2O-alquilo, CH2O-arilo, SO2-alquilo, SO2-arilo, ferc-butildimetilsililo, ferc-butildifenilsililo. Los acetales, tales como MOM o THP y similares se consideran grupos posibles. Los compuestos fluorados tambien se contemplan en la medida en que pueden unirse al compuesto y pueden eliminarse selectivamente pasando a traves de un medio de extraccion en fase solida de fluor (FluoroFlash®). Un ejemplo especifico incluye un analogo de tritilo fluorado, un analogo tritilo 1-[4-(1H,1H,2H,2H-perfluorodecil)fenil)-1,1-difenilmetanoL Tambien se contemplan otros analogos fluorados de tritilo, BOC, FMOC, CBz, etc. Los cloruros de sulfonilo como cloruro de p- toluenosulfonilo pueden reaccionar selectivamente en la posicion 5'. Los esteres pueden formarse selectivamente, tales como acetatos y benzoatos. Pueden usarse anhidridos dicarboxilicos, tal como anhidrido succinico y sus derivados para generar un enlace ester con un acido carboxilico libre, dichos ejemplos incluyen, pero sin limitacion oxalilo, malonilo, succinilo, glutarilo, adipilo, pimelilo, superilo, azelailo, sebacilo, ftalilo, isoftalilo, tereftalilo, etc. El acido carboxilico libre aumenta la polaridad dramaticamente y tambien puede usarse como una palanca para extraer el producto de reaccion en fases acuosas moderadamente basicas tales como soluciones de bicarbonato sodico. El grupo fosforamidato es relativamente estable en medios acidos, por lo que tambien pueden usarse grupos que requieren condiciones de reaccion acidas, tales como, tetrahidropiranilo.
El termino "grupo protector" que se obtiene a partir de un "compuesto protector", tiene su significado simple y habitual, es decir, al menos un grupo protector o de bloqueo esta unido a al menos un grupo funcional (por ejemplo, -OH, -NH2, etc.) que permite la modificacion quimica de al menos un grupo funcional diferente. Los ejemplos de grupos protectores, incluyen, pero sin limitacion, benzoilo, acetilo, benzoilo fenil-sustituido, tetrahidropiranilo, tritilo, DMT (4,4'-dimetoxitritilo), MMT (4-monometoxitritilo), trimetoxitritilo, grupo pixilo (9-fenilxanten-9-ilo), tiopixilo (9- feniltioxanten-9-ilo) o 9-(p-metoxifenil)xantina-9-ilo (MOX), etc.; C(O)-alquilo, C(O)Ph, C(O)arilo, C(O)O(alquilo inferior), C(O)O(alquileno inferior)arilo (por ejemplo, -C(O)OCH2Ph), C(O)Oarilo, CH2O-alquilo, CH2O-arilo, SO2- alquilo, SO2-arilo, un grupo protector que comprende al menos un atomo de silicio, tales como ferc-butildimetilsililo, ferc-butildifenilsililo, Si(alquil inferior)2OSi(alquil inferior)2OH (tal como -Si('Pr)2OSi('Pr)2OH.
La expresion "compuesto protector", como se usa en el presente documento, y a menos que se indique otra cosa, se refiere a un compuesto que contiene un "grupo protector" y que es capaz de reaccionar con un compuesto que contiene grupos funcionales que son capaces de protegerse.
La expresion "grupo saliente", como se usa en este documento, tiene el mismo significado para el experto (Advanced Organic Chemistry: reactions, mechanisms and structure-Cuarta Edicion de Jerry March, John Wiley and Sons Ed.; 1992 paginas 351-357) y representa un grupo que forma parte de y esta unido a una molecula de sustrato; en una reaccion donde la molecula de sustrato experimenta una reaccion de desplazamiento (por ejemplo, con un nucleofilo), el grupo saliente se desplaza entonces. Los ejemplos de grupos salientes incluyen, pero sin limitacion: halogeno (F, Cl, Br e I), preferiblemente Cl, Br o I; tosilato, mesilato, triflato, acetato, canforsulfonato, ariloxido, y ariloxido sustituido con al menos un grupo aceptor de electrones (por ejemplo, p-nitrofenoxido, 2-clorofenoxido, 4- clorofenoxido, 2,4-dinitrofenoxido, pentafluorofenoxido, etc.), etc. La expresion "grupo aceptor de electrones" tiene su significado habitual aqui. Los ejemplos de grupos aceptores de electrones incluyen, pero sin limitacion, un halogeno, -NO2, -C(O)(alquilo inferior), -C(O)(arilo), -C(O)O(alquilo inferior), -C(O)O(arilo), etc.
La expresion "reactivo basico", como se usa en este documento, significa un compuesto que es capaz de desprotonar un grupo hidroxilo. Los ejemplos de reactivos basicos incluyen, pero sin limitacion, un (alk inferior)oxido ((alquil inferior)OM) junto con un disolvente alcoholico, donde los (alk inferior)oxidos incluyen, pero sin limitacion, MeO-, EtO-, nPrO-, 'PrO-, fBuO-, 'AmO- (iso-amiloxido), etc., y donde M es un cation de metal alcalino, tal como Li+, Na+, K+, etc. Los disolventes alcoholicos incluyen (alquil inferior)OH, tales como, por ejemplo, MeOH, EtOH, nPrOH, 'PrOH, teuOH, AmOH, etc. Tambien pueden usarse bases no alcoxi tales como hidruro sodico, hexametildisilazano sodico, hexametildisilazano de litio, diisopropilamida de litio, hidruro calcico, carbonato sodico, carbonato potasico, carbonato de cesio, DBU, DBN, reactivos de Grignard, tales como (alquil inferior)Mg(halogeno), que incluyen, pero sin limitacion, MeMgCl, MeMgBr, 'BuMgCl, 'BuMgBr, etc.
El termino "base" incluye el termino "reactivo basico" y pretende ser un compuesto que es capaz de desprotonar un compuesto que contiene proton, es decir, una base Bronsted. Ademas de los ejemplos que se han mencionado anteriormente, los ejemplos adicionales de una base incluyen, pero sin limitacion piridina, colidina, 2,6-(alquil inferior)-piridina, dimetilanilina, imidazol, N-metil-imidazol, pirazol, N-metil-pirazol, trietilamina, di-isopropiletilamina, etc.
La expresion "grupo aceptor de electrones" es acorde con su significado habitual. Los ejemplos de grupos aceptores de electrones incluyen, pero sin limitacion, un halogeno (F, Cl, Br o I), -NO2, -C(O)(alquilo inferior), -C(O)(arilo), - C(O)O(alquil inferior),-C(O)O(arilo), etc.
El termino "co-cristalatos" incluyen co-cristalatos de 4, Rp-4, o Sp-4 junto con sales, que incluye sales farmaceuticamente aceptables.
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El termino "sales", como se describe en el presente documento, se refiere a un compuesto que comprende un cation y un anion, que puede producirse por la protonacion de un resto aceptor de protones y/o la desprotonacion de un resto donador de protones. Ha de apreciarse que la protonacion del resto aceptor de protones da como resultado la formacion de una especie cationica en la que la carga se equilibra por la presencia de un anion fisiologico, mientras que la desprotonacion del resto donador de protones da como resultado la formacion de una especie anionica en la que la carga se equilibra por la presencia de un cation fisiologico.
La expresion "sal farmaceuticamente aceptable" significa una sal que es farmaceuticamente aceptable. Los ejemplos de sales farmaceuticamente aceptables incluyen, pero sin limitacion: (1) sales de adicion de acidos, formadas con acidos inorganicos, tales como acido clorhidrico, acido bromhidrico, acido sulfurico, acido mtrico, acido fosforico, y similares; o formadas con acidos organicos, tales como acido glicolico, acido piruvico, acido lactico, acido malonico, acido malico, acido maleico, acido fumarico, acido tartarico, acido dtrico, acido 3-(4-hidroxibenzoil)benzoico, acido cinnamico, acido mandelico, acido metanosulfonico, acido etanosulfonico, acido 1,2-etano-disulfonico, acido 2- hidroxietanosulfonico, acido bencenosulfonico, acido 4-clorobencenosulfonico, acido 2-naftalenosulfonico, acido 4- toluenosulfonico, acido canforsulfonico, acido lauril sulfurico, acido gluconico, acido glutamico, acido salicNico, acido muconico, y similares, o (2) sales de adicion de bases formadas con las bases conjugadas de cualquiera de los acidos inorganicos que se han enumerado anteriormente, donde las bases conjugadas comprenden un componente cationico seleccionado de entre Na+, K+, Mg2+, Ca2+, NHgR'Vg+, en la que R"' es un alquilo C1-3 y g es un numero seleccionado de entre 0, 1, 2, 3 o 4. Ha de entenderse que todas las referencias a sales farmaceuticamente aceptables incluyen formas de adicion de disolventes (solvatos) o formas cristalinas (polimorfos) como se define en el presente documento, de la misma sal de adicion de acidos.
El termino "alquilo" se refiere a un residuo hidrocarburo de cadena no ramificada o ramificada, saturado y monovalente que contiene de 1 a 30 atomos de carbono. El termino "alquilo Ci-m" se refiere a un alquilo que comprende de 1 a M atomos de carbono, donde M es un numero entro que tiene los siguientes valores: 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21,22, 23, 24, 25, 26, 27, 28, 29 o 30. El termino "alquilo C1-4" se refiere a un alquilo que contiene de 1 a 4 atomos de carbono. El termino "alquilo inferior" representa un residuo hidrocarburo de cadena lineal o ramificada que comprende de 1 a 6 atomos de carbono. "Alquilo C1-20", como se usa en este documento, se refiere a un alquilo que comprende de 1 a 20 atomos de carbono. "Alquilo C1-10", como se usa en este documento, se refiere a un alquilo que comprende de 1 a 10 carbonos. Los ejemplos de grupos alquilo incluyen, pero sin limitacion, grupos alquilo inferior que incluyen metilo, etilo, propilo, i-propilo, n-butilo, i-butilo, t- butilo o pentilo, isopentilo, neopentilo, hexilo, heptilo y octilo. El termino (ar)alquilo o (heteroaril)alquilo indican que el grupo alquilo esta opcionalmente sustituido con un grupo arilo o un grupo heteroarilo respectivamente.
El termino "alquenilo" se refiere a un radical de cadena hidrocarburo sin sustituir que tiene de 2 a 10 atomos de carbono que tienen uno o dos dobles enlaces olefinicos, preferiblemente un doble enlace olefinico. El termino "alquenilo C2-N" se refiere a un alquenilo que comprende de 2 a N atomos de carbono, donde N es un numero entero que tiene los siguientes valores: 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9 o 10. El termino " alquenilo C2-10" se refiere a un alquenilo que comprende de 2 a 10 atomos de carbono. El termino "alquenilo C2-4" se refiere a un alquenilo que comprende de 2 a 4 atomos de carbono. Los ejemplos incluyen, pero sin limitacion, vinilo, 1-propenilo, 2-propenilo (alilo) o 2-butenilo (crotilo).
El termino "arilo", como se usa en el presente documento, y a menos que se indique otra cosa, se refiere a fenilo sustituido o sin sustituir (Ph), bifenilo, o naftilo, preferiblemente el termino arilo se refiere a fenilo sustituido o sin sustituir. El grupo arilo puede estar sustituido con uno o mas restos seleccionados entre hidroxilo, F, Cl, Br, I, amino, alquilamino, arilamino, alcoxi, ariloxi, nitro, ciano, acido sulfonico, sulfato, acido fosfonico, fosfato y fosfonato, sin proteger o protegidos segun sea necesario, como se conoce por los expertos en la tecnica, por ejemplo, como se indica en T.W. Greene y P.G. M. Wuts, "Protective Groups in Organic Synthesis", 3a ed., John Wiley & Sons, 1999.
El termino "ariloxido", como se usa en el presente documento, y a menos que se indique otra cosa, se refiere a fenoxido sustituido o sin sustituir (PhO-), p-fenil-fenoxido (p-Ph-PhO-), o naftoxido, preferiblemente el termino ariloxido se refiere a fenoxido sustituido o sin sustituir. El grupo ariloxido puede estar sustituido con uno o mas restos seleccionados de entre hidroxilo, F, Cl, Br, I, -C(O)(alquilo inferior), -C(O)O(alquilo inferior), amino, alquilamino, arilamino, alcoxi, ariloxi, nitro, ciano, acido sulfonico, sulfato, acido fosfonico, fosfato y fosfonato, sin proteger o protegidos segun sea necesario, como se conoce por los expertos en la tecnica, por ejemplo, como se indica en T.W. Greene y P.G. M. Wuts, "Protective Groups in Organic Synthesis", 3a ed., John Wiley & Sons, 1999.
El termino "preparacion" o "forma de dosificacion" pretende incluir tanto formulaciones solidas como liquidas del compuesto activo y un experto en la tecnica apreciara que un ingrediente activo puede existir en diferentes preparaciones dependiendo de la dosis deseada y los parametros farmacocineticos.
El termino "excipiente", como se usa en este documento, se refiere a un compuesto que se usa para preparar una composition farmaceutica, y es generalmente seguro, no toxico y ni biologica ni de otra manera indeseable, e incluye excipientes que son aceptables para su uso veterinario, asi como para uso farmaceutico humano.
El termino "cristalino" se refiere a una situation en la que una muestra solida de Sp-4 o Rp-4 tiene caracteristicas
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cristalinas cuando se determina por difraccion de polvo de rayos X o una tecnica de rayos X monocristalina.
El termino "tipo cristal" se refiere a una situacion en la que una muestra solida de Sp-4 o Rp-4 tiene caracteristicas cristalinas cuando se determina por un medio, visualmente o por microscopia optica o polarizante, pero no tiene caracteristicas cristalinas cuando se determina por otros medios, por ejemplo, difraccion de polvo de rayos X. Los metodos de determinacion visual de la cristalinidad de una muestra solida por vision o por microscopia optica o de polarizacion se desvelan en USP <695> y <776>. Una muestra solida de Sp-4 o Rp-4 que es de "tipo cristal" puede ser cristalina en ciertas condiciones, pero puede volverse no cristalina cuando se somete a otras condiciones.
El termino "amorfo" se refiere a una situacion en la que una muestra solida de Sp-4 o Rp-4 no es cristalina ni de tipo cristal.
Se desvela en el presente documento un compuesto representado por la formula 4:
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en la que P* representa un atomo de fosforo quiral. Debido al atomo de fosforo quiral, el compuesto representado por la formula 4 comprende dos diastereomeros designados como Rp-4 y Sp-4. El compuesto representado por la formula 4 tambien puede ser parte de un solvato, un hidrato, o un solvato/hidrato mixto. El solvato se designa como 4nS, mientras que el hidrato se designa como 4-mH2O, donde S es un disolvente reticular, n varia en una cantidad de numero entero o no entero de aproximadamente 0 a aproximadamente 3 y m varia en una cantidad de numero entero o no entero de aproximadamente 0 a aproximadamente 5. Finalmente, el compuesto representado por la formula 4 puede no existir como un solvato o hidrato, pero tiene una cierta cantidad ventajosa de disolvente adsorbido (S) o agua. En cuyo caso, la cantidad de S o agua puede variar de aproximadamente el 0 % en peso a aproximadamente el 10 % en peso, basado en el peso del compuesto representado por la formula 4. El compuesto representado por la formula 4 y sus solvatos e hidratos del mismo es cristalino, de tipo cristal o amorfo.
Tambien se desvela en el presente documento un compuesto representado por la formula Rp-4:
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El compuesto representado por la formula Rp-4 tambien puede ser parte de un solvato, un hidrato o un solvato/hidrato mixto. El solvato se designa como Rp-4-nS, mientras que el hidrato se designa como Sp-4mH2O, donde S es un disolvente reticular, n varia en una cantidad de numero entero o no entero de aproximadamente 0 a aproximadamente 3 y m varia en una cantidad de numero entero o no entero de aproximadamente 0 a aproximadamente 5. Finalmente, el compuesto representado por la formula Rp-4 puede no existir como un solvato, hidrato, o solvato/hidrato mixto, pero tener una cierta cantidad ventajosa de disolvente adsorbido (S), agua, o tanto S como agua. En cuyo caso, la cantidad de S o agua puede variar de aproximadamente el 0 % en peso a aproximadamente l0 % en peso basado en el peso del compuesto representado por la formula Rp-4. El compuesto representado por la formula Rp-4 y sus solvatos e hidratos del mismo es cristalino, de tipo cristal o amorfo.
Tambien se desvela en el presente documento Rp-4 cristalino.
Tambien se desvela en el presente documento Rp-4 cristalino que tiene reflexiones XRPD 20 (°) a aproximadamente: 6,6, 7,1, 9,0, 11,6, 17,9, 20,7, 24,1,24,4 y 26,2.
Tambien se desvela en el presente documento un Rp-4 cristalino que tiene reflexiones XRPD 20 (°) a aproximadamente: 6,6, 7,1, 9,0, 11,0, 11,6, 12,0, 16,0, 17,9, 19,6, 20,7, 21,0, 21,7, 21,9, 22,2, 23,1,24,1,24,4, 26,1, 27,3, 27,7 y 28,2.
Tambien se desvela en el presente documento Rp-4 cristalino que tiene un patron de difraccion XRPD sustancialmente como el que se muestra en la figura 2.
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Tambien se desvela en el presente documento Rp-4 que tiene los siguientes picos FT-IR (cm-1): 1742, 1713, 1679, 1460, 1377, 1259, 1157 y 1079.
Tambien se desvela en el presente documento Rp-4 que tiene un espectro FT-IR sustancialmente como el que se muestra en la figura 15.
Tambien se desvela en el presente documento Rp-4 sustancialmente puro.
Tambien se desvela en el presente documento Rp-4 cristalino sustancialmente puro.
Tambien se desvela en el presente documento Rp-4 sustancialmente puro amorfo.
Se desvela en el presente documento un compuesto representado por la formula Sp-4:
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El compuesto representado por la formula Sp-4 tambien puede ser parte de un solvato, un hidrato, o un solvato/hidrato mixto. El solvato se designa como Sp-4-nS, mientras que el hidrato se designa como Sp-4mH2O, donde S es un disolvente reticular, n varia en una cantidad de numero entero o no entero de aproximadamente 0 a aproximadamente 3 y m varia en una cantidad de numero entero o no entero de aproximadamente 0 a aproximadamente 5. Finalmente, el compuesto representado por la formula Sp-4 puede no existir como un solvato o hidrato, pero tener una cierta cantidad ventajosa de disolvente adsorbido (S) o agua. En cuyo caso, la cantidad de S o agua puede variar de aproximadamente 0 % en peso a aproximadamente 10 % en peso basado en el peso del compuesto representado por la formula Sp-4. El compuesto representado por la formula Sp-4 y sus solvatos e hidratos del mismo es cristalino, de tipo cristal o amorfo.
Tambien se desvela en el presente documento Sp-4 cristalino.
Tambien se desvela en el presente documento un Sp-4 cristalino monoclmico, que tiene preferiblemente los siguientes parametros de celda unitaria a ~ 12,88 A, b ~ 6,17 A, c ~ 17,73 A y p ~ 92,05°.
Tambien se desvela en el presente documento un Sp-4 monoclmico cristalino, que tiene preferiblemente los siguientes parametros de celda unitaria a ~ 20,09 A, b ~ 6,10 A, c ~ 23,01 A y p ~ 112,29°.
Tambien se desvela en el presente documento un Sp-4 monoclmico cristalino, que tiene preferiblemente los siguientes parametros de celda unitaria a ~ 12,83 A, b ~ 6,15 A, c ~ 17,63 A y p ~ 91,75°.
Tambien se desvela en el presente documento un Sp-4 monoclmico cristalino, que tiene preferiblemente los siguientes parametros de celda unitaria a ~ 12,93 A, b ~ 6,18 A, c ~ 18,01 A y p ~ 96,40°.
en 7,5,
el presente documento un 9,6, 16,7, 18,3, 22,2. Sp-4 cristalino que tiene reflexiones XRPD 20 C ) a
en 7,3,
el presente documento un 9,4 y 18,1. Sp-4 cristalino que tiene reflexiones XRPD 20 C ) a
en 6,9,
el presente documento un 9,8, 19,8, 20,6, 24,7 y 26,1. Sp-4 cristalino que tiene reflexiones XRPD 20 ( ) a
en 9,8,
el presente documento un 19,7, 20,6 y 24,6. Sp-4 cristalino que tiene reflexiones XRPD 20 ( ) a
en 6,8,
el presente documento un 19,9, 20,6, 20,9 y 24,9. Sp-4 cristalino que tiene reflexiones XRPD 20 ( ) a
en 6,6,
el presente documento un 7,1, 15,7, 19,1 y 25,0. Sp-4 cristalino que tiene reflexiones XRPD 20 ( ) a
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Tambien se desvela en el presente documento Sp-4 cristalino que tiene un patron de difraccion XRPD sustancialmente como el que se muestra en una cualquiera de la figura 3, figura 4, figura 5, figura 6, figura 7 y la figura 8.
Tambien se desvela en el presente documento Sp-4 que tiene los siguientes picos FT-IR (cm-1) a aproximadamente: 1743, 1713, 1688, 1454, 1378, 1208 y 1082.
Tambien se desvela en el presente documento Sp-4 que tiene un espectro FT-IR sustancialmente como el mostrado en la figura 7.
Tambien se desvela en el presente documento Sp-4 sustancialmente puro.
Tambien se desvela en el presente documento Sp-4 cristalino sustancialmente puro.
Tambien se desvela en el presente documento Sp-4 amorfo sustancialmente puro.
Dosificacion, administracion, y uso
Una composicion para el tratamiento y/o profilaxis de cualquiera de los agentes virales puede prepararse utilizando cualquiera de los compuestos 4, Rp-4, o Sp-4. Agentes virales posibles incluyen, entre otros: virus de la hepatitis C, virus de la hepatitis B, virus de la hepatitis A, virus del Nilo Occidental, virus de la fiebre amarilla, virus del dengue, rinovirus, virus de la polio, diarrea viral bovina, virus de la encefalitis japonesa, o aquellos virus que pertenecen a los grupos pestivirus, hepacivirus o flavivirus.
Una composicion para el tratamiento de cualquiera de los agentes virales divulgados en el presente documento se describe en el presente documento, dicha composicion que comprende un medio farmaceuticamente aceptable se selecciona entre un excipiente, transportador, diluyente, medio equivalente y cualquiera de los compuestos 4, Rp-4, o Sp-4, teniendo por objeto incluir sus hidratos, solvatos, y cualquier forma cristalina de cualquiera de los compuestos 4, Rp-4, o Sp-4 o sus hidratos y solvatos de los mismos.
Los compuestos 4, Rp-4, o Sp-4 pueden formularse de forma independiente en diversas formas de dosificacion y transportadores de administracion oral. La administracion oral puede encontrarse en forma de comprimidos, comprimidos recubiertos, capsulas duras y blandas de gelatina, soluciones, emulsiones, jarabes, o suspensiones. Los compuestos 4, Rp-4, o Sp-4 son eficaces cuando se administran por medio de la administracion con supositorios, entre otras vias de administracion. El modo mas conveniente de administracion es generalmente oral utilizando un regimen de dosificacion diario conveniente que puede ajustarse de acuerdo con la gravedad de la enfermedad y la respuesta del paciente a la medicacion antiviral.
Los compuestos 4, Rp-4, o Sp-4 junto con uno o mas excipientes, transportadores o diluyentes convencionales, pueden ubicarse en forma de composiciones farmaceuticas y dosis unitarias. Las composiciones farmaceuticas y formas de dosificacion unitaria pueden comprender ingredientes convencionales en proporciones convencionales, con o sin compuestos activos adicionales y las formas de dosificacion unitaria pueden contener cualquier cantidad eficaz adecuada del principio activo acorde con el intervalo diario de dosificacion que se pretende emplear. Las composiciones farmaceuticas pueden emplearse como solidos, tales como comprimidos o capsulas rellenas, semisolidos, polvos, formulaciones de liberacion sostenida, o liquidos, tales como suspensiones, emulsiones, o capsulas rellenas para uso oral; o en forma de supositorios para administracion rectal o vaginal. Una preparacion tipica contendra aproximadamente 5 % a aproximadamente 95 % de compuesto o compuestos activos (p/p).
Los compuestos 4, Rp-4, o Sp-4 pueden administrarse solos pero generalmente se administraran mezclados con uno o mas excipientes, diluyentes o transportadores farmaceuticos adecuados seleccionados con respecto a la via de administracion deseada y la practica farmaceutica convencional.
Las preparaciones en forma solida incluyen, por ejemplo, polvos, comprimidos, pildoras, capsulas, supositorios, y granulos dispersables. Un transportador solido puede ser una o mas sustancias que tambien pueden actuar como diluyentes, agentes aromatizantes, solubilizantes, lubricantes, agentes de suspension, aglutinantes, conservantes, agentes disgregantes de comprimidos, o un material de encapsulacion. En polvos, el transportador es generalmente un solido finamente dividido que es una mezcla con el componente activo finamente dividido. En comprimidos, el componente activo generalmente se mezcla con el transportador que tiene la capacidad de union necesaria en proporciones adecuadas y se compacta en la forma y tamano deseados. Transportadores adecuados incluyen, entre otros, carbonato de magnesio, estearato de magnesio, talco, azucar, lactosa, pectina, dextrina, almidon, gelatina, tragacanto, metilcelulosa, carboximetilcelulosa sodica, una cera de bajo punto de fusion, manteca de cacao, y similares. Las preparaciones en forma solida pueden contener, ademas del componente activo, colorantes, aromatizantes, estabilizadores, tampones, edulcorantes artificiales y naturales, dispersantes, espesantes, agentes solubilizantes, y similares. Los ejemplos de formulaciones solidas se ejemplifican en los documentos EP 0524579; US 2002/0142050; US 2004/0224917; US 2005/0048116; US 2005/0058710; US 2006/0034937; US 2006/0057196;
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US 2006/0188570; US 2007/0026073; US 2007/0059360; US 2007/0077295; US 2007/0099902; US 2008/0014228; US 6.267.985; US 6.294.192; US 6.383.471; US 6.395.300; US 6.569.463; US 6.635.278; US 6.645.528; US 6.923.988; US 6.932.983; US 7.060.294; y US 7.462.608.
Las formulaciones liquidas que tambien son adecuadas para la administracion oral incluyen formulaciones liquidas que incluyen asimismo emulsiones, jarabes, elixires y suspensiones acuosas. Estas incluyen preparaciones en forma solida destinadas a convertirse en preparaciones en forma liquida poco antes de su uso. Ejemplos de formulaciones liquidas se ejemplifican en las patentes de Estados Unidos n.° 3.994.974; 5.695.784; y 6.977.257. Las emulsiones pueden prepararse en soluciones, por ejemplo, en soluciones acuosas de propilenglicol o pueden contener agentes emulsionantes, tales como lecitina, monooleato de sorbitan, o acacia. Las suspensiones acuosas pueden prepararse dispersando el componente activo finamente dividido en agua con material viscoso, tal como gomas naturales o sinteticas, resinas, metilcelulosa, carboximetilcelulosa sodica, y otros agentes de suspension adecuadamente conocidos.
Los compuestos 4, Rp-4, o Sp-4 pueden formularse de forma independiente para la administracion como supositorios. En primer lugar, se funde una cera de bajo punto de fusion, tal como una mezcla de gliceridos de acidos grasos o manteca de cacao y el componente activo se dispersa homogeneamente, por ejemplo, por agitacion. La mezcla homogenea fundida se vierte entonces en moldes de tamano conveniente, se deja enfriar y solidificar.
Los compuestos 4, Rp-4, o Sp-4 pueden formularse de forma independiente para la administracion vaginal. Pesarios, tampones, cremas, geles, pastas, espumas o pulverizadores que contienen ademas el ingrediente activo, tal como transportadores se conocen en la materia por ser apropiados. Algunas de estas formulaciones pueden utilizarse igualmente junto con un condon con o sin un agente espermicida.
Formulaciones adecuadas junto con transportadores, diluyentes y excipientes farmaceuticos se describen en Remington: The Science and Practice of Pharmacy 1995, editado por E. W. Martin, Mack Publishing Company, 19a edicion, Easton, Pensilvania. Un cientifico experto en formulacion puede modificar las formulaciones en las ensenanzas de la memoria descriptiva para proporcionar numerosas formulaciones para una via particular de administracion sin hacer que las composiciones que contienen los compuestos contemplados en el presente documento sean inestables o comprometan su actividad terapeutica.
Adicionalmente, los compuestos purificados 4, Rp-4, o Sp-4 pueden formularse de forma independiente junto con liposomas o micelas. En cuanto a los liposomas, se contempla que los compuestos purificados pueden formularse de manera como se divulga en las patentes de Estados Unidos n.° 4.797.285; 5.013.556; 5.077.056; 5.077.057;
5.154.930; 5.192.549; 5.213.804; 5.225.212; 5.277.914; 5.316.771; 5.376.380; 5.549.910; 5.567.434; 5.736.155;
5.827.533; 5.882.679; 5.891.468; 6.060.080; 6.132.763; 6.143.321; 6.180.134; 6.200.598; 6.214.375; 6.224.903;
6.296.870; 6.653.455; 6.680.068; 6.726.925; 7.060.689; y 7.070.801. Con respecto a las micelas, se contempla que los compuestos purificados pueden formularse de manera como se divulga en las patentes de Estados Unidos 5.145.684 y 5.091.188.
Cualquiera de los compuestos 4, Rp-4, o Sp-4 puede utilizarse en la fabricacion de un medicamento para el tratamiento de cualquier afeccion del resultado de una infeccion por uno cualquiera de los siguientes agentes virales: virus de la hepatitis C, virus del Nilo Occidental, virus de la fiebre amarilla, virus del dengue, rinovirus, virus de la polio, virus de la hepatitis A, virus de la diarrea viral bovina y virus de la encefalitis japonesa.
El termino "medicamento" significa una sustancia utilizada en un metodo de tratamiento y/o profilaxis de un sujeto en necesidad del mismo, en el que la sustancia incluye, entre otros, una composicion, una formulacion, una forma de dosificacion, y similares, que comprende cualquiera de los compuestos 4, Rp-4, o Sp-4. Se contempla el uso de cualquiera de los compuestos 4, Rp-4, o Sp-4 en la fabricacion de un medicamento, para el tratamiento de cualquiera de las afecciones antivirales divulgadas en el presente documento, solo o en combinacion con otro compuesto divulgado en el presente documento. Un medicamento incluye, entre otros, una cualquiera de las composiciones contempladas por la cuarta realizacion divulgada en el presente documento.
Asimismo se divulga un metodo de tratamiento y/o profilaxis en un sujeto en necesidad del mismo, dicho metodo comprende administrar una cantidad terapeuticamente eficaz de cualquiera de los compuestos 4, Rp-4, o Sp-4 al sujeto.
Se tiene por objeto que un sujeto que lo necesita es uno con cualquier afeccion resultado de una infeccion por cualquiera de los agentes virales divulgados en el presente documento, que incluye, entre otros, virus de la hepatitis C, virus del Nilo Occidental, virus de la fiebre amarilla, virus del dengue, rinovirus, virus de la polio, virus de la hepatitis A, virus de la diarrea viral bovina o virus de la encefalitis japonesa, virus Flaviviridae o pestivirus o hepacivirus o un agente viral que provoca sintomas equivalentes o comparables a cualquiera de los virus mencionados previamente.
El termino "sujeto" se refiere a un mamifero, que incluye, entre otros, ganado, cerdos, ovejas, pollos, pavos, bufalos,
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llamas, avestruces, perros, gatos y seres humanos, preferentemente el sujeto es un ser humano . Se contempla que en el metodo de tratamiento de un mismo sujeto de la novena realizacion puede ser cualquiera de los compuestos contemplados en el presente documento, ya sea solo o en combinacion con otro compuesto divulgado en el presente documento.
El termino "cantidad terapeuticamente eficaz" como se utiliza en el presente documento, significa una cantidad requerida para reducir los sintomas de una enfermedad en un individuo. La dosis se ajustara a los requisitos individuales en cada caso particular. Esa dosificacion puede variar en los amplios limites en funcion de numerosos factores, tales como la gravedad de la enfermedad a tratar, la edad y el estado de salud general del paciente, otros medicamentos con los que se esta tratando al paciente, la via y forma de administracion y las preferencias y experiencia del practicante medico involucrado. Para la administracion oral, una dosificacion diaria comprendida entre aproximadamente 0,001 y aproximadamente 10 g, incluyendo todos los valores intermedios, tales como 0,001, 0,0025, 0,005, 0,0075, 0,01, 0,025, 0,050, 0,075, 0,1, 0,125, 0,150, 0,175, 0,2, 0,25, 0,5, 0,75, 1, 1,5, 2, 2,5, 3, 3,5, 4, 4,5, 5, 5,5, 6, 6,5, 7, 7,5, 8, 8,5, 9 y 9,5, por dia ha de ser apropiada en monoterapia y/o en terapia de combinacion. Una dosificacion diaria en particular oscila entre aproximadamente 0,01 y aproximadamente 1 g por dia, incluyendo todos los valores incrementales de 0,01 g (es decir, 10 mg) intermedios, una dosificacion diaria preferente entre aproximadamente 0,01 y aproximadamente 0,8 g por dia, mas preferentemente 0,01 y aproximadamente 0,6 g por dia, y mas preferentemente aproximadamente 0,01 y aproximadamente 0,25 g por dia, incluyendo cada uno de los cuales todos los valores incrementales de 0,01 g intermedios. Generalmente, el tratamiento se inicia con una "dosis de carga" inicial elevada para reducir o eliminar rapidamente el virus seguido de una disminucion de la dosis a un nivel suficiente para evitar la reaparicion de la infeccion. Un experto en el tratamiento de las enfermedades descritas en el presente documento sera capaz de establecer, sin experimentacion excesiva y en funcion de su conocimiento, experiencia y las divulgaciones de la presente solicitud, una cantidad terapeuticamente eficaz del compuesto divulgado en el presente documento para una enfermedad y un paciente dados.
La eficacia terapeutica puede determinarse a partir de ensayos de la funcion hepatica, incluyendo, entre otros, niveles proteicos, tales como proteinas sericas (p. ej., albumina, factores de coagulacion, fosfatasa alcalina, aminotransferasas (p. ej., alanina transaminasa, aspartato transaminasa), 5'-nucleosidasa, y- glutaminiltranspeptidasa, etc.), sintesis de bilirrubina, sintesis de colesterol y sintesis de acidos biliares; una funcion metabolica hepatica, incluyendo, entre otros, metabolismo de carbohidratos, metabolismo de aminoacidos y de amoniaco. Alternativamente, la eficacia terapeutica puede controlarse por medicion de ARN de VHC. Los resultados de estos ensayos permitiran que se optimice la dosis.
Se divulga un metodo de tratamiento y/o profilaxis en un sujeto en necesidad del mismo, en el que dicho metodo comprende administrar al sujeto una cantidad terapeuticamente eficaz de un compuesto representado por cualquiera de los compuestos 4, Rp-4, o Sp-4 y una cantidad terapeuticamente eficaz de otro agente antiviral; en el que la administracion es simultanea o alternativa. Queda entendido que el tiempo entre la administracion alternativa puede oscilar entre 1-24 horas, que incluye cualquier subintervalo intermedio que incluye 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21,22, y 23 horas.
Ejemplos de "otro agente antiviral" incluyen, entre otros: inhibidores de la proteasa NS3 del VHC (vease los documentos EP 1881001, US 2003187018, US 2005267018, WO 2003006490, WO 200364456, WO 2004094452, WO 2005028502, WO 2005037214, WO 2005095403, WO 2007014920, WO 2007014921, WO 2007014922, WO 2007014925, WO 2007014926, WO 2007015824, WO 2008010921 y WO 2008010921); inhibidores NS5B del VHC (vease los documentos US 2004229840, US 2005154056, US 2005-98125, US 20060194749, US 20060241064, US 20060293306, US 2006040890, US 2006040927, US 2006166964, US 2007275947, US 6784166, US20072759300, WO 2002057287, WO 2002057425, WO 2003010141, WO 2003037895, WO 2003105770, WO 2004000858, WO 2004002940, WO 2004002944, WO 2004002977, WO 2004003138, WO 2004041201, WO 2004065367, WO
2004096210, WO 2005021568, WO 2005103045, WO 2005123087, WO 2006012078, WO 2006020082, WO
2006065335, WO 2006065590, WO 2006093801, WO 200702602, WO 2007039142, WO 2007039145, WO
2007076034, WO 2007088148, WO 2007092000, y WO2007095269); inhibidores NS4 del VHC (vease los
documentos WO 2005067900 y WO 2007070556); inhibidores NS5a del VHC (vease los documentos US 2006276511, WO 2006035061, WO 2006100310, WO 2006120251 y WO 2006120252); agonistas del receptor tipo Toll (vease el documento WO 2007093901); y otros inhibidores (vease los documentos WO 2000006529, WO 2003101993, WO 2004009020, WO 2004014313, WO 2004014852 y WO 2004035571); y compuestos divulgados en la solicitud de patente de Estados Unidos n.° 12/053.015, presentada el 21 de marzo de 2008 (documento US 2010/0016251), interferon-a, interferon-p, interferon-a pegilado, ribavirina, levovirina, viramidina, otro inhibidor nucleosido de la polimerasa de VHC, inhibidor no nucleosido de la polimerasa de VHC, inhibidor de la proteasa de VHC, inhibidor de la helicasa de VHC o inhibidor de fusion de VHC.
