ES2287772T3

ES2287772T3 - Sintesis regioselectiva de cci-779.

Info

Publication number: ES2287772T3
Application number: ES04778398T
Authority: ES
Inventors: Warren Chew; Chia-Cheng Shaw
Original assignee: Wyeth LLC
Current assignee: Wyeth LLC
Priority date: 2003-08-07
Filing date: 2004-07-15
Publication date: 2007-12-16
Anticipated expiration: 2024-07-15
Also published as: RU2006106910A; TW200508241A; BRPI0412667A; PT1658295E; AR045217A1; CA2532988A1; NO20060494L; WO2005016935A3; DE602004007145D1; DE602004007145T2; JP2007501783A; KR20060057605A; CN1829722B; AU2004265267A1; WO2005016935A2; CR8189A; US20050033046A1; ZA200601055B; ATE365169T1; CN1829722A

Abstract

Procedimiento para la preparación de un 42-éster de rapamicina, que comprende: (a) acilar un éter 31-silílico de rapamicina con un compuesto de fórmula HOOC.CR7R8R9 o un anhídrido mixto del mismo, en el que: R7 es hidrógeno, alquilo de 1-6 átomos de carbono, alquenilo de 2-7 átomos de carbono, alquinilo de 2-7 átomos de carbono, -(CR12R13)fOR10, -CF3, -F, o -CO2R10; R10 es hidrógeno, alquilo de 1-6 átomos de carbono, alquenilo de 2-7 átomos de carbono, alquinilo de 2-7 átomos de carbono, trifenilmetilo, bencilo, alcoximetilo de 2-7 átomos de carbono, cloroetilo o tetrahidropiranilo; R8 y R9 forman juntos X; X es un 2-fenil-1, 3, 2-dioxaborinan-5-ilo o un 2-fenil-1, 3, 2-dioxaborinan-4-ilo, en los que el fenilo puede estar opcionalmente sustituido; R12 y R13 son, cada uno independientemente, hidrógeno, alquilo de 1-6 átomos de carbono, alquenilo de 2-7 átomos de carbono, alquinilo de 2-7 átomos de carbono, trifluorometilo, o -F; y f = 0-6; para dar lugar a un 42-éster con boronato, éter 31-silílico de rapamicina; (b) hidrolizar selectivamente el 42-éster con boronato, éter 31-silílico en condiciones ácidas suaves, para proporcionar un 42-éster de rapamicina con boronato; y (c) tratar el 42-éster de rapamicina con boronato con un diol adecuado, para proporcionar un 42-éster de rapamicina.

Description

Síntesis regioselectiva de CCI-779.

Antecedentes de la invención

La presente invención se refiere a la síntesis regioselectiva de CCI-779, que resulta útil como agente antineoplásico.

El 42-éster de rapamicina con ácido 3-hidroxi-2-(hidroximetil)-2-metilpropiónico (CCI-779) es un éster de rapamicina que ha demostrado tener significativos efectos inhibidores del crecimiento de tumores tanto en modelos in vitro como in vivo.

El CCI-779 puede retrasar el tiempo hasta la progresión de los tumores o el tiempo hasta la recidiva del tumor, que es un efecto más típico de agentes citostáticos, en vez de citotóxicos. Se considera que el CCI-779 tiene un mecanismo de acción similar al del sirolimús. El CCI-779 se une a la proteína citoplásmica FKBP, con la que forma un complejo que inhibe la enzima mTOR (la diana de la rapamicina en los mamíferos, también denominada proteína asociada a FKBP12-rapamicina [FRAP]). La inhibición de la actividad quinasa de mTOR provoca la inhibición de diversas rutas de transducción de señales, incluidas la proliferación celular estimulada por citocinas, la traducción de los ARNm de varias proteínas fundamentales para la regulación de la fase G1 del ciclo celular, y la transcripción inducida por IL-2, dando lugar a una inhibición de la progresión del ciclo celular de G1 a S. El mecanismo de acción del CCI-779 que provoca el bloqueo de la transición de la fase G1 a S es nuevo en un fármaco antineoplásico.

En los estudios in vitro, el CCI-779 ha demostrado inhibir el crecimiento de varias células tumorales de diversos tipos histológicos. Entre las líneas más sensibles a CCI-779 se encontraban las del cáncer del sistema nervioso central (SNC), leucemia (de células T), cáncer de mama, cáncer de próstata y melanoma. El compuesto detenía las células en la fase G1 del ciclo celular.

Los estudios in vivo en ratones atímicos han demostrado que el CCI-779 presenta actividad frente a xenoinjertos de tumores humanos de diversos tipos histológicos. Los gliomas fueron particularmente sensibles al CCI-779, y el compuesto era activo en un modelo de glioma ortotópico en ratones atímicos. La estimulación, provocada por el factor de crecimiento (derivado de plaquetas), de una línea celular de glioblastoma humano in vitro resultó notablemente inhibida por CCI-779. El crecimiento de varios tumores pancreáticos humanos en ratones atímicos, así como una de dos líneas celulares de cáncer de mama estudiadas in vivo, resultó también inhibido por CCI-779.

La preparación y la utilización de hidroxiésteres de rapamicina, incluido CCI-779, se describen en la patente US nº 5.362.718. En la patente US nº 6.277.983 se describe una síntesis regioespecífica de CCI-779.

El CCI-779 puede sintetizarse por acilación no regioselectiva de la rapamicina, como se describe en la patente US nº 5.362.718. No obstante, la síntesis se complica por las mezclas del 42-éster deseado con rapamicina esterificada en la posición 31, así como rapamicina diesterificada en las posiciones 31 y 42, y rapamicina no reaccionada.

El CCI-779 también puede prepararse por acilación del éter 31-silílico de rapamicina con un cetal del ácido bis-(hidroximetil)propiónico, seguido por la eliminación del éter 31-silílico y grupo protector del cetal del ácido bis-(hidroximetil)propiónico, como se describe en la patente US nº 6.277.983. Sin embargo, el 42-monoéster crudo producido a partir de esta síntesis regioselectiva requiere purificación adicional por cromatografía en columna para eliminar cantidades residuales de los productos secundarios de diéster y del material de partida de rapamicina no
reaccionada.

Sumario de la invención

La presente invención proporciona una síntesis regioselectiva del 42-éster de rapamicina con ácido 3-hidroxi-2-(hidroximetil)-2-metilpropiónico (CCI-779) basada en técnicas químicas con ácido borónico. La presente invención resuelve la complejidad y la purificación, a menudo laboriosa, del 42-monoéster de rapamicina obtenido utilizando los métodos anteriores.

Otros aspectos y ventajas de la presente invención se reconocerán fácilmente a partir de la siguiente descripción detallada de la invención.

Descripción detallada de la invención

La presente invención proporciona una síntesis regioselectiva de un 42-éster de rapamicina mediante la acilación de un éter 31-silílico de rapamicina con un compuesto de fórmula

HOOC.CR^{7}R^{8}R^{9}

o un anhídrido mixto del mismo, en el que:

R^{7} es hidrógeno, alquilo de 1-6 átomos de carbono, alquenilo de 2-7 átomos de carbono, alquinilo de 2-7 átomos de carbono, -(CR^{12}R^{13})_{f}OR^{10}, -CF_{3}, -F, o -CO_{2}R^{10};

R^{10} es hidrógeno, alquilo de 1-6 átomos de carbono, alquenilo de 2-7 átomos de carbono, alquinilo de 2-7 átomos de carbono, trifenilmetilo, bencilo, alcoximetilo de 2-7 átomos de carbono, cloroetilo o tetrahidropiranilo;

R^{8} y R^{9} forman juntos X;

X es 2-fenil-1,3,2-dioxaborinan-5-ilo o 2-fenil-1,3,2-dioxaborinan-4-ilo, en los que el fenilo puede estar opcionalmente sustituido;

R^{12} y R^{13} son, cada uno independientemente, hidrógeno, alquilo de 1-6 átomos de carbono, alquenilo de 2-7 átomos de carbono, alquinilo de 2-7 átomos de carbono, trifluorometilo, o -F; y

f = 0-6; para dar lugar a un 42-éster con boronato, éter 31-silílico de rapamicina.

A continuación, el éter 31-silílico de rapamicina, 42-boronato, se hidroliza en condiciones ácidas suaves para formar un 42-éster de rapamicina con boronato. El 42-éster de rapamicina con boronato se trata con un diol adecuado. El procedimiento permite la preparación de un 42-éster de rapamicina regioespecífico.

La preparación, aislamiento y purificación de un 42-éster de rapamicina a partir de un éter silílico de rapamicina según el método de la invención comprende una reacción de trans-boronación en la que el radical fenilboronato del compuesto se transfiere a un diol. Una precipitación del 42-éster de rapamicina en éter:heptanos sigue a dicha trans-boronación. La ruta de síntesis de la presente invención ofrece varias ventajas claras respecto a la metodología de síntesis publicada previamente para la preparación de ésteres o éteres de rapamicina, principalmente en lo relativo a la purificación, la reducción del coste de los productos, el aumento en la seguridad, el aumento en el rendimiento, y la reducción del tiempo en la planta. El método de la invención proporciona una nueva estrategia para la fabricación de 42-ésteres de rapamicina (por ejemplo, CCI-779). Se ha eliminado una etapa laboriosa de cromatografía utilizada previamente en todos los lotes a gran escala del CCI-779 ilustrado. La gran cantidad de disolvente necesario para la cromatografía descrita en la patente US nº 6.277.983 ha sido eliminada, con lo que se reduce el coste de los productos. El tiempo en el reactor de la planta y los recursos se reducen en un 50%. El tamaño del reactor necesario para la síntesis a gran escala de CCI-779 se reduce, con lo que aumenta el rendimiento global. El nuevo procedimiento de trans-boronación descrito en la presente invención reduce el tiempo global de elaboración. La purificación final en éter dietílico empleada en los métodos de síntesis previos ha sido asimismo eliminada con un procedimiento de purificación incorporado en la presente invención.

Según la invención, un éter 31-silílico de rapamicina se acila utilizando un compuesto de fórmula HOOC.CR^{7}R^{8}R^{9} o un anhídrido del mismo, como se ha definido anteriormente, para dar lugar a un 31-sililetil-, 42-éster de boronato. En una realización, se acila un éter 31-silílico de rapamicina utilizando un ácido 5-metil-2-boronato[1,3-dioxano]-5-carboxílico (ilustrado por el compuesto [A] en el Esquema 1 presentado más adelante) o un anhídrido mixto 2,4,6-triclorobenzoílico del ácido 5-metil-2-fenil-1,3,2-dioxoborinano-5-carboxílico.