Cuando cualquiera de los compuestos 4, Rp-4, o Sp-4 se administra en combinacion con otro agente antiviral, la actividad puede aumentar con respecto al compuesto original. Cuando el tratamiento es una terapia de combinacion, dicha administracion puede ser simultanea o secuencial con respecto a la de los derivados de nucleosido. "Administracion simultanea" como se utiliza en el presente documento incluye por consecuencia la administracion de los agentes al mismo tiempo o en momentos diferentes. La administracion de dos o mas agentes al mismo tiempo
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puede conseguirse mediante una formulacion unica que contiene dos o mas principios activos o mediante la administracion basicamente simultanea de dos o mas formas de dosificacion con un unico agente activo.
Se entendera que las referencias en el presente documento con respecto al tratamiento se extienden a la profilaxis asi como al tratamiento de las afecciones existentes. Es mas, el termino "tratamiento" de una infeccion por VHC, como se utiliza en el presente documento, tambien incluye el tratamiento o profilaxis de una enfermedad o una afeccion asociada o mediada por la infeccion por VHC, o los sintomas clinicos de la misma.
Preparacion
La presente invention proporciona un proceso para preparar 4, o un diastereomero a base de fosforo del mismo (Rp- 4 o Sp-4), que comprende: a) hacer reaccionar un alanato de isopropilo, A, un di-X'-fenilfosfato, B, 2'-desoxi-2'- fluoro-2'-C-metiluridina, 3, y una base para obtener una primera mezcla que comprende 4, o el diastereomero a base de fosforo del mismo;
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en la que X es una base conjugada de un acido, n es 0 o 1, y X' es un halogeno; b) hacer reaccionar la primera mezcla con un compuesto protector para obtener una segunda mezcla que comprende 4, o el diastereomero a base de fosforo del mismo, en la que el compuesto protector se selecciona de entre un compuesto protector t- butildimetilsililo y un compuesto protector dimetoxitrifenilmetilo; y c) someter opcionalmente la segunda mezcla a cristalizacion, cromatografia o extraction con el fin de obtener 4, o el diastereomero a base de fosforo del mismo.
De acuerdo con una realization, el alanato de isopropilo esta presente como su sal de acido clorhidrico, que es preferiblemente anhidra.
De acuerdo con una realizacion, la base es N-metilimidazol.
De acuerdo con una realizacion, la relation molar de A con respecto a B con respecto a 3 es 1,6 con respecto a 1,3 con respecto a 1.
De acuerdo con una realizacion, el compuesto protector es cloruro de t-butildimetilsililo.
Tambien se desvela en el presente documento un proceso para preparar Sp-4 o Rp-4, que comprende:
a) hacer reaccionar un alanato de isopropilo, A, un di-LG-fenilfosfato, B, 2'-desoxi-2'-fluoro-2'-C-metiluridina, 3, y una base para obtener una primera mezcla que comprende al menos uno de Sp-4 y Rp-4
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b) someter opcionalmente la segunda mezcla a cristalizacion, cromatografia o extraccion con el fin de obtener Sp-4 o Rp-4 purificados.
Un proceso para preparar Rp-4 puede incluir adicionalmente purificar ademas puede la segunda mezcla o el Rp-4 purificado disolviendo o suspendiendo la segunda mezcla o la mezcla de Rp-4 purificado en un disolvente; opcionalmente seguido de siembra con Rp-4 cristalino; y anadir suficiente anti-disolvente para obtener Rp-4 cristalino.
Un proceso para preparar Sp-4 puede incluir adicionalmente purificar ademas la segunda mezcla o el Sp-4 purificado
d) disolviendo o suspendiendo la segunda mezcla o el Sp-4 purificado en un disolvente seguido de siembra con Sp-4 cristalino a aproximadamente la temperatura ambiente; recoger un primer solido cuya mayor parte comprende Sp-4; disolver el primer solido en un disolvente a su temperatura de reflujo; y enfriar o anadir un anti-disolvente para obtener un segundo solido.
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Un proceso para la preparacion de Sp-4 puede incluir adicionalmente purificar ademas Sp-4 d) disolviendo o suspendiendo la segunda mezcla o la mezcla de Sp-4 purificado en un primer disolvente seguido de anadir un anti- disolvente para obtener una primera composicion en la que el disolvente/anti-disolvente residual se elimina por decantacion para obtener un residuo; tratar el residuo con una solucion que contiene el primer disolvente y anti- disolvente para producir una segunda composicion por lo que tras reducir la presion produce un primer solido; disolver o suspender el primer solido usando un segundo disolvente para obtener una tercera composicion; anadir cristales de siembra de Sp-4 a la tercera composicion; recoger un segundo solido; disolver o suspender el segundo solido en un tercer disolvente, opcionalmente calentado a la temperatura de reflujo del tercer disolvente para obtener una cuarta composicion, y, si es necesario, enfriar la cuarta composicion para obtener un tercer solido que comprende Sp-4 que se recoge por filtracion.
En un proceso para la preparacion de Sp-4, Sp-4 puede purificarse adicionalmente a partir de la segunda mezcla o el Sp-4 purificado d) anadiendo gel de silice a la segunda mezcla o el Sp-4 purificado seguido de evaporacion del disolvente para proporcionar una suspension seca; agitar la suspension seca en una primera combinacion de disolvente/anti-disolvente para obtener una primera suspension humeda; decantar la primera combinacion de disolvente/anti-disolvente de la primera suspension humeda para obtener una segunda suspension humeda y una primera composicion; anadir a la segunda suspension humeda una segunda combinacion de disolvente/anti- disolvente seguido de agitacion; decantar la segunda combinacion de disolvente/anti-disolvente de la segunda suspension humeda para obtener una tercera suspension humeda y una segunda composicion; repetir opcionalmente las etapas g)-h) en la tercera suspension humeda o suspensiones humedas adicionales; evaporar el disolvente de la segunda composicion, y opcionalmente cualquier composicion adicional obtenida de la etapa opcional i) para obtener un primer solido; disolver o suspender el primer solido en una solucion que contiene un tercer disolvente y opcionalmente un cuarto disolvente para obtener una tercera composicion; anadir opcionalmente cristales de siembra de Sp-4 a la tercera composicion; obtener de la tercera composicion un segundo solido que comprende Sp-4; y recristalizar opcionalmente el segundo solido usando un tercer disolvente para obtener un tercer solido que comprende Sp-4.
Un experto apreciara que los compuestos pueden separarse por extraccion tradicional, cristalizacion tradicional, o tecnicas cromatograficas tradicionales. Las tecnicas cromatograficas tradicionales incluyen, pero sin limitacion, cromatografia sobre gel de silice (usando, por ejemplo, metanol al 3-5 % en DCM o isopropanol al 4-6 % en DCM) para producir niveles mejorados de un isomero (50-100 %) y despues cristalizarlo. Como alternativa, se puede usar cromatografia de fase inversa (usando, por ejemplo, fase movil acuosa de acetonitrilo al 1-30 %). Ademas, los compuestos pueden aislarse por cromatografia de fluidos supercriticos SFC sobre dioxido de carbono como el disolvente principal y alcoholes tal como metanol como un modificador, usando preferiblemente el medio quiral apropiado, tal como Daicel Chiralpack IA. Como alternativa, puede emplearse cromatografia SMB usando el medio quiral apropiado, tal como, Daicel ChiralPack IA, usando una mezcla de disolventes tal como hexanos/isopropanol o disolventes individuales, tal como acetato de etilo.
Tambien se desvela en el presente documento un proceso para preparar Sp-4, que comprende: a) hacer reaccionar un alanil-fosforamidato de isopropilo con un 3 3'-O-protegido o no protegido, y un reactivo basico para obtener una composicion que comprende Sp-4 protegido o no protegido
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en la que el alanil-fosforamidato de isopropilo esta compuesto por una mezcla de diastereomeros representada por las siguientes estructuras:
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en las que la relacion de C:C' es de aproximadamente 1:1.
El reactivo basico puede ser cloruro de t-butilmagnesio y la relacion de C:C' puede ser mayor de o igual a aproximadamente 1:1.
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El reactivo basico puede ser cloruro de t-butilmagnesio y la relacion de C:C' puede ser mayor de aproximadamente 1:1.
El reactivo basico puede ser cloruro de t-butilmagnesio y la relacion de C:C' puede ser al menos aproximadamente 1,5:1, aproximadamente 2,3:1, aproximadamente 4:1, aproximadamente 5,7:1, aproximadamente 9:1, aproximadamente 19:1, aproximadamente 32,3:1, aproximadamente 49:1, o aproximadamente 99:1.
LG' puede ser p-nitrofenoxido, el reactivo basico puede ser cloruro de t-butilmagnesio, y la relacion de C:C' puede ser al menos aproximadamente 1,5:1, aproximadamente 2,3:1, aproximadamente 4:1, aproximadamente 5,7:1, aproximadamente 9:1, aproximadamente 19:1, aproximadamente 32,3:1, aproximadamente 49:1, o aproximadamente 99:1.
Se desvela un proceso adicional para preparar Sp-4, y comprende: a) hacer reaccionar un alanil-fosforamidato de isopropilo (C) con un 3 3'-O-protegido o no protegido, y un reactivo basico para obtener una composicion que comprende Sp-4 protegido o no protegido
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en la que Z es un grupo protector o hidrogeno; LG' es un grupo saliente; y b) someter opcionalmente el Sp-4 protegido o no protegido obtenido a cromatografia, extraccion o cristalizacion para obtener Sp-4 purificado protegido o no protegido. LG' puede ser tosilato, canforsulfonato, o un ariloxido sustituido con al menos un grupo aceptor de electrones; mas preferiblemente, LG' puede seleccionarse de entre p-nitrofenoxido, 2,4-dinitrofenoxido y pentafluorofenoxido. Cuando Sp-4 esta protegido, es decir, Z no es hidrogeno, el proceso puede incluir adicionalmente desproteger el Sp-4 protegido. La reaccion puede realizarse en un disolvente aprotico polar, tal como, tetrahidrofurano u otro disolvente etereo ya sea en solitario o en combinacion entre si o con un nitrilo C2 a C7, tal como acetonitrilo.
El proceso puede comprender adicionalmente 1) hacer reaccionar (LG')P(O)(LG)2, en la que LG, independiente de LG', es un grupo saliente, con (i) alanato de isopropilo y una primera base para obtener (LG')P(O)(LG)(Ala-Pr) seguido de hacer reaccionar (LG')P(O)(LG)(Ala-Pr) con fenol y una segunda base para obtener una mezcla que comprende C y C', (ii) fenol y una primera base para obtener (LG')P(O)(LG)(OPh) seguido de hacer reaccionar (LG')P(O)(LG)(OPh) con alanato de isopropilo y una segunda base para obtener una mezcla que comprende C y C', o (iii) combinar alanato de isopropilo, fenol, y al menos una base para obtener una mezcla que comprende C y C'; o 2) hacer reaccionar (PhO)P(O)(LG)2, en la que LG', independiente de LG, es un grupo saliente, con (i) alanato de isopropilo y una primera base para obtener (PhO)P(O)(LG)(Ala-Pr) seguido de hacer reaccionar (PhO)P(O)(LG)(Ala- Pr) con un grupo saliente precursor y una segunda base para obtener una mezcla que comprende C y C',

O O

p... + p.,,
LG,^ ^'"NHAla-iPr '"OPh
OPh NHAla-iPr

C C'
y someter la mezcla a cromatografia o cristalizacion de la mezcla para obtener C. El alanato de isopropilo puede estar presente como su sal de acido clorhidrico, que es preferiblemente sustancialmente anhidra.
Se desvela un proceso adicional para preparar Rp-4, que comprende: a) hacer reaccionar un alanil-fosforamidato de isopropilo con un 3 3'-O-protegido o no protegido, y un reactivo basico para obtener una composicion que comprende Rp-4 protegido o no protegido
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en la que el alanil-fosforamidato de isopropilo esta compuesto por una mezcla de diastereomeros representada por las siguientes estructuras:

O O

p.,„ + p,,,
LG,^ ^ "NHAIa-iPr L(y/ \ "OPh
OPh NHAla-iPr

C C'
en las que la relacion de C':C es de aproximadamente 1:1.
El reactivo basico puede ser cloruro de t-butilmagnesio y la relacion de C':C puede ser mayor de o igual a aproximadamente 1:1.
El reactivo basico puede ser cloruro de t-butilmagnesio y la relacion de C':C puede ser mayor de aproximadamente 1:1.
El reactivo basico puede ser cloruro de t-butilmagnesio y la relacion de C':C puede ser al menos aproximadamente 1,5:1, aproximadamente 2,3:1, aproximadamente 4:1, aproximadamente 5,7:1, aproximadamente 9:1, aproximadamente 19:1, aproximadamente 32,3:1, aproximadamente 49:1, o aproximadamente 99:1.
LG' puede ser p-nitrofenoxido, el reactivo basico puede ser cloruro de t-butilmagnesio, y la relacion de C':C puede ser al menos aproximadamente 1,5:1, aproximadamente 2,3:1, aproximadamente 4:1, aproximadamente 5,7:1, aproximadamente 9:1, aproximadamente 19:1, aproximadamente 32,3:1, aproximadamente 49:1, o aproximadamente 99:1.
Un metodo adicional para preparar Rp-4 comprende: a) hacer reaccionar un alanil-fosforamidato de isopropilo (C') con un 3 3'-O-protegido o no protegido, y un reactivo basico para obtener una composition que comprende Rp-4
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en la que Z es un grupo protector o hidrogeno; LG' es un grupo saliente; y b) someter opcionalmente el Rp-4 protegido o no protegido obtenido a cromatografia, extraction o cristalizacion para obtener Rp-4 purificado protegido o no protegido, LG' puede ser tosilato, canforsulfonato, o un ariloxido sustituido con al menos un grupo aceptor de electrones; mas preferiblemente, LG' puede seleccionarse de entre p-nitrofenoxido, 2,4-dinitrofenoxido y pentafluorofenoxido. Cuando Rp-4 esta protegido, es decir, Z no es hidrogeno, el proceso puede incluir adicionalmente desproteger el Rp-4 protegido. La reaction puede realizarse en un disolvente aprotico polar, tal como, tetrahidrofurano u otro disolvente etereo ya sea en solitario o en combination entre si o con un nitrilo C2 a C7, tal como acetonitrilo.
El proceso puede comprender adicionalmente 1) hacer reaccionar (LG')P(O)(LG)2, en la que LG, independiente de LG', es un grupo saliente, con (i) alanato de isopropilo y una primera base para obtener (LG')P(O)(LG)(Ala-'Pr) seguido de hacer reaccionar (LG')P(O)(LG)(Ala-'Pr) con fenol y una segunda base para obtener una mezcla que comprende C y C', (ii) fenol y una primera base para obtener (LG')P(O)(LG)(OPh) seguido de hacer reaccionar (LG')P(O)(LG)(OPh) con alanato de isopropilo y una segunda base para obtener una mezcla que comprende C y C', o (iii) combinar alanato de isopropilo, fenol, y al menos una base para obtener una mezcla que comprende C y C'; o 2) hacer reaccionar (PhO)P(O)(LG)2, en la que LG', independiente de LG, es un grupo saliente, con (i) alanato de isopropilo y una primera base para obtener (PhO)P(O)(LG)(Ala-'Pr) seguido de hacer reaccionar (PhO)P(O)(LG)(Ala- 'Pr) con un grupo saliente precursor y una segunda base para obtener una mezcla que comprende C y C’,

O O

p.,„ + p..„
LQI/ ^"NHAla-iPr LQI/ ^ "OPh
OPh NHAla-iPr

C C'
y someter la mezcla a cromatografia o cristalizar la mezcla para obtener C'. El alanato de isopropilo puede estar presente como su sal de acido clorhidrico, que es preferiblemente sustancialmente anhidra.
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Tambien se desvela en el presente documento una composicion obtenida por los procesos que se han mencionado anteriormente. Tambien se desvela en el presente documento una composicion obtenida por una cualquiera de las realizaciones ilustradas analizadas a continuacion. La composicion obtenida de este modo puede ser cristalina, de tipo cristal, amorfa, o una combinacion de los mismos.
Tambien se desvela en el presente documento un compuesto 3
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en la que Z es un grupo protector o hidrogeno; que es util para la preparacion de Rp-4 o Sp-4.
El compuesto 3 puede seleccionarse de entre compuestos que tienen las siguientes estructuras
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3a: Z = -C(O)CH2CH2C(O)CH3
3b: Z = -C(O)OCH2Ph
3c: Z = -Si(Me)2fBu
3d: Z = -Si('Pr)2OSi('Pr)2OH
Tambien se desvela un compuesto, su sal, hidrato, solvato, o combinacion de los mismos, representado por las siguientes estructuras
LG’
0
O
p.„„
o P.„
^'"NHAla-iPr
LG'^ V
OPh
t
C
C'
'OPh
NHAla-iPr
donde LG' es un grupo saliente, que es util para la preparacion de Rp-4 o Sp-4.
LG' puede ser tosilato, canforsulfonato, un ariloxido, o un ariloxido sustituido con al menos un grupo aceptor de electrones.
LG' puede seleccionarse de entre p-nitrofenoxido, 2,4-dinitrofenoxido y pentafluorofenoxido.
Tambien se desvela en el presente documento un analogo marcado con isotopos de Rp-4 o Sp-4. La expresion analogo "marcado con isotopos" se refiere a un analogo de Rp-4 o Sp-4 que es un "analogo deuterado", un "analogo marcado con 13C", o un "analogo deuterado/marcado con 13C". La expresion "analogo deuterado" significa un compuesto descrito en el presente documento, por lo que un isotopo 1H, es decir, hidrogeno (H), esta sustituido con un isotopo 2H, es decir, deuterio (D). La sustitucion de deuterio puede ser parcial o completa. La sustitucion de deuterio parcial significa que al menos un hidrogeno esta sustituido con al menos un deuterio. Por ejemplo, para Rp- 4 o Sp-4, un experto puede contemplar al menos los siguientes analogos deuterados parciales (donde "dn" representa n numero de atomos de deuterio, tal como, para un grupo n = 1-7, mientras que para un grupo fenilo, n = 1-5), asi como los representados a continuacion.
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Aunque los grupos metilo que se han representado anteriormente se muestran como completamente deuterados, se reconocera que tambien son posibles variaciones deuteradas parciales, tales como -CDH2 y -CD2H. Tambien se contemplan etiquetas isotopicas en la furanosa y la base. De forma analoga, las expresiones "analogo marcado con 13C" y "analogo deuterado/marcado con 13C" se refiere a un compuesto descrito en el presente documento, por lo que el atomo de carbono se enriquece con un isotopo 13C lo que significa que la extension de enriquecimiento excede la abundancia natural habitual de aproximadamente el 1,1 %.
Ejemplos
Sin limitarse a modo de ejemplo, los siguientes ejemplos sirven para facilitar un mejor entendimiento de la divulgacion.
Aspectos de la smtesis
Para preparar el nucleosido de uridina, se puede aprovechar un intermedio de citidina tribenzoilada avanzado en la smtesis de ciertos analogos 3',5'-diacilados de 3 (vease a continuacion) ya producidos eficientemente a una escala de planta piloto (vease el documento WO 2006/031725 o el documento US 2006/0122146). Se descubrio que el siguiente metodo era escalable y rentable.
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Se obtiene 3',5'-O-dibenzoil-2'-desoxi-2'-fluoro-2'-C-metil-N4-benzoilcitidina (1) mediante un metodo desvelado en los documentos WO 2006/031725 y WO 2008/045419. 1 se trata con acido acetico acuoso al 70 % para formar 3',5'-O- dibenzoil-2'-desoxi-2'-fluoro-2'-C-metil-uridina (2). Los benzoil esteres pueden hidrolizarse en varios metodos tambien, por ejemplo, alcoxidos en disolvente alcoholico, tal como metoxido sodico en metanol, carbonato potasico en metanol, o analogos de etanol, alquilaminas tal como metilamina en metanol, butilamina, etc. Se escoge amoniaco metanolico para el trabajo a mayor escala. El producto uridina (3) puede purificarse por cristalizacion para proporcionar un rendimiento del 70 % en la citidina tribenzoilada (1).
Numerosos procedimientos bibliograficos detallan diferentes rutas y condiciones para preparar fosforamidatos usando equivalentes en varias veces de reactivos. Veanse, por ejemplo, McGuigan y col. J. Med. Chem. 2005, 48, 3504-3515 y McGuigan y col. J. Med. Chem. 2006, 49, 7215. Para un trabajo a escala de proceso, existe unicamente un ejemplo conocido en la actualidad, que se desvela en Lehsten y col., Org. Process Res. Dev. 2002, 6, 819-822 ("Lehsten"). En esta referencia, los autores introducen el concepto de un "procedimiento de una etapa" en el que una sal clorhidrato de aminoacido y diclorofosfato de fenilo se hacen reaccionar junto con N-metilimidazol en diclorometano. Mas tarde, el nucleosido se anade para formar el producto de 5'-O-fosforamidato deseado, que en el presente caso proporcionara un compuesto representado por la formula 4. Desafortunadamente, el procedimiento de Lehsten tenia algunos inconvenientes. Por ejemplo, el procedimiento de Lehsten utilizo un exceso mucho mayor de reactivos del que fue necesario, lo que se anadio al coste y la dificultad de la purification cromatografica. Ademas, Lehsten sugirio que se puede controlar la selectividad de la reaccion en el 5'-hidroxilo sobre el 3'-hidroxilo en comparacion con una referencia bibliografica a traves del uso de temperaturas inferiores y una adicion lenta del nucleosido.
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5'-0-fosforamidato 3'-0-fosforamidato
(2 diastereomeros) (2 diastereomeros)
3',5'-bis-0-fosforamidato (4 diastereomeros)
Usando el procedimiento de Lehsten para los compuestos desvelados en el presente documento proporciono aproximadamente el 1-5 % de diastereomeros de 3'-O-fosforamidato mono-sustituido (5) y aproximadamente el 1030 % del producto bis-sustituido (6). Dado que la polaridad de los 3'-diastereomeros fue muy similar a los 5'- diastereomeros deseados (4), la separation cromatografica fue un gran desafio. La expansion del proceso fue casi imposible sin descartar una portion sustancial de los 5'-diastereomeros menos polares (4) o aceptar un mayor nivel de contamination de los 3'-diastereomeros (5). En un aumento de 50 g inicial, el producto resultante contenia una contamination del 3'-diastereomero (5) de aproximadamente un 3 %, que co-eluyo con el menos polar del 5'- diastereomero (4).
Se desvelan en el presente documento condiciones de reaction que usan menos cantidades de reactivos y un metodo para eliminar selectivamente la impureza de los diastereomeros 3'-O-fosforamidato (5) con una separacion cromatografica mas facil, proporcionando de este modo los diastereomeros 5'-O-fosforamidato deseados con una pureza mucho mayor (4).
Para la estequiometrica del reactivo, se hizo un estudio en el que la estequiometria de los reactivos se cambio sistematicamente y los resultados se controlaron por RMN de fosforo de la reaccion en bruto segun Lehsten habia indicado. En las realizaciones mas exitosas, el rendimiento aislado y la pureza del producto deseado se compararon. Se observo que el 5'-hidroxilo primario reacciona a una velocidad mas rapida que el 3'-hidroxilo secundario. Esto crea una situation competente entre el progreso de reaccion del consumo de todo el nucleosido de partida y la conversion de los productos 5'- y 3'-monosustituidos (4 y 5) en los productos 5',3'-bis sustituidos (6). El producto 3'- monosustituido se convierte en el producto bis a una velocidad mas rapida que el producto 5'-monosustituido, por lo que es posible reducir el nivel de contaminacion del 3'-diastereomero empujando la reaccion mas a los productos bis-sustituidos. Sin embargo, con un modo eficaz para retirar los 3'-diastereomeros, la reaccion puede optimizarse para producir mas del 5'-diastereomero deseado sin tener que sacrificar gran parte del 5'-diastereomero que se convierte en el (6) bis-sustituido. Tambien se observo que el clorhidrato de aminoacido es muy higroscopico. Dado que cualquier agua presente consumira una cantidad equivalente del reactivo de diclorofosfato de fenilo, ha de tenerse cuidado para mantener el aminoacido sustancialmente anhidro o deberia hacerse sustancialmente anhidro antes de su uso. En resumen, Lehsten ha indicado que la relation optima de aminoacido con respecto a diclorofosfato de fenilo con respecto a nucleosido fue de 3,5:2,5:1, respectivamente. Se descubrio que la relacion optima de aminoacido con respecto a diclorofosfato de fenilo con respecto a nucleosido de aproximadamente 1,6 a aproximadamente 1,3 a aproximadamente 1 es optima en condiciones en las que el 3'-diastereomero puede eliminarse eficientemente y cuando el clorhidrato de aminoacido es sustancialmente anhidro. Usando una cantidad menor de los reactivos, se consiguen ahorros en el coste junto con una simplification de la separacion cromatografica del producto deseado de los subproductos de reactivo y del nivel reducido de bis diastereomeros.
En un procedimiento alternativo, un derivado 3'-hidroxi-bloqueado de 3 se preparo usando un grupo de bloqueo de t- butildimetilsililo en dos etapas. Despues, este se convirtio en su derivado 5'-fosforamidato. El deseo es que el grupo sililo puede entonces eliminarse y no habria ningun 3' isomero (5) o 3',5'-bis fosforamidato (6). Se demostro un procedimiento similar por Borch y Fries (patente de Estados Unidos 5.233.031) con un rendimiento general bajo en un fosforamidato de alquilo.
Otro procedimiento alternativo fue usar la sintesis directa y despues usar la quimica para facilitar la diferenciacion de las impurezas de 3'-diastereomero 5 de los 5'-diastereomeros deseados 4 para facilitar la separacion. Se deseo que un grupo reaccionara selectivamente con el hidroxilo primario libre de la impureza de 3'-O-fosforamidato 5 sobre el hidroxilo secundario libre del 5'-O-fosforamidato deseado 4. Tambien se deseo que el grupo de bloqueo cambiase significativamente la polaridad del producto 3'-O-fosforamidato 5'-O-bloqueado resultante del 5'-O-fosforamidato deseado 4. No seria necesaria ninguna etapa adicional para eliminar el grupo de bloqueo ya que los 5'- diastereomeros deseados 4 no se cambiarian. Los 3'-diastereomeros quimicamente alterados permitiran entonces una separacion cromatografica mas facil o una separacion por soportes de barrido especiales o mediante
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extracciones.
Espedficamente, el grupo de bloqueo terc-butildimetilsililo (tBDMS) cumplio estos criterios y fue el primero en demostrarse y usarse posteriormente a una escala de multiples kilogramos. En ciertas condiciones, tales como en piridina como disolvente y base, el grupo tBDMS reacciona con alta selectividad en la posicion del hidroxilo primario sobre la posicion del hidroxilo secundario 3'. La reaccion de fosforamidato usa N-metilimidazol (NMI) como base. En presencia de NMI, la sililacion es menos selectiva. Preferiblemente, la cantidad de NMI deberia reducirse. Esto puede realizarse facilmente despues de la reaccion de fosforamidato lavando la solucion de reaccion con acido clorhidrico 1 N. El NMI y el nucleosido de partida restante se eliminan, dejando una mezcla en bruto de productos mono y bis sustituidos y subproductos de reactivo. Despues, esto se disuelve en piridina y se trata con cloruro de terc-butildimetilsililo. El producto 3'-monosustituido 5 se convierte en algunas horas o en el 5'-O-tBDMS-3'-O- fosforamidato 7. El avance de la reaccion puede controlarse por HPLC. La polaridad de este producto sililado 7 es menor que el bis-fosforamidato 6 y se elimina facilmente por cromatografia. Usando este metodo, fue posible reducir el nivel de 3'-monofosforamidato 5 a menos del 0,1 % del producto 5' 4 en comparacion con el 1-3 % sin el tratamiento sililo. De forma analoga, el tratamiento con cloruro de dimetoxitrifenilmetilo (DMT-Cl) en las mismas condiciones funciono igual de bien. Tambien fue mas facil identificar el producto de reaccion DMT por TLC como DMT que contiene tincion de moleculas de color naranja brillante en calentamiento o exposicion a acido.
Tanto las condiciones de reaccion como el arrastre de la impureza 3' son metodos generales y pueden aplicarse a la mayor parte de fosforamidatos de nucleosido con un hidroxilo 3' libre. El resto fosforamidato puede ser cualquier combinacion de ester de aminoacido y alcohol aromatico. El resto nucleosido puede ser cualquier nucleosido en el que un 5' fosforamidato conducira a un 5'-monofosfato y puede metabolizarse adicionalmente en la forma 5'- trifosfato.
El siguiente esquema es el esquema de reaccion principal ilustrado haciendo isopropil L-alanato fenil fosforamidato de 2'-desoxi-2'-fluoro-2'-C-metiluridina con el producto principal como el 5'-O-fosforamidato deseado (4, dos diastereomeros) y el producto secundario como el 3'-O-fosforamidato (5, dos diastereomeros) y el 3',5'-bis-O- fosforamidato (6, cuatro diastereomeros). Los reactivos se anaden en las relaciones estequiometricas como se describe en el metodo de la seccion de preparation. La reaccion se deja avanzar hasta que queda aproximadamente un 5 % del material de partida segun se determina por visualization UV sobre cromatografia de capa fina (TLC). Ademas, UPLC/MS mostro que se ha formado aproximadamente el 10 % del 3',5' bis-fosforamidato 6 en comparacion en el producto 5' deseado. Despues de la inactivation y el tratamiento acuoso acido, el residuo en bruto de la capa organica se preparo para la sililacion. En las condiciones de reaccion descritas, el grupo sililo reacciono preferiblemente con el 5'-hidroxilo libre del 3'-O-fosforamidato para formar 7. La reaccion se continuo hasta que el 3'-0-fosforamidato ya no fue detectable por UPLC/MS.
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Despues del tratamiento de la reaccion de sililacion, el producto deseado se somete a cromatografia sobre gel de sflice y se eluye con un gradiente de metanol en diclorometano (1-4 %). El 5'-monofosforamidato deseado 4 se eluye en ultimo lugar.
Metodo de preparation
Ejemplo de referencia 1. Preparacion de 2'-desoxi-2'-fluoro-2'-C-metiluridina (3)
En un matraz de 10 l se anadieron 3', 5'-O-dibenzoil-2'-desoxi-2'-fluoro-2'-C-metil-N4-benzoilcitidina (500 g, 0,874 mol) y acido acetico acuoso al 70 % (7,5 l). La solucion se calento a reflujo (110 °C) durante 20 h. El analisis por TLC indico una reaccion completa (Fr 0,6 en metanol al 5 % en diclorometano (DCM)). La mezcla se enfrio a temperatura ambiente y se diluyo con agua (2 l). Despues de agitar durante 2 h, el precipitado resultante se recogio por filtracion y el solido se aclaro con agua (5 l) y se seco en la atmosfera a temperatura ambiente durante 12 h para proporcionar 360 g (88 %). Este intermedio de dibenzoiluridina se uso directamente en la siguiente etapa anadiendolo tolo a amoniaco metanolico recien preparado (5,4 l, aprox. 25 %) a 0 °C. Esta temperatura se mantuvo durante 3 h y despues se dejo calentar a 15 °C durante 24 h. El analisis por TLC indico una reaccion completa (Fr 0,4 en metanol al 10 % en DCM). La mezcla de reaccion se filtro a traves de un lecho de Celite y se concentro a presion reducida para dar el producto en bruto (216 g). El producto en bruto se agito con acetato de etilo (325 ml) durante 3 h a temperatura ambiente. El solido resultante se recogio por filtracion y se lavo con acetato de etilo (216 ml). El solido se seco al vado a temperatura ambiente durante 4 h para proporcionar 160 g (78 %) del producto deseado con el 98,7 % de pureza HPLC. 1H RMN (DMSO-d6) 5 11,44 (s a, 1H, NH), 7,95 (d, 1H, C-6H), 5,97 (d, 1H, C-1'H), 5,64 (d, 1H, C-5H), 3,84-3,77 (m, 3H, C-5'-Ha, C-3'H. C-4'H), 3,63-3,60 (m, 1H, C5'-Hb), 1,23 (d, 3H, C-2'- CH3). ES-MS M-1 259.
Ejemplo 2. Preparacion de ester isopropHico del acido (S)-2-{[(1R,4R,5R)-5-(2,4-Dioxo-3,4-dihidro-2H- pirimidm-1-N)-4-(R)-fluoro-3-hidroxi-4-metM-tetrahidro-furan-2-Mmetoxi]-fenoxi-fosforMammo}-propi6mco (4)
Sinonimo: Mezcla diastereomerica de 5'-O-(Isopropil-L-alanato, fenil fosforamidil)-2'-desoxi-2-fluoro-2-C-metil- uridina.
Un matraz de 3 bocas de 5 l se equipo con un agitador mecanico y bano de hielo de salmuera, un termometro interno y una atmosfera de nitrogeno. El matraz se cargo con clorhidrato de L-alanina isopropil ester (82,0 g, 0,490 mol) y diclorometano anhidro (0,80 l). Mientras que esto se agitaba, se anadio en un lote diclorofosfato de
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fenilo (85,0 g, 0,40 mol) y se agito. Mientras que se mantema la temperatura interna entre -5 a 5 °C, se anadio una solucion de N-metilimidazol (NMI, 250 g, 3,07 mol) en diclorometano (250 ml) durante un periodo de media hora. La solucion se dejo en agitacion durante 1 h en este intervalo de temperatura. Se anadio en una porcion 2'-desoxi-2'- fluoro-2'-C-metil-uridina (3, 80,0 g, 0,307 mol) a 0 °C y despues el matraz de reaccion se dejo calentar lentamente en el bano de salmuera. En 1 h, la temperatura interna fue de hasta -2 °C. El analisis por TLC (Metanol al 5 % en DCM) en 1 h mostro que se habia consumido mas del 50 % del nucleosido. El bano se retiro y el matraz de reaccion alcanzo la temperatura ambiente durante 1 h mas. El analisis por TLC despues de 3 h y en 5 h en total mostro que el 95 % del nucleosido de partida se habia consumido. La mezcla de reaccion se inactivo anadiendo metanol (100 ml) y agitando la reaccion durante 5 minutos.
La mezcla de reaccion se lavo con HCl 1 N (2 x 500 ml) seguido de una solucion saturada de bicarbonato sodico (2 x 500 ml). La capa organica separada se seco sobre sulfato sodico anhidro (50 g) y se filtro. La solucion se evaporo a presion reducida y despues a alto vacio a sequedad para dar el producto en bruto en forma de un aceite viscoso (170 g). Las RMN del producto en bruto (31P y 1H) se tomaron. La 31P-RMN indico que aproximadamente el 1 % de la integracion de fosforo total fue debido a la presencia del isomero 3' 5.
Al producto en bruto se le anadio piridina anhidra (1700 ml). El disolvente se evaporo a presion reducida y despues a alto vacio para reducir el contenido de agua de la mezcla en bruto a traves de co-evaporacion. El aceite resultante se disolvio de nuevo en piridina anhidra (500 ml) y despues se anadio exceso de cloruro de t-butildimetilsililo (9,0 g, 60 mM). La reaccion se agito a temperatura ambiente. El avance de la reaccion se controlo por UPLC/MS. Despues de 3 horas, la impureza 3' 5 ya no se detecto y la reaccion se interrumpio mediante la adicion de metanol (50 ml).
La reaccion se evaporo a presion reducida hasta un aceite. El residuo se disolvio en acetato de etilo (1,5 l) y se lavo con HCl 1 N (2 x 500 ml), seguido de una solucion saturada de bicarbonato sodico (2 x 500 ml). La capa organica se seco sobre sulfato sodico anhidro (50 g), se filtro y se evaporo a presion reducida para dar el producto en bruto en forma de un aceite de color amarillo palido.