Un método particularmente deseable para la preparación de éteres 31-silílicos de rapamicina se proporciona en la patente US nº 6.277.983. La invención no se limita a dicho método para la obtención de éteres 31-silílicos de rapamicina. Sin embargo, en la actualidad es preferido que el éter 31-silílico de rapamicina sea el éter 31-O-trimetilsilílico de rapamicina.

En una forma de realización, un éter 31-silílico de rapamicina se caracteriza por tener la fórmula:

1

en la que R se selecciona a partir de:

-O-C=O.CR^{7}R^{8}R^{9},

\hskip0.5cm

en el que:

R^{8} y R^{9} forman juntos X;

f = 0-6;

y en la que R', R'' y R''' son iguales o distintos, y se seleccionan a partir de alquilo de 1-6 átomos de carbono, fenilo y bencilo.

La presente invención proporciona el compuesto [A] como un nuevo compuesto útil para la producción de CCI-779 y de análogos del mismo. La preparación del compuesto [A] comprende mezclar un ácido fenilborónico con ácido 2,2-bis(hidroximetil)-propiónico a temperatura ambiente, para dar lugar a un fenilborinano. Los rendimientos típicos son > 90%. La reacción puede llevarse a cabo en cloruro de metileno, pero el disolvente preferido es tetrahidrofurano (THF).

Es deseable que el fenilborinano sea un ácido 2-fenil-1,3,2-dioxoborinano-5-carboxílico en el que el fenilo está opcionalmente sustituido. En otra realización, el fenilborinano es un 2-fenil-1,3,2-dioxaborinan-4-ilo, en el que el fenilo está opcionalmente sustituido. Una sustitución particularmente deseable del grupo fenilo es un alquilo, más preferiblemente un alquilo C_{1}, C_{2}, C_{3}, C_{4}, C_{5} o C_{6}. Pueden utilizarse otros ácidos aril- (incluido fenil-) borónicos en esta reacción, que incluyen ácidos arilborónicos mono, di- y tri-sustituidos, en los que los sustituyentes son iguales o distintos. Los sustituyentes del grupo arilo incluyen halógeno, alquilo, alcoxi, ariloxi (por ejemplo, fenoxi), aralquilo, nitro, ciano, fenilo fusionado tal como ácido naftalilborónico. El término alquilo, cuando se utiliza como un grupo o como parte de un grupo tal como alcoxi o aralquilo, incluye radicales de 1 a 12 átomos de carbono, por ejemplo, 1-6 átomos de carbono. El término arilo, como grupo o parte de un grupo, por ejemplo, aralquilo o ariloxi significa un grupo aromático, incluidos aquellos de 6-10 átomos de carbono, tales como fenilo o naftilo. El ácido arilborónico preferido es el ácido fenilborónico.

Brevemente, es preferible que la rapamicina esté bis-sililada en las posiciones 31 y 42 con cloruro de trimetilsililo, seguido por la desililación regioselectiva en la posición 42 con ácido sulfúrico diluido. El producto aislado se acila en la posición 42 con el anhídrido derivado del ácido 2-fenilboronato. Se añadió dimetilaminopiridina como catalizador para completar la reacción. La reacción requería \sim3 equivalentes de anhídrido mixto para consumir toda la 31-trimetilsilil-rapamicina. Tras el tratamiento de la reacción, la solución resultante se almacenó a 0 a 10ºC hasta su utilización en la etapa siguiente. Al reposar en solución de acetona, el producto se disociará para formar el compuesto [B]. Esto no representa un problema, ya que la siguiente etapa es la hidrólisis del grupo funcional sililo. Se logró una conversión casi completa (< 3%) a [B] después de 83 días en acetona a 0 hasta 10ºC.

La formación del anhídrido mixto puede seguirse por REACTIR (ASI Applied Systems). El sistema REACTIR (ASI Applied Systems) es un instrumento especialmente diseñado para el análisis in situ y en tiempo real de diversas reacciones químicas. Dado que el anhídrido mixto se forma a partir de un ácido carboxílico y un cloruro de ácido, la reacción es adecuada para su seguimiento por espectroscopía infrarroja (IR). La IR es un método potente para detectar la presencia de grupos funcionales carbonilo y, en el caso de REACTIR, para el seguimiento de la aparición o desaparición de grupos funcionales carbonilo. En un procedimiento típico de REACTIR (ASI Applied Systems), el compuesto [A] se mezcló con diisopropiletilamina en cloruro de metileno y se enfrió hasta 0-5ºC en un baño de hielo. Se obtuvo un espectro IR que servía de espectro de fondo. Después se añadió cloruro de 2,4,6-triclorobenzoílo. Se obtuvo una segunda imagen del espectro de IR que servía como espectro a T = 0 min (es decir, el comienzo de la reacción). El experimento estaba configurado para obtener un espectro IR cada 5 min durante 5 h manteniendo la temperatura del baño a 0 a 5ºC. Las bandas características principales fueron 1818 cm^{-1}, 1741 cm^{-1} y 1031 cm^{-1}. Cuando se añadió el cloruro de ácido a la mezcla del compuesto [A] y diisopropiletilamina (T= 0 min) el espectro no presentó prácticamente ninguna señal de picos. Sin embargo, las regiones de frecuencia de carbonilo y de anhídrido (C-O-C) habían aumentado con el tiempo, lo que indicaba la formación del anhídrido mixto.