El aceite en bruto se diluyo con el mismo volumen de diclorometano y se cargo sobre un cartucho de 2,5 kg de gel de silice en un modulo de compresion radial a 100 psi (0,69 MPa) de presion de aire. Usando una bomba de gradiente a 60 psi (0,41 MPa) y un caudal de 400 ml/min, el cartucho se lavo con cloruro de metileno (4 l) seguido de un gradiente de metanol al 1-4 % en cloruro de metileno (48 l). La mayor parte de las impurezas principales (fosfato de di-(isopropilalanil)fenilo, 3',5'-bis fosforamidato (6), aducto de 3'-fosforamidato-5'-TBDMS (7)) eluyeron con ~3 % de gradiente. El producto deseado eluyo entre 3 y el 4 % de metanol. Las fracciones que contenian el producto se clasificaron en dos lotes. El primero contenia pequenas cantidades de impurezas superiores y el ultimo era producto puro. El primer conjunto de fracciones contenia pequenas cantidades de impurezas menos polares (impurezas superiores) tal como el 3',5'-bis fosforamidato y el fosfato de di-alanilfenilo y una sobre todo el diastereomero Rp y requirio una segunda purificacion en columna. (La terminologia relativa, superior frente a inferior se refiere a la elucion sobre cromatografia en gel de silice de fase normal, donde el "isomero superior" se refiere al primer isomero de elucion). El segundo conjunto de fracciones no tenia una cantidad significativa de impurezas -solo el Rp restante y sobre todo los diastereomeros Sp. Se combino mas tarde con las fracciones en columnas de dos veces. El disolvente se evaporo a presion reducida y la espuma de color blanco resultante se seco adicionalmente (0,20 mmHg) durante 1 h para dar 42 g del lote impuro (isomero 4:1 superior frente a inferior basado en 31P-RMN) y 38 g del lote puro (isomero 1:3 superior frente a inferior). El lote impuro se volvio a someter a columna de una manera similar para dar 3,8 g de isomero superior puro al 97 % (fraccion reservada) y 36 g de producto puro en una relacion 4:1. Los dos lotes principales se disolvieron en DCM, se combinaron, se evaporaron a presion reducida y se secaron (50 °C, 0,2 mmHg, 24 h) para obtener 74 g (45,7 %) de producto puro 4 con una relacion diastereomerica de 48: 51, en forma de una espuma de color blanco, p.f. aproximadamente 75-85 °C.
Para producir un solido amorfo de la mezcla diastereomerica, 74 g de la espuma de color blanco se agitaron con t- butil metil eter (750 ml) dando como resultado una solucion parcial y un residuo solido gomoso. Mientras se agitaba, se anadieron lentamente heptanos (750 ml) y la suspension se agito mecanicamente durante 1 hora hasta que la mayor parte de la goma se convirtio en un solido de color blanco. El solido se raspo con una espatula y la suspension resultante se filtro. El solido se lavo con heptanos (4 x 50 ml) y se seco al vacio (50 °C, 0,2 mmHg, 24 h) para dar un polvo amorfo de color blanco (64 g) con un amplio intervalo de fusion de aprox. 70-80 °C. 1H y 31P RMN se conformaron para estructurar y el analisis por HPLc mostro una pureza del 99,8 % con una relacion diastereomerica de 46:54 (tambien confirmada por 31P RMN).
Metodo alternativo para preparar la mezcla solida de 4. Despues de la cromatografia, el residuo se co-evaporo con diclorometano dos veces (5 ml/g) y se seco durante 24 h a 35-40 °C a 35-45 mTorr. El residuo de espuma se tamizo a traves de una pantalla de 250 micrometros y se seco adicionalmente en las mismas condiciones hasta que el diclorometano residual cayo por debajo de 400 ppm segun se midio por GC de espacio libre. El polvo amorfo fino de color blanquecino a blanco resultante tiene un intervalo de temperatura de transicion vitrea de 53,7 a 63,5 °C.
Caracterizacion de la mezcla de isomeros (4): 1H RMN (CDCb) 5 10,05 (s a, 1H, NH, Sp), 10,00 (s a, 1H, NH, Rp), 7,49 (d, 1H, C6-H, Sp), 7,36 (m, 5H, C6-H, Rp, aromatico), 7,23-7,14 (m, 6H, Rp/Sp, aromatico), 6,18 (d a, 2H, C1'-H, Rp/Sp), 5,63 (d, 1H, C5-H, Sp), 5,58 (d, 1H, C5-H, Rp), 5,01 (m, 2H, CH-(CH3)2, Rp/Sp), 4,46-4,33 (m, 8H, C-5'-H2,
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31P-RMN (CDCl3) 5 3,60 (Rp), 3,20 Sp con respecto a trifenilfosfato a -17,80 ppm. ES-MS M+1 530,2. Analisis elemental: % calculado (incluyendo agua al 0,29 % como se descubrio por el analisis de Karl Fisher) C, 49,75; H, 5,54; N, 7,90, F, 3,58, P, 5,84. % observado: C, 49,50; H, 5,44; N, 7,85; F, 3,62; P, 6,05.
Analisis sobre la separacion de isomeros
El compuesto 4, debido a la quiralidad en fosforo, esta compuesto por dos diastereomeros, que se designan como Sp-4 y Rp-4. La asignacion estereoqmmica se hizo basado en un analisis de rayos X monocristalino de Sp-4. Tanto Rp-4 como Sp-4 dieron un producto cristalino.
Los procedimientos para la cristalizacion se describen a continuacion.
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Ejemplo 3. Cristalizacion del isomero Rp-4. La fraccion cromatografiada que contema el primer isomero de elucion menos polar Rp-4 (3,8 g, puro al 97 %) se disolvio en isopropanol (36 g) y se diluyo con heptanos hasta turbidez (72 g). La solucion se pipeteo y se agito a temperatura ambiente durante 5 h. El solido resultante se recogio por filtracion al vado, se lavo con heptanos (2 x 20 ml) y se seco (50 °C, 0,2 mm, 24 h) para dar 2,3 g de agujas de color blanco muy pequenas p.f. 136,2-137,8 °C. Se descubrio que la pureza HPLC del material resultante era del 99,02 %.
Rp-4: 1H RMN (CDCb) 5 9,10 (s a, 1H, NH), 7,36 (m, 2H, o-aromatico), 7,26-7,16 (m, 4 H, C6-H, m,p-aromatico), 6,16 (d a, 1H, C1'-H), 5,58 (d, 1H, C5-H), 5,01 (sept., 1H, CH-(CH3)2), 4,52-4,47 (m, 2H, C-5'-H2), 4,10 (d, 1H, C3'-H), 4,02-3,76 (m, 4H, ala-NH, C3'-OH, C4'-H, ala-CH-CH3), 1,37-1,20 (m, 12H, todos CH3).
Ejemplo 4. Preparacion y cristalizacion de Sp-4.
Metodo 1: Precipitacion directa de 4 en bruto: A una solucion agitada de clorhidrato de ester isopropilico de L-alanina (10,5 g, 61,5 mmol, secado por destilacion azeotropica, dos veces, con 50 ml de tolueno cada vez) en diclorometano (100 ml) se le anadio fenildiclorofosfato (7,5 ml, 50 mmol) a temperatura ambiente. La mezcla se enfrio a -10 °C y despues se anadio una solucion de NMI (30,5 ml, 384,3 mmol) en 30 ml de diclorometano durante un periodo de 30 min. Despues de la finalizacion de la adicion, la mezcla se agito entre -10 y -15 °C durante 1 h. A la mezcla anterior se le anadio en un lote 2'-desoxi-2'-fluoro-2'-C-metiluridina (3) (10 g, 38,4 mmol) y la mezcla se agito por debajo de -10 °C durante 3 h y despues se dejo calentar lentamente a 20 °C (6 h). La mezcla se agito a esta temperatura durante una noche (15 h) y despues se inactivo con 10 ml de metanol. El disolvente se evaporo y el residuo se disolvio de nuevo en EtOAc (200 ml). La capa de EtOAc se lavo con agua (100 ml), HCl 1 N (3 x 75 ml), una solucion acuosa al 2 % de NaHCO3 (50 ml) y salmuera (50 ml). La capa organica se seco sobre Na2SO4, se filtro y se concentro. El residuo se seco a alto vacio durante 2 h para dar una espuma de color blanco (22 g).
La espuma anterior se disolvio en 33 ml de DCM y despues se anadio 65 ml de IPE (eter isopropilico) para dar una solucion saturada. La solucion se filtro a traves de un lecho pequeno de Celite y el filtrado se agito con semillas de Sp-4 durante 72 h a temperatura ambiente (aproximadamente 22 °C -ha de apreciarse que enfriar la suspension a 0 °C condujo a la lubricacion del producto en bruto). El solido de color blanco se filtro, se lavo con IPE (20 ml) y se seco para dar 4,58 g (-85:15 de mezcla de Sp-4:Rp-4 respectivamente segun se determino por 31P RMN) de un polvo de color blanco. El solido anterior se suspendio en 23 ml de DCM y despues se calento a reflujo durante 3 h. La mezcla se enfrio a temperatura ambiente y se agito durante 15 h. El solido de color blanco se filtro, se lavo con
4,5 ml de DCM frio y se seco a alto vacio a 45 °C para dar Sp-4 puro, p.f. 93,9-104,7 °C, pureza HPLC al 99,74 % (3,11 g, 15,2 % del nucleosido de uridina).
Sp-4 1H RMN (CDCh) 5 8,63 (s a, 1H, NH), 7,47 (d, 1H, C6-H), 7,30 (m, 2H, o-aromatico), 7,26-7,18 (m, 3H, m,p- aromatico), 6,18 (d a, 1H, C1'-H), 5,70 (d, 1H, C5-H), 5,02 (sept., CH-(CH3)2), 4,53 (m, 2H, C-5'-H2), 4,11 (d, 1H, C3'- H), 3,97 (m, 3H, C3'-OH, C4'-H, ala-CH-CH3), 3,77 (s a, 1H, ala-NH), 1,39 (d, 3H,C2'-CH3), 1,37 (d, 3H, ala-CH3), 1,24 (d, 6H, CH-(CH3)2).
Metodo 2: Lubricacion del 4 en bruto: A una solucion agitada de clorhidrato de ester isopropilico de L-alanina (20,6 g, 123 mmol, secado por destilacion azeotropica, dos veces, con 75 ml de tolueno cada vez) en diclorometano (200 ml)
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se le anadio fenildiclorofosfato (14,9 ml, 100 mmol) a temperatura ambiente. La mezcla se enfrio a -10 °C y despues se anadio una solucion de NMI (61,3 ml, 769 mmol) en 60 ml de diclorometano durante un periodo de 30 min. Despues de la finalizacion de la adicion, la mezcla se agito entre -10 °C y -15 °C durante 1 h. A la mezcla anterior se le anadio en un lote 2'-desoxi-2'-fluoro-2'-C-metiluridina (3) (20 g, 76,9 mmol) y la mezcla se agito por debajo de - 10 °C durante 3 h y despues se dejo calentar lentamente a 20 °C (6 h). La mezcla se agito a esta temperatura durante una noche (15 h) y despues se inactivo con 10 ml de metanol. El disolvente se evaporo y el residuo se disolvio de nuevo en EtOAc (400 ml). La capa de EtOAc se lavo con agua (200 ml), HCl 1 N (3 x 100 ml), una solucion acuosa al 2 % de NaHCO3 (100 ml) y salmuera (50 ml). La capa organica se seco sobre Na2SO4, se filtro y se concentro. El residuo se seco a alto vacio durante 2 h para dar una espuma de color blanco (43 g). La espuma anterior se disolvio en 86 ml de EtOAc en un matraz de fondo redondo de dos bocas equipado con un agitador mecanico. Mientras se agitaba, se anadieron lentamente 100 ml de heptano y la suspension se agito durante 1 h. La capa superior se decanto y el residuo se agito de nuevo con 50 ml de soluciones 2:3 de EtOAc/heptano durante 10 min y despues se decanto. El residuo se seco a alto vacio para dar una espuma de color blanco (31 g).
La espuma anterior se disolvio en 46 ml de DCM y despues se anadieron 95 ml de IPE para dar una solucion saturada. La solucion se filtro a traves de un lecho pequeno de Celite y el filtrado se agito con semillas de Sp-4 durante 72 h a temperatura ambiente. El solido de color blanco se filtro, se lavo con IPE (30 ml) y se seco para dar 7,33 g (-85:15 de mezcla de Sp-4:Rp-4 respectivamente segun se determino por 31P RMN) de polvo de color blanco. El solido anterior se suspendio en 36 ml de DCM y despues se calento a reflujo durante 3 h. La mezcla se enfrio a temperatura ambiente y se agito durante 15 h. El solido de color blanco se filtro, se lavo con 7,5 ml de DCM frio y se seco a alto vacio a 45 °C para dar >99 % de Sp-4 puro (4,78 g, 11,6 % del nucleosido de uridina).
Metodo 3: Carga de gel de silice de 4 en bruto: Se produjeron 5,0 g de 4 en bruto de la misma manera que la mezcla de diastereomeros justo antes de la etapa de cromatografia en columna partiendo con aproximadamente 2,5 g de 2'- desoxi-2'-fluoro-2'-C-metiluridina (3). El producto en bruto se disolvio en 10 ml de DCM y a la solucion se le anadieron 10 g de gel de silice. El disolvente se evaporo para dar una suspension seca. La suspension se agito con 40 ml de EtOAc al 50 %/hexanos durante 15 min y despues se filtro. El gel de silice se lavo con 10 ml mas de EtOAc al 50 %/hexanos. Despues, el gel de silice se lavo con MeOH al 15 %/DCM (100 ml) y se recogio por separado. El disolvente se evaporo y se seco a alto vacio para dar 4,0 g del residuo (espuma). El residuo se disolvio en DCM (6 ml) y despues se anadieron ~9 ml de IPE para hacer una solucion saturada. Despues, la mezcla se agito suavemente durante una noche con semillas de SP-4 a temperatura ambiente. El solido de color blanco se filtro y se lavo con IPE (5 ml) para dar 1,28 g de producto. 31P RMN revelo que el producto anterior contenia 77:23 de mezcla de Sp-4:Rp-4 respectivamente. Esto se recristalizo en 20 ml de DCM para obtener 0,75 g de >99 % de Sp-4 puro (aproximadamente 12 % del nucleosido de uridina). Esta preparation de Sp-4 no requiere la etapa de sililacion como se hizo para la mezcla, por lo que todo el procedimiento de reaction se ha mostrado anteriormente. Los aspectos de las formas monocristalinas y polimorficas de Sp-4 se presentan a continuation.
Metodo 4: Se disolvieron 40,0 g de mezcla 1:1 de 4 en 90 ml de diclorometano. Se anadio eter diisopropilico (70 ml) a la solucion anterior para dar una solucion saturada. (La cantidad de eter diisopropilico puede variar basandose en la pureza del producto). La solucion se pipeteo con Sp-4 puro (>99 %) y la mezcla se agito suavemente con una barra de agitation a temperatura ambiente durante 20 h (se observo la formation de solido despues de 2 h). El solido se filtro, se lavo con 40 ml de la mezcla de eter diisopropilico/diclorometano (1:1) y se seco para dar un solido de color blanco (16,6 g, 89,35 % de Sp-4 puro por RMN). Este solido se suspendio en 83 ml de diclorometano y se calento a reflujo durante 3 h. La suspension se enfrio a temperatura ambiente y se agito durante una noche. El solido se filtro y se lavo con 10 ml de DCM frio. El solido se seco al vacio para dar Sp-4 (13,1 g, 99,48 % puro por HPLC). Se disolvieron de nuevo 11 g de este solido en 330 ml de DCM en condiciones calientes. La solucion se enfrio a temperatura ambiente y se dejo a esta temperatura durante una noche. El producto cristalino se filtro y se seco para dar 10,5 g de Sp-4 (99,74 % por HPLC).
Como alternativa, los compuestos Sp-4 y Rp-4 pueden prepararse por un metodo desvelado en el presente documento y que no forma parte de la presente invencion, haciendo reaccionar el nucleosido (protegido o no protegido) 3 con y alanil-fosforamidato de isopropilo (mezcla de C y C', C o C'), como se muestra en la siguiente ecuacion.
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P.D. Howes y col. Nucleosides, Nucleotides & Nucleic Acids 2003, Vol. 22, n.° 5-8, pags. 687-689 ("Howes") desvelan 2'- y 5'-fosforamidatos obtenidos por una reaccion con cloruro de t-butilmagnesio. Aqui, Howes desvela
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que cuando un nucleosido de 3'-desoxi-citidina se hace reaccionar con ester metflico del acido (S)-2-[cloro-fenoxi- fosforilamino] propionico en presencia de 1,2 equivalentes de cloruro de t-butilmagnesio, se produce una fosforilacion selectiva en la posicion 2', pero que con un equivalente adicional de cloruro de t-butilmagnesio se produce una fosforilacion selectiva en la posicion 5'. Esta divulgacion debe contrastarse con la que se desvela en el Esquema 1.
Ejemplo de referencia 5-1. Preparacion de ester isopropflico del acido (S)-2-[(4-nitro-fenoxi)-fenoxi- fosforflamino]propi6nico
CM„C1 Y ? PhOH. Et3N, DCM, -78 °C
^ + °Y^nh2.hci *
o
A una solucion agitada de fosforodicloridato de 4-nitrofenilo (12,8 g, 50 mmol) en diclorometano (100 ml) se le anadio una solucion de fenol y trietilamina (7,7 ml, 55 mmol) en diclorometano (100 ml) a -78 °C durante un periodo de 20 min. La mezcla se agito a esta temperatura durante 30 min y despues se transfirio a otro matraz de fondo redondo que contema clorhidrato de ester isopropflico de L-alanina (8,38 g, 50 mmol) en diclorometano (100 ml) a 0 °C. A la mezcla se le anadio una segunda porcion de trietilamina (14,6 ml, 105 mmol) durante un periodo de 15 min. La mezcla se agito a 0 °C durante 1 h y despues el disolvente se evaporo. El residuo se trituro con acetato de etilo (150 ml) y el solido de color blanco se retiro por filtracion. El filtrado se concentro a presion reducida para dar aceite de color amarillo palido. El compuesto en bruto se sometio a cromatografia usando gradiente de acetato de etilo al 0-20 %/hexanos para dar un producto (17 g, rendimiento del 83 %) en forma de una mezcla de diastereomeros en una relacion de aproximadamente 1:1. 31P RMN (162 MHz, DMSO-d6): 5 -0,31, -0,47; 1H RMN (400 MHz, DMSO-d6): 5 8,31-8,27 (m, 2H), 7,51-7,37(m, 4H), 7,27-7,19(m, 3H), 6,70-6,63(m, 1H), 4,85-4,78(m, 1H), 3,97-3,86(m, 1H), 1,21-1,19(m, 3H), 1,11-1,09 (m, 6H); MS (ESI) m/z 407 (M-1)+. 31P RMN (162 MHz, CDCh): 5 - 2,05, -2,10; 1H RMN (400 MHz, CDCh): 5 8,22 (d, J = 9,2 Hz, 2H), 7,41-7,33(m, 4H), 7,26-7,18(m, 3H), 5,05-4,96(m, 1H), 4,14-4,05(m, 1H), 3,93-3,88(m, 1H), 1,38(d, J = 6,8 Hz, 3H), 1,22 (dd, J = 6,2 & 3,0 Hz, 6H); MS (ESI) m/z 407 (M-1)+.
Ejemplo de referencia 5-2. Preparacion de Sp-4/Rp-4.
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3 + mezcla de C y C' (~1:1)
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Sp-4 + ^p-4
~3 ~1
A una solucion agitada de 1-((2R,3R,4R,5R)-3-Fluoro-4-hidroxi-5-hidroximetil-3-metil-tetrahidro-furan-2-il)-1H- pirimidina-2,4-diona (130 mg, 0,5 mmol) en THF seco (1,5 ml) se le anadio una solucion 1,0 M de cloruro de terc- butilmagnesio (1,05 ml, 1,05 mmol, 2,1 equiv.)) a temperatura ambiente durante un periodo de 5 min. Despues de 30 min, se anadio gota a gota una solucion de ester isopropflico del acido (S)-2-[(4-nitro-fenoxi)-fenoxi- fosforilamino]propionico (mezcla 1:1 de isomeros, 408 mg, 1 mmol) en THF (1,5 ml) durante un periodo de 5 min. La mezcla se dejo en agitacion a temperatura ambiente durante 48 h y despues se inactivo con NH4Cl acuoso saturado (20 ml). La mezcla se repartio entre acetato de etilo (50 ml) y agua (20 ml). El extracto organico combinado se seco sobre sulfato sodico anhidro, se filtro y se concentro a presion reducida para dar un residuo amarillo palido. La cromatografia en columna del residuo usando gradiente de MeOH al 0-2 %/diclorometano dio un soliido espumoso de color blanco (125 mg, rendimiento del 47 %, mezcla de Sp-4/Rp-4 en una relacion de aproximadamente 3,05:1,0).
Ejemplo de referencia 6. Preparacion y aislamiento no cromatografico de ester isopropflico del acido (S)-2- [(S)-(4-nitro-fenoxi)-fenoxi-fosforilamino]propionico
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Se seco previamente clorhidrato de ester isopropflico de L-alanina (330 g, 1,97 mol) por co-evaporacion con tolueno (2 x 400 ml) a presion reducida y despues se seco en un horno de vado (50 °C, 0,2 mmHg, 17 h). A una solucion agitada de fosforodicloridato de 4-nitrofenilo (500,0 g, 1,953 mol) en diclorometano anhidro (3,0 l) se le anadio una solucion de fenol (183,8 g, 1,953 mol) y trietilamina (300 ml, 2,15 mol) en diclorometano (900 ml) a -60 °C de temperatura interna durante un periodo de 3 horas. La mezcla se agito a esta temperatura durante 30 min mas y despues se dejo calentar hasta -5 °C durante 2,5 horas. El ester de aminoacido secado previamente se anadio a - 5~0 °C en una atmosfera de nitrogeno durante 10 min. El residuo de sal aminoester en el matraz de adicion se transfirio a la mezcla de reaccion a traves de aclarado con diclorometano (2 x 100 ml). La mezcla se agito a 0 °C durante 40 min y se anadio una segunda porcion de trietilamina (571 ml, 4,10 mol) durante un periodo de 40 min a 0 °C. La mezcla se agito a 0~10 °C durante 3 h y despues el solido de color blanco (clorhidrato de trietilamina) se
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retiro por filtracion y se aclaro con diclorometano (3 x 300 ml). El filtrado se concentro a presion reducida y el residuo se trituro con metil t-butil eter (MTBE, 4 l). La sal solida adicional formada de esta manera se retiro por filtracion y se aclaro con MTBE (3 x 150 ml). El filtrado se concentro a presion reducida para dar un aceite de color pardo claro transparente. El residuo se co-evaporo con hexanos (2 x 140 ml) para retirar cualquier MTBE residual y se seco adicionalmente al vacio a 40 °C durante 2 horas. El residuo seco se mezclo con eter diisopropilico (IPE, 1,1 l) y se agito a 5 °C en un bano de hielo-agua. A la solucion se le anadio una pequena cantidad de cristales de siembra del isomero Sp deseado del producto y la mezcla se agito a 5 °C durante 22 h para formar una suspension medio espesa. Esta se dejo en reposo en un refrigerador (-10 °C) durante 44 h. El producto precipitado se recogio por filtracion y se aclaro con disolventes mixtos enfirados previamente de IPE y hexanos (1:1, 3 x 190 ml). El solido se seco al vacio (0,5 mm de Hg) a temperatura ambiente hasta que se obtuvo un peso constante para dar 227,23 g (rendimiento: 28,5 %) en forma de un solido en polvo de color blanco. La relacion de dos diastereomeros Sp:Rp fue de 9,65/1 basado en 31P RMN (162 MHz, DMSO-d6, 5 -0,31 (Sp), -0,47). El producto se recristalizo disolviendo en IPE (840 ml) mientras se calentaba en un bano a 60 °C. La solucion anterior se agito a temperatura ambiente durante 1 h y depsues se anadio una pequena cantidad de semillas de isomero Sp cristalino. Se formo un polvo de color blanco en 2 horas y el matraz se almaceno en un refrigerador (-10 °C) durante 16 horas. Un solido cristalino de color blanco y fino obtenido se filtro, se lavo con IPE enfriado previamente (3x 50 ml) y se seco al vacio (ambiente, 0,5 mm de Hg) a un peso constante para dar un solido mullido de color blanco (177,7 g, rendimiento total del 22 % o rendimiento total del 44 % basandose en el rendimiento teorico del isomero Sp) con una relacion diastereomerica de 48/1 basado en 31P-RMN. P.f. 62-66 °C.
31P RMN (162 MHz, DMSO-d6): 5 -0,31; 1H RMN (400 MHz, DMSO-d6): 5 8,30-8,27 (m, 2H), 7,49(d, J = 8,8 Hz,
2H), 7,41-7,37(m, 2H), 7,23-7,19 (m, 3H), 6,66 (dd, J = 13,6, 10,0 Hz, 1H), 4,86-4,78 (m, 1H), 3,97-3,86 (m, 1H), 1,19 (d, J = 7,2 Hz, 3H), 1, 10(d, J = 6,4 Hz, 6H);
31P RMN (162 MHz, CDCI3): 5 -2,05; (162 MHz, DMSO-d6): 5 -0,31; 1H RMN (400 MHz, CDCI3): 5 8,22 (d, J = 9,2 Hz, 2H), 7,41-7,33(m, 4H), 7,26-7,18(m, 3H), 5,05-4,96(m, 1H), 4,14-4,05(m, 1H), 3,93-3,88(m, 1H), 1,38(d, J = 6,8 Hz, 3H), 1,22 (dd, J = 6,2 & 3,0 Hz, 6H); 1H RMN (400 MHz, DMSO-d6): 5 8,30-8,27 (m, 2H), 7,49(d, J = 8,8 Hz, 2H), 7,41-7,37(m, 2H), 7,23-7,19 (m, 3H), 6,66 (dd, J = 13,6, 10,0 Hz, 1H), 4,86-4,78 (m, 1H), 3,97-3,86 (m, 1H), 1,19 (d, J = 7,2 Hz, 3H), 1, 10(d, J = 6,4 Hz, 6H)
MS (ESI) m/z 407 (M-1)+.
La estereoquimica de 8 (isomero Sp) se ha confirmado por cristalografia de rayos X monocristalina, veanse los detalles proporcionados a continuacion.
Ejemplo de referencia 7. Separacion de la mezcla diastereomerica de ester isopropilico del acido (S)-2-[(4- mtro-fenoxi)-fenoxi-fosforilammo]propi6mco por SFC
Una muestra de la mezcla de diastereomeros (4,8 g) enriquecida con el isomero Rp se sometio a SFC usando una columna ChiralPak AD-H (2 x 15 cm) y se eluyo con isopropanol al 35 % en dioxido de carbono a 100 bar. Se uso una carga de inyeccion de 4 ml de muestra a una concentracion de 17 mg/ml de metanol. El isomero Rp [ester isopropilico del acido (S)-2-[(R)-(4-nitro-fenoxi)-fenoxi-fosforilamino]propionico] se eluyo en primer lugar. Las fracciones apropiadas de las multiples realizaciones se combinaron y se concentraron a presion reducida para dar 2,9 g del isomero Rp [ester isopropilico del acido (S)-2-[(R)-(4-nitro-fenoxi)-fenoxi-fosforilamino]propionico] en forma de un aceite viscoso de color amarillo claro y 1,9 g del isomero Sp [ester isopropilico del acido (S)-2-[(S)-(4-nitro- fenoxi)-fenoxi-fosforilamino]propionico] en forma de un solido de color blanco. Los datos analiticos del isomero Rp son similares al producto aislado por el metodo de cristalizacion anterior. Datos analiticos para ester isopropilico del acido (S)-2-[(R)-(4-mtro-fenoxi)-fenoxi-fosforilamino]propi6mco (8, isomero Rp) : 31P RMN (162 MHz, DMSO-d6): 5-0,47; 1H RMN (400 MHz, DMSO-d6): 5 8,30-8,27 (m, 2H), 7,46-7,38 (m, 4H), 7,27-7,20 (m, 3H), 6,68 (dd, J = 13,8, 10,2 Hz, 1H), 4,86-4,77 (m, 1H), 3,97-3,86 (m, 1H), 1,20 (d, J = 7,2 Hz, 3H), 1,10(dd, J = 6,2, 2,2 Hz, 6H); MS (ESI) m/z 407 (M-1)+.
Ejemplo de referencia 8-1. Preparacion de ester isopropilico del acido 2-[(4-cloro-fenoxi)-fenoxi- fosforilamino]propionico racemico (±):
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A una solucion agitada de fosforodicloridato de 4-cloro-fenilo (2,45 g, 10,0 mmol) en diclorometano (20 ml) se le anadio una solucion de fenol (0,94 g, 10 mmol) y trietilamina (1,56 ml, 11 mmol) en diclorometano (20 ml) a -78 °C durante un periodo de 20 min. La mezcla se agito a esta temperatura durante 30 min y despues se transfirio a otro matraz de fondo redondo que contenia clorhidrato de ester isopropilico de L-alanina (1,67 g, 10 mmol) en diclorometano (50 ml) a 0 °C. A la mezcla se le anadio un segundo lote de trietilamina (2,92 ml, 21 mmol) durante un periodo de 15 min. La mezcla se agito a 0 °C durante 1 h y despues el disolvente se evaporo. El residuo se trituro
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con acetato de etilo (30 ml) y el solido de color blanco se retiro por filtracion. El filtrado se concentro a presion reducida para dar aceite de color amarillo palido. El compuesto en bruto se sometio a cromatografia usando gradiente de acetato de etilo al 10-20 %/hexanos para dar un producto (2,0 g, rendimiento del 50 %) en forma de una mezcla de diastereomeros en una relacion de aproximadamente 1:1. 31P RMN (162 MHz, CDCI3): 5 -1,58, -1,62; 1H RMN (400 MHz, CDCI3): 5 7,06-7,51 (m, 8H), 7,15-7,28 (m, 2H), 7,29-7,47(m, 2H), 4,0-4,10(m, 1H), 3,82-3,88 (m, 3H), 1,35-1,36 (dd, 6H); 1,19-1,22 (m, 3H). MS (ESI) m/z 398 (M-1)+. El producto resultante se purifico por extraccion, cristalizacion o cromatografia, como se ha indicado anteriormente.
Ejemplo de referencia 8-2. Preparacion de 2-((2R,3R,4R,5R)-5-(2,4-dioxo-3,4-dihidropirimidin-1(2H)-iI)-4- fIuoro-3-hidroxi-4-metiItetrahidrofurano-2 il)metoxi)(fenoxi)-fosforilamino)propanoato de (S)-isopropilo (4).
A una solucion agitada de 1-((2R,3R,4R,5R)-3-Fluoro-4-hidroxi-5-hidroximetil-3-metil-tetrahidro-furan-2-il)-1H- pirimidina-2,4-diona (3, 2,6 g, 10 mmol) en THF seco (50 ml) se le anadio una solucion 1,7 M de cloruro de terc- butilmagnesio (12,4 ml, 21 mmol, 2,1 equiv.)) a temperatura ambiente durante un periodo de 15 min. Despues de 30 min, se anadio gota a gota una solucion de ester isopropilico del acido (2-[(4-cloro-fenoxi)-fenoxi- fosforilamino]propionico racemico (4,08 g, 10 mmol) en THF (15 ml) durante un periodo de 10 min. La mezcla se dejo en agitacion a temperatura ambiente durante 72. El analisis por TLC co-punteado con producto autentico mostro que se habia formado aproximadamente el 5 % del producto deseado en comparacion con el nucleosido de partida.
Ejemplo de referencia 9-1. Preparacion de ester isopropilico del acido 2-[(2-cIoro-fenoxi)-fenoxi- fosforilamino]propi6mco racemico (±).
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A una solucion agitada de fosforodicloridato de 2-cloro-fenilo (9,8 g, 40 mmol) en diclorometano (80 ml) se le anadio una solucion de fenol (3,76 g, 40 mmol) y trietilamina (6,16 ml, 44 mmol) en diclorometano (80 ml) a -78 °C durante un periodo de 20 min. La mezcla se agito a esta temperatura durante 30 min y despues se transfirio a otro matraz de fondo redondo que contenia clorhidrato de ester isopropilico de L-alanina (6,7 g, 40 mmol) en diclorometano (150 ml) a 0 °C. A la mezcla se le anadio una segunda porcion de trietilamina (11,6 ml, 84 mmol) durante un periodo de 15 min. La mezcla se agito a 0 °C durante 1 h y despues el disolvente se evaporo. El residuo se trituro con acetato de etilo (100 ml) y el solido de color blanco se retiro por filtracion. El filtrado se concentro a presion reducida para dar aceite de color amarillo palido. El compuesto en bruto se sometio a cromatografia usando un gradiente de acetato de etilo al 10-20 %/hexanos para dar un producto (11,3 g, rendimiento del 72 %) en forma de una mezcla de diastereomeros en una relacion de aproximadamente 1:1. 31P RMN (162 MHz, CDCI3): 5 -1,58, -1,61; 1H RMN (400 MHz, CDCI3): 5 7,06-7,51 (m, 8H), 5,02-5,94 (m, 1H), 4,10-4,16(m, 1H), 3,31-3,94(m, 1H), 1,18-1,35(m, 3H), 1,38-1,40 (dd, 6H); MS (ESI) m/z 398 (M-1)+. El producto resultante se purifica por extraccion, cristalizacion o cromatografia, como se ha indicado anteriormente.
Ejemplo de referencia 9-2. Preparacion de 2-((2R,3R,4R,5R)-5-(2,4-dioxo-3,4-dihidropirimidin-1(2H)-iI)-4- fIuoro-3-hidroxi-4-metiItetrahidrofurano-2 iI)metoxi)(fenoxi)- fosforiIamino)propanoato de (S)-isopropiIo.
A una solucion agitada de 1-((2R,3R,4R,5R)-3-Fluoro-4-hidroxi-5-hidroximetil-3-metil-tetrahidro-furan-2-il)-1H- pirimidina-2,4-diona (3, 2,6 g, 10 mmol) en THF seco (50 ml) se le anadio una solucion 1,7 M de cloruro de terc- butilmagnesio (12,4 ml, 21 mmol, 2,1 equiv.)) a temperatura ambiente durante un periodo de 15 min. Despues de 30 min, se anadio gota a gota una solucion de ester isopropilico del acido (2-[(2-cIoro-fenoxi)-fenoxi- fosforiIamino]propionico (racemico, 4,08 g, 10 mmol) en THF (15 ml) durante un periodo de 10 min. La mezcla se dejo en agitacion a temperatura ambiente durante 72 h. El analisis por TLC co-punteado con producto autentico mostro que se habia formado aproximadamente el 5-10 % del producto deseado en comparacion con el nucleosido de partida.
Ejemplo de referencia 10-1. Preparacion de ester isopropilico del acido 2-[(2,3,4,5,6-pentafIuorofenoxi)- fenoxi-fosforiIamino]propionico racemico (±).
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A una solucion agitada de fosforodicloridato de pentafluorofenilo (6,0 g, 20 mmol) en diclorometano (40 ml) se le anadio una solucion de fenol y trietilamina (3,08 ml, 22 mmol) en diclorometano (40 ml) a -78 °C durante un periodo de 20 min. La mezcla se agito a esta temperatura durante 30 min y despues se transfirio a otro matraz de fondo redondo que contenia clorhidrato de ester isopropHico de L-alanina (3,35 g, 20 mmol) en diclorometano (100 ml) a 0 °C. A la mezcla se le anadio un segundo lote de trietilamina (5,84 ml, 42 mmol) durante un periodo de 15 min. La mezcla se agito a 0 °C durante 1 h y despues el disolvente se evaporo. El residuo se trituro con acetato de etilo (60 ml) y el solido de color blanco se retiro por filtracion. El filtrado se concentro a presion reducida para dar aceite de color amarillo palido en forma de una mezcla de diastereomeros en una relacion de aproximadamente 1:1. 31P RMN (162 MHz, CDCI3): 5 -0,49, -0,58, El producto resultante se purifica por extraccion, cristalizacion o cromatografia, como se ha indicado anteriormente.
Ejemplo de referencia 10-2. Preparacion de 2-((2R,3R,4R,5R)-5-(2,4-dioxo-3,4-dihidropirimidin-1(2H)-il)-4- fluoro-3-hidroxi-4-metiltetrahidrofurano-2 il)metoxi)(fenoxi)-fosforilamino)propanoato de (S)-isopropilo.
A una solucion agitada de 1-((2R,3R,4R,5R)-3-Fluoro-4-hidroxi-5-hidroximetil-3-metil-tetrahidro-furan-2-il)-1H- pirimidina-2,4-diona (3, 2,6 g, 10 mmol) en THF seco (50 ml) se le anadio una solucion 1,7 M de cloruro de terc- butilmagnesio (12,4 ml, 21 mmol, 2,1 equiv.)) a temperatura ambiente durante un periodo de 15 min. Despues de 30 min, se anadio gota a gota una solucion de ester isopropilico del acido (2-[(2,3,4,5,6-pentafluoro fenoxi)- fenoxi-fosforilamino]propi6nico racemico en bruto (4,08 g, 10 mmol) en THF (15 ml) durante un periodo de 10 min. La mezcla se dejo en agitacion a temperatura ambiente durante 72 h. El analisis por TLC co-punteado con producto autentico mostro que se habia formado aproximadamente el 40-50 % del producto deseado en comparacion con el nucleosido de partida.
La preparacion y purificacion de C o C' proporciona acceso directo a Sp-4 o Rp-4, como se ilustra en los siguientes ejemplos.
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Ejemplo de referencia 11. Preparacion de Sp-4 (escala de 32 mg): A una solucion agitada de 1-((2R,3R,4R,5R)-3- Fluoro-4-hidroxi-5-hidroximetil-3-metil-tetrahidro-furan-2-il)-1H-pirimidina-2,4-diona 3 (32 mg, 0,12 mmol) en THF seco (1 ml) se le anadio una solucion 1 M de cloruro de tButilmagnesio (0,26 ml, 0,26 mmol, 2,1 equiv.)) a temperatura ambiente durante un periodo de 3 min. Despues de 30 min, se anadio gota a gota una solucion de ester isopropilico del acido (S)-2-[(S)-(4-nitro-fenoxi)-fenoxi-fosforilamino]propionico (8, isomero Sp) en THF (0,5 ml) durante un periodo de 3 min. La mezcla se dejo en agitacion a temperatura ambiente durante 42 h y despues se inactivo con NH4Cl acuoso saturado (10 ml). La mezcla se repartio entre acetato de etilo y agua. El extracto organico combinado se seco sobre sulfato sodico anhidro y se concentro. El residuo se sometio a cromatografia usando un gradiente de metanol al 0-4 %/diclorometano para dar Sp-4 en forma de un solido espumoso (29 mg, rendimiento del
44,5 %). 1H y 31P RMN coinciden con lo que se desvela en el presente documento.
Ejemplo de referencia 12. Preparacion de Sp-4 (escala de 2,6 g, sin cromatografia): A una solucion agitada de 1- ((2R,3R,4R,5R)-3-Fluoro-4-hidroxi-5-hidroximetil-3-metil-tetrahidro-furan-2-il)-1H-pirimidina-2,4-diona (2,6 g,
10 mmol) en THF seco (50 ml) se le anadio una solucion 1,7 M de cloruro de terc-butilmagnesio (12,4 ml, 21 mmol,
2,1 equiv.)) a temperatura ambiente durante un periodo de 15 min. Despues de 30 min, se anadio gota a gota una solucion de ester isopropilico del acido (S)-2-[(S)-(4-nitro-fenoxi)-fenoxi-fosforilamino]propionico (8, isomero Sp, 4,08 g, 10 mmol) en THF (15 ml) durante un periodo de 10 min. La mezcla se dejo en agitacion a temperatura ambiente durante 60 h y despues e inactivo con NH4Cl acuoso saturado (20 ml). La mezcla se repartio entre acetato de etilo (150 ml) y secuencialmente, Na2CO3 acuoso al 10 % (3 x 20 ml) y agua (20 ml). El extracto organico combinado se seco sobre sulfato sodico anhidro, se filtro y se concentro a presion reducida para dar un residuo amarillo palido (3,8 g). El residuo se disolvio en diclorometano (7,6 ml) y despues se agito durante 20 ha temperatura ambiente. El solido de color blanco se filtro, se lavo con 1:1 de IPE/diclorometano (5 ml) y se seco al vacio para dar un producto puro en forma de un solido de color blanco (1,85 g, rendimiento del 35 %).
Ejemplo de referencia 13. Preparacion de Sp-4 usando NaHMDS: A una solucion agitada de 1-((2R,3R,4R,5R)-3- Fluoro-4-hidroxi-5-hidroximetil-3-metil-tetrahidrofurano-2-il)-1H-pirimidina-2,4-diona (71 mg, 0,27 mmol) en THF seco (2,0 ml) se le anadio una solucion 2,0 M de bis(trimetilsilil)amida sodica (NaHMDS) en THF (270 ^l, 0,54 mmol) a - 78 °C durante un periodo de 2 min. Despues de 30 min, a la mezcla se le anadio una solucion de ester isopropilico del acido (S)-2-[(S)-(4-Nitro-fenoxi)-fenoxi-fosforilamino]-propionico (8, isomero Sp, 111 mg, 0,27 mmol) en THF (1 ml). La mezcla de reaccion se dejo agitar a esta temperatura durante 2 h y despues se calento a -20 °C a cuya temperatura se agito durante 20 h mas. El analisis por TLC indico ~30 % de material de partida de nucleosido sin reaccionar. Por lo tanto, a la mezcla se le anadieron 0,5 equivalentes mas del reactivo (55 mg, 0,14 mmol) en THF (0,5 ml) y se agito durante 6 h mas. La mezcla de reaccion se inactivo con una solucion acuosa saturada de cloruro
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de amonio y despues se repartio entre acetato de etilo y agua. El extracto organico combinado se seco sobre sulfato sodico anhidro y se concentro para dar un residuo de color pardo claro. La cromatografia en columna del producto en bruto usando un gradiente de metanol al 0-5 %/diclorometano dio Sp-4 (22 mg, rendimiento del 15 %), 3'- fosforamidato (5, isomero Sp, 11,5 mg, rendimiento del 16 %) y bis fosforamidato (6, Sp, isomero Sp, 12,6 mg).
Ejemplo de referencia 14. Preparacion de Rp-4 (escala de 260 mg): A una solucion agitada de 1-((2R,3R,4R,5R)- 3-Fluoro-4-hidroxi-5-hidroximetil-3-metil-tetrahidro-furan-2-il)-1H-pirimidina-2,4-diona (260 mg, 1 mmol) en THF seco (6 ml) se le anadio una solucion 1,7 M de cloruro de terc-butilmagnesio (1,23 ml, 2,1 mmol, 2,1 equiv.)) a temperatura ambiente durante un periodo de 5 min. Despues de 30 min, se anadio gota a gota una solucion de ester isopropilico del acido (S)-2-[(R)-(4-nitro-fenoxi)-fenoxi-fosforilamino]propionico (8, isomero Rp) en THF (3 ml) durante un periodo de 3 min. La mezcla se dejo en agitacion a temperatura ambiente durante 96 h y despues se inactivo con NH4Cl acuoso saturado (10 ml). La mezcla se repartio entre acetato de etilo (50 ml) y agua (2 x 20 ml). El extracto organico combinado se seco sobre sulfato sodico anhidro, se filtro y se concentro a presion reducida para dar un residuo amarillo palido (490 mg). El residuo se sometio a cromatografia usando un gradiente de metanol al 05 %/diclorometano para dar un producto en forma de un solido de color blanco (160 mg, rendimiento del 30 %).
La preparacion de Sp-4 o Rp-4 tambien puede conseguirse haciendo reaccionar 3 3'-protegido con el reactivo apropiado C o C' o una mezcla que contiene C y C', como se ilustra en los siguientes ejemplos.
Ejemplo de referencia 15. Preparacion de Sp-4 con 3a como un intermedio sintetico
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JU-
N I
Anhidrido evuhnico
DMAP/CH2C1
Piridina
TEA,3111-
NO
NH
t H
NH
8 (isomero Sp)
tBuMgCl/THF
Na,S03: Na,S20
THF/H,0
NH
NH
O'-P-O
Ejemplo de referencia 15-1. Smtesis de 5'-O-terc-Butildimetilsilil-2'-desoxi-2'-fluoro-2'-C-metiluridina (9):
A una solucion agitada de 2'-desoxi-2'-fluoro-2'-C-metiluridina (3, 81,1 g, 312 mmol) en piridina seca (750 ml) se le
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anadio gota a gota una solucion de TBDMSCI (103,19 g, 685,6 mmol) en piridina seca (500 ml) durante un periodo de 45 min a temperatura ambiente. La reaccion se dejo en agitacion a temperatura ambiente durante 24 h. A la mezcla de reaccion se le anadio metanol (85 ml) y se dejo en agitacion durante 10 min, y despues los disolventes se retiraron por destilacion a presion reducida. A la masa de reaccion se le anadio agua caliente (45 °C) (1 l) y la mezcla se extrajo con acetato de etilo (2 x 500 ml) y se lavo con agua (1 x 500 ml). La capa organica se seco sobre sulfato sodico anhidro. Se retiro por destilacion acetato de etilo y el residuo obtenido se co-evaporo con tolueno (2 x 500 ml) para dar 9 en bruto en forma de una espuma de color blanco. Rendimiento = 116,9 g (cuantitativo). 1H RMN (CDCl3, 300 MHz): 5 0,1 (s,6H), 0,91 (s, 9H), 1,22 (d, 3H, J = 21 Hz), 2,50 (s, 2H), 3,75-4,05 (m,4H), 5,54 (d, 1H, J = 9 Hz), 5,73 (s, 1H), 6,0 (d, 1H, J = 18 Hz), 7,81 (d, 1H, J = 9 Hz), 8,57 (s a, 1H), 11,1 (s, 1H).
Ejemplo de referencia 15-2. Sintesis de 5'-O -(terc-Butildimetilsilil)-3'-O-levulinil-2'-desoxi-2'-fluoro 2'-C-metil- uridina (10):
A una solucion agitada del nucleosido 9 (116,9 g, 312,1 mmol) en DCM (1 l) se le anadio DMAP (30,5 g, 249,7 mmol) y esto se dejo en agitacion a TA durante 20 min. A la mezcla se le anadio una solucion de anhidrido levulinico (133,6 g, 642,3 mmol) en DCM (200 ml) y es dejo en agitacion durante 24 h. El analisis por TLC de la mezcla indico la finalizacion de la reaccion. Se anadio agua fria (500 ml) y la mezcla se agito durante 20 min. Las capas se separaron y la capa organica se lavo con una solucion sat. de bicarbonato sodico (2 x 250 ml), se seco sobre sulfato sodico anhidro y despues el disolvente se destilo a presion reducida para dar un aceite de color amarillo. Rendimiento en bruto: 197,6 g (135 %). El material se uso tal cual para la siguiente etapa. 1H RMN (CDCb, 300 MHz) 5 0,11 (s, 6H), 0,94 (s, 9H), 1,34 (d, 3H, J = 21 Hz), 2,22 (s, 3H), 2,6-2,89 (m, 4H), 3,72 (m, 1H), 4,01 (d, 1H, J = 12 Hz), 4,23 (d, 1H, J = 9 Hz), 5,33 (dd, 1H, J = 15 Hz), 5,73 (d, 1H, J = 6 Hz), 6,26 (d, 1H, J = 15 Hz), 8,12 (d, 1H, J = 12 Hz), 8,72 (s a, 1H).
Ejemplo de referencia 15-3. Sintesis de 3'-O-levulinil-2'-desoxi-2'-fluoro 2'-C-metil-uridina (3a):
Se disolvio 10 en bruto (197,6 g, ~312,1 mmol) en DCM (1 l) al que se le anadio TEA.3HF (50,3 g, 312,1 mmol) y se dejo agitar durante una noche a temperatura ambiente. El analisis por TLC de la mezcla indico un 50 % de finalizacion de la reaccion. Se anadio otro equivalente de TEA.3HF (50,3 g, 312,1 mmol) y la mezcla de reaccion se dejo en agitacion durante 6 h. El analisis por TLC en este punto indico aproximadamente un 10 % de material de partida sin reaccionar. Se anadieron 0,25 equiv. mas de TEA.3HF (12,5 g, 78,0 mmol) y la mezcla de reaccion se dejo en agitacion durante una noche. La mezcla de reaccion se concentro a sequedad para dar un aceite de color amarillo. El producto en bruto de todos los lotes se purifico por cromatografia en columna sobre gel de silice (MeOH al 0-2 % en DCM) para dar 124,1 g de 3'-levulinato en forma de un solido espumoso de color blanco (rendimiento del 90 % purificado en tres etapas de 2'-desoxi-2'-fluoro-2'-C-metiluridina). 1H RMN: (CDCb, 400 MHz) 5 1,55 (d, 3H, CH3, J = 20 Hz), 2,36 (s, 3H, CH3), 2,8-3,03 (m, 5H, CH2CH3), 3,91-3,96 (dd, 1H, CH"), 4,2-4,25 (m, 1H, CH'), 4,34 (dd, 1H, CH, J = 8 Hz), 5,25 (dd, 1H, J = 16 Hz), 5,93 (d, 1H, J = 8 Hz), 8,20 (d, 1H, J = 8 Hz), 9,18 (s, 1H).
Ejemplo de referencia 15-4. Sintesis estereoselectiva de (S)-isopropil ester del acido (S)-2-{[(1R,4R,5R)-5-(2,4- Dioxo-3,4-dihidro-2H-pirimidin-1-il)-4-(R)-fluoro-3-(4-oxopentanoil)-4-metil-tetrahidro-furan-2-ilmetoxi]-fenoxi- fosforilamino}-propionico (11):
A una solucion del nucleosido (3a, 1,00 mmol, 358 mg) en 5 ml de THF anhidro que se enfrio a 0 °C se le anadio tBuMgCl (1,7 M en THF, 2 equiv.), se dejo calentar a temperatura ambiente y se agito durante media hora. A esta mezcla se le anadio en un lote el reactivo (pureza quiral de aprox. el 97 %) ester isopropilico del acido (S)-2-[(S)-(4- nitro-fenoxi)-fenoxi-fosforilamino]propionico (8, isomero Sp) (408 mg, 1,00 mmol, 1,00 equiv.) y se dejo en agitacion a ta. Despues de 16 h, quedo ~30 % de material de partida. La mezcla de reaccion se inactivo con una solucion saturada de NH4Cl 10 ml, y la fase acuosa se extrajo con acetato de etilo (3 x 25 ml). La fase organica combinada se lavo con salmuera, se seco sobre sulfato sodico anhidro y se evaporo a sequedad para dar una espuma de color amarillo palido (500 mg). Esto se purifico por cromatografia sobre gel de silice usando metanol al 2-5 % en cloruro de metileno para dar el producto en forma de una espuma de color blanco (275 mg) de pureza quiral P de aproximadamente el 97 % y material de partida sin reaccionar (162 mg). Basado en el material de partida consumido, el rendimiento fue del 76 %.
31P RMN (CDCl3, 162 MHz): 3,7 ppm; 1H RMN (CDCb, 400 MHz): 5 1,22 (dd, 6H, J = 6,4 Hz), 1,37 (s, 3H), 1,58 (s, 3H), 2,18 (s, 3H), 2,63-2,9 (m, 4H), 4,0 (d, 1H, J = 8 Hz), 4,2-4,33 (m, 1h), 4,57 (d, 1H, J = 8 Hz), 4,96-5,00 (sept., 1 h), 5,2 (dd, 1H, J = 9 Hz), 5,42 (d, 1H, J = 8 Hz), 6,19 (d, 1H, J = 18 Hz), 7,15-7,35 (m, 5H), 7,5 (d, 1H, J = 5,6 Hz), 8,2 (s a, 1H).
Ejemplo de referencia 15-5. Sintesis de (S)-isopropil ester del acido (S)-2-{[(1R,4R,5R)-5-(2,4-Dioxo-3,4- dihidro-2H-pirimidin-1-il)-4-(R)-fluoro-3-hidroxi-4-metil-tetrahidro-furan-2-ilmetoxi]-fenoxi-fosforilamino}- propionico (Sp-4)
Una solucion de sulfito sodico se preparo anadiendo Na2S2O3 (1,51 g) y Na2S2O5 (0,57 g) en agua (25 ml). A una solucion del levulinato (11, 250 mg, 0,40 mmol) en THF anhidro (2,5 ml) se le anadio 1,0 ml de la solucion de sulfito sodico. Esto se dejo en agitacion a temperatura ambiente durante 4 h. La mezcla de reaccion se vertio en agua (15 ml), se extrajo con acetato de etilo (3 x 25 ml), se seco y se evaporo para dar cuantitativamente un producto
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solido de color blanco con una pureza quiral P de aproximadamente el 97 % que correspondio con las propiedades fisicas y espectrales del Sp-4 producido directamente a partir del nucleosido no protegido.
Ejemplo de referencia 16. Procedimiento alternativo para preparar Sp-4 a partir de 3a.
A una solucion agitada de (2R,3R,4R,5R)-5-(2,4-dioxo-3,4-dihidro-2H-pirimidin-1-il)-4-fluoro-2-hidroximetil-4-metil- tetrahidro-furan-3-il ester del acido 4-oxo-pentanoico (3a, 210 mg, 0,59 mmol) en THF seco (1,5 ml) se le anadio una solucion 1,7 M de cloruro de terc-butilmagnesio (1,07 ml, 1,82 mmol) a temperatura ambiente durante un periodo de 2 min. Inicialmente, se observo un precipitado de color blanco y despues 10 min, la mezcla de reaccion se convirtio en una solucion de color amarillo oscuro. Despues de 30 min, se anadio gota a gota una solucion de ester isopropilico del acido (S)-2-[(S)-(4-nitrofenoxi)-fenoxi-fosforilamino]-propionico (8 (isomero Sp), 382 mg, 0,94 mmol) en THF (1,5 ml) durante un periodo de 3 min. La mezcla se calento a 40 °C durante 5 h, momento en el que el analisis por TLC y 1H RMN indicaron menos del 2 % de material de partida sin reaccionar. La reaccion se interrumpio con cloruro de amonio acuoso saturado y despues se repartio entre acetato de etilo y agua. La fase organica combinada se lavo con una solucion acuosa al 10 % de Na2CO3 (3 x 10 ml) seguido de agua. La capa organica se seco sobre sulfato sodico anhidro y se concentro para dar un residuo de color pardo (410 mg). El producto en bruto se disolvio en tetrahidrofurano (1,0 ml) y despues se anadio una solucion acuosa de la mezcla de sulfito sodico (37 mg, 0,295 mmol) y metabisulfito sodico (224 mg, 1,18 mmol) en 1 ml de agua. La mezcla se calento a 45 °C durante 20 h, fase en la que unicamente se observo una conversion de aproximadamente el 10 % por TLC, por lo tanto, se anadio mas cantidad del sulfito sodico (74 mg) y el metabisulfito sodico (448 mg), y el calentamiento se continuo durante 52 h mas. En este momento, se observo una conversion de aproximadamente el 40 % por TLC. La mezcla de reaccion se repartio entre agua y acetato de etilo. La fase organica combinada se seco sobre sulfato sodico anhidro y se concentro para dar un residuo de color pardo (210 mg). La cromatografia en columna del residuo usando un gradiente de MeOH al 0-5 %/DCM dio material de partida sin reaccionar (89 mg) y Sp-4 (57 mg, rendimiento del 18 %, 24 % basado en el material de partida recuperado).
Ejemplo de referencia 17. Preparacion de Sp-4 con 3c como un intermedio sintetico
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Ejemplo de referencia 17-1. Preparacion de 1-[(2R,3R,4R,5R)-4-(terc-butildimetilsilaniloxi)-3-fluoro-5- hidroximetil-3-metil-tetrahidro-furan-2-il]-1H-pirimidina-2,4-diona, 12.
A una solucion de 3 (10,0 g, 38,43 mmol) en piridina (50 ml) se le anadio diclorometano (50 ml). La solucion se enfrio a 0 °C. A la solucion se le anadio cloruro de 4,4'-dimetoxitritilo (14,32 g, 42,27 mmol) y la solucion se agito a 0 °C durante 5 h. Se anadio metanol (5 ml) para interrumpir la reaccion. La solucion se concentro a sequedad a presion reducida y el residuo se repartio entre acetato de etilo (500 ml) y agua (50 ml). La solucion organica se lavo con salmuera (50 ml) y se seco (sulfato sodico, 4 g). El disolvente se retiro a presion reducida y el residuo se disolvio en diclorometano (100 ml). A la solucion se le anadieron imidazol (7,83 g, 115 mmol) y cloruro de t-butildimetilsililo (8,68 g, 57,6 mmol). La solucion se agito a temperatura ambiente durante 16 h. Se anadio metanol para interrumpir la reaccion (5 ml) y el disolvente se retiro a presion reducida y el residuo se repartio entre acetato de etilo (500 ml) y agua (50 ml). La solucion organica se seco (sulfato sodico, 4 g) y se evaporo a presion reducida. El residuo se purifico por cromatografia en columna (EtOAc al 10-40 % en Hexano) para dar el producto intermedio de 5'-O-DMT- 3'-O-tBDMS. A su vez, este se trato con acido trifluoroacetico al 1 % en diclorometano (200 ml). La solucion se agito a temperatura ambiente durante 1 h. Se anadio agua (20 ml) y la solucion se agito a ambiente durante 1 h mas. Se anadio lentamente metanol (5 ml) y la solucion se agito a temperatura ambiente durante 1 h mas. Se anadio hidroxido de amonio para ajustar el pH de la solucion a 7. La solucion organica se separo, se seco (sulfato sodico, 4 g) y se evaporo a sequedad a presion reducida. El residuo se purifico por cromatografia en columna sobre gel de silice (metanol al 1-5 % en diclorometano) para dar 12 en forma de un solido de color blanco 7,5 g con un rendimiento del 50 % en tres etapas. 1H RMN (DMSO-d6) 5 (ppm) 11,48 (s a, 1H, NH), 7,94 (d, 1H, H-6), 6,00 (d, 1H, H-1'), 5,69 (d, 1H, H-5), 4,06 (dd, 1H, 3'-H), 3,85 (m, 2H, H-5'a, H-4'), 3,58 (d a, 1H, H-5'b), 1,27 (d, 3 H, 2-CH3), 0,89 (s, 9H, C(CH3)3), 0,12 (s, 6H, Si(CH3)2).
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Ejemplo de referencia 17-2. Preparacion de Sp-4 usando 1-[(2R,3R,4R,5R)-4-(terc-butMdimetMsManMoxi)-3- fluoro-5-hidroximetil-3-metil-tetrahidro-furan-2-il]-1H-pirimidina-2,4-diona (3c).
A una solucion agitada de 1-[(2R,3R,4R,5R)-4-(terc-butildimetilsilaniloxi)-3-fluoro-5-hidroximetil-3-metil-tetrahidro- furan-2-il]-1H-pirimidina-2,4-diona (12, 374 mg, 1 mmol) en THF seco (3 ml) se le anadio una solucion 1,7 M de cloruro de terc-butilmagnesio (1,8 ml, 3,1 mmol)) a temperatura ambiente durante un periodo de 2 min. Inicialmente, se observo un precipitado de color blanco y despues de 10 min la mezcla de reaccion se convirtio en una solucion de color amarillo oscuro transparente. Despues de 30 min, se anadio gota a gota una solucion de ester isopropilico del acido (S)-2-[(S)-(4-nitrofenoxi)-fenoxi-fosforilamino]-propionico (8, isomero Sp, 653 mg, 1,6 mmol) en THF (2,5 ml) durante un periodo de 3 min. La mezcla se calento a 40 °C durante 20 h, momento en el que el analisis por TLC y 1H RMN indico menos del 5 % de material de partida sin reaccionar. La mezcla de reaccion se inactivo con cloruro de amonio acuoso saturado y despues se repartio entre acetato de etilo y agua. La capa organica se lavo con una solucion acuosa al 10 % de Na2CO3 (3 x 10 ml), seguido de agua (20 ml). La capa organica se seco sobre sulfato sodico anhidro y se concentro para dar un residuo de color pardo que contenia 3c (850 mg). El producto en bruto se disolvio en tetrahidrofurano (2 ml) y se anadieron 0,8 ml de acido formico acuoso al 80 % a temperatura ambiente. La mezcla de reaccion se calento a 50 °C durante 96 h. Se observo una conversion de aproximadamente el 70 % por TLC. La mezcla de reaccion se vertio en bicarbonato sodico acuoso saturado frfo y despues se repartio entre acetato de etilo y agua. La fase organica combinada se seco sobre sulfato sodico anhidro y se concentro para dar un residuo de color pardo (220 mg). La cromatografia en columna del residuo usando un gradiente de MeOH al 0-5 %/DCM dio material de partida sin reaccionar (21 mg) y Sp-4 (77 mg, rendimiento del 35 %, rendimiento del 39 % basado en el material de partida recuperado).
Ejemplo de referencia 18. Preparacion de Sp-4 con 3d como intermedio sintetico
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Ejemplo de referencia 18-1. Preparacion de 3d
A una solucion agitada de 3 en piridina (20 ml) a 0 °C se le anadio gota a gota TIPDS-Cl durante un periodo de 15 min. La mezcla se dejo calentar lentamente a temperatura ambiente, temperatura a la que se agito durante 16 h. La piridina se evaporo y el residuo se co-evaporo con tolueno (50 ml). Despues, el residuo se trituro con hexanos y el precipitado blanco se retiro por filtracion usando una capa de Celite. El filtrado se concentro a presion reducida para dar un solido espumoso (12,97 g). El producto en bruto (13) se disolvio de nuevo en tetrahidrofurano (75 ml) y se anadio una solucion acuosa de TFA (75 ml, 1:1 TFA/agua) a 0 °C durante un periodo de 20 min. La mezcla se agito a esta temperatura durante 6 h. El analisis por TLC indico ~5 % de material de partida. La mezcla de reaccion se inactivo con NaHCO3 acuoso saturado hasta un pH 8 y despues se extrajo con acetato de etilo. El extracto organico combinado se lavo con agua, se seco y se concentro para dar un solido cristalino de color blanco. La
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trituracion adicional del solido con hexanos (30 ml) dio un solido de color blanco que se Ultra y se seco a alto vacio para dar 3d (10,1 g, rendimiento del 84 % en 2 etapas). 1H RMN (400 MHz, CDCI3): 5 8,83 (s a, 1H), 7,94 (d a, J = 6,0 Hz, 1H), 6,10(d a, J = 18,4 Hz, 1H), 5,71 (d, J = 8,2 Hz, 1H), 4,43 (s a, 1H), 4,36 (dd, J = 22,6, 9,0 Hz, 1H), 4,27 (s a, 1H), 4,10(d, J = 13,2 Hz, 1H), 4,03 (d, J = 9,2 Hz, 1H), 3,92 (d, J = 13,2 Hz, 1H), 1,39 (d, J = 22,0 Hz, 3H), 1,110,92 (m, 28H).
Ejemplo de referencia 18-2. Preparacion de Sp-4
A una solucion agitada de 3d (520 mg, 1 mmol) en THF seco (5 ml) se le anadio una solucion 1,7 M de cloruro de terc-butilmagnesio (1,8 ml, 3,1 mmol, 3,1 equiv.)) a temperatura ambiente durante un periodo de 15 min. Despues de 30 min, se anadio gota a gota una solucion de ester isopropilico del acido (S)-2-[(S)-(4-nitro-fenoxi)- fenoxifosforilamino]propionico (8, isomero Sp, 653 mg, 1,6 mmol) en THF (1 ml) durante un periodo de 3 min. La mezcla se dejo en agitacion a temperatura ambiente durante 60 h. El analisis 1H y 31P RMN de la muestra en bruto indico una mezcla de diastereomeros en aproximadamente 1:0,76. La mezcla de reaccion se inactivo con NH4Cl acuoso saturado (20 ml). La mezcla se repartio entre acetato de etilo (150 ml) y secuencialmente, Na2CO3 acuoso al 10 % (3 x 20 ml) y agua (20 ml). El extracto organico combinado se seco sobre sulfato sodico anhidro, se filtro y se concentro a presion reducida para dar un residuo amarillo palido (14, 878 mg).
El compuesto anterior, 14, se disolvio de nuevo en tetrahidrofurano (3 ml) y despues se anadio acido formico acuoso al 80 %. La mezcla se calento a 55 °C durante 20 h. La mezcla de reaccion se enfrio a 0 °C, y despues se inactivo con bicarbonato sodico acuoso saturado (pH 7,0). Despues, la mezcla de reaccion se repartio entre acetato de etilo y agua. La fase organica combinada se seco sobre sulfato sodico y se concentro para dar 560 mg del residuo. El residuo se sometio a cromatografia usando un gradiente de metanol al 0-5 %/diclorometano para dar material de partida sin reaccionar (14, 242 mg) y Sp-4 (80 mg, rendimiento del 15 %) en forma de un solido de color blanco.
Ejemplo de referencia 19. Preparacion de Sp-4 marcado con isotopos
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Ejemplo de referencia 19-1. Preparacion de 1-((6aR,8R,9R,9aS)-9-hidroxi-2,2,4,4-tetraisopropiltetrahidro-6H- furo[3,2-f][1,3,5,2,4]trioxadisilocin-8-il)pirimidina-2,4(1H,3H)-diona, 16
Se co-evaporo uridina (15, 100,0 g, 409,5 mmol) a sequedad con piridina anhidra (600 ml) y se suspendio de nuevo en piridina anhidra (700 ml). A esta suspension fina agitada se le anadio 1,3-dicloro-1,1,3,3-tetraisopropildisiloxano (135,7 g, 482,5 mmol) durante 60 min a temperatura ambiente. Despues de agitar la suspension fina durante 17 h a temperatura ambiente, la reaccion se interrumpio anadiendo metanol (20 ml) y despues se concentro a presion reducida. El residuo se repartio entre acetato de etilo (1,5 l) y agua (2 l). La capa organica se lavo adicionalmente con acido clorhidrico al 5 % (2 x 1 l) y salmuera (500 ml), se seco sobre sulfato sodico solido (50 g), se filtro y se concentro a presion reducida para dar el producto en bruto, aprox. 250 g. El residuo se sometio a una columna de filtracion usando gel de silice (1,75 kg) y un gradiente de acetato de etilo en hexanos al 20-65 %. Las fracciones del producto puro, segun se determino por un analisis TLC homogeneo (Fr 0,55 en 1:1 de hexanos-acetato de etilo) se combinaron, se concentraron a presion reducida y se secaron (40 °C, 0,2 mm de Hg, 24 h) para proporcionar 145,5 g
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(76 %) de 16 en forma de un solido espumoso de color blanco. Tambien se recogio una fraccion adicional (35 g) de
16 ligeramente impuro. 1H RMN (DMSO-de) 5 (ppm) 11,35 (s, 1H, NH), 7,66 (d, 1H, J = 7,6 Hz, H-6), 5,57 (d, 1H, J = 4,8 Hz, 2'-OH), 5,50-5,49 (m, 2H, 1'-H y H-5), 4,14-4,18 (m, 3H, 2', 3', 4'-H), 3,97-3,87 (m, 2H, 5'-Ha y Hb), 1,02-0,95 (m, 28H, CH(CHa)2).
Ejemplo de referencia 19-2. Preparacion de 1-((6aR,8R,9aR)-2,2,4,4-tetraisopropN-9-oxotetrahidro-6H-furo[3,2- f][1,3,5,2,4]trioxadisilocin-8-il)pirimidina-2,4(lH,3H)-diona, 17
En un matraz de fondo redondo de tres bocas seco se anadieron DCM anhidro (600 ml) y DMSO (30,82 g,
394,5 mmol). La solucion se enfrio a -78 °C en un bano de hielo seco/acetona en una atmosfera de nitrogeno. Se anadio anhidrido trifluoroacetico (puro, 77,7 g, 369,8 mmol) mediante una jeringa durante 40 min y proporciono una mezcla turbia. A la mezcla una solucion del derivado de uridina 16 en DCM (600 ml) se le anadio gota a gota durante 75 min a -78 °C mediante un embudo de adicion. La mezcla heterogenea se agito durante 2 h a -78~65 °C y despues se anadio trietilamina anhidra (92 ml) mediante una jeringa rapidamente para formar una solucion de color amarillo claro transparente. Despues de 1 h a baja temperatura, la reaccion se completo como se muestra por TLC (EtOAc al 30 % en hexanos). El bano de refrigeracion se retiro y la mezcla de reaccion se calento lentamente a temperatura ambiente durante 1 h. La reaccion se interrumpio mediante la adicion de NH4Cl sat. (180 ml). Se anadio agua (200 ml) y la fase organica se separo. La capa acuosa se extrajo de nuevo con DCM (300 ml). La fase organica combinada se lavo con agua (3 x 400 ml) y salmuera (150 ml), y se seco sobre Na2SO4. La retirada del disolvente proporciono un residuo de color pardo pegajoso.
El residuo oleoso en bruto (contenia traza de DCM) se almaceno durante una noche en el refrigerador. Despues de durante una noche, se observo algo de solido de cristal en el aceite. El aceite se disolvio en 500 ml de hexanos a temperatura ambiente. La solucion se almaceno en el refrigerador durante 24 horas y se formo mas solido. El solido se recogio por filtracion y se aclaro con DCM frio al 10 % en hexanos (1 l) para retirar la mayor parte del color naranja. El solido (17) se seco al vacio durante 2 h y despues se seco al aire durante 24 h. El solido peso 21 g despues de secarse a 50 °C al vacio. El filtrado se concentro y el residuo se purifico a traves de cromatografia en columna (acetato de etilo al 10-70 % en hexanos) para proporcionar 37 g mas (rendimiento combinado de 97 %) de
17 en forma de un solido de color naranja claro.
Ejemplo de referencia 19-3. Preparacion de 1-((2R,3S,4R,5R)-3,4-dihidroxi-5-(hidroximetM)-3-13-C- perdeuteriometiltetrahidrofurano-2-il)pirimidina-2,4(1H,3H)-diona, 18
Se lavo magnesio (3,53 g, 147 mmol) con acido clorhidrico acuoso al 5 %, se seco (50 °C, 0,2 mm de Hg, 24 h), se puso en un matraz de fondo redondo de dos bocas equipado con un agitador magnetico y un condensador. El matraz se lleno con gas argon y despues se anadio eter anhidro (80 ml). Al magnesio en eter se e anadio lentamente metil yoduro de perdeuterio-13C (15,06 g, 110,3 mmol), que genero una reaccion exotermica. Despues de que la mezcla de reaccion se enfriase, el sobrenadante se transfirio a una solucion del compuesto seco 17 (50 °C, 0,2 mm de Hg, 15 h) (10,0 g, 20,63 mmol) en THF anhidro (1 l) a -50 °C durante 20 min. La temperatura se dejo elevar hasta -40 °C y la mezcla se agito entre -40 a -25 °C durante 4 h. Tras la finalizacion de la reaccion, la mezcla se diluyo con EtOAc (1 l) a -50 °C y despues se anadio lentamente salmuera (300 ml). La capa organica se separo, despues se lavo con una solucion sat. de cloruro de amonio (300 ml x 2) y se seco con sulfato sodico. Despues de la filtracion y la concentracion a presion reducida, el residuo se disolvio en MeOH (250 ml). Se anadieron fluoruro de amonio (12 g) y TBAF (400 mg). La mezcla resultante se agito a 90 °C durante 7 h y despues se concentro con gel de silice (20 g) a presion reducida. Despues de un extenso secado al vacio, el residuo obtenido se purifico por cromatografia ultrarrapida en columna sobre gel de silice (MeOH:CH2Ch = 1:20 a 1:10) para dar el compuesto 18 (5 g, 46 %) en forma de un solido de color blanco. 1H RMN (DMSO-cfe) 5 (ppm) 11,26 (s, 1H, NH), 7,65 (d, 1H, J =
8,4 Hz, H-6), 5,77 (d, 1H, J = 2,4 Hz, H-1'), 5,57 (d, 1H, J = 8,0 Hz, H-5), 5,46 (d, 1H, J = 5,2 Hz, HO-3'), 5,24 (d, 1H,
J = 2,4 Hz, HO-2'), 5,14 (t, 1H, J = 5,6 Hz, HO-5'), 3,74-3,56 (m, 4H, H-3', 4', 5', 5").
Ejemplo de referencia 19-4. Preparacion de acetato de ((2R,3R,4S,5R)-3-acetoxi-5-(2,4-dioxo-3,4-
dihidropirimidin-1(2H)-il)-4-hidroxi-4-13C-perdeuteriometiltetrahidrofurano-2-il)metilo, 19
A una solucion del compuesto 18 (5,00 g, 19,1 mmol) en piridina anhidra (100 ml) se le anadio anhidrido acetico (3 ml) a temperatura ambiente. La mezcla resultante se agito a tempera ambiente durante 15 h, se diluyo con EtOAc (250 ml), se lavo con agua (50 ml x 3), y se seco con sulfato sodico. Despues de la filtracion y la concentracion, el residuo se purifico por cromatografia en columna ultrarrapida (MeOH del 0 al 5 % en CH2Cl2) para dar el compuesto 19 (4,0 g, 68 %) en forma de un solido de color gris.