La reacción del anhídrido mixto puede llevarse a cabo en acetato de etilo, éter t-butil-metílico, éter dietílico y tetrahidrofurano (THF), pero las reacciones son más lentas. El disolvente preferido es cloruro de metileno, debido a la facilidad con la que se completa la reacción. La DMAP es el catalizador básico preferido para esta reacción. Otras bases que pueden utilizarse son 4-pirrolidinopiridina, N-metil-imidazol y piridina.

El anhídrido mixto es una especie inestable y se prepara in situ a bajas temperaturas. Es estable hasta 48 h a -5 a 0ºC. Puede prepararse desde -50 a 20ºC, pero el intervalo de temperatura preferido es de -6 a 5ºC. El anhídrido mixto se deja reposar hasta 8 h antes de la reacción de acoplamiento. El tiempo de retención preferido es de 4 a 5 h antes de la adición del componente de 31-trimetilsilil (TMS) -rapamicina que participa en el acoplamiento.

La reacción de acoplamiento puede llevarse a cabo desde -20 a 20ºC, pero el intervalo temperatura preferido es -11 a -5ºC. A temperaturas superiores la reacción se hace más lenta y son necesarias cargas adicionales del anhídrido mixto para que se complete. A temperaturas inferiores el anhídrido mixto es más estable, aunque el tiempo de reacción es más prolongado. La reacción se completa generalmente en el plazo de 12 a 17 h.

El compuesto [B] se preparó, aisló y purificó en una secuencia de reacción de tres etapas en un recipiente. El elemento clave en esta reacción fue la selección de acetona como disolvente. Otros disolventes que pueden utilizarse en esta preparación incluyen éter dietílico, acetonitrilo, acetato de etilo, THF, éter t-butil-metílico y cloruro de metileno. En la actualidad el disolvente preferido es la acetona.

De este modo, el 31-trimetilsilil CCI-779 boronato, [D], se disuelve en acetona en forma de concentrado. Sin embargo, en ciertas realizaciones, la hidrólisis puede llevarse cabo utilizando un sistema de una sola fase con ácido acuoso/disolvente orgánico.

La hidrólisis del grupo 31-trimetilsililo (para proporcionar [B]) se lleva cabo en condiciones ácidas suaves. De este modo, el disolvente orgánico seleccionado (por ejemplo, acetona) se mezcla con un ácido inorgánico diluido tal como, por ejemplo, ácido sulfúrico, clorhídrico o fosfórico. Los ejemplos de concentraciones adecuadas de ácidos inorgánicos diluidos adecuados van desde aproximadamente 0,1 N hasta aproximadamente 3 N, aproximadamente 0,2 N hasta aproximadamente 2 N, o aproximadamente 0,5 N. Típicamente, esta etapa se lleva a cabo a una temperatura comprendida entre aproximadamente 25ºC o inferior, entre aproximadamente -5ºC y aproximadamente 10ºC, o entre aproximadamente 0ºC y aproximadamente 5ºC. Es preferible que esta etapa se lleve a cabo a un pH comprendido entre 5 y 6. Opcionalmente, se añade un tampón adecuado, por ejemplo, acetato de sodio, o en presencia de bicarbonato de sodio y/o ácido acético, a la mezcla para ajustar o mantener el pH en el intervalo deseado.

En los ejemplos presentados más adelante la reacción de hidrólisis utiliza ácido sulfúrico 0,5 N a 0 hasta 5ºC. La reacción se completa típicamente en 5 a 6 horas, y el compuesto [B] se obtuvo fácilmente mediante una simple filtración. Sin embargo, la utilización de reactivos con base de fluoruro para eliminar el grupo 31-trimetilsililo no es preferida, ya que se forman productos de descomposición.

El éster 42-boronato de rapamicina es un nuevo intermediario útil en el método de la invención para la preparación de un 42-éster de rapamicina. En una realización, el intermediario es 42-éster de rapamicina con ácido 5-metil-2-fenil-1,3,2-dioxaborinato-5-carboxílico.

En una forma de realización, la invención proporciona un compuesto de 42-éster de rapamicina con boronato de fórmula 1:

2

en el que R se selecciona a partir de:

-O-C=O.CR^{7}R^{8}R^{9};

\hskip0.5cm

en el que

R^{8} y R^{9} forman juntos X;

f = 0-6.

En esta etapa del método de la invención, el 42-éster de rapamicina con boronato preparado según el método de la invención está presente generalmente en forma de isómeros B y C del compuesto. [Estos dos isómeros del compuesto [B] presentado como ejemplo se ilustran más adelante.] En esta etapa, la relación de isómeros B:C es normalmente < 10:1. Los inventores han comprobado que el isómero B es más cristalino que el isómero C, y es menos soluble en acetona que el isómero C. Con el objeto de aprovechar estas propiedades los inventores han demostrado que en tampón de acetato de sodio a un pH 5 a 6, la relación de isómeros B:C puede aumentarse por encima de 20:1. Cuando se aumenta esta relación puede incrementarse la recuperación del compuesto [B]. De este modo, es deseable aumentar la relación de isómeros B:C hasta por lo menos 1:1, más preferiblemente por encima de 5:1, por encima de 10:1, por encima de 15:1, por encima de 20:1, y lo más preferiblemente hasta aproximadamente 25:1. Se añadió bicarbonato de sodio para neutralizar el ácido sulfúrico y ajustar el pH hasta 7 a 8. Después se añadió ácido acético para formar acetato de sodio y bajar el pH hasta 5 a 6. Después de mantener la mezcla de reacción durante 16 h, la relación de isómeros es \sim25:1.
Pueden utilizarse otros tampones tales como acetato de potasio y acetato de cinc, pero el preferido es acetato de sodio.