Ejemplo de referencia 19-5. Preparacion de acetato de ((2R,3R,4R,5R)-3-acetoxi-5-(2,4-dioxo-3,4-
dihidropirimidin-1(2H)-il)-4-fluoro-4-13C-perdeuteriometiltetrahidrofurano-2-il)metilo, 20
A una solucion del compuesto 19 (2,33 g, 6,73 mmol) en CH2Ch anhidro (60 ml) se le anadio lentamente DAST (1,33 ml, 10,1 mmol) a -78 °C. La mezcla resultante se agito durante 30 min despues de exponerse a temperatura ambiente. Se realizaron dos reacciones a escala de 2,33 g adicionales y una reaccion a escala de 1,00 g exactamente de la misma manera. Las cuatro mezclas de reaccion se combinaron, se diluyeron con CH2Ch
5
10
15
20
25
30
35
40
45
50
55
(300 ml), y se lavaron con hielo-agua (100 ml x 2) y despues una solucion acuosa fria de NaHCO3 (100 ml x 2). Despues del secado, la filtracion y la concentracion, el residuo se purifico por cromatografia ultrarrapida en columna sobre gel de sHice (EtOAc del 0 % al 50 % en hexanos, compuesto obtenido a aproximadamente el 48 %) para dar el compuesto 20 (2,0 g, 24 % de 7,99 g totales del compuesto 19) en forma de un solido de color blanco. 1H RMN (CDCb) 5 (ppm) 8,27 (s, 1H, NH), 7,55 (d, 1H, J = 8,4 Hz, H-6), 6,17 (d, 1H, J = 18,8 Hz, H-1'), 5,78 (dd, 1H, J = 1,2, 8,4 Hz, H-5), 5,12 (dd, 1H, J = 9,6, 21,6 Hz, H-3'), 4,40-4,31 (m, 3H, H-4', 5', 5"), 2,19 (s, 3H, CH3), 2,15 (s, 3H, CH3).
Ejemplo de referencia 19-6. Preparacion de 1-((2R,3R,4R,5R)-3-fluoro-4-hidroxi-5-(hidroximetil)-3-13C- perdeuteriometiltetrahidrofurano-2-il)pirimidina-2,4(1H,3H)-diona, 21
A una solucion del compuesto 20 (2 g, 5,74 mmol) en metanol (20 ml) se le anadio n-butilamina (6 ml). La mezcla resultante se agito a ta durante 15 h y se concentro con gel de silice al vacio. El residuo obtenido se purifico por cromatografia ultrarrapida en columna sobre gel de silice (MeOH del 0 al 10 % en CH2Cl2) para dar el compuesto 21 (1,3 g, 85 %) en forma de un solido de color blanco. 1H RMN (CD3OD) 5 (ppm) 8,08 (d, 1H, J = 8,0 Hz, H-6), 6,13 (d, 1H, J = 18,4 Hz, H-1'), 5,70 (d, 1H, J = 8,0 Hz, H-5), 3,99 (d, 1H, J = 13,6 Hz, H-5'), 3,97-3,91 (m, 2H, H-3', 4'), 3,80 (dd, 1H, J = 2,0, 12,8 Hz, H-5"), ESMS (M+1) estimado 265, observado 265.
imagen36
Ejemplo de referencia 19-7. Preparacion de 2-((((2R,3R,4R,5R)-5-(2,4-dioxo-3,4-dihidropirimidin-1(2H)-N)-4- fluoro-3-hidroxi-4-13C-perdeuteriometiltetrahidrofurano-2-il)metoxi)(fenoxi)fosforilamino)propanoato de (S)- isopropilo, 22
A una solucion del nucleosido no protegido 21 (207 mg, 0,783 mmol) y N-metilimidazol (0,4 ml, 5 mmol) en THF (4 ml) se le anadio gota a gota el fosforocloridato preparado previamente en THF (1,0 M, 2,35 ml, 2,35 mmol) a 0 °C. La reaccion se calento lentamente a temperatura ambiente durante 1 h y despues se anadieron agua (1 ml) y EtOAc (5 ml). La solucion organica se lavo con citrato sodico mono basico ac. sat. (2 x 2 ml), NaHCO3 ac. sat. (1 x 2 ml), se seco (MgSO4) y se concentro a presion reducida. El producto en bruto se purifico por cromatografia en columna sobre silice usando PrOH del 0 al 5 % en CH2G2 como eluyentes para dar el fosforamidato, 22 (216 mg, 52 %, mezcla 1:1 de P-diastereomeros) en forma de un solido de color blanco: 1H RMN (400 MHz, DMSO-cfe) 5 11,54 (s, 1H), 7,56 (d, J = 6,8 Hz, 1H), 7,40-7,35 (m, 2H), 7,23-7,18 (m, 3 H), 6,14-5,96 (m, 2H), 5,89 (dd, J = 5,6, 25,6 Hz, 1H), 5,55 (t, J = 8,4 Hz, 1H), 4,85 (dc, J = 1,6, 6,0 Hz, 1H), 4,44-4,32 (m, 1H), 4,25 (m, 1H), 4,06-3,98 (m, 1H), 3,863,70 (m, 2H), 1,30-1,08 (m, 9H); 31P RMN (162 MHz, DMSO-d6) 5 4,90, 4,77; LRMS (ESI) [M + H]+ calculado para C2i13CH27D3FN3O9P 534,5, observado 534,4.
Ejemplo de referencia 19-8. Preparacion de acido (2S)-2-(((((2R,3R,4R,5R)-5-(2,4-dioxo-3,4-dihidropirimidin- 1(2H)-il)-4-fluoro-3-hidroxi-4-13C-perdeuteriometiltetrahidrofurano-2- il)metoxi)(hidroxi)fosforil)amino)propanoico, 23
Se suspendio fosforamidato 22 (147 mg, 0,276 mmol) en trietilamina (2 ml) y agua (0,5 ml), y se calento a 60 °C durante 30 h. Despues, los componentes volatiles se evaporaron a presion reducida. El producto en bruto se purifico por cromatografia en columna sobre silice eluyendo con 'PrOH al 50-70 % en CH2Ch y despues, NH4OH del 0 al 20 % en 'PrOH para dar 23 en forma de un solido de color blanco (95 mg, 83 %): 1H RMN (400 MHz, DMSO-d6) 5 8,00 (d, J = 8,4 Hz, 1H), 5,98 (d, J = 19,2 Hz, 1H), 5,52 (d, J = 8,4 Hz, 1H), 4,02-3,81 (m, 4H), 1,10 (d, J = 6,8 Hz, 3H); 31P RMN (162 MHz, DMSO-d6) 5 8,12; LRMS (ESI) [M + H]+ calculado para C1213CH17D3FN3O9P 416,3, observado 416,4.
Propiedades de las muestras de Rp-4, 4, y Sp-4
Las muestras de Rp-4, 4, y Sp-4 se analizaron por difraccion de polvo de rayos X (XRPD), espectrometria de resonancia magnetica nuclear (RMN), espectroscopia infrarroja transformada de Fourier (FT-IR), calorimetria diferencial de barrido (DSC), analisis gravimetrico termico (TGA), absorcion de vapor gravimetrico (GVS), solubilidad acuosa termodinamica, y cromatografia liquida de alto rendimiento).
Ejemplo de referencia 20. Difraccion de polvo de rayos X
Las muestras de Rp-4, 4 y Sp-43 se analizaron por difraccion de polvo de rayos X (XRPD) en el siguiente regimen. a. Bruker AXS/Siemens D5000
5
10
15
20
25
30
35
40
Los patrones de difraccion de polvo de rayos X se recogieron en un difractometro Siemens D5000 usando radiacion Cu Ka (40 kV, 40 mA), goniometros 0-0, divergencia de V20 y hendiduras de recepcion, un monocromator secundario de grafito y un contador de centelleo. El instrumento es la realizacion verificada usando un estandar Corundum certificado (NIST 1976). El software usado para la recogida de datos fue Diffrac Plus XRPD Commander v2.3.1 y los datos se analizaron y presentaron usando Diffrac Plus EVA v 11.0.0.2 o v 13.0.0.2.
Condiciones ambientales
Las muestras realizadas en condiciones ambientales se prepararon como especimenes de placa plana usando polvo como se recibe. Aproximadamente se empaquetaron suavemente 35 mg de la muestra en una cavidad cortada en obleas de silicio (510) de respaldo nulo y pulidas. La muestra se giro en su propio plano durante el analisis. Los detalles de la recogida de datos son: intervalo angular: 2 a 42°20; tamano de la etapa: 0,05°20; y tiempo de recogida: 4 s.etapa-1.
b. Bruker AXS C2 GADDS
Los patrones de difraccion de polvo de rayos X se recogieron en un difractometro Bruker AXS C2 GADDS usando radiacion Cu Ka (40 kV, 40 mA), etapa XYZ automatica, microscopio de video laser para el posicionamiento de la auto-muestra y un detector de area dimensional HiStar 2. Las opticas de rayos X consisten en un espejo de capa multiple Gobel individual acoplado con un colimador pinhole de 0,3 mm.
La divergencia del haz, es decir, el tamano efectivo del haz de rayos X en la muestra, fue aproximadamente 4 mm. Se empleo un modo de barrido continuo 0-0 con una distancia del detector de muestra de 20 cm que da un intervalo de 20 efectivo de 3,2o- 29,7°. Normalmente, la muestra debera exponerse al haz de rayos X durante 120 segundos. El software usado para la recogida de datos fue GADDS para WNT 4.1.16 y los datos se analizaron y se presentaron usando Diffrac Plus EVA v 9.0.0.2 o v 13.0.0.2.
Condiciones ambientales
Las muestras realizadas bajo condiciones ambientales se prepararon como especimenes de placa plana usando polvo como se recibe sin moler. Aproximadamente 1-2 mg de la muestra se presionaron ligeramente en un portaobjetos de vidrio para obtener una superficie plana.
Difraccion de polvo de rayos X (XRPD)
Se descubrio por XRPD que 4 era amorfo (vease la figura 1). El analisis XRPD de alta resolution de Rp-4 preparado de acuerdo con el Ejemplo 3 confirmo un solido cristalino que mostraba un patron en polvo diferente al de de Sp-4 (preparado de acuerdo con el Ejemplo 4, Metodo 4), que tambien se confirmo que era un solido cristalino. La tabla de resultados XRPD para Rp-4 y Sp-4 se muestra en la Tabla 1 con todos los picos mostrando muestran una intensidad de <5 % (Rp-4) y <3 % (Sp-4) excluido.
Tabla 1. Datos XRPD para Rp-4 y Sp-4.
Datos XRPD para Rp-4
Datos XRPD para Sp-4 (Forma 1)
Angulo 2-Theta ° 1
% de intensidad Angulo 2-Theta ° % de intensidad
6,616
51,1 4,900 6,8
7,106
40,5 5,190 19,8
8,980
30,0 7,501 100,0
11,020
21,7 8,355 4,1
11,559
77,1 8,965 7,7
11,950
12,8 9,619 21,2
13,023
5,2 10,145 3,6
14,099
6,2 14,393 4,9
15,121
5,7 16,300 7,0
15,624
5,4 16,688 10,6
16,003
17,8 17,408 5,5
17,882
100,0 17,820 8,2
18,567
8,8 18,262 31,5
19,564
22,7 18,600 6,3
20,280
5,6 18,900 7,3
20,728
42,5 19,150 6,1
21,047
19,9 19,696 4,8
21,671
22,0 20,398 4,4
21,943
23,3 20,710 6,9
22,214
18,9 21,950 6,1
23,074
28,5 22,175 12,2
5
10
15
20
25
30
24,145
30,3 22,511 5,6
24,355
39,1 22,924 3,1
25,366
7,6 23,360 6,5
26,146
36,2 23,538 7,1
27,000
9,0 23,910 7,4
27,313
15,6 24,873 3,7
27,677
22,7 25,123 4,9
28,219
12,8 25,649 4,2
28,661
6,2 26,748 5,2
29,450
6,8 27,339 3,7
29,735
9,4 27,646 3,5
31,372
8,2 28,066 3,1
31,967
10,9 29,050 3,0
32,295
6,4 29,541 3,6
33,001
11,4 30,178 3,8
33,774
11,8 31,648 3,1
34,385
6,6 32,721 3,5
34,734
6,5 33,154 3,0
35,600
7,3 33,923 3,5
35,965
13,1 34,341 3,1
36,409
14,7 35,465 3,5
36,880
7,0 36,923 3,1
37,509
5,9 37,760 3,4
37,870
6,0 38,404 3,3
38,313
5,8 40,416 3,1
38,943
8,4
40,093
6,6
40,511
7,8
41,429
6,5
Una muestra de Sp-4 se molio con un mortero, y despues se paso sucesivamente a traves de tamices de 500 y 250 |jm para producir la muestra en forma de un polvo fino. Esta muestra se analizo de nuevo por XRPD de alta resolucion, confirmando que no se produce ningun cambio de forma.
Ejemplo de referencia 21. Estudios de cristalizacion para Sp-4.
Sp-4 cristalino muestra polimorfismo. Por lo tanto, un aspecto se dirige a Sp-4 cristalino y sus formas polimorficas individuales. Sp-4 puede existir en al menos cinco forma polimorficas, designadas como Formas 1-5. Ademas, Sp-4 amorfo tambien puede prepararse. Una cristalizacion tipica se preve disolver aproximadamente 100 mg de Sp-4 en un volumen apropiado del disolvente de cristalizacion (acetonitrilo (5 vol.), cloroformo (5 vol.), acetato de n-butilo (7 vol.), diclorometano (50 vol.), anisol (7 vol.), y 1:1 de MTBE/heptano (50 vol.)) y despues permite la evaporacion de la solucion a 5 °C. Se obtuvieron diversas formas cristalinas, pero cada forma, durante la filtracion y/o el secado, proporciono la Forma 1.
Las formas 1, 2 y 3 estan en forma no solvatada, 1:1 de solvato de DCM y 1:1 de solvato de cloroformo, respectivamente, como se confirmo por analisis XRPD y de rayos X de cristal sencillo. Las formas 4 y 5 se obtuvieron a partir de la cristalizacion de Sp-4 de soluciones de acetonitrilo y anisol, respectivamente. No pueden recogerse datos suficientes para determinar si las Formas 4 y 5 estan sin solvatar, hidratadas o solvatadas ya que no se obtuvieron cristales individuales de calidad suficiente. Las formas 4 y 5 se transforman en la Forma 1 en la filtracion. Se obtienen dos formas cristalinas adicionales se obtienen tras la cristalizacion de Sp-4 en acetato de n- butilo (nBuAc) y una solucion que contiene metiMbutil eter (MTBE) y heptano; tras la filtracion ambas de estas formas cristalinas se convierten en la Forma 1. Las Formas 2 y 3 tambien se transforman en la Forma 1 en aislamiento. La Forma 1 es una forma no solvatada que muestra una amplia endotermia de fusion con una temperatura de aparicion de de 94,3 °C y AHfus de 24,0 kJ mol-1. Se representa un patron XRPD adicional de la Forma 1 de Sp-4 en la Figura 4.
Ejemplo de referencia 21-1. Forma 1 de Sp-4
Se presenta una lista de picos de la Forma 1 de Sp-4 en la Tabla 2._____
Angulo
% de intensidad
2-Theta °
%
5,0
74,8
7,3
100,0
7,8
2,2
8,2
6,8
8,8
9,3
9,4
23,5
10,0
8,4
11,4
4,2
13,3
3,0
14,2
6,1
14,9
3,5
16,1
7,9
16,6
13,2
17,3
15,4
17,7
10,1
18,1
42,6
18,4
7,6
18,7
11,4
18,9
5,7
19,3
5,0
19,6
2,9
20,2
8,5
20,5
11,5
20,8
3,6
21,8
7,2
22,0
14,5
22,4
9,6
23,2
5,3
23,4
5,8
23,5
4,6
23,8
7,4
24,0
3,1
24,7
2,5
25,0
13,0
25,5
3,1
26,6
4,5
27,2
3,2
27,5
2,2
28,1
2,9
30,0
3,2
Ejemplo de referencia 21-2. Forma 2 de Sp-4
Se representa un patron de XRPD de la Forma 2 de Sp-4 en la Figura 5. 5
Se presenta una lista de picos de la Forma 2 de Sp-4 en la Tabla 3.
Angulo
% de intensidad
2-Theta °
%
4,9
44,1
5,1
19,1
6,9
62,1
8,7
6,8
9,8
28,6
10,1
10,4
13,7
7,0
16,7
3,1
19,5
8,9
19,8
45,5
20,1
18,6
20,4
3,6
20,6
25,6
20,9
15,9
21,1
10,9
22,1
3,4
24,6
38,7
24,7
100,0
25,1
61,2
26,1
53,3
39,0
6,3
Ejemplo de referencia 21-3. Forma 3 de Sp-4
Se representa un patron de XRPD de la Forma 3 de Sp-4 en la Figura 6. 5
Se presenta una lista de picos de la Forma 3 de Sp-4 en la Tabla 4.
Angulo
% de intensidad
2-Theta °
%
5,0
10,0
6,9
23,3
9,8
22,6
19,7
34,8
20,6
100,0
21,8
10,5
24,6
65,3
34,7
4,1
Ejemplo de referencia 21-4. Forma 4 de Sp-5
10 Se representa un patron de XRPD de la Forma 4 de Sp-4 en la Figura 7. Se presenta una lista de picos de la Forma 4 de Sp-4 en la Tabla 5.
Angulo
% de intensidad
2-Theta °
%
5,0
29,8
6,8
100,0
8,2
4,8
8,7
5,2
9,9
3,8
13,7
1,7
14,9
4,8
19,9
22,5
20,4
2,1
20,6
20,0
20,9
20,0
24,7
3,4
24,9
29,9
25,1
1,5
36,8
3,1
Ejemplo de referencia 21-5. Forma 5 de Sp-4
15
Se representa un patron de XRPD de la Forma 5 de Sp-4 en la Figura 8. Se presenta una lista de picos de la Forma 5 de Sp-4 en la Tabla 6.
Angulo
% de intensidad
2-Theta °
%
5,2
52,9
6,6
100,0
7,1
25,9
9,7
12,1
10,4
16,4
13,4
11,4
15,7
25,8
19,1
31,1
19,9
12,9
20,0
9,0
21,3
3,5
25,0
22,3
25,6
2,3
26,3
5,9
5
10
15
20
25
30
35
26,9
2,0
31,7
2,1
Ejemplo de referencia 21-6, Sp-4 (Amorfo)
Se representa un patron XRPD para Sp-4 amorfo en la Figura 9.
Ejemplo de referencia 22. Cristalografia de rayos X monocristalina de Sp-4 y sus solvatos Ejemplo de referencia 22-1. Cristalografia de rayos X monocristalina de Sp-4 (Forma 1)
La figura 10 muestra una estructura de cristal de rayos X para la Forma 1 de Sp-4. Aqui, la figura muestra una vista de las moleculas de la Forma 1 de la estructura de cristal que muestra el esquema de numeracion empleado. Los elipsoides de desplazamiento atomico anisotropicos para los atomos distintos de de hidrogeno se muestran en el nivel de probabilidad del 50 %. Los atomos de hidrogeno se muestran con un radio arbitrariamente pequeno.
La solucion de la estructura se obtuvo mediante metodos directos, refinamiento de minimos cuadrados de matriz completa en F 2 con peso w-1 = o2(Fo2) + (0,0592P)2 + (0,6950P), donde P = (Fo2+2Fc2)l3, parametros de desplazamiento anisotropico, correccion de absorcion empmca usando armonicos esfericos, implementados en un algoritmo de escala SCALE3 ABSPACK. wR2 final = {I[w(Fo2-Fc2)2]/X[w(Fo2)2]1/2} = 0,0871 para todos los datos, Ri convencional = 0,0329 en valores F de 7090 reflexiones con Fo > 4o( Fo), S = 1,016 para todos los datos y 870 parametros. A/o(max) final 0,001, A/o(promedio), 0,000. Mapa de diferencia final entre +0,534 y -0,36 e A-3.
Tabla 7. Parametros de cristal individual de la Forma 1
Formula molecular
C22H29F1N3O9P1
Peso molecular
529,45
Sistema de cristal
Monoclinico
Grupo espacial
P2i a 20,0898(5)A, a 90°,
b
6,10290(10)A, p 112,290(3)°,
c
23,0138(6)A, 90°
V
2610,79(10)A3
Z
4
Dc
1,347 g.cm-1
M
1,475 mm-1
Fuente, A
Cu Ka, 1,54178A
F(000)
1112
T
100(1)K
Cristal
Placa incolora, 0,12 x 0,09 x 0,03 mm
Datos truncados para
0,80 A
0max
74,48°
Plenitud
99,4 %
Reflexiones
14854
Reflexiones unicas
7513
Rint
0,0217
Ejemplo de referencia 22-2. Cristalografia de rayos X monocristalina de Sp-4 (Forma 2)
La figura 11 muestra una estructura de cristal de rayos X para la Forma 2 de Sp-4. Aqui, esta figura muestra una vista de las moleculas de la Forma 2 de la estructura de cristal que muestra el esquema de numeracion empleado. Los heteroatomos se resolvieron isotropicamente debido a datos muy debiles. Los atomos de hidrogeno no se muestran.
La solucion de la estructura se obtuvo mediante metodos directos, refinamiento de minimos cuadrados de matriz completa en F 2 con peso w1 = o2(Fo2) + (0,0975P)2 + (10,6969P), donde P = (Fo2+2Fc2)l3, parametros de desplazamiento anisotropico, correccion de absorcion empirica usando armonicos esfericos, implementados en un algoritmo de escala SCALE3 ABSPACK. wR2 final = {Z[w(Fo2-Fc2)]/X[w(Fo2)2]1/2} = 0,1883 para todos los datos, Ri convencional = 0,0741 en valores F de 2525 reflexiones con Fo > 4o(Fo), S = 1,05 para todos los datos y 158 parametros. A/o(max) final 0,000, A/o(promedio), 0,000. Mapa de diferencia final entre +1,388 y -0,967 e A-3.
Tabla 8. Parametros de cristal individual de la Forma 2
Formula molecular
C23H3lChFN3O9P
Peso molecular
614,38
Sistema de cristal
Monoclinico
Grupo espacial
P2i | a | 12,8315(3)A, | a | 90°,
5
10
15
20
25
30
35
40
b 6,14530(10)A, P 91,752(2)°,
c
17,6250(4)A, 0 0 CD
V
1389,14(5)A3
Z
2
Dc
1,469 g.cm-1
M
3,196 mm-1
Fuente, A
Cu-K, 1,54178A
F(000)
640
T
293(2)K
Datos truncados para
0,80 A
0max
62,23°
Plenitud
91,1 %
Reflexiones
3528
Reflexiones unicas
2562
Rint
0,0227
Ejemplo de referencia 22-3. Cristalografla de rayos X monocristalina de Sp-4 (Forma 2)
La figura 12 representa una estructura de cristal de rayos X (ORTEP - anisotropica) Sp-4 (Forma 2). Una estructura de cristal del solvato de cloruro de metileno de Sp-4 (Forma 2), C23H31N3PO9FG2, produce un grupo espacial monoclmico P2i (ausencias sistematicas 0k0: k = impar) con a = 12,8822(14) A, b = 6,1690(7) A, c = 17,733(2) A, p = 92,045(3)°, V = 1408,4(3)A, Z = 2 y dcaic. = 1,449 g/cm3. Los datos de intensidad de rayos X se recogieron en un detector de area Rigaku Mercury CCD empleando radiacion Mo-Ka monocromada por grafito (A = 0,71073 A) a una temperatura de 143 °K. La indexacion preliminar se realizo a partir de una serie de doce imagenes de rotacion de 0,5° con exposiciones de 30 segundos. Se recogieron un total de 648 imagenes de rotacion con un cristal a una distancia del detector de 35 mm, un angulo de balanceo 20 de -12°, anchuras de rotacion de 0,5° y exposiciones de 30 segundos: El barrido n.° 1 fue un barrido 0 de 315° a 525° a w = 10° y x = 20°; el barrido n.° 2 fue un barrido w de -20° a 5° a x = -90° y 0 = 315°; el barrido n.° 3 fue un barrido w de -20° a 4° a x = -90° y 0 = 135°; el barrido n.° 4 fue un barrido w de -20° a 5° a x = -90° y 0 = 225°; el barrido n.° 5 fue un barrido w de -20° a 20° a x = -90° y 0 = 45°. Las imagenes de rotacion se procesaron usando CrystalClear (CrystalClear: Rigaku Corporation, 1999), produciendo una lista de valores no promediados F2 y o(F2) que despues se pasaron al paquete de programas CrystalStructure (CrystalStructure: Paquete de analisis de estructura de cristal, Rigaku Corp. Rigaku/MSC (2002)) para un procesamiento adicional y una solucion de la estructura en un ordenador Dell Pentium III. Se midieron un total de 7707 reflexiones sobre los intervalos 5,48 < 20 < 50,04°, -14 < h < 15, 15, -7 < k < 6, -19 < 1 < 21 produciendo 4253 reflexiones Unicas (Rint = 0,0180). Los datos de intensidad se corrigieron para los efectos Lorentz y de polarizacion y para la absorcion usando REQAB (transmision minima y maxima 0,824, 1,000).
La estructura se resolvio por metodos directos (SIR97, SIR97: Altomare, A., M. Burla, M. Camalli, G. Cascarano, C. Giacovazzo, A. Guagliardi, A. Moliterni, G. Polidori & R. Spagna (1999). J. Appl. Cryst., 32, 115-119). El refinamiento fue por minimos cuadrados de matriz completa basado en F2 usando SHELXL-97 (SHELXL-97: Sheldrick, G.M. (2008) Acta Cryst., A64, 112-122). Se usaron todas las reflexiones durante el refinamiento. El esquema de peso
usado fue w_l/[a (F0)+0.0472P + 0.4960P] donde p = P = (F0 + 2Fc)/3. |_os atomos distintos de de hidrogeno se refinaron anisotropicamente y los atomos de hidrogeno se refinaron usando un modelo de "soporte". El refinamiento convergio en R1 = 0,0328 y wR2= 0,0817 para 4046 reflexiones para las que F > 4o(F) y R1 = 0,0348,
WR2 = 0,0838 y GOF = 1,056 para todas las 4253 reflexiones unicas no nulas y 358 variables (^4 - £ l|F0l ' |FJ| ^
X |F0|; wR2 - { E w (Fo - Fc f / £ w(F2 f }m; GOF = { £ w (F02 - F2 f / (n - p)}1/2; donde n = el nCimero de
reflexiones y p = el numero de parametros refinados). El A/o maximo en el ciclo final de minimos cuadrados fue 0,000 y los dos picos mas prominentes en la diferencia final de Fourier fueron +0,312 y -0,389 e/A3. El parametro de estructura absoluto de Flack refinado en -0,06(6) corrobora de esta manera la estereoquimica del compuesto del titulo.
La Tabla 1 enumera la informacion celular, los parametros de recogida de datos y los datos de refinamiento. Los parametros termicos isotropicos equivalentes y posicionales finales se dan en la Tabla 2. Los parametros termicos anisotropicos se encuentran en la Tabla 3. ("ORTEP-II: A Fortran Thermal Ellipsoid Plot Program for Crystal Structure Illustrations". C.K. Johnson (1976) ORNL-5138). Se muestra la representacion de la molecula con un 30 % de probabilidad de elipsoides termicos.
Tabla 9. Resumen de determinacion de la estructura del Compuesto Sp-4-CH2Ch Formula: C23H3iN3PO9FCl2
Peso de la formula: 614,38
Clase del cristal: monoclmico
Grupo espacial: P2i (#4)
Z 2
Constantes celulares:
a
12,8822(14)A
b
6,1690(7) A
c
17,733(2)A
p
92,045 (3)°
V
1408,4(3) A3 3
M
3,48 cm-1
tamano del cristal, mm
0,42 x 0,12 x 0,10
Dcalc
1,449 g/cm3
F (000)
640
Radiacion:
Mo-Ka (A = 0,71073A)
angulo 20
5,48 - 50,04°
hkl recogido:
-14h<h<15; -7<k<6; -19<1<21
N.° de reflexiones medidas:
7707
N.° de reflexiones unicas:
4253 (Rint=0,0180)
N.° de reflexiones observadas
4046(F>4o)
N.° de reflexiones usadas en el refinamiento
4253
N.° de parametros
358
indices R (F>4o)^
Ri = 0,0328 wR2 = 0,0817
indices R (todos los datos □
R1 = 0,0348 wR2 = 0,0838
GOF:
1,056
Picos de diferencia finales, e/A3
+0,312, -0,389
Ejemplo de referencia 22-4. Cristalografia de rayos X monocristalina de Sp-4 (Forma 3)
La figura 13 muestra una estructura de cristal de rayos X para la Forma 3 de Sp-4. Aqui, esta figura muestra una 5 vista de las moleculas de la Forma 3 de la estructura de cristal que muestra el esquema de numeracion empleado. Los elipsoides de desplazamiento atomico anisotropicos para los atomos distintos de de hidrogeno se muestran en el nivel de probabilidad del 50 %. Los atomos de hidrogeno se muestran con un radio arbitrariamente pequeno.
La solucion de la estructura se obtuvo mediante metodos directos, refinamiento de minimos cuadrados de matriz 10 completa en F2 con peso w1 = o2(Fo2) + (0,0512P)2 + (0,6810P), donde P = (Fo2+2Fc2)l3, parametros de
desplazamiento anisotropico, correccion de absorcion empirica usando armonicos esfericos, implementados en un algoritmo de escala SCALE3 ABSPACK. wR2 final = {Z[w(Fo2-Fc2)2]/X[w(Fo2)2]1/2}= 0,0796 para todos los datos, Ri convencional = 0,0294 en los valores F de 2486 reflexiones con Fo > 4o(Fo), S = 1,068 para todos los datos y 377 parametros. A/o(max) final 0,001, A/o(promedio), 0,000. Mapa de diferencia final entre +0,211 y -0,334 e A-3.
15
Tabla 10. Parametros de cristal individual de la Forma 3
Formula molecular
C23H30CEF1N3O9P1
Peso molecular
648,82
Sistema de cristal
Monoclmico
Grupo espacial
P2i a 12,9257(4)A, a 90°,
b
6,18080(10)A, p 96,399(2)°,
c
18,0134(4)A, 90°
V
1430,15(6)A3
Z
2
Dc
1,507 g.cm-1
M
3,977 mm-1
Fuente, A
Cu Ka, 1,54178A
F(000)
672
T
100(1)K
Cristal
Aguja incolora, 0,22 x 0,03 x 0,02 mm
Datos truncados para
0,80 A
0max
74,41°
Plenitud
69,1 %
Reflexiones
3062
Reflexiones unicas
2607
Rint
0,0198
Ejemplo de referencia 23. Estabilidad a temperaturas elevadas y humedad relativa
20 Una muestra de Rp-4 se almaceno en una camara de humedad a 40 °C y humedad relativa al 75 % durante una semana, y la muestra se analizo de nuevo por XRPD. El patron de polvo obtenido para Rp-4 no mostro ningun
5
10
15
20
25
30
35
40
45
50
55
cambio sustancial durante el transcurso del experimento, lo que significa que no se observo ningun en la forma solida. Esto debe contrastarse con una muestra de 4, que se convirtio en Kquido en aproximadamente 16 horas tras el almacenamiento a 40 °C y una humedad relativa al 75 %. De hecho, se ilustra una ilustracion de la naturaleza delicuescente de 4 mediante lo siguiente. Una muestra de 4 se paso a traves de un tamiz de 250 jm y despues las muestras se almacenaron a 40 °C/HR al 75 % y 25 °C/humedad relativa al 53 % y se hicieron observaciones visuales a intervalos reguladores. Los resultados se dan en la Tabla 4.
Tabla 11. Estabilidad de 4 a humedad relativa elevada.
Condiciones
t = 1,5 h t = 4,5 h t = 6,5 h t = 8,5 h t = 73 h
40 °C/HR al 75 %
Delicuescencia - - - -
25 °C/HR al
Sin Solido Delicuescencia Delicuescencia casi Delicuescencia
53 %
delicuescencia pegajoso parcial completa
Tras el almacenamiento a 40 °C y humedad relativa al 75 %, una muestra de Sp-4 se hizo delicuescente en 16 horas. Por ejemplo, una muestra de Sp-4 se molio con un mortero, y despues se paso sucesivamente a traves de tamices de 500 y 250 |jm para producir la muestra en forma de un polvo fino. Las muestras de este material se almacenaron a 40 °C y una humedad relativa al 75 % y 25 °C y HR al 53 % y se hicieron observaciones visuales a intervalos regulares. Los resultados se dan en la Tabla 5.
Tabla 12. Estabilidad de Sp-4 a humedad relativa elevada.
Condiciones
t = 1,5 h t = 4,5 h t=104h
40 °C/HR al 75 % 25 °C/HR al 53 %
Sin delicuescencia Sin delicuescencia Delicuescencia Sin delicuescencia Sin delicuescencia
El analisis XRPD de la muestra despues de un almacenamiento a 25 °C y una HR al 53 % durante 104 horas no mostro ningun cambio significativo en los difractogramas producidos, lo que indica que no se produjo ningun cambio de forma.
Ejemplo de referencia 24. Transformada de Fourier - Espectrometria de infrarrojos (FT-IR)
Los datos se recogieron en un Perkin-Elmer Spectrum One equipado con un accesorio de muestreo de reflectancia total atenuada (ATR) universal. Los datos se recogieron y se analizaron usando el software Spectrum v 5.0.1.
El espectro IR obtenido para 4, Rp-4 y Sp-4 se muestra en las figuras 5-7, respectivamente. Los picos seleccionados, en numeros de onda (cm-1) se mencionan a continuacion:
4: ~1680, ~1454, ~1376, ~1205, ~1092, ~1023 (figura 14);
Rp-4: ~1742, ~1713, ~1679, ~1460, ~1377, ~1259, ~1157, ~1079 (figura 15); y Sp-4 (Forma 1): ~1743, ~1713, ~1688, ~1454, ~1378, ~1208, ~1082 (figura 16).
Ejemplo de referencia 25. Analisis termogravimetrico (TGA) por Calorimetna diferencial de barrido (DSC)
Los datos DSC se recogieron en un TA Instruments Q2000 equipado con un auto-muestreador de 50 posiciones. La calibracion para la capacidad termica se realizo usando zafiro y la calibration para la energia y temperatura se realizo usando indio certificado.
La temperatura modulada DSC se realizo en normalmente 0,8-1,2 mg de cada muestra, en un plato de aluminio agujereado, usando una velocidad de calentamiento subyacente de 2 °C.min-1 y parametros de modulation de temperatura de ± 0,2 °C.min-1 y 40 segundos. Se mantuvo sobre la muestra una purga de nitrogeno seco a 50 ml.min-1.
El software de control del instrumental fue Advantage para Q Series v 2.8.0.392 y Thermal Advantage v 4.8.3 y los datos se analizaron usando Universal Analysis v 4.3A.
Los datos DSC se recogieron en un Mettler DSC 823e equipado con un automuestreador de 34 posiciones. El instrumento se calibro para la energia y la temperatura usando indio certificado. Normalmente, se calentaron 0,8
1,2 mg de cada muestra, en un plato de aluminio agujereado, a 10 °C.min-1 de 25 °C a 250 °C. Se mantuvo sobre la muestra una purga de nitrogeno a 50 ml.min-1. El software de control de los instrumentos y el analisis de datos fue STARe v 9.20.
Los datos TGA se recogieron en un Mettler TGA/SDTA 851e equipado con un automuestreador de 34 posiciones. El instrumento se calibro para la temperatura usando indio certificado. Normalmente se cargaron 8-12 mg de cada muestra sobre un crisol de aluminio pesado previamente y se calento a 10 °C.min-1 de la temperatura ambiente a 350 °C. Se mantuvo sobre la muestra una purga de nitrogeno a 50 ml.min-1. El software de control de los
5
10
15
20
25
30
35
40
45
50
55
instrumentos y el analisis de datos fue STARe v 9.20.
El analisis por DSC de 4 mostro una endotermia amplia individual con una aparicion de 58,7 °C (AH 14 J.g-1) confirmada que se debe a la relajacion molecular durante la transicion vttrea por un analisis por DSC modulado adicionalmente (figura 17). El analisis por TGA de 4 no mostro ninguna perdida de peso antes de la descomposicion por encima de 240 °C, lo que conforma que el material estaba sin solvatar. Dado que el analisis por XrPd de 4 confirmo que el material era amorfo, el analisis por DSC modulada se llevo a acabo en un intento de calcular la temperatura de la transicion vitrea, que se descubrio que era 57 °C.
El analisis por DSC mostro una unica endotermia marcada con una aparicion de 136,2 °C (AH 76 J.g-1) que se confirmo que era una fusion por microscopia en fase caliente. Vease la figura 18. El analisis por TGA de Rp-4 no mostro ninguna perdida de peso antes de la descomposicion por encima de 240 °C, lo que confirmo que el material estaba sin solvatar.
El analisis por DSC de Sp-4 mostro una unica endotermia amplia con una aparicion de 93,9 °C (AH 43 J.g-1) que se confirmo a una fusion por microscopia en fase caliente. Vease la figura 19. El analisis por TGA de Sp-4 no mostro ninguna perdida de peso antes de la descomposicion por encima de 240 °C, lo que confirmo que el material estaba sin solvatar.