3

La mezcla se filtró, se lavó y se secó, para dar lugar al compuesto [B] crudo. Los licores madre contienen predominantemente el isómero C, los productos secundarios bis-éster y otras impurezas desconocidas relacionadas con el material de partida de rapamicina cruda cristalina.

Para facilitar la obtención de un producto limpio, es esencial en esta etapa controlar el nivel de rapamicina en el compuesto [B] crudo. El contenido de rapamicina es típicamente \sim5% (% de área) a juzgar por la cromatografía de líquidos de alta eficacia (HPLC). Las recristalizaciones disminuyen el contenido de rapamicina hasta < 0,7%. La purificación en disolventes adecuados tales como acetona podría reducir los niveles de rapamicina. El compuesto [B], como se ilustra en el esquema, es un sólido blanco en polvo, que es estable a temperatura ambiente.

La reacción puede llevarse a cabo en un disolvente tal como un disolvente de éter o, preferiblemente, THF, diluyendo la mezcla de reacción con éter t-butil-metílico o tolueno, y aplicando un método de extracción acuosa para eliminar el exceso de diol y productos secundarios de diol-boronato. Tanto el diol como el diol-boronato son hidrosolubles. El método preferido elimina la extracción acuosa. El método preferido implica una simple etapa de filtración. El procedimiento comprende disolver el compuesto [B] en THF, éter t-butil-metílico o acetonitrilo, añadir el diol y mezclar a temperatura ambiente durante 3 h. El disolvente se destiló para proporcionar la mezcla de reacción en forma de espuma/aceite. Se añadió éter y el producto se coprecipitó con heptanos. El procedimiento puede repetirse para producir CCI-779 con un rendimiento del 80% al 90% del compuesto [B].

El tratamiento inicial con diol elimina la mayor parte del ácido fenilborónico en la mezcla de reacción. Las cantidades residuales de ácido fenilborónico que estén todavía presentes se eliminan fácilmente con un tratamiento adicional con diol. El compuesto final [C] que resulta de este procedimiento muestra un contenido aceptable de ácido fenilborónico. Puede utilizarse el exceso de diol en el tratamiento de transboronación, pero la cantidad preferida es de 1 a 5 equivalentes molares. El rendimiento obtenido de esta reacción de trans-boronación fue 86%. El rendimiento global a partir de rapamicina fue 47% a 50%.

Pueden utilizarse diversos 1,2-, 1,3-, 1,4- y 1,5-dioles para llevar a cabo dicha transboronación. Los dioles sustituidos con alquilo son preferibles, tales como 2-metil-2,4-pentanodiol. También fueron útiles la dietanolamina o el poliestireno-dietanolamina (PS-DEAM) en soporte sólido. La transboronación también puede lograrse utilizando reactivos de ácidos carboxílicos, tales como ácido oxálico, malónico, tartárico, ftálico y salicílico. El ácido 2,2-bis(hidroximetil)propiónico fue eficaz, pero no pudo eliminarse del producto final.

El procedimiento se ilustra en el esquema siguiente. Dicho esquema se presenta exclusivamente a título ilustrativo, y no supone una limitación de la invención.

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Preparación del ácido 5-metil-2-fenil-1,3,2-dioxaborinano-5-carboxílico, [A]

A una suspensión de ácido 2,2-bis(hidroximetil)propiónico (131 g, 0,98 mol) en tetrahidrofurano (500 ml) se le añadió una solución de ácido fenilborónico (122 g, 1,0 mol) en tetrahidrofurano (500 ml). La mezcla se agitó durante 3 h y se añadió tolueno (1,0 l). El agua se eliminó por destilación azeotrópica con tolueno. Se añadieron heptanos (500 ml) al producto precipitado, se calentó hasta reflujo, y se enfrió. La mezcla se filtró y se lavó con heptanos (2 x 300 ml). Los sólidos se secaron en vacío a 70-75ºC hasta obtener un peso constante, para dar lugar a un rendimiento del 94%. ^{1}H RMN: \delta (DMSO-d_{6}) 7,65 (d, 2H, Ar), 7,40 (m, 3H, Ar), 4,35 (d, 2H, CH_{2}), 3,92 (d, 2H,CH_{2}), 1,17 (s, 3H, CH_{3}).

Preparación del 42-éster de rapamicina con ácido 5-metil-2-fenil-1,3,2-dioxaborinano-5-carboxílico, [B]

Como se describe en la patente US nº 6.277.983 (2001), en un matraz de 3 l se introdujo rapamicina (100 g, 0,104 mol) y se disolvió en acetato de etilo (1,50 l). La solución se enfrió hasta 5-10ºC. Se añadió imidazol (30 g, 0,44 mol, 4,23 eq) y se disolvió. En atmósfera de nitrógeno se añadió cloruro de trimetilsililo (44 g, 0,405 mol, 4,0 eq) durante 30-40 min mientras se mantenía la temperatura a 0-5ºC durante la adición. La mezcla se mantuvo durante un mínimo de 0,5 h. La reacción se controló por TLC (eluyente de acetona:heptano 30:70). La reacción se completó cuando se consumió toda la rapamicina.

Se extrajeron dos a tres gotas de la mezcla de reacción y se conservaron como patrón de referencia de 31,42-bis(trimetilsilil)rapamicina. Se añadió ácido sulfúrico 0,5 N (300 ml) al matraz de 3 l durante 0,5 h, manteniendo la temperatura a 0-5ºC. La mezcla se agitó vigorosamente y se mantuvo durante 5 h. La reacción se controló por cromatografía en capa fina (TLC) (eluyente de acetona:heptano 30:70). La reacción se completó cuando prácticamente ya no había más 31,42-bis(trimetilsilil)rapamicina presente. Las capas se separaron y la capa acuosa inferior se extrajo de nuevo con acetato de etilo (500 ml). Las capas orgánicas combinadas se lavaron con salmuera saturada (500 ml) y bicarbonato de sodio saturado (2 x 200 ml) hasta que se alcanzó pH 8. La capa orgánica se lavó con agua (2 x 500 ml) y salmuera (500 ml) hasta que se alcanzó un pH 6 a 7. La solución se secó con sulfato de magnesio (100 g) durante 30 min, se filtró en un matraz de 2 l, y se concentró hasta un volumen de 135 ml. Se añadió acetato de etilo (500 ml) y se concentró hasta un volumen de 135 ml. La eliminación de agua se repitió una vez más con acetato de etilo (500 ml). Se añadió cloruro de metileno (300 ml) y la solución se mantuvo hasta su utilización en la siguiente etapa.

En un matraz de 3 l equipado con un agitador mecánico se introdujo el compuesto [A] (75 g, 0,341 mol) en cloruro de metileno (400 ml). Se añadió diisopropiletilamina (66,1 g, 0,51 mol) gota a gota durante 20 min, y se lavó con cloruro de metileno (25 ml). Se añadió cloruro de 2,4,6-triclorobenzoílo (80 g, 0,328 mol) y se lavó con cloruro de metileno (25 ml). La mezcla se mantuvo a 0-5ºC durante 4 h, y se enfrió hasta -10 \pm 5ºC.

La solución de 31-trimetilsilil-rapamicina se añadió al matraz de 3 l que contenía el anhídrido mixto, y se lavó con cloruro de metileno (25 ml). Se preparó una solución de dimetilamino-piridina (48,5 g, 0,397 mol) en cloruro de metileno (150 ml), que se añadió durante 1,5 h, manteniendo la temperatura < -8ºC, y se lavó con cloruro de metileno (25 ml). La mezcla se mantuvo durante 12 h a -11 a -5ºC. La mezcla de reacción se desactivó con ácido sulfúrico 1 N (600 ml) manteniendo la temperatura < 10ºC. La mezcla se agitó y se mantuvo durante 30 min. El pH de la capa acuosa superior era < 2. Las capas se separaron, y las capas orgánicas inferiores se lavaron con salmuera (450 ml), bicarbonato de sodio saturado (500 ml) hasta alcanzar pH \geq 8. la capa orgánica se lavó con agua (450 ml) hasta alcanzar pH 6-7. La solución se concentró, se le añadió acetona (250 ml) y se concentró. Esta etapa se repitió con otra porción de acetona (250 ml), y se concentró.

La solución se diluyó con acetona. Se añadió ácido sulfúrico 0,5 N (500 ml) gota a gota durante 30 min manteniendo la temperatura del recipiente a 0-5ºC. La mezcla se mantuvo durante un mínimo de 5 h, y durante ese tiempo el producto precipitó de la solución. Se añadió bicarbonato de sodio acuoso (30 g en 375 ml de agua) gota a gota durante 30 minutos, manteniendo la temperatura del recipiente a 0 hasta 5ºC; la mezcla se mantuvo durante un mínimo de 30 minutos. Se añadió ácido acético (25 ml) hasta obtener un pH de 5-6, manteniendo la temperatura del recipiente a
< 10ºC. La mezcla se calentó hasta la temperatura ambiente y se mantuvo durante 16 h. El producto sólido se filtró y se lavó con agua (2 x 100 ml), seguido por acetona:agua 1:1 (2 x 100 ml). La pasta se purificó en acetona (375 ml), para dar lugar a 65 g (rendimiento global del 58% a partir de rapamicina) del producto [B]. CL/EM: la utilización de una interfaz con electronebulización en modo de ion positivo dio lugar a un ion molecular [M + Na] = 1138,5 unidades de masa atómica (uma).