Ejemplo de referencia 26. Absorcion de vapor gravimetrica (GVS)
SMS DVS intr'mseco
Las isotermias de absorcion se obtuvieron usando un analizador de absorcion de humedad SMS DVS intrinseco, controlado por el software SMS Analysis Suite. La temperatura de muestra se mantuvo a 25 °C por los controles del instrumento. La humedad se controlo mezclando corrientes de nitrogeno seco y humedo, con un caudal total de 200 ml.min-1. La humedad relativa se midio por una sonda Rotronic calibrada (intervalo dinamico de HR al 1,0100 %), situada cerca de la muestra. El cambio de peso, (relajacion de la masa) de la muestra en funcion del % de HR se control constantemente por la microbalanza (precision ±0,005 mg).
Normalmente se pusieron 5-20 mg de muestra en una cesta de acero inoxidable de malla tarada en condiciones ambientales. La muestra se cargo y se descargo a una HR del 40 % y 25 °C (condiciones ambientales tipicas). Se realizo una isotermia de absorcion de la humedad como se describe a continuacion (2 barridos dando 1 ciclo completo). La isotermia estandar se realizo a 25 °C a intervalos de HR al 10 % sobre un intervalo de HR al 0,5-90 %.
Tabla 13. Parametros del metodo para experimentos SMS DVS intrinsecos
Parametros
Valores
Absorcion - Barrido 1
40 - 90
Desorcion/Absorcion - Barrido 2
90 - 0, 0 - 40
Intervalos (% de HR)
10
Numero de barridos
2
Caudal (ml.min-1)
200
Temperatura (°C)
25
Estabilidad (°C.mn-1)
0,2
Tiempo de absorcion (horas)
6 horas de tiempo de espera
La muestra se recupero despues de la finalizacion de la isotermia y se analizo de nuevo por XRPD.
El analisis por GVS mostro que Rp-4 no era higroscopico que muestra una captation reversible de aproximadamente 0,2 % en peso de agua del 0 al 90 % de humedad relativa. El reanalisis de la muestra por XRPD despues del experimento por GVS no mostro ningun cambio en la forma.
Una muestra de Sp-4 se molio con un mortero, y despues se paso sucesivamente a traves de tamices de 500 y 250 |jm para producir la muestra en forma de un polvo fino que despues se analizo usando un metodo de un unico ciclo modificado. La muestra se tomo de HR al 40 % (aproximadamente ambiente) al HR al 60 %, en lugar del 90 % para el metodo estandar, y despues se ciclo al 0 % y de nuevo al 40 % de HR. Este analisis mostro que Sp-4 no era higroscopico hasta una HR al 60 %, con captacion reversible de ~0,2 % en peso de agua del 0 al 60 % de HR.
Ejemplo de referencia 27. Solubilidad acuosa termodinamica
La solubilidad acuosa se determino suspendiendo una cantidad suficiente de compuesto en agua para dar una concentration final maxima de >10 mg.ml-1 de la forma libre de partida del compuesto. La suspension se equilibro a 25 °C durante 24 horas y despues se midio el pH. Despues, la suspension se filtro a traves de un filtro C de fibra de vidrio en una placa de 96 pocillos. Despues, el filtrado se diluyo en un factor de 101. La cuantificacion fue por HPLC con referencia a una solution estandar de aproximadamente 0,1 mg.ml-1 en DMSO. Se inyectaron diferentes
volumenes de las soluciones de muestra diluidas y no diluidas estandar. La solubilidad se calculo usando las areas pico determinadas por la integracion del pico observado al mismo tiempo de retencion que el pico principal en la inyeccion estandar.
5 _____Tabla 14. Parametros del metodo por HPLC para mediciones de solubilidad_____
Tipo de metodo:
Fase inversa con gradiente de elucion
Columna:
Phenomenex Luna, C18 (2) 5 jm 50 x 4,6 mm
Temperatura de columna (°C):
25
Inyecciones estandar (jl):
1,2, 3, 5, 7, 10
Inyecciones de ensayo (jl):
1,2, 3, 10, 20, 50
Deteccion:
260,80
Longitud de onda, ancho de banda (nm) :
Caudal (ml.min-1):
2
Fase A:
TFA al 0,1 % en agua
Fase B:
TFA al 0,085 % en acetonitrilo
Planificacion:
Tiempo (min) % de Fase A % de Fase B
0,0
95 5
1,0
80 20
2,3
5 95
3,3
5 95
3,5
95 5
4,4
95 5
El analisis se realizo en las condiciones que se han indicado anteriormente en un sistema de la serie Agilent HP 1100 equipado con un detector de matriz de diodos y usando el software ChemStation vB.02.01-SR1.
10 _______Tabla 15. Resultado de solubilidad acuosa para Rp-4, 4, y Sp-4._______
Muestra ID
pH de mezcla no filtrada Solubilidad/mg. ml-1 Comentarios
Rp-4
7,12 1,58 Suspension
4
7,03 6,11 Solido residual
Sp-4
6,88 5,65 Solido residual
Ejemplo de referencia 28. Determinacion de la pureza quimica por HPLC
Pueden usarse diversas condiciones de HPLC para determinar la pureza quimica de los compuestos desvelados en 15 el presente documento. Un de dichos ejemplos se ha desvelado anteriormente en relacion con los estudios de solubilidad acuosa termodinamica. Otro ejemplo se desvela a continuacion.
Condiciones de HPLC:
20
LC:
Columna: Caudal: Volumen inyeccion: Fase movil:
Gradiente:
Modulo de separaciones Waters Alliance 2695, detector Waters 2996 PDA y software Waters Empower 2 (Version 6.00)
Phenomenex Luna C18(2); 4,6 x 50 mm; 3 |jm
1,2 ml/min de 10 |^l
Disolvente A: 95 % Agua con Metanol al 5 % y acetato de amonio 10 mM; pH Disolvente B: MeOH con acetato de amonio 10 mM mantenimiento en 0 % de B 3 min
0-47 % de B 3-4 min
mantenimiento en 47 % de B 4-10 min
47 %-74 % de B 10-11 min
mantenimiento en 74 % de B 11-13,5 min
regreso al 0 % de B 13,5-13,6 min
mantenimiento en 0 % de B 13,6-15,5 min
5,3
En estas condiciones, la pureza de 4, Rp-4, y Sp-4 se determino que era del -99,6, ~99 %, y ~99,5 %, respectivamente. Se aprecia que pueden conseguirse mayores purezas optimizando los metodos desvelados anteriormente.
25 La inspeccion de los difractogramas de XRPD muestra que los dos diaestereoisomeros individuales cristalinos dieron patrones XRPD claramente diferentes. Ademas, hubo una clara diferencia en el punto de fusion de los dos diaestereoisomeros cristalinos, teniendo Rp-4 una aparicion considerablemente superior que Sp-4 (136 °C frente a 94 °C).
5
10
15
20
25
30
Ejemplo de referencia 29. Metodos de separacion adicionales
La siguiente separacion por SFC (condiciones enumeradas a continuacion) produjo la separacion adecuada de una mezcla de los diastereomeros, Rp-4 y Sp-4.______________________________________________
Metodo preparativo:
Metodo analitico:
Chiralpak AS-H (2 x 25 cm) SN# 07-8656
Chiralpak AS-H (25 x 0,46 cm)
metanol al 20 %/CO2 (100 bar)
metanol al 20 %/CO2 (100 bar)
50 ml/min, 220 nm.
3 ml/min, 220 nm.
Conc.: 260 mg/30 ml de metanol, vol. de iny.: 1,5 ml
La siguiente separacion por SFC (condiciones enumeradas a continuacion) produjo una separacion adecuada de una mezcla de los diastereomeros, Rp-4 y Sp-4. ______________________________
Metodo preparativo:
Metodo analitico:
Chiralpak IA (2 x 15 cm) 802091
Chiralpak IA (15 x 0,46 cm)
isopropanol al 30 % (DEA al 0,1 %)/CO2, 100 bar
metanol al 40 % (DEA)/CO2,100 bar
60 ml/min, 220 nm.
3 ml/min, 220 nm.
vol. de iny.: 2 ml, 20 mg/ml de metanol
Tabla 16. Resumen de resultados de la caracterizacion por lotes de Rp-4, 4 y Sp-4.
Analisis
Rp-4 4 Sp-4
RMN de proton
Diastereoisomero individual Mezcla 1:1 de diaestereoisomeros Diastereoisomero individual
XRPD
Cristalino - diferente de Sp-4 Amorfo Cristalino - diferente de Rp-4
DSC
Endotermia; fusion - 136 °C Endotermia; 59 °C Endotermia; fusion - 94 °C
TGA
Sin perdida de peso, Sin perdida de peso, Sin perdida de peso,
descomposicion >240 °C
descomposicion >240 °C
descomposicion >240 °C
IR
Vease anteriormente Vease anteriormente Vease anteriormente
Solubilidad ac.
1,58 6,11 5,65
(mg. ml-1)
Pureza HPLC
96,9 % 99,6 % 99,5 %
40 °C/HR al 75 %
Sin cambio de forma Delicuescencia en 1,5 h Delicuescencia en 4,5 h
25 °C/HR al 53 %
Delicuescencia Sin cambio de forma
GVS
No higroscopico hasta HR al No higroscopico hasta HR al
90 %
60 %
Ejemplo de referencia 30. Cristalografia de rayos X de 8 (isomero Sp)
El compuesto 8 (isomero Sp), C18H21N2PO7, cristaliza en el grupo espacial monoclinico P2i (ausencias sistematicas 0k0: k = impar) con a = 5,3312(4)A, b = 15,3388(8)A, c = 23,7807(13)A, p = 92,891(3)°, V = 1942,2(2)A3 Z = 4, y dcaic=1,397 g/cm3. Los datos de intensidad de rayos X se recogieron en un detector de area Bruker APEXII CCD empleando radiacion Mo-Ka monocromada por grafito (A = 0,71073 A) a una temperatura de 100(1)K. Las figuras 20A y 20B muestran moleculas numeradas 1 y 2, respectivamente, de la unidad asimetrica.
La indexacion preliminar se realizo a partir de una serie de treinta y seis cuadros de rotacion a 0,5° con exposiciones de 30 segundos. Se recogieron un total de 3608 cuadros con un cristal a una distancia del detector de 70,00 mm, anchuras de rotacion de 0,5° y exposiciones de 20 segundos:_______________________
tipo de barrido
20 to $ X cuadros
$
-35,50 279,40 27,32 48,96 725
$
24,50 22,31 35,56 69,08 692
to
-13,00 321,68 247,79 69,08 95
$
34,50 204,08 28,21 -92,80 293
$
-30,50 310,60 214,10 54,21 361
$
32,00 304,67 24,47 50,72 722
______$______
-35,50 122,14 316,59 -78,84 720
Los cuadros de rotacion se integraron usando SAINT (Bruker (2009) SAINT. Bruker AXS Inc., Madison, Wisconsin, Estados Unidos) produciendo una lista de valores no promediados F2 y o(F2) que despues se pasaron al paquete de programas SHELXTL (Bruker (2009) SHELXTL. Bruker AXS Inc., Madison, Wisconsin, Estados Unidos) para un procesamiento adicional y una solucion de la estructura en un ordenador Dell Pentium 4. Se midieron un total de 6909 reflexiones sobre los intervalos 1,58 < 0 < 25,09°, -6 < h < 6, -18 < k < 18, -28 < 1 < 28 produciendo 6909 reflexiones unicas (Rint = 0,0581). Los datos de intensidad se corrigieron para los efectos Lorentz y de polarizacion y para la absorcion usando SADABS (Sheldrick, G.M. (2007) SAdAbS. University of Gottingen, Alemania) (transmision minima y maxima 0,6093, 0,7452).
La estructura se resolvio por metodos directos (SHELXS-97 (Sheldrick, G.M. (2008) Acta Cryst. A64,112-122,)). El refinamiento fue por mmimos cuadrados de matriz completa basado en F2 usando SHELXL-97 (Sheldrick, G.M. (2008) Acta Cryst. A64, 112-122,). Se usaron todas las reflexiones durante el refinamiento. El esquema de peso 5 usado fue w=1/[c2(Fo2)+ (0,0000P)2 + 14,0738P] donde P = (Fo2 + 2Fc2)/3. Los atomos diferentes de hidrogeno se
refinaron anisotropicamente y los atomos de hidrogeno se refinaron usando un modelo de soporte. El refinamiento convergio en R1 = 0,0847 y wR2 = 0,1899 para 6173 reflexiones observadas para las que F > 4u(F) y R1=0,0963 y wR2 = 0,1963 y GOF = 1,119 para todas las 6909 reflexiones no nulas unicas y 512 variables (R1 =X//Fo|-|Fc///£ |Fo|; wR2 =[^w(Fo2- Fc2)2/£w(Fo2)2]1/; GOF = [£w(Fo2- Fc2)2/(n - p)]1/; donde n = el numero de reflexiones y p = el 10 numero de parametros refinados). El A/u maximo en el ciclo final de mmimos cuadrados fue 0,000 y los dos picos mas prominentes en la diferencia final de Fourier fueron +0,402 y -0,559 e/A3.
Tabla 17. Resumen de la determinacion de estructura del compuesto 8 (isomero Sp )
Formula empirica
C18H21N2PO7
Peso de la formula
408,34
Temperatura
100(1) K
Longitud de onda
0,71073 A
Sistema de cristal
monoclmico
Grupo espacial
P2i
Constantes celulares
a
5,3312(4) A
b
15,3388(8) A
c
23,7807(13) A
p
92,891(3)°
Volumen
1942,2(2) A3
Z
4
Densidad (calculada)
1,397 Mg/m3
Coeficiente de absorcion
0,185 mm-1
F(000)
856
Tamano del cristal
0,40 x 0,10 x 0,08 mm3
Rango Theta para recogida de datos
1,58 a 25,09°
Rangos de indice
-6 <h <6, -18 <k < 18, -28 < 1 < 28
Reflexiones recogidas
6909
Reflexiones independientes
6909 [R(int) = 0,0581]
Plenitud hasta theta = 25,09°
99,6 %
Correction de absorcion
Semi-empirica de equivalentes
Transmision max. y min.
0,7452 y 0,6093
Metodo de refinamiento
Mmimos cuadrados de matriz completa en F2
Datos/restricciones/parametros
6909/1/512
Bondad de ajuste en F2
1,119
Indices R finales [I>2sigma(I)]
R1 = 0,0847, wR2 = 0,1899
Indices R (todos los datos)
R1 = 0,0963, wR2 = 0,1963
Parametro de estructura absoluta
0,1(2)
Pico y orificio de dif. mayor
0,402 y -0,559 e.A-3
15
Ejemplo de referencia 31. Actividad biologica
Se sembraron celulas que contenian replicon a 3.000 celulas/pocillo (50 |jl) en placas blancas/opacas de 96 pocillos, o a 1.500 celulas/pocillo (25 jl) en placas blancas/opacas de 384 pocillos. Se anadieron 50 jl de compuesto 2X en 20 la placa de 96 pocillos o se anadieron 25 jl de compuesto 2X en la placa de 384 pocillos. Las placas se incubaron a 37 °C en una atmosfera de CO2 humidificada al 5 % durante 4 dias. Tras la incubacion, se anadio el reactivo Bright- Glo (50 jl para la placa de 96 pocillos, o 25 jl para la placa de 384 pocillos) para medir el indicador de luciferasa de luciernaga para la replicacion del VHC. El porcentaje de inhibicion se calculo frente al control sin farmaco.
Compuesto
Actividad del replicon de VHC (jM)
4
0,58
Rp-4
2,87
Sp-4
0,13
Se ha demostrado que Rp-4, o Sp-4 tienen una amplia cobertura de genotipo. Por ejemplo, se ha demostrado que ambos son activos frente a los genotipos 1-4 del virus de la hepatitis C.

Claims (22)

  1. 5
    10
    15
    20
    25
    30
    35
    REIVINDICACIONES
    1. Un proceso para preparar un compuesto representado por la formula 4, o un diastereomero a base de fosforo del mismo:
    imagen1
    en la que P* representa un atomo de fosforo quiral,
    y en la que dicho diastereomero a base de fosforo se representa por las formulas Rp-4 o Sp-4:
    imagen2
    que comprenden:
    a) hacer reaccionar un alanato de isopropilo, A, un di-X'-fenilfosfato, B, 2-desoxi-2'-fluoro-2-C-metiluridina, 3, y una base para obtener una primera mezcla que comprende 4, o el diastereomero a base de fosforo del mismo;
    imagen3
    en donde X es una base conjugada de un acido, n es 0 o 1, y X' es un halogeno
    b) hacer reaccionar la primera mezcla con un compuesto protector para obtener una segunda mezcla que comprende 4, o el diastereomero a base de fosforo del mismo, en donde el compuesto protector se selecciona de entre un compuesto protector t-butildimetilsililo y un compuesto protector dimetoxitrifenilmetilo; y
    c) someter opcionalmente la segunda mezcla a cristalizacion, cromatografia o extraccion con el fin de obtener 4, o el diastereomero a base de fosforo del mismo.
  2. 2. El proceso de acuerdo con la reivindicacion 1, en el que X es cloruro y n es 1.
  3. 3. El proceso de acuerdo con la reivindicacion 2, en el que A es anhidro.
  4. 4. El proceso de acuerdo con la reivindicacion 1, en el que la base es N-metilimidazol.
  5. 5. El proceso de acuerdo con la reivindicacion 1, en el que la relacion molar de A con respecto a B con respecto a 3 es 1,6 con respecto a 1,3 con respecto a 1.
  6. 6. El proceso de acuerdo con la reivindicacion 1, en el que el compuesto protector es cloruro de t-butildimetilsililo.
  7. 7. El proceso de acuerdo con la reivindicacion 1, en el que el compuesto es Rp-4:
    5
    10
    15
    20
    25
    30
    35
    40
    45
    50
    imagen4
  8. 8. El proceso de acuerdo con la reivindicacion 7, en el que X es cloruro y n es 1.
  9. 9. El proceso de acuerdo con la reivindicacion 7, en el que A es anhidro.
  10. 10. El proceso de acuerdo con la reivindicacion 7, en el que la base es N-metilimidazol.
  11. 11. El proceso de acuerdo con la reivindicacion 7, en el que la relacion molar de A con respecto a B con respecto a 3
    es 1,6 con respecto a 1,3 con respecto a 1.
  12. 12. El proceso de acuerdo con la reivindicacion 7, en el que el compuesto protector es cloruro de t-butildimetilsililo.
  13. 13. El proceso de acuerdo con la reivindicacion 7, en el que el Rp-4 es cristalino, que comprende adicionalmente:
    d) disolver o suspender la segunda mezcla o el Rp-4 purificado en un disolvente;
    e) seguido opcionalmente de siembra con Rp-4 cristalino; y
    f) anadir suficiente anti-disolvente para obtener Rp-4 cristalino.
  14. 14. El proceso de acuerdo con la reivindicacion 1, en el que el compuesto es Sp-4:
    imagen5
  15. 15. El proceso de acuerdo con la reivindicacion 14, en el que X es cloruro y n es 1.
  16. 16. El proceso de acuerdo con la reivindicacion 14, en el que A es anhidro.
  17. 17. El proceso de acuerdo con la reivindicacion 14, en el que la base es N-metilimidazol.
  18. 18. El proceso de acuerdo con la reivindicacion 14, en el que la relacion molar de A con respecto a B con respecto a
    3 es 1,6 con respecto a 1,3 con respecto a 1.
  19. 19. El proceso de acuerdo con la reivindicacion 14, en el que el compuesto protector es cloruro de t-butildimetilsililo.
  20. 20. El proceso de acuerdo con la reivindicacion 14, en el que el Sp-4 es cristalino, que comprende adicionalmente:
    d) disolver o suspender la segunda mezcla o el Sp-4 purificado en un disolvente seguido de siembra con Sp-4 cristalino a temperatura ambiente;
    e) recoger un primer solido, la mayor parte del cual comprende Sp-4;
    f) disolver o suspender el primer solido en un disolvente a su temperatura de reflujo; y
    g) enfriar o anadir un anti-disolvente para obtener un segundo solido.
  21. 21. El proceso de acuerdo con la reivindicacion 14, en el que el Sp-4 es cristalino, que comprende adicionalmente:
    d) disolver o suspender la segunda mezcla o el Sp-4 purificado en un primer disolvente seguido de la adicion de un anti-disolvente para obtener una primera composicion en la que el disolvente/anti-disolvente residual se elimina por decantacion para obtener un residuo;
    e) tratar el residuo con una solucion que contiene el primer disolvente y anti-disolvente para producir una segunda composicion por lo que tras reducir la presion produce un primer solido;
    f) disolver o suspender el primer solido usando un segundo disolvente para obtener una tercera composicion;
    g) anadir cristales de siembra de Sp-4 a la tercera composicion;
    h) recoger un segundo solido;
    i) disolvente o suspender el segundo solido en un tercer disolvente, opcionalmente calentado a la temperatura de reflujo del tercer disolvente para obtener una cuarta composicion, y, si es necesario,
    j) enfriar la cuarta composicion para obtener un tercer solido que comprende Sp-4 que se recoge por filtracion.
    5
  22. 22. El proceso de acuerdo con la reivindicacion 14, en el que el Sp-4 es cristalino, que comprende adicionalmente:
    d) anadir gel de silice a la segunda mezcla o a la tercera mezcla seguido de evaporacion del disolvente para proporcionar una suspension seca;
    10 e) agitar la suspension seca en una primera combinacion de disolvente/anti-disolvente para obtener una primera suspension humeda;
    f) decantar la primera combinacion de disolvente/anti-disolvente de la primera suspension humeda para obtener una segunda suspension humeda y una primera composicion;
    g) anadir a la segunda suspension humeda una segunda combinacion de disolvente/anti-disolvente seguido de 15 agitacion;
    h) decantar la segunda combinacion de disolvente/anti-disolvente de la segunda suspension humeda para obtener una tercera suspension humeda y una segunda composicion
    i) repetir opcionalmente las etapas g)-h) en la tercera suspension humeda o las suspensiones humedas adicionales;
    20 j) evaporar el disolvente de la segunda composicion, y opcionalmente cualquier composicion adicional obtenida de la etapa opcional i) para obtener un primer solido;
    k) disolver o suspender el primer solido en una solucion que contiene un tercer disolvente y opcionalmente un cuarto disolvente para obtener una tercera composicion;
    l) anadir opcionalmente cristales de siembra de Sp-4 a la tercera composicion;
    25 m) obtener de la tercera composicion un segundo solido que comprende SP-4; y
    n) recristalizar opcionalmente el segundo solido usando un tercer disolvente para obtener un tercer solido que comprende Sp-4.
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Families Citing this family (188)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
MY164523A (en) 2000-05-23 2017-12-29 Univ Degli Studi Cagliari Methods and compositions for treating hepatitis c virus
DK1576138T3 (en) 2002-11-15 2017-05-01 Idenix Pharmaceuticals Llc 2'-METHYL NUCLEOSIDES IN COMBINATION WITH INTERFERON AND FLAVIVIRIDAE MUTATION
PT3521297T (pt) 2003-05-30 2022-03-18 Gilead Pharmasset Llc Análogos de nucleosídeo fluorados modificados
US7964580B2 (en) 2007-03-30 2011-06-21 Pharmasset, Inc. Nucleoside phosphoramidate prodrugs
AP3237A (en) * 2008-04-23 2015-04-30 Gilead Sciences Inc 1'-Substituted carba-nucleoside analogs for antiviral treatment
US8173621B2 (en) 2008-06-11 2012-05-08 Gilead Pharmasset Llc Nucleoside cyclicphosphates
NZ593649A (en) 2008-12-23 2013-11-29 Gilead Pharmasset Llc Nucleoside analogs
AU2009329872B2 (en) 2008-12-23 2016-07-07 Gilead Pharmasset Llc Synthesis of purine nucleosides
EP2376088B1 (en) 2008-12-23 2017-02-22 Gilead Pharmasset LLC 6-O-Substituted-2-amino-purine nucleoside phosphoramidates
TWI583692B (zh) 2009-05-20 2017-05-21 基利法瑪席特有限責任公司 核苷磷醯胺
US8618076B2 (en) 2009-05-20 2013-12-31 Gilead Pharmasset Llc Nucleoside phosphoramidates
AU2010295392B2 (en) 2009-09-21 2015-10-22 Gilead Sciences, Inc. Processes and intermediates for the preparation of 1'-substituted carba-nucleoside analogs
US7973013B2 (en) * 2009-09-21 2011-07-05 Gilead Sciences, Inc. 2'-fluoro substituted carba-nucleoside analogs for antiviral treatment
US8455451B2 (en) 2009-09-21 2013-06-04 Gilead Sciences, Inc. 2'-fluoro substituted carba-nucleoside analogs for antiviral treatment
UY33310A (es) * 2010-03-31 2011-10-31 Pharmasset Inc Sintesis estereoselectiva de activos que contienen fosforo
JP2013527145A (ja) * 2010-03-31 2013-06-27 ギリード・ファーマセット・エルエルシー リン含有活性化剤の立体選択的合成
PL3290428T3 (pl) 2010-03-31 2022-02-07 Gilead Pharmasset Llc Tabletka zawierająca krystaliczny (S)-2-(((S)-(((2R,3R,4R,5R)-5-(2,4-diokso-3,4-dihydropirymidyn-1(2H)-ylo)-4-fluoro-3-hydroksy-4-metylotetrahydrofuran-2-ylo)metoksy)(fenoksy)fosforylo)amino)propanian izopropylu
MX2013000656A (es) 2010-07-19 2013-04-03 Gilead Sciences Inc Metodos para la preparacion de profarmacos de fosforamidato diastereomericamente puros.
ME01924B (me) 2010-07-22 2015-05-20 Gilead Sciences Inc Metode i jedinjenja za lečenje infekcija izazvanih Paramyxoviridae virusom
WO2012048013A2 (en) * 2010-10-06 2012-04-12 Inhibitex, Inc. Phosphorodiamidate derivatives of guanosine nucleoside compounds for treatment of viral injections
ES2716158T3 (es) 2010-11-30 2019-06-10 Gilead Pharmasset Llc 2'-spiro-nucleótidos para el tratamiento de hepatitis C
SI3447061T1 (sl) 2011-03-01 2022-02-28 NuCana plc Farmacevtska formulacija, ki obsega fosforamidni derivat 5-fluoro-2'-deoksiuridina za uporabo pri zdravljenju raka
BR112013026345A2 (pt) 2011-04-13 2019-04-24 Merck Sharp & Dohe Corp. composto, composição farmacêutica, uso de um composto, e, método para tratar um paciente infectado com hcv
WO2012142093A2 (en) 2011-04-13 2012-10-18 Merck Sharp & Dohme Corp. 2'-cyano substituted nucleoside derivatives and methods of use thereof for the treatment of viral diseases
WO2012142075A1 (en) 2011-04-13 2012-10-18 Merck Sharp & Dohme Corp. 2'-azido substituted nucleoside derivatives and methods of use thereof for the treatment of viral diseases
EP2731433A4 (en) 2011-07-13 2014-12-31 Merck Sharp & Dohme 5'-SUBSTITUTED NUCLEOSIDE ANALOGUES AND METHODS OF USE FOR THE TREATMENT OF VIRAL DISEASES
EP2731434A4 (en) 2011-07-13 2014-12-31 Merck Sharp & Dohme 5'-SUBSTITUTED NUCLEOSIDE DERIVATIVES AND METHOD FOR THEIR USE FOR THE TREATMENT OF VIRUS DISEASES
WO2013039920A1 (en) 2011-09-12 2013-03-21 Idenix Pharmaceuticals, Inc. Substituted carbonyloxymethylphosphoramidate compounds and pharmaceutical compositions for the treatment of viral infections
MX354958B (es) * 2011-09-16 2018-03-27 Gilead Pharmasset Llc Metodos para el tratamiento de vhc.
EP2768838A1 (en) 2011-10-14 2014-08-27 IDENIX Pharmaceuticals, Inc. Substituted 3',5'-cyclic phosphates of purine nucleotide compounds and pharmaceutical compositions for the treatment of viral infections
SE1450019A1 (sv) 2011-10-21 2014-01-10 Abbvie Inc Förfaranden för att behandla HCV innefattande minst två direktverkande antivirala agenser, ribavirin men inte interferon
BR112014005617A2 (pt) * 2011-10-21 2017-06-13 Abbvie Inc tratamento de combinação (por exemplo, com abt-072 ou abt -333) de daas para uso no tratamento de hcv
US8492386B2 (en) 2011-10-21 2013-07-23 Abbvie Inc. Methods for treating HCV
US8466159B2 (en) 2011-10-21 2013-06-18 Abbvie Inc. Methods for treating HCV
EP2776024A1 (en) 2011-10-31 2014-09-17 Gilead Pharmasset LLC Methods and compositions for treating hepatitis c virus
DK2635588T3 (en) 2011-11-16 2015-09-07 Gilead Pharmasset Llc Dehydrated imidazolylimidazoler as anti-viral compounds
JP5899327B2 (ja) * 2011-11-29 2016-04-06 ギリアド ファーマセット エルエルシー Ｃ型肝炎ウイルスを処置するための組成物および方法
US8889159B2 (en) 2011-11-29 2014-11-18 Gilead Pharmasset Llc Compositions and methods for treating hepatitis C virus
WO2013082476A1 (en) 2011-11-30 2013-06-06 Emory University Antiviral jak inhibitors useful in treating or preventing retroviral and other viral infections
US20130309196A1 (en) 2012-05-16 2013-11-21 Gilead Sciences, Inc. Antiviral compounds
US9296778B2 (en) 2012-05-22 2016-03-29 Idenix Pharmaceuticals, Inc. 3′,5′-cyclic phosphate prodrugs for HCV infection
WO2013177188A1 (en) 2012-05-22 2013-11-28 Idenix Pharmaceuticals, Inc. 3',5'-cyclic phosphoramidate prodrugs for hcv infection
AU2013266393B2 (en) 2012-05-22 2017-09-28 Idenix Pharmaceuticals Llc D-amino acid compounds for liver disease
KR20150014457A (ko) 2012-05-25 2015-02-06 얀센 알 앤드 디 아일랜드 우라실 스피로옥세탄 뉴클레오시드
WO2014052638A1 (en) 2012-09-27 2014-04-03 Idenix Pharmaceuticals, Inc. Esters and malonates of sate prodrugs
MX353422B (es) 2012-10-08 2018-01-12 Idenix Pharmaceuticals Llc Análogos de 2'-cloronucleósido para infección por vhc.
EP2909222B1 (en) 2012-10-22 2021-05-26 Idenix Pharmaceuticals LLC 2',4'-bridged nucleosides for hcv infection
WO2014078427A1 (en) * 2012-11-14 2014-05-22 Idenix Pharmaceuticals, Inc. D-alanine ester of rp-nucleoside analog
US20140140952A1 (en) * 2012-11-14 2014-05-22 Idenix Pharmaceuticals, Inc. D-Alanine Ester of Sp-Nucleoside Analog
ES2725491T3 (es) 2012-11-16 2019-09-24 Univ College Cardiff Consultants Ltd Mezcla de RP/SP gemcitabina-[fenil-(benciloxi-L-alaninil)]-fosfato
EP2935304A1 (en) 2012-12-19 2015-10-28 IDENIX Pharmaceuticals, Inc. 4'-fluoro nucleosides for the treatment of hcv
BR112015014457A2 (pt) 2012-12-21 2017-11-21 Alios Biopharma Inc composto ou sal farmaceuticamente aceitável do mesmo e composição farmacêutica e respectivos usos e processos para melhorar ou tratar infecção de hcv, para inibir a atividade da ns5b polimerase do vírus da hepatite c e a replicação de vírus da hepatite c
SG10201706949VA (en) * 2013-01-31 2017-09-28 Gilead Pharmasset Llc Combination formulation of two antiviral compounds
US10034893B2 (en) 2013-02-01 2018-07-31 Enanta Pharmaceuticals, Inc. 5, 6-D2 uridine nucleoside/tide derivatives
WO2014137930A1 (en) 2013-03-04 2014-09-12 Idenix Pharmaceuticals, Inc. Thiophosphate nucleosides for the treatment of hcv
US20140249101A1 (en) 2013-03-04 2014-09-04 Gilead Pharmasset Llc Methods for treating hepatitis c virus infection
EP2970358B1 (en) 2013-03-04 2021-06-30 Idenix Pharmaceuticals LLC 3'-deoxy nucleosides for the treatment of hcv
US20140271547A1 (en) 2013-03-13 2014-09-18 Idenix Pharmaceuticals, Inc. Amino acid phosphoramidate pronucleotides of 2'-cyano, azido and amino nucleosides for the treatment of hcv
WO2014165542A1 (en) 2013-04-01 2014-10-09 Idenix Pharmaceuticals, Inc. 2',4'-fluoro nucleosides for the treatment of hcv
EP2984097B1 (en) * 2013-04-12 2017-03-29 Achillion Pharmaceuticals, Inc. Highly active nucleoside derivative for the treatment of hcv
US10005779B2 (en) 2013-06-05 2018-06-26 Idenix Pharmaceuticals Llc 1′,4′-thio nucleosides for the treatment of HCV
CN103408624A (zh) * 2013-07-08 2013-11-27 江西科技师范大学 合成核苷磷酰氨基酸甲酯以及核苷硫代磷酰氨基酸甲酯的方法
US20150037282A1 (en) 2013-08-01 2015-02-05 Idenix Pharmaceuticals, Inc. D-amino acid phosphoramidate pronucleotides of halogeno pyrimidine compounds for liver disease
WO2015030853A1 (en) 2013-08-27 2015-03-05 Gilead Pharmasset Llc Combination formulation of two antiviral compounds
US8889701B1 (en) * 2013-10-11 2014-11-18 Alla Chem, Llc Substituted (S)-(2R,3R,5R)-3-hydroxy-(5-pyrimidin-1-yl)tetrahydrofuran-2-ylmethyl aryl phosphoramidate
WO2015084741A2 (en) 2013-12-02 2015-06-11 Gilead Pharmasset Llc Methods of treating hepatitis c virus infection in subjects with cirrhosis
TW201609785A (zh) * 2013-12-23 2016-03-16 吉李德製藥公司 固體型之抗病毒化合物
CN104761582B (zh) * 2014-01-08 2018-09-28 上海创诺医药集团有限公司 一种制备n-[(s)-(2,3,4,5,6-五氟苯氧基)苯氧基磷酰基]-l-丙氨酸异丙酯的方法
WO2015126995A1 (en) 2014-02-20 2015-08-27 Ratiopharm Gmbh Solid state forms of sofosbuvir
CN103804446A (zh) * 2014-02-27 2014-05-21 苏州东南药业股份有限公司 一种3,5-二苯甲酰基-2-去氧-2-氟-2甲基-D-核糖-γ-内酯的制备方法
US20170080008A1 (en) * 2014-03-05 2017-03-23 Galenicum Health S.L. Stable pharmaceutical compositions of sofosbuvir
US10493089B2 (en) 2014-04-03 2019-12-03 Sandoz Ag Solid composition comprising amorphous sofosbuvir
CZ307789B6 (cs) 2014-04-15 2019-05-09 Zentiva, K.S. Způsob výroby biologicky účinných fosforamidátových léčiv
WO2015161137A1 (en) 2014-04-16 2015-10-22 Idenix Pharmaceuticals, Inc. 3'-substituted methyl or alkynyl nucleosides for the treatment of hcv
TWI721947B (zh) 2014-06-11 2021-03-21 美商基利法瑪席特有限責任公司 抗病毒化合物的固態形式
CN105153257B (zh) * 2014-06-12 2019-03-05 正大天晴药业集团股份有限公司 索非布韦的制备方法
EP3845221B1 (en) 2014-06-13 2023-12-13 Ratiopharm GmbH Solid state forms of sofosbuvir
US20170128482A1 (en) 2014-06-23 2017-05-11 Sanovel Ilac Sanayi Ve Ticaret A.S. Modified release pharmaceutical compositions of sofosbuvir and ribavirin
WO2015197518A1 (en) 2014-06-23 2015-12-30 Sanovel Ilac Sanayi Ve Ticaret A.S. Pharmaceutical combinations of sofosbuvir and ribavirin
EA201692515A1 (ru) 2014-06-23 2017-05-31 Сановель Илач Санайи Ве Тиджарет А.Ш. Новая фармацевтическая композиция на основе софосбувира и рибавирина
EA034890B1 (ru) 2014-06-25 2020-04-02 НУКАНА ПиЭлСи Продукты гемцитабина
CN105254694B (zh) * 2014-07-14 2018-11-27 正大天晴药业集团股份有限公司 氘代核苷衍生物
CZ2014502A3 (cs) 2014-07-17 2016-01-27 Zentiva, K.S. Nová forma sofosbuviru a způsob její přípravy
CN104130302B (zh) * 2014-08-08 2017-02-15 乳源东阳光药业有限公司 一种核苷药物的晶型及其制备方法
WO2016023906A1 (en) * 2014-08-13 2016-02-18 Sandoz Ag A crystalline form of sofosbuvir
WO2016023905A1 (en) * 2014-08-13 2016-02-18 Sandoz Ag New and efficient process for the preparation of crystalline form 6 of sofosbuvir
US10526363B2 (en) 2014-08-15 2020-01-07 Merck Sharp & Dohme Corp. Substituted phosphoramidate compounds and uses thereof
WO2016033164A1 (en) 2014-08-26 2016-03-03 Enanta Pharmaceuticals, Inc. Nucleoside and nucleotide derivatives
WO2016035006A1 (en) * 2014-09-01 2016-03-10 Dr. Reddy’S Laboratories Limited Novel nucleotide analogs, process for the preparation of sofosbuvir and its analogs, novel forms of sofosbuvir and solid dispersion of sofosbuvir
CN104230985B (zh) * 2014-09-01 2017-01-18 北京天弘天达医药科技有限公司 (s)‑2‑[(s)‑(4‑硝基‑苯氧基)‑苯氧基‑磷酰基氨基]丙酸异丙酯的制备方法
WO2016038542A2 (en) 2014-09-10 2016-03-17 Mylan Laboratories Limited Polymorphic forms of sofosbuvir
CN107108676A (zh) * 2014-09-15 2017-08-29 美迪维尔公司 用于制备非对映异构纯的磷酰胺酯前药的方法
MX2017003284A (es) 2014-09-16 2017-06-28 Gilead Sciences Inc Formas solidas de modulador de receptor tipo toll.