Preparación del 42-éster de rapamicina con ácido 2,2-bis(hidroximetil)-propiónico, [C]

El compuesto [B] (200 g, 0,179 mol), se disolvió en tetrahidrofurano (600 ml), se le añadió 2-metil-2,4-pentanodiol (42,3 g, 0,358 mol, 2,0 eq) y la mezcla se agitó durante un mínimo de 3 h. La mezcla de reacción se concentró hasta obtener una espuma. Se añadió éter dietílico (1,0 l) y la mezcla se agitó durante 2 h. Se añadieron heptanos (1,0 l) gota a gota durante 1 h y la mezcla se agitó durante 2 h. La mezcla se filtró y el producto sólido se lavó con heptanos (500 ml). Los sólidos se disolvieron de nuevo en acetona (400 ml), se trataron otra vez con 2-metil-2,4-pentanodiol (21,1 g, 0,179 mol, 1 eq) en acetona (200 ml), se aclararon a través de un cartucho de filtro de 0,2 micrómetros, y se lavaron con acetona (200 ml). La solución se concentró hasta obtener una espuma, se añadió éter dietílico (1,0 l), previamente filtrado a través de un cartucho de filtro de 0,2 micrómetros, y la mezcla se agitó durante 2 h. La mezcla se coprecipitó añadiendo heptanos previamente filtrados (1,0 l). Los sólidos precipitados se filtraron y se lavaron con éter:heptano (2 x 500 ml). Los sólidos se secaron (55 a 60ºC, 10 mm Hg, durante un mínimo de 24 h), para dar lugar a 159 g (86%) del producto [C]. CL/EM: la utilización de APCI en el modo de ion positivo dio lugar a un ion molecular [M +NH_{4}] = 1047,0 uma. El análisis por ^{1}H RMN del producto (CCI-779) resultó idéntico al producto del ejemplo 11 de la patente US nº 5.362.718 (1994).

Todas las patentes, solicitudes de patente, artículos y otros documentos citados en la presente memoria se incorporan a la misma a título de referencia. El experto en la materia apreciará que se pueden realizar modificaciones a las formas de realización específicas descritas en la presente memoria sin apartarse del alcance de la invención.

Claims

1. Procedimiento para la preparación de un 42-éster de rapamicina, que comprende:

(a) acilar un éter 31-silílico de rapamicina con un compuesto de fórmula

HOOC.CR^{7}R^{8}R^{9}

o un anhídrido mixto del mismo,

en el que:

R^{8} y R^{9} forman juntos X;

X es un 2-fenil-1,3,2-dioxaborinan-5-ilo o un 2-fenil-1,3,2-dioxaborinan-4-ilo, en los que el fenilo puede estar opcionalmente sustituido;

f = 0-6;

para dar lugar a un 42-éster con boronato, éter 31-silílico de rapamicina;

(b) hidrolizar selectivamente el 42-éster con boronato, éter 31-silílico en condiciones ácidas suaves, para proporcionar un 42-éster de rapamicina con boronato; y

(c) tratar el 42-éster de rapamicina con boronato con un diol adecuado, para proporcionar un 42-éster de rapamicina.

2. Procedimiento según la reivindicación 1, en el que el 42-éster de rapamicina preparado es CCI-779, y en el que dicha etapa de acilación (a) comprende acilar un éter 31-silílico de rapamicina con ácido 5-metil-2-fenil-1,3,2-dioxaborinano-5-carboxílico o un anhídrido mixto del ácido 5-metil-2-fenil-1,3,2-dioxaborinano-5-carboxílico, para dar lugar a un éter 31-O-silílico de rapamicina, 42-éster con boronato.

3. Procedimiento según la reivindicación 1 ó 2, en el que el éter 31-silílico tiene la fórmula

-OSiR'R''R'''

en la que R', R'' y R''' son iguales o distintos, y se seleccionan de entre alquilo de 1-6 átomos de carbono, fenilo y bencilo.

4. Procedimiento según cualquiera de las reivindicaciones 1 a 3, en el que el éter 31-silílico de es un éter trimetilsilílico.

5. Procedimiento según cualquiera de las reivindicaciones 1 a 4, en el que la etapa de acilación (a) se lleva a cabo con ácido 5-metil-2-fenil-1,3,2-dioxaborinano-5-carboxílico.

6. Procedimiento según cualquiera de las reivindicaciones 1 a 4, en el que la etapa de acilación (a) se lleva a cabo utilizando el anhídrido mixto 2,4,6-triclorobenzoílico del ácido 5-metil-2-fenil-1,3,2-dioxaborinano-5-carboxílico.

7. Procedimiento según cualquiera de las reivindicaciones 1 a 6, que se lleva a cabo a una temperatura comprendida entre aproximadamente -50ºC y aproximadamente 20ºC.

8. Procedimiento según cualquiera de las reivindicaciones 1 a 7, en el que el ácido en la etapa (b) es un ácido inorgánico diluido.

9. Procedimiento según la reivindicación 7 o la reivindicación 8, en el que el ácido utilizado en la etapa (b) es desde aproximadamente 0,1 N hasta aproximadamente 3 N.

10. Procedimiento según cualquiera de las reivindicaciones 1 a 9, en el que la etapa (b) se lleva a cabo en un sistema de una sola fase de ácido acuoso/disolvente orgánico.

11. Procedimiento según cualquiera de las reivindicaciones 1 a 10, en el que la etapa (b) se lleva a cabo a una temperatura comprendida entre aproximadamente -5ºC y aproximadamente 10ºC.

12. Procedimiento según cualquiera de las reivindicaciones 1 a 11, en el que el diol utilizado en la etapa (c) es un 1,2-, 1,3-, 1,4- o 1,5-diol.