WO2016042576A1 (en) 2014-09-16 2016-03-24 Cadila Healthcare Limited Co-crystal of sofosbuvir and amino acid and process for preparation thereof
CN104327138B (zh) * 2014-10-21 2017-05-10 齐鲁制药有限公司 Psi‑7977中间体化合物的制备方法
CN104277088A (zh) * 2014-10-29 2015-01-14 汤律进 索菲布韦单晶m及其制备方法和用途
TWI740546B (zh) 2014-10-29 2021-09-21 美商基利科學股份有限公司 製備核糖苷的方法
WO2016073756A1 (en) 2014-11-06 2016-05-12 Enanta Pharmaceuticals, Inc. Deuterated nucleoside/tide derivatives
CN106046088B (zh) * 2014-11-07 2018-05-15 南京旗昌医药科技有限公司 索氟布韦的晶型h3及其制备方法
CN104327137A (zh) * 2014-11-07 2015-02-04 王彩琴 一种氘代索菲布韦及其用途
WO2016074596A1 (zh) * 2014-11-10 2016-05-19 南京曼杰生物科技有限公司 核苷氨基磷酸酯衍生物及其应用
CN104478976A (zh) * 2014-11-12 2015-04-01 苏州明锐医药科技有限公司 索非布韦的制备方法
US9732110B2 (en) 2014-12-05 2017-08-15 Enanta Pharmaceuticals, Inc. Nucleoside and nucleotide derivatives
CN105732751A (zh) * 2014-12-09 2016-07-06 北京万生药业有限责任公司 索非布韦新晶体
CN107530369A (zh) * 2014-12-10 2018-01-02 索尔斯蒂斯生物有限公司 具有生物可逆的二硫基的单核苷酸
CN104546783A (zh) * 2014-12-12 2015-04-29 安徽一灵药业有限公司 一种索非布韦薄膜包衣片制剂及其制备方法
RS62434B1 (sr) * 2014-12-26 2021-11-30 Univ Emory Antivirusni n4-hidroksicitidin derivati
CN105801645B (zh) * 2014-12-29 2019-01-04 浙江海正药业股份有限公司 制备索非布韦晶型6的方法
CN104610404B (zh) * 2015-01-16 2016-04-06 南通常佑药业科技有限公司 一种呋喃核糖磷酸酯衍生物的制备方法
JP2018505201A (ja) * 2015-02-13 2018-02-22 サンド・アクチエンゲゼルシヤフト レジパスビルおよびソホスブビルを含む医薬組成物
EP3271371A4 (en) * 2015-03-02 2018-12-05 Medivir Aktiebolag Nucleotide derivatives which are hcv inhibitors for use in the treatment of hepatitis c
GEP20237502B (en) 2015-03-06 2023-04-25 Atea Pharmaceuticals Inc B-D-2'-DEOXY-2'a-FLUORO-2'-B-C-SUBSTITUTED-2-MODIFIED-N6-SUBSTITUTED PURINE NUCLEOTIDES FOR HCV TREATMENT
ITUB20152109A1 (it) * 2015-07-13 2017-01-13 Quim Sintetica S A Nucleosidi fosforamidati utili per il trattamento di infezioni virali e loro preparazione
EP3274356A1 (en) 2015-03-26 2018-01-31 Química Sintética, S.A. Nucleoside phosphoramidates useful for the treatment of viral infections and preparation thereof
CN106146588A (zh) * 2015-03-26 2016-11-23 常州制药厂有限公司 一种索非布韦的制备方法
WO2016156512A1 (en) 2015-04-01 2016-10-06 Sandoz Ag A process for preparing a crystalline form of sofosbuvir
US10618926B2 (en) 2015-04-02 2020-04-14 Merck Sharp & Dohme Process for making phosphoramidate protected nucleoside compounds
WO2016181313A1 (en) 2015-05-11 2016-11-17 Lupin Limited A process for the preparation of sofosbuvir intermediates & its polymorph
CN104829668B (zh) * 2015-05-19 2017-05-31 江苏福瑞生物医药有限公司 一种核苷氨基磷酸酯类药物母液回收的方法
WO2016189040A1 (en) 2015-05-26 2016-12-01 Sandoz Ag Selective process for synthesis of nucleoside phosphoramidates
WO2016191079A1 (en) * 2015-05-26 2016-12-01 Boropharm, Inc. Improved process for preparing boryl 7-azaindole compounds
ES2933032T3 (es) 2015-06-03 2023-01-31 Teva Pharmaceuticals Int Gmbh Procesos mejorados para la preparación de sofosbuvir e intermedios del mismo
CN107771179A (zh) * 2015-06-22 2018-03-06 桑多斯股份公司 氨基磷酸酯的合成
CZ2015443A3 (cs) 2015-06-26 2017-01-04 Zentiva, K.S. Farmaceutická formulace sofosbuviru
CN105017359A (zh) * 2015-07-08 2015-11-04 苏州晶云药物科技有限公司 一种索非布韦晶型的制备方法
CN106366146A (zh) * 2015-07-13 2017-02-01 中科云和（北京）生物医药科技有限公司 2’-双烷基取代的核苷类似物及用途
CN106397515B (zh) * 2015-07-28 2021-05-11 广东东阳光药业有限公司 一种改良的索菲布韦制备方法
WO2017019581A1 (en) * 2015-07-29 2017-02-02 Merck Sharp & Dohme Corp. Process for making phosphorus-containing nucleoside prodrug compounds
EP3133062A1 (en) 2015-08-19 2017-02-22 Zaklady Farmaceutyczne Polpharma SA Process for the preparation of a pharmaceutical agent
WO2017029408A1 (en) 2015-08-20 2017-02-23 Ratiopharm Gmbh Solid state forms of sofosbuvir
MX2018002707A (es) 2015-09-02 2018-08-01 Abbvie Inc Derivados de tetrahidrofurano antivirales.
CN106543220A (zh) 2015-09-16 2017-03-29 博瑞生物医药（苏州）股份有限公司 氨基磷酸酯化合物及其制备方法和晶体
CN106539810B (zh) * 2015-09-16 2021-03-09 济南高合医疗科技有限公司 一种富集了nuc-1031单一异构体的组合物及其制备方法和用途
EP3349758B1 (en) 2015-09-16 2022-04-06 Gilead Sciences, Inc. Methods for treating arenaviridae virus infections
CA2999215A1 (en) 2015-10-07 2017-04-13 Sandoz Ag Solid pharmaceutical composition comprising amorphous sofosbuvir
EP4011896A1 (en) 2015-12-11 2022-06-15 NuCana plc Diastereoselective synthesis of (sp)-gemcitabine-[phenyl(benzoxy-l-alaninyl)]phosphate nuc-1031
CN105461775B (zh) * 2015-12-24 2018-03-13 江苏阿尔法药业有限公司 一种索非布韦的制备方法
WO2017158624A1 (en) 2016-03-17 2017-09-21 Mylan Laboratories Limited Polymorphic forms of sofosbuvir
CN107226831A (zh) 2016-03-25 2017-10-03 江苏天士力帝益药业有限公司 尿苷类磷酰胺前药、其制备方法及其在医药上的应用
CN105669804B (zh) * 2016-03-28 2018-08-17 南通常佑药业科技有限公司 索非布韦的制备方法
WO2017184670A2 (en) * 2016-04-22 2017-10-26 Gilead Sciences, Inc. Methods for treating zika virus infections
US11192914B2 (en) 2016-04-28 2021-12-07 Emory University Alkyne containing nucleotide and nucleoside therapeutic compositions and uses related thereto
CN107337702B (zh) * 2016-04-29 2021-11-05 江苏豪森药业集团有限公司 结晶型hcv抑制剂及其制备方法和应用
CZ2016257A3 (cs) 2016-05-05 2017-11-15 Zentiva, K.S. Amorfní forma sofosbuviru, způsob její přípravy a její stabilizace
CN109562113A (zh) 2016-05-10 2019-04-02 C4医药公司 用于靶蛋白降解的螺环降解决定子体
CN109641874A (zh) 2016-05-10 2019-04-16 C4医药公司 用于靶蛋白降解的c3-碳连接的戊二酰亚胺降解决定子体
EP3454856B1 (en) 2016-05-10 2024-09-11 C4 Therapeutics, Inc. Heterocyclic degronimers for target protein degradation
BR112018073858A2 (pt) 2016-05-27 2019-02-26 Gilead Sciences, Inc. métodos para tratamento de infecções pelo vírus da hepatite b usando inibidores de ns5a, ns5b ou ns3
BR102017011025A2 (pt) 2016-06-02 2017-12-19 Gilead Pharmasset Llc Formulation of combination of three antiviral compounds
WO2018013937A1 (en) 2016-07-14 2018-01-18 Atea Pharmaceuticals, Inc. Beta-d-2'-deoxy-2'-alpha-fluoro-2'-beta-c-substituted-4'-fluoro-n6-substituted-6-amino-2-substituted purine nucleotides for the treatment of hepatitis c virus infection
US10239910B2 (en) * 2016-07-20 2019-03-26 Optimus Drugs (P) Limited Process for the preparation of sofosbuvir
BR112019002729A2 (pt) 2016-08-12 2019-05-14 Sandoz Ag composição farmacêutica sólida e processo para preparar uma composição farmacêutica sólida
US20190185507A1 (en) 2016-08-19 2019-06-20 Sandoz Ag Sofosbuvir Derivatives for the Treatment of Hepatitis C
AU2017324939B2 (en) 2016-09-07 2021-10-14 Atea Pharmaceuticals, Inc. 2'-substituted-N6-substituted purine nucleotides for RNA virus treatment
CN106432328B (zh) * 2016-09-14 2019-03-22 江苏福瑞生物医药有限公司 一种索非布韦中间体的制备方法
CN106432327A (zh) * 2016-09-14 2017-02-22 江苏福瑞生物医药有限公司 一种索非布韦关键中间体的制备方法
US11434255B2 (en) 2016-09-16 2022-09-06 Lcb Pharma Inc. Nucleoside and nucleotide analogues bearing a quaternary all-carbon stereogenic center at the 2′ position and methods of use as a cardioprotective agent
WO2018093717A1 (en) * 2016-11-17 2018-05-24 Abbvie Inc. Compositions and methods for treating hcv infection
JP2020500853A (ja) * 2016-11-18 2020-01-16 ネウロビベ プハルマセウトイカル エービー ミトコンドリアのプロトンイオノフォアの肝臓プロドラッグ
CN108129514A (zh) * 2016-12-01 2018-06-08 北京美倍他药物研究有限公司 磷酸/膦酸衍生物的单一异构体及其医药用途
EP3577124A4 (en) 2017-02-01 2021-01-06 ATEA Pharmaceuticals, Inc. NUCLEOTID HEMI-SULPHATE SALT FOR TREATMENT OF HEPATITIS C VIRUS
WO2018169946A1 (en) 2017-03-14 2018-09-20 Gilead Sciences, Inc. Methods of treating feline coronavirus infections
CN110636884B (zh) 2017-05-01 2022-10-04 吉利德科学公司 新结晶形式
RU2656228C9 (ru) * 2017-06-13 2019-04-16 Олег Ростиславович Михайлов Слабозакристаллизованная β-модификация (S)-изопропил 2-((S)-(((2R,3R,4R,5R)-5-(2,4-диоксо-3,4-дигидропиримидин-(2Н)-ил)-4-фтор-3-гидрокси-4-метилтетрагидрофуран-2-ил)метокси)-(фенокси)фосфориламино)пропаноата, способ её получения и фармацевтическая композиция на её основе
GB201709471D0 (en) 2017-06-14 2017-07-26 Nucana Biomed Ltd Diastereoselective synthesis of hosphate derivatives
US10675296B2 (en) 2017-07-11 2020-06-09 Gilead Sciences, Inc. Compositions comprising an RNA polymerase inhibitor and cyclodextrin for treating viral infections
EP3661944A1 (en) 2017-08-03 2020-06-10 Sandoz AG Sofosbuvir hydrate
WO2019030387A1 (en) 2017-08-11 2019-02-14 Sandoz Ag SOLID COMPOSITION COMPRISING AMORPHOUS SOFOSBUVIR AND AMORPHOUS DACLATASVIR
GB201715011D0 (en) 2017-09-18 2017-11-01 Nucana Biomed Ltd Floxuridine synthesis
BR112020010581A2 (pt) 2017-12-07 2020-11-10 Emory University composição farmacêutica, recipiente pressurizado, e, métodos para tratar ou prevenir uma infecção viral e de tratamento ou prevenção de coronavírus humano, sars, coronavírus mers, vírus da encefalite equina oriental, vírus da encefalite equina ocidental, vírus da encefalite equina venezuelana, vírus chikungunya e infecção por infecção de ross river, vírus orthomyxoviridae ou vírus paramyxoviridae ou vírus rsv, ou infecção pelo vírus influenza a e vírus influenza b ou vírus filoviridae ou vírus ebola.
WO2019134971A1 (en) 2018-01-04 2019-07-11 Sandoz Ag Encapsulated particles comprising a pharmaceutically active ingredient
JP2021521118A (ja) 2018-04-10 2021-08-26 アテア ファーマシューティカルズ， インコーポレイテッド 肝硬変を伴うｈｃｖ感染患者の治療
WO2019237297A1 (en) * 2018-06-14 2019-12-19 Janssen Pharmaceuticals, Inc. Processes for preparing compounds/intermediates useful in the treatment of viral infections
CN111233956B (zh) * 2018-11-29 2023-04-28 北京凯因科技股份有限公司 索非布韦的晶型及其制备方法
CN111018844B (zh) * 2019-12-10 2021-05-07 常州制药厂有限公司 一种索氟布韦关键中间体的制备方法
RU2745293C1 (ru) * 2019-12-26 2021-03-23 Общество С Ограниченной Ответственностью "Технология Лекарств" Способ получения кристаллической формы 8 софосбувира (варианты)
AU2021214911A1 (en) 2020-01-27 2022-07-21 Gilead Sciences, Inc. Methods for treating SARS CoV-2 infections
US10874687B1 (en) 2020-02-27 2020-12-29 Atea Pharmaceuticals, Inc. Highly active compounds against COVID-19
WO2021183750A2 (en) 2020-03-12 2021-09-16 Gilead Sciences, Inc. Methods of preparing 1'-cyano nucleosides
US11701372B2 (en) 2020-04-06 2023-07-18 Gilead Sciences, Inc. Inhalation formulations of 1'-cyano substituted carba-nucleoside analogs
WO2021209563A1 (en) 2020-04-16 2021-10-21 Som Innovation Biotech, S.A. Compounds for use in the treatment of viral infections by respiratory syndrome-related coronavirus
CA3179226A1 (en) 2020-05-29 2021-12-02 Tomas Cihlar Remdesivir treatment methods
IL299202A (en) 2020-06-24 2023-02-01 Gilead Sciences Inc 1'-cyano nucleoside analogs and uses thereof
RU2740058C1 (ru) * 2020-06-26 2020-12-31 Общество С Ограниченной Ответственностью "Технология Лекарств" Способ получения софосбувира и фосфорамидаты
AU2021331214B2 (en) 2020-08-27 2024-01-04 Gilead Sciences, Inc. Compounds and methods for treatment of viral infections
CN113552265B (zh) * 2021-09-17 2022-01-04 天地恒一制药股份有限公司 富马酸丙酚替诺福韦合成原料中杂质的检测方法及应用
EP4320128A1 (en) 2022-03-02 2024-02-14 Gilead Sciences, Inc. Compounds and methods for treatment of viral infections
US12060148B2 (en) 2022-08-16 2024-08-13 Honeywell International Inc. Ground resonance detection and warning system and method

Family Cites Families (342)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US2007275A (en) 1933-01-09 1935-07-09 Elizabeth Q Kendall Ingot stripper
US2759300A (en) 1954-08-11 1956-08-21 Pest Control Ltd Method and means for introducing a predetermined amount of a poisonous material beneath the surface of the soil
USRE29835E (en) 1971-06-01 1978-11-14 Icn Pharmaceuticals 1,2,4-Triazole nucleosides
US3798209A (en) 1971-06-01 1974-03-19 Icn Pharmaceuticals 1,2,4-triazole nucleosides
US3994974A (en) 1972-02-05 1976-11-30 Yamanouchi Pharmaceutical Co., Ltd. α-Aminomethylbenzyl alcohol derivatives
US3852267A (en) 1972-08-04 1974-12-03 Icn Pharmaceuticals Phosphoramidates of 3{40 ,5{40 -cyclic purine nucleotides
US4526988A (en) 1983-03-10 1985-07-02 Eli Lilly And Company Difluoro antivirals and intermediate therefor
US5077056A (en) 1984-08-08 1991-12-31 The Liposome Company, Inc. Encapsulation of antineoplastic agents in liposomes
US5736155A (en) 1984-08-08 1998-04-07 The Liposome Company, Inc. Encapsulation of antineoplastic agents in liposomes
NL8403224A (nl) 1984-10-24 1986-05-16 Oce Andeno Bv Dioxafosforinanen, de bereiding ervan en de toepassing voor het splitsen van optisch actieve verbindingen.
US5223263A (en) 1988-07-07 1993-06-29 Vical, Inc. Liponucleotide-containing liposomes
US4797285A (en) 1985-12-06 1989-01-10 Yissum Research And Development Company Of The Hebrew University Of Jerusalem Lipsome/anthraquinone drug composition and method
US5154930A (en) 1987-03-05 1992-10-13 The Liposome Company, Inc. Pharmacological agent-lipid solution preparation
GB8719367D0 (en) 1987-08-15 1987-09-23 Wellcome Found Therapeutic compounds
JPH03501253A (ja) 1987-09-22 1991-03-22 ザ リージェンツ オブ ザ ユニバーシティ オブ カリフォルニア エイズ（ａｉｄｓ）治療を目的とするリポソームによるヌクレオシド類似物質
IL91664A (en) 1988-09-28 1993-05-13 Yissum Res Dev Co Ammonium transmembrane gradient system for efficient loading of liposomes with amphipathic drugs and their controlled release
US6132763A (en) 1988-10-20 2000-10-17 Polymasc Pharmaceuticals Plc Liposomes
US5705363A (en) 1989-03-02 1998-01-06 The Women's Research Institute Recombinant production of human interferon τ polypeptides and nucleic acids
US5277914A (en) 1989-03-31 1994-01-11 The Regents Of The University Of California Preparation of liposome and lipid complex compositions
US5549910A (en) 1989-03-31 1996-08-27 The Regents Of The University Of California Preparation of liposome and lipid complex compositions
US5077057A (en) 1989-04-05 1991-12-31 The Regents Of The University Of California Preparation of liposome and lipid complex compositions
US5411947A (en) 1989-06-28 1995-05-02 Vestar, Inc. Method of converting a drug to an orally available form by covalently bonding a lipid to the drug
US5194654A (en) 1989-11-22 1993-03-16 Vical, Inc. Lipid derivatives of phosphonoacids for liposomal incorporation and method of use
US5225212A (en) 1989-10-20 1993-07-06 Liposome Technology, Inc. Microreservoir liposome composition and method
US5013556A (en) 1989-10-20 1991-05-07 Liposome Technology, Inc. Liposomes with enhanced circulation time
US5463092A (en) 1989-11-22 1995-10-31 Vestar, Inc. Lipid derivatives of phosphonacids for liposomal incorporation and method of use
US5026687A (en) 1990-01-03 1991-06-25 The United States Of America As Represented By The Department Of Health And Human Services Treatment of human retroviral infections with 2',3'-dideoxyinosine alone and in combination with other antiviral compounds
DE69132332T2 (de) 1990-04-06 2000-11-30 Genelabs Technologies, Inc. Hepatitis c-virus-epitope
US5091188A (en) 1990-04-26 1992-02-25 Haynes Duncan H Phospholipid-coated microcrystals: injectable formulations of water-insoluble drugs
AU7872491A (en) 1990-05-07 1991-11-27 Vical, Inc. Lipid prodrugs of salicylate and nonsteroidal anti-inflammatory drugs
JPH05507279A (ja) 1990-05-29 1993-10-21 ネクススター・ファーマシューティカルズ・インコーポレイテッド グリセロールジ―およびトリホスフェート誘導体の合成
EP0533833B1 (en) 1990-06-13 1995-12-20 GLAZIER, Arnold Phosphorous produgs
US6060080A (en) 1990-07-16 2000-05-09 Daiichi Pharmaceutical Co., Ltd. Liposomal products
JP2599492B2 (ja) 1990-08-21 1997-04-09 第一製薬株式会社 リポソーム製剤の製造法
US5372808A (en) 1990-10-17 1994-12-13 Amgen Inc. Methods and compositions for the treatment of diseases with consensus interferon while reducing side effect
US5256641A (en) 1990-11-01 1993-10-26 State Of Oregon Covalent polar lipid-peptide conjugates for immunological targeting
US5149794A (en) 1990-11-01 1992-09-22 State Of Oregon Covalent lipid-drug conjugates for drug targeting
US5543390A (en) 1990-11-01 1996-08-06 State Of Oregon, Acting By And Through The Oregon State Board Of Higher Education, Acting For And On Behalf Of The Oregon Health Sciences University Covalent microparticle-drug conjugates for biological targeting
US5543389A (en) 1990-11-01 1996-08-06 State Of Oregon, Acting By And Through The Oregon State Board Of Higher Education On Behalf Of The Oregon Health Sciences University, A Non Profit Organization Covalent polar lipid-peptide conjugates for use in salves
US5145684A (en) 1991-01-25 1992-09-08 Sterling Drug Inc. Surface modified drug nanoparticles
US5595732A (en) 1991-03-25 1997-01-21 Hoffmann-La Roche Inc. Polyethylene-protein conjugates
US5157027A (en) 1991-05-13 1992-10-20 E. R. Squibb & Sons, Inc. Bisphosphonate squalene synthetase inhibitors and method
EP0594677A4 (en) 1991-07-12 1997-09-17 Vical Inc Antiviral liponucleosides: treatment of hepatitis b
HU9202318D0 (en) 1991-07-22 1992-10-28 Bristol Myers Squibb Co Method for preparing medical preparatives containing didesoxi-purine nucleoside
US5554728A (en) 1991-07-23 1996-09-10 Nexstar Pharmaceuticals, Inc. Lipid conjugates of therapeutic peptides and protease inhibitors
TW224053B (es) 1991-09-13 1994-05-21 Paul B Chretien
US5233031A (en) 1991-09-23 1993-08-03 University Of Rochester Phosphoramidate analogs of 2'-deoxyuridine
DE4200821A1 (de) 1992-01-15 1993-07-22 Bayer Ag Geschmacksmaskierte pharmazeutische mittel
US5676942A (en) 1992-02-10 1997-10-14 Interferon Sciences, Inc. Composition containing human alpha interferon species proteins and method for use thereof
US5405598A (en) 1992-02-24 1995-04-11 Schinazi; Raymond F. Sensitizing agents for use in boron neutron capture therapy
JP3102945B2 (ja) 1992-02-27 2000-10-23 財団法人野田産業科学研究所 肝炎治療剤
US5610054A (en) 1992-05-14 1997-03-11 Ribozyme Pharmaceuticals, Inc. Enzymatic RNA molecule targeted against Hepatitis C virus
US5426183A (en) 1992-06-22 1995-06-20 Eli Lilly And Company Catalytic stereoselective glycosylation process for preparing 2'-deoxy-2',2'-difluoronucleosides and 2'-deoxy-2'-fluoronucleosides
JP3291071B2 (ja) 1992-06-22 2002-06-10 イーライ・リリー・アンド・カンパニー アルファ−アノマーに富む１−ハロ−２−デオキシ−２，２−ジフルオロ−ｄ−リボフラノシル誘導体の製造方法
US5256798A (en) 1992-06-22 1993-10-26 Eli Lilly And Company Process for preparing alpha-anomer enriched 2-deoxy-2,2-difluoro-D-ribofuranosyl sulfonates
HU214980B (hu) 1992-09-01 1998-08-28 Eli Lilly And Co. Eljárás nukleozidok anomerizálására
GB9226729D0 (en) 1992-12-22 1993-02-17 Wellcome Found Therapeutic combination
US5496546A (en) 1993-02-24 1996-03-05 Jui H. Wang Compositions and methods of application of reactive antiviral polyadenylic acid derivatives
US6180134B1 (en) 1993-03-23 2001-01-30 Sequus Pharmaceuticals, Inc. Enhanced ciruclation effector composition and method
WO1994026273A1 (en) 1993-05-12 1994-11-24 Hostetler Karl Y Acyclovir derivatives for topical use
AU688344B2 (en) 1993-07-19 1998-03-12 Mitsubishi-Tokyo Pharmaceuticals, Inc. Hepatitis C virus proliferation inhibitor
US6156501A (en) 1993-10-26 2000-12-05 Affymetrix, Inc. Arrays of modified nucleic acid probes and methods of use
US7375198B2 (en) 1993-10-26 2008-05-20 Affymetrix, Inc. Modified nucleic acid probes
AU691225B2 (en) 1993-11-10 1998-05-14 Schering Corporation Improved interferon polymer conjugates
US5951974A (en) 1993-11-10 1999-09-14 Enzon, Inc. Interferon polymer conjugates
AU6550394A (en) 1994-03-11 1995-09-25 Isis Pharmaceuticals, Inc. Novel pyrimidine nucleosides
DE4415539C2 (de) 1994-05-03 1996-08-01 Osama Dr Dr Med Omer Pflanzen mit virustatischer und antiviraler Wirkung
JPH10501809A (ja) 1994-06-22 1998-02-17 ネクスター ファーマスーティカルズ，インコーポレイテッド 分子内求核置換による公知および新規２′−ヌクレオシドの新規製造方法
DE4432623A1 (de) 1994-09-14 1996-03-21 Huels Chemische Werke Ag Verfahren zur Bleichung von wäßrigen Tensidlösungen
US5738846A (en) 1994-11-10 1998-04-14 Enzon, Inc. Interferon polymer conjugates and process for preparing the same
US5696277A (en) 1994-11-15 1997-12-09 Karl Y. Hostetler Antiviral prodrugs
US5703058A (en) 1995-01-27 1997-12-30 Emory University Compositions containing 5-fluoro-2',3'-didehydro-2',3'-dideoxycytidine or a mono-, di-, or triphosphate thereof and a second antiviral agent
US6391859B1 (en) 1995-01-27 2002-05-21 Emory University [5-Carboxamido or 5-fluoro]-[2′,3′-unsaturated or 3′-modified]-pyrimidine nucleosides
GB9505025D0 (en) 1995-03-13 1995-05-03 Medical Res Council Chemical compounds
DE19514523A1 (de) 1995-04-12 1996-10-17 Schering Ag Neue Cytosin- und Cytidinderivate
ATE318896T1 (de) 1995-09-27 2006-03-15 Univ Emory Rekombinante rna-replikase von hepatitis-c-virus
US5908621A (en) 1995-11-02 1999-06-01 Schering Corporation Polyethylene glycol modified interferon therapy
US5767097A (en) 1996-01-23 1998-06-16 Icn Pharmaceuticals, Inc. Specific modulation of Th1/Th2 cytokine expression by ribavirin in activated T-lymphocytes
GB9602028D0 (en) 1996-02-01 1996-04-03 Amersham Int Plc Nucleoside analogues
US5980884A (en) 1996-02-05 1999-11-09 Amgen, Inc. Methods for retreatment of patients afflicted with Hepatitis C using consensus interferon
JP2000506010A (ja) 1996-02-29 2000-05-23 イミューソル インコーポレイテッド Ｃ型肝炎ウイルスリボザイム
US5633388A (en) 1996-03-29 1997-05-27 Viropharma Incorporated Compounds, compositions and methods for treatment of hepatitis C
US5830905A (en) 1996-03-29 1998-11-03 Viropharma Incorporated Compounds, compositions and methods for treatment of hepatitis C
US5990276A (en) 1996-05-10 1999-11-23 Schering Corporation Synthetic inhibitors of hepatitis C virus NS3 protease
GB9609932D0 (en) 1996-05-13 1996-07-17 Hoffmann La Roche Use of IL-12 and IFN alpha for the treatment of infectious diseases
US5891874A (en) 1996-06-05 1999-04-06 Eli Lilly And Company Anti-viral compound
US5837257A (en) 1996-07-09 1998-11-17 Sage R&D Use of plant extracts for treatment of HIV, HCV and HBV infections
US6214375B1 (en) 1996-07-16 2001-04-10 Generex Pharmaceuticals, Inc. Phospholipid formulations
US5922757A (en) 1996-09-30 1999-07-13 The Regents Of The University Of California Treatment and prevention of hepatic disorders
TW520297B (en) 1996-10-11 2003-02-11 Sequus Pharm Inc Fusogenic liposome composition and method
US6224903B1 (en) 1996-10-11 2001-05-01 Sequus Pharmaceuticals, Inc. Polymer-lipid conjugate for fusion of target membranes
US6509320B1 (en) 1996-10-16 2003-01-21 Icn Pharmaceuticals, Inc. Purine L-nucleosides, analogs and uses thereof
CZ120699A3 (cs) 1996-10-16 1999-09-15 Icn Pharmaceuticals, Inc. Monocyklická L-nukleosidová analoga a jejich využití
BR9714349A (pt) 1996-10-16 2000-11-14 Icn Pharmaceuticals L-nucleosìdeos purina, seus análogos e utilizacões dos mesmos
US6455690B1 (en) 1996-10-16 2002-09-24 Robert Tam L-8-oxo-7-propyl-7,8-dihydro-(9H)-guanosine
EP2314598A1 (en) 1996-10-18 2011-04-27 Vertex Pharmaceuticals Incorporated Inhibitors of Hepatitis C virus NS3 serine protease
GB9623908D0 (en) 1996-11-18 1997-01-08 Hoffmann La Roche Amino acid derivatives
IL119833A (en) 1996-12-15 2001-01-11 Lavie David Hypericum perforatum extracts for the preparation of pharmaceutical compositions for the treatment of hepatitis
US5827533A (en) 1997-02-06 1998-10-27 Duke University Liposomes containing active agents aggregated with lipid surfactants
US6004933A (en) 1997-04-25 1999-12-21 Cortech Inc. Cysteine protease inhibitors
PL193237B1 (pl) 1997-06-30 2007-01-31 Merz Pharma Gmbh & Co Kgaa Pochodne 1-aminoalkilocykloheksanu, kompozycja farmaceutyczna je zawierająca oraz ich zastosowanie
JP4452401B2 (ja) 1997-08-11 2010-04-21 ベーリンガー インゲルハイム （カナダ） リミテッド Ｃ型肝炎ウイルス阻害ペプチドアナログ
DE69801970T2 (de) 1997-09-21 2002-06-13 Schering Corp., Kenilworth Kombinationstherapie zur Entfernung von nachweisbarer HCV-RNS in Patienten mit chronischer Hepatitis C-Infektion
US6703374B1 (en) 1997-10-30 2004-03-09 The United States Of America As Represented By The Department Of Health And Human Services Nucleosides for imaging and treatment applications
US5981709A (en) 1997-12-19 1999-11-09 Enzon, Inc. α-interferon-polymer-conjugates having enhanced biological activity and methods of preparing the same
TWI244924B (en) 1998-01-23 2005-12-11 Newbiotics Inc Enzyme catalyzed therapeutic agents
KR100954390B1 (ko) 1998-02-25 2010-04-26 에모리 유니버시티 2'-플루오로뉴클레오사이드
US6787305B1 (en) 1998-03-13 2004-09-07 Invitrogen Corporation Compositions and methods for enhanced synthesis of nucleic acid molecules
WO1999049873A1 (en) 1998-03-27 1999-10-07 Regents Of The University Of Minnesota Nucleosides with antiviral and anticancer activity
GB9806815D0 (en) 1998-03-30 1998-05-27 Hoffmann La Roche Amino acid derivatives
TWI277424B (en) 1998-05-15 2007-04-01 Schering Corp Combination therapy for eradicating detectable NCV-RNA in antiviral treatment naive patients having chronic hepatitis C infection
US20010014352A1 (en) 1998-05-27 2001-08-16 Udit Batra Compressed tablet formulation
ATE307597T1 (de) 1998-06-08 2005-11-15 Hoffmann La Roche Verwendung von peg-ifn-alpha und ribavirin zur behandlung chronischer hepatitis c
US6200598B1 (en) 1998-06-18 2001-03-13 Duke University Temperature-sensitive liposomal formulation
US6726925B1 (en) 1998-06-18 2004-04-27 Duke University Temperature-sensitive liposomal formulation
AU756627B2 (en) 1998-07-27 2003-01-16 Istituto Di Ricerche Di Biologia Molecolare P. Angeletti S.P.A. Diketoacid-derivatives as inhibitors of polymerases
US6323180B1 (en) 1998-08-10 2001-11-27 Boehringer Ingelheim (Canada) Ltd Hepatitis C inhibitor tri-peptides
PT2415776T (pt) 1998-08-10 2016-07-07 Novartis Ag Beta-l-2'-desoxi-nucleosidos para o tratamento da hepatite b
GB9821058D0 (en) 1998-09-28 1998-11-18 Univ Cardiff Chemical compound
NZ511093A (en) 1998-10-16 2003-04-29 Mercian Corp Crystallization of doxorubicin hydrochloride
US6635278B1 (en) 1998-12-15 2003-10-21 Gilead Sciences, Inc. Pharmaceutical formulations
EP1140143A2 (en) 1998-12-18 2001-10-10 Schering Corporation Ribavirin-pegylated interferon alfa induction hcv combination therapy
US6267985B1 (en) 1999-06-30 2001-07-31 Lipocine Inc. Clear oil-containing pharmaceutical compositions
US6248363B1 (en) 1999-11-23 2001-06-19 Lipocine, Inc. Solid carriers for improved delivery of active ingredients in pharmaceutical compositions
US6294192B1 (en) 1999-02-26 2001-09-25 Lipocine, Inc. Triglyceride-free compositions and methods for improved delivery of hydrophobic therapeutic agents
US6383471B1 (en) 1999-04-06 2002-05-07 Lipocine, Inc. Compositions and methods for improved delivery of ionizable hydrophobic therapeutic agents
US6395300B1 (en) 1999-05-27 2002-05-28 Acusphere, Inc. Porous drug matrices and methods of manufacture thereof
US7919119B2 (en) 1999-05-27 2011-04-05 Acusphere, Inc. Porous drug matrices and methods of manufacture thereof
AU5905400A (en) 1999-07-14 2001-02-05 Board Of Regents, The University Of Texas System Methods and compositions for delivery and retention of active agents to lymph nodes
NZ516850A (en) 1999-07-30 2004-09-24 Abbott Gmbh & Co 2-pyrazolin-5-ones
WO2001032153A2 (en) 1999-11-04 2001-05-10 Shire Biochem Inc. Method for the treatment or prevention of flaviviridae viral infection using nucleoside analogues
CA2391279A1 (en) 1999-11-12 2001-05-17 Pharmasset Limited Synthesis of 2'-deoxy-l-nucleosides
US20060034937A1 (en) 1999-11-23 2006-02-16 Mahesh Patel Solid carriers for improved delivery of active ingredients in pharmaceutical compositions
US6495677B1 (en) 2000-02-15 2002-12-17 Kanda S. Ramasamy Nucleoside compounds
WO2001060315A2 (en) 2000-02-18 2001-08-23 Shire Biochem Inc. Method for the treatment or prevention of flavivirus infections using nucleoside analogues
BR0110023A (pt) 2000-04-13 2003-12-30 Pharmasset Ltd Derivados de nucleosìdeo 3'-ou-2' substituìdos para tratamento de infecções por vìrus da hepatite
WO2001081359A1 (en) 2000-04-20 2001-11-01 Schering Corporation Ribavirin-interferon alfa combination therapy for eradicating detectable hcv-rna in patients having chronic hepatitis c infection
MY164523A (en) 2000-05-23 2017-12-29 Univ Degli Studi Cagliari Methods and compositions for treating hepatitis c virus
US6787526B1 (en) 2000-05-26 2004-09-07 Idenix Pharmaceuticals, Inc. Methods of treating hepatitis delta virus infection with β-L-2′-deoxy-nucleosides
EA005890B1 (ru) 2000-05-26 2005-06-30 Айденикс (Кайман) Лимитед СПОСОБЫ ЛЕЧЕНИЯ ИНФЕКЦИЙ, ВЫЗЫВАЕМЫХ ВИРУСОМ ГЕПАТИТА ДЕЛЬТА, С ИСПОЛЬЗОВАНИЕМ β-L-2'-ДЕЗОКСИНУКЛЕОЗИДОВ
AP2006003708A0 (en) 2000-05-26 2006-08-31 Idenix Cayman Ltd Methods and compositions for treating flavivirusesand pestiviruses
FR2810322B1 (fr) 2000-06-14 2006-11-10 Pasteur Institut PRODUCTION COMBINATOIRE D'ANALOGUES DE NUCLEOTIDES ET NUCLEOTIDES (XiTP)
MY141594A (en) 2000-06-15 2010-05-14 Novirio Pharmaceuticals Ltd 3'-PRODRUGS OF 2'-DEOXY-ß-L-NUCLEOSIDES
US6815542B2 (en) 2000-06-16 2004-11-09 Ribapharm, Inc. Nucleoside compounds and uses thereof
US6680068B2 (en) 2000-07-06 2004-01-20 The General Hospital Corporation Drug delivery formulations and targeting
UA72612C2 (en) 2000-07-06 2005-03-15 Pyrido[2.3-d]pyrimidine and pyrimido[4.5-d]pyrimidine nucleoside analogues, prodrugs and method for inhibiting growth of neoplastic cells
EP1301519B2 (en) 2000-07-21 2021-11-10 Gilead Sciences, Inc. Prodrugs of phosphonate nucleotide analogues and methods for selecting and making same
JP2004504407A (ja) 2000-07-21 2004-02-12 コルバス・インターナショナル・インコーポレイテッド Ｃ型肝炎ウイルスのｎｓ３−セリンプロテアーゼ阻害剤としての新規ペプチド
AR029851A1 (es) 2000-07-21 2003-07-16 Dendreon Corp Nuevos peptidos como inhibidores de ns3-serina proteasa del virus de hepatitis c
AR034127A1 (es) 2000-07-21 2004-02-04 Schering Corp Imidazolidinonas como inhibidores de ns3-serina proteasa del virus de hepatitis c, composicion farmaceutica, un metodo para su preparacion, y el uso de las mismas para la manufactura de un medicamento
MXPA03000626A (es) 2000-07-21 2004-07-30 Schering Corp Nuevos peptidos como inhibidores de ns3-serina proteasa del virus de la hepatitis c.
AR039558A1 (es) 2000-08-21 2005-02-23 Inspire Pharmaceuticals Inc Composiciones y metodo para el tratamiento de glaucoma o hipertension ocular
US6897201B2 (en) 2000-08-21 2005-05-24 Inspire Pharmaceuticals, Inc. Compositions and methods for the treatment of glaucoma or ocular hypertension
US7018985B1 (en) 2000-08-21 2006-03-28 Inspire Pharmaceuticals, Inc. Composition and method for inhibiting platelet aggregation
US20030008841A1 (en) 2000-08-30 2003-01-09 Rene Devos Anti-HCV nucleoside derivatives
US20030087873A1 (en) 2000-10-18 2003-05-08 Lieven Stuyver Modified nucleosides for the treatment of viral infections and abnormal cellular proliferation
EP1326594A2 (en) 2000-10-18 2003-07-16 Schering Corporation Ribavirin-pegylated interferon alfa hcv combination therapy
US6555677B2 (en) 2000-10-31 2003-04-29 Merck & Co., Inc. Phase transfer catalyzed glycosidation of an indolocarbazole
CN100391967C (zh) 2000-11-20 2008-06-04 布里斯托尔-迈尔斯斯奎布公司 丙型肝炎三肽抑制剂
MXPA03005219A (es) 2000-12-12 2003-09-25 Schering Corp Peptidos diarilicos como inhibidores de ns3-serina proteasa en hepatitis de virus c.
AU2002230763A1 (en) 2000-12-13 2008-01-03 Bristol-Myers Squibb Pharma Company Inhibitors of hepatitis c virus ns3 protease
WO2002048157A2 (en) 2000-12-13 2002-06-20 Bristol-Myers Squibb Pharma Company Imidazolidinones and their related derivatives as hepatitis c virus ns3 protease inhibitors
CA2429352A1 (en) 2000-12-15 2002-06-20 Lieven Stuyver Antiviral agents for treatment of flaviviridae infections
US7105499B2 (en) 2001-01-22 2006-09-12 Merck & Co., Inc. Nucleoside derivatives as inhibitors of RNA-dependent RNA viral polymerase
ATE526339T1 (de) 2001-01-22 2011-10-15 Merck Sharp & Dohme Nukleosidderivate als inhibitoren der rna- abhängigen viralen rna-polymerase
MY129350A (en) 2001-04-25 2007-03-30 Bristol Myers Squibb Co Aripiprazole oral solution
GB0112617D0 (en) 2001-05-23 2001-07-18 Hoffmann La Roche Antiviral nucleoside derivatives
GB0114286D0 (en) 2001-06-12 2001-08-01 Hoffmann La Roche Nucleoside Derivatives
EP1404694A1 (en) 2001-06-21 2004-04-07 Glaxo Group Limited Nucleoside compounds in hcv
CN100402549C (zh) 2001-07-11 2008-07-16 沃泰克斯药物股份有限公司 桥连二环的丝氨酸蛋白酶抑制剂
EP2335700A1 (en) 2001-07-25 2011-06-22 Boehringer Ingelheim (Canada) Ltd. Hepatitis C virus polymerase inhibitors with a heterobicylic structure
CN100434079C (zh) * 2001-08-14 2008-11-19 富山化学工业株式会社 吡嗪核苷酸/吡嗪核苷类似物及其医药用途
US6962991B2 (en) 2001-09-12 2005-11-08 Epoch Biosciences, Inc. Process for the synthesis of pyrazolopyrimidines
WO2003022861A1 (en) 2001-09-13 2003-03-20 Bristol-Myers Squibb Company Process for the preparation of rebeccamycin and analogs thereof
WO2003024461A1 (en) 2001-09-20 2003-03-27 Schering Corporation Hcv combination therapy
EP1435974A4 (en) 2001-09-28 2006-09-06 Idenix Cayman Ltd METHOD AND COMPOSITIONS FOR TREATING HEPATITIS C VIRUS WITH 4'-MODIFIED NUCLEOSIDES
US7259163B2 (en) 2001-11-02 2007-08-21 Glaxo Group Limited 4-(6-membered)-heteroaryl acyl pyrrolidine derivatives as HCV inhibitors
WO2003045327A2 (en) 2001-11-27 2003-06-05 Bristol-Myers Squibb Company Efavirenz tablet formulation having unique biopharmaceutical characteristics
GB0129945D0 (en) 2001-12-13 2002-02-06 Mrc Technology Ltd Chemical compounds
CN100560073C (zh) 2001-12-14 2009-11-18 法玛塞特公司 用于治疗病毒感染的n4-酰基胞嘧啶核苷
AU2002353165A1 (en) 2001-12-17 2003-06-30 Ribapharm Inc. Deazapurine nucleoside libraries and compounds
US20030153744A1 (en) 2001-12-21 2003-08-14 Micrologix Biotech Inc. Anti-viral 7-deaza L-nucleosides
WO2003062256A1 (en) 2002-01-17 2003-07-31 Ribapharm Inc. 2'-beta-modified-6-substituted adenosine analogs and their use as antiviral agents
EP1572705A2 (en) * 2002-01-17 2005-09-14 Ribapharm, Inc. Sugar modified nucleosides as viral replication inhibitors
US7070801B2 (en) 2002-01-30 2006-07-04 National Institute Of Advanced Industrial Science And Technology Sugar-modified liposome and products comprising the liposome
US6642204B2 (en) 2002-02-01 2003-11-04 Boehringer Ingelheim International Gmbh Hepatitis C inhibitor tri-peptides
CA2370396A1 (en) 2002-02-01 2003-08-01 Boehringer Ingelheim (Canada) Ltd. Hepatitis c inhibitor tri-peptides
US7323453B2 (en) 2002-02-13 2008-01-29 Merck & Co., Inc. Methods of inhibiting orthopoxvirus replication with nucleoside compounds
US20040023901A1 (en) 2002-02-28 2004-02-05 Cook Phillip D. Nucleoside 5'-monophosphate mimics and their prodrugs
EP1485395A4 (en) 2002-02-28 2011-04-13 Biota Scient Management NUCLEOTIDE MIMETICS AND PRODRUGS THEREOF
CN101074242A (zh) 2002-04-26 2007-11-21 吉里德科学公司 Hiv蛋白酶抑制剂化合物的膦酸酯类似物的细胞蓄积及这类化合物
AU2003241621A1 (en) 2002-05-24 2003-12-12 Isis Pharmaceuticals, Inc. Oligonucleotides having modified nucleoside units
ES2304511T3 (es) 2002-06-04 2008-10-16 Schering Corporation Compuestos de pirazolo(1,5-a)pirimidina como agentes antivirales.
CA2488611C (en) 2002-06-07 2011-11-15 Kylix, B.V. Compounds for modulating the activity of exchange proteins directly activated by camp (epacs)
AU2003248708A1 (en) 2002-06-17 2003-12-31 Isis Pharmaceuticals, Inc. Oligomeric compounds that include carbocyclic nucleosides and their use in gene modulation
JP2005533777A (ja) 2002-06-17 2005-11-10 メルク　エンド　カムパニー　インコーポレーテッド Ｒｎａ抗ウイルス剤としての炭素環ヌクレオシドアナログ
US20070004669A1 (en) 2002-06-21 2007-01-04 Carroll Steven S Nucleoside derivatives as inhibitors of rna-dependent rna viral polymerase
CA2488484A1 (en) 2002-06-27 2004-01-08 Merck & Co., Inc. Nucleoside derivatives as inhibitors of rna-dependent rna viral polymerase
AP2005003211A0 (en) 2002-06-28 2005-03-31 Idenix Cayman Ltd 1'-,2'-and 3'-modified nucleoside derivatives for treating flaviviridae infections.
US7608600B2 (en) 2002-06-28 2009-10-27 Idenix Pharmaceuticals, Inc. Modified 2′ and 3′-nucleoside prodrugs for treating Flaviviridae infections
WO2004002422A2 (en) 2002-06-28 2004-01-08 Idenix (Cayman) Limited 2’-c-methyl-3’-o-l-valine ester ribofuranosyl cytidine for treatment of flaviviridae infections
EP2332952B1 (en) 2002-06-28 2015-04-29 IDENIX Pharmaceuticals, Inc. Modified 2' and 3'-nucleoside prodrugs for treating flaviridae infections
US6973905B2 (en) 2002-07-01 2005-12-13 Cinetic Automation Corporation Valve lash adjustment apparatus and method
CA2490950A1 (en) 2002-07-01 2004-01-08 Pharmacia & Upjohn Company Llc Inhibitors of hcv ns5b polymerase
MXPA05000020A (es) 2002-07-01 2005-12-05 Pharmacia & Upjohn Co Llc Inhibidores de polimerasa ns5b de la infeccion del virus de la hepatitis c (hcv).
AU2003269902A1 (en) 2002-07-16 2004-02-02 Isis Pharmaceuticals, Inc. Nucleoside derivatives as inhibitors of rna-dependent rna viral polymerase
WO2004009610A2 (en) 2002-07-24 2004-01-29 Ptc Therapeutics, Inc. Use of nucleoside compounds for nonsense suppression and the treatment of genetic diseases
AU2003256619A1 (en) 2002-07-24 2004-02-09 Isis Pharmaceuticals, Inc. Pyrrolopyrimidine thionucleoside analogs as antivirals
CN1671727A (zh) 2002-07-25 2005-09-21 麦克洛基克斯生物技术有限公司 抗病毒7－脱氮－d－核苷及其用途
TWI244393B (en) * 2002-08-06 2005-12-01 Idenix Pharmaceuticals Inc Crystalline and amorphous forms of beta-L-2'-deoxythymidine
WO2004014313A2 (en) 2002-08-12 2004-02-19 Bristol-Myers Squibb Company Combination pharmaceutical agents as inhibitors of hcv replication
KR100855907B1 (ko) 2002-09-13 2008-09-02 노파르티스 아게 내성 ＨＢＶ 균주 치료용 β-Ｌ-2'-데옥시뉴클레오시드 및병용 요법
US20050215614A1 (en) 2002-10-15 2005-09-29 Rigel Pharmaceuticals, Inc. Substituted indoles and their use as hcv inhibitors
US20040229840A1 (en) 2002-10-29 2004-11-18 Balkrishen Bhat Nucleoside derivatives as inhibitors of RNA-dependent RNA viral polymerase
AU2003290584B2 (en) 2002-11-01 2009-07-16 Viropharma Incorporated Benzofuran compounds, compositions and methods for treatment and prophylaxis of hepatitis C viral infections and associated diseases
DK1576138T3 (en) 2002-11-15 2017-05-01 Idenix Pharmaceuticals Llc 2'-METHYL NUCLEOSIDES IN COMBINATION WITH INTERFERON AND FLAVIVIRIDAE MUTATION
TWI332507B (en) 2002-11-19 2010-11-01 Hoffmann La Roche Antiviral nucleoside derivatives
PL377287A1 (pl) 2002-12-12 2006-01-23 Idenix (Cayman) Limited Sposób wytwarzania 2'-rozgałęzionych nukleozydów
PL408254A1 (pl) 2003-01-14 2014-07-21 Gilead Sciences Inc. Kompozycje i i sposoby wykorzystywane w skojarzonej terapii przeciwwirusowej
US7223785B2 (en) 2003-01-22 2007-05-29 Boehringer Ingelheim International Gmbh Viral polymerase inhibitors
AU2003225705A1 (en) 2003-03-07 2004-09-30 Ribapharm Inc. Cytidine analogs and methods of use
WO2004084453A2 (en) 2003-03-20 2004-09-30 Microbiologica Quimica E Farmaceutica Ltd. METHODS OF MANUFACTURE OF 2'-DEOXY-β-L-NUCLEOSIDES
JP4733023B2 (ja) 2003-04-16 2011-07-27 ブリストル−マイヤーズ スクイブ カンパニー Ｃ型肝炎ウイルスの大環状イソキノリンペプチド阻害剤
US7452901B2 (en) 2003-04-25 2008-11-18 Gilead Sciences, Inc. Anti-cancer phosphonate analogs
US20050261237A1 (en) 2003-04-25 2005-11-24 Boojamra Constantine G Nucleoside phosphonate analogs
EP2359833A1 (en) 2003-04-25 2011-08-24 Gilead Sciences, Inc. Antiviral phosphonate analogs
US7407965B2 (en) 2003-04-25 2008-08-05 Gilead Sciences, Inc. Phosphonate analogs for treating metabolic diseases
JP2006524710A (ja) 2003-04-25 2006-11-02 ギリアード サイエンシーズ， インコーポレイテッド キナーゼインヒビターホスホネート抱合体
WO2005002626A2 (en) 2003-04-25 2005-01-13 Gilead Sciences, Inc. Therapeutic phosphonate compounds
US7470724B2 (en) 2003-04-25 2008-12-30 Gilead Sciences, Inc. Phosphonate compounds having immuno-modulatory activity
WO2004096235A2 (en) 2003-04-25 2004-11-11 Gilead Sciences, Inc. Anti-cancer phosphonate analogs
WO2004096210A1 (en) 2003-05-01 2004-11-11 Glaxo Group Limited Acylated indoline and tetrahydroquinoline derivatives as hcv inhibitors
US20040259934A1 (en) 2003-05-01 2004-12-23 Olsen David B. Inhibiting Coronaviridae viral replication and treating Coronaviridae viral infection with nucleoside compounds
WO2005020884A2 (en) 2003-05-14 2005-03-10 Idenix (Cayman) Limited Nucleosides for treatment of infection by corona viruses, toga viruses and picorna viruses
US20040229839A1 (en) 2003-05-14 2004-11-18 Biocryst Pharmaceuticals, Inc. Substituted nucleosides, preparation thereof and use as inhibitors of RNA viral polymerases
WO2004106356A1 (en) 2003-05-27 2004-12-09 Syddansk Universitet Functionalized nucleotide derivatives
PT3521297T (pt) 2003-05-30 2022-03-18 Gilead Pharmasset Llc Análogos de nucleosídeo fluorados modificados
EP1644479A4 (en) 2003-06-16 2008-04-23 Mark W Grinstaff MACROMOLECULES AND FUNCTIONAL SYNTHETIC MOLECULES FOR GENES ADMINISTRATION
GB0317009D0 (en) 2003-07-21 2003-08-27 Univ Cardiff Chemical compounds
DE602004028841D1 (de) 2003-07-25 2010-10-07 Centre Nat Rech Scient Purin nucleoside für die behandlung von durch flavividrae verursachten krankheiten, einschliesslich hepatitis c
BRPI0414019A (pt) 2003-08-27 2006-10-24 Biota Inc nucleosìdios ou nucleotìdio tricìclicos como agentes terapêuticos
TW200526686A (en) 2003-09-18 2005-08-16 Vertex Pharma Inhibitors of serine proteases, particularly HCV NS3-NS4A protease
US20050148534A1 (en) 2003-09-22 2005-07-07 Castellino Angelo J. Small molecule compositions and methods for increasing drug efficiency using compositions thereof
US7491794B2 (en) 2003-10-14 2009-02-17 Intermune, Inc. Macrocyclic compounds as inhibitors of viral replication
RS54573B1 (en) 2003-10-14 2016-06-30 F. Hoffmann-La Roche Ltd MACROCYCLIC CARBOXYLIC ACIDS AND ACYLSULPHONAMIDES AS HCV REPLICATION INHIBITORS
US7026339B2 (en) 2003-11-07 2006-04-11 Fan Yang Inhibitors of HCV NS5B polymerase
TW200528459A (en) 2004-01-06 2005-09-01 Achillion Pharmaceuticals Inc Azabenzofuran substituted thioureas; inhibitors of viral replication
AU2005208887B2 (en) 2004-01-28 2010-02-25 Merck Sharp & Dohme Corp. Aminocyclopentyl pyridopyrazinone modulators of chemokine receptor activity
WO2005082144A1 (en) 2004-02-25 2005-09-09 Government Of The United States Of America, As Represented By The Secretary, Department Of Health And Human Services Office Of Technology Transfer Methylation inhibitor compounds
WO2005087788A2 (en) 2004-03-04 2005-09-22 The Regents Of The University Of California Methods for preparation of nucleoside phosphonate esters
BRPI0509467A (pt) 2004-03-30 2007-09-11 Intermune Inc compostos macrocìclicos como inibidores de replicação viral
GB0408995D0 (en) 2004-04-22 2004-05-26 Glaxo Group Ltd Compounds
US7534767B2 (en) 2004-06-15 2009-05-19 Merck & Co., Inc. C-purine nucleoside analogs as inhibitors of RNA-dependent RNA viral polymerase
WO2006000922A2 (en) 2004-06-23 2006-01-05 Idenix (Cayman) Limited 5-aza-7-deazapurine derivatives for treating infections with flaviviridae
JP5080973B2 (ja) 2004-06-24 2012-11-21 メルク・シャープ・エンド・ドーム・コーポレイション Ｒｎａ依存性ｒｎａウイルスの感染を処置するためのヌクレオシドアリールホスホルアミダート
US7217523B2 (en) 2004-07-02 2007-05-15 Regents Of The University Of Minnesota Nucleoside phosphoramidates and nucleoside phosphoramidases
CN101023094B (zh) 2004-07-21 2011-05-18 法莫赛特股份有限公司 烷基取代的2-脱氧-2-氟代-d-呋喃核糖基嘧啶和嘌呤及其衍生物的制备
EP1773856B1 (en) 2004-07-21 2012-02-01 Pharmasset, Inc. Preparation of alkyl-substituted 2-deoxy-2-fluoro-d-ribofuranosyl pyrimidines and purines and their derivatives
ME03423B (me) 2004-07-27 2020-01-20 Gilead Sciences Inc Fosfonatni analozi jedinjenja hiv inhibitora
US7153848B2 (en) 2004-08-09 2006-12-26 Bristol-Myers Squibb Company Inhibitors of HCV replication
US7348425B2 (en) 2004-08-09 2008-03-25 Bristol-Myers Squibb Company Inhibitors of HCV replication
WO2006021340A1 (en) 2004-08-23 2006-03-02 F.Hoffmann-La Roche Ag Heterocyclic antiviral compounds
ES2327252T3 (es) 2004-08-23 2009-10-27 F. Hoffmann-La Roche Ag 4'-azido nucleosidos antivirales.
WO2006029081A2 (en) 2004-09-02 2006-03-16 Neopharm, Inc. Nucleoside-lipid conjugates, their method of preparation and uses thereof
KR101177590B1 (ko) 2004-09-14 2012-08-27 파마셋 인코포레이티드 2'-플루오로-2'-알킬 치환되거나 또는 다른 선택적으로치환된 리보퓨라노실 피리미딘 및 퓨린 및 그 유도체의제조
RU2007115419A (ru) 2004-09-24 2008-10-27 Айденикс (Кайман) Лимитед (Ky) Способы и композиции для лечения флавивирусов, пестивирусов и гепацивируса
EP1799218A1 (en) 2004-09-30 2007-06-27 Tibotec Pharmaceuticals Ltd. Hcv inhibiting bi-cyclic pyrimidines
US20080280842A1 (en) 2004-10-21 2008-11-13 Merck & Co., Inc. Fluorinated Pyrrolo[2,3-D]Pyrimidine Nucleosides for the Treatment of Rna-Dependent Rna Viral Infection
CN101166750A (zh) 2004-10-29 2008-04-23 拜奥克里斯特制药公司 治疗用呋喃并嘧啶类化合物和噻吩并嘧啶类化合物
JP2008523082A (ja) 2004-12-09 2008-07-03 リージェンツ オブ ザ ユニバーシティ オブ ミネソタ 抗菌活性および抗癌活性を有するヌクレオチド
WO2006063717A2 (en) 2004-12-16 2006-06-22 Febit Biotech Gmbh Polymerase-independent analysis of the sequence of polynucleotides
WO2006065590A2 (en) 2004-12-16 2006-06-22 Xtl Biopharmaceuticals Inc. Pyridine and pyrimidine antiviral compositions
EP1674104A1 (en) 2004-12-24 2006-06-28 Institut National De La Sante Et De La Recherche Medicale (Inserm) Uridine derivatives as antiviral drugs against a flaviviridae, especially HCV
WO2006093801A1 (en) 2005-02-25 2006-09-08 Abbott Laboratories Thiadiazine derivatives useful as anti-infective agents
MX2007010463A (es) 2005-02-28 2007-11-08 Genelabs Tech Inc Profarmacos de nucleosido triciclico para tratar infecciones virales.
BRPI0609650A2 (pt) 2005-03-25 2010-04-20 Tibotec Pharm Ltd inibidores heterobicìlicos de hvc
WO2006116557A1 (en) 2005-04-25 2006-11-02 Genelabs Technologies, Inc. Nucleoside compounds for treating viral infections
WO2006121820A1 (en) * 2005-05-05 2006-11-16 Valeant Research & Development Phosphoramidate prodrugs for treatment of viral infection
TW200716631A (en) 2005-05-12 2007-05-01 Tibotec Pharm Ltd Pyrido[2,3-d]pyrimidines useful as HCV inhibitors, and methods for the preparation thereof
AR056347A1 (es) 2005-05-12 2007-10-03 Tibotec Pharm Ltd Uso de compuestos de pteridina para fabricar medicamentos y composiciones farmaceuticas
WO2007027248A2 (en) 2005-05-16 2007-03-08 Valeant Research & Development 3', 5' - cyclic nucleoside analogues for treatment of hcv
US8143288B2 (en) 2005-06-06 2012-03-27 Bristol-Myers Squibb Company Inhibitors of HCV replication
TWI375560B (en) 2005-06-13 2012-11-01 Gilead Sciences Inc Composition comprising dry granulated emtricitabine and tenofovir df and method for making the same
TWI471145B (zh) 2005-06-13 2015-02-01 Bristol Myers Squibb & Gilead Sciences Llc 單一式藥學劑量型
US20060293752A1 (en) 2005-06-27 2006-12-28 Missoum Moumene Intervertebral disc prosthesis and associated methods
NZ594105A (en) 2005-07-25 2013-02-22 Intermune Inc Novel macrocyclic inhibitors of hepatitis c virus replication
CN101277682B (zh) 2005-07-28 2015-07-29 Isp投资有限公司 无定形依发韦仑及其生产
EP1919898B1 (en) 2005-07-29 2011-01-26 Tibotec Pharmaceuticals Macrocyclic inhibitors of hepatitis c virus
AR054882A1 (es) 2005-07-29 2007-07-25 Tibotec Pharm Ltd Inhibidores macrociclicos del virus de la hepatitis c
US20070059360A1 (en) 2005-07-29 2007-03-15 Ashish Jaiswal Water-dispersible anti-retroviral pharmaceutical compositions
ES2389964T3 (es) 2005-07-29 2012-11-05 Janssen R&D Ireland Inhibidores macrocíclicos del virus de la hepatitis C
PE20070211A1 (es) 2005-07-29 2007-05-12 Medivir Ab Compuestos macrociclicos como inhibidores del virus de hepatitis c
MY139923A (en) 2005-07-29 2009-11-30 Tibotec Pharm Ltd Macrocylic inhibitors of hepatitis c virus
CN101287472B (zh) * 2005-08-15 2011-10-12 弗·哈夫曼-拉罗切有限公司 抗病毒的4'-取代前核苷酸的氨基磷酸酯类化合物
GB0519478D0 (en) 2005-09-23 2005-11-02 Glaxo Group Ltd Compounds
GB0519488D0 (en) 2005-09-23 2005-11-02 Glaxo Group Ltd Compounds
KR101238461B1 (ko) 2005-12-09 2013-03-05 길리어드 파마셋 엘엘씨 항바이러스성 뉴클레오시드
WO2007070556A2 (en) 2005-12-12 2007-06-21 Genelabs Technologies, Inc. N-(6-membered aromatic ring)-amido anti-viral compounds
RU2441869C2 (ru) 2005-12-21 2012-02-10 Эбботт Лэборетриз Противовирусные соединения
GB0602046D0 (en) 2006-02-01 2006-03-15 Smithkline Beecham Corp Compounds
WO2007092000A1 (en) 2006-02-06 2007-08-16 Bristol-Myers Squibb Company Inhibitors of hcv replication
JP2009526850A (ja) 2006-02-14 2009-07-23 メルク エンド カムパニー インコーポレーテッド Ｒｎａ依存性ｒｎａウイルス感染を治療するためのヌクレオシドアリールホスホルアミデート
CA2640672A1 (en) 2006-02-17 2007-08-23 Pfizer Limited 3 -deazapurine derivatives as tlr7 modulators
US8895531B2 (en) 2006-03-23 2014-11-25 Rfs Pharma Llc 2′-fluoronucleoside phosphonates as antiviral agents
CN101490054B (zh) 2006-05-25 2012-05-16 百时美施贵宝公司 环丙基稠合的吲哚并苯并氮杂*hcv ns5b抑制剂
PT2487165T (pt) 2006-07-07 2016-11-18 Gilead Sciences Inc Moduladores de propriedades farmacocinéticas de agentes terapêuticos
US20080014228A1 (en) 2006-07-14 2008-01-17 Olivia Darmuzey Solid form
EP1881001A1 (en) 2006-07-20 2008-01-23 Tibotec Pharmaceuticals Ltd. HCV NS-3 serine protease inhibitors
PL2084174T3 (pl) 2006-10-10 2013-12-31 Gilead Pharmasset Llc Sposób otrzymywania nukleozydów rybofuranozylopirymidynowych
PL216525B1 (pl) 2006-10-17 2014-04-30 Ct Badań Molekularnych I Makromolekularnych Polskiej Akademii Nauk 5'-O-[(N-acylo)amidoditiofosforano] nukleozydy oraz sposób wytwarzania 5'-O-[(N-acylo)amidofosforano]-,5'-O-[(N-acylo)amidotiofosforano]-, 5'-O-[(N-acylo)amidoditiofosforano]nukleozydów
GB0623493D0 (en) 2006-11-24 2007-01-03 Univ Cardiff Chemical compounds
WO2008079206A1 (en) 2006-12-20 2008-07-03 Merck & Co., Inc. Nucleoside cyclic phosphoramidates for the treatment of rna-dependent rna viral infection
US20080261913A1 (en) 2006-12-28 2008-10-23 Idenix Pharmaceuticals, Inc. Compounds and pharmaceutical compositions for the treatment of liver disorders
WO2008085508A2 (en) 2007-01-05 2008-07-17 Merck & Co., Inc. Nucleoside aryl phosphoramidates for the treatment of rna-dependent rna viral infection
US7964580B2 (en) 2007-03-30 2011-06-21 Pharmasset, Inc. Nucleoside phosphoramidate prodrugs
GB0709791D0 (en) 2007-05-22 2007-06-27 Angeletti P Ist Richerche Bio Antiviral agents
CN101108870A (zh) 2007-08-03 2008-01-23 冷一欣 核苷磷酸酯类化合物及制备方法和应用
WO2009029844A1 (en) 2007-08-31 2009-03-05 The United States Of America, As Represented By The Secretary, Department Of Health And Human Services Compounds for inhibiting wip1, prodrugs and compositions thereof, and related methods
JO2778B1 (en) 2007-10-16 2014-03-15 ايساي انك Certain vehicles, installations and methods
US20090176732A1 (en) 2007-12-21 2009-07-09 Alios Biopharma Inc. Protected nucleotide analogs
US8227431B2 (en) 2008-03-17 2012-07-24 Hetero Drugs Limited Nucleoside derivatives
US20110269814A1 (en) 2008-03-26 2011-11-03 Alnylam Pharamaceuticals, Inc. 2'-f modified rna interference agents
EP2268288A4 (en) 2008-04-15 2012-05-30 Rfs Pharma Llc NUCLEOSIDE DERIVATIVES FOR THE TREATMENT OF CALICIVIRIDAE INFECTIONS, INCLUDING NOROVIRUS INFECTIONS
AP3237A (en) 2008-04-23 2015-04-30 Gilead Sciences Inc 1'-Substituted carba-nucleoside analogs for antiviral treatment
US8173621B2 (en) 2008-06-11 2012-05-08 Gilead Pharmasset Llc Nucleoside cyclicphosphates
KR20110036609A (ko) 2008-07-10 2011-04-07 프로시디온 리미티드 피페리디닐 ｇｐｃｒ 작용제
US20110229438A1 (en) 2008-10-09 2011-09-22 Anadys Pharmaceuticals, Inc. Method of inhibiting hepatitus c virus by combination of a 5,6-dihydro-1h-pyridin-2-one and one or more additional antiviral compounds
EP2376088B1 (en) * 2008-12-23 2017-02-22 Gilead Pharmasset LLC 6-O-Substituted-2-amino-purine nucleoside phosphoramidates
NZ593649A (en) 2008-12-23 2013-11-29 Gilead Pharmasset Llc Nucleoside analogs
AU2009329872B2 (en) 2008-12-23 2016-07-07 Gilead Pharmasset Llc Synthesis of purine nucleosides
CA2748792A1 (en) 2009-01-07 2010-07-15 Samuel Earl Hopkins Combination of a cyclosporine derivative and nucleosides for treating hcv
JP2012514657A (ja) 2009-01-09 2012-06-28 ユニバーシテイ・カレツジ・オブ・カーデイフ・コンサルタンツ・リミテツド ウィルス感染を治療するためのグアノシンヌクレオシド化合物のホスホルアミダート誘導体
US8618076B2 (en) 2009-05-20 2013-12-31 Gilead Pharmasset Llc Nucleoside phosphoramidates
TWI583692B (zh) 2009-05-20 2017-05-21 基利法瑪席特有限責任公司 核苷磷醯胺
SI2480552T1 (sl) 2009-09-21 2017-02-28 Gilead Sciences, Inc. 2'-fluoro substituirani karba-nukleozidni analogi za protivirusno obravnavo
UY33310A (es) * 2010-03-31 2011-10-31 Pharmasset Inc Sintesis estereoselectiva de activos que contienen fosforo
JP2013527145A (ja) * 2010-03-31 2013-06-27 ギリード・ファーマセット・エルエルシー リン含有活性化剤の立体選択的合成
PL3290428T3 (pl) 2010-03-31 2022-02-07 Gilead Pharmasset Llc Tabletka zawierająca krystaliczny (S)-2-(((S)-(((2R,3R,4R,5R)-5-(2,4-diokso-3,4-dihydropirymidyn-1(2H)-ylo)-4-fluoro-3-hydroksy-4-metylotetrahydrofuran-2-ylo)metoksy)(fenoksy)fosforylo)amino)propanian izopropylu
US20120107278A1 (en) 2010-10-29 2012-05-03 Pharmasset, Inc. Abbreviated hcv therapy for hcv infected patients with il28b c/c genotype
US20130109647A1 (en) 2011-10-31 2013-05-02 Gilead Pharmasset Llc Methods and compositions for treating hepatitis c virus
US8889159B2 (en) 2011-11-29 2014-11-18 Gilead Pharmasset Llc Compositions and methods for treating hepatitis C virus
EP2828277A1 (en) 2012-03-21 2015-01-28 Vertex Pharmaceuticals Incorporated Solid forms of a thiophosphoramidate nucleotide prodrug

Also Published As

Publication number Publication date
SG10201708263SA (en) 2017-11-29
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EA026731B1 (ru) 2017-05-31
US8642756B2 (en) 2014-02-04
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MY176918A (en) 2020-08-26
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TW201107341A (en) 2011-03-01
KR20140147144A (ko) 2014-12-29
PH12014502684B1 (en) 2016-02-10
SI2432792T1 (sl) 2016-09-30
JP2015028060A (ja) 2015-02-12
WO2010135569A1 (en) 2010-11-25
KR20120034662A (ko) 2012-04-12
NZ709926A (en) 2016-11-25
BRPI1012781A2 (pt) 2016-07-12
CA2819700C (en) 2016-03-22
HK1213572A1 (zh) 2016-07-08
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KR101599183B1 (ko) 2016-03-03
US20100298257A1 (en) 2010-11-25
EA201370186A1 (ru) 2015-02-27
US20130165401A1 (en) 2013-06-27
JP2012527477A (ja) 2012-11-08
ZA201108749B (en) 2013-05-29
EP2432792B1 (en) 2016-07-06
IL216492A0 (en) 2012-01-31
CN102459299A (zh) 2012-05-16
TWI576352B (zh) 2017-04-01
CN102459299B (zh) 2015-09-30
AR082937A1 (es) 2013-01-23
US9637512B2 (en) 2017-05-02
HK1254977A1 (zh) 2019-08-02
IL216492A (en) 2015-06-30
TWI598358B (zh) 2017-09-11
HK1213571A1 (zh) 2016-07-08
AU2010249481A1 (en) 2011-12-15
JP5909535B2 (ja) 2016-04-26
CA2915187A1 (en) 2010-11-25
US9206217B2 (en) 2015-12-08
US8633309B2 (en) 2014-01-21
ES2927501T3 (es) 2022-11-07
PT2913337T (pt) 2017-11-28
DK2432792T3 (en) 2016-10-03
JP6355605B2 (ja) 2018-07-11
IL239115A (en) 2016-07-31
IL237471A (en) 2016-10-31
EA028742B1 (ru) 2017-12-29
HRP20160958T1 (hr) 2016-10-07
CN105085592A (zh) 2015-11-25
EP2610264A2 (en) 2013-07-03
CA2763151A1 (en) 2010-11-25
US8629263B2 (en) 2014-01-14
PT2432792T (pt) 2016-08-18
NZ596635A (en) 2014-05-30
JP5885659B2 (ja) 2016-03-15
JP2016053045A (ja) 2016-04-14
CO6470789A2 (es) 2012-06-29
SMT201600316B (it) 2016-11-10
EA201171417A1 (ru) 2012-05-30
US20180044367A1 (en) 2018-02-15
EA028709B1 (ru) 2017-12-29
KR20150043553A (ko) 2015-04-22
HUE031637T2 (en) 2017-07-28
CA2988217A1 (en) 2010-11-25
EP2432792A1 (en) 2012-03-28
LT2432792T (lt) 2016-09-26
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