13. Procedimiento según cualquiera de las reivindicaciones 1 a 12, en el que el diol en la etapa (c) se utiliza en una cantidad comprendida entre aproximadamente 1 y aproximadamente 5 equivalentes molares.

14. Procedimiento según cualquiera de las reivindicaciones 1 a 13, en el que la etapa (c) se lleva a cabo a una temperatura comprendida entre aproximadamente -5ºC y aproximadamente +25ºC.

15. Procedimiento según cualquiera de las reivindicaciones 1 a 14, en el que la etapa (c) se lleva a cabo en presencia de disolvente de tetrahidrofurano.

16. Procedimiento según cualquiera de las reivindicaciones 1 a 14, que se lleva a cabo en presencia de disolvente de éter.

17. Procedimiento según la reivindicación 1, en el que el éter 31-O-silílico de rapamicina, 42-éster con boronato tiene la fórmula:

5

en la que R es -O-C=O.CR^{7}R^{8}R^{9},

\hskip0.5cm

en el que:

R^{8} y R^{9} forman juntos X;

f = 0-6.

18. Procedimiento según la reivindicación 1, en el que el éster 42-boronato de rapamicina tiene la fórmula:

6

en la que R es -O-C=O.CR^{7}R^{8}R^{9},

\hskip0.5cm

en el que:

R^{8} y R^{9} forman juntos X;

f = 0-6.

19. Procedimiento para la preparación de un compuesto de fórmula:

\vskip1.000000\baselineskip

7

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que comprende tratar un éter 31-silílico, éster 42-boronato de rapamicina con un diol adecuado.

20. Procedimiento según la reivindicación 19, en el que el diol utilizado es un 1,2-, 1,3-, 1,4-, o 1,5-diol.

21. Procedimiento según la reivindicación 19 o la reivindicación 20, en el que el diol es 2-metil-2,4-pentano-diol.

22. Procedimiento según cualquiera de las reivindicaciones 19 a 21, en el que el diol se utiliza en una cantidad comprendida entre aproximadamente 1 y aproximadamente 5 equivalentes molares.

23. Procedimiento según cualquiera de las reivindicaciones 19 a 22, que se lleva a cabo a una temperatura comprendida entre aproximadamente -5ºC y aproximadamente +25ºC.

24. Procedimiento según cualquiera de las reivindicaciones 19 a 23, que se lleva a cabo en presencia de disolvente de tetrahidrofurano.

25. Procedimiento según cualquiera de las reivindicaciones 19 a 23, que se lleva a cabo en presencia de disolvente de éter.

26. Procedimiento para la preparación de ácido 5-metil-2-fenil-1,3,2-dioxaborinano-5-carboxílico, que comprende:

hacer reaccionar el ácido 2,2-bis(hidroximetil)propiónico con ácido fenilborónico.

27. Procedimiento según la reivindicación 26, que se lleva a cabo en presencia de disolvente de tetrahidrofurano.

\newpage

28. Procedimiento para aumentar la pureza de un compuesto de fórmula

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8

\vskip1.000000\baselineskip

en una solución que contiene isómeros B y C en una relación < aproximadamente 10:1

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9

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que comprende la etapa de ajustar el pH de la solución hasta un pH comprendido entre aproximadamente 5 y aproximadamente 6.

29. Procedimiento según la reivindicación 28, que se lleva a cabo en presencia de disolvente de acetona.

30. Procedimiento según la reivindicación 28 o la reivindicación 29, que se lleva a cabo en presencia de tampón de acetato de sodio.

31. Procedimiento según la reivindicación 28 o la reivindicación 29, que se lleva a cabo en presencia de bicarbonato de sodio y ácido acético.

\newpage

32. Compuesto de fórmula (I):

10

en la que R se selecciona a partir de:

-O-C=O.CR^{7}R^{8}R^{9},

\hskip0.5cm

en el que:

R^{8} y R^{9} forman juntos X;

f = 0-6.

33. Compuesto de fórmula:

11

en la que R se selecciona a partir de:

-O-C=O.CR^{7}R^{8}R^{9},

\hskip0.5cm

en el que:

R^{8} y R^{9} forman juntos X;

f = 0-6;

y en la que R', R'' y R''' son iguales o distintos y se seleccionan de entre alquilo de 1-6 átomos de carbono, fenilo y bencilo.

34. Compuesto que es un 42-éster de rapamicina con ácido 5-metil-2-fenil-1,3,2- dioxaborinano-5-carboxílico.

35. Compuesto que es un éter 31-O-trimetilsilílico de rapamicina, 42-éster con ácido 5-metil-2-fenil-1,3,2-dioxaborinano-5-carboxílico.

36. Compuesto de fórmula:

HO-C=O.CR^{7}R^{8}R^{9}

en el que R^{7} y R^{8} y R^{9} son tal como se han definido en la reivindicación 1, o un derivado de anhídrido mixto del mismo.

37. Compuesto según la reivindicación 36, que es ácido 5-metil-2-fenil-1,3,2-dioxaborinano-5-carboxílico, en el que el fenilo está opcionalmente sustituido; o un derivado de anhídrido mixto 2,4,6-triclorobenzoílico del mismo.

38. Compuesto según la reivindicación 36, que es ácido 5-metil-2-fenil-1,3,2-dioxaborinano-5-carboxílico o un derivado de anhídrido mixto 2,4,6-triclorobenzoílico del mismo.